(57)【要約】  本発明は、直接共有結合または共有結合分子リンカーを介して少なくとも１つのアルギネートオリゴマーに共有結合したポリミキシン群の抗生物質またはその薬学的に許容される塩、溶媒和化合物、水和物、ジアステレオ異性体、互変異性体、鏡像異性体もしくは活性代謝物を含むポリミキシン−アルギネートオリゴマー結合体を提供する。また、前記結合体の製造方法、前記結合体を含む医薬組成物、および細菌感染症に罹患している、罹患していると疑われる、またはその危険性がある対象における細菌感染症の治療または予防の方法におけるその使用も提供する。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
直接共有結合または共有結合分子リンカーを介して少なくとも１つのアルギネートオリゴマーに共有結合したポリミキシン群の抗生物質、またはその薬学的に許容される塩、溶媒和化合物、水和物、ジアステレオ異性体、互変異性体、鏡像異性体もしくは活性代謝物を含む、ポリミキシン−アルギネートオリゴマー結合体。
【請求項２】
前記ポリミキシン群の抗生物質が、ポリミキシンＡ１、Ａ２、Ｂ１、Ｂ１−Ｉ、Ｂ２、Ｂ３、Ｂ４、Ｂ５、Ｂ６、Ｃ、Ｄ１、Ｄ２、Ｅ１、Ｅ２、Ｆ、Ｋ１、Ｋ２、Ｍ、Ｐ１、Ｐ２、ＳおよびＴならびにそれらの機能的に等価な誘導体から選択される、請求項１に記載のポリミキシン−アルギネートオリゴマー結合体。
【請求項３】
前記ポリミキシン群の抗生物質が、式ＩＩにより表される、請求項１または２に記載のポリミキシン−アルギネートオリゴマー結合体。
【化２】
2020503253.tif 000017
（式中、Ｄ−ＬｅｕはＤ−ロイシンであり、Ｌ−ＬｅｕはＬ−ロイシンであり、Ｌ−ＴｈｒはＬ−スレオニンであり、Ｌ−Ｄａｂはα，γ−ジアミノ酪酸であり、また、それらのうち０または１つ以上は、天然または非遺伝子的にコードされたアミノ酸から選択され得る別のアミノ酸残基で置き換えられている。
【請求項４】
前記天然または非遺伝子的にコードされたアミノ酸が、ロイシン、スレオニン、酸、フェニルアラニン、アルギニン、ヒスチジン、リジン、アスパラギン、セリン、システイン、ホモリジン、オルニチン、ジアミノ酪酸（例えば、α、γ−ジアミノ酪酸）、ジアミノピメリン酸、ジアミノプロピオン酸、ホモアルギニン、トリメチルリジン、トリメチルオルニチン、４−アミノピペリジン−４−カルボン酸、４−アミノ−１−カルバムイミドイルピペリジン−４−カルボン酸および４−グアニジノフェニルアラニンから選択される、請求項３に記載のポリミキシン−アルギネートオリゴマー結合体。
【請求項５】
前記ポリミキシン群の抗生物質が、ポリミキシンＢ１、Ｂ１−Ｉ、Ｂ２、Ｅ１またはＥ２から選択される、請求項１〜４のいずれか１つに記載のポリミキシン−アルギネートオリゴマー結合体。
【請求項６】
前記アルギネートオリゴマーの平均分子量が、３５，０００ダルトン未満、好ましくは、３０，０００、２５，０００または２０，０００ダルトン未満である、請求項１〜５のいずれか１つに記載のポリミキシン−アルギネートオリゴマー結合体。
【請求項７】
前記アルギネートオリゴマーの重合度（ＤＰ）または数平均重合度（ＤＰｎ）が、
（ｉ）４〜１００、４〜７５、４〜５０、４〜３５、４〜３０、４〜２５、４〜２２、４〜２０、４〜１８、４〜１６もしくは４〜１４．
（ｉｉ）６〜５０、６〜３５、６〜３０、６〜２５、６〜２２、６〜２０、６〜１８、６〜１６もしくは６〜１４、
（ｉｉｉ）８〜５０、８〜３５、８〜３０、８〜２５、１０〜２５、１０〜２２、１０〜２０、１０〜１８もしくは１０〜１５、または
（ｉｖ）２０〜１００、２０〜９０、２０〜８０、２０〜７５、２０〜７０、２０〜６５、２０〜６０、２０〜５５、２０〜５０、２０〜４５、２０〜４０、２０〜３５、２０〜３０もしくは２０〜２５、または、
（ｖ）３０〜１００、３０〜９０、３０〜８０、３０〜７５、３０〜７０、３０〜６５、３０〜６０、３０〜５５、３０〜５０、３０〜４５、３０〜４０もしくは３０〜３５
である、請求項１〜４のいずれか１つに記載のポリミキシン−アルギネートオリゴマー結合体。
【請求項８】
前記アルギネートオリゴマーが、少なくとも７０％のＧ残基、または少なくとも８０％もしくは、少なくとも８５％もしくは、少なくとも９０％もしくは、少なくとも９５％のＧ残基を有する、請求項１〜７のいずれか１つに記載のポリミキシン−アルギネートオリゴマー結合体。
【請求項９】
前記Ｇ残基の少なくとも８０％がＧブロック中に配置されている、請求項８に記載のポリミキシン−アルギネートオリゴマー結合体。
【請求項１０】
前記アルギネートオリゴマーが、少なくとも７０％のＭ残基、または少なくとも８０％もしくは、少なくとも８５％もしくは、少なくとも９０％もしくは、少なくとも９５％のＭ残基を有する、請求項１〜７のいずれか１つに記載のポリミキシン−アルギネートオリゴマー結合体。
【請求項１１】
前記Ｍ残基の少なくとも８０％がＭブロック中に配置されている、請求項１０に記載のポリミキシン−アルギネートオリゴマー結合体。
【請求項１２】
前記直接共有結合が、エステル、炭酸エステル、オルトエステル、ケタール、ヘミケタール、、エーテル、アセタール、ヘミアセタール（hemiacteal）、ペルオキシ、メチレンジオキシ、アミド、アミン、イミン、イミド、アジド、アゾ、オキシム、スルフィド、ジスルフィド、スルフィニル、スルホニル、カルボノチオイル、チオエステル、ホスフィンまたはホスホジエステル官能基の一部である、請求項１〜１１のいずれか１つに記載のポリミキシン−アルギネートオリゴマー結合体。
【請求項１３】
前記直接共有結合が、エステルまたはアミドの一部である、請求項１２に記載のポリミキシン−アルギネートオリゴマー結合体。
【請求項１４】
前記共有結合リンカーが、
（ｉ）アミノ酸またはペプチド、
（ｉｉ）グルロネートもしくはマンヌロネート以外の単糖またはオリゴ糖、あるいはそれらから形成されるポリマー、
（ｉｉｉ）リボヌクレオチドまたはデオキシリボヌクレオチド、
（ｉｖ）直鎖、分岐もしくは環状、置換もしくは非置換のアルキル、アルケニルまたはアルキニル基、
（ｖ）アセチル、スクシニル、アコニチル（シスまたはトランス）、グルタリル、メチルスクシニル、トリメリチルシステアミン（trimellityl cysteamine）、ペニシラミン、Ｎ−（２−メルカプトプロピオニル）グリシン、２−メルカプトプロピオン酸、ホモシステイン、３−メルカプトプロピオン酸またはデアミノ−ペニシラミン基
から選択される分子基であるかまたはそれらを含む、請求項１〜１１のいずれか１つに記載のポリミキシン−アルギネートオリゴマー結合体。
【請求項１５】
前記直接共有結合、前記共有結合を含有する官能基または前記共有結合分子リンカーが、
（ｉ）酸不安定性であり、
（ｉｉ）活性酸素種に敏感であり、および／または
（ｉｉｉ）細菌もしくは免疫細胞により分泌される酵素により分解される、
請求項１〜１４のいずれか１つに記載のポリミキシン−アルギネートオリゴマー結合体。
【請求項１６】
前記結合体が、アルギネート上のカルボキシル基とポリミキシン上のヒドロキシル基とから形成されるエステル結合を介してポリミキシン群の抗生物質に共有結合した少なくとも１つのアルギネートオリゴマーからなる、請求項１〜１５のいずれか１つに記載のポリミキシン−アルギネートオリゴマー結合体。
【請求項１７】
前記結合体が、アルギネート上のカルボキシル基とポリミキシン上のアミン基とから形成されるアミド結合を介してポリミキシン群の抗生物質に共有結合した少なくとも１つのアルギネートオリゴマーからなる、請求項１〜１４のいずれか１つに記載のポリミキシン−アルギネートオリゴマー結合体。
【請求項１８】
前記ポリミキシン群の抗生物質が、コリスチン（例えば、ポリミキシンＥ１またはＥ２）またはポリミキシンＢ（例えば、ポリミキシンＢ１、Ｂ１−ＩまたはＢ２）である、請求項１６または１７に記載のポリミキシン−アルギネートオリゴマー結合体。
【請求項１９】
前記アルギネートオリゴマーが、２〜１００個のモノマー残基を含有する、請求項１６〜１８のいずれか１つに記載のポリミキシン−アルギネートオリゴマー結合体。
【請求項２０】
前記アルギネートオリゴマーが、少なくとも７０％のＧ残基を有する、請求項１６〜１９のいずれか１つに記載のポリミキシン−アルギネートオリゴマー結合体。
【請求項２１】
請求項１〜２０のいずれか１つに記載のポリミキシン−アルギネートオリゴマー結合体と、薬学的に許容される賦形剤、担体または希釈剤とを含む、医薬組成物。
【請求項２２】
請求項１〜２０のいずれか１つに記載のポリミキシン−アルギネートオリゴマーの製造方法であって、前記方法が、
（ｉａ）アルギネートオリゴマーおよびポリミキシン群の抗生物質を準備し、それらの２つの分子基の間に直接共有結合を形成すること、または
（ｉｂ）アルギネートオリゴマー、ポリミキシン群の抗生物質および共有結合分子リンカーを準備し、アルギネートオリゴマーとリンカー分子の２つの分子基の間に直接共有結合を形成し、且つ、ポリミキシン群の抗生物質とリンカー分子の２つの分子基の間に直接共有結合を形成すること、または
（ｉｃ）アルギネートオリゴマーおよびポリミキシン群の抗生物質を準備すること（但し、一方または両方が、それに共有結合し、且つ、リンカー分子の少なくとも１つを介してアルギネートオリゴマーをポリミキシン群の抗生物質に共有結合させている共有結合分子リンカー分子を有する）、ならびに、任意に、
（ｉｉ）反応混合物から、ポリミキシン−アルギネートオリゴマー結合体の少なくとも一部を分離すること
を含む、製造方法。
【請求項２３】
請求項２２に記載の方法であって、前記方法が、
（ｉ）利用可能なカルボキシル基を有するアルギネートオリゴマーの水溶液を準備することと、
（ｉｉ）アルギネートオリゴマー中の少なくとも１つのカルボキシル基を活性化するのに十分な量および条件下で、前記アルギネート溶液を１−エチル−３−［３−ジメチルアミノプロピル］カルボジイミド塩酸塩（ＥＤＣ）と接触させることと、
（ｉｉｉ）任意に、アミン反応性スルホ−Ｎ−ヒドロキシスクシンイミド（スルホ−ＮＨＳ）エステルを形成するのに十分な量および条件下で、前記カルボキシル活性化アルギネートオリゴマーをスルホ−ＮＨＳと接触させることと、
（ｉｖ）アルギネートオリゴマーとポリミキシン群の抗生物質との間にアミド結合を形成するのに十分な量および条件下で、工程（ｉｉ）の前記カルボキシル活性化アルギネートオリゴマーまたは工程（ｉｉｉ）のアミン反応性スルホ−ＮＨＳエステルを、利用可能な一級アミン基を有するポリミキシン群の抗生物質と接触させることと、
（ｖ）反応混合物から、ポリミキシン−アルギネートオリゴマー結合体の少なくとも一部を分離することと
を含む、方法。
【請求項２４】
請求項２２に記載の方法であって、前記方法が、
（ｉ）利用可能なカルボキシル基を有するアルギネートオリゴマーの溶液、好ましくは有機（例えば、ＤＭＦおよび／またはＤＭＳＯ）溶液を準備することと、
（ｉｉ）Ｏ−アシルイソ尿素中間体を形成するのに十分な量および条件下で、前記アルギネート溶液をジシクロヘキシルカルボジイミド（ＤＣＣ）と接触させることと、
（ｉｉｉ）アルギネートオリゴマーとポリミキシン群の抗生物質との間にエステル結合を形成するのに十分な量および条件下で、前記Ｏ−アシルイソ尿素中間体を利用可能なヒドロキシル基を有するポリミキシン群の抗生物質および４−Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノピリジン（ＤＭＡＰ）と接触させることと、
（ｉｖ）反応混合物から、ポリミキシン−アルギネートオリゴマー結合体の少なくとも一部を分離することと
を含み、
工程（ｉｉ）および（ｉｉｉ）は、同時に実施してもよい、方法。
【請求項２５】
細菌感染症の予防の治療に使用される請求項２１に記載の医薬組成物の請求項１〜２０のいずれか１つに記載のポリミキシン−アルギネートオリゴマー結合体。
【請求項２６】
細菌感染症に罹患している、罹患していると疑われる、またはその危険性がある対象における細菌感染症の治療または予防の方法であって、前記方法が、請求項１〜２０のいずれか１つに記載のポリミキシン−アルギネートオリゴマー結合体または請求項２１に記載の医薬組成物の有効量を前記対象に投与することを含む、方法。
【請求項２７】
前記結合体が、対象に全身投与される、請求項２６に記載の方法。
【請求項２８】
請求項２５に記載の使用または請求項２６もしくは請求項２７に記載の方法のための、ポリミキシン−アルギネートオリゴマー結合体または医薬組成物であって、前記細菌感染症が、
（ｉ）全身感染症または前記対象の身体内もしくは身体上の多重遺伝子座の感染症、
（ｉｉ）呼吸器の基礎疾患または症状に罹患している対象における呼吸器感染症であり、好ましくは、ＣＦ、ＣＯＰＤ／ＣＯＡＤまたは喘息から選択される呼吸器感染症、
（ｉｉｉ）植込み型医療機器または補綴医療器機に関連した医療機器関連感染症、あるいは
（ｉｖ）慢性創傷における感染症
である、ポリミキシン−アルギネートオリゴマー結合体または医薬組成物。
【請求項２９】
前記感染症が、グラム陰性菌感染症である、請求項２５もしくは請求項２８に記載の使用または請求項２６〜２８のいずれか１つに記載の方法のための、ポリミキシン−アルギネートオリゴマー結合体または医薬組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、有利な特性を有する新規修飾型のポリミキシン群の抗生物質を提供する。特に、アルギネートオリゴマーをポリミキシン群の抗生物質に共有結合させることにより、それらの抗菌効力を著しく低下させることなく当該抗生物質の宿主毒性を低下させ、また、いくつかの実施形態では、抗生物質の抗菌作用を延長させさえすることが分かっている。言い換えれば、ポリミキシン−アルギネートオリゴマー結合体は、抗菌効力（非結合型ポリミキシン群の抗生物質と本質的に同じまたは類似の抗菌効力であり得る）を有するが、宿主毒性が少なく、さらにより長期間の抗菌作用を有する一群の新規化学物質である。本発明のポリミキシン−アルギネートオリゴマー結合体はまた、同じポリミキシン群の抗生物質の非結合型よりもバイオフィルムへの対処においてより効果的でもあり得る。したがって、本発明のポリミキシン−アルギネートオリゴマー結合体は、動物対象における細菌感染症に対する改善された治療法を意味する。よって、本発明は、本発明のポリミキシン−アルギネートオリゴマー結合体のこれらの特性を反映する医学的使用および治療方法、すなわち、細菌感染症の治療または予防における本発明のポリミキシン−アルギネートオリゴマー結合体の使用を提供する。本発明は更に、本発明の結合体の製造方法を提供する。
【背景技術】
【０００２】
ポリミキシン群の抗生物質は、細胞膜細菌、特にグラム陰性菌に結合し、それに損傷を与える、周知且つ特徴が十分に特定されている一群の環状ポリペプチド抗生物質である。ポリミキシンは、菌体内毒素のリピドＡ部分にも結合し、この内毒素の生物学的作用を中和し得るとされている。ポリミキシンは、一般に、非特許文献１（Hoeprich、P.D.、The Polymyxins、Medical Clinics of North America、p.1257、54(5), Sept. 1970）に記載されており、その全体を参照により本明細書に援用する。これらの抗生物質は、当初、グラム陽性菌の菌株、すなわちバチルス属、例えば、バチルス・ポリミキサ・バル・コリスチヌス（Bacillus polymyxa var colistinus）（非特許文献２（Minor、R.W.編：バチルスポリミキシン由来の抗生物質（Antibiotics derived from Bacillus polymyxin.）、An. N. Y Acad. Sci, 51:853, 1949）、これは参照により本明細書に援用する）からの二次代謝産物とされていたもので、サーキュリンおよびコリスチンとして知られる物質が含まれ、例えば、ポリミキシンＡ１、Ａ２、Ｂ１、Ｂ１−Ｉ、Ｂ２、Ｂ３、Ｂ４、Ｂ５、Ｂ６、Ｃ（サーキュリンＡ）、Ｄ１、Ｄ２、Ｅ１（コリスチンＡ）、Ｅ２（コリスチンＢ）、Ｆ、Ｋ１、Ｋ２、Ｍ  、Ｐ１、Ｐ２、ＳおよびＴ（非特許文献３（Velkovら、J. Med. Chem.、2010、53、1898-1916）および付随する補助情報、非特許文献４（Stormら、Ann. Rev. Biochem. 46:723-63、1977）および非特許文献５（Srinivasa and Ramachandran, Ind. J. Biophys.、17:112-118,1979）、これらはそれぞれ、その全体を参照により本明細書に援用する）が含まれる。ポリミキシン構造は、非特許文献６（メルクインデックス（The Merck Index）、第15版（2013））；非特許文献７（医薬品化学の原理（Principles of Medicinal Chemistry）、第2版、1981、p.779）に開示されており、これらはいずれも、その全体を参照により本明細書に援用する。
【０００３】
ポリミキシンは、一般に、カチオン性分岐環状デカペプチド、より具体的には、トリペプチド側鎖を有する七環ペプチドと呼ばれる場合もあり、これは、界面活性剤の活性によるものと考えられる抗菌効力を示す。典型的には、トリペプチドのＮ末端アミノ酸残基のα−アミノ基に結合した疎水性脂肪酸テールが存在する。トリペプチドのＮ末端アミノ酸残基が除去された、トランケートされたノナペプチド型を含むそれらの誘導体が、その後、成功の程度は様々であるが、合成されている。
【０００４】
機能的には、この群は、グラム陰性菌、特に、緑膿菌、大腸菌、クレブシエラ属（Klebsiella sp.）、エンテロバクター属（Enterobacter sp.）、サルモネラ属（Salmonella sp.）、赤痢菌属（Shigella sp.）、ビブリオ属（Vibrio sp.）、パスツレラ属（Pasteurella sp.）、ヘモフィルス属（Hemophilus sp.）およびボルデテラ属（Bordetella sp.）などのグラム陰性桿菌に対して、非常に効果的である。グラム陽性菌に対する効果は、さまざまであり、ほとんどの場合、限られている。しかしながら、この群は、毒性の問題（すなわち、ポリミキシン抗生物質を投与する対象または「宿主」に対する毒性、すなわち「宿主毒性」）、特に腎毒性および神経毒性の問題を抱えている。抗生物質特性を様々な程度に保持しながら、様々な程度にこの問題を克服するポリミキシン誘導体が生成されてきた。
【０００５】
ポリミキシン群の抗生物質の深刻な宿主毒性の問題が意味することは、それらの使用が長年にわたって抑制されてきということである。しかしながら、多剤耐性細菌の対処に使用できる「新しい」抗生物質（いわゆる最後の手段として使用される抗生物質）に対する近年の需要が、それらの宿主毒性の問題にもかかわらず、ポリミキシン群の抗生物質の使用の増加をもたらした。今日、最も一般的に使用されているポリミキシン群の抗生物質は、コリスチン（ポリミキシンＥ１とＥ２の混合物）およびポリミキシンＢ（ポリミキシンＢ１、Ｂ１−Ｉ、Ｂ２、Ｂ３およびＢ６の混合物であり、Ｂ１とＢ２が主である）である。スルホメチル化アミン基を有するコリスチンは、全身投与される場合、非修飾コリスチンより毒性が低いことが分かっているため、コリスチンは、全身投与が必要とされる場合、典型的にはスルホメチル化形態（コリスチンメタンスルホネート）で使用される。しかしながら、それは抗菌剤としては効能が低い。投与すると、ＣＭＳが、部分的にスルホンメチル化誘導体に加水分解されるため、抗菌活性がいくらか回復する。ノナペプチド切断型のポリミキシンもまた、毒性が低い。
【０００６】
他のアプローチでは、小さなデキストリン分子が、スクシニルリンカーを介してコリスチン分子に結合されており、かかる結合体は、宿主毒性が低下していることが示されている（特許文献１（国際公開第２０１２／０３５３１０号））。しかしながら、これらの結合体は、抗菌作用が劇的に低下しており、これはデキストリン基のアミラーゼ触媒消化により部分的に回復される場合もある（表３；実施例１、１７ページ）。報告されている実験のいずれにおいても、完全な抗生物質活性が回復していないことは注目に値する。生物学的膜拡散の２コンパートメントモデルにおいて、これらの結合体は、非結合コリスチンの初期薬物動態／薬力学的（ＰＫ／ＰＤ）プロファイルを示さないことがさらに観察されている（非特許文献８（Azzopardi E.ら、Antimicrob. Agents Chemother., 2015, vol. 59(4), 1837-1843））。非結合コリスチンを、結合型と共に投与し、デキストリン：コリスチン結合体の有効性の低下を軽減することが提案された。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００７】
【特許文献１】国際公開第２０１２／０３５３１０号
【非特許文献】
【０００８】
【非特許文献１】Hoeprich、P.D.、The Polymyxins、Medical Clinics of North America、p.1257、54(5), Sept. 1970
【非特許文献２】Minor、R.W.編：バチルスポリミキシン由来の抗生物質（Antibiotics derived from Bacillus polymyxin.）、An. N. Y Acad. Sci, 51:853, 1949
【非特許文献３】Velkovら、J. Med. Chem.、2010、53、1898-1916および付随する補助情報
【非特許文献４】Stormら、Ann. Rev. Biochem. 46:723-63、1977
【非特許文献５】Srinivasa and Ramachandran, Ind. J. Biophys.、17:112-118,1979
【非特許文献６】メルクインデックス（The Merck Index）、第15版（2013）
【非特許文献７】医薬品化学の原理（Principles of Medicinal Chemistry）、第2版、1981、p.779
【非特許文献８】Azzopardi E.ら、Antimicrob. Agents Chemother., 2015, vol. 59(4), 1837-1843
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００９】
したがって、ポリミキシン群の抗生物質の宿主毒性の問題無く、ポリミキシン群の抗生物質の抗菌作用を有する抗生物質に対する継続的な需要がある。別の言い方をすると、ポリミキシン群の抗生物質の抗菌効果を損なうことなく、それら抗生物質の宿主毒性の問題を軽減するための手段を特定する必要がある。
【００１０】
アルギネートオリゴマーは、文献に詳細に記載されている。簡単に説明すると、アルギネートは、（１−４）結合したβ−Ｄ−マンヌロン酸（Ｍ）および／またはそのＣ−５エピマーα−Ｌ−グルロン酸（Ｇ）の直鎖ポリマーである。アルギネートの一次構造は、大きく異なり得る。Ｍ残基及びＧ残基は、Ｍ残基又はＧ残基が連続したホモポリマーブロック、Ｍ残基及びＧ残基が交互になったブロックとして構成されることがあり、これらのブロック構造の間に位置する単一のＭ残基又はＧ残基が見られる場合もある。アルギネート分子は、これらの構造の一部または全てを含むことができ、かかる構造は、ポリマー全体に渡って均一に分布していない場合もある。極端な場合、グルロン酸のホモポリマー（ポリグルロネート）またはマンヌロン酸のホモポリマー（ポリマンヌロネート）が存在する。アルギネートオリゴマーは、典型的には天然の供給源から大きな高分子量ポリマー（例えば、平均分子量が３００，０００〜５００，０００ダルトンの範囲）として単離されるアルギネートポリマーから得ることができる。かかる大きなアルギネートポリマーは、例えば、化学的加水分解または酵素加水分解により、分解（degraded）、すなわち化学分解（broken down）され、より低い分子量のアルギネート構造を生成し得る（ すなわち、アルギネートオリゴマー）。
【課題を解決するための手段】
【００１１】
実施例に示されているように、ポリミキシン群の抗生物質のアルギネートオリゴマーへの共有結合により、抗菌効力（ポリミキシン群の抗生物質の抗菌効力と比較して、本質的に同じもしくは類似している、または少なくとも顕著に低下していない）を有するが、ポリミキシン群の抗生物質の非結合型と比較して、宿主毒性が低下した新規化学成分が作り出されることが見出された。ポリミキシン群の抗生物質の非結合型と比較して、ポリミキシン−アルギネートオリゴマー結合体の抗菌作用が延長され得ることがさらに見出された。ある特定の生理学的モデルにおいて、ポリミキシン群の抗生物質の非結合型に類似した初期ＰＫ／ＰＤプロファイルを有するある特定のポリミキシン−アルギネートオリゴマー結合体を調製し得ることも見出された。
【００１２】
したがって、本発明は、第１の態様において、直接共有結合または共有結合分子リンカーを介して、少なくとも１つのアルギネートオリゴマーに共有結合したポリミキシン群の抗生物質を含むポリミキシン−アルギネートオリゴマー結合体を提供する。
【００１３】
ポリミキシン−アルギネートオリゴマー結合体は、式Ｉによっても表し得る。
Ｐ−（Ｌ−Ａ）ｎ            （Ｉ）
（式中、Ｐ−は、ポリミキシン群の抗生物質、Ｌは、直接共有結合または共有結合分子リンカー、−Ａは、アルギネートオリゴマー、およびｎは、１〜１０の整数、例えば、１〜９、１〜８、１〜７、１〜６、１〜５、１〜４、１〜３または２もしくは１である。）
【図面の簡単な説明】
【００１４】
【図１Ａ】図１Ａは、オリゴＧ−Ａ−コリスチン（ＭＩＣ中央値１μｇ／ｍＬ）の様々な濃度下でのＶ２緑膿菌の増殖に関するグラフ図を示す。
【図１Ｂ】図１Ｂは、オリゴＧ（ＡのオリゴＧ−Ａ−コリスチン結合体におけるオリゴＧと同等の濃度）の様々な濃度下でのＶ２緑膿菌の増殖に関するグラフ図を示す。
【図１Ｃ】図１Ｃは、プロノバ（Pronova）アルギネート（ＡのオリゴＧ−Ａ−コリスチン結合体におけるオリゴＧと同等の濃度）の様々な濃度下でのＶ２緑膿菌の増殖に関するグラフ図を示す。
【図１Ｄ】図１Ｄは、オリゴＧ（ＡのオリゴＧ−Ａ−コリスチン結合体におけるオリゴＧと同等の濃度）およびコリスチン（ＡのオリゴＧ−Ａ−コリスチン結合体におけるコリスチンと同等の濃度）の様々な濃度下でのＶ２緑膿菌の増殖に関するグラフ図を示す。
【図１Ｅ】図１Ｅは、オリゴＧ−Ｅ−コリスチン（ＭＩＣ中央値０．５μｇ／ｍＬ）の様々な濃度下でのＶ２緑膿菌の増殖に関するグラフ図を示す。
【図１Ｆ】図１Ｆは、オリゴＧ（ＥのオリゴＧ−Ｅ−コリスチン結合におけるオリゴＧと同等の濃度）の様々な濃度下でのＶ２緑膿菌の増殖に関するグラフ図を示す。
【図１Ｇ】図１Ｇは、プロノバアルギネート（ＥのオリゴＧ−Ｅ−コリスチン結合体におけるオリゴＧと同等の濃度）の様々な濃度下でのＶ２緑膿菌の増殖に関するグラフ図を示す。
【図１Ｈ】図１Ｈは、オリゴＧ（ＥのオリゴＧ−Ｅ−コリスチン結合体におけるオリゴＧと同等の濃度）およびコリスチン（ＥのオリゴＧ−Ｅ−コリスチン結合体におけるコリスチンと同等の濃度）の様々な濃度下でのＶ２緑膿菌の増殖に関するグラフ図を示す。
【図１Ｉ】図１Ｉは、２．５ｋのＡＨＧ−Ａ−コリスチン（ＭＩＣ中央値０．５μｇ／ｍＬ）の様々な濃度下でのＶ２緑膿菌の増殖に関するグラフ図を示す。
【図１Ｊ】図１Ｊは、２．５ｋのＡＨＧ−Ｅ−コリスチン（ＭＩＣ中央値０．５μｇ／ｍＬ）の様々な濃度下でのＶ２緑膿菌の増殖に関するグラフ図を示す。
【図１Ｋ】図１Ｋは、硫酸コリスチン（ＭＩＣ中央値０．０６３μｇ／ｍＬ）の様々な濃度下でのＶ２緑膿菌の増殖に関するグラフ図を示す。
【図２Ａ】図２Ａは、オリゴＧ−Ａ−コリスチン（ＭＩＣ中央値０．０６３μｇ／ｍＬ）の様々な濃度下でのＶ３クレブシエラ・ニューモニエの増殖に関するグラフ図を示す。
【図２Ｂ】図２Ｂは、オリゴＧ（ＡのオリゴＧ−Ａ−コリスチン結合体におけるオリゴＧと同等の濃度）の様々な濃度下でのＶ３クレブシエラ・ニューモニエの増殖に関するグラフ図を示す。
【図２Ｃ】図２Ｃは、プロノバアルギネート（ＡのオリゴＧ−Ａ−コリスチン結合体におけるオリゴＧと同等の濃度）の様々な濃度下でのＶ３クレブシエラ・ニューモニエの増殖に関するグラフ図を示す。
【図２Ｄ】図２Ｄは、オリゴＧ（ＡのオリゴＧ−Ａ−コリスチン結合体におけるオリゴＧと同等の濃度）およびコリスチン（ＡのオリゴＧ−Ａ−コリスチン結合体におけるコリスチンと同等の濃度）の様々な濃度下でのＶ３クレブシエラ・ニューモニエの増殖に関するグラフ図を示す。
【図２Ｅ】図２Ｅは、オリゴＧ−Ｅ−コリスチン（ＭＩＣ中央値０．１２５μｇ／ｍＬ）の様々な濃度下でのＶ３クレブシエラ・ニューモニエの増殖に関するグラフ図を示す。
【図２Ｆ】図２Ｆは、オリゴＧ（ＥのオリゴＧ−Ｅ−コリスチン結合体におけるオリゴＧと同等の濃度）の様々な濃度下でのＶ３クレブシエラ・ニューモニエの増殖に関するグラフ図を示す。
【図２Ｇ】図２Ｇは、プロノバアルギネート（ＥのオリゴＧ−Ｅ−コリスチン結合体におけるオリゴＧと同等の濃度）の様々な濃度下でのＶ３クレブシエラ・ニューモニエの増殖に関するグラフ図を示す。
【図２Ｈ】図２Ｈは、オリゴＧ（ＥのオリゴＧ−Ｅ−コリスチン結合体におけるオリゴＧと同等の濃度）およびコリスチン（ＥのオリゴＧ−Ｅ−コリスチン結合体におけるコリスチンと同等の濃度）の様々な濃度下でのＶ３クレブシエラ・ニューモニエの増殖に関するグラフ図を示す。
【図２Ｉ】図２Ｉは、２．５ｋのＡＨＧ−Ａ−コリスチン（ＭＩＣ中央値０．１２５μｇ／ｍＬ）の様々な濃度下でのＶ３クレブシエラ・ニューモニエの増殖に関するグラフ図を示す。
【図２Ｊ】図２Ｊは、２．５ｋのＡＨＧ−Ｅ−コリスチン（ＭＩＣ中央値０．０６３μｇ／ｍＬ）の様々な濃度下でのＶ３クレブシエラ・ニューモニエの増殖に関するグラフ図を示す。
【図２Ｋ】図２Ｋは、硫酸コリスチン（ＭＩＣ中央値０．００８μｇ／ｍＬ）の様々な濃度下でのＶ３クレブシエラ・ニューモニエの増殖に関するグラフ図を示す。
【図３Ａ】図３Ａは、オリゴＧ−Ａ−コリスチン（ＭＩＣ中央値０．０６３μｇ／ｍＬ）の様々な濃度下でのＶ１９アシネトバクター・バウマンニの増殖に関するグラフ図を示す。
【図３Ｂ】図３Ｂは、オリゴＧ（ＡのオリゴＧ−Ａ−コリスチン結合体におけるオリゴＧと同等の濃度）の様々な濃度下でのＶ１９アシネトバクター・バウマンニの増殖に関するグラフ図を示す。
【図３Ｃ】図３Ｃは、プロノバアルギネート（ＡのオリゴＧ−Ａ−コリスチン結合体におけるオリゴＧと同等の濃度）の様々な濃度下でのＶ１９アシネトバクター・バウマンニの増殖に関するグラフ図を示す。
【図３Ｄ】図３Ｄは、オリゴＧ（ＡのオリゴＧ−Ａ−コリスチン結合体におけるオリゴＧと同等の濃度）およびコリスチン（ＡのオリゴＧ−Ａ−コリスチン結合体におけるコリスチンと同等の濃度）の様々な濃度下でのＶ１９アシネトバクター・バウマンニの増殖に関するグラフ図を示す。
【図３Ｅ】図３Ｅは、オリゴＧ−Ｅ−コリスチン（ＭＩＣ中央値０．１２５μｇ／ｍＬ）の様々な濃度下でのＶ１９アシネトバクター・バウマンニの増殖に関するグラフ図を示す。
【図３Ｆ】図３Ｆは、オリゴＧ（ＥのオリゴＧ−Ｅ−コリスチン結合体におけるオリゴＧと同等の濃度）の様々な濃度下でのＶ１９アシネトバクター・バウマンニの増殖に関するグラフ図を示す。
【図３Ｇ】図３Ｇは、プロノバアルギネート（ＥのオリゴＧ−Ｅ−コリスチン結合体におけるオリゴＧと同等の濃度）の様々な濃度下でのＶ１９アシネトバクター・バウマンニの増殖に関するグラフ図を示す。
【図３Ｈ】図３Ｈは、オリゴＧ（ＥのオリゴＧ−Ｅ−コリスチン結合体におけるオリゴＧと同等の濃度）およびコリスチン（ＥのオリゴＧ−Ｅ−コリスチン結合体におけるコリスチンと同等の濃度）の様々な濃度下でのＶ１９アシネトバクター・バウマンニの増殖に関するグラフ図を示す。
【図３Ｉ】図３Ｉは、２．５ｋのＡＨＧ−Ａ−コリスチン（ＭＩＣ中央値０．１２５μｇ／ｍＬ）の様々な濃度下でのＶ１９アシネトバクター・バウマンニの増殖に関するグラフ図を示す。
【図３Ｊ】図３Ｊは、２．５ｋのＡＨＧ−Ｅ−コリスチン（ＭＩＣ中央値０．１２５μｇ／ｍＬ）の様々な濃度下でのＶ１９アシネトバクター・バウマンニの増殖に関するグラフ図を示す。
【図３Ｋ】図３Ｋは、硫酸コリスチン（ＭＩＣ中央値０．００２μｇ／ｍＬ）の様々な濃度下でのＶ１９アシネトバクター・バウマンニの増殖に関するグラフ図を示す。
【図４Ａ】図４Ａは、オリゴＧ−Ａ−コリスチン（ＭＩＣ中央値０．０６３μｇ／ｍＬ）の様々な濃度下でのＶ７大腸菌の増殖に関するグラフ図を示す。
【図４Ｂ】図４Ｂは、オリゴＧ（ＡのオリゴＧ−Ａ−コリスチン結合体におけるオリゴＧと同等の濃度）の様々な濃度下でのＶ７大腸菌の増殖に関するグラフ図を示す。
【図４Ｃ】図４Ｃは、プロノバアルギネート（ＡのオリゴＧ−Ａ−コリスチン結合体におけるオリゴＧと同等の濃度）の様々な濃度下でのＶ７大腸菌の増殖に関するグラフ図を示す。
【図４Ｄ】図４Ｄは、オリゴＧ（ＡのオリゴＧ−Ａ−コリスチン結合体におけるオリゴＧと同等の濃度）およびコリスチン（ＡのオリゴＧ−Ａ−コリスチン結合体におけるコリスチンと同等の濃度）の様々な濃度下でのＶ７大腸菌の増殖に関するグラフ図を示す。
【図４Ｅ】図４Ｅは、オリゴＧ−Ｅ−コリスチン（ＭＩＣ中央値０．１２５μｇ／ｍＬ）の様々な濃度下でのＶ７大腸菌の増殖に関するグラフ図を示す。
【図４Ｆ】図４Ｆは、オリゴＧ（ＥのオリゴＧ−Ｅ−コリスチン結合体におけるオリゴＧと同等の濃度）の様々な濃度下でのＶ７大腸菌の増殖に関するグラフ図を示す。
【図４Ｇ】図４Ｇは、プロノバアルギネート（ＥのオリゴＧ−Ｅ−コリスチン結合体におけるオリゴＧと同等の濃度）の様々な濃度下でのＶ７大腸菌の増殖に関するグラフ図を示す。
【図４Ｈ】図４Ｈは、オリゴＧ（ＥのオリゴＧ−Ｅ−コリスチン結合体におけるオリゴＧと同等の濃度）およびコリスチン（ＥのオリゴＧ−Ｅ−コリスチン結合体におけるコリスチンと同等の濃度）の様々な濃度下でのＶ７大腸菌の増殖に関するグラフ図を示す。
【図４Ｉ】図４Ｉは、２．５ｋのＡＨＧ−Ａ−コリスチン（ＭＩＣ中央値０．５μｇ／ｍＬ）の様々な濃度下でのＶ７大腸菌の増殖に関するグラフ図を示す。
【図４Ｊ】図４Ｊは、２．５ｋのＡＨＧ−Ｅ−コリスチン（ＭＩＣ中央値０．５μｇ／ｍＬ）の様々な濃度下でのＶ７大腸菌の増殖に関するグラフ図を示す。
【図４Ｋ】図４Ｋは、硫酸コリスチン（ＭＩＣ中央値０．０６３μｇ／ｍＬ）の様々な濃度下でのＶ７大腸菌の増殖に関するグラフ図を示す。
【図５Ａ】図５Ａは、オリゴＧ−Ａ−コリスチン、オリゴＧ−Ｅ−コリスチン、２．５ｋのＡＨＧ−Ａ−コリスチン、２．５ｋのＡＨＧ−Ｅ−コリスチンおよび硫酸コリスチンの存在下における、各薬剤のそれぞれのＭＩＣでのＶ２緑膿菌の増殖に関するグラフ図を示す。
【図５Ｂ】図５Ｂは、オリゴＧ−Ａ−コリスチン、オリゴＧ−Ｅ−コリスチン、２．５ｋのＡＨＧ−Ａ−コリスチン、２．５ｋのＡＨＧ−Ｅ−コリスチンおよび硫酸コリスチンの存在下における、各薬剤のそれぞれのＭＩＣでのＶ３クレブシエラ・ニューモニエの増殖に関するグラフ図を示す。
【図５Ｃ】図５Ｃは、オリゴＧ−Ａ−コリスチン、オリゴＧ−Ｅ−コリスチン、２．５ｋのＡＨＧ−Ａ−コリスチン、２．５ｋのＡＨＧ−Ｅ−コリスチンおよび硫酸コリスチンの存在下における、各薬剤のそれぞれのＭＩＣでのＶ１９アシネトバクター・バウマンニの増殖に関するグラフ図を示す。
【図５Ｄ】図５Ｄは、オリゴＧ−Ａ−コリスチン、オリゴＧ−Ｅ−コリスチン、２．５ｋのＡＨＧ−Ａ−コリスチン、２．５ｋのＡＨＧ−Ｅ−コリスチンおよび硫酸コリスチンの存在下における、各薬剤のそれぞれのＭＩＣでのＶ７大腸菌の増殖に関するグラフ図を示す。
【図５Ｅ】図５Ｅは、オリゴＧ−Ａ−コリスチン、オリゴＧ−Ｅ−コリスチン、２．５ｋのＡＨＧ−Ａ−コリスチン、２．５ｋのＡＨＧ−Ｅ−コリスチンおよび硫酸コリスチンの存在下における、各薬剤の存在下における、各薬剤のそれぞれのＭＩＣでの各菌株についての細菌増殖の開始の平均時間の比較に関するグラフ図を示す。
【図６】図６は、ＭＩＣでのオリゴＧ−Ａ−コリスチン（黒丸）、ＭＩＣ×２でのオリゴＧ−Ａ−コリスチン（灰色の丸）、ＭＩＣでのオリゴＧ−Ｅ−コリスチン（三角）、ＭＩＣ×２でのオリゴＧ−Ｅ−コリスチン（逆三角）ＭＩＣでの硫酸コリスチン（菱形）または未処理のコントロール（正方形）への曝露後の実施例４の２コンパートメント膜拡散モデルにおけるアシネトバクター・バウマニ（Ｖ１９）についてのインキュベーション時間に対するＣＦＵ数に関するグラフ図を示す。
【図７Ａ】図７Ａは、オリゴＧ（丸）、オリゴＧ−Ａ−コリスチン（２バッチ；六角形および逆三角形）、オリゴＧ−Ｅ−コリスチン（三角）、コリスチンメタンスルホネート（ＣＭＳ；正方形）および硫酸コリスチン（菱形）の漸増濃度についての細胞毒性に関するグラフ図を示す。
【図７Ｂ】図７Ｂは、オリゴＧ（白丸）、オリゴＧ−Ｅ−ポリミキシンＢ（正方形）、オリゴＧ−Ａ−ポリミキシンＢ（黒丸）およびポリミキシンＢ（三角）の漸増濃度についての細胞毒性に関するグラフ図を示す。
【図８】図８は、ポリミキシンＢ（黒三角）、硫酸コリスチン、（黒丸）、オリゴＧ−Ｅ−ポリミキシンＢ（灰色三角）、オリゴＧ−Ｅ−コリスチン（灰色丸）、オリゴＧ−Ａ−コリスチン（白丸）、オリゴＧ−Ａ−ポリミキシンＢ（白三角）、オリゴＧの漸増濃度への暴露による、細胞生存率に応じて調整された、ＨＫ２細胞からの腫瘍壊死因子α（ＴＮＦα）放出に関するグラフ図を示す。データは平均±ＳＥＭ（ｎ＝６）として表した。
【図９Ａ】図９Ａは、前記薬剤の存在下で形成された緑膿菌バイオフィルムの構造および緑膿菌バイオフィルム内の細胞生存率に対する、オリゴＧ−Ａ−コリスチン（ＭＩＣ中央値＝１μｇ／ｍＬ）の漸増濃度の影響を示す。
【図９Ｂ】図９Ｂは、前記薬剤の存在下で形成された緑膿菌バイオフィルムの構造および緑膿菌バイオフィルム内の細胞生存率に対する、硫酸コリスチン（ＭＩＣ中央値＝０．０６３μｇ／ｍＬ）の漸増濃度の影響を示す。
【発明を実施するための形態】
【００１５】
本発明によれば、ポリミキシン群の抗生物質は、抗菌効力を示すカチオン環状デカペプチドまたはノナペプチドとして広く定義され、ここで前記ペプチドは、トリペプチド側鎖またはジペプチド側鎖を有する七環ペプチドからなる。ある特定の実施形態では、疎水性脂肪酸テールは、トリペプチドまたはジペプチドのＮ末端アミノ酸残基のα−アミノ基に結合しており、これは、いくつかの実施形態では、飽和または不飽和（例えば、アルカノイル、アルケノイルまたはアルキノール）の、分岐鎖または直鎖脂肪酸であってもよく、任意に、１つ以上のヒドロキシル基で置換されていてもよい。脂肪酸残基は、Ｃ３〜Ｃ２０、例えば、Ｃ３〜１８、Ｃ３〜１６、Ｃ３〜１４、Ｃ３〜１２、Ｃ３〜１０、Ｃ３〜８、Ｃ３〜６、Ｃ６〜２０、Ｃ６〜１８、Ｃ６〜１６、Ｃ６〜１４、Ｃ６〜１２、Ｃ６〜１０、Ｃ６〜８、Ｃ１０〜２０、Ｃ１０〜１８、Ｃ１０〜１６、Ｃ１０〜１４またはＣ１０〜１２であってもよい。
【００１６】
本明細書で特に検討するのは、天然のポリミキシンまたはその機能的に等価な誘導体であって、抗菌効力を保持している誘導体であり、完全合成および半合成の形態を含む。したがって、ポリミキシン群の抗生物質という用語に含まれるのは、ポリミキシンＡ１、Ａ２、Ｂ１、Ｂ１−Ｉ、Ｂ２、Ｂ３、Ｂ４、Ｂ５、Ｂ６、Ｃ（サーキュリンＡ）、Ｄ１、Ｄ２、Ｅ１（コリスチンＡ）、Ｅ２（コリスチンＢ）、Ｆ、Ｋ１、Ｋ２、Ｍ、Ｐ１、Ｐ２、ＳおよびＴであり、例えば、特に、Velkovら、J, Stormら、SrinivasaおよびRamachandran、ならびにメルクインデックス、第１５版（上記参照）に記載されている。機能的に等価な誘導体は、特に、国際公開第２０１０／１３０００７号、国際公開第２００８／０１７７３４号、国際公開第２０１０／０７５４１６号、国際公開第２０１２／１６８８２０号、国際公開第２００９／０９８３５７号、国際公開第２０１４／１８８１７８号、国際公開第２０１５／１３５９７６号、国際公開第２０１３／０７２６９５号、国際公開第２０１６／０８３５３１号、国際公開第２０１６／１００５７８号に記載されている。
【００１７】
例として、 ポリミキシン群の抗生物質は、式IIの抗菌分子により表し得る。
【００１８】
【化１】
2020503253.tif 000002
【００１９】
（式中、脂肪酸およびアミノ酸残基１は、独立して任意であり、ここでＤ−ＬｅｕはＤ−ロイシンであり、Ｌ−ＬｅｕはＬ−ロイシンであり、Ｌ−ＴｈｒはＬ−スレオニンであり、Ｌ−Ｄａｂはα，γ−ジアミノ酪酸であり、また、アミノ酸１〜１０のうち０または１つ以上は、天然または非遺伝子的にコードされたアミノ酸から選択され得る別のアミノ酸残基で置き換えられており、前記アミノ酸の例としては、ロイシン、スレオニン、フェニルアラニン、アルギニン、ヒスチジン、リジン、アスパラギン、セリン、システイン、ホモリジン、オルニチン、ジアミノ酪酸（例えば、α，γ−ジアミノ酪酸）、ジアミノピメリン酸、ジアミノプロピオン酸、ホモアルギニン、トリメチルリジン、トリメチルオルニチン、４−アミノピペリジン−４−カルボン酸、４−アミノ−１−カルバムイミドイルピペリジン−４−カルボン酸および４−グアニジノフェニルアラニンが挙げられる。置換型は、ポリミキシンＥ１および／またはＥ２（コリスチン）の機能的に等価な誘導体、すなわち、ポリミキシンＥ１および／またはＥ２の抗菌効力を保持する（例えば、前記抗菌効力の少なくとも７０％、８０％、９０％または９５％有する）誘導体であると考え得る。
【００２０】
好ましくは、置換アミノ酸は、カチオン性側鎖を有するアミノ酸、すなわち、腫瘍細胞の細胞内ｐＨ（例えば、約ｐＨ７．４）で正味正電荷を持つ側鎖を有するアミノ酸である。これには、遺伝的にコードされたアミノ酸のうち、リジンおよびアルギニンが含まれるであろうが、かかる正味正電荷をその側鎖に有する任意の非遺伝的にコードされたまたは修飾されたアミノ酸を使用してもよい。例えば、グアニジノ基またはアミン基または他のカチオン部分を有する側鎖を持つアミノ酸であって、例えば、プロトン化水素以外の、側鎖中の任意の水素が、ハロゲン原子（例えば、フッ素、塩素もしくは臭素）あるいは直鎖、分岐鎖の脂肪族不飽和もしくは飽和のＣ１〜Ｃ４アルキルまたはアルコキシ基（例えば、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ブチル、イソブチル、ｓｅｃ−ブチル、ｔｅｒｔ−ブチル、エチレン、プロピレン、ブチレン、ヒドロキシ、メトキシ、エチルオキシ、プロピルオキシ、イソプロピルオキシ、ブチルオキシ基、イソブチルオキシ、ｓｅｃ−ブチルオキシ、ｔｅｒｔ−ブチルオキシまたはそれらのハロゲン置換型）で置換されているアルギニンおよびリジンの誘導体などがあげられる。カチオン性側鎖を有する好適な非遺伝的にコードされたアミノ酸としては、ホモリジン、オルニチン、ジアミノ酪酸、ジアミノピメリン酸、ジアミノプロピオン酸およびホモアルギニンならびにトリメチルリジンおよびトリメチルオルニチン、４−アミノピペリジン−４−カルボン酸、４−アミノ−１−カルバムイミドイルピペリジン−４−カルボン酸および４−グアニジノフェニルアラニンが挙げられる。本発明に包含される式ＩＩの置換型は、式ＩＩの非置換型の抗菌効力を保持する（例えば、前記抗菌効力の少なくとも７０％、８０％、９０％または９５％を有する）。
【００２１】
「脂肪酸」基は、上記のいずれであってもよく、好ましくは、メチルオクタン酸またはメチルヘプタン酸、例えば、６−メチルオクタン酸または６−メチルヘプタン酸であってもよい。
【００２２】
アミノ酸は、アミン基、カルボン酸基、およびこれら二つの基を分離する少なくとも一つの炭素を含む分子である。この分離炭素（単数または複数）に、他の基が結合していてもよい。これらの基は、「側鎖」と称し得るが、その最も単純な形態では、この側鎖は水素（グリシン）であり得る。単一の分離炭素を有するアミノ酸は、「α−アミノ酸」と呼ばれ、一般式Ｈ２ＮＣＲ１Ｒ２ＣＯＯＨを有し、式中、Ｒ１およびＲ２は、置換基、すなわち側鎖である。分離炭素は、α−炭素として知られている。アミノ基とカルボン酸基が２個以上の炭素原子で分離されている他の種類のアミノ酸が存在する。例えば、β−アミノ酸では、アミノ基が、カルボン酸基から２個の炭素原子で分離されている炭素原子が、γ−アミノ酸では、３個の炭素原子がアミノ基とカルボン酸基を分離している。好ましくは、本発明で使用されるポリミキシン群の抗生物質中のアミノ酸は、α、βまたはγ−アミノ酸、より好ましくはαまたはβ−アミノ酸、最も好ましくはα−アミノ酸である。
【００２３】
アミノ酸は、グリシンを除いて、２つ以上の立体異性体として存在し得る。特に、グリシン以外のアミノ酸のα−炭素はキラル中心であるため、各アミノ酸の２つの鏡像異性体型が生じる。これらの型は、しばしばＤ型およびＬ型と呼ばれる（例えば、Ｄ−アラニンおよびＬ−アラニン）。さらなるキラル中心を有するアミノ酸は、４つ以上の可能性のある立体異性体で存在することがあり、例えば、トレオニンは、２つのキラル中心を有するため、４つの立体異性体型のうちの１つで存在し得る。アミノ酸の任意の立体異性体型が、本発明において使用されるポリミキシン群の抗生物質分子に存在し得る。本発明を説明することを目的として、「非遺伝的にコードされた」という用語がアミノ酸に適用される場合、これはＬ型で天然に存在するＤ型のアミノ酸を含まない。
【００２４】
好ましい実施形態において、ポリミキシン群の抗生物質は、ポリミキシンＢ１、Ｂ１−Ｉ、Ｂ２、Ｂ３、Ｂ４、Ｂ５、Ｂ６、Ｅ１またはＥ２から選択され、より好ましくはポリミキシンＢ１、Ｂ１−Ｉ、Ｂ２、Ｅ１またはＥ２から選択され、最も好ましくは、ポリミキシンＥ１もしくはＥ２または上記のいずれかの機能的に等価な誘導体、すなわち当該ポリミキシンの抗菌効力を保持する（例えば、前記抗菌効力の少なくとも７０％、８０％、９０％または９５％有する）誘導体である。
【００２５】
ある特定の実施形態では、ポリミキシン群の抗生物質中の１つ以上の遊離アミン基は、修飾により（例えば、スルホメチル化により）マスクし得る。
【００２６】
上記のように、アルギネートは典型的には、平均分子量が少なくとも３５，０００ダルトン、すなわち約１７５〜約１９０モノマー残基を有するポリマーとして生じるが、一般的には平均分子量はそれよりはるかに高い。一方、本発明に係るアルギネートオリゴマーは、２〜１００のモノマー残基、より典型的には３、４、５または６〜１００のモノマー残基を含み、また、２、３、４、５もしくは６〜７５、２、３、４、５もしくは６〜５０、２、３、４、５もしくは６〜４０、２、３、４、５もしくは６〜３５または２、３、４、５もしくは６〜３０残基を含んでいてもよい。したがって、本発明に従って使用するためのアルギネートオリゴマーは、典型的には、３５０、５５０、７００、９００もしくは１０００〜２０，０００ダルトン、３５０、５５０、７００、９００もしくは１０００〜１５，０００ダルトン、３５０、５５０、７００、９００もしくは１０００〜１０，０００ダルトン、３５０、５５０、７００、９００もしくは１０００〜８０００ダルトン、３５０、５５０、７００、９００もしくは１０００〜７０００ダルトン、または３５０、５５０、７００、９００もしくは１０００〜６０００ダルトンの平均分子量を有するであろう。
【００２７】
言い換えれば、アルギネートオリゴマーの重合度（ＤＰ）または数平均重合度（ＤＰｎ）は、２〜１００、好ましくは２〜７５、好ましくは２〜５０、より好ましくは２〜４０、２〜３５、２〜３０、２〜２８、２〜２５、２〜２２、２〜２０、２〜１８、２〜１７、２〜１５または２〜１２であり得る。
【００２８】
他の代表的な範囲（残基の数、ＤＰまたはＤＰｎに関する範囲かどうかにかかわらず）としては、３、４、５、６、７、８、９、１０または１１のいずれか１つから、５０、４５、４０、３９、３８、３７、３６、３５、３４、３３、３２、３１、３０、２９、２８、２７、２６、２５、２４、２３、２２、２１、２０、１９、１８、１７、１６、１５、１４、１３または１２のいずれか１つまでが挙げられる。
【００２９】
他の代表的な範囲（残基の数、ＤＰまたはＤＰｎに関する範囲かどうかにかかわらず）としては、８、９、１０、１１、１２、１３、１４または１５のいずれか１つから、５０、４５、４０、３９、３８、３７、３６、３５、３４、３３、３２、３１、３０、２９、２８、２７、２６、２５、２４、２３、２２、２１、２０、１９、１８、１７または１６のいずれか１つまでが挙げられる。
【００３０】
他の代表的な範囲（残基の数、ＤＰまたはＤＰｎに関する範囲かどうかにかかわらず）としては、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７または１８のいずれか１つから、５０、４５、４０、３９、３８、３７、３６、３５、３４、３３、３２、３１、３０、２９、２８、２７、２６、２５、２４、２３、２２、２１、２０または１９のいずれか１つまでが挙げられる。
【００３１】
いくつかの実施形態では、より大きなサイズの結合体が作られるように、より大きなアルギネートオリゴマーを選択することが有利である場合もある。より大きな結合体は、ポリミキシン群の抗生物質の感染部位および感染場所への選択的な送達を促進し得る。なぜなら、対象におけるかかる領域の血管透過性が、典型的には非感染領域の脈管構造におけるよりも高いからである。このため、より大きな結合体は、血流から非感染領域に入る可能性は低くなるが、透過性のより高い感染領域には入ることができるであろう。かかるより大きなオリゴマーの代表的なサイズ範囲は、例えば、２０〜１００残基（または２０〜１００のＤＰもしくはＤＰｎ）、または２０、２１、２２、２３、２４もしくは２５のいずれか１つから、１００、９０、８０、７５、７０、６５、６０、５５、５０、４５、４０、３５もしくは３０のいずれか１つの残基（またはこれらの範囲のいずれか１つのＤＰもしくはＤＰｎ）、または３０、３１、３２、３３、３４もしくは３５のいずれか１つから、１００、９０、８０、７５、７０、６５、６０、５５、５０、４５もしくは４０のいずれか１つの残基（またはこれらの範囲のいずれか１つのＤＰもしくはＤＰｎ）であり得る。また、より小さなサイズのものであっても、これらの結果は、結合体中のアルギネートオリゴマーの数を増加させることによっても達成され得る。
【００３２】
アルギネートオリゴマーは、上記のように、グルロネートもしくはグルロン酸（Ｇ）および／またはマンヌロネートもしくはマンヌロン酸（Ｍ）の残基または単位を含有する（contain）（または含む（comprise））。本発明に係るアルギネートオリゴマーは、好ましくは、ウロン酸塩／ウロン酸残基のみまたは実質的にそれのみで構成されており（すなわち、本質的にそれからなる）、より具体的には、Ｇ残基および／またはＭ残基のみまたは実質的にそれのみで構成されている。別の表現をすると、本発明において使用されるアルギネートオリゴマーにおいて、少なくとも８０％、より具体的には、少なくとも８５、９０、９５または９９％のモノマー残基が、ウロン酸塩／ウロン酸残基、または、特に、Ｇ残基および／もしくはＭ残基であり得る。言い換えれば、好ましくは、アルギネートオリゴマーは、他の残基または単位（例えば、他の糖残基、または、より具体的には、他のウロン酸／ウロン酸塩残基）を含まない。
【００３３】
アルギネートオリゴマーは、好ましくは線状オリゴマーである。
【００３４】
より具体的には、本発明に従って使用するために提案されているアルギネートオリゴマーは、少なくとも７０％のＧ残基を含有する（すなわち、アルギネートオリゴマーのモノマー残基の少なくとも７０％がＧ残基である）。したがって、特定の実施形態は、７０〜１００％のＧ（グルロネート）残基を有する（例えば、含有する）アルギネートオリゴマーを含む。
【００３５】
好ましくは、少なくとも７５％または８０％、特に、少なくとも８５％または９０％、さらに具体的には、少なくとも９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８または９９％のモノマー残基がグルロネートである。一実施形態では、アルギネートオリゴマーは、オリゴグルロネート（すなわち、Ｇのホモオリゴマー、すなわち、１００％Ｇ）であってもよい。
【００３６】
さらに好ましい実施形態では、上述の本発明のアルギネートは、Ｇ残基の大部分がいわゆるＧブロック中にある一次構造を有する。好ましくは少なくとも５０％、より好ましくは少なくとも７０または７５％、最も好ましくは少なくとも８０、８５、９０、９２または９５％のＧ残基がＧブロック中にある。Ｇブロックは、少なくとも２個のＧ残基、好ましくは少なくとも３個の連続したＧ残基、より好ましくは少なくとも４個または５個の連続したＧ残基、最も好ましくは少なくとも７個の連続したＧ残基の連続配列である。
【００３７】
特に、Ｇ残基の少なくとも９０％が、別のＧ残基に（１−４）結合している。より具体的には、アルギネートのＧ残基の少なくとも９５％、より好ましくは少なくとも９８％、最も好ましくは少なくとも９９％が、別のＧ残基に（１−４）結合している。より具体的には、オリゴマー中のモノマー残基の少なくとも７０％が、別のＧ残基に（１−４）結合したＧ残基、または、より好ましくは少なくとも７５％、最も好ましくは少なくとも８０、８５、９０、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９％のオリゴマーのモノマー残基が、別のＧ残基に（１−４）結合したＧ残基である。また、２個のＧ残基のこの（１−４）結合は、隣接するグルロン単位に結合したグルロン単位として表すことができる。
【００３８】
本発明において使用されるアルギネートオリゴマーは、当業者により一般に「高Ｇ」または「Ｇブロック」オリゴマーと呼ばれ、すなわち、高含有量のＧ残基またはＧブロックを有する（例えば、モノマー残基の少なくとも７０％が、Ｇであり、好ましくはＧブロック中に配置されている）。
【００３９】
本発明において使用されるアルギネートオリゴマーは、好ましくは３〜３５量体、より好ましくは３〜２８量体、特に４〜２５量体、例えば、５〜２０量体、特に６〜２２量体、特に８〜２０量体、特に１０〜１５量体であり、例えば、分子量が、３５０〜６４００ダルトンまたは３５０〜６０００ダルトン、好ましくは５５０〜５５００ダルトン、好ましくは７５０〜５０００ダルトン、特に７５０〜４５００ダルトンまたは２０００〜３０００ダルトンまたは９００〜３５００ダルトンの範囲である。他の代表的なアルギネートオリゴマーとしては、上記のように、５、６、７、８、９、１０、１１、１２または１３個〜５０、４５、４０、３５、２８、２５、２２または２０個の残基を有するオリゴマーが挙げられる。
【００４０】
アルギネートオリゴマーは、単一の化合物であってもよいし、化合物（例えば、ある範囲の異なる重合度を有する）の混合物であってもよい。上記の如く、アルギネートオリゴマーにおけるモノマー残基は、同一であっても異なっていてもよく、すべてが荷電基を有する必要はないが、大部分（例えば、少なくとも６０％、好ましくは少なくとも８０％、より好ましくは少なくとも９０％）が荷電基を有するのが好ましい。荷電基の実質的な大部分、例えば少なくとも８０％、より好ましくは少なくとも９０％が同じ極性を有するのが好ましい。アルギネートオリゴマーにおいて、ヒドロキシル基の荷電基に対する比は、好ましくは少なくとも２：１、特に、少なくとも３：１である。
【００４１】
本発明のアルギネートオリゴマーの重合度（ＤＰ）または数平均重合度（ＤＰｎ）は、３〜２８、４〜２５、６〜２２、８〜２０もしくは１０〜１５、または５〜１８もしくは７〜１５もしくは８〜１２、特に、１０であってもよい。
【００４２】
本発明のアルギネートオリゴマーの重合度（ＤＰ）または数平均重合度（ＤＰｎ）は、３〜２４、４〜２３、５〜２２、６〜２１、７〜２０、８〜１９、９〜１８、１０〜１７、１１〜１６、１２〜１５または１３〜１４（例えば、１３または１４）であってもよい。
【００４３】
本発明のアルギネートオリゴマーの重合度（ＤＰ）または数平均重合度（ＤＰｎ）は、４〜２５、５〜２４、６〜２３、７〜２２、８〜２１、９〜２０、１０〜１９、１１〜１８、１２〜１７、１３〜１６、１４〜１５（例えば、１４または１５）であってもよい。
【００４４】
本発明のアルギネートオリゴマーの重合度（ＤＰ）または数平均重合度（ＤＰｎ）は、５〜２６、６〜２５、７〜２４、８〜２３、９〜２２、１０〜２１、１１〜２０、１２〜１９、１３〜１８、１４〜１７または１５〜１６（例えば、１５または１６）であってもよい。
【００４５】
本発明のアルギネートオリゴマーの重合度（ＤＰ）または数平均重合度（ＤＰｎ）は、４〜５０、４〜４０、４〜３５、４〜３０、４〜２８、４〜２６、４〜２２、４〜２０、４〜１８、４〜１６または４〜１４であってもよい。
【００４６】
本発明のアルギネートオリゴマーの重合度（ＤＰ）または数平均重合度（ＤＰｎ）は、５〜５０、５〜４０、５〜２５、５〜２２、５〜２０、５〜１８、５〜２３、５〜２０、５〜１８、５〜１６または５〜１４であってもよい。
【００４７】
本発明のアルギネートオリゴマーの重合度（ＤＰ）または数平均重合度（ＤＰｎ）は、６〜５０、６〜４０、６〜３５、６〜３０、６〜２８、６〜２６、６〜２４、６〜２０、６〜１９、６〜１８、６〜１６または６〜１４であってもよい。
【００４８】
本発明のアルギネートオリゴマーの重合度（ＤＰ）または数平均重合度（ＤＰｎ）は、８〜５０、８〜４０、８〜３５、８〜３０、８〜２８、８〜２５、８〜２２、８〜２０、８〜１８、８〜１６または８〜１４であってもよい。
【００４９】
本発明のアルギネートオリゴマーの重合度（ＤＰ）または数平均重合度（ＤＰｎ）は、９〜５０、９〜４０、９〜３５、９〜３０、９〜２８、９〜２５、９〜２２、９〜２０、９〜１８、９〜１６または９〜１４であってもよい。
【００５０】
本発明のアルギネートオリゴマーの重合度（ＤＰ）または数平均重合度（ＤＰｎ）は、１０〜５０、１０〜４０、１０〜３５、１０〜３０、１０〜２８、１０〜２５、１０〜２２、１０〜２０、１０〜１８、１０〜１６または１０〜１４であってもよい。
【００５１】
本発明のアルギネートオリゴマーの重合度（ＤＰ）または数平均重合度（ＤＰｎ）は、１１〜５０、１１〜４０、１１〜３５、１１〜３０、１１〜２８、１１〜２５、１１〜２２、１１〜２０、１１〜１８、１１〜１６または１１〜１４であってもよい。
【００５２】
本発明のアルギネートオリゴマーの重合度（ＤＰ）または数平均重合度（ＤＰｎ）は、１２〜５０、１２〜４０、１２〜３５、１２〜３０、１２〜２８、１２〜２５、１２〜２２、１２〜２０、１２〜１８、１２〜１６または１２〜１４であってもよい。
【００５３】
本発明のアルギネートオリゴマーの重合度（ＤＰ）または数平均重合度（ＤＰｎ）は、１３〜５０、１３〜４０、１３〜３５、１３〜３０、１３〜２８、１３〜２５、１３〜２２、１３〜２０、１３〜１８、１３〜１６または１３〜１４（例えば、１３または１４）であってもよい。
【００５４】
本発明のアルギネートオリゴマーの重合度（ＤＰ）または数平均重合度（ＤＰｎ）は、１４〜５０、１４〜４０、１４〜３５、１４〜３０、１４〜２８、１４〜２５、１４〜２２、１４〜２０、１４〜１８または１４〜１６であってもよい。
【００５５】
本発明のアルギネートオリゴマーの重合度（ＤＰ）または数平均重合度（ＤＰｎ）は、１５〜５０、１５〜４０、１５〜３５、１５〜３０、１５〜２８、１５〜２５、１５〜２２、１５〜２０または１５〜１８であってもよい。
【００５６】
本発明のアルギネートオリゴマーの重合度（ＤＰ）または数平均重合度（ＤＰｎ）は、１８〜５０、１８〜４０、１８〜３５、１８〜３０、１８〜２８、１８〜２５、１８〜２２または１８〜２０であってもよい。
【００５７】
本発明のアルギネートオリゴマーの重合度（ＤＰ）または数平均重合度（ＤＰｎ）は、２０〜１００、２０〜９０、２０〜８０、２０〜７５、２０〜７０、２０〜６５、２０〜６０、２０〜５５、２０〜５０、２０〜４５、２０〜４０、２０〜３５、２０〜３０または２０〜２５であってもよい。
【００５８】
本発明のアルギネートオリゴマーの重合度（ＤＰ）または数平均重合度（ＤＰｎ）は、３０〜１００、３０〜９０、３０〜８０、３０〜７５、３０〜７０、３０〜６５、３０〜６０、３０〜５５、３０〜５０、３０〜４５、３０〜４０または３０〜３５であってもよい。
【００５９】
好ましくは、本発明のアルギネートオリゴマーは、本明細書に開示されている範囲外の重合度を有するアルギネートオリゴマーを実質的に含まず、好ましくは本質的に含まない。これは、本発明のアルギネートオリゴマーの分子量分布、例えば、適切な範囲外のＤＰを有する、本発明に従って使用されるアルギネートオリゴマーの各モルのパーセンテージで表し得る。分子量分布は、１０モル％以下、好ましくは９、８、７、６、５、４、３、２または１モル％以下のＤＰが、ＤＰｎの適切な上限よりも３、２または１高くなっているのが好ましい。同様に、１０モル％以下、好ましくは９、８、７、６、５、４、３、２または１モル％以下のＤＰが、ＤＰｎの適切な下限の数値より３、２または１低いことが好ましい。
【００６０】
好適なアルギネートオリゴマーは、国際公開第２００７／０３９７５４号、国際公開第２００７／０３９７６０号、国際公開第２００８／１２５８２８号および国際公開第２００９／０６８８４１号に記載されており、それらの開示の全体を、参照により本明細書に明示的に援用する。
【００６１】
代表的な好適なアルギネートオリゴマーは、ＤＰｎが５〜３０の範囲内、グルロネート率（ＦＧ）が少なくとも０．８０、マンヌロネート率（ＦＭ）が０．２０以下、および少なくとも９５モル％のＤＰが２５以下である。
【００６２】
さらに好適なアルギネートオリゴマーは、数平均重合度が７〜１５（好ましくは８〜１２）の範囲内、グルロネート率（ＦＧ）が少なくとも０．８５（好ましくは少なくとも０．９０）、マンヌロネート率（ＦＭ）が０．１５以下（好ましくは０．１０以下）、および少なくとも９５モル％の重合度が１７未満（好ましくは１４未満）である。
【００６３】
さらに好適なアルギネートオリゴマーは、数平均重合度が５〜１８（特に７〜１５）の範囲内、グルロネート率（ＦＧ）が少なくとも０．８０（好ましくは少なくとも０．８５、特に少なくとも０．９２）、マンヌロネート率（ＦＭ）が０．２０以下（好ましくは０．１５以下、特に０．０８以下）、および少なくとも９５モル％の重合度が２０未満（好ましくは１７未満）である。
【００６４】
さらに好適なアルギネートオリゴマーは、数平均重合度が５〜１８の範囲内、グルロネート率（ＦＧ）が少なくとも０．９２、マンヌロネート率（ＦＭ）が０．０８以下、および少なくとも９５モル％の重合度が２０未満である。
【００６５】
さらに好適なアルギネートオリゴマーは、数平均重合度が５〜１８（好ましくは７〜１５、より好ましくは８〜１２、特に約１０）の範囲内、グルロネート率（ＦＧ）が少なくとも０．８０（好ましくは少なくとも０．８５、より好ましくは少なくとも０．９０、特に少なくとも０．９２、最も特に少なくとも０．９５）、マンヌロネート率（ＦＭ）が０．２０以下（好ましくは０．１５以下、より好ましくは０．１０以下、特に０．０８以下、最も特に０．０５以下）、および少なくとも９５モル％の重合度が２０未満（好ましくは１７未満、より好ましくは１４未満）である。
【００６６】
さらに好適なアルギネートオリゴマーは、数平均重合度が７〜１５（好ましくは８〜１２）の範囲内、グルロネート率（ＦＧ）が少なくとも０．９２（好ましくは少なくとも０．９５）、マンヌロネート率（ＦＭ）が０．０８以下（好ましくは０．０５以下）、および少なくとも９５モル％の重合度が１７未満（好ましくは１４未満）である。
【００６７】
さらに好適なアルギネートオリゴマーは、数平均重合度が５〜１８の範囲内、グルロネート率（ＦＧ）が少なくとも０．８０、マンヌロネート率（ＦＭ）が０．２０以下、および少なくとも９５モル％の重合度が２０未満である。
【００６８】
さらに好適なアルギネートオリゴマーは、数平均重合度が７〜１５の範囲内、グルロネート率（ＦＧ）が少なくとも０．８５、マンヌロネート率（ＦＭ）が０．１５以下、および少なくとも９５モル％の重合度が１７未満である。
【００６９】
さらに好適なアルギネートオリゴマーは、数平均重合度が７〜１５の範囲内、グルロネート率（ＦＧ）が少なくとも０．９２、マンヌロネート率（ＦＭ）が０．０８以下、および少なくとも９５モル％の重合度が１７未満である。
【００７０】
さらに好適なアルギネートオリゴマーは、数平均重合度が５〜２０の範囲内、グルロネート率（ＦＧ）が少なくとも０．８５、およびマンヌロネート率（ＦＭ）が０．１５以下である。
【００７１】
さらに好適なアルギネートオリゴマーは、数平均重合度が５〜２０の範囲内、グルロネート率（ＦＧ）が０．９〜０．９５、およびマンヌロネート率（ＦＭ）が０．０５〜０．１であり、これは、９０〜９５％のＧ残基を有し、平均分子量が２６００Ｄａのアルギネートオリゴマーと表し得る。さらに好適なアルギネートオリゴマーは、数平均重合度が約１３（例えば、１２、１３または１４）、グルロネート率（ＦＧ）が少なくとも約０．８０、０．８５、０．８７、０．８８、０．９０または０．９３（例えば、０．９２、０．９３または０．９４）、および対応するマンヌロネート率（ＦＭ）が約０．２０、０．１５、０．１３、０．１２、０．１０または０．０７以下（例えば、０．０８、０．０７または０．０６）である。
【００７２】
さらに好適なアルギネートオリゴマーは、数平均重合度が約２１（例えば、２０、２１または２２）、グルロネート率（ＦＧ）が少なくとも約０．８０（例えば、０．８５、０．８７、０．８８、０．９０、０．９２、０．９４または０．９５）、および対応するマンヌロネート率（ＦＭ）が約０．２０以下（例えば、０．１５、０．１３、０．１２、０．１０、０．０８、０．０６、０．０５）である。
【００７３】
さらに好適なアルギネートオリゴマーは、数平均重合度が約６（例えば、５、６または７）、グルロネート率（ＦＧ）が少なくとも約０．８０（例えば、０．８５、０．８７、０．８８、０．９０、０．９２、０．９４または０．９５）、および対応するマンヌロネート率（ＦＭ）が約０．２０以下（例えば、０．１５、０．１３、０．１２、０．１０、０．０８、０．０６、０．０５）である。
【００７４】
したがって、本発明に有利な特定群のアルギネートオリゴマーは、いわゆる「高Ｇ」または「Ｇブロック」オリゴマーとして定義される、すなわち、Ｇ残基またはＧブロックの含有量が高い（例えば、モノマー残基の少なくとも７０％がＧであり、好ましくはＧブロック中に配置されている）アルギネートオリゴマーであることが分かるであろう。しかしながら、さらに後述する如く、特に「高Ｍ」もしくは「Ｍブロック」オリゴマーまたはＭＧブロックオリゴマーを含む他のタイプのアルギネートオリゴマーも使用してもよい。従って、単一モノマータイプの割合が高く、且つ、前記のこのタイプのモノマーが、そのモノマータイプの連続配列中に主として存在するアルギネートオリゴマーであり、特に好ましいオリゴマー、例えば、オリゴマー中のモノマー残基の少なくとも７０％が、別のＧ残基に（１−４）結合したＧ残基であるか、またはより好ましくはオリゴマーのモノマー残基の少なくとも７５％、最も好ましくは少なくとも８０、８５、９０、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９％が別のＧ残基に（１−４）結合したＧ残基であるオリゴマーを意味する。また、この２個のＧ残基の（１−４）結合は、隣接するグルロン単位に結合したグルロン単位として表すこともできる。
【００７５】
さらなる実施形態では、アルギネートオリゴマーのモノマー残基の少なくとも５０％、特に５０％超が、Ｍ残基（すなわち、マンヌロネートまたはマンヌロン酸）であってもよい。言い換えれば、アルギネートオリゴマーは、少なくとも５０％または５０％超のマンヌロネート（またはマンヌロン酸）残基を含有する。したがって、具体的な実施形態は、５０〜７０％のＭ（マンヌロネート）残基または、例えば、７０〜１００％のＭ（マンヌロネート）残基を有する（例えば含有する）アルギネートオリゴマーを含む。更に具体的な実施形態は、７１〜８５％のＭ残基または８５〜１００％のＭ残基を含有するオリゴマーも含む。したがって、本発明のこの実施形態に従って使用するのための代表的なアルギネートオリゴマーは、７０％超のＭ残基を含有する（すなわち、アルギネートオリゴマーのモノマー残基の７０％超が、Ｍ残基である）。
【００７６】
他の実施形態では、少なくとも５０％または６０％、より具体的には少なくとも７０％または７５％、更により具体的には少なくとも８０、８５、９０、９５または９９％のモノマー残基がマンヌロネートである。一実施形態では、アルギネートオリゴマーは、オリゴマンヌロネート（すなわち、Ｍのホモオリゴマー、すなわち、１００％Ｍ）であってもよい。
【００７７】
更なる実施形態では、上述の本発明のアルギネートは、Ｍ残基の大部分がいわゆるＭブロック中にある一次構造を有する。この実施形態では、好ましくは少なくとも５０％、より好ましくは少なくとも７０または７５％、最も好ましくは少なくとも８０、８５、９０または９５％のＭ残基が、Ｍブロック中にある。Ｍブロックは、少なくとも２個のＭ残基、好ましくは少なくとも３個の連続したＭ残基、より好ましくは少なくとも４個または５個の連続したＭ残基、最も好ましくは少なくとも７個の連続したＭ残基の連続配列である。
【００７８】
具体的には、Ｍ残基の少なくとも９０％が、別のＭ残基に（１−４）結合している。より具体的には、アルギネートのＭ残基の少なくとも９５％、より好ましくは少なくとも９８％、最も好ましくは少なくとも９９％が、別のＭ残基に（１−４）結合している。
【００７９】
他の好ましいオリゴマーは、オリゴマー中のモノマー残基の少なくとも７０％が、別のＭ残基に（１−４）結合したＭ残基であるか、またはより好ましくはオリゴマーのモノマー残基の少なくとも７５％、最も好ましくは少なくとも８０、８５、９０、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９％が別のＭ残基に（１−４）結合したＭ残基であるアルギネートオリゴマーである。また、この２個のＭ残基の（１−４）結合は、隣接したマンヌロン単位に結合したマンヌロン単位として表すこともできる。
【００８０】
また更なる実施形態では、本発明のアルギネートオリゴマーは、Ｍ残基とＧ残基の交互配列を含む。少なくとも３個、好ましくは少なくとも４個のＭ残基とＧ残基の交互配列は、ＭＧブロックを表す。好ましくは、本発明のアルギネートオリゴマーは、ＭＧブロックを含む。より具体的に表すと、ＭＧブロックは、Ｇ残基およびＭ残基からなる少なくとも３個の連続した残基の配列であり、連続配列中の各非末端（内部）Ｇ残基は、Ｍ残基に（１−４）および（４−１）結合しており、連続配列中の各非末端（内部）Ｍ残基は、Ｇ残基に（１−４）および（４−１）結合している。好ましくは、ＭＧブロックは、少なくとも５個または６個の連続した残基、より好ましくは少なくとも７個または８個の連続した残基である。
【００８１】
更なる実施形態では、アルギネートオリゴマー中の少数ウロネート（すなわち、マンヌロネートまたはグルロネート）が、主にＭＧブロック中に見られる。この実施形態では、ＭＧブロックアルギネートオリゴマー中の少数ウロネートモノマーの好ましくは少なくとも５０％、より好ましくは少なくとも７０または７５％、最も好ましくは少なくとも８０、８５、９０または９５％が、ＭＧブロック中に存在する。別の実施形態では、アルギネートオリゴマーは、オリゴマー中のＧ残基およびＭ残基の少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％、例えば１００％が、ＭＧブロック中に配置されるようにアレンジされている。
【００８２】
本発明は、その最も広い範囲において、オリゴマーのモノマー残基の１％以上１００％未満がＧ残基（すなわちグルロネートまたはグルロン酸）であり、より具体的には、以下に更に明確にするように、モノマー残基の少なくとも３０％がＧ残基である実施形態にまで及ぶ。したがって、その最も広い範囲において、アルギネートオリゴマーを含有するＭＧブロックは、１％以上１００％未満のグルロネート（またはグルロン酸）残基を含有し得るが、通常、アルギネートオリゴマーを含有するＭＧブロックは、３０％以上（または３５、４０もしくは４５％以上または５０％のＧ）１００％未満のＧを含有する。したがって、具体的な実施形態は、１〜３０％のＧ（グルロネート）残基、３０〜７０％のＧ（グルロネート）残基または７０〜９９％のＧ（グルロネート）残基を有する（例えば、含有する）アルギネートオリゴマーを含有するＭＧブロックを含む。よって、本発明に従って使用するためのアルギネートオリゴマーを含有する代表的なＭＧブロックは、３０％超７０％未満のＧ残基を含有し得る（すなわち、ＭＧブロックアルギネートオリゴマーのモノマー残基の３０％超７０％未満がＧ残基である）。
【００８３】
好ましくは、アルギネートオリゴマーを含有するＭＧブロックのモノマー残基の３０％超、より具体的には３５％超または４０％超、更により具体的には４５、５０、５５、６０または６５％超（ただし、いずれの場合も７０％未満）がグルロネートである。また、アルギネートオリゴマーを含有するＭＧブロックのモノマー残基の７０％未満、より好ましくは６５％または６０％未満、更により好ましくは５５、５０、４５、４０または３５％未満（ただし、いずれの場合も３０％超）がグルロネートである。これらの値の任意の組合せにより形成される任意の範囲を選択してもよい。したがって、例として、アルギネートオリゴマーを含有するＭＧブロックは、例えば、３５％〜６５％、４０％〜６０％または４５％〜５５％のＧ残基を有し得る。
【００８４】
別の実施形態では、アルギネートオリゴマーを含有するＭＧブロックは、ほぼ等量のＧ残基およびＭ残基（例えば、その比率は、６５％のＧ／３５％のＭ〜３５％のＧ／６５％のＭ、例として、６０％のＧ／４０％のＭ〜４０％のＧ／６０％のＭ、５５％のＧ／４５％のＭ〜４５％のＧ／５５％のＭ、５３％のＧ／４７％のＭ〜４７％のＧ／５３％のＭ、５１％のＧ／４９％のＭ〜４９％のＧ／５１％のＭ、例えば、約５０％のＧと約５０％のＭ）を有していてもよく、これらの残基は主に、好ましくは全体的にまたは可能な限り完全に、ＭＧの交互パターンで配置されている（例えば、Ｍ残基およびＧ残基の少なくとも５０％または少なくとも６０、７０、８０、８５、９０もしくは９５％または１００％が、ＭＧの交互配列中にある）。
【００８５】
ある特定の実施形態では、本発明において使用されるオリゴマーの末端ウロン酸残基は、二重結合、特に、Ｃ４とＣ５原子の間に位置する二重結合を持たない。かかるオリゴマーは、飽和末端ウロン酸残基を有すると表現し得る。当業者は、過度の負担なく、飽和末端ウロン酸残基を有するオリゴマーを調製することができるであろう。これは、かかるオリゴマーを得る生成技術の使用を通して、または不飽和末端ウロン酸残基を有するオリゴマーを得るプロセスにより生成されたオリゴマーを変換する（飽和させる）ことによるものであってもよい。
【００８６】
アルギネートオリゴマーは、通常、電荷を保有するため、アルギネートオリゴマーに対する対イオンは、任意の生理学的に許容できるイオン、特に、荷電薬剤物質に一般的に使用されるもの（例えば、ナトリウム、カリウム、アンモニウム、塩化物、メシレート、メグルミン等）であってもよい。アルギネートのゲル化を促進するイオン（例えば、２族の金属イオン）も、使用し得る。
【００８７】
アルギネートオリゴマーは、適切な数のグルロネート残基およびマンヌロネート残基の重合により生成された合成物質であってもよいが、本発明において使用されるアルギネートオリゴマーは、上述したものなどのような天然源、すなわち天然アルギネート原料から、好都合に入手、生成または誘導し得る。
【００８８】
本発明により使用可能なアルギネートオリゴマーを生成するための多糖からオリゴ糖への切断は、酵素消化および酸加水分解等の従来の多糖溶解技法を用いて行われてもよい。好都合な一実施形態では、酸加水分解を使用して本発明のアルギネートオリゴマーを調製する。他の実施形態では、酵素消化を更なる処理工程（単数または複数）と共に使用し、オリゴマー中の末端ウロン酸を飽和させる。
【００８９】
その後、オリゴマーは、イオン交換樹脂を用いてクロマトグラフィにより、または分画沈殿もしくは可溶化もしくは濾過により、多糖分解生成物から分離し得る。米国特許第６，１２１，４４１号明細書および国際公開第２００８／１２５８２８号（その全体を参照により本明細書に明示的に援用する）には、本発明において使用されるアルギネートオリゴマーの調製に好適な方法が記載されている。更なる情報および考察は、例えば、「親水コロイドのハンドブック（Handbooks of Hydrocolloids）」（Ed. Phillips and Williams, CRC, Boca Raton, Florida, USA, 2000）（このテキストは、その全体を参照により本明細書に明示的に援用する）に見られる。
【００９０】
アルギネートオリゴマーはまた、化学的に修飾してもよく、これには荷電基を付加する修飾（カルボキシル化またはカルボキシメチル化グリカン等）や、（例えば、過ヨウ素酸酸化により）フレキシビリティを変化させるよう修飾したアルギネートオリゴマーが含まれるが、これらに限定されない。
【００９１】
本発明に係る使用に好適なアルギネートオリゴマー（例えば、オリゴグルロン酸）は、ラミナリア・ハイパーボラ（Laminaria hyperbora）およびレッソニア・ニグレセンス（Lessonia nigrescens）（ただしこれらに限定されない）由来のアルギン酸の酸加水分解、中性ｐＨでの溶解、ｐＨを３．４に低下させアルギネートオリゴマー（オリゴグルロン酸）を沈殿させるための無機酸の添加、弱酸を用いた洗浄、中性ｐＨでの再懸濁および凍結乾燥により、好都合に生成し得る。
【００９２】
本発明のアルギネートオリゴマーを生成するためのアルギネートは、好適な細菌源（例えば、緑膿菌（Pseudomonas aeruginosa）またはアゾトバクター・ビネランジー（Azotobacter vinelandii））から直接得ることもできる。
【００９３】
Ｇ残基の大部分が単一残基としてではなくＧブロック中に配置されている一次構造を有するアルギネートオリゴマーを必要とする実施形態では、藻類源が、これらの生物において産生されるアルギネートがこれらの構造を有する傾向にあることから、最も好適であると考えられる。細菌源は、異なる構造のアルギネートオリゴマーを得るのにより好適であり得る。
【００９４】
シュードモナス・フルオレセンス（Pseudomonas fluorescens）およびアゾトバクター・ビネランジーにおけるアルギネート生合成に関与する分子装置が、クローニングされており、且つ、特徴が特定されており（国際公開第９４／０９１２４号、Ertesvag, H.ら, Metabolic Engineering, 1999, Vol 1, 262-269、国際公開第２００４／０１１６２８号、Gimmestad, M.ら（上記参照）、Remminghorst and Rehm, Biotechnology Letters, 2006, Vol 28, 1701-1712、Gimmestad, M.ら, Journal of Bacteriology, 2006, Vol 188(15), 5551-5560)、これらの系を操作することにより、目的に合わせた一次構造を有するアルギネートが、容易に得られる。
【００９５】
アルギネート（例えば、藻類原料）のＧ含量は、例えば、アゾトバクター・ビネランジー由来のマンヌロナン（mannuronan）Ｃ−５エピメラーゼまたは他のエピメラーゼ酵素を用いて、エピマー化により増加させることができる。よって、例えば、ｉｎ  ｖｉｔｒｏでのエピマー化を、シュードモナスまたはアゾトバクター由来の単離エピメラーゼ、例えばシュードモナス・フルオレセンスもしくはアゾトバクター・ビネランジー由来のＡｌｇＧまたはアゾトバクター・ビネランジー由来のＡｌｇＥ酵素（ＡｌｇＥ１〜ＡｌｇＥ７）を用いて実施してもよい。アルギネートを産生する能力を有する他の生物（特に藻類）由来のエピメラーゼの使用も、具体的に検討されている。アゾトバクター・ビネランジーＡｌｇＥエピメラーゼを用いた低Ｇアルギネートのｉｎ  ｖｉｔｒｏでのエピマー化は、Ertesvagら（上記参照）およびStrugalaら（食品産業用のゴム質と安定剤(Gums and Stabilisers for the Food Industry), 2004, 12, The Royal Society of Chemistry, 84-94）に詳細に記載されている。
【００９６】
アルギネートまたはアルギネートオリゴマーを含有するＧブロックを得るために、ＡｌｇＥ４以外の１つ以上のアゾトバクター・ビネランジーＡｌｇＥエピメラーゼを用いるエピマー化が、これらの酵素がＧブロック構造を産生する能力を有するため、好ましい。一方、ＡｌｇＥ４エピメラーゼは、Ｇブロックを産生するのではなく、Ｍ残基に結合した単一のＧ残基を産生するように個々のＭ残基を優先的にエピマー化するようであることが分かっているため、この酵素を使用し、交互に連なるＭ／Ｇ配列または単一のＧ残基を含有する一次構造を有するアルギネートまたはアルギネートオリゴマーを作り出すことができる。これらの酵素の異なる組合せを使用することにより、特定の一次構造を得ることができる。
【００９７】
これらの酵素の突然変異型または他の生物由来の相同体も、有用であるとして具体的に検討されている。国際公開第９４／０９１２４号には、例えば、エピメラーゼの様々なドメインまたはモジュールをコードするＤＮＡ配列が、シャッフルされているかまたは欠失させ且つ組み換えられているエピメラーゼ配列によりコードされた組換えまたは修飾マンヌロナンＣ−５エピメラーゼ酵素（ＡｌｇＥ酵素）が記載されている。また、例えば、ＡｌｇＧ遺伝子またはＡｌｇＥ遺伝子の部位特異的突然変異誘発またはランダム突然変異誘発により得られる、天然のエピメラーゼ酵素（ＡｌｇＧまたはＡｌｇＥ）の突然変異体を使用してもよい。
【００９８】
異なるアプローチは、シュードモナス属（Pseudomonas）およびアゾトバクター属（Azotobacter）の生物を作り出すことであり、これらは、それらの突然変異体が、後のアルギネートオリゴマー産生に必要とされる構造のアルギネートまたは必要とされる構造およびサイズ（または分子量）のアルギネートオリゴマーさえも産生するように、それらのエピメラーゼ遺伝子の一部または全てにおいて突然変異させたものである。突然変異したＡｌｇＧ遺伝子を有する多数のシュードモナス・フルオレセンス生物の生成が、国際公開第２００４／０１１６２８号およびGimmestad, M.ら, 2003（上記参照）に詳細に記載されている。突然変異したＡｌｇＥ遺伝子を有する多数のアゾトバクター・ビネランジー生物の生成は、Gimmestad, M.ら, 2006（上記参照）に開示されている。
【００９９】
更なるアプローチは、アゾトバクター属またはシュードモナス属の生物由来の内在性エピメラーゼ遺伝子を欠失または不活性化させ、その後、１つ以上の外来性エピメラーゼ遺伝子を導入することであり、これらは、突然変異していても突然変異していなくともよく（すなわち、野生型であっても修飾されていてもよく）、また、それらの発現は、例えば、誘導性のまたは他の「制御可能なプロモータ」の使用により制御し得る。遺伝子の適切な組合せを選択することにより、所定の一次構造を有するアルギネートを生成することができる。
【０１００】
また更なるアプローチは、シュードモナス属および／またはアゾトバクター属のアルギネート生合成機構の一部または全てを、非アルギネート産生生物（例えば、大腸菌）中に導入し、これらの遺伝子操作生物からアルギネートの産生を誘導することであろう。
【０１０１】
これらの培養系システムを用いる場合、アルギネートまたはアルギネートオリゴマー生成物の一次構造は、培養条件により影響され得る。特定の生物により産生されるアルギネートの一次構造を操作するために、温度、モル浸透圧濃度、栄養レベル／栄養源および大気パラメータなどの培養パラメータを調整することは、十分に当業者の能力範囲内である。
【０１０２】
「Ｇ残基／Ｇ」および「Ｍ残基／Ｍ」またはグルロン酸もしくはマンヌロン酸またはグルロネートもしくはマンヌロネートは、グルロン酸／グルロネートおよびマンヌロン酸／マンヌロネート（具体的には、α−Ｌ−グルロン酸／グルロネートおよびβ−Ｄ−マンヌロン酸／マンヌロネート）と同じ意味に解釈されるものとし、さらにそれらの誘導体が含まれ、それらの誘導体は、それらの抗菌効力を著しく低下させることなく前記抗生物質の宿主毒性を低下させる能力、および任意に、抗生物質の抗菌作用を延長する能力、および任意に、前記抗生物質の初期ＰＫ／ＰＤプロファイル（未修飾オリゴマーより実質的に低い）を維持する能力をもたらすことなく、１つ以上の利用可能な側鎖または基が修飾されている。一般的な糖修飾基としては、アセチル基、スルフェート基、アミノ基、デオキシ基、アルコール基、アルデヒド基、ケトン基、エステル基およびアンヒドロ基が挙げられるであろう。アルギネートオリゴマーはまた、化学修飾し、荷電基（例えば、カルボキシル化またはカルボキシメチル化グリカンなど）を付加してもよく、フレキシビリティを（例えば、過ヨウ素酸酸化により）変化させてもよい。当業者は、オリゴ糖の単糖サブユニットに対して行うことができる更なる化学修飾について認識しており、これらの化学修飾は、本発明において使用されるアルギネートオリゴマーに適用することができる。
【０１０３】
アルギネートオリゴマーとポリミキシン群の抗生物質との間の直接共有結合は、アルギネートオリゴマーの原子とポリミキシン群の抗生物質の原子とにより形成される共有結合である。結合に寄与する原子は、組み合わせてまたは単独で、炭素、酸素、硫黄、窒素および／またはリンであってもよい。結合は、一重、二重または三重であってもよい。ある特定の実施形態では、結合は、有機官能基の一部である。当業者は、アルギネートオリゴマーとポリミキシン群の抗生物質との間のリンカーとして作用し得る好適な有機官能基に利用可能な選択肢に完全に精通しているであろう。その非限定的な例としては、エステル、炭酸エステル、オルトエステル、ケトン、ケタール、ヘミケタール、ケテン、エーテル、アセタール、ヘミアセタール（hemiacteal）、ペルオキシ、メチレンジオキシ、カルバメート、アミド、アミン、アミンオキシド、ヒドロキサム酸、イミン、イミド、イミデート、アジド、アゾ、オキシム、カルボジイミド、カルバゾン、ヒドラゾン（hydrozone）、スルフィド、ジスルフィド、スルフィニル、スルホニル、カルボノチオイル、チオアミド、チオエステル、チオエーテル、チオケトン、チオケタール、スルホネートエステル、ジチオカルバメート、セミカルバゾン、ホスフィンまたはホスホジエステル官能基が挙げられる。実施例に示されるように、アミド結合およびエステル結合の形成が、便利かつ有益であり得る。
【０１０４】
共有結合分子リンカーは、アルギネートオリゴマーおよびポリミキシン群の抗生物質と共有結合することができる共有結合した原子から形成される構造を有する任意の分子、典型的には有機分子またはその一部であってもよい。結合体内には、分子リンカーを介してアルギネートオリゴマーからポリミキシン群の抗生物質まで、連続した一連の共有結合した原子が存在するであろう。好ましい実施形態では、前記一連の共有結合した原子における共有結合の少なくとも１つは、上述した通りである。しかしながら、分子リンカーは、ポリミキシン群の抗生物質とアルギネートオリゴマーとの間の共有結合に寄与していない分子の部分に、非共有結合（例えば、イオン結合）をさらに含んでいてもよい。
【０１０５】
共有結合分子リンカーは、直鎖状、環状または分岐状であってもよい。ある特定の実施形態では、分子リンカーの分子量は、１５００ダルトン以下、例えば、１２５０、１０００、９００、８００、７００、６００、５００、４００、３００、２００または１００ダルトン以下であろう。
【０１０６】
ある特定の実施形態では、アルギネートオリゴマーと共有結合分子リンカーとの間の少なくとも１つの直接共有結合は、上述の通りである。ある特定の実施形態では、ポリミキシン群の抗生物質と共有結合分子リンカーとの間の少なくとも１つの直接共有結合は、上述の通りである。各結合は、同じであっても異なっていてもよい。共有結合リンカー分子は、好ましくは、分子リンカーを介してアルギネートオリゴマーからポリミキシン群の抗生物質まで連続した一連の共有結合した原子に寄与している、その分子の一部に、少なくとも１つの上述の共有結合を含んでいてもよい。
【０１０７】
共有結合分子リンカーは、例えば、１５個以下のアミノ酸残基の（例えば、１２、１０、８、６、５、４、３または２個以下のアミノ酸残基の）アミノ酸またはペプチドであってもよいし、それを含んでいてもよい。アミノ酸は、上記アミノ酸のいずれであってもよく、ペプチドは、上記アミノ酸のいずれかを含んでいてもよい。使用し得るペプチドリンカーの具体例としては、Ｇｌｙおよび／またはＳｅｒ残基のペプチド（例えば、（Ｇｌｙ）２−８、（Ｓｅｒ）２−８、（ＧＧＧＧＳ）１−３）、（ＥＡＡＡＫ）１−３；Ａ（ＥＡＡＡＫ）１−３Ａ；Ｌｅｕ−Ｇｌｕ；（Ｘａａ−Ｐｒｏ）１−６（例えば、（Ｇｌｕ−Ｐｒｏ）１−６、（Ｌｙｓ−Ｐｒｏ）１−６、（Ａｌａ−Ｐｒｏ）１−６；ＶＳＱＴＳＫＬＴＲ↓ＡＥＴＶＦＰＤＶ（第ＸＩａ因子／第ＶＩＩａ因子感受性切断）、ＰＬＧ↓ＬＷＡ（マトリックスメタロプロテアーゼ−１感受性切断）；ＲＶＬ↓ＡＥＡ（ＨＩＶ−１プロテアーゼ感受性切断）；ＥＤＶＶＣＣ↓ＳＭＳＹ（ＮＳ３プロテアーゼ感受性切断；ＧＧＩＥＧＲ↓ＧＳ（第Ｘａ因子感受性切断）；ＴＲＨＲＱＰＲ↓ＧＷＥ（フューリン感受性切断）；ＡＧＮＲＶＲＲ↓ＳＶＧ（フリン感受性切断）；ＧＦＬＧ↓（カテプシンＢ感受性切断）が挙げられるが、これらに限定されない。
【０１０８】
共有結合分子リンカーは、グルロネートもしくはマンヌロネートまたはそれらから形成されるポリマー以外の単糖類またはオリゴ糖類（例えば、１２アミノ酸残基以下（例えば、１０、８、６、５、４、３または２個以下のアミノ酸残基）の糖類）であってもよいし、またはそれを含んでいてもよい。したがって、共有結合分子リンカーは、単糖類、二糖類もしくは三糖類またはその糖誘導体、例えば、アルドン酸およびウロン酸、デオキシ糖もしくはアミノ糖、硫酸化糖、ならびに糖アルコールなどであってもよい。単糖類または二糖類もしくは三糖類の単糖残基の１個以上は、ピラノース型もしくはフラノース型および／または適切な場合にはＬ型もしくはＤ型のトリオース、テトロース、ペントース、ヘキソース、ヘプトース、オクトース、ノノースもしくはデコースおよび／またはそれらの糖誘導体であってもよい。ペントースまたはヘキソース糖類／残基が好ましく、例えば、マンノース（例えば、Ｄ−マンノース）、ガラクトース（例えば、Ｄ−ガラクトース）、グルコース（例えば、Ｄ−グルコース）、フルクトース、フコース（例えば、Ｌ−フコース）、Ｎ−アセチル−グルコサミン、Ｎ−アセチルガラクトサミン、ラムノース、ガラクトサミン、グルコサミン（例えば、Ｄ−グルコサミン）、ガラクツロン酸、グルクロン酸、Ｎ−アセチルノイラミン酸、メチルＤ−マンノピラノシド（マンノシド）、α−メチル−グルコシド、ガラクトシド、リボース、キシロース、アラビノース、サッカラ―ト、マンニトール、ソルビトール、イノシトール、グリセロールおよびこれらのモノマーの誘導体が挙げられる。二糖類は、実例として、アカルビオシン、アロラクトース、セロビオース、キトビオース、ガラクトース−アルファ−１，３−ガラクトース、デンチオビオース（dentiobiose）、イソマルト、イソマルトース、イソマルツロース、コージビオース、ラクチトール、ラクトビオン酸、ラクトース、ラクツロース、ラミナリビオース、マルチトール、マルトース、マンノビオース、メリビオース、メリビウロース、ネオヘスペリドース、ニゲロース、ロビノース、ルチノース、サンブビオース、ソホロース、スクラルファート、スクラロース、スクロース、スクロースアセテートイソブチレート、スクロースオクタアセテート、トレハロース、ツルラノース（truranose）、キシロビオースまたはこれら二糖類の誘導体が挙げられる。
【０１０９】
共有結合分子リンカーは、ヌクレオチドまたはオリゴヌクレオチド、すなわち核酸（例えば、リボヌクレオチドまたはデオキシリボヌクレオチド）であってもよく、またはそれを含んでいてもよい。
【０１１０】
リンカーはまた、直鎖、分岐もしくは環状、置換もしくは非置換のアルキル、アルケニルまたはアルキニル（alkynl）基（典型的には、Ｃ２-８）あるいはそれらの誘導体、例えば、アミノヘキサン酸、あるいは市販の様々なＰＥＧ（ポリエチレングリコール）リンカーの１つなどであってもよいし、それを含んでいてもよい。
【０１１１】
好適な共有結合リンカー分子のさらなる例としては、アセチル基、サクシニル基、アコニチル（シスまたはトランス）基、グルタリル基、メチルスクシニル基、トリメリチルシステアミン（trimellityl cysteamine）基、ペニシラミン基、Ｎ−（２−メルカプトプロピオニル）グリシン基、２−メルカプトプロピオン酸基、ホモシステイン基、３−メルカプトプロピオン酸基およびデアミノ−ペニシラミン基が挙げられるが、これらに限定されない。
【０１１２】
ある特定の実施形態において、共有結合リンカー分子は、上記の複数の分子および／または基であってもよい。
【０１１３】
ある特定の実施形態において、直接共有結合または共有結合リンカー分子（より具体的には、リンカー分子内の共有結合、リンカー分子とアルギネートオリゴマーとの間の共有結合および／またはリンカー分子とポリミキシン群の抗生物質との間の共有結合）は、対象における標的部位または場所の典型的な条件下、または好都合には本質的に標的部位または場所に固有の条件下（例えば、細菌感染症、気道（特に、肺、より具体的には、嚢胞性線維症患者の肺を含む下気道）または創傷（特に、慢性創傷）の典型的な条件下）で溶解できるように選択される。このようにして、ポリミキシン群の抗生物質を、標的部位に対してより選択的に送達し得る。
【０１１４】
特定の実施形態では、通常の生理的ｐＨ（ｐＨ７．２）より低いｐＨ、すなわち酸性ｐＨ（例えば、約３〜約７、６．５、６、５．５、５、４．５、４または３．５のｐＨ）に敏感な（で不安定な、分解する、溶解する）、共有結合、当該共有結合を含有する官能基またはリンカー分子を選択してもよい。炎症、特に感染により引き起こされる炎症の部位または場所は、典型的にはこれらの範囲のｐＨを有する。エステル、シス−アコニチル、ジスルフィドおよびヒドラゾンを含む官能基は、低いｐＨに敏感であり得、すなわち、酸不安定性と言える。
【０１１５】
特定の実施形態では、活性酸素種に敏感な共有結合、官能基またはリンカー分子を選択してもよい。炎症、特に感染により引き起こされる炎症の部位または場所は、典型的には高レベルの活性酸素種を有する。チオケタールおよびチオエーテルを含む官能基は、活性酸素種に敏感であり得る
さらなる特定の実施形態では、標的部位でのみ産生もしくは分泌される酵素または標的部位で過剰産生もしくは過剰分泌される酵素により溶解される共有結合、官能基またはリンカー分子を選択してもよい。これには、グリコシダーゼ、ヌクレアーゼおよびペプチダーゼなどの酵素、特に感染細菌によって分泌されるものおよび宿主の炎症細胞によって分泌されるもの、例えば、リゾチーム、アルギネートリアーゼ、デオキシリボヌクレアーゼＩ、制限酵素、好中球エラスターゼ、カテプシン、ホスホリパーゼおよびβ−ラクタマーゼが挙げられる。しかしながら、アルギネートオリゴマーまたはポリミキシン群の抗生物質を分解することができる酵素によって溶解されない共有結合、官能基またはリンカー分子を選択することが有利である場合もあり、そのため、ポリミキシン群の抗生物質からのアルギネートオリゴマーの分離は、アルギネートオリゴマーまたはポリミキシン群の抗生物質の分解とは別に生じる。
【０１１６】
他の実施形態では、直接共有結合または共有結合リンカー分子は、対象における標的部位もしくは場所（例えば、上記の場所、または結合体が、投与後にそれらの場所および部位への途中で遭遇する可能性のある場所もしくは部位および／またはその身体における分配中に結合体が遭遇する可能性のある場所もしくは部位）の典型的な条件下、または好都合には本質的に標的部位もしくは場所に固有の条件下、安定性を持つように選択してもよい。例えば、アミド結合、チオエーテル結合またはＧｌｙ−Ｇｌｙペプチドリンカーがここでは好適であり得る。
【０１１７】
さらなる特定の実施形態では、ポリミキシン群の抗生物質の初期ＰＫ／ＰＤプロファイルに類似の、好ましくは実質的にまたは本質的に同一の初期ＰＫ／ＰＤプロファイルを有するポリミキシン−アルギネートオリゴマー結合体が得られる共有結合、官能基またはリンカー分子を選択し得る。本発明によれば、ＰＫ／ＰＤモデルは、生体膜拡散の２コンパートメントモデル、例えば、Azzopardi（上記参照）および／または実施例４に記載されたものであってもよく、プロファイルは、供試活性剤の投与後１２時間、例えば、１０、８、６または４時間以内に決定される。エステル結合が、例えば、ここでは好適であり得る。
【０１１８】
好ましい実施形態では、ポリミキシン−アルギネートオリゴマー結合体は、アルギネート上のカルボキシル基およびポリミキシン上のアミン基から形成されるアミド結合を介してポリミキシン群の抗生物質に共有結合した少なくとも１つのアルギネートオリゴマーからなる。好ましくは、ポリミキシン群の抗生物質は、コリスチン（例えば、ポリミキシンＥ１またはＥ２）またはポリミキシンＢ（例えば、ポリミキシンＢ１、Ｂ１−ＩまたはＢ２）である。アルギネートオリゴマーは、好ましくは２〜１００個のモノマー残基を含有する。アルギネートオリゴマーはまた、少なくとも７０％のＧ残基も有し得る。
【０１１９】
好ましい実施形態では、ポリミキシン−アルギネートオリゴマー結合体は、アルギネート上のカルボキシル基およびポリミキシン上のヒドロキシル基から形成されるエステル結合を介してポリミキシン群の抗生物質に共有結合した少なくとも１つのアルギネートオリゴマーからなる。好ましくは、ポリミキシン群の抗生物質は、コリスチン（例えば、ポリミキシンＥ１またはＥ２）またはポリミキシンＢ（例えば、ポリミキシンＢ１、Ｂ１−ＩまたはＢ２）である。アルギネートオリゴマーは、好ましくは２〜１００個のモノマー残基を含有する。アルギネートオリゴマーはまた、少なくとも７０％のＧ残基も有し得る。
【０１２０】
複数のアルギネートオリゴマーがポリミキシン群の抗生物質に共有結合している多価配置が考えられる。アルギネートオリゴマーは、同一のものであっても異なるものであってもよく、同じタイプの共有結合または共有結合分子リンカーを介してポリミキシン群の抗生物質に結合されていてもよい。他の配置において、アルギネートオリゴマーは、本明細書に記載の形態で、複数のポリミキシン分子に共有結合されていてもよい。ポリミキシン分子は、同一のものであっても異なるものであってもよく、他のアルギネートオリゴマーに共有結合していてもしていなくてもよい。
【０１２１】
本発明のポリミキシン−アルギネートオリゴマー結合体とは、それらの薬学的に許容される塩、溶媒和化合物または水和物、それらのジアステレオ異性体、互変異性体、鏡像異性体および活性代謝物も含む。好適な塩としては、塩酸、硫酸、リン酸、硝酸、炭酸、ホウ酸、スルファミン酸および臭化水素酸などの無機酸からの酸付加塩、または酢酸、プロピオン酸、酪酸、酒石酸、マレイン酸、ヒドロキシマレイン酸、フマル（fumeric）酸、、クエン酸、乳酸、ムチン酸、グルコン酸、安息香酸、コハク酸、シュウ酸、フェニル酢酸、メタンスルホン酸、トルエンスルホン酸、ベンゼンスルホン（benezenesulphonic）酸、サリチル（salicyclic）酸、スルファニル酸、アスパラギン酸、グルタミン酸、エデト酸、ステアリン酸、パルミチン酸、オレイン酸、ラウリン酸、パントテン酸、タンニン酸、アスコルビン酸、フェンジゾン（fendizoic）酸、４−４’−メチレンビス−３−ヒドロキシ−２−ナフトエ酸、ｏ−（ｐ−ヒドロキシベンゾイル）安息香酸、４−４’−ジヒドロキシトリフェニルメタン−２−カルボン酸および吉草酸などの薬学的に許容される有機酸の塩が挙げられる。塩基塩としては、薬学的に許容されるカチオン、例えば、ナトリウム、カリウム、リチウム、カルシウム、マグネシウム、アンモニウムおよびアルキルアンモニウムなどを用いて形成されるものが挙げられるが、これらに限定されない。
【０１２２】
本発明は、さらなる態様において、本発明のポリミキシン−アルギネートオリゴマー結合体の製造方法を提供するものであって、前記方法は、
（ｉａ）アルギネートオリゴマーおよびポリミキシン群の抗生物質を準備し、それらの２つの分子基の間に直接共有結合を形成すること、または
（ｉｂ）アルギネートオリゴマー、ポリミキシン群の抗生物質および共有結合分子リンカーを準備し、アルギネートオリゴマーとリンカー分子の２つの分子基の間に直接共有結合を形成し、且つ、ポリミキシン群の抗生物質とリンカー分子の２つの分子基の間に直接共有結合を形成すること、または
（ｉｃ）アルギネートオリゴマーおよびポリミキシン群の抗生物質を準備すること（但し、一方または両方が、それに共有結合し、且つ、リンカー分子の少なくとも１つを介してアルギネートオリゴマーをポリミキシン群の抗生物質に共有結合させている共有結合分子リンカー分子を有する）、ならびに、任意に、
（ｉｉ）反応混合物から、ポリミキシン−アルギネートオリゴマー結合体の少なくとも一部を分離すること
を含む。
【０１２３】
本発明は、ある特定の実施形態において、本発明のポリミキシン−アルギネートオリゴマー結合体の製造方法を提供するものであって、前記方法は、
（ｉ）利用可能なカルボキシル基を有するアルギネートオリゴマーの水溶液を準備することと、
（ｉｉ）アルギネートオリゴマー中の少なくとも１つのカルボキシル基を活性化するのに十分な量および条件下で、前記アルギネート溶液を１−エチル−３−［３−ジメチルアミノプロピル］カルボジイミド塩酸塩（ＥＤＣ）と接触させることと、
（ｉｉｉ）任意に、アミン反応性スルホ−Ｎ−ヒドロキシスクシンイミド（スルホ−ＮＨＳ）エステルを形成するのに十分な量および条件下で、前記カルボキシル活性化アルギネートオリゴマーをスルホ−ＮＨＳと接触させることと、
（ｉｖ）アルギネートオリゴマーとポリミキシン群の抗生物質との間にアミド結合を形成するのに十分な量および条件下で、工程（ｉｉ）の前記カルボキシル活性化アルギネートオリゴマーまたは工程（ｉｉｉ）のアミン反応性スルホ−ＮＨＳエステルを、利用可能な一級アミン基を有するポリミキシン群の抗生物質と接触させることと、
（ｖ）反応混合物から、ポリミキシン−アルギネートオリゴマー結合体の少なくとも一部を分離することと
を含む。
【０１２４】
本発明は、ある特定の実施形態において、本発明のポリミキシン−アルギネートオリゴマー結合体の製造方法を提供するものであって、前記方法は、
（ｉ）利用可能なカルボキシル基を有するアルギネートオリゴマーの溶液、好ましくは有機（例えば、ＤＭＦおよび／またはＤＭＳＯ）溶液を準備することと、
（ｉｉ）Ｏ−アシルイソ尿素中間体を形成するのに十分な量および条件下で、前記アルギネート溶液をジシクロヘキシルカルボジイミド（ＤＣＣ）と接触させることと、
（ｉｉｉ）アルギネートオリゴマーとポリミキシン群の抗生物質との間にエステル結合を形成するのに十分な量および条件下で、前記Ｏ−アシルイソ尿素中間体を利用可能なヒドロキシル基を有するポリミキシン群の抗生物質および４−Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノピリジン（ＤＭＡＰ）と接触させることと、
（ｉｖ）反応混合物から、ポリミキシン−アルギネートオリゴマー結合体の少なくとも一部を分離することと
を含み、
工程（ｉｉ）および（ｉｉｉ）は、同時に実施してもよい。
【０１２５】
上記の如く、ポリミキシン−アルギネートオリゴマー結合体は、非結合ポリミキシン群の抗生物質と本質的に同じまたは類似の抗菌効力を有するが、宿主毒性がより低く、潜在的により長期間の抗菌作用を有する一群の新規化学物質である。抗菌効力は、例えば、最小阻止濃度（ＭＩＣ）値に基づき評価することができ、ＭＩＣ値（例えば、結合体自体の質量に基づき計算した、または結合体のポリミキシン含有量に基づき計算した）が、非結合抗生物質と比較して２倍未満である場合、ポリミキシン−アルギネートオリゴマー結合体は、同様の抗菌効力を有すると判断し得る。例えば、結合体のＭＩＣ値は、１倍以下であり得る。さらに、ＭＩＣの上昇は許容でき（例えば、２倍以上）、非結合抗生物質と比較して結合体の毒性が実質的に低い場合、依然として有益または有用な生成物が得られ得る。例えば、循環系の、ある特定の生理学的モデルにおいて、ポリミキシン群の抗生物質の非結合型に類似の初期ＰＫ／ＰＤプロファイルを有するある特定のポリミキシン−アルギネートオリゴマー結合体を調製し得ることも見出した。この特性の組合せにより、ポリミキシン群の抗生物質それ自体と比較しても、マスキング成分（masking entities）を使用し宿主毒性を低下させる、先に提案されたポリミキシン修飾物と比較しても、細菌（特にグラム陰性の）感染症の治療において（特に全身治療において）本発明の結合体が有利となる。特に、小さいデキストリン分子の使用が、マスキング成分として提案されており、かかる結合体の宿主毒性は著しく低いが、得られた結合体の呈する抗生物質効力は、著しく低く、これはデキストリン基の除去により部分的にしか回復できない。さらに、デキストリン−ポリミキシン結合体の初期ＰＫ／ＰＤプロファイルは、生体膜拡散の２コンパートメントモデルにおける非結合ポリミキシンの対応するプロファイルに類似しておらず、これはそれらの臨床利用を複雑にし得る（Azzopardi、上記参照）。
【０１２６】
一方、実施例に示されるように、ポリミキシン−アルギネートオリゴマー結合体は、非修飾抗生物質と本質的に同じ抗生物質効力を有する。本発明のポリミキシン−アルギネートオリゴマー結合体のさらに驚くべき特性は、それらの抗生物質効果の持続時間であり、それは非修飾型のポリミキシン群の抗生物質よりも著しく長くなり得る。さらに、実施例は、本発明のポリミキシン−アルギネートオリゴマー結合体が、同じポリミキシン群の非結合型よりもバイオフィルムに対処する（combating）（例えば、バイオフィルムを破壊、低減、制限または排除する）際により効果的であり得ることを示している。さらに、例えば、循環系の、ある特定の生理学的モデルでは、ポリミキシン群の抗生物質の非結合型に類似した初期ＰＫ／ＰＤプロファイルを有するポリミキシン−アルギネートオリゴマー結合体をデザインすることが可能である。
【０１２７】
したがって、本発明は、さらなる様態において、本明細書に定義しているポリミキシン−アルギネートオリゴマー結合体および薬学的に許容される賦形剤、担体または希釈剤を含む医薬組成物を提供する。好適な賦形剤、担体または希釈剤は、下記に記載されており、具体的な医薬組成物は、下記に詳述されている。
【０１２８】
本発明は更に、細菌感染症への対処（combat）における、本明細書に記載のポリミキシン−アルギネートオリゴマー結合体およびそれを含む医薬組成物の使用に関する。本明細書で使用される「対処」という用語は、療法および予防法の両方を含む（すなわち、細菌感染症の治療または予防）。
【０１２９】
したがって、本発明は、この態様において、療法に使用するための、特に、細菌感染症の治療または予防に使用するための、本明細書に記載の本発明のポリミキシン−アルギネートオリゴマー結合体およびそれらを含む医薬組成物を提供する。
【０１３０】
具体的には、本発明は、さらなる様態において、細菌感染症に罹患している、罹患していると疑われる、またはその危険性がある対象における細菌感染症の治療または予防の方法を提供するものであって、前記方法は、本明細書に定義されている本発明のポリミキシン−アルギネートオリゴマー結合体の有効量を前記対象に投与することを含む。
【０１３１】
本発明は更に、細菌感染症に罹患している、罹患していると疑われる、またはその危険性がある対象における細菌感染症の治療または予防において使用するための、本明細書に定義されている本発明のポリミキシン−アルギネートオリゴマー結合体を提供する。
【０１３２】
ポリミキシン−アルギネートオリゴマー結合体の「有効」量、より具体的には、「薬学的有効」量とは、標的細菌感染症の測定可能な治療または予防をもたらす結合体の量である。ある特定の実施形態では、結合体の抗菌作用は、ポリミキシン群の抗生物質の非結合型のものより長い（すなわち、より長く継続または持続する）ため、必要とされる結合体は少なくてもよく、例えば、結合体の有効量は、ポリミキシン群の抗生物質の非結合型のものよりも比較的少ない。
【０１３３】
特に、かかる方法および使用において、有効量のポリミキシン−アルギネートオリゴマー結合体により、対象において引き起こされる宿主毒性は、最高でも対処可能な、好ましくは、わずかなもしくは無視できる、または感知不可のもしくは臨床的に意味のないものである。いずれにしても、宿主毒性は、対応する非結合型ポリミキシンと比較して低下する。
【０１３４】
上述の実施形態では、達成されるべき主要な生理学的成果は、感染部位（特に、感染部位または場所に存在する細菌であり、体内の複数の感染部位または場所を含んでいてもよく、全身感染症も含む）および／または感染症が発生し得る（または発生する危険性がある）部位（例えば、表面）のポリミキシン−アルギネートオリゴマー結合体との接触である。本発明の結合体の投与およびそれに続く本発明の部位の接触からの二次的な生理学的転帰は、対応する非結合ポリミキシン抗生物質と比較して、治療を受けている対象における宿主毒性の程度が低下するまたは制限されることであり、例えば、見られる宿主毒性は、対処可能な、好ましくは、わずかなもしくは無視できる、または感知不可のもしくは臨床的に意味のないものである。
【０１３５】
別の表現をすると、本発明は、細菌感染症に罹患している、罹患していると疑われる、またはその危険性がある対象における細菌感染症の治療または予防において使用するための薬剤の製造用の本明細書に定義されている本発明のポリミキシン−アルギネートオリゴマー結合体の使用をさらに提供する。
【０１３６】
「細菌感染症」（または「〜により感染された」もしくは「〜に感染している」など）という用語は、本明細書において、広義に使用され、対象が、問題の細菌を含むか、含有するか、または保有し得る、すなわち、細菌が単純に対象内または対象上に存在し得ることを示し、これは対象の身体内または身体上の任意の部位または場所を含み得る。対象の感染症が、臨床疾患として現れている（すなわち、感染により対象に臨床症候が現れている）必要はないが、これは当然ながら包含される。感染症に罹患していると疑われる、またはその危険性がある対象とは、細菌もしくは感染した対象に曝された対象、または感染症の臨床徴候もしくは症候を呈している対象（感染症が疑われる場合）、または一般的に（例えば、対象の臨床状態による）もしくは具体的に、問題の細菌に対してであるかどうかにかかわらず、感染しやすい対象であり得る。
【０１３７】
また、本発明のある特定の態様によれば、対象が、細菌感染症に罹患している、罹患していると疑われる、またはその危険性がある対象であると特定する先行工程、または対象が、細菌感染症に罹患している、罹患していると疑われる、またはその危険性がある対象であると診断する工程があってもよい。特に、細菌感染症は、ポリミキシン群の抗生物質を用いた通常の臨床診療において、治療される、すなわち治療可能であることが知られているタイプのものであり得る。一実施形態では、細菌は、ポリミキシン群の抗生物質に反応する（すなわち感受性がある）細菌であると特定されるかまたは反応する（すなわち感受性がある）細菌であろうと思われる。ある特定の実施形態では、ポリミキシン群の抗生物質に対するその感染症（またはより具体的には感染症における細菌）の感受性を判定し得る。
【０１３８】
本発明によれば、上記の先行工程の代わりにまたは上記の先行工程に加えて、対象の細菌感染症の臨床指標を評価し、且つ、好ましくは、臨床指標における任意の変化を特定するために、前記治療に先立ってまたは前記治療の早い段階で行われた対応する評価と比較する、次工程があってもよい。
【０１３９】
容易に観察可能な生理学的指標に基づく細菌感染症の診断およびモニタリングは、臨床医にとって完全に日常的なことである。分子生物学的手法および微生物学的手法も、診断結果を更に確認するために、そして病原体（例えば、分類学的情報）、可能性のある毒性の徴候、および抗生物質に対するそれらの感受性に関する更なる情報を提供するために使用され得る。
【０１４０】
本発明によれば、上記の先行工程および／または次工程の代わりにまたは上記の先行工程および／または次工程に加えて、対象のポリミキシン毒性の臨床指標を評価し、且つ、好ましくは、臨床指標における任意の変化を特定するために、前記治療に先立ってまたは前記治療の早い段階で行われた対応する評価と比較する、次工程があってもよい。容易に観察可能な生理学的指標に基づく対象におけるポリミキシン毒性のモニタリングは、臨床医にとって完全に日常的なことである。これは、対象の全身状態またはより特異的な分子マーカー、例えば、炎症マーカー（例えば、循環または局所サイトカインレベル）の評価を含み得る。
【０１４１】
本発明は、単一のポリミキシン−アルギネートオリゴマー結合体または異なる複数のポリミキシン−アルギネートオリゴマー結合体の混合物（多様／多数；２種類以上）の使用を包含する。当該混合物は、異なる複数のポリミキシン群の抗生物質と、同一のアルギネートオリゴマーとを有する結合体を含んでいてもよい。当該混合物は、同一のポリミキシン群の抗生物質と、異なる複数のアルギネートオリゴマーとを有する結合体を含んでいてもよい。当該混合物は、異なる複数のポリミキシン群の抗生物質と、異なる複数のアルギネートオリゴマーとを有する結合体を含んでいてもよい。
【０１４２】
本発明により標的とされる細菌感染症は、任意の細菌の属または種から選ばれる細菌を含み得る。細菌の属または種の例としては、アビオトロフィア属（Abiotrophia）、アクロモバクター属（Achromobacter）、アシダミノコッカス属（Acidaminococcus）、アシドボラックス属（Acidovorax）、アシネトバクター属（Acinetobacter）、アクチノバチルス属（Actinobacillus）、アクチノバクラム属（Actinobaculum）、アクチノマジュラ属（Actinomadura）、アクチノミセス属（Actinomyces）、アエロコッカス属（Aerococcus）、エロモナス属（Aeromonas）、アフピア属（Afipia）、アグロバクテリウム属（Agrobacterium）、アルカリゲネス属（Alcaligenes）、アロイオコッカス属（Alloiococcus）、アルテロモナス属（Alteromonas）、アミコラータ属（Amycolata）、アミコラトプシス属（Amycolatopsis）、アナエロボスピリルム属（Anaerobospirillum）、アナエロラブダス属（Anaerorhabdus）、アラキニア属（Arachnia）、アルカノバクテリウム属（Arcanobacterium）、アルコバクター属（Arcobacter）、アルスロバクター属（Arthrobacter）、アトポビウム属（Atopobium）、オーレオバクテリウム属（Aureobacterium）、バクテロイデス属（Bacteroides）、バルネアトリックス属（Balneatrix）、バルトネラ属（Bartonella）、ベルゲイエラ属（Bergeyella）、ビフィドバクテリウム属（Bifidobacterium）、バイロフィラ・ブランハメラ属（Bilophila Branhamella）、ボレリア属（Borrelia）、ボルデテラ属（Bordetella）、ブラキスピラ属（Brachyspira）、ブレビバチルス属（Brevibacillus）、ブレビバクテリウム属（Brevibacterium）、ブレブンディモナス属（Brevundimonas）、ブルセラ属（Brucella）、バークホルデリア属（Burkholderia）、ブティアウクセラ属（Buttiauxella）、ブチリビブリオ属（Butyrivibrio）、カリマトバクテリウム属（Calymmatobacterium）、カンピロバクター属（Campylobacter）、キャプノサイトファーガ属（Capnocytophaga）、カルジオバクテリウム属（Cardiobacterium）、カトネラ属（Catonella）、セデセア属（Cedecea）、セルロモナス属（Cellulomonas）、センティペーダ属（Centipeda）、クラミジア属（Chlamydia）、クラミドフィラ属（Chlamydophila）、クロモバクテリウム属（Chromobacterium）、クイセオバクテリウム属（Chyseobacterium）、クリセオモナス属（Chryseomonas）、シトロバクター属（Citrobacter）、クロストリジウム属（Clostridium）、コリンセラ属（Collinsella）、コマモナス属（Comamonas）、コリネバクテリウム属（Corynebacterium）、コクシエラ属（Coxiella）、クリプトバクテリウム属（Cryptobacterium）、デルフチア属（Delftia）、デルマバクター属（Dermabacter）、デルマトフィルス属（Dermatophilus）、デスルフォモナス属（Desulfomonas）、デスルホビブリオ属（Desulfovibrio）、ジアリスタ属（Dialister）、ディケロバクター属（Dichelobacter）、ドロシコッカス属（Dolosicoccus）、ドロシグラヌルム属（Dolosigranulum）、エドワージエラ属（Edwardsiella）、エッゲルセラ属（Eggerthella）、エーリキア属（Ehrlichia）、エイケネラ属（Eikenella）、エンペドバクター属（Empedobacter）、エンテロバクター属（Enterobacter）、エンテロコッカス属（Enterococcus）、エルウィニア属（Erwinia）、エリシペロスリクス属（Erysipelothrix）、エシェリキア属（Escherichia）、ユーバクテリウム属（Eubacterium）、エウィンゲラ属（Ewingella）、エキシグオバクテリウム属（Exiguobacterium）、ファクラミア属（Facklamia）、フィリファクター属（Filifactor）、フラビモナス属（Flavimonas）、フラボバクテリウム属（Flavobacterium）、フランシセラ属（Francisella）、フソバクテリウム属（Fusobacterium）、ガードネレラ属（Gardnerella）、グロビカテラ属（Globicatella）、双子菌属（Gemella）、ゴルドナ属（Gordona）、ヘモフィルス属（Haemophilus）、ハフニア属（Hafnia）、ヘリコバクター属（Helicobacter）、ヘロコッカス属（Helococcus）、ホールディマニア属（Holdemania）、イグナビグラナム属（Ignavigranum）、ジョンソネラ属（Johnsonella）、キンゲラ属（Kingella）、クレブシエラ属（Klebsiella）、コクリア属（Kocuria）、コセレラ属（Koserella）、クルチア属（Kurthia）、キトコッカス属（Kytococcus）、ラクトバチルス属（Lactobacillus）、ラクトコッカス属（Lactococcus）、ロートロピア属（Lautropia）、レクレルシア属（Leclercia）、レジオネラ属（Legionella）、レミノレラ属（Leminorella）、レプトスピラ属（Leptospira）、レプトトリキア属（Leptotrichia）、リューコノストック属（Leuconostoc）、リステリア属（Listeria）、リストネラ属（Listonella）、メガスフェラ属（Megasphaera）、メチロバクテリウム属（Methylobacterium）、ミクロバクテリウム属（Microbacterium）、ミクロコッカス属（Micrococcus）、ミツオケラ属（Mitsuokella）、モビルンカス属（Mobiluncus）、モエレレラ属（Moellerella）、モラクセラ属（Moraxella）、モルガネラ属（Morganella）、マイコバクテリウム属（Mycobacterium）、マイコプラズマ属（Mycoplasma）、ミロイデス属（Myroides）、ナイセリア属（Neisseria）、ノカルジア属（Nocardia）、ノカルジオプシス属（Nocardiopsis）、オクロバクテリウム属（Ochrobactrum）、オエスコビア属（Oeskovia）、オリゲラ属（Oligella）、オリエンティア属（Orientia）、パエニバチルス属（Paenibacillus）、パントエア属（Pantoea）、パラクラミジア属（Parachlamydia）、パスツレラ属（Pasteurella）、ペディオコッカス属（Pediococcus）、ペプトコッカス属（Peptococcus）、ペプトストレプトコッカス属（Peptostreptococcus）、フォトバクテリウム属（Photobacterium）、フォトラブダス属（Photorhabdus）、プレジオモナス属（Plesiomonas）、ポルフィリモナス属（Porphyrimonas）、プレボテラ属（Prevotella）、プロピオニバクテリウム属（Propionibacterium）、プロテウス属（Proteus）、プロビデンシア属（Providencia）、シュードモナス属、シュードノカルディア属（Pseudonocardia）、シュードラミバクター属（Pseudoramibacter）、サイクロバクター属（Psychrobacter）、ラーネラ属（Rahnella）、ラルストニア属（Ralstonia）、ロドコッカス属（Rhodococcus）、リケッチア（Rickettsia）ロシャリメア（Rochalimaea）ロゼオモナス属（Roseomonas）、ロチア属（Rothia）、ルミノコッカス属（Ruminococcus）、サルモネラ属（Salmonella）、セレノモナス属（Selenomonas）、セルプリナ属（Serpulina）、セラチア属（Serratia）、シュウェネラ属（Shewenella）、赤痢菌属（Shigella）、シムカニア属（Simkania）、スラッキア属（Slackia）、スフィンゴバクテリウム属（Sphingobacterium）、スフィンゴモナス属（Sphingomonas）、スピリルム属（Spirillum）、ブドウ球菌属（Staphylococcus）、ステノトロホモナス属（Stenotrophomonas）、ストマトコッカス属（Stomatococcus）、ストレプトバチルス属（Streptobacillus）、連鎖球菌属（Streptococcus）、ストレプトミセス属（Streptomyces）、サクシニビブリオ属（Succinivibrio）、ステレラ属（Sutterella）、ストネラ属（Suttonella）、テイタメラ属（Tatumella）、ティシエレラ属（Tissierella）、トラバルシエラ属（Trabulsiella）、トレポネーマ属（Treponema）、トロフェリマ属（Tropheryma）、ツァカムレラ属（Tsakamurella）、ツリセラ属（Turicella）、ウレアプラズマ属（Ureaplasma）、バゴコッカス属（Vagococcus）、ベイロネラ属（Veillonella）、ビブリオ属（Vibrio）、ウィークセラ属（Weeksella）、ウォリネラ属（Wolinella）、ザントモナス属（Xanthomonas）、ゼノラブダス属（Xenorhabdus）、エルシニア属（Yersinia）およびヨケネラ属（Yokenella）；例えば、黄色ブドウ球菌（Staphylococcus aureus）、表皮ブドウ球菌（Staphylococcus epidermidis）、腺疫菌（Staphylococcus equi）、化膿連鎖球菌（Streptococcus pyogenes）、ストレプトコッカス・アガラクチア（Streptococcus agalactiae）、リステリア・モノサイトゲネス（Listeria monocytogenes）、リステリア・イバノビイ（Listeria ivanovii）、炭疽菌（Bacillus anthracis）、枯草菌（B. subtilis）、ノカルジア・アステロイデス（Nocardia asteroides）、イスラエル放線菌（Actinomyces israelii）、アクネ菌（Propionibacterium acnes）、破傷風菌（Clostridium tetani）、ウェルシュ菌（Clostridium perfringens）、ボツリヌス菌（Clostridium botulinum）および腸球菌種（Enterococcus species）などのグラム陽性細菌、ならびに、緑膿菌、コレラ菌（Vibrio cholerae）、アクチノバチルス・プルロニューモニエ（Actinobacillus pleuropneumoniae）、ヘモリチカ菌（Pasteurella haemolytica）、パスツレラ・マルトシダ（Pasteurella multocida）、レジオネラ・ニューモフィラ（Legionella pneumophila）、チフス菌（Salmonella typhi）、ウシ流産菌（Brucella abortus）、コクシエラ菌（Coxiella burnetti）、大腸菌（Escherichia coli）、髄膜炎菌（Neiserria meningitidis）、淋菌（Neiserria gonorrhea）、インフルエンザ菌（Haemophilus influenzae）、軟性下疳菌（Haemophilus ducreyi）、ペスト菌（Yersinia pestis）、エルシニア・エンテロリチカ（Yersinia enterolitica）、エシェリキア・ヒラエ（Escherichia hirae）、セパシア菌（Burkholderia cepacia）、鼻疽菌（Burkholderia mallei）、類鼻疽菌（Burkholderia pseudomallei）、野兎病菌（Francisella tularensis）、バクテロイデス・フラジリス（Bacteroides fragilis）、フソバスクテリウム・ヌクレアタム（Fusobascterium nucleatum）、コウドリア・ルミナンチウム（Cowdria ruminantium）、モラクセラ・カタラーリス（Moraxella catarrhalis）、クレブシエラ・ニューモニエ（Klebsiella pneumoniae）、プロテウス・ミラビリス（Proteus mirabilis）、エンテロバクター・クロアカ（Enterobacter cloacae）、霊菌（Serratia marcescens）、ヘリコバクター・ピロリ（Helicobacter pylori）、腸炎菌（Salmonella enteritidis）、チフス菌およびアシネトバクター・バウマンニ（Acinetobacter baumannii）、アシネトバクター・ルオフィ（Acinetobacter lwoffi）、プロビデンシア・スチュアルティイ（Providencia stuartii）、プロビデンシア・レットゲリ（Providencia rettgeri）、プロビデンシア・アルカリファシエンス（Providencia alcalifaciens）およびクレブシエラ・オキシトカ（Klebsiella oxytoca）などのグラム陰性菌、ならびにクラミジア・トラコマチス（Chlamydia trachomatis）、オウム病クラミジア（Chlamydia psittaci）などのグラム非応答性細菌（Gram non-responsive bacteria）、ならびに、結核菌（M. tuberculosis）、ウシ型結核菌（M. bovis）、マイコバクテリウム・チフィムリウム（M. typhimurium）、ウシ型結核菌株ＢＣＧ（M. bovis strain BCG）、ＢＣＧ亜株（BCG substrains）、マイコバクテリウム・アビウム（M. avium）、マイコバクテリウム・イントラセルラーレ（M. intracellulare）、マイコバクテリウム・アフリカヌム（M. africanum）、カンサシ菌（M. kansasii）、マイコバクテリウム・マリヌム（M. marinum）、マイコバクテリウム・ウルセランス（M. ulcerans）、マイコバクテリウム・アビウム亜種パラ結核症（M. avium subspecies paratuberculosis）などのマイコバクテリア（mycobacteria） が挙げられるが、これらに限定されない、
好ましくは、本発明によって標的とされる細菌感染症は、以下の属から選択される細菌を含む：アクロモバクター属、アシネトバクター属、アクチノバチルス属、エロモナス属、アグロバクテリウム属、アルカリゲネス属、アルテロモナス属、バクテロイデス属、バルトネラ属、ボレリア属、ボルデテラ属、ブルセラ属、バークホルデリア属、カンピロバクター属、カルジオバクテリウム属、クラミジア属、クラミドフィラ属、クロモバクテリウム属、クイセオバクテリウム属、クリセオモナス属、シトロバクター属、クロストリジウム属、コマモナス属、コリネバクテリウム属、コクシエラ属、クリプトバクテリウム属、エドワージエラ属、エイケネラ属、エンテロバクター属、エンテロコッカス属、エルウィニア属、キンゲラ属、クレブシエラ属、ラクトバチルス属、ラクトコッカス属、レジオネラ属、レプトスピラ属、レプトトリキア属、リューコノストック属、リステリア属、リストネラ属、モビルンカス属、モラクセラ属、モルガネラ属、マイコバクテリウム属、マイコプラズマ属、ナイセリア属、ノカルジア属、ノカルジオプシス属、パントエア属、パラクラミジア属、パスツレラ属、ペプトコッカス属、ペプトストレプトコッカス属、プレボテラ属、プロピオニバクテリウム属、プロテウス属、プロビデンシア属、シュードモナス属、ラルストニア属、リケッチア属、サルモネラ属、シュウェネラ属、赤痢菌属、スフィンゴバクテリウム属、スフィンゴモナス属、ブドウ球菌属、ステノトロホモナス属、ストレプトバチルス属、連鎖球菌属、ストレプトミセス属、トレポネーム属（Treponem）およびエルシニア属
したがって、本発明は、グラム陽性菌もしくはグラム陰性菌、または実際にはグラム不定菌に対して使用してもよい。グラム陰性菌、例えば、上記で特定したものが重要である。グラム陰性菌の中でも、腸内細菌およびグラム陰性菌の非発酵細菌が、特に注目に値する。
【０１４３】
腸内細菌としては、アリシェワネラ属（Alishewanella）、アルテロコッカス属（Alterococcus）、アクアモナス属（Aquamonas）、アラニコラ属（Aranicola）、アゾチビルガ属（Azotivirga）、ブレネリア属（Brenneria）、ブドビシア属（Budvicia）、ブティアウクセラ属、セデセア属、シトロバクター属、クロノバクター属（Cronobacter）、ディケヤ属（Dickeya）、エドワージエラ属、エンテロバクター属、エルウィニア属、エシェリキア属、エウィンゲラ属、グリモンテラ属（Grimontella）、ハフニア属、クレブシエラ属、クライベラ属（Kluyvera）、レクレルシア属、レミノレラ属、モエレレラ属、モルガネラ属、オベサムバクテリウム属（Obesumbacterium）、パントエア属、ペクトバクテリウム属（Pectobacterium）、フロモバクター属（Phlomobacter）、フォトラブダス属、プレジオモナス属、プラジア属（Pragia）、プロテウス属、プロビデンシア属、ラーネラ属、ラオウルテラ属（Raoultella）、サルモネラ属、サムソニア属（Samsonia）、セラチア属、赤痢菌属、ソダリス属（Sodalis）、テイタメラ属、トラバルシエラ属、ウィグルスウォーチア属（Wigglesworthia）、ゼノラブダス属、エルシニア属、ヨケネラ属の細菌が挙げられるが、これらに限定されない。好ましい腸内細菌の属としては、エシェリキア属、クレブシエラ属、サルモネラ属、赤痢菌属、エルシニア属およびプロビデンシア属が挙げられる。
【０１４４】
非発酵グラム陰性菌としては、シュードモナス属、アシネトバクター属、ステノトロホモナス属およびバークホルデリア属、アクロモバクター属、アルガリゲネス属（Algaligenes）、ボルデテラ属、ブレブンディモナス属、コマモナス属、エリザベトキンギア属（Elizabethkingia）（以前はクリセオバクテリウム属）、メチロバクテリウム属、モラクセラ属、オクロバクテリウム属、オリゲラ属、サイクロバクター属、ラルストニア属、ロゼオモナス属、シュワネラ属、スフィンゴバクテリウム属、例えば、緑膿菌、アシネトバクター・バウマンニ、ステノトロホモナス・マルトフィリア（Stenotrophomonas maltophilia）およびバークホルデリア種（Burkholderia spp.）の細菌が挙げられるが、これらに限定されない。
【０１４５】
好ましくは、細菌は、シュードモナス属、アシネトバクター属、ステノトロホモナス属、バークホルデリア属、エシェリキア属、クレブシエラ属、プロビデンシア属、連鎖球菌属、ブドウ球菌属、例えば、緑膿菌、アシネトバクター・バウマンニ、ステノトロホモナス・マルトフィリア、バークホルデリア種、大腸菌、クレブシエラ・ニューモニエおよびセパシア菌、鼻疽菌、類鼻疽菌、アシネトバクター・ルオフィ、プロビデンシア・スチュアルティイ、プロビデンシア・レットゲリ、プロビデンシア・アルカリファシエンス、クレブシエラ・オキシトカ、シュードモナス・アンギリセプチカ（Pseudomonas anguilliseptica）、シュードモナス・オリジハビタンス（Pseudomonas oryzihabitans）、シュードモナス・プレコグロッシシーダ（Pseudomonas plecoglossicida）、シュードモナス・ルテオラ（Pseudomonas luteola）およびＭＲＳＡから選択し得る。
【０１４６】
ある特定の態様において、感染症は、院内感染症、患者の気道における感染症、例えば、嚢胞性線維症、慢性閉塞性肺疾患、鬱血性閉塞性気道疾患／鬱血性閉塞性気道肺炎（ＣＯＡＤ／ＣＯＡＰ）、肺炎、気腫、気管支炎または副鼻腔炎を患っている患者における感染症；創傷、特に、慢性創傷（火傷を含む）における感染症、植込み型医療機器または補綴医療器機に関連した医療機器関連感染症、例えば、人工弁心内膜炎、あるいはライン、カテーテル、人工関節、代替組織（tissue replacements）または気管内チューブもしくは気管切開チューブの感染症である。かかる感染症を一般的に引き起こす種類の細菌の例としては、緑膿菌、アシネトバクター・バウマンニ、ステノトロホモナス・マルトフィリア、バークホルデリア種（例えば、セパシア菌）、大腸菌、クレブシエラ・ニューモニエ、黄色ブドウ球菌、メチシリン耐性黄色ブドウ球菌（ＭＲＳＡ）、クロストリジウム・ディフィシル（Clostridium difficile）、結核菌（Mycobacterium tuberculosis）、エンテロコッカス属およびバンコマイシン耐性腸球菌（Vancomycin-Resistant Enterococcus）、並びにプロビデンシア・スチュアルティイが挙げられる。本発明において、その他の重要な感染症としては、バルトネラ菌（例えば、バルトネラ・ヘンセラ菌（Bartonella hensela））、マイコバクテリア（例えば、マイコバクテリウム・アビウムコンプレックス（Mycobacterium avium Complex）（MAC）、カンサシ菌、マイコバクテリウム・マリヌム、マイコバクテリウム・ウルセランス、マイコバクテリウム・ゼノピ（M. xenopi））、ヘモフィルスインフルエンザb型菌（Haemophilus influenzae type b）（Hib）またはレジオネラ属（例えば、レジオネラ・ニューモフィラ;レジオネラ病（Legionnaire's disease））、ハンセン病（らい菌（M. leprae））、ヒト顆粒球アナプラズマ症（human granulocytic anaplasmosis）（アナプラズマ・ファゴサイトフィルム(Anaplasma phagocytophilum））、ブルセラ症（brucellosis）（ブルセラ・メリテンシス(Brucella melitensis））、髄膜炎菌性疾患（meningococcal disease）(髄膜炎菌（Neisseria meningitides））および炭疽（anthrax）（炭疽菌）による感染症が挙げられる。
【０１４７】
細菌は多剤耐性であってもよく、例えば、少なくとも３個または少なくとも４、５、６、７、８、９もしくは１０個の抗生物質群の抗生物質に対する耐性を有する細菌、例えば、アミノグリコシド系抗生物質（例えば、アミカシン（amikacin）、ゲンタマイシン（gentamicin）、カナマイシン（kanamycin）、カプレオマイシン（capreomycin）、ネオマイシン（neomycin）、ネチルマイシン（netilmicin）、ストレプトマイシン（streptomycin）、トブラマイシン（tobramycin））；βラクタム系抗生物質（例えば、カルバセフェム系抗生物質（carbecephems）（例えば、ロラカルベフ（loracarbef））；第一世代セファロスポリン系抗生物質（cephalosporins）（例えば、セファドロキシル（cefadroxil）、セファゾリン（cefazolin）、セファレキシン（cephalexin））；第二世代セファロスポリン系抗生物質（例えば、セファクロル（cefaclor）、セファマンドール（cefamandole）、セファレキシン、セフォキシチン（cefoxitin）、セフプロジル（cefprozil）、セフロキシム（cefuroxime））；第三世代セファロスポリン系抗生物質（例えば、セフィキシム（cefixime）、セフジニル（cefdinir）、セフジトレン（cefditoren）、セフォペラゾン（cefoperazone）、セフォタキシム（cefotaxime）、セフポドキシム（cefpodoxime）、セフタジジム（ceftazidime）、セフチブテン（ceftibuten）、セフチゾキシム（ceftizoxime）、セフトリアキソン（ceftriaxone））；第四世代セファロスポリン系抗生物質（例えば、セフェピム（cefepime））；モノバクタム系抗生物質（例えば、アズトレオナム（aztreonam））；マクロライド系抗生物質（macrolides）（例えば、アジスロマイシン（azithromycin）、クラリスロマイシン（clarithromycin）、ジリスロマイシン（dirithromycin）、エリスロマイシン（erythromycin）、トロレアンドマイシン（troleandomycin））；モノバクタム系抗生物質（monobactams）（例えば、アズトレオナム））；ペニシリン系抗生物質（例えば、アモキシシリン（amoxicillin）、アンピシリン（ampicillin）、カルベニシリン（carbenicillin）、クロキサシリン（cloxacillin）、ジクロキサシリン（dicloxacillin）、ナフシリン（nafcillin）、オキサシリン（oxacillin）、ペニシリンＧ、ペニシリンＶ、ピペラシリン（piperacillin）、チカルシリン（ticarcillin））；ポリペプチド系抗生物質（例えば、バシトラシン（bacitracin）、コリスチン（colistin）およびポリミキシンＢ（polymyxin B）、しかし、ある特定の実施形態では、使用されるポリミキシン−アルギネートオリゴマー結合体のポリミキシンではない）；キノロン系抗生物質（例えば、シプロフロキサシン（ciprofloxacin）、エノキサシン（enoxacin）、ガチフロキサシン（gatifloxacin）、レボフロキサシン（levofloxacin）、ロメフロキサシン（lomefloxacin）、モキシフロキサシン（moxifloxacin）、ノルフロキサシン（norfloxacin）、オフロキサシン（ofloxacin）、トロバフロキサシン（trovafloxacin））；スルホンアミド系抗生物質（例えば、マフェニド（mafenide）、スルファセタミド（sulfacetamide）、スルファメチゾール（sulfamethizole）、スルファサラジン（sulfasalazine）、スルフイソキサゾール（sulfisoxazole）、トリメトプリム・スルファメトキサゾール合剤（trimethoprim-sulfamethoxazole））；テトラサイクリン系抗生物質（例えば、デメクロサイクリン（demeclocycline）、ドキシサイクリン（doxycycline）、ミノサイクリン（minocycline）、オキシテトラサイクリン（oxytetracycline）、テトラサイクリン（tetracycline））；グリシルサイクリン系抗生物質（glycylcyclines）（例えば、チゲサイクリン（tigecycline））；カルバペネム系抗生物質（carbapenems）（例えば、イミペネム（imipenem）、メロペネム（meropenem）、エルタペネム（ertapenem）、ドリペネム（doripenem）、パニペネム・ベタミプロン合剤（panipenem/betamipron）、ビアペネム（biapenem）、ＰＺ−６０１）；および他の抗生物質としては、クロラムフェニコール（chloramphenicol）；クリンダマイシン（clindamycin）、エタンブトール（ethambutol）；ホスホマイシン（fosfomycin）；イソニアジド（isoniazid）；リネゾリド（linezolid）；メトロニダゾール（metronidazole）；ニトロフラントイン（nitrofurantoin）；ピラジナミド（pyrazinamide）；キヌプリスチン・ダルホプリスチン合剤（quinupristin/dalfopristin）；スペクチノマイシン（spectinomycin）；ホスホマイシン（fosfomycin）およびバンコマイシン（vancomycin）が挙げられる。
【０１４８】
抗生物質に対する感受性、すなわち感度、（逆に言えば耐性および耐容性）は、任意の好都合な方法で（例えば希釈感受性試験および／またはディスク拡散試験により）測定することができる。好ましくは、抗生物質に対する菌種の感受性は、当該微生物に対する当該抗生物質の最小阻止濃度（ＭＩＣ）(Jorgensenら、臨床微生物学マニュアル(Manual of Clinical Microbiology), 7th ed. Washington, D.C: American Society for Microbiology, 1999; 1526-43)、すなわち、当該菌種の増殖を完全に阻止する抗生物質の濃度で表される。
【０１４９】
当業者は、耐性をもたらすのに十分な耐容性／感受性における差異の程度は、供試抗生物質および菌種ならびに採用される試験に応じて変化することを理解するであろう。多くの規制機関（例えば、欧州抗菌薬感受性試験法検討委員会（the European Committee on Antimicrobial Susceptibility Testing (EUCAST）））は、特定の抗菌薬および微生物についていわゆる「ブレークポイント」を設定しており、これは、感受性試験の結果の解釈に使用し、分離菌を、供試抗菌剤に対して感受性がある、中程度または耐性があると定義する識別可能な抗菌薬濃度である。当業者は、かかる情報を利用して、本発明により治療される細菌感染症が、これらの定義の下で供試抗生物質に対して耐性があるかどうかを確かめることができる。
【０１５０】
実施例に示されるように、本発明のポリミキシン−アルギネートオリゴマー結合体は、同じポリミキシン群の抗生物質の非結合型よりもバイオフィルムに対処する（例えば、バイオフィルムを破壊、低減、制限または排除する）際により効果的であり得る。よって、ある特定の実施形態では、標的感染症は、バイオフィルム中の細菌である。しかしながら、他の実施形態では、細菌は、バイオフィルム中には存在しない（例えば、浮遊状態で（planktonically）増殖する）。別の言い方をすると、細菌は、バイオフィルムの増殖様式である場合もあるし、そうではない場合もあり、また、バイオフィルム以外の増殖様式である場合もあるし、そうではない場合もある。
【０１５１】
「バイオフィルム」とは、底質もしくは界面にまたは互いに付着しており（いくつかの運動性細胞も存在し得る）、且つ、細胞外ポリマー（より具体的には、微生物が産生した細胞外ポリマー）のマトリックス中に包埋されている固着細胞が優勢であることを特徴とする微生物の群集を意味し、このコロニーの微生物が、増殖速度および遺伝子転写に関して（例えば、それら微生物と同等の「バイオフィルム以外の(non-biofilm)」もの、すなわち自由浮遊性の(free-floating)もの、つまり浮遊性の（planktonic）ものと比較して）変化した表現型を示すことを特徴とする。「バイオフィルム中に」とは、本発明の方法によって標的とされる細菌が、バイオフィルムのポリマーマトリックス内に（完全にまたは部分的に）あるか、ポリマーマトリックス上にあるか、またはポリマーマトリックスと結合していることを意味する。別の見方をすると、「バイオフィルム中に存在しない」細菌とは、分離している（例えば、浮遊性である（planktonic））か、または複数の生物の集合体中にある場合、その集合体は組織化されていない、および／またはバイオフィルムに特有のマトリックスのない生物である。いずれの場合にも、個々の細菌は、そのバイオフィルムに住む対応物において観察される変化した表現型を示さない。
【０１５２】
ある特定の実施形態では、細菌感染症は、アシネトバクター属の細菌を含まない。ある特定の実施形態では、本発明に従って治療または予防される細菌感染症は、多剤耐性の細菌を含まない。
【０１５３】
本発明は、特定の実施形態では、呼吸器感染症またはそれに関連する症状（例えば、嚢胞性線維症、肺炎、ＣＯＰＤ、ＣＯＡＤ、ＣＯＡＰ、気管支炎、副鼻腔炎、慢性創傷（火傷を含む）における感染症、植込み型医療機器または補綴医療器機に関連した医療機器関連感染症、菌血症、敗血症、敗血症性ショックまたはセプシスの治療または予防を提供し得る。
【０１５４】
好ましい一実施形態では、細菌感染症は、特にＣＦ、ＣＯＰＤ／ＣＯＡＤまたは喘息を含む、呼吸器の基礎疾患または症状に罹患している対象における呼吸器感染症である。
【０１５５】
「治療」は、本発明による対象における細菌感染症／症状の治療に関して使用される場合、本明細書では広義に使用され、任意の治療効果、すなわち、感染症に関するまたは症状に対する任意の有益な効果を含む。したがって、感染症の根絶もしくは排除、または対象もしくは感染症の治癒だけでなく、対象の感染症もしくは症状の改善も含まれる。よって、例えば、感染症もしくは症状の任意の症候または徴候、あるいは感染症／症状の臨床的に認められている任意の指標（例えば、創傷サイズの縮小または治癒時間の加速）の改善が含まれる。したがって、治療には、（例えば、既存のまたは診断された感染症／症状の）根治療法と緩和療法の両方、すなわち、対症治療が含まれる。
【０１５６】
本明細書で使用される「予防」とは、任意の予防的（prophylactic/preventative）効果を指す。したがって、「予防」は、感染症／症状もしくは感染症／症状の発症、または感染症／症状の１つ以上の症候もしくは徴候を（例えば、予防的治療前の感染症／症状または症候もしくは徴候と比較して）遅延、制限、軽減または予防することを含む。よって、予防は、感染症／症状またはその症候もしくは徴候の発現または進行の完全な予防と、感染症／症状またはその症候もしくは徴候の発症または進行のあらゆる遅延あるいは感染症／症状またはその症候もしくは徴候の進行または悪化の軽減または制限とのいずれをも明示的に包含する。
【０１５７】
対象は、任意のヒト対象またはヒト以外の動物対象であり得るが、より具体的には、ヒトまたはヒト以外の脊椎動物（例えば、ヒト以外の哺乳類、鳥類、両生類、魚類または爬虫類）であってもよい。好ましい一実施形態では、対象は、哺乳動物対象である。動物は、家畜もしくは飼育動物、または実験動物または動物園もしくは自然動物保護公園の動物を含む商業的に価値のある動物であってもよい。したがって、代表的な動物としては、イヌ、ネコ、ウサギ、マウス、モルモット、ハムスター、ウマ、ブタ、ヒツジ、ヤギおよびウシが挙げられる。このように、本発明の獣医学的使用が包含される。対象は、患者とみなされる場合もある。好ましくは、対象は、ヒトである。いくつかの実施形態では、対象は、反芻哺乳動物ではない。
【０１５８】
「対象における」という用語は、本明細書では広義に使用され、対象内の部位もしくは場所または対象上の部位もしくは場所（例えば、体外表面）を含み、特に医療機器（例えば、植込み型または「留置型」医療機器）の感染を含み得る。「患者における」という用語は、これと一貫して解釈されるものとする。
【０１５９】
したがって、感染の場所は、口腔内の表面（例えば、歯、歯肉、歯肉溝、歯周ポケット）、生殖管（例えば、子宮頸部、子宮、卵管）、腹膜、中耳、前立腺、尿路、血管内膜、眼、すなわち、眼組織（例えば、結膜、角膜組織、涙管、涙腺、まぶた）、気道、肺組織（例えば、気管支および肺胞）、心臓弁、消化管、皮膚、頭皮、爪および創傷の内部、特に慢性創傷および外科的創傷（これらは、局所的創傷または内部創傷であってもよい）の内部であり得る。他の表面としては、器官、特に移植を受けているもの、例えば、心臓、肺、腎臓、肝臓、心臓弁、膵臓、腸、角膜組織、動脈および静脈移植片ならびに皮膚の外面が挙げられる。
【０１６０】
したがって、感染症は、体液（例えば、血液、血漿、血清、脳脊髄液、消化管内容物、精液、痰およびその他の肺分泌物）や組織（例えば、副腎、肝臓、腎臓、膵臓、下垂体、甲状腺、免疫、卵巣、精巣、前立腺、子宮内膜、眼、乳房、脂肪、上皮、内皮、神経、筋肉、肺、表皮、骨の組織）にも存在し得る。
【０１６１】
感染症はさらに、任意の「留置型」医療用もしくは外科用の器具（equipment）または機器（devices）において見られる場合もある。これには、カテーテル（例えば、中心静脈カテーテルおよび尿道カテーテルなど）を含めたあらゆる種類のライン、人工器官、例えば、心臓弁、人工関節、入れ歯、歯冠、デンタルキャップおよび軟組織インプラント（例えば、乳房インプラント、臀部インプラントおよびリップインプラント）が含まれ得る。任意の種類の植込み型医療機器（例えば、ステント、子宮内避妊器具、ペースメーカー、挿管チューブ（例えば、気管内チューブまたは気管切開チューブ）、プロテーゼまたは人工器官、ラインまたはカテーテル）が含まれる。「留置型」医療機器には、その任意の部分が身体内に収容されている機器が含まれてもよく、すなわちこの機器は、全体的にまたは部分的に留置されていてもよい。
【０１６２】
感染症は、急性または慢性のもの（例えば、少なくとも５日間または少なくとも１０日間、特に少なくとも２０日間、さらには、少なくとも３０日間、さらには、少なくとも４０日間持続している感染症）であってもよい。
【０１６３】
細菌感染症は、どのような対象においても起こり得るが、対象によっては、他の対象よりも（that others）感染症に罹患しやすい。細菌感染症に罹患しやすい対象としては、上皮および／または内皮バリアが弱っているかまたは損なわれている対象、微生物感染に対する分泌による防御が、抑止、破壊、弱体化または害されている対象、ならびに易感染性の対象、免疫不全の対象または免疫抑制されている対象（すなわち、疾病もしくは臨床的介入もしくは他の治療のいずれに起因するかにかかわらず、または理由は何であれ、免疫系の何らかの部分が正常に機能していないか、その機能が標準以下である対象、言い換えれば、免疫応答の何らかの部分または免疫活性が、低下または損なわれている対象）が挙げられるが、これらに限定されない。
【０１６４】
細菌感染症に罹患しやすい対象の代表例としては、予め確立された感染症（例えば、細菌、ウイルス、真菌または原虫などの寄生虫による）に罹患した対象、特にＨＩＶに罹患した対象、菌血症、セプシスに罹患した対象および敗血症性ショックに罹患した対象；免疫不全を有する対象、例えば、化学療法および／または放射線療法のための準備をしている、化学療法および／または放射線療法を受けているまたは化学療法および／または放射線療法から回復中である対象、臓器（例えば、骨髄、肝臓、肺、心臓、心臓弁、腎臓など）移植を受けた対象（自家移植、同種移植および異種移植の患者を含む）；ＡＩＤＳに罹患した対象；健康管理機関、例えば病院に入院している対象、特に、集中治療室または救急救命治療室（すなわち、患者に対し生命維持システムまたは臓器維持システムを提供することに関連する部署）にいる対象；人工呼吸器を装着している対象；外傷を患っている対象；火傷を負っている対象、急性創傷および／または慢性創傷を有する対象；新生児である対象；高齢である対象；がん（本明細書においては広義に定義され、あらゆる腫瘍性症状を含む；悪性または非悪性のもの）に罹患している対象、特に免疫系のがん（例えば、白血病、リンパ腫および他の血液がん）に罹患している対象；関節リウマチ、Ｉ型糖尿病、クローン病等の自己免疫性症状を患っている対象、特に、これらの疾病に対する免疫抑制治療を受けている対象；上皮または内皮分泌（例えば、粘液、涙、唾液）および／または分泌物排出が減少しているまたは抑止されている対象（例えば、粘膜組織上の繊毛の機能が低下している対象および／または過粘稠の粘液を有する患者（例えば、喫煙者、およびＣＯＰＤ、ＣＯＡＤ、ＣＯＡＰ、気管支炎、嚢胞性線維症、気腫、肺がん、喘息、肺炎または副鼻腔炎に罹患した対象））、並びに医療機器を装着した対象が挙げられるが、これらに限定されない。
【０１６５】
本発明のポリミキシン−アルギネートオリゴマー結合体は、例えば、非経口（例えば、静脈内、脊髄内、筋肉内、皮下）、局所、経腸（例えば、経口、口腔内、舌下、直腸）経路または吸入（経鼻吸入を含む）により、標的感染症の細菌および／または本発明を有する部位もしくは感染の危険性がある部位に有効量を送達するために、任意の好都合な形態でまたは任意の好都合な手段により対象に投与し得る。投与により、全身的に分布または局部的に分布させることができ、これは、標的感染症の細菌および／または感染している部位もしくは感染の危険性がある部位への送達は行われるが、本質的に患者の他の場所への送達は行われないことを意味する。当業者は、任意の特定の標的感染症および／または感染している部位もしくは感染の危険性がある部位に適するように適切な投与手段を選択することができるであろう。
【０１６６】
本発明のポリミキシン−アルギネートオリゴマー結合体の宿主毒性が比較的低いことにより、これらの成分（entities）は、対象における全身使用、すなわち全身感染症を治療するための全身投与および局所感染症（例えば、肺や創傷における感染症）を治療するための全身投与に適したものとなる。これに対して、ポリミキシン群の抗生物質の使用は、これらの抗生物質の付随する宿主毒性のため、一般的には、局所治療または少なくとも厳密に局部化した治療に限定されている。ポリミキシン群の抗生物質の全身使用は、多剤耐性細菌による生命を脅かす感染症の最も重症で深刻な症例に限られている。というのも、これらの状況では、感染症がもたらす対象の生命に対する差し迫った危険が、宿主毒性が引き起こす問題を上回るためである。ある特定のポリミキシン−アルギネートオリゴマー結合体（例えば、エステル結合リンカーを有するもの）が、ある特定の生理学的モデル（例えば、ポリミキシン群の抗生物質の非結合型に類似した、循環系を模倣するもの）において初期ＰＫ／ＰＤプロファイルを有し得るという知見は、かかるポリミキシン−アルギネートオリゴマー結合体が全身使用に特に適していることを示し得る。
【０１６７】
したがって、本発明のある特定の実施形態では、細菌感染症に罹患している、罹患していると疑われる、またはその危険性がある対象における細菌感染症の治療または予防の方法であって、前記対象に本明細書に定義されている本発明のポリミキシン−アルギネートオリゴマー結合体の有効量を全身投与することを含む方法を提供する。ある特定の実施形態では、前記細菌感染症は、全身性細菌感染症、例えば、対象における多重遺伝子座に関与する感染症またはセプシス（敗血症（septicaemia））である。
【０１６８】
当業者は、当技術分野において公知であり且つ文献に広く記載されている従来の方法のいずれかに従って、本発明のポリミキシン−アルギネートオリゴマー結合体を、これらの投与経路および体内分布に適合した医薬組成物に製剤化することができるであろう。
【０１６９】
より具体的には、本発明のポリミキシン−アルギネートオリゴマー結合体は、場合により他の活性剤と共に、１種以上の従来の担体、希釈剤および／または賦形剤と混合し、錠剤、丸剤、顆粒剤（例えば、自由な形態のものまたはカプセルに封入されたもの）、粉末剤（例えば、乾燥吸入粉末剤を含む吸入粉末剤）、トローチ剤、サシェ剤、カシェ剤、エリキシル剤、懸濁剤、乳剤、溶剤、シロップ剤、エアロゾル剤（固体としてまたは液体媒体中）、スプレー剤（例えば、点鼻薬）、ネブライザー用の組成物、軟膏剤、クリーム剤、膏薬（salves）、軟ゼラチンカプセル剤および硬ゼラチンカプセル剤、坐剤、ペッサリー、無菌注射溶液剤、無菌包装粉剤などの従来の生薬製剤を製造し得る。腸溶性固体組成物または腸溶性液体組成物、例えば、腸溶性錠剤および腸溶性顆粒剤（腸溶性カプセルまたは非腸溶性カプセルで提供されてもよい、すなわちコーティングは腸溶コーティングであってもなくてもよい）、無菌吸入用組成物および無菌注射用組成物が、特に注目に値する。
【０１７０】
好適な担体、賦形剤および希釈剤の例としては、ラクトース、デキストロース、スクロース、ソルビトール、マンニトール、デンプン、アカシア・ゴム、リン酸カルシウム、不活性アルギネートポリマー、トラガカント、ゼラチン、ケイ酸カルシウム、微結晶性セルロース、ポリビニルピロリドン、 セルロース、水シロップ、水、水／エタノール、水／グリコール、水／ポリエチレン、高張塩水、グリコール、プロピレングリコール、メチルセルロース、メチルヒドロキシベンゾエート、プロピルヒドロキシベンゾエート、タルク、ステアリン酸マグネシウム、鉱油もしくはハードファットなどの脂肪物質またはそれらの好適な混合物が挙げられる。注目すべき賦形剤および希釈剤は、マンニトールおよび高張塩水（生理食塩水）である。
【０１７１】
組成物は、滑剤、湿潤剤、乳化剤、懸濁剤、保存剤、甘味剤、着香剤等を更に含んでいてもよい。
【０１７２】
非経口的に投与可能な形態（例えば、静脈内送達に好適な溶液）は、無菌であるべきであり、且つ、生理学的に許容できない薬剤を含まないべきであり、また、投与時の刺激または他の悪影響を最小限にするために低浸透圧であるべきであることから、溶液は、好ましくは、等張性またはわずかに高張性（例えば、高張塩水（生理食塩水））であるべきである。好適なビヒクルとしては、非経口溶液、例えば、滅菌注射用蒸留水、塩化ナトリウム注射液、リンゲル注射液、デキストロース注射液、デキストロースおよび塩化ナトリウム注射液、乳酸加リンゲル注射液、並びにRemington's Pharmaceutical Sciences, 15th ed., Easton: Mack Publishing Co., pp. 1405-1412 and 1461-1487 (1975)およびThe National Formulary XIV, 14th ed. Washington: American Pharmaceutical Association (1975）（その全体を参照により本明細書に明示的に援用する）に記載されているような他の溶液を投与するために習慣的に使用されている水性ビヒクルが含まれる。溶液には、ポリミキシン−アルギネートオリゴマー結合体と混合可能であり、且つ、製品の製造、保管または使用を妨げない非経口溶液、賦形剤および他の添加物用に従来から使用されている保存料、抗菌剤、緩衝液および抗酸化剤が含まれ得る。
【０１７３】
ポリミキシン−アルギネートオリゴマー結合体の単純な滅菌溶液またはポリミキシン−アルギネートオリゴマー結合体を含む単純な滅菌液体組成物が、外科的処置中の使用および肺への（例えば、ネブライザーによる）または副鼻腔への（例えば、鼻内噴霧装置による）送達に特に便利であり得る。
【０１７４】
ポリミキシン−アルギネートオリゴマー結合体の固体または液体製剤には、胃および／または上部消化管の他の部分での分解は防ぐが、下部消化管（例えば、小腸）において分解させる腸溶コーティングを施してもよい。かかるコーティングは、脂肪酸、ワックス、シェラック、プラスチックおよび植物繊維を含むポリマーから日常的に調製されている。その具体例としては、アクリル酸メチル−メタクリル酸共重合体、メタクリル酸メチル−メタクリル酸共重合体、セルロースアセテートサクシネート、ヒドロキシプロピルメチルセルロースフタレート、ヒドロキシプロピルメチルセルロースアセテートサクシネート（ヒプロメロースアセテートサクシネート）、ポリビニルアセテートフタレート（ＰＶＡＰ）、セルロースアセテートトリメリテートおよびアルギン酸ナトリウムポリマーが挙げられるが、これらに限定されない。腸溶性錠剤および腸溶性顆粒剤（これらは、腸溶性カプセルまたは非腸溶性カプセルで提供され得る）は特に注目に値する。腸溶性顆粒剤は、国際公開第１９８９００８４４８号およびAl-Khedairy, E.B.H, 2006, Iraqi J.Pharm.Sci., Vol.15 (1) 49（それらの内容を参照により本明細書に援用する）の教示に従って調製してもよいが、当業者は、使用し得るさらなる他の技法を知っているであろう。
【０１７５】
局所投与を目的として、ポリミキシン−アルギネートオリゴマー結合体を、クリーム剤、軟膏剤、ゲル剤、膏薬、経皮吸収型貼付剤などに配合することができる。好適であると考えられるさらなる局所システムは、ｉｎ  ｓｉｔｕ薬物送達システムであり、例えば、固体、半固体、非晶質または液晶ゲルマトリックスが、ｉｎ  ｓｉｔｕで形成され、且つ、アルギネートオリゴマー（本明細書に記載の任意のアルギネートオリゴマーであり得る）を含み得るゲルなどである。かかるマトリックスは、このマトリックスからのポリミキシン−アルギネートオリゴマー結合体の放出を制御するように好都合に設計することができ、例えば、選択した期間にわたり放出を遅延および／または持続させることができる。かかるシステムは、生体組織または流体、例えば、粘膜表面などとの接触に際してのみ、ゲルを形成してもよい。典型的には、ゲルは、生体接着性および／または粘膜付着性である。プレゲル組成物を保持できるまたは保持するように適合させることができる任意の身体の部位への送達は、かかる送達技法により標的とすることができる。かかるシステムは、国際公開第２００５／０２３１７６号に記載されており、その全体を参照により本明細書に明示的に援用する。
【０１７６】
本発明の組成物におけるポリミキシン−アルギネートオリゴマー結合体の相対含量は、必要とされる投与量および従う投与計画に応じて変化し得るが、治療対象の体格、対象の特定の病気の性質、標的治療領域の場所や特性など、さまざまな可変要素を考慮して、標的治療部位、すなわち、標的感染症の細菌および／もしくは感染症に罹患している部位または感染の危険性がある部位で、有効量を達成するのに十分な量であろう。当業者であれば、ポリミキシン−アルギネートオリゴマー結合体の量は、複数回の投与計画に従う場合は減らすことができ、また、その量を増加させ、投与回数または適用回数を最小限にすることができることを知っているであろう。
【０１７７】
本発明のポリミキシン−アルギネートオリゴマー結合体の注射による（例えば、静脈注射、脊髄内注射、筋肉内注射または皮下注射による）送達用の代表的な水溶液は、無菌のものであり、ポリミキシン−アルギネートオリゴマー結合体を、６〜２５％、例えば、６〜２０％、６〜１５％、６〜１０％、８〜２５％、８〜２０％、８〜１５％、９〜２５％、９〜２０％、９〜１５％、１０〜１５％、１０〜２０％、１０〜２５％、１５〜２０％または１５〜２５％（ｗ／ｖ）含有していてもよく、残りは、水と薬学的に許容される賦形剤および／または他の活性剤（使用される場合）から成っていてもよい。
【０１７８】
鼻または副鼻腔への投与に、滅菌水性製剤および／または油性液体製剤（例えば、乳剤）を使用してもよく、例えば、鼻内噴霧装置（例えば、噴霧剤非含有または噴霧剤使用）により投与してもよい。代表的な製剤は、ポリミキシン−アルギネートオリゴマー結合体を１〜２５％、１〜２０％（例えば、１〜１５％、１〜１０％、１〜９％、１〜８％、１〜７％または１〜６％）、５〜２５％、５〜２０％、５〜１５％、５〜１０％、５〜９％、５〜８％、５〜７％、５〜６％、８〜２５％、８〜２０％、８〜１５％、８〜１０％、９〜２５％、９〜２０％または９〜１５％（ｗ／ｖまたはｗ／ｗ）含有していてもよく、残りは、薬学的に許容される賦形剤（例えば、水）および／または他の活性剤（使用される場合）から成っていてもよい。
【０１７９】
本発明のポリミキシン−アルギネートオリゴマー結合体を上気道に投与するために使用される代表的な吸入可能な溶液は、典型的には無菌のものであり、ポリミキシン−アルギネートオリゴマー結合体を、６〜２５％、例えば、６〜２０％、６〜１５％、６〜１０％、８〜２５％、８〜２０％、８〜１５％、９〜２５％、９〜２０％、９〜１５％、１０〜１５％、１０〜２０％、１０〜２５％、１５〜２０％または１５〜２５％（ｗ／ｖ）含有していてもよく、残りは、薬学的に許容される賦形剤（例えば、水）および／または他の活性剤（使用される場合）から成っていてもよい。
【０１８０】
本発明のポリミキシン−アルギネートオリゴマー結合体を下気道に投与するために使用される代表的な吸入粉末剤は、ポリミキシン−アルギネートオリゴマー結合体を、最高９０％まで、例えば、最高８５％、８０％、７５％または７０％まで、例えば、５０〜９０％、５５〜９０％、６０〜９０％、６５〜９０％、７０〜９０％、７５〜９０％、８０〜９０％、８５〜９０％、５０〜８５％、５５〜８５％、６０〜８５％、６５〜８５％、７０〜８５％、７５〜８５％、８０〜８５％、５０〜８０％、５５〜８０％、６０〜８０％、６５〜８０％、７０〜８０％、７５〜８０％、５０〜７０％、５５〜７０％、６０〜７０％または６５〜７０％（ｗ／ｖまたはｗ／ｗ）含有していてもよく、残りは、薬学的に許容される賦形剤および／または他の活性剤（同一の組成物中に使用される場合）から成っていてもよい。
【０１８１】
他の実施形態では、徐放、遅延または持続放出製剤を、例えば、鼻または副鼻腔への送達に使用してもよい。代表的な製剤は、ポリミキシン−アルギネートオリゴマー結合体を含有する粉末剤または前記粉末剤の懸濁液であってもよく、前記粉末剤は、ポリミキシン−アルギネートオリゴマー結合体を、最高９０％まで、例えば、最高８５％、８０％、７５％または７０％まで、例えば、５０〜９０％、５５〜９０％、６０〜９０％、６５〜９０％、７０〜９０％、７５〜９０％、８０〜９０％、８５〜９０％、５０〜８５％、５５〜８５％、６０〜８５％、６５〜８５％、７０〜８５％、７５〜８５％、８０〜８５％、５０〜８０％、５５〜８０％、６０〜８０％、６５〜８０％、７０〜８０％、７５〜８０％、５０〜７０％、５５〜７０％、６０〜７０％または６５〜７０％（ｗ／ｖまたはｗ／ｗ）含有していてもよく、残りは、薬学的に許容される賦形剤および／または他の活性剤（使用される場合）から成っていてもよい。この粉末剤は、ポリミキシン−アルギネートオリゴマー結合体の放出を制御するコーティングを含んでいてもよい。
【０１８２】
本発明のポリミキシン−アルギネートオリゴマー結合体を、女性の下部生殖器系の皮膚、子宮頸部またはその他の部分に投与するために使用し得る、代表的な局所製剤（例えば、クリーム剤、軟膏剤または膏薬）は、ポリミキシン−アルギネートオリゴマー結合体を、１〜２５％、１〜２０％、１〜１５％、１〜１０％、１〜９％、１〜８％、１〜７％、１〜６％、５〜２５％、５〜２０％、５〜１５％、５〜１０％、５〜９％、５〜８％、５〜７％、５〜６％、８〜２５％、８〜２０％、８〜１５％、８〜１０％、９〜２５％、９〜２０％または９〜１５％（ｗ／ｖ）含有していてもよく、残りは、薬学的に許容される賦形剤および／または他の活性剤（使用される場合）から成っていてもよい。局所製剤を女性の生殖器系に適用するために設計された送達装置は公知であり、好都合である場合、上記製剤を送達するために使用してもよい。
【０１８３】
本発明のポリミキシン−アルギネートオリゴマー結合体を、下部消化管に投与するために使用される代表的な錠剤は、ポリミキシン−アルギネートオリゴマー結合体を最高９９％まで、最高９５％、９０％、８５％または８０％まで、例えば、５０〜９５％、５５〜９５％、６０〜９５％、６５〜９５％、７０〜９５％、７５〜９５％、８０〜９５％、８５〜９５％、９０〜９５％、５０〜９０％、５０〜９０％、５５〜９０％、６０〜９０％、６５〜９０％、７０〜９０％、７５〜９０％、８０〜９０％、８５〜９０％、５０〜９０％、５５〜８５％、６０〜８０％または６５〜７５％（ｗ／ｖまたはｗ／ｗ）含有していてもよく、残りは、薬学的に許容される賦形剤および／または他の活性剤（使用される場合）から成っていてもよい。この錠剤は、多層錠であってもよい。
【０１８４】
腸溶性錠剤も、本発明のポリミキシン−アルギネートオリゴマー結合体を下部消化管に投与する際に効果的であり得る。代表的な腸溶性錠剤は、ポリミキシン−アルギネートオリゴマー結合体を、最高９５％まで、例えば、最高９０％、８５％または８０％まで、例えば、５５〜９０％、６０〜９０％、６５〜９０％、７０〜９０％、７５〜９０％、８０〜９０％、８５〜９０％、５５〜８５％、６０〜８５％、６５〜８５％、７０〜８５％、７５〜８５％、８０〜８５％、５０〜８０％、５５〜８０％、６０〜８０％、６５〜８０％、７０〜８０％または７５〜８０％（ｗ／ｖまたはｗ／ｗ）含有していてもよく、残りは、薬学的に許容される賦形剤（腸溶コーティング（例えば、脂肪酸、ワックス、シェラック、プラスチックおよび植物繊維を含むポリマー）を含む）および／または他の活性剤（使用される場合）から成っていてもよい。この錠剤は、多層錠（例えば、上述のもの）であってもよい。
【０１８５】
腸溶性顆粒剤も、本発明のポリミキシン−アルギネートオリゴマー結合体を下部消化管に投与する際に効果的であり得る。かかる顆粒剤は、カプセルで提供されてもよく、このカプセルは、それ自体が腸溶コーティングを有していても有していなくてもよい。代表的な腸溶性顆粒剤は、ポリミキシン−アルギネートオリゴマー結合体を、最高９５％まで、例えば、最高９０％、８５％または８０％まで、例えば、５５〜９０％、６０〜９０％、６５〜９０％、７０〜９０％、７５〜９０％、８０〜９０％、８５〜９０％、５５〜８５％、６０〜８５％、６５〜８５％、７０〜８５％、７５〜８５％、８０〜８５％、５０〜８０％、５５〜８０％、６０〜８０％、６５〜８０％、７０〜８０％または７５〜８０％（ｗ／ｖまたはｗ／ｗ）含有していてもよく、残りは、薬学的に許容される賦形剤（腸溶コーティング（例えば、脂肪酸、ワックス、シェラック、プラスチックおよび植物繊維を含むポリマー）を含む）および／または他の活性剤（使用される場合）から成っていてもよい。
【０１８６】
本発明のポリミキシン−アルギネートオリゴマー結合体を女性生殖器官の下部に投与するために、ペッサリーを使用してもよい。代表的な製剤は、ポリミキシン−アルギネートオリゴマー結合体を１〜２５％、１〜２０％、例えば、１〜１５％、１〜１０％、１〜９％、１〜８％、１〜７％、１〜６％、５〜２５％、５〜２０％、５〜１５％、５〜１０％、５〜９％、５〜８％、５〜７％、５〜６％、８〜２５％、８〜２０％、８〜１５％、８〜１０％、９〜２５％、９〜２０％または９〜１５％（ｗ／ｖまたはｗ／ｗ）含有していてもよく、残りは、薬学的に許容される賦形剤（個体賦形剤を含む）および／または他の活性剤（使用される場合）から成っていてもよい。直腸坐剤も同様に製剤化し得る。
【０１８７】
ポリミキシン−アルギネートオリゴマー結合体は、１日量として０．１ｇ〜１０ｇ、例えば、０．５ｇ〜５ｇ、０．８ｇ〜３ｇ、１ｇ〜２ｇ、例えば、約２ｇ使用してもよく、これは、１日に１回以上（例えば、１日２回）および１種以上の投薬形態または投与回数（例えば、２錠を１日２回）投与してもよい。
【０１８８】
本明細書において定義されているポリミキシン−アルギネートオリゴマー結合体は、１つ以上のさらなる治療活性剤と併用または組み合わせて用いてもよく、治療活性剤は、他の抗微生物剤（例えば、抗菌剤、抗生物質製剤、抗真菌剤および抗ウイルス剤）、免疫賦活剤、コルチコステロイド、非ステロイド性抗炎症剤（ＮＳＡＩＤｓ）、気管支拡張剤、粘液粘度低下剤（すなわち、粘液の粘度を低下させる薬剤であり、その用語は、「粘液溶解剤」という用語と同じ意味で用いられる）またはＣＦＴＲモジュレーター（「ＣＦＴＲモディファイヤー」としても知られる）を含んでいてもよい。
【０１８９】
更なる薬剤、例えば、抗生物質は、アルギネートオリゴマーまたは他の任意の結合部分に非結合であってもよい。
【０１９０】
ポリミキシン−アルギネートオリゴマー結合体およびさらなる治療活性剤は、例えば、単一の医薬製剤もしくは組成物で共にまたは個別に投与（すなわち、個別投与、逐次投与または同時投与）してもよい。したがって、ポリミキシン−アルギネートオリゴマー結合体と、さらなる治療活性剤を、例えば、医薬キットにおいてまたは複合（配合）製品として、組み合わせてもよい。
【０１９１】
したがって、本発明のさらなる態様は、対象における細菌感染症を治療または予防する際に個別、逐次または同時に使用するための複合（combined）製剤として更なる治療活性剤（例えば、上述のもの）と共に、本明細書において定義されているポリミキシン−アルギネートオリゴマー結合体を含む製品（例えば、医薬配合物（pharmaceutical combination）またはキット）を提供する。
【０１９２】
より一般的には、本発明のこの態様は、さらなる治療活性剤（例えば、上述のもの）と共に、本明細書において定義されているポリミキシン−アルギネートオリゴマー結合体を含むキットも提供する。
【０１９３】
本明細書において定義されているポリミキシン−アルギネートオリゴマー結合体ならびに抗生物質、抗真菌剤、ＣＦＴＲモジュレーターおよび／または粘液粘度低下剤を含む配合物（Combinations）が特に好ましい。かかる医薬製品および医薬組成物は、好ましくは、本発明の医療方法における使用に適応している。
【０１９４】
前記さらなる治療活性剤は、ポリミキシン−アルギネートオリゴマー結合体の前に、それと同時にまたはその後に都合よく適用してもよい。好都合なことに、さらなる治療活性剤は、ポリミキシン−アルギネートオリゴマー結合体と実質的に同時にまたはその後に適用される。他の実施形態では、さらなる治療活性剤は、ポリミキシン−アルギネートオリゴマー結合体の前に都合よく適用または投与されてもよい。さらなる治療活性剤はまた、使用される薬剤に適切な時点で繰り返し与える（例えば、投与するまたは送達する）こともできる。当業者は、好適な投与計画を立てることができる。長期間治療では、ポリミキシン−アルギネートオリゴマー結合体は、繰り返し使用することもできる。ポリミキシン−アルギネートオリゴマー結合体は、さらなる治療活性剤と同じ頻度でまたはより高い頻度でもしくはより低い頻度で適用することができる。必要とされる頻度は、ポリミキシン−アルギネートオリゴマー結合体が投与される患者の体内もしくは体表面上における部位または場所、また、治療を受けている特定の患者が示す臨床症状の全体的な性質により決まり得る。
【０１９５】
したがって、ポリミキシン−アルギネートオリゴマー結合体およびさらなる治療活性剤は、共にまたは個別に、すなわち、同一のもしくは異なる製剤または医薬組成物に製剤化してもよく、また、同一のまたは異なる経路による投与用に提供し得る。本発明の医療方法において使用するためのかかる医薬製品および医薬組成物を製造するために、本明細書において定義しているポリミキシン−アルギネートオリゴマー結合体を使用することも考えられる。
【０１９６】
本明細書で定義しているポリミキシン−アルギネートオリゴマー結合体と併用または組み合わせて使用し得る代表的な抗生物質としては、アミノグリコシド系抗生物質（例えば、アミカシン、ゲンタマイシン、カナマイシン、ネオマイシン、ネチルマイシン、ストレプトマイシン、トブラマイシン）；βラクタム系抗生物質（例えば、カルべセフェム系抗生物質（例えば、ロラカルベフ）；第一世代セファロスポリン系抗生物質（例えば、セファドロキシル、セファゾリン、セファレキシン）；第二世代セファロスポリン系抗生物質（例えば、セファクロル、セファマンドール、セファレキシン、セフォキシチン、セフプロジル、セフロキシム）；第三世代セファロスポリン系抗生物質（例えば、セフィキシム、セフジニル、セフジトレン、セフォペラゾン、セフォタキシム、セフポドキシム、セフタジジム、セフチブテン、セフチゾキシム、セフトリアキソン）；第四世代セファロスポリン系抗生物質（例えば、セフェピム）；モノバクタム系抗生物質（例えば、アズトレオナム）；マクロライド系抗生物質（例えば、アジスロマイシン、クラリスロマイシン、ジリスロマイシン、エリスロマイシン、トロレアンドマイシン）；モノバクタム系抗生物質（例えば、アズトレオナム）；ペニシリン系抗生物質（例えば、アモキシシリン、アンピシリン、カルベニシリン、クロキサシリン、ジクロキサシリン、ナフシリン、オキサシリン、ペニシリンＧ、ペニシリンＶ、ピペラシリン、チカルシリン）；ポリペプチド系抗生物質（例えば、バシトラシン、コリスチン、ポリミキシンＢであるが、ある特定の実施形態では、使用されるポリミキシン−アルギネートオリゴマー結合体のポリミキシンではない）；キノロン系抗生物質（例えば、シプロフロキサシン、エノキサシン、ガチフロキサシン、レボフロキサシン、ロメフロキサシン、モキシフロキサシン、ノルフロキサシン、オフロキサシン、トロバフロキサシン）；スルホンアミド系抗生物質（例えば、マフェニド、スルファセタミド、スルファメチゾール、スルファサラジン、スルフイソキサゾール、トリメトプリム・スルファメトキサゾール合剤）；テトラサイクリン系抗生物質（例えば、デメクロサイクリン、ドキシサイクリン、ミノサイクリン、オキシテトラサイクリン、テトラサイクリン）；グリシルサイクリン系抗生物質（例えば、チゲサイクリン）；カルバペネム系抗生物質（例えば、イミペネム、メロペネム、エルタペネム、ドリペネム、パニペネム・ベタミプロン合剤、ビアペネム、ＰＺ−６０１）が挙げられるが、これらに限定されず；他の抗生物質は、クロラムフェニコール；クリンダマイシン、エタンブトール；ホスホマイシン；イソニアジド；リネゾリド；メトロニダゾール；ニトロフラントイン；ピラジナミド；キヌプリスチン・ダルホプリスチン合剤；リファンピン；スペクチノマイシン；およびバンコマイシンを含む。
【０１９７】
代表的な抗真菌剤としては、ポリエン系抗真菌剤（例えば、ナタマイシン（natamycin）、リモシジン（rimocidin）、フィリピン（filipin）、ナイスタチン（nystatin）、アムホテリシンＢ（amphotericin B）、カンジシン（candicin））；イミダゾール系抗真菌剤（例えば、ミコナゾール（miconazole）、ケトコナゾール（ketoconazole）、クロトリマゾール（clotrimazole）、エコナゾール（econazole）、ビホナゾール（bifonazole）、ブトコナゾール（butoconazole）、フェンチコナゾール（fenticonazole）、イソコナゾール（isoconazole）、オキシコナゾール（oxiconazole）、セルタコナゾール（sertaconazole）、スルコナゾール（sulconazole）、チオコナゾール（tioconazole））；トリアゾール系抗真菌剤（例えば、フルコナゾール（fluconazole）、イトラコナゾール（itraconazole）、イサブコナゾール（isavuconazole）、ラブコナゾール（ravuconazole）、ポサコナゾール（posaconazole）、ボリコナゾール（voriconazole）、テルコナゾール（terconazole））；アリルアミン系抗真菌剤（例えば、テルビナフィン（terbinafine）、アモロルフィン（amorolfine）、ナフチフィン（naftifine）、ブテナフィン（butenafine））；およびエキノキャンディン系抗真菌剤（例えば、アニデュラファンギン（anidulafungin）、カスポファンギン（caspofungin）、ミカファンギン（micafungin））が挙げられるが、これらに限定されない。
【０１９８】
代表的な抗ウイルス剤としては、アバカビル（abacavir）、アシクロビル（acyclovir）、アデフォビル（adefovir）、アマンタジン（amantadine）、アンプレナビル（amprenavir）、アルビドール（arbidol）、アタザナビル（atazanavir）、アトリプラ（atripla）、ボセプレビル（boceprevir）、シドフォビル（cidofovir）、コンビビル（combivir）、ダルナビル（darunavir）、デラビルジン（delavirdine）、ジダノシン（didanosine）、ドコサノール（docosanol）、エドクスジン（edoxudine）、エファビレンツ（efavirenz）、エムトリシタビン（emtricitabine）、エンフビルチド（enfuvirtide）、エンテカビル（entecavir）、ファムシクロビル（famciclovir）、ホミビルセン（fomivirsen）、ホスアンプレナビル（fosamprenavir）、ホスカルネット（foscarnet）、ホスホネット（fosfonet）、ガンシクロビル（ganciclovir）、イバシタビン（ibacitabine）、イムノビル（imunovir）、イドクスウリジン（idoxuridine）、イミキモド（imiquimod）、インジナビル（indinavir）、イノシン（inosine）、ＩＩＩ型インターフェロン（interferon type III）、ＩＩ型インターフェロン（interferon type II）、Ｉ型インターフェロン（interferon type I）、ラミブジン（lamivudine）、ロピナビル（lopinavir）、ロビリド（loviride）、マラビロク（maraviroc）、モロキシジン（moroxydine）、ネルフィナビル（nelfinavir）、ネビラピン（nevirapine）、ネキサビル（nexavir）、オセルタミビル（oseltamivir）、ペンシクロビル（penciclovir）、ペラミビル（peramivir）、プレコナリル（pleconaril）、ポドフィロトキシン（podophyllotoxin）、ラルテグラビル（raltegravir）、リバビリン（ribavirin）、リマンタジン（rimantadine）、リトナビル（ritonavir）、サキナビル（saquinavir）、スタブジン（stavudine）、テノホビル（tenofovir）、テノホビルジソプロキシル（tenofovir disoproxil）、チプラナビル（tipranavir）、トリフルリジン（trifluridine）、トリジビル（trizivir）、トロマンタジン（tromantadine）、ツルバダ（truvada）、バラシクロビル（valaciclovir）、バルガンシクロビル（valganciclovir）、ビクリビロック（vicriviroc）、ビダラビン（vidarabine）、ビラミジン（viramidine）、ザルシタビン（zalcitabine）、ザナミビル（zanamivir）およびジドブジン（zidovudine）が挙げられるが、これらに限定されない。
【０１９９】
代表的な免疫賦活剤としては、サイトカイン、例えば、ＴＮＦ、ＩＬ−１、ＩＬ−６、ＩＬ−８、並びに、例えば、米国特許第５，１６９，８４０号、国際公開第９１／１１２０５号および国際公開第０３／０４５４０２号（これらの全体を参照により本明細書に明示的に援用する）に記載されている高Ｍ含量アルギネートなどの免疫賦活性アルギネートが挙げられるが、これらに限定されず、免疫賦活性を有する任意のアルギネートを含む。
【０２００】
好適なコルチコステロイドの代表例としては、プレドニゾン（prednisone）、フルニソリド（flunisolide）、トリアムシノロン（triamcinolone）、フルチカゾン（fluticasone）、ブデソニド（budesonide）、モメタゾン（mometasone）、ベクロメタゾン（beclomethasone）、アムシノニド（amcinonide）、ブデソニド（budesonide）、デソニド（desonide）、フルオシノニド（fluocinonide）、フルオシノロン（fluocinolone）、ハルシノニド（halcinonide）、ヒドロコルチゾン（hydrocortisone）、コルチゾン（cortisone）、チキソコルトール（tixocortol）、プレドニゾロン（prednisolone）、メチルプレドニゾロン（methylprednisolone）、プレドニゾン、ベタメタゾン（betamethasone）、デキサメタゾン（dexamethasone）、フルオコルトロン（fluocortolone）、アクロメタゾン（aclometasone）、プレドニカルベート（prednicarbate）、クロベタゾン（clobetasone）、クロベタゾール（clobetasol）およびフルプレドニデン（fluprednidene）が挙げられるが、これらに限定されない。
【０２０１】
代表的なＮＳＡＩＤｓとしては、サリチル酸系非ステロイド性抗炎症薬（例えば、アスピリン（アセチルサリチル酸）、コリンマグネシウムトリサリチル酸塩（choline magnesium trisalicylate）、ジフルニサル（diflunisal）、サルサレート（salsalate）、プロピオン酸誘導体系非ステロイド性抗炎症薬（例えば、イブプロフェン（ibuprofen）、デクスイブプロフェン（dexibuprofen）、デクスケトプロフェン（dexketoprofen）、フェノプロフェン（fenoprofen）、フルルビプロフェン（flurbiprofen）、ケトプロフェン（ketoprofen）、ロキソプロフェン（loxoprofen）、ナプロキセン（naproxen）、オキサプロジン（oxaprozin））、酢酸誘導体系非ステロイド性抗炎症薬（例えば、アセクロフェナク（aceclofenac）、ジクロフェナク（diclofenac）、エトドラク（etodolac）、インドメタシン（indomethacin）、ケトロラク（ketorolac）、ナブメトン（nabumetone）、トルメチン（tolmetin）、スリンダク（sulindac）)、エノール酸誘導体系非ステロイド性抗炎症薬（例えば、ドロキシカム（droxicam）、イソキシカム（isoxicam）、ロルノキシカム（lornoxicam）、メロキシカム（meloxicam）、ピロキシカム（piroxicam）、テノキシカム（tenoxicam）)、アントラニル酸誘導体系非ステロイド性抗炎症薬（例えば、フルフェナム酸（flufenamic acid）、メクロフェナム酸（meclofenamic acid）、メフェナム酸（mefenamic acid）、トルフェナム酸（tolfenamic acid））および選択的シクロオキシゲナーゼ−２阻害薬（コキシブ（Coxibs）；例えば、セレコキシブ（celecoxib）、エトリコキシブ（etoricoxib）、ルミラコキシブ（lumiracoxib）、パレコキシブ（parecoxib）、ロフェコキシブ（rofecoxib）、バルデコキシブ（valdecoxib)）が挙げられるが、これらに限定されない。プロピオン酸誘導体系非ステロイド性抗炎症薬（例えば、イブプロフェン、デクスイブプロフェン、デクスケトプロフェン、フェノプロフェン、フルルビプロフェン、ケトプロフェン、ロキソプロフェン、ナプロキセン、オキサプロジン）が好ましく、イブプロフェンが最も好ましい。
【０２０２】
好適な気管支拡張剤の代表例としては、β２アゴニスト気管支拡張剤（例えば、短時間作用型β２アゴニスト気管支拡張剤（例えば、ピルブテロール（pirbuterol）、エピネフリン（epinephrine）、サルブタモール（salbutamol）、レボサルブタモール（levosalbutamol）、クレンブテロール（clenbuterol）、テルブタリン（terbutaline）、プロカテロール（procaterol）、メタプロテレノール（metaproterenol）、フェノテロール（fenoterol）、ビトルテロールメシレート（bitolterol mesylate）、リトドリン（ritodrine）、イソプレナリン（isoprenaline））；長時間作用型β２アゴニスト気管支拡張剤（例えば、サルメテロール（salmeterol）、ホルモテロール（formoterol）、バンブテロール（bambuterol）、クレンブテロール（clenbuterol））；および超長時間作用型β２アゴニスト気管支拡張剤（例えば、インダカテロール（indacaterol）））、抗コリン作用薬気管支拡張剤（例えば、イプラトロピウム（ipratropium）、オキシトロピウム（oxitropium）、チオトロピウム（tiotropium））およびテオフィリン（theophylline）が挙げられるが、これらに限定されない。
【０２０３】
本明細書で使用される用語「粘液溶解剤」および「粘液粘度低下剤」は、粘液の固有粘度を低下させる薬剤および下層上皮への粘液の付着を低減させる薬剤、特に、粘液の成分内または成分間の分子間相互作用を直接的または間接的に阻害する薬剤、粘液の水和反応に作用する薬剤および粘膜上皮のイオン微小環境（特に、二価カチオン（例えば、カルシウム）の濃度）を調節する薬剤を包含することを意図している。好適な粘液粘度低下剤の代表例としては、核酸切断酵素（例えば、デオキシリボヌクレアーゼＩまたはドルナーゼアルファなどのデオキシリボヌクレアーゼ）、高張食塩水、ゲルゾリン、チオール還元剤、アセチルシステイン、非荷電低分子量多糖類（例えば、デキストラン、マンニトール）、アルギニン（または、他の一酸化窒素前駆体若しくは合成促進剤）、プリン受容体のＰ２Ｙ２サブタイプのアゴニスト（例えば、デヌホソル（denufosol））またはアニオン性ポリアミノ酸（例えば、ポリＡＳＰまたはポリＧＬＵ）が挙げられるが、これらに限定されない。注目に値する具体的な粘液溶解薬は、アンブロキソール（Ambroxol）、ブロムヘキシン（bromhexine）、カルボシステイン（carbocisteine）、ドミオドール（domiodol）、エプラジノン（eprazinone）、エルドステイン（erdosteine）、レトステイン（letosteine）、メスナ（mesna）、ネルテネキシン（neltenexine）、ソブレロール（sobrerol）、ステプロニン（stepronin）、チオプロニン（tiopronin）である。デオキシリボヌクレアーゼＩおよび高張食塩水が好ましい。
【０２０４】
ＣＦＴＲモジュレーターは、ＣＦＴＲ機能不全を、少なくとも部分的に改善することのできる小分子である。本ＣＦＴＲモジュレーターは、３つの主なグループに分類される：ＣＦＴＲ増強剤、ＣＦＴＲ修正剤（correctors）およびリードスルー薬（Derichs、N., Eur. Respir. Rev., 2013, 22(127), 58-65; Petit, R.S. and Fellner, C., Pharmacy and Therapeutics, 2014, 39(7), 500-511；これらの内容を参照により本明細書に援用する）。ＣＦＴＲ増強剤は、上皮細胞表面に存在するＣＦＴＲイオンチャネルの活性を高めるＣＦＴＲモジュレーターである。ＣＦＴＲ修正剤は、上皮細胞表面に送達されるまたは保持されるＣＦＴＲタンパク質の量を増加させるＣＦＴＲモジュレーターである。リードスルー薬（「未成熟終止コドンサプレッサー（premature stop codon suppressors）」（ＰＳＣサプレッサー）または「中途終止コドンサプレッサー（premature termination codon suppressors）」（ＰＴＣサプレッサー；これら用語は、本明細書において同じ意味で使用される）としても知られている）は、細胞の翻訳機構に、ＣＦＴＲｍＲＮＡ内の任意の中途終止コドンを通過させることにより、産生される実質的に全長且つ機能的なＣＦＴＲの量を増加させるＣＦＴＲモジュレーターである。
【０２０５】
好適なＣＦＴＲ増強剤の代表例としては、バーテックス・ファーマシューティカルズ（Vertex Pharmaceuticals（登録商標））のアイバカフトール（ivacaftor）（ＶＸ−７７０；Ｎ−（２，４−ジ−ｔｅｒｔ−ブチル−５−ヒドロキシフェニル）−１，４−ジヒドロ−４−オキソキノリン−３−カルボキサミド）およびＶＲＴ−５３２（４−メチル−２−（５−フェニル−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）−フェノール））が挙げられるが、これらに限定されない。
【０２０６】
好適なＣＦＴＲ修正剤の代表例としては、バーテックス・ファーマシューティカルズ（Vertex Pharmaceuticals（登録商標））のプロトタイプのルマカフトール（Prototypical lumacaftor）（ＶＸ−８０９）およびＶＸ−６６１並びにＮ６０２２（３−［１−（４−カルバモイル−２−メチルフェニル）−５−（４−イミダゾール−１−イルフェニル）ピロール−２−イル］プロパン酸）が挙げられるが、これらに限定されない。
【０２０７】
好適なリードスルー薬の代表例としては、ＰＴＣセラピューティクス（PTC Therapeutics）社のアタルレン（ataluren）（ＰＴＣ１２４）およびゲンタマイシンが挙げられるが、これらに限定されない。
【０２０８】
以下の非限定的な実施例を用いて、本発明を更に説明する。実施例において：
図１は、Ａ：オリゴＧ−Ａ−コリスチン（ＭＩＣ中央値１μｇ／ｍＬ）；Ｂ：オリゴＧ（ＡのオリゴＧ−Ａ−コリスチン結合体におけるオリゴＧと同等の濃度）；Ｃ：プロノバ（Pronova）アルギネート（ＡのオリゴＧ−Ａ−コリスチン結合体におけるオリゴＧと同等の濃度）；Ｄ：オリゴＧ（ＡのオリゴＧ−Ａ−コリスチン結合体におけるオリゴＧと同等の濃度）およびコリスチン（ＡのオリゴＧ−Ａ−コリスチン結合体におけるコリスチンと同等の濃度）；Ｅ  オリゴＧ−Ｅ−コリスチン（ＭＩＣ中央値０．５μｇ／ｍＬ）；Ｆ：オリゴＧ（ＥのオリゴＧ−Ｅ−コリスチン結合におけるオリゴＧと同等の濃度）；Ｇ：プロノバアルギネート（ＥのオリゴＧ−Ｅ−コリスチン結合体におけるオリゴＧと同等の濃度）；Ｈ：オリゴＧ（ＥのオリゴＧ−Ｅ−コリスチン結合体におけるオリゴＧと同等の濃度）およびコリスチン（ＥのオリゴＧ−Ｅ−コリスチン結合体におけるコリスチンと同等の濃度）；Ｉ：２．５ｋのＡＨＧ−Ａ−コリスチン（ＭＩＣ中央値０．５μｇ／ｍＬ）；Ｊ：２．５ｋのＡＨＧ−Ｅ−コリスチン（ＭＩＣ中央値０．５μｇ／ｍＬ）；およびＫ：硫酸コリスチン（ＭＩＣ中央値０．０６３μｇ／ｍＬ）の様々な濃度下でのＶ２緑膿菌の増殖に関するグラフ図を示す。
図２は、Ａ：オリゴＧ−Ａ−コリスチン（ＭＩＣ中央値０．０６３μｇ／ｍＬ）；Ｂ：オリゴＧ（ＡのオリゴＧ−Ａ−コリスチン結合体におけるオリゴＧと同等の濃度）；Ｃ：プロノバアルギネート（ＡのオリゴＧ−Ａ−コリスチン結合体におけるオリゴＧと同等の濃度）；Ｄ：オリゴＧ（ＡのオリゴＧ−Ａ−コリスチン結合体におけるオリゴＧと同等の濃度）およびコリスチン（ＡのオリゴＧ−Ａ−コリスチン結合体におけるコリスチンと同等の濃度）；Ｅ  オリゴＧ−Ｅ−コリスチン（ＭＩＣ中央値０．１２５μｇ／ｍＬ）；Ｆ：オリゴＧ（ＥのオリゴＧ−Ｅ−コリスチン結合体におけるオリゴＧと同等の濃度）；Ｇ：プロノバアルギネート（ＥのオリゴＧ−Ｅ−コリスチン結合体におけるオリゴＧと同等の濃度）；Ｈ：オリゴＧ（ＥのオリゴＧ−Ｅ−コリスチン結合体におけるオリゴＧと同等の濃度）およびコリスチン（ＥのオリゴＧ−Ｅ−コリスチン結合体におけるコリスチンと同等の濃度）；Ｉ：２．５ｋのＡＨＧ−Ａ−コリスチン（ＭＩＣ中央値０．１２５μｇ／ｍＬ）；Ｊ：２．５ｋのＡＨＧ−Ｅ−コリスチン（ＭＩＣ中央値０．０６３μｇ／ｍＬ）；およびＫ：硫酸コリスチン（ＭＩＣ中央値０．００８μｇ／ｍＬ）の様々な濃度下でのＶ３クレブシエラ・ニューモニエの増殖に関するグラフ図を示す。
図３は、Ａ：オリゴＧ−Ａ−コリスチン（ＭＩＣ中央値０．０６３μｇ／ｍＬ）；Ｂ：オリゴＧ（ＡのオリゴＧ−Ａ−コリスチン結合体におけるオリゴＧと同等の濃度）；Ｃ：プロノバアルギネート（ＡのオリゴＧ−Ａ−コリスチン結合体におけるオリゴＧと同等の濃度）；Ｄ：オリゴＧ（ＡのオリゴＧ−Ａ−コリスチン結合体におけるオリゴＧと同等の濃度）およびコリスチン（ＡのオリゴＧ−Ａ−コリスチン結合体におけるコリスチンと同等の濃度）；Ｅ  オリゴＧ−Ｅ−コリスチン（ＭＩＣ中央値０．１２５μｇ／ｍＬ）；Ｆ：オリゴＧ（ＥのオリゴＧ−Ｅ−コリスチン結合体におけるオリゴＧと同等の濃度）；Ｇ：プロノバアルギネート（ＥのオリゴＧ−Ｅ−コリスチン結合体におけるオリゴＧと同等の濃度）；Ｈ：オリゴＧ（ＥのオリゴＧ−Ｅ−コリスチン結合体におけるオリゴＧと同等の濃度）およびコリスチン（ＥのオリゴＧ−Ｅ−コリスチン結合体におけるコリスチンと同等の濃度）；Ｉ：２．５ｋのＡＨＧ−Ａ−コリスチン（ＭＩＣ中央値０．１２５μｇ／ｍＬ）；Ｊ：２．５ｋのＡＨＧ−Ｅ−コリスチン（ＭＩＣ中央値０．１２５μｇ／ｍＬ）；およびＫ：硫酸コリスチン（ＭＩＣ中央値０．００２μｇ／ｍＬ）の様々な濃度下でのＶ１９アシネトバクター・バウマンニの増殖に関するグラフ図を示す。
図４は、Ａ：オリゴＧ−Ａ−コリスチン（ＭＩＣ中央値０．０６３μｇ／ｍＬ）；Ｂ：オリゴＧ（ＡのオリゴＧ−Ａ−コリスチン結合体におけるオリゴＧと同等の濃度）；Ｃ：プロノバアルギネート（ＡのオリゴＧ−Ａ−コリスチン結合体におけるオリゴＧと同等の濃度）；Ｄ：オリゴＧ（ＡのオリゴＧ−Ａ−コリスチン結合体におけるオリゴＧと同等の濃度）およびコリスチン（ＡのオリゴＧ−Ａ−コリスチン結合体におけるコリスチンと同等の濃度）；Ｅ  オリゴＧ−Ｅ−コリスチン（ＭＩＣ中央値０．１２５μｇ／ｍＬ）；Ｆ：オリゴＧ（ＥのオリゴＧ−Ｅ−コリスチン結合体におけるオリゴＧと同等の濃度）；Ｇ：プロノバアルギネート（ＥのオリゴＧ−Ｅ−コリスチン結合体におけるオリゴＧと同等の濃度）；Ｈ：オリゴＧ（ＥのオリゴＧ−Ｅ−コリスチン結合体におけるオリゴＧと同等の濃度）およびコリスチン（ＥのオリゴＧ−Ｅ−コリスチン結合体におけるコリスチンと同等の濃度）；Ｉ：２．５ｋのＡＨＧ−Ａ−コリスチン（ＭＩＣ中央値０．５μｇ／ｍＬ）；Ｊ：２．５ｋのＡＨＧ−Ｅ−コリスチン（ＭＩＣ中央値０．５μｇ／ｍＬ）；およびＫ：硫酸コリスチン（ＭＩＣ中央値０．０６３μｇ／ｍＬ）の様々な濃度下でのＶ７大腸菌の増殖に関するグラフ図を示す。
図５は、オリゴＧ−Ａ−コリスチン、オリゴＧ−Ｅ−コリスチン、２．５ｋのＡＨＧ−Ａ−コリスチン、２．５ｋのＡＨＧ−Ｅ−コリスチンおよび硫酸コリスチンの存在下における、各薬剤のそれぞれのＭＩＣでのＡ：Ｖ２緑膿菌、Ｂ：Ｖ３クレブシエラ・ニューモニエ、Ｃ：Ｖ１９アシネトバクター・バウマンニおよびＤ：Ｖ７大腸菌の増殖；ならびにＥ  各薬剤の存在下における、各薬剤のそれぞれのＭＩＣでの各菌株についての細菌増殖の開始の平均時間の比較に関するグラフ図を示す。
図６は、ＭＩＣでのオリゴＧ−Ａ−コリスチン（黒丸）、ＭＩＣ×２でのオリゴＧ−Ａ−コリスチン（灰色の丸）、ＭＩＣでのオリゴＧ−Ｅ−コリスチン（三角）、ＭＩＣ×２でのオリゴＧ−Ｅ−コリスチン（逆三角）ＭＩＣでの硫酸コリスチン（菱形）または未処理のコントロール（正方形）への曝露後の実施例４の２コンパートメント膜拡散モデルにおけるアシネトバクター・バウマニ（Ｖ１９）についてのインキュベーション時間に対するＣＦＵ数に関するグラフ図を示す。
図７は、Ａ：オリゴＧ（丸）、オリゴＧ−Ａ−コリスチン（２バッチ；六角形および逆三角形）、オリゴＧ−Ｅ−コリスチン（三角）、コリスチンメタンスルホネート（ＣＭＳ；正方形）および硫酸コリスチン（菱形）；およびＢ：オリゴＧ（白丸）、オリゴＧ−Ｅ−ポリミキシンＢ（正方形）、オリゴＧ−Ａ−ポリミキシンＢ（黒丸）およびポリミキシンＢ（三角）の漸増濃度についての細胞毒性に関するグラフ図を示す。
図８は、ポリミキシンＢ（黒三角）、硫酸コリスチン、（黒丸）、オリゴＧ−Ｅ−ポリミキシンＢ（灰色三角）、オリゴＧ−Ｅ−コリスチン（灰色丸）、オリゴＧ−Ａ−コリスチン（白丸）、オリゴＧ−Ａ−ポリミキシンＢ（白三角）、オリゴＧの漸増濃度への暴露による、細胞生存率に応じて調整された、ＨＫ２細胞からの腫瘍壊死因子α（ＴＮＦα）放出に関するグラフ図を示す。データは平均±ＳＥＭ（ｎ＝６）として表した。
図９は、前記薬剤の存在下で形成された緑膿菌バイオフィルムの構造および緑膿菌バイオフィルム内の細胞生存率に対する、Ａ：オリゴＧ−Ａ−コリスチン（ＭＩＣ中央値＝１μｇ／ｍＬ）およびＢ：硫酸コリスチン（ＭＩＣ中央値＝０．０６３μｇ／ｍＬ）の漸増濃度の影響を示す。
【０２０９】
［実施例］
［実施例１］
ポリミキシン−アルギネートオリゴマー結合体の調製
酸加水分解によるアルギネートオリゴマーの調製
６０％超のグルロネートモノマー（PRONOVA UP MVG）を含有するナトリウムアルギネート（Sodium alginate）を、ｄＨ２Ｏ（１０ｍｇ／ｍＬ）に溶解し、その溶液を０．０１ＭのＨＣｌに調整した後、最高２４時間まで８０℃の水浴中に置いた。加水分解を終了させるため、酸加水分解物を冷却し、１０ＭのＮａＯＨを添加することによりｐＨをｐＨ７に上げた。溶液を凍結乾燥させ、最少量のｄＨ２Ｏに再懸濁させた。
【０２１０】
許容される数平均重合度ならびに分子量分布を有する酸加水分解Ｇフラグメント（ＡＨＧ）を得るために、溶液を透析により一度濾過し、低分子量オリゴマーおよび塩を除去した。典型的には、以下の反応時間および透析膜カットオフを用いて所望の分子量を有するＡＨＧを生成した。
【０２１１】
【表１】
2020503253.tif 000003
【０２１２】
最終生成物を凍結乾燥させ、フーリエ変換赤外分光法（ＦＴ−ＩＲ）およびゲル浸透クロマトグラフィー（ＧＰＣ）により特性を明らかにした。ＧＰＣシステムは、直列の２つのＴＳＫ  Ｇ５０００ＰＷＸＬおよびＧ３０００ＰＷＸＬカラム（Polymer Laboratories、英国）から成り、移動相はリン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）（ｐＨ７．４）、流速は１ｍＬ／分であった。分子量および多分散性は、プルラン標準物質に対して相対的に算出した。アルギネート標準物質は市販されていないことから、プルランの使用を余儀なくされた。ＧＰＣは、さまざまな高分子構造によって異なる流体力学的体積に従って分離するため、これらの較正標準ではアルギネートに関する正確な分子量が得られない。アルギネートは、プルランよりも膨張するため、プルランを用いたＧＰＣによると、アルギネートの分子量は６倍過大評価されることになる。このため、プルラン較正により算出された見かけの分子量に換算係数（６で割る）を適用し、プルラン分子量標準の異なる高分子構造に対して調整した（Andersen T.ら, 2012, 組織工学における生体材料としてのアルギネート（Alginates as biomaterials in tissue engineering）. Carbohydrate Chemistry: Chemical and Biological Approaches, Vol. 37, 232-233）。
【０２１３】
ＧＰＣ用サンプルを、ＰＢＳ（３ｍｇ／ｍＬ）中に調製し、その溶出液を示差屈折計（Optilab t-Rex(Wyatt、英国)）を用いてモニターした。Polymer Laboratories（英国）製のPL Caliber Instrumentソフトウェア、バージョン7.0.4をデータ分析に使用した。
【０２１４】
２，５００〜２６，０００ｇ／ｍｏｌ（多分散性２．５〜３．５）の分子量を有する酸加水分解Ｇフラグメント（ＡＨＧ）を生成した。これらの研究において使用したＡＨＧの典型的な特徴を、以下の表に要約する。
【０２１５】
【表２】
2020503253.tif 000004
【０２１６】
結合用のオリゴＧ  ＣＦ−５／２０を、先に説明したようにして生成した（Khanら、2012、抗菌薬と化学療法（Antimicrobial Agents and Chemotherapy)56(10), 5134-5141）。オリゴＧは、少なくとも８５％のＧ残基を有する５〜２０量体のアルギネートオリゴマーである。
【０２１７】
エステル結合（‘Ｅ’）
簡単に説明すると、２，５００ｇ／ｍｏｌのＡＨＧをコリスチンに結合させるために、アルギネートオリゴマー（２００ｍｇ、０．０８ｍｍｏｌ）を、１０ｍＬの丸底フラスコにおいて、攪拌しながら無水ＤＭＦ（４ｍＬ）（またはバッチ３以降では無水ＤＭＳＯ）に溶解した。これに、ＤＣＣ（１６．５ｍｇ、０．０８ｍｍｏｌ）、ＤＭＡＰ（１．６ｍｇ、０．０１ｍｍｏｌ）および硫酸コリスチン（３７．５ｍｇ、０．０３ｍｍｏｌ）を添加し、撹拌しながら室温で一晩反応を進行させた。反応を停止させるために、その混合液を過剰のクロロホルム（最高２０ｍＬまで）に注いだ後、生じた沈殿物を濾過により採取し、蒸留水（ｄＨ２Ｏ、２ｍＬ）に再溶解し、ＦＰＬＣにより精製した（下記参照）。
【０２１８】
本明細書において挙げている他のエステル結合した結合体（ester-linked conjugates）も同様に調製した。
【０２１９】
アミド結合（‘Ａ’）
簡単に説明すると、２，５００ｇ／ｍｏｌのＡＨＧをコリスチンに結合させるために、アルギネートオリゴマー（２００ｍｇ、０．０８ｍｍｏｌ）を、１０ｍＬの丸底フラスコにおいて、攪拌しながらｄＨ２Ｏ（２ｍＬ）に溶解した。これに、ＥＤＣ（１９．９ｍｇ、０．１ｍｍｏｌ）およびスルホ−ＮＨＳ（２２．６ｍｇ、０．１ｍｍｏｌ）を添加し、その混合液を１５分間撹拌したままにした。続いて、硫酸コリスチン（３７．５ｍｇ、０．０３ｍｍｏｌ）を添加し、反応混合液を室温で２時間撹拌したままにし、ＦＰＬＣによる精製まで−２０℃で保存した（下記参照）。
【０２２０】
本明細書において挙げている他のアミド結合した結合体（amide-linked conjugates）も同様に調製した。
【０２２１】
ＦＰＬＣによる結合体の精製
ＵＶ検出器を備えたプレパックＨｉＬｏａｄ  Ｓｕｐｅｒｄｅｘ７５  １６／６００ＰＧカラムを使用して、高速タンパク質液体クロマトグラフィー（ＦＰＬＣ）（AKTA FPLC；Amersham Pharmacia Biotech、英国）により、反応混合液から結合体を精製し、ユニコーン４．０ソフトウェア（Amersham Pharmacia Biotech、英国）を使用してデータ分析した。移動相として、０．５ｍＬ／分のＰＢＳ（ｐＨ７．４）を使用して、反応混合液のサンプル（２ｍＬ）を２μＬループに注入した。画分（５ｍＬ）を採取し、脱イオン水（８回水交換）に対して透析し、結合体を含有する画分をプールする前にタンパク質含有量を測定した（ＢＣＡアッセイ）。最終結合体を凍結乾燥させ、−２０℃で保存した。
【０２２２】
［実施例２］
アルギネートオリゴマー−抗生物質結合体の特徴
純度、分子量および薬物含有量
アルギネートオリゴマー−抗生物質結合体は、ＦＰＬＣおよびＧＰＣにより特徴を明らかにし、純度を評価し、分子量を概算し、結合体の総薬物含有量は、較正剤として遊離薬物を使用し、ＢＣＡアッセイにより求めた。
【０２２３】
プレパックＳｕｐｅｒｄｅｘ７５  １０／３００ＧＬカラムを用いて、最終的な結合体の特徴を明らかにするために、精製用の上記ＦＰＬＣシステムを再度使用した。サンプル（２００μＬ）をＰＢＳ（ｐＨ７．４）に溶解し、０．５ｍＬ／分で１００ｍＬループに注入した。上記ＧＰＣシステムが、最終的な結合体の特徴を明らかにするために再度使用されるものとし、同じ換算係数を適用した。
【０２２４】
アミド結合した結合体については、ニンヒドリンアッセイを使用し、アミド結合を介してアルギネートオリゴマーに結合するために、コリスチンのアミン基がいくつ使用されたかを求めた。最初に、酢酸リチウム二水和物（４０．８１ｇ）を６０ｍＬのｄＨ２Ｏに溶解することにより４Ｍ酢酸リチウム緩衝液を調製した。ｐＨ５．２に達するまで十分な酢酸（氷）を添加した。ｄＨ２Ｏを用いて容量を１００ｍＬの最終容量にした。次に、ニンヒドリン（０．２ｇ）およびヒドリンダンチン（０．０３ｇ）を、７．５ｍＬのＤＭＳＯおよび２．５ｍＬの酢酸リチウム緩衝液に溶解した。緩衝ニンヒドリン試薬（８６μＬ）を、等量のサンプル／標準溶液（１．５ｍＬエッペンドルフ）に添加し、１００℃の水浴中で１５分間加熱した。続いて、この混合液を室温まで冷却し、１３０μＬの５０％（ｖ／ｖ）エタノールを添加した。この溶液を混合してから、最終溶液２００μＬを９６ウェルプレートのウェルに添加した。分光光度分析は５７０ｎｍで行った。アッセイの較正は、エタノールアミン（０〜０．１１５８ｍＭ）を用いて成された。
【０２２５】
アルギネートオリゴマーおよびアルギネートオリゴマー−抗生物質結合体の安定性
アルギネートオリゴマーの分解速度を比較するために、溶液（３ｍｇ／ｍＬ）を、細菌性アルギネートリアーゼ（０、１〜１０００Ｕ／ｍＬ）を含むｐＨ７のＰＢＳ中で調製し、３７℃で４８時間までインキュベートした。アルギネートオリゴマー−抗生物質結合体溶液を、ｉ）ｐＨ５のＰＢＳ、ｉｉ）ｐＨ７のＰＢＳまたはｉｉｉ）細菌性アルギネートリアーゼ（１Ｕ／ｍＬ）を含有するｐＨ７のＰＢＳのいずれかにおいて調製し（３ｍｇ／ｍＬ）、３７℃で４８時間までインキュベートした。様々な時点でサンプル（３００ｍＬ）を採取し、直ちに液体窒素中で急速冷凍し反応を停止させた後、経時的な分子量の変化を測定するＧＰＣおよび経時的な遊離コリスチンの変化を測定するＦＰＬＣ（結合体のみ）による分析まで−２０℃で保存した。
【０２２６】
結果
これらのアルギネートオリゴマーを使用し、（プルラン分子量標準に対して）２４，０００〜１２０，０００ｇ／ｍｏｌの分子量で、約５０の典型的な反応収率で、結合体のライブラリーを作製した。含まれる薬物の装填量は１〜１１重量％％（３〜６ＡＨＧ：１薬物分子に相当）であった。
【０２２７】
【表３】
2020503253.tif 000005
【０２２８】
【表４】
2020503253.tif 000006
【０２２９】
【表５】
2020503253.tif 000007
【０２３０】
【表６】
2020503253.tif 000008
【０２３１】
【表７】
2020503253.tif 000009
【０２３２】
【表８】
2020503253.tif 000010
【０２３３】
様々な濃度のＡｌｇＬと共にオリゴＧをインキュベートすることにより、濃度依存的に分子量が減少した（データは示さず）。ｐＨ５またはｐＨ７のいずれかでＰＢＳ中においてインキュベートしたオリゴＧ−コリスチン、１６ｋのＡＨＧ−コリスチンおよびオリゴＧ−ポリミキシンＢのエステル結合体およびアミド結合体のいずれも、分子量の有意な減少は示さなかった（データは示さず）。結合体は、ｐＨ５と比較して、ｐＨ７では安定性がわずかに低かった。逆に、ＡｌｇＬは、１Ｕ／ｍＬでこれらの結合体からの薬物放出（遊離薬物％の増加）を効果的に引き起こす（データ示さず）。アミド結合した結合体およびエステル結合した結合体からの薬物放出にはほとんど差がなかった（エステル結合体がより迅速な放出およびより多くの総放出量を示した１６ｋのＡＨＧ−コリスチン結合体を除く）。
【０２３４】
細菌感染症および炎症の部位では、（細菌感染症における）反応性酸素生成物（ＲＯＳ）、エステラーゼおよびアルギネートリアーゼの活性、ひいては薬物の放出が並行して増加するにつれてｐＨが低下することが予想される。
【０２３５】
［実施例３］
抗菌活性
細菌分離株および細菌株:
感受性試験に使用される菌株には、培養保存菌株および臨床分離株の双方が含まれる（表１）。以下に示す範囲で、それらの公知の関連遺伝子型および原産地は、Khanら（上記参照）に記載されている。
【０２３６】
【表９】
2020503253.tif 000011
【０２３７】
抗菌活性の測定
ＭＩＣは、標準ガイドライン（ＣＬＳＩ  ２０１２）に従ってブロス微量希釈法を用いて求めた。供試生物をミューラーヒントン（Mueller Hinton）カチオン調整（ＭＨ）ブロス（１００μＬ、１〜５×１０４ＣＦＵ／ｍＬ）に懸濁させ、供試化合物の連続２倍希釈液で９６ウェルマイクロタイタープレートにおいてインキュベートした。ＭＩＣは、１６〜２０時間後、目に見える増殖をもたらすことのなかった供試化合物の最低濃度とした。特に明記しない限り、結果は３回の実験の中央値を示す。
【０２３８】
アルギネートオリゴマーの分解が抗菌活性に必要であるかどうかを調べるため、アルギネートリアーゼ（１、１０および５０Ｕ／ｍＬ）の存在下、ＭＩＣアッセイを行った。その際、マイクロタイタープレートのセットアップ中に、アルギネートリアーゼをＭＨブロスに添加した。さらに、アルギネートオリゴマー−コリスチン結合体（３ｍｇ／ｍＬ）を、細菌性アルギネートリアーゼ（１Ｕ／ｍＬ）を含有するｐＨ７のＰＢＳ中、３７℃で２４時間インキュベートした後、上記のようにマイクロタイタープレートを準備した。
【０２３９】
最後に、オリゴＧ−コリスチン結合体（アミド結合およびエステル結合された）および硫酸コリスチンについて先に求めたＭＩＣ値の平均値を用いて、細菌増殖曲線を使用して、インビトロでそれらの薬物動態プロファイルを比較した。比較するために、ｉ）オリゴＧ、ｉｉ）プロノバ（高分子量アルギネート）およびｉｉｉ）オリゴＧとコリスチン（いずれも、対応する結合体中に存在する量に相当する濃度）の存在下での細菌増殖を測定した。無菌９６ウェルマイクロタイタープレートを、前述のようにＭＩＣアッセイ用にセットアップした（範囲：ＭＩＣ×１６〜ＭＩＣ／１６、０）。次に、プレートをパラフィルムで覆い、３７℃、５％ＣＯ２のマイクロタイタープレートリーダーに入れ、６００ｎｍでの吸光度を４８時間１時間毎に測定した。実験は３回行い、結果は平均値（ｎ＝３）として表した。
【０２４０】
結果
アルギネート画分のいずれも、またオリゴＧも、抗菌活性を示さなかったが、非結合ポリミキシン群の抗生物質は、高い抗菌活性を示した。アルギネートオリゴマー結合コリスチンおよびポリミキシンの抗菌活性は保持され、場合によっては増強される。これは、ＭＩＣ値が実際には悪化するスクシニル基を介して結合された前述のコリスチン−デキストリン結合体とは好対照である。
【０２４１】
抗菌活性は、エステル結合を介して抗生物質に結合した低分子量アルギネートオリゴマー（オリゴＧを含む）を含む結合体において最高であった。結合体は、抗菌活性における再現性のあるバッチ変動性を示した。
【０２４２】
【表１０】
2020503253.tif 000012
【０２４３】
【表１１】
2020503253.tif 000013
【０２４４】
【表１２】
2020503253.tif 000014
【０２４５】
【表１３】
2020503253.tif 000015
【０２４６】
結合体の抗菌活性をＡｌｇＬの存在下またはＡｌｇＬを用いたプレインキュベーション後（バッチ３）に評価した場合、アミド結合した結合体またはエステル結合した結合体のいずれについても有意な変化は観察されなかった（データ示さず）。これらの結果は、オリゴＧの分解が抗生物質活性に必要ではないこと、またはアルギネートオリゴマーが、細菌酵素または培養ブロスに含有されるものによって分解されることを示唆している。
【０２４７】
細菌増殖曲線（図１〜図５）は、アルギネートオリゴマー−コリスチン結合体（バッチ２）が濃度依存的に細菌増殖を遅延させ、未処理細菌と比較して再増殖速度を低下させたことを示した。一方、硫酸コリスチン単独では、より急速な細菌の再増殖が見られた。全体として、全てのバッチにわたって先に求めたＭＩＣ値の中央値で、オリゴＧ−コリスチン結合体は典型的には、細菌の再増殖の阻害が最も長かったことを示した一方で、硫酸コリスチンは、細菌再増殖の阻害が最も短かった（実に、Ｖ３およびＶ１９に対する無抗生物質コントロールと同等であった）ことを示した。オリゴＧ−コリスチン結合体は、２倍以上のＭＩＣで最高４８時間まで細菌の再増殖を阻害した一方で、硫酸コリスチンは、８倍以上のＭＩＣで最高４８時間まで細菌の再増殖を阻害する（すなわち、オリゴＧ−コリスチン結合体と同様の長時間にわたって増殖を阻害するためには、より高い当量濃度のコリスチンが必要であった）。オリゴＧ−コリスチン結合体と２．５ｋのアルギネートオリゴマー−コリスチン結合体との間では、細菌の再増殖が始まるまでの時間に差はなく、アミド結合した結合体とエステル結合した結合体の間にも差はなかった。全体として、これは、コリスチンの抗菌作用を延長させる、結合体からのコリスチン放出が、より安定しており且つ制御されていることを示唆し得る。
【０２４８】
対応する結合体中のオリゴＧおよびコリスチンと同等の濃度のオリゴＧ＋コリスチンの組み合わせは、濃度依存的な増殖阻害を示した。典型的には、オリゴＧに共有結合したコリスチンは、同等の濃度の非結合コリスチン＋オリゴＧと同等の活性を示した。オリゴＧ−コリスチン結合体（アミド結合およびエステル結合した）中のオリゴＧと同等の濃度のオリゴＧまたはプロノバは、細菌増殖の減少に有意な効果を及ぼさなかった。
【０２４９】
［実施例４］
オリゴＧ−ポリミキシン結合体の薬物動態／薬力学的モデリング
インビトロでの非結合コリスチンと比較して、オリゴＧ−コリスチン結合体（バッチ６）のＰＫ／ＰＤプロファイルを調べるために研究を行った。これは、従来の小分子薬剤のナノサイズ構造への組み込みが、元の薬剤から実質的に変更されているＰＫ／ＰＤ特性と関連しているナノスケール薬物送達システムにおいて特に重要である。Azzopardi（上記参照）に既に記載されているモデル系を使用した。
【０２５０】
無限シンク条件（infinite sink conditions）下（総容量２０ｍｌ；内部コンパートメント容量５ｍｌ）でAzzopardiの２コンパートメント静的透析バッグモデル（Azzopardi two-compartment static dialysis bag model）を使用して、オリゴＧ−コリスチン結合体のアンマスキングをシミュレーションした。透析膜（１０，０００ｇ／ｍｏｌ分画分子量［ＭＷＣＯ］）を、蒸留水（ｄＨ２Ｏ）に１５〜３０分間予浸し、透析クリップで固定し、注入口から吊り下げて、滅菌医療グレードポリウレタン膜（Tegaderm）で密封された２５ｍｌ滅菌ビーカーにおいて、内部コンパートメント（ＩＣ）を外部コンパートメント（ＯＣ）から分離した。
【０２５１】
クラス２層流キャビネットにおいて無菌条件下でモデル系を調製し、周囲空気中３７℃に設定された振盪インキュベーターに移し、７０ｒｐｍで４８時間、一定の軌道撹拌を行った。０時間の時点で、ミューラーヒントンブロス（５ｘ１０５ＣＦＵ／ｍｌ）中のアシネトバクター・バウマンニ（Acinetobacter baumanii）（Ｖ１９）をＯＣに移し、事前に求めたＭＩＣでまたは当該ＭＩＣの２倍で、ＩＣにＰＢＳ中の供試薬剤（バッチ６）を充填した（実施例３；バッチ６−コリスチンＭＩＣ：０．２５μｇ／ｍｌ；オリゴＧ−Ｅ−コリスチンＭＩＣ：０．１２５μｇ／ｍｌ；オリゴＧ−Ａ−コリスチンＭＩＣ：０．１２５μｇ／ｍｌ）。サンプルは、様々な時点でＯＣから採取し、ミスラ法を用いて細菌コロニー数（ＣＦＵ／ｍｌ）により特徴を明らかにした。
【０２５２】
結果
図６に結果を示す。ＰＫ／ＰＤモデルは、硫酸コリスチンが、先に求めたＭＩＣ（０．２５μｇ／ｍｌ）で、またオリゴＧ−エステル−コリスチン結合体が、２倍のＭＩＣ（０．２５μｇ／ｍｌ）で、４時間後、生菌数を減少させ（約１／２）、全体として初期ＰＫ／ＰＤプロファイルは本質的に同じであることを示した。オリゴＧ−アミド−コリスチン結合体では、ＭＩＣおよび２倍のＭＩＣで、有意な活性は見られなかった。これらの結果は、透析膜を通過して拡散し、非結合コリスチンと同様の時間経過および程度で、外膜コンパートメント内で活性を発揮する能力をエステル結合した結合体は有するが、アミド結合した結合体は有さないことを実証している。より安定したアミド結合した結合体で観察された活性の欠如は、これらがＩＣ内に保持されているのに対して、より不安定なエステル結合した結合体は急速に分解することにより、マスクされていないコリスチンをＩＣから外に拡散させ、ＯＣの細菌にその抗菌作用を及ぼすことを示唆している。
【０２５３】
［実施例５］
インビトロ細胞毒性の測定：ＭＴＴアッセイ
ＭＴＴアッセイを用いて、ヒト腎臓（ＨＫ−２）細胞株における細胞生存率を評価した（７２時間のインキュベーション）。ＨＫ−２細胞を、Ｌ−グルタミン、ＥＧＦおよびＢＰＥを含有する０．１ｍＬ／ウェルの培地（Ｋ−ＳＦＭ）において、滅菌９６ウェルマイクロタイタープレート（１×１０５細胞／ｍＬ）に播種した。それらは、２４時間付着させた。次に培地を除去し、新鮮な培地に溶解した一連の濃度の供試化合物（０．２μｍフィルター滅菌済み）を細胞に添加した。さらに６７時間インキュベートした後、ＭＴＴ、３−（４，５−ジメチルチアゾール−２−イル）−２，５−ジフェニルテトラゾリウムブロマイド（ＰＢＳ中５ｍｇ／ｍＬ溶液２０μＬ）を各ウェルに加え、さらに５時間、細胞をインキュベートした。その後、培地を除去し、析出したホルマザン結晶を３０分かけて光学グレードのＤＭＳＯ（１００μＬ）を加えて可溶化した。マイクロタイタープレートリーダーを用いて、５４０ｎｍで吸光度を測定した。細胞生存率は、未処理のコントロール細胞の生存率のパーセントとして表した。ＩＣ５０値は、平均値として表した（ｎ＝１８）。
【０２５４】
結果
オリゴＧ結合は、コリスチンおよびポリミキシンＢの毒性を著しく減少させた（図７）。以下にまとめたＩＣ５０値は、抗生物質（ポリミキシンＢ、硫酸コリスチンまたはコリスチンメタンスルホネート（ＣＭＳ））、すなわち、ＨＫ２細胞増殖を半分まで阻害するのに必要とされる結合体内の抗生物質の濃度を表す。オリゴＧは、コントロールとして含まれている。
【０２５５】
【表１４】
2020503253.tif 000016
【０２５６】
［実施例６］
インビトロ細胞毒性の測定：ＨＫ２細胞からのＴＮＦα放出
ポリミキシン細胞毒性に関与するモデル炎症性サイトカインとして、ポリミキシンおよびオリゴＧ−ポリミキシン結合体に応答したＨＫ２細胞からのＴＮＦα放出をＥＬＩＳＡにより測定した。ＨＫ−２細胞を、Ｌ−グルタミン、ＥＧＦおよびＢＰＥを含有する０．１ｍＬ／ウェルの培地（Ｋ−ＳＦＭ）において、滅菌９６ウェルマイクロタイタープレート（１×１０５細胞／ｍＬ）に播種した。それらは、２４時間付着させた。次に培地を除去し、新鮮な培地に溶解した一連の濃度の供試化合物（０．２μｍフィルター滅菌済み）を細胞に添加した。７２時間のインキュベーション後、マイクロタイタープレートを遠心分離し（１５００ｒｐｍ、３分）、上清を新しい９６ウェルマイクロタイタープレートに移した。
【０２５７】
ＴＮＦαのＥＬＩＳＡアッセイは、製造業者の説明書（Thermo Scientific、ESS0001）に従って実施した。簡単に説明すると、１００μＬのコーティング抗体（ＰＢＳにおいて１：１００希釈）を９６ウェルマイクロタイタープレートの各ウェルに添加した。プレートをプラスチックシールで覆い、室温（２２〜２５℃）で一晩インキュベートした。コーティング抗体溶液を吸引し、３００μＬのブロッキング緩衝液（ＰＢＳ中４％ＢＳＡ、５％スクロース）を各ウェルに添加した後、室温（２２〜２５℃）で１時間インキュベートし、吸引した。バイアルラベルに従って標準物質を試薬希釈剤（ＰＢＳ中４％ＢＳＡ、ｐＨ７．４）で再構成し、１：２に希釈して最高標準濃度（１０００ｐｇ／ｍＬ）に調製した。９６ウェルプレートの列ＡおよびＢにわたって二連で（in duplicate）連続２倍希釈を行った（０、３．９〜１０００ｐｇ／ｍＬ）。ＨＫ−２細胞の上清（試薬希釈液において１：１に希釈、１００μＬ）を９６ウェルマイクロタイタープレートの各ウェルに添加し、室温（２２〜２５℃）で一晩インキュベートした。溶液を吸引し、洗浄緩衝液（ＰＢＳ中０．０５％Ｔｗｅｅｎ−２０、ｐＨ７．４）３００μＬ／ウェルを用いてプレートを３回洗浄した。次に、１００μＬの検出抗体（試薬希釈液において１：１００希釈）を各ウェルに添加した。室温（２２〜２５℃）で１時間、プレートをインキュベートし、洗浄緩衝液３００μＬ／ウェルを用いて３回洗浄した。次に、１００μＬのストレプトアビジン−ＨＲＰ（試薬希釈剤において１：４００希釈）を各ウェルに添加し、室温（２２〜２５℃）で３０分間インキュベートした後、洗浄緩衝液３００μＬ／ウェルを用いて３回洗浄した。基質溶液（１００μＬ）を９６ウェルマイクロタイタープレートの各ウェルに添加し、室温（２２〜２５℃）で２０分間、暗所でインキュベートした。各ウェルに１００μＬの停止液を添加することにより反応を停止させた。吸光度は、４５０ｎｍ−５５０ｎｍで測定した。
【０２５８】
検量線は、縦（Ｙ）軸に、各標準濃度について得られた平均吸光度を、横（Ｘ）軸に、対応するヒトＴＮＦα濃度（ｐｇ／ｍＬ）をプロットすることにより作成した。各サンプルにおけるヒトＴＮＦα量は、検量線を用いて吸光値（Ｙ軸）からヒトＴＮＦα濃度（Ｘ軸）に内挿することにより求めた。検量線から得られた内挿値に希釈係数（×２）を掛け、各薬物濃度について細胞生存率に調整し（ＭＴＴアッセイ結果）、サンプル中のヒトＴＮＦαのｐｇ／ｍＬを算出した。
【０２５９】
結果
図８に結果を示す。図から分かるように、ポリミキシンＢおよびコリスチンは、オリゴＧ−Ｅ−ポリミキシンＢ（コリスチンと同様の効果を示したが、ポリミキシンＢよりも少なかった）を除き、ＴＮＦα放出が非常に低いかまたは検出不可能であった結合体と比較して、より大きなＴＮＦα放出を誘導した。全体として、オリゴＧ結合は、ポリミキシン群の抗生物質による炎症性サイトカインの放出を著しく減少させた。
【０２６０】
［実施例７］
バイオフィルム発生阻害
方法
これらの実験では、オリゴＧ−コリスチンコン結合体が、非結合型コリスチンよりも効果的にバイオフィルムの発生を阻害できるかどうかを調べた。最初に、供試化合物の原液を、ＭＨブロス中１ｍｇ／ｍＬで調製し、これを使用して、Greiner製のガラス底光学９６ウェルプレート（１ウェルあたり９０μＬ）のウェル全てにおいて、ＭＨブロス中、二重希釈により一連の濃度（２倍ＭＩＣ〜１／８ＭＩＣ）の抗生物質を調製した。無菌性コントロール（１００μＬのＭＨブロス）および増殖コントロール（９０μＬのＭＨブロス＋１０μＬの供試細菌性病原体）も調製した。細菌培養液を、ＴＳブロス（ＴＳＢ）中で一晩増殖させ、ＭＨブロスにおいて希釈し、ＯＤ６２５を０．５にした後、１０μＬをウェルに添加した。プレートをパラフィルムで包み、ロッカー（２０ｒｐｍ）上で３７℃で２４時間インキュベートした。２４時間のインキュベーションの後、上清をすべてのウェルから慎重に除去し、３μＬの生／死染色液（Live/dead Baclight細菌生存率キット；１ｍＬのＰＢＳ中に１μＬの成分ＡおよびＢを混合することにより調製）を添加した。プレートをホイルで包み、１５分間暗所に保存した。最後に、４７μＬのＰＢＳを全ての供試ウェルに添加した。プレートをパラフィルムで包み、共焦点レーザー走査顕微鏡法（ＣＬＳＭ）により分析するまで暗所に保存した（ｎ＝２）。
【０２６１】
結果
オリゴＧ−コリスチン結合体（バッチ５、オリゴＧ−Ａ−コリスチン（１））は、緑膿菌（P. aeruginosa）バイオフィルムの形成を著しく阻害し、２倍のＭＩＣ（２μｇ／ｍＬ）で細菌死を引き起こした（図９）。ＭＩＣ（１μｇ／ｍＬ）でさえ、オリゴＧ−コリスチン結合体は、死細胞の存在とともに、バクテリアの凝集と無秩序なバイオフィルム構造を引き起こした。一方、硫酸コリスチンは、緑膿菌バイオフィルムに対してわずかな影響しか示さず、最高濃度ではバイオフィルムの厚さが非常にわずかに変化したが、細胞死はほとんどなかった。これらの結果は、オリゴＧ−コリスチン結合体が、発生するバイオフィルムを破壊し、常在細菌を殺菌する上で、コリスチンよりも有意に効果的であることを示している。したがって、オリゴＧ−コリスチン結合体は、バイオフィルム感染症の対処に有用な抗菌剤と見なすことができる。
【図１Ａ】
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【図１Ｂ】
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【図１Ｃ】
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【図１Ｄ】
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【図１Ｅ】
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【図１Ｆ】
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【図１Ｇ】
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【図１Ｈ】
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【図１Ｉ】
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【図１Ｊ】
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【図１Ｋ】
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【図２Ａ】
2020503253.tif 000029
【図２Ｂ】
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【図２Ｃ】
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【図２Ｄ】
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【図２Ｅ】
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【図２Ｆ】
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【図２Ｇ】
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【図２Ｈ】
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【図２Ｉ】
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【図２Ｊ】
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【図２Ｋ】
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【図３Ａ】
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【図３Ｂ】
2020503253.tif 000041
【図３Ｃ】
2020503253.tif 000042
【図３Ｄ】
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【図３Ｅ】
2020503253.tif 000044
【図３Ｆ】
2020503253.tif 000045
【図３Ｇ】
2020503253.tif 000046
【図３Ｈ】
2020503253.tif 000047
【図３Ｉ】
2020503253.tif 000048
【図３Ｊ】
2020503253.tif 000049
【図３Ｋ】
2020503253.tif 000050
【図４Ａ】
2020503253.tif 000051
【図４Ｂ】
2020503253.tif 000052
【図４Ｃ】
2020503253.tif 000053
【図４Ｄ】
2020503253.tif 000054
【図４Ｅ】
2020503253.tif 000055
【図４Ｆ】
2020503253.tif 000056
【図４Ｇ】
2020503253.tif 000057
【図４Ｈ】
2020503253.tif 000058
【図４Ｉ】
2020503253.tif 000059
【図４Ｊ】
2020503253.tif 000060
【図４Ｋ】
2020503253.tif 000061
【図５Ａ】
2020503253.tif 000062
【図５Ｂ】
2020503253.tif 000063
【図５Ｃ】
2020503253.tif 000064
【図５Ｄ】
2020503253.tif 000065
【図５Ｅ】
2020503253.tif 000066
【図６】
2020503253.tif 000067
【図７Ａ】
2020503253.tif 000068
【図７Ｂ】
2020503253.tif 000069
【図８】
2020503253.tif 000070
【図９Ａ】
2020503253.tif 000071
【図９Ｂ】
2020503253.tif 000072
【国際調査報告】
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2020503253.tif 000074
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