(57)【要約】TIGITに特異的に結合する作用物質を含む、免疫応答を増強するためおよび/またはがんなどの疾患を処置するための方法が開示されている。TIGIT結合物質は、ポリペプチド、抗体、および/または二重特異性作用物質を含んでもよい。【特許請求の範囲】
【請求項１】
ヒトTIGITの細胞外ドメインに特異的に結合する抗体の治療的有効量を対象に投与する工程を含む、該対象において腫瘍成長を阻害する方法であって、
該腫瘍が、高頻度マイクロサテライト不安定性(microsatellite instability-high)結腸直腸がん、マイクロサテライト安定性(microsatellite stable)結腸直腸がん、トリプルネガティブ乳がん、メルケル細胞がん、子宮内膜がん、または食道がんであり、かつ
ヒトTIGITに結合する該抗体が、TSDYAWN(SEQ ID NO:4)を含む重鎖CDR1、
2020503273.tif 000175
を含む重鎖CDR2、
2020503273.tif 000176
を含む重鎖CDR3、
2020503273.tif 000177
を含む軽鎖CDR1、SASYRYT(SEQ ID NO:8)を含む軽鎖CDR2、およびQQHYSTP(SEQ ID NO:9)を含む軽鎖CDR3を含む、該方法。
【請求項２】
ヒトTIGITの細胞外ドメインに特異的に結合する抗体の治療的有効量をPD-1アンタゴニストまたはPD-L1アンタゴニストと組み合わせて対象に投与する工程を含む、該対象において腫瘍成長を阻害する方法であって、
該腫瘍が、高頻度マイクロサテライト不安定性結腸直腸がん、マイクロサテライト安定性結腸直腸がん、トリプルネガティブ乳がん、メルケル細胞がん、子宮内膜がん、または食道がんであり、かつ
ヒトTIGITに結合する該抗体が、TSDYAWN(SEQ ID NO:4)を含む重鎖CDR1、
2020503273.tif 000178
を含む重鎖CDR2、
2020503273.tif 000179
を含む重鎖CDR3、
2020503273.tif 000180
を含む軽鎖CDR1、SASYRYT(SEQ ID NO:8)を含む軽鎖CDR2、およびQQHYSTP(SEQ ID NO:9)を含む軽鎖CDR3を含む、該方法。
【請求項３】
ヒトTIGITの細胞外ドメインに特異的に結合する抗体の治療的有効量を対象に投与する工程を含む、該対象において腫瘍成長を阻害する方法であって、
該腫瘍が、PD-1アンタゴニストまたはPD-L1アンタゴニストを用いる処置に対して抵抗性または不応性であり、かつ
ヒトTIGITに結合する該抗体が、TSDYAWN(SEQ ID NO:4)を含む重鎖CDR1、
2020503273.tif 000181
を含む重鎖CDR2、
2020503273.tif 000182
を含む重鎖CDR3、
2020503273.tif 000183
を含む軽鎖CDR1、SASYRYT(SEQ ID NO:8)を含む軽鎖CDR2、およびQQHYSTP(SEQ ID NO:9)を含む軽鎖CDR3を含む、該方法。
【請求項４】
ヒトTIGITの細胞外ドメインに特異的に結合する抗体の治療的有効量をPD-1アンタゴニストまたはPD-L1アンタゴニストと組み合わせて対象に投与する工程を含む、該対象において腫瘍成長を阻害する方法であって、
該腫瘍が、単一の作用物質としてPD-1アンタゴニストまたはPD-L1アンタゴニストを用いる処置に対して抵抗性または不応性であり、かつ
ヒトTIGITに結合する該抗体が、TSDYAWN(SEQ ID NO:4)を含む重鎖CDR1、
2020503273.tif 000184
を含む重鎖CDR2、
2020503273.tif 000185
を含む重鎖CDR3、
2020503273.tif 000186
を含む軽鎖CDR1、SASYRYT(SEQ ID NO:8)を含む軽鎖CDR2、およびQQHYSTP(SEQ ID NO:9)を含む軽鎖CDR3を含む、該方法。
【請求項５】
ヒトTIGITの細胞外ドメインに特異的に結合する抗体の治療的有効量を対象に投与する工程を含む、該対象において腫瘍成長を阻害する方法であって、
該対象が、単一の作用物質としてPD-1アンタゴニストまたはPD-L1アンタゴニストを用いて以前に処置されたことがあり、かつ
ヒトTIGITに結合する該抗体が、TSDYAWN(SEQ ID NO:4)を含む重鎖CDR1、
2020503273.tif 000187
を含む重鎖CDR2、
2020503273.tif 000188
を含む重鎖CDR3、
2020503273.tif 000189
を含む軽鎖CDR1、SASYRYT(SEQ ID NO:8)を含む軽鎖CDR2、およびQQHYSTP(SEQ ID NO:9)を含む軽鎖CDR3を含む、該方法。
【請求項６】
ヒトTIGITの細胞外ドメインに特異的に結合する抗体の治療的有効量をPD-1アンタゴニストまたはPD-L1アンタゴニストと組み合わせて対象に投与する工程を含む、該対象において腫瘍成長を阻害する方法であって、
該対象が、単一の作用物質としてPD-1アンタゴニストまたはPD-L1アンタゴニストを用いて以前に処置されたことがあり、かつ
ヒトTIGITに結合する該抗体が、TSDYAWN(SEQ ID NO:4)を含む重鎖CDR1、
2020503273.tif 000190
を含む重鎖CDR2、
2020503273.tif 000191
を含む重鎖CDR3、
2020503273.tif 000192
を含む軽鎖CDR1、SASYRYT(SEQ ID NO:8)を含む軽鎖CDR2、およびQQHYSTP(SEQ ID NO:9)を含む軽鎖CDR3を含む、該方法。
【請求項７】
ヒトTIGITの細胞外ドメインに特異的に結合する抗体の治療的有効量を対象に投与する工程を含む、該対象において腫瘍成長を阻害する方法であって、
該腫瘍がポリオウイルス受容体(PVR)および/またはポリオウイルス受容体関連2(PVRL2)を発現し、かつ
ヒトTIGITに結合する該抗体が、TSDYAWN(SEQ ID NO:4)を含む重鎖CDR1、
2020503273.tif 000193
を含む重鎖CDR2、
2020503273.tif 000194
を含む重鎖CDR3、
2020503273.tif 000195
を含む軽鎖CDR1、SASYRYT(SEQ ID NO:8)を含む軽鎖CDR2、およびQQHYSTP(SEQ ID NO:9)を含む軽鎖CDR3を含む、該方法。
【請求項８】
ヒトTIGITの細胞外ドメインに特異的に結合する抗体の治療的有効量をPD-1アンタゴニストまたはPD-L1アンタゴニストと組み合わせて対象に投与する工程を含む、該対象において腫瘍成長を阻害する方法であって、
該腫瘍が、ポリオウイルス受容体(PVR)および/またはポリオウイルス受容体関連2(PVRL2)を発現し、かつ
ヒトTIGITに結合する該抗体が、TSDYAWN(SEQ ID NO:4)を含む重鎖CDR1、
2020503273.tif 000196
を含む重鎖CDR2、
2020503273.tif 000197
を含む重鎖CDR3、
2020503273.tif 000198
を含む軽鎖CDR1、SASYRYT(SEQ ID NO:8)を含む軽鎖CDR2、およびQQHYSTP(SEQ ID NO:9)を含む軽鎖CDR3を含む、該方法。
【請求項９】
ヒトTIGITの細胞外ドメインに特異的に結合する抗体の治療的有効量を対象に投与する工程を含む、該対象において腫瘍成長を阻害する方法であって、
該腫瘍が腫瘍浸潤リンパ球(TIL)を含み、かつ
ヒトTIGITに結合する該抗体が、TSDYAWN(SEQ ID NO:4)を含む重鎖CDR1、
2020503273.tif 000199
を含む重鎖CDR2、
2020503273.tif 000200
を含む重鎖CDR3、
2020503273.tif 000201
を含む軽鎖CDR1、SASYRYT(SEQ ID NO:8)を含む軽鎖CDR2、およびQQHYSTP(SEQ ID NO:9)を含む軽鎖CDR3を含む、該方法。
【請求項１０】
ヒトTIGITの細胞外ドメインに特異的に結合する抗体の治療的有効量をPD-1アンタゴニストまたはPD-L1アンタゴニストと組み合わせて対象に投与する工程を含む、該対象において腫瘍成長を阻害する方法であって、
該腫瘍が腫瘍浸潤リンパ球を含み、かつ
ヒトTIGITに結合する該抗体が、TSDYAWN(SEQ ID NO:4)を含む重鎖CDR1、
2020503273.tif 000202
を含む重鎖CDR2、
2020503273.tif 000203
を含む重鎖CDR3、
2020503273.tif 000204
を含む軽鎖CDR1、SASYRYT(SEQ ID NO:8)を含む軽鎖CDR2、およびQQHYSTP(SEQ ID NO:9)を含む軽鎖CDR3を含む、該方法。
【請求項１１】
ヒトTIGITの細胞外ドメインに特異的に結合する抗体の治療的有効量を対象に投与する工程を含む、該対象において腫瘍成長を阻害する方法であって、
該腫瘍が調節性T細胞を含み、かつ
ヒトTIGITに結合する該抗体が、TSDYAWN(SEQ ID NO:4)を含む重鎖CDR1、
2020503273.tif 000205
を含む重鎖CDR2、
2020503273.tif 000206
を含む重鎖CDR3、
2020503273.tif 000207
を含む軽鎖CDR1、SASYRYT(SEQ ID NO:8)を含む軽鎖CDR2、およびQQHYSTP(SEQ ID NO:9)を含む軽鎖CDR3を含む、該方法。
【請求項１２】
ヒトTIGITの細胞外ドメインに特異的に結合する抗体の治療的有効量をPD-1アンタゴニストまたはPD-L1アンタゴニストと組み合わせて対象に投与する工程を含む、該対象において腫瘍成長を阻害する方法であって、
該腫瘍が調節性T細胞を含み、かつ
ヒトTIGITに結合する該抗体が、TSDYAWN(SEQ ID NO:4)を含む重鎖CDR1、
2020503273.tif 000208
を含む重鎖CDR2、
2020503273.tif 000209
を含む重鎖CDR3、
2020503273.tif 000210
を含む軽鎖CDR1、SASYRYT(SEQ ID NO:8)を含む軽鎖CDR2、およびQQHYSTP(SEQ ID NO:9)を含む軽鎖CDR3を含む、該方法。
【請求項１３】
PD-1アンタゴニストまたはPD-L1アンタゴニストを用いる処置の最中または後に腫瘍成長進行がある、請求項3〜6のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１４】
PD-1アンタゴニストまたはPD-L1アンタゴニストを用いる処置の後に腫瘍成長再発がある、請求項3〜6のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１５】
前記腫瘍再発が局所再発、局部再発、または遠隔再発である、請求項14に記載の方法。
【請求項１６】
前記腫瘍が、抗PD-1抗体を用いる処置に対して抵抗性または不応性である、請求項3または請求項4に記載の方法。
【請求項１７】
前記腫瘍が、抗PD-L1抗体を用いる処置に対して抵抗性または不応性である、請求項3または請求項4に記載の方法。
【請求項１８】
前記対象が、抗PD-1抗体を用いて以前に処置されたことがある、請求項5または請求項6に記載の方法。
【請求項１９】
前記対象が、抗PD-L1抗体を用いて以前に処置されたことがある、請求項5または請求項6に記載の方法。
【請求項２０】
併用療法が抗PD-1抗体を含む、請求項2、4、6、8、10、または12のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２１】
併用療法が抗PD-L1抗体を含む、請求項2、4、6、8、10、または12のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２２】
前記腫瘍が、肺腫瘍、肝臓腫瘍、乳房腫瘍、腎細胞がん/腎臓腫瘍、前立腺腫瘍、胃腸腫瘍/胃腫瘍、黒色腫、頸部腫瘍、膀胱腫瘍、グリア芽細胞腫、頭頸部腫瘍、膵臓腫瘍、卵巣腫瘍、結腸直腸腫瘍、子宮内膜腫瘍、および食道腫瘍からなる群より選択される、請求項3〜21のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２３】
前記ヒトTIGITに結合する抗体が、SEQ ID NO:10を含む重鎖可変領域、およびSEQ ID NO:11を含む軽鎖可変領域を含む、請求項1〜22のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２４】
前記ヒトTIGITに結合する抗体がモノクローナル抗体である、請求項1〜23のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２５】
前記ヒトTIGITに結合する抗体が二重特異性抗体である、請求項1〜24のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２６】
前記ヒトTIGITに結合する抗体が、抗原結合部位を含む抗体断片である、請求項1〜25のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２７】
前記ヒトTIGITに結合する抗体がIgG1抗体である、請求項1〜25のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２８】
前記ヒトTIGITに結合する抗体がIgG4抗体である、請求項1〜25のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２９】
前記ヒトTIGITに結合する抗体が、SEQ ID NO:13の重鎖アミノ酸配列、およびSEQ ID NO:15の軽鎖アミノ酸配列を含む、請求項1〜25のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３０】
前記ヒトTIGITに結合する抗体が、SEQ ID NO:17の重鎖アミノ酸配列、およびSEQ ID NO:15の軽鎖アミノ酸配列を含む、請求項1〜25のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３１】
前記ヒトTIGITに結合する抗体が、指定番号PTA-122346としてATCCに寄託されたプラスミドによってコードされる重鎖可変領域、および指定番号PTA-122347としてATCCに寄託されたプラスミドによってコードされる軽鎖可変領域を含む、請求項1〜26のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３２】
前記腫瘍内および/または腫瘍微小環境内のTエフェクター細胞を増大させる、請求項1〜31のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３３】
前記腫瘍内および/または腫瘍微小環境内のTエフェクター細胞活性を増大させる、請求項1〜31のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３４】
前記腫瘍内および/または腫瘍微小環境内の調節性T細胞を枯渇させる、請求項1〜31のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３５】
前記腫瘍内および/または腫瘍微小環境内のTregの抑制活性を阻害しかつ/または減少させる、請求項1〜31のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３６】
前記ヒトTIGITに結合する抗体が、週1回、2週間に1回、3週間に1回、または4週間に1回投与される、請求項1〜35のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３７】
前記ヒトTIGITに結合する抗体が、約2週間に1回または3週間に1回投与される、請求項36に記載の方法。
【請求項３８】
前記ヒトTIGITに結合する抗体が、約0.1mg/kg〜約25mg/kgの用量で投与される、請求項1〜37のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３９】
前記ヒトTIGITに結合する抗体が、約0.3mg/kg、約1mg/kg、約3mg/kg、約10mg/kg、または約15mg/kgの用量で投与される、請求項38に記載の方法。
【請求項４０】
少なくとも1種類のさらなる治療用物質を投与する工程をさらに含む、請求項1〜39のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４１】
前記さらなる治療用物質が化学療法剤である、請求項40に記載の方法。
【請求項４２】
前記さらなる治療用物質が抗体である、請求項40に記載の方法。
【請求項４３】
前記さらなる治療用物質が免疫療法剤である、請求項40に記載の方法。
【請求項４４】
前記免疫療法剤が、GM-CSF、M-CSF、G-CSF、IL-2、IL-3、IL-12、IL-15、B7-1(CD80)、B7-2(CD86)、4-1BBリガンド、GITRL、OX40L、CD40L、抗CD3抗体、抗CTLA-4抗体、抗GITR抗体、抗OX40抗体、抗4-1BB抗体、抗LAG-3抗体、および抗TIM-3抗体からなる群より選択される、請求項43に記載の方法。
【請求項４５】
前記さらなる治療用物質が、Notch経路、Wnt経路、またはRSPO/LGR経路の阻害物質である、請求項40に記載の方法。
【請求項４６】
前記対象の腫瘍またはがんが少なくとも部分的に除去されている、請求項1〜45のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４７】
ヒトTIGITの細胞外ドメインに特異的に結合する抗体の治療的有効量を対象に投与する工程を含む、該対象において腫瘍成長を阻害する方法であって、
該腫瘍が、頭頸部がん、食道がん/胃食道がん、胃がん、結腸直腸がん、肛門がん、肝細胞がん/肝臓がん、子宮頸がん、肺がん、黒色腫、メルケル細胞がん、腎細胞がん/腎臓がん、膀胱がん、卵巣がん、膵臓がん、子宮内膜がん、およびトリプルネガティブ乳がん、既知高頻度MSI固形腫瘍(MSI CRCを含む)またはMSS結腸直腸がんであり、
該腫瘍が、抗PD-1抗体または抗PD-L1抗体を用いる処置に対して抵抗性または不応性であり、かつ
ヒトTIGITに結合する該抗体が、TSDYAWN(SEQ ID NO:4)を含む重鎖CDR1、
2020503273.tif 000211
を含む重鎖CDR2、
2020503273.tif 000212
を含む重鎖CDR3、
2020503273.tif 000213
を含む軽鎖CDR1、SASYRYT(SEQ ID NO:8)を含む軽鎖CDR2、およびQQHYSTP(SEQ ID NO:9)を含む軽鎖CDR3を含む、該方法。
【請求項４８】
前記対象が、抗PD-1抗体または抗PD-L1抗体を用いて以前に処置されたことがある、請求項47に記載の方法。
【請求項４９】
前記ヒトTIGITの細胞外ドメインに特異的に結合する抗体が、約0.1mg/kg、約0.3mg/kg、約1mg/kg、約1.5mg/kg、約2mg/kg、約2.5mg/kg、約3mg/kg、約5mg/kg、約7.5kg/kg、約10mg/kg、または約15mg/kgの用量で前記対象に投与される、請求項1〜48のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５０】
前記ヒトTIGITの細胞外ドメインに特異的に結合する抗体が、週1回、2週間に1回、3週間に1回、または4週間に1回投与される、請求項1〜49のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５１】
前記対象が、組織学的に確認された進行型の再発性または不応性固形腫瘍を有する、請求項1〜50のいずれか一項に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
発明の分野
本発明は概して、ヒトTIGITに結合する作用物質を使用して、特に、TIGITの細胞外ドメインに特異的に結合する抗体を使用してがんを処置するための方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
発明の背景
免疫療法の基本は、自然免疫応答と適応免疫応答の両方を含む免疫系を操作および/または調整することである。免疫療法の一般的な目的は、「外来因子」、例えば、病原体または腫瘍細胞に対する免疫応答を制御することによって疾患を処置することである。しかしながら、場合によっては、免疫療法は、体内に普通に存在するタンパク質、分子、および/または組織に対する異常な免疫応答に起因し得る自己免疫疾患を処置するために用いられる。免疫療法は、特異的な免疫応答を誘導するもしくは亢進させるための作用物質および方法を含んでもよいか、または特異的な免疫応答を阻害もしくは低減する方法を含んでもよい。
【０００３】
免疫系は、T細胞、B細胞、ナチュラルキラー細胞、抗原提示細胞、樹状細胞、単球、およびマクロファージを含むが、これらに限定されない多数の細胞タイプで構成される高度に複雑な系である。これらの細胞は、これらの相互作用および応答を制御するための複雑かつ精巧な系を有する。これらの細胞は、応答を食い止め、制御されていない免疫応答のマイナスの結果(例えば、自己免疫疾患)を可能にしないようにするために活性化機構および阻害機構ならびにフィードバックループを用いる。
【０００４】
がん免疫監視という概念は、免疫系が腫瘍細胞を認識し、免疫応答を開始し、腫瘍の発達および/または進行を抑制することができるという理論に基づいている。しかしながら、多くのがん/腫瘍細胞が、これらの細胞の非抑制性成長を可能にし得る免疫系回避機構を発達させていることは明らかである。がん/腫瘍免疫療法は、腫瘍細胞に対するより有効な攻撃を実現して腫瘍細胞の死滅および/または腫瘍成長の阻害をブーストするために免疫系を活性化および/またはブーストすることができる新しくかつ新規の作用物質を開発することに焦点を当てている。
【発明の概要】
【０００５】
発明の簡単な概要
本発明は、T-cell immunoreceptor with Ig and ITIM domains (TIGIT)の細胞外ドメインに特異的に結合する抗体を含むが、これに限定されない、TIGITに結合する作用物質を用いて、がんを処置するための(すなわち、腫瘍成長を阻害するための)方法を提供する。ある特定の態様において、作用物質はTIGITアンタゴニストである。一部の態様において、方法は、がんおよび/または腫瘍に対する免疫応答を誘導する、活性化する、促進する、増大させる、強化する、または延長するためにTIGIT結合物質を使用する工程を含む。一部の態様において、方法は、腫瘍成長を阻害するためにTIGIT結合物質を使用する工程を含む。一部の態様において、方法は、がんを処置するためにTIGIT結合物質を使用する工程を含む。一部の態様において、方法は、TIGIT結合物質を少なくとも1種類のさらなる治療用物質と組み合わせて使用する工程を含む。
【０００６】
本発明の一部の態様において、対象において腫瘍成長を阻害する方法は、治療的有効量のTIGIT結合物質を対象に投与する工程を含み、腫瘍は、結腸直腸がん(CRC)、例えば、高頻度マイクロサテライト不安定性(microsatellite instability-high)結腸直腸がん(MSI CRC)もしくはマイクロサテライト安定性(microsatellite stable)結腸直腸がん(MSS CRC)、トリプルネガティブ乳がん(TNBC)、メルケル細胞がん、子宮内膜がん、または食道がんである。一部の態様において、対象において腫瘍成長を阻害する方法は、ヒトTIGITの細胞外ドメインに特異的に結合する治療的有効量の抗体を対象に投与する工程を含み、腫瘍は、高頻度マイクロサテライト不安定性結腸直腸がん、マイクロサテライト安定性結腸直腸がん、トリプルネガティブ乳がん、メルケル細胞がん、子宮内膜がん、または食道がんであり、かつヒトTIGITに結合する抗体は、TSDYAWN(SEQ ID NO:4)を含む重鎖CDR1、
2020503273.tif 000002
を含む重鎖CDR2、
2020503273.tif 000003
を含む重鎖CDR3、
2020503273.tif 000004
を含む軽鎖CDR1、SASYRYT(SEQ ID NO:8)を含む軽鎖CDR2、およびQQHYSTP(SEQ ID NO:9)を含む軽鎖CDR3を含む。
【０００７】
本発明の一部の態様において、対象において腫瘍成長を阻害する方法は、治療的有効量のTIGIT結合物質を対象に投与する工程を含み、腫瘍は、高頻度マイクロサテライト不安定性(MSI)固形腫瘍である。一部の態様において、対象において腫瘍成長を阻害する方法は、ヒトTIGITの細胞外ドメインに特異的に結合する治療的有効量の抗体を対象に投与する工程を含み、かつヒトTIGITに結合する抗体は、TSDYAWN(SEQ ID NO:4)を含む重鎖CDR1、
2020503273.tif 000005
を含む重鎖CDR2、
2020503273.tif 000006
を含む重鎖CDR3、
2020503273.tif 000007
を含む軽鎖CDR1、SASYRYT(SEQ ID NO:8)を含む軽鎖CDR2、およびQQHYSTP(SEQ ID NO:9)を含む軽鎖CDR3を含む。一部の態様において、高頻度MSI固形腫瘍は、MSI CRC、MSI胃がん、MSI子宮内膜がん、MSI卵巣がん、MSI肝胆道がん、MSI尿路がん、MSI脳がん、またはMSI皮膚がんからなる群より選択される。
【０００８】
本発明の一部の態様において、対象において腫瘍成長を阻害する方法は、TIGIT結合物質の治療的有効量をPD-1アンタゴニストまたはPD-L1アンタゴニストと組み合わせて対象に投与する工程を含み、腫瘍は、高頻度マイクロサテライト不安定性結腸直腸がん、マイクロサテライト安定性結腸直腸がん、トリプルネガティブ乳がん、メルケル細胞がん、子宮内膜がん、または食道がんである。一部の態様において、対象において腫瘍成長を阻害する方法は、ヒトTIGITの細胞外ドメインに特異的に結合する抗体の治療的有効量をPD-1アンタゴニストまたはPD-L1アンタゴニストと組み合わせて対象に投与する工程を含み、腫瘍は、結腸直腸がん(CRC)、例えば、高頻度マイクロサテライト不安定性結腸直腸がんもしくはマイクロサテライト安定性結腸直腸がん、トリプルネガティブ乳がん、メルケル細胞がん、子宮内膜がん、または食道がんであり、かつヒトTIGITに結合する抗体は、TSDYAWN(SEQ ID NO:4)を含む重鎖CDR1、
2020503273.tif 000008
を含む重鎖CDR2、
2020503273.tif 000009
を含む重鎖CDR3、
2020503273.tif 000010
を含む軽鎖CDR1、SASYRYT(SEQ ID NO:8)を含む軽鎖CDR2、およびQQHYSTP(SEQ ID NO:9)を含む軽鎖CDR3を含む。一部の態様において、併用療法は抗PD-1抗体を含む。一部の態様において、併用療法は抗PD-L1抗体を含む。
【０００９】
本発明の一部の態様において、対象において腫瘍成長を阻害する方法は、TIGIT結合物質の治療的有効量をPD-1アンタゴニストまたはPD-L1アンタゴニストと組み合わせて対象に投与する工程を含み、腫瘍は高頻度MSI固形腫瘍である。一部の態様において、対象において腫瘍成長を阻害する方法は、ヒトTIGITの細胞外ドメインに特異的に結合する抗体の治療的有効量をPD-1アンタゴニストまたはPD-L1アンタゴニストと組み合わせて対象に投与する工程を含み、腫瘍は、高頻度マイクロサテライト不安定性固形腫瘍であり、かつヒトTIGITに結合する抗体は、TSDYAWN(SEQ ID NO:4)を含む重鎖CDR1、
2020503273.tif 000011
を含む重鎖CDR2、
2020503273.tif 000012
を含む重鎖CDR3、
2020503273.tif 000013
を含む軽鎖CDR1、SASYRYT(SEQ ID NO:8)を含む軽鎖CDR2、およびQQHYSTP(SEQ ID NO:9)を含む軽鎖CDR3を含む。一部の態様において、併用療法は抗PD-1抗体を含む。一部の態様において、併用療法は抗PD-L1抗体を含む。一部の態様において、高頻度MSI固形腫瘍は、MSI CRC、MSI胃がん、MSI子宮内膜がん、MSI卵巣がん、MSI肝胆道がん、MSI尿路がん、MSI脳がん、またはMSI皮膚がんからなる群より選択される。
【００１０】
本発明の一部の態様において、対象において腫瘍成長を阻害する方法は、治療的有効量のTIGIT結合物質を対象に投与する工程を含み、腫瘍は、PD-1アンタゴニストまたはPD-L1アンタゴニストを用いる処置に対して抵抗性または不応性である。一部の態様において、対象において腫瘍成長を阻害する方法は、ヒトTIGITの細胞外ドメインに特異的に結合する治療的有効量の抗体を対象に投与する工程を含み、腫瘍は、PD-1アンタゴニストまたはPD-L1アンタゴニストを用いる処置に対して抵抗性または不応性であり、かつヒトTIGITに結合する抗体は、TSDYAWN(SEQ ID NO:4)を含む重鎖CDR1、
2020503273.tif 000014
を含む重鎖CDR2、
2020503273.tif 000015
を含む重鎖CDR3、
2020503273.tif 000016
を含む軽鎖CDR1、SASYRYT(SEQ ID NO:8)を含む軽鎖CDR2、およびQQHYSTP(SEQ ID NO:9)を含む軽鎖CDR3を含む。一部の態様において、腫瘍は、PD-1アンタゴニストまたはPD-L1アンタゴニストを用いる処置に対して抵抗性または不応性であった。本明細書で用いられるように、腫瘍は、作用物質を用いる処置に対して抵抗性または不応性であり、作用物質を用いる処置の最中または後に腫瘍成長進行がある。一部の態様において、腫瘍は、単一の作用物質として投与される作用物質を用いる処置に対して抵抗性または不応性である。一部の態様において、腫瘍は、第一選択治療薬または第二選択治療薬として投与される作用物質を用いる処置に対して抵抗性または不応性である。一部の態様において、腫瘍は、(例えば、単一の作用物質として)抗PD-1抗体を用いる処置に対して抵抗性または不応性である。一部の態様において、腫瘍は、(例えば、単一の作用物質として)抗PD-L1抗体を用いる処置に対して抵抗性または不応性である。一部の態様において、PD-1アンタゴニストまたはPD-L1アンタゴニストを用いる処置に対して抵抗性または不応性の腫瘍は、黒色腫、非小細胞肺がん(NSCLC)、腎細胞がん、頭頸部扁平上皮がん、尿路上皮がん、結腸直腸がん(例えば、MSIまたはDNAミスマッチ修復欠損(dMMR)転移性CRC)、および肝細胞がんからなる群より選択される。
【００１１】
本発明の一部の態様において、対象において腫瘍成長を阻害する方法は、TIGIT結合物質の治療的有効量をPD-1アンタゴニストまたはPD-L1アンタゴニストと組み合わせて対象に投与する工程を含み、腫瘍は、単一の作用物質としてPD-1アンタゴニストまたはPD-L1アンタゴニストを用いる処置に対して抵抗性または不応性である。一部の態様において、対象において腫瘍成長を阻害する方法は、ヒトTIGITの細胞外ドメインに特異的に結合する抗体の治療的有効量をPD-1アンタゴニストまたはPD-L1アンタゴニストと組み合わせて対象に投与する工程を含み、腫瘍は、単一の作用物質としてPD-1アンタゴニストまたはPD-L1アンタゴニストを用いる処置に対して抵抗性または不応性であり、かつヒトTIGITに結合する抗体は、TSDYAWN(SEQ ID NO:4)を含む重鎖CDR1、
2020503273.tif 000017
を含む重鎖CDR2、
2020503273.tif 000018
を含む重鎖CDR3、
2020503273.tif 000019
を含む軽鎖CDR1、SASYRYT(SEQ ID NO:8)を含む軽鎖CDR2、およびQQHYSTP(SEQ ID NO:9)を含む軽鎖CDR3を含む。一部の態様において、腫瘍は、第一選択治療薬または第二選択治療薬として投与された作用物質に対して抵抗性または不応性である。一部の態様において、腫瘍は、単一の作用物質としてPD-1アンタゴニストを用いる処置に対して抵抗性または不応性であるが、TIGIT結合物質と組み合わせてこの作用物質を用いる処置に応答性である。一部の態様において、腫瘍は、単一の作用としてPD-L1アンタゴニストを用いる処置に対して抵抗性または不応性であるが、TIGIT結合物質と組み合わせてこの作用物質を用いる処置に応答性である。一部の態様において、腫瘍は、(例えば、単一の作用物質として)抗PD-1抗体を用いる処置に対して抵抗性または不応性である。一部の態様において、腫瘍は、(例えば、単一の作用物質として)抗PD-L1抗体を用いる処置に対して抵抗性または不応性である。一部の態様において、併用療法は抗PD-1抗体を含む。一部の態様において、併用療法は抗PD-L1抗体を含む。一部の態様において、PD-1アンタゴニストまたはPD-L1アンタゴニストを用いる処置に対して抵抗性または不応性の腫瘍は、黒色腫、NSCLC、腎細胞がん、頭頸部扁平上皮がん、尿路上皮がん、結腸直腸がん(例えば、MSIまたはdMMR転移性CRC)、および肝細胞がんからなる群より選択される。
【００１２】
本発明の一部の態様において、対象において腫瘍成長を阻害する方法は、治療的有効量のTIGIT結合物質を対象に投与する工程を含み、対象は、単一の作用物質としてPD-1アンタゴニストまたはPD-L1アンタゴニストを用いて以前に処置されたことがある。一部の態様において、対象において腫瘍成長を阻害する方法は、ヒトTIGITの細胞外ドメインに特異的に結合する治療的有効量の抗体を対象に投与する工程を含み、対象は、単一の作用物質としてPD-1アンタゴニストまたはPD-L1アンタゴニストを用いて以前に処置されたことがあり、かつヒトTIGITに結合する抗体は、TSDYAWN(SEQ ID NO:4)を含む重鎖CDR1、
2020503273.tif 000020
を含む重鎖CDR2、
2020503273.tif 000021
を含む重鎖CDR3、
2020503273.tif 000022
を含む軽鎖CDR1、SASYRYT(SEQ ID NO:8)を含む軽鎖CDR2、およびQQHYSTP(SEQ ID NO:9)を含む軽鎖CDR3を含む。一部の態様において、対象は、PD-1アンタゴニストまたはPD-L1アンタゴニストを用いて以前に処置されたことがあり、処置中にまたは処置後に疾患進行があった。一部の態様において、PD-1アンタゴニストまたはPD-L1アンタゴニストを用いる処置の後に腫瘍成長再発がある。本明細書で使用する場合、腫瘍成長の再発とは、処置後でかつがんが検出されない期間の後にがんが再び現れることと定義される。がんは、最初に発見された場所で再発してもよく、体内のどこか他の場所で発見されてもよい。一部の態様において、再発は局所再発、局部再発、または遠隔再発である。一部の態様において、対象は抗PD-1抗体を用いて以前に処置されたことがある。一部の態様において、対象は抗PD-L1抗体を用いて以前に処置されたことがある。一部の態様において、腫瘍は、黒色腫、NSCLC、腎細胞がん、頭頸部扁平上皮がん、尿路上皮がん、結腸直腸がん(例えば、MSIまたはdMMR転移性CRC)、および肝細胞がんからなる群より選択される。
【００１３】
本発明の一部の態様において、対象において腫瘍成長を阻害する方法は、TIGIT結合物質の治療的有効量をPD-1アンタゴニストまたはPD-L1アンタゴニストと組み合わせて対象に投与する工程を含み、対象は、単一の作用物質としてPD-1アンタゴニストまたはPD-L1アンタゴニストを用いて以前に処置されたことがある。一部の態様において、対象において腫瘍成長を阻害する方法は、ヒトTIGITの細胞外ドメインに特異的に結合する抗体の治療的有効量をPD-1アンタゴニストまたはPD-L1アンタゴニストと組み合わせて対象に投与する工程を含み、対象は、単一の作用物質としてPD-1アンタゴニストまたはPD-L1アンタゴニストを用いて以前に処置されたことがあり、かつヒトTIGITに結合する抗体は、TSDYAWN(SEQ ID NO:4)を含む重鎖CDR1、
2020503273.tif 000023
を含む重鎖CDR2、
2020503273.tif 000024
を含む重鎖CDR3、
2020503273.tif 000025
を含む軽鎖CDR1、SASYRYT(SEQ ID NO:8)を含む軽鎖CDR2、およびQQHYSTP(SEQ ID NO:9)を含む軽鎖CDR3を含む。一部の態様において、対象は、PD-1アンタゴニストまたはPD-L1アンタゴニストを用いて以前に処置されたことがあり、処置中にまたは処置後に疾患進行があった。一部の態様において、PD-1アンタゴニストまたはPD-L1アンタゴニストを用いる処置の後に腫瘍成長再発がある。一部の態様において、再発は局所再発、局部再発、または遠隔再発である。一部の態様において、併用療法は、PD-1アンタゴニストまたはPD-L1アンタゴニストを用いる処置に対して腫瘍を「再増感させる(resensitize)」。一部の態様において、対象は抗PD-1抗体を用いて以前に処置されたことがある。一部の態様において、対象は抗PD-L1抗体を用いて以前に処置されたことがある。一部の態様において、併用療法は抗PD-1抗体を含む。一部の態様において、併用療法は抗PD-L1抗体を含む。一部の態様において、腫瘍は、黒色腫、NSCLC、腎細胞がん、頭頸部扁平上皮がん、尿路上皮がん、結腸直腸がん(例えば、MSIまたはdMMR転移性CRC)、および肝細胞がんからなる群より選択される。
【００１４】
本発明の一部の態様において、対象において腫瘍成長を阻害する方法は、治療的有効量のTIGIT結合物質を対象に投与する工程を含み、腫瘍はポリオウイルス受容体(PVR)および/またはポリオウイルス受容体関連2(PVRL2)を発現する。一部の態様において、対象において腫瘍成長を阻害する方法は、ヒトTIGITの細胞外ドメインに特異的に結合する治療的有効量の抗体を対象に投与する工程を含み、がんはPVRおよび/またはPVRL2を発現し、かつヒトTIGITに結合する抗体は、TSDYAWN(SEQ ID NO:4)を含む重鎖CDR1、
2020503273.tif 000026
を含む重鎖CDR2、
2020503273.tif 000027
を含む重鎖CDR3、
2020503273.tif 000028
を含む軽鎖CDR1、SASYRYT(SEQ ID NO:8)を含む軽鎖CDR2、およびQQHYSTP(SEQ ID NO:9)を含む軽鎖CDR3を含む。
【００１５】
本発明の一部の態様において、対象において腫瘍成長を阻害する方法は、TIGIT結合物質の治療的有効量をPD-1アンタゴニストまたはPD-L1アンタゴニストと組み合わせて対象に投与する工程を含み、がんはPVRおよび/またはPVRL2を発現する。一部の態様において、対象において腫瘍成長を阻害する方法は、ヒトTIGITの細胞外ドメインに特異的に結合する抗体の治療的有効量をPD-1アンタゴニストまたはPD-L1アンタゴニストと組み合わせて対象に投与する工程を含み、がんはPVRおよび/またはPVRL2を発現し、かつヒトTIGITに結合する抗体は、TSDYAWN(SEQ ID NO:4)を含む重鎖CDR1、
2020503273.tif 000029
を含む重鎖CDR2、
2020503273.tif 000030
を含む重鎖CDR3、
2020503273.tif 000031
を含む軽鎖CDR1、SASYRYT(SEQ ID NO:8)を含む軽鎖CDR2、およびQQHYSTP(SEQ ID NO:9)を含む軽鎖CDR3を含む。一部の態様において、腫瘍は、黒色腫、NSCLC、腎細胞がん、頭頸部扁平上皮がん、尿路上皮がん、結腸直腸がん(例えば、MSIまたはdMMR)転移性CRC、および肝細胞がんからなる群より選択される。
【００１６】
本発明の一部の態様において、対象において腫瘍成長を阻害する方法は、治療的有効量のTIGIT結合物質を対象に投与する工程を含み、腫瘍は腫瘍浸潤リンパ球(TIL)を含む。一部の態様において、対象において腫瘍成長を阻害する方法は、ヒトTIGITの細胞外ドメインに特異的に結合する治療的有効量の抗体を対象に投与する工程を含み、腫瘍は腫瘍浸潤リンパ球を含み、かつヒトTIGITに結合する抗体は、TSDYAWN(SEQ ID NO:4)を含む重鎖CDR1、
2020503273.tif 000032
を含む重鎖CDR2、
2020503273.tif 000033
を含む重鎖CDR3、
2020503273.tif 000034
を含む軽鎖CDR1、SASYRYT(SEQ ID NO:8)を含む軽鎖CDR2、およびQQHYSTP(SEQ ID NO:9)を含む軽鎖CDR3を含む。
【００１７】
本発明の一部の態様において、対象において腫瘍成長を阻害する方法は、TIGIT結合物質の治療的有効量をPD-1アンタゴニストまたはPD-L1アンタゴニストと組み合わせて対象に投与する工程を含み、腫瘍は腫瘍浸潤リンパ球を含む。一部の態様において、対象において腫瘍成長を阻害する方法は、ヒトTIGITの細胞外ドメインに特異的に結合する抗体の治療的有効量をPD-1アンタゴニストまたはPD-L1アンタゴニストと組み合わせて対象に投与する工程を含み、腫瘍は腫瘍浸潤リンパ球(TIL)を含み、かつヒトTIGITに結合する抗体は、TSDYAWN(SEQ ID NO:4)を含む重鎖CDR1、
2020503273.tif 000035
を含む重鎖CDR2、
2020503273.tif 000036
を含む重鎖CDR3、
2020503273.tif 000037
を含む軽鎖CDR1、SASYRYT(SEQ ID NO:8)を含む軽鎖CDR2、およびQQHYSTP(SEQ ID NO:9)を含む軽鎖CDR3を含む。
【００１８】
本発明の一部の態様において、対象において腫瘍成長を阻害する方法は、治療的有効量のTIGIT結合物質を対象に投与する工程を含み、腫瘍は調節性T細胞(Treg)を含む。一部の態様において、対象において腫瘍成長を阻害する方法は、ヒトTIGITの細胞外ドメインに特異的に結合する治療的有効量の抗体を対象に投与する工程を含み、腫瘍はTregを含み、かつヒトTIGITに結合する抗体は、TSDYAWN(SEQ ID NO:4)を含む重鎖CDR1、
2020503273.tif 000038
を含む重鎖CDR2、
2020503273.tif 000039
を含む重鎖CDR3、
2020503273.tif 000040
を含む軽鎖CDR1、SASYRYT(SEQ ID NO:8)を含む軽鎖CDR2、およびQQHYSTP(SEQ ID NO:9)を含む軽鎖CDR3を含む。
【００１９】
本発明の一部の態様において、対象において腫瘍成長を阻害する方法は、TIGIT結合物質の治療的有効量をPD-1アンタゴニストまたはPD-L1アンタゴニストと組み合わせて対象に投与する工程を含み、腫瘍はTregを含む。一部の態様において、対象において腫瘍成長を阻害する方法は、ヒトTIGITの細胞外ドメインに特異的に結合する抗体の治療的有効量をPD-1アンタゴニストまたはPD-L1アンタゴニストと組み合わせて対象に投与する工程を含み、腫瘍はTregを含み、かつヒトTIGITに結合する抗体は、TSDYAWN(SEQ ID NO:4)を含む重鎖CDR1、
2020503273.tif 000041
を含む重鎖CDR2、
2020503273.tif 000042
を含む重鎖CDR3、
2020503273.tif 000043
を含む軽鎖CDR1、SASYRYT(SEQ ID NO:8)を含む軽鎖CDR2、およびQQHYSTP(SEQ ID NO:9)を含む軽鎖CDR3を含む。
【００２０】
本明細書に記載の方法の一部の態様において、腫瘍は、肺腫瘍、肝臓腫瘍、乳房腫瘍、腎細胞がん/腎臓腫瘍、前立腺腫瘍、胃腸腫瘍/胃腫瘍、黒色腫、頸部腫瘍、膀胱腫瘍、グリア芽細胞腫、頭頸部腫瘍、膵臓腫瘍、卵巣腫瘍、結腸直腸腫瘍、子宮内膜腫瘍、肛門腫瘍、および食道腫瘍からなる群より選択される。
【００２１】
一部の態様において、肺腫瘍は、NSCLC、例えば、NSCLC扁平上皮またはNSCLC腺がんを含む。
【００２２】
一部の態様において、乳房腫瘍はトリプルネガティブ乳がん(TNBC)を含む。
【００２３】
一部の態様において、腫瘍は高頻度MSI固形腫瘍である。一部の態様において、高頻度マイクロサテライト不安定性固形腫瘍は、MSI結腸直腸がん(MSI CRC)、MSI胃がん、MSI子宮内膜がん、MSI卵巣がん、MSI肝胆道がん、MSI尿路がん、MSI脳がん、またはMSI皮膚がんである。一部の態様において、高頻度MSI固形腫瘍はMSI CRCである。
【００２４】
一部の態様において、腫瘍はマイクロサテライト安定性(MSS)腫瘍である。一部の態様において、腫瘍はマイクロサテライト安定性結腸直腸がん(MSS CRC)である。
【００２５】
一部の態様において、腫瘍は、黒色腫、NSCLC、腎細胞がん、頭頸部扁平上皮がん、尿路上皮がん、結腸直腸がん(例えば、MSIまたはdMMR転移性CRC)、および肝細胞がんからなる群より選択される。
【００２６】
本明細書に記載の方法の一部の態様において、作用物質は、ヒトTIGITの細胞外ドメインに特異的に結合する抗体であり、ヒトTIGITの細胞外ドメインに特異的に結合する抗体は、TSDYAWN(SEQ ID NO:4)を含む重鎖CDR1、
2020503273.tif 000044
を含む重鎖CDR2、および
2020503273.tif 000045
を含む重鎖CDR3、ならびに/または
2020503273.tif 000046
を含む軽鎖CDR1、SASYRYT(SEQ ID NO:8)を含む軽鎖CDR2、およびQQHYSTP(SEQ ID NO:9)を含む軽鎖CDR3を含む。
【００２７】
本明細書に記載の方法の一部の態様において、作用物質は、TIGITの細胞外ドメインに特異的に結合する抗体であり、前記抗体は、SEQ ID NO:10と少なくとも90％の配列同一性を有する重鎖可変領域および/またはSEQ ID NO:11と少なくとも90％の配列同一性を有する軽鎖可変領域を含む。一部の態様において、抗体は、SEQ ID NO:10と少なくとも95％の配列同一性を有する重鎖可変領域および/またはSEQ ID NO:11と少なくとも95％の配列同一性を有する軽鎖可変領域を含む。一部の態様において、抗体は、SEQ ID NO:10を含む重鎖可変領域およびSEQ ID NO:11を含む軽鎖可変領域を含む。
【００２８】
本明細書に記載の方法の一部の態様において、TIGIT結合物質は、モノクローナル抗体、ヒト化抗体、ヒト抗体、組換え抗体、キメラ抗体、二重特異性抗体、抗原結合部位を含む抗体断片、IgG抗体、IgG1抗体、IgG2抗体、またはIgG4抗体である抗体である。一部の態様において、前記抗体は一価である。一部の態様において、前記抗体は二価である。一部の態様において、前記抗体は単一特異性である。一部の態様において、前記抗体は二重特異性である。
【００２９】
本明細書に記載の方法の一部の態様において、ヒトTIGITに特異的に結合する抗体は、SEQ ID NO:13の重鎖アミノ酸配列およびSEQ ID NO:15の軽鎖アミノ酸配列を含む。一部の態様において、ヒトTIGITに特異的に結合する抗体は、SEQ ID NO:17の重鎖アミノ酸配列およびSEQ ID NO:15の軽鎖アミノ酸配列を含む。
【００３０】
本明細書に記載の方法の一部の態様において、ヒトTIGITに特異的に結合する抗体はマウスTIGITに結合しない。一部の態様において、ヒトTIGITに特異的に結合する抗体はラットTIGITに結合しない。一部の態様において、ヒトTIGITに特異的に結合する抗体はウサギTIGITに結合しない。一部の態様において、ヒトTIGITに特異的に結合する抗体はマーモセットTIGITに結合しない。一部の態様において、ヒトTIGITに特異的に結合する抗体はイヌTIGITに結合しない。一部の態様において、ヒトTIGITに特異的に結合する抗体はブタTIGITに結合しない。一部の態様において、ヒトTIGITに特異的に結合する抗体はカニクイザルTIGITに結合しない。一部の態様において、ヒトTIGITに特異的に結合する抗体はアカゲザルTIGITに結合しない。
【００３１】
本明細書に記載の方法の一部の態様において、ヒトTIGITに特異的に結合する抗体は、抗体OMP-313M32に由来する重鎖可変領域および軽鎖可変領域を含む。一部の態様において、前記抗体は、指定番号PTA-122346としてATCCに寄託されたプラスミドによってコードされる重鎖可変領域を含む。一部の態様において、前記抗体は、指定番号PTA-122346としてATCCに寄託されたプラスミドによってコードされる重鎖可変領域を含むポリペプチドを含む。一部の態様において、前記抗体は、指定番号PTA-122347としてATCCに寄託されたプラスミドによってコードされる軽鎖可変領域を含む。一部の態様において、前記抗体は、指定番号PTA-122347としてATCCに寄託されたプラスミドによってコードされる軽鎖を含む。一部の態様において、前記抗体は、指定番号PTA-122346としてATCCに寄託されたプラスミドによってコードされる重鎖可変領域、および指定番号PTA-122347としてATCCに寄託されたプラスミドによってコードされる軽鎖可変領域を含む。一部の態様において、前記抗体は、PTA-122346としてATCCに寄託されたプラスミドによってコードされるポリペプチド、および指定番号PTA-122347としてATCCに寄託されたプラスミドによってコードされるポリペプチドを含む。
【００３２】
本明細書に記載の方法の一部の態様において、TIGIT結合物質は一価である。一部の態様において、TIGIT結合物質は二価である。一部の態様において、TIGIT結合物質は単一特異性である。一部の態様において、TIGIT結合物質は二重特異性である。一部の態様において、二重特異性作用物質はヘテロ二量体作用物質またはヘテロ二量体分子である。一部の態様において、ヘテロ二量体作用物質は、TIGITに特異的に結合する抗体を含む。一部の態様において、二重特異性作用物質はホモ二量体作用物質またはホモ二量体分子である。一部の態様において、ホモ二量体作用物質は、TIGITに特異的に結合する抗体を含む。
【００３３】
本明細書に記載の方法の一部の態様において、TIGIT結合物質は、ヒトTIGITとの特異的結合において、本明細書に記載の抗体と競合する抗体である。一部の態様において、TIGIT結合物質は、本明細書に記載の抗体と同じ、ヒトTIGITにおけるエピトープに結合する。一部の態様において、TIGIT結合物質は、本明細書に記載の抗体が結合する、TIGITにおけるエピトープと重複する、ヒトTIGITにおけるエピトープに結合する。一部の態様において、TIGIT結合物質は、SEQ ID NO:27の中のアミノ酸を含むエピトープに結合する。一部の態様において、TIGIT結合物質は、SEQ ID NO:28の中のアミノ酸を含むエピトープに結合する。一部の態様において、TIGIT結合物質は、SEQ ID NO:27およびSEQ ID NO:28の中のアミノ酸を含むエピトープに結合する。一部の態様において、TIGIT結合物質は、SEQ ID NO:1のアミノ酸Q62およびI109を含むエピトープに結合する。一部の態様において、TIGIT結合物質は、SEQ ID NO:1のアミノ酸Q62およびT119を含むエピトープに結合する。一部の態様において、TIGIT結合物質は、SEQ ID NO:1のアミノ酸Q64およびI109を含むエピトープに結合する。一部の態様において、TIGIT結合物質は、SEQ ID NO:1のアミノ酸Q64およびT119を含むエピトープに結合する。一部の態様において、TIGIT結合物質は、SEQ ID NO:1のアミノ酸Q62、Q64、およびI109を含むエピトープに結合する。一部の態様において、TIGIT結合物質は、SEQ ID NO:1のアミノ酸Q62、Q64、およびT119を含むエピトープに結合する。一部の態様において、TIGIT結合物質は、SEQ ID NO:1のアミノ酸Q62、I109、およびT119を含むエピトープに結合する。一部の態様において、TIGIT結合物質は、SEQ ID NO:1のアミノ酸Q64、I109、およびT119を含むエピトープに結合する。一部の態様において、TIGIT結合物質は、SEQ ID NO:1のアミノ酸Q62、Q64、I109、およびT119を含むエピトープに結合する。一部の態様において、TIGIT結合物質は、SEQ ID NO:1のN58、E60、Q62、Q64、L65、F107、I109、H111、T117、T119、G120、およびR121からなる群より選択される少なくとも1つのアミノ酸を含むエピトープに結合する。一部の態様において、エピトープはコンホメーションエピトープである。一部の態様において、TIGIT結合物質は、SEQ ID NO:1のアミノ酸V100を含まないエピトープに結合する。
【００３４】
本明細書に記載の方法の一部の態様において、TIGITに特異的に結合する作用物質は抗体であり、前記抗体は二重特異性作用物質の一部である。一部の態様において、二重特異性作用物質は、TIGITに結合する第1のアーム、および第2の標的に結合する第2のアームを含む。一部の態様において、二重特異性作用物質は、TIGITに特異的に結合する第1のアーム、および第2のアームを含み、第1のアームは、抗TIGIT抗体を含む。一部の態様において、二重特異性作用物質は、TIGITに結合する第1のアーム、および抗体に由来する抗原結合部位を含む第2のアームを含む。一部の態様において、二重特異性作用物質は、TIGITに結合する第1のアーム、およびPD-1、PD-L1、CTLA4、TIM-3、LAG-3、OX-40、またはGITRに特異的に結合する第2のアームを含む。一部の態様において、二重特異性作用物質は、TIGITに結合する第1のアーム、および腫瘍抗原に特異的に結合する第2のアームを含む。一部の態様において、二重特異性作用物質は、TIGITに結合する第1のアーム、および免疫応答刺激作用物質を含む第2のアームを含む。一部の態様において、免疫応答刺激作用物質は、顆粒球-マクロファージコロニー刺激因子(GM-CSF)、マクロファージコロニー刺激因子(M-CSF)、顆粒球コロニー刺激因子(G-CSF)、インターロイキン2(IL-2)、インターロイキン3(IL-3)、インターロイキン12(IL-12)、インターロイキン15(IL-15)、B7-1(CD80)、B7-2(CD86)、4-1BBリガンド、GITRL、OX-40L、抗CD3抗体、抗CTLA4抗体、抗PD-1抗体、抗PD-L1抗体、抗GITR抗体、抗OX-40抗体、抗LAG-3抗体、および抗TIM-3抗体からなる群より選択される。
【００３５】
一部の態様において、二重特異性作用物質はヘテロ二量体作用物質またはヘテロ二量体分子である。一部の態様において、二重特異性作用物質はホモ二量体作用物質またはホモ二量体分子である。一部の態様において、ヘテロ二量体分子は、ヒトTIGITに結合する第1のアーム、および第2の標的に結合する第2のアームを含む。一部の態様において、ヘテロ二量体分子は、ヒトTIGITに特異的に結合する第1のアーム、および第2のアームを含み、第1のアームは、抗TIGIT抗体を含む。一部の態様において、ヘテロ二量体分子は、ヒトTIGITに結合する第1のアーム、および第2の標的に特異的に結合する抗体に由来する抗原結合部位を含む第2のアームを含む。一部の態様において、ヘテロ二量体分子は二重特異性抗体である。一部の態様において、ヘテロ二量体分子は、ヒトTIGITに結合する第1のアーム、および腫瘍抗原に特異的に結合する第2のアームを含む。一部の態様において、ヘテロ二量体分子は、ヒトTIGITに結合する第1のアーム、およびPD-1、PD-L1、CTLA-4、TIM-3、LAG-3、OX-40、4-1BB、またはGITRに特異的に結合する第2のアームを含む。一部の態様において、ヘテロ二量体分子は、TIGITに結合する第1のアーム、および免疫療法剤を含む第2のアームを含む。一部の態様において、免疫療法剤は、顆粒球-マクロファージコロニー刺激因子(GM-CSF)、マクロファージコロニー刺激因子(M-CSF)、顆粒球コロニー刺激因子(G-CSF)、インターロイキン2(IL-2)、インターロイキン3(IL-3)、インターロイキン12(IL-12)、インターロイキン15(IL-15)、B7-1(CD80)、B7-2(CD86)、4-1BBリガンド、GITRL、OX-40L、抗CD3抗体、抗CTLA-4抗体、抗PD-1抗体、抗PD-L1抗体、抗4-1BB抗体、抗GITR抗体、抗OX-40抗体、抗LAG-3抗体、および抗TIM-3抗体からなる群より選択される。
【００３６】
本明細書に記載の方法の一部の態様において、作用物質はTIGITに特異的に結合し、TIGITとPVRとの結合を阻害する。一部の態様において、作用物質はTIGITに特異的に結合し、TIGITとPVRとの間の相互作用を阻害またはブロックする。一部の態様において、作用物質はTIGITに特異的に結合し、TIGITとPVRL2との結合を阻害する。一部の態様において、作用物質はTIGITに特異的に結合し、TIGITとPVRL2との間の相互作用を阻害またはブロックする。一部の態様において、作用物質はTIGITに特異的に結合し、TIGITとPVRL3との結合を阻害する。一部の態様において、作用物質はTIGITに特異的に結合し、TIGITとPVRL3との間の相互作用を阻害またはブロックする。一部の態様において、前記作用物質はTIGITのアンタゴニストである。一部の態様において、作用物質はTIGITに特異的に結合し、TIGITシグナル伝達を阻害する。一部の態様において、作用物質はTIGITに特異的に結合し、TIGITを介したシグナル伝達のアンタゴニストである。一部の態様において、作用物質はTIGITに特異的に結合し、TIGIT活性化を阻害する。一部の態様において、作用物質はTIGITに特異的に結合し、TIGITのリン酸化を阻害する。一部の態様において、作用物質はTIGITに特異的に結合し、TIGITの細胞表面発現を減少させる。
【００３７】
本明細書に記載の方法の一部の態様において、作用物質は、TIGITに特異的に結合し、免疫応答を誘導するか、活性化するか、促進するか、増大させるか、増強するか、かつ/または延長する。一部の態様において、免疫応答は腫瘍または腫瘍細胞(を殺滅することなど)に向けられている。一部の態様において、前記作用物質は細胞性免疫を増大させる。一部の態様において、前記作用物質はT細胞活性を増大させる。一部の態様において、前記作用物質は細胞溶解性T細胞(CTL)活性を増大させる。一部の態様において、前記作用物質はナチュラルキラー(NK)細胞活性を増大させる。一部の態様において、前記作用物質は、IL-2産生、および/またはIL-2産生細胞の数を増大させる。一部の態様において、前記作用物質は、IFN-γ産生、および/もしくはIFN-γ産生細胞の数を増大させる。一部の態様において、前記作用物質はTh1型免疫応答を増大させる。一部の態様において、前記作用物質は、IL-4産生、および/もしくはIL-4産生細胞の数を減少させる。一部の態様において、前記作用物質は、IL-10、および/もしくはIL-10産生細胞の数を減少させる。一部の態様において、前記作用物質は、IL-6産生、および/またはIL-6産生細胞の数を減少させる。一部の態様において、前記作用物質は、IL-5産生、および/またはIL-5産生細胞の数を減少させる。一部の態様において、前記作用物質はTh2型免疫応答を減少させる。一部の態様において、前記作用物質はTreg細胞の数を減少させる。一部の態様において、前記作用物質はTreg活性を減少させる。一部の態様において、前記作用物質は、Tregの抑制活性を阻害しかつ/または減少させる。一部の態様において、前記作用物質は骨髄由来抑制細胞(MDSC)の数を減少させる。一部の態様において、前記作用物質は、MDSCの抑制活性を阻害しかつ/または減少させる。
【００３８】
本明細書に記載の方法の一部の態様において、作用物質はTIGITに特異的に結合し、腫瘍成長を阻害する。一部の態様において、前記作用物質は腫瘍成長を低減する。一部の態様において、前記作用物質は、検出不可能なサイズまで腫瘍成長を低減する。一部の態様において、前記作用物質は長期の抗腫瘍免疫を誘導する。
【００３９】
別の局面において、本発明は、本明細書に記載の方法において使用するためのTIGIT結合作用物質を含む組成物を提供する。一部の局面において、本発明は、本明細書に記載の方法において使用するためのTIGIT結合作用物質と、薬学的に許容される担体とを含む薬学的組成物を提供する。
【００４０】
本明細書に記載の方法のある特定の態様において、前記TIGIT結合作用物質は単離されている。ある特定の態様において、前記TIGIT結合作用物質は実質的に純粋である。
【００４１】
本発明はまた、TIGIT結合作用物質をコードするポリヌクレオチドを含むポリヌクレオチドも提供する。一部の態様において、前記ポリヌクレオチドは単離されている。一部の態様において、本発明は、前記ポリヌクレオチドを含むベクター、ならびに前記ベクターおよび/または前記ポリヌクレオチドを含む細胞を提供する。一部の態様において、本発明はまた、TIGIT結合作用物質を含む細胞、またはTIGIT結合作用物質を産生する細胞を提供する。一部の態様において、前記細胞はモノクローナル細胞株である。
【００４２】
本明細書に記載の方法の一部の態様において、方法は、少なくとも1種類のさらなる治療用物質を投与する工程をさらに含む。一部の態様において、さらなる治療用物質は化学療法剤である。一部の態様において、さらなる治療用物質は抗体である。一部の態様において、さらなる治療用物質は、抗PD-1抗体、抗PD-L1抗体、抗CTLA4抗体、抗LAG-3抗体、または抗TIM-3抗体である。一部の態様において、さらなる治療用物質は、Notch経路、Wnt経路、またはRSPO/LGR経路の阻害物質である。一部の態様において、さらなる治療用物質は免疫療法剤である。本明細書で使用する「免疫療法剤」という句は最も広い意味で用いられ、直接的または間接的に免疫系に影響を及ぼすか、または免疫系を調整する物質を指す。一部の態様において、免疫療法剤は、任意の免疫系成分の活性化を誘導することによって、またはその活性を増大させることによって、直接的または間接的に免疫系を刺激する剤である。TIGIT結合物質は免疫療法剤とみなされるので、このさらなる免疫療法剤は「第2の」免疫療法剤とみなされる場合がある。一部の態様において、第2の免疫療法剤は、GM-CSF、M-CSF、G-CSF、IL-2、IL-3、IL-12、IL-15、B7-1(CD80)、B7-2(CD86)、4-1BBリガンド、GITRL、OX-40リガンド、抗CD3抗体、抗CTLA-4抗体、抗CD28抗体、抗PD-1抗体、抗PD-L1抗体、抗4-1BB抗体、抗GITR抗体、抗OX-40抗体、抗LAG-3抗体、および抗TIM-3抗体からなる群より選択される。一部の態様において、第2の免疫療法剤は、GM-CSF、M-CSF、G-CSF、IL-2、IL-3、IL-12、IL-15、B7-1(CD80)、B7-2(CD86)、4-1BBリガンド、GITRL、OX-40リガンド、またはその断片を含む融合タンパク質である。一部の態様において、第2の免疫療法剤は、少なくとも1コピーのGITRL細胞外ドメイン、OX40リガンド、または4-1BBリガンドを含む融合タンパク質である。
【００４３】
本明細書に記載の方法の一部の態様において、対象はヒトである。一部の態様において、対象は腫瘍またはがんが少なくとも部分的に取り除かれている。
【００４４】
本明細書に記載の方法の一部の態様において、腫瘍またはがんはPD-L1を発現する。一部の態様において、方法は、腫瘍またはがんにおいてPD-L1発現レベルを決定する工程をさらに含む。一部の態様において、PD-L1発現レベルを決定する工程は、TIGIT結合作用物質で処置される前に、またはTIGIT結合作用物質と接触される前に行われる。一部の態様において、腫瘍またはがんのPD-L1発現レベルが高い場合に、TIGIT結合作用物質が対象に投与される。
【００４５】
一部の態様において、本発明は、ヒトTIGITの細胞外ドメインに特異的に結合する治療的有効量の抗体を対象に投与する工程を含む、対象において腫瘍成長を阻害する方法であって、腫瘍が、頭頸部がん、食道がん/胃食道がん、胃がん、結腸直腸がん、肛門がん、肝細胞がん/肝臓がん、子宮頸がん、肺がん(例えば、NSCLC)、黒色腫、メルケル細胞がん、腎細胞がん/腎臓がん、膀胱がん、卵巣がん、膵臓がん、子宮内膜がん、およびトリプルネガティブ乳がん、既知高頻度MSI固形腫瘍(MSI CRCを含む)またはMSS結腸直腸がんであり、腫瘍が、抗PD-1抗体または抗PD-L1抗体を用いる処置に対して抵抗性または不応性であり、かつヒトTIGITに結合する抗体が、TSDYAWN(SEQ ID NO:4)を含む重鎖CDR1、
2020503273.tif 000047
を含む重鎖CDR2、
2020503273.tif 000048
を含む重鎖CDR3、
2020503273.tif 000049
を含む軽鎖CDR1、SASYRYT(SEQ ID NO:8)を含む軽鎖CDR2、およびQQHYSTP(SEQ ID NO:9)を含む軽鎖CDR3を含む、方法を含む。
【００４６】
本明細書に記載の方法の一部の態様において、対象は抗PD-1抗体または抗PD-L1抗体を用いて以前に処置されたことがある。一部の態様において、ヒトTIGITの細胞外ドメインに特異的に結合する抗体は、約0.1mg/kg、約0.3mg/kg、約1mg/kg、約1.5mg/kg、約2mg/kg、約2.5mg/kg、約3mg/kg、約5mg/kg、約7.5kg/kg、または約10mg/kgの用量で対象に投与される。一部の態様において、ヒトTIGITの細胞外ドメインに特異的に結合する抗体は、およそ1週間に1回、およそ2週間に1回、およそ3週間に1回、またはおよそ4週間に1回、投与される。一部の態様において、対象は、組織学的に確認された進行型の再発性または不応性固形腫瘍を有する。
【００４７】
本発明の局面または態様がマーカッシュグループまたは代替物の他のグループで説明された場合、本発明は、列挙されたグループ全体を全体として含むだけでなく、グループの各メンバーも個々に含み、メイングループの可能性のある全てのサブグループも含み、グループメンバーの1つまたは複数が存在しないメイングループも含む。本発明はまた、本発明において任意のグループメンバーの1つまたは複数の明確な除外も想定する。
【図面の簡単な説明】
【００４８】
【図１】ヒト化マウスモデルにおける抗TIGIT抗体OMP-313M32による腫瘍成長の阻害。ヒト化マウスに患者由来黒色腫腫瘍細胞(OMP-M9、細胞75,000個/マウス)を皮下注射した。腫瘍の平均体積が約50mm3になるまで、腫瘍を19日間成長させた。担がんマウスを、いくつかの群(n＝8マウス/群)に無作為化した。担がんマウスを対照抗体または抗TIGIT抗体OMP-313M32で処置した。マウスに5日ごとに1mg/kgまたは5mg/kgを投薬した。腫瘍成長をモニタリングし、腫瘍体積を、表示された時点で電子ノギスを用いて測定した。
【図２】抗TIGIT抗体313M32を用いた臨床試験初期フェーズについての用量漸増および増大を示す模式図。
【発明を実施するための形態】
【００４９】
発明の詳細な説明
本発明は、ヒトTIGITに特異的に結合するポリペプチド、抗体、ヘテロ二量体分子、およびホモ二量体分子を含むがこれらに限定されない新規の作用物質を使用する方法を提供する。腫瘍成長を阻害するためおよび/またはがんを処置するために新規の作用物質を使用する方法が提供される。新規の作用物質を使用する方法、例えば、免疫応答を活性化する方法、免疫応答を刺激する方法、免疫応答を促進する方法、免疫応答を増大させる方法、ナチュラルキラー(NK)細胞および/もしくはT細胞を活性化する方法、NK細胞および/もしくはT細胞の活性を増大させる方法、NK細胞および/もしくはT細胞の活性を促進する方法、サプレッサーT細胞(すなわち、調節性T細胞)を減少させかつ/もしくは阻害する方法、ならびに/または骨髄由来抑制細胞を減少させかつ/もしくは阻害する方法がさらに提供される。
【００５０】
I.定義
本発明の理解を容易にするために、多数の用語および句を以下で定義する。
【００５１】
本明細書で使用する「アゴニスト」および「アゴニストの」という用語は、標的および/または経路の生物学的活性を直接的または間接的に、実質的に誘導するか、活性化するか、促進するか、増大させるか、または亢進させることができる、作用物質を指すか、またはこれについて説明する。「アゴニスト」という用語は、タンパク質の活性を部分的または完全に誘導するか、活性化するか、促進するか、増大させるか、または亢進させる、任意の作用物質を含むように本明細書において用いられる。
【００５２】
本明細書で使用する「アンタゴニスト」および「アンタゴニストの」という用語は、標的および/または経路の生物学的活性を直接的または間接的に、部分的または完全にブロックするか、阻害するか、低減するか、または中和することができる、作用物質を指すか、またはこれについて説明する。「アンタゴニスト」という用語は、タンパク質の活性を部分的または完全にブロックするか、阻害するか、低減するか、または中和する、任意の分子を含むように本明細書において用いられる。
【００５３】
本明細書で使用する「調整」および「調整する」という用語は、生物学的活性の変更または変化を指す。調整には活性の刺激または阻害が含まれるが、これらに限定されない。調整は活性の増大もしくは減少でも、結合特性の変更でも、または、関心対象のタンパク質、経路、系、もしくは他の生物学的標的の活性に関連する生物学的特性、機能的特性、もしくは免疫学的特性の他の任意の変更でもよい。
【００５４】
本明細書で使用する「抗体」という用語は、少なくとも1つの抗原結合部位を介して標的を認識し、かつ前記標的に特異的に結合する免疫グロブリン分子を指す。前記標的は、タンパク質、ポリペプチド、ペプチド、炭水化物、ポリヌクレオチド、脂質、または上記の任意の組み合わせであることができる。本明細書で使用する場合、この用語は、無傷のポリクローナル抗体、無傷のモノクローナル抗体、抗体断片(例えば、Fab、Fab'、F(ab')2、およびFv断片)、単鎖Fv(scFv)抗体、多重特異性抗体、二重特異性抗体、単一特異性抗体、一価抗体、キメラ抗体、ヒト化抗体、ヒト抗体、抗体の抗原結合部分を含む融合タンパク質、ならびに抗体が望ましい生物学的活性を示す限り、抗原結合部位を含む他の任意の改変された免疫グロブリン分子を包含する。抗体は、重鎖定常ドメインの同一性に基づきそれぞれα、δ、ε、γ、およびμと呼ばれる、5つの主要なクラスの免疫グロブリン:IgA、IgD、IgE、IgG、およびIgM、またはそのサブクラス(アイソタイプ)(例えばIgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgA1、およびIgA2)のいずれかである。異なるクラスの免疫グロブリンは異なる周知のサブユニット構造および三次元構造を有する。抗体は、裸でもよいか、または毒素および放射性同位体を含むがこれらに限定されない他の分子に結合体化されてもよい。
【００５５】
「抗体断片」という用語は、無傷の抗体の一部を指し、かつ、一般的に、無傷の抗体の抗原決定可変領域を指す。抗体断片の例には、Fab、Fab'、F(ab')2、およびFv断片、直鎖抗体、単鎖抗体、ならびに抗体断片から形成される多重特異性抗体が含まれるが、これらに限定されない。本明細書で使用する「抗体断片」は抗原結合部位またはエピトープ結合部位を含む。
【００５６】
抗体の「可変領域」という用語は、抗体軽鎖の可変領域または抗体重鎖の可変領域を単独でまたは組み合わせて指す。一般的に、重鎖または軽鎖の可変領域は、「超可変領域」とも知られる、3つの相補性決定領域(CDR)によって接続された4つのフレームワーク領域からなる。各鎖内のCDRはフレームワーク領域によって近くにまとめられ、他の鎖からのCDRと共に抗体の抗原結合部位の形成に寄与する。CDRの決定には少なくとも2種類の技法:(1)異種間配列可変性に基づくアプローチ(すなわち、Kabat et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5th Edition., 1991, National Institutes of Health, Bethesda MD));および(2)抗原-抗体複合体の結晶学研究に基づくアプローチ(Al-Lazikani et al (1997) J. Mol. Biol. 273:927-948))がある。さらに、CDRを決定するために、これらの2つのアプローチの組み合わせが当技術分野において用いられることもある。
【００５７】
本明細書で使用する「モノクローナル抗体」という用語は、1つの抗原決定基、すなわちエピトープの極めて特異的な認識および結合に関与する均質な抗体集団を指す。これは、典型的に、異なる抗原決定基を認識する異なる抗体の混合物を含むポリクローナル抗体とは対照的である。「モノクローナル抗体」という用語は、無傷であり、かつ完全長であるモノクローナル抗体、ならびに抗体断片(例えば、Fab、Fab'、F(ab')2、Fv)、単鎖(scFv)抗体、抗体断片を含む融合タンパク質、および抗原結合部位を含む他の任意の改変された免疫グロブリン分子を包含する。さらに、「モノクローナル抗体」とは、ハイブリドーマ作製、ファージ選択、組換え体発現、およびトランスジェニック動物を含むが、これらに限定されない任意の数の技法によって作製された、このような抗体を指す。
【００５８】
本明細書で使用する「ヒト化抗体」という用語は、最小の非ヒト配列を含む特異的な免疫グロブリン鎖、キメラ免疫グロブリン、またはその断片である、抗体を指す。典型的には、ヒト化抗体は、CDRのアミノ酸残基が、望ましい特異性、親和性、および/または結合能力を有する非ヒト種(例えば、マウス、ラット、ウサギ、またはハムスター)のCDR由来のアミノ酸残基により置き換えられているヒト免疫グロブリンである。場合によっては、ヒト免疫グロブリンのフレームワーク可変領域アミノ酸残基は、非ヒト種由来の抗体中の対応するアミノ酸残基で置き換えられてもよい。さらに、ヒト化抗体を、フレームワーク可変領域中および/または置き換えられた非ヒトアミノ酸残基内のさらなるアミノ酸残基の置換によって改変して、さらに、抗体の特異性、親和性、および/または結合能力を精緻にしかつ最適化することができる。ヒト化抗体は、非ヒト免疫グロブリンに対応するCDRのうちの全て、または実質的に全てを含有する可変ドメインを含む場合があるのに対して、フレームワーク可変領域の全てまたは実質的に全てがヒト免疫グロブリン配列のフレームワーク領域である。一部の態様において、可変ドメインはヒト免疫グロブリン配列のフレームワーク領域を含む。一部の態様において、可変ドメインはヒト免疫グロブリンコンセンサス配列のフレームワーク領域を含む。ヒト化抗体はまた、免疫グロブリンの定常領域またはドメイン(Fc)の少なくとも一部、典型的には、ヒト免疫グロブリンの定常領域またはドメイン(Fc)の少なくとも一部を含むこともできる。
【００５９】
本明細書で使用する「ヒト抗体」という用語は、ヒトによって産生された抗体、または当技術分野で公知の任意の技術を用いて作製された、ヒトによって産生された抗体に対応するアミノ酸配列を有する抗体を指す。
【００６０】
本明細書で使用する「キメラ抗体」という用語は、免疫グロブリン分子のアミノ酸配列が2つまたはそれ以上の種に由来する抗体を指す。典型的には、軽鎖および重鎖の可変領域は、望ましい特異性、親和性、および/または結合能力を有する1つの哺乳動物種(例えば、マウス、ラット、ウサギなど)由来の抗体の可変領域に対応し、一方、定常領域は、別の種に由来する抗体中の配列と相同である。
【００６１】
「エピトープ」または「抗原決定基」という用語は本明細書において同義に用いられ、かつ特定の抗体が認識し、特異的に結合することができる抗原または標的の部分を指す。抗原または標的がポリペプチドである場合、エピトープは、連続したアミノ酸、およびタンパク質の三次フォールディングによって近接して並べられた非連続アミノ酸の両方から形成することができる。連続するアミノ酸から形成されたエピトープ(線状エピトープとも呼ばれる)は、タンパク質が変性した場合に典型的には保持されるのに対して、三次フォールディングによって形成されたエピトープ(コンホメーションエピトープとも呼ばれる)は、タンパク質が変性すると典型的には失われる。エピトープは独特の空間配置中に典型的には少なくとも3アミノ酸、より通常は少なくとも5、6、7、または8〜10アミノ酸を含む。
【００６２】
「選択的に結合する」または「特異的に結合する」という用語は、作用物質が、関連タンパク質および非関連タンパク質を含む別の物質よりも高頻度で、迅速に、長い期間で、高い親和性で、または前記を組み合わせてエピトープ、タンパク質、または標的分子と反応することを意味する。ある特定の態様において、「特異的に結合する」とは、例えば、約0.1mMまたはそれ未満、より通常は約1μM未満のKDで、作用物質がタンパク質または標的に結合することを意味する。ある特定の態様において、「特異的に結合する」とは、少なくとも約0.1μMもしくはそれ未満、少なくとも約0.01μMもしくはそれ未満、または少なくとも約1nMもしくはそれ未満のKDで、作用物質が標的に結合することを意味する。異なる種における相同タンパク質間には配列同一性があるので、特異的結合は、複数の種におけるタンパク質または標的（例えば、マウスTIGITおよびヒトTIGIT）を認識する作用物質を含んでもよい。同様に、異なるタンパク質のポリペプチド配列のある特定の領域内には相同性があるので、特異的結合は、複数種類のタンパク質または標的を認識する作用物質を含んでもよい。ある特定の態様では、第1の標的に特異的に結合する作用物質は第2の標的に特異的に結合してもよいかまたは特異的に結合しなくてもよいことが理解される。従って、「特異的結合」は、必ずしも、排他的な結合、すなわち、1種類の標的との結合を必要とするわけではない(だが、1種類の標的との結合を含んでもよい)。従って、作用物質は、ある特定の態様では、複数種類の標的に特異的に結合してもよい。ある特定の態様では、複数種類の標的が作用物質の同じ抗原結合部位に結合してもよい。例えば、抗体は、ある特定の場合では、2つ同一の抗原結合部位を含んでもよく、これらの抗原結合部位はそれぞれ、2種類またはそれ以上のタンパク質にある同じエピトープに特異的に結合する。ある特定の他の態様では、抗体は二重特異性でもよく、特異性の異なる少なくとも2種類の抗原結合部位を含んでもよい。必ずしもそうとは限らないが、一般的に、結合についての言及は特異的結合を意味する。
【００６３】
患者に関連して、本明細書で使用する「選択する」および「選択された」とは、特定の患者が、予め決定された基準を有することに基づいて(予め決定された基準を有するという理由から)、例えば、この患者が、PVRおよび/またはPVRL2発現レベルの高い腫瘍を有することに基づいて、大きな患者群から特異的に選択されることを意味するのに用いられる。同様に、「腫瘍を有する患者を選択的に処置する」とは、特定の患者が、予め決定された基準を有することに基づいて(予め決定された基準を有するという理由から)、例えば、この患者が、PVRおよび/またはPVRL2発現レベルの高い腫瘍を有することに基づいて、大きな患者群から特異的に選択されたがん患者に処置を提供することを指す。同様に、「選択的に投与する」とは、特定の患者が、予め決定された基準を有することに基づいて(予め決定された基準を有するという理由から)、例えば、この患者が、PVRおよび/またはPVRL2発現レベルの高い腫瘍を有することに基づいて、大きな患者群から特異的に選択されたがん患者に薬物を投与することを指す。選択する、選択的に処置する、および選択的に投与するとは、患者がCRCまたはNSCLCなどのがんを有するということだけに基づいて患者に標準的な処置レジメンがもたらされるのではなく、患者のがん生物学に基づいて患者にがんの個別化療法がもたらされることを意味する。
【００６４】
「ポリペプチド」および「ペプチド」および「タンパク質」という用語は本明細書において同義に用いられ、任意の長さのアミノ酸のポリマーを指す。ポリマーは直鎖または分枝鎖でもよく、修飾アミノ酸を含んでもよく、非アミノ酸によって中断されてもよい。これらの用語はまた、天然に、あるいは介入によって、例えば、ジスルフィド結合形成、グリコシル化、脂質化、アセチル化、リン酸化、または標識成分との結合体化などの他の任意の操作もしくは修飾によって改変されたアミノ酸ポリマーも包含する。例えば、1つまたは複数のアミノ酸類似体(例えば、非天然アミノ酸を含む)ならびに当技術分野において公知の他の修飾を含有するポリペプチドも、この定義に含まれる。本発明のポリペプチドは、ある特定の態様では抗体または他の免疫グロブリンスーパーファミリーメンバーをベースとしてもよいため、「ポリペプチド」は単鎖または2つもしくはそれ以上の会合した鎖として生じうることが理解される。
【００６５】
「ポリヌクレオチド」および「核酸」および「核酸分子」という用語は本明細書において同義に用いられ、任意の長さのヌクレオチドのポリマーを指し、DNAおよびRNAを含む。ヌクレオチドは、デオキシリボヌクレオチド、リボヌクレオチド、修飾ヌクレオチドもしくは塩基、および/またはその類似体、あるいはDNAポリメラーゼまたはRNAポリメラーゼによってポリマーに組み込むことができる任意の基質でもよい。
【００６６】
2つまたはそれ以上の核酸またはポリペプチドの文脈において「同一の」またはパーセント「同一性」という用語は、配列同一性の一部として保存的アミノ酸置換を全く考慮することなく、最大一致を得るように比較およびアラインメントされた場合に(必要であれば、ギャップを導入する)、同じであるか、または特定のパーセントの同じヌクレオチドもしくはアミノ酸残基を有する2つまたはそれ以上の配列または部分配列を指す。パーセント同一性は、配列比較ソフトウェアもしくはアルゴリズムを用いて、または目視検査によって、測定されてもよい。アミノ酸配列またはヌクレオチド配列のアラインメントを得るために用いられることがある様々なアルゴリズムおよびソフトウェアが当技術分野において周知である。これらのアルゴリズムおよびソフトウェアには、BLAST、ALIGN、Megalign、BestFit、GCG Wisconsin Package、およびそのバリエーションが含まれるが、これらに限定されない。一部の態様において、本発明の2つの核酸またはポリペプチドは実質的に同一であり、実質的に同一であるとは、2つの核酸またはポリペプチドが最大限一致するように比較およびアラインメントされた場合に、配列比較アルゴリズムを用いて、または目視検査によって測定された場合に、少なくとも70％、少なくとも75％、少なくとも80％、少なくとも85％、少なくとも90％、一部の態様では少なくとも95％、96％、97％、98％、99％のヌクレオチド同一性またはアミノ酸残基同一性を有することを意味する。一部の態様において、同一性は、長さが少なくとも約10個、少なくとも約20個、少なくとも約40〜60個のヌクレオチドもしくはアミノ酸残基、少なくとも約60〜80個のヌクレオチドもしくはアミノ酸残基、またはその間の任意の整数値である、配列の領域にわたって存在する。一部の態様において、同一性は、60〜80個のヌクレオチドもしくはアミノ酸残基より長い領域、例えば、少なくとも約80〜100個のヌクレオチドもしくはアミノ酸残基にわたって存在し、一部の態様では、配列は、比較されている配列、例えば、ヌクレオチド配列のコード領域の完全長にわたって実質的に同一である。
【００６７】
「保存的アミノ酸置換」とは、あるアミノ酸残基が、類似の側鎖を有する別のアミノ酸残基で置き換えられる置換である。一般的に、塩基性側鎖(例えば、リジン、アルギニン、ヒスチジン)、酸性側鎖(例えば、アスパラギン酸、グルタミン酸)、無電荷極性側鎖(例えば、グリシン、アスパラギン、グルタミン、セリン、スレオニン、チロシン、システイン)、非極性側鎖(例えば、アラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、プロリン、フェニルアラニン、メチオニン、トリプトファン)、β分枝側鎖(例えば、スレオニン、バリン、イソロイシン)、および芳香族側鎖(例えば、チロシン、フェニルアラニン、トリプトファン、ヒスチジン)を含む、類似の側鎖を有するアミノ酸残基ファミリーが当技術分野において定義されている。例えば、チロシンからフェニルアラニンへの置換は保存的置換であると企図される。一般的に、本発明のポリペプチドの配列および/または抗体の配列における保存的置換は、アミノ酸配列を含有するポリペプチドまたは抗体と標的結合部位との結合を阻止しない。結合を無くさないヌクレオチドおよびアミノ酸の保存的置換を同定する方法は当技術分野において周知である。
【００６８】
本明細書で使用する「ベクター」という用語は、宿主細胞中に関心対象の1つまたは複数の遺伝子または配列を送達することができる、通常、発現することができる構築物を意味する。ベクターの例には、ウイルスベクター、裸のDNA発現ベクターまたはRNA発現ベクター、プラスミド、コスミド、またはファージベクター、カチオン性縮合剤と結合したDNA発現ベクターまたはRNA発現ベクター、ならびにリポソームにカプセル化されたDNA発現ベクターまたはRNA発現ベクターが含まれるが、これらに限定されない。
【００６９】
「単離された」ポリペプチド、可溶性タンパク質、抗体、ポリヌクレオチド、ベクター、細胞、または組成物は、天然では見出されない形をとる、ポリペプチド、可溶性タンパク質、抗体、ポリヌクレオチド、ベクター、細胞、または組成物である。単離されたポリペプチド、可溶性タンパク質、抗体、ポリヌクレオチド、ベクター、細胞、または組成物は、天然で見出される形をもはやとっていない程度まで精製されているポリペプチド、可溶性タンパク質、抗体、ポリヌクレオチド、ベクター、細胞、または組成物を含む。一部の態様において、単離された、ポリペプチド、可溶性タンパク質、抗体、ポリヌクレオチド、ベクター、細胞、または組成物は実質的に純粋である。
【００７０】
本明細書で使用する「実質的に純粋な」という用語は、少なくとも50％の純度(すなわち、汚染物質を含まない)、少なくとも90％の純度、少なくとも95％の純度、少なくとも98％の純度、または少なくとも99％の純度である材料を指す。
【００７１】
本明細書で使用する「免疫応答」という用語は、自然免疫系および適応免疫系の両方からの応答を含む。「免疫応答」は細胞性免疫応答および/または体液性免疫応答を両方とも含む。「免疫応答」は、T細胞応答およびB細胞応答の両方、ならびに他の免疫系細胞、例えば、ナチュラルキラー(NK)細胞、単球、マクロファージなどからの応答を含むがこれらに限定されない。
【００７２】
本明細書で使用する「がん」および「がん性」という用語は、無秩序な細胞成長を特徴とする細胞集団がある哺乳動物における生理的状態を指すか、またはこれについて説明する。がんの例には、がん腫、芽腫、肉腫、ならびに血液がん、例えば、リンパ腫および白血病が含まれるが、これらに限定されない。
【００７３】
本明細書で使用する「腫瘍」および「新生物」という用語は、過度の細胞成長または増殖に起因する、前がん病変を含む良性(非がん性)または悪性(がん性)いずれかの任意の組織塊を指す。
【００７４】
本明細書で使用する「転移」という用語は、がんが、発生部位(site of origin)から他の身体領域に広がるか、または移って、新たな場所で同様のがん病変が発生するプロセスを指す。一般的に、「転移性の」または「転移している」細胞とは、隣接する細胞との付着性接触を失い、血流またはリンパを介して疾患の原発部位から身体を通って二次部位まで移動する細胞である。
【００７５】
「がん細胞」および「腫瘍細胞」という用語は、がん細胞集団の大部分を構成する非腫瘍形成性細胞と腫瘍形成性幹細胞(がん幹細胞)の両方を含む、がんもしくは腫瘍または前がん病変に由来する細胞の集団全体を指す。本明細書で使用する「がん細胞」または「腫瘍細胞」という用語は、複製および分化する能力が無い細胞だけを指している場合、このような腫瘍細胞とがん幹細胞を区別するために「非腫瘍形成性の」という用語で修飾される。
【００７６】
「対象」という用語は、特定の処置のレシピエントとなる、ヒト、非ヒト霊長類、イヌ、ネコ、ウサギ、げっ歯類などを含むが、これらに限定されない任意の動物(例えば、哺乳動物)を指す。典型的には、本明細書ではヒト対象については「対象」および「患者」という用語が同義に用いられる。
【００７７】
「薬学的に許容される」という用語は、連邦政府または州政府の規制当局によって認可されているかもしくは認可可能である物質、または米国薬局方、もしくはヒトを含む動物において使用するための一般に認められている他の薬局方に列挙されている物質を指す。
【００７８】
「薬学的に許容される賦形剤、担体、もしくはアジュバント」または「許容される薬学的担体」という用語は、本開示の少なくとも1種類の作用物質と共に対象に投与することができ、その薬理学的活性を破壊せず、治療効果をもたらすのに十分な用量で投与された場合に無毒の賦形剤、担体、またはアジュバントを指す。普通、当業者および米食品医薬品局は、薬学的に許容される賦形剤、担体、またはアジュバントが任意の製剤の不活性成分と考える。
【００７９】
「有効量」または「治療的有効量」または「治療効果」という用語は、哺乳動物などの対象において疾患または障害を「処置する」のに有効な、作用物質、抗体、ポリペプチド、ポリヌクレオチド、有機低分子、または他の薬物の量を指す。がんまたは腫瘍の場合には、治療的有効量の作用物質(例えば、ポリペプチドまたは抗体)は、治療効果を有し、従って、免疫応答を増強もしくはブーストしてもよいか、抗腫瘍応答を増強もしくはブーストしてもよいか、免疫細胞の細胞溶解活性を増大させてもよいか、腫瘍細胞の死滅を増大させてもよいか、免疫細胞による腫瘍細胞の死滅を増大させてもよいか、腫瘍細胞の数を低減してもよいか、腫瘍形成能、腫瘍形成頻度、もしくは腫瘍形成能力を減少させてもよいか、がん幹細胞の数もしくは頻度を低減してもよいか、腫瘍サイズを低減してもよいか、がん細胞集団を低減してもよいか、例えば、軟部組織および骨へのがんの拡大を含む、末梢器官へのがん細胞浸潤を阻害もしくは停止してもよいか、腫瘍もしくはがん細胞転移を阻害および停止してもよいか、腫瘍もしくはがん細胞成長を阻害および停止してもよいか、がんに関連する症状の1つもしくは複数をある程度まで緩和してもよいか、罹患率および死亡率を低減してもよいか、生活の質を改善してもよいか、またはこのような効果の組み合わせでもよい。
【００８０】
「処置する」もしくは「処置」もしくは「処置するために」または「軽減する」もしくは「軽減するために」という用語は、(1)診断された病理学的状態もしくは障害の症状を治癒し、診断された病理学的状態もしくは障害の症状を遅らせ、診断された病理学的状態もしくは障害の症状を和らげ、かつ/または診断された病理学的状態もしくは障害の進行を止める、治療的処置と、(2)標的とされた病理学的状態もしくは障害の発症を予防するかもしくは遅らせる予防的処置もしくは防止的処置の両方を指す。従って、処置を必要とする者には、既に障害がある者;障害になりやすい者;および障害を予防しようとする者が含まれる。がんまたは腫瘍の場合、患者が、以下の1つまたは複数を示す場合には、対象は本発明の方法に従って首尾良く「処置されている」:免疫応答の増大、抗腫瘍応答の増大、免疫細胞の細胞溶解活性の増大、腫瘍細胞死滅の増大、免疫細胞による腫瘍細胞死滅の増大、がん細胞の数の低減もしくはがん細胞の完全な欠如、腫瘍サイズの縮小、軟部組織および骨へのがん細胞の拡大を含む末梢器官へのがん細胞浸潤の阻害もしくは欠如、腫瘍もしくはがん細胞の転移の阻害もしくは欠如、がん成長の阻害もしくは欠如、特定のがんに関連する1つもしくは複数の症状の緩和、罹患率および死亡率の低減、生活の質の改善、腫瘍形成能の低減、がん幹細胞の数もしくは頻度の低減、または効果の何らかの組み合わせ。
【００８１】
本開示および特許請求の範囲で使用する単数形「1つの(a)」、「1つの(an)」、および「その(the)」は、文脈によってはっきりと規定されていない限り複数形を含む。
【００８２】
本明細書において「を含む」という言葉で態様が説明された場合はいつでも、「からなる」および/または「から本質的になる」という用語で説明された他の類似する態様も提供されることが理解される。本明細書において「から本質的になる」という言葉で態様が説明された場合はいつでも、「からなる」で説明された他の類似する態様も提供されることも理解される。
【００８３】
本明細書で使用する場合、「約」値もしくはパラメータまたは「おおよそ」値もしくはパラメータについての言及は、その値もしくはパラメータを対象とする態様を含む(およびその態様について説明する)。例えば、「約X」について言及している説明は「X」の説明を含む。
【００８４】
本明細書において「Aおよび/またはB」などの句において用いられる「および/または」という用語は、AおよびB、AまたはB、A(のみ)、ならびにB(のみ)を含むことが意図される。同様に、「A、B、および/またはC」などの句で用いられる「および/または」という用語は、以下の態様のそれぞれを包含することが意図される:A、B、およびC;A、B、またはC;AまたはC;AまたはB;BまたはC;AおよびC;AおよびB;BおよびC;A(のみ);B(のみ);ならびにC(のみ)。
【００８５】
II.使用方法および薬学的組成物
本発明のTIGIT結合物質は、がん処置法などの治療的処置方法を含むが、これに限定されない様々な用途において有用である。一部の態様において、治療的処置方法は、がんに対する免疫療法を含む。ある特定の態様において、TIGIT結合物質は、免疫応答を活性化する、促進する、増大させる、および/もしくは強化するのに、腫瘍成長を阻害するのに、腫瘍体積を減らすのに、腫瘍細胞アポトーシスを増やすのに、ならびに/または腫瘍の腫瘍形成能を小さくするのに有用である。
【００８６】
本発明は、TIGIT結合物質を用いて腫瘍成長を阻害するための方法を提供する。ある特定の態様において、腫瘍成長を阻害する方法は、治療的有効量のTIGIT結合物質を対象に投与する工程を含む。一部の態様において、TIGIT結合物質は、ヒトTIGITの細胞外ドメインに特異的に結合する抗体である。ある特定の態様において、対象はヒトである。ある特定の態様において、対象は腫瘍を有するか、または対象は腫瘍が少なくとも部分的に除去されている。
【００８７】
一部の態様において、本発明は、治療的有効量のTIGIT結合物質を対象に投与する工程を含む、対象において腫瘍成長を阻害する(例えば、がんを処置する)方法であって、腫瘍が、高頻度マイクロサテライト不安定性結腸直腸がん(MSI CRC)、マイクロサテライト安定性結腸直腸がん(MSS CRC)、トリプルネガティブ乳がん(TNBC)、メルケル細胞がん、子宮内膜がん、または食道がんである、方法を提供する。一部の態様において、ヒトTIGITの細胞外ドメインに特異的に結合する治療的有効量の抗体を対象に投与する工程を含む、対象において腫瘍成長を阻害する(例えば、がんを処置する)方法であって、腫瘍が、高頻度マイクロサテライト不安定性結腸直腸がん(MSI CRC)、マイクロサテライト安定性結腸直腸がん(MSS CRC)、トリプルネガティブ乳がん(TNBC)、メルケル細胞がん、子宮内膜がん、または食道がんであり、かつヒトTIGITに結合する抗体が、TSDYAWN(SEQ ID NO:4)を含む重鎖CDR1、
2020503273.tif 000050
を含む重鎖CDR2、
2020503273.tif 000051
を含む重鎖CDR3、
2020503273.tif 000052
を含む軽鎖CDR1、SASYRYT(SEQ ID NO:8)を含む軽鎖CDR2、およびQQHYSTP(SEQ ID NO:9)を含む軽鎖CDR3を含む、方法を提供する。一部の態様において、腫瘍は食道がんである。一部の態様において、腫瘍は、切除不能な、および/または転移性の疾患に対する少なくとも1つの先の全身療法または治療方針の際に進行していた食道がんである。一部の態様において、腫瘍はトリプルネガティブ乳がんである。一部の態様において、腫瘍は、不治の、進行型のエストロゲン受容体陰性、プロゲステロン受容体陰性、およびヒト上皮増殖因子受容体2陰性乳腺がんとして組織学的に確認されているトリプルネガティブ乳がんである。
【００８８】
一部の態様において、組織学的確認は、当業者、例えば、訓練を受けた臨床医師によって、当技術分野において公知の任意の方法、例えば、免疫組織化学を用いて、行われる。
【００８９】
一部の態様において、本発明は、治療的有効量のTIGIT結合物質を対象に投与する工程を含む、対象において腫瘍成長を阻害する(例えば、がんを処置する)方法であって、腫瘍が高頻度MSI固形腫瘍である、方法を提供する。一部の態様において、ヒトTIGITの細胞外ドメインに特異的に結合する治療的有効量の抗体を対象に投与する工程を含む、対象において腫瘍成長を阻害する(例えば、がんを処置する)方法であって、腫瘍が高頻度MSI固形腫瘍であり、かつヒトTIGITに結合する抗体が、TSDYAWN(SEQ ID NO:4)を含む重鎖CDR1、
2020503273.tif 000053
を含む重鎖CDR2、
2020503273.tif 000054
を含む重鎖CDR3、
2020503273.tif 000055
を含む軽鎖CDR1、SASYRYT(SEQ ID NO:8)を含む軽鎖CDR2、およびQQHYSTP(SEQ ID NO:9)を含む軽鎖CDR3を含む、方法を提供する。一部の態様において、高頻度MSI固形腫瘍には、MSI CRC、MSI胃がん、MSI子宮内膜がん、MSI卵巣がん、MSI肝胆道がん、MSI尿路がん、MSI脳がん、またはMSI皮膚がんが含まれ得る。
【００９０】
一般的に、腫瘍はマイクロサテライト安定性(MSI)に従って分類することができる。例えば、固形腫瘍は、MSI-high、MSI-lowまたはMSI-stable腫瘍として分類することができる。MSI-high腫瘍には、結腸がん、胃がん、子宮内膜がん、卵巣がん、肝胆道がん、尿路がん、脳がん、および皮膚がんが含まれ得るが、それに限定されるわけではない。MSIは、ポリメラーゼ連鎖反応(PCR)または免疫組織化学(IHC)などの当技術分野において公知の任意の方法を用いて確かめることができる。一部の態様において、MSIは、がん患者から得られた試料において判定される。一部の態様において、試料は生検試料(例えば、針生検材料)である。一部の態様において、MSIは、逆転写PCR(RT-PCR)、定量RT-PCR(qPCR)、TaqMan(商標)、またはTaqMan(商標)低密度アレイ(TLDA)などがあるが、これに限定されない、ポリメラーゼ連鎖反応(PCR)に基づく方法において判定される。一部の態様において、MSIはマイクロアレイを用いて判定される。一部の態様において、MSIは、次世代シークエンシングなどのDNAシークエンシングによって判定される。一部の態様において、MSIは免疫組織化学(IHC)アッセイにおいて判定される。一部の態様において、腫瘍MSIは、予め判定されたMSIと比較される。一部の態様において、腫瘍のMSIが、予め判定されたMSIより大きければ、腫瘍はMSI-high腫瘍として分類される。一部の態様において、予め決定されたMSIは、参照腫瘍試料、参照正常組織試料、一連の参照腫瘍試料、または一連の参照正常組織試料のMSIである。
【００９１】
一部の態様において、本発明は、TIGIT結合物質の治療的有効量をPD-1アンタゴニストまたはPD-L1アンタゴニストと組み合わせて対象に投与する工程を含む、対象において腫瘍成長を阻害する(例えば、がんを処置する)方法であって、腫瘍が、高頻度マイクロサテライト不安定性結腸直腸がん、マイクロサテライト安定性結腸直腸がん、トリプルネガティブ乳がん、メルケル細胞がん、子宮内膜がん、または食道がんである、方法を提供する。一部の態様において、対象において腫瘍成長を阻害する(例えば、がんを処置する)方法は、ヒトTIGITの細胞外ドメインに特異的に結合する抗体の治療的有効量をPD-1アンタゴニストと組み合わせて対象に投与する工程を含み、腫瘍は、高頻度マイクロサテライト不安定性結腸直腸がん、マイクロサテライト安定性結腸直腸がん、トリプルネガティブ乳がん、メルケル細胞がん、子宮内膜がん、または食道がんであり、かつヒトTIGITに結合する抗体は、TSDYAWN(SEQ ID NO:4)を含む重鎖CDR1、
2020503273.tif 000056
を含む重鎖CDR2、
2020503273.tif 000057
を含む重鎖CDR3、
2020503273.tif 000058
を含む軽鎖CDR1、SASYRYT(SEQ ID NO:8)を含む軽鎖CDR2、およびQQHYSTP(SEQ ID NO:9)を含む軽鎖CDR3を含む。一部の態様において、対象において腫瘍成長を阻害する(例えば、がんを処置する)方法は、ヒトTIGITの細胞外ドメインに特異的に結合する抗体の治療的有効量をPD-L1アンタゴニストと組み合わせて対象に投与する工程を含み、腫瘍は、高頻度マイクロサテライト不安定性結腸直腸がん、マイクロサテライト安定性結腸直腸がん、トリプルネガティブ乳がん、メルケル細胞がん、子宮内膜がん、または食道がんであり、かつヒトTIGITに結合する抗体は、TSDYAWN(SEQ ID NO:4)を含む重鎖CDR1、
2020503273.tif 000059
を含む重鎖CDR2、
2020503273.tif 000060
を含む重鎖CDR3、
2020503273.tif 000061
を含む軽鎖CDR1、SASYRYT(SEQ ID NO:8)を含む軽鎖CDR2、およびQQHYSTP(SEQ ID NO:9)を含む軽鎖CDR3を含む。一部の態様において、腫瘍は食道がんである。一部の態様において、腫瘍は、切除不能な、および/または転移性の疾患に対する少なくとも1つの先の全身療法または治療方針の際に進行していた食道がんである。一部の態様において、腫瘍はトリプルネガティブ乳がんである。一部の態様において、腫瘍は、不治の、進行型のエストロゲン受容体陰性、プロゲステロン受容体陰性、およびヒト上皮増殖因子受容体2陰性乳腺がんとして組織学的に確認されているトリプルネガティブ乳がんである。
【００９２】
一部の態様において、本発明は、TIGIT結合物質の治療的有効量をPD-1アンタゴニストまたはPD-L1アンタゴニストと組み合わせて対象に投与する工程を含む、対象において腫瘍成長を阻害する(例えば、がんを処置する)方法であって、腫瘍が高頻度MSI固形腫瘍である、方法を提供する。一部の態様において、対象において腫瘍成長を阻害する(例えば、がんを処置する)方法は、ヒトTIGITの細胞外ドメインに特異的に結合する抗体の治療的有効量をPD-1アンタゴニストと組み合わせて対象に投与する工程を含み、腫瘍は高頻度MSI固形腫瘍であり、かつヒトTIGITに結合する抗体は、TSDYAWN(SEQ ID NO:4)を含む重鎖CDR1、
2020503273.tif 000062
を含む重鎖CDR2、
2020503273.tif 000063
を含む重鎖CDR3、
2020503273.tif 000064
を含む軽鎖CDR1、SASYRYT(SEQ ID NO:8)を含む軽鎖CDR2、およびQQHYSTP(SEQ ID NO:9)を含む軽鎖CDR3を含む。一部の態様において、対象において腫瘍成長を阻害する(例えば、がんを処置する)方法は、ヒトTIGITの細胞外ドメインに特異的に結合する抗体の治療的有効量をPD-L1アンタゴニストと組み合わせて対象に投与する工程を含み、腫瘍は高頻度MSI固形腫瘍であり、かつヒトTIGITに結合する抗体は、TSDYAWN(SEQ ID NO:4)を含む重鎖CDR1、
2020503273.tif 000065
を含む重鎖CDR2、
2020503273.tif 000066
を含む重鎖CDR3、
2020503273.tif 000067
を含む軽鎖CDR1、SASYRYT(SEQ ID NO:8)を含む軽鎖CDR2、およびQQHYSTP(SEQ ID NO:9)を含む軽鎖CDR3を含む。一部の態様において、高頻度マイクロサテライト不安定性固形腫瘍には、MSI CRC、MSI胃がん、MSI子宮内膜がん、MSI卵巣がん、MSI肝胆道がん、MSI尿路がん、MSI脳がん、またはMSI皮膚がんが含まれ得る。
【００９３】
一部の態様において、本発明は、治療的有効量のTIGIT結合物質を対象に投与する工程を含む、対象において腫瘍成長を阻害する(例えば、がんを処置する)方法であって、腫瘍が、PD-1アンタゴニストまたはPD-L1アンタゴニストを用いる処置に対して抵抗性または不応性である、方法を提供する。一部の態様において、対象において腫瘍成長を阻害する(例えば、がんを処置する)方法は、ヒトTIGITの細胞外ドメインに特異的に結合する治療的有効量の抗体を対象に投与する工程を含み、腫瘍は、PD-1アンタゴニストを用いる処置に対して抵抗性または不応性であり、かつヒトTIGITに結合する抗体は、TSDYAWN(SEQ ID NO:4)を含む重鎖CDR1、
2020503273.tif 000068
を含む重鎖CDR2、
2020503273.tif 000069
を含む重鎖CDR3、
2020503273.tif 000070
を含む軽鎖CDR1、SASYRYT(SEQ ID NO:8)を含む軽鎖CDR2、およびQQHYSTP(SEQ ID NO:9)を含む軽鎖CDR3を含む。一部の態様において、腫瘍は、抗PD-1抗体を用いる処置に対して抵抗性または不応性である。一部の態様において、対象において腫瘍成長を阻害する(例えば、がんを処置する)方法は、ヒトTIGITの細胞外ドメインに特異的に結合する治療的有効量の抗体を対象に投与する工程を含み、腫瘍は、PD-L1アンタゴニストを用いる処置に対して抵抗性または不応性であり、かつヒトTIGITに結合する抗体は、TSDYAWN(SEQ ID NO:4)を含む重鎖CDR1、
2020503273.tif 000071
を含む重鎖CDR2、
2020503273.tif 000072
を含む重鎖CDR3、
2020503273.tif 000073
を含む軽鎖CDR1、SASYRYT(SEQ ID NO:8)を含む軽鎖CDR2、およびQQHYSTP(SEQ ID NO:9)を含む軽鎖CDR3を含む。一部の態様において、腫瘍は、抗PD-L1抗体を用いる処置に対して抵抗性または不応性である。
【００９４】
一部の態様において、PD-1アンタゴニストまたはPD-L1アンタゴニストを用いる処置に対して抵抗性または不応性である腫瘍は、黒色腫、NSCLC、腎細胞がん、頭頸部扁平上皮がん、尿路上皮がん、結腸直腸がん(例えば、MSIまたはdMMR転移性CRC)、および肝細胞がんからなる群より選択される。
【００９５】
一部の態様において、本発明は、TIGIT結合物質の治療的有効量をPD-1アンタゴニストまたはPD-L1アンタゴニストと組み合わせて対象に投与する工程を含む、対象において腫瘍成長を阻害する(例えば、がんを処置する)方法であって、腫瘍が、単一の作用物質としてPD-1アンタゴニストまたは単一の作用物質としてPD-L1アンタゴニストを用いる処置に対して抵抗性または不応性である、方法を提供する。一部の態様において、対象において腫瘍成長を阻害する(例えば、がんを処置する)方法は、ヒトTIGITの細胞外ドメインに特異的に結合する抗体の治療的有効量をPD-1アンタゴニストと組み合わせて対象に投与する工程を含み、腫瘍は、単一の作用物質としてPD-1アンタゴニストを用いる処置に対して抵抗性または不応性であり、かつヒトTIGITに結合する抗体は、TSDYAWN(SEQ ID NO:4)を含む重鎖CDR1、
2020503273.tif 000074
を含む重鎖CDR2、
2020503273.tif 000075
を含む重鎖CDR3、
2020503273.tif 000076
を含む軽鎖CDR1、SASYRYT(SEQ ID NO:8)を含む軽鎖CDR2、およびQQHYSTP(SEQ ID NO:9)を含む軽鎖CDR3を含む。一部の態様において、PD-1アンタゴニストは抗PD-1抗体である。一部の態様において、抗PD-1抗体はペンブロリズマブ(キイトルーダ(KEYTRUDA))である。一部の態様において、抗PD-1抗体はニボルマブ(オプジーボ(OPDIVO))である。一部の態様において、対象において腫瘍成長を阻害する(がんを処置する)方法は、ヒトTIGITの細胞外ドメインに特異的に結合する抗体の治療的有効量をPD-L1アンタゴニストと組み合わせて対象に投与する工程を含み、腫瘍は、単一の作用物質としてPD-L1アンタゴニストを用いる処置に対して抵抗性または不応性であり、かつヒトTIGITに結合する抗体は、TSDYAWN(SEQ ID NO:4)を含む重鎖CDR1、
2020503273.tif 000077
を含む重鎖CDR2、
2020503273.tif 000078
を含む重鎖CDR3、
2020503273.tif 000079
を含む軽鎖CDR1、SASYRYT(SEQ ID NO:8)を含む軽鎖CDR2、およびQQHYSTP(SEQ ID NO:9)を含む軽鎖CDR3を含む。一部の態様において、PD-L1アンタゴニストは抗PD-L1抗体である。一部の態様において、抗PD-L1抗体はアテゾリズマブ(テセントリク(TECENTRIQ))である。一部の態様において、抗PD-L1抗体はアベルマブ(MSB0010718C)である。
【００９６】
一部の態様において、腫瘍は、単一の作用物質としてPD-1アンタゴニストまたは単一の作用物質としてPD-L1アンタゴニストを用いる処置に対して抵抗性または不応性であり、黒色腫、NSCLC、腎細胞がん、頭頸部扁平上皮がん、尿路上皮がん、結腸直腸がん(例えば、MSIまたはdMMR転移性CRC)、および肝細胞がんを含んでもよい。
【００９７】
一部の態様において、本発明は、治療的有効量のTIGIT結合物質を対象に投与する工程を含む、対象において腫瘍成長を阻害する(例えば、がんを処置する)方法であって、対象がPD-1アンタゴニストまたはPD-L1アンタゴニストを用いて以前に処置されたことがある、方法を提供する。一部の態様において、対象において腫瘍成長を阻害する(例えば、がんを処置する)方法は、ヒトTIGITの細胞外ドメインに特異的に結合する治療的有効量の抗体を対象に投与する工程を含み、対象はPD-1アンタゴニストを用いて以前に処置されたことがあり、かつヒトTIGITに結合する抗体は、TSDYAWN(SEQ ID NO:4)を含む重鎖CDR1、
2020503273.tif 000080
を含む重鎖CDR2、
2020503273.tif 000081
を含む重鎖CDR3、
2020503273.tif 000082
を含む軽鎖CDR1、SASYRYT(SEQ ID NO:8)を含む軽鎖CDR2、およびQQHYSTP(SEQ ID NO:9)を含む軽鎖CDR3を含む。一部の態様において、対象において腫瘍成長を阻害する(例えば、がんを処置する)方法は、ヒトTIGITの細胞外ドメインに特異的に結合する治療的有効量の抗体を対象に投与する工程を含み、対象はPD-L1アンタゴニストを用いて以前に処置されたことがあり、かつヒトTIGITに結合する抗体は、TSDYAWN(SEQ ID NO:4)を含む重鎖CDR1、
2020503273.tif 000083
を含む重鎖CDR2、
2020503273.tif 000084
を含む重鎖CDR3、
2020503273.tif 000085
を含む軽鎖CDR1、SASYRYT(SEQ ID NO:8)を含む軽鎖CDR2、およびQQHYSTP(SEQ ID NO:9)を含む軽鎖CDR3を含む。一部の態様において、対象は、単一の作用物質としてPD-1アンタゴニストまたはPD-L1アンタゴニストを用いて以前に処置されたことがある。一部の態様において、対象はPD-1アンタゴニストまたはPD-L1アンタゴニストを用いて以前に処置されたことがあり、処置中にまたは処置後に疾患進行があった。特定の処置の際に、または特定の処置の後に疾患進行があった対象は本明細書において「進行者」と呼ばれることがある。一部の態様において、対象は、第一選択治療薬である抗PD-1抗体を用いて以前に処置されたことがある。一部の態様において、対象は、第二選択治療薬または第三選択治療薬である抗PD-1抗体を用いて以前に処置されたことがある。一部の態様において、対象はペンブロリズマブ(キイトルーダ)を用いて以前に処置されたことがある。一部の態様において、対象はニボルマブ(オプジーボ)を用いて以前に処置されたことがある。一部の態様において、対象は、第一選択治療薬である抗PD-L1抗体を用いて以前に処置されたことがある。一部の態様において、対象は、第二選択治療薬または第三選択治療薬である抗PD-L1抗体を用いて以前に処置されたことがある。一部の態様において、対象はアテゾリズマブ(テセントリク)を用いて以前に処置されたことがある。一部の態様において、対象はアベルマブ(MSB0010718C)を用いて以前に処置されたことがある。一部の態様において、対象は、併用療法の一環としてPD-1アンタゴニストまたはPD-L1アンタゴニストを用いて以前に処置されたことがある。一部の態様において、対象は、抗PD-1抗体および第2のチェックポイント阻害物質を用いて以前に処置されたことがある。一部の態様において、対象は、抗PD-1抗体および抗CTLA-4抗体を用いて以前に処置されたことがある。一部の態様において、対象は、ニボルマブ(オプジーボ)およびイピリムマブ(ヤーボイ(YERVOY))を用いて以前に処置されたことがある。一部の態様において、対象は、抗PD-1抗体および化学療法剤を用いて以前に処置されたことがある。一部の態様において、対象は、抗PD-L1抗体および第2のチェックポイント阻害物質を用いて以前に処置されたことがある。一部の態様において、対象は、抗PD-L1抗体および抗CTLA-4抗体を用いて以前に処置されたことがある。一部の態様において、対象は、抗PD-L1抗体およびイピリムマブ(ヤーボイ)を用いて以前に処置されたことがある。一部の態様において、対象は抗PD-L1抗体および化学療法剤を用いて以前に処置されたことがある。
【００９８】
一部の態様において、本発明は、TIGIT結合物質の治療的有効量をPD-1アンタゴニストと組み合わせて対象に投与する工程を含む、対象において腫瘍成長を阻害する(例えば、がんを処置する)方法であって、対象がPD-1アンタゴニストまたはPD-L1アンタゴニストを用いて以前に処置されたことがある、方法を提供する。一部の態様において、対象において腫瘍成長を阻害する(例えば、がんを処置する)方法は、ヒトTIGITの細胞外ドメインに特異的に結合する抗体の治療的有効量をPD-1アンタゴニストと組み合わせて対象に投与する工程を含み、対象はPD-1アンタゴニストを用いて以前に処置されたことがあり、かつヒトTIGITに結合する抗体は、TSDYAWN(SEQ ID NO:4)を含む重鎖CDR1、
2020503273.tif 000086
を含む重鎖CDR2、
2020503273.tif 000087
を含む重鎖CDR3、
2020503273.tif 000088
を含む軽鎖CDR1、SASYRYT(SEQ ID NO:8)を含む軽鎖CDR2、およびQQHYSTP(SEQ ID NO:9)を含む軽鎖CDR3を含む。一部の態様において、対象は抗PD-1抗体を用いて以前に処置されたことがある。一部の態様において、対象はペンブロリズマブ(キイトルーダ)を用いて以前に処置されたことがある。一部の態様において、対象はニボルマブ(オプジーボ)を用いて以前に処置されたことがある。一部の態様において、抗PD-1抗体を用いる処置の間に腫瘍成長が進行した。一部の態様において、抗PD-1抗体を用いる処置の後に腫瘍成長が再発した。一部の態様において、腫瘍は、抗TIGIT抗体と抗PD-1抗体の併用療法に応答性である。一部の態様において、腫瘍は、抗TIGIT抗体と抗PD-1抗体の併用療法に応答性であり、この応答は、抗TIGIT抗体単独の投与を用いて得られる応答よりも優れている。一部の態様において、対象において腫瘍成長を阻害する(がんを処置する)方法は、ヒトTIGITの細胞外ドメインに特異的に結合する抗体の治療的有効量をPD-L1アンタゴニストと組み合わせて対象に投与する工程を含み、対象は、単一の作用物質としてPD-L1アンタゴニストを用いて以前に処置されたことがあり、かつヒトTIGITに結合する抗体は、TSDYAWN(SEQ ID NO:4)を含む重鎖CDR1、
2020503273.tif 000089
を含む重鎖CDR2、
2020503273.tif 000090
を含む重鎖CDR3、
2020503273.tif 000091
を含む軽鎖CDR1、SASYRYT(SEQ ID NO:8)を含む軽鎖CDR2、およびQQHYSTP(SEQ ID NO:9)を含む軽鎖CDR3を含む。一部の態様において、対象は抗PD-L1抗体を用いて以前に処置されたことがある。一部の態様において、対象はアテゾリズマブ(テセントリク)を用いて以前に処置されたことがある。一部の態様において、対象はアベルマブ(MSB0010718C)を用いて以前に処置されたことがある。一部の態様において、抗PD-L1抗体を用いる処置の間に腫瘍成長が進行した。一部の態様において、抗PD-L1抗体を用いる処置の後に腫瘍成長が再発した。一部の態様において、腫瘍は、抗TIGIT抗体と抗PD-L1抗体の併用療法に応答性である。一部の態様において、腫瘍は、抗TIGIT抗体と抗PD-L1抗体の併用療法に応答性であり、この応答は、抗TIGIT抗体単独の投与を用いて得られる応答よりも優れている。
【００９９】
一部の態様において、PD-1アンタゴニストまたはPD-L1アンタゴニストを用いて以前に処置された対象にある腫瘍は、腫瘍、例えば、黒色腫、NSCLC、腎細胞がん、頭頸部扁平上皮がん、尿路上皮がん、結腸直腸がん(例えば、MSIもしくはdMMR転移性CRC)、または肝細胞がんを有してもよい。
【０１００】
一部の態様において、本発明は、治療的有効量のTIGIT結合物質を対象に投与する工程を含む、対象において腫瘍成長を阻害する(例えば、がんを処置する)方法であって、腫瘍/がんがPVRおよび/またはPVRL2を発現する、方法を提供する。一部の態様において、対象において腫瘍成長を阻害する(例えば、がんを処置する)方法は、ヒトTIGITの細胞外ドメインに特異的に結合する治療的有効量の抗体を対象に投与する工程を含み、腫瘍/がんはPVRおよび/またはPVRL2を発現し、かつヒトTIGITに結合する抗体は、TSDYAWN(SEQ ID NO:4)を含む重鎖CDR1、
2020503273.tif 000092
を含む重鎖CDR2、
2020503273.tif 000093
を含む重鎖CDR3、
2020503273.tif 000094
を含む軽鎖CDR1、SASYRYT(SEQ ID NO:8)を含む軽鎖CDR2、およびQQHYSTP(SEQ ID NO:9)を含む軽鎖CDR3を含む。一部の態様において、腫瘍試料が対象から得られ、PVRおよび/またはPVRL2の発現レベルが決定される。一部の態様において、PVRの発現レベルは、処置のために対象を選択するのに用いられる。一部の態様において、PVRL2の発現レベルは、処置のために対象を選択するのに用いられる。
【０１０１】
一部の態様において、本発明は、腫瘍/がんがPVRおよび/またはPVRL2を発現することに基づいて、治療的有効量のTIGIT結合物質を対象に選択的に投与する工程を含む、対象において腫瘍成長を阻害する(例えば、がんを処置する)方法方法を提供する。一部の態様において、対象において腫瘍成長を阻害する(例えば、がんを処置する)方法は、腫瘍/がんがPVRおよび/またはPVRL2を発現することに基づいて、ヒトTIGITの細胞外ドメインに特異的に結合する治療的有効量の抗体を対象に選択的に投与する工程を含み、かつヒトTIGITに結合する抗体は、TSDYAWN(SEQ ID NO:4)を含む重鎖CDR1、
2020503273.tif 000095
を含む重鎖CDR2、
2020503273.tif 000096
を含む重鎖CDR3、
2020503273.tif 000097
を含む軽鎖CDR1、SASYRYT(SEQ ID NO:8)を含む軽鎖CDR2、およびQQHYSTP(SEQ ID NO:9)を含む軽鎖CDR3を含む。
【０１０２】
一部の態様において、PVRおよび/またはPVRL2を発現する腫瘍/がんには、NSCLC、腎細胞がん、頭頸部扁平上皮がん、尿路上皮がん、結腸直腸がん(例えば、MSIまたはdMMR転移性CRC)、または肝細胞がんが含まれる。
【０１０３】
一部の態様において、PVRおよび/またはPVRL2を発現する腫瘍/がんには、CRC、胃がん、子宮内膜がん、卵巣がん、肝胆道がん、尿路がん、脳がん、または皮膚がんが含まれる。
【０１０４】
一部の態様において、PVRおよび/またはPVRL2を発現する腫瘍/がんには、MSI CRC、MSI胃がん、MSI子宮内膜がん、MSI卵巣がん、MSI肝胆道がん、MSI尿路がん、MSI脳がん、またはMSI皮膚がんが含まれる。
【０１０５】
一部の態様において、本発明は、TIGIT結合物質の治療的有効量をPD-1アンタゴニストまたはPD-L1アンタゴニストと組み合わせて対象に投与する工程を含む、対象において腫瘍成長を阻害する(例えば、がんを処置する)方法であって、がんがPVRおよび/またはPVRL2を発現する、方法を提供する。一部の態様において、対象において腫瘍成長を阻害する(例えば、がんを処置する)方法は、ヒトTIGITの細胞外ドメインに特異的に結合する抗体の治療的有効量をPD-1アンタゴニストと組み合わせて対象に投与する工程を含み、がんはPVRおよび/またはPVRL2を発現し、かつヒトTIGITに結合する抗体は、TSDYAWN(SEQ ID NO:4)を含む重鎖CDR1、
2020503273.tif 000098
を含む重鎖CDR2、
2020503273.tif 000099
を含む重鎖CDR3、
2020503273.tif 000100
を含む軽鎖CDR1、SASYRYT(SEQ ID NO:8)を含む軽鎖CDR2、およびQQHYSTP(SEQ ID NO:9)を含む軽鎖CDR3を含む。一部の態様において、対象において腫瘍成長を阻害する(例えば、がんを処置する)方法は、ヒトTIGITの細胞外ドメインに特異的に結合する抗体の治療的有効量をPD-L1アンタゴニストと組み合わせて対象に投与する工程を含み、がんはPVRおよび/またはPVRL2を発現し、かつヒトTIGITに結合する抗体は、TSDYAWN(SEQ ID NO:4)を含む重鎖CDR1、
2020503273.tif 000101
を含む重鎖CDR2、
2020503273.tif 000102
を含む重鎖CDR3、
2020503273.tif 000103
を含む軽鎖CDR1、SASYRYT(SEQ ID NO:8)を含む軽鎖CDR2、およびQQHYSTP(SEQ ID NO:9)を含む軽鎖CDR3を含む。一部の態様において、抗TIGIT抗体は抗PD-1抗体と組み合わせて投与される。一部の態様において、抗TIGIT抗体はペンブロリズマブ(キイトルーダ)と組み合わせて投与される。一部の態様において、抗TIGIT抗体はニボルマブ(オプジーボ)と組み合わせて投与される。一部の態様において、抗TIGIT抗体は抗PD-L1抗体と組み合わせて投与される。一部の態様において、抗TIGIT抗体はアテゾリズマブ(テセントリク)と組み合わせて投与される。
【０１０６】
一部の態様において、腫瘍試料中のPVRおよび/またはPVRL2の発現レベルは高レベルだと決定されている。一部の態様において、試料中のPVRの発現レベルは、PVRの予め決定された発現レベルと比較される。一部の態様において、試料中のPVRL2の発現レベルは、PVRL2の予め決定された発現レベルと比較される。一部の態様において、PVR発現の予め決定された発現レベルは、参照腫瘍試料、参照正常組織試料、一連の参照腫瘍試料、または一連の参照正常組織試料におけるPVRの発現レベルである。一部の態様において、PVRL2発現の予め決定された発現レベルは、参照腫瘍試料、参照正常組織試料、一連の参照腫瘍試料、または一連の参照正常組織試料におけるPVRL2の発現レベルである。一部の態様において、PVRまたはPVRL2の発現レベルは免疫組織化学(IHC)アッセイを用いて決定される。一部の態様において、PVRおよび/またはPVRL2の発現レベルは、Hスコア評価を含むアッセイを用いて決定される。一部の態様において、PVRの発現レベルは、PVRに特異的に結合する抗体を用いて決定される。一部の態様において、PVRL2の発現レベルは、PVRL2に特異的に結合する抗体を用いて決定される。一部の態様において、PVRは腫瘍細胞の表面で検出される。一部の態様において、PVRL2は腫瘍細胞の表面で検出される。一部の態様において、PVRは、腫瘍浸潤性免疫細胞の表面で、および/または腫瘍微小環境内で検出される。一部の態様において、PVRL2は腫瘍浸潤性免疫細胞の表面で、および/または腫瘍微小環境内で検出される。
【０１０７】
ある特定の態様において、PVRおよび/またはPVRL2の発現レベルは、逆転写PCR(RT-PCR)、定量RT-PCR(qPCR)、TaqMan(商標)、またはTaqMan(商標)低密度アレイ(TLDA)などがあるが、これに限定されない、PCRに基づく方法を用いて決定される。一部の態様において、バイオマーカーの発現レベルはマイクロアレイを用いて決定される。
【０１０８】
ある特定の態様において、PVRおよび/またはPVRL2の発現レベルは、タンパク質に基づく方法を用いて決定される。一部の態様において、バイオマーカーの発現レベルは、多分析物(multi-analyte)プロファイル試験、ラジオイムノアッセイ(RIA)、ウエスタンブロットアッセイ、免疫蛍光アッセイ、酵素イムノアッセイ、酵素結合免疫測定法(ELISA)、免疫沈降アッセイ、化学発光アッセイ、免疫組織化学的(IHC)アッセイ、ドットブロットアッセイ、またはスロットブロットアッセイによって測定されるか、または決定される。一部の態様において、PVRおよび/またはPVRL2の発現レベルはIHCアッセイを用いて決定される。一部の態様において、このアッセイは抗体(例えば、抗PVR抗体または抗PVRL2抗体)を使用する。アッセイが抗体を使用する一部の態様では、前記抗体は検出可能に標識されている。一部の態様において、標識は、免疫蛍光標識、化学発光標識、リン光標識、酵素標識、放射標識、アビジン/ビオチン標識、コロイド金粒子、色のついた粒子、および磁性粒子からなる群より選択される。
【０１０９】
一部の態様において、PVRおよび/またはPVRL2発現レベルは、TIGIT結合物質を用いる処置前に決定される。一部の態様において、腫瘍またはがんのPVRおよび/またはPVRL2の発現レベルが高ければ、TIGIT結合物質が対象に投与される。一部の態様において、方法は、(i)対象から腫瘍試料を得る工程;(ii)試料中のPVRおよび/またはPVRL2の発現レベルを測定する工程;ならびに(iii)腫瘍またはがんのPVRおよび/またはPVRL2の発現レベルが上昇していれば、または高ければ、有効量のTIGIT結合物質を対象に投与する工程を含む。
【０１１０】
一部の態様において、本発明は、腫瘍のPVRおよび/またはPVRL2発現レベルが高いことに基づいて、TIGIT結合物質の治療的有効量をPD-1アンタゴニストまたはPD-L1アンタゴニストと組み合わせて対象に選択的に投与する工程を含む、対象において腫瘍成長を阻害する(例えば、がんを処置する)方法を提供する。一部の態様において、対象において腫瘍成長を阻害する(例えば、がんを処置する)方法は、ヒトTIGITの細胞外ドメインに特異的に結合する抗体の治療的有効量をPD-1アンタゴニストと組み合わせて対象に投与する工程を含み、腫瘍のPVRおよび/またはPVRL2発現レベルが高く、かつヒトTIGITに結合する抗体は、TSDYAWN(SEQ ID NO:4)を含む重鎖CDR1、
2020503273.tif 000104
を含む重鎖CDR2、
2020503273.tif 000105
を含む重鎖CDR3、
2020503273.tif 000106
を含む軽鎖CDR1、SASYRYT(SEQ ID NO:8)を含む軽鎖CDR2、およびQQHYSTP(SEQ ID NO:9)を含む軽鎖CDR3を含む。一部の態様において、対象において腫瘍成長を阻害する(例えば、がんを処置する)方法は、腫瘍のPVRおよび/またはPVRL2発現レベルが高いことに基づいて、ヒトTIGITの細胞外ドメインに特異的に結合する抗体の治療的有効量をPD-L1アンタゴニストと組み合わせて対象に選択的に投与する工程を含み、かつヒトTIGITに結合する抗体は、TSDYAWN(SEQ ID NO:4)を含む重鎖CDR1、
2020503273.tif 000107
を含む重鎖CDR2、
2020503273.tif 000108
を含む重鎖CDR3、
2020503273.tif 000109
を含む軽鎖CDR1、SASYRYT(SEQ ID NO:8)を含む軽鎖CDR2、およびQQHYSTP(SEQ ID NO:9)を含む軽鎖CDR3を含む。一部の態様において、抗TIGIT抗体は抗PD-1抗体と組み合わせて投与される。一部の態様において、抗TIGIT抗体はペンブロリズマブ(キイトルーダ)と組み合わせて投与される。一部の態様において、抗TIGIT抗体はニボルマブ(オプジーボ)と組み合わせて投与される。一部の態様において、抗TIGIT抗体は抗PD-L1抗体と組み合わせて投与される。一部の態様において、抗TIGIT抗体はアテゾリズマブ(テセントリク)と組み合わせて投与される。
【０１１１】
一部の態様において、試料は生検試料である。一部の態様において、試料は、腫瘍細胞、がん浸潤性免疫細胞、ストローマ細胞、およびその任意の組み合わせを含む。一部の態様において、試料はホルマリン固定パラフィン包埋(FFPE)試料である。一部の態様において、試料は、保存(archival)組織、新鮮組織、または凍結組織である。
【０１１２】
一部の患者は、活発な免疫微小環境を有する腫瘍を有する。これらの腫瘍は、「炎症性の」または「熱い」腫瘍と呼ばれ、例えば、腫瘍浸潤リンパ球(TIL)、IFN-γ産生CD8+T細胞、およびPD-L1発現の存在を特徴とする。いくつかの研究では、炎症性腫瘍または熱い腫瘍は免疫療法に対する臨床応答と関連付けられている。
【０１１３】
従って、一部の態様では、本発明は、治療的有効量のTIGIT結合物質を対象に投与する工程を含む、対象において腫瘍成長を阻害する(例えば、がんを処置する)方法であって、腫瘍がTILを含む、方法を提供する。一部の態様において、対象において腫瘍成長を阻害する(例えば、がんを処置する)方法は、ヒトTIGITの細胞外ドメインに特異的に結合する治療的有効量の抗体を対象に投与する工程を含み、腫瘍はTILを含み、かつヒトTIGITに結合する抗体は、TSDYAWN(SEQ ID NO:4)を含む重鎖CDR1、
2020503273.tif 000110
を含む重鎖CDR2、
2020503273.tif 000111
を含む重鎖CDR3、
2020503273.tif 000112
を含む軽鎖CDR1、SASYRYT(SEQ ID NO:8)を含む軽鎖CDR2、およびQQHYSTP(SEQ ID NO:9)を含む軽鎖CDR3を含む。一部の態様において、腫瘍は、予め決定されたレベルと比較して高レベルのTILを含む。一部の態様において、TILのレベルはTILの絶対数である。一部の態様において、TILのレベルは、総細胞数に対するパーセントである。
【０１１４】
一部の態様において、本発明は、TIGIT結合物質の治療的有効量をPD-1アンタゴニストまたはPD-L1アンタゴニストと組み合わせて対象に投与する工程を含む、対象において腫瘍成長を阻害する(例えば、がんを処置する)方法であって、腫瘍がTILを含む、方法を提供する。一部の態様において、対象において腫瘍成長を阻害する(例えば、がんを処置する)方法は、ヒトTIGITの細胞外ドメインに特異的に結合する抗体の治療的有効量をPD-1アンタゴニストまたはPD-L1アンタゴニストと組み合わせて対象に投与する工程を含み、腫瘍はTILを含み、かつヒトTIGITに結合する抗体は、TSDYAWN(SEQ ID NO:4)を含む重鎖CDR1、
2020503273.tif 000113
を含む重鎖CDR2、
2020503273.tif 000114
を含む重鎖CDR3、
2020503273.tif 000115
を含む軽鎖CDR1、SASYRYT(SEQ ID NO:8)を含む軽鎖CDR2、およびQQHYSTP(SEQ ID NO:9)を含む軽鎖CDR3を含む。一部の態様において、腫瘍は、予め決定されたレベルと比較して高レベルのTILを含む。一部の態様において、TILのレベルはTILの絶対数である。一部の態様において、TILのレベルは、総細胞数に対するパーセントである。一部の態様において、抗TIGIT抗体は抗PD-1抗体と組み合わせて投与される。一部の態様において、抗TIGIT抗体はペンブロリズマブ(キイトルーダ)と組み合わせて投与される。一部の態様において、抗TIGIT抗体はニボルマブ(オプジーボ)と組み合わせて投与される。一部の態様において、抗TIGIT抗体は抗PD-L1抗体と組み合わせて投与される。一部の態様において、抗TIGIT抗体はアテゾリズマブ(テセントリク)と組み合わせて投与される。
【０１１５】
一部の態様において、本発明は、TIGIT結合物質の治療的有効量を対象に投与する工程を含む、対象において腫瘍成長を阻害する(例えば、がんを処置する)方法であって、腫瘍が高レベルの調節性T細胞(Treg)を含む、方法を提供する。一部の態様において、対象において腫瘍成長を阻害する(例えば、がんを処置する)方法は、ヒトTIGITの細胞外ドメインに特異的に結合する治療的有効量の抗体を対象に投与する工程を含み、腫瘍は高レベルのTregを含み、かつヒトTIGITに結合する抗体は、TSDYAWN(SEQ ID NO:4)を含む重鎖CDR1、
2020503273.tif 000116
を含む重鎖CDR2、
2020503273.tif 000117
を含む重鎖CDR3、
2020503273.tif 000118
を含む軽鎖CDR1、SASYRYT(SEQ ID NO:7)を含む軽鎖CDR2、およびQQHYSTP(SEQ ID NO:8)を含む軽鎖CDR3を含む。
【０１１６】
一部の態様において、本発明は、TIGIT結合物質の治療的有効量をPD-1アンタゴニストまたはPD-L1アンタゴニストと組み合わせて対象に投与する工程を含む、対象において腫瘍成長を阻害する(例えば、がんを処置する)方法であって、腫瘍が高レベルのTregを含む、方法を提供する。一部の態様において、対象において腫瘍成長を阻害する(例えば、がんを処置する)方法は、ヒトTIGITの細胞外ドメインに特異的に結合する抗体の治療的有効量をPD-1アンタゴニストまたはPD-L1アンタゴニストと組み合わせて対象に投与する工程を含み、腫瘍は高レベルのTregを含み、かつヒトTIGITに結合する抗体は、TSDYAWN(SEQ ID NO:4)を含む重鎖CDR1、
2020503273.tif 000119
を含む重鎖CDR2、
2020503273.tif 000120
を含む重鎖CDR3、
2020503273.tif 000121
を含む軽鎖CDR1、SASYRYT(SEQ ID NO:8)を含む軽鎖CDR2、およびQQHYSTP(SEQ ID NO:9)を含む軽鎖CDR3を含む。一部の態様において、抗TIGIT抗体は抗PD-1抗体と組み合わせて投与される。一部の態様において、抗TIGIT抗体はペンブロリズマブ(キイトルーダ)と組み合わせて投与される。一部の態様において、抗TIGIT抗体はニボルマブ(オプジーボ)と組み合わせて投与される。一部の態様において、抗TIGIT抗体は抗PD-L1抗体と組み合わせて投与される。一部の態様において、抗TIGIT抗体はアテゾリズマブ(テセントリク)と組み合わせて投与される。
【０１１７】
一部の態様において、腫瘍中のまたは腫瘍微小環境内の免疫細胞(例えば、TIL、Treg、Teff)の存在は、細胞表面での、または細胞内での特定のタンパク質の発現を評価することによって分析される。タンパク質発現を分析するために一般的に用いられる方法には、免疫組織化学(IHC)に基づく方法、抗体に基づく方法、および質量分析法に基づく方法が含まれるが、これに限定されない。一部の態様において、免疫細胞表面での、または免疫細胞内でのタンパク質発現は、多分析物プロファイル試験、酵素結合免疫測定法(ELISA)、ラジオイムノアッセイ、ウエスタンブロットアッセイ、免疫蛍光アッセイ、酵素イムノアッセイ、免疫沈降アッセイ、化学発光アッセイ、免疫組織化学的(IHC)アッセイ、ドットブロットアッセイ、またはスロットブロットアッセイを含むが、これに限定されない、当業者に公知のアッセイによって測定される。遺伝子産物(例えば、タンパク質)の発現を検出するために、抗体、一般的に、モノクローナル抗体が用いられることがある。一部の態様において、前記抗体は、抗体そのものを直接標識することによって検出することができる。他の態様において、標識されていない一次抗体が、標識された二次抗体と一緒に用いられる。
【０１１８】
一部の態様において、特定のタンパク質の発現は、そのタンパク質に特異的に結合する作用物質を用いて測定される。そのタンパク質に対して特異的結合を示す任意の分子的実体を用いて、試料中にあるタンパク質の発現を評価することができる。特異的結合作用物質には、抗体、抗体ミメティック、およびポリヌクレオチド(例えば、アプタマー)が含まれるが、これに限定されない。当業者は、必要とされる特異性の程度が、タンパク質を検出するのに用いられる特定のアッセイによって決まることを理解する。
【０１１９】
CD45(白血球共通抗原、LCA;CD45ファミリーにある全タンパク質を含む)は、リンパ球、NK細胞、マクロファージ、単球などを含む免疫細胞のマーカーとして用いられる。T細胞は、CD4+T細胞またはCD8+T細胞を含むが、これに限定されない異なるサブセットに分離することができる。一部の態様において、CD45は、腫瘍試料におけるTILマーカーとして用いられる。一部の態様において、TILは抗CD45抗体を用いて検出および/または評価される。一部の態様において、モノクローナル抗CD45抗体のカクテルが用いられ、それぞれが、異なるCD45アイソタイプおよび/または異なるエピトープを認識する。一部の態様において、TILは、抗CD4抗体を用いて検出および/または評価される。一部の態様において、TILは、抗CD8抗体を用いて検出および/または評価される。
【０１２０】
FOXP3が調節性T細胞(Treg)マーカーであり、腫瘍試料中のTregを検出および/または同定するのに使用できることは当業者に公知である。研究から、Treg細胞は、機能が異なる多くの部分母集団で構成されることが分かっており、ある部分母集団はFOXP3+およびTIGIT+であることが突き止められている。一部の態様において、TregはFOXP3発現によって検出および/または評価される。一部の態様において、FOXP3発現は、抗FOXP3抗体を用いて検出および/または評価される。一部の態様において、モノクローナル抗FOXP3抗体のカクテルが用いられ、それぞれが、異なるアイソタイプおよび/または異なるエピトープを認識する。一部の態様において、TregはFOXP3およびTIGIT発現によって検出および/または評価される。一部の態様において、TIGIT発現は抗TIGIT抗体を用いて検出および/または評価される。
【０１２１】
一部の態様では、アッセイにおいて抗体が用いられ、抗体は検出可能に標識されている。検出可能な物質の例には、様々な酵素、補欠分子団、蛍光材料、リン光材料、発光材料、生物発光材料、化学発光材料、放射性材料、アビジン/ビオチン、コロイド金粒子、色のついた粒子、および磁性粒子が含まれる。適切な酵素の例には、西洋ワサビペルオキシダーゼ、アルカリホスファターゼ、?-ガラクトシダーゼ、またはアセチルコリンエステラーゼが含まれる。適切な補欠分子団複合体の例には、ストレプトアビジン/ビオチンおよびアビジン/ビオチンが含まれる。適切な蛍光材料の例には、ウンベリフェロン、フルオレセイン、フルオレセインイソチオシアネート、ローダミン、ジクロロトリアジニルアミンフルオレセイン、塩化ダンシル、またはフィコエリトリンが含まれる。発光材料の一例にはルミノールが含まれる。生物発光材料の例には、ルシフェラーゼ、ルシフェリン、およびエクオリンが含まれる。適切な放射性材料の例には、125I、131I、35S、または3Hが含まれる。
【０１２２】
一部の態様において、CD45、CD4、CD8、FOXP3、および/またはTIGITの発現はIHCアッセイによって測定される。例えば、FFPE切片を腫瘍試料から切断し、コーティングされたガラススライド上にマウントする。抗原賦活化のために組織をキシレン、100％エタノール、95％エタノール、70％エタノール、および蒸留水の中で連続してインキュベートすることによって組織を脱パラフィンおよび再水和する。スライドを賦活化溶液中に入れ、抗原賦活化のためにデクロアカー(decloaker)中に入れる。内因性ペルオキシダーゼ活性をブロックするために、スライドを過酸化水素中でインキュベートし、PBSで洗浄する。非特異的バックグラウンド染色をブロックするために、スライドをブロッカー(blocker)中でインキュベートする。スライドを抗PD-L1抗体とインキュベートする。特異的結合を、ジアミノベンジジン(DAB)を含むキットを用いて検出する。切片をヘマトキシリンを用いて対比染色する。一部の態様において、FFPE切片を、コーティングされたガラススライド上にマウントし、自動システムを用いて、例えば、Ventana試薬を用いるVentana BenchMark ULTRA機器によって染色する。
【０１２３】
一部の態様において、前記抗体はポリクローナル抗体である。一部の態様において、前記抗体はモノクローナル抗体である。一部の態様において、前記抗体は、ヒトバイオマーカー(例えば、CD45、CD4、CD8、FOXP3、TIGIT)に結合するマウス抗体である。一部の態様において、前記抗体は、ヒトバイオマーカー(例えば、CD45、CD4、CD8、FOXP3、TIGIT)に結合するウサギ抗体である。一部の態様において、前記抗体は、ヒトバイオマーカー(例えば、CD45、CD4、CD8、FOXP3、TIGIT)に結合するヤギ抗体である。
【０１２４】
IHCスライドは自動機器を用いて分析されてもよく、手作業で顕微鏡によって評価されてもよい。各細胞の染色強度(0:発現なし、1:弱い発現、2:中間の発現、3:強い発現)が測定され、各染色レベルの細胞が計数され、各タイプのパーセントが計算される。各組織切片についてデータを、重みつきHスコアにまとめる:Hスコア＝[3×(3+細胞％)]＋[2×(2+細胞％)]＋[1×(1+細胞％)]。これらのパラメータを用いて、使用可能な最も高いスコアがHスコア＝300である。一部の態様において、1またはそれ未満のHスコアは陰性だとみなされる。一部の態様において、IHCアッセイにはカットオフ値がある。一部の態様において、IHCアッセイには、特異性のカットオフ値がある。一部の態様において、IHCアッセイには、有効性についてのカットオフ値がある。一部の態様において、IHCアッセイには、陽性および陰性の腫瘍組織をスクリーニングすることによって決定されたカットオフ値がある。一部の態様において、IHCアッセイには約25のカットオフ値がある。一部の態様において、IHCアッセイのカットオフ値は約30、約40、約50、約60、約70、約80、約90、約100、または約110、または約120である。
【０１２５】
バイオマーカーの発現レベルを分析するための他の適切な方法には、プロテオミクスに基づく方法が含まれる。プロテオミクスには、特に、試料におけるグローバル(global)なタンパク質発現変化の研究が含まれる。一部の態様において、プロテオーム法は、以下の工程を含む:(1)2D電気泳動(2-D PAGE)による試料中の個々のタンパク質の分離、(2)(例えば、質量分析法またはN末端シークエンシングによる)ゲルから回収された個々のタンパク質の特定、および(3)バイオインフォマティクスを用いたデータの分析。一部の態様において、プロテオーム法は組織マイクロアレイ(TMA)の使用を含む。組織アレイは、当業者に公知の様々な技法に従って構築することができる。ある特定の態様では、マニュアルティッシュアレイヤー(manual tissue arrayer)を用いて、組織試料から調製したパラフィンブロックから「コア」を取り出す。次いで、コアを、別のパラフィンブロックのグリッド上の指定された場所に挿入する。約400個もの試料に由来するコアを1個のレシピエントブロックに挿入することができる。結果として生じた組織アレイを分析のために薄片に加工してもよい。一部の態様において、プロテオーム法は抗体マイクロアレイを含む。一部の態様において、プロテオーム法は、SELDI、MALDI、エレクトロスプレー、および表面プラズモン共鳴法を含むが、これに限定されない質量分析法の使用を含む。一部の態様において、プロテオーム法は、アレイ形式でのビーズ上の抗体を含むが、これに限定されない、ビーズに基づく技術を含む。一部の態様において、プロテオーム法は逆相タンパク質マイクロアレイ(RPPM)を含む。一部の態様において、プロテオーム法は、グローバルプロテオームサーベイ(Global Proteome Survey:GPS)法を含むが、これに限定されないマルチプレックスドプロテインプロファイリング(multiplexed protein profiling)を含む。
【０１２６】
バイオマーカーの発現レベルを分析するための他の適切な方法には、ポリヌクレオチド発現の分析、ポリヌクレオチドのシークエンシング、および/またはタンパク質発現の分析に基づく方法が含まれるが、これに限定されない。例えば、バイオマーカー発現レベルの決定は、関心対象の遺伝子から発現したmRNAの発現を検出することによって、および/またはその遺伝子がコードするポリペプチドの発現を検出することによって実施されてもよい。
【０１２７】
ポリヌクレオチドを分析するために一般的に用いられる方法には、サザンブロット分析、ノザンブロット分析、およびインサイチューハイブリダイゼーション、RNアーゼ保護アッセイ、およびポリメラーゼ連鎖反応(PCR)に基づく方法、例えば、逆転写ポリメラーゼ連鎖反応(RT-PCR)、リアルタイムPCRとして知られる定量PCR(qPCR)、TaqMan(商標)、TaqMan(商標)低密度アレイ(TLDA)、アンカードPCR、競合的PCR、rapid amplification of cDNA ends(RACE)、およびマイクロアレイ分析が含まれる。RT-PCRは、異なる試料のmRNAレベルを比較して遺伝子発現プロファイルを調べるのに使用することができる定量方法である。RT-PCRのバリエーションが、二重標識蛍光プローブ(例えば、TaqMan(商標)プローブ)によりPCR産物蓄積を測定するリアルタイム定量PCRである。ディファレンシャルディスプレイ、増幅断片長多型、BeadArray(商標)技術、網羅的遺伝子発現解析法(high coverage expression profiling:HiCEP)、およびデジタルPCRを含むが、これに限定されない、当業者に公知の他の多くのPCRに基づく技法がある。シークエンシングに基づく遺伝子発現分析のための代表的な方法には、Serial Analysis of Gene Expression(SAGE)、大規模並列シグネチャー配列決定(Massively Parallel Signature Sequencing:MPSS)、およびmRNAシークエンシングを含むNexGenシークエンシング分析が含まれる。
【０１２８】
ある特定の態様において、バイオマーカー発現はqPCRアッセイを用いて測定される。例えば、新鮮凍結(FF)組織試料から全RNAを抽出するか、またはマイクロダイセクションを用いて得られた(macro-dissected)ホルマリン固定パラフィン包埋(FFPE)組織試料から全RNAを抽出する。全RNAの量および質を、標準的な分光光度法および/または他の任意の適切な方法(例えば、Agilent Bioanalyzer)によって評価する。RNA抽出後、RNA試料を、標準的な方法および/または市販のcDNA合成キット(例えば、Roche Transcriptor First Strand cDNA合成キット)を用いて逆転写する。結果として得られたcDNAを、例えば、ABI前増幅キット(pre-amplification kit)を用いて前増幅する。バイオマーカー(例えば、CD45、CD4、CD8、Foxp3、TIGIT、他の免疫応答遺伝子)の発現を、例えば、Roche Lightcycler 480システム(Roche Diagnostics)によってABI TaqMan Gene Expression Mastermixを用いて評価する。qPCR反応を三回繰り返して行う。各アッセイについて、試料の一部を逆転写することなく流し(RT-負の対照)、対照試料をテンプレートが無い状態で流す。正の対照として働くように、ユニバーサルヒト参照RNA試料を各プレート上に含める。標準的な参照遺伝子パネルから適切な参照遺伝子を同定する。同時制御のリスクを無くすために、異なる細胞機能を有する候補参照遺伝子を選択する。特定のソフトウェアおよびアルゴリズム(例えば、Genexソフトウェア;GeNormおよびNormfinderアルゴリズム)を用いて、最も適した参照遺伝子を評価および選択する。各バイオマーカーの発現レベルを、選択された最適な参照遺伝子を用いて規準化する。一部の態様において、これらの、各バイオマーカーの規準化された(または標準化された)発現値を用いて試料の決定値を計算する。一部の態様において、これらの、各バイオマーカーの規準化された(または標準化された)発現値を用いて発現レベルを計算する。
【０１２９】
一部の態様において、バイオマーカー発現は、ヒトバイオマーカー(例えば、CD45、CD4、CD8、Foxp3、TIGIT)に特異的なプライマーおよび/またはプローブを含む、PCRに基づくアッセイを用いて測定される。本明細書で使用する「プローブ」という用語は、具体的に意図された標的生体分子に選択的に結合することができる任意の分子を指す。プローブは、公知の技法を用いて当業者により合成されてもよく、生物学的調製物に由来してもよい。プローブには、RNA、DNA、タンパク質、ペプチド、アプタマー、抗体、および有機分子が含まれ得るが、これに限定されない。「プライマー」または「プローブ」という用語は、特定のSEQ ID NOの配列を有するオリゴヌクレオチド、または特定のSEQ ID NOに相補的な配列を有するオリゴヌクレオチドを含む。一部の態様において、プローブは改変されている。一部の態様において、プローブはクエンチャーによって改変されている。一部の態様において、プローブは標識されている。標識には、比色標識、蛍光標識、化学発光標識、または生物発光標識が含まれ得るが、これに限定されない。
【０１３０】
または、バイオマーカー発現レベルは、mRNAから生成された相補的DNA(cDNA)または相補的RNA(cRNA)を増幅し、マイクロアレイを用いて分析することによって決定される場合がある。マイクロアレイ技術を用いると、数千の遺伝子の発現を同時に分析することが可能になる。多数の異なるアレイ配置およびアレイ配置を生成する方法が当業者に公知である。さらに、マイクロアレイは市販されているか(例えば、Affymetrix GeneChips)、または注文製作することができる。現在、広く用いられているマイクロアレイにはcDNAアレイおよびオリゴヌクレオチドアレイが含まれる。一般的に、関心対象のポリヌクレオチド(例えば、プローブまたはプローブセット)がマイクロチップ基板上にプレーティングされるか、または整列される。一部の態様において、少なくとも10、25、50、100、500、1000、5000、10,000、20,000、もしくは25,000個またはそれ以上の遺伝子に対するプローブがアレイ基板上に固定化される。この基板は、多孔性または非多孔性の支持体、例えば、ガラス、プラスチック、またはゲル表面でもよい。プローブには、DNA、RNA、DNAとRNAのコポリマー配列、DNA類似体および/もしくはRNA類似体、またはその組み合わせが含まれ得る。一部の態様において、マイクロアレイは、1つ1つの各遺伝子に対する順序よく並べられた結合部位アレイを有する支持体を含む。マイクロアレイは、アドレス指定が可能なアレイでもよく、位置的にアドレス指定が可能なアレイでもよく、例えば、各プローブの身元がアレイの位置から明らかになるように、アレイの各プローブは、固体支持体上の既知の、予め決定された位置に配置されている。
【０１３１】
マイクロアレイ上の各プローブは長さが10〜50,000ヌクレオチドでもよい。一部の態様において、マイクロアレイのプローブは、長さが約1,000ヌクレオチド未満、約750ヌクレオチド未満、約500ヌクレオチド未満、約250ヌクレオチド未満、約100ヌクレオチド未満、または約50ヌクレオチド未満の長さを有するヌクレオチド配列からなってもよい。一般的に、アレイには正の対照プローブおよび負の対照プローブが含まれる。
【０１３２】
ある特定の態様において、バイオマーカー発現はマイクロアレイを用いて測定される。例えば、新鮮凍結(FF)組織試料から全RNAを抽出するか、またはマイクロダイセクションを用いて得られたホルマリン固定パラフィン包埋(FFPE)組織試料から全RNAを抽出する。全RNAの量および質を、標準的な分光光度法および/または他の任意の適切な技術(例えば、Agilent Bioanalyzer)によって評価する。RNA抽出後、RNA試料を、標準的な方法および/または市販の増幅システム(例えば、NuGEN Ovation RNA Amplification System V2)を用いて増幅する。増幅されたcDNAを、標準的な手順に従って断片化し、標識し、(例えば、NuGEN Encore Biotin ModuleおよびAffymetrix GeneChipアレイを用いて)マイクロアレイにハイブリダイズする。アレイをマイクロアレイの説明書に従って洗浄し、染色し、スキャンする。マイクロアレイデータを前処理し、プローブ-レベル強度測定値を、Robust Multichipアルゴリズム(RMA)を用いてバックグラウンド補正し、規準化し、発現測定値としてまとめる。プローブレベルデータをまとめて、各バイオマーカー(例えば、CD45、CD4、CD8、Foxp3、TIGIT)の発現レベルを得る。プロファイル品質を確立し、潜在的な範囲外試料を突き止めるために、品質パラメータ閾値とデータ整理法(例えば、主成分分析)の組み合わせをデータセットに適用する。これらの、各バイオマーカーの規準化された(または標準化された)発現値を用いて試料の決定値を計算する。
【０１３３】
本明細書に記載の方法のいずれかの一部の態様において、腫瘍/がんは、肺、肝臓、乳房、腎細胞がん/腎臓、前立腺、胃腸/胃、黒色腫、頸部、膀胱、グリア芽細胞腫、頭頸部、膵臓、卵巣、結腸直腸、子宮内膜、および食道の腫瘍/がんからなる群より選択される。一部の態様において、結腸直腸がんは高頻度マイクロサテライト不安定性結腸直腸がんである。一部の態様において、結腸直腸がんはマイクロサテライト安定性結腸直腸がんである。一部の態様において、食道腫瘍は、組織学的に確認された切除不能な、進行型の、または再発性の食道がんまたは胃食道接合部がんである。一部の態様において、食道腫瘍は、切除不能な、または転移性の疾患に対する少なくとも1つの先の全身療法または治療方針の際に進行していた腫瘍である。一部の態様において、結腸直腸腫瘍は、組織学的に確認された不治の、進行型の、結腸または直腸の腺がんである。一部の態様において、結腸直腸腫瘍は、結腸直腸がんまたは転移性結腸直腸がんに対する少なくとも1つの先の標準化学療法方針を用いて処置されたことがあり、これらの療法に対して不応性であるか、またはこれらの療法の際に進行している腫瘍である。一部の態様において、結腸直腸腫瘍は、結腸直腸がんまたは転移性結腸直腸がんに対する少なくとも2つの先の標準化学療法方針を用いて処置されたことがあり、これらの療法に対して不応性であるか、またはこれらの療法の時に進行している腫瘍である。一部の態様において、肝臓腫瘍または肝細胞腫瘍は、外科的療法および/または局所領域的療法に適していない、組織学的に確認された進行性肝細胞がんである。一部の態様において、肝臓腫瘍または肝細胞腫瘍は外科的療法および/または局所領域的療法の後に進行しているか、または進行していた。一部の態様において、頸部腫瘍は、組織学的に確認された再発性または転移性の子宮頸がんである。一部の態様において、頸部腫瘍は、子宮頸がんに対する少なくとも1つの先の化学療法方針の際に進行していた腫瘍である。一部の態様において、乳房腫瘍はトリプルネガティブ乳がんである。一部の態様において、乳房腫瘍は、不治の、進行型のエストロゲン受容体陰性、プロゲステロン受容体陰性、およびヒト上皮増殖因子受容体2陰性乳腺がんとして組織学的に確認されている。一部の態様において、頭頸部腫瘍は、標準的な根治療法または対症療法を適用できない、組織学的に確認された再発性の、または転移性の頭頸部扁平上皮がん(SCCHN)である。一部の態様において、頭頸部腫瘍には、口腔、鼻腔、副鼻腔、上咽頭、中咽頭、下咽頭、または喉頭の扁平上皮がんが含まれるが、これに限定されない。一部の態様において、頭頸部腫瘍には、根治療法または確立した対症療法が適用できない原発性または再発性のがんが含まれる。
【０１３４】
本明細書に記載の方法の一部の態様において、本発明は、腫瘍または腫瘍細胞の成長を阻害するための医薬の製造または調製におけるTIGIT結合物質の使用を提供する。本明細書に記載の方法の一部の態様において、本発明は、がんを処置するための医薬の製造または調製におけるTIGIT結合物質の使用を提供する。一部の態様において、TIGIT結合物質はヒトTIGITに結合し、がんの成長を阻害または低減する。ある特定の態様において、腫瘍/がんはがん幹細胞を含む。ある特定の態様において、腫瘍/がんにおけるがん幹細胞の頻度が低減する。ある特定の態様において、対象はヒトである。ある特定の態様において、対象は腫瘍が少なくとも部分的に除去されている。
【０１３５】
2種類またはそれ以上の治療用物質を用いた併用療法では、異なる作用機構によって働く作用物質を使用することが多いが、このことは必要とされない。異なる作用機構を有する作用物質を用いた併用療法を用いると相加効果または相乗効果が得られることがある。併用療法を用いると、各作用物質の用量が、単独療法において用いられる用量より少なくなり、それによって、前記作用物質の毒性副作用が低減する可能性、および/または前記作用物質の治療指数が増加する可能性がある。併用療法は、耐性がん細胞が発生する可能性を小さくする可能性がある。一部の態様において、併用療法は、免疫応答に影響を及ぼす(例えば、応答を増強または活性化する)治療用物質と、腫瘍/がん細胞に影響を及ぼす(腫瘍/がん細胞を阻害または死滅する)治療用物質を含む。
【０１３６】
本明細書に記載の方法の一部の態様において、TIGIT結合物質と少なくとも1種類のさらなる治療用物質を組み合わせると相加的または相乗的な結果が得られる。一部の態様において、併用療法は、TIGIT結合物質の治療指数を増加させる。一部の態様において、併用療法は、さらなる治療用物質の治療指数を増加させる。一部の態様において、併用療法は、TIGIT結合物質の毒性および/または副作用を減少させる。一部の態様において、併用療法は、さらなる治療用物質の毒性および/または副作用を減少させる。
【０１３７】
本明細書に記載の方法のある特定の態様において、方法または処置は、TIGIT結合物質を投与する工程に加えて、少なくとも1種類のさらなる治療用物質を投与する工程をさらに含む。さらなる治療用物質は、前記物質が投与される前に、前記物質が投与されると同時に、および/または前記物質が投与された後に投与することができる。一部の態様において、少なくとも1種類のさらなる治療用物質は1種類、2種類、3種類、またはそれより多くのさらなる治療用物質を含む。
【０１３８】
TIGIT結合物質と組み合わせて投与され得る治療用物質には化学療法剤が含まれる。従って、一部の態様では、前記の方法または処置は、TIGIT結合物質と化学療法剤を組み合わせて、または化学療法剤のカクテルと組み合わせて投与することを伴う。TIGIT結合物質による処置は、化学療法が投与される前に、化学療法が投与されると同時に、または化学療法が投与された後に行うことができる。併用投与は、単一の薬学的製剤中での同時投与、または別個の製剤を用いた同時投与を含んでもよく、どちらの順番でもよいが、活性作用物質の全てがその生物活性を同時に発揮できるように一般的にある期間内で行われる連続投与を含んでもよい。このような化学療法剤の調製および投与計画は、製造業者の説明書に従って、または当業者により経験的に決定されたとおりに、使用することができる。このような化学療法の調製および投与計画はまた、The Chemotherapy Source Book, 4th Edition, 2008, M. C. Perry, Editor, Lippincott, Williams & Wilkins, Philadelphia, PAにも記載されている。
【０１３９】
治療用物質の有用なクラスには、例えば、抗チューブリン剤、アウリスタチン、DNA副溝結合物質、DNA複製阻害物質、アルキル化剤(例えば、白金錯体、例えば、シスプラチン、モノ(白金)、ビス(白金)、および三核白金錯体、ならびにカルボプラチン)、アントラサイクリン、抗生物質、葉酸代謝拮抗剤、代謝拮抗物質、化学療法増感剤、デュオカルマイシン、エトポシド、フッ化ピリミジン、イオノフォア、レキシトロプシン(lexitropsin)、ニトロソ尿素、プラチノール、プリン代謝拮抗物質、ピューロマイシン、放射線増感剤、ステロイド、タキサン、トポイソメラーゼ阻害ｖ、ビンカアルカロイドなどが含まれる。ある特定の態様において、第2の治療用物質は、アルキル化剤、代謝拮抗物質、抗有糸分裂剤、トポイソメラーゼ阻害物質、または血管形成阻害物質である。
【０１４０】
本発明において有用な化学療法剤には、アルキル化剤、例えば、チオテパおよびシクロスホスファミド(cyclosphosphamide)(サイトキサン(CYTOXAN));アルキルスルホナート、例えば、ブスルファン、インプロスルファン、およびピポスルファン;アジリジン、例えば、ベンゾドーパ(benzodopa)、カルボコン、メツレドーパ(meturedopa)、およびウレドーパ(uredopa);アルトレタミン、トリエチレンメラミン、トリエチレンホスホラミド、トリエチレンチオホスホラミド、およびトリメチローロメラミン(trimethylolomelamime)を含む、エチレンイミンおよびメチルアメラミン(methylamelamine);ナイトロジェンマスタード、例えば、クロランブシル、クロルナファジン、シクロホスファミド(cyclophosphamide)、エストラムスチン、イホスファミド、メクロレタミン、塩酸メクロレタミンオキシド、メルファラン、ノベムビシン(novembichin)、フェネステリン(phenesterine)、プレドニムスチン、トロホスファミド、ウラシルマスタード;ニトロソ尿素、例えば、カルムスチン、クロロゾトシン、ホテムスチン、ロムスチン、ニムスチン、ラニムスチン;抗生物質、例えば、アクラシノマイシン、アクチノマイシン、アウスラマイシン(authramycin)、アザセリン、ブレオマイシン、カクチノマイシン、カリチアマイシン、カラビシン(carabicin)、カミノマイシン、カルジノフィリン、クロモマイシン、ダクチノマイシン、ダウノルビシン、デトルビシン、6-ジアゾ-5-オキソ-L-ノルロイシン、ドキソルビシン、エピルビシン、エソルビシン、イダルビシン、マルセロマイシン(marcellomycin)、マイトマイシン、ミコフェノール酸、ノガラマイシン、オリボマイシン、ペプロマイシン、ポトフィロマイシン(potfiromycin)、ピューロマイシン、クエラマイシン(quelamycin)、ロドルビシン(rodorubicin)、ストレプトニグリン、ストレプトゾシン、ツベルシジン、ユベニメックス、ジノスタチン、ゾルビシン;代謝拮抗物質、例えば、メトトレキセートおよび5-フルオロウラシル(5-FU);葉酸類似体、例えば、デノプテリン、メトトレキセート、プテロプテリン、トリメトレキセート;プリン類似体、例えば、フルダラビン、6-メルカプトプリン、チアミプリン(thiamiprine)、チオグアニン;ピリミジン類似体、例えば、アンシタビン、アザシチジン、6-アザウリジン、カルモフール、シトシンアラビノシド、ジデオキシウリジン、ドキシフルリジン、エノシタビン、フロクスウリジン、5-FU;アンドロゲン、例えば、カルステロン、プロピオン酸ドロモスタノロン、エピチオスタノール、メピチオスタン、テストラクトン;抗副腎剤、例えば、アミノグルテチミド、ミトタン、トリロスタン;葉酸補充剤、例えば、フロリン酸(frolinic acid);アセグラトン;アルドホスファミドグリコシド;アミノレブリン酸;アムサクリン;ベストラブシル;ビサントレン;エダトレキサート(edatraxate);デフォファミン(defofamine);デメコルチン;ジアジクオン;エルフォルミチン(elformithine);酢酸エリプチニウム;エトグルシド;硝酸ガリウム;ヒドロキシ尿素;レンチナン;ロニダミン;ミトグアゾン;ミトキサントロン;モピダモール;ニトラクリン;ペントスタチン;フェナメット;ピラルビシン;ポドフィリニック酸;2-エチルヒドラジド;プロカルバジン;PSK;ラゾキサン;シゾフラン(sizofuran);スピロゲルマニウム;テヌアゾン酸;トリアジクオン;2,2',2''-トリクロロトリエチルアミン;ウレタン;��ンデシン;ダカルバジン;マンノムスチン;ミトブロニトール;ミトラクトール;ピポブロマン;ガシトシン(gacytosine);アラビノシド(Ara-C);タキソイド、例えば、パクリタキセル(タキソール(TAXOL))およびドセタキセル(タキソテール(TAXOTERE));クロランブシル;ゲムシタビン;6-チオグアニン;メルカプトプリン;白金類似体、例えば、シスプラチンおよびカルボプラチン;ビンブラスチン;白金;エトポシド(VP-16);イホスファミド;マイトマイシンC;ミトキサントロン;ビンクリスチン;ビノレルビン;ナベルビン;ノバントロン;テニポシド;ダウノマイシン;アミノプテリン;イバンドロン酸;CPT11;トポイソメラーゼ阻害物質RFS2000;ジフルオロメチルオルニチン(DMFO);レチノイン酸;エスペラミシン;カペシタビン(ゼローダ(XELODA));および前記のいずれかの薬学的に許容される塩、酸、または誘導体が含まれるが、これに限定されない。化学療法剤には、腫瘍に対するホルモン作用を調節または阻害するように働く抗ホルモン剤、例えば、タモキシフェン、ラロキシフェン、アロマターゼ阻害4(5)-イミダゾール、4-ヒドロキシタモキシフェン、トリオキシフェン(trioxifene)、ケオキシフェン、LY117018、オナプリストン、およびトレミフェン(ファレストン(FARESTON))を含む抗エストロゲン、ならびにフルタミド、ニルタミド、ビカルタミド、ロイプロリド、およびゴセレリンなどの抗アンドロゲン、ならびに前記のいずれかの薬学的に許容される塩、酸、または誘導体も含まれる。ある特定の態様において、さらなる治療用物質はシスプラチンである。ある特定の態様において、さらなる治療用物質はカルボプラチンである。
【０１４１】
ある特定の態様において、化学療法剤はトポイソメラーゼ阻害物質である。トポイソメラーゼ阻害物質は、トポイソメラーゼ酵素(トポイソメラーゼIまたはII)の働きを妨害する化学療法剤である。トポイソメラーゼ阻害物質には、ドキソルビシンHCl、クエン酸ダウノルビシン、ミトキサントロンHCl、アクチノマイシンD、エトポシド、トポテカンHCl、テニポシド(VM-26)、およびイリノテカン、ならびにこれらのいずれかの薬学的に許容される塩、酸、または誘導体が含まれるが、これに限定されない。一部の態様において、さらなる治療用物質はイリノテカンである。
【０１４２】
ある特定の態様において、化学療法剤は代謝拮抗物質である。代謝拮抗物質は、正常な生化学反応に必要な代謝産物に似ているが、細胞の1つまたは複数の正常機能、例えば、細胞分裂を妨害するほど十分に異なる構造を有する化学物質である。代謝拮抗物質には、ゲムシタビン、フルオロウラシル、カペシタビン、メトトレキセートナトリウム、ラリトレキセド(ralitrexed)、ペメトレキセド、テガフール、シトシンアラビノシド、チオグアニン、5-アザシチジン、6-メルカプトプリン、アザチオプリン、6-チオグアニン、ペントスタチン、リン酸フルダラビン、およびクラドリビン、ならびにこれらのいずれかの薬学的に許容される塩、酸、または誘導体が含まれるが、これに限定されない。ある特定の態様では、さらなる治療用物質はゲムシタビンである。
【０１４３】
ある特定の態様において、化学療法剤は、チューブリンに結合する作用物質を含むが、これに限定されない有糸分裂阻害剤である。一部の態様において、前記作用物質はタキサンである。ある特定の態様では、前記作用物質は、パクリタキセルもしくはドセタキセル、またはパクリタキセルもしくはドセタキセルの薬学的に許容される塩、酸、もしくは誘導体である。ある特定の態様では、前記作用物質は、パクリタキセル(タキソール)、ドセタキセル(タキソテール)、アルブミン結合パクリタキセル(ABRAXANE(登録商標))、DHA-パクリタキセル、またはPG-パクリタキセルである。ある特定の他の態様では、有糸分裂阻害剤は、ビンカアルカロイド、例えば、ビンクリスチン、ビンブラスチン、ビノレルビン、もしくはビンデシン、またはその薬学的に許容される塩、酸、もしくは誘導体を含む。一部の態様では、有糸分裂阻害剤は、キネシンEg5の阻害物質または有糸分裂キナーゼ、例えば、AuroraAもしくはPlk1の阻害物質である。ある特定の態様では、さらなる治療用物質はパクリタキセルである。ある特定の態様では、さらなる治療用物質はアルブミン結合パクリタキセル(ABRAXANE(登録商標))である。
【０１４４】
一部の態様において、さらなる治療用物質は低分子などの作用物質を含む。例えば、処置は、本発明の作用物質と、EGFR、HER2(ErbB2)、および/またはVEGFを含むが、これに限定されない腫瘍関連抗原に対する阻害物質として働く低分子との併用投与を伴ってもよい。一部の態様において、本発明の作用物質は、ゲフィチニブ(イレッサ(IRESSA))、エルロチニブ(タルセバ(TARCEVA))、スニチニブ(ステント(SUTENT))、ラパタニブ(lapatanib)、バンデタニブ(ザクティマ(ZACTIMA))、AEE788、CI-1033、セジラニブ(レセンチン(RECENTIN))、ソラフェニブ(ネクサバール(NEXAVAR))、およびパゾパニブ(GW786034B)からなる群より選択されるプロテインキナーゼ阻害物質と併用投与される。一部の態様において、さらなる治療用物質はmTOR阻害物質を含む。
【０１４５】
ある特定の態様において、さらなる治療用物質は、がん幹細胞経路を阻害する作用物質である。一部の態様において、さらなる治療用物質はNotch経路の阻害物質である。一部の態様において、さらなる治療用物質はWnt経路の阻害物質である。一部の態様において、さらなる治療用物質はBMP経路の阻害物質である。一部の態様において、さらなる治療用物質はHippo経路の阻害物質である。一部の態様において、さらなる治療用物質はRSPO/LGR経路の阻害物質である。一部の態様において、さらなる治療用物質はmTOR/AKR経路の阻害物質である。
【０１４６】
本明細書に記載の方法の一部の態様において、さらなる治療用物質は抗体などの生物学的分子を含む。例えば、処置は、TIGIT結合物質と、EGFR、HER2/ErbB2、および/またはVEGFに結合する抗体を含むが、これに限定されない、腫瘍関連抗原に対する抗体との併用投与を伴ってもよい。ある特定の態様において、さらなる治療用物質は、がん幹細胞マーカーに特異的な抗体である。一部の態様において、さらなる治療用物質は、Notch経路の成分に結合する抗体である。一部の態様において、さらなる治療用物質は、Wnt経路の成分に結合する抗体である。ある特定の態様において、さらなる治療用物質は、がん幹細胞経路を阻害する抗体である。一部の態様において、さらなる治療用物質はNotch経路の阻害物質である。一部の態様において、さらなる治療用物質はWnt経路の阻害物質である。一部の態様において、さらなる治療用物質はBMP経路の阻害物質である。一部の態様において、さらなる治療用物質は、β-カテニンシグナル伝達を阻害する抗体である。ある特定の態様において、さらなる治療用物質は、血管形成阻害物質である抗体(例えば、抗VEGF抗体または抗VEGF受容体抗体)である。ある特定の態様において、さらなる治療用物質は、ベバシズマブ(アバスチン(AVASTIN))、ラムシルマブ(ramucirumab)、トラスツズマブ(ハーセプチン(HERCEPTIN))、ペルツズマブ(オムニターグ(OMNITARG))、パニツムマブ(ベクチビックス(VECTIBIX))、ニモツズマブ(nimotuzumab)、ザルツムマブ、またはセツキシマブ(エルビタックス(ERBITUX))である。
【０１４７】
本明細書に記載の方法のある特定の態様において、前記の方法または処置は、TIGIT結合物質を投与する工程に加えて、少なくとも1種類のさらなる免疫療法剤を投与する工程をさらに含む。一部の態様において、さらなる免疫療法剤は免疫応答刺激作用物質である。一部の態様において、免疫療法剤(例えば、免疫応答刺激作用物質)には、コロニー刺激因子(例えば、顆粒球-マクロファージコロニー刺激因子(GM-CSF)、マクロファージコロニー刺激因子(M-CSF)、顆粒球コロニー刺激因子(G-CSF)、幹細胞因子(SCF))、インターロイキン(例えば、IL-1、IL2、IL-3、IL-7、IL-12、IL-15、IL-18)、免疫抑制機能をブロックする抗体(例えば、抗CTLA4抗体、抗CD28抗体、抗CD3抗体、抗PD-1抗体、抗PD-L1抗体)、免疫細胞機能を強化する抗体(例えば、抗GITR抗体もしくは抗OX-40抗体)、toll様受容体(例えば、TLR4、TLR7、TLR9)、可溶性リガンド(例えば、GITRLもしくはOX-40L)、またはB7ファミリーのメンバー(例えば、CD80、CD86)が含まれるが、これに限定されない。さらなる免疫療法剤(例えば、免疫応答刺激作用物質)は、TIGIT結合物質が投与される前に、TIGIT結合物質が投与されると同時に、および/またはTIGIT結合物質が投与された後に投与することができる。TIGIT結合物質と、さらなる免疫療法剤(例えば、免疫応答刺激作用物質)を含む薬学的組成物も提供される。一部の態様において、免疫療法剤は1種類、2種類、3種類、またはそれより多くの免疫療法剤を含む。一部の態様において、免疫応答刺激作用物質は1種類、2種類、3種類、またはそれより多くの免疫応答刺激作用物質を含む。
【０１４８】
本明細書に記載の方法の一部の態様において、さらなる治療用物質は、免疫チェックポイント阻害物質である抗体である。一部の態様において、免疫チェックポイント阻害物質は、抗PD-1抗体、抗PD-L1抗体、抗CTLA4抗体、抗CD28抗体、抗LAG3抗体、抗TIM3抗体、抗GITR抗体、または抗OX-40抗体である。一部の態様において、免疫チェックポイント阻害物質は抗4-1BB抗体である。一部の態様において、さらなる治療用物質は、ニボルマブ(オプジーボ)、ペンブロリズマブ(キイトルーダ)、またはピジルズマブ(pidilzumab)からなる群より選択される抗PD-1抗体である。一部の態様において、さらなる治療用物質は、MEDI0680、REGN2810、BGB-A317、およびPDR001からなる群より選択される抗PD-1抗体である。一部の態様において、さらなる治療用物質は、BMS935559(MDX-1105)、アテゾリズマブ(テセントリク)、デュルバルマブ(MEDI4736)、またはアベルマブ(MSB0010718C)からなる群より選択される抗PD-L1抗体である。一部の態様において、さらなる治療用物質は、イピリムマブ(ヤーボイ)またはトレメリムマブからなる群より選択される抗CTLA-4抗体である。一部の態様において、さらなる治療用物質は、BMS-986016およびLAG525からなる群より選択される抗LAG-3抗体である。一部の態様において、さらなる治療用物質は、MEDI6469、MEDI0562、およびMOXR0916からなる群より選択される抗OX-40抗体である。一部の態様において、さらなる治療用物質は、PF-05082566からなる群より選択される抗4-1BB抗体である。
【０１４９】
さらに、TIGIT結合物質を用いる処置は、他の生物分子、例えば、1種類または複数種類のサイトカイン(例えば、リンホカイン、インターロイキン、インターフェロン、腫瘍壊死因子、および/または増殖因子)との併用処置を含んでもよく、腫瘍の外科的除去、がん細胞の除去、または処置を行っている医師により必要だと考えられた他の任意の療法を伴ってもよい。
【０１５０】
一部の態様において、TIGIT結合物質は、アドレノメデュリン(AM)、アンジオポエチン(Ang)、BMP、BDNF、EGF、エリスロポエチン(EPO)、FGF、GDNF、G-CSF、GM-CSF、GDF9、HGF、HDGF、IGF、遊走刺激因子、ミオスタチン(GDF-8)、NGF、ニューロトロフィン、PDGF、トロンボポエチン、TGF-α、TGF-β、TNF-α、VEGF、PlGF、γ-IFN、IL-1、IL-2、IL-3、IL-4、IL-5、IL-6、IL-7、IL-12、IL-15、およびIL-18からなる群より選択される生物分子と組み合わせて投与することができる。一部の態様において、TIGIT結合物質は、マクロファージコロニー刺激因子(M-CSF)および幹細胞因子(SCF)からなる群より選択される生物分子と組み合わせて投与することができる。
【０１５１】
本明細書に記載の方法の一部の態様において、TIGIT結合物質を用いる処置は、腫瘍の外科的除去、がん細胞の除去、または処置を行っている医師により必要だと考えられた他の任意の外科的療法を伴ってもよい。
【０１５２】
本明細書に記載の方法のある特定の態様において、処置は、TIGIT結合物質と放射線療法との併用投与を伴う。TIGIT結合物質を用いる処置は、放射線療法の投与の前に、放射線療法の投与と同時に、または放射線療法の投与の後に行ってもよい。このような放射線療法の投与計画は当業者により決定することができる。
【０１５３】
併用投与は、単一の薬学的製剤中での同時投与、または別個の製剤を用いた同時投与を含んでもよく、どちらの順番でもよいが、一般的に、活性作用物質の全てがその生物活性を同時に発揮できるような期間内で行われる連続投与を含んでもよい。
【０１５４】
TIGIT結合物質と少なくとも1種類のさらなる治療用物質の組み合わせは任意の順序で投与されてもよく、同時に投与されてもよいことが理解される。一部の態様において、TIGIT結合物質は、第2の/異なる治療用物質を用いて以前に治療されたことがある患者に投与される。ある特定の他の態様において、TIGIT結合物質と第2のさらなる治療用物質は実質的に同時に、または同時に投与される。例えば、対象は、さらなる治療用物質(例えば、化学療法)による治療コースを受けながらTIGIT結合物質が与えられてもよい。ある特定の態様では、TIGIT結合物質は、第2の治療用物質で処置して1年以内に投与される。ある特定の他の態様では、TIGIT結合物質は、第2の治療用物質で処置して10ヶ月以内、8ヶ月以内、6ヶ月以内、4ヶ月以内、または2ヶ月以内に投与される。ある特定の他の態様では、TIGIT結合物質は、第2の抗がん剤を用いた任意の処置の4週間以内、3週間以内、2週間以内、または1週間以内に投与される。一部の態様では、作用物質は、第2の抗がん剤を用いた任意の処置の5日以内、4日以内、3日以内、2日以内、または1日以内に投与される。さらに、2種類の(またはそれより多い)作用物質または処置が数時間または数分のうちに(すなわち、実質的に同時に)対象に投与されてもよいことが理解される。
【０１５５】
疾患を処置する場合、TIGIT結合物質の適切な投与量は、処置しようとする疾患のタイプ、疾患の重篤度および経過、疾患の応答性、前記物質が治療目的または予防目的で投与されるかどうか、以前の療法、患者の病歴などによって決まる。これらは全て、治療を行っている医師の自由裁量に委ねられている。TIGIT結合物質は一度に投与されてもよく、数日〜数ヶ月間続く一連の処置にわたって投与されてもよく、治癒するまで、または疾患状態が低下(例えば、腫瘍サイズが縮小)するまで投与されてもよい。一部の態様において、TIGIT結合物質は、疾患が進行するまで一連の処置にわたって投与される。一部の態様において、最適な投与計画は患者の体内の薬物蓄積測定値から計算され、個々の作用物質の相対的な有効性に応じて変化する。投与を行っている医師は、最適な投与量、投与方法、および反復率を決定することができる。
【０１５６】
本明細書に記載の方法のある特定の態様において、TIGIT結合物質の投与量は、0.01μg〜100mg/kg体重、0.1μg〜100mg/kg体重、1μg〜100mg/kg体重、1mg〜100mg/kg体重、1mg〜80mg/kg体重、10mg〜100mg/kg体重、10mg〜75mg/kg体重、または10mg〜50mg/kg体重である。ある特定の態様において、TIGIT結合物質は、約0.1mg/kg、約0.3mg/kg、約1mg/kg、約1.5mg/kg、約2mg/kg、約2.5mg/kg、約3mg/kg、約5mg/kg、約7.5kg/kg、約10mg/kg、約12mg/kg、約12.5mg/kg、約15mg/kg、約17.5mg/kg、約20mg/kg、または約25mg/kgの用量で対象に投与される。ある特定の態様において、TIGIT結合物質の投与量は約0.1mg〜約20mg/kgである。一部の態様において、TIGIT結合物質の投与量は約0.3mg/kgである。一部の態様において、TIGIT結合物質の投与量は約1mg/kgである。一部の態様において、TIGIT結合物質の投与量は約1.5mg/kgである。一部の態様において、TIGIT結合物質の投与量は約2mg/kgである。一部の態様において、TIGIT結合物質の投与量は約2.5mg/kgである。一部の態様において、TIGIT結合物質の投与量は約3mg/kgである。一部の態様において、TIGIT結合物質の投与量は約5mg/kgである。一部の態様において、TIGIT結合物質の投与量は約7.5mg/kgである。一部の態様において、TIGIT結合物質の投与量は約10mg/kgである。一部の態様において、TIGIT結合物質の投与量は約12.5mg/kgである。一部の態様において、TIGIT結合物質の投与量は約15mg/kgである。一部の態様において、TIGIT結合物質の投与量は約17.5mg/kgである。一部の態様において、TIGIT結合物質の投与量は約20mg/kgである。ある特定の態様において、投与量は1日に、1週間に、1ヶ月に、または1年に1回またはそれ以上与えることができる。ある特定の態様において、TIGIT結合物質は1週間に1回、2週間に1回、3週間に1回、または4週間に1回、与えられる。
【０１５７】
一部の態様において、TIGIT結合物質は多量の初回「負荷」量で投与され、その後に、それより少ない1つまたは複数の用量で投与されてもよい。一部の態様において、投与頻度も変更してもよい。一部の態様において、投与計画は、初回量を投与し、その後に、1週間に1回、2週間に1回、3週間に1回、または数か月に1回、さらなる用量(または「維持」用量)を投与する工程を含んでもよい。例えば、投与計画は、初回負荷量を投与し、その後に、毎週維持量、例えば、初回量の半分を投与する工程を含んでもよい。または、投与計画は、初回負荷量を投与し、その後に、維持量、例えば、初回量の半分を隔週で投与する工程を含んでもよい。または、投与計画は、3週間にわたって3つの初回量を投与し、その後に、維持量、例えば、同じ量を隔週で投与する工程を含んでもよい。
【０１５８】
当業者に公知であるとおり、どの治療用物質の投与でも副作用および/または毒性が生じる可能性がある。場合によっては、副作用および/または毒性は、治療に有効な用量の特定の作用物質の投与を止めるほど重篤である。場合によっては、薬物療法は中断しなければならず、他の作用物質が試みられる場合がある。しかしながら、同じ薬効分類(therapeutic class)中の多くの作用物質が同様の副作用および/または毒性を示すことが多い。このことは、患者は療法を停止しなければならないか、または可能なら、治療用物質に関連する不快な副作用に苦しむことを意味する。
【０１５９】
一部の態様において、投与計画は特定の回数の投与または「サイクル」に限定される場合がある。一部の態様において、作用物質は3回、4回、5回、6回、7回、8回、またはそれより多いサイクルで投与される。例えば、作用物質は6回のサイクルで2週間ごとに投与される、作用物質は6回のサイクルで3週間ごとに投与される、作用物質は4回のサイクルで2週間ごとに投与される、作用物質は4回のサイクルで3週間ごとに投与されるなど。当業者は投与計画を決定し、その後に変更することができる。
【０１６０】
複数の態様において、TIGIT結合物質は、およそ1週間に1回、およそ2週間に1回、およそ3週間に1回、およそ4週間に1回、およそ5週間に1回、およそ6週間に1回、およそ8週間に1回、およそ12週間に1回、およそ1か月に1回、およそ2か月に1回、およそ3か月に1回、またはそれより長い期間に1回、投与される。ある特定の態様において、TIGIT結合物質は、約0.1mg/kg、約0.3mg/kg、約1mg/kg、約1.5mg/kg、約2mg/kg、約2.5mg/kg、約3mg/kg、約5mg/kg、約7.5kg/kg、約10mg/kg、約12mg/kg、約12.5mg/kg、約15mg/kg、約17.5mg/kg、約20mg/kg、または約25mg/kgの用量で、およそ2週間に1回、対象に投与される。
【０１６１】
一部の態様において、TIGIT結合物質は、約0.3mg/kgの用量で2週間に1回、対象に投与される。
【０１６２】
一部の態様において、TIGIT結合物質は、約1mg/kgの用量で2週間に1回、対象に投与される。
【０１６３】
一部の態様において、TIGIT結合物質は、約3mg/kgの用量で2週間に1回、対象に投与される。
【０１６４】
一部の態様において、TIGIT結合物質は、約10mg/kgの用量で2週間に1回、対象に投与される。
【０１６５】
一部の態様において、TIGIT結合物質は、約15mg/kgの用量で2週間に1回、対象に投与される。
【０１６６】
ある特定の態様において、対象は、PD-1アンタゴニストおよび/またはPD-L1アンタゴニストを用いた先の処置を受けたことがある。ある特定の態様において、対象は、組織学的に確認された進行型の再発性または不応性固形腫瘍を有する。
【０１６７】
ある特定の態様において、対象は、頭頸部がん、食道がん/胃食道がん、胃がん、結腸直腸がん、肛門がん、肝細胞がん/肝臓がん、子宮頸がん、肺がん、黒色腫、メルケル細胞がん、腎細胞がん/腎臓がん、膀胱がん、卵巣がん、膵臓がん、子宮内膜がん、肛門がん、トリプルネガティブ乳がん、既知高頻度MSI固形腫瘍(MSI CRCを含む)、またはMSS結腸直腸がんを有する。
【０１６８】
本発明は、1種類または複数種類の作用物質を投与するために間欠投与戦略を使用する工程を含む、TIGIT結合物質を対象に投与する方法を提供する。間欠投与戦略を使用する工程によって、作用物質、化学療法剤などの投与に関連する副作用および/または毒性が低減する可能性がある。一部の態様において、ヒト対象において腫瘍成長を阻害するための、および/またはがんを処置するための方法は、治療に有効な用量のTIGIT結合物質を治療に有効な用量の化学療法剤と組み合わせて対象に投与する工程を含み、作用物質の一方または両方は間欠投与戦略に従って投与される。一部の態様において、間欠投与戦略は、初回量のTIGIT結合物質を対象に投与する工程、および後の用量のTIGIT結合物質を、およそ2週間に1回、投与する工程を含む。一部の態様において、間欠投与戦略は、初回量のTIGIT結合物質を対象に投与する工程、および後の用量のTIGIT結合物質を、およそ3週間に1回、投与する工程を含む。一部の態様において、間欠投与戦略は、初回量のTIGIT結合物質を対象に投与する工程、および後の用量のTIGIT結合物質を、およそ4週間に1回、投与する工程を含む。一部の態様において、TIGIT結合物質は間欠投与戦略を用いて投与され、第2の作用物質が毎週投与される。
【０１６９】
本発明は、TIGIT結合物質を含む組成物を使用する方法を提供する。本発明はまた、TIGIT結合物質と薬学的に許容されるビヒクルを含む薬学的組成物を使用する本明細書に記載の方法も提供する。一部の態様において、前記薬学的組成物は免疫療法において有用である。一部の態様において、前記組成物は、腫瘍成長を阻害するのに有用である。一部の態様において、前記薬学的組成物は、対象(例えば、ヒト患者)において腫瘍成長を阻害するのに有用である。一部の態様において、前記組成物はがんを処置するのに有用である。一部の態様において、前記薬学的組成物は、対象(例えば、ヒト患者)においてがんを処置するのに有用である。
【０１７０】
精製されたTIGIT結合物質と、薬学的に許容されるビヒクル(例えば、担体または賦形剤)を組み合わせることによって、保管および使用のための製剤が調製される。当業者は、普通、薬学的に許容される担体、賦形剤、および/または安定剤が製剤または薬学的組成物の不活性成分だと考える。
【０１７１】
適切な薬学的に許容されるビヒクルには、無毒の緩衝液、例えば、リン酸、クエン酸、および他の有機酸;塩、例えば、塩化ナトリウム;アスコルビン酸およびメチオニンを含む抗酸化物質;防腐剤、例えば、塩化オクタデシルジメチルベンジルアンモニウム、塩化ヘキサメトニウム、塩化ベンザルコニウム、塩化ベンゼトニウム、フェノール、ブチルアルコールまたはベンジルアルコール、アルキルパラベン、例えば、メチルパラベンまたはプロピルパラベン、カテコール、レゾルシノール、シクロヘキサノール、3-ペンタノール、およびm-クレゾール;低分子量ポリペプチド(例えば、約10未満のアミノ酸残基);タンパク質、例えば、血清アルブミン、ゼラチン、または免疫グロブリン;親水性ポリマー、例えば、ポリビニルピロリドン;アミノ酸、例えば、グリシン、グルタミン、アスパラギン、ヒスチジン、アルギニン、またはリジン;炭水化物、例えば、単糖、二糖、グルコース、マンノース、またはデキストリン;キレート剤、例えば、EDTA;糖、例えば、スクロース、マンニトール、トレハロース、またはソルビトール;塩を形成する対イオン、例えば、ナトリウム;金属錯体、例えば、Zn-タンパク質錯体、ならびに非イオン界面活性剤、例えば、TWEENまたはポリエチレングリコール(PEG)が含まれるが、これに限定されない。(Remington: The Science and Practice of Pharmacy, 22st Edition, 2012, Pharmaceutical Press, London.)。
【０１７２】
本発明の薬学的組成物は局所処置または全身処置のための多くの手法で投与することができる。一部の態様において、投与は、(i)表皮パッチもしくは経皮パッチ、軟膏、ローション剤、クリーム、ゲル、ドロップ、坐剤、スプレー、液剤、および散剤による局部投与;(ii)ネブライザーによる投与を含む、散剤もしくはエアゾール剤の吸入もしくはガス注入による肺投与、気管内投与、および鼻腔内投与;(iii)経口投与;あるいは(iv)静脈内投与、動脈内投与、腫瘍内投与、皮下投与、腹腔内投与、もしくは筋肉内投与(例えば、注射もしくは注入)を含む非経口投与;または頭蓋内投与(例えば、くも膜下腔内投与もしくは脳室内投与)である。
【０１７３】
治療用製剤は単位剤形でもよい。このような製剤には、錠剤、丸剤、カプセル、散剤、顆粒剤、水もしくは非水性媒体に溶解した溶液もしくは懸濁液、または坐剤が含まれる。錠剤などの固形組成物では、主要な有効成分が薬学的担体と混合されている。従来の錠剤化成分には、コーンスターチ、ラクトース、スクロース、ソルビトール、タルク、ステアリン酸、ステアリン酸マグネシウム、リン酸二カルシウム、またはゴム、および希釈剤(例えば、水)が含まれる。これらを用いて、本発明の化合物またはその無毒な薬学的に許容される塩の均質な混合物を含有する固体の予備処方組成物を形成することができる。次いで、固体の予備処方組成物は上述のタイプの単位剤形にさらに分けられる。長期作用という利点を与える剤形を得るために、製剤または組成物の錠剤、丸剤などがコーティングされてもよく、他の方法で調合されてもよい。例えば、錠剤または丸剤は内部組成物が外部成分によって覆われてもよい。さらに、崩壊に抵抗するよう働いて、内部成分がそのまま胃を通過するのを可能にするか、またはその放出を遅らせることができる腸溶層によって、2つの成分は分離されてもよい。このような腸溶層またはコーティングには様々な材料を使用することができる。このような材料には、多くのポリマー酸、ならびにポリマー酸と、セラック、セチルアルコール、および酢酸セルロースのような材料との混合物が含まれる。
【０１７４】
TIGIT結合物質ははまたマイクロカプセルの中に封入することもできる。このようなマイクロカプセルは、例えば、コアセルベーション技法または界面重合法によって調製され、それぞれ、例えば、Remington, The Science and Practice of Pharmacy, 22nd Edition, 2012, Pharmaceutical Press, London.に記載のように、ヒドロキシメチルセルロースまたはゼラチン-マイクロカプセルおよびポリ(メチルメタクリレート)マイクロカプセルを、コロイド状薬物送達システム(例えば、リポソーム、アルブミンミクロスフェア、マイクロエマルジョン、ナノ粒子、およびナノカプセル)の中に、またはマクロエマルジョンの中に入れる。
【０１７５】
ある特定の態様では、薬学的製剤には、リポソームと複合体化したTIGIT結合物質が含まれる。リポソームを生成する方法は当業者に公知である。例えば、リポソームの中には、ホスファチジルコリン、コレステロール、およびPEG誘導体化ホスファチジルエタノールアミン(PEG-PE)を含む脂質組成物を用いた逆相蒸発によって作製できるものもある。規定された孔径のフィルターに通してリポソームを押し出すことにより、望ましい直径を有するリポソームを得ることができる。
【０１７６】
ある特定の態様では、TIGIT結合物質を含む徐放性調製物が生成される。徐放性調製物の適切な例には、作用物質を含有する固体疎水性ポリマーの半透性マトリックスが含まれ、そのマトリックスは、成形された物品(例えば、フィルムまたはマイクロカプセル)の形をしている。徐放性マトリックスの例には、ポリエステル、ヒドロゲル、例えば、ポリ(2-ヒドロキシエチル-メタクリレート)またはポリ(ビニルアルコール)、ポリ乳酸、L-グルタミン酸と7エチル-L-グルタメートのコポリマー、非分解性エチレン-酢酸ビニル、LUPRON DEPOT(商標)(乳酸-グリコール酸コポリマーおよび酢酸ロイプロリドで構成される注射可能なミクロスフェア)などの分解性乳酸-グリコール酸コポリマー、ショ糖酢酸イソ酪酸エステル、ならびにポリ-D-(-)-3-ヒドロキシ酪酸が含まれる。
【０１７７】
III.TIGIT結合物質
T-cell immunoreceptor with Ig and ITIM domains(TIGIT)は、免疫グロブリン可変(IgV)ドメインを含有するI型膜貫通糖タンパク質である。TIGITはポリオウイルス受容体(PVR)ファミリーに属し、高親和性でポリオウイルス受容体(PVR;CD155)に結合し、これより低い親和性でPVRL-2(CD112)およびPVRL-3(CD113)に結合する。TIGITは、調節性T細胞(Treg)およびメモリーT細胞を含むT細胞上に、ならびにNK細胞上に発現しており、ナイーブCD4+T細胞が活性化された後に上方制御される。ヒトTIGITの完全長アミノ酸(aa)配列(UniProtKB No.Q495A1)は当技術分野において公知であり、本明細書中ではSEQ ID NO:1として提供される。本明細書で使用する場合、アミノ酸位置についての言及は、シグナル配列を含む完全長アミノ酸配列のナンバリングを指す。
【０１７８】
本発明は、TIGITに特異的に結合する作用物質を使用する方法を提供する。これらの作用物質は本明細書中では「TIGIT結合物質」と呼ばれる。一部の態様において、TIGIT結合物質は抗体である。一部の態様において、TIGIT結合物質はポリペプチドである。ある特定の態様において、TIGIT結合物質はマウスTIGITに結合する。ある特定の態様において、TIGIT結合物質はヒトTIGITに結合する。ある特定の態様において、TIGIT結合物質はマウスTIGITおよびヒトTIGITに結合する。一部の態様において、TIGIT結合物質はヒトTIGITに結合し、マウスTIGITに結合しない。TIGIT結合物質の非限定的な例は、例えば、国際特許出願番号PCT/US2016/034549;国際特許公報番号WO2016/106302および同WO2016/028656;ならびに米国特許出願第2013/0251720号に記載されている。
【０１７９】
一部の態様において、作用物質はTIGITに結合し、TIGITと第2のタンパク質との相互作用を妨害する。一部の態様において、作用物質はTIGITに結合し、TIGITとPVRとの相互作用を妨害する。一部の態様において、作用物質はTIGITに結合し、TIGITとPVRL2との相互作用を妨害する。一部の態様において、作用物質はTIGITに結合し、TIGITとPVRL3との相互作用を妨害する。一部の態様において、作用物質は、TIGITに結合し、かつ、この作用物質は、TIGITとPVRとの結合を破壊し、かつ/またはTIGITシグナル伝達のPVR活性化を破壊する。
【０１８０】
ある特定の態様において、TIGIT結合物質は、TIGITの細胞外ドメインに特異的に結合する抗体またはその断片である。ある特定の態様において、TIGIT結合物質は、マウスTIGITの細胞外ドメインに特異的に結合する抗体またはその断片である。ある特定の態様において、TIGIT結合物質は、ヒトTIGITの細胞外ドメインに特異的に結合する抗体またはその断片である。ある特定の態様において、TIGIT結合物質は、マウスTIGITおよびヒトTIGITの細胞外ドメインに特異的に結合する抗体またはその断片である。一部の態様において、TIGIT結合物質は、TIGITのIg様ドメインに特異的に結合する抗体である。一部の態様において、TIGIT結合物質は、TIGITのIgVドメインに特異的に結合する抗体である。一部の態様において、TIGIT結合物質は、ヒトTIGITのアミノ酸22-141の内部に結合する抗体である。一部の態様において、TIGIT結合物質は、SEQ ID NO:1のアミノ酸22-141の内部に結合する抗体である。一部の態様において、作用物質は、ヒトTIGITのアミノ酸22-124の内部に結合する。一部の態様において、作用物質は、SEQ ID NO:1のアミノ酸22-124の内部に結合する。ある特定の態様において、TIGIT結合物質は、SEQ ID NO:3またはその断片の内部に結合する。一部の態様において、TIGIT結合物質は、ヒトTIGITのアミノ酸50-124の内部に結合する抗体である。一部の態様において、TIGIT結合物質は、SEQ ID NO:1のアミノ酸50-124の内部に結合する抗体である。ある特定の態様において、TIGIT結合物質はSEQ ID NO:3またはその断片の内部に結合する。
【０１８１】
一部の態様において、TIGIT結合物質は、SEQ ID NO:27の中のアミノ酸を含むエピトープに結合する抗体である。一部の態様において、TIGIT結合物質は、SEQ ID NO:28の中のアミノ酸を含むエピトープに結合する抗体である。一部の態様において、TIGIT結合物質は、SEQ ID NO:27およびSEQ ID NO:28の中のアミノ酸を含むエピトープに結合する抗体である。一部の態様において、TIGIT結合物質は、SEQ ID NO:1のアミノ酸Q62およびI109を含むエピトープに結合する抗体である。一部の態様において、TIGIT結合物質は、SEQ ID NO:1のアミノ酸Q62およびT119を含むエピトープに結合する抗体である。一部の態様において、TIGIT結合物質は、SEQ ID NO:1のアミノ酸Q64およびI109を含むエピトープに結合する抗体である。一部の態様において、TIGIT結合物質は、SEQ ID NO:1のアミノ酸Q64およびT119を含むエピトープに結合する抗体である。一部の態様において、TIGIT結合物質は、SEQ ID NO:1のアミノ酸Q62、Q64、およびI109を含むエピトープに結合する抗体である。一部の態様において、TIGIT結合物質は、SEQ ID NO:1のアミノ酸Q62、Q64、およびT119を含むエピトープに結合する抗体である。一部の態様において、TIGIT結合物質は、SEQ ID NO:1のアミノ酸Q62、I109、およびT119を含むエピトープに結合する抗体である。一部の態様において、TIGIT結合物質は、SEQ ID NO:1のアミノ酸Q64、I109、およびT119を含むエピトープに結合する抗体である。一部の態様において、TIGIT結合物質は、SEQ ID NO:1のアミノ酸Q62、Q64、I109、およびT119を含むエピトープに結合する抗体である。一部の態様において、TIGIT結合物質は、SEQ ID NO:1のN58、E60、Q62、Q64、L65、F107、I109、H111、T117、T119、G120、およびR121からなる群より選択される少なくとも1つのアミノ酸を含むエピトープに結合する抗体である。一部の態様において、エピトープはコンホメーションエピトープである。一部の態様において、TIGIT結合物質は、SEQ ID NO:1のアミノ酸V100を含まないエピトープに結合する抗体である。
【０１８２】
ある特定の態様において、TIGIT結合物質(例えば、抗体)は、約1μMもしくはそれ未満、約100nMもしくはそれ未満、約40nMもしくはそれ未満、約20nMもしくはそれ未満、約10nMもしくはそれ未満、約1nMもしくはそれ未満、約0.1nMもしくはそれ未満、50pMもしくはそれ未満、10pMもしくはそれ未満、または1pMもしくはそれ未満の解離定数(KD)でTIGITに結合する。一部の態様において、TIGIT結合物質は約20nMまたはそれ未満のKDでTIGITに結合する。一部の態様において、TIGIT結合物質は約10nMまたはそれ未満のKDでTIGITに結合する。一部の態様において、TIGIT結合物質は約1nMまたはそれ未満のKDでTIGITに結合する。一部の態様において、TIGIT結合物質は約0.5nMまたはそれ未満のKDでTIGITに結合する。一部の態様において、TIGIT結合物質は約0.1nMまたはそれ未満のKDでTIGITに結合する。一部の態様において、TIGIT結合物質は約50pMまたはそれ未満のKDでTIGITに結合する。一部の態様において、TIGIT結合物質は約25pMまたはそれ未満のKDでTIGITに結合する。一部の態様において、TIGIT結合物質は約10pMまたはそれ未満のKDでTIGITに結合する。一部の態様において、TIGIT結合物質は約1pMまたはそれ未満のKDでTIGITに結合する。一部の態様において、TIGIT結合物質は約10nMまたはそれ未満のKDでヒトTIGITとマウスTIGITの両方に結合する。一部の態様において、TIGIT結合物質は約1nMまたはそれ未満のKDでヒトTIGITとマウスTIGITの両方に結合する。一部の態様において、TIGIT結合物質は約0.1nMまたはそれ未満のKDでヒトTIGITとマウスTIGITの両方に結合する。一部の態様において、TIGITに対する結合物質(例えば、抗体)の解離定数は、Biacoreチップ上に固定化されたTIGITタンパク質の細胞外ドメインの少なくとも一部を含むTIGIT融合タンパク質を用いて求められた解離定数である。一部の態様において、TIGITに対する結合物質(例えば、抗体)の解離定数は、Biacoreチップ上の抗ヒトIgG抗体によって捕捉された結合物質と、可溶性TIGITタンパク質を用いて求められた解離定数である。
【０１８３】
一部の態様において、TIGIT結合物質は、TIGITに特異的に結合する第1の抗原結合部位と、第2の標的に特異的に結合する第2の抗原結合部位とを含む。一部の態様において、TIGIT結合物質は、TIGITに特異的に結合する第1の抗原結合部位と、第2の標的に特異的に結合する第2の抗原結合部位とを含む二重特異性作用物質である。一部の態様において、TIGIT結合物質は、約100nMまたはそれ未満のKDでTIGITと第2の標的の両方に結合する。一部の態様において、TIGIT結合物質は、約50nMまたはそれ未満のKDでTIGITと第2の標的の両方に結合する。一部の態様において、TIGIT結合物質は、約20nMまたはそれ未満のKDでTIGITと第2の標的の両方に結合する。一部の態様において、TIGIT結合物質は、約10nMまたはそれ未満のKDでTIGITと第2の標的の両方に結合する。一部の態様において、TIGIT結合物質は、約1nMまたはそれ未満のKDでTIGITと第2の標的の両方に結合する。一部の態様において、一方の抗原結合部位の親和性は他方の抗原結合部位の親和性より弱くてもよい。例えば、一方の抗原結合部位のKDは約1nMでもよく、第2の抗原結合部位のKDは約10nMでもよい。一部の態様において、2種類の抗原結合部位間の親和性の差は、約2倍もしくはそれ以上、約3倍もしくはそれ以上、約5倍もしくはそれ以上、約8倍もしくはそれ以上、約10倍もしくはそれ以上、約15倍もしくはそれ以上、約20倍もしくはそれ以上、約30倍もしくはそれ以上、約50倍もしくはそれ以上、または約100倍もしくはそれ以上でもよい。2種類の抗原結合部位の親和性の調整が二重特異性抗体の生物学的活性に影響を及ぼすことがある。例えば、TIGITまたは第2の標的に対する抗原結合部位の親和性の減少には、望ましい効果、例えば、結合物質の毒性の減少および/または治療指数の増大がある場合がある。
【０１８４】
ある特定の態様において、TIGIT結合物質(例えば、抗体)は、約1μMもしくはそれ未満、約100nMもしくはそれ未満、約40nMもしくはそれ未満、約20nMもしくはそれ未満、約10nMもしくはそれ未満、約1nMもしくはそれ未満、または約0.1nMもしくはそれ未満の50％効果濃度 (EC50)でTIGITに結合する。ある特定の態様において、TIGIT結合物質は、約1μMもしくはそれ未満、約100nMもしくはそれ未満、約40nMもしくはそれ未満、約20nMもしくはそれ未満、約10nMもしくはそれ未満、約1nMもしくはそれ未満、または約0.1nMもしくはそれ未満の50％効果濃度(EC50)でヒトTIGITに結合する。ある特定の態様において、TIGIT結合物質は、約40nMもしくはそれ未満、約20nMもしくはそれ未満、約10nMもしくはそれ未満、約1nMもしくはそれ未満、または約0.1nMもしくはそれ未満のEC50でマウスTIGITおよび/またはヒトTIGITに結合する。
【０１８５】
ある特定の態様において、TIGIT結合物質は抗体である。一部の態様において、前記抗体は組換え抗体である。一部の態様において、前記抗体はモノクローナル抗体である。一部の態様において、前記抗体はキメラ抗体である。一部の態様において、前記抗体はヒト化抗体である。一部の態様において、前記抗体はヒト抗体である。一部の態様において、前記抗体は、IgA、IgD、IgE、IgG、またはIgM抗体である。ある特定の態様において、前記抗体はIgG1抗体である。ある特定の態様において、前記抗体はIgG2抗体である。一部の態様において、前記抗体はIgG4抗体である。ある特定の態様において、前記抗体は、抗原結合部位を含む抗体断片である。一部の態様において、前記抗体は二重特異性抗体または多重特異性抗体である。一部の態様において、前記抗体は一価抗体である。一部の態様において、前記抗体は単一特異性抗体である。一部の態様において、前記抗体は二価抗体である。一部の態様において、前記抗体は細胞傷害性部分に結合体化されている。一部の態様において、前記抗体は単離されている。一部の態様において、前記抗体は実質的に純粋である。
【０１８６】
一部の態様において、TIGIT結合物質はポリクローナル抗体である。ポリクローナル抗体は任意の公知の方法によって調製することができる。一部の態様において、ポリクローナル抗体は、複数回の皮下注射または腹腔内注射を用いて、動物(例えば、ウサギ、ラット、マウス、ヤギ、ロバ)を関心対象の抗原(例えば、精製されたペプチド断片、完全長組換えタンパク質、または融合タンパク質)で免疫することによって産生される。抗原は、任意で、キーホールリンペットヘモシアニン(KLH)または血清アルブミンなどの担体に結合体化することができる。(担体タンパク質を含む、または担体タンパク質を含まない)抗原は滅菌食塩水で希釈され、安定したエマルジョンを形成するために、通常、アジュバント(例えば、完全フロイントアジュバントまたは不完全フロイントアジュバント)と組み合わされる。十分な時間が経過した後に、免疫された動物から、通常、血液または腹水からポリクローナル抗体が回収される。ポリクローナル抗体は、アフィニティクロマトグラフィー、イオン交換クロマトグラフィー、ゲル電気泳動、および透析を含むが、これらに限定されない、当技術分野における標準的な方法に従って血清または腹水から精製することができる。
【０１８７】
一部の態様において、TIGIT結合物質はモノクローナル抗体である。モノクローナル抗体は、当業者に公知のハイブリドーマ法を用いて調製することができる。ハイブリドーマ法を用いた一部の態様では、免疫用抗原に特異的に結合する抗体の産生を誘発するために、前記のようにマウス、ラット、ウサギ、ハムスター、または他の適切な宿主動物が免疫される。一部の態様において、リンパ球はインビトロで免疫することができる。一部の態様において、免疫用抗原はヒトタンパク質またはその断片でもよい。一部の態様において、免疫用抗原はマウスタンパク質またはその断片でもよい。
【０１８８】
免疫後に、リンパ球は単離され、例えば、ポリエチレングリコールを用いて、適切なミエローマ細胞株と融合される。ハイブリドーマ細胞は、当技術分野において公知のように専用の培地を用いて選択され、融合しなかったリンパ球およびミエローマ細胞は選択プロセスに生き残らない。選択された抗原に対して特異的に作られたモノクローナル抗体を産生するハイブリドーマは、免疫沈降、イムノブロッティング、およびインビトロ結合アッセイ(例えば、フローサイトメトリー、FACS、ELISA、およびラジオイムノアッセイ)を含むが、これらに限定されない様々な方法によって同定することができる。ハイブリドーマは、標準的な方法を用いてインビトロ培養で増殖されてもよく、動物の腹水腫瘍としてインビボで増殖されてもよい。モノクローナル抗体は、アフィニティクロマトグラフィー、イオン交換クロマトグラフィー、ゲル電気泳動、および透析を含むが、これらに限定されない当技術分野において標準的な方法に従って培養培地または腹水から精製することができる。
【０１８９】
ある特定の態様において、モノクローナル抗体は、当業者に公知のように組換えDNA法を用いて作製することができる。モノクローナル抗体をコードするポリヌクレオチドは、例えば、抗体の重鎖および軽鎖をコードする遺伝子を特異的に増幅するオリゴヌクレオチドプライマーを用いたRT-PCRによって、成熟したB細胞またはハイブリドーマ細胞から単離され、これらの配列は標準的な技法を用いて決定される。次いで、重鎖および軽鎖をコードする単離されたポリヌクレオチドは適切な発現ベクターにクローニングされ、この発現ベクターは、トランスフェクションによって、宿主細胞、例えば、何もしなければ免疫グロブリンタンパク質を産生しない大腸菌(E. coli)、サルCOS細胞、チャイニーズハムスター卵巣(CHO)細胞、またはミエローマ細胞に導入されるとモノクローナル抗体を産生する。
【０１９０】
ある特定の他の態様において、組換えモノクローナル抗体またはその断片は、望ましい種の可変ドメインまたはCDRを発現するファージディスプレイライブラリーから単離することができる。
【０１９１】
モノクローナル抗体をコードするポリヌクレオチドは、例えば、組換えDNA技術を用いることによって、代わりの抗体を生じるように改変することができる。一部の態様では、キメラ抗体を作製するためには、軽鎖および重鎖、例えば、マウスモノクローナル抗体の軽鎖および重鎖の定常ドメインを、定常領域、例えば、ヒト抗体の定常領域で、または融合抗体を作製するためには非免疫グロブリンポリペプチドで置換することができる。一部の態様では、モノクローナル抗体の望ましい抗体断片を作製するために、定常領域は切断または除去される。可変領域の部位特異的変異誘発または高密度変異誘発を用いて、モノクローナル抗体の特異性、親和性などを最適化することができる。
【０１９２】
一部の態様において、TIGIT結合物質はヒト化抗体である。典型的には、ヒト化抗体は、当業者に公知の方法を用いて、CDRのアミノ酸残基が、望ましい特異性、親和性、および/または結合能力を有する非ヒト種(例えば、マウス、ラット、ウサギ、ハムスターなど)のCDRに由来するアミノ酸残基により置き換えられているヒト免疫グロブリンである。一部の態様において、ヒト免疫グロブリンのフレームワーク可変領域アミノ酸残基の一部は、非ヒト種に由来する抗体にある対応するアミノ酸残基と置き換えられる。一部の態様において、ヒト化抗体は、フレームワーク可変領域中および/または置き換えられた非ヒト残基内のさらなる残基の置換によってさらに改変されて、抗体の特異性、親和性、および/または能力をさらに改良および最適化することができる。一般的に、ヒト化抗体は、非ヒト免疫グロブリンに対応する全てまたは実質的に全てのCDRを含む可変ドメイン領域を含むのに対して、全てまたは実質的に全てのフレームワーク領域がヒト免疫グロブリン配列のフレームワーク領域である。一部の態様において、フレームワーク領域は、ヒトコンセンサス免疫グロブリン配列のフレームワーク領域である。一部の態様において、ヒト化抗体はまた、免疫グロブリン定常領域またはドメイン(Fc)の少なくとも一部、典型的には、ヒト免疫グロブリンの定常領域またはドメイン(Fc)の少なくとも一部も含むことができる。ある特定の態様において、このようなヒト化抗体は、ヒト対象に投与された場合に抗原性およびHAMA(ヒト抗マウス抗体)応答を低減する可能性があるので治療に用いられる。
【０１９３】
ある特定の態様において、TIGIT結合物質はヒト抗体である。ヒト抗体は、当技術分野において公知の様々な技法を用いて直接、調製することができる。一部の態様において、ヒト抗体は、インビトロで免疫された不死化ヒトBリンパ球から作製されてもよく、免疫された個体から単離されたリンパ球から作製されてもよい。どちらの場合でも、標的抗原に対して作られた抗体を産生する細胞を作製および単離することができる。一部の態様において、ヒト抗体を発現するファージライブラリーからヒト抗体を選択することができる。または、ファージディスプレイ技術を用いて、インビトロで、未免疫ドナーに由来する免疫グロブリン可変ドメイン遺伝子レパートリーからヒト抗体および抗体断片を生成することができる。抗体ファージライブラリーを作製および使用するための技法は当技術分野において周知である。抗体が同定されたら、高親和性ヒト抗体を作製するために、鎖シャッフリングおよび部位特異的変異誘発を含むが、これらに限定されない当技術分野において公知の親和性成熟戦略が用いられる場合がある。
【０１９４】
一部の態様において、ヒト抗体は、ヒト免疫グロブリン遺伝子座を含有するトランスジェニックマウスにおいて作製することができる。これらのマウスが免疫されると、内因性免疫グロブリン産生の非存在下で、ヒト抗体の全レパートリーを産生することができる。
【０１９５】
一部の態様において、TIGIT結合物質は二重特異性抗体である。従って、本発明は、TIGITと、少なくとも1つのさらなる標的を特異的に認識する二重特異性抗体を包含する。二重特異性抗体は、少なくとも2つの異なる抗原またはエピトープを特異的に認識および結合することができる。異なるエピトープは同じ分子内に存在してもよく(例えば、TIGITにおける2つのエピトープ)、異なる分子において存在してもよい(例えば、TIGITにおける1つのエピトープ、および異なるタンパク質における1つのエピトープ)。一部の態様において、二重特異性抗体の有効性は、個々の抗体と比較して、または複数種類の抗体の組み合わせと比較して高い。一部の態様において、二重特異性抗体の毒性は、個々の抗体と比較して、または複数種類の抗体の組み合わせと比較して低い。どの治療用物質も特有の薬物動態(PK)(例えば、循環半減期)を有し得ることは当業者に公知である。一部の態様において、二重特異性抗体には、2種類の活性結合物質のPKを同時発生させる能力がある。この場合、2種類の個々の結合物質のPKプロファイルは異なる。一部の態様において、二重特異性抗体には、2種類の作用物質の働きを共通の領域(例えば、腫瘍および/または腫瘍微小環境)に集める能力がある。一部の態様において、二重特異性抗体には、2種類の作用物質の働きを共通の標的(例えば、腫瘍または腫瘍細胞)に集める能力がある。一部の態様において、二重特異性抗体には、2種類の作用物質の働きを複数の生物学的経路または生物学的機能に標的化する能力がある。一部の態様において、二重特異性抗体には、2つの異なる細胞(例えば、免疫細胞および腫瘍細胞)を標的化し、近づける能力がある。
【０１９６】
一部の態様において、二重特異性抗体はモノクローナル抗体である。一部の態様において、二重特異性抗体はヒト化抗体である。一部の態様において、二重特異性抗体はヒト抗体である。一部の態様において、二重特異性抗体はIgG1抗体である。一部の態様において、二重特異性抗体はIgG2抗体である。一部の態様において、二重特異性抗体はIgG4抗体である。一部の態様において、二重特異性抗体は毒性および/または副作用が弱い。一部の態様において、二重特異性抗体は、2種類の個々の抗体の混合物または単一作用物質としての抗体と比較して毒性および/または副作用が弱い。一部の態様において、二重特異性抗体は治療指数が大きい。一部の態様において、二重特異性抗体は、2種類の個々の抗体の混合物または単一作用物質としての抗体と比較して治療指数が大きい。
【０１９７】
一部の態様において、前記抗体は、TIGITならびに第2の抗原標的、例えば、免疫細胞上のエフェクター分子(例えば、CD2、CD3、CD28、CTLA4、PD-1、PD-L1、CD80、もしくはCD86)またはFc受容体(例えば、CD64、CD32、もしくはCD16)を特異的に認識および結合することができる。一部の態様において、前記抗体は、細胞傷害剤を、特定の標的抗原を発現する細胞に方向付けるのに使用することができる。これらの抗体は、抗原結合アーム、および細胞傷害剤または放射性核種キレート剤、例えば、EOTUBE、DPTA、DOTA、またはTETAに結合するアームを有する。
【０１９８】
二重特異性抗体を作製するための技法は当業者に公知である。一部の態様において、二重特異性抗体は、2本の重鎖間にある境界面の一部であるアミノ酸が改変された重鎖定常領域を含む。一部の態様において、二重特異性抗体は「ノブ-イントゥ-ホール」戦略を用いて作製することができる。場合によっては、「ノブ」および「ホール」という専門用語は「突起」および「空洞」という用語と置き換えられる。一部の態様において、二重特異性抗体は、重鎖間でジスルフィド結合を形成することができない変種ヒンジ領域を含んでもよい。一部の態様において、改変は、静電相互作用を変えるアミノ酸変化を含んでもよい。一部の態様において、改変は、疎水性相互作用/親水性相互作用を変えるアミノ酸変化を含んでもよい。
【０１９９】
二重特異性抗体は無傷の抗体でもよく、抗原結合部位を含む抗体断片でもよい。結合価が2を超える抗体も意図される。例えば、三重特異性抗体を調製することができる。従って、ある特定の態様では、TIGITに対する抗体は多重特異性である。
【０２００】
ある特定の態様において、本明細書に記載の抗体(または他のポリペプチド)は単一特異性でもよい。ある特定の態様において、抗体が含む1つまたは複数の抗原結合部位はそれぞれ、TIGITにおける相同エピトープに結合することができる(またはTIGITにおける相同エピトープに結合する)。
【０２０１】
ある特定の態様において、TIGIT結合物質は抗体断片である。抗体断片は、無傷の抗体とは異なる機能または能力を有する場合がある。例えば、抗体断片は高い腫瘍浸透力を有することがある。無傷の抗体のタンパク質分解消化を含むが、これに限定されない、抗体断片を生成するための様々な技法が公知である。一部の態様において、抗体断片には、抗体分子のペプシン消化によって生成されるF(ab')2断片が含まれる。一部の態様において、抗体断片には、F(ab')2断片のジスルフィド架橋を還元することによって作製されるFab断片が含まれる。他の態様において、抗体断片には、抗体分子をパパインおよび還元剤で処理することによって作製されるFab断片が含まれる。ある特定の態様において、抗体断片は組換え法によって生成される。一部の態様において、抗体断片にはFvまたは単鎖Fv(scFv)断片が含まれる。Fab、Fv、およびscFv抗体断片は大腸菌または他の宿主細胞の中で発現させ、大腸菌または他の宿主細胞から分泌させることができ、これにより、これらの断片を多量に産生することが可能になる。一部の態様において、抗体断片は、本明細書において議論される抗体ファージライブラリーから単離される。例えば、TIGITまたはその誘導体、断片、類似体、もしくはホモログに対して望ましい特異性を有するモノクローナルFab断片を迅速かつ効果的に同定するためにFab発現ライブラリーを構築するための方法を使用することができる。一部の態様において、抗体断片は直鎖抗体断片である。ある特定の態様において、抗体断片は単一特異性または二重特異性である。ある特定の態様において、TIGIT結合物質はscFvである。TIGITに特異的な単鎖抗体を生成するために様々な技法を使用することができる。
【０２０２】
一部の態様において、特に抗体断片の場合、抗体の血清半減期を変える(例えば、延ばす、または短くする)ように抗体は改変される。これは、例えば、サルベージ(salvage)受容体結合エピトープを前記抗体断片に組み込むことによって、前記抗体断片にある適切な領域を変異させることによって、またはペプチドタグにエピトープを組み込み、次いで、これを、(例えば、DNA合成もしくはペプチド合成によって)どちらかの端に、もしくは中央で前記抗体断片と融合させることによって達成することができる。
【０２０３】
ヘテロ結合体抗体も本発明の範囲内にある。ヘテロ結合体抗体は、共有結合した2種類の抗体で構成される。例えば、免疫細胞を不必要な細胞に標的化するために、このような抗体が提案されている。ヘテロ結合体抗体は、架橋剤が関与する方法を含む、合成タンパク質化学において公知の方法を用いてインビトロで調製できることも考えられている。例えば、ジスルフィド交換反応を用いて、またはチオエーテル結合を形成することによって免疫毒素を構築することができる。この目的に適した試薬の例には、イミノチオラートおよびメチル-4-メルカプトブチルイミダートが含まれる。
【０２０４】
本発明の意図に関して、改変された抗体は、前記抗体と標的(すなわち、TIGIT)を会合させる任意のタイプの可変領域を含んでもよいことが理解されるはずである。これに関して、可変領域は、体液性応答を開始し、望ましい抗原に対する免疫グロブリンを発生するように誘導することができる任意のタイプの哺乳動物を含んでもよく、体液性応答を開始し、望ましい抗原に対する免疫グロブリンを発生するように誘導することができる任意のタイプの哺乳動物に由来してもよい。従って、改変された抗体の可変領域は、例えば、ヒト、マウス、ラット、ウサギ、非ヒト霊長類(例えば、カニクイザル、マカクなど)、またはウサギに由来する可変領域でもよい。一部の態様において、改変された免疫グロブリンの可変領域と定常領域は両方ともヒトである。他の態様において、適合性抗体(通常、非ヒト供給源に由来する)の可変領域は、分子の結合特性を改善するように、または分子の免疫原性を弱めるように操作されてもよく、特別に合わせられてもよい。これに関して、本発明において有用な可変領域はヒト化されもよく、移入アミノ酸配列を含めることによって他の方法で変えられてもよい。
【０２０５】
ある特定の態様において、重鎖および軽鎖の両方にある可変ドメインは1つまたは複数のCDRの少なくとも部分的な交換によって変えられ、必要に応じて、部分的なフレームワーク領域交換ならびに配列の改変および/または変化によって変えられる。CDRは、フレームワーク領域が得られた抗体と同じクラス、さらにはサブクラスの抗体に由来してもよいが、CDRが異なるクラスの抗体から得られ場合があること、多くの場合は異なる種に由来する抗体から得られる場合があることが想定される。ある可変ドメインの抗原結合能力を別の可変ドメインに移すために、全CDRを、ドナー可変領域に由来する全CDRと交換することが必要でない場合がある。逆に、抗原結合部位の活性を維持するのに必要な残基を移すことだけ必要な場合がある。
【０２０６】
可変領域に対する変化にもかかわらず、当業者は、天然の定常領域または変化していない定常領域を含むほぼ同じ免疫原性の抗体と比較した場合に、本発明の改変された抗体が、高い腫瘍局在化または長い血清半減期などの望ましい生化学的特性を得るように定常領域ドメインのうちの1つまたは複数の少なくとも一部分が欠失されているかまたは他の方法で変えられている抗体(例えば、完全長抗体またはその免疫反応性断片)を含むことを理解する。一部の態様において、改変された抗体の定常領域はヒト定常領域を含む。本発明と適合する定常領域に対する改変は、1つまたは複数のドメインにおける1つまたは複数のアミノ酸の付加、欠失、または置換を含む。本明細書において開示された改変された抗体は、3つの重鎖定常ドメイン(CH1、CH2、もしくはCH3)のうちの1つもしくは複数、および/または軽鎖定常ドメイン(CL) に対する変化または改変を含んでもよい。一部の態様において、1つまたは複数のドメインは、改変された抗体の定常領域から部分的にまたは完全に欠失されている。一部の態様において、改変された抗体は、CH2ドメイン全体が取り除かれているドメイン欠失構築物または変種(ΔCH2構築物)を含む。一部の態様において、取り除かれる定常領域ドメインは、典型的には、存在しない定常領域によって付与される分子柔軟性の一部をもたらす短いアミノ酸スペーサー(例えば、10個のアミノ酸残基)と交換される。
【０２０７】
一部の態様において、改変された抗体は、CH3ドメインを抗体のヒンジ領域に直接融合させるように操作される。他の態様では、ヒンジ領域と、改変されたCH2ドメインおよび/またはCH3ドメインとの間にペプチドスペーサーが挿入される。例えば、CH2ドメインが欠失されており、5〜20アミノ酸スペーサーを用いて、残っているCH3ドメイン(改変または非改変)がヒンジ領域とつなげられている構築物が発現されてもよい。このようなスペーサーを付加することにより、定常ドメインの調節エレメントを遊離状態でアクセス可能に保つこと、またはヒンジ領域の可動性を保つことができる。しかしながら、アミノ酸スペーサーは場合によっては免疫原性を有することが判明しており、構築物に対して望ましくない免疫応答を誘発する場合があることに留意しなければならない。従って、ある特定の態様では、改変された抗体の望ましい生物学的特性が維持されるように、構築物に付加されるスペーサーは全て比較的、免疫原性がない。
【０２０８】
一部の態様において、改変された抗体には、定常ドメインの部分的欠失しかなくてもよいか、または数個のアミノ酸の置換、さらには1個のアミノ酸の置換しかなくてもよい。例えば、CH2ドメインの選択された領域中の一アミノ酸の変異はFc結合を大幅に減少させるのに十分である場合がある。一部の態様において、CH2ドメインの選択された領域中の一アミノ酸の変異は、Fc結合を大幅に減少させてがん細胞局在化および/または組織浸透力を高めるのに十分である場合がある。同様に、調整される特定のエフェクター機能(例えば、補体C1q結合)を制御する1つまたは複数の定常領域ドメインの一部を単に欠失させることが望ましい場合がある。定常領域のこのような部分的欠失は、この定常領域ドメインに関連する他の望ましい機能をそのままにしながら、前記抗体の選択された特性(血清半減期)を改善する可能性がある。さらに、上記で言及したとおり、開示された抗体の定常領域は、結果として生じる構築物のプロファイルを向上させる、1つまたは複数のアミノ酸の変異または置換によって改変されてもよい。この点で、改変された抗体の構成および免疫原性プロファイルを実質的に維持しながら、保存された結合部位(例えば、Fc結合)によって提供される活性を混乱させることが可能な場合がある。ある特定の態様では、改変された抗体は、エフェクター機能の減少もしくは増大などの望ましい特性を強化するような、または細胞毒もしくは炭水化物接着部位をもっと増やすような、定常領域への1個または複数個のアミノ酸の付加を含む。
【０２０９】
定常領域はいくつかのエフェクター機能を媒介することが当技術分野において公知である。例えば、補体のC1成分と、(抗原に結合した)IgG抗体またはIgM抗体のFc領域が結合すると補体系が活性化される。補体活性化は細胞病原体のオプソニン化および溶解において重要である。補体活性化はまた炎症応答も刺激し、自己免疫過敏にも関与する場合がある。さらに、抗体のFc領域は、Fc受容体(FcR)を発現する細胞に結合することができる。IgG(γ受容体)、IgE(ε受容体)、IgA(α受容体)、およびIgM(μ受容体)を含む異なるクラスの抗体に特異的な多くのFc受容体がある。抗体と、細胞表面上のFc受容体が結合すると、抗体コーティング粒子の貪食および破壊、免疫複合体のクリアランス、キラー細胞による抗体コーティング標的細胞の溶解(抗体依存性細胞傷害またはADCCと呼ばれる)、炎症メディエーターの放出、胎盤通過、ならびに免疫グロブリン産生の制御を含む多くの重要かつ多様な生物学的応答が誘発される。
【０２１０】
ある特定の態様において、改変された抗体はエフェクター機能の変化をもたらし、次に、これにより、投与された抗体の生物学的プロファイルが影響を受ける。例えば、一部の態様では、(点変異または他の手段によって)定常領域ドメインが欠失または不活性化されると、改変された循環抗体のFc受容体結合が低減する可能性がある。一部の態様では、(点変異または他の手段によって)定常領域ドメインが欠失または不活性化されると、改変された循環抗体のFc受容体結合が低減し、それによって、がん細胞局在化および/または腫瘍浸透力が増大する可能性がある。他の態様において、定常領域の改変は前記抗体の血清半減期を延ばす。他の態様において、定常領域の改変は前記抗体の血清半減期を短くする。一部の態様において、ジスルフィド結合またはオリゴ糖部分を無くすように定常領域は改変される。本発明による定常領域の改変は、周知の生化学的または分子的な操作法を用いて容易に行われる場合がある。
【０２１１】
ある特定の態様において、抗体であるTIGIT結合物質には1つまたは複数のエフェクター機能がない。例えば、一部の態様において、前記抗体にはADCC活性がない、および/または補体依存性細胞傷害(CDC)活性がない。ある特定の態様において、前記抗体はFc受容体および/または補体因子に結合しない。ある特定の態様において、前記抗体にはエフェクター機能がない。
【０２１２】
本発明は、本明細書に記載の組換え抗体、モノクローナル抗体、キメラ抗体、ヒト化抗体、およびヒト抗体、またはその抗体断片と実質的に相同な変種および同等物をさらに含む。これらの変種は、例えば、保存的置換変異、すなわち、類似するアミノ酸による1つまたは複数のアミノ酸の置換を含有してもよい。
【０２１３】
ある特定の態様において、本明細書に記載の抗体は単離されている。ある特定の態様において、本明細書に記載の抗体は実質的に純粋である。
【０２１４】
本発明のTIGIT結合物質(例えば、抗体)は、当技術分野において公知の任意の方法によって特異的結合についてアッセイすることができる。使用することができるイムノアッセイには、Biacore分析、FACS分析、免疫蛍光、免疫細胞化学、ウエスタンブロット分析、ラジオイムノアッセイ、ELISA、「サンドイッチ」イムノアッセイ、免疫沈降アッセイ、沈殿反応、ゲル拡散沈降反応、免疫拡散法アッセイ、凝集アッセイ、補体結合アッセイ、免疫放射線測定法、蛍光イムノアッセイ、およびプロテインAイムノアッセイなどの技法を用いた競合的アッセイ系および非競合的アッセイ系が含まれるが、これらに限定されない。このようなアッセイは日常的なものであり、当技術分野において周知である(例えば、Ausubel et al., Editors, 1994現在, Current Protocols in Molecular Biology, John Wiley & Sons, Inc., New York, NYを参照されたい。)。
【０２１５】
非限定的な例では、抗体とヒトTIGITとの特異的結合のスクリーニングはELISAを用いて判定される場合がある。ELISAは、抗原(例えば、TIGITまたはその断片)を調製する工程、96ウェルマイクロタイタープレートのウェルを抗原でコーティングする工程、検出可能な化合物、例えば、酵素基質(例えば、西洋ワサビペルオキシダーゼまたはアルカリホスファターゼ)に結合体化された試験抗体をウェルに添加する工程、ある期間にわたってインキュベートする工程、および抗原に結合した抗体の存在を検出する工程を含む。一部の態様において、試験抗体は、検出可能な化合物に結合体化されず、その代わりに、抗体を認識し、検出可能な化合物に結合体化された二次抗体(例えば、抗Fc抗体)がウェルに添加される。一部の態様において、ウェルを抗原でコーティングする代わりに、試験抗体がウェルにコーティングされてもよく、抗原(例えば、TIGIT)がウェルに添加された後に、検出可能な化合物に結合体化された二次抗体が添加される。当業者であれば、検出されるシグナルを増やすように改変することができるパラメータならびに当技術分野において公知のELISAの他のバリエーションについて精通しているであろう。
【０２１６】
別の非限定的な例では、抗体とTIGITとの特異的結合はFACSを用いて判定される場合がある。FACSスクリーニングアッセイは、抗原を完全長タンパク質(TIGIT)または融合タンパク質(例えば、TIGIT-CD4TM)として発現するcDNA構築物を作製する工程、トランスフェクションによって構築物を細胞に導入する工程、細胞表面に抗原を発現させる工程、試験抗体を、トランスフェクトされた細胞と混合する工程、ある期間にわたってインキュベートする工程を含んでもよい。試験抗体が結合した細胞は、検出可能な化合物と結合体化した二次抗体(例えば、PE結合抗Fc抗体)とフローサイトメーターを用いて同定することができる。当業者であれば、検出されるシグナルを最適化するように改変することができるパラメータならびにスクリーニング(例えば、遮断抗体のスクリーニング)を強化し得るFACSの他のバリエーションについて精通しているであろう。
【０２１７】
競合的結合アッセイによって、抗体または他の結合物質と抗原(例えば、TIGIT)との結合親和性および抗体-抗原相互作用のオフレートを求めることができる。競合的結合アッセイの一例は、漸増量の非標識抗原の存在下で、標識された抗原(例えば、3Hまたは125I-TIGIT)またはその断片もしくは変種を関心対象の抗体とインキュベーションした後に、標識抗原に結合した抗体を検出する工程を含むラジオイムノアッセイである。抗原に対する抗体の親和性および結合オフレートは、スキャッチャードプロット分析によるデータから求めることができる。一部の態様において、抗原(例えば、TIGIT)に結合する抗体または作用物質の結合オンレートおよびオフレートを求めるために、Biacore動態解析が用いられる。一部の態様において、Biacore動態解析は、抗原(例えば、TIGIT)がチップ表面に固定化されているチップからの抗体の結合および解離を解析する工程を含む。一部の態様において、Biacore動態解析は、抗体(例えば、抗TIGIT抗体)がチップ表面に固定化されているチップからの抗原(例えば、TIGIT)の結合および解離を解析する工程を含む。
【０２１８】
本明細書に記載の方法のある特定の態様において、本発明は、ヒトTIGITに特異的に結合するTIGIT結合物質(例えば、抗体)を提供し、TIGIT結合物質は、抗体OMP-313M32のCDR(表1を参照されたい)のうちの1つ、2つ、3つ、4つ、5つ、および/または6つを含む。抗TIGIT抗体OMP-313M32。一部の態様において、TIGIT結合物質は、OMP-313M32のCDRのうちの1つまたは複数;OMP-313M32のCDRのうちの2つまたはそれ以上;OMP-313M32のCDRのうちの3つまたはそれ以上;OMP-313M32のCDRのうちの4つまたはそれ以上;OMP-313M32のCDRのうちの5つまたはそれ以上;またはOMP-313M32のCDRのうちの6つ全てを含む。
【０２１９】
（表１）
2020503273.tif 000122
【０２２０】
本明細書に記載の方法のある特定の態様において、本発明は、ヒトTIGITに特異的に結合するTIGIT結合物質(例えば、抗体)を提供し、TIGIT結合物質は、TSDYAWN(SEQ ID NO:4)を含む重鎖CDR1、
2020503273.tif 000123
を含む重鎖CDR2、および
2020503273.tif 000124
を含む重鎖CDR3を含む。一部の態様において、TIGIT結合物質は、
2020503273.tif 000125
を含む軽鎖CDR1、SASYRYT(SEQ ID NO:8)を含む軽鎖CDR2、およびQQHYSTP(SEQ ID NO:9)を含む軽鎖CDR3をさらに含む。一部の態様において、TIGIT結合物質は、KASQDVSTAVA(SEQ ID NO:7)を含む軽鎖CDR1、SASYRYT(SEQ ID NO:8)を含む軽鎖CDR2、およびQQHYSTP(SEQ ID NO:9)を含む軽鎖CDR3を含む。一部の態様において、TIGIT結合物質は、(a)TSDYAWN(SEQ ID NO:4)を含む重鎖CDR1、
2020503273.tif 000126
を含む重鎖CDR2、および
2020503273.tif 000127
を含む重鎖CDR3;ならびに(b)
2020503273.tif 000128
を含む軽鎖CDR1、SASYRYT(SEQ ID NO:8)を含む軽鎖CDR2、およびQQHYSTP(SEQ ID NO:9)を含む軽鎖CDR3を含む。
【０２２１】
本明細書に記載の方法のある特定の態様において、本発明は、ヒトTIGITに特異的に結合するTIGIT結合物質(例えば、抗体)を提供し、TIGIT結合物質は、(a)TSDYAWN(SEQ ID NO:4)を含む重鎖CDR1、または1個、2個、3個、もしくは4個のアミノ酸置換を含むその変種;(b)
2020503273.tif 000129
を含む重鎖CDR2、または1個、2個、3個、もしくは4個のアミノ酸置換を含むその変種;(c)
2020503273.tif 000130
を含む重鎖CDR3、または1個、2個、3個、もしくは4個のアミノ酸置換を含むその変種;(d)
2020503273.tif 000131
を含む軽鎖CDR1、または1個、2個、3個、もしくは4個のアミノ酸置換を含むその変種;(e)SASYRYT(SEQ ID NO:8)を含む軽鎖CDR2、または1個、2個、3個、もしくは4個のアミノ酸置換を含むその変種;および(f)QQHYSTP(SEQ ID NO:9)を含む軽鎖CDR3、または1個、2個、3個、もしくは4個のアミノ酸置換を含むその変種
を含む。ある特定の態様において、アミノ酸置換は保存的置換である。一部の態様において、置換はヒト化プロセスの一環としてなされる。一部の態様において、置換は生殖系列ヒト化プロセスの一環としてなされる。一部の態様において、置換は結合最適化プロセスの一環としてなされる。
【０２２２】
本明細書に記載の方法のある特定の態様において、本発明は、ヒトTIGITに特異的に結合するTIGIT結合物質(例えば、抗体)を提供し、TIGIT結合物質は、SEQ ID NO:10と少なくとも約80％の配列同一性を有する重鎖可変領域および/またはSEQ ID NO:11と少なくとも80％の配列同一性を有する軽鎖可変領域を含む。ある特定の態様において、TIGIT結合物質は、SEQ ID NO:10と少なくとも約85％、少なくとも約90％、少なくとも約95％、少なくとも約97％、または少なくとも約99％の配列同一性を有する重鎖可変領域を含む。ある特定の態様において、TIGIT結合物質は、SEQ ID NO:11と少なくとも約85％、少なくとも約90％、少なくとも約95％、少なくとも約97％、または少なくとも約99％の配列同一性を有する軽鎖可変領域を含む。ある特定の態様において、TIGIT結合物質は、SEQ ID NO:10と少なくとも約95％の配列同一性を有する重鎖可変領域および/またはSEQ ID NO:11と少なくとも約95％の配列同一性を有する軽鎖可変領域を含む。ある特定の態様において、TIGIT結合物質は、SEQ ID NO:10を含む重鎖可変領域およびSEQ ID NO:11を含む軽鎖可変領域を含む。ある特定の態様において、TIGIT結合物質は、SEQ ID NO:10を含む重鎖可変領域および/またはSEQ ID NO:11を含む軽鎖可変領域を含む。ある特定の態様において、TIGIT結合物質は、SEQ ID NO:10から本質的になる重鎖可変領域およびSEQ ID NO:11から本質的になる軽鎖可変領域を含む。ある特定の態様において、TIGIT結合物質は、SEQ ID NO:10からなる重鎖可変領域およびSEQ ID NO:11からなる軽鎖可変領域を含む。
【０２２３】
本明細書に記載の方法のある特定の態様において、TIGIT結合物質は、SEQ ID NO:10を含む重鎖可変領域およびSEQ ID NO:11を含む軽鎖可変領域を含む。ある特定の態様において、TIGIT結合物質は、SEQ ID NO:10から本質的になる重鎖可変領域およびSEQ ID NO:11から本質的になる軽鎖可変領域を含む。ある特定の態様において、TIGIT結合物質は、SEQ ID NO:10からなる重鎖可変領域およびSEQ ID NO:11からなる軽鎖可変領域を含む。
【０２２４】
本明細書に記載の方法のある特定の態様において、本発明は、ヒトTIGITに特異的に結合するTIGIT結合物質(例えば、抗体)を提供し、TIGIT結合物質は、SEQ ID NO:13と少なくとも90％の配列同一性を有する重鎖および/またはSEQ ID NO:15と少なくとも90％の配列同一性を有する軽鎖を含む。一部の態様において、TIGIT結合物質は、SEQ ID NO:13と少なくとも95％の配列同一性を有する重鎖および/またはSEQ ID NO:15と少なくとも95％の配列同一性を有する軽鎖を含む。一部の態様において、TIGIT結合物質は、SEQ ID NO:13を含む重鎖および/またはSEQ ID NO:15を含む軽鎖を含む。一部の態様において、TIGIT結合物質は、SEQ ID NO:13から本質的になる重鎖およびSEQ ID NO:15から本質的になる軽鎖を含む。一部の態様において、TIGIT結合物質は、SEQ ID NO:13からなる重鎖およびSEQ ID NO:15からなる軽鎖を含む。
【０２２５】
本明細書に記載の方法のある特定の態様において、本発明は、ヒトTIGITに特異的に結合するTIGIT結合物質(例えば、抗体)を提供し、TIGIT結合物質は、SEQ ID NO:17と少なくとも90％の配列同一性を有する重鎖および/またはSEQ ID NO:15と少なくとも90％の配列同一性を有する軽鎖を含む。一部の態様において、TIGIT結合物質は、SEQ ID NO:17と少なくとも95％の配列同一性を有する重鎖および/またはSEQ ID NO:15と少なくとも95％の配列同一性を有する軽鎖を含む。一部の態様において、TIGIT結合物質は、SEQ ID NO:17を含む重鎖および/またはSEQ ID NO:15を含む軽鎖を含む。一部の態様において、TIGIT結合物質は、SEQ ID NO:17から本質的になる重鎖およびSEQ ID NO:15から本質的になる軽鎖を含む。一部の態様において、TIGIT結合物質は、SEQ ID NO:17からなる重鎖およびSEQ ID NO:15からなる軽鎖を含む。
【０２２６】
本明細書に記載の方法のある特定の態様において、TIGIT結合物質は、OMP-313M32抗体の重鎖可変領域および軽鎖可変領域を含む。一部の態様において、TIGIT結合物質は、OMP-313M32抗体に由来する重鎖可変領域および/または軽鎖可変領域が親和性成熟している、OMP-313M32抗体の可変領域を含む。ある特定の態様において、TIGIT結合物質は、(リーダー配列を有するかまたはリーダー配列を有さない)OMP-313M32抗体の重鎖および軽鎖を含む。ある特定の態様において、TIGIT結合物質はOMP-313M32抗体である。ある特定の態様において、TIGIT結合物質は、IgG1重鎖、IgG2重鎖、またはIgG4重鎖の一部としてOMP-313M32抗体の重鎖可変領域を含む。ある特定の態様において、TIGIT結合物質は、ヒトIgG1重鎖の一部としてOMP-313M32抗体の重鎖可変領域を含む。ある特定の態様において、TIGIT結合物質は、ヒトIgG2重鎖の一部としてOMP-313M32抗体の重鎖可変領域を含む。ある特定の態様において、TIGIT結合物質は、ヒトIgG4重鎖の一部としてOMP-313M32抗体の重鎖可変領域を含む。ある特定の態様において、ヒトIgG4重鎖の一部としてOMP-313M32抗体の重鎖可変領域を含むTIGIT結合物質はOMP-313M33抗体と呼ばれる。
【０２２７】
本明細書に記載の方法のある特定の態様において、TIGIT結合物質は抗体313M32を含むか、抗体OMP-313M32から本質的になるか、または抗体OMP-313M32からなる。ある特定の態様において、TIGIT結合物質は抗体OMP-313M32の変種を含むか、抗体OMP-313M32の変種から本質的になるか、または抗体OMP-313M32の変種からなる。ある特定の態様において、TIGIT結合物質は抗体OMP-313M33を含むか、抗体OMP-313M33から本質的になるか、または抗体OMP-313M33からなる。
【０２２８】
本明細書に記載の方法の一部の態様において、TIGIT結合物質は、ブダペスト条約の規定に基づいて2015年8月11日にアメリカン タイプ カルチャー コレクション(ATCC), 10801 University Boulevard, Manassas, VA, USAに寄託され、PTA-122346と指定されたプラスミドによってコードされる重鎖可変領域を含む。一部の態様において、TIGIT結合物質は、ブダペスト条約の規定に基づいて2015年8月11日にATCC, 10801 University Boulevard, Manassas, VA, USAに寄託され、PTA-122347と指定されたプラスミドによってコードされる軽鎖可変領域を含む。一部の態様において、TIGIT結合物質は、ATCCに寄託され、PTA-122346と指定されたプラスミドによってコードされる重鎖可変領域と、ATCCに寄託され、PTA-122347と指定されたプラスミドによってコードされる軽鎖可変領域とを含む。一部の態様において、TIGIT結合物質は、ATCCに寄託され、PTA-122346と指定されたプラスミドによってコードされる可変領域を含む重鎖を含む。一部の態様において、TIGIT結合物質は、ATCCに寄託され、PTA-122347と指定されたプラスミドによってコードされる軽鎖を含む。一部の態様において、TIGIT結合物質は、ATCCに寄託され、PTA-122346と指定されたプラスミドによってコードされる可変領域を含む重鎖、およびATCCに寄託され、PTA-122347と指定されたプラスミドによってコードされる軽鎖を含む。
【０２２９】
本明細書に記載の方法の一部の態様において、TIGIT結合物質は、ホモ二量体作用物質/分子およびヘテロ二量体作用物質/分子も包含する。一部の態様において、ホモ二量体作用物質はポリペプチドである。一部の態様において、ヘテロ二量体分子はポリペプチドである。一般的に、ホモ二量体分子は、2つの同一のポリペプチドを含む。一般的に、ヘテロ二量体分子は、少なくとも2つの異なるポリペプチドを含む。一部の態様において、ヘテロ二量体分子、例えば、二重特異性作用物質は、少なくとも2種類の標的に結合することができる。標的は、例えば、単一細胞の表面にある2つの異なるタンパク質でもよく、2つの別々の細胞の表面にある2つの異なるタンパク質でもよい。ホモ二量体作用物質、ヘテロ二量体作用物質、および/または二重特異性作用物質の構造について述べるために、本明細書において「アーム」という用語が用いられることがある。一部の態様において、それぞれのアームは少なくとも1つのポリペプチドを含む。一般的に、ヘテロ二量体分子のそれぞれのアームは、異なる機能、例えば、2つの異なる標的に結合する機能を有する。一部の態様において、あるアームは、抗体に由来する抗原結合部位を含んでもよい。一部の態様において、あるアームは受容体の結合部分を含んでもよい。一部の態様において、あるアームはリガンドを含んでもよい。一部の態様において、あるアームはリガンドの結合領域を含んでもよい。一部の態様において、ホモ二量体作用物質は2つの同一のアームを含む。一部の態様において、ヘテロ二量体作用物質は2つの異なるアームを含む。一部の態様において、二重特異性作用物質は2つの異なるアームを含む。
【０２３０】
本明細書に記載の方法の一部の態様において、本発明は、ホモ二量体分子であるTIGIT結合物質を提供する。一部の態様において、ホモ二量体分子は、2つの同一のポリペプチドを含む。一部の態様において、本発明は、ヘテロ二量体分子であるTIGIT結合物質を提供する。一部の態様において、ヘテロ二量体分子は、少なくとも2つの異なるポリペプチドを含む。一部の態様において、本発明は、ヘテロ二量体作用物質であるTIGIT結合物質を提供する。一部の態様において、本発明は、二重特異性作用物質であるTIGIT結合物質を提供する。ある特定の態様において、TIGIT結合物質は二重特異性抗体である。
【０２３１】
本明細書に記載の方法の態様の一部において、本発明は、TIGITに特異的に結合する抗体を含むが、これに限定されないポリペプチドを提供する。一部の態様において、ポリペプチドはヒトTIGITに結合する。一部の態様において、ポリペプチドはマウスTIGITに結合する。一部の態様において、ポリペプチドはマウスTIGITおよびヒトTIGITに結合する。一部の態様において、ポリペプチドはヒトTIGITに結合し、マウスTIGITに結合しない。一部の態様において、ポリペプチドはヒトTIGITに結合し、ラットTIGITに結合しない。一部の態様において、ポリペプチドはヒトTIGITに結合し、ウサギTIGITに結合しない。一部の態様において、ポリペプチドはヒトTIGITに結合し、マーモセットTIGITに結合しない。一部の態様において、ポリペプチドはヒトTIGITに結合し、イヌTIGITに結合しない。一部の態様において、ポリペプチドはヒトTIGITに結合し、ブタTIGITに結合しない。一部の態様において、ポリペプチドはヒトTIGITに結合し、カニクイザルTIGITに結合しない。一部の態様において、ポリペプチドはヒトTIGITに結合し、アカゲザルTIGITに結合しない。
【０２３２】
本明細書に記載の方法のある特定の態様において、ポリペプチドは、抗体OMP-313M32のCDR(本明細書の表1を参照されたい)のうちの1つ、2つ、3つ、4つ、5つ、および/または6つを含む。一部の態様において、ポリペプチドは、1つのCDRにつき4個まで(すなわち、0個、1個、2個、3個、または4個)のアミノ酸置換を有するCDRを含む。ある特定の態様において、重鎖CDRは重鎖可変領域内に含まれる。ある特定の態様において、軽鎖CDRは軽鎖可変領域内に含まれる。
【０２３３】
本明細書に記載の方法の一部の態様において、本発明は、ヒトTIGITに特異的に結合するポリペプチドを提供し、ポリペプチドは、SEQ ID NO:10と少なくとも約80％の配列同一性を有するアミノ酸配列および/またはSEQ ID NO:11と少なくとも約80％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。ある特定の態様において、前記ポリペプチドは、SEQ ID NO:10と少なくとも約85％、少なくとも約90％、少なくとも約95％、少なくとも約97％、または少なくとも約99％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。ある特定の態様において、前記ポリペプチドは、SEQ ID NO:64またはSEQ ID NO:11と少なくとも約85％、少なくとも約90％、少なくとも約95％、少なくとも約97％、または少なくとも約99％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。ある特定の態様において、前記ポリペプチドは、SEQ ID NO:10と少なくとも約95％の配列同一性を有するアミノ酸配列および/またはSEQ ID NO:11と少なくとも約95％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。ある特定の態様において、前記ポリペプチドは、SEQ ID NO:10を含むアミノ酸配列および/またはSEQ ID NO:11を含むアミノ酸配列を含む。
【０２３４】
本明細書に記載の方法の一部の態様において、ポリペプチドは、SEQ ID NO:10、SEQ ID NO:11、SEQ ID NO:12、SEQ ID NO:13、SEQ ID NO:14、SEQ ID NO:15、SEQ ID NO:16、およびSEQ ID NO:17からなる群より選択される1つまたは複数のアミノ酸配列を含む。本明細書において定義されるように、ポリペプチドは単鎖として生じてもよく、2本またはそれ以上の会合した鎖として生じてもよい。ある特定の態様において、ポリペプチドは、SEQ ID NO:10を含むアミノ酸配列およびSEQ ID NO:11を含むアミノ酸配列を含む。ある特定の態様において、ポリペプチドは、SEQ ID NO:12を含むアミノ酸配列およびSEQ ID NO:14を含むアミノ酸配列を含む。ある特定の態様において、前記ポリペプチドは、SEQ ID NO:13を含むアミノ酸配列およびSEQ ID NO:15を含むアミノ酸配列を含む。ある特定の態様において、前記ポリペプチドは、SEQ ID NO:16を含むアミノ酸配列およびSEQ ID NO:14を含むアミノ酸配列を含む。ある特定の態様において、前記ポリペプチドは、SEQ ID NO:17を含むアミノ酸配列およびSEQ ID NO:15を含むアミノ酸配列を含む。
【０２３５】
本明細書に記載の方法のある特定の態様において、ポリペプチドは、SEQ ID NO:10からなるアミノ酸配列およびSEQ ID NO:11からなるアミノ酸配列を含む。ある特定の態様において、ポリペプチドは、SEQ ID NO:12からなるアミノ酸配列およびSEQ ID NO:14からなるアミノ酸配列を含む。ある特定の態様において、ポリペプチドは、SEQ ID NO:13からなるアミノ酸配列およびSEQ ID NO:15からなるアミノ酸配列を含む。ある特定の態様において、ポリペプチドは、SEQ ID NO:16からなるアミノ酸配列およびSEQ ID NO:14からなるアミノ酸配列を含む。ある特定の態様において、ポリペプチドは、SEQ ID NO:17からなるアミノ酸配列およびSEQ ID NO:15からなるアミノ酸配列を含む。
【０２３６】
抗体を含む多くのタンパク質は、様々な場所へのタンパク質の輸送を方向付けるシグナル配列を含有する。一般的に、シグナル配列(シグナルペプチドまたはリーダー配列とも呼ばれる)は新生ポリペプチドのN末端に位置する。シグナル配列はポリペプチドを小胞体に標的化し、タンパク質は目的地に、例えば、細胞小器官の内部空間に、内膜に、細胞の外膜に仕分けされるか、または分泌を介して細胞外部に仕分けされる。タンパク質が小胞体に輸送された後に、ほとんどのシグナル配列はシグナルペプチダーゼによってタンパク質から切断される。ポリペプチドからのシグナル配列の切断は、通常、アミノ酸配列中の特異的部位で起こり、シグナル配列内のアミノ酸残基に依存する。通常、一カ所の特異的切断部位が存在するが、複数の切断部位がシグナルペプチダーゼによって認識されてかつ/または使用されて、ポリペプチドの均質でないN末端が生じる場合がある。例えば、シグナル配列内にある異なる切断部位を用いると、異なるN末端アミノ酸を有する発現ポリペプチドを生じることができる。従って、一部の態様において、本明細書に記載のポリペプチドは、異なるN末端を有するポリペプチドの混合物を含んでもよい。一部の態様において、N末端の長さは1個、2個、3個、4個、または5個のアミノ酸分だけ異なる。一部の態様において、前記ポリペプチドは実質的に均質である、すなわち、前記ポリペプチドは同じN末端を有する。一部の態様において、前記ポリペプチドのシグナル配列は、「天然」または「親」シグナル配列と比較して1つまたは複数の(例えば、1個、2個、3個、4個、5個、6個、7個、8個、9個、10個などの)アミノ酸置換および/または欠失を含む。一部の態様において、前記ポリペプチドのシグナル配列は、一カ所の切断部位が優勢になり、それによって、あるN末端を有する実質的に均質なポリペプチドが生じるのを可能にするアミノ酸置換および/または欠失を含む。一部の態様において、ポリペプチドのシグナル配列は、ポリペプチドの発現レベル、例えば、発現の増大または発現の減少に影響を与える。
【０２３７】
本明細書に記載の方法のある特定の態様において、抗体または他の結合物質は、ヒトTIGITとの特異的結合において、本明細書に記載のTIGIT結合物質と競合する。一部の態様において、抗体または他の結合物質は、 (a)TSDYAWN(SEQ ID NO:4)を含む重鎖CDR1、
2020503273.tif 000132
を含む重鎖CDR2、および
2020503273.tif 000133
を含む重鎖CDR3、ならびに(b)
2020503273.tif 000134
を含む軽鎖CDR1、SASYRYT(SEQ ID NO:8)を含む軽鎖CDR2、およびQQHYSTP(SEQ ID NO:9)を含む軽鎖CDR3を含む、TIGIT結合物質と、TIGITとの特異的結合について競合する。
【０２３８】
本明細書に記載の方法のある特定の態様において、抗体または他の結合物質は、ヒトTIGITとの特異的結合において、SEQ ID NO:10を含む重鎖可変領域およびSEQ ID NO:11を含む軽鎖可変領域を含むTIGIT結合物質と競合する。ある特定の態様において、抗体または他の結合物質は、ヒトTIGITとの特異的結合において、SEQ ID NO:13を含む重鎖およびSEQ ID NO:15を含む軽鎖を含むTIGIT結合物質と競合する。ある特定の態様において、抗体または他の結合物質は、ヒトTIGITとの特異的結合において、SEQ ID NO:17を含む重鎖およびSEQ ID NO:15を含む軽鎖を含むTIGIT結合物質と競合する。
【０２３９】
本明細書に記載の方法のある特定の態様において、抗体または他の結合物質は、ヒトTIGITとの特異的結合において抗体OMP-313M32と競合する。一部の態様において、抗体または他の結合物質は、ヒトTIGITとの特異的結合において、抗体OMP-313M32である参照抗体と競合する。一部の態様において、抗体または他の結合物質は、ヒトTIGITとの特異的結合において、抗体313M33である参照抗体と競合する。
【０２４０】
本明細書に記載の方法のある特定の態様において、抗体または他の結合物質は、TIGITにおける、本明細書に記載のTIGIT結合物質と同じエピトープまたは本質的に同じエピトープに結合する。ある特定の態様において、抗体または他の結合物質は、ヒトTIGITにおける、抗体OMP-313M32と同じエピトープまたは本質的に同じエピトープに結合する。ある特定の態様において、抗体または他の結合物質は、ヒトTIGITにおける、抗体313M33と同じエピトープまたは本質的に同じエピトープに結合する。
【０２４１】
本明細書に記載の方法の別の態様において、抗体または他の結合物質は、本明細書に記載のTIGIT結合物質が結合する、TIGITにおけるエピトープと重複する、TIGITにおけるエピトープに結合する。別の態様において、前記抗体または他の結合物質は、抗体OMP-313M32が結合する、ヒトTIGITにおけるエピトープと重複する、TIGITにおけるエピトープに結合する。別の態様において、前記抗体または他の結合物質は、抗体313M33が結合する、ヒトTIGITにおけるエピトープと重複する、TIGITにおけるエピトープに結合する。
【０２４２】
本明細書に記載の方法の一部の態様において、抗体または他の結合物質は、SEQ ID NO:27の中のアミノ酸を含むエピトープとの結合において、本明細書に記載のTIGIT結合物質と競合する。一部の態様において、抗体または他の結合物質は、SEQ ID NO:28の中のアミノ酸を含むエピトープとの結合において、本明細書に記載のTIGIT結合物質と競合する。一部の態様において、抗体または他の結合物質は、SEQ ID NO:27およびSEQ ID NO:28の中のアミノ酸を含むエピトープとの結合において、本明細書に記載のTIGIT結合物質と競合する。一部の態様において、抗体または他の結合物質は、SEQ ID NO:1のアミノ酸Q62およびI109を含むエピトープとの結合において、本明細書に記載のTIGIT結合物質と競合する。一部の態様において、抗体または他の結合物質は、SEQ ID NO:1のアミノ酸Q62およびT119を含むエピトープとの結合において、本明細書に記載のTIGIT結合物質と競合する。一部の態様において、抗体または他の結合物質は、SEQ ID NO:1のアミノ酸Q64およびI109を含むエピトープとの結合において、本明細書に記載のTIGIT結合物質と競合する。一部の態様において、抗体または他の結合物質は、SEQ ID NO:1のアミノ酸Q64およびT119を含むエピトープとの結合において、本明細書に記載のTIGIT結合物質と競合する。一部の態様において、抗体または他の結合物質は、SEQ ID NO:1のアミノ酸Q62、Q64、およびI109を含むエピトープとの結合において、本明細書に記載のTIGIT結合物質と競合する。一部の態様において、抗体または他の結合物質は、SEQ ID NO:1のアミノ酸Q62、Q64、およびT119を含むエピトープとの結合において、本明細書に記載のTIGIT結合物質と競合する。一部の態様において、抗体または他の結合物質は、SEQ ID NO:1のアミノ酸Q62、I109、およびT119を含むエピトープとの結合において、本明細書に記載のTIGIT結合物質と競合する。一部の態様において、抗体または他の結合物質は、SEQ ID NO:1のアミノ酸Q64、I109、およびT119を含むエピトープとの結合において、本明細書に記載のTIGIT結合物質と競合する。一部の態様において、抗体または他の結合物質は、SEQ ID NO:1のアミノ酸Q62、Q64、I109、およびT119を含むエピトープとの結合において、本明細書に記載のTIGIT結合物質と競合する。一部の態様において、抗体または他の結合物質は、SEQ ID NO:1のN58、E60、Q62、Q64、L65、F107、I109、H111、T117、T119、G120、およびR121からなる群より選択される少なくとも1つのアミノ酸を含むエピトープとの結合において、本明細書に記載のTIGIT結合物質と競合する。
【０２４３】
本明細書に記載の方法のある特定の態様において、TIGIT結合物質(例えば、抗体)はTIGITに結合し、TIGIT活性を調整する。一部の態様において、TIGIT結合物質はTIGITアンタゴニストであり、TIGIT活性を減少させる。ある特定の態様において、TIGIT結合物質はTIGIT活性を少なくとも約10％、少なくとも約20％、少なくとも約30％、少なくとも約50％、少なくとも約75％、少なくとも約90％、または約100％阻害する。ある特定の態様において、TIGIT活性を阻害するTIGIT結合物質は抗体OMP-313M32である。ある特定の態様において、TIGIT活性を阻害するTIGIT結合物質は抗体OMP-313M32である。ある特定の態様において、TIGIT活性を阻害するTIGIT結合物質は抗体OMP-313M33である。
【０２４４】
本明細書に記載の方法の一部の態様において、TIGIT結合物質はTIGITに結合し、TIGITシグナル伝達を阻害または低減する。ある特定の態様において、TIGIT結合物質(例えば、抗体)はTIGITシグナル伝達を少なくとも約10％、少なくとも約20％、少なくとも約30％、少なくとも約50％、少なくとも約75％、少なくとも約90％、または約100％阻害する。一部の態様において、TIGIT結合物質はマウスTIGITシグナル伝達を阻害する。一部の態様において、TIGIT結合物質はヒトTIGITシグナル伝達を阻害する。ある特定の態様において、TIGITシグナル伝達を阻害するTIGIT結合物質は抗体OMP-313M32である。ある特定の態様において、TIGITシグナル伝達を阻害するTIGIT結合物質は抗体OMP-313M33である。
【０２４５】
TIGITは、TIGITのカウンターレセプターのPVRと相互作用した後に、TIGITの細胞質テールがリン酸化される。TIGITリン酸化は、他の既知のシグナル伝達経路に影響を及ぼす下流事象を含むカスケードの始まりである。従って、TIGITリン酸化を評価すると、TIGIT活性およびTIGITシグナル伝達についての情報を得ることができる。
【０２４６】
リン酸化アッセイは当業者に公知であり、タンパク質活性化および/または経路活性化をモニタリングするために一般的に用いられる。このアッセイは、標的タンパク質および/または標的経路の活性化に対する様々な処置の効果をモニタリングするのに用いられる場合がある。例えば、インビトロリン酸化アッセイを用いて、PVRによって誘導されるTIGIT活性化に対するTIGITアンタゴニストの効果を評価することができる。
【０２４７】
本明細書に記載の方法のある特定の態様において、TIGIT結合物質(例えば、抗体)は、TIGITと受容体との結合を阻害する。ある特定の態様において、TIGIT結合物質は、TIGITとPVRとの結合を阻害する。一部の態様において、TIGIT結合物質は、TIGITとPVR-L2、PVR-L3、および/またはPVR-L4との結合を阻害する。ある特定の態様において、TIGIT結合物質とPVRとの結合の阻害は、少なくとも約10％、少なくとも約25％、少なくとも約50％、少なくとも約75％、少なくとも約90％、または少なくとも約95％である。ある特定の態様において、TIGIT結合物質とPVR-L2、PVR-L3、および/またはPVR-L4との結合の阻害は、少なくとも約10％、少なくとも約25％、少なくとも約50％、少なくとも約75％、少なくとも約90％、または少なくとも約95％である。ある特定の態様において、TIGITとPVRとの結合を阻害するTIGIT結合物質は抗体OMP-313M32である。ある特定の態様において、TIGITとPVRとの結合を阻害するTIGIT結合物質は抗体OMP-313M33である。ある特定の態様において、TIGITとPVR-L2、PVR-L3、および/またはPVR-L4との結合を阻害するTIGIT結合物質は抗体OMP-313M32である。ある特定の態様において、TIGITとPVR-L2、PVR-L3、および/またはPVR-L4との結合を阻害するTIGIT結合物質は抗体OMP-313M33である。
【０２４８】
本明細書に記載の方法のある特定の態様において、TIGIT結合物質(例えば、抗体)は、TIGITと受容体との結合をブロックする。ある特定の態様において、TIGIT結合物質は、TIGITとPVRとの結合をブロックする。ある特定の態様において、TIGIT結合物質とPVRとの結合のブロッキングは、少なくとも約10％、少なくとも約25％、少なくとも約50％、少なくとも約75％、少なくとも約90％、または少なくとも約95％である。一部の態様において、TIGIT結合物質は、TIGITとPVRL2、PVRL3、および/またはPVRL4との結合をブロックする。ある特定の態様において、TIGIT結合物質とPVRL2、PVRL3、および/またはPVRL4との結合のブロッキングは、少なくとも約10％、少なくとも約25％、少なくとも約50％、少なくとも約75％、少なくとも約90％、または少なくとも約95％である。ある特定の態様において、TIGITとPVRとの結合をブロックするTIGIT結合物質は抗体OMP-313M32である。ある特定の態様において、TIGITとPVRとの結合をブロックするTIGIT結合物質は抗体OMP-313M33である。ある特定の態様において、TIGITとPVRL2、PVRL3、および/またはPVRL4との結合をブロックするTIGIT結合物質は抗体OMP-313M32である。ある特定の態様において、TIGITとPVRL2、PVRL3、および/またはPVRL4との結合をブロックするTIGIT結合物質は抗体OMP-313M33である。
【０２４９】
結合アッセイは当業者に公知であり、本明細書において説明される。結合アッセイは、標的タンパク質と、このタンパク質の結合パートナー(例えば、受容体またはリガンド)との相互作用に対する試験作用物質の効果をモニタリングするために用いられてもよい。例えば、インビトロ結合アッセイを用いて、TIGITアンタゴニストがTIGITとPVRとの相互作用をブロックするかどうか評価することができる。
【０２５０】
ある特定の態様において、本明細書に記載のTIGIT結合物質は、以下の作用:腫瘍細胞の増殖を阻害すること、腫瘍成長を阻害すること、腫瘍の腫瘍形成能を低減すること、腫瘍内のがん幹細胞の頻度を低減することによって腫瘍の腫瘍形成能を低減すること、腫瘍細胞の細胞死を誘発すること、免疫応答を増強もしくはブーストすること、抗腫瘍応答を増強もしくはブーストすること、免疫細胞の細胞溶解活性を増大させること、腫瘍細胞の死滅を増大させること、免疫細胞による腫瘍細胞の死滅を増大させること、腫瘍内の細胞が分化するように誘導すること、腫瘍形成細胞を非腫瘍形成状態に分化させること、腫瘍細胞において分化マーカーの発現を誘導すること、腫瘍細胞の転移を阻止すること、腫瘍細胞の生存を減少させること、細胞接触依存性増殖の阻害を増大させること、腫瘍細胞アポトーシスを増大させること、上皮間葉転換(EMT)を低減すること、または腫瘍細胞の生存を減少させることのうちの1つまたは複数を有する。一部の態様において、前記物質は、以下の作用のうちの1つまたは複数を有する:ウイルス感染を阻害すること、慢性ウイルス感染を阻害すること、ウイルス量を低減すること、ウイルス感染細胞の細胞死を誘発すること、またはウイルス感染細胞の数もしくはパーセントを低減すること。
【０２５１】
本明細書に記載の方法のある特定の態様において、TIGIT結合物質は腫瘍成長を阻害する。ある特定の態様において、TIGIT結合物質は、インビボで(例えば、マウスモデルにおいて、および/またはがんを有するヒトにおいて)腫瘍成長を阻害する。ある特定の態様において、未処置腫瘍と比較して、腫瘍成長は少なくとも約2倍、約3倍、約5倍、約10倍、約50倍、約100倍、または約1000倍阻害される。
【０２５２】
本明細書に記載の方法のある特定の態様において、作用物質(例えば、ポリペプチドおよび/または抗体)はTIGITに結合し、免疫応答を調整する。一部の態様において、TIGIT結合物質は、免疫応答を活性化しかつ/または増大させる。一部の態様において、TIGIT結合物質は細胞性免疫を増大させるか、促進するか、または増強する。一部の態様において、TIGIT結合物質は自然細胞性免疫を増大させるか、促進するか、または増強する。一部の態様において、TIGIT結合物質は適応細胞性免疫を増大させるか、促進するか、または増強する。一部の態様において、TIGIT結合物質はT細胞活性を増大させるか、促進するか、または増強する。一部の態様において、TIGIT結合物質は細胞溶解性T細胞(CTL)活性を増大させるか、促進するか、または増強する。一部の態様において、TIGIT結合物質はNK細胞活性を増大させるか、促進するか、または増強する。一部の態様において、TIGIT結合物質はリンホカイン活性化キラー細胞(LAK)活性を増大させるか、促進するか、または増強する。一部の態様において、TIGIT結合物質は腫瘍浸潤リンパ球(TIL)活性を増大させるか、促進するか、または増強する。一部の態様において、TIGIT結合物質はTreg細胞活性を阻害するか、または減少させる。一部の態様において、TIGIT結合物質はMDSC活性を阻害するか、または減少させる。一部の態様において、TIGIT結合物質は腫瘍細胞死滅を増大させるか、促進するか、または増強する。一部の態様において、TIGIT結合物質は腫瘍成長の阻害を増大させるか、促進するか、または増強する。
【０２５３】
本明細書に記載の方法のある特定の態様において、TIGIT結合作用物質は、ヒトTIGITのアンタゴニストである。一部の態様において、前記作用物質はTIGITのアンタゴニストであり、免疫応答を活性化しかつ/または増大させる。一部の態様において、前記作用物質はTIGITのアンタゴニストであり、NK細胞の活性を活性化しかつ/または増大させる。ある特定の態様において、前記作用物質は、前記活性を少なくとも約10％、少なくとも約20％、少なくとも約30％、少なくとも約50％、少なくとも約75％、少なくとも約90％、または約100％増大させる。一部の態様において、前記作用物質は、TIGITのアンタゴニストであり、T細胞活性(例えば、T細胞細胞溶解活性)を活性化しかつ/または増大させる。ある特定の態様において、前記作用物質は前記活性を少なくとも約10％、少なくとも約20％、少なくとも約30％、少なくとも約50％、少なくとも約75％、少なくとも約90％、または約100％増大させる。一部の態様において、前記作用物質はTIGITのアンタゴニストであり、Th1型免疫応答を誘導および/または増強する。一般的に、Th1型免疫応答は、インターフェロン-γ(IFN-γ)、IL-2、および腫瘍壊死因子-β(TNF-β)の産生を含む。比較して、Th2型免疫応答は、一般的に、IL-4、IL-5、IL-6、IL-9、IL-10、およびIL-13の産生を含む。一部の態様において、前記作用物質はTIGITのアンタゴニストであり、サイトカインもしくはリンホカインの産生を誘導しかつ/または増大させる。一部の態様において、サイトカインまたはリンホカインの産生の誘導および/または増大は間接効果でもよい。
【０２５４】
本明細書に記載の方法のある特定の態様において、TIGIT結合物質はNK細胞の活性化を増大させる。ある特定の態様において、TIGIT結合物質はT細胞の活性化を増大させる。ある特定の態様において、TIGIT結合物質によってNK細胞および/またはT細胞が活性化されると、NK細胞および/またはT細胞の活性化のレベルが少なくとも約10％、少なくとも約25％、少なくとも約50％、少なくとも約75％、少なくとも約90％、または少なくとも約95％増大する。ある特定の態様において、NK細胞の活性化を増大させるTIGIT結合物質は、抗体OMP-313M32である。ある特定の態様において、NK細胞の活性化を増大させるTIGIT結合物質は抗体OMP-313M33である。
【０２５５】
本明細書に記載の方法のある特定の態様において、TIGIT結合物質(例えば、抗体)は調節性T細胞(Treg)活性のアンタゴニストである。ある特定の態様において、TIGIT結合物質はTreg活性を阻害するか、または減少させる。ある特定の態様において、TIGIT結合物質によってTreg活性が阻害されると、Treg細胞の抑制活性が少なくとも約10％、少なくとも約25％、少なくとも約50％、少なくとも約75％、少なくとも約90％、少なくとも約95％、または約100％阻害される。ある特定の態様において、Treg活性を阻害するTIGIT結合物質は、抗体OMP-313M32である。ある特定の態様において、Treg活性を阻害するTIGIT結合物質は抗体OMP-313M33である。
【０２５６】
本明細書に記載の方法のある特定の態様において、TIGIT結合物質(例えば、抗体)は骨髄由来抑制細胞(MDSC)のアンタゴニストである。ある特定の態様において、TIGIT結合物質はMDSC活性を阻害する。ある特定の態様において、TIGIT結合物質はMDSC活性を少なくとも約10％、少なくとも約20％、少なくとも約30％、少なくとも約50％、少なくとも約75％、少なくとも約90％、または約100％阻害する。ある特定の態様において、MDSC活性を阻害するTIGIT結合物質は抗体OMP-313M32である。ある特定の態様において、MDSC活性を阻害するTIGIT結合物質は抗体OMP-313M33である。
【０２５７】
本明細書に記載の方法のある特定の態様において、TIGIT結合物質(例えば、抗体)はナチュラルキラー(NK)細胞活性を増大させる。ある特定の態様において、TIGIT結合物質はNK細胞活性を少なくとも約10％、少なくとも約20％、少なくとも約30％、少なくとも約50％、少なくとも約75％、少なくとも約90％、または約100％増大させる。ある特定の態様において、NK細胞活性を増大させるTIGIT結合物質は抗体OMP-313M32である。ある特定の態様において、NK細胞活性を増大させるTIGIT結合物質は抗体OMP-313M33である。
【０２５８】
本明細書に記載の方法のある特定の態様において、TIGIT結合物質(例えば、抗体)は腫瘍浸潤リンパ球(TIL)活性を増大させる。ある特定の態様において、TIGIT結合物質はTIL活性を少なくとも約10％、少なくとも約20％、少なくとも約30％、少なくとも約50％、少なくとも約75％、少なくとも約90％、または約100％増大させる。ある特定の態様において、TIL細胞活性を増大させるTIGIT結合物質は抗体OMP-313M32である。ある特定の態様において、TIL細胞活性を増大させるTIGIT結合物質は抗体OMP-313M33である。
【０２５９】
本明細書に記載の方法のある特定の態様において、TIGIT結合物質(例えば、抗体)はリンホカイン活性化キラー細胞(LAK)活性を増大させるか、または増強する。ある特定の態様において、TIGIT結合物質はLAK活性を少なくとも約10％、少なくとも約20％、少なくとも約30％、少なくとも約50％、少なくとも約75％、少なくとも約90％、または約100％増大させる。ある特定の態様において、LAK細胞活性を増大させるTIGIT結合物質は抗体OMP-313M32である。ある特定の態様において、LAK細胞活性を増大させるTIGIT結合物質は抗体OMP-313M33である。
【０２６０】
TIGIT結合物質(または候補結合物質)が免疫応答を調整するかどうか判定するためのインビボアッセイおよびインビトロアッセイは当技術分野において公知であるか、または開発中である。一部の態様では、T細胞活性化を検出する機能アッセイを使用することができる。一部の態様では、T細胞増殖を検出する機能アッセイを使用することができる。一部の態様では、NK活性を検出する機能アッセイを使用することができる。一部の態様では、CTL活性を検出する機能アッセイを使用することができる。一部の態様では、Treg活性を検出する機能アッセイを使用することができる。一部の態様では、MDSC活性を検出する機能アッセイを使用することができる。一部の態様では、サイトカインもしくはリンホカインの産生、またはサイトカインもしくはリンホカインを産生する細胞を検出する機能アッセイを使用することができる。一部の態様では、抗原特異的T細胞の頻度を測定するためにエリスポットアッセイが用いられる。一部の態様では、エリスポットアッセイはサイトカイン放出/産生を測定するために用いられ、かつ/またはサイトカインを産生する細胞の数を測定するために用いられる。一部の態様では、サイトカインアッセイはTh1型応答を同定するために用いられる。一部の態様では、サイトカインアッセイはTh2型応答を同定するために用いられる。一部の態様では、サイトカインアッセイはTh17型応答を同定するために用いられる。一部の態様では、FACS分析は、T細胞、B細胞、NK細胞、マクロファージ、および/または骨髄系細胞を含むが、これらに限定されない免疫細胞上の活性化マーカーを測定するために用いられる。
【０２６１】
本明細書に記載の方法のある特定の態様において、TIGIT結合物質は、少なくとも約2時間、少なくとも約5時間、少なくとも約10時間、少なくとも約24時間、少なくとも約3日、少なくとも約1週間、または少なくとも約2週間のマウス、ラット、カニクイザル、またはヒトにおける循環半減期を有する。ある特定の態様において、TIGIT結合物質は、少なくとも約2時間、少なくとも約5時間、少なくとも約10時間、少なくとも約24時間、少なくとも約3日、少なくとも約1週間、または少なくとも約2週間のマウス、カニクイザル、またはヒトにおける循環半減期を有するIgG(例えば、IgG1、IgG2、またはIgG4)抗体である。ポリペプチド および抗体などの作用物質の半減期を延ばす(または短くする)方法は当技術分野において公知である。例えば、IgG抗体の循環半減期を延ばす公知の方法には、pH6.0で抗体と胎児性Fc受容体(FcRn)とのpH依存的結合を増大させる、Fc領域への変異の導入が含まれる。Fc領域が無い抗体断片の循環半減期を延ばす公知の方法にはペグ化などの技法が含まれる。
【０２６２】
本明細書に記載の方法の一部の態様において、TIGIT結合物質はポリペプチドである。一部の態様において、前記ポリペプチドは、TIGITに結合する抗体またはその断片を含む、組換えポリペプチド、天然ポリペプチド、または合成ポリペプチドである。本発明のアミノ酸配列の中には、タンパク質の構造または機能に重大な影響を及ぼすことなく変えることができるものもあることが当技術分野において認められる。従って、本発明は、TIGITに結合するかなりの活性を示すか、またはTIGITに結合する抗体の領域またはその断片を含む、前記ポリペプチドのバリエーションをさらに含む。一部の態様において、TIGIT結合ポリペプチドのアミノ酸配列のバリエーションには、欠失、挿入、逆位、反復、および/または他のタイプの置換が含まれる。
【０２６３】
前記ポリペプチド、その類似体および変種は、通常、ポリペプチドの一部にはない、さらなる化学部分を含有するように、さらに改変することができる。誘導体化部分はポリペプチドの溶解度、生物学的半減期、および/または吸収を改善するか、そうでなければ調整することができる。これらの部分はまたポリペプチドおよび変種の望ましくない副作用を低減するか、または無くすこともできる。化学部分の概要は、Remington: The Science and Practice of Pharmacy, 22st Edition, 2012, Pharmaceutical Press, Londonにおいて見ることができる。
【０２６４】
本明細書に記載の方法のある特定の態様において、TIGIT結合物質は、多数の結合体化した形(すなわち、免疫結合体もしくは放射性結合体)または結合体化していない形のいずれか1つで用いられる。ある特定の態様において、作用物質は、補体依存性細胞傷害(CDC)および抗体依存性細胞傷害(ADCC)を含む対象の自然防御機構を用いて悪性細胞またはがん細胞を排除するために、結合体化していない形で使用することができる。
【０２６５】
本明細書に記載の方法の一部の態様において、TIGIT結合物質は細胞傷害作用物質に結合体化される。一部の態様において、TIGIT結合物質は、ADC(抗体-薬物結合体)として細胞傷害作用物質に結合体化される抗体である。一部の態様において、細胞傷害作用物質は、メトトレキセート、アドリアマイシン/ドキソルビシン、メルファラン、マイトマイシンC、クロランブシル、ダウノルビシン、ピロロベンゾジアゼピン(PBD)、または他の挿入剤を含むが、これらに限定されない化学療法剤である。一部の態様において、細胞傷害作用物質は、細菌、真菌、植物、もしくは動物に由来する酵素活性を有する毒素、またはジフテリアA鎖、ジフテリア毒素の非結合活性断片、エキソトキシンA鎖、リシンA鎖、アブリンA鎖、モデシンA鎖、α-サルシン、シナアブラギリ(Aleurites fordii)タンパク質、ジアンシンタンパク質、アメリカヤマゴボウ(Phytolaca americana)タンパク質(PAPI、PAPII、およびPAP-S)、ニガウリ(Momordica charantia)阻害物質、クルシン、クロチン、サボンソウ(Sapaonaria officinalis)阻害物質、ゲロニン、ミトゲリン(mitogellin)、レストリクトシン、フェノマイシン(phenomycin)、エノマイシン(enomycin)、およびトリコテセン(tricothecene)を含むが、これらに限定されない、その断片である。一部の態様において、細胞傷害作用物質は、放射性結合体または放射性結合抗体を生成するための放射性同位体である。放射性結合抗体を生成するために、90Y、125I、131I、123I、111In、131In、105Rh、153Sm、67Cu、67Ga、166Ho、177Lu、186Re、188Re、および212Biを含むが、これらに限定されない様々な放射性核種を用いることができる。抗体と、カリチアマイシン、マイタンシノイド、トリコテン(trichothene)、およびCC1065、ならびに毒素活性を有するこれらの毒素の誘導体などの1種類または複数種類の低分子毒素との結合体も使用することができる。抗体と細胞傷害作用物質との結合体は、様々な二官能性タンパク質カップリング物質、例えば、N-スクシンイミジル-3-(2-ピリジジチオール(pyridyidithiol))プロピオナート(SPDP)、イミノチオラン(IT)、イミドエステルの二官能性誘導体(例えば、アジプイミド酸ジメチルHCl)、活性エステル(例えば、スベリン酸ジスクシンイミジル)、アルデヒド(例えば、グルタルアルデヒド)、ビス-アジド化合物(例えば、ビス(p-アジドベンゾイル)ヘキサンジアミン)、ビス-ジアゾニウム誘導体(例えば、ビス-(p-ジアゾニウムベンゾイル)-エチレンジアミン)、ジイソシアネート(例えば、トルエン2,6-ジイソシアネート)、およびビス活性フッ素化合物(例えば、1,5-ジフルオロ-2,4-ジニトロベンゼン)を用いて作製されてもよい。
【０２６６】
IV.ポリヌクレオチド
本発明は、TIGIT結合作用物質をコードするポリヌクレオチドを含むポリヌクレオチドを提供する。「ポリペプチドをコードするポリヌクレオチド」という用語は、ポリペプチドのコード配列しか含まないポリヌクレオチド、ならびにさらなるコード配列および/または非コード配列を含むポリヌクレオチドを包含する。本発明のポリヌクレオチドは、RNAの形をとってもよいか、またはDNAの形をとってもよい。DNAはcDNA、ゲノムDNA、および合成DNAを含み、二本鎖または一本鎖でもよく、一本鎖である場合コード鎖または非コード(アンチセンス)鎖でもよい。
【０２６７】
ある特定の態様において、ポリヌクレオチドは、SEQ ID NO:10、SEQ ID NO:11、SEQ ID NO:12、SEQ ID NO:13、SEQ ID NO:14、SEQ ID NO:15、SEQ ID NO:16、およびSEQ ID NO:17からなる群より選択されるアミノ酸配列を含むポリペプチドをコードするポリヌクレオチド(例えば、ヌクレオチド配列)を含む。
【０２６８】
ある特定の態様において、ポリヌクレオチドは、SEQ ID NO:10、SEQ ID NO:11、SEQ ID NO:12、SEQ ID NO:13、SEQ ID NO:14、SEQ ID NO:15、SEQ ID NO:16、およびSEQ ID NO:17からなる群より選択されるアミノ酸配列をコードするポリヌクレオチドと少なくとも約80％同一の、少なくとも約85％同一の、少なくとも約90％同一の、少なくとも約95％同一の、一部の態様では、少なくとも約96％、97％、98％、または99％同一のヌクレオチド配列を有するポリヌクレオチドを含む。SEQ ID NO:10、SEQ ID NO:11、SEQ ID NO:12、SEQ ID NO:13、SEQ ID NO:14、SEQ ID NO:15、SEQ ID NO:16、およびSEQ ID NO:17からなる群より選択されるアミノ酸配列をコードするポリヌクレオチドにハイブリダイズするポリヌクレオチドを含むポリヌクレオチドも提供される。ある特定の態様において、ハイブリダイゼーションは高ストリンジェンシー条件下で行われる。高ストリンジェンシーの条件は、当業者に公知であり、(1)洗浄のために低いイオン強度および高い温度、例えば、50℃で、15mM塩化ナトリウム/1.5mMクエン酸ナトリウム(1×SSC)と0.1％ドデシル硫酸ナトリウムを使用する条件;(2)ハイブリダイゼーションの間に、5×SSC(0.75M NaCl、75mMクエン酸ナトリウム)に溶解した変性剤、例えば、ホルムアミド、例えば、50％(v/v)ホルムアミドと、0.1％ウシ血清アルブミン/0.1％Ficoll/0.1％ポリビニルピロリドン/50mMリン酸ナトリウム緩衝液、pH6.5を42℃で使用する条件;または(3)50％ホルムアミド、5×SSC、50mMリン酸ナトリウム(pH6.8)、0.1％ピロリン酸ナトリウム、5×デンハート溶液、超音波処理済みサケ精子DNA(50μg/ml)、0.1％SDS、および10％硫酸デキストランを42℃で使用し、55℃で50％ホルムアミドを含む0.2×SSCで洗浄し、その後に、EDTAを含む0.1×SSCからなる高ストリンジェンシー洗浄を55℃で行う条件を含んでもよいが、これに限定されない。
【０２６９】
一部の態様において、ポリヌクレオチドは、SEQ ID NO:18、SEQ ID NO:19、SEQ ID NO:20、SEQ ID NO:21、およびSEQ ID NO:22からなる群より選択されるポリヌクレオチド配列を含む。ある特定の態様において、ポリヌクレオチドは、SEQ ID NO:18、SEQ ID NO:19、SEQ ID NO:20、SEQ ID NO:21、およびSEQ ID NO:22からなる群より選択されるヌクレオチド配列と少なくとも約80％同一の、少なくとも約85％同一の、少なくとも約90％同一の、少なくとも約95％同一の、一部の態様では、少なくとも約96％、97％、98％、または99％同一のヌクレオチド配列を有するポリヌクレオチドを含む。SEQ ID NO:18、SEQ ID NO:19、SEQ ID NO:20、SEQ ID NO:21、およびSEQ ID NO:22からなる群より選択されるポリヌクレオチド配列にハイブリダイズするポリヌクレオチドを含むポリヌクレオチドも提供される。ある特定の態様において、ハイブリダイゼーション法は、前記のように高ストリンジェンシー条件下で行われる。
【０２７０】
ある特定の態様において、ポリヌクレオチドは、同じ読み枠で、ポリヌクレオチド、例えば、宿主細胞からのポリペプチドの発現および分泌を助けるポリヌクレオチド(例えば、細胞からのポリペプチドの輸送を制御するための分泌配列として機能するリーダー配列)と融合した成熟ポリペプチドのコード配列を含む。リーダー配列を有するポリペプチドがプレタンパク質であり、成熟型ポリペプチドを形成するために宿主細胞によって切断されるリーダー配列を有してもよい。前記ポリヌクレオチドはまた、成熟タンパク質+さらなる5'アミノ酸残基であるプロタンパク質をコードしてもよい。プロ配列を有する成熟タンパク質がプロタンパク質であり、不活性型タンパク質である。プロ配列が切断されると、活性のある成熟タンパク質が残る。
【０２７１】
ある特定の態様において、ポリヌクレオチドは、同じ読み枠で、マーカー配列、例えば、コードされるポリペプチドの精製を可能にするマーカー配列と融合した成熟ポリペプチドのコード配列を含む。例えば、マーカー配列は、細菌宿主の場合、マーカーと融合した成熟ポリペプチドを精製するための、pQE-9ベクターによって供給されるヘキサヒスチジンタグでもよい。または、マーカー配列は、哺乳動物宿主(例えば、COS-7細胞)が用いられる場合、インフルエンザ血球凝集素タンパク質に由来する血球凝集素(HA)タグでもよい。一部の態様において、マーカー配列は、他のアフィニティタグと共に使用することができ、配列DYKDDDDK(SEQ ID NO:29)のペプチドであるFLAG-タグである。
【０２７２】
本発明はさらに、本明細書に記載のポリヌクレオチドの変種に関し、前記変種は、例えば、断片、類似体、および/または誘導体をコードする。
【０２７３】
ある特定の態様において、本発明は、TIGIT結合物質を含むポリペプチドをコードするポリヌクレオチドと少なくとも約80％同一、少なくとも約85％同一、少なくとも約90％同一、少なくとも約95％同一、一部の態様では少なくとも約96％、97％、98％、または99％同一のヌクレオチド配列を有するポリヌクレオチドを含むポリヌクレオチドを提供する。
【０２７４】
本明細書で使用する場合、参照ヌクレオチド配列と少なくとも、例えば95％「同一の」ヌクレオチド配列を有するポリヌクレオチドという句は、前記ポリヌクレオチド配列が、参照ヌクレオチド配列の100ヌクレオチドごとに5個までの点変異を含むことができること以外は、前記ポリヌクレオチドのヌクレオチド配列が参照配列と同一であることを意味することが意図される。言い換えると、参照ヌクレオチド配列と少なくとも95％同一のヌクレオチド配列を有するポリヌクレオチドを得るためには、参照配列にあるヌクレオチドを5％まで欠失させるか、または別のヌクレオチドで置換することができる。または、参照配列にある全ヌクレオチドの5％までの数のヌクレオチドを参照配列に挿入することができる。参照配列のこれらの変異は参照ヌクレオチド配列の5'末端位置もしくは3'末端位置または末端位置の間にあるどの場所でも起こってもよく、参照配列においてヌクレオチド間で個別に散在してもよく、参照配列内で1つまたは複数の連続したグループとなって散在してもよい。
【０２７５】
ポリヌクレオチド変種は、コード領域、非コード領域、またはその両方の変化を含有してもよい。一部の態様において、ポリヌクレオチド変種は、サイレントな置換、付加、または欠失を生じるが、コードされるポリペプチドの性質も活性も変えない変化を含有する。一部の態様において、ポリヌクレオチド変種は、(遺伝暗号の縮重により)ポリペプチドのアミノ酸配列を変えないサイレントな置換を含む。ポリヌクレオチド変種は、様々な理由で、例えば、特定の宿主に合わせてコドン発現を最適化するように生成することができる(すなわち、ヒトmRNAのコドンを、細菌宿主、例えば、大腸菌に好ましいコドンに変えることができる)。一部の態様において、ポリヌクレオチド変種は配列の非コード領域またはコード領域において少なくとも1つのサイレント変異を含む。
【０２７６】
一部の態様において、コードされるポリペプチドの発現(または発現レベル)を調整するために、または変えるためにポリヌクレオチド変種が生成される。一部の態様において、コードされるポリペプチドの発現を増やすために、ポリヌクレオチド変種が生成される。一部の態様において、コードされるポリペプチドの発現を減らすために、ポリヌクレオチド変種が生成される。一部の態様において、ポリヌクレオチド変種は、コードされるポリペプチドの発現を親ポリヌクレオチド配列と比較して増やす。一部の態様において、ポリヌクレオチド変種は、コードされるポリペプチドの発現を親ポリヌクレオチド配列と比較して減らす。
【０２７７】
一部の態様において、ヘテロ二量体分子の産生を増やすために、(コードされるポリペプチドのアミノ酸配列を変えることなく)少なくとも1種類のポリヌクレオチド変種が生成される。一部の態様において、二重特異性抗体の産生を増大させるために、(コードされるポリペプチドのアミノ酸配列を変えることなく)少なくとも1種類のポリヌクレオチド変種が生成される。
【０２７８】
ある特定の態様において、前記ポリヌクレオチドは単離されている。ある特定の態様において、前記ポリヌクレオチドは実質的に純粋である。
【０２７９】
本明細書に記載のポリヌクレオチドを含むベクターおよび細胞も提供される。一部の態様において、発現ベクターはポリヌクレオチド分子を含む。一部の態様において、宿主細胞は、前記ポリヌクレオチド分子を含む発現ベクターを含む。一部の態様において、宿主細胞はポリヌクレオチド分子を含む。
【０２８０】
V.本明細書に記載の作用物質を含むキット
本発明は、本明細書に記載の方法を実施するために使用することができる、本明細書に記載のTIGIT結合物質を含むキットを提供する。ある特定の態様において、キットは、1つまたは複数の容器の中に、少なくとも1種類の精製されたTIGIT結合物質を含む。一部の態様において、キットは、全対照を含む、検出アッセイを実施するのに必要および/または十分な成分、アッセイを実施するための指示、ならびに結果を分析および提示するための任意の必要なソフトウェアを全て備える。当業者は、本発明の開示されたTIGIT結合物質を、当技術分野において周知の確立したキットの形式の1つに容易に組み入れることができることを容易に認識する。
【０２８１】
さらに、TIGIT結合物質と少なくとも1種類のさらなる治療用物質を含むキットが提供される。ある特定の態様において、第2の(または第3以上の)治療用物質は化学療法剤である。ある特定の態様において、第2の(または第3以上の)治療用物質は抗体である。
【０２８２】
VI.さらなる例示的な態様
一部の態様において、本願全体を通して提供される、対象において腫瘍成長を阻害する方法は、TIGITの細胞外ドメインに特異的に結合する治療的有効量の抗体を対象に投与する工程を含み、腫瘍は高頻度MSI固形腫瘍であり、かつヒトTIGITに結合する抗体は、TSDYAWN(SEQ ID NO:4)を含む重鎖CDR1、
2020503273.tif 000135
を含む重鎖CDR2、
2020503273.tif 000136
を含む重鎖CDR3、
2020503273.tif 000137
を含む軽鎖CDR1、SASYRYT(SEQ ID NO:8)を含む軽鎖CDR2、およびQQHYSTP(SEQ ID NO:9)を含む軽鎖CDR3を含む。一部の態様において、高頻度MSI腫瘍は、CRC、胃がん、子宮内膜がん、肝胆道がん、尿路がん、脳がん、および皮膚がんからなる群より選択される。一部の態様において、TIGITの細胞外ドメインに特異的に結合する抗体は、約0.3mg/kg、約1mg/kg、約3mg/kg、約10mg/kg、または約15mg/kgの用量で2週間ごとに投与される。
【０２８３】
一部の態様において、対象において腫瘍成長を阻害する方法は、TIGITの細胞外ドメインに特異的に結合する治療的有効量の抗体を対象に投与する工程を含み、腫瘍は、MSI CRC、MSI胃がん、MSI子宮内膜がん、MSI肝胆道がん、MSI尿路がん、MSI脳がん、およびMSI皮膚がんからなる群より選択される高頻度MSI固形腫瘍であり、前記抗体は約3mg/kgの用量で2週間ごとに投与され、かつヒトTIGITに結合する抗体は、TSDYAWN(SEQ ID NO:4)を含む重鎖CDR1、
2020503273.tif 000138
を含む重鎖CDR2、
2020503273.tif 000139
を含む重鎖CDR3、
2020503273.tif 000140
を含む軽鎖CDR1、SASYRYT(SEQ ID NO:8)を含む軽鎖CDR2、およびQQHYSTP(SEQ ID NO:9)を含む軽鎖CDR3を含む。
【０２８４】
一部の態様において、対象において腫瘍成長を阻害する方法は、TIGITの細胞外ドメインに特異的に結合する治療的有効量の抗体を対象に投与する工程を含み、腫瘍は、MSI CRC、MSI胃がん、MSI子宮内膜がん、MSI肝胆道がん、MSI尿路がん、MSI脳がん、およびMSI皮膚がんからなる群より選択される高頻度MSI固形腫瘍であり、前記抗体は約10mg/kgの用量で2週間ごとに投与され、かつヒトTIGITに結合する抗体は、TSDYAWN(SEQ ID NO:4)を含む重鎖CDR1、
2020503273.tif 000141
を含む重鎖CDR2、
2020503273.tif 000142
を含む重鎖CDR3、
2020503273.tif 000143
を含む軽鎖CDR1、SASYRYT(SEQ ID NO:8)を含む軽鎖CDR2、およびQQHYSTP(SEQ ID NO:9)を含む軽鎖CDR3を含む。
【０２８５】
一部の態様において、対象において腫瘍成長を阻害する方法は、TIGITの細胞外ドメインに特異的に結合する治療的有効量の抗体を対象に投与する工程を含み、腫瘍は、MSI CRC、MSI胃がん、MSI子宮内膜がん、MSI肝胆道がん、MSI尿路がん、MSI脳がん、およびMSI皮膚がんからなる群より選択される高頻度MSI固形腫瘍であり、前記抗体は2週間ごとに約15mg/kgの用量で投与され、かつヒトTIGITに結合する抗体は、TSDYAWN(SEQ ID NO:4)を含む重鎖CDR1、
2020503273.tif 000144
を含む重鎖CDR2、
2020503273.tif 000145
を含む重鎖CDR3、
2020503273.tif 000146
を含む軽鎖CDR1、SASYRYT(SEQ ID NO:8)を含む軽鎖CDR2、およびQQHYSTP(SEQ ID NO:9)を含む軽鎖CDR3を含む。
【０２８６】
一部の態様において、対象において腫瘍成長を阻害する方法は、TIGITの細胞外ドメインに特異的に結合する治療的有効量の抗体を対象に投与する工程を含み、腫瘍は、黒色腫、NSCLC、腎細胞がん、頭頸部扁平上皮がん、尿路上皮がん、結腸直腸がん(例えば、MSIまたはdMMR転移性CRC)、および肝細胞がんからなる群より選択される、抗PD1抗体を用いる処置に対して不応性の腫瘍であり、かつヒトTIGITに結合する抗体は、TSDYAWN(SEQ ID NO:4)を含む重鎖CDR1、
2020503273.tif 000147
を含む重鎖CDR2、
2020503273.tif 000148
を含む重鎖CDR3、
2020503273.tif 000149
を含む軽鎖CDR1、SASYRYT(SEQ ID NO:8)を含む軽鎖CDR2、およびQQHYSTP(SEQ ID NO:9)を含む軽鎖CDR3を含む。一部の態様において、TIGITの細胞外ドメインに特異的に結合する抗体は、約0.3mg/kg、約1mg/kg、約3mg/kg、約10mg/kg、または約15mg/kgの用量で2週間ごとに投与される。
【０２８７】
一部の態様において、対象において腫瘍成長を阻害する方法は、TIGITの細胞外ドメインに特異的に結合する治療的有効量の抗体を対象に投与する工程を含み、腫瘍は、黒色腫、NSCLC、腎細胞がん、頭頸部扁平上皮がん、尿路上皮がん、結腸直腸がん(例えば、MSIまたはdMMR転移性CRC)、および肝細胞がんからなる群より選択される、抗PD-L1抗体を用いる処置に対して不応性の腫瘍であり、かつヒトTIGITに結合する抗体は、TSDYAWN(SEQ ID NO:4)を含む重鎖CDR1、YISYSGSTSYNPSLRS(SEQ ID NO:5)を含む重鎖CDR2、ARRQVGLGFAY(SEQ ID NO:6)を含む重鎖CDR3、KASQDVSTAVA(SEQ ID NO:7)を含む軽鎖CDR1、SASYRYT(SEQ ID NO:8)を含む軽鎖CDR2、およびQQHYSTP(SEQ ID NO:9)を含む軽鎖CDR3を含む。一部の態様において、TIGITの細胞外ドメインに特異的に結合する抗体は、約0.3mg/kg、約1mg/kg、約3mg/kg、約10mg/kg、または約15mg/kgの用量で2週間ごとに投与される。
【０２８８】
一部の態様において、対象において腫瘍成長を阻害する方法は、TIGITの細胞外ドメインに特異的に結合する治療的有効量の抗体を対象に投与する工程を含み、腫瘍は、黒色腫、NSCLC、腎細胞がん、頭頸部扁平上皮がん、尿路上皮がん、結腸直腸がん(例えば、MSIまたはdMMR転移性CRC)、および肝細胞がんからなる群より選択される、抗PD1抗体を用いる処置に対して抵抗性の腫瘍であり、かつヒトTIGITに結合する抗体は、TSDYAWN(SEQ ID NO:4)を含む重鎖CDR1、
2020503273.tif 000150
を含む重鎖CDR2、
2020503273.tif 000151
を含む重鎖CDR3、
2020503273.tif 000152
を含む軽鎖CDR1、SASYRYT(SEQ ID NO:8)を含む軽鎖CDR2、およびQQHYSTP(SEQ ID NO:9)を含む軽鎖CDR3を含む。一部の態様において、対象は抗PD1抗体を用いて以前に処置されたことがある。一部の態様において、TIGITの細胞外ドメインに特異的に結合する抗体は、約0.3mg/kg、約1mg/kg、約3mg/kg、約10mg/kg、または約15mg/kgの用量で2週間ごとに投与される。
【０２８９】
一部の態様において、対象において腫瘍成長を阻害する方法は、TIGITの細胞外ドメインに特異的に結合する治療的有効量の抗体を対象に投与する工程を含み、腫瘍は、黒色腫、NSCLC、腎細胞がん、頭頸部扁平上皮がん、尿路上皮がん、結腸直腸がん(例えば、MSIまたはdMMR転移性CRC)、および肝細胞がんからなる群より選択される、抗PD-L1抗体を用いる処置に対して抵抗性を示す腫瘍であり、かつヒトTIGITに結合する抗体は、TSDYAWN(SEQ ID NO:4)を含む重鎖CDR1、
2020503273.tif 000153
を含む重鎖CDR2、
2020503273.tif 000154
を含む重鎖CDR3、
2020503273.tif 000155
を含む軽鎖CDR1、SASYRYT(SEQ ID NO:8)を含む軽鎖CDR2、およびQQHYSTP(SEQ ID NO:9)を含む軽鎖CDR3を含む。一部の態様において、対象は抗PD-L1抗体を用いて以前に処置されたことがある。一部の態様において、TIGITの細胞外ドメインに特異的に結合する抗体は、約0.3mg/kg、約1mg/kg、約3mg/kg、約10mg/kg、または約15mg/kgの用量で2週間ごとに投与される。
【０２９０】
一部の態様において、対象において腫瘍成長を阻害する方法は、腫瘍/がんがPVRおよび/またはPVRL2を発現することに基づいて、TIGITの細胞外ドメインに特異的に結合する治療的有効量の抗体を対象に選択的に投与する工程を含み、ヒトTIGITに結合する抗体は、TSDYAWN(SEQ ID NO:4)を含む重鎖CDR1、
2020503273.tif 000156
を含む重鎖CDR2、
2020503273.tif 000157
を含む重鎖CDR3、
2020503273.tif 000158
を含む軽鎖CDR1、SASYRYT(SEQ ID NO:8)を含む軽鎖CDR2、およびQQHYSTP(SEQ ID NO:9)を含む軽鎖CDR3を含む。一部の態様において、前記腫瘍は、頭頸部がん、食道がん、胃がん、子宮頸がん、TNBR、肛門がん、肝細胞がん、高頻度MSI固形腫瘍(例えば、MSI CRC)、NSCLC、および結腸直腸がんからなる群より選択される。一部の態様において、TIGIの細胞外ドメインに特異的に結合する抗体は、約0.3mg/kg、約1mg/kg、約3mg/kg、約10mg/kg、または約15mg/kgの用量で2週間ごとに投与される。
【０２９１】
一部の態様において、対象において腫瘍成長を阻害する方法は、腫瘍/がんがPVRおよび/またはPVRL2を発現することに基づいて、TIGITの細胞外ドメインに特異的に結合する治療的有効量の抗体を対象に選択的に投与する工程を含み、腫瘍/がんは、頭頸部がん、食道がん、胃がん、子宮頸がん、TNBR、肛門がん、肝細胞がん、高頻度MSI固形腫瘍(例えば、MSI CRC)、NSCLC、および結腸直腸がんからなる群より選択され、前記抗体は約3mg/kgの用量で2週間ごとに投与され、かつヒトTIGITに結合する抗体は、TSDYAWN(SEQ ID NO:4)を含む重鎖CDR1、
2020503273.tif 000159
を含む重鎖CDR2、
2020503273.tif 000160
を含む重鎖CDR3、
2020503273.tif 000161
を含む軽鎖CDR1、SASYRYT(SEQ ID NO:8)を含む軽鎖CDR2、およびQQHYSTP(SEQ ID NO:9)を含む軽鎖CDR3を含む。
【０２９２】
一部の態様において、対象において腫瘍成長を阻害する方法は、腫瘍/がんがPVRおよび/またはPVRL2を発現することに基づいて、TIGITの細胞外ドメインに特異的に結合する治療的有効量の抗体を対象に選択的に投与する工程を含み、腫瘍/がんは、頭頸部がん、食道がん、胃がん、子宮頸がん、TNBR、肛門がん、肝細胞がん、高頻度MSI固形腫瘍(例えば、MSI CRC)、NSCLC、および結腸直腸がんからなる群より選択され、前記抗体は約10mg/kgの用量で2週間ごとに投与され、かつヒトTIGITに結合する抗体は、TSDYAWN(SEQ ID NO:4)を含む重鎖CDR1、
2020503273.tif 000162
を含む重鎖CDR2、
2020503273.tif 000163
を含む重鎖CDR3、
2020503273.tif 000164
を含む軽鎖CDR1、SASYRYT(SEQ ID NO:8)を含む軽鎖CDR2、およびQQHYSTP(SEQ ID NO:9)を含む軽鎖CDR3を含む。
【０２９３】
一部の態様において、対象において腫瘍成長を阻害する方法は、腫瘍/がんがPVRおよび/またはPVRL2を発現することに基づいて、TIGITの細胞外ドメインに特異的に結合する治療的有効量の抗体を対象に選択的に投与する工程を含み、腫瘍/がんは、頭頸部がん、食道がん、胃がん、子宮頸がん、TNBR、肛門がん、肝細胞がん、高頻度MSI固形腫瘍(例えば、MSI CRC)、NSCLC、および結腸直腸がんからなる群より選択され、前記抗体は約15mg/kgの用量で2週間ごとに投与され、かつヒトTIGITに結合する抗体は、TSDYAWN(SEQ ID NO:4)を含む重鎖CDR1、
2020503273.tif 000165
を含む重鎖CDR2、
2020503273.tif 000166
を含む重鎖CDR3、
2020503273.tif 000167
を含む軽鎖CDR1、SASYRYT(SEQ ID NO:8)を含む軽鎖CDR2、およびQQHYSTP(SEQ ID NO:9)を含む軽鎖CDR3を含む。
【０２９４】
本開示の態様は、以下の非限定的な実施例を参照することによって、さらに明確にすることができる。以下の非限定的な実施例は、本開示のある特定の抗体の調製と、本開示の抗体を使用する方法を詳述する。本開示の範囲から逸脱することなく、材料と方法の両方に多くの変更を加えることができることが当業者に明らかである。
【実施例】
【０２９５】
実施例1
抗TIGIT抗体によるヒト化マウスにおけるインビボ腫瘍成長阻害
ヒト化マウスモデルを用いて、ヒト腫瘍に対する抗hTIGIT抗体を用いる処置の有効性を試験した。ヒト化マウスはJackson Laboratoriesから入手した。これらのマウスは、ヒト造血幹細胞(CD34+細胞)を放射線照射されたNSGマウスに注射することによって作り出された。15週間後に、成熟ヒトリンパ球の存在がフローサイトメトリーによって確認された。各マウスに患者由来黒色腫腫瘍細胞(OMP-M9; 細胞75,000個/マウス)を皮下注射した。腫瘍の平均体積が約50mm3になるまで、腫瘍を19日間成長させた。担がんマウスを、いくつかの群(n＝8マウス/群)に無作為化した。担がんマウスを対照抗体または抗hTIGIT抗体OMP-313M32で処置した。マウスに5日ごとに1mg/kgまたは5mg/kgを投薬した。腫瘍成長をモニタリングし、腫瘍体積を、表示された時点で電子ノギスを用いて測定した。
【０２９６】
図1に示すとおり、抗体OMP-313M32で処置したマウスの腫瘍成長は対照と比較して阻害された。これらの結果から、TIGIT標的化は、ヒトリンパ球の抗腫瘍免疫応答を増大するのに有効であり、インビボでのヒト腫瘍成長阻害に寄与したことが分かる。さらに、抗TIGIT抗体313R12および313R19とマウス腫瘍モデルを用いて行った前臨床研究と並行して、これらの結果から、患者由来異種移植片を有するヒト化マウスモデルを用いて(ヒトTIGITにのみ結合する)抗hTIGIT抗体OMP-313M32を研究できることが証明された。
【０２９７】
実施例2
第1相試験
ある特定の局所的に進行した、または転移した腫瘍を有する患者におけるOMP-313M32の非盲検第1相用量漸増および増大試験をデザインした。患者には、標準療法後に進行した腫瘍があるか、または療法が我慢できないものと判明したか、もしくは不適切だとみなされた腫瘍がある。登録前に、試験適格性を確かめるために患者はスクリーニングを受ける。この試験目的は、患者におけるOMP-313M32の安全性および忍容性を評価すること、OMP-313M32の最大耐量(MTD)を評価すること、OMP-313M32の用量規定毒性(DLT)を特徴決定すること、OMP-313M32の推奨される第2相用量を突き止めること、OMP-313M32の薬物動態を特徴決定すること、OMP-313M32の免疫原能力を特徴決定すること、OMP-313M32の抗腫瘍活性を予備的に評価すること、薬物動力学(PD)マーカーを予備的に評価することである。
【０２９８】
図2に示すとおり、用量漸増は、本試験の初期フェーズにおいて最大耐量(MTD)または最大投与量(maximum administered dose)(MAD)を求めるために行われる。OMP-313M32の0.3mg/kg、1.0mg/kg、3mg/kg、10mg/kg、および15mg/kgの用量レベルが2週間に1回のIV注入によって投与される。用量コホートの中で用量の漸増または低減は許可されない。DLTが観察されなければ、各用量レベルで3人の患者が処置される。3人の患者のうち1人がDLTを経験したら、用量レベルは6人の患者まで増大される。2人またはそれ以上の患者がDLTを経験したら、このレベルではこれ以上の患者には投薬されず、かつ、前記の用量レベルで6人の患者が処置されている場合を除いてもう3人の患者が前記の用量コホートに加えられる。患者のDLTは28日間(1日目から29日目)評価される。
【０２９９】
本試験の用量増大フェーズでは、患者は、OMP-313M32のMTDまたはMADに等しい用量レベルで登録される。増大フェーズは、特定の腫瘍タイプまたはサブタイプを有する患者において、OMP-313M32の安全性および忍容性をより良好に特徴決定するように、および抗腫瘍活性を予備的に評価するようにデザインされている。用量増大フェーズにおける評価が考慮される腫瘍タイプには、頭頸部がん、食道がん/胃食道がん、胃がん、結腸直腸がん、肝細胞がん/肝臓がん、子宮頸がん、肺がん、黒色腫、メルケル細胞がん、腎細胞がん/腎臓がん、膀胱がん、卵巣がん、膵臓がん、子宮内膜がん、およびトリプルネガティブ乳がんが含まれるが、これに限定されない。本明細書で使用する「肺がん」は非小細胞肺がん(NSCLC)および小細胞肺がんを含む。NSCLCにはNSCLC扁平上皮およびNSCLC腺がんが含まれ得る。結腸直腸がん(CRC)には高頻度マイクロサテライト不安定性CRCおよびマイクロサテライト安定性CRCが含まれ得る。用量増大フェーズの患者には、PD-1アンタゴニスト(例えば、抗PD-1抗体)またはPD-L1アンタゴニスト(例えば、抗PD-L1抗体)を用いる処置に対して抵抗性または不応性の腫瘍があってもよい。用量増大フェーズの患者は、PD-1アンタゴニスト(例えば、抗PD-1抗体)またはPD-L1アンタゴニスト(例えば、抗PD-L1抗体)を用いて以前に処置されたことがあり、処置の最中または後に腫瘍成長が進行した対象(抗PD-1/PD-L1進行者と呼ばれることがある)でもよい。
【０３００】
用量漸増コホートおよび増大コホートに登録した患者全員が、医学的禁忌がある場合を除いて処置前に生検を受け、処置が開始した後に少なくとも1回の腫瘍生検を受ける。生検は、ベースライン時に、およびOMP-313M32が最初に投与されて約2〜3週間後に行われる。さらなる生検材料が試験責任者の自由裁量で収集されてもよい。生検方法には、コア針生検、パンチ生検、ピンセット生検、または切除/切開生検が含まれ得る。TIGIT、PVR、PVRL2、FOXP3、および他の免疫マーカーの発現はFFPE腫瘍標本において評価される。さらなるタンパク質および遺伝子(例えば、免疫遺伝子シグネチャー)の発現レベルが評価され、臨床上の利益と相関付けられてもよい。
【０３０１】
実施例3
IHCによって評価したTIGITタンパク質発現
TIGITタンパク質発現を調べるために、TIGIT免疫組織化学(IHC)アッセイを、知的財産権によって保護されているマウス抗hTIGITモノクローナル抗体を用いて開発および最適化した。4マイクロメートルのFFPE切片を切断し、正電荷キャピラリーギャップスライド(positively-charged capillary gap slide)にマウントした。組織を、4回のキシレン5分交換と、その後の段階的アルコールシリーズ〜蒸留水によって脱ろうした。蒸気熱誘導エピトープ回復(steam heat-induced epitope recovery)(SHIER)を、Black and Decker Steamerの上部チャンバー中でSHIER2溶液(クエン酸緩衝液pH6.0-6.2)を用いて20分間行った。スライドをプロテイナーゼK酵素(1:40希釈)で10分間前処理し、非特異的バックグラウンド染色を小さくするためにブロッキング溶液中で15分間インキュベートした。スライドを1μg/mlの抗hTIGIT抗体と一晩インキュベートした。内因性ペルオキシダーゼ活性をブロックするために、スライドを過酸化水素の中で2.5分間、3回インキュベートし、PBSで洗浄した。マウス抗体用に設計されたPolink-2 Plus Detection Kitを使用し、DABおよびヘマトキシリンを使用して特異的結合を検出した。陽性染色は、西洋ワサビペルオキシダーゼとDAB基質の茶色の色素原反応産物が存在することによって示される。細胞および組織形態を評価するためにヘマトキシリン対比染色によって青色の核染色が生じる。
【０３０２】
17種類の異なるがんタイプをカバーする試料の一団を、IHCアッセイ(表2)により、腫瘍細胞、腫瘍関連免疫細胞、および非腫瘍/間質免疫細胞においてTIGITが染色されるかどうか評価した。
【０３０３】
（表２）
2020503273.tif 000168
【０３０４】
腫瘍細胞について原形質膜における反応性を、差次的強度で観察されたパーセントを用いて評価した。強度スコアリングは、0＝ゼロ、1+＝低い、または弱い、2+＝中間、および3+＝高い、または強いを含んだ。各強度レベルで記録したパーセントを、10％より上は10刻みで、10％より下は1刻みで0〜100％で報告した。腫瘍細胞におけるTIGIT発現のスコアリングデータを、標準的なHスコア法とパーセントスコア法を用いて評価した。Hスコアは、三点半定量スケールでの発現強度(0、1+、2+、または3+)を有する細胞のパーセントを用いて計算した。従って、スコアは0〜300にわたる。Hスコア＝[(1+の％)×1]＋[(2+の％)×2]＋[(3+の％)×3]。パーセントスコアは、強度≧1+、≧2+、および≧3+のパーセントを合計することによって計算した。従って、スコアは0〜100にわたる。パーセントスコア≧1+＝(1+の％)＋(2+の％)＋(3+の％)。パーセントスコア≧2+＝(2+の％)＋(3+の％)。パーセントスコア≧3+＝(3+の％)。
【０３０５】
各試料はまた、(1)間質/非腫瘍の領域中の免疫細胞において、および(2)腫瘍内の領域または腫瘍と密接に関連する領域中の免疫細胞において、TIGIT反応性があるかどうか分析された。免疫細胞反応性を、0〜3の存在量スケールを用いてスコア付けし、このスケールでは、0＝免疫細胞染色なし;1＝免疫細胞染色ほとんどなし;2＝中間量の免疫細胞染色;3＝多量の免疫細胞染色である。
【０３０６】
腫瘍関連免疫細胞におけるTIGIT発現についてのIHCアッセイの結果を表3にまとめた。
【０３０７】
（表３）腫瘍関連免疫細胞におけるTIGIT染色
2020503273.tif 000169
【０３０８】
全体的に見て、トリプルネガティブ乳がん、T細胞リンパ腫、頭頸部がん、および子宮頸がんは間質と腫瘍関連免疫細胞の両方に最も強い染色があった。このIHCデータと一致して、RNA-SeqによるThe Cancer Genome Atlas(TGCA)における33種類の腫瘍タイプの分析はTIGITの発現レベルとT細胞マーカーの良好な相関関係を示した。腫瘍細胞の原形質膜におけるTIGIT染色の全発生率は少なく、強度は弱かった。これらの結果から、主に、腫瘍中および腫瘍微小環境中の免疫細胞において、TIGITが発現していることが強く示唆される。
【０３０９】
実施例4
薬物動力学(PD)バイオマーカー
代理抗TIGIT抗体313R12で処置した担がんマウスに由来する腫瘍および対応する全血試料における抗TIGIT処置の薬物動力学(PD)バイオマーカーを調べるためにマルチプラットフォームアプローチを採用した。腫瘍組織および対応する全血試料を、免疫細胞の優勢および機能についてマイクロアレイ、免疫化学(IHC)、およびフローサイトメトリーによって分析した。
【０３１０】
抗体313R12を、CT26.WT結腸腫瘍、4T1乳房腫瘍、またはB16F10黒色腫腫瘍を有する免疫応答性マウスに投与した。これらの腫瘍には、いろいろなレベルの免疫原性があると考えられている。CT26.WT腫瘍は高免疫原性であり、細胞傷害性T細胞が豊富にある。4T1腫瘍は高免疫原性かつ免疫抑制性である。B16F10腫瘍は低免疫原性であり、免疫学的にサイレントである。各モデルにおいてマウスを週1回処置した。
【０３１１】
有効性と相関する潜在的な遺伝子発現PDバイオマーカーを同定するために、3つのモデルそれぞれについて、RNAを、試験終了時に収集した腫瘍組織および末梢血試料から単離した。マイクロアレイ分析を、以下の群に由来する試料を用いて行った:(1)0.1mg/kgおよび12.5mg/kg 313R12で処置した4T1担がんマウス、(2)0.1mg/kgおよび12.5mg/kg 313R12で処置したB16F10担がんマウス、(3)0.1mg/kg、0.5mg/kg、2.5mg/kg、および12.5mg/kg 313R12で処置したCT26.WT担がんマウス、ならびに(4)対照マウスからの3匹の動物。処置した組織および対照組織に対するマイクロアレイによってグローバルな遺伝子発現レベルをプロファイリングした。免疫細胞に関連する遺伝子変化を、T細胞、NK細胞、およびB細胞マーカーに重点を置いて調べた。免疫細胞集団およびサイトカイン分泌の変化をフローサイトメトリー、Luminex、およびIHCによってモニタリングした。
【０３１２】
腫瘍試料において、抗TIGIT処置は、T細胞、CD8 T細胞、細胞傷害性細胞、Th1細胞、NK細胞、Teff細胞、およびT細胞活性化マーカーに関連する遺伝子の発現増大を促した。これらの遺伝子発現変化は、定量リアルタイムPCR、(すなわち、CD3e、CD8a、Ncr1、Ifn-γ、Gzma、およびCD266)によって検証された。同様の結果が血液試料中の遺伝子発現変化において認められた。これらの結果から、抗TIGIT抗体OMP-313M32のオンターゲット活性を研究するためにPDバイオマーカーを診療所で使用できることが示唆される。
【０３１３】
本明細書に記載の実施例および態様が例示目的にすぎないこと、ならびに本明細書に記載の実施例および態様を考慮して様々な修正または変更が、当業者に示唆され、かつ本願の精神および範囲の中に含まれることが理解される。
【０３１４】
本明細書において引用された、刊行物、特許、特許出願、インターネットサイト、ならびにポリヌクレオチド配列およびポリペプチド配列の両方を含むアクセッション番号/データベース配列は全て、それぞれ個々の刊行物、特許、特許出願、インターネットサイト、またはアクセッション番号/データベース配列が参照により組み入れられるように詳細かつ個々に示されるのと同じ程度に、全ての目的のためにその全体が参照により本明細書に組み入れられる。
【０３１５】
本願において開示された配列は以下である。
2020503273.tif 000170
2020503273.tif 000171
2020503273.tif 000172
2020503273.tif 000173
2020503273.tif 000174
【図１】
2020503273.tif 000214
【図２】
2020503273.tif 000215
【配列表】
2020503273000001.app
【国際調査報告】
2020503273.tif 000216
2020503273.tif 000217
2020503273.tif 000218