(57)【要約】  本発明は、薬学的に許容可能な水性担体中に懸濁した、抗ＴＢ化合物であるベダキリンのマイクロ又はナノ粒子を含む、筋肉注射又は皮下注射によって投与するための医薬組成物、並びに病原性マイコバクテリア感染症の治療及び予防におけるこうした医薬組成物の使用に関する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
治療有効量のベダキリン、又はその薬学的に許容可能な塩をマイクロ又はナノ粒子の懸濁液形態で含む、筋肉注射又は皮下注射によって投与するための医薬組成物であって、前記マイクロ又はナノ粒子の懸濁液が、
（ａ）マイクロ又はナノ粒子形態のベダキリン、又はその薬学的に許容可能な塩、及び表面改質剤と、
（ｂ）薬学的に許容可能な水性担体と、を含む、医薬組成物。
【請求項２】
前記表面改質剤は、ポロキサマー、α−トコフェリルポリエチレングリコールスクシネート、ポリオキシエチレンソルビタン脂肪酸エステル、及び負荷電リン脂質の塩の群から選択される、請求項１に記載の組成物。
【請求項３】
ベダキリンはその非塩形態若しくは遊離形態にあるか、又はフマル酸塩形態にある、請求項１又は２に記載の組成物。
【請求項４】
前記表面改質剤は、Ｐｌｕｒｏｎｉｃ（商標）Ｆ１０８、ビタミンＥ  ＴＧＰＳ、Ｔｗｅｅｎ（商標）８０、及びＬｉｐｏｉｄ（商標）ＥＰＧから選択される、請求項１〜４のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項５】
マイクロ又はナノ粒子であるベダキリン又はその薬学的に許容可能な塩の平均有効粒径は、約５０μｍ未満、具体的には約２００ｎｍ未満である、請求項１〜４のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項６】
マイクロ又はナノ粒子であるベダキリン又はその薬学的に許容可能な塩の平均有効粒径は、約１３０ｎｍである、請求項１〜４のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項７】
前記組成物の全体積に対して重量で：
（ａ）１０〜７０％（ｗ／ｖ）、若しくは２０〜６０％（ｗ／ｖ）、若しくは２０〜５０％（ｗ／ｖ）、若しくは２０〜４０％（ｗ／ｖ）のベダキリン（又はその薬学的に許容可能な塩であるが、前記ｗ／ｖはその非塩形態に基づいて計算される）；
（ｂ）０．５〜２０％、又は２〜１５％若しくは２０％（ｗ／ｖ）、又は５〜１５％（ｗ／ｖ）の湿潤剤；
（ｃ）０％〜１０％、又は０％〜５％、又は０％〜２％、又は０％〜１％の１種類以上の緩衝剤；
（ｄ）０〜２０％、又は２〜１５％若しくは２０％（ｗ／ｖ）、又は５〜１５％（ｗ／ｖ）の等張化剤；
（ｅ）０％〜２％（ｗ／ｖ）の保存剤；及び
（ｆ）全体で１００％とするための適量の注射用水；
を含む、請求項１又は２に記載の組成物。
【請求項８】
病原性マイコバクテリア感染症を治療するための薬剤を製造するための、請求項１〜７のいずれか一項で定義される医薬組成物の使用。
【請求項９】
前記薬剤は、マイコバクテリウム・ツベルクローシス（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ）（潜伏／休眠形態などの）又はマイコバクテリウム・レプレ（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｌｅｐｒａｅ）の長期的治療のためである、請求項８に記載の使用。
【請求項１０】
前記薬剤は、筋肉注射又は皮下注射によって投与するためであり、前記組成物は、１週間〜２年間の時間間隔で間欠的に投与される、請求項８に記載の使用。
【請求項１１】
前記医薬組成物は、少なくとも１ヶ月〜１年間の間隔で投与される、請求項８に記載の使用。
【請求項１２】
前記医薬組成物は、１週間〜１ヶ月の範囲、又は１ヶ月〜３ヶ月の範囲、又は３ヶ月〜６ヶ月の範囲、又は６ヶ月〜１２ヶ月の範囲、又は１２ヶ月〜２４ヶ月の範囲の時間間隔で投与される、請求項８に記載の使用。
【請求項１３】
前記医薬組成物は、２週間に１回、又は１ヶ月に１回、又は３ヶ月に１回投与される、請求項８に記載の使用。
【請求項１４】
（ａ）マイクロ粒子化形態のベダキリン、又はその薬学的に許容可能な塩を得ることと；
（ｂ）前記マイクロ粒子化されたベダキリン又はその薬学的に許容可能な塩を液状媒体に添加して予備混合体／予備分散体を形成することと；
（ｃ）前記予備混合体を粉砕媒体の存在下で機械的手段に供して平均有効粒径を低下させることと；
を含む、請求項１〜７のいずれか一項で定義される医薬組成物を調製する方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、薬学的に許容可能な水性担体中に懸濁した、ＡＴＰ合成酵素阻害化合物であるベダキリン（Ｓｉｒｔｕｒｏ（登録商標）として販売され、ここでベダキリンはそのフマル酸塩形態にある）のマイクロ又はナノ粒子を含む、筋肉注射又は皮下注射によって投与するための医薬組成物、及び細菌感染症、例えば結核などの治療におけるこうした医薬組成物の使用に関する。
【背景技術】
【０００２】
ベダキリンは、様々な組み合わせで用いられる既知の抗結核薬である。これは、Ｓｉｒｔｕｒｏ（登録商標）として販売されるフマル酸ベダキリン形態などの、薬学的に許容可能な塩の形態で配合され得る。これは、真核細胞のミトコンドリアＡＴＰ合成酵素と比較すると、２００００を超えるマイコバクテリアＡＴＰ合成酵素の選択指数を有して、ＡＴＰ合成酵素阻害剤としての機能を果たすものと考えられている。
【０００３】
既にベダキリンは、マイコバクテリア感染症の治療に有用であり、且つ休眠状態で潜伏する持続性マイコバクテリア、具体的にはマイコバクテリウム・ツベルクローシス（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ）を死滅させる上で有用であり、その結果、潜伏性ＴＢの治療に用いることができることが報告されている。ベダキリンのこうした使用は、国際公開第２００４／０１１４３６号パンフレット及び同第２００６／０６７０４８号パンフレットを含むいくつかの刊行物で説明されている。更に、例えば、「Ｂａｃｔｅｒｉａｌ  Ａｃｔｉｖｉｔｉｅｓ  ｏｆ  Ｒ２０７９１０  ａｎｄ  ｏｔｈｅｒ  Ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂｉａｌ  Ａｇｅｎｔｓ  ａｇａｉｎｓｔ  Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｌｅｐｒａｅ  ｉｎ  Ｍｉｃｅ」（Ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂｉａｌ  ａｇｅｎｔｓ  ａｎｄ  Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒａｐｙ，Ａｐｒｉｌ  ２００６，ｐ１５５８）、及び「Ｔｈｅ  Ｄｉａｒｙｌｑｕｉｎｏｌｏｎｅ  Ｒ２０７９１０  ｉｓ  Ｂａｃｔｅｒｉｃｉｄａｌ  ａｇａｉｎｓｔ  Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｌｅｐｒａｅ  ｉｎ  ｍｉｃｅ  ａｎｄ  ａｔ  Ｌｏｗ  Ｄｏｓｅ  Ａｄｍｉｎｉｓｔｅｒｅｄ  Ｉｎｔｅｒｍｉｔｔｅｎｔｌｙ」（Ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂｉａｌ  ａｇｅｎｔｓ  ａｎｄ  Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒａｐｙ，Ｓｅｐｔ  ２００９，ｐ３９８９）に説明されるように、ベダキリンがマイコバクテリウム・レプレ（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｌｅｐｒａｅ）に対して殺菌性があることも知られている。
【０００４】
長時間作用型配合物の目標は、薬剤による負担を低減させることである。これは、数カ月間継続する場合のある治療レジメンの場合に特に有用である。
【０００５】
投与する必要がある投薬形態の数及び／又は量は、一般に「ピル負荷（ｐｉｌｌ  ｂｕｒｄｅｎ）」と呼ばれる。高いピル負荷は、摂取の頻度などの多くの理由から、大型の剤形を嚥下しなくてはならない不都合、並びに多数の又は大型の錠剤を貯蔵し輸送する必要性と頻繁に相まって、望ましくない。高いピル負荷は、患者が彼らの全用量を服用しないために処方された投薬レジメンに従わなくなるリスクを増大させる。これは治療効果を低下させるだけでなく、耐性の発生をもたらす場合もある（例えば、ベダキリンの場合は菌耐性）。
【０００６】
１週間以上、又は更には１ヶ月以上などの長期間隔での投薬形態の投与を伴う療法を提供することは魅力的となる。
【０００７】
当該技術分野では、長時間作用型を含む様々な配合物が既知である。例えば、例えば国際公開第２００７／１４７８８２号パンフレット及び同第２０１２／１４０２２０号パンフレットで説明されるように、抗ＨＩＶ薬の分野では、マイクロ及びナノ懸濁液技術が長時間作用型配合物を得ることで知られている。更に、例えば欧州特許出願公開第Ａ−０４９９２９９号明細書では、従来技術で既知のナノ粒子が説明されている。こうした粒子は、サブミクロン範囲の平均粒径を有し、その表面に表面改質剤を吸着させた結晶質の製剤原料粒子からなる。ナノ粒子はまた、水難溶性の活性成分を配合するためにも用いられている。
【０００８】
抗結核薬であるベダキリンの長時間作用型配合物を以下で説明する。化合物ベダキリンは、マイクロ又はナノ粒子状に配合することができ、またこうした配合物は、例えば結核を含む様々な細菌感染症の治療に使用され得る長時間作用型（又はデポ）配合物として用いることができることが現在では判明している。
【０００９】
こうした配合物の課題は、ベダキリンを含む結核薬の薬物動態学的（ＰＫ）特性と、これらのＰＫ特性を念頭に置いての、血漿中濃度を最小濃度より高く維持する必要性と、に基づいて存在するものと考えられる。ベダキリン及びＮ−モノデスメチル代謝物（Ｍ２代謝物としても知られる）の平均消失半減期（ｍｅａｎ  ｔｅｒｍｉｎａｌ  ｅｌｉｍｉｎａｔｉｏｎ  ｈａｌｆ−ｌｉｆｅ）は約５．５ヶ月である。この長期の消失段階は、ベダキリン及びＭ２が末梢組織から徐放することを恐らく反映している。２０１６年１０月のＬｉｖｅｒｐｏｏｌ市におけるＵＮＩＯＮ会議では、Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  ｏｆ  Ｎｅｂｒａｓｋａ  Ｍｅｄｉｃａｌ  ＣｅｎｔｅｒのＳｕｓａｎ  Ｓｗｉｎｄｅｌｌｓが「Ｅｘｐｅｒｉｅｎｃｅ  ｆｒｏｍ  Ｌｏｎｇ−Ａｃｔｉｎｇ  ＨＩＶ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ」を発表し、ここで、既存の結核薬は（長時間作用型の）理想的な候補ではなく、また信頼できる薬理学モデルが不足していることが概説された。
【００１０】
本発明は、更に、マイコバクテリア感染の増殖を抑制するのに十分となり得る血漿中濃度をもたらす、１週間以上の時間間隔でのこれらのマイクロ又はナノ粒子配合物の間欠投与にも関する。これは、投与回数を低減させるため、患者のピル負荷及び服薬遵守の点で有利になる。したがって、本発明のベダキリンのマイクロ又はナノ粒子配合物は、マイコバクテリア感染症（例えば、潜伏性結核を含む結核、及びらい病）の長期的治療において有用となり得る。
【００１１】
ベダキリンのマイクロ又はナノ粒子配合物の１週間以上の時間間隔での間欠投与は、更に、マイコバクテリア感染症の伝染を予防するのに十分となり得る血漿中濃度をもたらす。この場合にも、投与回数は低減が必要であり、これも感染リスクのある個人のピル負荷及び服薬遵守の点で有利である。
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【００１２】
本発明は、治療有効量のベダキリン、又はその薬学的に許容可能な塩をマイクロ又はナノ粒子の懸濁液形態で含む、筋肉注射又は皮下注射によって投与するための医薬組成物であって、マイクロ又はナノ粒子の懸濁液が、
（ａ）マイクロ又はナノ粒子形態のベダキリン、又はその薬学的に許容可能な塩、及び表面改質剤と、
（ｂ）薬学的に許容可能な水性担体と、を含む医薬組成物に関し、
こうした組成物は、本明細書では「本発明の組成物」と称され得る。
【００１３】
本発明の組成物は懸濁液であり、これは、ベダキリン活性成分が薬学的に許容可能な水性担体中に懸濁していることを意味する。
【００１４】
本発明の組成物（すなわち、懸濁液）は、活性成分であるベダキリンの表面上に吸着され得る表面改質剤を含有する。
【００１５】
したがって、一実施形態では、本発明は、治療有効量のベダキリン、又はその薬学的に許容可能な塩をマイクロ又はナノ粒子の懸濁液形態で含む、筋肉注射又は皮下注射によって投与するための医薬組成物であって、マイクロ又はナノ粒子の懸濁液が、
（ａ）その表面に表面改質剤を吸着させたマイクロ又はナノ粒子形態のベダキリン、又はその薬学的に許容可能な塩と、
（ｂ）薬学的に許容可能な水性担体と、を含み、ベダキリン活性成分は懸濁されている、医薬組成物に関する。
【００１６】
本発明は、更に、マイコバクテリウム・ツベルクローシス（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ）、Ｍ．ボビス（Ｍ．ｂｏｖｉｓ）、Ｍ．レプレ（Ｍ．ｌｅｐｒａｅ）、Ｍ．アビウム（Ｍ．ａｖｉｕｍ）、及びＭ．マリナム（Ｍ．ｍａｒｉｎｕｍ）などの病原性マイコバクテリアに感染した対象を治療する方法に関する。一実施形態では、マイコバクテリアは、マイコバクテリウム・ツベルクローシス（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ）（潜伏又は休眠形態を含む）又はマイコバクテリウム・レプレ（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｌｅｐｒａｅ）である。本発明の組成物は、マイコバクテリウム・レプレ（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｌｅｐｒａｅ）、及び潜伏又は休眠形態のマイコバクテリウム・ツベルクローシス（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ）の治療に特に好適となり得る。これは、これらの特定の感染症を治療する場合、血漿中のベダキリンが低濃度であることが、こうした感染症に対して有効となり得るためであり、これは例えば、Ｒｏｂｅｒｔ  Ｇｅｌｂｅｒ、Ｋｏｅｎ  ＡｎｄｒｉｅｓらのＡｎｔｉｍｉｃｒｏｂｉａｌ  Ａｇｅｎｔｓ  ａｎｄ  Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒａｐｙ（Ｓｅｐｔ  ２００９，ｐ．３９８９−３９９１）で説明される（その内容は参照により本明細書に組み込まれる；また、本質的に、ベダキリンの低濃度且つ間欠的な投薬がらい病患者には期待することができ、桿菌の９９％を死滅させる最小有効量は、Ｍ．ツベルクローシス（Ｍ．ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ）の場合で３０ｍｇ／ｋｇ／ｗｋ、Ｍ．レプラ（Ｍ．ｌｅｐｒａ）の場合で＜５．０ｍｇ／ｋｇ／ｗｋであり、従って、１ヶ月に１回の投薬が１週間に５回の投薬と同程度の効果があり得る；マウスにおけるマイコバクテリウム・レプレ（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｌｅｐｒａｅ）に対するベダキリンの効果に関するその他の刊行物としては、Ｂａｏｈｏｎｇ  Ｊｉ、Ｋｏｅｎ  ＡｎｄｒｉｅｓらのＡｎｔｉｍｉｃｒｏｂｉａｌ  Ａｇｅｎｔｓ  ａｎｄ  Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒａｐｙ（Ａｐｒｉｌ  ２００６，ｐ．１５５８−１５６０）が挙げられ、その内容は参照により本明細書に組み込まれる）。したがって、本発明の組成物は、マイコバクテリウム・レプレ（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｌｅｐｒａｅ）、又は潜伏／休眠形態のマイコバクテリウム・ツベルクローシス（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ）に感染した対象の治療方法に特に好適であり得る。こうした病原性マイコバクテリアに感染した対象の治療方法には、上記又は下記で明記するように、治療有効量の医薬組成物を筋肉注射又は皮下注射によって投与することが含まれる。或いは、本発明は、病原性マイコバクテリア感染症を治療するための薬剤を製造するための（又は、こうした薬剤を本明細書で説明される特定の治療レジームで使用するための）、上記又は下記で明記される医薬組成物の使用に関する。一実施形態では、本組成物は、病原性マイコバクテリア感染症の長期的治療のためのものである。一実施形態では、病原性マイコバクテリア感染症は、長期的治療を必要とする感染症などの、上記又は下記で説明されるようなもの（更なる実施形態では、比較��低いベダキリン又はその活性代謝物の血漿中濃度レベルで更に治療され得る感染症、例えば、潜伏／休眠マイコバクテリウム・ツベルクローシス（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ）、又は、特定の実施形態では、マイコバクテリウム・レプレ（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｌｅｐｒａｅ））であり得る。
【００１７】
別の態様では、マイコバクテリウム・ツベルクローシス（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ）、Ｍ．ボビス（Ｍ．ｂｏｖｉｓ）、Ｍ．レプレ（Ｍ．ｌｅｐｒａｅ）、Ｍ．アビウム（Ｍ．ａｖｉｕｍ）、及びＭ．マリナム（Ｍ．ｍａｒｉｎｕｍ）などの病原性マイコバクテリアに感染した対象を長期的に治療するための方法が提供され、上記の方法は、筋肉注射又は皮下注射によって投与するために、上記又は下記で明記されるとおり有効量の医薬組成物を投与することを含み、組成物は、１週間から１年、又は１週間から２年の範囲である時間間隔で間欠的に投与されるか又は投与されることになる。或いは、本発明は、筋肉注射又は皮下注射によって投与するために、マイコバクテリウム・ツベルクローシス（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ）、Ｍ．ボビス（Ｍ．ｂｏｖｉｓ）、Ｍ．レプレ（Ｍ．ｌｅｐｒａｅ）、Ｍ．アビウム（Ｍ．ａｖｉｕｍ）、及びＭ．マリナム（Ｍ．ｍａｒｉｎｕｍ）などの病原性マイコバクテリアに感染した対象を長期的に治療するための薬剤を製造するための、上記又は下記で明記される医薬組成物の使用に関し、組成物は、１週間から１年、又は１週間から２年の範囲である時間間隔で間欠的に投与されるか又は投与されることになる。したがって、用語「長期的治療」は、１回の投薬又は１回の投与（例えば、筋肉注射又は皮下注射による）が、本明細書で説明されるように、一定の期間にわたる持続的な治療効果、例えば数時間、数週間、又は数週間にわたる持続的な治療効果（例えば、一実施形態では、少なくとも又は最大で１ヶ月、３ヶ月、又は６ヶ月の期間にわたる）を有する治療を指すことが理解されよう。実施例を参照されたい。言い換えると、長期的治療とは、投薬／投与が２回以上である場合、投薬／投与の間隔が長期間であること（本明細書で説明するような）、すなわち、間隔が本明細書で説明するような長期間であることを指し得る。
【００１８】
別の態様では、本明細書（例えば上記）で説明するとおりの、病原性マイコバクテリア（例えば、本明細書で説明するタイプのうちのいずれかの）に感染した対象を長期的に治療するための方法が提供され、ここでは１回の投薬又は投与（例えば、本明細書の、例えば下記で説明される量の）が、提供される／必要とされる（且つ、例えば本明細書に記載する期間、持続的な効果を有する）。別の態様では、こうした長期治療レジメンが提供され、ここでは２回のこうした投薬又は投与が提供され／必要とされ、この投薬／投与は間隔をおいて与えられ、間隔の期間は本明細書に記載されるとおり、例えば少なくとも又は最大で１ヶ月、３ヶ月、又は６ヶ月間（例えば持続的な治療効果が持続する期間）である。更なる実施形態では、こうした長期治療レジメンが提供され、ここでは３回のこうした投薬又は投与が、本明細書に記載される間隔で提供される／必要とされる。更に別の実施形態では、本明細書で説明されるとおりであるが、リードイン治療段階（例えば、１週間、２週間、３週間、又は１ヶ月間継続される１日１回の投与コースであって、長期治療レジメンではない）が先行する、長期治療レジメンが提供される。
【００１９】
本発明は、更に、病原性マイコバクテリア感染症に感染する危険性のある対象内で病原性マイコバクテリア感染症を予防する方法に関し、上記の方法は、上記で明記されたか又は下記で更に明記される病原性マイコバクテリア感染症を予防するのに有効な量の医薬組成物を上記の対象に投与することを含む。或いは、本発明は、病原性マイコバクテリア感染症に感染する危険性のある対象内で病原性マイコバクテリア感染症を予防するための薬剤を製造するための、上記で明記されたか又は下記で更に明記される医薬組成物の使用に関する。
【００２０】
別の態様では、本発明は、更に、病原性マイコバクテリア感染症に感染する危険性のある対象内で病原性マイコバクテリア感染症を長期的に予防する方法に関し、上記の方法は、上記で明記されたか又は下記で更に明記される有効量の医薬組成物を上記の対象に投与することを含み、ここで組成物は、１週間から１年、又は１週間から２年の範囲である時間間隔で間欠的に投与されるか又は投与されることになる。
【００２１】
本発明は、更に、病原性マイコバクテリア感染症に感染する危険性のある対象内で病原性マイコバクテリア感染症を長期的に予防するための薬剤を製造するための、上記で明記されたか又は下記で更に明記される医薬組成物の使用に関し、組成物は、１週間から１年、又は１週間から２年の範囲である時間間隔で間欠的に投与されるか又は投与されることになる。
【００２２】
一実施形態では、本発明は、本明細書で明記される使用又は方法に関し、ここでは医薬組成物は、１週間〜１ヶ月の範囲、又は１ヶ月〜３ヶ月の範囲、又は３ヶ月〜６ヶ月の範囲、又は６ヶ月〜１２ヶ月の範囲、又は１２ヶ月〜２４ヶ月の範囲の時間間隔で投与されるか又は投与されることになる。
【００２３】
別の実施形態では、本発明は、本明細書で明記される使用又は方法に関し、医薬組成物は、２週間に１回、又は１ヶ月に１回、又は３ヶ月に１回投与されるか又は投与されることになる。
【００２４】
更なる医薬組成物、治療法又は予防法、及びこれらの組成物に基づく薬剤を製造するための使用が下記で説明され、これは本発明の一部となることが意図される。
【００２５】
本発明は更に、以下の図を参照しながら説明される。
【図面の簡単な説明】
【００２６】
【図１】「マウスにおけるＴＭＣ２０７（ベダキリン；ＢＤＱ）及びＭ２（ベダキリンの代謝物（本明細書を参照）を３０ｍｇ／ｋｇ単回投薬した後の血漿中動態」
【図２】「２００ｍｇ／ｍＬ配合物（具体的には、実施例１Ａ及び１Ｂの配合物、すなわち、それぞれナノ及びマイクロ懸濁液）を１６０ｍｇ／ｋｇの用量でＩＭ又はＳＣ投与した場合のマウスにおけるＴＭＣ２０７の血漿中動態」（ＴＭＣ２０７は図中「ＵＤ」として参照される）
【図３】「２００ｍｇ／ｍＬ配合物（具体的には、実施例１Ａ及び１Ｂの配合物、すなわち、それぞれナノ及びマイクロ懸濁液）を１６０ｍｇ／ｋｇの用量でＩＭ又はＳＣ投与した場合のマウスにおけるＭ２の血漿中動態」（Ｍ２は図中「ｍｅｔ」として参照される）
【図４】「１００ｍｇ／ｍＬ配合物（具体的には、実施例１Ｃ及び１Ｄの配合物、すなわち、それぞれナノ及びマイクロ懸濁液）を８０ｍｇ／ｋｇの用量でＩＭ又はＳＣ投与した場合のマウスにおけるＴＭＣ２０７の血漿中動態」（ＴＭＣ２０７は図中「ＵＤ」として参照される）
【図５】「１００ｍｇ／ｍＬ配合物（具体的には、実施例１Ｃ及び１Ｄの配合物、すなわち、それぞれナノ及びマイクロ懸濁液）を８０ｍｇ／ｋｇの用量でＩＭ又はＳＣ投与した場合のマウスにおけるＭ２の血漿中動態」（Ｍ２は図中「ｍｅｔ」として参照される）
【図６】「２００ｍｇ／ｍＬマイクロ配合物（例えば実施例１の配合物１Ｂ、すなわちマイクロ懸濁液を参照）を４０ｍｇ／ｋｇの用量でＩＭ又はＳＣ投与した場合の雄ラットにおけるＴＭＣ２０７の血漿中動態」及び「２００ｍｇ／ｍＬナノ配合物（例えば実施例１の配合物１Ａ、すなわちナノ懸濁液を参照）を４０ｍｇ／ｋｇの用量でＩＭ又はＳＣ投与した場合の雄ラットにおけるＴＭＣ２０７の血漿中動態」
【図７】「２００ｍｇ／ｍＬマイクロ配合物（例えば実施例１の配合物１Ｂを参照）を４０ｍｇ／ｋｇの用量でＩＭ又はＳＣ投与した場合の雄ビーグル種イヌにおけるＴＭＣ２０７の血漿中動態」及び「２００ｍｇ／ｍＬナノ配合物（例えば実施例１の配合物１Ａ参照）を４０ｍｇ／ｋｇの用量でＩＭ又はＳＣ投与した場合の雄ビーグル種イヌにおけるＴＭＣ２０７の血漿中動態」
【発明を実施するための形態】
【００２７】
本発明で用いられる化合物は、化合物ＴＭＣ２０７であり、これはベダキリンとも称される。
【００２８】
ベダキリンは、その非塩形態で、又は酸付加塩形態又は塩基付加塩形態といった好適な薬学的に許容可能な塩形態として使用され得る。一実施形態では、ベダキリンは本発明の組成物中ではその非塩形態にある。
【００２９】
薬学的に許容可能な酸付加塩は、ベダキリンが形成可能な、治療効果のある非毒性の酸付加塩形態を含むように定義される。上記の酸付加塩は、遊離形態のベダキリンを適切な酸、例えば無機酸、例えばハロゲン化水素酸、特に塩酸、臭化水素酸、硫酸、硝酸、及びリン酸；有機酸、例えば酢酸、ヒドロキシ酢酸、プロパン酸、乳酸、ピルビン酸、シュウ酸、マロン酸、コハク酸、マレイン酸、フマル酸、リンゴ酸、酒石酸、クエン酸、メタンスルホン酸、エタンスルホン酸、ベンゼンスルホン酸、ｐ−トルエンスルホン酸、シクラミン酸、サリチル酸、ｐ−アミノサリチル酸、及びパモン酸で処理することによって得ることができる。具体的には、既に市販されている製品Ｓｉｒｔｕｒｏ（登録商標）で採用される形態であることを踏まえると、フマル酸塩が検討される。
【００３０】
可能な治療効果のある非毒性の塩基付加塩形態は、適切な有機及び無機塩基で処理することによって調製され得る。適切な塩基塩形態には、例えば、アンモニウム塩、アルカリ金属塩及びアルカリ土類金属塩、具体的には、リチウム塩、ナトリウム塩、カリウム塩、マグネシウム塩、及びカルシウム塩、有機塩基との塩、例えば、ベンザチン塩、Ｎ−メチル−Ｄ−グルカミン塩、ヒブラミン（ｈｙｂｒａｍｉｎｅ）塩、並びにアミノ酸との塩、例えば、アルギニン及びリシンとの塩が含まれる。
【００３１】
逆に、上記の酸付加塩形態又は塩基付加塩形態は、適切な塩基又は酸による処理によって遊離形態に変換され得る。
【００３２】
本出願の枠組みで用いられる用語「付加塩」は、ベダキリン及びその塩が形成可能な溶媒和物を更に含む。こうした溶媒和物は、例えば水和物及びアルコレートである。
【００３３】
本明細書で用いられるベダキリン（又はＴＭＣ２０７）に対するいかなる引用も、市販製品Ｓｉｒｔｕｒｏ（登録商標）で用いられ、国際公開第２００４／０１１４３６号パンフレットで抗マイコバクテリア剤として開示されている、単一の立体異性体を指す。
【００３４】
ベダキリンの物理化学的性質によって、病原性マイコバクテリア感染症の長期的治療及び病原性マイコバクテリア感染症の長期的予防に使用することができるという点で固有の薬物動態学的特性を有するマイクロ又はナノ粒子懸濁液を製造することが可能となり、この目的のためには限定された回数の薬物投与しか必要としないことが判明した。これは、ピル負荷、及び所定の投薬レジメンに対する患者の服薬遵守に関して有益である。
【００３５】
本明細書で使用するとき、用語「病原性マイコバクテリア感染症の治療」は、病原性マイコバクテリア感染症に感染している対象の治療を指す。
【００３６】
用語「病原性マイコバクテリア感染症の予防」は、対象が病原性マイコバクテリア感染症に感染するのを予防又は回避することを指す。感染源は、例えば病原性マイコバクテリア感染症を含有する物質など様々であり得る。
【００３７】
用語「治療有効量」、「病原性マイコバクテリア感染症を予防するのに有効な量」、及び同様の用語は、有効な血漿中濃度をもたらす本発明の組成物の量又は濃度（或いはこうした組成物内の活性成分であるベダキリンの量／濃度）を指す。「有効な血漿中濃度」とは、病原性マイコバクテリア感染症を効果的に治療、又は効果的に予防するベダキリンの血漿中濃度を意味する。これは、所定の量／用量／投与が、例えば本明細書に説明される効果的な治療／予防のために所望される暴露濃度又は所望される血漿中濃度（例えば実施例を参照されたい）と連関し得るためである。
【００３８】
「対象」という用語は、特にヒトに関する。
【００３９】
用語「マイクロ又はナノ粒子」は、マイクロメートル又はナノメートル範囲内の粒子を指す。粒径は、最大径未満であるべきであり、これを超えると皮下又は筋肉注射による投与は減じられるか、又は更にはもはや不可能になる。上記の最大径は、例えば、針の直径、若しくは大型の粒子に対する身体の拒絶反応、又はその両方によって課せられる制限によって決まる。一実施形態では、本発明の医薬組成物はマイクロ粒子形態のベダキリンを含む。別の実施形態では、本発明の医薬組成物はナノ粒子形態のベダキリンを含む。
【００４０】
本発明のマイクロ又はナノ粒子の平均有効粒径は、約５０μｍ未満、又は約２０μｍ未満、又は約１０μｍ未満、又は約１０００ｎｍ未満、又は約５００ｎｍ未満、又は約４００ｎｍ未満、又は約３００ｎｍ未満、又は約２００ｎｍ未満であってもよい。平均有効粒径の下限は、例えば約１００ｎｍ、又は約５０ｎｍまで低くてもよい。一実施形態では、平均有効粒径は、約５０ｎｍ〜約５０μｍ、又は約５０ｎｍ〜約２０μｍ、又は約５０ｎｍ〜約１０μｍ、又は約５０ｎｍ〜約１０００ｎｍ、約５０ｎｍ〜約５００ｎｍ、又は約５０ｎｍ〜約４００ｎｍ、又は約５０ｎｍ〜約３００ｎｍ、又は約５０ｎｍ〜約２５０ｎｍ、又は約１００ｎｍ〜約２５０ｎｍ、又は約１５０ｎｍ〜約２２０ｎｍ、又は１００〜２００ｎｍ、又は約１５０ｎｍ〜約２００ｎｍの範囲、例えば約１３０ｎｍ、又は約１５０ｎｍである。例えば、一般に、調製後、及び最大３ヶ月の期間後の両方で（例えば、約５℃、２５℃、及び４０℃の温度で貯蔵される場合に）：
マイクロ懸濁液は、一実施形態では、約３〜１０μｍ（例えば３．５、４、又は５μｍ）のＤ９０と、約２〜４μｍ（例えば３μｍ）のＤ５０と、を有してもよい。
ナノ懸濁液は、一実施形態では、約０．５〜１．５μｍ（例えば、約１μｍ以下、又は約１０００ｎｍ以下）のＤ９０と、約０．１〜０．５μｍ（例えば、約０．３μｍ以下、又は約３００ｎｍ未満）のＤ５０と、を有してもよい。
【００４１】
一実施形態では、マイクロ粒子が採用され、ここでＤ１０、Ｄ５０、及び／又はＤ９０によって測定される（一実施形態ではＤ５０によって測定される）平均有効粒径は、約５０μｍ未満、又は約２０μｍ未満、且つ約０．１μｍ（１００ｎｍ）超である。一実施形態では、本発明の組成物に採用されるこうしたマイクロ粒子の範囲は、約２０μｍ〜約０．１μｍ、更なる実施形態では、約１５μｍ〜約０．２μｍ（２００ｎｍ）超、また更なる実施形態では、約１０μｍ〜約０．５μｍ（５００ｎｍ）超、例えば約１０μｍ〜約１μｍ超、又は約１０００ｎｍ未満、若しくは約５００ｎｍ未満、若しくは約４００ｎｍ未満、若しくは約３００ｎｍ未満、若しくは約２００ｎｍ未満である。上記の値は調製後の測定値を指す。しかしながら、これらは、一実施形態では、様々な温度（例えば、約５℃、２５℃、及び４０℃の温度）で貯蔵されて、最大３ヶ月の期間後（例えば５日、１週間、２週間、１ヶ月、２ヶ月、又は３ヶ月後）の測定値を指してもよい。
【００４２】
本明細書で使用するとき、平均有効粒径という用語は、当業者に既知のその従来の意味を有し、例えば電界中流体分離法、光子相関分光法、レーザー回折、又はディスク遠心分離などの技術分野で既知の粒径測定技術によって測定され得る。本明細書に記載される平均有効粒径は、粒子の体積分布に関連し得る。その場合には、「約５０μｍ未満の有効平均粒径」とは、粒子の体積の少なくとも５０％が５０μｍの有効平均未満である粒径を有し、同じことが他の記載される有効粒径に当てはまる。同様に、平均有効粒径は粒子の重量分布に関連し得るが、通常、これは、平均有効粒径に関しても同一又はほぼ同一の値をもたらす。
【００４３】
本発明の医薬組成物は、長期間にわたって活性成分ベダキリンを放出させるため、徐放性又は遅放組成物と呼ぶこともできる。投与後、本発明の組成物は体内に留まり、患者の系内でこの活性成分の濃度を長期間維持しながらベダキリンを間断なく放出することにより、上記の期間中、病原性マイコバクテリア感染症の適切な治療又は予防を提供する。本発明の医薬組成物は、体内に留まってベダキリン（及び本明細書ではＭ２と称されるその活性代謝物；下記のメチル置換代謝物を参照されたい）を間断なく放出するため、これらは長時間作用（又はデポ）配合物として好適な医薬組成物と称することができる。
【００４４】
本明細書において使用される用語「長期間」は、１週間〜最大１年若しくは最大２年の範囲にあり得る時間（若しくは期間）、又は１〜２週間、若しくは２〜３週間、若しくは３〜４週間の範囲の期間、又は１〜２ヶ月間、若しくは２〜３ヶ月間、若しくは３〜４ヶ月間、若しくは３〜６ヶ月間、若しくは６〜１２ヶ月間、若しくは１２〜２４ヶ月間の範囲の期間、又は数日、例えば７、１０、若しくは１２日、若しくは数週間、例えば２、３、若しくは４週間、若しくは１ヶ月、若しくは数ヶ月、例えば２、３、４、５、若しくは６ヶ月、若しくはそれ以上、例えば７、８、９、若しくは１２ヶ月間の範囲の期間を意味する。
【００４５】
本発明の医薬組成物は、病原性マイコバクテリア感染症の長期的治療又は長期的予防に適用することができ、又は言い換えると、これらは、病原性マイコバクテリア感染症の治療若しくは病原性マイコバクテリア感染症の予防に長期間使用することができる。本発明の組成物は、病原性マイコバクテリア感染症の治療又は予防に、長期間、例えば少なくとも約１週間以上、又は約１ヶ月以上有効である。「少なくとも約１週間以上有効」という表現は、活性成分であるベダキリン（及び／又はその活性代謝物であるＭ２）の血漿中濃度が閾値を超えることを意味する。治療的用途の場合、上記の閾値は、ベダキリン（及び／又はその活性代謝物であるＭ２）が病原性マイコバクテリア感染症の有効な治療を提供する最小血漿中濃度である。病原性マイコバクテリア感染症の予防における適用の場合、上記の閾値は、ベダキリン（及び／又はその活性代謝物であるＭ２）が病原性マイコバクテリア感染症の伝染予防に有効な最小血漿中濃度である。
【００４６】
例えば「病原性マイコバクテリア感染症の長期的予防」若しくは「病原性マイコバクテリア感染症の長期的治療」又は同様の用語に関連して用いられる「長期」は、１週間から最大１年若しくは２年間、又はそれ以上、例えば５年又は１０年の範囲にあり得る期間を意味する。特に、病原性マイコバクテリア感染症を治療する場合、こうした期間は、約１ヶ月から数ヶ月、１年、又はそれ以上になる。こうした期間は、特に予防の場合には比較的短い場合もある。より短い期間は、数日間、例えば７、１０、若しくは１２日、又は数週間、例えば２、３、若しくは４週間、又は１ヶ月、若しくは数ヶ月、例えば２、３、４、５、若しくは６ヶ月、又は更にそれ以上、例えば７、８、９、若しくは１２ヶ月の期間である。一実施形態では、本発明による方法及び使用は、１ヶ月、又は数ヶ月、例えば２、３、４、５、若しくは６ヶ月、又はそれ以上、例えば７、８、９、若しくは１２ヶ月間、病原性マイコバクテリア感染症を予防するためのものである。
【００４７】
本発明の医薬組成物は、様々な時間間隔で投与することができる。病原性マイコバクテリア感染症の予防で使用される場合、本発明の医薬組成物は、１回のみ、又は限定された回数、例えば２、３、４、５若しくは６回、又はそれ以上投与されてもよい。これは、感染リスクが存在する期間など限定された期間だけ予防が必要な場合に推奨され得る。
【００４８】
本発明の医薬組成物は、上記の時間間隔で、例えば１週間〜１ヶ月の範囲、又は１ヶ月〜３ヶ月の範囲、又は３ヶ月〜６ヶ月の範囲、又は６ヶ月〜１２ヶ月の範囲の時間間隔で投与することができる。一実施形態では、医薬組成物は、２週間に１回、又は１ヶ月に１回、又は３ヶ月に１回投与することができる。別の実施形態において、その時間間隔は、１〜２週間、又は２〜３週間、又は３〜４週間の範囲であり、或いはその時間間隔は、１〜２ヶ月、又は２〜３ヶ月、又は３〜４ヶ月、又は３〜６ヶ月、又は６〜１２ヶ月、又は１２〜２４ヶ月の範囲である。その時間間隔は、少なくとも１週間であり得るが、数週間、例えば２、３、４、５、又は６週間であってもよく、或いは１ヶ月又は数ヶ月、例えば２、３、４、５、若しくは６ヶ月、又は更にそれ以上、例えば７、８、９、若しくは１２ヶ月の時間間隔であってもよい。一実施形態において、本発明の医薬組成物は、１、２、又は３ヶ月間の時間間隔で投与される。本発明の医薬組成物の各投与間の期間がこのように長いと、ピル負荷及び服薬遵守が更に改善される。服薬遵守を更に改善するために、組成物が週単位のスケジュールで投与される場合はその週の特定の曜日に、又は月単位のスケジュールの場合はその月の特定の日に薬を服用するように患者に指示してもよい。
【００４９】
本発明の組成物の各投与間の時間間隔の長さは変化し得る。例えば上記の時間間隔は、血漿中濃度の関数で選択され得る。ベダキリン（及び／又はその活性代謝物であるＭ２）の血漿中濃度が低すぎると見なされる場合、例えばこれらが下記で明記する最小血漿中濃度に近づく場合には、この間隔はより短くなり得る。ベダキリン（及び／又はその活性代謝物であるＭ２）の血漿中濃度が高すぎると見なされる場合には、この間隔はより長くなり得る。一実施形態では、本発明の組成物は、等しい時間間隔で投与される。この組成物は、中間の追加投与なしに投与されてもよく、又は言い換えれば、組成物は、異なる又は等しい長さの期間、例えば少なくとも１週間の期間、又は本明細書で指定される任意の他の期間、互いに離れた特定の時点で投与されてもよく、その間は更なるベダキリンは投与されない。時間間隔が同じ長さであることは、例えば投与が週の同じ曜日又は月の同じ日に行われるなど、投与スケジュールが単純になる利点がある。したがって、かかる投与スケジュールは「ピル負荷」が限定的であるため、処方された投薬レジメンに対する患者の服薬遵守に有益に寄与する。
【００５０】
ベダキリン（及び／又はその活性代謝物であるＭ２）によって治療された対象の血漿中のその濃度（又は「Ｃ」）は、一般に、単位体積当たりの質量として、通常はナノグラム／ミリリットル（ｎｇ／ｍＬ）で表される。便宜上、この濃度は本明細書において「血漿中薬物濃度」又は「血漿中濃度」と呼ばれる場合がある。
【００５１】
投与されるベダキリンの用量（又は量）は、本発明の医薬組成物中のベダキリンの量、又は投与される所定の組成物の量に応じて異なる。より高い血漿中濃度が望ましい場合には、より高いベダキリン濃度の組成物、若しくはより多い量の所定の組成物のいずれか、又はその両方が投与され得る。より低い血漿中濃度が望まれる場合にはこれが逆に当てはまる。特定の望ましい血漿中濃度を得るために、様々な時間間隔と様々な投薬との組み合わせも選択され得る。
【００５２】
投与されるベダキリンの用量（又は量）は、投与の頻度（すなわち、各投与間の時間間隔）に応じても異なる。通常、投与の頻度が少ないと、用量は高くなる。これらのすべてのパラメータを用いて、血漿中濃度を目的の値に向けることができる。
【００５３】
投薬レジメンは、病原性マイコバクテリア感染症の予防が想定されるか、又は病原性マイコバクテリア感染症の治療が想定されるかに応じても異なる。治療の場合は、投与されるベダキリンの用量、若しくは投薬頻度、又はその両方は、ベダキリンの血漿中濃度が最小血漿中濃度を超えて維持されるように選択される。この文脈における用語「最小血漿中濃度」（又はＣｍｉｎ）は、病原性マイコバクテリア感染症の効果的な治療を提供するベダキリン（及び／又はその活性代謝物であるＭ２）の血漿中濃度を指す。具体的には、ベダキリン（及び／又はその活性代謝物であるＭ２）の血漿中濃度は、約１０ｎｇ／ｍＬの最小血漿中濃度を超える濃度、又は約１５ｎｇ／ｍＬ超、又は約２０ｎｇ／ｍＬ超、又は約４０ｎｇ／ｍＬ超に維持される。ベダキリン（及び／又はその活性代謝物であるＭ２）の血漿中濃度は、例えば、約５０ｎｇ／ｍＬ超、又は約９０ｎｇ／ｍＬ超、又は約２７０ｎｇ／ｍＬ超、又は約５４０ｎｇ／ｍＬ超の、最小血漿中濃度を超えるより高い濃度に維持されてもよい。一実施形態では、ベダキリン（及び／又はその活性代謝物であるＭ２）の血漿中濃度は、約１３．５ｎｇ／ｍＬの濃度を超えて維持され、又は約２０ｎｇ／ｍＬの濃度を超えて維持される。或いは、ベダキリン（及び／又はその活性代謝物であるＭ２）の血漿中濃度は、一定の範囲内で、特に上記の値から選択される最小血漿中濃度から始まり、上記の値から選択されるより高い血漿中濃度で終わり、且つ５００ｎｇ／ｍＬ〜１０００ｎｇ／ｍＬから選択される範囲内で（例えば、１０〜１５、１０〜２０、１０〜４０など、又は１５〜２０、或いは１５〜４０、又は１５〜９０など、或いは２０〜４０、２０〜９０、又は２０〜２７０など、或いは４０〜９０、４０〜２７０、又は４０〜５４０など、各回およその指示値（ｎｇ／ｍＬ）からおよその指示値（ｎｇ／ｍＬ）まで）維持され得る。一実施形態では、上記の範囲は、約１０〜約２０、約２０〜約９０、約９０〜約２７０、約２７０〜約５４０、約５４０〜約１０００であり、各回およその指示値（ｎｇ／ｍＬ）からおよその指示値（ｎｇ／ｍＬ）までである。
【００５４】
濃度が低いと、細菌をもはや十分に抑制できず、その結果、細菌が増殖して突然変異の出現の更なるリスクを伴うため、ベダキリン（及び／又はその活性代謝物であるＭ２）の血漿中濃度は、上記の最小血漿中濃度を超えて維持されるべきである。
【００５５】
予防の場合は、用語「最小血漿中濃度」（又はＣｍｉｎ）は、感染症の効果的な治療／予防を提供するベダキリン（及び／又はその活性代謝物であるＭ２）の最小血漿中濃度を指す。
【００５６】
特に、予防の場合は、ベダキリン（及び／又はその活性代謝物であるＭ２）の血漿中濃度は、治療に関して上記で説明された最小血漿中濃度を超える濃度で維持され得る。しかしながら、予防において、ベダキリン（及び／又はその活性代謝物であるＭ２）の血漿中濃度は、より低い濃度、例えば約４ｎｇ／ｍＬ、又は約５ｎｇ／ｍＬ、又は約８ｎｇ／ｍＬを超える濃度で維持され得る。より低い濃度では、薬剤はもはや効果的でない場合があり、その結果、感染症の伝染リスクが増大するため、ベダキリン（及び／又はその活性代謝物であるＭ２）の血漿中濃度は、これらの最小血漿中濃度を超えて維持されることが好ましい。ベダキリン（及び／又はその活性代謝物であるＭ２）の血漿中濃度は、安全域を有するように、やや高い濃度で維持されてもよい。こうしたより高い濃度は約５０ｎｇ／ｍＬ以上から開始する。ベダキリン（及び／又はその活性代謝物であるＭ２）の血漿中濃度は、治療に関連する場合は上述の範囲の濃度で維持されてもよいが、その下限は、約４ｎｇ／ｍＬ、又は約５ｎｇ／ｍＬ、又は約８ｎｇ／ｍＬの血漿中濃度を含む。
【００５７】
ベダキリン（及び／又はその活性代謝物であるＭ２）の利点は、いかなる重大な副作用を伴うことなく比較的高い血漿中濃度まで使用することができることである。ベダキリン（及び／又はその活性代謝物であるＭ２）の血漿中濃度は、比較的高い濃度に到達することができるが、いかなる薬剤とも同様に、ベダキリン（及び／又はその活性代謝物であるＭ２）が重大な副作用を生じさせる血漿中濃度である最大血漿中濃度（又はＣｍａｘ）を超えるべきではない。更に、血漿中濃度に含められていない組織からの化合物の放出も考慮に入れるべきである。本明細書で使用される、用語「重大な副作用」は、関連する患者集団において、患者の正常な機能に影響を及ぼす程度の副作用が存在することを意味する。一実施形態において、投与されるベダキリン（及び／又はその活性代謝物であるＭ２）の投与量及び頻度は、血漿中濃度が、最大血漿中濃度（又は上記で指定されるＣｍａｘ）と最小血漿中濃度（又は上記で指定されるＣｍｉｎ）との間に含まれる濃度で長期間維持されるように選択される。
【００５８】
特定の場合には、比較的低い濃度、例えば本明細書で指定される最小血漿中濃度に可能な限り近い濃度で、ベダキリン（及び／又はその活性代謝物であるＭ２）の血漿中濃度を維持することが望ましい場合がある。これによって、投与の頻度及び／又は各投与で投与されるベダキリン（及び／又はその活性代謝物であるＭ２）の量を低減することが可能となる。これによって、更に、好ましくない副作用を避けることも可能となり、これは、感染リスクのある健康なヒトであり、したがって副作用を耐え難い傾向のある標的集団の大部分においてこの投薬形態を許容することに寄与する。ベダキリン（及び／又はその活性代謝物であるＭ２）の血漿中濃度は、予防の場合は比較的低い濃度で維持されてもよい。一実施形態は、上記又は下記で明記される感染症の予防のための使用又は方法に関し、ベダキリン（及び／又はその活性代謝物であるＭ２）の最小血漿中濃度は本明細書で明記されるとおりであり、最大血漿中濃度は、これも本明細書に明記されるように、活性成分を治療的に作用させる最小血漿中濃度とほぼ等しい。
【００５９】
その他の実施形態では、ベダキリン（及び／又はその活性代謝物であるＭ２）の血漿中濃度は、約１０ｎｇ／ｍＬ、より具体的には約１５ｎｇ／ｍＬ、更により具体的には約２０ｎｇ／ｍＬ、なお更により具体的には約４０ｎｇ／ｍＬの、より低い最大血漿中濃度未満の濃度に維持される。特定の一実施形態では、ベダキリン（及び／又はその活性代謝物であるＭ２）の血漿中濃度は、約１３．５ｎｇ／ｍＬの濃度未満に維持される。一実施形態では、ベダキリン（及び／又はその活性代謝物であるＭ２）の血漿中濃度は、上記で明記されたより低い最大血中濃度と、予防に関連して記載された最小血漿中濃度と、の合間に維持される。例えば、ベダキリン（及び／又はその活性代謝物であるＭ２）の血漿中濃度は、約１０ｎｇ／ｍＬ未満、且つ約４ｎｇ／ｍＬの最小濃度超に維持される。
【００６０】
他の場合には、例えば高い感染リスクがあり、より頻繁、且つ／又はより高用量になることが問題にならない場合、比較的高い濃度でベダキリン（及び／又はその活性代謝物であるＭ２）の血漿中濃度を維持することが望ましい場合がある。こうした場合、最小血漿中濃度は、本明細書で説明する特定の濃度などの、病原性マイコバクテリア感染症の効果的な治療を提供するベダキリン（及び／又はその活性代謝物であるＭ２）の最小血漿中濃度と等しくてもよい。
【００６１】
予防の場合、投与されるべき用量は、約０．２ｍｇ／日〜約５０ｍｇ／日、又は約０．５ｍｇ／日〜約５０ｍｇ／日、又は約１ｍｇ／日〜約１０ｍｇ／日、又は約２ｍｇ／日〜約５ｍｇ／日、例えば約３ｍｇ／日に基づいて計算されるべきである。これは、１週間で約１．５ｍｇ〜約３５０ｍｇ、具体的には約３．５ｍｇ〜約３５０ｍｇ、具体的には約７ｍｇ〜約７０ｍｇ、若しくは約１４ｍｇ〜約３５ｍｇ、例えば約３５ｍｇの用量、又は、１ヶ月で約６ｍｇ〜約３０００ｍｇ、具体的には約１５ｍｇ〜約１，５００ｍｇ、より具体的には約３０ｍｇ〜約３００ｍｇ、若しくは約６０ｍｇ〜約１５０ｍｇ、例えば約１５０ｍｇの用量に相当する。その他の投薬レジメンの用量も、１日の用量を各投与間の日数で乗算することによって容易に計算することができる。
【００６２】
治療の場合、投与されるべき用量はいくらかより高めであるべきであり、約１ｍｇ／日〜約１５０ｍｇ／日、又は約２ｍｇ／日〜約１００ｍｇ／日、又は約５ｍｇ／日〜約５０ｍｇ／日、又は約１０ｍｇ／日〜約２５ｍｇ／日、例えば約１５ｍｇ／日に基づいて計算されるべきである。相当する１週間の用量又は１か月の用量は、上記のとおりに計算することができる。予防における適用の場合、治療用途に対する場合と同じ投薬を用いてもよいが、その用量はより少なくてもよい。一実施形態では、投薬／投与は１ヶ月間隔、又は３ヶ月間隔、又は６ヶ月間隔で与えられ、合計治療期間は３、６、又は１２ヶ月となる。一実施形態では、投薬／投与が１ヶ月に１回、３ヶ月に１回、又は６ヶ月に１回である場合、所定の用量（例えばヒト対象における）は、２週間で１日用量４００ｍｇに基づき計算される。したがって、用量ごとに与えられるベダキリンの総量は、５６００ｍｇであってもよい（例えば３０００〜８０００ｍｇの範囲内）が、最大でかかる量の１／５であってもよい（例えば５００及び２０００ｍｇの範囲内、例えば約１０００〜１５００ｍｇ）。
【００６３】
予防の場合、又は特定の治療において、別の実施形態では、用量はｍｇ／ｋｇ単位で表すこともできる。例えば、実施例においては、特定の用量は、重量（例えば哺乳類の、及び実施例に示されるようにマウスの）に基づいて投与できるため、１ｍｇ／ｋｇ〜１０００ｍｇ／ｋｇの用量を用いることができ（例えば４０ｍｇ／ｋｇ、８０ｍｇ／ｋｇ、１６０ｍｇ／ｋｇ、３２０ｍｇ／ｋｇ、４８０ｍｇ／ｋｇを用いることができ）、こうした用量は、４週間、８週間、又は１２週間、効果的であり続けることができる（例えば実施例で示すように）。例えば、１回の用量が４週間毎に取られてもよく（実質的に１２週間の治療レジメン、すなわち合計３回の用量として見られる）、又は、１２週間にわたるモニタリングによって実証され得る実質的に十分な治療（例えば、ＣＦＵの低減によって定義される（実施例を参照されたい））を提供する単回の用量が取られてもよい。したがって、一態様では、細菌感染症を治療するために１回の用量が取られてもよく（例えば１ｍｇ／ｋｇ〜１０００ｍｇ／ｋｇ（例えば２ｍｇ／ｋｇ〜５００ｍｇ／ｋｇ））、或いは１回のこうした用量が４週間毎に取られてもよい（例えば２又は３回のこうした用量が取られてもよい）。こうした用量は、治療されるべき細菌感染に応じて変化する。例えば、潜伏性結核又はらい病の治療においては、細菌を制御するのにより低い量のベダキリンが求められることを考慮すると、より低い用量が求められる場合がある（例えば多剤耐性結核などと比較して）。この一例を下記で説明するが（実施例３）、ここでは、マウスにおいて、１６０ｍｇ／ｋｇの１回の用量が、潜伏性結核感染症のマウスモデルにおいてＣＦＵを十分に低減させることができることが示され、更に、１６０ｍｇ／ｋｇの２又は３回の用量（第２及び第３の用量はそれぞれ４及び８週間で投与される）もこのモデルにおいて効果的であったことも見られた。
【００６４】
一旦投与されると、ベダキリン（及び／又はその活性代謝物であるＭ２）の血漿中濃度は多少安定し、すなわちこれは限界内で変動することが判明している。血漿中濃度は、長期間、定常状態モードに多少なりとも近づく、又はゼロ次の放出速度に多少なりとも近づくことが判明している。「定常状態」とは、対象の血漿中に存在する薬剤量が、長期間にわたって多少なりとも同じ濃度を維持する状態を意味する。ベダキリン（及び／又はその活性代謝物であるＭ２）の血漿中濃度は、一般に、薬剤が有効である最小血漿中濃度を下回る低下を一切示さない。「多少なりとも同じ濃度を維持する」という表現は、許容可能な範囲の血漿中濃度の小変動、例えば約±３０％、又は約±２０％、又は約±１０％、又は約±１０％の範囲内の変動があり得ることを除外しない。
【００６５】
一部の場合には、投与後に初期血漿中濃度ピークがある場合があり、その後、下記で説明するように血漿中濃度が「定常状態」に達する。
【００６６】
本発明の組成物は、良好な局所耐性及び投与の容易さを示す。良好な局所耐性は、注射部位における最小限の刺激及び炎症に関連し、投与の容易さは、特定の薬剤配合物を１回分投与するのに必要な針のサイズ及び時間の長さに関連する。更に、本発明の組成物は、良好な安定性を示し、且つ許容可能な貯蔵寿命を有する。
【００６７】
本発明のマイクロ又はナノ粒子は、その表面に吸着した表面改質剤を有する。表面改質剤の機能は、コロイド（ｃｏｌｌｏｉｄｉａｌ）懸濁液の湿潤剤及び安定化剤としての役割を果たすことである。
【００６８】
一実施形態では、本発明の組成物中のマイクロ又はナノ粒子は、結晶質のベダキリン又はその塩、及び表面改質剤を主に含み、その組み合わせられた量は、少なくとも約５０％、又は少なくとも約８０％、又は少なくとも約９０％、又は少なくとも約９５％、又は少なくとも約９９％のマイクロ又はナノ粒子を含んでもよい。本明細書で示されるように、一実施形態では、ベダキリンはその非塩形態にあり（又はその「遊離形態」にあり）、更なる一実施形態では、これは結晶性の非塩（又は遊離）形態にある。この点に関し、本明細書で説明するように、ベダキリンは、国際公開第２００４／０１１４３６号パンフレットで（又はキラル試薬を含む光学分割を説明する国際公開第２００６／１２５７６９号パンフレットで）説明される手順を用いてこのように調製され得る。こうした手順に従い、トルエン／エタノールからの析出によってベダキリンが得られ、また、この生成物は結晶化することが示されている。こうした形態のベダキリンは、本発明の組成物の調製に用いることができ、また更に、こうした形態は、以下の特徴を備えた単一の結晶性多形体であり得る：
（ｉ）１８１．５℃の溶解吸熱（吸熱開始）、及び約１８２．５℃で生成物が溶解することを示すＤＳＣ曲線（その直後に分解が生じる；示差走査熱量測定法（ＤＳＣ）によって、約３ｍｇの化合物を標準アルミニウムのＴＡ−Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔ製試料皿に移動させることにより測定し、試料皿は適切なコア（ｃｏｅｒ）で覆い、ＲＣＳ冷却ユニットを備えたＴＡ−Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ  Ｑ２０００  ＭＴＤＳＣでＤＳＣ曲線を記録し、以下のパラメータを用いる：初期温度２５℃、加熱範囲１０℃／分、最終温度３００℃、窒素流５０ｍＬ／分）；
（ｉｉ）とりわけ約１６００ｃｍ−１、約１４５０ｃｍ−１、約１４００ｃｍ−１、約１３４０ｃｍ−１、及び約１２５０ｃｍ−１における赤外線（ＩＲ）スペクトルのピーク（試料は、走査数数３２、分解能１ｃｍ−１を導入した好適なマイクロＡＴＲアクセサリ、Ｔｈｅｒｍｏ  Ｎｅｘｕｓ６７０  ＦＴＩＲ分光計、ＫＢｒ窓を伴うＤＴＧＳ検出器、ＫＢｒ上Ｇｅビームスプリッタ、及びマイクロＡＴＲアクセサリ（Ｓｉ結晶を伴うＨａｒｒｉｃｋ  Ｓｐｌｉｔ  Ｐｅａ）を用いて解析される）；並びに／又は
（ｉｉｉ）生成物の結晶化度を示すハロの存在しない回折ピークを示す、約１１．２５°２−θ、約１８°２−θ、約１８．５°２−θ、約１９°２−θ、約２０．２５°２−θ、約２１．２５°２−θ、約２２．２５°２−θ、約２４．５°２−θ、及び約２７°２−θの特性ピークを備えるＸ線粉末回析（分析がＰＡＮａｌｙｔｉｃａｌ（Ｐｈｉｌｉｐｓ）Ｘ’ＰｅｒｔＰＲＯ  ＭＰＤ回折計上で実施され、装置がＣｕ  ＬＦＦ  Ｘ線管を備え、化合物がゼロバックグラウンド試料ホルダ上に広げられた場合、装置のパラメータは次の通りであった：発生装置電圧：４５ｋＶ、発生装置アンペア数：４０ｍＡ、形状：Ｂｒａｇｇ−Ｂｒｅｎｔａｎｏ、ステージ：スピナーステージ、走査モード：連続、走査範囲：３〜５０°２θ、ステップサイズ：０．０２°／ステップ、計数時間：３０秒／ステップ、スピナー回転時間：１秒、放射線タイプ：ＣｕＫα）。
【００６９】
したがって、一実施形態では、本発明の組成物を調製するためのプロセスで用いられるベダキリン（すなわち、マイクロ／ナノ粒子に変換する前の）は、結晶形態（例えば、上記で特性決定された特定の形態の）である。本発明の更なる実施形態では、本発明の組成物に用いられるベダキリン（すなわち、例えばミリングによってマイクロ／ナノ粒子に変換した後の）もまた結晶形態（例えば、上記で特性決定された特定の形態の）である。
【００７０】
更なる態様では、本発明は、治療有効量のベダキリン、又はその薬学的に許容可能な塩を粒子の懸濁液形態で含む、筋肉注射又は皮下注射によって投与するための医薬組成物であって、粒子の懸濁液が、
（１）その表面に表面改質剤を吸着させたマイクロ又はナノ粒子形態のベダキリン、又はその薬学的に許容可能な塩と、
（２）薬学的に許容可能な水性担体と、から本質的になり、活性成分は懸濁されている、医薬組成物に関する。
【００７１】
好適な表面改質剤は、様々なポリマー、低分子量オリゴマー、天然産物、及び界面活性剤を含む既知の有機及び無機薬剤賦形剤から選択され得る。特定の表面改質剤としては、非イオン性及びアニオン性界面活性剤が挙げられる。表面改質剤の代表的な例としては、ゼラチン、カゼイン、レシチン、負荷電リン脂質の塩又はその酸形態（例えば、ホスファチジルグリセロール、ホスファチジルイノサイト、ホスファチジルセリン、ホスファチジン酸（ｐｈｏｓｐｈａｔｉｃ  ａｃｉｄ）及びそれらの塩、例えばアルカリ金属塩、例えばそれらのナトリウム塩、例えば卵ホスファチジルグリセロールナトリウム、例えばＬｉｐｏｉｄ（商標）ＥＰＧの商品名で入手可能な製品）、アラビアゴム、ステアリン酸、塩化ベンザルコニウム、ポリオキシエチレンアルキルエーテル、例えばマクロゴルエーテル、例えばセトマクロゴール１０００、ポリオキシエチレンヒマシ油誘導体；ポリオキシエチレンステアレート、コロイド二酸化ケイ素、ドデシル硫酸ナトリウム、カルボキシメチルセルロースナトリウム、胆汁塩、例えばタウロコール酸ナトリウム、デソキシタウロコール酸ナトリウム、デソキシコール酸ナトリウム；メチルセルロース、ヒドロキシエチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、マグネシウムアルミネートシリケート、ポリビニルアルコール（ＰＶＡ）、エチレンオキシドとプロピレンオキシドとのブロックコポリマーであるポロキサマー、例えばＰｌｕｒｏｎｉｃ（商標）Ｆ６８、Ｆ１０８、及びＦ１２７；チロキサポール；ビタミンＥ−ＴＧＰＳ（α−トコフェリルポリエチレングリコールスクシネート、特にα−トコフェリルポリエチレングリコール１０００スクシネート）；ポロキサミン、例えばエチレンジアミンへのエチレンオキシド及びプロピレンオキシドの逐次付加から誘導される四官能性ブロックコポリマーであるＴｅｔｒｏｎｉｃ（商標）９０８（Ｔ９０８）；デキストラン；レシチン；スルホコハク酸ナトリウムのジオクチルエステル、例えばＡｅｒｏｓｏｌ  ＯＴ（商標）（ＡＯＴ）の商品名で市販される製品；ラウリル硫酸ナトリウム（Ｄｕｐｏｎｏｌ（商標）Ｐ）；Ｔｒｉｔｏｎ（商標）Ｘ−２００の商品名で入手可能なアルキルアリールポリエーテルスルホネート；ポリオキシエチレンソルビタン脂肪酸エステル（Ｔｗｅｅｎｓ（商標）２０、４０、６０、及び８０）；脂肪酸のソルビタンエステル（Ｓｐａｎ（商標）２０、４０、６０、及び８０、又はＡｒｌａｃｅｌ（商標）２０、４０、６０、及び８０）；ポリエチレングリコール（例えばＣａｒｂｏｗａｘ（商標）３５５０及び９３４の商品名で市販されているもの）；スクロースステアレート及びスクロースジステアレート混合物、例えばＣｒｏｄｅｓｔａ（商標）Ｆ１１０又はＣｒｏｄｅｓｔａ（商標）ＳＬ−４０の商品名で入手可能な製品；ヘキシルデシルトリメチルアンモニウムクロリド（ＣＴＡＣ）；ポリビニルピロリドン（ＰＶＰ）が挙げられる。所望される場合、２種類以上の表面改質剤を組み合わせて用いてもよい。
【００７２】
具体的な表面改質剤は、ポロキサマー、α−トコフェリルポリエチレングリコールスクシネート、ポリオキシエチレンソルビタン脂肪酸エステル、及び負荷電リン脂質の塩又はその酸形態から選択される。より具体的には、表面改質剤は、Ｐｌｕｒｏｎｉｃ（商標）Ｆ１０８、ビタミンＥ  ＴＰＧＳ、Ｔｗｅｅｎ（商標）８０、及びＬｉｐｏｉｄ（商標）ＥＰＧから選択される（及び、特定の実施形態では、これはビタミンＥ  ＴＧＰＳである）。これらの表面改質剤の１種類以上を用いることができる。Ｐｌｕｒｏｎｉｃ（商標）Ｆ１０８はポロキサマー３３８に相当し、またこれはポリオキシエチレン，ポリオキシプロピレンブロックコポリマーであり、これは一般に、式ＨＯ−［ＣＨＣＨＯ］−［ＣＨ（ＣＨ３）ＣＨ２Ｏ］ｙ−［ＣＨ２ＣＨ２Ｏ］ｚ−Ｈに従い、式中、ｘ、ｙ、及びｚの平均値はそれぞれ１２８、５４、及び１２８である。ポロキサマー３３８の他の商品名は、Ｈｏｄａｇ  Ｎｏｎｉｏｎｉｃ（商標）１１０８−Ｆ及びＳｙｎｐｅｒｏｎｉｃ（商標）ＰＥ／Ｆ１０８である。一実施形態では、表面改質剤はポリオキシエチレンソルビタン脂肪酸エステルとホスファチジルグリセロール塩（特に卵ホスファチジルグリセロールナトリウム）との組み合わせを含む。
【００７３】
表面改質剤に対するベダキリンの最適な相対的量は、選択される表面改質剤、平均有効粒径、及びベダキリン濃度により決定されるベダキリン懸濁液の比表面積、表面改質剤がミセルを形成する場合はその臨界ミセル濃度などに依存する。表面改質剤に対するベダキリンの相対量（ｗ／ｗ）は、好ましくは１：２〜約２０：１の範囲内、具体的には１：１〜約１０：１の範囲内、例えば約４：１である。
【００７４】
本発明の粒子は、機械的手段による、及び過飽和溶液からの制御された析出による、若しくはＧＡＳ法（「ガス逆溶剤（ｇａｓ  ａｎｔｉ−ｓｏｌｖｅｎｔ））」）におけるような超臨界流体の使用による、又はこうした技術の組み合わせによる、マイクロ粒子化（ｍｉｃｒｏｎｉｚａｔｉｏｎ）／微粉化／ナノ粒子化（ｎａｎｏｎｉｚａｔｉｏｎ）によって調製することができる。一実施形態では、液体分散媒中にベダキリンを分散させてから、粉砕媒体の存在下で機械的手段を適用して、ベダキリンの粒径を約５０μｍ未満、具体的には約１，０００ｎｍ未満の平均有効粒径まで低下させる工程を含む方法が用いられる。粒子の寸法は、表面改質剤の存在下で低下させることができる。
【００７５】
本発明の粒子を調製するための一般的な方法は、
（ａ）マイクロ粒子化形態のベダキリンを得ることと；
（ｂ）マイクロ粒子化されたベダキリンを液状媒体に添加して予備混合体／予備分散体を形成することと；
（ｃ）予備混合体を粉砕媒体の存在下で機械的手段に供して平均有効粒径を低下させることと；
を含む。
【００７６】
マイクロ粒子化形態のベダキリンは、当該技術分野で既知の技術を用いて調製される。予備分散体中のベダキリン活性剤の平均有効粒径は、ふるい分析で測定して約１００μｍ未満であることが好ましい。マイクロ粒子化されたベダキリンの平均有効粒径が約１００μｍを超える場合、ベダキリン化合物粒子の寸法を１００μｍ未満に低下させることが好ましい（例えば本明細書で説明される寸法又は寸法範囲まで）。
【００７７】
マイクロ粒子化したベダキリンは、続いて液状媒体に添加してもよく、これは液状媒体中では本質的に不溶性であるため予備分散体を形成する。液状媒体中のベダキリンの濃度（重量／重量百分率）は大きく変化し得、選択された表面改質剤及びその他の因子に依存する。組成物中のベダキリンの適した濃度は、約０．１％〜約６０％、又は約１％〜約６０％、又は約１０％〜約５０％、又は約１０％〜約３０％、例えば約１０％、２０％、又は３０％で変化し得る（このパラグラフ中の各％はｗ／ｖに関する）。
【００７８】
予備混合体は、これを機械的手段に供して分散体中の平均有効粒径を約２，０００ｎｍ未満に低下させることにより、直接使用され得る。磨砕にボールミルを使用する場合は予備混合体を直接使用することが好ましい。或いは、ベダキリン、及び任意で表面改質剤は、例えばローラーミルなどの好適な攪拌を用いて、均一な分散が達成されるまで液状媒体中で分散させてもよい。
【００７９】
ベダキリンの有効平均有効粒径（ｅｆｆｅｃｔｉｖｅ  ａｖｅｒａｇｅ  ｅｆｆｅｃｔｉｖｅ  ｐａｒｔｉｃｌｅ  ｓｉｚｅ）を低下させるために適用される機械的手段は、簡便には分散ミルの形態を取ってもよい。好適な分散ミルとしては、ボールミル、磨砕機／磨砕ミル、振動ミル、遊星ミル、媒体ミル、例えばサンドミル及びビーズミルが挙げられる。媒体ミルは、粒径を所望通りに低下させるのに必要なミリング時間が比較的短いため好ましい。ビーズはＺｒＯ２ビーズであることが好ましい。例えば、ナノ粒子の場合、理想的なビーズ寸法は約０．５ｍｍであり、マイクロ粒子の場合、理想的なビーズ寸法は約２ｍｍである。
【００８０】
粒径低下工程のための粉砕媒体は、好ましくは、３ｍｍ未満、より好ましくは１ｍｍ未満の平均寸法を有する球形態又は粒子形態の剛性媒体（２００μｍほどに小さいビーズ）から選択され得る。こうした媒体は、望ましくは、より短い加工時間で本発明の粒子を提供して、ミリング装置に与える損耗がより少ない。粉砕媒体の例は、マグネシア安定化又はイットリウム安定化９５％ＺｒＯ２などのＺｒＯ２、ケイ酸ジルコニウム、ガラス粉砕媒体、高分子ビーズ、ステンレス鋼、チタニア、アルミナなどである。好ましい粉砕媒体は２．５ｇ／ｃｍ３超の密度を有し、これとしてはマグネシア安定化９５％ＺｒＯ２及び高分子ビーズが挙げられる。
【００８１】
磨砕時間は大きく変化し得、主に選択された特定の機械的手段及び加工条件に応じて変化する。ローリングミルの場合、最大２日間、又はそれ以上の加工時間が必要とされ得る。
【００８２】
粒径は、ベダキリン化合物を有意に劣化させない温度で低下させるべきである。３０℃〜４０℃未満の加工温度が通常好ましい。所望され得る場合、加工装置は従来の冷却装置を用いて冷却してもよい。この方法は、便利には、ミリングプロセスに対して安全且つ効果的である、周囲温度条件下、及び加工圧力下で実施される。
【００８３】
本発明の医薬組成物は、好ましくは薬学的に許容可能な水性担体を含有する。上記の水性担体は、任意選択的に他の薬学的に許容可能な成分と混合されている滅菌水を含む。後者は、注入式配合物で使用するための任意の成分を含む。こうした成分は任意選択的である。これらの成分は、懸濁化剤、緩衝剤、ｐＨ調整剤、保存剤、等張化剤などの成分のうちの１種又は複数種から選択され得る。一実施形態において、上記の成分は、懸濁化剤、緩衝剤、ｐＨ調整剤、任意に保存剤、及び等張化剤のうちの１種又は複数種から選択される。特定の成分は、これらの剤のうちの２種類以上として同時に機能することができ、例えば、保存剤及び緩衝剤のように挙動し、又は緩衝剤及び等張化剤のように挙動することができる。
【００８４】
適切な任意選択的緩衝剤及びｐＨ調整剤は、分散液を、中性から、好ましくはｐＨ範囲７〜７．５のごくわずかな塩基性（最大でｐＨ８．５）にするのに十分な量で使用すべきである。特定の緩衝剤は、弱酸の塩である。添加することができる緩衝剤及びｐＨ調整剤は、酒石酸、マレイン酸、グリシン、乳酸ナトリウム／乳酸、アスコルビン酸、クエン酸ナトリウム／クエン酸、酢酸ナトリウム／酢酸、重炭酸ナトリウム／炭酸、コハク酸ナトリウム／コハク酸、安息香酸ナトリウム／安息香酸、リン酸ナトリウム、トリス（ヒドロキシメチル）アミノメタン、重炭酸ナトリウム／炭酸ナトリウム、水酸化アンモニウム、ベンゼンスルホン酸、安息香酸ナトリウム／安息香酸、ジエタノールアミン、グルコノデルタラクトン、塩酸、臭化水素、リジン、メタンスルホン酸、モノエタノールアミン、水酸化ナトリウム、トロメタミン、グルコン酸、グリセリン酸、グルタル酸、グルタミン酸、エチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ）、トリエタノールアミン、これらの混合物などから選択され得る。一実施形態では、本発明の組成物は緩衝剤を含まない。
【００８５】
好適な任意選択的保存剤は、安息香酸、ベンジルアルコール、ブチル化ヒドロキシアニソール（ＢＨＡ）、ブチル化ヒドロキシトルエン（ＢＨＴ）、クロルブトール、没食子酸塩、ヒドロキシベンゾエート、ＥＤＴＡ、フェノール、クロロクレゾール、メタクレゾール、塩化ベンゼトニウム、ミリスチル−γ−ピコリニウムクロリド、酢酸フェニル水銀、及びチメロサールからなる群から選択され得る、抗菌剤及び酸化防止剤を含む。ラジカル捕捉剤としては、ＢＨＡ、ＢＨＴ、ビタミンＥ、及びアスコルビン酸パルミテート、及びその混合物が挙げられる。酸素捕捉剤としては、アスコルビン酸ナトリウム、亜硫酸ナトリウム、Ｌ−システイン、アセチルシステイン、メチオニン、チオグリセロール、アセトン重亜硫酸ナトリウム、イソアコルビン酸（ｉｓｏａｃｏｒｂｉｃ  ａｃｉｄ）、ヒドロキシプロピルシクロデキストリンが挙げられる。キレート剤としては、クエン酸ナトリウム、ナトリウムＥＤＴＡ、及びリンゴ酸が挙げられる。本発明の一実施形態では、本発明の組成物は保存剤（ｐｅｒｓｅｖｅｒａｔｉｖｅ）を含まない。
【００８６】
本発明の医薬組成物の等張性を確保するために等張化剤が存在してもよく、これとしては、グルコース、ブドウ糖、スクロース、フルクトース、トレハロース、ラクトースなどの糖；多価糖アルコール、好ましくは三価又は四価以上の糖アルコール、例えばグリセリン、エリトリトール、アラビトール、キシリトール、ソルビトール、及びマンニトールが挙げられる。或いは、溶液に等張性を付与するために、塩化ナトリウム、硫酸ナトリウム、又は他の適切な無機塩を使用してもよい。これらの等張化剤は単独で、又は組み合わせて使用することができる。懸濁液は、好都合には等張化剤を０〜１０％（ｗ／ｖ）、特に０〜６％含む。電解質がコロイド安定性に影響を及ぼし得るため、非イオン性等張化剤、例えばグルコースが興味の対象となる。本発明の一実施形態では、本発明の組成物は等張化剤を含有し、これは、更なる実施形態では、マンニトールなどの好適な糖などの非イオン性等張化剤である。
【００８７】
本発明の医薬組成物の好ましい特徴は、投与の容易さに関する。本発明の医薬組成物の粘度は、注射による投与を可能にするのに十分なほど低くあるべきである。具体的には、本発明の医薬組成物は、注射器に容易に（例えば、バイアル瓶から）吸い上げられ、細い針（例えば、２０Ｇ１  １／２、２１Ｇ１  １／２、２２Ｇ２、又は２２Ｇ１  １／４針）を通してそれほど長くない時間で注入することができるように設計されるべきである。一実施形態では、本発明の組成物の粘度は、約７５ｍＰａ・ｓ未満、又は６０ｍＰａ・ｓ未満である。かかる粘度又はそれ以下の粘度の水性懸濁液は、通常、上記の基準を満たす。
【００８８】
理想的には、本発明の水性懸濁液は、注入容積を最小限に維持するように、許容され得る限り多くのベダキリン（又はその薬学的に許容可能な塩）、具体的には３〜７０％（ｗ／ｖ）、又は３〜６０％（ｗ／ｖ）、又は３〜４０％（ｗ／ｖ）、又は１０〜４０％（ｗ／ｖ）のベダキリン（又はその薬学的に許容可能な塩）を含む。一実施形態では、本発明の水性懸濁液は、約５０％〜７０％（ｗ／ｖ）のベダキリン（又はその薬学的に許容可能な塩）、又は約４０％〜６０％（ｗ／ｖ）のベダキリン（又はその薬学的に許容可能な塩）、又は約３０％〜５０％（ｗ／ｖ）のベダキリン（又はその薬学的に許容可能な塩）を含む。
【００８９】
一実施形態では、水性懸濁液は、組成物の全体積に対して、重量基準で、
（ａ）１０〜７０％（ｗ／ｖ）、若しくは２０〜６０％（ｗ／ｖ）、若しくは２０〜５０％（ｗ／ｖ）、若しくは２０〜４０％（ｗ／ｖ）のベダキリン（又はその薬学的に許容可能な塩）；
（ｂ）０．５〜２０％、又は２〜１５％若しくは２０％（ｗ／ｖ）、又は５〜１５％（ｗ／ｖ）の湿潤剤；
（ｃ）０％〜１０％、又は０％〜５％、又は０％〜２％、又は０％〜１％の１種類以上の緩衝剤；
（ｄ）０〜２０％、又は２〜１５％若しくは２０％（ｗ／ｖ）、又は５〜１５％（ｗ／ｖ）の等張化剤；
（ｅ）０％〜２％（ｗ／ｖ）の保存剤；及び
（ｆ）全体で１００％とするための適量の注射用水；を含み得る。
【００９０】
一実施形態では、水性懸濁液は、組成物の全体積に対して重量で：
（ａ）３〜５０％（ｗ／ｖ）、又は１０〜４０％（ｗ／ｖ）、又は１０〜３０％（ｗ／ｖ）のベダキリン（又はその薬学的に許容可能な塩）；
（ｂ）０．５％〜１０％、又は０．５％〜２％（ｗ／ｖ）の湿潤剤；
（ｃ）０％〜１０％、又は０％〜５％、又は０％〜２％、又は０％〜１％の１種類以上の緩衝剤；
（ｄ）０％〜１０％、又は０％〜６％（ｗ／ｖ）の等張化剤；
（ｅ）０％〜２％（ｗ／ｖ）の保存剤；及び
（ｆ）全体で１００％とするための適量の注射用水；を含み得る。
【００９１】
懸濁液には、そのｐＨを約ｐＨ７にする量の酸又は塩基が任意選択的に添加されてもよい。好適な酸又は塩基は、生理学的に許容される酸又は塩基のいずれか、例えばＨＣｌ、ＨＢｒ、硫酸、ＮａＯＨなどのアルカリ金属水酸化物である。一実施形態では、こうした酸又は塩基は、本発明の組成物に添加する必要はない。
【００９２】
本発明にあるようなベダキリン（又はその薬学的に許容可能な塩）の投与は、病原性マイコバクテリア感染症を治療するのに十分となり得るが、多くの場合で、他の抗ＴＢ薬を同時投与することが推奨される場合がある。
【００９３】
特定の場合では、病原性マイコバクテリア感染症の治療は、本発明によるベダキリン（及び／又はその代謝物）の組成物の投与、すなわち、更なる抗ＴＢ薬の同時投与を含まない単剤療法としての投与のみに限定されてもよい。この選択肢は、例えば、低濃度の活性成分が細菌を治療することのできる特定のマイコバクテリア感染症の場合（例えば、潜伏／休眠ＴＢ、又はマイコバクテリウム・レプレ（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｌｅｐｒａｅ）の場合）に推奨することができる。
【００９４】
更なる態様では、本発明は、病原性マイコバクテリア感染症に感染している対象の維持療法用の薬剤を製造するための、本発明による有効量のベダキリン又はその薬学的に許容可能な塩を含む医薬組成物の使用に関し、組成物は、１週間から１年、又は１週間から２年の範囲である時間間隔で間欠的に投与されるか又は投与されることになる。
【００９５】
したがって、更なる態様では、本発明は、病原性マイコバクテリア感染症に感染している患者を長期的に治療するための方法であって、
（ｉ）抗ＴＢ薬を併用した上記の患者の治療；及びそれに続いて
（ｉｉ）本発明による治療有効量のベダキリン、又はその薬学的に許容可能な塩を含む医薬組成物の間欠投与であって、組成物は少なくとも１週間の時間間隔で投与される、間欠投与を含む、方法を提供する。
【００９６】
治療がマイコバクテリウム・レプレ（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｌｅｐｒａｅ）を目的とする場合、ここでもレジメンは単剤療法として、又は、マイコバクテリウム・レプレ（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｌｅｐｒａｅ）の治療に有用な既存の薬剤（例えばリファペンチン）との組み合わせで与えられる場合がある。本発明の組成物は、１回、又は例えば１ヶ月間隔として最大３回の注射によって投与される場合がある。利点は、服薬遵守、ダプソンを避けることによる抵抗力の不在、クロファジミンを避けることによる斑点（ｓｔｉｇｍａ）の不在である。
【００９７】
本発明は更に、病原性マイコバクテリア感染症の治療又は予防における薬剤として使用するための、上記で説明された医薬組成物にも関する。
【００９８】
更に、本発明は、病原性マイコバクテリア感染症を予防又は治療するための薬剤を調製するための、本明細書で説明される医薬組成物の使用に関する。
【００９９】
本発明は更に、病原性マイコバクテリア感染症に感染した対象の治療方法にも関し、上記の方法は、本明細書で説明するように治療有効量の医薬組成物を投与することを含む。
【０１００】
本明細書で使用される語「実質的に」は「完全に」を除外せず、例えば、Ｙを「実質的に含まない」組成物は、Ｙを完全に含まない場合もある。必要な場合は、語「実質的に」は、本発明の定義から省略してもよい。数値と関連する用語「約」は、数値の文脈におけるその通常の意味を有することが意図される。必要な場合、単語「約」は、数値±１０％、±５％、±２％、又は±１％によって置き換えられ得る。
【０１０１】
本明細書で引用される全ての文献は、その内容全体が参照により援用される。
【０１０２】
以下の実施例は本発明を例示するためのものであり、本発明をこれに制限するものと解釈すべきではない。
【実施例】
【０１０３】
実施例１：マイクロ及びナノ懸濁液の調製
活性成分のベダキリンは、そのままで用いてもよく、或いはフマル酸塩などのその薬学的に許容可能な塩（例えば市販製品Ｓｉｒｔｕｒｏ（登録商標）で用いられる形態）に変換してもよい。本明細書で引用される場合、別途明記されない限り、ベダキリンはその非塩形態で用いられる。
【０１０４】
ベダキリン配合物の原型は以下のとおりである：
２００ｍｇ／ｍＬ及び１００ｍｇ／ｍＬのナノ及びマイクロ懸濁液の調製。
使用される材料：
０．５ｍｍジルコニウムビーズ（プロセスを補助するため）
注入用滅菌水（Ｖｉａｆｌｏ）
ベダキリン（非ミリング／非粉砕）
トコフェリルＰＥＧ１０００スクシネート−賦形剤
２ｍｍジルコニウムビーズ（プロセスを補助するため）
マンニトール（非経口）−賦形剤
【０１０５】
ガラス瓶、及びミリング媒体として用いられるＺｒＯ２ビーズ（所望されるナノ又はマイクロ懸濁液に応じて０．５ｍｍ又は２ｍｍのいずれか）をオートクレーブ内で殺菌した。注入のため、製剤原料（量は調製される配合物に応じて変わる；例えば下記の配合／懸濁液を参照）をトコフェリルＰＥＧ１０００スクシネートの水溶液（量は必要とされる／所望される濃度に応じて変わる；例えば下記の配合／懸濁液を参照）と共にガラス瓶に入れた。平均粒径５００μｍ又は２ｍｍ（マイクロ又はナノ懸濁液のどちらが必要とされる／所望されるかに応じて変わる）のＺｒＯ２−ビーズを添加した。瓶をローラーミル上に置いた。懸濁液を１００ｒｐｍで最大７２時間の期間マイクロ粒子化／ナノ粒子化した。例えば、マイクロ粒子化は、１００ｒｐｍで３時間（又は最大３時間）実施してもよく、ナノ粒子化は、１００ｒｐｍで最大４６時間（例えば約４０時間）実施してもよい。ミリングプロセスが終了したら、濃縮したマイクロ又はナノ懸濁液を注射器で取り出してバイアル瓶に充填する。得られた配合物（ナノ懸濁液及びマイクロ懸濁液をベースとする）を以下の表に記載する。濃度の決定はＨＰＬＣ／ＵＶによって実施した。必要な場合は希釈を行って活性成分であるベダキリンの最終濃度を２００ｍｇ／ｍＬとした。得られた懸濁液を遮光した。３００ｍｇ／ｍＬ及び１００ｍｇ／ｍＬのナノ及びマイクロ配合物を含むその他の濃度も作製して試験した。
【０１０６】
こうした配合物は、可能な長時間作用効果（例えばらい病の治療における）を調査するためのＰＫ研究のため、動物に筋肉及び皮下投与された（且つ今後投与される）。
様々な貯蔵条件後に粒径を測定することにより、懸濁液の物理的安定性を追跡調査する。
【０１０７】
配合物の特定の実施形態は、以下の特徴を有する：
２ｍｍのＺｒビーズを用いることによるマイクロ懸濁液
２００ｍｇ／ｍＬのミリング（そうでない場合、例えば３００ｍｇ／ｍＬでは濃度が高くなりすぎる場合がある）
ナノ懸濁液を得るより長時間のミリング
例えば物理的安定性に基づいて選択される好適な表面改質剤は、例えば一実施形態ではＴＰＧＳであり、別の実施形態ではＴｗｅｅｎである。
【０１０８】
ベダキリンマイクロ及びナノ懸濁液の実施例
本明細書では実施例１Ａ（ナノ）及び実施例１Ｂ（マイクロ）と称される２００ｍｇ／ｍＬのナノ及びマイクロ懸濁液
【０１０９】
【表１】
2020526538.tif 000002
【０１１０】
本明細書では実施例１Ｃ（ナノ）及び実施例１Ｄ（マイクロ）と称される１００ｍｇ／ｍＬのナノ及びマイクロ懸濁液
【０１１１】
【表２】
2020526538.tif 000003
【０１１２】
上記の配合物の粒径分布（ＰＳＤ）
適用可能な場合、ＮＤ＝測定せず
【０１１３】
【表３】
2020526538.tif 000004
【０１１４】
【表４】
2020526538.tif 000005
【０１１５】
【表５】
2020526538.tif 000006
【０１１６】
【表６】
2020526538.tif 000007
【０１１７】
実施例２：薬物動態学的研究
研究Ａ−マウスにおける薬物動態学的プロファイル
ベダキリンの単一用量をマウスに経口投与し、ベダキリン自体（「ＴＭＣ２０７」とも称される）及びその主代謝物であるＮ−モノデスメチル（「Ｍ２」とも称される）の血漿中動態を、１６８時間にわたって測定した。Ｍ２は活性代謝物であるように思われ、ベダキリン（ＴＭＣ２０７）投与時のその形成は、少なくとも以下の種で見られる：マウス、ラット／イヌ、及びヒト（その形成は、マウスにおいて最大であり、ヒトにおいて最小である）。
【０１１８】
結果は、図１の「マウスにおける３０ｍｇ／ｋｇの単回投薬後のＴＭＣ２０７及びＭ２の血漿中動態」に記載されるとおりである。
【０１１９】
以下のことが分かる：
ＴＭＣ２０７及びＭ２の血漿中動態は低速であり、Ｍ２の形成も低速である
Ｍ２の血漿曝露（ＡＵＣ）はＴＭＣ２０７の曝露よりも高い
Ｍ２の肺濃度は、ＴＭＣ２０７の肺濃度よりもはるかに高い
１６８時間の期間後、血漿中のＴＭＣ２０７濃度は約０．０１μｇ／ｍＬであり、Ｍ２は約０．１μｇ／ｍＬである
【０１２０】
実施例１に記載されるように、２００ｍｇ／ｍＬ及び１００ｍｇ／ｍＬのマイクロ及びナノ懸濁液（実施例１Ａ、１Ｂ、１Ｃ、及び１Ｄ）はマウスで試験し、ここでこのマウスは以下のいずれかを受けた：
８０ｍｇ／ｋｇ（この場合、１００ｍｇ／ｍＬの懸濁液が用いられた（すなわち実施例１Ｃ及び１Ｄ））又は１６０ｍｇ／ｋｇ（この場合、２００ｍｇ／ｍＬの懸濁液が用いられた（すなわち実施例１Ａ及び１Ｂ））の用量
が筋肉内に（ＩＭ）又は皮下に（ＳＭ）投与された
【０１２１】
配合物１Ａ、１Ｂ、１Ｃ、及び１Ｄのそれぞれが、マウスに投与される前に懸濁液ＡＰＩアッセイ（ｓｕｓｐｅｎｓｉｏｎ  ＡＰＩ  ａｓｓａｙ）で試験され、ＡＰＩは７５〜１４２％の範囲内であることが決定された（異常に広い範囲）。しかしながら、マウスにおいて、ベダキリン及びその代謝物の血漿中濃度は、こうした配合物の投与後も依然として測定及び評価することができた。
【０１２２】
結果の段階１−６７２時間まで
図２「２００ｍｇ／ｍＬ配合物（具体的には、実施例１Ａ及び１Ｂの配合物、すなわち、それぞれナノ及びマイクロ懸濁液）を１６０ｍｇ／ｋｇの用量でＩＭ又はＳＣ投与した場合のマウスにおけるＴＭＣ２０７の血漿中動態」（ＴＭＣ２０７は図中「ＵＤ」として参照される）
【０１２３】
図３「２００ｍｇ／ｍＬ配合物（具体的には、実施例１Ａ及び１Ｂの配合物、すなわち、それぞれナノ及びマイクロ懸濁液）を１６０ｍｇ／ｋｇの用量でＩＭ又はＳＣ投与した場合のマウスにおけるＭ２の血漿中動態」（Ｍ２は図中「ｍｅｔ」として参照される）
【０１２４】
概ね以下のことが分かる：
ＴＭＣ２０７濃度に関して、Ｃｍａｘ範囲は、約３０００ｎｇ／ｍＬ（マイクロ懸濁液投与ＩＭの最大値）〜約１００ｎｇ／ｍＬ（マイクロ懸濁液投与ＳＣの最小値）の範囲である
６７２時間では、約２００ｎｇ／ｍＬ（マイクロ懸濁液投与ＩＭの最大値）〜約５０ｎｇ／ｍＬ（マイクロ懸濁液投与ＳＣの最小値）の範囲で、依然として測定可能なＴＭＣ２０７濃度が存在した
Ｍ２濃度に関して、Ｃｍａｘ範囲は、約３０００ｎｇ／ｍＬ（マイクロ懸濁液投与ＩＭの最大値）〜約３００ｎｇ／ｍＬ（マイクロ懸濁液投与ＳＣの最小値）の範囲である
６７２時間では、約１０００ｎｇ／ｍＬ（マイクロ懸濁液投与ＩＭの最大値）〜約２００ｎｇ／ｍＬ（マイクロ懸濁液投与ＳＣの最小値）の範囲で、依然として測定可能なＭ２濃度が存在した
【０１２５】
図４「１００ｍｇ／ｍＬ配合物（具体的には、実施例１Ｃ及び１Ｄの配合物、すなわち、それぞれナノ及びマイクロ懸濁液）を８０ｍｇ／ｋｇの用量でＩＭ又はＳＣ投与した場合のマウスにおけるＴＭＣ２０７の血漿中動態」（ＴＭＣ２０７は図中「ＵＤ」として参照される）
【０１２６】
図５「１００ｍｇ／ｍＬ配合物（具体的には、実施例１Ｃ及び１Ｄの配合物、すなわち、それぞれナノ及びマイクロ懸濁液）を８０ｍｇ／ｋｇの用量でＩＭ又はＳＣ投与した場合のマウスにおけるＭ２の血漿中動態」（Ｍ２は図中「ｍｅｔ」として参照される）
【０１２７】
概ね以下のことが分かる：
ＴＭＣ２０７濃度に関して、Ｃｍａｘ範囲は、約２０００ｎｇ／ｍＬ（ナノ懸濁液投与ＩＭの最大値）〜約４００ｎｇ／ｍＬ（ナノ及びマイクロ懸濁液投与ＳＣの最小値）の範囲である
６７２時間では、約１００ｎｇ／ｍＬ（マイクロ懸濁液投与ＩＭの最大値）〜約３０ｎｇ／ｍＬ（マイクロ懸濁液投与ＳＣの最小値）の範囲で、依然として測定可能なＴＭＣ２０７濃度が存在したＭ２濃度に関して、Ｃｍａｘ範囲は、約２０００ｎｇ／ｍＬ（ナノ懸濁液投与ＩＭの最大値）〜約３００ｎｇ／ｍＬ（マイクロ懸濁液投与ＳＣの最小値）の範囲である
６７２時間では、約５００ｎｇ／ｍＬ（マイクロ懸濁液投与ＩＭの最大値）〜約１００ｎｇ／ｍＬ（マイクロ懸濁液投与ＳＣの最小値）の範囲で、依然として測定可能なＭ２濃度が存在した
【０１２８】
結果の段階２−２１８４時間まで
これらの研究のマウスを２１８４時間まで更に監視して、以下の結果を得た：
配合物１Ａ、すなわち濃度２００ｍｇ／ｍＬのナノ懸濁液を、１６０ｍｇ／ｋｇでＳＣ（ＳｔＤｅｖ＝標準偏差）、及び１６０ｍｇ／ｋｇでＩＭ投与した場合
【０１２９】
【表７】
2020526538.tif 000008
【０１３０】
配合物１Ｃ、すなわち濃度１００ｍｇ／ｍＬのナノ懸濁液を、８０ｍｇ／ｋｇでＳＣ、及び８０ｍｇ／ｋｇでＩＭ投与した場合
【０１３１】
【表８】
2020526538.tif 000009
【０１３２】
配合物１Ｂ、すなわち濃度２００ｍｇ／ｍＬのマイクロ懸濁液を、１６０ｍｇ／ｋｇでＳＣ（ＳｔＤｅｖ＝標準偏差）、及び１６０ｍｇ／ｋｇでＩＭ投与した場合
【０１３３】
【表９】
2020526538.tif 000010
【０１３４】
配合物１Ｄ、すなわち濃度１００ｍｇ／ｍＬのマイクロ懸濁液を、８０ｍｇ／ｋｇでＳＣ（ＳｔＤｅｖ＝標準偏差）、及び８０ｍｇ／ｋｇでＩＭ投与した場合
【０１３５】
【表１０】
2020526538.tif 000011
【０１３６】
研究Ｂ−ラット及びビーグル種イヌにおける薬物動態学的プロファイル
本研究では、どちらも上記の図１で示されるナノ懸濁液（配合物１Ａ）及びマイクロ懸濁液（配合物１Ｂ）である、濃度２００ｍｇ／ｍＬの濃度の配合物を使用した（すなわち、濃度２００ｍｇ／ｍＬのマイクロ及びナノ粒子（活性ベダキリンの）に加えて、ＴＰＧＳ（４：１ベダキリン：ＴＰＧＳ）及び５０ｍｇ／ｍＬのマンニトールをＷＦＩ（注入用水）中で用いた）。
【０１３７】
これらの研究は、実施例１に記載される配合物（具体的には１Ａ及び１Ｂのナノ及びマイクロ配合物）は、皮下（ＳＣ）及び筋肉内（ＩＭ）投与されると、雄ラット及び雄ビーグル種イヌにおいて長期間にわたり安定した血漿中濃度をもたらすことを実証する。
【０１３８】
雄ラット
第１の実験は雄ラット上で実施され、ここでは上記で参照された各該当する２００ｍｇ／ｍＬナノ懸濁液及びマイクロ懸濁液が、４０ｍｇ／ｋｇ（０．２ｍＬ／ｋｇ）の濃度で皮下（ＳＣ）及び筋肉内（ＩＭ）投与された。３ヶ月で中間分析を実施して、その結果を６ヶ月目に追跡調査した。研究には１２匹のラットを使用した。６匹のラットに筋肉内（ＩＭ）投与を施し、これらのラットのうち３匹には２００ｍｇ／ｍＬのナノ懸濁液（上記の実施例１、配合物１Ａを参照）を、他の３匹には２００ｍｇ／ｍＬのマイクロ懸濁液（上記の実施例１、配合物１Ｂを参照）を投与した。６匹のラットに皮下（ＳＣ）投与を施し、これらのラットのうち３匹には２００ｍｇ／ｍＬのナノ懸濁液（上記の配合物１Ａを参照）を、他の３匹には２００ｍｇ／ｍＬのマイクロ懸濁液（上記の配合物１Ｂを参照）を投与した。
【０１３９】
結果の段階１−２２００時間まで
図６「２００ｍｇ／ｍＬマイクロ配合物（例えば実施例１の配合物１Ｂ、すなわちマイクロ懸濁液を参照）を４０ｍｇ／ｋｇの用量でＩＭ又はＳＣ投与した場合の雄ラットにおけるＴＭＣ２０７の血漿中動態」及び「２００ｍｇ／ｍＬナノ配合物（例えば実施例１の配合物１Ａ、すなわちナノ懸濁液を参照）を４０ｍｇ／ｋｇの用量でＩＭ又はＳＣ投与した場合の雄ラットにおけるＴＭＣ２０７の血漿中動態」
【０１４０】
ＴＭＣ２０７に関して以下のパラメータを計算した（図６を参照）：
【０１４１】
【表１１】
2020526538.tif 000012
【０１４２】
概ね以下のことが分かる：
マイクロ懸濁液の投与後、ＩＭ後ではＳＣ後よりも高い（２．６倍）ＡＵＣ。ナノ懸濁液の投与後、ＳＣ又はＩＭ後に同様のＡＵＣ
バイオアベイラビリティ（５ｍｇ／ｋｇのＩＶとの比較）は、最小（マイクロ懸濁液ＳＣ）＝５６％、他の３つ＞１００％
図６のグラフに示されていないＭ２は、ｔｍａｘがより後であり、Ｍ２のＡＵＣがＴＭＣ２０７よりも１．５〜２倍低いことを除いては、ＴＭＣ２０７と同じプロファイルを有し、一般に、この比はＰＯ経路に匹敵する
【０１４３】
ラットにおける経口（ＰＯ）投与でも比較を実施し、これは１３週間の毒性研究とも見なされ得、ここでは次の結果が観察された：
両方の配合物の単一ＩＭ又はＳＣ後３ヶ月における暴露量（Ｃｍａｘ及びＡＵＣ）は、１３週間研究の最大用量でのＰＯ投与後の合計暴露量よりもはるかに少ない；同じ期間（３ヶ月）中で、ＩＭ／ＳＣが３４５００〜９１５００ｎｇ．ｈ／ｍＬであるのに対し、ＰＯの合計暴露量＝２，３８５，３８３ｎｇ．ｈ／ｍＬ
Ｍ２に関しては上記を参照されたい
【０１４４】
雄ビーグル種イヌ
第２の実験は雄ビーグル種イヌ上で実施され、ここでは上記で参照された各該当する２００ｍｇ／ｍＬナノ懸濁液及びマイクロ懸濁液が、４０ｍｇ／ｋｇ（０．２ｍＬ／ｋｇ）の濃度で皮下（ＳＣ）及び筋肉内（ＩＭ）投与された。３ヶ月で中間分析を実施して、その結果を６ヶ月目に追跡調査した。研究開始時の体重が８〜１６ｋｇの範囲の、１２匹の健康な雄ビーグル種イヌを用いた。各イヌは耳に入れ墨した番号によって識別された。６匹のイヌの左右の大腿二頭筋に筋肉内（ＩＭ）投与を施し、これらのイヌトのうち３匹には２００ｍｇ／ｍＬのナノ懸濁液（上記の実施例１、配合物１Ａを参照）を、他の３匹には２００ｍｇ／ｍＬのマイクロ懸濁液（実施例１、配合物１Ｂを参照）を投与した。６匹のイヌの左右の大腿二頭筋に皮下（ＳＣ）投与を施し、これらのイヌのうち３匹には２００ｍｇ／ｍＬのナノ懸濁液（上記の配合物１Ａを参照）を、他の３匹には２００ｍｇ／ｍＬのマイクロ懸濁液（上記の配合物１Ｂを参照）を投与した。
【０１４５】
全てのイヌの左頸静脈から、０日目の０時間目（投与前）、投与後２０分目、１時間目、３時間目、８時間目、及び２４時間目に、並びに更に２、３、６、８、１０、１３、１６、２０、２３、２７、２９、３６、４３、５０、５７、６４、７１、７８、８５、及び９２日目のおよそ午前８時に、３ｍＬの血液試料を採取した。
【０１４６】
血液試料をＥＤＴＡ（ＥＤＴＡ  Ｖａｃｕｅｔｔｅ  Ｇｒｅｉｎｅｒ，Ｃａｔ．Ｎｏ．４５４０８６（Ｇｒｅｉｎｅｒ  Ｌａｂｏｒｔｅｃｈｎｉｋ  Ｎ．Ｖ．））上に配置した。２時間の血液サンプリング中に、室温下で、試料を約１９００ｘｇで１０分間遠心分離して血漿を分離させた。血漿は即座に第２の管へと移し、遠心分離の開始から２時間以内に冷凍室に保管した。有効性が確認されているＬＣ−ＭＳ／ＭＳ法によって、血漿試料のＴＭＣ２０７及びその代謝物Ｍ２を個別に分析した。
【０１４７】
図７「２００ｍｇ／ｍＬマイクロ配合物（例えば実施例１の配合物１Ｂを参照）を４０ｍｇ／ｋｇの用量でＩＭ又はＳＣ投与した場合の雄ビーグル種イヌにおけるＴＭＣ２０７の血漿中動態」及び「２００ｍｇ／ｍＬナノ配合物（例えば実施例１の配合物１Ａ参照）を４０ｍｇ／ｋｇの用量でＩＭ又はＳＣ投与した場合の雄ビーグル種イヌにおけるＴＭＣ２０７の血漿中動態」
【０１４８】
ＴＭＣ２０７に関して以下のパラメータを計算した（図７を参照）：
【０１４９】
【表１２】
2020526538.tif 000013
【０１５０】
概ね以下のことが分かる：
マイクロ懸濁液の投与後、ＩＭ後はＳＣ後よりも高い（２倍）ＡＵＣ
ナノ懸濁液の投与後、ＳＣ又はＩＭ後に同様のＡＵＣ
Ｃｍａｘは、両方の配合物に関してＩＭ後はＳＣ後よりも高い
バイオアベイラビリティ（１ｍｇ／ｋｇのＩＶとの比較）は、＞１００％
Ｍ２は、ｔｍａｘがより後であり、ＡＵＣがＴＭＣ２０７よりも３〜４倍低いことを除いては、ＴＭＣ２０７と同じプロファイルを有し、一般に、この比はＰＯ経路に匹敵する
【０１５１】
ラットにおける経口（ＰＯ）投与でも比較を実施し、これは１３週間の毒性研究と見なされ得、ここでは次の結果が観察された：
ＩＭナノ懸濁液後に、１８ｍｇ／ｋｇでのＰＯ後のＣｍａｘに類似した最大のＣｍａｘ；暴露は、ＰＯ後にＩＭ／ＳＣ後よりも遥かに高い合計暴露：同じ期間で、ＩＭ／ＳＣが２６８０００〜５４９０００ｎｇ．ｈ／ｍＬであるのに対し、ＰＯの合計暴露量＝１３，９８８，５２０ｎｇ．ｈ／ｍＬ
Ｍ２に関しては上記を参照されたい
【０１５２】
３ヶ月回の中間結果に基づき、以下の結論が得られた：
ナノ懸濁液／マイクロ懸濁液のＩＭ／ＳＣ後：
ラットにおけるＡＵＣ：ＩＭマイクロ＞ＳＣナノ〜＝ＩＭナノ（より急激な低下）＞ＳＣマイクロ
イヌにおけるＡＵＣ：ＩＭマイクロ＞ＳＣナノ〜＝ＩＭナノ＞ＳＣマイクロ（４つのプロファイルで同様の低下）
【０１５３】
ナノ懸濁液／マイクロ懸濁液のＩＭ／ＳＣ後の４０ｍｇ／ｋｇでは、ＰＯとＩＭとの間で類似しているナノ懸濁液ＩＭ後のイヌにおけるＴＭＣ２０７のＣｍａｘを除いて両方の種における経口毒性研究でＴＭＣ２０７／Ｍ２のＣｍａｘ及びＡＵＣが網羅される
【０１５４】
結果の段階２−４４００時間まで
全てのケースで、ＢＤＱ又はＭ２の血漿中濃度が、関連研究における３体の動物（ラット又はイヌ）の平均値として計算される。
【０１５５】
ラットの研究：配合物１Ｂ、すなわち濃度２００ｍｇ／ｍＬのマイクロ懸濁液を、４０ｍｇ／ｋｇでＳＣ（ＳｔＤｅｖ＝標準偏差）、及び４０ｍｇ／ｋｇでＩＭ投与した場合
【０１５６】
【表１３】
2020526538.tif 000014
【０１５７】
ラットの研究：配合物１Ａ、すなわち濃度２００ｍｇ／ｍＬのナノ懸濁液を、４０ｍｇ／ｋｇでＳＣ（ＳｔＤｅｖ＝標準偏差）、及び４０ｍｇ／ｋｇでＩＭ投与した場合（このケースでは、小試料サイズがサマリー変数の計算に適用される）
【０１５８】
【表１４】
2020526538.tif 000015
【０１５９】
【表１５】
2020526538.tif 000016
【０１６０】
イヌの研究：配合物１Ｂ、すなわち濃度２００ｍｇ／ｍＬのマイクロ懸濁液を、４０ｍｇ／ｋｇでＳＣ（ＳｔＤｅｖ＝標準偏差）、及び４０ｍｇ／ｋｇでＩＭ投与した場合。
【０１６１】
【表１６】
2020526538.tif 000017
【０１６２】
【表１７】
2020526538.tif 000018
【０１６３】
イヌの研究：配合物１Ａ、すなわち濃度２００ｍｇ／ｍＬのナノ懸濁液を、４０ｍｇ／ｋｇでＳＣ（ＳｔＤｅｖ＝標準偏差）、及び４０ｍｇ／ｋｇでＩＭ投与した場合（このケースでは、小試料サイズがサマリー変数の計算に適用される）
【０１６４】
【表１８】
2020526538.tif 000019
【０１６５】
実施例３
潜伏性結核感染症の少菌型マウスモデル（ｐａｕｃｉｂａｃｉｌｌａｒｙ  ｍｏｕｓｅ  ｍｏｄｅｌ）における注入式長時間作用型ベダキリン配合物の評価
本研究の目的は、少菌型の潜伏性結核感染症（ＬＴＢＩ）のマウスモデルを用いて、４週間毎に合計１、２、又は３回用量を投与した長時間作用型ベダキリン（ＢＬＡ）配合物の殺菌活性作用と、標準の２５ｍｇ／ｋｇ用量、又はＢＬＡとして投与された合計薬剤用量と一致するより低い用量での毎日（１週間に５日）経口投与したＢの活性と、を比較することであった。最初の研究スキームを表１に示す。本研究に用いられたＢＬＡは上記の実施例１Ｂに記載されるもの、すなわち濃度２００ｍｇ／ｍＬのマイクロ懸濁液である。主要な成果は、治療中のマイコバクテリウム・ツベルクローシス（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ）肺ＣＦＵ計数の低下であった。
【０１６６】
【表１９】
2020526538.tif 000020
【０１６７】
レジメンの正当化
未治療のマウスを用いて、少菌型感染のレベル及び安定性を決定した。
Ｒ１０（５／７）は、米国及びカナダ国におけるＬＴＢＩ治療のための代替的レジメンであり、４ヶ月間投与される。本明細書では、これはモデルを適格にするための対照として用いられた。
Ｐ１５Ｈ５０（１／７）は、米国におけるＬＴＢＩ治療のための代替的レジメンであり、３ヶ月間、１週間に１回投与される（１２回投薬）。これは、少なくとも９ヶ月間のイソニアジドと同じ効果があることが証明された。これは、現在推奨されるレジメンで最も間欠的であり、第２の対照としての役割を果たす。
Ｂ２５（５／７）は、少菌型モデルで従来研究されているヒト等価用量での１日１回のＢである。これは、２８日毎に５００ｍｇ／ｋｇの合計用量を提供する。
Ｂ８（５／７）は、２８日毎に３用量を投与されて、ＢＬＡ配合物用量（すなわち１６０ｍｇ／ｋｇ）と同じ合計用量（４８０ｍｇ／ｋｇ）を提供するように低減された用量の１日１回のＢである。
Ｂ５．３３（５／７）は、２８日毎に２用量を投与されて、ＢＬＡ配合物用量（すなわち１６０ｍｇ／ｋｇ）と同じ合計用量（３２０ｍｇ／ｋｇ）を提供するように低減された用量の１日１回のＢである。
Ｂ２．６７（５／７）は、１回投与されて、ＢＬＡ配合物用量（すなわち１６０ｍｇ／ｋｇ）と同じ合計用量（１６０ｍｇ／ｋｇ）を提供するように低減された用量の１日１回のＢである。
ＢＬＡ−１６０（１／２８）×３は、１６０ｍｇ／ｋｇとして２８日毎に合計３用量投与されるＢＬＡ配合物である。したがって、合計Ｂ用量は、各２８日間隔でのＢ８（５／７）群のそれと一致する。
ＢＬＡ−１６０（１／２８）×２は、０日目から開始して、１６０ｍｇ／ｋｇとして２８日毎に合計２用量投与されるＢＬＡ配合物である。したがって、週１２（３２０ｍｇ／ｋｇ）までに投与される合計Ｂ用量は、Ｂ５．３３（５／７）群のそれと同じになる。
ＢＬＡ−１６０（１／２８）×１は、１６０ｍｇ／ｋｇとして０日目に１回だけ投与されるＢＬＡ配合物である。したがって、週１２（１６０ｍｇ／ｋｇ）までに投与される合計Ｂ用量は、Ｂ２．６７（５／７）群のそれと同じになる。
【０１６８】
最終結果
全てのＣＦＵ計数データを最終決定して下記の表２に示す。研究機関の合意を最終決定してＢＬＡの供給物を得ることが遅れたために、治療はＭ．ツベルクローシス（Ｍ．ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ）の攻撃感染から約１３週間後まで開始されず、表２の時間線はそれに合わせて調整されている。異なる治療群間で比較するため、ボンフェローニの多重比較検定によって調整した一元配置分散分析（ｏｎｅ−ｗａｙ  ＡＮＯＶＡ）を用いて統計的有意性を評価した。
【０１６９】
【表２０】
2020526538.tif 000021
【０１７０】
ＢＣＧ免疫化。エアロゾルによって１５０体の雌ＢＡＬＢ／ｃマウスをＭ．ボビス（Ｍ．ｂｏｖｉｓ）ｒＢＣＧ３０に感染させた。ＯＤ６００が１．０３の培養懸濁液を１０倍に希釈して、エアロゾル感染のために使用した。細菌懸濁液の濃度は６．８８ｌｏｇ１０ＣＦＵ／ｍＬであり、これは３．０５（ＳＤ０．１０）ｌｏｇ１０ＣＦＵ／肺の平均着床をもたらした。６週間後、Ｍ．ツベルクローシス（Ｍ．ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ）攻撃感染時に、マウス肺中の平均ＢＣＧ負荷は４．９５（ＳＤ０．１１）ｌｏｇ１０ＣＦＵであった。０日目までに、ＢＣＧ負荷は低下して３．２７（ＳＤ０．４５）ｌｏｇ１０ＣＦＵ／肺で安定し、４、８、及び１２週目に同様の肺負荷が未治療のマウスで観察された。したがって、予期されたとおり、これらのマウスの肺中に、低レベルの安定したＢＣＧ感染が確立された。
【０１７１】
Ｍ．ツベルクローシス（Ｍ．ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ）攻撃。ＢＣＧ免疫化から６週間後、エアロゾルによってマウスをＭ．ツベルクローシス（Ｍ．ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ）Ｈ３７Ｒｖに感染させた。ＯＤ６００が０．８５０の培養懸濁液を〜１００倍に希釈して、エアロゾル感染のために使用した。細菌懸濁液の濃度は４．７３ｌｏｇ１０ＣＦＵ／ｍＬであり、これは２．１１（ＳＤ０．０９）ｌｏｇ１０ＣＦＵ／肺の平均着床をもたらした。着床は意図していたよりも約１ｌｏｇ１０ＣＦＵ高かった。０日目までに、Ｍ．ツベルクローシス（Ｍ．ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ）負荷は約４．８ｌｏｇ１０ＣＦＵ／肺で安定し、４、８、及び１２週目に同様の肺負荷が未治療のマウスで観察された。したがって、より高い着床にもかかわらず、これらのマウスの肺中に、安定したＭ．ツベルクローシス（Ｍ．ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ）感染が確立され、これに応じて、安定化された肺ＣＦＵ負荷は、これ以前の実験（１〜３）で観察されたものよりもほぼ１ｌｏｇ１０ＣＦＵだけ高くなった。
【０１７２】
殺菌活性作用の評価（表２）。未治療マウスの肺内おけるＭ．ツベルクローシス（Ｍ．ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ）ＣＦＵ計数と比較して、Ｒ１０（５／７）対照レジメンは、平均ＣＦＵ計数を、それぞれ４、８、及び１２週間の治療後に約１、２、及び３ｌｏｇ１０ＣＦＵ／肺だけ低下させた。Ｐ１５Ｈ５０（１／７）対照レジメンは、それぞれ４、８、及び１２週間の治療後に約２、３、及び４．５ｌｏｇ１０ＣＦＵの低下をもたらした。両方の対照レジメンの肺ＣＦＵ計数低下の相対的規模は、これ以前の研究（１、２）に基づき予期したとおりである。Ｂ２５（５／７）は、４、８、及び１２週間の治療後に約１．７、４．０、及び４．９ｌｏｇ１０ＣＦＵ／肺の低下をもたらし、この結果もこれ以前の研究（１〜２）に基づいて予期したとおりである。したがって、より高い着床及び０日目のＣＦＵ計数は、マウスの肺中におけるこの安定化した細菌集団に対する薬剤の相対的活性に影響を及ぼさなかった。
【０１７３】
全てのＢ試験のレジメンで、用量を増加させると４、８、及び１２週目で活性の増加が観察された。ＢＬＡ−１６０（１／２８）を１回又は２回用量を受けたマウスの場合、未治療のマウスと比較しての肺ＣＦＵ計数の低下は、それぞれ４又は８週間、１日１回の経口レジメンとして投与されたＢ８（５／７）の同じ合計用量を受けたマウスにおける低下と等しかった（両方の時点でｐ＞０．０５）。０日目に１６０ｍｇ／ｋｇを送達するＢＬＡ−１６０の１回の用量は、約１．３ｌｏｇ１０ＣＦＵ／肺の低下をもたらし、４週間のＢ８（５／７）は、１．５ｌｏｇ１０ＣＦＵ／肺の低下をもたらした。ＢＬＡ−１６０（１／２８）の２回の用量、又は８週間のＢ８（５／７）後、これらのレジメンのうちのいずれかを受けたマウス中で、肺内のＣＦＵ計数は追加的１ｌｏｇ１０だけ低下した。１２週間の治療後、肺中のＣＦＵ計数は、ＢＬＡ−１６０の１回用量を受けたマウスの方が、Ｂ２．６７（５／７）（ｐ＝０．０００２）の１日１回の投薬によって同じ合計用量のベダキリン（１６０ｍｇ／ｋｇ）を受けたマウスよりも低く、未治療の対照マウスにおける肺中計数と比較して、前者のレジメンは約３ｌｏｇ１０ＣＦＵ／肺の低下をもたらし、後者は約１．７ｌｏｇ１０ＣＦＵ／肺の低下をもたらした。２回用量のＢＬＡ−１６０、又はＢ５．３３（５／７）１回１回の投与のいずれかによって３２０ｍｇ／ｋｇの合計ベダキリン用量を受けたマウスにおいては、肺中ＣＦＵ計数の低下は約３ｌｏｇ１０ＣＦＵ／肺（ｐ＞０．０５）で同じであった。３回用量のＢＬＡ−１６０（１／２８）によって４８０ｍｇ／ｋｇの合計ベダキリン用量を受けたマウスの場合、肺中ＣＦＵ計数は、Ｂ８（５／７）の１日１回の投薬によって同等の合計用量を受けたマウスよりも高かったが、その差は統計的に有意ではなかった。
【０１７４】
１２週間の治療後、ほぼ全ての試験レジメンが、Ｒ１０（５／７）対照レジメンと等しい殺菌活性作用を有し、Ｂ２．６７（５／７）レジメンのみがこの対照よりも有意に低い殺菌性であった（ｐ＜０．０００１）。試験レジメンＢ８（５／７）は、Ｐ１５Ｈ５０（１／７）及びＢ２５（５／７）の対照レジメンの両方に対して等しい殺菌活性作用を示し、他のすべての試験レジメンが、１２週目で、これらの対照レジメンのいずれかよりも有意に低い殺菌性であった。しかしながら、１２週目の時点で記録されたＣＦＵデータは、長時間作用型ベダキリンレジメンの全体的な有効性を反映していない場合がある。０日目に単一用量のＢＬＡ−１６０を受けたマウスにおいては、投与後１２週間後でもなお殺菌が観察された。そのため、２又は３回用量のＢＬＡ−１６０を受けたマウスの肺における細菌負荷は、最終用量の投与から少なくとも１２週間後でなお更に低下することが考えられる。また、単一用量のＢＬＡ−１６０は、投与後５〜８週目と比較して、１〜４週目及び９〜１２週目により高い殺菌活性作用を発揮するように思われ、これは、長時間作用型媒体からの二相性のＢの放出動力学の可能性を示唆していることも関心の対象である。
【０１７５】
結論
予想されるより高い細菌着床にも関わらず、ＢＡＬＢ／ｃマウスにおいて安定したＭ．ツベルクローシス（Ｍ．ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ）の感染が確立され、これはＬＴＢＩ治療レジメンの評価に好適であった。
１２週間の治療後、ＢＬＡ−１６０の１ヶ月の１回の投薬は、１日１回でそれぞれ１６０又は３２０又は及び４８０ｍｇ／ｋｇの合計ベダキリン用量の投薬と比較して、より優れた、又は同等な殺菌活性作用を示した。
単一用量のＢＬＡ−１６０から観察された殺菌活性作用は、投与後少なくとも１２週間は明白であり、おそらく、２及び３回の用量を受けたマウスの肺内でＣＦＵ計数は低下し続けるものと思われる。本実験における予期されるよりも高いベースライン細菌負荷と共に考えると、これらの発見は、２又は３回の注入後の治癒が可能であり得ることを示唆する。したがって、より長い期間にわたりこれらのＢＬＡレジメンの殺菌活性作用を評価することは、ＬＴＢＩ治療で使用するためのその潜在力を真に理解する上で極めて重要となる。
【０１７６】
参考文献
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【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【国際調査報告】
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