(57)【要約】本発明は、細胞への１つもしくは複数のウイルス（組換えウイルス、例えば、組換えＡＡＶなど）の送達、および／または１つもしくは複数のウイルスにおける抗原性エピトープのマスクに有用である、ペプチド含有複合体／ナノ粒子に関する。本発明は例えば、細胞膜透過ペプチドおよびウイルスを含む、ウイルスの細胞内送達のためのウイルス送達複合体であって、前記細胞膜透過ペプチドが、ＰＥＰ−１ペプチド、ＰＥＰ−２ペプチド、ＰＥＰ−３ペプチド、ＶＥＰＥＰ−３ペプチド、ＶＥＰＥＰ−６ペプチド、ＶＥＰＥＰ−９ペプチドおよびＡＤＧＮ−１００ペプチドからなる群から選択される、ウイルス送達複合体を提供する。【選択図】なし
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
細胞膜透過ペプチドおよびウイルスを含む、ウイルスの細胞内送達のためのウイルス送達複合体であって、前記細胞膜透過ペプチドが、ＰＥＰ−１ペプチド、ＰＥＰ−２ペプチド、ＰＥＰ−３ペプチド、ＶＥＰＥＰ−３ペプチド、ＶＥＰＥＰ−６ペプチド、ＶＥＰＥＰ−９ペプチドおよびＡＤＧＮ−１００ペプチドからなる群から選択される、ウイルス送達複合体。
【請求項２】
前記細胞膜透過ペプチドが、ＶＥＰＥＰ−３ペプチドである、請求項１に記載のウイルス送達複合体。
【請求項３】
前記細胞膜透過ペプチドが、配列番号１〜１４からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む、請求項２に記載のウイルス送達複合体。
【請求項４】
前記細胞膜透過ペプチドが、配列番号７５または７６のアミノ酸配列を含む、請求項２に記載のウイルス送達複合体。
【請求項５】
前記細胞膜透過ペプチドが、ＶＥＰＥＰ−６ペプチドである、請求項１に記載のウイルス送達複合体。
【請求項６】
前記細胞膜透過ペプチドが、配列番号１５〜４０からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む、請求項５に記載のウイルス送達複合体。
【請求項７】
前記細胞膜透過ペプチドが、配列番号７７のアミノ酸配列を含む、請求項５に記載のウイルス送達複合体。
【請求項８】
前記細胞膜透過ペプチドが、ＶＥＰＥＰ−９ペプチドである、請求項１に記載のウイルス送達複合体。
【請求項９】
前記細胞膜透過ペプチドが、配列番号４１〜５２からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む、請求項８に記載のウイルス送達複合体。
【請求項１０】
前記細胞膜透過ペプチドが、配列番号７８のアミノ酸配列を含む、請求項８に記載のウイルス送達複合体。
【請求項１１】
前記細胞膜透過ペプチドが、ＡＤＧＮ−１００ペプチドである、請求項１に記載のウイルス送達複合体。
【請求項１２】
前記細胞膜透過ペプチドが、配列番号５３〜７０からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む、請求項１１に記載のウイルス送達複合体。
【請求項１３】
前記細胞膜透過ペプチドが、配列番号７９または８０のアミノ酸配列を含む、請求項１１に記載のウイルス送達複合体。
【請求項１４】
前記細胞膜透過ペプチドが、ＰＥＰ−１、ＰＥＰ−２またはＰＥＰ−３ペプチドである、請求項１に記載のウイルス送達複合体。
【請求項１５】
前記細胞膜透過ペプチドが、配列番号７１〜７３のうちいずれか１つのアミノ酸配列を含む、請求項１４に記載のウイルス送達複合体。
【請求項１６】
前記細胞膜透過ペプチドが、前記ウイルスに共有結合によって連結している、請求項１に記載のウイルス送達複合体。
【請求項１７】
前記細胞膜透過ペプチドが、前記細胞膜透過ペプチドのＮ末端に共有結合によって連結している１つまたは複数の部分をさらに含み、前記１つまたは複数の部分が、アセチル、脂肪酸、コレステロール、ポリエチレングリコール、核内局在化シグナル、核外輸送シグナル、抗体、多糖類およびターゲティング分子からなる群から選択される、請求項１から１６のいずれか一項に記載のウイルス送達複合体。
【請求項１８】
前記細胞膜透過ペプチドが、前記細胞膜透過ペプチドのＣ末端に共有結合によって連結している１つまたは複数の部分をさらに含み、前記１つまたは複数の部分が、システアミド、システイン、チオール、アミド、必要に応じて置換されているニトリロ三酢酸、カルボキシル、必要に応じて置換されている直鎖状または分枝状Ｃ１〜Ｃ６アルキル、一級または二級アミン、オシド誘導体、脂質、リン脂質、脂肪酸、コレステロール、ポリエチレングリコール、核内局在化シグナル、核外輸送シグナル、抗体、多糖類およびターゲティング分子からなる群から選択される、請求項１から１７のいずれか一項に記載のウイルス送達複合体。
【請求項１９】
前記ウイルス送達複合体中の前記細胞膜透過ペプチドの少なくとも一部が、連結によりターゲティング部分に連結している、請求項１から１８のいずれか一項に記載のウイルス送達複合体。
【請求項２０】
前記ウイルスが、組換えウイルスである、請求項１〜１９のいずれか一項に記載のウイルス送達複合体。
【請求項２１】
前記組換えウイルスが、組換えアデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）、アデノウイルス、レンチウイルス、レトロウイルス、単純ヘルペスウイルス（ＨＳＶ）、ポックスウイルス、エプスタイン・バーウイルス（ＥＢＶ）、ワクシニアウイルスまたはヒトサイトメガロウイルス（ｈＣＭＶ）である、請求項２０に記載のウイルス送達複合体。
【請求項２２】
前記細胞膜透過ペプチドの前記ウイルス（Ｖｇ、ｐｆｕまたはＭＯＩ単位）に対するモル比が、約１：１〜約１×１０８：１の間である、請求項１〜２１のいずれか一項に記載のウイルス送達複合体。
【請求項２３】
前記ウイルス送達複合体の平均直径が、約２０ｎｍ〜約１０００ｎｍの間である、請求項１から２２のいずれか一項に記載のウイルス送達複合体。
【請求項２４】
請求項１から２３のいずれか一項に記載のウイルス送達複合体を含むコアを含むナノ粒子。
【請求項２５】
前記コアが、１つまたは複数の追加の、請求項１から２３のいずれか一項に記載のウイルス送達複合体をさらに含む、請求項２４に記載のナノ粒子。
【請求項２６】
前記ナノ粒子中の前記細胞膜透過ペプチドの少なくとも一部が、連結によりターゲティング部分に連結している、請求項２４または２５に記載のナノ粒子。
【請求項２７】
前記コアが、周囲細胞膜透過ペプチドを含むシェルにより被覆されている、請求項２４から２６のいずれか一項に記載のナノ粒子。
【請求項２８】
請求項１から２３のいずれか一項に記載のウイルス送達複合体または請求項２４から２７のいずれか一項に記載のナノ粒子と、薬学的に許容される担体とを含む医薬組成物。
【請求項２９】
請求項１から２３のいずれか一項に記載のウイルス送達複合体を調製する方法であって、前記細胞膜透過ペプチドを前記１つまたは複数のウイルスと組み合わせるステップを含み、それによって前記ウイルス送達複合体を形成する方法。
【請求項３０】
１つまたは複数のウイルスを細胞に送達する方法であって、前記細胞を請求項１から２３のいずれか一項に記載のウイルス送達複合体または請求項２４から２７のいずれか一項に記載のナノ粒子と接触させるステップを含み、前記ウイルス送達複合体または前記ナノ粒子が、前記１つまたは複数のウイルスを含む、方法。
【請求項３１】
前記細胞が、顆粒球、マスト細胞、単球、樹状細胞、Ｂ細胞、Ｔ細胞、ナチュラルキラー細胞、線維芽細胞、筋肉細胞、心臓細胞、肝細胞、肺前駆細胞または神経細胞である、請求項３０に記載の方法。
【請求項３２】
前記ウイルスが、ＰＤ−１、ＰＤ−Ｌ１、ＰＤ−Ｌ２、ＴＩＭ−３、ＢＴＬＡ、ＶＩＳＴＡ、ＬＡＧ−３、ＣＴＬＡ−４、ＴＩＧＩＴ、４−１ＢＢ、ＯＸ４０、ＣＤ２７、ＴＩＭ−１、ＣＤ２８、ＨＶＥＭ、ＧＩＴＲおよびＩＣＯＳからなる群から選択される遺伝子内の配列を標的とする、請求項３１に記載の方法。
【請求項３３】
個体の疾患を処置する方法であって、前記個体に請求項２８に記載の医薬組成物の有効量を投与するステップを含む方法。
【請求項３４】
前記疾患が、がん、糖尿病、自己免疫性疾患、血液疾患、心疾患、血管性疾患、炎症性疾患、線維性疾患、ウイルス感染性疾患、遺伝性疾患、眼疾患、肝臓疾患、肺疾患、筋肉疾患、酵素欠損疾患、リソソーム蓄積症、神経学的疾患、腎臓疾患、老化および変性疾患、ならびにコレステロールレベル異常によって特徴付けられる疾患からなる群から選択される、請求項３３に記載の方法。
【請求項３５】
前記疾患が、がんであり、前記がんが、固形腫瘍であり、前記医薬組成物が、成長因子およびサイトカイン、細胞表面受容体、シグナル伝達分子およびキナーゼ、転写因子および他の転写調節因子、タンパク質発現および修飾の制御因子、腫瘍抑制因子、ならびにアポトーシスおよび転移の制御因子からなる群から選択される１つまたは複数のタンパク質の発現を調節する１つまたは複数のウイルスを含む、ウイルス送達複合体またはナノ粒子を含む、請求項３３に記載の方法。
【請求項３６】
前記疾患が、ウイルス感染症であり、前記医薬組成物が、前記ウイルス感染性疾患の発症および／または進行に関与する１つまたは複数のタンパク質の発現を調節する１つまたは複数のウイルスを含む、ウイルス送達複合体またはナノ粒子を含む、請求項３３に記載の方法。
【請求項３７】
前記疾患が、遺伝性疾患であり、前記医薬組成物が、前記遺伝性疾患の発症および／または進行に関与する１つまたは複数のタンパク質の発現を調節する１つまたは複数のウイルスを含む、ウイルス送達複合体またはナノ粒子を含む、請求項３３に記載の方法。
【請求項３８】
前記疾患が、老化または変性疾患であり、前記医薬組成物が、前記老化または変性疾患の発症および／または進行に関与する１つまたは複数のタンパク質の発現を調節する１つまたは複数のウイルスを含む、ウイルス送達複合体またはナノ粒子を含む、請求項３３に記載の方法。
【請求項３９】
前記疾患が、線維性または炎症性疾患であり、前記医薬組成物が、前記線維性または炎症性疾患の発症および／または進行に関与する２つまたはそれより多いタンパク質の発現を調節する１つまたは複数のウイルスを含む、ウイルス送達複合体またはナノ粒子を含む、請求項３３に記載の方法。
【請求項４０】
前記個体がヒトである、請求項３３から３９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４１】
請求項１から２３のいずれか一項に記載のウイルス送達複合体および／または請求項２４から２７のいずれか一項に記載のナノ粒子を含む組成物を含むキット。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願
本出願は、２０１７年８月１０日に出願された仏国特許出願第１７５７６４７号の利益およびそれに対する優先権を主張する。仏国特許出願の内容は、その全体が参照により本明細書に組み込まれている。
発明の分野
【０００２】
本発明は、細胞への１つもしくは複数のウイルス（組換えウイルス、例えば、組換えＡＡＶなど）の送達、および／または１つもしくは複数のウイルスにおける抗原性エピトープのマスクに有用である、ペプチド含有複合体／ナノ粒子に関する。
【背景技術】
【０００３】
本明細書で言及するすべての刊行物、特許、特許出願および公開特許出願の開示は、それら全体が本明細書での参照により本明細書に組み入れられている。
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【０００４】
本出願は、細胞への１つもしくは複数のウイルス（組換えウイルス、例えば、組換えＡＡＶなど）の送達、および／または１つもしくは複数のウイルスにおける抗原性エピトープのマスクに有用である、細胞膜透過ペプチドを含む複合体およびナノ粒子を提供する。一部の実施形態では、ウイルスは、導入遺伝子を含み、ウイルスの細胞内送達は、細胞ゲノム内への導入遺伝子の移入を可能にする。一部の実施形態では、導入遺伝子は、治療用タンパク質などのタンパク質をコードする。一部の実施形態では、導入遺伝子は、内因性遺伝子、例えば、疾患関連内因性遺伝子を標的とする阻害性ＲＮＡ（ＲＮＡｉ）などのＲＮＡｉをコードする。一部の実施形態では、導入遺伝子は、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）をコードする。
【０００５】
一部の実施形態では、ウイルスと会合している細胞膜透過ペプチドを含む、ウイルスの細胞内送達のためのウイルス送達複合体が提供される。
【０００６】
一部の実施形態では、ウイルスと会合している細胞膜透過ペプチドを含む、ウイルスの細胞内送達のためのウイルス送達複合体であって、細胞膜透過ペプチドが、ＰＥＰ−１ペプチド、ＰＥＰ−２ペプチド、ＰＥＰ−３ペプチド、ＶＥＰＥＰ−３ペプチド、ＶＥＰＥＰ−６ペプチド、ＶＥＰＥＰ−９ペプチドおよびＡＤＧＮ−１００ペプチドからなる群から選択される、ウイルス送達複合体が提供される。一部の実施形態では、ウイルスは、組換えアデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）、アデノウイルス、レンチウイルス、レトロウイルス、単純ヘルペスウイルス（ＨＳＶ）、ポックスウイルス、エプスタイン・バーウイルス（ＥＢＶ）、ワクシニアウイルスおよびヒトサイトメガロウイルス（ｈＣＭＶ）を含む組換えウイルスである。
【０００７】
一部の実施形態では、上記のウイルス送達複合体のいずれかによれば、細胞膜透過ペプチドは、ＶＥＰＥＰ−３ペプチドである。一部の実施形態では、細胞膜透過ペプチドは、配列番号１〜１４からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、細胞膜透過ペプチドは、配列番号７５または７６のアミノ酸配列を含む。
【０００８】
一部の実施形態では、細胞膜透過ペプチドは、ＶＥＰＥＰ−６ペプチドである。一部の実施形態では、細胞膜透過ペプチドは、配列番号１５〜４０からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、細胞膜透過ペプチドは、配列番号７７のアミノ酸配列を含む。
【０００９】
一部の実施形態では、上記のウイルス送達複合体のいずれかによれば、細胞膜透過ペプチドは、ＶＥＰＥＰ−９ペプチドである。一部の実施形態では、細胞膜透過ペプチドは、配列番号４１〜５２からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、細胞膜透過ペプチドは、配列番号７８のアミノ酸配列を含む。
【００１０】
一部の実施形態では、上記のウイルス送達複合体のいずれかによれば、細胞膜透過ペプチドは、ＡＤＧＮ−１００ペプチドである。一部の実施形態では、細胞膜透過ペプチドは、配列番号５３〜７０からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、細胞膜透過ペプチドは、配列番号７９または８０のアミノ酸配列を含む。
【００１１】
一部の実施形態では、上記のウイルス送達複合体のいずれかによれば、細胞膜透過ペプチドは、細胞膜透過ペプチドのＮ末端に共有結合によって連結している１つまたは複数の部分をさらに含み、１つまたは複数の部分は、アセチル、脂肪酸、コレステロール、ポリエチレングリコール、核内局在化シグナル、核外輸送シグナル、抗体、多糖類およびターゲティング分子からなる群から選択される。一部の実施形態では、細胞膜透過ペプチドは、そのＮ末端に共有結合によって連結しているアセチル基を含む。一部の実施形態では、細胞膜透過ペプチドは、細胞膜透過ペプチドのＣ末端に共有結合によって連結している１つまたは複数の部分をさらに含み、１つまたは複数の部分は、システアミド、システイン、チオール、アミド、必要に応じて置換されているニトリロ三酢酸、カルボキシル、必要に応じて置換されている直鎖状または分枝状Ｃ１〜Ｃ６アルキル、一級または二級アミン、オシド（osidic）誘導体、脂質、リン脂質、脂肪酸、コレステロール、ポリエチレングリコール、核内局在化シグナル、核外輸送シグナル、抗体、多糖類およびターゲティング分子からなる群から選択される。一部の実施形態では、細胞膜透過ペプチドは、そのＣ末端に共有結合によって連結しているシステアミド基を含む。
【００１２】
一部の実施形態では、上記のウイルス送達複合体のいずれかによれば、ウイルス送達複合体内の細胞膜透過ペプチドの少なくとも一部は、連結によりターゲティング部分に連結している。一部の実施形態では、連結は、共有結合である。
【００１３】
一部の実施形態では、上記のウイルス送達複合体のいずれかによれば、細胞膜透過ペプチドのウイルス（例えば、Ｖｇ、ｐｆｕまたはＭＯＩ単位）に対するモル比は、約１：１〜約１×１０８：１の間である。
【００１４】
一部の実施形態では、上記のウイルス送達複合体のいずれかによれば、ウイルス送達複合体の平均直径（average  diameter）は、約２０ｎｍ〜約１０００ｎｍの間である。
【００１５】
一部の実施形態では、上記の実施形態のいずれかによるウイルス送達複合体を含むコアを含むナノ粒子が提供される。一部の実施形態では、コアは、１つまたは複数の追加の、上記の実施形態のいずれかによるウイルス送達複合体を含む。一部の実施形態では、ナノ粒子中の細胞膜透過ペプチドの少なくとも一部は、連結によりターゲティング部分に連結している。一部の実施形態では、コアは、周囲細胞膜透過ペプチドを含むシェルにより被覆されている。一部の実施形態では、シェル中の周囲細胞膜透過ペプチドの少なくとも一部は、連結によりターゲティング部分に連結している。一部の実施形態では、連結は、共有結合である。一部の実施形態では、周囲細胞膜透過ペプチドは、ＰＥＰ−１ペプチド、ＰＥＰ−２ペプチド、ＰＥＰ−３ペプチド、ＶＥＰＥＰ−３ペプチド、ＶＥＰＥＰ−６ペプチド、ＶＥＰＥＰ−９ペプチドおよびＡＤＧＮ−１００ペプチドからなる群から選択される。一部の実施形態では、周囲細胞膜透過ペプチドは、配列番号１〜８０からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ナノ粒子の平均直径は、約２０ｎｍ〜約１０００ｎｍの間である。一部の実施形態では、ナノ粒子の平均直径は、約５０ｎｍ〜約８００ｎｍの間である。一部の実施形態では、ナノ粒子の平均直径は、約１００ｎｍ〜約５００ｎｍの間である。
【００１６】
一部の実施形態では、上記の実施形態のいずれかによるウイルス送達複合体または上記の実施形態のいずれかによるナノ粒子と、薬学的に許容される担体とを含む医薬組成物が提供される。一部の実施形態では、医薬組成物は、静脈内、腫瘍内、動脈内、局所、眼内、眼科的、門脈内、頭蓋内、脳内、脳室内、髄腔内、膀胱内、皮内、皮下、筋肉内、鼻腔内、気管内、肺、腔内（intracavity）または経口投与用に製剤化されている。一部の実施形態では、医薬組成物は、凍結乾燥されている。
【００１７】
一部の実施形態では、上記の実施形態のいずれかによるウイルス送達複合体を調製する方法であって、細胞膜透過ペプチドをウイルスと組み合わせるステップを含み、それによってウイルス送達複合体を形成する方法が提供される。一部の実施形態では、細胞膜透過ペプチドは、それぞれ約１：１〜約１×１０８：１の比でウイルス（例えば、Ｖｇ、ｐｆｕまたはＭＯＩ単位）と組み合わされる。
【００１８】
一部の実施形態では、１つまたは複数のウイルスを細胞に送達する方法であって、細胞を上記の実施形態のいずれかによるウイルス送達複合体および／または上記の実施形態のいずれかによるナノ粒子と接触させるステップを含み、ウイルス送達複合体および／またはナノ粒子が、１つまたは複数のウイルスを含む、方法が提供される。一部の実施形態では、細胞をウイルス送達複合体および／またはナノ粒子と接触させるステップは、ｉｎ  ｖｉｖｏで行われる。一部の実施形態では、細胞をウイルス送達複合体および／またはナノ粒子と接触させるステップは、ｅｘ  ｖｉｖｏで行われる。一部の実施形態では、細胞をウイルス送達複合体および／またはナノ粒子と接触させるステップは、ｉｎ  ｖｉｔｒｏで行われる。一部の実施形態では、細胞は、顆粒球、マスト細胞、単球、樹状細胞、Ｂ細胞、Ｔ細胞、ナチュラルキラー細胞、線維芽細胞、筋肉細胞、心臓細胞または肝細胞である。一部の実施形態では、細胞は、Ｔ細胞である。一部の実施形態では、細胞は、線維芽細胞である。一部の実施形態では、細胞は、肝細胞である。一部の実施形態では、細胞は、肺前駆細胞である。一部の実施形態では、細胞は、神経細胞（neuronal  cell）である。一部の実施形態では、ウイルスは、ＰＤ−１、ＰＤ−Ｌ１、ＰＤ−Ｌ２、ＴＩＭ−３、ＢＴＬＡ、ＶＩＳＴＡ、ＬＡＧ−３、ＣＴＬＡ−４、ＴＩＧＩＴ、４−１ＢＢ、ＯＸ４０、ＣＤ２７、ＴＩＭ−１、ＣＤ２８、ＨＶＥＭ、ＧＩＴＲ、およびＩＣＯＳからなる群から選択される遺伝子内の配列を標的とする。一部の実施形態では、ウイルスは、外来性タンパク質をコードする核酸分子を含む。一部の実施形態では、外来性タンパク質は、細胞の表面で発現され得る組換え受容体である。一部の実施形態では、組換え受容体は、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）である。
【００１９】
一部の実施形態では、細胞内のウイルスの細胞内送達の方法であって、細胞を、上記の実施形態のいずれかによるウイルス送達複合体または上記の実施形態のいずれかによるナノ粒子と接触させるステップを含み、ウイルス送達複合体またはナノ粒子が１つまたは複数のウイルスを含む、方法が提供される。
【００２０】
一部の実施形態では、個体の疾患を処置する方法であって、個体に上記の実施形態のいずれかによる医薬組成物の有効量を投与するステップを含む方法を提供する。一部の実施形態では、疾患は、がん、糖尿病、自己免疫性疾患、炎症性疾患、線維性疾患、ウイルス感染性疾患、遺伝性疾患、眼疾患、肝臓疾患、肺疾患、筋肉疾患、酵素欠損疾患、リソソーム蓄積症、神経学的疾患、腎臓疾患、ならびに老化および変性疾患からなる群から選択される。一部の実施形態では、医薬組成物は、個体における遺伝子療法に使用される。
【００２１】
一部の実施形態では、疾患はがんである。一部の実施形態では、がんは、固形腫瘍であり、医薬組成物は、成長因子およびサイトカイン、細胞表面受容体、シグナル伝達分子およびキナーゼ、転写因子および他の転写調節因子、タンパク質発現および修飾の制御因子、ならびにアポトーシスおよび転移の制御因子からなる群から選択される１つまたは複数のタンパク質の発現を調節する１つまたは複数のウイルスを含む、ウイルス送達複合体またはナノ粒子を含む。一部の実施形態では、がんは、肝臓、肺または腎臓のがんである。一部の実施形態では、がんは、血液悪性腫瘍であり、医薬組成物は、成長因子およびサイトカイン、細胞表面受容体、シグナル伝達分子およびキナーゼ、転写因子および他の転写調節因子、タンパク質発現および修飾の制御因子、ならびにアポトーシスおよび転移の制御因子からなる群から選択される１つまたは複数のタンパク質の発現を調節する１つまたは複数のウイルスを含む、ウイルス送達複合体またはナノ粒子を含む。
【００２２】
一部の実施形態では、上記の疾患を処置する方法のいずれかによれば、疾患は、ウイルス感染症（viral  infection  disease）であり、医薬組成物は、ウイルス感染性疾患（）の発症および／または進行に関与する１つまたは複数のタンパク質の発現を調節する１つまたは複数のウイルスを含む、ウイルス送達複合体またはナノ粒子を含む。
【００２３】
一部の実施形態では、上記の疾患を処置する方法のいずれかによれば、疾患は、遺伝子疾患であり、医薬組成物は、遺伝性疾患の発症および／または進行に関与する１つまたは複数のタンパク質の発現を調節する１つまたは複数のウイルスを含む、ウイルス送達複合体またはナノ粒子を含む。
【００２４】
一部の実施形態では、上記の疾患を処置する方法のいずれかによれば、疾患は、老化または変性疾患であり、医薬組成物は、老化または変性疾患の発症および／または進行に関与する１つまたは複数のタンパク質の発現を調節する１つまたは複数のウイルスを含む、ウイルス送達複合体またはナノ粒子を含む。
【００２５】
一部の実施形態では、上記の疾患を処置する方法のいずれかによれば、疾患は、線維性または炎症性疾患であり、医薬組成物は、線維性または炎症性疾患の発症および／または進行に関与する２つまたはそれより多いタンパク質の発現を調節する１つまたは複数のウイルスを含む、ウイルス送達複合体またはナノ粒子を含む。
【００２６】
一部の実施形態では、上記の疾患を処置する方法のいずれかによれば、ウイルス送達複合体またはナノ粒子を含む医薬組成物は、ウイルス送達複合体またはナノ粒子に含有される１つまたは複数のウイルスを単独で含む同様の医薬組成物（すなわち、本明細書に記載のペプチドと会合していない１つまたは複数のウイルスを含む医薬組成物）よりも免疫原性が低い。
【００２７】
一部の実施形態では、上記の疾患を処置する方法のいずれかによれば、方法は、ウイルス送達複合体またはナノ粒子を含む医薬組成物の複数回の投与を含む。一部の実施形態では、医薬組成物の反復投与は、医薬組成物に対する個体における有害免疫応答を誘発しない、またはウイルス送達複合体もしくはナノ粒子に含有される１つもしくは複数のウイルスを単独で含む同様の医薬組成物の反復投与と比較して、個体における実質的に低下された免疫応答を誘発する。
【００２８】
一部の実施形態では、上記の疾患を処置する方法のいずれかによれば、個体は、医薬組成物中のウイルス送達複合体またはナノ粒子に含有される１つまたは複数のウイルスのうち少なくとも１つに対する中和抗体を産生し、ウイルス送達複合体またはナノ粒子のペプチドは、中和抗体から少なくとも１つのウイルスをマスクする。一部の実施形態では、中和抗体は、少なくとも１つのウイルスの中和から遮断される、または少なくとも１つのウイルス単独（すなわち、本明細書に記載のペプチドと会合していない少なくとも１つのウイルス）と比較して、少なくとも１つのウイルスの実質的に低下された中和をもたらす。
【００２９】
一部の実施形態では、上記の疾患を処置する方法のいずれかによれば、個体はヒトである。
【００３０】
一部の実施形態では、上記の実施形態のいずれかによるウイルス送達複合体および／または上記の実施形態のいずれかによるナノ粒子を含む組成物を含むキットが提供される。
【図面の簡単な説明】
【００３１】
【図１】図１Ａおよび１Ｂは、ＣＰＰのＡＡＶ−２との会合により、ＨｅｐＧ２細胞（図１Ａ）およびＨＳ６８細胞（図１Ｂ）におけるウイルスによる形質導入が促進されることを示す。細胞を、ＡＡＶ−２−ＧＦＰ（ＭＯＩ４００）単独、または０．１μＭ、１μＭ、１０μＭ、１００μＭ、２００μＭ、および５００μＭのＰＥＰ１、ＰＥＰ２、もしくはＰ−ＡＮＴと予め複合体を形成したＡＡＶ−２−ＧＦＰに感染させた。ＧＦＰ発現細胞のパーセンテージをフローサイトメトリーによって検出した。
【００３２】
【図２】図２は、ＣＰＰのＡＡＶ−６との会合により、ＨＵＶＥＣ細胞におけるウイルスによる形質導入が促進されることを示す。細胞を、βガラクトシダーゼを発現するＡＡＶ−６（ＭＯＩ４００）単独または０．１μＭ、１μＭ、１０μＭ、１００μＭ、２００μＭおよび５００μＭのＰＥＰ１、ＰＥＰ２、もしくはＰ−ＡＮＴと予め複合体を形成したβガラクトシダーゼを発現するＡＡＶ−６に感染させた。βガラクトシダーゼ活性のパーセンテージを、細胞溶解液中で決定した。
【００３３】
【図３】図３は、ＨＵＶＥＣ細胞におけるＣＰＰの毒性プロファイルを示す。βガラクトシダーゼをコードするアデノウイルス（ＡＡＶ−βＧａｌ）を１μＭ〜５００μＭの範囲の濃度のＰＥＰ−１、ＰＥＰ−２、およびペネトラチンとプレインキュベートした。ＡＡＶ−ＣＰＰ複合体の細胞の細胞毒性を、２日後にＸＴＴアッセイを使用して決定した。
【００３４】
【図４】図４Ａおよび４Ｂは、ＣＰＰが、ウイルス媒介性の遺伝子発現に必要な力価に影響を及ぼすことを示す。２００μＭの固定濃度のペプチド（ＰＥＰ−１、ＰＥＰ−２、ペネトラチン、およびＴＡＴ）を、緑色蛍光タンパク質をコードするＡＡＶ−２（ＡＡＶ−ＧＦＰ）のＭＯＩを増加させながら（２０００まで）プレインキュベートした。ＨＳ  ６８細胞（図４Ｂ）およびＨｅｐＧ２細胞（図４Ａ）を、遊離ＡＡＶ−２またはＡＡＶ／ＣＰＰ複合体のいずれかで４時間処理した。ＧＦＰの発現を感染の２日後に解析した。
【００３５】
【図５】図５Ａ〜５Ｄは、ＣＰＰのＡＡＶ−１との会合により、ＨｅｐＧ２細胞（図５Ａおよび５Ｂ）およびＨＣＮ２細胞（図５Ｃおよび５Ｄ）におけるウイルスによる形質導入が促進されることを示す。細胞を、ＡＡＶ−１−ＧＦＰ（ＭＯＩ５００）単独、または０．１μＭ、１μＭ、１０μＭ、１００μＭおよび２００μＭのＡＤＧＮ−１０３ａ、ＡＤＧＮ−１０３ｂ、ＡＤＧＮ−１００、ＡＤＧＮ−１０９、ＡＤＧＮ−１０６、ＰＥＰ−１、ＰＥＰ−２、ＣＡＤＹ、もしくはＴＡＴ−ＨＡ２と予め複合体を形成したＡＡＶ−１−ＧＦＰに感染させた。ＧＦＰ発現細胞のパーセンテージをフローサイトメトリーによって検出し（図５Ａおよび５Ｃ）、ＡＡＶ−１の感染力の増加を、ＧＦＰ陽性細胞の数に基づいて算出した（図５Ｂおよび５Ｄ）。
【００３６】
【図６】図６Ａ〜６Ｄは、ＣＰＰのＡＡＶ−２との会合により、ＨｅｐＧ２細胞（図６Ａおよび６Ｂ）およびＨＣＮ２細胞（図６Ｃおよび６Ｄ）におけるウイルスによる形質導入が促進されることを示す。細胞を、ＡＡＶ−２−ＧＦＰ（ＭＯＩ５００）単独、または０．１μＭ、１μＭ、１０μＭ、１００μＭおよび２００μＭのＡＤＧＮ−１０３ａ、ＡＤＧＮ−１０３ｂ、ＡＤＧＮ−１００、ＡＤＧＮ−１０９、ＡＤＧＮ−１０６、ＰＥＰ−１、ＰＥＰ−２、ＣＡＤＹ、もしくはＴＡＴ−ＨＡ２と予め複合体を形成したＡＡＶ−２−ＧＦＰに感染させた。ＧＦＰ発現細胞のパーセンテージをフローサイトメトリーによって検出し（図６Ａおよび６Ｃ）、ＡＡＶ−２の感染力の増加を、ＧＦＰ陽性細胞の数に基づいて算出した（図６Ｂおよび６Ｄ）。
【００３７】
【図７】図７Ａ〜７Ｄは、ＣＰＰのＡＡＶ−５との会合により、ＨｅｐＧ２細胞（図７Ａおよび７Ｂ）およびＨＣＮ２細胞（図７Ｃおよび７Ｄ）におけるウイルスによる形質導入が促進されることを示す。細胞を、ＡＡＶ−５−ＧＦＰ（ＭＯＩ５００）単独、または０．１μＭ、１μＭ、１０μＭ、１００μＭおよび２００μＭのＡＤＧＮ−１０３ａ、ＡＤＧＮ−１０３ｂ、ＡＤＧＮ−１００、ＡＤＧＮ−１０９、ＡＤＧＮ−１０６、ＰＥＰ−１、ＰＥＰ−２、ＣＡＤＹ、もしくはＴＡＴ−ＨＡ２と予め複合体を形成したＡＡＶ−５−ＧＦＰに感染させた。ＧＦＰ発現細胞のパーセンテージをフローサイトメトリーによって検出し（図７Ａおよび７Ｃ）、ＡＡＶ−５の感染力の増加を、ＧＦＰ陽性細胞の数に基づいて算出した（図７Ｂおよび７Ｄ）。
【００３８】
【図８】図８Ａ〜８Ｄは、ＣＰＰのＡＡＶ−６との会合により、ＨｅｐＧ２細胞（図８Ａおよび８Ｂ）およびＨＣＮ２細胞（図８Ｃおよび８Ｄ）におけるウイルスによる形質導入が促進されることを示す。細胞を、ＡＡＶ−６−ＧＦＰ（ＭＯＩ５００）単独、または０．１μＭ、１μＭ、１０μＭ、１００μＭおよび２００μＭのＡＤＧＮ−１０３ａ、ＡＤＧＮ−１０３ｂ、ＡＤＧＮ−１００、ＡＤＧＮ−１０９、ＡＤＧＮ−１０６、ＰＥＰ−１、ＰＥＰ−２、ＣＡＤＹ、もしくはＴＡＴ−ＨＡ２と予め複合体を形成したＡＡＶ−６−ＧＦＰに感染させた。ＧＦＰ発現細胞のパーセンテージをフローサイトメトリーによって検出し（図８Ａおよび８Ｃ）、ＡＡＶ−６の感染力の増加を、ＧＦＰ陽性細胞の数に基づいて算出した（図８Ｂおよび８Ｄ）。
【００３９】
【図９】図９Ａ〜９Ｄは、ＣＰＰのＡＡＶ−８との会合により、ＨｅｐＧ２細胞（図９Ａおよび９Ｂ）およびＨＣＮ２細胞（図９Ｃおよび９Ｄ）におけるウイルスによる形質導入が促進されることを示す。細胞を、ＡＡＶ−８−ＧＦＰ（ＭＯＩ１０００）単独、または０．１μＭ、１μＭ、１０μＭ、１００μＭおよび２００μＭのＡＤＧＮ−１０３ａ、ＡＤＧＮ−１０３ｂ、ＡＤＧＮ−１００、ＡＤＧＮ−１０９、ＡＤＧＮ−１０６、ＰＥＰ−１、ＰＥＰ−２、ＣＡＤＹ、もしくはＴＡＴ−ＨＡ２と予め複合体を形成したＡＡＶ−８−ＧＦＰに感染させた。ＧＦＰ発現細胞のパーセンテージをフローサイトメトリーによって検出し（図９Ａおよび９Ｃ）、ＡＡＶ−８の感染力の増加を、ＧＦＰ陽性細胞の数に基づいて算出した（図９Ｂおよび９Ｄ）。
【００４０】
【図１０】図１０は、ＣＰＰのＮ末端またはＣ末端にコンジュゲートしたターゲティング分子（ＣＰＰ−ＴまたはＴ−ＣＰＰ）、ＣＰＰのＮ末端にコンジュゲートしたドーパミン部分（Ｄｏｐ−ＣＰＰ）またはＣＰＰのＮ末端にコンジュゲートしたＰＥＧ部分（ＰＥＧ−ＣＰＰ）などのＣＰＰの修飾により、細胞におけるウイルスによる形質導入が促進されたことを示す。
【発明を実施するための形態】
【００４１】
発明の詳細な説明
ウイルスにより媒介されるゲノム編集技法を治療適用可能にするために、ウイルスは、標的疾患の疾患細胞など、標的細胞の内側に安全にかつ効率的に送達されなければならない。アデノ随伴ウイルス粒子は、遺伝子送達剤としてよく使用されてきたが、その臨床使用は、オフターゲット細胞の感染および免疫原性から生じる安全性の問題のために限定されていた。よって、標的細胞の内側へのウイルスの安全かつ効率的な送達のための改善された方法の必要がある。
【００４２】
本出願は、細胞膜透過ペプチド（ＣＰＰ）および１つまたは複数のウイルスを含む複合体およびナノ粒子であって、ＣＰＰが、１つもしくは複数のウイルス（組換えウイルス、例えば、組換えＡＡＶなど）の細胞への送達、および／または１つもしくは複数のウイルスにおける抗原性エピトープのマスクに適する、複合体およびナノ粒子を提供する。複合体およびナノ粒子は、複数のウイルスを含むことができる。ウイルスは、例えば、組換えＡＡＶ、アデノウイルス、レンチウイルス、レトロウイルス、ＨＳＶ、ポックスウイルス、ＥＢＶ、ワクシニアウイルスおよびｈＣＭＶを含むことができる。
【００４３】
したがって、本出願は、一態様では、さらに下文でより詳細に説明される新規ウイルス送達複合体およびナノ粒子を提供する。
【００４４】
別の態様では、細胞膜透過ペプチドを使用してウイルスを細胞に送達する方法が提供される。
【００４５】
細胞膜透過ペプチドと、１つまたは複数のウイルスとを（例えば、複合体およびナノ粒子の形態で）含む医薬組成物、および疾患を処置するためのそれらの使用も提供される。
定義
【００４６】
本明細書で使用される場合、用語「野生型」は、当業者により理解されている当技術分野の用語であり、変異体またはバリアント形態と区別される、自然界に存在する生物、株、遺伝子または特性の典型的な形態を意味する。
【００４７】
本明細書で使用される場合、用語「バリアント」は、自然界に存在するものから逸脱するパターンを有する質を呈することを意味すると解釈されたい。
【００４８】
用語「天然に存在しない」または「操作された」は、交換可能で使用され、人手の関与を示す。核酸分子またはポリペプチドに言及するときのこれらの用語は、核酸分子またはポリペプチドには、それらが自然界で天然に会合している、自然界では見出されるような、少なくとも１つの他の成分が、少なくとも実質的にないことを意味する。
【００４９】
「相補性」は、核酸が従来のワトソン・クリック塩基対合または他の非従来型のどちらかにより別の核酸配列と水素結合（複数可）を形成することができることを指す。相補性パーセントは、ある核酸分子中の、別の（a  second）核酸配列と水素結合（例えば、ワトソン−クリック塩基対合）を形成することができる残基の、パーセンテージを示す（例えば、１０のうち５、６、７、８、９、１０は、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％および１００％相補性である）。「完全に相補性の」は、核酸配列の連続する残基の全てが、別の核酸配列内の同数の連続する残基と水素結合することを意味する。本明細書で使用される場合、「実質的に相補性の」は、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、３０、３５、４０、４５、５０ヌクレオチドもしくはそれより多いヌクレオチドの領域にわたって少なくとも６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９７％、９８％、９９％もしくは１００％である相補性度を指すか、またはストリンジェントな条件下でハイブリダイズする２つの核酸を指す。
【００５０】
本明細書で使用される場合、「発現」は、ポリヌクレオチドが鋳型ＤＮＡから（例えば、ｍＲＮＡまたは他のＲＮＡ転写物に）転写されるプロセス、および／または転写されたｍＲＮＡが、その後、ペプチド、ポリペプチドもしくはタンパク質に翻訳されるプロセスを指す。転写物およびコードされているポリペプチドは、まとめて「遺伝子産物」と称されることもある。ポリヌクレオチドがゲノムＤＮＡに由来する場合、発現は、真核細胞におけるｍＲＮＡのスプライシングを含むことがある。
【００５１】
用語「対象」、「個体」および「患者」は、本明細書では、脊椎動物、好ましくは哺乳動物、より好ましくはヒトを指すために交換可能で使用される。哺乳動物には、マウス、サル、ヒト、家畜、競技用動物、およびペットが含まれるが、これらに限定されない。ｉｎ  ｖｉｖｏで得られたまたはｉｎ  ｖｉｔｒｏで培養された生物学的実体の組織、細胞およびそれらの後代も包含される。
【００５２】
用語「治療剤」、「治療可能薬剤」または「処置剤」は、交換可能で使用され、対象へ投与されるといくらかの有益な効果を付与する分子または化合物を指す。有益な効果には、診断を下すことをできるようにすること；疾患、症状、障害または病態の軽減；疾患、症状、障害または状態の発現を低減させるまたは予防すること；および疾患、症状、障害または病態を一般に抑えることが含まれる。
【００５３】
本明細書で使用される場合、「処置」または「処置すること」は、治療的利益を含むがこれに限定されない有益なまたは所望の結果を得るためのアプローチを指す。治療的利益とは、処置中の１つもしくは複数の疾患、状態もしくは症状の、治療に関連するあらゆる改善、または処置中の１つもしくは複数の疾患、状態もしくは症状に対する、治療に関連するあらゆる効果を意味する。
【００５４】
用語「有効量」または「治療有効量」は、有益なまたは所望の結果をもたらすのに十分である薬剤の量を指す。治療有効量は、処置を受ける対象および病状、対象の体重および年齢、病状の重症度、投与方法などのうちの１つまたは複数に依存して変わり得、当業者は治療有効量を容易に決定することができる。この用語は、本明細書に記載のイメージング方法のいずれか１つにより検出用の画像をもたらす用量にも当てはまる。具体的な用量は、選択される特定の薬剤、従うべき投与レジメン、他の化合物と組み合わせて投与されるかどうか、投与のタイミング、撮像されるべき組織、およびそれが運ばれる物理的送達システムのうちの１つまたは複数に依存して変わり得る。
【００５５】
本明細書で使用される場合、単数形「１つの（a）」、「１つの（an）」および「その（the）」は、別段の指示がない限り、複数形の言及を含む。
【００５６】
本明細書での「約」値またはパラメーターへの言及は、その値またはパラメーター自体に関する実施形態を含む（および記載する）。例えば、「約Ｘ」に言及する記述は、「Ｘ」の記述を含む。
【００５７】
本発明の組成物および方法は、本明細書に記載の本発明の本質的要素および制限、ならびに本明細書に記載のまたは別様に有用なあらゆる追加のまたは必要に応じた構成要素、成分または制限を含むこともあり、それからなることもあり、またはそれから本質的になることもある。
【００５８】
別段の断り書きがない限り、専門用語は、従来の慣習に従って使用される。
複合体およびナノ粒子
【００５９】
一部の態様では、本発明は、１つまたは複数のウイルスを細胞に送達するための、細胞膜透過ペプチドを含む複合体およびナノ粒子を提供する。一部の実施形態では、細胞膜透過ペプチドは、１つまたは複数のウイルスと複合体を形成している。一部の実施形態では、細胞膜透過ペプチドは、１つまたは複数のウイルスのうち少なくとも１つと非共有結合によって複合体を形成している。一部の実施形態では、細胞膜透過ペプチドは、１つまたは複数のウイルスのそれぞれと非共有結合によって複合体を形成している。一部の実施形態では、細胞膜透過ペプチドは、１つまたは複数のウイルスのうち少なくとも１つと共有結合によって複合体を形成している。一部の実施形態では、細胞膜透過ペプチドは、１つまたは複数のウイルスのそれぞれと共有結合によって複合体を形成している。一部の実施形態では、ウイルスは、組換えＡＡＶ、アデノウイルス、レンチウイルス、レトロウイルス、ＨＳＶ、ポックスウイルス、ＥＢＶ、ワクシニアウイルスおよびｈＣＭＶを含む組換えウイルスである。一部の実施形態では、組換えウイルスは、導入遺伝子を含み、ウイルスの細胞内送達は、細胞のゲノム内への導入遺伝子の移入を可能にする。一部の実施形態では、導入遺伝子は、治療用導入遺伝子（therapeutic  transgene）である。一部の実施形態では、導入遺伝子は、治療用タンパク質などのタンパク質をコードする。一部の実施形態では、導入遺伝子は、内因性遺伝子、例えば、疾患関連内因性遺伝子を標的とする阻害性ＲＮＡ（ＲＮＡｉ）などのＲＮＡｉをコードする。一部の実施形態では、導入遺伝子は、ＣＡＲをコードする。一部の実施形態では、複合体および／またはナノ粒子は、ＲＮＡｉをコードする第１の導入遺伝子およびタンパク質をコードする第２の導入遺伝子を含む１つまたは複数のウイルスを含む。一部の実施形態では、ＲＮＡｉは、疾患または状態に関与する内因性遺伝子を標的とする治療用ＲＮＡｉ（therapeutic  RNAi）であり、タンパク質は、疾患または状態を処置するために有用な治療用タンパク質である。一部の実施形態では、治療用ＲＮＡｉは、内因性遺伝子の疾患関連形態（例えば、変異体タンパク質をコードする遺伝子、またはタンパク質の異常発現をもたらす遺伝子）を標的とし、第２の導入遺伝子は、内因性遺伝子の治療形態である（例えば、第２の導入遺伝子は、変異体タンパク質の野生型もしくは機能形態をコードする、または第２の導入遺伝子は、タンパク質の正常発現をもたらす）。例えば、一部の実施形態では、複合体および／またはナノ粒子は、変異体および正常内因性ロドプシン遺伝子を標的とするＲＮＡｉをコードする第１の導入遺伝子、ならびにＲＮＡｉに対して抵抗性である機能的（function）ロドプシン遺伝子を含む第２の導入遺伝子を含む。一部の実施形態では、複合体および／またはナノ粒子は、第１の導入遺伝子を含む第１のウイルスおよび第２の導入遺伝子を含む第２のウイルスを含む。一部の実施形態では、複合体および／またはナノ粒子は、第１の導入遺伝子および第２の導入遺伝子を含む単一のウイルスを含む。
細胞膜透過ペプチド
【００６０】
本発明のウイルス送達複合体またはナノ粒子中の細胞膜透過ペプチドは、様々なウイルスを有する、安定した複合体およびナノ粒子を形成することができる。本明細書に記載のいずれのウイルス送達複合体またはナノ粒子におけるいずれの細胞膜透過ペプチドが、このセクションに記載のいずれの細胞膜透過ペプチド配列を含んでいても、またはそれらからなってもよい。
【００６１】
一部の実施形態では、本明細書に記載のウイルス送達複合体またはナノ粒子は、ＣＡＤＹ、ＰＥＰ−１、ＰＥＰ−２、ＭＰＧ、ＶＥＰＥＰ−３ペプチド、ＶＥＰＥＰ−４ペプチド、ＶＥＰＥＰ−５ペプチド、ＶＥＰＥＰ−６ペプチド、ＶＥＰＥＰ−９ペプチドおよびＡＤＧＮ−１００ペプチドからなる群から選択される細胞膜透過ペプチドを含む。一部の実施形態では、細胞膜透過ペプチドは、ウイルス送達複合体中に存在する。一部の実施形態では、細胞膜透過ペプチドは、ナノ粒子のコア中に存在するウイルス送達複合体中に存在する。一部の実施形態では、細胞膜透過ペプチドは、ナノ粒子のコア中に存在する。一部の実施形態では、細胞膜透過ペプチドは、ナノ粒子のコア中に存在し、ウイルスと会合している。一部の実施形態では、細胞膜透過ペプチドは、ナノ粒子の中間層中に存在する。一部の実施形態では、細胞膜透過ペプチドは、ナノ粒子の表面層中に存在する。一部の実施形態では、細胞膜透過ペプチドは、ターゲティング部分に連結している。一部の実施形態では、連結は、共有結合である。一部の実施形態では、共有結合による連結は、化学的カップリングによる。一部の実施形態では、共有結合による連結は、遺伝学的方法による。ＷＯ２０１４／０５３８７９には、ＶＥＰＥＰ−３ペプチドが開示されており、ＷＯ２０１４／０５３８８１には、ＶＥＰＥＰ−４ペプチドが開示されており、ＷＯ２０１４／０５３８８２には、ＶＥＰＥＰ−５ペプチドが開示されており、ＷＯ２０１２／１３７１５０には、ＶＥＰＥＰ−６ペプチドが開示されており、ＷＯ２０１４／０５３８８０には、ＶＥＰＥＰ−９ペプチドが開示されており、ＷＯ２０１６／１０２６８７には、ＡＤＧＮ−１００ペプチドが開示されており、米国特許出願公開第２０１０／００９９６２６号には、ＣＡＤＹペプチドが開示されており、および米国特許第７，５１４，５３０号には、ＭＰＧペプチドが開示されており、これらの開示は、それら全体が本明細書での参照により本明細書に組み入れられている。
【００６２】
一部の実施形態では、本明細書に記載のウイルス送達複合体またはナノ粒子は、アミノ酸配列Ｘ１Ｘ２Ｘ３Ｘ４Ｘ５Ｘ２Ｘ３Ｘ４Ｘ６Ｘ７Ｘ３Ｘ８Ｘ９Ｘ１０Ｘ１１Ｘ１２Ｘ１３（配列番号１）を含むＶＥＰＥＰ−３細胞膜透過ペプチドを含み、この配列中、Ｘ１は、ベータ−ＡまたはＳであり、Ｘ２は、（互いに独立して）Ｋ、ＲまたはＬであり、Ｘ３は、（互いに独立して）ＦまたはＷであり、Ｘ４は、（互いに独立して）Ｆ、ＷまたはＹであり、Ｘ５は、Ｅ、ＲまたはＳであり、Ｘ６は、Ｒ、ＴまたはＳであり、Ｘ７は、Ｅ、ＲまたはＳであり、Ｘ８は、存在しないか、ＦまたはＷであり、Ｘ９は、ＰまたはＲであり、Ｘ１０は、ＲまたはＬであり、Ｘ１１は、Ｋ、ＷまたはＲであり、Ｘ１２は、ＲまたはＦであり、およびＸ１３は、ＲまたはＫである。一部の実施形態では、ＶＥＰＥＰ−３ペプチドは、アミノ酸配列Ｘ１Ｘ２ＷＸ４ＥＸ２ＷＸ４Ｘ６Ｘ７Ｘ３ＰＲＸ１１ＲＸ１３（配列番号２）を含み、この配列中、Ｘ１は、ベータ−ＡまたはＳであり、Ｘ２は、Ｋ、ＲまたはＬであり、Ｘ３は、ＦまたはＷであり、Ｘ４は、Ｆ、ＷまたはＹであり、Ｘ５は、Ｅ、ＲまたはＳであり、Ｘ６は、Ｒ、ＴまたはＳであり、Ｘ７は、Ｅ、ＲまたはＳであり、Ｘ８は、存在しないか、ＦまたはＷであり、Ｘ９は、ＰまたはＲであり、Ｘ１０は、ＲまたはＬであり、Ｘ１１は、Ｋ、ＷまたはＲであり、Ｘ１２は、ＲまたはＦであり、およびＸ１３は、ＲまたはＫである。一部の実施形態では、ＶＥＰＥＰ−３ペプチドは、アミノ酸配列Ｘ１ＫＷＦＥＲＷＦＲＥＷＰＲＫＲＲ（配列番号３）、Ｘ１ＫＷＷＥＲＷＷＲＥＷＰＲＫＲＲ（配列番号４）、Ｘ１ＫＷＷＥＲＷＷＲＥＷＰＲＫＲＫ（配列番号５）、Ｘ１ＲＷＷＥＫＷＷＴＲＷＰＲＫＲＫ（配列番号６）、またはＸ１ＲＷＹＥＫＷＹＴＥＦＰＲＲＲＲ（配列番号７）を含み、これらの配列中のＸ１は、ベータ−ＡまたはＳである。一部の実施形態では、ＶＥＰＥＰ−３ペプチドは、細胞膜透過ペプチドが、１０位のアミノ酸の非天然アミノ酸による置換、２位と３位のアミノ酸間への非天然アミノ酸の付加、および２つの非天然アミノ酸間への炭化水素連結の付加により修飾されている、配列番号１〜７のいずれか１つのアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＶＥＰＥＰ−３ペプチドは、アミノ酸配列Ｘ１ＫＸ１４ＷＷＥＲＷＷＲＸ１４ＷＰＲＫＲＫ（配列番号８）を含み、この配列中、Ｘ１は、ベータ−ＡまたはＳであり、およびＸ１４は、非天然アミノ酸であり、ならびに２つの非天然アミノ酸間に炭化水素連結がある。一部の実施形態では、ＶＥＰＥＰ−３ペプチドは、アミノ酸配列Ｘ１Ｘ２Ｘ３ＷＸ５Ｘ１０Ｘ３ＷＸ６Ｘ７ＷＸ８Ｘ９Ｘ１０ＷＸ１２Ｒ（配列番号９）を含み、この配列中、Ｘ１は、ベータ−ＡまたはＳであり、Ｘ２は、Ｋ、ＲまたはＬであり、Ｘ３は、ＦまたはＷであり、Ｘ５は、ＲまたはＳであり、Ｘ６は、ＲまたはＳであり、Ｘ７は、ＲまたはＳであり、Ｘ８は、ＦまたはＷであり、Ｘ９は、ＲまたはＰであり、Ｘ１０は、ＬまたはＲであり、およびＸ１２は、ＲまたはＦである。一部の実施形態では、ＶＥＰＥＰ−３ペプチドは、アミノ酸配列Ｘ１ＲＷＷＲＬＷＷＲＳＷＦＲＬＷＲＲ（配列番号１０）、Ｘ１ＬＷＷＲＲＷＷＳＲＷＷＰＲＷＲＲ（配列番号１１）、Ｘ１ＬＷＷＳＲＷＷＲＳＷＦＲＬＷＦＲ（配列番号１２）、またはＸ１ＫＦＷＳＲＦＷＲＳＷＦＲＬＷＲＲ（配列番号１３）を含み、これらの配列中のＸ１は、ベータ−ＡまたはＳである。一部の実施形態では、ＶＥＰＥＰ−３ペプチドは、細胞膜透過ペプチドが、５位または１２位のアミノ酸の非天然アミノ酸による置換、および２つの非天然アミノ酸間への炭化水素連結の付加により修飾されている、配列番号１および９〜１３のいずれか１つのアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＶＥＰＥＰ−３ペプチドは、アミノ酸配列Ｘ１ＲＷＷＸ１４ＬＷＷＲＳＷＸ１４ＲＬＷＲＲ（配列番号１４）を含み、この配列中、Ｘ１は、ベータ−アラニンまたはセリンであり、およびＸ１４は、非天然アミノ酸であり、ならびに２つの非天然アミノ酸間に炭化水素連結がある。一部の実施形態では、ＶＥＰＥＰ−３ペプチドは、ウイルス送達複合体中に存在する。一部の実施形態では、ＶＥＰＥＰ−３ペプチドは、ナノ粒子のコア中のウイルス送達複合体中に存在する。一部の実施形態では、ＶＥＰＥＰ−３ペプチドは、ナノ粒子のコア中に存在する。一部の実施形態では、ＶＥＰＥＰ−３ペプチドは、ナノ粒子のコア中に存在し、ウイルスと会合している。一部の実施形態では、ＶＥＰＥＰ−３ペプチドは、ナノ粒子の中間層中に存在する。一部の実施形態では、ＶＥＰＥＰ−３ペプチドは、ナノ粒子の表面層中に存在する。一部の実施形態では、ＶＥＰＥＰ−３ペプチドは、ターゲティング部分に連結している。一部の実施形態では、連結は、共有結合である。一部の実施形態では、共有結合による連結は、化学的カップリングによる。一部の実施形態では、共有結合による連結は、遺伝学的方法による。
【００６３】
一部の実施形態では、本明細書に記載のウイルス送達複合体またはナノ粒子は、ＶＥＰＥＰ−６細胞膜透過ペプチドを含む。一部の実施形態では、ＶＥＰＥＰ−６ペプチドは、Ｘ１ＬＸ２ＲＡＬＷＸ９ＬＸ３Ｘ９Ｘ４ＬＷＸ９ＬＸ５Ｘ６Ｘ７Ｘ８（配列番号１５）、Ｘ１ＬＸ２ＬＡＲＷＸ９ＬＸ３Ｘ９Ｘ４ＬＷＸ９ＬＸ５Ｘ６Ｘ７Ｘ８（配列番号１６）およびＸ１ＬＸ２ＡＲＬＷＸ９ＬＸ３Ｘ９Ｘ４ＬＷＸ９ＬＸ５Ｘ６Ｘ７Ｘ８（配列番号１７）からなる群から選択されるアミノ酸配列を含み、これらの配列中、Ｘ１は、ベータ−ＡまたはＳであり、Ｘ２は、ＦまたはＷであり、Ｘ３は、Ｌ、Ｗ、ＣまたはＩであり、Ｘ４は、Ｓ、Ａ、ＮまたはＴであり、Ｘ５は、ＬまたはＷであり、Ｘ６は、ＷまたはＲであり、Ｘ７は、ＫまたはＲであり、Ｘ８は、Ａであるか、または存在せず、およびＸ９は、ＲまたはＳである。一部の実施形態では、ＶＥＰＥＰ−６ペプチドは、アミノ酸配列Ｘ１ＬＸ２ＲＡＬＷＲＬＸ３ＲＸ４ＬＷＲＬＸ５Ｘ６Ｘ７Ｘ８（配列番号１８）を含み、この配列中、Ｘ１は、ベータ−ＡまたはＳであり、Ｘ２は、ＦまたはＷであり、Ｘ３は、Ｌ、Ｗ、ＣまたはＩであり、Ｘ４は、Ｓ、Ａ、ＮまたはＴであり、Ｘ５は、ＬまたはＷであり、Ｘ６は、ＷまたはＲであり、Ｘ７は、ＫまたはＲであり、およびＸ８は、Ａであるか、または存在しない。一部の実施形態では、ＶＥＰＥＰ−６ペプチドは、アミノ酸配列Ｘ１ＬＸ２ＲＡＬＷＲＬＸ３ＲＸ４ＬＷＲＬＸ５Ｘ６ＫＸ７（配列番号１９）を含み、この配列中、Ｘ１は、ベータ−ＡまたはＳであり、Ｘ２は、ＦまたはＷであり、Ｘ３は、ＬまたはＷであり、Ｘ４は、Ｓ、ＡまたはＮであり、Ｘ５は、ＬまたはＷであり、Ｘ６は、ＷまたはＲであり、Ｘ７は、Ａであるか、または存在しない。一部の実施形態では、ＶＥＰＥＰ−６ペプチドは、Ｘ１ＬＦＲＡＬＷＲＬＬＲＸ２ＬＷＲＬＬＷＸ３（配列番号２０）、Ｘ１ＬＷＲＡＬＷＲＬＷＲＸ２ＬＷＲＬＬＷＸ３Ａ（配列番号２１）、Ｘ１ＬＷＲＡＬＷＲＬＸ４ＲＸ２ＬＷＲＬＷＲＸ３Ａ（配列番号２２）、Ｘ１ＬＷＲＡＬＷＲＬＷＲＸ２ＬＷＲＬＷＲＸ３Ａ（配列番号２３）、Ｘ１ＬＷＲＡＬＷＲＬＸ５ＲＡＬＷＲＬＬＷＸ３Ａ（配列番号２４）、およびＸ１ＬＷＲＡＬＷＲＬＸ４ＲＮＬＷＲＬＬＷＸ３Ａ（配列番号２５）からなる群から選択されるアミノ酸配列を含み、これらの配列中、Ｘ１は、ベータ−ＡまたはＳであり、Ｘ２は、ＳまたはＴであり、Ｘ３は、ＫまたはＲであり、Ｘ４は、Ｌ、ＣまたはＩであり、およびＸ５は、ＬまたはＩである。一部の実施形態では、ＶＥＰＥＰ−６ペプチドは、Ａｃ−Ｘ１ＬＦＲＡＬＷＲＬＬＲＳＬＷＲＬＬＷＫ−システアミド（配列番号２６）、Ａｃ−Ｘ１ＬＷＲＡＬＷＲＬＷＲＳＬＷＲＬＬＷＫＡ−システアミド（配列番号２７）、Ａｃ−Ｘ１ＬＷＲＡＬＷＲＬＬＲＳＬＷＲＬＷＲＫＡ−システアミド（配列番号２８）、Ａｃ−Ｘ１ＬＷＲＡＬＷＲＬＷＲＳＬＷＲＬＷＲＫＡ−システアミド（配列番号２９）、Ａｃ−Ｘ１ＬＷＲＡＬＷＲＬＬＲＡＬＷＲＬＬＷＫＡ−システアミド（配列番号３０）、およびＡｃ−Ｘ１ＬＷＲＡＬＷＲＬＬＲＮＬＷＲＬＬＷＫＡ−システアミド（配列番号３１）からなる群から選択されるアミノ酸配列を含み、これらの配列中、Ｘ１は、ベータ−ＡまたはＳである。一部の実施形態では、ＶＥＰＥＰ−６ペプチドは、８位と１２位の２つの残基間に炭化水素連結をさらに含む、配列番号１５〜３１のいずれか１つのアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＶＥＰＥＰ−６ペプチドは、Ａｃ−Ｘ１ＬＦＲＡＬＷＲＳＬＬＲＳＳＬＷＲＬＬＷＫ−システアミド（配列番号３２）、Ａｃ−Ｘ１ＬＦＬＡＲＷＲＳＬＬＲＳＳＬＷＲＬＬＷＫ−システアミド（配列番号３３）、Ａｃ−Ｘ１ＬＦＲＡＬＷＳＳＬＬＲＳＳＬＷＲＬＬＷＫ−システアミド（配列番号３４）、Ａｃ−Ｘ１ＬＦＬＡＲＷＳＳＬＬＲＳＳＬＷＲＬＬＷＫ−システアミド（配列番号３５）、Ａｃ−Ｘ１ＬＦＲＡＬＷＲＬＬＲＳＳＬＷＳＳＬＬＷＫ−システアミド（配列番号３６）、Ａｃ−Ｘ１ＬＦＬＡＲＷＲＬＬＲＳＳＬＷＳＳＬＬＷＫ−システアミド（配列番号３７）、Ａｃ−Ｘ１ＬＦＲＡＬＷＲＬＬＳＳＳＬＷＳＳＬＬＷＫ−システアミド（配列番号３８）、Ａｃ−Ｘ１ＬＦＬＡＲＷＲＬＬＳＳＳＬＷＳＳＬＬＷＫ−システアミド（配列番号３９）、およびＡｃ−Ｘ１ＬＦＡＲＳＬＷＲＬＬＲＳＳＬＷＲＬＬＷＫ−システアミド（配列番号４０）からなる群から選択されるアミノ酸配列を含み、これらの配列中、Ｘ１は、ベータ−ＡまたはＳであり、下付の（inferior）「Ｓ」が後ろにある残基は、前記炭化水素連結により連結している残基である。一部の実施形態では、ＶＥＰＥＰ−６ペプチドは、ウイルス送達複合体中に存在する。一部の実施形態では、ＶＥＰＥＰ−６ペプチドは、ナノ粒子のコア中のウイルス送達複合体中に存在する。一部の実施形態では、ＶＥＰＥＰ−６ペプチドは、ナノ粒子のコア中に存在する。一部の実施形態では、ＶＥＰＥＰ−６ペプチドは、ナノ粒子のコア中に存在し、ウイルスと会合している。一部の実施形態では、ＶＥＰＥＰ−６ペプチドは、ナノ粒子の中間層中に存在する。一部の実施形態では、ＶＥＰＥＰ−６ペプチドは、ナノ粒子の表面層中に存在する。一部の実施形態では、ＶＥＰＥＰ−６ペプチドは、ターゲティング部分に連結している。一部の実施形態では、連結は、共有結合である。一部の実施形態では、共有結合による連結は、化学的カップリングによる。一部の実施形態では、共有結合による連結は、遺伝学的方法による。
【００６４】
一部の実施形態では、本明細書に記載のウイルス送達複合体またはナノ粒子は、アミノ酸配列Ｘ１Ｘ２Ｘ３ＷＷＸ４Ｘ５ＷＡＸ６Ｘ３Ｘ７Ｘ８Ｘ９Ｘ１０Ｘ１１Ｘ１２ＷＸ１３Ｒ（配列番号４１）を含むＶＥＰＥＰ−９細胞膜透過ペプチドを含み、この配列中、Ｘ１は、ベータ−ＡまたはＳであり、Ｘ２は、Ｌであるか、または存在せず、Ｘ３は、Ｒであるか、または存在せず、Ｘ４は、Ｌ、ＲまたはＧであり、Ｘ５は、Ｒ、ＷまたはＳであり、Ｘ６は、Ｓ、ＰまたはＴであり、Ｘ７は、ＷまたはＰであり、Ｘ８は、Ｆ、ＡまたはＲであり、Ｘ９は、Ｓ、Ｌ、ＰまたはＲであり、Ｘ１０は、ＲまたはＳであり、Ｘ１１は、Ｗであるか、または存在せず、Ｘ１２は、Ａであるか、Ｒであるか、または存在せず、およびＸ１３は、ＷまたはＦであり、ならびにＸ３が存在しない場合には、Ｘ２、Ｘ１１およびＸ１２も存在しない。一部の実施形態では、ＶＥＰＥＰ−９ペプチドは、アミノ酸配列Ｘ１Ｘ２ＲＷＷＬＲＷＡＸ６ＲＷＸ８Ｘ９Ｘ１０ＷＸ１２ＷＸ１３Ｒ（配列番号４２）を含み、この配列中、Ｘ１は、ベータ−ＡまたはＳであり、Ｘ２は、Ｌであるか、または存在せず、Ｘ６は、ＳまたはＰであり、Ｘ８は、ＦまたはＡであり、Ｘ９は、Ｓ、ＬまたはＰであり、Ｘ１０は、ＲまたはＳであり、Ｘ１２は、ＡまたはＲであり、およびＸ１３は、ＷまたはＦである。一部の実施形態では、ＶＥＰＥＰ−９ペプチドは、Ｘ１ＬＲＷＷＬＲＷＡＳＲＷＦＳＲＷＡＷＷＲ（配列番号４３）、Ｘ１ＬＲＷＷＬＲＷＡＳＲＷＡＳＲＷＡＷＦＲ（配列番号４４）、Ｘ１ＲＷＷＬＲＷＡＳＲＷＡＬＳＷＲＷＷＲ（配列番号４５）、Ｘ１ＲＷＷＬＲＷＡＳＲＷＦＬＳＷＲＷＷＲ（配列番号４６）、Ｘ１ＲＷＷＬＲＷＡＰＲＷＦＰＳＷＲＷＷＲ（配列番号４７）、およびＸ１ＲＷＷＬＲＷＡＳＲＷＡＰＳＷＲＷＷＲ（配列番号４８）からなる群から選択されるアミノ酸配列を含み、これらの配列中、Ｘ１は、ベータ−ＡまたはＳである。一部の実施形態では、ＶＥＰＥＰ−９ペプチドは、Ｘ１ＷＷＸ４Ｘ５ＷＡＸ６Ｘ７Ｘ８ＲＸ１０ＷＷＲ（配列番号４９）のアミノ酸配列を含み、この配列中、Ｘ１は、ベータ−ＡまたはＳであり、Ｘ４は、ＲまたはＧであり、Ｘ５は、ＷまたはＳであり、Ｘ６は、Ｓ、ＴまたはＰであり、Ｘ７は、ＷまたはＰであり、Ｘ８は、ＡまたはＲであり、およびＸ１０は、ＳまたはＲである。一部の実施形態では、ＶＥＰＥＰ−９ペプチドは、Ｘ１ＷＷＲＷＷＡＳＷＡＲＳＷＷＲ（配列番号５０）、Ｘ１ＷＷＧＳＷＡＴＰＲＲＲＷＷＲ（配列番号５１）、およびＸ１ＷＷＲＷＷＡＰＷＡＲＳＷＷＲ（配列番号５２）からなる群から選択されるアミノ酸配列を含み、これらの配列中のＸ１は、ベータ−ＡまたはＳである。一部の実施形態では、ＶＥＰＥＰ−９ペプチドは、ウイルス送達複合体中に存在する。一部の実施形態では、ＶＥＰＥＰ−９ペプチドは、ナノ粒子のコア中のウイルス送達複合体中に存在する。一部の実施形態では、ＶＥＰＥＰ−９ペプチドは、ナノ粒子のコア中に存在する。一部の実施形態では、ＶＥＰＥＰ−９ペプチドは、ナノ粒子のコア中に存在し、ウイルスと会合している。一部の実施形態では、ＶＥＰＥＰ−９ペプチドは、ナノ粒子の中間層中に存在する。一部の実施形態では、ＶＥＰＥＰ−９ペプチドは、ナノ粒子の表面層中に存在する。一部の実施形態では、ＶＥＰＥＰ−９ペプチドは、ターゲティング部分に連結している。一部の実施形態では、連結は、共有結合である。一部の実施形態では、共有結合による連結は、化学的カップリングによる。一部の実施形態では、共有結合による連結は、遺伝学的方法による。
【００６５】
一部の実施形態では、本明細書に記載のウイルス送達複合体またはナノ粒子は、アミノ酸配列Ｘ１ＫＷＲＳＸ２Ｘ３Ｘ４ＲＷＲＬＷＲＸ５Ｘ６Ｘ７Ｘ８ＳＲ（配列番号５３）を含むＡＤＧＮ−１００細胞膜透過ペプチドを含み、この配列中、Ｘ１は、任意のアミノ酸であるか、または存在せず、およびＸ２〜Ｘ８は、任意のアミノ酸である。一部の実施形態では、ＡＤＧＮ−１００ペプチドは、アミノ酸配列Ｘ１ＫＷＲＳＸ２Ｘ３Ｘ４ＲＷＲＬＷＲＸ５Ｘ６Ｘ７Ｘ８ＳＲ（配列番号５４）を含み、この配列中、Ｘ１は、βＡであるか、Ｓであるか、または存在せず、Ｘ２は、ＡまたはＶであり、Ｘ３は、またはＬであり、Ｘ４は、ＷまたはＹであり、Ｘ５は、ＶまたはＳであり、Ｘ６は、Ｒ、ＶまたはＡであり、Ｘ７は、ＳまたはＬであり、およびＸ８は、ＷまたはＹである。一部の実施形態では、ＡＤＧＮ−１００ペプチドは、アミノ酸配列ＫＷＲＳＡＧＷＲＷＲＬＷＲＶＲＳＷＳＲ（配列番号５５）、ＫＷＲＳＡＬＹＲＷＲＬＷＲＶＲＳＷＳＲ（配列番号５６）、ＫＷＲＳＡＬＹＲＷＲＬＷＲＳＲＳＷＳＲ（配列番号５７）、またはＫＷＲＳＡＬＹＲＷＲＬＷＲＳＡＬＹＳＲ（配列番号５８）を含む。一部の実施形態では、ＡＤＧＮ−１００ペプチドは、炭化水素連結により連結している３つまたは６つの残基により隔てられている２つの残基を含む。一部の実施形態では、ＡＤＧＮ−１００ペプチドは、アミノ酸配列ＫＷＲＳＳＡＧＷＲＳＷＲＬＷＲＶＲＳＷＳＲ（配列番号５９）、ＫＷＲＳＳＡＧＷＲＷＲＳＬＷＲＶＲＳＷＳＲ（配列番号６０）、ＫＷＲＳＡＧＷＲＳＷＲＬＷＲＶＲＳＳＷＳＲ（配列番号６１）、ＫＷＲＳＳＡＬＹＲＳＷＲＬＷＲＳＲＳＷＳＲ（配列番号６２）、ＫＷＲＳＳＡＬＹＲＷＲＳＬＷＲＳＲＳＷＳＲ（配列番号６３）、ＫＷＲＳＡＬＹＲＳＷＲＬＷＲＳＲＳＳＷＳＲ（配列番号６４）、ＫＷＲＳＡＬＹＲＷＲＳＬＷＲＳＳＲＳＷＳＲ（配列番号６５）、ＫＷＲＳＡＬＹＲＷＲＬＷＲＳＳＲＳＷＳＳＲ（配列番号６６）、ＫＷＲＳＳＡＬＹＲＷＲＳＬＷＲＳＡＬＹＳＲ（配列番号６７）、ＫＷＲＳＳＡＬＹＲＳＷＲＬＷＲＳＡＬＹＳＲ（配列番号６８）、ＫＷＲＳＡＬＹＲＷＲＳＬＷＲＳＳＡＬＹＳＲ（配列番号６９）、またはＫＷＲＳＡＬＹＲＷＲＬＷＲＳＳＡＬＹＳＳＲ（配列番号７０）を含み、これらの配列中、下付の「Ｓ」で示された残基は、炭化水素連結により連結している。一部の実施形態では、ＡＤＧＮ−１００ペプチドは、ウイルス送達複合体中に存在する。一部の実施形態では、ＡＤＧＮ−１００ペプチドは、ナノ粒子のコア中のウイルス送達複合体中に存在する。一部の実施形態では、ＡＤＧＮ−１００ペプチドは、ナノ粒子のコア中に存在する。一部の実施形態では、ＡＤＧＮ−１００ペプチドは、ナノ粒子のコア中に存在し、ウイルスと会合している。一部の実施形態では、ＡＤＧＮ−１００ペプチドは、ナノ粒子の中間層中に存在する。一部の実施形態では、ＡＤＧＮ−１００ペプチドは、ナノ粒子の表面層中に存在する。一部の実施形態では、ＡＤＧＮ−１００ペプチドは、ターゲティング部分に連結している。一部の実施形態では、連結は、共有結合である。一部の実施形態では、共有結合による連結は、化学的カップリングによる。一部の実施形態では、共有結合���よる連結は、遺伝学的方法による。
【００６６】
一部の実施形態では、本明細書に記載のＣＰＰ（例えば、ＰＥＰ−１、ＰＥＰ−２、ＶＥＰＥＰ−３ペプチド、ＶＥＰＥＰ−６ペプチド、ＶＥＰＥＰ−９ペプチドまたはＡＤＧＮ−１００ペプチド）は、ＣＰＰのＮ末端またはＣ末端に連結している１つまたは複数の部分をさらに含む。一部の実施形態では、１つまたは複数の部分は、ＣＰＰのＮ末端に共有結合によって連結している。一部の実施形態では、１つまたは複数の部分は、アセチル基、ステアリル基、脂肪酸、コレステロール、ポリエチレングリコール、核内局在化シグナル、核外輸送シグナル、抗体またはその抗体断片、ペプチド、多糖類、およびターゲティング分子からなる群から選択される。一部の実施形態では、１つまたは複数の部分は、アセチル基および／またはステアリル基である。一部の実施形態では、ＣＰＰは、そのＮ末端に連結しているアセチル基および／またはステアリル基を含む。一部の実施形態では、ＣＰＰは、そのＮ末端に連結しているアセチル基を含む。一部の実施形態では、ＣＰＰは、そのＮ末端に連結しているステアリル基を含む。一部の実施形態では、ＣＰＰは、そのＮ末端に共有結合によって連結しているアセチル基および／またはステアリル基を含む。一部の実施形態では、ＣＰＰは、そのＮ末端に共有結合によって連結しているアセチル基を含む。一部の実施形態では、ＣＰＰは、そのＮ末端に共有結合によって連結しているステアリル基を含む。
【００６７】
一部の実施形態では、本明細書に記載のＣＰＰ（例えば、ＰＥＰ−１、ＰＥＰ−２、ＶＥＰＥＰ−３ペプチド、ＶＥＰＥＰ−６ペプチド、ＶＥＰＥＰ−９ペプチドまたはＡＤＧＮ−１００ペプチド）は、ＣＰＰのＣ末端に連結している１つまたは複数の部分をさらに含む。一部の実施形態では、１つまたは複数の部分は、ＣＰＰのＣ末端に共有結合によって連結している。一部の実施形態では、１つまたは複数の部分は、システアミド基、システイン、チオール、アミド、ニトリロ三酢酸、カルボキシル基、直鎖状または分枝状Ｃ１〜Ｃ６アルキル基、一級または二級アミン、オシド誘導体（osidic  derivative）、脂質、リン脂質、脂肪酸、コレステロール、ポリエチレングリコール、核内局在化シグナル、核外輸送シグナル、抗体またはその抗体断片、ペプチド、多糖類、およびターゲティング分子からなる群から選択される。一部の実施形態では、１つまたは複数の部分は、システアミド基である。一部の実施形態では、ＣＰＰは、そのＣ末端に連結しているシステアミド基を含む。一部の実施形態では、ＣＰＰは、そのＣ末端に共有結合によって連結しているシステアミド基を含む。
【００６８】
一部の実施形態では、本明細書に記載のＣＰＰ（例えば、ＰＥＰ−１、ＰＥＰ−２、ＶＥＰＥＰ−３ペプチド、ＶＥＰＥＰ−６ペプチド、ＶＥＰＥＰ−９ペプチドまたはＡＤＧＮ−１００ペプチド）は、１つまたは複数の部分をさらに含む。一部の実施形態では、１つまたは複数の部分は、ＣＰＰのＮ末端またはＣ末端にコンジュゲートされる。一部の実施形態では、第１の部分は、ＣＰＰのＮ末端にコンジュゲートされ、第２の部分は、ＣＰＰのＣ末端にコンジュゲートされる。
【００６９】
一部の実施形態では、１つまたは複数の部分は、ターゲティング分子を含む。一部の実施形態では、ターゲティング分子は、ＣＰＰのＮ末端またはＣ末端にコンジュゲートされる。一部の実施形態では、第１のターゲティング分子は、ＣＰＰのＮ末端にコンジュゲートされ、第２のターゲティング分子は、ＣＰＰのＣ末端にコンジュゲートされる。一部の実施形態では、ターゲティング分子は、少なくとも約３、４または５個のアミノ酸を含む。一部の実施形態では、ターゲティング分子は、約８、７、６、５または４個以下のアミノ酸を含む。一部の実施形態では、ターゲティング分子は、約３、４または５個のアミノ酸を含む。一部の実施形態では、ターゲティング分子は、ＧＹ、ＹＶ、ＶＳ、ＳＫ、ＧＹＶ、ＹＶＳ、ＶＳＫ、ＧＹＶＳ、ＹＶＳＫ、ＹＩ、ＩＧ、ＧＳ、ＳＲ、ＹＩＧ、ＩＧＳ、ＧＳＲ、ＹＩＧＳ、ＩＧＳＲからなる群から選択される配列を含む。一部の実施形態では、配列（例えば、ターゲティング配列）は、ＧＹＶＳＫ、ＧＹＶＳ、ＹＩＧＳおよびＹＩＧＳＲからなる群から選択される。一部の実施形態では、ターゲティング分子は、リンカーを介してＣＰＰにコンジュゲートされる。一部の実施形態では、リンカーは、ポリグリシンリンカーを含む。一部の実施形態では、リンカーは、β−アラニンを含む。一部の実施形態では、リンカーは、少なくとも約２、３または４個のグリシン、必要に応じて連続したグリシンを含む。一部の実施形態では、リンカーは、セリンをさらに含む。一部の実施形態では、リンカーは、ＧＧＧＧＳまたはＳＧＧＧＧ配列を含む。一部の実施形態では、リンカーは、グリシン−β−アラニンモチーフを含む。
【００７０】
一部の実施形態では、１つまたは複数の部分は、ポリマー（例えば、ＰＥＧ、ポリリシン、ＰＥＴ）を含む。一部の実施形態では、ポリマーは、ＣＰＰのＮ末端またはＣ末端にコンジュゲートされる。一部の実施形態では、第１のポリマーは、ＣＰＰのＮ末端にコンジュゲートされ、第２のポリマーは、ＣＰＰのＣ末端にコンジュゲートされる。一部の実施形態では、ポリマーは、ＰＥＧである。一部の実施形態では、ＰＥＧは、直鎖状ＰＥＧである。一部の実施形態では、ＰＥＧは、分枝状ＰＥＧである。一部の実施形態では、ＰＥＧの分子量は、約５ｋＤａ、１０ｋＤａ、１５ｋＤａ、２０ｋＤａ、３０ｋＤａまたは４０ｋＤａ以下である。一部の実施形態では、ＰＥＧの分子量は、少なくとも約５ｋＤａ、１０ｋＤａ、１５ｋＤａ、２０ｋＤａ、３０ｋＤａまたは４０ｋＤａである。一部の実施形態では、ＰＥＧの分子量は、約５ｋＤａ〜約１０ｋＤａ、約１０ｋＤａ〜約１５ｋＤａ、約１５ｋＤａ〜約２０ｋＤａ、約２０ｋＤａ〜約３０ｋＤａまたは約３０ｋＤａ〜約４０ｋＤａである。一部の実施形態では、ＰＥＧの分子量は、約５ｋＤａ、１０ｋＤａ、２０ｋＤａまたは４０ｋＤａである。一部の実施形態では、ＰＥＧの分子量は、５ｋＤａ、１０ｋＤａ、２０ｋＤａまたは４０ｋＤａからなる群から選択される。一部の実施形態では、ＰＥＧの分子量は、約５ｋＤａである。一部の実施形態では、ＰＥＧの分子量は、約１０ｋＤａである。一部の実施形態では、ＰＥＧは、少なくとも約１、２または３個のエチレングリコール単位を含む。一部の実施形態では、ＰＥＧは、約３、２または１個以下のエチレングリコール単位を含む。一部の実施形態では、ＰＥＧは、約１、２または３個のエチレングリコール単位を含む。
【００７１】
一部の実施形態では、１つまたは複数の部分は、ドーパミンを含む。一部の実施形態では、ドーパミンは、ＣＰＰのＮ末端またはＣ末端にコンジュゲートしたドーパミンである。一部の実施形態では、第１のドーパミンは、ＣＰＰのＮ末端にコンジュゲートされ、第２のドーパミンは、ＣＰＰのＣ末端にコンジュゲートされる。一部の実施形態では、ドーパミンは、リンカーを介してＣＰＰにコンジュゲートされる。一部の実施形態では、リンカーは、ポリグリシンリンカーを含む。一部の実施形態では、リンカーは、β−アラニンを含む。一部の実施形態では、リンカーは、少なくとも約２、３または４個のグリシン、必要に応じて連続したグリシンを含む。一部の実施形態では、リンカーは、セリンをさらに含む。一部の実施形態では、リンカーは、ＧＧＧＧＳまたはＳＧＧＧＧ配列を含む。一部の実施形態では、リンカーは、グリシン−β−アラニンモチーフを含む。
【００７２】
一部の実施形態では、本明細書に記載のＣＰＰ（例えば、ＰＥＰ−１、ＰＥＰ−２、ＶＥＰＥＰ−３ペプチド、ＶＥＰＥＰ−６ペプチド、ＶＥＰＥＰ−９ペプチドまたはＡＤＧＮ−１００ペプチド）は、ステープル化されている。本明細書において使用する場合の「ステープル化」は、ペプチド中の２残基間の化学的連結を指す。一部の実施形態では、該ペプチドの２アミノ酸間に化学的連結を含むＣＰＰは、ステープル化されている。一部の実施形態では、化学的連結により連結している２つのアミノ酸は、３つまたは６つのアミノ酸により隔てられている。一部の実施形態では、化学的連結により連結している２つのアミノ酸は、３つのアミノ酸により隔てられている。一部の実施形態では、化学的連結により連結している２つのアミノ酸は、６つのアミノ酸により隔てられている。一部の実施形態では、化学的連結により連結している２つのアミノ酸の各々は、ＲまたはＳである。一部の実施形態では、化学的連結により連結している２つのアミノ酸の各々は、Ｒである。一部の実施形態では、化学的連結により連結している２つのアミノ酸の各々は、Ｓである。一部の実施形態では、化学的連結により連結している２つのアミノ酸の一方は、Ｒであり、他方は、Ｓである。一部の実施形態では、化学的連結は、炭化水素連結である。
【００７３】
一部の実施形態では、ＣＰＰは、Ｌ−アミノ酸を含むＬ−ペプチドである。一部の実施形態では、ＣＰＰは、レトロ−インベルソ（retro-inverso）ペプチド（例えば、逆向き配列にＤ−アミノ酸で構成されたペプチドであり、伸長されると、その親分子と同様の側鎖トポロジーをとるが、逆方向アミドペプチド結合を有する）である。
【００７４】
本明細書に記載の全てのＣＰＰも提供される。
複合体
【００７５】
一部の実施形態では、１つまたは複数のウイルスと会合している、細胞膜透過ペプチド（例えば、ＰＥＰ−１、ＰＥＰ−２、ＶＥＰＥＰ−３、ＶＥＰＥＰ−６、ＶＥＰＥＰ−９またはＡＤＧＮ−１００ペプチド）を含む、ウイルスの細胞内送達のためのウイルス送達複合体が提供される。一部の実施形態では、会合は、非共有結合である。一部の実施形態では、会合は、共有結合である。一部の実施形態では、ウイルスは、組換えＡＡＶ、アデノウイルス、レンチウイルス、レトロウイルス、ＨＳＶ、ポックスウイルス、ＥＢＶ、ワクシニアウイルスおよびｈＣＭＶを含む組換えウイルスである。一部の実施形態では、組換えウイルスは、細胞ゲノム内への挿入のための導入遺伝子を含む。一部の実施形態では、導入遺伝子は、治療用導入遺伝子である。一部の実施形態では、ウイルス送達複合体中の細胞膜透過ペプチドの少なくとも一部は、ターゲティング部分に連結している。一部の実施形態では、連結は、共有結合である。一部の実施形態では、共有結合による連結は、化学的カップリングによる。一部の実施形態では、共有結合による連結は、遺伝学的方法による。一部の実施形態では、細胞膜透過ペプチドの、１つまたは複数のウイルスのうち少なくとも１つ（例えば、Ｖｇ、ｐｆｕまたはＭＯＩ単位）に対するモル比は、約１：１〜約１×１０８：１の間である。一部の実施形態では、ＣＰＰは、これらに限定されないが、ＰＴＤに基づくペプチド、両親媒性ペプチド、ポリアルギニンに基づくペプチド、ＭＰＧペプチド、ＣＡＤＹペプチド、ＶＥＰＥＰペプチド（例えば、ＶＥＰＥＰ−３、ＶＥＰＥＰ−６またはＶＥＰＥＰ−９ペプチド）、ＡＤＧＮ−１００ペプチド、Ｐｅｐ−１ペプチドおよびＰｅｐ−２ペプチドを含む。一部の実施形態では、ウイルス送達複合体は、標的ポリヌクレオチドに特定の修飾を導入するためのウイルスを含む。一部の実施形態では、標的ポリヌクレオチドは、コード配列が修飾される。一部の実施形態では、標的ポリヌクレオチドは、非コード配列が修飾される。一部の実施形態では、標的ポリヌクレオチドは、標的遺伝子の発現を減少させること、または不活性な産物を発現する修飾標的遺伝子をもたらすことなどにより、標的遺伝子を不活性化するように修飾される。一部の実施形態では、標的ポリヌクレオチドは、標的遺伝子の発現を増加させること、または活性標的遺伝子産物を発現する修飾標的遺伝子をもたらすことなどにより、標的遺伝子を活性化するように修飾される。一部の実施形態では、導入遺伝子は、治療用タンパク質などのタンパク質をコードする。一部の実施形態では、導入遺伝子は、内因性遺伝子、例えば、疾患関連内因性遺伝子を標的とする阻害性ＲＮＡ（ＲＮＡｉ）などのＲＮＡｉをコードする。一部の実施形態では、導入遺伝子は、ＣＡＲをコードする。一部の実施形態では、複合体は、ＲＮＡｉをコードする第１の導入遺伝子およびタンパク質をコードする第２の導入遺伝子を含む１つまたは複数のウイルスを含む。一部の実施形態では、ＲＮＡｉは、疾患または状態に関与する内因性遺伝子を標的とする治療用ＲＮＡｉであり、タンパク質は、疾患または状態を処置するために有用な治療用タンパク質である。一部の実施形態では、治療用ＲＮＡ���は、内因性遺伝子の疾患関連形態（例えば、変異体タンパク質をコードする遺伝子、またはタンパク質の異常発現をもたらす遺伝子）を標的とし、第２の導入遺伝子は、内因性遺伝子の治療形態である（例えば、第２の導入遺伝子は、変異体タンパク質の野生型もしくは機能形態をコードする、または第２の導入遺伝子は、タンパク質の正常発現をもたらす）。一部の実施形態では、複合体は、第１の導入遺伝子を含む第１のウイルスおよび第２の導入遺伝子を含む第２のウイルスを含む。一部の実施形態では、複合体は、第１の導入遺伝子および第２の導入遺伝子を含む単一のウイルスを含む。
【００７６】
ＣＰＰは、化学的コンジュゲーションまたは遺伝的組換えのいずれかを使用して、ウイルス（ＡＡＶなど）に共有結合によって会合することができる。例えば、ＣＰＰは、Ｃ末端システアミド／システインまたはＮ末端ベータ−アラニン橋架けのいずれかが関与する架橋を介して、ウイルスに連結することができる。ウイルスは、例えば、６−マレイミドヘキサン酸Ｎ−ヒドロキシスクシンイミドエステルなどの化学を含む、かかる目的のための当技術分野において公知のいずれかの技法を使用して、ペプチド鎖の内側の様々な部分に共有結合によって連結することもできる。例えば、Kurachi,  S.,  et  al.  Gene  therapy  14.15  (2007):  1160;およびYu,  Di,  et  al.  Journal  of  virology  85.24  (2011):  13114-13123を参照されたい。
【００７７】
一部の実施形態では、細胞膜透過ペプチド（例えば、ＰＥＰ−１、ＰＥＰ−２、ＶＥＰＥＰ−３、ＶＥＰＥＰ−６、ＶＥＰＥＰ−９またはＡＤＧＮ−１００ペプチド）、および標的ポリヌクレオチドを標的とするウイルスを含む、標的ポリヌクレオチドに修飾を導入するためのウイルス送達複合体が提供される。一部の実施形態では、修飾は、標的ポリヌクレオチドにおける１つまたは複数のヌクレオチドの付加、欠失または置換である。一部の実施形態では、修飾は、標的ポリヌクレオチドにおける異種核酸の挿入である。一部の実施形態では、ウイルス送達複合体中の細胞膜透過ペプチドの少なくとも一部は、ターゲティング部分に連結している。一部の実施形態では、連結は、共有結合である。一部の実施形態では、共有結合による連結は、化学的カップリングによる。一部の実施形態では、共有結合による連結は、遺伝学的方法による。一部の実施形態では、細胞膜透過ペプチドの、１つまたは複数のウイルスのうち少なくとも１つ（例えば、Ｖｇ、ｐｆｕまたはＭＯＩ単位）に対するモル比は、約１：１〜約１×１０８：１の間である。一部の実施形態では、ＣＰＰは、これらに限定されないが、ＰＴＤに基づくペプチド、両親媒性ペプチド、ポリアルギニンに基づくペプチド、ＭＰＧペプチド、ＣＡＤＹペプチド、ＶＥＰＥＰペプチド（例えば、ＶＥＰＥＰ−３、ＶＥＰＥＰ−６またはＶＥＰＥＰ−９ペプチド）、ＡＤＧＮ−１００ペプチド、Ｐｅｐ−１ペプチドおよびＰｅｐ−２ペプチドを含む。一部の実施形態では、標的ポリヌクレオチドは、コード配列が修飾される。一部の実施形態では、標的ポリヌクレオチドは、非コード配列が修飾される。一部の実施形態では、標的ポリヌクレオチドは、標的遺伝子の発現を減少させること、または不活性な産物を発現する修飾標的遺伝子をもたらすことなどにより、標的遺伝子を不活性化するように修飾される。一部の実施形態では、標的ポリヌクレオチドは、標的遺伝子の発現を増加させること、または活性標的遺伝子産物を発現する修飾標的遺伝子をもたらすことなどにより、標的遺伝子を活性化するように修飾される。
【００７８】
一部の実施形態では、細胞膜透過ペプチド（例えば、ＰＥＰ−１、ＰＥＰ−２、ＶＥＰＥＰ−３、ＶＥＰＥＰ−６、ＶＥＰＥＰ−９またはＡＤＧＮ−１００ペプチド）および複数のウイルスを含む、１つまたは複数の標的ポリヌクレオチドを修飾するためのウイルス送達複合体であって、複数のウイルスのそれぞれが、１つまたは複数の標的ポリヌクレオチドにおける異なる配列を標的とする、ウイルス送達複合体が提供される。一部の実施形態では、ウイルス送達複合体中の細胞膜透過ペプチドの少なくとも一部は、ターゲティング部分に連結している。一部の実施形態では、連結は、共有結合である。一部の実施形態では、共有結合による連結は、化学的カップリングによる。一部の実施形態では、共有結合による連結は、遺伝学的方法による。一部の実施形態では、細胞膜透過ペプチドの、１つまたは複数のウイルスのうち少なくとも１つ（例えば、Ｖｇ、ｐｆｕまたはＭＯＩ単位）に対するモル比は、約１：１〜約１×１０８：１の間である。一部の実施形態では、ＣＰＰは、これらに限定されないが、ＰＴＤに基づくペプチド、両親媒性ペプチド、ポリアルギニンに基づくペプチド、ＭＰＧペプチド、ＣＡＤＹペプチド、ＶＥＰＥＰペプチド（例えば、ＶＥＰＥＰ−３、ＶＥＰＥＰ−６またはＶＥＰＥＰ−９ペプチド）、ＡＤＧＮ−１００ペプチド、Ｐｅｐ−１ペプチドおよびＰｅｐ−２ペプチドを含む。一部の実施形態では、１つまたは複数の標的ポリヌクレオチドのうちの１つは、コード配列が修飾される。一部の実施形態では、１つまたは複数の標的ポリヌクレオチドのうちの１つは、非コード配列が修飾される。一部の実施形態では、１つまたは複数の標的ポリヌクレオチドのうちの１つは、標的遺伝子の発現を減少させること、または不活性な産物を発現する修飾標的遺伝子をもたらすことなどにより、標的遺伝子を不活性化するように修飾される。一部の実施形態では、１つまたは複数の標的ポリヌクレオチドのうちの１つは、標的遺伝子の発現を増加させること、または活性標的遺伝子産物を発現する修飾標的遺伝子をもたらすことなどにより、標的遺伝子を活性化するように修飾される。
【００７９】
一部の実施形態では、ウイルスの細胞内送達のためのウイルス送達複合体であって、ウイルスと会合している、細胞膜透過ペプチドを含み、細胞膜透過ペプチドが、ＰＥＰ−１ペプチド、ＰＥＰ−２ペプチド、ＶＥＰＥＰ−３ペプチド、ＶＥＰＥＰ−６ペプチド、ＶＥＰＥＰ−９ペプチドまたはＡＤＧＮ−１００ペプチドのアミノ酸配列を含む、ウイルス送達複合体が提供される。一部の実施形態では、ＰＥＰ−１ペプチドは、配列番号７１のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＰＥＰ−２ペプチドは、配列番号７２のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＰＥＰ−３ペプチドは、配列番号７３のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＶＥＰＥＰ−３ペプチドは、配列番号１〜１４、７５および７６のうちのいずれか１つのアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＶＥＰＥＰ−６ペプチドは、配列番号１５〜４０および７７のうちのいずれか１つのアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＶＥＰＥＰ−９ペプチドは、配列番号４１〜５２および７８のうちのいずれか１つのアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＡＤＧＮ−１００ペプチドは、配列番号５３〜７０、７９および８０のうちのいずれか１つのアミノ酸配列を含む。
【００８０】
一部の実施形態では、標的ポリヌクレオチドに修飾を導入するためのウイルス送達複合体であって、細胞膜透過ペプチドとウイルスとを含み、ウイルスが、標的ポリヌクレオチドを標的とし、細胞膜透過ペプチドが、ＰＥＰ−１ペプチド、ＰＥＰ−２ペプチド、ＶＥＰＥＰ−３ペプチド、ＶＥＰＥＰ−６ペプチド、ＶＥＰＥＰ−９ペプチドまたはＡＤＧＮ−１００ペプチドのアミノ酸配列を含む、ウイルス送達複合体が提供される。一部の実施形態では、ＰＥＰ−１ペプチドは、配列番号７１のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＰＥＰ−２ペプチドは、配列番号７２のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＰＥＰ−３ペプチドは、配列番号７３のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＶＥＰＥＰ−３ペプチドは、配列番号１〜１４、７５および７６のうちのいずれか１つのアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＶＥＰＥＰ−６ペプチドは、配列番号１５〜４０および７７のうちのいずれか１つのアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＶＥＰＥＰ−９ペプチドは、配列番号４１〜５２および７８のうちのいずれか１つのアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＡＤＧＮ−１００ペプチドは、配列番号５３〜７０、７９および８０のうちのいずれか１つのアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、修飾は、標的ポリヌクレオチドにおける１つまたは複数のヌクレオチドの付加、欠失または置換である。一部の実施形態では、修飾は、標的ポリヌクレオチドにおける異種核酸の挿入である。
【００８１】
一部の実施形態では、細胞膜透過ペプチドおよび複数のウイルスを含む、１つまたは複数の標的ポリヌクレオチドを修飾するためのウイルス送達複合体であって、複数のウイルスのそれぞれが、１つまたは複数の標的ポリヌクレオチドにおける異なる配列を標的とし、細胞膜透過ペプチドが、ＰＥＰ−１ペプチド、ＰＥＰ−２ペプチド、ＶＥＰＥＰ−３ペプチド、ＶＥＰＥＰ−６ペプチド、ＶＥＰＥＰ−９ペプチドまたはＡＤＧＮ−１００ペプチドのアミノ酸配列を含む、ウイルス送達複合体が提供される。一部の実施形態では、ＰＥＰ−１ペプチドは、配列番号７１のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＰＥＰ−２ペプチドは、配列番号７２のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＰＥＰ−３ペプチドは、配列番号７３のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＶＥＰＥＰ−３ペプチドは、配列番号１〜１４、７５および７６のうちのいずれか１つのアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＶＥＰＥＰ−６ペプチドは、配列番号１５〜４０および７７のうちのいずれか１つのアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＶＥＰＥＰ−９ペプチドは、配列番号４１〜５２および７８のうちのいずれか１つのアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＡＤＧＮ−１００ペプチドは、配列番号５３〜７０、７９および８０のうちのいずれか１つのアミノ酸配列を含む。
【００８２】
一部の実施形態では、本明細書に記載の実施形態のいずれかによるウイルス送達複合体に含有されているウイルスは、免疫チェックポイント制御因子、および抗原提示に関与するタンパク質を含む、免疫応答の制御に関与するタンパク質をコードする遺伝子を標的とする。一部の実施形態では、本明細書に記載の実施形態のいずれかによるウイルス送達複合体に含有されているウイルスは、コレステロール輸送および／または代謝の制御に関与するタンパク質をコードする遺伝子を標的とする。一部の実施形態では、ウイルスは、限定ではないが、ＰＤ−１、ＰＤ−Ｌ１、ＰＤ−Ｌ２、ＴＩＭ−１、ＴＩＭ−３、ＴＩＭ−４、ＢＴＬＡ、ＶＩＳＴＡ、ＬＡＧ−３、ＣＴＬＡ−４、ＴＩＧＩＴ、４−１ＢＢ、ＯＸ４０、ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＨＶＥＭ、ＧＩＴＲ、ＩＣＯＳ、ＣＤ４０、ＣＤ８０、ＣＤ８６、Ｂ７−Ｈ２、Ｂ７−Ｈ３、Ｂ７−Ｈ４、Ｂ７−Ｈ６、２Ｂ４、ＣＤ１６０、ｇｐ４９Ｂ、ＰＩＲ−Ｂ、ＫＩＲファミリー受容体、ＳＩＲＰアルファ（ＣＤ４７）、ＣＤ４８、２Ｂ４（ＣＤ２４４）、Ｂ７．１、Ｂ７．２、ＩＬＴ−２、ＩＬＴ−４、Ａ２ａＲ、Ｔｏｌｌ様受容体ＴＬＲ−２、３、４、６、７、８および９、顆粒球マクロファージコロニー刺激因子（ＧＭ−ＣＳＦ）、ＴＮＦ、ＣＤ４０Ｌ、ＦＬＴ−３リガンド、サイトカイン、例えばＩＬ−１、ＩＬ−２、ＩＬ−４、ＩＬ−７、ＩＬ−１０、ＩＬ−１２、ＩＬ−１５、ＩＬ−２１およびＩＬ−３５、ＦａｓＬ、ＴＧＦ−β、インドールアミン−２，３−ジオキシゲナーゼ（indoleamine-2,3  dioxygenase）（ＩＤＯ）、主要組織適合複合体（ＭＨＣ）タンパク質（ベータ−２ミクログロブリン（beta-2  microglobulin）（β２Ｍ）を含む）、低密度リポタンパク質（ＬＤＬ）受容体（ＬＤＬＲ）、アポリポタンパク質Ｂ（ＡｐｏＢ）、低密度リポタンパク質受容体アダプタータンパク質１（ＬＤＬＲＡＰ１）、およびプロタンパク質転換酵素サブチリシン・ケキシン９型（proprotein  convertase  subtilisin  kexin  9）（ＰＣＳＫ９）を含む、タンパク質をコードする遺伝子内の配列を標的とする。
【００８３】
一部の実施形態では、本明細書に記載のウイルス送達複合体のいずれかによれば、ウイルス送達複合体は、ウイルスタンパク質以外のタンパク質、またはウイルス核酸分子以外の核酸分子（非ウイルスタンパク質をコードする核酸分子、例えば、ＤＮＡプラスミドまたはｍＲＮＡなど）をさらに含む。
【００８４】
一部の実施形態では、本明細書に記載のウイルス送達複合体の平均サイズ（直径）は、約２０ｎｍ〜約１０ミクロンのいずれかの間であり、これは、例えば、約３０ｎｍ〜約１ミクロンの間、約５０ｎｍ〜約７５０ｎｍの間、約１００ｎｍ〜約５００ｎｍの間、および約２００ｎｍ〜約４００ｎｍの間を含む。一部の実施形態では、ウイルス送達複合体は、実質的に非毒性である。
【００８５】
一部の実施形態では、本明細書に記載のウイルス送達複合体のターゲティング部分は、組織または特定の細胞型にウイルス送達複合体を向かわせる。一部の実施形態では、組織は、処置を必要とする組織である。一部の実施形態では、ターゲティング部分は、ウイルスにより処置され得る組織または細胞にウイルス送達複合体を向かわせる。
ナノ粒子
【００８６】
一部の実施形態では、ウイルスの細胞内送達のためのナノ粒子であって、本明細書に記載の１つまたは複数のウイルス送達複合体を含むコアを含むナノ粒子が提供される。一部の実施形態では、ナノ粒子コアは、複数のウイルス送達複合体を含む。一部の実施形態では、ナノ粒子コアは、所定の比率で存在する複数のウイルス送達複合体を含む。一部の実施形態では、所定の比率は、より詳細に下記で説明される方法のいずれかにおけるナノ粒子の最も有効な使用を可能にするように選択される。一部の実施形態では、ナノ粒子コアは、１つもしくは複数の追加の細胞膜透過ペプチド、および／または１つもしくは複数の追加のウイルスをさらに含む。一部の実施形態では、ナノ粒子コアは、１つまたは複数の追加のウイルスと会合した（共有結合または非共有結合によるなど）１つまたは複数の追加の細胞膜透過ペプチドをさらに含む。一部の実施形態では、１つまたは複数の追加の細胞膜透過ペプチドは、１つまたは複数のウイルス送達複合体のいずれかにおいて見いだされる細胞膜透過ペプチドを含まない。一部の実施形態では、１つまたは複数の追加のウイルスは、１つまたは複数のウイルス送達複合体のいずれかにおいて見いだされるウイルスを含まない。一部の実施形態では、１つまたは複数の追加の細胞膜透過ペプチドは、これらに限定されないが、ＰＴＤに基づくペプチド、両親媒性ペプチド、ポリアルギニンに基づくペプチド、ＭＰＧペプチド、ＣＡＤＹペプチド、ＶＥＰＥＰペプチド（例えば、ＶＥＰＥＰ−３、ＶＥＰＥＰ−６またはＶＥＰＥＰ−９ペプチド）、ＡＤＧＮ−１００ペプチド、Ｐｅｐ−１ペプチドおよびＰｅｐ−２ペプチドを含む。一部の実施形態では、１つまたは複数の追加の細胞膜透過ペプチドの少なくとも一部は、ターゲティング部分に連結している。一部の実施形態では、連結は、共有結合である。一部の実施形態では、共有結合による連結は、化学的カップリングによる。一部の実施形態では、共有結合による連結は、遺伝学的方法による。
【００８７】
一部の実施形態では、ウイルスと会合している１つまたは複数の細胞膜透過ペプチド（例えば、ＰＥＰ−１、ＰＥＰ−２、ＶＥＰＥＰ−３、ＶＥＰＥＰ−６、ＶＥＰＥＰ−９またはＡＤＧＮ−１００ペプチド）を含むコアを含む、ウイルスの細胞内送達のためのナノ粒子が提供される。一部の実施形態では、会合は、非共有結合である。一部の実施形態では、会合は、共有結合である。一部の実施形態では、ウイルスは、組換えＡＡＶ、アデノウイルス、レンチウイルス、レトロウイルス、ＨＳＶ、ポックスウイルス、ＥＢＶ、ワクシニアウイルスおよびｈＣＭＶを含む組換えウイルスである。一部の実施形態では、組換えウイルスは、細胞ゲノム内への挿入のための導入遺伝子を含む。一部の実施形態では、導入遺伝子は、治療用導入遺伝子である。一部の実施形態では、ナノ粒子中の１つまたは複数の細胞膜透過ペプチドの少なくとも一部は、ターゲティング部分に連結している。一部の実施形態では、連結は、共有結合である。一部の実施形態では、共有結合による連結は、化学的カップリングによる。一部の実施形態では、共有結合による連結は、遺伝学的方法による。一部の実施形態では、ナノ粒子中に存在する複合体における、細胞膜透過ペプチドと、該細胞膜透過ペプチドと会合しているウイルス（例えば、Ｖｇ、ｐｆｕまたはＭＯＩ単位）のモル比は、約１：１〜約１×１０８：１の間である。一部の実施形態では、ウイルスは、標的ポリヌクレオチドに特定の修飾を導入するためのものである。一部の実施形態では、標的ポリヌクレオチドは、コード配列が修飾される。一部の実施形態では、標的ポリヌクレオチドは、非コード配列が修飾される。一部の実施形態では、標的ポリヌクレオチドは、標的遺伝子の発現を減少させること、または不活性な産物を発現する修飾標的遺伝子をもたらすことなどにより、標的遺伝子を不活性化するように修飾される。一部の実施形態では、標的ポリヌクレオチドは、標的遺伝子の発現を増加させること、または活性標的遺伝子産物を発現する修飾標的遺伝子をもたらすことなどにより、標的遺伝子を活性化するように修飾される。一部の実施形態では、導入遺伝子は、治療用タンパク質などのタンパク質をコードする。一部の実施形態では、導入遺伝子は、内因性遺伝子、例えば、疾患関連内因性遺伝子を標的とする阻害性ＲＮＡ（ＲＮＡｉ）などのＲＮＡｉをコードする。一部の実施形態では、導入遺伝子は、ＣＡＲをコードする。一部の実施形態では、ナノ粒子は、ＲＮＡｉをコードする第１の導入遺伝子およびタンパク質をコードする第２の導入遺伝子を含む１つまたは複数のウイルスを含む。一部の実施形態では、ＲＮＡｉは、疾患または状態に関与する内因性遺伝子を標的とする治療用ＲＮＡｉであり、タンパク質は、疾患または状態を処置するために有用な治療用タンパク質である。一部の実施形態では、治療用ＲＮＡｉは、内因性遺伝子の疾患関連形態（例えば、変異体タンパク質をコードする遺伝子、またはタンパク質の異常発現をもたらす遺伝子）を標的とし、第２の導入遺伝子は、内因性遺伝子の治療形態である（例えば、第２の導入遺伝子は、変異体タンパク質の野生型もしくは機能形態をコードする、または第２の導入遺伝子は、タンパク質の正常���現をもたらす）。一部の実施形態では、ナノ粒子は、第１の導入遺伝子を含む第１のウイルスおよび第２の導入遺伝子を含む第２のウイルスを含む。一部の実施形態では、ナノ粒子は、第１の導入遺伝子および第２の導入遺伝子を含む単一のウイルスを含む。一部の実施形態では、１つまたは複数の細胞膜透過ペプチドは、これらに限定されないが、ＰＴＤに基づくペプチド、両親媒性ペプチド、ポリアルギニンに基づくペプチド、ＭＰＧペプチド、ＣＡＤＹペプチド、ＶＥＰＥＰペプチド（例えば、ＶＥＰＥＰ−３、ＶＥＰＥＰ−６またはＶＥＰＥＰ−９ペプチド）、ＡＤＧＮ−１００ペプチド、Ｐｅｐ−１ペプチドおよびＰｅｐ−２ペプチドを含む。
【００８８】
一部の実施形態では、１つまたは複数の細胞膜透過ペプチド（例えば、ＰＥＰ−１、ＰＥＰ−２、ＶＥＰＥＰ−３、ＶＥＰＥＰ−６、ＶＥＰＥＰ−９またはＡＤＧＮ−１００ペプチド）と、複数のウイルスとを含むコアを含む、１つまたは複数の標的ポリヌクレオチドを修飾するためのナノ粒子であって、複数のウイルスのそれぞれが、１つまたは複数の標的ポリヌクレオチドにおける異なる配列を標的とする、ナノ粒子が提供される。一部の実施形態では、ナノ粒子コアは、複数のウイルスのうち少なくとも１つと会合している１つまたは複数の細胞膜透過ペプチドのうち１つを含む。一部の実施形態では、ナノ粒子コアは、ａ）複数のウイルスのうち少なくとも１つと会合している１つまたは複数の細胞膜透過ペプチドのうち１つを含む第１の複合体、およびｂ）残りのウイルスと会合している残りの細胞膜透過ペプチドを含む１つまたは複数の追加の複合体を含む。一部の実施形態では、ナノ粒子中の１つまたは複数の細胞膜透過ペプチドの少なくとも一部は、ターゲティング部分に連結している。一部の実施形態では、連結は、共有結合である。一部の実施形態では、共有結合による連結は、化学的カップリングによる。一部の実施形態では、共有結合による連結は、遺伝学的方法による。一部の実施形態では、ナノ粒子中に存在する複合体における、細胞膜透過ペプチドの、細胞膜透過ペプチドと会合しているウイルス（例えば、Ｖｇ、ｐｆｕまたはＭＯＩ単位）に対するモル比は、約１：１〜約１×１０８：１の間である。一部の実施形態では、１つまたは複数の標的ポリヌクレオチドのうち１つは、コード配列が修飾されている。一部の実施形態では、１つまたは複数の標的ポリヌクレオチドのうちの１つは、非コード配列が修飾される。一部の実施形態では、１つまたは複数の標的ポリヌクレオチドのうちの１つは、標的遺伝子の発現を減少させること、または不活性な産物を発現する修飾標的遺伝子をもたらすことなどにより、標的遺伝子を不活性化するように修飾される。一部の実施形態では、１つまたは複数の標的ポリヌクレオチドのうちの１つは、標的遺伝子の発現を増加させること、または活性標的遺伝子産物を発現する修飾標的遺伝子をもたらすことなどにより、標的遺伝子を活性化するように修飾される。一部の実施形態では、１つまたは複数の細胞膜透過ペプチドは、これらに限定されないが、ＰＴＤに基づくペプチド、両親媒性ペプチド、ポリアルギニンに基づくペプチド、ＭＰＧペプチド、ＣＡＤＹペプチド、ＶＥＰＥＰペプチド（例えば、ＶＥＰＥＰ−３、ＶＥＰＥＰ−６またはＶＥＰＥＰ−９ペプチド）、ＡＤＧＮ−１００ペプチド、Ｐｅｐ−１ペプチドおよびＰｅｐ−２ペプチドを含む。
【００８９】
一部の実施形態では、細胞膜透過ペプチドとウイルスとを含むコアを含む、ウイルスの細胞内送達のためのナノ粒子であって、細胞膜透過ペプチドが、ウイルスと会合しており、細胞膜透過ペプチドが、ＰＥＰ−１ペプチド、ＰＥＰ−２ペプチド、ＶＥＰＥＰ−３ペプチド、ＶＥＰＥＰ−６ペプチド、ＶＥＰＥＰ−９ペプチドまたはＡＤＧＮ−１００ペプチドのアミノ酸配列を含む、ナノ粒子が提供される。一部の実施形態では、ＰＥＰ−１ペプチドは、配列番号７１のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＰＥＰ−２ペプチドは、配列番号７２のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＰＥＰ−３ペプチドは、配列番号７３のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＶＥＰＥＰ−３ペプチドは、配列番号１〜１４、７５および７６のうちのいずれか１つのアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＶＥＰＥＰ−６ペプチドは、配列番号１５〜４０および７７のうちのいずれか１つのアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＶＥＰＥＰ−９ペプチドは、配列番号４１〜５２および７８のうちのいずれか１つのアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＡＤＧＮ−１００ペプチドは、配列番号５３〜７０、７９および８０のうちのいずれか１つのアミノ酸配列を含む。
【００９０】
一部の実施形態では、１つまたは複数の標的ポリヌクレオチドを修飾するためのナノ粒子であって、細胞膜透過ペプチドと、複数のウイルスとを含むコアを含み、複数のウイルスの各々が、１つまたは複数の標的ポリヌクレオチドにおける異なる配列を標的とし、細胞膜透過ペプチドが、ＰＥＰ−１ペプチド、ＰＥＰ−２ペプチド、ＶＥＰＥＰ−３ペプチド、ＶＥＰＥＰ−６ペプチド、ＶＥＰＥＰ−９ペプチドまたはＡＤＧＮ−１００ペプチドのアミノ酸配列を含む、ナノ粒子が提供される。一部の実施形態では、ＰＥＰ−１ペプチドは、配列番号７１のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＰＥＰ−２ペプチドは、配列番号７２のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＰＥＰ−３ペプチドは、配列番号７３のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＶＥＰＥＰ−３ペプチドは、配列番号１〜１４、７５および７６のうちのいずれか１つのアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＶＥＰＥＰ−６ペプチドは、配列番号１５〜４０および７７のうちのいずれか１つのアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＶＥＰＥＰ−９ペプチドは、配列番号４１〜５２および７８のうちのいずれか１つのアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＡＤＧＮ−１００ペプチドは、配列番号５３〜７０、７９および８０のうちのいずれか１つのアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ナノ粒子コアは、複数のウイルスのうち少なくとも１つと会合している細胞膜透過ペプチドを含む。一部の実施形態では、ナノ粒子コアは、ａ）複数のウイルスのうち少なくとも１つと会合している細胞膜透過ペプチドを含む第１の複合体、およびｂ）残りのウイルスと会合している細胞膜透過ペプチドを含む１つまたは複数の追加の複合体を含む。
【００９１】
一部の実施形態では、ナノ粒子は、コアを囲む周囲ＣＰＰを含む表面層をさらに含む。一部の実施形態では、周囲ＣＰＰは、コア中のＣＰＰと同じである。一部の実施形態では、周囲ＣＰＰは、コア中のいずれのＣＰＰとも異なる。一部の実施形態では、周囲ＣＰＰは、これらに限定されないが、ＰＴＤに基づくペプチド、両親媒性ペプチド、ポリアルギニンに基づくペプチド、ＭＰＧペプチド、ＣＡＤＹペプチド、ＶＥＰＥＰペプチド（例えば、ＶＥＰＥＰ−３、ＶＥＰＥＰ−６またはＶＥＰＥＰ−９ペプチド）、ＡＤＧＮ−１００ペプチド、Ｐｅｐ−１ペプチドおよびＰｅｐ−２ペプチドを含む。一部の実施形態では、周囲ＣＰＰは、ＶＥＰＥＰ−３ペプチド、ＶＥＰＥＰ−６ペプチド、ＶＥＰＥＰ−９ペプチド、またはＡＤＧＮ−１００ペプチドである。一部の実施形態では、表面層中の周囲細胞膜透過ペプチドの少なくとも一部は、ターゲティング部分に連結している。一部の実施形態では、連結は、共有結合である。一部の実施形態では、共有結合による連結は、化学的カップリングによる。一部の実施形態では、共有結合による連結は、遺伝学的方法による。一部の実施形態では、ナノ粒子は、該ナノ粒子のコアと表面層との間に中間層をさらに含む。一部の実施形態では、中間層は、中間ＣＰＰを含む。一部の実施形態では、中間ＣＰＰは、コア中のＣＰＰと同じである。一部の実施形態では、中間ＣＰＰは、コア中のいずれのＣＰＰとも異なる。一部の実施形態では、中間ＣＰＰは、これらに限定されないが、ＰＴＤに基づくペプチド、両親媒性ペプチド、ポリアルギニンに基づくペプチド、ＭＰＧペプチド、ＣＡＤＹペプチド、ＶＥＰＥＰペプチド（例えば、ＶＥＰＥＰ−３、ＶＥＰＥＰ−６またはＶＥＰＥＰ−９ペプチド）、ＡＤＧＮ−１００ペプチド、Ｐｅｐ−１ペプチドおよびＰｅｐ−２ペプチドを含む。一部の実施形態では、中間ＣＰＰは、ＶＥＰＥＰ−３ペプチド、ＶＥＰＥＰ−６ペプチド、ＶＥＰＥＰ−９ペプチド、またはＡＤＧＮ−１００ペプチドである。
【００９２】
一部の実施形態では、本明細書に記載の実施形態のいずれかによるナノ粒子に含有されているウイルスは、免疫チェックポイント制御因子、および抗原提示に関与するタンパク質を含む、免疫応答の制御に関与するタンパク質をコードする遺伝子内の配列を標的とする。一部の実施形態では、本明細書に記載の実施形態のいずれかによるナノ粒子に含有されているウイルスは、コレステロール輸送および／または代謝の制御に関与するタンパク質をコードする遺伝子内の配列を標的とする。一部の実施形態では、ウイルスは、限定ではないが、ＰＤ−１、ＰＤ−Ｌ１、ＰＤ−Ｌ２、ＴＩＭ−１、ＴＩＭ−３、ＴＩＭ−４、ＢＴＬＡ、ＶＩＳＴＡ、ＬＡＧ−３、ＣＴＬＡ−４、ＴＩＧＩＴ、４−１ＢＢ、ＯＸ４０、ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＨＶＥＭ、ＧＩＴＲ、ＩＣＯＳ、ＣＤ４０、ＣＤ８０、ＣＤ８６、Ｂ７−Ｈ２、Ｂ７−Ｈ３、Ｂ７−Ｈ４、Ｂ７−Ｈ６、２Ｂ４、ＣＤ１６０、ｇｐ４９Ｂ、ＰＩＲ−Ｂ、ＫＩＲファミリー受容体、ＳＩＲＰアルファ（ＣＤ４７）、ＣＤ４８、２Ｂ４（ＣＤ２４４）、Ｂ７．１、Ｂ７．２、ＩＬＴ−２、ＩＬＴ−４、Ａ２ａＲ、Ｔｏｌｌ様受容体ＴＬＲ−２、３、４、６、７、８および９、顆粒球マクロファージコロニー刺激因子（ＧＭ−ＣＳＦ）、ＴＮＦ、ＣＤ４０Ｌ、ＦＬＴ−３リガンド、サイトカイン、例えばＩＬ−１、ＩＬ−２、ＩＬ−４、ＩＬ−７、ＩＬ−１０、ＩＬ−１２、ＩＬ−１５、ＩＬ−２１およびＩＬ−３５、ＦａｓＬ、ＴＧＦ−β、インドールアミン−２，３−ジオキシゲナーゼ（ＩＤＯ）、主要組織適合複合体（ＭＨＣ）タンパク質（ベータ２−ミクログロブリン（β２Ｍ）を含む）、ＬＤＬＲ、ＡｐｏＢ、ＬＤＬＲＡＰ１、ＰＣＳＫ９を含む、タンパク質をコードする遺伝子内の配列を標的とする。
【００９３】
一部の実施形態では、本明細書に記載のナノ粒子のいずれかによれば、ナノ粒子は、ウイルスタンパク質以外のタンパク質、またはウイルス核酸分子以外の核酸分子（非ウイルスタンパク質をコードする核酸分子、例えば、ＤＮＡプラスミドまたはｍＲＮＡなど）をさらに含む。
【００９４】
一部の実施形態では、本明細書に記載のナノ粒子のいずれかによれば、ナノ粒子の平均サイズ（直径）は、約２０ｎｍ〜約１０００ｎｍであり、これは、例えば、約５０ｎｍ〜約８００ｎｍ、約７５ｎｍ〜約６００ｎｍ、約１００ｎｍ〜約６００ｎｍ、および約２００ｎｍ〜約４００ｎｍを含む。一部の実施形態では、ナノ粒子の平均サイズ（直径）は、約１０００ナノメートル（ｎｍ）以下、例えば、約９００、８００、７００、６００、５００、４００、３００、２００または１００ｎｍのいずれか以下である。一部の実施形態では、ナノ粒子の平均直径または平均直径（average  or  mean  diameter）は、約２００ｎｍ以下である。一部の実施形態では、ナノ粒子の平均直径または平均直径は、約１５０ｎｍ以下である。一部の実施形態では、ナノ粒子の平均直径または平均直径は、約１００ｎｍ以下である。一部の実施形態では、ナノ粒子の平均直径または平均直径は、約２０ｎｍ〜約４００ｎｍである。一部の実施形態では、ナノ粒子の平均直径または平均直径は、約３０ｎｍ〜約４００ｎｍである。一部の実施形態では、ナノ粒子の平均直径または平均直径は、約４０ｎｍ〜約３００ｎｍである。一部の実施形態では、ナノ粒子の平均直径または平均直径は、約５０ｎｍ〜約２００ｎｍである。一部の実施形態では、ナノ粒子の平均直径または平均直径は、約６０ｎｍ〜約１５０ｎｍである。一部の実施形態では、ナノ粒子の平均直径または平均直径は、約７０ｎｍ〜約１００ｎｍである。一部の実施形態では、ナノ粒子は、滅菌濾過可能である。
【００９５】
一部の実施形態では、ナノ粒子のゼータ電位は、約−３０ｍＶ〜約６０ｍＶ（例えば、約−３０、−２５、−２０、−１５、−１０、−５、０、５、１０、１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、５５および６０ｍＶ（これらの値の間の任意の範囲を含む）のいずれか）である。一部の実施形態では、ナノ粒子のゼータ電位は、約−３０ｍＶ〜約３０ｍＶであり、これは、例えば、約−２５ｍＶ〜約２５ｍＶ、約−２０ｍＶ〜約２０ｍＶ、約−１５ｍＶ〜約１５ｍＶ、約−１０ｍＶ〜約１０ｍＶ、および約−５ｍＶ〜約１０ｍＶを含む。一部の実施形態では、ナノ粒子の多分散指数（ＰＩ）は、約０．０５〜約０．６（例えば、約０．０５、０．１、０．１５、０．２、０．２５、０．３、０．３５、０．４、０．４５、０．５、０．５５および０．６（これらの値の間の任意の範囲を含む）のいずれか）である。一部の実施形態では、ナノ粒子は、実質的に非毒性である。
修飾
【００９６】
一部の実施形態では、本明細書に記載のウイルス送達複合体またはナノ粒子は、ターゲティング部分を含み、該ターゲティング部分は、細胞特異的ターゲティングおよび／または核ターゲティングが可能なリガンドである。細胞膜表面受容体および／または細胞表面マーカーは、前記リガンドに高い親和性でおよび好ましくは高い特異性で結合することができる、分子または構造である。前記細胞膜表面受容体および／または細胞表面マーカーは、好ましくは、特定の細胞に特異的であり、すなわち、別の細胞型でではなく、ある細胞型において主として見いだされる（例えば、肝細胞の表面のアシアロ糖タンパク質受容体を標的とするガラクトシル残基）。細胞膜表面受容体は、リガンド（例えば、ターゲティング部分）および結合分子（例えば、本発明の複合体またはナノ粒子）の細胞ターゲティングおよび標的細胞への内在化を容易にする。本発明に関して使用することができる多数のリガンド部分／リガンド結合パートナーは、文献に広く記載されている。そのようなリガンド部分は、所与の結合パートナー分子とまたは少なくとも１つの標的細胞の表面に局在する結合パートナー分子のクラスと結合する能力を、本発明の複合体またはナノ粒子に付与することができる。好適な結合パートナー分子としては、限定ではないが、細胞特異的マーカー、組織特異的マーカー、細胞受容体、ウイルス抗原、抗原性エピトープおよび腫瘍関連マーカーからなる群から選択されるポリペプチドが挙げられる。結合パートナー分子は、さらに、例えば１つまたは複数の糖、脂質、糖脂質、抗体分子もしくは抗体分子の断片、またはアプタマーからなることもあり、あるいはこれらを含むこともある。本発明によれば、リガンド部分は、例えば、脂質、糖脂質、ホルモン、糖、ポリマー（例えば、ＰＥＧ、ポリリシン、ＰＥＴ）、オリゴヌクレオチド、ビタミン、抗原、レクチンのすべてもしくは一部、例えばＪＴＳ１（ＷＯ９４／４０９５８）などのポリペプチドのすべてもしくは一部、抗体もしくはその断片、またはそれらの組合せであってもよい。一部の実施形態では、本発明で使用されるリガンド部分は、７アミノ酸の最小長を有するペプチドまたはポリペプチドである。リガンド部分は、天然ポリペプチドであるか、または天然ポリペプチドに由来するポリペプチドである。「由来する」は、（ａ）天然配列に対する１つもしくは複数の修飾（例えば、１つもしくは複数の残基の付加、欠失および／もしくは置換）、（ｂ）天然に存在しないアミノ酸を含む、アミノ酸類似体、（ｃ）置換されている連結、または（ｄ）当技術分野において公知の他の修飾を含有することを意味する。リガンド部分として役立つポリペプチドは、例えば、マウス抗体の可変領域およびヒト免疫グロブリンの定常領域を併せ持つヒト化抗体などの、様々な起源の配列を融合させることにより得られるバリアントおよびキメラポリペプチドを包含する。加えて、そのようなポリペプチドは、直鎖状または環化構造を（例えば、システイン残基をポリペプチドリガンドの両端に隣接させることにより）有し得る。加えて、リガンド部分として使用されているポリペプチドは、化学的部分の置換または付加によるその原構造の修飾（例えば、グリコシル化、アルキル化、アセチル化、アミド化、リン酸化、スルフヒドリル基の付加など）を含み得る。本発明は、リガンド部分を検出できるようにする修飾をさらに企図している。このために、検出可能な部分（すなわち、シンチグラフィーの、放射性もしくは蛍光部分、または色素標識など）での修飾を、想定することができる。そのような検出可能な標識を、いずれの従来の技法によりリガンド部分に結合させてもよく、診断目的（例えば、腫瘍細胞のイメージング）に使用してもよい。一部の実施形態では、結合パートナー分子は、抗原（例えば、標的細胞特異的抗原、疾患特異的抗原、操作された標的細胞の表面で特異的に発現される抗原）であり、リガンド部分は、抗体、その断片または最小認識単位（例えば、抗原特異性をなお提示する断片）、例えば、免疫学マニュアル（例えば、Immunology,  third  edition  1993,  Roitt,  Brostoff  and  Male,  ed  Gambli,  Mosbyを参照されたい）に詳細に記載されているものである。リガンド部分は、モノクローナル抗体であってもよい。これらの抗原の多くに結合する多くのモノクローナル抗体が既知であり、モノクローナル抗体技術に関して当技術分野において公知の技法を使用して、ほとんどの抗原に対する抗体を調製することができる。リガンド部分は、抗体の一部（例えば、Ｆａｂ断片）であってもよく、または合成抗体断片（例えば、ＳｃＦｖ）であってもよい。一部の実施形態では、リガンド部分は、全抗体ではなく、抗体断片の中から選択される。補体結合などの全抗体の有効な機能は除去される。ＳｃＦｖおよびｄＡｂ抗体断片は、１つまたは複数の他のポリペプチドとの融合体として発現させてよい。最小認識単位は、Ｆｖ断片の相補性決定領域（ＣＤＲ）の１つまたは複数についての配列に由来し得る。全抗体、およびＦ（ａｂ’）２断片は、「二価」である。「二価」とは、前記抗体およびＦ（ａｂ’）２断片が２つの抗原結合部位を有することを意味する。対照的に、Ｆａｂ、Ｆｖ、ＳｃＦｖ、ｄＡｂ断片および最小認識単位は一価であり、抗原結合部位を１つしか有さない。一部の実施形態では、リガンド部分は、腫瘍細胞へのターゲティングを可能にし、および腫瘍の状態に関連する分子、例えば、腫瘍特異的抗原、腫瘍細胞において差次的にもしくは過剰発現される細胞タンパク質、またはがん関連ウイルス（cancer-associated  vims）の遺伝子産物を認識することができ、それらと結合することができる。腫瘍特異的抗原の例としては、乳がんに関連するＭＵＣ−１（Hareuven  i  et  al.,  990,  Eur.  J.  Biochem  189,  475-486）、乳がんおよび卵巣がんに関連する変異ＢＲＣＡ１およびＢＲＣＡ２遺伝子によりコードされている産物（Miki  et  al,  1994,  Science  226,  66-7  1；Fuireal  et  al,  1994,  Science  226,  120-  122；Wooster  et  al.,  1995,  Nature  378,  789-792）、結腸がんに関連するＡＰＣ（Poiakis,  1995,  Curr.  Opin.  Genet.  Dev.  5,  66-71）、前立腺がんに関連する前立腺特異的抗原（ＰＳＡ）（Stamey  et  al.,  1987,  New  England  J.  Med.  317,  909）、結腸がんに関連する癌胎児抗原（ＣＥＡ）（Schrewe  et  al.,  1990,  Mol.  Cell.  Biol.  10,  2738-2748）、メラノーマに関連するチロシナーゼ（Vile  et  al,  1993,  Cancer  Res.  53,  3860-3864）、メラノーマ細胞において高度に発現されるメラニン細胞刺激ホルモン（ＭＳＨ）の受容体、乳がん���よび膵臓がんに関連するＥｒｂＢ−２（Harris  et  al.,  1994,  Gene  Therapy  1,  170-175）、ならびに肝がんに関連するアルファ−フェトプロテイン（Kanai  et  al.,  1997,  Cancer  Res.  57,  46  1-465）が挙げられるが、これらに限定されない。一部の実施形態では、リガンド部分は、ＭＵＣ−１抗原を認識すること、およびＭＵＣ−１抗原と結合することができ、したがってＭＵＣ−１陽性腫瘍細胞を標的とすることができる、抗体の断片である。一部の実施形態では、リガンド部分は、ＭＵＣ−１抗原のタンデムリピート領域を認識するＳＭ３モノクローナル抗体のｓｃＦｖ断片である（Burshell  et  al.,  1987,  Cancer  Res.  47,  5476-5482；Girling  et  al.,  1989,  Int.  J.  Cancer  43,  1072-1076；Dokurno  et  al.,  1998,  J.  Mol.  Biol.  284,  713-728）。腫瘍細胞において差次的にまたは過剰発現される細胞タンパク質の例としては、一部のリンパ系腫瘍において過剰発現されるインターロイキン２（ＩＬ−２）の受容体、肺癌細胞、膵臓腫瘍、前立腺腫瘍および胃腫瘍において過剰発現されるＧＲＰ（ガストリン放出ペプチド）（Michael  et  al.,  1995,  Gene  Therapy  2,  660-668）、ＴＮＦ（腫瘍壊死因子）受容体、上皮成長因子受容体、Ｆａｓ受容体、ＣＤ４０受容体、ＣＤ３０受容体、ＣＤ２７受容体、ＯＸ−４０、α−ｖインテグリン（Brooks  et  al,  994,  Science  264,  569）、およびある特定の血管新生成長因子の受容体（Hanahan,  1997,  Science  277,  48）が挙げられるが、これらに限定されない。これらの指標に基づいて、そのようなタンパク質を認識することおよびそのようなタンパク質と結合することができる適切なリガンド部分を定義することは、当業者の範囲内である。例を挙げて説明すると、ＩＬ−２は、ＴＬ−２受容体と結合するための好適なリガンド部分である。線維症および炎症に特異的である受容体の場合、これらは、ＴＧＦベータ受容体またはアデノシン受容体を含み、該受容体は、上記で特定され、本発明の組成物の好適な標的である。多発性骨髄腫の細胞表面マーカーは、これらに限定されないがＣＤ５６、ＣＤ４０、ＦＧＦＲ３、ＣＳ１、ＣＤ１３８、ＩＧＦ１Ｒ、ＶＥＧＦＲおよびＣＤ３８を含み、本発明の組成物の好適な標的である。これらの細胞表面マーカーと結合する好適なリガンド部分としては、抗ＣＤ５６、抗ＣＤ４０、ＰＲＯ−００１、Ｃｈｉｒ−２５８、ＨｕＬｕｃ６３、抗ＣＤ１３８−ＤＭ１、抗ＩＧＦ１Ｒおよびベバシズマブが挙げられるが、これらに限定されない。
導入遺伝子
【００９７】
一部の実施形態では、本明細書に記載のウイルス送達複合体またはナノ粒子は、１つまたは複数の導入遺伝子（例えば、約１、２、３、４、５種またはそれよりも多い導入遺伝子のいずれか）を含む１つまたは複数のウイルスを含む。一部の実施形態では、導入遺伝子のうち１つまたは複数は、治療用タンパク質などのタンパク質をコードする。一部の実施形態では、導入遺伝子のうち１つまたは複数は、治療用阻害性ＲＮＡ（ＲＮＡｉ）などのＲＮＡｉをコードする。一部の実施形態では、導入遺伝子のうち１つまたは複数は、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）をコードする。
キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）
【００９８】
ＣＡＲをはじめとする例示的な抗原受容体、およびそのような受容体を操作する方法としては、例えば、国際特許出願公開番号ＷＯ２０００１４２５７、ＷＯ２０１３１２６７２６、ＷＯ２０１２／１２９５１４、ＷＯ２０１４０３１６８７、ＷＯ２０１３／１６６３２１、ＷＯ２０１３／０７１１５４、ＷＯ２０１３／１２３０６１、米国特許出願公開第２００２１３１９６０号、同第２０１３２８７７４８号、同第２０１３０１４９３３７号、米国特許第６，４５１，９９５号、同第７，４４６，１９０号、同第８，２５２，５９２号、同第８，３３９，６４５号、同第８，３９８，２８２号、同第７，４４６，１７９号、同第６，４１０，３１９号、同第７，０７０，９９５号、同第７，２６５，２０９号、同第７，３５４，７６２号、同第７，４４６，１９１号、同第８，３２４，３５３号、および同第８，４７９，１１８号、ならびに欧州特許出願番号ＥＰ２５３７４１６に記載されているもの、ならびに／またはSadelain  et  al.,  Cancer  Discov.  2013  April;  3(4):  388-398；Davila  et  al.  (2013)  PLoS  ONE  8(4):  e61338；Turtle  et  al.,  Curr.  Opin.  Immunol.,  2012  October;  24(5):  633-39；Wu  et  al.,  Cancer,  2012  March  18(2):  160-75により説明されているものが挙げられる。一部の態様では、抗原受容体は、米国特許第７，４４６，１９０号に記載されているようなＣＡＲ、および国際特許出願公開番号ＷＯ／２０１４０５５６６８Ａ１に記載されているものを含む。ＣＡＲの例としては、ＷＯ２０１４０３１６８７、米国特許第８，３３９，６４５号、米国特許第７，４４６，１７９号、米国特許出願公開第２０１３／０１４９３３７号、米国特許第７，４４６，１９０号、米国特許第８，３８９，２８２号；Kochenderfer  et  al.,  2013,  Nature  Reviews  Clinical  Oncology,  10,  267-276  (2013)；Wang  et  al.  (2012)  J.  Immunother.  35(9):  689-701；およびBrentjens  et  al.,  Sci  Transl  Med.  2013  5(177)などの、上述の刊行物のいずれかにおいて開示されているようなＣＡＲが挙げられる。ＷＯ２０１４０３１６８７、米国特許第８，３３９，６４５号、米国特許第７，４４６，１７９号、米国特許出願公開第２０１３／０１４９３３７号、米国特許第７，４４６，１９０号および米国特許第８，３８９，２８２号も参照されたい。
【００９９】
本明細書に記載のリガンド結合ドメインを含む組換え受容体の一部の実施形態では、リガンド結合ドメインは、疾患または状態に関連するリガンドと特異的に結合する。一部の実施形態では、リガンド結合ドメインは、がん関連抗原または病原体特異的抗原と特異的に結合する。一部の実施形態では、リガンド結合ドメインは、ウイルス抗原（例えば、ＨＩＶ、ＨＣＶ、ＨＢＶなど）、細菌抗原、および／または寄生虫抗原に特異的である。一部の実施形態では、リガンド結合ドメインは、限定ではないが次のものを含むリガンドと、特異的に結合する：オーファンチロシンキナーゼ受容体ＲＯＲｌ、ｔＥＧＦＲ、Ｈｅｒ２、Ｌｌ−ＣＡＭ、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２２、メソテリン、ＣＥＡ、およびＢ型肝炎表面抗原、抗葉酸受容体、ＣＤ２３、ＣＤ２４、ＣＤ３０、ＣＤ３３、ＣＤ３８、ＣＤ４４、ＥＧＦＲ、ＥＧＰ−２、ＥＧＰ−４、０ＥＰＨａ２、ＥｒｂＢ２、３または４、ＦＢＰ、胎児アセチルコリンｅ受容体、ＧＤ２、ＧＤ３、ＨＭＷ−ＭＡＡ、ＩＬ−２２Ｒ−アルファ、ＩＬ−１３Ｒ−アルファ２、ｋｄｒ、カッパ軽鎖、Ｌｅｗｉｓ  Ｙ、Ｌ１−細胞接着分子、ＭＡＧＥ−Ａ１、メソテリン、ＭＵＣ１、ＭＵＣ１６、ＰＳＣＡ、ＮＫＧ２Ｄリガンド、ＮＹ−ＥＳＯ−１、ＭＡＲＴ−１、ｇｐ１００、腫瘍胎児抗原、ＲＯＲ１、ＴＡＧ７２、ＶＥＧＦ−Ｒ２、癌胎児抗原（ＣＥＡ）、前立腺特異的抗原、ＰＳＭＡ、Ｈｅｒ２／ｎｅｕ、エストロゲン受容体、プロゲステロン受容体、エフリンＢ２、ＣＤ１２３、ＣＳ−１、ｃ−Ｍｅｔ、ＧＤ−２、およびＭＡＧＥ  Ａ３、ＣＥ７、ウィルムス腫瘍１（ＷＴ−１）、サイクリン、例えばサイクリンＡ１（ＣＣＮＡ１）、ならびに／またはビオチン化分子、ならびに／またはＨＩＶ、ＨＣＶ、ＨＢＶもしくは他の病原体により発現される分子。
ウイルス
【０１００】
一部の実施形態では、本明細書に記載の複合体および／またはナノ粒子のいずれかによれば、ウイルスは、組換えアデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）、アデノウイルス、レンチウイルス、レトロウイルス、単純ヘルペスウイルス（ＨＳＶ）、ポックスウイルス、エプスタイン・バーウイルス（ＥＢＶ）、ワクシニアウイルスおよびヒトサイトメガロウイルス（ｈＣＭＶ）を含む組換えウイルスである。一部の実施形態では、組換えウイルスは、細胞ゲノム内への挿入のための導入遺伝子を含む。一部の実施形態では、導入遺伝子は、治療用導入遺伝子である。一部の実施形態では、導入遺伝子は、治療用タンパク質などのタンパク質をコードする。一部の実施形態では、導入遺伝子は、内因性遺伝子、例えば、疾患関連内因性遺伝子を標的とする阻害性ＲＮＡ（ＲＮＡｉ）などのＲＮＡｉをコードする。一部の実施形態では、導入遺伝子は、ＣＡＲをコードする。一部の実施形態では、ウイルスは、ＲＮＡｉをコードする第１の導入遺伝子を含む。一部の実施形態では、ＲＮＡｉは、疾患または状態に関与する内因性遺伝子を標的とする治療用ＲＮＡｉである。一部の実施形態では、治療用ＲＮＡｉは、内因性遺伝子の疾患関連形態（例えば、変異体タンパク質をコードする遺伝子、またはタンパク質の異常発現をもたらす遺伝子）を標的とする。一部の実施形態では、ウイルスは、タンパク質をコードする第２の導入遺伝子を含む。一部の実施形態では、タンパク質は、疾患または状態を処置するために有用な治療用タンパク質である。一部の実施形態では、第２の導入遺伝子は、内因性遺伝子の治療形態である（例えば、第２の導入遺伝子は、内因性遺伝子によってコードされる変異体タンパク質の野生型もしくは機能形態をコードする、または第２の導入遺伝子は、内因性遺伝子によってコードされるタンパク質の正常発現をもたらす）。一部の実施形態では、第１の導入遺伝子および第２の導入遺伝子を含むウイルスが提供される。
【０１０１】
一部の実施形態では、本明細書に記載の複合体および／またはナノ粒子のいずれかによれば、ウイルスは、修飾されたアデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）、アデノウイルス、レンチウイルス、レトロウイルス、単純ヘルペスウイルス（ＨＳＶ）、ポックスウイルス、エプスタイン・バーウイルス（ＥＢＶ）、ワクシニアウイルスおよびヒトサイトメガロウイルス（ｈＣＭＶ）を含む修飾されたウイルスである。一部の実施形態では、本明細書に記載の複合体および／またはナノ粒子のいずれかによれば、ウイルスは、不活性化されたアデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）、アデノウイルス、レンチウイルス、レトロウイルス、単純ヘルペスウイルス（ＨＳＶ）、ポックスウイルス、エプスタイン・バーウイルス（ＥＢＶ）、ワクシニアウイルスおよびヒトサイトメガロウイルス（ｈＣＭＶ）を含む不活性化されたウイルスである。一部の実施形態では、本明細書に記載の複合体および／またはナノ粒子のいずれかによれば、ウイルスは、複製欠損アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）、アデノウイルス、レンチウイルス、レトロウイルス、単純ヘルペスウイルス（ＨＳＶ）、ポックスウイルス、エプスタイン・バーウイルス（ＥＢＶ）、ワクシニアウイルスおよびヒトサイトメガロウイルス（ｈＣＭＶ）を含む複製欠損ウイルスである。一部の実施形態では、本明細書に記載の複合体および／またはナノ粒子のいずれかによれば、ウイルスは、標的細胞内でのみ複製することができる。
ＡＡＶ
【０１０２】
ＡＡＶカプシドは、３．９メガダルトンの推定サイズを有する、ＶＰ１、ＶＰ２およびＶＰ３が１：１：１０の比で正二十面体対称性に配置された６０個のカプシドタンパク質サブユニットで構成されている。ＶＰタンパク質は、いくつかのループが隣接するカプシドの内表面におけるβ−バレル構造組織化からなる。ＶＰタンパク質の表面は、糖の硫酸塩（sugar  sulfate）とのイオン性相互作用が優勢のため、いくつかの正荷電パッチを含有する。全体的に見て、外表面は、５回対称軸（five-fold  axes）を囲むくぼみにおける対称性関連パッチ（symmetry-related  patch）の突出した環により正電荷を有する。
【０１０３】
したがって、ＡＡＶおよびＣＰＰの間の緊密な相互作用は、タンパク質／タンパク質界面における主要残基であるＴｒｐなどの芳香族残基の存在と共に、荷電表面を露出させる両親媒性ＣＰＰの能力と直接関連する。ＣＰＰは、ＶＰカプシドタンパク質と安定した静電的および疎水性相互作用を形成することができる。トリプトファン残基は、表面露出したループと相互作用することができる。これまでに、ＡＡＶの１２種の異なる血清型が単離されている。残基が有する、各血清型に対するコンセンサス残基との類似性の程度に応じて、異なる血清型に対する系統学的関係性が確立された。ツリーは、血清型ＡＡＶ５が、これまでに発見されたヒト血清型の残りと５３％〜５９％の間の相同性を共有する、最も分岐したアミノ酸カプシド配列を有することを示す。ＡＡＶ４も、ＡＡＶ１〜９の配列を比較した場合、相当な程度の分岐を示す（５３％〜６４％の間）。
【０１０４】
しかし、分岐は、カプシド配列に沿って分布のではなく、ウイルスの表面における数個のループし露出した箇所に主に局在化したアミノ酸配列において主に発生し、ＣＰＰは、ＡＡＶを全体的に網羅することから、分岐が、ＣＰＰ／ＡＡＶ相互作用に対して僅かな影響を有し得ることを示唆する。
【０１０５】
一部の実施形態では、本明細書に記載のウイルス送達複合体またはナノ粒子のいずれかによれば、複合体またはナノ粒子は、ＡＡＶを含む。一部の実施形態では、ＡＡＶは、ＡＡＶ１、ＡＡＶ２、ＡＡＶ３、ＡＡＶ４、ＡＡＶ５、ＡＡＶ６、ＡＡＶ７、ＡＡＶ８、ＡＡＶ９、ＡＡＶ１０、ＡＡＶ１１またはＡＡＶ１２である。一部の実施形態では、ＡＡＶは、異なるウイルス血清型に由来するカプシドおよびゲノムを含む偽型である。例えば、一部の実施形態では、ＡＡＶは、ＡＡＶ１／２、ＡＡＶ１／３、ＡＡＶ１／４、ＡＡＶ１／５、ＡＡＶ１／６、ＡＡＶ１／７、ＡＡＶ１／８、ＡＡＶ１／９、ＡＡＶ１／１０、ＡＡＶ１／１１、ＡＡＶ１／１２、ＡＡＶ２／１、ＡＡＶ２／３、ＡＡＶ２／４、ＡＡＶ２／５、ＡＡＶ２／６、ＡＡＶ２／７、ＡＡＶ２／８、ＡＡＶ２／９、ＡＡＶ２／１０、ＡＡＶ２／１１、ＡＡＶ２／１２、ＡＡＶ３／１、ＡＡＶ３／２、ＡＡＶ３／４、ＡＡＶ３／５、ＡＡＶ３／６、ＡＡＶ３／７、ＡＡＶ３／８、ＡＡＶ３／９、ＡＡＶ３／１０、ＡＡＶ３／１１、ＡＡＶ３／１２、ＡＡＶ４／１、ＡＡＶ４／２、ＡＡＶ４／３、ＡＡＶ４／５、ＡＡＶ４／６、ＡＡＶ４／７、ＡＡＶ４／８、ＡＡＶ４／９、ＡＡＶ４／１０、ＡＡＶ４／１１、ＡＡＶ４／１２、ＡＡＶ５／１、ＡＡＶ５／２、ＡＡＶ５／３、ＡＡＶ５／４、ＡＡＶ５／６、ＡＡＶ５／７、ＡＡＶ５／８、ＡＡＶ５／９、ＡＡＶ５／１０、ＡＡＶ５／１１、ＡＡＶ５／１２、ＡＡＶ６／１、ＡＡＶ６／２、ＡＡＶ６／３、ＡＡＶ６／４、ＡＡＶ６／５、ＡＡＶ６／７、ＡＡＶ６／８、ＡＡＶ６／９、ＡＡＶ６／１０、ＡＡＶ６／１１、ＡＡＶ６／１２、ＡＡＶ７／１、ＡＡＶ７／２、ＡＡＶ７／３、ＡＡＶ７／４、ＡＡＶ７／５、ＡＡＶ７／６、ＡＡＶ７／８、ＡＡＶ７／９、ＡＡＶ７／１０、ＡＡＶ７／１１、ＡＡＶ７／１２、ＡＡＶ８／１、ＡＡＶ８／２、ＡＡＶ８／３、ＡＡＶ８／４、ＡＡＶ８／５、ＡＡＶ８／６、ＡＡＶ８／７、ＡＡＶ８／９、ＡＡＶ８／１０、ＡＡＶ８／１１、ＡＡＶ８／１２、ＡＡＶ９／１、ＡＡＶ９／２、ＡＡＶ９／３、ＡＡＶ９／４、ＡＡＶ９／５、ＡＡＶ９／６、ＡＡＶ９／７、ＡＡＶ９／８、ＡＡＶ９／１０、ＡＡＶ９／１１、ＡＡＶ９／１２、ＡＡＶ１０／１、ＡＡＶ１０／２、ＡＡＶ１０／３、ＡＡＶ１０／４、ＡＡＶ１０／５、ＡＡＶ１０／６、ＡＡＶ１０／７、ＡＡＶ１０／８、ＡＡＶ１０／９、ＡＡＶ１０／１１、ＡＡＶ１０／１２、ＡＡＶ１１／１、ＡＡＶ１１／２、ＡＡＶ１１／３、ＡＡＶ１１／４、ＡＡＶ１１／５、ＡＡＶ１１／６、ＡＡＶ１１／７、ＡＡＶ１１／８、ＡＡＶ１１／９、ＡＡＶ１１／１０、ＡＡＶ１１／１２、ＡＡＶ１２／１、ＡＡＶ１２／２、ＡＡＶ１２／３、ＡＡＶ１２／４、ＡＡＶ１２／５、ＡＡＶ１２／６、ＡＡＶ１２／７、ＡＡＶ１２／８、ＡＡＶ１２／９、ＡＡＶ１２／１０、およびＡＡＶ１２／１１のうちいずれか１つである。一部の実施形態では、ＡＡＶは、複数の異なるウイルス血清型に由来するハイブリッドカプシドを含む。例えば、一部の実施形態では、ＡＡＶは、ＡＡＶ−ＤＪまたはＡＡＶ−ＤＪ８である。
【０１０６】
一部の実施形態では、本明細書に記載のウイルス送達複合体またはナノ粒子のいずれかによれば、複合体またはナノ粒子は、Fraser  Wright,  J.,  Wellman,  J.,  &  High,  K.  A.  Current  gene  therapy,  10(5):  341-349.  2010；臨床試験ＮＣＴ０２６５１６７５、ＮＣＴ０３０６６２５８、ＮＣＴ０３００３５３３、ＮＣＴ０２４８４０９２、ＮＣＴ０２３４１８０７、ＮＣＴ００９９９６０９、ＮＣＴ０１６２０８０１、ＮＣＴ００５１５７１０、ＮＣＴ００５１６４７７およびＮＣＴ０１２０８３８９；ならびに特許公開ＷＯ２０１７０９６０３９、ＷＯ２０１６１７９０３８およびＷＯ２０１４１８６５７９に記載されているＡＡＶを含む。
【０１０７】
一部の実施形態では、本明細書に記載のウイルス送達複合体またはナノ粒子のいずれかによれば、複合体またはナノ粒子は、ヒト第ＶＩＩＩ因子（ｈＦＶＩＩＩ）遺伝子を保有する組換えアデノ随伴ウイルス（ｒＡＡＶ）ベクターを含む。一部の実施形態では、ｒＡＡＶベクターは、非修飾ｒＡＡＶベクターよりも強くヒト肝臓と相互作用するように修飾される。一部の実施形態では、ウイルス送達複合体またはナノ粒子は、血友病Ａの処置に有用である。
【０１０８】
一部の実施形態では、本明細書に記載のウイルス送達複合体またはナノ粒子のいずれかによれば、複合体またはナノ粒子は、ヒト第ＩＸ因子（ｈＦＩＸ）遺伝子を保有するｒＡＡＶベクターを含む。一部の実施形態では、ｒＡＡＶベクターは、ｒＡＡＶ血清型２（ｒＡＡＶ２）ベクターである。一部の実施形態では、ｒＡＡＶベクターは、ｒＡＡＶ血清型８（ｒＡＡＶ８）ベクターである。一部の実施形態では、ｒＡＡＶベクターは、非修飾ｒＡＡＶベクターよりも強くヒト肝臓と相互作用するように修飾される。一部の実施形態では、ウイルス送達複合体またはナノ粒子は、血友病Ｂの処置に有用である。
【０１０９】
一部の実施形態では、本明細書に記載のウイルス送達複合体またはナノ粒子のいずれかによれば、複合体またはナノ粒子は、ヒトＣＨＭ遺伝子を保有するｒＡＡＶベクターを含む。一部の実施形態では、ｒＡＡＶベクターは、ｒＡＡＶ血清型２（ｒＡＡＶ２）ベクターである。一部の実施形態では、ウイルス送達複合体またはナノ粒子は、全脈絡膜萎縮症（ＣＨＭ）の処置に有用である。
【０１１０】
一部の実施形態では、本明細書に記載のウイルス送達複合体またはナノ粒子のいずれかによれば、複合体またはナノ粒子は、ヒトＲＰＥ６５遺伝子を保有するｒＡＡＶベクターを含む。一部の実施形態では、ｒＡＡＶベクターは、ｒＡＡＶ血清型２（ｒＡＡＶ２）ベクターである。一部の実施形態では、ウイルス送達複合体またはナノ粒子は、レーバー先天黒内障（ＬＣＡ）の処置に有用である。
【０１１１】
一部の実施形態では、本明細書に記載のウイルス送達複合体またはナノ粒子のいずれかによれば、複合体またはナノ粒子は、可溶性抗ＶＥＧＦタンパク質をコードするｒＡＡＶベクターを含む。一部の実施形態では、可溶性抗ＶＥＧＦタンパク質は、ＶＥＧＦに結合しその活性を中和するモノクローナル抗体断片である。一部の実施形態では、ｒＡＡＶベクターは、ｒＡＡＶ血清型８（ｒＡＡＶ８）ベクターである。一部の実施形態では、ウイルス送達複合体またはナノ粒子は、血管新生（滲出型）加齢黄斑変性（ｎＡＭＤ）の処置に有用である。
【０１１２】
一部の実施形態では、本明細書に記載のウイルス送達複合体またはナノ粒子のいずれかによれば、複合体またはナノ粒子は、ヒト低密度リポタンパク質受容体（ＬＤＬＲ）遺伝子を保有するｒＡＡＶベクターを含む。一部の実施形態では、ｒＡＡＶベクターは、ｒＡＡＶ血清型８（ｒＡＡＶ８）ベクターである。一部の実施形態では、ｒＡＡＶベクターは、非修飾ｒＡＡＶベクターよりも強くヒト肝臓と相互作用するように修飾される。一部の実施形態では、ウイルス送達複合体またはナノ粒子は、ホモ接合性家族性高コレステロール血症（ＨｏＦＨ）の処置に有用である。
【０１１３】
一部の実施形態では、本明細書に記載のウイルス送達複合体またはナノ粒子のいずれかによれば、複合体またはナノ粒子は、ヒトα−ｌ−イズロニダーゼ（ＩＤＵＡ）遺伝子を保有するｒＡＡＶベクターを含む。一部の実施形態では、ｒＡＡＶベクターは、ｒＡＡＶ血清型９（ｒＡＡＶ９）ベクターである。一部の実施形態では、ｒＡＡＶベクターは、非修飾ｒＡＡＶベクターよりも強くヒト肝臓と相互作用するように修飾される。一部の実施形態では、ウイルス送達複合体またはナノ粒子は、ムコ多糖症Ｉ型（ＭＰＳ  Ｉ）の処置に有用である。
【０１１４】
一部の実施形態では、本明細書に記載のウイルス送達複合体またはナノ粒子のいずれかによれば、複合体またはナノ粒子は、ヒトイズロン酸−２−スルファターゼ（ＩＤＳ）遺伝子を保有するｒＡＡＶベクターを含む。一部の実施形態では、ｒＡＡＶベクターは、ｒＡＡＶ血清型９（ｒＡＡＶ９）ベクターである。一部の実施形態では、ｒＡＡＶベクターは、非修飾ｒＡＡＶベクターよりも強くヒト肝臓と相互作用するように修飾される。一部の実施形態では、ウイルス送達複合体またはナノ粒子は、ムコ多糖症ＩＩ型（ＭＰＳ  ＩＩ）の処置に有用である。
アデノウイルス
【０１１５】
一部の実施形態では、本明細書に記載のウイルス送達複合体またはナノ粒子のいずれかによれば、複合体またはナノ粒子は、アデノウイルスを含む。一部の実施形態では、アデノウイルスは、Ａｄ１〜Ａｄ５７のうちいずれか１つである。一部の実施形態では、アデノウイルスは、Ａｄ５である。
レンチウイルス
【０１１６】
一部の実施形態では、本明細書に記載のウイルス送達複合体またはナノ粒子のいずれかによれば、複合体またはナノ粒子は、レンチウイルスを含む。
レトロウイルス
【０１１７】
一部の実施形態では、本明細書に記載のウイルス送達複合体またはナノ粒子のいずれかによれば、複合体またはナノ粒子は、レトロウイルスを含む。一部の実施形態では、レトロウイルスは、γ−レトロウイルスである。
単純ヘルペスウイルス（ＨＳＶ）
【０１１８】
一部の実施形態では、本明細書に記載のウイルス送達複合体またはナノ粒子のいずれかによれば、複合体またはナノ粒子は、単純ヘルペスウイルス（ＨＳＶ）を含む。一部の実施形態では、ＨＳＶは、ＨＳＶ−１である。一部の実施形態では、ＨＳＶは、ＨＳＶ−２である。
ポックスウイルス
【０１１９】
一部の実施形態では、本明細書に記載のウイルス送達複合体またはナノ粒子のいずれかによれば、複合体またはナノ粒子は、ポックスウイルスを含む。
エプスタイン・バーウイルス（ＥＢＶ）
【０１２０】
一部の実施形態では、本明細書に記載のウイルス送達複合体またはナノ粒子のいずれかによれば、複合体またはナノ粒子は、エプスタイン・バーウイルス（ＥＢＶ）を含む。
ワクシニアウイルス
【０１２１】
一部の実施形態では、本明細書に記載のウイルス送達複合体またはナノ粒子のいずれかによれば、複合体またはナノ粒子は、ワクシニアウイルスを含む。
ヒトサイトメガロウイルス（ｈＣＭＶ）
【０１２２】
一部の実施形態では、本明細書に記載のウイルス送達複合体またはナノ粒子のいずれかによれば、複合体またはナノ粒子は、サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）を含む。一部の実施形態では、ＣＭＶは、ヒトＣＭＶ（ｈＣＭＶ）である。
組成物
【０１２３】
一部の実施形態では、本明細書に記載のウイルス送達複合体またはナノ粒子を含む組成物が提供される。一部の実施形態では、組成物は、本明細書に記載のウイルス送達複合体またはナノ粒子と、薬学的に許容される希釈剤、賦形剤および／または担体とを含む、医薬組成物である。一部の実施形態では、組成物中の複合体またはナノ粒子の濃度は、約１ｎＭ〜約１００ｍＭであり、これは、例えば、約１０ｎＭ〜約５０ｍＭ、約２５ｎＭ〜約２５ｍＭ、約５０ｎＭ〜約１０ｍＭ、約１００ｎＭ〜約１ｍＭ、約５００ｎＭ〜約７５０μＭ、約７５０ｎＭ〜約５００μＭ、約１μＭ〜約２５０μＭ、約１０μＭ〜約２００μＭ、および約５０μＭ〜約１５０μＭを含む。
【０１２４】
本明細書で使用される場合、用語「薬学的に許容される希釈剤、賦形剤および／または担体」は、ヒトまたは他の脊椎動物宿主への投与に適合する任意のおよびすべての溶媒、分散媒、被覆剤、抗菌および抗真菌剤、等張および吸収遅延剤などを含むことを意図したものである。典型的に、薬学的に許容される希釈剤、賦形剤および／または担体は、ヒトはもちろん非ヒト哺乳動物を含む動物における使用について、連邦政府の規制機関、州政府もしくは他の規制機関によって承認された、または米国薬局方もしくは他の一般に認知されている薬局方に収載されている、希釈剤、賦形剤および／または担体である。用語の希釈剤、賦形剤および／または「担体」は、医薬組成物を投与するのに用いる希釈剤、アジュバント、賦形剤またはビヒクルを指す。そのような薬学的希釈剤、賦形剤および／または担体は、滅菌液、例えば、水および油（石油、動物、植物または合成由来のものを含む）であり得る。水、食塩溶液ならびにデキストロースおよびグリセロール水溶液を液体希釈剤、賦形剤および／または担体として、特に注射用溶液に利用することができる。好適な薬学的希釈剤および／または賦形剤には、凍結乾燥助剤を含む、デンプン、グルコース、ラクトース、スクロース、ゼラチン、麦芽、米、小麦粉、白亜、シリカゲル、ステアリン酸ナトリウム、モノステアリン酸グリセロール、タルク、塩化ナトリウム、脱脂粉乳、グリセロール、プロピレングリコール、水、エタノールなどが含まれる。組成物は、所望される場合、少量の湿潤剤、増量剤、乳化剤、またはｐＨ緩衝剤も含有することができる。これらの組成物は、液剤、懸濁剤、エマルジョン、徐放製剤などの形態をとることができる。好適な薬学的希釈剤、賦形剤および／または担体の例は、E.W.Martinによる「Remington's  Pharmaceutical  Sciences」に記載されている。製剤は、投与方法に適合しなければならない。適切な希釈剤、賦形剤および／または担体は、当業者には明らかであり、大部分が投与経路に依存する。
【０１２５】
一部の実施形態では、本明細書に記載の医薬組成物は、静脈内、腫瘍内、動脈内、局所、眼内、眼科的、門脈内、頭蓋内、脳内、脳室内、髄腔内、膀胱内、皮内、皮下、筋肉内、鼻腔内、気管内、肺、腔内または経口投与用に製剤化される。
【０１２６】
一部の実施形態では、ヒトまたは哺乳動物対象の処置に好適であることが判明した本発明の医薬組成物の投薬量は、ウイルス送達複合体またはナノ粒子の約０．００１ｍｇ／ｋｇ〜約１００ｍｇ／ｋｇの範囲（例えば、約０．００１、０．０１、０．１、０．２、０．３、０．４、０．５、０．６、０．７、０．８、０．９、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、５５、６０、６５、７０、７５、８０、８５、９０、９５および１００ｍｇ／ｋｇ（これらの値の間の任意の範囲を含む）のいずれか）である。一部の実施形態では、投薬量範囲は、約０．１ｍｇ／ｋｇ〜約２０ｍｇ／ｋｇ（例えば、約０．１、０．２、０．３、０．４、０．５、０．６、０．７、０．８、０．９、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９および２０ｍｇ／ｋｇ（これらの値の間の任意の範囲を含む）のいずれか）である。一部の実施形態では、投薬量範囲は、約０．５ｍｇ／ｋｇ〜約１０ｍｇ／ｋｇである。
【０１２７】
例示的な投薬頻度としては、中断なしで毎週；４週間のうちの３週間、毎週；３週間毎に１回；２週間毎に１回；３週間のうち２週間、毎週が挙げられるが、これらに限定されない。一部の実施形態では、医薬組成物は、約２週間毎に１回、３週間毎に１回、４週間毎に１回、６週間毎に１回、または８週間毎に１回、投与される。一部の実施形態では、医薬組成物は、週に少なくとも約１回、２回、３回、４回、５回、６回、または７回（すなわち毎日）のいずれか、投与される。一部の実施形態では、各投与間の間隔は、約６カ月、３カ月、１カ月、２０日、１５日、１２日、１０日、９日、８日、７日、６日、５日、４日、３日、２日または１日のいずれかより短い。一部の実施形態では、各投与間の間隔は、約１カ月、２カ月、３カ月、４カ月、５カ月、６カ月、８カ月または１２カ月のいずれかより長い。一部の実施形態では、投薬スケジュールに中断がない。一部の実施形態では、各投与間の間隔は、約１週間以下である。一部の実施形態では、個体への医薬組成物の投与スケジュールは、全処置に相当する単回投与から、毎日の投与に及ぶ。医薬組成物の投与を、約１カ月から約７年までなどの、長期間にわたって延長することができる。一部の実施形態では、医薬組成物は、少なくとも約２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１８、２４、３０、３６、４８、６０、７２または８４ヶ月のいずれかの期間にわたって投与される。
【０１２８】
一部の実施形態では、本明細書に記載のウイルス送達複合体またはナノ粒子と薬学的に許容される担体とを含む医薬組成物であって、薬学的に許容される担体が糖またはタンパク質である、医薬組成物が提供される。一部の実施形態では、糖は、スクロース、グルコース、マンニトールおよびこれらの組合せからなる群から選択され、約５％〜約２０％の濃度で医薬組成物中に存在する。一部の実施形態では、糖は、スクロースである。一部の実施形態では、糖は、グルコースである。一部の実施形態では、糖は、マンニトールである。一部の実施形態では、タンパク質は、アルブミンである。一部の実施形態では、アルブミンは、ヒト血清アルブミンである。一部の実施形態では、医薬組成物は、凍結乾燥される。
調製方法
【０１２９】
一部の実施形態では、本明細書に記載のウイルス送達複合体またはナノ粒子を調製する方法であって、ＣＰＰを１つまたは複数のウイルスと組み合わせるステップを含み、それによってウイルス送達複合体またはナノ粒子を形成する方法が提供される。
【０１３０】
したがって、一部の実施形態では、本明細書に記載のウイルス送達複合体またはナノ粒子を調製する方法であって、ＣＰＰを１つまたは複数のウイルスと組み合わせるステップを含む、方法が提供される。
【０１３１】
例えば、一部の実施形態では、本明細書に記載のウイルス送達複合体またはナノ粒子を調製する方法であって、ａ）水性媒体中で、１つまたは複数のウイルスを含む第１の組成物を、細胞膜透過ペプチドを含む第２の組成物と組み合わせて、混合物を形成するステップ、およびｂ）混合物をインキュベートして、１つまたは複数のウイルスと会合している細胞膜透過ペプチドを含む複合体を形成するステップとを含み、それによって、ウイルス送達複合体またはナノ粒子を生成する方法が提供される。一部の実施形態では、水性媒体は、例えば、ＰＢＳ、Ｔｒｉｓ、またはタンパク質複合体を安定化するための当技術分野において公知の任意の緩衝液を含む、緩衝液である。一部の実施形態では、１つまたは複数のウイルスを含む第１の組成物は、約１×１０４〜約１×１０１５（約１×１０７〜約１×１０１２または約１×１０９〜約１×１０１１など）の力価で、１つまたは複数のウイルスのうち少なくとも１つ（ＡＡＶ、レンチウイルスおよび／またはヘルペスウイルスなど）を含む溶液である。一部の実施形態では、１つまたは複数のウイルスを含む第１の組成物は、凍結乾燥形態の１つまたは複数のウイルスと好適な担体とを含む固体である。一部の実施形態では、細胞膜透過ペプチドを含む第２の組成物は、細胞膜透過ペプチドを約１ｎＭ〜約２００μＭ（例えば、約２ｎＭ、５ｎＭ、１０ｎＭ、２５ｎＭ、５０ｎＭ、１００ｎＭ、２００ｎＭ、３００ｎＭ、４００ｎＭ、５００ｎＭ、６００ｎＭ、７００ｎＭ、８００ｎＭ、９００ｎＭ、１μＭ、２μＭ、５μＭ、１０μＭ、２５μＭ、５０μＭ、１００μＭ、１５０μＭまたは２００μＭ（これらの値の間の任意の範囲を含む）のいずれか）の濃度で含む溶液である。一部の実施形態では、細胞膜透過ペプチドを含む第２の組成物は、凍結乾燥形態の細胞膜透過ペプチドと好適な担体とを含む固体である。一部の実施形態では、溶液は、水で製剤化される。一部の実施形態では、水は、蒸留水である。一部の実施形態では、溶液は、緩衝液で製剤化される。一部の実施形態では、緩衝液は、ウイルスまたはポリペプチドを保管するために使用される、当技術分野において公知の任意の緩衝液である。一部の実施形態では、混合物における、細胞膜透過ペプチドの、細胞膜透過ペプチドと会合しているウイルス（例えば、Ｖｇ、ｐｆｕまたはＭＯＩ単位）に対するモル比は、約１：１〜約１×１０８：１の間である。一部の実施形態では、混合物は、１つまたは複数のウイルスと会合している細胞膜透過ペプチドを含む複合体またはナノ粒子を形成するために、例えば、約２０分、３０分、４０分および５０分間のいずれかを含む、約１０分〜６０分間、例えば、約２℃〜約５℃、約５℃〜約１０℃、約１０℃〜約１５℃、約１５℃〜約２０℃、約２０℃〜約２５℃、約２５℃〜約３０℃、約３０℃〜約３５℃、約３５℃〜約４０℃、約４０℃〜約４５℃、および約４５℃〜約５０℃を含む、約２℃〜約５０℃の温度でインキュベートされ、それによって、結果として、ウイルス送達複合体またはナノ粒子を含む溶液が得られる。一部の実施形態では、ウイルス送達複合体またはナノ粒子を含む溶液は、例えば、少なくとも約６週間、２ヶ月、３ヶ月、４ヶ月、５ヶ月および６ヶ月��のいずれかを含む、少なくとも約３週間、４℃で、安定した状態を保つ。一部の実施形態では、ウイルス送達複合体またはナノ粒子を含む溶液は、担体の存在下で凍結乾燥される。一部の実施形態では、担体は、例えば、スクロース、グルコース、マンニトールおよびこれらの組合せを含む、糖であり、ウイルス送達複合体またはナノ粒子を含む溶液中に、例えば、約７．５％〜約１７．５％、約１０％〜約１５％、および約１２．５％を含む、約５％〜約２０％（単位体積当たりの重量）、で存在する。一部の実施形態では、担体は、例えば、ヒト血清アルブミンなどのアルブミンを含む、タンパク質である。一部の実施形態では、細胞膜透過ペプチドは、本明細書に記載のＰＥＰ−１ペプチド、ＰＥＰ−２ペプチド、ＶＥＰＥＰ−３ペプチド、ＶＥＰＥＰ−６ペプチド、ＶＥＰＥＰ−９ペプチドまたはＡＤＧＮ−１００ペプチドである。一部の実施形態では、細胞膜透過ペプチドは、配列番号７５〜８０のうちのいずれか１つのアミノ酸配列を含む。
【０１３２】
一部の実施形態では、本明細書に記載のコアおよび少なくとも１つの追加の層を含むナノ粒子を調製する方法であって、ａ）水性媒体中で、１つまたは複数のウイルスを含む組成物を、第１の細胞膜透過ペプチドを含む組成物と組み合わせて、第１の混合物を形成するステップ、ｂ）第１の混合物をインキュベートして、１つまたは複数のウイルスと会合している第１の細胞膜透過ペプチドを含むナノ粒子のコアを形成するステップ、ｃ）水性媒体中で、ｂ）の混合物などのナノ粒子のコアを含む組成物を、第２の細胞膜透過ペプチドを含む組成物と組み合わせて、第２の混合物を形成するステップ、ならびにｄ）第２の混合物をインキュベートして、コアおよび少なくとも１つの追加の層を含むナノ粒子を形成するステップを含む方法が提供される。一部の実施形態では、方法は、ｅ）水性媒体中で、コアおよび少なくとも１つの追加の層を含むナノ粒子を含む組成物、ならびに第３の細胞膜透過ペプチドを含む組成物を組み合わせて、第３の混合物を形成するステップ、ならびにｆ）第３の混合物をインキュベートして、コアおよび少なくとも２つの追加の層を含むナノ粒子を形成するステップをさらに含む。ますます多くの層を含むナノ粒子の形成に方法を適応させることができることは、理解されたい。一部の実施形態では、水性媒体は、例えば、ＰＢＳ、Ｔｒｉｓ、またはタンパク質複合体を安定化するための当技術分野において公知の任意の緩衝液を含む、緩衝液である。一部の実施形態では、１つまたは複数のウイルスを含む組成物は、約１×１０４〜約１×１０１５（約１×１０７〜約１×１０１２または約１×１０９〜約１×１０１１など）の力価で１つまたは複数のウイルスを含む溶液である。一部の実施形態では、１つまたは複数のウイルスを含む組成物は、凍結乾燥形態の１つまたは複数のウイルスと好適な担体とを含む固体である。一部の実施形態では、第１、第２および／または第３の細胞膜透過ペプチドを含む組成物はそれぞれ、約１ｎＭ〜約２００μＭ（例えば、約２ｎＭ、５ｎＭ、１０ｎＭ、２５ｎＭ、５０ｎＭ、１００ｎＭ、２００ｎＭ、３００ｎＭ、４００ｎＭ、５００ｎＭ、６００ｎＭ、７００ｎＭ、８００ｎＭ、９００ｎＭ、１μＭ、２μＭ、５μＭ、１０μＭ、２５μＭ、５０μＭ、１００μＭ、１５０μＭまたは２００μＭ（これらの値の間の任意の範囲を含む）のいずれか）の濃度で細胞膜透過ペプチドを含む溶液である。一部の実施形態では、第１、第２および／または第３の細胞膜透過ペプチドを含む組成物はそれぞれ、凍結乾燥形態の細胞膜透過ペプチドと好適な担体とを含む固体である。一部の実施形態では、溶液は、水で製剤化される。一部の実施形態では、水は、蒸留水である。一部の実施形態では、溶液は、緩衝液で製剤化される。一部の実施形態では、緩衝液は、ウイルスまたはポリペプチドを保管するために使用される当技術分野において公知の任意の緩衝液である。一部の実施形態では、第１の混合物における第１の細胞膜透過ペプチドのウイルス（例えば、Ｖｇ、ｐｆｕまたはＭＯＩ単位）に対するモル比は、約１：１〜約１×１０８：１の間である。一部の実施形態では、第１、第２および／または第３の混合物は、例えば、約２０分間、３０分間、４０分間および��０分間のいずれかを含む、約１０分〜６０分間、例えば、約２℃〜約５℃、約５℃〜約１０℃、約１０℃〜約１５℃、約１５℃〜約２０℃、約２０℃〜約２５℃、約２５℃〜約３０℃、約３０℃〜約３５℃、約３５℃〜約４０℃、約４０℃〜約４５℃および約４５℃〜約５０℃を含む、約２℃〜約５０℃の温度で、個々にインキュベートされる。一部の実施形態では、ナノ粒子を含む溶液は、例えば、少なくとも約６週間、２ヶ月、３ヶ月、４ヶ月、５ヶ月および６ヶ月間のいずれかを含む、少なくとも約３週間、４℃で、安定した状態を保つ。一部の実施形態では、ナノ粒子を含む溶液は、担体の存在下で凍結乾燥される。一部の実施形態では、担体は、例えば、スクロース、グルコース、マンニトールおよびこれらの組合せを含む、糖であり、ウイルス送達複合体またはナノ粒子を含む溶液中に、例えば、約７．５％〜約１７．５％、約１０％〜約１５％、および約１２．５％を含む、約５％〜約２０％（単位体積当たりの重量）、で存在する。一部の実施形態では、担体は、例えば、ヒト血清アルブミンなどのアルブミンを含む、タンパク質である。一部の実施形態では、第１、第２および／または第３の細胞膜透過ペプチドは、個々に、本明細書に記載のＰＥＰ−１ペプチド、ＰＥＰ−２ペプチド、ＶＥＰＥＰ−３ペプチド、ＶＥＰＥＰ−６ペプチド、ＶＥＰＥＰ−９ペプチドまたはＡＤＧＮ−１００ペプチドである。一部の実施形態では、第１、第２および／または第３の細胞膜透過ペプチドは、個々に、配列番号７５、７６、７７、７８、７９または８０のアミノ酸配列を含む。
【０１３３】
本発明のウイルス送達複合体またはナノ粒子を含む安定した組成物についての、一部の実施形態では、複合体またはナノ粒子の平均直径は、約１０％を超えるまでは変化せず、多分散指数は、約１０％を超えるまでは変化しない。
【０１３４】
本明細書に記載のＣＰＰのいずれかを調製する方法も提供される。
使用方法
疾患処置方法
【０１３５】
一部の実施形態では、個体の疾患または状態を処置する方法であって、個体に、ウイルスの細胞内送達のための本明細書に記載のウイルス送達複合体またはナノ粒子と薬学的に許容される担体とを含む医薬組成物の有効量を投与するステップを含み、ウイルス送達複合体またはナノ粒子が、疾患または状態の処置に有用な１つまたは複数のウイルスを含む、方法が提供される。一部の実施形態では、ウイルス送達複合体またはナノ粒子は、ＰＥＰ−１ペプチド、ＰＥＰ−２ペプチド、ＶＥＰＥＰ−３ペプチド、ＶＥＰＥＰ−６ペプチド、ＶＥＰＥＰ−９ペプチドまたはＡＤＧＮ−１００ペプチドのアミノ酸配列を含むＣＰＰを含む。一部の実施形態では、医薬組成物中のウイルスの最低有効量は、ウイルスが本明細書に記載のウイルス送達複合体またはナノ粒子に存在しない同様の医薬組成物（例えば、遊離ウイルスを含む医薬組成物）中のウイルスの最低有効量未満である。一部の実施形態では、ウイルスは、組換えＡＡＶ、アデノウイルス、レンチウイルス、レトロウイルス、ＨＳＶ、ポックスウイルス、ＥＢＶ、ワクシニアウイルスおよびｈＣＭＶを含む組換えウイルスである。一部の実施形態では、組換えウイルスは、細胞ゲノム内への挿入のための導入遺伝子を含む。一部の実施形態では、導入遺伝子は、治療用導入遺伝子である。一部の実施形態では、導入遺伝子は、治療用タンパク質などのタンパク質をコードする。一部の実施形態では、導入遺伝子は、内因性遺伝子、例えば、疾患関連内因性遺伝子を標的とする阻害性ＲＮＡ（ＲＮＡｉ）などのＲＮＡｉをコードする。一部の実施形態では、導入遺伝子は、ＣＡＲをコードする。一部の実施形態では、複合体またはナノ粒子は、ＲＮＡｉをコードする第１の導入遺伝子およびタンパク質をコードする第２の導入遺伝子を含む１つまたは複数のウイルスを含む。一部の実施形態では、ＲＮＡｉは、疾患または状態に関与する内因性遺伝子を標的とする治療用ＲＮＡｉであり、タンパク質は、疾患または状態を処置するために有用な治療用タンパク質である。一部の実施形態では、治療用ＲＮＡｉは、内因性遺伝子の疾患関連形態（例えば、変異体タンパク質をコードする遺伝子、またはタンパク質の異常発現をもたらす遺伝子）を標的とし、第２の導入遺伝子は、内因性遺伝子の治療形態である（例えば、第２の導入遺伝子は、変異体タンパク質の野生型もしくは機能形態をコードする、または第２の導入遺伝子は、タンパク質の正常発現をもたらす）。一部の実施形態では、複合体またはナノ粒子は、第１の導入遺伝子を含む第１のウイルスおよび第２の導入遺伝子を含む第２のウイルスを含む。一部の実施形態では、複合体またはナノ粒子は、第１の導入遺伝子および第２の導入遺伝子を含む単一のウイルスを含む。一部の実施形態では、処置を予定している疾患または状態は、がん、糖尿病、自己免疫性疾患、炎症性疾患、線維性疾患、ウイルス感染性疾患、遺伝性疾患、眼疾患、老化および変性疾患、ならびにコレステロールレベル異常を特徴とする疾患を含むが、これらに限定されない。一部の実施形態では、ウイルスは、１つまたは複数の遺伝子の配列を修飾することができる。一部の実施形態では、ウイルスは、１つまたは複数の遺伝子の発現を調節することができる。一部の実施形態では、１つまたは複数の遺伝子は、成長因子およびサイトカイン、細胞表面受容体、シグナル伝達分子およびキナーゼ、転写因子および他の転写調節因子、タンパク質発現および修飾の制御因子、腫瘍抑制因子、ならびにアポトーシスおよび転移の制御因子を、これらに限定されないが、含むタンパク質をコードする。一部の実施形態では、医薬組成物は、本明細書に記載の１つまたは複数の追加のウイルス送達複合体またはナノ粒子をさらに含む。一部の実施形態では、方法は、個体に、本明細書に記載の１つまたは複数の追加のウイルス送達複合体またはナノ粒子を含む１つまたは複数の追加の医薬組成物の有効量を投与するステップをさらに含む。一部の実施形態では、標的ポリヌクレオチドは、標的遺伝子の発現を減少させること、または不活性な産物を発現する修飾標的遺伝子をもたらすことなどにより、標的遺伝子を不活性化するように修飾される。一部の実施形態では、標的ポリヌクレオチドは、標的遺伝子の発現を増加させること、または活性標的遺伝子産物を発現する修飾標的遺伝子をもたらすことなどにより、標的遺伝子を活性化するように修飾される。
【０１３６】
本明細書で使用される活性または発現の「調節」は、遺伝子もしくはｍＲＮＡの状態もしくはコピー数を制御もしくは変更すること、または産生されるタンパク質などの遺伝子産物の量を変化させることを意味する。一部の実施形態では、ウイルスは、標的遺伝子の発現を阻害する。一部の実施形態では、ウイルスは、遺伝子または遺伝子産物の発現を、少なくとも約０％、２０％、３０％、４０％、６０％、７０％、８０％、９０％または１００％のいずれか、阻害する。
【０１３７】
一部の実施形態では、個体の疾患または状態を処置する方法であって、個体に、ウイルスの細胞内送達のための本明細書に記載のウイルス送達複合体またはナノ粒子と薬学的に許容される担体とを含む医薬組成物の有効量を投与するステップを含み、ウイルス送達複合体またはナノ粒子が、疾患または状態の処置に有用な１つまたは複数のウイルスと、ＰＥＰ−１ペプチド、ＰＥＰ−２ペプチド、ＶＥＰＥＰ−３ペプチド、ＶＥＰＥＰ−６ペプチド、ＶＥＰＥＰ−９ペプチドまたはＡＤＧＮ−１００ペプチドのアミノ酸配列を含む細胞膜透過ペプチドとを含む、方法が提供される。一部の実施形態では、ＶＥＰＥＰ−３ペプチドは、配列番号１〜１４、７５および７６のうちのいずれか１つのアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＶＥＰＥＰ−６ペプチドは、配列番号１５〜４０および７７のうちのいずれか１つのアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＶＥＰＥＰ−９ペプチドは、配列番号４１〜５２および７８のうちのいずれか１つのアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＡＤＧＮ−１００ペプチドは、配列番号５３〜７０、７９および８０のうちのいずれか１つのアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、処置を予定している疾患または状態は、がん、糖尿病、自己免疫性疾患、炎症性疾患、線維性疾患、ウイルス感染性疾患、遺伝性疾患、眼疾患、老化および変性疾患、ならびにコレステロールレベル異常を含むが、これらに限定されない。一部の実施形態では、医薬組成物中のウイルス送達複合体またはナノ粒子は、個体の１つまたは複数の遺伝子の配列を修飾するための、１つまたは複数のウイルスを含む。一部の実施形態では、医薬組成物中のウイルス送達複合体またはナノ粒子は、個体の１つまたは複数の遺伝子の発現を調節するための、１つまたは複数のウイルスを含む。一部の実施形態では、１つまたは複数の遺伝子は、成長因子およびサイトカイン、細胞表面受容体、シグナル伝達分子およびキナーゼ、転写因子および他の転写調節因子、タンパク質発現および修飾の制御因子、腫瘍抑制因子、ならびにアポトーシスおよび転移の制御因子を、これらに限定されないが、含むタンパク質をコードする。一部の実施形態では、医薬組成物は、本明細書に記載の１つまたは複数の追加のウイルス送達複合体またはナノ粒子をさらに含む。一部の実施形態では、方法は、個体に、本明細書に記載の１つまたは複数の追加のウイルス送達複合体またはナノ粒子を含む１つまたは複数の追加の医薬組成物の有効量を投与するステップをさらに含む。一部の実施形態では、標的ポリヌクレオチドは、標的遺伝子の発現を減少させること、または不活性な産物を発現する修飾標的遺伝子をもたらすことなどにより、標的遺伝子を不活性化するように修飾される。一部の実施形態では、標的ポリヌクレオチドは、標的遺伝子の発現を増加させること、または活性標的遺伝子産物を発現する修飾標的遺伝子をもたらすことなどにより、標的遺伝子を活性化するように修飾される。
【０１３８】
本明細書に記載の方法の一部の実施形態では、ウイルス送達複合体またはナノ粒子は、１つまたは複数の導入遺伝子（例えば、約１、２、３、４、５種またはそれよりも多い導入遺伝子のうちいずれか）を含む１つまたは複数のウイルスを含む。一部の実施形態では、導入遺伝子のうち１つまたは複数は、治療用タンパク質などのタンパク質をコードする。一部の実施形態では、導入遺伝子のうち１つまたは複数は、治療用阻害性ＲＮＡ（ＲＮＡｉ）などのＲＮＡｉをコードする。一部の実施形態では、導入遺伝子のうち１つまたは複数は、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）をコードする。
【０１３９】
一部の実施形態では、個体における疾患または状態を処置する方法であって、本明細書に記載のウイルス送達複合体またはナノ粒子および薬学的に許容される担体を含む有効量の医薬組成物を個体に投与するステップを含み、医薬組成物が、ウイルス送達複合体またはナノ粒子に含有される１つまたは複数のウイルスを単独で含む同様の医薬組成物（すなわち、本明細書に記載のペプチドと会合していない１つまたは複数のウイルスを含む医薬組成物）よりも免疫原性が低い、方法が提供される。一部の実施形態では、医薬組成物は、ウイルス送達複合体またはナノ粒子に含有される１つまたは複数のウイルスを単独で含む同様の医薬組成物の約９９％以下（例えば、約９５、９０、８５、８０、７５、７０、６５、６０、５５、５０、４５、４０、３５、３０、２５、２０、１５、１０、５、４、３、２、１％以下またはそれ未満（これらの値の間の任意の範囲を含む）のいずれか）の免疫原性である。
【０１４０】
一部の実施形態では、個体における疾患または状態を処置する方法であって、本明細書に記載のウイルス送達複合体またはナノ粒子および薬学的に許容される担体を含む有効量の医薬組成物を個体に投与するステップを含み、医薬組成物の複数回の投与を含む方法が提供される。一部の実施形態では、医薬組成物の反復投与は、医薬組成物に対する個体における有害免疫応答を誘発しない、またはウイルス送達複合体もしくはナノ粒子に含有される１つもしくは複数のウイルスを単独で含む同様の医薬組成物の反復投与と比較して個体における実質的に低下された免疫応答を誘発する。一部の実施形態では、医薬組成物の反復投与は、ウイルス送達複合体またはナノ粒子に含有される１つまたは複数のウイルスを単独で含む同様の医薬組成物の対応する反復投与によって生成される免疫応答の約９９％以下（例えば、約９５、９０、８５、８０、７５、７０、６５、６０、５５、５０、４５、４０、３５、３０、２５、２０、１５、１０、５、４、３、２、１％以下またはそれ未満（これらの値の間の任意の範囲を含む）のいずれか）の強さの免疫応答をもたらす。
【０１４１】
一部の実施形態では、個体における疾患または状態を処置する方法であって、本明細書に記載のウイルス送達複合体またはナノ粒子および薬学的に許容される担体を含む有効量の医薬組成物を個体に投与するステップを含み、個体が、ウイルス送達複合体またはナノ粒子に含有される１つまたは複数のウイルスのうち少なくとも１つに対する中和抗体を産生し、ウイルス送達複合体またはナノ粒子のペプチドが、中和抗体から少なくとも１つのウイルスをマスクする、方法が提供される。一部の実施形態では、中和抗体は、複合体もしくはナノ粒子中の少なくとも１つのウイルスの中和から遮断される、または少なくとも１つのウイルス単独（すなわち、本明細書に記載のペプチドと会合していない少なくとも１つのウイルス）と比較して、複合体もしくはナノ粒子中の少なくとも１つのウイルスの実質的に低下された中和をもたらす。一部の実施形態では、中和抗体による複合体またはナノ粒子中の少なくとも１つのウイルスの中和は、中和抗体による少なくとも１つのウイルス単独の中和の約９９％以下（例えば、約９５、９０、８５、８０、７５、７０、６５、６０、５５、５０、４５、４０、３５、３０、２５、２０、１５、１０、５、４、３、２、１％以下またはそれ未満（これらの値の間の任意の範囲を含む）のいずれか）である。
疾患および状態
【０１４２】
本明細書に記載の方法の一部の実施形態では、処置を予定している疾患は、がんである。一部の実施形態では、がんは、固形腫瘍であり、医薬組成物は、成長因子およびサイトカイン、細胞表面受容体、シグナル伝達分子およびキナーゼ、転写因子および他の転写調節因子、タンパク質発現および修飾の制御因子、腫瘍抑制因子、ならびにアポトーシスおよび転移の制御因子を含むがこれらに限定されないタンパク質をコードする１つまたは複数の遺伝子の発現を調節する１つまたは複数のウイルスを含む、ウイルス送達複合体またはナノ粒子を含む。一部の実施形態では、成長因子またはサイトカインには、これらに限定されないが、ＥＧＦ、ＶＥＧＦ、ＦＧＦ、ＨＧＦ、ＨＤＧＦ、ＩＧＦ、ＰＤＧＦ、ＴＧＦ−α、ＴＧＦ−β、ＴＮＦ−αおよびｗｎｔが、これらの変異型を含めて、含まれる。一部の実施形態では、細胞表面受容体には、これらに限定されないが、ＥＲ、ＰＲ、Ｈｅｒ２、Ｈｅｒ３、アンジオポエチン受容体、ＥＧＦＲ、ＦＧＦＲ、ＨＧＦＲ、ＨＤＧＦＲ、ＩＧＦＲ、ＫＧＦＲ、ＭＳＦＲ、ＰＤＧＦＲ、ＴＧＦＲ、ＶＥＧＦＲ１、ＶＥＧＦＲ２、ＶＥＧＦＲ３、Ｆｒｉｚｚｌｅｄファミリー受容体（ＦＺＤ−１〜１０）、スムーズンド（smoothened）、パッチド（patched）およびＣＸＣＲ４が、これらの変異型を含めて、含まれる。一部の実施形態では、シグナル伝達分子またはキナーゼには、これらに限定されないが、ＫＲＡＳ、ＮＲＡＳ、ＲＡＦ、ＭＥＫ、ＭＥＫＫ、ＭＡＰＫ、ＭＫＫ、ＥＲＫ、ＪＮＫ、ＪＡＫ、ＰＫＡ、ＰＫＣ、ＰＩ３Ｋ、Ａｋｔ、ｍＴＯＲ、Ｒａｐｔｏｒ、ＲＩＣＴＯＲ、ＭＬＳＴ８、ＰＲＡＳ４０、ＤＥＰＴＯＲ、ＭＳＩＮ１、Ｓ６キナーゼ、ＰＤＫ１、ＢＲＡＦ、ＦＡＫ、Ｓｒｃ、Ｆｙｎ、Ｓｈｃ、ＧＳＫ、ＩＫＫ、ＰＬＫ−１、サイクリン依存性キナーゼ（Ｃｄｋ１〜１３）、ＣＤＫ活性化キナーゼ、ＡＬＫ／Ｍｅｔ、Ｓｙｋ、ＢＴＫ、Ｂｃｒ−Ａｂｌ、ＲＥＴ、β−カテニン、Ｍｃｌ−１およびＰＫＮ３が、これらの変異型を含めて、含まれる。一部の実施形態では、転写因子、または他の転写調節因子には、これらに限定されないが、ＡＲ、ＡＴＦ１、ＣＥＢＰＡ、ＣＲＥＢ１、ＥＳＲ１、ＥＷＳＲ１、ＦＯＸＯ１、ＧＡＴＡ１、ＧＡＴＡ３、ＨＮＦ１Ａ、ＨＮＦ１Ｂ、ＩＫＺＦ１、ＩＲＦ１、ＩＲＦ４、ＫＬＦ６、ＬＭＯ１、ＬＹＬ１、ＭＹＣ、ＮＲ４Ａ３、ＰＡＸ３、ＰＡＸ５、ＰＡＸ７、ＰＢＸ１、ＰＨＯＸ２Ｂ、ＰＭＬ、ＲＵＮＸ１、ＳＭＡＤ４、ＳＭＡＤ７、ＳＴＡＴ５Ｂ、ＴＡＬ１、ＴＰ５３、ＷＴ１、ＺＢＴＢ１６、ＡＴＦ−２、Ｃｈｏｐ、ｃ−Ｊｕｎ、ｃ−Ｍｙｃ、ＤＰＣ４、Ｅｌｋ−１、Ｅｔｓ１、Ｍａｘ、ＭＥＦ２Ｃ、ＮＦＡＴ４、Ｓａｐ１ａ、ＳＴＡＴ、Ｔａｌ、ｐ５３、ＣＲＥＢ、ＮＦ−κＢ、ＨＤＡＣ、ＨＩＦ−１αおよびＲＲＭ２が、これらの変異型を含めて、含まれる。一部の実施形態では、タンパク質発現または修飾の制御因子には、これらに限定されないが、ユビキチンリガーゼ、ＬＭＰ２、ＬＭＰ７およびＭＥＣＬ−１が、これらの変異型を含めて、含まれる。一部の実施形態では、腫瘍抑制因子には、これらに限定されないが、ＡＰＣ、ＢＲＣＡ１、ＢＲＣＡ２、ＤＰＣ４、ＩＮＫ４、ＭＡＤＲ２、ＭＬＨ１、ＭＳＨ２、ＭＳＨ６、ＮＦ１、���Ｆ２、ｐ５３、ＰＴＣ、ＰＴＥＮ、Ｒｂ、ＶＨＬ、ＷＴ１およびＷＴ２が、これらの変異型を含めて、含まれる。一部の実施形態では、アポトーシスまたは転移の制御因子には、これらに限定されないが、ＸＩＡＰ、Ｂｃｌ−２、オステオポンチン、ＳＰＡＲＣ、ＭＭＰ−２、ＭＭＰ−９、ｕＰＡＲが、これらの変異型を含めて、含まれる。
【０１４３】
本明細書に記載の方法の一部の実施形態では、処置を予定している疾患は、固形腫瘍である、がんであり、医薬組成物は、腫瘍の発生および／または進行に関与するタンパク質をコードする１つまたは複数の遺伝子を標的とする１つまたは複数のウイルスを含む、ウイルス送達複合体またはナノ粒子を含む。一部の実施形態では、腫瘍の発生および／または進行に関与するタンパク質をコードする１つまたは複数の遺伝子には、これらに限定されないが、ＩＬ−２、ＩＬ−１２、インターフェロン−ガンマ、ＧＭ−ＣＳＦ、Ｂ７−１、カスパーゼ−９、ｐ５３、ＭＵＣ−１、ＭＤＲ−１、ＨＬＡ−Ｂ７／ベータ２−ミクログロブリン、Ｈｅｒ２、Ｈｓｐ２７、チミジンキナーゼおよびＭＤＡ−７が、これらの変異型を含めて、含まれる。一部の実施形態では、ウイルスは、組換えＡＡＶ、アデノウイルス、レンチウイルス、レトロウイルス、ＨＳＶ、ポックスウイルス、ＥＢＶ、ワクシニアウイルスおよびｈＣＭＶを含む組換えウイルスである。一部の実施形態では、組換えウイルスは、導入遺伝子を含み、ウイルスの細胞内送達は、細胞のゲノム内への導入遺伝子の移入を可能にする。一部の実施形態では、導入遺伝子は、治療用導入遺伝子である。一部の実施形態では、導入遺伝子は、治療用タンパク質などのタンパク質をコードする。一部の実施形態では、導入遺伝子は、内因性遺伝子、例えば、疾患関連内因性遺伝子を標的とする阻害性ＲＮＡ（ＲＮＡｉ）などのＲＮＡｉをコードする。一部の実施形態では、導入遺伝子は、ＣＡＲをコードする。一部の実施形態では、複合体またはナノ粒子は、ＲＮＡｉをコードする第１の導入遺伝子およびタンパク質をコードする第２の導入遺伝子を含む１つまたは複数のウイルスを含む。一部の実施形態では、ＲＮＡｉは、疾患または状態に関与する内因性遺伝子を標的とする治療用ＲＮＡｉであり、タンパク質は、疾患または状態を処置するために有用な治療用タンパク質である。一部の実施形態では、治療用ＲＮＡｉは、内因性遺伝子の疾患関連形態（例えば、変異体タンパク質をコードする遺伝子、またはタンパク質の異常発現をもたらす遺伝子）を標的とし、第２の導入遺伝子は、内因性遺伝子の治療形態である（例えば、第２の導入遺伝子は、変異体タンパク質の野生型もしくは機能形態をコードする、または第２の導入遺伝子は、タンパク質の正常発現をもたらす）。一部の実施形態では、複合体またはナノ粒子は、第１の導入遺伝子を含む第１のウイルスおよび第２の導入遺伝子を含む第２のウイルスを含む。一部の実施形態では、複合体またはナノ粒子は、第１の導入遺伝子および第２の導入遺伝子を含む単一のウイルスを含む。
【０１４４】
本明細書に記載の方法の一部の実施形態では、処置を予定している疾患は、肝がんである、がんであり、医薬組成物は、肝がんの発生および／または進行に関与するタンパク質をコードする１つまたは複数の遺伝子を標的とする１つまたは複数のウイルスを含む、ウイルス送達複合体またはナノ粒子を含む。一部の実施形態では、肝がんは、肝細胞癌、胆管癌、肝臓の血管肉腫（angiosarcoma）、または肝臓の血管肉腫（hemangiosarcoma）である。一部の実施形態では、肝がんの発生および／または進行に関与するタンパク質をコードする１つまたは複数の遺伝子には、これらに限定されないが、ＣＣＮＤ２、ＲＡＤ２３Ｂ、ＧＲＰ７８、ＣＥＰ１６４、ＭＤＭ２およびＡＬＤＨ２が、これらの変異型を含めて、含まれる。
【０１４５】
一部の実施形態では、本明細書に記載の方法のいずれかによれば、がんは、肝細胞癌（ＨＣＣ）である。一部の実施形態では、ＨＣＣは、早期ＨＣＣ、非転移性ＨＣＣ、原発性ＨＣＣ、進行ＨＣＣ、局所進行ＨＣＣ、転移性ＨＣＣ、寛解期のＨＣＣ、または再発ＨＣＣである。一部の実施形態では、ＨＣＣは、限局性切除可能（すなわち、完全な外科的除去が可能である肝臓の一部分に限定される腫瘍）であるか、限局性切除不能（すなわち、極めて重要な血管構造が冒されているため、もしくは肝臓が障害されるため、切除不能であり得る限局性腫瘍）であるか、または切除不能である（すなわち、腫瘍が、すべての肝臓葉が冒されている、および／または拡大して他の器官（例えば、肺、リンパ節、骨）が冒されている。一部の実施形態では、ＨＣＣは、ＴＮＭ分類に従って、ステージＩ腫瘍（血管浸潤のない単一の腫瘍）、ステージＩＩ腫瘍（血管浸潤を伴う単一の腫瘍、または５ｃｍより大きいものがない複数の腫瘍）、ステージＩＩＩ腫瘍（いずれも５ｃｍより大きい複数の腫瘍、または門脈もしくは肝静脈の主枝を冒している腫瘍）、ステージＩＶ腫瘍（胆嚢以外の隣接器官への直接浸潤、または臓側腹膜穿孔を伴う、腫瘍）、Ｎ１腫瘍（領域リンパ節転移）またはＭ１腫瘍（遠隔転移）である。一部の実施形態では、ＨＣＣは、ＡＪＣＣ（米国がん合同委員会（American  Joint  Commission  on  Cancer））ステージ分類基準に従って、ステージＴ１、Ｔ２、Ｔ３またはＴ４  ＨＣＣである。一部の実施形態では、ＨＣＣは、肝細胞癌、ＨＣＣの線維層板型バリアントおよび混合型肝細胞・胆管癌のいずれか１つである。一部の実施形態では、個体は、肝細胞癌に関連する遺伝子、遺伝子変異または多型（例えば、ＣＣＮＤ２、ＲＡＤ２３Ｂ、ＧＲＰ７８、ＣＥＰ１６４、ＭＤＭ２および／またはＡＬＤＨ２の変異または多型）を有するヒトであってもよく、または肝細胞癌に関連する遺伝子の１つもしくは複数の余分なコピーを有するヒトであってもよい。
【０１４６】
本明細書に記載の方法の一部の実施形態では、処置を予定している疾患は、肺がんである、がんであり、医薬組成物は、肺がんの発生および／または進行に関与するタンパク質をコードする１つまたは複数の遺伝子を標的とする１つまたは複数のウイルスを含む、ウイルス送達複合体またはナノ粒子を含む。一部の実施形態では、肺がんの発生および／または進行に関与するタンパク質をコードする１つまたは複数の遺伝子には、これらに限定されないが、ＳＡＳＨ１、ＬＡＴＳ１、ＩＧＦ２Ｒ、ＰＡＲＫ２、ＫＲＡＳ、ＰＴＥＮ、Ｋｒａｓ２、Ｋｒａｇ、Ｐａｓ１、ＥＲＣＣ１、ＸＰＤ、ＩＬ８ＲＡ、ＥＧＦＲ、Ｏｔ１−ＡＤ、ＥＰＨＸ、ＭＭＰ１、ＭＭＰ２、ＭＭＰ３、ＭＭＰ１２、ＩＬ１β、ＲＡＳおよびＡＫＴが、これらの変異型を含めて、含まれる。
【０１４７】
一部の実施形態では、本明細書に記載の方法のいずれかによれば、がんは、肺がんである。一部の実施形態では、肺がんは、非小細胞肺がん（ＮＳＣＬＣ）である。ＮＳＣＬＣの例としては、大細胞癌（例えば、大細胞神経内分泌癌、混合型大細胞神経内分泌癌、類基底細胞癌、リンパ上皮腫様癌、明細胞癌、およびラブドイド表現型を有する大細胞癌）、腺癌（例えば、腺房状、乳頭状（例えば、気管支肺胞癌、非粘液性、粘液性、粘液性と非粘液性の混合型、および不確定細胞型）、ムチンを伴う固形腺癌、混合亜型を伴う腺癌、高分化型胎児型腺癌、粘液性（膠様）腺癌、粘液性嚢胞腺癌、印環腺癌、および明細胞腺癌）、神経内分泌肺腫瘍、および扁平上皮癌（例えば、乳頭状、明細胞、小細胞、類基底のもの）が挙げられるが、これらに限定されない。一部の実施形態では、ＮＳＣＬＣは、ＴＮＭ分類に従って、ステージＴ腫瘍（原発性腫瘍）、ステージＮ腫瘍（領域リンパ節）、またはステージＭ腫瘍（遠隔転移）である。一部の実施形態では、肺がんは、カルチノイド（定型または非定型）、腺扁平上皮癌、円柱腫、または唾液腺の癌（例えば、腺様嚢胞癌または粘表皮癌）である。一部の実施形態では、肺がんは、多形性、肉腫様または肉腫性要素を伴う癌（例えば、紡錘および／もしくは巨細胞を伴う癌、紡錘細胞癌、巨細胞癌、癌肉腫、または肺芽腫）である。一部の実施形態では、がんは、小細胞肺がん（ＳＣＬＣ；燕麦細胞癌とも呼ばれる）である。小細胞肺がんは、限局期小細胞肺がんであってもよく、進展期小細胞肺がんであってもよく、または再発小細胞肺がんであってもよい。一部の実施形態では、個体は、肺がんに関連することが疑われるもしくは明らかにされた遺伝子、遺伝子変異もしくは多型（例えば、ＳＡＳＨ１、ＬＡＴＳ１、ＩＧＦ２Ｒ、ＰＡＲＫ２、ＫＲＡＳ、ＰＴＥＮ、Ｋｒａｓ２、Ｋｒａｇ、Ｐａｓ１、ＥＲＣＣ１、ＸＰＤ、ＩＬ８ＲＡ、ＥＧＦＲ、Ｏｔ１−ＡＤ、ＥＰＨＸ、ＭＭＰ１、ＭＭＰ２、ＭＭＰ３、ＭＭＰ１２、ＩＬ１  β、ＲＡＳおよび／もしくはＡＫＴの変異もしくは多型）を有するヒトであってもよく、または肺がんに関連する遺伝子の１つもしくは複数の余分なコピーを有するヒトであってもよい。
【０１４８】
本明細書に記載の方法の一部の実施形態では、処置を予定している疾患は、腎細胞癌（ＲＣＣ）である、がんであり、医薬組成物は、ＲＣＣの発生および／または進行に関与するタンパク質をコードする１つまたは複数の遺伝子を標的とする１つまたは複数のウイルスを含む、ウイルス送達複合体またはナノ粒子を含む。一部の実施形態では、ＲＣＣの発生および／または進行に関与するタンパク質をコードする１つまたは複数の遺伝子には、これらに限定されないが、ＶＨＬ、ＴＳＣ１、ＴＳＣ２、ＣＵＬ２、ＭＳＨ２、ＭＬＨ１、ＩＮＫ４ａ／ＡＲＦ、ＭＥＴ、ＴＧＦ−α、ＴＧＦ−β１、ＩＧＦ−Ｉ、ＩＧＦ−ＩＲ、ＡＫＴおよびＰＴＥＮが、これらの変異型を含めて、含まれる。
【０１４９】
一部の実施形態では、上記に記載の方法のいずれかによれば、がんは、腎細胞癌である。一部の実施形態では、腎細胞癌は、腺癌である。一部の実施形態では、腎細胞癌は、明細胞腎細胞癌、乳頭状腎細胞癌（好色素性腎細胞癌とも呼ばれる）、嫌色素性腎細胞癌、集合管腎細胞癌、顆粒腎細胞癌、混合顆粒腎細胞癌（mixed  granular  renal  cell  carcinoma）、腎血管筋脂肪腫、または腎紡錘細胞癌（spindle  renal  cell  carcinoma）である。一部の実施形態では、個体は、腎細胞癌に関連する遺伝子、遺伝子変異または多型（例えば、ＶＨＬ、ＴＳＣ１、ＴＳＣ２、ＣＵＬ２、ＭＳＨ２、ＭＬＨ１、ＩＮＫ４ａ／ＡＲＦ、ＭＥＴ、ＴＧＦ−α、ＴＧＦ−β１、ＩＧＦ−Ｉ、ＩＧＦ−ＩＲ、ＡＫＴおよび／またはＰＴＥＮの変異または多型）を有するヒトであってもよく、または腎細胞癌に関連する遺伝子の１つもしくは複数の余分なコピーを有するヒトであってもよい。一部の実施形態では、腎細胞癌は、（１）フォンヒッペル・リンダウ（ＶＨＬ）症候群、（２）遺伝性乳頭状腎癌（ＨＰＲＣ）、（３）バート・ホッグ・デュベ症候群（ＢＨＤＳ）に関連する家族性腎オンコサイトーマ（ＦＲＯ）、または（４）遺伝性腎癌（ＨＲＣ）に、関連している。一部の実施形態では、腎細胞癌は、米国がん合同委員会（American  Joint  Committee  on  Cancer）（ＡＪＣＣ）ステージ分類グループに従って、ステージＩ、ＩＩ、ＩＩＩまたはＩＶのいずれかである。一部の実施形態では、腎細胞癌は、ステージＩＶ腎細胞癌である。
【０１５０】
本明細書に記載の方法の一部の実施形態では、処置を予定している疾患は、中枢神経系（ＣＮＳ）腫瘍である、がんであり、医薬組成物は、ＣＮＳ腫瘍の発生および／または進行に関与するタンパク質をコードする１つまたは複数の遺伝子を標的とする１つまたは複数のウイルスを含む、ウイルス送達複合体またはナノ粒子を含む。一部の実施形態では、医薬組成物は、ＣＮＳ腫瘍に対する外科手術手技中または後（例えば、直後）に投与される。一部の実施形態では、外科手術手技は、ＣＮＳ腫瘍の切除である。一部の実施形態では、医薬組成物は、外科手術手技の結果として生じる術後腔に投与される。一部の実施形態では、ＣＮＳ腫瘍の発生および／または進行に関与するタンパク質をコードする１つまたは複数の遺伝子には、これらに限定されないが、ＮＦ１、ＮＦ２、ＳＭＡＲＣＢ１、ｐＶＨＬ、ＴＳＣ１、ＴＳＣ２、ｐ５３、ＣＨＫ２、ＭＬＨ１、ＰＭＳ２、ＰＴＣＨ、ＳＵＦＵおよびＸＲＣＣ７が、これらの変異型を含めて、含まれる。
【０１５１】
一部の実施形態では、本明細書に記載の方法のいずれかによれば、がんは、ＣＮＳ腫瘍である。一部の実施形態では、ＣＮＳ腫瘍は、神経膠腫（例えば、脳幹神経膠腫および混合型神経膠腫）、神経膠芽腫（多形神経膠芽腫としても公知）、星細胞腫（例えば、高悪性度星細胞腫）、小児神経膠腫もしくは神経膠芽腫（例えば、小児高悪性度神経膠腫（ＨＧＧ）およびびまん性内在性橋神経膠腫（ＤＩＰＧ））、ＣＮＳリンパ腫、胚細胞腫、髄芽腫、神経鞘腫、頭蓋咽頭腫、上衣腫、松果体腫、血管芽細胞腫、聴神経腫、乏突起神経膠腫、髄膜腫（menangioma）、神経芽細胞腫、網膜芽細胞腫、または脳転移である。一部の実施形態では、個体は、ＣＮＳ腫瘍に関連することが疑われるもしくは明らかにされた遺伝子、遺伝子変異または多型（例えば、ＮＦ１、ＮＦ２、ＳＭＡＲＣＢ１、ｐＶＨＬ、ＴＳＣ１、ＴＳＣ２、ｐ５３、ＣＨＫ２、ＭＬＨ１、ＰＭＳ２、ＰＴＣＨ、ＳＵＦＵおよびＸＲＣＣ７の変異もしくは多型）を有するヒトであってもよく、またはＣＮＳ腫瘍に関連する遺伝子の１つもしくは複数の余分なコピーを有するヒトであってもよい。
【０１５２】
本明細書に記載の方法の一部の実施形態では、処置を予定している疾患は、血液疾患であり、医薬組成物は、血液疾患（hematologic  disease）の発生および／または進行に関与するタンパク質をコードする１つまたは複数の遺伝子の配列および／または発現を修飾する１つまたは複数のウイルスを含む、ウイルス送達複合体またはナノ粒子を含む。一部の実施形態では、血液疾患は、ヘモグロビン異常症、例えば、鎌状赤血球症、サラセミアもしくはメトヘモグロビン血症、貧血、例えば、巨赤芽球性貧血、溶血性貧血（例えば、遺伝性球状赤血球症、遺伝性楕円赤血球症、先天性赤血球形成異常性貧血、グルコース−６−リン酸脱水素酵素欠損症、ピルビン酸キナーゼ欠損症、免疫介在性溶血性貧血、自己免疫性溶血性貧血、温式抗体自己免疫性溶血性貧血、全身性エリテマトーデス、エバンス症候群、寒冷自己免疫性溶血性貧血、寒冷凝集素症、発作性寒冷ヘモグロビン尿症、伝染性単核症、同種免疫性溶血性貧血、新生児溶血性疾患、もしくは発作性夜間ヘモグロビン尿症）、再生不良性貧血（例えば、ファンコニ貧血、ダイアモンド・ブラックファン貧血、もしくは後天性赤芽球癆）、骨髄異形成症候群、骨髄線維症、好中球減少症、無顆粒球症、グランツマン血小板無力症、血小板減少症、骨髄増殖性障害、例えば、真正赤血球増加症（polycethemia  vera）、赤血球増加症、白血球増加症もしくは血小板増加症、または凝血異常、例えば、再発性血栓症、播種性血管内凝固、血友病（例えば、血友病Ａ、血友病Ｂ、もしくは血友病Ｃ）、フォン・ヴィルブランド病、プロテインＳ欠乏症、抗リン脂質抗体症候群、またはウィスコット・オルドリッチ症候群である。一部の実施形態では、血液疾患の発生および／または進行に関与するタンパク質をコードする１つまたは複数の遺伝子には、これらに限定されないが、ＨＢＡ１、ＨＢＡ２、ＨＢＢ、ＰＲＯＣ、ＡＬＡＳ２、ＡＢＣＢ７、ＳＬＣ２５Ａ３８、ＭＴＴＰ、ＦＡＮＣＡ、ＦＡＮＣＢ、ＦＡＮＣＣ、ＦＡＮＣＤ１（ＢＲＣＡ２）、ＦＡＮＣＤ２、ＦＡＮＣＥ、ＦＡＮＣＦ、ＦＡＮＣＧ、ＦＡＮＣＩ、ＦＡＮＣＪ（ＢＲＩＰ１）、ＦＡＮＣＬ、ＦＡＮＣＭ、ＦＡＮＣＮ（ＰＡＬＢ２）、ＦＡＮＣＰ（ＳＬＸ４）、ＦＡＮＣＳ（ＢＲＣＡ１）、ＲＡＤ５１Ｃ、ＸＰＦ、ＡＮＫ１、ＳＰＴＢ、ＳＰＴＡ、ＳＬＣ４Ａ１、ＥＰＢ４２、およびＴＰＩ１が、これらの変異型を含めて、含まれる。
【０１５３】
本明細書に記載の方法の一部の実施形態では、処置を予定している疾患は、器官に基づいた疾患であり、医薬組成物は、器官に基づいた疾患の発生および／または進行に関与するタンパク質をコードする１つまたは複数の遺伝子の配列および／または発現を修飾する１つまたは複数のウイルスを含む、ウイルス送達複合体またはナノ粒子を含む。一部の実施形態では、器官に基づいた疾患は、眼、肝臓、肺、腎臓、心臓、神経系、筋肉または皮膚の疾患である。一部の実施形態では、疾患は、心血管疾患、例えば、冠動脈心疾患、高血圧症、心房細動、末梢動脈疾患、マルファン症候群、ＱＴ延長症候群、または先天性心臓欠陥である。一部の実施形態では、疾患は、消化器系疾患、例えば、過敏性腸症候群、潰瘍性大腸炎、クローン病、セリアック病、消化性潰瘍疾患、胃食道逆流症、または慢性膵炎である。一部の実施形態では、疾患は、泌尿器疾患、例えば、慢性前立腺炎、良性前立腺肥大症、または間質性膀胱炎である。一部の実施形態では、疾患は、筋骨格系疾患、例えば、変形性関節症、骨粗鬆症、骨形成不全症、または骨パジェット病である。一部の実施形態では、疾患は、皮膚疾患、例えば、湿疹、乾癬、ざ瘡、酒さ、または皮膚炎である。一部の実施形態では、疾患は、歯または頭蓋顔面障害、例えば、歯周病または側頭下顎関節および筋肉の障害（ＴＭＪＤ）である。
【０１５４】
本明細書に記載の方法の一部の実施形態では、処置を予定している疾患は、眼疾患であり、医薬組成物は、眼疾患の発生および／または進行に関与するタンパク質をコードする１つまたは複数の遺伝子の配列および／または発現を修飾する１つまたは複数のウイルスを含む、ウイルス送達複合体またはナノ粒子を含む。一部の実施形態では、眼疾患は、加齢黄斑変性など、未熟児網膜症、ポリープ状脈絡膜血管症、糖尿病性網膜症、糖尿病性黄斑浮腫、虚血性増殖性網膜症、網膜色素変性、錐体ジストロフィー、増殖性硝子体網膜症、網膜動脈閉塞、網膜静脈閉塞、角膜炎、結膜炎、ぶどう膜炎、レーバー病、網膜剥離、網膜色素上皮剥離、血管新生緑内障、角膜血管新生、網膜脈絡膜血管新生または遺伝性網膜疾患（ＲＰＥ６５媒介性ＩＲＤ、全脈絡膜萎縮症、ロドプシン関連常染色体優性網膜色素変性（ＲＨＯ−ａｄＲＰ）、レーバー遺伝性視神経症（ＬＨＯＮ）またはレーバー先天黒内障など）である。一部の実施形態では、眼疾患の発生および／または進行に関与するタンパク質をコードする１つまたは複数の遺伝子には、これらに限定されないが、Ｒｈｏ、ＰＤＥ６β、ＡＢＣＡ４、ＲＰＥ６５、ＬＲＡＴ、ＲＤＳ／ペリフェリン、ＭＥＲＴＫ、ＣＮＧＡ１、ＲＰＧＲ、ＩＭＰＤＨ１、ＣｈＲ２、ＧＵＣＹ２Ｄ、ＲＤＳ／ペリフェリン、ＡＩＰＬ１、ＡＢＣＡ４、ＲＰＧＲＩＰ１、ＩＭＰＤＨ１、ＡＩＰＬ１、ＧＵＣＹ２Ｄ、ＬＲＡＴ、ＭＥＲＴＫ、ＲＰＧＲＩＰ１、ＲＰＥ６５、ＣＥＰ２９０、ＡＢＣＡ４、ＤＦＮＢ３１、ＭＹＯ７Ａ、ＵＳＨ１Ｃ、ＣＤＨ２３、ＰＣＤＨ１５、ＵＳＨ１Ｇ、ＣＬＲＮ１、ＧＮＡＴ２、ＣＮＧＡ３、ＣＮＧＢ３、Ｒｓ１、ＯＡ１、ＭＴ−ＮＤ４、（ＯＣＡ１）、チロシナーゼ、ｐ２１  ＷＡＦ−１／ＯＣｉｐｌ、ＲＥＰ−１、ＰＤＧＦ、エンドスタチン、アンジオスタチン、ＶＥＧＦインヒビター、オプシン、ＯＰＮ１ＬＷ、アリールスルファターゼＢおよびβ−グルクロニダーゼが、これらの変異型を含めて、含まれる。
【０１５５】
本明細書に記載の方法の一部の実施形態では、処置を予定している疾患は、肝臓疾患であり、医薬組成物は、肝臓疾患の発生および／または進行に関与するタンパク質をコードする１つまたは複数の遺伝子の配列および／または発現を修飾する１つまたは複数のウイルスを含む、ウイルス送達複合体またはナノ粒子を含む。一部の実施形態では、肝臓疾患は、肝炎、脂肪肝疾患（アルコール性および非アルコール性）、ヘモクロマトーシス、ウィルソン病、進行性家族性肝内胆汁うっ滞３型、遺伝性果糖不耐症、糖原病ＩＶ型、チロシン血症Ｉ型、アルギニノコハク酸リアーゼ欠損症、シトリン欠損症（ＣＴＬＮ２、ＮＩＣＣＤ）、コレステリルエステル蓄積症、嚢胞性線維症、アルストレム症候群、先天性肝線維症、アルファ１アンチトリプシン欠損症、糖原病ＩＩ型、トランスサイレチン関連遺伝性アミロイドーシス、ジルベール症候群、肝硬変、原発性胆汁性肝硬変、原発性硬化性胆管炎または血友病（血友病Ａまたは血友病Ｂなど）である。一部の実施形態では、肝臓疾患の発生および／または進行に関与するタンパク質をコードする１つまたは複数の遺伝子には、これらに限定されないが、ＡＴＰ７Ｂ、ＡＢＣＢ４、ＡＬＤＯＢ、ＧＢＥ１、ＦＡＨ、ＡＳＬ、ＳＬＣ２５Ａ１３、ＬＩＰＡ、ＣＦＴＲ、ＡＬＭＳ１、ＨＦＥ、ＨＦＥ２、ＨＦＤＥ２Ｂ、ＨＦＥ３、ＳＬＣ１１Ａ３／ＳＬＣ４０Ａ１、セルロプラスミン、トランスフェリン、Ａ１ＡＴ、ＢＣＳ１Ｌ、Ｂ３ＧＡＴ１、Ｂ３ＧＡＴ２、Ｂ３ＧＡＴ３、ＵＧＴ１Ａ１、ＵＧＴ１Ａ３、ＵＧＴ１Ａ４、ＵＧＴ１Ａ５、ＵＧＴ１Ａ６、ＵＧＴ１Ａ７、ＵＧＴ１Ａ８、ＵＧＴ１Ａ９、ＵＧＴ１Ａ１０、ＵＧＴ２Ａ１、ＵＧＴ２Ａ２、ＵＧＴ２Ａ３、ＵＧＴ２Ｂ４、ＵＧＴ２Ｂ７、ＧＴ２Ｂ１０、ＵＧＴ２Ｂ１１、ＵＧＴ２Ｂ１５、ＵＧＴ２Ｂ１７、ＵＧＴ２Ｂ２８、第ＩＸ因子、および第ＶＩＩＩ因子が、これらの変異型を含めて、含まれる。
【０１５６】
本明細書に記載の方法の一部の実施形態では、処置を予定している疾患は、肺疾患であり、医薬組成物は、肺疾患の発生および／または進行に関与するタンパク質をコードする１つまたは複数の遺伝子の配列および／または発現を修飾する１つまたは複数のウイルスを含む、ウイルス送達複合体またはナノ粒子を含む。一部の実施形態では、肺疾患は、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、喘息、嚢胞性線維症、原発性線毛機能不全、肺線維症、バート・ホッグ・デュベ症候群、結節性硬化症、カルタゲナー症候群、α１−アンチトリプシン欠損症、肺毛細血管腫症（ＰＣＨ）、または遺伝性出血性毛細血管拡張症（hereditary  heamorrhagic  telangiectasia）である。一部の実施形態では、肺疾患の発生および／または進行に関与するタンパク質をコードする１つまたは複数の遺伝子には、これらに限定されないが、ＥＩＦ２ＡＫ４、ＩＲＥＢ２、ＨＨＩＰ、ＦＡＭ１３Ａ、ＩＬ１ＲＬ１、ＴＳＬＰ、ＩＬ３３、ＩＬ２５、ＣＦＴＲ、ＤＮＡＩ１、ＤＮＡＨ５、ＴＸＮＤＣ３、ＤＮＡＨ１１、ＤＮＡＩ２、ＫＴＵ、ＲＳＰＨ４Ａ、ＲＳＰＨ９、ＬＲＲＣ５０、ＴＥＲＣ、ＴＥＲＴ、ＳＦＴＰＣ、ＳＦＴＰＡ２、ＦＬＣＮ、ＴＳＣ１、ＴＳＣ２、Ａ１ＡＴ、ＥＮＧ、ＡＣＶＲＬ１、およびＭＡＤＨ４が、これらの変異型を含めて、含まれる。
【０１５７】
本明細書に記載の方法の一部の実施形態では、処置を予定している疾患は、腎臓疾患であり、医薬組成物は、腎臓疾患の発生および／または進行に関与するタンパク質をコードする１つまたは複数の遺伝子の配列および／または発現を修飾する１つまたは複数のウイルスを含む、ウイルス送達複合体またはナノ粒子を含む。一部の実施形態では、腎臓疾患は、嚢胞性腎臓疾患（例えば、常染色体優性多発性嚢胞腎疾患、常染色体劣性多発性嚢胞腎疾患、ネフロン癆、もしくは髄質海綿腎）、アルポート症候群、バーター症候群、先天性ネフローゼ症候群、爪膝蓋骨症候群、原発性免疫性糸球体腎炎、逆流性腎症、または溶血性尿毒症症候群である。一部の実施形態では、腎臓疾患の発生および／または進行に関与するタンパク質をコードする１つまたは複数の遺伝子には、これらに限定されないが、ＰＫＤ１、ＰＫＤ２、ＰＫＤ３、フィブロシスチン、ＮＰＨＰ１、ＮＰＨＰ２、ＮＰＨＰ３、ＮＰＨＰ４、ＮＰＨＰ５、ＮＰＨＰ６、ＮＰＨＰ７、ＮＰＨＰ８、ＮＰＨＰ９、ＮＰＨＰ１１、ＮＰＨＰ１１、ＮＰＨＰＬ１、ＧＤＮＦ、ＣＯＬ４Ａ５、ＣＯＬ４Ａ３、ＣＯＬ４Ａ４、ＳＬＣ１２Ａ２（ＮＫＣＣ２）、ＲＯＭＫ／ＫＣＮＪ１、ＣＬＣＮＫＢ、ＢＳＮＤ、ＣＡＳＲ、ＳＬＣ１２Ａ３（ＮＣＣＴ）、およびＡＤＡＭＴＳ１３が、これらの変異型を含めて、含まれる。
【０１５８】
本明細書に記載の方法の一部の実施形態では、処置を予定している疾患は、筋肉疾患であり、医薬組成物は、筋肉疾患の発生および／または進行に関与するタンパク質をコードする１つまたは複数の遺伝子の配列および／または発現を修飾する１つまたは複数のウイルスを含む、ウイルス送達複合体またはナノ粒子を含む。一部の実施形態では、筋肉疾患は、ミオパチー（例えば、ミトコンドリアミオパチー）、筋ジストロフィー（例えば、デュセンヌ型、ベッカー型、エミリー・ドレイフス型、顔面肩甲上腕型、筋強直性、先天性、遠位型、肢帯型、および眼咽頭型）、脳性麻痺、進行性骨化性線維異形成症、皮膚筋炎、コンパートメント症候群、重症筋無力症、筋萎縮性側索硬化症、横紋筋融解、多発性筋炎、線維筋痛症、筋強直、筋筋膜性疼痛症候群である。一部の実施形態では、筋肉疾患の発生および／または進行に関与するタンパク質をコードする１つまたは複数の遺伝子には、これらに限定されないが、ＤＭＤ、ＬＡＭＡ２、コラーゲンＶＩ（ＣＯＬ６Ａ１、ＣＯＬ６Ａ２、またはＣＯＬ６Ａ３）、ＰＯＭＴ１、ＰＯＭＴ２、ＦＫＴＮ、ＦＫＲＰ、ＬＡＲＧＥ１、ＰＯＭＧＮＴ１、ＩＳＰＤ、ＳＥＰＮ１、ＬＭＮＡ、ＤＹＳＦ、ＥＭＤ、ＤＵＸ４、ＤＭＰＫ、ＺＮＦ９、ＰＡＢＰＮ１、ＣＡＶ３、ＣＡＰＮ３、ＳＧＣＡ、ＳＧＣＢ、ＳＧＣＧ、ＳＧＣＤ、ＴＴＮ、ＡＮＯ５、ＤＮＡＪＢ６、ＨＮＲＮＰＤＬ、ＭＹＯＴ、ＴＣＡＰ、ＴＮＰＯ３、ＴＲＡＰＰＣ１１、およびＴＲＩＭ３２が、これらの変異型を含めて、含まれる。
【０１５９】
本明細書に記載の方法の一部の実施形態では、処置を予定している疾患は、神経系疾患（例えば、中枢神経系疾患）であり、医薬組成物は、神経系疾患の発生および／または進行に関与するタンパク質をコードする１つまたは複数の遺伝子の配列および／または発現を修飾する１つまたは複数のウイルスを含む、ウイルス送達複合体またはナノ粒子を含む。一部の実施形態では、神経系疾患は、副腎白質ジストロフィー、アンジェルマン症候群、毛細血管拡張性運動失調症、シャルコー・マリー・トゥース症候群、コケイン症候群、本態性振戦、脆弱Ｘ症候群、フリードライヒ運動失調症、ゴーシェ病、レッシュ・ナイハン症候群、メープルシロップ尿症、メンケス症候群、ナルコレプシー、神経線維腫症、ニーマン・ピック病、フェニルケトン尿症、プラダー・ウィリー症候群、レフサム病、レット症候群、脊髄性筋萎縮症、脊髄小脳失調症、タンジール病、テイ・サックス病、結節性硬化症、フォンヒッペル・リンダウ症候群、ウィリアムズ症候群、ウィルソン病、ツェルベーガー症候群、注意欠陥／多動性障害（ＡＤＨＤ）、自閉症、双極性障害、うつ病、てんかん、偏頭痛、多発性硬化症、脊髄症、アルツハイマー病、ハンチントン病、パーキンソン病、トゥレット症、ＣＬＮ２疾患（ＴＰＰ１欠損に起因するＣＬＮ２疾患など）またはムコ多糖症（ムコ多糖症Ｉ型（ＭＰＳ  Ｉ）またはムコ多糖症ＩＩ型（ＭＰＳ  ＩＩ）など）である。一部の実施形態では、神経系疾患の発生および／または進行に関与するタンパク質をコードする１つまたは複数の遺伝子には、これらに限定されないが、ＡＬＤ、ＰＳ１（ＡＤ３）、ＰＳ２（ＡＤ４）、ＳＯＤ１、ＵＢＥ３Ａ、ＡＴＭ、ＰＭＰ２２、ＭＰＺ、ＬＩＴＡＦ、ＥＧＲ２、ＭＦＮ２、ＫＩＦ１Ｂ、ＲＡＢ７Ａ、ＬＭＮＡ、ＴＲＰＶ４、ＢＳＣＬ２、ＧＡＲＳ、ＮＥＦＬ、ＨＳＰＢ１、ＧＤＡＰ１、ＨＳＰＢ８、ＭＴＭＲ２、ＳＢＦ２、ＳＨ３ＴＣ２、ＮＤＲＧ１、ＰＲＸ、ＦＧＤ４、ＦＩＧ４、ＤＮＭ２、ＹＡＲＳ、ＧＪＢ１、ＰＲＰＳ１、ＣＳＡ、ＣＳＢ、Ｃｘ２６、ＥＰＭ２Ａ、ＥＴＭ１（ＦＥＴ１）、ＥＴＭ２、ＦＭＲ１、フラタキシン、ＧＢＡ、ＨＴＴ、ＨＰＲＴ１、ＢＣＫＤＨ、ＡＴＰ７Ａ、ＡＴＰ７Ｂ、ＨＬＡ−ＤＱＢ１、ＨＬＡ−ＤＱＡ１、ＨＬＡ−ＤＲＢ１、ＮＦ１、ＮＦ２、ＳＭＰＤ１、ＮＰＣ１、ＮＰＣ２、ＬＲＲＫ２、ＰＡＲＫ７、ＰＩＮＫ１、ＰＲＫＮ、ＳＮＣＡ、ＵＣＨＬ１、ＰＡＨ、ＰＨＹＨ、ＰＥＸ７、ＭｅＣＰ２、ＳＭＮ１、ＡＴＸＮ遺伝子（例えば、ＡＴＸＮ１、ＡＴＸＮ２など）、ＡＢＣ１、ＨＥＸＡ、ＴＳＣ１、ＴＳＣ２、ＶＨＬ、ＣＬＩＰ２、ＥＬＮ、ＧＴＦ２Ｉ、ＧＴＦ２ＩＲＤ１、ＬＩＭＫ１、ＰＸＲ１、ＴＰＰ１、ＩＤＵＡ、およびＩＤＳが、これらの変異型を含めて、含まれる。
【０１６０】
本明細書に記載の方法の一部の実施形態では、処置を予定している疾患は、血液悪性腫瘍であるがんであり、医薬組成物は、血液悪性腫瘍の発生および／または進行に関与するタンパク質をコードする１つまたは複数の遺伝子の配列および／または発現を修飾する１つまたは複数のウイルスを含む、ウイルス送達複合体またはナノ粒子を含む。一部の実施形態では、血液悪性腫瘍の発症および／または進行に関与するタンパク質をコードする１つまたは複数の遺伝子には、これらに限定されないが、ＧＬＩ１、ＣＴＮＮＢ１、ｅＩＦ５Ａ、変異型ＤＤＸ３Ｘ、ヘキソキナーゼＩＩ、ヒストンメチルトランスフェラーゼＥＺＨ２、ＡＲＫ５、ＡＬＫ、ＭＵＣ１、ＨＭＧＡ２、ＩＲＦ１、ＲＰＮ１３、ＨＤＡＣ１１、Ｒａｄ５１、Ｓｐｒｙ２、ｍｉｒ−１４６ａ、ｍｉｒ−１４６ｂ、サバイビン、ＭＤＭ２、ＭＣＬ１、ＣＭＹＣ、ＸＢＰ１（スプライシングされたものおよびスプライシングされていないもの）、ＳＬＡＭＦ７、ＣＳ１、Ｅｒｂｂ４、Ｃｘｃｒ４（ワルデンストレームマクログロブリン血症）、Ｍｙｃ、Ｂｃｌ２、Ｐｒｄｘ１およびＰｒｄｘ２（バーキットリンパ腫）、Ｂｃｌ６、Ｉｄｈ１、Ｉｄｈ２、Ｓｍａｄ、Ｃｃｎｄ２、サイクリンｄ１〜２、Ｂ７−ｈ１（ｐｄｌ−１）およびＰｙｋ２が、これらの変異型を含めて、含まれる。
【０１６１】
本明細書に記載の方法の一部の実施形態では、処置を予定している疾患は、ウイルス感染性疾患であり、医薬組成物は、ウイルス感染性疾患の発生および／または進行に関与するタンパク質をコードする１つまたは複数の遺伝子の配列および／または発現を修飾する１つまたは複数のウイルスを含む、ウイルス送達複合体またはナノ粒子を含む。一部の実施形態では、ウイルス感染性疾患は、肝炎ウイルス、ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）、ピコルナウイルス、ポリオウイルス、エンテロウイルス、ヒトコクサッキーウイルス、インフルエンザウイルス、ライノウイルス、エコーウイルス、風疹ウイルス、脳炎ウイルス、狂犬病ウイルス、ヘルペスウイルス、パピローマウイルス、ポリオーマウイルス、ＲＳＶ、アデノウイルス、黄熱病ウイルス、デングウイルス、パラインフルエンザウイルス、出血性ウイルス、ポックスウイルス、水痘帯状疱疹ウイルス、パラインフルエンザウイルス、レオウイルス、オルビウイルス、ロタウイルス、パルボウイルス、アフリカブタ熱ウイルス、麻疹、ムンプスまたはノーウォークウイルスによる感染を特徴とする。一部の実施形態では、ウイルス感染性疾患は、ＣＭＶ、ＥＢＶ、ＨＢＶ、ＫＳＨＶ、ＨＰＶ、ＭＣＶ、ＨＴＬＶ−１、ＨＩＶ−１およびＨＣＶを含むがこれらに限定されない、発癌ウイルスによる感染を特徴とする。一部の実施形態では、ウイルス感染性疾患の発生および／または進行に関与するタンパク質をコードする１つまたは複数の遺伝子には、これらに限定されないが、ＲＳＶヌクレオカプシド、Ｐｒｅ−ｇｅｎ／Ｐｒｅ−Ｃ、Ｐｒｅ−Ｓ１、Ｐｒｅ−Ｓ２／Ｓ、Ｘ、ＨＢＶ保存配列、ＨＩＶ  Ｇａｇポリタンパク質（ｐ５５）、ＨＩＶ  Ｐｏｌポリタンパク質、ＨＩＶ  Ｇａｇ−Ｐｏｌ前駆体（ｐ１６０）、ＨＩＶマトリックスタンパク質（ＭＡ、ｐ１７）、ＨＩＶカプシドタンパク質（ＣＡ、ｐ２４）、ＨＩＶスペーサーペプチド１（ＳＰ１、ｐ２）、ＨＩＶヌクレオカプシドタンパク質（ＮＣ、ｐ９）、ＨＩＶスペーサーペプチド２（ＳＰ２、ｐ１）、ＨＩＶ  Ｐ６タンパク質、ＨＩＶ逆転写酵素（ＲＴ、ｐ５０）、ＨＩＶ  ＲＮアーゼＨ（ｐ１５）、ＨＩＶインテグラーゼ（ＩＮ、ｐ３１）、ＨＩＶプロテアーゼ（ＰＲ、ｐ１０）、ＨＩＶ  Ｅｎｖ（ｇｐ１６０）、ｇｐ１２０、ｇｐ４１、ＨＩＶトランス活性化因子（Ｔａｔ）、ＨＩＶビリオンタンパク質発現制御因子（Ｒｅｖ）、ＨＩＶレンチウイルスタンパク質Ｒ（Ｖｐｒ）、ＨＩＶ  Ｖｉｆ、ＨＩＶ陰性因子（negative  factor）（Ｎｅｆ）、ＨＩＶウイルスタンパク質Ｕ（Ｖｐｕ）、ヒトＣＣＲ５、ｍｉＲ−１２２、ＥＢＯＶポリメラーゼＬ、ＶＰ２４、ＶＰ４０、ＧＰ／ｓＧＰ、ＶＰ３０、ＶＰ３５、ＮＰＣ１およびＴＩＭ−１をコードする遺伝子が、これらの変異型を含めて、含まれる。
【０１６２】
本明細書に記載の方法の一部の実施形態では、処置を予定している疾患または状態は、自己免疫または炎症性の疾患または状態であり、医薬組成物は、自己免疫または炎症性の疾患または状態の発生および／または進行に関与するタンパク質をコードする１つまたは複数の遺伝子の配列および／または発現を修飾する１つまたは複数のウイルスを含む、ウイルス送達複合体またはナノ粒子を含む。一部の実施形態では、自己免疫または炎症性の疾患または状態は、ざ瘡、アレルギー、アナフィラキシー、喘息、セリアック病、憩質炎、糸球体腎炎、炎症性腸疾患、間質性膀胱炎、狼瘡、耳炎、骨盤内炎症性疾患、関節リウマチ、サルコイドーシス、または血管炎である。一部の実施形態では、自己免疫または炎症性の疾患または状態の発生および／または進行に関与するタンパク質をコードする１つまたは複数の遺伝子には、これらに限定されないが、補体系の分子をコードする遺伝子（ＣＤ４６、ＣＤ５９、ＣＦＢ、ＣＦＤ、ＣＦＨ、ＣＦＨＲ１、ＣＦＨＲ２、ＣＦＨＲ３、ＣＦＨＲ４、ＣＦＨＲ５、ＣＦＩ、ＣＦＰ、ＣＲ１、ＣＲ１Ｌ、ＣＲ２、Ｃ１ＱＡ、Ｃ１ＱＢ、Ｃ１ＱＣ、Ｃ１Ｒ、Ｃ１Ｓ、Ｃ２、Ｃ３、Ｃ３ＡＲ１、Ｃ４Ａ、Ｃ４Ｂ、Ｃ５、Ｃ５ＡＲ１、Ｃ６、Ｃ７、Ｃ８Ａ、Ｃ８Ｂ、Ｃ８Ｇ、Ｃ９、ＩＴＧＡＭ、ＩＴＧＡＸ、およびＩＴＧＢ２）が、これらの変異型を含めて、含まれる。
【０１６３】
本明細書に記載の方法の一部の実施形態では、処置を予定している疾患または状態は、リソソーム蓄積症であり、医薬組成物は、リソソーム蓄積症の発生および／または進行に関与するタンパク質をコードする１つまたは複数の遺伝子の配列および／または発現を修飾する１つまたは複数のウイルスを含む、ウイルス送達複合体またはナノ粒子を含む。一部の実施形態では、リソソーム蓄積症は、スフィンゴリピドーシス（例えば、ファーバー病、クラッベ病（乳児発症型、遅発型）、ガラクトシアリドーシス、ガングリオシドーシス（例えば、ファブリー病、シンドラー病、ＧＭ１ガングリオシドーシス（乳児型、若年型、成人型／慢性）、ＧＭ２ガングリオシドーシス（例えば、サンドホフ病（乳児、若年、成人発症型）、テイ・サックス））、ゴーシェ病（Ｉ型、ＩＩ型、ＩＩＩ型）、リソソーム酸性リパーゼ欠損症（早期発症型、遅発型）、ニーマン・ピック病（Ａ型、Ｂ型）、スルファチドーシス（例えば、異染性白質ジストロフィー（ＭＬＤ）、マルチプルスルファターゼ欠損症））、ムコ多糖症（例えば、ＭＰＳ  Ｉ型ハーラー症候群、ＭＰＳ  Ｉ  Ｓ型シャイエ症候群、ＭＰＳ  Ｉ  Ｈ−Ｓ型ハーラー・シャイエ症候群、ＩＩ型（ハンター症候群）、ＩＩＩ型（サンフィリポ症候群）、ＩＶ型（モルキオ）、ＶＩ型（マロトー・ラミー症候群）、ＶＩＩ型（スライ症候群）、ＩＸ型（ヒアルロニダーゼ欠損症））、ムコリピドーシス（例えば、Ｉ型（シアリドーシス）、ＩＩ型（Ｉ細胞病）、ＩＩＩ型（偽性ハーラー・ポリジストロフィー／ホスホトランスフェラーゼ欠損症）、ＩＶ型（ムコリピジン（Mucolipidin）１欠損症））、リピドーシス（例えば、ニーマン・ピック病（Ｃ型、Ｄ型）、神経セロイドリポフスチン症（Neuronal  Ceroid  Lipofuscinoses）、ウォルマン病）、アルファマンノシドーシス、ベータマンノシドーシス、アスパルチルグルコサミン尿症、フコシドーシス、リソソーム輸送障害（例えば、シスチン症、濃化異骨症、サラ病／シアル酸蓄積症、乳児遊離シアル酸蓄積症（ＩＳＳＤ））、コレステリルエステル蓄積症である。一部の実施形態では、リソソーム蓄積症の発生および／または進行に関与するタンパク質をコードする１つまたは複数の遺伝子には、これらに限定されないが、セラミダーゼ、アルファガラクトシダーゼ（Ａ、Ｂ）、ベータガラクトシダーゼ、ヘキソサミニダーゼＡ、スフィンゴミエリナーゼ、リソソーム酸性リパーゼ、サポシンＢ、スルファターゼ、ヒアルロニダーゼ、ホスホトランスフェラーゼ、ムコリピジン１、アスパルチルグルコサミニダーゼ、アルファ−Ｄ−マンノシダーゼ、ベータマンノシダーゼ、アルファ−Ｌ−フコシダーゼ、シスチノシン、カテプシンＫ、シアリン、ＳＬＣ１７Ａ５、酸性アルファグルコシダーゼ、ＬＡＭＰ２をコードする遺伝子が、これらの変異型を含めて、含まれる。
【０１６４】
本明細書に記載の方法の一部の実施形態では、処置を予定している疾患または状態は、糖原病であり、医薬組成物は、糖原病の発生および／または進行に関与するタンパク質をコードする１つまたは複数の遺伝子の配列および／または発現を修飾する１つまたは複数のウイルスを含む、ウイルス送達複合体またはナノ粒子を含む。一部の実施形態では、糖原病は、フォン・ギルーケ病、ポンペ病、コリ病もしくはフォーブス病、アンダーソン病、マッカードル病、ハース病、垂井病、ファンコニ・ビッケル症候群、または赤血球アルドラーゼ欠損症である。一部の実施形態では、糖原病の発生および／または進行に関与するタンパク質をコードする１つまたは複数の遺伝子には、これらに限定されないが、グリコーゲンシンターゼ、グルコース−６−ホスファターゼ、酸性アルファグルコシダーゼ、グリコーゲン脱分枝酵素、グリコーゲン分枝酵素、筋グリコーゲンホスホリラーゼ、肝グリコーゲンホスホリラーゼ、筋ホスホフルクトキナーゼ、ホスホリラーゼキナーゼ、グルコース輸送体、ＧＬＵＴ２、アルドラーゼＡおよびβ−エノラーゼをコードする遺伝子が、これらの変異型を含めて、含まれる。
【０１６５】
本明細書に記載の方法の一部の実施形態では、処置を予定している疾患または状態は、免疫不全症であり、医薬組成物は、糖原病の発生および／または進行に関与するタンパク質をコードする１つまたは複数の遺伝子の配列および／または発現を修飾する１つまたは複数のウイルスを含む、ウイルス送達複合体またはナノ粒子を含む。一部の実施形態では、糖原病は、フォン・ギルーケ病、ポンペ病、コリ病もしくはフォーブス病、アンダーソン病、マッカードル病、ハース病、垂井病、ファンコニ・ビッケル症候群、または赤血球アルドラーゼ欠損症である。一部の実施形態では、糖原病の発生および／または進行に関与するタンパク質をコードする１つまたは複数の遺伝子には、これらに限定されないが、グリコーゲンシンターゼ、グルコース−６−ホスファターゼ、酸性アルファグルコシダーゼ、グリコーゲン脱分枝酵素、グリコーゲン分枝酵素、筋グリコーゲンホスホリラーゼ、肝グリコーゲンホスホリラーゼ、筋ホスホフルクトキナーゼ、ホスホリラーゼキナーゼ、グルコース輸送体、ＧＬＵＴ２、アルドラーゼＡおよびβ−エノラーゼをコードする遺伝子が、これらの変異型を含めて、含まれる。
【０１６６】
本明細書に記載の方法の一部の実施形態では、処置を予定している状態は、異常なコレステロールレベル（例えば、異常に高いＬＤＬレベル、例えば、約１００ｍｇ／ｄＬより高いＬＤＬ、および／または異常に低いＨＤＬレベル、例えば、約４０〜５０ｍｇ／ｄＬより低いＨＤＬ）によって特徴付けされ、例えば、家族性高コレステロール血症（ホモ接合性家族性高コレステロール血症（ＨｏＦＨ）など）を含み、医薬組成物は、コレステロールの輸送および／または代謝に関与するタンパク質をコードする１つまたは複数の遺伝子の配列および／または発現を修飾する１つまたは複数のウイルスを含むウイルス送達複合体またはナノ粒子を含む。一部の実施形態では、コレステロールの輸送および／または代謝に関与するタンパク質をコードする１つまたは複数の遺伝子には、これらに限定されないが、低密度リポタンパク質（ＬＤＬ）受容体（ＬＤＬＲ）、アポリポタンパク質Ｂ（ＡｐｏＢ）、低密度リポタンパク質受容体アダプタータンパク質１（ＬＤＬＲＡＰ１）、およびＰＣＳＫ９が、これらの変異型を含めて、含まれる。
【０１６７】
一部の実施形態では、本明細書に記載のウイルス送達複合体またはナノ粒子は、ＬＤＬＲ発現を活性化するために使用される。一部の実施形態では、本明細書に記載のウイルス送達複合体またはナノ粒子は、ＬＤＬＲをコードする遺伝子における変異を修正するために使用される。一部の実施形態では、本明細書に記載のウイルス送達複合体またはナノ粒子は、ＬＤＬＲをコードする遺伝子を導入するために使用される。
【０１６８】
一部の実施形態では、本明細書に記載のウイルス送達複合体またはナノ粒子は、ＡｐｏＢ発現を活性化するために使用される。一部の実施形態では、本明細書に記載のウイルス送達複合体またはナノ粒子は、ＡｐｏＢをコードする遺伝子における変異を修正するために使用される。一部の実施形態では、本明細書に記載のウイルス送達複合体またはナノ粒子は、ＡｐｏＢをコードする遺伝子を導入するために使用される。
【０１６９】
一部の実施形態では、本明細書に記載のウイルス送達複合体またはナノ粒子は、ＬＤＬＲＡＰ１発現を活性化するために使用される。一部の実施形態では、本明細書に記載のウイルス送達複合体またはナノ粒子は、ＬＤＬＲＡＰ１をコードする遺伝子における変異を修正するために使用される。一部の実施形態では、本明細書に記載のウイルス送達複合体またはナノ粒子は、ＬＤＬＲＡＰ１をコードする遺伝子を導入するために使用される。
【０１７０】
一部の実施形態では、本明細書に記載のウイルス送達複合体またはナノ粒子は、遺伝子ノックアウトによるなど、ＰＣＳＫ９発現を抑止するために使用される。
【０１７１】
本明細書に記載の方法の一部の実施形態では、処置を予定している疾患は、遺伝性疾患などの遺伝子疾患であり、医薬組成物は、遺伝子疾患の発生および／または進行に関与するタンパク質をコードする１つまたは複数の遺伝子の配列および／または発現を修飾する１つまたは複数のウイルスを含む、ウイルス送達複合体またはナノ粒子を含む。一部の実施形態では、ウイルスは、遺伝子疾患の発生および／または進行に関与するタンパク質をコードする１つまたは複数の遺伝子の変異を修正する。一部の実施形態では、遺伝子疾患は、２２ｑ１１．２欠失症候群、軟骨無形成症、アルファ−１アンチトリプシン欠損症、アンジェルマン症候群、常染色体優性多発性嚢胞腎疾患、乳がん、カナバン病、シャルコー・マリー・トゥース病、結腸がん、色覚異常、嚢胞性線維症、デュシェンヌ型筋ジストロフィー、第Ｖ因子ライデン血栓形成傾向、家族性地中海熱、脆弱Ｘ症候群、ゴーシェ病、ヘモクロマトーシス、血友病、ハンチントン病、マルファン症候群、筋強直性ジストロフィー、骨形成不全症、パーキンソン病、フェニルケトン尿症、多発性嚢胞腎疾患、ポルフィリン症、プラダー・ウィリー症候群、早老症、ＳＣＩＤ、鎌状赤血球症、脊髄性筋萎縮症、テイ・サックス病、サラセミア、トリメチルアミン、およびウィルソン病を含むが、これらに限定されない。一部の実施形態では、遺伝子疾患の発生および／または進行に関与する遺伝子には、これらに限定されないが、ＡＡＴ、ＡＤＡ、ＡＬＡＤ、ＡＬＡＳ２、ＡＰＣ、ＡＳＰＭ、ＡＴＰ７Ｂ、ＢＤＮＦ、ＢＲＣＡ１、ＢＲＣＡ２、ＣＦＴＲ、ＣＯＬ１Ａ１、ＣＯＬ１Ａ２、ＣＯＭＴ、ＣＮＢＰ、ＣＰＯＸ、ＣＲＥＢＢＰ、ＣＲＨ、ＣＲＴＡＰ、ＣＸＣＲ４、ＤＨＦＲ、ＤＭＤ、ＤＭＰＫ、Ｆ５、ＦＢＮ１、ＦＥＣＨＦＧＦＲ３、ＦＧＲ３、ＦＩＸ、ＦＶＩＩＩ、ＦＭＯ３、ＦＭＲ１、ＧＡＲＳ、ＧＢＡ、ＨＢＢ、ＨＥＸＡ、ＨＦＥ、ＨＭＢＳ、ＨＴＴ、ＩＬ２ＲＧ、ＫＲＴ１４、ＫＲＴ５、ＬＭＮＡ、ＬＲＲＫ２、ＭＥＦＶ、ＭＬＨ１、ＭＳＨ２、ＭＳＨ６、ＰＡＨ、ＰＡＲＫ２、ＰＡＲＫ３、ＰＡＲＫ７、ＰＧＬ２、ＰＨＦ８、ＰＩＮＫ１、ＰＫＤ１、ＰＫＤ２、ＰＭＳ１、ＰＭＳ２、ＰＰＯＸ、ＲＨＯ、ＳＤＨＢ、ＳＤＨＣ、ＳＤＨＤ、ＳＭＮＩ、ＳＮＣＡ、ＳＲＹ、ＴＳＣ１、ＴＳＣ２、ＵＣＨＬ１、ＵＲＯＤ、ＵＲＯＳ、ＭＥＦＶ、ＡＰＰ、ＧＡＳＴ、ＩＮＳ、ＬＣＫ、ＬＥＰ、ＬＩＦ、ＭＣＭ６、ＭＹＨ７、ＭＹＯＤ１、ＮＰＰＢ、ＯＳＭ、ＰＫＣ、ＰＩＰ、ＳＬＣ１８Ａ２、ＴＢＸ１、トランスサイレチン、ＭＤＳ１−ＥＶＩ１、ＰＲＤＭ１６、ＳＥＴＢＰ１、β−グロビンおよびＬＰＬが、これらの変異型を含めて、含まれる。
【０１７２】
本明細書に記載の方法の一部の実施形態では、処置を予定している疾患は、老化または変性疾患であり、医薬組成物は、老化または変性疾患の発生および／または進行に関与するタンパク質をコードする１つまたは複数の遺伝子の配列および／または発現を修飾する１つまたは複数のウイルスを含む、ウイルス送達複合体またはナノ粒子を含む。一部の実施形態では、老化または変性疾患の発生および／または進行に関与するタンパク質をコードする１つまたは複数の遺伝子には、これらに限定されないが、ケラチンＫ６Ａ、ケラチンＫ６Ｂ、ケラチン１６、ケラチン１７、ｐ５３、β−２アドレナリン作用性受容体（ＡＤＲＢ２）、ＴＲＰＶ１、ＶＥＧＦ、ＶＥＧＦＲ、ＨＩＦ−１およびカスパーゼ−２が、これらの変異型を含めて、含まれる。
【０１７３】
本明細書に記載の方法の一部の実施形態では、処置を予定している疾患は、線維性または炎症性疾患であり、医薬組成物は、線維性または炎症性疾患の発生および／または進行に関与するタンパク質をコードする１つまたは複数の遺伝子の配列および／または発現を修飾する１つまたは複数のウイルスを含む、ウイルス送達複合体またはナノ粒子を含む。一部の実施形態では、線維性または炎症性疾患の発生および／または進行に関与するタンパク質をコードする１つまたは複数の遺伝子には、ＳＰＡＲＣ、ＣＴＧＦ、ＴＧＦβ１、ＴＧＦβ受容体１、ＴＧＦβ受容体２、ＴＧＦβ受容体３、ＶＥＧＦ、アンジオテンシンＩＩ、ＴＩＭＰ、ＨＳＰ４７、トロンボスポンジン、ＣＣＮ１、ＬＯＸＬ２、ＭＭＰ２、ＭＭＰ９、ＣＣＬ２、アデノシン受容体Ａ２Ａ、アデノシン受容体Ａ２Ｂ、アデニリルシクラーゼ、Ｓｍａｄ  ３、Ｓｍａｄ  ４、Ｓｍａｄ  ７、ＳＯＸ９、アレスチン、ＰＤＣＤ４、ＰＡＩ−１、ＮＦ−κＢおよびＰＡＲＰ−１（これらの変異型を含めて）からなる群から選択される。
【０１７４】
本明細書に記載の方法の一部の実施形態では、医薬組成物は、疾患または状態に関与する１つまたは複数のｍｉＲＮＡの発現を調節する１つまたは複数のウイルスを含む、ウイルス送達複合体またはナノ粒子を含む。一部の実施形態では、疾患または状態は、Ｂ型肝炎、Ｃ型肝炎、多発性肝嚢胞および多発性嚢胞腎疾患、がん、心血管疾患、心不全、心肥大、神経発達疾患、脆弱Ｘ症候群、レット症候群、ダウン症候群、アルツハイマー病、ハンチントン病、統合失調症、炎症性疾患、関節リウマチ、全身性エリテマトーデス、乾癬、および骨格筋疾患を含むが、これらに限定されない。一部の実施形態では、１つまたは複数のｍｉＲＮＡには、これらに限定されないが、ｈａｓ−ｍｉｒ−１２６＊、Ｈａｓ−ｍｉＲ−１９１、ｈａｓ−ｍｉｒ−２０５、ｈａｓ−ｍｉｒ−２１、ｈｓａ−ｌｅｔ−７ａ−２、ｌｅｔ−７ファミリー、ｌｅｔ−７ｃ、ｌｅｔ−７ｆ−１、ｍｉＲ−１、ｍｉＲ−１００、ｍｉＲ−１０３、ｍｉＲ−１０３−１、ｍｉＲ−１０６ｂ−２５、ｍｉＲ−１０７、ｍｉＲ−１０ｂ、ｍｉＲ−１１２、ｍｉＲ−１２２、ｍｉＲ−１２５ｂ、ｍｉＲ−１２５ｂ−２、ｍｉＲ１２５ｂｌ、ｍｉＲ−１２６、ｍｉＲ−１２８ａ、ｍＩＲ−１３２、ｍｉＲ−１３３、ｍｉＲ−１３３ｂ、ｍｉＲ１３５、ｍｉＲ−１４０、ｍｉＲ−１４１、ｍｉＲ−１４２−３ｐ、ｍｉＲ１４３、ｍｉＲ−１４３、ｍｉＲ１４５、ｍｉＲ−１４５、ｍｉＲ−１４６、ｍｉＲ−１４６ｂ、ｍｉＲ１５０、ｍｉＲ−１５５、ｍｉＲ−１５ａ、ｍｉＲ−１５ｂ、ｍｉＲ１６、ｍｉＲ−１６、ｍｉＲ−１７−１９ファミリー、ｍｉＲ−１７３ｐ、ｍｉＲ１７−５ｐ、ｍｉＲ−１７−５ｐ、ｍｉＲ−１７−９２、ｍｉＲ−１８１ａ、ｍｉＲ−１８１ｂ、ｍｉＲ−１８４、ｍｉＲ−１８５、ｍｉＲ−１８９、ｍｉＲ−１８ａ、ｍｉＲ−１９１、ｍｉＲ−１９２、ｍｉＲ−１９３ａ、ｍｉＲ−１９３ｂ、ｍｉＲ−１９４、ｍｉＲ−１９５、ｍｉＲ−１９６ａ、ｍｉＲ−１９８、ｍｉＲ−１９９、ｍｉＲ−１９９ａ、ｍｉＲ−１９ａ、ｍｉＲ−１９ｂ−１、ｍｉＲ２００ａ、ｍｉＲ−２００ａ、ｍｉＲ−２００ｂ、ｍｉＲ２００ｃ、ｍｉＲ−２００ｃ、ｍｉＲ−２０３、ｍｉＲ−２０５、ｍｉＲ−２０８、ｍｉＲ−２０ａ、ｍｉＲ−２１、ｍｉＲ−２１４、ｍｉＲ−２２１、ｍｉＲ−２２２、ｍｉＲ−２２３、ｍｉＲ−２２４、ｍｉＲ−２３、ｍｉＲ−２３ａ、ｍｉＲ−２３ｂ、ｍｉＲ−２４、ｍｉＲ−２６ａ、ｍｉＲ−２６ｂ、ｍｉＲ−２７ｂ、ｍｉＲ−２９、ｍｉＲ−２９８、ｍｉＲ−２９９−３ｐ、ｍｉＲ−２９ｃ、ｍｉＲ−３０ａ−５ｐ、ｍｉＲ−３０ｃ、ｍｉＲ−３０ｄ、ｍｉＲ−３０ｅ−５ｐ、ｍｉＲ３１、ｍｉＲ−３４、ｍｉＲ３４２、ｍｉＲ−３８１、ｍｉＲ−３８２、ｍｉＲ−３８３、ｍｉＲ−４０９−３ｐ、ｍｉＲ−４５、ｍｉＲ−６１、ｍｉＲ−７８、ｍｉＲ−８０２、ｍｉＲ−９、ｍｉＲ−９２ａ−１、ｍｉＲ−９９ａ、ｍｉＲ−ｌｅｔ７、ｍｉＲ−ｌｅｔ７ａおよびｍｉＲ−ｌｅｔ７ｇが含まれる。
【０１７５】
本明細書に記載の方法の一部の実施形態では、医薬組成物は、個体に、静脈内、腫瘍内、動脈内、局所、眼内、眼科的、門脈内、頭蓋内、脳内、脳室内、髄腔内、膀胱内、皮内、皮下、筋肉内、鼻腔内、気管内、肺、腔内または経口投与のいずれかによって投与される。
【０１７６】
本明細書に記載の方法の一部の実施形態では、個体は、哺乳動物である。一部の実施形態では、個体はヒトである。
細胞送達方法
【０１７７】
一部の実施形態では、１つまたは複数のウイルスを細胞に送達する方法であって、細胞を本明細書に記載のウイルス送達複合体またはナノ粒子と接触させるステップを含み、複合体またはナノ粒子が、１つまたは複数のウイルスを含む、方法が提供される。一部の実施形態では、複合体またはナノ粒子は、ＰＥＰ−１ペプチド、ＰＥＰ−２ペプチド、ＶＥＰＥＰ−３ペプチド、ＶＥＰＥＰ−６ペプチド、ＶＥＰＥＰ−９ペプチドまたはＡＤＧＮ−１００ペプチドのアミノ酸配列を含む、ＣＰＰを含む。一部の実施形態では、細胞を複合体またはナノ粒子と接触させるステップは、ｉｎ  ｖｉｖｏで行われる。一部の実施形態では、細胞を複合体またはナノ粒子と接触させるステップは、ｅｘ  ｖｉｖｏで行われる。一部の実施形態では、細胞を複合体またはナノ粒子と接触させるステップは、ｉｎ  ｖｉｔｒｏで行われる。一部の実施形態では、細胞は、不死化細胞、例えば、細胞系からの細胞である。一部の実施形態では、細胞は、初代細胞、例えば、個体からの細胞である。一部の実施形態では、細胞は、免疫細胞、例えば、顆粒球、マスト細胞、単球、樹状細胞、Ｂ細胞、Ｔ細胞、またはナチュラルキラー細胞である。一部の実施形態では、細胞は、末梢血由来Ｔ細胞、セントラルメモリーＴ細胞、臍帯血由来Ｔ細胞、または造血幹細胞もしくは他の前駆細胞である。一部の実施形態では、Ｔ細胞は、不死化Ｔ細胞、例えば、Ｔ細胞系からのＴ細胞である。一部の実施形態では、Ｔ細胞は、初代Ｔ細胞、例えば、個体のＴ細胞である。一部の実施形態では、細胞は、Ｔ細胞であり、接触させるステップは、Ｔ細胞を活性化した後に行われる。一部の実施形態では、細胞は、Ｔ細胞であり、接触させるステップは、Ｔ細胞を活性化してから少なくとも１２時間（例えば、少なくとも約１２時間、１日、２日、３日、４日、５日、６日、またはそれより長い時間のうちのいずれか）後に行われる。一部の実施形態では、Ｔ細胞は、抗ＣＤ３／ＣＤ２８試薬（例えば、マイクロビーズ）を使用して活性化される。一部の実施形態では、細胞は、線維芽細胞である。一部の実施形態では、線維芽細胞は、初代線維芽細胞、例えば、個体の線維芽細胞である。一部の実施形態では、細胞は、筋肉細胞である。一部の実施形態では、細胞は、心臓細胞である。一部の実施形態では、細胞は、肝細胞である。一部の実施形態では、肝細胞は、個体の肝細胞など、初代（primary）肝細胞である。一部の実施形態では、細胞は、ヒト肺前駆細胞（ＬＰＣ）である。一部の実施形態では、細胞は、神経細胞である。一部の実施形態では、ウイルスは、組換えＡＡＶ、アデノウイルス、レンチウイルス、レトロウイルス、ＨＳＶ、ポックスウイルス、ＥＢＶ、ワクシニアウイルスおよびｈＣＭＶを含む。一部の実施形態では、ウイルスは、疾患、例えば、本明細書に記載の処置を予定している疾患のいずれか（例えば、がん、糖尿病、自己免疫性疾患、炎症性疾患、線維性疾患、ウイルス感染性疾患、遺伝性疾患、眼疾患、ならびに老化および変性疾患）の処置に有用である。一部の実施形態では、複合体またはナノ粒子は、１つまたは複数の追加のウイルスをさらに含む。一部の実施形態では、追加のウイルスは、疾患の処置に有用である。
【０１７８】
したがって、一部の実施形態では、１つまたは複数のウイルスを細胞に送達する方法であって、細胞を本明細書に記載のウイルス送達複合体またはナノ粒子と接触させるステップを含み、ウイルス送達複合体またはナノ粒子が、１つまたは複数のウイルスと、ＰＥＰ−１ペプチド、ＰＥＰ−２ペプチド、ＶＥＰＥＰ−３ペプチド、ＶＥＰＥＰ−６ペプチド、ＶＥＰＥＰ−９ペプチドまたはＡＤＧＮ−１００ペプチドのアミノ酸配列を含むＣＰＰとを含む、方法が提供される。一部の実施形態では、ＶＥＰＥＰ−３ペプチドは、配列番号１〜１４、７５および７６のうちのいずれか１つのアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＶＥＰＥＰ−６ペプチドは、配列番号１５〜４０および７７のうちのいずれか１つのアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＶＥＰＥＰ−９ペプチドは、配列番号４１〜５２および７８のうちのいずれか１つのアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＡＤＧＮ−１００ペプチドは、配列番号５３〜７０、７９および８０のうちのいずれか１つのアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ウイルスは、組換えＡＡＶ、アデノウイルス、レンチウイルス、レトロウイルス、ＨＳＶ、ポックスウイルス、ＥＢＶ、ワクシニアウイルスおよびｈＣＭＶを含む組換えウイルスである。一部の実施形態では、組換えウイルスは、細胞ゲノム内への挿入のための導入遺伝子を含む。一部の実施形態では、導入遺伝子は、治療用導入遺伝子である。一部の実施形態では、導入遺伝子は、治療用タンパク質などのタンパク質をコードする。一部の実施形態では、導入遺伝子は、内因性遺伝子、例えば、疾患関連内因性遺伝子を標的とする阻害性ＲＮＡ（ＲＮＡｉ）などのＲＮＡｉをコードする。一部の実施形態では、導入遺伝子は、ＣＡＲをコードする。一部の実施形態では、複合体またはナノ粒子は、ＲＮＡｉをコードする第１の導入遺伝子およびタンパク質をコードする第２の導入遺伝子を含む１つまたは複数のウイルスを含む。一部の実施形態では、ＲＮＡｉは、疾患または状態に関与する内因性遺伝子を標的とする治療用ＲＮＡｉであり、タンパク質は、疾患または状態を処置するために有用な治療用タンパク質である。一部の実施形態では、治療用ＲＮＡｉは、内因性遺伝子の疾患関連形態（例えば、変異体タンパク質をコードする遺伝子、またはタンパク質の異常発現をもたらす遺伝子）を標的とし、第２の導入遺伝子は、内因性遺伝子の治療形態である（例えば、第２の導入遺伝子は、変異体タンパク質の野生型もしくは機能形態をコードする、または第２の導入遺伝子は、タンパク質の正常発現をもたらす）。一部の実施形態では、複合体またはナノ粒子は、第１の導入遺伝子を含む第１のウイルスおよび第２の導入遺伝子を含む第２のウイルスを含む。一部の実施形態では、複合体またはナノ粒子は、第１の導入遺伝子および第２の導入遺伝子を含む単一のウイルスを含む。一部の実施形態では、細胞を複合体またはナノ粒子と接触させるステップは、ｉｎ  ｖｉｖｏで行われる。一部の実施形態では、細胞を複合体またはナノ粒子と接触させるステップは、ｅｘ  ｖｉｖｏで行われる。一部の実施形態では、細胞を複合体またはナノ粒子と接触させるステップは、ｉｎ  ｖｉｔｒｏで行われる。一部の実施形態では、細胞は、不死化細胞、例えば、細胞系からの細胞である。一部の実施形態では、細胞は、初代細胞、例えば、個体からの細胞である。一部の実施形態では、細胞は、免疫細胞、例えば、顆粒球、マスト細胞、単球、樹状細胞、Ｂ細胞、Ｔ細胞、またはナチュラルキラー細胞である。一部の実施形態では、Ｔ細胞は、不死化Ｔ細胞、例えば、Ｔ細胞系からのＴ細胞である。一部の実施形態では、Ｔ細胞は、初代Ｔ細胞、例えば、個体のＴ細胞である。一部の実施形態では、細胞は、線維芽細胞である。一部の実施形態では、線維芽細胞は、初代線維芽細胞、例えば、個体の線維芽細胞である。一部の実施形態では、細胞は、筋肉細胞である。一部の実施形態では、細胞は、心臓細胞である。一部の実施形態では、細胞は、肝細胞である。一部の実施形態では、肝細胞は、初代肝細胞、例えば、個体の肝細胞である。一部の実施形態では、細胞は、ヒト肺前駆細胞（ＬＰＣ）である。一部の実施形態では、細胞は、神経細胞である。一部の実施形態では、ウイルスは、疾患、例えば、本明細書に記載の処置を予定している疾患のいずれか（例えば、がん、糖尿病、自己免疫性疾患、炎症性疾患、線維性疾患、ウイルス感染性疾患、遺伝性疾患、眼疾患、ならびに老化および変性疾患）の処置に有用である。一部の実施形態では、ウイルスは、疾患、例えば、本明細書に記載の処置を予定している疾患のいずれか（例えば、がん、糖尿病、自己免疫性疾患、炎症性疾患、線維性疾患、ウイルス感染性疾患、遺伝性疾患、眼疾患、ならびに老化および変性疾患）に関与するタンパク質の調節に有用である。一部の実施形態では、細胞膜透過ペプチドは、ＡＤＧＮ−１００ペプチドまたはＶＥＰＥＰ−３ペプチドである。
【０１７９】
一部の実施形態では、１つまたは複数のウイルスをＴ細胞に送達する方法であって、細胞を本明細書に記載のウイルス送達複合体またはナノ粒子と接触させるステップを含み、複合体またはナノ粒子が、１つまたは複数のウイルスと、ＰＥＰ−１ペプチド、ＰＥＰ−２ペプチド、ＰＥＰ−３ペプチド、ＶＥＰＥＰ−３ペプチド、ＶＥＰＥＰ−６ペプチド、ＶＥＰＥＰ−９ペプチドおよびＡＤＧＮ−１００ペプチドからなる群から選択されるＣＰＰとを含む、方法が提供される。一部の実施形態では、Ｔ細胞を複合体またはナノ粒子と接触させるステップは、ｉｎ  ｖｉｖｏで行われる。一部の実施形態では、Ｔ細胞を複合体またはナノ粒子と接触させるステップは、ｅｘ  ｖｉｖｏで行われる。一部の実施形態では、Ｔ細胞を複合体またはナノ粒子と接触させるステップは、ｉｎ  ｖｉｔｒｏで行われる。一部の実施形態では、Ｔ細胞は、不死化Ｔ細胞、例えば、Ｔ細胞系からのＴ細胞である。一部の実施形態では、Ｔ細胞は、初代Ｔ細胞、例えば、個体のＴ細胞である。一部の実施形態では、１つまたは複数のウイルスは、組換えＡＡＶ、アデノウイルス、レンチウイルス、レトロウイルス、ＨＳＶ、ポックスウイルス、ＥＢＶ、ワクシニアウイルスおよびｈＣＭＶを含む。一部の実施形態では、ウイルスは、本明細書に記載の処置を予定している疾患のいずれかなど、疾患の処置に有用である。一部の実施形態では、複合体またはナノ粒子は、１つまたは複数の追加のウイルスをさらに含む。一部の実施形態では、追加のウイルスは、疾患の処置に有用である。
【０１８０】
一部の実施形態では、線維芽細胞に１つまたは複数のウイルスを送達する方法であって、線維芽細胞を本明細書に記載のウイルス送達複合体またはナノ粒子と接触させるステップを含み、複合体またはナノ粒子が、１つまたは複数のウイルスと、ＰＥＰ−１ペプチド、ＰＥＰ−２ペプチド、ＰＥＰ−３ペプチド、ＶＥＰＥＰ−３ペプチド、ＶＥＰＥＰ−６ペプチド、ＶＥＰＥＰ−９ペプチドおよびＡＤＧＮ−１００ペプチドからなる群から選択されるＣＰＰとを含む、方法が提供される。一部の実施形態では、線維芽細胞を複合体またはナノ粒子と接触させるステップは、ｉｎ  ｖｉｖｏで行われる。一部の実施形態では、線維芽細胞を複合体またはナノ粒子と接触させるステップは、ｅｘ  ｖｉｖｏで行われる。一部の実施形態では、線維芽細胞を複合体またはナノ粒子と接触させるステップは、ｉｎ  ｖｉｔｒｏで行われる。一部の実施形態では、線維芽細胞は、不死化線維芽細胞、例えば、線維芽細胞系からの線維芽細胞である。一部の実施形態では、線維芽細胞は、初代線維芽細胞、例えば、個体の線維芽細胞である。一部の実施形態では、１つまたは複数のウイルスは、組換えＡＡＶ、アデノウイルス、レンチウイルス、レトロウイルス、ＨＳＶ、ポックスウイルス、ＥＢＶ、ワクシニアウイルスおよびｈＣＭＶを含む。一部の実施形態では、ウイルスは、本明細書に記載の処置を予定している疾患のいずれかなど、疾患の処置に有用である。一部の実施形態では、複合体またはナノ粒子は、１つまたは複数の追加のウイルスをさらに含む。一部の実施形態では、追加のウイルスは、疾患の処置に有用である。
【０１８１】
一部の実施形態では、１つまたは複数のウイルスを肝細胞に送達する方法であって、肝細胞を本明細書に記載のウイルス送達複合体またはナノ粒子と接触させるステップを含み、複合体またはナノ粒子が、１つまたは複数のウイルスと、ＰＥＰ−１ペプチド、ＰＥＰ−２ペプチド、ＰＥＰ−３ペプチド、ＶＥＰＥＰ−３ペプチド、ＶＥＰＥＰ−６ペプチド、ＶＥＰＥＰ−９ペプチドおよびＡＤＧＮ−１００ペプチドからなる群から選択されるＣＰＰとを含む、方法が提供される。一部の実施形態では、肝細胞を複合体またはナノ粒子と接触させるステップは、ｉｎ  ｖｉｖｏで行われる。一部の実施形態では、肝細胞を複合体またはナノ粒子と接触させるステップは、ｅｘ  ｖｉｖｏで行われる。一部の実施形態では、肝細胞を複合体またはナノ粒子と接触させるステップは、ｉｎ  ｖｉｔｒｏで行われる。一部の実施形態では、肝細胞は、不死化肝細胞、例えば、肝細胞系からの肝細胞である。一部の実施形態では、肝細胞は、初代肝細胞、例えば、個体の肝細胞である。一部の実施形態では、１つまたは複数のウイルスは、組換えＡＡＶ、アデノウイルス、レンチウイルス、レトロウイルス、ＨＳＶ、ポックスウイルス、ＥＢＶ、ワクシニアウイルスおよびｈＣＭＶを含む。一部の実施形態では、ウイルスは、本明細書に記載の処置を予定している疾患のいずれかなど、疾患の処置に有用である。一部の実施形態では、複合体またはナノ粒子は、１つまたは複数の追加のウイルスをさらに含む。一部の実施形態では、追加のウイルスは、疾患の処置に有用である。
【０１８２】
一部の実施形態では、１つまたは複数のウイルスを個体の細胞に送達する方法であって、個体に本明細書に記載のウイルス送達複合体またはナノ粒子を含む組成物を投与するステップを含み、複合体またはナノ粒子が、１つまたは複数のウイルスと、ＰＥＰ−１ペプチド、ＰＥＰ−２ペプチド、ＰＥＰ−３ペプチド、ＶＥＰＥＰ−３ペプチド、ＶＥＰＥＰ−６ペプチド、ＶＥＰＥＰ−９ペプチドおよびＡＤＧＮ−１００ペプチドからなる群から選択されるＣＰＰとを含む、方法が提供される。一部の実施形態では、組成物は、個体に、静脈内、動脈内、腹腔内、膀胱内、皮下、髄腔内、頭蓋内、脳内、脳室内、肺内、筋肉内、気管内、眼内、眼科的、門脈内、経皮、皮内、経口、舌下、局所または吸入経路によって投与される。一部の実施形態では、組成物は、個体に静脈内経路によって投与される。一部の実施形態では、組成物は、個体に皮下経路によって投与される。一部の実施形態では、細胞は、肺、肝臓、脳、腎臓、心臓、脾臓、血液、膵臓、筋肉、骨髄および腸を含む、器官または組織に存在する。一部の実施形態では、細胞は、個体の肺、肝臓、腎臓または脾臓に存在する。一部の実施形態では、１つまたは複数のウイルスは、組換えＡＡＶ、アデノウイルス、レンチウイルス、レトロウイルス、ＨＳＶ、ポックスウイルス、ＥＢＶ、ワクシニアウイルスおよびｈＣＭＶを含む。一部の実施形態では、細胞は、免疫細胞、例えば、顆粒球、マスト細胞、単球、樹状細胞、Ｂ細胞、Ｔ細胞、またはナチュラルキラー細胞である。一部の実施形態では、細胞は、線維芽細胞である。一部の実施形態では、細胞は、筋肉細胞である。一部の実施形態では、細胞は、心臓細胞である。一部の実施形態では、細胞は、肝細胞である。一部の実施形態では、細胞は、ヒト肺前駆細胞（ＬＰＣ）である。一部の実施形態では、細胞は、神経細胞である。一部の実施形態では、個体は、疾患を有し、または疾患を発症するリスクがあり、ウイルスは、疾患の処置に有用である。一部の実施形態では、組成物は、医薬組成物であり、薬学的に許容される担体をさらに含む。一部の実施形態では、個体は、哺乳動物である。一部の実施形態では、個体は、ヒトである。
【０１８３】
一部の実施形態では、細胞に導入遺伝子を送達する方法であって、細胞を本明細書に記載のウイルス送達複合体またはナノ粒子と接触させるステップを含み、ウイルス送達複合体またはナノ粒子が、ウイルス内にパッケージされた導入遺伝子と、ＰＥＰ−１ペプチド、ＰＥＰ−２ペプチド、ＶＥＰＥＰ−３ペプチド、ＶＥＰＥＰ−６ペプチド、ＶＥＰＥＰ−９ペプチドまたはＡＤＧＮ−１００ペプチドのアミノ酸配列を含むＣＰＰとを含む、方法が提供される。一部の実施形態では、ＶＥＰＥＰ−３ペプチドは、配列番号１〜１４、７５および７６のうちのいずれか１つのアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＶＥＰＥＰ−６ペプチドは、配列番号１５〜４０および７７のうちのいずれか１つのアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＶＥＰＥＰ−９ペプチドは、配列番号４１〜５２および７８のうちのいずれか１つのアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＡＤＧＮ−１００ペプチドは、配列番号５３〜７０、７９および８０のうちのいずれか１つのアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ウイルスは、組換えＡＡＶ、アデノウイルス、レンチウイルス、レトロウイルス、ＨＳＶ、ポックスウイルス、ＥＢＶ、ワクシニアウイルスおよびｈＣＭＶを含む組換えウイルスである。一部の実施形態では、組換えウイルスは、細胞ゲノム内への挿入のための導入遺伝子を含む。一部の実施形態では、導入遺伝子は、治療用導入遺伝子である。一部の実施形態では、導入遺伝子は、治療用タンパク質などのタンパク質をコードする。一部の実施形態では、導入遺伝子は、内因性遺伝子、例えば、疾患関連内因性遺伝子を標的とする阻害性ＲＮＡ（ＲＮＡｉ）などのＲＮＡｉをコードする。一部の実施形態では、導入遺伝子は、ＣＡＲをコードする。一部の実施形態では、複合体またはナノ粒子は、ＲＮＡｉをコードする第１の導入遺伝子およびタンパク質をコードする第２の導入遺伝子を含む１つまたは複数のウイルスを含む。一部の実施形態では、ＲＮＡｉは、疾患または状態に関与する内因性遺伝子を標的とする治療用ＲＮＡｉであり、タンパク質は、疾患または状態を処置するために有用な治療用タンパク質である。一部の実施形態では、治療用ＲＮＡｉは、内因性遺伝子の疾患関連形態（例えば、変異体タンパク質をコードする遺伝子、またはタンパク質の異常発現をもたらす遺伝子）を標的とし、第２の導入遺伝子は、内因性遺伝子の治療形態である（例えば、第２の導入遺伝子は、変異体タンパク質の野生型もしくは機能形態をコードする、または第２の導入遺伝子は、タンパク質の正常発現をもたらす）。一部の実施形態では、複合体またはナノ粒子は、第１の導入遺伝子を含む第１のウイルスおよび第２の導入遺伝子を含む第２のウイルスを含む。一部の実施形態では、複合体またはナノ粒子は、第１の導入遺伝子および第２の導入遺伝子を含む単一のウイルスを含む。一部の実施形態では、細胞を複合体またはナノ粒子と接触させるステップは、ｉｎ  ｖｉｖｏで行われる。一部の実施形態では、細胞を複合体またはナノ粒子と接触させるステップは、ｅｘ  ｖｉｖｏで行われる。一部の実施形態では、細胞を複合体またはナノ粒子と接触させるステップは、ｉｎ  ｖｉｔｒｏで行われる。一部の実施形態では、細胞は、細胞系由来の細胞など、不死化細胞である。一部の実施形態では、細胞は、個体由来の細胞など、初代細胞である。一部の実施形態では、細胞は、顆粒球、マスト細胞、単球、樹状細胞、Ｂ細胞、Ｔ細胞またはナチュラルキラー細胞など、免疫細胞である。一部の実施形態では、Ｔ細胞は、Ｔ細胞系由来のＴ細胞など、不死化Ｔ細胞である。一部の実施形態では、Ｔ細胞は、個体のＴ細胞など、初代Ｔ細胞である。一部の実施形態では、細胞は、線維芽細胞である。一部の実施形態では、線維芽細胞は、個体の線維芽細胞など、初代線維芽細胞である。一部の実施形態では、細胞は、筋肉細胞である。一部の実施形態では、細胞は、心臓細胞である。一部の実施形態では、細胞は、肝細胞である。一部の実施形態では、肝細胞は、個体の肝細胞など、初代肝細胞である。一部の実施形態では、細胞は、ヒト肺前駆細胞（ＬＰＣ）である。一部の実施形態では、細胞は、神経細胞である。一部の実施形態では、ウイルスは、本明細書に記載の処置を予定している疾患（例えば、がん、糖尿病、自己免疫性疾患、炎症性疾患、線維性疾患、ウイルス感染性疾患、遺伝性疾患、眼疾患、ならびに老化および変性疾患）のいずれかなど、疾患の処置に有用である。一部の実施形態では、ウイルスは、本明細書に記載の処置を予定している疾患（例えば、がん、糖尿病、自己免疫性疾患、炎症性疾患、線維性疾患、ウイルス感染性疾患、遺伝性疾患、眼疾患、ならびに老化および変性疾患）のいずれかなど、疾患に関与するタンパク質を調節するために有用である。一部の実施形態では、細胞膜透過ペプチドは、ＡＤＧＮ−１００ペプチドまたはＶＥＰＥＰ−３ペプチドである。
細胞操作方法
【０１８４】
一部の実施形態では、操作されたＴ細胞などの操作された細胞を産生する方法であって、１つまたは複数のウイルスを細胞に送達するための本明細書に記載の方法を含む方法が提供される。一部の実施形態では、方法は、エレクトロポレーションまたは非ＣＰＰ媒介性ウイルストランスフェクションの使用を含む方法などの、操作された細胞を産生する以前の方法に対する改善である。一部の実施形態では、改善には、限定ではないが、該方法の効率を上昇させること、該方法に付随するコストを削減すること、該方法の細胞毒性を低下させること、および／または該方法の複雑さを低減させることが含まれる。
ウイルスをマスクする方法
【０１８５】
本出願の別の態様では、１つまたは複数のウイルス（ＡＡＶなど）をマスクする方法であって、１つまたは複数のウイルスを本明細書に記載のＣＰＰと組み合わせるステップを含み、それによって、１つまたは複数のウイルスをマスクする方法が提供される。一部の実施形態では、１つまたは複数のウイルス、およびＣＰＰは、本明細書に記載のウイルス送達複合体またはナノ粒子を形成する。一部の実施形態では、１つまたは複数のウイルスは、免疫原性であり、ＣＰＰは、複合体またはナノ粒子が投与される個体の免疫系によって認識されることから１つまたは複数のウイルスをマスクする。一部の実施形態では、複合体またはナノ粒子中の１つまたは複数のウイルスは、ウイルス送達複合体またはナノ粒子に含有される１つまたは複数のウイルス単独の約９９％以下（例えば、約９５、９０、８５、８０、７５、７０、６５、６０、５５、５０、４５、４０、３５、３０、２５、２０、１５、１０、５、４、３、２、１％以下またはそれ未満（これらの値の間の任意の範囲を含む）のいずれか）の免疫原性である。
【０１８６】
ＡＡＶベクターおよび他の遺伝子送達ベクターは、多くの場合、患者に直接的に投与されるため、ヒト研究によって示される通り、宿主免疫応答の見込みが高い。ベクターが操作される野生型ウイルスに対する、または導入遺伝子産物それ自体に対する既存のおよび／またはリコール応答は、治療有効性に干渉し得る。ベクターに対する免疫応答の回避は、全てのベクター型に伴う大きな課題である。ウイルスベクター、特に、生物内で免疫原性エピトープを発現するアデノウイルスおよびＡＡＶなどのウイルスベクターは、免疫応答を誘導する可能性が最も高い。ベクター移入後に発生する最初の免疫応答は、自然免疫系から現れ、投与部位周囲の炎症性サイトカインおよびケモカインの急速（数時間）分泌から主になる。この反応は、アデノウイルスベクターで高く、ＡＡＶではほとんど無しである。プラスミドＤＮＡベクターも、ＣｐＧ刺激性の島のため、白血球におけるＴＬＲ受容体の刺激を介して自然免疫を刺激することに注目されたい。抗体産生およびＴリンパ球活性化をもたらす特異的免疫応答も、ベクター導入後数日以内に発生する。カプシド抗原は、大部分は、アデノウイルスに対する特異的免疫の原因であり、ＡＡＶに対する応答にも関与する。しかし、前者の場合でのみ、ウイルス遺伝子コードタンパク質も免疫原性となり得る。野生型ＡＡＶまたはアデノウイルスによる初期感染に由来する既存の液性免疫は、対応するベクターによる効率的な遺伝子移入を防止し得る。あらゆる場合において、投与経路、用量またはプロモーターの型などのいくつかのパラメーターは、ベクター免疫に影響する決定的な因子として広範に記載されている。免疫系を回避し、よって、遺伝子移入効率および安全性を増強するための、ベクター構造に対する変更も広範に行われた。
【０１８７】
宿主免疫系は、ＡＡＶベクターによるｉｎ  ｖｉｖｏでの遺伝子移入の安全性および有効性の両方に関して克服されるべき重要な障害を表す。遺伝子移入を受けるヒトにおける結果は、形質導入細胞に対するカプシド特異的Ｔ細胞応答が、ＡＡＶ遺伝子移入後の導入遺伝子発現の持続時間を限定し得ること、また、同様に抗ＡＡＶ中和抗体が、標的組織の形質導入を完全に防止し、有効性の欠如をもたらし得ることを示す。抗ＡＡＶ中和抗体は、ヒトにおいて高度に蔓延しており、検出可能な力価を有する対象の頻度は、集団の最大で３分の２に達し得る。ＡＡＶに対する既存の液性免疫の課題に対するアプローチは、これまで、セロポジティブ対象の除外であったが、この解法は、最適には程遠い。ＡＡＶベクターにおける抗原性部位をマスクすることは、効率の増加および用量の低下と共に、これらの課題を克服するために役立つことができる。
【０１８８】
本明細書に記載の方法のいずれを併用してもよいことは、理解されたい。したがって、例えば、複数のウイルス分子を細胞に送達するために本明細書に記載の方法のいずれかを併用することにより、１つまたは複数のウイルス（例えば、ＡＡＶ）の第１のセット、および１つまたは複数のウイルスの第２のセットを送達することができる。企図される可能な併用は、本明細書に記載の方法のいずれかについての２つまたはそれより多くの併用を含む。
キット
【０１８９】
本明細書に記載の方法に有用なキット、試薬および製造品も、本明細書で提供される。そのようなキットは、ＣＰＰ、集合分子（assembly  molecule）および／または他の細胞膜透過ペプチドを含んでいるバイアルを、１つまたは複数のウイルス（例えば、ＡＡＶ）を含んでいるバイアルとは別に含むことができる。患者処置の時点で、例えば、患者試料の遺伝子発現分析またはプロテオーム解析もしくは組織学的分析に基づいて、どのような特定の病変を処置すべきかが、先ず決定される。これらの結果が得られたら、ＣＰＰならびに必要に応じた集合分子および／または細胞膜透過ペプチドを、それに応じて、適切な１つまたは複数のウイルスと組み合わせて、有効な処置のために患者に投与することができる複合体またはナノ粒子をもたらす。したがって、一部の実施形態では、１）ＣＰＰと、必要に応じて２）１つまたは複数のウイルスとを含む、キットが提供される。一部の実施形態では、キットは、集合分子および／または他の細胞膜透過ペプチドをさらに含む。一部の実施形態では、キットは、遺伝子発現プロファイルを決定するための薬剤をさらに含む。一部の実施形態では、キットは、薬学的に許容される担体をさらに含む。
【０１９０】
本明細書に記載のキットは、対象方法を実施するためにキットの成分を使用するための指示（例えば、本明細書に記載の医薬組成物を作製するためのおよび／または医薬組成物の使用のための指示）をさらに含むことができる。対象方法を実施するための指示は、一般に、好適な記録媒体に記録される。例えば、指示は、紙またはプラスチックなどのような基材に印刷されていてもよい。したがって、指示は、キット内に添付文書として存在していてもよく、キットの容器またはキットの成分のラベルの中に（すなわち、パッケージまたはサブパッケージに付随する）あってもよい。一部の実施形態では、指示は、好適なコンピュータ可読記憶媒体、例えば、ＣＤ−ＲＯＭ、ディスケットなどに存在する電子保存データファイルとして存在する。さらに他の実施形態では、実際の指示はキット内に存在せず、リモートソースから、例えばインターネット経由で、指示を得る手段が提供される。この実施形態の一例は、指示を見ることができるおよび／または指示をダウンロードすることができるウェブアドレスを含むキットである。指示と同様に、指示を得るためのこの手段は、好適な基材に記録される。
【０１９１】
キットの様々な成分は、別個の容器内に存在することもあり、それらの容器が単一のハウジング、例えば箱、の中に含まれていることもある。
例示的実施形態
【０１９２】
実施形態１．  細胞膜透過ペプチドおよびウイルスを含む、ウイルスの細胞内送達のためのウイルス送達複合体であって、細胞膜透過ペプチドが、ＰＥＰ−１ペプチド、ＰＥＰ−２ペプチド、ＰＥＰ−３ペプチド、ＶＥＰＥＰ−３ペプチド、ＶＥＰＥＰ−６ペプチド、ＶＥＰＥＰ−９ペプチドおよびＡＤＧＮ−１００ペプチドからなる群から選択される、ウイルス送達複合体。
【０１９３】
実施形態２．  細胞膜透過ペプチドが、ＶＥＰＥＰ−３ペプチドである、実施形態１に記載のウイルス送達複合体。
【０１９４】
実施形態３．  細胞膜透過ペプチドが、配列番号１〜１４からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む、実施形態２に記載のウイルス送達複合体。
【０１９５】
実施形態４．  細胞膜透過ペプチドが、配列番号７５または７６のアミノ酸配列を含む、実施形態２に記載のウイルス送達複合体。
【０１９６】
実施形態５．  細胞膜透過ペプチドが、ＶＥＰＥＰ−６ペプチドである、実施形態１に記載のウイルス送達複合体。
【０１９７】
実施形態６．  細胞膜透過ペプチドが、配列番号１５〜４０からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む、実施形態５に記載のウイルス送達複合体。
【０１９８】
実施形態７．  細胞膜透過ペプチドが、配列番号７７のアミノ酸配列を含む、実施形態５に記載のウイルス送達複合体。
【０１９９】
実施形態８．  細胞膜透過ペプチドが、ＶＥＰＥＰ−９ペプチドである、実施形態１に記載のウイルス送達複合体。
【０２００】
実施形態９．  細胞膜透過ペプチドが、配列番号４１〜５２からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む、実施形態８に記載のウイルス送達複合体。
【０２０１】
実施形態１０．  細胞膜透過ペプチドが、配列番号７８のアミノ酸配列を含む、実施形態８に記載のウイルス送達複合体。
【０２０２】
実施形態１１．  細胞膜透過ペプチドが、ＡＤＧＮ−１００ペプチドである、実施形態１に記載のウイルス送達複合体。
【０２０３】
実施形態１２．  細胞膜透過ペプチドが、配列番号５３〜７０からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む、実施形態１１に記載のウイルス送達複合体。
【０２０４】
実施形態１３．  細胞膜透過ペプチドが、配列番号７９または８０のアミノ酸配列を含む、実施形態１１に記載のウイルス送達複合体。
【０２０５】
実施形態１４．  細胞膜透過ペプチドが、ＰＥＰ−１、ＰＥＰ−２またはＰＥＰ−３ペプチドである、実施形態１に記載のウイルス送達複合体。
【０２０６】
実施形態１５．  細胞膜透過ペプチドが、配列番号７１〜７３のうちいずれか１つのアミノ酸配列を含む、実施形態１４に記載のウイルス送達複合体。
【０２０７】
実施形態１６．  細胞膜透過ペプチドが、ウイルスに共有結合によって連結している、実施形態１に記載のウイルス送達複合体。
【０２０８】
実施形態１７．  細胞膜透過ペプチドが、細胞膜透過ペプチドのＮ末端に共有結合によって連結している１つまたは複数の部分をさらに含み、１つまたは複数の部分が、アセチル、脂肪酸、コレステロール、ポリエチレングリコール、核内局在化シグナル、核外輸送シグナル、抗体、多糖類およびターゲティング分子からなる群から選択される、実施形態１〜１６のいずれか一項に記載のウイルス送達複合体。
【０２０９】
実施形態１８．  細胞膜透過ペプチドが、そのＮ末端に共有結合によって連結しているアセチル基を含む、実施形態１７に記載のウイルス送達複合体。
【０２１０】
実施形態１９．  細胞膜透過ペプチドが、細胞膜透過ペプチドのＣ末端に共有結合によって連結している１つまたは複数の部分をさらに含み、１つまたは複数の部分が、システアミド、システイン、チオール、アミド、必要に応じて置換されているニトリロ三酢酸、カルボキシル、必要に応じて置換されている直鎖状または分枝状Ｃ１〜Ｃ６アルキル、一級または二級アミン、オシド誘導体、脂質、リン脂質、脂肪酸、コレステロール、ポリエチレングリコール、核内局在化シグナル、核外輸送シグナル、抗体、多糖類およびターゲティング分子からなる群から選択される、実施形態１〜１８のいずれか一項に記載のウイルス送達複合体。
【０２１１】
実施形態２０．  細胞膜透過ペプチドが、そのＣ末端に共有結合によって連結しているシステアミド基を含む、実施形態１９に記載のウイルス送達複合体。
【０２１２】
実施形態２１．  ウイルス送達複合体中の細胞膜透過ペプチドの少なくとも一部が、連結によりターゲティング部分に連結している、実施形態１〜２０のいずれか一項に記載のウイルス送達複合体。
【０２１３】
実施形態２２．  連結が、共有結合である、実施形態２１に記載のウイルス送達複合体。
【０２１４】
実施形態２３．  ウイルスが、組換えウイルスである、実施形態１〜２２のいずれか一項に記載のウイルス送達複合体。
【０２１５】
実施形態２４．  組換えウイルスが、細胞ゲノム内への挿入のための導入遺伝子を含む、実施形態２３に記載のウイルス送達複合体。
【０２１６】
実施形態２５．  組換えウイルスが、組換えアデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）、アデノウイルス、レンチウイルス、レトロウイルス、単純ヘルペスウイルス（ＨＳＶ）、ポックスウイルス、エプスタイン・バーウイルス（ＥＢＶ）、ワクシニアウイルスまたはヒトサイトメガロウイルス（ｈＣＭＶ）である、実施形態２３または２４に記載のウイルス送達複合体。
【０２１７】
実施形態２６．  ウイルスが、組換えＡＡＶである、実施形態２５に記載のウイルス送達複合体。
【０２１８】
実施形態２７．  ＡＡＶが、ＡＡＶ１、ＡＡＶ２、ＡＡＶ３、ＡＡＶ４、ＡＡＶ５、ＡＡＶ６、ＡＡＶ７、ＡＡＶ８、ＡＡＶ９、ＡＡＶ１０、ＡＡＶ１１またはＡＡＶ１２である、実施形態２６に記載のウイルス送達複合体。
【０２１９】
実施形態２８．  ＡＡＶが、異なるウイルス血清型に由来するカプシドおよびゲノムを含む偽型である、実施形態２６に記載のウイルス送達複合体。
【０２２０】
実施形態２９．  細胞膜透過ペプチドのウイルス（Ｖｇ、ｐｆｕまたはＭＯＩ単位）に対するモル比が、約１：１〜約１×１０８：１の間である、実施形態１〜２８のいずれか一項に記載のウイルス送達複合体。
【０２２１】
実施形態３０．  ウイルス送達複合体の平均直径が、約２０ｎｍ〜約１０００ｎｍの間である、実施形態１〜２９のいずれか一項に記載のウイルス送達複合体。
【０２２２】
３１．  実施形態１〜３０のいずれか一項に記載のウイルス送達複合体を含むコアを含むナノ粒子。
【０２２３】
実施形態３２．  コアが、１つまたは複数の追加の、実施形態１〜３０のいずれか一項に記載のウイルス送達複合体をさらに含む、実施形態３１に記載のナノ粒子。
【０２２４】
実施形態３３．  ナノ粒子中の細胞膜透過ペプチドの少なくとも一部が、連結によりターゲティング部分に連結している、実施形態３１または３２に記載のナノ粒子。
【０２２５】
実施形態３４．  コアが、周囲細胞膜透過ペプチドを含むシェルにより被覆されている、実施形態３１〜３３のいずれか一項に記載のナノ粒子。
【０２２６】
実施形態３５．  周囲細胞膜透過ペプチドが、ＰＥＰ−１ペプチド、ＰＥＰ−２ペプチド、ＰＥＰ−３ペプチド、ＶＥＰＥＰ−３ペプチド、ＶＥＰＥＰ−６ペプチド、ＶＥＰＥＰ−９ペプチドおよびＡＤＧＮ−１００ペプチドからなる群から選択される、実施形態３４に記載のナノ粒子。
【０２２７】
実施形態３６．  周囲細胞膜透過ペプチドが、配列番号１〜８０からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む、実施形態３５に記載のナノ粒子。
【０２２８】
実施形態３７．  シェル内の周囲細胞膜透過ペプチドの少なくとも一部が、連結によりターゲティング部分に連結している、実施形態３４〜３６のいずれか一項に記載のナノ粒子。
【０２２９】
実施形態３８．  連結が、共有結合である、実施形態３３または３７に記載のナノ粒子。
【０２３０】
実施形態３９．  ナノ粒子の平均直径が、約２０ｎｍ〜約１０００ｎｍの間である、実施形態３１〜３８のいずれか一項に記載のナノ粒子。
【０２３１】
実施形態４０．  実施形態１〜３０のいずれか一項に記載のウイルス送達複合体または実施形態３１〜３９のいずれか一項に記載のナノ粒子と薬学的に許容される担体とを含む医薬組成物。
【０２３２】
実施形態４１．  ウイルス送達複合体またはナノ粒子が、治療用タンパク質をコードする導入遺伝子を含むウイルスを含む、実施形態４０に記載の医薬組成物。
【０２３３】
実施形態４２．  ウイルス送達複合体またはナノ粒子が、阻害性ＲＮＡ（ＲＮＡｉ）をコードする導入遺伝子を含むウイルスを含む、実施形態４０に記載の医薬組成物。
【０２３４】
実施形態４３．  ウイルス送達複合体またはナノ粒子が、治療用タンパク質をコードする第１の導入遺伝子およびＲＮＡｉをコードする第２の導入遺伝子を含む１つまたは複数のウイルスを含む、実施形態４０に記載の医薬組成物。
【０２３５】
実施形態４４．  ウイルス送達複合体またはナノ粒子が、治療用タンパク質をコードする第１の導入遺伝子を含む第１のウイルスおよびＲＮＡｉをコードする第２の導入遺伝子を含む第２のウイルスを含む、実施形態４３に記載の医薬組成物。
【０２３６】
実施形態４５．  ウイルス送達複合体またはナノ粒子が、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）をコードする導入遺伝子を含むウイルスを含む、実施形態４０に記載の医薬組成物。
【０２３７】
実施形態４６．  実施形態１〜３０のいずれか一項に記載のウイルス送達複合体を調製する方法であって、細胞膜透過ペプチドを１つまたは複数のウイルスと組み合わせるステップを含み、それによって、ウイルス送達複合体を形成する方法。
【０２３８】
実施形態４７．  細胞膜透過ペプチドおよびウイルス（Ｖｇ、ｐｆｕまたはＭＯＩ単位）が、約１：１〜約１×１０８：１の比でそれぞれ組み合わされる、実施形態４６に記載の方法。
【０２３９】
実施形態４８．  １つまたは複数のウイルスを細胞に送達する方法であって、細胞を実施形態１〜３０のいずれか一項に記載のウイルス送達複合体または実施形態３１〜３９のいずれか一項に記載のナノ粒子と接触させるステップを含み、ウイルス送達複合体またはナノ粒子が、１つまたは複数のウイルスを含む、方法。
【０２４０】
実施形態４９．  細胞をウイルス送達複合体またはナノ粒子と接触させるステップが、ｉｎ  ｖｉｖｏで行われる、実施形態４８に記載の方法。
【０２４１】
実施形態５０．  細胞をウイルス送達複合体またはナノ粒子と接触させるステップが、ｅｘ  ｖｉｖｏで行われる、実施形態４８に記載の方法。
【０２４２】
実施形態５１．  細胞をウイルス送達複合体またはナノ粒子と接触させるステップが、ｉｎ  ｖｉｔｒｏで行われる、実施形態４８に記載の方法。
【０２４３】
実施形態５２．  細胞が、顆粒球、マスト細胞、単球、樹状細胞、Ｂ細胞、Ｔ細胞、ナチュラルキラー細胞、線維芽細胞、筋肉細胞、心臓細胞、肝細胞、肺前駆細胞、または神経細胞である、実施形態４８〜５１のいずれか一項に記載の方法。
【０２４４】
実施形態５３．  細胞がＴ細胞である、実施形態５２に記載の方法。
【０２４５】
実施形態５４．  ウイルスが、ＰＤ−１、ＰＤ−Ｌ１、ＰＤ−Ｌ２、ＴＩＭ−３、ＢＴＬＡ、ＶＩＳＴＡ、ＬＡＧ−３、ＣＴＬＡ−４、ＴＩＧＩＴ、４−１ＢＢ、ＯＸ４０、ＣＤ２７、ＴＩＭ−１、ＣＤ２８、ＨＶＥＭ、ＧＩＴＲおよびＩＣＯＳからなる群から選択される遺伝子内の配列を標的とする、実施形態５２または５３に記載の方法。
【０２４６】
実施形態５５．  ウイルス送達複合体またはナノ粒子が、治療用タンパク質をコードする導入遺伝子を含むウイルスを含む、実施形態４８〜５４のいずれか一項に記載の方法。
【０２４７】
実施形態５６．  ウイルス送達複合体またはナノ粒子が、阻害性ＲＮＡ（ＲＮＡｉ）をコードする導入遺伝子を含むウイルスを含む、実施形態４８〜５４のいずれか一項に記載の方法。
【０２４８】
実施形態５７．  ウイルス送達複合体またはナノ粒子が、治療用タンパク質をコードする第１の導入遺伝子およびＲＮＡｉをコードする第２の導入遺伝子を含む１つまたは複数のウイルスを含む、実施形態４８〜５４のいずれか一項に記載の方法。
【０２４９】
実施形態５８．  ウイルス送達複合体またはナノ粒子が、治療用タンパク質をコードする第１の導入遺伝子を含む第１のウイルスおよびＲＮＡｉをコードする第２の導入遺伝子を含む第２のウイルスを含む、実施形態５７に記載の方法。
【０２５０】
実施形態５９．  ウイルス送達複合体またはナノ粒子が、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）をコードする導入遺伝子を含むウイルスを含む、実施形態４８〜５４のいずれか一項に記載の方法。
【０２５１】
実施形態６０．  個体の疾患を処置する方法であって、個体に実施形態４０〜４５のいずれか一項に記載の医薬組成物の有効量を投与するステップを含む方法。
【０２５２】
実施形態６１．  疾患が、がん、糖尿病、自己免疫性疾患、血液疾患（hematological  disease）、心疾患、血管性疾患、炎症性疾患、線維性疾患、ウイルス感染性疾患、遺伝性疾患、眼疾患、肝臓疾患、肺疾患、筋肉疾患、酵素欠損疾患、リソソーム蓄積症、神経学的疾患、腎臓疾患、老化および変性疾患、ならびにコレステロールレベル異常によって特徴付けられる疾患からなる群から選択される、実施形態６０に記載の方法。
【０２５３】
実施形態６２．  疾患が、がんである、実施形態６１に記載の方法。
【０２５４】
実施形態６３．  がんが、固形腫瘍であり、医薬組成物が、成長因子およびサイトカイン、細胞表面受容体、シグナル伝達分子およびキナーゼ、転写因子および他の転写調節因子、タンパク質発現および修飾の制御因子、腫瘍抑制因子、ならびにアポトーシスおよび転移の制御因子からなる群から選択される１つまたは複数のタンパク質の発現を調節する１つまたは複数のウイルスを含む、ウイルス送達複合体またはナノ粒子を含む、実施形態６２に記載の方法。
【０２５５】
実施形態６４．  がんが、肝臓、肺または腎臓のがんである、実施形態６３に記載の方法。
【０２５６】
実施形態６５．  がんが、血液悪性腫瘍であり、医薬組成物が、成長因子およびサイトカイン、細胞表面受容体、シグナル伝達分子およびキナーゼ、転写因子および他の転写調節因子、タンパク質発現および修飾の制御因子、腫瘍抑制因子、ならびにアポトーシスおよび転移の制御因子からなる群から選択される１つまたは複数のタンパク質の発現を調節する１つまたは複数のウイルスを含む、ウイルス送達複合体またはナノ粒子を含む、実施形態６２に記載の方法。
【０２５７】
実施形態６６．  疾患が、ウイルス感染症であり、医薬組成物が、ウイルス感染性疾患の発症および／または進行に関与する１つまたは複数のタンパク質の発現を調節する１つまたは複数のウイルスを含む、ウイルス送達複合体またはナノ粒子を含む、実施形態６１に記載の方法。
【０２５８】
実施形態６７．  疾患が、遺伝性疾患であり、医薬組成物が、遺伝性疾患の発症および／または進行に関与する１つまたは複数のタンパク質の発現を調節する１つまたは複数のウイルスを含む、ウイルス送達複合体またはナノ粒子を含む、実施形態６１に記載の方法。
【０２５９】
実施形態６８．  疾患が、老化または変性疾患であり、医薬組成物が、老化または変性疾患の発症および／または進行に関与する１つまたは複数のタンパク質の発現を調節する１つまたは複数のウイルスを含む、ウイルス送達複合体またはナノ粒子を含む、実施形態６１に記載の方法。
【０２６０】
実施形態６９．  疾患が、線維性または炎症性疾患であり、医薬組成物が、線維性または炎症性疾患の発症および／または進行に関与する２つまたはそれより多いタンパク質の発現を調節する１つまたは複数のウイルスを含む、ウイルス送達複合体またはナノ粒子を含む、実施形態６１に記載の方法。
【０２６１】
実施形態７０．  個体がヒトである、実施形態６０〜６９のいずれか一項に記載の方法。
【０２６２】
実施形態７１．  実施形態１〜３０のいずれか一項に記載のウイルス送達複合体および／または実施形態３１〜３９のいずれか一項に記載のナノ粒子を含む組成物を含むキット。
【実施例】
【０２６３】
本発明の範囲および精神内でいくつもの実施形態が可能であることを当業者は認識する。以下の非限定的な実施例を参照することにより本発明をより詳細に説明する。以下の実施例は、本発明を例を挙げてさらに説明するものであるが、当然ながら、いかなる形でもその範囲を限定するものと解してはならない。
材料および方法
細胞膜透過ペプチド：
【０２６４】
以下のペプチドを使用した：
【化１】
2020530463.tif 000003
【０２６５】
ペプチドのストック溶液を蒸留水または５％のＤＭＳＯ中２ｍｇ／ｍＬで調製し、水浴ソニケーターで１０分間超音波処理した後、使用直前に希釈した。
細胞系
【０２６６】
安定なＥＧＦＰ発現細胞系（ＧＦＰ−Ｕ２ＯＳ、ＥＧＦＰ−ＪＵＲＫＡＴ  Ｔ、ＥＧＦＰ−ＨＥＫ）ならびにＵ２ＯＳ（ＡＴＣＣ（登録商標）ＨＴＢ−９６（商標））、初代ヒト線維芽細胞、Ｈｅｐ  Ｇ２（ＡＴＣＣ（登録商標）ＨＢ−８０６５（商標））、ヒト胎児腎臓（ＨＥＫ２９３）（ＡＴＣＣ（登録商標）ＣＲＬ−１５７３（商標））、ヒト骨髄性白血病Ｋ５６２細胞（ＡＴＣＣ（登録商標）ＣＣＬ２４３（商標））、Ｊｕｒｋａｔ  Ｔ細胞（ＡＴＣＣ（登録商標）ＴＩＢ−１５２（商標））、ヒトＥＳＣ（Ｈ９）、およびマウスＥＳＣ（ＥＳＦ  １５８）を含むいくつかの細胞系を使用した。細胞はＡｍｅｒｉｃａｎ  Ｔｙｐｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ［ＡＴＣＣ］から入手した。
（実施例１）
培養細胞において、細胞膜透過ペプチドによって、アデノ随伴ウイルスの遺伝子送達を増強する
【０２６７】
アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）をｉｎ  ｖｉｖｏ遺伝子療法および臨床試験について主に評価した。ＡＡＶによって、分裂細胞および非分裂細胞の両方において、副作用を制限しながら長期遺伝子発現の確立がもたらされる。しかし、ＡＡＶが、少数の許容細胞種にしか感染することができないという事実によって、および、単一用量投与によってｉｎ  ｖｉｖｏでウイルス抗原が急速に出現するために、ＡＡＶの臨床適用は依然として限定されている。細胞膜透過ペプチド（ＣＰＰ）は、様々なカーゴに関して、細胞内への輸送の安全で、効率的で、非侵襲的な方式をもたらし、これらは、近年、遺伝子生成物および生物学的生成物の送達のためのベクターとして開発されてきた。細胞膜透過ペプチド（ＣＰＰ）は、非毒性様式で細胞膜を通過し、ナノ粒子、小分子、ｓｉＲＮＡ、タンパク質およびプラスミドＤＮＡを含む様々な分子のカーゴの細胞内送達を改善することができる。
【０２６８】
本実施例では、本発明者らは、様々な細胞系において、ＡＡＶ−２およびＡＡＶ−６媒介性の遺伝子送達に対する細胞膜透過ペプチドの影響を調べた。本発明者らは、２つのＡＤＧＮ関連ＣＰＰ（ＰＥＰ−１およびＰＥＰ−２）を、ＡｎｔｐおよびＴＡＴ−ＨＡ２などの周知の（well  know）ＣＰＰと比較した。両方のＣＰＰが、ＡＡＶと安定な複合体を形成し、ヒト肝細胞ＨｅｐＧ２、ヒト線維芽細胞（ＨＳ６８）およびＨＵＶＥＣなどの非許容細胞へのＡＡＶ２およびＡＡＶ６媒介性の形質導入を有意に増強したことを本発明者らは実証した。
【０２６９】
細胞膜透過ペプチド（ＣＰＰ）は、培養細胞において、ウイルス媒介性の遺伝子送達を有意に増加させる
【０２７０】
ウイルス：緑色蛍光タンパク質（ＡＡＶ−ＧＦＰ）またはベータガラクトシダーゼ（ＡＡＶ−βＧＡｌ）をコードするアデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ−２およびＡＡＶ−６）を許容細胞種ＨＥＫ２９３細胞において産生した。
【０２７１】
ペプチド：ペプチドを固相合成によって得た。
【０２７２】
細胞培養：細胞（ＨＳ６８、ＨｅｐＧ２およびＨＵＶＥＣ）を、２ｍＭグルタミン、１％抗生物質（ストレプトマイシン１０，０００μｇ／ｍＬ、ペニシリン、１０，０００ＩＵ／ｍＬ）、および１０％（ｗ／ｖ）ウシ胎児血清（ＦＣＳ）を補充したダルベッコ改変イーグル培地（ＤＭＥＭ）中、５％ＣＯ２を含有する加湿雰囲気下３７℃で培養した。
結果
力価の低下したＡＡＶの感染力に対するＣＰＰの影響の評価
【０２７３】
ＭＯＩ３００の緑色蛍光タンパク質をコードするＡＡＶ（ＡＡＶ２−ＧＦＰ）またはベータガラクトシダーゼをコードするＡＡＶ（ＡＡＶ−６−βＧａｌ）を、濃度を０．１から５００μＭの範囲で増加させたＣＰＰを含むＰＢＳ中で３０分間プレインキュベートした。ＡＡＶ単独またはＣＰＰ／ＡＡＶ複合体を２４ウェルプレートフォーマットにある培養細胞に添加した。細胞を、遊離ＡＡＶまたはＣＰＰ／ＡＡＶ複合体のいずれかで４時間処理し、次いで、培地を新鮮な培地で置き換えた。ウイルス媒介性の導入遺伝子の発現を、ＡＡＶ−ＧＦＰに関しては細胞系ＨＳ−６８およびＨｅｐＧ２、ＡＡＶ−βＧａｌに関してはＨＵＶＥＣにおいて、感染の２日後にモニターした。ＧＦＰ発現細胞をフローサイトメトリーによって検出し、βガラクトシダーゼ活性を細胞溶解液で決定した。
【０２７４】
図１Ａおよび１Ｂに報告するように、ＣＰＰは、ＨｅｐＧ２およびＨＳ６８細胞系において、ＡＡＶの侵入ならびに遺伝子発現を用量依存的様式で、ウイルスの力価を低下させて、有意に増加させる。遊離ＡＡＶは、１２〜１５％のＧＦＰ陽性細胞をもたらし、１００μＭ濃度のＰＥＰ−１またはＰＥＰ−２を使用することによって、両方の細胞系に対するＧＦＰ陽性細胞のレベルが約８倍増加する。ＰＥＰ−１およびＰＥＰ−２は、ｐＡＮＴ（ペネトラチン）より２倍より強力である。
【０２７５】
図２に報告するように、ＣＰＰは、ＨＵＶＥＣにおいて、ＡＡＶの侵入ならびに遺伝子発現を用量依存的様式で、ウイルスの力価を低下させて、有意に増加させる。１００μＭの濃度のＰＥＰ−１およびＰＥＰ−２に関して、最適な応答が得られる。ＰＥＰ−１およびＰＥＰ−２は、遊離ＡＡＶと比較してベータガラクトシダーゼの発現レベルを約４倍増加させる。ＰＥＰ−１およびＰＥＰ−２は、ｐＡＮＴ（ペネトラチン）より２倍より強力である。
【０２７６】
ＡＡＶ−ＣＰＰ複合体の細胞毒性をＨＵＶＥＣ細胞系で評価した。ＭＯＩ３００のベータガラクトシダーゼをコードするＡＡＶ（ＡＡＶ−６−βＧａｌ）を、濃度を１から５００μＭの範囲で増加させたＣＰＰを含むＰＢＳ中で３０分間プレインキュベートした。細胞を、遊離ＡＡＶ（ＣＰＰなし）またはＣＰＰ／ＡＡＶ複合体のいずれかで４時間処理し、次いで、培地を新鮮な培地で置き換えた。ＡＡＶ−ＣＰＰ複合体の細胞毒性を、２日後にＸＴＴアッセイを使用して決定した。図３に報告するように、１００μＭの濃度でＣＰＰ／ＡＡＶ複合体の毒性は観察されなかった。５００μＭのＣＰＰ濃度では、ＰＥＰ−１およびＰＥＰ−２に関しては５％、ならびにＰａｎｔに関しては８％の低い細胞毒性が得られた。
ウイルス媒介性の遺伝子発現に必要な力価に対するＣＰＰの影響の評価
【０２７７】
２００μＭの固定濃度のペプチド（ＰＥＰ−１、ＰＥＰ−２、ペネトラチン（Ｐ−ＡＮＴ）およびＴＡＴ）を、緑色蛍光タンパク質をコードするＡＡＶ−２（ＡＡＶ−ＧＦＰ）のＭＯＩを増加させて（２０００まで）プレインキュベートした。ＨＳ  ６８細胞およびＨｅｐＧ２細胞を、遊離ＡＡＶまたはＡＡＶ：ＣＰＰ複合体のいずれかで４時間処理し、次いで、培地を新鮮な培地で置き換えた。ＧＦＰ発現を感染の２日後に分析し、ＧＦＰ発現細胞をフローサイトメトリーで定量した。
【０２７８】
図３Ａおよび３Ｂに報告するように、ＣＰＰのプレインキュベーションによって、力価の低いＡＡＶにおいてＡＡＶの感染力を２０倍（aby  20-fold）有意に増加させる。ＧＦＰ陽性細胞のレベルは、ＰＥＰ−１およびＰＥＰ−２の存在下で５倍増加する。対照的に、ＴＡＴペプチドに関して感染性の機会は観察されず、ｐＡＮＴペプチドに関しては５倍の増加が観察される。
（実施例２Ａ）
力価の低下した様々なＡＡＶ血清型の感染力に対するＣＰＰの影響の評価
【０２７９】
これまでに、１１種のＡＡＶ血清型が同定されており、すべての血清型が複数の多様な組織型に由来の細胞を感染させることができる。しかし、感染力は１つの血清型から別の血清型で様々であり、組織特異性はカプシドの血清型によって決定される（Vance  et  al,  2016の図３に報告されるとおり）。したがって、ＡＡＶベクターの偽型化またはそれらのトロピズム範囲を変更するためにＣＰＰを使用することは、治療におけるそれらの使用に対して重要である可能性がある。この実施例では、ＡＡＶ１、ＡＡＶ２、ＡＡＶ５、ＡＡＶ６、ＡＡＶ８、およびＡＡＶ９を含む様々なＡＡＶ血清型が、例えば、ＡＤＧＮ−１０３ａ（配列番号７５）、ＡＤＧＮ−１０３ｂ（配列番号７６）、ＡＤＧＮ−１００（配列番号７９）、ＡＤＧＮ−１０９（配列番号７８）、ＡＤＧＮ−１０６（配列番号７７）、ＰＥＰ−１（配列番号７１）、ＰＥＰ−２（配列番号７２）、ＣＡＤＹ（配列番号８１）、およびＴＡＴ−ＨＡ２（配列番号８３）（ＡＤＧＮ−１０３は、本明細書でＶＥＰＥＰ−３と交換可能で使用され；ＡＤＧＮ−１０６は、本明細書でＶＥＰＥＰ−６と交換可能で使用され；ＡＤＧＮ−１０９は、本明細書でＶＥＰＥＰ−９と交換可能で使用される）を含むＣＰＰの存在下または非存在下で、様々な細胞種（例えば、ヒト肝細胞（ＨｅｐＧ２）およびヒト神経細胞（ＨＣＮ２））に対して負荷される。
【０２８０】
例えば、３００という低ＭＯＩ（１×１０７ＰＦＵ）の緑色蛍光タンパク質をコードするＡＡＶを、濃度を例えば０．１μＭから５００μＭの範囲で増加させたＣＰＰを含むＰＢＳ中で３０分間プレインキュベートした。ＡＡＶ単独またはＣＰＰ／ＡＡＶ複合体を、例えば、２４ウェルプレートフォーマットにある培養細胞に添加した。細胞を、遊離ＡＡＶまたはＣＰＰ／ＡＡＶ複合体のいずれかで（例えば、４時間）処理し、次いで、培地を新鮮な培地で置き換えた。ウイルス媒介性の導入遺伝子の発現を（例えば、ＡＡＶ−ＧＦＰに関してはＨｅｐＧ２における感染後２日間）モニターする。ＧＦＰ発現細胞を、例えば、フローサイトメトリーによって検出する。
（実施例２Ｂ）
ＨｅｐＧ２細胞およびＨＣＮ２細胞における力価の低下した様々なＡＡＶ血清型の感染力に対するＣＰＰの影響の評価
【０２８１】
この実施例では、ＡＤＧＮ−１０３ａ、ＡＤＧＮ−１０３ｂ、ＡＤＧＮ−１００、ＡＤＧＮ−１０９、ＡＤＧＮ−１０６、ＰＥＰ−１、ＰＥＰ−２、ＣＡＤＹ、およびＴＡＴ−ＨＡ２を含むＣＰＰの存在下または非存在下で、ＡＡＶ１、ＡＡＶ２、ＡＡＶ５、ＡＡＶ６、ＡＡＶ８およびＡＡＶ９を含む異なるＡＡＶ血清型を、ヒト肝細胞（ＨｅｐＧ２）およびヒト神経細胞（ＨＣＮ２）に対して試験した。
【０２８２】
緑色蛍光タンパク質をコードするＡＡＶ−１、ＡＡＶ−２、ＡＡＶ−５、およびＡＡＶ−６ウイルスをＣｅｌｌ  Ｂｉｏｌａｂｓ  Ｉｎｃから入手し、ＡＡＶ−８をＶｅｃｔｏｒ  Ｂｉｏｌａｂｓから入手した。ウイルスのストック溶液を、ＰＢＳ／０．０１％中１×１０１３ＧＣ／ｍｌで得、使用前に２×１０１１ＧＣ／ｍｌまで５０倍に希釈した。
【０２８３】
緑色蛍光タンパク質をコードするＡＡＶ−１、ＡＡＶ−２、ＡＡＶ−５、およびＡＡＶ６を５００という低ＭＯＩ（１〜２×１０７ＰＦＵ）で使用し、ＡＡＶ−８をＭＯＩ１０００（２〜４×１０７ＰＦＵ）で使用した。ＨｅｐＧ２およびＨＣＮ２細胞（ウェル当たり１×１０６個の細胞）を２４ウェルプレート培養ディッシュフォーマットで培養した。ＭＯＩ１０００に関して、５μｌのＡＡＶウイルスを希釈した溶液を、濃度を０．１から２００μＭの範囲で増加させたＣＰＰを含むＰＢＳ中で３０分間プレインキュベートした。ＭＯＩ５００に関して、２．５μｌのＡＡＶウイルスを希釈した溶液を、ＣＰＰ濃度を０．１から２００μＭの範囲で増加させながらＰＢＳ中で３０分間プレインキュベートした。２００μｌのＡＡＶまたはＣＰＰ／ＡＡＶ複合体溶液を培養細胞に添加した（ウェル当たり１×１０６個の細胞）。細胞を、遊離ＡＡＶまたはＣＰＰ／ＡＡＶ複合体のいずれかで４時間処理し、次いで、培地を新鮮な培地で置き換えた。
【０２８４】
ウイルス媒介性の導入遺伝子の発現をＨｅｐＧ２およびヒト神経ＨＣＮ２において、感染の２日後にフローサイトメトリーによってモニターした。ＧＦＰ発現細胞のパーセンテージを、フローサイトメトリーによって検出し、ＡＡＶの感染力の増加をＧＦＰ陽性細胞の数に基づいて算出した。結果を図５Ａ〜５Ｄ、６Ａ〜６Ｄ、７Ａ〜７Ｄ、８Ａ〜８Ｄ、および９Ａ〜９Ｄに報告する。
【０２８５】
図５Ａ〜５Ｄに報告するように、すべての試験したＣＰＰは、非許容ＨｅｐＧ２細胞およびＨＣＮ２細胞におけるＡＡＶ１媒介性の遺伝子発現を増強した。ＨｅｐＧ２では、２００μＭの最も高い濃度のＣＰＰ、ＡＤＧＮ−１０３ａ、ＡＤＧＮ−１０３ｂ、およびＰＥＰ−１は、２０倍〜ＰＥＰ−１についての２３倍までＡＡＶ−１の有効性を増加させた。１６倍および１３倍の増加が、それぞれ、ＡＤＧＮ−１０９およびＡＤＧＮ−１００について得られた。比較すると、ＡＤＧＮ−１０６およびＰＥＰ−２は、７〜８倍ＡＡＶ−１の有効性を増加させ、ＴＡＴ−ＨＡ２およびＣＡＤＹは、３〜４倍しか増加させなかった（図５Ｂ）。これらの結果は、ＡＤＧＮ−１０３ａおよびＡＤＧＮ−１０３ｂが、ＣＰＰ  ＴＡＴ−ＨＡ２より約５〜６倍強力であることを示唆する。ＧＦＰを発現する細胞の数は、２００μＭのＰＥＰ−１、ＡＤＧＮ−１０３ｂ、ＡＤＧＮ−１０３ａ、ＡＤＧＮ−１０９、およびＡＤＧＮ−１００を使用して、ＣＰＰの非存在下での５％から、それぞれ、８７％、８１％、７６％、６１％、および５０％に増加した。対照的に、ＴＡＴ−ＨＡ２またはＣＡＤＹペプチドを使用してわずか２７％のＧＦＰ陽性細胞しか得られなかった（図５Ａ）。
【０２８６】
ヒト神経細胞ＨＣＮ２では、２００μＭの最も高い濃度のＣＰＰ、ＡＤＧＮ−１０３ａ、ＡＤＧＮ−１０３ｂ、およびＰＥＰ−１は、１８倍〜ＰＥＰ−１についての２２倍までＡＡＶ−１の有効性を増加させた。１５倍および１２倍の増加が、それぞれ、ＡＤＧＮ−１０９およびＡＤＧＮ−１００について得られた。比較すると、ＡＤＧＮ−１０６およびＰＥＰ−２は、７倍ＡＡＶ−１の有効性を増加させ、ＴＡＴ−ＨＡ２およびＣＡＤＹは、３倍しか増加しなかった（図５Ｄ）。ＧＦＰを発現する細胞の数は、２００μＭのＰＥＰ−１、ＡＤＧＮ−１０３ｂ、ＡＤＧＮ−１０３ａ、ＡＤＧＮ−１０９、およびＡＤＧＮ−１００を使用して、ＣＰＰの非存在下での５％から、それぞれ、８２％、７８％、７５％、６２％、および５２％に増加した。対照的に、ＴＡＴ−ＨＡ２またはＣＡＤＹペプチドを使用してわずか２２％のＧＦＰ陽性細胞しか得られなかった（図５Ｃ）。
【０２８７】
両方の細胞系について、ＡＡＶ−１の感染力に対するＡＤＧＮ−１０３ｂ、ＡＤＧＮ−１０３ａ、ＡＤＧＮ−１０９、およびＡＤＧＮ−１００の有意な影響が、１μＭの濃度でも明らかであり、２００μＭで得られた最終的改善の約６０％は、１０μＭの濃度のＣＰＰで既に観察されていた（図５Ａおよび５Ｃ）。
【０２８８】
図６Ａ〜６Ｄに報告するように、すべての試験したＣＰＰが、非許容ＨｅｐＧ２細胞およびＨＣＮ２細胞におけるＡＡＶ−２媒介性の遺伝子発現を増強する。ＨｅｐＧ２では、２００μＭの最も高い濃度のＣＰＰ、ＡＤＧＮ−１０３ａ、ＡＤＧＮ−１０３ｂ、ＡＤＧＮ−１０９、およびＰＥＰ−１は、以下の順序ＰＥＰ１＞ＡＤＧＮ−１０３ｂ＞ＡＤＧＮ−１０３ａ＞ＡＤＧＮ−１０９で、２３倍〜２５倍までＡＡＶ−２の有効性を増加させた。２０倍の増加がＡＤＧＮ−１００で得られた。比較すると、ＡＤＧＮ−１０６およびＰＥＰ−２は、ＡＡＶ−２の有効性を９〜１０倍増加させ、ＴＡＴ−ＨＡ２およびＣＡＤＹは５倍しか増加させなかった（図６Ｂ）。これらの結果は、ＡＤＧＮ−１０３ａおよびＡＤＧＮ−１０３ｂが、ＣＰＰ  ＴＡＴ−ＨＡ２より約５〜６倍強力であることを示唆する。ＧＦＰを発現する細胞の数は、２００μＭのＰＥＰ−１、ＡＤＧＮ−１０３ｂ、ＡＤＧＮ−１０３ａ、ＡＤＧＮ−１０９、およびＡＤＧＮ−１００を使用して、ＣＰＰの非存在下での４％から、それぞれ、９８％、９６％、９８％、９０％、および５７％に増加した。対照的に、ＴＡＴ−ＨＡ２またはＣＡＤＹペプチドを使用してわずか２３％のＧＦＰ陽性細胞しか得られなかった（図６Ａ）。
【０２８９】
ヒト神経細胞ＨＣＮ２では、２００μＭの最も高い濃度のＣＰＰ、ＡＤＧＮ−１０３ａ、ＡＤＧＮ−１０３ｂ、ＰＥＰ−１、およびＡＤＧＮ−１０９は、以下の順序ＰＥＰ１＞ＡＤＧＮ−１０３ｂ＞ＡＤＧＮ−１０３ａ＞ＡＤＧＮ−１０９で、２０倍〜ＰＥＰ−１についての２１倍までＡＡＶ−２の有効性を増加させた。１５倍の増加がＡＤＧＮ−１００で得られた。比較すると、ＡＤＧＮ−１０６およびＰＥＰ−２は、ＡＡＶ−２の有効性を７倍増加させ、ＴＡＴ−ＨＡ２およびＣＡＤＹは３倍しか増加させなかった（図６Ｄ）。ＧＦＰを発現する細胞の数は、２００μＭのＰＥＰ−１、ＡＤＧＮ−１０３ｂ、ＡＤＧＮ−１０３ａ、ＡＤＧＮ−１０９、およびＡＤＧＮ−１００を使用して、ＣＰＰの非存在下での４％から、それぞれ、８７％、８１％、７１％、５８％、および５９％に増加した。対照的に、ＴＡＴ−ＨＡ２またはＣＡＤＹペプチドを使用してわずか２０％のＧＦＰ陽性細胞しか得られなかった（図６Ｃ）。
【０２９０】
両方の細胞系について、ＡＡＶ−２の感染力に対するＡＤＧＮ−１０３ｂ、ＡＤＧＮ−１０３ａ、ＡＤＧＮ−１０９、およびＡＤＧＮ−１００の有意な影響が、１μＭの濃度でも明らかであり、２００μＭで得られた最終的改善の約７０％は、１０μＭの濃度のＣＰＰで観察された（図６Ａおよび６Ｃ）。
【０２９１】
図７Ａ〜７Ｄに報告するように、すべての試験したＣＰＰは、非許容ＨｅｐＧ２細胞およびＨＣＮ２細胞におけるＡＡＶ５媒介性の遺伝子発現を増強した。ＨｅｐＧ２では、２００μＭの最も高い濃度のＣＰＰ、ＡＤＧＮ−１０３ａ、ＡＤＧＮ−１０３、ＰＥＰ−１、およびＡＤＧＮ−１０９は、１２〜１４倍ＡＡＶ−５の有効性を増加させた。１０倍の増加が、ＡＤＧＮ−１００について得られた。比較すると、ＡＤＧＮ−１０６およびＰＥＰ−２は、７〜８倍ＡＡＶ−５の有効性を増加させ、ＴＡＴ−ＨＡ２およびＣＡＤＹは、３倍しか増加させなかった（図７Ｂ）。これらの結果は、ＡＤＧＮ−１０３ａおよびＡＤＧＮ−１０３ｂが、ＣＰＰ  ＴＡＴ−ＨＡ２より約４〜５倍強力であることを示唆する。ＧＦＰを発現する細胞の数は、２００μＭのＰＥＰ−１、ＡＤＧＮ−１０３ｂ、ＡＤＧＮ−１０３ａ、ＡＤＧＮ−１０９、およびＡＤＧＮ−１００を使用して、ＣＰＰの非存在下での５％から、それぞれ、６７％、６４％、６０％、５１％、および３９％に増加した。対照的に、ＴＡＴ−ＨＡ２またはＣＡＤＹペプチドを使用してわずか１１％のＧＦＰ陽性細胞しか得られなかった（図７Ａ）。
【０２９２】
ヒト神経細胞ＨＣＮ２では、２００μＭの最も高い濃度のＣＰＰ、ＡＤＧＮ−１０３ａ、ＡＤＧＮ−１０３ｂ、ＡＤＧＮ−１０９、およびＰＥＰ−１は、１１倍〜ＰＥＰ−１についての１２倍までＡＡＶ−５の有効性を増加させた。５倍の増加がＡＤＧＮ−１００で得られた。比較すると、ＡＤＧＮ−１０６およびＰＥＰ−２は、ＡＡＶ−５の有効性を４倍増加させ、ＴＡＴ−ＨＡ２およびＣＡＤＹは２倍しか増加させなかった（図７Ｄ）。ＧＦＰを発現する細胞の数は、２００μＭのＰＥＰ−１、ＡＤＧＮ−１０３ｂ、ＡＤＧＮ−１０３ａ、ＡＤＧＮ−１０９、およびＡＤＧＮ−１００を使用して、ＣＰＰの非存在下での５％から、それぞれ、５２％、４８％、４５％、３７％、および２２％に増加した。対照的に、ＴＡＴ−ＨＡ２またはＣＡＤＹペプチドを使用してわずか１０％のＧＦＰ陽性細胞しか得られなかった（図７Ｃ）。
【０２９３】
両方の細胞系について、ＡＡＶ−５の感染力に対するＡＤＧＮ−１０３ｂ、ＡＤＧＮ−１０３ａ、ＡＤＧＮ−１０９、およびＡＤＧＮ−１００の有意な影響が、１μＭの濃度でも明らかであり、２００μＭで得られた最終的改善の約５０％は、１０μＭの濃度で既に観察されていた。
【０２９４】
図８Ａ〜８Ｄに報告するように、すべての試験したＣＰＰは、非許容ＨｅｐＧ２細胞およびＨＣＮ２細胞におけるＡＡＶ６媒介性の遺伝子発現を増強した。ＨｅｐＧ２では、２００μＭの最も高い濃度のＣＰＰ、ＡＤＧＮ−１０３ａ、ＡＤＧＮ−１０３ｂ、ＡＤＧＮ−１０９、およびＰＥＰ−１は、以下の順序ＡＤＧＮ−１０３ｂ＞ＰＥＰ１＞ＡＤＧＮ−１０３ａ＞ＡＤＧＮ−１０９で２５倍〜ＡＤＧＮ−１０３ｂについての３０倍までＡＡＶ−６の有効性を増加させた。１７倍の増加が、ＡＤＧＮ−１００について得られた。比較すると、ＡＤＧＮ−１０６およびＴＡＴ−ＨＡ２は、約１０倍ＡＡＶ−６の有効性を増加させ、ＰＥＰ−２およびＣＡＤＹは、７〜５倍しか増加させなかった（図８Ｂ）。ＧＦＰを発現する細胞の数は、２００μＭのＰＥＰ−１、ＡＤＧＮ−１０３ｂ、ＡＤＧＮ−１０３ａ、ＡＤＧＮ−１０９、およびＡＤＧＮ−１００を使用して、ＣＰＰの非存在下での５％から、それぞれ、９９％、９８％、９４％、８２％、および５９％に増加した。対照的に、ＴＡＴ−ＨＡ２およびＣＡＤＹペプチドを使用して、それぞれ、わずか３５％および２９％のＧＦＰ陽性細胞しか得られなかった（図８Ａ）。
【０２９５】
ヒト神経細胞ＨＣＮ２では、２００μＭの最も高い濃度のＣＰＰ、ＡＤＧＮ−１０３ａ、ＡＤＧＮ−１０３ｂ、およびＰＥＰ−１は、以下の順序ＡＤＧＮ−１０３ｂ＞ＰＥＰ１＞ＡＤＧＮ−１０３ａ＞ＡＤＧＮ−１０９で、１８倍〜ＡＤＧＮ−１０３ｂについての２２倍までＡＡＶ−６の有効性を増加させた。１５倍の増加がＡＤＧＮ−１００で得られた。比較すると、ＡＤＧＮ−１０６およびＰＥＰ−２は、ＡＡＶ−６の有効性を７倍増加させ、ＴＡＴ−ＨＡ２およびＣＡＤＹは３倍しか増加させなかった（図８Ｄ）。ＧＦＰを発現する細胞の数は、２００μＭのＰＥＰ−１、ＡＤＧＮ−１０３ｂ、ＡＤＧＮ−１０３ａ、ＡＤＧＮ−１０９、およびＡＤＧＮ−１００を使用して、ＣＰＰの非存在下での４％から、それぞれ、７２％、６７％、６５％、６２％、および４８％に増加した。対照的に、ＴＡＴ−ＨＡ２およびＣＡＤＹペプチドを使用して、それぞれ、わずか２２％および１８％のＧＦＰ陽性細胞しか得られなかった（図８Ｃ）。
【０２９６】
両方の細胞系について、ＡＡＶ−６の感染力に対するＡＤＧＮ−１０３ｂ、ＡＤＧＮ−１０３ａ、ＡＤＧＮ−１０９、およびＡＤＧＮ−１００の有意な影響が、１μＭの濃度でも明らかであり、２００μＭで得られた最終的改善の約７０％は、１０μＭの濃度で既に観察されていた。
【０２９７】
図９Ａ〜９Ｄに報告するように、すべての試験したＣＰＰは、非許容ＨｅｐＧ２およびＨＣＮ２細胞におけるＡＡＶ−８媒介性の遺伝子発現を増強した。ＨｅｐＧ２では、２００μＭの最も高い濃度のＣＰＰ、ＡＤＧＮ−１０３ａ、ＡＤＧＮ−１０３ｂ、ＡＤＧＮ−１０９、およびＰＥＰ−１は、以下の順序ＰＥＰ１＞ＡＤＧＮ−１０３ｂ＞ＡＤＧＮ−１０３ａ＞ＡＤＧＮ−１０９で１０倍〜ＰＥＰ−１についての１４倍までＡＡＶ−８の有効性を増加させた。比較すると、ＡＤＧＮ−１０６、ＡＤＧＮ−１００、ＴＡＴ−ＨＡ２、およびＣＡＤＹは、３〜５倍しかＡＡＶ−８の有効性を増加させなかった（図９Ｂ）。ＧＦＰを発現する細胞の数は、２００μＭのＰＥＰ−１、ＡＤＧＮ−１０３ｂ、ＡＤＧＮ−１０３ａ、ＡＤＧＮ−１０９、およびＡＤＧＮ−１００を使用して、ＣＰＰの非存在下での５％から、それぞれ、６８％、６０％、５２％、４５％、および２６％に増加した。対照的に、ＴＡＴ−ＨＡ２およびＣＡＤＹペプチドを使用して、わずか１５％のＧＦＰ陽性細胞しか得られなかった（図９Ａ）。
【０２９８】
ヒト神経細胞ＨＣＮ２では、２００μＭの最も高い濃度のＣＰＰ、ＡＤＧＮ−１０３ａ、ＡＤＧＮ−１０３ｂ、ＡＤＧＮ−１０９、およびＰＥＰ−１は、以下の順序ＰＥＰ１＞ＡＤＧＮ−１０３ｂ＞ＡＤＧＮ−１０３ａ＞ＡＤＧＮ−１０９で、１２倍〜ＰＥＰ−１についての１４倍までＡＡＶ−８の有効性を増加させた。比較すると、ＡＤＧＮ−１０６、ＡＤＧＮ−１００、ＴＡＴ−ＨＡ２、およびＣＡＤＹは、ＡＡＶ−８の有効性を４〜５倍しか増加させなかった（図９Ｄ）。ＧＦＰを発現する細胞の数は、２００μＭのＰＥＰ−１、ＡＤＧＮ−１０３ｂ、ＡＤＧＮ−１０３ａ、ＡＤＧＮ−１０９、およびＡＤＧＮ−１００を使用して、ＣＰＰの非存在下での５％から、それぞれ、６１％、５８％、４９％、４４％、および２３％に増加した。対照的に、ＴＡＴ−ＨＡ２またはＣＡＤＹペプチドを使用して、わずか１２％のＧＦＰ陽性細胞しか得られなかった（図９Ｃ）。
【０２９９】
両方の細胞系について、ＡＡＶ−８の感染力に対するＡＤＧＮ−１０３ｂ、ＡＤＧＮ−１０３ａ、ＡＤＧＮ−１０９、およびＡＤＧＮ−１００の有意な影響が、１μＭの濃度でも明らかであり、２００μＭで得られた最終的改善の約６０％は、１０μＭの濃度で既に観察されていた。
【０３００】
結果は、ＡＤＧＮペプチドが、ヒト肝細胞ＨｅｐＧ２およびヒト神経細胞ＨＣＮ２を含む、非許容細胞系におけるウイルス媒介性の遺伝子送達を有意に改善すること（than）を実証する。ＡＤＧＮペプチドは、ペプチドの非存在下での５％未満のＧＦＰ陽性細胞しかもたらさないＭＯＩのＡＡＶ−１、ＡＡＶ−２、ＡＡＶ−５、ＡＡＶ−６、およびＡＡＶ−８を含むすべての試験したＡＡＶ血清型の感染力を増加させた。ＡＤＧＮペプチドは、０．１μＭで出発して、用量依存的様式で、ウイルス遺伝子の送達を促進し、１００μＭで最適な効果を示した。興味深いことに、試験したすべてのＡＤＧＮペプチドについて、１０μＭのＣＰＰ濃度で、６０％を超える（more  that  60%）最大増加が既に観察されていた。
【０３０１】
ＴＡＴ−ＨＡ２またはＬＡＨ４（ロイシンリッチペプチドおよびヒスチジンリッチペプチドである配列番号８４）を含む他の公知のＣＰＰと比較して、ＡＤＧＮ−１０３ａ、ＡＤＧＮ−１０３ｂ、およびＡＤＧＮ−１０９は、少なくとも４〜６倍より強力である。以前の研究（Lui  and  collaborators,  Molecular  Therapy,  2014）は、ＴＡＴ−ＨＡ２またはＬＡＨ４ペプチドを使用することにより、ＨｅｐＧ２細胞のトランスフェクションに対するＡＡＶ−２の有効性が改善されたことを示した。Luiらは、２００μＭの濃度のＴＡＴ−ＨＡ２またはＬＡＨ４ペプチドを使用することにより、それぞれ、約２５％および４５％のＧＦＰ陽性細胞がもたらされ、これは、ＡＤＧＮペプチドにより得られた結果より４倍および２倍低いことを実証した。興味深いことに、１０μＭのより低い濃度のＣＰＰでは、LiuらによるＴＡＴ−ＨＡ２またはＬＡＨ４のいずれかを使用して、１２％のＧＦＰ陽性細胞しか得られなかった。同じ用量のＡＤＧＮペプチドで、８７％〜９５％のＧＦＰ陽性細胞がもたらされたことを考慮すると、ＡＤＧＮペプチドは、ＴＡＴ−ＨＡ２またはＬＡＨ４より７〜８倍までより強力であり、ウイルス粒子の細胞内への取り込みを改善するために、有意に低い濃度のＡＤＧＮペプチドが必要とされる。
（実施例３）
細胞膜透過ペプチド（ＣＰＰ）は、ｉｎ  ｖｉｖｏでウイルス媒介性の遺伝子送達を有意に増加する
【０３０２】
本実施例では、ｉｎ  ｖｉｖｏマウスモデルにおいて、ＡＡＶ−２、ＡＡＶ−６、およびＡＡＶ−８媒介性の遺伝子送達に対する細胞膜透過ペプチドの影響を調べる。本実施例の目的は、本発明のＣＰＰ（例えば、ＰＥＰ−１、ＰＥＰ−２、ＶＥＰＥＰ−３ａ、ＶＥＰＥＰ−３ｂ、ＶＥＰＥＰ−６、ＶＥＰＥＰ−９、ＡＤＧＮ−１００ａ、およびＡＤＧＮ−１００ｂ）の以前に記載したＣＰＰ、例えば、ｐＡＮＴおよびＴＡＴ−ＨＡ２との比較ならびに本発明のＣＰＰとの会合が、全身または局所筋肉内注射／皮下注射のいずれかによる、ｉｎ  ｖｉｖｏでのＡＡＶ２、ＡＡＶ６、およびＡＡＶ８媒介性形質導入の有意な増強をもたらすことを実証することである。診療所でＡＡＶを使用することの主な制限は、有意なトランスジェニック発現を得るために必要とされるＡＡＶベクターの投与により強力な免疫応答が誘導されるという事実に関する。したがって、有意な検出可能なレベルの遺伝子発現を生じるために必要とされる最少用量が決定される。
【０３０３】
導入遺伝子、例えば、緑色蛍光タンパク質（ＡＡＶ−ＧＦＰ）または関連する治療用遺伝子、例えば、血友病Ａ（ＡＡＶ−第ＶＩＩＩ因子）、血友病Ｂ（ＡＡＶ−第ＩＸ因子）、二対立遺伝子ＲＰＥ６５媒介性の遺伝性網膜疾患（ＩＲＤ）（ＡＡＶ−ＲＰＥ６５）、全脈絡膜萎縮症（ＡＡＶ−ＣＨＭ）、レーバー遺伝性視神経症（ＬＨＯＮ）、ＴＰＰ１欠乏（ＡＡＶ−ＴＰＰ１）、または網膜色素変性症、例えば、ロドプシン関連常染色体優性網膜色素変性症（ａｄＲＰ）（ＡＡＶ−Ｒｈｏ））をコードするアデノ随伴ウイルス（例えば、ＡＡＶ−２、ＡＡＶ−６、およびＡＡＶ−８）は、許容細胞種、例えば、ＨＥＫ２９３細胞において生じる。ペプチドを固相合成によって得る。適切な疾患モデルマウス（例えば、ＢＡＬＢ／Ｃマウスなど）をＡＡＶおよびＡＡＶ／ＣＰＰ複合体の投与に使用する。マウス１匹当たり１０７〜１０１２個の粒子（例えば、マウス１匹当たり１〜４×１０９個の粒子）の、緑色蛍光タンパク質および治療用遺伝子をコードするＡＡＶ（ＡＡＶ２−ＧＦＰ、ＡＡＶ−６  ＧＦＰおよびＡＡＶ−８  ＧＦＰ）を、様々な濃度のＣＰＰ、例えば、約１、１０、および１００μＭを含む生理的ＮａＣｌ緩衝液中で３０分間プレインキュベートする。マウス１匹当たりのペプチド用量は、１０μｇ〜１０００μｇの間で変更し得る。
【０３０４】
２００μｌの最終体積中ＡＡＶ単独またはＣＰＰ／ＡＡＶ複合体を、ＢＡＬＢ／Ｃマウス（１群当たり４匹のマウス）に静脈内、筋肉内または皮下注射する。ウイルス媒介性の導入遺伝子発現を、注射の１０〜３０日後にモニターして、発現の持続性を評価する。様々な組織中のＧＦＰの発現または治療用遺伝子の発現を、例えば、免疫蛍光、落射蛍光、またはＰＣＲで分析する。治療用遺伝子産物はまた、標準的技法によって、血液または血漿中で測定することができる。ＧＦＰまたは治療用遺伝子産物のレベルを、例えば、肺、肝臓、脾臓、脳、心臓、筋肉および膵臓を含む様々な組織について、遊離ＡＡＶマウス群および注射を受けていないマウス群と比較する。ＡＡＶのｉｎ  ｖｉｖｏでの分布に対するＣＰＰの影響を決定する。データは、例えば、１群当たり３匹のマウスの平均として報告する。
【０３０５】
毒性およびＡＡＶに関連する免疫応答に対するＣＰＰの影響を調べる。すべての場合に、肝臓、脾臓、肺および筋肉を含む主要器官の組織学的研究を実施する。本発明者らは、ＣＰＰが、ｉｎ  ｖｉｖｏで、炎症性サイトカインのレベルを増加させないことを以前に実証した。サイトカイン、インターロイキンおよびＴＮＦのレベルは、２０ｐｌｅｘサイトカイン検査を使用して注射後の様々な時点で評価し、遊離ＡＡＶ注射と比較する。例えば、ベクター投与後２、４、６、８および１２週に、マウスから採血し、導入遺伝子産物のレベルおよびＡＡＶ中和抗体を測定する。繰り返し投与実験では、１日目の注射後に観察した有効性および毒性の結果に基づいて選択した濃度用量（concentration  dose）を、３０日目の第２のＡＡＶ投与において使用する。ＡＡＶ投与後の選択した時点における各実験群に関する抗ＡＡＶ  ＩｇＧおよび中和抗体のレベルを決定する。
【０３０６】
ＣＰＰは、ＡＡＶベクターに対する宿主細胞の免疫応答に影響を及ぼすことなく、ｉｎ  ｖｉｖｏでのＡＡＶ媒介性遺伝子送達を有意に増強することができる。ＣＰＰは、非常に低いＡＡＶの用量での有効なベクターによる形質導入を可能とし、免疫応答を潜在的に制限するかまたは回避する。
【０３０７】
ＣＰＰは、遺伝子送達におけるＡＡＶの全体的安全性を増加させ、ＡＡＶが宿主免疫系にアクセスするのを妨げることによって複数回注射／投与を可能とすることができる。
（実施例４）
細胞膜透過ペプチド（ＣＰＰ）の最適化
ペプチド化学
【０３０８】
ペプチドを固相合成によって得た。Ｌペプチドまたはレトロインベルソペプチド（ＡＤＧＮ−１００；ＡＤＧＮ−１０６、ＡＤＧＮ−１０９）を、以下のモチーフでＮまたはＣ末端のいずれかで修飾することができる。
【化２】
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【０３０９】
特定のターゲティング配列ＧＹＶＳ（Ｋ）またはＹＩＧＳ（Ｒ）を、以下に報告するリンカーによって分離されたペプチドのＣまたはＮ末端に付加する。リンカーは、Ｇｌｙ−ベータＡｌａまたはＧｌｙ４−Ｓｅｒモチーフのいずれかに対応する。例として、ＡＤＧＮ−１００の配列は、以下のように修飾される。
【化３】
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【０３１０】
ｐＨ５．５のアルデヒドモノエトキシポリ（エチレングリコール）を使用して、Ｎ末端ベータアラニン残基の第一級アミノ基での、モノ−ＰＥＧ化ペプチドコンジュゲーション（１０ｋＤａのＰＥＧまたは５ｋＤａのＰＥＧにコンジュゲートしたペプチド）を実施し、次いで、ＰＥＧ化ペプチドを、ＲＰ−ＨＰＬＣでさらに精製し、エレクトロスプレーイオン化質量分析によって分析した。
【０３１１】
ドーパミンは、タンパク質表面の芳香族および疎水性パッチとの相互作用を改善した。ドーパミンは、Ｇｌｙ４ＳリンカーまたはＧ−βＡｌａを使用してペプチドのＮ末端に付加した。
粒子安定性の評価
【０３１２】
ペプチドのストック溶液を蒸留水または５％ＤＭＳＯ中で２ｍｇ／ｍＬに調製し、水浴ソニケーター中で１０分間超音波処理し、次いで、使用する直前に希釈した。ＭＯＩ３００で緑色蛍光タンパク質をコードするＡＡＶを、５０および１００μＭの濃度の特異的ターゲティングモチーフ、ＰＥＧまたはドーパミン部分のいずれかを含有するＣＰＰと共に低塩培地中で３０分間プレインキュベートした。ＡＡＶ／ＣＰＰ粒子の安定性を様々な条件で評価した。１０、２０〜５０％血清（ＦＳＣ）を含有する培地中およびヘパリン（５および１０μｇ）の存在下で、粒子を１時間インキュベートした。次いで、ＡＡＶ単独またはＣＰＰ／ＡＡＶ複合体を２４ウェルプレートフォーマットにある培養細胞に添加した。細胞を、遊離ＡＡＶまたはＣＰＰ／ＡＡＶ複合体のいずれかで４時間処理し、次いで、培地を新鮮な培地で置き換えた。ウイルス媒介性の導入遺伝子の発現を、感染の２日後にモニターした。ＧＦＰ発現細胞をフローサイトメトリーによって検出した。
（実施例５）
２９３Ｔ細胞におけるウイルス送達に関するＰＥＰ−１ペプチドの最適化
ペプチドの合成および化学
【０３１３】
Ｐｅｐ−１ペプチドを、Ｆｍｏｃ／ｔＢｏｃ方法に従って固相ペプチド合成によって合成した。すべてのペプチドをＮアセチル化し、それらのカルボキシ末端にシステアミド基（−ＮＨ−ＣＨ２−ＣＨ２−ＳＨ）を保有させる。粗製ペプチドをＲＰ−ＨＰＬＣによってＣ１８カラム（Ｉｎｔｅｒｃｈｒｏｍ  ＵＰ５  ＷＯＤ／２５Ｍ  Ｕｐｔｉｓｐｅｒｅ  ３００  ５  ＯＤＢ、２５０＿２１．２ｍｍ）で精製した。特定のターゲティング配列ＧＹＶＳＫを、以下に記載するＧｌｙ４またはＧｌｙ４−Ｓｅｒリンカーによって分離されたペプチドのＣまたはＮ末端に付加した。
【化４】
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５ＫＤａのＰＥＧ−ＰＥＧ化ＰＥＰ−１
【０３１４】
ｐＨ５．５のアルデヒドモノエトキシポリ（エチレングリコール）を使用して、Ｎ末端ベータアラニン残基の第一級アミノ基での、モノ−ＰＥＧ化ペプチドコンジュゲーション（５ｋＤａのＰＥＧでコンジュゲートしたペプチド）を実施し、次いで、ＰＥＧ化ペプチドを、ＲＰ−ＨＰＬＣでさらに精製し、エレクトロスプレーイオン化質量分析によって分析した。
【化５】
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粒子安定性の評価
【０３１５】
ペプチドのストック溶液を蒸留水または５％ＤＭＳＯ中で２ｍｇ／ｍＬに調製し、水浴ソニケーター中で１０分間超音波処理し、次いで、使用する直前に希釈した。ＭＯＩ３００の緑色蛍光タンパク質をコードするＡＡＶ−２を、５０μＭの濃度の特異的ターゲティングモチーフ、ＰＥＧまたはドーパミン部分のいずれかを含有するＰＥＰ−１ペプチドと共に低塩培地中で３０分間プレインキュベートした。ＡＡＶ−２／ペプチド粒子の安定性を様々な条件で評価した。１０、２０〜５０％血清（ＦＳＣ）を含有するＤＭＥＭ培地中またはヘパリン（５および１０μｇ）の存在下で、粒子を１時間インキュベートした。次いで、ＡＡＶ単独またはＰＥＰ−１／ＡＡＶ複合体を２４ウェルプレートフォーマットにある培養２９３Ｔ細胞に添加した。細胞を、遊離ＡＡＶ−２またはペプチド／ＡＡＶ−２複合体のいずれかで４時間処理し、次いで、培地を新鮮な培地で置き換えた。ウイルス媒介性の導入遺伝子の発現を、感染の２日後にモニターした。ＧＦＰ発現細胞をフローサイトメトリーによって検出した。
結果
【０３１６】
以下の図１０に報告するように、いずれの修飾もない条件で、２０％および５０％の血清の存在が、ＡＡＶ／ＰＥＰ−１複合体の安定性を有意に低下させた。ＧＦＰ発現細胞のレベルは、それぞれ、６０％および８０％低下する。対照的に、ヘパリンの存在下でのインキュベーションは、安定性に対して限定された効果しか有さなかったという事実は、ＰＥＰ−１とＡＡＶの間の相互作用が静電接触に関与せず、主に疎水性であることを示唆した。
【０３１７】
ＰＥＰ−１のＤｏｐａおよびＰＥＧ修飾は、標準的条件（血清なし、ヘパリンなし）で、有効性を４０％増加させ、高濃度の血清の存在下でペプチド／ＡＡＶ−２粒子を安定化させた。有効性は、５０％血清中で３０％だけ低下する。
【０３１８】
ＰＥＰ−１のＣ末端におけるＧＹＶＳＫターゲティング配列の存在は、ＡＡＶ／ＰＥＰ−１複合体の安定性に対して中程度の効果のみを有した。対照的に、Ｎ末端へのターゲティング配列の存在は、複合体を血清から有意に保護した。有効性は、５０％血清条件下で２７％だけ低下した。
【０３１９】
【表１−１】
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【表１−２】
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【表１−３】
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【表１−４】
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【表１−５】
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【表１−６】
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【表１−７】
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【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【配列表】
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【国際調査報告】
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