(57)【要約】  本開示は、哺乳動物の内分泌性、栄養性および／または代謝性疾患の処置における薬剤およびその使用に関する。本開示はさらに、新規なペプチドに関する。【選択図】図１
2020518556.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ａ）一般式：
ＫＸ２ＬＡＸ５Ｘ６Ｘ７Ｘ８ＩＸ１０ＬＸ１２ＹＧＩＫ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１４０）
で示されるアミノ酸配列を含むペプチドもしくはペプチド類似体
（式中、
Ｘ２は、Ｃ、ＰまたはＧであり；
Ｘ５は、ＥまたはＧであり；
Ｘ６は、Ｃ、ＤまたはＩであり；
Ｘ７は、Ｄ、Ｉ、ＳまたはＧであり；
Ｘ８は、Ｓ、ＤまたはＧであり；
Ｘ１０は、ＥまたはＧであり；
Ｘ１２は、ＳまたはＴであるが、
条件として、Ｘ１２が、Ｔであれば、前記ペプチドが、２５を超えないアミノ酸残基を含み、
条件として、Ｘ２が、Ｐであり、Ｘ５が、Ｅであり、Ｘ６が、Ｉであり、Ｘ７が、Ｄであり、  Ｘ８が、Ｓであり、Ｘ１０が、Ｅであり、Ｘ１２が、Ｓであれば、前記ペプチドが、８５を超えないアミノ酸残基を含む）、または
ＣＬＡＥＩＤＳＣ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１４２）、ＣＦＫＰＬＡＥＩＤＳＩＥＣＳＹＧＩＫ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１４３）、ＫＰＬＡＥＧＤＩＥＬＳＹＧＩＫ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１４７）、ＫＰＬＡＥＩＥＬＳＹＧＩＫ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１４８）、ＫＣＬＡＥＩＤＳＣＥＬＳＹＧＩＫ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１５５）、およびＣＦＫＰＬＡＥＩＤＳＩＥＣ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１５６）
からなる群から選択される、その生物活性断片および／もしくは変異体と；
ｂ）発現の際にａ）のペプチドをコードするポリヌクレオチドと；
ｃ）ｂ）のポリヌクレオチドを含むベクターと；
ｄ）ｂ）のポリヌクレオチドまたはｃ）のベクターを含む細胞と、
を含む、薬剤。
【請求項２】
前記ペプチドまたはペプチド類似体が、一般式：
ＫＸ２ＬＡＸ５Ｘ６Ｘ７Ｘ８ＩＸ１０ＬＳＹＧＩＫ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１６２）
（式中、
Ｘ２は、Ｃ、ＰまたはＧであり；
Ｘ５は、ＥまたはＧであり；
Ｘ６は、Ｃ、Ｉまたは非存在であり；
Ｘ７は、Ｄ、Ｇまたは非存在であり；
Ｘ８は、Ｓ、Ｇまたは非存在であり；
Ｘ１０は、ＥまたはＧである）
で示されるアミノ酸配列を含む、請求項１に記載の薬剤。
【請求項３】
８０を超えない、７５を超えない、７０を超えない、６５を超えない、６０を超えない、５５を超えない、５０を超えない、５５を超えない、４０を超えない、３５を超えない、３０を超えない、２８を超えない、２６を超えない、２４を超えない、２２を超えない、２０を超えない、１９を超えない、１８を超えない、１７を超えない、１６を超えない、１５を超えない、１４を超えない、１３を超えない、１２を超えない、１１を超えない、１０を超えないアミノ酸など、８５を超えないアミノ酸を含む、先行請求項のいずれかに記載の薬剤。
【請求項４】
前記ペプチドのＮ−またはＣ−末端にコンジュゲートされた、少なくとも３、少なくとも４、少なくとも５、少なくとも６、少なくとも７、少なくとも８、少なくとも９、少なくとも１０、少なくとも１５、または少なくとも２０のアミノ酸など、少なくとも２の追加のアミノ酸を含む、先行請求項のいずれか１項に記載の薬剤。
【請求項５】
非天然由来である、先行請求項のいずれか１項に記載の薬剤。
【請求項６】
ある部分にコンジュゲートされている、先行請求項のいずれか１項に記載の薬剤。
【請求項７】
前記部分が、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、単糖類、フルオロフォア、クロモフォア、放射性化合物、および細胞透過性ペプチドからなる群から選択される、請求項６に記載の薬剤。
【請求項８】
グリコシル化されることなど、またはＰＥＧ化、アミド化、エステル化、アシル化、アセチル化および／もしくはアルキル化により、さらに修飾されている、先行請求項のいずれか１項に記載の薬剤。
【請求項９】
タンデムリピートを含む、またはそれからなる、先行請求項のいずれか１項に記載の薬剤。
【請求項１０】
前記タンデムリピートが、先行請求項に記載の配列の任意の１つまたは複数のアミノ酸配列を含む、またはそれからなる、請求項９に記載の薬剤。
【請求項１１】
別のポリペプチドに融合されている、先行請求項のいずれかに記載の薬剤。
【請求項１２】
前記ポリペプチドが、グルタチオン−Ｓ−トランスフェラーゼ（ＧＳＴ）およびプロテインＡからなる群から選択される、請求項１１に記載の薬剤。
【請求項１３】
タグに融合されている、先行請求項のいずれかに記載の薬剤。
【請求項１４】
前記タグが、オリゴ−ヒスチジンタグである、請求項１３に記載の薬剤。
【請求項１５】
環状である、先行請求項のいずれかに記載の薬剤。
【請求項１６】
前記ペプチドまたはペプチド類似体が、少なくとも１つの分子内システイン架橋を形成することができる、先行請求項のいずれかに記載の薬剤。
【請求項１７】
前記ペプチドまたはペプチド類似体が、ＫＣＬＡＥＣＤＳＩＥＬＳＹＧＩＫ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１４１）、ＣＬＡＥＩＤＳＣ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１４２）、ＣＦＫＰＬＡＥＩＤＳＩＥＣＳＹＧＩＫ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１４３）、ＫＰＬＡＥＤＩＳＩＥＬＳＹＧＩＫ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１４５）、ＫＰＬＡＥＩＧＤＩＥＬＳＹＧＩＫ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１４６）、ＫＰＬＡＥＧＤＩＥＬＳＹＧＩＫ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１４７）、ＫＰＬＡＥＩＥＬＳＹＧＩＫ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１４８）、ＫＰＬＡＥＩＤＳＩＥＬＴＹＧＩＫ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１４９）、ＫＰＬＡＥＩＤＧＩＥＬＳＹＧＩＫ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１５０）、ＫＰＬＡＥＩＤＧＩＥＬＴＹＧＩＫ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１５１）、ＫＰＬＡＥＩＧＳＩＥＬＳＹＧＩＫ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１５２）、ＫＧＬＡＥＩＤＳＩＥＬＳＹＧＩＫ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１５３）、ＫＰＬＡＧＩＤＳＩＧＬＳＹＧＩＫ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１５４）、ＫＣＬＡＥＩＤＳＣＥＬＳＹＧＩＫ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１５５）およびＣＦＫＰＬＡＥＩＤＳＩＥＣ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１５６）、またはそれらの変異体もしくは断片からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む、またはそれからなる、先行請求項のいずれかに記載の薬剤。
【請求項１８】
前記ペプチドまたはペプチド類似体が、アミノ酸配列ＫＰＬＡＥＩＤＳＩＥＬＳＹＧＩＫ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１３６）、またはそれらの変異体もしくは断片を含む、またはそれからなる、先行請求項のいずれかに記載の薬剤。
【請求項１９】
前記ペプチドまたはペプチド類似体が、アミノ酸配列ＫＰＬＡＧＩＤＳＩＧＬＳＹＧＩＫ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１５４）、またはそれらの変異体もしくは断片を含む、またはそれからなる、先行請求項のいずれかに記載の薬剤。
【請求項２０】
前記ペプチドまたはペプチド類似体が、アミノ酸配列ＫＧＬＡＥＩＤＳＩＥＬＳＹＧＩＫ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１５３）、またはそれらの変異体もしくは断片を含む、またはそれからなる、先行請求項のいずれかに記載の薬剤。
【請求項２１】
前記ペプチドまたはペプチド類似体が、アミノ酸配列ＫＣＬＡＥＣＤＳＩＥＬＳＹＧＩＫ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１４１）、またはそれらの変異体もしくは断片を含む、またはそれからなる、先行請求項のいずれかに記載の薬剤。
【請求項２２】
前記ペプチドまたはペプチド類似体が、アミノ酸配列ＫＰＬＡＥＩＤＧＩＥＬＴＹＧＩＫ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１５１）、またはそれらの変異体もしくは断片を含む、またはそれからなる、先行請求項のいずれかに記載の薬剤。
【請求項２３】
前記ペプチドまたはペプチド類似体が、アミノ酸配列ＫＰＬＡＥＩＧＳＩＥＬＳＹＧＩＫ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１５２）、またはそれらの変異体もしくは断片を含む、またはそれからなる、先行請求項のいずれかに記載の薬剤。
【請求項２４】
前記ペプチドまたはペプチド類似体が、アミノ酸配列ＫＰＬＡＥＩＥＬＳＹＧＩＫ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１４８）、またはそれらの変異体もしくは断片を含む、またはそれからなる、先行請求項のいずれかに記載の薬剤。
【請求項２５】
前記変異体が、任意の１つのアミノ酸が別のタンパク質原性または非タンパク質原性アミノ酸で改変されている配列を含む、またはそれからなるが、条件として、５を超えないアミノ酸がそのように改変されている、先行請求項のいずれか１項に記載の薬剤。
【請求項２６】
前記変異体が、４を超えないアミノ酸、３を超えないアミノ酸、２を超えないアミノ酸、１を超えないアミノ酸が改変されているなど、５を超えないアミノ酸が、別のタンパク質原性または非タンパク質原性アミノ酸で改変されている配列を含む、またはそれからなる、先行請求項のいずれか１項に記載の薬剤。
【請求項２７】
１つまたは複数のアミノ酸が、保存的に置換されている、先行請求項のいずれか１項に記載の薬剤。
【請求項２８】
前記ペプチドまたはペプチド類似体が、前記配列のＮ−および／もしくはＣ−末端で、ならびに／または内部に挿入された、１つまたは複数の追加のアミノ酸を含む、またはそれからなる、先行請求項のいずれか１項に記載の薬剤。
【請求項２９】
前記ペプチドまたはペプチド類似体が、１つの追加のアミノ酸を有する、先行請求項のいずれか１項に記載の薬剤。
【請求項３０】
検出可能な部分をさらに含む、先行請求項のいずれかに記載の薬剤。
【請求項３１】
前記検出可能な部分が、放射性同位体を含む、またはそれからなる、先行請求項のいずれかに記載の薬剤。
【請求項３２】
前記放射性同位体が、９９ｍＴｃ、１１１Ｉｎ、６７Ｇａ、６８Ｇａ、７２Ａｓ、８９Ｚｒ、１２３Ｉおよび２０１Ｔｌからなる群から選択される、先行請求項のいずれかに記載の薬剤。
【請求項３３】
前記検出可能な部分が、ＳＰＥＣＴ、ＰＥＴ、ＭＲＩ、光学または超音波造影などの造影技術により検出可能である、先行請求項のいずれかに記載の薬剤。
【請求項３４】
個体における膵臓の疾患、障害または損傷の診断のための診断性組成物の調製のための、先行請求項のいずれかに記載の薬剤の使用。
【請求項３５】
先行請求項のいずれかに記載の薬剤を含む、組成物。
【請求項３６】
医薬組成物である、請求項３５に記載の組成物。
【請求項３７】
ｃ）アミノ酸配列ＧＤＰＮＤＧＲＧＤＳＶＶＹＧＬＲ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１３７）、ＶＤＴＹＤＧＧＩＳＶＶＹＧＬＲ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１３８）、ＶＤＴＹＤＧＤＧＳＶＶＹＧＬＲ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１３９）、ＶＤＶＰＥＧＤＩＳＬＡＹＧＬＲ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１５７）、ＬＤＧＬＶＲＡＹＤＮＩＳＰＶＧ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１５８）、ＧＤＰＮＧＤＩＳＶＶＹＧＬＲ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１５９）、ＶＤＶＰＮＧＤＩＳＬＡＹＲＬＲ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１６０）、ＶＤＶＰＥＧＤＩＳＬＡＹＲＬＲ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１６１）、Ｖ（ベータ−Ｄ）ＴＹＤＧＤＩＳＶＶＹＧＬＲ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１６７）、ＶＤＴＹ（ベータ−Ｄ）ＧＤＩＳＶＶＹＧＬＲ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１６８）、ＶＤＴＹＤＧ（ベータ−Ｄ）ＩＳＶＶＹＧＬＲ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１６９）
を含む、またはそれからなるペプチドまたはペプチド類似体と；
ｂ）発現の際にａ）のペプチドをコードするポリヌクレオチドと；
ｃ）ｂ）のポリヌクレオチドを含むベクターと；
ｄ）ｂ）のポリヌクレオチドまたはｃ）のベクターを含む細胞と、
を含む、薬剤。
【請求項３８】
医薬としての使用のための、先行請求項のいずれか１項に記載の薬剤または組成物。
【請求項３９】
哺乳動物の内分泌性疾患、栄養性疾患および／または代謝性疾患の処置における使用のための、
ａ）（ｉ）一般式：
ＫＸ２ＬＡＸ５Ｘ６Ｘ７Ｘ８ＩＸ１０ＬＸ１２ＹＧＩＫ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１４０）
で示されるアミノ酸配列を含む、またはそれからなるペプチド
（式中、
Ｘ２は、Ｃ、ＰまたはＧであり；
Ｘ５は、ＥまたはＧであり；
Ｘ６は、Ｃ、ＤまたはＩであり；
Ｘ７は、Ｄ、Ｉ、ＳまたはＧであり；
Ｘ８は、Ｓ、ＤまたはＧであり；
Ｘ１０は、ＥまたはＧであり；
Ｘ１２は、ＳまたはＴであるが、
条件として、Ｘ１２が、Ｔであれば、前記ペプチドが、２５を超えないアミノ酸残基を含む）；
（ｉｉ）一般式：
ＶＤＺ３Ｚ４Ｚ５ＧＺ７Ｚ８ＳＺ１０Ｚ１１ＹＧＬＲ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：６８）
で示されるアミノ酸配列を含む、またはそれからなるペプチド
（式中、
Ｚ３は、ＴまたはＶであり；
Ｚ４は、ＹまたはＰであり；
Ｚ５は、ＤまたはＮであり；
Ｚ７は、ＤまたはＧであり；
Ｚ８は、ＩまたはＧであり；
Ｚ１０は、ＶまたはＬであり；
Ｚ１１は、ＶまたはＡである）；ならびに
（ｉｉｉ）ＫＣＬＡＥＣＤＳＩＥＬＳＹＧＩＫ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１４１）、ＣＬＡＥＩＤＳＣ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１４２）、ＣＦＫＰＬＡＥＩＤＳＩＥＣＳＹＧＩＫ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１４３）、ＫＰＬＡＥＧＤＩＥＬＳＹＧＩＫ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１４７）、ＫＰＬＡＥＩＥＬＳＹＧＩＫ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１４８）、ＫＣＬＡＥＩＤＳＣＥＬＳＹＧＩＫ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１５５）、およびＣＦＫＰＬＡＥＩＤＳＩＥＣ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１５６）からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む、またはそれからなるペプチド、
からなる群から選択されるペプチドまたはペプチド類似体と；
ｂ）発現の際にａ）のペプチドをコードするポリヌクレオチドと；
ｃ）ｂ）のポリヌクレオチドを含むベクターと；
ｄ）ｂ）のポリヌクレオチドまたはｃ）のベクターを含む細胞と、
を含む、薬剤。
【請求項４０】
前記薬剤が、第二の、またはさらなる有効成分を含む、先行請求項のいずれか１項に記載の使用のための薬剤または組成物。
【請求項４１】
前記第二の、またはさらなる有効成分が、インスリン、グルカゴン様ペプチド−１（ＧＬＰ−１）、スルホニル尿素、ジペプチジルペプチダーゼ−４（ＤＰＰ４）阻害剤、アルファ−グルコシダーゼ阻害剤、チアゾリジンジオン、メグリチジンおよびナトリウム・グルコースコトランスポータ−２（ＳＧＬＴ２）阻害剤からなる群から選択される、請求項４０に記載の使用のための薬剤または組成物。
【請求項４２】
哺乳動物における内分泌性疾患、栄養性疾患および／または代謝性疾患の処置における使用のための、先行請求項のいずれかに記載の薬剤または組成物。
【請求項４３】
前記哺乳動物が、ヒトである、請求項４２に記載の使用のための薬剤または組成物。
【請求項４４】
前記内分泌性疾患、栄養性疾患および／または代謝性疾患が、糖尿病、１型糖尿病、２型糖尿病、栄養不良関連糖尿病、グルコース調節および膵臓内分泌の障害、インスリン抵抗性症候群、耐糖能障害、高血糖症、高インスリン血症、およびそれらの任意の組み合わせからなる群から選択される、先行請求項のいずれかに記載の使用のための薬剤または組成物。
【請求項４５】
前記内分泌性疾患、栄養性疾患および／または代謝性疾患が、糖尿病、甲状腺の障害、グルコース調節および膵臓内分泌の障害、内分泌腺の障害、栄養不良、栄養欠乏症、肥満、過栄養、ならびに代謝障害からなる群から選択される、先行請求項のいずれかに記載の使用のための薬剤または組成物。
【請求項４６】
前記糖尿病が、１型糖尿病、２型糖尿病、栄養不良関連糖尿病、特定された糖尿病、および特定されていない糖尿病からなる群から選択される、先行請求項のいずれかに記載の使用のための薬剤または組成物。
【請求項４７】
前記グルコース調節および膵臓内分泌の障害が、非糖尿病性低血糖性昏睡および膵臓内分泌の障害からなる群から選択される、先行請求項のいずれかに記載の使用のための薬剤または組成物。
【請求項４８】
前記肥満および過栄養の障害が、局在化された脂肪症、過栄養、および過栄養の続発症からなる群から選択される、先行請求項のいずれかに記載の使用のための薬剤または組成物。
【請求項４９】
前記栄養欠乏症の障害が、芳香族アミノ酸代謝の障害、分枝鎖アミノ酸代謝および脂肪酸代謝の障害、アミノ酸代謝の障害、ラクトース不耐性、炭水化物代謝の障害、スフィンゴリピド代謝の障害、脂質蓄積障害、グリコサミノグリカン代謝の障害、糖タンパク質代謝の障害、リポタンパク質代謝の障害、脂肪血症、プリンおよびピリミジン代謝の障害、ポルフィリンおよびビリルビン代謝の障害、ミネラル代謝の障害、嚢胞性線維症、アミロイドーシス、体液量減少、体液、電解質および酸・塩基平衡の障害、ならびに処置後内分泌および代謝障害からなる群から選択される、先行請求項のいずれかに記載の使用のための薬剤または組成物。
【請求項５０】
先行請求項のいずれか１項に記載の薬剤を必要とする対象に投与することを含む、内分泌性疾患、栄養性疾患および／または代謝性疾患を処置する方法。
【請求項５１】
哺乳動物における内分泌性疾患、栄養性疾患および／または代謝性疾患の処置における使用のための医薬の製造のための、先行請求項のいずれか１項に記載の薬剤の使用。
【請求項５２】
先行請求項のいずれか１項に記載の薬剤の治療有効量を必要とする個体に投与することを含む、糖尿病および／または糖尿病関連の障害もしくは疾患の発病を遅延させるための方法。
【請求項５３】
先行請求項のいずれか１項に記載の薬剤の治療有効量を必要とする個体に投与することを含む、血中グルコースレベルを低下させるための方法。
【請求項５４】
インスリン分泌が、増加される、請求項５３に記載の方法。
【請求項５５】
グルコースの細胞内取り込みが、増加される、請求項５３に記載の方法。
【請求項５６】
インスリン産生が、増加される、請求項５３に記載の方法。
【請求項５７】
グルカゴン産生が、減少される、請求項５３に記載の方法。
【請求項５８】
先行請求項のいずれか１項に記載の薬剤の治療有効量を必要とする個体に投与することを含む、ベータ細胞の生存性を改善するための方法。
【請求項５９】
先行請求項のいずれか１項に記載の薬剤の治療有効量を必要とする個体に投与することを含む、ベータ細胞の形態を改善するための方法。
【請求項６０】
先行請求項のいずれか１項に記載の薬剤の治療有効量を必要とする個体に投与することを含む、膵島の生存性および／または形態を安定化または改善するための方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
技術分野
本開示は、糖尿病および関連障害の処置に有用なペプチドに関する。
【背景技術】
【０００２】
背景
膵臓のランゲルハンス島においてβ細胞により産生されるペプチドホルモンのインスリンは、血中グルコースレベルの上昇に応答して放出される。こうしてグルコースは、標的組織、例えば脂肪組織、骨格筋および肝臓の細胞膜に位置するグルコーストランスポーターのインスリン依存性刺激により血液から除去される。インスリンは、膜結合インスリン受容体（ＩＲ）に結合してそれを活性化し、それにより細胞内シグナル伝達イベントのカスケードを開始してグルコースおよび脂質代謝などの複数の生物学的プロセスを調節することにより、生物学的効果を発揮する。
【０００３】
現在、１型および２型糖尿病の両方の糖尿病の処置は、主にインスリン処置に頼っている。インスリン処置への補助薬が、長期作用型グルカゴン様ペプチド１（ＧＬＰ−１）受容体アゴニスト、即ち、ＧＬＰ−１と同じ受容体で作用する誘導体である。ＧＬＰ−１は、インスリン分泌を刺激する代謝ホルモンである。ＧＬＰ−１は、グルコース依存的に膵臓からのインスリン分泌を増加させること以外に、αおよびβ細胞の両方でインスリン感受性を上昇させること；β細胞量、インスリン発現、翻訳後修飾、および分泌を増加させること；ならびに膵臓からのグルカゴン分泌を減少させることが知られている。血漿グルコースレベルを低下させる目的でインスリン処置に補助的に用いられる他の医薬としては、ＤＰＰ−ＩＶ阻害剤、メトホルミン、ＳＧＬＴ−２阻害剤およびスルホニル尿素が挙げられる。
【０００４】
体重増加、ならびに癌および低血糖症のリスク増大などの特定の欠点が、インスリンの長期使用に関連する。したがって、インスリン抵抗性および高血糖症に取り組むことにより糖尿病を処置するだけでなく、関連の、そして結果的な合併症を低減することにより糖尿病を処置することが可能な新規な非インスリン化合物への要求が、当該分野において高まっている。
【０００５】
このため、グルコース代謝を回復させて糖尿病および関連障害を処置することが可能な新規化合物を同定することは、非常に妥当性がある。複数のアプローチが企図され得るが、いずれも当業者に明白でない。
【発明の概要】
【０００６】
概要
本発明者らは、β細胞増殖を刺激し、糖毒性条件により誘導されたアポトーシスからβ細胞を救済する能力を有し、ラットＩＮＳ−１  β細胞および単離されたマウス膵島からのインスリン分泌を刺激する、ペプチドを見出した。さらに本発明者らは、耐糖能テストにおいて、該ペプチドがインビボで血漿グルコースレベルを低下させ、１型糖尿病モデルであるＢＢ  ｌｙｐ／ｌｙｐラットの糖尿病疾患の発病を遅延させることを見出した。こうして本開示のペプチドは、内分泌性、栄養性および代謝性疾患および障害の処置における使用に適する。
【０００７】
一態様において、本開示は、
ａ）一般式：
ＫＸ２ＬＡＸ５Ｘ６Ｘ７Ｘ８ＩＸ１０ＬＸ１２ＹＧＩＫ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１４０）
で示されるアミノ酸配列を含むペプチドもしくはペプチド類似体
（式中、
Ｘ２は、Ｃ、ＰまたはＧであり；
Ｘ５は、ＥまたはＧであり；
Ｘ６は、Ｃ、ＤまたはＩであり；
Ｘ７は、Ｄ、Ｉ、ＳまたはＧであり；
Ｘ８は、Ｓ、ＤまたはＧであり；
Ｘ１０は、ＥまたはＧであり；
Ｘ１２は、ＳまたはＴであるが、
条件として、Ｘ１２が、Ｔであれば、該ペプチドが、２５を超えないアミノ酸を含み、
条件として、Ｘ２が、Ｐであり、Ｘ５が、Ｅであり、Ｘ６が、Ｉであり、Ｘ７が、Ｄであり、  Ｘ８が、Ｓであり、Ｘ１０が、Ｅであり、Ｘ１２が、Ｓであれば、該ペプチドが、８５を超えないアミノ酸残基を含む）、または
ＣＬＡＥＩＤＳＣ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１４２）、ＣＦＫＰＬＡＥＩＤＳＩＥＣＳＹＧＩＫ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１４３）、ＫＰＬＡＥＧＤＩＥＬＳＹＧＩＫ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１４７）、ＫＰＬＡＥＩＥＬＳＹＧＩＫ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１４８）、ＫＣＬＡＥＩＤＳＣＥＬＳＹＧＩＫ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１５５）、およびＣＦＫＰＬＡＥＩＤＳＩＥＣ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１５６）
からなる群から選択される、その生物活性断片および／もしくは変異体と；
ｂ）発現の際にａ）のペプチドをコードするポリヌクレオチドと；
ｃ）ｂ）のポリヌクレオチドを含むベクターと；
ｄ）ｂ）のポリヌクレオチドまたはｃ）のベクターを含む細胞と、
を含む、またはそれからなる薬剤に関する。
【０００８】
一態様において、本開示は、
ａ）アミノ酸配列ＧＤＰＮＤＧＲＧＤＳＶＶＹＧＬＲ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１３７）、ＶＤＴＹＤＧＧＩＳＶＶＹＧＬＲ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１３８）、ＶＤＴＹＤＧＤＧＳＶＶＹＧＬＲ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１３９）、ＶＤＶＰＥＧＤＩＳＬＡＹＧＬＲ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１５７）、ＬＤＧＬＶＲＡＹＤＮＩＳＰＶＧ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１５８）、ＧＤＰＮＧＤＩＳＶＶＹＧＬＲ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１５９）、ＶＤＶＰＮＧＤＩＳＬＡＹＲＬＲ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１６０）、ＶＤＶＰＥＧＤＩＳＬＡＹＲＬＲ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１６１）、Ｖ（ベータ−Ｄ）ＴＹＤＧＤＩＳＶＶＹＧＬＲ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１６７）、ＶＤＴＹ（ベータ−Ｄ）ＧＤＩＳＶＶＹＧＬＲ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１６８）、ＶＤＴＹＤＧ（ベータ−Ｄ）ＩＳＶＶＹＧＬＲ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１６９）
を含む、またはそれからなるペプチドまたはペプチド類似体と；
ｂ）発現の際にａ）のペプチドをコードするポリヌクレオチドと；
ｃ）ｂ）のポリヌクレオチドを含むベクターと；
ｄ）ｂ）のポリヌクレオチドまたはｃ）のベクターを含む細胞と、
を含む薬剤に関する。
【０００９】
一態様において、本開示は、本明細書の先に記載された薬剤を含む組成物に関する。
【００１０】
一態様において、本開示は、医薬としての使用のための薬剤、または上記薬剤を含む組成物に関する。
【００１１】
一態様において、本開示は、哺乳動物の内分泌性疾患、栄養性疾患および／または代謝性疾患の処置における使用のための、
ａ）（ｉ）一般式：
ＫＸ２ＬＡＸ５Ｘ６Ｘ７Ｘ８ＩＸ１０ＬＸ１２ＹＧＩＫ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１４０）
で示されるアミノ酸配列を含む、またはそれからなるペプチドまたはペプチド類似体
（式中、
Ｘ２は、Ｃ、ＰまたはＧであり；
Ｘ５は、ＥまたはＧであり；
Ｘ６は、Ｃ、ＤまたはＩであり；
Ｘ７は、Ｄ、Ｉ、ＳまたはＧであり；
Ｘ８は、Ｓ、ＤまたはＧであり；
Ｘ１０は、ＥまたはＧであり；
Ｘ１２は、ＳまたはＴであるが、
条件として、Ｘ１２が、Ｔであれば、該ペプチドが、２５を超えないアミノ酸残基を含む）；
（ｉｉ）一般式：
ＶＤＺ３Ｚ４Ｚ５ＧＺ７Ｚ８ＳＺ１０Ｚ１１ＹＧＬＲ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：６８）
で示されるアミノ酸配列を含むペプチド
（式中、
Ｚ３は、ＴまたはＶであり；
Ｚ４は、ＹまたはＰであり；
Ｚ５は、ＤまたはＮであり；
Ｚ７は、ＤまたはＧであり；
Ｚ８は、ＩまたはＧであり；
Ｚ１０は、ＶまたはＬであり；
Ｚ１１は、ＶまたはＡである）、ならびに
（ｉｉｉ）ＫＣＬＡＥＣＤＳＩＥＬＳＹＧＩＫ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１４１）、ＣＬＡＥＩＤＳＣ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１４２）、ＣＦＫＰＬＡＥＩＤＳＩＥＣＳＹＧＩＫ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１４３）、ＫＰＬＡＥＩＥＬＳＹＧＩＫ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１４８）、ＫＣＬＡＥＩＤＳＣＥＬＳＹＧＩＫ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１５５）、およびＣＦＫＰＬＡＥＩＤＳＩＥＣ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１５６）からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む、またはそれからなるペプチドと；
ｂ）発現の際にａ）のペプチドをコードするポリヌクレオチドと；
ｃ）ｂ）のポリヌクレオチドを含むベクターと；
ｄ）ｂ）のポリヌクレオチドまたはｃ）のベクターを含む細胞と、
を含む薬剤に関する。
【００１２】
一態様において、本開示は、本明細書に記載された薬剤の治療有効量を必要とする個体に投与することを含む、内分泌性疾患、栄養性疾患および／または代謝性疾患を処置するための方法に関する。
【００１３】
一態様において、本開示は、内分泌性疾患、栄養性疾患および／または代謝性疾患の処置のための医薬の製造のための、本明細書に記載された薬剤の使用に関する。
【００１４】
一態様において、本開示は、本明細書に記載された薬剤の治療有効量を必要とする個体に投与することを含む、糖尿病の発病を遅延させるための方法に関する。
【００１５】
一態様において、本開示は、本明細書に記載された薬剤の治療有効量を必要とする個体に投与することを含む、血中グルコースレベルを低下させるための方法に関する。
【００１６】
一態様において、本開示は、本明細書に記載された薬剤の治療有効量を必要とする個体に投与することを含む、ベータ細胞の形態を改善するための方法、例えばインビトロ法に関する。
【００１７】
一態様において、本開示は、本明細書に記載された薬剤の治療有効量を必要とする個体に投与することを含む、ベータ細胞の生存性を改善するための方法に関する。
【００１８】
一態様において、本開示は、個体における膵臓の疾患、障害または損傷の診断のための診断組成物の調製のための、本明細書に記載された薬剤の使用に関する。
【図面の簡単な説明】
【００１９】
【図１】ＦＯＬ−００５およびＦＯＬ−０１４はβ細胞の増殖を誘導した。溶液中の上昇濃度のＦＯＬ−００５の添加が、４８時間後のＩＮＳ−１細胞の増殖増加を誘導した（図１Ａ）。ＦＯＬ−００５でコーティングされ、ウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）で遮断されたウェルは、ＢＳＡのみをコーティングされた対照（ｃｔｒｌ）ウェルに比較してβ細胞のより多くの増殖を誘導した（図１Ｂ）。ＦＯＬ−０１４でプレコーティングされ、ＢＳＡで遮断されたウェルは、ＢＳＡのみをコーティングされたウェルに比較してより多くの増殖を誘導した（図１Ｃ）。データを、未刺激対照（ｃｔｒｌ）細胞に比較した計数／分（ＣＰＭ）として表す。平均±ＳＤを、各群の１０〜１２の異なる観察について表す。
【図２】ＦＯＬ−００５はβ細胞を糖毒性から防御した。２０ｍＭグルコース中で４８時間インキュベートされたＩＮＳ−１細胞は、５ｍＭグルコースでインキュベートされた細胞に比較してより多くのアポトーシス細胞（アネキシンＶ陽性）を示した。２０ｍＭグルコースと共にインキュベートされた細胞へのＦＯＬ−００５の添加は、２０ｍＭグルコースのみに比較してアポトーシス細胞のレベルを低下させた（図２Ａ）。カスパーゼ−３活性により測定されたアポトーシスは、５ｍＭグルコースに比較して２０ｍＭでＩＮＳ−１細胞において増加した。ＦＯＬ−００５の添加は、糖毒性誘導性カスパーゼ−３活性の割合を低減した（図２Ｂ）。平均±ＳＤを、各群の４〜８の異なる観察について表す。
【図３】ＦＯＬ−００５刺激後に膵島およびβ細胞からインスリン分泌が増加した。ＦＯＬ−００５は、β細胞および膵島インスリン分泌を刺激した。ＩＮＳ−１細胞からのインスリン放出は、非刺激対照（ｃｔｒｌ）およびスクランブル対照のペプチド（ＦＯＬ−０１５）に比較して、非グルコース含有培地中でのＦＯＬ−００５（６μＭ）刺激後に増加した（図３Ａ）。ＦＯＬ−００５は、低（５ｍＭ）および高（２０ｍＭ）グルコースの両方でＩＮＳ−１からのインスリン放出を刺激した（図３Ｂ）。ＦＯＬ−００５（６μｍ）またはＧＬＰ−１（１００ｎＭ）で刺激された単離マウス膵島は、未刺激対照膵島に比較してより多くのインスリンを分泌した（図３Ｃ）。平均±ＳＤを、各群の５〜６の異なる観察について表す。
【図４】ＦＯＬ−０１４刺激後に膵島およびβ細胞からインスリン分泌が増加した。ＦＯＬ−０１４は、β細胞および膵島からのインスリン分泌を刺激した。ＦＯＬ−０１４（６μＭ）で刺激されたＩＮＳ−１細胞は、未刺激対照細胞に比較してより多くのインスリンを分泌した（図４Ａ）。ＦＯＬ−０１４（６μｍ）で刺激された単離マウス膵島は、対照膵島に比較してより多くのインスリンを分泌した（図４Ｂ）。ＧＬＰ−１（１００ｎＭ）またはＦＯＬ−０１４（０．６μＭ）の添加は、インスリン分泌への影響を有さなかった。平均±ＳＤを、各群の５〜６の異なる観察について表す。
【図５】インスリン分泌に及ぼすＦＯＬ−０１４の影響は用量依存性であった。ＦＯＬ−０１４の用量を増加させることによるＩＮＳ−１細胞の刺激が、テストされた濃度全てでインスリン分泌の有意な増加をもたらした。インスリン分泌は、０．６ｎＭ〜６０ｎＭの範囲内のＦＯＬ−０１４の存在下で直線的に増加した。より高濃度では、インスリン分泌に及ぼす影響はそれほど明白でないようであった。さらに、ＦＯＬ−０１４で誘導されたインスリン分泌は、１００ｎＭ  ＧＬＰ−１の影響と同等であった。バーは、平均値および平均の標準誤差（ＳＥＭ）を表す。
【図６】ＦＯＬ−０１４のインスリン分泌に及ぼす影響はグルコース濃度依存性であった。未処置の、またはＦＯＬ−０１４に暴露されたＩＮＳ−１細胞からのインスリン分泌を、上昇するグルコース濃度の存在下で測定した。５．５ｍＭ以上のグルコースレベルでは、インスリン分泌は、未処置対照細胞に比較してＦＯＬ−０１４処置細胞で有意に高かった。バーは、平均値および平均の標準誤差（ＳＥＭ）を表す。
【図７】ネイティブＧＬＰ−１と共に投与されたＦＯＬ−００５およびＦＯＬ−０１４はインスリン分泌に及ぼす相加的影響を誘発した。ＩＮＳ−１細胞からのインスリン放出を、ＧＬＰ−１と、それぞれＦＯＬ−００５およびＦＯＬ−０１４（３種のペプチドは全て１００ｎＭ濃度）との併用処置後に測定し、各ペプチドのみの影響と比較した。ＧＬＰ−１とＦＯＬ−０１４との組み合わせは、各ペプチドのみに比較してインスリン分泌を有意に増加させた。増加は、ＦＯＬ−００５とＧＬＰ−１との組み合わせでも観察された。バーは、平均値および平均の標準誤差（ＳＥＭ）を表す。
【図８】ＦＯＬ−０１４は膵島におけるインスリンおよびグルカゴン分泌に影響を与えた。２つの異なる濃度のＦＯＬ−０１４をテストして、低（２．８ｍＭ）（Ａ、Ｃ）および高（１６．７ｍＭ）（Ｂ、Ｄ）濃度のグルコースでの単離されたマウス膵島に及ぼす１００ｎＭ  ＧＬＰ−１の影響と比較した。低グルコース試料では、ＦＯＬ−０１４の存在は、インスリン分泌を増加させず、対照およびＧＬＰ−１と比較してグルカゴン分泌を減少させた。高グルコース試料では、６００ｎＭ  ＦＯＬ−０１４およびＧＬＰ−１は、６μＭ  ＦＯＬ−０１４と異なり、インスリン分泌を有意に増加させ（Ｂ）、ＧＬＰ−１と両濃度のＦＯＬ−０１４は、グルカゴン分泌を効率的に減少させた（Ｄ）。バーは、平均値および平均の標準誤差（ＳＥＭ）を表す。
【図９】ＦＯＬ−０１４はグルコース注射後にインビボでの血漿グルコースレベルを低下させた。腹腔内耐糖能テスト（ＩＰＧＴＴ）を、野生型Ｃ５７ｂｌ／６マウスで実施した。２００ｎｍｏｌ／ｋｇで投与されたＦＯＬ−０１４は、１５分目、３０分目および４５分目に対照に比較して血漿グルコースレベルを有意に低下させた（Ｐ＝０．００２７）。３０ｎｍｏｌ／ｋｇ用量では、ＦＯＬ−０１４は、グルコース注射後４５分目に有意な影響でグルコースレベルを低下させた。点線は、平均非絶食グルコースレベルに対応する。データは、平均値および平均の標準誤差（ＳＥＭ）を表す。統計解析は、スチューデントｔ検定を用いて実施した。
【図１０】ＦＯＬ−０１４は、ＢＢ  ｌｙｐ／ｌｙｐラットにおける１型糖尿病の発病を遅延させた。ＦＯＬ−０１４で処置されたＢＢ  ｌｙｐ／ｌｙｐラットは、１１．１ｍｍｏｌ／ｌ未満の血漿グルコースで定義された糖尿病の発病の有意な遅延を示した。各ラットの糖尿病の発病齢を（Ａ）に示しており、未処置群と処置群の間に有意差があった。各日に１型糖尿病を発症した動物の割合を（Ｂ）に示しており、群間に有意差があった。（Ａ）のエラーバーは、平均の標準誤差（ＳＥＭ）を表す。
【図１１】ＦＯＬ−００５またはＦＯＬ−０１４に由来するペプチド類似体のインスリン分泌に及ぼす影響。新規なペプチド類似体を、高グルコース（１６．７ｍＭ）条件下でインスリン分泌を誘導する能力について、２種の別個のＩＮＳ−１細胞株（ＡおよびＢ）でテストした。この影響を、ネイティブＧＬＰ−１、ＦＯＬ−００５およびＦＯＬ−０１４に加え、高グルコースのみの影響と比較した。高グルコース対照の平均未満のインスリン放出を誘導した類似体は、非機能的と見なされた（図示しない）。インスリン分泌のレベルを、新規類似体では黒のバー、そして比較物質では対照的なパターンで示している。バーは、平均値および平均の標準誤差（ＳＥＭ）を表す。
【図１２】ＦＯＬ−００５およびＦＯＬ−０１４は、マウスへの注射後の特異的分泌パターンを示した。３Ｈ−ＦＯＬ−００５の皮下投与後に、放射能の最高の全レベルが、注射後１時間（Ａ）および２時間（Ｂ）目の膵臓および注射部位で示された。３Ｈ−ＦＯＬ−００５の蓄積は、肝臓、腎臓、唾液腺でも可視である。Ｐｅａｒｌ  Ｔｒｉｌｏｇｙ  Ｓｍａｌｌ  Ａｎｉｍａｌ  Ｉｍａｇｉｎｇ  Ｓｙｓｔｅｍを用いて、皮下注射を介したＮＭＲＩヌードマウスにおけるＣｙ７．５標識ＦＯＬ−００５（Ｃ）およびＦＯＬ−０１４（Ｄ）のインビボ生体分布および組織局在化を検討した。初期対照造影に続いて、マウスあたり１０ｎｍｏｌ用量を投与して、ライブ造影を、５分目、２０分目、５０分目、６０分目、２時間目、４時間目、６時間目、２４時間目および４８時間目に実施した。両ペプチドの高度の蓄積が、膵臓領域および注射部位で明らかであった。
【発明を実施するための形態】
【００２０】
詳細な記載
本開示は、特許請求の範囲に定義された通りである。
【００２１】
一態様において、本開示は、一般式：
ａ）  ＫＸ２ＬＡＸ５Ｘ６Ｘ７Ｘ８ＩＸ１０ＬＸ１２ＹＧＩＫ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１４０）
（式中、
Ｘ２は、Ｃ、ＰまたはＧであり；
Ｘ５は、ＥまたはＧであり；
Ｘ６は、Ｃ、ＤまたはＩであり；
Ｘ７は、Ｄ、Ｉ、ＳまたはＧであり；
Ｘ８は、Ｓ、ＤまたはＧであり；
Ｘ１０は、ＥまたはＧであり；
Ｘ１２は、ＳまたはＴであるが、
条件として、Ｘ１２が、Ｔであれば、ペプチドが、２５を超えないアミノ酸を含み、
条件として、Ｘ２が、Ｐであり、Ｘ５が、Ｅであり、Ｘ６が、Ｉであり、Ｘ７が、Ｄであり、Ｘ８が、Ｓであり、Ｘ１０が、Ｅであり、Ｘ１２が、Ｓであれば、ペプチドが、８５を超えないアミノ酸残基を含む）と；
ｂ）発現の際にａ）のペプチドをコードするポリヌクレオチドと；
ｃ）ｂ）のポリヌクレオチドを含むベクターと；
ｄ）ｂ）のポリヌクレオチドまたはｃ）のベクターを含む細胞と、
で示されるアミノ酸配列を含むペプチドまたはペプチド類似体に関する。
【００２２】
一実施形態において、本開示は、一般式：
ＫＸ２ＬＡＸ５Ｘ６Ｘ７Ｘ８ＩＸ１０ＬＳＹＧＩＫ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１６２）
（式中、
Ｘ２は、Ｃ、ＰまたはＧであり；
Ｘ５は、ＥまたはＧであり；
Ｘ６は、Ｃ、Ｉまたは非存在であり；
Ｘ７は、Ｄ、Ｇまたは非存在であり；
Ｘ８は、Ｓ、Ｇまたは非存在であり；
Ｘ１０は、ＥまたはＧであり、
ここで非存在は、アミノ酸Ｘ５がアミノ酸Ｘ１０にカップリングされていることを意味する）
で示されるアミノ酸配列を含むペプチドまたはペプチド類似体に関する。
【００２３】
一実施形態において、本開示は、
ＫＸ２ＬＡＸ５ＩＸ１０ＬＳＹＧＩＫ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１６３）
（式中、
Ｘ２は、Ｃ、ＰまたはＧであり；
Ｘ５は、ＥまたはＧであり；
Ｘ１０は、ＥまたはＧである）
で示されるアミノ酸配列を含むペプチドに関する。
【００２４】
一実施形態において、本開示は、
ａ）ｉ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１３６、１４１、１４２、１４３、１４４、１４５、１４６、１４７、１４８、１４９、１５０、１５１、１５２、１５３、１５４、１５５、および１５６のアミノ酸配列を含む、またはそれからなるペプチド；
ｉｉ）任意の１つのアミノ酸が別のタンパク質原性または非タンパク質原性アミノ酸のために改変されているが、条件として５を超えないアミノ酸がそのように改変されている、ｉ）のペプチドの任意の１つの生物活性の配列変異体；
ｉｉｉ）ｉ）またはｉｉ）の任意の１つの少なくとも１０の連続するアミノ酸を含む、ｉ）またはｉｉ）の任意の１つのペプチドの生物活性断片、
からなる群から選択されるペプチドと；
ｂ）発現の際にａ）のペプチドをコードするポリヌクレオチドと；
ｃ）ｂ）のポリヌクレオチドを含むベクターと；
ｄ）ｂ）のポリヌクレオチドまたはｃ）のベクターを含む細胞と、
を含む薬剤に関する。
【００２５】
一実施形態において、本開示は、
ａ）ＧＤＰＮＤＧＲＧＤＳＶＶＹＧＬＲ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１３７）、ＶＤＴＹＤＧＧＩＳＶＶＹＧＬＲ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１３８）、ＶＤＴＹＤＧＤＧＳＶＶＹＧＬＲ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１３９）、ＶＤＶＰＥＧＤＩＳＬＡＹＧＬＲ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１５７）、ＬＤＧＬＶＲＡＹＤＮＩＳＰＶＧ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１５８）、ＧＤＰＮＧＤＩＳＶＶＹＧＬＲ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１５９）、ＶＤＶＰＮＧＤＩＳＬＡＹＲＬＲ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１６０）、ＶＤＶＰＥＧＤＩＳＬＡＹＲＬＲ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１６１）からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む、またはそれからなるペプチドと；
ｂ）発現の際にａ）のペプチドをコードするポリヌクレオチドと；
ｃ）ｂ）のポリヌクレオチドを含むベクターと；
ｄ）ｂ）のポリヌクレオチドまたはｃ）のベクターを含む細胞と、
を含む薬剤に関する。
【００２６】
一実施形態において、本開示は、一般式：
ＶＤＶＰＺ５ＧＤＩＳＬＡＹＺ１３ＬＲ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１６４）
（式中、
Ｚ５は、ＥまたはＮであり；
Ｚ１３は、ＲまたはＧである）
で示されるアミノ酸配列を含むペプチドに関する。
【００２７】
一実施形態において、本開示は、一般式：
ＶＤＶＴＹＤＧＺ７Ｚ８ＳＶＶＹＧＬＲ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１６５）
（式中、
Ｚ７は、ＤまたはＧであり；
Ｚ８は、ＩまたはＧである）
で示されるアミノ酸配列を含むペプチドに関する。
【００２８】
一実施形態において、本開示は、一般式：
ＧＤＰＮＺ５Ｚ６Ｚ７Ｚ８Ｚ９ＳＶＶＹＧＬＲ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１６６）
（式中、
Ｚ５は、ＤまたはＧであり；
Ｚ６は、ＤまたはＧであり；
Ｚ７は、ＩまたはＲであり；
Ｚ８は、Ｇまたは非存在であり；
Ｚ９は、Ｄまたは非存在である）
で示されるアミノ酸配列を含むペプチドに関する。
【００２９】
本明細書で用いられる用語「非存在」、例えば「Ｘ６が、Ｃ、Ｉまたは非存在である」は、非存在のアミノ酸に直接隣接するアミノ酸残基が従来のアミド結合によって互いに直接つながっていることと理解されなければならない。
【００３０】
本明細書に記載される用語「ペプチド類似体」は、非天然由来ペプチドを含む、またはそれからなるペプチドを指す。
【００３１】
本明細書で用いられる用語「アミノ酸」は、標準の２０の遺伝子コードされたアミノ酸および「Ｄ」形態（天然の「Ｌ」形態に比較して）の対応する立体異性体、オメガアミノ酸および他の天然由来アミノ酸、非従来型アミノ酸（例えば、α，α−二置換アミノ酸、Ｎ−アルキルアミノ酸など）、ならびに化学的に誘導されたアミノ酸を包含する（以下参照）。
【００３２】
「アラニン」または「Ａｌａ」または「Ａ」など、アミノ酸が具体的に列挙されている場合、他に明白に言及されない限り、Ｌ−アラニンおよびＤ−アラニンの両方を指す。所望の機能的性質が、ペプチドにより保持される限り、他の非従来型アミノ酸が、本開示のペプチドに適切な成分であってもよい。示されたペプチドの場合、適宜、各コードされたアミノ酸残基が、従来のアミノ酸の普通の名称に対応する一文字の呼称により表される。
【００３３】
１つまたは複数のアミノ酸の化学的誘導体は、機能的側鎖基との反応により実現され得る。そのような誘導体としては、例えば遊離アミノ基がアミン塩酸塩、ｐ−トルエンスルホニル基、カルボキシベンゾキシ基、ｔ−ブチルオキシカルボニル基、クロロアセチル基またはホルミル基を形成するように遊離アミノ基が誘導されたそれらの分子が挙げられる。遊離カルボキシル基を誘導体化して、塩、メチルおよびエチルエステル、または他のタイプのエステルおよびヒドラジドを形成させてもよい。遊離ヒドロキシル基を誘導体化して、Ｏ−アシルまたはＯ−アルキル誘導体を形成させてもよい。同じく、化学的誘導体として含まれるのは、２０種の標準的アミノ酸の天然由来アミノ酸誘導体を含有するそれらのペプチドである。例えば、４−ヒドロキシプロリンで、プロリンを置換していてもよく；５−ヒドロキシリシンで、リシンを置換していてもよく；３−メチルヒスチジンで、ヒスチジンを置換していてもよく；ホモセリンでセリンを置換し、オルニチンでリシンを置換していてもよい。必須の活性が維持される限り、誘導体はまた、１種または複数の付加または欠失を含むペプチドを含む。他の含まれる修飾は、アミド化、アミノ末端アシル化（例えば、アセチル化またはチオグリコール酸アミド化）、末端カルボキシルアミド化（例えば、アンモニアまたはメチルアミンでの）および類似の末端修飾である。
【００３４】
本開示のペプチドの幾つかは、天然由来のオステオポンチンタンパク質の部分領域とアミノ酸配列類似性を共有する。幾つかの実施形態において、上記ペプチドは、天然由来オステオポンチンタンパク質の活性断片、または断片などの変異体と見なされてもよい。
【００３５】
本開示のペプチドの幾つかは、天然由来のテネイシンタンパク質の部分領域とアミノ酸配列類似性を共有する。幾つかの実施形態において、上記ペプチドは、天然由来テネイシンタンパク質の活性断片、または断片などの変異体と見なされてもよい。
【００３６】
「断片」には、アミノ酸配列の少なくとも５つの隣接するアミノ酸、例えばアミノ酸配列の少なくとも６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４または１５の隣接するアミノ酸が、含まれる。したがって該断片は、１５以下のアミノ酸長、例えば１４、１３、１２、１１、１０、９、８、７、６または５アミノ酸長であってもよい。
【００３７】
一実施形態において、上記ペプチドは、８０を超えない、７５を超えない、７０を超えない、６５を超えない、６０を超えない、５５を超えない、５０を超えない、５５を超えない、４０を超えない、３５を超えない、３０を超えない、２８を超えない、２６を超えない、２４を超えない、２２を超えない、２０を超えない、１９を超えない、１８を超えない、１７を超えない、１６を超えない、１５を超えない、１４を超えない、１３を超えない、１２を超えない、１１を超えない、１０を超えないアミノ酸長など、８５を超えないアミノ酸長である。
【００３８】
別の実施形態において、上記ペプチドは、５〜２０の間、８〜２０の間、８〜１６の間、１０〜１５の間のアミノ酸長など、５〜３０の間のアミノ酸長である。
【００３９】
さらに別の実施形態において、上記断片は、１４未満のアミノ酸長、１３未満のアミノ酸長、１２未満のアミノ酸長、１１未満のアミノ酸長、１０未満のアミノ酸長、９未満のアミノ酸長、８未満のアミノ酸長、７未満のアミノ酸長、６未満のアミノ酸長、５未満のアミノ酸長など、１５以下のアミノ酸長を含む。
【００４０】
用語「変異体」は、親ペプチドと１００％のアミノ酸配列同一性を共有しないペプチドを指し、即ち、１種または複数のアミノ酸が突然変異されていなければならない。「突然変異された」は、親ペプチド内の指定された位置のアミノ酸を改変することを指す。例えば指定された位置のアミノ酸が、欠失、改変、置換されていてもよく、または１つもしくは複数のアミノ酸の挿入／付加の部位であってもよい。該置換が保存的または非保存的であり得ることは、当業者に察知されよう。
【００４１】
一実施形態において、上記ペプチド変異体は、５を超えないアミノ酸が別のタンパク質原性または非タンパク質原性アミノ酸で改変されており、４を超えないアミノ酸、３を超えないアミノ酸、２を超えないアミノ酸、１を超えないアミノ酸などが、改変されている、配列を含む、またはそれからなる。一実施形態において、１つまたは複数のアミノ酸が、保存的に置換されている。「保存的に置換された」は、ペプチドの機能が有意に改変されないような、１つのアミノ酸の、類似の特性（サイズ、疎水性など）を有する別のアミノ酸での置換を指す。したがって「保存的置換」とは、Ｇｌｙ、Ａｌａ；Ｖａｌ、Ｉｌｅ、Ｌｅｕ；Ａｓｐ、Ｇｌｕ；Ａｓｎ、Ｇｌｎ；Ｓｅｒ、Ｔｈｒ；Ｌｙｓ、Ａｒｇ；およびＰｈｅ、Ｔｙｒなどの意図する組み合わせである。
【００４２】
別の実施形態において、上記ペプチドは、該配列のＮ−および／もしくはＣ−末端で、ならびに／または内部に挿入された、１つまたは複数の追加のアミノ酸を含む、またはそれからなる。一実施形態において、少なくとも３、少なくとも４、少なくとも５、少なくとも６、少なくとも７、少なくとも８、少なくとも９、少なくとも１０、少なくとも１５、または少なくとも２０の追加のアミノ酸など、少なくとも２の追加のアミノ酸が挿入されている。該追加のアミノ酸は、野生型ヒトオステオポンチン（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：６６）の対応する位置からの、または野生型ネズミオステオポンチン（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１３４）の対応する位置からのアミノ酸であってもよい。野生型オステオポンチンの「対応する位置」という用語は、追加のアミノ酸が上記の野生型オステオポンチンの中の同等の位置に存在するものと同じである、ということを本発明者らは意味する（イメージとしては、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１のアミノ酸配列で、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：６６の斜体の下線が引かれた配列が置き換えられている）。
【００４３】
別の実施形態において、該ペプチドは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１、１３６、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６７、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９、１００、１０１、１０２、１０３、１０４、１０５、１０６、１０７、１０８、１０９、１１０、１１１、１１２、１１３、１１４、１１５、１１６、１１７、１１８、１１９、１２０、１２１、１２２、１２３、１２４、１２５、１２６、１２７、１２８、１２９、１３０、１３１、１３２、１３３、１３５、１３７、１３８、１３９、１４１、１４２、１４３、１４４、１４５、１４６、１４７、１４８、１４９、１５０、１５１、１５２、１５３、１５４、１５５、１５６、１５７、１５８、１５９、１６０、１６１、１６７、１６８および１６９；
【化１】
2020518556.tif 000003
2020518556.tif 000004
2020518556.tif 000005
2020518556.tif 000006
2020518556.tif 000007
からなる群から選択される。
【００４４】
一実施形態において、上記ペプチドは、哺乳動物オステオポンチン変異体および／または断片などのオステオポンチンに由来する。
【００４５】
一実施形態において、上記ペプチドは、非タンパク質原性アミノ酸残基を含むペプチドなどの非天然由来である。
【００４６】
幾つかの実施形態において、上記ペプチドは、ＰＥＧ、単糖類、フルオロフォア、クロモフォア、放射性化合物、および細胞透過性ペプチドからなる群から選択され得る部分にさらにコンジュゲートされている。一実施形態において、該フルオロフォアは、ルシファイエロー、ビオチン、５，６−カルボキシルテトラメチルローダミン（ＴＡＭＲＡ）、インドジカルボシアニン（Ｃ５）、Ａｌｅｘａ  Ｆｌｕｏｒ（登録商標）  ４８８、  Ａｌｅｘａ  Ｆｌｕｏｒ（登録商標）  ５３２、Ａｌｅｘａ  Ｆｌｕｏｒ（登録商標）  ６４７、ＡＴＴＯ  ４８８、ＡＴＴＯ  ５３２、６−カルボキシフルオレセイン（６−ＦＡＭ）、Ａｌｅｘａ  Ｆｌｕｏｒ（登録商標）  ３５０、ＤＹ−４１５、ＡＴＴＯ  ４２５、ＡＴＴＯ  ４６５、Ｂｏｄｉｐｙ（登録商標）  ＦＬ、フルオレセインイソチオシアナート、Ｏｒｅｇｏｎ  Ｇｒｅｅｎ（登録商標）  ４８８、Ｏｒｅｇｏｎ  Ｇｒｅｅｎ（登録商標）  ５１４、Ｒｈｏｄａｍｉｎｅ  Ｇｒｅｅｎ（商標）、５’−テトラクロロ−フルオレセイン、ＡＴＴＯ  ５２０、６−カルボキシ−４’，５’−ジクロロ−２’，７’−ジメトキシフルオレセイン、Ｙａｋｉｍａ  Ｙｅｌｌｏｗ（商標）色素、Ｂｏｄｉｐｙ（登録商標）  ５３０／５５０、ヘキサクロローフルオレセイン、Ａｌｅｘａ  Ｆｌｕｏｒ（登録商標）  ５５５、ＤＹ−５４９、Ｂｏｄｉｐｙ（登録商標）  ＴＭＲ−Ｘ、シアニンホスホラミダイト（シアニン３、シアニン３．５、シアニン５、シアニン５．５、シアニン７．５）、ＡＴＴＯ  ５５０、Ｒｈｏｄａｍｉｎｅ  Ｒｅｄ（商標）、ＡＴＴＯ  ５６５、カルボキシ−Ｘ−ローダミン、テキサスレッド（スルホローダミン１０１酸塩化物）、ＬｉｇｈｔＣｙｃｌｅｒ（登録商標）  Ｒｅｄ  ６１０、ＡＴＴＯ  ５９４、ＤＹ−４８０−ＸＬ、ＤＹ−６１０、ＡＴＴＯ  ６１０、ＬｉｇｈｔＣｙｃｌｅｒ（登録商標）  Ｒｅｄ  ６４０、Ｂｏｄｉｐｙ  ６３０／６５０、ＡＴＴＯ  ６３３、Ｂｏｄｉｐｙ  ６５０／６６５、ＡＴＴＯ  ６４７Ｎ、ＤＹ−６４９、ＬｉｇｈｔＣｙｃｌｅｒ（登録商標）  Ｒｅｄ  ６７０、ＡＴＴＯ  ６８０、ＬｉｇｈｔＣｙｃｌｅｒ（登録商標）  Ｒｅｄ  ７０５、ＤＹ−６８２、ＡＴＴＯ  ７００、ＡＴＴＯ  ７４０、ＤＹ−７８２、ＩＲＤ  ７００、ＩＲＤ  ８００、ＣＡＬ  Ｆｌｕｏｒ（登録商標）  Ｇｏｌｄ  ５４０ｎｍ、ＣＡＬ  Ｆｌｕｏｒ（登録商標）  Ｇｏｌｄ  ５２２ｎｍ、ＣＡＬ  Ｆｌｕｏｒ（登録商標）  Ｇｏｌｄ  ５４４ｎｍ  、ＣＡＬ  Ｆｌｕｏｒ（登録商標）  Ｏｒａｎｇｅ  ５６０ｎｍ、ＣＡＬ  Ｆｌｕｏｒ（登録商標）  Ｏｒａｎｇｅ  ５３８ｎｍ、ＣＡＬ  Ｆｌｕｏｒ（登録商標）  Ｏｒａｎｇｅ  ５５９ｎｍ、ＣＡＬ  Ｆｌｕｏｒ（登録商標）  Ｒｅｄ  ５９０ｎｍ、ＣＡＬ  Ｆｌｕｏｒ（登録商標）  Ｒｅｄ  ５６９ｎｍ、ＣＡＬ  Ｆｌｕｏｒ（登録商標）  Ｒｅｄ  ５９１ｎｍ、ＣＡＬ  Ｆｌｕｏｒ（登録商標）  Ｒｅｄ  ６１０ｎｍ、ＣＡＬ  Ｆｌｕｏｒ（登録商標）  Ｒｅｄ  ５９０ｎｍ、ＣＡＬ  Ｆｌｕｏｒ（登録商標）  Ｒｅｄ  ６１０ｎｍ、ＣＡＬ  Ｆｌｕｏｒ（登録商標）  Ｒｅｄ  ６３５ｎｍ、Ｑｕａｓａｒ（登録商標）  ５７０ｎｍ、Ｑｕａｓａｒ（登録商標）  ５４８ｎｍ、Ｑｕａｓａｒ（登録商標）  ５６６ｎｍ  （Ｃｙ  ３）、Ｑｕａｓａｒ（��録商標）  ６７０ｎｍ、Ｑｕａｓａｒ（登録商標）  ６４７ｎｍ、Ｑｕａｓａｒ（登録商標）  ６７０ｎｍ、Ｑｕａｓａｒ（登録商標）  ７０５ｎｍ、Ｑｕａｓａｒ（登録商標）  ６９０ｎｍ、Ｑｕａｓａｒ（登録商標）  ７０５ｎｍ  （Ｃｙ  ５．５）、Ｐｕｌｓａｒ（登録商標）  ６５０  Ｄｙｅｓ、ＳｕｐｅｒＲｏｘ（登録商標）  Ｄｙｅｓ）からなる群から選択される。
【００４７】
別の実施形態において、上記ペプチドは、グリコシル化されることなど、またはＰＥＧ化、アミド化、エステル化、アシル化、アセチル化および／もしくはアルキル化により、さらに修飾されている。
【００４８】
一実施形態において、上記ペプチドは、本明細書に記載された配列の任意の１つまたは複数のアミノ酸配列を含み得る、またはそれからなり得るタンデムリピートを含む、またはそれからなる。
【００４９】
一実施形態において、上記ペプチドは、環状である。該環状構造は、任意の適切な合成方法により実現され得る。したがってヘテロデチックなつながりとしては、ジスルフィド架橋、システイン架橋、アルキレン架橋またはスルフィド架橋を介した形成を挙げることができるが、これらに限定されない。
【００５０】
さらなる実施形態において、該ペプチドは、融合を含む、またはそれからなる。例えば該ペプチドは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１または１３６のアミノ酸配列の融合を含んでいてもよい。
【００５１】
ペプチドの「融合」という用語は、例えば任意の他のペプチドに融合されたＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１または１３６（またはその断片もしくは変異体）、に対応するアミノ酸配列に関する。例えば上記ペプチドは、上記ペプチドの精製を容易にするために、グルタチオン−Ｓ−トランスフェラーゼ（ＧＳＴ）またはプロテインＡなどのポリペプチドに融合されていてもよい。そのような融合の例は、当業者に周知である。同様に上記ペプチドは、Ｈｉｓ６などのオリゴ−ヒスチジンタグに、または周知のＭｙｃタグエピトープなどの抗体によって認識されるエピトープに、融合されていてもよい。上記ペプチドの任意の変異体または誘導体への融合もまた、本開示の範囲に含まれる。
【００５２】
あるいは該融合された部分は、当業者に公知の通り、該ポリペプチドの細胞内取り込みを促進することが可能な親油性分子またはペプチドドメインであってもよい。
【００５３】
新規なペプチド
一実施形態において、本開示は、ＫＰＬＡＥＩＤＳＩＥＬＳＹＧＩＫ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１３６）、ＧＤＰＮＤＧＲＧＤＳＶＶＹＧＬＲ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１３７）、ＶＤＴＹＤＧＧＩＳＶＶＹＧＬＲ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１３８）、ＶＤＴＹＤＧＤＧＳＶＶＹＧＬＲ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１３９）、ＶＤＶＰＥＧＤＩＳＬＡＹＧＬＲ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１５７）、ＬＤＧＬＶＲＡＹＤＮＩＳＰＶＧ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１５８）、ＧＤＰＮＧＤＩＳＶＶＹＧＬＲ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１５９）、ＶＤＶＰＮＧＤＩＳＬＡＹＲＬＲ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１６０）、ＶＤＶＰＥＧＤＩＳＬＡＹＲＬＲ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１６１）、またはそれらの変異体もしくは断片からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む、またはそれからなるペプチドに関する。
【００５４】
一実施形態において、本開示は、ＫＣＬＡＥＣＤＳＩＥＬＳＹＧＩＫ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１４１）、ＣＬＡＥＩＤＳＣ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１４２）、ＣＦＫＰＬＡＥＩＤＳＩＥＣＳＹＧＩＫ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１４３）、ＫＰＬＡＥＤＩＳＩＥＬＳＹＧＩＫ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１４５）、ＫＰＬＡＥＩＧＤＩＥＬＳＹＧＩＫ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１４６）、ＫＰＬＡＥＧＤＩＥＬＳＹＧＩＫ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１４７）、ＫＰＬＡＥＩＥＬＳＹＧＩＫ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１４８）、ＫＰＬＡＥＩＤＳＩＥＬＴＹＧＩＫ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１４９）、ＫＰＬＡＥＩＤＧＩＥＬＳＹＧＩＫ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１５０）、ＫＰＬＡＥＩＤＧＩＥＬＴＹＧＩＫ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１５１）、ＫＰＬＡＥＩＧＳＩＥＬＳＹＧＩＫ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１５２）、ＫＧＬＡＥＩＤＳＩＥＬＳＹＧＩＫ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１５３）、ＫＰＬＡＧＩＤＳＩＧＬＳＹＧＩＫ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１５４）、ＫＣＬＡＥＩＤＳＣＥＬＳＹＧＩＫ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１５５）およびＣＦＫＰＬＡＥＩＤＳＩＥＣ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１５６）、またはそれらの変異体もしくは断片からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む、またはそれからなるペプチドに関する。
【００５５】
一実施形態において、本開示は、アミノ酸配列ＫＰＬＡＥＩＤＳＩＥＬＳＹＧＩＫ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１３６）、またはそれらの変異体もしくは断片を含む、またはそれからなるペプチドを含む薬剤に関する。
【００５６】
一実施形態において、本開示は、アミノ酸配列ＫＰＬＡＧＩＤＳＩＧＬＳＹＧＩＫ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１５４）、またはそれらの変異体もしくは断片を含む、またはそれからなるペプチドを含む薬剤に関する。
【００５７】
一実施形態において、本開示は、アミノ酸配列ＫＧＬＡＥＩＤＳＩＥＬＳＹＧＩＫ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１５３）、またはそれらの変異体もしくは断片を含む、またはそれからなるペプチドを含む薬剤に関する。
【００５８】
一実施形態において、本開示は、アミノ酸配列ＫＣＬＡＥＣＤＳＩＥＬＳＹＧＩＫ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１４１）、またはそれらの変異体もしくは断片を含む、またはそれからなるペプチドを含む薬剤に関する。
【００５９】
一実施形態において、本開示は、アミノ酸配列ＫＰＬＡＥＩＤＧＩＥＬＴＹＧＩＫ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１５１）、またはそれらの変異体もしくは断片を含む、またはそれからなるペプチドを含む薬剤に関する。
【００６０】
一実施形態において、本開示は、アミノ酸配列ＫＰＬＡＥＩＧＳＩＥＬＳＹＧＩＫ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１５２）、またはそれらの変異体もしくは断片を含む、またはそれからなるペプチドを含む薬剤に関する。
【００６１】
一実施形態において、本開示は、アミノ酸配列ＫＰＬＡＥＩＥＬＳＹＧＩＫ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１４８）、またはそれらの変異体もしくは断片を含む、またはそれからなるペプチドを含む薬剤に関する。
【００６２】
一実施形態において、本開示は、
ｂ）アミノ酸配列ＧＤＰＮＤＧＲＧＤＳＶＶＹＧＬＲ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１３７）、ＶＤＴＹＤＧＧＩＳＶＶＹＧＬＲ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１３８）、ＶＤＴＹＤＧＤＧＳＶＶＹＧＬＲ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１３９）、ＶＤＶＰＥＧＤＩＳＬＡＹＧＬＲ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１５７）、ＬＤＧＬＶＲＡＹＤＮＩＳＰＶＧ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１５８）、ＧＤＰＮＧＤＩＳＶＶＹＧＬＲ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１５９）、ＶＤＶＰＮＧＤＩＳＬＡＹＲＬＲ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１６０）、ＶＤＶＰＥＧＤＩＳＬＡＹＲＬＲ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１６１）、Ｖ（ベータ−Ｄ）ＴＹＤＧＤＩＳＶＶＹＧＬＲ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１６７）、ＶＤＴＹ（ベータ−Ｄ）ＧＤＩＳＶＶＹＧＬＲ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１６８）、ＶＤＴＹＤＧ（ベータ−Ｄ）ＩＳＶＶＹＧＬＲ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１６９）を含む、またはそれからなるペプチドまたはペプチド類似体と；
ｂ）発現の際にａ）のペプチドをコードするポリヌクレオチドと；
ｃ）ｂ）のポリヌクレオチドを含むベクターと；
ｄ）ｂ）のポリヌクレオチドまたはｃ）のベクターを含む細胞と、
を含む薬剤に関する。
【００６３】
幾つかの実施形態において、上記変異体は、任意の１つのアミノ酸が別のタンパク質原性または非タンパク質原性アミノ酸で改変されている配列を含む、またはそれからなるが、条件として、５を超えないアミノ酸がそのように改変されており、４を超えないアミノ酸、３を超えないアミノ酸、２を超えないアミノ酸、１を超えないアミノ酸などが改変されている。幾つかの実施形態において、１つまたは複数のアミノ酸が、保存的に置換されている。
【００６４】
幾つかの実施形態において、上記ペプチドは、該配列のＮ−および／もしくはＣ−末端で、ならびに／または内部に挿入された、１つまたは複数の追加のアミノ酸を含む、またはそれからなる。一実施形態において、少なくとも３、少なくとも４、少なくとも５、少なくとも６、少なくとも７、少なくとも８、少なくとも９、少なくとも１０、少なくとも１５、または少なくとも２０の追加のアミノ酸など、少なくとも２の追加のアミノ酸が挿入されている。
【００６５】
幾つかの実施形態において、上記ペプチドは、８０を超えない、７５を超えない、７０を超えない、６５を超えない、６０を超えない、５５を超えない、５０を超えない、５５を超えない、４０を超えない、３５を超えない、３０を超えない、２８を超えない、２６を超えない、２４を超えない、２２を超えない、２０を超えない、１９を超えない、１８を超えない、１７を超えない、１６を超えない、１５を超えない、１４を超えない、１３を超えない、１２を超えない、１１を超えない、１０を超えないアミノ酸長など、８５を超えないアミノ酸長である。
【００６６】
幾つかの実施形態において、上記ペプチドは、ＰＥＧ、単糖類、フルオロフォア、クロモフォア、放射性化合物、および細胞透過性ペプチドからなる群から選択され得る部分にさらにコンジュゲートされている。
【００６７】
一実施形態において、上記ペプチドは、グリコシル化されることなど、またはＰＥＧ化、アミド化、エステル化、アシル化、アセチル化および／もしくはアルキル化により、さらに修飾されている。
【００６８】
幾つかの実施形態において、上記ペプチドは、本明細書の先に記載された配列の任意の１つまたは複数のアミノ酸配列を含み得る、またはそれからなり得るタンデムリピートを含む、またはそれからなる。
【００６９】
一実施形態において、上記ペプチドは、環状である。該環状構造は、任意の適切な合成方法により実現され得る。したがってヘテロデチックなつながりとしては、システイン架橋、ジスルフィド架橋、アルキレン架橋またはスルフィド架橋を介した形成を挙げることができるが、これらに限定されない。
【００７０】
適応症
本開示の薬剤は、内分泌性、栄養性および代謝性疾患および障害の処置における使用に適する。
【００７１】
一実施形態において、該内分泌性疾患、栄養性疾患および／または代謝性疾患の処置を必要とする哺乳動物は、ヒトである。
【００７２】
幾つかの実施形態において、該内分泌性疾患、栄養性疾患および／または代謝性疾患は、糖尿病、１型糖尿病、２型糖尿病、栄養不良関連糖尿病、グルコース調節および膵臓内分泌の障害、インスリン抵抗性症候群、耐糖能障害、高血糖症、高インスリン血症、およびそれらの任意の組み合わせからなる群から選択される。
【００７３】
幾つかの実施形態において、該内分泌性疾患、栄養性疾患および／または代謝性疾患は、糖尿病、甲状腺の障害、グルコース調節および膵臓内分泌の障害、内分泌腺の障害、栄養不良、栄養欠乏症、肥満、過栄養、ならびに代謝障害からなる群から選択される。
【００７４】
一実施形態において、糖尿病は、１型糖尿病、２型糖尿病、栄養不良関連糖尿病、特定された糖尿病、および特定されていない糖尿病からなる群から選択される。
【００７５】
一実施形態において、グルコース調節および膵臓内分泌の障害は、非糖尿病性低血糖性昏睡および膵臓内分泌の障害からなる群から選択される。
【００７６】
一実施形態において、肥満および過栄養の障害は、局在化された脂肪症、過栄養、および過栄養の続発症からなる群から選択される。
【００７７】
一実施形態において、栄養欠乏症の障害は、芳香族アミノ酸代謝の障害、分枝鎖アミノ酸代謝および脂肪酸代謝の障害、アミノ酸代謝の障害、ラクトース不耐性、炭水化物代謝の障害、スフィンゴリピド代謝の障害、脂質蓄積障害、グリコサミノグリカン代謝の障害、糖タンパク質代謝の障害、リポタンパク質代謝の障害、脂肪血症、プリンおよびピリミジン代謝の障害、ポルフィリンおよびビリルビン代謝の障害、ミネラル代謝の障害、嚢胞性線維症、アミロイドーシス、体液量減少、体液、電解質および酸・塩基平衡の障害、ならびに処置後内分泌および代謝障害からなる群から選択される。
【００７８】
組成物
一態様において、本開示は、本明細書に記載された薬剤を含む組成物に関する。
【００７９】
一態様において、本開示は、哺乳動物における内分泌性疾患、栄養性疾患および／または代謝性疾患の処置における使用のための、
ａ）（ｉ）一般式：
ＫＸ２ＬＡＸ５Ｘ６Ｘ７Ｘ８ＩＸ１０ＬＸ１２ＹＧＩＫ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１４０）
で示されるアミノ酸配列を含む、またはそれからなるペプチド
（式中、
Ｘ２は、Ｃ、ＰまたはＧであり；
Ｘ５は、ＥまたはＧであり；
Ｘ６は、Ｃ、ＤまたはＩであり；
Ｘ７は、Ｄ、Ｉ、ＳまたはＧであり；
Ｘ８は、Ｓ、ＤまたはＧであり；
Ｘ１０は、ＥまたはＧであり；
Ｘ１２は、ＳまたはＴであるが、
条件として、Ｘ１２が、Ｔであれば、該ペプチドが、２５を超えないアミノ酸残基を含む）；ならびに
（ｉｉ）一般式：
ＶＤＺ３Ｚ４Ｚ５ＧＺ７Ｚ８ＳＺ１０Ｚ１１ＹＧＬＲ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：６８）
で示されるアミノ酸配列を含む、またはそれからなるペプチド
（式中、
Ｚ３は、ＴまたはＶであり；
Ｚ４は、ＹまたはＰであり；
Ｚ５は、ＤまたはＮであり；
Ｚ７は、ＤまたはＧであり；
Ｚ８は、ＩまたはＧであり；
Ｚ１０は、ＶまたはＬであり；
Ｚ１１は、ＶまたはＡである）、ならびに
（ｉｉｉ）ＫＣＬＡＥＣＤＳＩＥＬＳＹＧＩＫ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１４１）、ＣＬＡＥＩＤＳＣ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１４２）、ＣＦＫＰＬＡＥＩＤＳＩＥＣＳＹＧＩＫ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１４３）、ＫＰＬＡＥＩＥＬＳＹＧＩＫ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１４８）、ＫＣＬＡＥＩＤＳＣＥＬＳＹＧＩＫ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１５５）、およびＣＦＫＰＬＡＥＩＤＳＩＥＣ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１５６）からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む、またはそれからなるペプチド、
からなる群から選択されるペプチドまたはペプチド類似体と；
ｂ）発現の際にａ）のペプチドをコードするポリヌクレオチドと；
ｃ）ｂ）のポリヌクレオチドを含むベクターと；
ｄ）ｂ）のポリヌクレオチドまたはｃ）のベクターを含む細胞と、
からなる群から選択される薬剤に関する。
【００８０】
一態様において、本開示は、本明細書に記載された薬剤を含む、内分泌性疾患、栄養性疾患および／または代謝性疾患の処置における使用のための組成物に関する。一実施形態において、上記組成物は、医薬組成物である。
【００８１】
一実施形態において、該薬剤は、第二の有効成分をさらに含む。上記第二の有効成分は、インスリン、グルカゴン様ペプチド−１（ＧＬＰ−１）、ビグアニド、フォルスコリン化合物、スルホニル尿素、ジペプチジルペプチダーゼ−４（ＤＰＰ４）阻害剤、アルファ−グルコシダーゼ阻害剤、チアゾリジンジオン、メグリチジンおよびナトリウム・グルコースコトランスポータ−２（ＳＧＬＴ２）阻害剤からなる群から選択されてもよい。
【００８２】
他の方法
一態様において、本開示は、本明細書に記載された薬剤を必要とする対象に投与することを含む、内分泌性疾患、栄養性疾患および／または代謝性疾患を処置する方法に関する。
【００８３】
一態様において、本開示は、哺乳動物における内分泌性疾患、栄養性疾患および／または代謝性疾患の処置における使用のための、医薬の製造のための薬剤の使用に関する。
【００８４】
一態様において、本開示は、発現の際に本明細書に記載されたペプチドをコードするポリヌクレオチドに関する。一態様において、本開示は、発現の際に本明細書に記載されたペプチドをコードする上記ポリヌクレオチドを含むベクターに関する。一態様において、本開示は、発現の際に本明細書に記載されたペプチドをコードする上記ポリヌクレオチドまたは上記ベクターを含む細胞に関する。
【００８５】
一態様において、本開示は、本明細書に記載されたペプチドの治療有効量を必要とする個体に投与することを含む、インスリン分泌を増加させるための方法に関する。一実施形態において、上記方法は、インビトロ法である。
【００８６】
一態様において、本開示は、本明細書に記載されたペプチドの治療有効量を必要とする個体に投与することを含む、血中グルコースレベルを低下させるための方法に関する。一実施形態において、上記方法は、インビトロ法である。一実施形態において、インスリン分泌が、増加される。別の実施形態において、グルコースの細胞内取り込みが、増加される。さらに別の実施形態において、インスリン産生が、増加される。別の実施形態において、グルカゴン産生が、減少される。
【００８７】
一態様において、本開示は、本明細書に記載されたペプチドの治療有効量を必要とする個体に投与することを含む、β細胞の形態を改善するための方法、例えばインビトロ法に関する。
【００８８】
一態様において、本開示は、本明細書に記載されたペプチドの治療有効量を必要とする個体に投与することを含む、β細胞の生存性を改善するための方法に関する。
【００８９】
一態様において、本開示は、本明細書に記載されたペプチドの治療有効量を必要とする個体に投与することを含む、糖尿病、ならびに糖尿病関連の障害および疾患の発病を遅延させるための方法に関する。
【００９０】
本開示の一実施形態において、該薬剤は、検出可能な部分をさらに含み得る。例えば検出可能な部分は、９９ｍＴｃ、１１１Ｉｎ、６７Ｇａ、６８Ｇａ、７２Ａｓ、８９Ｚｒ、１２３Ｉおよび２０１Ｔｌからなる群から選択される放射性同位体などの放射性同位体を含んでも、またはそれからなってもよい。したがって該結合部分は、マルチイメージング（例えば、ＳＰＥＣＴ、ＰＥＴ、ＭＲＩ、光学または超音波）の能力を有するナノ粒子にカップリングされていてもよい。あるいは該検出可能な部分は、常磁性の同位体を含んでいても、またはそれからなってもよく、常磁性の同位体などは、１５７Ｇｄ、５５Ｍｎ、１６２Ｄｙ、５２Ｃｒおよび５６Ｆｅからなる群から選択される。
【００９１】
該薬剤が、検出可能な部分を含む場合、該検出可能な部分は、ＳＰＥＣＴ、ＰＥＴ、ＭＲＩ、光学または超音波造影などの造影技術により検出可能であり得る。
【００９２】
一態様において、本開示は、個体における膵臓の疾患、障害または損傷の診断のための診断性組成物の調製のための、本明細書に記載された薬剤の使用に関する。
【００９３】
項目
１．ａ）ペプチドであって、該ペプチドまたはペプチド類似体が、一般式：
ＫＸ２ＬＡＸ５Ｘ６Ｘ７Ｘ８ＩＸ１０ＬＸ１２ＹＧＩＫ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１４０）
で示されるアミノ酸配列を含むペプチド
（式中、
Ｘ２は、Ｃ、ＰまたはＧであり；
Ｘ５は、ＥまたはＧであり；
Ｘ６は、Ｃ、ＤまたはＩであり；
Ｘ７は、Ｄ、Ｉ、ＳまたはＧであり；
Ｘ８は、Ｓ、ＤまたはＧであり；
Ｘ１０は、ＥまたはＧであり；
Ｘ１２は、ＳまたはＴであるが、
条件として、Ｘ１２が、Ｔであれば、該ペプチドが、２５を超えないアミノ酸残基を含み、
条件として、Ｘ２が、Ｐであり、Ｘ５が、Ｅであり、Ｘ６が、Ｉであり、Ｘ７が、Ｄであり、  Ｘ８が、Ｓであり、Ｘ１０が、Ｅであり、Ｘ１２が、Ｓであれば、該ペプチドが、８５を超えないアミノ酸残基を含む）、または
ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１４０で示される生物活性断片および／もしくは変異体と；
ｂ）発現の際にａ）のペプチドをコードするポリヌクレオチドと；
ｃ）ｂ）のポリヌクレオチドを含むベクターと；
ｄ）ｂ）のポリヌクレオチドまたはｃ）のベクターを含む細胞と、
を含む、薬剤。
【００９４】
２．一般式：
ＶＤＶＰＺ５ＧＤＩＳＬＡＹＺ１３ＬＲ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１６４）
（式中、
Ｚ５は、ＥまたはＮであり；
Ｚ１３は、ＲまたはＧである）
で示されるアミノ酸配列を含むペプチドを含む、薬剤。
【００９５】
３．一般式：
ＶＤＴＹＤＧＺ７Ｚ８ＳＶＶＹＧＬＲ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１６５）
（式中、
Ｚ７は、ＤまたはＧであり；
Ｚ８は、ＩまたはＧである）
で示されるアミノ酸配列を含むペプチドを含む、薬剤。
【００９６】
４．一般式：
ＧＤＰＮＺ５Ｚ６Ｚ７Ｚ８Ｚ９ＳＶＶＹＧＬＲ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１６６）
（式中、
Ｚ５は、ＤまたはＧであり；
Ｚ６は、ＤまたはＧであり；
Ｚ７は、ＩまたはＲであり；
Ｚ８は、Ｇまたは非存在であり；
Ｚ９は、Ｄまたは非存在である）
で示されるアミノ酸配列を含むペプチドを含む、薬剤。
【００９７】
５．ａ）ＧＤＰＮＤＧＲＧＤＳＶＶＹＧＬＲ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１３７）、ＶＤＴＹＤＧＧＩＳＶＶＹＧＬＲ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１３８）、ＶＤＴＹＤＧＤＧＳＶＶＹＧＬＲ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１３９）、ＶＤＶＰＥＧＤＩＳＬＡＹＧＬＲ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１５７）、ＬＤＧＬＶＲＡＹＤＮＩＳＰＶＧ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１５８）、ＧＤＰＮＧＤＩＳＶＶＹＧＬＲ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１５９）、ＶＤＶＰＮＧＤＩＳＬＡＹＲＬＲ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１６０）、ＶＤＶＰＥＧＤＩＳＬＡＹＲＬＲ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１６１）からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む、またはそれからなるペプチドと；
ｂ）発現の際にａ）のペプチドをコードするポリヌクレオチドと；
ｃ）ｂ）のポリヌクレオチドを含むベクターと；
ｄ）ｂ）のポリヌクレオチドまたはｃ）のベクターを含む細胞と、
を含む、項目２〜４に記載の薬剤。
【００９８】
６．該ペプチドが、一般式：
ＫＸ２ＬＡＸ５Ｘ６Ｘ７Ｘ８ＩＸ１０ＬＳＹＧＩＫ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１６２）
（式中、
Ｘ２は、Ｃ、ＰまたはＧであり；
Ｘ５は、ＥまたはＧであり；
Ｘ６は、Ｃ、Ｉまたは非存在であり；
Ｘ７は、Ｄ、Ｇまたは非存在であり；
Ｘ８は、Ｓ、Ｇまたは非存在であり；
Ｘ１０は、ＥまたはＧである）
で示されるアミノ酸配列を含む、またはそれからなる、項目１に記載の薬剤。
【００９９】
７．該ペプチドが、一般式：
ＫＸ２ＬＡＸ５ＩＸ１０ＬＳＹＧＩＫ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１６３）
（式中、
Ｘ２は、Ｃ、ＰまたはＧであり；
Ｘ５は、ＥまたはＧであり；
Ｘ１０は、ＥまたはＧである）
で示されるアミノ酸配列を含む、項目６に記載の薬剤。
【０１００】
８．ａ）アミノ酸配列ＧＤＰＮＤＧＲＧＤＳＶＶＹＧＬＲ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１３７）、ＶＤＴＹＤＧＧＩＳＶＶＹＧＬＲ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１３８）、ＶＤＴＹＤＧＤＧＳＶＶＹＧＬＲ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１３９）、ＶＤＶＰＥＧＤＩＳＬＡＹＧＬＲ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１５７）、ＬＤＧＬＶＲＡＹＤＮＩＳＰＶＧ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１５８）、ＧＤＰＮＧＤＩＳＶＶＹＧＬＲ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１５９）、ＶＤＶＰＮＧＤＩＳＬＡＹＲＬＲ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１６０）、ＶＤＶＰＥＧＤＩＳＬＡＹＲＬＲ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１６１）、Ｖ（ベータ−Ｄ）ＴＹＤＧＤＩＳＶＶＹＧＬＲ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１６７）、ＶＤＴＹ（ベータ−Ｄ）ＧＤＩＳＶＶＹＧＬＲ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１６８）、ＶＤＴＹＤＧ（ベータ−Ｄ）ＩＳＶＶＹＧＬＲ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１６９）
を含む、またはそれからなるペプチドまたはペプチド類似体と；
ｂ）発現の際にａ）のペプチドをコードするポリヌクレオチドと；
ｃ）ｂ）のポリヌクレオチドを含むベクターと；
ｄ）ｂ）のポリヌクレオチドまたはｃ）のベクターを含む細胞と、
を含む、薬剤。
【０１０１】
９．非天然由来、例えば非タンパク質原性アミノ酸残基を含む、先行項目のいずれか１つに記載の薬剤。
【０１０２】
１０．ある部分にコンジュゲートされている、先行項目のいずれか１つに記載の薬剤。
【０１０３】
１１．該部分が、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、単糖類、フルオロフォア、クロモフォア、放射性化合物、および細胞透過性ペプチドからなる群から選択される、先行項目のいずれか１つに記載の薬剤。
【０１０４】
１２．グリコシル化されることなど、またはＰＥＧ化、アミド化、エステル化、アシル化、アセチル化および／もしくはアルキル化により、さらに修飾されている、先行項目のいずれか１つに記載の薬剤。
【０１０５】
１３．タンデムリピートを含む、またはそれからなる、先行項目のいずれか１つに記載の薬剤。
【０１０６】
１４．該タンデムリピートが、先行項目に記載の配列の任意の１つまたは複数のアミノ酸配列を含む、またはそれからなる、先行項目のいずれか１つに記載の薬剤。
【０１０７】
１５．別のポリペプチドに融合されている、先行項目のいずれかに記載の薬剤。
【０１０８】
１６．上記ポリペプチドが、グルタチオン−Ｓ−トランスフェラーゼ（ＧＳＴ）およびプロテインＡからなる群から選択される、先行項目のいずれか１つに記載の薬剤。
【０１０９】
１７．タグに融合されている、先行項目のいずれかに記載の薬剤。
【０１１０】
１８．上記タグが、オリゴ−ヒスチジンタグである、先行項目のいずれか１つに記載の薬剤。
【０１１１】
１９．該ペプチドが環状であるなど、該薬剤が環状である、先行項目のいずれかに記載の薬剤。
【０１１２】
２０．該ペプチドまたはペプチド類似体が、例えば環状または部分環状ペプチドを形成するように、少なくとも１つの分子内システイン架橋を形成することができる、先行項目のいずれかに記載の薬剤。
【０１１３】
２１．該ペプチドまたはペプチド類似体が、ＫＣＬＡＥＣＤＳＩＥＬＳＹＧＩＫ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１４１）、ＣＬＡＥＩＤＳＣ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１４２）、ＣＦＫＰＬＡＥＩＤＳＩＥＣＳＹＧＩＫ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１４３）、ＫＰＬＡＥＤＩＳＩＥＬＳＹＧＩＫ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１４５）、ＫＰＬＡＥＩＧＤＩＥＬＳＹＧＩＫ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１４６）、ＫＰＬＡＥＧＤＩＥＬＳＹＧＩＫ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１４７）、ＫＰＬＡＥＩＥＬＳＹＧＩＫ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１４８）、ＫＰＬＡＥＩＤＳＩＥＬＴＹＧＩＫ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１４９）、ＫＰＬＡＥＩＤＧＩＥＬＳＹＧＩＫ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１５０）、ＫＰＬＡＥＩＤＧＩＥＬＴＹＧＩＫ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１５１）、ＫＰＬＡＥＩＧＳＩＥＬＳＹＧＩＫ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１５２）、ＫＧＬＡＥＩＤＳＩＥＬＳＹＧＩＫ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１５３）、ＫＰＬＡＧＩＤＳＩＧＬＳＹＧＩＫ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１５４）、ＫＣＬＡＥＩＤＳＣＥＬＳＹＧＩＫ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１５５）およびＣＦＫＰＬＡＥＩＤＳＩＥＣ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１５６）、またはそれらの変異体もしくは断片からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む、またはそれからなる、先行項目のいずれかに記載の薬剤。
【０１１４】
２２．該ペプチドまたはペプチド類似体が、アミノ酸配列ＫＰＬＡＥＩＤＳＩＥＬＳＹＧＩＫ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１３６）、またはそれらの変異体もしくは断片を含む、またはそれからなる、先行項目のいずれかに記載の薬剤。
【０１１５】
２３．該ペプチドまたはペプチド類似体が、アミノ酸配列ＫＰＬＡＧＩＤＳＩＧＬＳＹＧＩＫ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１５４）、またはそれらの変異体もしくは断片を含む、またはそれからなる、先行項目のいずれかに記載の薬剤。
【０１１６】
２４．該ペプチドまたはペプチド類似体が、アミノ酸配列ＫＧＬＡＥＩＤＳＩＥＬＳＹＧＩＫ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１５３）、またはそれらの変異体もしくは断片を含む、またはそれからなる、先行項目のいずれかに記載の薬剤。
【０１１７】
２５．該ペプチドまたはペプチド類似体が、アミノ酸配列ＫＣＬＡＥＣＤＳＩＥＬＳＹＧＩＫ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１４１）、またはそれらの変異体もしくは断片を含む、またはそれからなる、先行項目のいずれかに記載の薬剤。
【０１１８】
２６．該ペプチドまたはペプチド類似体が、アミノ酸配列ＫＰＬＡＥＩＤＧＩＥＬＴＹＧＩＫ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１５１）、またはそれらの変異体もしくは断片を含む、またはそれからなる、先行項目のいずれかに記載の薬剤。
【０１１９】
２７．該ペプチドまたはペプチド類似体が、アミノ酸配列ＫＰＬＡＥＩＧＳＩＥＬＳＹＧＩＫ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１５２）、またはそれらの変異体もしくは断片を含む、またはそれからなる、先行項目のいずれかに記載の薬剤。
【０１２０】
２８．該ペプチドまたはペプチド類似体が、アミノ酸配列ＫＰＬＡＥＩＥＬＳＹＧＩＫ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１４８）、またはそれらの変異体もしくは断片を含む、またはそれからなる、先行項目のいずれかに記載の薬剤。
【０１２１】
２９．該変異体が、任意の１つのアミノ酸が別のタンパク質原性または非タンパク質原性アミノ酸で改変されている配列を含む、またはそれからなるが、条件として、５を超えないアミノ酸がそのように改変されている、先行項目のいずれか１つに記載の薬剤。
【０１２２】
３０．該変異体が、４を超えないアミノ酸、３を超えないアミノ酸、２を超えないアミノ酸、１を超えないアミノ酸が改変されているなど、５を超えないアミノ酸が、別のタンパク質原性または非タンパク質原性アミノ酸で改変されている配列を含む、またはそれからなる、先行項目のいずれか１つに記載の薬剤。
【０１２３】
３１．１つまたは複数のアミノ酸が、保存的に置換されている、先行項目のいずれか１つに記載の薬剤。
【０１２４】
３２．該ペプチドまたはペプチド類似体が、該配列のＮ−および／もしくはＣ−末端で、ならびに／または内部に挿入された、１つまたは複数の追加のアミノ酸を含む、またはそれからなる、先行項目のいずれか１つに記載の薬剤。
【０１２５】
３３．該ペプチドまたはペプチド類似体が、Ｎ−またはＣ−末端のいずれかにコンジュゲートされた１つの追加のアミノ酸を含む、先行項目のいずれか１つに記載の薬剤。
【０１２６】
３４．８０を超えない、７５を超えない、７０を超えない、６５を超えない、６０を超えない、５５を超えない、５０を超えない、５５を超えない、４０を超えない、３５を超えない、３０を超えない、２８を超えない、２６を超えない、２４を超えない、２２を超えない、２０を超えない、１９を超えない、１８を超えない、１７を超えない、１６を超えない、１５を超えない、１４を超えない、１３を超えない、１２を超えない、１１を超えない、１０を超えないアミノ酸など、８５を超えないアミノ酸を含む、先行項目のいずれかに記載の薬剤。
【０１２７】
３５．該ペプチドのＮ−またはＣ−末端にコンジュゲートされた。少なくとも３、少なくとも４、少なくとも５、少なくとも６、少なくとも７、少なくとも８、少なくとも９、少なくとも１０、少なくとも１５、または少なくとも２０のアミノ酸など、少なくとも２の追加のアミノ酸を含む、先行項目のいずれか１つに記載の薬剤。
【０１２８】
３６．  検出可能な部分をさらに含む、先行項目のいずれかに記載の薬剤。
【０１２９】
３７．該検出可能な部分が、放射性同位体を含む、またはそれからなる、先行項目のいずれかに記載の薬剤。
【０１３０】
３８．該放射性同位体が、９９ｍＴｃ、１１１Ｉｎ、６７Ｇａ、６８Ｇａ、７２Ａｓ、８９Ｚｒ、１２３Ｉおよび２０１Ｔｌからなる群から選択される、先行項目のいずれかに記載の薬剤。
【０１３１】
３９．該検出可能な部分が、ＳＰＥＣＴ、ＰＥＴ、ＭＲＩ、光学または超音波造影などの造影技術により検出可能である、先行項目のいずれかに記載の薬剤。
【０１３２】
４０．個体における膵臓の疾患、障害または損傷の診断のための診断性組成物の調製のための、先行項目のいずれかに記載の薬剤の使用。
【０１３３】
４１．先行項目のいずれかに記載の薬剤を含む組成物。
【０１３４】
４２．医薬組成物である、先行項目のいずれか１項に記載の組成物。
【０１３５】
４３．医薬としての使用のための、先行項目のいずれか１項に記載の薬剤または組成物。
【０１３６】
４４．哺乳動物の内分泌性疾患、栄養性疾患および／または代謝性疾患の処置における使用のための、
ａ）（ｉ）一般式：
ＫＸ２ＬＡＸ５Ｘ６Ｘ７Ｘ８ＩＸ１０ＬＸ１２ＹＧＩＫ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１４０）
で示されるアミノ酸配列を含む、またはそれからなるペプチド
（式中、
Ｘ２は、Ｃ、ＰまたはＧであり；
Ｘ５は、ＥまたはＧであり；
Ｘ６は、Ｃ、ＤまたはＩであり；
Ｘ７は、Ｄ、Ｉ、ＳまたはＧであり；
Ｘ８は、Ｓ、ＤまたはＧであり；
Ｘ１０は、ＥまたはＧであり；
Ｘ１２は、ＳまたはＴであるが、
条件として、Ｘ１２が、Ｔであれば、該ペプチドが、２５を超えないアミノ酸残基を含む）；
またはＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１４０で示される生物活性断片および／もしくは変異体；
（ｉｉ）一般式：
ＶＤＺ３Ｚ４Ｚ５ＧＺ７Ｚ８ＳＺ１０Ｚ１１ＹＧＬＲ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：６８）
で示されるアミノ酸配列を含む、またはそれからなるペプチド
（式中、
Ｚ３は、ＴまたはＶであり；
Ｚ４は、ＹまたはＰであり；
Ｚ５は、ＤまたはＮであり；
Ｚ７は、ＤまたはＧであり；
Ｚ８は、ＩまたはＧであり；
Ｚ１０は、ＶまたはＬであり；
Ｚ１１は、ＶまたはＡである）：
からなる群から選択されるペプチドと；
ｂ）発現の際にａ）のペプチドをコードするポリヌクレオチドと；
ｃ）ｂ）のポリヌクレオチドを含むベクターと；
ｄ）ｂ）のポリヌクレオチドまたはｃ）のベクターを含む細胞と、
からなる群から選択される、薬剤。
【０１３７】
４５．該ペプチドが、ＫＣＬＡＥＣＤＳＩＥＬＳＹＧＩＫ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１４１）、ＣＬＡＥＩＤＳＣ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１４２）、ＣＦＫＰＬＡＥＩＤＳＩＥＣＳＹＧＩＫ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１４３）、ＫＰＬＡＥＩＥＬＳＹＧＩＫ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１４８）、ＫＣＬＡＥＩＤＳＣＥＬＳＹＧＩＫ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１５５）、およびＣＦＫＰＬＡＥＩＤＳＩＥＣ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１５６）からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む、またはそれからなる、項目４４に記載の使用のための薬剤または組成物。
【０１３８】
４６．該ペプチドが、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１４１、１４２、１４３、１４４、１４５、１４６、１４７、１４８、１４９、１５０、１５１、１５２、１５３、１５４、１５５、および１５６からなる群から選択される、先行項目のいずれか１つに記載の使用のための薬剤または組成物。
【０１３９】
４７．該ペプチドが、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１、１３６、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６７、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９、１００、１０１、１０２、１０３、１０４、１０５、１０６、１０７、１０８、１０９、１１０、１１１、１１２、１１３、１１４、１１５、１１６、１１７、１１８、１１９、１２０、１２１、１２２、１２３、１２４、１２５、１２６、１２７、１２８、１２９、１３０、１３１、１３２、１３３、１３５、１３７、１３８、１３９、１５７、１５８、１５９、１６０、１６１、１６７、１６８および１６９からなる群から選択される、先行項目のいずれか１つに記載の使用のための薬剤または組成物。
【０１４０】
４８．上記薬剤が、第二の、またはさらなる有効成分を含む、先行項目のいずれか１つに記載の使用のための薬剤または組成物。
【０１４１】
４９．該第二の、またはさらなる有効成分が、インスリン、グルカゴン様ペプチド−１（ＧＬＰ−１）、スルホニル尿素、ジペプチジルペプチダーゼ−４（ＤＰＰ４）阻害剤、アルファ−グルコシダーゼ阻害剤、チアゾリジンジオン、メグリチジンおよびナトリウム・グルコースコトランスポータ−２（ＳＧＬＴ２）阻害剤からなる群から選択される、項目４８に記載の使用のための薬剤または組成物。
【０１４２】
５０．哺乳動物における内分泌性疾患、栄養性疾患および／または代謝性疾患の処置における使用のための、先行項目のいずれかに記載の使用のための薬剤または組成物。
【０１４３】
５１．該哺乳動物が、ヒトである、項目５０に記載の使用のための薬剤または組成物。
【０１４４】
５２．該内分泌性疾患、栄養性疾患および／または代謝性疾患が、糖尿病、１型糖尿病、２型糖尿病、栄養不良関連糖尿病、グルコース調節および膵臓内分泌の障害、インスリン抵抗性症候群、耐糖能障害、高血糖症、高インスリン血症、およびそれらの任意の組み合わせからなる群から選択される、先行項目のいずれか１つに記載の使用のための薬剤または組成物。
【０１４５】
５３．該内分泌性疾患、栄養性疾患および／または代謝性疾患が、糖尿病、甲状腺の障害、グルコース調節および膵臓内分泌の障害、内分泌腺の障害、栄養不良、栄養欠乏症、肥満、過栄養、ならびに代謝障害からなる群から選択される、先行項目のいずれか１つに記載の使用のための薬剤または組成物。
【０１４６】
５４．該糖尿病が、１型糖尿病、２型糖尿病、栄養不良関連糖尿病、特定された糖尿病、および特定されていない糖尿病からなる群から選択される、先行項目のいずれか１つに記載の使用のための薬剤または組成物。
【０１４７】
５５．該グルコース調節および膵臓内分泌の障害が、非糖尿病性低血糖性昏睡および膵臓内分泌の障害からなる群から選択される、先行項目のいずれか１つに記載の使用のための薬剤または組成物。
【０１４８】
５６．該肥満および過栄養の障害が、局在化された脂肪症、過栄養、および過栄養の続発症からなる群から選択される、先行項目のいずれか１つに記載の使用のための薬剤または組成物。
【０１４９】
５７．該栄養欠乏症の障害が、芳香族アミノ酸代謝の障害、分枝鎖アミノ酸代謝および脂肪酸代謝の障害、アミノ酸代謝の障害、ラクトース不耐性、炭水化物代謝の障害、スフィンゴリピド代謝の障害、脂質蓄積障害、グリコサミノグリカン代謝の障害、糖タンパク質代謝の障害、リポタンパク質代謝の障害、脂肪血症、プリンおよびピリミジン代謝の障害、ポルフィリンおよびビリルビン代謝の障害、ミネラル代謝の障害、嚢胞性線維症、アミロイドーシス、体液量減少、体液、電解質および酸・塩基平衡の障害、ならびに処置後内分泌および代謝障害からなる群から選択される、先行項目のいずれか１つに記載の使用のための薬剤または組成物。
【０１５０】
５８．先行項目のいずれか１つに記載の薬剤を必要とする対象に投与することを含む、内分泌性疾患、栄養性疾患および／または代謝性疾患を処置する方法。
【０１５１】
５９．哺乳動物における内分泌性疾患、栄養性疾患および／または代謝性疾患の処置における使用のための医薬の製造のための、先行項目のいずれか１つに記載の薬剤の使用。
【０１５２】
６０．先行項目のいずれか１つに記載の薬剤の治療有効量を必要とする個体に投与することを含む、糖尿病、ならびに糖尿病関連の障害および疾患の発病を遅延させるための方法。
【０１５３】
６１．先行項目のいずれか１つに記載の薬剤の治療有効量を必要とする個体に投与することを含む、血中グルコースレベルを低下させるための方法。
【０１５４】
６２．該インスリン分泌が、増加される、項目６１に記載の方法。
【０１５５】
６３．該グルコースの細胞内取り込みが、増加される、項目６１に記載の方法。
【０１５６】
６４．該インスリン産生が、増加される、項目６１に記載の方法。
【０１５７】
６５．該グルカゴン産生が、減少される、項目６１に記載の方法。
【０１５８】
６６．先行項目のいずれか１つに記載の薬剤の治療有効量を必要とする個体に投与することを含む、ベータ細胞の生存性を改善するための方法。
【０１５９】
６７．先行項目のいずれか１つに記載の薬剤の治療有効量を必要とする個体に投与することを含む、ベータ細胞の形態を改善するための方法。
【０１６０】
６８．先行項目のいずれか１つに記載の薬剤の治療有効量を必要とする個体に投与することを含む、膵島の生存性および／または形態を安定化または改善するための方法。
【０１６１】
実施例
本開示は、以下の実施例によりさらに示されるが、実施例は本開示を限定するものと解釈されてはならない。これらの実施例は、本開示の模範的ペプチドがβ細胞増殖を刺激し、糖毒性条件により誘導されたアポトーシスからβ細胞を防御および救済する能力を有することを実証している。模範的ペプチドがラットβ細胞および単離されたマウス膵島からのインスリン分泌を刺激する能力を有することも実証され、該ペプチドがグルカゴンレベルを低下させることも実証される。さらに実施例は、該ペプチドが耐糖能テストにおいてインビボで血漿グルコースレベルを低下させること、および該ペプチドがＢＢ  ｌｙｐ／ｌｙｐラットにおける１型糖尿病の発病を遅延させることを実証している。
【０１６２】
実施例１：ペプチドの設計
新規なペプチドを、以下の合理的な構造活性研究に従って設計した。ＦＯＬ−００５（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１）では、該ペプチドを、ＲＧＤ部位周辺で設計したが、潜在的に異なるインテグリンと相互作用する可能性がある異なる構造を作製するために突然変異させた。ＦＯＬ−００５と類似の配列が、テネイシンＣにおける第三のフィブロネクチンＩＩＩ型リピートドメイン（ＴＮｆｎ３）において同定され、ＦＯＬ−００５の突然変異ＲＧＤ部位と適度に類似していることが見出された。１つのペプチドをこの配列から設計し、ＦＯＬ−０１４で表した。テネイシン３  ＴＮｆｎ３ドメインのＸ線結晶構造（ＰＤＢ  ｃｏｄｅ  １  ＴＥＮ、Ｌｅａｈｙ  ｅｔ  ａｌ．  （１９９２）  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２５８（５０８４）：９８７−９１）を解析した。ＦＯＬ−０１４（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１３６）配列は、βターンの前および３番目のベータシート全体に広がる。ＦＯＬ−０１４変異体を設計して、三次元分子構造の構造的修飾および安定化を可能にした。具体的には該ペプチド変異体は、ベータターン領域が露出した側鎖および幾つかの環状変異体で覆われていて、幾何学的構造が維持されていた。
【０１６３】
ペプチドは全て、複数のペプチド製造業者を利用して固相ペプチド合成により合成された。主に該ペプチド変異体は、カリフォルニア所在のＢｉｏｐｅｐｔｉｄｅ  Ｉｎｃ．により提供された。
【０１６４】
実施例２：ＦＯＬ−００５およびＦＯＬ−０１４はＩＮＳ−１細胞の増殖を誘導した
ＦＯＬ−００５およびＦＯＬ−０１４が、β細胞の増殖を誘導し得るか否かを検討するために、本発明者らは、ＩＮＳ−１細胞を用いた。ラットＩＮＳ−１細胞を、補充されたＲＰＭＩ培地中で９６ウェルプレートに播種し、２時間後に培地を補充のないＲＰＭＩに交換した。
【０１６５】
増殖実験の際に、細胞を異なるテスト条件（ＦＯＬ−００５、ＦＯＬ−０１４、コーティングあり、または溶液中、４８時間インキュベーション）でインキュベートし、培養期間の最後の２０時間に、細胞を１μＣｉ／ウェル［メチル−３Ｈ］チミジンでパルス標識した。その後、細胞を、ＦｉｌｔｅｒＭａｔｅハーベスターを使用してガラス繊維フィルター上に回収した。フィルターを風乾し、結合した放射能を、液体シンチレーションカウンターを用いて測定した。ＦＯＬ−００５がβ細胞増殖に影響を及ぼすか否かを試験するために、ＩＮＳ−１細胞を増加量の可溶性ＦＯＬ−００５（０．０６〜６μＭ）で４８時間処置し、増殖を、新たに合成されたＤＮＡへの放射能標識チミジン取り込みで測定した。ＦＯＬ−００５は、ＩＮＳ−１細胞の増殖を刺激した（図１Ａ）。ＦＯＬ−００５またはＦＯＬ−０１４のいずれかをコーティングされ、後にウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）でブロックされ、その後、ＩＮＳ−１細胞を添加されたウェルもまた、対照（Ｃｔｒｌ）コーティングウェルに比較して増殖を刺激した（図１Ｂ〜Ｃ）。
【０１６６】
これにより、ＦＯＬ−００５およびＦＯＬ−０１４がβ細胞と相互作用し、増殖を誘導することが実証された。
【０１６７】
実施例３：ＦＯＬ−００５は糖毒性からのβ細胞を防御した
膵臓β細胞における糖毒性は、２型糖尿病の確立されたプロセスであるため、本発明者らは次に、糖毒性条件でのβ細胞に及ぼすＦＯＬ−００５の防御効果を検討した。最初に本発明者らは、２０ｍＭグルコースが４８時間暴露後にＩＮＳ細胞において細胞アポトーシスを誘導することを確認した。高グルコース（２０ｍＭ）含有ＲＰＭＩ培地は、５ｍＭグルコースを含有する培地とインキュベートされた細胞に比較して、ＩＮＳ細胞においてより多くのアネキシンＶ陽性細胞およびより大きなカスパーゼ−３活性を誘導した（図２Ａ〜Ｂ）。ＦＯＬ−００５と同時間での２０ｍＭグルコースへのＩＮＳ−１細胞の暴露は、アネキシンＶ染色およびカスパーゼ−３活性の両方の検出で細胞アポトーシスを減少させた（図２Ａ〜Ｂ）。ＩＮＳ−１細胞におけるアポトーシスの割合は、カスパーゼ−３アッセイキットで測定するか、またはアネキシンＶアポトーシス検出キットおよび７−ＡＡＤで染色した。カスパーゼ−３活性は、３８０ｎｍの励起波長および４４０ｎｍの発光波長での蛍光により測定した。その後、カスパーゼ−３活性を、各ウェルのタンパク質濃度に正規化した。アネキシンＶ染色細胞の測定は、ＣｙＡｎ  ＡＤＰフローサイトメーターを利用して実施し、Ｓｕｍｍｉｔ  Ｖ４．３ソフトウエアで解析した。
【０１６８】
結論として、糖毒性がβ細胞アポトーシスを誘導することは周知であるが、ＦＯＬ−００５の存在下では、糖毒性誘導性アポトーシスが低減された。
【０１６９】
実施例４：ＦＯＬ−００５はＩＮＳ−１細胞からのインスリン分泌を誘導した
インスリン分泌に及ぼすＦＯＬ−００５の刺激性効果を検討するために、ＩＮＳ−１  β細胞を以下の実験に用いた。細胞をｃＲＰＭＩ中に一晩、播種し、その後、ＰＢＳで洗浄して、１０ｍＭ  ＨＥＰＥＳ、０．１％ウシ血清アルブミンを補充されたクレブス・リンゲル重炭酸緩衝液（ＫＲＢ）（ｐＨ７．４）中、３７℃で６０分間プレインキュベートした。プレインキュベーションの後、緩衝液を交換して、ＩＮＳ−１細胞を異なるテスト条件（０ｍＭ、５ｍＭまたは２０ｍＭグルコース）でインキュベートして、３７℃で６０分間、ペプチドＦＯＬ−００５もしくはＦＯＬ−０１５（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１５８）で刺激するか、または未処置のまま放置した。インキュベーションの直後に、該緩衝液のアリコットを取り出して、インスリンラジオイムノアッセイキットを用いた次のインスリンアッセイのために凍結した。
【０１７０】
結果から、ＦＯＬ−００５ペプチドで刺激されたβ細胞は、グルコース不含の条件下で、未刺激の対照細胞またはＦＯＬ−０１５対照ペプチドで刺激された細胞に比較してより多くのインスリンを分泌することが実証された（図３Ａ）。グルコース（５ｍＭまたは２０ｍＭ）に供されたＩＮＳ−１  β細胞は、ＦＯＬ−００５ペプチド（６μＭ）刺激の後のインスリン分泌により応答した（図３Ｂ）。２０ｍＭグルコースの存在下、６μＭ  ＦＯＬ−００５ペプチドで刺激されたＩＮＳ−１細胞は、５ｍＭグルコースと共にインキュベートされたＦＯＬ−００５刺激細胞に比較してより多くのインスリン分泌により応答した（図３Ｂ）。
【０１７１】
実施例５：ＦＯＬ−００５はマウス膵島からのインスリン分泌を誘導した
マウス膵島を、８週齢Ｃ５７ＢＬ／６Ｊ雄マウス（Ｔａｃｏｎｉｃ）から単離した。マウスを過剰用量のイソフルランおよび頸椎脱臼により殺処分した。０．９Ｕ／ｍｌコラーゲナーゼＰ  ３ｍｌを膵管に注射して、膵臓を膨張させた。その後、膵臓を取り出し、コラーゲンを３７℃で１９分間消化させた。試料を激しく振とうして、組織を破壊した。消化物を、Ｃａ２＋およびＭｇ２＋を含む氷冷ハンクス平衡塩溶液（ＨＢＳＳ）に移入した。該懸濁液を１０分間静置して膵島を沈ませ、膵島を新鮮なＨＢＳＳで４回洗浄した。その後、膵島をサイズに応じて精選および選別した。膵島（９６ウェルプレートのウェルあたりｎ＝３）を、１０ｍＭ  ＨＥＰＥＳ、０．１％ウシ血清アルブミンを補充されたＫＲＢ緩衝液（ｐＨ７．４）中、３７℃で１０分間プレインキュベートした。プレインキュベーションの後、緩衝液を交換して、膵島を、０．１％ウシ血清アルブミンを含む新しいＫＲＢ緩衝液中の異なるテスト条件（非処置Ｃｔｒｌ、ＦＯＬ−００５ペプチド、またはＧＬＰ−１）により３７℃で６０分間インキュベートした。インキュベーションの直後に、該緩衝液のアリコットを取り出して、次のインスリンアッセイのために凍結した。
【０１７２】
結果から、ＧＬＰ−１（１００ｎＭ）またはＦＯＬ−００５（６μＭ）で刺激された単離マウス膵島が、未刺激の対照膵島に比較してより多くのインスリンを分泌することが実証された（図３Ｃ）。
【０１７３】
実施例６：ＦＯＬ−０１４はＩＮＳ−１細胞からのインスリン分泌を誘導した
ＩＮＳ−１  β細胞を用いて、インスリン分泌に及ぼすＦＯＬ−０１４の刺激性効果を検討した。細胞を一晩、播種し、その後、ＰＢＳで洗浄して、１０ｍＭ  ＨＥＰＥＳ、０．１％ウシ血清アルブミンを補充されたクレブス・リンゲル重炭酸緩衝液（ＫＲＢ）（ｐＨ７．４）中、３７℃で６０分間プレインキュベートした。プレインキュベーションの後、緩衝液を交換して、ＩＮＳ−１細胞を、１０ｍＭ  ＨＥＰＥＳ、０．１％ウシ血清アルブミンを補充された新しいＫＲＢ緩衝液中でインキュベートして、３７℃で６０分間、ペプチドＦＯＬ−０１４で刺激するか、または未処置のまま放置した。インキュベーションの直後に、該緩衝液のアリコットを取り出して、次のインスリンアッセイのために凍結した。
【０１７４】
結果から、ＦＯＬ−０１４ペプチドで刺激されたβ細胞が、未刺激対照細胞に比較してより多くのインスリンを分泌することが実証された（図４Ａ）。
【０１７５】
実施例７：ＦＯＬ−０１４はマウス膵島からのインスリン分泌を誘導した
マウス膵島を、実施例５に記載された通り８週齢Ｃ５７ＢＬ／６Ｊ雄マウスから単離した。その後、膵島をサイズに応じて精選および選別した。膵島（９６ウェルプレートのウェルあたりｎ＝５）を、１０ｍＭ  ＨＥＰＥＳ、０．１％ウシ血清アルブミンを補充されたＫＲＢ緩衝液（ｐＨ７．４）２００μｌ中、３７℃で１０分間プレインキュベートした。プレインキュベーションの後、緩衝液を交換して、膵島を、０．１％ウシ血清アルブミンを含む新しいＫＲＢ緩衝液中、異なるテスト条件（非処置Ｃｔｒｌ、ＦＯＬ−０１４ペプチド、およびＧＬＰ−１）により３７℃で６０分間インキュベートした。インキュベーションの直後に、該緩衝液のアリコットを取り出して、次のインスリンアッセイのために凍結した。
【０１７６】
結果から、ＦＯＬ−０１４（６μＭ）で刺激されたマウス膵島が、未刺激対照膵島に比較してより多くのインスリンを分泌したことが示される（図４Ｂ）。ＧＬＰ−１（１００ｎＭ）またはＦＯＬ−０１４（０．６μｍ）は、インスリン分泌に影響を及ぼさなかった（図４Ｂ）。
【０１７７】
実施例８〜１１：ＦＯＬ−０１４、ＦＯＬ−００５および関連のペプチドによるＩＮＳ−１細胞株からのインスリン分泌の刺激
材料と方法：他に断りがなければ、ラットＩＮＳ−１  β細胞（６０〜７０継代）を、ｃＲＰＭＩ培地（１０％ウシ胎児血清、５０ＩＵ／ｍｌ  ペニシリン、５０ｍｇ／Ｌストレプトマイシン、１０ｍＭ  ＨＥＰＥＳ、２ｍＭ  Ｌ−グルタミン、１ｍＭ  ピルビン酸ナトリウム、および５０μＭ  ベータ−メルカプトエタノールを補充されたＲＰＭＩ１６４０）中、３７℃および５％ＣＯ２で培養した。ＩＮＳ−１細胞をｃＲＰＭＩ培地中で９６ウェルプレートに播種し（２×１０３細胞／ウェル）、一晩インキュベートした後、細胞をＰＢＳで洗浄して、１０ｍＭ  ＨＥＰＥＳ、０．１％ウシ血清アルブミンおよび２．８ｍＭグルコースを補充されたクレブス・リンゲル重炭酸緩衝液（ｐＨ７．４）中、３７℃で１２０分間プレインキュベートした。プレインキュベーションの後、緩衝液を、先に記載された通りで、以下に記載される個々の実験用の特別なグルコース濃度およびペプチドを補充された新しいクレブス・リンゲル緩衝液と交換した。３７℃で６０分間インキュベーションした直後に、該緩衝液のアリコットを取り出して、次のインスリンＥＬＩＺＡアッセイのために凍結した。
【０１７８】
実施例８．ＦＯＬ−０１４が誘導したインスリン分泌は非直線的な用量依存性である
ＩＮＳ−１細胞からのインスリン放出を、上昇濃度のＦＯＬ−０１４に暴露された後に測定して、高グルコース濃度（１６．７ｍＭ）の際のＧＬＰ−１および未処置対照の刺激性効果と比較した。テストされたＦＯＬ−０１４の濃度は全て、未処置対照と比較して有意に高いインスリン放出を誘発した。ＦＯＬ−０１４は、６ｎＭ以上では１００ｍＭ  ＧＬＰ−１と同じ範囲内のインスリン放出を惹起した。０．６〜６０ｎＭ範囲の濃度では、インスリン分泌が、ＦＯＬ−０１４濃度上昇に関係して直線的に増加した。６００ｎＭ以上のＦＯＬ−０１４濃度への暴露は、インスリン分泌を増加させなかった（図５）。
【０１７９】
結果から、ＦＯＬ−０１４がインビトロでのＩＮＳ−１  β細胞からのインスリン分泌を非直線的な用量依存性で有意に増加させることが実証された。
【０１８０】
実施例９．インスリン分泌を誘導するＦＯＬ−０１４の能力はグルコース依存性である
ＩＮＳ−１細胞からのインスリン放出を、上昇濃度のグルコースで６０ｎＭ  ＦＯＬ−０１４への暴露後に測定した。未処置対照試料では、高濃度のグルコースでは、１１．１ｍＭ以上のグルコースがインスリン分泌を増加させた。ＦＯＬ−０１４の存在下では、インスリン分泌が、既に５．５ｍＭグルコースから、グルコース依存性で有意に増加した（図６）。
【０１８１】
結果から、ＦＯＬ−０１４の存在がインビトロでのＩＮＳ−１  β細胞からのインスリン分泌をグルコース濃度依存性で有意に増加させること、およびＦＯＬ−０１４がわずかに高いグルコースレベルで効果的であることも実証された。
【０１８２】
実施例１０．ＧＬＰ−１と組み合わせたＦＯＬ−０１４またはＦＯＬ−００５はいずれかのペプチドのみと比較してインスリン分泌を増加させた
ＩＮＳ−１細胞からのインスリン分泌を、ＦＯＬ−００５、ＦＯＬ−０１４、ＧＬＰ−１、またはそれらの組み合わせへの暴露後に測定し、未処置対照に対するパーセンテージとして表した。ＧＬＰ−１とＦＯＬ−０１４の組み合わせによる効果は、ＧＬＰ−１のみまたはＦＯＬ−０１４のみよりも有意に高いインスリン放出率をもたらした。ＦＯＬ−００５とＧＬＰ−１の組み合わせによる相加的影響は、それほど顕著でなかったが、ＧＬＰ−１のみと比較してインスリン分泌を増加させた。実験は、１６．７ｍＭグルコースの存在下で実施した（図７）。
【０１８３】
結果から、ＧＬＰ−１とＦＯＬ−０１４の組み合わせが各ペプチドのみと比較して、インビトロでのＩＮＳ−１細胞からのインスリン分泌をさらに増強させ得ることが実証された。さらにＦＯＬ−００５とＧＬＰ−１の組み合わせは、インスリン分泌を傾向的に増加させた。
【０１８４】
実施例１１．膵臓β細胞株においてインスリン分泌を誘導する新規なペプチド類似体の能力を検討した
ＦＯＬ−００５またはＦＯＬ−０１４のいずれかに由来する新規なペプチド類似体を、１６．７ｍＭグルコースの存在下で２種の別個のＩＮＳ−１細胞株におけるインスリン分泌を誘導する能力に関してテストした。ＦＯＬ−００５、ＦＯＬ−０１４およびＧＬＰ−１に加え、高グルコース（１６．７ｍＭ）および低グルコース（２．８ｍＭ）対照（図示しない）を各実験に含め、ペプチド濃度は１００ｎＭであった。実験間の変動を修正するために、全ての値を、個々の実験における高グルコース対照の平均値に対して正規化し、そのパーセンテージとして表した。次に、類似体を性能に従ってランク付けした（図１１Ａおよび１１Ｂ）。高グルコース対照平均値未満のインスリン応答を誘発したペプチド類似体は、非機能的と見なされ、このため除外された（図示しない）。
【０１８５】
結果から、インビトロでのＩＮＳ−１  β細胞からのインスリン分泌を増大させる複数の新規なペプチド類似体の能力が実証された。
【０１８６】
実施例１２．ＦＯＬ−０１４はマウス由来膵島からのインスリン分泌を増加させる
１２週齢雄Ｃ５７／ｂ１６マウスを、イソフルランおよび頸椎脱臼で安楽死させた。肝管を締めた後、０．９Ｕ／ｍｌコラーゲナーゼＰ  ３ｍｌを胆管に注射して、膵臓を膨張させた。その後、膵臓を取り出して、３７℃で１９分間消化させた。試料を激しく振とうして、組織を破壊した。消化物を、Ｃａ２＋およびＭｇ２＋を含む氷冷ハンクス平衡塩溶液に迅速に移し入れた。懸濁液を８分間静置して膵島を沈ませ、膵島を同じ手法で４回洗浄した。その後、膵島を、サイズに応じて精選および選別した。
【０１８７】
単離されたばかりの膵島を、９６ウェルプレート内の５の群に播種し、クレブス・リンゲル重炭酸緩衝液（ｐＨ７．４）中、３７℃で１時間プレインキュベートした。膵島を、０．６もしくは６μＭのＦＯＬ−０１４、または１００ｎＭ  ＧＬＰ−１を補充された、あるいは対照として補充されないままのクレブス・リンゲル緩衝溶液中、３７℃で１時間インキュベートした。インキュベーションの直後に、培地を、ＭｅｒｃｏｄｉａのＥＬＩＳＡキットを利用したインスリンおよびグルカゴンのアッセイ用に取り出した。単離されたマウス膵島からのインスリン（図８ＡおよびＢ）およびグルカゴン（図８ＣおよびＤ）分泌に及ぼすＦＯＬ−０１４の影響を、低グルコース（２．８ｍＭ；図８ＡおよびＣ）または高グルコース（１６．７ｍＭ；図８ＢおよびＤ）濃度の存在下で測定した。ＦＯＬ−０１４の有意な影響が、インスリンについては高グルコースの存在下で、そしてグルカゴンについては高および低の両方のグルコースの存在下で観察された。ＦＯＬ−０１４の影響は、ＧＬＰ−１と異なっており、低グルコース試料でもインスリン分泌を増大させたが、グルカゴン分泌は低グルコース条件では阻害できなかった。
【０１８８】
結果から、ＦＯＬ−０１４が膵島におけるインスリン分泌を増大し、グルカゴン分泌を阻害することが実証された。
【０１８９】
実施例１３．ＦＯＬ−０１４はマウスにおける腹腔内耐糖能テスト（ＩＰＧＴＴ）において血漿グルコースレベルを低下させた
全血を、グルコースおよびインスリン測定のために、１０週齢野生型雄Ｃ５７ｂ１／６マウスから採取した。マウスを、４時間の絶食後に３群に分類し、生理食塩水、３０ｎｍｏｌ／ｋｇペプチド（図９Ａ）または２００ｎｍｏｌ／ｋｇペプチド（図９Ｂ）のいずれかの腹腔内注射（ｉｐ）を与えた。ＦＯＬ−０１４または生理食塩水（対照）注射の１５分後に、マウスに２ｇグルコース／ｋｇをｉｐにより投与した。血中グルコース濃度を、グルコース注射後５、１５、３０、４５および６０分目に測定した。統計計算は、スチューデントｔ検定を利用して実施した。２００ｎｍｏｌ／ｋｇ用量のＦＯＬ−０１４は、血漿グルコースレベルを曲線下面積として測定された場合に、対照に比較して有意に低下させた。加えて、その差は、１５、３０および４５分目に有意であった。３０ｎｍｏｌ／ｋｇ用量では、ＦＯＬ−０１４は、血漿グルコースレベルを低下させ、グルコース注射後４５分後に有意な影響を示した。
【０１９０】
結果から、ＦＯＬ−０１４が健常野生型マウスで実施された耐糖能テストにおいて血漿グルコースレベルを低下し得ることが実証された。
【０１９１】
実施例１４．ＦＯＬ−０１４はＢＢ  ｌｙｐ／ｌｙｐラットにおい１型糖尿病の発病を遅延させた
ＢＢ  ｌｙｐ／ｌｙｐラットを、血漿グルコースレベル≧１１．１ｍＭとして定義された１型糖尿病の発病までの、４０日目から週３回のプラセボ（塩化ナトリウム、９ｍｇ／ｍｌ）またはＦＯＬ−０１４処置のために無作為化した。生理食塩水中の１００ｎｍｏｌ／ｋｇ用量のＦＯＬ−０１４ペプチドまたはプラセボ（生理食塩水）を皮下投与して、動物が限界の血漿グルコースレベルを超えたら、直ちに中止した。ＦＯＬ−０１４処置動物とプラセボ処置を受けた動物の間の差は、１型糖尿病の発病の平均齢として表した場合（図１０Ａ）、および１日あたりの１型糖尿病発症動物のパーセンテージとして記載された場合に（図１０Ｂ）の両方で有意であった。
【０１９２】
結果から、ＦＯＬ−０１４処置がＢＢ  ｌｙｐ／ｌｙｐラットにおける１型糖尿病の発病を有意に遅延させることが実証された。
【０１９３】
実施例１５．ＦＯＬ−００５およびＦＯＬ−０１４はマウスにおいて臓器特異的分布パターンを示した
Ｃ５７Ｂｌ／６マウスに、Ｈ３標識ＦＯＬ−００５を皮下注射し、注射後１時間目（図１２Ａ）または２時間目（図１２Ｂ）に安楽死させた。全身を区分した後、標識されたペプチドの分布を視覚化した。強い結合が、膵臓および注射部位で明らかとなった。Ｐｅａｒｌ  Ｔｒｉｌｏｇｙ  Ｓｍａｌｌ  Ａｎｉｍａｌ  Ｉｍａｇｉｎｇ  Ｓｙｓｔｅｍを用いて、皮下注射によるＮＭＲＩヌードマウスにおける２種のＣｙ７．５標識ペプチドＦＯＬ−００５（図１２Ｃ）およびＦＯＬ−０１４（図１２Ｄ）のインビボ生体分布および組織局在化を検討した。高度のペプチド蓄積が、膵臓組織エリアで明らかとなった。同じ分布パターンが、ｉ．ｖ．投与後に見出された（図示しない）。各ペプチドの用量は、１０ｎｍｏｌ／マウスであった。マウスを、標識ペプチドの注射前、投与後５分目、２０分目、５０分目、６０分目、２時間目、４時間目、６時間目、２４時間目および４８時間目に造影した。
【０１９４】
実施例１６．診断利用のための組織特異的造影
本明細書の先に定義された通り調製された薬剤を、当業者に公知の方法を利用した適切な造影プローブまたは部分へのコンジュゲーションにより標識する。コンジュゲートされたペプチドプローブ剤を、次に対象に投与して、次に生体分布を例えば投与後４８時間まで、モニタリングする。コンジュゲート化された薬剤を、こうして膵臓状態の検討のための診断または予知ツールとして用いる。そのため、該コンジュゲート化された薬剤は、疾患、疾患のプロセスおよび進行、感受性を検出、診断、またはモニタリングするのに、そして処置の有効性を計測するのに適する。該薬剤は、対象の糖尿病状態をモニタリングするのに特に適する。該コンジュゲート化された薬剤はまた、疾患、具体的には糖尿病をモニタリングするため、そして／またはその発症リスクを予測するために用いられる。該テストは、単独で、または血液テスト、遺伝子検査、尿テスト、および生検などの当業者に公知の他のテストと共に用いられる。
【０１９５】
実施例１７：配列の概要
【表１】
2020518556.tif 000008
2020518556.tif 000009
2020518556.tif 000010
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2020518556.tif 000014
【図１】
2020518556.tif 000015
【図２】
2020518556.tif 000016
【図３】
2020518556.tif 000017
【図４】
2020518556.tif 000018
【図５】
2020518556.tif 000019
【図６】
2020518556.tif 000020
【図７】
2020518556.tif 000021
【図８−１】
2020518556.tif 000022
【図８−２】
2020518556.tif 000023
【図８−３】
2020518556.tif 000024
【図８−４】
2020518556.tif 000025
【図９−１】
2020518556.tif 000026
【図９−２】
2020518556.tif 000027
【図１０−１】
2020518556.tif 000028
【図１０−２】
2020518556.tif 000029
【図１１−１】
2020518556.tif 000030
【図１１−２】
2020518556.tif 000031
【図１２】
2020518556.tif 000032
【配列表】
2020518556000001.app
【手続補正書】
【提出日】令和1年6月4日(2019.6.4)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ａ）アミノ酸配列ＫＰＬＡＥＩＤＳＩＥＬＳＹＧＩＫ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１３６）、ＫＣＬＡＥＣＤＳＩＥＬＳＹＧＩＫ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１４１）、ＫＰＬＡＥＤＩＳＩＥＬＳＹＧＩＫ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１４５）、ＫＰＬＡＥＩＧＤＩＥＬＳＹＧＩＫ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１４６）、ＫＰＬＡＥＩＤＳＩＥＬＴＹＧＩＫ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１４９）、ＫＰＬＡＥＩＤＧＩＥＬＳＹＧＩＫ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１５０）、ＫＰＬＡＥＩＤＧＩＥＬＴＹＧＩＫ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１５１）、ＫＰＬＡＥＩＧＳＩＥＬＳＹＧＩＫ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１５２）、ＫＧＬＡＥＩＤＳＩＥＬＳＹＧＩＫ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１５３）、ＫＰＬＡＧＩＤＳＩＧＬＳＹＧＩＫ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１５４）、ＣＬＡＥＩＤＳＣ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１４２）、ＣＦＫＰＬＡＥＩＤＳＩＥＣＳＹＧＩＫ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１４３）、ＫＰＬＡＥＧＤＩＥＬＳＹＧＩＫ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１４７）、ＫＰＬＡＥＩＥＬＳＹＧＩＫ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１４８）、ＫＣＬＡＥＩＤＳＣＥＬＳＹＧＩＫ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１５５）、およびＣＦＫＰＬＡＥＩＤＳＩＥＣ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１５６）を含む、またはそれからなるペプチドまたはペプチド類似体と；
ｂ）発現の際にａ）のペプチドをコードするポリヌクレオチドと；
ｃ）ｂ）のポリヌクレオチドを含むベクターと；
ｄ）ｂ）のポリヌクレオチドまたはｃ）のベクターを含む細胞と、
を含む、薬剤。
【請求項２】
前記ペプチドまたはペプチド類似体が、一般式：
ＫＸ２ＬＡＸ５Ｘ６Ｘ７Ｘ８ＩＸ１０ＬＳＹＧＩＫ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１６２）
（式中、
Ｘ２は、Ｃ、ＰまたはＧであり；
Ｘ５は、ＥまたはＧであり；
Ｘ６は、Ｃ、Ｉまたは非存在であり；
Ｘ７は、Ｄ、Ｇまたは非存在であり；
Ｘ８は、Ｓ、Ｇまたは非存在であり；
Ｘ１０は、ＥまたはＧである）
で示されるアミノ酸配列を含む、請求項１に記載の薬剤。
【請求項３】
８０を超えない、７５を超えない、７０を超えない、６５を超えない、６０を超えない、５５を超えない、５０を超えない、５５を超えない、４０を超えない、３５を超えない、３０を超えない、２８を超えない、２６を超えない、２４を超えない、２２を超えない、２０を超えない、１９を超えない、１８を超えない、１７を超えない、１６を超えない、１５を超えない、１４を超えない、１３を超えない、１２を超えない、１１を超えない、１０を超えないアミノ酸など、８５を超えないアミノ酸を含む、先行請求項のいずれかに記載の薬剤。
【請求項４】
前記ペプチドのＮ−またはＣ−末端にコンジュゲートされた、少なくとも３、少なくとも４、少なくとも５、少なくとも６、少なくとも７、少なくとも８、少なくとも９、少なくとも１０、少なくとも１５、または少なくとも２０のアミノ酸など、少なくとも２の追加のアミノ酸を含む、先行請求項のいずれか１項に記載の薬剤。
【請求項５】
非天然由来である、先行請求項のいずれか１項に記載の薬剤。
【請求項６】
ある部分にコンジュゲートされている、先行請求項のいずれか１項に記載の薬剤。
【請求項７】
前記部分が、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、単糖類、フルオロフォア、クロモフォア、放射性化合物、および細胞透過性ペプチドからなる群から選択される、請求項６に記載の薬剤。
【請求項８】
グリコシル化されることなど、またはＰＥＧ化、アミド化、エステル化、アシル化、アセチル化および／もしくはアルキル化により、さらに修飾されている、先行請求項のいずれか１項に記載の薬剤。
【請求項９】
タンデムリピートを含む、またはそれからなる、先行請求項のいずれか１項に記載の薬剤。
【請求項１０】
前記タンデムリピートが、先行請求項に記載の配列の任意の１つまたは複数のアミノ酸配列を含む、またはそれからなる、請求項９に記載の薬剤。
【請求項１１】
別のポリペプチドに融合されている、先行請求項のいずれかに記載の薬剤。
【請求項１２】
前記ポリペプチドが、グルタチオン−Ｓ−トランスフェラーゼ（ＧＳＴ）およびプロテインＡからなる群から選択される、請求項１１に記載の薬剤。
【請求項１３】
タグに融合されている、先行請求項のいずれかに記載の薬剤。
【請求項１４】
前記タグが、オリゴ−ヒスチジンタグである、請求項１３に記載の薬剤。
【請求項１５】
環状である、先行請求項のいずれかに記載の薬剤。
【請求項１６】
前記ペプチドまたはペプチド類似体が、少なくとも１つの分子内システイン架橋を形成することができる、先行請求項のいずれかに記載の薬剤。
【請求項１７】
１つまたは複数のアミノ酸が、保存的に置換されている、先行請求項のいずれか１項に記載の薬剤。
【請求項１８】
前記ペプチドまたはペプチド類似体が、前記配列のＮ−および／もしくはＣ−末端で、ならびに／または内部に挿入された、１つまたは複数の追加のアミノ酸を含む、またはそれからなる、先行請求項のいずれか１項に記載の薬剤。
【請求項１９】
前記ペプチドまたはペプチド類似体が、１つの追加のアミノ酸を有する、先行請求項のいずれか１項に記載の薬剤。
【請求項２０】
検出可能な部分をさらに含む、先行請求項のいずれかに記載の薬剤。
【請求項２１】
前記検出可能な部分が、放射性同位体を含む、またはそれからなる、先行請求項のいずれかに記載の薬剤。
【請求項２２】
前記放射性同位体が、９９ｍＴｃ、１１１Ｉｎ、６７Ｇａ、６８Ｇａ、７２Ａｓ、８９Ｚｒ、１２３Ｉおよび２０１Ｔｌからなる群から選択される、先行請求項のいずれかに記載の薬剤。
【請求項２３】
前記検出可能な部分が、ＳＰＥＣＴ、ＰＥＴ、ＭＲＩ、光学または超音波造影などの造影技術により検出可能である、先行請求項のいずれかに記載の薬剤。
【請求項２４】
個体における膵臓の疾患、障害または損傷の診断のための診断性組成物の調製のための、先行請求項のいずれかに記載の薬剤の使用。
【請求項２５】
先行請求項のいずれかに記載の薬剤を含む、組成物。
【請求項２６】
医薬組成物である、請求項２５に記載の組成物。
【請求項２７】
ａ）アミノ酸配列ＧＤＰＮＤＧＲＧＤＳＶＶＹＧＬＲ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１３７）、ＶＤＴＹＤＧＧＩＳＶＶＹＧＬＲ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１３８）、ＶＤＴＹＤＧＤＧＳＶＶＹＧＬＲ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１３９）、ＶＤＶＰＥＧＤＩＳＬＡＹＧＬＲ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１５７）、ＬＤＧＬＶＲＡＹＤＮＩＳＰＶＧ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１５８）、ＧＤＰＮＧＤＩＳＶＶＹＧＬＲ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１５９）、ＶＤＶＰＮＧＤＩＳＬＡＹＲＬＲ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１６０）、ＶＤＶＰＥＧＤＩＳＬＡＹＲＬＲ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１６１）、Ｖ（ベータ−Ｄ）ＴＹＤＧＤＩＳＶＶＹＧＬＲ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１６７）、ＶＤＴＹ（ベータ−Ｄ）ＧＤＩＳＶＶＹＧＬＲ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１６８）、ＶＤＴＹＤＧ（ベータ−Ｄ）ＩＳＶＶＹＧＬＲ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１６９）
を含む、またはそれからなるペプチドまたはペプチド類似体と；
ｂ）発現の際にａ）のペプチドをコードするポリヌクレオチドと；
ｃ）ｂ）のポリヌクレオチドを含むベクターと；
ｄ）ｂ）のポリヌクレオチドまたはｃ）のベクターを含む細胞と、
を含む、薬剤。
【請求項２８】
医薬としての使用のための、先行請求項のいずれか１項に記載の薬剤または組成物。
【請求項２９】
哺乳動物の内分泌性疾患および／または代謝性疾患の処置における使用のための、
ａ）（ｉ）一般式：
ＫＸ２ＬＡＸ５Ｘ６Ｘ７Ｘ８ＩＸ１０ＬＸ１２ＹＧＩＫ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１４０）
で示されるアミノ酸配列を含む、またはそれからなるペプチド
（式中、
Ｘ２は、Ｃ、ＰまたはＧであり；
Ｘ５は、ＥまたはＧであり；
Ｘ６は、Ｃ、ＤまたはＩであり；
Ｘ７は、Ｄ、Ｉ、ＳまたはＧであり；
Ｘ８は、Ｓ、ＤまたはＧであり；
Ｘ１０は、ＥまたはＧであり；
Ｘ１２は、ＳまたはＴであるが、
条件として、Ｘ１２が、Ｔであれば、前記ペプチドが、２５を超えないアミノ酸残基を含む）；
（ｉｉ）一般式：
ＶＤＺ３Ｚ４Ｚ５ＧＺ７Ｚ８ＳＺ１０Ｚ１１ＹＧＬＲ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：６８）
で示されるアミノ酸配列を含む、またはそれからなるペプチド
（式中、
Ｚ３は、ＴまたはＶであり；
Ｚ４は、ＹまたはＰであり；
Ｚ５は、ＤまたはＮであり；
Ｚ７は、ＤまたはＧであり；
Ｚ８は、ＩまたはＧであり；
Ｚ１０は、ＶまたはＬであり；
Ｚ１１は、ＶまたはＡであり、
前記ペプチドは、
【化１】
2020518556.tif 000033
からなる群から選択される）；
（ｉｉｉ）ＫＣＬＡＥＣＤＳＩＥＬＳＹＧＩＫ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１４１）、ＣＬＡＥＩＤＳＣ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１４２）、ＣＦＫＰＬＡＥＩＤＳＩＥＣＳＹＧＩＫ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１４３）、ＫＰＬＡＥＧＤＩＥＬＳＹＧＩＫ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１４７）、ＫＰＬＡＥＩＥＬＳＹＧＩＫ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１４８）、ＫＣＬＡＥＩＤＳＣＥＬＳＹＧＩＫ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１５５）、およびＣＦＫＰＬＡＥＩＤＳＩＥＣ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１５６）からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む、またはそれからなるペプチド、
からなる群から選択されるペプチドまたはペプチド類似体と；
ｂ）発現の際にａ）のペプチドをコードするポリヌクレオチドと；
ｃ）ｂ）のポリヌクレオチドを含むベクターと；
ｄ）ｂ）のポリヌクレオチドまたはｃ）のベクターを含む細胞と、
を含む、薬剤。
【請求項３０】
前記薬剤が、第二の、またはさらなる有効成分を含む、先行請求項のいずれか１項に記載の使用のための薬剤または組成物。
【請求項３１】
前記第二の、またはさらなる有効成分が、インスリン、グルカゴン様ペプチド−１（ＧＬＰ−１）、スルホニル尿素、ジペプチジルペプチダーゼ−４（ＤＰＰ４）阻害剤、アルファ−グルコシダーゼ阻害剤、チアゾリジンジオン、メグリチジンおよびナトリウム・グルコースコトランスポータ−２（ＳＧＬＴ２）阻害剤からなる群から選択される、請求項３０に記載の使用のための薬剤または組成物。
【請求項３２】
哺乳動物における内分泌性疾患および／または代謝性疾患の処置における使用のための、先行請求項のいずれかに記載の薬剤または組成物。
【請求項３３】
前記哺乳動物が、ヒトである、請求項３２に記載の使用のための薬剤または組成物。
【請求項３４】
前記内分泌性疾患および／または代謝性疾患が、糖尿病、１型糖尿病、２型糖尿病、栄養不良関連糖尿病、グルコース調節および膵臓内分泌の障害、インスリン抵抗性症候群、耐糖能障害、高血糖症、高インスリン血症、およびそれらの任意の組み合わせからなる群から選択される、先行請求項のいずれかに記載の使用のための薬剤または組成物。
【請求項３５】
前記内分泌性疾患および／または代謝性疾患が、糖尿病、甲状腺の障害、グルコース調節および膵臓内分泌の障害、内分泌腺の障害、栄養不良、栄養欠乏症、肥満、過栄養、ならびに代謝障害からなる群から選択される、先行請求項のいずれかに記載の使用のための薬剤または組成物。
【請求項３６】
前記糖尿病が、１型糖尿病、２型糖尿病、栄養不良関連糖尿病、特定された糖尿病、および特定されていない糖尿病からなる群から選択される、先行請求項のいずれかに記載の使用のための薬剤または組成物。
【請求項３７】
前記グルコース調節および膵臓内分泌の障害が、非糖尿病性低血糖性昏睡および膵臓内分泌の障害からなる群から選択される、先行請求項のいずれかに記載の使用のための薬剤または組成物。
【請求項３８】
前記肥満および過栄養の障害が、局在化された脂肪症、過栄養、および過栄養の続発症からなる群から選択される、先行請求項のいずれかに記載の使用のための薬剤または組成物。
【請求項３９】
前記栄養欠乏症の障害が、芳香族アミノ酸代謝の障害、分枝鎖アミノ酸代謝および脂肪酸代謝の障害、アミノ酸代謝の障害、ラクトース不耐性、炭水化物代謝の障害、スフィンゴリピド代謝の障害、脂質蓄積障害、グリコサミノグリカン代謝の障害、糖タンパク質代謝の障害、リポタンパク質代謝の障害、脂肪血症、プリンおよびピリミジン代謝の障害、ポルフィリンおよびビリルビン代謝の障害、ミネラル代謝の障害、嚢胞性線維症、アミロイドーシス、体液量減少、体液、電解質および酸・塩基平衡の障害、ならびに処置後内分泌および代謝障害からなる群から選択される、先行請求項のいずれかに記載の使用のための薬剤または組成物。
【請求項４０】
先行請求項のいずれか１項に記載の薬剤を必要とする対象に投与することを含む、内分泌性疾患および／または代謝性疾患を処置する方法。
【請求項４１】
哺乳動物における内分泌性疾患および／または代謝性疾患の処置における使用のための医薬の製造のための、先行請求項のいずれか１項に記載の薬剤の使用。
【請求項４２】
先行請求項のいずれか１項に記載の薬剤の治療有効量を必要とする個体に投与することを含む、糖尿病および／または糖尿病関連の障害もしくは疾患の発病を遅延させるための方法。
【請求項４３】
先行請求項のいずれか１項に記載の薬剤の治療有効量を必要とする個体に投与することを含む、血中グルコースレベルを低下させるための方法。
【請求項４４】
インスリン分泌が、増加される、請求項４３に記載の方法。
【請求項４５】
グルコースの細胞内取り込みが、増加される、請求項４３に記載の方法。
【請求項４６】
インスリン産生が、増加される、請求項４３に記載の方法。
【請求項４７】
グルカゴン産生が、減少される、請求項４３に記載の方法。
【請求項４８】
先行請求項のいずれか１項に記載の薬剤の治療有効量を必要とする個体に投与することを含む、ベータ細胞の生存性を改善するための方法。
【請求項４９】
先行請求項のいずれか１項に記載の薬剤の治療有効量を必要とする個体に投与することを含む、ベータ細胞の形態を改善するための方法。
【請求項５０】
先行請求項のいずれか１項に記載の薬剤の治療有効量を必要とする個体に投与することを含む、膵島の生存性および／または形態を安定化または改善するための方法。
【請求項５１】
ａ）アミノ酸配列ＧＤＰＮＤＧＲＧＤＳＶＶＹＧＬＲ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１３７）からなるペプチドまたはペプチド類似体と；
ｂ）発現の際にａ）のペプチドをコードするポリヌクレオチドと；
ｃ）ｂ）のポリヌクレオチドを含むベクターと；
ｄ）ｂ）のポリヌクレオチドまたはｃ）のベクターを含む細胞と、
を含む、薬剤。
【手続補正書】
【提出日】令和1年11月6日(2019.11.6)
【手続補正１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】配列表
【補正方法】追加
【補正の内容】
【配列表】
2020518556000001.app
【国際調査報告】
2020518556.tif 000034
2020518556.tif 000035
2020518556.tif 000036
2020518556.tif 000037