(57)【要約】ピルビン酸キナーゼを活性化する化合物、医薬組成物およびそれらの使用方法が本明細書に記載される。これらの化合物は、式（I）によって表され、2020531443.tif 000133（I）式中、R1、R2、Ra、Rb、Rj、Rk、およびQは、本明細書に定義されるとおりである。式（I）-（V）の化合物、またはその薬学的に許容可能な塩、および薬学的に許容可能な担体を含む医薬組成物も提供されている。本開示は、(1)本明細書に記載される化合物またはその薬学的に許容可能な塩、（2）本明細書に記載される化合物またはその薬学的に許容可能な塩、および薬学的に許容可能な担体を含む、薬学的に許容可能な組成物の有効量を対象に投与することを含む、対象の貧血を治療する方法をさらに提供する。特定の実施形態では、貧血は、先天性異常赤血球産生症の貧血Ｉ、ＩＩ、ＩＩＩ、またはＩＶ型などの異常赤血球産生症の貧血である。【選択図】なし
2020531443.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
以下の構造式で表される化合物：
【化５３】
2020531443.tif 000119
（I）
またはその薬学的に許容可能な塩であって、式中、
R1は、水素、任意で置換されたアルキル、任意で置換されたハロアルキル、任意で置換されたアルケニル、任意で置換されたアルキニル、任意で置換されたシクロアルキル、任意で置換されたヘテロシクリル、任意で置換されたアリール、-ORo1、-C(=O)Rc1、または窒素保護基であり、式中、
Ro1は、水素、任意で置換されたアルキル、または酸素保護基であり、
Rc1は、任意で置換されたアルキル、または-N(Rcn)2であり、式中、Rcnの各例が独立して、水素、-C1-6アルキル、または窒素保護基であり、
R2およびQはそれぞれ独立して、任意で置換された5または6員の単環式ヘテロアリールであり、
RaおよびRbはそれぞれ独立して、水素、ハロゲン、-CN、-NO2、-N3、任意で置換されたアルキル、-ORo3、-N(Rn1)2、-C(=O)N(Rn1)2、もしくは-C(=O)Rc2であるか、または代替的に、RaおよびRbは、それらが結合している炭素原子と一緒になって、任意で置換されたシクロアルキルもしくは任意で置換されたヘテロシクリルを形成することができ、式中、
Rn1の各例は独立して、水素、任意で置換された-C1-C6アルキル、または窒素保護基であり、
Ro3は、水素、任意で置換された-C1-C6アルキル、または酸素保護基であり、
Rc2は、任意で置換された-C1-C6アルキルであり、
RjおよびRkは、それぞれ独立して、水素、ハロゲン、-CN、-ORo7、-N（Rn5)2、
-N(Rn5)C(=O)Rc5、-C(=O)N(Rn5)2、-C(=O)Rc5、-C(=O)ORo7、-SRjs、-S(=O)2Rjs、
-S(=O)Rjs、または任意で置換された-C1-C6アルキルであり、または代替的に、RjおよびRkは、それらが結合している炭素原子と一緒になって、C=O、任意で置換されたC1-C6単環式シクロアルキル環、もしくは任意で置換されたC3-C6単環式ヘテロシクリル環を形成することができ、式中、
Rn5の各例は独立して、水素、任意で置換された-C1-C6アルキル、-ORo8、または窒素保護基であり、式中、Ro8は、水素、任意で置換された-C1-C6アルキル、または酸素保護基であり、
Ro7の各例は独立して、水素、任意で置換された-C1-C6アルキル、または酸素保護基であり、
Rc5の各例は独立して、任意で置換された-C1-C6アルキルであり、
Rjsの各例は独立して、任意で置換された
-C1-C6アルキル、任意で置換されたC6-12アリール、任意で置換されたヘテロアリール、または硫黄保護基である、化合物、またはその薬学的に許容可能な塩。
【請求項２】
R2によって表される5または6員の単環式ヘテロアリールは、Rpにより置換可能な各環炭素原子において任意で置換され、かつRn6により置換可能な各環窒素原子において任意で置換され、式中、
Rpの各例は独立して、水素、ハロゲン、-CN、-NO2、-N3、任意で置換されたアルキル、任意で置換されたアルケニル、任意で置換されたアルキニル、任意で置換されたシクロアルキル、任意で置換されたアリール、任意で置換されたヘテロシクリル、任意で置換されたヘテロアリール、-ORo6、-SRs2、-N(Rn3)2、
-C(=O)N(Rn3)2、-N（Rn3)C(=O)Rc4、-C(=O)Rc4、-C(=O)ORo6、-OC（=O）Rc4、-S(=O)Rs2、
-S(=O)2Rs2、-S(=O)ORo6、-OS(=O)Rc4、-S(=O)2ORo6、-OS(=O)2Rc4、-S(=O)N(Rn3)2、
-S(=O)2N(Rn3)2、-N(Rn3)S(=O)Rs2、-N(Rn3)S(=O)2Rs2、-N(Rn3)C(=O)ORo6、
-OC(=O)N(Rn3)2、-N(Rn3)C(=O)N(Rn3)2、-N(Rn3)S(=O)N(Rn3)2、-N(Rn3)S(=O)2N(Rn3)2、-N(Rn3)S(=O)ORo6、-N(Rn3)S(=O)2ORo6、-OS(=O)N(Rn3)2、もしくは-OS(=O)2N(Rn3)2であるか、または、同一もしくは隣接する炭素原子に結合したRpの二つの例が、それらが結合する炭素原子と一緒になって、任意で置換されたシクロアルキルもしくはヘテロシクロアルキルを形成することができ、式中、
Rn3の各例が独立して、水素、任意で置換された-C1-C6アルキル、または窒素保護基であり、
Ro6の各例は独立して、水素、任意で置換された-C1-C6アルキル、または酸素保護基であり、
Rc4の各例は、任意で置換された-C1-C6アルキルであり、
Rs2の各例は独立して、任意で置換された-C1-C6アルキル、または硫黄保護基であり、
Rn6は、水素、任意で置換された-C1-C6アルキル、または窒素保護基である、請求項1に記載の化合物、またはその薬学的に許容可能な塩。
【請求項３】
R2によって表される5または6員の
単環式ヘテロアリールは、以下のうちの一つから選択され、
【化５４】
2020531443.tif 000120
式中、
RncおよびRndの各例は独立して、水素、任意で置換された-C1-C6アルキル、または窒素保護基であり、
pは、原子価が許す限り、0、1、2、3、または4である、請求項1および2のいずれか一項に記載の化合物、またはその薬学的に許容可能な塩。
【請求項４】
R2で表される5または6員の単環式ヘテロアリールが、以下の一つから選択される、請求項1〜3のいずれか一項に記載の化合物、またはその薬学的に許容可能な塩。
【化５５】
2020531443.tif 000121
【請求項５】
R2で表される5または6員の単環式ヘテロアリールが、以下の一つから選択される、請求項1〜4のいずれか一項に記載の化合物、またはその薬学的に許容可能な塩。
【化５６】
2020531443.tif 000122
【請求項６】
前記化合物が、以下の構造式によって表される化合物、
【化５７】
2020531443.tif 000123
(II)
またはその薬学的に許容可能な塩であり、式中、qは0、1、2、または3である、請求項1〜5のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項７】
前記化合物が、以下の構造式によって表される化合物、
【化５８】
2020531443.tif 000124
(III)
またはその薬学的に許容可能な塩であり、式中、qは0、1、2、または3である、請求項1〜5のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項８】
前記化合物が、以下の構造式によって表される化合物、
【化５９】
2020531443.tif 000125
(IV)
またはその薬学的に許容可能な塩であり、式中、qは0、1、2、または3である、請求項1〜5のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項９】
前記化合物が、以下の構造式によって表される化合物、
【化６０】
2020531443.tif 000126
(V)
またはその薬学的に許容可能な塩であり、式中、qは0、1、2、または3である、請求項1〜5のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項１０】
Rn6が、水素または-C1-4アルキルである、請求項2〜9のいずれか一項に記載の化合物、またはその薬学的に許容可能な塩。
【請求項１１】
Rpの各例が独立して、水素、ハロゲン、任意で置換されたC1-4アルキル、-CN、-NO2、-N3、-ORo4、-N(Rn2)2、-C(=O)N(Rn2)2、
-C(=O)Rc3、または-C(=O)ORo4である、請求項2〜7のいずれか一項に記載の化合物、またはその薬学的に許容可能な塩。
【請求項１２】
Qで表される5または6員の単環式ヘテロアリールが、以下から選択され、
【化６１】
2020531443.tif 000127
式中、
Rnの各例は独立して、水素、ハロゲン、-CN、-NO2、-N3、任意で置換されたアルキル、任意で置換されたアルケニル、任意で置換されたアルキニル、任意で置換されたシクロアルキル、任意で置換されたアリール、任意で置換されたヘテロシクリル、任意で置換されたヘテロアリール、-ORo4、-SRs1、-N(Rn2)2、
-C(=O)N(Rn2)2、-N(Rn2)C(=O)Rc3、-C(=O)Rc3、-C(=O)ORo4、-OC(=O)Rc3、-S(=O)Rs1、-S(=O)2Rs1、-S(=O)ORo4、-OS(=O)Rc3、-S(=O)2ORo4、-OS(=O)2Rc3、-S(=O)N(Rn2)2、
-S(=O)2N(Rn2)2、-N(Rn2)S(=O)Rs1、-N(Rn2)S(=O)2Rs1、-N(Rn2)C(=O)ORo4、
-OC(=O)N(Rn2)2、-N(Rn2)C(=O)N(Rn2)2、-N(Rn2)S(=O)N(Rn2)2、-N(Rn2)S(=O)2N(Rn2)2、-N(Rn2)S(=O)ORo4、-N(Rn2)S(=O)2ORo4、-OS(=O)N(Rn2)2、もしくは-OS(=O)2N(Rn2)2であるか、または、同一もしくは隣接する炭素原子に結合したRnの二つの例が、それらが結合する炭素原子と一緒になって、任意で置換されたシクロアルキルもしくはヘテロシクロアルキルを形成し、式中、
Rn2の各例は独立して、水素、任意で置換された-C1-C6アルキル、または窒素保護基であり、
Ro4の各例は独立して、水素、任意で置換された-C1-C6アルキル、または酸素保護基であり、
Rc3の各例は独立して、任意で置換された-C1-C6アルキルであり、
Rs1の各例は独立して、任意で置換された-C1-C6アルキルまたは硫黄保護基であり、
nは、原子価が許す限り、0、1、2、または3であり、
Rna、Rnb、およびRndの各々は独立して、水素、任意で置換された-C1-C6アルキル、または窒素保護基である、請求項1〜11のいずれか一項に記載の化合物、またはその薬学的に許容可能な塩。
【請求項１３】
Qで表される5または6員の単環式ヘテロアリールが、以下から選択される、請求項1〜12のいずれか一項に記載の化合物、またはその薬学的に許容可能な塩。
【化６２】
2020531443.tif 000128
【請求項１４】
Qで表される5または6員の単環式ヘテロアリールが、以下から選択される、請求項1〜13のいずれか一項に記載の化合物、またはその薬学的に許容可能な塩。
【化６３】
2020531443.tif 000129
【請求項１５】
Qで表される5または6員の単環式ヘテロアリールが、
【化６４】
2020531443.tif 000130
または
【化６５】
2020531443.tif 000131
である、請求項1〜14のいずれか一項に記載の化合物、またはその薬学的に許容可能な塩。
【請求項１６】
Qで表される5または6員の単環式ヘテロアリールが、
【化６６】
2020531443.tif 000132
である、請求項1〜14のいずれか一項に記載の化合物、またはその薬学的に許容可能な塩。
【請求項１７】
Rnaが、水素または-C1-4アルキルである、請求項12〜15のいずれか一項に記載の化合物、またはその薬学的に許容可能な塩。
【請求項１８】
Rnの各例が独立して、水素、ハロゲン、任意で置換されたC1-4アルキル、-CN、-NO2、-N3、-ORo4、-N(Rn2)2、
-C(=O)N(Rn2)2、-C(=O)Rc3、または-C(=O)ORo4である、請求項12〜17のいずれか一項に記載の化合物、またはその薬学的に許容可能な塩。
【請求項１９】
R1が、水素または-C1-C4アルキルである、請求項1〜18のいずれか一項に記載の化合物、またはその薬学的に許容可能な塩。
【請求項２０】
R1が、メチルである、請求項1〜19のいずれか一項に記載の化合物、またはその薬学的に許容可能な塩。
【請求項２１】
RjおよびRkが、それぞれ独立して、水素、ハロゲン、
-ORo7、または-C1-C4アルキルであり、またはRjおよびRkが一緒に結合して＝Oを形成する、請求項1〜20のいずれか一項に記載の化合物、またはその薬学的に許容可能な塩。
【請求項２２】
RjおよびRkが、それぞれ水素である、請求項1〜21のいずれか一項に記載の化合物、またはその薬学的に許容可能な塩。
【請求項２３】
RaおよびRbが、それぞれ水素である、請求項1〜22のいずれか一項に記載の化合物、またはその薬学的に許容可能な塩。
【請求項２４】
qが、0または1である、請求項5〜23のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項２５】
nが、0または1である、請求項12〜24のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項２６】
請求項1〜25のいずれか一項に記載の化合物またはその薬学的に許容可能な塩の有効量、および薬学的に許容可能な担体を含む医薬組成物。
【請求項２７】
赤血球を(1)請求項1〜25のいずれか一項に記載の化合物、もしくはその薬学的に許容可能な塩、または（2）請求項26に記載の医薬組成物の有効量と接触させることを含む、赤血球（RBC）の寿命を延長するための方法。
【請求項２８】
前記化合物または前記医薬組成物が、前記赤血球を含む全血または前記赤血球を含む濃厚赤血球に体外で直接添加される、請求項27に記載の方法。
【請求項２９】
前記化合物または前記医薬組成物が、前記赤血球を含む対象に投与される、請求項28に記載の方法。
【請求項３０】
血液を(1)請求項1〜25のいずれか一項に記載の化合物、もしくはその薬学的に許容可能な塩、または（2）請求項26に記載の医薬組成物の有効量と接触させることを含む、前記血液中の2,3-ジホスホグリセリン酸レベルを調節するための方法。
【請求項３１】
(1)請求項1〜25のいずれか一項に記載の化合物、もしくはその薬学的に許容可能な塩、または（2）請求項26に記載の医薬組成物の有効量を対象に投与することを含む、前記対象における貧血を治療するための方法。
【請求項３２】
前記貧血が異常赤血球産生症の貧血である、請求項31に記載の方法。
【請求項３３】
(1)請求項1〜25のいずれか一項に記載の化合物、もしくはその薬学的に許容可能な塩、または（2）請求項26に記載の医薬組成物の有効量を対象に投与することを含む、前記対象における溶血性貧血を治療するための方法。
【請求項３４】
前記溶血性貧血は、遺伝性および／または先天性溶血性貧血、後天性溶血性貧血、または多系統疾患の一部としての貧血である、請求項33に記載の方法。
【請求項３５】
(1)請求項1〜25のいずれか一項に記載の化合物、もしくはその薬学的に許容可能な塩、または（2）請求項26に記載の医薬組成物の有効量を対象に投与することを含む、前記対象における鎌状赤血球症を治療するための方法。
【請求項３６】
(1)請求項1〜25のいずれか一項に記載の化合物、もしくはその薬学的に許容可能な塩、または（2）請求項26に記載の医薬組成物の有効量を対象に投与することを含む、前記対象におけるピルビン酸キナーゼ欠損症(PKD)を治療する方法。
【請求項３７】
(1)請求項1〜25のいずれか一項に記載の化合物、もしくはその薬学的に許容可能な塩、または（2）請求項26に記載の医薬組成物の有効量を対象に投与することを含む、前記対象におけるサラセミア、遺伝性球状赤血球症、遺伝性楕円赤血球症、無ベータリポ蛋白血症もしくはバッセン-コーンツヴァイク症候群、鎌状赤血球症、発作性夜間血色素尿症、後天性溶血性貧血または慢性疾患の貧血を治療する方法。
【請求項３８】
(1)請求項1〜25のいずれか一項に記載の化合物、もしくはその薬学的に許容可能な塩、または（2）請求項26に記載の医薬組成物の有効量を対象に投与することを含む、前記対象におけるサラセミアを治療する方法。
【請求項３９】
前記サラセミアがベータサラセミアである、請求項38に記載の方法。
【請求項４０】
(1)請求項1〜25のいずれか一項に記載の化合物、もしくはその薬学的に許容可能な塩、または（2）請求項26に記載の医薬組成物の有効量を対象に投与することを含む、それを必要とする前記対象の赤血球における変異型ピルビン酸キナーゼR(PKR)を活性化するための方法。
【請求項４１】
(1)請求項1〜25のいずれか一項に記載の化合物、もしくはその薬学的に許容可能な塩、または（2）請求項26に記載の医薬組成物の有効量を対象に投与することを含む、それを必要とする前記対象の赤血球における野生型ピルビン酸キナーゼR(PKR)を活性化するための方法。
【請求項４２】
(1)請求項1〜25のいずれか一項に記載の化合物、もしくはその薬学的に許容可能な塩、または（2）請求項26に記載の医薬組成物の有効量を対象に投与することを含む、それを必要とする前記対象におけるヘモグロビンの量を増加させる方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願への相互参照
本出願は、いずれも2018年5月18日に出願された米国仮特許出願第62/673,526号および第62/673,533号の優先権の利益を主張する。本出願はまた、2017年8月15日に出願された国際特許出願第PCT/CN2017/097496号の優先権の利益も主張する。前述の優先出願の各々は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。
【背景技術】
【０００２】
ピルビン酸キナーゼ欠損症（PKD）は、PKLR遺伝子の劣性変異型によるピルビン酸キナーゼR（PKR）酵素の欠損によって引き起こされる赤血球の疾患である（Wijk  et  al.  Human  Mutation、  2008、  30  (3)  446-453)。PKR活性化因子は、PKD、サラセミア（例えば、ベータサラセミア）、遺伝性楕円赤血球症、無ベータリポ蛋白血症またはバッセン-コーンツヴァイク症候群、鎌状赤血球症、発作性夜間血色素尿症、貧血（例えば、先天性貧血（例えば、酵素異常症）、溶血性貧血（例えば、遺伝性および／または先天性溶血性貧血、後天性溶血性貧血、ホスホグリセリン酸キナーゼ欠損によって引き起こされる慢性溶血性貧血、慢性疾患の貧血、非球状溶血性貧血または遺伝性球状赤血球症）を治療するのに有益であり得る。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【０００３】
【非特許文献１】Wijk  et  al.  Human  Mutation、  2008、  30  (3)  446-453
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【０００４】
本明細書に記載されているのは、野生型および／または変異型酵素（本明細書に記載されるものなど）である、ピルビン酸キナーゼR（PKR）を活性化する、式（I）、（II）、（III）、（IV）、および（V）（本明細書では総称して「式（I）〜（V）」と呼ばれる）の化合物、およびその薬学的に許容可能な塩である。
一実施形態では、本発明は式（I）の化合物またはその薬学的に許容可能な塩を提供する:
【化１】
2020531443.tif 000003
（I）
式中、R1、R2、Ra、Rb、Rj、Rk、およびQは、本明細書に定義されるとおりである。
【０００５】
一実施形態では、化合物またはその薬学的に許容可能な塩は、表1、または図1の化合物から選択される。
【０００６】
式（I）-（V）の化合物、またはその薬学的に許容可能な塩、および薬学的に許容可能な担体を含む医薬組成物も提供されている。
【０００７】
本開示は、(1)本明細書に記載される化合物またはその薬学的に許容可能な塩、（2）本明細書に記載される化合物またはその薬学的に許容可能な塩、および薬学的に許容可能な担体を含む、薬学的に許容可能な組成物の有効量を対象に投与することを含む、対象の貧血を治療する方法をさらに提供する。特定の実施形態では、貧血は、先天性異常赤血球産生症の貧血Ｉ、ＩＩ、ＩＩＩ、またはＩＶ型などの異常赤血球産生症の貧血である。
【０００８】
本開示は、(1)本明細書に開示される化合物またはその薬学的に許容可能な塩、（2）本明細書に開示される化合物またはその薬学的に許容可能な塩、および薬学的に許容可能な担体を含む、医薬組成物の有効量を対象に投与することを含む、対象の鎌状赤血球症を治療するための方法をさらに提供する。
【０００９】
本開示は、(1)本明細書に開示される化合物またはその薬学的に許容可能な塩、（2）本明細書に開示される化合物またはその薬学的に許容可能な塩、および薬学的に許容可能な担体を含む、医薬組成物の有効量を対象に投与することを含む、対象の溶血性貧血（例えば、ホスホグリセリン酸キナーゼ欠損によって引き起こされる慢性溶血性貧血、Blood  Cells  Mol  Dis,  2011;  46(3):206）を治療するための方法をさらに提供する。特定の実施形態では、溶血性貧血は、遺伝性および／または先天性溶血性貧血、後天性溶血性貧血、または多系統疾患の一部としての貧血である。特定の実施形態では、溶血性貧血は先天性貧血である。特定の実施形態では、溶血性貧血は、遺伝性である（例えば、非球状溶血性貧血または遺伝性球状赤血球症）。
【００１０】
本開示は、(1)本明細書に開示される化合物またはその薬学的に許容可能な塩、（2）本明細書に開示される化合物またはその薬学的に許容可能な塩、および薬学的に許容可能な担体を含む医薬組成物の有効量を対象に投与することを含む、サラセミア（例えば、ベータサラセミア）、遺伝性球状赤血球症、遺伝性楕円赤血球症、無ベータリポ蛋白血症（またはバッセン-コーンツヴァイク症候群）、発作性夜間血色素尿症、後天性溶血性貧血（例えば、先天性貧血（例えば、酵素異常症））、鎌状赤血球症、または慢性疾患の貧血の対象を治療するための方法をさらに提供する。一実施形態では、後天性溶血性貧血は、先天性貧血を含む。特定の実施形態では、提供される方法は、サラセミアを治療するためである。特定の実施形態では、サラセミアはベータサラセミアである。
【００１１】
本開示は、(1)本明細書に開示される化合物またはその薬学的に許容可能な塩、（2）本明細書に開示される化合物またはその薬学的に許容可能な塩、および薬学的に許容可能な担体を含む、医薬組成物の有効量を対象に投与することを含む、対象のピルビン酸キナーゼ欠損症(PKD)を治療するための方法をさらに提供する。特定の実施形態では、PKDはPKRの欠損である。特定の実施形態では、PKRの欠損は、ピルビン酸キナーゼR変異型と関連付けられる。
【００１２】
本明細書に記載される化合物および医薬組成物は、野生型と比較して低い活性を有するPKRの活性化因子であり、従って本開示の方法に有用である。特定の実施形態では、PKRは野生型である。特定の実施形態では、PKRは変異型である。PKRにおけるこのような変異型は、酵素活性（触媒効率）、調節特性（フルクトース二リン酸による調節）(FBP)/ATP）、および/または酵素の熱安定性に影響を及ぼす可能性がある。このような変異型の例は、Valentini  et  al、JBC  2002に記載されている。本明細書に記載される化合物によって活性化される変異型の一部の例には、G332S、G364D、T384M、R479H、R479K、R486W、R532W、K410E、R510Q、およびR490Wが含まれる。理論に束縛されるものではないが、特定の実施形態では、本明細書に記載される化合物は、FBP非応答PKR変異型を活性化すること、安定性が低下した変異型の熱安定性を回復すること、または障害のある変異型の触媒効率を回復することによって、PKR変異型の活性に影響を及ぼす。PKR変異型に対する本化合物の活性を活性化することは、実施例に記載の方法に従って試験されてもよい。特定の実施形態では、本明細書に記載される化合物は、野生型PKRの活性化因子でもある。
【００１３】
本開示は、(1)本明細書に開示される化合物またはその薬学的に許容可能な塩、（2）本明細書に開示される化合物またはその薬学的に許容可能な塩、および薬学的に許容可能な担体を含む、医薬組成物の有効量を対象に投与することを含む、その必要がある対象に赤血球中のPKRを活性化させるための方法を提供する。特定の実施形態では、PKRは野生型である。特定の実施形態では、PKRは変異型である。
【００１４】
一実施形態では、変異型PKRは、G332S、G364D、T384M、K410E、R479H、R479K、R486W、R532W、R510Q、およびR490Wから選択される。特定の実施形態では、変異型PKRは、A468V、A495V、I90N、T408I、およびQ421K、およびR498Hから選択される。特定の実施形態では、変異型PKRは、R532W、K410E、またはR510Qである。
【図面の簡単な説明】
【００１５】
【図１】図1は、本発明の例示的化合物の構造の一覧である。
【図２−１】図2は、実施例1〜10において使用される例示的中間体の合成を示す。
【図２−２】同上。
【図２−３】同上。
【図２−４】同上。
【発明を実施するための形態】
【００１６】
構成の詳細、および以下の説明に述べられるか、または図面に示される構成要素の配置は、制限することを意味していない。実施形態は、様々な方式で実践または実行することができる。本明細書で使用される表現および用語は、説明の目的であり、限定的と見なされるべきではない。
【００１７】
定義
本明細書に記載の化合物は、一つまたは複数の不斉中心を含むことができ、従って、様々な立体異性形態、例えば、エナンチオマーおよび/またはジアステレオマーで存在することができる。例えば、本明細書に記載の化合物は、個別のエナンチオマー、ジアステレオマー、または幾何異性体の形態であり得るか、またはラセミ混合物および一つまたは複数の立体異性体中に濃縮された混合物を含む立体異性体の混合物の形態であり得る。異性体は、キラル高圧液体クロマトグラフィー(HPLC)ならびにキラル塩の形成および結晶化を含む当業者に既知の方法によって混合物から単離され得るか、または好ましい異性体が不斉合成によって調製され得る。例えば、Jacques  et  al.,Enantiomers,Racemates  and  Resolutions(Wiley  Interscience,New  York,1981)、Wilen  et  al.,Tetrahedron  33:2725(1977)、Eliel,E.L.Stereochemistry  of  Carbon  Compounds(McGraw-Hill,NY,1962)、およびWilen,S.H.Tables  of  Resolving  Agents  and  Optical  Resolutions  p.  268(E.L.Eliel,Ed.,Univ.of  Notre  Dame  Press,Notre  Dame,IN  1972)を参照されたい。
【００１８】
本明細書に記載の化合物は、複数の互変異性形態で表される場合もあり、かかる例では、単一の互変形態しか表すことができない場合であっても、本明細書に記載の化合物の全ての互変異性形態を明示的に含む(例えば、環系のアルキル化により複数の部位でのアルキル化がもたらされる場合があり、全てのかかる反応生成物が明示的に含まれる)。かかる化合物の全ての異性体形態が明示的に含まれる。化合物の互変異性体が芳香族である場合、この化合物は芳香族である。同様に、置換基の互変異性体がヘテロアリールである場合、この置換基はヘテロアリールである。
【００１９】
「アルキル」という用語は、1〜10個の炭素原子を有する直鎖状または分岐状飽和炭化水素基のラジカル(「C1-10アルキル」)を指す。C1-6アルキル基の例としては、メチル(C1)、エチル(C2)、プロピル(C3)(例えば、n-プロピル、イソプロピル)、ブチル(C4)(例えば、n-ブチル、tert-ブチル、sec-ブチル、イソ-ブチル)、ペンチル(C5)(例えば、n-ペンチル、3-ペンタニル、アミル、ネオペンチル、3-メチル-2-ブタニル、第3級アミル)、およびヘキシル(C6)(例えば、n-ヘキシル)が挙げられる。別途指定されない限り、アルキル基の各例は独立して、非置換である(「非置換アルキル」)か、または一つまたは複数の置換基(例えば、Fなどのハロゲン)で置換されている(「置換アルキル」)。特定の実施形態では、アルキル基は、非置換-C1-10アルキルである。特定の実施形態では、アルキル基は、置換-C1-10アルキルである。
【００２０】
「ハロアルキル」という用語は、置換アルキル基を指し、ここで、水素原子のうちの一つまたは複数が独立して、ハロゲン、例えば、フルオロ、ブロモ、クロロ、またはヨードにより置換されおり、全ての水素がハロにより置換されているアルキル部分(例えば、ペルフルオロアルキル)を含む。いくつかの実施形態では、ハロアルキル部分は、1〜8個の炭素原子を有する(「C1-8ハロアルキル」)。
【００２１】
「アルコキシ」または「アルコキシル」という用語は、-O-アルキルラジカルを指す。例えば、1〜6個の炭素原子を含む。
【００２２】
「アリールオキシ」という用語は、-O-アリールラジカルを指す。いくつかの実施形態では、アリールオキシ基はフェノキシである。
【００２３】
「アルケニル」という用語は、2〜10個の炭素原子および一つまたは複数の炭素-炭素二重結合(例えば、1、2、3、または4つの二重結合)を有する直鎖状または分岐状炭化水素基のラジカルを指す。一つまたは複数の炭素-炭素二重結合は、内部にあり得る（例えば、2-ブテニル内）か、または末端にあり得る（例えば、1-ブテニル内）。-C2-4アルケニル基の例には、エテニル（C2）、1-プロペニル（C3）、2-プロペニル（C3）、1-ブテニル（C4）、2-ブテニル（C4）、ブタジエニル（C4）、ペンテニル（C5）、ペンタジエニル（C5）、ヘキセニル（C6）、ヘプテニル（C7）、オクテニル（C8）、オクタトリエニル（C8）などが挙げられる。別途指定されない限り、アルケニル基の各例は独立して、非置換である(「非置換アルケニル」)か、または一つまたは複数の置換基で置換されている(「置換アルケニル」)。特定の実施形態では、アルケニル基は、非置換-C2-10アルケニルである。特定の実施形態では、アルケニル基は、置換-C2-10アルケニルである。アルケニル基では、C=C二重結合は、(E)または(Z)二重結合であり得る。
【００２４】
「アルキニル」という用語は、2〜10個の炭素原子および一つまたは複数の炭素-炭素三重結合(例えば、1、2、3、または4つの三重結合)を有する直鎖状または分岐状飽和炭化水素基のラジカル(「C2-10アルキニル」)を指す。アルキニル基の例としては、エチニル(C2)、1-プロピニル(C3)、2-プロピニル(C3)、1-ブチニル(C4)、2-ブチニル(C4)、ペンチニル(C5)、ヘキシニル(C6)、ヘプチニル(C7)、オクチニル(C8)などが挙げられる。別途指定されない限り、アルキニル基の各例は独立して、非置換である(「非置換アルキニル」)か、または一つまたは複数の置換基で置換されている(「置換アルキニル」)。特定の実施形態では、アルキニル基は、非置換-C2-10アルキニルである。特定の実施形態では、アルキニル基は、置換-C2-10アルキニルである。
【００２５】
「カルボシクリル」または「炭素環式」という用語は、非芳香族環系内に3〜14個の環炭素原子および0個のヘテロ原子を有する非芳香族単環式、二環式、または三環式もしくは多環式炭化水素環系のラジカル(「C3-14カルボシクリル」)を指す。カルボシクリル基には、完全飽和環系(例えば、シクロアルキル)、および部分飽和環系が含まれる。いくつかの実施形態では、カルボシクリル基は、3〜10個の環炭素原子を有する(「C3-10カルボシクリル」)。
【００２６】
本明細書で用いられる「シクロアルキル」という用語には、示される数の環および炭素原子を含む3〜14個の炭素を有する飽和環式、二環式、三環式、または多環式炭化水素基(例えば、C3-C14単環式、C4-C14二環式、C5-C14三環式、またはC6-C14多環式シクロアルキル)が含まれる。いくつかの実施形態では、「シクロアルキル」は、単環式シクロアルキルである。単環式シクロアルキル基の例としては、シクロペンチル(C5)、シクロヘキシル(C5)、シクロプロピル(C3)、シクロブチル(C4)、シクロヘプチル(C7)、およびシクロオクチル(C8)が挙げられる。いくつかの実施形態では、「シクロアルキル」は、二環式シクロアルキルである。二環式シクロアルキルの例としては、ビシクロ[1.1.0]ブタン(C4)、ビシクロ[1.1.1]
ペンタン(C5)、スピロ[2.2]ペンタン(C5)、ビシクロ[2.1.0]ペンタン(C5)、ビシクロ[2.1.1]ヘキサン(C6)、ビシクロ[3.3.3]ウンデカン(C11)、デカヒドロナフタレン(C10)、ビシクロ[4.3.2]ウンデカン(C11)、スピロ[5.5]ウンデカン(C11)、およびビシクロ[4.3.3]ドデカン(C12)が挙げられる。いくつかの実施形態では、「シクロアルキル」は、三環式シクロアルキルである。三環式シクロアルキルの例としては、アダミンチン(C12)が挙げられる。別途指定されない限り、シクロアルキル基の各例は独立して、非置換である(「非置換シクロアルキル」)か、または一つまたは複数の置換基で置換されている(「置換シクロアルキル」)。特定の実施形態では、シクロアルキル基は、非置換C3-14シクロアルキルである。特定の実施形態では、シクロアルキル基は、置換C3-14シクロアルキルである。
【００２７】
「ヘテロシクリル」または「複素環式」という用語は、各ヘテロ原子が独立して、窒素、酸素、および硫黄から選択される、環炭素原子および1〜4個の環ヘテロ原子を有する3〜14員非芳香族環系のラジカル(「3〜14員のヘテロシクリル」)を指す。一つまたは複数の窒素原子を含有するヘテロシクリル基では、結合点は、原子価が許す限り、炭素原子または窒素原子であり得る。ヘテロシクリル基は、単環式(「単環式ヘテロシクリル」)または多環式(例えば、二環式系(「二環式ヘテロシクリル」)または三環式系(「三環式ヘテロシクリル」)などの縮合、架橋、またはスピロ環系)のいずれかであり得、飽和であり得るか、または一つまたは複数の炭素-炭素二重または三重結合を含み得る。ヘテロシクリル多環式環系は、一方の環または両方の環に一つまたは複数のヘテロ原子を含み得る。「ヘテロシクリル」は、上で定義されたヘテロシクリル環が一つまたは複数のカルボシクリル基と縮合されている環系（ここで、結合点がカルボシクリル環上またはヘテロシクリル環上のいずれかにある）、または上で定義されたヘテロシクリル環が一つまたは複数のアリール基またはヘテロアリール基と縮合されている環系（ここで、結合点がヘテロシクリル環上にある）も含み、かかる例では、環員の数は、依然としてヘテロシクリル環系内の環員の数を指定する。別途指定されない限り、ヘテロシクリルの各例は独立して、非置換である(「非置換ヘテロシクリル」)か、または一つまたは複数の置換基で置換されている(「置換ヘテロシクリル」)。特定の実施形態では、ヘテロシクリル基は、非置換3-14員のヘテロシクリルである。特定の実施形態では、ヘテロシクリル基は、置換3-14員のヘテロシクリルである。いくつかの実施形態では、ヘテロシクリル基は、環炭素原子および1〜4個の環ヘテロ原子を有する5〜10員の非芳香族環系であり、各ヘテロ原子が独立して、窒素、酸素、および硫黄から選択される(「5〜10員のヘテロシクリル」)。例示的なヘテロシクリル基としては、アジリジニル、オキシラニル、チイラニル、アゼチジニル、オキセタニル、チエタニル、テトラヒドロフラニル、ジヒドロフラニル、テトラヒドロチオフェニル、ジヒドロチオフェニル、ピロリジニル、ジヒドロピロリル、ピロリル-2,5-ジオン、ジオキソラニル、オキサチオラニル、ジチオラニル、トリアゾリニル、オキサジアゾリニル、チアジアゾリニル、ピペリジニル、テトラヒドロピラニル、ジヒドロピリジニル、チアニル、ピペラジニル、モルホリニル、ジチアニル、ジオキサニル、トリアジナニル、アゼパニル、オキセパニル、チエパニル、アゾカニル、オキセカニル、チオカニル、インドリニル、イソインドリニル、ジヒドロベンゾフラニル、ジヒドロベンゾチエニル、テトラヒドロベンゾチエニル、テトラヒドロベンゾフラニル、テトラヒドロインドリル、テトラヒドロキノリニル、テトラヒドロイソキノリニル、デカヒドロキノリニル、デカヒドロイソキノリニル、オクタヒドロクロメニル、オクタヒドロイソクロメニル、デカヒドロナフチリジニル、デカヒドロ-1,8-ナフチリジニル、オクタヒドロピロロ[3,2-b]ピロール、インドリニル、フタリミジル、ナフタリミジル、クロマニル、クロメニル、1H-ベンゾ[e][1,4]ジアゼピニル、1,4,5,7-テトラヒドロピラノ[3,4-b]ピロリル、5,6-ジヒドロ-4H-フロ[3,2-b]ピロリル、6,7-ジヒドロ-5H-フロ[3,2-b]ピラニル、5,7-ジヒドロ-4H-チエノ[2,3-c]ピラニル、2,3-ジヒドロ-1H-ピロロ[2,3-b]ピリジニル、2,3-ジヒドロフロ[2,3-b]ピリジニル、4,5,6,7-テトラヒドロ-1H-ピロロ[2,3-b]ピリジニル、4,5,6,7-テトラヒドロフロ[3,2-c]ピリジニル、4,5,6,7-テトラヒドロチエノ[3,2-b]ピリジニル、1,2,3,4-テトラヒドロ-1,6-ナフチリジニルなどが挙げられる。
【００２８】
「アリール」という用語は、6〜14個の環炭素原子および0個のヘテロ原子が芳香族環系内に提供された単環式または多環式(例えば、二環式または三環式)4n+2芳香族環系(例えば、6、10、または14個のπ電子が環式アレイ内で共有されている)のラジカル(「C6-14アリール」)を指す。いくつかの実施形態では、アリール基は、6個の環炭素原子を有する(「C6アリール」、例えば、フェニル)。いくつかの実施形態では、アリール基は、10個の環炭素原子を有する(「C10アリール」、例えば、1-ナフチルおよび2-ナフチルなどのナフチル)。いくつかの実施形態では、アリール基は、14個の環炭素原子を有する(「C14アリール」、例えば、アントラシル)。「アリール」は、上で定義されたアリール環が一つまたは複数のカルボシクリル基またはヘテロシクリル基と縮合されている環系（ここで、ラジカルまたは結合点がアリール環上にある）も含み、かかる例では、炭素原子の数は、依然としてアリール環系内の炭素原子の数を指定する。別途指定されない限り、アリール基の各例は独立して、非置換である(「非置換アリール」)か、または一つまたは複数の置換基で置換されている(「置換アリール」)。特定の実施形態では、アリール基は、非置換C6-14アリールである。特定の実施形態では、アリール基は、置換C6-14アリールである。
【００２９】
「ヘテロアリール」という用語は、芳香族環系内に提供された、環炭素原子および1〜4個の環ヘテロ原子を有する、5〜14員の単環式または多環式(例えば、二環式、三環式)4n+2芳香族環系(例えば、6個のπ電子が環式アレイ内で共有されている)のラジカルを指し、各へテロ原子は独立して、窒素、酸素、および硫黄から選択される(「5〜14員のヘテロアリール」)。いくつかの実施形態では、ヘテロアリールは、1〜4個のヘテロ原子を含有する5または6員の単環式ヘテロアリールであり得る。いくつかの実施形態では、ヘテロアリールは、1〜6個のヘテロ原子を有する8〜12員二環式ヘテロアリールであり得る。「5または6員の単環式ヘテロアリール」または「5員または6員の単環式ヘテロアリール」は、環炭素原子および1〜4個の環ヘテロ原子を有する、5または6員の単環式および非融合の4n+2芳香環系を指す。例示的な単環5または6員のヘテロアリール基には、ピロリル、フラニル、チオフェニル、イミダゾリル、ピラゾリル、オキサゾリル、イソキサゾリル、チアゾリル、イソチアゾリル、トリアゾリル、オキサジアゾリル、チアジアゾリル、テトラゾリル、ピリジニル、ピリダジニル、ピリミジニル、ピラジニル、トリアジニル、およびテトラジニルが含まれる。本明細書で使用される場合、ラジカルの互変異性体がヘテロアリールである場合、このラジカルはヘテロアリールである。「互変異性体」または「互変異性体の」という用語は、水素原子の少なくとも一つのホルマール移動、および原子価の少なくとも一つの変化（例えば、二重結合への単結合、単一結合への三重結合、またはその逆）から生じる二つ以上の相互転換可能な化合物／置換基を指す。互変異性体の正確な比は、温度、溶媒、pHなどのいくつかの要因に依存する。互変異性（すなわち、互変異性対を提供する反応）は、酸または塩基によって触媒され得る。例示的な互変異性には、ケトからエノール、アミドからイミド、ラクタムからラクティム、エナミンからイミン、およびエナミンから（異なるエナミン）互変異性が挙げられる。
【００３０】
「飽和」という用語は、二重結合または三重結合を含まない部分を指し、すなわち、この部分は、単結合のみを含む。
【００３１】
「任意で置換された」という用語は、置換されているか、または置換されていないことを指す。一般に、「置換された」という用語は、ある基上に存在する少なくとも一つの水素が許容される置換基、例えば、置換時に、安定した化合物、例えば、再編成、環化、脱離、または他の反応などの変換を自発的に受けない化合物をもたらす置換基で置き換えられることを意味する。別途示されない限り、「置換された」基は、その基の一つまたは複数の置換可能な位置に置換基(例えば、C1-6アルキル、ハロゲン、ニトロ、シアノ、ヒドロキシル、C1-6ハロアルキル、C1-6ハロアルコキシ、C1-6アシル、C3-6シクロアルキル、C6-10アリール、単環式または二環式ヘテロアリール、および単環式または二環式ヘテロシクリル)を有し、任意の所与の構造における二つ以上の位置が置換された場合、置換基は、各位置で同じであるかまたは異なるかのいずれかである。「置換された」という用語は、有機化合物の全ての許容される置換基での置換を含むよう企図されており、安定した化合物の形成をもたらす本明細書に記載の置換基うちののいずれかを含む。本発明は、安定した化合物に到達するためにありとあらゆるかかる組み合わせを企図する。本発明の目的のために、窒素などのヘテロ原子は、ヘテロ原子の原子価を満たし、安定した部分の形成をもたらす水素置換基および/または任意の好適な置換基を有し得る。本発明は、いかなる方法によっても本明細書に記載の例示的な置換基によって制限されるようには意図されていない。
【００３２】
「置換可能な環炭素原子」は、上記で定義された許容される置換基と置換される炭素原子上に存在する少なくとも一つの水素を有するアリール／ヘテロアリール／カルボシクリル／ヘテロシクリル環上の炭素原子を指す。「置換可能な環窒素原子」は、
許容される置換基と置換される窒素原子上に存在する少なくとも一つの水素を有するヘテロアリール−ヘテロシクリル環上の窒素原子を指す。
【００３３】
別途示されていない限り、「置換された」基は、基の一つまたは複数の置換可能な位置に置換基を有し、任意の所与の構造で二つ以上の位置が置換された場合、置換基は各位置で同じであるかまたは異なるかのいずれかである。「置換された」という用語は、有機化合物の全ての許容される置換基での置換を含むよう企図されており、安定した化合物の形成をもたらす本明細書に記載の置換基うちののいずれかを含む。本発明は、安定した化合物に到達するためにありとあらゆるかかる組み合わせを企図する。本発明の目的のために、窒素などのヘテロ原子は、ヘテロ原子の原子価を満たし、安定した部分の形成をもたらす水素置換基および/または任意の好適な置換基を有し得る。本発明は、いかなる方法によっても本明細書に記載の例示的な置換基によって制限されるようには意図されていない。
【００３４】
「ハロ」または「ハロゲン」という用語は、フッ素、塩素、臭素、またはヨウ素を指す。
【００３５】
「アシル」という用語は、一般式-C(=O)RX1、-C(=O)ORX1、-C(=O)-O-C(=O)RX1、-C(=O)SRX1、-C(=O)N(RX1)2、-C(=S)RX1、-C(=S)N(RX1)2、および-C(=S)S(RX1)、-C(=NRX1)RX1、-C(=NRX1)ORX1、-C(=NRX1)SRX1、および-C(=NRX1)N(RX1)2を有する基を指し、式中、RX1は、原子価が許す限り、水素、ハロゲン、置換もしくは非置換ヒドロキシル、置換もしくは非置換チオール、置換もしくは非置換アミノ、置換もしくは非置換アシル、環式もしくは非環式、置換もしくは非置換、分岐状または非分枝状C1-10アルキル、環式もしくは非環式、置換もしくは非置換、分岐状または非分枝状C2-10アルケニル、置換もしくは非置換C2-10アルキニル、置換もしくは非置換C6-12アリール、置換もしくは非置換ヘテロアリールである。例示的なアシル基としては、アルデヒド(-CHO)、カルボン酸(-CO2H)、ケトン、ハロゲン化アシル、エステル、アミド、イミン、カルボネート、カルバメート、および尿素が挙げられる。
【００３６】
特定の実施形態では、窒素原子、酸素原子、または硫黄原子上に存在する置換基は、それぞれ、窒素保護基、酸素保護基、または硫黄保護基である。窒素保護基、酸素保護基、および硫黄保護基は当該技術分野で周知であり、参照により本明細書に組み込まれる、Protecting  Groups  in  Organic  Synthesis,T.W.Greene  and  P.G.M.Wuts,3rd  edition,John  Wiley  &  Sons,1999に詳述されているものを含む。例えば、窒素保護基には、ホルムアミド、アセトアミド、クロロアセトアミド、トリクロロアセトアミド、トリフルオロアセトアミド、フェニルアセトアミド、メチルカルバメート、エチルカルバメート、9-フルオレニルメチルカルバメート(Fmoc)、t-ブチルカルバメート(BOCまたはBoc)、1-アダマンチルカルバメート(Adoc)、ビニルカルバメート(Voc)、アリルカルバメート(Alloc)、2-(トリメチルシリル)
エトキシ]メチル(SEM)、p-トルエンスルホンアミド(Ts)、ベンゼンスルホンアミド、2,3,6-トリメチル-4-メトキシベンゼンスルホンアミド(Mtr)、2,4,6-トリメトキシベンゼンスルホンアミド(Mtb)、フェノチアジニル-(10)-アシル誘導体、N'-p-トルエンスルホニルアミノ誘導体などが挙げられるが、これらに限定されない。例示的な酸素保護基としては、メチル、
メトキシメチル(MOM)、メチルチオメチル(MTM)、t-ブチルチオメチル、(フェニルジメチルシリル)メトキシメチル(SMOM)、ベンジルオキシメチル(BOM)、p-メトキシベンジルオキシメチル(PMBM)、(4-メトキシフェノキシ)メチル(p-AOM)、テトラヒドロピラニル(THP)、メタンスルホネート(メシレート)、ベンジルスルホネート、およびトシレート(Ts)が挙げられるが、これらに限定されない。
【００３７】
「脱離基」という用語は、合成有機化学の技術分野におけるその通常の意味であり、求核体によって置換され得る原子または基を指す。好適な脱離基の例としては、ハロゲン(F、Cl、Br、またはI(ヨウ素)など)、アルコキシカルボニルオキシ、アリールオキシカルボニルオキシ、アルカンスルホニルオキシ、アレンスルホニルオキシ、アルキル-カルボニルオキシ(例えば、アセトキシ)、スルホン酸エステル、例えば、トルエンスルホネート(トシレート、-OTs)、メタンスルホネート(メシレート、-OMs)、p-ブロモベンゼンスルホニルオキシ(ブロシレート、-OBs)、-OS(=O)2(CF2)3CF3(ノナフレート、-ONf)、またはトリフルオロメタンスルホネート(トリフレート、-OTf)が挙げられるが、これらに限定されない。
【００３８】
「薬学的に許容可能な塩」という用語は、正しい医学的判断の範囲内で、過度の毒性、刺激、アレルギー性反応などなくヒトおよび下等動物の組織との接触における使用に好適であり、かつ適度なベネフィット／リスク比に見合った塩を指す。薬学的に許容可能な塩は、当該技術分野で周知である。例えば、Bergeらは、参照により本明細書に組み込まれる、J.pHarmaceutical  Sciences,1977,66,1-19で、薬学的に許容可能な塩について詳細に説明している。本発明の化合物の薬学的に許容可能な塩には、好適な無機及び有機酸及び塩基に由来するものが含まれる。薬学的に許容される非毒性の酸付加塩の例は、無機酸、例えば、塩酸、臭化水素酸、リン酸、硫酸、および過塩素酸、または有機酸、例えば、酢酸、シュウ酸、マレイン酸、酒石酸、クエン酸、コハク酸、もしくはマロン酸で形成されるか、またはイオン交換などの当該技術分野で既知の他の方法を使用して形成されるアミノ基の塩である。他の薬学的に許容可能な塩には、アジピン酸塩、アルギン酸塩、アスコルビン酸塩、アスパラギン酸塩、ベンゼンスルホン酸塩、安息香酸塩、重硫酸塩、ホウ酸塩、酪酸塩、樟脳酸塩、カンファースルホン酸塩、クエン酸塩、シクロペンタンプロピオン酸塩、ジグルコン酸塩、ドデシル硫酸塩、エタンスルホン酸塩、ギ酸塩、フマル酸塩、グルコヘプトン酸塩、グリセロリン酸塩、グルコン酸塩、ヘミ硫酸塩、ヘプタン酸塩、ヘキサン酸塩、ヨウ化水素酸塩、2-ヒドロキシ-エタンスルホン酸塩、ラクトビオン酸塩、乳酸塩、ラウリン酸塩、ラウリル硫酸塩、リンゴ酸塩、マレイン酸塩、マロン酸塩、メタンスルホン酸塩、2-ナフタレンスルホン酸塩、ニコチン酸塩、硝酸塩、オレイン酸塩、シュウ酸塩、パルミチン酸塩、パモン酸塩、ペクチン酸塩、過硫酸塩、3-フェニルプロピオン酸塩、リン酸塩、ピクリン酸塩、ピバル酸塩、プロピオン酸塩、ステアリン酸塩、コハク酸塩、硫酸塩、酒石酸塩、チオシアン酸塩、p-トルエンスルホン酸塩、ウンデカン酸塩、吉草酸塩などが含まれる。適切な塩基に由来する塩には、アルカリ金属塩、アルカリ土類金属塩、アンモニウム塩、およびN+(C1-4アルキル)4-塩が含まれる。代表的なアルカリまたはアルカリ土類金属塩には、ナトリウム、リチウム、カリウム、カルシウム、マグネシウムなどが含まれる。さらなる薬学的に許容可能な塩には、適切な場合、ハロゲン化物、水酸化物、カルボン酸塩、硫酸塩、リン酸、硝酸塩、低級アルキルスルホン酸塩、およびアリールスルホン酸塩などの対イオンを使用して形成される非毒性のアンモニウム、四級アンモニウム、およびアミンカチオンが含まれる。
【００３９】
「組成物」および「製剤」という用語は、同義に使用される。
【００４０】
投与が企図されている「被検者」とは、ヒト(すなわち、任意の年齢群の男性または女性、例えば、小児対象(例えば、乳幼児、子供、もしくは青年)または成人対象(例えば、若年成人、中年成人、もしくは高齢成人))、または非ヒト動物を指す。特定の実施形態では、非ヒト動物は、哺乳動物(例えば、霊長類(例えば、カニクイザルもしくはアカゲザル)、商業的に関連性のある哺乳動物(例えば、ウシ、ブタ、ウマ、ヒツジ、ヤギ、ネコ、もしくはイヌ)、またはトリ(例えば、ニワトリ、カモ、ガチョウ、もしくはシチメンチョウなどの商業的に関連性のあるトリ)である。特定の実施形態では、非ヒト動物は、魚、爬虫類、または両生類である。非ヒト動物は、任意の発育段階の雄または雌であり得る。非ヒト動物は、トランスジェニック動物または遺伝子操作された動物であり得る。特定の実施形態では、対象は、患者である。「患者」という用語は、疾患の治療を必要とするヒト対象を指す。特定の実施形態では、「患者」という用語は、疾患の治療を必要とする18歳超のヒト成人である。特定の実施形態では、「患者」という用語は、疾患の治療を必要とする18歳以下のヒト小児である。特定の実施形態では、患者は、定期的な輸血を受けていない(例えば、12ヶ月間に4回以下の輸血エピソードを受けている)。特定の実施形態では、患者は、定期的な輸血を受けている(例えば、12ヶ月間に少なくとも4回の輸血エピソードを受けている)。特定の実施形態では、対象は脾臓摘出を受けた。特定の実施形態では、対象は脾臓摘出を受け、定期的な輸血を受ける。特定の実施形態では、対象は脾臓摘出を受け、定期的な輸血を受けない。
【００４１】
「投与する」、「投与すること」、または「投与」という用語は、対象内または対象上に、本明細書に記載の化合物またはその組成物を埋め込むか、吸収させるか、取り込むか、注射するか、吸入させるか、またはさもなければ導入することを指す。
【００４２】
「治療」、「治療する」、および「治療すること」という用語は、本明細書に記載の疾患を逆転させるか、緩和させるか、その発症を遅延させるか、またはその進行を阻止することを指す。いくつかの実施形態では、治療は、疾患の一つまたは複数の兆候または症状が発症または観察された後に投与され得る(すなわち、治療的治療)。他の実施形態では、治療は、疾患の兆候または症状の不在下で投与され得る。例えば、治療は、症状の発症前に罹患しやすい対象に投与され得る(すなわち、予防的治療)(例えば、症状の経歴を考慮しておよび／または病原体への曝露を考慮して)。治療は、症状が消失した後に、例えば、再発を遅延させるか、または防止するためにも継続され得る。特定の実施形態では、治療は、ある期間にわたって障害の少なくとも一つの症状の発症を遅延させることを含む。
【００４３】
「状態」、「疾患」、および「障害」という用語は、同義に使用される。
【００４４】
本明細書に記載の化合物の「有効量」は、所望の生物学的応答を誘発するのに十分な量を指す。本明細書に記載の化合物の有効量は、所望の生物学的エンドポイント、化合物の薬物動態、治療される状態、投与方法、ならびに対象の年齢および健康に応じて変動し得る。特定の実施形態では、有効量は、治療有効量である。特定の実施形態では、有効量は、ベースラインからHb濃度を1.5g/dL以上増加させる対象のヘモグロビン応答を生じさせるものである。対象のベースラインHb濃度は、化合物で治療する前の全ての利用可能なHb濃度の平均である。特定の実施形態では、有効量は、ベースラインからHb濃度を1.0g/dL以上増加させる対象のヘモグロビン応答を生じさせるものである。特定の実施形態では、有効量は、ベースラインからHb濃度を2.0g/dL以上増加させる対象のヘモグロビン応答を生じさせるものである。特定の実施形態では、有効量は、本明細書に記載の化合物の単回投与量である。特定の実施形態では、有効量は、本明細書に記載の化合物の複数回投与量を組み合わせた量である。特定の実施形態では、有効量は、治療有効量である。
【００４５】
本明細書に記載の化合物の「治療有効量」は、状態の治療において治療的利益を提供するか、またはその状態に関連する一つまたは複数の症状を遅延させるかまたは最小限に抑えるのに十分な量である。化合物の治療有効量とは、状態の治療において治療的利益を提供する、単独での、または他の療法と組み合わせた治療薬の量を意味する。「治療有効量」という用語は、全体的な療法を改善し、状態の症状、兆候、または原因を軽減または回避し、かつ/または別の治療薬の治療有効性を強化する量を包含し得る。特定の実施形態では、治療有効量は、野生型または変異型PKRの測定可能な活性化を引き起こすのに十分な量である。特定の実施形態では、治療有効量は、それを必要とする血液中の2,3-ジホスホグリセリン酸および／またはATPレベルの調節、またはピルビン酸キナーゼ欠損症（PKD）、溶血性貧血（例えば、慢性溶血性貧血、遺伝性非球状貧血）、鎌状赤血球症、サラセミア（例えば、ベータサラセミア）、遺伝性球状赤血球症、遺伝性楕円赤血球症、無ベータリポ蛋白血症（またはバッセン-コーンツヴァイク症候群）、発作性夜間血色素尿症、後天性溶血性貧血（例えば、先天性貧血（例えば、酵素異常症））、慢性疾患の貧血の治療、または2,3-ジホスホグリセリン酸レベルの増加に関連する疾患または状態（例えば、肝臓疾患）の治療に十分な量である。特定の実施形態では、治療有効量は、野生型または変異型PKRの測定可能な活性化を引き起こすこと、およびそれを必要とする血液中の2,3-ジホスホグリセリン酸レベルの調節、またはピルビン酸キナーゼ欠損症（PKD）、溶血性貧血（例えば、慢性溶血性貧血、遺伝性非球状貧血）、鎌状赤血球症、サラセミア（例えば、ベータサラセミア）、遺伝性球状赤血球症、遺伝性楕円赤血球症、無ベータリポ蛋白血症（またはバッセン-コーンツヴァイク症候群）、発作性夜間血色素尿症、後天性溶血性貧血（例えば、先天性貧血（例えば、酵素異常症））、慢性疾患の貧血の治療、または2,3-ジホスホグリセリン酸レベルの増加に関連する疾患または状態（例えば、肝臓疾患）の治療に十分な量である。一態様では、治療上有効量は、ベースラインからHb濃度を1.0g/dL以上（1.5g/dL以上、または2.0g/dL以上など）増加させる対象のヘモグロビン応答を生じさせるのに必要な量である。対象のベースラインHb濃度は、本明細書に記載される化合物を用いた治療前の少なくとも二週間（例えば、3週間、4週間、5週間、または6週間）以内のすべての利用可能なHb濃度の平均である。特定の態様では、治療上有効量は、患者の輸血負担を減少させるために必要な量である。一態様では、治療上有効量は、例えば、一日当たり0.1〜100mg／体重kgになど、提供される化合物の一日当たり0.01〜100mg／体重kgである。特定の実施形態では、治療上有効な量は、患者の輸血負担を減少させるためのものである。
【００４６】
本明細書で使用される場合、輸血負担の減少とは、少なくとも5週間の治療で輸血されたRBC単位の数の少なくとも20%の減少を意味する。特定の実施形態では、輸血負担の減少とは、少なくとも5週間の治療で輸血されたRBC単位の数の33%以上の減少である。特定の実施形態では、輸血負担の減少は、少なくとも10週間（例えば、少なくとも20週間または少なくとも24週間）の治療で観察される。
本明細書で使用される場合、鎌状赤血球症（SCD）、ヘモグロビンSS疾患、および鎌状赤血球貧血が互換的に使用される。鎌状赤血球症（SCD）は、遺伝性赤血球障害の群を表す。特定の実施形態では、SCDを有する対象は、赤血球にヘモグロビンSまたは鎌状ヘモグロビンと呼ばれる、異常ヘモグロビンを有する。特定の実施形態では、SCDを有する人々は、体にヘモグロビンSを生成させる少なくとも一つの異常遺伝子を有する。特定の実施形態では、SCDを有する人々は、二つのヘモグロビンS遺伝子、ヘモグロビンSSを有する。
【００４７】
サラセミアは、体が異常な形態のヘモグロビンを生成する遺伝性血液障害である。特定の実施形態では、ヘモグロビンの異常形態は、アルファまたはベータグロビンのいずれかの欠損を生じさせる。特定の実施形態では、障害は多数の赤血球を破壊し、これが貧血につながる。特定の実施形態では、サラセミアはアルファサラセミアである。特定の実施形態では、サラセミアはベータサラセミアである。
【００４８】
本明細書で使用される「活性化因子」という用語は、野生型ピルビン酸キナーゼR（wt  PKR）の活性を（測定可能なほど）増加させるか、もしくは野生型ピルビン酸キナーゼR（wt  PKR）活性をwt  PKRの基礎活性レベルよりも高いレベルに増加させる薬剤、または変異型ピルビン酸キナーゼR（m  PKR）の活性を（測定可能なほど）増加させるか、もしくは変異型ピルビン酸キナーゼR（mPKR)活性を、変異型PKRの基礎活性レベル、例えば、野生型PKRの活性の20%、40%、50%、60%、70%、80%、90%もしくは100%よりも高いレベルに増加させる薬剤を意味する。
本明細書において使用される「濃厚赤血球」またはPRBCという用語は、ほとんどの血漿の遠心分離および除去によって全血の単位から生成された赤血球を指す。特定の実施形態では、PRBCユニットは少なくとも約95%のヘマトクリットを有する。特定の実施形態では、PRBCユニットは、少なくとも約90%、80%、70%、60%、50%、40%、30%、20%、または10%のヘマトクリットを有する。
【００４９】
本明細書で使用される方法を指す「エクスビボ」という用語は、その方法が生体外で行われることを意味する。例えば、細胞（例えば、赤血球）、組織または血液（少なくとも赤血球、血漿、およびヘモグロビンを含有する）は、生体から抽出されて、任意で人工的に制御された条件（例えば、温度）下で、本明細書に提供される一つまたは複数の化合物、またはその薬学的に許容可能な塩、またはその医薬組成物と接触し得る。
【００５０】
本明細書で使用される方法を指す「インビトロ」という用語は、その方法が生体外で行われ、かつ人工環境内に収容されることを意味する。例えば、細胞（例えば、赤血球）、組織または血液（少なくとも赤血球、血漿、およびヘモグロビンを含有する）は、生体から抽出されて、収容される人工環境（例えば、培養システム）、例えば、試験管内、培養物内、フラスコ内、マイクロタイタープレート内、ペトリ皿上などにおいて、本明細書に提供される一つまたは複数の化合物、またはその薬学的に許容可能な塩、またはその医薬組成物と接触し得る。
【００５１】
化合物
本明細書に記載されるものなどの野生型PKRおよび／または変異型PKRを活性化する化合物および組成物が本明細書に記載されている。一実施形態では、式（I）-（V）の化合物、もしくはその薬学的に許容可能な塩、または式（I）〜（V）の化合物を含む医薬組成物、もしくはその薬学的に許容可能な塩が提供される。
【００５２】
本発明の第一の実施形態では、式（I）によって表される化合物が提供されている:
【化２】
2020531443.tif 000004
（I）
またはその薬学的に許容可能な塩であって、式中、
R1は、水素、任意で置換されたアルキル、任意で置換されたハロアルキル、任意で置換されたアルケニル、任意で置換されたアルキニル、任意で置換されたシクロアルキル、任意で置換されたヘテロシクリル、任意で置換されたアリール、-ORo1、-C(=O)Rc1、または窒素保護基であり、式中、
Ro1は、水素、任意で置換されたアルキル、または酸素保護基であり、
Rc1は、任意で置換されたアルキル、または-N(Rcn)2であり、式中、Rcnの各例が独立して、水素、-C1-6アルキル、または窒素保護基であり、
R2およびQはそれぞれ独立して、任意で置換された5または6員の単環式ヘテロアリールであり、
RaおよびRbはそれぞれ独立して、水素、ハロゲン、-CN、-NO2、-N3、任意で置換されたアルキル、-ORo3、-N(Rn1)2、-C(=O)N(Rn1)2、もしくは-C(=O)Rc2であるか、または代替的に、RaおよびRbは、それらが結合している炭素原子と一緒になって、任意で置換されたシクロアルキルもしくは任意で置換されたヘテロシクリルを形成することができ、式中、
Rn1の各例は独立して、水素、任意で置換された-C1-C6アルキル、または窒素保護基であり、
Ro3は、水素、任意で置換された-C1-C6アルキル、または酸素保護基であり、
Rc2は、任意で置換された-C1-C6アルキルであり、
RjおよびRkは、それぞれ独立して、水素、ハロゲン、-CN、-ORo7、-N（Rn5)2、
-N(Rn5)C(=O)Rc5、-C(=O)N(Rn5)2、-C(=O)Rc5、-C(=O)ORo7、-SRjs、-S(=O)2Rjs、
-S(=O)Rjs、または任意で置換された-C1-C6アルキルであり、または代替的に、RjおよびRkは、それらが結合している炭素原子と一緒になって、C=O、任意で置換されたC1-C6単環式シクロアルキル環、もしくは任意で置換されたC3-C6単環式ヘテロシクリル環を形成することができ、式中、
Rn5の各例は独立して、水素、任意で置換された-C1-C6アルキル、-ORo8、または窒素保護基であり、式中、Ro8は、水素、任意で置換された-C1-C6アルキル、または酸素保護基であり、
Ro7の各例は独立して、水素、任意で置換された-C1-C6アルキル、または酸素保護基であり、
Rc5の各例は独立して、任意で置換された-C1-C6アルキルであり、
Rjsの各例は独立して、任意で置換された-C1-C6アルキル、任意で置換されたC6-12アリール、任意で置換されたヘテロアリール、または硫黄保護基である。
【００５３】
本発明の第二の実施形態では、式(I)によって表される化合物、またはその薬学的に許容可能な塩が提供され、式中、R2によって表される5または6員の単環式ヘテロアリールは、Rpにより置換可能な各環炭素原子において任意で置換され、かつRn6により置換可能な各環窒素原子において任意で置換され、式中、
Rpの各例は独立して、水素、ハロゲン、-CN、-NO2、-N3、任意で置換されたアルキル、任意で置換されたアルケニル、任意で置換されたアルキニル、任意で置換されたシクロアルキル、任意で置換されたアリール、任意で置換されたヘテロシクリル、任意で置換されたヘテロアリール、-ORo6、-SRs2、-N(Rn3)2、
-C(=O)N(Rn3)2、-N（Rn3)C(=O)Rc4、-C(=O)Rc4、-C(=O)ORo6、-OC（=O）Rc4、-S(=O)Rs2、
-S(=O)2Rs2、-S(=O)ORo6、-OS(=O)Rc4、-S(=O)2ORo6、-OS(=O)2Rc4、-S(=O)N(Rn3)2、
-S(=O)2N(Rn3)2、-N(Rn3)S(=O)Rs2、-N(Rn3)S(=O)2Rs2、-N(Rn3)C(=O)ORo6、
-OC(=O)N(Rn3)2、-N(Rn3)C(=O)N(Rn3)2、-N(Rn3)S(=O)N(Rn3)2、-N(Rn3)S(=O)2N(Rn3)2、-N(Rn3)S(=O)ORo6、-N(Rn3)S(=O)2ORo6、-OS(=O)N(Rn3)2、もしくは-OS(=O)2N(Rn3)2であるか、または、同一もしくは隣接する炭素原子に結合したRpの二つの例が、それらが結合する炭素原子と一緒になって、任意で置換されたシクロアルキルもしくはヘテロシクロアルキルを形成することができ、式中、
Rn3の各例が独立して、水素、任意で置換された-C1-C6アルキル、または窒素保護基であり、
Ro6の各例は独立して、水素、任意で置換された-C1-C6アルキル、または酸素保護基であり、
Rc4の各例は、任意で置換された-C1-C6アルキルであり、
Rs2の各例は独立して、任意で置換された-C1-C6アルキル、または硫黄保護基であり、
Rn6は、水素、任意で置換された-C1-C6アルキル、または窒素保護基であり、
残りの変数は、第一の実施形態に定義されるとおりである。
【００５４】
本発明の第三の実施形態では、式（I）によって表される化合物、またはその薬学的に許容可能な塩が提供され、式中、R2によって表される5または6員の単環式へテロアリールは、次のいずれかから選択され、
【化３−１】
2020531443.tif 000005
【化３−２】
2020531443.tif 000006
式中、
RncおよびRndの各例は独立して、水素、任意で置換された-C1-C6アルキル、または窒素保護基であり、
pは、原子価が許す限り、0、1、2、、3、または4であり、
残りの変数は、第一または第二の実施形態に定義されるとおりである。
【００５５】
本発明の第四の実施形態では、式（I）によって表される化合物、またはその薬学的に許容可能な塩が提供され、式中、R2によって表される5または6員の単環式へテロアリールは、次のいずれかから選択され、
【化４−１】
2020531443.tif 000007
【化４−２】
2020531443.tif 000008
残りの変数は、第一、第二または第三の実施形態に定義されるとおりである。
【００５６】
本発明の第五の実施形態では、式（I）によって表される化合物、またはその薬学的に許容可能な塩が提供され、式中、R2によって表される5または6員の単環式へテロアリールは、次のいずれかから選択され、
【化５】
2020531443.tif 000009
残りの変数は、第一、第二、第三または第四の実施形態に定義されるとおりである。
【００５７】
本発明の第六の実施形態では、式（II）によって表される化合物
【化６】
2020531443.tif 000010
(II)
またはその薬学的に許容可能な塩が提供され、式中、qは、0、1、2、または3であり、残りの変数は、第一、第二、第三、第四、または第五の実施形態に定義されるとおりである。特定の実施形態では、以下の式のうちの一つによって表される化合物
【化７】
2020531443.tif 000011
(II-a)；
【化８】
2020531443.tif 000012
(II-b)；
その薬学的に許容可能な塩が提供される。
【００５８】
本発明の第七の実施形態では、式（III）によって表される化合物
【化９】
2020531443.tif 000013
(III)
またはその薬学的に許容可能な塩が提供され、式中、qは、0、1、2、または3であり、残りの変数は、第一、第二、第三、第四、第五、または第六の実施形態に定義されるとおりである。
【００５９】
本発明の第八の実施形態では、式（IV）によって表される化合物
【化１０】
2020531443.tif 000014
(IV)
またはその薬学的に許容可能な塩が提供され、式中、qは、0、1、2、または3であり、残りの変数は、第一、第二、第三、第四、第五、第六、または第七の実施形態に定義されるとおりである。
【００６０】
本発明の第九の実施形態では、式（V）によって表される化合物
【化１１】
2020531443.tif 000015
(V)
またはその薬学的に許容可能な塩が提供され、式中、qは、0、1、2、または3であり、残りの変数は、第一、第二、第三、第四、第五、第六、第七、または第八の実施形態に定義されるとおりである。
【００６１】
本発明の第十の実施形態では、式(II)、(III)、(IV)、もしくは（V）によって表される化合物、またはその薬学的に許容可能な塩が提供され、式中、Rn6は、水素または-C1-4アルキルであり、残りの変数は、第二、第三、第四、第五、第六、第七、第八、または第九の実施形態で定義されるとおりである。
【００６２】
本発明の第十一の実施形態では、式(II)、(III)、(IV)、もしくは（V）によって表される化合物、またはその薬学的に許容可能なその塩が提供され、式中、Rpの各例は、独立して水素、ハロゲン、任意で置換されたC1-4アルキル、-CN、-NO2、-N3、-ORo4、-N（Rn2)2、-C(=O)N(Rn2)2、-C(=O)Rc3、または-C(=O)ORo4であり、残りの変数は、第二、第三、第四、第五、第六、第七、第八、第九、または第十の実施形態で定義されるとおりである。
【００６３】
本発明の第十二の実施形態では、式（I）、(II)、(III)、(IV)、もしくは(V)によって表される化合物、またはその薬学的に許容可能な塩が提供され、式中、Qによって表される5または6員の単環式へテロアリールは、次のいずれかから選択され、
【化１２】
2020531443.tif 000016
式中、
Rnの各例は独立して、水素、ハロゲン、-CN、-NO2、-N3、任意で置換されたアルキル、任意で置換されたアルケニル、任意で置換されたアルキニル、任意で置換されたシクロアルキル、任意で置換されたアリール、任意で置換されたヘテロシクリル、任意で置換されたヘテロアリール、-ORo4、-SRs1、-N(Rn2)2、
-C(=O)N(Rn2)2、-N(Rn2)C(=O)Rc3、-C(=O)Rc3、-C(=O)ORo4、-OC(=O)Rc3、-S(=O)Rs1、-S(=O)2Rs1、-S(=O)ORo4、-OS(=O)Rc3、-S(=O)2ORo4、-OS(=O)2Rc3、-S(=O)N(Rn2)2、
-S(=O)2N(Rn2)2、-N(Rn2)S(=O)Rs1、-N(Rn2)S(=O)2Rs1、-N(Rn2)C(=O)ORo4、
-OC(=O)N(Rn2)2、-N(Rn2)C(=O)N(Rn2)2、-N(Rn2)S(=O)N(Rn2)2、-N(Rn2)S(=O)2N(Rn2)2、-N(Rn2)S(=O)ORo4、-N(Rn2)S(=O)2ORo4、-OS(=O)N(Rn2)2、もしくは-OS(=O)2N(Rn2)2であるか、または、同一もしくは隣接する炭素原子に結合したRnの二つの例が、それらが結合する炭素原子と一緒になって、任意で置換されたシクロアルキルもしくはヘテロシクロアルキルを形成し、式中、
Rn2の各例は独立して、水素、任意で置換された-C1-C6アルキル、または窒素保護基であり、
Ro4の各例は独立して、水素、任意で置換された-C1-C6アルキル、または酸素保護基であり、
Rc3の各例は独立して、任意で置換された-C1-C6アルキルであり、
Rs1の各例は独立して、任意で置換された-C1-C6アルキルまたは硫黄保護基であり、
nは、原子価が許す限り、0、1、2、または3であり、
Rna、Rnb、およびRndの各々は独立して、水素、任意で置換された-C1-C6アルキル、または窒素保護基であり、
残りの変数は、第一、第二、第三、第四、第五、第六、第七、第八、第九、第十、または第十一の実施形態で定義されるとおりである。
【００６４】
本発明の第十三の実施形態では、式（I）、(II)、(III)、(IV)、もしくは(V)によって表される化合物、またはその薬学的に許容可能な塩が提供され、式中、Qによって表される5または6員の単環式へテロアリールは、次のいずれかから選択され、
【化１３】
2020531443.tif 000017
残りの変数は、第一、第二、第三、第四、第五、第六、第七、第八、第九、第十、第十一、または第十二の実施形態で定義されるとおりである。
【００６５】
本発明の第十四の実施形態では、式（I）、(II)、(III)、(IV)、もしくは(V)によって表される化合物、またはその薬学的に許容可能な塩が提供され、式中、Qによって表される5または6員の単環式へテロアリールは、次のいずれかから選択され、
【化１４】
2020531443.tif 000018
残りの変数は、第一、第二、第三、第四、第五、第六、第七、第八、第九、第十、第十一、第十二、または第十三の実施形態で定義されるとおりである。
【００６６】
本発明の第十五の実施形態では、式(I)、(II)、(III)、(IV)、もしくは（V）によって表される化合物、またはその薬学的に許容可能な塩が提供され、式中、Qは、
【化１５】
2020531443.tif 000019
または
【化１６】
2020531443.tif 000020
であり、残りの変数は、第一、第二、第三、第四、第五、第六、第七、第八、第九、第十、第十一、第十二、第十三、または第十四の実施形態で定義されるとおりである。さらなる実施形態では、式(I)、(II)、(III)、(IV)、もしくは（V）によって表される化合物、またはその薬学的に許容可能な塩が提供され、式中、Qは、
【化１７】
2020531443.tif 000021
であり、残りの変数は、第一、第二、第三、第四、第五、第六、第七、第八、第九、第十、第十一、第十二、第十三、または第十四の実施形態で定義されるとおりである。
【００６７】
本発明の第十六の実施形態では、式(I)、(II)、(III)、(IV)、もしくは（V）によって表される化合物、またはその薬学的に許容可能な塩が提供され、式中、Qは、
【化１８】
2020531443.tif 000022
であり、残りの変数は、第一、第二、第三、第四、第五、第六、第七、第八、第九、第十、第十一、第十二、第十三、または第十四の実施形態で定義されるとおりである。さらなる実施形態では、式(I)、(II)、(III)、(IV)、もしくは（V）によって表される化合物、またはその薬学的に許容可能な塩が提供され、式中、Qは、
【化１９】
2020531443.tif 000023
であり、残りの変数は、第一、第二、第三、第四、第五、第六、第七、第八、第九、第十、第十一、第十二、第十三、または第十四の実施形態で定義されるとおりである。特定の実施形態では、R2およびQは、同一である。特定の実施形態では、R2およびQは、異なる。
【００６８】
本発明の第十七の実施形態では、式(I)、(II)、(III)、(IV)、もしくは（V）によって表される化合物、またはその薬学的に許容可能な塩が提供され、式中、Rnaは、水素または-C1-4アルキルであり、残りの変数は、第十二、第十三、第十四、または第十五の実施形態で定義されるとおりである。
【００６９】
本発明の第十七の実施形態では、式(I)、(II)、(III)、(IV)、もしくは（V）によって表される化合物、またはその薬学的に許容可能な塩が提供され、式中、Rnbは、水素または-C1-4アルキルであり、残りの変数は、第十二、第十三、第十四、または第十五の実施形態で定義されるとおりである。
【００７０】
本発明の第十七の実施形態では、式(I)、(II)、(III)、(IV)、もしくは（V）によって表される化合物、またはその薬学的に許容可能な塩が提供され、式中、Rndは、水素または-C1-4アルキルであり、残りの変数は、第十二、第十三、第十四、または第十五の実施形態で定義されるとおりである。
【００７１】
本発明の第十八の実施形態では、式(I)、(II)、(III)、(IV)、もしくは（V）によって表される化合物、またはその薬学的に許容可能な塩が提供され、式中、Rnの各例は独立して、水素、ハロゲン、任意で置換されたC1-4アルキル、-CN、-NO2、-N3、-ORo4、-N（Rn2)2、-C(=O)N(Rn2)2、-C(=O)Rc3、または
-C(=O)ORo4であり、残りの変数は、第十二、第十三、第十四、第十五、第十六、または第十七の実施形態で定義されるとおりである。
【００７２】
本発明の第十九の実施形態では、式(I)、(II)、(III)、(IV)、もしくは（V）によって表される化合物、またはその薬学的に許容可能な塩が提供され、式中、R1は、水素または-C1-C4アルキルであり、残りの変数は、第一、第二、第三、第四、第五、第六、第七、第八、第九、第十、第十一、第十二、第十三、第十四、第十五、第十六、第十七、または第十八の実施形態で定義されるとおりである。
【００７３】
本発明の第二十の実施形態では、式(I)、(II)、(III)、(IV)、もしくは（V）によって表される化合物、またはその薬学的に許容可能な塩が提供され、式中、R1はメチルであり、残りの変数は、第一、第二、第三、第四、第五、第六、第七、第八、第九、第十、第十一、第十二、第十三、第十四、第十五、第十六、第十七、または第十八の実施形態で定義されるとおりである。
【００７４】
本発明の第二十一の実施形態では、式(I)、(II)、(III)、(IV)、もしくは（V）によって表される化合物、またはその薬学的に許容可能な塩が提供され、式中、RjおよびRkはそれぞれに独立して、水素、ハロゲン、-ORo7もしくは-C1-C4アルキルであり、または代替的に、RjおよびRkは一緒に結合して=Oを形成し、残りの変数は、第一、第二、第三、第四、第五、第六、第七、第八、第九、第十、第十一、第十二、第十三、第十四、第十五、第十六、第十七、第十八、第十九、または第二十の実施形態で定義されるとおりである。
【００７５】
本発明の第二十二の実施形態では、式(I)、(II)、(III)、(IV)、もしくは（V）によって表される化合物、またはその薬学的に許容可能な塩が提供され、式中、RjおよびはRkはそれぞれが水素であり、残りの変数は、第一、第二、第三、第四、第五、第六、第七、第八、第九、第十、第十一、第十二、第十三、第十四、第十五、第十六、第十七、第十八、第十九、第二十、または第二十一の実施形態で定義されるとおりである。
【００７６】
本発明の第二十三の実施形態では、式(I)、(II)、(III)、(IV)、もしくは（V）によって表される化合物、またはその薬学的に許容可能な塩が提供され、式中、RaおよびはRbはそれぞれが水素であり、残りの変数は、第一、第二、第三、第四、第五、第六、第七、第八、第九、第十、第十一、第十二、第十三、第十四、第十五、第十六、第十七、第十八、第十九、第二十、第二十一、または第二十二の実施形態で定義されるとおりである。
【００７７】
本発明の第二十四の実施形態では、式(I)、(II)、(III)、(IV)、もしくは（V）によって表される化合物、またはその薬学的に許容可能な塩が提供され、式中、qは0または1であり、残りの変数は、第五、第六、第七、第八、第九、第十、第十一、第十二、第十三、第十四、第十五、第十六、第十七、第十八、第十九、第二十、第二十一、第二十二、または第二十三の実施形態で定義されるとおりである。
【００７８】
本発明の第二十五の実施形態では、式(I)、(II)、(III)、(IV)、もしくは（V）によって表される化合物、またはその薬学的に許容可能な塩が提供され、式中、nは0または1であり、残りの変数は、第十二、第十三、第十四、第十五、第十六、第十七、第十八、第十九、第二十、第二十一、第二十二、第二十三、または第二十四の実施形態で定義されるとおりである。
【００７９】
一実施形態では、その薬学的に許容可能な塩の化合物は、実施形態、ならびに表1および図1における式(I)-(V)の化合物から選択される。
【００８０】
本明細書に記載される化合物は、野生型と比較して低い活性を有するPKR変異型の活性化因子として有用であり、従って本発明の方法に有用である。PKRにおけるこのような変異型は、酵素活性（触媒効率）、調節特性（フルクトース二リン酸による調節）(FBP)/ATP）、および/または酵素の熱安定性に影響を及ぼす可能性がある。このような変異型の例は、Valentini  et  al、JBC  2002に記載されている。本明細書に記載される化合物によって活性化される変異型の一部の例には、G332S、G364D、T384M、R479H、R479K、R486W、R532W、K410E、R510Q、およびR490Wが含まれる。理論に束縛されるものではないが、本明細書に記載される化合物は、FBP非応答PKR変異型を活性化すること、安定性が低下した変異型の熱安定性を回復すること、または障害のある変異型の触媒効率を回復することによって、PKR変異型の活性に影響を及ぼす。PKR変異型に対する本化合物の活性を活性化することは、実施例11〜17に記載の方法に従って試験されてもよい。本明細書に記載される化合物は、野生型PKRの活性化因子としても有用である。
【００８１】
一実施形態では、赤血球の寿命を延ばすために、本明細書に記載される化合物、組成物、もしくは医薬組成物は、全血もしくは濃厚赤血球に体外で直接添加され、または患者に（例えば、i.p.、i.v.、i.m.、経口、吸入（エアロゾル化送達）、経皮、舌下および他の送達経路によって）直接提供される。理論に束縛されるものではないが、本明細書に記載される化合物は、RBCの寿命を延ばし、従って血液からの2,3-DPGおよび／またはATPのレベルに影響を与えることによって、保存された血液のエージングを妨げる。2,3-DPG濃度のレベルの低下は、酸素ヘモグロビン解離曲線の左シフトを誘発し、アロステリック平衡をRまたは酸素化状態にシフトし、従って2,3-DPG枯渇による酸素親和性の増加によって、鎌状化の基礎となる細胞内重合の治療的な阻害が生じ、それにより可溶性のオキシヘモグロビンが安定化する。従って、一実施形態では、本明細書に記載の化合物および医薬組成物は、抗鎌状剤として有用である。別の実施形態では、2,3-ジホスホグリセリン酸を調節するために、本明細書に記載される化合物、組成物、もしくは医薬組成物は、全血もしくは濃厚赤血球に体外で直接添加され、または患者に（例えば、i.p.、i.v.、i.m.、経口、吸入（エアロゾル化送達）、経皮、舌下および他の送達経路によって）直接提供される。別の実施形態では、本明細書に記載される化合物、組成物または医薬組成物は、ATPのレベルを増加させ、活性酸素種から細胞を保護するのに役立つことができる（Mol  Cell.  2012  Oct  26;  48(2):  158-167)。
【００８２】
表1では、本明細書に説明される化合物は、野生型PKR、PKR  K410EまたはPKR  510QのAC50を有し得る。「Ａ」は、0.300μM未満のAC50を指し、「Ｂ」は、0.301μM〜0.800μMのAC50を指し、「Ｃ」は、0.800μM超のAC50を指す。特定の化合物の野生型PKRのAC50は、細胞ベースのATPアッセイでさらに測定された。「ＡＡ」は1μM以下のAC50を指し、「BB」は1μM超のAC50を指す。
【００８３】
表1.例示的な化合物による野生型および変異型PKRの活性化
【表１−１】
2020531443.tif 000024
【表１−２】
2020531443.tif 000025
【表１−３】
2020531443.tif 000026
【表１−４】
2020531443.tif 000027
【表１−５】
2020531443.tif 000028
【表１−６】
2020531443.tif 000029
【表１−７】
2020531443.tif 000030
【表１−８】
2020531443.tif 000031
【表１−９】
2020531443.tif 000032
【表１−１０】
2020531443.tif 000033
【表１−１１】
2020531443.tif 000034
【表１−１２】
2020531443.tif 000035
【表１−１３】
2020531443.tif 000036
【表１−１４】
2020531443.tif 000037
【表１−１５】
2020531443.tif 000038
【表１−１６】
2020531443.tif 000039
【表１−１７】
2020531443.tif 000040
【表１−１８】
2020531443.tif 000041
「*」は、試験された複数の結果の平均に基づく値を示す。
【００８４】
本明細書に説明される化合物は、実施例に記載される様々な合成技術を使用して作製することができる。本明細書に説明される化合物を合成するのに有用な合成化学的形質転換および保護基方法論（保護および脱保護）は、当該技術分野において公知であり、例えば、R.  Larock,Comprehensive  Organic  Transformations,VCH  Publishers(1989)、T.W.Greene  and  P.G.M.  Wuts,Protective  Groups  in  Organic  Synthesis,2d.  Ed.,John  Wiley  and  Sons(1991)、L.Fieser  and  M.  Fieser,Fieser  and  Fieser's  Reagents  for  Organic  Synthesis,John  Wiley  and  Sons(1994)、およびL.Paquette,ed.,Encyclopedia  of  Reagents  for  Organic  Synthesis,John  Wiley  and  Sons(1995)、ならびにそれらの後続版に説明されるものなどを含む。
【００８５】
PKR野生型および／または変異型の活性化因子として有用な特定の活性化因子化合物は、FBPの非存在下でのPKR酵素（野生型および/または変異型酵素）の特異性と活性化を、FBPの存在下では、10、15、20、25、30、35、40、45、50、55、60、65、70、75、80、85、90、95、99、または100%を超えるレベルで示すものである。
【００８６】
本発明の化合物の合成
スキーム1
【化２０】
2020531443.tif 000042
いくつかの実施形態では、式（I）の化合物は、スキーム1に示す方法を使用して調製することができる。式S1のチアゾリルアルデヒドは、適切な溶媒（例えば、エタノール）中でアジド酢酸エチルと求核付加条件（例えば、塩基）下で反応して、式S2の中間体をもたらす。式S2のヒドロキシル基は、脱離基に変換することができ、脱離して式S3をもたらすことができる。アミノ基の環化およびそれに続く官能基化は、式S5の二環式化合物を提供し、これはナトリウムメタンチオラートでの求核置換、続いて酸化を受けて、式S7をもたらす。ヒドラジンの存在下での式S7のさらなる環化、続いて塩基の存在下でのLG1-CH2-Q1での求核置換は、式S9の中間体を提供する。式S9中の硫黄基を酸化してスルフィニルまたはスルホニルにして、式S10またはS11を提供することができ、これは一般式S12を生成するためのさらなる求核置換のための基材である。本明細書で使用される場合、X1は、本明細書に定義されるような脱離基である。特定の実施形態では、X1は、ハロゲン、アルカンスルホニルオキシ、アレンスルホニルオキシ、ジアゾニウム、アルキルジアゼン、アリールジアゼン、アルキルトリアゼン、アリールトリアゼン、ニトロ、硝酸アルキル、硝酸アリール、リン酸アルキル、リン酸アリール、アルキルカルボニルオキシ、アリールカルボニルオキシ、アルコキシカルボニルオキシ、アリオキシカルボニルオキシアンモニア、アルキルアミン、アリールアミン、ヒドロキシル基、アルキルオキシ基、アリールオキシ基であり、LG1は、本明細書に定義されるような脱離基であり、Q1は、任意で置換されたシクロアルキル、任意で置換されたヘテロシクリル、任意で置換されたアリール、または任意で置換されたヘテロアリール（例えば、任意で置換された5または6員の単環式へテロアリール）であり、Nu1は、本明細書に定義されるような求核体である（例えば、任意で置換された5または6員の単環式ヘテロアリールアルキレン）。式S12の化合物のNu1は、標準的な化学的形質転換を用いて、他の官能基にさらに変換することができる。R1は、第一の実施形態に定義されるとおりである。特定の実施形態では、Q1は任意で置換されたヘテロアリールである。
【００８７】
スキーム2
【化２１】
2020531443.tif 000043
いくつかの実施形態では、式(I)の化合物は、スキーム2に示す方法を使用して調製することができる。スキーム1と同様に、式S21は、式S13のチアゾールアルデヒドから調製することができる。式S21のハロゲン化は式S22をもたらし、これは、アルキル金属、アルケニル金属、アルキニル金属、アリール金属、ヘテロアリール金属、ヘテロシクリル金属、またはシクロアルキル金属との有機カップリング反応を受けて、式S23の化合物をもたらすことができる。本明細書で使用される場合、X3は、ハロゲンであり、R1は、本発明の第1の実施形態で定義されるとおりであり、LG2は、本明細書に定義されるような脱離基であり、Q2は、任意で置換されたシクロアルキル、任意で置換されたヘテロシクリル、任意で置換されたアリール、または任意で置換されたヘテロアリール（例えば、任意で置換された5または6員の単環式へテロアリール）であり、M1は、金属（例えば、Li、Na、K、Mg、Zn、Sn、B、Pd、Si、Cuなど）であり、X4は、ハロゲンまたはアルキルスルホン酸エステルもしくはアリールスルホン酸エステルであり、Rr1は、任意で置換されたアルキル、任意で置換されたアルケニル、任意で置換されたアルキニル、任意で置換されたシクロアルキル、任意で置換されたヘテロシクリル、任意で置換されたアリール、または任意で置換されたヘテロアリールである。特定の実施形態では、有機カップリング反応は、Negishi反応であり、X3は、Iであり、M1は、Znである。
【００８８】
式S22およびS23の化合物は、X3および/またはRr1位置により多くの官能基を導入するために有用な中間体である（スキーム3）。特定の実施形態では、式23-iの化合物は、さらに酸化して式S24を形成することができる。適切な求核体を用いたS24の求核付加は、S25の化合物を生成する。別の実施形態では、式S22の化合物は、ビニル金属と結合して、ビニル基をチアゾール環に導入することができる。ビニル基の酸化とそれに続く求核付加は、式S28の化合物を提供する。本明細書で使用される場合、Nu2は、求核体である。特定の実施形態では、Rr1は任意で置換される5または6員の単環式ヘテロアリールアルキレンであり、Ｑ2は任意で置換される5または6員単環式ヘテロアリールである。
【００８９】
スキーム3
【化２２】
2020531443.tif 000044
本明細書で使用される場合、Rr2は、任意で置換されたアルキル、任意で置換されたアルケニル、任意で置換されたアルキニル、任意で置換されたシクロアルキル、任意で置換されたヘテロシクリル、任意で置換されたアリール、または任意で置換されたヘテロアリールであり、Q2はスキーム2で定義されたとおりである。特定の実施形態では、Rr2およびQ2はそれぞれ独立して、任意で置換される5または6員の単環式ヘテロアリールである。
【００９０】
本明細書で使用される場合、求核体とは、電子対を求電子体に寄与し、反応に関連して化学結合を形成する化学種である。自由電子対もしくは少なくとも一つのｐｉ結合を有するすべての分子またはイオンは、求核体として作用することができる。例示的な求核体は、求核官能基、例えば、アルファ炭素（例えば、カルボニル、スルホニル、スルフィニル、アリール基、またはヘテロアリール）、チオール基、ヒドロキシル基、一級アミン基、二級アミン基、ハロゲン化物、シアン化物、アジド、アルコキシド、有機金属、または無機塩基を有する、少なくとも一つの基を含む。
【００９１】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の化合物は、スキーム4に示す方法を使用して調製することができる。式S30およびS33の二級環状アミンでの求核置換は、式S31およびS34をそれぞれ提供する。化合物S35の有機カップリング反応（例えば、Suzukiカップリング、Stilleカップリングなど）は、式S36(i)〜(ii)の化合物を提供する。
【００９２】
スキーム4
【化２３】
2020531443.tif 000045
本明細書で使用される場合、
【化２４】
2020531443.tif 000046
は、環原子として窒素を有する5または6員の単環式ヘテロアリール環Aを表す。本明細書で使用される場合、
【化２５】
2020531443.tif 000047
は、炭素環原子上の結合点を有する5または6員の単環式へテロアリール環Bを表す。
【００９３】
R1は、第一の実施形態に定義されるとおりである。X4は、ハロゲンまたは-OTfである。M4は、原子価が許す限り、必要に応じて適切なリガンド（有機または無機）を伴う有機金属である。例示的なM4には、有機Li、Sn、B（例えば、ボロン酸およびボロンエステル）、Zn、Mg、Si、Pd、およびCuが含まれるが、これらに限定されない。
【００９４】
治療方法
一実施形態では、本明細書に説明される疾患、状態または障害を治療するための方法（例えば、治療）が提供され、この方法は、本明細書に説明される化合物（例えば、実施例、ならびに表1および図1における式（I）〜（V）の化合物）、その化合物の薬学的に許容可能な塩、またはその化合物を含む医薬組成物を投与することを含む。
【００９５】
本明細書に説明される化合物および組成物は、培養物中の細胞に、例えば、インビトロもしくはエクスビボで、または対象に、例えば、インビボで投与して、本明細書で以下に説明されるものを含む、様々な障害を治療および／または診断することができる。
【００９６】
本発明の一実施形態では、(1)本明細書に記載される化合物（例えば、実施例、ならびに表1および図1における式（I）〜（V））、または薬学的に許容可能な塩、（2）本明細書に記載される化合物またはその薬学的に許容可能な塩、および薬学的に許容可能な担体を含む、薬学的に許容可能な組成物の有効量と血液を接触させることを含む、それを必要とする赤血球（RBC）の寿命を延ばす方法が提供されている。
【００９７】
さらなる実施形態では、化合物または医薬組成物は、全血または濃厚赤血球に直接添加される（例えば、体外で）。別の実施形態では、化合物または医薬組成物は、その必要のある対象に投与される。
【００９８】
本発明の一実施形態では、(1)本明細書に記載される化合物（例えば、実施例、ならびに表1および図1における式（I）〜（V）の化合物）、または薬学的に許容可能な塩、（2）本明細書に記載される化合物またはその薬学的に許容可能な塩、および薬学的に許容可能な担体を含む、薬学的に許容可能な組成物の有効量で血液と接触させることを必要とする血液中の2,3-ジホスホグリセリン酸レベルを調節する方法が提供されている。
【００９９】
本発明の一実施形態では、(1)本明細書に記載される化合物（例えば、実施例、ならびに表1および図1における式（I）〜（V）の化合物）、または薬学的に許容可能な塩、（2）本明細書に記載される化合物またはその薬学的に許容可能な塩、および薬学的に許容可能な担体を含む、薬学的に許容可能な組成物の有効量を、それを必要とする対象に投与することを含む、鎌状赤血球症を治療する方法が提供されている。
【０１００】
ここで使用される場合、鎌状赤血球症（SCD）、ヘモグロビンSS疾患、および鎌状赤血球貧血が互換的に使用される。鎌状赤血球症（SCD）は、遺伝性赤血球障害の群を表す。特定の実施形態では、SCDを有する対象は、赤血球にヘモグロビンSまたは鎌状ヘモグロビンと呼ばれる、異常ヘモグロビンを有する。特定の実施形態では、SCDを有する対象は、体にヘモグロビンSを生成させる少なくとも一つの異常遺伝子を有する。特定の実施形態では、SCDを有する対象は、二つのヘモグロビンS遺伝子、ヘモグロビンSSを有する。
【０１０１】
本発明の一実施形態では、(1)本明細書に記載される化合物（例えば、実施例、ならびに表1および図1における式（I）〜（V）の化合物）、または薬学的に許容可能な塩、（2）本明細書に記載される化合物またはその薬学的に許容可能な塩、および薬学的に許容可能な担体を含む、薬学的に許容可能な組成物の有効量を、対象に投与することを含む、対象におけるピルビン酸キナーゼ欠損症（PKD）を治療する方法が提供されている。
【０１０２】
本明細書に記載されるように、PKDはPKRの欠損である。特定の実施形態では、PKRの欠損は、PKR変異型と関連付けられる。特定の実施形態では、PKDは、PKLR遺伝子における少なくとも二つの変異型対立遺伝子の存在を指す。特定の実施形態では、PKLR遺伝子内の少なくとも二つの変異型対立遺伝子の少なくとも一つは、ミスセンス変異型である。特定の実施形態では、PKD患者は10.0g/dL以下のHb濃度を有する。特定の実施形態では、患者は、定期的に輸血を受けていない(例えば、12ヶ月間に4回より多くの輸血エピソードを受けていない)。特定の実施形態では、患者は、定期的に輸血を受けている(例えば、12ヶ月間に少なくとも4回の輸血エピソードを受けている)。特定の実施形態では、患者は、12ヶ月間に少なくとも6回の輸血エピソードを有する定期的な輸血を受けている。特定の実施形態では、定期的な輸血を受けている患者は、12.0g/dL以下（男性）または11.0g/dL以下（女性）、例えば15のヘモグロビン（Hb）を有する。特定の実施形態では、患者は脾臓摘出を受けている。
【０１０３】
一実施形態では、PKR変異型は、A31V、A36G、G37Q、R40W、R40Q、L73P、S80P、P82H、R86P、I90N、T93I、G95R、M107T、G111R、A115P、S120F、H121Q、S130P、S130Y、V134D、R135D、A137T、G143S、I153T、A154T、L155P、G159V、R163C、R163L、T164N、G165V、L167M、G169G、E172Q、W201R、I219T、A221Y、D221N、G222A、I224T、G232C、N253D、G263R、G263W、E266K、V269F、L272V、L272P、G275R、G275R、E277K、V280G、D281N、F287V、F287L、V288L、D293N、D293V、A295I、A295V、I310N、I314T、E315K、N316K、V320L、V320M、S330R、D331N、D331G、D331E、G332S、V335M、A336S、R337W、R337P、R337Q、D339N、D339Q、G341A、G341D、I342F、K348N、A352D、I357T、G358R、G358E、R359C、R359H、C360Y、N361D、G364D、K365M、V368F、T371I、L374P、S376I、T384M、R385W、R385K、E387G、D390N、A392T、N393D、N393S、N393K、A394S、A394D、A394V、V395L、D397V、G398A、M403I、G406R、E407K、E407G、T408P、T408A、T408I、K410E、G411S、G411A、Q421K、A423A、A423A、R426W、R426Q、E427A、E427N、A431T、R449C、I457V、G458D、A459V、V460M、A468V、A468G、A470D、T477A、R479C、R479H、S485F、R486W、R486L、R488Q、R490W、I494T、A495T、A495V、R498C、R498H、A503V、R504L、Q505E、V506I、R510Q、G511R、G511E、R518S、R531C、R532W、R532Q、E538D、G540R、D550V、V552M、G557A、R559G、R559P、N566K、M568V、R569Q、R569L、Q58X、E174X、W201X、E241X、R270X、E440X、R486X、Q501X、L508X、R510X、E538X、R559Xからなる群から選択される。これらの変異型は、Canu  et.al.、Blood  Cells,  Molecules  and  Diseases  2016、57、pp.  100-109に記載されている。一実施形態では、変異型PKRは、G332S、G364D、T384M、K410E、R479H、R479K、R486W、R532W、R510Q、およびR490Wから選択される。特定の実施形態では、変異型PKRは、A468V、A495V、I90N、T408I、およびQ421K、およびR498Hから選択される。特定の実施形態では、変異型PKRは、R532W、K410E、またはR510Qである。
【０１０４】
本発明の一実施形態では、(1)本明細書に記載される化合物（例えば、実施例、ならびに表1および図1における式（I）〜（V）の化合物）、または薬学的に許容可能な塩、（2）本明細書に記載される化合物またはその薬学的に許容可能な塩、および薬学的に許容可能な担体を含む、薬学的に許容可能な組成物の有効量を、対象に投与することを含む、対象における貧血を治療する方法が提供されている。特定の実施形態では、貧血は、先天性異常赤血球産生症の貧血Ｉ、ＩＩ、ＩＩＩ、またはＩＶ型などの異常赤血球産生症の貧血である。特定の実施形態では、貧血は溶血性貧血である。特定の実施形態では、溶血性貧血は、PKD、鎌状赤血球症、サラセミア（例えば、アルファまたはベータ）、遺伝性球状赤血球症、遺伝性楕円赤血球症、発作性夜間血色素尿症、無ベータリポ蛋白血症（バッセン-コーンツヴァイク症候群）などの溶血性貧血の先天性および／または遺伝性形態である。特定の実施形態では、溶血性貧血は、自己免疫性溶血性貧血、薬物性溶血性貧血などの後天性溶血性貧血である。特定の実施形態では、溶血性貧血は、先天性赤血球新生紫斑病（Congenital  Erythropoietic  Purpura）、ファンコニー、ダイアモンド・ブラックファン貧血などの多系統疾患の一部としての貧血である。
【０１０５】
本明細書で使用される場合、「貧血」という用語は、赤血球（RBC）および／またはヘモグロビンの欠損を指す。本明細書において使用される場合、貧血は、例えば（これらに限定しないが）、小球性貧血、鉄欠乏性貧血、異常ヘモグロビン症、ヘム合成障害、グロビン合成障害、鉄芽球性貧血、正球性貧血、慢性疾患の貧血、再生不良性貧血、溶血性貧血、大球性貧血、巨赤芽球性貧血、悪性貧血、二形性貧血、未熟児貧血、ファンコニー貧血、遺伝性球状赤血球症、鎌状赤血球症、温式自己免疫溶血性貧血、寒冷凝集素溶血性貧血、大理石骨病、サラセミア、および骨髄異形成症候群の貧血などすべての型の臨床貧血を含む。
【０１０６】
特定の実施形態では、貧血は全血球計算で診断することができる。特定の実施形態では、貧血は、溶血の一つまたは複数のマーカーの測定値（例えば、RBC数、ヘモグロビン、網状赤血球、分裂赤血球、乳酸脱水素酵素（LDH）、ハプトグロビン、ビリルビン、およびフェリチン）および／またはヘモジデリン尿の平均赤血球容積（MCV）および／または赤血球分布幅（RDW）に基づいて診断することができる。本発明の文脈では、個体が、例えば14g/dL未満のHb濃度、より好ましくは13g/dL未満、より好ましくは12g/dL未満、より好ましくは11g/dL未満、または最も好ましくは10g/dL未満などの望ましいレベルよりも少ないヘモグロビン（Hb）を有する場合、貧血が存在する。
【０１０７】
特定の実施形態では、本明細書に記載の化合物、またはその薬学的に許容可能な塩、またはその薬学的に許容可能な組成物の治療有効量を投与することにより、対象のヘモグロビンの量を増やす方法を提供している。特定の実施形態では、提供される方法は対象のヘモグロビン濃度を増加させる。特定の実施形態では、提供される方法は、例えば10g/dL超、より好ましくは11g/dL超、より好ましくは12g/dL超、より好ましくは13g/dL超、または最も好ましくは14g/dL超の望ましいレベルにHb濃度を増加させる。特定の実施形態では、提供される方法は、少なくとも約0.5g/dL、Hb濃度を増加させる。特定の実施形態では、提供される方法は、少なくとも約1.0g/dL、Hb濃度を増加させる。特定の実施形態では、提供される方法は、少なくとも約1.5g/dL、Hb濃度を増加させる。特定の実施形態では、提供される方法は、少なくとも約2.0g/dL、Hb濃度を増加させる。特定の実施形態では、提供される方法は、少なくとも約2.5g/dL、Hb濃度を増加させる。特定の実施形態では、提供される方法は、少なくとも約3.0g/dL、Hb濃度を増加させる。特定の実施形態では、提供される方法は、少なくとも約3.5g/dL、Hb濃度を増加させる。特定の実施形態では、提供される方法は、少なくとも約4.0g/dL、Hb濃度を増加させる。特定の実施形態では、提供される方法は、少なくとも約4.5g/dL、Hb濃度を増加させる。特定の実施形態では、提供される方法は、少なくとも約5.0g/dL、Hb濃度を増加させる。特定の実施形態では、提供される方法は、少なくとも約5.5g/dL、Hb濃度を増加させる。特定の実施形態では、提供される方法は、少なくとも約6.0g/dL、Hb濃度を増加させる。
【０１０８】
本発明の一実施形態では、(1)本明細書に記載される化合物（例えば、実施例、ならびに表1および図1における式（I）〜（V）の化合物）、または薬学的に許容可能な塩、（2）本明細書に記載される化合物またはその薬学的に許容可能な塩、および薬学的に許容可能な担体を含む、薬学的に許容可能な組成物の有効量を、対象に投与することを含む、溶血性貧血を治療する方法が提供されている。
【０１０９】
さらなる実施形態では、溶血性貧血は、遺伝性および／または先天性溶血性貧血、後天性溶血性貧血、または多系統疾患の一部としての貧血である。特定の実施形態では、溶血性貧血は先天性貧血である。特定の実施形態では、溶血性貧血は、遺伝性である（例えば、非球状溶血性貧血または遺伝性球状赤血球症）。
【０１１０】
本発明の一実施形態では、(1)本明細書に記載の化合物（例えば、実施例、ならびに表1および図1における式（I）〜（V）の化合物）またはその薬学的に許容可能な塩、（2）本明細書に記載の化合物またはその薬学的に許容可能な塩、および薬学的に許容可能な担体を含む薬学的に許容可能な組成物の有効量を、対象に投与することを含む、サラセミア、遺伝性球状赤血球症、遺伝性楕円赤血球症、無ベータリポ蛋白血症またはバッセン-コーンツヴァイク症候群、発作性夜間血色素尿症、後天性溶血性貧血（例えば、先天性貧血（例えば、酵素異常症））、鎌状赤血球症、または慢性疾患の貧血を治療する方法を提供している。一実施形態では、後天性溶血性貧血は、先天性貧血を含む。特定の実施形態では、提供される方法は、サラセミアを治療するためである。特定の実施形態では、サラセミアはベータサラセミアである。
【０１１１】
本明細書で使用される場合、サラセミアは、体が異常な形態のヘモグロビンを生成する遺伝性血液障害である。特定の実施形態では、障害は多数の赤血球を破壊し、これが貧血につながる。特定の実施形態では、サラセミアはアルファサラセミアである。特定の実施形態では、サラセミアはベータサラセミアである。
【０１１２】
本発明の一実施形態では、(1)本明細書に記載される化合物（例えば、実施例、ならびに表1および図1における式（I）〜（V）の化合物）、または薬学的に許容可能な塩、（2）本明細書に記載される化合物またはその薬学的に許容可能な塩、および薬学的に許容可能な担体を含む、薬学的に許容可能な組成物の有効量を、それを必要とする対象に投与することを含む、赤血球内の変異型PKRを活性化させる方法が提供されている。一実施形態では、方法は、エクスビボ方法である。別の実施形態では、方法は、インビトロ方法である。いくつかの実施形態では、血液または赤血球は、ピルビン酸キナーゼ欠損症（PKD）、サラセミア（例えば、ベータサラセミア）、遺伝性球状赤血球症、遺伝性楕円赤血球症、無ベータリポ蛋白血症またはバッセン-コーンツヴァイク症候群、鎌状赤血球症、発作性夜間血色素尿症、貧血（例えば、異常赤血球産生症の貧血）、溶血性貧血、および慢性疾患の貧血からなる群から選択される疾患または障害を患う対象またはこれらに感染しやすい対象由来または対象から得た。いくつかの実施形態では、溶血性貧血は、遺伝性および／または先天性溶血性貧血、後天性溶血性貧血、または多系統疾患の一部としての貧血である。
【０１１３】
本発明の一実施形態では、(1)本明細書に記載される化合物（例えば、実施例、ならびに表1および図1における式（I）〜（V）の化合物）、または薬学的に許容可能な塩、（2）本明細書に記載される化合物またはその薬学的に許容可能な塩、および薬学的に許容可能な担体を含む、薬学的に許容可能な組成物の有効量を、それを必要とする対象に投与することを含む、赤血球内の野生型PKRを活性化させる方法が提供されている。一実施形態では、方法は、エクスビボ方法である。別の実施形態では、方法は、インビトロ方法である。いくつかの実施形態では、血液または赤血球は、ピルビン酸キナーゼ欠損症（PKD）、サラセミア（例えば、ベータサラセミア）、遺伝性球状赤血球症、遺伝性楕円赤血球症、無ベータリポ蛋白血症またはバッセン-コーンツヴァイク症候群、鎌状赤血球症、発作性夜間血色素尿症、貧血（例えば、異常赤血球産生症の貧血）、溶血性貧血、および慢性疾患の貧血からなる群から選択される疾患または障害を患う対象またはこれらに感染しやすい対象由来または対象から得た。いくつかの実施形態では、溶血性貧血は、遺伝性および／または先天性溶血性貧血、後天性溶血性貧血、または多系統疾患の一部としての貧血である。
【０１１４】
本発明の一実施形態では、その必要がある赤血球（RBC)の寿命を延ばすための薬剤の調製のための(1)本明細書に記載される化合物（例えば、実施例、ならびに表1および図1における式（I）〜（V）の化合物）、または薬学的に許容可能な塩、（2）本明細書に記載される化合物またはその薬学的に許容可能な塩、および薬学的に許容可能な担体を含む、薬学的に許容可能な組成物の使用が提供されている。
【０１１５】
さらなる実施形態では、化合物または医薬組成物は、体外で全血または濃厚赤血球に直接添加するように製剤化されている。別の実施形態では、化合物または医薬組成物は、その必要のある対象に投与されるように製剤化されている。
【０１１６】
本発明の一実施形態では、その必要がある血液中の2,3-ジホスホグリセリン酸レベルを調節するための薬剤の調製のための(1)本明細書に記載される化合物（例えば、実施例、ならびに表1および図1における式（I）〜（V）の化合物）、または薬学的に許容可能な塩、（2）本明細書に記載される化合物またはその薬学的に許容可能な塩、および薬学的に許容可能な担体を含む、薬学的に許容可能な組成物の使用が提供されている。
【０１１７】
本発明の一実施形態では、貧血を治療するための薬剤の調製のための(1)本明細書に記載される化合物（例えば、実施例、ならびに表1および図1における式（I）〜（V）の化合物）、または薬学的に許容可能な塩、（2）本明細書に記載される化合物またはその薬学的に許容可能な塩、および薬学的に許容可能な担体を含む、薬学的に許容可能な組成物の使用が提供されている。特定の実施形態では、貧血は、先天性異常赤血球産生症の貧血Ｉ、ＩＩ、ＩＩＩ、またはＩＶ型などの異常赤血球産生症の貧血である。特定の実施形態では、貧血は溶血性貧血である。特定の実施形態では、溶血性貧血は、PKD、鎌状赤血球症、サラセミア（例えば、アルファまたはベータ）、遺伝性球状赤血球症、遺伝性楕円赤血球症、発作性夜間血色素尿症、無ベータリポ蛋白血症（バッセン-コーンツヴァイク症候群）などの溶血性貧血の先天性および／または遺伝性形態である。特定の実施形態では、溶血性貧血は、自己免疫性溶血性貧血、薬物性溶血性貧血などの後天性溶血性貧血である。特定の実施形態では、溶血性貧血は、先天性赤血球新生紫斑病（Congenital  Erythropoietic  Purpura）、ファンコニー、ダイアモンド・ブラックファン貧血などの多系統疾患の一部としての貧血である。
【０１１８】
本発明の一実施形態では、溶血性貧血を治療するための薬剤の調製のための(1)本明細書に記載される化合物（例えば、実施例、ならびに表1および図1における式（I）〜（V）の化合物）、または薬学的に許容可能な塩、（2）本明細書に記載される化合物またはその薬学的に許容可能な塩、および薬学的に許容可能な担体を含む、薬学的に許容可能な組成物の使用が提供されている。
【０１１９】
本発明の一実施形態では、鎌状赤血球症を治療するための薬剤の調製のための(1)本明細書に記載される化合物（例えば、実施例、ならびに表1および図1における式（I）〜（V）の化合物）、または薬学的に許容可能な塩、（2）本明細書に記載される化合物またはその薬学的に許容可能な塩、および薬学的に許容可能な担体を含む、薬学的に許容可能な組成物の使用が提供されている。
【０１２０】
本発明の一実施形態では、対象のピルビン酸キナーゼ欠損症(PKD)を治療するための薬剤の調製のための(1)本明細書に記載される化合物（例えば、実施例、ならびに表1および図1における式（I）〜（V）の化合物）、または薬学的に許容可能な塩、（2）本明細書に記載される化合物またはその薬学的に許容可能な塩、および薬学的に許容可能な担体を含む、薬学的に許容可能な組成物の使用が提供されている。
【０１２１】
本明細書に記載されるように、PKDはPKRの欠損である。特定の実施形態では、PKRの欠損は、PKR変異型と関連付けられる。
【０１２２】
本発明の一実施形態では、サラセミア、遺伝性球状赤血球症、遺伝性楕円赤血球症、無ベータリポ蛋白血症もしくはバッセン-コーンツヴァイク症候群、発作性夜間血色素尿症、後天性溶血性貧血、または慢性疾患の貧血を治療するための薬剤の調製のための(1)本明細書に記載される化合物（例えば、実施例、ならびに表1および図1における式（I）〜（V）の化合物）、または薬学的に許容可能な塩、（2）本明細書に記載される化合物またはその薬学的に許容可能な塩、および薬学的に許容可能な担体を含む、薬学的に許容可能な組成物の使用が提供されている。
【０１２３】
本発明の一実施形態では、赤血球中の変異型PKRを活性化するための薬剤の調製のための(1)本明細書に記載される化合物（例えば、実施例、ならびに表1および図1における式（I）〜（V）の化合物）、または薬学的に許容可能な塩、（2）本明細書に記載される化合物またはその薬学的に許容可能な塩、および薬学的に許容可能な担体を含む、薬学的に許容可能な組成物の使用が提供されている。
【０１２４】
本発明の一実施形態では、赤血球中の野生型PKRを活性化するための薬剤の調製のための(1)本明細書に記載される化合物（例えば、実施例、ならびに表1および図1における式（I）〜（V）の化合物）、または薬学的に許容可能な塩、（2）本明細書に記載される化合物またはその薬学的に許容可能な塩、および薬学的に許容可能な担体を含む、薬学的に許容可能な組成物の使用が提供されている。
【０１２５】
本発明の一実施形態では、(1)本明細書に記載される化合物（例えば、実施例、ならびに表1および図1における式（I）〜（V）の化合物）、または薬学的に許容可能な塩、（2）本明細書に記載される化合物またはその薬学的に許容可能な塩、および薬学的に許容可能な担体を含む、薬学的に許容可能な組成物の有効量を、PKRと接触させることを含む、ピルビン酸キナーゼR（PKR）を活性化する方法が提供されている。一実施形態では、PKRは野生型PKRである。別の実施形態では、PKRは変異型PKRである。いくつかの実施形態では、PKRは赤血球で発現する。一実施形態では、方法は、エクスビボ方法である。別の実施形態では、方法は、インビトロ方法である。いくつかの実施形態では、血液または赤血球は、ピルビン酸キナーゼ欠損症（PKD）、サラセミア（例えば、ベータサラセミア）、遺伝性球状赤血球症、遺伝性楕円赤血球症、無ベータリポ蛋白血症またはバッセン-コーンツヴァイク症候群、鎌状赤血球症、発作性夜間血色素尿症、貧血（例えば、異常赤血球産生症の貧血）、溶血性貧血、および慢性疾患の貧血からなる群から選択される疾患または障害を患う対象またはこれらに感染しやすい対象由来または対象から得た。いくつかの実施形態では、溶血性貧血は、遺伝性および／または先天性溶血性貧血、後天性溶血性貧血、または多系統疾患の一部としての貧血である。
【０１２６】
本明細書に記載される化合物および組成物は、WO2012/151451に記載される化合物と同じ生物学的経路に作用し、類似した作用モードを有するため、本明細書に提示される化合物および組成物は、WO2012/151451に記載されるように、PKR変異型を活性化することができる。
【０１２７】
組成物および投与経路
本明細書に詳述される組成物は、本明細書に詳述される化合物（例えば、本明細書に記載される化合物）、ならびに存在する場合、疾患または疾患症状の調節を達成するのに有効な量で、本明細書に記載されるものを含むさらなる治療剤を含む。
【０１２８】
「薬学的に許容可能な担体またはアジュバント」という用語は、本明細書で提供される化合物と共に患者に投与することができ、その薬理学的活性を損なわず、有効量の化合物を送達するのに十分な用量で投与されるときに非毒性である担体またはアジュバントを指す。
【０１２９】
本明細書で提供される医薬組成物において使用され得る薬学的に許容可能な担体、アジュバント、およびビヒクルには、イオン交換剤、アルミナ、ステアリン酸アルミニウム、レシチン、ｄ−α−トコフェロールポリエチレングリコール1000スクシネートなどの自己乳化薬物送達システム（ＳＥＤＤＳ）、Ｔｗｅｅｎまたは他の類似の高分子送達マトリックスなどの薬学的剤形において使用される界面活性剤、ヒト血清アルブミンなどの血清タンパク質、緩衝物質（例えば、リン酸）、グリシン、ソルビン酸、ソルビン酸カリウム、飽和植物性脂肪酸の部分的にグリセリドの混合物、水、塩もしくは電解質（例えば、硫酸プロタミン）、リン酸水素二ナトリウム、リン酸水素カリウム、塩化ナトリウム、亜鉛塩、コロイド状シリカ、三ケイ酸マグネシウム、ポリビニルピロリドン、セルロースベースの物質、ポリエチレングリコール、カルボキシメチルセルロースナトリウム、ポリアクリレート、ワックス、ポリエチレン−ポリオキシプロピレンブロックポリマー、ポリエチレングリコール、および羊毛脂が含まれるが、これらに限定されない。α-、β-、およびγ−シクロデキストリンなどのシクロデキストリン、または2−および3−ヒドロキシプロピル−β−シクロデキストリンを含むヒドロキシアルキルシクロデキストリンなどの化学的に修飾された誘導体、または他の可溶化された誘導体も、本明細書に記載される式の化合物の送達を亢進するために有利に使用することができる。
【０１３０】
医薬組成物は、経口的に、非経口的に、吸入スプレーによって、局所的に、直腸に、鼻腔に、頬側に、膣に、または植え込まれた貯蔵器を介して、好ましくは経口投与または注射による投与によって投与することができる。医薬組成物は、何らかの従来の非毒性の薬学的に許容される担体、アジュバント、またはビヒクルを含有することができる。
【０１３１】
医薬組成物は、カプセル剤、錠剤、エマルションならびに水性の懸濁剤、分散剤および液剤を含むが、これらに限定されない、何らかの経口的に許容可能な剤形で経口投与することができる。経口使用のための錠剤の場合、一般的に使用される担体はラクトースおよびトウモロコシデンプンを含む。ステアリン酸マグネシウムなどの潤滑剤も典型的に添加される。カプセル形態での経口投与については、有用な希釈剤はラクトースおよび乾燥トウモロコシデンプンを含む。水性懸濁剤および／またはエマルションが経口投与されるとき、有効成分は、乳化剤および／または懸濁剤と組み合わせられた油相において懸濁または溶解することができる。
【０１３２】
本明細書で提供される組成物が、本明細書に記載される式の化合物と、一つまたは複数のさらなる治療剤または予防剤との組み合わせを含むとき、化合物およびさらなる薬剤は両方とも、約1〜100％の投薬量レベルで存在するべきであり、単剤療法で通常投与される投薬量の約5〜95％であることがより好ましい。さらなる薬剤は、本明細書で提供される化合物から複数回投与レジメンの一部として別個に投与され得る。あるいは、これらの薬剤は、本明細書で提供される化合物と一緒に単一組成物で混合された単一剤形の一部であってもよい。
【０１３３】
本明細書に記載される化合物は、例えば、注射、静脈内、動脈内、皮下、腹腔内、筋肉内、または皮下により、または、経口、口腔内、鼻腔内、経粘膜、局所、眼科用調製物中、または吸入により、約0.5〜100ｍｇ／ｋｇ（体重）の範囲内の投与量で、あるいは、1ｍｇ〜1000ｍｇ／用量の投与量、4〜120時間毎に、または特定の薬剤の要件に従って、経口投与することができる。単一剤形を製造するために担体材料と組み合わせられ得る有効成分の量は、処置される宿主および特定の投与様式に応じて異なる。典型的な調製物は、約5％〜約95％の有効化合物（ｗ／ｗ）を含有することになる。あるいは、このような調製物は、約20%〜約80%の有効化合物を含有する。
【０１３４】
実験
略記のリスト:
【表２−１】
2020531443.tif 000048
【表２−２】
2020531443.tif 000049
【０１３５】
一般的な実験
以下の実施例では、化学試薬は、商業的供給源（Alfa、Acros、Sigma  Aldrich、TCIおよびShanghai  Chemical  Reagent  Company等）から購入し、さらに精製することなく使用した。フラッシュクロマトグラフィーは、200〜300個のシリカゲル粒子を有するカラムを用いて、Ez  Purifier  IIIで実施した。分析及び分取薄層クロマトグラフィープレート(TLC)は、HSGF  254(厚さ0.15〜0.2mm、Shanghai  Anbang  Company、China)であった。核磁気共鳴（NMR）スペクトルは、Brucker  AMX-300またはAMX-400  NMR(Brucker、Switzerland)を使用して記録した。化学的シフトは、Waters  LCT  TOF  Mass  Spectrometer(Waters、USA)から、百万分率（ppm、δ）のetero（ESI）で報告した。HPLCクロマトグラフィーは、Agilent  1200  Liquid  Chromatography(Agilent、USA、コラム：Ultimate  4.6m×50mm、5M、移動相A:水中の0.1%のギ酸、移動相B:アセトニトリル)で記録した。マイクロ波反応は、Initiator  2.5  Microwave  Synthesizer(Biotage、Sweden)で実行した。
【０１３６】
本明細書に説明される実験において使用されるＨＰＬＣ条件は、以下のとおりである。
【０１３７】
方法1:
計器:Shimadzu  LC-2010AHT
カラム:YMC-Triart  C18、50×4.6mm、5μm
移動相:  溶媒A:H2O/CH3OH/TFA  =  90/10/0.1、溶媒B:H2O/CH3OH/TFA  =  90/10/0.1
流量:2.5mL/分；カラム温度:35℃、波長:220nm/254nm
【０１３８】
方法2:
計器:Shimadzu  LC-2010AHT
カラム:YMC-Triart  C18、50×4.6mm、5μm
移動相:  溶媒A:H2O/CH3OH/TFA  =  90/10/0.1、溶媒B:H2O/CH3OH/TFA  =  90/10/0.1
流量:2.5mL/分；カラム温度:35℃、波長:220nm/254nm
本明細書に説明される実験において使用される分取HPLC条件は、以下のとおりである。
【０１３９】
計器:Waters  2545B/2767
カラム:YMC-Triart  C18、50×4.6mm、5μm
移動相:  溶媒A:H2O(01.%のFA)、溶媒B:CH3OHまたはCH3CN
流量:20mL/分；カラム温度:35℃、波長:220nm/254nm
【０１４０】
実施例1.6-(3-メトキシベンジル)-2,4-ジメチル-4,6-ジヒドロ-5H-チアゾロ[5',4':4,5]ピロロ[2,3-d]ピリダジン-5-オンの合成。
【化２６】
2020531443.tif 000050
ステップA.  エチル(Z)-2-アジド-3-(2-メチルチアゾール-5-イル)アクリレート。約-10℃〜約-5℃のEtOH(10mL)中のNaOEt(803mg、11.79mmol)の溶液に、無水EtOH(3mL)中の2-メチルチアゾール-5-カルボアルデヒド(500mg、3.93mmol)およびエチル2-アジドアセテート（1.53g、11.79mmol）の溶液を滴加した。反応混合物を、温度を0℃未満に維持しながら約1時間攪拌し、次いで室温に加熱して、さらに2時間攪拌した。得られた混合物を、0℃の飽和水性NH4Cl(50mL)中に注ぎ、EtOAcで抽出した。合わせた有機層を、塩水で洗浄し、無水Na2SO4で乾燥し、減圧下で濃縮して、所望の生成物（500mg）を得、これを精製することなく次のステップで直接使用した。LCMS:m/z  239  (M+H)+。
【０１４１】
ステップB.エチル2-メチル-4H-ピロロ[2,3-d]チアゾール-5-カルボキシレート。o-キシレン(5mL)中のエチル(Z)-2-アジド-3-(2-メチルチアゾール-5-イル)アクリレート（500mg、2.1mmol）の混合物を、140℃で2時間攪拌し、次いで室温に冷却し、次いでシリカゲル上のカラムクロマトグラフィー（溶出液:ペンタン/EtOAc=6/1）により直接精製して、所望の生成物（220mg、収率49.8%）を得た。LCMS:m/z  211(M+H)+。
【０１４２】
ステップC.エチル2,4-ジメチル-4H-ピロロ[2,3-d]チアゾール-5-カルボキシレート。0℃のDMF(3mL)中のエチル2-メチル-4H-ピロロ[2,3-d]チアゾール-5-カルボキシレート(160mg、0.76mmol)の溶液に、NaH（36.5mg、1.52mmol）を添加した。反応混合物を、室温で0.5時間攪拌し、続いてCH3I(47μL、0.76mmol)を添加した。得られた混合物を、室温で0.5時間攪拌し、次いで0℃の飽和水性NH4Cl中に注いで、EtOAcで抽出した。合わせた有機層を、塩水で洗浄し、無水Na2SO4で乾燥して、減圧下で濃縮した。残渣を、シリカゲル上のカラムクロマトグラフィー（溶出液:ペンタン／酢酸エチル＝6/1）により精製して、所望の生成物（124mg、収率72.6%）を得た。LCMS:m/z  225  (M+H)+。
【０１４３】
ステップD.エチル6-ホルミル-2,4-ジメチル-4H-ピロロ[2,3-d]チアゾール-5-カルボキシレート。0℃のDMF(1mL)中のエチル2,4-ジメチル-4H-ピロロ[2,3-d]チアゾール-5-カルボキシレート(100mg、0.446mmol)の混合物に、POCl3(122.5μL、1.338mmol)を添加した。反応混合物を、100℃で2時間攪拌し、次いで0℃の飽和水性NaHCO3中に注いで、EtOAcで抽出した。合わせた有機層を、塩水で洗浄し、無水Na2SO4で乾燥して、減圧下で濃縮した。残渣を、シリカゲル上のカラムクロマトグラフィー（溶出液:ペンタン／酢酸エチル＝5/1）により精製して、所望の生成物（57mg、収率50.7%）を得た。LCMS:m/z  253  (M+H)+。
【０１４４】
ステップE.2,4-ジメチル-4,6-ジヒドロ-5H-チアゾロ[5',4':4,5]ピロロ[2,3-d]ピリダジン-5-オン。2-エトキシエタノール(2mL)中のエチル6-ホルミル-2,4-ジメチル-4H-ピロロ[2,3-d]チアゾール-5-カルボキシレート(57mg、0.226mmol)の混合物に、N2H4.H2O（53.7μL、1.130mmol）を添加した。反応混合物を、100℃で1時間攪拌し、次いでH2O中に注いで、EtOAcで抽出した。合わせた有機層を、塩水で洗浄し、無水Na2SO4で乾燥して、減圧下で濃縮した。残渣を、シリカゲル上のカラムクロマトグラフィー（溶出液:ペンタン／酢酸エチル＝5/1）により精製して、所望の生成物（49mg、収率98.4%）を得た。LCMS:m/z  221  (M+H)+。
【０１４５】
ステップF.6-(3-メトキシベンジル)-2,4-ジメチル-4,6-ジヒドロ-5H-チアゾロ[5',4':4,5]ピロロ[2,3-d]ピリダジン-5-オン。0℃のDMF(1mL)中の2,4-ジメチル-4,6-ジヒドロ-5H-チアゾロ[5',4':4,5]ピロロ[2,3-d]ピリダジン-5-オン(49mg、0.223mmol)の混合物に、t-BuOK(50.8mg、0.454mmol)を添加した。反応混合物を、室温で0.5時間攪拌し、続いて1-(クロロメチル)-3-メトキシベンゼン(34.9mg、0.223mmol)を添加した。得られた混合物を、室温で1時間攪拌し、次いで0℃の飽和水性NH4Cl溶液中に注いで、EtOAcで抽出した。合わせた有機層を、塩水で洗浄し、無水Na2SO4で乾燥して、減圧下で濃縮した。残渣を、シリカゲル上のカラムクロマトグラフィー（溶出液:ペンタン／酢酸エチル＝3/1）により精製して、所望の生成物を得た。LCMS:m/z  341  (M+H)+。1H  NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.56(s,1H),7.23(t,1H),6.92-6.72(m,3H),5.32(s,2H),4.26(s,3H),3.72(s,3H),2.85(s,3H)。
【０１４６】
実施例１は、化合物E1-3の例示的な合成を提供する。適切なヘテロアリール-CH2-ハロゲン化物を用いて異なる化合物を合成できることが理解される。
【０１４７】
実施例2.  スキームE2を用いた式E2-viiの化合物の調製
スキームE2
【化２７】
2020531443.tif 000051
式中、Ｘは脱離基（例えば、Ｃｌ、ＢｒもしくはＩ、ＯＭs、またはＯＴs）であり、Ｍは有機金属錯体（例えば、ボロン酸またはピナコホウ素錯体（pinaco  boron  complex）などの有機ホウ素錯体、-Sn(But)3などの有機すず錯体、-Zn(ハロゲン)などの有機亜鉛錯体)であり、QおよびR2は、それぞれ独立して、任意で置換された5員または6員のヘテロアリールである。実施例1における式E1-vの化合物の合成と同様に、化合物E2-ivは、いくつかの修正とともに、チアゾールアルデヒドE2-iから合成することができる（例えば、化合物E2-iiのMsClとの反応と、それに続く脱離によって、化合物E2-iiiを得ることができ、三環系は、2-メトキシエタノール中のAcOH触媒を用いて形成することができる）。化合物E2-ivの置換およびヨウ化は、化合物E2-viを提供する。化合物E2-viの、触媒の存在下での有機金属とのカップリングは、化合物E2-viiをもたらす。
【０１４８】
実施例2A.4-メチル-4,6-ジヒドロ-5H-チアゾロ[5',4':4,5]ピロロ
-[2,3-d]ピリダジン-5-オンの合成
【化２８】
2020531443.tif 000052
ステップＡ．エチル２−アジド−３−ヒドロキシ−３−（チアゾール−５−イル）プロパノエート。ナトリウム（12.2g、0.531mol）を、乾燥EtOH（300mL）の攪拌溶液に、室温でゆっくり添加した。次いで、反応混合物を-20℃に冷却し、その後、温度を-20℃〜-15℃に維持しながら、無水EtOH（100mL）中の2-アジド酢酸エチル(68.5g、0.531mol)およびチアゾール-5-カルボアルデヒド(20.0g、0.177mol)の溶液を滴加した。添加後、反応化合物を、-20℃でさらに1時間攪拌し、次いで飽和水性NH4Cl(1L)中に注いだ。得られた混合物を、NaClで飽和し、EtOAcで抽出した。合わせた有機相を、塩水で洗浄し、無水Na2SO4で乾燥して、減圧下で濃縮した。残渣を、（溶出液:PE/EtOAc=6/1〜5/1〜1/1）を使用するシリカゲル上のカラムクロマトグラフィーにより精製して、所望の生成物（34g）をペールとして得た。LCMS:m/z=  243  (M+H)+。
【０１４９】
ステップB.エチル(Z)-2-アジド-3-(チアゾール-5-イル)アクリレート。-35℃の乾燥DCM(1.5L)中のエチル2-アジド-3-ヒドロキシ-3-(チアゾール-5-イル)プロパノエート(103g、0.426mol)の攪拌混合物に、MsCl（146g、1.28mol）、続いてTEA(301g、2.98mol)を、温度を-35℃〜-30℃に維持しながら滴加した。添加後、反応混合物を、-30℃でさらに15分間攪拌し、次いで飽和水性NH4Cl(1.5L)中に注いだ。得られた混合物を、NaClで飽和し、DCMで2回抽出した。合わせた有機層を、水性HCl(1M)および塩水で順に洗浄し、無水Na2SO4で乾燥して、減圧下で濃縮した。残渣を、（溶出液:PE/EtOAc=5/1）を使用するシリカゲル上のカラムクロマトグラフィーにより精製して、所望の生成物（82.0g、収率86.3%）を得た。LCMS:m/z=  225  (M+H)+。
【０１５０】
ステップC〜E  エチル4H-ピロロ[2,3-d]チオアゾール-5-カルボキシレート、エチル4-メチル-4H-ピロロ[2,3-d]チアゾール-5-カルボキシレート、およびエチル6-ホルミル-4-メチル-4H-ピロロ[2,3-d]チアゾール-5-カルボキシレートを、実施例1の手順と同様に合成した。
【０１５１】
ステップF.エチル  (E)-6-(ヒドラゾノメチル)-4-メチル-4H-ピロロ[2,3-d]チオアゾール-5-カルボキシレート。室温の2−メトキシエタノール（50mL）中のN2H4.H2O（2.0ｇ、98%、40ｍｍｏｌ）の攪拌混合物に、エチル6−ホルミル−4−メチル−4Ｈ−ピロロ[2，3−ｄ］チアゾール−5−カルボキシレート（4.8ｇ、20ｍｍｏｌ）を添加し、続いて20滴のＡｃＯＨを添加した。反応混合物を、混合物が透明になるまで、室温で約30分間攪拌した。得られた混合物を、攪拌しながら水（100mL）中に注ぎ、DCMで抽出した。合わせた有機層を、無水Na2SO4で乾燥し、減圧下で濃縮して、所望の生成物を得、これをさらに精製することなく次のステップで使用した。LCMS:m/z=  253  (M+H)+。
【０１５２】
ステップＧ.4−メチル−4，6−ジヒドロ−5Ｈ−チアゾロ[5’，4’:4，5］ピロロ［2，3−ｄ］ピリダジン−5−オン。室温の2−メトキシエタノール（50mL）中のエチル（E）−6−（ヒドラゾノメチル）−4−メチル−4Ｈ−ピロロ[2，3−ｄ］チオアゾール−5−カルボキシレート（4.8ｇ、0.19ｍｏｌ）の攪拌懸濁液に、ＡｃＯＨ（20滴）を添加した。反応懸濁液を、105℃で3時間攪拌し、次いで濾過した。濾過ケークを、水で洗浄し、高真空下で乾燥して、所望の生成物の第一のバッチを得た。濾液を、水で希釈し、DCMで二回抽出した。有機層を、塩水で洗浄し、無水Na2SO4で乾燥して、減圧下で濃縮し、所望の生成物の第二のバッチを得た。所望の生成物の合わせた二つのバッチ（2.5g）を、さらに精製することなく次のステップで直接使用した。LCMS:m/z=  207  (M+H)+。1H  NMR(400MHz,DMSO)δ12.68(s,1H),9.35(s,1H),8.55(s,1H),4.30(s,3H)。
【０１５３】
実施例3.化合物E3-viiおよびE3-viiiの合成
スキームE3
【化２９】
2020531443.tif 000053
式中、Halはハロゲン（例えば、Cl、BrまたはI）であり、LGは脱離基（例えば、Cl、Br、I、OMs、またはOTs）であり、Qは任意で置換された5員または6員のヘテロアリールであり、Q'はさらに官能基化された5員または6員のヘテロアリールである。化合物E3-iのナトリウムメタンチオレートとの芳香族置換反応は、化合物E3-iiを提供し、これは、化合物E1-iii〜E1-viの合成を使用して化合物E3-vに変換され得る。化合物E3-vのmCPBAとの酸化により、化合物E3-viおよびE3-viiをそれぞれ得る。
【０１５４】
実施例3A.4-メチル-2-(メチルチオ)-4,6-ジヒドロ-5H-チアゾロ[5',4':4,5]ピロロ[2,3-d]ピリダジン-5-オンの合成。
【化３０】
2020531443.tif 000054
ステップA:エチル4-メチル-2-(メチルチオ)-4H-ピロロ[2,3-d]チアゾール-5-カルボキシレート。EtOH(10.0mL)中のエチル2-ブロモ-4-メチル-4H-ピロロ[2,3-d]チアゾール-5-カルボンキシレート(500.0mg、1.73mmol)の混合物に、NaSMe（240.0mg、3.5mmol）を添加した。反応混合物を、25℃で3時間攪拌し、次いで氷水でクエンチして、DCMで抽出した。合わせた有機層を、塩水で洗浄し、無水Na2SO4で乾燥し、減圧下で濃縮して、所望の生成物（460mg）を得、これを精製することなく次のステップで直接使用した。LC-MS:m/z  257  (M+H)+。
【０１５５】
ステップB:エチル6-ホルミル-4-メチル-2-(メチルチオ)-4H-ピロロ[2,3-d]チオゾール-5-カルボキシレート。DCE(10mL)中のエチル4-メチル-2-(メチルチオ)-4H-ピロロ[2,3-d]チアゾール-5-カルボキシレー(460.0mg、1.8mmol)およびN-メチル-N-フェニルホルムアミド（490mg、3.6mmol）の溶液に、POCl3（550.0mg、3.6mmol）を添加した。得られた混合物を、130℃で3時間攪拌し、次いで氷水でクエンチして、DCMで抽出した。合わせた有機層を、塩水で洗浄し、無水Na2SO4で乾燥して、減圧下で濃縮した。残渣を、シリカゲル上のカラムクロマトグラフィー（溶出液:PE/EtOAc=8/1）により精製して、所望の生成物（320.0mg、収率63%）を得た。LC-MS:m/z  285  (M+H)+。
【０１５６】
ステップC:4-メチル-2-(メチルチオ)-4,6-ジヒドロ-5H-チアゾロ[5',4':4,5]ピロロ
[2,3-d]ピリダジン-5-オン。EtOH(5.0mL)中のエチル6-ホルミル-4-メチル-2-(メチルチオ)-4H-ピロロ[2,3-d]チオゾール-5-カルボキシレート(300.0mg、1.06mmol)の溶液に、N2H4.H2O(2mL、98重量%)を添加した。反応混合物を、室温で1時間攪拌し、次いで60℃に一晩加熱して、次いで冷却した。固形分を、濾過により収集し、高真空下で乾燥して、所望の生成物（180.0mg、収率67%）を得た。LC-MS:m/z  253  (M+H)+。1H  NMR(400MHz,DMSO-d6)δ12.61(s,1H),8.48(s,1H),4.22(s,3H),2.81(s,3H)。
【０１５７】
実施例3B.6-((2-アミノピリジン-4-イル)メチル)-4-メチル-2-(メチルスルフィニル)-4H-チアゾロ[5',4':4,5]ピロロ[2,3-d]ピリダジン-5(6H)-オンの合成
【化３１】
2020531443.tif 000055
ステップA.2-ブロモ-4-(ブロモメチル)ピリジン。CCl4(10mL)中の2-ブロモ-4-メチルピリジン(1g、5.81mmol)、NBS(1.1g、6.39mmol)、および触媒量のAIBN(100mg)の混合物を、80°Cで一晩攪拌した。得られた混合物を、減圧下で濃縮し、残渣を、シリカゲル上のカラムクロマトグラフィー（溶出液:PE/EtOAc=200/1）により精製して、所望の生成物E3-4（500mg、収率34.28%）を得た。
【０１５８】
ステップＢ.6-((2-ブロモピリジン-4-イル)メチル)-4-メチル-2-(メチルチオ)-4H-チアゾロ[5',4':4,5]ピロロ[2,3-d]ピリダジン-5(6H)-オン。DMF（8mL）中の4-メチル-2-(メチルチオ)-4H-チアゾロ[5',4':4,5]ピロロ[2,3-d]ピリダジン-5(6H)-オン(100mg、0.40mmol)およびK2CO3（164mg、1.19mmol）の混合物を、60℃で2時間攪拌し、続いてDMF（2mL）中の2-ブロモ-4-(ブロモメチル)ピリジン（199mg、0.80mmol）の溶液および触媒量のTBAB（13mg）を添加した。混合物を、60℃で一晩攪拌し、次いで水(20mL)でクエンチして、EtOAcで抽出した。合わせた有機層を、飽和水性NH4Clで洗浄し、無水Na2SO4で乾燥して、減圧下で濃縮した。残渣を、シリカゲル上のカラムクロマトグラフィー（溶出液:PE/EtOAc=10/1）により精製して、所望の生成物（150mg、収率89.62%）を得た。LCMS:m/z  423  (M+H)+。
【０１５９】
ステップC.Tert-ブチル(4-((4-メチル-2-(メチルチオ)-5-オキソ-4H-チアゾロ[5',4':4,5]ピロロ[2,3-d]ピリダジン-6(5H)-イル)メチル)ピリジン-2-イル)カルバメート。ジオキサン（10mL）中の6-((2-ブロモピリジン-4-イル)メチル)-4-メチル-2-(メチルチオ)-4H-チアゾロ[5',4':4,5]ピロロ[2,3-d]ピリダジン-5(6H)-オン（100mg、0.24mmol）、tert-ブチルカルバメート（83mg、0.71mmol）、K3PO4(201mg、0.95mmol)、Pd2（dba）3（18mg、0.02mmol）、およびキサントホス（11mg、0.02mmol）の混合物を、窒素下で、100℃で一晩攪拌した。得られた混合物を、水でクエンチし、EtOAcで抽出した。合わせた有機層を、塩水で洗浄し、無水Na2SO4で乾燥して、減圧下で濃縮した。残渣を、シリカゲル上のカラムクロマトグラフィー（溶出液:PE/EtOAc=3/1）により精製して、所望の生成物（100mg、収率92.10%）を得た。LCMS:m/z  459  (M+H)+。
【０１６０】
ステップD.Tert-ブチル(4-((4-メチル-2-(メチルスルフィニル)-5-オキソ-4H-チアゾロ[5',4':4,5]ピロロ[2,3-d]ピリダジン-6(5H)-イル)メチル)ピリジン-2-イル)カルバメート。DCM（5mL）中のtert-ブチル(4-((4-メチル-2-(メチルチオ)-5-オキソ-4H-チアゾロ[5',4':4,5]ピロロ[2,3-d]ピリダジン-6(5H)-イル)メチル）ピリジン-2-イル)カルバメート（100mg、0.22mmol）の混合物に、3-クロロペルオキシ安息香酸（38mg、0.22mmol）を0℃で添加した。反応混合物を、0℃で1時間攪拌し、次いで水でクエンチして、DCMで抽出した。合わせた有機層を、飽和NaHCO3水で洗浄し、無水Na2SO4で乾燥し、減圧下で濃縮して、所望の生成物（100mg、収率96.63%）を得、これを精製することなく次のステップで直接使用した。LCMS:m/z  475  (M+H)+。
【０１６１】
ステップE.6-((2-アミノピリジン-4-イル)メチル)-4-メチル-2-(メチルスルフィニル)-4H-チアゾロ[5',4':4,5]ピロロ[2,3-d]ピリダジン-5(6H)-オン。TFA（1mL）およびDCM（3mL）中のtert-ブチル(4-((4-メチル-2-(メチルスルフィニル)-5-オキソ-4H-チアゾロ[5',4':4,5]ピロロ[2,3-d]ピリダジン-6(5H)-イル)メチル）ピリジン-2-イル)カルバメート（100mg、0.21mmol）の混合物を、室温で1時間攪拌し、次いで、減圧下で濃縮した。残渣を、分取HPLCにより精製し、所望の生成物（20mg、収率25.35%）を得た。LCMS:m/z  375  (M+H)+。1H  NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.67(s,1H),7.73(d,1H),6.30(d,1H),6.12(s,1H),5.89(s,2H),5.24-5.03(m,2H),4.29(s,3H),3.03(s,3H)。
【０１６２】
上記の手順を使用して、適切な開始材料を使用して以下の化合物を製造した。標準的な保護および脱保護を、必要に応じて使用することができる。
【表３】
2020531443.tif 000056
【０１６３】
実施例3C.6-((2-アミノチアゾール-5-イル)メチル)-4-メチル-2-(メチルスルフィニル)-4H-チアゾロ[5',4':4,5]ピロロ[2,3-d]ピリダジン-5(6H)-オンの合成
【化３２】
2020531443.tif 000057
ステップA〜B．2-ブロモ-5-(ブロモメチル)チアゾールおよび6-((2-ブロモチアゾール-5-イル)メチル)-4-メチル-2-(メチルチオ)-4H-チアゾロ[5',4':4,5]ピロロ[2,3-d]ピリダジン-5(6H)-オンを、実施例3Bと同様に合成した。
【０１６４】
ステップC.6-((2-((2,4-ジメトキシベンジル)アミノ)チアゾール-5-イル)メチル)-4-メチル-2-(メチルチオ)-4H-チアゾロ[5',4':4,5]ピロロ[2,3-d]ピリダジン-5(6H)-オン。NMP(0.1mL)および(2,4-ジメトキシフェニル）メタンアミン（0.1mL)中の6-((2-ブロモチアゾール-5-イル)メチル)-4-メチル-2-(メチルチオ)-4H-チアゾロ[5',4':4,5]ピロロ[2,3-d]ピリダジン-5(6H)-オン（130mg、0.30mmol)およびDIPEA（0.1mL）の混合物を150℃で4時間攪拌した。次いで、反応混合物を、水(10mL)でクエンチし、EtOAcで抽出した。合わせた有機層を、塩水で洗浄し、無水Na2SO4で乾燥して、減圧下で濃縮した。残渣を、シリカゲル上のカラムクロマトグラフィー（PE/EtOAc=5/1で溶出）により精製して、所望の生成物（60mg、収率38.4%）を得た。LC-MS:m/z  515  (M+H)+。
【０１６５】
ステップＤ．6-((2-((2,4-ジメトキシベンジル)アミノ)チアゾール-5-イル)メチル)-4-メチル-2-(メチルスルフィニル)-4H-チアゾロ[5',4':4,5]ピロロ[2,3-d]ピリダジン-5(6H)-オン。0℃のTHF(3mL)中の6-((2-((2,4-ジメトキシベンジル)アミノ)チアゾール-5-イル)メチル)-4-メチル-2-(メチルチオ)-4H-チアゾロ[5',4':4,5]ピロロ[2,3-d]ピリダジン-5(6H)-オン(50mg、0.10mmol)の混合物に、オキソン(61mg、0.10mmol)を添加した。混合物を、0℃で1時間攪拌し、次いで飽和水性Na2S2O3溶液(5mL)でクエンチして、DCMで抽出した。合わせた有機層を、塩水で洗浄し、無水Na2SO4で乾燥し、減圧下で濃縮して、所望の生成物（30mg、収率50.1%）を得、これをさらに精製することなく次のステップで直接使用した。LC-MS:m/z  531  (M+H)+。
【０１６６】
ステップE．6-((2-アミノチアゾール-5-イル)メチル)-4-メチル-2-(メチルスルフィニル)-4H-チアゾロ[5',4':4,5]ピロロ[2,3-d]ピリダジン-5(6H)-オンを、実施例3Bと同様に合成した。LC-MS:m/z  381  (M+H)+。1H  NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.70(s,1H),6.97(s,1H),6.87(s,2H),5.28(s,2H),4.29(s,3H),3.11(s,3H)。
【０１６７】
上記の手順を使用して、適切な開始材料を使用して以下の化合物を製造した。標準的な保護および脱保護を、必要に応じて使用することができる。
【表４】
2020531443.tif 000058
【０１６８】
実施例4.  6-((1H-ピラゾール-3-イル)メチル)-2-((1H-ピラゾール-5-イル)メチル)-4-メチル-4H-チアゾロ[5',4':4,5]ピロロ[2,3-d]ピリダジン-5(6H)-オンの合成
【０１６９】
実施例4A.3-((フェニルスルホニル)メチル)-1-((2-(トリメチルシリル)
エトキシ)メチル)-1H-ピラゾールの合成
【化３３】
2020531443.tif 000059
ステップA.メチル1-((2-(トリメチルシリル)エトキシ)メチル)-1H-ピラゾール-3-カルボキシレート0℃のN2雰囲気下で、THF(1L)中のメチル1H-ピラゾール-3-カルボキシレート（90g、0.72モル）の攪拌溶液に、NaH（20.7g、0.864mol、60%）を添加した。得られた混合物を、最高で室温まで徐々に加温し、1時間攪拌した。次いで、反応混合物を再び0℃に冷却し、SEMCl(151.5mL、0.842mol)を滴加した。さらに2時間攪拌を続けてから、飽和NH4Clでクエンチして、酢酸エチル（3×）で抽出した。合わせた有機層を、塩水で洗浄し、Na2SO4で乾燥した。溶媒を真空下で除去して、粗生成物210gを得、これを精製することなく次のステップで使用した。
【０１７０】
ステップB.(1-((2-(トリメチルシリル)エトキシ)メチル)-1H-ピラゾール-3-イル)メタノール0℃のN2雰囲気下で、THF（760mL）中のLAH(16.9g、0.44mol)の懸濁液に、粗メチル1−（（2−（トリメチルシリル）エトキシ）メチル）−1Ｈ−ピラゾール−3−カルボキシレート（76g）を添加した。得られた混合物を、最高で室温まで徐々に加温し、1時間攪拌した。反応混合物を、再び0℃に冷却し、H2O(15.6mL)、10%のNaOH(15.6mL)、H2O(15.6mL)を連続的に添加した。得られた混合物を、セライトのパッドを通して濾過し、MTBE(4×)で洗浄した。合わせた有機画分を、Na2SO4で乾燥した。溶媒を減圧下で除去して、粗生成物69.4gを得、これを精製することなく次のステップで使用した。LC-MS:m/z  229  (M+H)+。
【０１７１】
ステップC.3-(ヨードメチル)-1-((2-(トリメチルシリル)エトキシ)メチル)-1H-ピラゾール0℃のN2雰囲気下で、THF（310mL）中の(1-((2-(トリメチルシリル)エトキシ)メチル)-1H-ピラゾール-3-イル)メタノール（61.5g、理論上、0.262mol）の攪拌溶液に、TEA(55.42mL、0.393mol)、続いてMsCl(24mL、0.314mol)を添加した。反応物を、最高で室温まで加温し、1時間攪拌してから、NaI(196.5g、1.31mol、310mLのDMF中)を添加した。得られた混合物を、さらに1時間攪拌し、氷水でクエンチして、MTBE（3×）で抽出した。合わせた有機層を、飽和Na2S2O3および塩水で洗浄し、Na2SO4で乾燥して、濃縮し、77.5gの粗生成物を得て、精製することなく次のステップで使用した。LC-MS:m/z  339  (M+H)+。
【０１７２】
ステップD.3-((フェニルスルフォニル)メチル)-1-((2-(トリメチルシリル)エトキシ)メチル)-1H-ピラゾール0℃のN2雰囲気下で、DMF(600mL)中の(1-((2-(トリメチルシリル)エトキシ)メチル)-1H-ピラゾール-3-イル)メタノール(77.5g、理論上、0.229mol)の攪拌溶液に、ベンゼンスルフィン酸ナトリウム（53.5g、0.32mol）を添加して、0℃で1時間攪拌した。室温に加温した後、反応混合物を、氷水および飽和Na2S2O3でクエンチして、酢酸エチル（3×）で抽出した。合わせた有機層を、飽和NaHCO3および塩水で連続的に洗浄し、Na2SO4で乾燥した。溶媒を、真空下で除去し、残渣を、フラッシュクロマトグラフィー（シリカゲル、石油エーテル中の20%〜70%の酢酸エチル）により精製して、淡黄色油として56.7g得た。LCMS:[M+H]+353。1H  NMR(400MHz,DMSO)δ7.85-7.77(m,4H),7.62(dd,2H),6.19(d,1H),5.35(d,2H),4.70(d,2H),3.44-3.38(m,2H),0.88-0.77(m,2H),-0.01(s,9H)。
【０１７３】
実施例4B.6-((1H-ピラゾール-3-イル)メチル)-2-((1H-ピラゾール-5-イル)メチル)-4-メチル-4H-チアゾロ[5',4':4,5]ピロロ[2,3-d]ピリダジン-5(6H)-オンの合成
【化３４】
2020531443.tif 000060
ステップA.4-メチル-2-((フェニルスルホニル)(1-((2-(トリメチルシリル)エトキシ)メチル)-1H-ピラゾール-5-イル)メチル)-4H-チアゾロ[5',4':4,5]ピロロ[2,3-d]ピリダジン-5(6H)-オン。-40℃の乾燥THF(30mL)中の3-((フェニルスルホニル)メチル)-1-((2-(トリメチルシリル)エトキシ)メチル)-1H-ピラゾール(1.8g、5.1mmol)の溶液に、LiHMDS(7.5mL、7.5mmol)を滴加した。混合物を、室温で30分間攪拌し、続いて乾燥THF(30mL)中の4-メチル-2-(メチルスルホニル)-4H-チアゾロ[5',4':4,5]ピロロ[2,3-d]ピリダジン-5(6H)-オン（580mg、2.7mmol）の懸濁液を、室温で添加した。混合物を、室温でさらに1時間攪拌し、氷冷飽和水性NH4Cl(20mL)中に注いで、EtOAc(3×100mL)で抽出した。合わせた有機層を、水(60mL)で洗浄し、無水Na2SO4で乾燥して、減圧下で濃縮した。残渣を、フラッシュクロマトグラフィー（シリカゲル、ジクロロメタン中0〜2.5%のメタノール）で精製して、所望の生成品（800mg、66%）を得た。LC-MS（ESI）観測:557  (M+H)+。1H  NMR(400MHz,DMSO)δ12.78(s,1H),8.65(s,1H),8.03(d,1H),7.84-7.78(m,3H),7.67-7.59(m,2H),6.94(s,1H),6.72(d,1H),5.48(d,2H),4.29(s,3H),3.56(dd,2H),0.88(dd,2H),0.00(s,9H)。
【０１７４】
ステップB.4-メチル-2-((1-((2-(トリメチルシリル)エトキシ)メチル)-1H-ピラゾール-5-イル)メチル)-4H-チアゾロ[5',4':4,5]ピロロ[2,3-d]ピリダジン-5(6H)-オン。N2下のTHF(5mL)およびMeOH(10mL)中の4-メチル-2-((フェニルスルホニル)(1-((2-(トリメチルシリル)エトキシ)メチル)-1H-ピラゾール-5-イル)メチル)-4H-チアゾロ[5',4':4,5]ピロロ[2,3-d]ピリダジン-5(6H)-オン（0.8g、1.41mmol）の混合物に、SmI2(0.1M/THF、45mL)を氷浴下で滴加した。10分間攪拌した後、反応物を、飽和水性NH4Cl(50mL)でクエンチし、EAOAc(50mL×3)で抽出した。合わせた有機層を、水(60mL)で洗浄し、無水Na2SO4で乾燥して、減圧下で濃縮した。残渣を、フラッシュクロマトグラフィー（シリカゲル、ジクロロメタン中0〜3%のメタノール）で精製して、所望の生成品（310mg、51.0%）を得た。LC-MS  観測:417  (M+H)+。1H  NMR(400MHz,CDCl3)δ8.31(s,1H),7.60(d,1H),6.39(d,1H),5.49(s,2H),4.58(s,2H),4.43(s,3H),3.62(t,2H),0.95(t,2H),0.0(s,9H)。
【０１７５】
ステップC.tert-ブチル  3-((4-メチル-5-オキソ-2-((1-((2-(トリメチルシリル)エトキシ)メチル)-1H-ピラゾール-5-イル)メチル)-4H-チアゾロ[5',4':4,5]ピロロ[2,3-d]ピリダジン-6(5H)-イル)メチル)-1H-ピラゾール-1-カルボキシレート。DMF(5.0mL)中の4-メチル-2-((1-((2-(トリメチルシリル)エトキシ)メチル)-1H-ピラゾール-5-イル)メチル)-4H-チアゾロ[5',4':4,5]
ピロロ[2,3-d]ピリダジン-5(6H)-オン（30mg、0.07mmol)およびK2CO3（25mg、0.18mmol）の混合物にアルゴンを吹き込み、50oCで1時間で攪拌した。次いで、tert-ブチル3-(ブロモメチル)-1H-ピラゾール-1-カルボン酸(37mg、0.14mmol)を加えた。50oCで一晩、アルゴン下で攪拌後、反応混合物を室温まで冷却し、飽和水性NH4Cl(20mL)でクエンチして、EAOAc（30mLx3）で抽出した。合わせた有機層を、水(40mL)で洗浄し、無水Na2SO4で乾燥して、減圧下で濃縮した。残渣を、分取TLC(DCM:MeOH  =  15:1)により精製し、所望の生成物(15mg、35.0%)を得た。LC-MS(ESI）観測:597  (M  +  H)+。
【０１７６】
ステップD.6-((1H-ピラゾール-3-イル)メチル)-2-((1H-ピラゾール-5-イル)メチル)-4-メチル-4H-チアゾロ[5',4':4,5]ピロロ[2,3-d]ピリダジン-5(6H)-オンDCM(5mL)中のtert-ブチル3-((4-メチル-5-オキソ-2-((1-((2-(トリメチルシリル)エトキシ)メチル)-1H-ピラゾール-5-イル)メチル)-4H-チアゾロ[5',4':4,5]ピロロ[2,3-d]ピリダジン-6(5H)-イル)メチル)-1H-ピラゾール-1-カルボキシレート(15mg、0.025mmol)の溶液に、TFA（1mL）を添加した。反応混合物を室温で一晩攪拌し、濃縮して、分取TLC（DCM:MeOH  =  15:1）により精製して、所望の生成物を得た（5mg、50%）。LC-MS、観測:367(M+H)+。1H  NMR  (400  MHz,  DMSO)  δ  12.80  (s,  1H),  12.65  (s,  1H),  8.50  (s,  1H),  7.71  (brs,  1H),  7.60  (brs,  1H),  6.26  (d,  1H),  6.11  (d,  1H),  5.32  (s,  2H),  4.49  (s,  2H),  4.27  (s,  3H)。
【０１７７】
実施例5.4-メチル-2-(メチルスルフィニル)-4,6-ジヒドロ-5H-チアゾロ[5',4':4,5]ピロロ[2,3-d]ピリダジン-5-オンの合成
【化３５】
2020531443.tif 000061
DCM（20mL）中の4-メチル-2-(メチルチオ)-4,6-ジヒドロ-5H-チアゾロ[5',4':4,5]ピロロ[2,3-d]ピリダジン-5-オン（1.01g、4.0mmol）の攪拌懸濁液に、3-(クロロ-ベンゾペルオキソ酸（0.77g、3.8mmol）を室温で添加した。混合物を、室温で2時間攪拌した。次いで、混合物を濾過して、EtOAcで洗浄し、MeOHで研和した。固形物を真空中で乾燥させ、4-メチル-2-(メチルスルフィニル)-4,6-ジヒドロ-5H-チアゾlo[5',4':4,5]ピロロ[2,3-d]ピリダジン-5-オン（600mg）を得た。LCMS:m/z  269  (M+H)+。  1H  NMR(400  MHz,  DMSO)  δ  12.78(s,1H),  8.64  (s,1H),  4.28  (s,3H),  3.11  (s,  3H)。
【０１７８】
実施例6.4-メチル-2-(メチルスルホニル)-4,6-ジヒドロ-5H-チアゾロ
[5',4':4,5]ピロロ[2,3-d]ピリダジン-5-オン
【化３６】
2020531443.tif 000062
DCM(600mL)中の4-メチル-4,6-ジヒドロ-5H-チアゾロ[5',4':4,5]ピロロ[2,3-d]ピリダジン-5-オン（30g、0.119モル、1.0当量）で満たした3口フラスコに、m-CPBA(61.5g、3当量)を20℃で3回に分けて添加した。混合物を、30℃で一晩攪拌し、LC-MSは、出発材料が100%消費され、20%のE4-2および80%のE6-1が形成されたことを示した。混合物を、室温に冷却し、別の分量のm-CPBA（1.0当量）を添加した。反応混合物を、30℃で2時間攪拌し、LC-MSは、E4-2(LCMS:m/z269(M+H)+)が8%未満であることを示した。混合物を、室温に冷却して、濾過した。濾過ケーキを、MeOH(500mL)中に懸濁し、室温で1時間攪拌した。固形分を、濾過により収集し、酢酸エチルで洗浄して、真空中で乾燥し、5%のE4-2および95%のE6-1混合物28gを得た。混合物（28g）を、DMSO（600mL）中に懸濁し、120℃〜130℃に加熱して、透明な溶液を形成した。次いで、室温に冷却して、固形分を沈殿させた。混合物を濾過し、乾燥して、23gの純E6-1、LCMS:m/z285（M+H)+を得た。1H  NMR(400MHz,DMSO)δ12.87(s,1H),8.69(s,1H),4.32(s,3H),3.56(s,3H)。
【０１７９】
実施例7.化合物E7-vおよびE7-viiiの合成
スキームE7
【化３７】
2020531443.tif 000063
化合物E7-iおよび化合物E4-2および／または化合物E6-1との間の求核芳香族置換により、中間体E7〜iiを得る。化合物E7-iiのフェニルスルホニル基の減少は、中間体E7-iiiをもたらす。塩基（例えば、K2CO3、K3PO4、t-BuOK、またはCs2CO3）の存在下で、Ｅ7−ｉｖおよび化合物Ｅ7−ｉｉｉの標準アルキル化反応を用いて、化合物E7-viを得、式中、Xaは、Cl、Br、I、OMs、OTsなどの脱離基であり、Ar1およびAr2はそれぞれ独立して、任意で置換された5員または6員の単環式ヘテロアリールである。化合物E7-viはまた、トルエン中のシアノメチレントリブチルホスホラン（CMBP）を使用した、化合物E7-iiiとE7-vとの光延反応から合成することができる。
【０１８０】
実施例7A.4-メチル-2-((1-((2-(トリメチルシリル)エトキシ)メチル)-1H-ピラゾール-3-イル)メチル)-4,6-ジヒドロ-5H-チアゾロ[5',4':4,5]ピロロ[2,3-d]ピリダジン-5-オンの合成
【化３８】
2020531443.tif 000064
ステップA.4-メチル-2-((フェニルスルホニル)(1-((2-(トリメチルシリル)エトキシ)メチル)-1H-ピラゾール-3-イル)メチル)-4,6-ジヒドロ-5H-チアゾロ[5',4':4,5]ピロロ[2,3-d]ピリダジン-5-オン無水THF(700mL)中の3-((フェニルスルホニル)メチル)-1-((2-(トリメチルシリル)エトキシ)メチル)-1H-ピラゾール(26g、78.86mmol、2.1当量)の溶液に、LiHMDS(81.2mL、81.2mmol、THF中の1M、2.31当量)を-40oCで添加した。反応物を、室温に加温し、1時間攪拌した。次いで、4-メチル-2-(メチルスルホニル)-4H-チアゾロ[5',4':4,5]ピロロ[2,3-d]ピリダジン-5(6H)-オン（10g、35.17mmol、1当量）を室温で混合物に加えた。反応物を、室温でさらに0.5時間攪拌した。反応物を0oCで、飽和塩化アンモニウム溶液(500mL)に注ぎ、酢酸エチルで二回抽出した。合わせた有機層を、水および塩水で洗浄し、乾燥させて濃縮し、黄色残渣を得た。残渣を、シリカゲルクロマトグラフィー（ジクロロメタン：メタノール＝100:1〜30:1）により精製し、4-メチル-2-((フェニルスルホニル)(1-((2-(トリメチルシリル)エトキシ)メチル)-1H-ピアゾロ-3-イル)メチル)-4H-チアゾロ[5',4':4,5]ピロロ[2,3-d]ピリダジン-5(6H)-オン（13mg）を得た。LC-MS  ESI  M/Z  =  557  (M+H)+。1H  NMR  (400  MHz,  DMSO)  δ  12.81  (s,  1H),  8.65  (s,  1H),  8.03  (d,  1H),  7.84-7.78  (m,  3H),  7.66  (t,  2H),  6.94  (s,  1H),  6.72  (d,  1H),  5.50  (d,  2H),  4.29  (s,  3H),  3.56  (dd,  2H),  0.91  (dd,  2H),  0.02  (s,  9H)。
【０１８１】
ステップB.4-メチル-2-((1-((2-(トリメチルシリル)エトキシ)メチル)-1H-ピラゾール-3-イル)メチル)-4,6-ジヒドロ-5H-チアゾロ[5',4':4,5]ピロロ[2,3-d]ピリダジン-5-オン。THF（500mL）およびMeOH（500mL）中の4-メチル-2-((フェニルスルホニル)(1-((2-(トリメチルシリル)エトキシ)メチル)-1H-ピラゾール-3-イル)メチル)-4H-チアゾロ[5',4':4,5]ピロロ[2,3-d]ピリダジン-5(6H)-オン(8g、14.37mmol、1当量）の溶液に、SmI2（503mL、50.29mmol、THF中0.1M、3.5当量）を室温で加えた。反応物を0.5時間攪拌し、濃縮した。残渣を、シリカゲルクロマトグラフィー（石油エーテル：酢酸エチル：メタノール＝75:25:0〜20:20:1）により精製し、4-メチル-2-((1-((2-(トリメチルシリル)エトキシ)メチル)-1H-ピアゾロ-3-イル)メチル)-4H-チアゾロ[5',4':4,5]ピロロ[2,3-d]ピリダジン-5(6H)-オン（4.3mg）を得た。LC-MS  ESI  M/Z  =  417  (M+H)+。1H  NMR  (400  MHz,  CDCl3)  δ  8.31  (s,  1H),  7.60  (d,  1H),  7.28  (s,  1H),  6.39  (d,  1H),  5.49  (s,  2H),  4.58  (s,  2H),  4.43  (s,  3H),  3.62  (t,  2H),  0.95  (t,  2H),  0.0  (s,  9H)。
【０１８２】
実施例7B.6-((1H-イミダゾール-2-イル)メチル)-2-((1H-ピラゾール-3-イル)メチル)-4-メチル-4H-チアゾロ[5',4':4,5]ピロロ[2,3-d]ピリダジン-5(6H)-オンの合成
【化３９】
2020531443.tif 000065
ステップA.1-((2-(トリメチルシリル)エトキシ)メチル)-1H-イミダゾール-2-カルボアルデヒド:NaHの試料を、N2下でヘキサン(2×10mL)で洗浄した。フラスコを、乾燥DMF（20mL）で満たし、1H-イミダゾール-2-カルボアルデヒド（500mg、5.2mmol）を、少量ずつ添加した。室温で1.5時間攪拌した後、SEMCl(864mg、5.2mmol)を滴加した。反応混合物を、室温で30分間攪拌した。反応混合物を、水中に注いで、EtOAcで抽出した。有機層を、塩水で洗浄し、Na2SO4で乾燥して、減圧下で濃縮し、粗1-((2-(トリメチルシリル)エトキシ)メチル)-1H-イミダゾール-2-カルボアルデヒド(800mg)を得た。LCMS:227  (M+H)+。
【０１８３】
ステップＢ．（１−（（２−（トリメチルシリル）エトキシ）メチル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル）メタノール:THF(20mL)中の1-((2-(トリメチルシリル)エトキシ)メチル)-1H-イミダゾール-2-カルボアルデヒド（1.6g、7mmol）の攪拌混合物に、NaBH4(1.34g、35mmol)を0℃で添加した。反応混合物を、室温で30分間攪拌した。反応混合物を、NH4Cl水溶液中に注ぎ、EtOAcで抽出した。有機層を、塩水で洗浄し、Na2SO4で乾燥して、減圧下で濃縮し、粗(1-((2-(トリメチルシリル)エトキシ)メチル)-1H-イミダゾール-2-イル)メタノール(1.3g)を得た。
【０１８４】
ステップC.2-(クロロメチル)-1-((2-(トリメチルシリル)エトキシ)メチル)-1H-イミダゾール:DCM(20mL)中の(1-((2-(トリメチルシリル)エトキシ)メチル)-1H-イミダゾール-2-イル)メタノール(400mg、1.75mmol)の攪拌混合物に、NCS(466mg、3.5mmol)およびPPh3(920mg、3.5mmol)を室温で添加した。混合物を、室温で2時間攪拌した。反応混合物を、水中に注ぎ、DCMで抽出した。混合物を、水で洗浄し、有機層を、減圧下で濃縮した。残渣を、分取TLC（PE:EtOAc=1:1）で精製し、2-(クロロメチル)-1-((2-(トリメチルシリル)エトキシ)メチル)-1H-イミダゾールを得た。LCMS:247  (M+H)+。乾燥DMF(5mL)中の4-メチル-2-((1-((2-(トリメチルシリル)エトキシ)メチル)-1H-ピラゾール-3-イル)メチル)-4H-チアゾロ[5',4':4,5]ピロロ[2,3-d]ピリダジン-5(6H)-オン(50mg、0.12mmol)の攪拌混合物に、K2CO3(66mg、0.48mmol)を60℃でN2下で添加した。20分後、乾燥DMF（2mL）中の化合物E7-2（60mg、0.24mmol）を、60℃のN2下で添加した。混合物を、N2下で、60℃で1.5時間攪拌した。反応混合物を、室温に冷却し、0.5NのHCl水溶液を用いてpH=5〜6に調整した。次いで、混合物を、EtOAcで抽出し、水および塩水で洗浄した。有機層を、Na2SO4で乾燥して、減圧下で濃縮し、分取TLC(PE:EtOAc=1:1.5)により精製して、4-メチル-6-((1-((2-(トリメチルシリル)エトキシ)メチル)-1H-イミダゾール-2-イル)メチル)-2-((1-((2-(トリメチルシリル)エトキシ)メチル)-1H-ピラゾール-3-イル)メチル)-4H-チアゾロ[5',4':4,5]
ピロロ[2,3-d]ピリダジン-5(6H)-オン（25mg）を得た。LCMS:627  (M+H)+。DCM/TFA(2mL/2mL)中の4-メチル-6-((1-((2-(トリメチルシリル)エトキシ)メチル)-1H-イミダゾール-2-イル)メチル)-2-((1-((2-(トリメチルシリル)エトキシ)メチル)-1H-ピラゾール-3-イル)メチル)-4H-チアゾロ[5',4':4,5]ピロロ[2,3-d]ピリダジン-5(6H)-オン(25mg、0.04mmol)の混合物を、
室温で1時間攪拌した。反応混合物を、濃縮した。残渣を、分取HPLCにより精製し、所望の生成物（1.3mg）を得た。LCMS:367  (M+H)+。1H  NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.51(s,1H),7.66(d,1H),6.9(s,2H),6.27(d,1H),5.34(s,2H),4.51(s,2H),4.27(s,3H)。
【０１８５】
以下の化合物を、適切な出発材料を使用して、スキームE7および実施例7A〜7Bの手順に従って合成した。標準的な保護および脱保護法を、必要に応じて使用する。
【表５−１】
2020531443.tif 000066
【表５−２】
2020531443.tif 000067
【表５−３】
2020531443.tif 000068
【表５−４】
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【表５−５】
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【表５−６】
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【表５−７】
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【表５−８】
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【表５−９】
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【表５−１０】
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【表５−１１】
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【表５−１２】
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【表５−１３】
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【表５−１４】
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【表５−１５】
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【表５−１６】
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【表５−１７】
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【表５−１８】
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【表５−１９】
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【表５−２０】
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【表５−２１】
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【表５−２２】
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【表５−２３】
2020531443.tif 000088
【０１８６】
実施例8.化合物E8-v、E8-vi、およびE8-viiiの合成
スキームE8
【化４０】
2020531443.tif 000089
化合物E8-iは、実施例E7-iii〜E7-viと同様に、アルキル化または光延反応のいずれかにより、中間体E8-iiに変換することができる（スキームE8の経路(i)を参照）。E8-iiのmCPBAまたはオキソンのいずれかでの酸化により、化合物E8-vおよび／またはE8-viを生成する。E8-vおよびE8-viの両方の化合物はまた、まず酸化により、続いてアルキル化または光延反応により、E8-iから形成することもできる（スキームE8の経路(ii)を参照）。ここで、Xaは、脱離基（例えば、Cl、Br、I、OMs、OTs）であり、化合物E8-vおよび／またはE8-viは、LiHMDSまたはt-BuOKなどを塩基として使用して、化合物E8-xiとの求核芳香族置換反応により、中間体E8-viiに変換することができる。化合物E8-viiiは、SmI2、またはAcOH中のZn、またはAlCl3中のTESのいずれか使用して、化合物E8-viiから合成することができる。本明細書で使用される場合、Ar1およびAr2は、それぞれ独立して、任意で置換された5員または6員のヘテロアリールである。
【０１８７】
実施例8A.2-((1H-ピラゾール-3-イル)メチル)-6-((6-アミノピリジン-2-イル)メチル)-4-メチル-4H-チアゾロ[5',4':4,5]ピロロ[2,3-d]ピリダジン-5(6H)-オンおよび6-((6-アミノピリジン-2-イル)メチル)-4-メチル-2-(1H-ピラゾール-3-カルボニル)-4H-チアゾロ[5',4':4,5]ピロロ[2,3-d]ピリダジン-5(6H)-オンの合成
【化４１】
2020531443.tif 000090
ステップA.tert-ブチルN-[(tert-ブトキシ)カルボニル]-N-[6-({4-メタンスルホニル-7-メチル-9-オキソ-3-チア-5,7,10,11-テトラアザトリシクロ[6.4.0.0{2,6}]ドデカ-1(8),2(6),4,11-テトラエン-10-イル}メチル)ピリジン-2-イル]カルバメート無水MeCN(300mL)中の4-メチル-2-(メチルスルホニル)-4H-チアゾロ[5',4':4,5]ピロロ[2,3-d]ピリダジン-5(6H)-オン(7.5g、26.4mmol)およびK3PO4（8.3g、39.3mmol）の混合物を、70℃で1時間、N2下で撹拌した。続いて、MeCN(30mL)中のtert-ブチルN-[(tert-ブトキシ)カルボニル]-N-[6-(ブロモメチル)ピリジン-2-イル]カルバメート(11.2g、29.0mmol)の溶液を添加した。70℃で2.5時間、N2下で撹拌した後、反応混合物を、飽和NH4Clでクエンチして、EA(300mL×3)で抽出した。合わせた有機層を、水および塩水で洗浄し、Na2SO4で乾燥して、濾過し、有機相を濃縮した。粗生成物を、フラッシュクロマトグラフィー（シリカゲル、石油エーテル中0〜50%の酢酸エチル）により精製して、tert-ブチルN-[(tert-ブトキシ)カルボニル]-N-[6-({4-メタンスルホニル-7-メチル-9-オキソ-3-チア-5,7,10,11-テトラアザトリシクロ[6.4.0.0{2,6}]ドデカ-1(8),2(6),4,11-テトラエン-10-イル}メチル)ピリジン-2-イル]カルバメート（5.5g）を得た。LC-MS（ESI）観測:591.1  (M+H)+。
【０１８８】
ステップＢ.tert-ブチル(6-((4-メチル-5-オキソ-2-((フェニルスルホニル)(1-((2-(トリメチルシリル)エトキシ)メチル)-1H-ピラゾール-3-イル)メチル)-4H-チアゾロ[5',4':4,5]
ピロロ[2,3-d]ピリダジン-6(5H)-イル)メチル)ピリジン-2-イル)カルバメート。  無水THF（200mL）中の3-((フェニルスルホニル)メチル)-1-((2-(トリメチルシリル)エトキシ)メチル)-1H-ピラゾール(11.9g、33.8mmol)の攪拌混合物に、LiHMDS（50mL、THF中1M）を-40℃のアルゴン下で添加した。10分後、混合物を、最高10℃まで加温し、1時間撹拌して、次いでtert-ブチルＮ−[(tert-ブトキシ)カルボニル]-N-[6-({4-メタンスルホニル-7-メチル-9-オキソ-3-チア-5,7,10,11-テトラアザトリシクロ[6.4.0.0{2,6}]ドデカ-1(8),2(6),4,11-テトラエン-10-イル}メチル)ピリジン-2-イル]カルバメート(9.1g、35mLのTHF中15.4mmol)を添加した。反応物を、10℃でさらに30分間攪拌した。反応混合物を、NH4Cl水溶液中に注ぎ、EtOAc(200mL×3)で抽出した。合わせた有機層を、水および塩水で洗浄し、無水Na2SO4で乾燥して、濃縮した。粗生成物を、フラッシュクロマトグラフィー（シリカゲル、石油エーテル中0〜50%の酢酸エチル）により精製して、tert-ブチル(6-((4-メチル-5-オキソ-2-((フェニルスルホニル)(1-((2-(トリメチルシリル)エトキシ)メチル)-1H-ピラゾール-3-イル)メチル)-4H-チアゾロ[5',4':4,5]ピロロ
[2,3-d]ピリダジン-6(5H)-イル)メチル)ピリジン-2-イル)カルバメート（6.6g）を得た。LC-MS（ESI）観測:763.2  (M+H)+。
【０１８９】
ステップC.tert-ブチル(6-((4-メチル-5-オキソ-2-((1-((2-(トリメチルシリル)エトキシ)メチル)-1H-ピラゾール-3-イル)メチル)-4H-チアゾロ[5',4':4,5]ピロロ[2,3-d]ピリダジン-6(5H)-イル)メチル)ピリジン-2-イル)カルバメート  EtOH/AcOH(35mL/50mL)中のtert-ブチル(6-((4-メチル-5-オキソ-2-((フェニルスルホニル)(1-((2-(トリメチルシリル)エトキシ)メチル)-1H-ピラゾール-3-イル)メチル)-4H-チアゾロ[5',4':4,5]ピロロ[2,3-d]ピリダジン-6(5H)-イル)メチル)ピリジン-2-イル)カルバメート（6.0g、7.86mmol）の溶液を、Zn（2.55g、117.9mmol）の存在下で40分間激しく攪拌しながら、50℃に加熱した。追加の亜鉛を、40分毎に添加した（2.55g、2回、TLC/LC-MSにより反応を監視して、副生成物および過還元生成物を回避した）。溶液を濾過し、濾過ケーキをDCMで洗浄した。濾液を、部分的に蒸発させ、飽和NaHCO3溶液で中和し、MgSO4で乾燥して、溶媒を、真空下で除去した。粗生成物を、フラッシュクロマトグラフィー（シリカゲル、DCM:MeOH=40:1）により精製して、tert-ブチル(6-((4-メチル-5-オキソ-2-((1-((2-(トリメチルシリル)エトキシ)メチル)-1H-ピラゾール-3-イル)メチル)-4H-チアゾロ[5',4':4,5]ピロロ[2,3-d]ピリダジン-6(5H)-イル)メチル)ピリジン-2-イル)カルバメート（3.1g）を得た。LC-MS（ESI）観測:623.3  (M+H)+。
【０１９０】
ステップD.2-((1H-ピラゾール-3-イル)メチル)-6-((6-アミノピリジン-2-イル)メチル)-4-メチル-4H-チアゾロ[5',4':4,5]ピロロ[2,3-d]ピリダジン-5(6H)-オン  エタノール(30mL)中のtert-ブチル(6-((4-メチル-5-オキソ-2-((1-((2-(トリメチルシリル)エトキシ)メチル)-1H-ピラゾール-3-イル)メチル)-4H-チアゾロ[5',4':4,5]ピロロ[2,3-d]ピリダジン-6(5H)-イル)メチル)ピリジン-2-イル)カルバメート(3.0g、4.8mmol)の混合物に、HCl(30mL、ジオキサン中4M)を添加した。反応混合物を、80℃で40分間攪拌した。反応混合物を、室温に冷却し、濾過して、固形分を収集し、水中で懸濁して、水性NaHCO3で10℃で中和した。濾過して、所望の化合物2-((1H-ピラゾール-3-イル)メチル)-6-((6-アミノピリジン-2-イル)メチル)-4-メチル-4H-チアゾロ[5',4':4,5]ピロロ[2,3-d]ピリダジン-5(6H)-オン（1.5g）を得た。LC-MS（ESI）観測:393.2  (M+H)+。1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ12.78(s,1H),8.53(s,1H),7.72(s,1H),7.25(dd,1H),6.33-6.24(m,2H),6.08(d,1H),5.90(s,2H),5.19(s,2H),4.49(s,2H),4.26(s,3H)。
【０１９１】
ステップE.tert-ブチル(6-((4-メチル-5-オキソ-2-(1-((2-(トリメチルシリル)エトキシ)
メチル)-1H-ピラゾール-3-カルボニル)-4H-チアゾロ[5',4':4,5]ピロロ[2,3-d]ピリダジン-6(5H)-イル)メチル)ピリジン-2-イル)カルバメートの合成  DMF(2mL)中のtert-ブチル(6-((4-メチル-5-オキソ-2-((1-((2-(トリメチルシリル)エトキシ)メチル)-1H-ピラゾール-3-イル)メチル)-4H-チアゾロ[5',4':4,5]ピロロ[2,3-d]ピリダジン-6(5H)-イル)メチル)ピリジン-2-イル)カルバメート(100mg、0.16mmol)の溶液に、K2CO3（88mg、0.64mmol）を添加した。混合物を、70℃で8時間攪拌した。混合物を、水中に注ぎ、沈殿物を、濾過により収集し、分取TLC(DCM中2%のMeOH)により精製して、tert-ブチル(6-((4-メチル-5-オキソ-2-(1-((2-(トリメチルシリル)エトキシ)メチル)-1H-ピラゾール-3-カルボニル)-4H
-チアゾロ[5',4':4,5]ピロロ[2,3-d]ピリダジン-6(5H)-イル)メチル)ピリジン-2-イル)カルバメート（20mg）を得た。LC-MS(ESI):  m/z  637  (M+H)+。
【０１９２】
ステップF.6-((6-アミノピリジン-2-イル)メチル)-4-メチル-2-(1H-ピラゾール-3-カルボニル)-4H-チアゾロ[5',4':4,5]ピロロ[2,3-d]ピリダジン-5(6H)-オンの合成  EtOH(1mL)中のtert-ブチル(6-((4-メチル-5-オキソ-2-(1-((2-(トリメチルシリル)エトキシ)メチル)-1H-ピラゾール-3-カルボニル)-4H-チアゾロ[5',4':4,5]ピロロ[2,3-d]ピリダジン-6(5H)-イル)メチル)ピリジン-2-イル)カルバメート(20mg、0.03mmol)の溶液に、HCl(1mL、ジオキサン中の4mol/L)を添加した。混合物を、80℃で1時間攪拌して、冷却した。沈殿物を、濾過により収集し、飽和NaHCO3で中和して、水で洗浄し、乾燥させて、5mgの6-((6-アミノピリジン-2-イル)メチル)-4-メチル-2-(1H-ピラゾール-3-カルボニル)-4H-チアゾロ[5',4':4,5]ピロロ[2,3-d]ピリダジン-5(6H)-オンを得た。LC-MS(ESI):m/z  407  (M+H)+。1H  NMR(400MHz,DMSO-d6)δ:8.75(s,1H),7.96(s,1H),7.50(s,1H),7.31-7.22(m,1H),6.31(d,1H),6.14(d,1H),5.91(s,2H),5.23(s,2H),4.38(s,3H)。
【０１９３】
実施例8B.6-((1H-ピラゾール-3-イル)メチル)-2-((6-(ジメチルアミノ)ピリジン-2-イル)メチル)-4-メチル-4,6-ジヒドロ-5H-チアゾロ[5',4':4,5]ピロロ[2,3-d]ピリダジン-5-オンの合成
【化４２】
2020531443.tif 000091
ステップA.(6-(ジメチルアミノ)ピリジン-2-イル)メタノール。THF（35mL）中のジメチルアミン中の(6-クロロピリジン-2-イル)メタノール（500mg、2.67mmol）の溶液に、Pd(OAc)2（78mg、0.35mmol）、キサントホス（170mg、0.29mmol）およびt-BuONa（385mg、4.01mmol）を添加した。反応混合物を、100℃で18時間攪拌した。反応混合物を、濾過して、減圧下で濃縮した。残渣を、フラッシュクロマトグラフィー（シリカゲル、石油エーテル中の0〜35%の酢酸エチル）により精製し、(6-(ジメチルアミノ)ピリジン-2-イル)メタノール(180mg)を得た。LCMS:153  (M+H)+。
【０１９４】
ステップＢ．６−（クロロメチル）−Ｎ，Ｎ−ジメチルピリジン−２−アミン。DCM(10mL)中の(6-(ジメチルアミノ)ピリジン-2-イル)メタノール(170mg、1.1mmol)の攪拌混合物に、SOCl2(665mg、5.6mmol)を0℃で添加した。反応混合物を、室温で1時間攪拌した。反応混合物を、NaHCO3水溶液を用いてpH=7〜8に調整した。次いで、混合物を、DCMで抽出し、水および塩水で洗浄した。有機層を、Na2SO4で乾燥し、減圧下で濃縮して、6−（クロロメチル）−Ｎ，Ｎ−ジメチルピリジン−2−アミン(70mg)を得た。LCMS:171  (M+H)+。
【０１９５】
ステップC.N,N-ジメチル-6-((フェニルスルホニル)メチル)ピリジン-2-アミン。DMSO(10mL)中の6-(クロロメチル)-N,N-ジメチルピリジン-2-アミン（500mg、2.94mmol）の攪拌混合物に、PhSO2Na(1.44g、8.82mmol)を室温で添加した。混合物を、室温で18時間攪拌した。反応混合物を、水中に注いで、DCMで抽出した。混合物を、水で洗浄して、有機層を、減圧下で濃縮した。残渣を、フラッシュクロマトグラフィー（シリカゲル、石油エーテル中の0〜20%の酢酸エチル）により精製し、N,N-ジメチル-6-((フェニルスルホニル)メチル)
ピリジン-2-アミン(380mg)を得た。LCMS:277  (M+H)+。
【０１９６】
ステップＤ．2-((6-(ジメチルアミノ)ピリジン-2-イル)(フェニルスルホニル)メチル)-4-メチル-6-((1-((2-(トリメチルシリル)エトキシ)メチル)-1H-ピラゾール-3-イル)メチル)-4H-チアゾロ[5',4':4,5]ピロロ[2,3-d]ピリダジン-5(6H)-オン。実施例8Aの化合物E8-1と同様に合成した、乾燥THF（10mL）中の4-メチル-2-(メチルスルホニル)-6-((1-((2-(トリメチルシリル)エトキシ)メチル)-1H-ピラゾール-3-イル)メチル)-4H-チアゾロ[5',4':4,5]ピロロ[2,3-d]ピリダジン-5(6H)-オン(180mg、0.36mmol)の攪拌混合物に、N,N-ジメチル-6-((フェニルスルホニル)メチル)ピリジン-2-アミン（120mg、0.44mmol）およびt-BuOK（122mg、1.1mmol）を、60℃のN2下で添加した。混合物を、N2下で、60℃で2時間攪拌した。次いで、混合物を水中に注ぎ、EtOAcで抽出して、水および塩水で洗浄した。有機層を、Na2SO4で乾燥させ、減圧下で濃縮して、分取TLC（PE:EtOAc=1:1.5）により精製し、2-((6-(ジメチルアミノ)ピリジン-2-イル)(フェニルスルホニル)メチル)-4-メチル-6-((1-((2-(トリメチルシリル)エトキシ)メチル)-1H-ピラゾール-3-イル)メチル)-4H-チアゾロ[5',4':4,5]
ピロロ[2,3-d]ピリダジン-5(6H)-オン（50mg）を得た。LCMS:691  (M+H)+。
【０１９７】
ステップE.2-((6-(ジメチルアミノ)ピリジン-2-イル)メチル)-4-メチル-6-((1-((2-(トリメチルシリル)エトキシ)メチル)-1H-ピラゾール-3-イル)メチル)-4H-チアゾロ
[5',4':4,5]ピロロ[2,3-d]ピリダジン-5(6H)-オン。室温のN2下で、THF(5mL)およびMeOH(5mL)中の2-((6-(ジメチルアミノ)ピリジン-2-イル)(フェニルスルホニル)メチル)-4-メチル-6-((1-((2-(トリメチルシリル)エトキシ)メチル)-1H-ピラゾール-3-イル)メチル)-4H-チアゾロ[5',4':4,5]
ピロロ[2,3-d]ピリダジン-5(6H)-オン(50mg、0.07mmol)の混合物に、SmI2(5mL、THF中の0.1M)を-40℃で添加した。反応混合物を、-40℃で10分間攪拌し、次いで水でクエンチした。以下の混合物を、EtOAcで二回抽出した。合わせた有機層を、塩水(30mL)で洗浄し、無水Na2SO4で乾燥して、減圧下で濃縮した。残渣を、分取TLC(PE/EtOAc=1/1.5)により精製し、所望の生成物（10mg）を得た。LCMS:m/z551(M+H)+。
【０１９８】
ステップF.6-((1H-ピラゾール-3-イル)メチル)-2-((6-(ジメチルアミノ)ピリジン-2-イル)メチル)-4-メチル-4H-チアゾロ[5',4':4,5]ピロロ[2,3-d]ピリダジン-5(6H)-オン。DCM/TFA(2mL/2mL)中の2-((6-(ジメチルアミノ)ピリジン-2-イル)メチル)-4-メチル-6-((1-((2-(トリメチルシリル)エトキシ)メチル)-1H-ピラゾール-3-イル)メチル)-4H-チアゾロ[5',4':4,5]ピロロ[2,3-d]ピリダジン-5(6H)-オン(10mg、0.018mmol)の混合物を、室温で1時間攪拌した。反応混合物を、濃縮した。残渣を、分取HPLCにより精製し、所望の生成物（1.4mg）を得た。LCMS:421  (M+H)+。1H  NMR(400MHz,DMSO)δ8.51(s,1H),7.55(s,1H),7.48(dd,1H),6.64(d,1H),6.54(d,1H),6.11(d,1H),5.32(s,2H),4.44(s,2H),4.26(s,3H),3.05(s,6H)。
【０１９９】
以下の化合物を、適切な出発材料を使用して、スキームE8および実施例8Cに従って合成した。標準的な保護および脱保護を、必要に応じて使用することができる。
【表６−１】
2020531443.tif 000092
【表６−２】
2020531443.tif 000093
【表６−３】
2020531443.tif 000094
【表６−４】
2020531443.tif 000095
【表６−５】
2020531443.tif 000096
【表６−６】
2020531443.tif 000097
【表６−７】
2020531443.tif 000098
【表６−８】
2020531443.tif 000099
【表６−９】
2020531443.tif 000100
【表６−１０】
2020531443.tif 000101
【表６−１１】
2020531443.tif 000102
【表６−１２】
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【表６−１３】
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【表６−１４】
2020531443.tif 000105
【０２００】
実施例9.化合物E9-viおよびE9-viiの合成
スキームE9
【化４３】
2020531443.tif 000106
化合物E9-ivは、スキーム9の二つのアプローチ、（i）および（ii）により合成することができる。アプローチ（ｉ）では、化合物Ｅ9−ｉｉは、実施例7または実施例8に示されるように、アルキル化反応により化合物Ｅ9−ｉから合成することができる。本明細書で使用される場合、Xaは脱離基である。化合物E9-iiのLiHMDSおよびDMFとのホルミル化反応は、中間体E9-iiiを提供する。E9-iiiは、還元剤（例えば、NaBH4）と反応して、化合物E9-ivを提供する。代替的に、アプローチ（ｉｉ）では、化合物E9-iのハロゲン化は、化合物E9-ixを生成する。化合物E9-ixは、スチル反応、オゾン分解、および還元を受けて、化合物E9-xを提供する。化合物E9-xは、E9-viiiでアルキル化して、化合物E9-ivを提供することができる。スキーム9、（iii）では、化合物E9-ivは、ハロゲン化を受けて、中間体E9-vを得る（Xbは、ClまたはBrなどのハロゲンである。）E9-vの有機スズ、ホウ素、亜鉛またはマグネシウムとの金属(例えばPdまたはCu)触媒カップリングは、化合物E9-viを提供する。本明細書で使用される場合、Ｍは有機金属錯体（例えば、ボロン酸またはピナコホウ素錯体などの有機ホウ素錯体、-Sn(But)3などの有機スズ錯体、-Zn(ハロゲン)などの有機亜鉛錯体）であり、化合物E9-vはまた、複合環中の窒素などのいくつかの求核体とも反応して、生成物E9-viiを得ることができる。本明細書で使用される場合、Ar1およびAr2は、それぞれ独立して、任意で置換された5員または6員のヘテロアリールであり、Xaは脱離基（例えば、Br、I、OMs、またはOTs）であり、Xbはハロゲンである。
【０２０１】
実施例9A.6-((1H-インダゾール-4-イル)メチル)-4-メチル-2-(チアゾール-4-イルメチル)-4H-チアゾロ[5',4':4,5]ピロロ[2,3-d]ピリダジン-5(6H)-オンの合成
【化４４】
2020531443.tif 000107
ステップA.4-メチル-5-オキソ-6-((1-((2-(トリメチルシリル)エトキシ)メチル)-1H-インダゾール-4-イル)メチル)-5,6-ジヒドロ-4H-チアゾロ[5',4':4,5]ピロロ[2,3-d]ピリダジン-2-カルボアルデヒドの合成。乾燥THF(30mL)中の4-メチル-6-((1-((2-(トリメチルシリル)エトキシ)メチル)-1H-インダゾール-4-イル)メチル)-4H-チアゾロ[5',4':4,5]ピロロ[2,3-d]ピリダジン-5(6H)-オン（2.6g、5.57mmol、1当量）の混合物に、LiHMDS（1M、11.14mL、2.0当量）を-78℃で加えた。混合物を、-78℃で2時間攪拌した。次いで、DMF（2.04g、27.86mmol、2.14mL、5.0当量）を、上記の混合物に滴加した。混合物を、-78℃で2時間攪拌した。TLC（PE:EA=2:1、UV=254nm）は、一つの主要な新規スポットが形成されたことを示した。混合物を、冷たい飽和NH4Cl(20mL)中に注いだ。次いで、混合物を、室温に加熱した。混合物を、EtOAc(40mL×3)で抽出した。有機層を、水（20mL×3）で洗浄し、真空中で濃縮して、所望の生成物（2.6g、粗製物）を得た。LCMS:m/z  495.2  [M+H]+
ステップB.2-(ヒドロキシメチル)-4-メチル-6-((1-((2-(トリメチルシリル)エトキシ)
メチル)-1H-インダゾール-4-イル)メチル)-4H-チアゾロ[5',4':4,5]ピロロ[2,3-d]ピリダジン-5(6H)-オン。THF(10mL)およびMeOH(10mL)中の粗4-メチル-5-オキソ-6-((1-((2-(トリメチルシリル)エトキシ)
メチル)-1H-インダゾール-4-イル)メチル)-5,6-ジヒドロ-4H-チアゾロ[5',4':4,5]ピロロ[2,3-d]ピリダジン-2-カルボアルデヒド（1.0g、2.02mmol、1当量）の混合物に、NaBH4（152.97mg、4.04mmol、2当量）を添加した。混合物を、30℃で14時間攪拌した。TLC（DCM:MeOH=10:1、UV=254nm）は、出発材料が完全に消費され、一つの主要な新規スポットが形成されたことを示した。反応物を、水（20mL）の添加によりクエンチし、EtOAc(30mL×3)で抽出した。合わせた有機層を、塩水(20mL)で洗浄した。有機相を、真空中で濃縮した。残渣を、フラッシュシリカゲルクロマトグラフィー（ISCO（登録商標）、40gのSepaFlash（登録商標）Silica  Flash  Column、30mL/分で0〜5%のMeOH/DCMの溶出液）により精製した。溶出液を、真空中で濃縮し、所望の生成物（382mg）を得た。LCMS:m/z  497.1  [M+H]+。1H  NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm8.61(s,1H),8.25(s,1H),7.66(d,1H),7.38(t,1H),7.05(d,1H),6.36(t,1H),5.74(s,2H),5.68(s,2H),4.89(d,2H),4.26(s,3H),3.50(t,2H),0.78(t,2H),-0.12(s,9H)。
【０２０２】
ステップC.2-(クロロメチル)-4-メチル-6-((1-((2-(トリメチルシリル)エトキシ)メチル)-1H-インダゾール-4-イル)メチル)-4H-チアゾロ[5',4':4,5]ピロロ[2,3-d]ピリダジン-5(6H)-オンの合成。DCM(5mL)中の2-(ヒドロキシメチル)-4-メチル-6-((1-((2-(トリメチルシリル)
エトキシ)メチル)-1H-インダゾール-4-イル)メチル)-4H-チアゾロ[5',4':4,5]ピロロ[2,3-d]ピリダジン-5(6H)-オン（150.0mg、302.02umol、1当量）およびEt3N（61.12ｍｇ、604.04ｕｍｏｌ、84.08ｕＬ、2.0当量）の混合物に、4-メチルベンゼンスルホニルクロリド（75.0ｍｇ、393.40ｕｍｏｌ、1.30当量）を添加した。混合物を、30℃で5時間攪拌した。TLC（PE:4:1、UV=254nm）は、出発材料が完全に消費されたことを示した。水(10mL)およびDCM(20mL)を、混合物に添加した。有機層を、真空中で濃縮して、黄色のゴム状物（0.1g）を得た。残渣を、フラッシュシリカゲルクロマトグラフィー（ISCO（登録商標）、4gのSepaFlash（登録商標）Silica  Flash  Column、30mL/分の勾配の0〜20%の酢酸エチル/石油エーテルの溶出液）により精製した。所望の画分を、真空中で濃縮し、所望の生成物（40.0mg、76.88umol）を得た。LCMS:m/z  515.1  [M+H]+。1H  NMR(400MHz,クロロホルム-d)δppm8.27(d,1H),8.26(s,1H),7.52(d,1H),7.39(dd,1H),7.25(s,1H),5.76(s,2H),5.72(s,2H),4.96(s,2H),4.40(s,3H),3.50-3.57(m,2H),0.84-0.90(m,2H),-0.09〜-0.06(m,9H)。
【０２０３】
ステップD.4-メチル-2-(チアゾール-4-イルメチル)-6-((1-((2-(トリメチルシリル)エトキシ)
メチル)-1H-インダゾール-4-イル)メチル)-4,6-ジヒドロ-5H-チアゾロ[5',4':4,5]ピロロ[2,3-d]ピリダジン-5-オンの合成。トルエン(4mL)中の2-(クロロメチル)-4-メチル-6-((1-((2-(トリメチルシリル)エトキシ)メチル)-1H-インダゾール-4-イル)メチル)-4H-チアゾロ[5',4':4,5]
ピロロ[2,3-d]ピリダジン-5(6H)-オン(50mg、0.97mmol)および4-(トリブチルスタニル)チアゾール(114mg、2.91mmol)の溶液に、Ｐｄ（PPh3)4（402mg、2.91mmol)を添加した。次いで、混合物を、N2下で、120℃で30分間、MW反応器中で加熱した。溶液を、水中に注いで、EtOAcで抽出し、無水Na2SO4で乾燥した。有機層を、減圧下で濃縮した。残渣を、フラッシュクロマトグラフィー（シリカゲル、石油エーテル中の0〜50%の酢酸エチル）により精製し、4-メチル-2-(チアゾール-4-イルメチル)-6-((1-((2-(トリメチルシリル)エトキシ)メチル)-1H-インダゾール-4-イル)メチル)-4H-チアゾロ[5',4':4,5]ピロロ[2,3-d]ピリダジン-5(6H)-オン（30mg）を得た。LCMS:564  (M+H)+。
【０２０４】
ステップE.6-((1H-インダゾール-4-イル)メチル)-4-メチル-2-(チアゾール-4-イルメチル)-4,6-ジヒドロ-5H-チアゾロ[5',4':4,5]ピロロ[2,3-d]ピリダジン-5-オンの合成。N2下で室温のDCM(3mL)中の化合物E9-4（30mg、0.05mmol）の混合物に、TFA（3mL）を添加した。反応混合物を、室温で1時間攪拌した。混合物を、減圧下で濃縮した。残渣を、分取HPLC(C18、0.1%のギ酸を含むH2O中0〜90%のアセトニトリル)により精製し、所望の生成物（3.9mg）を得た。LCMS:434  (M+H)+。1H  NMR(400MHz,DMSO)δ13.12(s,1H),9.12(d,1H),8.56(s,1H),8.14(s,1H),7.71(d,1H),7.45(d,1H),7.35-7.24(m,1H),6.96(d,1H),5.65(s,2H),4.70(s,2H),4.27(s,3H)。
【０２０５】
実施例9B.4-メチル-2-(ピリジン-2-イルメチル)-6-(ピリジン-3-イルメチル)-4H-チアゾロ[5',4':4,5]ピロロ[2,3-d]ピリダジン-5(6H)-オンの合成
【化４５】
2020531443.tif 000108
ステップA.2-(ヒドロキシメチル)-4-メチル-6-(ピリジン-3-イルメチル)-4H-チアゾロ[5',4':4,5]ピロロ[2,3-d]ピリダジン-5(6H)-オンの合成 -78℃で、THF(10mL)中の4−メチル−6−（ピリジン−3−イルメチル）−4Ｈ−チアゾロ[5’，4’:4，5］ピロロ［2，3−ｄ］ピリダジン−5（6Ｈ）−オン（640ｍｇ、2.15ｍｍｏｌ）の混合物に、LiHMDS(4.3mL、THF中の1M)を添加した。30分後、乾燥DMF（0.84mL、10.8mmol）を、混合物に添加した。出発物質を完全に消費した後、EtOH(4mL)中のNaBH4(164mg、4.3mmol)の混合物を添加し、5分間攪拌した。次いで、混合物を、飽和NH4Cl中に注ぎ、EtOAcで抽出した。有機層を、塩水で洗浄し、無水Na2SO4で乾燥して、濾過して濃縮した。残渣を、フラッシュクロマトグラフィー（シリカゲル、DCM中0〜5%のMeOH）により精製して、2-(ヒドロキシメチル)-4-メチル-6-(ピリジン-3-イルメチル)-4H-チアゾロ[5',4':4,5]ピロロ[2,3-d]ピリダジン-5(6H)-オン（220mg）を得た。LC-MS(ESI):m/z  328  (M+H)+。
【０２０６】
ステップB．２−（クロロメチル）−４−メチル−６−（ピリジン−３−イルメチル）−４Ｈ−チアゾロ[５’，４’:４，５］ピロロ［２，３−ｄ］ピリダジン−５（６Ｈ）−オンの合成  DCM(5mL)中の2-(ヒドロキシメチル)-4-メチル-6-(ピリジン-3-イルメチル)-4H-チアゾロ[5',4':4,5]ピロロ[2,3-d]ピリダジン-5(6H)-オン（100mg、0.31mmol）の混合物に、ET3N(0.43mL、3.1mmol)およびMsCl(0.12mL、1.5mmol)を添加した。反応物を、室温で6時間攪拌した。次いで、混合物を、飽和NH4Cl（水性）で洗浄して、無水Na2SO4で乾燥して、濾過して濃縮した。残渣を、フラッシュクロマトグラフィー（シリカゲル、PE中の0〜50%のEtOAc）により精製し、65mgの2−（クロロメチル）−4−メチル−6−（ピリジン−3−イルメチル）−4Ｈ−チアゾロ[5’，4’:4，5］ピロロ［2，3−ｄ］ピリダジン−5（6Ｈ）−オンを得た。LC-MS(ESI):m/z  346  (M+H)+。
【０２０７】
ステップC.4-メチル-2-(ピリジン-2-イルメチル)-6-(ピリジン-3-イルメチル)-4H-チアゾロ[5',4':4,5]ピロロ[2,3-d]ピリダジン-5(6H)-オンの合成  窒素下で、トルエン(3mL)中の2-(クロロメチル)-4-メチル-6-(ピリジン-3-イルメチル)-4H-チアゾロ[5',4':4,5]ピロロ[2,3-d]ピリダジン-5(6H)-オン（50mg、0.14mmol）および2-(トリブチルスタニル)ピリジン(0.14mL、0.43mmol)の混合物に、Pd(PPh3)4（17mg、0.014mmol）を添加した。反応混合物を、100℃で一晩攪拌した。次いで、混合物を冷却して、減圧下で濃縮し、残渣を、分取TLC（溶出：DCM中10%のMeOH）により精製して、2mgの4-メチル-2-(ピリジン-2-イルメチル)-6-(ピリジン-3-イルメチル)-4H-チアゾロ[5',4':4,5]ピロロ[2,3-d]ピリダジン-5(6H)-オンを得た。LC-MS(ESI):m/z  389  (M+H)+。1  H  NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.56(m,3H),8.48(dd,1H),7.81(td,1H),7.71(d,1H),7.50(d,1H),7.37-7.30(m,2H),5.38(s,2H),4.67(s,2H),4.25(s,3H)。
【０２０８】
実施例9C.2-((1H-1,2,4-トリアゾール-1-イル)メチル)-6-((1H-ピラゾール-3-イル)メチル)-4-メチル-4H-チアゾロ[5',4':4,5]ピロロ[2,3-d]ピリダジン-5(6H)-オンおよび6-((1H-ピラゾール-3-イル)メチル)-2-((4H-1,2,4-トリアゾール-4-イル)メチル)-4-メチル-4H-チアゾロ[5',4':4,5]ピロロ[2,3-d]ピリダジン-5(6H)-オンの合成
【化４６】
2020531443.tif 000109
ステップA.1-((2-(トリメチルシリル)エトキシ)メチル)-1H-ピラゾール-3-カルボアルデヒドの合成。DCM（500mL）中の1H-ピラゾール-3-カルボアルデヒド（10.0g、104.07mmol、1当量）およびDIPEA（33.63g、260.18mmol、45.32mL、2.5当量）の懸濁液に、-40℃で、2-(クロロメトキシ)エチル-トリメチル-シラン(26.03g、156.11mmol、27.63mL、1.5当量)を滴加した。次いで、反応混合物を、室温に加温し、16時間攪拌した。TLC（石油エーテル:EtOAc=5:1）は、出発材料が完全に消費され、二つの新規スポットが形成されたことを示した。反応混合物を、真空中で濃縮した。残渣を、別の2つのバッチ（各10.0g）と合わせて、Combiflash（石油エーテル中の100%の石油エーテル〜40%のEtOAc）により精製し、所望の生成物60.0gを得た。（注:約5/4の比の2つの位置異性体の混合物）。1H  NMR(400MHz,クロロホルム-d)δppm10.06(s,1H),10.00(s,1H),7.68(d,1H),7.67(d,1H),7.03(d,1H),6.92(d,1H),5.87(s,2H),5.56(s,2H),3.61-3.67(m,4H),0.91-1.01(m,4H),-0.09-0.05(m,18H)。
【０２０９】
ステップＢ.(1-((2-(トリメチルシリル)エトキシ)メチル)-1H-ピラゾール-3-イル)メタノールの合成。THF(200mL)/MeOH(100mL)中の1-((2-(トリメチルシリル)エトキシ)メチル)-1H-ピラゾール-3-カルボアルデヒド（30g、132.54mmol、1当量、約5/4の比の2つの位置異性体の混合物）の溶液に、NaBH4(7.52g、198.81mmol、1.50当量）を、0°Cで少しずつ添加し、反応混合物を、0℃から室温に、18時間攪拌した。TLC（石油エーテル:EtOAc=2:1）は、出発材料が完全に消費され、二つの新規スポットが形成されたことを示した。溶媒を、真空中で濃縮した。残渣を、Combiflash（100%の石油エーテル〜100%のEtOAc）により精製して、25gの所望の生成物を得た。（注:約3/2の比の2つの位置異性体の混合物）。1H  NMR(400MHz,クロロホルム-d)δppm7.55(d,1H),7.47(brs,1H),6.36(d,1H),6.34(d,1H),5.57(s,2H),5.42(s,2H),4.74-4.76(m,4H),3.55-3.60(m,4H),0.85-0.96(m,4H),0.00-0.06(m,18H)。
【０２１０】
ステップC.3-(ブロモメチル)-1-((2-(トリメチルシリル)エトキシ)メチル)-1H-ピラゾールの合成。DCM(200mL)中の(1-((2-(トリメチルシリル)エトキシ)メチル)-1H-ピラゾール-3-イル)メタノール（23g、100.72mmol、1当量、約3/2の比の2つの位置異性体の混合物）およびPPh3（36.98g、141.00mmol、1.4当量）の溶液に、CBr4（46.76g、141.00mmol、1.4当量）を0℃で添加し、反応混合物を、0℃で3時間攪拌した。TLC（石油エーテル:EtOAc=5:1）は、出発材料が完全に消費され、新規スポットが形成されたことを示した。反応混合物を、真空中で濃縮した。残渣を、別のバッチ（2.0g）と合わせて、Combiflash（石油エーテル中の100%の石油エーテル〜50%のEtOAc）により精製し、所望の生成物22.0g（75.53mmol）を得た。1H  NMR(400MHz,クロロホルム-d)δppm7.51(d,1H),6.39(d,1H),5.38(s,2H),4.50(s,2H),3.52-3.57(m,2H),0.86-0.96(m,2H),-0.03-0.02(m,9H)。
【０２１１】
ステップD.4-メチル-6-((1-((2-(トリメチルシリル)エトキシ)メチル)-1H-ピラゾール-3-イル)メチル)-4H-チアゾロ[5',4':4,5]ピロロ[2,3-d]ピリダジン-5(6H)-オンの合成。DMF（15mL）中の4-メチル-4H-チアゾロ[5',4':4,5]ピロロ[2,3-d]ピリダジン-5(6H)-オン(1.0g、4.85mmol、1当量)、3-(ブロモメチル)-1-((2-(トリメチルシリル)エトキシ)メチル)-1H-ピラゾール(2.12g、7.27mmol、1.5当量)、K3PO4（2.57g、12.12mmol、2.5当量）およびNaI（218.05mg、1.45mmol、0.3当量）の懸濁液を、60℃で18時間、N2下で撹拌した。TLC（石油エーテル:EtOAc=1:1）は、出発材料が完全に消費され、新規スポットが形成されたことを示した。反応混合物を、別の3つのバッチ（各1.0g）と合わせ、氷水（250mL）中に注いだ。混合物を、EtOAc(150mL×3)で抽出した。合わせた有機層を、水(120mL×2)、塩水(120mL)で洗浄し、Na2SO4で乾燥した。溶媒を、真空中で濃縮した。粗生成物を、Combiflash（石油エーテル中の100%の石油エーテル〜80%のEtOA）により精製し、所望の生成物（3.6g）を得た。1H  NMR(400MHz,クロロホルム-d)δppm8.91(s,1H),8.27(s,1H),7.49(d,1H),6.36(d,1H),5.51(s,2H),5.40(m,2H),4.45(s,3H),3.52-3.58(m,2H),0.85-0.90(m,2H),-0.05(s,9H)。
【０２１２】
ステップE.4-メチル-5-オキソ-6-((1-((2-(トリメチルシリル)エトキシ)メチル)-1H-ピラゾール-3-イル)メチル)-5,6-ジヒドロ-4H-チアゾロ[5',4':4,5]ピロロ[2,3-d]ピリダジン-2-カルボアルデヒドの合成。アルゴン下で、THF(30mL)中の4-メチル-6-((1-((2-(トリメチルシリル)エトキシ)
メチル)-1H-ピラゾール-3-イル)メチル)-4H-チアゾロ[5',4':4,5]ピロロ[2,3-d]ピリダジン-5(6H)-オン（1.7g、4.09mmol、1当量）の溶液に、LiHMDS(1.0M、8.18mL、2当量)を-78℃で徐々に添加し、反応混合物を、-70℃で1時間攪拌した。次いで、THF（3mL）中のDMF（1.49g、20.45mmol、1.57mL、5当量）の溶液を、混合物に滴加した。得られた混合物を、-70℃で1時間攪拌した。TLC（石油エーテル:EtOAc=1:1）は、新規スポットが形成されたことを示した。反応混合物を、水性NH4Cl(50mL)に0℃で滴加し、次いで混合物を、EtOAc(30mL×3)で抽出した。合わせた有機層を、塩水(40mL)で洗浄し、Na2SO4で乾燥した。溶媒を、真空中で除去し、所望の粗生成物(1.8g)を得、これをさらに精製することなく次のステップで使用した。
【０２１３】
ステップF.2-(ヒドロキシメチル)-4-メチル-6-((1-((2-(トリメチルシリル)エトキシ)
メチル)-1H-ピラゾール-3-イル)メチル)-4H-チアゾロ[5',4':4,5]ピロロ[2,3-d]ピリダジン-5(6H)-オンの合成。THF(20mL)およびMeOH(10mL)中の4-メチル-5-オキソ-6-((1-((2-(トリメチルシリル)エトキシ)メチル)-1H-ピラゾール-3-イル)メチル)-5,6-ジヒドロ-4H-チアゾロ[5',4':4,5]ピロロ[2,3-d]ピリダジン-2-カルボアルデヒド(1.8g、3.24mmol、1当量)の溶液に、NaBH4（245.08ｍｇ、6.48ｍｍｏｌ、2当量）を0℃で添加し、反応混合物を、室温で18時間攪拌した。TLC（石油エーテル:EtOAc=1:2）は、出発材料が完全に消費され、新規スポットが形成されたことを示した。反応混合物を、真空中で濃縮し、残渣を、Combiflash（DCM中、100%のDCM〜5%のMeOH）により精製した。所望の生成物（1.1g）を得た。1H  NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm8.63(s,1H),7.86(d,1H),6.44(t,1H),6.27(d,1H),5.40-5.42(m,4H),4.98(d,2H),4.34(s,3H),3.55-3.61(m,2H),0.86-0.91(m,2H),0.00(s,9H)。
【０２１４】
ステップG.(4-メチル-5-オキソ-6-((1-((2-(トリメチルシリル)エトキシ)メチル)-1H-ピラゾール-3-イル)メチル)-5,6-ジヒドロ-4H-チアゾロ[5',4':4,5]ピロロ[2,3-d]ピリダジン-2-イル）メタンスルホン酸メチルの合成。DCM(15mL)中の2-(ヒドロキシメチル)-4-メチル-6-((1-((2-(トリメチルシリル)エトキシ)メチル)-1H-ピラゾール-3-イル)メチル)-4H-チアゾロ[5',4':4,5]
ピロロ[2,3-d]ピリダジン-5(6H)-オン(700mg、1.57mmol、1当量)およびEt3N（317.21ｍｇ、3.13ｍｍｏｌ、436.33ｕＬ、2.0当量）の溶液に、0℃でMsCl（269.32mg、2.35mmol、181.97Ul、1.5当量）を添加し、反応混合物を、室温で1時間攪拌した。TLC（石油エーテル:EtOAc=1:1）は、出発材料が完全に消費され、新規スポットが形成されたことを示した。反応混合物を、EtOAc(80mL)で希釈し、水(30mL×4)、塩水(40mL)で洗浄し、Na2SO4で乾燥した。溶媒を、真空中で除去し、所望の粗生成物(700mg)を得た。LCMS:m/z525.5(M+H)+。
【０２１５】
ステップＨ．2-((1H-1,2,4-トリアゾール-1-イル)メチル)-4-メチル-6-((1-((2-(トリメチルシリル)エトキシ)メチル)-1H-ピラゾール-3-イル)メチル)-4H-チアゾロ[5',4':4,5]
ピロロ[2,3-d]ピリダジン-5(6H)-オンおよび2-((4H-1,2,4-トリアゾール-4-イル)メチル)-4-メチル-6-((1-((2-(トリメチルシリル)エトキシ)メチル)-1H-ピラゾール-3-イル)メチル)-4H-チアゾロ[5',4':4,5]ピロロ[2,3-d]ピリダジン-5(6H)-オンの合成。MeCN(8mL)中の(4-メチル-5-オキソ-6-((1-((2-(トリメチルシリル)エトキシ)メチル)-1H-ピラゾール-3-イル)メチル)-5,6-ジヒドロ-4H-チアゾロ[5',4':4,5]ピロロ[2,3-d]ピリダジン-2-イル)メタンスルホン酸メチル(150mg、285.88umol、1当量)、1H-1,2,4-トリアゾール(197.45mg、2.86mmol、10当量)およびCsF(86.85mg、571.77umol、21.08uL、2当量)の混合物を、N2下で、60℃で18時間攪拌した。LCMSは、出発材料が完全に消費され、二つの新しいピークが形成されたことを示した。反応混合物を、真空中で濃縮し、残渣を、Combiflash（DCM中、100%のDCM〜8%のMeOH）により精製した。生成物2-((1H-1,2,4-トリアゾール-1-イル)メチル)-4-メチル-6-((1-((2-(トリメチルシリル)エトキシ)メチル)-1H-ピラゾール-3-イル)メチル)-4H-チアゾロ[5',4':4,5]ピロロ[2,3-d]ピリダジン-5(6H)-オン(55mg)および2-((4H-1,2,4-トリアゾール-4-イル)メチル)-4-メチル-6-((1-((2-(トリメチルシリル)エトキシ)メチル)-1H-ピラゾール-3-イル)メチル)-4H-チアゾロ[5',4':4,5]ピロロ[2,3-d]ピリダジン-5(6H)-オン(30mg)を得た。
【０２１６】
ステップＩ.2-((1H-1,2,4-トリアゾール-1-イル)メチル)-6-((1H-ピラゾール-3-イル)メチル)-4-メチル-4H-チアゾロ[5',4':4,5]ピロロ[2,3-d]ピリダジン-5(6H)-オンの合成。DCM(3mL)中の2-((1H-1,2,4-トリアゾール-1-イル)メチル)-4-メチル-6-((1-((2-(トリメチルシリル)エトキシ)メチル)-1H-ピラゾール-3-イル)メチル)-4H-チアゾロ[5',4':4,5]ピロロ[2,3-d]ピリダジン-5(6H)-オン(55mg、110.52umol、1当量)およびHCl/ジオキサン(4M、1mL、36.19当量)の懸濁液に、H2O(1.99mg、110.52umol、0.05mL、1当量)を添加し、反応混合物を、室温で18時間攪拌した。LCMSは、出発材料が完全に消費され、84％の所望の生成物が観測されたことを示した。反応混合物を、真空中で濃縮し、残渣を、分取HPLCにより精製して、所望の生成物（24.1mg、65.60umol、収率59.35%）を得た。カラム:Xtimate  C18  150*25mm*5um、移動相:[水(0.225%FA)-ACN]、B%:13%〜43%、11.2分。LCMS:m/z  367.9(M+H)+1HNMR(400MHz,メタノール-d4)  δppm8.72(s,1H),8.35(s,1H),8.05(s,1H),7.52(brs,1H),6.26(d,1H),5.92(s,2H),5.43(s,2H),4.30(s,3H)。
【０２１７】
ステップＪ.6-((1H-ピラゾール-3-イル)メチル)-2-((4H-1,2,4-トリアゾール-4-イル)メチル)-4-メチル-4H-チアゾロ[5',4':4,5]ピロロ[2,3-d]ピリダジン-5(6H)-オンの合成。DCM（3mL）中の2-((4H-1,2,4-トリアゾール-4-イル)メチル)-4-メチル-6-((1-((2-(トリメチルシリル)エトキシ)メチル)-1H-ピラゾール-3-イル)メチル)-4H-チアゾロ[5',4':4,5]ピロロ[2,3-d]ピリダジン-5(6H)-オン(30mg、60.28umol、1当量)およびHCl/ジオキサン(4M、1mL、66.35当量)の懸濁液に、H2O（50.00mg、2.78mmol、0.05mL、46.04当量）を添加し、反応混合物を、室温で18時間攪拌した。LCMSは、出発材料が完全に消費され、所望の生成物が観測されたことを示した。反応混合物を、真空中で濃縮し、残渣を、分取HPLCにより精製して、所望の生成物（2.1mg、5.72umol）を得た。カラム:Xtimate  C18  150*25mM*5um、移動相:[水(0.225%のFA)-ACN]、B%:13%〜43%、11.2分。LCMS:m/z  368.0(M+H)+。1H  NMR(400MHz,メタノール-d4)δppm8.74(s,2H),8.38(s,1H),7.52(d,1H),6.26(d,1H),5.84(s,2H),5.44(s,2H),4.31(s,3H)。
【０２１８】
以下の化合物を、適切な出発材料を使用して、スキームE9および実施例9A〜9Bの手順に従って合成した。標準的な保護および脱保護を、必要に応じて使用することができる。
【表７−１】
2020531443.tif 000110
【表７−２】
2020531443.tif 000111
【０２１９】
実施例9D  2-((1H-1,2,4-トリアゾール-1-イル)メチル)-6-((2-アミノピリミジン-4-イル)メチル)-4-メチル-4H-チアゾロ[5',4':4,5]ピロロ[2,3-d]ピリダジン-5(6H)-オンの合成
【化４７】
2020531443.tif 000112
ステップA.2-クロロ-4-メチル-4H-チアゾロ[5',4':4,5]ピロロ[2,3-d]ピリダジン-5(6H)-オン  乾燥THF（80mL）中の4-メチル-4H-チアゾロ[5',4':4,5]ピロロ[2,3-d]ピリダジン-5(6H)-オン（3g、14.5mmol）の混合物に、LiHMDS（30.5mL）を-65℃で滴加した。1時間攪拌した後、乾燥THF（20mL）中のヘキサクロロエタン（1.8mL、16mmol）の溶液を添加した。反応混合物を、3時間かけて-20℃に上昇させた。次いで、混合物を、飽和NH4Clでクエンチし、室温で20分間撹拌して、沈殿物を、濾過により収集し、EtOAcで洗浄して、3.5gの2-クロロ-4-メチル-4H-チアゾロ[5',4':4,5]ピロロ[2,3-d]ピリダジン-5(6H)-オンを得た。LC-MS(ESI):m/z  241  (M+H)+。
【０２２０】
ステップＢ.4−メチル−2−ビニル−4Ｈ−チアゾロ[5’，4’:4，5］ピロロ［2，3−ｄ］ピリダジン−5（6Ｈ）−オンの合成  窒素下で、ＤＭＦ(30mL)中の2-クロロ-4-メチル-4H-チアゾロ[5',4':4,5]ピロロ[2,3-d]ピリダジン-5(6H)-オン（1.5g、6.2mmol）および
トリブチル（エテニル）スタンナン(5.5mL、18.7mmol)の混合物に、Pd(PPh3)4(0.36g、0.31mmol)を添加した。反応混合物を、100℃で2時間攪拌した。次いで、混合物を冷却し、EtOAcで希釈して、水および塩水で洗浄し、無水Na2SO4で乾燥して、濃縮した。残渣を、フラッシュクロマトグラフィー（シリカゲル、DCM中0〜10%のMeOH）により精製して、1.4gの4-メチル-2-ビニル-4H-チアゾロ[5',4':4,5]ピロロ[2,3-d]ピリダジン-5(6H)-オンを得た。LC-MS(ESI):m/z  233  (M+H)+。
【０２２１】
ステップC.  4-メチル-5-オキソ-5,6-ジヒドロ-4H-チアゾロ[5',4':4,5]ピロロ[2,3-d]ピリダジン-2-カルボアルデヒドの合成 -60℃下で、DCM/MeCN(500mL、1:1容積)中の4-メチル-2-ビニル-4H-チアゾロ[5',4':4,5]ピロロ[2,3-d]ピリダジン-5(6H)-オン(500mg、2.15mmol)の混合物を、O3で20分間パージした。次いで、反応物を、ジメチルソルファンでクエンチし、濃縮して、500mgの4-メチル-5-オキソ-5,6-ジヒドロ-4H-チアゾロ[5',4':4,5]ピロロ[2,3-d]ピリダジン-2-カルボアルデヒドを得た。LC-MS(ESI):m/z235(M+H)+。
【０２２２】
ステップD.2-(ヒドロキシメチル)-4-メチル-4H-チアゾロ[5',4':4,5]ピロロ[2,3-d]ピリダジン-5(6H)-オン EtOH(3mL)中の4-メチル-5-オキソ-5,6-ジヒドロ-4H-チアゾロ[5',4':4,5]ピロロ[2,3-d]ピリダジン-2-カルボアルデヒド（500mg、2.13mmol）の混合物に、NaBH4(81mg、2.13mmol)を0℃で添加した。反応物を、室温で5分間攪拌した。次いで、混合物を、飽和NH4Cl中に注ぎ、EtOAcで抽出した。有機層を、塩水で洗浄し、無水Na2SO4で乾燥して、濃縮した。残渣を、フラッシュクロマトグラフィー（シリカゲル、DCM中0〜8%のMeOH）により精製して、120mgの2-(ヒドロキシメチル)-4-メチル-4H-チアゾロ[5',4':4,5]ピロロ[2,3-d]ピリダジン-5(6H)-オンを得た。LC-MS(ESI):m/z237(M+H)+。
【０２２３】
ステップE.  6-((2-クロロピリミジン-4-イル)メチル)-2-(ヒドロキシメチル)-4-メチル-4H-チアゾロ[5',4':4,5]ピロロ[2,3-d]ピリダジン-5(6H)-オンの合成 DMF(8mL)中の2-(ヒドロキシメチル)-4-メチル-4H-チアゾロ[5',4':4,5]ピロロ[2,3-d]ピリダジン-5(6H)-オン(200mg、0.85mmol)の混合物に、K2CO3（351mg、2.54mmol）を添加した。60℃で30分間攪拌した後、DMF(2mL)中の2-クロロ-4-(クロロメチル)ピリミジン(276mg、1.7mmol)の溶液を添加した。反応混合物を、さらに4時間攪拌し、飽和NH4Cl中に注ぎ、EtOAcで抽出した。有機層を、塩水で洗浄し、無水Na2SO4で乾燥して、濃縮した。残渣を、フラッシュクロマトグラフィー（シリカゲル、DCM中の0〜8%MeOH中、DCM）により精製して、160mgの6-((2-クロロピリミジン-4-イル)メチル)-2-(ヒドロキシメチル)-4-メチル-4H-チアゾロ[5',4':4,5]ピロロ[2,3-d]ピリダジン-5(6H)-オンを得た。LC-MS(ESI):m/z  363  (M+H)+。
【０２２４】
ステップF.6-((2-(ビス(2,4-ジメトキシベンジル)アミノ)ピリミジン-4-イル)メチル)-2-(ヒドロキシメチル)-4-メチル-4H-チアゾロ[5',4':4,5]ピロロ[2,3-d]ピリダジン-5(6H)-オン MeCN(5mL)中の6-((2-クロロピリミジン-4-イル)メチル)-2-(ヒドロキシメチル)-4-メチル-4H-チアゾロ[5',4':4,5]ピロロ[2,3-d]ピリダジン-5(6H)-オン(160mg、0.44mmol)の混合物に、ビス(2,4-ジメトキシベンジル)アミン（280mg、0.88mmol）およびAcOH（1滴）を添加した。反応混合物を、80℃で一晩攪拌した。反応混合物を、蒸発させて、残渣を、分取TLC（溶出液：DCM中5%のMeOH）により精製して、75mgの6-((2-(ビス(2,4-ジメトキシベンジル)アミノ)ピリミジン-4-イル)メチル)-2-(ヒドロキシメチル)-4-メチル-4H-チアゾロ[5',4':4,5]ピロロ[2,3-d]ピリダジン-5(6H)-オンを得た。LC-MS(ESI):m/z  644  (M+H)+。
【０２２５】
ステップG.6-((2-(ビス(2,4-ジメトキシベンジル)アミノ)ピリミジン-4-イル)メチル)-2-(クロロメチル)-4-メチル-4H-チアゾロ[5',4':4,5]ピロロ[2,3-d]ピリダジン-5(6H)-オン 0℃下で、DCM(5mL)中の6-((2-(ビス(2,4-ジメトキシベンジル)アミノ)ピリミジン-4-イル)メチル)-2-(ヒドロキシメチル)-4-メチル-4H-チアゾロ[5',4':4,5]ピロロ[2,3-d]ピリダジン-5(6H)-オン(75mg、0.12mmol)の溶液に、Et3N（0.16mL、1.16mmol）を添加した。
【０２２６】
およびMsCl(0.05mL、0.58mmol)を添加した。混合物を、室温で一晩攪拌した。反応混合物を、DCMで希釈し、飽和NH4Clおよび塩水で洗浄して、無水Na2SO4で乾燥し、濃縮して、70mgの粗生成物6-((2-(ビス(2,4-ジメトキシベンジル)アミノ)ピリミジン-4-イル)メチル)-2-(クロロメチル)-4-メチル-4H-チアゾロ[5',4':4,5]ピロロ[2,3-d]ピリダジン-5(6H)-オンを得た。LC-MS(ESI):m/z  662  (M+H)+。
【０２２７】
ステップＨ．2-((1H-1,2,4-トリアゾール-1-イル)メチル)-6-((2-(ビス(2,4-ジメトキシベンジル)アミノ)ピリミジン-4-イル)メチル)-4-メチル-4H-チアゾロ[5',4':4,5]ピロロ[2,3-d]ピリダジン-5(6H)-オンの合成  DMF(3mL)中の4H-1,2,4-トリアゾール(39mg、0.57mmol)およびK2CO3（78mg、0.57mmol）の混合物を、60℃で30分間撹拌した。6-((2-(ビス(2,4-ジメトキシベンジル)アミノ)ピリミジン-4-イル)メチル)-2-(クロロメチル)-4-メチル-4H-チアゾロ[5',4':4,5]ピロロ[2,3-d]ピリダジン-5(6H)-オン(75mg、0.11mmol)を添加し、さらに30分間攪拌した。懸濁液を、飽和NH4Cl中に注ぎ、EtOAcで抽出した。有機層を、塩水で洗浄し、無水Na2SO4で乾燥して、濃縮した。残渣を、フラッシュクロマトグラフィー（シリカゲル、MeO中0〜10%のDCM）により精製して、60mgの2-((1H-1,2,4-トリアゾール-1-イル)メチル)-6-((2-(ビス(2,4-ジメトキシベンジル)アミノ)ピリミジン-4-イル)メチル)-4-メチル-4H-チアゾロ[5',4':4,5]ピロロ[2,3-d]ピリダジン-5(6H)-オンを得た。LC-MS(ESI):m/z  695  (M+H)+。
【０２２８】
ステップG.2-((1H-1,2,4-トリアゾール-1-イル)メチル)-6-((2-アミノピリミジン-4-イル)メチル)-4-メチル-4H-チアゾロ[5',4':4,5]ピロロ[2,3-d]ピリダジン-5(6H)-オンの合成  EtOH(2mL)中の2-((1H-1,2,4-トリアゾール-1-イル)メチル)-6-((2-(ビス(2,4-ジメトキシベンジル)アミノ)ピリミジン-4-イル)メチル)-4-メチル-4H-チアゾロ[5',4':4,5]ピロロ[2,3-d]ピリダジン-5(6H)-オン（30mg、0.043mmol）の混合物に、HCl(0.5mL、ジオキサン中の4M)を添加した。反応混合物を、80℃で一晩攪拌した。次いで、混合物を冷却し、飽和NaHCO3中に注いで、EtOAcで抽出した。有機層を、塩水で洗浄し、無水Na2SO4で乾燥して、濃縮した。残渣を、分取HPLCにより精製して、8mgの2-((1H-1,2,4-トリアゾール-1-イル)メチル)-6-((2-アミノピリミジン-4-イル)メチル)-4-メチル-4H-チアゾロ[5',4':4,5]ピロロ[2,3-d]ピリダジン-5(6H)-オン。LC-MS(ESI):m/z395(M+H)+。1H  NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.80(s,1H),8.62(s,1H),8.12-8.10(m,2H),6.60(s,2H),6.19(d,1H),6.01(s,2H),5.19(s,2H),4.26(s,3H)。
【０２２９】
【表８】
2020531443.tif 000113
【０２３０】
実施例10.化合物E10-iiの合成
スキームE10
【化４８】
2020531443.tif 000114
E10-iのLiHMDSおよびアルデヒドとの反応により、化合物E10-iiを生成し、これは、キラルHPLCまたはSFCで分離されて二つのエナンチオマーを得ることができる。本明細書で使用される場合、Ar1およびAr2は、それぞれ独立して、任意で置換された5または6員の単環式ヘテロアリールである。
【０２３１】
実施例10A.(R)-6-((1H-ピラゾール-3-イル)メチル)-2-(ヒドロキシ(1H-ピラゾール-3-イル)メチル)-4-メチル-4H-チアゾロ[5',4':4,5]ピロロ[2,3-d]ピリダジン-5(6H)-オンおよび(S)-6-((1H-ピラゾール-3-イル)メチル)-2-(ヒドロキシ(1H-ピラゾール-3-イル)メチル)-4-メチル-4H-チアゾロ[5',4':4,5]ピロロ[2,3-d]ピリダジン-5(6H)-オンの合成
【化４９】
2020531443.tif 000115
ステップA.2-(ヒドロキシ(1-((2-(トリメチルシリル)エトキシ)メチル)-1H-ピラゾール-3-イル)メチル)-4-メチル-6-((1-((2-(トリメチルシリル)エトキシ)メチル)-1H-ピラゾール-3-イル)メチル)-4H-チアゾロ[5',4':4,5]ピロロ[2,3-d]ピリダジン-5(6H)-オン。アルゴン下で、THF(10mL)中の4-メチル-6-((1-((2-(トリメチルシリル)エトキシ)メチル)-1H-ピラゾール-3-イル)メチル)-4H-チアゾロ[5',4':4,5]ピロロ[2,3-d]ピリダジン-5(6H)-オン（0.5g、1.20mmol、1当量）の溶液に、LiHMDS(1.0M、2.41mL、2当量)を-78℃で徐々に添加し、反応混合物を、-70℃で1時間攪拌した。次いで、THF(1mL)中の1-(2-トリメチルシリルエトキシメチル)
ピラゾール-3-カルボアルデヒド（816.97mg、3.61mmol、3当量）の溶液を、反応混合物に滴加した。得られた混合物を、-70℃で1時間攪拌した。TLC（石油エーテル:EtOAc=1:1）は、二つの新規スポットが形成されたことを示した。反応混合物を、水性NH4Cl(5mL)で-70℃でクエンチして、次いで室温に加温した。混合物を、水(10mL)で希釈し、EtOAc(8mL×3)で抽出した。合わせた有機層を、塩水(10mL)で洗浄し、Na2SO4で乾燥した。溶媒を、真空中で濃縮した。残渣を、Combiflash（100%の石油エーテル〜100%のEtOAc）により精製して、粗生成物（130mg）を淡茶色のゴム状物として得、これを、さらに生成することなく次のステップで使用した。LCMS:m/z643.2[M+H]+
ステップＢ．6-((1H-ピラゾール-3-イル)メチル)-2-(ヒドロキシ(1H-ピラゾール-3-イル)メチル)-4-メチル-4H-チアゾロ[5',4':4,5]ピロロ[2,3-d]ピリダジン-5(6H)-オンの合成。DCM(8mL)中の2-(ヒドロキシ(1-((2-(トリメチルシリル)エトキシ)メチル)-1H-ピラゾール-3-イル)メチル)-4-メチル-6-((1-((2-(トリメチルシリル)エトキシ)メチル)-1H-ピラゾール-3-イル)メチル)-4H-チアゾロ[5',4':4,5]ピロロ[2,3-d]ピリダジン-5(6H)-オン(0.13g、202.20umol、1当量)の溶液に、TFA(4.62g、40.52mmol、3mL、200.38当量)を添加し、続いてH2O（500.00mg、27.75mmol、0.5mL、137.26当量）を添加し、次いで反応混合物を、室温で18時間攪拌し、次いで40℃に18時間加熱した。LCMSは、出発材料が完全に消費されたことを示した。反応混合物を、真空中で濃縮し、残渣を、分取HPLCにより精製して、所望の生成物（20.5mg）を得た。LCMS:m/z  382.9  [M+H]+。1H  NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm12.72(brs,1H),12.61(brs,1H),8.52(s,1H),7.56-7.62(m,2H),6.82(brs,1H),6.18(d,1H),5.99-6.09(m,2H),5.24-5.32(m,2H),4.19(s,3H)。
【０２３２】
ステップC.(R)-6-((1H-ピラゾール-3-イル)メチル)-2-(ヒドロキシ(1H-ピラゾール-3-イル)メチル)-4-メチル-4H-チアゾロ[5',4':4,5]ピロロ[2,3-d]ピリダジン-5(6H)-オンおよび(S)-6-((1H-ピラゾール-3-イル)メチル)-2-(ヒドロキシ(1H-ピラゾール-3-イル)メチル)-4-メチル-4H-チアゾロ[5',4':4,5]ピロロ[2,3-d]ピリダジン-5(6H)-オンの合成。化合物6-((1H-ピラゾール-3-イル)メチル)-2-(ヒドロキシ(1H-ピラゾール-3-イル)メチル)-4-メチル-4H-チアゾロ[5',4':4,5]
[2,3-d]ピリダジン-5(6H)-オンを、SFCにより分離した。SFC条件:カラムは、DAICEL  CHIRALCEL  OJ-H（250mM*30mM、5um）、移動相:A:55%のCO2、B:45%［EtOH中0.1%のNH3H2O]/分。SFC分離により、2-[(R)-ヒドロキシ(1H-ピラゾール-3-イル)メチル]-4-メチル-6-(1H-ピラゾール-3-イルメチル)チアゾロ[3,4]ピロロ[1,3-d]ピリダジン-5-オンおよび2-[(S)-ヒドロキシ(1H-ピラゾール-3-イル)メチル]-4-メチル-6-(1H-ピラゾール-3-イルメチル)チアゾロ[3,4]ピロロ[1,3-d]ピリダジン-5-オンを得た。一つの異性体（4.4mg）:LCMS:  m/z  383  [M+H]+。1H  NMR(400MHz,メタノール-d4)δppm8.39(s,1H),7.61(brs,1H),7.55(brs,1H),6.34(brs,1H),6.25(brs,1H),6.18(brs,1H),5.44(s,2H),4.29(s,3H)。別の異性体（4.1mg）:LCMS:  m/z  383  (M+H)+。1H  NMR(400MHz,メタノール-d4)δppm8.40(s,1H),7.59(brs,1H),7.54(brs,1H),6.34(brs,1H),6.26(brs,1H),6.19(brs,1H),5.44(s,2H),4.29(s,3H)。
【０２３３】
実施例10B:6-((1H-ピラゾール-3-イル)メチル)-2-(ジフルオロ(1H-ピラゾール-3-イル)メチル)-4-メチル-4,6-ジヒドロ-5H-チアゾロ[5',4':4,5]ピロロ[2,3-d]ピリダジン-5-オンの合成
【化５０】
2020531443.tif 000116
ステップA.3-(6-((1-(N,N-ジメチルスルファモイル)-1H-ピラゾール-3-イル)メチル)-4-メチル-5-オキソ-5,6-ジヒドロ-4H-チアゾロ[5',4':4,5]ピロロ[2,3-d]ピリダジン-2-カルボニル）-N,N-ジメチル-1H-ピラゾール-1-スルホンアミド。DCM(1.5mL)中の3-((2-((1-(N,N-ジメチルスルファモイル)-1H-ピラゾール-3-イル)(ヒドロキシ)メチル)-4-メチル-5-オキソ-4,5-ジヒドロ-6H-チアゾロ[5',4':4,5]ピロロ[2,3-d]ピリダジン-6-イル)メチル)-N,N-ジメチル-1H-ピラゾール-1-スルホンアミド(50mg、83.80umol、E10-1と同様に作製)の混合物に、MnO2(72.85mg、838.00umol)を添加し、15℃で1.5時間攪拌した。反応混合物を濾過し、減圧下で濃縮して、粗生成物（60mg、粗製物）を得た。LCMS:m/z  595.1  (M+H)+。1H  NMR(400MHz,CDCl3)δ8.34(s,1H),8.12(d,1H),7.90(d,1H),7.41(d,1H),6.38(d,1H),5.54(s,2H),4.49(s,3H),3.10(s,6H)2.93(s,6H)。
【０２３４】
ステップB.3-((2-((1-(N,N-ジメチルスルファモイル)-1H-ピラゾール-3-イル)ジフルオロメチル)-4-メチル-5-オキソ-4,5-ジヒドロ-6H-チアゾロ[5',4':4,5]ピロロ[2,3-d]ピリダジン-6-イル)メチル)-N,N-ジメチル-1H-ピラゾール-1-スルホンアミド。DCE(4mL)中の3-(6-((1-(N,N-ジメチルスルファモイル)-1H-ピラゾール-3-イル)メチル)-4-メチル-5-オキソ-5,6-ジヒドロ-4H-チアゾロ[5',4':4,5]ピロロ[2,3-d]ピリダジン-2-カルボニル)-N,N-ジメチル-1H-ピラゾール-1-スルホンアミド(240mg、403.60umol)の溶液に、BAST（1.34g、6.05mmol、1.33mL）を添加し、混合物を、50℃で12時間攪拌した。反応混合物を、ジクロロメタン(20mL)で希釈し、飽和NaHCO3（10mL×2）で洗浄して、無水Na2SO4で乾燥し、濾過して減圧下で濃縮し、粗生成物（300mg、粗製物）を得て、これをさらに精製することなく次のステップで使用した。LCMS:m/z  617.1  (M+H)+。
【０２３５】
ステップC.6-((1H-ピラゾール-3-イル)メチル)-2-(ジフルオロ(1H-ピラゾール-3-イル)メチル)-4-メチル-4,6-ジヒドロ-5H-チアゾロ[5',4':4,5]ピロロ[2,3-d]ピリダジン-5-オン。DCM(2mL)中の3-((2-((1-(N,N-ジメチルスルファモイル)-1H-ピラゾール-3-イル)ジフルオロメチル)-4-メチル-5-オキソ-4,5-ジヒドロ-6H-チアゾロ[5',4':4,5]ピロロ[2,3-d]ピリダジン-6-イル)メチル)-N,N-ジメチル-1H-ピラゾール-1-スルホンアミド(240mg、163.47umol)の混合物に、TFA(2.07g、18.15mmol、1.34mL)を添加し、混合物を、最高50℃まで5時間加温した。反応混合物を、減圧下で濃縮した。残渣を、分取HPLC（カラム:Agela  ASB  150*25mM*5um、移動相:[水（0.05%のHCl)-ACN]、B%:30%〜60%、8分）により精製し、所望の生成物（3.9mg、収率5.45%、純度92%）を白色固形分として得た。LCMS:m/z  403.1  (M+H)+。1H  NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.67(s,1H),7.95(s,1H),7.61(s,1H),6.72(s,1H),6.16(s,1H),5.36(s,2H),4.28(s,3H)。
【０２３６】
実施例10C:2-(1-(1H-ピラゾール-3-イル)エチル)-6-((1H-ピラゾール-3-イル)メチル)-4-メチル-4,6-ジヒドロ-5H-チアゾロ[5',4':4,5]ピロロ[2,3-d]ピリダジン-5-オンの合成
【化５１】
2020531443.tif 000117
ステップA:3-((2-(1-(1-(N,N-ジメチルスルファモイル)-1H-ピラゾール-3-イル)-1-ヒドロキシエチル)-4-メチル-5-オキソ-4,5-ジヒドロ-6H-チアゾロ[5',4':4,5]ピロロ[2,3-d]ピリアジン-6-イル)メチル)-N,N-ジメチル-1H-ピラゾール-1-スルホンアミド。THF(3mL)中の3-(6-((1-(N,N-ジメチルスルファモイル)-1H-ピラゾール-3-イル)メチル)-4-メチル-5-オキソ-5,6-ジヒドロ-4H-チアゾロ[5',4':4,5]ピロロ[2,3-d]ピリダジン-2-カルボニル)-N,N-ジメチル-1H-ピラゾール-1-スルホンアミド(160mg、269.07umol)溶液に、CH3MgBr（3M、179.38uL）を添加し、反応混合物を、0℃で3時間攪拌した。反応混合物を、飽和NH4Cl(10mL)中に0℃で注ぎ、酢酸エチル（20mL×3）で抽出した。合わせた有機層を、塩水(10mL)で洗浄し、無水Na2SO4で乾燥し、濾過して、減圧下で濃縮した。残渣を、フラッシュシリカゲルクロマトグラフィー(ISCO（登録商標）、12gのSepaFlash（登録商標）Silica  Flash  Column、40mL/分の0〜90%の酢酸エチル/石油エーテル勾配溶離液)により精製し、所望の生成物(50mg、81.87umol)を得た。LCMS:m/z  611.1  (M+H)+。
【０２３７】
ステップB:2-(1-(1H-ピラゾール-3-イル)エチル)-6-((1H-ピラゾール-3-イル)メチル)-4-メチル-4,6-ジヒドロ-5H-チアゾロ[5',4':4,5]ピロロ[2,3-d]ピリダジン-5-オン。  DCE(0.5mL)中の3-((2-(1-(1-(N,N-ジメチルスルファモイル)-1H-ピラゾール-3-イル)-1-ヒドロキシエチル)-4-メチル-5-オキソ-4,5-ジヒドロ-6H-チアゾロ[5',4':4,5]ピロロ[2,3-d]ピリダジン-6-イル)メチル)-N,N-ジメチル-1H-ピラゾール-1-sスルホンアミド(50mg、81.87umol)の混合物に、0℃でEt3SiH(19.04mg、163.75umol、26.15uL)を添加し、続いてTFA(1.54g、13.51mmol、1mL、164.96当量)を添加し、0℃で1時間攪拌した。混合物を、さらに1時間、50℃に加温した。反応混合物を、減圧下で濃縮した。残渣を、分取HPLC(カラム:Agela  ASB  150*25mM*5um、移動相:[水(0.05%のHCl)-ACN]、B%:25%〜55%、7分)により精製し、7.0mgの所望の生成物を得た。LCMS:m/z  381.2  (M+H)+。1H  NMR(400MHz,  CD3OD)δ8.46(s,1H),8.15(d,2H),6.78(d,1H),6.74(d,1H),5.60(s,2H),5.00(q,1H),4.33(s,3H),1.94(d,3H)。
【０２３８】
実施例10D:6-((1H-ピラゾール-3-イル)メチル)-4-メチル-2-(1H-ピラゾール-3-カルボニル)-4,6-ジヒドロ-5H-チアゾロ[5',4':4,5]ピロロ[2,3-d]ピリダジン-5-オンの合成
【化５２】
2020531443.tif 000118
ステップA.4-メチル-2-(1H-ピラゾール-3-カルボニル)-6-(1H-ピラゾール-3-イルメチル)チアゾロ[3,4]ピロロ[1,3-d]ピリダジン-5-オン.  DCE(1.5mL)中の3-(6-((1-(N,N-ジメチルスルファモイル)-1H-ピラゾール-3-イル)メチル)-4-メチル-5-オキソ-5,6-ジヒドロ-4H-チアゾロ[5',4':4,5]ピロロ[2,3-d]ピリダジン-2-カルボニル)-N,N-ジメチル-1H-ピラゾール-1-スルホンアミド(50mg、84.08umol)の溶液に、TFA(2.31g、20.26mmol、1.5mL)を添加し、反応混合物を、最高50℃まで12時間加温した。反応混合物を、真空下で濃縮した。残渣を、分取HPLCにより精製し、6.0mgの所望の生成物を得た。LCMS:m/z  381.1  (M+H)+。1H  NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.72(s,1H),7.96(d,1H),7.64(d,1H),7.49(d,1H),6.19(d,1H),5.37(s,2H),4.38(s,3H)。
【０２３９】
実施例11.PKR変異型アッセイ
手順：
PKRまたはPKR変異型酵素溶液を、1x緩衝液（100mMのKCl、50mMのTris  pH7.5、5mMのMgCl2）ならびにＰＥＰ（濃度は酵素に依存）、180μMのNADH、0.5単位のLDH、1mMのDTT、0.03%のBSA含む反応混合物中に希釈し、1.11倍希釈後の最終アッセイ濃度が示されている。
最初に2μLの試験化合物をウェルに加え、その後180μLの反応混合物を加えた。
試験化合物との反応混合物を、ADPを除いて構築し、プレートを室温で60分間保存した。
20uLのADPを加えて室温で反応を開始させ、反応の進行を室温での波長340nmでの吸光度の変化として測定した。
試験化合物の調製：
試験化合物ストックは、100%のDMSO（10mM）で100×濃度で作製した。
1〜3回の希釈を11ポイント行った（すなわち、50μlの最初の濃度を100μlの100％DMSOに添加して3.33mMを得、この50μlを100μlのDMSOに添加して1.11mMを得る、など）。
・  アッセイへの1〜100回の希釈（200μl中2μl）により、100μMの開始濃度を得、11ポイントで3倍減少した。
アッセイ緩衝液:100mMのKCl、50mMのTris  7.5、5mMのMgCl2、1mMのDTT、0.03%のBSA
反応混合物:PKR変異型酵素:40〜400ng/ウェル；ADP:0.2〜1.65mM；PEP:0.1〜0.5mM；NADH:180μM；LDH:0.5単位（Sigma#  59023）；DTT:1mM；BSA:0.03%。
【０２４０】
実施例12.PKR  WT単一ポイントパーセント起動アッセイ
本明細書に記載の化合物をDMSOで希釈し、1μM濃度で試験した。酵素を、1x緩衝液（100mMのKCl、50mMのTris  pH7.5、5mMのMgCl2）ならびにＰＥＰ（濃度は酵素に依存）、180μMのNADH、0.5単位のLDH、1mMのDTT、0.03%のBSA含む酵素溶液中に希釈し、1.11倍希釈後の最終アッセイ濃度が示されている。
【０２４１】
最初に2μLの化合物溶液をウェルに加え、その後180μLの酵素溶液を加えた。ADPを除いてアッセイを構築し、プレートは室温で60分間保存した。20μLのADPを添加して、アッセイを開始し、ＯＤ340を用いてアッセイ出力を評価した。アッセイを室温で実行した。
【０２４２】
最終濃度:ＰＫＲwt（100ｎｇ／ウェル）、Tris  ｐＨ7.5（50ｍＭ）、ＫＣｌ（100ｍＭ）、ＭｇＣｌ2(5mM)、ADP(0.48mM)、PEP(0.15mM)、NADH(180μm)、LDH(0.5単位、Sigma  59023)、DTT(1mM)およびBSA(0.03%)。
【０２４３】
実施例13.PKR  R510Q単一ポイントパーセント起動アッセイ
本明細書に記載の化合物をDMSOで希釈し、1μM濃度で試験した。酵素を、1x緩衝液（100mMのKCl、50mMのTris  pH7.5、5mMのMgCl2）ならびにＰＥＰ（濃度は酵素に依存）、180μMのNADH、0.5単位のLDH、1mMのDTT、0.03%のBSA含む酵素溶液中に希釈し、1.11倍希釈後の最終アッセイ濃度が示されている。
【０２４４】
最初に2μLの化合物溶液をウェルに加え、その後180μLの酵素溶液を加えた。ADPを除いてアッセイを構築し、プレートは室温で60分間保存した。20μLのADPを添加して、アッセイを開始し、ＯＤ340を用いてアッセイ出力を評価した。アッセイを室温で実行した。
【０２４５】
最終濃度:ＰＫＲ  R510Q（40ｎｇ／ウェル）、Ｔｒｉｔｈ  ｐＨ7.5（50ｍＭ）、ＫＣｌ（100ｍＭ）、MgCl2(5mM)、ADP(0.2mM)、PEP(0.11mM)、NADH(180μm)、LDH(0.5単位、Sigma  59023)、DTT(1mM)およびBSA(0.03%)。
【０２４６】
実施例14.PKR  R532W単一ポイントパーセント起動アッセイ
本明細書に記載の化合物をDMSOで希釈し、1μM濃度で試験した。酵素を、1x緩衝液（100mMのKCl、50mMのTris  pH7.5、5mMのMgCl2）ならびにＰＥＰ（濃度は酵素に依存）、180μMのNADH、0.5単位のLDH、1mMのDTT、0.03%のBSA含む酵素溶液中に希釈し、1.11倍希釈後の最終アッセイ濃度が示されている。
【０２４７】
最初に2μLの化合物溶液をウェルに加え、その後180μLの酵素溶液を加えた。ADPを除いてアッセイを構築し、プレートは室温で60分間保存した。20μLのADPを添加して、アッセイを開始し、ＯＤ340を用いてアッセイ出力を評価した。アッセイを室温で実行した。
【０２４８】
最終濃度:ＰＫＲ  R532W（100ｎｇ／ウェル）、Ｔｒｉｔｈ  ｐＨ7.5（50ｍＭ）、ＫＣｌ（100ｍＭ）、MgCl2(5mM)、ADP(0.36mM)、PEP(0.1mM)、NADH(180μm)、LDH(0.5単位、Sigma  59023)、DTT(1mM)およびBSA(0.03%)。
【０２４９】
実施例15.PKR  T384M単一ポイントパーセント起動アッセイ
本明細書に記載の化合物をDMSOで希釈し、1μM濃度で試験した。酵素を、1x緩衝液（100mMのKCl、50mMのTris  pH7.5、5mMのMgCl2）ならびにＰＥＰ（濃度は酵素に依存）、180μMのNADH、0.5単位のLDH、1mMのDTT、0.03%のBSA含む酵素溶液中に希釈し、1.11倍希釈後の最終アッセイ濃度が示されている。
【０２５０】
最初に2μLの化合物溶液をウェルに加え、その後180μLの酵素溶液を加えた。ADPを除いてアッセイを構築し、プレートは室温で60分間保存した。20μLのADPを添加して、アッセイを開始し、ＯＤ340を用いてアッセイ出力を評価した。アッセイを室温で実行した。
【０２５１】
最終濃度:ＰＫＲ  T384M可溶型（300ｎｇ／ウェル）、Ｔｒｉｔｈ  ｐＨ7.5（50ｍＭ）、ＫＣｌ（100ｍＭ）、ＭｇＣｌ2(5mM)、ADP(0.08mM)、PEP(0.23mM)、NADH(180μm)、LDH(0.5単位、Sigma  59023)、DTT(1mM)およびBSA(0.03%)。
【０２５２】
実施例16.赤血球（RBC）精製
健康対象からK2EDTAチューブに新鮮な血液を採取した。全血を、500gで10分間回転させることによりペレット化した。Purecell白血球除去ネオフィルター（Fisher  NC0267633）の輸液バッグポートを、フィルターの1インチ上で切断する。ネオフィルターに取り付けられた残りのカットチューブに10mlのシリンジバレルを取り付ける。血漿層を全血のペレットから除去し、ペレットを2x容量のリン酸緩衝生理食塩水（PBS）中に再懸濁した。9ｍｌの再懸濁血球ペレットを、ネオフィルターに取り付けられた準備された10ｍｌのシリンジに移動させる。全ての流体が上部管を通ってフィルターディスクに流れるまで、全血が重力でフィルターに流れるようにする。プランジャーをシリンジに追加し、シリンジをクランプから取り外してフィルターを反転させ、次にシリンジフィルターシステムを通して空気をプランジする。新しい5mlのシリンジを使用して、シリンジポートによって濾過されたRBCをバッグから取り出し、精製したRBCを氷上でインキュベートした5mlのスナップキャップチューブに移す。15Cで10分間、500gで5mlのスナップキャップチューブを回転させ、上清を吸引し、4ｘ109細胞/mLの密度でAGAM（1×ＰＢＳ、1%のグルコース、170ｍｇ／Ｌのアデニン、5.25ｇ／Ｌのマンニトール）に再懸濁する。
【０２５３】
実施例17.細胞ベースATPアッセイ
細胞ベースのATPアッセイでは、本明細書に記載の化合物は、10mMのストックとして100%のDMSOで調製した。96ウェルＶ底貯蔵プレートで系列希釈（1:4）を行い、次いでＡＧＡＭを含む96ウェルＶ底プレートに1:100を添加した。RBCを、AGAM培地中で1x107細胞／mLの密度に希釈した後、90μL/ウェルを黒色透明底のアッセイプレートに添加した（0.1%のDMSO濃度での最終化合物濃度）。アッセイプレートをアルミ箔シールを用いてシールし、加湿チャンバー内で37℃で一晩インキュベートした。ATPレベルをCell-Titer-Glo（Promega社）を使用して読み取った。
【０２５４】
いくつかの実施形態のいくつかの態様について説明することにより、当業者には様々な変更、修正、および改善が容易に思い浮かぶであろうことが理解されるべきである。そのような変更、修正、および改善は、本開示の一部であることが意図され、本発明の趣旨および範囲内であることが意図されている。したがって、前述の説明および図面は、例証としてのみである。
【図１】
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【図２−１】
2020531443.tif 000135
【図２−２】
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【図２−３】
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【図２−４】
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【国際調査報告】
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