(57)【要約】タンパク質の機能又は活性の喪失により引き起こされる疾患について治療を必要とする対象を治療する方法が提供される。タンパク質の機能、活性又は発現の獲得により引き起こされる疾患について治療を必要とする対象を治療する方法もまた提供される。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
タンパク質の機能又は活性の喪失により引き起こされる疾患について治療を必要とする対象を治療する方法であって、（ａ）アフェレーシスを含むプロセスにより前記対象から得られた血液製剤からＡＡＶ結合抗体を、除去する、低減させる、枯渇させる、阻害する、不活性化する又は捕捉するステップ；及び（ｂ）前記タンパク質の機能又は活性を提供するか又は補助するタンパク質又はペプチドをコードする異種ポリヌクレオチドを含むある量の組換えアデノ随伴ウイルス（ｒＡＡＶ）ベクターを投与するステップを含む、方法。
【請求項２】
タンパク質の機能、活性又は発現の獲得により引き起こされる疾患について治療を必要とする対象を治療する方法であって、（ａ）アフェレーシスを含むプロセスにより前記対象から得られた血液製剤からＡＡＶ結合抗体を、除去する、低減させる、枯渇させる、阻害する、不活性化する又は捕捉するステップ；及び（ｂ）前記タンパク質の機能、活性又は発現の獲得の発現を阻害する、減少させる又は低減させる核酸に転写される異種ポリヌクレオチドを含むある量の組換えアデノ随伴ウイルス（ｒＡＡＶ）ベクターを投与するステップを含む、方法。
【請求項３】
前記アフェレーシスプロセスが、基材に取り付けた又は固定されたＡＡＶ結合抗体親和性マトリックスを含む、請求項１又は２に記載の方法。
【請求項４】
前記ＡＡＶ結合抗体親和性マトリックスが、基材に取り付けた又は固定された、前記血液製剤中の前記ＡＡＶ結合抗体に結合するＡＡＶキャプシド又はＡＡＶキャプシド断片を含む、請求項３に記載の方法。
【請求項５】
基材に固定された前記ＡＡＶ結合抗体親和性マトリックスが、前記ＡＡＶ結合抗体親和性マトリックスと接触したときに前記血液製剤からＡＡＶ結合抗体を体外又は体内で除去又は枯渇させるための入口及び出口を有する、カラム、装置、チャンバー、デバイス、フィルター、カートリッジ、チューブ内に配されている、請求項３〜５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６】
前記ＡＡＶ結合抗体親和性マトリックスが、天然に存在する又は非天然の又は合成のインタクトなＡＡＶ空キャプシドを含む、請求項３〜５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項７】
前記ＡＡＶ結合抗体親和性マトリックスが、ＡＡＶ  ＶＰ１、ＶＰ２及び／又はＶＰ３キャプシドタンパク質又はその断片を含む、請求項３〜５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項８】
前記ＡＡＶ結合抗体親和性マトリックスが、天然に存在する又は非天然の又は合成のＡＡＶ  ＶＰ１、ＶＰ２及び／又はＶＰ３キャプシドタンパク質を含む、請求項３〜７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項９】
前記ＡＡＶ結合抗体親和性マトリックスが、天然に存在する又は非天然の又は合成のＡＡＶ  ＶＰ１、ＶＰ２及び／又はＶＰ３キャプシドタンパク質モノマーを含む、請求項３〜８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１０】
前記ＡＡＶ結合抗体親和性マトリックスが、天然に存在する又は非天然の又は合成のＡＡＶ  ＶＰ１、ＶＰ２及び／又はＶＰ３キャプシドタンパク質ポリマーを含む、請求項３〜９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１１】
前記ＡＡＶ結合抗体親和性マトリックスが、天然に存在する又は非天然の又は合成のＡＡＶキャプシドタンパク質に対して６０％又はそれより高い配列同一性を有するＡＡＶ  ＶＰ１、ＶＰ２及び／又はＶＰ３キャプシドタンパク質を含む、請求項３〜１０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１２】
前記ＡＡＶ結合抗体親和性マトリックスが、ＡＡＶ１、ＡＡＶ２、ＡＡＶ３、ＡＡＶ４、ＡＡＶ５、ＡＡＶ６、ＡＡＶ７、ＡＡＶ８、ＡＡＶ９、ＡＡＶ１０、Ｒｈ１０、Ｒｈ７４、配列番号１及び配列番号２のＶＰ１、ＶＰ２及び／又はＶＰ３キャプシドタンパク質からなる群から選択されるＡＡＶ  ＶＰ１、ＶＰ２及び／又はＶＰ３キャプシドタンパク質に対して６０％又はそれより高い配列同一性を有するＡＡＶ  ＶＰ１、ＶＰ２及び／又はＶＰ３キャプシドタンパク質を含む、請求項３〜１１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１３】
前記ＡＡＶ結合抗体親和性マトリックスが、配列番号１又は配列番号２に対して６０％又はそれより高い配列同一性を有するＡＡＶ  ＶＰ１、ＶＰ２及び／又はＶＰ３キャプシドタンパク質を含む、請求項３〜１２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１４】
前記ＡＡＶ結合抗体親和性マトリックスが、前記血液製剤中の前記ＡＡＶ結合抗体に結合する抗イディオタイプ抗体を含む、請求項３〜５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１５】
ＡＡＶ結合抗体に結合する前記抗イディオタイプ抗体が、ＡＡＶ１、ＡＡＶ２、ＡＡＶ３、ＡＡＶ４、ＡＡＶ５、ＡＡＶ６、ＡＡＶ７、ＡＡＶ８、ＡＡＶ９、ＡＡＶ１０、Ｒｈ１０、Ｒｈ７４、配列番号１及び／若しくは配列番号２の（１つ若しくは複数の）キャプシドタンパク質、又はＡＡＶ１、ＡＡＶ２、ＡＡＶ３、ＡＡＶ４、ＡＡＶ５、ＡＡＶ６、ＡＡＶ７、ＡＡＶ８、ＡＡＶ９、ＡＡＶ１０、Ｒｈ１０、Ｒｈ７４、配列番号１及び／若しくは配列番号２の（１つ若しくは複数の）キャプシドタンパク質の誘導体若しくはアミノ酸置換体に結合する、請求項１４に記載の方法。
【請求項１６】
ＡＡＶ結合抗体に結合する前記抗イディオタイプ抗体が抗体断片である、請求項１４又は１５に記載の方法。
【請求項１７】
ＡＡＶ結合抗体に結合する前記抗イディオタイプ抗体が、ＩｇＧ、ＩｇＡ、ＩｇＭ、ＩｇＥ又はＩｇＤである、請求項１〜１６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１８】
前記ＡＡＶ結合抗体親和性マトリックスがＧＭＰグレードである、請求項１４〜１６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１９】
前記対象から得られた前記血液製剤への前記ＡＡＶ結合抗体親和性マトリックスの浸出が、前記血液製剤が前記対象に再導入される場合に、前記対象を実質的に害しない、請求項１〜１８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２０】
前記ＡＡＶ結合抗体が、ＡＡＶキャプシドタンパク質に結合するＩｇＧ、ＩｇＭ、ＩｇＡ又はＩｇＤを含む、請求項１〜１９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２１】
前記基材及び／又はカラム、装置、チャンバー、デバイス、フィルター、カートリッジ、若しくはチューブが、プラスチック又はガラスから構成されている、請求項１〜２０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２２】
前記ＡＡＶ結合抗体親和性マトリックス、基材及び／又はカラム、装置、チャンバー、デバイス、フィルター、カートリッジ、チューブが無菌である、請求項１〜２１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２３】
前記アフェレーシスプロセスの前に前記血液製剤中に存在する前記ＡＡＶ結合抗体が、約１：１００より多く、その場合、１部の前記血液製剤を１００部の等張緩衝液で希釈して、５０％のＡＡＶの中和がもたらされる、請求項１〜２２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２４】
前記アフェレーシスプロセスの前に前記血液製剤中に存在する前記ＡＡＶ結合抗体が、約１：１０００より多く、その場合、１部の前記血液製剤を１０００部の等張緩衝液で希釈して、５０％のＡＡＶの中和が結果もたらされる、請求項１〜２３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２５】
前記血液製剤中に存在する前記ＡＡＶ結合抗体の２０〜５０％、５０〜７５％、７５〜９０％、９０〜９５％又は９５％又はそれより多くが除去される、請求項１〜２４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２６】
前記アフェレーシスプロセス後の前記血液製剤中に存在する前記ＡＡＶ結合抗体が、約１：１０未満であり、その場合、１部の前記血液製剤を１０部の等張緩衝液で希釈して、５０％のＡＡＶの中和がもたらされる、請求項１〜２５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２７】
前記アフェレーシスプロセス後の前記血液製剤中に存在する前記ＡＡＶ結合抗体が、約１：５未満であり、その場合、１部の前記血液製剤を５部の等張緩衝液で希釈して、５０％のＡＡＶの中和がもたらされる、請求項１〜２６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２８】
前記アフェレーシスプロセス後の前記血液製剤中に存在するＡＡＶ結合抗体の比が、約１：４未満であり、その場合、１部の前記血液製剤を４部の等張緩衝液で希釈して、５０％のＡＡＶの中和がもたらされる、請求項１〜２７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２９】
前記アフェレーシスプロセス後の前記血液製剤中に存在するＡＡＶ結合抗体の比が、約１：３未満であり、その場合、１部の前記血液製剤を３部の等張緩衝液で希釈して、５０％のＡＡＶの中和がもたらされる、請求項１〜２７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３０】
前記アフェレーシスプロセス後の前記血液製剤中に存在するＡＡＶ結合抗体の比が、約１：２未満であり、その場合、１部の前記血液製剤を２部の等張緩衝液で希釈して、５０％のＡＡＶの中和がもたらされる、請求項１〜２９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３１】
前記アフェレーシスプロセス後の前記血液製剤中に存在するＡＡＶ結合抗体の比が、約１：１未満であり、その場合、１部の前記血液製剤を１部の等張緩衝液で希釈して、５０％のＡＡＶの中和がもたらされる、請求項１〜３０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３２】
前記方法後の前記血液製剤の全て又は一部分が、前記対象に再導入又は再注入される、請求項１〜３１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３３】
ステップ（ｂ）の後に、前記対象にドナーからの血液製剤が与えられる、請求項１〜３２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３４】
ステップ（ｂ）が（ａ）の後の約７２時間以内に行われる、請求項１〜３３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３５】
ステップ（ｂ）が（ａ）の後の約４８時間以内に行われる、請求項１〜３３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３６】
ステップ（ｂ）が（ａ）の後の約１〜４８時間以内に行われる、請求項１〜３３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３７】
ステップ（ｂ）が（ａ）の後の約３６時間以内に行われる、請求項１〜３３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３８】
ステップ（ｂ）が（ａ）の後の約２４時間以内に行われる、請求項１〜３３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３９】
ステップ（ｂ）が（ａ）の後の約１〜２４時間以内に行われる、請求項１〜３３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４０】
ステップ（ｂ）が（ａ）の後の約１２時間以内に行われる、請求項１〜３３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４１】
ステップ（ｂ）が（ａ）の後の約６時間以内に行われる、請求項１〜３３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４２】
ステップ（ｂ）が（ａ）の後の約３時間以内に行われる、請求項１〜３３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４３】
ステップ（ｂ）が（ａ）の後の約３０分〜６時間以内に行われる、請求項１〜３３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４４】
ステップ（ｂ）が（ａ）の後の約３０分〜３時間以内に行われる、請求項１〜３３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４５】
ステップ（ａ）の後であるがステップ（ｂ）の前に、前記対象からの試料を前記試料中に存在するＡＡＶ結合抗体の量について分析することをさらに含む、請求項１〜４４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４６】
ステップ（ｂ）の後に、前記対象からの試料を前記試料中に存在するＡＡＶ結合抗体の量について分析することをさらに含む、請求項１〜４５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４７】
前記対象からの試料分析される前記試料が血液製剤である、請求項４５又は４６に記載の方法。
【請求項４８】
前記血液製剤が血漿である、請求項１〜４７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４９】
前記対象が、肺疾患（例えば、嚢胞性繊維症）、出血障害（例えば、阻害剤あり若しくはなしの血友病Ａ若しくは血友病Ｂ）、サラセミア、血液障害（例えば、貧血）、アルツハイマー病、パーキンソン病、ハンチントン病、筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）、癲癇、リソソーム蓄積症、銅若しくは鉄蓄積障害（例えば、ウィルソン病若しくはメンケス病）、リソソーム酸リパーゼ欠損症、神経学的若しくは神経変性障害、がん、１型若しくは２型糖尿病、ゴーシェ病、ハーラー病、アデノシンデアミナーゼ欠損症、代謝障害（例えば、グリコーゲン貯蔵病）、網膜変性疾患（例えば、ＲＰＥ６５欠損症、コロイデレミア、及び眼の他の疾患）、固形臓器（例えば、脳、肝臓、腎臓、心臓）の疾患、又は感染性ウイルス（例えば、Ｂ型及びＣ型肝炎、ＨＩＶなど）、細菌性若しくは真菌性疾患を有する、請求項１〜４８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５０】
前記疾患が、前記タンパク質をコードする遺伝子の発現の喪失又は低減により引き起こされるものである、請求項１〜４９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５１】
前記疾患が血液凝固障害である、請求項１〜５０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５２】
前記疾患が、血友病Ａ、阻害抗体を有する血友病Ａ患者、血友病Ｂ、任意の凝固因子：ＶＩＩ、ＶＩＩＩ、ＩＸ及びＸ、ＸＩ、Ｖ、ＸＩＩ、ＩＩ、フォンウィルブランド因子の欠損症、又はＦＶ／ＦＶＩＩＩ合併欠損症、又はサラセミア、ビタミンＫエポキシドレダクターゼＣ１欠損症又はガンマ−カルボキシラーゼ欠損症である、請求項１〜５１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５３】
前記疾患が、貧血、外傷に関連する出血、損傷、血栓症、血小板減少症、卒中、凝固障害、播種性血管内凝固（ＤＩＣ）；ヘパリン、低分子量ヘパリン、五糖、ワルファリン、小分子抗血栓剤（すなわち、ＦＸａ阻害剤）に関連する過剰抗凝固；及び血小板障害、例えば、ベルナール・スーリエ症候群、グランツマン血小板無力症（ｔｈｒｏｍｂｌａｓｔｅｍｉａ）、又は貯蔵プール欠乏症である、請求項１〜５０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５４】
前記疾患が、中枢神経系（ＣＮＳ）に影響を与えるものか、又はＣＮＳから発生するものである、請求項１〜５０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５５】
前記疾患が神経変性疾患である、請求項１〜５０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５６】
前記ＣＮＳ又は神経変性疾患が、アルツハイマー病、ハンチントン病、ＡＬＳ、遺伝性痙性片麻痺、原発性側索硬化症、脊髄性筋萎縮症、ケネディ病、ポリグルタミンリピート疾患、又はパーキンソン病である、請求項５４又は５５に記載の方法。
【請求項５７】
前記ＣＮＳ又は神経変性疾患がポリグルタミンリピート疾患である、請求項５５又は５６に記載の方法。
【請求項５８】
前記ポリグルタミンリピート疾患が脊髄小脳失調症（ＳＣＡ１、ＳＣＡ２、ＳＣＡ３、ＳＣＡ６、ＳＣＡ７、又はＳＣＡ１７）である、請求項５７に記載の方法。
【請求項５９】
前記異種ポリヌクレオチドが、インスリン、グルカゴン、成長ホルモン（ＧＨ）、副甲状腺ホルモン（ＰＴＨ）、成長ホルモン放出因子（ＧＲＦ）、卵胞刺激ホルモン（ＦＳＨ）、黄体形成ホルモン（ＬＨ）、ヒト絨毛性ゴナドトロピン（ｈＣＧ）、血管内皮増殖因子（ＶＥＧＦ）、アンジオポエチン、アンジオスタチン、顆粒球コロニー刺激因子（ＧＣＳＦ）、エリスロポエチン（ＥＰＯ）、結合組織成長因子（ＣＴＧＦ）、塩基性線維芽細胞増殖因子（ｂＦＧＦ）、酸性線維芽細胞増殖因子（ａＦＧＦ）、上皮成長因子（ＥＧＦ）、トランスフォーミング増殖因子α（ＴＧＦα）、血小板由来成長因子（ＰＤＧＦ）、インスリン成長因子Ｉ及びＩＩ（ＩＧＦ−Ｉ及びＩＧＦ−ＩＩ）、ＴＧＦβ、アクチビン、インヒビン、骨形成タンパク質（ＢＭＰ）、神経成長因子（ＮＧＦ）、脳由来神経栄養因子（ＢＤＮＦ）、ニューロトロフィンＮＴ−３及びＮＴ４／５、毛様体神経栄養因子（ＣＮＴＦ）、グリア細胞株由来神経栄養因子（ＧＤＮＦ）、ニュールツリン、アグリン、ネトリン−１及びネトリン−２、肝細胞増殖因子（ＨＧＦ）、エフリン、ノギン、ソニックヘッジホッグ並びにチロシンヒドロキシラーゼからなる群から選択されるタンパク質をコードする、請求項１又は３〜５８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６０】
前記異種ポリヌクレオチドが、トロンボポエチン（ＴＰＯ）、インターロイキン（ＩＬ１〜ＩＬ−１７）、単球走化性タンパク質、白血病抑制因子、顆粒球−マクロファージコロニー刺激因子、Ｆａｓリガンド、腫瘍壊死因子α及びβ、インターフェロンα、β、及びγ、幹細胞因子、ｆｌｋ−２／ｆｌｔ３リガンド、ＩｇＧ、ＩｇＭ、ＩｇＡ、ＩｇＤ及びＩｇＥ、キメラ免疫グロブリン、ヒト化抗体、単鎖抗体、Ｔ細胞受容体、キメラＴ細胞受容体、単鎖Ｔ細胞受容体、クラスＩ及びクラスＩＩ  ＭＨＣ分子からなる群から選択されるタンパク質をコードする、請求項１又は３〜５８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６１】
前記異種ポリヌクレオチドが、ＣＦＴＲ（嚢胞性線維症膜貫通調節タンパク質）、血液凝固（凝血）因子（第ＸＩＩＩ因子、第ＩＸ因子、第ＶＩＩＩ因子、第Ｘ因子、第ＶＩＩ因子、第ＶＩＩａ因子、プロテインＣなど）機能性血液凝固因子の獲得、抗体、網膜色素上皮特異的６５ｋＤａタンパク質（ＲＰＥ６５）、エリスロポエチン、ＬＤＬ受容体、リポタンパク質リパーゼ、オルニチントランスカルバミラーゼ、β−グロビン、α−グロビン、スペクトリン、α−アンチトリプシン、アデノシンデアミナーゼ（ＡＤＡ）、金属トランスポーター（ＡＴＰ７Ａ若しくはＡＴＰ７）、スルファミダーゼ、リソソーム蓄積症（ＡＲＳＡ）に関与する酵素、ヒポキサンチングアニンホスホリボシルトランスフェラーゼ、β−２５グルコセレブロシダーゼ、スフィンゴミエリナーゼ、リソソームヘキソサミニダーゼ、分岐鎖ケト酸デヒドロゲナーゼ、ホルモン、成長因子、インスリン様成長因子１若しくは２、血小板由来成長因子、上皮成長因子、神経成長因子、神経栄養因子−３及び−４、脳由来神経栄養因子、グリア由来成長因子、トランスフォーミング増殖因子α及びβ、サイトカイン、α−インターフェロン、β−インターフェロン、インターフェロン−γ、インターロイキン−２、インターロイキン−４、インターロイキン１２、顆粒球−マクロファージコロニー刺激因子、リンホトキシン、自殺遺伝子産物、単純ヘルペスウイルスチミジンキナーゼ、シトシンデアミナーゼ、ジフテリア毒素、シトクロムＰ４５０、デオキシシチジンキナーゼ、腫瘍壊死因子、薬物耐性タンパク質、腫瘍抑制タンパク質（例えば、ｐ５３、Ｒｂ、Ｗｔ−１、ＮＦ１、フォンヒッペル−リンドウ（ＶＨＬ）、腺腫様大腸ポリポーシス（ＡＰＣ））、免疫調節特性を有するペプチド、寛容原性若しくは免疫原性ペプチド若しくはタンパク質Ｔレギトープ若しくはｈＣＤＲ１、インスリン、グルコキナーゼ、グアニル酸シクラーゼ２Ｄ（ＬＣＡ−ＧＵＣＹ２Ｄ）、Ｒａｂエスコートタンパク質１（コロイデレミア）、ＬＣＡ５（ＬＣＡ−レベルシリン）、オルニチンケト酸アミノトランスフェラーゼ（脳回転状萎縮）、レチノスキシン１（Ｘ連鎖性網膜分離）、ＵＳＨ１Ｃ（アッシャー症候群１Ｃ）、Ｘ連鎖性網膜色素変性症ＧＴＰａｓｅ（ＸＬＲＰ）、ＭＥＲＴＫ（ＲＰのＡＲ形態：網膜色素変性症）、ＤＦＮＢ１（コネキシン２６難聴）、ＡＣＨＭ２、３及び４（色覚異常）、ＰＫＤ−１若しくはＰＫＤ−２（多発性嚢胞腎疾患）、ＴＰＰ１、ＣＬＮ２、リソソーム蓄積症に関与する遺伝子産物（例えば、スルファターゼ、Ｎ−アセチルグルコサミン−１−リン酸トランスフェラーゼ、カテプシンＡ、ＧＭ２−ＡＰ、ＮＰＣ１、ＶＰＣ２、スフィンゴ脂質活性化タンパク質、ゲノム編集用の１つ若しくは複数のジンクフィンガーヌクレアーゼ、又はゲノム編集用の修復鋳型として使用されるドナー配列をコードする、請求項１又は３〜５８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６２】
前記異種ポリヌクレオチドが阻害核酸をコードする、請求項２〜５８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６３】
前記阻害核酸が、ｓｉＲＮＡ、アンチセンス分子、ｍｉＲＮＡ、ＲＮＡｉ、リボザイム及びｓｈＲＮＡからなる群から選択される、請求項２〜５８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６４】
前記阻害核酸が、病原性遺伝子、病原性遺伝子の転写物、若しくはポリヌクレオチドリピート疾患に関連する遺伝子転写物、ハンチンチン（ＨＴＴ）遺伝子、歯状核赤核淡蒼球ルイ体萎縮症（ｄｅｎｔａｔｏｒｕｂｒｏｐａｌｌｉｄｏｌｕｓｙａｎ  ａｔｒｏｐｙ）に関連する遺伝子（アトロフィン１、ＡＴＮ１）、球脊髄性筋萎縮症におけるＸ染色体上のアンドロゲン受容体、ヒトアタキシン−１、−２、−３、及び−７、（ＣＡＣＮＡ１Ａ）によりコードされるＣａｖ２．１  Ｐ／Ｑ電位依存性カルシウムチャネル、ＴＡＴＡ結合タンパク質、ＡＴＸＮ８ＯＳとしても公知のアタキシン８逆鎖、脊髄小脳失調症におけるセリン／スレオニンプロテインホスファターゼ２Ａ  ５５ｋＤａ調節サブユニットＢベータアイソフォーム（１、２、３、６、７、８、１２  １７型）、脆弱Ｘ症候群におけるＦＭＲ１（脆弱Ｘ精神遅滞１）、脆弱Ｘ関連振戦／運動失調症候群におけるＦＭＲ１（脆弱Ｘ精神遅滞１）、ＦＭＲ１（脆弱Ｘ精神遅滞２）若しくは脆弱ＸＥ精神遅滞におけるＡＦ４／ＦＭＲ２ファミリーメンバー２；筋強直性ジストロフィーにおけるミオトニン−プロテインキナーゼ（ＭＴ−ＰＫ）；フリードライヒ運動失調症におけるフラタキシン；筋萎縮性側索硬化症におけるスーパーオキシドディスムターゼ１（ＳＯＤ１）遺伝子の突然変異体；パーキンソン病及び／若しくはアルツハイマー病の病理発生に関与する遺伝子；アポリポタンパク質Ｂ（ＡＰＯＢ）及びプロタンパク質転換酵素スブチリシン／ケキシン９型（ＰＣＳＫ９）、高コレステロール血症（ｈｙｐｅｒｃｏｌｏｅｓｔｅｒｏｌｅｍｉａ）；ＨＩＶ感染症におけるＨＩＶ  Ｔａｔ、転写遺伝子のヒト免疫不全ウイルストランス活性化因子；ＨＩＶ感染症におけるＨＩＶ  ＴＡＲ、ＨＩＶ  ＴＡＲ、ヒト免疫不全ウイルストランス活性化因子応答エレメント遺伝子；ＨＩＶ感染症におけるＣ−Ｃケモカイン受容体（ＣＣＲ５）；ＲＳＶ感染症におけるラウス肉腫ウイルス（ＲＳＶ）ヌクレオキャプシドタンパク質、Ｃ型肝炎ウイルス感染症における肝臓特異的マイクロＲＮＡ（ｍｉＲ−１２２）；ｐ５３、急性腎障害若しくは遅延グラフト機能腎臓移植片若しくは腎障害急性腎不全；進行性再発性若しくは転移性固形悪性腫瘍におけるプロテインキナーゼＮ３（ＰＫＮ３）；ＬＭＰ２、プロテアソームサブユニットベータ−９型（ＰＳＭＢ９）としても公知のＬＭＰ２、転移性黒色腫；プロテアソームサブユニットベータ−８型（ＰＳＭＢ８）としても公知のＬＭＰ７、転移性黒色腫；プロテアソームサブユニットベータ−１０型（ＰＳＭＢ１０）としても公知のＭＥＣＬ１、転移性黒色腫；固形腫瘍における血管内皮増殖因子（ＶＥＧＦ）；固形腫瘍におけるキネシンスピンドルタンパク質、慢性骨髄性白血病におけるアポトーシス抑制Ｂ細胞ＣＬＬ／リンパ腫（ＢＣＬ−２）；固形腫瘍におけるリボヌクレオチドレダクターゼＭ２（ＲＲＭ２）；固形腫瘍におけるフューリン；肝臓腫瘍におけるポロ様キナーゼ１（ＰＬＫ１）、Ｃ型肝炎感染症におけるジアシルグリセロールアシルトランスフェラーゼ１（ＤＧＡＴ１）、家族性腺腫性ポリポーシスにおけるベータカテニン；ベータ２アドレナリン作動性受容体、緑内障；糖尿病性黄斑浮腫（ｏｅｄｍａ）（ＤＭ���）若しくは加齢黄斑変性症における、ＤＡＮ損傷誘導性転写物４タンパク質としても公知のＲＴＰ８０１／Ｒｅｄｄ１；加齢黄斑変性症若しくは脈絡膜新生血管（ｃｈｏｒｏｉｄａｌ  ｎｅｉｖａｓｃｕｌａｒｉｚａｔｉｏｎ）における血管内皮増殖因子受容体Ｉ（ＶＥＧＦＲ１）、非動脈炎性虚血性視神経症におけるカスパーゼ２；先天性爪肥厚症におけるケラチン６Ａ  Ｎ１７Ｋ突然変異体タンパク質；インフルエンザ感染症におけるインフルエンザＡウイルスゲノム／遺伝子配列；重症急性呼吸器症候群（ＳＡＲＳ）感染症におけるＳＡＲＳコロナウイルスゲノム／遺伝子配列；呼吸器合胞体ウイルス感染症における呼吸器合胞体ウイルスゲノム／遺伝子配列；エボラ感染症におけるエボラフィロウイルスゲノム／遺伝子配列；Ｂ型及びＣ型肝炎感染症におけるＢ型及びＣ型肝炎ウイルスゲノム／遺伝子配列；単純ヘルペスウイルス（ＨＳＶ）感染症におけるＨＳＶゲノム／遺伝子配列、コクサッキーウイルスＢ３感染症におけるコクサッキーウイルスＢ３ゲノム／遺伝子配列；原発性ジストニアにおけるトルシンＡ（ＴＯＲ１Ａ）のような遺伝子の病原性アレルのサイレンシング（アレル特異的サイレンシング）、移植における汎クラスＩ及びＨＬＡアレル特異的；又は常染色体優性遺伝網膜色素変性症（ａｄＲＰ）における突然変異体ロドプシン遺伝子（ＲＨＯ）に結合する、請求項６３に記載の方法。
【請求項６５】
前記異種ポリヌクレオチドが遺伝子編集ヌクレアーゼをコードする、請求項１〜６４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６６】
前記遺伝子編集ヌクレアーゼがジンクフィンガーヌクレアーゼ（ＺＦＮ）又は転写活性化因子様エフェクターヌクレアーゼ（ＴＡＬＥＮ）を含む、請求項６５に記載の方法。
【請求項６７】
前記異種ポリヌクレオチドが、機能的なＩＩ型ＣＲＩＳＰＲ−Ｃａｓ９；及び／又はガイドＲＮＡ配列；及び／又は標的遺伝子の修正若しくは置換のためのドナー核酸配列をコードする、請求項１〜６４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６８】
ステップ（ａ）及び／又はステップ（ｂ）が２回又はそれより多くの回数行われる、請求項１〜６７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６９】
前記対象がヒトである、請求項１〜６８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項７０】
ＡＡＶ結合抗体親和性マトリックスと接触したときに血液製剤からＡＡＶ結合抗体を体外又は体内で除去又は枯渇させるための入口及び出口を有する、カラム、装置、チャンバー、デバイス、フィルター、カートリッジ、チューブ内に配された基材に固定された、前記ＡＡＶ結合抗体親和性マトリックス。
【請求項７１】
天然に存在する又は非天然の又は合成のインタクトなＡＡＶ空キャプシドを含む、請求項７０に記載のＡＡＶ結合抗体親和性マトリックス。
【請求項７２】
ＡＡＶ  ＶＰ１、ＶＰ２及び／若しくはＶＰ３キャプシドタンパク質又はその断片を含む、請求項７０に記載のＡＡＶ結合抗体親和性マトリックス。
【請求項７３】
前記ＡＡＶ結合抗体親和性マトリックスが、天然に存在する又は非天然の又は合成のＡＡＶ  ＶＰ１、ＶＰ２及び／又はＶＰ３キャプシドタンパク質を含む、請求項７０に記載のＡＡＶ結合抗体親和性マトリックス。
【請求項７４】
前記ＡＡＶ結合抗体親和性マトリックスが、天然に存在する又は非天然の又は合成のＡＡＶ  ＶＰ１、ＶＰ２及び／又はＶＰ３キャプシドタンパク質モノマーを含む、請求項７０に記載のＡＡＶ結合抗体親和性マトリックス。
【請求項７５】
前記ＡＡＶ結合抗体親和性マトリックスが、天然に存在する又は非天然の又は合成のＡＡＶ  ＶＰ１、ＶＰ２及び／又はＶＰ３キャプシドタンパク質ポリマーを含む、請求項７０に記載のＡＡＶ結合抗体親和性マトリックス。
【請求項７６】
前記ＡＡＶ結合抗体親和性マトリックスが、天然に存在する又は非天然の又は合成のＡＡＶキャプシドタンパク質に対して６０％又はそれより高い配列同一性を有するＡＡＶ  ＶＰ１、ＶＰ２及び／又はＶＰ３キャプシドタンパク質を含む、請求項７０に記載のＡＡＶ結合抗体親和性マトリックス。
【請求項７７】
前記ＡＡＶ結合抗体親和性マトリックスが、ＡＡＶ１、ＡＡＶ２、ＡＡＶ３、ＡＡＶ４、ＡＡＶ５、ＡＡＶ６、ＡＡＶ７、ＡＡＶ８、ＡＡＶ９、ＡＡＶ１０、Ｒｈ１０、Ｒｈ７４、配列番号１及び配列番号２のＶＰ１、ＶＰ２及び／又はＶＰ３キャプシドタンパク質からなる群から選択されるＡＡＶ  ＶＰ１、ＶＰ２及び／又はＶＰ３キャプシドタンパク質に対して６０％又はそれより高い配列同一性を有するＡＡＶ  ＶＰ１、ＶＰ２及び／又はＶＰ３キャプシドタンパク質を含む、請求項７０に記載のＡＡＶ結合抗体親和性マトリックス。
【請求項７８】
前記ＡＡＶ結合抗体親和性マトリックスが、配列番号１又は配列番号２に対して６０％又はそれより高い配列同一性を有するＡＡＶ  ＶＰ１、ＶＰ２及び／又はＶＰ３キャプシドタンパク質を含む、請求項７０に記載のＡＡＶ結合抗体親和性マトリックス。
【請求項７９】
前記ＡＡＶ結合抗体親和性マトリックスが、前記血液製剤中の前記ＡＡＶ結合抗体に結合する抗イディオタイプ抗体を含む、請求項７０に記載のＡＡＶ結合抗体親和性マトリックス。
【請求項８０】
ＡＡＶ結合抗体に結合する前記抗イディオタイプ抗体が、ＡＡＶ１、ＡＡＶ２、ＡＡＶ３、ＡＡＶ４、ＡＡＶ５、ＡＡＶ６、ＡＡＶ７、ＡＡＶ８、ＡＡＶ９、ＡＡＶ１０、Ｒｈ１０、Ｒｈ７４、配列番号１及び／若しくは配列番号２の（１つ若しくは複数の）キャプシドタンパク質、又はＡＡＶ１、ＡＡＶ２、ＡＡＶ３、ＡＡＶ４、ＡＡＶ５、ＡＡＶ６、ＡＡＶ７、ＡＡＶ８、ＡＡＶ９、ＡＡＶ１０、Ｒｈ１０、Ｒｈ７４、配列番号１及び／若しくは配列番号２の（１つ若しくは複数の）キャプシドタンパク質の誘導体若しくはアミノ酸置換体に結合する、請求項７９に記載のＡＡＶ結合抗体親和性マトリックス。
【請求項８１】
ＡＡＶ結合抗体に結合する前記抗イディオタイプ抗体が抗体断片である、請求項７９に記載のＡＡＶ結合抗体親和性マトリックス。
【請求項８２】
ＡＡＶ結合抗体に結合する前記抗イディオタイプ抗体が、ＩｇＧ、ＩｇＡ、ＩｇＭ、ＩｇＥ又はＩｇＤである、請求項７９に記載のＡＡＶ結合抗体親和性マトリックス。
【請求項８３】
前記ＡＡＶ結合抗体親和性マトリックスがＧＭＰグレードである、請求項７０〜８２のいずれか一項に記載のＡＡＶ結合抗体親和性マトリックス。
【請求項８４】
対象から得られた血液製剤への前記ＡＡＶ結合抗体親和性マトリックスの浸出が、前記血液製剤が前記対象に再導入される場合に、前記対象を実質的に害しない、請求項７０〜８２のいずれか一項に記載のＡＡＶ結合抗体親和性マトリックス。
【請求項８５】
前記ＡＡＶ結合抗体が、ＡＡＶキャプシドタンパク質に結合するＩｇＧ、ＩｇＭ、ＩｇＡ又はＩｇＤを含む、請求項７０〜８２のいずれか一項に記載のＡＡＶ結合抗体親和性マトリックス。
【請求項８６】
前記基材及び／又はカラム、装置、チャンバー、デバイス、フィルター、カートリッジ、若しくはチューブが、プラスチック又はガラスから構成されている、請求項７０〜８２のいずれか一項に記載のＡＡＶ結合抗体親和性マトリックス。
【請求項８７】
前記ＡＡＶ結合抗体親和性マトリックス、基材及び／又はカラム、装置、チャンバー、デバイス、フィルター、カートリッジ、チューブが無菌である、請求項７０〜８２のいずれか一項に記載のＡＡＶ結合抗体親和性マトリックス。
【発明の詳細な説明】
【背景技術】
【０００１】
序論
[0002]組換えアデノ随伴ウイルス（ｒＡＡＶ）を使用する遺伝子療法（遺伝子移入）は、満たされていない医学上の必要性に対処する有望な可能性を示している。例えば、凝固第ＶＩＩＩ因子及び第ＩＸ因子を発現するＡＡＶを使用する遺伝子療法は、ヒト臨床試験において有望な安全性及び有効性を示している（参考文献）。
【０００２】
[0003]ＡＡＶ感染はヒト集団において一般的であり、疾患を引き起こすことは知られていない。ＡＡＶベースの遺伝子療法から利益を受けることができるヒト対象の大部分は、以前にＡＡＶにより感染された者である。感染は人生の後期に起こることがあるが、最も頻繁には小児期に起こる。あらゆるウイルス感染と同様に、ＡＡＶ感染への宿主免疫応答は、ＡＡＶへの抗体（ＡＡＶ抗体）の形成を結果としてもたらす。ＡＡＶへの曝露後、迅速なＡＡＶ抗体形成（週）、高力価抗体ピークの達成、及びその後のＡＡＶ抗体レベルの徐々の低下（年）という時系列が周知である（参考文献）。ＡＡＶ感染後のＡＡＶ抗体の典型的なピーク力価は＞１：１００であり、１：１０００を容易に超えることがある（Ｃａｌｃｅｄｏ  ｅｔ  ａｌ，  ２００９）。
【０００３】
[0004]現在までの有望な血友病臨床試験において（Ｇｅｏｒｇｅ  ｅｔ  ａｌ  ２０１６，  Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｓｏｃｉｅｔｙ  ｆｏｒ  Ｈｅｍａｔｏｌｏｇｙ，  Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ  ＣＡ，  Ｐｌｅｎａｒｙ  Ｌｅｃｔｕｒｅ；  Ｇｅｏｒｇｅ  ｅｔ  ａｌ  ２０１７，  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  Ｓｏｃｉｅｔｙ  ｆｏｒ  Ｔｈｒｏｍｂｏｓｉｓ  ａｎｄ  Ｈｅｍｏｓｔａｓｉｓ，  Ｂｅｒｌｉｎ，  Ｇｅｒｍａｎｙ）、既存の抗体を有しない（力価＜１：１）ヒト対象への治療的な導入遺伝子（ＦＶＩＩＩ又はＦＩＸ）を発現するＡＡＶベクターの全身性（例えば、静脈内）投与後に最良の結果が観察されている。既存の抗体が非常に低い力価（１：１〜１：２）である場合にも良好な結果が得られることがあり、低い力価の既存の抗体（１：３〜１：５）の場合に中等度の結果が得られることがある。これらのレベルを超える既存の抗体のレベルは、ほぼ下限から不十分な程度の遺伝子形質導入に相当する。既存の抗体力価の関数としての遺伝子移入効率のこの低下の機序は、既存のＡＡＶ抗体によるＡＡＶ遺伝子療法ベクターの結合及びその中和である。抗ＡＡＶ抗体が結合した場合、ベクターは、治療遺伝子移入の標的である肝細胞などの肝臓の細胞及び内皮細胞のような標的組織及び細胞に達してそれに導入されることができない。特定のＡＡＶ血清型に応じて、５０％まで及び５０％を超える血友病を有する対象は、既存のＡＡＶ抗体を理由にして、ＡＡＶベースの遺伝子療法処置から利益を受けるのに適格でないことがある（Ｃａｌｃｅｄｏ  ｅｔ  ａｌ  ２００９）。
【発明の概要】
【０００４】
[0005]ＡＡＶ遺伝子療法から利益を受けることができるヒト対象のような見込みのある哺乳動物においてＡＡＶ抗体を除去し、枯渇させ、捕捉し、及び／又は不活化させる方法及び使用が本明細書に開示される。ある特定の態様では、ＡＡＶ抗体は、標的細胞の治療遺伝子移入ベクター形質導入を低減又は遮断するレベルで存在する。ある特定の態様では、ＡＡＶ抗体は、予め存在しており、標的細胞の治療遺伝子移入ベクター形質導入を低減又は遮断するレベルで存在することができる。ある特定の態様では、ＡＡＶ抗体は、ＡＡＶへの曝露又は遺伝子療法用のＡＡＶベクターの投与後に発生することができる。そのような抗体が遺伝子療法用のＡＡＶベクターの投与後に発生する場合、これらの対象もまた、本発明にしたがって治療することができる。
【０００５】
[0006]方法は、一般的にアフェレーシス、より特には、血液製剤が関与するプラズマフェレーシスと称される医療用デバイス／手順に基づく。ある特定の実施形態では、アフェレーシスは、特に、既存のＡＡＶ抗体を有するか、又は遺伝子療法後にＡＡＶ抗体を発生する対象において、ＡＡＶ遺伝子療法の利益を与えるために使用される。
【０００６】
[0007]一般的に、アフェレーシス又はプラズマフェレーシスは、ヒト対象の血漿を、患者に戻す前に成分の追加、除去及び／又は交換を通じて血漿を改変するデバイスを通じてｅｘ  ｖｉｖｏ（体外）で循環させる方法である。プラズマフェレーシスは、血液製剤（例えば、血漿）からヒト免疫グロブリン（例えば、ＩｇＧ、ＩｇＥ、ＩｇＡ、ＩｇＤ）を除去するために使用することができる。この手順は、ＡＡＶに結合する免疫グロブリン（抗体）を枯渇させ、捕捉し、不活性化させ、低減させ又は除去し、それにより、治療される対象においてＡＡＶ抗体の力価を低減させ、それにより、ＡＡＶの中和に寄与し得るＡＡＶ抗体を低減させる。本発明の実施に有用なデバイスは、ＡＡＶキャプシド親和性マトリックスカラムの形態であり得る。ヒト対象の血液製剤（例えば、血漿）をＡＡＶキャプシド親和性マトリックスに通すことは、ＡＡＶ抗体、及び全てのアイソタイプ（ＩｇＧ、ＩｇＭなどを含む）のみの結合を結果としてもたらす。
【０００７】
[0008]ＡＡＶキャプシド親和性マトリックスを使用する十分量のプラズマフェレーシスは、ＡＡＶキャプシド抗体を実質的に除去し、そのようにして治療されるヒトにおいてＡＡＶキャプシド抗体力価（負荷）を低減させることが予測される。ある特定の実施形態では、治療される対象における力価は、実質的に低いレベル（＜１：５、又はそれ未満、例えば、＜１：４、又は＜１：３、又は＜１：２、又は＜１：１）まで低減される。抗体力価の低減は一時的なものであり、その理由は、ＡＡＶキャプシド抗体を産生するＢリンパ球は、ＡＡＶキャプシド抗体力価がプラズマフェレーシス手順の介入前の定常状態レベルにリバウンドすることを徐々に引き起こすと予想されるからである。このリバウンドの速度論は、ＩｇＧの半減期（２０時間）及び定常状態（プラズマフェレーシスの方法の前の定常状態ＡＡＶキャプシド力価に対応する）の系について合成速度が減衰速度に等しいことに基づく。
【０００８】
[0009]既存のキャプシド抗体力価が１：１００から１：１へと低減した場合、約０．１５％（１：１．２の力価に対応する）０．４３％（１：１．４）、０．９％（１：１．９）、１．７％（１：２．７）、及び３．４％（１：４．４）のＡＡＶ抗体力価のリバウンドは、プラズマフェレーシスの方法の完了のそれぞれ１時間、３時間、６時間、１２時間及び２４時間後に起こる。そのような対象からのＡＡＶ抗体（例えば、ＡＡＶキャプシドに結合するＡＡＶ抗体）の一時的な除去は、ある時間枠（例えば、約２４時間又はそれ未満、例えば、１２時間若しくはそれ未満、又は６時間若しくはそれ未満、又は３時間若しくはそれ未満、又は２時間若しくはそれ未満、又は１時間若しくはそれ未満）に対応し、この時間枠の間に、治療用ＡＡＶベクターは、対象に投与され、ＡＡＶ抗体でのＡＡＶベクターの大幅な中和なしに標的組織に効率的に形質導入されると予測することができる。
【０００９】
[0010]既存のキャプシド抗体力価が１：１０００から１：１へと低減した場合、約０．１５％（１：２．５の力価に対応する）０．４％（１：５．３）、０．９％（１：９．７）、１．７％（１：１８）、及び３．４％（１：３５）のＡＡＶ抗体力価のリバウンドは、プラズマフェレーシスの方法の完了のそれぞれ１時間、３時間、６時間、１２時間及び２４時間後に起こる。したがって、ＡＡＶベクターの投与のための枠は比較的短い。
【００１０】
[0011]ＡＡＶキャプシド親和性マトリックスの種類のようなパラメーターは、対象における（１つ又は複数の）ＡＡＶ抗体血清型にしたがって変更することができる。したがって、ＡＡＶキャプシド親和性マトリックスは、対象における（１つ又は複数の）ＡＡＶ抗体血清型にしたがって調整（増加又は減少）することができる。例えば、抗体が、ＡＡＶ１、ＡＡＶ２、ＡＡＶ３、ＡＡＶ４、ＡＡＶ５、ＡＡＶ６、ＡＡＶ７、ＡＡＶ８、ＡＡＶ９、ＡＡＶ１０、Ｒｈ１０、Ｒｈ７４、配列番号１及び配列番号２の（１つ又は複数の）キャプシドタンパク質のような１つのさらなる血清型に結合する場合、１つ又は複数のＡＡＶ１、ＡＡＶ２、ＡＡＶ３、ＡＡＶ４、ＡＡＶ５、ＡＡＶ６、ＡＡＶ７、ＡＡＶ８、ＡＡＶ９、ＡＡＶ１０、Ｒｈ１０、Ｒｈ７４、配列番号１及び配列番号２の（１つ又は複数の）キャプシドタンパク質に特異的な抗体を親和性マトリックスとして使用することができる。
【００１１】
[0012]ＡＡＶキャプシド親和性マトリックスの量のようなパラメーターは、対象におけるＡＡＶ抗体力価にしたがって変更することができる。例えば、ＡＡＶキャプシド親和性マトリックスの量は、対象におけるＡＡＶ抗体の量にしたがって調整（増加又は減少）することができる。高いＡＡＶ抗体力価について、ＡＡＶキャプシド親和性マトリックスの量を増加させることができる。より低いＡＡＶ抗体力価について、ＡＡＶキャプシド親和性マトリックスの量を比較的より少なくすることができる。
【００１２】
[0013]ＡＡＶキャプシド親和性マトリックスの量のようなパラメーターもまた、対象からの処理される血液製剤の体積にしたがって変更することができる。例えば、ＡＡＶキャプシド親和性マトリックスの量は、マトリックスが接触する血液製剤の体積にしたがって調整（増加又は減少）することができる。
【００１３】
[0014]加えて、ＡＡＶ抗体の枯渇、捕捉、不活性化又は除去後の時間枠は、どれほど迅速にＡＡＶ抗体がリバウンドするかに応じて変更することができる。例えば、ある特定の対象においてＡＡＶ抗体のリバウンドは、より速い又はより遅いことがある。ＡＡＶ抗体のリバウンドがより速い場合、治療用ＡＡＶベクターを対象に投与できる時間枠は、比較的より短くなる。ＡＡＶ抗体のリバウンドがより遅い場合、治療用ＡＡＶベクターを対象に投与できる時間枠は、比較的より長くなる。
【発明を実施するための形態】
【００１４】
[0015]ＡＡＶベクターは、分裂細胞及び非分裂細胞のための指向性を含むそのような応用のために多数の望ましい特徴を持つ。これらのベクターを用いた初期の臨床経験は、治療されたヒトにおける長期の発現を実証した。加えて、初期の臨床試験は、持続的な毒性がないこと及び免疫応答が最小又は検出不可能であったことを実証した。ＡＡＶは、受容体媒介性のエンドサイトーシス又はトランスサイトーシスによりｉｎ  ｖｉｖｏ及びｉｎ  ｖｉｔｒｏで多様な細胞種に感染することが公知である。これらのベクター系は、網膜上皮、肝臓、骨格筋、気道、脳、関節及び造血幹細胞のような多くの組織を標的化してヒトにおいて試験されてきた。
【００１５】
[0016]本発明は、ＡＡＶ結合抗体を除去し、枯渇させ、捕捉し、及び／又は不活性化させるための組成物及び方法を提供する。そのような抗体は、哺乳動物、例えばヒトのような対象中に予め存在することができる。或いは、そのようなＡＡＶ結合抗体は、ＡＡＶへの曝露又はＡＡＶベクターを用いた対象の処置／投与に起因して哺乳動物、例えばヒトのような対象中で発生することができる。本発明の組成物及び方法は、ＡＡＶ結合抗体親和性マトリックスを用いる。
【００１６】
[0017]一部の実施形態では、ＡＡＶ結合抗体は、アフェレーシスを含む方法により対象から得られた血液製剤から除去され、枯渇され、捕捉され及び／又は不活性化される。アフェレーシスの非限定的な例としては、アフェレーシス、プラズマフェレーシス、サイタフェレーシス又はこれらの組合せが挙げられる。アフェレーシスは、対象の血液又は血液製剤中に存在する成分の体外（ｅｘ  ｖｉｖｏ）でのマニピュレーション、除去、枯渇、及び／又は不活性化の方法を指す。一部の実施形態では、アフェレーシス後に血液又は血液製剤は対象に戻される。
【００１７】
[0018]典型的なアフェレーシスの方法では、血液は対象の静脈又は動脈から直接的に得られる。一部の実施形態では、血液は２つ又はそれより多くの血液製剤に分離され、成分（例えば、細胞又はタンパク質）は血液製剤の１つから除去され、血液製剤は任意選択で合わせられる。血液は、任意選択で患者の動脈又は静脈に直接的に戻される。
【００１８】
[0019]より詳細には、例えば、アフェレーシスの方法において、末梢血が好適なアフェレーシスカラム又は機械により対象から除去され、抗凝固剤が任意選択で血液に添加され、血液は細胞画分（例えば、赤血球細胞、白血球細胞、及び血小板を含む）及び液体画分（例えば、血漿）に分離される。液体画分は次にアフェレーシスに供され、アフェレーシスにおいて液体画分中の成分（ＡＡＶ結合抗体）は除去され、枯渇され、捕捉され及び／又は不活性化される。次に、処理された血漿は、以前に分離された固体血液成分と合わせられて、対象に再注入することができる。全血から血漿を分離するための好適な方法及び装置は、例えば、米国特許第４，６１９，６３９号に記載されるように当業者に公知であり、アフェレーシスに起因する任意の体積損失を等張生理食塩水溶液のような好適な溶液により後に置換することができる。
【００１９】
[0020]ある特定の実施形態では、アフェレーシスの方法は、少なくとも２０％〜５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、又は１００％のＡＡＶ結合抗体を対象から得られた血液製剤から除去し、枯渇させ、捕捉し及び／又は及び不活性化させる。ある特定の実施形態では、方法は、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、又は１００％のＡＡＶ結合抗体を対象から得られた血液製剤から除去し、枯渇させ、捕捉し及び／又は及び不活性化させる。血液製剤の非限定的な例としては、全血、血清、血漿など、及びこれらの組合せが挙げられる。血液製剤は細胞を欠いていてもよく、又は細胞（例えば、赤血球細胞、血小板及び／又はリンパ球）を含んでいてもよい。
【００２０】
[0021]組成物の製造のため又は任意の好適な方法を使用するアフェレーシスの方法において使用するために任意のＡＡＶ結合抗体親和性マトリックスを基材に取り付ける又は固定することができる。例えば、一実施形態では、本明細書に開示されるようなアフェレーシスカラム又はアフェレーシスの方法のためにＡＡＶ結合抗体に結合する抗体を基材に取り付ける又は固定することができる。別の実施形態では、本明細書に開示されるようなアフェレーシスカラム又はアフェレーシスの方法のためにＡＡＶキャプシドタンパク質又はＡＡＶキャプシド断片を基材に取り付ける又は動員することができる。そのようなＡＡＶキャプシドタンパク質及び断片としては、組成物の製造のため又はアフェレーシスの方法における使用のために好適な任意のＡＡＶ血清型のＶＰ１、ＶＰ２及び／又はＶＰ３が挙げられる。
【００２１】
[0022]ＡＡＶ抗体に結合する親和性マトリックスは、任意の好適な方法及び任意の好適な基材を使用して基材に固定することができる。一部の実施形態では、親和性カラムの基材に固定される親和性マトリックスは、アフェレーシスへの応用のために好適である。一部の実施形態では、アフェレーシス（ａｐｈｅｒｅｒｓｉｓ）のプロセスは、米国特許第９，７２６，６６６号及び同第８，８７７，１７７号に開示されるようなアフェレーシスの方法、デバイス又はカラムを含む。
【００２２】
[0023]ＡＡＶ抗体に結合する親和性マトリックスが固定される基材は、典型的に固体基材である。「固体基材」は、例えば、剛性又は半剛性の１つ又は複数の表面を有する材料であって、表面が、規則的又は不規則な幾何学的構成であってもよく、ビーズ、樹脂、ゲル、スフェア、マイクロスフェア、粒子、繊維又は他の幾何学的構成若しくは物理的形態の形態をとることができる材料を指す。固体基材は典型的に、医学的、生化学的又は生物学的アッセイにおいて適用可能な材料、例えば、アフェレーシス、生物学的分子又は有機分子の精製又は分離のためのカラムクロマトグラフィー及びＥＬＩＳＡアッセイにおいて使用される基材を含む。固体基材は、多孔性又は非多孔性であってもよい。
【００２３】
[0024]本発明のＡＡＶ抗体に結合する親和性マトリックスを固定するための固体基材は当該技術分野において公知である。固体基材の非限定的な例としては、例えば、多糖のようなポリマーが挙げられる。多糖の非限定的な例は、高分子量多糖、特に、アガロースのような１００ｋＤａ又はそれより高い分子量を有する多糖である。アガロースは粒子状形態であってもよく、粒子状形態は任意選択で架橋されていてもよい。アガロースの特定の非限定的な例はセファロース（Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ）（商標）である。多糖のさらに別の非限定的な例はセルロースであり、セルロースは任意選択で架橋されていてもよい。
【００２４】
[0025]基材として適切な他のポリマーとしては、例えば、カルボキシル化ポリスチレンが挙げられる。固体基材は、磁気ビーズの形態で提供されてもよい。ガラスもまた適切な基材材料である。
【００２５】
[0026]任意の好適な血液若しくは血漿濾過カラム又はシステムを本明細書に開示されるアフェレーシスカラム又はアフェレーシスの方法のために構成することができる。非限定的な例としては、米国特許第４，６１９，６３９号に記載されているカラム、好適な粒子、表面、又は基材と共に使用される膜濾過システム（例えば、ＭＤＦ）、並びに日本国Ａｓａｈｉ  Ｍｅｄｉｃａｌ  Ｃｏｍｐａｎｙ，  Ｌｔｄ．により製造されるＰｌａｓｍａＦｌｏ（登録商標）ＯＰ−０５（Ｗ）Ｌ及びＲｈｅｏＦｉｌｔｅｒ（登録商標）ＡＲ２０００血液フィルターが挙げられる。
【００２６】
[0027]対象の血液からのＡＡＶ結合抗体の除去、枯渇、捕捉及び／又は不活性化のためのアフェレーシスカラム又は本発明の方法は、所望の結果を達成するために、必要に応じて１回又は繰り返して実行されてもよい。一部の実施形態では、アフェレーシスの方法は、有益な治療効果を得るための努力において、連日、２日毎、３日毎、４日毎、週に１回、２週毎、月に２回、月に１回、２カ月毎、又はこれらの組合せで行われる。
【００２７】
[0028]ある特定の実施形態では、本明細書に記載されるＡＡＶ遺伝子療法ベクターは、ＡＡＶ結合抗体が対象の血液製剤から除去され、枯渇され、捕捉され及び／又は不活性化された後に投与される。ＡＡＶ遺伝子療法ベクターは、アフェレーシスの方法の直後に対象に投与されてもよい。一部の実施形態では、ＡＡＶ遺伝子療法ベクターは、ＡＡＶ結合抗体が対象の血液製剤から除去され、枯渇され、捕捉され及び／又は不活性化されてから少なくとも１分以内、少なくとも１０分以内、少なくとも２０分以内、少なくとも６０分以内、少なくとも１時間以内、少なくとも４時間以内、少なくとも８分以内、少なくとも１２分以内、又は少なくとも２４時間以内に投与される。一部の実施形態では、ＡＡＶ遺伝子療法ベクターは、ＡＡＶ結合抗体が対象の血液製剤から除去され、枯渇され、捕捉され及び／又は不活性化されてから１分〜２４時間以内、１分〜８時間以内、又は１分〜４時間以内に投与される。
【００２８】
[0029]ある特定の実施形態では、ＡＡＶ結合抗体親和性マトリックスは、ＡＡＶ結合抗体親和性マトリックスを基材に連結させる共有結合を含む。一部の実施形態では、好適な共有結合はペプチド結合を含む。
【００２９】
[0030]ある特定の実施形態では、ＡＡＶ結合抗体親和性マトリックスは、ＡＡＶ結合抗体親和性マトリックスを基材に連結させるリンカーを含む。リンカーは、ＡＡＶ結合抗体親和性マトリックスを基材に共有結合により取り付けるための機構を提供することができる。任意の好適なリンカーを本明細書に開示される組成物又は方法において使用することができる。ＡＡＶ結合抗体親和性マトリックスを基材に連結させるために任意の好適な共有結合又はリンカーを使用することができる。
【００３０】
[0031]一部の実施形態では、リンカーは、ペプチドリンカーのような１つ又は複数のアミノ酸を含む。ペプチドリンカーは、任意の好適な数のアミノ酸を含んでもよい。一部の実施形態では、ペプチドリンカーは、少なくとも１、少なくとも２、少なくとも３、少なくとも４、少なくとも５又は少なくとも１０のアミノ酸を含む。ある特定の実施形態では、ペプチドリンカーは、１〜５０、１〜２０、１〜１０、又は１〜５のアミノ酸を含む。一部の実施形態では、ペプチドリンカーは、１、２、３、４、５、６、７、８、９又は１０のアミノ酸を含む。アミノ酸及びペプチドリンカーの非限定的な例としては、１つ若しくは複数のグリシン残基、１つ若しくは複数のセリン残基、又はこれらの組合せが挙げられる。追加の好適なリンカーとしては、１つ又は複数の炭素、シラン、チオール、ホスホン酸、及びポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、これらの組合せが挙げられる。
【００３１】
[0032]共有結合をＡＡＶ結合抗体親和性マトリックスのＮ末端又はＣ末端に取り付けることができる。リンカーをＡＡＶ結合抗体親和性マトリックスのＮ末端又はＣ末端に取り付けることができる。
【００３２】
[0033]共有結合又はリンカーを使用して２つ又はそれより多くの分子を取り付ける方法は当該技術分野において周知であり、「架橋」と称されることがある。架橋の非限定的な例としては、Ｎ−ヒドロキシスクシンイミド（ＮＨＳ）エステル、イミドエステル、ペンタフルオロフェニル（ＰＦＰ）エステル、ヒドロキシメチルホスフィン、オキシラン又は任意の他のカルボニル化合物と反応するアミン；カルボジイミドと反応するカルボキシル；マレイミド、ハロアセチル、ピリジルジスルフィド、及び／又はビニルスルホンと反応するスルフヒドリル；ヒドラジンと反応するアルデヒド；ジアジリン及び／又はアリールアジドと反応する任意の非選択的な基；イソシアネートと反応するヒドロキシル；カルボニル化合物と反応するヒドロキシルアミン；並びにこれらの組合せが挙げられる。
【００３３】
[0034]「ベクター」という用語は、小さいキャリア核酸分子、プラスミド、ウイルス（例えば、ＡＡＶベクター）、又は核酸の挿入若しくは組込みによりマニピュレートできる他のビヒクルを指す。ベクターを遺伝子マニピュレーション（すなわち、「クローニングベクター」）のために使用して、ポリヌクレオチドを細胞に導入／移入し、及び挿入されたポリヌクレオチドを細胞中で転写又は翻訳させることができる。「発現ベクター」は、宿主細胞での発現のために必要とされる必要な調節領域と共に遺伝子又は核酸配列を含有する特殊なベクターである。ベクターの核酸配列は、一般に、細胞での繁殖のために少なくとも複製起点を含有し、任意選択で追加のエレメント、例えば、異種ポリヌクレオチド配列、発現制御エレメント（例えば、プロモーター、エンハンサー）、イントロン、逆末端反復配列（ＩＴＲ）、選択マーカー（例えば、抗生物質抵抗性）、ポリアデニル化シグナルを含有する。
【００３４】
[0035]ウイルスベクターは、ウイルスゲノムを構成する１つ又は複数の核酸エレメントに由来するか、又はそれに基づく。特定のウイルスベクターはアデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）ベクターである。
【００３５】
[0036]組換えＡＡＶベクターのようなベクターの修飾語の他に、組換えポリヌクレオチド及びポリペプチドのような配列の修飾語としての「組換え」という用語は、一般に天然で起こらない様式で組成物がマニピュレート（すなわち、操作）されていることを意味する。組換えＡＡＶベクターの特定の例は、野生型ＡＡＶゲノムに通常存在しない核酸配列がＡＡＶゲノム内に挿入されている場合である。「組換え」という用語は、ＡＡＶベクターの他に、ポリヌクレオチドのような配列に関して本明細書において必ずしも使用されないが、異種ポリヌクレオチドを含む組換え形態は、いかなるそのような省略があっても、明示的に含まれる。
【００３６】
[0037]「組換えＡＡＶベクター」又は「ｒＡＡＶ」は、分子的方法を使用してＡＡＶゲノムから野生型ゲノムを除去し、異種核酸と称される非天然核酸配列で置換することによりＡＡＶの野生型ゲノムに由来する。典型的には、ＡＡＶについてＡＡＶゲノムの１つ又は両方の逆末端反復（ＩＴＲ）配列が保持されている。ＡＡＶゲノムの全体又は一部分がＡＡＶゲノム核酸に関して非天然の配列で置換されているので、ｒＡＡＶはＡＡＶゲノムから区別される。非天然又は異種配列の組込みは、したがって、「ｒＡＡＶベクター」と称することができる「組換え」ベクターとしてＡＡＶベクターを定義する。
【００３７】
[0038]ｒＡＡＶ配列は、ｅｘ  ｖｉｖｏ、ｉｎ  ｖｉｔｒｏ又はｉｎ  ｖｉｖｏでの細胞のその後の感染（形質導入）のためにパッケージング（本明細書において「粒子」と称される）することができる。組換えＡＡＶベクター配列がＡＡＶ粒子にキャプシド化又はパッケージングされる場合、粒子を「ｒＡＡＶベクター」又は「ｒＡＡＶ粒子」と称することもできる。そのようなｒＡＡＶ粒子は、ベクターゲノムをキャプシド化又はパッケージングするタンパク質を含む。ＡＡＶの場合、それらはキャプシドタンパク質と称される。
【００３８】
[0039]ＡＡＶベクター「ゲノム」は、最終的にパッケージング又はキャプシド化されて、ウイルス（例えば、ＡＡＶ）粒子を形成する組換えプラスミド配列の部分を指す。組換えベクターを構築又は製造するために組換えプラスミドが使用される場合、ベクターゲノムは、組換えプラスミドのベクターゲノム配列に対応しない「プラスミド」の部分を含まない。組換えプラスミドのこの非ベクターゲノム部分は、「プラスミド骨格」と称され、繁殖及び組換えウイルスの製造のために必要なプロセスであるプラスミドのクローニング及び増幅のために重要であるが、それ自体はウイルス（例えば、ＡＡＶ）粒子にパッケージング又はキャプシド化されない。したがって、ベクター「ゲノム」は、ウイルス（例えば、ＡＡＶ）によりパッケージング又はキャプシド化される核酸を指す。
【００３９】
[0040]「核酸」及び「ポリヌクレオチド」という用語は本明細書において交換可能に使用され、デオキシリボ核酸（ＤＮＡ）及びリボ核酸（ＲＮＡ）を含む全ての形態の核酸、オリゴヌクレオチドを指す。核酸としては、ゲノムＤＮＡ、ｃＤＮＡ及びアンチセンスＤＮＡ、並びにスプライシング又は非スプライシングｍＲＮＡ、ｒＲＮＡ、ｔＲＮＡ及び阻害ＤＮＡ又はＲＮＡ（ＲＮＡｉ、例えば、小若しくは短鎖ヘアピン（ｓｈ）ＲＮＡ、マイクロＲＮＡ（ｍｉＲＮＡ）、小若しくは短鎖干渉（ｓｉ）ＲＮＡ、トランススプライシングＲＮＡ、又はアンチセンスＲＮＡ）が挙げられる。核酸としては、天然に存在する、合成の、及び意図的に改変された又は変化したポリヌクレオチド（例えば、変種核酸）が挙げられる。
【００４０】
[0041]ポリヌクレオチドは、一本鎖、二本鎖、又はトリプレックス、直鎖状又は環状であってもよく、任意の長さであってもよい。ポリヌクレオチドの議論において、特定のポリヌクレオチドの配列又は構造は、５’から３’の方向に配列を記載する慣習にしたがって本明細書において記載されることがある。
【００４１】
[0042]「導入遺伝子」は、意図されるか又は細胞若しくは生物に導入された異種核酸を簡便に指すために本明細書において使用される。導入遺伝子としては、ポリペプチド若しくはタンパク質をコードするか又は阻害ＲＮＡをコードする遺伝子のような任意の異種核酸が挙げられる。
【００４２】
[0043]「形質導入する」及びその文法的変形の用語は、細胞又は宿主生物へのｒＡＡＶベクターのような分子の導入を指す。異種核酸／導入遺伝子は、レシピエント細胞のゲノム核酸に組み込まれてもよいし、組み込まれなくてもよい。導入された異種核酸はまた、レシピエント細胞又は宿主生物において染色体外に存在してもよいし、一過的にのみ存在してもよい。
【００４３】
[0044]「形質導入細胞」は、導入遺伝子が導入された細胞である。したがって、「形質導入」細胞（例えば、哺乳動物中、例えば、細胞又は組織又は臓器細胞）は、外因性分子、例えば核酸（例えば、導入遺伝子）の細胞への組込み後の細胞中の遺伝子の変化を意味する。したがって、「形質導入」細胞は、外因性核酸が導入された細胞、又はその子孫である。（１つ又は複数の）細胞を繁殖させ、及び導入されたタンパク質を発現させ、又は核酸を転写させることができる。遺伝子療法の使用及び方法のために、１つの形質導入細胞又は複数の形質導入細胞が対象中に存在することができる。
【００４４】
[0045]「発現制御エレメント」は、作動可能に連結された核酸の発現に影響を及ぼす（１つ又は複数の）核酸配列を指す。制御エレメントとしては、プロモーター及びエンハンサーのような本明細書に記載されるような発現制御エレメントが挙げられる。ＡＡＶベクターを含むベクター配列は、１つ又は複数の「発現制御エレメント」を含むことができる。典型的に、そのようなエレメントは、適切な異種ポリヌクレオチドの転写及び適切な場合は翻訳を促進するために含まれる（例えば、プロモーター、エンハンサー、イントロン用のスプライシングシグナル、ｍＲＮＡのインフレームの翻訳を可能とするための遺伝子の正しいリーディングフレームの維持、及び終止コドンなど）。そのようなエレメントは典型的にシスで作用し、「シス作用性」エレメントと称されるが、トランスで作用することもある。
【００４５】
[0046]発現制御は、転写、翻訳、スプライシング、メッセージ安定性などのレベルにおいてもたらされることがある。典型的には、転写をモジュレートする発現制御エレメントは、転写される核酸の５’末端（すなわち、「上流」）付近に並置される。発現制御エレメントはまた、転写される配列の３’末端（すなわち、「下流」）又は転写物内（例えば、イントロン中）に位置することができる。発現制御エレメントは、隣接して位置するか、又は、かなりの距離であっても、転写される配列から離れて（例えば、ポリヌクレオチドから１〜１０、１０〜２５、２５〜５０、５０〜１００、１００〜５００、又はそれより多くのヌクレオチド）位置することができる。それにもかかわらず、ＡＡＶベクターの長さの制限により、発現制御エレメントは、典型的に転写される核酸から１〜１０００ヌクレオチド以内にある。
【００４６】
[0047]機能的に、作動可能に連結された核酸の発現は、エレメント（例えば、プロモーター）により少なくとも部分的に制御可能であり、それにより、エレメントは、核酸の転写及び適切な場合は転写物の翻訳をモジュレートする。発現制御エレメントの特定の例は、転写される核酸配列の５’に通常位置するプロモーターである。プロモーターは、プロモーターが存在しない場合に発現される量と比較して典型的に作動可能に連結された核酸から発現される量を増加させる。
【００４７】
[0048]本明細書において使用される「エンハンサー」は、異種核酸に隣接して位置する配列を指すことができる。エンハンサーエレメントは典型的にプロモーターエレメントの上流に位置して機能するが、配列の下流又は配列内に位置することができる。それゆえ、エンハンサーエレメントは、異種核酸配列の１０〜５０塩基対、５０〜１００塩基対、１００〜２００塩基対、又は２００〜３００塩基対、又はそれより多くの塩基対だけ上流又は下流に位置することができる。エンハンサーエレメントは、典型的にプロモーターエレメントにより付与される発現より作動可能に連結された核酸の発現（ｅｘｐｒｅｓｓｅｄ）を増加させる。
【００４８】
[0049]発現構築物は、特定の細胞又は組織種において発現を推進するように働く調節エレメントを含んでもよい。発現制御エレメント（例えば、プロモーター）としては、特定の組織又は細胞種において活性のものが挙げられ、これは本明細書において「組織特異的発現制御エレメント／プロモーター」と称される。組織特異的発現制御エレメントは、典型的に特定の細胞又は組織（例えば、肝臓）において活性である。発現制御エレメントは、典型的に特定の細胞、組織又は臓器において活性であり、その理由は、それらは、特定の細胞、組織又は臓器種に特有の転写活性化タンパク質、又は転写の他の調節因子により認識されるからである。そのような調節エレメントは当業者に公知である（例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋ  ｅｔ  ａｌ．（１９８９）及びＡｕｓｕｂｅｌ  ｅｔ  ａｌ．（１９９２）を参照）。
【００４９】
[0050]発現構築物中の組織特異的調節エレメントの組込みは、タンパク質又は阻害ＲＮＡをコードする異種核酸の発現について少なくとも部分的な組織指向性を提供する。肝臓において活性のプロモーターの例は、特に、ＴＴＲプロモーター、ヒトアルファ１−アンチトリプシン（ｈＡＡＴ）プロモーター；アルブミン、Ｍｉｙａｔａｋｅ，  ｅｔ  ａｌ．  Ｊ．  Ｖｉｒｏｌ．，  ７１：５１２４−３２（１９９７）；Ｂ型肝炎ウイルスコアプロモーター、Ｓａｎｄｉｇ，  ｅｔ  ａｌ．，  Ｇｅｎｅ  Ｔｈｅｒ．  ３：１００２−９（１９９６）；アルファ−フェトプロテイン（ＡＦＰ）、Ａｒｂｕｔｈｎｏｔ，  ｅｔ  ａｌ．，  Ｈｕｍ．  Ｇｅｎｅ．  Ｔｈｅｒ．，  ７：１５０３−１４（１９９６）］である。肝臓において活性のエンハンサーの例は、アポリポタンパク質Ｅ（ａｐｏＥ）ＨＣＲ−１及びＨＣＲ−２である（Ａｌｌａｎ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｊ．  Ｂｉｏｌ．  Ｃｈｅｍ．，  ２７２：２９１１３−１９（１９９７））。
【００５０】
[0051]発現制御エレメントとしては、多くの異なる細胞種においてポリヌクレオチドの発現を推進することができる遍在又は乱交雑（ｐｒｏｍｉｓｃｕｏｕｓ）プロモーター／エンハンサーも挙げられる。そのようなエレメントとしては、サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）最初期プロモーター／エンハンサー配列、ラウス肉腫ウイルス（ＲＳＶ）プロモーター／エンハンサー配列及び様々な哺乳動物細胞種において活性の他のウイルスプロモーター／エンハンサー、又は天然に存在しない合成エレメント（例えば、Ｂｏｓｈａｒｔ  ｅｔ  ａｌ，  Ｃｅｌｌ，  ４１：５２１−５３０（１９８５）を参照）、ＳＶ４０プロモーター、ジヒドロ葉酸レダクターゼプロモーター、細胞質β−アクチンプロモーター及びホスホグリセロールキナーゼ（ＰＧＫ）プロモーターが挙げられるがこれらに限定されない。
【００５１】
[0052]発現制御エレメントはまた、調節可能な方式で発現を付与することができ、すなわち、シグナル又は刺激が、作動可能に連結された異種ポリヌクレオチドの発現を増加又は減少させる。シグナル又は刺激に応答して作動可能に連結されたポリヌクレオチドの発現を増加させる調節可能なエレメントはまた、「誘導性エレメント」（すなわち、シグナルにより誘導される）とも称される。特定の例としては、ホルモン（例えば、ステロイド）誘導性プロモーターが挙げられるがこれに限定されない。典型的に、そのようなエレメントにより付与される増加又は減少の量は、存在するシグナル又は刺激の量に比例し、シグナル又は刺激の量が大きくなるほど、発現の増加又は減少は大きくなる。特定の非限定的な例としては、亜鉛誘導性ヒツジメタロチオネイン（ｍｅｔａｌｌｏｔｈｉｏｎｉｎｅ）（ＭＴ）プロモーター；ステロイドホルモン誘導性マウス乳腺腫瘍ウイルス（ＭＭＴＶ）プロモーター；Ｔ７ポリメラーゼプロモーターシステム（国際公開第９８／１００８８号）；テトラサイクリン抑制性システム（Ｇｏｓｓｅｎ，  ｅｔ  ａｌ．、Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔｌ．  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．  ＵＳＡ、８９：５５４７−５５５１（１９９２））；テトラサイクリン誘導性システム（Ｇｏｓｓｅｎ，  ｅｔ  ａｌ．，  Ｓｃｉｅｎｃｅ．  ２６８：１７６６−１７６９（１９９５）；Ｈａｒｖｅｙ，  ｅｔ  ａｌ．，  Ｃｕｒｒ．  Ｏｐｉｎ．  Ｃｈｅｍ．  Ｂｉｏｌ．  ２：５１２−５１８（１９９８）も参照）；ＲＵ４８６誘導性システム（Ｗａｎｇ，  ｅｔ  ａｌ．，  Ｎａｔ．  Ｂｉｏｔｅｃｈ．  １５：２３９−２４３（１９９７）及びＷａｎｇ，  ｅｔ  ａｌ．，  Ｇｅｎｅ  Ｔｈｅｒ．４：４３２−４４１（１９９７）］；及びラパマイシン誘導性システム（Ｍａｇａｒｉ，  ｅｔ  ａｌ．，  Ｊ．  Ｃｌｉｎ．  Ｉｎｖｅｓｔ．  １００：２８６５−２８７２（１９９７）；Ｒｉｖｅｒａ，  ｅｔ  ａｌ．，  Ｎａｔ．  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ．  ２：１０２８−１０３２（１９９６））が挙げられる。この文脈において有用なことがある他の調節可能な制御エレメントは、特定の生理学的状態、例えば、温度、急性期、発生により調節されるものである。
【００５２】
[0053]発現制御エレメントはまた、異種ポリヌクレオチドのための（１つ又は複数の）天然のエレメントを含む。天然の制御エレメント（例えば、プロモーター）は、異種ポリヌクレオチドの発現が天然の発現を模倣することが所望される場合に使用されることがある。天然のエレメントは、異種ポリヌクレオチドの発現が、一時的に又は発生上で、又は組織特異的な方式で、又は特定の転写刺激に応答して調節されるべき場合に使用されることがある。イントロン、ポリアデニル化部位又はＫｏｚａｋコンセンサス配列のような他の天然の発現制御エレメントもまた使用することができる。
【００５３】
[0054]「作動可能に連結される」という用語は、核酸配列の発現のために必要な調節配列が、核酸配列の発現をもたらすように該配列に対して適切な位置で置かれることを意味する。この同じ定義が、発現ベクター、例えばｒＡＡＶベクター中の核酸配列及び転写制御エレメント（例えば、プロモーター、エンハンサー、及び終止エレメント）の構成に適用されることがある。
【００５４】
[0055]核酸と作動可能に連結した発現制御エレメントの例において、関係性は、制御エレメントが核酸の発現をモジュレートするようなものである。より詳細には、例えば、作動可能に連結された２つのＤＮＡ配列は、ＤＮＡ配列の少なくとも１つが他の配列に対して生理学的効果を発揮できるような関係性で２つのＤＮＡが配置されている（シス又はトランス）ことを意味する。
【００５５】
[0056]したがって、ベクターのための追加のエレメントとしては、発現制御（例えば、プロモーター／エンハンサー）エレメント、転写終結シグナル若しくは終止コドン、ＡＡＶ  ＩＴＲ配列の１つ若しくは複数のコピーのような配列に隣接する５’若しくは３’非翻訳領域（例えば、ポリアデニル化（ポリＡ）配列）、又はイントロンが挙げられるがこれらに限定されない。
【００５６】
[0057]さらなるエレメントとしては、例えば、フィラー又はスタッファーポリヌクレオチド配列、例えば、パッケージングを向上させ及び汚染性核酸の存在を低減させるためのフィラー又はスタッファーポリヌクレオチド配列が挙げられる。ＡＡＶベクターは、一般に約４ｋｂ〜約５．２ｋｂ、又はわずかにより大きいサイズ範囲を有するＤＮＡのインサートを典型的に許容する。したがって、より短い配列について、ウイルス粒子へのＡＡＶベクターのパッケージングのために許容されるウイルスゲノム配列の正常なサイズの近く又は該サイズまで長さを調整するためにスタッファー又はフィラーが含められる。様々な実施形態では、フィラー／スタッファー核酸配列は、核酸の非翻訳（非タンパク質コーディング）セグメントである。４．７Ｋｂ未満の核酸配列について、フィラー又はスタッファーポリヌクレオチド配列は、配列と組み合わせられた（例えば、ベクターに挿入された）場合に約３．０〜５．５Ｋｂ、又は約４．０〜５．０Ｋｂ、又は約４．３〜４．８Ｋｂの合計の長さを有する。
【００５７】
[0058]組成物の修飾語として使用された場合の「単離された」という用語は、組成物が人工的に作られたか、又はそれが天然に存在するｉｎ  ｖｉｖｏ環境から完全に又は少なくとも部分的に分離されていることを意味する。一般的に、単離された組成物は、それが天然で通常一緒に存在する１つ又は複数の材料、例えば、１つ又は複数のタンパク質、核酸、脂質、炭水化物、細胞膜を実質的に含まない。
【００５８】
[0059]「単離された」という用語は、人工的に製造された組合せ、例えば、ｒＡＡＶ配列、又はＡＡＶベクターゲノム及び医薬配合物をパッケージング若しくはキャプシド化するｒＡＡＶ粒子を除外しない。「単離された」という用語はまた、組成物の代替的な物理的形態、例えば、ハイブリッド／キメラ、マルチマー／オリゴマー、修飾（例えば、リン酸化、グリコシル化、脂質化）又は誘導化形態、又は人工的に製造された宿主細胞で発現される形態を除外しない。
【００５９】
[0060]特定のヌクレオチド配列又はアミノ酸配列を指す場合の「から本質的になる」という語句は、配列が所与の参照配列の特性を有することを意味する。例えば、アミノ酸配列に関して使用される場合、該語句は、配列自体並びに配列の基本的な及び新規の特徴に影響しない分子修飾を含む。
【００６０】
[0061]「同一性」、「相同性」及びこれらの文法的変形の用語は、２つ又はそれより多くの参照される実体が、それらが「アライメントされた」配列である場合に同じであることを意味する。したがって、例として、２つのタンパク質配列が同一である場合、それらは、少なくとも参照される領域又は部分内において、同じアミノ酸配列を有する。２つの核酸配列が同一である場合、それらは、少なくとも参照される領域又は部分内において、同じ核酸配列を有する。同一性は、配列の定義された区画（領域又はドメイン）にわたるものであってもよい。
【００６１】
[0062]同一性の「区画」又は「領域」は、２つ又はそれより多くの参照される実体の同じ部分を指す。したがって、２つのタンパク質又は核酸配列が１つ又は複数の配列区画又は領域にわたり同一である場合、それらはその領域内で同一性を共有する。「アライメントされた」配列は、多くの場合に参照配列と比較して欠失又は追加の塩基若しくはアミノ酸（ギャップ）の訂正を含有する複数のタンパク質（アミノ酸）又は核酸配列を指す。
【００６２】
[0063]同一性は、配列の全長又は部分にわたる広がりを持つものであってもよい。ある特定の実施形態では、同一性パーセントを共有する配列の長さは、２、３、４、５又はそれより多くの連続するアミノ酸又は核酸、例えば、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０などの連続する核酸又はアミノ酸である。追加の実施形態では、同一性を共有する配列の長さは、２１又はそれより多くの連続するアミノ酸又は核酸、例えば、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０などの連続するアミノ酸又は核酸である。さらなる実施形態では、同一性を共有する配列の長さは、４１又はそれより多くの連続するアミノ酸又は核酸、例えば、４２、４３、４４、４５、４５、４７、４８、４９、５０などの連続するアミノ酸又は核酸である。いっそうさらなる実施形態では、同一性を共有する配列の長さは、５０又はそれより多くの連続するアミノ酸又は核酸、例えば、５０〜５５、５５〜６０、６０〜６５、６５〜７０、７０〜７５、７５〜８０、８０〜８５、８５〜９０、９０〜９５、９５〜１００、１００〜１５０、１５０〜２００、２００〜２５０、２５０〜３００、３００〜５００、５００〜１，０００などの連続するアミノ酸又は核酸である。
【００６３】
[0064]２つの配列間の同一性（相同性）又は「同一性パーセント」の程度は、コンピュータープログラム及び／又は数学的アルゴリズムを使用して確認することができる。本発明の目的のために、核酸配列の比較は、Ｍａｄｉｓｏｎ、ＷｉｓｃｏｎｓｉｎのＧｅｎｅｔｉｃ  Ｃｏｍｐｕｔｅｒ  Ｇｒｏｕｐから入手可能なＧＣＧ  Ｗｉｓｃｏｎｓｉｎ  Ｐａｃｋａｇｅバージョン９．１を使用して行われる。簡便のために、プログラムにより指定されるデフォルトのパラメーター（ギャップ生成ペナルティ＝１２、ギャップエクステンションペナルティ＝４）が、配列同一性を比較するために本発明において使用されることが意図される。或いは、デフォルトのパラメーターを用いるギャップアライメントを使用する米国国立生物工学情報センターにより提供されるＢｌａｓｔｎ  ２．０プログラム（ワールドワイドウェブｎｃｂｉ．ｎｌｍ．ｎｉｈ．ｇｏｖ／ｂｌａｓｔ／に見出される；Ａｌｔｓｃｈｕｌ  ｅｔ  ａｌ．，  １９９０，  Ｊ  Ｍｏｌ  Ｂｉｏｌ  ２１５：４０３−４１０）を使用して、核酸配列間及びアミノ酸配列間の同一性及び類似性のレベルを決定してもよい。ポリペプチド配列比較のために、ＢＬＡＳＴＰアルゴリズムは、ＰＡＭ１００、ＰＡＭ  ２５０、ＢＬＯＳＵＭ  ６２又はＢＬＯＳＵＭ  ５０のようなスコアリングマトリックスと組み合わせて典型的に使用される。ＦＡＳＴＡ（例えば、ＦＡＳＴＡ２及びＦＡＳＴＡ３）及びＳＳＥＡＲＣＨ配列比較プログラムもまた同一性の程度を定量化するために使用される（Ｐｅａｒｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔｌ．  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．  ＵＳＡ  ８５：２４４４（１９８８）；Ｐｅａｒｓｏｎ，  Ｍｅｔｈｏｄｓ  Ｍｏｌ  Ｂｉｏｌ．  １３２：１８５（２０００）；及びＳｍｉｔｈ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｊ．  Ｍｏｌ．  Ｂｉｏｌ．  １４７：１９５（１９８１））。ドロネーベースのトポロジカルマッピングを使用してタンパク質構造類似性を定量化するためのプログラムもまた開発されている（Ｂｏｓｔｉｃｋ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｂｉｏｃｈｅｍ  Ｂｉｏｐｈｙｓ  Ｒｅｓ  Ｃｏｍｍｕｎ．  ３０４：３２０（２００３））。
【００６４】
[0065]核酸分子、発現ベクター（例えば、ＡＡＶベクターゲノム）、プラスミド及び異種核酸は、組換えＤＮＡ技術の方法を使用することにより調製されてもよい。ヌクレオチド配列情報が利用可能であることにより、様々な手段による本発明の単離された核酸分子の調製が可能となる。例えば、治療用タンパク質をコードする核酸配列は、細胞発現又はｉｎ  ｖｉｔｒｏ翻訳及び化学合成技術を介して様々な標準的なクローニング、組換えＤＮＡ技術を使用して調製することができる。ポリヌクレオチドの純度は、シークエンシング及びゲル電気泳動などを通じて決定することができる。例えば、ハイブリダイゼーション又はコンピューターベースのデータベーススクリーニング技術を使用して核酸を単離することができる。そのような技術としては以下が挙げられるがこれらに限定されない：（１）相同ヌクレオチド配列を検出するためのプローブを用いたゲノムＤＮＡ又はｃＤＮＡライブラリーのハイブリダイゼーション；（２）例えば発現ライブラリーを使用して、共有された構造的特徴を有するポリペプチドを検出するための抗体スクリーニング；（３）目的の核酸配列にアニーリングすることができるプライマーを使用するゲノムＤＮＡ又はｃＤＮＡのポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）；（４）関連配列のための配列データベースのコンピューターサーチ；及び（５）サブトラクト核酸ライブラリーの差次的なスクリーニング。
【００６５】
[0066]核酸は、任意の簡便なクローニングベクター中にＤＮＡとして維持されてもよい。例えば、好適な大腸菌（Ｅ．  ｃｏｌｉ）宿主細胞で繁殖するｐＢｌｕｅｓｃｒｉｐｔ（Ｓｔｒａｔａｇｅｎｅ、Ｌａ  Ｊｏｌｌａ、ＣＡ）のようなプラスミドクローニング／発現ベクター中にクローンを維持することができる。或いは、哺乳動物細胞での発現のために好適なベクター、例えばＡＡＶベクター中に核酸を維持してもよい。
【００６６】
[0067]本明細書に開示されるように、ｒＡＡＶベクター（ａｃｔｏｒ）は、宿主細胞でのコードされたタンパク質の発現を可能とするような方式で配置された細胞での異種核酸の発現のために必要な調節エレメントを任意選択で含んでもよい。発現のために必要とされるそのような調節エレメントとしては、本明細書に記載される及び当業者に公知のプロモーター配列、エンハンサー配列及び転写開始配列が挙げられるがこれらに限定されない。
【００６７】
[0068]本発明の方法及び使用は、分裂及び／又は非分裂細胞を含む宿主細胞に核酸（導入遺伝子）を送達（導入）することを含む。本発明の核酸、ｒＡＡＶベクター、方法、使用及び医薬配合物は追加的に、治療方法として、それを必要とする対象に異種核酸によりコードされる配列を送達、投与又は提供する方法において有用である。この方式では、核酸が転写され、及びタンパク質又は阻害核酸は対象においてｉｎ  ｖｉｖｏで産生されてもよい。対象は、タンパク質の欠乏を抱えているか、又は対象におけるタンパク質若しくは阻害核酸の産生は、治療方法として何らかの治療効果を付与することがあるか、又はそれ以外を理由として、対象は、タンパク質又は阻害核酸から利益を受けるか、又はそれを必要とすることがある。例えば、阻害核酸は、明白な又は有害なタンパク質が神経学的疾患又は障害のような疾患又は障害を引き起こしている対象において発現される異常な有害なタンパク質の発現又は転写を低減させることができる。
【００６８】
[0069]異種核酸を有するＡＡＶゲノムを含むｒＡＡＶベクターは、遺伝性疾患の治療を可能とする。欠乏状態疾患について、遺伝子移入を使用して、影響された組織に正常な遺伝子を置換療法のために運ぶことができる他に、アンチセンス突然変異を使用して疾患のための動物モデルを作製することができる。均衡が崩れた病態について、遺伝子移入を使用して、モデルシステムにおいて病態を作製することができ、次にそれを、病態に対抗する努力において使用することができる。欠陥を訂正するための核酸配列の部位特異的組込みの使用もまた可能である。
【００６９】
[0070]様々な実施形態では、異種核酸を有するＡＡＶゲノムを含むｒＡＡＶベクターは、例えば、治療剤及び／又は予防剤（タンパク質又は核酸）として使用することができる。特定の実施形態では、異種核酸は、血液凝固カスケードをモジュレートできるタンパク質をコードする。
【００７０】
[0071]例えば、コードされたＦＶＩＩＩ又はＦＶＩＩＩ−ＢＤＤは、野生型ＦＶＩＩＩと類似の凝固活性を有してもよく、又は野生型ＦＶＩＩと比較して変化した凝固活性を有してもよい。患者へのＦＶＩＩＩ又はＦＶＩＩＩ−ＢＤＤコーディングｒＡＡＶベクターの投与は、凝固カスケードを正常化するために働くＦＶＩＩＩ又はＦＶＩＩＩ−ＢＤＤタンパク質の発現を結果としてもたらす。
【００７１】
[0072]追加の実施形態では、異種核酸は、グリコーゲンの蓄積を阻害し若しくは低減させ、グリコーゲンの蓄積を防止し、又はグリコーゲンを分解することができるタンパク質（酵素）をコードする。例えば、コードされたＧＡＡは、野生型ＧＡＡと類似の活性を有してもよい。ポンペ病を有する患者へのＧＡＡコーディングｒＡＡＶベクターの投与は、グリコーゲンの蓄積を阻害し若しくは低減させ、グリコーゲンの蓄積を防止し、又はグリコーゲンを分解するように働き、次にそれがポンペ病の１つ又は複数の有害効果を低減又は減少させることができるＧＡＡタンパク質の発現を結果としてもたらす。
【００７２】
[0073]ｒＡＡＶベクターは、単独で、又は他の分子と組み合わせて投与することができる。本発明によれば、ｒＡＡＶベクター又は治療剤の組合せを単独で又は薬学的に許容できる若しくは生物学的に適合性の組成物中で患者に投与することができる。
【００７３】
[0074]ｒＡＡＶベクターの直接送達又はヒト細胞のｅｘ−ｖｉｖｏでの形質導入及びその後の身体への注入は、異種核酸の発現を結果としてもたらし、それにより、うっ血に対する有益な治療効果を発揮する。第ＶＩＩＩ因子のような血液凝固因子の文脈において、投与は凝固促進活性を増進させる。ＧＡＡのような酵素の文脈において、投与は、グリコーゲンの量若しくは蓄積を低減させ、グリコーゲンの蓄積を防止し、又はグリコーゲンを分解する。次にこれが、筋緊張及び／若しくは筋肉強度の促進若しくは向上並びに／又は肝肥大の低減若しくは減少のように、ポンペ病の１つ又は複数の有害効果を低減又は減少させることができる。
【００７４】
[0075]組換えＡＡＶベクターの他に、方法及びその使用は、任意のウイルス株又は血清型を含む。非限定的な例として、組換えＡＡＶベクターは、例えば、ＡＡＶ−１、−２、−３、−４、−５、−６、−７、−８、−９、−１０、−１１、−１２、−ｒｈ７４、−ｒｈ１０又はＡＡＶ−２ｉ８のような任意のＡＡＶゲノムに基づくことができる。そのようなベクターは、同じ株若しくは血清型（又は亜群若しくは変種）に基づいてもよく、又は互いに異なっていてもよい。非限定的な例として、特定の血清型ゲノムに基づく組換えＡＡＶベクターは、ベクターをパッケージングするキャプシドタンパク質の血清型と同一であってもよい。加えて、組換えＡＡＶベクターゲノムは、ベクターをパッケージングするＡＡＶキャプシドタンパク質の血清型とは別個のＡＡＶ血清型ゲノムに基づいてもよい。例えば、ＡＡＶベクターゲノムは、ＡＡＶ２に基づいてもよい一方、３つのキャプシドタンパク質の少なくとも１つは、例えば、配列番号１、配列番号２、ＡＡＶ１、ＡＡＶ３、ＡＡＶ４、ＡＡＶ５、ＡＡＶ６、ＡＡＶ７、ＡＡＶ８、ＡＡＶ９、ＡＡＶ１０、ＡＡＶ１１、ＡＡＶ１２、Ｒｈ１０、Ｒｈ７４又はＡＡＶ−２ｉ８又はこれらの変種であってもよい。
【００７５】
[0076]特定の実施形態では、アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）ベクターは、配列番号１、配列番号２、ＡＡＶ１、ＡＡＶ２、ＡＡＶ３、ＡＡＶ４、ＡＡＶ５、ＡＡＶ６、ＡＡＶ７、ＡＡＶ８、ＡＡＶ９、ＡＡＶ１０、ＡＡＶ１１、ＡＡＶ１２、Ｒｈ１０、Ｒｈ７４及びＡＡＶ−２ｉ８の他に、例えば、国際公開第２０１３／１５８８７９号（国際出願ＰＣＴ／ＵＳ２０１３／０３７１７０）、国際公開第２０１５／０１３３１３号（国際出願ＰＣＴ／ＵＳ２０１４／０４７６７０）及び米国特許出願公開第２０１３／００５９７３２号（米国特許第９，１６９，２９９号明細書；ＬＫ０１、ＬＫ０２、ＬＫ０３などを開示する）に記載されるようなその変種（例えば、キャプシド変種、例えば、アミノ酸の挿入、付加、置換及び欠失）を含む。
【００７６】
[0077]本明細書において使用される場合、「血清型」という用語は、他のＡＡＶ血清型とは血清学的に別個のキャプシドを有するＡＡＶを指すために使用される区別である。血清学的に別個であることは、別のＡＡＶと比較して１つのＡＡＶに対する抗体間に交差反応性がないことに基づいて決定される。そのような交差反応性の差異は、キャプシドタンパク質配列／抗原決定基の差異に起因することが通常である（例えば、ＡＡＶ血清型のＶＰ１、ＶＰ２、及び／又はＶＰ３配列の差異に起因する）。ＡＡＶ変種が参照ＡＡＶ又は他のＡＡＶ血清型とは血清学的に別個ではない可能性にもかかわらず、それらは、参照又は他のＡＡＶ血清型と比較して少なくとも１つのヌクレオチド又はアミノ酸残基が異なる。
【００７７】
[0078]伝統的な定義の下では、血清型は、目的のウイルスが、全ての既存の及び特徴付けられた血清型に特異的な血清に対して中和活性について試験されており、及び目的のウイルスを中和する抗体が見出されていないことを意味する。より多くの天然に存在するウイルス分離株が発見され及び／又はキャプシド突然変異体が生成されるにつれて、現行の既存の任意の血清型と血清学的な差異を有することもあるし、有しないこともある。したがって、新たなウイルス（例えば、ＡＡＶ）が血清学的な差異を有しない場合、この新たなウイルス（例えば、ＡＡＶ）は、対応する血清型の亜群又は変種である。多くの場合、中和活性についての血清学試験は、血清型の伝統的な定義にしたがって別の血清型であるかどうかを決定するためにキャプシド配列改変を有する突然変異体ウイルスに対してまだ行われていない。したがって、簡便性及び繰返しの回避のために、「血清型」という用語は、血清学的に別個のウイルス（例えば、ＡＡＶ）の他に、所与の血清型の亜群又は変種に入る可能性がある血清学的に別個ではないウイルス（例えば、ＡＡＶ）の両方を広く指す。
【００７８】
[0079]本明細書に記載される場合、ＡＡＶキャプシドタンパク質及びキャプシドタンパク質をコードする核酸は、配列番号１、配列番号２、ＡＡＶ１、ＡＡＶ２、ＡＡＶ３、ＡＡＶ４、ＡＡＶ５、ＡＡＶ６、ＡＡＶ７、ＡＡＶ８、ＡＡＶ９、ＡＡＶ１０、ＡＡＶ１１、ＡＡＶ１２、Ｒｈ１０、又はＡＡＶ−２ｉ８のような参照又は親ＡＡＶ血清型に対して１００％未満の配列同一性を呈するが、配列番号１、配列番号２、ＡＡＶ１、ＡＡＶ２、ＡＡＶ３、ＡＡＶ４、ＡＡＶ５、ＡＡＶ６、ＡＡＶ７、ＡＡＶ８、ＡＡＶ９、ＡＡＶ１０、ＡＡＶ１１、ＡＡＶ１２、Ｒｈ１０、Ｒｈ７４又はＡＡＶ−２ｉ８のような公知のＡＡＶ遺伝子又はタンパク質とは別個であり、それらと同一ではない。一実施形態では、ＡＡＶキャプシドタンパク質は、配列番号１、配列番号２、ＡＡＶ１、ＡＡＶ２、ＡＡＶ３、ＡＡＶ４、ＡＡＶ５、ＡＡＶ６、ＡＡＶ７、ＡＡＶ８、ＡＡＶ９、ＡＡＶ１０、ＡＡＶ１１、ＡＡＶ１２、Ｒｈ１０、Ｒｈ７４又はＡＡＶ−２ｉ８のような参照又は親ＡＡＶキャプシドタンパク質に対して少なくとも８０％、８５％、８５％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．１％、９９．２％、９９．３％、９９．４％、９９．５％など、最大９９．９％同一の配列を含むか、又は該配列からなる。
【００７９】
[0080]ある特定の実施形態では、改変ＡＡＶキャプシドタンパク質は、１、２、３、４、５、５〜１０、１０〜１５、１５〜２０又はそれより多くのアミノ酸置換を有する。ある特定の実施形態では、改変ＡＡＶキャプシドタンパク質は、２、３、４、５、５〜１０、１０〜１５、１５〜２０、２０〜２５、２５〜３０、３０〜３５、３５〜４０、４０〜５０又は５０〜６０のアミノ酸のペプチド挿入長さを有する。
【００８０】
[0081]ｒＡＡＶベクターは、生物学的に適合性の担体中での注入を介して、例えば静脈注射を介して、患者に投与されてもよい。ｒＡＡＶベクターは、分子の安定性を増加させるために、任意選択で、リポソーム中にカプセル化されるか、又は他のリン脂質若しくはミセルと混合されてもよい。
【００８１】
[0082]ｒＡＡＶベクター（ｖｅｅｃｔｏｒ）は、単独で又は他の組成物、剤、薬物、生物学的製剤などと組み合わせて投与されてもよい。したがって、ｒＡＡＶベクターは、単独で及び他の組成物、剤、薬物、生物学的製剤（タンパク質）と共に医薬組成物に組み込むことができる。そのような医薬組成物は、特に、ｉｎ  ｖｉｖｏ又はｅｘ  ｖｉｖｏでの対象への投与及び送達のために有用である。
【００８２】
[0083]特定の実施形態では、医薬組成物はまた、薬学的に許容できる担体又は賦形剤を含有する。そのような賦形剤としては、組成物を与えられる個体に有害な免疫応答をそれ自体は誘導せず、過度の毒性なしに投与することができる任意の医薬物質が挙げられる。
【００８３】
[0084]本明細書において使用される場合、「薬学的に許容できる」及び「生理学的に許容できる」という用語は、１つ又は複数の投与経路、ｉｎ  ｖｉｖｏ送達又は接触のために好適な生物学的に許容できる配合物、気体、液体又は固体、又はこれらの混合物を意味する。「薬学的に許容できる」又は「生理学的に許容できる」組成物は、生物学的に又はそれ以外に望ましくないものではない材料であり、例えば、材料は、大きな望ましくない生物学的効果を引き起こすことなく対象に投与することができる。したがって、そのような医薬組成物は、例えば、核酸、ベクター、ウイルス粒子又はタンパク質の対象への投与において使用することができる。
【００８４】
[0085]薬学的に許容できる賦形剤としては、水、生理食塩水、グリセロール、糖及びエタノールのような液体が挙げられるがこれらに限定されない。薬学的に許容できる塩としてはまた、例えば、塩酸塩、臭化水素酸塩、リン酸塩、及び硫酸塩などのような鉱酸塩；及び酢酸塩、プロピオン酸塩、マロン酸塩、及び安息香酸塩などのような有機酸の塩を挙げることができる。さらに、助剤物質、例えば、湿潤剤又は乳化剤、及びｐＨ緩衝物質などがそのようなビヒクル中に存在してもよい。
【００８５】
[0086]医薬組成物は、塩として提供されてもよく、多くの酸と共に形成されることができ、塩としては、塩酸、硫酸、酢酸、乳酸、酒石酸、リンゴ酸、コハク酸などの塩が挙げられるがこれらに限定されない。塩は、対応する遊離塩基形態よりも水性又は他のプロトン溶媒中でより可溶性な傾向がある。他の場合には、調製物は、以下：１〜５０ｍＭのヒスチジン、０．１％〜２％のスクロース、及び２〜７％のマンニトールのいずれか又は全てを含有してもよい４．５〜５．５のｐＨ範囲の凍結乾燥粉末であってもよく、これは使用前に緩衝液と合わせられる。
【００８６】
[0087]医薬組成物は、医薬投与又はｉｎ  ｖｉｖｏでの接触若しくは送達と適合性の、溶媒（水性又は非水性）、溶液（水性又は非水性）、エマルション（例えば、水中油又は油中水）、懸濁液、シロップ、エリキシル、分散液及び懸濁媒体、コーティング、等張剤及び吸収促進又は遅延剤を含む。水性及び非水性の溶媒、溶液及び懸濁液は、懸濁化剤及び増粘剤を含んでもよい。そのような薬学的に許容できる担体としては、錠剤（コーティング又は非コーティング）、カプセル（硬質又は軟質）、マイクロビーズ、粉末、顆粒及び結晶が挙げられる。補助活性化合物（例えば、防腐剤、抗菌剤、抗ウイルス剤及び抗真菌剤）もまた組成物中に組み込むことができる。
【００８７】
[0088]医薬組成物は、本明細書に記載されるか、又は当業者に公知のように、特定の投与又は送達の経路と適合するように配合することができる。したがって、医薬組成物は、様々な経路による投与のために好適な担体、希釈剤、又は賦形剤を含む。
【００８８】
[0089]非経口投与のために好適な組成物は、活性化合物の水性及び非水性溶液、懸濁液又はエマルションを含み、この調製物は典型的に無菌であり、意図するレシピエントの血液と等張であってもよい。非限定的な実例としては、水、緩衝生理食塩水、ハンクス溶液、リンガー溶液、デキストロース、フルクトース、エタノール、動物油、植物油又は合成油が挙げられる。水性注射用懸濁液は、カルボキシメチルセルロースナトリウム、ソルビトール、又はデキストランのような懸濁液の粘度を増加させる物質を含有してもよい。
【００８９】
[0090]さらに、活性化合物の懸濁液は、適切な油性注射用懸濁液として調製されてもよい。好適な親油性溶媒又はビヒクルとしては、ゴマ油のような脂肪油、又はオレイン酸エチル若しくはトリグリセリドのような合成脂肪酸エステル、又はリポソームが挙げられる。任意選択で、懸濁液はまた、好適な安定化剤、又は化合物の溶解度を増加させて高度に濃縮された溶液の調製を可能とする剤を含有してもよい。
【００９０】
[0091]共溶媒及びアジュバントを配合物に加えてもよい。共溶媒の非限定的な例は、ヒドロキシル基又は他の極性基、例えば、イソプロピルアルコールのようなアルコール；プロピレングリコール、ポリエチレングリコール、ポリプロピレングリコール、グリコールエーテルのようなグリコール；グリセロール；ポリオキシエチレンアルコール及びポリオキシエチレン脂肪酸エステルを含有する。アジュバントとしては、例えば、ソーヤレシチン及びオレイン酸のような界面活性剤；ソルビタントリオレエートのようなソルビタンエステル；及びポリビニルピロリドンが挙げられる。
【００９１】
[0092]医薬組成物が調製された後、それらを適切な容器中に入れて処理のために標識することができる。そのような標識化としては、投与の量、頻度、及び方法を挙げることができる。
【００９２】
[0093]本発明の組成物、方法及び使用のために適切な医薬組成物及び送達システムは当該技術分野において公知である（例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：  Ｔｈｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｙ（２００３）２０ｔｈ  ｅｄ．，  Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏ．，  Ｅａｓｔｏｎ、ＰＡ；Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ（１９９０）１８ｔｈ  ｅｄ．，  Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏ．，  Ｅａｓｔｏｎ，  ＰＡ；Ｍｅｒｃｋ  Ｉｎｄｅｘ（１９９６）１２ｔｈ  ｅｄ．，  Ｍｅｒｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｇｒｏｕｐ，  Ｗｈｉｔｅｈｏｕｓｅ，  ＮＪ；Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ  ｏｆ  Ｓｏｌｉｄ  Ｄｏｓａｇｅ  Ｆｏｒｍｓ（１９９３），  Ｔｅｃｈｎｏｎｉｃ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏ．，  Ｉｎｃ．，  Ｌａｎｃａｓｔｅｒ，  Ｐａ．；Ａｎｓｅｌ及びＳｔｏｋｌｏｓａ，  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｃａｌｃｕｌａｔｉｏｎｓ（２００１）１１ｔｈ  ｅｄ．，  Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ  Ｗｉｌｌｉａｍｓ  ＆  Ｗｉｌｋｉｎｓ，  Ｂａｌｔｉｍｏｒｅ，  ＭＤ；及びＰｏｚｎａｎｓｋｙ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ  Ｓｙｓｔｅｍｓ（１９８０），  Ｒ．  Ｌ．  Ｊｕｌｉａｎｏ，  ｅｄ．，  Ｏｘｆｏｒｄ，  Ｎ．Ｙ．，  ｐｐ．２５３−３１５を参照）。
【００９３】
[0094]「有効量」又は「十分量」は、単独で又は１つ若しくは複数の他の組成物（薬物のような治療剤又は免疫抑制（ｉｍｍｕｎｏｓｕｐｐｒｏｓｉｖｅ）剤）、治療、プロトコール、又は治療レジメン剤との組合せで、任意の継続期間（長期又は短期）の検出可能な応答、任意の測定可能若しくは検出可能な程度の又は任意の継続期間（例えば、分、時間、日、月、年、又は治癒の間）の対象における期待若しくは所望されるアウトカム又は対象にとっての利益を単回又は複数回用量で提供する量を指す。
【００９４】
[0095]用量は変動することがあり、治療が為される疾患の種類、発症、進行、重篤度、頻度、継続期間、又は確率、対象の所望される臨床的なエンドポイント、先行する若しくは同時の治療、全般的健康状態、年齢、性別、人種又は免疫学的適格性、及び当業者により理解される他の要因に依存する。用量、回数、頻度又は継続期間は、治療又は療法の任意の有害な副作用、合併症又は他のリスク因子及び対象の状態により指し示されるように、比例的に増加又は低減させてもよい。当業者は、治療又は予防上の利益をもたらすために十分な量を提供するために必要とされる投与量及びタイミングに影響を及ぼすことがある要因を理解する。
【００９５】
[0096]治療効果を達成するための用量、例えば、体重１キログラム当たりのベクターゲノムの用量（ｖｇ／ｋｇ）は、いくつもの要因に基づいて変化し、該要因としては、投与経路、治療効果を達成するために必要とされる異種ポリヌクレオチド発現のレベル、治療される特定の疾患、ウイルスベクターへの任意の宿主免疫応答、異種ポリヌクレオチド又は発現産物（タンパク質）への宿主免疫応答、及び発現されるタンパク質の安定性が挙げられるがこれらに限定されない。当業者は、上述の要因の他に、他の要因に基づいて特定の疾患又は障害を有する患者を治療するためのｒＡＡＶ／ベクターゲノムの用量範囲を決定することができる。
【００９６】
[0097]一般に、用量は、治療効果を達成するために、対象の体重１キログラム当たり少なくとも１×１０８のベクターゲノム（ｖｇ／ｋｇ）又はそれより多く、例えば、対象の体重１キログラム当たり１×１０９、１×１０１０、１×１０１１、１×１０１２、１×１０１３又は１×１０１４、又はそれより多くのベクターゲノム（ｖｇ／ｋｇ）の範囲内である。マウスにおいて１×１０１０〜１×１０１１ｖｇ／ｋｇ、イヌにおいて１×１０１２〜１×１０１３ｖｇ／ｋｇの範囲内のｒＡＡＶ用量は効果的であった。用量は、例えば、６×１０１２ｖｇ／ｋｇ未満の用量といった、より低いものであってもよい。より特には、５×１０１１ｖｇ／ｋｇ又は１×１０１２ｖｇ／ｋｇの用量である。
【００９７】
[0098]ｒＡＡＶベクター用量は、異種核酸配列、コードされるタンパク質若しくは阻害核酸、又はｒＡＡＶベクターに対して大きな免疫応答がないように、典型的には用量スペクトルの下端のレベルであってもよい。より特には、最大６×１０１２ｖｇ／ｋｇであるがそれ未満、例えば、約５×１０１１〜約５×１０１２ｖｇ／ｋｇ、又はより特には、約５×１０１１ｖｇ／ｋｇ又は約１×１０１２ｖｇ／ｋｇの用量である。
【００９８】
[0099]治療のための「有効量」又は「十分量」の用量（例えば、寛解のため又は治療的利益若しくは改善をもたらすため）は、典型的に、測定可能な程度まで、疾患の１つ、複数又は全ての有害な症状、帰結又は合併症、例えば、疾患により引き起こされるか、又は疾患に関連する、１つ又は複数の有害な症状、障害、病気、病状、又は合併症に対して応答をもたらすために効果的であるが、疾患の進行又は悪化を減少させ、低減させ、阻害し、抑制し、制限し又は制御することは満足のいくアウトカムである。
【００９９】
[0100]有効量又は十分量は、単回投与で提供されてもよいがその必要はなく、複数回投与を必要とすることがあり、単独で又は別の組成物（例えば、剤）、治療、プロトコール若しくは治療レジメンと組み合わせて提供されてもよいがその必要はない。例えば、量は、対象の必要性、治療されている疾患の種類、状態及び重篤度又は治療の副作用（それがある場合）により指し示されるように比例的に増加させてもよい。
【０１００】
[0101]加えて、有効量又は十分量は、第２の組成物（例えば、別の薬物又は剤）、治療、プロトコール又は治療レジメンなしで単回又は複数回用量で与えられた場合に効果的又は十分なものである必要はなく、その理由は、所与の対象において効果的又は十分であると考えるために、そのような用量を上回るように追加の用量、量若しくは継続期間、又は追加の組成物（例えば、薬物若しくは剤）、治療、プロトコール若しくは治療レジメンを含めてもよいからである。効果的と考えられる量としてはまた、酵素欠乏（例えば、ポンペ病）の治療のための組換え酵素（例えば、ＧＡＡ）の投与又は凝固障害（例えば、血友病Ａ）の治療のための組換え凝固因子タンパク質（例えば、ＦＶＩＩＩ）の投与のような別の治療、治療レジメン又はプロトコールの使用の低減を結果としてもたらす量が挙げられる。
【０１０１】
[0102]したがって、本発明の方法及び使用はまた、特に、別の化合物、剤、薬物、治療レジメン、治療プロトコール、方法、又は治療薬の必要性又は使用の低減を結果としてもたらす方法及び使用を含む。したがって、本発明によれば、別の治療又は療法の必要性又は使用を低減させる方法及び使用が提供される。
【０１０２】
[0103]有効量又は十分量は、治療される各々及びあらゆる対象において効果的である必要はなく、所与の群又は集団内の治療される対象の大部分において効果的である必要もない。有効量又は十分量は、群又は一般集団ではなく特定の対象における有効性又は十分性を意味する。そのような方法について典型的であるように、一部の対象は、所与の治療方法又は使用に対してより大きな応答、又はより小さい応答を呈し、又は応答を呈さない。
【０１０３】
[0104]「寛解させる」という用語は、対象の疾患又はその症状、又はこれらの背景となる細胞応答における検出可能又は測定可能な改善を意味する。検出可能又は測定可能な改善としては、疾患、若しくは疾患により引き起こされるか若しくは疾患に関連する合併症の存在、頻度、重篤度、進行、若しくは継続期間の主観的若しくは客観的な減少、低減、阻害、抑制、制限若しくは制御、又は疾患の症状若しくは背景となる原因若しくは帰結の改善、又は疾患の後退が挙げられる。
【０１０４】
[0105]ポンペ病について、有効量は、例えば、グリコーゲンの産生若しくは蓄積を阻害し若しくは低減させ、グリコーゲンの分解若しくは除去を増進若しくは増加させ、又は対象における筋緊張及び／若しくは筋肉強度を向上させるＧＡＡの量である。血友病Ａについて、有効量は、例えば、対象における急性出血発生の頻度若しくは重篤度を低減させる量、又は、例えば、凝固アッセイにより測定される凝固時間を低減させる量である。
【０１０５】
[0106]治療用量は、他の要因の中でも特に、対象の年齢及び全般的状態、疾患又は障害の重篤度に依存する。ヒトにおける治療有効量は、個々の患者の応答に基づいて医師により決定されることがある比較的広範な範囲に入る。
【０１０６】
[0107]医薬組成物のような組成物は、コードされたタンパク質又は阻害核酸の産生を可能とするように、対象に送達されてもよい。特定の実施形態では、医薬組成物は、レシピエントが対象中で治療有効量のタンパク質又は阻害核酸を産生することを可能とするために十分な遺伝材料を含む。
【０１０７】
[0108]組成物は、単独で投与されてもよい。ある特定の実施形態では、組換えＡＡＶ粒子は、免疫抑制剤なしで治療効果をもたらす。治療効果は、任意選択で、免疫抑制剤を投与することなく、例えば、２〜４、４〜６、６〜８、８〜１０、１０〜１４、１４〜２０、２０〜２５、２５〜３０、又は３０〜５０日又はそれより長い期間、例えば、５０〜７５、７５〜１００、１００〜１５０、１５０〜２００日又はそれより長い期間にわたり持続する。したがって、治療効果は、ある期間にわたりもたらされる。
【０１０８】
[0109]組成物は、少なくとも１つの他の剤と組み合わせて投与されてもよい。ある特定の実施形態では、ｒＡＡＶベクターは、ｒＡＡＶベクターの投与の前に、実質的に同時に又は後に１つ又は複数の免疫抑制剤と組み合わせて投与される。ある特定の実施形態では、ｒＡＡＶベクターの投与後、例えば、１〜１２、１２〜２４又は２４〜４８時間、又は２〜４、４〜６、６〜８、８〜１０、１０〜１４、１４〜２０、２０〜２５、２５〜３０、３０〜５０日、又は５０日より後である。ｒＡＡＶベクターを投与した後のある期間後の免疫抑制剤のそのような投与は、ｒＡＡＶベクター後のある期間、例えば、２０〜２５、２５〜３０、３０〜５０、５０〜７５、７５〜１００、１００〜１５０、１５０〜２００日、又は２００日より後にわたり初期発現レベル後のコードされたタンパク質又は阻害核酸の減少がある場合。
【０１０９】
[0110]ある特定の実施形態では、免疫抑制剤は抗炎症剤である。ある特定の実施形態では、免疫抑制剤はステロイドである。ある特定の実施形態では、免疫抑制剤は、サイクロスポリン（例えば、サイクロスポリンＡ）、ミコフェノレート、リツキシマブ又はこれらの誘導体である。追加の特定の剤としては、安定化化合物が挙げられる。
【０１１０】
[0111]組成物は、生理食塩水、緩衝生理食塩水、デキストロース、及び水が挙げられるがこれらに限定されない任意の無菌の、生体適合性の薬学的担体中に配合し及び／又は該担体中で投与することができる。組成物は、単独で、又はうっ血に影響を及ぼす他の剤（例えば、補因子）と組み合わせて配合し及び／又は患者に投与することができる。
【０１１１】
[0112]本発明の方法及び使用は、全身、限局的若しくは局所的に、又は任意の経路、例えば注射若しくは注入により送達及び投与することを含む。ｉｎ  ｖｉｖｏでの医薬組成物の送達は、一般に、従来のシリンジを使用する注射を介して達成することができるが、対流強化送達法のような他の送達方法もまた想定される（例えば、米国特許第５，７２０，７２０号明細書を参照）。例えば、組成物は、皮下に、表皮に、皮内に、髄腔内に、眼窩内に、粘膜内に、腹腔内に、静脈内に、胸膜内に、動脈内に、経口的に、肝臓内に、門脈を介して、又は筋肉内に送達されてもよい。投与の他の様式としては、経口及び肺投与、坐剤、及び経皮塗布が挙げられる。血液凝固障害を有する患者の治療を専門とする臨床医は、患者の状態及び治療の目的（例えば、血液凝固の増進又は低減）が挙げられるがこれらに限定されない多数の基準に基づいてＡＡＶベクターの投与のための最適な経路を決定することができる。
【０１１２】
[0113]本発明のｒＡＡＶベクター、方法及び使用は、所望の治療的、有益、付加的、相乗的又は相補的な活性又は効果を有する任意の化合物、剤、薬物、治療又は他の治療レジメン又はプロトコールと組み合わせることができる。例示的な組合せ組成物及び治療は、生物学的製剤（タンパク質）、剤（例えば、免疫抑制剤）及び薬物のような第２の活性剤を含む。そのような生物学的製剤（タンパク質）、剤、薬物、治療及び療法は、任意の他の方法又は本発明の使用の前に、それと実質的に同期間に又はその後に投与又は行うことができる。
【０１１３】
[0114]化合物、剤、薬物、治療又は他の治療レジメン又はプロトコールは、組合せ組成物として投与するか、又は別々に投与することができ、例えば、核酸、ベクター、又はｒＡＡＶ粒子の送達又は投与と並行して又は連続して又は逐次的（前又は後）に投与することができる。本発明は、したがって、本発明の方法又は使用が、本明細書に記載される又は当業者に公知の任意の化合物、剤、薬物、治療レジメン、治療プロトコール、方法、治療薬又は組成物と組み合わせられた組合せを提供する。化合物、剤、薬物、治療レジメン、治療プロトコール、方法、治療薬又は組成物は、本発明の核酸、ベクター又はｒＡＡＶ粒子の投与の前に、それと実質的に同期間に又はその後に対象に投与又は行うことができる。
【０１１４】
[0115]本発明は、ヒトを含む動物及び獣医学的応用において有用である。好適な対象としては、したがって、ヒトの他に、非ヒト哺乳動物のような哺乳動物が挙げられる。「対象」という用語は、動物、典型的には哺乳動物、例えば、ヒト、非ヒト霊長動物（類人猿、テナガザル、ゴリラ、チンパンジー、オランウータン、マカク）、家畜動物（イヌ及びネコ）、農用動物（家禽、例えば、ニワトリ及びカモ、ウマ、ウシ、ヤギ、ヒツジ、ブタ）、及び実験動物（マウス、ラット、ウサギ、モルモット）を指す。ヒト対象としては、胎児、新生児、乳児、若年児及び成人対象が挙げられる。対象としては、ポンペ病、ＨｅｍＡのような血液凝固疾患及び当業者に公知の他のもののようなタンパク質／酵素欠損の動物疾患モデル、例えばマウス及び他の動物モデルが挙げられる。
【０１１５】
[0116]本発明による治療のために適切な対象としては、不十分な量の機能的な遺伝子産物を産生するか若しくは該遺伝子産物に欠損を有するか、若しくはこれらのリスクがあるか、又は疾患に繋がることがある異常な、部分的に機能的若しくは非機能的な遺伝子産物を産生する対象が挙げられる。本発明による治療のために適切な対象としてはまた、疾患に繋がる異常な、又は欠陥のある（突然変異体）遺伝子産物（タンパク質）を有するか、又はそれを産生するリスクがあり、それにより、異常な、又は欠陥のある（突然変異体）遺伝子産物（タンパク質）の量、発現又は機能の低減が、疾患の治療に繋がるか、又は１つ若しくは複数の症状を低減させるか、又は疾患を寛解させるような対象が挙げられる。
【０１１６】
[0117]免疫応答、例えば、ＡＡＶに対する抗体について対象を試験することができる。したがって、本発明の方法による治療の前に対象候補をスクリーニングすることができる。治療後のＡＡＶに対する抗体について対象を試験することもでき、及び任意選択で、治療後の期間にわたり対象をモニターすることができる。ＡＡＶ抗体を発生する対象を免疫抑制剤で治療することができ、又は該対象に１つ若しくは複数の追加の量のＡＡＶベクターを投与することができる。
【０１１７】
[0118]本発明による治療のために適切な対象としてはまた、ＡＡＶに対する抗体を有するか、又は該抗体を産生するリスクがある対象が挙げられる。いくつもの技術を使用してそのような対象にｒＡＡＶベクターを投与又は送達することができる。例えば、ＡＡＶ空キャプシド（すなわち、異種核酸を欠いたＡＡＶ）を送達して対象中のＡＡＶ抗体に結合させ、それにより、異種核酸を含むｒＡＡＶベクターが対象の細胞に導入されることを可能とすることができる。
【０１１８】
[0119]ＡＡＶ空キャプシド対ｒＡＡＶベクターの比は、約２：１〜約５０：１、又は約２：１〜約２５：１、又は約２：１〜約２０：１、又は約２：１〜約１５：１、又は約２：１〜約１０：１であってもよい。比はまた、約２：１、３：１、４：１、５：１、６：１、７：１、８：１、９：１、又は１０：１であってもよい。
【０１１９】
[0120]投与すべきＡＡＶ空キャプシドの量は、特定の対象中で産生されるＡＡＶ抗体の量（力価）に基づいて軟正されてもよい。ＡＡＶ空キャプシドは、任意の血清型、例えば、配列番号１、配列番号２、ＡＡＶ１、ＡＡＶ２、ＡＡＶ３、ＡＡＶ４、ＡＡＶ５、ＡＡＶ６、ＡＡＶ７、ＡＡＶ８、ＡＡＶ９、ＡＡＶ１０、ＡＡＶ１１、ＡＡＶ１２、Ｒｈ１０、Ｒｈ７４又はＡＡＶ−２ｉ８であってもよい。
【０１２０】
[0121]代替的又は追加的に、ｒＡＡＶベクターは、直接的な筋肉内注射（例えば、１つ又は複数の遅筋線維）により送達されてもよい。別の代替手段では、大腿動脈中に導入されたカテーテルを使用して、肝動脈を介してｒＡＡＶベクターを肝臓に送達することができる。ｒＡＡＶベクターを肝臓に直接的に送達し、それにより血流及びＡＡＶ抗体をバイパスするために、内視鏡的逆行性胆道膵管造影（ＥＲＣＰ）のような非外科的手段もまた用いることができる。顎下腺管のような他の管系もまた、抗ＡＡＶ抗体を発生するか、又は既存の抗ＡＡＶ抗体を有する対象にｒＡＡＶベクターを送達するためのポータルとして使用することができる。
【０１２１】
[0122]疾患により引き起こされるか又は疾患に関連する有害な症状、条件、合併症などの発症の前に対象への投与又はｉｎ  ｖｉｖｏ送達を行うことができる。例えば、スクリーニング（例えば、遺伝子スクリーニング）を使用して、本発明の組成物、方法及び使用の候補としてそのような対象を同定することができる。そのような対象としては、したがって、機能的な遺伝子産物において不十分な量若しくは欠乏について陽性とスクリーニングされたか、又は異常な、部分的に機能的若しくは非機能的な遺伝子産物を産生する対象が挙げられる。
【０１２２】
[0123]本明細書に開示されるような本発明の方法及び使用による対象への投与又はｉｎ  ｖｉｖｏ送達は、対象が、治療のために標的化された疾患を有すると同定され、疾患の１つ若しくは複数の症状を有し、又はスクリーニングされて、対象は疾患の１つ若しくは複数の症状を有しないが本明細書に記載されるように陽性であると同定された後、１〜２、２〜４、４〜１２、１２〜２４又は２４〜７２時間以内に実施することができる。当然、本発明の方法及び使用は、対象が、治療のために標的化された疾患を有すると同定され、疾患の１つ若しくは複数の症状を有し、又はスクリーニングされて、対象は疾患の１つ若しくは複数の症状を有しないが本明細書に記載されるように陽性であると同定された後、１〜７、７〜１４、１４〜２４、２４〜４８、４８〜６４又はそれより後の日、月又は年に実施することができる。
【０１２３】
[0124]本明細書において使用される「単位剤形」は、治療すべき対象のための単位投与量として適した物理的に別々の単位を指し、各単位は、１つ又は複数の用量で投与された時に所望の効果（例えば、予防又は治療効果）を生じさせると算出される薬学的担体（賦形剤、希釈剤、ビヒクル又は充填剤）と任意選択で組み合わせた予め決定された量を含有する。単位剤形は、例えば、アンプル及びバイアル内にあってもよく、アンプル及びバイアルは、液体組成物、又はフリーズドライ若しくは凍結乾燥状態の組成物を含んでもよく、例えば、ｉｎ  ｖｉｖｏでの投与又は送達の前に無菌の液体担体を加えることができる。個々の単位剤形は、複数用量のキット又は容器に含まれてもよい。ｒＡＡＶ粒子、及びその医薬組成物は、投与を容易にし、投与量を均一にするために単一又は複数の単位剤形中にパッケージングすることができる。
【０１２４】
[0125]対象をタンパク質活性について試験して、そのような対象が本発明の方法による治療のために適切かどうかを決定することができる。対象を本発明の方法にしたがってタンパク質の量について試験することもできる。そのような治療される対象を、治療後に定期的に、例えば、１〜４週毎、１〜６カ月毎、６〜１２カ月毎、又は１、２、３、４、５若しくはより長い年毎にモニターすることができる。
【０１２５】
[0126]有害な応答について対象を１つ又は複数の肝臓酵素について試験して、そのような対象が本発明の方法による治療のために適切かどうかを決定することができる。したがって、本発明の方法による治療の前に対象候補を１つ又は複数の肝臓酵素の量についてスクリーニングすることができる。本発明の方法による治療後に対象を１つ又は複数の肝臓酵素の量について試験することもできる。そのような治療される対象を肝臓酵素の上昇について定期的に、例えば、１〜４週毎、１〜６カ月毎、６〜１２カ月毎、又は１、２、３、４、５若しくはより長い年毎に治療後にモニターすることができる。
【０１２６】
[0127]例示的な肝臓酵素としては、アラニンアミノトランスフェラーゼ（ＡＬＴ）、アスパラギン酸アミノトランスフェラーゼ（ＡＳＴ）、及び乳酸デヒドロゲナーゼ（ＬＤＨ）が挙げられるが、肝臓損傷の指標となる他の酵素もまたモニターすることができる。循環中のこれらの酵素の正常レベルは、典型的に上限レベルを有する範囲として定義され、該上限レベルより高い酵素レベルは上昇しており、したがって肝臓損傷の指標となると考えられる。正常範囲は、部分的に、アッセイを実行する臨床試験室により使用される基準に基づく。
【０１２７】
[0128]別段の定義がなければ、本明細書において使用される全ての科学技術用語は、本発明が属する技術分野の当業者により一般的に理解されるものと同じ意味を有する。本明細書に記載されるものと類似又は同等の方法及び材料を本発明の実施又は試験において使用することができるが、好適な方法及び材料を本明細書に記載する。
【０１２８】
[0129]本明細書で引用する全ての特許、特許出願、刊行物、及び他の参考文献、ＧｅｎＢａｎｋの引用及びＡＴＣＣの引用は、参照により全体が組み込まれる。矛盾がある場合、定義を含む本明細書の記載が優先される。
【０１２９】
[0130]本発明の生物学的分子に関する様々な用語が、上記、並びに本明細書の全体及び特許請求の範囲において使用される。
【０１３０】
[0131]本明細書に開示される全ての特徴は、任意の組合せで組み合わせることができる。本明細書に開示される各特徴を、同じ、同等、又は類似の目的を果たす代替的な特徴により置換することができる。したがって、別段の明示的な記載がなければ、開示される特徴は、同等又は類似の特徴の属の例である。
【０１３１】
[0132]本明細書において使用される場合、単数形「ａ」、「ａｎｄ」及び「ｔｈｅ」は、そうでないことを文脈が明確に指し示さなければ、複数の指示対象を含む。したがって、例えば、「核酸」（ａ  ｎｕｃｌｅｉｃ  ａｃｉｄ）への言及は複数のそのような核酸を含み、「ベクター」（ａ  ｖｅｃｔｏｒ）への言及は複数のそのようなベクターを含み、「ウイルス」（ａ  ｖｉｒｕｓ）又は「粒子」（ａ  ｐａｒｔｉｃｌｅ）への言及は複数のそのようなウイルス／粒子を含む。
【０１３２】
[0133]本明細書において使用される場合、全ての数値又は数値範囲は、そうでないことを文脈が明確に指し示さなければ、そのような範囲内の整数及び値又は範囲内の整数の小数を含む。したがって、実例を示すと、８０％又はそれより高い同一性への言及は、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％などの他に、８１．１％、８１．２％、８１．３％、８１．４％、８１．５％など、８２．１％、８２．２％、８２．３％、８２．４％、８２．５％など、及び以下同様のものを含む。
【０１３３】
[0134]より大きい（超）又はより小さいを伴う整数への言及は、それぞれ、参照数より大きい又は小さい任意の数を含む。したがって、例えば、１００未満への言及は、９９、９８、９７など、さらに減少して数１までの全てを含み、１０未満は、９、８、７など、さらに減少して数１までの全てを含む。
【０１３４】
[0135]本明細書において使用される場合、全ての数値又は範囲は、そうでないことを文脈が明確に指し示さなければ、値の小数及びそのような範囲内の整数及びそのような範囲内の整数の小数を含む。したがって、実例を示すと、１〜１０のような数値範囲への言及は、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０の他に、１．１、１．２、１．３、１．４、１．５など、及び以下同様のものを含む。１〜５０の範囲への言及は、したがって、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０など、５０を含めて５０までの他に、１．１、１．２、１．３、１．４、１．５など、２．１、２．２、２．３、２．４、２．５など、及び以下同様のものを含む。
【０１３５】
[0136]範囲のシリーズへの言及は、シリーズ内の異なる範囲の境界の値を合わせた範囲を含む。したがって、実例を示すと、例えば、１〜１０、１０〜２０、２０〜３０、３０〜４０、４０〜５０、５０〜６０、６０〜７５、７５〜１００、１００〜１５０、１５０〜２００、２００〜２５０、２５０〜３００、３００〜４００、４００〜５００、５００〜７５０、７５０〜８５０の範囲のシリーズへの言及は、１〜２０、１〜３０、１〜４０、１〜５０、１〜６０、１０〜３０、１０〜４０、１０〜５０、１０〜６０、１０〜７０、１０〜８０、２０〜４０、２０〜５０、２０〜６０、２０〜７０、２０〜８０、２０〜９０、５０〜７５、５０〜１００、５０〜１５０、５０〜２００、５０〜２５０、１００〜２００、１００〜２５０、１００〜３００、１００〜３５０、１００〜４００、１００〜５００、１５０〜２５０、１５０〜３００、１５０〜３５０、１５０〜４００、１５０〜４５０、１５０〜５００などの範囲を含む。
【０１３６】
[0137]本発明は、一般に、多数の実施形態及び態様を記載するために肯定的な表現を使用して本明細書に開示される。本発明はまた、物質又は材料、方法ステップ及び条件、プロトコール、又は手順のような特定の主題が全体的又は部分的に除外された実施形態を特に含む。例えば、本発明のある特定の実施形態又は態様では、材料及び／又は方法ステップが除外される。したがって、本発明は、一般に、本発明が何を含まないのかの点で本明細書中に表現されないが、それにもかかわらず、本発明において明示的に除外されない態様が本明細書に開示される。
【０１３７】
[0138]本発明のいくつかの実施形態を記載してきた。それにもかかわらず、当業者は、本発明の精神及び範囲から離れることなく、本発明を様々な使用法及び条件に適合させるために本発明に様々な変更及び改良を行うことができる。したがって、以下の実施例は、実例を示すことを意図したものであり、いかなる意味でも請求される発明の範囲を限定することを意図しない。
【実施例】
【０１３８】
[0001]以下は、ＡＡＶキャプシド特異的抗体親和性マトリックスを生成するために使用することができた親和性樹脂（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）の代表的な非限定的（ｎｏｎ−ｌｉｍｉｎｇ）な例である。ＡＡＶキャプシドタンパク質は、以下に記載される様々なクロマトグラフィー媒体に架橋され得るアミノ酸を含有する。ＡＡＶキャプシドを取り付けることができる親和性樹脂の他の製造業者からの同等の及び／又は好適な材料を適宜に使用又は製造することもできる。
【０１３９】
実施例１
ＣＮＢｒ活性化セファロース４ファストフロー（Ｆａｓｔ  Ｆｌｏｗ）
[0002]ＣＮＢｒ活性化セファロース４ファストフローは、大きいアミノ含有リガンドの連結のための予め活性化されたクロマトグラフィー媒体である。
大きいアミノ含有リガンドの連結のために設計されたＣＮＢｒ活性化ＢｉｏＰｒｏｃｅｓｓ媒体。
迅速及び効率的な連結。
この樹脂は、タンパク質リガンドの複数点取付けを可能とし、リガンド漏出を最小化する。
産業用途のために支持され、認証された方法において十分に確立されたＢｉｏＰｒｏｃｅｓｓ媒体。
【０１４０】
[0003]ＣＮＢｒ活性化セファロース４ファストフローは、確立されたセファロースファストフロープラットフォームに基づく。樹脂は、臭化シアンで予め活性化された架橋された４％のアガロースビーズから構成される。ＣＮＢｒ活性化セファロース  ４ファストフローは、アミノ基を含有するタンパク質リガンドの複数点取付けのために設計されている。
【０１４１】
[0004]ＣＮＢｒ活性化セファロース４ファストフローへの生体分子特異的リガンドの連結によるアフィニティークロマトグラフィー媒体の調製及び使用は、広く使用されている、十分に文書化されたアプローチであり、容易、迅速及び効率的な連結手順を伴う。
【０１４２】
[0005]ＣＮＢｒ活性化セファロース４ファストフローは、容易なスケールアップ及びプロセス開発のために異なるバルクパックサイズ及び簡便な事前パッキングされたフォーマットの範囲で利用可能である。
【０１４３】
[0006]ＢｉｏＰｒｏｃｅｓｓ媒体範囲のメンバーとして、ＣＮＢｒ活性化セファロース４ファストフローは産業上の需要を満たし、供給の確実性並びに包括的な技術的及び規制上のサポートを伴う。
【０１４４】
実施例２
活性化チオールセファロース４Ｂ
[0007]活性化チオールセファロース４Ｂ媒体は、穏やかな条件下でのチオール基を含有する分子の可逆的な固定のために使用される媒体である。大分子の固定のために最適化されている。
グルタチオンスペーサーアームを介したセファロース４Ｂへのチオール基を用いたタンパク質及び大きい生体分子の可逆的な連結。
リガンドは、２，２’−ジピリジルジスルフィドとＣＮＢｒ活性化セファロース４Ｂに連結されたグルタチオンとの間に形成された混合ジスルフィドである。
酵素及び核酸のような大分子の共有結合クロマトグラフィーに良好に適する。
ゲルはまた、重金属イオン並びにハロゲン化アルキル及びハロゲン化アリールと反応する。Ｃ＝Ｏ、Ｃ＝Ｃ、及びＮ＝Ｎ結合を含有する化合物と付加反応を起こす。
チオール含有タンパク質を非チオール含有タンパク質から分離する。
【０１４５】
[0008]活性化チオールセファロース４Ｂは、２，２’−ジピリジルジスルフィドとＣＮＢｒ活性化セファロース４Ｂに連結されたグルタチオンとの間に形成される混合ジスルフィドである。活性化チオールセファロース４Ｂは、穏やかな条件下でチオール基を含有する溶質と反応して、混合ジスルフィドを形成する。この反応は、共有結合クロマトグラフィー及びチオール含有生体分子の固定のための手順の基礎を形成する。
【０１４６】
実施例３
ＥＡＨセファロース４Ｂ
[0009]ＥＡＨセファロース事前活性化媒体は、１１原子スペーサーアームを介するカルボジイミドベースの連結を通じたセファロース４Ｂへのカルボキシル基を含有する化合物の連結のために使用される。
１１原子親水性スペーサーアームを介したセファロース４Ｂへのカルボキシル基の安定なカルボジイミドベースの連結は非常に安定な連結を可能とする。
【０１４７】
実施例４
エポキシ活性化セファロース６Ｂ
[0010]エポキシ活性化セファロース６Ｂは、１２原子親水性スペーサーアームを介したセファロース６Ｂへのリガンドのヒドロキシ、アミノ又はチオール基の連結を通じた糖を含む様々なリガンドの固定のための予め活性化された媒体である。
エポキシ活性化セファロース６Ｂを使用して、安定なエーテル結合を介して糖及び他の炭水化物をヒドロキシル基に連結することができる。
【０１４８】
[0011]エポキシ活性化セファロース６Ｂは、様々なリガンドの固定のための予め活性化された媒体である。エポキシ活性化セファロース６Ｂを使用して、安定なエーテル結合を介して糖及び他の炭水化物をヒドロキシル基に連結することができる。他のリガンドをヒドロキシル、アミノ又はチオール基を通じて連結することができる。媒体は長い親水性スペーサーアームを有し、それにより、小分子の固定のために特に好適である。エポキシ活性化セファロース６Ｂは、セファロース６Ｂを１，４−ビス（２，３−エポキシ−プロポキシ−）ブタンと反応させることにより形成される。
【０１４９】
実施例５
精製されたＡＡＶキャプシドは本質的にＧＭＰグレードであり得る
[0012]ＡＡＶキャプシド親和性マトリックスを生成するために適切な樹脂又はマトリックスと組み合わせて使用されるＡＡＶキャプシドタンパク質の典型的な特徴は純度である。細胞培養物中のＡＡＶの生成は複雑であり、共に生成される豊富に存在する非ＡＡＶ成分（不純物及び汚染物）からのその分離は重要である。特に、ＡＡＶキャプシド粒子は、製造細胞及び細胞培養培地由来の不純物から精製される。親和性マトリックスを生成するために使用されるＡＡＶキャプシド調製物中の高い不純物レベルの存在は、アフェレーシスの状況において使用される時に、より低い効率及びより低い結合特異性を結果としてもたらす。ＡＡＶ粒子の１つの例示的な精製は、ヒト非経口製品の現行医薬品適正製造基準（ＧＭＰ）下のものであり、その理由は、想定される親和性マトリックスはプラズマフェレーシスプロセス中にヒト対象の血液製剤と接触するからである。
【０１５０】
実施例６
親和性マトリックスの製造のためのＡＡＶキャプシド材料
[0013]プラズマフェレーシス用のＡＡＶキャプシド親和性マトリックスの生成において使用するためのキャプシド材料の１つの典型的な形態は、導入遺伝子を欠いたＡＡＶ粒子であるＡＡＶ「空」キャプシドである。親和性マトリックス結合ＡＡＶ空キャプシドは、対応するＡＡＶベクターと同じ表面エピトープを提示すると予測される。
【０１５１】
[0014]例えば、ＡＡＶキャプシド変種配列番号１又は２に由来する高度に精製された空キャプシドをＣＮＢｒ活性化セファロース樹脂に連結させることができる。重篤な血友病Ａを有し、１：１００のＡＡＶ−配列番号１又は２の抗体力価を有するヒト対象において、高度に精製されたＡＡＶ−配列番号１又は２の空キャプシドを使用して調製されたＡＡＶ結合抗体親和性マトリックスを用いる本明細書に記載されるような十分なプラズマフェレーシスは、対象のＡＡＶ−配列番号１又は２の抗体力価を例えば１：１に低減させることが予測される。プラズマフェレーシスプロトコールの完了の約１２時間未満又は典型的に約６時間未満に、次にこの対象をヒト凝固第ＶＩＩＩ因子を発現するＡＡＶ−ＡＡＶ−配列番号１又は２を用いて治療することで、効率的な遺伝子移入が達成され、その後に治療的なレベルの循環性ＦＶＩＩＩが発現される。より高い初期ＡＡＶ力価（１：１００より高い）において、プラズマフェレーシスプロトコール後の治療はより早く行われる。
【０１５２】
[0015]或いは、任意の他の公知のＡＡＶキャプシド血清型又はキャプシド変種について調製された空キャプシドを同様に使用して、その特定のＡＡＶキャプシド血清型又はキャプシド変種への抗体力価を低減させ、それにより、任意の治療的な導入遺伝子を発現する対応するＡＡＶベクターでの効率的な遺伝子移入を可能とすることができる。
【０１５３】
[0016]いっそうさらには、別の代替手段において、単独で又は任意の化学量論での組合せで使用される、任意の天然に存在するＡＡＶキャプシド血清型又は合成ＡＡＶキャプシド変種からの任意のＡＡＶ  ＶＰ１、ＶＰ２及びＶＰ３キャプシドタンパク質を同様に使用して、ＡＡＶ抗体力価を低減させ、任意の治療遺伝子を発現する対応するウイルスベクターでの効率的な遺伝子移入を可能とすることができる。
【０１５４】
実施例７
親和性マトリックスの製造のための他のウイルスベクター材料
[0017]或いは、遺伝子移入を達成するために使用することができるウイルスからの他のウイルスベクター又はウイルスベクタータンパク質を使用して、抗体親和性マトリックスを開発し、及び本明細書に記載されるような方法を実行してもよい。例示的に、ウイルスは以下のウイルスファミリー：ピコルナウイルス科、カリシウイルス科、アストロウイルス科、トガウイルス科、フラビウイルス科、コロナウイルス科（Ｃｏｒｏｎｏｖｉｒｉｄａｅ）、ラブドウイルス科、フィロウイルス科、パラミクソウイルス科（Ｐａｒｏｍｙｘｏｖｉｒｉｄａｅ）、オルトミクソウイルス科、ブニヤウイルス科、アレナウイルス科、レオウイルス科、レトロウイルス科（Ｅｔｒｏｖｉｒｉｄａｅ）、パポバウイルス科（Ｐａｐｏｖｉｒｉｄａｅ）、アデノウイルス科、パルボウイルス科、ヘルペスウイルス科、ポックスウイルス科、ヘパドナウイルス科からのものであり、各々のウイルス抗体力価を低減させるために使用して、任意の治療遺伝子を発現する対応するベクターでの効率的な遺伝子移入を可能とすることができる。
【０１５５】
実施例８
治療的利益のためのベクターの再投与及び／又は連続投与
[0018]ヒト集団中に天然に生じる既存の抗体によるＡＡＶベクターによる治療遺伝子移入の阻害に加えて、キャプシド特異的抗体は、ＡＡＶベクター（及び本明細書に記載されるような他のベクター）自体の投与後に増加することがある。ＡＡＶキャプシド親和性プラズマフェレーシスの使用は、同様に、遺伝子療法ベクターの事前の投与により引き起こされるＡＡＶキャプシド抗体を低減させて、再投与時の効率的な遺伝子移入を可能とすることができる。このプロセスを長期間にわたり連続的な方式で行って、ヒト対象中の治療遺伝子発現のレベルを徐々に増加させることができる。例えば、重篤な血友病Ａを有する幼児におけるＡＡＶベースの遺伝子移入後の凝固第ＦＶＩＩＩ因子の血中レベルは、子供が成長するにつれて徐々に減少すると考えられる。本明細書に開示されるＡＡＶキャプシド親和性プラズマフェレーシスプロトコールを使用する小児期及び青年期の定期的な再投与は、子供が成長する際の及び成人期を通じてＦＶＩＩＩの治療的なレベルの維持を可能とする。
【０１５６】
実施例９
抗体のリバウンド速度の算出
ＩｇＧの半減期（ヒト）＝２０日
ヒト血清中のＩｇＧ濃度は８〜１８ｍｇ／ｍＬの範囲内であり、１２ｍｇ／ｍＬｍを使用する。
指数関数的減衰式ＨＩＤ＝Ｎｏ（１／２）ｔ／ｔ１／２（ｔの単位は日）
式の証明：Ｈ（０）＝１２（１／２）０／２０＝１２（１）＝１２ｍｇ／ｍＬ
Ｈ（２０）＝１２（１／２）２０／２０＝１２（１／２）＝６ｍｇ／ｍＬ
Ｎ＝ＩｇＧ損失
１日＝２４時間      Ｎ（ｔ＝１）＝１２（１／２）１／２０＝１２（０．５）０．０５＝１１．５９１ｍｇ／ｍＬ
０．５日＝１２時間  Ｎ（０．５）＝１２（１／２）０．５／２０＝１２（０．５）０．０２５＝１１．７９４ｍｇ／ｍＬ
０．２５日＝６時間  Ｎ（０．２５）＝１２（１／２）０．２５／２０＝１２（０．５）０．０１２５＝１１．８９６ｍｇ／ｍＬ
＝３時間  Ｈ（０．１２５）＝１２（１／２）０．１２５／２０＝１２（０．５）０．００６２５＝１１．９４８ｍｇ／ｍＬ
＝１時間  Ｎ（０．０４２）＝１２（１／２）＾０．０４２／２０＝１２（０．５）＾０．００２０８＝１１．９８３ｍｇ／ｍＬ
定常状態１２ｍｇ／ｍＬは等しい合成速度を意味する。
ＩｇＧ合成
２４時間    １２−１１．５９１＝０．４０９ｍｇ／ｍ２÷１２＝３．４１％
１２時間    １２−１１．７９４＝０．２０６ｍｇ／ｍ２÷１２＝１．７２％
６時間    １２−１１．８９６＝０．１０４ｍｇ／ｍ２÷１２＝０．８７％
３時間    １２−１１．９４８＝０．０５２ｍｇ／ｍ２÷１２＝０．４３％
１時間    １２−１１．９８３＝０．０１７ｍｇ／ｍＬ／１２＝０．１５％
合成速度は全てのＩｇＧにわたり同等に分布すると想定する。
１：１００で開始するＡＡＶキャプシドＩｇＧは、キャプシドプラズマフェレーシスにより１：１に低減し、
２４時間時で１：４．４、
１２時間時で１：．７、
６時間時で１：１．９、
３時間時で１：１．４３、
１時間時で１：１．１５
にリバウンドした。
【０１５７】
[0019]表１は、初期ＡＡＶキャプシドＩｇＧ力価（すなわち、１：１０、１：２３０、上記の通り１：１００、１：３００、１：１０００、１：３０００、１：１００００）の関数としての力価リバウンド速度のより広い範囲を示す。特に、表１は、最大１：１０００のＡＡＶ抗体力価を有する対象にプラズマフェレーシス後の約１時間以内に遺伝子療法用のＡＡＶベクターを投与することができ、最大１：３００のＡＡＶ抗体力価を有する対象にプラズマフェレーシス後の約３時間以内に遺伝子療法用のＡＡＶベクターを投与することができ、最大１：１００のＡＡＶ抗体力価を有する対象にプラズマフェレーシス後の約６時間以内に遺伝子療法用のＡＡＶベクターを投与することができ、最大１：１００のＡＡＶ抗体力価を有する対象にプラズマフェレーシス後の約１２時間以内に遺伝子療法用のＡＡＶベクターを投与することができ、最大１：３０のＡＡＶ抗体力価を有する対象にプラズマフェレーシス後の約２４時間以内に遺伝子療法用のＡＡＶベクターを投与することができることを示す。
【０１５８】
【表１】
2020530834.tif 000002
【０１５９】
実施例９
代表的なＡＡＶキャプシド（ＶＰ１）タンパク質
ＡＡＶ−ＳＰＫ  ＶＰ１キャプシド（配列番号１）
1   MAADGYLPDWLEDNLSEGIREWWDLKPGAPKPKANQQKQDNGRGLVLPGYKYLGPFNGLD
61 KGEPVNAADAAALEHDKAYDQQLQAGDNPYLRYNHADAEFQERLQEDTSFGGNLGRAVFQ
121AKKRVLEPLGLVESPVKTAPGKKRPVEPSPQRSPDSSTGIGKKGQQPAKKRLNFGQTGDS
181ESVPDPQPIGEPPAAPSGVGPNTMAAGGGAPMADNNEGADGVGSSSGNWHCDSTWLGDRV
241 ITTSTRTWALPTYNNHLYKQISNGTSGGSTNDNTYFGYSTPWGYFDFNRFHCHFSPRDWQ
301RLINNNWGFRPKRLNFKLFNIQVKEVTQNEGTKTIANNLTSTIQVFTDSEYQLPYVLGSA
361HQGCLPPFPADVFMIPQYGYLTLNNGSQAVGRSSFYCLEYFPSQMLRTGNNFEFSYNFED
421VPFHSSYAHSQSLDRLMNPLIDQYLYYLSRTQSTGGTAGTQQLLFSQAGPNNMSAQAKNW
481 LPGPCYRQQRVSTTLSQNNNSNFAWTGATKYHLNGRDSLVNPGVAMATHKDDEERFFPSS
541GVLMFGKQGAGKDNVDYSSVMLTSEEEIKTTNPVATEQYGVVADNLQQQNAAPIVGAVNS
601QGALPGMVWQNRDVYLQGPIWAKIPHTDGNFHPSPLMGGFGLKHPPPQILIKNTPVPADP
661PTTFNQAKLASFITQYSTGQVSVEIEWELQKENSKRWNPEIQYTSNYYKSTNVDFAVNTE
721 GTYSEPRPIGTRYLTRNL
ＡＡＶ−ＬＫ０３  ＶＰ１キャプシド（配列番号２）
MAADGYLPDWLEDNLSEGIREWWALQPGAPKPKANQQHQDNARGLVLPGYKYLGPGNGLDKGEPVNAADAAALEHDKAYDQQLKAGDNPYLKYNHADAEFQERLKEDTSFGGNLGRAVFQAKKRLLEPLGLVEEAAKTAPGKKRPVDQSPQEPDSSSGVGKSGKQPARKRLNFGQTGDSESVPDPQPLGEPPAAPTSLGSNTMASGGGAPMADNNEGADGVGNSSGNWHCDSQWLGDRVITTSTRTWALPTYNNHLYKQISSQSGASNDNHYFGYSTPWGYFDFNRFHCHFSPRDWQRLINNNWGFRPKKLSFKLFNIQVKEVTQNDGTTTIANNLTSTVQVFTDSEYQLPYVLGSAHQGCLPPFPADVFMVPQYGYLTLNNGSQAVGRSSFYCLEYFPSQMLRTGNNFQFSYTFEDVPFHSSYAHSQSLDRLMNPLIDQYLYYLNRTQGTTSGTTNQSRLLFSQAGPQSMSLQARNWLPGPCYRQQRLSKTANDNNNSNFPWTAASKYHLNGRDSLVNPGPAMASHKDDEEKFFPMHGNLIFGKEGTTASNAELDNVMITDEEEIRTTNPVATEQYGTVANNLQSSNTAPTTRTVNDQGALPGMVWQDRDVYLQGPIWAKIPHTDGHFHPSPLMGGFGLKHPPPQIMIKNTPVPANPPTTFSPAKFASFITQYSTGQVSVEIEWELQKENSKRWNPEIQYTSNYNKSVNVDFTVDTNGVYSEPRPIGTRYLTRPL
【０１６０】
［関連出願］
[0001]この特許出願は、２０１７年７月１７日に出願された米国特許出願第６２／５３３，５７９号の優先権の利益を主張する。上記出願の内容全体は、全てのテキスト、表、図面及び配列を含めて、参照により本明細書に組み込まれる。
【配列表】
2020530834000001.app
【国際調査報告】
2020530834.tif 000003
2020530834.tif 000004
2020530834.tif 000005