(57)【要約】  本発明は、爪真菌症及び／又は足白癬の処置に使用するための組成物であって、当該組成物は、ナノ粒子を形成することができるポリマーと、テルビナフィン、又はその誘導体若しくは塩とを含み、このナノ粒子は、テルビナフィン若しくはその誘導体若しくは塩を用いて、及び／又はテルビナフィン若しくはその誘導体若しくは塩の存在下で形成され、当該組成物は、感染領域への約５μｇ〜約５０μｇの範囲のテルビナフィンの１日用量を与えるように局所投与される組成物に関する。本発明は、当該組成物と、予め規定された量の当該組成物を使用者の足の足指及び／又は指趾間部及び／又は前面に分配するための液体分配装置との組み合わせにも関する。【選択図】図１３【特許請求の範囲】
【請求項１】
爪真菌症及び／又は足白癬の処置に使用するための組成物であって、前記組成物は、ナノ粒子を形成することができるポリマーと、テルビナフィン、又はその誘導体若しくは塩とを含み、前記ナノ粒子は、テルビナフィン若しくはその誘導体若しくは塩を用いて、及び／又はテルビナフィン若しくはその誘導体若しくは塩の存在下で形成され、前記組成物は、感染領域への約５μｇ〜約５０μｇの範囲のテルビナフィンの１日用量を与えるように局所投与される組成物。
【請求項２】
感染領域への前記テルビナフィンの１日用量が約１０μｇ〜約４０μｇの範囲である請求項１に記載の組成物。
【請求項３】
感染領域への前記テルビナフィンの１日用量が約１５μｇ〜約３５μｇの範囲である請求項２に記載の組成物。
【請求項４】
感染領域への前記テルビナフィンの１日用量が約２０μｇ〜約３０μｇの範囲である請求項３に記載の組成物。
【請求項５】
感染領域への前記テルビナフィンの１日用量が約２５μｇである請求項４に記載の組成物。
【請求項６】
スプレー塗布によって投与される請求項１から請求項５のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項７】
前記１日用量が１回以上のスプレー塗布を用いて投与される請求項６に記載の組成物。
【請求項８】
前記１日用量が８回までのスプレー塗布を含む請求項７に記載の組成物。
【請求項９】
前記１日用量が５回までのスプレー塗布を含む請求項７に記載の組成物。
【請求項１０】
前記スプレーが、足又は手の指及び／又は指趾間部及び／又は前面を被覆するのに有効である請求項１から請求項９のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１１】
（ａ）約０．００５％ｗ／ｗ〜約１％ｗ／ｗの範囲の量で存在するテルビナフィン、又はその誘導体若しくは塩、
（ｂ）ナノ粒子を形成することができるポリマー及びテルビナフィン、又はその誘導体若しくは塩であって、前記ナノ粒子は、テルビナフィン若しくはその誘導体若しくは塩を用いて、及び／又はテルビナフィン若しくはその誘導体若しくは塩の存在下で形成され、前記ポリマーは、約０．０１５％ｗ／ｗ〜約３％ｗ／ｗの範囲の量で存在するポリマー及びテルビナフィン、又はその誘導体若しくは塩、
（ｃ）約３０％ｗ／ｗ未満のアルコール、並びに
（ｄ）最大約９０％ｗ／ｗの水
を含む請求項１から請求項１０のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１２】
（ａ）約０．０２５％ｗ／ｗ〜約０．２％ｗ／ｗの範囲の量で存在するテルビナフィン、又はその誘導体若しくは塩、
（ｂ）約０．７５％ｗ／ｗ〜約０．６％ｗ／ｗの範囲の量で存在するポリマー、
（ｃ）約２０％ｗ／ｗ〜約２９％ｗ／ｗの範囲の量で存在するアルコール、及び
（ｄ）約７０％ｗ／ｗ約９０％ｗ／ｗの範囲の量で存在する水
を含む請求項１１に記載の組成物。
【請求項１３】
（ａ）約０．１％ｗ／ｗのテルビナフィン、又はその誘導体若しくは塩、
（ｂ）約０．３％ｗ／ｗのポリマー、
（ｃ）約２０％ｗ／ｗのアルコール、及び
（ｄ）最大約７９．６％ｗ／ｗの水
を含む請求項１２に記載の組成物。
【請求項１４】
前記ポリマーが、直鎖状及び／若しくは分枝状若しくは環状のポリモノグアニド／ポリグアニジン、ポリビグアニド、これらの類似体又は誘導体を含む請求項１から請求項１３のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１５】
前記ポリマーが、ポリヘキサメチレンビグアニド（ＰＨＭＢ）を含む請求項１４に記載の組成物。
【請求項１６】
前記アルコールがエタノールを含む請求項１から請求項１５のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１７】
緩衝液、賦形剤、結合剤、油、水、乳化剤、グリセリン、酸化防止剤、防腐剤、香料及び尿素、のうちの１以上をさらに含む請求項１から請求項１６のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１８】
他の成分を実質的に含まない請求項１から請求項１６のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１９】
請求項１から請求項６及び請求項１０から請求項１８のいずれか一項に記載の組成物と、予め規定された量の前記組成物を使用者の足の足指及び／又は指趾間部及び／又は前面に分配するための液体分配装置との組み合わせであって、前記装置は、前記組成物を収容する容器、前記容器から前記組成物を放出するためのノズル、並びに予め規定された量の前記組成物を前記容器から引き出してそれを前記ノズルを介して放出し、これにより前記組成物を使用者の足の足指及び／又は指趾間部及び／又は前面に向けて霧化するための使用者により操作可能なポンプ作用機構を備える組み合わせ。
【請求項２０】
前記装置が、予め規定された量の前記組成物が分配される際に通る定量弁をさらに含む請求項１９に記載の装置。
【請求項２１】
予め規定された量の前記組成物が、最大約２００μｌを含む請求項１９又は請求項２０に記載の装置。
【請求項２２】
予め規定された量の前記組成物が、最大約１５０μｌを含む請求項２１に記載の装置。
【請求項２３】
予め規定された量の前記組成物が最大約１００μｌを含む請求項２２に記載の装置。
【請求項２４】
予め規定された量の前記組成物が約１００μｌを含む請求項２２に記載の装置。
【請求項２５】
前記装置が、前記使用者が前記感染領域に対して前記装置の前記ノズルを置くべき正しい距離を示すための距離表示装置をさらに備え、かつ／又は距離表示装置と関係づけられている請求項１９から請求項２４のいずれか一項に記載の装置。
【請求項２６】
使用の際に、前記装置の前記ノズルが前記感染領域の約５ｃｍ〜１５ｃｍの範囲に置かれるとき、前記装置の前記ノズルが、必要とされる用量のすべてを最大約５回の吸い上げで分配することができる請求項１９から請求項２４のいずれか一項に記載の装置。
【請求項２７】
使用の際に、前記装置の前記ノズルが前記感染領域の約１０ｃｍに置かれるとき、前記装置の前記ノズルが、必要とされる用量のすべてを約５回の吸い上げで分配することができる請求項１９から請求項２４のいずれか一項に記載の装置。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、ポリマー及びテルビナフィンから形成されるナノ粒子を含む組成物（並びにこのような組成物の製造方法）に関する。このような組成物は、限定はされないが、爪及び／又は皮膚の真菌症の処置に特に好適である。
【背景技術】
【０００２】
真菌症は、ヒト及び動物の両方においてますます一般的になっているが、このような感染症の処置は、抗真菌性組成物の毒性、これらの組成物の溶解性の低さ、及び従来の医薬品処方物を使用して到達するのが困難であると判明しうるいくつかの感染症の離れた場所のため、未だ問題が残っている。
【０００３】
アンホテリシンＢ、ハマイシン、フィリピン及びニスタチン等の広範囲の抗真菌薬は、１９６０年代に見出された。しかし、毒性のため、ハマイシン及びニスタチンだけが局所的に使用され、アンホテリシンＢは全身的に使用される。抗真菌治療におけるブレークスルーは、アゾール類、とりわけケトコナゾールの導入であった。現在使用されている抗真菌薬の主要クラスは、ポリエン類、アゾール類、アリルアミン類、リポペプチド類、及びピリミジン類である。しかしながら、ポリエン類は哺乳類細胞にとって毒性がある。アゾール類は、局所的には十分に容認されるが全身的に与えられると副作用を有し、かつアゾール類に対する耐性の報告がいくつか存在する。フルシトシンは、使用される最も一般的なピリミジンである。フルシトシンは優れた組織浸透を有する一方で、フルシトシンに対する耐性が急速に発達し、胃腸への副作用を生じる可能性がある。リポペプチド類は低毒性を呈し、有効性を試験するためにいくつかの臨床試験がまだ進行中である。
【０００４】
真菌は真核生物であり、細胞内標的が、もし乱されれば、宿主細胞も損傷しうるため、新しい抗真菌薬の開発は制約される。真菌症の増加及び抗真菌薬の使用の増加は、真菌に耐性の発生をもたらした。真菌性疾患は免疫不全患者の罹患率及び死亡率の増加を引き起こしているため、抗真菌薬耐性が与える臨床的影響は大きい。
【０００５】
新しく見出された薬物のうちのおよそ４０％が、水溶性の問題のため適切に送達できず不首尾に終わると推定されている。薬物の局所送達の場合、皮膚のバリア特性のため、薬物の必要とされる用量を達成するために透過促進剤を必要とすることが多い。
【０００６】
爪真菌症（より一般的には爪の真菌感染として知られる）は、爪が肥厚すること、変色すること、外観を損ねること、及び割れることを引き起こす。処置しなければ、その爪は、爪が靴の内部を圧迫し、圧力、刺激作用及び痛みを引き起こすほどに非常に厚くなる可能性がある。とりわけ糖尿病患者、末梢血管疾患の患者及び免疫不全患者では、さらなる合併症のリスクがある。爪の真菌感染は、心理学的問題及び社会問題を引き起こす可能性がある。爪の真菌感染の発生率は、年齢と共に増加し、６０歳以上の人々の約３０％という罹患率を有し、欧州ではかなりの発生率であり、アジアではさらに高いレベルにある。爪の真菌感染は、１以上の足の爪及び／又は指の爪に影響を及ぼす可能性があり、未処置のまま放置すると爪を完全に破壊する可能性がある。
【０００７】
爪の真菌感染に対する現在の処置は、６〜１２ヵ月間の週に１〜２回の局所用爪ラッカー／ペイント（アモロルフィン等）、及び／又は経口抗真菌薬（テルビナフィン又はイトラコナゾール等）である。経口抗真菌薬は、消化器不調等の重篤な副作用を有する可能性があり、さらには肝臓不全を生じる可能性がある。再発は、一般に症例の２５〜５０％で報告されており、多くの患者は、予測される副作用及び処置時間の長さに起因して処置過程を完遂しようとせず、疾患がより悪性になったときだけ処置が始まることが多い。現在の経口処置又は局所処置は、効果を出すのに６〜１２ヵ月かかることがある。経口処置は、足指に到達するために全身循環を飽和させる必要があり、用量の増加は、胃腸内及び肝臓での合併症のリスクを高める。局所処置は、肥厚した爪に浸透するには効果的ではなく、この点でも高い投薬を必要とする。
【０００８】
水虫（このほか、足の白癬、足白癬又はモカシン足として知られる）は、一般にトリコフィトン属（白癬菌属、Ｔｒｉｃｈｏｐｈｙｔｏｎ属）の真菌（最も一般的にはトリコフィトン・ルブルム（Ｔ．ｒｕｂｒｕｍ）又はトリコフィトン・メンタグロフィテス（Ｔ．ｍｅｎｔａｇｒｏｐｈｙｔｅｓ））によって引き起こされる皮膚の真菌症である。水虫の原因となる種々の寄生性の真菌は、爪真菌症及び股部白癬等の他の皮膚感染症も引き起こしうる。爪の真菌感染とは異なるものの、水虫も処置の遵守及び継続期間に関する問題を抱える。
【０００９】
国際公開第２０１５／０４４６６９号パンフレットは、ナノ粒子を形成することができるポリマーと抗真菌剤とを含む真菌症の処置のための局所組成物（及びこのような組成物の製造方法）を開示する。国際公開第２０１７／００６１１２号パンフレットは、ポリマー及びテルビナフィンから形成されるナノ粒子を含む抗真菌性組成物であって、このナノ粒子が、０．５〜５ｎｍの範囲及び／又は１５０〜２５０ｎｍの範囲の粒子を含む抗真菌性組成物を開示する。
【先行技術文献】
【特許文献】
【００１０】
【特許文献１】国際公開第２０１５／０４４６６９号パンフレット
【特許文献２】国際公開第２０１７／００６１１２号パンフレット
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１１】
本発明の目的は、現在の抗真菌性処置に関連する上記の問題のうちの１以上に対処することである。本発明の１つの目的は、局所的な抗真菌性処置を提供することである。本発明の別の目的は、爪及び／又は真皮を通る抗真菌剤のより良好な浸透を可能にする処置を提供することである。本発明が、爪真菌症及び足白癬の両方に対処するための単一処置として使用することができ、また簡単に適用できて高い治療アドヒアランスを生じ、低再発率を有することができれば、望ましい。
【課題を解決するための手段】
【００１２】
本発明によれば、爪真菌症及び／又は足白癬の処置に使用するための組成物であって、当該組成物は、ナノ粒子を形成することができるポリマーと、テルビナフィン、又はその誘導体若しくは塩とを含み、上記ナノ粒子は、テルビナフィン若しくはその誘導体若しくは塩を用いて、及び／又はテルビナフィン若しくはその誘導体若しくは塩の存在下で形成され、当該組成物は、感染領域への約５μｇ〜約５０μｇの範囲のテルビナフィンの１日用量を与えるように局所投与される組成物が提供される。
【００１３】
本発明のさらなる代替の第１の態様によれば、医薬として使用するための、爪真菌症及び／又は足白癬の処置に使用するための組成物であって、当該組成物は、ナノ粒子を形成することができるポリマーと、テルビナフィン、又はその誘導体若しくは塩とを含み、上記ナノ粒子は、テルビナフィン若しくはその誘導体若しくは塩を用いて、及び／又はテルビナフィン若しくはその誘導体若しくは塩の存在下で形成され、当該組成物は、感染領域への約５μｇ〜約５０μｇの範囲のテルビナフィンの１日用量を与えるように局所投与される組成物が提供される。
【００１４】
本発明のなおさらなる代替の第１の態様によれば、爪真菌症及び／又は足白癬の処置のための組成物の使用であって、上記組成物は、ナノ粒子を形成することができるポリマーと、テルビナフィン、又はその誘導体若しくは塩とを含み、上記ナノ粒子は、テルビナフィン若しくはその誘導体若しくは塩を用いて、及び／又はテルビナフィン若しくはその誘導体若しくは塩の存在下で形成され、上記組成物は、感染領域への約５μｇ〜約５０μｇの範囲のテルビナフィンの１日用量を与えるように局所投与される使用が提供される。
【００１５】
本発明のさらに別のさらなる代替の第１の態様によれば、爪真菌症及び／又は足白癬の処置のための医薬の製造のための組成物の使用であって、上記組成物は、ナノ粒子を形成することができるポリマーと、テルビナフィン、又はその誘導体若しくは塩とを含み、上記ナノ粒子は、テルビナフィン若しくはその誘導体若しくは塩を用いて、及び／又はテルビナフィン若しくはその誘導体若しくは塩の存在下で形成され、上記組成物は、感染領域への約５μｇ〜約５０μｇの範囲のテルビナフィンの１日用量を与えるように局所投与される使用が提供される。
【００１６】
本発明のさらに別のさらなる代替の第１の態様によれば、必要とする患者に、ナノ粒子を形成することができるポリマーと、テルビナフィン、又はその誘導体若しくは塩とを含む組成物を局所投与することによる爪真菌症及び／又は足白癬の処置方法であって、上記ナノ粒子は、テルビナフィン若しくはその誘導体若しくは塩を用いて、及び／又はテルビナフィン若しくはその誘導体若しくは塩の存在下で形成され、上記組成物は、感染領域への約５μｇ〜約５０μｇの範囲のテルビナフィンの１日用量で投与される方法が提供される。
【００１７】
好ましくは、感染領域への上記テルビナフィンの１日用量は、約１０μｇ〜約４０μｇの範囲である。より好ましくは、感染領域へのテルビナフィンの１日用量は、約１５μｇ〜約３５μｇの範囲である。より好ましくは、感染領域へのテルビナフィンの１日用量は、約２０μｇ〜約３０μｇの範囲である。さらにより好ましくは、感染領域へのテルビナフィンの１日用量は、約２０μｇ〜約３０μｇの範囲である。最も好ましくは、感染領域へのテルビナフィンの１日用量は、約２５μｇである。
【００１８】
用語「１日用量」は、爪真菌症及び／又は足白癬に罹患している個体又は動物の足、手又は肢の指及び／又は指趾間部及び／又は前面の感染領域に局所的に与えられる（塗布される）テルビナフィンの量を意味することが意図されている。個体又は動物の複数の領域が感染している可能性があり、それゆえ当該組成物の別々の用量を必要とする可能性があるということが想定される。
【００１９】
この１日用量は、好ましくは、患部が洗浄され又は浸漬されて乾燥された後、朝に施用される。好ましくは、その患部は、最大約８時間は、再度洗浄又は浸漬されない。この１日用量は、朝又は夜に与えられてもよい。
【００２０】
当該組成物は、スプレーによって投与されてもよい。爪真菌症及び／又は足白癬に罹患している患者の足又は手又は感染した肢の指及び／又は指趾間部及び／又は前面の実質的に完全な被覆を得るために、１日用量を算出する目的で、当該組成物のスプレーのおよそ５０％が患者に塗布されることになり、当該組成物のスプレーのおよそ５０％は無駄になり、罹患した肢が置かれている床又は表面を覆うことになると見積もられた。それゆえ、テルビナフィンの１日用量は約２５μｇであることが最も好ましいものの、当該組成物を感染領域に塗布する場合には、噴霧される用量の中に含有される全用量は、およそ５０％の損失を考慮して、所望の用量の２倍の用量であることになる。それゆえ、好ましくは、当該組成物がスプレーによって投与される場合、感染領域に向かって噴霧されるテルビナフィンの量は約２０μｇ〜約８０μｇの範囲ということになる。より好ましくは、当該組成物がスプレーによって投与される場合、感染領域に向かって噴霧されるテルビナフィンの量は約３０μｇ〜約７０μｇの範囲である。さらにより好ましくは、当該組成物がスプレーによって投与される場合、感染領域に向かって噴霧されるテルビナフィンの量は約４０μｇ〜約６０μｇの範囲である。最も好ましくは、当該組成物がスプレーによって投与される場合、感染領域に向かって噴霧されるテルビナフィンの量は約５０μｇである。
【００２１】
当該組成物は、スプレー塗布によって投与されてもよい。１日用量は、１回以上のスプレー塗布を使用して投与されてもよい。１日用量は、最大約１０回のスプレー塗布を含んでもよい。あるいは、１日用量は、最大約８回のスプレー塗布を含んでもよい。好ましくは、１日用量は、最大約７回のスプレー塗布を含んでもよい。最も好ましくは、１日用量は、最大約５回のスプレー塗布を含む。スプレー装置により投与されるとき、複数回投与は、単回投与よりも、有利なことに被覆の領域を大きくすることが示されている。
【００２２】
スプレーは、爪真菌症及び／又は足白癬を処置できるように、足、手又は肢の感染領域、指及び／又は指趾間部及び／又は前面の全体を覆うのに効果的である必要がある。
【００２３】
当該組成物は、
ａ）約１：２〜約１：４の範囲の、ポリマーに対するテルビナフィン、又はその誘導体若しくは塩の比、及び
ｂ）最大約３０％（ｖ／ｖ）（体積／体積）のアルコール
を含んでもよい。
【００２４】
上記ポリマーは、ポリヘキサメチレンビグアニド（ＰＨＭＢ）、ポリヘキサメチレンモノグアニド（ＰＨＭＧ）、ポリエチレンビグアニド（ＰＥＢ）、ポリテトラメチレンビグアニド（ＰＴＭＢ）又はポリエチレンヘキサメチレンビグアニド（ＰＥＨＭＢ）のうちの１以上を含んでもよい。
【００２５】
従って、上記ポリマーは、ポリヘキサメチレンビグアニド（ＰＨＭＢ）、ポリヘキサメチレンモノグアニド（ＰＨＭＧ）、ポリエチレンビグアニド（ＰＥＢ）、ポリテトラメチレンビグアニド（ＰＴＭＢ）、ポリエチレンヘキサメチレンビグアニド（ＰＥＨＭＢ）、ポリメチレンビグアニド（ＰＭＢ）、ポリ（アリルビグアニジノ−ｃｏ−アリルアミン）、ポリ（Ｎ−ビニルビグアニド）、ポリアリルビグアニドのうちの１以上の均一又は不均一な混合物を含んでもよい。
【００２６】
最も好ましいポリマーは、ポリヘキサメチレンビグアニド（ＰＨＭＢ）を含む。
【００２７】
用語「テルビナフィン、又はその誘導体若しくは塩」は、もともと商標名Ｌａｍｉｓｉｌ（登録商標）で販売された合成のアリルアミン抗真菌薬であるテルビナフィン塩酸塩に関連する薬学的に活性な物質を意味することが意図されている。この用語は、テルビナフィン塩酸塩の薬学的なバリエーション、誘導体、代替の塩、例えば薬学的に許容できる形態の無毒な有機又は無機の酸若しくは塩基の付加塩も包含することが意図されている。
【００２８】
テルビナフィン、又はその誘導体若しくは塩は、約５〜約１０００μｇ／ｍｌ（約５μｇ／ｍｌ以上約１０００μｇ／ｍｌ以下）の範囲の量で処方物中に存在してもよい。好ましくは、テルビナフィン、又はその誘導体若しくは塩は、約５〜約６００μｇ／ｍｌの範囲で処方物中に存在してもよい。より好ましくは、テルビナフィン、又はその誘導体若しくは塩は、約２５〜約２００μｇ／ｍｌの範囲の処方物中に存在することになる。さらにより好ましくは、テルビナフィン、又はその誘導体若しくは塩は、約５０〜約１５０μｇ／ｍｌの範囲で処方物中に存在することになる。最も好ましくは、テルビナフィン、又はその誘導体若しくは塩は、約１００μｇ／ｍｌで処方物中に存在することになる。
【００２９】
上記ポリマーは、約１５〜約３０００μｇ／ｍｌの範囲の量で処方物中に存在してもよい。好ましくは、上記ポリマーは、約１５〜約１８００μｇ／ｍｌの範囲で処方物中に存在する。より好ましくは、上記ポリマーは、約７５〜約６００μｇ／ｍｌの範囲で処方物中に存在することになる。さらにより好ましくは、上記ポリマーは、約１５０〜約４５０μｇ／ｍｌの範囲で処方物中に存在することになる。最も好ましくは、上記ポリマーは、約３００μｇ／ｍｌで処方物中に存在することになる。上記ポリマーは、好ましくはＰＨＭＢを含むことになる。
【００３０】
上記アルコールは、約５％〜約２９％又は約５％〜約３０％（ｖ／ｖ）の範囲の量で処方物中に存在してもよい。より好ましくは、上記アルコールは、約１０％〜約２９％又は約１０％〜約３０％（ｖ／ｖ）の範囲の量で処方物中に存在することになる。さらにより好ましくは、上記アルコールは、約２０％〜約２９％又は約２０％〜約３０％（ｖ／ｖ）の範囲の量で処方物中に存在することになる。なおより好ましくは、上記アルコールは、最大約２５％又は２３％（ｖ／ｖ）の量で処方物中に存在することになる。最も好ましくは、上記アルコールは、最大約２０％（ｖ／ｖ）の量で処方物の中に存在する。
【００３１】
このアルコールは、好ましくはエタノールを含むことになろうが、このアルコールは、（単独で、又は組み合わせて）メタノール又はプロパノール等の他のアルコールを含んでもよい。
【００３２】
当該組成物は、水も含んでよい。この水は、好ましくは蒸留水である。この水は、約７０％〜約９５％（ｖ／ｖ）の範囲の量で処方物中に存在してもよい。好ましくは、上記水は、約７０％〜約９０％（ｖ／ｖ）の範囲の量で処方物中に存在することになる。より好ましくは、上記水は、約７０％〜約８０％（ｖ／ｖ）の範囲の量で処方物中に存在することになる。なおより好ましくは、上記水は、約７７％（ｖ／ｖ）超の量で処方物中に存在することになる。最も好ましくは、上記水は、最大約９０％（ｖ／ｖ）、最大約８０％（ｖ／ｖ）又は最大約７９．６％（ｖ／ｖ）の量で処方物中に存在する。
【００３３】
テルビナフィン、又はその誘導体若しくは塩は、約０．００５％ｗ／ｗ（重量／重量）〜約１．０％ｗ／ｗの範囲の量で存在してもよい。好ましくは、テルビナフィン、又はその誘導体若しくは塩は、約０．００５％ｗ／ｗ〜約０．６％ｗ／ｗの範囲で存在してもよい。より好ましくは、テルビナフィン、又はその誘導体若しくは塩は、約０．０２５％ｗ／ｗ〜約０．２％ｗ／ｗの範囲で存在することになる。さらにより好ましくは、テルビナフィン、又はその誘導体若しくは塩は、約０．０５％ｗ／ｗ〜約０．１５％ｗ／ｗの範囲で存在することになる。最も好ましくは、テルビナフィン、又はその誘導体若しくは塩は、約０．１％ｗ／ｗで存在することになる。
【００３４】
上記ポリマーは、約０．１５％ｗ／ｗ〜約３％ｗ／ｗの範囲の量で存在してもよい。好ましくは、上記ポリマーは、約０．１５％ｗ／ｗ〜約１．８％ｗ／ｗの範囲で存在する。より好ましくは、上記ポリマーは、約０．７５％ｗ／ｗ〜約０．６％ｗ／ｗの範囲で存在することになる。さらにより好ましくは、上記ポリマーは、約０．１５％ｗ／ｗ〜約０．４５％ｗ／ｗの範囲で存在することになる。最も好ましくは、上記ポリマーは、約０．３％ｗ／ｗで存在することになる。上記ポリマーは、好ましくはＰＨＭＢを含むことになる。
【００３５】
上記アルコールは、約５％ｗ／ｗ〜約２９％ｗ／ｗの範囲の量で存在してもよい。好ましくは、上記アルコールは、約１０％ｗ／ｗ〜約２９％ｗ／ｗの範囲の量で存在するであろう。より好ましくは、上記アルコールは、約２０％ｗ／ｗ〜約２９％ｗ／ｗの範囲の量で存在するであろう。なおより好ましくは、上記アルコールは、最大約２９％ｗ／ｗ、より好ましくは最大約２５％、さらにより好ましくは最大約２３％ｗ／ｗの量で存在することになり、最も好ましくは、上記アルコールは、最大約２０％ｗ／ｗの量で存在する。
【００３６】
上記アルコールは、好ましくはエタノールを含むことになろうが、このアルコールは、（単独で、又は組み合わせて）メタノール又はプロパノール等の他のアルコールを含んでもよい。
【００３７】
当該組成物は、水も含んでよい。この水は、好ましくは蒸留水である。この水は、約７０％ｗ／ｗ〜約９５％ｗ／ｗの範囲の量で存在してもよい。好ましくは、上記水は、約７０％ｗ／ｗ約９０％ｗ／ｗの範囲の量で存在するであろう。より好ましくは、上記水は、約７０％ｗ／ｗ〜約８０％ｗ／ｗの範囲の量で存在するであろう。なおより好ましくは、上記水は、最大約７０％ｗ／ｗ、より好ましくは最大約７７％ｗ／ｗの量で存在するであろう。最も好ましくは、上記アルコールは、最大約９０％ｗ／ｗ、最大約８０％ｗ／ｗ又は最大７９．６％ｗ／ｗの量で存在する。
【００３８】
好ましくは、当該組成物は、
（ａ）約０．００５％ｗ／ｗ〜約１％ｗ／ｗの範囲の量で存在するテルビナフィン、又はその誘導体若しくは塩；
（ｂ）テルビナフィン、又はその誘導体若しくは塩及びナノ粒子を形成することができるポリマーであって、上記ナノ粒子は、テルビナフィン若しくはその誘導体若しくは塩を用いて、及び／又はテルビナフィン若しくはその誘導体若しくは塩の存在下で形成され、上記ポリマーは、約０．０１５％ｗ／ｗ〜約３％ｗ／ｗの範囲の量で存在するポリマー、
（ｃ）約３０％ｗ／ｗ未満のアルコール、及び
（ｄ）最大約９０％ｗ／ｗの水
を含む。
【００３９】
より好ましくは、当該組成物は、
（ａ）約０．０２５％ｗ／ｗ〜約０．２％ｗ／ｗの範囲の量で存在するテルビナフィン、又はその誘導体若しくは塩、
（ｂ）約０．７５％ｗ／ｗ〜約０．６％ｗ／ｗの範囲の量で存在するポリマー、
（ｃ）約２０％ｗ／ｗ〜約２９％ｗ／ｗの範囲の量で存在するアルコール、及び
（ｄ）約７０％ｗ／ｗ  約９０％ｗ／ｗの範囲の量で存在する水
を含む。
【００４０】
さらにより好ましくは、当該組成物は、
（ａ）約０．１％ｗ／ｗのテルビナフィン、又はその誘導体若しくは塩、
（ｂ）約０．３％ｗ／ｗのポリマー、
（ｃ）約２０％ｗ／ｗのアルコール、及び
（ｄ）最大約７９．６％ｗ／ｗの水
を含む。
【００４１】
ポリマーに対するテルビナフィン、又はその誘導体若しくは塩の比は、約１：３±０．７５であってよい。好ましくは、ポリマーに対するテルビナフィン、又はその誘導体若しくは塩の比は、約１：３±０．５であろう。より好ましくは、ポリマーに対するテルビナフィン、又はその誘導体若しくは塩の比は、約１：３±０．２５であろう。さらにより好ましくは、ポリマーに対するテルビナフィン、又はその誘導体若しくは塩の比は、約１：３±０．１であろう。最も好ましくは、ポリマーに対するテルビナフィン、又はその誘導体若しくは塩の比は約１：３であろう。
【００４２】
上記ナノ粒子は、２つの直径が異なる種として形成された粒子を含んでもよい。これは、０．５〜５ｎｍの範囲の第１種及び５０〜３５０ｎｍの範囲の第２種を含んでもよい。
【００４３】
第２種に対する第１種の相対量は、互いにほぼ等しくてもよく、又は１つの種が当該組成物内でより多量の種であってもよい。
【００４４】
好ましくは、上記第１種の中の粒子は、０．５〜３ｎｍの範囲である。より好ましくは、上記第１種の中の粒子は、０．５〜２．５ｎｍの範囲である。最も好ましくは、上記第１種の中の粒子は、０．５〜２ｎｍの範囲である。好ましくは、上記第２種の中の粒子は、７５〜３２５ｎｍの範囲である。より好ましくは、上記第２種の中の粒子は、１００〜３００ｎｍの範囲である。最も好ましくは、上記第２種の中の粒子は、１５０〜２００ｎｍ又は２１５ｎｍの範囲である。
【００４５】
好ましくは、上記第１種の中の粒子の平均径は、０．５〜１．５ｎｍの範囲であろう。より好ましくは、上記第１種の中の粒子の平均径は、０．６〜１．４ｎｍの範囲であろう。さらにより好ましくは、上記第１種の中の粒子の平均径は、０．７〜１．２ｎｍの範囲であろう。最も好ましくは、上記第１種の中の粒子の平均径は、約０．９ｎｍの領域にある。
【００４６】
好ましくは、上記第２種の粒子の平均径は、５０〜３５０ｎｍの範囲であろう。より好ましくは、上記第２種の粒子の平均径は、１００〜３００ｎｍの範囲であろう。さらにより好ましくは、上記第２種の粒子の平均径は、１５０〜２００ｎｍの範囲であろう。最も好ましくは、上記第２種の粒子の平均径は、約１６０〜約１７６ｎｍの領域であろう。
【００４７】
好ましくは、上記第２種の粒子の平均モード径は、１５０〜２２５ｎｍの範囲であろう。より好ましくは、上記第２種の粒子の平均モード径は、１５５〜２２０ｎｍの範囲であろう。さらにより好ましくは、上記第２種の粒子の平均モード径は、１６０〜２１５ｎｍの範囲であろう。最も好ましくは、上記第２種の粒子の平均モード径は、約１６４〜約２１１ｎｍの領域にあろう。
【００４８】
当該組成物は、以下の成分、すなわち緩衝液、賦形剤、結合剤、油、溶媒、水、乳化剤、グリセリン、酸化防止剤、防腐剤及び香料、又は医薬、及び特に局所用クリーム及び軟膏剤で通常見出されるいずれかの他の成分のうちの１以上をさらに含んでもよいということは、当業者には明らかであろう。さらには、当該組成物は、ペースト又は懸濁液等のいくつかの形態であってもよいであろう。あるいは、及びより好ましくは、当該組成物は、他の成分を実質的に含まない。
【００４９】
遠心分離法、電気泳動法、クロマトグラフィー法又は濾過法等のいくつかの技法が、必要とされるサイズ範囲のナノ粒子を選択するように、上記混合物をさらに処理するために用いられてもよい。ナノ粒子のサイズ／直径の測定は、好ましくは動的光散乱分析を使用して行われる。
【００５０】
本発明のさらなる態様では、本願明細書中に上記された組成物の局所送達のためのスプレー装置が提供される。
【００５１】
本発明のさらなる態様では、ポンプディスペンサー等のスプレー装置を使用することによる、本願明細書中に上記された組成物の局所投与方法が提供される。当該組成物は、目的領域から約０〜３０ｃｍの距離でポンプディスペンサーから噴霧（スプレー）されてもよい。好ましくは、当該組成物は、目的領域から約５〜２５ｃｍの距離でポンプディスペンサーから噴霧されてもよい。最も好ましくは、当該組成物は、目的領域から約５〜１５ｃｍの距離でポンプディスペンサーから噴霧されてもよい。有利なことに、５〜１５ｃｍのスプレー距離が、目的領域の完全被覆及び周囲領域への噴霧された用量の５０％未満の損失をもたらすことが示されている。
【００５２】
本発明の別の態様によれば、本明細書中に上記された組成物と、予め規定された量の当該組成物を感染領域（足指及び／又は手又は感染した肢の指、及び／又は指趾間部及び／又は前面等）に分配するための液体分配装置との組み合わせであって、上記装置は、当該組成物を収容する容器、この容器から当該組成物を放出（吐出）するためのノズル、及び予め規定された量の当該組成物を容器から引き出してそれをノズルを介して放出し、これにより当該組成物を感染領域に向けて霧化するための使用者により操作可能なポンプ作用機構を備える組み合わせが提供される。
【００５３】
上記装置は、予め規定された量の当該組成物が分配される際に通る定量弁をさらに含んでもよい。予め規定された量の当該組成物が最大約２００μｌを含むことが好ましい。より好ましくは、予め規定された量の当該組成物は最大約１５０μｌを含む。最も好ましくは、予め規定された量の当該組成物は、最大約１００μｌ又は約１００μｌを含む。
【００５４】
上記装置は、使用者が感染領域（足又は手又は肢の使用者の指及び／若しくは指趾間部及び／又は前面等）に対して上記装置のノズルを置くべき正しい距離を示すための距離表示装置若しくは距離測定装置をさらに含んでもよく、かつ／又は距離表示装置若しくは距離測定装置と関係づけられてもよい。
【００５５】
使用の際には、上記装置のノズルが足の足指及び／又は指趾間部及び／又は前面の約５ｃｍ〜１５ｃｍの範囲に置かれるとき、上記装置のノズルは、必要とされる用量のすべてを最大約５回の吸い上げで分配することができる。好ましくは、使用の際には、上記装置のノズルが感染領域（足又は手又は肢の指及び／又は指趾間部及び／又は前面等）の約１０ｃｍに置かれるとき、上記装置のノズルは、必要とされる用量のすべてを約５回の吸い上げで分配することができる。
【００５６】
本発明の実施形態は、これより、例としてのみ示す以下の実験及び添付の図面を参照して説明される。
【図面の簡単な説明】
【００５７】
【図１】図１は、ＢＢ２６０３（テルビナフィン及びＰＨＭＢのナノ粒子）及びテルビナフィンのみを用いた爪浸漬実験の結果を示すグラフである。この実験では、健康な爪切片由来の３ｍｍヒトの爪ディスクが等価濃度の有効成分（０．１、１及び１０ｍｇ／ｍｌ）のＢＢ２６０３及びテルビナフィン溶液に懸濁された。洗浄し乾燥された爪が５Ｍ  ＮａＯＨに溶解され、テルビナフィンのレベルが定量ＬＣ−ＭＳ／ＭＳにより決定された。
【図２Ａ】図２Ａは、０．２５ｍｇ／ｍｌ  ＰＨＭＢ、０．０５ｍｇ／ｍｌ  ＦＩＴＣ標識ＰＨＭＢ（蛍光標識ＰＨＭＢの１：５の添加）及び０．１ｍｇ／ｍｌ  テルビナフィンの溶液に３２℃で２４時間浸漬された、健康なヒトのボランティア由来の爪切片の凍結切片にした組織学試料の写真である（スケールバーはおよそ１００μｍである）。
【図２Ｂ】図２Ｂは、図２Ａと同様にして浸漬された、健康なヒトのボランティア由来の爪切片の凍結切片にした組織学試料の写真である。爪断面全体（左手側のスケールバーはおよそ１００μｍである）及び爪のみの中央領域（右手側のスケールバーはおよそ２０μｍである）の２つの画像が提示されている。爪構造自体の中へ少なくとも２０μｍ浸透する爪の縁のまわりで染色が明らかに見られる。
【図３】図３は、ＢＢ２６０３（テルビナフィン及びＰＨＭＢのナノ粒子）又はテルビナフィン溶液で処置された健康なヒトの爪試料へのテルビナフィンの浸透を示す散布図である。テルビナフィンの濃度は、ＢＢ２６０３又は０．１ｍｇ／ｍｌテルビナフィン溶液で処置された健康なヒトの爪由来のエタノール洗浄液中においてＬＣ−ＭＳ／ＭＳにより決定された。個々の試料がプロットされている。（ダイヤモンド形状マーカー）すべてのテルビナフィン試料（ｎ＝４）は検出限界未満（＜０．１ｎｇ／ｍｌ）であった。この２つの試料セットは、テルビナフィン溶液で処置された爪を通過するテルビナフィンの濃度が０．１ｎｇ／ｍｌ（ＬＣ−ＭＳ／ＭＳ検出の限界）であると仮定して、対応のない独立２群のパラメトリックなスチューデントのＴ検定を使用して比較された。この検定についてのｐ値は０．０４であった。
【図４】図４は、ＢＢ２６０３（テルビナフィン及びＰＨＭＢのナノ粒子）又はテルビナフィン溶液で処置された爪と会合するテルビナフィンのレベルを示す散布図である。テルビナフィンの濃度は、ＢＢ２６０３又は０．１ｍｇ／ｍｌテルビナフィン溶液で処置された健康なヒトの爪由来の溶解した爪試料中においてＬＣ−ＭＳにより決定された。個々の試料がプロットされている。この２つの試料セットは、対応のない独立２群のパラメトリックなスチューデントのＴ検定を使用して比較された。この検定についてのｐ値は０．０２であった。
【図５】図５Ａは、ヒトの爪へのＢＢ２６０３（テルビナフィン及びＰＨＭＢのナノ粒子）の複数回用量添加からのフランツ（Ｆｒａｎｚ）セルデータの概要を示す散布図であり、ここでは、複数回の少用量のＢＢ２６０３で処置された健康なヒトの爪由来のエタノール洗浄液中のテルビナフィンの濃度（ＬＣ−ＭＳ／ＭＳにより決定された）が調べられた。図５Ｂは、ヒトの爪へのＢＢ２６０３（テルビナフィン及びＰＨＭＢのナノ粒子）の複数回用量添加からのフランツセルデータの概要を示す散布図であり、ここでは、複数回の少用量のＢＢ２６０３で処置された健康なヒトの爪からの溶解した爪試料中のテルビナフィンの濃度（ＬＣ−ＭＳ／ＭＳにより決定された）が調べられた。
【図６】図６Ａ〜図６Ｅは、３０℃で４日間のインキュベーション後のトリコフィトン・メンタグロフィテス（Ｔｒｙｃｈｏｐｈｙｔｏｎ  ｍｅｎｔａｇｒｏｐｈｙｔｅｓ）を有する酵母エキスペプトンデキストロース（ＹＥＰＤ）寒天板の写真画像である。各プレートは、トリコフィトン・メンタグロフィテス菌叢の中心に置かれた１０ｍｍの無菌ペーパーディスクを有していた。再蒸留水又は様々な濃度のテルビナフィン溶液の４０μｌが各ペーパーディスク上にスポッティングされた。使用されたテルビナフィン溶液の濃度は、０μｇ／ｍｌ（対照、図６Ａ）、０．０６μｇ／ｍｌ（図６Ｂ）、０．６μｇ／ｍｌ（図６Ｃ）、６．００μｇ／ｍｌ（図６Ｄ）及び６０．０μｇ／ｍｌ（図６Ｅ）であった。
【図７】図７Ａ及び図７Ｂは、トリコフィトン・メンタグロフィテスに対する健康なヒトの爪を通過するＢＢ２６０３（テルビナフィン及びＰＨＭＢのナノ粒子）及びテルビナフィン試料の有効性を評価するＹＥＰＤプレートの写真画像である。トリコフィトン・メンタグロフィテスの菌叢が５０μｇ／ｍｌクロラムフェニコールを添加したＹＥＰＤ寒天板に広げられた。健康なヒトの爪の０．１ｍｇ／ｍｌテルビナフィン（図７Ａ）又はＢＢ２６０３（図７Ｂ）のいずれかによる７日間の処置後のフランツセル収集チャンバーからの水性試料が、１０ｍｍペーパーディスク上にスポッティングされた。このディスクはトリコフィトンプレートの中央に置かれ、これはその後、真菌を増殖させるため３０℃で５日間インキュベーションされた。ＢＢ２６０３処置された爪からのテルビナフィンの抗真菌活性は、ディスクの周りのクリアランスのゾーンとして見られる。
【図８】図８は、ＢＢ２６０３（テルビナフィン及びＰＨＭＢのナノ粒子）の複数回投与で処置された爪からのエタノール洗浄液中のテルビナフィン濃度を示す散布図である。複数回の少用量のＢＢ２６０３で処置された健康なヒトの爪由来のエタノール洗浄液中のテルビナフィンの濃度（ＬＣ−ＭＳ／ＭＳにより決定された）は２０％（ｖ／ｖ）エタノール（左手側）又は３０％（ｖ／ｖ）エタノール（右手側）のいずれかであった。
【図９】図９は、ＢＢ２６０３（テルビナフィン及びＰＨＭＢのナノ粒子）の複数回投与で処置された爪からの溶解した爪中のテルビナフィン濃度を示す散布図である。複数回の少用量のＢＢ２６０３で処置された健康なヒトの爪由来の溶解した爪中のテルビナフィンの濃度（ＬＣ−ＭＳ／ＭＳにより決定された）は、２０％（ｖ／ｖ）エタノール（左手側）又は３０％（ｖ／ｖ）エタノール（右手側）のいずれかであった。
【図１０】図１０Ａ〜図１０Ｅは、スポットスプレー試験からの青色食用色素スポットの画像であり、ここでは、噴霧は、紙のシートから５ｃｍ（図１０Ａ）、１０ｃｍ（図１０Ｂ）、１５ｃｍ（図１０Ｃ）、２０ｃｍ（図１０Ｄ）及び２５ｃｍ（１０Ｅ）の距離で行われた。画像はすべて同じスケールで示されている。スケールバーは１ｃｍである。
【図１１】図１１は、スポットスプレー試験からの可視染料被覆（ｎ＝２）の合計面積の直径及び１００％染料被覆を示す面積の直径を示す、紙のシートからのスプレーの距離に対してプロットされた折れ線グラフである。
【図１２】図１２は、紙のシートから１０ｃｍの距離で噴霧し、５回の繰り返しスプレー吸い上げを行うことにより実施された青色食用色素を用いたスポットスプレー試験からのスポットの画像である。この画像は原寸に比例していない。合計可視被覆及び１００％被覆の直径が測定された。それが画像上に示されている。
【図１３】図１３Ａ及び図１３Ｂは、１０ｃｍの距離から５回の染料スプレーで処置された足テンプレート（図１３Ａ）及び下にあった紙（図１７Ｂ）の画像である。１００％染料被覆の領域は、両方の画像上で線により示されている。１００％染料被覆に対応する紙の面積は切り出され、その紙は、被覆の相対面積を評価する方法として秤量された。
【発明を実施するための形態】
【００５８】
以下の実験の目的は、爪真菌症及び／又は足白癬の処置に使用するためのテルビナフィン及びカチオン性ポリマーポリヘキサメチレンビグアニド（ＰＨＭＢ）を含む配合物の有望さ、有効性及び投薬を調べることであった。
【００５９】
テルビナフィン及びＰＨＭＢを用いるナノ粒子形成
実験は、最初に、テルビナフィン及びＰＨＭＢのナノ粒子を形成するために行った。これらのテルビナフィン及びＰＨＭＢのナノ粒子は、初期実験全体にわたってＢＢ２６０３と表した。
【００６０】
ＢＢ２６０３ナノ粒子は、０．１ｍｇ／ｍｌ、１ｍｇ／ｍｌ又は１０ｍｇ／ｍｌに等価な最終テルビナフィン濃度に、３０％（ｖ／ｖ）エタノール中でテルビナフィン．ＨＣｌとＰＨＭＢとを組み合わせることにより最初に形成された。ナノ粒子形成は、Ｎａｎｏｓｉｇｈｔ  ＬＭ１０  Ｚｅｔａｓｉｚｅｒ機器（Ｍａｌｖｅｒｎ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ）で常法により確認した。対照テルビナフィン溶液は、０．１ｍｇ／ｍｌ、１ｍｇ／ｍｌ又は１０ｍｇ／ｍｌの最終濃度にテルビナフィン．ＨＣＬを３０％（ｖ／ｖ）エタノールに溶解することにより作製した。
【００６１】
３０％エタノール中のテルビナフィンとＰＨＭＢとの最初の配合物は、形成されたナノ粒子の数を顕著に増加させることが示され、テルビナフィンのみを３０％エタノール中で用いて形成した粒子よりもより単分散のナノ粒子の形成を生じた。結果は、ＰＨＭＢが、後続する一定範囲の潜在的な真菌症の処置のための局所用医薬の調製において使用することができる、抗真菌薬を有する単分散のナノ粒子を形成するために使用することができるということを示した。
【００６２】
ナノ粒子の分析
０．１ｍｇ／ｍｌテルビナフィンの等価濃度のＢＢ２６０３の溶液では、大量（典型的には５〜１０ｘ１０８ナノ粒子／ｍｌ）の１７０〜２１０ｎｍの範囲の直径を有する単分散粒子が観察された。より高濃度のＢＢ２６０３（それぞれ１ｍｇ／ｍｌ及び１０ｍｇ／ｍｌのテルビナフィンの等価濃度）も、初期爪浸漬実験（後述するとおり）において使用するために製造したが、これらは単分散性を失っていることを示し、これは、より大きいナノ粒子凝集体の形成（データは示さず）を可能にするより高いポリマー濃度に起因すると考えられた。
【００６３】
最後に、３０％（ｖ／ｖ）エタノール中のＢＢ２６０３の溶液の長期安定性が、１７０日の期間にわたって溶液中のナノ粒子を測定することにより評価された。Ｎａｎｏｓｉｇｈｔ  ＬＭ１０を使用して分析を実施し、そのため、ＢＢ２６０３ナノ粒子のより大きい直径の集団のみを考慮した。この分析は、溶液中の粒子の数の初期のいくらかの減少及び粒子のモード径のいくらかのばらつきにもかかわらず、ＢＢ２６０３ナノ粒子は、周囲光条件下、室温で少なくとも５ヵ月間、実質的に安定であることを実証した。
【００６４】
爪浸漬実験
健康なヒトの爪の試料を、ｄｄＨ２Ｏ中、３０℃で２時間、事前インキュベーションした。次いで３ｍｍディスクを、３ｍｍ生検パンチを使用して上記切片から切り出した。この爪ディスクを１．５ｍｌチューブ中で２５０μｌの試験溶液の中に入れ、０．５％（ｖ／ｖ）ＣＯ２の加湿培養器の中で、３２℃で２４時間インキュベーションした。爪試料を取り出し、大量のｄｄＨ２Ｏの中で洗浄し、爪の上に薬物溶液があればそれを除去した。この爪をきれいなティッシュを使用して乾燥し、次いで秤量した。秤量した爪を２００μｌの５Ｍ  ＮａＯＨに３７℃で１時間溶解させた。溶解後、２００μｌのメタノールを試料に加え、試料中にテルビナフィンがあればそれが溶液中に残ることを確実にした。溶解した爪試料溶液の中のテルビナフィンの量を、定量ＬＣ−ＭＳ／ＭＳ質量分析を使用して分析した。
【００６５】
定量的質量分析（ＭＳ）を使用して、試料中のテルビナフィンを検出し定量した。分析に提出する前に試料識別子を隠した。分析は、Ｗａｔｅｒｓ  Ｘｅｖｏ  ＴＱ−Ｓ  Ｍａｓｓ  Ｓｐｅｃｔｒｏｍｅｔｅｒと組み合わせたＷａｔｅｒｓ  Ａｃｑｕｉｔｙ  Ｉ−Ｃｌａｓｓ  ＵＰＬＣクロマトグラフィーシステムを使用する、タンデム質量分析（ＬＣ−ＭＳ／ＭＳ）を用いる高速液体クロマトグラフィーを使用した。テルビナフィンのレベルは、０．１〜１０ｎｇ／ｍｌテルビナフィンの標準曲線の薬物標品に対して定量した。試料を適切に希釈し、標準曲線の範囲内に入ることを確実にした。０．１ｎｇ／ｍｌテルビナフィン未満の試料は、この分析については検出限界未満であった。爪試料中のテルビナフィンの濃度は爪の全量に対して規格化し、「ｎｇテルビナフィン／爪のｍｇ」として表した。
【００６６】
初期の研究は、ヒトの爪の３ｍｍディスクを異なる配合物及び試験溶液の中でインキュベーションした単純な爪「浸漬」実験を使用することに焦点を当てた。これらの実験は、テルビナフィンが爪と会合しているか否かを検出できるだけであり、爪浸透の直接的な根拠を与えなかった。しかしながら、それらの実験は実施するには技術的に単純であり、比較的高スループットであり、一定範囲の異なる配合物を評価することを可能にした。
【００６７】
テルビナフィンの単純溶液中のテルビナフィンは、ヒトの爪試料と会合することが示された。爪と会合したテルビナフィンの量は、０．１ｍｇ〜１ｍｇ／ｍｌの間では濃度依存的であったが、より高濃度の１０ｍｇ／ｍｌではさらなる増加を何ら示さなかった。これは、１ｍｇ／ｍｌ超では、爪ディスクは、その爪ディスクと会合することができるテルビナフィンの量についての上限に到達したということを示しているであろう。
【００６８】
０．１ｍｇ／ｍｌテルビナフィンまでの等価濃度では、ＢＢ２６０３とテルビナフィンの溶液との間で有意差は見られず、これら両方は溶解した爪試料中の同等の濃度の薬物をもたらした。テルビナフィンについて観察したとおり、０．１ｍｇ／ｍｌ及び１ｍｇ／ｍｌに等価のテルビナフィン濃度のＢＢ２６０３の間でも薬物会合の増加があったが、１０ｍｇ／ｍｌではさらなる増加はなかった。ここでも、１ｍｇ／ｍｌ超で、ＢＢ２６０３は、２４時間で爪ディスクに浸漬できる薬物の量の限界に到達したことを示唆する。しかしながら、テルビナフィンで処置した爪と比べて、ＢＢ２６０３で処置した爪と会合できる薬物の最大量ははるかに高かった（１．３〜２．５倍）。この増加は、接近できる爪表面又は爪材料全体の相違には起因しなかった。というのも、すべての試験は、実質的に同じ表面積を有する３ｍｍ爪ディスクに対して実施しており、試料間で１０％未満しか異ならない重量を有していたからである。それゆえ、これらの実験は、ＢＢ２６０３はヒトの爪と会合できるテルビナフィンの最大量を増加させるということを示唆しており、このことは、上記配合物は組織への薬物送達を増強しているということを示した。
【００６９】
この爪浸漬実験は、ＢＢ２６０３が爪への薬物送達を増強するということを示唆したが、爪への増加した薬物浸透と爪への増加した薬物結合とを区別することはできなかった。それゆえ、組織へのナノ粒子浸透の直接的な根拠を得ようとするために、０．１ｍｇ／ｍｌ  ＢＢ２６０３配合物を組織学的研究に進めることを決めた。この濃度は、最もロバストで一貫性のあるナノ粒子配合物を生成し、これまでに論じたように、より高濃度のＢＢ２６０３は、ナノ粒子の形成においてはるかに大きくばらつくため、選んだ。
【００７０】
組織学的研究
１％（ｗ／ｗ）「添加」のＦＩＴＣに結合したＮａｎｏｃｉｎ（商標）（ＰＨＭＢからなるナノ粒子ベースの送達プラットフォームであり、Ｔｅｃｒｅａ  Ｌｔｄ、Ｔｈｅ  Ｌｏｎｄｏｎ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ  Ｉｎｎｏｖａｔｉｏｎ  Ｃｅｎｔｅｒ、２  Ｒｏｙａｌ  Ｃｏｌｌｅｇｅ  Ｓｔｒｅｅｔ、Ｌｏｎｄｏｎ、ＮＷ１  ０ＮＨ、ＵＫから市販されている）を含む０．１ｍｇ／ｍｌテルビナフィンの等価濃度でＢＢ２６０３の配合物を作製した。この標識ＢＢ２６０３を上記の爪浸漬実験で使用した。洗浄し乾燥した爪を、次に組織学的分析に送った。組織学的検査及び蛍光顕微鏡法を爪の凍結切片に対して実施した。
【００７１】
ＦＩＴＣ標識ＢＢ２６０３を用いた組織学的研究からの例示的な画像を図６Ａ及び図６Ｂに示す。強い蛍光が爪の縁のまわりで観察され、爪の表面に結合するＢＢ２６０３と整合する。加えて、本発明者らは、染色が表面から爪の中へと浸透していることも観察した。染色のレベルはばらついたが、本発明者らは、爪構造自体の中の深部で蛍光を検出することができた（特に図６Ａに示すとおり）。
【００７２】
このデータは、ＢＢ２６０３ナノ粒子がヒトの爪に中に浸透していることを非常に示唆するが、観察した染色が遊離のＦＩＴＣ−Ｎａｎｏｃｉｎ（商標）に起因したにすぎないという可能性を排除する必要がある。それゆえ、これらの組織学的実験からフランツセルを使用することに進み、ヒトの爪試料にわたる薬物通過を直接測定することを決めた。
【００７３】
フランツセル爪浸透研究
爪切片を３０℃で水に一晩浸漬し、手早く乾燥した。３ｍｍ直径のパンチを使用して爪切片のディスク生検試料を採取した。各爪ディスクをフランツセルに加え、セルの上側チャンバーを取り付けた。４０μｌの以下の配合物を上側チャンバーに加えた：０．３ｍｇ／ｍｌ  ＰＨＭＢ＋０．１ｍｇ／ｍｌテルビナフィン；又は１０ｍｇ／ｍｌテルビナフィン。フランツセルの下側の収集チャンバーを水（およそ６００μｌ）で満たし、試料チャンバーの底面にある孔もｄｄＨ２Ｏで満たし、気泡が爪の下に形成するのを防いだ。上側の試料チャンバーを注意深く収集チャンバーの中に入れ、気泡を導入しないことを確実にした。収集チャンバーからの過剰の液体をこの時点で放出し、最終体積の液体を５００μｌの下側チャンバーを残した。Ｐａｒａｆｉｌｍ（登録商標）を使用して、上側チャンバーと下側チャンバーとの間の接合部を包み、液体のエバポレーションを防いだ。
【００７４】
単回投与（連続曝露）実験については、４０μｌの関連する試験試料（ＢＢ２６０３又はテルビナフィン対照）を、小さいピペット先端部を使用して上側の試料チャンバーに加え、爪／液体の界面に気泡を導入しないことを確実にした。上側チャンバーを密封して、エバポレーションを制限した。複数回投与実験については、５μｌの試料を、小さいピペット先端部を使用して７日間毎日、上側の試料チャンバーへ、爪の上へ直接加え、爪／液体界面に気泡が導入されないことを確実にした。チャンバーを開いたままにし、試料が揮発するようにした。フランツセを、０．５％（ｖ／ｖ）ＣＯ２の加湿培養器の中で、３２℃でインキュベーションした。
【００７５】
このフランツセルのインキュベーションの後、試料チャンバー及びカラーアセンブリを注意深く取り除き、液体のすべてを下側の収集チャンバー及びカラーの底面にある孔から取り出した。試料チャンバー及びカラーアセンブリを反転し、次いで爪の下側を５×２０μｌのエタノールで優しく洗浄し、爪の下側と会合する薬物があればその薬物を除去した。合わされたエタノール洗浄液を分析のために保持した（１００μｌ全量）。この洗浄液は、爪を通過したと思われるあらゆるテルビナフィンを捕捉することが意図されていた。下側の収集チャンバー又は爪の下側のエタノール洗浄液のいずれかで見つかったテルビナフィンは、爪を通過した薬物を表していた。
【００７６】
上記フランツセルからの爪ディスクも、以下のとおりテルビナフィンの存在について分析した。残りの試験試料を上側の試料チャンバーから取り出して捨て、試料チャンバーの中に残っているあらゆる残留試験溶液を除去するために、試料チャンバーを１００μｌのｄｄＨ２Ｏで５回洗浄し、各洗浄液を捨てた。次に、試料チャンバー及びカラーを分解し、爪試料を取り出した。爪を大量のｄｄＨ２Ｏに浸漬することにより洗浄し、きれいなティッシュを使用して乾燥し、秤量した。次に、秤量した爪を２００μｌの５Ｍ  ＮａＯＨに３７℃で１時間溶解させた。溶解後、２００μｌのメタノールを、この試料に加え、試料中にテルビナフィンがあればそれが溶液中に残ることを確実にした。
【００７７】
図３〜図５Ｂは、ヒトの爪試料にわたる薬物通過のフランツセル分析からのデータをまとめる。溶解した爪試料及び爪の下側のエタノール洗浄液から存在するデータだけが提供されている。というのも、これらの観察が、試料間で最もロバストであることが明らかになったからである。しかしながら、ＢＢ２６０３で処置した爪の下側チャンバーの中のテルビナフィンを、時には非常に高いレベル（＞０．６μｇ／ｍｌ）で検出することは常に可能であった。この分析は、ＢＢ２６０３で処置した試料において爪を通過するテルビナフィンの量の控えめな見方を表すと考えられる。
【００７８】
単回投与（定常曝露）実験
４０μｌのＢＢ２６０３溶液（０．１ｍｇ／ｍｌテルビナフィンに相当）又は３０％（ｖ／ｖ）エタノール中のテルビナフィン（０．１ｍｇ／ｍｌ）を、健康なヒトの爪試料を含有するフランツセルの試料チャンバーに加えた。次に、このセルを３２℃で７日間インキュベーションした。試料は、各実験の継続期間のあいだ爪上側表面と接触したまま留まった。７日後、爪の下側からの試料（エタノール洗浄液）を集め、ＬＣ−ＭＳ／ＭＳにより分析した。７日目の爪試料を洗浄し、これまでに記載したように５Ｍ  ＮａＯＨを使用して溶解した。集めたすべての試料を、Ｗａｔｅｒｓ  Ｘｅｖｏ  ＴＱ−Ｓ  Ｍａｓｓ  Ｓｐｅｃｔｒｏｍｅｔｅｒと組み合わせたＷａｔｅｒｓ  Ａｃｑｕｉｔｙ  Ｉ−Ｃｌａｓｓ  ＵＰＬＣクロマトグラフィーシステムで、タンデム質量分析（ＬＣ−ＭＳ／ＭＳ）を用いる高速液体クロマトグラフィーを使用してテルビナフィンの存在について分析した。テルビナフィンのレベルは、薬物標品に対して定量した。これらの分析における検出限界は０．１ｎｇ／ｍｌであった。
【００７９】
図３及び４に示すように、ＢＢ２６０３で処置した試料は、健康なヒトの爪試料へのテルビナフィンの浸透を一貫して実証した。テルビナフィンは、１日のインキュベーションという早々から、収集チャンバー溶液及び爪の下側のエタノール洗浄液の両方において検出することができた。７日間ＢＢ２６０３で処置した爪の下側由来のエタノール洗浄液の分析により、ＢＢ２６０３による爪を通る旺盛な薬物送達が明らかとなった（図３に示すとおり）。送達量は試料間でばらつき、これは、おそらくは爪試料の自然なばらつきによるものであるが、すべての場合において送達量は、菌学的死滅用量を達成するために必要な送達量よりも大きいと予測された。
【００８０】
対照的に、テルビナフィン溶液は爪に浸透せず、ＢＢ２６０３と等価な薬物濃度（０．１ｍｇ／ｍｌ）を使用するすべての実験において、爪を通過するテルビナフィンの量は、ＬＣ−ＭＳ／ＭＳにおける検出限界（＜０．１ｎｇ／ｍｌ）未満であった（図３に図示するとおり）。テルビナフィンが０．１ｎｇ／ｍｌの濃度まで浸透したと仮定することにより、統計的検定を上記データに適用して、ＢＢ２６０３の結果が単純なテルビナフィン溶液の結果とは有意に異なるということを明らかにすることができた。この分析で算出された０．０４というｐ値は有意性の過小評価である。というのも、単純なテルビナフィンで処置した試料におけるできるだけ高い濃度のテルビナフィンを仮定したからである。
【００８１】
フランツセルからの溶解した爪試料テルビナフィンの量を、７日目にも測定した（図４に示すとおり）。これは、爪自体の中にあるいずれかの薬物、すなわち爪に浸透したが他方側に到達しなかった薬物と共に、（５Ｍ  ＮａＯＨを用いた溶解の前に洗い流されなかった）爪の上面に結合した薬物の量を表す。本発明者らは、テルビナフィン単独と比べて、ＢＢ２６０３で処置した爪と会合する有意により大きい量のテルビナフィンを知得した（およそ２倍の中央値（メジアン）の差、ｐ＝０．０２）。これは、ＢＢ２６０３が爪の中への（爪を通る）テルビナフィンの送達を増大させるという考えと再び整合する。
【００８２】
複数回投与実験
上記単回投与実験では、試験溶液は、インキュベーション期間全体にわたって爪の上側表面と常に接触したままであった。これは、薬物が感染した爪に毎日塗布され、次いで放置して乾かされると思われる患者の塗布の現実を必ずしも反映していない。それゆえ、この状況を再現しようとして、５μｌのＢＢ２６０３をフランツセル中で爪に毎日加える実験を実施した。この少量は、爪ディスク表面を覆うのに十分であったが、次の添加までに揮発し、これにより、患者がＢＢ２６０３を毎日の局所的処置として塗布することがより厳密に模倣される。爪の下側のエタノール洗浄液及び爪自体からの試料を集め、上記のようにして、テルビナフィンの存在についてＬＣ−ＭＳ／ＭＳにより分析した。
【００８３】
この複数回投与実験では、爪自体に付随してかなりの量のテルビナフィンを検出した（図５Ａ及び図５Ｂに図示するとおり）。これは、ＢＢ２６０３を用いた単回投与（定常曝露）実験において観察したレベル（図４に示すとおり）とさほど異ならないレベルにあり、ここでも単回投与実験からのテルビナフィン対照よりも高かった。爪の下側からのエタノール洗浄液の中のかなりの量のテルビナフィンも検出され、これは、この実験において上記薬物も爪を通過したことを示した。単回投与（定常曝露）実験と比べて、爪を通って送達された薬物のレベルは、複数回投与実験においてはるかに低かった。これは、ＢＢ２６０３による処置が長期であるほど爪を通るテルビナフィンの送達が大きいという考えと整合する。
【００８４】
トリコフィトン・メンタグロフィテス抗真菌性アッセイ
これまでの実験は、ＢＢ２６０３が爪を通ってテルビナフィンを送達することを明瞭に示したが、爪を通るこの薬物の通過が、有効性の喪失につながる化学変性を引き起こさないということを確認する必要があった。それゆえ、トリコフィトン・メンタグロフィテスの菌叢を使用する抗真菌性アッセイを実施した。
【００８５】
トリコフィトン・メンタグロフィテスは、爪真菌症と関連する主要病原体に関係する実験（室）用真菌種であり（例えばＷａｄｅ  Ｆｏｓｔｅｒら、Ｊ．Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ａｃａｄ．Ｄｅｒｍａｔｏｌｏｇｙ．  ２００４．５０（５）．７４８−７５２頁を参照）、そのため、この種に対する有効性は、トリコフィトン・ルブルム（Ｔ．ｒｕｂｕｍ）等の病原性のトリコフィトン種（下記表１）に対する有効性に言い換えられると予想した。
【００８６】
【表１】
2020530829.tif 000002
【００８７】
トリコフィトン・メンタグロフィテスの１つのコロニーをストックプレートから採取し、５ｍｌのＹＥＰＤ（酵母エキス、ペプトン、デキストロース）培地中で、３０℃で４８時間成長させた。無菌のスワブを得られた培養液に漬け、次いでそれを、クロラムフェニコール（５０μｇ／ｍｌ）を添加したＹＥＰＤ寒天板にトリコフィトン・メンタグロフィテスの菌叢を広げるために使用した。フランツセルからの試料は無菌ではなく、通常のＹＥＰＤプレートで細菌の増殖を示したため、クロラムフェニコールを含めた。１０ｍｍの無菌ペーパーディスクを試験溶液に浸漬し、過剰の液体を取り除き、ディスクをこのトリコフィトン・メンタグロフィテス菌叢の上に置いた。プレートを反転し、３０℃で５日間インキュベーションした。
【００８８】
実施した最初の実験は、ペーパーディスクアッセイにおいて、トリコフィトン・メンタグロフィテスに対するテルビナフィンについてのおよそのＭＩＣ（最小阻害剤濃度）を確立することであった。これを行うために、ｄｄＨ２Ｏ中のテルビナフィン．ＨＣｌの１：１０希釈系列を６０μｇ／ｍｌから０．０６μｇ／ｍｌまで生成した。次に、１０ｍｍの無菌ペーパーディスクをこの種々の希釈物の中に浸漬し、これらをトリコフィトン・メンタグロフィテスの菌叢の上に置いた。５日間のインキュベーションの後、クリアランス（菌の増殖なし）のゾーンを、この種に対する抗真菌活性を有するテルビナフィンの濃度を有するディスクの周りで観察した（図６に示すとおり）。このアッセイにおけるテルビナフィンについてのＭＩＣは０．６μｇ／ｍｌであり、この濃度に満たない範囲では、明確なクリアランスのゾーンは観察されなかった。このアッセイにおけるＭＩＣは、トリコフィトン・メンタグロフィテスに対してテルビナフィンについてこれまでに報告されたＭＩＣ（６ｎｇ／ｍｌ）よりも１００倍超高い（上記表１を参照して）ことに注目した。報告した数字は、液体ＭＩＣアッセイに確かに由来したものであり、液体ＭＩＣアッセイはより高感度であることが知られており、このためこのペーパーディスクアッセイは、薬物有効性の実質的により厳格な試験を表していた。
【００８９】
このアッセイは、ＢＢ２６０３で処置した試料における爪を通過するテルビナフィンがまだその抗真菌効力を保持するか否かという疑問に対処するためにも使用した。これを行うために、０．６μｇ／ｍｌ超のテルビナフィンを含有することを定量ＬＣ−ＭＳ／ＭＳ分析が実証したフランツセル実験のうちの１つからの水相の試料を使用して、トリコフィトン・メンタグロフィテス菌叢アッセイを実施した（図７Ａ〜図７Ｂ）。この試料についてのＭＩＣ実験及び定量的ＭＳ結果と整合して、ＢＢ２６０３に関しては明確なクリアランスのゾーンは見ることができたが、テルビナフィン対照試料に関しては効果がなかった。従って、ＢＢ２６０３で処置した健康なヒトの爪を通過するテルビナフィンは、その効力を保持しており、まだトリコフィトン・メンタグロフィテスを死滅させることができた。
【００９０】
爪真菌症におけるＢＢ２６０３の潜在的有効性
ＢＢ２６０３に関する目的は、全身薬物曝露に関連する安全性の問題を有しないと思われたテルビナフィンの局所用配合物と経口のこのテルビナフィンの性能とを匹敵させることであった。テルビナフィン溶液と比べて、ＢＢ２６０３は、健康なヒトの爪を通る薬物の送達を有意に増大させることが示された。重要な疑問は、ＢＢ２６０３投薬により成し遂げられる量が爪真菌症の処置において有効であると予測されるか否かである。この疑問に対処するために、上記フランツセル実験で観察したテルビナフィンの濃度を、経口テルビナフィンで処置した患者の爪において報告されたテルビナフィンの濃度（Ｌｅｙｄｅｎ、Ｊ．Ａｍ．Ａｃａｄ．Ｄｅｒｍａｔｏｌ．  １９９８．３８：Ｓ４２−７）と比較した。
【００９１】
経口投薬のあと、テルビナフィンは、７日間の処置後に０．１μｇ／ｇの爪中の濃度に到達し、３週間後に約０．２５μｇ／ｇへと上昇し、１８ヵ月後に０．５５μｇ／ｇへと上昇する（Ｌｅｙｄｅｎ、１９９８）。これらのレベルのすべては、爪真菌症に関連する一定範囲の重要な真菌種のＭＩＣ（表１）よりも高く、従って、これらの患者で爪の真菌感染を処置することにおける薬物有効性を説明する。
【００９２】
ＢＢ２６０３は、溶解した爪においてこのレベルを大きく超え（図４及び図５Ａ〜図５Ｂ）、７日後に爪中でおよそ１ｍｇ／ｇの薬物（経口投薬よりも１００００倍高い）に等しいメジアン濃度を達成するように見える。しかしながら、より低いが、テルビナフィン単独も溶解した爪に会合する薬物の有意なレベル（およそ０．５ｍｇ／ｇのメジアン濃度）を示したが、（これらの実験で使用したよりもはるかに高い用量の）局所テルビナフィンを用いた臨床試験は、爪真菌症の処置において有効性を示すことができなかった（Ｅｌｅｗｓｋｉら、Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｅｕｒｏｐｅａｎ  Ａｃａｄｅｍｙ  ｏｆ  Ｄｅｒｍａｔｏｌｏｇｙ  ａｎｄ  Ｖｅｎｅｒｅｏｌｏｇｙ．  ２０１３，２７（３），２８７−２９４頁）。
【００９３】
テルビナフィン溶液で処置した爪に関連してかなりの量の薬物が見つかるが、本発明者らの試料のいずれにおいても顕著な量のテルビナフィンが爪を通過するとは測定されなかった（図７）。そこでこれらの試料に対しては、本発明者らは、非常に多くの数のこの薬物が爪の上側表面に結合しているか、又は組織の中あまり深くまでは浸透していないと結論した。
【００９４】
テルビナフィンで処置した試料とは対照的に、テルビナフィンは、ＢＢ２６０３で処置した爪の下側で常に検出され、これは、この薬物が爪に入り爪を通過したに違いないということを示す。従って、ＢＢ２６０３で処置した試料由来の溶解した爪におけるテルビナフィンの測定値は、上側表面に会合する薬物だけでなく組織の全体深さにわたって存在する薬物も表す。
【００９５】
ＢＢ２６０３処置された爪において、上側（の処置した）表面で濃度がより高く、爪の底に向かって薬物の最低濃度が見られるという、この薬物の非対称分布が確証される可能性が非常に高い。このため、爪の下部におけるテルビナフィンの濃度を推定した。というのも、これが本発明者らの試料における薬物の最低濃度であると思われたからである。これを行うために、爪の下側（エタノール洗浄液中）で見つかる薬物のレベルは、爪ディスクにおける上記爪の下側のすぐ上の爪中の濃度と等価であると仮定した。爪の３ｍｍ直径ディスクをフランツセル実験では使用したが、爪の１．５ｍｍ直径の円だけが上側チャンバー及び下側チャンバーの中で溶液と接触している（爪の残部は、チャンバー自体とシールを形成する）。これは、爪の底部のエタノール洗浄液の中のテルビナフィンが爪のおよそ１．８ｍｍ２の表面積に由来するということを意味する。爪の下部におけるおよその濃度を算出するために、爪のこの部分が０．１ｍｍの深さを有すると仮定した。全体では、爪は約０．５ｍｍの厚さであり、そのためこの０．１ｍｍは、爪ディスクの全体の約５分の１を表す。従って、爪ディスクの下部の体積は０．１８ｍｍ３であり、０．１８μｌに等しい。爪の下部におけるテルビナフィンの濃度を算出するために、爪のこの体積がエタノール洗浄液で見つかるテルビナフィンと等量のテルビナフィンを含有すると仮定した。
【００９６】
複数回投与実験において爪の下側で見つかったテルビナフィンのメジアン濃度は０．４ｎｇ／ｍｌであったが（図５Ａ〜５Ｂ）、これは、試料中の０．０４ｎｇの合計テルビナフィンに等しい。これから、爪の最下部におけるテルビナフィンの濃度は、それゆえ２２０ｎｇ／ｍｌ（０．０４ｎｇ／０．１８μｌ）であると推定した。最後に、健康なヒトの爪の密度は１．３４ｇ／ｍｌであり（Ｂａｒａｌｄｉら  ２０１５，Ｐｈａｒｍ．Ｒｅｓ．  ３２（５），１６２６−３３）、そのため爪の最下部におけるテルビナフィンの濃度は、およそ０．１６５μｇ／ｇ（０．２２μｇ／ｍｌ／１．３４ｇ／ｍｌ）に等しい。
【００９７】
この算出から、複数回用量実験で、ＢＢ２６０３は、経口投薬によって７日後に到達するテルビナフィンの濃度よりも大きいテルビナフィンの量を爪の最下部に送達した（０．１μｇ／ｇと比べて０．１６５μｇ／ｇ）ということがわかる。薬物のこのレベルは、爪真菌症に関連する最低感度の真菌種を死滅させるために必要なレベル（０．０６μｇ／ｍｌ超、表１参照）よりも２〜３倍高い。処置表面により近い爪の部分については、本発明者らは、濃度ははるかに高いと予測した。これらの数字は、上記複数回用量実験からの最も控えめなデータに基づいている。単回投与実験については、エタノール洗浄液で見つかったテルビナフィンのメジアン濃度は１８５ｎｇ／ｍｌであり（図３）、下部における薬物の予測される等価な爪濃度は８μｇ／ｍｌであることになり、経口投薬によって成し遂げられ抗真菌効力のために必要な濃度を大きく超える。
【００９８】
要約すれば、ＢＢ２６０３の７日間の局所塗布は、単純なテルビナフィン溶液よりも、テルビナフィンと健康なヒトの爪とのはるかに大きい会合を促す。さらには、ＢＢ２６０３は、テルビナフィンが爪を通って広く浸透することを可能にし、爪の薬物レベルのこの上昇が、少なくとも一部は、組織への薬物浸透の増大に起因するということを示す。ＢＢ２６０３塗布から最も遠位の爪の部分でさえ、等価な経口投薬によってもたらされる薬物濃度を超える薬物濃度を達成すると予測される。このレベルは、関係する真菌種のＭＩＣよりも高く、それゆえ爪真菌症の処置において有効である可能性が高い。
【００９９】
経口テルビナフィンは、現在、爪真菌症の処置についての至適基準（ゴールドスタンダード）であり、最短の処置時間で最高の治癒率を有する（３〜６ヵ月の投薬後に＞８０％の治癒）。しかしながら、この疾患の処置におけるその使用は、その安全性プロファイルによって、及びテルビナフィンが重大な薬物−薬物相互作用を有するという事実によって制限されている。非常に多くのこれらの問題は、ほぼ確実に、経口投薬（例えば肝臓毒性学、ＣＮＳ効果）及びその後の高い全身薬物曝露に起因する。他の局所的な爪真菌症処置は、長い処置レジメン（最長１８ヵ月の処置）を必要とし、低い治癒率（２０〜４０％）を有し、高い割合（＞５０％）の疾患再発を示す（Ｈａｌｍｙ，Ｋ．  Ｊ．Ａｍ．Ａｃａｄ．Ｄｅｒｍａｔｏｌ，２００５．  ５２（３）：１２６−１２６、ＳｃｈｅｒらＪ  Ａｍ  Ａｃ  Ｄｅｒｍａｔｏｌ．  ２００７；５６（６）：９３９−９４４）。テルビナフィンの有効な局所用配合物を製造することは、爪真菌症の処置に対する非常に魅力的なアプローチである。というのも、そのような局所用配合物は、最も証明された臨床的有効性を有する上記薬物を採用し、全身暴露に関連する安全性の問題を取り除くからである。これを達成することは困難であることは明らかになっており、局所用テルビナフィン溶液を用いるこれまでの多くの試みは爪真菌症の処置における有意な有効性を何ら実証できなかった。
【０１００】
上記のとおり、局所塗布のためのＢＢ２６０３の中に存在するテルビナフィンの量は、現在の経口用量のために必要と思われる量よりもはるかに少ない。現在の全身処置なら、典型的には、７日にわたって毎日２５０ｍｇ用量の経口テルビナフィンを用いることになる。少量のＢＢ２６０３を爪試料に７日間、毎日局所塗布した（毎日の患者の塗布を模倣した）後に、経口用量について報告されたレベルよりも高い、爪中のテルビナフィンのレベルが成し遂げられた。爪で見られた薬物レベルは、爪真菌症に関連するすべての関係する真菌種に対して有効性を示すために必要とされると思われるレベル（表１）よりもはるかに高い。これらの実験から１つの考えを言えば、経口処置のための１．７５ｇテルビナフィンと比べて、平均的な爪（１００ｍｍ２）を処置するために必要とされたと思われるＢＢ２６０３の用量は１週間で約２００μｇであったと思われ、すなわち８７５０倍少ない用量であると思われた。
【０１０１】
健康なヒトの爪は、薬物浸透のはるかにより厳格な試験である。Ｂａｒａｌｄｉらによる最近の刊行物（Ｂａｒａｌｄｉら、２０１５）は、爪は爪真菌症においてはより厚いが、爪は著しく完全性を喪失するということを明らかにし、これは、爪が水溶液にとってはるかにより浸透性である（３〜４倍大きい）ということを意味した。従って、本発明者らは、ＢＢ２６０３が罹患した組織においてさらにより良好な薬物浸透特性を示すと予想した。
【０１０２】
２０％（ｖ／ｖ）エタノール対３０％（ｖ／ｖ）エタノールでのＢＢ２６０３の比較
ＢＢ２６０３を用いる上記のすべての実験は、３０％（ｖ／ｖ）エタノールの溶液中で行った。最初の配合物研究は、３０％（ｖ／ｖ）エタノールが最大数のＢＢ２６０３ナノ粒子を生成するが、他方で１０％（ｖ／ｖ）以下のエタノールの溶液での実験は粒子数のかなりの低下を示すということを明らかにした。３０％（ｖ／ｖ）エタノールは局所的な真菌感染の処置に使用するために許容できる溶液であるが、より低いエタノール含有量がなお有効性を維持するか否かを知るために異なる％（ｖ／ｖ）エタノールを評価した。それゆえ、２０％（ｖ／ｖ）エタノール中のＢＢ２６０３の配合物に注目することを決めた。
【０１０３】
ＢＢ２６０３の配合物を上記のとおりに作製したが、３０％（ｖ／ｖ）エタノールの代わりに２０％（ｖ／ｖ）エタノールを使用した。ＮａｎｏＳｉｇｈｔ  ＬＭ１０での分析により、３０％（ｖ／ｖ）エタノールと比べて、ＢＢ２６０３の粒子数又は粒子分布のいずれにおいても２０％（ｖ／ｖ）配合物で検出可能な差がないことが示された。それゆえ、２０％（ｖ／ｖ）エタノール中のＢＢ２６０３配合物を用いたいくつかの複数回用量フランツセル実験を実施した。というのも、それらは、患者が使用すると思われる毎日の局所的な投薬の種類を最も模倣しており、それゆえ爪真菌症における薬物処置の有効性をモデル化する際に最も意味があったからである。
【０１０４】
５μｌの２０％（ｖ／ｖ）エタノール中のＢＢ２６０３の毎日の添加により一週間処置した爪の下側のエタノール洗浄液で見られるテルビナフィンの量を、本文に記載したようにＬＣ−ＭＳ／ＭＳにより分析した（図８に図示されるとおり）。これらは、洗浄液における０．５ｎｇ／ｍｌという平均値で、爪を通過するテルビナフィンの一貫したレベルを明らかにした。これらのデータは、２０％（ｖ／ｖ）エタノール中のＢＢ２６０３で処置した爪を通過するテルビナフィンの量においてわずかにより高い傾向を示し、これは、爪を通して薬物を送達することにおいて２０％（ｖ／ｖ）中のＢＢ２６０３がより有効であるということを示唆する。これと整合して、２０％（ｖ／ｖ）エタノール中のＢＢ２６０３で処置した溶解した爪中のテルビナフィンの量は、３０％（ｖ／ｖ）エタノール中のＢＢ２６０３で処置した溶解した爪の場合よりも３倍高かった（図９に示されるとおり）。
【０１０５】
合わせると、これらの結果は、２０％（ｖ／ｖ）エタノール中のＢＢ２６０３の配合物を使用することは、フランツセル複数回用量（毎日添加）実験において、ヒトの爪の中への及びヒトの爪を通るテルビナフィンの送達をさらに増大させるということを実証した。実質的により高い量の薬物が爪と会合していることが判明し、爪を通過するテルビナフィンの量もより多い。算出により、ＢＢ２６０３のこの配合物で処置した爪の下部における薬物のメジアン量は０．２１μｇ／ｇであろうと示され、この値は、経口投薬後７日目に爪において成し遂げられる値の２倍であり、爪真菌症における関係する真菌種を死滅させるために必要な値の十分上にある。この結果は、Ｂａｒａｌｄｉら（Ｂａｒａｌｄｉら、２０１５）の、水溶液中の化合物が、５０％（ｖ／ｖ）エタノール溶液中の化合物と比べて、健康な爪及び罹患した爪の両方においてより高いレベルの浸透度を有するという観察と整合する。
【０１０６】
要約すれば、ＢＢ２６０３の溶液におけるエタノール濃度を３０％から２０％（ｖ／ｖ）へと低下させることは、ナノ粒子形成に対して検出可能な影響を与えないが、興味深いことに、２０％（ｖ／ｖ）エタノール中のＢＢ２６０３の配合物は、爪真菌症の処置における薬物の毎日塗布を模倣するフランツセル実験において、健康なヒトの爪の中への及び健康なヒトの爪を通るテルビナフィン送達特性の向上を明らかにした。
【０１０７】
爪真菌症医薬の配合物
上記の実験に鑑み、以下の配合物は爪真菌症のための局所用医薬として有効であろうと想定される。
【０１０８】
【表２】
2020530829.tif 000003
【０１０９】
他の配合物も有効な局所用医薬を提供する可能性がある。
【０１１０】
【表３】
2020530829.tif 000004
【０１１１】
【表４】
2020530829.tif 000005
【０１１２】
【表５】
2020530829.tif 000006
【０１１３】
【表６】
2020530829.tif 000007
【０１１４】
本発明に係る配合物を下記配合Ｆに従って調製し、ＢＢ２６０３と表した。
【０１１５】
【表７】
2020530829.tif 000008
【０１１６】
配合Ｆの配合物をスプレーボトルに入れた。次に、この配合物を、爪真菌症（ある場合には、さらに足白癬）に罹患している患者の足指に１〜２週間にわたって定期的に噴霧することにより試験を行った。この処置は上首尾であることが判明し、爪真菌症（及び足白癬）に罹患している患者を成功裏かつ迅速に、あとの再発もなく治療した。
【０１１７】
用法・用量
足指及び指趾間部の完全被覆を与えるための足からの最適のスプレー距離を特定するために実験を行った。本発明に係る配合物は、上記のように、配合Ｆに従って調製した（ＢＢ２６０３）。
【０１１８】
ＢＢ２６０３のスプレー塗布後に患者が受けるであろうと思われる全体の局所用量を推定した。患者は、処置あたりスプレーの５回の吸い上げを用いるであろうと仮定した。各吸い上げは、１００μｌのＢＢ２６０３を送達するため、５回の吸い上げからの全塗布量は５００μｌである。
【０１１９】
上記ポンプの基本的なスプレー特性を、青色食用色素の溶液を使用して評価した。４００μｌの青色食用色素を２０ｍｌの２０％ｖ／ｖエタノールに希釈し、清浄なスプレーボトルに移した。噴霧ノズルからあらゆる空気を除去するために、スプレーを５回汲み出すことによりこのスプレーを準備した。次に、染料スポットを形成するために、この染料スプレーを白紙のシートへ１回スプレーした。紙から５ｃｍ、１０ｃｍ、１５ｃｍ、２０ｃｍ及び２５ｃｍの距離で噴霧を実施し、これにより異なる直径のスポット範囲を生じた（図１０Ａ〜図１０Ｅ）。
【０１２０】
図１０Ａ〜図１０Ｅからわかるように、各スポットは、実質的に３つのゾーンを有している。中心部には、多量の染料付着量を有するゾーンがあり、このゾーンを取り囲んで１００％染料被覆（白紙は見えない）のゾーンがあり、この外側に染料被覆のより拡散したゾーンがある。
【０１２１】
理想的には、ＢＢ２６０３による局所処置は、足指の爪又は近接する皮膚のいずれかのあらゆる目に見えない真菌症がこの薬物で処置されることを確実にするために、感染領域及び周囲組織（足指及び指趾間部）の１００％被覆を達成する必要がある。このため、処置のためのスプレー距離を最適化する際に主に考慮すべきことは、１００％被覆のゾーンの直径である。各スポットを分析するために、１００％被覆のゾーンの直径を、スポット全体（見える染料の縁）の直径と共に測定した。これらを、図１５に示すように、紙からのスプレーの距離に対してグラフにプロットした。これは、スポット全体の幅とスプレー距離との間のおよそ直線関係を明らかにした（図１１）。しかしながら、スプレー距離が１５ｃｍよりも大きいと、１００％染料被覆の面積は減少した。
【０１２２】
このスポット試験に基づき、５〜１５ｃｍのスプレー距離が１００％被覆のゾーンの最大直径をもたらした。この距離が１５ｃｍを超えると、見える染料の合計面積は増加するものの、１回の塗布からの１００％被覆の面積は減少した（図１１）。
【０１２３】
１０ｃｍの距離から紙に５回噴霧することにより、染料被覆の面積に対する複数回塗布の効果を評価した（図１２）。これは、１０ｃｍの直径及びおよそ７８ｃｍ２の面積を有するスポットまで１００％染料被覆が増加することを明らかにした。１０ｃｍの足幅（足指にわたる）を仮定して、これは、足指の先端から足首側へ７ｃｍ超の領域を被覆するのに十分なはずであり、これは、足指及び指趾間部を被覆するのに十分すぎる。
【０１２４】
このように、５〜１５ｃｍのスプレー距離が、このスプレー装置からのＢＢ２６０３による患者処置にとって最適であろうと思われる。
【０１２５】
足テンプレート実験
スプレー試験から、上記スプレーボトルからのＢＢ２６０３のスプレー塗布の最適の距離は５〜１５ｃｍである。複数回塗布試験（図１２）は、これが、スポットの面積に基づき患者の足指、指趾間部及び足前部にわたる１００％薬物被覆をもたらすのに十分であるはずであるということを示した。これを確かめるため、及びおよその全用量を算出するために、患者は、足テンプレートを使用する一連の実験を受けることになり、その実験を行った。
【０１２６】
協力者の足（男性、英国サイズ１０）の周囲に線を引くことにより足テンプレートを紙から構築した。この紙テンプレートを切断し、次いで白紙のシートの上に置いた。染料を、紙の「足」の前上方１０ｃｍの距離から５回噴霧し、すべての「足指」が処置されることを確保した。染料は、足テンプレート及び下にあった紙の両方で見られた（図１３Ａ及び図１３Ｂ）。染料が乾いた後、足及び下にあった紙の両方からの１００％染料被覆の領域の周囲に線を引き、切断し、秤量した。「足」上の薬物用量の百分率を以下のようにして算出した。
【数１】
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【０１２７】
見たところ、１０ｃｍの距離からの５回のスプレーが足テンプレート全体にわたる１００％被覆を与えるのに十分であるということは明らかであった。１００％染料被覆の領域を秤量することにより、被覆のおよその面積を比較し、足で局所的に受けられた用量の割合を見積もることが可能であった。データを表２にまとめる。
【０１２８】
【表８】
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【０１２９】
この実験に基づいて、１０ｃｍのスプレー距離からＢＢ２６０３を自身の足に噴霧する患者は、全体の塗布量の約５０％を局所的に受けることになると推定した。
【０１３０】
要約すれば、これらの実験は、５〜１５ｃｍの距離でスプレーボトルから５回の「吸い上げ」を使用するＢＢ２６０３のスプレー処置が足の足指、指趾間部及び前面の１００％被覆を与えるのに十分なはずであるということを示す。足テンプレート実験から、そのような塗布により、患者は噴霧された容量の約５０％の局所用量を受けることになろうと推定される。５回の「吸い上げ」については、これは、２５０μｌの局所用量又はテルビナフィンの２５μｇの全用量に等価であることになろう。
【０１３１】
上記の実施形態は、特許請求の範囲によって与えられる保護の範囲を限定することを意図されておらず、むしろ本発明が実施されてもよい態様の例を説明することを意図されている。
【図１】
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【図２Ａ】
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【図２Ｂ】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７Ａ】
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【図７Ｂ】
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【図８】
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【図９】
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【図１０Ａ−１０Ｂ】
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【図１０Ｃ−１０Ｅ】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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【国際調査報告】
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