(57)【要約】本特許発明の対象は特に、不活性化された、生存能力を有さない、もしくは死んでいるバチルス・コアグランス細菌、例えば死んでいる細菌の芽胞および／もしくは細胞の全体、ならびに／または不活性化された、生存能力を有さない、もしくは死んでいるバチルス・コアグランス細菌を含む粒子を含む、組成物と方法とを提供する。また、バチルス・コアグランスのペプチドグルカンおよび／またはリポタイコ酸を含む組成物と方法も提供される。2020524711.tif 000041
2020524711.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
不活性化された、生存能力を有さない、または死んでいるバチルス・コアグランス（Bacillus coagulans）細菌を含む組成物の有効量を対象に投与する工程を含む、該対象の身体能力を向上させる方法。
【請求項２】
前記不活性化された、生存能力を有さない、または死んでいるバチルス・コアグランス細菌が、不活性化された、生存能力を有さない、または死んでいるバチルス・コアグランス芽胞を含む、請求項1に記載の方法。
【請求項３】
細菌がバチルス・コアグランス芽胞を少なくとも85％含む、請求項1に記載の方法。
【請求項４】
前記不活性化された、生存能力を有さない、または死んでいるバチルス・コアグランス細菌が、不活性化された、生存能力を有さない、または死んでいるバチルス・コアグランス栄養型細菌を含む、請求項1に記載の方法。
【請求項５】
前記細菌が、バチルス・コアグランスGBI-30（ATCC表示番号PTA-6086）細菌である、請求項1に記載の方法。
【請求項６】
身体能力の向上が筋肉痛の減少を含む、請求項1に記載の方法。
【請求項７】
前記筋肉痛が運動後の筋肉痛である、請求項6に記載の方法。
【請求項８】
身体能力の向上が身体強度または持久力の向上を含む、請求項1に記載の方法。
【請求項９】
身体能力の向上が運動後の回復時間の減少を含む、請求項1に記載の方法。
【請求項１０】
身体能力の向上が筋肉量の増加を含む、請求項1に記載の方法。
【請求項１１】
身体能力の向上が、前記対象における引き締まった筋肉（lean muscle）の発達、回復、強度、または修復の向上を含む、請求項1に記載の方法。
【請求項１２】
前記対象が身体能力の向上を望んでいる、請求項1に記載の方法。
【請求項１３】
前記対象が、運動競技選手、警察官、または軍隊の構成員である、請求項1に記載の方法。
【請求項１４】
前記対象が、パフォーマンス動物、コンパニオンアニマル、または使役動物である、請求項1に記載の方法。
【請求項１５】
前記対象が、損傷もしくは関節炎を有するか、または脳卒中を起こしたことがある、請求項1に記載の方法。
【請求項１６】
前記対象が、呼吸器感染症、粘膜感染症、皮膚感染症、および胃腸感染症を有さない、請求項1に記載の方法。
【請求項１７】
前記有効量が、前記対象において炎症を減少させるのに有効である、請求項1に記載の方法。
【請求項１８】
前記有効量が、前記対象において少なくとも1つの成長因子のレベルを増加させるのに有効である、請求項1に記載の方法。
【請求項１９】
前記レベルが、前記対象の体液における前記少なくとも1つの成長因子のレベルである、請求項18に記載の方法。
【請求項２０】
前記体液が、血液、血漿、または血清である、請求項19に記載の方法。
【請求項２１】
前記成長因子が、組織修復、幹細胞分化、または幹細胞増殖を増大させる、請求項18に記載の方法。
【請求項２２】
前記有効量が、前記対象において顆粒球コロニー刺激因子（G-CSF）または顆粒球マクロファージコロニー刺激因子（GM-CSF）のレベルを増加させるのに有効である、請求項18に記載の方法。
【請求項２３】
前記有効量が、前記対象においてインターロイキン-1受容体アンタゴニスト（IL1RA）、インターロイキン-6（IL-6）、またはインターロイキン-10（IL-10）のレベルを増加させるのに有効である、請求項1に記載の方法。
【請求項２４】
前記有効量が、前記対象において少なくとも1つの免疫活性化サイトカインのレベルを増加させるのに有効である、請求項1に記載の方法。
【請求項２５】
前記少なくとも1つの免疫活性化サイトカインが、インターロイキン-1β（IL-1β）、インターロイキン-6（IL-6）、インターロイキン-17A（IL-17A）、腫瘍壊死因子-α（TNF-α）、またはインターフェロンγ（IFNγ）を含む、請求項24に記載の方法。
【請求項２６】
前記有効量が、前記対象において少なくとも1つの免疫活性化ケモカインのレベルを増加させるのに有効である、請求項1に記載の方法。
【請求項２７】
前記少なくとも1つの免疫活性化ケモカインが、単球走化性タンパク質-1（MCP-1）、マクロファージ炎症性タンパク質1-α（MIP-1α）、またはマクロファージ炎症性タンパク質-1β（MIP1β）を含む、請求項26に記載の方法。
【請求項２８】
前記組成物は重量比で約0.001％未満が水分である、請求項1に記載の方法。
【請求項２９】
前記組成物が賦形剤をさらに含む、請求項1に記載の方法。
【請求項３０】
前記組成物が、β-グルカン、マルトデキストリン、イヌリン、イニトソール（initosol）、トレハロース、微結晶セルロース（MCC）、乳酸カルシウム、ステアリン酸マグネシウム、フラクトオリゴ糖（FOS）、またはグルコオリゴ糖（GOS）をさらに含む、請求項1に記載の方法。
【請求項３１】
前記不活性化された、生存能力を有さない、または死んでいるバチルス・コアグランス細菌が凍結乾燥されている、請求項1に記載の方法。
【請求項３２】
前記不活性化された、生存能力を有さない、または死んでいるバチルス・コアグランス細菌が、凍結乾燥されて、その後に水溶液と混合されている、請求項1に記載の方法。
【請求項３３】
前記組成物が界面活性剤または乳化剤をさらに含む、請求項1に記載の方法。
【請求項３４】
前記組成物が食物組成物または飲料組成物である、請求項1に記載の方法。
【請求項３５】
前記食物組成物または飲料組成物が、
（a）茶、コーヒー、もしくはアルコール飲料、
（b）発酵食品もしくは発酵飲料、
（c）穀粒ベースの組成物、
（d）ベイクド組成物、
（e）菓子、
（f）オメガ-3脂肪酸、
（g）酪農組成物、
（h）非酪農乳様組成物、
（i）スポーツ栄養組成物、または
（j）使役動物用、コンパニオンアニマル用、家畜用、もしくは水産養殖用飼料
を含む、請求項34に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願の相互参照
本願は、2017年6月21日に出願された米国特許仮出願第62/522,817号からの優先権の恩典を主張し、その全内容を参照により本明細書に組み入れる。
【０００２】
配列表の参照による組み入れ
2018年6月20日に作成されサイズが78,756バイトである、「019374-553001WO_SEQUENCE_LISTING.txt」と名付けられた配列表テキストファイルの全内容を、参照により本明細書に組み入れる。
【背景技術】
【０００３】
背景
胃腸内ミクロフローラは、胃腸管機能および全体的な生理学的健康の維持に関して多くの重要な役割を果たしている。胃腸管に生息する多くの個々の細菌種の成長および代謝は主として、それらが利用可能であり多くが食事由来である、物質に依存している。これらの知見から、主に、生きている微生物の食品サプリメントであるプロバイオティクスを用いて、食事を通じて細菌社会の構成および代謝活性を改善しようという試みがなされている。
【発明の概要】
【０００４】
本明細書において不活性化された、生存能力を有さない、および／または死んでいるバチルス・コアグランス（Bacillus coagulans）芽胞、細菌、および／またはその粒子を含む、組成物が特に提供される。好ましくは、この組成物は、不活性化された、生存能力を有さない、および／または死んでいるB. コアグランス、例えばGBI-30株（「BC30」「GBI-30,6086」および「ATCC表示番号PTA-6086」とも称される）芽胞を含む。例えば、不活性化された、生存能力を有さない、または死んでいるバチルス・コアグランス細菌は、不活性化された、生存能力を有さない、または死んでいるバチルス・コアグランス芽胞を含む、例えば、細菌は、バチルス・コアグランス芽胞を少なくとも85％、少なくとも90％、少なくとも95％、少なくとも98％、少なくとも99％、または少なくとも100％含む。そのような不活性化された、生存能力を有さない、または死んでいるバチルス・コアグランス芽胞は、発芽しない。不活性化された芽胞は、発芽して増殖することができる栄養型細菌細胞にならない。
【０００５】
1つの局面において、本明細書には、対象の身体能力を向上させる方法が提供される。様々な態様において、この方法は、不活性化された、生存能力を有さない、または死んでいるバチルス・コアグランス細菌を含む組成物の有効量を対象に投与する工程を含む。様々な態様において、不活性化された、生存能力を有さない、または死んでいるバチルス・コアグランス細菌は、不活性化された、生存能力を有さない、または死んでいるバチルス・コアグランス芽胞の形態である。いくつかの例において、不活性化された、生存能力を有さない、または死んでいるバチルス・コアグランス細菌は、不活性化された、生存能力を有さない、または死んでいるバチルス・コアグランス栄養型細菌を含む。
【０００６】
生存能力を有さない芽胞および／または栄養型のバチルス・コアグランスの摂取により利益を享受する対象は、筋肉痛を生じる肉体活動に参加した対象および筋痛または筋消耗、例えば、サルコペニア、悪液質、および摂食障害（タンパク・エネルギー低栄養）の結果としての骨格筋量の減少を伴う、疾患または障害を有すると診断されたまたは罹患している対象を含む。特定の態様において、細菌は、バチルス・コアグランスGBI-30（ATCC表示番号PTA-6086）細菌である。本明細書に記載される、死んでおり不活性化され増殖せず発芽しないB.コアグランス、例えばGBI-30（ATCC表示番号PTA-6086）を含む非薬学的組成物は、食品および／もしくは飲料添加物、機能性食品または栄養サプリメントとして有用である。GBI-30のドラフトゲノム配列は、Orru et al., (2014) Genome Announcements, 2(6): 1-2に記載されており、その全体を参照により本明細書に組み入れる。Orru et al., (2014)に関連する全ゲノムショットガン計画は、アクセッション番号JPSK00000000.1の下でDDBJ/EMBL/GenBankに登録されている。本明細書に提供される食物組成物および飲料組成物の非限定的な例は、茶、コーヒー、アルコール飲料、発酵食品および発酵飲料、穀粒ベースの組成物、ベイクド組成物、菓子、オメガ-3脂肪酸、酪農組成物、非酪農乳様組成物、スポーツ栄養組成物、ならびに使役動物用、コンパニオンアニマル用、家畜用、または水産養殖用飼料を含む。
【０００７】
様々な態様において、身体能力の向上は、筋肉痛の減少を含む。いくつかの態様において、筋肉痛は、運動後の筋肉痛である。特定の態様において、身体能力の向上は、身体強度または持久力の向上を含む。様々な態様において、身体能力の向上は、運動後の回復時間の減少を含む。いくつかの態様において、身体能力の向上は、筋肉量の増加を含む。特定の態様において、身体能力の向上は、対象における引き締まった筋肉（lean muscle）の発達、回復、強度、または修復の向上を含む。
【０００８】
様々な態様において、対象は、身体能力の向上を望んでいる。いくつかの態様において、対象は、運動競技選手、警察官、または軍隊の構成員である。特定の態様において、対象は、パフォーマンス動物、コンパニオンアニマル、または使役動物である。様々な態様において、対象は、障害もしくは関節炎を有するか、または脳卒中を起こしたことがある。いくつかの態様において、対象は、呼吸器感染症、粘膜感染症、皮膚感染症、および胃腸感染症を有さない。
【０００９】
特定の態様において、有効量は、対象において炎症を減少させるのに有効である。様々な態様において、有効量は、対象において少なくとも1つの成長因子のレベルを増加させるのに有効である。いくつかの態様において、レベルは、対象の体液における少なくとも1つの成長因子のレベルである。特定の態様において、体液は、血液、血漿、または血清である。様々な態様において、成長因子は、組織修復、幹細胞分化、または幹細胞増殖を増大させる。いくつかの態様において、有効量は、対象において顆粒球コロニー刺激因子（G-CSF）または顆粒球マクロファージコロニー刺激因子（GM-CSF）のレベルを増加させるのに有効である。特定の態様において、有効量は、対象においてインターロイキン-1受容体アンタゴニスト（IL1RA）、インターロイキン-6（IL-6）、またはインターロイキン-10（IL-10）のレベルを増加させるのに有効である。様々な態様において、有効量は、対象において少なくとも1つの免疫活性化サイトカインのレベルを増加させるのに有効である。いくつかの態様において、少なくとも1つの免疫活性化サイトカインは、インターロイキン-1β（IL-1β）、インターロイキン-6（IL-6）、インターロイキン-17A（IL-17A）、腫瘍壊死因子-α（TNF-α）、またはインターフェロンγ（IFNγ）を含む。特定の態様において、有効量は、対象において少なくとも1つの免疫活性化ケモカインのレベルを増加させるのに有効である。様々な態様において、少なくとも1つの免疫活性化ケモカインは、単球走化性タンパク質-1（MCP-1）、マクロファージ炎症性タンパク質1-α（MIP-1α）、またはマクロファージ炎症性タンパク質-1β（MIP1β）を含む。
【００１０】
本明細書で使用される場合、「不活性化された」バチルス・コアグランス細菌は、不活性化されていない対応菌と比較して低下した内部代謝活性および複製能を有するバチルス・コアグランス細菌である。様々な態様において、不活性化されたバチルス・コアグランス細菌は、インタクトな細胞壁を含む。いくつかの態様において、不活性化されたバチルス・コアグランス細菌は、インタクトな細胞膜を含む。いくつかの態様において、不活性化されたバチルス・コアグランス細菌は、二本鎖開裂を有さないゲノムを含む。特定の態様において、不活性化されたバチルス・コアグランス細菌は、不活性化された芽胞を含む。様々な態様において、不活性化されたバチルス・コアグランス細菌は、不活性化された栄養型細菌を含む。いくつかの態様において、不活性化されたバチルス・コアグランス細菌は、不活性化された芽胞および不活性化された栄養型細菌を含む。
【００１１】
本明細書で使用される場合、「生存能力を有さない」バチルス・コアグランス細菌は、複製能を有さないバチルス・コアグランス細菌である。様々な態様において、生存能力を有さないバチルス・コアグランス細菌は、代謝活性を有さない。いくつかの態様において、生存能力を有さないバチルス・コアグランス栄養型細菌は、グルコースを消費または代謝しない（例えば、エネルギーのためにまたは炭素源としてグルコースを使用することができない）。特定の態様において、生存能力を有さないバチルス・コアグランス芽胞は、発芽できない。様々な態様において、生存能力を有さないバチルス・コアグランス細菌のバイオマスは、バチルス・コアグランス成長培地中でインキュベートされたときに変化しない。いくつかの態様において、生存能力を有さないバチルス・コアグランス細菌は、少なくとも1つの二本鎖開裂を有するゲノムを含む。特定の態様において、生存能力を有さないバチルス・コアグランス細菌は、生存能力を有さない芽胞を含む。様々な態様において、生存能力を有さないバチルス・コアグランス細菌は、生存能力を有さない栄養型細菌を含む。いくつかの態様において、生存能力を有さないバチルス・コアグランス細菌は、生存能力を有さない芽胞および生存能力を有さない栄養型細菌を含む。
【００１２】
例えば、「死んでいる」バチルス・コアグランス細菌は、完全にインタクトな細胞壁または芽胞を有さないバチルス・コアグランス細菌である。例えば、死んでいるバチルス・コアグランス栄養型細菌の細胞壁は、流体が細胞内外に自由に流動できる1つまたは複数の構造的欠陥（例えば、裂け目、穴、空洞、せん孔等）を有し得る。別の例において、細胞または芽胞は、死んでいる／生存能力を有さない栄養型細胞全体であり得る。この例において、細胞は、生存能力を有さない／増殖能力を有さないが、構造的にはほとんど（例えば、細胞壁または芽胞構造の点で）インタクトなままである。特定の態様において、死んでいるバチルス・コアグランス細菌は、ペプチドグリカンおよび／またはリポタイコ酸を含むバチルス・コアグランス細胞壁の一部を含むバチルス・コアグランス細菌の破片である。様々な態様において、死んでいるバチルス・コアグランス細菌は、2つまたはそれ以上の二本鎖開裂を含むゲノムを含み、ゲノムは細胞壁の内側にある。いくつかの態様において、死んでいるバチルス・コアグランス細菌は、2つまたはそれ以上の二本鎖開裂を含むゲノムを含み、ゲノムは細胞壁の内側にある。特定の態様において、死んでいるバチルス・コアグランス細菌は、細胞壁の内側に少なくとも約100キロ塩基長（例えば、1、2、3、4、または5つの少なくとも約200、少なくとも約300、少なくとも約400、少なくとも約500キロ塩基長）である1つまたは複数のゲノムフラグメントを含む。特定の態様において、死んでいるバチルス・コアグランス細菌は、死んでいる芽胞を含む。様々な態様において、死んでいるバチルス・コアグランス細菌は、死んでいる栄養型細菌を含む。いくつかの態様において、死んでいるバチルス・コアグランス細菌は、死んでいる芽胞、および死んでいる栄養型細菌を含む。
【００１３】
様々な態様において、不活性化された、生存能力を有さない、または死んでいるバチルス・コアグランス細菌および／または粒子は、無傷のリポタイコ酸の存在を維持している。例えば、リポタイコ酸は、免疫活性化活性を含む。特定の態様において、リポタイコ酸は、対応する生存能力を有するバチルス・コアグランス細菌におけるのと同じ化学構造を有する。
【００１４】
例えば、障害を処置するため、炎症を減少させるため、組織修復を促進するため、および運動能力を改善するために、そのような不活性化された、生存能力を有さない、または死んでいるバチルス・コアグランス細菌、（例えば、不活性化された、生存能力を有さない、および／または死んでいるバチルス・コアグランス細菌を含む）粒子ならびに化合物（例えば、リポタイコ酸またはペプチドグリカン）を投与する方法もまた、提供される。様々な態様において、不活性化された、生存能力を有さない、もしくは死んでいるバチルス・コアグランス細菌、粒子、または組成物は、（例えば、有効量で投与された場合に）対象において少なくとも1つの成長因子のレベルを増加させる。いくつかの態様において、成長因子は、免疫活性化成長因子または抗炎症性成長因子である。特定の態様において、成長因子は、組織修復、幹細胞分化、または幹細胞増殖を増大させる化合物（例えば、タンパク質またはペプチド）である。様々な態様において、不活性化された、生存能力を有さない、もしくは死んでいるバチルス・コアグランス細菌、粒子、または化合物は、対象において少なくとも1つの免疫活性化サイトカインのレベルを増加させる。いくつかの態様において、少なくとも1つの免疫活性化サイトカインは、インターロイキン-1β（IL-1β）、インターロイキン-6（IL-6）、インターロイキン-17A（IL-17A）、腫瘍壊死因子-α（TNF-α）、またはインターフェロンγ（IFNγ）を含む。特定の態様において、不活性化された、生存能力を有さない、もしくは死んでいるバチルス・コアグランス細菌、粒子、または化合物は、対象において少なくとも1つの免疫活性化ケモカインのレベルを増加させる。様々な態様において、少なくとも1つの免疫活性化ケモカインは、単球走化性タンパク質-1（MCP-1）、マクロファージ炎症性タンパク質1-α（MIP-1α）、またはマクロファージ炎症性タンパク質-1β（MIP1β）を含む。いくつかの態様において、不活性化された、生存能力を有さない、もしくは死んでいるバチルス・コアグランス細菌、粒子、または化合物は、対象において少なくとも1つの炎症性サイトカインを増大させる。特定の態様において、少なくとも1つの炎症性サイトカインは、インターロイキン-1受容体アンタゴニスト（IL-1RA）またはインターロイキン-10（IL-10）を含む。様々な態様において、不活性化された、生存能力を有さない、もしくは死んでいるバチルス・コアグランス細菌、粒子、または化合物は、インターロイキン-4（IL-4）、インターロイキン-7（IL-7）、インターロイキン-8（IL-8）、インターロイキン-9（IL-9）、またはインターロイキン-12（IL12p70）のレベルを増加させる。いくつかの態様において、レベルは、体液、例えば血液、血漿、血清、尿、汗、精液、唾液、または涙液中のレベルである。
【００１５】
1つの局面において、不活性化された、生存能力を有さない、もしくは死んでいるバチルス・コアグランス細菌および／またはそのような細菌を含む粒子を含む組成物が、本明細書に提供される。様々な態様において、不活性化された、生存能力を有さない、もしくは死んでいるバチルス・コアグランス細菌および／または粒子は、対象において少なくとも1つの成長因子のレベルを増加させるのに有効な量で存在する。いくつかの態様において、少なくとも1つの成長因子は、顆粒球コロニー刺激因子（G-CSF）および／または顆粒球マクロファージコロニー刺激因子（GM-CSF）である。特定の態様において、組成物は、経口投与用に配合される。いくつかの態様において、組成物は、経鼻、局所（例えば、粘膜用および／もしくは皮膚用）、腹腔内または静脈内投与用に配合される。様々な態様において、有効量はまた、対象においてインターロイキン-1受容体アンタゴニスト（IL1RA）、インターロイキン-6（IL-6）、またはインターロイキン-10（IL-10）のレベルを増加させるのに有効である。特定の態様において、レベルは、対象の体液（例えば、血液、血漿、血清、汗、唾液、精液、粘液、涙液、または尿）における少なくとも1つの成長因子のレベルである。
【００１６】
様々な態様において、不活性化された、生存能力を有さない、もしくは死んでいるバチルス・コアグランス細菌（またはそのような細菌を含む粒子）は、不活性化された、生存能力を有さない、または死んでいるバチルス・コアグランス栄養型細菌を含む。特定の態様において、不活性化された、生存能力を有さない、もしくは死んでいるバチルス・コアグランス細菌または粒子は、不活性化された、生存能力を有さない、または死んでいるバチルス・コアグランス芽胞を含む。いくつかの態様において、不活性化された、生存能力を有さない、もしくは死んでいるバチルス・コアグランス細菌または粒子は、不活性化された、生存能力を有さない、または死んでいるバチルス・コアグランス栄養型細菌および芽胞を含む。特定の態様において、不活性化された、生存能力を有さない、および／もしくは死んでいるバチルス・コアグランス細菌（またはそのような細菌を含む粒子）は、乾燥しており、例えば、重量比で約10％未満、約5％未満、約1％未満、約0.1％未満、約0.01％未満、約0.001％未満、約0.0001％未満、または約0.00001％未満の水分を含む。様々な態様において、不活性化された、生存能力を有さない、および／もしくは死んでいるバチルス・コアグランス細菌（またはそのような細菌を含む粒子）は、約5、約3、約4、約2、約1.5、約1、約0.75、約0.5、約0.25、または約0.1より小さい水分活性を有する。本明細書で使用される場合、「水分活性」という用語は、物質（例えば、不活性化された、生存能力を有さない、および／または死んでいるバチルス・コアグランスを含む組成物、例えば粒子）中の水分の蒸気圧を、同じ温度下での蒸留水の蒸気圧で割ったものである。水分活性は、しばしば、pを物質中の水分の蒸気圧、p0を同じ温度下での蒸留水の蒸気圧として、数式aw=p/p0により表される。この特定の定義を用いる場合、蒸留水は、水分活性1を有する。本明細書に示される水分活性は、25度の温度下でのものである。
【００１７】
特定の態様において、組成物はβ-グルカンをさらに含む。
【００１８】
様々な態様において、組成物は賦形剤または担体をさらに含む。
【００１９】
いくつかの態様において、組成物は、マルトデキストリン、イヌリン、イノシトール、トレハロース、微結晶セルロース（MCC）、乳酸カルシウム、ステアリン酸マグネシウム、フラクトオリゴ糖（FOS）、またはグルコオリゴ糖（GOS）をさらに含む。
【００２０】
特定の態様において、不活性化された、生存能力を有さない、または死んでいるバチルス・コアグランス細菌は、乾燥、例えば凍結乾燥されている。いくつかの態様において、不活性化された、生存能力を有さない、または死んでいるバチルス・コアグランス細菌を含む粒子は、ヒトまたは非ヒト動物対象への投与前に水溶液と混合され得る。特定の態様において、不活性化された、生存能力を有さない、または死んでいるバチルス・コアグランス細菌は、凍結乾燥されて、その後に水溶液と混合されている。
【００２１】
様々な態様において、組成物は、界面活性剤または乳化剤をさらに含む。いくつかの態様において、界面活性剤は、ポリソルベート20および／またはポリソルベート80を含む。界面活性剤のさらなる非限定的な例は、レシチン、モノグリセリド、ソルビタンエステル、ソルビタンエステルのエトキシレート、スクロースエステル、糖脂質、脂肪族アルコール、脂肪酸、塩化ベンザルコニウム、塩化セチルピリジニウム、ドデシルベンゼンスルホン酸ナトリウム、ポリエトキシル化オクチルフェノール、塩化N-ドデシルピリジニウム、ラウリルモノエタノール、ソルビタンモノエステル、テトラデシルホスホン酸のジメチルエーテル、グリセロールジエステル、ドデシルベタイン、アニオン性界面活性剤、カチオン性界面活性剤、非イオン性界面活性剤、双性イオン性界面活性剤、およびジェミニ界面活性剤を含む。
【００２２】
特定の態様において、組成物は、食物組成物または飲料組成物を含む。様々な態様において、組成物は、茶、コーヒー、および／またはアルコール飲料を含む。いくつかの態様において、組成物は、発酵食品または発酵飲料を含む。特定の態様において、組成物は、穀粒ベースの組成物を含む。様々な態様において、組成物は、ベイクド組成物を含む。いくつかの態様において、組成物は、菓子を含む。特定の態様において、組成物は、オメガ-3脂肪酸を含む。様々な態様において、組成物は、酪農組成物を含む。いくつかの態様において、組成物は、非酪農乳様組成物を含む。特定の態様において、組成物は、スポーツ栄養組成物を含む。様々な態様において、組成物は、動物飼料を含む。いくつかの、動物飼料は、使役動物用、コンパニオンアニマル用、家畜用、または水産養殖用飼料を含む。
【００２３】
バチルス・コアグランスペプチドグリカンおよび／またはリポタイコ酸を含有する（例えば、バチルス・コアグランスペプチドグリカンおよび／もしくはリポタイコ酸を含む、バチルス・コアグランスペプチドグリカンおよび／もしくはリポタイコ酸から本質的になる、またはバチルス・コアグランスペプチドグリカンおよび／もしくはリポタイコ酸からなる）組成物もまた提供される。特定の態様において、ペプチドグリカンおよび／またはリポタイコ酸は、対象において少なくとも1つの成長因子のレベルを増加させるのに有効な量で存在する。様々な態様において、組成物は、ペプチドグリカンおよびリポタイコ酸の両方を含む。いくつかの態様において、ペプチドグリカンおよび／またはリポタイコ酸は、精製されたペプチドグリカンおよび／またはリポタイコ酸である。特定の態様において、組成物は、生存能力を有するバチルス・コアグランス細菌を含まない。様々な態様において、組成物は、β-グルカンをさらに含む。β-グルカンは、穀物、細菌、および真菌の細胞壁に天然に存在するβ-D-グルコース多糖のグループを含み、その大きく相違する物理化学的特性は供給源に依存する。典型的に、β-グルカンは、1〜3個のβ-グリコシド結合を有する直鎖骨格を形成するが、その分子量、溶解度、粘性、分枝構造、およびゲル化特性は相違し、それによって動物において多様な生理学的効果を発生させている。
【００２４】
いくつかの態様において、組成物は、食物組成物または飲料組成物を含む。特定の態様において、組成物は、茶、コーヒー、および／またはアルコール飲料を含む。様々な態様において、組成物は、発酵食品または発酵飲料を含む。いくつかの態様において、組成物は、穀粒ベースの組成物を含む。特定の態様において、組成物は、ベイクド組成物を含む。様々な態様において、組成物は、菓子を含む。いくつかの態様において、組成物は、オメガ-3脂肪酸を含む。オメガ-3脂肪酸（ω-3脂肪酸またはn-3脂肪酸とも呼ばれる）は、その炭素鎖の末端から3つ目の炭素原子に二重結合（C=C）を有する多価不飽和脂肪酸である。オメガ-3脂肪酸の非限定的な例は、ヘキサデカトリエン酸（HTA）、α-リノレン酸（ALA）、ステアリドン酸（SDA）、エイコサトリエン酸（ETE）、エイコサテトラエン酸（ETA）、エイコサペンタエン酸（EPA）、ヘネイコサペンタエン酸（heneicosapentaenoic acid; HPA）、ドコサペンタエン酸（DPA）、ドコサヘキサエン酸（DHA）、テトラコサペンタエン酸、およびテトラコサヘキサエン酸を含む。特定の態様において、組成物は、酪農組成物を含む。様々な態様において、組成物は、非酪農乳様組成物を含む。いくつかの態様において、組成物は、スポーツ栄養組成物を含む。特定の態様において、組成物は、動物飼料を含む。
【００２５】
対象において組織修復を向上させる方法も、本明細書に提供される。様々な態様において、組織修復は、組織内での細胞（例えば、筋細胞）の成長および／または分裂を含む。特定の態様において、この方法は、有効量の不活性化された、生存能力を有さない、もしくは死んでいるバチルス・コアグランス細菌または粒子（例えば、不活性化された、生存能力を有さない、もしくは死んでいるバチルス・コアグランス細菌またはそのような細菌を含む粒子を含む組成物）を対象に投与する工程を含む。いくつかの態様において、この方法は、バチルス・コアグランスのペプチドグリカンおよび／またはリポタイコ酸の有効量を対象に投与する工程を含む。
【００２６】
様々な態様において、対象は、損傷を有する。いくつかの態様において、損傷は、腱炎、捻挫、肉離れ、組織損傷（例えば、皮膚または筋肉）、裂傷、創傷、すり傷、または滑液包炎を含む。
【００２７】
いくつかの態様において、対象は、外傷性脳損傷を有する。
【００２８】
特定の態様において、対象は、脳卒中を起こしたことがある。
【００２９】
様々な態様において、対象は、関節炎を有する。いくつかの態様において、関節炎は、変形性関節炎である。特定の態様において、関節炎は、関節リウマチである。
【００３０】
様々な態様において、対象は、感染症（例えば、呼吸器感染症、粘膜感染症、皮膚感染症、および胃腸感染症）を有さない。
【００３１】
いくつかの態様において、（例えば、損傷部位の）炎症が対象において減少する。特定の態様において、成長因子の量が対象において増加する。様々な態様において、G-CSFおよび／またはGM-CSFのレベルが対象において増加する。いくつかの態様において、G-CSFのレベルおよびGM-CSFのレベルが対象において増加する。特定の態様において、GM-CSFのレベルが対象において減少する。いくつかの態様において、抗炎症または寛容化サイトカインのレベルが対象において増加する。特定の態様において、IL1RA、IL-6、および／またはIL-10のレベルが対象において増加する。
【００３２】
様々な態様において、対象において組織修復を向上させる方法は、筋肉組織の修復を向上させる。
【００３３】
1つの局面において、対象の身体能力を向上させる方法が、本明細書に提供される。いくつかの態様において、この方法は、有効量の不活性化された、生存能力を有さない、もしくは死んでいるバチルス・コアグランス細菌または粒子（例えば、不活性化された、生存能力を有さない、もしくは死んでいるバチルス・コアグランス細菌またはそのような細菌を含む粒子を含む組成物）を投与する工程を含む。様々な態様において、この方法は、バチルス・コアグランスのペプチドグリカンおよび／またはリポタイコ酸の有効量を対象に投与する工程を含む。
【００３４】
いくつかの態様において、身体能力の向上は筋肉痛の減少を含む。特定の態様において、筋肉痛は運動後の筋肉痛である。
【００３５】
様々な態様において、身体能力の向上は身体強度または持久力の向上を含む。
【００３６】
いくつかの態様において、身体能力の向上は、運動後の回復時間の減少を含む。
【００３７】
特定の態様において、身体能力の向上は筋肉量の増加を含む。
【００３８】
様々な態様において、対象は、身体能力の向上を望んでいる。いくつかの態様において、対象は、運動競技選手（例えば、陸上競技選手、自転車競技選手、野球選手、サッカー選手、フットボール選手、ホッケー選手、バスケットボール選手、またはクリケット選手）である。特定の態様において、対象は、法執行官である。様々な態様において、対象は、消防隊員である。いくつかの態様において、対象は、宇宙飛行士である。特定の態様において、対象は、建設作業員である。様々な態様において、対象は、軍隊の構成員（例えば、陸兵、海兵、航海士、またはパイロット）である
【００３９】
いくつかの態様において、動物は、パフォーマンス動物（例えば、軍犬、警察犬、競走犬、ショー出演犬、軍馬、警察馬、競走馬、ポロ出場馬、もしくはショー出演馬）、コンパニオンアニマル（例えば、イヌもしくはネコ）、または使役動物（例えば、ヤク、ラクダ、ウマ、ウシもしくはヤク）である。特定の態様において、対象は、爬虫類、両生類、鳥類、または哺乳類である。様々な態様において、対象は、霊長類（例えば、類人猿、猿、ゴリラ、オラウータン、チンパンジー、またはヒト）である。いくつかの態様において、対象は、オウム、ニワトリ、ガチョウ、アヒル、イヌ、ネコ、ウサギ、ブタ、またはウマである。特定の態様において、対象は、反芻動物、例えば、ウシ、ヒツジ、ヤギ、バッファロー、ヤク、シカ、エルク、キリン、またはラクダである。様々な態様において、動物は、偽反芻動物、例えばカバである。反芻動物は、4室の胃を有するのに対して、偽反芻動物は、3室の胃を有する。いくつかの態様において、動物は、パフォーマンス動物、例えば軍犬、警察犬、競走犬、ショー出演犬、軍馬、警察馬、競走馬、ポロ出場馬、またはショー出演馬である。
【００４０】
対象において引き締まった筋肉の発達、回復、強度、または修復を向上させる方法が、本明細書に含まれる。様々な態様において、この方法は、有効量の不活性化された、生存能力を有さない、もしくは死んでいるバチルス・コアグランス細菌または粒子（例えば、不活性化された、生存能力を有さない、もしくは死んでいるバチルス・コアグランス細菌またはそのような細菌を含む粒子を含む組成物）を対象に投与する工程を含む。いくつかの態様において、この方法は、バチルス・コアグランスのペプチドグリカンおよび／またはリポタイコ酸の有効量を対象に投与する工程を含む。
【００４１】
様々な態様において、対象は、胃腸疾患および炎症性腸状態を有さない（例えば、有すると診断されていない）。いくつかの態様において、対象は、感染症（例えば、ウイルス感染症および細菌感染症）を有さない（例えば、それらを有すると診断されていない）。特定の態様において、対象はウイルス性呼吸器感染症を有さない。様々な態様において、対象は、胃腸感染症を有さない。
【００４２】
いくつかの態様において、不活性化された、生存能力を有さない、もしくは死んでいるバチルス・コアグランス細菌または粒子は、組成物の重量比で約0.000001％〜約10％を構成する。特定の態様において、本明細書に提供される組成物は、重量比で約0.000001％、約0.00001％、約0.0001％、約0.001％、約0.01％、約0.1％、約1％、約1.5％、約2％、約2.5％、約3％、約3.5％、約4％、約4.5％、約5％、約5.5％、約6％、約6.5％、約7％、約7.5％、約8％、約8.5％、約9％、約9.5％、または約10％が、不活性化された、生存能力を有さない、もしくは死んでいるバチルス・コアグランス細菌または粒子であり得る。様々な態様において、本明細書に提供される組成物は、重量比で少なくとも0.000001％、少なくとも0.00001％、少なくとも0.0001％、少なくとも0.001％、少なくとも0.01％、少なくとも0.1％、少なくとも1％、少なくとも1.5％、少なくとも2％、少なくとも2.5％、少なくとも3％、少なくとも3.5％、少なくとも4％、少なくとも4.5％、少なくとも5％、少なくとも5.5％、少なくとも6％、少なくとも6.5％、少なくとも7％、少なくとも7.5％、少なくとも8％、少なくとも8.5％、少なくとも9％、少なくとも9.5％、または少なくとも10％が、不活性化された、生存能力を有さない、もしくは死んでいるバチルス・コアグランス細菌または粒子であり得る。いくつかの態様において、本明細書に提供される組成物は、重量比で0.000001％未満、0.00001％未満、0.0001％未満、0.001％未満、0.01％未満、0.1％未満、1％未満、1.5％未満、2％未満、2.5％未満、3％未満、3.5％未満、4％未満、4.5％未満、5％未満、5.5％未満、6％未満、6.5％未満、7％未満、7.5％未満、8％未満、8.5％未満、9％未満、9.5％未満、または10％未満が、死んでいるまたは不活性化されたバチルス・コアグランス細菌であり得る。特定の態様において、組成物は、重量比で少なくとも0.000001％、少なくとも0.00001％、少なくとも0.0001％、少なくとも0.001％、少なくとも0.01％、少なくとも0.1％であるが、1％未満、1.5％未満、2％未満、2.5％未満、3％未満、3.5％未満、4％未満、4.5％未満、5％未満、5.5％未満、6％未満、6.5％未満、7％未満、7.5％未満、8％未満、8.5％未満、9％未満、9.5％未満、または10％未満の、不活性化された、生存能力を有さない、もしくは死んでいるバチルス・コアグランス細菌または粒子を含む。
【００４３】
様々な態様において、組成物中の粒子の数は、約1×103〜1×1020、約1×103〜1×109、約1×103〜1×106、約1×106〜1×109、約1×106〜1×1020、約1×106〜1×1015、約1×106〜1×1012、約1×108〜1×1017、約1×1010〜1×1020、約1×103〜1×1010、約1×105〜1×1010、約1×105〜1×1015、約1×1010〜1×1015、約1×1014〜1×1016個の粒子数であるか、または、約5、約10、約50、約100、約500、約1×103、約1×104、約1×105、約1×106、約1×107、約1×108、約1×109、約1×1010、約1×1011、約1×1012、約1×1013、約1×1014、約1×1015、約1×1016、約1×1017、約1×1018、約1×1019、もしくは約1×1020個の粒子数、少なくとも5、少なくとも10、少なくとも50、少なくとも100、少なくとも500、少なくとも1×103、少なくとも1×104、少なくとも1×105、少なくとも1×106、少なくとも1×107、少なくとも1×108、少なくとも1×109、少なくとも1×1010、少なくとも1×1011、少なくとも1×1012、少なくとも1×1013、少なくとも1×1014、少なくとも1×1015、少なくとも1×1016、少なくとも1×1017、少なくとも1×1018、少なくとも1×1019、もしくは少なくとも1×1020個の粒子数、もしくは5、10、50、100、500、1×103、1×104、1×105、1×106、1×107、1×108、1×109、1×1010、1×1011、1×1012、1×1013、1×1014、1×1015、1×1016、1×1017、1×1018、1×1019、もしくは1×1020個未満の粒子数である。いくつかの態様において、組成物中の粒子の数は、1グラムあたり約1×103〜1×1020、約1×103〜1×109、約1×103〜1×106、約1×106〜1×109、約1×106〜1×1020、約1×106〜1×1015、約1×106〜1×1012、約1×108〜1×1017、約1×1010〜1×1020、約1×103〜1×1010、約1×105〜1×1010、約1×105〜1×1015、約1×1010〜1×1015、約1×1014〜1×1016個の粒子数であるか、または、1グラムあたり約5、約10、約50、約100、約500、約1×103、約1×104、約1×105、約1×106、約1×107、約1×108、約1×109、約1×1010、約1×1011、約1×1012、約1×1013、約1×1014、約1×1015、約1×1016、約1×1017、約1×1018、約1×1019、もしくは約1×1020個の粒子数、少なくとも5、少なくとも10、少なくとも50、少なくとも100、少なくとも500、少なくとも1×103、少なくとも1×104、少なくとも1×105、少なくとも1×106、少なくとも1×107、少なくとも1×108、少なくとも1×109、少なくとも1×1010、少なくとも1×1011、少なくとも1×1012、少なくとも1×1013、少なくとも1×1014、少なくとも1×1015、少なくとも1×1016、少なくとも1×1017、少なくとも1×1018、少なくとも1×1019、もしくは少なくとも1×1020個の粒子数、もしくは、5、10、50、100、500、1×103、1×104、1×105、1×106、1×107、1×108、1×109、1×1010、1×1011、1×1012、1×1013、1×1014、1×1015、1×1016、1×1017、1×1018、1×1019、もしくは1×1020個未満の粒子数である。特定の態様において、組成物中の粒子の数は、1グラムあたり約1×109〜1×1011個、または1グラムあたり約1×109、約1.5×109、約2×109、約2.5×109、約3×109、約3.5×109、約4×109、約4.5×109、約5×109、約5.5×109、約6×109、約6.5×109、約7×109、約7.5×109、約8×109、約8.5×109、約9×109、約9.5×109、約1×1010、約1.5×1010、約2×1010、約2.5×1010、約3×1010、約3.5×1010、約4×1010、約4.5×1010、約5×1010、約5.5×1010、約6×1010、約6.5×1010、約7×1010、約7.5×1010、約8×1010、約8.5×1010、約9×1010、約9.5×1010、もしくは約1×1011個の粒子数である。
【００４４】
様々な態様において、バチルス・コアグランス細菌は、不活性化させる（例えば、死滅させる）前に（例えば、成長培養物中の培地または上清から）単離または精製される。特定の態様において、バチルス・コアグランス細菌は、不活性化させた（例えば、死滅させた）後に（例えば、成長培養物中の培地または上清から）単離または精製される。いくつかの態様において、バチルス・コアグランス細菌は、不活性化させる（例えば、死滅させる）前に（例えば、成長培養物中の培地または上清から）単離されるが精製されない。バチルス・コアグランス細菌に関して、「精製」および「実質的に精製」という用語は、混入微生物または他の高分子、例えば多糖、核酸、もしくはタンパク質を実質的に含まないバチルス・コアグランス細菌を意味する。「単離」という用語は、（自然環境または実験状況のいずれであっても）それが最初に生成されたときに付随していた成分の少なくとも一部から分離された細菌または他の物体もしくは物質を包含する。様々な態様において、単離された細菌または他の物体もしくは物質は、人の手によって生成、調製、精製、および／または製造される。例えば、単離された細菌は、それらに当初付随していた他の成分の（重量比、例えば乾燥重量比で）少なくとも約10％、約20％、約30％、約40％、約50％、約60％、約70％、約80％、約90％、約95％、約96％、約97％、約98％、約99％、またはそれ以上から分離され得る。いくつかの態様において、単離された細菌は、（重量比、例えば乾燥重量比で）約80％超、約85％、約90％、約91％、約92％、約93％、約94％、約95％、約96％、約97％、約98％、約99％純粋、または約99％超純粋である。本明細書で使用される場合、物質は、他の成分を実質的に含まない場合、「純粋」である。本明細書で使用される場合、「単離」または「精製」された化合物（例えば、核酸分子、ポリヌクレオチド、ポリペプチド、またはタンパク質）は、組み換え技術によって生成されたとき、他の細胞物質もしくは培養培地を、または化学的に合成されたとき、化学的前駆体もしくは他の化合物を実質的に含まない。精製された化合物は、重量比（乾燥重量比）で少なくとも60％が、関心対象の化合物である。好ましくは、調製物は、重量比で少なくとも75％、より好ましくは少なくとも90％、最も好ましくは少なくとも99％が、関心対象の化合物である。例えば、精製された化合物は、重量比で少なくとも90％、少なくとも91％、少なくとも92％、少なくとも93％、少なくとも94％、少なくとも95％、少なくとも98％、少なくとも99％、または少なくとも100％（w/w）が所望の化合物であるものである。純度は、任意の適切な標準的方法、例えばカラムクロマトグラフィー、薄層クロマトグラフィーまたは高性能液体クロマトグラフィー（HPLC）分析によって測定され得る。特定の態様において、精製または単離されたポリヌクレオチド（リボ核酸（RNA）またはデオキシリボ核酸（DNA））は、その天然に存在する状況でそれに隣接する遺伝子または配列を含まない。様々な態様において、精製はまた、ヒト対象への投与にとって安全である滅菌性、例えば感染性または毒性因子の欠如の程度を定義する。
【００４５】
様々な態様において、不活性化された、生存能力を有さない、もしくは死んでいるバチルス・コアグランス細菌またはそのような細菌を含む粒子は、不活性化された、生存能力を有さない、または死んでいるバチルス・コアグランス栄養型細菌を含む。いくつかの態様において、不活性化された、生存能力を有さない、もしくは死んでいるバチルス・コアグランス細菌またはそのような細菌を含む粒子は、不活性化された、生存能力を有さない、または死んでいるバチルス・コアグランス芽胞を含む。特定の態様において、不活性化された、生存能力を有さない、もしくは死んでいるバチルス・コアグランス細菌またはそのような細菌を含む粒子は、不活性化された、生存能力を有さない、または死んでいるバチルス・コアグランス栄養型細菌および不活性化された、生存能力を有さない、または死んでいるバチルス・コアグランス芽胞を含む。
【００４６】
様々な態様において、不活性化された、生存能力を有さない、または死んでいるバチルス・コアグランス細菌は、熱および／または圧により不活性化または死滅させたバチルス・コアグランスである。特定の態様において、不活性化された、生存能力を有さない、または死んでいるバチルス・コアグランス細菌は、酸により不活性化されるまたは酸性化粒子の形態である。いくつかの態様において、死んでいるバチルス・コアグランス栄養型細胞は、少なくとも部分的にインタクトである、例えば、死んでいるバチルス・コアグランス栄養型細胞の細胞壁の表面積（例えば、生きている細胞と比較した表面積）の少なくとも約1％、少なくとも約2％、少なくとも約3％、少なくとも約4％、少なくとも約5％、少なくとも約6％、少なくとも約7％、少なくとも約8％、少なくとも約9％、少なくとも約10％、少なくとも約15％、少なくとも約20％、少なくとも約25％、少なくとも約30％、少なくとも約35％、少なくとも約40％、少なくとも約45％、少なくとも約50％、少なくとも約55％、少なくとも約60％、少なくとも約65％、少なくとも約70％、少なくとも約75％、少なくとも約80％、少なくとも約85％、少なくとも約90％、少なくとも約95％、少なくとも約96％、少なくとも約97％、少なくとも約98％、少なくとも約99％、もしくは少なくとも約100％、または約1％、約2％、約3％、約4％、約5％、約6％、約7％、約8％、約9％、約10％、約15％、約20％、約25％、約30％、約35％、約40％、約45％、約50％、約55％、約60％、約65％、約70％、約75％、約80％、約85％、約90％、約95％、約96％、約97％、約98％、約99％、もしくは約100％がインタクトである。特定の態様において、死んでいるバチルス・コアグランス栄養型細胞の少なくとも約1％、少なくとも約2％、少なくとも約3％、少なくとも約4％、少なくとも約5％、少なくとも約6％、少なくとも約7％、少なくとも約8％、少なくとも約9％、少なくとも約10％、少なくとも約15％、少なくとも約20％、少なくとも約25％、少なくとも約30％、少なくとも約35％、少なくとも約40％、少なくとも約45％、少なくとも約50％、少なくとも約55％、少なくとも約60％、少なくとも約65％、少なくとも約70％、少なくとも約75％、少なくとも約80％、少なくとも約85％、少なくとも約90％、少なくとも約95％、少なくとも約96％、少なくとも約97％、少なくとも約98％、少なくとも約99％、もしくは少なくとも約100％、または約1％、約2％、約3％、約4％、約5％、約6％、約7％、約8％、約9％、約10％、約15％、約20％、約25％、約30％、約35％、約40％、約45％、約50％、約55％、約60％、約65％、約70％、約75％、約80％、約85％、約90％、約95％、約96％、約97％、約98％、約99％、もしくは約100％が、少なくとも部分的にインタクトである、例えば、死んでいるバチルス・コアグランス栄養型細胞の細胞壁の表面積の少なくとも約1％、少なくとも約2％、少なくとも約3％、少なくとも約4％、少なくとも約5％、少なくとも約6％、少なくとも約7％、少なくとも約8％、少なくとも約9％、少なくとも約10％、少なくとも約15％、少なくとも約20％、少なくとも約25％、少なくとも約30％、少なくとも約35％、少なくとも約40％、少なくとも約45％、少なくとも約50％、少なくとも約55％、少なくとも約60％、少なくとも約65％、少なくとも約70％、少なくとも約75％、少なくとも約80％、少なくとも約85％、少なくとも約90％、少なくとも約95％、少なくとも約96％、少なくとも約97％、少なくとも約98％、少なくとも約99％、もしくは少なくとも約100％、または約1％、約2％、約3％、約4％、約5％、約6％、約7％、約8％、約9％、約10％、約15％、約20％、約25％、約30％、約35％、約40％、約45％、約50％、約55％、約60％、約65％、約70％、約75％、約80％、約85％、約90％、約95％、約96％、約97％、約98％、約99％、もしくは約100％がインタクトである。様々な態様において、死んでいるバチルス・コアグランス栄養型細胞はインタクトである。
【００４７】
いくつかの態様において、不活性化された、生存能力を有さない、または死んでいるバチルス・コアグランス細菌（例えば、栄養型細菌および／または芽胞）は、対応する数の生存能力を有するバチルス・コアグランス細菌の少なくとも約80％、少なくとも約85％、少なくとも約90％、少なくとも約95％、少なくとも約96％、少なくとも約97％、少なくとも約98％、少なくとも約99％、または少なくとも約100％の量（例えば、乾燥重量または溶液中の重量）を有する。特定の態様において、不活性化された、生存能力を有さない、または死んでいるバチルス・コアグランス細菌（例えば、栄養型細菌および／または芽胞）は、（例えば、死滅または不活性化プロセスを開始したまたはそれが起こった時点の）不活性化された、生存能力を有さない、または死んでいるバチルス・コアグランス細菌の元となったバチルス・コアグランス細菌の少なくとも約80％、少なくとも約85％、少なくとも約90％、少なくとも約95％、少なくとも約96％、少なくとも約97％、少なくとも約98％、少なくとも約99％、または少なくとも約100％の量（例えば、乾燥重量または溶液中の重量）を有する。
【００４８】
いくつかの態様において、死んでいるバチルス・コアグランス細菌は、死んでいるバチルス・コアグランス細菌の細片または成分を含む。特定の態様において、細片または成分は、バチルス・コアグランス細菌の細胞壁の細片または成分を含む。様々な態様において、細片または成分は、粒子に凝縮される。いくつかの態様において、そのような粒子は、例えば、約1〜5 μｍ、約1〜10 μｍ、約5〜50 μｍ、約5〜100 μｍ、約5〜25 μｍ、約10〜100 μｍ、もしくは約1〜1000 μｍ（例えば、約1 μm、約2.5 μm、約5 μm、約7.5 μm、約10 μm、約15 μm、約20 μm、約25 μm、約30 μm、約35 μm、約40 μm、約45 μm、約50 μm、約75 μm、約100 μm、約150 μm、約200 μm、約250 μm、約300 μm、約350 μm、約400 μm、約450 μm、約500 μm、約600 μm、約700 μm、約800 μm、約900 μm、約1000 μm、10〜1000 μm、10〜100 μm、10〜500 μm、50〜100 μm、50〜200 μm、50〜300 μm、50〜400 μm、50〜500 μm、100〜250 μm、100〜500 μm、150〜450 μm、150〜300 μm、250〜500 μm、500〜750 μm、もしくは500〜1000 μm）のおおよその最大幅もしくは直径を含む；約1〜5 μｍ、約1〜10 μｍ、約5〜50 μｍ、約5〜100 μｍ、約5〜25 μｍ、約10〜100 μｍ、もしくは約1〜1000 μｍ（例えば、約1 μm、約2.5 μm、約5 μm、約7.5 μm、約10 μm、約15 μm、約20 μm、約25 μm、約30 μm、約35 μm、約40 μm、約45 μm、約50 μm、約75 μm、約100 μm、約150 μm、約200 μm、約250 μm、約300 μm、約350 μm、約400 μm、約450 μm、約500 μm、約600 μm、約700 μm、約800 μm、約900 μm、約1000 μm、10〜1000 μm、10〜100 μm、10〜500 μm、50〜100 μm、50〜200 μm、50〜300 μm、50〜400 μm、50〜500 μm、100〜250 μm、100〜500 μm、150〜450 μm、150〜300 μm、250〜500 μm、500〜750 μm、もしくは500〜1000 μm）の平均径を含み；かつ／または約10〜10000 mm3（例えば、約10 mm3、約25 mm3、約50 mm3、約75 mm3、約100 mm3、約150 mm3、約200 mm3、約250 mm3、約300 mm3、約350 mm3、約400 mm3、約450 mm3、約500 mm3、約600 mm3、約700 mm3、約800 mm3、約900 mm3、約1000 mm3、約2500 mm3、約7000 mm3、約7500 mm3、約10000 mm3、100〜10000 mm3、100〜1000 mm3、100〜5000 mm3、500〜1000 mm3、500〜2000 mm3、500〜3000 mm3、500〜4000 mm3、500〜5000 mm3、100〜250 mm3、100〜500 mm3、150〜450 mm3、150〜300 mm3、250〜500 mm3、500〜750 mm3、500〜1000 mm3、1000〜2500 mm3、1000〜5000 mm3、1500〜4500 mm3、1500〜3000 mm3、2500〜5000 mm3、5000〜7500 mm3、もしくは5000〜10000 mm3）の総容積を有する、様々なサイズの粒子を含む。
【００４９】
様々な態様において、本明細書に提供される組成物または方法は、死んでいるバチルス・コアグランスの細胞壁の成分（例えば、リポタイコ酸および／またはペプチドグリカン）を含む。特定の態様において、成分は、精製される。
【００５０】
いくつかの態様において、バチルス・コアグランス細菌を死滅させることは、例えば、含水条件（例えば、水溶液中でもしくは蒸気の存在下で）または乾燥条件下で、バチルス・コアグランス細菌を熱に曝露することを含む。特定の態様において、バチルス・コアグランス細菌を死滅させることは、バチルス・コアグランス細菌を圧に曝露することを含む。様々な態様において、バチルス・コアグランス細菌を死滅させることは、バチルス・コアグランス細菌を熱および圧の両方に曝露することを含む。特定の態様において、バチルス・コアグランス細菌を死滅させることは、フレンチプレスを用いてバチルス・コアグランス細菌に圧をかけることを含む。
【００５１】
いくつかの態様において、栄養型バチルス・コアグランス細菌細胞は、凍結解凍サイクルの繰り返し（例えば、少なくとも約2、少なくとも約3、少なくとも約4、少なくとも約5、少なくとも約6、少なくとも約7、少なくとも約8、少なくとも約9、または少なくとも約10回の凍結とその後の解凍）によって死滅させられる。特定の態様において、バチルス・コアグランス細菌（例えば、栄養型細菌および／または芽胞）は、ビーズミル処理によって死滅させられる。様々な態様において、ビーズミル処理することは、ビーズの存在下で細菌をボルテックスすることを含む。いくつかの態様において、ビーズは、約50 μm、約100 μm、約150 μm、約200 μm、約250 μm、約300 μm、約350 μm、約400 μm、約450 μm、約500 μm、約20〜250μm、約100〜300 μm、約50〜500 μm、約50〜750 μm、約500〜1000 μm、または約750〜1000 μmの直径を有する。特定の態様において、ビーズは、低タンパク質結合性ビーズである。様々な態様において、ビーズは、ジルコニウムを含む。いくつかの態様において、ビーズは、ジルコニウムビーズである。特定の態様において、バチルス・コアグランス細菌を死滅させることは、凍結解凍サイクルおよびビーズミル処理を行うことを含む。様々な態様において、バチルス・コアグランスを死滅させることは、ビーズミル処理を行うことを含まない。いくつかの態様において、バチルス・コアグランス細菌を死滅させることは、栄養型細菌を乾燥、例えば凍結乾燥させることを含む。特定の態様において、バチルス・コアグランス細菌を死滅させることは、栄養型細菌を凍結乾燥し、その後に凍結乾燥した細菌を（例えば、ビーズを用いて）ミル処理することを含む。いくつかの態様において、バチルス・コアグランス細菌を死滅させることは、超音波処理を含む。
【００５２】
特定の態様において、バチルス・コアグランス細菌は、不活性化（例えば、死滅）の前に発酵槽で培養される。様々な態様において、バチルス・コアグランス細菌は、培養培地から（例えば、発酵槽またはフラスコから）（例えば、バチルス・コアグランス細菌のペレットを形成するよう）遠心分離される。
【００５３】
様々な態様において、バチルス・コアグランス細菌は、食用組成物の通常の製造プロセスの一部として死滅させられる。例えば、組成物中のすべてまたは実質的にすべて（例えば、約90％、約91％、約92％、約93％、約94％、約95％、約96％、約97％、約98％、約99％、約99.1％、約99.2％、約99.3％、約99.4％、約99.5％、約99.6％、約99.7％、約99.8％、もしくは約99.9％、または少なくとも90％、少なくとも91％、少なくとも92％、少なくとも93％、少なくとも94％、少なくとも95％、少なくとも96％、少なくとも97％、少なくとも98％、少なくとも99％、少なくとも99.1％、少なくとも99.2％、少なくとも99.3％、少なくとも99.4％、少なくとも99.5％、少なくとも99.6％、少なくとも99.7％、少なくとも99.8％、もしくは少なくとも99.9％）のバチルス・コアグランス細菌（例えば、栄養型細胞および／または芽胞）を死滅させる低温殺菌技術が使用され得る。いくつかの態様において、製造プロセスの間に事前調理される食物（例えば、ベイクド組成物、肉製品、例えばハンバーガーパティ、調理済み冷凍製品等）は、組成物中のすべてまたは実質的にすべて（例えば、約90％、約91％、約92％、約93％、約94％、約95％、約96％、約97％、約98％、約99％、約99.1％、約99.2％、約99.3％、約99.4％、約99.5％、約99.6％、約99.7％、約99.8％、もしくは約99.9％、または少なくとも90％、少なくとも91％、少なくとも92％、少なくとも93％、少なくとも94％、少なくとも95％、少なくとも96％、少なくとも97％、少なくとも98％、少なくとも99％、少なくとも99.1％、少なくとも99.2％、少なくとも99.3％、少なくとも99.4％、少なくとも99.5％、少なくとも99.6％、少なくとも99.7％、少なくとも99.8％、もしくは少なくとも99.9％）のバチルス・コアグランス栄養型細胞および／または芽胞を死滅させる温度および／または圧の下で調理される。飲料組成物に関する非限定的な例は、組成物中のすべてまたは実質的にすべて（例えば、約90％、約91％、約92％、約93％、約94％、約95％、約96％、約97％、約98％、約99％、約99.1％、約99.2％、約99.3％、約99.4％、約99.5％、約99.6％、約99.7％、約99.8％、もしくは約99.9％、または少なくとも90％、少なくとも91％、少なくとも92％、少なくとも93％、少なくとも94％、少なくとも95％、少なくとも96％、少なくとも97％、少なくとも98％、少なくとも99％、少なくとも99.1％、少なくとも99.2％、少なくとも99.3％、少なくとも99.4％、少なくとも99.5％、少なくとも99.6％、少なくとも99.7％、少なくとも99.8％、もしくは少なくとも99.9％）のバチルス・コアグランス栄養型細胞および／または芽胞を死滅させるのに十分な時間加熱（例えば、沸騰または浸漬）される飲料組成物を含む。飲料組成物の非限定的な例は、加温飲料組成物、例えば、エールベリー、アニスメルク、アップルサイダー、アジアティコ、アトリー（atoly）、バジグル、バンドレック、ブラックベリーデミタス、ブルーブレーザー、ブイヨン、バター茶、カードル、コーヒー、ホットエッグドリンク、エスプレッソ、ホットジンジャーコーディアル、グレヤナラキア（greyana rakiya）、グロッグ、茶、ホットバターラム、ホットチョコレート、ホットトディ、アイリッシュコーヒー、ホットレモネード、麦芽乳、メイトコシド、マルドワイン、ポセット、ポストゥム、酒、サレップ、ササフラス茶、ス��ーキングビショップ、ホットソーダ、スパイスパンチ（spiced punch）、およびウェダン ジャヘを含む。
【００５４】
いくつかの態様において、不活性化された、生存能力を有さない、または死んでいるバチルス・コアグランス細菌のゲノムは、インタクトである。特定の態様において、不活性化された、生存能力を有さない、または死んでいるバチルス・コアグランス細菌は、例えば、配列決定、ポリメラーゼ連鎖反応、マイクロアレイ分析および／またはプローブにより、バチルス・コアグランスのゲノムDNAを含んでいると判断され得る。様々な態様において、バチルス・コアグランスゲノムの少なくとも1つまたはそれ以上の、10、20、30、40、50、60、70、80、90、100、150、200、250、300、350、400、450、500、750、1000、1500、2000、2500、または3000キロ塩基のフラグメントまたは部分が、不活性化された、生存能力を有さない、または死んでいるバチルス・コアグランス細菌および／または芽胞の中に存在する。
【００５５】
特定の態様において、本明細書に提供される組成物は、食用組成物の外表面に存在する。例えば、組成物は、食用組成物の外表面上のコーティングとして存在し得る。いくつかの態様において、組成物は、食用組成物を完全に覆っている。様々な態様において、食用組成物は、食物組成物またはサプリメント組成物を含む。いくつかの態様において、食用組成物は、食物組成物を含む。特定の態様において、食用組成物は、ヒトまたは非ヒト動物（例えば、爬虫類、両生類、鳥類、または哺乳類）、例えば、霊長類（例えば、類人猿、猿、ゴリラ、オラウータン、チンパンジー、もしくはヒト）または他の動物（例えば、オウム、ニワトリ、ガチョウ、アヒル、イヌ、ネコ、ウサギ、ブタもしくはウマ、または反芻動物、例えば、ウシ、ヒツジ、ヤギ、バッファロー、ヤク、シカ、エルク、キリン、もしくはラクダ）が食するものであり得るおよび／またはそれらに給餌され得る。いくつかの態様において、動物は、偽反芻動物、例えばカバである。反芻動物は、4室の胃を有するのに対して、偽反芻動物は、3室の胃を有する。いくつかの態様において、動物は、パフォーマンス動物、例えば軍犬、警察犬、競走犬、ショー出演犬、軍馬、警察馬、競走馬、ポロ出場馬、またはショー出演馬である。
【００５６】
いくつかの態様において、不活性化された、生存能力を有さない、または死んでいるバチルス・コアグランス細菌は、不活性化された、生存能力を有さない、または死んでいるバチルス・コアグランス細菌の粒子の形態である。特定の態様において、本明細書に提供される組成物は、粒子もしくは粒子群の形態であるまたはそれらを含む（例えば、例えば合計または1グラムあたり、少なくとも約1、少なくとも約5、少なくとも約10、少なくとも約50、少なくとも約100、少なくとも約500、少なくとも約1×103、少なくとも約1×104、少なくとも約1×105、少なくとも約1×106、少なくとも約1×107、少なくとも約1×108、少なくとも約1×109、少なくとも約1×1010、少なくとも約1×1011、少なくとも約1×1012、少なくとも約1×1013、少なくとも約1×1014、少なくとも約1×1015、少なくとも約1×1016、少なくとも約1×1017、少なくとも約1×1018、少なくとも約1×1019、もしくは少なくとも約1×1020個の粒子）。様々な態様において、粒子の少なくとも80％、少なくとも85％、少なくとも90％、少なくとも95％、少なくとも96％、少なくとも97％、少なくとも98％、少なくとも99％、少なくとも99.1％、少なくとも99.2％、少なくとも99.3％、少なくとも99.4％、少なくとも99.5％、少なくとも99.6％、少なくとも99.7％、少なくとも99.8％、少なくとも99.9％、または少なくとも100％は、25メッシュ（すなわち、707μmの名目開口部を有するふるいを通過するのに十分小さい）、30メッシュ（すなわち、595μmの名目開口部を有するふるいを通過するのに十分小さい）、35メッシュ（すなわち、500μmの名目開口部を有するふるいを通過するのに十分小さい）、40メッシュ（すなわち、420μmの名目開口部を有するふるいを通過するのに十分小さい）、45メッシュ（すなわち、354μmの名目開口部を有するふるいを通過するのに十分小さい）、または50メッシュ（すなわち、297μmの名目開口部を有するふるいを通過するのに十分小さい）であり、粒子の少なくとも70％、少なくとも75％、少なくとも80％、少なくとも85％、少なくとも90％、少なくとも95％、少なくとも96％、少なくとも97％、少なくとも98％、少なくとも99％、少なくとも99.1％、少なくとも99.2％、少なくとも99.3％、少なくとも99.4％、少なくとも99.5％、少なくとも99.6％、少なくとも99.7％、少なくとも99.8％、少なくとも99.9％、または少なくとも100％は、70メッシュ（すなわち、210μmの名目開口部を有するふるいを通過するのに十分小さい）、80メッシュ（すなわち、177μmの名目開口部を有するふるいを通過するのに十分小さい）、または100メッシュ（すなわち、149μmの名目開口部を有するふるいを通過するのに十分小さい）である。いくつかの態様において、粒子の少なくとも80％、少なくとも85％、少なくとも90％、少なくとも95％、少なくとも96％、少なくとも97％、少なくとも98％、少なくとも99％、少なくとも99.1％、少なくとも99.2％、少なくとも99.3％、少なくとも99.4％、少なくとも99.5％、少なくとも99.6％、少なくとも99.7％、少なくとも99.8％、少なくとも99.9％、または少なくとも100％は、約707μm、約595μm、約500μm、約420μm、約354μm、または約297μmより小さい、少なくとも1つの寸法を有し、粒子の少なくとも70％、少なくとも75％、少なくとも80％、少なくとも85％、少なくとも90％、少なくとも95％、少なくとも96％、少なくとも97％、少な��とも98％、少なくとも99％、少なくとも99.1％、少なくとも99.2％、少なくとも99.3％、少なくとも99.4％、少なくとも99.5％、少なくとも99.6％、少なくとも99.7％、少なくとも99.8％、少なくとも99.9％、または少なくとも100％は、約210μm、約177μm、または約149μmより小さい、少なくとも1つの寸法を有する。特定の態様において、粒子の少なくとも80％、少なくとも85％、少なくとも90％、少なくとも95％、少なくとも96％、少なくとも97％、少なくとも98％、少なくとも99％、少なくとも99.1％、少なくとも99.2％、少なくとも99.3％、少なくとも99.4％、少なくとも99.5％、少なくとも99.6％、少なくとも99.7％、少なくとも99.8％、少なくとも99.9％、または少なくとも100％は、約707μm、約595μm、約500μm、約420μm、約354μm、または約297μmより小さい、少なくとも2つの寸法を有し、粒子の少なくとも70％、少なくとも75％、少なくとも80％、少なくとも85％、少なくとも90％、少なくとも95％、少なくとも96％、少なくとも97％、少なくとも98％、少なくとも99％、少なくとも99.1％、少なくとも99.2％、少なくとも99.3％、少なくとも99.4％、少なくとも99.5％、少なくとも99.6％、少なくとも99.7％、少なくとも99.8％、少なくとも99.9％、または少なくとも100％は、約210μm、約177μm、または約149μmより小さい、少なくとも2つの寸法を有する。様々な態様において、粒子の少なくとも80％、少なくとも85％、少なくとも90％、少なくとも95％、少なくとも96％、少なくとも97％、少なくとも98％、少なくとも99％、少なくとも99.1％、少なくとも99.2％、少なくとも99.3％、少なくとも99.4％、少なくとも99.5％、少なくとも99.6％、少なくとも99.7％、少なくとも99.8％、少なくとも99.9％、または少なくとも100％は、約707μm、約595μm、約500μm、約420μm、約354μm、または約297μmを超える寸法を有さず、粒子の少なくとも70％、少なくとも75％、少なくとも80％、少なくとも85％、少なくとも90％、少なくとも95％、少なくとも96％、少なくとも97％、少なくとも98％、少なくとも99％、少なくとも99.1％、少なくとも99.2％、少なくとも99.3％、少なくとも99.4％、少なくとも99.5％、少なくとも99.6％、少なくとも99.7％、少なくとも99.8％、少なくとも99.9％、または少なくとも100％は、約210μm、約177μm、または約149μmを超える寸法を有さない。
【００５７】
特定の態様において、粒子は、組成物（例えば、食用組成物）内に存在する。様々な態様において、粒子は、組成物（例えば、食用組成物）の外表面に存在する。いくつかの態様において、粒子は、組成物（例えば、食用組成物）内および外表面に存在する。
【００５８】
「粒子」という用語は、本明細書で使用される場合、独立した物体を表す。粒子は不定形であり得、または円形、楕円形、正方形等を含む様々な形態をとり得る。粒子の非限定的な例は、結晶、粒、ビーズ、不定形体および球体を含む。本特許発明の対象の特定の態様は、例えば、約1〜5 μｍ、約1〜10 μｍ、約5〜50 μｍ、約5〜100 μｍ、約5〜25 μｍ、約10〜100 μｍ、もしくは約1〜1000 μｍ（例えば、約1 μm、約2.5 μm、約5 μm、約7.5 μm、約10 μm、約15 μm、約20 μm、約25 μm、約30 μm、約35 μm、約40 μm、約45 μm、約50 μm、約75 μm、約100 μm、約150 μm、約200 μm、約250 μm、約300 μm、約350 μm、約400 μm、約450 μm、約500 μm、約600 μm、約700 μm、約800 μm、約900 μm、約1000 μm、10〜1000 μm、10〜100 μm、10〜500 μm、50〜100 μm、50〜200 μm、50〜300 μm、50〜400 μm、50〜500 μm、100〜250 μm、100〜500 μm、150〜450 μm、150〜300 μm、250〜500 μm、500〜750 μm、もしくは500〜1000 μm）のおおよその最大幅もしくは直径を含み；約1〜5 μｍ、約1〜10 μｍ、約5〜50 μｍ、約5〜100 μｍ、約5〜25 μｍ、約10〜100 μｍ、もしくは約1〜1000 μｍ（例えば、約1 μm、約2.5 μm、約5 μm、約7.5 μm、約10 μm、約15 μm、約20 μm、約25 μm、約30 μm、約35 μm、約40 μm、約45 μm、約50 μm、約75 μm、約100 μm、約150 μm、約200 μm、約250 μm、約300 μm、約350 μm、約400 μm、約450 μm、約500 μm、約600 μm、約700 μm、約800 μm、約900 μm、約1000 μm、10〜1000 μm、10〜100 μm、10〜500 μm、50〜100 μm、50〜200 μm、50〜300 μm、50〜400 μm、50〜500 μm、100〜250 μm、100〜500 μm、150〜450 μm、150〜300 μm、250〜500 μm、500〜750 μm、もしくは500〜1000 μm）の平均径を含み；かつ／または約10〜10000 mm3（例えば、約10 mm3、約25 mm3、約50 mm3、約75 mm3、約100 mm3、約150 mm3、約200 mm3、約250 mm3、約300 mm3、約350 mm3、約400 mm3、約450 mm3、約500 mm3、約600 mm3、約700 mm3、約800 mm3、約900 mm3、約1000 mm3、約2500 mm3、約7000 mm3、約7500 mm3、約10000 mm3、100〜10000 mm3、100〜1000 mm3、100〜5000 mm3、500〜1000 mm3、500〜2000 mm3、500〜3000 mm3、500〜4000 mm3、500〜5000 mm3、100〜250 mm3、100〜500 mm3、150〜450 mm3、150〜300 mm3、250〜500 mm3、500〜750 mm3、500〜1000 mm3、1000〜2500 mm3、1000〜5000 mm3、1500〜4500 mm3、1500〜3000 mm3、2500〜5000 mm3、5000〜7500 mm3、もしくは5000〜10000 mm3）の総容積を有する、様々なサイズの粒子を含む。いくつかの態様において、粒子は、少なくとも約1、少なくとも約5、少なくとも約10、少なくとも約50、少なくとも約100、少なくとも約500、少なくとも約1×103、少なくとも約1×104、少なくとも約1×105、少なくとも約1×106、少なくとも約1×107、少なくとも約1×108、少なくとも約1×109、少なくとも約1×1010、少なくとも約1×1011、少なくとも約1×1012、少なくとも約1×1013、少なくとも約1×1014、少なくとも約1×1015、少なくとも約1×1016、少なくとも約1×1017、少なくとも約1×1018、少なくとも約1×1019、もしくは少なくとも約1×1020個の不活性化された、生存能力を有さない、もしくは死んでいるバチルス・コアグランス栄養型細菌および／もしくは芽胞、または約1×103〜約1×105、約1×103〜約1×106、約1×103〜約1×107、約1×103〜約1×108、約1×103〜約1×109、約1×103〜約1×1010、約1×103〜約1×1011、約1×103〜約1×1012、約1×103〜約1×1013、約1×103〜約1×1014、1×106〜約1×105、約1×106〜約1×10６、もしくは約1×106〜約1×107、約1×106〜約1×108、約1×106〜約1×109、約1×106〜約1×1010、約1×106〜約1×1011、約1×106〜約1×1012、約1×106〜約1×1013、約1×106〜約1×1014、1×103〜1×1020、1×103〜1×109、1×103〜1×106、1×106〜1×109、1×106〜1×1020、1×106〜1×1015、1×106〜1×1012、1×108〜1×1017、1×1010〜1×1020、1×103〜1×1010、1×105〜1×1010、1×105〜1×1015、1×1010〜1×1015、1×1014〜1×1016個の、または、約5、約10、約50、約100、約500、約1×103、約1×104、約1×105、約1×106、約1×107、約1×108、約1×109、約1×1010、約1×1011、約1×1012、約1×1013、約1×1014、約1×1015、約1×1016、約1×1017、約1×1018、約1×1019、もしくは約1×1020個の、もしくは少なくとも5、少なくとも10、少なくとも50、少なくとも100、少なくとも500、少なくとも1×103、少なくとも1×104、少なくとも1×105、少なくとも1×106、少なくとも1×107、少なくとも1×108、少なくとも1×109、少なくとも1×1010、少なくとも1×1011、少なくとも1×1012、少なくとも1×1013、少なくとも1×1014、少なくとも1×1015、少なくとも1×1016、少なくとも1×1017、少なくとも1×1018、少なくとも1×1019、もしくは少なくとも1×1020個の、もしくは5、10、50、100、500、1×103、1×104、1×105、1×106、1×107、1×108、1×109、1×1010、1×1011、1×1012、1×1013、1×1014、1×1015、1×1016、1×1017、1×1018、1×1019、もしくは1×1020個未満の、不活性化された、生存能力を有さない、もしくは死んでいるバチルス・コアグランス栄養型細菌および／もしくは芽胞を含む。
【００５９】
特定の態様において、組成物は、少なくとも約1、少なくとも約5、少なくとも約10、少なくとも約50、少なくとも約100、少なくとも約500、少なくとも約1×103、少なくとも約1×104、少なくとも約1×105、少なくとも約1×106、少なくとも約1×107、少なくとも約1×108、少なくとも約1×109、少なくとも約1×1010、少なくとも約1×1011、少なくとも約1×1012、少なくとも約1×1013、少なくとも約1×1014、少なくとも約1×1015、少なくとも約1×1016、少なくとも約1×1017、少なくとも約1×1018、少なくとも約1×1019、もしくは少なくとも約1×1020個の不活性化された、生存能力を有さない、もしくは死んでいるバチルス・コアグランス栄養型細菌および／もしくは芽胞、または約1×103〜約1×105、約1×103〜約1×106、約1×103〜約1×107、約1×103〜約1×108、約1×103〜約1×109、約1×103〜約1×1010、約1×103〜約1×1011、約1×103〜約1×1012、約1×103〜約1×1013、約1×103〜約1×1014、1×106〜約1×105、約1×106〜約1×10６、もしくは約1×106〜約1×107、約1×106〜約1×108、約1×106〜約1×109、約1×106〜約1×1010、約1×106〜約1×1011、約1×106〜約1×1012、約1×106〜約1×1013、約1×106〜約1×1014、1×103〜1×1020、1×103〜1×109、1×103〜1×106、1×106〜1×109、1×106〜1×1020、1×106〜1×1015、1×106〜1×1012、1×108〜1×1017、1×1010〜1×1020、1×103〜1×1010、1×105〜1×1010、1×105〜1×1015、1×1010〜1×1015、1×1014〜1×1016個の、または、約5、約10、約50、約100、約500、約1×103、約1×104、約1×105、約1×106、約1×107、約1×108、約1×109、約1×1010、約1×1011、約1×1012、約1×1013、約1×1014、約1×1015、約1×1016、約1×1017、約1×1018、約1×1019、もしくは約1×1020個の、もしくは少なくとも5、少なくとも10、少なくとも50、少なくとも100、少なくとも500、少なくとも1×103、少なくとも1×104、少なくとも1×105、少なくとも1×106、少なくとも1×107、少なくとも1×108、少なくとも1×109、少なくとも1×1010、少なくとも1×1011、少なくとも1×1012、少なくとも1×1013、少なくとも1×1014、少なくとも1×1015、少なくとも1×1016、少なくとも1×1017、少なくとも1×1018、少なくとも1×1019、もしくは少なくとも1×1020個の、もしくは5、10、50、100、500、1×103、1×104、1×105、1×106、1×107、1×108、1×109、1×1010、1×1011、1×1012、1×1013、1×1014、1×1015、1×1016、1×1017、1×1018、1×1019、もしくは1×1020個未満の、不活性化された、生存能力を有さない、もしくは死んでいるバチルス・コアグランス栄養型細菌および／もしくは芽胞を含む。様々な態様において、組成物中の不活性化された、生存能力を有さない、または死んでいるバチルス・コアグランス栄養型細菌および／または芽胞の数は、1グラムあたり約1×105〜1×107個、または1グラムあたり約1×105、約1.5×105、約2×105、約2.5×105、約3×105、約3.5×105、約4×105、約4.5×105、約5×105、約5.5×105、約6×105、約6.5×105、約7×105、約7.5×105、約8×105、約8.5×105、約9×105、約9.5×105、約1×106、約1.5×106、約2×106、約2.5×106、約3×106、約3.5×106、約4×106、約4.5×106、約5×106、約5.5×106、約6×106、約6.5×106、約7×106、約7.5×106、約8×106、約8.5×106、約9×106、約9.5×106、もしくは約1×107個の粒子である。
【００６０】
いくつかの態様において、不活性化された、生存能力を有さない、または死んでいるバチルス・コアグランス細菌（例えば、不活性化された、生存能力を有さない、または死んでいるバチルス・コアグランス細菌の粒子）は、その凝集を軽減するよう処理される。特定の態様において、不活性化された、生存能力を有さない、または死んでいる細菌の処理は、不活性化された、生存能力を有さない、または死んでいるバチルス・コアグランス細菌をふるいまたはフィルターに通すことを含む。様々な態様において、不活性化された、生存能力を有さない、または死んでいるバチルス・コアグランス細菌の処理は、不活性化された、生存能力を有さない、または死んでいるバチルス・コアグランス細菌を界面活性剤または乳化剤と混合することを含む。いくつかの態様において、不活性化された、生存能力を有さない、または死んでいるバチルス・コアグランス細菌の処理は、不活性化された、生存能力を有さない、または死んでいるバチルス・コアグランス細菌をポリソルベート20および／またはポリソルベート80と混合することを含む。特定の態様において、不活性化された、生存能力を有さない、または死んでいるバチルス・コアグランス細菌の処理は、不活性化された、生存能力を有さない、または死んでいるバチルス・コアグランス細菌をマルトデキストリン、イヌリン、イノシトール、トレハロース、微結晶セルロース（MCC）、乳酸カルシウム、ステアリン酸マグネシウム、フラクトオリゴ糖（FOS）、またはグルコオリゴ糖（GOS）と混合することを含む。
【００６１】
様々な態様において、不活性化された、生存能力を有さない、または死んでいるバチルス・コアグランス細菌（例えば、単独またはコーティング組成物の一部として）は、物理的プロセスによって外表面（例えば、1つまたは複数の表面、例えば上表面または全表面に対するコーティングとして）適用されるまたは適用されている。物理的プロセスの非限定的な例は、噴霧コーティング、スプレードライコーティング、スピンディスクコーティング（spinning disk coating）、押出コーティング、流動床コーティング、パンコーティング（pan coating）、滴下、乳濁コーティング、懸濁コーティングおよび遠心押出コーティングを含む。
【００６２】
本発明の方法における不活性化されたプロバイオティクスの投与形式は、有効量が投与される限り、重要ではない。本明細書で使用される場合、「有効」は、不活性化された、生存能力を有さない、もしくは死んでいるバチルス・コアグランス細菌（または不活性化された、生存能力を有さない、もしくは死んでいるバチルス・コアグランス細菌を含む粒子）の量を参照するとき、本開示の様式で使用されたときに合理的な利益／リスク比相応に、過度の有害な副作用（例えば、毒性、刺激またはアレルギー反応）なしに所望の応答をもたらすのに十分な不活性化された、生存能力を有さない、または死んでいるバチルス・コアグランス細菌（または粒子）の量を表す。
【００６３】
いくつかの態様において、不活性化された、生存能力を有さない、もしくは死んでいるバチルス・コアグランス細菌（または不活性化された、生存能力を有さない、もしくは死んでいるバチルス・コアグランス細菌を含む粒子）は、錠剤、ピル、カプセル封入物、カプレット、ジェルキャップ、カプセル、油滴、またはサッシェを通じて対象に投与される。特定の態様において、不活性化された、生存能力を有さない、または死んでいるバチルス・コアグランス細菌または粒子は、糖、脂肪、または多糖内にカプセル封入される。様々な態様において、不活性化された、生存能力を有さない、または死んでいるバチルス・コアグランス細菌または粒子は、食品または飲料品に添加され消費される。いくつかの態様において、食品または飲料品は、子供用栄養製品、例えば、フォローアップ用調合乳、グローアップミルク、飲料、ミルク、ヨーグルト、フルーツジュース、フルーツベースの飲み物、チュアブル錠、クッキー、クラッカー、または粉ミルクである。特定の態様において、製品は、幼児用栄養製品、例えば幼児用フォーミュラまたは母乳強化剤（human milk fortifier）である。
【００６４】
いくつかの態様において、食用組成物は、ハードスイート、ファッジ、トフィー、リコリッシュ、チョコレート、ゼリーキャンディ、マシュマロ、およびマジパンを含む。様々な態様において、食用組成物は、チョコレートを含む。例えば、食用組成物は、チョコレートおよび少なくとも1つの他の成分を含むキャンディバーを含み得る。
【００６５】
様々な実施態様は、不活性化された、生存能力を有さない、または死んでいるバチルス・コアグランス細菌または粒子をその外表面上に含む食用組成物を提供する。あるいはまたは加えて、不活性化された、生存能力を有さない、または死んでいるバチルス・コアグランス細菌は、食用組成物の内部に存在し得る。例えば、不活性化された、生存能力を有さない、または死んでいるバチルス・コアグランス細菌または粒子は、食用組成物の外表面上および／または内部に存在し得る。
【００６６】
スポーツ栄養組成物も提供される。いくつかの態様においてスポーツ栄養組成物は、乾燥重量比でタンパク質を少なくとも約10％、少なくとも約20％、少なくとも約30％、少なくとも約40％、少なくとも約50％、または少なくとも約60％含む。スポーツ栄養組成物の非限定的な例は、少なくとも約5、少なくとも約10、少なくとも約15、少なくとも約20、少なくとも約25、少なくとも約30、少なくとも約36、少なくとも約40、少なくとも約45、少なくとも約50、少なくとも約55、少なくとも約60、少なくとも約65、少なくとも約70、少なくとも約75、少なくとも約80、少なくとも約85、少なくとも約90、少なくとも約95、もしくは少なくとも約100グラムの炭水化物および／または少なくとも約5、少なくとも約10、少なくとも約15、少なくとも約20、少なくとも約25、少なくとも約30、少なくとも約36、少なくとも約40、少なくとも約45、少なくとも約50、少なくとも約55、少なくとも約60、少なくとも約65、少なくとも約70、少なくとも約75、少なくとも約80、少なくとも約85、少なくとも約90、少なくとも約95、もしくは少なくとも約100グラムのタンパク質を含む。スポーツ栄養組成物の非限定的な例は、例えば、シェイク、運動前または運動後飲料で使用するタンパク質粉末を含む。いくつかの態様において、スポーツ栄養組成物は、ビタミンまたはミネラルを含む。スポーツ栄養組成物の非限定的な例は、スポーツ栄養バー、例えばエネルギーバー、プロテインバー、持久力増強バー、食事代用バー、運動前バー、および運動後バーを含む。そのようなスポーツ栄養組成物は、例えば、乾燥させたまたは乾燥した穀粒（例えば、大麦、オート麦、米、ライ麦、スペルト、テフ、ライ小麦、小麦、ソルガム、キビ、トウモロコシ、および／もしくはフォニオ）、ナッツ（例えば、アーモンド、ブラジルナッツ、ククイナッツ、カシュー、ヘーゼルナッツ、マカダミアナッツ、クリ、ピーカン、ピーナツ、モンゴンゴ、松の実、ピスタチオ、クルミおよび／もしくはイェヘブナッツ）、ドライフルーツ、蜂蜜、動物タンパク質、乳清タンパク質、植物タンパク質、ビタミン、ミネラル、糖、繊維、ならびに／またはデンプンを含む。
【００６７】
いくつかの態様において、食用組成物は、飲料である。飲料の非限定的な例は、茶、緑茶、紅茶、烏龍茶、黄茶、白茶、ハーブティー、ローズヒップティー、カモミールティー、アマチャヅル茶、ジンジャーティー、ペパーミントティー、フルーツティー、ジャスミンティー、ハイビスカスティー、レモングラスティー、朝鮮人参茶、ルイボス茶、コーヒー、ジュース、アップルジュース、ココナッツウォーター、クランベリージュース、グレープジュース、グレープフルーツジュース、キーウィフルーツジュース、レモネード、レモンジュース、ライムエード、ライムジュース、リモナナ、メロンジュース、モーラマスト（mora must）、オレンジジュース、パパイヤジュース、パイナップルジュース、ザクロジュース、プルーンジュース、イチゴジュース、トマトジュース、ビートジュース、ニンジンジュース、セロリジュース、キュウリジュース、タンポポ葉ジュース、ホウレンソウジュース、カブジュース、ソーダ、オレンジソーダ、コーラソーダ、ルートビアソーダ、クリームソーダ、水、ミネラルウォーター、セルツァーウォーター、またはトニックウォーターを含む。
【００６８】
特定の態様において、食用組成物は、アルコール飲料である。様々な態様において、アルコール飲料は、ビール、ワイン、またはスピリットである。いくつかの態様において、アルコール飲料は、容積で少なくとも約1、少なくとも約2、少なくとも約3、少なくとも約4、少なくとも約5、少なくとも約10、少なくとも約15、少なくとも約20、少なくとも約25、少なくとも約30、少なくとも約35、少なくとも約40、少なくとも約45、少なくとも約50、少なくとも約55、少なくとも約60、少なくとも約65、少なくとも約70、少なくとも約75、少なくとも約80、少なくとも約85、少なくとも約90、または少なくとも約95％エタノールである。特定の態様において、エタノールのレベルは、それに添加されるすべての栄養型バチルス・コアグランス栄養型細菌および／または芽胞を死滅させるのに効果的なものである。アルコール飲料の非限定的な例は、ビール、エール、バーレーワイン、ウィスキー、焼酎、ウォッカ、ブルム、トゥンバ、ボザ、ブルム、黄酒、稠酒、ルー・ガオ（ruou gao）、酒、ソンティ、マッコリ、、チュンジュ（chungju）、トゥアック、スウォン、クワス、ブルクトゥ、ピトー、メリサ、ビリビリ（bilibili）、マオタイ、高梁酒、ヴァイツェンコルン、ソジュ、ホリルカ（horilka）、サイダー、アップルジャック、カルヴァドス、ジャブコバカ（jabukovaca）、カジジェヴァカ（kajsijevaca）、カイシエヴァ・ラキア（kaisieva rakia）、パリンカ、フェニ、マジムノヴァカ（majmunovaca）、チュォイホット、カイム、ウルグワグワ（urgwagwa）、ムベゲ、カシキシ（kasikisi）、アラック、キルシュ、ジンジャエール、ジンジャービール、ジンジャーワイン、枸杞酒、赤ワイン、白ワイン（white rine）、ロゼ、ロゾバカ（lozovaca）、ビンジャク（vinjak）、ブランデー、コニャック、ベルモット、アルマニャック、ブラントヴァイン、ピスコ、ラキヤ、シンガニ、アラック、トルコパリンカ、ジン、ジュネヴァ、ボロビチュカ、オギ、ポアール、ペアサイダー、プラムワイン、ビルジャモカ（viljamovka）、ペアーブランデー、オー・ド・ヴィー、パリンカ、クルショヴァラキヤ（krushova rakia）、スリヴォヴィッツ（sljivovica）、スリヴォヴィッツ（slivovitz）、ツイカ、梅酒、パリンカ、スリヴォヴァラキヤ、ダンジェヴァカ（dunjevaca）、ポマースワイン、グラッパ、マール、オルホ、テキーラ、メスカル、ライチラ、ブルケ、カイム、チチャ、カシリ、ニハマンチ（nihamanchi）、ミード、サンブーカ、およびアブサンを含む。
【００６９】
様々な態様において、食用組成物は、発酵食品または発酵飲料である。発酵食品および発酵飲料の非限定的な例は、アマシ（amasi）、甘酒、アッパム、アッチャラー、アイラン、バゴーン、バゴーンモナモン、バゴーンナス（bagoong terong）、バインクオン、ビール、ブランド、ボザ、発酵パン（leavened bread）、ブルム、ブロンマンガ、バターミルク、カルピス、チャス（chass）、チーズ、例えばシャンクリッシュ、チョングッチャン、チャクリピタ、発酵タラ肝油、クレームフレーシュ、クルティド（curtido）、ドクラ、テンジャン、ドゥーグ、ドーサ、豆板醤、豆チ、エンデューリピタ、腐乳、発酵豆ペースト、発酵魚、発酵乳製品、フィールミョルク、ガンジャン、ガリ、ケジャン、コチュジャン、グンドルック、ハカール、ホンオフェ、イドゥリ、イグナク（igunaq）、インゲラ、イル（iru）、チョッカル、ジョギジョット、カプスタキショナドゥショナ（kapusta kiszona duszona）、鰹節、カイマク、ケフィア、ケンキー（kenkey）、カノムジーン、キムチ、キビヤック、コンブチャ、クミス、くさや、クジパニヤラム、クワス、ラッシー、レーベン、ルフ（lufu）、マゲウ、マッサ・デ・ピメンタォン、梅干菜、味噌、ミクシアン、モーニインツジン（mohnyin tjin）、ムリ（murri）、ムルシク、ミョルチジョッ、ナタデココ、納豆、ネムチュア、ヌガピ（ngapi）、オギ（ogi）、オギリ、オンコム、パルアッパム（palappam）、ペサハアッパム、プイエム、ピクルス、ポドピヴェック、ポイ、ポンイエジー、プルケ、プート、ラクフィスク、ルオウ・ネプ、リャジェンカ、セウジョッ、サラミ、ザワークラウト、細菌および酵母の共生培養物、シャルガム、塩辛、発酵シュリンプペースト（fermented shimp paste）、シンキ（sinki）、スキール、スマンタナ（smantana）、スメタナ、ソム・ムー（som moo）、酢キャベツ、サワークリーム、サワーミルク、ソワンス（sowans）、醤油、サムジャン、臭豆腐、ストレインヨーグルト（strained yogurt）、酸菜、スンバラ、シュールストレミング、タパイ、タルハナ、テンペ、テスギーノ（tesguino）、甜麺醤、甜麺醤、ティビコス、漬物、トゥオン、トゥンサイ（tung tsai）、ビリ（villi）、酢、ワイン、白糖スポンジケーキ、ウスターソース、ヤクルト、発酵インゲンペースト、ヨーグルト、ザーサイ、およびジンシカ（Zincica）を含む。
【００７０】
いくつかの態様において、食用組成物は、スープを含む。特定の態様において、食用組成物は、穀粒を含む。様々な態様において、食用組成物は、穀粒ベースの組成物を含む。いくつかの態様において、穀粒ベースの組成物は、パスタ、オートミール、グリッツまたはシリアルを含む。パスタの非限定的な例は、管状パスタ、ストレート丸棒状パスタ、リボンパスタ、ミクロパスタ、具材詰めパスタ、不規則形状パスタ、スパゲティ（硬く細い円筒状）、マカロニ（管状または中空円筒状）、フジッリ（らせん形状）、ラザニア（平板状）、タリアテッレ（平らなリボン状）、ヴェルミチェッリ（細いスパゲティ）およびラビオリ（詰め物パスタ）、ペンネ（円筒形状のパスタ）、ロッチーニ（コルクスクリュー形状のパスタ）、リガトーニ（管形状のパスタ）、麺およびシュペッツレを含む。特定の態様において、パスタは乾燥されたものである。様々な態様において、パスタは生である。いくつかの態様において、パスタは、エッグパスタを含む。いくつかの態様において、パスタは卵を含まない。
【００７１】
特定の態様において、食用組成物は、ベイクド組成物を含む。様々な態様において、ベイクド組成物は、パン、ケーキ、マフィン、パイ、タルト、ペストリー、フードバー、グラノーラバー、キッシュ、クッキー、ピザ、ベイクドコーンチップ、ベイクドトルティーヤチップ、ベイクドポテトチップ、ベイクドクラッカー、およびコンパニオンアニマル用の焼き菓子を含む。
【００７２】
いくつかの態様において、組成物は酪農組成物を含む。特定の態様において、組成物は乳様組成物を含む。
【００７３】
様々な態様において、不活性化された、生存能力を有さない、または死んでいるバチルス・コアグランスまたは粒子は、経口投与される。いくつかの態様において、不活性化された、生存能力を有さない、または死んでいるバチルス・コアグランスまたは粒子は、経鼻、局所（例えば、粘膜および／もしくは皮膚に）、腹腔内、または静脈内投与される。
【００７４】
特定の態様において、組成物は、錠剤、カプセル、ロゼンジ、水溶液、シロップ、懸濁物、乳化物、粉末、ジェル、ローション、またはクリームとして配合される。
【００７５】
いくつかの態様において、組成物は、サプリメント組成物である。サプリメント組成物は、ダイエタリーサプリメントが添加された組成物である。本明細書で使用される場合、「ダイエタリーサプリメント」という用語は、United States Dietary Supplement Health and Education Act of 1994（DESHEA）で定義されるものである。様々な態様において、ダイエタリーサプリメントは、以下の食事成分の1つまたは複数を有するまたは含む食事を補充することが意図されている製品（タバコ以外）である：（A) ビタミン；（B) ミネラル：（C) ハーブまたは他の植物；（D) アミノ酸；（E) 総食事摂取量を増加させることによって食事を補充するために人によって使用されるダイエタリーサプリメント；または（F) （A)、（B)、（C)、（D) 、もしくは（E)に記載される任意の成分の濃縮物、代謝産物、構成成分、抽出物、もしくは組み合わせ。
【００７６】
本特許発明の対象の組成物、コーティング、粒子、および食用組成物において不活性化された、生存能力を有さない、または死んでいるバチルス・コアグランス細菌を生成するために、バチルス・コアグランスの様々な菌株が使用され得る。例えば、バチルス・コアグランスは、バチルス・コアグランスHammer株アクセッション番号ATCC 31284、バチルス・コアグランスHammer株アクセッション番号ATCC31284由来の菌株、GBI-30株（ATCC表示番号PTA-6086)、GBI-20株（ATCC表示番号PTA-6085）、またはGBI-40株（ATCC表示番号PTA-6087）の1つまたは複数を含み得る。
【００７７】
本特許発明の対象は、不活性化された、生存能力を有さない、または死んでいるバチルス・コアグランス細菌を含む組成物（例えば、不活性化された、生存能力を有さない、または死んでいるバチルス・コアグランス細菌を含む粒子およびそのような粒子を含む組成物）を提供する。いくつかの態様において、不活性化された、生存能力を有さない、もしくは死んでいるバチルス・コアグランス細菌またはそのような細菌を含む粒子は、例えば食物組成物に添加するのに適したドライミックスの形態であり得る。特定の態様において、ドライミックスは、重量比（例えば乾燥重量比）で1％〜50％が、不活性化された、生存能力を有さない、または死んでいるバチルス・コアグランス細菌、例えば、約5％、約10％、約15％、約20％、約25％、約35％、約45％、または約50％が、不活性化された、生存能力を有さない、または死んでいるバチルス・コアグランス細菌であり得る。様々な態様において、ドライミックスは、重量比で約15％が不活性化された、生存能力を有さない、または死んでいるバチルス・コアグランス細菌である。例えば、約100ポンドのドライミックスは、約15ポンドの不活性化された、生存能力を有さない、または死んでいるバチルス・コアグランス細菌を含み得る。
【００７８】
バチルス・コアグランスHammer株は、非病原性であり、一般に、米国食品医薬品局（FDA）および米国農務省（USDA）によって、ならびに当業者によって、ヒト栄養摂取における使用（すなわち、GRAS分類）に関して安全であるとみなされている。さらに、本明細書に記載されるバチルス・コアグランスHammer株は、ヒトの体温またはそれ以下で発芽し、そのためそれらはプロバイオティクスとして有用である。Hammer群以外の多くのバチルス・コアグランス株は、ほとんどが工業的な用途を有し、栄養的な利益をほとんどかつ全く有さず、安全であると評価されていない環境混入物を含む。さらに、バチルス・コアグランスの多くの他の非Hammer株は、ヒトの体温を超える温度で最も成長し、したがってヒト体内では効率的に発芽しない。そのような菌株は、ヒトの摂取のためのプロバイオティクスとしての適性が低いまたは適さない。
【００７９】
特に定義されていない限り、本明細書で使用されるすべての技術および化学用語は、（例えば、細胞培養、分子遺伝学および生化学の）当業者によって一般に理解されているのと同じ意味を有するものとみなされるべきである。
【００８０】
本明細書中の記載においておよび特許請求の範囲において、「〜の少なくとも1つ」または「〜の1つまたは複数」等のフレーズが、要素または特徴の一群の後に用いられていることがある。「および／または」という用語もまた、2つまたはそれ以上の要素または特徴の一群で用いられ得る。それが使用されている文脈によって暗示的または明示的にそうでないと否定されない限り、そのようなフレーズは、列挙されている要素もしくは特徴のいずれかを個別に、または言及されている要素もしくは特徴のいずれかとその他の言及されている要素もしくは特徴のいずれかとの組み合わせを意味することが意図されている。例えば、「AおよびBの少なくとも1つ」、「AおよびBの1つまたは複数」、ならびに「Aおよび／またはB」というフレーズは各々、「A単独、B単独、またはAおよびBの両方」を意味することが意図されている。3つまたはそれ以上の項目を含む一群についても同様の解釈が意図されている。例えば、「A、B、およびCの少なくとも1つ」、「A、B、およびCの1つまたはそれ以上」、ならびに「A、B、および／またはC」というフレーズは各々、「A単独、B単独、C単独、AおよびBの両方、AおよびCの両方、BおよびCの両方、またはAおよびBおよびCのすべて」を意味することが意図されている。さらに、本明細書および特許請求の範囲における「〜に基づく」という用語の使用は、言及されていない特徴または要素も許容されるよう、「〜に少なくとも部分的に基づく」を意味することが意図されている。
【００８１】
本明細書で使用される場合、数値または範囲の文脈における「約」という用語は、文脈がさらに限定された範囲を要求していない限り、言及されているまたは要求されている数値または範囲の±10％を意味する。
【００８２】
あるパラメータ範囲が提供される場合、その範囲内のすべての整数およびそれらの10分の1の値もまた、本発明によって提供される。例えば、「0.2〜5 mg」は、最大5.0 mgであり5.0 mgを含む、0.2 mg、0.3 mg、0.4 mg、0.5 mg、0.6 mg等の開示である。
【００８３】
「〜を含む（including）」、「〜を含む（containing）」、または「〜を特徴とする」と同義である、「〜を含む（comprising）」という移行語は、包括的またはオープンエンドであり、追加の、言及されていない要素、方法の工程または成分を排除しない。これに対して、「〜からなる」という移行句は、その請求項において指定されていないあらゆる要素、工程または成分を排除する。「〜から本質的になる」という移行句は、請求の範囲を、指定されている物質または工程「および」請求される発明の基本的かつ新規の特徴に実質的に影響しないそれらに限定する。方法および組成物が「〜を含む」という移行語を用いて開示されている場合、それは、「〜からなる」および「〜から本質的になる」という移行語を用いた対応する方法および組成物も開示されていることが理解されるであろう。
【００８４】
「配列同一性の比率」は、2つの最適にアラインメントされた配列を比較ウィンドウ内で比較することによって決定され、比較ウィンドウ内のポリヌクレオチドまたはポリペプチド配列の一部は、2つの配列の最適なアラインメントのために、（付加または欠失を含まない）参照配列と比較して付加または欠失（すなわち、ギャップ）を含み得る。比率は、両方の配列において同一の核酸塩基またはアミノ酸残基が存在する位置の数を決定して一致する位置の数を算出し、この一致する位置の数を比較ウィンドウ内の総位置数で割り、その結果に100をかけて、配列同一性の比率を決定することによって算出される。
【００８５】
2つまたはそれ以上の核酸またはポリペプチド配列の文脈における「同一」またはパーセント「同一性」という用語は、比較ウィンドウにわたってまたは配列比較アルゴリズムを用いてまたは手作業によるアラインメントもしくは目視検査により測定される場合は指定領域にわたって、最大一致がみられるように比較およびアラインメントされた場合に、2つまたはそれ以上の配列または部分配列が、同じであること、または同じである特定比率のアミノ酸残基もしくはヌクレオチドを有すること（例えば、例えば全ポリペプチド配列もしくはその個別のドメインの、特定領域において50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％、もしくはそれ以上の同一性）を表す。少なくとも約80％同一であるそのような配列は、「実質的に同一」と称される。いくつかの態様において、2つの配列は、100％同一である。特定の態様において、2つの配列は、それらの配列の一方（例えば、それらの配列が異なる長さを有する場合の2つの配列のうちの短い方）の全長にわたって100％同一である。様々な態様において、同一性は、試験配列の相補鎖を表し得る。いくつかの態様において、同一性は、少なくとも約10〜約100、約20〜約75、約30〜約50のアミノ酸またはヌクレオチド長である領域にわたって存在する。特定の態様において、同一性は、少なくとも約50アミノ酸長である領域にわたって、またはより好ましくは100〜500、100〜200、150〜200、175〜200、175〜225、175〜250、200〜225、200〜250個、もしくはそれ以上のアミノ酸長である領域にわたって存在する。
【００８６】
配列比較のために、典型的に1つの配列が、試験配列と比較する参照配列として扱われる。様々な態様において、配列比較アルゴリズムが使用される場合、試験および参照配列がコンピュータに入力され、必要な場合、部分配列の座標が指定され、そして配列アルゴリズムプログラムのパラメータが指定される。好ましくは、既定のプログラムパラメータが使用され得、または代替のパラメータが指定され得る。配列比較アルゴリズムは、次いで、プログラムのパラメータに基づき、参照配列に対する試験配列のパーセント配列同一性を算出する。
【００８７】
「比較ウィンドウ」は、連続した位置数（例えば、少なくとも約10〜約100、約20〜約75、約30〜約50、100〜500、100〜200、150〜200、175〜200、175〜225、175〜250、200〜225、200〜250個）の任意の一つのセグメントを表し、そのセグメント中、1つの配列が、連続した位置数が同じ参照配列に対して、それら2つの配列の最適なアラインメントが行われた後に比較され得る。様々な態様において、比較ウィンドウは、2つのアラインメントされた配列の一方または両方の全長である。いくつかの態様において、比較される2つの配列は異なる長さを含み、比較ウィンドウは2つの配列の長い方または短い方の全長である。異なる長さの2つの配列に関連する特定の態様において、比較ウィンドウは、2つの配列の短い方の全長を含む。異なる長さの2つの配列に関連するいくつかの態様において、比較ウィンドウは、2つの配列の長い方の全長を含む。
【００８８】
比較のための配列のアラインメント方法は当技術分野で周知である。比較のための配列の最適なアラインメントは、例えば、Smith & Waterman, Adv. Appl. Math. 2:482, (1981)のローカルホモロジーアルゴリズムによって、Needleman & Wunsch, J. Mol. Biol. 48:443, (1970)のホモロジーアラインメントアルゴリズムによって、Pearson & Lipman, Proc. Nat'l. Acad. Sci. USA, 85:2444 (1998)の類似性検索法によって、これらのアルゴリズムのコンピュータ実施によって（Wisconsin Genetics Software Package, Genetics Computer Group, 575 Science Dr., Madison, Wis.のGAP、BESTFIT、FASTAおよびTFASTA）、または手作業によるアラインメントおよび目視検査によって（例えば、Current Protocols in Molecular Biology (Ausubel et al., eds. 1995付録)を参照のこと）行われ得る。
【００８９】
パーセント配列同一性および配列類似性を決定するのに適したアルゴリズムの好ましい例は、Altschul et al., Nuc. Acids Res., 25:3389-3402 (1997)およびAltschul et al., J. Mol. Biol., 215:403-410 (1990)に記載される、それぞれ、BLASTおよびBLAST 2.0アルゴリズムである。BLASTおよびBLAST 2.0は、核酸およびタンパク質のパーセント配列同一性を決定するために、本明細書に記載されるパラメータで使用され得る。BLAST分析を行うためのソフトウェアは、当技術分野で公知のように、National Center for Biotechnology Information（NCBI）を通じて公開されている。例示的なBLASTアルゴリズムでは、最初に、データベース配列中の同じ長さのワードとアラインメントさせたときに一致するかまたは一定の正の値のしきいスコアTを充足するかのいずれかである、クエリー配列中の長さWの短いワードを同定することによって、高スコア配列対（HSP）を同定する。Tは、近傍ワードスコアしきい値（Altschul et al., 前記）と称される。これらの最初の近傍ワードヒットが、それらを含むより長いHSPを発見するための検索を開始するシードとして扱われる。このワードヒットは、累積アラインメントスコアが増加し得る限り、各配列に沿って両方向に拡張される。累積スコアは、ヌクレオチド配列の場合、パラメータM（一致する残基の対に対するリワードスコア；常に＞0）およびN（不一致残基に対するペナルティースコア；常に＜0）を用いて算出される。アミノ酸配列の場合、スコア行列が累積スコアの算出に使用される。各方向へのワードヒットの拡張は、累積アラインメントスコアがその最大到達値から量X低下したとき、累積スコアが1つもしくは複数の負スコアの残基のアラインメントの蓄積によりゼロもしくはそれ未満になったとき、またはいずれかの配列の末端に到達したとき、に停止される。BLASTアルゴリズムのパラメータW、T、およびXは、アラインメントの感度および速度を決定する。特定の態様において、配列をアラインメントさせるためにNCBI BLASTNまたはBLASTPプログラムが使用される。特定の態様において、BLASTNまたはBLASTPプログラムは、NCBIによって使用される既定値を使用する。特定の態様において、BLASTNプログラム（ヌクレオチド配列用）は、既定値として以下が使用される：ワードサイズ（W）28、期待値（E）10、クエリー範囲内の最大一致を0に設定、一致／不一致スコア1、-2、リニアギャップコスト、低複雑性領域に対するフィルター使用、およびルックアップデーブルに対するマスクのみ使用。特定の態様において、BLASTPプログラム（アミノ酸配列用）は、既定値として以下を使用する：ワードサイズ（W）3、期待値（E）10、クエリー範囲内の最大一致を0に設定、BLOSUM62行列（Henikoff & Henikoff, Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 89:10915 (1989)を参照のこと）、存在のギャップコスト11、および拡張1、ならびに条件付き組成スコア行列調整。
【００９０】
本明細書に開示される各態様は、他の開示される態様の各々にも適用可能であることが意図されている。したがって、本明細書に記載される様々な要素のすべての組み合わせが、本発明の範囲に包含される。
【図面の簡単な説明】
【００９１】
【図１Ａ】リンパ球および単球におけるCD69細胞活性化マーカーの発現を示すグラフである。不活性化されたバチルス・コアグランスGBI-30の連続希釈物で24時間処置されたヒトPBMC培養物中のリンパ球におけるCD69発現。CD69発現の平均蛍光強度が示されている。データは、3つの培養物からの平均±標準偏差を表し、3名の異なる健常ヒトドナー由来のPBMC細胞を用いた3回の独立した実験の1つを表している。略語：LPS、リポ多糖；UT、未処置、注記：*P<0.05；**P<0.01。
【図１Ｂ】リンパ球および単球におけるCD69細胞活性化マーカーの発現を示すグラフである。不活性化されたバチルス・コアグランスGBI-30の連続希釈物で24時間処置されたヒトPBMC培養物中の単球（図1B）におけるCD69発現。CD69発現の平均蛍光強度が示されている。データは、3つの培養物からの平均±標準偏差を表し、3名の異なる健常ヒトドナー由来のPBMC細胞を用いた3回の独立した実験の1つを表している。略語：LPS、リポ多糖；UT、未処置、注記：*P<0.05；**P<0.01。
【図２Ａ】免疫細胞サブセットにおけるCD69細胞活性化マーカーの発現を示すグラフである。不活性化されたバチルス・コアグランスGBI-30の連続希釈物で24時間処置されたヒトPBMC培養物中のTリンパ球におけるCD69発現。CD69発現の平均蛍光強度が示されている。データは、3つの培養物からの平均±標準偏差を表し、3名の異なる健常ヒトドナー由来のPBMC細胞を用いた3回の独立した実験の1つを表している。略語：LPS、リポ多糖；UT、未処置、注記：*P<0.05；**P<0.01。
【図２Ｂ】免疫細胞サブセットにおけるCD69細胞活性化マーカーの発現を示すグラフである。不活性化されたバチルス・コアグランスGBI-30の連続希釈物で24時間処置されたヒトPBMC培養物中のNKT細胞におけるCD69発現。CD69発現の平均蛍光強度が示されている。データは、3つの培養物からの平均±標準偏差を表し、3名の異なる健常ヒトドナー由来のPBMC細胞を用いた3回の独立した実験の1つを表している。略語：LPS、リポ多糖；UT、未処置、注記：*P<0.05；**P<0.01。
【図２Ｃ】免疫細胞サブセットにおけるCD69細胞活性化マーカーの発現を示すグラフである。不活性化されたバチルス・コアグランスGBI-30の連続希釈物で24時間処置されたヒトPBMC培養物中のNK細胞におけるCD69発現。CD69発現の平均蛍光強度が示されている。データは、3つの培養物からの平均±標準偏差を表し、3名の異なる健常ヒトドナー由来のPBMC細胞を用いた3回の独立した実験の1つを表している。略語：LPS、リポ多糖；UT、未処置、注記：*P<0.05；**P<0.01。
【図２Ｄ】免疫細胞サブセットにおけるCD69細胞活性化マーカーの発現を示すグラフである。不活性化されたバチルス・コアグランスGBI-30の連続希釈物で24時間処置されたヒトPBMC培養物中の非T非NK細胞におけるCD69発現。CD69発現の平均蛍光強度が示されている。データは、3つの培養物からの平均±標準偏差を表し、3名の異なる健常ヒトドナー由来のPBMC細胞を用いた3回の独立した実験の1つを表している。略語：LPS、リポ多糖；UT、未処置、注記：*P<0.05；**P<0.01。
【図３Ａ】ヒトPBMC培養物における炎症促進性サイトカインレベルの変化を示すグラフである。不活性化されたバチルス・コアグランスGBI-30の連続希釈物で24時間処置されたヒトPBMC培養物におけるサイトカインレベルの変化が、未処置細胞培養物からの変化率として示されている。CD69発現の平均蛍光強度が示されている。データは、3名の異なる健常ヒトドナー由来のPBMC細胞を用いた3回の独立した実験の1つからの培養上清の2回の試験からの平均±標準偏差を表している。注記：*P<0.05；**P<0.01。
【図３Ｂ】ヒトPBMC培養物における炎症促進性サイトカインレベルの変化を示すグラフである。不活性化されたバチルス・コアグランスGBI-30の連続希釈物で24時間処置されたヒトPBMC培養物におけるサイトカインレベルの変化が、未処置細胞培養物からの変化率として示されている。CD69発現の平均蛍光強度が示されている。データは、3名の異なる健常ヒトドナー由来のPBMC細胞を用いた3回の独立した実験の1つからの培養上清の2回の試験からの平均±標準偏差を表している。注記：*P<0.05；**P<0.01。
【図３Ｃ】ヒトPBMC培養物における炎症促進性サイトカインレベルの変化を示すグラフである。不活性化されたバチルス・コアグランスGBI-30の連続希釈物で24時間処置されたヒトPBMC培養物におけるサイトカインレベルの変化が、未処置細胞培養物からの変化率として示されている。CD69発現の平均蛍光強度が示されている。データは、3名の異なる健常ヒトドナー由来のPBMC細胞を用いた3回の独立した実験の1つからの培養上清の2回の試験からの平均±標準偏差を表している。注記：*P<0.05；**P<0.01。
【図３Ｄ】ヒトPBMC培養物における炎症促進性サイトカインレベルの変化を示すグラフである。不活性化されたバチルス・コアグランスGBI-30の連続希釈物で24時間処置されたヒトPBMC培養物におけるサイトカインレベルの変化が、未処置細胞培養物からの変化率として示されている。CD69発現の平均蛍光強度が示されている。データは、3名の異なる健常ヒトドナー由来のPBMC細胞を用いた3回の独立した実験の1つからの培養上清の2回の試験からの平均±標準偏差を表している。注記：*P<0.05；**P<0.01。
【図４Ａ】ヒトPBMC培養物における抗ウイルス免疫に関与するサイトカインのレベルの変化を示すグラフである。不活性化されたバチルス・コアグランスGBI-30の連続希釈物で24時間処置されたヒトPBMC培養物におけるサイトカインレベルの変化が、未処置細胞培養物からの変化率として示されている。CD69発現の平均蛍光強度が示されている。データは、3名の異なる健常ヒトドナー由来のPBMC細胞を用いた3回の独立した実験の1つからの2つの上清からの平均±標準偏差を表している。注記：*P<0.05；**P<0.01。
【図４Ｂ】ヒトPBMC培養物における抗ウイルス免疫に関与するサイトカインのレベルの変化を示すグラフである。不活性化されたバチルス・コアグランスGBI-30の連続希釈物で24時間処置されたヒトPBMC培養物におけるサイトカインレベルの変化が、未処置細胞培養物からの変化率として示されている。CD69発現の平均蛍光強度が示されている。データは、3名の異なる健常ヒトドナー由来のPBMC細胞を用いた3回の独立した実験の1つからの2つの上清からの平均±標準偏差を表している。注記：*P<0.05；**P<0.01。
【図４Ｃ】ヒトPBMC培養物における抗ウイルス免疫に関与するサイトカインのレベルの変化を示すグラフである。不活性化されたバチルス・コアグランスGBI-30の連続希釈物で24時間処置されたヒトPBMC培養物におけるサイトカインレベルの変化が、未処置細胞培養物からの変化率として示されている。CD69発現の平均蛍光強度が示されている。データは、3名の異なる健常ヒトドナー由来のPBMC細胞を用いた3回の独立した実験の1つからの2つの上清からの平均±標準偏差を表している。注記：*P<0.05；**P<0.01。
【図４Ｄ】ヒトPBMC培養物における抗ウイルス免疫に関与するサイトカインのレベルの変化を示すグラフである。不活性化されたバチルス・コアグランスGBI-30の連続希釈物で24時間処置されたヒトPBMC培養物におけるサイトカインレベルの変化が、未処置細胞培養物からの変化率として示されている。CD69発現の平均蛍光強度が示されている。データは、3名の異なる健常ヒトドナー由来のPBMC細胞を用いた3回の独立した実験の1つからの2つの上清からの平均±標準偏差を表している。注記：*P<0.05；**P<0.01。
【図５Ａ】24時間処置されたヒトPBMC培養物における抗炎症サイトカインレベルの変化を示すグラフである。不活性化されたバチルス・コアグランスGBI-30の連続希釈物で24時間処置されたヒトPBMC培養物におけるサイトカインレベルの変化が、未処置細胞培養物からの変化率として示されている。CD69発現の平均蛍光強度が示されている。データは、3名の異なる健常ヒトドナー由来のPBMC細胞を用いた3回の独立した実験の1つからの2つの上清からの平均±標準偏差を表している。注記：*P<0.05；**P<0.01。
【図５Ｂ】24時間処置されたヒトPBMC培養物における抗炎症サイトカインレベルの変化を示すグラフである。不活性化されたバチルス・コアグランスGBI-30の連続希釈物で24時間処置されたヒトPBMC培養物におけるサイトカインレベルの変化が、未処置細胞培養物からの変化率として示されている。CD69発現の平均蛍光強度が示されている。データは、3名の異なる健常ヒトドナー由来のPBMC細胞を用いた3回の独立した実験の1つからの2つの上清からの平均±標準偏差を表している。注記：*P<0.05；**P<0.01。
【図６Ａ】24時間処置されたヒトPBMC培養物における成長因子レベルの変化を示すグラフである。不活性化されたバチルス・コアグランスGBI-30の連続希釈物で24時間処置されたヒトPBMC培養物における成長因子レベルの変化が、未処置細胞培養物からの変化率として示されている。CD69発現の平均蛍光強度が示されている。データは、3名の異なる健常ヒトドナー由来のPBMC細胞を用いた3回の別個の実験の1つからの2つの上清からの平均±標準偏差を表している。注記：*P<0.05；**P<0.01。
【図６Ｂ】24時間処置されたヒトPBMC培養物における成長因子レベルの変化を示すグラフである。不活性化されたバチルス・コアグランスGBI-30の連続希釈物で24時間処置されたヒトPBMC培養物における成長因子レベルの変化が、未処置細胞培養物からの変化率として示されている。CD69発現の平均蛍光強度が示されている。データは、3名の異なる健常ヒトドナー由来のPBMC細胞を用いた3回の別個の実験の1つからの2つの上清からの平均±標準偏差を表している。注記：*P<0.05；**P<0.01。
【図６Ｃ】24時間処置されたヒトPBMC培養物における成長因子レベルの変化を示すグラフである。不活性化されたバチルス・コアグランスGBI-30の連続希釈物で24時間処置されたヒトPBMC培養物における成長因子レベルの変化が、未処置細胞培養物からの変化率として示されている。CD69発現の平均蛍光強度が示されている。データは、3名の異なる健常ヒトドナー由来のPBMC細胞を用いた3回の別個の実験の1つからの2つの上清からの平均±標準偏差を表している。注記：*P<0.05；**P<0.01。
【図６Ｄ】24時間処置されたヒトPBMC培養物における成長因子レベルの変化を示すグラフである。不活性化されたバチルス・コアグランスGBI-30の連続希釈物で24時間処置されたヒトPBMC培養物における成長因子レベルの変化が、未処置細胞培養物からの変化率として示されている。CD69発現の平均蛍光強度が示されている。データは、3名の異なる健常ヒトドナー由来のPBMC細胞を用いた3回の別個の実験の1つからの2つの上清からの平均±標準偏差を表している。注記：*P<0.05；**P<0.01。
【発明を実施するための形態】
【００９２】
詳細な説明
本特許発明の対象は特に、不活性化された、生存能力を有さない、および／または死んでいるバチルス・コアグランス細菌を含む組成物を提供する。様々な態様において、不活性化された、生存能力を有さない、および／または死んでいるバチルス・コアグランス細菌は、不活性化された、生存能力を有さない、および／または死んでいるバチルス・コアグランス芽胞を含む。適切なバチルス・コアグランス株の非限定的な例は、GBI-30である。死んでいる細菌（例えば芽胞および／もしくは栄養型細菌）全体または死んでいる細菌全体を含む粒子は、その死細胞またはそのような死細胞を含む粒子を摂取した対象、例えばヒトにおいて有益な成長因子の産生を刺激する。驚くべきことに、死んでいるバチルス・コアグランス細菌は、免疫活性化および抗炎症効果に関して、生きている細菌と同等の効果を有する。死んでいるバチルス・コアグランス細菌の投与は、運動、外傷、および損傷の後の組織修復に重要な成長因子を含む、ヒト細胞による成長因子の分泌を増大させる。
【００９３】
本特許発明の対象の様々な実施態様は、例えば、筋肉痛（例えば、運動後の筋肉痛）を減少させること、（例えば、運動後の回復期間を減少させることにより）身体強度もしくは持久力を向上させること、筋肉量を増加させること、および／または引き締まった筋肉の発達、回復、強度、もしくは修復を向上させることによる対象の身体能力の向上に関する。
【００９４】
バチルス・コアグランス
バチルス・コアグランスは、ホモ発酵条件下でL(+)乳酸（右旋性）を産生する非病原性、グラム陽性、芽胞形成細菌である。それは、天然源、例えば栄養培地に接種された熱処理土壌サンプルから単離された（例えば、Bergey's Manual of Systemic Bacteriology, Vol.2, Sneath, P.H.A. et al., eds., Williams & Wilkins, Baltimore, Md., 1986を参照のこと）。単離されたバチルス・コアグランス株は、エンドヌクレアーゼ（例えば、米国特許第5,200,336号）；アミラーゼ（米国特許第4,980,180号）；ラクターゼ（米国特許第4,323,651号）およびシクロ-マルト-デキストリン グルカノ-トランスフェラーゼ（米国特許第5,102,800号）を含む酵素の供給源となっている。
【００９５】
American Type Culture Collection（ATCC, Manassas, Va.）から現時点で商業的に入手可能な様々なバチルス・コアグランス細菌株は、以下のアクセッション番号を含む：バチルス・コアグランスHammer NRS 727（ATCC番号11014）；バチルス・コアグランスHammer株C（ATCC番号11369）；バチルス・コアグランスHammer（ATCC番号31284）；およびバチルス・コアグランスHammer NCA 4259（ATCC番号15949）。精製されたバチルス・コアグランス細菌はまた、Deutsche Sammlung von Mikroorganismen und Zellkulturen GmbH（Braunschweig, Germany）から以下のアクセッション番号を用いて入手可能である：バチルス・コアグランスHammer 1915（DSM番号2356）；バチルス・コアグランスHammer 1915（DSM番号2383、ATCC番号11014に対応）；バチルス・コアグランスHammer（DSM番号2384、ATCC番号11369に対応）；およびバチルス・コアグランスHammer（DSM番号2385、ATCC番号15949に対応）。バチルス・コアグランス細菌はまた、Nebraska Cultures（Walnut Creek, Calif.）等の商業的供給源からも入手することができる。組成物は、バチルス・コアグランスHammer株ATCC番号31284由来の菌株または変種、例えばATCC PTA-6085、PTA-6086、またはPTA-6087を含む。
【００９６】
いくつかの態様において、バチルス・コアグランスは、バチルス・コアグランスHammer株アクセッション番号ATCC 31284、またはバチルス・コアグランスHammer株アクセッション番号ATCC 31284由来の1つもしくは複数の株（例えば、ATCC番号：GBI-20、ATCC表示番号PTA-6085；GBI-30（ATCC表示番号PTA-6086、「BC30」としても公知）；およびGBI-40、ATCC表示番号PTA-6087；その全体が参照により本明細書に組み入られる、Farmerに対する米国特許第6,849,256号を参照のこと）である。
【００９７】
バチルス・コアグランスは、以前は、ラクトバチルスであると誤って特徴づけられ、ラクトバチルス・スポロゲネス（Lactobacillus sporogenes）と命名されていた（Nakamura et al. 1988. Int. J. Syst. Bacteria 38: 63-73）。しかし、最初の分類は、バチルス・コアグランスが芽胞を生成し、代謝を通じてL(+)-乳酸を分泌するという理由から、不正確であった。これらの特徴は両方とも、バチルス・コアグランスの有用性に関する鍵となる特徴を提供する。これらの発生上および代謝上の局面は、この細菌が乳酸杆菌として分類されることを必要とした。加えて、古典的なラクトバチルス種は、胆汁、特にヒト胆汁の厳しい（すなわち、酸性の）pH環境下でのそれらの不安定性のために腸内コロニー形成に適さないことが、一般に認識されていない。対照的に、バチルス・コアグランスは、胆汁環境下において胃腸管で生存およびコロニー形成し、この低いpH範囲で成長さえすることができる。
【００９８】
成長因子の非限定的な例
対象において1つまたは複数の成長因子の発現を増大させるのに有効な方法および組成物が本明細書に提供される。そのような成長因子の非限定的な例は、G-CSF（顆粒球コロニー刺激因子）およびGM-CSF（顆粒球マクロファージコロニー刺激因子）を含む。
【００９９】
本明細書に記載される具体的な成長因子タンパク質（例えば、G-CSFおよびGM-CSF）について、列挙されるタンパク質は、そのタンパク質の天然に存在する形態（例えば、アイソフォームならびにその天然に存在する変異体および変種）のいずれかを含む。非ヒト対象に関しては、ヒトタンパク質の非ヒトホモログも含まれる。特定の態様において、非ヒトホモログは、本明細書に記載されるヒトタンパク質のアミノ酸配列に対して少なくとも約50％、少なくとも約55％、少なくとも約60％、少なくとも約65％、少なくとも約70％、少なくとも約75％、少なくとも約80％、少なくとも約85％、少なくとも約90％、少なくとも約91％、少なくとも約92％、少なくとも約93％、少なくとも約94％、少なくとも約95％、少なくとも約96％、少なくとも約97％、少なくとも約98％、少なくとも約99％同一であるアミノ酸配列を有する哺乳動物タンパク質である。様々な態様において、成長因子タンパク質は、United States National Center for Biotechnology Information (NCBI）配列リファレンスによって特定されるタンパク質である。いくつかの態様において、成長因子タンパク質は、UniProt配列リファレンスによって特定されるタンパク質である。
【０１００】
特定の態様において、ヒトG-CSFは、NCBI配列リファレンスNP_000750.1によって特定されるタンパク質またはそのアイソフォームもしくは天然に存在する変異体もしくは変種である。様々な態様において、ヒトG-CSFは、NCBI配列リファレンスNP_001171618.1によって特定されるタンパク質またはそのアイソフォームもしくは天然に存在する変異体もしくは変種である。特定の態様において、ヒトG-CSFは、NCBI配列リファレンスNP_757373.1によって特定されるタンパク質またはそのアイソフォームもしくは天然に存在する変異体もしくは変種である。様々な態様において、ヒトG-CSFは、NCBI配列リファレンスNP_757374.2によって特定されるタンパク質またはそのアイソフォームもしくは天然に存在する変異体もしくは変種である。NCBI配列リファレンスの下で入手可能なヒトG-CSFアミノ酸配列の非限定的な例は以下の通りである。
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【０１０１】
いくつかの態様において、ヒトG-CSFは、UniProtリファレンスP09919によって特定されるタンパク質またはそのアイソフォームもしくは天然に存在する変異体もしくは変種である。UniProtリファレンスP09919の下で入手可能なヒトG-CSFアミノ酸配列の非限定的な例は以下の通りである。
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【０１０２】
ヒトG-CSFをコードするヌクレオチド配列の非限定的な例は、以下の通りである（開始および終止コドンが下線付きおよび太字になっている）。
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【０１０３】
特定の態様において、ヒトGM-CSFは、NCBI配列リファレンスNP_000749.2によって特定されるタンパク質またはそのアイソフォームもしくは天然に存在する変異体もしくは変種である。NCBI配列リファレンスNP_000749.2の下で入手可能なヒトGM-CSFアミノ酸配列は以下の通りである。
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【０１０４】
いくつかの態様において、ヒトGM-CSFは、UniProtリファレンスP04141によって特定されるタンパク質またはそのアイソフォームもしくは天然に存在する変異体もしくは変種である。UniProtリファレンスP04141の下で入手可能なヒトGM-CSFアミノ酸配列は以下の通りである。
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【０１０５】
ヒトGM-CSFをコードするヌクレオチド配列の非限定的な例は、以下の通りである（開始および終止コドンが下線付きおよび太字になっている）。
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【０１０６】
サイトカインおよびケモカインの非限定的な例
対象において1つまたは複数のサイトカインまたはケモカインの発現を増大させるのに有効な方法および組成物が本明細書に提供される。そのようなサイトカインの非限定的な例は、IL1RA、IL-6、IL-10、IL-1β、IL-17A、TNF-α、IFN-γを含む。そのようなケモカインの非限定的な例は、MCP-1、MIP-1α、またはMIP1βを含む。
【０１０７】
本明細書に記載される具体的なタンパク質（例えば、IL1RA、IL-6、IL-10、IL-1β、IL-17A、TNF-α、IFN-γ、MCP-1、MIP-1α、およびMIP1β）について、列挙されるタンパク質は、そのタンパク質の天然に存在する形態（例えば、アイソフォームならびにその天然に存在する変異体および変種）のいずれかを含む。非ヒト対象に関しては、ヒトタンパク質の非ヒトホモログも含まれる。特定の態様において、非ヒトホモログは、本明細書に記載されるヒトタンパク質のアミノ酸配列に対して少なくとも約50％、少なくとも約55％、少なくとも約60％、少なくとも約65％、少なくとも約70％、少なくとも約75％、少なくとも約80％、少なくとも約85％、少なくとも約90％、少なくとも約91％、少なくとも約92％、少なくとも約93％、少なくとも約94％、少なくとも約95％、少なくとも約96％、少なくとも約97％、少なくとも約98％、少なくとも約99％同一であるアミノ酸配列を有する哺乳動物タンパク質である。様々な態様において、サイトカインまたはケモカインタンパク質は、United States National Center for Biotechnology Information (NCBI）配列リファレンスによって特定されるタンパク質である。いくつかの態様において、タンパク質は、UniProt配列リファレンスによって特定されるタンパク質である。
【０１０８】
特定の態様において、ヒトIL1RAは、NCBI配列リファレンスNP_001305843.1によって特定されるタンパク質またはそのアイソフォームもしくは天然に存在する変異体もしくは変種である。様々な態様において、ヒトIL1RAは、NCBI配列リファレンスNP_776215.1によって特定されるタンパク質またはそのアイソフォームもしくは天然に存在する変異体もしくは変種である。様々な態様において、ヒトIL1RAは、NCBI配列リファレンスNP_776214.1によって特定されるタンパク質またはそのアイソフォームもしくは天然に存在する変異体もしくは変種である。特定の態様において、ヒトIL1RAは、NCBI配列リファレンスNP_776213.1によって特定されるタンパク質またはそのアイソフォームもしくは天然に存在する変異体もしくは変種である。特定の態様において、ヒトIL1RAは、NCBI配列リファレンスNP_000568.1によって特定されるタンパク質またはそのアイソフォームもしくは天然に存在する変異体もしくは変種である。NCBI配列リファレンスの下で入手可能なヒトIL1RAアミノ酸配列の非限定的な例は以下の通りである。
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【０１０９】
いくつかの態様において、ヒトIL1RAは、UniProtリファレンスP18510によって特定されるタンパク質またはそのアイソフォームもしくは天然に存在する変異体もしくは変種である。UniProtリファレンスP18510の下で入手可能なヒトIL1RAアミノ酸配列の非限定的な例は以下の通りである。
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【０１１０】
ヒトIL1RAをコードするヌクレオチド配列の非限定的な例は、以下の通りである（開始および終止コドンが下線付きおよび太字になっている）。
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【０１１１】
特定の態様において、ヒトIL-6は、NCBI配列リファレンスNP_000591.1によって特定されるタンパク質またはそのアイソフォームもしくは天然に存在する変異体もしくは変種である。様々な態様において、ヒトIL-6は、NCBI配列リファレンスNP_001305024.1によって特定されるタンパク質またはそのアイソフォームもしくは天然に存在する変異体もしくは変種である。NCBI配列リファレンスの下で入手可能なヒトIL-6アミノ酸配列の非限定的な例は以下の通りである。
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【０１１２】
いくつかの態様において、ヒトIL-6は、UniProtリファレンスP05231によって特定されるタンパク質またはそのアイソフォームもしくは天然に存在する変異体もしくは変種である。UniProtリファレンスP05231の下で入手可能なヒトIL-6アミノ酸配列の非限定的な例は以下の通りである。
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【０１１３】
ヒトIL-6をコードするヌクレオチド配列の非限定的な例は、以下の通りである（開始および終止コドンが下線付きおよび太字になっている）。
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【０１１４】
特定の態様において、ヒトIL-10は、NCBI配列リファレンスNP_000563.1によって特定されるタンパク質またはそのアイソフォームもしくは天然に存在する変異体もしくは変種である。NCBI配列リファレンスNP_000563.1の下で入手可能なヒトIL-10アミノ酸配列の非限定的な例は以下の通りである。
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【０１１５】
いくつかの態様において、ヒトIL-10は、UniProtリファレンスP22301によって特定されるタンパク質またはそのアイソフォームもしくは天然に存在する変異体もしくは変種である。UniProtリファレンスP22301の下で入手可能なヒトIL-10アミノ酸配列の非限定的な例は以下の通りである。
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【０１１６】
ヒトIL-10をコードするヌクレオチド配列の非限定的な例は、以下の通りである（開始および終止コドンが下線付きおよび太字になっている）。
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【０１１７】
様々な態様において、ヒトIL-1βは、NCBI配列リファレンスNP_000567.1によって特定されるタンパク質またはそのアイソフォームもしくは天然に存在する変異体もしくは変種である。NCBI配列リファレンスNP_000567.1の下で入手可能なヒトIL-1βアミノ酸配列の非限定的な例は以下の通りである。
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【０１１８】
いくつかの態様において、ヒトIL-1βは、UniProtリファレンスP01584によって特定されるタンパク質またはそのアイソフォームもしくは天然に存在する変異体もしくは変種である。UniProtリファレンスP01584の下で入手可能なヒトIL-1βアミノ酸配列の非限定的な例は以下の通りである。
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【０１１９】
ヒトIL-1βをコードするヌクレオチド配列の非限定的な例は、以下の通りである（開始および終止コドンが下線付きおよび太字になっている）。
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【０１２０】
特定の態様において、ヒトIL-17Aは、NCBI配列リファレンスNP_002181.1によって特定されるタンパク質またはそのアイソフォームもしくは天然に存在する変異体もしくは変種である。NCBI配列リファレンスNP_002181.1の下で入手可能なヒトIL-17Aアミノ酸配列の非限定的な例は以下の通りである。
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【０１２１】
いくつかの態様において、ヒトIL-17Aは、UniProtリファレンスQ16552によって特定されるタンパク質またはそのアイソフォームもしくは天然に存在する変異体もしくは変種である。UniProtリファレンスQ16552の下で入手可能なヒトIL-17Aアミノ酸配列の非限定的な例は以下の通りである。
2020524711.tif 000023
【０１２２】
ヒトIL-17Aをコードするヌクレオチド配列の非限定的な例は、以下の通りである（開始および終止コドンが下線付きおよび太字になっている）。
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【０１２３】
特定の態様において、ヒトTNF-αは、NCBI配列リファレンスNP_000585.2によって特定されるタンパク質またはそのアイソフォームもしくは天然に存在する変異体もしくは変種である。NCBI配列リファレンスNP_000585.2の下で入手可能なヒトTNF-αアミノ酸配列の非限定的な例は以下の通りである。
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【０１２４】
いくつかの態様において、ヒトTNF-αは、UniProtリファレンスP01375によって特定されるタンパク質またはそのアイソフォームもしくは天然に存在する変異体もしくは変種である。UniProtリファレンスP01375の下で入手可能なヒトTNF-αアミノ酸配列の非限定的な例は以下の通りである。
2020524711.tif 000027
【０１２５】
ヒトTNF-αをコードするヌクレオチド配列の非限定的な例は、以下の通りである（開始および終止コドンが下線付きおよび太字になっている）。
2020524711.tif 000028
【０１２６】
様々な態様において、ヒトIFN-γは、NCBI配列リファレンスNP_000610.2によって特定されるタンパク質またはそのアイソフォームもしくは天然に存在する変異体もしくは変種である。NCBI配列リファレンスNP_000610.2の下で入手可能なヒトIFN-γアミノ酸配列の非限定的な例は以下の通りである。
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【０１２７】
いくつかの態様において、ヒトIFN-γは、UniProtリファレンスP01579によって特定されるタンパク質またはそのアイソフォームもしくは天然に存在する変異体もしくは変種である。UniProtリファレンスP01579の下で入手可能なヒトIFN-γアミノ酸配列の非限定的な例は以下の通りである。
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【０１２８】
ヒトIFN-γをコードするヌクレオチド配列の非限定的な例は、以下の通りである（開始および終止コドンが下線付きおよび太字になっている）。
2020524711.tif 000031
【０１２９】
特定の態様において、ヒトMCP-1は、NCBI配列リファレンスNP_002973.1によって特定されるタンパク質またはそのアイソフォームもしくは天然に存在する変異体もしくは変種である。NCBI配列リファレンスNP_002973.1の下で入手可能なヒトMCP-1アミノ酸配列の非限定的な例は以下の通りである。
2020524711.tif 000032
【０１３０】
いくつかの態様において、ヒトMCP-1は、UniProtリファレンスP13500によって特定されるタンパク質またはそのアイソフォームもしくは天然に存在する変異体もしくは変種である。UniProtリファレンスP13500の下で入手可能なヒトMCP-1アミノ酸配列の非限定的な例は以下の通りである。
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【０１３１】
ヒトMCP-1をコードするヌクレオチド配列の非限定的な例は、以下の通りである（開始および終止コドンが下線付きおよび太字になっている）。
2020524711.tif 000034
【０１３２】
様々な態様において、ヒトMIP-1αは、NCBI配列リファレンスNP_002974.1によって特定されるタンパク質またはそのアイソフォームもしくは天然に存在する変異体もしくは変種である。NCBI配列リファレンスNP_002974.1の下で入手可能なヒトMIP-1αアミノ酸配列の非限定的な例は以下の通りである。
2020524711.tif 000035
【０１３３】
いくつかの態様において、ヒトMIP-1αは、UniProtリファレンスP10147によって特定されるタンパク質またはそのアイソフォームもしくは天然に存在する変異体もしくは変種である。UniProtリファレンスP10147の下で入手可能なヒトMIP-1αアミノ酸配列の非限定的な例は以下の通りである。
2020524711.tif 000036
【０１３４】
ヒトMIP-1αをコードするヌクレオチド配列の非限定的な例は、以下の通りである（開始および終止コドンが下線付きおよび太字になっている）。
2020524711.tif 000037
【０１３５】
特定の態様において、ヒトMIP1βは、NCBI配列リファレンスNP_002975.1によって特定されるタンパク質またはそのアイソフォームもしくは天然に存在する変異体もしくは変種である。NCBI配列リファレンスNP_002975.1の下で入手可能なヒトMIP1βアミノ酸配列の非限定的な例は以下の通りである。
2020524711.tif 000038
【０１３６】
いくつかの態様において、ヒトMIP1βは、UniProtリファレンスP13236によって特定されるタンパク質またはそのアイソフォームもしくは天然に存在する変異体もしくは変種である。UniProtリファレンスP13236の下で入手可能なヒトMIP1βアミノ酸配列の非限定的な例は以下の通りである。
2020524711.tif 000039
【０１３７】
ヒトMIP1βをコードするヌクレオチド配列の非限定的な例は、以下の通りである（開始および終止コドンが下線付きおよび太字になっている）。
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【０１３８】
菓子ベースの組成物の非限定的な例
本特許発明の対象の局面は、不活性化された、生存能力を有さない、もしくは死んでいるバチルス・コアグランス細菌またはそのような細菌を含む粒子を含む菓子組成物に関する。菓子組成物は、ヒトまたは動物による摂取に適したものである。本明細書で使用される場合、「菓子」または「菓子組成物」は、糖または人工甘味料を多く含む食物を含む。文脈により、「キャンディ」または「スイーツ」という単語が、「菓子」という用語と同義的に使用され得る。様々な態様において、キャンディは、液体（例えば、水またはミルク）に糖を溶解させてシロップを形成し、これを所望の濃度に達するまでまたはカラメル化が開始するまで煮ることによって製造される。いくつかの態様において、キャンディのタイプは、成分およびその混合物をどのくらいの時間煮るかに依存し、キャンディの最終的な質感は、糖濃度に依存する。特定の態様において、シロップを加熱すると、それは沸騰し、水分を蒸発させ、糖濃度が増加し、沸点が上昇する。したがって、様々な態様において、沸点温度は、個々の糖濃度に対応する。いくつかの態様において、より高い温度およびより高い糖濃度は硬くもろいキャンディを生成し、より低い温度はより柔らかいキャンディを生成する。特定の態様において、キャンディの名前は、小さなスプーン1杯のシロップを冷たい水の中に滴下し、生じた塊の特徴を評価してシロップの濃度を決定したという、温度計が一般的になる前のシロップを試験するために使用されていたプロセスに由来し得る。長いひも状の硬化した糖は「糸引き」段階を示し、滑らかな塊は「玉」段階を示し、対応する硬度で表される。「クラック」段階は、その水からの急速な冷却によって文字通りひびが入るほどもろいボール状のキャンディによって示される。キャンディは、柔らかく噛みごたえのあるものから硬くもろいものまで無数の質感で製造される。
【０１３９】
菓子のカテゴリーおよびタイプは多種存在する。非限定的な例が、本明細書に記載されている。様々な態様において、ハードスイーツは、サッカー、ロリポップ、ジョーブレイカー（またはゴブストッパー）、レモンドロップ、ペパーミントドロップおよびディスク、キャンディケイン、ロックキャンディ等を含む、ハードクラック段階まで調理された糖に基づく。ハードスイーツはまた、しばしば木の実と混合されるキャンディ、例えばブリットルを含む。他のもの、例えばコピコは、コーヒー等のフレーバーを含む。特定の態様において、ファッジは、ソフトボール段階まで煮たミルクと糖の菓子である。いくつかの態様において、トフィー（またはタフィー（Taffy）もしくはタフィー（Tuffy））は、ソフトボール段階まで調理し、その後に弾力性のある質感を生じるよう引き伸ばした糖に基づく。様々な態様において、タブレットは、ソフトボール段階まで調理した糖に基づく、砕けやすいミルクベースのソフトおよびハードキャンディであり、様々な形態、例えばウエハーおよびハート型で製造される。リコリスの根のエキスを含むリコリスは、ガム／ゼラチンキャンディよりも咀嚼性および弾力性があるものの、嚥下用に設計されている。他のタイプの菓子は、チョコレート、マシュマロ、マルチパンおよびディビニティを含む。ゼリーキャンディは、糖およびデンプン、ペクチン、ガムまたはゼラチンに基づくもの、例えばゼリービーンズ、ガムドロップ、ナツメキャンディ（jujubes）、コーラボトルおよびグミを含む。いくつかの態様において、ゼリーキャンディは、グミキャンディ／菓子を含む。特定の態様において、グミキャンディは、ゼラチンベースのグミキャンディを含み得る。様々な態様において、グミキャンディは、親水コロイド、例えば、以下の1つもしくは複数または任意の組み合わせを含む：ゼラチン、ゼランガム、キサンタンガム、ペクチン、カラギーナン、セルロースガム、アラビアガム、および加工デンプン。特定の態様において、ゼラチンベースのグミキャンディは、重量比で少なくとも約5％、10％、少なくとも約15％、少なくとも約20％、もしくは少なくとも約25％のゼラチン、重量比で少なくとも約5％、少なくとも約10％、少なくとも約15％、少なくとも約20％、少なくとも約25％、少なくとも約30％、少なくとも約35％、少なくとも約40％、少なくとも約45％、少なくとも約50％、少なくとも約55％、少なくとも約60％、少なくとも約65％、少なくとも約70％、もしくは少なくとも約75％の単糖もしくは二糖、重量比で少なくとも約5％、少なくとも約10％、少なくとも約15％、少なくとも約20％、少なくとも約25％、少なくとも約30％、少なくとも約35％、少なくとも約40％、少なくとも約45％、もしくは少なくとも約50％のデンプン（例えば、加工デンプン）またはコーンシロップ、重量比で少なくとも約0.1％、少なくとも約0.2％、少なくとも約0.3％、少なくとも約0.4％、少なくとも約0.5％、少なくとも約0.6％、少なくとも約0.7％、少なくとも約0.8％、少なくとも約0.9％、少なくとも約1.0％、少なくとも約1.1％、少なくとも約1.2％、少なくとも約1.3％、少なくとも約1.4％、もしくは少なくとも約1.5％のペクチン、重量比で少なくとも約0.1％、少なくとも約0.2％、少なくとも約0.3％、少なくとも約0.4％、少なくとも約0.5％、少なくとも約0.6％、少なくとも約0.7％、少なくとも約0.8％、少なくとも約0.9％、少なくとも約1.0％、少なくとも約1.1％、少なくとも約1.2％、少なくとも約1.3％、少なくとも約1.4％、もしくは少なくとも約1.5％のゲランガム、および／または重量比で少なくとも約5％、少なくとも約10％、少なくとも約15％、少なくとも約20％、もしくは少なくとも約25％の水分を含む。
【０１４０】
適切なグミ菓子は、クマ、指輪、虫、カエル、ヘビ、ハンバーガー、サクランボ、サメ、ペンギン、カバ、ロブスター、タコ、リンゴ、モモ、オレンジ、およびクモの形状のものを含む。適切なクマ型グミのサイズは、標準的なキャンディのサイズ（またはそれより小さいもの）から数キログラムの重さのクマ型グミの範囲である。グミ菓子は、ラズベリー、オレンジ、イチゴ、パイナップル、およびレモンを含む、様々なフレーバーで製造される。
【０１４１】
伝統的なグミ菓子の非限定的な例（例えば、クマ型グミ）は、糖、グルコースシロップ、デンプン、フレーバー、食用着色料、クエン酸、およびゼラチンから製造される。適切なゲル化剤および親水コロイドは、当業者によって選択され得る。例は、ガム、カラギーナン、ゼラチン、ペクチン、高メトキシペクチン、アルギネート、および寒天を含む。当業者は、デンプンで型取りされたピースの所望の最終的質感に基づいて適切なゲル化剤または親水コロイドを選択することができる。菜食主義者に適したものになるようゼラチンの代わりにペクチンまたはデンプンを用いて製造されたグミ菓子もいくつか存在する。例示的な有機グミ菓子は、ほぼすべての天然成分、例えば有機タピオカシロップ、有機濃縮サトウキビジュース、ゼラチン、有機グレープジュース濃縮液、クエン酸、乳酸、アスコルビン酸、色素添加物（黒色、ニンジンジュース濃縮液、ウコン、アナトー）、天然フレーバー、有機ヒマワリ油、およびカルナウバロウを用いて製造される。
【０１４２】
様々な態様において、大きな酸味のあるクマ型グミは、伝統的なクマ型グミよりも大きく平らであり、より柔らかい質感を有し、酸味を生じるフマル酸または他の酸成分を含む。いくつかの態様において、酸味のある「グミ」は、甘みのある、味付けされた、噛みごたえのあるコアを形成し、その後にその外側に食用酸、例えばクエン酸をふりかけることによって製造される。特定の態様において、これらの製品のコアにあるゲル化成分は、ゼラチンまたはペクチンである。様々な態様において、酸性の外側部は、湿潤剤または食用接着剤の使用によって適用される。いくつかの製造業者は、ゼラチンの代わりにデンプンに基づいて、異なる質感を有する酸味のあるクマを製造している。典型的に、デンプンは、ゼラチンよりも短い（噛んだ後がきれいな、噛みごたえの少ない）質感を生成する。
【０１４３】
菓子ベースの組成物、例えば、本明細書に記載されるそれら、は、当業者に公知の様々な成分から製造され得る。いくつかの態様において、菓子ベースの組成物は、菓子成分と液体、例えば水またはミルクを混合することによって製造される。特定の態様において、組成物は、菓子成分と液体を混合し、得られる混合物を加熱することによって製造される。任意で、混合物は、適用された熱、火炎、またはマイクロ波を用いて加熱（加熱処理）される。様々な態様において、菓子ベースの組成物は、熱水中で、例えば、コンロ上で煮ることによって、容器に沸騰水を添加することによって、または菓子ベースの組成物を水と共にマイクロ波にかけることによって煮られる。いくつかの態様において、沸騰水（約100℃）は、菓子成分と不活性化された、生存能力を有さない、もしくは死んでいるバチルス・コアグランス細菌またはそのような細菌を含む粒子の混合物に添加される。態様において、生存能力を有するバチルス・コアグランス細菌（例えば、芽胞および／または栄養型細菌）は、1つまたは複数の菓子成分と混合され、そして菓子を製造するプロセスが、（例えば、本明細書に開示される量の）バチルス・コアグランス細菌を不活性化または死滅させる。
【０１４４】
特定の態様において、グミ菓子（すなわち、クマ型グミ）の大量生産は、グミ菓子成分を混合し、得られる混合物を多くのデンプンで裏打ちされた（例えば、トウモロコシデンプンで裏打ちされた）トレイ／鋳型に注ぐことを含む。様々な態様において、トウモロコシデンプンは、クマ型グミが鋳型に付着することを防止し、かつ、それらをはめ込むとそれらを容易に取り外せるようにする。いくつかの態様において、最初に、所望のキャラクターの鋳型が作製され、そして必要に応じて、機械により複製される。任意で、デンプン粉がキャラクター鋳型に適用される。特定の態様において、グミ菓子成分、例えば糖、グルコースシロップ、ゼラチン、および水が一緒に混合されて加熱される。様々な態様において、成分は、クマにそれらのシグネチャールックおよび味を与える着色料およびフレーバーと混合される。いくつかの態様において、溶解ゼラチン混合物が鋳型に注がれ、そして包装または消費の前に冷却および配置される。特定の態様において、グミ菓子は、その後、加熱され、そして、単離された不活性化された、生存能力を有さない、もしくは死んでいるバチルス・コアグランス細菌またはそのような細菌を含む粒子の組成物および甘味料（例えば、糖）を適用するために大型のドラムタンブラーに入れられる。
【０１４５】
WO/2009/102575に記載される非限定的な例において、グミ菓子の製造は、以下を含む。
コロイドバッチおよびピュレバッチを形成し、コーンシロップおよび糖と混合してベーススラリーを形成する。このコロイドバッチは、重量比で5〜15％のゲル化剤のレベルの水中のゲル化剤、より好ましくはコロイドバッチの総重量に基づき7〜12％のゲル化剤、の溶液を含む。このコロイドバッチを170〜190°Fの温度で維持する。ピュレバッチは、好ましくは、水、果実ピュレ、および／または高フルクトースコーンシロップまたは他の甘味料、低粘性（thin boiling）デンプンおよびクエン酸ナトリウムを含む。それは、65〜75°Fの温度で維持される。好ましくは、果実ピュレは、10〜45、より好ましくは25〜40のブリックスを有する。任意で、ピュレバッチは、複数の果実ピュレを含む。果実ピュレは、典型的な果実ピュレ、果汁または果実粉末を含む。ピュレバッチは、重量比で30〜40％の水分、重量比で0〜40％の果実ピュレ、重量比で0〜40％の高フルクトースコーンシロップ、重量比で25〜35％の低粘性デンプン、および重量比で0.0〜2.0％のクエン酸ナトリウムを含む。ベーススラリーを形成するために、混合ケトルにおいて、重量比で25〜40％のさらなるコーンシロップを、重量比で15〜40％の微粉化糖、重量比で10〜15％のコロイドバッチ、および重量比で20〜30％のピュレバッチと混合する。好ましくは、コーンシロップは、およそ42 DEのコーンシロップであるが、当業者に理解されるように、他のDEのコーンシロップも使用することができる。ベーススラリー成分を完全に混合し、保管タンク中で130〜150°Fで維持する。その後、ベーススラリーを、そのブリックスが70〜85 ブリックス、より好ましくは75〜80のブリックスになるよう調理する。1つの態様において、ベーススラリーを、コイル型調理器を通し、250〜325°Fの温度に加熱することで、それを調理する。
【０１４６】
他の調理方法は、当業者に公知であろう。いくつかの態様において、調理されたベーススラリーは、好ましくは、ブリックスを所望の範囲にさらに増大させるために減圧に供される。調理されたベーススラリーは、使用までおよそ200°Fで維持される。
【０１４７】
様々な態様において、デンプン鋳型に投入する直前に、調理されたベーススラリーに、酸味料溶液が着色料およびフレーバーと共に添加される。特定の態様において、酸味料溶液は、重量比で15〜20％の量で存在するアスコルビン酸、重量比で10〜20％の量で存在するクエン酸、および重量比で5〜10％の量で存在するリンゴ酸を含み、残りは水分を含む。当業者に理解されているように、列挙されているものに代えてまたは加えて、他の食用酸も使用され得る。いくつかの態様において、重量比で95〜97％の調理されたベーススラリーが、重量比で2〜3％の酸味料溶液と混合され、残りはフレーバーおよび着色料を含む。任意で、酸味料溶液は、ベーススラリーのpHを2.6〜3.2にするよう使用される。適切な着色料およびフレーバーを選択することは、当業者にとって困難なことではないであろう。特定の態様において、組み合わされた混合物は、その後、例えばMogulデンプン成型機を用いて、デンプン鋳型に投入される。そのようなデンプン成型機は、当業者に周知である。いくつかの態様において、0.3〜3グラムのベーススラリーが、各々の鋳型の空洞部に投入される。様々な態様において、投入されたスラリーを含むデンプントレイは乾燥室に移され、そこで12〜48時間維持される。任意で、トレイは最初に130〜150°Fの温度で10〜15時間維持され、ついで70〜80°Fに冷却され、その温度で6〜12時間維持される。特定の態様において、ゲル化したデンプン成型された食物ピースは、その後、トレイから取り除かれ、デンプンが再利用される。
【０１４８】
チョコレートと不活性化された、生存能力を有さない、もしくは死んでいるバチルス・コアグランス細菌またはそのような細菌を含む粒子とを含む組成物が、本明細書に含まれる。チョコレートは、世界で最も人気のある食物タイプおよびフレーバーの1つとなっており、チョコレートを含む多数の食料が製造されている。特定の祝日に異なる形状に成型されたチョコレートを贈呈することが伝統となっている。チョコレートはまた、冷たいおよび温かい飲み物、例えばチョコレートミルクおよびホットチョコレートにおいて使用される。
【０１４９】
チョコレートは、例えば、ホワイト、プレーン、ダーク、またはミルクチョコレートであり得る。その分類は、配合物内に存在する固形ココアの量に依存する。例えば、プレーンチョコレートは、高い比率の固形ココアを有し得（最低30％、かつ12％以上の乾燥、脱脂固形ココア）、ミルクチョコレートは、低い固形ココア含量を有し（最低25％かつ2.5％以上の乾燥、脱脂固形ココア）、ホワイトチョコレートは、ココアバター（最低20％）と14％以上の固形ミルクから製造され得る。本明細書で使用される場合、「チョコレート」は、乾燥固形ココア、脱脂固形ココアおよび／またはココアバターの（例えば、それらを含む組成物の）任意の調製物を含む。チョコレート組成物の非限定的な例は、抽出ココアバターを添加するまたは添加しない、ココアニブ、ココアマス、ココア、低脂肪ココア、またはそれらの2つもしくはそれ以上の任意の組み合わせおよび糖、例えばスクロースから得られる製品を含む。いくつかの態様において、チョコレート組成物は、14％以上の乾燥脱脂固形ココアおよび18％以上の認可ココアバターを含む、35％以上の総乾燥固形ココアを含む。
【０１５０】
チョコレート組成物の非限定的な例は、糖、ココアパウダー、および／もしくは固形ミルク、ならびに／またはココアバター以外の植物油と組み合わされたココアリカーから製造されるコーティングを含む。様々な態様において、最終的なチョコレート配合物は、例えば、コーティング、成型品、またはパンド（panned）製品のために使用されてもよく、そして使用前に調整されてもまたはされなくてもよい。
【０１５１】
いくつかの態様において、配合物は、それ自体が食用菓子最終製品であり得るまたはそのような最終製品を製造するためにさらに処理され得る。特定の態様において、得られる製品は、常温または低温条件下での販売のために調製され得る。低温条件下での販売のための製品の非限定的な例は、冷凍および冷蔵デザート、ならびに常温で消費される、低温、例えば-25℃〜+15℃、適切には-20℃〜+5℃の菓子を含む。そのような低温製品は、アイスクリーム（例えば、ミルクまたは植物油ベースのアイスクリーム）を含み得るがこれに限定されない。
【０１５２】
様々な態様において、チョコレート配合物はまた、濃縮糖シロップと混合する前に、単に、例えば少なくとも25％ w/wの総脂肪量を含むチョコレート脂肪相を含み得る。総脂肪量の適切な範囲は、例えば、25％〜60％ w/w、または25％〜45％ w/w、または28％〜35％ w/wを含む。いくつかの態様において、そのようなチョコレート配合物はさらに、最終菓子製品に加工され得る。特定の態様において、最終配合物における最終的な脂肪量の範囲は、少なくとも10％ w/wであり得るか、または15％〜45％ w/wもしくは25％〜35％ w/wの範囲であり得る。これらの例は、限定とみなされるべきでない。
【０１５３】
チョコレートを配合するための例示的な方法は、例えば、2004年11月3日に登録された欧州特許番号EP 0958747B1；1984年5月1日に発行された米国特許第4,446,166号、および1996年6月18日に発行された米国特許第5,527,556号に提供されており、これらの全内容を、参照により本明細書に組み入れる。
【０１５４】
本明細書に提供される菓子はまた、トリュフ用の短い貯蔵期間のフィリングとしてまたは菓子用のトッピングとして従来から使用されている「ガナッシュ」を含む。ガナッシュは、相が反転された（すなわち、水中油の）チョコレート調製物の菓子用語である。ガナッシュは、滑らかで光沢のある質感および外観、ならびに濃厚なチョコレートまたはミルクチョコレートの味を有する。ガナッシュはまた、同様の方法でホワイトチョコレートから製造され得る。ガナッシュの例示的な含水量は、10〜40％ w/wである。いくつかの態様において、ガナッシュは、従来的なチョコレートと同じ方法での加工に用いることができず、その柔らかな質感の特徴が、それを、大部分のエンローブ、成型、またはパンコーティング操作に不適なものにしている。
【０１５５】
特定の態様において、本明細書に提供される菓子は、その外表面上に、甘味料（例えば、グラニュー糖または粉砂糖）コーティングをさらに含む。甘味料は、例えば、1つまたは複数の単糖または二糖を含み得る。非限定的な例は、糖、スクロース、転化糖、デキストロース、ラクトース、ハチミツ、モルトシロップ、固形モルトシロップ、マルトース、フルクトース、顆粒フルクトース、メープルシロップ、ライスシロップ、固形ライスシロップ、ソルガムシロップ、リファイナーシロップ（refiners syrup）、コーンシロップ、固形コーンシロップ、高フルクトースコーンシロップ、糖蜜、およびそれらの任意の組合わせを含む。いくつかの態様において、糖は、甘藷糖、甜菜糖、デートシュガー（date sugar）、スカナット、顆粒フルクトースまたは人工甘味料（例えば、サッカリン含有甘味料、例えば、Sweet-n-Low（登録商標）、アスパルテームおよび／もしくはネオテーム含有甘味料、例えば、NutraSweet（登録商標）、またはアスパルテーム、アセスルファムカリウム、デキストロースおよびマルトデキストリンを含有する甘味料、例えば、Equal（登録商標））を含む。さらなる人工甘味料は、アセスルファムK、アスパルテーム、スクラロース、d-タガトース、およびそれらの組み合わせを含む。
【０１５６】
不活性化された、生存能力を有さない、または死んでいるバチルス・コアグランスのドライミックスおよび食物組成物への添加
本明細書に提供される組成物は、組成物中に含めるためまたは組成物の表面に添加するための、不活性化された、生存能力を有さない、もしくは死んでいるバチルス・コアグランス細菌またはそのような細菌を含む粒子を含むドライミックスを含む。特定の態様において、ドライミックスは、不活性化された、生存能力を有さない、または死んでいるバチルス・コアグランス細菌が1％〜50％、例えば不活性化された、生存能力を有さない、または死んでいるバチルス・コアグランス細菌が約5％、約10％、約15％、約20％、約25％、約35％、約45％、または約50％であり得る。いくつかの態様において、ドライミックスは、不活性化された、生存能力を有さない、または死んでいるバチルス・コアグランス細菌が約15％、および糖が85％であり得る。例えば、約100ポンドのドライミックスは、約15ポンドの不活性化された、生存能力を有さない、または死んでいるバチルス・コアグランス細菌および約85ポンドの他の食用物質、例えばデンプンまたは糖を含み得る。
【０１５７】
様々な態様において、組成物中に含まれる場合、ドライミックスは、組成物の重量比で約1％〜約50％、例えば組成物の重量比で約1％〜約20％、約5％〜約15％、約6％、約7％、約8％、約9％、または約10％であり得る。例えば、3グラムの組成物は、組成物の重量比で約7％のドライミックスを含み得る。
【０１５８】
いくつかの態様において、不活性化された、生存能力を有さない、または死んでいるバチルス・コアグランス細菌は、菓子の加熱、成型、およびその後の冷却の前に組成物の成分に直接添加される。
【０１５９】
茶組成物の非限定的な例
1つの局面において、不活性化された、生存能力を有さない、もしくは死んでいるバチルス・コアグランス細菌またはそのような細菌を含む粒子を含む茶飲料組成物が提供される。様々な態様において、茶は、脱水した植物物質、例えば植物の葉、つぼみ、根または小枝を水に浸すことによって生成される飲料である。いくつかの態様において、茶は、インスタントティーミックス（例えば、粉末）と水の組み合わせである。特定の態様において、植物物質は、数分間（例えば、約1、約2、約3、約4、約5、約6、約7、約8、約9、もしくは約10分間、もしくは少なくとも約1、少なくとも約2、少なくとも約3、少なくとも約4、少なくとも約5、少なくとも約6、少なくとも約7、少なくとも約8、少なくとも約9、もしくは少なくとも約10分間、または約1〜5、約2〜5、約3〜5、約4〜5、もしくは約1〜10分間）熱水に浸される。様々な態様において、本明細書に提供される茶組成物は、茶を生成するために使用される乾燥させた植物物質を含む。いくつかの態様において、本明細書に提供される茶組成物は、インスタントティーミックス（例えば、乾燥粉末）を含む。特定の態様において、茶は、インスタントティーまたは抽出される茶である。
【０１６０】
様々な態様において、植物物質は、チャノキ（Camellia sinensis）植物由来である。茶の非限定的な例は、黒茶、烏龍茶、緑茶、黄茶、および白茶を含む。特定の態様において、茶は、脱カフェイン茶である。
【０１６１】
いくつかの態様において、インスタントティーは、抽出された茶の濃縮物または脱水物を含む。特定の態様において、インスタントティー配合物は、植物物質を含まない。
【０１６２】
様々な態様において、茶は、茶のブレンドである。いくつかの態様において、茶のブレンドは、異なる植物由来の茶、例えばチャノキ等の植物とチャノキ以外の植物由来の茶を添加することによって調製される。例えば、人気のあるアールグレイティーは、ベルガモットを含む黒茶であり、ジャスミン茶は、ジャスミンを含む中国茶である。
【０１６３】
特定の態様において、茶組成物は、ハーブティーを含む。様々な態様において、ハーブは、木質的ではなく肥厚した部分を含む小さな種子植物として特徴づけられる。多年草に加えて、ハーブは、木、低木、一年草、つる植物、およびより原始的な植物、例えばシダ、藻類、および／またはコケを含み得る。ハーブは、しばしば、それらの味、香り、医療および健康的特性、経済的および工業的用途、殺虫性、ならびに着色物質（例えば、色素として）の面で価値がある。いくつかの態様において、ハーブティーは、チャノキ植物由来のもの以外の植物物質の浸出物である。特定の態様において、ハーブティーは、新鮮なまたは乾燥させた花、実、葉、種子、または根を用いて、例えばそれらの植物部分に熱（例えば、沸騰）水を注ぎ、それらを数分間（例えば、約1、約2、約3、約4、約5、約6、約7、約8、約9、もしくは約10分間、もしくは少なくとも約1、少なくとも約2、少なくとも約3、少なくとも約4、少なくとも約5、少なくとも約6、少なくとも約7、少なくとも約8、少なくとも約9、もしくは少なくとも約10分間、または約1〜5、約2〜5、約3〜5、約4〜5、もしくは約1〜10分間）浸すことによって生成される。様々な態様において、ハーブティーは、薬用植物の乾燥させた葉、花、実または種子を用いて生成される。いくつかの態様において、種子および／または根は、ストーブまたは電子レンジで加熱される。特定の態様において、ハーブティーは、その後、それが望まれる場合、漉し取られるまたは甘味づけされる。ハーブティーの非限定的な例は、アニスティー、麦茶、ビサップティー、大麻茶、キャットニップティー、セラシーティー（Cerasse tea）、カモミールティー、（乾燥させた花から作られる）菊花茶、（ベルガモット、レモンおよびオレンジピールを含む）シトラスピールティー、トウモロコシ茶、エキナセアティー、エイジアックティー（ブレンドされたハーブティー）、フェンネルティー、センブリ茶（Gentian tea）、生姜根茶、ニンジン茶、（様々なシデリティス・シリアカ（Sideritis syriaca）植物から作られる）グリークマウンテンティー、（しばしばローズヒップとブレンドされる）ハイビスカスティー、ハニーブッシュティー、ホアハウンドティー、アマチャヅル茶、カヴァルートティー（Kava root tea）、ラブラドルティー、ラパチョティー、レモングラスティー、リコリスルートティー、ライムブロッサムティー、蓮花茶、マテ茶、マテ・ド・コカティー（Mate de coca tea）、ミントティー、セイヨウヤドリギ茶、ニームリーフティー、ネトルリーフティー、レッドラズベリーリーフティー、玄米茶、ルイボス（レッドブッシュまたはレッド）ディー、（しばしばハイビスカスとブレンドされる）ローズヒップティー、ローズマリーティー、セージティー、ササフラスティー、スカルキャップティー、スタグホーンスマックティー、ステビアティー、タイムティー、トゥルシーティー、ウンカリア・トメントーサ（Uncaria tomentosa）ティー（キャッツクロー）、バレリアンティー、バーベインティー、ベチバーティー、麦茶、ウォンロガティー、ウッドラフティー、黄茶、吉林甘和茶（Yuen Kut Lam Kam Wo Tea）、ならびに単眼老涼茶（Tan Ngan Lo herbal tea）を含む。
【０１６４】
いくつかの態様において、茶は、地衣類または真菌を含む。
【０１６５】
様々な態様において、茶は、包装されていない植物物質を含む（例えば、茶は、ティーバッグ中に存在しない）。いくつかの態様において、茶は、インフューザーまたはストレーナーに入れられ得る。特定の態様において、茶組成物は、ティーバッグ内に存在する。ティーバッグは、茶およびバッグの2つの部分からなる。ティーバッグの非限定的な例は、茶を抽出するために使用される、内部に茶を含む多孔性の絹、紙、綿、またはナイロンバッグのそれらを含む。不活性化された、生存能力を有さない、もしくは死んでいるバチルス・コアグランス細菌（または生存能力を有さないもしくは死んでいるバチルス・コアグランス細菌を含む粒子）は、任意の方法で茶に、例えば、ゆるやかにティーバッグ内に、ティーバッグ上にもしくはティーバッグ中に、および／または植物物質上に（例えば、植物物質に付着されてもしくは植物物質とゆるやかに組み合わされて）、添加され得る。いくつかの態様において、ティーバッグは、チャノキから得られた脱水された植物物質を含む。いくつかの態様において、ティーバッグは、チャノキ以外の植物から得られた脱水された植物物質を含む。いくつかの態様において、脱水された植物物質は、乾燥された葉、つぼみ、根、および／または小枝を含む。
【０１６６】
不活性化された、生存能力を有さない、もしくは死んでいるバチルス・コアグランス細菌（または生存能力を有さないもしくは死んでいるバチルス・コアグランス細菌を含む粒子）と組み合わされ得る非細菌成分のさらなる非限定的な例は、コーヒー豆またはその破片、コーヒーパウダー、チョコレートパウダー、およびココアパウダーを含む。飲料組成物の非限定的な例は、コーヒー、ホットチョコレート、およびホットココアを含む。いくつかの態様において、コーヒーは、インスタントコーヒーまたは抽出されるコーヒーである。特定の態様において、コーヒーは、脱カフェインコーヒーである。様々な態様において、飲料組成物は、乳製品、非乳製クリーム、フレーバー付けされたクリーム、フレーバーエキス、天然甘味料（例えば、ステビア）、または人工甘味料、例えばスクラロースもしくは粒状サッカリンを含む。いくつかの態様において、不活性化された、生存能力を有さない、もしくは死んでいるバチルス・コアグランス細菌（または生存能力を有さないもしくは死んでいるバチルス・コアグランス細菌を含む粒子）は、コーヒー（例えば、挽いたコーヒー豆または凍結乾燥された抽出されたコーヒー結晶もしくは粉末）自体に直接添加される噴霧乾燥粉末の形態である。特定の態様において、不活性化された、生存能力を有さない、もしくは死んでいるバチルス・コアグランス細菌（または生存能力を有さない、もしくは死んでいるバチルス・コアグランス細菌を含む粒子）は、コーヒーと混合される粉末の形態である。
【０１６７】
スープおよび穀粒含有組成物の非限定的な例
穀粒またはその一部もしくは加工された生産物および不活性化された、生存能力を有さない、もしくは死んでいるバチルス・コアグランス細菌またはそのような細菌を含む粒子を含む調理されたおよび未調理の組成物が、本明細書に含まれる。いくつかの態様において、穀粒は、インタクトな穀粒またはその一部、例えば、小麦の穀粒の穀粒、米の穀粒、キヌアの穀粒、フォニオの穀粒、大麦の穀粒、トウモロコシの穀粒、そばの穀粒、ライ麦の穀粒、ソルガムの穀粒、ミレットの穀粒、ライ小麦の穀粒、またはテフの穀粒である。特定の態様において、穀粒は、例えば、脱穀されているが、穀粒は、砕かれておらず、割られておらず、挽かれていない。様々な態様において、穀粒は、加工される、例えばその天然の状態から変更される。いくつかの態様において、穀粒は、脱穀され、砕かれ、割られまたは挽かれる。特定の態様において、穀粒は、粉末または穀粒ベースの粉末のさらなる操作により生成される組成物の形態である。本明細書で使用される場合、「穀粒」という用語は、穀粒様の種子、例えばそばを含む。様々な態様において、穀粒は、小さく、硬い種子、特に食用植物、例えば小麦、トウモロコシ、ライ麦、オート麦、米、またはミレットの種子である。穀粒の非限定的な例は、小麦、米、キヌア、フォニオ、大麦、トウモロコシ、そば、ライ麦、ソルガム、ミレット、ライ小麦、およびテフを含む。小麦の非限定的な例は、ハード・レッド・ウィンターウィート、ハード・レッド・スプリングウィート、ソフト・レッド・ウィンターウィート、ソフト・ホワイトウィート、ハード・ホワイトウィート、およびデュラムウィートを含む。調理された組成物の非限定的な例は、パスタ、オートミール、およびグリットを含む。パスタの非限定的な例は、エッグパスタ、スパゲティ（硬く細い円筒状）、マカロニ（管状または中空円筒状）、フジッリ（らせん形状）、ラザニア（平板状）、タリアテッレ（平らなリボン状）、ヴェルミチェッリ（細いスパゲティ）、ラビオリ（詰め物パスタ）、シュペッツレ、ニョッキ、ペンネ・リガテ（溝のある円筒形状のパスタ）、ペンネ・リーシェ（平滑な円筒形状のパスタ）、ロッチーニ（コルクスクリュー形状のパスタ）、およびリガトーニ（管形状のパスタ）を含む。
【０１６８】
いくつかの態様において、組成物は、穀粒および不活性化された、生存能力を有さない、もしくは死んでいるバチルス・コアグランス細菌またはそのような細菌を含む粒子を含むドライミックス型の穀粒ベースの組成物を含む。脱水された物質および不活性化された、生存能力を有さない、もしくは死んでいるバチルス・コアグランス細菌またはそのような細菌を含む粒子を含むスープ用のドライミックスを含む組成物も提供される。
【０１６９】
穀粒含有ベースミックスおよび液体部分を提供する工程、穀粒含有ベースミックスと液体部分を混合し、バターまたは練り粉を形成する工程、生存能力を有するバチルス・コアグランスとバターまたは練り粉を組み合わせる工程、ならびに生存能力を有するバチルス・コアグランスのすべてまたは実質的にすべてを死滅させる温度でバターまたは練り粉を熱処理し、穀粒ベースの組成物を生成する工程を含む、穀粒ベースの組成物の製造方法も提供される。様々な態様において、液体部分は、水分またはミルクを含む。いくつかの態様において、生存能力を有するバチルス・コアグランスは、芽胞の形態である。いくつかの態様において、生存能力を有するバチルス・コアグランスは、栄養型細胞の形態である。
【０１７０】
穀粒ベースの組成物の非限定的な例は、パスタ、オートミール、グリット、およびシリアルを含む。パスタの一般的（非限定的）な種類は、管状パスタ、ストレート丸棒状パスタ、リボンパスタ、ミクロパスタ、具材詰めパスタ、不規則形状パスタ、スパゲティ（硬く細い円筒状）、マカロニ（管状または中空円筒状）、フジッリ（らせん形状）、ラザニア（平板状）、タリアテッレ（平らなリボン状）、ヴェルミチェッリ（細いスパゲティ）、およびラビオリ（詰め物パスタ）、ペンネ（円筒形状のパスタ）、ロッチーニ（コルクスクリュー形状のパスタ）、リガトーニ（管形状のパスタ）、麺、およびシュペッツレを含む。いくつかの態様において、パスタは乾燥されたものである。特定の態様において、パスタは生である。様々な態様において、パスタは、卵を含む（エッグパスタ）。いくつかの態様において、パスタは卵を含まない。
【０１７１】
単純な穀粉と水の混合物から、練り粉への卵、スパイスおよびチーズ、またはイカスミの添加を必要とするものまで、多くの成分が、パスタの練り粉を作るために使用され得る。特定の態様において、パスタは、詰め物、例えば、チーズ、野菜、果実、および／または肉を含む。様々な態様において、乾燥パスタは、デュラムコムギ粉、ファリナ粉、またはセモリナ粉から生成される。いくつかのパスタ種、例えばピッツォッケリは、そば粉から生成される。
【０１７２】
いくつかの態様において、本明細書に提供される組成物は、ニョッキ（しばしばパスタとみなされるが、全く異なる成分、例えばミルにかけたジャガイモを有し得る）を含む。
【０１７３】
不活性化された、生存能力を有さない、もしくは死んでいるバチルス・コアグランス細菌またはそのような細菌を含む粒子を含むオートミールの形態の穀粒ベースの組成物も提供される。オートミールは、挽いたオート麦のひき割りの生産物（例えば、オートミール、コーンミール、ピースミール等）およびそのような生産物から作られるポリッジ（オートミールシリアルとも呼ばれる）を含む。いくつかの態様において、オートミールは、オート麦のひき割り、例えば切断されたオート麦、粉砕されたオート麦およびローラーで押しつぶされたオート麦から作られる他の生産物を含む。特定の態様において、ひき割りは、粗く挽かれてオートミールにされるか、または小片に切断されてスチールカットオート麦にされるか、または蒸してローラーで押しつぶされてロールされたオート麦にされる。ロールされたオート麦に関連する様々な態様において、オート麦のひき割りは、蒸され、ローラーで押しつぶされ、そして乾燥される。いくつかの態様において、オートミールは、インスタントオートミールである。特定の態様において、インスタントオートミールは、事前調理され、乾燥される。様々な態様において、オートミールは、甘味料および／または別の成分（例えば、風味を加える成分）を含む。甘味料および風味添加料の非限定的な例は、塩、白砂糖、ブラウンシュガー、ステビア、シナモン、ハチミツ、ジャム、糖蜜、メープルシロップ、バター、チョコレート、醤油、豆乳、ミルク、酢、加糖または無糖練乳、およびクリームを含む。いくつかの態様において、1つまたは複数の果実および／または木の実、イチゴ、ブルーベリー、リンゴ、モモ、マンゴー、バナナ、レーズン、ドライチェリー、ドライクランベリー、ペカン、クルミ、およびピーナツバターが添加される。特定の態様において、オートミールは、ポリッジを作る上で、（オートミールクッキーおよびオート麦ケーキにおけるように）成分として、またはオート麦ブランパン上のトッピングにおけるようにアクセントとしてもしくはカボットチーズ（caboc cheese）上のコーティングとして使用される。様々な態様において、オートミールは、食物、例えばチリコンカーン（例えば、缶詰チリコンカーン）における増粘成分として使用される。いくつかの態様において、オートミールは、動物飼料製品において使用される。
【０１７４】
特定の態様において、組成物は、グリットおよび不活性化された、生存能力を有さない、もしくは死んでいるバチルス・コアグランス細菌またはそのような細菌を含む粒子を含む。
【０１７５】
スープ、例えば冷たいものおよび熱いものも、提供される。様々な態様において、スープは、肉および野菜等の成分を、味が抽出されるまでストックまたは熱／沸騰水中で混合し、ブロスを形成することによって作られる食物である。任意で、スープは、クリアスープおよび濃スープの2つの大グループに分類され得る。濃スープは、使用される増粘剤のタイプに依存して分類され、ピュレはデンプンを用いて増粘される野菜スープであり、ビスクはクリームを用いて増粘された裏ごしされた甲殻類から作られ、クリームスープはベシャメルソースを用いて増粘され、ヴルーテは卵、バターおよびクリームを用いて増粘される。スープおよびブロスを増粘するために広く使用されている他の成分は、米、穀粉、および穀粒を含む。いくつかの態様において、ラーメンを含む混合物が、調理に熱水のみを必要とする安価なインスタントランチとして販売されている。スープの非限定的な例は、トマトスープ、マッシュルームスープのクリーム、チキンヌードルスープ、野菜ビーフスープ、ミネストローネスープ、リーキとジャガイモのスープ、レンズマメスープ、魚スープ、味噌汁、エンドウマメスープ、果物スープ、クラムチャウダー、ガンボ、およびビスクを含む。特定の態様において、スープ、例えば野菜、鶏ベース、ジャガイモ、パスタ、およびチーズスープは、熱水を添加することによって準備が整うドライミックス形態で入手可能である。様々な態様において、ドライミックススープは、脱水物、例えば脱水された肉、例えば家禽肉および牛肉、脱水された野菜、脱水されたハーブ、脱水されたスパイス、ならびに／または脱水された麺を含む。いくつかの態様において、ドライスープストック（例えば、ラーメン）の小包は、水を含まない。特定の態様において、インスタントスープは、例えば小包またはカップ中に保管され得るドライパウダーにして保存される。いくつかの態様において、不活性化された、生存能力を有さない、もしくは死んでいるバチルス・コアグランス細菌またはそのような細菌を含む粒子は、ドライスープミックスに熱水を添加する前にまたは添加した後に添加される粉末の形態である。特定の態様において、不活性化された、生存能力を有さない、もしくは死んでいるバチルス・コアグランス細菌またはそのような細菌を含む粒子は、ドライスープミックス内に含まれる。
【０１７６】
様々な態様において、組成物は、不活性化された、生存能力を有さない、もしくは死んでいるバチルス・コアグランス細菌またはそのような細菌を含む粒子を含むベイクド組成物である。ベイクド組成物の非限定的な例は、パン、ケーキ、マフィン、パイ、タルト、ペストリー、フードバー、グラノーラバー、キッシュ、クッキー、ピザ、ベイクドコーンチップ、ベイクドトルティーヤチップ、ベイクドポテトチップ、ベイクドクラッカー、およびコンパニオンアニマル用のベイクド飼料を含む。いくつかの態様において、ベイクド組成物は、穀粉を含む。特定の態様において、ベイクド組成物は、加熱される、例えば焼かれる（乾性温熱への曝露）ものである。
【０１７７】
特定の態様において、ベイクド組成物は、脂肪を含む。脂肪の非限定的な例は、油、バター、ショートニング、人工脂質、および合成脂肪を含む。あるいはまたは加えて、ベイクド組成物は、脂肪代替物を含む。特定の態様において、ベイクド組成物はまた、糖または糖代替物を含む。様々な態様において、ベイクド組成物は、人工甘味料を含む。
【０１７８】
いくつかの態様において、組成物は、穀粉および不活性化された、生存能力を有さない、もしくは死んでいるバチルス・コアグランス細菌またはそのような細菌を含む粒子を含むベイクド組成物用のドライミックスである。
【０１７９】
いくつかの態様において、組成物は、不活性化された、生存能力を有さない、もしくは死んでいるバチルス・コアグランス細菌またはそのような細菌を含む粒子を含むパンである。任意のパン製法が使用され得る。様々な態様において、パンは、穀粉および水を含む。いくつかの態様において、塩も存在する。特定の態様において、膨張剤、例えば酵母、卵、ベーキングパウダー、またはベーキングソーダが使用される。いくつかの態様において、パンは、クイックパン、すなわち、酵母または卵以外の膨張剤（例えば、ベーキングパウダーまたはベーキングソーダ）を用いて膨張させたパンである。様々な態様において、ベイクド組成物は、（例えば、膨張および／または調理前に生地またはバターに添加および混合することにより）不活性化された、生存能力を有さない、もしくは死んでいるバチルス・コアグランス細菌またはそのような細菌を含む粒子がその中に分散されている酵母により膨張させた組成物である。穀粉の非限定的な例は、小麦粉、米粉、トウモロコシ粉、ライ麦粉、ジャガイモ粉、ミレット粉、ベーキング粉、グラハム粉、およびキヌア粉を含む。様々な態様において、穀粉は、セルフライジング性であるまたはセルフライジング性の穀粉を含む。いくつかの態様において、ベイクド組成物、例えばパンは、一定量の砂糖、スパイス、果実（例えば、レーズン、カボチャ、バナナ、イチゴ、ブルーベリー等）、野菜（例えば、タマネギもしくはズッキーニ等）、木の実または種子（例えば、キャラウェイ、ゴマ、またはポピーシード）も含む。いくつかの態様において、油（植物油、トウモロコシ油、オリーブ油、ブドウ種子油、クルミ油、または果実油）、バター、ショートニング、人工脂質、合成脂肪または脂肪代替物、例えばオレストラも存在する。特定の態様において、糖、糖代替物、または人工甘味料、例えばサッカリン、スクラロース、またはアスパルテームが存在する。ベイクド組成物の非限定的な例は、丸パン、ロール、ベーグル、クッキー、およびペストリーを含むがこれらに限定されない。
【０１８０】
特定の態様において、不活性化された、生存能力を有さない、もしくは死んでいるバチルス・コアグランス細菌またはそのような細菌を含む粒子は、ベイクド組成物の製造プロセスの間にベイクド組成物に含浸される（例えば、バターまたは生地ミックスに添加される）。いくつかの態様において、不活性化された、生存能力を有さない、もしくは死んでいるバチルス・コアグランス細菌またはそのような細菌を含む粒子は、ベイクド組成物の外面に（例えば、ベイクド組成物の外表面の少なくとも一部上のコーティングとして）添加される。
【０１８１】
非酪農乳様組成物の非限定的な例
特定の態様において、組成物は、不活性化された、生存能力を有さない、もしくは死んでいるバチルス・コアグランス細菌またはそのような細菌を含む粒子を含む非酪農乳様組成物である。そのような組成物は、ヴィーガンである、低い乳コレステロール量を望む、ラクトース不寛容である、乳タンパク質に対するアレルギーを示す、または動物製品もしくは副産物を寛容できないもしくは消費することを望まない、対象に対して利益（例えば、プロバイオティクス的な利益）を提供し得る。
【０１８２】
様々な態様において、乳製品は、哺乳動物、例えばウシ、ヒツジ、またはヤギの乳から作られるまたは乳を含む食品または飲料製品である。「乳様組成物」は、哺乳動物の乳を含まない。いくつかの態様において、乳様組成物は、牛乳の見た目および／または質感を有する。特定の態様において、乳様組成物は、押しつぶされたまたは粉砕された花、種子、穀粒、木の実、またはマメからの液体を含む。様々な態様において、乳様組成物は、エンドウマメ、ピーナツ、レンズマメ、豆（例えば、大豆）、アーモンド、カシュー、ピーカン、マカダミア、ヘーゼルナッツ、クルミ、大麦、オート麦、米、スペルト小麦、麻の実、カボチャ種子、キヌア、ルピナス、ゴマ種子、ヒマワリ種子、および／またはココナツから作られる。
【０１８３】
いくつかの態様において、組成物は、非酪農乳様組成物、例えばミルク、チーズ、ヨーグルト、アイスクリーム、プリン、クリームチーズ、サワークリーム、コーヒークリーム、ケフィア、カッテージチーズ、またはマヨネーズを含む。特定の態様において、非酪農乳様組成物は、穀粒（大麦、オート麦、米、スペルト小麦）、マメ（エンドウマメ、ピーナツ、レンズマメ、豆、大豆）、木の実（アーモンド、カシュー、ピーカン、マカダミア、ヘーゼルナッツ、クルミ）、および種子（麻、カボチャ、キヌア、ルピナス、ゴマ、カボチャ、ヒマワリ、ココナツ）由来であり得る非酪農乳様組成物、例えば植物性ミルクから作られるものと組み合わせて不活性化された、生存能力を有さない、もしくは死んでいるバチルス・コアグランス細菌またはそのような細菌を含む粒子を含む。
【０１８４】
運動、強度、回復、および活動のための組成物および使用の非限定的な例
不活性化された、生存能力を有さない、もしくは死んでいるバチルス・コアグランス細菌またはそのような細菌を含む粒子を含むスポーツ栄養組成物が、本明細書に含まれる。様々な態様において、スポーツ栄養組成物は、例えば、回復時間を減少させることにより、強度を向上させるまたは促進することにより、持久力を向上させるもしくは促進することにより、および／または損傷の治癒を改善（例えば、向上もしくは高速化）することにより、運動の利益を増大させるのを助ける。いくつかの態様において、スポーツ栄養組成物は、対象が体重、例えば筋肉量を増加させるのを補助するために、単位用量あたり多量のカロリーを含む。本明細書に記載される組成物の単位用量は、1回の用量、例えば1回の給仕で消費者に摂取される組成物の量である。単位用量の包装は、例えば非再利用容器による1回の用量の包装である。例えば、単位用量は、各単位が適切な担体、希釈剤、または賦形剤と共に所望の効果を生じるよう算出された既定量の活性物質を含む、個体にとって単回の摂取に適した物理的に独立した単位を表す。特定の態様において、包装は、例えば、単回または複数回用量を含み得る。
【０１８５】
対象が体重を増加させるのを補助するための多量のカロリーを提供する組成物は、「ウェイトゲイナー（weight gainer）」と称される。様々な態様において、組成物は、単位用量（すなわち、給仕）あたり約100〜約10,000食物カロリー（kcal）、例えば、250〜5,000 kcal、500〜3,000 kcal、750〜2,500 kcalまたは1,000〜2,000 kcal、例えば約1,000 kcal、約1,100 kcal、約1,200 kcal、約1,300 kcal、約1,400 kcal、約1,500 kcal、約1,600 kcal、約1,700 kcal、約1,800 kcal、約1,900 kcal、または約2,000 kcalを含む。
【０１８６】
いくつかの態様において、組成物は、多量のカロリーを含まない。特定の態様において、組成物は、約10〜500 kcal、例えば約20〜250 kcal、約50〜200 kcal、または約100〜150 kcal、例えば、約100 kcal、約110 kcal、約120 kcal、約130 kcal、約140 kcal、または約150 kcalを含む。
【０１８７】
特定の態様において、組成物は、タンパク質を含む。例えば、タンパク質は、組成物の重量比で約1％〜約99％、例えば、組成物の重量比で、約5％、約10％、約15％、約20％、約25％、約30％、約35％、約40％、約45％、約50％、約55％、約60％、約65％、約70％、約75％、約80％、約85％、約90％、または約95％を構成する。例えば、組成物は、1グラム〜500グラムのタンパク質、例えば、約10グラム、約15グラム、約20グラム、約25グラム、約30グラム、約35グラム、約40グラム、約45グラム、約50グラム、約55グラム、約60グラム、約65グラム、約70グラム、約75グラム、約80グラム、約85グラム、約90グラム、約95グラム、約100グラム、約150グラム、約200グラム、約250グラム、約300グラム、約350グラム、約400グラム、約450グラム、または約500グラムのタンパク質を含む。様々な態様において、スポーツ栄養組成物は、精製または処理されたタンパク質、例えば、ダイズタンパク質、乳清タンパク質、コメタンパク質、麻の実タンパク質、カゼインタンパク質、またはミルクタンパク質を含む。いくつかの態様において、組成物は、イソロイシン、アラニン、ロイシン、アルギニン、リジン、アスパルテート、アスパラギン酸、メチオニン、システイン、フェニルアラニン、スレオニン、トリプトファン、グリシン、バリン、プロリン、ヒスチジン、セリン、チロシン、アスパラギン、セレノシステイン、ピロリジン、グルタメート、グルタミン酸、および／またはグルタミンを含む。
【０１８８】
特定の態様において、スポーツ栄養組成物は、クレアチン、カルシウム、カゼインナトリウム、乳清ペプチド、またはラクトフェリンを含む。
【０１８９】
様々な態様において、組成物は、ナトリウム、カリウム、糖、炭水化物、食物繊維、ビタミンA、ビタミンC、カルシウム、鉄、ビタミンD、ビタミンE、チアミン、リボフラビン、ナイアシン、ビタミンB6、葉酸、ビタミンB12、ビオチン、パントテン酸、リン、ヨウ素、マグネシウム、亜鉛、セレニウム、銅、マンガン、クロム、またはモリブデン等の成分を含む。いくつかの態様において、組成物は、グルコースポリマー、タンパク質ブレンド（例えば、濃縮乳清タンパク質、単離乳清タンパク質、卵アルブミン、単離ミルクタンパク質、および部分加水分解乳清タンパク質）、濃縮コメタンパク質、濃縮ブラウンライス、タウリン、L-グルタミン、非酪農クリーマー（例えば、ヒマワリ油、固形コーンシロップ、カゼインナトリウム、モノグリセリド、ジグリセリド、リン酸二カリウム、リン酸三カルシウム、ダイズレシチン、および／もしくはトコフェロール）、天然および人工フレーバー、キサンタンガム、クエン酸カルシウム、クエン酸カリウム、リン酸二カリウム、セルロースガム、リン酸三カルシウム、アスパラギン酸マグネシウム、コメデンプン、カラギーナン、ビタミンもしくはミネラル（例えば、アスコルビン酸、ナイアシンアミド、d-αトコフェリルコハク酸、d-パントテン酸カルシウム、クエン酸亜鉛、ピリドキシン塩酸塩、フマル酸第一鉄、チアミン硝酸塩、リボフラビン、マンガンアミノ酸キレート、β-カロテン、グルコン酸銅、葉酸、ビオチン、ヨウ化カリウム、クロミウムポリニコチネート、モリブデンアミノ酸キレート、セレノメチオニン、シアノコバラミン、および／もしくはコレカルシフェロール）、スクラロース、アセスルファムカリウム、ならびに／またはラクターゼを含む。
【０１９０】
特定の態様において、スポーツ栄養組成物は、不活性成分、例えば賦形剤、結合剤または増量剤を含む。増量剤は、組成物のサイズを満たし、それを製造可能なようにおよび対象による使用が便利なようにする。様々な態様において、バルク体積を増加させることにより、増量剤は、その最終製品が個人による取り扱いに適した容積を有することができるようにする。増量剤の非限定的な例は、キサンタンガム、セルロースガム、レシチン、ラクトース、スクロース、グルコース、マンニトール、ソルビトール、炭酸カルシウム、およびステアリン酸マグネシウムを含む。
【０１９１】
いくつかの態様において、組成物は、特定の成分を含まない。特定の態様において、組成物は、糖（例えば、グルコース、フルクトース、ガラクトース、マルトースもしくはラクトース）、グルテン、アスパルテーム、および／または人工着色料を含まない。
【０１９２】
特定の態様において、組成物は、プロテインシェーク、プロテインバー、プロテインバイト、またはプロテインジェルをすぐに飲めるよう、プロテインパウダーを含む。
【０１９３】
様々な態様において、不活性化された、生存能力を有さない、もしくは死んでいるバチルス・コアグランス細菌またはそのような細菌を含む粒子を含むスポーツ栄養組成物のドライミックスが、本明細書に含まれる。いくつかの態様において、ドライミックスは、ダイズタンパク質、乳清タンパク質、コメタンパク質、麻の実タンパク質、および／またはカゼインタンパク質を含む。特定の態様において、スポーツ栄養組成物は、クレアチン、カルシウム、カゼインナトリウム、乳清ペプチド、および／またはラクトフェリンを含む。
【０１９４】
引き締まった筋肉の発達、運動後の回復、および筋肉の修復を向上させる方法も、本明細書に提供される。様々な態様において、本明細書に提供される方法は、運動時間前、運動時間中、および／または運動時間後の、不活性化された、生存能力を有さない、もしくは死んでいるバチルス・コアグランス細菌またはそのような細菌を含む粒子を含むスポーツ栄養組成物の摂取を含む。いくつかの態様において、組成物は、運動時間から60分以内（例えば、前または後）、例えば運動時間から15分以内、30分以内または45分以内に摂取される。特定の態様において、組成物は、運動時間から2時間以内、5時間以内、または8時間以内に摂取される。
【０１９５】
様々な態様において、スポーツ栄養組成物は、動物による消費に適したものである。いくつかの態様において、スポーツ栄養組成物は、ヒトによる消費に適したものである。特定の態様において、対象は、筋肉の発達、強度、回復、持久力、もしくは除脂肪体重の増加を望んでいるヒト、または筋肉の発達もしくは強度の向上が望まれる動物、例えば家畜もしくはパフォーマンス動物、例えば使役動物（例えば、警察もしくは軍用犬）もしくは競走馬である。
【０１９６】
いくつかの態様において、スポーツ栄養組成物は、タンパク質、アミノ酸、例えば、分枝鎖アミノ酸（BCAA）、グルタミン、必須脂肪酸、食事代替品、プロホルモン、クレアチン、発熱性成分、および／またはテストステロンブースターを含む。BCAAは、ロイシン、イソロイシン、およびバリンを含む。
【０１９７】
プロテイン製品は、プロテインシェーク、バー、バイト、またはジェルをすぐに飲める、プロテインパウダーを含む、様々な形態で製造され得る。特定の態様において、プロテイン製品は、フレーバー、例えばパイナップル、オレンジ、フルーツポンチ、ミックスベリー、マンゴー、クッキーアンドクリーム、イチゴ、イチゴバナナ、フレンチバニラ、バニラ、バニラアイスクリーム、バニラミルクセーキ、バナナ、バナナクリーム、ダッチチョコレート、モカカプチーノ、ダブルリッチチョコレート、チョコレートキャラメル、チョコレートミルクセーキ、エクストリームミルクチョコレート、チョコレートミント、チョコレートチップ、およびチョコレートを有し得る。様々な態様において、プロテインパウダーは、（例えばミルクセーキ中の）「プロテインシェーク」または「プリン」として公知の形態となるよう、水、ミルク、またはジュース（例えば、グレープフルーツジュース、グレープジュース、およびオレンジジュース）と混合される。
【０１９８】
いくつかの態様において、組成物は、不活性化された、生存能力を有さない、もしくは死んでいるバチルス・コアグランス細菌またはそのような細菌を含む粒子を含む食事代替品（MRP)である。特定の態様において、MPRは、調理された食事の代わりとなるよう設計された事前に包装された粉末化飲料ミックスまたは食用バーのいずれかである。様々な態様において、MRPは、タンパク質が豊富であり、脂肪が少なく、少量〜中程度の量の炭水化物を有し、様々なビタミンおよびミネラルを含む。いくつかの態様において、MRPは、タンパク質源として、乳清タンパク質、カゼイン（例えば、カゼインカルシウムもしくはミセルカゼイン）、ダイズタンパク質、および／または卵アルブミンを使用する。特定の態様において、炭水化物は、マルトデキストリン、オート麦繊維、ブラウンライス、および／または小麦粉由来である。様々な態様において、組成物、例えばMRPは、アマニ油を含む。
【０１９９】
様々な態様において、本明細書に提供されるスポーツ栄養組成物は、ボディビル成分、例えばカルシウム、カゼインナトリウム、乳清ペプチド、グルタミンペプチド、L-グルタミン、α-ケトグルタル酸カルシウム、単離／遊離アミノ酸、ラクトフェリン、共役リノール酸、中鎖トリグリセリド、またはクレアチン（例えば、クレアチン一水和物）を含む。
【０２００】
いくつかの態様において、スポーツ栄養組成物の成分は、乾燥成分として一緒にブレンドされる。
【０２０１】
特定の態様において、スポーツ栄養組成物は、即時使用または滅菌包装、例えば、3オンス包装（例えば、バッグもしくはボトル）、6オンス包装、9オンス包装、12オンス包装、15オンス包装、18オンス包装、24オンス包装、48オンス包装、80オンス包装、または100オンス包装内での保管ができるようにされる。様々な態様において、乾燥粉末は、単位用量で、例えば、5グラム、10グラム、20グラム、30グラム、40グラム、50グラム、60グラム、70グラム、80グラム、90グラム、または100グラムの一包に包装される。いくつかの態様において、乾燥粉末は、バルク、例えば約500グラム、約600グラム、約700グラム、約800グラム、約900グラム、約1,000グラム、約1,250グラム、約1,500グラム、約1,750グラム、約2,000グラム、約2,250グラム、約2,500グラム、または約3,000グラム容器で包装される。特定の態様において、スポーツ栄養組成物は、消費するまで、室温で、滅菌包装中で保管される。
【０２０２】
油および脂肪酸組成物の非限定的な例
オメガ-3脂肪酸および不活性化された、生存能力を有さない、もしくは死んでいるバチルス・コアグランス細菌またはそのような細菌を含む粒子を含む組成物もまた、本明細書に含まれる。様々な態様において、オメガ-3脂肪酸は、エイコサペンタエン酸またはドコサヘキサエン酸を含む。いくつかの態様において、オメガ-3脂肪酸は、微細藻類によって産生されたものである。特定の態様において、オメガ-3脂肪酸は、油中に含まれる。様々な態様において、油は、魚油を含む。いくつかの態様において、油は、貝油または魚油を含む。特定の態様において、油は、オキアミ油を含む。様々な態様において、油は、サーモン油、タラ油、ニシン油、アンチョビ油、イワシ油もしくはポラック油、マグロ油、ナマズ油、ヒラメ油、レイクトラウト油、ハタ油、オヒョウ油、シイラ油、オレンジラフィー油、タイ油、サメ油、メカジキ油、アマダイ油、またはサバ油を含む。いくつかの態様において、油は、タラ油、例えばタラ肝油を含む。
【０２０３】
特定の態様において、組成物は、ソフトシェルカプセルまたはソフトゼラチンカプセルでカプセル化される。様々な態様において、油は、不純物（例えば、毒素、ポリ塩化ビフェニル、または水銀）を除去するよう処理される。いくつかの態様において、不活性化された、生存能力を有さない、もしくは死んでいるバチルス・コアグランス細菌またはそのような細菌を含む粒子ならびに油は、ひとまとめにしてカプセル化される。
【０２０４】
特定の態様において、組成物は、保存剤を含む。
【０２０５】
様々な態様において、オメガ-3脂肪酸は、エイコサペンタエン酸、および／またはドコサヘキサエン酸を含む。
【０２０６】
いくつかの態様において、油は、エチルエステルに変換される。特定の態様において、油は、エステル交換に供される。様々な態様において、油は、他の脂肪および望ましくない要素を除去し、油を濃縮するために、分子および減圧蒸留に供される。いくつかの態様において、魚油から刺激臭を除去するために、酸性白土等の成分が添加される。
【０２０７】
態様
態様は、以下のP1〜P72を含む。
態様P1. 粒子を含み、該粒子が、対象において少なくとも1つの成長因子のレベルを増加させるのに有効な量で、不活性化された、生存能力を有さない、または死んでいるバチルス・コアグランス細菌を含む、組成物。
態様P2. 前記粒子の少なくとも95％が、420μm未満の少なくとも1つの寸法を含み、かつ該粒子の少なくとも75％が、180μm未満の少なくとも1つの寸法を含む、態様P1の組成物。
態様P3. 各々の前記粒子の少なくとも1つの寸法が約5μm〜750μmである、態様P1またはP2の組成物。
態様P4. 前記少なくとも1つの成長因子が、免疫活性化成長因子または抗炎症性成長因子を含む、態様P1〜P3のいずれかの組成物。
態様P5. 重量比で約0.001％未満が水分である、態様P1〜P4のいずれかの組成物。
態様P6. 前記少なくとも1つの成長因子が、顆粒球コロニー刺激因子（G-CSF）、または顆粒球マクロファージコロニー刺激因子（GM-CSF）である、態様P1〜P5のいずれかの組成物。
態様P7. 有効量が、前記対象においてインターロイキン-1受容体アンタゴニスト（IL1RA）、インターロイキン-6（IL-6）、またはインターロイキン-10（IL-10）のレベルを増加させるのにも有効である、態様P1〜P6のいずれかの組成物。
態様P8. 前記レベルが、前記対象の体液における前記少なくとも1つの成長因子のレベルである、態様P1〜P8のいずれかの組成物。
態様P9. 前記体液が、血液、血漿、または血清である、態様P8の組成物。
態様P10. 前記不活性化された、生存能力を有さない、または死んでいるバチルス・コアグランス細菌が、不活性化された、生存能力を有さない、または死んでいるバチルス・コアグランス栄養型細菌を含む、態様P1〜P9のいずれかの組成物。
態様P11. 前記不活性化された、生存能力を有さない、または死んでいるバチルス・コアグランス細菌が、不活性化された、生存能力を有さない、または死んでいるバチルス・コアグランス栄養型細菌および芽胞を含む、態様P10の組成物。
態様P12. 前記不活性化された、生存能力を有さない、または死んでいるバチルス・コアグランス栄養型細菌の細胞壁の表面積が、対応する生存能力を有するバチルス・コアグランス栄養型細菌の細胞壁の表面積と比較して少なくとも約75％インタクトである、態様P10およびP11の組成物。
態様P13. 前記不活性化された、生存能力を有さない、または死んでいるバチルス・コアグランス栄養型細菌が、対応する生存能力を有するバチルス・コアグランス細菌の質量の少なくとも約90％を有する、態様P10〜P12のいずれかの組成物。
態様P14. 前記不活性化された、生存能力を有さない、または死んでいるバチルス・コアグランス細菌が、配列決定により、バチルス・コアグランスゲノムDNAを含むと同定され得る、態様P1〜P13のいずれかの組成物。
態様P15. 前記不活性化された、生存能力を有さない、または死んでいるバチルス・コアグランス細菌が、バチルス・コアグランスゲノムの少なくとも1つの500キロ塩基部分を含む、態様P1〜P14のいずれかの組成物。
態様P16. 前記不活性化された、生存能力を有さない、または死んでいるバチルス・コアグランス細菌が、バチルス・コアグランスゲノムの少なくとも1つの1000キロ塩基部分を含む、態様P1〜P15のいずれかの組成物。
態様P17. 賦形剤をさらに含む、態様P1〜P16のいずれかの組成物。
態様P18. β-グルカン、マルトデキストリン、イヌリン、イニトソール（initosol）、トレハロース、微結晶セルロース（MCC）、乳酸カルシウム、ステアリン酸マグネシウム、フラクトオリゴ糖（FOS）、またはグルコオリゴ糖（GOS）をさらに含む、態様P1〜P17のいずれかの組成物。
態様P19. 前記不活性化された、生存能力を有さない、または死んでいるバチルス・コアグランス細菌が凍結乾燥されている、態様P1〜P18のいずれかの組成物。
態様P20. 前記不活性化された、生存能力を有さない、または死んでいるバチルス・コアグランス細菌が、凍結乾燥されて、その後に水溶液と混合されている、態様19の組成物。
態様P21. 界面活性剤または乳化剤をさらに含む、態様P1〜P20のいずれかの組成物。
態様P22. 前記界面活性剤がポリソルベート20またはポリソルベート80を含む、態様21の組成物。
態様P23. 食物組成物または飲料組成物である、態様P1〜P22のいずれかの組成物。
態様P24. 茶、コーヒー、またはアルコール飲料を含む、態様P23の組成物。
態様P25. 発酵食品または発酵飲料を含む、態様P23の組成物。
態様P26. 穀粒ベースの組成物を含む、態様P23の組成物。
態様P27. ベイクド組成物を含む、態様P23の組成物。
態様P28. 菓子を含む、態様P23の組成物。
態様P29. オメガ-3脂肪酸を含む、態様P23の組成物。
態様P30. 酪農組成物を含む、態様P23の組成物。
態様P31. 非酪農乳様組成物を含む、態様P23の組成物。
態様P32. スポーツ栄養組成物を含む、態様P23の組成物。
態様P33. 動物飼料である、態様P23の組成物。
態様P34. 前記動物飼料が、使役動物用、コンパニオンアニマル用、家畜用、または水産養殖用の飼料を含む、態様P23の組成物。
態様P35. 有効量が、前記対象において少なくとも1つの免疫活性化サイトカインのレベルを増加させるのにも有効である、態様P1〜P34のいずれかの組成物。
態様P36. 前記少なくとも1つの免疫活性化サイトカインが、インターロイキン-1β（IL-1β）、インターロイキン-6（IL-6）、インターロイキン-17A（IL-17A）、腫瘍壊死因子-α（TNF-α）、またはインターフェロンγ（IFNγ）を含む、態様35の組成物。
態様P37. 有効量が、前記対象において少なくとも1つの免疫活性化ケモカインのレベルを増加させるのにも有効である、態様P1〜P36のいずれかの組成物。
態様P38. 前記少なくとも1つの免疫活性化ケモカインが、単球走化性タンパク質-1（MCP-1）、マクロファージ炎症性タンパク質1-α（MIP-1α）、またはマクロファージ炎症性タンパク質-1β（MIP1β）を含む、態様P37の組成物。
態様P39. 有効量が、前記対象において少なくとも1つの抗炎症性サイトカインのレベルを増加させるのにも有効である、態様P1〜P38のいずれかの組成物。
態様P40. 前記少なくとも1つの抗炎症性サイトカインがIL-1RAまたはIL-10を含む、態様P39の組成物。
態様P41. 前記成長因子が、組織修復、幹細胞分化、または幹細胞増殖を増大させる、態様P1〜P40のいずれかの組成物。
態様P42. 態様P1〜P41のいずれかの組成物の有効量を対象に投与する工程を含む、該対象において組織修復を向上させる方法。
態様P43. 前記対象が損傷を有する、対象P42の方法。
態様P44. 前記対象が外傷性脳損傷を有する、態様P42またはP43の方法。
態様P45. 前記対象が脳卒中を有する、態様P42〜P44のいずれかの方法。
態様P46. 前記対象が関節炎を有する、態様P42〜P45のいずれかの方法。
態様P47. 前記関節炎が変形性関節炎である、態様P46の方法。
態様P48. 前記関節炎が関節リウマチである、態様P46の方法。
態様P49. 前記対象が、呼吸器感染症、粘膜感染症、皮膚感染症、および胃腸感染症を有さない、態様P42〜P48のいずれかの方法。
態様P50. 有効量が前記対象において炎症を減少させる、態様P42〜P49のいずれかの方法。
態様P51. 有効量が、前記対象においてG-CSFまたはGM-CSFのレベルを増加させる、態様P42〜P50のいずれかの方法。
態様P52. 有効量が、前記対象においてIL1RA、IL-6、またはIL-10のレベルを増加させる、態様P42〜P51のいずれかの方法。
態様P53. 前記組織が筋肉組織である、態様P42〜P52のいずれかの方法。
態様P54. 態様P1〜P41のいずれかの組成物の有効量を対象に投与する工程を含む、該対象において身体能力を向上させる方法。
態様P55. 身体能力の向上が筋肉痛の減少を含む、態様P54の方法。
態様P56. 前記筋肉痛が運動後の筋肉痛である、態様P55の方法。
態様P57. 身体能力の向上が、身体の強度または持久力の向上を含む、態様P54〜P56のいずれかの方法。
態様P58. 身体能力の向上が、運動後の回復時間の減少を含む、態様P54〜P57のいずれかの方法。
態様P59. 身体能力の向上が筋肉量の増加を含む、態様P54〜P58のいずれかの方法。
態様P60. 前記対象が身体能力の向上を望んでいる、態様P54〜P59のいずれかの方法。
態様P61. 前記対象が運動競技選手である、態様P54〜P60のいずれかの方法。
態様P62. 前記対象が、警察官、または軍隊の構成員である、態様P54〜P61のいずれかの方法。
態様P63. 前記動物が、パフォーマンス動物、コンパニオンアニマル、または使役動物である、態様P54〜P60のいずれかの方法。
態様P64. 態様P1〜P41のいずれかの組成物の有効量を対象に投与する工程を含む、該対象における引き締まった筋肉の発達、回復、強度、または修復を向上させる方法。
態様P65. 対象において少なくとも1つの成長因子のレベルを増加させるのに有効な量でバチルス・コアグランスのペプチドグリカンまたはリポタイコ酸を含む、組成物。
態様P66. ペプチドグリカンおよびリポタイコ酸の両方を含む、態様P65の組成物。
態様P67. 前記ペプチドグリカンまたはリポタイコ酸が、精製されたペプチドグリカンまたはリポタイコ酸である、態様P65またはP66の組成物。
態様P68. 生存能力を有するバチルス・コアグランス細菌を含まない、態様P65〜P67のいずれかの組成物。
態様P69. β-グルカンをさらに含む、態様P65〜P68のいずれかの組成物。
態様P70. 食物組成物または飲料組成物である、態様P65〜P69のいずれかの組成物。
態様P71. （a）茶、コーヒー、もしくはアルコール飲料、
（b）発酵食品もしくは発酵飲料、
（c）穀粒ベースの組成物、
（d）ベイクド組成物、
（e）菓子、
（f）オメガ-3脂肪酸、
（g）酪農組成物、
（h）非酪農乳様組成物、
（i）スポーツ栄養組成物、または
（j）動物飼料
を含む、態様P70の組成物。
態様P72. 摂取後に対象において少なくとも1つの成長因子のレベルを増加させるのに有効な量で、死んでいるバチルス・コアグランス細菌全体を含む、組成物であって、該成長因子が、顆粒球コロニー刺激因子（G-CSF）、顆粒球マクロファージコロニー刺激因子（GM-CSF）、インターロイキン-1受容体アンタゴニスト（IL1RA）、インターロイキン-6（IL-6）、またはインターロイキン-10（IL-10）を含む、該組成物。
【０２０８】
さらなる態様は、以下の態様1〜35を含む。
態様1. 不活性化された、生存能力を有さない、または死んでいるバチルス・コアグランス細菌を含む組成物の有効量を対象に投与する工程を含む、該対象の身体能力を向上させる方法。
態様2. 前記不活性化された、生存能力を有さない、または死んでいるバチルス・コアグランス細菌が、不活性化された、生存能力を有さない、または死んでいるバチルス・コアグランス芽胞を含む、態様1の方法。
態様3. 細菌がバチルス・コアグランス芽胞を少なくとも85％含む、態様1または2の方法。
態様4. 前記不活性化された、生存能力を有さない、または死んでいるバチルス・コアグランス細菌が、不活性化された、生存能力を有さない、または死んでいるバチルス・コアグランス栄養型細菌を含む、態様1〜3のいずれかの方法。
態様5. 前記細菌が、バチルス・コアグランスGBI-30（ATCC表示番号PTA-6086）細菌である、態様1〜4のいずれかの方法。
態様6. 身体能力の向上が筋肉痛の減少を含む、態様1〜5のいずれかの方法。
態様7. 前記筋肉痛が運動後の筋肉痛である、態様6の方法。
態様8. 身体能力の向上が身体強度または持久力の向上を含む、態様1〜7のいずれかの方法。
態様9. 身体能力の向上が運動後の回復時間の減少を含む、態様1〜8のいずれかの方法。
態様10. 身体能力の向上が筋肉量の増加を含む、態様1〜9のいずれかの方法。
態様11. 身体能力の向上が、前記対象における引き締まった筋肉の発達、回復、強度、または修復の向上を含む、態様1〜10のいずれかの方法。
態様12. 前記対象が身体能力の向上を望んでいる、態様1〜11のいずれかの方法。
態様13. 前記対象が、運動競技選手、警察官、または軍隊の構成員である、態様1〜12のいずれかの方法。
態様14. 前記対象が、パフォーマンス動物、コンパニオンアニマル、または使役動物である、態様1〜12のいずれかの方法。
態様15. 前記対象が、損傷もしくは関節炎を有するか、または脳卒中を起こしたことがある、態様1〜14のいずれかの方法。
態様16. 前記対象が、呼吸器感染症、粘膜感染症、皮膚感染症、および胃腸感染症を有さない、態様1〜15のいずれかの方法。
態様17. 前記有効量が、前記対象において炎症を減少させるのに有効である、態様1〜16のいずれかの方法。
態様18. 前記有効量が、前記対象において少なくとも1つの成長因子のレベルを増加させるのに有効である、態様1〜17のいずれかの方法。
態様19. 前記レベルが、前記対象の体液における前記少なくとも1つの成長因子のレベルである、態様18の方法。
態様20. 前記体液が、血液、血漿、または血清である、態様19の方法。
態様21. 前記成長因子が、組織修復、幹細胞分化、または幹細胞増殖を増大させる、態様18の方法。
態様22. 前記有効量が、前記対象において顆粒球コロニー刺激因子（G-CSF）または顆粒球マクロファージコロニー刺激因子（GM-CSF）のレベルを増加させるのに有効である、態様18の方法。
態様23. 前記有効量が、前記対象においてインターロイキン-1受容体アンタゴニスト（IL1RA）、インターロイキン-6（IL-6）、またはインターロイキン-10（IL-10）のレベルを増加させるのに有効である、態様1〜22のいずれかの方法。
態様24. 前記有効量が、前記対象において少なくとも1つの免疫活性化サイトカインのレベルを増加させるのに有効である、態様1〜23のいずれかの方法。
態様25. 前記少なくとも1つの免疫活性化サイトカインが、インターロイキン-1β（IL-1β）、インターロイキン-6（IL-6）、インターロイキン-17A（IL-17A）、腫瘍壊死因子-α（TNF-α）、またはインターフェロンγ（IFNγ）を含む、態様24の方法。
態様26. 前記有効量が、前記対象において少なくとも1つの免疫活性化ケモカインのレベルを増加させるのに有効である、態様1〜25のいずれかの方法。
態様27. 前記少なくとも1つの免疫活性化ケモカインが、単球走化性タンパク質-1（MCP-1）、マクロファージ炎症性タンパク質1-α（MIP-1α）、またはマクロファージ炎症性タンパク質-1β（MIP1β）を含む、態様26の方法。
態様28. 前記組成物は重量比で約0.001％未満が水分である、態様1〜27のいずれかの方法。
態様29. 前記組成物が賦形剤をさらに含む、態様1〜28のいずれかの方法。
態様30. 前記組成物が、β-グルカン、マルトデキストリン、イヌリン、イニトソール（initosol）、トレハロース、微結晶セルロース（MCC）、乳酸カルシウム、ステアリン酸マグネシウム、フラクトオリゴ糖（FOS）、またはグルコオリゴ糖（GOS）をさらに含む、態様1〜29のいずれかの方法。
態様31. 前記不活性化された、生存能力を有さない、または死んでいるバチルス・コアグランス細菌が凍結乾燥されている、態様1〜30のいずれかの方法。
態様32. 前記不活性化された、生存能力を有さない、または死んでいるバチルス・コアグランス細菌が、凍結乾燥されて、その後に水溶液と混合されている、態様1〜30のいずれかの方法。
態様33. 前記組成物が界面活性剤または乳化剤をさらに含む、態様1〜32のいずれかの方法。
態様34. 前記組成物が食物組成物または飲料組成物である、態様1〜33のいずれかの方法。
態様35. 前記食物組成物または飲料組成物が、
（a）茶、コーヒー、もしくはアルコール飲料、
（b）発酵食品もしくは発酵飲料、
（c）穀粒ベースの組成物、
（d）ベイクド組成物、
（e）菓子、
（f）オメガ-3脂肪酸、
（g）酪農組成物、
（h）非酪農乳様組成物、
（i）スポーツ栄養組成物、または
（j）使役動物用、コンパニオンアニマル用、家畜用、もしくは水産養殖用飼料
を含む、態様34の方法。
【０２０９】
本発明のより完全な理解を助けるために、以下に実施例を提供する。以下の実施例は、本発明を製造および実施する例示的な様式を示すものである。しかし、本発明の範囲は、これらの実施例に開示される具体的態様に限定されるものではなく、これらは例示を目的としたものにすぎず、代替の方法を用いて同様の結果を得ることもできる。
【実施例】
【０２１０】
実施例1：バチルス・コアグランス培養物の調製
バチルス・コアグランスHammer細菌（ATCCアクセッション番号31284）を、30℃で標準的なエアリフト発酵槽を用いて、5 gペプトン、3 gミートエキス、10〜30 mg MnSO4、および1,000 ml蒸留水を含み、pH 7.0に調整された栄養ブロス中に接種し、約108〜109個の細胞/mlの細胞密度まで成長させた。芽胞形成のために許容されるMnSO4の範囲は、1 mg/l〜1 g/lである。栄養型細胞は、最大45℃まで能動的に複製することができる。発酵後、B.コアグランス細菌細胞または芽胞を、標準的な方法（例えば、ろ過、遠心分離）を用いて収集し、収集した細胞および芽胞を、凍結乾燥、噴霧乾燥、風乾、または凍結させることができる。細胞培養物からの上清を収集し、B.コアグランスにより分泌された細胞外物質として使用する。
【０２１１】
上記培養物からの典型的な収量は、約109〜1010個の生存能力を有する芽胞、より典型的には、乾燥前の1グラムあたり約1000億〜1500億個の細胞／芽胞の範囲である。芽胞は、室温で保管される場合、最大10年間、乾燥後に少なくとも90％の生存率を維持し、したがってB.コアグランスHammer芽胞を含む組成物の室温での有効貯蔵期間は、約10年間である。
【０２１２】
実施例2：バチルス・コアグランス芽胞の調製
乾燥させたB.コアグランス芽胞の培養物を、以下のようにして調製した。1000万個の芽胞を、24 gのジャガイモデキストロースブロス、10 gの家禽および魚組織の酵素消化物、5 gのFOSおよび10 gのMnSO4を含む1リットルの培養物に接種した。この培養物を、培養物1グラムあたり約1500億個の細胞を有する培養物を生成するよう、37℃の高酸素環境下で72時間維持した。その後、培養物をろ過して培養培地液を除去し、細菌ペレットを水で再懸濁し、凍結乾燥させた。ついで凍結乾燥させた粉末を、標準的な適正製造基準（GMP）を用いて挽き、細粉にした。
【０２１３】
実施例3：不活性化されたプロバイオティクスバチルス・コアグランスGBI-30はインビトロで複合的な免疫活性化、抗炎症、および再生のマーカーを誘導する
この研究は、プロバイオティクス腸内細菌を熱殺傷することにより製造される、新規の摂取可能な健康製品を試験するために行った。この腸内細菌の菌株がヒト免疫細胞を活性化させ、外来抗原の検出に重要である特定の免疫細胞の成熟を助けることが以前に示された。不活性化（例えば、熱殺傷）プロセスにより、この細菌を幅広い用途、例えば、生きている細菌が腐食させ得るまたはその貯蔵期間を非常に限られたものにし得る食物において使用できるようにする。この熱殺傷した細菌が生きている細菌と同様の特性を有することを示すことが重要であった。
【０２１４】
このことを試験するため、健常なヒト由来の血液サンプルを使用し、免疫細胞および幹細胞を含む白血球細胞の一部を単離した。この血液サンプルは、腸からの抗原が免疫細胞に提示される腸壁内の血液循環中にあるのと同じタイプの細胞を含んでいた。この細胞を、不活性化された細菌と共に24時間培養した。免疫細胞を、それらの活性化状態について試験した。その液体培養培地を、分泌されたバイトマーカーについて試験した。
【０２１５】
熱殺傷した細菌が、免疫活性化および抗炎症効果に関して、生きている細菌と同様の効果を有することが見いだされた。驚くべきことに、これらのヒト細胞が、外傷および損傷後の組織修復に重要である成長因子を分泌することを示したという効果も見いだされた。
【０２１６】
腸内微生物のコミュニティである「腸内ミクロビオーム」は、ヒト宿主の健康に大きな影響を有している（The Human Microbiome Project Consortium. Nature 2012; 486 (7402): 207-214; Shreiner et al. Curr Opin Gastroenterol. 2015; 31(1): 69-75）。腸内にコロニーを形成する微生物と人類の免疫機能、代謝、および脳機能の間には不可欠な協力関係が存在する（Galland J Med Food 2014; 17(12): 1261-72）。腸内微生物と宿主細胞および組織の間の相互作用は、細菌細胞壁成分および分泌される代謝産物を通じたものを含む様々な方法で行われる。微生物と宿主細胞の間の最も即時的かつ直接的な相互作用は、腸管内腔の免疫細胞、例えば抗原を直接採集する樹状細胞上の受容体と結合する細菌細胞壁成分の外側層が関与するものである。この相互作用は、グラム陽性細菌とグラム陰性細菌で異なるタイプの細菌細胞壁成分を提示する。グラム陰性細菌は、Toll様受容体4（TLR-4）によって認識されるリポ多糖を提示し（Gioannini and Weiss Immunol Res. 2007; 39 (1-3): 249-60）、グラム陽性細菌の外側細胞壁は、TLR-2によって認識されるタイコ酸およびリポタイコ酸を免疫細胞に対して提示する（Shwandner et al. J Biol Chem 1999; 274: 17406-17409）。多くの病原性細菌において、リポタイコ酸は毒性を示し（Kang et al. Arch Pharm Res. 2016; 39 (11): 1519-1529）、一方、有益なプロバイオティクス細菌由来のリポタイコ酸は、複合的な有益な免疫調整を誘導する。リポタイコ酸は、様々な免疫活性化機構を細胞および分子レベルで研究するためのモデルTLR-2リガンドとして広く使用されており、興味深いことに、インビトロで炎症促進性（Paustian et al. PLoS One. 2013; 8(1): e54804; Cheng et al. Cytokine. 2013; 61(2): 499-505）および抗炎症性（Kim et al. Mol Cells. 2012; 33(5): 479-86; Kim et al. Mol Immunol. 2011; 48(4): 382-91）の両方の活性を発揮することが示されている。リポタイコ酸の構造の複雑さが、宿主の免疫応答に影響することが示唆されている。リポタイコ酸の化学組成は、微生物間および類似微生物の菌株間で相違する。このことは、宿主細胞において多様な効果を誘導する上で非常に重要であり、異なる微生物株によって誘導される高度に選択的な免疫調整効果における鍵となる因子の1つであると考えられている。
【０２１７】
有益なプロバイオティクス細菌の摂取は、「脳腸相関（gut-brain axis）」とも称される、胃腸系と中枢神経系の間の広範囲のコミュニケーション（Dinan et al. Gastroenterol Clin North Am. 2017; 46(1): 77-89）の結果として、胃腸疾患（Korpela et al. PLoS One 2016; 11(4): e0154012）、呼吸器感染症（Lenoir-Wijnkoop et al. PLoS One. 2016; 11(11): e0166232）、神経免疫および神経精神障害（Wang et al. Brain Behav Immun. 2014; 38: 1-12）、肥満体における満腹および心理社会的挙動（Sanchez et al. Nutrients. 2017; 9(3)）ならびに不安およびうつの症状の軽減（Wallace et al. Ann Gen Psychiatry. 2017; 16: 14）を含む炎症の調節に結びつく健康上の利益に関連付けられている。プロバイオティクス細菌の摂取は高度に安全であるとみなされているが、不活性化されたプロバイオティクス株には多くの有用な用途、例えば長い貯蔵期間、および代謝的に活性な生きている細菌がその食物の見た目を損なわせ得る多くのタイプの食品における有用性がある。不活性化されたプロバイオティクス細菌はまた、腸内細菌が血流に移動する危険が潜在的に存在し得る免疫不全個体に関する特定の臨床状況下での用途も有する。不活性化されたプロバイオティクス細菌は、加熱し、宿主免疫細胞との相互作用の主要機構としてその外側細菌細胞壁を残すことによって生成され得る。熱殺傷されたラクトバチルス・プランタルム（Lactobacillus plantarum）L-137（HK L-137）は、げっ歯類およびヒトにおけるその効果に関して、過去十数年にわたって広く研究されている。動物研究は、HK L-137の摂取が、インターフェロン産生の増大を伴う、インフルエンザウイルス感染症に対する保護を提供することを示しており、これは、抗ウイルス免疫防御活性の全般的補助を示唆するものである（Maeda et al. Int Immunopharmacol. 2009 Aug; 9(9): 1122-5）。臨床試験は、HK L-137の毎日の摂取が、獲得免疫応答およびTH1関連免疫機能の向上（Hirose et al. J Nutr. 2006 Dec; 136(12): 3069-73）ならびに上気道感染症の発生率の減少（Hirose et al. J Nutr Sci. 2013 Dec 6; 2: e39）を含む、健康的な免疫機能を補助することを示している。その摂取はまた、改善された口内の健康にも関与する（Iwasaki et al. Oral Health Prev Dent. 2016; 14(3): 207-14）。熱殺傷された細菌はまた、細菌表面上のリポタイコ酸によるIL-12およびインターフェロンの強力な誘導（Arimori et al. Immunopharmacol Immunotoxicol. 2012 Dec; 34(6): 937-43）に一部起因して、抗アレルギー性（Murosaki et al. J Allergy Clin Immunol. 1998 Jul; 102(1): 57-64）および抗腫瘍（Guo et al. Bull Cancer. 2015 Mar; 102(3): 204-12）効果を示すことも知られている。さらに、L-137株は、関係が近いラクトバチルス・プランタルムJCM1149株よりも、多量のアラニンを含む高レベルのリポタイコ酸をその表面上に露出させており（Hatano et al. Int Immunopharmacol. 2015 Apr; 25(2): 321-31）、これはJCM1149株によるものよりも高い、L-137株によるIL-12の誘導に関連する（Hirose et al. Microbiol Immunol. 2010 Mar; 54(3): 143-51）。
【０２１８】
乳酸産生プロバイオティクス細菌の別のグループは、芽胞形成性バチルス・コアグランス（以前はバチルス・スポロゲネス（Lactobacillus sporogenes）と分類されていた）の様々な特有の菌株を含む。バチルス・コアグランス壁由来のタイコ酸は、ほとんどのグラム陽性細菌よりも高い脂質含量を有し、グルコースおよびガラクトースという2つの中性糖で置換されたグリセロリン酸ポリマーである。それは、それ以外ではタイコ酸の特徴であるとみなされるアミノ酸置換を欠くという点で独特である（Forrester and Wicken Microbiology, 01 January 1966, 42: 147-154）。
【０２１９】
生きているGBI-30株由来の細胞壁は、インビトロで免疫調整および抗炎症効果を示す（Jensen et al. BMC Immunol. 2010; 24: 11-15）。バチルス・コアグランスGBI-30株の免疫調整効果は、インビトロで細胞壁画分および生きている細菌によって産生される代謝産物の両方に関連することが以前に示されている（Benson et al. World J Gastroenterol. 2012 Apr 28; 18(16): 1875-83）。このプロバイオティクス株は、クロストリジウム・ディフィシレ（Clostridium difficile）に感染したマウスにおいて生存期間を延長し、症状を減少させることがさらに示されている（Fitzpatrick et al. Gut Pathog. 2011 Oct 20; 3(1): 16; Fitzpatrick et al. Gut Pathog. 2012 Oct 22; 4(1): 13）。臨床研究は、GBI-30の摂取が、有益な細菌の数を増加させることにより腸内ミクロビオームを変化させることを補助することを示し（Nyangale et al. Anaerobe. 2014 Dec; 30: 75-81）、GBI-30を28日間摂取した高齢者由来の血液のエクスビボ試験は、抗炎症性サイトカイン応答の増大を示した（Nyangale et al. J Nutr. 2015 Jul; 145(7): 1446-52）。最近の臨床試験の結果は、GBI-30の摂取が、運動能力を支援し、運動に誘導される筋肉へのダメージを減少させるのを補助することを示唆している（Jager et al. Peer J. 2016 Jul 21; 4: e2276）。
【０２２０】
最近、熱不活性化されたバチルス・コアグランスGBI-30細菌が、経口消費用に製造された。本明細書に示される研究は、生きているGBI-30株の細胞壁に付随する免疫活性化および抗炎症特性が不活性化産物において保護されているかどうかを示すために行われた。この研究の重要な焦点は、抗原提示単球および樹状細胞とリンパ球およびナチュラルキラー細胞の間のクロストークを許容する細胞培養系においてヒト免疫細胞に対して提示されたときの不活性化された細菌の生物学的活性を実証すること、したがって腸粘膜免疫組織における現象を模倣することであった。
【０２２１】
材料および方法
試薬
リン酸緩衝生理食塩水、Roswell Park Memorial Insititute 1640（RPMI-1640）培地、ペニシリン・ストレプトマイシン 100×、インターロイキン-2（IL-2）、およびリポ多糖（LPS）は、Sigma-Aldrich Co.（St Louis, MO, USA）から購入した。CD69フルオレセインイソチオシアネート、CD56フィコエリスリン、CD3ペリジニンクロロフィルタンパク質、CD25ブリリアントバイオレット421、およびヘパリンVacutainerチューブは、BD Biosciences（Franklin Lakes, NJ, USA）から購入した。Bio-Plex Pro（商標）ヒトサイトカイン27-Plexは、Bio-Rad Laboratories Inc.（Hercules, CA, USA）から購入した。
【０２２２】
不活性化されたバチルス・コアグランスGBI-30（Staimune（商標））
不活性化されたバチルス・コアグランスGBI-30（ATCC表示番号PTA-6086）細菌は、Ganeden Biotechから提供を受けた。細菌数は、1グラムあたり150億個（1.5×1010）（CFU）であった。不活性化された細菌を、生理学的食塩水で希釈し、0.78×106〜100×106個の不活性化細菌/mL細胞培養物の量で細胞培養物に添加した。
【０２２３】
末梢血単核細胞培養物
Sky Lakes Medical Center Institutional Review Boardにより承認されたインフォームドコンセントの下、50〜60歳の年齢の健常ヒトボランティアを血液ドナーとして用いた（FWA 2603）。ヘパリンナトリウム中の新たに採血した末梢静脈血液サンプルをLympholyte-Poly上に重層し、1800 rpm（450 g）で35分間遠心分離した。上層のPBMCが豊富な界面を、滅菌されたトランスファーピペットを用いて新しいバイアルに収集し、カルシウムまたはマグネシウムを含まない10 mL PBSを用いて、2400 rpmで10分間の遠心分離によって二度洗浄した。細胞を、10％ウシ胎仔血清、L-グルタミンならびに抗生物質（ペニシリンおよびストレプトマイシン）を含むRPMI 1640に再懸濁し、106個/mLの細胞密度にした。試験する8つの用量の不活性化GBI-30の各々につき、3つの培養物を準備した。未処置の細胞培養物（陰性対照）を、6つ組で作製した。一方のセットでLPS（10 ng/mL）を用い、他方のセットでIL-2（100 IU/mL）を用いて2つの異なる経路により免疫細胞を活性化させる2セットの陽性対照培養物を、3つ組で作製した。
【０２２４】
サイトカイン試験
上清をヒト免疫細胞24時間培養物から収集し、27個のサイトカイン、ケモカイン、および成長因子のレベルを分析した。試験は、6つの高用量の不活性化GBI-30で処置した細胞培養物からの培養上清を用いて行った。以下のマーカー：インターロイキン（IL）-1β、IL-1ra、IL-2、IL-4、IL-5、IL-6、IL-7、IL-8、IL-9、IL-10、IL-12（p70）、IL-13、Il-15、IL-17、エオタキシン、塩基性線維芽細胞成長因子（FGF）、顆粒球コロニー刺激因子（G-CSF）、顆粒球マクロファージコロニー刺激因子（GM-CSF）、インターフェロン（IFN）-γ、インターフェロンγ誘導タンパク質10（IP-10）、単球走化性タンパク質-1（MCP-1；MCAF）、マクロファージ炎症タンパク質（MIP）-1α、MIP-1β、血小板由来成長因子（PDGF）-BB、活性化制御（regulated on activation）、正常T細胞発現・分泌（normal T cell expressed and secreted; RANTES）、腫瘍壊死因子（TNF）-α、および血管内皮成長因子（VEGF）を、Bio-Plexタンパク質アレイ（Bio-Rad Laboratories Inc.）を用いておよびxMAP技術（Luminex, Austin, TX, USA）を用いて定量した。
【０２２５】
統計分析
各データセットの平均および標準偏差は、Microsoft Excelを用いて算出した。統計分析は、両側独立t検定を用いて行った。統計学的有意性は、p<0.05の場合に示され、高レベルの有意性は、p<0.01で示された。
【０２２６】
結果
免疫細胞活性化
不活性化されたバチルス・コアグランスGBI-30による免疫細胞の活性化を、活性化マーカーCD69の細胞表面発現を測定することにより決定した。異なる前方および側方散乱特性を用いた細胞のゲーティングにより、リンパ球対単球／マクロファージのCD69発現の分析を行った（図1）。不活性化されたGBI-30を用いた24時間の両方の細胞型の処置は、幅広い用量範囲で活性化をもたらした。リンパ球におけるCD69発現の結果は、その最低用量においてさえも、CD69発現が基準値に戻らないことを示しており、このことは、さらに少ない用量であってもなおリンパ球を活性化することができることを示唆している（図1A）。これに対して、単球の最も確実かつ統計的に有意な活性化は、より狭い用量範囲内で見られ、示されているその最低用量では基準値に戻った（図1B）。
【０２２７】
CD3、CD56、およびCD69に対する蛍光標識された抗体の使用により、CD3+ Tリンパ球、CD3+CD56+ NKT細胞、CD3-CD56+ NK細胞、および非T非NKリンパ球を含むリンパ球サブセットの変化を観察した。GBI-30を用いた24時間のPBMC培養物の処置は、Tリンパ球、NKT細胞、NK細胞、および非T非NK細胞の活性化をもたらした（図2）。Tリンパ球の活性化は、幅広い用量範囲で見られ、その3番目に低い用量（3.13×106個の細菌/mL）において、CD69発現は、LPSにより誘導されるCD69発現と同程度に確実であった（図2A)。Tリンパ球の活性化は、GBI-30の最低用量においてさえも、高い有意性を保っていた。NKT細胞の活性化もまた、全用量範囲で観察され、一部の用量で活性化は未処置対照培養物と比較して高度に有意であった（図2B）。NK細胞の活性化は、より低い用量で最も確実であり、より多い用量では顕著でなかった（図2C）。非T非NKリンパ球集団におけるCD69発現も幅広い用量範囲で見られ、試験した最低用量で基準値に戻った（図2D）。リポ多糖（LPS）は、陽性対照として用い（10 ng/mL）、これはすべての細胞型においてCD69発現を増大させた。IL-2は、第2の陽性対照として用い（100 IU/mL）、これもまたすべての細胞型においてCD69の増大を示した。
【０２２８】
場合によっては、3つの培養物からなる1つのセット内で、大きなエラーバーによって反映される、CD69発現の大きなばらつきが観察され、いくつかの例において、3つ組のセットにおける平均応答が、全体の用量応答から外れているように見える。いかなる科学的理論によっても拘束されるものではないが、これは、不活性化された細菌が分散されずに培養ウェル内で塊になることがある、したがってそれらのウェル内で細菌とPBMC細胞の間の最適な相互作用が提供されないという試験物質の性質によるものであると考えられる。例は、3つ組の培養ウェルの1つのみがその上の用量および下の用量と同等のCD69発現レベルを示した、12.5×106個のGBI-30/mLの用量での非T非NKリンパ球における非常に低いCD69発現である（図2D）。
【０２２９】
免疫活性化サイトカイン
不活性化されたバチルス・コアグランスGBI-30に24時間曝露されたPBMC培養物由来の上清を、27つの異なるサイトカイン、ケモカイン、および成長因子について、磁気ビーズベースのアレイおよびLuminex xMAP技術を用いて同時にアッセイした。様々な免疫活性化および調節特性を有するサイトカインのレベルの増加が観察された。これには、IL-1β、IL-6、IL-17、およびTNF-αを含む特定の炎症促進性サイトカインの確実な上方調節が含まれていた（図3）。サイトカインIL-4、IL-7、IL-8、IL-9、およびIL12p70についても増加が観察された（データ示さず）。さらに、抗ウイルス免疫防御活性に関与する4つのバイオマーカー、すなわち、インターフェロンγ（IFN-γ）および3つのケモカインMCP-1、MIP1α、およびMIP1βについて増加が観察された（図4）。
【０２３０】
抗炎症性サイトカイン
免疫活性化、炎症促進性サイトカインの増大と並行して、より高用量の不活性化GBI-30は、2つの抗炎症性サイトカインIL-1raおよびIL-10の確実な増大も誘発した（図5）。その増大は、2つの抗炎症性サイトカインの間で同等であり、未処置細胞培養物におけるレベルのおよそ300倍の増大がみられた。
【０２３１】
成長因子
不活性化されたGBI-30へのヒトPBMC細胞の曝露は、成長因子の産生に関して複合的な変化を誘発した（図6）。心血管系の健康および創傷治癒において役割を果たすことが知られている、塩基性線維芽細胞成長因子（bFGF）および血管内皮成長因子（VEGF）という2つの成長因子に関して二相性用量応答が見られた（図6Aおよび6B）。どちらも幹細胞生物学に対して分化作用を有する成長因子である、顆粒球コロニー刺激因子（G-CSF）および顆粒球マクロファージコロニー刺激因子（GM-CSF）に関して、高度に選択的な変化が見られ（図6Cおよび6D）、不活性化されたGBI-30を用いたPBMCの処置は、GM-CSF産生の穏やかな減少とは対照的に、G-CSF産生の非常に強い増大をもたらした。
【０２３２】
不活性化されたプロバイオティクスバチルス・コアグランスGBI-30はインビトロで複合的な免疫活性化、抗炎症、および再生のマーカーを誘導する
この研究の目的は、インビトロでのヒト免疫細胞に対する熱不活性化されたプロバイオティクス株バチルス・コアグランスGBI-30（ATCC表示番号PTA-6086）（Staimune（商標））の免疫活性化および抗炎症効果を実証することであった。
【０２３３】
健常な血液ドナー由来のヒト末梢血単核細胞のインビトロ培養物を、熱不活性化されたGBI-30を用いて24時間処置した。インキュベート後、細胞を、CD3、CD56、およびCD69に対する蛍光色素標識モノクローナル抗体を用いて染色し、フローサイトメトリーにより細胞の活性化を観察した。培養上清を、27プレックスLuminexアレイを用いて、炎症促進性および抗炎症性サイトカイン、ケモカイン、ならびに成長因子を含むサイトカインプロフィールに関して試験した。
【０２３４】
不活性化されたGBI-30は、CD3+CD56- Tリンパ球、CD3+CD56+ NKT細胞、CD3-CD56+ NK細胞、およびCD3-CD56- 非T非NK細胞サブセット内の一部の細胞において早期活性化マーカーであるCD69を誘導した。培養上清は、免疫活性化サイトカインIL-1b、IL-6、IL-17A、およびTNF-αの確実な増大を示した。IFN-γは、MCP-1、MIP-1α、およびMIP-1βの3つのケモカインと共に増大した。2つの抗炎症性サイトカインIL-1raおよびIL-10は、修復および幹細胞生物学に関与する成長因子、すなわち、VEGF、bFGF、およびG-CSFと同程度に増大した。対照的に、GM-CSFレベルは、穏やかな減少を示し、これにより高度に選択的な成長因子の応答が示された。
【０２３５】
不活性化されたGBI-30は、ヒト免疫細胞を活性化させ、免疫活性化および抗炎症性サイトカインおよびケモカインの産生を変化させた。特に重要なのは、損傷後および炎症後の修復および再生に関与する成長因子の選択的上方調節が実証されたことである。このことは、重要な免疫原性の細胞壁成分、例えばリポタイコ酸が、熱不活性化後もダメージを受けておらず、生きているGBI-30細胞壁に付随する複合的で有益な生物学的活性を維持していることを示唆している。バチルス・コアグランスGBI-30由来の細胞壁は、免疫活性化および抗炎症特性の両方を含む、複合的な生物学的特性を有する。
【０２３６】
不活性化されたGBI-30は、複数のヒト免疫細胞型において活性化マーカーであるCD69の増大を誘導した。CD69は、多くの細胞型における早期活性化マーカーであり、ウイルスに感染したおよび形質転換した細胞のNK細胞を通じた殺傷を担う分子装置に直接関与している（Moretta et al. J Exp Med. 1991 Dec 1; 174(6): 1393-8; Dons'koi et al. J Immunol Methods. 2011 Sep 30; 372(1-2): 187-95; Clausen et al. Immunobiology. 2003; 207(2): 83-95)。加えて、CD69は、広範囲の機能を有し、T細胞／B細胞相互作用、適切な組織環境へのホーミングならびに免疫学的記憶を生成および維持するプロセスにも重要である（Schoenberger. Proc Natl Acad Sci U S A. 2012 May 29; 109(22): 8358-9; Cibrian and Sanchez-Madrid. CD69: from activation marker to metabolic gatekeeper. Eur J Immunol. 2017 May 5. doi: 10.1002/eji.201646837）。複数の細胞型においてCD69を誘導する不活性化されたGBI-30の能力は、自然および獲得の両方の免疫システムの細胞に対する幅広い効果を示している。非T非NK細胞サブセット内の細胞型は、樹状細胞、Bリンパ球、循環造血、間葉および内皮幹細胞を含む。生きているGBI-30に関する研究は、ヒト単核食細胞の曝露が、抗原提示細胞のマクロファージおよび樹状細胞の両方の表現型への好ましい成熟を誘導したことを示した。樹状細胞は腸粘膜免疫組織における最前線の抗原提示細胞であり、インタクトな上皮バリアを横断する特有の監視行動および抗原認識が可能であり（Allen et al. Front Immunol. 2016 Jun 10; 7: 231）、したがってインビボで摂取されたGBI-30に出会う最初の細胞型であるため、このことは重要である。
【０２３７】
不活性化されたGBI-30は、複数のサイトカイン、ケモカイン、および成長因子の産生の確実な増大をもたらした。本データは、生きているGBI-30に関して以前に試験されたものよりも広範囲のサイトカイン、ケモカインおよび成長因子を網羅している。これが、GBI-30の強力な免疫活性化特性の確認の助けとなった。それはまた、抗ウイルスおよび再生機能に関連する生物学的特性も実証した。抗ウイルス免疫防御機構および細胞動員に関係するバイオマーカーであるIFNγ、MCP-1、MIP-1α、およびMIP-1βの増大は、特に重要である。IFNγは、直接的な抗ウイルス特性を有し、マクロファージを活性化し、形質転換細胞のNK細胞殺傷活性を強化する。これら3つのケモカインは、損傷によるものか感染症によるものかによらず、炎症部位への免疫細胞の動員を促進する。2つの抗炎症性サイトカインIL-1raおよびIL-10の増大は、不活性化されたGBI-30の免疫調整の複合性を示している。いかなる科学的理論によっても束縛されるものではないが、この効果は、初期の炎症促進性の免疫活性化を解消し、炎症プロセスを空間的および時間的に制限するために誘導されるカスケードの後半部分である。
【０２３８】
内在再生において特定の役割を果たすことが公知の様々な成長因子が、ヒト単核細胞の培養物において上方調節された。VEGFおよびbFGFの2つの成長因子が、不活性化されたGBI-30で処置された免疫細胞において上方調節され、これらは血管新生としても公知の新血管形成の誘導因子である。VEGFおよびbFGFの通常の機能は、一部は間葉幹細胞を通じた、損傷および運動後の修復ならびに新しい血管および筋肉の形成の重要なメカニズムに関するものである（Supanc et al. J Tissue Eng. Regen Med. 2017 Jan 12）。これは、外傷、例えば筋損傷、外傷性脳損傷および脳卒中からの回復プロセスにおいて重要な機能である。加えて、高度に選択的、対照的な効果が、2つの幹細胞成長因子、すなわちG-CSFおよびGM-CSFで見られた。不活性化されたGBI-30で処置されたPBMC培養物は、ゆるやかに減少したGM-CSFレベルと対照的に、最高用量のGBI-30で未処置培養物の7000倍超に達するG-CSFレベルの確実な増加を示した。G-CSFは幹細胞が好中球を生成するのを支援するのに対して、GM-CSFは、多細胞寄生虫に対する免疫防御に関与する、またアレルギーおよび喘息における炎症に関与する、好酸球を含む、より多くの細胞型の生成を促進するので、これは重要な違いである。加えて、VEGF、FGF、およびG-CSFは、幹細胞の動員、遊走および組織修復を支援するために治療的に使用される（Chan et al. Neurochem Int. 2017 Apr 12. pii: S0197-0186(16) 30432-6）。したがって、成長因子の産生に対するGBI-30の選択的効果は、例えば、潰瘍の状況で、腸粘膜組織の修復および再生において直接的に、ならびに炎症を調整する間葉幹細胞を含む、多くの細胞型に対する効果を通じて全身的に、有益であり得る（Lee et al. J Dent Res. 2016 Oct; 95(11): 1274-81; Sica and Mantovani. J Clin Invest. 2012 Mar; 122(3): 787-95）。間葉幹細胞は、損傷した、炎症をおこしたおよび虚血性の組織からのシグナルを検知し、それらに遊走することができる。それらは、血液脳関門を通過し、脳損傷、例えば脳卒中の修復に寄与し得る。興味深いことに、IL-1、TNF-αおよびIFN-γ産物による健常ヒトドナー由来の間葉幹細胞の処置は、間葉幹細胞によるG-CSF産生の強い増大（Redondo-Castro et al. Stem Cell Res Ther. 2017 Apr 17; 8(1): 79）、およびその後の、いくつかの炎症メディエーターを分泌するG-CSF再プログラムLPS活性化小グリア細胞の増大に寄与することが示されている。この一連のプロセスは、様々なタイプの幹細胞を含む単核細胞が不活性化GBI-30に曝露されたときのイベントに適用され得、初期の免疫活性化シグナルが炎症促進性サイトカインの産生を上方調節し、その後に炎症を解消することを意図した抗炎症プロセスが、修復成長因子と共に続く、イベントのカスケードを示唆し得る。
【０２３９】
いかなる科学的理論によっても拘束されるものではないが、生きているバチルス・コアグランスBC-30由来の非熱処理細胞壁画分の免疫調整特性と比較した、不活性化された熱処理GBI-30の同等の生物学的活性の検証においては、本明細書で報告される本研究からの3つの観察が特に重要である：（1）両方とも、リンパ球においてCD69活性化マーカーを増大させることができること、（2）両方とも、炎症促進性サイトカインIL-6の産生を増大させることができること、および（3）両方とも、抗炎症性サイトカインIL-10を増大させることができること。これは、リポタイコ酸を含む細胞壁成分が、不活性化プロセスによって少なくとも部分的に保存された状態で維持されることを示唆している。以前のインビトロ研究に対する直接的な用量比較は実施可能でない。細胞壁の免疫活性化特性に関する以前の研究は、繰り返しの凍結／解凍およびビーズミルサイクルを経た、したがって細胞壁が、各々PBMC細胞の表面上の適切な受容体に結合することができる小片に分解した物質に対して行われたものである。これに対して、本研究では、インタクトな細菌を細胞培養物に添加した。
【０２４０】
GBI-30の複合的な効果は、免疫活性化、抗炎症効果、ならびに迅速な修復に関与する幹細胞の動員、ホーミング、および再プログラムに関する効果を含む、摂取後の多方面の臨床応答の可能性を示唆している。GBI-30の直接的な効果は、腸粘膜のレベルでの免疫活性化として具現化され、迅速な全身効果を誘導すると考えられる。これは、消化された芽胞が腸管でコロニー形成することができる生きている細菌を生じる、およびその生物学的効果の重要な部分が分泌された細菌代謝産物に起因する、生きているバチルス・コアグランスに関する研究とは異なっている。不活性化されたGBI-30に関するさらなる研究は、効果的な免疫調整性を有する自然食品（Jensen et al. J Med Food. 2011 Sep; 14(9): 1002-10; Jensen et al. Prev Med. 2012 May; 54 Suppl: S124-9）およびヒト幹細胞生物学に対する効果を有する栄養補助食品（Jensen et al. Cardiovasc Revasc Med. 2007 Jul-Sep; 8(3): 189-202; Drapeau et al. J Stem Cell Res Ther 2015, 5: 287）に関して本発明者らのチームによって以前に公開された研究デザインを用いて急性的効果を試験するヒト臨床研究を含むべきである。
【０２４１】
他の態様
本発明は、その詳細な説明に関連して記載されているが、上記の記載は例示を意図したものであり、本発明の範囲を限定するものではなく、本発明の範囲は、添付の特許請求の範囲によって定義される。他の局面、利点、および改変も、添付の特許請求の範囲に包含される。
【０２４２】
本明細書で引用されているすべての米国特許および公開されたまたは未公開の米国特許出願は、参照により組み入れられる。本明細書で引用されているすべての公開された外国特許および特許出願は、参照により本明細書に組み入れられる。本明細書で引用されているすべての他の公開された参照文献、資料、原稿、および科学文献は、参照により本明細書に組み入れられる。
【０２４３】
本発明は、その好ましい態様に関して具体的に示され記載されているが、添付の特許請求の範囲に包含される本発明の範囲から逸脱することなく、形式および細部における様々な変更がその中でなされ得ることが当業者によって理解されるであろう。
【図１Ａ】
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【図１Ｂ】
2020524711.tif 000043
【図２Ａ】
2020524711.tif 000044
【図２Ｂ】
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【図２Ｃ】
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【図２Ｄ】
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【図３Ａ】
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【図３Ｂ】
2020524711.tif 000049
【図３Ｃ】
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【図３Ｄ】
2020524711.tif 000051
【図４Ａ】
2020524711.tif 000052
【図４Ｂ】
2020524711.tif 000053
【図４Ｃ】
2020524711.tif 000054
【図４Ｄ】
2020524711.tif 000055
【図５Ａ】
2020524711.tif 000056
【図５Ｂ】
2020524711.tif 000057
【図６Ａ】
2020524711.tif 000058
【図６Ｂ】
2020524711.tif 000059
【図６Ｃ】
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【図６Ｄ】
2020524711.tif 000061
【配列表】
2020524711000001.app
【国際調査報告】
2020524711.tif 000062