(57)【要約】  外傷に関連する脳損傷に対する治療及び予防の組成物並びに方法が本明細書において開示される。ある特定の態様では、外傷に関連する脳損傷の予防、軽減、又は治療を、それを必要とする対象において行うための方法が開示され、その方法は、ドコサヘキサエン酸及びエイコサペンタエン酸を含む組成物を対象に投与することを含む。【選択図】図１
2020531589.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
対象において外傷に関連する脳損傷を減弱する方法であって、前記対象に：
ａ．ドコサヘキサエン酸（ＤＨＡ）；及び
ｂ．エイコサペンタエン酸（ＥＰＡ）、
を含み、前記ＤＨＡ及びＥＰＡは、約５：１〜約１：１の範囲内の比で存在する組成物、を投与することを含む、方法。
【請求項２】
前記組成物が、治療有効量で投与される、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記組成物が、予防有効量で投与される、請求項１に記載の方法。
【請求項４】
前記ＤＨＡ及びＥＰＡが、約３．５：１の比で存在する、請求項４に記載の方法。
【請求項５】
前記組成物が、ドコサペンタエン酸（ＤＰＡ）をさらに含み、ＤＨＡ及びＤＰＡが、約７：１の比で存在する、請求項４に記載の方法。
【請求項６】
前記組成物が、エマルジョンを含む、請求項４に記載の方法。
【請求項７】
前記組成物が、１日当たり約２ｇの用量で投与される、請求項１に記載の方法。
【請求項８】
前記組成物が、約７５０ｍｇ〜約６０００ｍｇのＤＨＡを含む、請求項１に記載の方法。
【請求項９】
前記組成物が、半脳震盪性損傷のリスクが高い対象に投与される、請求項１に記載の方法。
【請求項１０】
前記組成物が、脳震盪性損傷のリスクが高い対象に投与される、請求項９に記載の方法。
【請求項１１】
前記組成物が、脳震盪性損傷の高いリスクの前に、及び脳震盪性損傷に対するリスクの開始後に一定の間隔で、投与される、請求項１０に記載の方法。
【請求項１２】
前記組成物の前記対象への投与の結果、ＤＨＡ又はＥＰＡが単独で投与された対象と比較して、脳震盪バイオマーカーの相乗的な減少が得られ、前記脳震盪バイオマーカーは、血清ニューロフィラメント軽鎖（ＮＦＬ）である、請求項１に記載の方法。
【請求項１３】
前記対象への前記組成物の投与の結果、同等量のＤＨＡ又はＥＰＡが単独で投与された対象と比較して、ＤＨＡ及び／又はＥＰＡの血漿レベルの相乗的な増加が得られる、請求項１に記載の方法。
【請求項１４】
前記組成物が、栄養補助食品として投与される、請求項１に記載の方法。
【請求項１５】
前記組成物が、機能性食品として投与される、請求項１に記載の方法。
【請求項１６】
反復的頭部衝撃の脳に対する影響の減弱を、それを必要とする対象に対して行うための方法であって、
ａ．ドコサヘキサエン酸（ＤＨＡ）；
ｂ．エイコサペンタエン酸（ＥＰＡ）；及び
ｃ．ドコサペンタエン酸（ＤＰＡ）
を含む組成物を前記対象に投与することを含み、ＤＨＡ：ＥＰＡ：ＤＰＡの比は、約７：２：１である、方法。
【請求項１７】
前記対象の血漿ω−６ＦＡ：ω−３ＦＡの比を低下させるのに有効である量の前記組成物を前記対象に投与することをさらに含む、請求項１６に記載の方法。
【請求項１８】
反復的頭部衝撃に関連する脳損傷を減弱するための組成物であって：
ａ．ドコサヘキサエン酸（ＤＨＡ）；
ｂ．エイコサペンタエン酸（ＥＰＡ）；
ｃ．ドコサペンタエン酸（ＤＰＡ）；
ｄ．これらの医薬的に許容されるキャリア、
を含み、ＤＨＡ：ＥＰＡ：ＤＰＡの比は、約７：２：１である、組成物。
【請求項１９】
前記医薬的に許容されるキャリアが、リン脂質キャリアを含む、請求項１８に記載の組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願の相互参照
本出願は、米国特許法第１１９条（ｅ）の下で、２０１７年８月２５日に出願された「COMPOSITIONS ETHODS FOR PREVENTING,ALLEVIATING AND TREATING SYMPTOMS OF CONCUSSIONS」と題する米国特許仮出願第６２／５５０，４３０号及び２０１７年９月１８日に出願された「COMPOSITIONS AND METHODS FOR PREVENTING,ALLEVIATING AND TREATING SYMPTOMS OF CONCUSSIONS」と題する米国特許仮出願第６２／５５９，９７８号の優先権を主張するものであり、これら各々の全内容は、あらゆる点で参照により本明細書に援用される。
【０００２】
技術分野
本開示は、脳震盪及び半脳震盪（sub-concussive）に関連する脳損傷のための治療及び予防の組成物並びに方法全般に関する。
【背景技術】
【０００３】
米国疾病管理予防センターによると、米国におけるスポーツ及びレクリエーション活動での脳震盪の発生数は、１年間に約１６０万〜３８０万件であると推計されている。脳震盪は、プロ選手からリトルリーグ選手まで広範囲のスポーツ及びアスリートに影響を及ぼしており、したがって、公衆衛生上の懸念となってきた。また、アスリートは、競技に戻ることが早過ぎる結果として、長期的な影響としてさらなる損傷を起こしやすくなり得るとする研究結果も報告されている。脳震盪を認識し、適切な治療を提供することは、より若年のアスリートにとって特に重要であり、なぜなら、彼らは、通常、成人よりも完全に回復するのに時間が掛かるからである。脳震盪は、頭部への直接の又は間接的な衝撃に起因し、それは、意識の喪失を伴って、又は伴わずに発生し得るものであり、一時的な認知症状に繋がる場合がある。症状としては、頭痛、混乱、協調不全、記憶喪失、吐き気、嘔吐、めまい、耳鳴、眠気、及び過度な疲労感が挙げられ得る。脳震盪に対する特定の治療法は存在しない。
【０００４】
脳震盪性の、さらには半脳震盪性の損傷についての問題は、アメリカンフットボールで特に重要である。アメリカンフットボールに参加することに付随して、アスリートは、反復的頭部衝撃（ＲＨＩ）を日常的に受ける。若年アスリートにおいて年間１１０万〜１９０万件のスポーツ及びレクリエーションに関連する脳震盪が発生していると推計されているが、この統計には、接触系スポーツに参加してＲＨＩに曝されているが、臨床的に明確な脳震盪（すなわち、識別可能な機能的障害又は症状をもたらす結果とはならない衝撃）は起こしていないアスリートは反映されていない。接触系スポーツのアスリートに発生する半脳震盪性のＲＨＩを神経変性障害、慢性外傷性脳症（ＣＴＥ）と関連付ける一連の証拠が積み上がりつつある。接触系スポーツへの参加によるＲＨＩへの曝露は、実際にＣＴＥの発症の前段階であり得るものの、科学界でのＣＴＥの理解は限定的であり、これまでのところ、死後症例集積研究に依存していることが、発病の明確な理解を妨げている。それにもかかわらず、米国州立高校協会による毎年の参加調査からのデータが、１１人制タックルフットボールの参加人数が、過去３年間で毎年減少してきていることを示していることから、アメリカンフットボールへの参加による予測される長期的な影響について、一般社会は明らかに懸念している。
【０００５】
競技シーズン全体を通して接触系スポーツ参加者が受ける半脳震盪性ＲＨＩの蓄積の結果、明白な機能的障害又は臨床的に診断された脳震盪が無い場合であっても、脳には定量可能な微細な構造的及び機能的変化が起こっている。具体的には、Ｘ線検査で検出される白質（ＷＭ）の変化は、高校及び大学レベルでのアメリカンフットボールアスリートに発生するＲＨＩと関連付けられている。コストの高い先進の神経イメージング技術に頼るのではなく、超高感度単分子アレイ技術の進歩によって、ＲＨＩ及びびまん性微細構造損傷と関連付けられる循環血液中のバイオマーカーの検出が可能である。
【発明の概要】
【０００６】
本技術分野において、脳震盪性及び半脳震盪性の脳損傷の急性的及び慢性的影響を、そのような損傷のリスクの高い個人において低減するための組成物及び治療方法が求められている。
【０００７】
外傷に関連する脳損傷の治療及び予防のための組成物並びに方法に関連する様々な実施形態が、本明細書において記載される。対象において外傷に関連する脳損傷を予防、軽減、又は治療するための方法が開示され、その方法は、ドコサヘキサエン酸（ＤＨＡ）及びエイコサペンタエン酸（ＥＰＡ）を含む組成物を対象に投与することを含む。ある特定の態様では、ＤＨＡ及びＥＰＡは、約１０：１〜約１：１０の範囲内の比で存在する。ある特定の態様では、組成物は、治療有効量で投与される。さらなる態様では、組成物は、予防有効量で投与される。
【０００８】
ある特定の態様では、ＤＨＡ及びＥＰＡは、約５：１の比で存在する。さらなる態様では、ＤＨＡ及びＥＰＡは、約３．５：１の比で存在する。
ある特定の態様によると、組成物はさらに、ドコサペンタエン酸（ＤＰＡ）を含む。ある特定の態様では、ＤＨＡ及びＤＰＡは、約７：１の比で存在する。
【０００９】
ある特定の態様では、組成物は、エマルジョンを含む。これらの実施形態のある特定の態様では、組成物はさらに、１又は複数の乳化剤を含む。
ある特定の態様によると、組成物は、１日あたり約２ｇの用量で投与される。さらなる態様では、組成物は、約７５０ｍｇ〜約６０００ｍｇのＤＨＡを含む。
【００１０】
ある特定の態様では、組成物は、半脳震盪性損傷のリスクが高い対象に投与される。なおさらなる態様では、組成物は、脳震盪性損傷のリスクが高い対象に投与される。なおさらなる態様では、組成物は、脳震盪性損傷の高いリスクの前に、及び脳震盪性損傷に対するリスクの開始後に一定の間隔で、投与される。
【００１１】
なおさらなる態様では、対象への組成物の投与の結果、ＤＨＡ又はＥＰＡが単独で投与された対象と比較して、脳震盪バイオマーカーの相乗的な低下が得られる。ある特定の態様では、脳震盪バイオマーカーは、血清ニューロフィラメント軽鎖（ＮＦＬ）である。なおさらなる態様では、対象への組成物の投与の結果、同等量のＤＨＡ又はＥＰＡが単独で投与された対象と比較して、ＤＨＡ及び／又はＥＰＡの血漿レベルの相乗的な増加が得られる。
【００１２】
ある特定の態様では、組成物は、栄養補助食品として投与される。さらなる態様では、組成物は、機能性食品として投与される。
さらに、反復的頭部衝撃の脳に対する影響の減弱を、それを必要とする対象に対して行うための方法も開示され、その方法は、ＤＨＡ、ＥＰＡ、及びＤＰＡを含む組成物を対象に投与することを含み、ＤＨＡ：ＥＰＡ：ＤＰＡの比は、約７：２：１である。ある特定の態様では、方法は、対象の血漿ω−６ＦＡ：ω−３ＦＡ比を低下させるのに有効である量の組成物を対象に投与することを含む。
【００１３】
さらに、ＤＨＡ、ＥＰＡ、ＤＰＡ、及びその医薬的に許容されるキャリアを含み、ＤＨＡ：ＥＰＡ：ＤＰＡの比が約７：２：１である、反復的頭部衝撃に関連する脳損傷を減弱するための組成物も、本明細書で開示される。ある特定の態様では、医薬的に許容されるキャリアは、リン脂質キャリアを含む。
【００１４】
複数の実施形態が開示されるが、本開示のさらに他の実施形態は、当業者であれば、開示される装置、システム、及び方法の例示的な実施形態を示し記載する以下の詳細な記述から明らかとなる。認識されるように、開示される装置、システム、及び方法は、すべて本開示の趣旨及び範囲から逸脱することなく、様々な明白な態様において改変が可能である。したがって、図面及び詳細な記述は、限定的ではなく、例示的な性質のものとして見なされるべきである。
【図面の簡単な説明】
【００１５】
【図１】図１は、ある特定の実施形態に従う、アメリカンフットボールアスリートにおけるシーズン全体にわたっての、血清ＮＦＬのベースラインからの変化パーセントに対するある特定の開示される調合剤の効果を示す。
【図２】図２は、ある特定の実施形態に従う、アメリカンフットボールアスリートにおけるシーズン全体にわたっての、血清ＮＦＬのベースラインからの変化パーセントに対するある特定の開示される調合剤の効果をＤＨＡの標準的な２ｇ用量と比較して示す。
【図３】図３は、ある特定の実施形態に従う、アメリカンフットボールアスリートにおけるシーズン全体にわたっての、血清脂肪酸ＤＨＡの１（Ｔ１）からの相対的変化に対するある特定の開示される調合剤及びＤＨＡの効果をシーズン終了時と比較して示す。
【図４】図４は、ある特定の実施形態に従う、アメリカンフットボールアスリートにおけるシーズン全体にわたっての、血清脂肪酸ＥＰＡの１（Ｔ１）からの相対的変化に対するある特定の開示される調合剤及びＥＰＡの効果をシーズン終了時と比較して示す。
【図５】図５は、ある特定の実施形態に従う、アメリカンフットボールアスリートにおけるシーズン全体にわたっての、血清アラキドン酸（ＡＲＡ）の１（Ｔ１）からの相対的変化に対するある特定の開示される調合剤及びＤＨＡの効果をシーズン終了時と比較して示す。
【図６】図６は、ある特定の実施形態に従う、ＥＰＡの割合、ＤＨＡの割合、及びオメガ−６：オメガ−３の比に対するある特定の開示される調合剤の効果を示す。
【図７】図７は、ある特定の実施形態に従う、血清ＮＦＬに対するある特定の開示される調合剤の効果を示す。
【図８】図８は、ある特定の実施形態に従う、先発メンバーとして分類されるアメリカンフットボールアスリートにおける血清ＮＦＬに対するある特定の開示される調合剤の効果を示す。
【図９】図９は、ある特定の実施形態に従う試験設計を模式的に示す。
【図１０】図１０は、ある特定の実施形態に従うタンパク質ネットワーク相互作用データを示す。
【発明を実施するための形態】
【００１６】
範囲は、「約」１つの特定の値から及び／又は「約」別の特定の値まで、として本明細書において表現され得る。そのような範囲が表現される場合、さらなる態様は、その１つの特定の値から及び／又は他の特定の値まで、を含む。同様に、先行詞「約」を用いることによって値が近似として表現される場合、その特定の値が、さらなる態様を形成することは理解される。各範囲の終点が、他方の終点と関連して、及び他方の終点と独立して、これら両方において意味を持つことはさらに理解される。また、本明細書でいくつかの値が開示され、その各値は、その値自体に加えて、「約」その特定の値、としても本明細書で開示されることも理解される。例えば、値「１０」が開示される場合、「約１０」も開示される。また、２つの特定のユニット間の各ユニットも開示されることも理解される。例えば、１０及び１５が開示される場合、１１、１２、１３、及び１４も開示される。
【００１７】
ドコサヘキサエン酸（ＤＨＡ）は、式Ｃ２２Ｈ３２Ｏ２を有するオメガ−３脂肪酸を意味する。化学的には、ＤＨＡは、２２炭素鎖及び６つのシス二重結合を有し、第一の二重結合がオメガ末端から三番目の炭素に位置しているカルボン酸である。ＤＨＡは、それ自体として、又はトリグリセリドなどの誘導体の形態で、海洋動物の油脂、魚油（サバ油、メンヘーデン油、サケ油、シシャモ油、マグロ油、イワシ油、オキアミ油、又はタラ油など）、シゾキトリウム属（Schizochytrium sp.）などの海洋藻、ヒト乳、及び亜麻仁油などの植物油に由来してよい又はそれらから製造されてよい。
【００１８】
エイコサペンタエン酸（ＥＰＡ）は、式Ｃ２０Ｈ３０Ｏ２を有するオメガ−３脂肪酸を意味する。化学的には、ＥＰＡは、２０炭素鎖及び５つのシス二重結合を有し、第一の二重結合がオメガ末端から三番目の炭素に位置しているカルボン酸である。二重結合が存在することから、ＥＰＡは、多不飽和脂肪酸である。ＥＰＡの由来源としては、限定されないが、タラの肝臓、オキアミ、ニシン、サバ、サケ、メンヘーデン、及びイワシの魚油が挙げられる。
【００１９】
アラキドン酸（ＡＲＡ）は、式Ｃ２０Ｈ３２Ｏ２を有するオメガ−６脂肪酸を意味する。化学的には、ＡＲＡは、２０炭素鎖及び４つのシス二重結合を有し、第一の二重結合がオメガ末端から六番目の炭素に位置しているカルボン酸である。ＡＲＡは、豚肉、卵、魚、及び牛肉に見出され得る。
【００２０】
本明細書で用いられる場合、ドコサペンタエン酸（ｎ−３ ＤＰＡ）は、式Ｃ２２Ｈ３４Ｏ２を有するＥＰＡとＤＨＡとの中間に位置するオメガ−３脂肪酸を意味する。化学的には、ｎ−３ ＤＰＡは、ＤＨＡの前駆体であり、２２炭素鎖及び５つのシス二重結合を有する多不飽和脂肪酸である。ｎ−３ ＤＰＡの由来源としては、限定されないが、メンヘーデン油、サケ油、オキアミ油、サケ、牛肉、及びヒト母乳が挙げられる。
【００２１】
本明細書で用いられる場合、「投与する」及び「投与」の用語は、対象に医薬製剤を提供するいずれの方法をも意味する。そのような方法は、当業者に周知であり、限定されないが、経口投与、経皮投与、吸入による投与、経鼻投与、局所投与、腟内投与、眼内投与、耳内投与、脳内投与、直腸内投与、舌下投与、頬側投与、並びに静脈内投与、動脈内投与、筋肉内投与、及び皮下投与などの注射剤を含む非経口投与が挙げられる。投与は、連続的であっても、又は断続的であってもよい。様々な態様では、製剤は、治療的に投与されてよく、すなわち、既存の疾患又は病状を治療するために投与されてよい。さらなる様々な態様では、製剤は、予防的に投与されてよく、すなわち、疾患又は病状を予防するために投与されてよい。
【００２２】
本明細書で用いられる場合、「外傷に関連する脳損傷」の用語は、外部からの機械的な力に起因する脳に対する損傷を意味する。そのような力としては、限定されないが、急な加速若しくは減速、衝撃、爆風、又は投射物の貫通が挙げられ得る。損傷は、脳に対する力に直接起因する損傷、又は力に起因する頭蓋骨に対する脳の衝突（例：直撃損傷及び対側打撃損傷）の両方を含み得る。「外傷に関連する脳損傷」の用語は、本技術分野において外傷性脳損傷、脳震盪性脳損傷、さらには半脳震盪性脳損傷（例：脳震盪又は外傷性脳損傷の診断基準を満たす症状を呈さない外傷に誘導された脳損傷）を包含する。外傷性脳損傷の高い発生率及び／又は高いリスクを伴う活動としては、限定されないが、サイクリング、フットボール、野球及びソフトボール、バスケットボール、ウォータースポーツ（例：ダイビング、スキューバダイビング、サーフィン、水泳、水球、水上スキー、ウォーターチュービング）、動力付きレクリエーション用車両の使用（ＡＴＶ、デューンバギー、ゴーカート、ミニバイク、オフロード車）、サッカー、スケートボード／スクーター、フィットネス／エクササイズ／ヘルスクラブ、ウィンタースポーツ（スキー、そり、スノーボード、スノーモービル）、乗馬、体操／ダンス／チアリーディング、ゴルフ、ホッケー、トランポリン、ラグビー／ラクロス、ローラースケート及びインラインスケート、並びにアイススケートが挙げられる。
【００２３】
本明細書で用いられる場合、「治療」の用語は、疾患、病的状況、又は障害を治癒、寛解、安定化、又は予防することを意図して患者を医学的に管理することを意味する。この用語は、積極的治療、すなわち、疾患、病的状況、又は障害の改善へ特に向かっての治療を含み、また原因療法、すなわち、関連する疾患、病的状況、又は障害の原因の除去に向かっての治療も含む。加えて、この用語は、緩和療法、すなわち、疾患、病的状況、又は障害の治癒ではなく、症状の緩和のために設計された治療；予防的治療、すなわち、関連する疾患、病的状況、又は障害の発症を最小限に抑える、又は部分的に若しくは完全に予防する方向へ向かっての治療；並びに支持療法、すなわち、関連する疾患、病的状況、又は障害の改善に向かっての別の特定の治療法を補助するために用いられる治療、も含む。様々な態様では、この用語は、哺乳類（例：ヒト）を含む対象のいかなる治療も包含し：（ｉ）疾患に罹患し易い可能性があるがまだ罹患しているとして診断はされていない対象において疾患が発症することを予防すること；（ｉｉ）疾患を阻害すること、すなわち、疾患の進行を抑止すること；又は（ｉｉｉ）疾患を緩和すること、すなわち、疾患を後退させること、を含む。１つの態様では、対象は、霊長類などの哺乳類であり、さらなる態様では、対象は、ヒトである。
【００２４】
本明細書で用いられる場合、「予防する」又は「予防」の用語は、特に事前の活動によって、何かが発生することを排除すること、避けること、防ぐこと、未然に阻止すること、停止すること、又は妨げることを意味する。低減、阻害、又は予防が本明細書で用いられる場合、特に断りのない限り、残りの２語の使用も明示的に開示されていることは理解される。
【００２５】
本明細書で用いられる場合、「医薬的に許容されるキャリア」又は「キャリア」の用語は、滅菌水性若しくは非水性溶液、コロイド、分散体、懸濁液、又はエマルジョン、さらには使用の直前に再溶解して滅菌注射溶液又は分散体とするための滅菌粉末を意味する。適切な水性及び非水性キャリア、希釈剤、溶媒、又は媒体の例としては、水、エタノール、ポリオール（グリセロール、プロピレングリコール、ポリエチレングリコールなど）、カルボキシメチルセルロース及び適切なその混合物、植物油（オリーブ油など）、リン脂質又はリン脂質の混合物、並びにオレイン酸エチルなどの注射用有機エステルが挙げられる。適切な流動性は、例えばレシチンなどのコーティング剤の使用によって、分散体の場合は必要とされる粒子サイズの維持によって、及び界面活性剤の使用によって、維持することができる。これらの組成物は、保存剤、湿潤剤、乳化剤、及び分散剤などの補助剤も含有していてよい。微生物作用の防止は、パラベン、クロロブタノール、フェノール、ソルビン酸などの様々な抗菌剤及び抗真菌剤を含めることによって確保することができる。糖、塩化ナトリウムなどの等張剤を含めることも望ましい場合がある。注射用医薬剤形の長期間にわたる吸収は、モノステアリン酸アルミニウム及びゼラチンなど、吸収を遅延させる剤を含めることによってもたらすことができる。注射用デポー剤形は、ポリラクチド−ポリグリコリド、ポリ（オルソエステル）、及びポリ（無水物）などの生分解性ポリマー中に薬物のマイクロカプセル化マトリックスを形成することによって作製される。薬物のポリマーに対する比及び用いた特定のポリマーの性質に応じて、薬物の放出速度を制御することができる。デポー注射用調合剤はまた、身体組織との適合性を有するリポソーム又はマイクロエマルジョン中に薬物をトラップさせることによっても製剤される。注射用調合剤の滅菌は、例えば、細菌保持フィルターを通してろ過することによって、又は使用直前に滅菌水若しくは他の滅菌注射用媒体中に溶解若しくは分散することができる滅菌固体組成物の形態の滅菌剤を組み込むことによって行われてよい。適切な不活性キャリアとしては、ラクトースなどの糖を挙げることができる。望ましくは、活性成分の粒子の少なくとも９５重量％が、０．０１〜１０マイクロメートルの範囲内の有効粒子サイズを有する。
【００２６】
予防、軽減、又は治療を必要とする対象の外傷に関連する脳損傷を予防、軽減、又は治療する方法が本明細書で開示され、その方法は、ＤＨＡ及びＥＰＡ（ＤＨＡ／ＥＰＡ）を含む組成物をその対象に投与することを含む。ある特定の態様では、組成物は、有効量で投与される。さらなる態様では、組成物は、治療有効量で投与される。なおさらなる態様では、組成物は、予防有効量で投与される。
【００２７】
ある特定の実施形態によると、ＤＨＡ及びＥＰＡは、約１０：１〜約１：１０の範囲内の比で存在する。さらなる実施形態では、ＤＨＡ及びＥＰＡは、約５：１〜約１：１の比で存在する。さらなる実施形態では、ＤＨＡ及びＥＰＡは、約３．５：１の比で存在する。なおさらなる実施形態では、ＤＨＡのＥＰＡに対する比は、約１：２．２〜約１：１．５である。
【００２８】
ある特定の実施形態によると、組成物はさらに、ドコサペンタエン酸（ＤＰＡ）を含む。これらの実施形態のある特定の態様では、ＤＰＡは、約７：１のＤＨＡ：ＤＰＡ比で存在する。これらの実施形態のさらなる態様では、ＤＰＡは、約７：２：１のＤＨＡ：ＥＰＡ：ＤＰＡ比で存在する。
【００２９】
ある特定のさらなる実施形態によると、ドコサヘキサエン酸（ＤＨＡ）；エイコサペンタエン酸（ＥＰＡ）；及びドコサペンタエン酸（ＤＰＡ）を含む、ＲＨＩに関連する脳損傷を減弱するための組成物が開示される。ある特定の態様では、ＤＨＡ：ＥＰＡ：ＤＰＡの比は、約７：２：１である。さらなる態様では、組成物はさらに、その医薬的に許容されるキャリアを含む。
【００３０】
ある特定のさらなる実施形態によると、組成物は、エマルジョンである。ある特定の態様では、エマルジョンは、公知の１又は複数の乳化剤を用いて製剤される。例示的な実施形態によると、組成物は、キシリトール、グリセリン、アラビアガム、グアーガム、及び／又はキサンタンガムを含有する。さらなる実施形態によると、開示される組成物は、あらゆる点において参照により本明細書に援用されるMcClements and Jafari, Advances in Colloid and Interface Science 251 (2018) 55-79に記載の乳化剤及びプロセスを用いてエマルジョンとして製剤されてよい。
【００３１】
いくつかの実施形態では、キャリアは、リン脂質又はリン脂質の混合物を含む。ある特定の実施形態の場合、リン脂質は、さらに、リン脂質のための許容される可溶化剤を含んでよい。単数形での１つの（又はその）リン脂質、可溶化剤、又は他の調合剤成分に対する本明細書における言及は、複数を含むものと理解され、したがって、２つ以上のリン脂質又は２つ以上の可溶化剤の組み合わせ、例えば混合物は、明示的に本明細書において考慮される。可溶化剤、又は可溶化剤とリン脂質との組み合わせは、ＤＨＡ：ＥＰＡ：ＤＰＡも可溶化するが、キャリア中に所望に応じて存在する界面活性剤又はエタノールなどのアルコールなどの他のキャリア成分も、ある状況下において組成物の可溶化を促進し得る。ある特定の態様では、医薬的に許容されるいかなるリン脂質又はリン脂質の混合物が用いられてもよい。一般的に、そのようなリン脂質は、加水分解によってリン酸、脂肪酸、アルコール、及び窒素含有塩基となるリン酸エステルである。
【００３２】
ある特定の態様では、開示される組成物は、１又は複数の酸化防止剤を含有する。ある特定の実施形態では、開示される組成物は、酸化防止剤のパルミチン酸アスコルビル及び／又はベータカロテンを含有する。当業者であれば理解されるように、適切な他の酸化防止剤が用いられてもよい。なおさらなる実施形態では、組成物は、１又は複数の安定化剤（例：ソルビン酸カリウム）を含む。当業者であれば理解されるように、適切な他の安定化剤が用いられてもよい。
【００３３】
ある特定の態様では、組成物は、１日あたり約５００ミリグラム（ｍｇ）〜１日あたり約６ｇの用量範囲で投与される。さらなる態様では、組成物は、１日あたり約２ｇの用量で投与される。なおさらなる態様によると、対象に投与される組成物は、約７５０ｍｇ〜６０００ｍｇのＤＨＡを含む。
【００３４】
これらの態様のある特定の例示的な実施形態によると、組成物は、１日に１〜３回投与される。
本発明で開示される方法のある特定の態様では、組成物は、脳震盪性損傷のリスクが高い対象に投与される。さらなる態様では、組成物は、半脳震盪性損傷のリスクが高い対象に投与される。さらなる態様では、組成物は、脳震盪性損傷又は半脳震盪性損傷の高いリスクの前に投与される。これらの実施形態の例示的な態様では、組成物は、脳震盪性損傷に対するリスクの開始後に一定の間隔で投与される。
【００３５】
さらなる実施形態によると、本発明で開示される組成物及び方法は、頭部外傷に伴う損傷を治療するために用いられる。開示される方法によって治療される例示的な損傷としては、限定されないが、軽度外傷性脳損傷（ＴＢＩ）、中等度ＴＢＩ、及び重度ＴＢＩが挙げられる。
【００３６】
ある特定の実施形態では、本明細書で開示される組成物のそれを必要とする対象への投与の結果、ＤＨＡ又はＥＰＡが単独で投与された対象と比較して、脳震盪バイオマーカーの相乗的な低下が得られる。ある特定の例示的な実施形態では、脳震盪バイオマーカーは、血清ニューロフィラメント軽鎖（ＮＦＬ）である。これらの実施形態では、対象の血清中で検出されるＮＦＬは、頭部外傷に伴う軸索損傷に対する代替マーカーとして用いられる。例示的な実施形態では、考え得る頭部損傷後の、ベースライン血清ＮＦＬと比較した血清ＮＦＬレベルの上昇は、損傷が発生したことを示すものである。これらの実施形態では、ＮＦＬレベルの上昇は、本発明で開示される方法による治療の必要性を示すものとして解釈され得る。さらなる実施形態では、経時でのＮＦＬレベルの変化は、所与の治療過程の効果を評価するために、及び／又は治療過程に対して調節を行うために用いられ得る。
【００３７】
ある特定の態様では、対象への組成物の投与の結果、同等量のＤＨＡ又はＥＰＡが単独で投与された対象と比較して、脳震盪バイオマーカー（例：血清ＮＦＬ）の相乗的な低下が得られる。
【００３８】
ある特定の態様によると、対象への組成物の投与の結果、同等量のＤＨＡ又はＥＰＡが単独で投与された対象と比較して、ＤＨＡ及び／又はＥＰＡの血漿レベルの相乗的な増加が得られる。
【００３９】
別の実施形態では、本発明で開示される組成物を用いた、例えば、約１〜約２００週間、約１〜約１００週間、約１〜約８０週間、約１〜約５０週間、約１〜約４０週間、約１〜約２０週間、約１〜約１５週間、約１〜約１２週間、約１〜約１０週間、約１〜約５週間、約１〜約２週間、又は約１週間にわたる治療の後、対象又は対象群は、コントロール対象又は群と比較して、血清ＮＦＬレベルの低下、血漿ω−６ＦＡ：ω−３ＦＡの比の低下、及び／又は脳震盪性若しくは半脳震盪性脳損傷の徴候若しくは症状の減少を呈する。
【００４０】
当業者であれば理解されるように、組成物は、いくつかの剤形で投与されてよい。ある特定の態様では、組成物は、栄養補助食品として投与される。さらなる態様では、組成物は、機能性食品として投与される。なおさらなる態様によると、組成物は、医薬製剤の一部として投与される。当業者であれば、多くのそのような製剤が可能であることは理解されるであろう。
【００４１】
さらなる実施形態によると、反復的頭部衝撃の脳に対する影響の減弱を、それを必要とする対象に対して行うための方法が開示され、その方法は、ドコサヘキサエン酸（ＤＨＡ）、エイコサペンタエン酸（ＥＰＡ）、及びドコサペンタエン酸（ＤＰＡ）を含む組成物を対象に投与することを含む。これらの実施形態のある特定の態様によると、ＤＨＡ：ＥＰＡ：ＤＰＡの比は、約７：２：１である。さらなる態様では、組成物は、対象の血漿ω−６ＦＡ：ω−３ＦＡの比を低下させるのに有効な量で投与される。
【００４２】
スポーツでの脳震盪に対する最新の一致した見解は、スポーツに関連する脳震盪を予防する方法についてはほとんど分かっておらず、半脳震盪性損傷の予防及び／又はそれからの保護の必要性に対処できていないことを認めるものである。したがって、接触系スポーツに起因するＲＨＩの考え得る長期的な影響からアスリートを保護するための方法について探究する必要がある。本明細書では、ＲＨＩに関して神経保護を与える組成物及びその使用方法が開示される。作用機構に関していかなる特定の理論にも束縛されるものではないが、開示される組成物の保護機能は、一連の相互に関連する機構に帰することができる可能性が高い。例えば、開示される組成物は、グルタミン酸細胞毒性の緩和、ミトコンドリア機能不全及び酸化ストレスの発生の抑制、カルシウム流入の低下、及びアルファ−アミノ−３−ヒドロキシ−５−メチル−４−イソオキサゾールプロピオン酸（ＡＭＰＡ）受容体サブユニットの下方制御を行い得、これらの各々は神経性外傷の病的特徴である。さらに、開示される組成物は、その投与に続いて、ベータアミロイド前駆体陽性軸索の減少によって確認されるＷＭの保存、ミエリン保存の向上、及びニューロフィラメント形態の保護を介して予後を改善し得る。実際、開示される組成物のサプリメントによって、複数回の損傷後であっても、損傷のこれらの生物学的指標を反映する機能的帰結を伴う頭部外傷に対する回復力の向上が一貫して付与される。
【００４３】
実施例
以下の例は、本明細書で請求される化合物、組成物、物品、装置、及び／又は方法をいかに作製し評価するかについての完全な開示並びに記述を当業者に提供するために提示されるものであり、本発明の単なる例示であることを意図しており、本発明者らが本発明者らの発明として考える範囲を限定することを意図するものではない。しかし、当業者であれば、本開示に照らして、本発明の趣旨及び範囲から逸脱することなく、開示される具体的な実施形態に対して多くの変更が成されてよく、やはり同等又は類似の結果を得ることができることは理解される。
【００４４】
数値（例：量、温度など）に関して正確性を確保するよう努力したが、ある程度の誤差及びズレは考慮されるべきである。特に断りのない限り、部は、重量部であり、温度は、℃の単位又は周囲温度であり、圧力は、大気圧又は大気圧近傍である。
【００４５】
例１
ＤＨＡ／ＥＰＡ調合剤対プラセボの比較
方法
対象．  アスリートの被験者はすべて、チーム医師の判断で大学競技への参加条件をクリアした全米大学体育協会（ＮＣＡＡ）ディビジョンＩ又はディビジョンＩＩＩのアメリカンフットボールアスリートであった。損傷を受けているアスリート、又は定期的に予定された調整若しくは競技に参加できないアスリートも除外した。
【００４６】
試験設計
並行群間試験設計を用いて、ＤＨＡ／ＥＰＡを含有する新規な調合剤の、プレシーズンキャンプ及び競技シーズンを含むシーズンを通しての血清ＮＦＬに対する効果を調べた。３１人（ｎ＝３１）のアメリカンフットボールアスリートを処理群とし、３３人（ｎ＝３３）のアメリカンフットボールアスリートをコントロール群とした。処理群は、ベースライン血液サンプリングの後、マグロの魚油由来のＤＨＡ／ＥＰＡを含有する新規な調合剤を１日２ｇの量で受け、一方コントロール群は、シーズンを通してサプリメントは受けなかった。シーズンの開始前に、接触の激しさ、接触の時間の変化に合わせた特定の間隔で、並びに頭部衝撃の回数及び大きさの変化が報告された時点に合わせた特定の間隔で、血液のサンプリングを行った。ベースライン血液サンプルは、被験者が、プレシーズントレーニングキャンプの前（ベースライン；Ｔ１）の接触のない期間から戻って来た時点（ベースライン；Ｔ１）で採取した。第二のサンプルは、プレシーズントレーニングキャンプ後（ポストキャンプ；Ｔ２）に採取した。残りの血液サンプルは、競技シーズンを通して、土曜日の試合後の月曜日（４８時間）（Ｔ３〜Ｔ６）に採取した。ＮＣＡＡアメリカンフットボールアスリートの場合、シーズンあたりの頭部衝撃の最大（及びメジアン）回数は、それぞれ練習及び試合において、１５．６〜２４（４．８〜７．５）及び５８．５〜８６．１（１２．１〜１６．３）の範囲内であると報告されている。
【００４７】
血清ＮＦＬ．  血清ＮＦＬ（Ｓｉｍｏａ（商標）ベータキット）濃度は、デジタルアレイ技術を用い、単分子アレイ（Ｓｉｍｏａ（商標））ＨＤ−１分析器、ソフトウェアバージョン１．５（Ｑｕａｎｔｅｒｉｘ；Ｌｅｘｉｎｇｔｏｎ，ＭＡ）によって測定した。同じロットのキットを用いた。統計分析．  Ｇ＊Ｐｏｗｅｒバージョン３．１．９を用いて事前検定力分析を行い、所望される検出力レベルを．８０に、α−レベルを．０５に設定し、標準化効果量はこれまでのパイロット試験から算出して、全血漿脂肪酸中のＤＨＡの割合の有意な変化を見出すのに必要とされる最小サンプルサイズを特定した。合計で２０人の対象（群あたり５人）が、適切な検出力を確保するために必要であることが特定された。
【００４８】
注目する変数に対するサプリメント及び時間の効果を、ＳＰＳＳ  Ｖ．２２（ＩＢＭ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ；Ａｒｍｏｎｋ，ＮＹ）による混合モデルの分散分析（ＡＮＯＶＡ）から算出した。このモデルから、処理及び時間の従属測定値に対する効果の大サンプル効果量（large- sample effect size）の推定値及び不確実性をモデルから誘導して、大きさに基づく推論手法（magnitude-based approach to inference）を可能とした。すべての処理の中でベースラインでの対象間標準偏差の０．２倍の標準化された変化として算出された最小の閾値よりも差異が少なくとも大きい確率（可能性）は、以下のように定めた：０．５％、ほぼ確実に可能性がない；０．５〜５％、非常に可能性が低い；５〜２５％、可能性が低い；２５〜７５％、可能性がある；７５〜９５％、可能性が高い；９５〜９９．５％、非常に可能性が高い；９９．５％、ほぼ確実。信頼区間（ＣＩ）の大部分（＞５０％）が実質性（substantiveness）に対する閾値間に含まれる場合、及び有益又は有害の確率が＜５．０％である場合、効果は、該当する可能性のレベル（appropriate likelihood qualifier）を持つことが自明であると見なした。
【００４９】
結果
図１は、アメリカンフットボールアスリートにおけるシーズン全体にわたっての、血清ＮＦＬのベースラインからの変化パーセントに対するある特定の開示される調合剤の効果を示す。■プラセボ（ｎ＝３３）；◇サプリメントを受けたアスリート（ｎ＝３１）。ベースラインＳＤｂｅｔｗｅｅｎの０．２倍として算出された最小の有意変化に対する閾値；可能性は記号の数の増加で示され、プラセボに対して、独特の記号：（＊）で表される。＊  可能性がある、＊＊  可能性が高い、＊＊＊  非常に可能性が高い、＊＊＊＊  最も可能性が高い。データはすべて平均である。コントロール群（プラセボ）に対して、新規な調合剤は、接触の激しい期間であるポストキャンプに相当するＴ２での血清Ｎｆ−Ｌを減少させた可能性が非常に高い（平均；×／÷９０％  信頼限界；１．５；×／÷１．２倍）。さらに、プラセボに対する減少は、Ｔ３（１．３；×／÷１．２倍）、Ｔ４（１．３；×／÷１．２倍）、Ｔ５（１．３；×／÷１．３倍）、及びＴ６（１．２；×／÷１．３倍）で維持されたと考えられる（図１）。
【００５０】
例２
ＤＨＡ／ＥＰＡ調合剤対海洋藻ＤＨＡの比較
方法
対象．  アスリートの被験者はすべて、チーム医師の判断で大学競技への参加条件をクリアしたＮＣＡＡディビジョンＩのアメリカンフットボールアスリートであった。損傷を受けているアスリート、又は定期的に予定された調整若しくは競技に参加できないアスリートも除外した。
【００５１】
試験設計
並行群間試験設計を用いて、ＤＨＡ／ＥＰＡを含有する新規な調合剤の、プレシーズンキャンプ及び競技シーズンを含むシーズンを通しての血漿血清ＮＦＬに対する効果を、海洋藻ＤＨＡと比較した。アメリカンフットボールアスリートを、マグロの魚油由来ＤＨＡ／ＥＰＡの新規な調合剤の摂取（ｎ＝３３）、又はシゾキトリウム属由来の３５〜４５重量％のＤＨＡを含有する海洋藻ＤＨＡの摂取（ｎ＝４）のいずれかに振り分けた。シーズンの開始前に、接触の激しさ、接触の時間の変化に合わせた特定の間隔で、並びに頭部衝撃の回数及び大きさの変化が報告された時点に合わせた特定の間隔で、血液のサンプリングを行った。ベースライン血液サンプルは、被験者が、プレシーズントレーニングキャンプの前（ベースライン；Ｔ１）の接触のない期間から戻って来た時点（ベースライン；Ｔ１）で採取した。第二のサンプルは、プレシーズントレーニングキャンプ後（ポストキャンプ；Ｔ２）に採取した。残りの血液サンプルは、競技シーズンを通して、土曜日の試合後の月曜日（４８時間）（Ｔ３〜Ｔ６）に採取した。ＮＣＡＡアメリカンフットボールアスリートの場合、シーズンあたりの頭部衝撃の最大（及びメジアン）回数は、それぞれ練習及び試合において、１５．６〜２４（４．８〜７．５）及び５８．５〜８６．１（１２．１〜１６．３）の範囲内であると報告されている。
【００５２】
血清ＮＦＬ．  血清ＮＦＬ（Ｓｉｍｏａ（商標）ベータキット）濃度は、デジタルアレイ技術を用い、単分子アレイ（Ｓｉｍｏａ（商標））ＨＤ−１分析器、ソフトウェアバージョン１．５（Ｑｕａｎｔｅｒｉｘ；Ｌｅｘｉｎｇｔｏｎ，ＭＡ）によって測定した。同じロットのキットを用いた。統計分析。Ｇ＊Ｐｏｗｅｒバージョン３．１．９を用いて事前検定力分析を行い、所望される検出力レベルを．８０に、α−レベルを．０５に設定し、標準化効果量はこれまでのパイロット試験から算出して、全血漿脂肪酸中のＤＨＡの割合の有意な変化を見出すのに必要とされる最小サンプルサイズを特定した。合計で２０人の対象（群あたり５人）が、適切な検出力を確保するために必要であることが特定された。
【００５３】
注目する変数に対するサプリメント及び時間の効果を、ＳＰＳＳ  Ｖ．２２（ＩＢＭ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ；Ａｒｍｏｎｋ，ＮＹ）による混合モデルの分散分析（ＡＮＯＶＡ）から算出した。このモデルから、処理及び時間の従属測定値に対する効果の大サンプル効果量の推定値及び不確実性をモデルから誘導して、大きさに基づく推論手法を可能とした。すべての処理の中でベースラインでの対象間標準偏差の０．２倍の標準化された変化として算出された最小の閾値よりも差異が少なくとも大きい確率（可能性）は、以下のように定めた：０．５％、ほぼ確実に可能性がない；０．５〜５％、非常に可能性が低い；５〜２５％、可能性が低い；２５〜７５％、可能性がある；７５〜９５％、可能性が高い；９５〜９９．５％、非常に可能性が高い；９９．５％、ほぼ確実。信頼区間（ＣＩ）の大部分（＞５０％）が実質性に対する閾値間に含まれる場合、及び有益又は有害の確率が＜５．０％である場合、効果は、適切な可能性のレベルを持つことが自明であると見なした。
【００５４】
結果
図２は、アメリカンフットボールアスリートにおけるシーズン全体にわたっての、血清ＮＦＬのベースラインからの変化パーセントに対するある特定の開示される調合剤の効果（◇；ｎ＝３３）を藻ＤＨＡの標準的な２ｇ用量（■；ｎ＝４）と比較して示す。ベースラインＳＤｂｅｔｗｅｅｎの０．２倍として算出された最小の有意変化に対する閾値；可能性は記号の数の増加で示され、藻ＤＨＡの標準的な２ｇ用量に対して、独特の記号：（＊）で表される。＊  可能性がある、＊＊  可能性が高い、＊＊＊  非常に可能性が高い、＊＊＊＊  最も可能性が高い。データはすべて平均である。海洋藻ＤＨＡに対して、新規な調合剤は、接触の激しい期間であるポストキャンプに相当するＴ２（平均；×／÷９０％  信頼限界；１．４；×／÷１．４倍）、Ｔ３（１．３；×／÷１．４倍）、Ｔ４（１．３；×／÷１．４倍）での血清ＮＦＬを減少させた可能性が非常に高い（図２）。
【００５５】
例３
ＤＨＡ／ＥＰＡ調合剤対海洋藻ＤＨＡの比較
方法
対象．  アスリートの被験者はすべて、チーム医師の判断で大学競技への参加条件をクリアしたＮＣＡＡディビジョンＩのアメリカンフットボールアスリートであった。損傷を受けているアスリート、又は定期的に予定された調整若しくは競技に参加できないアスリートも除外した。
【００５６】
試験設計
並行群間試験設計を用いて、ＤＨＡ／ＥＰＡを含有する新規な調合剤の、プレシーズンキャンプ及び競技シーズンを含むシーズンを通しての血漿脂肪酸ＤＨＡ、ＥＰＡ、及びＡＲＡに対する効果を、海洋藻ＤＨＡと比較した。アメリカンフットボールアスリートを、マグロの魚油由来ＤＨＡ／ＥＰＡの新規な調合剤の摂取（ｎ＝６）、又はシゾキトリウム属由来の３５〜４５重量％のＤＨＡを含有する海洋藻ＤＨＡの摂取（ｎ＝６）のいずれかに振り分けた。シーズンの開始前に、接触の激しさ、接触の時間の変化に合わせた特定の間隔で、並びに頭部衝撃の回数及び大きさの変化が報告された時点に合わせた特定の間隔で、血液のサンプリングを行った。ベースライン血液サンプルは、被験者が、プレシーズントレーニングキャンプの前（ベースライン；Ｔ１）の接触のない期間から戻って来た時点（ベースライン；Ｔ１）で採取した。第二のサンプル及び残りの血液サンプルは、競技シーズンを通して、土曜日の試合後の月曜日（４８時間）（Ｔ６）に採取した。
【００５７】
脂肪酸分析．  ＤＨＡ、ＥＰＡ、及びＡＲＡの血清脂肪酸濃度は、Ostermann et al. (2014)の方法を改変し、ガスクロマトグラフィ／質量分析（ＧＣ／ＭＳ）を用いて測定した。
【００５８】
結果
図３は、アメリカンフットボールアスリートにおけるシーズン全体にわたっての、血清脂肪酸ＤＨＡの１（Ｔ１）からの相対的変化に対するある特定の開示される調合剤（ＤＨＡ／ＥＰＡ；ｎ＝６）及び藻ＤＨＡ（藻ＤＨＡ；ｎ＝６）の効果をシーズン終了時２（Ｔ６）と比較して示す［ｎｍｏｌ／ｍｌ］。図４は、アメリカンフットボールアスリートにおけるシーズン全体にわたっての、血清脂肪酸ＥＰＡの１（Ｔ１）からの相対的変化に対するある特定の開示される調合剤（ＤＨＡ／ＥＰＡ；ｎ＝６）及び藻ＤＨＡ（藻ＤＨＡ；ｎ＝６）の効果をシーズン終了時２（Ｔ６）と比較して示す［ｎｍｏｌ／ｍｌ］。図５は、アメリカンフットボールアスリートにおけるシーズン全体にわたっての、血清アラキドン酸（ＡＲＡ）の１（Ｔ１）からの相対的変化に対するある特定の開示される調合剤（ＤＨＡ／（ＥＰＡ；ｎ＝６）及び藻ＤＨＡ（藻ＤＨＡ；ｎ＝６）の効果をシーズン終了時２（Ｔ６）と比較して示す［ｎｍｏｌ／ｍｌ］。海洋藻ＤＨＡと比較して、新規な調合剤は、血清脂肪酸ＤＨＡ、ＥＰＡの増加、さらには炎症バイオマーカーであるＡＲＡの減少を引き起こしており、ＤＨＡ及びＥＰＡの脂肪酸吸収プロファイルの全体としての改善、したがって改善された有効性を示している（表１、図３〜５）。
【００５９】
【表１】
2020531589.tif 000003
【００６０】
例４
ＤＨＡ／ＥＰＡ／ｎ−３ ＤＰＡ調合剤対非処理コントロールの比較
方法
対象．  アスリートの被験者はすべて、チームの医療スタッフの判断で大学競技への参加条件をクリアしたＮＣＡＡディビジョンＩのアメリカンフットボールアスリートであった。長期的な抗炎症療法を用いているアスリート、降圧薬の薬物療法を用いているアスリート、血中脂質に影響を与えることが知られている薬物療法を用いているアスリート、魚油又はオメガ−３脂肪酸のサプリメントを摂取しているアスリート、又は１週間に３回以上魚料理を食べているアスリートは、除外した。１８歳未満のアスリートも除外した。損傷を受けた、病気に罹患した、又は定期的に予定された調整、練習、若しくは競技に参加できないアスリートも除外した。処理を受けたアスリート、処理チームは、ＮＣＡＡディビジョンＩのアメリカンフットボールチームのメンバーであり、処理を受けないアスリートは、ＮＣＡＡディビジョンＩＩＩのアメリカンフットボールチームのメンバーであった。血清ＮＦＬを、先発メンバー及び控えメンバーにわたって比較した。この試験の目的のために、先発メンバーは、第一又は第二のチームと共に出場するデプスロースター（depth roster）の一番目又は二番目であり、大部分の反復（repetitions）を受けることが分かっているアスリートとして定めた。コントロールチームは１９人（ｎ＝１９）の先発メンバーとし、処理チームは１０人（ｎ＝１０）とした。
【００６１】
試験設計
並行群間試験設計を用いて、ＤＨＡ／ＥＰＡ／ｎ−３ ＤＰＡを含有する新規な調合剤の、プレシーズンキャンプ及び競技シーズンを含むシーズンを通してのＥＰＡ、ＤＨＡの割合、及びオメガ−６：オメガ−３脂肪酸比、及び血清ＮＦＬに対する効果を、非処理コントロールと比較した。
【００６２】
処理チームのアメリカンフットボールアスリートは、２０００ｍｇのＤＨＡ、５６６ｍｇのＥＰＡ、及び３３０ｍｇのｎ−３ ＤＰＡを含有するオメガ−３脂肪酸の毎日のサプリメントを、２０１６年フットボールシーズンの毎日、合計８９日間にわたって摂取するように割り当てた。非処理コントロールチームは、同じ期間にわたって処理を受けなかった。両チームともに、試験期間中の高オメガ−３脂肪酸の食事は、週２回までに制限した。
【００６３】
試験プロトコルの概略図を図９に示す。シーズンの開始前に、接触の激しさ、接触の時間の変化に合わせた特定の間隔で、並びに頭部衝撃の回数及び大きさの変化が報告された時点に合わせた特定の間隔で、血液のサンプリングを行った。ベースライン血液サンプルは、被験者が、サプリメント開始の前及びプレシーズントレーニングキャンプの前（ベースライン；Ｔ１）の接触のない期間から戻って来た時点（ベースライン；Ｔ１）で採取した。第二のサンプルは、１日２回のプレシーズンキャンプの終了時（ポストキャンプ；Ｔ２）に採取した。残りの血液サンプルは、競技シーズンを通して、試合のない週末の後の、又は土曜日の試合後の月曜日（４８時間）（Ｔ３〜Ｔ６）に採取した。
【００６４】
血清ＮＦＬの定量．  血清ＮＦＬ濃度は、デジタルアレイ技術を用い、単分子アレイＨＤ−１分析器、ソフトウェアバージョン１．５によって測定した。各アッセイに対して同じロットのキットを用いた。分析の前に、サンプルを１／４に希釈した。サンプルはすべて、定量下限以上であった。検出下限は、０．０４８ｐｇ／ｍｌであった。２連のサンプルで測定し、メジアン量の変動係数は５パーセントであった。
【００６５】
脂肪酸分析．  血漿サンプルを等分し、ボルテックス撹拌し、相に分離させた。下側の相を抽出し、窒素ガス下で乾燥し、メチル化した。次に、メチル化したサンプルを分離し、最上層を抽出し、窒素ガス下で乾燥した。次に、サンプルをヘキサン中に再溶解して、脂肪酸分析用とした。血漿脂肪酸濃度を、ガスクロマトグラフィを用いて測定し、脂肪酸ピークを、脂肪酸基準サンプルに対して脂肪酸のそれぞれの保持時間を比較することによって識別した。
【００６６】
結果
ω−３サプリメントは、血清ω−３脂肪酸を増加させ、ω−６：ω−３比を低下させる。ベースライン（Ｔ１）及びポストシーズン（Ｔ６）のＤＨＡ、ＥＰＡの割合、並びにω−６：ω−３比を、それぞれ図６のパネルＡ〜Ｃに示す。キャンプの開始前（ベースライン、プレキャンプ）及びω−３ＦＡサプリメントの開始前は、群間の小さい（ＥＳ＝０．４２）可能性の高い差異がＥＰＡの割合で観察され、コントロール群の方が高いベースラインＥＰＡを示した（平均差異；±９０％ＣＩ；０．０６％；±０．０６％）。ベースラインでコントロール群の方が高いＥＰＡが観察された結果、ω−６：ω−３比において、小さい（ＥＳ＝０．３７）可能性がある差異（−０．９３、±１．１）を得た。シーズン終了時（Ｔ６）、処理群は、ＥＰＡ及びＤＨＡに対してそれぞれ、最も可能性が高い非常に大きい（ＥＳ＝３．８）増加、及び最も可能性が高い極めて大きい（ＥＳ＝４．８）増加を呈した。これらの増加の結果、シーズン終了時までに、ＥＰＡ（０．２７％；±０．１３％）及びＤＨＡ（１．４％；±０．６７％）に対してそれぞれ、大きい（ＥＳ＝１．２４）及び非常に大きい（ＥＳ＝２．６２）群間差異を得た。処理群で観察されたＥＰＡ及びＤＨＡの割合の増加の結果、ω−６：ω−３比において、最も可能性が高い大きい（ＥＳ＝２．０）減少を得た。ＥＰＡの割合の小さい（ＥＳ＝０．４７）可能性が高い増加がシーズン全体にわたってコントロール群で観察され、ω−６：ω−３比の小さい（ＥＳ＝０．３６）減少という結果になったが、処理群では、より大きい変化が観察された結果、ポストシーズン（Ｔ６）でω−６：ω−３比の最も可能性が高い大きい（ＥＳ＝１．３５）群間差異（３．８、＋１．８）を得た。
【００６７】
ω−３サプリメントは、頭部外傷の代替マーカーである血清ニューロフィラメント軽鎖を減少させる。図７は、ω−３ＦＡサプリメントの血清Ｎｆ−Ｌに対する効果を示す。各チーム内の対応するベースラインからの変化パーセントを、対応する倍率変化の統計推定値及び定性的推論と共に表２に示す。キャンプ開始前及びω−３ＦＡサプリメントの開始前のコントロールチームと処理チームとの間の血清Ｎｆ−Ｌの差異は明白ではなかった（０．３ｐｇ・ｍＬ−１；±１．４ｐｇ・ｍＬ−１）。キャンプの終了時、最も可能性が高い増加（３．７ｐｇ・ｍＬ−１；±１．７ｐｇ・ｍＬ−１）が、中程度の大きさ（ＥＳ＝１．０７）であるがベースライン値に対しては１．５倍の増加として、コントロールチームで観察された。対照的に、処理を受けたことでは僅かな（ＥＳ＝０．１４）明白ではない増加（０．１ｐｇ・ｍＬ−１；±２．１ｐｇ・ｍＬ−１）しか観察されず、その結果、コントロールチームと処理チームとの間で、絶対差異においては非常に可能性が高い差異（３．７ｐｇ・ｍＬ−１；±１．７ｐｇ・ｍＬ−１；ＥＳ＝０．７１）が、しかし倍率変化の差異では最も可能性が高い差異（ＥＳ＝１．０４）が得られた。その後、ω−３ＦＡサプリメントを受けなかったコントロールチームのアスリートでは、血清Ｎｆ−Ｌは、競技シーズンを通して高い状態で維持された（ＥＳ範囲＝０．７３〜１．０２）。処理チームでは、血清Ｎｆ−Ｌの増加は観察されたが、増加の大きさは僅かであった（ＥＳ範囲＝０．２３〜０．４３）。シーズン全体にわたってのコントロールチームと処理チームとの間の増加の大きさの差異の結果、競技シーズン全体にわたる倍率変化において、可能性が高いから最も可能性が高いまでのチーム間の差異となった（表２）。
【００６８】
ω−３サプリメントは、先発メンバーとして分類されるアスリートにおいて頭部外傷の代替マーカーである血清ニューロフィラメント軽鎖を減少させる。先発メンバーとして分類されるアメリカンフットボールアスリートにおけるω−３ＦＡサプリメントの血清Ｎｆ−Ｌに対する効果を、図８に示す。各チームの先発メンバーでの対応するベースラインからの変化パーセント、及び対応する倍率変化の統計推定値、及び定性的推論を、表２に示す。全アスリートの場合に観察されたものと同様に、キャンプ開始前及びω−３ＦＡサプリメントの開始前の先発メンバーでのコントロールチームと処理チームとの間の血清Ｎｆ−Ｌの差異は明白ではなかった（０．０８ｐｇ・ｍＬ−１；±２．２ｐｇ・ｍＬ−１）。さらに同様に、キャンプ終了時、先発メンバーのコントロールチームにおいて血清Ｎｆ−Ｌの中程度の大きさの最も可能性が高い増加（４．９ｐｇ・ｍＬ−１；±２．２ｐｇ・ｍＬ−１；ＥＳ＝１．１０）が観察され、これは、非先発メンバーが含まれていた場合よりも大きいベースライン値からの倍率変化（１．７）に相当していた。ω−３ＦＡサプリメントを受けた先発メンバーでは、ポストキャンプ（Ｔ２）で増加は観察されなかった（０．０４ｐｇ・ｍＬ−１；±２．１ｐｇ・ｍＬ−１；ＥＳ＝０．０２）。この差異の結果、最も可能性が高い差異（４．９ｐｇ・ｍＬ−１；±３．０ｐｇ・ｍＬ−１；ＥＳ＝０．９６）が得られた。その後、コントロールチームの先発メンバーでは、血清Ｎｆ−Ｌは競技シーズンを通して高い状態で維持された（ＥＳ範囲＝０．６９〜１．３２）。非先発メンバーが除外された場合、ω−３ＦＡサプリメントを受けたチームの方が大きい平均増加が観察されたが（ＥＳ範囲＝１．１２〜１．８９）、これらの増加は、ここでも、コントロールチームの先発メンバーと比較して低い大きさであった（図８、表３）。
【００６９】
図の説明
図６は、ある特定の開示される調合剤（ＤＨＡ／ＥＰＡ／ｎ−３ ＤＰＡ；ｎ＝３１）のＥＰＡの割合、ＤＨＡの割合、及びオメガ−６：オメガ−３比に対する効果を示す。ベースラインＳＤｂｅｔｗｅｅｎの０．２倍として算出された最小の有意変化に対する閾値；可能性は記号（例えば＋が用いられる）の数の増加で示され、独特の記号で表される：（＋）ベースラインに対して、（＊）コントロールに対して。＋  可能性がある、＋＋  可能性が高い、＋＋＋  非常に可能性が高い、＋＋＋＋  最も可能性が高い。データはすべて平均＋ＳＤである。図７は、ある特定の開示される調合剤（ＤＨＡ／ＥＰＡ／ｎ−３  ＤＰＡ；ｎ＝３１）の血清ＮＦＬに対する効果を示す（ｐｇ・ｍＬ−１）。ベースラインＳＤｂｅｔｗｅｅｎの０．２倍として算出された最小の有意変化に対する閾値；可能性は記号の数の増加で示される：（＋）ベースラインに対して。＋  可能性がある、＋＋  可能性が高い、＋＋＋  非常に可能性が高い、＋＋＋＋  最も可能性が高い。データはすべて平均である。各チーム内の対応するベースラインからの変化パーセントを、対応する倍率変化の統計推定値及び定性的推論と共に表２に示す。ＤＨＡ／ＥＰＡ／ｎ−３ ＤＰＡ調合剤によるサプリメントは、血清ω−３脂肪酸を増加させ、オメガ−６：オメガ−３比を低下させた（図６）。図７は、ある特定の開示される調合剤（ＤＨＡ／ＥＰＡ／ｎ−３ ＤＰＡ；ｎ＝３１）の血清ＮＦＬに対する効果を示す（ｐｇ・ｍＬ−１）。ベースラインＳＤｂｅｔｗｅｅｎの０．２倍として算出された最小の有意変化に対する閾値；可能性は記号の数の増加で示される：（＋）ベースラインに対して。＋  可能性がある、＋＋  可能性が高い、＋＋＋  非常に可能性が高い、＋＋＋＋  最も可能性が高い。データはすべて平均である。各チーム内の対応するベースラインからの変化パーセントを、対応する倍率変化の統計推定値及び定性的推論と共に表２に示す。上記調合剤によるサプリメントは、血清ＮＦＬも減少させた（表２、図７）。図８は、先発メンバーとして分類されるアメリカンフットボールアスリートにおける、ある特定の開示される調合剤（ＤＨＡ／ＥＰＡ／ｎ−３  ＤＰＡ；ｎ＝３１）の血清ＮＦＬに対する効果を示す（ｐｇ・ｍＬ−１）。ベースラインＳＤｂｅｔｗｅｅｎの０．２倍として算出された最小の有意変化に対する閾値；可能性は記号の数の増加で示される：（＋）ベースラインに対して。＋  可能性がある、＋＋  可能性が高い、＋＋＋  非常に可能性が高い、＋＋＋＋  最も可能性が高い。データはすべて平均である。各チーム内の対応するベースラインからの変化パーセントを、対応する倍率変化の統計推定値及び定性的推論と共に表３に示す。サプリメントは、さらに、先発メンバーとして分類されるアスリートの血清ＮＦＬも減少させた（表３、図８）。
【００７０】
【表２】
2020531589.tif 000004
【００７１】
【表３】
2020531589.tif 000005
【００７２】
例５
本発明で開示される組成物によって実現される相乗効果の基礎を、ＤＨＡ単独の効果と比較して調べるために、本発明者らは、両組成物におけるタンパク質相互作用ネットワークを識別するために、及び両者の間でのネットワークの重複を特定するために、大容量データ抽出法を用いた。具体的には、ＤＨＡと、ＤＨＡ（２０００ｍｇ）、ＥＰＡ（５６０ｍｇ）、及び３２０ｍｇのドコサペンタエン酸、２０ｍｇの他のオメガ−３脂肪酸（以降、ＦＡ−１０１と称する）とを比較した。図１０は、重複しない、したがって、これら２つの製品間の差異が識別されるタンパク質相互作用ネットワークの領域を示す。したがって、図１０の左側に示されるタンパク質ネットワークフラグメントは、ＦＡ−１０１によって優先的に修飾される回路を識別するものであり、図１０の右側は、これらのタンパク質ネットワークフラグメントによって直接影響される分子プロセスを識別するものである。このタンパク質相互作用ネットワークの違いが身体の慢性脳損傷に対する応答を制御する＞３４００の回路の機能に及ぼす影響を評価するために、本発明者らは、図１０に示される分子プロセスと外傷性脳損傷に影響を受ける３４００の分子プロセスとの間のタンパク質相互作用ネットワークの重複を調べた。ＤＨＡ調合剤ではなくＦＡ−１０１によって影響を受ける特定の回路を識別するために、本発明者らは、＞３４００の分子プロセスの相互リンクパターンを調べた。結果から、虚血の発病において重要な役割を果たしている神経幹細胞の分化の制御が、２つの製品によって異なって影響を受けていると思われることが示された。これに関して、神経幹細胞の増殖の制御は、ミトコンドリア機能によって行われる。したがって、ＤＨＡではなくＥＰＡが、コントロールと比較して神経幹細胞の増殖を著しく増加させ、エンドカンナビノイドである２−アラキドノイルグリセロール（２−ＡＧ）及びｐ−ｐ３８ ＭＡＰＫのレベルの上昇に伴う効果であった。ＦＡ−１０１調合剤の成分であるＥＰＡは、ミトコンドリア膜の能力を守り、ミトコンドリアを酸化ストレス及び炎症ストレスから保護する。対照的に、ＤＨＡは、ミトコンドリア新生を活性化し、酸化ストレスを増加させ、ミトコンドリア膜の能力を失わせる。神経の完全性を損なうこの効果を相殺するために、ＰＬＡ２の媒介によって細胞膜から遊離すると、ＤＨＡは直ちにＤＨＡ代謝物である「ニューロプロテクチンＤ１」及び「４−ヒドロキシヘキセナール」に変換される。これらのＤＨＡ代謝物はいずれも、ＥＰＡ様の機能を有し、細胞を酸化ストレスから保護し、炎症促進性信号を相殺する。
【００７３】
したがって、ＥＰＡ及びＤＨＡ代謝物が類似の神経保護の保護機能を作用させることから、ＥＰＡとＤＨＡ代謝物との間の相互作用が、相乗作用として現れている可能性があり、このことは、ＦＡ−１０１調合剤が、ＤＨＡと比較してより優れた治療特性を有することを意味している。ＦＡ−１０１のさらに追加の利点は、ＦＡ−１０１が差異的に代謝を制御することを示すタンパク質ネットワーク回路に対する効果である。例えば、培養したラット肝細胞では、［１−１４Ｃ］パルミチン酸の酸化が、ＤＨＡによって低下され、一方それはＥＰＡによって刺激される。
【００７４】
外傷性脳損傷の治療におけるこの機能の意味は、アデノシン三リン酸（ＡＴＰ）の産生源として、虚血時の解糖及び虚血後の再灌流時の脂肪酸β−酸化に対する依存が高まることである。ＤＨＡではなくＦＡ−１０１は、ミトコンドリア脂肪酸の酸化を増加させ、これらの代謝プロセスにおいて重要な役割を果たす酵素２，４−ジエノイル−ＣｏＡレダクターゼ遺伝子を上方制御することが知られている。ＣＮＳの外傷性損傷後に観察される神経細胞消失において役割を果たしていると提案されているアポトーシス細胞死は、パルミチン酸及びステアリン酸によって誘導される。ＤＨＡではなくＥＰＡは、これらの脂肪酸の濃度を低下させ、したがって、神経保護効果を作用させることができる。
【００７５】
最後に、有利なＦＡ−１０１の特性のリストの拡張は、ＦＡ−１０１調合剤がミクログリア分化に影響を与える能力を有するという観察結果である。ミクログリア細胞は、ｃＰＬＡ２の活性化を通して、細胞膜からＤＨＡを遊離し、炎症促進応答を引き起こす。炎症の増加及び神経新生の減少が、慢性外傷性脳損傷の主要な合併症の１つである鬱状態と関連付けられてきた。加えて、ミクログリアの活性化及び同時に発生する炎症性サイトカイン、インターロイキン−１βの遊離によって、神経変性が悪化し、空間記憶及び文脈記憶が悪化する。
【００７６】
本開示を、好ましい実施形態を参照して記載してきたが、当業者であれば、開示される装置、システム、及び方法の趣旨並びに範囲から逸脱することなく、形式上でも詳細にも変更が成されてよいことは認識される。
【図１】
2020531589.tif 000006
【図２】
2020531589.tif 000007
【図３】
2020531589.tif 000008
【図４】
2020531589.tif 000009
【図５】
2020531589.tif 000010
【図６】
2020531589.tif 000011
【図７】
2020531589.tif 000012
【図８】
2020531589.tif 000013
【図９】
2020531589.tif 000014
【図１０】
2020531589.tif 000015
【国際調査報告】
2020531589.tif 000016
2020531589.tif 000017