(57)【要約】  陽春砂抽出物を有効成分として含有する肥満予防又は改善組成物に関し、前記陽春砂抽出物を水で抽出することを特徴とし、マウスの経口投与を基準にして１００ｍｇ／ｋｇ〜５００ｍｇ／ｋｇ含まれていることを特徴とする肥満予防又は改善組成物に関する。本発明は、陽春砂抽出物の肝内脂肪細胞増加の抑制、脂肪細胞の大きさの制限、中性脂肪生成の抑制、ｉｎ  ｖｉｖｏでのｍＲＮＡ発現の抑制を通じて抗肥満効能を有する陽春砂抽出物を含有した肥満予防又は改善組成物を提供する。【選択図】図３
2020518282.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
陽春砂抽出物を有効成分として含有する高脂肪食による肥満予防又は改善用健康機能食品組成物であって、
前記陽春砂抽出物は水で抽出し、マウスの経口投与を基準にして１００ｍｇ／ｋｇ〜５００ｍｇ／ｋｇ含まれ、
前記陽春砂抽出物は、高脂肪食による誘導肥満マウスにおける中性脂肪の含量を抑制し、マウスにおけるＰＰＡＲγ（ｐｅｒｏｘｉｓｏｍｅ  ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｏｒｓ−ａｃｔｉｖａｔｅｄ  ｒｅｃｅｐｔｒｏｒ  γ）、Ｃ／ＥＢＰα（ＣＣＡＡＴ／ｅｎｈａｎｃｅｒ  ｂｉｎｄｉｎｇ  ｐｒｏｔｅｉｎ  α）、ＦＡＳ（ｆａｔｔｙ  ａｃｉｄ  ｓｙｎｔｈａｓｅ）、ＳＲＥＢＰ１（ｓｔｅｒｏｌ  ｒｅｇｕｌａｔｏｒｙ  ｅｌｅｍｅｎｔ−ｂｉｎｄｉｎｇ  ｐｒｏｔｅｉｎ  １）、ＴＮＦα（ｔｕｍｏｒ  ｎｅｃｒｏｓｉｓ  ｆａｃｔｏｒ  α）及びアディポネクチンｍＲＮＡの発現を抑制する
ことを特徴とする高脂肪食による肥満予防又は改善用健康機能食品組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、陽春砂抽出物を含有する肥満予防、改善又は治療組成物に関する。
【０００２】
本発明は、前記陽春砂抽出物を水で抽出することを特徴とし、陽春砂抽出物の肝内脂肪生成の抑制、脂肪細胞の大きさの制限、中性脂肪生成の抑制、脂肪細胞分化関連ｍＲＮＡ発現の抑制及び脂肪肝誘発ｍＲＮＡ発現の抑制を通じて陽春砂抽出物の肥満予防又は改善効能を確認することによって陽春砂抽出物を含有する肥満予防、改善又は治療組成物を提供する。
【背景技術】
【０００３】
現代人達の過剰栄養により、摂取とエネルギー消費との間の不均衡によって誘発される代謝障害で体内に脂肪が過剰に蓄積され、肥満が増加している状態である。
【０００４】
このような肥満の人口は漸次増加しており、２００８年には全世界の成人の人口のうち１５億人が過体重及び肥満であり、２０３０年には過体重の人口が約２１億人に至ると推算されている。
【０００５】
特に、児童期に形成される肥満症は、脂肪細胞の大きさ及び細胞の数が増加する形態を示しており、体重を減少させると、脂肪細胞の大きさは減少するが、細胞の数は一生にわたって減少しないので危険である。
【０００６】
これと異なり、成人の場合、脂肪細胞は肥大するが、細胞の数は増加しない形態を示す。肥満の分布も、腹部を中心に体幹に限定される傾向がある。
【０００７】
すなわち、成人の場合は、脂肪細胞の大きさのみが増加するが、小児期に始まった肥満の場合は、脂肪細胞の大きさと共に脂肪細胞の数が増加するようになり、成人期に体重を減量するとしても、一時的に脂肪細胞の大きさのみが減少し、脂肪細胞の数は依然として多い状態であるので、肥満が再発しやすくなり得る。
【０００８】
併せて、最近、栄養状態が良くなり、成人病が増加していくにつれて脂肪肝の患者が増加している。脂肪肝は、脂肪の過度な摂取によって肝内に脂肪が蓄積及び合成され、正常な脂肪代謝が行われないことから発病する疾患である。
【０００９】
脂肪肝疾患の患者の７０％〜８０％は肥満であり、その他に相当数の患者は過体重である。したがって、体重減少は、インスリン感受性を向上させるので脂肪肝を好転させ、最近は、体重の約５％程度のみを減量してもインスリン抵抗性が改善され、肝機能数値が好転するという報告がある。そこで、生活習慣の改善が何よりも重要である。
【００１０】
これによって、最近、肥満の深刻性が浮かび上がりながらダイエット補助剤として多様な製品が発売されているが、これによって胃炎、便秘、食慾不振などの副作用がもたらされている実情にある。
【００１１】
本出願人は、陽春砂（Ａｍｏｍｕｍ  ｖｉｌｌｏｓｕｍ  Ｌｏｕｒｅｉｒｏ）抽出物を用いることによって、副作用がなく、長期服用しても毒性がなく、肥満改善に効果がある本発明を案出した。
【００１２】
砂仁は、ショウガ科（Ｚｉｎｇｉｂｅｒａｃｅａｅ）に属した緑殻砂（Ａｍｏｍｕｍ  ｖｉｌｌｏｓｕｍ  Ｌｏｕｒｅｉｒｏ  ｖａｒ．ｘａｎｔｈｉｏｉｄｅｓ  Ｔ．Ｌ．Ｗｕ  ｅｔ  Ｓｅｎｊｅｎ）又は陽春砂（Ａｍｏｍｕｍ  ｖｉｌｌｏｓｕｍ  Ｌｏｕｒｅｉｒｏ）のよく熟れた果実又は種子塊を意味し、本発明では陽春砂の果実を材料として用いた。
【００１３】
陽春砂は、主に福建省（Ｆｕｊｉａｎ）、広東省（Ｇｕａｎｇｄｏｎｇ）、広西チワン族自治区（Ｇｕａｎｇｘｉ）、雲南省（Ｙｕｎｎａｎ）で生産され、緑殻砂は、主にカンボジア（Ｃａｍｂｏｄｉａ）、インド（Ｉｎｄｉａ）、ラオス（Ｌａｏｓ）、ミャンマー（Ｍｙａｎｍａｒ）、タイ王国（Ｔｈａｉｌａｎｄ）、ベトナム（Ｖｉｅｔｎａｍ）などのインドシナ半島地域及び中国の広西チワン族自治区（Ｇｕａｎｇｘｉ）、雲南省（Ｙｕｎｎａｎ）の一部地域で産出される（非特許文献１）。生産地が異なるので、古代には緑殻砂を別途に「縮砂仁」という名称で称した。
【００１４】
一方、中国では本物と認めるが、韓国では偽物として取り扱われる海南砂（Ａｍｏｍｕｍ  ｌｏｎｇｉｌｉｇｕｌａｒｅ  Ｔ．Ｌ．Ｗｕ）の果実も大量に流通されている状況である。しかし、Ｓｈｅｎ等（非特許文献２）は、ＲＰ−ＨＰＬＣ研究の結果、成分上、３種類の砂仁が高い類似度を示すが、海南砂と陽春砂の場合は化学成分が類似する一方、緑殻砂の場合は前記海南砂及び陽春砂と明らかに相違しているので、これに対する薬理及び臨床効能の比較が究明されるべきであると述べた。
【００１５】
そこで、本発明は、陽春砂抽出物の肥満予防又は改善効能を立証するために、ｉｎ  ｖｉｖｏで高脂肪食誘導肥満モデルを用いて肝内脂肪生成の抑制、脂肪細胞の大きさの制限、中性脂肪生成の抑制、脂肪細胞分化関連ｍＲＮＡ発現及び脂肪肝誘発ｍＲＮＡ発現の抑制を通じて陽春砂抽出物の肥満予防、改善及び治療効能を明らかにすることによって本発明を完成した。
【００１６】
一方、先行技術文献を検討すると、特許文献１には、烏梅及び紫草抽出物を有効成分として含む肥満、脂質異常症、脂肪肝又は糖尿の予防又は治療用薬剤学的組成物が記載されており、特許文献２には、栗皮抽出物を含む脂肪肝の予防又は治療用組成物に効果があることが記載されている。
【００１７】
しかし、前記各先行技術文献は、陽春砂（Ａｍｏｍｕｍ  ｖｉｌｏｓｕｍ）とは異なる天然物を用いて効能を明らかにしたものであって、本発明とは区別されると言える。
【先行技術文献】
【特許文献】
【００１８】
【特許文献１】大韓民国登録特許公報第１０−１４３１６１０号
【特許文献２】大韓民国登録特許公報第１０−１２０６５４３号
【非特許文献】
【００１９】
【非特許文献１】Ｆｌｏｒａ  ｏｆ  Ｃｈｉｎａ，ｖ２４：３４７−３５６．２０００
【非特許文献２】ＳＨＥＮ  Ｌｉ  ＷＡＮＧ  Ｙａｎｇ  ＪＩＡＮＧ  Ｋｕ  ｅｔ  ａｌ．Ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎ  ｏｆ  ＨＰＬＣ  Ｆｉｎｇｅｒｐｒｉｎｔｓ  ｏｆ  Ａｍｏｍｕｍ  ｖｉｌｌｏｓｕｍ  Ｌｏｕｒ．，Ａｍｏｍｕｒｎ  ｖｉｌｌｏｓｕｍ  Ｌｏｕｒ．ｖａｒ．ｘａｎｔｈｉｏｉｄｅｓ  Ｔ．Ｌ．Ｗｕ  ｅｔ  Ｓｅｎｊｅｎ  ａｎｄ  Ａｍｏｍｕｍ  ｌｏｎｇｉｌｉｇｕｌａｒｅ  Ｔ．Ｌ．Ｗｕ．Ｃｈｉｎｅｓｅ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｊｏｕｒｎａｌ．２０１６：５１（１２）；１０３９−１０４３．
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００２０】
本発明の技術的課題は、高脂肪食誘導肥満モデルを用いた陽春砂抽出物の抗肥満効能を確認し、陽春砂抽出物を含有した抗肥満組成物を提供することにある。
【００２１】
本発明の技術的課題は、陽春砂抽出物の肥満予防又は改善効能を立証するために、ｉｎ  ｖｉｖｏで高脂肪食誘導肥満モデルを用いて肝内脂肪生成の抑制、脂肪細胞の大きさの制限、中性脂肪生成の抑制、脂肪細胞分化関連ｍＲＮＡ発現及び脂肪肝誘発ｍＲＮＡ発現の抑制を通じて陽春砂抽出物の肥満予防又は改善効能を確認することによって、陽春砂抽出物を含有する肥満予防、改善又は治療組成物を提供することにある。
【課題を解決するための手段】
【００２２】
本発明は、陽春砂抽出物を含有する肥満予防、改善又は治療組成物を提供することによって技術的課題を解決しようとする。
【００２３】
本発明は、前記陽春砂抽出物が、マウスの経口投与を基準にして１００ｍｇ／ｋｇ〜５００ｍｇ／ｋｇ含まれていることを特徴とする肥満予防又は改善組成物を提供することによって技術的課題を解決しようとする。
【００２４】
本発明は、前記陽春砂抽出物を水で抽出することを特徴とする肥満予防又は改善組成物を提供することによって技術的課題を解決しようとする。
【００２５】
本発明において、前記陽春砂抽出物は、高脂肪食による誘導肥満マウスにおける中性脂肪の含量を抑制し、マウスにおけるＰＰＡＲγ（ｐｅｒｏｘｉｓｏｍｅ  ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｏｒｓ−ａｃｔｉｖａｔｅｄ  ｒｅｃｅｐｔｒｏｒ  γ）、Ｃ／ＥＢＰα（ＣＣＡＡＴ／ｅｎｈａｎｃｅｒ  ｂｉｎｄｉｎｇ  ｐｒｏｔｅｉｎ  α）、ＦＡＳ（ｆａｔｔｙ  ａｃｉｄ  ｓｙｎｔｈａｓｅ）、ＳＲＥＢＰ１（ｓｔｅｒｏｌ  ｒｅｇｕｌａｔｏｒｙ  ｅｌｅｍｅｎｔ−ｂｉｎｄｉｎｇ  ｐｒｏｔｅｉｎ  １）、ＴＮＦα（ｔｕｍｏｒ  ｎｅｃｒｏｓｉｓ  ｆａｃｔｏｒ  α）及びアディポネクチン（Ａｄｉｐｏｎｅｃｔｉｎ）ｍＲＮＡの発現を抑制することを特徴とする肥満予防又は改善組成物を提供することによって技術的課題を解決しようとする。
【００２６】
本発明は、前記陽春砂抽出物が、高脂肪食による誘導肥満に対して中性脂肪生成の抑制を通じた肥満予防又は改善組成物を提供することによって技術的課題を解決しようとする。
【００２７】
本発明は、陽春砂抽出物を有効成分として含有する肥満改善健康機能食品組成物を提供することによって技術的課題を解決しようとする。
【発明の効果】
【００２８】
本発明の実験例により、高脂肪食誘導肥満モデルを用いた陽春砂抽出物の抗肥満効能を確認するためにｉｎ  ｖｉｖｏで脂肪蓄積抑制効能に対して確認した。
【００２９】
本発明の実験例により、高脂肪食誘導肥満モデルのマウスに陽春砂抽出物を投与した結果、肝内脂肪生成の抑制、脂肪細胞の大きさの制限、中性脂肪生成の抑制、脂肪細胞分化関連ｍＲＮＡ及び脂肪肝誘発ｍＲＮＡ発現の抑制を通じて陽春砂抽出物の肥満予防又は改善効能を確認することによって、陽春砂抽出物を含有する肥満予防、改善又は治療組成物を開発することによって本発明を完成した。
【図面の簡単な説明】
【００３０】
【図１】高脂肪食誘導肥満モデルを用いた陽春砂抽出物の投与量による動物の体重変化を示した説明図
【図２】高脂肪食誘導肥満モデルを用いた陽春砂抽出物の投与量による肝の重さ及び総脂肪量の変化を示した説明図
【図３】高脂肪食誘導肥満モデルを用いた陽春砂抽出物の投与量による肝内脂肪組織を観察した説明図
【図４】高脂肪食誘導肥満モデルを用いた陽春砂抽出物の投与量による脂肪の組織変化を観察した説明図
【図５】高脂肪食誘導肥満モデルを用いた陽春砂抽出物の投与量による中性脂肪の含量を分析したグラフ
【図６】高脂肪食誘導肥満モデルを用いた陽春砂抽出物の投与量によるＰＰＡＲγ及びＣ／ＥＢＰαの発現量を確認したグラフ
【図７】高脂肪食誘導肥満モデルを用いた陽春砂抽出物の投与量によるＦＡＳ  ｍＲＮＡ及びＳＲＥＢＰ１  ｍＲＮＡの発現量を確認したグラフ
【図８】高脂肪食誘導肥満モデルを用いた陽春砂抽出物の投与量によるＴＮＦα及びアディポネクチンの発現量を確認したグラフ
【発明を実施するための形態】
【００３１】
本明細書及び特許請求の範囲に使用された用語や単語は、通常的又は辞書的な意味に限定して解釈してはならなく、発明者は、自分の発明を最善の方法で説明するために用語の概念を適宜定義できるという原則に立脚し、本発明の技術的思想に符合する意味及び概念で解釈される。
したがって、本明細書に記載した実施例、参照例及び図面に示した事項は、本発明の最も好ましい一例に過ぎなく、本発明の技術的思想を全て代弁するものではないので、本出願時点において、これらに取って代わる多様な均等物及び変形例があり得る。
【００３２】
実験例１．高脂肪食誘導肥満モデルを用いた陽春砂抽出物の抗肥満効果
【００３３】
１）陽春砂抽出物の製造
【００３４】
陽春砂（Ａｍｏｍｕｍ  ｖｉｌｌｏｓｕｍ）は、円光大学韓医科大学の本草学教室で本物であることが確認されており、水で陽春砂を抽出することによって抽出物を得る段階である。
【００３５】
設計条件に応じて他の溶媒が使用されてもよく、抽出溶媒の種類に応じて抽出温度、抽出時間、溶媒の量及び残留成分処理方式などが異なる形で設計され得る。抽出溶媒としても多様な溶媒が使用可能であるが、抽出可能な溶媒としては、水、エタノール、メタノール、脂肪油、グリセリン、麻油、エチルアセテート、アセトン、ブタノール及びイソプロパノールなどがある。
【００３６】
好ましくは、本発明では、水で陽春砂を抽出した。抽出過程を検討すると、１００ｇを３次蒸留水９００ｍｌで３時間加熱及び還流抽出した後でろ過し、余液を減圧、濃縮及び凍結乾燥することによって陽春砂水抽出物９．２５ｇを得た後、これを冷蔵保管しながら実験に使用した。したがって、水で抽出することを特徴とする肥満予防又は改善組成物を開発することができる。
【００３７】
２）実験動物の飼育及び食餌
【００３８】
実験動物として６週齢のＣ５７ＢＬ／６Ｊ雄マウスを購入（Ｏｒｉｅｎｔｂｉｏ、城南、韓国）し、これを１週間飼育室の環境に適応させた。平均体重が約２０ｇ〜２２ｇになるマウスを正常食対照群（Ｃｏｎｔｒｏｌ）、高脂肪食対照群（Ｈｉｇｈ  ｆａｔ  ｄｉｅｔ）、高脂肪食と陽春砂抽出物１００ｍｇ／ｋｇ投与群（Ｈｉｇｈ  ｆａｔ  ｄｉｅｔ＋ＡＶＥ（１００ｍｇ／ｋｇ））、高脂肪食と陽春砂抽出物２００ｍｇ／ｋｇ（Ｈｉｇｈ  ｆａｔ  ｄｉｅｔ＋ＡＶＥ（２００ｍｇ／ｋｇ））投与群、高脂肪食と陽春砂抽出物５００ｍｇ／ｋｇ（Ｈｉｇｈ  ｆａｔ  ｄｉｅｔ＋ＡＶＥ（５００ｍｇ／ｋｇ））投与群の５個の群に任意に配置し、これらを７週間飼育した。
【００３９】
飼育室の温度は１８℃〜２４℃に、相対湿度は５０％〜６０％に維持し、明暗は１２時間周期（８：００〜２０：００）に調節した。本実験に使用した高脂肪飼料は、総熱量の約６０％が脂肪として供給されるように１５％のラード（ｌａｒｄ）を基本食にさらに添加し、体重は一週間に一回ずつ測定した。動物実験は、円光大学の動物実験倫理委員会（Ｗｏｎｋｗａｎｇ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  Ａｎｉｍａｌ  Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔ  Ｅｔｈｉｃｓ  Ｃｏｍｍｉｔｔｅｅ）で承認を受けており、実験室動物の使用及び管理は機関のガイドライン（ｉｎｓｔｉｔｕｔｉｏｎａｌ  ｇｕｉｄｅｌｉｎｅ）に従った。
【００４０】
３）実験群設定及び試料投与
【００４１】
馴化期間が終了した実験動物の体重を測定した。実験群は、正常群（Ｃｏｎｔｒｏｌ  ｇｒｏｕｐ）、高脂肪食投与群（Ｈｉｇｈ  ｆａｔ  ｄｉｅｔ）、高脂肪飼料＋陽春砂抽出物１００ｍｇ／ｋｇ投与群（Ａｍｏｍｕｍ  ｖｉｌｌｏｓｕｍ  ｅｘｔｒａｃｔ、ＡＶＥ  １００ｍｇ／ｋｇ  ｇｒｏｕｐ）、高脂肪飼料＋陽春砂抽出物２００ｍｇ／ｋｇ投与群（Ａｍｏｍｕｍ  ｖｉｌｌｏｓｕｍ  ｅｘｔｒａｃｔ、ＡＶＥ  ２００ｍｇ／ｋｇ  ｇｒｏｕｐ）、高脂肪飼料＋陽春砂抽出物５００ｍｇ／ｋｇ投与群（Ａｍｏｍｕｍ  ｖｉｌｌｏｓｕｍ  ｅｘｔｒａｃｔ、ＡＶＥ  ５００ｍｇ／ｋｇ  ｇｒｏｕｐ）に区分し、各群当たり１０匹ずつ実験に使用した。また、陽春砂抽出物は、毎日定められた濃度でマウス用ゾンデを用いて７週間投与した。
【００４２】
図１は、高脂肪食誘導肥満モデルを用いた陽春砂抽出物の投与量による動物の体重変化を示した図である。
【００４３】
その結果、陽春砂抽出物の投与量が増加するにつれて体重が減少することを確認することができた。すなわち、陽春砂抽出物は、マウスの経口投与を基準にして１００ｍｇ／ｋｇ〜５００ｍｇ／ｋｇ含まれていることを特徴とする肥満予防、改善又は治療組成物で製造することができる。
【００４４】
４）バイオマーカー分析及び剖検
【００４５】
体重は、実験開始後に毎週測定し、剖検のためには、エーテルで麻酔した後、腹帯静脈から採血し、血液分析に使用した。また、肝と脂肪（副睾丸脂肪）組織を摘出し、その重さを測定した。
【００４６】
図２は、高脂肪食誘導肥満モデルを用いた陽春砂抽出物の投与量による肝の重さ及び総脂肪量の変化を示した図である。
【００４７】
その結果、陽春砂抽出物の投与量が増加するにつれて肝と脂肪組織の重さが減少することを確認することができた。
【００４８】
５）組織学的分析
【００４９】
摘出した肝と脂肪組織は、１０％のホルマリン液で固定させた検体を切り取り（ｔｒｉｍｍｉｎｇ）、再び１０％のホルマリン液で後固定させた。その後、パラフィンに包埋した後、５μｍ厚の切片に細く切った後、ヘマトキシリン・エオジン（ｈｅｍａｔｏｘｙｌｉｎ−ｅｏｓｉｎ）で染色した。染色した肝と脂肪組織は、光学顕微鏡であるオリンパスＢＸ５０  Ｆ４（オリンパス、日本）を用いて観察及び撮影した。
【００５０】
図３は、高脂肪食誘導肥満モデルを用いた陽春砂抽出物の投与量による肝内脂肪組織を観察した図である。
【００５１】
図４は、高脂肪食誘導肥満モデルを用いた陽春砂抽出物の投与量による脂肪の組織変化を観察した図である。
【００５２】
その結果、陽春砂抽出物の投与量が増加するにつれて肝内脂肪が減少し、脂肪組織の大きさが減少することを確認することができた。
【００５３】
６）トータル（Ｔｏｔａｌ）ＲＮＡ分離
【００５４】
実験が終了した後、摘出された肝と脂肪組織からのトータルＲＮＡの分離は、Ｔｒｉｚｏｌ試薬（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ、ＵＫ）を用いて製造会社で提供する方法によって行った。
【００５５】
それぞれの組織を細く切って１０００μｌのＲＮＡｚｏｌ  Ｂで溶解させた後、２００μｌのクロロホルムを添加し、氷の中で５分間反応させた。反応が終了した後、４℃及び１３，０００ｒｐｍで２０分間遠心分離し、上層液５００μｌを新しいチューブに移した。
【００５６】
前記上層液に同量のイソプロパノールを添加して混ぜた後、氷で３０分間反応させた。反応が終了した後、４℃及び１３，０００ｒｐｍで２０分間遠心分離し、沈殿物を７５％のＥｔＯＨで２回洗浄した。洗浄されたＲＮＡを乾燥させた後、ＤＥＰＣ水２０μｌで溶かし、分光光度計で吸光度を測定して定量した。
【００５７】
７）実時間逆転写酵素重合反応（Ｒｅａｌ  Ｔｉｍｅ  ＰＣＲ）
【００５８】
逆転写反応（ｒｅｖｅｒｓｅ  ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ  ｒｅａｃｔｉｏｎ）は、２μｇのトータルＲＮＡ及びＰｒｉｍｅＳｃｒｉｐｔ  ＴＭ試薬キット（ｐｅｒｆｅｃｔ  ｒｅａｌｔｉｍｅ）（タカラバイオ株式会社）を用いて製造会社で提供する方法によって行った。
【００５９】
逆転写反応は、トータルＲＮＡ（２μｇ）、オリゴｄ（Ｔ）プライマー（２５ｐｍｏｌ）、ＰｒｉｍｅＳｃｒｉｐｔ  ＲＴエンザイムミックスＩ、５Ｘ  ｐｒｉｍｅＳｃｒｉｐｔバッファーが含有された反応液で３７℃で１５分、８５℃で５時間にわたって反応させることによってｃＤＮＡを合成した。
【００６０】
実時間逆転写酵素重合反応は、１０倍希釈したｃＤＮＡにパワーＳＹＢＹグリーンＰＣＲマスターミックスを用いて行った。発現されたそれぞれの遺伝子のｍＲＮＡ量は、ＬｉｇｈｔＣｙｃｌｅｒシステムソフトウェア（Ｒｏｃｈｅ）を用いてＧＡＰＤＨに対する相対的な量として計算した。使用されたプライマーのシーケンスは表１に示した。
【００６１】
【表１】
2020518282.tif 000003
【００６２】
図６は、高脂肪食誘導肥満モデルを用いた陽春砂抽出物の投与量によるＰＰＡＲγ及びＣ／ＥＢＰαの発現量を確認したグラフである。
【００６３】
図７は、高脂肪食誘導肥満モデルを用いた陽春砂抽出物の投与量によるＦＡＳ  ｍＲＮＡ及びＳＲＥＢＰ１  ｍＲＮＡの発現量を確認したグラフである。
【００６４】
図８は、高脂肪食誘導肥満モデルを用いた陽春砂抽出物の投与量によるＴＮＦα及びアディポネクチンの発現量を確認したグラフである。
【００６５】
その結果、高脂肪食による誘導肥満マウスにおいて陽春砂抽出物の投与量によってＰＰＡＲγ（ｐｅｒｏｘｉｓｏｍｅ  ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｏｒｓ−ａｃｔｉｖａｔｅｄ  ｒｅｃｅｐｔｒｏｒ  γ）、Ｃ／ＥＢＰα（ＣＣＡＡＴ／ｅｎｈａｎｃｅｒ  ｂｉｎｄｉｎｇ  ｐｒｏｔｅｉｎ  α）、ＦＡＳ（ｆａｔｔｙ  ａｃｉｄ  ｓｙｎｔｈａｓｅ）、ＳＲＥＢＰ１（ｓｔｅｒｏｌ  ｒｅｇｕｌａｔｏｒｙ  ｅｌｅｍｅｎｔ−ｂｉｎｄｉｎｇ  ｐｒｏｔｅｉｎ  １）、ＴＮＦα（ｔｕｍｏｒ  ｎｅｃｒｏｓｉｓ  ｆａｃｔｏｒ  α）及びアディポネクチンｍＲＮＡの発現を抑制することを確認することができ、これは、脂肪細胞の分化及び発現、及び脂肪肝の発現を抑制するものと予測される。
【００６６】
高脂肪食による誘導肥満マウスにおける中性脂肪の含量を抑制し、マウスにおけるＰＰＡＲγ（ｐｅｒｏｘｉｓｏｍｅ  ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｏｒｓ−ａｃｔｉｖａｔｅｄ  ｒｅｃｅｐｔｒｏｒ  γ）、Ｃ／ＥＢＰα（ＣＣＡＡＴ／ｅｎｈａｎｃｅｒ  ｂｉｎｄｉｎｇ  ｐｒｏｔｅｉｎ  α）、ＦＡＳ（ｆａｔｔｙ  ａｃｉｄ  ｓｙｎｔｈａｓｅ）、ＳＲＥＢＰ１（ｓｔｅｒｏｌ  ｒｅｇｕｌａｔｏｒｙ  ｅｌｅｍｅｎｔ−ｂｉｎｄｉｎｇ  ｐｒｏｔｅｉｎ  １）、ＴＮＦα（ｔｕｍｏｒ  ｎｅｃｒｏｓｉｓ  ｆａｃｔｏｒ  α）及びアディポネクチンｍＲＮＡの発現を抑制することを特徴とする肥満予防、改善又は治療組成物を製造することができる。
【００６７】
８）肝中性脂肪（ｌｉｖｅｒ  ｔｒｉｇｌｙｃｅｒｉｄｅ）の分析
【００６８】
肝中性脂肪の含量は次のように測定した。肝組織をクロロホルム−メタノール溶液（２：１、ｖ／ｖ）で均質化し、１時間にわたって常温で反応させた後で遠心分離し、有機溶媒層を２４時間にわたって乾燥した。エタノールで溶解した後、肝の中性脂肪の含量は、ＴＧキット（ＡＭ  １５７Ｓ−Ｋ  ａｎｄ  ＡＭ  ２０２−Ｋ、Ａｓａｎ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ、韓国）を用いて調査し、タンパク質濃度に標準化させた。
【００６９】
高脂肪食による誘導肥満マウスにおける陽春砂抽出物の投与量によって中性脂肪の生成が抑制されることを確認することができる。
【００７０】
陽春砂抽出物は、高脂肪食による誘導肥満に対して中性脂肪の生成を抑制するので、これを通じて肥満予防、改善又は治療組成物を開発した。
【００７１】
９）統計分析
【００７２】
全ての実験結果は、平均±標準誤差として計算した。各群間の統計的有意性検定による統計分析は、ＡＮＯＶＡ（ｏｎｅ−ｗａｙ  ａｎａｌｙｓｉｓ  ｏｆ  ｖａｒｉａｎｃｅ  ｔｅｓｔ）及びダンカン（Ｄｕｎｃａｎ）の事後検定比較を実施し、ｐ＜０．０５であるときに有意であると判定した（ＳＰＳＳ  Ｖ１２．，ＳＰＳＳ  Ｉｎｃ，Ｃｈｉｃａｇｏ，ＩＬ，ＵＳＡ）。
【図１】
2020518282.tif 000004
【図２】
2020518282.tif 000005
【図３】
2020518282.tif 000006
【図４】
2020518282.tif 000007
【図５】
2020518282.tif 000008
【図６】
2020518282.tif 000009
【図７】
2020518282.tif 000010
【図８】
2020518282.tif 000011
【国際調査報告】
2020518282.tif 000012
2020518282.tif 000013
2020518282.tif 000014
2020518282.tif 000015