(57)【要約】本発明は、ヒトニューロンまたはヒト神経に特異的に結合する蛍光標識ペプチドを投与することによって、手術中にヒトニューロンまたはヒト神経の保存をガイドするための方法を提供する。本発明は、ヒトニューロンまたはヒト神経に特異的に結合する蛍光標識ペプチドを含むヒトニューロンまたは神経ターゲティング分子およびそれらの組成物をさらに提供する。2020530034.tif 000584
2020530034.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ヒトニューロンもしくは神経またはいずれかの構成要素に特異的に結合するヒトニューロンまたは神経ターゲティング分子であって、
2020530034.tif 000553
からなる群より選択されるペプチドを含む、ヒトニューロンまたは神経ターゲティング分子。
【請求項２】
2020530034.tif 000554
からなる群より選択されるペプチドを含む、請求項１に記載のヒトニューロンまたは神経ターゲティング分子。
【請求項３】
2020530034.tif 000555
からなる群より選択されるペプチドを含む、請求項１に記載のヒトニューロンまたは神経ターゲティング分子。
【請求項４】
ペプチド
2020530034.tif 000556
を含む、請求項１に記載のヒトニューロンまたは神経ターゲティング分子。
【請求項５】
ペプチド
2020530034.tif 000557
を含む、請求項１に記載のヒトニューロンまたは神経ターゲティング分子。
【請求項６】
ペプチド
2020530034.tif 000558
を含む、請求項１に記載のヒトニューロンまたは神経ターゲティング分子。
【請求項７】
ペプチド
2020530034.tif 000559
を含む、請求項１に記載のヒトニューロンまたは神経ターゲティング分子。
【請求項８】
ペプチド
2020530034.tif 000560
を含む、請求項１に記載のヒトニューロンまたは神経ターゲティング分子。
【請求項９】
ペプチド
2020530034.tif 000561
を含む、請求項１に記載のヒトニューロンまたは神経ターゲティング分子。
【請求項１０】
ペプチド
2020530034.tif 000562
を含む、請求項１に記載のヒトニューロンまたは神経ターゲティング分子。
【請求項１１】
ペプチド
2020530034.tif 000563
を含む、請求項１に記載のヒトニューロンまたは神経ターゲティング分子。
【請求項１２】
ペプチド
2020530034.tif 000564
を含む、請求項１に記載のヒトニューロンまたは神経ターゲティング分子。
【請求項１３】
ペプチド
2020530034.tif 000565
を含む、請求項１に記載のヒトニューロンまたは神経ターゲティング分子。
【請求項１４】
ペプチド
2020530034.tif 000566
を含む、請求項１に記載のヒトニューロンまたは神経ターゲティング分子。
【請求項１５】
ペプチド
2020530034.tif 000567
を含む、請求項１に記載のヒトニューロンまたは神経ターゲティング分子。
【請求項１６】
ペプチド
2020530034.tif 000568
を含む、請求項１に記載のヒトニューロンまたは神経ターゲティング分子。
【請求項１７】
ペプチド
2020530034.tif 000569
を含む、請求項１に記載のヒトニューロンまたは神経ターゲティング分子。
【請求項１８】
ペプチド
2020530034.tif 000570
を含む、請求項１に記載のヒトニューロンまたは神経ターゲティング分子。
【請求項１９】
ペプチド
2020530034.tif 000571
を含む、請求項１に記載のヒトニューロンまたは神経ターゲティング分子。
【請求項２０】
ペプチド
2020530034.tif 000572
を含む、請求項１に記載のヒトニューロンまたは神経ターゲティング分子。
【請求項２１】
ペプチド
2020530034.tif 000573
を含む、請求項１に記載のヒトニューロンまたは神経ターゲティング分子。
【請求項２２】
2020530034.tif 000574
を含む、請求項１に記載のヒトニューロンまたは神経ターゲティング分子。
【請求項２３】
ペプチド
2020530034.tif 000575
を含む、請求項１に記載のヒトニューロンまたは神経ターゲティング分子。
【請求項２４】
ペプチド
2020530034.tif 000576
を含む、請求項１に記載のヒトニューロンまたは神経ターゲティング分子。
【請求項２５】
ペプチド
2020530034.tif 000577
を含む、請求項１に記載のヒトニューロンまたは神経ターゲティング分子。
【請求項２６】
ペプチド
2020530034.tif 000578
を含む、請求項１に記載のヒトニューロンまたは神経ターゲティング分子。
【請求項２７】
ペプチド
2020530034.tif 000579
を含む、請求項１に記載のヒトニューロンまたは神経ターゲティング分子。
【請求項２８】
薬物、蛍光部分、および光増感剤からなる群より選択されるカーゴをさらに含む、請求項１〜２６のいずれか一項に記載のヒトニューロンまたは神経ターゲティング分子。
【請求項２９】
2020530034.tif 000580
を含む、請求項２８に記載のヒトニューロンまたは神経ターゲティング分子。
【請求項３０】
前記カーゴが、前記薬物を含む、請求項２８に記載のヒトニューロンまたは神経ターゲティング分子。
【請求項３１】
前記薬物が、抗ヒスタミン剤、ＧＡＢＡ受容体調節剤、神経伝達物質再取り込み阻害剤、局所麻酔剤、抗コリン剤、ナトリウムチャネル遮断剤、カルシウムチャネル遮断剤、チロトロピン放出ホルモン、γ−セクレターゼ阻害剤、ＡＭＰＡ受容体アゴニストまたはアンタゴニスト、ＮＭＤＡ受容体アゴニストまたはアンタゴニスト、ｍＧｌｕ受容体アゴニストまたはアンタゴニスト、成長因子、制吐剤、コルチコステロイド、細胞毒性剤、抗酸化剤、鉄キレート剤、ミトコンドリア調節剤、サーチュイン調節剤、一酸化窒素（ＮＯ）および／または一酸化窒素シンターゼ（ＮＯＳ）調節剤、カリウムチャネルアゴニストまたはアンタゴニスト、プリン受容体アゴニストまたはアンタゴニスト、ならびにそれらの組み合わせからなる群より選択される、請求項３０に記載のヒトニューロンまたは神経ターゲティング分子。
【請求項３２】
前記薬物が、ベンゾカイン、カルチカイン、シンコカイン、シクロメチカイン、リドカイン、プリロカイン、プロポキシカイン、プロパラカイン、テトラカイン、トカイニド、およびトリメカイン、メトトレキサート、シクロホスファミド、サリドマイド、パクリタキセル、ペメトレキセド、ペントスタチン、ピポブロマン、ピキサントロン、プリカマイシン、プラトニン、プロカルバジン、ラルチトレキセド、レベッカマイシン、ルビテカン、ＳＮ−３８、サリノスポラミドＡ、サトラプラチン、ストレプトゾトシン、スワインソニン、タリキダール、タキサン、テガフール−ウラシル、テモゾロミド、テストラクトン、チオＴＥＰＡ、チオグアニン、トポテカン、トラベクテジン、トレチノイン、四硝酸トリプラチン、トリス（２−クロロエチル）アミン、トロキサシタビン、ウラシルマスタード、バルルビシン、ビンブラスチン、ビンクリスチン、ビノレルビン、ボリノスタット、ゾスキダル、カルバマゼピン、オキシカルバゼピン、フェニテイン、バルプロ酸、バルプロ酸ナトリウム、シンナリジン、フルナリジン、ニモジピン、脳由来神経栄養因子（ＢＤＮＦ）、毛様体神経栄養因子（ＣＮＴＦ）、グリア細胞株由来神経栄養因子（ＧＤＮＦ）、ニューロトロフィン−３、ニューロトロフィン−４、線維芽細胞成長因子（ＦＧＦ）受容体、インスリン様成長因子（ＩＧＦ）、ならびにそれらの組み合わせからなる群より選択される、請求項３０に記載のヒトニューロンまたは神経ターゲティング分子。
【請求項３３】
前記カーゴが、前記蛍光部分を含む、請求項２８に記載のヒトニューロンまたは神経ターゲティング分子。
【請求項３４】
前記蛍光部分が、蛍光タンパク質、蛍光ペプチド、蛍光色素、およびそれらの組み合わせからなる群より選択される、請求項３３に記載のヒトニューロンまたは神経ターゲティング分子。
【請求項３５】
前記蛍光部分が、キサンテン、ビマン、クマリン、芳香族アミン、ベンゾフラン、蛍光シアニン、カルバゾール、ジシアノメチレンピラン、ポリメチン、オキサベンズアントラン (oxabenzanthrane)、ピリリウム、カルボスチル、ペリレン、アクリドン、キナクリドン、ルブレン、アントラセン、コロネン、フェナントレセン、ピレン、ブタジエン、スチルベン、ポルフィリン、フタロシアニン、ランタニド金属キレート錯体、希土類金属キレート錯体、およびそれらの誘導体からなる群より選択される、請求項３３に記載のヒトニューロンまたは神経ターゲティング分子。
【請求項３６】
前記蛍光部分が、５−カルボキシフルオレセイン、フルオレセイン−５−イソチオシアネート、６−カルボキシフルオレセイン、テトラメチルローダミン−６−イソチオシアネート、５−カルボキシテトラメチルローダミン、５−カルボキシロドール誘導体、テトラメチルおよびテトラエチルローダミン、ジフェニルジメチルおよびジフェニルジエチルローダミン、ジナフチルローダミン、ローダミン１０１スルホニルクロリド、Ｃｙ３、Ｃｙ３Ｂ、Ｃｙ３．５、Ｃｙ５、Ｃｙ５．５、Ｃｙ７、インドシアニングリーン、ＩＲ８００ＣＷ、シアン蛍光タンパク質（ＣＦＰ）、ＥＧＦＰ、６−ＦＡＭ、ＦＡＭ、フルオレセイン、５，６−ジカルボキシフルオレセイン、５−（および６）−スルホフルオレセイン、スルホンフルオレセイン、スクシニルフルオレセイン、５−（および６）−カルボキシＳＮＡＲＦ−１、カルボキシフルオレセインスルホネート、カルボキシフルオレセイン双性イオン、カルボキシフルオレセイン第四級アンモニウム、カルボキシフルオレセインホスホネート、カルボキシフルオレセインＧＡＢＡ、カルボキシフルオレセイン−シス−Ｃｙ５、５’（６’）−カルボキシフルオレセイン、フルオレセイングルタチオン、ならびにそれらの組み合わせからなる群より選択される、請求項３３に記載のヒトニューロンまたは神経ターゲティング分子。
【請求項３７】
前記カーゴが、前記光増感剤を含む、請求項２９に記載のヒトニューロンまたは神経ターゲティング分子。
【請求項３８】
前記光増感剤が、ポルフィリン、クロリン、および色素からなる群より選択される、請求項３７に記載のヒトニューロンまたは神経ターゲティング分子。
【請求項３９】
前記光増感剤が、ポルフィリン、プロトポルフィリンＩＸ、プルリチン、ベルテポルフィン、ＨＰＰＨ、テモポルフィン、メチレンブルー、フォトフリン、プロトフリン、ヘマトポルフィリン、タラポルフィン、ベンゾポルフィリン誘導体一酸、５−アミノレブリン酸、ルテチウムテキサフィリン、メタロフタロシアニン、メタロナフタロシアニンスルホベンゾ−ポルフィラジン、メタロナフタロシアニン、亜鉛テトラスルホフタロシアニン、バクテリオクロリン、メタロクロリン、塩素誘導体、テトラ（ｍ−ヒドロキシフェニル）クロリン（ｍＴＨＰＣ）、フェオホルビド、ジブロモフルオレセイン（ＤＢＦ）、ＩＲ７００ＤＸ、ナフタロシアニン、およびポルフィリン誘導体からなる群より選択される、請求項３７に記載のヒトニューロンまたは神経ターゲティング分子。
【請求項４０】
前記カーゴが、前記ペプチドのＮ末端に結合されている、請求項２８〜３９のいずれか一項に記載のヒトニューロンまたは神経ターゲティング分子。
【請求項４１】
前記カーゴが、前記ペプチドのＣ末端に結合されている、請求項２８〜３９のいずれか一項に記載のヒトニューロンまたは神経ターゲティング分子。
【請求項４２】
前記カーゴが、リンカーを介して前記ペプチドに結合されている、請求項２８〜４１のいずれか一項に記載のヒトニューロンまたは神経ターゲティング分子。
【請求項４３】
前記リンカーが、直鎖もしくは分岐鎖炭素リンカー、複素環炭素リンカー、アミノ酸リンカー、親油性残基、ペプチドリンカー、ペプチド核酸リンカー、ヒドラゾンリンカー、ＳＰＤＢジスルフィド、スルホ−ＳＰＤＢ、マレイミドメチルシクロヘキサン−１−カルボキシレート（ＭＣＣ）、アミノヘキサン酸リンカー、ポリエーテルリンカー、またはポリエチレングリコールリンカーである、請求項４２に記載のヒトニューロンまたは神経ターゲティング分子。
【請求項４４】
2020530034.tif 000581
を含む、請求項１に記載のヒトニューロンまたは神経ターゲティング分子。
【請求項４５】
２つ以上のニューロンまたは神経ターゲティングペプチドを含むマルチドメインニューロンまたは神経ターゲティング分子であって、前記２つ以上のニューロンまたは神経ターゲティング分子が、ヒトニューロンもしくは神経またはいずれかの構成要素に結合し、第１のペプチドが、
2020530034.tif 000582
からなる群より選択される、マルチドメインニューロンまたは神経ターゲティング分子。
【請求項４６】
第２のペプチドが、
2020530034.tif 000583
からなる群より選択される、請求項４５に記載のマルチドメインニューロンまたは神経ターゲティング分子。
【請求項４７】
前記第１のペプチドおよび前記第２のペプチドが、同じまたは異なる、請求項４５または４６に記載のマルチドメインニューロンまたは神経ターゲティング分子。
【請求項４８】
薬物、蛍光部分、および光増感剤からなる群より選択されるカーゴをさらに含む、請求項４５〜４７のいずれか一項に記載のマルチドメインニューロンまたは神経ターゲティング分子。
【請求項４９】
前記第１のペプチドおよび第２のペプチドが、リンカーを介して結合されている、請求項４５〜４８のいずれか一項に記載のマルチドメインニューロンまたは神経ターゲティング分子。
【請求項５０】
前記第１のペプチドおよび第２のペプチドが、前記カーゴを介して結合されている、請求項４８に記載のマルチドメインニューロンまたは神経ターゲティング分子。
【請求項５１】
ヒトニューロンまたは神経を特定する方法であって、前記ヒトニューロンまたは神経を請求項３３〜３６のいずれか一項に記載のターゲティング分子と接触させることを含む、方法。
【請求項５２】
前記ヒトニューロンまたは神経が、前記ヒトニューロンまたは神経ターゲティング分子との組み合わせで遊離蛍光部分と接触させられる、請求項５１に記載の方法。
【請求項５３】
薬物をヒトニューロンまたは神経に送達する方法であって、前記ヒトニューロンまたは神経を、請求項３０〜３２のいずれか一項に記載のヒトニューロンまたは神経ターゲティング分子と接触させることを含む、方法。
【請求項５４】
光増感剤をヒトニューロンまたは神経に送達する方法であって、前記ヒトニューロンまたは神経を、請求項３７〜３９のいずれか一項に記載のヒトニューロンまたは神経ターゲティング分子と接触させることを含む、方法。
【請求項５５】
前記方法が、前記ヒトニューロンまたは神経を、前記光増感剤を活性化させる光源に曝露することをさらに含み、前記ヒトニューロンまたは神経が、活性化した前記光増感剤によってアブレーションされる、請求項５４に記載の方法。
【請求項５６】
前記ヒトニューロンまたは神経ターゲティング分子が、ヒト対象の全身静脈内注射によって投与される、請求項５１〜５５のいずれかに記載の方法。
【請求項５７】
前記ヒトニューロンまたは神経ターゲティング分子が、外科的処置の前に投与される、請求項５１〜５６のいずれかに記載の方法。
【請求項５８】
前記外科的処置が、がんの外科的処置である、請求項５７に記載の方法。
【請求項５９】
前記外科的処置が、前立腺がんの外科的処置である、請求項５８に記載の方法。
【請求項６０】
（ａ）請求項１〜４４のいずれか一項に記載のヒトニューロンもしくは神経ターゲティング分子または請求項４５〜５０のいずれか一項に記載のマルチドメインニューロンもしくは神経ターゲティング分子と、（ｂ）薬学的に許容される賦形剤とを含む、薬学的組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願の相互参照
本出願は、２０１８年４月１８日に提出された米国仮特許出願第６２／６５９，６１２号および２０１７年８月２日に出願された米国仮特許出願第６２／５４０，５１０号の優先権を主張し、これらの両方は、それらの全体が参照により本明細書に組み込まれる。
【０００２】
連邦政府の資金提供による研究または開発の下でなされた発明の権利に関する陳述
本発明は、国立衛生研究所により授与されたＥＢ００８１２２およびＥＢ０１４９２９の下での政府支援によりなされた。政府は、本発明に一定の権利を有する。
【背景技術】
【０００３】
発明の背景
ニューロンまたは神経の偶発的な切断は著しく高い罹患率をもたらすため、ヒトニューロンおよびヒト神経の保存は、あらゆる外科的処置の最も重要な目標の１つである。神経は、典型的には、それらの細長く白っぽい外観および近くの構造との関係によって、または電気生理学的試験によって特定される。しかしながら、外傷、腫瘍関与、炎症、または感染などの場合、これらの基準を使用する神経の特定は困難であり得る。したがって、当該技術分野における欠陥を克服する、ニューロンまたは神経を確実かつ決定的に特定する方法に対する必要性が存在する。
【０００４】
手術中の直接露出前のニューロンもしくは神経の特定、または直接露出後に不確実である場合におけるニューロンもしくは神経同一性の確認は、筋電図（ＥＭＧ）モニタリングによって達成される。しかしながら、この技法は、執刀医に視覚的フィードバックを提供しないという不利点を有する。よって、偶発的または意図的な刺激のいずれかによって、神経が１つの場所で特定された場合でも、刺激部位からどのくらい離れて神経が存在するか、または刺激部位から離れて神経がとる進行方向について、執刀医に対する視覚的ガイドはない。さらに、ＥＭＧは、運動経路のみを追跡し、感覚線維は追跡しない。ニューロンもしくは神経伝導または神経筋伝達が記録部位から遠いどこでも一時的に遮断されると、ＥＭＧは失敗する。そのような遮断は、ニューロンもしくは神経の圧迫、外傷、局所麻酔剤、または神経筋遮断剤により容易に起こる。
【０００５】
ニューロンまたは神経の標識化は主に、蛍光色素の使用を介した個別に特定された軸索路の逆行性または順行性トレーシングに依存する。しかしながら、局所的に適用された蛍光トレーサーによってニューロンまたは神経を標識する方法は、いくつかの不利点を有する。第一に、この技法は、色素が注射された場所に応じて、一度に１つのニューロンまたは神経線維路のみを標識することができる。第二に、逆行性軸索トレーサーは典型的には神経細胞体に蓄積するため、この技法は、軸索路に沿った蛍光色素の限られた標識化のみをもたらす。第三に、逆行性輸送は比較的遅く（１日あたりミリメートル程度）、したがって、坐骨ニューロンまたは神経およびその樹枝状分岐の場合のように、しばしば１メートルよりも長いヒトニューロンまたは神経を標識するには、長い時間がかかる。第四に、運動ニューロンまたは神経を標識する直接筋肉内注射などの神経支配標的への蛍光色素の適用は、典型的には、注射部位に可変量のトレーサー色素が残った状態で汚い。ニューロンまたは神経の切開は、隣接する構造に遭遇する前のそれらの正確な視覚化に依存するため、蛍光色素で汚染されている手術部位は望ましくないであろう。最後に、蛍光色素自体の直接注射は、機械的損傷または注射部位での色素およびビヒクルの非常に高い局所濃度のいずれかによって、標的器官または目的のニューロンもしくは神経に損傷を与え得る。
【０００６】
当該技術分野では、外科的処置およびヒト神経保護を容易にするために、ヒト神経およびニューロンに結合することができるペプチドを特定する必要性があった。
【０００７】
神経ホーミングペプチド配列は、実験室での研究のためにマウス神経に結合するそれらの能力によって以前に特定された。しかしながら、本出願に記載されるペプチド配列は、ヒト患者への全身静脈内注射後にヒト神経に結合するそれらの能力によって特定され、そのようなものとして、これらのペプチドは、以前の配列と比較してより特異的かつ効果的にヒト神経に結合することができるという必要性を満たす。本発明は、ヒト神経および／またはニューロンに選択的に結合するペプチド配列、ならびに、当該配列を外科的処置において（例えば、神経を保存しかつ／または当該処置中の神経損傷を回避するために）使用する方法を提供する。
【発明の概要】
【０００８】
本明細書では、特定の実施形態において、ヒトニューロン、ヒト神経、またはいずれかの構成要素に特異的に結合するペプチドを含むターゲティング分子が開示される。いくつかの実施形態において、ペプチドは、
2020530034.tif 000003
および／またはそれらの組み合わせからなる群より選択される。
【０００９】
いくつかの実施形態において、ヒトニューロンもしくは神経またはいずれかの構成要素に特異的に結合するヒトニューロンまたは神経ターゲティング分子であって、当該ターゲティング分子は、
2020530034.tif 000004
および／またはそれらの組み合わせからなる群より選択されるペプチドを含む。
【００１０】
いくつかの実施形態において、ターゲティング分子は、
2020530034.tif 000005
からなる群より選択されるペプチドを含む。
【００１１】
いくつかの実施形態において、ターゲティング分子は、
2020530034.tif 000006
からなる群より選択されるペプチドを含む。
【００１２】
いくつかの実施形態において、ターゲティング分子は、ペプチド
2020530034.tif 000007
を含む。
【００１３】
いくつかの実施形態において、ターゲティング分子は、ペプチド
2020530034.tif 000008
を含む。
【００１４】
いくつかの実施形態において、ターゲティング分子は、ペプチド
2020530034.tif 000009
を含む。
【００１５】
いくつかの実施形態において、ターゲティング分子は、ペプチド
2020530034.tif 000010
を含む。
【００１６】
いくつかの実施形態において、ターゲティング分子は、ペプチド
2020530034.tif 000011
を含む。
【００１７】
いくつかの実施形態において、ターゲティング分子は、ペプチド
2020530034.tif 000012
を含む。
【００１８】
いくつかの実施形態において、ターゲティング分子は、ペプチド
2020530034.tif 000013
を含む。
【００１９】
いくつかの実施形態において、ターゲティング分子は、ペプチド
2020530034.tif 000014
を含む。
【００２０】
いくつかの実施形態において、ターゲティング分子は、ペプチド
2020530034.tif 000015
を含む。
【００２１】
いくつかの実施形態において、ターゲティング分子は、ペプチド
2020530034.tif 000016
を含む。
【００２２】
いくつかの実施形態において、ターゲティング分子は、ペプチド
2020530034.tif 000017
を含む。
【００２３】
いくつかの実施形態において、ターゲティング分子は、ペプチド
2020530034.tif 000018
を含む。
【００２４】
いくつかの実施形態において、ターゲティング分子は、ペプチド
2020530034.tif 000019
を含む。
【００２５】
いくつかの実施形態において、ターゲティング分子は、ペプチド
2020530034.tif 000020
を含む。
【００２６】
いくつかの実施形態において、ターゲティング分子は、ペプチド
2020530034.tif 000021
を含む。
【００２７】
いくつかの実施形態において、ターゲティング分子は、ペプチド
2020530034.tif 000022
を含む。
【００２８】
いくつかの実施形態において、ターゲティング分子は、ペプチド
2020530034.tif 000023
を含む。
【００２９】
いくつかの実施形態において、ターゲティング分子は、ペプチド
2020530034.tif 000024
を含む。
【００３０】
いくつかの実施形態において、ターゲティング分子は、ペプチド
2020530034.tif 000025
を含む。
【００３１】
いくつかの実施形態において、ターゲティング分子は、ペプチド
2020530034.tif 000026
を含む。
【００３２】
いくつかの実施形態において、ターゲティング分子は、
2020530034.tif 000027
を含む。
【００３３】
いくつかの実施形態において、ターゲティング分子は、ペプチド
2020530034.tif 000028
を含む。
【００３４】
いくつかの実施形態において、ターゲティング分子は、ペプチド
2020530034.tif 000029
を含む。
【００３５】
いくつかの実施形態において、ターゲティング分子は、ペプチド
2020530034.tif 000030
を含む。
【００３６】
いくつかの実施形態において、ターゲティング分子は、ペプチド
2020530034.tif 000031
を含む。
【００３７】
いくつかの実施形態において、ターゲティング分子は、ペプチド
2020530034.tif 000032
を含む。
【００３８】
いくつかの実施形態において、ターゲティング分子は、ペプチド
2020530034.tif 000033
を含む。
【００３９】
いくつかの実施形態において、ターゲティング分子は、ペプチド
2020530034.tif 000034
を含む。
【００４０】
いくつかの実施形態において、ターゲティング分子は、ペプチド
2020530034.tif 000035
を含む。
【００４１】
いくつかの実施形態において、ターゲティング分子は、ペプチド
2020530034.tif 000036
を含む。
【００４２】
いくつかの実施形態において、ターゲティング分子は、ペプチド
2020530034.tif 000037
を含む。
【００４３】
いくつかの実施形態において、ヒトニューロンまたは神経ターゲティング分子は、カーゴをさらに含む。いくつかの実施形態において、カーゴは、薬物、蛍光部分、光増感剤、またはそれらの組み合わせである。
【００４４】
いくつかの実施形態において、ヒトニューロンまたは神経ターゲティング分子は、薬物をさらに含む。
【００４５】
いくつかの実施形態において、ヒトニューロンまたは神経ターゲティング分子は、抗ヒスタミン剤、ＧＡＢＡ受容体調節剤、神経伝達物質再取り込み阻害剤、局所麻酔剤、抗コリン剤、ナトリウムチャネル遮断剤、カルシウムチャネル遮断剤、チロトロピン放出ホルモン、γ−セクレターゼ阻害剤、ＡＭＰＡ受容体アゴニストもしくはアンタゴニスト、ＮＭＤＡ受容体アゴニストもしくはアンタゴニスト、ｍＧｌｕ受容体アゴニストもしくはアンタゴニスト、成長因子、制吐剤、コルチコステロイド、細胞毒性剤、抗酸化剤、鉄キレート剤、ミトコンドリア調節剤、サーチュイン調節剤、一酸化窒素（ＮＯ）および／もしくは一酸化窒素シンターゼ（ＮＯＳ）調節剤、カリウムチャネルアゴニストもしくはアンタゴニスト、プリン受容体アゴニストもしくはアンタゴニスト、ならびに／またはそれらの組み合わせからなる群より選択される薬物をさらに含む。
【００４６】
いくつかの実施形態において、ヒトニューロンまたは神経ターゲティング分子は、ベンゾカイン、カルチカイン、シンコカイン、シクロメチカイン、リドカイン、プリロカイン、プロポキシカイン、プロパラカイン、テトラカイン、トカイニド、およびトリメカイン、メトトレキサート、シクロホスファミド、サリドマイド、パクリタキセル、ペメトレキセド、ペントスタチン、ピポブロマン、ピキサントロン、プリカマイシン、プラトニン、プロカルバジン、ラルチトレキセド、レベッカマイシン、ルビテカン、ＳＮ−３８、サリノスポラミドＡ、サトラプラチン、ストレプトゾトシン、スワインソニン、タリキダール、タキサン、テガフール−ウラシル、テモゾロミド、テストラクトン、チオＴＥＰＡ、チオグアニン、トポテカン、トラベクテジン、トレチノイン、四硝酸トリプラチン、トリス（２−クロロエチル）アミン、トロキサシタビン、ウラシルマスタード、バルルビシン、ビンブラスチン、ビンクリスチン、ビノレルビン、ボリノスタット、ゾスキダル、カルバマゼピン、オキシカルバゼピン、フェニテイン、バルプロ酸、バルプロ酸ナトリウム、シンナリジン、フルナリジン、ニモジピン、脳由来神経栄養因子（ＢＤＮＦ）、毛様体神経栄養因子（ＣＮＴＦ）、グリア細胞株由来神経栄養因子（ＧＤＮＦ）、ニューロトロフィン−３、ニューロトロフィン−４、線維芽細胞成長因子（ＦＧＦ）受容体、インスリン様成長因子（ＩＧＦ）、ならびに／またはそれらの組み合わせからなる群より選択される薬物をさらに含む。
【００４７】
いくつかの実施形態において、ヒトニューロンまたは神経ターゲティング分子は、蛍光部分をさらに含む。
【００４８】
いくつかの実施形態において、ヒトニューロンまたは神経ターゲティング分子は、蛍光タンパク質、蛍光ペプチド、蛍光色素、および／またはそれらの組み合わせからなる群より選択される蛍光部分をさらに含む。
【００４９】
いくつかの実施形態において、ヒトニューロンまたは神経ターゲティング分子は、キサンテン、ビマン、クマリン、芳香族アミン、ベンゾフラン、蛍光シアニン、カルバゾール、ジシアノメチレンピラン、ポリメチン、オキサベンズアントラン、ピリリウム、カルボスチル、ペリレン、アクリドン、キナクリドン、ルブレン、アントラセン、コロネン、フェナントレセン、ピレン、ブタジエン、スチルベン、ポルフィリン、フタロシアニン、ランタニド金属キレート錯体、希土類金属キレート錯体、それらの誘導体、および／またはそれらの組み合わせからなる群より選択される蛍光部分をさらに含む。
【００５０】
いくつかの実施形態において、ヒトニューロンまたは神経ターゲティング分子は、５−カルボキシフルオレセイン、フルオレセイン−５−イソチオシアネート、６−カルボキシフルオレセイン、５（６）−カルボキシフルオレセイン、テトラメチルローダミン−６−イソチオシアネート、５−カルボキシテトラメチルローダミン、５−カルボキシロドール誘導体、テトラメチルおよびテトラエチルローダミン、ジフェニルジメチルおよびジフェニルジエチルローダミン、ジナフチルローダミン、ローダミン１０１スルホニルクロリド、Ｃｙ３、Ｃｙ３Ｂ、Ｃｙ３．５、Ｃｙ５、Ｃｙ５．５、Ｃｙ７、インドシアニングリーン、ＩＲ８００ＣＷ、シアン蛍光タンパク質（ＣＦＰ）、ＥＧＦＰ、６−ＦＡＭ、ＦＡＭ、フルオレセイン、５，６−ジカルボキシフルオレセイン、５−（および６）−スルホフルオレセイン、スルホンフルオレセイン、スクシニルフルオレセイン、５−（および６）−カルボキシＳＮＡＲＦ−１、カルボキシフルオレセインスルホネート、カルボキシフルオレセイン双性イオン、カルボキシフルオレセイン第四級アンモニウム、カルボキシフルオレセインホスホネート、カルボキシフルオレセインＧＡＢＡ、カルボキシフルオレセイン−シス−Ｃｙ５、５’（６’）−カルボキシフルオレセイン、フルオレセイングルタチオン、ならびに／またはそれらの組み合わせからなる群より選択される蛍光部分をさらに含む。
【００５１】
いくつかの実施形態において、ヒトニューロンまたは神経ターゲティング分子は、光増感剤をさらに含む。
【００５２】
いくつかの実施形態において、ヒトニューロンまたは神経ターゲティング分子は、ポルフィリン、クロリン、および色素からなる群より選択される光増感剤をさらに含む。
【００５３】
いくつかの実施形態において、ヒトニューロンまたは神経ターゲティング分子は、ポルフィリン、プロトポルフィリンＩＸ、プルリチン、ベルテポルフィン、ＨＰＰＨ、テモポルフィン、メチレンブルー、フォトフリン、プロトフリン、ヘマトポルフィリン、タラポルフィン、ベンゾポルフィリン誘導体一酸、５−アミノレブリン酸、ルテチウムテキサフィリン、メタロフタロシアニン、メタロナフタロシアニンスルホベンゾ−ポルフィラジン、メタロナフタロシアニン、亜鉛テトラスルホフタロシアニン、バクテリオクロリン、メタロクロリン、塩素誘導体、テトラ（ｍ−ヒドロキシフェニル）クロリン（ｍＴＨＰＣ）、フェオホルビド、ジブロモフルオレセイン（ＤＢＦ）、ＩＲ７００ＤＸ、ナフタロシアニン、ポルフィリン誘導体、および／またはそれらの組み合わせからなる群より選択される光増感剤をさらに含む。
【００５４】
いくつかの実施形態において、ヒトニューロンまたは神経を、（ａ）ニューロンもしくは神経、またはいずれかの構成要素に特異的に結合するペプチドと、（ｂ）蛍光部分と、を含む、ターゲティング分子と接触させることを含む、ヒトニューロンまたは神経を特定する方法が提供され、当該ターゲティング分子は、
2020530034.tif 000038
および／またはそれらの組み合わせからなる群より選択されるペプチドを含む。
【００５５】
いくつかの実施形態において、ヒトニューロンまたは神経ターゲティング分子は、
2020530034.tif 000039
からなる群より選択されるペプチドを含む。
【００５６】
いくつかの実施形態において、ヒトニューロンまたは神経ターゲティング分子は、
2020530034.tif 000040
からなる群より選択されるペプチドを含む。
【００５７】
いくつかの実施形態において、ターゲティング分子は、ペプチド
2020530034.tif 000041
を含む。
【００５８】
いくつかの実施形態において、ターゲティング分子は、ペプチド
2020530034.tif 000042
を含む。
【００５９】
いくつかの実施形態において、ターゲティング分子は、ペプチド
2020530034.tif 000043
を含む。
【００６０】
いくつかの実施形態において、ターゲティング分子は、ペプチド
2020530034.tif 000044
を含む。
【００６１】
いくつかの実施形態において、ターゲティング分子は、ペプチド
2020530034.tif 000045
を含む。
【００６２】
いくつかの実施形態において、ターゲティング分子は、ペプチド
2020530034.tif 000046
を含む。
【００６３】
いくつかの実施形態において、ターゲティング分子は、ペプチド
2020530034.tif 000047
を含む。
【００６４】
いくつかの実施形態において、ターゲティング分子は、ペプチド
2020530034.tif 000048
を含む。
【００６５】
いくつかの実施形態において、ターゲティング分子は、ペプチド
2020530034.tif 000049
を含む。
【００６６】
いくつかの実施形態において、ターゲティング分子は、ペプチド
2020530034.tif 000050
を含む。
【００６７】
いくつかの実施形態において、ターゲティング分子は、ペプチド
2020530034.tif 000051
を含む。
【００６８】
いくつかの実施形態において、ターゲティング分子は、ペプチド
2020530034.tif 000052
を含む。
【００６９】
いくつかの実施形態において、ターゲティング分子は、ペプチド
2020530034.tif 000053
を含む。
【００７０】
いくつかの実施形態において、ターゲティング分子は、ペプチド
2020530034.tif 000054
を含む。
【００７１】
いくつかの実施形態において、ターゲティング分子は、ペプチド
2020530034.tif 000055
を含む。
【００７２】
いくつかの実施形態において、ターゲティング分子は、ペプチド
2020530034.tif 000056
を含む。
【００７３】
いくつかの実施形態において、ターゲティング分子は、ペプチド
2020530034.tif 000057
を含む。
【００７４】
いくつかの実施形態において、ターゲティング分子は、ペプチド
2020530034.tif 000058
を含む。
【００７５】
いくつかの実施形態において、ターゲティング分子は、ペプチド
2020530034.tif 000059
を含む。
【００７６】
いくつかの実施形態において、ターゲティング分子は、ペプチド
2020530034.tif 000060
を含む。
【００７７】
いくつかの実施形態において、ターゲティング分子は、ペプチド
2020530034.tif 000061
を含む。
【００７８】
いくつかの実施形態において、ターゲティング分子は、ペプチド
2020530034.tif 000062
を含む。
【００７９】
いくつかの実施形態において、ターゲティング分子は、ペプチド
2020530034.tif 000063
を含む。
【００８０】
いくつかの実施形態において、ターゲティング分子は、ペプチド
2020530034.tif 000064
を含む。
【００８１】
いくつかの実施形態において、ターゲティング分子は、ペプチド
2020530034.tif 000065
を含む。
【００８２】
いくつかの実施形態において、ターゲティング分子は、ペプチド
2020530034.tif 000066
を含む。
【００８３】
いくつかの実施形態において、ターゲティング分子は、ペプチド
2020530034.tif 000067
を含む。
【００８４】
いくつかの実施形態において、ターゲティング分子は、ペプチド
2020530034.tif 000068
を含む。
【００８５】
いくつかの実施形態において、ターゲティング分子は、ペプチド
2020530034.tif 000069
を含む。
【００８６】
いくつかの実施形態において、ターゲティング分子は、ペプチド
2020530034.tif 000070
を含む。
【００８７】
いくつかの実施形態において、ターゲティング分子は、ペプチド
2020530034.tif 000071
を含む。
【００８８】
いくつかの実施形態において、蛍光部分は、蛍光タンパク質、蛍光ペプチド、蛍光色素、および／またはそれらの組み合わせからなる群より選択される。
【００８９】
いくつかの実施形態において、ターゲティング分子は、ペプチド
2020530034.tif 000072
を含む。
【００９０】
いくつかの実施形態において、蛍光部分は、キサンテン、ビマン、クマリン、芳香族アミン、ベンゾフラン、蛍光シアニン、カルバゾール、ジシアノメチレンピラン、ポリメチン、オキサベンズアントラン、ピリリウム、カルボスチル、ペリレン、アクリドン、キナクリドン、ルブレン、アントラセン、コロネン、フェナントレセン、ピレン、ブタジエン、スチルベン、ポルフィリン、フタロシアニン、ランタニド金属キレート錯体、希土類金属キレート錯体、それらの誘導体、および／またはそれらの組み合わせからなる群より選択される。
【００９１】
いくつかの実施形態において、蛍光部分は、５−カルボキシフルオレセイン（５−ＦＡＭ）、フルオレセイン−５−イソチオシアネート、６−カルボキシフルオレセイン（６−ＦＡＭ）、５（６）−カルボキシフルオレセイン、テトラメチルローダミン−６−イソチオシアネート、５−カルボキシテトラメチルローダミン、５−カルボキシロドール誘導体、テトラメチルおよびテトラエチルローダミン、ジフェニルジメチルおよびジフェニルジエチルローダミン、ジナフチルローダミン、ローダミン１０１スルホニルクロリド、Ｃｙ３、Ｃｙ３Ｂ、Ｃｙ３．５、Ｃｙ５、Ｃｙ５．５、Ｃｙ７、インドシアニングリーン、ＩＲ８００ＣＷ、シアン蛍光タンパク質（ＣＦＰ）、ＥＧＦＰ、６−ＦＡＭ、ＦＡＭ、フルオレセイン、５，６−ジカルボキシフルオレセイン、５−（および６）−スルホフルオレセイン、スルホンフルオレセイン、スクシニルフルオレセイン、５−（および６）−カルボキシＳＮＡＲＦ−１、カルボキシフルオレセインスルホネート、カルボキシフルオレセイン双性イオン、カルボキシフルオレセイン第四級アンモニウム、カルボキシフルオレセインホスホネート、カルボキシフルオレセインＧＡＢＡ、カルボキシフルオレセイン−シス−Ｃｙ５、５’（６’）−カルボキシフルオレセイン、フルオレセイングルタチオン、ならびに／またはそれらの組み合わせからなる群より選択される。
【００９２】
いくつかの実施形態において、ヒトニューロンまたは神経を、（ａ）ニューロンもしくは神経、またはいずれかの構成要素に特異的に結合するペプチドと、（ｂ）薬物と、を含む、ヒトニューロンまたは神経ターゲティング分子と接触させることを含む、薬物をヒトニューロンまたは神経に送達する方法が提供され、当該ターゲティング分子は、
2020530034.tif 000073
および／またはそれらの組み合わせからなる群より選択されるペプチドを含む。
【００９３】
いくつかの実施形態において、薬物は、抗ヒスタミン剤、ＧＡＢＡ受容体調節剤、神経伝達物質再取り込み阻害剤、局所麻酔剤、抗コリン剤、ナトリウムチャネル遮断剤、カルシウムチャネル遮断剤、チロトロピン放出ホルモン、γ−セクレターゼ阻害剤、ＡＭＰＡ受容体アゴニストもしくはアンタゴニスト、ＮＭＤＡ受容体アゴニストもしくはアンタゴニスト、ｍＧｌｕ受容体アゴニストもしくはアンタゴニスト、成長因子、制吐剤、コルチコステロイド、細胞毒性剤、抗酸化剤、鉄キレート剤、ミトコンドリア調節剤、サーチュイン調節剤、一酸化窒素（ＮＯ）および／もしくは一酸化窒素シンターゼ（ＮＯＳ）調節剤、カリウムチャネルアゴニストもしくはアンタゴニスト、プリン受容体アゴニストもしくはアンタゴニスト、ならびに／またはそれらの組み合わせからなる群より選択される。
【００９４】
いくつかの実施形態において、薬物は、ベンゾカイン、カルチカイン、シンコカイン、シクロメチカイン、リドカイン、プリロカイン、プロポキシカイン、プロパラカイン、テトラカイン、トカイニド、およびトリメカイン、メトトレキサート、シクロホスファミド、サリドマイド、パクリタキセル、ペメトレキセド、ペントスタチン、ピポブロマン、ピキサントロン、プリカマイシン、プロカルバジン、ラルチトレキセド、レベッカマイシン、ルビテカン、ＳＮ−３８、サリノスポラミドＡ、サトラプラチン、ストレプトゾトシン、スワインソニン、タリキダール、タキサン、テガフール−ウラシル、テモゾロミド、テストラクトン、チオＴＥＰＡ、チオグアニン、トポテカン、トラベクテジン、トレチノイン、四硝酸トリプラチン、トリス（２−クロロエチル）アミン、トロキサシタビン、ウラシルマスタード、バルルビシン、ビンブラスチン、ビンクリスチン、ビノレルビン、ボリノスタット、ゾスキダル、カルバマゼピン、オキシカルバゼピン、フェニテイン、バルプロ酸、バルプロ酸ナトリウム、シンナリジン、フルナリジン、ニモジピン、脳由来神経栄養因子（ＢＤＮＦ）、毛様体神経栄養因子（ＣＮＴＦ）、グリア細胞株由来神経栄養因子（ＧＤＮＦ）、ニューロトロフィン−３、ニューロトロフィン−４、線維芽細胞成長因子（ＦＧＦ）受容体、インスリン様成長因子（ＩＧＦ）、ならびに／またはそれらの組み合わせからなる群より選択される。
【００９５】
いくつかの実施形態において、ヒトニューロンまたは神経を、（ａ）ニューロンもしくは神経、またはいずれかの構成要素に特異的に結合するペプチドと、（ｂ）光増感剤と、を含む、ヒトニューロンまたは神経ターゲティング分子と接触させることを含む、光増感剤をヒトニューロンまたは神経に送達する方法が提供され、当該ターゲティング分子は、
2020530034.tif 000074
および／またはそれらの組み合わせからなる群より選択されるペプチドを含む。
【００９６】
いくつかの実施形態において、方法は、ヒトニューロンまたは神経を、光増感剤を活性化させる光源に曝露することをさらに含む。
【００９７】
いくつかの実施形態において、光増感剤は、ポルフィリン、クロリン、および色素からなる群より選択される。
【００９８】
いくつかの実施形態において、光増感剤は、ポルフィリン、プロトポルフィリンＩＸ、プルリチン、ベルテポルフィン、ＨＰＰＨ、テモポルフィン、メチレンブルー、フォトフリン、プロトフリン、ヘマトポルフィリン、タラポルフィン、ベンゾポルフィリン誘導体一酸、５−アミノレブリン酸、ルテチウムテキサフィリン、メタロフタロシアニン、メタロナフタロシアニンスルホベンゾ−ポルフィラジン、メタロナフタロシアニン、亜鉛テトラスルホフタロシアニン、バクテリオクロリン、メタロクロリン、塩素誘導体、テトラ（ｍ−ヒドロキシフェニル）クロリン（ｍＴＨＰＣ）、フェオホルビド、ジブロモフルオレセイン（ＤＢＦ）、ＩＲ７００ＤＸ、ナフタロシアニン、ポルフィリン誘導体、および／またはそれらの組み合わせからなる群より選択される。
【００９９】
いくつかの実施形態において、ヒトニューロンまたは神経ターゲティング分子は、ヒト対象の全身静脈内注射によって投与される。
【０１００】
いくつかの実施形態において、ヒトニューロンまたは神経ターゲティング分子は、外科的処置の前に投与される。いくつかの実施形態において、外科的処置は、がんの外科的処置である。いくつかの実施形態において、外科的処置は、前立腺がんの外科的処置である。
【０１０１】
いくつかの実施形態において、（ａ）ヒトニューロン、ヒト神経、またはいずれかの構成要素に特異的に結合するペプチドと、（ｂ）薬学的に許容される賦形剤と、を含む、薬学的組成物が提供され、当該ヒトニューロンまたは神経ターゲティング分子は、
2020530034.tif 000075
および／またはそれらの組み合わせからなる群より選択されるペプチドを含む。
【０１０２】
組成物のいくつかの実施形態では、ペプチドは、
2020530034.tif 000076
からなる群より選択される。
【０１０３】
組成物のいくつかの実施形態では、ペプチドは、
2020530034.tif 000077
からなる群より選択される。
【０１０４】
組成物のいくつかの実施形態では、ペプチドは、
2020530034.tif 000078
を含む。
【０１０５】
組成物のいくつかの実施形態では、ペプチドは、
2020530034.tif 000079
を含む。
【０１０６】
組成物のいくつかの実施形態では、ペプチドは、
2020530034.tif 000080
を含む。
【０１０７】
組成物のいくつかの実施形態では、ペプチドは、
2020530034.tif 000081
を含む。
【０１０８】
組成物のいくつかの実施形態では、ペプチドは、
2020530034.tif 000082
を含む。
【０１０９】
組成物のいくつかの実施形態では、ペプチドは、
2020530034.tif 000083
を含む。
【０１１０】
組成物のいくつかの実施形態では、ペプチドは、
2020530034.tif 000084
を含む。
【０１１１】
組成物のいくつかの実施形態では、ペプチドは、
2020530034.tif 000085
を含む。
【０１１２】
組成物のいくつかの実施形態では、ペプチドは、
2020530034.tif 000086
を含む。
【０１１３】
組成物のいくつかの実施形態では、ペプチドは、
2020530034.tif 000087
を含む。
【０１１４】
組成物のいくつかの実施形態では、ペプチドは、
2020530034.tif 000088
を含む。
【０１１５】
組成物のいくつかの実施形態では、ペプチドは、
2020530034.tif 000089
を含む。
【０１１６】
組成物のいくつかの実施形態では、ペプチドは、
2020530034.tif 000090
を含む。
【０１１７】
組成物のいくつかの実施形態では、ペプチドは、
2020530034.tif 000091
を含む。
【０１１８】
組成物のいくつかの実施形態では、ペプチドは、
2020530034.tif 000092
を含む。
【０１１９】
組成物のいくつかの実施形態では、ペプチドは、
2020530034.tif 000093
を含む。
【０１２０】
組成物のいくつかの実施形態では、ペプチドは、
2020530034.tif 000094
を含む。
【０１２１】
組成物のいくつかの実施形態では、ペプチドは、
2020530034.tif 000095
を含む。
【０１２２】
組成物のいくつかの実施形態では、ペプチドは、
2020530034.tif 000096
を含む。
【０１２３】
組成物のいくつかの実施形態では、ペプチドは、
2020530034.tif 000097
を含む。
【０１２４】
組成物のいくつかの実施形態では、ペプチドは、
2020530034.tif 000098
を含む。
【０１２５】
組成物のいくつかの実施形態では、ペプチドは、
2020530034.tif 000099
を含む。
【０１２６】
組成物のいくつかの実施形態では、ペプチドは、
2020530034.tif 000100
を含む。
【０１２７】
組成物のいくつかの実施形態では、ペプチドは、
2020530034.tif 000101
を含む。
【０１２８】
組成物のいくつかの実施形態では、ペプチドは、
2020530034.tif 000102
を含む。
【０１２９】
組成物のいくつかの実施形態では、ペプチドは、
2020530034.tif 000103
を含む。
【０１３０】
組成物のいくつかの実施形態では、ペプチドは、
2020530034.tif 000104
を含む。
【０１３１】
組成物のいくつかの実施形態では、ペプチドは、
2020530034.tif 000105
を含む。
【０１３２】
組成物のいくつかの実施形態では、ペプチドは、
2020530034.tif 000106
を含む。
【０１３３】
組成物のいくつかの実施形態では、ペプチドは、
2020530034.tif 000107
を含む。
【０１３４】
組成物のいくつかの実施形態では、ペプチドは、
2020530034.tif 000108
を含む。
【０１３５】
組成物のいくつかの実施形態では、ペプチドは、
2020530034.tif 000109
を含む。
【０１３６】
組成物のいくつかの実施形態では、ペプチドは、
2020530034.tif 000110
である。
【０１３７】
組成物のいくつかの実施形態では、ペプチドは、
2020530034.tif 000111
である。
【０１３８】
組成物のいくつかの実施形態では、ペプチドは、
2020530034.tif 000112
である。
【０１３９】
組成物のいくつかの実施形態では、ペプチドは、
2020530034.tif 000113
である。
【０１４０】
組成物のいくつかの実施形態では、ペプチドは、
2020530034.tif 000114
である。
【０１４１】
組成物のいくつかの実施形態では、ペプチドは、
2020530034.tif 000115
である。
【０１４２】
組成物のいくつかの実施形態では、ペプチドは、
2020530034.tif 000116
である。
【０１４３】
組成物のいくつかの実施形態では、ペプチドは、
2020530034.tif 000117
である。
【０１４４】
組成物のいくつかの実施形態では、ペプチドは、
2020530034.tif 000118
である。
【０１４５】
組成物のいくつかの実施形態では、ペプチドは、
2020530034.tif 000119
である。
【０１４６】
組成物のいくつかの実施形態では、ペプチドは、
2020530034.tif 000120
である。
【０１４７】
組成物のいくつかの実施形態では、ペプチドは、
2020530034.tif 000121
である。
【０１４８】
組成物のいくつかの実施形態では、ペプチドは、
2020530034.tif 000122
である。
【０１４９】
組成物のいくつかの実施形態では、ペプチドは、
2020530034.tif 000123
である。
【０１５０】
組成物のいくつかの実施形態では、ペプチドは、
2020530034.tif 000124
である。
【０１５１】
組成物のいくつかの実施形態では、ペプチドは、
2020530034.tif 000125
である。
【０１５２】
組成物のいくつかの実施形態では、ペプチドは、
2020530034.tif 000126
である。
【０１５３】
組成物のいくつかの実施形態では、ペプチドは、
2020530034.tif 000127
である。
【０１５４】
組成物のいくつかの実施形態では、ペプチドは、
2020530034.tif 000128
である。
【０１５５】
組成物のいくつかの実施形態では、ペプチドは、
2020530034.tif 000129
である。
【０１５６】
組成物のいくつかの実施形態では、ペプチドは、
2020530034.tif 000130
である。
【０１５７】
組成物のいくつかの実施形態では、ペプチドは、
2020530034.tif 000131
である。
【０１５８】
組成物のいくつかの実施形態では、ペプチドは、
2020530034.tif 000132
である。
【０１５９】
組成物のいくつかの実施形態では、ペプチドは、
2020530034.tif 000133
である。
【０１６０】
組成物のいくつかの実施形態では、ペプチドは、
2020530034.tif 000134
である。
【０１６１】
組成物のいくつかの実施形態では、ペプチドは、
2020530034.tif 000135
である。
【０１６２】
組成物のいくつかの実施形態では、ペプチドは、
2020530034.tif 000136
である。
【０１６３】
組成物のいくつかの実施形態では、ペプチドは、
2020530034.tif 000137
である。
【０１６４】
組成物のいくつかの実施形態では、ペプチドは、
2020530034.tif 000138
である。
【０１６５】
組成物のいくつかの実施形態では、ペプチドは、
2020530034.tif 000139
である。
【０１６６】
組成物のいくつかの実施形態では、ペプチドは、
2020530034.tif 000140
である。
【０１６７】
組成物のいくつかの実施形態では、ペプチドは、
2020530034.tif 000141
である。
【０１６８】
組成物のいくつかの実施形態では、ペプチドは、カーゴに結合されている。いくつかの実施形態において、カーゴは、薬物、光増感剤、または蛍光部分である。
【図面の簡単な説明】
【０１６９】
【図１】３匹のマウス（左）およびＮＰ４１（２匹のマウス、右）での４５０ｎｍｏｌのＨＮＰ４０１の投与後の生きた野生型マウスにおける露出した坐骨神経の蛍光画像。左右両方の坐骨神経が示される。ＦＡＭは、各ペプチド配列のＣ末端リジンに結合されたフルオレセインである。画像は、Ｚｅｉｓｓ  Ｌｕｍａｒで取得された。
【図２】図１からの画像の定量化は、ＨＮＰ  ４０１が、神経および隣接する筋肉組織の両方のより高い強度の標識化で、ＮＰ４１（６．７倍と比較して６．２倍）と類似のコントラスト（神経蛍光強度／筋肉蛍光強度）を有することを示す。ＨＮＰ４０１について合計６つの神経、３匹のマウス、およびＮＰ４１について２匹のマウス（４つの神経）。Ｙ軸＝ｉｍａｇｅＪにおいて計算された平均蛍光（５１５ｎｍ発光）強度。
【図３】ＨＮＰ４０１の高い結合を示す、ヒト神経切片への神経結合ペプチドの局所適用。ＨＮＰ４０１については、同一設定下での露出が高いシグナルによって飽和に達したため、他の標準と比較して露出ゲインを（３０から１０に）減少させた。
【図４】ＮＰ４１、ＨＮＰ４０１、およびＨＮＰ４０４の局所適用後のヒト神経切片からの蛍光。１００ｕＭのペプチドが２０分間適用され、続いてＰＢＳでの洗浄、およびＮｉｋｏｎ  Ａ１共焦点顕微鏡での撮像が行われた。全ての画像は、均等に平準化される。
【図５】ＨＮＰ４０１でのラット坐骨神経のインビボ標識化。
【図６】生きたラットにおけるラット前立腺海綿体神経の蛍光標識化。ＨＮＰ３０１は、ＨＮＰ４０１と比較して前立腺神経標識化について同等のコントラストを示さない初期世代神経結合ペプチドである。
【図７】ＨＮＰ４０１での前立腺神経血管束のインビボ標識化。生きたラットにおける自律神経束のＨＮＰ４０１標識化。
【図８】ファージディスプレイによって特定されたヒト神経結合ペプチドのスクリーニング。新鮮生存ヒト腓腹神経（上の画像）およびヒト側頭筋（下の画像）の連続切片への１００ｍＭのヒト神経結合ペプチドＦＡＭ−ＨＮＰ４０１（Ａ）、ＦＡＭ−ＨＮＰ４０２（Ｂ）、ＦＡＭ−ＨＮＰ４０３（Ｃ）の局所適用。比較のための、マウス神経ＮＰ４１−ＦＡＭ（Ｅ）への結合についてスクリーニングされた１００ｍＭのカルボキシ−ＦＡＭ（Ｄ）およびペプチドの局所適用。神経および筋肉の染色のＨ＆Ｅ（Ｆ）。Ｌｕｍａｒ顕微鏡で、３４倍拡大、２秒露出で取得され、比較のために均等に平準化された全ての蛍光画像。ＮＴＱＴＬＡＫＡＰＥＨＴ（ＮＰ４１、米国特許第８，６８５，３７２号または国際特許公開第ＷＯ２０１０１２１０２３Ａ２号からの配列番号１５）。
【図９】ヒト腓腹神経の結合および標識化におけるＦＡＭ−ＨＮＰ４０１およびＦＡＭ−ＮＰ４１の比較。同じガラススライド上に隣接して保持され、４８８ｎｍ励起レーザで共焦点顕微鏡で撮像された未固定ヒト腕神経叢神経組織（Ａ）およびヒト側頭筋組織（Ｄ）の１０ｍｍ切片への１００ｍＭのＨＮＰ４０１−ＦＡＭの局所適用。比較のために、ＮＰ４１−ＦＡＭは、（ＡおよびＤ）について言及されたものと同一の条件下で、ヒト神経（Ｂ）および筋肉（Ｃ）に適用された。神経（Ｃ）および筋肉（Ｆ）のＨ＆Ｅ染色。ＮＰ４１−ＦＡＭ（ｎ＝４）と比較したＨＮＰ４０１−ＦＡＭ（ｎ＝４）で処理された神経組織の神経周膜のシグナル強度（Ｇ）。ヒト組織切片に局所的に適用されたペプチドの神経対筋肉コントラスト（ｎ＝４）（Ｈ）。
【図１０】ヒトおよびマウス組織への神経結合ペプチドの差次的結合。ヒト組織：同一パラメータで共焦点顕微鏡で撮像され、比較のために均等に平準化された、３７５ｍＭ（Ａ）、１００ｍＭ（Ｂ）、５０ｍＭ（Ｃ）、１０ｍＭ（Ｄ）、および１ｍＭ（Ｅ）の最終濃度でのヒト腓腹神経切片へのＨＮＰ４０１−ＦＡＭの局所適用による最適用量応答の決定。＊＊視認するために２倍明るくした。共焦点顕微鏡で撮像され、直接比較のために平準化されたＦＡＭ−ＮＰ４１（ＦおよびＧ）およびＦＡＭ−ＨＮＰ４０１（ＨおよびＩ）についての３７５ｍＭの高濃度での神経および筋肉のコントラスト。マウス組織：周囲の筋肉が３７５ｍＭ（Ｊ）、１００ｍＭ（Ｋ）のＦＡＭ−ＮＰ４１または３７５ｍＭ（Ｌ）、１００ｍＭ（Ｍ）のＦＡＭ−ＨＮＰ４０１で処理されたマウス顔面神経（赤矢印）。同一パラメータでＬｕｍａｒ撮像スコープで取得され、同等である下段の画像。ＦＡＭ−ＨＮＰ４０１は、ＦＡＭ−ＮＰ４１と比較して、低いコントラストを有するマウス組織における筋肉の高い結合を示す。
【図１１】静脈内注射後の薬物動態プロファイルを含む齧歯類における神経結合ペプチドのインビボ撮像。４５０ｎｍｏｌのＦＡＭ−ＨＮＰ４０１（Ａ）またはＦＡＭ−ＮＰ４１（Ｂ）が静脈内注射され、注射から２時間後にＬｕｍａｒ撮像スコープで撮像された、６ヶ月齢ＳＫＨ１−Ｅｌｉｔｅマウスの坐骨神経のインビボ蛍光画像。Ｉｍａｇｅ  Ｊにおいて測定された坐骨神経の強度は、ヒト神経への結合についてスクリーニングされたペプチド（ＨＮＰ４０１）対マウス神経への結合についてスクリーニングされたペプチド（ＮＰ４１）の結合において２．３倍増加を示す（Ｃ）。しかしながら、２つのペプチドについての神経対周囲筋肉コントラストは同等であり、マウス大腿部においてＦＡＭ−ＨＮＰ４０１について５．７９±０．８１およびＦＡＭ−ＮＰ４１について６．６３±１．６３である（Ｄ）。１００ｇｍの雄Ｓｐｒａｇｕｅ  Ｄａｗｌｅｙラットにおける２μｍｏｌのＨＮＰ４０１−ＦＡＭのｔ．ｖ．注射後５時間のリアルタイムカスタム外科的撮像システム（Ｅ）およびＬｕｍａｒ小動物顕微鏡（Ｆ）を使用する前立腺神経叢のインビボ蛍光画像。ラットにおける坐骨神経は、２μｍｏｌのＦＡＭ−ＨＮＰ４０１の全身注射の５時間後に撮像された（Ｇ）。血液クリアランス曲線は、５匹のＳＫＨ１−Ｅｌｉｔｅ雄マウスから採取された等体積の採血から得られたＦＡＭシグナルを示す。１分、１０分、２０分、３０分、１時間、および２時間時点での採血前に、各マウスに１００ｎｍｏｌのＦＡＭ−ＨＮＰ４０１が静脈内注射された（Ｈ）。
【図１２】ＨＮＰ４０１は、ヒト神経（海綿体および内側前上腕皮）に結合する  ヒト前立腺内の神経（上段、ＡおよびＢ）または内側前上腕皮ヒト神経（下段、ＢおよびＦ）からの凍結切片化テープ上の１０μｍ切片への、１００μＭのＦＡＭ−ＨＮＰ４０１またはＦＡＭ−ＮＰ４１の局所適用後の蛍光撮像。神経は、共焦点顕微鏡を使用してペプチドの切片化および適用の直後に撮像された。神経の固定切片のニューロフィラメント抗体ＳＭＩ３１２（赤）およびＤＡＰＩ染色核（青）（ＣおよびＧ）ならびにガラススライド上の対応するＨ＆Ｅ染色（ＤおよびＨ）についての二重標識での免疫組織化学分析。
【図１３】ＨＮＰ４０１は、ヒト海綿体神経に結合する。共焦点顕微鏡を使用して、前立腺からの未固定新鮮生存神経の凍結切片テープ上の１０μｍ切片への１００μＭのＦＡＭ−ＨＮＰ４０１（Ａ）またはＦＡＭ−ＮＰ４１（Ｂ）の局所適用。前立腺からの神経の固定切片上の免疫蛍光（Ｃ）ニューロフィラメント抗体ＳＭＩ３１２およびガラススライド上の対応するＨ＆Ｅ染色（Ｄ）。これらの画像は、本明細書の図５に示される患者とは異なる患者から取得される。
【図１４】連続欠失によるＨＮＰ４０１のヒト神経結合ドメインの決定。１００ｕＭのＦＡＭ標識ＨＮＰ４０１（Ａ）、ＨＮＰ４０１−Ｎ−２（Ｂ）、ＨＮＰ４０１−Ｎ４（Ｃ）、ＨＮＰ４０１−Ｎ６（Ｄ）、ＨＮＰ４０１−Ｎ８（Ｅ）、ＨＮＰ４０１−Ｎ４  Ｃ−２（Ｆ）、ＨＮＰ４０１−Ｎ４  Ｃ−４（Ｇ）、ＨＮＰ４０１−Ｎ４  Ｃ−６（Ｈ）、ＨＮＰ４０１−Ｎ４  Ｃ−８（Ｉ）で局所的に処理された未固定ヒト腓腹神経の代表画像蛍光画像。
【図１５】ＨＮＰ４０１の欠失バリアントの神経結合の定量化。図７に示される各ＨＮＰ４０１バリアントの神経結合の定量化（ｎ＝５）。
【図１６】齧歯類における自律神経のインビボ蛍光標識化。マウスにおける隣接する自律神経がＦＡＭ−ＮＰ４１で標識された前立腺を走っている膀胱、輸精管、および尿道を示す低倍率蛍光画像（Ａ）。尿道に隣接して走る自律神経のより高倍率の白色光反射率画像（Ｂ）および対応する蛍光グレースケール画像（Ｃ）。マウスにおける白色光検出と比較した蛍光による自律神経検出の定量化（Ｄ）反射／蛍光についての神経対筋肉コントラストが、個々の神経枝についてプロットされた。線の右側の値は、反射光と比較して蛍光での視覚化が改善されていることを示す。画像（Ｅ〜Ｇ）は、それらがラット前立腺対マウスにおける自律神経のＦＡＭ−ＮＰ４１依存性標識化を強調し、白色光撮像が不可視神経（Ｆ）を示すことを除き、（Ａ〜Ｃ）に類似している。ＦＡＭ−ＮＰ４１標識前立腺神経はまた、臨床グレードＺｅｉｓｓ  Ｐｅｎｔｅｒｏ  Ｓｕｒｇｉｃａｌ  Ｍｉｃｒｏｓｃｏｐｅを使用して検出可能である（Ｈ）。
【図１７】ヒト腓腹神経の結合および標識化におけるＦＡＭ−ＨＮＰ４０１およびＦＡＭ−ＮＰ４１の比較。同じガラススライド上に隣接して保持され、４８８ｎｍ励起レーザで共焦点顕微鏡で撮像された未固定ヒト腓腹神経組織（Ａ）およびヒト側頭筋組織（Ｅ）の１０μｍ切片への１００μＭのＦＡＭ−ＨＮＰ４０１の局所適用。比較のために、ＦＡＭ−ＮＰ４１は、（ＡおよびＥ）について言及されたものと同一の条件下で、ヒト神経（Ｂ）および筋肉（Ｆ）の連続切片に適用された。神経（Ｃ）および筋肉（Ｇ）のＨ＆Ｅ染色。ＦＡＭ−ＮＰ４１（ｎ＝４）と比較してＦＡＭ−ＨＮＰ４０１（ｎ＝４）で処理された神経組織の神経周膜のシグナル強度（Ｄ）。ヒト組織切片に局所的に適用されたペプチドの神経対筋肉コントラスト（ｎ＝４）（Ｈ）。
【図１８】薬物動態を含むマウスおよびラットにおける神経結合ペプチドのインビボ撮像。４５０ｎｍｏｌのＦＡＭ−ＨＮＰ４０１［約４８．４ｍｇ／ｋｇ］（Ａ）またはＦＡＭ−ＮＰ４１［約３９ｍｇ／ｋｇ］（Ｂ）が以前に静脈内注射された６か月齢ＳＫＨ１マウスからの坐骨神経のインビボ蛍光画像。Ｉｍａｇｅ  Ｊにおいて測定および定量化された坐骨神経の強度は、ＦＡＭ−ＮＰ４１と比較してＦＡＭ−ＨＮＰ４０１について２．３倍増加を示した（Ｃ）。２つのペプチドについての神経対筋肉コントラストは同等であり、ＦＡＭ−ＨＮＰ４０１について５．７９±０．８１およびＦＡＭ−ＮＰ４１について６．６３±１．６３であった（Ｄ）。２μｍｏｌのＦＡＭ−ＨＮＰ４０１［約５４ｍｇ／ｋｇ］の静脈内注射後５時間のラット坐骨神経のインビボ蛍光画像（Ｅ）。２μｍｏｌのＦＡＭ−ＨＮＰ４０１の静脈内注射後５時間のリアルタイムカスタム外科的撮像システム（Ｆ）およびＬｕｍａｒ小動物顕微鏡（Ｇ）で撮像されたラット前立腺神経。血液クリアランス曲線は、５匹のＳＫＨ１−Ｅｌｉｔｅ雄マウス（Ｈ）から採取された等体積の採血から得られたＦＡＭシグナルを示す。１分、１０分、２０分、３０分、１時間、および２時間時点での採血前に、各マウスに１００ｎｍｏｌ［約１１ｍｇ／ｋｇ］のＦＡＭ−ＨＮＰ４０１が静脈内注射された。
【図１９】ＨＮＰ４０１は、前立腺からの新鮮生存神経および内側前上腕皮ヒト神経に結合する。ヒト前立腺内の神経（上段、ＡおよびＢ）または内側前上腕皮ヒト神経（下段、ＥおよびＦ）からの凍結切片化テープ上の１０μｍ切片への、１００μＭのＦＡＭ−ＨＮＰ４０１またはＦＡＭ−ＮＰ４１の局所適用後の蛍光撮像。神経は、共焦点顕微鏡を使用してペプチドの切片化および適用の直後に撮像された。神経の固定切片のニューロフィラメント抗体ＳＭＩ３１２（赤）およびＤＡＰＩ染色核（青）（ＣおよびＧ）ならびにガラススライド上の対応するＨ＆Ｅ染色（ＤおよびＨ）についての二重標識での免疫組織化学分析。
【図２０】結合効率を決定するための切断配列の比較。１００μＭのＦＡＭ標識Ｎ−２（Ａ）、Ｎ−４（Ｂ）、Ｎ−６（Ｃ）、Ｎ−８（Ｄ）、Ｃ−２（Ｅ）、Ｃ−４（Ｆ）、Ｃ−６（Ｇ）、Ｃ−８（Ｈ）、またはＨＮＰ４０１（Ｉ）で局所的に処理された未固定ヒト腓腹神経の代表画像蛍光画像。低い溶解度のために、局所試験について、Ｃ−６は＊７３μＭの最終濃度を有し、Ｃ−８は＊＊８０．６μＭの最終濃度を有した。改善された結合を試験するために、ＦＡＭ−ＨＮＰ４０１に正規化されたペプチドのシグナル強度の比較が行われた（Ｊ）。正規化された腓腹神経対側頭筋のコントラストが、ＦＡＭ−ＨＮＰ４０１およびＦＡＭ−ＨＮＰ４０１−Ｎ−２について決定された（スチューデントｔ検定、対応なし、片側、ｐ＝０．０１１）（Ｋ）。
【図２１】食品色素は、ＦＡＭ−ＮＰ４１膀胱蛍光を効率的に消光する。ＦＡＭ−ＮＰ４１蛍光の用量依存性消光を示すために、蛍光プレートリーダーアッセイが使用された。エリスロシンエクストラブルーイッシュ（Ｓａｎｔａ  Ｃｒｕｚ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｉｎｃ．）は、色素対フルオレセイン比２．５倍の場合に＞約８０％消光、および色素対フルオレセイン比５倍の場合に＞９５％消光であり、最も効率的な消光剤であった（Ａ）。試験された他の食品色素は、アルラレッドおよびサンセットイエローを含んだ。インビボで消光について試験するために、我々は、２時間前に１５０ｎｍｏｌのＦＡＭ−ＮＰ４１が注射されたマウスに、５０ｍｇ／ｋｇＭＷ８７９．７６（２５ｇｍマウスあたり約１．５μｍｏｌ）を直接静脈内注射によって投与した。これは約１０倍の色素対ＦＡＭ−ＮＰ４１用量を表す。撮像後にいくらかの膀胱蛍光が残ったので、追加の色素（３０μｌ、１０ｍＭエリスロシンエクストラブルーイッシュ）が膀胱に直接注射された。画像は、色素消光剤なし（Ｂ）およびエリスロシンエクストラブルーイッシュの追加（静脈内および膀胱内）（Ｃ）で膀胱蛍光がバックグラウンドレベル近くまで消光したマウス膀胱について示される。ＦＡＭ−ＮＰ４１が投与されて膀胱蛍光が洗い落とされ得るとき、患者における膀胱カテーテル挿入が開始され得るので、この方法がヒト患者に使用された場合、色素はおそらく必要ないであろう。
【図２２】ＴＡＭＲＡ−ＮＰ４１は、ラットの前立腺において自律無髄神経を標識する。５００ｎｍｏｌのＮＰ４１−ＴＡＭＲＡの静脈内注射１５分後に撮像された、生きた雄Ｓｐｒａｇｕｅ−Ｄａｗｌｅｙラットにおける前立腺周囲の神経束（白矢印）の蛍光画像（Ａ）。組織は、共焦点撮像（Ｂ）ならびにホースラディッシュペルオキシダーゼ二次およびジアミノベンジジン染色で検出されたＴＡＭＲＡに対する抗体での免疫組織化学（Ｃ）を使用するペプチド蛍光シグナルの検証のために、切除および凍結固定解除された。自律神経（Ｄ）非一次陰性対照（Ｅ）の存在を検証するために、チロシンヒドロキシラーゼに対する抗体染色が使用された。
【図２３】ファージディスプレイによって特定されたヒト神経結合ペプチドのスクリーニング。新鮮生存ヒト腓腹神経（上段）およびヒト側頭筋（下段）の連続切片への１００μＭのヒト神経結合ペプチドＦＡＭ−ＨＮＰ４０１（Ａ）、ＦＡＭ−ＨＮＰ４０２（Ｂ）、ＦＡＭ−ＨＮＰ４０３（Ｃ）の局所適用。比較のための、マウス神経ＮＰ４１−ＦＡＭ（Ｅ）への結合についてスクリーニングされた１００Ｍのカルボキシ−ＦＡＭ（Ｄ）およびペプチドの局所適用。神経および筋肉の染色のＨ＆Ｅ（Ｆ）。Ｌｕｍａｒ顕微鏡で、３４倍拡大、２秒露出で取得され、比較のために均等に平準化された全ての蛍光画像。
【図２４】ファージディスプレイによって特定されたヒト神経結合ペプチドのスクリーニング。２つの異なる患者の頸部からの新鮮生存ヒト頸神経ワナ神経（上段）およびヒト大耳介神経（下段）の連続切片への１００μＭのヒト神経結合ペプチドＦＡＭ−ＨＮＰ４０１（Ａ）、ＦＡＭ−ＨＮＰ４０２（Ｂ）、ＦＡＭ−ＨＮＰ４０３（Ｃ）の局所適用。比較のための、マウス神経ＮＰ４１−ＦＡＭ（Ｅ）への結合についてスクリーニングされた１００μＭのカルボキシ−ＦＡＭ（Ｄ）およびペプチドの局所適用。Ｌｕｍａｒ顕微鏡で、３４倍拡大、２秒露出で取得され、比較のために均等に平準化された全ての蛍光画像。
【図２５】ヒトおよびマウス組織への神経結合ペプチドの差次的結合。同一パラメータで共焦点顕微鏡で撮像され、比較のために均等に平準化された、３７５μＭ（Ａ）、１００μＭ（Ｂ）、５０μＭ（Ｃ）、１０μＭ（Ｄ）、および１μＭ（Ｅ）の最終濃度でのヒト咽頭神経切片へのＦＡＭ−ＨＮＰ４０１の局所適用による最適用量応答の決定。＊＊視認するために２倍明るくした。共焦点顕微鏡で撮像され、直接比較のために平準化されたＦＡＭ−ＮＰ４１（ＦおよびＧ）およびＦＡＭ−ＨＮＰ４０１（ＨおよびＩ）についての３７５μＭの高濃度での神経対筋肉のコントラスト。周囲の筋肉が３７５μＭ（Ｊ）、１００μＭ（Ｋ）のＦＡＭ−ＮＰ４１または３７５μＭ（Ｌ）、１００μＭ（Ｍ）のＦＡＭＨＮＰ４０１で処理されたマウス顔面神経（赤矢印）。同一パラメータでＬｕｍａｒ撮像スコープで取得され、同等である下段の画像。ＦＡＭ−ＨＮＰ４０１は、ＦＡＭＮＰ４１と比較して、低いコントラストを有するマウス組織における筋肉の高い結合を示す。ヒト神経上の低濃度のＦＡＭ−ＨＮＰ４０１（１０μＭ）の高解像度共焦点画像は、神経の非軸索構造構成要素へのペプチドの結合を示す（Ｎ）。
【図２６】ヒト神経組織の自己蛍光。未固定ヒト腓腹神経の１０μｍ切片上への１００μＭのＦＡＭ−ＨＮＰ４０１（Ａ）またはバッファーのみ（Ｂ）の局所適用、続いて直接比較のために同一取得パラメータ下で共焦点顕微鏡を使用する撮像。画像は、Ｉｍａｇｅ  Ｊを使用して均等に平準化され、続いて視認するために（Ｂ）の１６倍明るくした。
【図２７】神経結合ペプチドが注射されたマウスからの尿試料の質量分光分析。ペプチドが代謝されていることを示すＦＡＭ−ＨＮＰ４０１が注射されたマウスの尿から収集されたシステイン−ＦＡＭからの断片化イオンピーク（Ａ）。同様の結果は、ＦＡＭ−ＮＰ４１が注射されたマウスで得られた（Ｂ）。しかしながら、ペプチドがｄ−アミノ酸で作製され、尿中で検出可能であり、代謝されていない、ＦＡＭ−ｄＮＰ４１が注射されたマウス（Ｃ）。
【図２８−１】エクスビボヒト血漿およびラットからの脳脊髄液中のペプチドの安定性。５３．２ｍｇ／ｋｇまたは２μｍｏｌの用量でヒト血漿中３７℃でのインキュベーション後５分（Ａ）および２時間（Ｂ）で検出されたＦＡＭ−ＨＮＰ４０１ペプチド。タンパク質物質を沈殿させるために等量の１：１アセトニトリル：２％酢酸を含む水が添加され、Ｃ１８逆相カラムで、９：１  Ｈ２Ｏ＋０．０５％ＴＦＡ：アセトニトリル＋０．０５％ＴＦＡ〜１：９  Ｈ２Ｏ＋０．０５％ＴＦＡ：アセトニトリル＋０．０５％ＴＦＡの勾配、２０分でのＬＣ−ＭＳによる分析のために上清が抽出される。４５０ｎｍの検出器チャネルは、ＦＡＭ−ＨＮＰ４０１を示す。ペプチドは、ヒト血漿とのインキュベーション後５分での組成物のｘ％とのインキュベーション後２時間でインタクトなままである。５３．２ｍｇ／ｋｇまたは２μｍｏｌの用量でヒト血漿中３７℃でのインキュベーション後５分（Ｃ）および２時間（Ｄ）で検出され、続いて上記の方法でＬＣ−ＭＳ分析が行われた、ＦＡＭ−ＮＰ４１ペプチド。我々の以前の結果と同様に、ＦＡＭ−ＮＰ４１は、ヒト血漿とのインキュベーション後５分での組成物のｘ％とのインキュベーション後２時間でインタクトなままである。ＦＡＭ−ＨＮＰ４０１（Ｅ）およびＦＡＭ−ＮＰ４１（Ｆ）はまた、循環中のペプチドの安定性を示すために、インキュベーション後２時間でのラットからの脳脊髄液において試験された。
【図２８−２】図28-1の説明を参照。
【図２８−３】図28-1の説明を参照。
【図２９】ＦＡＭ−ＨＮＰ４０１は、ヒト前立腺から取得された新鮮生存神経に結合する。前立腺からの未固定神経の１０μｍ切片への１００μＭのＦＡＭ−ＨＮＰ４０１（Ａ）またはＦＡＭ−ＮＰ４１（Ｂ）の局所適用、続いて共焦点顕微鏡を使用する撮像。前立腺からの神経の固定切片上のニューロフィラメント抗体ＳＭＩ３１２（Ｃ）および対応するＨ＆Ｅ染色（Ｄ）を使用する神経についての免疫蛍光。これらの画像は、図２０に示される患者とは異なる患者から取得される。
【図３０】ペプチド配列およびそれらの略語の表。
【発明を実施するための形態】
【０１７０】
発明の詳細な説明
Ｉ．緒言
本明細書では、特定の実施形態において、ヒトニューロン、ヒト神経、またはいずれかの構成要素に特異的に結合するペプチドを含むターゲティング分子が開示される。いくつかの実施形態において、ペプチドは、
2020530034.tif 000142
からなる群より選択される。いくつかの実施形態において、ペプチドは、
2020530034.tif 000143
ではない。いくつかの実施形態において、ペプチドは、
2020530034.tif 000144
ではない。いくつかの実施形態において、ペプチドは、
2020530034.tif 000145
ではない。
【０１７１】
ＩＩ．定義
本説明において、任意の濃度範囲、パーセンテージ範囲、比率範囲、または整数範囲は、特に指示がない限り、列挙された範囲内の任意の整数の値、および適切な場合、その小数（整数の１／１０および１／１００など）を含むと理解されるべきである。また、ポリマーサブユニット、サイズ、または厚さなどの任意の物理的特徴に関連して本明細書に列挙された任意の数値範囲は、特に指示がない限り、列挙された範囲内の任意の整数を含むと理解されるべきである。本明細書で使用されるとき、「約」という用語は、特に指示がない限り、指示された範囲、値、または構造の±２０％を意味する。
【０１７２】
本明細書で使用される「１つ（ａ）」および「１つ（ａｎ）」という用語は、列挙された構成要素の「１つ以上」を指すことが理解されるべきである。選択肢（例えば、「または」）の使用は、選択肢の一方、両方、またはそれらの任意の組み合わせのいずれかを意味すると理解されるべきである。
【０１７３】
加えて、本明細書に記載される構造および置換基の様々な組み合わせから誘導される、個々の化合物、または化合物の群は、各化合物または化合物の群が個別に記載されるのと同程度に本願によって開示されることが理解されるべきである。よって、特定の構造または特定の置換基の選択は、本開示の範囲内である。
【０１７４】
本明細書で使用されるとき、以下の用語は、特に指定がない限り、それらに帰する意味を有する。
【０１７５】
中枢神経系（ＣＮＳ）は、脳および脊髄、ならびに網膜からなる。
【０１７６】
末梢神経系（ＰＮＳ）は、ＣＮＳの外側に延在する。ＰＮＳは、体性神経系および自律神経系に分けられる。
【０１７７】
ニューロンは、電気的および化学的シグナル伝達によって情報を処理および伝達する電気的興奮性細胞である。
【０１７８】
典型的なニューロンは、細胞体（しばしば体細胞と呼ばれる）、樹状突起、および軸索突起を有する。
【０１７９】
神経は、神経軸索突起の囲まれたケーブル状束である。各神経は、多くの軸索突起を含有する索状構造である。各軸索突起は、神経内膜と呼ばれる組織の層に囲まれている。軸索突起は、束と呼ばれる群にまとめられ、各束は、神経周膜と呼ばれる組織の層に包まれている。ニューロンまたは神経は、神経上膜と呼ばれる組織の層に包まれている。
【０１８０】
本明細書で使用されるとき、「ターゲティング分子」という用語は、目的の標的に特異的に結合する任意の薬剤（例えば、ペプチド、タンパク質、核酸ポリマー、アプタマー、または小分子）を指す。いくつかの実施形態において、ターゲティング分子は、本明細書において「ターゲティングペプチド」とも呼ばれるペプチドを含む。目的の標的は、組織、細胞型、細胞構造（例えば、細胞小器官）、タンパク質、ペプチド、多糖類、または核酸ポリマーであり得る。いくつかの実施形態において、ターゲティング分子は、対象の１つ以上のニューロンまたは神経に特異的に結合する任意の薬剤である。いくつかの実施形態において、ターゲティング分子は、カーゴ（例えば、薬物、蛍光標識、または光増感剤）をさらに含む。
【０１８１】
本明細書で使用されるとき、「アプタマー」という用語は、標的分子との非ワトソン−クリック相互作用に基づく高親和性特異性で他の分子に結合するそれらの能力に基づいてランダムプールから選択されたオリゴヌクレオチド（例えば、ＤＮＡ、ＲＮＡ、またはＸＮＡ）分子（例えば、Ｃｏｘ  ａｎｄ  Ｅｌｌｉｎｇｔｏｎ，Ｂｉｏｏｒｇ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．９：２５２５−２５３１（２００１）、Ｌｅｅ  ｅｔ  ａｌ，Ｎｕｃ．Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．３２：Ｄ９５−Ｄ１００（２００４）参照）または遊離ペプチドとしてではなく、安定したタンパク質足場内のループとして埋め込まれている短いペプチド（例えば、５〜２０アミノ酸）を指す。核酸、タンパク質、小有機化合物、ビタミン、無機化合物、細胞、およびさらには生物全体に結合するアプタマーを選択することができる。いくつかの実施形態において、ターゲティングペプチドは、アプタマーを含むことができるか、またはターゲティング分子ペプチド配列は、ペプチドアプタマーの形式であり得る。
【０１８２】
「ポリペプチド」、「ペプチド」、および「タンパク質」という用語は、本明細書では交換可能に使用され、アミノ酸残基のポリマーを指す。これらの用語は、天然に存在するアミノ酸ポリマー、および１つ以上のアミノ酸残基が天然に存在しないアミノ酸（例えば、アミノ酸類似体）であるアミノ酸ポリマーに適用される。これらの用語は、アミノ酸残基が共有ペプチド結合によって連結されている、完全長タンパク質（すなわち、抗原）を含む、任意の長さのアミノ酸鎖を包含する。本明細書で使用されるとき、「ペプチド」という用語は、典型的には２〜約５０残基の長さの範囲のアミノ酸残基のポリマーを指す。特定の実施形態において、ペプチドは、約２、３、４、５、７、９、１０、または１１残基〜約５０、４５、４０、４５、３０、２５、２０、または１５残基の長さの範囲である。特定の実施形態において、ペプチドは、約８、９、１０、１１、または１２残基〜約１５、２０、または２５残基の長さの範囲である。本明細書においてアミノ酸配列が提供される場合、配列のＬ−、Ｄ−、またはベータアミノ酸バージョンも、レトロ、インバージョン、およびレトロ−インバージョンアイソフォームと同様に企図される。ペプチドは、１つ以上のアミノ酸残基が対応する天然に存在するアミノ酸の人工化学的類似体であるアミノ酸ポリマー、および天然に存在するアミノ酸ポリマーも含む。加えて、用語は、ペプチド結合または他の修飾された結合によって結合されたアミノ酸（例えば、ペプチド結合がα−エステル、β−エステル、チオアミド、ホスホンアミド、カルバメート、ヒドロキシレートなどによって置換されている場合（例えば、Ｓｐａｔｏｌａ，（１９８３）Ｃｈｅｍ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ａｍｉｎｏ  Ａｃｉｄｓ  ａｎｄ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ７：２６７−３５７を参照されたい）、アミドが飽和アミンで置換されている場合（例えば、参照により本明細書に組み込まれるＳｋｉｌｅｓ  ｅｔ  ａｌ．、米国特許第４，４９６，５４２号、およびＫａｌｔｅｎｂｒｏｎｎ  ｅｔ  ａｌ．，（１９９０）Ｐｐ．９６９−９７０  ｉｎ  Ｐｒｏｃ．１１ｔｈ  Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｐｅｐｔｉｄｅ  Ｓｙｍｐｏｓｉｕｍ，ＥＳＣＯＭ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ，Ｔｈｅ  Ｎｅｔｈｅｒｌａｎｄｓなどを参照されたい））を対象とする。
【０１８３】
「アミノ酸」という用語は、天然に存在するアミノ酸および合成アミノ酸、ならびに天然に存在するアミノ酸と同様の方法で機能するアミノ酸類似体およびアミノ酸模倣体を指す。天然に存在するアミノ酸は、遺伝子コードによってコードされるもの、ならびに後で修飾されるアミノ酸、例えば、ヒドロキシプロリン、γ−カルボキシグルタメート、およびＯ−ホスホセリンである。アミノ酸は、Ｌ−またはＤ−アミノ酸であってもよい。アミノ酸類似体とは、天然に存在するアミノ酸と同じ基本化学構造を有する化合物、すなわち、水素、カルボキシル基、アミノ基、およびＲ基に結合された炭素、例えば、ホモセリン、ノルロイシン、メチオニンスルホキシドを指す。そのような類似体は、修飾されたＲ基（例えば、ノルロイシン）または修飾されたペプチド骨格を有するが、天然に存在するアミノ酸と同じ基本化学構造を保持する。アミノ酸模倣体とは、アミノ酸の一般的な化学構造とは異なる構造を有するが、天然に存在するアミノ酸と同様に機能する化学化合物を指す。
【０１８４】
アミノ酸は、本明細書では、それらの一般に知られている３文字記号またはＩＵＰ  ＡＣ−ＩＵＢ生化学命名委員会によって推奨される１文字記号のいずれかで呼ばれ得る。同様に、ヌクレオチドは、一般に受け入れられている１文字コードで呼ばれ得る。
【０１８５】
当業者は、コードされた配列中の単一のアミノ酸またはわずかな割合のアミノ酸を変更、付加、または欠失するペプチド、ポリペプチド、またはタンパク質配列への個々の置換、欠失、または付加が、変更がアミノ酸の化学的に類似のアミノ酸での置換をもたらす「保存的に修飾されたバリアント」であることを認識するであろう。機能的に類似のアミノ酸を提供する保存的置換表は、当該技術分野で周知である。そのような保存的に修飾されたバリアントは、本発明の多型バリアント、種間相同体、および対立遺伝子に加えられ、これらを除外しない。
【０１８６】
以下の８つの群は、それぞれ互いの保存的置換であるアミノ酸を含有する：１）アラニン（Ａ）、グリシン（Ｇ）、２）アスパラギン酸（Ｄ）、グルタミン酸（Ｅ）、３）アスパラギン（Ｎ）、グルタミン（Ｑ）、４）アルギニン（Ｒ）、リジン（Ｋ）、５）イソロイシン（Ｉ）、ロイシン（Ｌ）、メチオニン（Ｍ）、バリン（Ｖ）、６）フェニルアラニン（Ｆ）、チロシン（Ｙ）、トリプトファン（Ｗ）、７）セリン（Ｓ）、トレオニン（Ｔ）、および８）システイン（Ｃ）、メチオニン（Ｍ）（例えば、Ｃｒｅｉｇｈｔｏｎ，Ｐｒｏｔｅｉｎｓ（１９８４）を参照されたい）。
【０１８７】
「配列同一性」は、本明細書で使用されるとき、最大配列同一性パーセントを達成するために、必要に応じて、配列を整合し、ギャップを導入した後の、別の参照ポリペプチド配列中のアミノ酸残基と同一である単一配列中のアミノ酸残基のパーセンテージを指し、配列同一性の一部としていかなる保存的置換も考慮しない。配列同一性パーセンテージ値は、Ａｌｔｓｃｈｕｌ  ｅｔ  ａｌ．（１９９７），Ｎｕｃｌ．Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．２５：３３８９−３４０２によって定義されるＮＣＢＩ  ＢＬＡＳＴ  ２．０ソフトウェアを使用して、デフォルト値に設定されたパラメータで生成することができる。
【０１８８】
本明細書で使用されるとき、「標識」という用語は、本明細書で開示されるターゲティング分子の視覚化および／または検出を容易にする分子を指す。いくつかの実施形態において、標識は、蛍光部分である。
【０１８９】
「特異的に結合する」という句は、本明細書に開示されるターゲティング分子と標的（例えば、精製タンパク質、ニューロンもしくは神経組織、ニューロンもしくは神経、脳ニューロンもしくは神経、中枢ニューロンもしくは神経、有髄もしくは無髄ニューロンもしくは神経、またはニューロンもしくは神経の周囲の結合組織）との間の相互作用を指すとき、ターゲティング分子と標的との間の高親和性結合の形成を指す。さらに、用語は、ターゲティング分子が非標的について低い親和性を有することを意味する。
【０１９０】
「選択的結合」、「選択性」などは、別の分子と比較して、１つの分子と相互作用する薬剤の選好を指す。好ましくは、本明細書に開示されるターゲティング分子と標的との間の相互作用は、特異的かつ選択的である。いくつかの実施形態において、薬剤は、他の望ましくない標的に結合することなく、２つの別個であるが類似の標的を「特異的に結合」および「選択的に結合」するように設計されることに留意されたい。
【０１９１】
「個体」、「患者」、または「対象」という用語は、交換可能に使用される。本明細書で使用されるとき、それらは、任意の哺乳動物（すなわち、分類学的分類、動物界：脊索動物：脊椎動物：哺乳動物内の任意の目、科、および属の種）を意味する。いくつかの実施形態において、哺乳動物は、ウシ、ウマ、ヒツジ、ブタ、ネコ、イヌ、ヤギ、マウス、ラット、ウサギ、モルモット、非ヒト霊長類、またはヒトである。用語のいずれも、医療従事者（例えば、医師、登録看護師、ナースプラクティショナー、医師助手、用務員、またはホスピス職員）の監督（例えば、一定または断続的）を特徴とする状況を必要とせず、これに限定されない。
【０１９２】
「投与する」、「投与すること」、「投与」などの用語は、本明細書で使用されるとき、生物学的作用の所望の部位への薬剤または組成物の送達を可能にするために使用され得る方法を指す。これらの方法には、非経口注射（例えば、静脈内、皮下、腹腔内、筋肉内、血管内、髄腔内、硝子体内、点滴、または局所）が含まれるが、これらに限定されない。本明細書に記載される薬剤および方法と共に任意に使用される投与技術には、例えば、Ｇｏｏｄｍａｎ  ａｎｄ  Ｇｉｌｍａｎ，Ｔｈｅ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｂａｓｉｓ  ｏｆ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ，ｃｕｒｒｅｎｔ  ｅｄ．；Ｐｅｒｇａｍｏｎ；ａｎｄ  Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ，Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ（ｃｕｒｒｅｎｔ  ｅｄｉｔｉｏｎ），Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏ．，Ｅａｓｔｏｎ，Ｐａで考察されるものが含まれる。いくつかの実施形態において、投与は、ヒト患者への全身静脈内注射を介する。
【０１９３】
本明細書で使用される「薬学的に許容される」という用語は、本明細書に記載される薬剤の生物学的活性または特性を無効にせず、比較的非毒性である材料を指す（すなわち、材料の毒性は、材料の利益を有意に上回る）。いくつかの事例において、薬学的に許容される材料は、有意な望ましくない生物学的効果を引き起こすことなく、またはそれが含有される組成物の構成要素のいずれかと有意に有害に相互作用することなく、個体に投与され得る。
【０１９４】
本明細書で使用される「手術」という用語は、物理的介入によって操作するか、変更するか、または効果を引き起こすために使用され得る任意の方法を指す。これらの方法には、これらに限定されないが、直視下手術、内視鏡手術、腹腔鏡手術、低侵襲手術、ロボット手術、脊髄手術中のリトラクターの配置などの任意のニューロンまたは神経に影響を及ぼし得る任意の処置、心臓ニューロンまたは神経アブレーション、硬膜外注射、髄腔内注射、ニューロンまたは神経ブロック、ニューロンまたは神経刺激装置などのデバイスの埋め込み、およびポンプの埋め込みが含まれる。いくつかの実施形態において、手術の対象は、ヒト対象またはヒト患者である
【０１９５】
ＩＩＩ．標的
本明細書では、特定の実施形態において、ヒトニューロンまたは神経標的に特異的に結合するヒトニューロンおよび／または神経ターゲティング分子が開示される。
【０１９６】
いくつかの実施形態において、標的は、ヒトニューロンまたは神経である。神経は、任意のヒト神経（例えば、運動神経、感覚神経、交感神経および副交感神経、前立腺周囲神経血管束、坐骨神経、嗅神経を含む脳神経、視神経、眼球運動神経、滑車神経、三叉神経、外転神経、顔面神経、内耳神経、舌咽神経、迷走神経、副神経、舌下神経、脊髄神経、腕神経叢、または腰仙骨神経叢）である。ニューロンは、任意のニューロン（例えば、感覚ニューロン（求心性ニューロン）、運動ニューロン（遠心性ニューロン）、介在ニューロン、単極ニューロン、双極ニューロン、多極ニューロン、バスケット細胞、ベッツ細胞、中型有棘ニューロン、プルキンエ細胞、錐体細胞、レンショウ細胞、顆粒細胞、前角細胞）である。いくつかの実施形態において、ヒトニューロンまたは神経は、有髄である。いくつかの実施形態において、ニューロンまたは神経は、無髄である。いくつかの実施形態において、ヒトニューロンまたは神経は、脱髄される。いくつかの実施形態において、ヒトニューロンまたは神経は、脱髄を受けている。
【０１９７】
いくつかの実施形態において、ニューロンおよび／または神経標的は、ヒトニューロンまたは神経の構成要素である。ヒトニューロンまたは神経の構成要素は、ニューロンまたは神経の任意の構成要素である。いくつかの実施形態において、標的は、ニューロンまたは神経の内部または周囲の組織である（例えば、神経上膜、神経周膜、または神経内膜）。いくつかの実施形態において、標的は、ミエリンの構成要素である（例えば、ミエリン塩基性タンパク質（ＭＢＰ）、ミエリンオリゴデンドロサイト糖タンパク質、またはプロテオリピドタンパク質）。いくつかの実施形態において、標的は、シュワン細胞によって発現する（例えば、ＭＢＰ、グリア線維性酸性タンパク質、Ｓ−１００、またはミエリンタンパク質ゼロ）。いくつかの実施形態において、標的は、ニューロンまたは神経組織の構成要素である（例えば、エラスチン、フィブリリン、ｅ−カドヘリン、サイトケラチン、ビメンチン、コラーゲンＩ、コラーゲン、ＩＩＩ、コラーゲンＩＶ、またはコラーゲンＶ）。いくつかの実施形態において、標的は、ニューロンまたは神経において発現した神経栄養因子受容体である（例えば、チロシンキナーゼ受容体ＴｒｋＡ、ＴｒｋＢ、およびＴｒｋＣ、低親和性ニューロンもしくは神経成長受容体もしくはｐ７５ニューロトロフィン受容体、またはＧＤＮＦファミリー受容体アルファ−１もしくは−２）。いくつかの実施形態において、標的は、ニューロンまたは神経組織において発現した非神経栄養因子受容体である（例えば、上皮成長因子受容体、形質転換成長因子ベータ受容体、血管内皮成長因子受容体、エンドセリンＡ受容体、エンドセリンＢ受容体、およびインテグリン受容体）。
【０１９８】
ニューロンおよび／または神経ターゲティング分子がヒトニューロンもしくは神経またはその構成要素に結合することができるかどうかの決定は、任意の好適な方法によって達成される。いくつかの実施形態において、ニューロンおよび／または神経ターゲティング分子がヒトニューロンもしくは神経またはその構成要素に結合することができるかどうかを決定する方法は、本明細書に開示されるターゲティング分子（例えば、ペプチドまたはアプタマー）を試験薬剤と、ターゲティング分子および試験薬剤が結合複合体を形成することを可能にするために十分な時間接触させることを含む。結合複合体は、任意の好適な方法を使用して検出される。好適な結合アッセイは、インビトロまたはインビボで実施することができ、これらに限定されないが、ファージディスプレイ、ツーハイブリッドスクリーン、共沈、架橋、および発現クローニングを含む（例えば、Ｂｅｎｎｅｔ，Ｊ．Ｐ．ａｎｄ  Ｙａｍａｍｕｒａ，Ｈ．Ｉ．（１９８５）“Ｎｅｕｒｏｔｒａｎｓｍｉｔｔｅｒ，Ｈｏｒｍｏｎｅ  ｏｒ  Ｄｒｕｇ  Ｒｅｃｅｐｔｏｒ  Ｂｉｎｄｉｎｇ  Ｍｅｔｈｏｄｓ，”ｉｎ  Ｎｅｕｒｏｔｒａｎｓｍｉｔｔｅｒ  Ｒｅｃｅｐｔｏｒ  Ｂｉｎｄｉｎｇ（Ｙａｍａｍｕｒａ，Ｈ．Ｌ，ｅｔ  ａｌ．，ｅｄｓ．），ｐｐ．６１−８９を参照されたい）。他の結合アッセイは、目的の標的に結合された分子を特定する質量分析またはＮＭＲ技術の使用を含む。そのようなアッセイで利用されるターゲティング分子は、自然に発現、クローン化、または合成することができる。
【０１９９】
いくつかの実施形態において、ターゲティング分子は、目的のヒトニューロンまたは神経に到達して結合するために、血液脳関門を越えることができる。
【０２００】
ＩＶ．ターゲティング分子ペプチドおよびアプタマー
本開示では、ヒト運動／感覚および自律神経に結合され、本発明のヒトニューロンまたは神経ターゲティング分子に使用することができるペプチドが提供される。いくつかの実施形態において、ターゲティングペプチドは、アミノ酸配列
2020530034.tif 000146
を含む。
【０２０１】
いくつかの実施形態において、ヒトニューロンまたは神経ターゲティング分子は、
2020530034.tif 000147
からなる群より選択されるペプチド配列を含む。いくつかの実施形態において、本発明のペプチドは、ＰＹＹＶＶＫＫ（配列番号４０）のコア結合ドメインを含む約８〜約２５アミノ酸（例えば、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、または２５アミノ酸）、約１０〜約２３アミノ酸、または約１５〜約２１アミノ酸のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態において、本発明のペプチドは、ＰＹＹＶＶＫＫ（配列番号４０）のコア結合ドメインおよびＱＶＰＷＥＥ（配列番号４１）のＮ末端配列を含む約１３〜約２５アミノ酸のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態において、本発明のペプチドは、ＰＹＹ（配列番号１１６）またはＰＹＹＶＶ（配列番号１１７）のアミノ酸コア結合ドメインおよびＱＶＰＷＥＥ（配列番号４１）のＮ末端配列を含む。いくつかの実施形態において、本発明のペプチドは、ＰＹＹ（配列番号１１６）のアミノ酸コア結合ドメインおよびＱＶＰＷＥＥ（配列番号４１）のＮ末端配列を含む。いくつかの実施形態において、本発明のペプチドは、ＰＹＹＶＶ（配列番号１１７）のアミノ酸コア結合ドメインおよびＱＶＰＷＥＥ（配列番号４１）のＮ末端配列を含む。
【０２０２】
１つのそのような実施形態は、
2020530034.tif 000148
のペプチドである。いくつかの実施形態において、ターゲティング分子は、
2020530034.tif 000149
ではないペプチドを含む。いくつかの実施形態において、ターゲティング分子は、
2020530034.tif 000150
ではないペプチドを含む。いくつかの実施形態において、ペプチドは、
2020530034.tif 000151
ではない。
【０２０３】
いくつかの実施形態において、ターゲティング分子は、
2020530034.tif 000152
からなる群より選択されるペプチドを含む。
【０２０４】
いくつかの実施形態において、ターゲティング分子は、
2020530034.tif 000153
からなる群より選択されるペプチドを含む。
【０２０５】
いくつかの実施形態において、ターゲティング分子は、ペプチド
2020530034.tif 000154
を含む。
【０２０６】
いくつかの実施形態において、ターゲティング分子は、ペプチド
2020530034.tif 000155
を含む。
【０２０７】
いくつかの実施形態において、ターゲティング分子は、ペプチド
2020530034.tif 000156
を含む。
【０２０８】
いくつかの実施形態において、ターゲティング分子は、ペプチド
2020530034.tif 000157
を含む。
【０２０９】
いくつかの実施形態において、ターゲティング分子は、ペプチド
2020530034.tif 000158
を含む。
【０２１０】
いくつかの実施形態において、ターゲティング分子は、ペプチド
2020530034.tif 000159
を含む。
【０２１１】
いくつかの実施形態において、ターゲティング分子は、ペプチド
2020530034.tif 000160
を含む。
【０２１２】
いくつかの実施形態において、ターゲティング分子は、ペプチド
2020530034.tif 000161
を含む。
【０２１３】
いくつかの実施形態において、ターゲティング分子は、ペプチド
2020530034.tif 000162
を含む。
【０２１４】
いくつかの実施形態において、ターゲティング分子は、ペプチド
2020530034.tif 000163
を含む。
【０２１５】
いくつかの実施形態において、ターゲティング分子は、ペプチド
2020530034.tif 000164
を含む。
【０２１６】
いくつかの実施形態において、ターゲティング分子は、ペプチド
2020530034.tif 000165
を含む。
【０２１７】
いくつかの実施形態において、ターゲティング分子は、ペプチド
2020530034.tif 000166
を含む。
【０２１８】
いくつかの実施形態において、ターゲティング分子は、ペプチド
2020530034.tif 000167
を含む。
【０２１９】
いくつかの実施形態において、ターゲティング分子は、ペプチド
2020530034.tif 000168
を含む。
【０２２０】
いくつかの実施形態において、ターゲティング分子は、ペプチド
2020530034.tif 000169
を含む。
【０２２１】
いくつかの実施形態において、ターゲティング分子は、ペプチド
2020530034.tif 000170
を含む。
【０２２２】
いくつかの実施形態において、ターゲティング分子は、ペプチド
2020530034.tif 000171
を含む。
【０２２３】
いくつかの実施形態において、ターゲティング分子は、ペプチド
2020530034.tif 000172
を含む。
【０２２４】
いくつかの実施形態において、ターゲティング分子は、ペプチド
2020530034.tif 000173
を含む。
【０２２５】
いくつかの実施形態において、ターゲティング分子は、ペプチド
2020530034.tif 000174
を含む。
【０２２６】
いくつかの実施形態において、ターゲティング分子は、ペプチド
2020530034.tif 000175
を含む。
【０２２７】
いくつかの実施形態において、ターゲティング分子は、ペプチド
2020530034.tif 000176
を含む。
【０２２８】
いくつかの実施形態において、ターゲティング分子は、ペプチド
2020530034.tif 000177
を含む。
【０２２９】
いくつかの実施形態において、ターゲティング分子は、ペプチド
2020530034.tif 000178
を含む。
【０２３０】
いくつかの実施形態において、ターゲティング分子は、ペプチド
2020530034.tif 000179
を含む。
【０２３１】
いくつかの実施形態において、ターゲティング分子は、ペプチド
2020530034.tif 000180
を含む。
【０２３２】
いくつかの実施形態において、ターゲティング分子は、ペプチド
2020530034.tif 000181
を含む。
【０２３３】
いくつかの実施形態において、ターゲティング分子は、ペプチド
2020530034.tif 000182
を含む。
【０２３４】
いくつかの実施形態において、ターゲティング分子は、ペプチド
2020530034.tif 000183
を含む。
【０２３５】
いくつかの実施形態において、ターゲティング分子は、ペプチド
2020530034.tif 000184
を含む。
【０２３６】
いくつかの実施形態において、ターゲティング分子は、ペプチド
2020530034.tif 000185
を含む。
【０２３７】
いくつかの実施形態において、ターゲティング分子は、本明細書に開示されるペプチド配列と少なくとも８０％の相同性を共有するペプチド配列を含む。いくつかの実施形態において、ターゲティング分子は、本明細書に開示されるペプチド配列と少なくとも８５％の相同性を共有するペプチド配列を含む。いくつかの実施形態において、ターゲティング分子は、本明細書に開示されるペプチド配列と少なくとも９０％の相同性を共有するペプチド配列を含む。いくつかの実施形態において、ターゲティング分子は、本明細書に開示されるペプチド配列と少なくとも９５％の相同性を共有するペプチド配列を含む。いくつかの実施形態において、ターゲティング分子は、本明細書に開示されるペプチド配列と少なくとも９９％の相同性を共有するペプチド配列を含む。
【０２３８】
いくつかの実施形態において、ターゲティング分子は、ペプチド配列
2020530034.tif 000186
と少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９７％、または９９％の同一性を有するペプチド配列を含む。
【０２３９】
いくつかの実施形態において、ターゲティング分子は、アプタマーを含む。
【０２４０】
本発明のペプチドおよびアプタマーは、任意の好適な方法によって合成される。例えば、本発明のターゲティングペプチドおよびアプタマーは、固相ペプチド合成によって化学的に合成することができる。いくつかの実施形態において、本発明のペプチドは、Ｎ末端でアセチル化（「Ａｃ」または「アセチル」）、Ｃ末端でアミド化（「ＣＯＮＨ２」または「ＮＨ２」）、またはその両方である。例えば、ターゲティングペプチドは、
2020530034.tif 000187
2020530034.tif 000188
を含み得る。固相合成の技術は、例えば、Ｂａｒａｎｙ  ａｎｄ  Ｍｅｒｒｉｆｉｅｌｄ（１９６３）Ｓｏｌｉｄ−Ｐｈａｓｅ  Ｐｅｐｔｉｄｅ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ；ｐｐ．３−２８４  ｉｎ  Ｔｈｅ  Ｐｅｐｔｉｄｅｓ：Ａｎａｌｙｓｉｓ，Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，Ｂｉｏｌｏｇｙ．Ｖｏｌ．２：Ｓｐｅｃｉａｌ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｐｅｐｔｉｄｅ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，Ｐａｒｔ  Ａ．；Ｍｅｒｒｉｆｉｅｌｄ  ｅｔ  ａｌ．（１９６３）Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ，８５：２１４９−２１５６；およびＳｔｅｗａｒｔ  ｅｔ  ａｌ．（１９８４）Ｓｏｌｉｄ  Ｐｈａｓｅ  Ｐｅｐｔｉｄｅ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，２ｎｄ  ｅｄ．  Ｐｉｅｒｃｅ  Ｃｈｅｍ．  Ｃｏ．，  Ｒｏｃｋｆｏｒｄ，  ＩＩＩによって記載されている。
【０２４１】
Ｖ．カーゴ
いくつかの実施形態において、ヒトニューロンまたは神経ターゲティング分子は、カーゴをさらに含む。いくつかの実施形態において、ターゲティングペプチドは、アミノ酸配列
2020530034.tif 000189
を含む。
【０２４２】
いくつかの実施形態において、ヒトニューロンまたは神経ターゲティング分子は、カーゴをさらに含む。いくつかの実施形態において、ヒトニューロンまたは神経ターゲティング分子は、
2020530034.tif 000190
からなる群より選択されるペプチド配列を含む。いくつかの実施形態において、ターゲティング分子は、
2020530034.tif 000191
からなる群より選択されるペプチドを含む。いくつかの実施形態において、ターゲティング分子は、
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からなる群より選択されるペプチドを含む。いくつかの実施形態において、ターゲティング分子は、ペプチド
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を含む。いくつかの実施形態において、ターゲティング分子は、ペプチド
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を含む。いくつかの実施形態において、ターゲティング分子は、ペプチド
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を含む。いくつかの実施形態において、ターゲティング分子は、ペプチド
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を含む。いくつかの実施形態において、ターゲティング分子は、ペプチド
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を含む。いくつかの実施形態において、ターゲティング分子は、ペプチド
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を含む。いくつかの実施形態において、ターゲティング分子は、ペプチド
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を含む。いくつかの実施形態において、ターゲティング分子は、ペプチド
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を含む。いくつかの実施形態において、ターゲティング分子は、ペプチド
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を含む。いくつかの実施形態において、ターゲティング分子は、ペプチド
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を含む。いくつかの実施形態において、ターゲティング分子は、ペプチド
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を含む。いくつかの実施形態において、ターゲティング分子は、ペプチド
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を含む。いくつかの実施形態において、ターゲティング分子は、ペプチド
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を含む。いくつかの実施形態において、ターゲティング分子は、ペプチド
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を含む。いくつかの実施形態において、ターゲティング分子は、ペプチド
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を含む。いくつかの実施形態において、ターゲティング分子は、ペプチド
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を含む。いくつかの実施形態において、ターゲティング分子は、ペプチド
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を含む。いくつかの実施形態において、ターゲティング分子は、ペプチド
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を含む。いくつかの実施形態において、ターゲティング分子は、ペプチド
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を含む。いくつかの実施形態において、ターゲティング分子は、ペプチド
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を含む。いくつかの実施形態において、ターゲティング分子は、ペプチド
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を含む。いくつかの実施形態において、ターゲティング分子は、ペプチド
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を含む。いくつかの実施形態において、ターゲティング分子は、ペプチド
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を含む。いくつかの実施形態において、ターゲティング分子は、ペプチド
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を含む。いくつかの実施形態において、ターゲティング分子は、ペプチド
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を含む。いくつかの実施形態において、ターゲティング分子は、
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ではないペプチドを含む。いくつかの実施形態において、ターゲティング分子は、
2020530034.tif 000219
ではないペプチドを含む。いくつかの実施形態において、ペプチドは
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ではない。
【０２４３】
いくつかの実施形態において、ペプチドまたはアプタマーは、直接カーゴに結合されている。いくつかの実施形態において、ペプチドまたはアプタマーは、間接的に（例えば、リンカーを介して）カーゴに結合されている。いくつかの実施形態において、ペプチドまたはアプタマーは、ペプチドまたはアプタマーのそのＮ末端、そのＣ末端、または内部位置（例えば、内部アミノ酸）でカーゴに結合されている。いくつかの実施形態において、２つ、３つ、４つ、またはより多くのペプチドまたはアプタマーは、カーゴに直接または間接的に結合されている。特定の実施形態において、カーゴは、薬物、蛍光部分、光増感剤、またはそれらの組み合わせである。いくつかの実施形態において、カーゴは、薬物である。いくつかの実施形態において、カーゴは、蛍光部分または蛍光色素である。いくつかの実施形態において、カーゴは、蛍光部分または蛍光色素を含む。いくつかの実施形態において、カーゴは、光増感剤である。いくつかの実施形態において、ペプチドまたはアプタマーは、２つ以上のカーゴ部分に結合されている。２つ以上のカーゴ部分は、同じ部分もしくは異なる部分であり得るか、または同じクラスのカーゴ部分（例えば、２つの薬物）もしくは異なるクラスのカーゴ部分（例えば、１つの薬物および１つの蛍光部分）に由来し得る。
【０２４４】
蛍光色素の一般的なクラスには、これらに限定されないが、ローダミン、ロドール、およびフルオレセインなどのキサンテン、ならびにそれらの誘導体；ビマン；クマリンおよびそれらの誘導体、例えば、ウンベリフェロンおよびアミノメチルクマリン；ダンシルなどの芳香族アミン；スクエアレート色素；ベンゾフラン；蛍光シアニン；カルバゾール；ジシアノメチレンピラン、ポリメチン、オキサベンズアントラン、キサンテン、ピリリウム、カルボスチル、ペリレン、アクリドン、キナクリドン、ルブレン、アントラセン、コロネン、フェナントレセン、ピレン、ブタジエン、スチルベン、ランタニド金属キレート錯体、希土類金属キレート錯体、およびそのような色素の誘導体が含まれる。蛍光色素は、例えば、米国特許第４，４５２，７２０号、米国特許第５，２２７，４８７号、および米国特許第５，５４３，２９５号で考察される。
【０２４５】
いくつかの実施形態において、蛍光部分または色素は、キサンテン、ビマン、クマリン、芳香族アミン、ベンゾフラン、蛍光シアニン、カルバゾール、ジシアノメチレンピラン、ポリメチン、オキサベンズアントラン、ピリリウム、カルボスチル、ペリレン、アクリドン、キナクリドン、ルブレン、アントラセン、コロネン、フェナントレセン、ピレン、ブタジエン、スチルベン、ポルフィリン、フタロシアニン、ランタニド金属キレート錯体、希土類金属キレート錯体、ＦＩＴＣ、Ｃｙ３、ＥＧＦＰ、シアン蛍光タンパク質（ＣＦＰ）、ＥＧＦＰ、５−ＦＡＭ、６−ＦＡＭ、ＦＡＭ、フルオレセイン、ＩＡＥＤＡＮＳ、ＥＤＡＮＳおよびＢＯＤＩＰＹ  ＦＬ、ＴＲＩＴＣ、Ｃｙ５、Ｃｙ３、ＹＦＰ、６−ＦＡＭ、ＬＣ  Ｒｅｄ  ６４０、Ａｌｅｘａ  Ｆｌｕｏｒ  ５４６、フルオレセイン、テトラメチルローダミン、Ｄａｂｃｙｌ、ＢＯＤＩＰＹ  ＦＬ、ＱＳＹ７、ＱＳＹ９、ＱＳＹ２１、およびＢＢＱ−６５０色素からなる群より選択される。
【０２４６】
いくつかの実施形態において、カーゴは、フルオレセイン色素を含む。典型的なフルオレセイン色素には、これらに限定されないが、５−カルボキシフルオレセイン、フルオレセイン−５−イソチオシアネート、５（６）−カルボキシフルオレセイン、５，６−ジカルボキシフルオレセイン、５−（および６）−スルホフルオレセイン、スルホンフルオレセイン、スクシニルフルオレセイン、５−（および６）−カルボキシＳＮＡＲＦ−１、カルボキシフルオレセインスルホネート、カルボキシフルオレセイン双性イオン、カルボキシフルオレセイン第四級アンモニウム、カルボキシフルオレセインホスホネート、カルボキシフルオレセインＧＡＢＡ、カルボキシフルオレセイン−ｃｙｓ−Ｃｙ５、５’（６’）−カルボキシフルオレセイン、フルオレセイングルタチオン、および６−カルボキシフルオレセインが含まれ、他のフルオレセイン色素の例は、例えば、米国特許第６，００８，３７９号、米国特許第５，７５０，４０９号、米国特許第５，０６６，５８０号、および米国特許第４，４３９，３５６号に見出すことができる。カーゴは、例えば、５−（および６）−カルボキシローダミン１１０、テトラメチルローダミン−６−イソチオシアネート、５−カルボキシテトラメチルローダミン、５−カルボキシロドール誘導体、テトラメチルおよびテトラエチルローダミン、ジフェニルジメチルおよびジフェニルジエチルローダミン、ジナフチルローダミン、ローダミン１０１、スルホニルクロリド（ＴＥＸＡＳ  ＲＥＤ（登録商標）の商品名で販売）、および他のローダミン色素などのローダミン色素を含み得る。他のローダミン色素は、例えば、米国特許第６，０８０，８５２号、米国特許第６，０２５，５０５号、米国特許第５，９３６，０８７号、米国特許第５，７５０，４０９号に見出すことができる。いくつかの実施形態において、カーゴ部分は、例えば、Ｃｙ３、Ｃｙ３Ｂ、Ｃｙ３．５、Ｃｙ５、Ｃｙ５．５、Ｃｙ７などのシアニン色素を含む。
【０２４７】
いくつかの実施形態において、カーゴ部分は、フルオロフォアを含む。フルオロフォアは市販されており、任意の既知および／または市販のフルオロフォアをカーゴとして使用することができる。いくつかの実施形態において、フルオロフォアは、緑色蛍光（例えば、４９４ｎｍ／５１９ｎｍなど）、オレンジ色蛍光（例えば、５５４ｎｍ／５７０ｎｍなど）、赤色蛍光（例えば、５９０ｎｍ／６１７ｎｍなど）、または遠赤色蛍光（例えば、６５１ｎｍ／６７２ｎｍなど）励起／発光スペクトルを示す。いくつかの実施形態において、フルオロフォアは、約３５０ｎｍ〜約７７５ｎｍの範囲の励起および発光スペクトルを有するフルオロフォアである。いくつかの実施形態において、励起および発光スペクトルは、約３４６ｎｍ／４４６ｎｍ、約４９４ｎｍ／５１９ｎｍ、約５５４ｎｍ／５７０ｎｍ、約５５５ｎｍ／５７２ｎｍ、約５９０ｎｍ／６１７ｎｍ、約６５１ｎｍ／６７２ｎｍ、約６７９ｎｍ／７０２ｎｍ、または約７４９ｎｍ／７７５ｎｍである。いくつかの実施形態において、フルオロフォアは、ＡｌｅｘａＦｌｕｏｒ  ３、ＡｌｅｘａＦｌｕｏｒ  ５、ＡｌｅｘａＦｌｕｏｒ  ３５０、ＡｌｅｘａＦｌｕｏｒ  ４０５、ＡｌｅｘａＦｌｕｏｒ  ４３０、ＡｌｅｘａＦｌｕｏｒ  ４８８、ＡｌｅｘａＦｌｕｏｒ  ５００、ＡｌｅｘａＦｌｕｏｒ  ５１４、ＡｌｅｘａＦｌｕｏｒ  ５３２、ＡｌｅｘａＦｌｕｏｒ  ５４６、ＡｌｅｘａＦｌｕｏｒ  ５５５、ＡｌｅｘａＦｌｕｏｒ  ５６８、ＡｌｅｘａＦｌｕｏｒ  ５９４、ＡｌｅｘａＦｌｕｏｒ  ６１０、ＡｌｅｘａＦｌｕｏｒ  ６３３、ＡｌｅｘａＦｌｕｏｒ  ６４７、ＡｌｅｘａＦｌｕｏｒ  ６６０、ＡｌｅｘａＦｌｕｏｒ  ６８０、ＡｌｅｘａＦｌｕｏｒ  ７００、およびＡｌｅｘａＦｌｕｏｒ  ７５０（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，Ｉｎｃ．（ＵＳＡ）から入手可能なＭｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｐｒｏｂｅｓ  ＡｌｅｘａＦｌｕｏｒ色素）を含み得るが、これらに限定されない。いくつかの実施形態において、フルオロフォアは、Ｃｙ２、Ｃｙ３、Ｃｙ３Ｂ、Ｃｙ３．５、Ｃｙ５、Ｃｙ５．５およびＣｙ７（ＧＥ  Ｌｉｆｅ  ＳｃｉｅｎｃｅｓまたはＬｕｍｉｐｒｏｂｅｓから入手可能）を含む、Ｃｙ色素を含み得るが、これらに限定されない。いくつかの実施形態において、フルオロフォアは、ＤｙＬｉｇｈｔ  ３５０、ＤｙＬｉｇｈｔ  ４０５、ＤｙＬｉｇｈｔ  ４８８、ＤｙＬｉｇｈｔ  ５５０、ＤｙＬｉｇｈｔ  ５９４、ＤｙＬｉｇｈｔ  ６３３、ＤｙＬｉｇｈｔ  ６５０、ＤｙＬｉｇｈｔ  ６８０、ＤｙＬｉｇｈｔ  ７５０およびＤｙＬｉｇｈｔ  ８００（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ（ＵＳＡ）から入手可能）を含み得るが、これらに限定されない。いくつかの実施形態において、フルオロフォアは、これらに限定されないが、ＦｌｕｏＰｒｏｂｅｓ  ３９０、ＦｌｕｏＰｒｏｂｅｓ  ４８８、ＦｌｕｏＰｒｏｂｅｓ  ５３２、ＦｌｕｏＰｒｏｂｅｓ  ５４７Ｈ、ＦｌｕｏＰｒｏｂｅｓ  ５９４、ＦｌｕｏＰｒｏｂｅｓ  ６４７Ｈ、ＦｌｕｏＰｒｏｂｅｓ  ６８２、ＦｌｕｏＰｒｏｂｅｓ  ７５２、およびＦｌｕｏＰｒｏｂｅｓ  ７８２、ＡＭＣＡ、ＤＥＡＣ（７−ジエチルアミノクマリン−３−カルボン酸）；７−ヒドロキシ−４−メチルクマリン−３；７−ヒドロキシクマリン−３；ＭＣＡ（７−メトキシクマリン−４−酢酸）；７−メトキシクマリン−３；ＡＭＦ（４’−（アミノメチル）フルオレセイン）；５−ＤＴＡＦ（５−（４，６−ジクロロトリアジニル）アミノフルオレセイン）；６−ＤＴＡＦ（６−（４，６−ジクロロトリアジニル）アミノフルオレセイン）；ＦＡＭ；６−ＦＡＭ（６−カルボキシフルオレセイン）、５（６）−ＦＡＭカダベリン；５−ＦＡＭカダベリン；５（６）−ＦＡＭエチレンジアミン；５−ＦＡＭエチレンジアミン；５−ＦＩＴＣ（ＦＩＴＣ異性体Ｉ；フルオレセイン−５−イソチオシアネート）；５−ＦＩＴＣカダベリン；フルオレセイン−５−マレイミド；５−ＩＡＦ（５−ヨードアセトアミドフルオレセイン）；６−ＪＯＥ（６−カルボキシ−４’，５’−ジクロロ−２’，７’−ジメトキシフルオレセイン）；５−ＣＲｌ  ｌ０（５−カルボキシローダミン１１０）；６−ＣＲｌ  ｌ０（６−カルボキシローダミン１１０）；５−ＣＲ６Ｇ（５−カルボキシローダミン６Ｇ）；６−ＣＲ６Ｇ（６−カルボキシローダミン６Ｇ）；５（６）−カルボキシローダミン６Ｇカダベリン；５（６）−カルボキシローダミン６Ｇエチレンジアミン；５−ＲＯＸ（５−カルボキシ−Ｘ−ローダミン）；６−ＲＯＸ（６−カルボキシ−Ｘ−ローダミン）；５−ＴＡＭＲＡ（５−カルボキシテトラメチルローダミン）；６−ＴＡＭＲＡ（６−カルボキシテトラメチルローダミン）；５−ＴＡＭＲＡカダベリン；６−ＴＡＭＲＡカダベリン；５−ＴＡＭＲＡエチレンジアミン；６−ＴＡＭＲＡエチレンジアミン；５−ＴＭＲ  Ｃ６マレイミド；６−ＴＭＲ  Ｃ６マレイミド；ＴＲ  Ｃ２マレイミド；ＴＲカダベリン；５−ＴＲＩＴＣ；Ｇ異性体（テトラメチルローダミン−５−イソチオシアネート）；６−ＴＲＩＴＣ；Ｒ異性体（テトラメチルローダミン−６−イソチオシアネート）；ダンシルカダベリン（５−ジメチルアミノナフタレン−ｌ−（Ｎ−（５−アミノペンチル））スルホンアミド）；ＥＤＡＮＳ  Ｃ２マレイミド；フルオレサミン；ＮＢＤ；およびピロメテン、ならびにそれらの誘導体を含むことができる。
【０２４８】
いくつかの実施形態において、カーゴは、環境に敏感な蛍光色素またはフルオロフォアを含む。環境に敏感な蛍光色素またはフルオロフォアの例には、５，６−カルボキシ−ジエチルロドール（ｐＨに敏感）、メロシアニン（膜電位に敏感）、およびナイルレッドカルボン酸（脂質に敏感）が含まれる。
【０２４９】
いくつかの実施形態において、カーゴは、光増感剤を含む。光増感剤は、光誘発性アブレーション療法に有用な任意の薬剤または化合物である。そのような薬剤は、特定の波長の光に曝露されると、分子酸素と反応して、細胞毒性が高い一重項酸素を生成する。よって、光増感剤を含む本発明のターゲティング分子は、神経を局所的に損傷するために使用され得る。特定の実施形態において、光増感剤は、ポルフィリン、クロリン、または色素である。光増感剤の例としては、ポルフィリン、プロトポルフィリンＩＸ、プルリチン、ベルテポルフィン、ＨＰＰＨ、テモポルフィン、メチレンブルー、フォトフリン、プロトフリン、ヘマトポルフィリン、タラポルフィン、ベンゾポルフィリン誘導体一酸、５−アミノレブリン酸、ルテチウムテキサフィリン、メタロフタロシアニン、メタロナフタロシアニンスルホベンゾ−ポルフィラジン、メタロナフタロシアニン、亜鉛テトラスルホフタロシアニン、バクテリオクロリン、メタロクロリン、塩素誘導体、テトラ（ｍ−ヒドロキシフェニル）クロリン（ｍＴＨＰＣ）、フェオホルビド、ジブロモフルオレセイン（ＤＢＦ）、ＩＲ７００ＤＸ、ナフタロシアニン、およびポルフィリン誘導体が挙げられる。いくつかの実施形態において、光増感剤は、マレイミド媒介性コンジュゲーションを介してヒトニューロンまたは神経ターゲティング分子のＣ末端システイン残基にコンジュゲートされる。好ましくは、本発明の光増感剤は、４００ｎｍ〜７００ｎｍの間の波長を有する光によって活性化される。さらにより好ましくは、本発明の光増感剤は、６２７ｎｍおよび６６０ｎｍで活性化される。最適な光線量は、隣接組織への損傷を最小限に抑えながら最大限の神経殺傷をもたらすように特定することができる。
【０２５０】
ＶＩ．薬物
いくつかの実施形態において、ヒトニューロンまたは神経ターゲティング分子は、薬物をさらに含む。ニューロンまたは神経（またはその構成要素）に作用する全ての薬物は、「薬物」という用語内に包含される。本明細書で与えられる薬物の具体的な例は、例示であり、薬物を本明細書で開示されるターゲティング分子との使用について限定することを意味しない。いくつかの実施形態において、ペプチドまたはアプタマーは、薬物に直接結合されている。いくつかの実施形態において、ペプチドまたはアプタマーは、間接的に（例えば、リンカーを介して）薬物に結合されている。いくつかの実施形態において、２つ以上のペプチドまたはアプタマーは、薬物に直接または間接的に結合されている。いくつかの実施形態において、ヒトニューロンまたは神経ターゲティング分子は、カーゴをさらに含む。いくつかの実施形態において、ヒトニューロンまたは神経ターゲティング分子は、
2020530034.tif 000221
からなる群より選択されるペプチド配列を含む。いくつかの実施形態において、ターゲティング分子は、
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からなる群より選択されるペプチドを含む。いくつかの実施形態において、ターゲティング分子は、
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からなる群より選択されるペプチドを含む。いくつかの実施形態において、ターゲティング分子は、ペプチド
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を含む。いくつかの実施形態において、ターゲティング分子は、ペプチド
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を含む。いくつかの実施形態において、ターゲティング分子は、ペプチド
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を含む。いくつかの実施形態において、ターゲティング分子は、ペプチド
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を含む。いくつかの実施形態において、ターゲティング分子は、ペプチド
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を含む。いくつかの実施形態において、ターゲティング分子は、ペプチド
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を含む。いくつかの実施形態において、ターゲティング分子は、ペプチド
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を含む。いくつかの実施形態において、ターゲティング分子は、ペプチド
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を含む。いくつかの実施形態において、ターゲティング分子は、ペプチド
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を含む。いくつかの実施形態において、ターゲティング分子は、ペプチド
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を含む。いくつかの実施形態において、ターゲティング分子は、ペプチド
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を含む。いくつかの実施形態において、ターゲティング分子は、ペプチド
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を含む。いくつかの実施形態において、ターゲティング分子は、ペプチド
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を含む。いくつかの実施形態において、ターゲティング分子は、ペプチド
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を含む。いくつかの実施形態において、ターゲティング分子は、ペプチド
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を含む。いくつかの実施形態において、ターゲティング分子は、ペプチド
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を含む。いくつかの実施形態において、ターゲティング分子は、ペプチド
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を含む。いくつかの実施形態において、ターゲティング分子は、ペプチド
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を含む。いくつかの実施形態において、ターゲティング分子は、ペプチド
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を含む。いくつかの実施形態において、ターゲティング分子は、ペプチド
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を含む。いくつかの実施形態において、ターゲティング分子は、ペプチド
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を含む。いくつかの実施形態において、ターゲティング分子は、ペプチド
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を含む。いくつかの実施形態において、ターゲティング分子は、ペプチド
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を含む。いくつかの実施形態において、ターゲティング分子は、ペプチド
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を含む。いくつかの実施形態において、ターゲティング分子は、ペプチド
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を含む。
【０２５１】
いくつかの実施形態において、薬物は、細胞死（アポトーシスまたは壊死）を誘発する薬物、細胞死（アポトーシスまたは壊死）を阻害する薬物、ニューロンもしくは神経シグナル（すなわち、電気化学インパルス）の伝達を阻害する薬物、神経伝達物質の放出を阻害する薬物、ＧＡＢＡ受容体の活性をアゴナイズする薬物、ニューロンの再分極を部分的もしくは完全に阻害する薬物、イオンチャネルの伝導を妨害する薬物、またはそれらの組み合わせから選択される。
【０２５２】
いくつかの実施形態において、薬物は、抗ヒスタミン剤、ＧＡＢＡ受容体調節剤、神経伝達物質再取り込み阻害剤、局所麻酔剤、抗コリン剤、ナトリウムチャネル遮断剤、カルシウムチャネル遮断剤、チロトロピン放出ホルモン、γ−セクレターゼ阻害剤、ＡＭＰＡ受容体アゴニストもしくはアンタゴニスト、ＮＭＤＡ受容体アゴニストもしくはアンタゴニスト、ｍＧｌｕ受容体アゴニストもしくはアンタゴニスト、成長因子、制吐剤、コルチコステロイド、細胞毒性剤、抗酸化剤、鉄キレート剤、ミトコンドリア調節剤、サーチュイン調節剤、一酸化窒素（ＮＯ）および／もしくは一酸化窒素シンターゼ（ＮＯＳ）調節剤、カリウムチャネルアゴニストもしくはアンタゴニスト、プリン受容体アゴニストもしくはアンタゴニスト、またはそれらの組み合わせである。
【０２５３】
いくつかの実施形態において、薬物は、メクリジン、ジフェンヒドラミン、ジメンヒドリナート、ロラタジン、クエチアピン、メピラミン、ピペロキサン、アンタゾリン、カルビノキサミン、ドキシラミン、クレマスチン、フェニラミン、クロルフェナミン、クロルフェニラミン、デキスクロルフェニラミン、ブロムフェニラミン、トリプロリジン、シクリジン、クロルシクリジン、ヒドロキシジン、プロメタジン、アリメマジン、トリメプラジン、シプロヘプタジン、アザタジン、ケトチフェン、オキサトミド、塩酸メクリジン、塩酸プロメタジン、シンナリジン、パモ酸ヒドロキシジン、二塩酸ベタヒスチン、アルプラゾラム、ブロマゼパム、ブロチゾラム、クロルジアゼポキシド、クロナゼパム、クロルアゼペート、ジアゼパム、エスタゾラム、フルニトラゼパム、フルラゼパム、ロプラゾラム、ロラゼパム、ロルメタゼパム、イダゾラム、ニメタゼパム、ニトラゼパム、オキサゼパム、プラゼパム、テマゼパム、トリアゾラム、クロナゼパム、ジアゼパム、ロラゼパム、フロセミド、ブメタニド、エタクリン酸、ガバペンチン、プレガバリン、ムシモール、バクロフェン、アミトリプチリン、ノルトリプチリン、トリミプラミン、フルオキセチン、パロキセチン、セルトラリン、グリコピロレート、ホマトロピン、スコポラミン、アトロピン、ベンゾカイン、カルチカイン、シンコカイン、シクロメチカイン、リドカイン、プリロカイン、プロプキシカイン、プロパラカイン、テトラカイン、トカイニド、トリメカイン、カルバマゼピン、オキシカルバゼピン、フェニテイン、バルプロ酸、バルプロ酸ナトリウム、シンナリジン、フルナリジン、ニモジピン、チロトロピン放出ホルモン、アミホスチン（ＷＲ−２７２１、またはＥＴＨＹＯＬ（登録商標）としても知られる）、カルバメート化合物（例えば、２−フェニル−１，２−エタンジオールモノカルボメートおよびジカルバメート）、ＬＹ４５０１３９（ヒドロキシバレリルモノベンゾカプロラクタム）、Ｌ６８５４５８（１Ｓ−ベンジル−４Ｒ［１−［１−Ｓ−カルバモイル−２−フェネチルカルバモイル）−１Ｓ−３−メチルブチルカルバモイル］−２Ｒ−ヒドロキシ−５−フェニルペンチル｝カルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル）、ＬＹ４１１５７５（Ｎ２−［（２Ｓ）−２−（３，５−ジフルオロフェニル）−２−ヒドロキシエタノイル］−Ｎ１［（７Ｓ）−５−メチル−６−オキソ−６，７−ジヒドロ−５Ｈ−ジベンゾ［ｂｉｄ］アゼピン−７イル］−Ｌ−アラニンアミド）、ＭＫ−０７５２、タレンフルルビル、ＢＭＳ−２９９８９７（２−［（１Ｒ）−１−［［（４−クロロフェニル）スルホン］（２，５−ジフルオロフェニル）アミノ］エチル］−５−フルオロベンゼンプロパン酸、ＣＮＱＸ（６−シアノ−７−ニトロキノキサリン−２，３−ジオン）、ＮＢＱＸ（２，３−ジヒドロキシ−６−ニトロ−７−スルファモイル−ベンゾ［ｆ］キノキサリン−２，３−ジオン）、ＤＮＱＸ（６，７−ジニトロキノキサリン−２，３−ジオン）、キヌレン酸、２，３−ジヒドロキシ−６−ニトロ−７−スルファモイルベンゾ−［ｆ］キノキサリン、１−アミノアダマンタン、デキストロメトルファン、デキストロルファン、イボガイン、ケタミン、亜酸化窒素、フェンシクリジン、リルゾール、チレタミン、メマンチン、ジゾシルピン、アプチガネル、レマシミド、７−クロロキヌレネート、ＤＣＫＡ（５，７−ジクロロキヌレン酸）、キヌレン酸、１−アミノシクロプロパンカルボン酸（ＡＣＰＣ）、ＡＰ７（２−アミノ−７−ホスホノヘプタン酸）、ＡＰＶ（Ｒ−２−アミノ−５−ホスホノペンタノエート）、ＣＰＰｅｎｅ（３−［（Ｒ）−２−カルボキシピペラジン−４−イル］−プロプ−２−エニル−１−ホスホン酸）、（＋）−（１Ｓ，２Ｓ）−１−（４−ヒドロキシ−フェニル）−２−（４−ヒドロキシ−４−フェニルピペリジノ）−１−プロ−パノール、（１Ｓ，２Ｓ）−１−（４−ヒドロキシ−３−メトキシフェニル）−２−（４−ヒドロキシ−４−フェニルピペリジノ）−１−プロパノール、（３Ｒ，４Ｓ）−３−（４−（４−フルオロフェニル）−４−ヒドロキシピぺリジン−１−イル−）−クロマン−４、７−ジオール、（ＩＲ＊，２Ｒ＊）−１−（４−ヒドロキシ−３−メミルフェニル）−２−（４−（４−フルオロ−フェニル）−４−ヒドロキシピペリジン−１−イル）−プロパン−１−オール−メシレート）、ＬＹ３８９７９５（（−）−２−チア−４−アミノビシクロ−ヘキサン−４，６−ジカルボキシレート）、ＬＹ３７９２６８（（−）−２−オキサ−４−アミノビシクロ−ヘキサン−４，６−ジカルボキシレート）、ＬＹ３５４７４０（（＋）−２−アミノビシクロ−ヘキサン−２，６ジカルボキシレート）、ＤＣＧ−ＩＶ（（２Ｓ，２’Ｒ，３’Ｒ）−２−（２’，３１−ジカルボキシシクロプロピル）グリシン）、２Ｒ，４Ｒ−ＡＰＤＣ（２Ｒ，４Ｒ−４−アミノピロリジン−２，４−ジカルボキシレート）、（Ｓ）−３Ｃ４ＨＰＧ（（Ｓ）−３−カルボキシ−４−ヒドロキシフェニルグリシン）、（Ｓ）−４Ｃ３ＨＰＧ（（Ｓ）−４−カルボキシ−３−ヒドロキシフェニルグリシン）、Ｌ−ＣＣＧ−Ｉ（（２Ｓ，１’Ｓ，２’Ｓ）−２−（カルボキシシクロプロピル）グリシン）、ＡＣＰＴ−１（（１Ｓ，３Ｒ，４Ｓ）−１−アミノシクロペンタン−１，３，４−トリカルボン酸）、Ｌ−ＡＰ４（Ｌ−（＋）−２−アミノ−４−ホスホノ酪酸）、（Ｓ）−３，４−ＤＣＰＧ（（Ｓ）−３，４−ジカルボキシフェニルグリシン）、（ＲＳ）−３，４−ＤＣＰＧ（（ＲＳ）−３，４−ジカルボキシフェニルグリシン）、（ＲＳ）−４−ホスホノフェニルグリシン（（ＲＳ）ＰＰＧ）、ＡＭＮ０８２（二塩酸Ｎ’−ビス（ジフェニルメチル）−１，２−エタンジアミン）、ＤＣＧ−ＩＶ（（２Ｓ，２’Ｒ，３’Ｒ）−２−（２’，３’−ジカルボキシシクロプロピル）グリシン）、ＡＭＮ０８２、脳由来神経栄養因子（ＢＤＮＦ）、毛様体神経栄養因子（ＣＮＴＦ）、グリア細胞株由来神経栄養因子（ＧＤＮＦ）、ニューロトロフィン−３、ニューロトロフィン−４、線維芽細胞成長因子（ＦＧＦ）受容体、インスリン様成長因子（ＩＧＦ）、アミノグリコシド抗生物質（例えば、ゲンタマイシンおよびアミカシン）、マクロライド抗生物質（例えば、エリスロマイシン）、グリコペプチド抗生物質（例えば、バンコマイシン）、サリチル酸、ニコチン、エブルナメニン−１４−カルボン酸エチルエステル、シパトリジン（２−（４−メチルピペラジン−１−イル）−５−（２，３，５−トリクロロフェニル）−ピリミジン−４−アミン）、アミロライド（塩酸３，５−ジアミノ−Ｎ−（アミノイミノメチル）−６−クロロピラジンカルボキサミド）、カルバマゼピン（５Ｈ−ジベンゾ［ｂ，ｆ］アゼピン−５−カルボキサミド）、ＴＴＸ（オクタヒドロ−１２−（ヒドロキシメチル）−２−イミノ−５，９：７，１０ａ−ジメタノ−１０ａＨ−［１，３］ジオキソシノ［６，５−ｄ］ピリミジン−４，７，１０，１１，１２−ペントール）、ＲＳ１００６４２（塩酸１−（２，６−ジメチル−フェノキシ）−２−エチルアミノプロパン）、メキシレチン（（塩酸１−（２，６−ジメチルフェノキシ）−２−アミノプロパン））、ＱＸ−３１４（臭化Ｎ−（２，６−ジメチルフェニルカルバモイルメチル）トリエチルアンモニウム）、フェニトイン（５，５−ジフェニルイミダゾリジン−２，４−ジオン）、ラモトリギン（６−（２，３−ジクロロフェニル）−１，２，４−トリアジン−３，５−ジアミン）、４０３０Ｗ９２（２，４−ジアミノ−５−（２，３−ジクロロフェニル）−６−フルオロメチルピリミジン）、ＢＷ１００３Ｃ８７（５−（２，３，５−トリクロロフェニル）ピリミジン−２，４−１．１エタンスルホネート）、ＱＸ−２２２（２−［（２，６−ジメチルフェニル）アミノ］−Ｎ，Ｎ，Ｎ−トリメチル−２−オキソエタニミニウムクロリド）、アンブロキソール（塩酸ｔｒａｎｓ−４−［［（２−アミノ−３，５−ジブロモフェニル）メチル］アミノ］シクロヘキサノール）、Ｒ５６８６５（Ｎ−［１−（４−（４−フルオロフェノキシ）ブチル］−４−ピペリジニル−Ｎ−メチル−２−ベンゾ−チアゾラミン）、ルベルゾール、アジマリン（（１７Ｒ，２１α）−アジマラン−１７，２１−ジオール）、プロカインアミド（塩酸４−アミノ−Ｎ−（２−ジエチルアミノエチルベンズアミド）、フレカイニド、リルゾレア、トリアミシノロンアクテノイド、デキサメタゾン、プロメタジン、プロクロルペラジン、トリメトベンズアミド、トリエチルペラジン、ドラセトロン、グラニセトロン、オンダンセトロン、トロピセトロン、およびパロノセトロン、ドロペリドール、メクリジン、ペルフェナジン、チエチルペラジン、ドンペリドン、プロペリドール、ハロペリドール、クロルプロマジン、プロメタジン、プロクロルペラジン、メトクロプラミド、ドロナビノール、ナビロン、サティベックス、スコポラミン、デキサメタゾン、トリメトベンザミン、エメトロール、プロポフォール、ムシモール、アクチリジンカルボキサミド、アクチノマイシン、１７−Ｎ−アリルアミノ−１７−デメトキシゲルダナマイシン、アムサクリン、アミノプテリン、アントラサイクリン、抗新生物剤、アンチネオプラストン、５−アザシチジン、アザチオプリン、ＢＬ２２、ベンダムスチン、ビリコダール、ブレオマイシン、ボルテゾミブ、ブリオスタチン、ブスルファン、カリクリン、カンプトテシン、カペシタビン、カルボプラチン、クロラムブシル、シスプラチン、クラドリビン、クロファラビン、シタラビン、ダカルバジン、ダサチニブ、ダウノルビシン、デシタビン、ジクロロ酢酸、ジスコデルモリド、ドセタキセル、ドキソルビシン、エピルビシン、エポ���ロン、エリブリン、エストラムスチン、エトポシド、エキサテカン、エクシスリンド、フェルギノール、フロクスウリジン、フルダラビン、フルオロウラシル、ホスフェストロール、フォテムスチン、ゲムシタビン、ヒドロキシ尿素、ＩＴ−１０１、イダルビシン、イホスファミド、イミキモド、イリノテカン、イロフルベン、イキサベピロン、ラニキダル、ラパチニブ、レナリドマイド、ロムスチン、ルルトテカン、マホスファミド、マソプロコール、メクロレタミン、メルファラン、メルカプトプリン、マイトマイシン、ミトタン、ミトキサントロン、ネララビン、ニロチニブ、オブリメルセン、オキサリプラチン、ＰＡＣ−Ｉ、メトトレキサート（ＲＨＥＵＭＡＴＲＥＸ（登録商標）、アメトプテリン）、シクロホスファミド（ＣＹＴＯＸＡＮ（登録商標））サリドマイド（ＴＨＡＬＩＤ  ＯＭＩＤ（登録商標））、パクリタキセル、ペメトレキセド、ペントスタチン、ピポブロマン、ピキサントロン、プリカマイシン、プロカルバジン、プロテアソーム阻害剤（例えば、ボルテゾミブ）、ラルチトレキセド、レベッカマイシン、ルビテカン、ＳＮ−３８、サリノスポラミドＡ、サトラプラチン、ストレプトゾトシン、スワインソニン、タリキダール、タキサン、テガフールウラシル、テモゾロミド、
テストラクトン、チオＴＥＰＡ、チオグアニン、トポテカン、トラベクテジン、トレチノイン、四硝酸トリプラチン、トリス（２−クロロエチル）アンメ、トロキサシタビン、ウラシルマスタード、バルルビシン、ビンブラスチン、ビンクリスチン、ビノレルビン、ボリノスタット、ゾスキダル、Ｎ−アセチルシステイン、ビタミンＥ、ビタミンＣ、ビタミンＡ、ルテイン、セレングルタチオン、メラトニン、ポリフェノール、カロテノイド、コエンザイムＱ−ＩＯ、エブセレン（２−フェニル−１，２−ベンゾイソセレナゾール−３（２Ｈ）−オン（ＰＺ５１またはＤＲ３３０５とも呼ばれる）、Ｌ−メチオニン、アズレニルニトロン、Ｌ−（＋）−エルゴチオネイン、ＣＡＰＥ（カフェ酸フェネチルエステル）、ジメチルチオ尿素、ジメチルスルホキシド、ジスフェントンナトリウム、ペントキシフィリン、ＭＣＩ−１８６、アンブロキソール、Ｕ−８３８３６Ｅ、ＭｉｔｏＱ（ミトキノンメシレート）、イデベノン（２−（１０−ヒドロキシデシル）−５，６−ジメトキシ−３−メチル−シクロヘキサ−２，５−ジエン−１，４−ジオン）、デスフェリオキサミン、ヒドロキシベンジルエチレンジアミン、フラーレノール−１、ピロリジンジチオカルバメート、アセチルカルニチン、リポ酸、スチルベン、カルコン、フラボン、イソフラボン、フラバノン、アントシアニジン、カテキン、イソニコチンアミド、ジピリダモール、ＺＭ  ３３６３７２、カンプトテシン、クメストロール、ノルジヒドログアイアレチン酸、エスクレチン、ＳＲＴ−１７２０、ＳＲＴ−１４６０、ＳＲＴ−２１８３、アミノグアニジン、ｐ−トルエン硫酸ｌ−アミノ−２−ヒドロキシグアニジン、ＧＥＤ、メシル酸ブロモクリプチン、デキサメタゾン、ＳＤＭＡ、ＡＤＭＡ、Ｌ−ＮＭＭＡ、Ｌ−ＮＭＥＡ、Ｄ−ＭＭＡ、Ｌ−ＮＩＬ、Ｌ−ＮＮＡ、Ｌ−ＮＰＡ、Ｌ−ＮＡＭＥ、Ｌ−ＶＮＩＯ、塩化ジフェニレンヨードニウム、２−エチル−２−チオプソイドウレア、ハロペリドール、Ｌ−ＮＩＯ、ＭＥＧ、ＳＭＴ、ＳＭＴＣ、７−Ｎｉ、ｎＮＯＳ阻害剤、１，３−ＰＢＩＴＵ、Ｌ−チオシトルリン、ＴＲＩＭ、ＭＴＲ−１０５、ＢＢＳ−Ｉ、ＢＢＳ−２、ＯＮＯ−１７１４、ＧＷ２７３６２９、ＧＷ２７４１５０、ＰＰＡ２５０、ＡＲ−Ｒ１７４７７、ＡＲ−Ｒ１８５１２、スピロキナゾロン、１４００Ｗ、Ｓ−ＮＣ、ＮＴＧ、ＳＮＰ、タプシガルギン、ＶＥＧＦ、ブラジキニン、ＡＴＰ、スフィンゴシン−１−リン酸、エストロゲン、アンジオポエチン、アセチルコリン、ＳＩＮ−Ｉ、ＧＥＡ３１６２、ＧＥＡ、ＧＥＡ５０２４、ＧＥＡ５５３８、ＳＮＡＰ、モルシドミン、ＣＮＯ−４、ＣＮＯ−５、ＤＥＡ／ＮＯ、ＩＰＡ／ＮＯ、ＳＰＥＲ／ＮＯ、ＳＵＬＦＩ／ＮＯ、ＯＸＩ／ＮＯ、ＤＥＴＡ／ＮＯ、ニコランジル、ミノキシジル、レブクロマカリム、レマカリム、クロマカリム、Ｌ−７３５，３３４、レチガビン、フルピルチン、ＢＭＳ−２０４３５２、ＤＭＰ−５４３、リノピルジン、ＸＥ９９１、４−ＡＰ、３，４−ＤＡＰ、Ｅ−４０３１、ＤＩＤＳ、Ｗａｙ  １２３，３９８、ＣＧＳ−１２０６６  Ａ、ドフェチリド、ソタロール、アパミン、アミオダロン、アジミライド、ブレチリウム、クロフィリウム、テディサミル、イブチリド、セマチリド、ニフェカラント、タムルストキシン、ＡＴＰ、ＡＤＰ、ＵＴＰ、ＵＤＰ、ＵＤＰ−グルコース、アデノシン、２−ＭＥＳＡＴＰ、２−ＭＥＳＡＤＰ、ＡＢＭＥＡＴＰ、ＤＡＴＰＡＳ、ＡＴＰｒＳ、ＢＺ−ＡＴＰ、ＭＲＳ２７０３、ＤＥＮＵＦＯＳＯＬ  ＴＥＴＲＡＳＯＤＩＵＭ、ＭＲＳ２３６５、ＭＲＳ２６９０、ＰＳＢ０４７４、Ａ−３１７４９１、ＲＯ−３（Ｒｏｃｈｅ）、ＳＵＲＡＭＩＮ、ＰＰＡＤＳ、ＰＰＮＤＳ、ＤＩＤＳ、ピリドキサール−５−リン酸、５−（３−ブロモフェニル）−１，３−ジヒドロ−２Ｈ−ベンゾフロ−［３，２−ｅ］−１，４−ジアゼピン−２−オン、シバクロンブルー、バシレンブルー、イベルメクチン、Ａ−４３８０７９、Ａ−７４０００３、ＮＦ０２３、ＮＦ４４９、ＮＦＩ１０、ＮＦ１５７、ＭＲＳ２１７９、ＮＦ２７９、ＭＲＳ２２１１、ＭＲＳ２２７９、ＭＲＳ２５００四ナトリウム塩、ＴＮＰ−ＡＴＰ、テトラメチルピラジン、Ｉｐ５Ｉ、ｊＱγ−カルボキシメチレンＡＴＰ、βγ−クロロホスホメチレンＡＴＰ、ＫＮ−６２、スピノルフィン、ミノサイクリン、ＳＢ−２０３５８０（４−（４−フルオロフェニル）−２−（４−メチルスルフィニルフェニル）−５−（４−ピリジル）ＩＨ−イミダゾール）、ＰＤ１６９３１６（４−（４−フルオロフェニル）−２−（４−ニトロフェニル）−５−（４−ピリジル）−１Ｈ−イミダゾール）、ＳＢ２０２１９０（４−（４−フルオロフェニル）−２−（４−ヒドロキシフェニル）−５−（４−ピリジル）１Ｈ−イミダゾール）、ＲＷＪ６７６５７（４−［４−（４−フルオロフェニル）−１−（３−フェニルプロピル）−５−（４−ピリジニル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル］−３−ブチン−１−オール）、ＳＢ２２００２５（５−（２−アミノ−４−ピリミジニル）−４−（４−フルオロフェニル）−１−（４−ピペリジンイル）イミダゾール）、Ｄ−ＪＮＫＩ−Ｉ（（Ｄ）−ｈＪＩＰｉ７５−ｉ５７−ＤＰｒｏ−ＤＰｒｏ−（Ｄ）−ＨＩＶ−Ｔ  ＡＴ５７−４８）、ＡＭ−１１１（Ａｕｒｉｓ）、ＳＰ６００１２５（アントラ［１，９−ｃｄ］ピラゾール−６（２Ｈ）−オン）、ＪＮＫ阻害剤Ｉ（（Ｌ）−ＨＩＶ−ＴＡＴ４８−５７−ＰＰ−ＪＢＤ２０）、ＪＮＫ阻害剤ＩＩＩ（（Ｌ）−ＨＩＶ−ＴＡＴ４７−５７−ｇａｂａ−ｃ−Ｊｕｎδ３３−５７）、ＡＳ６０１２４５（１，３−ベンゾチアゾール−２−イル（２−［［２−（３−ピリジニル）エチル］アミノ］−４ピリミジニル）アセトニトリル）、ＪＮＫ阻害剤ＶＩ（Ｈ２Ｎ−ＲＰＫＲＰＴＴＬＮＬＦ−ＮＨ２）、ＪＮＫ阻害剤ＶＩＩＩ（Ｎ−（４−アミノ−５−シアノ−６−エトキシピリジン−２−イル）−２−（２，５−ジメトキシフェニル）アセトアミド）、ＪＮＫ阻害剤ＩＸ（Ｎ−（３−シアノ−４，５，６，７−テトラヒドロ−１−ベンゾチエン−２−イル）−１−ナフトアミド）、ジクマロール（３，３’−メチレンビス（４−ヒドロキシクマリン））、ＳＣ−２３６（４−［５−（４−クロロフェニル）−３−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イルジベンゼン−スルホンアミド）、ＣＥＰ−１３４７（Ｃｅｐｈａｌｏｎ）、ＣＥＰ−１１００４（Ｃｅｐｈａｌｏｎ）、Ｂｃｌ−２ポリペプチドの少なくとも一部分を含む人工タンパク質、組換えＦＮＫ、Ｖ５（Ｂａｘ阻害剤ペプチドＶ５としても知られている）、Ｂａｘチャネル遮断剤（（±）−１−（３，６−ジブロモカルバゾール−９−イル）−３−ピペラジン−１−イル−プロパン−２−オール）、Ｂａｘ阻害ペプチドＰ５（Ｂａｘ阻害ペプチドＰ５としても知られている）、Ｋｐ７−６、ＦＡＩＭ（Ｓ）（Ｆａｓアポトーシス阻害分子−短）、ＦＡＩＭ（Ｌ）（Ｆａｓアポトーシス阻害分子−長）、Ｆａｓ：Ｆｃ、ＦＡＰ−Ｉ、ＮＯＫ２、Ｆ２０５１、Ｆ１９２６、Ｆ２９２８、ＺＢ４、Ｆａｓ  Ｍ３  ｍＡｂ、ＥＧＦ、７４０Ｙ−Ｐ、
2020530034.tif 000249
ＰＩ  ３−キナーゼアクチベーター（Ｓａｎｔａ  Ｃｒｕｚ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｉｎｃ．）、Ｐａｍ３Ｃｙｓ（（Ｓ）−（２，３−ビス（パルミトイルオキシ）−（２ＲＳ）−プロピル）−Ｎ−パルミトイル−（Ｒ）−Ｃｙｓ−（Ｓ）−Ｓｅｒ（Ｓ）−Ｌｙｓ４−ＯＨ、三塩酸塩）、Ａｃｔｌ（ＮＦ−ｋＢアクチベーター１）、抗ＤｃＢ抗体、アセチル−１１−ケト−ｂ−ボスウェル酸、アンドログラフォライド、カフェ酸フェネチルエステル（ＣＡＰＥ）、グリオトキシン、イソヘレニン、ＮＥＭＯ結合ドメイン結合ペプチド
2020530034.tif 000250
ＮＦ−ｋＢ活性化阻害剤（６−アミノ−４−（４−フェノキシフェニルエチルアミノ）キナゾリン）、ＮＦ−ｋＢ活性化阻害剤ＩＩ（４−メチル−Ｎ１−（３−フェニルプロピル）ベンゼン−１，２−ジアミン）、ＮＦ−ｋＢ活性化阻害剤ＩＩＩ（３−クロロ−４−ニトロ−Ｎ−（５−ニトロ−２−チアゾリル）−ベンズアミド）、ＮＦ−ｋＢ活性化阻害剤ＩＶ（（Ｅ）−２−フルオロ−４’−メトキシスチルベン）、ＮＦ−ｋＢ活性化阻害剤Ｖ（５−ヒドロキシ−（２，６−ジイソプロピルフェニル）−ＩＨ−イソインドール−１，３−ジオン）、
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オリドニン、パルテノリド、ＰＰＭ−１８（２−ベンゾイルアミノ−１，４−ナフトキノン）、Ｒｏｌ０６−９９２０、スルファサラジン、ＴＩＲＡＰ阻害剤ペプチド
2020530034.tif 000252
ウィザフェリンＡ、ウォゴニン、ＢＡＹ  １１−７０８２（（Ｅ）３−［（４−メチルフェニル）スルホニル］−２−プロペンニトリル）、ＢＡＹ１１−７０８５（（Ｅ）３−［（４−ｔ−ブチルフェニル）スルホニル］−２−プロペンニトリル）、（Ｅ）−カプサイシン、金チオリンゴ酸塩（ＡＴＭまたはＡｕＴＭ）、エボジアミン、ハイポエストキシド、ＩＫＫ阻害剤ＩＩＩ（ＢＭＳ−３４５５４１）、ＩＫＫ阻害剤ＶＩＩ、ＩＫＫ阻害剤Ｘ、ＩＫＫ阻害剤ＩＩ、ＩＫＫ−２阻害剤ＩＶ、ＩＫＫ−２阻害剤Ｖ、ＩＫＫ−２阻害剤ＶＩ、ＩＫＫ−２阻害剤（ＳＣ−５１４）、ＩｋＢキナーゼ阻害剤ペプチド、ＩＫＫ−３阻害剤ＩＸ、ＡＲＲＹ−７９７（Ａｒｒａｙ  ＢｉｏＰｈａｒｍａ）、ＳＢ−２２００２５（５−（２−アミノ−４−ピリミジニル）−４−（４−フルオロフェニル）−１−（４−ピペリジンイル）イミダゾール）、ＳＢ−２３９０６３（トランス−４−［４−（４−フルオロフェニル）−５−（２−メトキシ−４−ピリミジニル）−１Ｈ−イミダゾール−１−イル］シクロヘキサノール）、ＳＢ−２０２１９０（４−（４−フルオロフェニル）−２−（４−ヒドロキシフェニル）−５−（４−ピリジル）１Ｈ−イミダゾール）、ＪＸ−４０１（−［２−メトキシ−４−（メチルチオ）ベンゾイル］−４−（フェニルメチル）ピペリジン）、ＰＤ−１６９３１６（４−（４−フルオロフェニル）−２−（４−ニトロフェニル）−５−（４−ピリジル）−１Ｈ−イミダゾール）、ＳＫＦ−８６００２（二塩酸６−（４−フルオロフェニル）−２，３−ジヒドロ−５−（４−ピリジニル）イミダゾ［２，１−ｂ］チアゾール）、ＳＢ−２００６４６（Ｎ−（１−メチル−１Ｈ−インドール−５−イル）−Ｎ’−３−ピリジニル尿素）、ＣＭＰＤ−Ｉ（２’−フルオロ−Ｎ−（４−ヒドロキシフェニル）−［１，１’−ビフェニル］−４−ブタンアミド）、ＥＯ−１４２８（（２−メチルフェニル）−［４−［（２−アミノ−４−ブロモフェニル）アミノ］−２−クロロフェニル］メタノン）、ＳＢ−２５３０８０（４−［５−（４−フルオロフェニル）−２−［４−（メチルスルホニル）フェニル］−１Ｈ−イミダゾール−４−イル］ピリジン）、ＳＤ−１６９（１Ｈ−インドール−５−カルボキサミド）、ＳＢ−２０３５８０（４−（４−フルオロフェニル）−２−（４−メチルスルフィニルフェニル）−５−（４−ピリジル）１Ｈ−イミダゾール）、ＴＺＰ−１０１（Ｔｒａｎｚｙｍｅ  Ｐｈａｒｍａ）、ＴＺＰ−１０２（Ｔｒａｎｚｙｍｅ  Ｐｈａｒｍａ）、ＧＨＲＰ−６（成長ホルモン放出ペプチド−６）、ＧＨＲＰ−２（成長ホルモン放出ペプチド−２）、ＥＸ−１３１４（Ｅｌｉｘｉｒ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ）、ＭＫ−６７７（Ｍｅｒｃｋ）、Ｌ−６９２，４２９（ブタンアミド、３−アミノ−３−メチル−Ｎ−（２，３，４，５−テトラヒドロ−２−オキソ−１−（（２’−（１Ｈ−テトラゾール−５−イル）（１，１’−ビフェニル）−４−イル）メチル）−１Ｈ−１−ベンズアゼピン−３−イル）−、（Ｒ）−）、ＥＰ１５７２（Ａｉｂ−ＤＴｒｐ−ＤｇＴｒｐ−ＣＨＯ）、ジルチアゼム、ジルチアゼムの代謝産物、ＢＲＥ（脳および生殖器官に発現するタンパク質）、ベラパミル、ニモ��ピン、ジルチアゼム、オメガコノトキシン、ＧＶＩＡ、アムロジピン、フェロジピン、ラシジピン、ミベフラジル、ＮＰＰＢ（５−ニトロ−２−（３−フェニルプロピルアミノ）安息香酸）、フルナリジン、エリスロポエチン、ピぺリン、ヘミン、ブラジリン、ｚ−ＶＡＤ−ＦＭＫ（ベンジルオキシカルボニル−Ｖａｌ−Ａｌａ−Ａｓｐ（ＯＭｅ）−フルオロメチルケトン）、ｚ−ＬＥＨＤ−ＦＭＫ（ベンジルオキシカルボニル−Ｌｅｕ−Ｇｌｕ（ＯＭｅ）−Ｈｉｓ−Ａｓｐ（ＯＭｅ）−フルオロメチルケトン）、Ｂ−Ｄ−ＦＭＫ（ｂｏｃ−アスパルチル（Ｏｍｅ）−フルオロメチルケトン）、Ａｃ−ＬＥＨＤ−ＣＨＯ（Ｎ−アセチル−Ｌｅｕ−Ｇｌｕ−Ｈｉｓ−Ａｓｐ−ＣＨＯ）、Ａｃ−ＩＥＴＤ−ＣＨＯ（Ｎ−アセチル−Ｉｌｅ−Ｇｌｕ−Ｔｈｒ−Ａｓｐ−ＣＨＯ）、ｚ−ＩＥＴＤ−ＦＭＫ（ベンジルオキシカルボニル−Ｉｌｅ−Ｇｌｕ（ＯＭｅ）−Ｔｈｒ−Ａｓｐ（ＯＭｅ）−フルオロメチルケトン）、ＦＡＭ−ＬＥＨＤ−ＦＭＫ（ベンジルオキシカルボニルＬｅｕ−Ｇｌｕ−Ｈｉｓ−Ａｓｐ−フルオロメチルケトン）、ＦＡＭ−ＬＥＴＤ−ＦＭＫ（ベンジルオキシカルボニルＬｅｕ−Ｇｌｕ−Ｔｈｒ−Ａｓｐ−フルオロメチルケトン）、Ｑ−ＶＤ−ＯＰＨ（キノリン−Ｖａｌ−ＡＳｐ−ＣＨ２−Ｏ−Ｐｈ）、ＸＩＡＰ、ｃＩＡＰ−１、ｃＩＡＰ−２、ＭＬ−ＩＡＰ、ＩＬＰ−２、ＮＡＩＰ、サバイビン、ブルース、ＩＡＰＬ−３、フォルチリン、ロイペプチン、ＰＤ−１５０６０６（３−（４−ヨードフェニル）−２−メルカプト−（Ｚ）−２−プロペン酸）、ＭＤＬ−２８１７０（Ｚ−Ｖａｌ−Ｐｈｅ−ＣＨＯ）、カルペプチン、アセチルカルパスタチン、ＭＧ  １３２（Ｎ−［（フェニルメトキシ）カルボニル］−Ｌ−ロイシル−Ｎ−［（１Ｓ）−１−ホルミル−３−メチルブチル］−Ｌ−ロイシンアミド）、ＭＹＯＤＵＲ、ＢＮ  ８２２７０（Ｉｐｓｅｎ）、ＢＮ  ２２０４（Ｉｐｓｅｎ）、ＡＨＬｉ−１１（Ｑｕａｒｋ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ）、ｍｄｍ２タンパク質、ピフィスリン−α（１−（４−メチルフェニル）−２−（４，５，６，７−テトラヒドロ−２−イミノ−３（２Ｈ）−ベンゾチアゾリル）エタノン）、トランス−スチルベン、シス−スチルベン、レスベラトロール、ピセアタンノール、ラポンチン、デオキシラポンチン、ブテイン、カルコン、イソリキルチゲン、ブテイン、４，２’，４’−トリヒドロキシカルコン、３，４，２’，４’，６’−ペンタヒドロキシカルコン、フラボン、モリン、フィセチン、ルテオリン、ケルセチン、ケンフェロール、アピゲニン、ゴシペチン、ミリセチン、６−ヒドロキシアピゲニン、５−ヒドロキシフラボン、５，７，３’，４’，５’−ペンタヒドロキシフラボン、３，７，３’，４’，５’−ペンタヒドロキシフラボン、３，６，３’，４’−テトラヒドロキシフラボン、７，３’，４’，５’−テトラヒドロキシフラボン、３，６，２’，４’−テトラヒドロキシフラボン、７，４’−ジヒドロキシフラボン、７，８，３’，４’−テトラヒドロキシフラボン、３，６，２’，３’−テトラヒドロキシフラボン、４’−ヒドロキシフラボン、５−ヒドロキシフラボン、５，４’−ジヒドロキシフラボン、５，７−ジヒドロキシフラボン、ダイ���イン、ゲニステイン、ナリンゲニン、フラバノン、３，５，７，３’，４’−ペンタヒドロキシフラバノン、塩化ペラルゴニジン、塩化シアニジン、塩化デルフィニジン、（−）−エピカテキン（ヒドロキシ部位：３，５，７，３’，４＾、（−）−カテキン（ヒドロキシ部位：３，５，７，３’，４０、（−）−ガロカテキン（ヒドロキシ部位：３，５，７，３’，４’，５Ｏ（＋）−カテキン（ヒドロキシ部位：３，５，７，３’，４＾、（＋）−エピカテキン（ヒドロキシ部位：３，５，７，３’，４１Ｊ、ヒノキチオール（ｂ−ツヤプリシン、２−ヒドロキシ−４−イソプロピル−２，４，６−シクロヘプタトリエン−１−オン）、Ｌ−（＋）−エルゴチオネイン（（Ｓ）−ａ−カルボキシ−２，３−ジヒドロ−Ｎ，Ｎ，Ｎ−トリメチル−２−チオキソ−１Ｈ−イミダゾール４−エタンアミニウム分子内塩）、カフェ酸フェニルエステル、ＭＣＩ−１８６（３−メチル−１−フェニル−２−ピラゾリン−５−オン）、ＨＢＥＤ（Ｎ，Ｎ’−ジ（２−ヒドロキシベンジル）エチレンジアミン−ＮＮ’−二酢酸・Ｈ２Ｏ）、アンブロキソール（トランス−４−（２−アミノ−３，５−ジブロモベンジルアミノ）シクロヘキサン−ＨＣｌ、およびＵ−８３８３６Ｅ（（−）−２−（（４−（２，６−ジ−１−ピロリジニル−４−ピリミジニル）−１−ピペラジニル）メチル）−３，４−ジヒドロ−２，５，７，８−テトラメチル−２Ｈ−１−ベンゾピラン−６−オール・２ＨＣｌ）、／５−１−５−メチル−ニコチンアミド−２’−デオキシリボース、／Ｓ−Ｄ−Ｉ’−５−メチル−ニコ−チンアミド−２’−デオキシリボフラノシド、／３−１’−４，５−ジメチル−ニコチンアミド−２’−デ−オキシリボース、／３−Ｄ−１’−４，５−ジメチル−ニコチンアミド−２’−デオキシリボフラノシド、１−ナフチルＰＰ  １（１−（１，１−ジメチルエチル）−３−（１−ナフタレニル）−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−４−アミン）、ラベンデュスチンＡ（５−［［（２，５−ジヒドロキシフェニル）メチル］［（２−ヒドロキシフェニル）メチル］アミノ］−２−ヒドロキシ安息香酸）、ＭＮＳ（３，４−メチレンジオキシ−ｂ−ニトロスチレン）、ＰＰ  １（１−（１，１−ジメチルエチル）−１−（４−メチルフェニル）−１  Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−４−アミン）、ＰＰ２（３−（４−クロロフェニル）１−（１，１−ジメチルエチル）−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−４−アミン）、ＫＸ１−００４（Ｋｉｎｅｘ）、ＫＸ１−００５（Ｋｉｎｅｘ）、ＫＸ１−１３６（Ｋｉｎｅｘ）、ＫＸ１−１７４（Ｋｉｎｅｘ）、ＫＸ１−１４１（Ｋｉｎｅｘ）、ＫＸ２−３２８（Ｋｉｎｅｘ）、ＫＸｌ−３０６（Ｋｉｎｅｘ）、ＫＸ１−３２９（Ｋｉｎｅｘ）、ＫＸ２−３９１（Ｋｉｎｅｘ）、ＫＸ２−３７７（Ｋｉｎｅｘ）、ＺＤ４１９０（Ａｓｔｒａ  Ｚｅｎｅｃａ、Ｎ−（４−ブロモ−２−フルオロフェニル）−６−メトキシ−７−（２−（１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−１−イル）エトキシ）キナゾリン−４−アミン）、ＡＰ２２４０８（Ａｒｉａｄ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ）、ＡＰ２３２３６（Ａｒｉａｄ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ）、ＡＰ２３４���１（Ａｒｉａｄ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ）、ＡＰ２３４６４（Ａｒｉａｄ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ）、ＡＺＤ０５３０（Ａｓｔｒａ  Ｚｅｎｅｃａ）、ＡＺＭ４７５２７１（Ｍ４７５２７１、Ａｓｔｒａ  Ｚｅｎｅｃａ）、ダサチニブ（Ｎ−（２−クロロ−６−メチルフェニル）−２−（６−（４−（２−ヒドロキシエチル）−ピペラジン−１−イル）−２−メチルピリミジン−４−イルアミノ）チアゾール−５−カルボキサミド）、ＧＮ９６３（硫酸トランス−４−（６，７−ジメトキシキノキサリン−２イルアミノ）シクロヘキサノール）、ボスチニブ（４−（（２，４−ジクロロ−５−メトキシフェニル）アミノ）−６−メトキシ−７−（３−（４−メチル−１−ピペラジニル）プロポキシ）−３−キノリンカルボニトリル）、またはそれらの組み合わせである。
【０２５４】
ＶＩＩ．蛍光部分
いくつかの実施形態において、ヒトニューロンまたは神経ターゲティング分子は、蛍光部分（例えば、蛍光タンパク質、ペプチド、または蛍光色素分子）をさらに含む。全ての蛍光部分は、「蛍光部分」という用語内に包含される。本明細書で与えられる蛍光部分の具体的な例は、例示であり、蛍光部分を本明細書で開示されるターゲティング分子との使用について限定することを意味しない。いくつかの実施形態において、ヒトニューロンまたは神経ターゲティング分子は、カーゴをさらに含む。いくつかの実施形態において、ヒトニューロンまたは神経ターゲティング分子は、
2020530034.tif 000253
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からなる群より選択されるペプチド配列を含む。いくつかの実施形態において、ターゲティング分子は、
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からなる群より選択されるペプチドを含む。いくつかの実施形態において、ターゲティング分子は、
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からなる群より選択されるペプチドを含む。いくつかの実施形態において、ターゲティング分子は、ペプチド
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を含む。いくつかの実施形態において、ターゲティング分子は、ペプチド
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を含む。いくつかの実施形態において、ターゲティング分子は、ペプチド
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を含む。いくつかの実施形態において、ターゲティング分子は、ペプチド
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を含む。いくつかの実施形態において、ターゲティング分子は、ペプチド
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を含む。いくつかの実施形態において、ターゲティング分子は、ペプチド
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を含む。いくつかの実施形態において、ターゲティング分子は、ペプチド
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を含む。いくつかの実施形態において、ターゲティング分子は、ペプチド
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を含む。いくつかの実施形態において、ターゲティング分子は、ペプチド
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を含む。いくつかの実施形態において、ターゲティング分子は、ペプチド
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を含む。いくつかの実施形態において、ターゲティング分子は、ペプチド
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を含む。いくつかの実施形態において、ターゲティング分子は、ペプチド
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を含む。いくつかの実施形態において、ターゲティング分子は、ペプチド
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を含む。いくつかの実施形態において、ターゲティング分子は、ペプチド
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を含む。いくつかの実施形態において、ターゲティング分子は、ペプチド
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を含む。いくつかの実施形態において、ターゲティング分子は、ペプチド
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を含む。いくつかの実施形態において、ターゲティング分子は、ペプチド
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を含む。いくつかの実施形態において、ターゲティング分子は、ペプチド
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を含む。いくつかの実施形態において、ターゲティング分子は、ペプチド
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を含む。いくつかの実施形態において、ターゲティング分子は、ペプチド
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を含む。いくつかの実施形態において、ターゲティング分子は、ペプチド
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を含む。いくつかの実施形態において、ターゲティング分子は、ペプチド
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を含む。いくつかの実施形態において、ターゲティング分子は、ペプチド
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を含む。いくつかの実施形態において、ターゲティング分子は、ペプチド
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を含む。いくつかの実施形態において、ターゲティング分子は、ペプチド
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を含む。いくつかの実施形態において、ターゲティング分子は、
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ではないペプチドを含む。いくつかの実施形態において、ターゲティング分子は、
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ではないペプチドを含む。いくつかの実施形態において、ペプチドは、
2020530034.tif 000284
ではない。
【０２５５】
いくつかの実施形態において、ペプチドまたはアプタマーは、蛍光部分に直接結合されている。いくつかの実施形態において、ペプチドまたはアプタマーは、間接的に（例えば、リンカーを介して）蛍光部分に結合されている。いくつかの実施形態において、ペプチドまたはアプタマーは、ペプチドまたはアプタマーのそのＮ末端、そのＣ末端、または内部位置（例えば、内部アミノ酸）で蛍光部分に結合されている。いくつかの実施形態において、２つ以上のペプチドまたはアプタマーは、単一蛍光部分に直接または間接的に結合されている。
【０２５６】
蛍光色素の例には、これらに限定されないが、キサンテン（例えば、ローダミン、ロドール、およびフルオレセイン、ならびにそれらの誘導体）、ビマン、クマリンおよびそれらの誘導体（例えば、ウンベリフェロンおよびアミノメチルクマリン）、芳香族アミン（例えば、ダンシル、スクエアレート色素）、ベンゾフラン、蛍光シアニン、カルバゾール、ジシアノメチレンピラン、ポリメチン、オキサベンズアントラン、キサンテン、ピリリウム、カルボスチル、ペリレン、アクリドン、キナクリドン、ルブレン、アントラセン、コロネン、フェナントレセン、ピレン、ブタジエン、スチルベン、ポルフィリン、フタロシアニン、ランタニド金属キレート錯体、希土類金属キレート錯体、およびそのような色素の誘導体が含まれる。
【０２５７】
いくつかの実施形態において、蛍光部分は、フルオレセイン色素である。フルオレセイン色素の例には、これらに限定されないが、５−カルボキシフルオレセイン、フルオレセイン−５−イソチオシアネートおよび６−カルボキシフルオレセイン、５，６−ジカルボキシフルオレセイン、５−（および６）−スルホフルオレセイン、スルホンフルオレセイン、スクシニルフルオレセイン、５−（および６）−カルボキシＳＮＡＲＦ−１、カルボキシフルオレセインスルホネート、カルボキシフルオレセイン双性イオン、カルボキシフルオレセイン第四級アンモニウム、カルボキシフルオレセインホスホネート、カルボキシフルオレセインＧＡＢＡ、５’（６’）−カルボキシフルオレセイン、カルボキシフルオレセイン−ｃｙｓ−Ｃｙ５、ならびにフルオレセイングルタチオンが含まれる。
【０２５８】
いくつかの実施形態において、蛍光部分は、ローダミン色素である。ローダミン色素の例は、これらに限定されないが、テトラメチルローダミン−６−イソチオシアネート、５−カルボキシテトラメチルローダミン、５−カルボキシロドール誘導体、カルボキシローダミン１１０、テトラメチルおよびテトラエチルローダミン、ジフェニルジメチルおよびジフェニルジエチルローダミン、ジナフチルローダミン、ローダミン１０１スルホニルクロリド（ＴＥＸＡＳ  ＲＥＤ（登録商標）の商品名で販売される）を含む。
【０２５９】
いくつかの実施形態において、蛍光部分は、シアニン色素である。シアニン色素の例は、これらに限定されないが、Ｃｙ３、Ｃｙ３Ｂ、Ｃｙ３．５、Ｃｙ５、Ｃｙ５．５、Ｃｙ７を含む。
【０２６０】
いくつかの実施形態において、蛍光部分は、ペプチドである。いくつかの実施形態において、蛍光部分は、緑色蛍光タンパク質（ＧＦＰ）である。いくつかの実施形態において、蛍光部分は、ＧＦＰの誘導体（例えば、ＥＢＦＰ、ＥＢＦＰ２、Ａｚｕｒｉｔｅ、ｍＫａｌａｍａｌ、ＥＣＦＰ、Ｃｅｒｕｌｅａｎ、ＣｙＰｅｔ、ＹＦＰ、Ｃｉｔｒｉｎｅ、Ｖｅｎｕｓ、ＹＰｅｔ）である。
【０２６１】
蛍光標識は、任意の好適な方法によって検出される。例えば、蛍光標識は、適切な波長の光で蛍光色素を励起し、得られた蛍光を検出することによって、例えば、顕微鏡、目視検査によって、写真フィルムを介して、電荷結合素子（ＣＣＤ）、光電子増倍管などのような電子検出器の使用によって検出され得る。
【０２６２】
いくつかの実施形態において、蛍光部分は、これらに限定されないが、デキストラン、ＰＥＧ、血清アルブミン、またはポリ（アミドアミン）デンドリマーを含む、水溶性ポリマーなどの高分子量分子にコンジュゲートしている。
【０２６３】
本発明による例示的なターゲティング分子は、
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を含む。
【０２６４】
ＶＩＩＩ．リンカー
いくつかの実施形態において、カーゴ（例えば、蛍光部分、光増感剤、または薬物）は、例えば、ターゲティングペプチドの末端で、ヒトニューロンまたは神経ターゲティング分子に直接結合されている。あるいは、いくつかの実施形態において、カーゴ（例えば、蛍光部分または薬物）は、（例えば、リンカーを介して）本明細書に開示されるターゲティング分子に間接的に結合されている。いくつかの実施形態において、ヒトニューロンまたは神経ターゲティング分子は、カーゴをさらに含む。いくつかの実施形態において、ヒトニューロンまたは神経ターゲティング分子は、
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からなる群より選択されるペプチド配列を含む。いくつかの実施形態において、ターゲティング分子は、
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からなる群より選択されるペプチドを含む。いくつかの実施形態において、ターゲティング分子は、
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からなる群より選択されるペプチドを含む。いくつかの実施形態において、ターゲティング分子は、ペプチド
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を含む。いくつかの実施形態において、ターゲティング分子は、ペプチド
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を含む。いくつかの実施形態において、ターゲティング分子は、ペプチド
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を含む。いくつかの実施形態において、ターゲティング分子は、ペプチド
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を含む。いくつかの実施形態において、ターゲティング分子は、ペプチド
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を含む。いくつかの実施形態において、ターゲティング分子は、ペプチド
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を含む。いくつかの実施形態において、ターゲティング分子は、ペプチド
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を含む。いくつかの実施形態において、ターゲティング分子は、ペプチド
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を含む。いくつかの実施形態において、ターゲティング分子は、ペプチド
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を含む。いくつかの実施形態において、ターゲティング分子は、ペプチド
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を含む。いくつかの実施形態において、ターゲティング分子は、ペプチド
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を含む。いくつかの実施形態において、ターゲティング分子は、ペプチド
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を含む。いくつかの実施形態において、ターゲティング分子は、ペプチド
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を含む。いくつかの実施形態において、ターゲティング分子は、ペプチド
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を含む。いくつかの実施形態において、ターゲティング分子は、ペプチド
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を含む。いくつかの実施形態において、ターゲティング分子は、ペプチド
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を含む。いくつかの実施形態において、ターゲティング分子は、ペプチド
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を含む。いくつかの実施形態において、ターゲティング分子は、
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を含む。いくつかの実施形態において、ターゲティング分子は、ペプチド
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を含む。いくつかの実施形態において、ターゲティング分子は、ペプチド
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を含む。いくつかの実施形態において、ターゲティング分子は、ペプチド
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を含む。いくつかの実施形態において、ターゲティング分子は、ペプチド
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を含む。いくつかの実施形態において、ターゲティング分子は、ペプチド
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を含む。いくつかの実施形態において、ターゲティング分子は、ペプチド
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を含む。いくつかの実施形態において、ターゲティング分子は、ペプチド
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を含む。いくつかの実施形態において、ターゲティング分子は、
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ではないペプチドを含む。いくつかの実施形態において、ターゲティング分子は、
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ではないペプチドを含む。いくつかの実施形態において、ターゲティング分子は、
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ではないペプチドを含む。
【０２６５】
本明細書で使用されるとき、「リンカー」は、本明細書で開示されるターゲティング分子に（例えば、共有結合的に）結合することができる任意の分子である。リンカーは、これらに限定されないが、直鎖または分岐鎖炭素リンカー、複素環炭素リンカー、アミノ酸リンカー（例えば、Ｄ−またはＬ−アミノ酸）、親油性残基、ペプチドリンカー、ペプチド核酸リンカー、ヒドラゾンリンカー、ＳＰＤＢジスルフィド、スルホ−ＳＰＤＢ、マレイミドメチルシクロヘキサン−１−カルボキシレート（ＭＣＣ）、アミノヘキサン酸リンカー、およびポリエーテルリンカー（例えば、ＰＥＧ）を含む。例えば、ポリ（エチレングリコール）リンカーは、Ｑｕａｎｔａ  Ｂｉｏｄｅｓｉｇｎ，Ｐｏｗｅｌｌ，ＯＨから入手可能である。これらのリンカーは、アミド結合、スルフヒドリル結合、またはヘテロ官能性結合を任意に有する。
【０２６６】
いくつかの実施形態において、リンカーは、共有結合によって本明細書で開示されるターゲティング分子に結合する。いくつかの実施形態において、共有結合は、エーテル結合、チオエーテル結合、アミン結合、アミド結合、炭素−炭素結合、炭素−窒素結合、炭素−酸素結合、または炭素−硫黄結合を含む。
【０２６７】
いくつかの実施形態では、リンカーは、柔軟性である。いくつかの実施形態では、リンカーは、剛性である。
【０２６８】
いくつかの実施形態では、リンカーは、線状構造を含む。いくつかの実施形態では、リンカーは、非線状構造を含む。いくつかの実施形態では、リンカーは、分岐構造を含む。いくつかの実施形態では、リンカーは、環状構造を含む。
【０２６９】
いくつかの実施形態では、リンカーは、アルキルである。いくつかの実施形態では、リンカーは、ヘテロアルキルである。
【０２７０】
いくつかの実施形態では、リンカーは、アルキレンである。いくつかの実施形態では、リンカーは、アルケニレンである。いくつかの実施形態では、リンカーは、アルキニレンである。いくつかの実施形態では、リンカーは、ヘテロアルキレンである。
【０２７１】
「アルキル」基は、脂肪族炭化水素基を指す。アルキル部分は、飽和アルキルでも不飽和アルキルでもよい。構造に応じて、アルキル基は、モノラジカルまたはジラジカル（すなわち、アルキレン基）であり得る。
【０２７２】
「アルキル」部分は、１〜１０個の炭素原子を有してもよい（本明細書に出現するときはいつでも、「１〜１０」などの数値範囲は、所定の範囲の各整数を指し、例えば、「１〜１０個の炭素原子」は、アルキル基が、最大１０個の炭素原子を含む、１個の炭素原子、２個の炭素原子、３個の炭素原子などで構成され得るが、本定義は、数値範囲が指定されていない「アルキル」という用語の出現も対象とする）。アルキル基は、１〜６個の炭素原子を有する「低級アルキル」でもあり得る。本明細書に記載される化合物のアルキル基は、「Ｃ１〜Ｃ４アルキル」または同様の名称として指定され得る。ほんの一例として、「Ｃ１〜Ｃ４アルキル」は、アルキル鎖に１〜４個の炭素原子があることを示し、すなわち、アルキル鎖は、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ｎ−ブチル、イソ−ブチル、ｓｅｃ−ブチル、およびｔ−ブチルから選択される。典型的なアルキル基には、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ブチル、イソブチル、第三級ブチル、ペンチル、ヘキシル、エテニル、プロペニル、ブテニルなどが含まれるが、決してこれらに限定されない。
【０２７３】
いくつかの実施形態において、リンカーは、環構造（例えば、アリール）を含む。本明細書で使用されるとき、「環」という用語は、任意の共有結合的に閉じた構造を指す。環には、例えば、炭素環（例えば、アリールおよびシクロアルキル）、複素環（例えば、ヘテロアリールおよび非芳香族複素環）、芳香族（例えば、アリールおよびヘテロアリール）、および非芳香族（例えば、シクロアルキルおよび非芳香族複素環）が含まれる。環は、任意に置換することができる。環は、単環式または多環式であり得る。
【０２７４】
本明細書で使用されるとき、「アリール」という用語は、環を形成する原子のそれぞれが炭素原子である芳香族環を指す。アリール環は、５、６、７、８、９、または９個を超える炭素原子によって形成することができる。アリール基は、任意に置換することができる。アリール基の例には、フェニル、ナフタレニル、フェナントレニル、アントラセニル、フルオレニル、およびインデニルが含まれるが、これらに限定されない。構造に応じて、アリール基は、モノラジカルまたはジラジカル（すなわち、アリーレン基）であり得る。
【０２７５】
「シクロアルキル」という用語は、単環式または多環式の非芳香族ラジカルを指し、環を形成する原子（すなわち、骨格原子）のそれぞれは、炭素原子である。シクロアルキルは、飽和していても、または部分的に不飽和でもよい。シクロアルキル基には、３〜１０個の環原子を有する基が含まれる。シクロアルキルには、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロヘキシル、シクロヘプチル、およびシクロオクチルが含まれるが、これらに限定されない。
【０２７６】
いくつかの実施形態において、環は、シクロアルカンである。いくつかの実施形態において、環は、シクロアルケンである。
【０２７７】
いくつかの実施形態において、環は、芳香環である。「芳香族」という用語は、４ｎ＋２個のπ電子を含有する非局在化π電子系を有する平面環を指し、式中、ｎは整数である。芳香環は、５、６、７、８、９、または９個を超える原子から形成することができる。芳香族は、任意に置換することができる。「芳香族」という用語には、炭素環式アリール（例えば、フェニル）および複素環式アリール（または「ヘテロアリール」もしくは「ヘテロ芳香族」）基（例えば、ピリジン）の両方が含まれる。用語には、単環式または縮合環多環式（すなわち、隣接する炭素原子のペアを共有する環）基が含まれる。
【０２７８】
いくつかの実施形態において、環は、複素環である。「複素環」という用語は、それぞれＯ、Ｓ、およびＮから選択される１〜４個のヘテロ原子を含有する複素芳香族および複素脂環式基を指し、各複素環式基は、その環系に４〜１０個の原子を有し、但し、当該基の環は、２つの隣接するＯまたはＳ原子を含有しない。非芳香族複素環式基は、それらの環系に３個のみの原子を有する基を含むが、芳香族複素環式基は、それらの環系に少なくとも５個の原子を有さなければならない。複素環式基には、ベンゾ縮合環系が含まれる。３員複素環式基の例は、アジリジニルである。４員複素環式基の例は、アゼチジニル（アゼチジン由来）である。５員複素環式基の例は、チアゾリルである。６員複素環式基の例は、ピリジルであり、１０員複素環式基の例は、キノリニルである。非芳香族複素環式基の例は、ピロリジニル、テトラヒドロフラニル、ジヒドロフラニル、テトラヒドロチエニル、テトラヒドロピラニル、ジヒドロピラニル、テトラヒドロチオピラニル、ピペリジノ、モルホリノ、チオモルホリノ、チオキサニル、ピペラジニル、アゼチジニル、オキセタニル、チエタニル、ホモピペリジニル、オキセパニル、チエパニル、オキサゼピニル、ジアゼピニル、チアゼピニル、１，２，３，６−テトラヒドロピリジニル、２−ピロリニル、３−ピロリニル、インドリニル、２Ｈ−ピラニル、４Ｈ−ピラニル、ジオキサニル、１，３−ジオキソラニル、ピラゾリニル、ジチアニル、ジチオラニル、ジヒドロピラニル、ジヒドロチエニル、ジヒドロフラニル、ピラゾリジニル、イミダゾリニル、イミダゾリジニル、３−アザビシクロ［３．１．０］ヘキサニル、３−アザビシクロ［４．１．０］ヘプタニル、３Ｈ−インドリル、およびキノリジニルである。芳香族複素環式基の例は、ピリジニル、イミダゾリル、ピリミジニル、ピラゾリル、トリアゾリル、ピラジニル、テトラゾリル、フリル、チエニル、イソキサゾリル、チアゾリル、オキサゾリル、イソチアゾリル、ピロリル、キノリニル、イソキノリニル、インドリル、ベンズイミダゾリル、ベンゾフラニル、シンノリニル、インダゾリル、インドリジニル、フタラジニル、ピリダジニル、トリアジニル、イソインドリル、プテリジニル、プリニル、オキサジアゾリル、チアジアゾリル、フラザニル、ベンゾフラザニル、ベンゾチオフェニル、ベンゾチアゾリル、ベンゾオキサゾリル、キナゾリニル、キノキサリニル、ナフチリジニル、およびファロピリジニルである。前述の基は、そのようなものが可能である場合、Ｃ結合またはＮ結合であり得る。例えば、ピロールに由来する基は、ピロール−１−イル（Ｎ結合）またはピロール−３−イル（Ｃ結合）であり得る。さらに、イミダゾールに由来する基は、イミダゾール−１−イルもしくはイミダゾール−３−イル（両方Ｎ結合）またはイミダゾール−２−イル、イミダゾール−４−イル、もしくはイミダゾール−５−イル（全てＣ結合）であり得る。複素環式基には、ベンゾ縮合環系およびピロリジン−２−オンなどの１つまたは２つのオキソ（＝０）部分で置換された環系が含まれる。構造に応じて、複素環基は、モノラジカルまたはジラジカル（すなわち、ヘテロシクレン基）であり得る。
【０２７９】
いくつかの実施形態において、環は、縮合している。「縮合」という用語は、２つ以上の環が１つ以上の結合を共有する構造を指し、いくつかの実施形態において、環は、二量体である。いくつかの実施形態において、環は、三量体である。いくつかの実施形態において、環は、置換されている。
【０２８０】
「炭素環式」または「炭素環」という用語は、環を形成する原子のそれぞれが炭素原子である環を指す。炭素環には、アリールおよびシクロアルキルが含まれる。よって、用語は、炭素環と、環骨格が炭素とは異なる少なくとも１つの原子（すなわち、ヘテロ原子）を含有する複素環（「複素環式」）とを区別する。複素環には、ヘテロアリールおよびヘテロシクロアルキルが含まれる。炭素環および複素環は、任意に置換することができる。
【０２８１】
いくつかの実施形態において、リンカーは、置換されている。「任意に置換された」または「置換された」という用語は、参照された基が、個別にかつ独立して、Ｃ１〜Ｃｅアルキル、Ｃ３〜Ｃｇシクロアルキル、アリール、ヘテロアリール、Ｃ２〜Ｃ６ヘテロ脂環式、ヒドロキシ、Ｃ１〜Ｃ６アルコキシ、アリールオキシ、Ｃ１〜Ｃ６アルキルチオ、アリールチオ、Ｃ１〜Ｃ６アルキルスルホキシド、アリールスルホキシド、Ｃ１〜Ｃ６アルキルスルホン、アリールスルホン、シアノ、ハロ、Ｃ２〜Ｃ８アシル、Ｃ２〜Ｃ８アシルオキシ、ニトロ、Ｃ１〜Ｃ６ハロアルキル、Ｃ１〜Ｃ６フルオロアルキル、およびＣ１〜Ｃ６アルキルアミノを含むアミノ、ならびにそれらの保護誘導体から選択される１つ以上の追加の基で置換され得ることを意味する。例として、任意の置換基は、ＬＳＲＳであってもよく、各Ｌは、独立して、結合、−Ｏ−、−Ｃ（＝Ｏ）−、−Ｓ−、−Ｓ（＝Ｏ）−、−Ｓ（Ｏ）２−、−ＮＨ−、−ＮＨＣ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）ＮＨ−、Ｓ（Ｏ）２ＮＨ−、−ＮＨＳ（Ｏ）２−、−ＯＣ（Ｏ）ＮＨ−、−ＮＨＣ（Ｏ）Ｏ−、−（ＣｐＣ６アルキル）−、または−（Ｃ２〜Ｃ６アルケニル）−から選択され、各Ｒは、独立して、Ｈ、（Ｃ１〜Ｃ４アルキル）、（Ｃ３〜Ｃ８シクロアルキル）、ヘテロアリール、アリール、およびＣ１〜Ｃ６ヘテロアルキルから選択される。任意に置換された非芳香族基は、１つ以上のオキソ（＝０）で置換され得る。上記置換基の保護誘導体を形成し得る保護基は、当業者に知られている。
【０２８２】
いくつかの実施形態において、所望のコンジュゲート体を形成するために、１つの分子上の基（例えば、ターゲティング分子）と反応性の１つの官能基、および他の分子上の反応性の別の基（例えば、蛍光部分または薬物）を有する二官能性リンカーが使用される。あるいは、いくつかの実施形態において、官能基を提供するために、誘導体化が行われる。よって、例えば、ペプチド上での遊離スルフヒドリル基の生成のための手順も知られている（米国特許第４，６５９，８３９号を参照されたい）。あるいは、リンカーは、ターゲティング分子と相互作用することができる複素環を形成する２つ以上の異なる反応性基を含むヘテロ二官能性架橋剤を含んでもよい。例えば、システインなどのヘテロ二官能性架橋剤は、アミン反応性基を含んでもよく、チオール反応性基は、誘導体化されたターゲティング分子上のアルデヒドと相互作用することができる。ヘテロ二官能性架橋剤に好適な反応性基の追加の組み合わせには、例えば、アミンおよびスルフヒドリル反応性基、カルボニルおよびスルフヒドリル反応性基、アミンおよび光反応性基、スルフヒドリルおよび光反応性基、カルボニルおよび光反応性基、カルボキシレートおよび光反応性基、ならびにアルギニンおよび光反応性基が含まれる。ヘテロ二官能性架橋剤の例には、Ｎ−スクシンイミジル４−（２−ピリジルジチオ）ブタノエート（ＳＰＤＢ）およびマレイミドメチルシクロヘキサン−１−カルボキシレート（ＭＣＣ）が含まれる。
【０２８３】
いくつかの実施形態において、ターゲティング分子と蛍光部分または薬物とを結合するために、１つ以上のアミノ酸からなるペプチドリンカーが使用される。一般に、ペプチドリンカーは、分子を結合するか、または分子間の最小距離もしくは他の空間的関係を保つ以外に、特定の生物学的活性を有さないであろう。しかしながら、リンカーの構成アミノ酸は、折り畳み、正味電荷、または疎水性などの分子のいくらかの特性に影響を与えるように選択され得る。いくつかの実施形態において、ペプチドリンカーは、比較的短く、典型的には約１０アミノ酸未満、好ましくは約８アミノ酸未満、より好ましくは５アミノ酸未満である。非限定的な例示的な例には、ターゲティングペプチドのＣ末端に付加することができるグリシンおよびグリシン−セリンリンカーが含まれる。いくつかの実施形態において、ペプチドリンカーは、グリシン−グリシン−グリシン−システイン（ＧＧＧＣ）リンカー、グリシン−グリシン−システイン（ＧＧＣ）リンカー、グリシン−グリシン（ＧＧ）リンカー、またはシステイン（Ｃ）リンカーである。いくつかの実施形態において、ＧＧＧＣ、ＧＧＣ、ＧＧ、またはＣリンカーは、ターゲティングペプチドのＣ末端に付加される。
【０２８４】
ＩＸ．さらなる修飾
いくつかの実施形態において、本発明のヒトニューロンまたは神経ターゲティング分子は、任意で、標識化の多価性および結合活性を増加させる高分子量分子にコンジュゲートされる。いくつかの実施形態において、高分子量分子は、水溶性ポリマーである。好適な水溶性ポリマーの例には、ペプチド、糖類、ポリ（ビニル）、ポリ（エーテル）、ポリ（アミン）、ポリ（カルボン酸）などが含まれるが、これらに限定されない。いくつかの実施形態において、水溶性ポリマーは、デキストラン、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、ポリオキシアルキレン、ポリシアル酸、デンプン、またはヒドロキシエチルデンプンである。ペプチドを水溶性ポリマーにコンジュゲートさせるために、任意の好適な方法が使用される（Ｈｅｒｍａｎｓｏｎ  Ｇ．，Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ  Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ  ２ｎｄ  Ｅｄ．，Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ，Ｉｎｃ．２００８を参照されたい）。いくつかの実施形態において、ヒトニューロンまたは神経ターゲティング分子は、カーゴをさらに含む。いくつかの実施形態において、ヒトニューロンまたは神経ターゲティング分子は、
2020530034.tif 000318
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からなる群より選択されるペプチド配列を含む。いくつかの実施形態において、ターゲティング分子は、
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からなる群より選択されるペプチドを含む。いくつかの実施形態において、ターゲティング分子は、
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からなる群より選択されるペプチドを含む。いくつかの実施形態において、ターゲティング分子は、ペプチド
2020530034.tif 000322
含む。いくつかの実施形態において、ターゲティング分子は、ペプチド
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を含む。いくつかの実施形態において、ターゲティング分子は、ペプチド
2020530034.tif 000324
を含む。いくつかの実施形態において、ターゲティング分子は、ペプチド
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を含む。いくつかの実施形態において、ターゲティング分子は、ペプチド
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を含む。いくつかの実施形態において、ターゲティング分子は、ペプチド
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を含む。いくつかの実施形態において、ターゲティング分子は、ペプチド
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を含む。いくつかの実施形態において、ターゲティング分子は、ペプチド
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を含む。いくつかの実施形態において、ターゲティング分子は、ペプチド
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を含む。いくつかの実施形態において、ターゲティング分子は、ペプチド
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を含む。いくつかの実施形態において、ターゲティング分子は、ペプチド
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を含む。いくつかの実施形態において、ターゲティング分子は、ペプチド
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を含む。いくつかの実施形態において、ターゲティング分子は、ペプチド
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を含む。いくつかの実施形態において、ターゲティング分子は、ペプチド
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を含む。いくつかの実施形態において、ターゲティング分子は、ペプチド
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を含む。いくつかの実施形態において、ターゲティング分子は、ペプチド
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を含む。いくつかの実施形態において、ターゲティング分子は、ペプチド
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を含む。いくつかの実施形態において、ターゲティング分子は、ペプチド
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を含む。いくつかの実施形態において、ターゲティング分子は、ペプチド
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を含む。いくつかの実施形態において、ターゲティング分子は、ペプチド
2020530034.tif 000341
を含む。いくつかの実施形態において、ターゲティング分子は、ペプチド
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を含む。いくつかの実施形態において、ターゲティング分子は、ペプチド
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を含む。いくつかの実施形態において、ターゲティング分子は、ペプチド
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を含む。いくつかの実施形態において、ターゲティング分子は、ペプチド
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を含む。いくつかの実施形態において、ターゲティング分子は、ペプチド
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を含む。いくつかの実施形態において、ターゲティング分子は、
2020530034.tif 000347
ではないペプチドを含む。いくつかの実施形態において、ターゲティング分子は、
2020530034.tif 000348
ではないペプチドを含む。いくつかの実施形態において、ターゲティング分子は、
2020530034.tif 000349
を含む。
【０２８５】
いくつかの実施形態において、本発明のターゲティング分子は、神経栄養特性を有する因子（例えば、神経成長因子（ＮＧＦ）、脳由来神経栄養因子（ＢＤＮＦ）、ニューロトロフィン−３（ＮＴ−３）、ニューロトロフィン−４（ＮＴ−４）、グリア細胞株由来神経栄養因子（ＧＤＮＦ）、毛様体神経栄養因子（ＣＮＴＦ）、および神経栄養特性を有する非タンパク質小分子などの神経栄養タンパク質）にコンジュゲートしている。
【０２８６】
いくつかの実施形態において、本発明のターゲティング分子は、溶解度を増加させるために修飾される。溶解度を増加させるペプチド修飾には、親水性アミノ酸、ＰＥＧ部分、または両方の付加が含まれる。いくつかの実施形態において、ＰＥＧ部分は、８−アミノ−３，６−ジオキサオクタン酸（ＡＥＥＡ）、１２−アミノ−４，７，１０−トリオキサドデカン酸、または１５−アミノ−４，７，１０，１３−テトラオキサペンタ−デカン酸である。いくつかの実施形態において、溶解度を増加させるために、約１〜１０個（例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０個）の親水性アミノ酸が、ターゲティング分子のＮ末端、Ｃ末端、内部位置、またはそれらの任意の組み合わせに付加され得る。親水性アミノ酸には、Ｄ、Ｅ、Ｈ、Ｋ、Ｎ、Ｑ、Ｒ、Ｓ、Ｔ、およびＧが含まれる。いくつかの実施形態において、ターゲティング分子は、Ｎ末端またはＣ末端でＫ、ＫＫ、Ｇ、またはＧＧを含む。
【０２８７】
Ｘ．マルチドメインターゲティング分子
特定の実施形態において、本明細書で提供されるヒトニューロンまたは神経ターゲティング分子は、２つ以上のニューロンまたは神経ターゲティングペプチドを含むマルチドメインニューロンまたは神経ターゲティング分子であり、第１のペプチドは、
2020530034.tif 000350
を含む。いくつかの実施形態において、第１のペプチドは、
2020530034.tif 000351
を含む。いくつかの実施形態において、第１のペプチドは、
2020530034.tif 000352
を含む。いくつかの実施形態において、第１のペプチドは、
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を含む。いくつかの実施形態において、第１のペプチドは、
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を含む。いくつかの実施形態において、第１のペプチドは、
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を含む。いくつかの実施形態において、第１のペプチドは、
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を含む。いくつかの実施形態において、第１のペプチドは、
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を含む。いくつかの実施形態において、第１のペプチドは、
2020530034.tif 000358
を含む。いくつかの実施形態において、第１のペプチドは、
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を含む。いくつかの実施形態において、第１のペプチドは、
2020530034.tif 000360
を含む。いくつかの実施形態において、第１のペプチドは、
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を含む。いくつかの実施形態において、第１のペプチドは、
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を含む。いくつかの実施形態において、第１のペプチドは、
2020530034.tif 000363
を含む。いくつかの実施形態において、第１のペプチドは、
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を含む。いくつかの実施形態において、第１のペプチドは、
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を含む。いくつかの実施形態において、第１のペプチドは、
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を含む。いくつかの実施形態において、第１のペプチドは、
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を含む。いくつかの実施形態において、第１のペプチドは、
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を含む。いくつかの実施形態において、第１のペプチドは、
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を含む。いくつかの実施形態において、第１のペプチドは、
2020530034.tif 000370
を含む。いくつかの実施形態において、第１のペプチドは、
2020530034.tif 000371
を含む。いくつかの実施形態において、第１のペプチドは、
2020530034.tif 000372
を含む。いくつかの実施形態において、第１のペプチドは、
2020530034.tif 000373
を含む。いくつかの実施形態において、第１のペプチドは、
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を含む。いくつかの実施形態において、第１のペプチドは、
2020530034.tif 000375
を含む。いくつかの実施形態において、第１のペプチドは、
2020530034.tif 000376
を含む。いくつかの実施形態において、第１のペプチドは、
2020530034.tif 000377
を含む。
【０２８８】
マルチドメインターゲティング分子内の２つ以上のニューロンまたは神経ターゲティングペプチドは、同じニューロンもしくは神経ターゲティングペプチドであり得るか、または好ましくは異なるニューロンもしくは神経ターゲティングペプチドである。いくつかの実施形態において、マルチドメインターゲティング分子は、
2020530034.tif 000378
を含む第２のペプチドを含む。
【０２８９】
いくつかの実施形態において、第１のニューロンまたは神経ターゲティングペプチドは、
2020530034.tif 000379
からなる群より選択される。いくつかの実施形態において、第２のペプチドは、
2020530034.tif 000380
からなる群より選択される。
【０２９０】
いくつかの実施形態において、第１のニューロンまたは神経ターゲティングペプチドは、
2020530034.tif 000381
を含む。いくつかの実施形態において、第１のニューロンまたは神経ターゲティングペプチドは、
2020530034.tif 000382
を含む。いくつかの実施形態において、第２のペプチドは、
2020530034.tif 000383
からなる群より選択される。
【０２９１】
いくつかの実施形態において、第１のニューロンまたは神経ターゲティングペプチドは、
2020530034.tif 000384
を含む。いくつかの実施形態において、第１のニューロンまたは神経ターゲティングペプチドは、
2020530034.tif 000385
である。いくつかの実施形態において、第２のペプチドは、
2020530034.tif 000386
2020530034.tif 000387
からなる群より選択される。
【０２９２】
いくつかの実施形態において、第１のニューロンまたは神経ターゲティングペプチドは、
2020530034.tif 000388
を含む。いくつかの実施形態において、第１のニューロンまたは神経ターゲティングペプチドは、
2020530034.tif 000389
である。いくつかの実施形態において、第２のペプチドは、
2020530034.tif 000390
2020530034.tif 000391
からなる群より選択される。
【０２９３】
いくつかの実施形態において、第１のニューロンまたは神経ターゲティングペプチドは、
2020530034.tif 000392
を含む。いくつかの実施形態において、第１のニューロンまたは神経ターゲティングペプチドは、
2020530034.tif 000393
である。いくつかの実施形態において、第２のペプチドは、
2020530034.tif 000394
2020530034.tif 000395
からなる群より選択される。
【０２９４】
いくつかの実施形態において、マルチドメインターゲティング分子内のニューロンまたは神経ターゲティングペプチドは、互いに直接結合されている。いくつかの実施形態において、マルチドメインターゲティング分子内のニューロンまたは神経ターゲティングペプチドは、例えば、リンカーまたはカーゴを介して、互いに間接的に結合されている。いくつかの実施形態において、ターゲティングペプチドは、線状に配置される。いくつかの実施形態において、マルチドメインターゲティング分子のターゲティングペプチドは、分岐構造で配置される。いくつかの実施形態において、マルチドメインターゲティング分子は、２つ、３つ、４つ、５つ、またはより多くのニューロンまたは神経ターゲティングペプチドを含む。
【０２９５】
ＸＩ．標識化の方法
本明細書では、特定の実施形態において、ニューロンまたは神経を本明細書に記載されるヒトニューロンまたは神経ターゲティング分子と接触させることにより、ニューロンまたは神経（またはいずれかの構成要素）を標識する方法が開示される。いくつかの実施形態において、ヒトニューロンまたは神経ターゲティング分子は、カーゴをさらに含む。いくつかの実施形態において、ヒトニューロンまたは神経ターゲティング分子は、
2020530034.tif 000396
2020530034.tif 000397
からなる群より選択されるペプチド配列を含む。いくつかの実施形態において、ターゲティング分子は、
2020530034.tif 000398
からなる群より選択されるペプチドを含む。いくつかの実施形態において、ターゲティング分子は、
2020530034.tif 000399
からなる群より選択されるペプチドを含む。いくつかの実施形態において、ターゲティング分子は、ペプチド
2020530034.tif 000400
を含む。いくつかの実施形態において、ターゲティング分子は、ペプチド
2020530034.tif 000401
を含む。いくつかの実施形態において、ターゲティング分子は、ペプチド
2020530034.tif 000402
を含む。いくつかの実施形態において、ターゲティング分子は、ペプチド
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を含む。いくつかの実施形態において、ターゲティング分子は、ペプチド
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を含む。いくつかの実施形態において、ターゲティング分子は、ペプチド
2020530034.tif 000405
を含む。いくつかの実施形態において、ターゲティング分子は、ペプチド
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を含む。いくつかの実施形態において、ターゲティング分子は、ペプチド
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を含む。いくつかの実施形態において、ターゲティング分子は、ペプチド
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を含む。いくつかの実施形態において、ターゲティング分子は、ペプチド
2020530034.tif 000409
を含む。いくつかの実施形態において、ターゲティング分子は、ペプチド
2020530034.tif 000410
を含む。いくつかの実施形態において、ターゲティング分子は、ペプチド
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を含む。いくつかの実施形態において、ターゲティング分子は、ペプチド
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を含む。いくつかの実施形態において、ターゲティング分子は、ペプチド
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を含む。いくつかの実施形態において、ターゲティング分子は、ペプチド
2020530034.tif 000414
を含む。いくつかの実施形態において、ターゲティング分子は、ペプチド
2020530034.tif 000415
を含む。いくつかの実施形態において、ターゲティング分子は、ペプチド
2020530034.tif 000416
を含む。いくつかの実施形態において、ターゲティング分子は、ペプチド
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を含む。いくつかの実施形態において、ターゲティング分子は、ペプチド
2020530034.tif 000418
を含む。いくつかの実施形態において、ターゲティング分子は、ペプチド
2020530034.tif 000419
を含む。いくつかの実施形態において、ターゲティング分子は、ペプチド
2020530034.tif 000420
を含む。いくつかの実施形態において、ターゲティング分子は、ペプチド
2020530034.tif 000421
を含む。いくつかの実施形態において、ターゲティング分子は、ペプチド
2020530034.tif 000422
を含む。いくつかの実施形態において、ターゲティング分子は、ペプチド
2020530034.tif 000423
を含む。いくつかの実施形態において、ターゲティング分子は、ペプチド
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を含む。いくつかの実施形態において、ターゲティング分子は、
2020530034.tif 000425
ではないペプチドを含む。いくつかの実施形態において、ターゲティング分子は、
2020530034.tif 000426
ではないペプチドを含む。いくつかの実施形態において、ターゲティング分子は、
2020530034.tif 000427
ではないペプチドを含む。
【０２９６】
いくつかの実施形態において、第１のヒトニューロンまたは神経ターゲティング分子は、第２のヒトニューロンまたは神経ターゲティング分子と組み合わせて（同時に、併用して、または連続して）投与される。さらなる実施形態において、第１のターゲティング分子、第２のターゲティング分子、または両方は、カーゴを含む。またさらなる実施形態において、第１のターゲティング分子のカーゴ、第２のターゲティング分子のカーゴ、または両方は、蛍光部分であり、これは同じ蛍光部分または異なる蛍光部分であってもよい。
【０２９７】
いくつかの実施形態において、ヒトニューロンまたは神経ターゲティング分子は、蛍光部分（例えば、蛍光部分は、ターゲティング分子にコンジュゲートしていない、「遊離」蛍光部分）と組み合わせて（同時に、併用して、または連続して）投与される。いくつかの実施形態において、蛍光部分は、フルオレセイン、例えば、カルボキシフルオレセインである。
【０２９８】
いくつかの実施形態において、接触させることは、インビボで起こる。いくつかの実施形態において、接触させることは、インビトロで起こる。
【０２９９】
いくつかの実施形態において、ニューロンまたは神経（またはその構成要素）は、手術中の特定のために標識される。いくつかの実施形態において、手術は、がん手術である。いくつかの実施形態において、がんは、前立腺がん、肝臓がん（ＨＣＣ）、結腸直腸がん、卵巣がん、子宮内膜がん、乳がん、膵臓がん、胃がん、子宮頸がん、頭頸部がん、甲状腺がん、精巣がん、尿路上皮がん、肺がん、黒色腫、精巣胚細胞腫瘍、中皮腫、および食道がんからなる群より選択される。いくつかの実施形態において、がんは、前立腺がんである。いくつかの実施形態において、方法は、本明細書に開示されるターゲティング分子を手術を受けるであろう対象に投与することを含む。いくつかの実施形態において、方法は、本明細書に開示されるターゲティング分子を手術を受けている対象に投与することを含む。いくつかの実施形態において、本明細書に開示されるターゲティング分子は、患者に全身投与される。いくつかの実施形態において、本明細書に開示されるターゲティング分子は、患者に局所投与される。
【０３００】
ＸＩＩ．薬物送達
本明細書では、特定の実施形態において、標的指向性薬物送達の方法が開示される。いくつかの実施形態において、本明細書に開示されるヒトニューロンまたは神経ターゲティング分子は、薬物を特定の標的に送達する。いくつかの実施形態において、本明細書に開示されるターゲティング分子は、薬物をニューロンまたは神経に送達する。いくつかの実施形態において、ヒトニューロンまたは神経ターゲティング分子は、カーゴをさらに含む。いくつかの実施形態において、ヒトニューロンまたは神経ターゲティング分子は、
2020530034.tif 000428
2020530034.tif 000429
からなる群より選択されるペプチド配列を含む。いくつかの実施形態において、ターゲティング分子は、
2020530034.tif 000430
からなる群より選択されるペプチドを含む。いくつかの実施形態において、ターゲティング分子は、
2020530034.tif 000431
からなる群より選択されるペプチドを含む。いくつかの実施形態において、ターゲティング分子は、ペプチド
2020530034.tif 000432
を含む。いくつかの実施形態において、ターゲティング分子は、ペプチド
2020530034.tif 000433
を含む。いくつかの実施形態において、ターゲティング分子は、ペプチド
2020530034.tif 000434
を含む。いくつかの実施形態において、ターゲティング分子は、ペプチド
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を含む。いくつかの実施形態において、ターゲティング分子は、ペプチド
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を含む。いくつかの実施形態において、ターゲティング分子は、ペプチド
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を含む。いくつかの実施形態において、ターゲティング分子は、ペプチド
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を含む。いくつかの実施形態において、ターゲティング分子は、ペプチド
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を含む。いくつかの実施形態において、ターゲティング分子は、ペプチド
2020530034.tif 000440
を含む。いくつかの実施形態において、ターゲティング分子は、ペプチド
2020530034.tif 000441
を含む。いくつかの実施形態において、ターゲティング分子は、ペプチド
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を含む。いくつかの実施形態において、ターゲティング分子は、ペプチド
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を含む。いくつかの実施形態において、ターゲティング分子は、ペプチド
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を含む。いくつかの実施形態において、ターゲティング分子は、ペプチド
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を含む。いくつかの実施形態において、ターゲティング分子は、ペプチド
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を含む。いくつかの実施形態において、ターゲティング分子は、ペプチド
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を含む。いくつかの実施形態において、ターゲティング分子は、ペプチド
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を含む。いくつかの実施形態において、ターゲティング分子は、ペプチド
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を含む。いくつかの実施形態において、ターゲティング分子は、ペプチド
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を含む。いくつかの実施形態において、ターゲティング分子は、ペプチド
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を含む。いくつかの実施形態において、ターゲティング分子は、ペプチド
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を含む。いくつかの実施形態において、ターゲティング分子は、ペプチド
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を含む。いくつかの実施形態において、ターゲティング分子は、ペプチド
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を含む。いくつかの実施形態において、ターゲティング分子は、ペプチド
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を含む。いくつかの実施形態において、ターゲティング分子は、ペプチド
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を含む。いくつかの実施形態において、ターゲティング分子は、
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ではないペプチドを含む。いくつかの実施形態において、ターゲティング分子は、
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ではないペプチドを含む。いくつかの実施形態において、ターゲティング分子は、
2020530034.tif 000459
ではないペプチドを含む。
【０３０１】
いくつかの実施形態において、薬物は、痛み（痛みの知覚または痛みを伴う刺激剤の活性のいずれか）を低減する薬剤である。いくつかの実施形態において、薬物は、麻酔剤である。いくつかの実施形態において、薬物は、ベンゾカイン、カルチカイン、シンコカイン、シクロメチカイン、リドカイン、プリロカイン、プロプキシカイン、プロパラカイン、テトラカイン、トカイニド、およびトリメカイン、またはその組み合わせである。
【０３０２】
いくつかの実施形態において、薬物は、ニューロンまたは神経の（例えば、アポトーシスまたは壊死を介した）死を調節する薬剤である。いくつかの実施形態において、薬物は、細胞毒性剤である。いくつかの実施形態において、薬物は、メトトレキサート（ＲＨＥＵＭＡＴＲＥＸ（登録商標）、アメトプテリン）、シクロホスファミド（ＣＹＴＯＸＡＮ（登録商標））、サリドマイド（ＴＨＡＬＩＤＯＭＩＤ（登録商標））、パクリタキセル、ペメトレキセド、ペントスタチン、ピポブロマン、ピキサントロン、プリカマイシン、プロカルバジン、プロテアソーム阻害剤（例えば、ボルテゾミブ）、ラルチトレキセド、レベッカマイシン、ルビテカン、ＳＮ−３８、サリノスポラミドＡ、サトラプラチン、ストレプトゾトシン、スワインソニン、タリキダール、タキサン、テガフール−ウラシル、テモゾロミド、テストラクトン、チオＴＥＰＡ、チオグアニン、トポテカン、トラベクテジン、トレチノイン、四硝酸トリプラチン、トリス（２−クロロエチル）アミン、トロキサシタビン、ウラシルマスタード、バルルビシン、ビンブラスチン、ビンクリスチン、ビノレルビン、ボリノスタット、ゾスキダル、またはそれらの組み合わせである。いくつかの実施形態において、薬物は、プロアポトーシス剤である。いくつかの実施形態において、薬物は、抗アポトーシス剤である。いくつかの実施形態において、薬物は、ミノサイクリン、ＳＢ−２０３５８０（４−（４−フルオロフェニル）−２−（４−メチルスルフミルフェニル）−５−（４−ピリジル）１Ｈ−イミダゾール）、ＰＤ１６９３１６（４−（４−フルオロフェニル）−２−（４−ニトロフェニル）−５−（４−ピリジル）−１Ｈ−イミダゾール）、ＳＢ２０２１９０（４−（４−フルオロフェニル）−２−（４−ヒドロキシフェニル）−５−（４−ピリジル）１Ｈ−イミダゾール）、ＲＷＪ６７６５７（４−［４−（４−フルオロフェニル）−１−（３−フェニルプロピル）−５−（４−ピリジニル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル］−３−ブチン−１−オール）、ＳＢ２２００２５（５−（２−アミノ−４−ピリミジニル）−４−（４−フルオロフェニル）−１−（４−ピペリジンリル）イミダゾール）、Ｄ−ＪＮＫＩ−１（（Ｄ）−ｈＪＩＰ１７５＿ｉ５７−ＤＰｒＯ−ＤＰｒＯ−（Ｄ）−ＨＩＶ−ＴＡＴ５７−４８）、ＡＭ−１１１（Ａｕｒｉｓ）、ＳＰ６００１２５（アントラ［１，９−ｃｄ］ピラゾール−６（２Ｈ）−オン）、ＪＮＫ阻害剤Ｉ（（Ｌ）−ＨＩＶ−Ｔ  ＡＴ４８−５７−ＰＰ−ＪＢＤ２０）、ＪＮＫ阻害剤ＩＩＩ（（Ｌ）−ＨＩＶ−ＴＡＴ４７−５７−ｇａｂａ−ｃ−Ｊｕｎδ３３−５７）、ＡＳ６０１２４５（１，３−ベンゾチアゾール−２−イル（２−［［２−（３−ピリジニル）エチル］アミノ］−４ピリミジニル）アセトニトリル）、ＪＮＫ阻害剤ＶＩ（Ｈ２Ｎ−ＲＰＫＲＰＴＴＬＮＬＦ−ＮＨ２）、ＪＮＫ阻害剤ＶＩＩＩ（Ｎ−（４−アミノ−５−シアノ−６−エトキシピリジン−２−イル）−２−（２，５−ジメトキシフェニル）アセトアミド）、ＪＮＫ阻害剤ＩＸ（Ｎ−（３−シアノ−４，５，６，７−テトラヒドロ−１−ベンゾチエン−２−イル）−１−ナフトアミド）、ジクマロール（３，３’−メチレンビス（４−��ドロキシクマリン））、ＳＣ−２３６（４−［５−（４−クロロフェニル）−３−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル］ベンゼン−スルホンアミド）、ＣＥＰ−１３４７（Ｃｅｐｈａｌｏｎ）、ＣＥＰ−１１００４（Ｃｅｐｈａｌｏｎ）、Ｂｃｌ−２ポリペプチドの少なくとも一部分を含む人工タンパク質、組換えＦＮＫ、Ｖ５（Ｂａｘ阻害剤ペプチドＶ５としても知られている）、Ｂａｘチャネル遮断剤（（±）−１−（３，６−ジブロモカルバゾール−９−イル）−３−ピペラジン−１−イル−プロパン−２−オール）、Ｂａｘ阻害ペプチドＰ５（Ｂａｘ阻害剤ペプチドＰ５としても知られている）、Ｋｐ７−６、ＦＡＩＭ（Ｓ）（Ｆａｓアポトーシス阻害分子−短）、ＦＡＩＭ（Ｌ）（Ｆａｓアポトーシス阻害分子−長）、Ｆａｓ：Ｆｃ、ＦＡＰ−１、Ｎ０Ｋ２、Ｆ２０５１、Ｆｌ９２６、Ｆ２９２８、ＺＢ４、Ｆａｓ  Ｍ３  ｍＡｂ、ＥＧＦ、７４０Ｙ−Ｐ、
2020530034.tif 000460
ＰＩ３−キナーゼアクチベーター（Ｓａｎｔａ  Ｃｒｕｚ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｉｎｃ．）、Ｐａｍ３Ｃｙｓ（（Ｓ）−（２，３−ビス（パルミトイルオキシ）−（２ＲＳ）−プロピル）−Ｎ−パルミトイル−（Ｒ）−Ｃｙｓ−（Ｓ）−Ｓｅｒ（Ｓ）−Ｌｙｓ４−ＯＨ、三塩酸塩）、Ａｃｔｌ（ＮＦ−ｋＢアクチベーター１）、抗ＤｃＢ抗体、アセチル−１１−ケト−ｂ−ボスウェル酸、アンドログラフォライド、カフェ酸フェネチルエステル（ＣＡＰＥ）、グリオトキシン、イソヘレニン、ＮＥＭＯ結合ドメイン結合ペプチド
2020530034.tif 000461
ＮＦ−ｋＢ活性化阻害剤（６−アミノ−４−（４−フェノキシフェニルエチルアミノ）キナゾリン）、ＮＦ−ｋＢ活性化阻害剤ＩＩ（４−メチル−Ｎ１−（３−フェニルプロピル）ベンゼン−１，２−ジアミン）、ＮＦ−ｋＢ活性化阻害剤ＩＩＩ（３−クロロ−４−ニトロ−Ｎ−（５−ニトロ−２−チアゾリル）−ベンズアミド）、ＮＦ−ｋＢ活性化阻害剤ＩＶ（（Ｅ）−２−フルオロ−４’−メトキシスチルベン）、ＮＦ−ｋＢ活性化阻害剤Ｖ（５−ヒドロキシ−（２，６−ジイソプロピルフェニル）−１Ｈ−イソインドール−１，３−ジオン）、
2020530034.tif 000462
オリドニン、パルテノリド、ＰＰＭ−１８（２−ベンゾイルアミノ−１，４−ナフトキノン）、Ｒｏｌ０６−９９２０、スルファサラジン、ＴＩＲＡＰ阻害剤ペプチド
2020530034.tif 000463
ウィサフェリンＡ、ウォゴニン、ＢＡＹ１１−７０８２（（Ｅ）３−［（４−メチルフェニル）スルホニル］−２−プロペンニトリル）、ＢＡＹ１１−７０８５（（Ｅ）３−［（４−ｔ−ブチルフェニル）スルホニル］−２−プロペンニトリル）、（Ｅ）−カプサイシン、オーロチオマレート（ＡＴＭまたはＡｕＴＭ）、エボジアミン、ハイポエストキシド、ＩＫＫ阻害剤ＩＩＩ（ＢＭＳ−３４５５４１）、ＩＫＫ阻害剤ＶＩＩ、ＩＫＫ阻害剤Ｘ、ＩＫＫ阻害剤ＩＩ、ＩＫＫ−２阻害剤ＩＶ、ＩＫＫ−２阻害剤Ｖ、ＩＫＫ−２阻害剤ＶＩ、ＩＫＫ−２阻害剤（ＳＣ−５１４）、ＩｋＢキナーゼ阻害剤ペプチド、ＩＫＫ−３阻害剤ＬＸ、ＡＲＲＹ−７９７（Ａｒｒａｙ  ＢｉｏＰｈａｒｍａ）、ＳＢ−２２００２５（５−（２−アミノ−４−ピリミジニル）−４−（４−フルオロフェニル）−１−（４−ピペリジンリル）イミダゾール）、ＳＢ−２３９０６３（トランス−４−［４−（４−フルオロフェニル）−５−（２−メトキシ−４−ピリミジニル）−１Ｈ−イミダゾール−１−イル］シクロヘキサノール）、ＳＢ−２０２１９０（４−（４−フルオロフェニル）−２−（４−ヒドロキシフェニル）−５−（４−ピリジル）１  Ｈ−イミダゾール）、ＪＸ−４０１（−［２−メトキシ−４−（メチルチオ）ベンゾイル］−４−（フェニルメチル）ピペリジン）、ＰＤ−１６９３１６（４−（４−フルオロフェニル）−２−（４−ニトロフェニル）−５−（４−ピリジル）−１Ｈ−イミダゾール）、ＳＫＦ−８６００２（６−（４−フルオロフェニル）−２，３−ジヒドロ−５−（４−ピリジニル）イミダゾ［２，１ｂ］チアゾール二塩酸塩）、ＳＢ−２００６４６（Ｎ−（１−メチル−１Ｈ−インドール−５−イル）−Ｎ’−３−ピリジニル尿素）、ＣＭＰＤ−１（２’−フルオロ−Ｎ−（４−ヒドロキシフェニル）−［１，１’−ビフェニル］−４−ブタンアミド）、ＥＯ−１４２８（（２−メチルフェニル）−［４−［（２−アミノ−４−ブロモフェニル）アミノ］−２−クロロフェニル］メタノン）、ＳＢ−２５３０８０（４−［５−（４−フルオロフェニル）−２−［４−（メチルスルホニル）フェニル］−１Ｈ−イミダゾール−４−イル］ピリジン）、ＳＤ−１６９（１Ｈ−インドール−５−カルボキサミド）、ＳＢ−２０３５８０（４−（４−フルオロフェニル）−２−（４−メチルスルフィニルフェニル）−５−（４−ピリジル）１Ｈ−イミダゾール）、ＴＺＰ−１０１（Ｔｒａｎｚｙｍｅ  Ｐｈａｒｍａ）、ＴＺＰ−１０２（Ｔｒａｎｚｙｍｅ  Ｐｈａｒｍａ）、ＧＨＲＰ−６（成長ホルモン放出ペプチド−６）、ＧＨＲＰ−２（成長ホルモン放出ペプチド−２）、ＥＸ−１３１４（Ｅｌｉｘｉｒ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ）、ＭＫ−６７７（Ｍｅｒｃｋ）、Ｌ−６９２，４２９（ブタンアミド、３−アミノ−３−メチル−Ｎ−（２，３，４，５−テトラヒドロ−２−オキソ−１−（（２’−（１Ｈ−テトラゾール−５−イル）（１’−ビフェニル）−４−イル）メチル）−１Ｈ−１−ベンズアゼピン−３−イル）−、（Ｒ）−）、ＥＰ１５７２（Ａｉｂ−ＤＴｒｐ−ＤｇＴφ−ＣＨＯ）、ジルチアゼム、ジルチアゼムの代謝産物、ＢＲＥ（脳および生殖器官に発現したタンパク質）、ベラパミル、ニモジピン、ジルチアゼム、オメガコノトキシン、ＧＶＩＡ、アムロジピン、フェロジピン、ラシジピン、ミベフラジル、ＮＰＰＢ（５−ニトロ−２−（３−フェニルプロピルアミノ）安息香酸）、フルナリジン、エリスロポエチン、ピペリン、ヘミン、ブラジリン、ｚ−Ｖ  ＡＤ−ＦＭＫ（ベンジルオキシカルボニル−Ｖａｌ−Ａｌａ−Ａｓｐ（ＯＭｅ）−フルオロメチルケトン）、ｚ−ＬＥＨＤ−ＦＭＫ（ベンジルオキシカルボニル−Ｌｅｕ−Ｇｌｕ（ＯＭｅ）−Ｈｉｓ−Ａｓｐ（ＯＭｅ）−フルオロメチルケトン）、Ｂ−Ｄ−ＦＭＫ（ｂｏｃ−アスパルチル（Ｏｍｅ）−フルオロメチルケトン）、Ａｃ−ＬＥＨＤ−ＣＨＯ（Ｎ−アセチル−Ｌｅｕ−Ｇｌｕ−Ｈｉｓ−Ａｓｐ−ＣＨＯ）、Ａｃ−ＩＥＴＤ−ＣＨＯ（Ｎ−アセチル−Ｉｌｅ−Ｇｌｕ−Ｔｈｒ−Ａｓｐ−ＣＨＯ）、ｚ−ＩＥＴＤ−ＦＭＫ（ベンジルオキシカルボニル−Ｉｌｅ−Ｇｌｕ（ＯＭｅ）−Ｔｈｒ−Ａｓｐ（ＯＭｅ）−フルオロメチルケトン）、ＦＡＭ−ＬＥＨＤ−ＦＭＫ（ベンジルオキシカルボニルＬｅｕ−Ｇｌｕ−Ｈｉｓ−Ａｓｐ−フルオロメチルケトン）、ＦＡＭ−ＬＥＴＤ−ＦＭＫ（ベンジルオキシカルボニルＬｅｕ−Ｇｌｕ−Ｔｈｒ−Ａｓｐ−フルオロメチルケトン）、Ｑ−ＶＤ−ＯＰＨ（キノリン−Ｖａｌ−ＡＳｐ−ＣＨ２−Ｏ−Ｐｈ）、ＸＩＡＰ、ｃＩＡＰ−１、ｃＩＡＰ−２、ＭＬ−ＩＡＰ、ＩＬＰ−２、ＮＡＩＰ、サバイビン、ブレース、ＩＡＰＬ−３、フォルチリン、ロイペプチン、ＰＤ−１５０６０６（３−（４−ヨードフェニル）−２−メルカプト−（Ｚ）−２−プロペン酸）、ＭＤＬ−２８１７０（Ｚ−Ｖａｌ−Ｐｈｅ−ＣＨＯ）、カルペプチン、アセチル−カルパスタチン、ＭＧ１３２（Ｎ−［（フェニルメトキシ）カルボニル］−Ｌ−ロイシル−Ｎ−［（１Ｓ）−１−ホルミル−３−メチルブチル］−Ｌ−ロイシンアミド）、ＭＹＯＤＵＲ、ＢＮ８２２７０（Ｉｐｓｅｎ）、ＢＮ２２０４（Ｉｐｓｅｎ）、ＡＨＬｉ−１１（Ｑｕａｒｋ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ）、ｍｄｍ２タンパク質、ピフィスリン−α（１−（４−メチルフェニル）−２−（４，５，６，７−テトラヒドロ−２−イミノ−３（２Ｈ）−ベンゾチアゾリル）エタノン）、トランス−スチルベン、シス−スチルベン、レスベラトロール、ピセアタンノール、ラポンチン、デオキシラポンチン、ブテイン、カルコン、イソリキルチゲン、ブテイン、４，２’，４’−トリヒドロキシカルコン、３，４，２’，４’，６’−ペンタヒドロキシカルコン、フラボン、モリン、フィセチン、ルテオリン、ケルセチン、ケンフェロール、アピゲニン、ゴシペチン、ミリセチン、６−ヒドロキシアピゲニン、５−ヒドロキシフラボン、５，７，３’，４’，５’−ペンタヒドロキシフラボン、３，７，３’，４’，５’−ペンタヒドロキシフラボン、３，６，３’，４’−テトラヒドロキシフラボン、７，３’，４’，５’−テトラヒドロキシフラボン、３，６，２’，４’−テトラヒドロキシフラボン、７，４’−ジヒドロキシフラボン、７，８，３’，４’−テトラヒドロキシフラボン、３，６，２’，３’−テトラヒドロキシフラボン、４’−ヒドロキシフラボン、５−ヒドロキシフラボン、５，４’−ジヒドロキシフラボン、５，７−ジヒドロキシフラボン、ダイゼイン、ゲニステイン、ナリンゲニン、フラバノン、３，５，７，３’，４’−ペンタヒドロキシフラバノン、ペラルゴニジンクロリド、塩化シアニジン、塩化デルフィニジン、（−）−エピカテキン（ヒドロキシ部位：３，５，７，３’、４＾；（−）−カテキン（ヒドロキシ部位：３，５，７，３’、４）；（−）−ガロカテキン（ヒドロキシ部位：３，５，７，３’，４’，５）（＋）−カテキン（ヒドロキシ部位：３，５，７，３’，４＾、（＋）−エピカテキン（ヒドロキシ部位：３，５，７，３’，４０、ヒノキチオール（ｂ−ツヤプリシン、２−ヒドロキシ−４−イソプロピル−２，４，６−シクロヘプタトリエン−１−オン）、Ｌ−（＋）−エルゴチオネイン（（Ｓ）−ａ−カルボキシ−２，３−ジヒドロ−Ｎ，Ｎ，Ｎ−トリメチル−２−チオキソ−１Ｈ−イニダゾール４−エタナミニウム分子内塩）、カフェー酸フェニルエステル、ＭＣＩ−１８６（３−メチル−１−フェニル−２−ピラゾリン−５−オン）、ＨＢＥＤ（Ｎ，Ｎ’−ジ−（２−ヒドロキシベンジル）エチレンジアミン−Ｎ，Ｎ’−二酢酸＊Ｈ２Ｏ）、アンブロキソール（トランス−４−（２−アミノ−３，５−ジブロモベンジルアミノ）シクロヘキサン−ＨＣｌ、およびＵ−８３８３６Ｅ（（−）−２−（（４−（２，６−ジ−１−ピロリジニル−４−ピリミジニル）−１−ピペラジニル）メチル）−３，４−ジヒドロ−２，５，７，８−テトラメチル−２Ｈ−１−ベンゾピラン−６−オール・２ＨＣｌ）、β−１−５−メチル−ニコチンアミド−２’−デオキシリボース、／３−Ｄ−１’−５−メチル−ニコチンアミド−２’−デオキシリボフラノシド、／３−１’−４，５−ジメチル−ニコチンアミド−２’−デオキシリボース、／３−Ｄ−１’−４，５−ジメチル−ニコチンアミド−２’−デオキシリボフラノシド、１−ナフチルＰＰ１（１−（１，１−ジメチルエチル）−３−（１−ナフタレニル）−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−４−アミン）、ラベンデュスチンＡ（５−［［（２，５−ジヒドロキシフェニル）メチル］［（２−ヒドロキシフェニル）メチル１］アミノ］−２−ヒドロキシ安息香酸）、ＭＮＳ（３，４−メチレンジオキシ−ｂ−ニトロスチレン）、ＰＰ１（１−（１，１−ジメチルエチル）−１−（４−メチルフェニル）−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−４−アミン）、ＰＰ２（３−（４−クロロフェニル）１−（１，１−ジメチルエチル）−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−４−アミン）、ＫＸ１−００４（Ｋｉｎｅｘ）、ＫＸ１−００５（Ｋｉｎｅｘ）、ＫＸ１−１３６（Ｋｉｎｅｘ）、ＫＸ１−１７４（Ｋｉｎｅｘ）、ＫＸ１−１４１（Ｋｉｎｅｘ）、ＫＸ２−３２８（Ｋｉｎｅｘ）、ＫＸ１−３０６（Ｋｉｎｅｘ）、ＫＸ１−３２９（Ｋｉｎｅｘ）、ＫＸ２−３９１（Ｋｉｎｅｘ）、ＫＸ２−３７７（Ｋｉｎｅｘ）、ＺＤ４１９０（Ａｓｔｒａ  Ｚｅｎｅｃａ、Ｎ−（４−ブロモ−２−フルオロフェニル）−６−メトキシ−７−（２−（１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−１−イル）エトキシ）キナゾリン−４−アミン）、ＡＰ２２４０８（Ａｒｉａｄ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ）、ＡＰ２３２３６（Ａｒｉａｄ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ）、ＡＰ２３４５１（Ａ���ｉａｄ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ）、ＡＰ２３４６４（Ａｒｉａｄ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ）、ＡＺＤ０５３０（Ａｓｔｒａ  Ｚｅｎｅｃａ）、ＡＺＭ４７５２７１（Ｍ４７５２７１、Ａｓｔｒａ  Ｚｅｎｅｃａ）、ダサチニブ（Ｎ−（２−クロロ−６−メチルフェニル）−２−（６−（４−（２−ヒドロキシエチル）−ピペラジン−１−イル）−２−メチルピリミジン−４−イルアミノ）チアゾール−５−カルボキサミド）、ＧＮ９６３（トランス−４−（６，７−ジメトキシキノキサリン−２イルアミノ）シクロヘキサノール硫酸塩）、ボスチニブ（４−（（２，４−ジクロロ−５−メトキシフェニル）アミノ）−６−メトキシ−７−（３−（４−メチル−１−ピペラジニル）プロポキシ）−３−キノリンカルボニトリル）、またはそれらの組み合わせから選択される。
【０３０３】
いくつかの実施形態において、薬物は、望ましくないニューロンまたは神経インパルスを低減する薬剤である。いくつかの実施形態において、薬物は、ジスキネジアまたはシンキネジアの１つ以上の症状を低減する。いくつかの実施形態において、薬物は、カルバマゼピン、オキシカルバゼピン、フェニテイン、バルプロ酸、バルプロ酸ナトリウム、シンナリジン、フルナリジン、もしくはニモジピン、またはそれらの組み合わせである。
【０３０４】
いくつかの実施形態において、薬物は、ニューロンまたは神経組織の再生を促進する薬剤である。いくつかの実施形態において、薬物は、成長因子である。いくつかの実施形態において、薬物は、脳由来神経栄養因子（ＢＤＮＦ）、毛様体神経栄養因子（ＣＮＴＦ）、グリア細胞株由来神経栄養因子（ＧＤＮＦ）、ニューロトロフィン−３、ニューロトロフィン−４、線維芽細胞成長因子（ＦＧＦ）受容体、インスリン様成長因子（ＩＧＦ）、またはそれらの組み合わせから選択される。
【０３０５】
ＸＩＩＩ．光誘発性神経アブレーションの方法
本開示は、光増感剤をヒトニューロンまたは神経に送達する方法であって、ヒトニューロンまたは神経を、（ａ）ニューロンもしくは神経、またはいずれかの構成要素に特異的に結合するペプチドと、（ｂ）光増感剤と、を含む、ヒトニューロンまたは神経ターゲティング分子と接触させることを含む、方法を提供する。いくつかの実施形態において、方法は、光増感剤を活性化させる光源にヒトニューロンまたは神経を曝露することをさらに含み、活性化した光増感剤は、ヒトニューロンまたは神経のアブレーションまたは殺傷を誘発する。特定の波長の光に曝露されると、光増感剤は、分子酸素と反応して、細胞毒性である一重項酸素を生成する。特定の実施形態において、光増感剤は、ポルフィリン、クロリン、または色素である。光増感剤の例としては、ポルフィリン、プロトポルフィリンＩＸ、プルリチン、ベルテポルフィン、ＨＰＰＨ、テモポルフィン、メチレンブルー、フォトフリン、プロトフリン、ヘマトポルフィリン、タラポルフィン、ベンゾポルフィリン誘導体一酸、５−アミノレブリン酸、ルテチウムテキサフィリン、メタロフタロシアニン、メタロナフタロシアニンスルホベンゾ−ポルフィラジン、メタロナフタロシアニン、亜鉛テトラスルホフタロシアニン、バクテリオクロリン、メタロクロリン、塩素誘導体、テトラ（ｍ−ヒドロキシフェニル）クロリン（ｍＴＨＰＣ）、フェオホルビド、ジブロモフルオレセイン（ＤＢＦ）、ＩＲ７００ＤＸ、ナフタロシアニン、およびポルフィリン誘導体が挙げられる。いくつかの実施形態において、ヒトニューロンまたは神経ターゲティング分子は、
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を含むペプチド配列を含む。いくつかの実施形態において、ペプチドは、
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を含む。いくつかの実施形態において、ペプチドは、
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を含む。いくつかの実施形態において、ペプチドは、
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を含む。いくつかの実施形態において、ペプチドは、
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を含む。いくつかの実施形態において、ペプチドは、
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を含む。いくつかの実施形態において、ペプチドは、
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を含む。いくつかの実施形態において、ペプチドは、
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を含む。いくつかの実施形態において、ペプチドは、
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を含む。いくつかの実施形態において、ペプチドは、
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ではないペプチドを含む。いくつかの実施形態において、ターゲティング分子は、
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ではないペプチドを含む。いくつかの実施形態において、ターゲティング分子は、
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ではないペプチドを含む。
【０３０６】
本明細書に開示される光増感剤を含むヒトニューロンまたは神経ターゲティング分子は、対象における局所的な神経殺傷の方法に使用することができる。いくつかの実施形態において、光増感剤を含むヒトニューロンまたは神経ターゲティング分子は、対象における慢性疼痛（例えば、背中、首、または関節痛）を治療するために使用される。いくつかの実施形態において、光増感剤を含むヒトニューロンまたは神経ターゲティング分子は、対象における前立腺がんを治療するために使用される。自律神経支配は、局所自律神経の光誘発性アブレーションによって前立腺がん成長および転移の一因となり得る。よって、局所自律神経は、前立腺がん療法の実行可能な標的であり得る。いくつかの実施形態において、光増感剤を含むヒトニューロンまたは神経ターゲティング分子は、腎血管における交感神経の光誘発性アブレーションにより対象における腎血管性高血圧症を治療するために使用される。いくつかの実施形態において、光増感剤を含むヒトニューロンまたは神経ターゲティング分子は、多汗症を治療するために使用される。いくつかの実施形態において、光増感剤を含むヒトニューロンまたは神経ターゲティング分子は、不整脈を治療するために使用される。いくつかの実施形態において、光増感剤を含むヒトニューロンまたは神経ターゲティング分子は、病理学的筋痙攣（例えば、メージュ症候群、片側顔面痙攣、斜頸）を治療するために使用される。
【０３０７】
ＸＩＶ．薬学的組成物
本明細書では、特定の実施形態において、本明細書に開示されるヒトニューロンまたは神経ターゲティング分子を含む薬学的組成物が開示される。本明細書における薬学的組成物は、薬学的に使用される調製物への活性薬剤の加工を容易にする賦形剤および助剤を含む１つ以上の生理学的に許容される担体を使用して製剤化される。適切な製剤は、選択される投与経路に依存する。薬学的組成物の要約は、例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｙ，Ｎｉｎｅｔｅｅｎｔｈ  Ｅｄ（Ｅａｓｔｏｎ，Ｐａ．：Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏｍｐａｎｙ，１９９５）、Ｈｏｏｖｅｒ，Ｊｏｈｎ  Ｅ．，Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏ．，Ｅａｓｔｏｎ，Ｐｅｎｎｓｙｌｖａｎｉａ  １９７５、Ｌｉｂｅｒｍａｎ，Ｈ．Ａ．ａｎｄ  Ｌａｃｈｍａｎ，Ｌ．，Ｅｄｓ．，Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｄｏｓａｇｅ  Ｆｏｒｍｓ，Ｍａｒｃｅｌ  Ｄｅｃｋｅｒ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，Ｎ．Ｙ．，１９８０、およびＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｄｏｓａｇｅ  Ｆｏｒｍｓ  ａｎｄ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ  Ｓｙｓｔｅｍｓ，Ｓｅｖｅｎｔｈ  Ｅｄ．（Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ  Ｗｉｌｌｉａｍｓ＆Ｗｉｌｋｉｎｓ，１９９９）に見出される。いくつかの実施形態において、ヒトニューロンまたは神経ターゲティング分子は、
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からなる群より選択されるペプチド配列を含む。いくつかの実施形態において、ターゲティング分子は、
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からなる群より選択されるペプチドを含む。いくつかの実施形態において、ターゲティング分子は、
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からなる群より選択されるペプチドを含む。いくつかの実施形態において、ターゲティング分子は、ペプチド
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を含む。いくつかの実施形態において、ターゲティング分子は、ペプチド
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を含む。いくつかの実施形態において、ターゲティング分子は、ペプチド
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を含む。いくつかの実施形態において、ターゲティング分子は、ペプチド
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を含む。いくつかの実施形態において、ターゲティング分子は、ペプチド
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を含む。いくつかの実施形態において、ターゲティング分子は、ペプチド
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を含む。いくつかの実施形態において、ターゲティング分子は、
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ではないペプチドを含む。いくつかの実施形態において、ターゲティング分子は、
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ではないペプチドを含む。いくつかの実施形態において、ターゲティング分子は、
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ではないペプチドを含む。
【０３０８】
特定の実施形態において、本明細書に開示される薬学的組成物は、薬学的に許容される希釈剤、賦形剤、または担体をさらに含む。いくつかの実施形態において、薬学的組成物は、他の医学的もしくは薬学的薬剤、担体、アジュバント、例えば、保存剤、安定剤、湿潤剤、もしくは乳化剤、溶液推進剤、浸透圧を調節するための塩、および／または緩衝剤を含む。加えて、薬学的組成物は、他の治療的に価値のある物質も含有する。
【０３０９】
特定の実施形態において、本明細書に開示されるヒトニューロンまたは神経ターゲティング分子は、薬物送達ビヒクルまたは担体を介して対象に送達される。いくつかの実施形態において、送達ビヒクルは、天然もしくは合成材料または両方から作製される。いくつかの実施形態において、送達ビヒクルは、ナノ粒子、マイクロ粒子、ポリマーミセル、ナノカプセル、デンドリマー、大ＰＥＧ、ナノゲル、リポソーム、フラーレン、ナノ構造脂質担体、ナノシェル、量子ドット、タンパク質ベースのナノ担体（例えば、アルブミン、エラスチン、グリアジン、レグミン、ゼイン、大豆タンパク質、乳タンパク質、乳清ベースのナノ担体）、有機ナノ担体（例えば、ゼラチン、デキストラン、グアーガム、キトサン、コラーゲン）、多糖類ベースの担体（例えば、デキストラン、キトサン、ペクチン）、脂質乳濁液、またはそれらの組み合わせである。
【０３１０】
特定の実施形態において、本明細書に開示される薬学的組成物は、非経口（静脈内、皮下、腹腔内、筋肉内、血管内、髄腔内、硝子体内、点滴、または局所）投与を含むが、これらに限定されない、任意の好適な投与経路によって対象に投与される。
【０３１１】
筋肉内、皮下、または静脈内注射に好適な製剤には、生理学的に許容される滅菌水性または非水性溶液、分散液、懸濁液、または乳濁液、および滅菌注射可能溶液または分散液に再構成するための滅菌粉末剤が含まれる。好適な水性および非水性担体、希釈剤、溶媒、またはビヒクルの例は、水、エタノール、ポリオール（プロピレングリコール、ポリエチレングリコール、グリセロール、クレモホールなど）、それらの好適な混合物、植物油（オリーブ油など）、およびオレイン酸エチルなどの注射可能な有機エステルを含む。適切な流動性は、例えば、レシチンなどのコーティングの使用、分散液の場合は必要な粒子サイズの維持、および界面活性剤の使用によって維持される。皮下注射に好適な製剤は、保存剤、湿潤剤、乳化剤、および調剤薬剤などの任意の添加剤も含有する。
【０３１２】
静脈内注射について、活性薬剤は、水性溶液、好ましくはハンクス液、リンゲル液、または生理食塩水緩衝液などの生理学的に適合性の緩衝液で任意に製剤化される。
【０３１３】
非経口注射には、ボーラス注射または持続点滴が任意に含まれる。注射用の製剤は、保存剤が添加された、例えば、アンプルまたは複数用量容器で、単位剤形で任意に提供される。いくつかの実施形態において、本明細書に記載される薬学的組成物は、油性または水性ビヒクル中の滅菌懸濁液、溶液、または乳濁液として非経口注射に好適な形態であり、懸濁剤、安定剤、および／または分散剤などの製剤化剤を含有する。非経口投与用の薬学的製剤には、水溶性形態の活性薬剤の水性溶液が含まれる。加えて、懸濁液は、適切な油性注射懸濁液として任意に調製される。
【０３１４】
いくつかの実施形態において、本明細書に記載される薬学的組成物は、正確な投与量の単回投与に好適な単位剤形である。単位剤形では、製剤は、適切な量の本明細書に開示される活性薬剤を含有する単位用量に分割される。いくつかの実施形態において、単位投与量は、個別の量の製剤を含有するパッケージの形態である。非限定的な例としては、包装された錠剤またはカプセル、およびバイアルまたはアンプル中の粉末剤がある。いくつかの実施形態において、水性懸濁液組成物は、単一用量の再密閉不可能な容器に包装される。あるいは、複数用量の再密閉可能な容器が使用され、この場合、組成物に保存剤を含めるのが典型的である。ほんの一例として、非経口注射用の製剤は、アンプルを含むが、これに限定されない、単位剤形で、または保存剤が添加された複数用量容器で提供される。
【０３１５】
いくつかの実施形態において、ヒトニューロンまたは神経ターゲティング分子は、ヒト対象に全身静脈内注射によって投与される。
【実施例】
【０３１６】
実施例１：ヒト神経をターゲティングするためのペプチド、ならびに画像誘導手術、診断、および治療的送達におけるそれらの使用
概要
ヒト神経に結合し、したがって蛍光支援手術中の神経の全身インビボ標識化に有用であり得るペプチドを特定するために、ファージディスプレイスクリーンを使用した。具体的には、ｇＩＩＩのＮ末端に１６個のランダムなアミノ酸配列を発現するｍ１３ファージライブラリー（Ｃｒｅａｔｉｖｅ  Ｂｉｏｌａｂｓ）を、新たに切除または凍結されたヒト神経への結合についての選択によって処理した。並行して、新たに設計されたＮＰ４１  Ｘ１２＋４ライブラリーをスクリーニングした。各ライブラリーを、最大６回の結合および洗浄サイクルによって処理した。選択されたファージは、神経結合についての陽性選択の前に、親和性の低い筋肉および脂肪組織にライブラリーを予め吸収させることによって、組織に高い親和性で結合するものについての対抗選択についてさらに選択された。個々のファージの配列決定によって、クローンのプールと比較して高度に富化され、したがって親和性がより高い、これらのユニーク配列：
Ｘ１６ライブラリーからの
2020530034.tif 000527
およびＮＰ４１−Ｘ１２＋４ライブラリーからの
2020530034.tif 000528
が得られた。選択されたファージの配列に由来するアミノ酸配列は、固相合成によってペプチドとして化学的に合成し、ヒト神経へのインビトロ結合および齧歯類神経のインビボ標識化のためにＧＧＣリンカーを介してＣ末端でフルオレセイン（ＦＡＭ）またはＣｙ５で標識した。ヒト神経およびインビボ標識マウス坐骨神経の新鮮な切片の強い標識化を示した。有用な標識化は、静脈内投与後２〜６時間に行われ、カスタマイズされた蛍光解剖顕微鏡、ＣＲＩからのＭａｅｓｔｒｏイメージャー、またはＺｅｉｓｓ  Ｌｕｍａｒを使用して視覚化することができた。
【０３１７】
外科的処置中の末梢神経の偶発的な切断は患者の著しく高い罹患率をもたらすため、末梢神経の保存は、あらゆる外科的処置の最も重要な目標の１つである。また、神経は、ほとんどの任意の他の組織よりも切断後ゆっくりとかつ不完全に成長する。典型的には、末梢神経は、近くの構造とのそれらの比較的一定の関係、および細長い白っぽく輝く構造の典型的な外観によって特定される。しかしながら、多くの場合、これらの基準を使用する末梢神経の特定は、例えば、腫瘍が関与する場合、炎症／感染の場合、以前に手術された手術野、または神経が骨に包まれている場合、困難であり得る。
【０３１８】
神経標識化のための現行方法は主に、蛍光色素の使用を介した個別に特定された軸索路の逆行性または順行性トレーシングに依存する。蛍光色素は、神経支配標的に適用され、逆行様式で移動して神経支配を担う神経線維を標識するか、または特定された神経に直接適用され、順行性および逆行性の両方で神経線維を標識するかのいずれかである。この技法は、標識することができるのは一度に１つの神経線維路のみであり、色素が注射された場所に依存する、という欠点を有する。第二の欠点は、逆行性軸索トレーサーが典型的には神経細胞体に蓄積し、これらの蛍光色素による軸索の標識化が限定されるため、軸索路に沿った蛍光色素の蓄積が限定されることである。この技法の第三の不利点は、逆行性輸送が比較的遅く（１日あたりミリメートル程度）、したがって（坐骨神経およびその樹枝状分岐の場合のように）しばしば１メートルよりも長いヒト神経を標識するためには長い時間がかかることである。さらに、運動神経を標識する直接筋肉内注射などの神経支配標的への蛍光色素の適用は、典型的には、注射部位に不定量のトレーサー色素が残った状態で汚い。神経の切開は、隣接する構造に遭遇する前のそれらの正確な視覚化に依存するため、蛍光色素で汚染されている手術部位は望ましくないであろう。最後に、蛍光色素自体の直接注射は、機械的損傷または注射部位での色素およびビヒクルの非常に高い局所濃度のいずれかによって、目的の標的器官または神経に損傷を与え得る。
【０３１９】
本明細書に記載される神経を標識する蛍光標識されたペプチドの全身注射の方法は、上記の蛍光トレーサーの不利点の全てに対処する。第一に、ペプチドが全身に送達されるので、体内の全ての末梢神経が標識される可能性を有する。これは、現行方法のような、一度に１つの神経のみの標識化とは対照的である。第二に、本明細書に記載されるペプチドは神経に結合するそれらの能力について選択されたため、神経線維は、隣接する非神経構造と比較して明確に視覚化される。これは、ほとんどの現行の蛍光色素を有する軸索突起ではなく神経細胞体への優先的な蓄積とは対照的である。第三に、本明細書に記載されるペプチドの神経への結合は非常に迅速に行われ、この技法を使用する末梢神経の視覚化は、数時間以内に達成することができる。これは、順行性または逆行性トレーサーによる標識化の比較的遅い速度とは対照的である。最後に、ペプチドは静脈内注射によって全身に適用されるため、注射部位での神経への損傷は問題ではない。
【０３２０】
実験室での研究のためにマウス末梢神経を使用して導き出された神経ホーミングペプチド配列は、以前に記載されている（米国特許第８，６８５，３７２号、２０１４年４月１日）。しかしながら、意図される神経標識化の最終的な臨床適用はヒト患者における適用であるため、ヒト神経に結合するユニークペプチド配列の特定が求められた。本出願に記載されるペプチド配列は、ヒト神経に結合するそれらの能力によって特定された。これらのペプチド配列は、ヒト患者への全身静脈内注射後にヒト神経に結合するそれらの能力によって特定され、したがって、これらのペプチドは、齧歯類神経に対して選択された配列と比較してヒト神経に結合する可能性がさらにより高いであろう。
【０３２１】
神経を標識するための現行方法は、蛍光トレーサー色素（Ｆａｓｔ  Ｂｌｕｅ、Ｒｈｏｄａｍｉｎｅ−ｉｓｏｔｈｉｏｃｙａｎａｔｅ、Ｆｌｕｏｒｏ−Ｒｕｂｙ、Ｆｌｕｏｒｏ−Ｅｍｅｒａｌｄ）、カルボシアニン色素（ＤｉＩ、ＤｉＡｓｐ、ＤｉＯ、ＤｉＡ）、Ｆｌｕｏｒｏ−Ｇｏｌｄ、蛍光標識されたラテックスビーズ、蛍光標識された植物レクチンおよび細菌毒素（小麦胚芽凝集素、落花生凝集素、コンカナバリンＡ、インゲンマメ白血球凝集素（ＰＨＡ−Ｌ）、大豆凝集素、ハリエニシダ凝集素、トウゴマ凝集素（ＩおよびＩＩ）、破傷風毒素断片Ｃ、コレラ毒素Ｂ、ならびに蛍光標識されたデキストランコンジュゲートの適用を含む。
【０３２２】
方法：
実験の詳細：
ヒト神経組織に結合するペプチドを特定するために、ｇＩＩＩのＮ末端にランダムな１６アミノ酸配列を発現するｍ１３ファージライブラリー（Ｃｒｅａｔｉｖｅ  Ｂｉｏｌａｂｓ）、またはＮＰ４１の誘導体を発現する内部作成ライブラリーを使用した。
【０３２３】
ペプチドの選択
ヒト末梢神経を、神経切除処置を受けている患者から入手し、ホモジナイズした。高タンパク質結合６ウェルプレートに結合された神経ホモジネートとファージライブラリー混合物をインキュベートした。インキュベーション後、混合物を遠心分離してペレットをＰＢＳで洗浄するか、またはプレートをＰＢＳで洗浄した。ペレットを再度ホモジナイズして力価および再増幅のために播種するか、または低ｐＨバッファーでプレートから遊離させた。各ラウンドで結合したファージを配列決定し、リピートを記録した。選択のラウンド４までリピートは特定されなかった。
Ｘ１６ライブラリーからの
2020530034.tif 000529
および
2020530034.tif 000530
が、ラウンド５の後に特定された。表１。
【０３２４】
（表１）特定されたペプチド
2020530034.tif 000531
【０３２５】
ペプチドのインビボ試験
１５０ｎｍｏｌまたは４５０ｎｍｏｌのいずれかのフルオレセイン標識合成ペプチドをマウスに静脈内注射した。非特異的結合のウォッシュアウトのための２時間の待機時間後、マウスに麻酔をかけ、坐骨神経を露出させるために後肢の背面にわたって皮膚切開を行った。明視野および蛍光画像は、Ｍｅｔａｍｏｒｐｈソフトウェアを使用する解剖顕微鏡で入手した（図１）。神経および隣接する非神経組織の蛍光の定量化は、Ｉｍａｇｅ  Ｊで行った（図２）。ヒト神経切片にもペプチドを局所適用した。神経は、切片化の前にＯＴＣで新鮮凍結した。ペプチドを３００ｕＭの濃度で局所適用し、ＨＮＰ４０１、ＨＮＰ４０２、ＨＮＰ４０４、および以前に報告された神経結合ペプチドＮＰ４１の画像を示した（図３）。バリアント
2020530034.tif 000532
およびＮＰ１２４の画像も示す。ＮＰ７１３も試験され、これは刊行物では報告されていない。ＮＰ７１３は、マウス組織に対する選択の７ラウンド後に富化され、またヒト組織に対する選択の４ラウンド後に見られた配列
2020530034.tif 000533
を有するＮＰ４１の誘導体である。ＮＰ７１３ファージの結合は、野生型ファージと比較して４．８倍高い神経：筋肉比を示した。ＦＡＭ−ＮＰ７１３は、ＮＰ４１と同様の神経：筋肉コントラストを示した（ここではデータを示していない）。ＮＰ−４１およびＮＰ７１３の全てのＤ−アミノ酸対照、ならびにペプチドとコンジュゲートしていないカルボキシフルオレセインも示す。ＨＮＰ４０１は、最も高い神経特異的コントラストを示し、標識化の大部分が神経周膜において発生した。ＨＮＰ４０１の選択的結合をさらに実証するために、ＨＮＰ４０１、ＮＰ４１、およびＨＮＰ４０４を、より低濃度の１００μＭで試験した（図４）。次いで、ＨＮＰ４０１を、ラット坐骨神経およびラット前立腺海綿体神経の標識化についてインビボで試験した。図５は、ラット坐骨神経のインビボ標識化を示す。図６および７は、白色光視覚化と比較したラット前立腺海綿体神経のインビボ標識化を示す。
【０３２６】
実験室での研究のためにマウス神経に結合するそれらの能力によって特定された神経ホーミングペプチド配列は、以前に記載されている。本明細書に記載されるペプチド配列は、ヒト患者への全身静脈内注射後にヒト神経に結合するそれらの能力によって特定されるので、これらのペプチドは、齧歯類神経に対して選択された配列と比較してヒト神経に結合する可能性がさらにより高いであろう。
【０３２７】
蛍光標識されたヒト神経結合ペプチドは、静脈内注射を介して全身に適用される。非特異的結合のウォッシュアウトの短い待機期間後、末梢神経は、適切な励起および放出フィルターで手術野内で視覚化することができる。
【０３２８】
ヒト神経結合ペプチドはまた、神経に対する神経栄養または保護特性を有し得る因子にコンジュゲートし得る。静脈内注射による全身適用後、ペプチド−栄養／神経保護因子コンジュゲートは、末梢および脊髄の両方で損傷した神経の修復／再生を促進し得る。
【０３２９】
神経保護／神経栄養因子にコンジュゲートしているヒト神経結合ペプチドは、損傷した神経へのこれらの因子の局所送達をさらに改善し、損傷に対する抵抗／修復／再生を潜在的に促進するために、損傷ホーミングペプチドにもコンジュゲートし得る。
【０３３０】
用途および使用：
蛍光標識された神経結合ペプチドは、物理的に遭遇し、よって潜在的にそれらを損傷する前に、外科的処置中の神経の視覚化において外科医を支援するために使用することができる。男性の勃起を制御する海綿体神経が前立腺の非常に近くを走るが、通常は実際には見えないため、これは前立腺の手術中に特に重要である。
【０３３１】
神経結合ペプチド−神経栄養／神経保護因子コンジュゲートは、損傷した神経の修復／再生を促進するために使用することができる。
【０３３２】
神経結合ペプチドは、局所疼痛の治療としての光誘発性神経殺傷での潜在的な使用のための光増感色素にコンジュゲートすることができる。
参考文献
2020530034.tif 000534
【０３３３】
実施例２：ヒト神経をターゲティングするための最適化されたペプチド、ならびに画像誘導手術、診断、および治療的送達におけるそれらの使用
概要
ヒト神経に結合し、したがって蛍光支援手術中の神経の全身インビボ標識化に有用であり得るペプチドを特定するために、ファージディスプレイスクリーンを使用した。具体的には、ｇＩＩＩのＮ末端に１６個のランダムなアミノ酸配列を発現するｍ１３ファージライブラリー（Ｃｒｅａｔｉｖｅ  Ｂｉｏｌａｂｓ）を、新たに切除または凍結されたヒト神経への結合についての選択によって処理した。ライブラリーを、最大６回の結合および洗浄サイクルによって処理した。選択されたファージは、神経結合についての陽性選択の前に、親和性の低い筋肉および脂肪組織にライブラリーを予め吸収させることによって、組織に高い親和性で結合するものについての対抗選択についてさらに選択された。個々のファージの配列決定によって、クローンのプールと比較して高度に富化され、したがって親和性がより高い、これらのユニーク配列：
2020530034.tif 000535
が得られた。選択されたファージの配列に由来するアミノ酸配列は、固相合成によってペプチドとして化学的に合成し、ヒト神経へのインビトロ結合および齧歯類神経のインビボ標識化のためにフルオレセインまたはＣｙ５で標識した。ヒト末梢神経（運動、感覚、自律）ならびにインビボ標識マウスおよびラット坐骨神経の新鮮な切片の強い標識化を示した。有用な標識化は、静脈内投与後２〜６時間に行われ、カスタマイズされた蛍光解剖顕微鏡、ＣＲＩからのＭａｅｓｔｒｏイメージャー、またはＺｅｉｓｓ  Ｌｕｍａｒ解剖顕微鏡を使用して視覚化することができた。
【０３３４】
結果
神経の特定および保存は、頭頸部の手術において不可欠である。
偶発的な切断または損傷は、慢性疼痛、しびれ、または永久麻痺を含む著しく高い患者罹患率をもたらし得るため、末梢神経の特定は、手術中のそれらの保存のために重要である１。神経の特定は、頭頸部の手術中に特に重要である。例えば、顔面神経機能障害は、急性術後期間中に４０％、耳下腺摘出術後１か月で３０％と報告されている２，３。同様に、顔面神経機能障害は、前庭神経鞘腫手術後１年で３０％に達すると報告されている４。一時的および永久的な声帯不動は、甲状腺手術、脊椎への前頸進入、食道切除術、および頸動脈内膜切除術の主要な外科的合併症である５。顔面神経のコースは典型的には定義された解剖学的ランドマークに従うが、広範な患者間のばらつきが、ディビジョンの総数、個々のディビジョンの起源、およびディビジョン間の接続におけるばらつきを含む側頭葉外顔面神経の各分岐について文書化されている６−９。同じ患者内であっても、左右の顔面神経は、コースおよびディビジョンにおける違いを示し得る１０。反回喉頭神経について同様のばらつきが文書化されている１１、１２。腫瘍浸潤、炎症、外傷、または再手術の場合、神経の特定はさらにより困難になり得る。最後に、再建手術中に非常に重要である変性神経の特定は、それらが時間と共により小さく、薄くなるため、それらの機能している対応物よりもさらに困難である。その結果、神経組織と非神経組織との間の視覚的決定を改善する任意の手段は、外科的技法における重大な進歩を表すであろう。
【０３３５】
神経の特定および保存は、前立腺がん手術を含む他の手術中に不可欠である。
前立腺がんは、米国人男性において最も一般的な固形臓器悪性腫瘍である。限局性前立腺がんを有する男性について、手術は、優れたがん管理をもたらす。大抵は、このがん治療は、勃起機能、尿制御、および全体的な生活の質を犠牲にして行われる。根治的前立腺切除術中の自律神経血管束の保存は、手術の重要な局面である。ほぼ２０年間にわたって、勃起機能を保存するために前立腺の後外側面に沿って走る自律神経を保存することの重要性が認識されている。しかしながら、自律神経線維自体はめったに視覚化されない。代わりに、外科医は、最も高密度の自律神経を有することが示されている、血管複合体または神経血管束を保存する。最も経験のある外科医でも勃起不全および尿失禁が一般的である１４ように、これらの自律神経の正確な位置および分布は様々である１３−１８。改善した性機能転帰は、外科医の経験の増加およびこれらの神経の圧挫または牽引損傷の回避と関連している。外科医の経験および体積における著しい解剖学的ばらつきおよび違いは、有害転帰を最小限に抑えながら外科的質を改善するための機会を生み出す。腫瘍浸潤、炎症、外傷、または再手術の場合、神経の特定および保存は、さらなる困難を表すであろう。最後に、触覚フィードバック１９の固有の欠如を伴うロボット支援手術の使用の増加は、外科医の視覚情報への依存をさらに増加させる。その結果、神経組織と非神経組織との間の視覚的決定を改善する任意の手段は、重大な進歩を表すであろう。
【０３３６】
手術中に小神経を特定するのは困難である。
細いか、または埋もれた神経は、特に区別するのが難しく、したがって外科的処置中に損傷を受ける可能性が最も高い。直接露出前の運動神経の特定は現在、刺激電極が挿入され、遠位筋収縮がモニターされる筋電図（ＥＭＧ）モニタリング２０−２２に依存している。ＥＭＧは、撮像技法ではないため、神経が１つの場所で特定された場合でも、刺激部位からどのくらい離れて、かつどの方向で神経が存在するかについての視覚的ガイドはない。さらに、ＥＭＧは運動経路のみを特定し、三叉神経または蝸牛前庭神経の最初の２つのディビジョンなどの感覚線維も、前立腺の周囲の神経血管束などの交感神経路も特定せず２３−２５、根治的前立腺切除術後の神経損傷は、重大な尿失禁および勃起不全をもたらす２６。電極挿入は、それ自体が神経を損傷し得る。最後に、軸索または神経筋伝達が、神経圧迫、外傷、腫瘍浸潤、局所麻酔剤、または神経筋遮断剤によって記録部位から遠い場所で一時的に遮断されると、ＥＭＧは失敗する。光コヒーレンストモグラフィ２７またはレーザ共焦点顕微鏡法２８など、外因性プローブ分子なしでのインビボ神経視覚化のためのいくつかの潜在的な技法がある。しかしながら、神経は、他の組織からそれらを区別するには非常に小さな固有のコントラストを有し、これらの技法は、手術を誘導するために必要な視野にわたってリアルタイムのライブ画像を容易に生成しない。がん切除、外傷性または治療的切断後の再建手術中に特定することが重要な変性神経もミエリンを有さず、したがってこれらの薬剤の恩恵を受けないであろう。
【０３３７】
手術中の神経の視覚化を改善するための競合戦略。
これらの理由で、手術中の神経視覚化を改善する標識化試薬の開発には大きな関心がある。蛍光色素２９−３２またはコレラ毒素のＢサブユニット（ＣＴｂ４８８）３３の使用を介した個別軸索路の逆行性または順行性トレーシングに依存する神経標識化が注目されている。蛍光色素は、神経支配標的に適用され、逆行様式で移動して神経支配神経線維を標識するか、または特定された神経に直接適用され、順行性および逆行性の両方で神経線維を標識する。局所注射は、一度に１つの神経線維路のみを標識することができるという欠点を有する。順行性および逆行性輸送は、比較的遅く、注射部位にトレーサーのほとんどを残しながら、数ミリメートル移動するために数日かかり得る。神経の切開は、隣接構造の正確な視覚化に依存するため、過剰な蛍光色素で重度に汚染された手術部位は望ましくないであろう。最後に、蛍光色素の直接注射は、機械的損傷または注射部位での色素およびビヒクルの非常に高い局所濃度のいずれかによって、目的の標的器官または神経に損傷を与え得る。
【０３３８】
より最近では、インドシアニングリーン（ＩＣＧ）などの血管色素を使用して、神経の血管供給（すなわち、神経脈管）を標識することに関心がある３４、３５。この技術の１つの制限は、小神経（前立腺手術に重要な海綿体神経など）が比例して少ない神経脈管を有し、隣接組織と比較してコントラストおよび強度を制限することである。
【０３３９】
ジスチリルベンゼン（ＤＳＢ）誘導体３６、クマリン誘導体、および抗ガングリオシド抗体３７を含むミエリンをターゲティングする薬剤にも注目が集まっている。ＤＳＢおよびクマリン誘導体は、固有の蛍光を有する小分子であり、抗ガングリオシド抗体は、撮像のために蛍光色素にコンジュゲートされる３６−４３。これらの分子は末梢神経撮像に潜在的に有望であるが、海綿体神経などの無髄神経（自律および最小限有髄である）は、ほとんど結合を有さず、それによってこれらの重要な手術におけるそれらの有用性を制限する可能性があるであろう。変性神経は存在するミエリンが限られ、よってこれらの薬剤で標識されないであろう。
【０３４０】
本明細書に記載される神経を標識する蛍光標識されたペプチドの全身注射の方法は、上記の他の神経ターゲティング技法の不利点の全てに対処する。第一に、ペプチドが全身に送達されるので、体内の全ての末梢神経が標識される可能性を有する。これは、現行方法のような、一度に１つの神経のみの標識化とは対照的である。第二に、本明細書に記載されるペプチドは神経に結合するそれらの能力について選択されたため、神経線維は、隣接する非神経構造と比較して明確に視覚化される。これは、ほとんどの現行の蛍光色素を有する軸索突起ではなく、神経細胞体への優先的な蓄積とは対照的である。第三に、本明細書に記載されるペプチドの神経への結合は非常に迅速に行われ、この技法を使用する末梢神経の視覚化は、数時間以内に達成することができる。これは、順行性または逆行性トレーサーでの標識化の比較的遅い速度とは対照的である。最後に、ペプチドは静脈内注射によって全身に適用されるため、注射部位での神経への損傷は問題ではない。
【０３４１】
実験室での研究のためにマウス末梢神経を使用して誘導された神経ホーミングペプチド配列は、以前に記載されている（米国特許第８，６８５，３７２号、２０１４年４月１日、Peptides and aptamers for targeting of neuron or nerves、ＵＳ２０１２／０１４８４９９、およびＷＯ２０１０／１２１０２３Ａ２）。しかしながら、神経標識化の最終的な臨床適用はヒト患者において意図されるため、ヒト神経に結合するユニークペプチド配列の特定が求められた。本出願に記載されるペプチド配列は、ヒト神経に結合するそれらの能力によって特定された。これらのペプチド配列は、ヒト患者への全身静脈内注射後にヒト神経に結合するそれらの能力によって特定され、そのようなものとして、齧歯類神経に対して選択されたペプチドよりも配列と比較してヒト神経に結合する可能性がさらにより高いであろう。
【０３４２】
神経を標識するための現行方法は、蛍光トレーサー色素（Ｆａｓｔ  Ｂｌｕｅ、Ｒｈｏｄａｍｉｎｅ−ｉｓｏｔｈｉｏｃｙａｎａｔｅ、Ｆｌｕｏｒｏ−Ｒｕｂｙ、Ｆｌｕｏｒｏ−Ｅｍｅｒａｌｄ）、カルボシアニン色素（ＤｉＩ、ＤｉＡｓｐ、ＤｉＯ、ＤｉＡ）、Ｆｌｕｏｒｏ−Ｇｏｌｄ、蛍光標識されたラテックスビーズ、蛍光標識された植物レクチンおよび細菌毒素（小麦胚芽凝集素、落花生凝集素、コンカナバリンＡ、インゲンマメ白血球凝集素（ＰＨＡ−Ｌ）、大豆凝集素、ハリエニシダ凝集素、トウゴマ凝集素（ＩおよびＩＩ）、破傷風毒素断片Ｃ、コレラ毒素Ｂ、ならびに蛍光標識されたデキストランコンジュゲートの適用を含む。
【０３４３】
蛍光色素は、神経支配標的に適用され、逆行様式で移動して神経支配神経線維を標識するか、または特定された神経に直接適用され、順行性および逆行性の両方で神経線維を標識する。上記のように、局所注射は、一度に１つの神経線維路のみを標識することができるという欠点を有する。順行性および逆行性輸送は、比較的遅く、注射部位にトレーサーのほとんどを残しながら、数ミリメートル移動するために数日かかり得る。神経の切開は、隣接構造の正確な視覚化に依存するため、過剰な蛍光色素で重度に汚染された手術部位は望ましくないであろう。最後に、蛍光色素の直接注射は、機械的損傷または注射部位での色素およびビヒクルの非常に高い局所濃度のいずれかによって、目的の標的器官または神経に損傷を与え得る。
【０３４４】
より最近では、インドシアニングリーン（ＩＣＧ）などの血管色素を使用して、神経の血管供給（すなわち、神経脈管）を標識することに関心がある３４、３５。この技術の１つの制限は、小神経（前立腺手術に重要な海綿体神経など）が比例して少ない神経脈管を有し、隣接組織と比較してコントラストおよび強度を制限することである。
【０３４５】
ジスチリルベンゼン（ＤＳＢ）誘導体３６、クマリン誘導体、および抗ガングリオシド抗体３７を含むミエリンをターゲティングする薬剤にも注目が集まっている。ＤＳＢおよびクマリン誘導体は、固有の蛍光を有する小分子であり、抗ガングリオシド抗体は、撮像のために蛍光色素にコンジュゲートされる３６−４３。これらの分子は末梢神経撮像に潜在的に有望であるが、海綿体神経などの無髄神経（自律および最小限有髄である）は、ほとんど結合を有さず、それによってこれらの重要な手術におけるそれらの有用性を制限する可能性があるであろう。変性神経は存在するミエリンが限られ、よってこれらの薬剤で標識されないであろう。
【０３４６】
実験室での研究のためにマウス神経に結合するそれらの能力によって特定された神経ホーミングペプチド配列は、以前に記載されている。本明細書に記載されるペプチド配列は、ヒト患者への全身静脈内注射後にヒト神経に結合するそれらの能力によって特定されるので、これらのペプチドは、齧歯類神経に対して選択された配列と比較してヒト神経に結合する可能性がさらにより高いであろう。
【０３４７】
蛍光標識されたヒト神経結合ペプチドは、静脈内注射を介して全身に適用される。非特異的結合のウォッシュアウトの短い待機期間後、末梢神経は、適切な励起および放出フィルターで手術野内で視覚化することができる。
【０３４８】
ヒト神経結合ペプチドはまた、神経に対する神経栄養または保護特性を有し得る因子にコンジュゲートし得る。静脈内注射による全身適用後、ペプチド−栄養／神経保護因子コンジュゲートは、末梢および脊髄の両方で損傷した神経の修復／再生を促進し得る。
【０３４９】
神経保護／神経栄養因子にコンジュゲートしているヒト神経結合ペプチドは、損傷した神経へのこれらの因子の局所送達をさらに改善し、損傷に対する抵抗／修復／再生を潜在的に促進するために、損傷ホーミングペプチドにもコンジュゲートし得る。
【０３５０】
方法
実験の詳細：
ヒト神経組織に結合するペプチドを特定するために、ｇＩＩＩのＮ末端にランダムな１６アミノ酸配列を発現するｍ１３ファージライブラリー（Ｃｒｅａｔｉｖｅ  Ｂｉｏｌａｂｓ）、またはＮＰ４１の誘導体を発現する内部作成ライブラリーを使用した。
2020530034.tif 000536
（ＮＰ−４１、配列番号１５、米国特許第８，６８５，３７２号または国際特許公開第ＷＯ２０１０／１２１０２３Ａ２号参照、その両方は本明細書にそれらの全体が参照により組み込まれる）。
【０３５１】
ペプチドの選択：
ヒト末梢神経を、神経切除処置を受けている患者から入手し、ホモジナイズした。高タンパク質結合６ウェルプレートに結合された神経ホモジネートとファージライブラリー混合物をインキュベートした。インキュベーション後、混合物を遠心分離してペレットをＰＢＳで洗浄するか、またはプレートをＰＢＳで洗浄した。ペレットを再度ホモジナイズして力価および再増幅のために播種するか、または低ｐＨバッファーでプレートから遊離させた。各ラウンドで結合したファージを配列決定し、リピートを記録した。選択のラウンド４までリピートは特定されなかった。
【０３５２】
以下のペプチドが特定された：Ｘ１６ライブラリーからの
2020530034.tif 000537
および
2020530034.tif 000538
がラウンド５後に特定された。ペプチド表２を参照されたい。
【０３５３】
（表２）特定されたペプチド
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【０３５４】
ヒト神経に結合するペプチドの実証：
ファージ選択されたペプチドのヒト神経への結合についての親和性を決定するために、それらを固相合成によって化学的に合成し、ＧＧＣリンカーを介してＣ末端でフルオレセインで標識した。ペプチドを、切片化されたヒト腓腹神経およびヒト側頭筋に局所的に適用して、神経対筋肉コントラストを決定した。ＨＮＰ４０１は、ヒト神経の最も高い結合および強調を示した（図８）。ヒト神経でスクリーニングされた他のペプチドのデータ、ならびに対照（遊離カルボキシフルオレセインおよびヒト神経でスクリーニングされたＮＰ４１を含む）のデータをさらに示す。追加の神経型についてのＨＮＰ４０１の結合およびコントラストを確認するために、結合を神経および筋肉において顔面腕神経叢神経のＨＮＰ４０１およびＮＰ４１の両方と比較した（図９）。ヒト神経への結合と筋肉への結合との差を定量化するために、フルオレセイン標識神経結合ペプチドの局所適用で同様に処理された選択神経およびヒト側頭筋の神経周膜からのＲＯＩについて蛍光シグナル強度を測定した。ＦＡＭ−ＨＮＰ４０１は、ＦＡＭ−ＮＰ４１（１２６．１７±６１．０３）と比較して１０．９倍の蛍光シグナル強度（１３７４．４４±４２５．９６）でヒト腓腹神経への選択的結合を示した（ｐ＝０．００９、スチューデントのｔ検定、対応なし）（図９Ｇ）。神経対筋肉コントラストは同等であり、ＦＡＭ−ＨＮＰ４０１では３．０３±０．５７であり、ＦＡＭ−ＮＰ４１では２．２８±０．９６であった（ｐ＝０．２３６、スチューデントのｔ検定、対応なし）（図９Ｈ）。用量依存性試験は、高濃度３７５ｕＭで検出されたＮＰ４１（図１０Ｆ〜Ｉ）と比較して、増加したＨＮＰ４０１の神経ヒト結合でＨＮＰ４０１が１０ｕＭまで有意な神経結合を有する（図１０Ａ〜Ｅ）ことを示す。ＦＡＭ−ＨＮＰ４０１は、マウス顔面神経の周囲の筋肉での標識化についてエクスビボ組織で局所的にさらに試験した（図１０、Ｊ〜Ｍ）。共焦点撮像はまた、ＨＮＰ４０１−ＦＡＭが軸索突起ではなく、神経上膜、神経周膜、および神経内膜に結合することを示す（図１０Ｎ）。
【０３５５】
４５０ｎｍｏｌのＦＡＭ−ＨＮＰ４０１（図１１Ａ）またはＦＡＭ−ＮＰ４１（図１１Ｂ）が注射されたマウスにおける坐骨神経のインビボ蛍光撮像は、ＨＮＰ４０１での神経コントラストがＮＰ４１と比較して２．３倍の蛍光強度を有する（図１１Ｃ）ことを示したが、神経対非神経コントラストは同様であり、ＦＡＭ−ＨＮＰ４０１では５．７９±０．８１でありＦＡＭ−ＮＰ４１では６．６３±１．６３であった（図１１Ｄ）。ＦＡＭ−ＨＮＰ４０１はまた、注射３時間後に撮像される場合２μｍｏｌの用量で、またはプローブ注射１０分後の撮像で０．５μｍｏｌのより低用量のＨＮＰ４０１を使用して、ラット前立腺神経（図１１Ｅ〜Ｆ）およびラット坐骨神経（図１１Ｇ）を強調した。１００ｎｍｏｌ静脈内注射後のＦＡＭ−ＨＮＰ４０１の血液クリアランスは、ＦＡＭ−ＮＰ４１と同様の３０分の半減期を示した（図１１Ｈ）。
【０３５６】
次いで、ＦＡＭ−ＨＮＰ４０１およびＦＡＭ−ＮＰ４１を、２人のヒト患者の切除された前立腺から単離された、自律神経への結合について局所的に試験した（図１２および１３）。ＦＡＭ−ＨＮＰ４０１（図１２Ａ）は、同じ濃度のＦＡＭ−ＮＰ４１（図１２Ｂ）と比較してヒト自律神経において有意により高い蛍光シグナルを示した。標識された線維は、核標識化を示すために抗ニューロフィラメント抗体ＳＭＩ３１２（赤）およびＤＡＰＩ（青）を使用して神経として確認された（図１２Ｃ）。標識組織を神経として確認するためにＨ＆Ｅ染色も行った（図１２Ｄ）。追加の患者からの組織を使用するＨＮＰ４０１の前立腺神経結合を図１３に示す。同様の染色が、ヒト腕から単離された末梢感覚前上腕皮神経について得られた（図１２Ｅ〜Ｈ）。
【０３５７】
ＨＮＰ４０１の欠失バリアントの合成および神経結合
ＨＮＰ４０１配列を最適化するために、ＣまたはＮ末端からの２つのアミノ酸の体系的欠失（表３）に続いて、ヒト神経切片への結合分析を行った。Ｃ末端からのアミノ酸の欠失は、結合有効性および溶解性を低減する。Ｎ末端からの２つのアミノ酸の除去は、神経結合を改善し、Ｎ−２では１４９８．７３（＋／−５１７．６３）およびＨＮＰ４０１では７４４．６３（＋／−１３０．１８）の平均シグナル強度を有する［スチューデントのｔ検定、対応なし、片側、ｐ＝０．０７］（図１４および１５）。
【０３５８】
（表３）神経結合ペプチドのリスト
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【０３５９】
用途および使用：
蛍光標識されたヒト神経結合ペプチドは、物理的に遭遇し、よって潜在的にそれらを損傷する前に、外科的処置中の神経の視覚化において外科医を支援するために使用することができる。これは、神経が小さく、変性し、がんによって浸潤され、外傷または感染によって損傷している場合に特に重要である。例えば、前立腺の手術中、男性の勃起を制御する海綿体神経は前立腺の非常に近くを走るが、手術室で利用可能な従来の照明（白色光反射率）を使用して決定的に特定されない。
【０３６０】
ヒト神経結合ペプチド−神経栄養／神経保護因子コンジュゲートは、損傷した神経の修復／再生を促進するために使用することができる。
【０３６１】
ヒト神経結合ペプチドは、慢性疼痛の治療としての光誘発性神経殺傷での潜在的な使用のための光増感色素にコンジュゲートすることができる。
【０３６２】
ヒト神経結合ペプチドは、多汗症の治療としての光誘発性神経殺傷での潜在的な使用のための光増感色素にコンジュゲートすることができる。
【０３６３】
ヒト神経結合ペプチドは、腎血管性高血圧症の治療としての光誘発性神経殺傷での潜在的な使用のための光増感色素にコンジュゲートすることができる。
【０３６４】
ヒト神経結合ペプチドは、不整脈の治療としての光誘発性神経殺傷での潜在的な使用のための光増感色素にコンジュゲートすることができる。
【０３６５】
ヒト神経結合ペプチドは、病理学的筋痙攣（メージュ症候群、片側顔面痙攣、斜頸）の治療としての光誘発性神経殺傷での潜在的な使用のための光増感色素にコンジュゲートすることができる。
参考文献
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2020530034.tif 000542
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【０３６６】
実施例３：蛍光ガイド手術中撮像のための神経標的指向性プローブ
要約
不注意による損傷は、しびれ、痛み、局所麻痺、および失禁を含む患者罹患率をもたらし得るので、多くの手術の基本的な目標は神経の保存である。手術中の神経の特定は現在、神経と非神経組織とを区別するために、解剖学、質感、色、および周囲構造との関係を含む複数のパラメータに依存する。現行の手術室における標準である白色光照明を使用すると、神経と隣接する組織との視覚的な違いは、感知不可能であり得る。全身投与後の齧歯類の運動神経および感覚神経に結合してそれらを強調する神経標的指向性プローブであるＦＡＭ−ＮＰ４１が以前に開発された。ここで、ＦＡＭ−ＮＰ４１は、直径５０μｍの小さな神経における有意な神経対非神経コントラストで、生きたマウスおよびラットにおける前立腺内の自律神経を強調することができることが実証される。
【０３６７】
この方法論をヒト患者における潜在的な臨床使用に変換するために、ファージディスプレイを使用して、ヒト神経に選択的に結合する新規ペプチド（ＨＮＰ４０１）を特定した。ＦＡＭ−ＨＮＰ４０１は、下肢腓腹神経、上腕内側前上腕神経、およびヒト前立腺を囲む海綿体神経を含む自律神経を含む、複数のヒト末梢神経に結合し、これらを強調することができる。ＨＮＰ４０１の結合ドメインは、完全長ペプチドからのアミノ酸の連続的な欠失によって特定した。ＨＮＰ４０１または最適化されたバリアントは、視覚化を改善し、手術中の神経損傷の発生率を潜在的に減少させるために、ヒト神経の手術中の特定のための臨床設定における使用のために変換することができた。
【０３６８】
導入
手術の基本的な目標は、患者罹患率を最小限に抑えるための神経機能の保存である。手術中の現行の神経の特定は、解剖学、質感、色、および周囲構造との関係などの測定不可能な基準を利用する。外傷、腫瘍浸潤、または感染の場合、上記基準を使用する神経の特定はさらにより困難になり得る。白色光反射率を使用すると、神経、特に前立腺内の自律神経のような小神経と、隣接する組織との間の視覚的な違いは、感知不可能であり得る。これらの細い神経または埋もれた神経の不注意による損傷は、手術の最も病的であるが意図しない結果の１つであり、機能喪失、しびれ、および手術誘発性神経因性疼痛を引き起こし得る［１］。例えば、根治的前立腺切除術（ＲＰ）は、優れた局所領域管理を有する限局性前立腺がんについて行うことができる［２、３］しかしながら、神経を保存する根治的前立腺切除術でも、自律神経または自律神経血管束の不注意による損傷による勃起不全および／または尿失禁の重大なリスクがある［４，５］。前立腺の後外側面に沿った自律神経血管束の保存は、ＲＰ中の機能保存の重要な局面である。自律神経線維自体は、めったに視覚化されないが、むしろそれらの位置は、血管構造に沿って追跡すると推定される。これらの自律神経の正確な位置および分布は、患者ごとに異なり、唯一の回避方法としての解剖学的位置の使用を複雑にし［６−８］、最も経験のある外科医でも損傷が発生し得る。最近の研究は、前立腺切除後、ＲＰ患者の７％のみが最初の１年で完全な勃起機能の術前状態を回復し［９］、１６％が２年後にベースライン勃起機能を回復した［１０］ことを示した。
【０３６９】
前立腺における神経構造の視覚化を改善するツールは、根治的前立腺切除術からの罹患率を低減するための大きな可能性、ならびにがん切除、外傷、および再建処置を含む多くの他の神経保存手術における用途を有する。神経撮像剤の全身投与は、単一プローブ投与での全ての関連神経の標識化を可能することができる。以前に、報告された方法は、神経支配部位への蛍光色素の直接適用によって個別軸索路の逆行性または順行性トレーシングに依存する［１１、１２］。スチリルピリジニウム色素［１３−１５］、アミノスチリル色素［１６−１８］、オキサジン４［１９、２０］、および抗ガングリオシド抗体［２１］は、運動神経、感覚神経、および自律神経を検出するために様々な前臨床モデルにおいて調査されている。
【０３７０】
ペプチド配列、神経ペプチド４１（ＮＰ４１）は、末梢神経組織に優先的に結合してこれを強調し、全身注射後の生きたマウスにおける運動神経および感覚神経の視覚化を強化するファージディスプレイによって以前に特定された［２２−２４］。このペプチドは、（抗体と比較して）神経に対する比較的低い親和性および急速な血液クリアランスを有するため、全身注射の数時間後に視覚化し、２４時間でほぼ完全にウォッシュアウトすることができる［２２］。ＮＰ４１は、神経線維における構造的ラミニンへの結合を通して変性神経を強調することも示した［２４、２５］。我々はここで、このペプチドをマウスおよびラット両方の前立腺における自律神経の術中特定に使用した。ヒト患者を含む手術における使用のための神経視覚化方法の臨床的変換を可能にするために、我々はここでファージディスプレイを使用して、フルオロフォアで標識されたときにヒト神経に選択的に結合し、これを強調する新規ペプチドＨＮＰ４０１を特定した。蛍光標識されたＨＮＰ４０１は、腓腹、内側前上腕皮、喉頭、頸神経ワナ、大耳介神経、ならびに前立腺内および周囲にあるもののような自律神経などのヒト感覚神経および運動神経に結合し、これらを強調することができる。
【０３７１】
結果
マウスの前立腺内の自律神経を視覚化するために、フルオレセインにコンジュゲートしているＮＰ４１ペプチド（ＦＡＭ−ＮＰ４１）を静脈内注射し、続いて外科的切除後の前立腺および周囲組織の撮像を行った。膀胱に急速に蓄積する色素からの強い蛍光は、前立腺内の神経の視覚化を妨げた。視覚化を強化するために、膀胱から尿を外科的に排出し、撮像前に縫合した。解剖学的に異なる構造である尿道は、実験期間にわたってマウスが生きているため尿が空になることはなく、継続的に尿が尿道を介して膀胱に代謝ペプチド色素を運搬する。将来の研究の助けとなるために、我々は、膀胱の外科的排液の代替として、高い膀胱の蛍光を低減するために（膀胱に直接注射された、および経口投与による）蛍光消光色素を使用することを実証した（図２１）。ＦＡＭ−ＮＰ４１は１５０〜６００ｎｍｏｌ（約１６〜６６ｍｇ／ｋｇ）の範囲の用量で注射され、６００ｎｍｏｌ（約３０ｎｍｏｌ／ｇ）用量は、最適な自律神経コントラストを示す（図１６Ａ〜１６Ｇ）。低倍率蛍光画像は、尿道に隣接して走る単一神経線維の強調を示す（図１６Ａ）。神経は、白色光反射率を使用する高倍率画像では非常にかすかである（図１６Ｂ）が、ＦＡＭ−ＮＰ４１標識化ではっきりと見えるようになる（図１６Ｃ）。神経検出を定量化するために、合計１０匹のマウスに６００ｎｍｏｌのＦＡＭ−ＮＰ４１を注射し、シグナル強度を、蛍光および白色光反射率の両方を使用して神経対隣接非神経組織について測定した。線の右側の値は、反射光と比較して蛍光での視覚化が改善されていることを示す。蛍光ガイドでの平均神経対非神経シグナル強度は、白色光反射率の１．０８６±０．０７（ｎ＝１２）と比較して、１．２５６±０．１４（ｎ＝１２、ｐ＜０．００１）であった（図１６Ｄ）。
【０３７２】
マウスにおける前立腺神経は非常に小さく、撮像することが困難（すなわち、高用量のＦＡＭ−ＮＰ４１が必要）であるため、我々は、ラットの前立腺内の自律神経の視覚化に研究を拡大した。雄Ｓｐｒａｇｕｅ  Ｄａｗｌｅｙラットにおける自律神経を視覚化するために、ＦＡＭ−ＮＰ４１を１２ｎｍｏｌ／グラムの用量で静脈内注射し、続いて撮像を行った。これは、２０グラムのマウスにおいて使用される６００ｎｍｏｌと比較して、体重に対して２．５倍低い用量である。有用な標識化は、静脈内投与後２〜６時間に行われ、カスタマイズされた蛍光解剖顕微鏡を使用して視覚化された。ＦＡＭ−ＮＰ４１神経強調は、ラット前立腺の中央を通って走る神経線維の視覚化を可能にする（図１６Ｅ）。より高倍率の撮像は、ＦＡＭ−ＮＰ４１が、前立腺の脂肪莢膜内を移動する神経血管束（図１６Ｇ）を囲む自律神経枝をさらに強調することを示した。これらの分岐神経は、白色光反射率撮像を使用して見ることができなかった（図１６Ｆ）。ラットにおける自律神経の選択的標識化を定量化するために、前立腺内の神経を蛍光および白色光反射率の両方で撮像した。蛍光からの平均神経対非神経シグナル強度は、白色光反射率の１．０８３±０．０１（ｎ＝３）と比較して、１．２７５±０．０２（ｎ＝３）であった。手術中撮像への適用性を示すために、我々は、同様の神経コントラストが、臨床グレードのＺｅｉｓｓ  Ｐｅｎｔｅｒｏ撮像システムを使用して生きたラットにおいて観察されたことを示す（図１６Ｈ）。臨床使用について承認されているＺｅｉｓｓ  Ｐｅｎｔｅｒｏスコープは、ＦＡＭ−ＮＰ４１からの蛍光画像（黄色）を白色光画像に重ねて、リアルタイムでデータを収集する（図１６Ｈ）。外科的操作中の記録は、ＮＰ４１−ＦＡＭ蛍光ガイドを使用して検出可能な神経として明確に存在する前立腺内の蛍光線維を示す（データは示されない）。蛍光標識された構造が実際に神経であることを確認するために、蛍光外科的ガイドをリアルタイムで使用して、神経であると考えられる蛍光線維を選択的に郭清した（図２２：Ａ）。次いで、解剖された蛍光線維を垂直に配置し、ＯＣＴ包埋化合物で瞬間凍結した。垂直断面切片を、蛍光を使用して撮像し、疑わしい神経線維がスライドの中心にあることを示した（図２２：Ｂ）。線維は、それらが無髄自律神経の既知のマーカーであるフルオロフォア（図２２：Ｃ）またはチロシンヒドロキシラーゼ（図２２：Ｄ）のいずれかに対する抗体での二重免疫組織化学分析を使用して蛍光標識されたため、神経であることが確認された。一次抗体の不在下では免疫染色は検出されなかった（図２２：Ｅ）
【０３７３】
ヒト患者において使用するための神経照明ペプチドの変換を可能にするために、ｇＩＩＩのＮ末端に１６個のランダムなアミノ酸配列を発現するｍ１３ファージライブラリー（Ｃｒｅａｔｉｖｅ  Ｂｉｏｌａｂｓ）を使用して、ヒト神経結合ペプチドを特定するためにファージディスプレイを行った。ファージは、筋肉および脂肪に対する陰性選択でのヒト腓腹神経への結合についての選択の反復ラウンドを使用して選択した。筋肉および脂肪に対する対抗選択は、ヒト神経への結合についての選択の前に、これらの組織にライブラリーを予め吸収させることによって行った。個々のファージを選択の各ラウンド後に配列決定し、３つの特定の配列
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および
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が５および６ラウンド後に高度に富化された。
【０３７４】
ヒト神経への結合について選択されたファージディスプレイペプチドの親和性を試験するために、それらを固相合成によって化学的に合成し、Ｃ末端でフルオレセインで標識した。外科的に採取されたヒト腓腹神経および側頭筋の切片にペプチドを局所的に適用し、選択されたペプチドおよび対照の神経対筋肉コントラストを決定した（図２３）。遊離色素（カルボキシフルオレセイン）を含む対照も、複数の患者組織からの様々な神経で試験し、ペプチド色素コンジュゲートのヒト神経への結合についての特異性を確認した（図２４）。カルボキシフルオレセインなどの遊離非反応性色素対照は、弱い非特異的結合のみを有することが示され、局所適用には効果的ではない。ＦＡＭ−ＨＮＰ４０１は、最も高いコントラストをもたらし、ヒト腓腹神経に局所適用された場合、以前報告された齧歯類神経結合ペプチドＦＡＭ−ＮＰ４１［２２］よりも優れていることが示された（図１７）。神経への結合と筋肉への結合との差を定量化するために、選択神経およびヒト側頭筋の神経周膜からのＲＯＩについて蛍光シグナル強度を測定した。ＦＡＭ−ＨＮＰ４０１は、ＦＡＭ−ＮＰ４１（１２６．１７±６１．０３）と比較して１０．９倍の蛍光シグナル強度（１３７４．４４±４２５．９６）でヒト腓腹神経への選択的結合を示した（図１７Ｄ、ｐ＝０．００９、スチューデントのｔ検定、対応なし）。神経対筋肉コントラストは同等であり、ＦＡＭ−ＨＮＰ４０１では３．０３±０．５７であり、ＦＡＭ−ＮＰ４１では２．２８±０．９６であった（図１７Ｈ、ｐ＝０．２３６、スチューデントのｔ検定、対応なし）。
【０３７５】
ＦＡＭ−ＨＮＰ４０１はまた、マウス顔面神経の周囲の筋肉での標識化についてエクスビボ組織で局所的に試験され、ＦＡＭ−ＮＰ４１ほど良好な性能は示さなかった（図２５：Ｊ〜Ｍ）。比較のために、ＦＡＭ−ＮＰ４１およびＦＡＭ−ＨＮＰ４０１でのヒト喉頭神経および周囲の筋肉のエクスビボ組織標識化を示す（図２５：Ｆ〜Ｉ）。ペプチド色素コンジュゲートによる処理なしでのヒト神経の自己蛍光は、ＦＡＭ−ＨＮＰ４０１の局所適用後に得られたシグナル強度と比較して、無視できるほどであった（図２６）。ＦＡＭ−ＨＮＰ４０１はまた、ＦＡＭ−ＮＰ４１と比較して、マウス坐骨神経へのインビボ結合について２．３倍高いシグナル強度を有する（図１８Ａ〜Ｃ）。神経対周囲筋肉コントラストは、２つのペプチドについて同等である（図１８Ｄ）。ＦＡＭ−ＨＮＰ４０１はまた、注射３時間後に撮像される場合、２μｍｏｌ（約５４ｍｇ／ｋｇ）の用量でラット坐骨神経（図１８Ｅ）および前立腺神経（図１８Ｆ）を強調した。膀胱は注射器で排液され、前立腺の周りでの流出および汚染を回避するために縫合された。収集された尿を質量分析によって分析し、予想通り、色素が結合したペプチドの断片が検出され、膀胱におけるペプチドが部分的に代謝されたことを示した（図２７）。前立腺内および血管束に隣接する自律神経は、プローブ注射の１０分後に０．５μｍｏｌ（１３．４ｍｇ／ｋｇ）の用量のＦＡＭ−ＨＮＰ４０１を使用してより高倍率で撮像される場合、容易に視覚化することができる（図１８Ｇ）。ＦＡＭ−ＨＮＰ４０１の血液クリアランスは、ＦＡＭ−ＮＰ４１と同様の３０分の半減期を示した（図１８Ｈ）。最適な神経コントラストは、低濃度（１０μＭ）高解像度共焦点撮像で５０〜１００μＭ（図２５：Ａ〜Ｅ）を使用して検出され、ＦＡＭ−ＨＮＰ４０１が、軸索突起からは除外されるが、神経周膜、神経上膜、および神経内膜により高親和性で結合することを示した（図２５：Ｎ）。ヒト神経からのＦＡＭ−ＨＮＰ４０１シグナルは１００μＭで飽和する一方で、ＦＡＭ−ＮＰ４１からのシグナルは３７５μＭでも増加し続けるが、シグナル強度は、同じ濃度で適用されたＨＮＰ４０１のシグナル強度よりもはるかに低いままである（図２５：ＦおよびＨ）。５分および２時間でのヒト血漿中のＦＡＭ−ＨＮＰ４０１の安定性は、質量分析による分析の前に、ヒト血清中のペプチド色素コンジュゲートのインキュベーションによって決定した。分析のために、ＦＡＭ−ＨＮＰ４０１の４５０ｎｍでの曲線下面積および対応する質量を、固定体積の分析物のＬＣ−ＭＳへの注射後に決定した（図２８：Ａ〜Ｂ）。比較のために、我々は、ヒト血漿中のＦＡＭ−ＮＰ４１の安定性も試験した（図２８：Ｃ〜Ｄ）。５分および２時間でのピーク面積の積分は、ＦＡＭ−ＨＮＰ４０１およびＦＡＭ−ＮＰ４１の両方がヒト血清中で安定であったことを示す。抽出されたイオン電流の面積を使用して、ペプチド定量化を決定した。ペプチド−ＦＡＭコンジュゲートの分解は観察されず、イオン電流の分析からヒト血漿との５分および２時間のインキュベーションで同一濃度が検出された。ペプチドは、同様に試験され、２時間露出後のラット脳脊髄液において安定であることが示された（図２８：Ｅ〜Ｆ）。
【０３７６】
ＦＡＭ−ＨＮＰ４０１およびＦＡＭ−ＮＰ４１を、２人のヒト患者の前立腺から単離された、自律神経への結合について試験した（図１９および２９）。ＦＡＭ−ＨＮＰ４０１（図１９Ａおよび２９Ａ）は、ＦＡＭ−ＮＰ４１（図１９Ｂおよび２９Ｂ）と比較して自律（海綿体）神経において有意により高い蛍光シグナルを示した。根治的前立腺切除術中の神経切除は肉眼的被膜浸潤の場合にのみ行われるため、２人のみの患者試料が試験に利用可能であったので、定量化は行わなかった。標識された線維は、核標識化を示すために抗ニューロフィラメント抗体ＳＭＩ３１２（赤）とＤＡＰＩ（青）とを使用して神経として確認された（図１９Ｃ）。Ｈ＆Ｅ染色も、組織学によって標識組織を神経として確認した（図１９Ｄ）。ＳＭＩ３１２は、神経束のこの領域にニューロフィラメント線維が存在しないため、神経周膜を染色しない。ＳＭＩ３１２染色は、軸索突起を支えるニューロフィラメント構造の染色により、単離された組織が神経であることを示す。ＦＡＭ−ＨＮＰ４０１を使用する同様の染色は、ヒト腕から単離された別の感覚神経（前上腕皮）について得られ、ＨＮＰ４０１の広範な神経結合活性を示した（図１９Ｅ〜Ｈ）。
【０３７７】
ＨＮＰ４０１のコア結合ドメインを最適化し、決定しようと試みるために、ＣまたはＮ末端からの２つのアミノ酸の体系的欠失を行い（例えば、図３０参照）、続いてヒト腓腹神経切片での結合分析を行った（図２０）。各事例において、神経結合およびシグナル強度は、親ＦＡＭ−ＨＮＰ４０１ペプチドに対して正規化した（図２０Ｊ）。Ｃ末端セリン（Ｃ−２）の除去は許容されたが、リジン（Ｃ−４）の除去後、溶解性および結合は、ＨＮＰ４０１−Ｃ−４の神経結合について０．４９±０．１１の正規化された平均シグナル強度で劇的に低減した（図２０Ｆ）。Ｎ末端からのアミノ酸の欠失は、ほとんど良好に許容される。Ｎ末端セリンおよびグリシンの除去は、ＨＮＰ４０１−Ｎ−２について２．０２±０．６５の正規化された平均シグナル強度で、神経選択的結合を約２倍向上した（図２０Ａおよび２０Ｊ、ｐ＝０．０２６、スチューデントのｔ検定、対応なし、片側）。ＨＮＰ４０１−Ｎ−４は、そのＮ末端に非極性アミノ酸を有し、これは結合を０．５６±０．１８の正規化された平均シグナル強度に低減した（図２０Ｂ）。非極性アミノ酸、トリプトファン、およびプロリンの除去は、いくらかの結合強度をＦＡＭ−ＨＮＰ４０１のレベルに回復させ、ＨＮＰ４０１−Ｎ−６（図２０Ｃ）およびＨＮＰ４０１−Ｎ−８（図２０Ｄ）は、１．０±０．３４および０．９８±０．３１の正規化された平均神経シグナル強度を有した。回復された結合効率は、非常に疎水性の高い残基がペプチドのＮ末端に存在する場合に発生する微小凝集を最小限に抑える向上した溶解性によるものであり得る。ＨＮＰ−４０１のＣおよびＮ末端欠失の研究は、コア結合ドメインがＰＹＹＶＶＫＫを含み、Ｎ末端残基ＱＶＰＷＥＥがＨＮＰ４０１−Ｎ−２で検出される強化された結合に寄与する可能性が高いことを示す。ＨＮＰ４０１−Ｎ−２についての正規化された神経対側頭筋コントラストは、ＦＡＭ−ＨＮＰ４０１に対して３倍の増加を与えた（図２０Ｋ、ｐ＝０．０１１、スチューデントのｔ検定、対応なし、片側）。
【０３７８】
考察
神経系における接続性をマッピングするために様々なトレーサー物質が長く使用されているが、それらのほとんどは局所適用後の順行性または逆行性トレーシングに依存していた［１１、１２、２６、２７］。トレーサーの輸送は比較的遅く、色素が注射部位から遠ざかるにつれてコントラストが発生する［２６、２７］。複数の神経路を特定し、独立して標識する必要があるため、これらの方法を使用することによって手術のために露出された大きな領域を標識することは、非実用的である可能性がある。齧歯類における親油性色素で逆行性神経血管束および主要骨盤神経節を追跡するという報告がある［４、２８］。より最近では、スチリルピリジニウム色素［１３−１５］、アミノスチリル色素［１６−１８］、オキサジン４［１９、２０］、および抗ガングリオシド抗体［２１］は、運動神経、感覚神経、および自律神経を検出するために様々な前臨床モデルにおいて調査されている。色素単独は、神経ターゲティングのための選択的メカニズムを有さないが、典型的にはミエリンに蓄積する。ミエリンは、自律神経において低い存在量で存在するか、または不在であることが知られており、これらの微細だが重要な神経を強調する遊離色素の使用を制限し得る［２９、３０］。遊離色素の局所および硬膜外適用は、動物モデルにおける神経を局所的に標識するために使用されているが、組織が除去され、視野が変化するため、これらのアプローチは、ヒト手術中の柔軟性において制限され得る［２０、３１］。抗ガングリオシド抗体は、特異的ターゲティングを有するが、長い血中半減期を有し、これは手術の数日前に注射を必要とする可能性があり、免疫応答を誘発する可能性が高い場合がある［３２、３３］。神経を標識する蛍光標識ペプチドの全身注射は、ペプチド色素コンジュゲートの単回注射で体内の全ての神経を標識することによって、これらのトレーサーの主要な不利点を克服する。我々は以前、齧歯類の運動神経および感覚神経を結合するためのＮＰ４１について報告し、ここで齧歯類モデルにおける微細な自律神経の特定へのその潜在的な適用を実証する。我々は、白色光反射率によって得られたコントラストと比較して蛍光撮像を使用して、神経から非神経へのシグナルにおける平均１７％の増加を見出した。これらの神経の無髄性およびそれらの超微細構造を考えると、これは重大な成果である。しかしながら、エクスビボでのヒトへのＮＰ４１の局所適用は、筋肉と比較してほとんどコントラストを提供しなかった。ヒト神経の強調を強化するために、ＨＮＰ４０１、ヒト運動／感覚神経および自律神経に結合し、これらを強調する新規ペプチドをここで特定した。
【０３７９】
我々は、ＦＡＭ−ＨＮＰ−４０１または最適化されたアナログが、ヒト患者が関与する手術における使用のための神経視覚化方法の臨床変換を可能にし得ると期待する。蛍光標識されたＨＮＰ４０１は、ヒト腓腹、内側前上腕皮、喉頭、ならびに前立腺内および周囲の自律神経に結合し、これらを強調することができる。ＦＡＭ−ＨＮＰ４０１は、カルボキシフルオレセインのその色素対照と比較して、高いシグナル強度および再現可能な神経束の標識化を示す。カルボキシフルオレセインは、局所ヒト神経切片で低シグナルおよび神経への非特異的結合を示す。ＦＩＴＣ−イソチオシアネートなどの色素は、それらが未固定組織における断面切片化によって露出したタンパク質の全ての求核性側鎖と反応するため、対照として使用することができなかった。さらに、ＦＩＴＣ−デキストランは、臨床使用されているが、神経断面内の深くにある微小血管を含む脈管構造を標識し、神経損傷および神経原性疼痛のマーカーであるため、我々の実験の実行可能な対照ではない［３４］。加えて、その大きなサイズは、色素の薬物動態プロファイルに影響を及ぼす。ＦＡＭ−ＨＮＰ４０１は、我々の以前に特定されたＦＡＭ−ＮＰ４１ペプチド色素コンジュゲートと比較して、ヒト神経に結合するために１０倍高いシグナルを一貫して与えた。短い露出時間を必要とするリアルタイム撮像には、より高いシグナル強度は利点である。ＨＮＰ４０１はまた、ヒトエクスビボ組織における局所切片に対する神経対筋肉の３倍コントラストを示した。ＦＡＭ−ＨＮＰ４０１は、マウスにおけるＮＰ４１と同様の血液クリアランスプロファイルを有する［２２］。ＦＡＭ−ＨＮＰ４０１は、有髄神経および無髄神経に結合する。ニューロフィラメントを標識するＳＭＩ３１２抗体は、ＦＡＭ−ＨＮＰ４０１染色と共局在せず、ＦＡＭ−ＨＭＰ４０１は、軸索突起に結合しないが、神経周膜に優先的に結合するため、神経伝導性に影響を与える可能性が低い場合があり得ることを示す。ＨＮＰ４０１−ＦＡＭが神経周膜における構造タンパク質に結合していると我々に考えさせるものは、この染色パターンである。除去は、ペプチドが著しくより低い溶解性となるか、神経に対する減少した結合親和性を示すかのいずれかであるため、Ｃ末端の極性アミノ酸は、溶解性および結合の両方に必要であるように見える。Ｎ末端の２つのアミノ酸の除去は神経結合を増加させたが、さらなる欠失は溶解性および結合の両方に悪影響を及ぼした。短ＰＥＧのような可溶化基に結合することは、切断されたバリアントへの結合を回復し得る。
【０３８０】
我々の初期研究について、神経強調ペプチドＨＮＰ４０１は、かなり短波長のフルオレセイン誘導体に結合され、現在がんの検出のための第ＩＩ相臨床試験（ＮＣＴ０３１１３８２５）中のＣｙ５／Ｃｙ７レシオメトリック活性化可能な細胞透過性ペプチドでの二重神経／腫瘍撮像と適合性である。インドシアニングリーン（ＩＣＧ）などのより長波長のＩＲまたは近ＩＲ色素、ＩＲｄｙｅ８００は、神経をＨＮＰ−４０１への結合後に外科的に露出した組織において表面下より深く撮像することを潜在的に可能にするであろう。前臨床モデルにおいて神経を強調するために遊離オキサジン４も最近使用されており、ＨＮＰ４０１のようなターゲティングペプチドに結合することによってターゲティングを強化することができる。我々の好ましい適用方法は全身であるが、局所適用はいくつかの処置での選択肢である。動物モデルにおいて神経を撮像するために、露出表面への色素のそのような局所適用、続いて未結合色素を除去する洗浄が使用されている［２０］。４−ｄｉ−２−ａｓｐなどの色素は、神経への局所適用にも使用されているが、神経終末におけるミトコンドリアへのその結合により神経に毒性があるという不利点を有する［３５］。抗体は、静脈内または局所適用することができ、高親和性および定義された結合標的を含むいくつかの利点を有するが、抗ガングリオシド抗体で報告されるように、それらは最適な神経コントラストを発達させるには蓄積およびウォッシュアウトに長い循環時間を必要とする。
【０３８１】
インビボ齧歯類研究では、我々は、末梢運動神経および感覚神経をマウスにおいて１５０ｎｍｏｌの用量のＦＡＭ−ＮＰ４１で標識することができ、これはヒト投与に容易に調整されるであろうことを見出した［３６、３７］。自律神経標識化は、マウスにおいて著しく高用量（６００ｎｍｏｌ）を必要としたので、臨床投与に進むためにはＨＮＰ４０１などのより高親和性のペプチドまたは改善されたバリアントが必要であり得る。興味深いことに、齧歯類における非常に小さな自律神経（５０μｍ程度）を視覚化するにはより高い投与量が必要であったが、有意により大きなヒト前立腺神経（約７５０μｍ）の標識化は、有意に低減した用量で達成され得る。大神経をより低用量で強調することができるという結論と一致して、我々は、４０％用量のＮＰ４１でラット前立腺における神経を視覚化することができた。ＮＰ４１もＨＮＰ４０１も、それらは両方２４時間後にウォッシュアウトし、シグナルがほとんど残らないため、神経束に永久的または共有結合的に結合することはない。ラミニン４２１、２１１を含む構造タンパク質は、ＮＰ４１の結合標的として特定されている［２５］。ＨＮＰ４０１の結合標的はまだ決定されていないが、撮像データはＮＰ４１と同様の非軸索結合パターンを示し、構造神経タンパク質にも結合し得ることを示す。親油性色素と比較したＨＮＰ４０１の１つの重大な特徴は、ミエリンの存在を必要としないことであり、我々は、これが前立腺内の神経血管束および海綿体神経に結合し、これらを強調することができることを示した。これらの神経は、泌尿器学的用途において重要であり、高レベルのミエリン形成を有さない［２９、３０］。我々は、この文脈における神経の保存が、神経撮像技術の最も緊急の満たされていない臨床的ニーズ［３８］の１つを表すと予想する。これらの神経を強調するＦＡＭ−ＨＮＰ４０１の能力は、ミエリンについて選択的であり［３９］、軸索突起に組み込まれる競合する神経結合剤に対して重大な利点を表す［２１］。
【０３８２】
方法
プローブの合成
ＦＡＭ−ＮＰ４１は、以前に記載されたように合成した［２２］。Ｐｒｅｌｕｄｅペプチドシンセサイザーおよび標準的なＦｍｏｃ固相ペプチド合成を使用して、配列
2020530034.tif 000547
を有するペプチドを生成し、各ペプチドはＣ末端「ＧＧＣ」リンカーを有した。ＤＭＳＯ中のＮ−メチルモルホリンの存在下で５−フルオレセイン−マレイミド［Ａｎａｓｐｅｃ］を使用して、カルボキシフルオレセインをＣ末端システインにコンジュゲートさせた。ペプチドは、ＬＣ−ＭＳによって確認された質量および純度＞９５％でＰｈｅｎｏｍｅｎｅｘ  ５ｕｍ  Ｃ１８  Ｌｕｎａを使用してＡｇｉｌｅｎｔ  ＬＣＭＳで精製した。（例えば、図３０参照）に列挙される切断されたＨＮＰ４０１ペプチドは、上記と同じ構成および方法を使用して合成および精製した。
【０３８３】
動物
体重２０〜３０グラムの野生型雄ＳＫＨ１マウス（Ｃｈａｒｌｅｓ  Ｒｉｖｅｒ，Ｗｉｌｍｉｎｇｔｏｎ，ＭＡ）をペプチド色素コンジュゲートの試験に使用した。体重１００〜２５０グラムの雄Ｓｐｒａｇｕｅ−Ｄａｗｌｅｙラットを、動物のサイズに基づいて用量を調整した色素コンジュゲートのインビボ試験に使用した。動物の使用のためのプロトコルは、カリフォルニア大学サンディエゴ校の施設内動物管理使用委員会（プロトコル番号Ｓ０５５３６）によって承認された。
【０３８４】
インビボ撮像
ケタミン（８０ｍｇ／ｋｇ）およびミダゾラム（４０ｍｇ／ｋｇ）の腹腔内注射での麻酔後、ＦＡＭ−ＮＰ４１またはそのバリアントをマウスの眼窩後部に投与した。２〜４時間のウォッシュアウト期間後、動物にケタミン（５０ｍｇ／ｍｌ）およびキシラジン（２０ｍｇ／ｍｌ）で麻酔をかけた。膀胱および前立腺を、腹部正中切開によって露出した。前立腺における海綿体血管に沿った自律神経を、カスタムメイド外科的撮像システムを使用して撮像し、記録した。このシステムは、Ｏｌｙｍｐｕｓ  ＭＶＸ１０スコープから改良したもので、高解像度の蛍光、ＲＧＢ反射率、０．６〜５．７ｃｍ視野のズームでのリアルタイムオーバーレイが可能である。ＩｍａｇｅＪは、試験された各ペプチド色素コンジュゲートについての神経コントラストの定量分析に使用された。前立腺における自律神経の画像は、記録されたファイルから選択し、ＲＯＩの選択および測定前に３００〜４００％拡大した。神経および隣接する非神経組織ＲＯＩは、反射率および蛍光画像の両方から同じ場所で多角形選択ツールを使用して手動選択した。選択された領域内のピクセル強度の平均および標準偏差を、神経（平均＝Ｉｎ、ＳＤ＝σｎ）および隣接する背景組織（平均＝Ｉｂ、ＳＤ＝σｂ）について比較した。神経対非神経コントラストを、式｜Ｉｎ−Ｉｂ｜／（σｎ２＋σｍ２）０．５でバックグラウンド減算後に計算した。雄ラットの前立腺における神経を撮像するために、ペプチド色素コンジュゲートを眼窩後部に注射した。ＦＡＭ−ＨＮＰ４０１を１３ｍｇ／ｋｇの濃度で注射し、続いて１５分後に撮像するか、あるいは５２ｍｇ／ｋｇの用量を３時間後の撮像で使用した。生きた動物の手術は、ＩＡＣＵＣプロトコルに従ってケタミン−キシラジンカクテル下で行った。前立腺を露出させるために滅菌技法が使用され、膀胱は小さな注射器で排液され、縫合された。手術野は、撮像前に滅菌生理食塩水で洗浄した。マン・ホイットニー検定を使用して、マウスおよびラット両方のデータを分析し、神経強度および神経対非神経コントラストを白色光反射率と蛍光との間で比較した。
【０３８５】
共焦点撮像のパラメータ
図１７の共焦点データは、４８８ｎｍレーザライン、ガラス上の１０μｍ切片、１０倍の倍率、０．４５ＮＡ空気対物レンズで取得した。５０に設定されたゲイン、レーザ出力の０．５％に設定されたパワー、１．２μｓのピクセル滞留値、１．２μｍの開口サイズ、および２ｋ×２ｋサイズ画像で０．２６のピクセルサイズ。我々は、ナイキスト特性を使用し、画像をタイルとして取得して、最大解像度を得た。
【０３８６】
図１９Ａおよび１９Ｂのデータは、４８８ｎｍレーザライン、ガラス上の１０μｍ切片、１０倍の倍率、０．４５ＮＡ空気対物レンズで取得した。４０に設定されたゲイン、レーザ出力の３％に設定されたパワー、１．２μｓのピクセル滞留値、１．２μｍの開口サイズ、および２ｋ×２ｋサイズ画像で０．２６μｍ／ｐｘのピクセルサイズ。
【０３８７】
図１９Ｅおよび１９Ｆのデータは、４８８ｎｍレーザライン、ガラス上の１０μｍ切片、１０倍の倍率、０．４５ＮＡ空気対物レンズで取得した。４０に設定されたゲイン、レーザ出力の１％に設定されたパワー、１．２μｓのピクセル滞留値、１．２μｍの開口サイズ、および２ｋ×２ｋサイズ画像で０．３μｍ／ｐｘのピクセルサイズ。
【０３８８】
ＳＭＩ３１２ニューロフィラメント抗体およびＤａｐｉ染色は、１０倍の倍率、ＮＡ０．４５空気対物レンズ、５０のゲインでのＮＡ、４０５ｎｍレーザラインのレーザパワーの５％に設定されたパワーおよび１００のゲイン、６４０ｎｍレーザラインのレーザパワーの５０％に設定されたパワーで撮像した。我々は、３．２μｓのピクセル滞留、１．２μｍの開口サイズ、タイルごとに２ｋ×２ｋの画像サイズを使用し、０．２９μｍ／ｐｘのピクセルサイズを得た。
【０３８９】
図２６のデータは、４８８ｎｍレーザライン、ガラス上の１０μｍ切片、１０倍の倍率、０．４５ＮＡ空気対物レンズで取得した。４０に設定されたゲイン、レーザ出力の３％に設定されたパワー、２．４μｓのピクセル滞留値、１．２μｍの開口サイズ、および２ｋ×２ｋサイズ画像で０．３μｍ／ｐｘのピクセルサイズ。
【０３９０】
ヒト神経組織上のＦＡＭ−ＨＮＰ４０１の用量応答データセット（図２５：Ａ〜Ｅ）は、４８８ｎｍレーザライン、ガラス上の１０μｍ切片、１０倍の倍率、０．４５ＮＡ空気対物レンズで取得した。４０に設定されたゲイン、レーザ出力の３％に設定されたパワー、１．２μｓのピクセル滞留値、１．１μｍの開口サイズ、および２ｋ×２ｋサイズ画像で０．３μｍ／ｐｘのピクセルサイズ。
【０３９１】
図２９のデータは、４８８ｎｍレーザライン、ガラス上の１０μｍ切片、２５倍の倍率、１．１０ＮＡ水浸レンズで取得した。４０に設定されたゲイン、レーザ出力の３％に設定されたパワー、２．２μｓのピクセル滞留値、１．２μｍの開口サイズ、および２ｋ×２ｋサイズのタイル画像で０．１１μｍ／ｐｘのピクセルサイズ。
【０３９２】
ファージディスプレイ
ファージディスプレイは、ｇＩＩＩのＮ末端に１６個のランダムなアミノ酸を発現するカスタム合成ｍ１３ファージライブラリー（多様性約１０９）（Ｃｒｅａｔｉｖｅ  Ｂｉｏｌａｂｓ）を使用して行った。ファージライブラリーは、マウス神経に結合したＮＰ４１の特定について記載されている［２２］のと同様に、新たに切除または凍結されたヒト神経への結合についての選択によって処理した。ライブラリーは、最大６回の結合および洗浄サイクルによって処理した。陽性選択の前に、ライブラリーを筋肉および脂肪組織に予め吸収させることによって、筋肉および脂肪組織に高い親和性で結合するものについて、ファージを対抗選択した。陽性選択について、ファージライブラリーを、ヒト腓腹神経組織と直接混合し、４℃で最大２時間インキュベートした。インキュベーション後、組織ファージ混合物を、遠心分離し、ＰＢＳで洗浄した。次いで、ファージが結合した組織ペレットを、ホモジナイズし、ＴＧ１細菌と混合し、ＬＢ寒天プレート上に播種した。コロニーを数えて力価を決定し、続いてＤＮＡ調製および配列決定のために単一コロニーを選択した。選択の各ラウンド後、ファージをプールし、反復選択のために増幅した。各ラウンドで結合したファージを配列決定し、リピートを記録した。結果に示されるように、選択の５および６ラウンド後に重複ファージが特定された。
【０３９３】
組織切片への局所適用および撮像
ヒト腓腹神経、前腕神経、および喉頭神経、ならびに側頭筋を、Ｄｒ．Ｑｕｙｅｎ  ＮｇｕｙｅｎのＩＲＢプロトコル番号１３０８３７下で入手した。ヒト末梢神経（典型的には腓腹）を、神経切除処置を受けている患者から入手した。２人の患者の前立腺からのヒト神経を、Ｍｏｏｒｅｓ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｃｅｎｔｒｅ  Ｂｉｏｒｅｐｏｓｉｔｏｒｙ  ＩＲＢプロトコル番号０９０４０１下で取得した。組織を、切片化し、ガラススライドまたはＣｒｙｏｊａｎｅテープ上にマウントした。組織切片を、ペプチド溶液の適用前の３０分間加湿器チャンバーに入れた。ペプチドを、局所適用の前に０．５倍ＨＢＳＳで適切な濃度に希釈した。既知の濃度（１μＭ〜３７５μＭ）の５０μｌのペプチド溶液を、テープまたはスライド上の１０μｍ神経切片に適用し、加湿器チャンバーにおいて３０分間インキュベートした。ペプチドとのインキュベーション後、神経切片を０．５倍ＨＢＳＳで２回、１倍ＰＢＳで１回洗浄した。カバースリップを適用し、スライドをＮｉｋｏｎ  Ａ１共焦点顕微鏡のＺｅｉｓｓ  Ｌｕｍａｒ解剖スコープのいずれかで直ちに撮像した。共焦点撮像について、１０μｍ厚の組織切片を、４８８ｎｍレーザ励起５１５（２５）、１０倍空気対物、０．２６？ｍ／ピクセルサイズで撮像した。免疫組織化学について、共焦点画像を２０倍空気対物で０．４μｍ／ピクセルで取得した。
【０３９４】
画像分析
Ｉｍａｇｅ  Ｊを使用して、共焦点顕微鏡およびＬｕｍａｒ解剖スコープを使用して取得された画像を分析および比較した。プローブが比較された各実験セットについて、我々は、入手されたデータを直接比較するために、取得パラメータを同一に保った。実験中、ＦＡＭ−ＨＮＰ４０１が我々の局所適用実験において最も明るいシグナルを有したことは明らかである。所定の実験コホートの全ての生画像ファイルを、１６ビットｔｉｆｆ画像として同時にＩｍａｇｅ  Ｊにロードした。次いで、我々は、ＦＡＭ−ＨＮＰ４０１で処理された組織について画像を平準化した。これらのレベルが設定されると、設定は、ＩｍａｇｅＪを使用して１つのステップで全ての画像に伝播される。最も明るい画像は、平準化が伝播される場合に飽和を回避するために、コホートにおける全ての他の画像のベンチマークとして設定される。画像を定量化するために、ｉｍａｇｅＪにおいて関心領域（ＲＯＩ）を描画し、シグナル数を測定した。図５について、ＦＡＭ−ＨＮＰ４０１−Ｎ−２が最も明るいが、一貫性のため、我々は、シグナル数を平準化し、正規化するためにＦＡＭ−ＨＮＰ４０１を選択する。
【０３９５】
ラット前立腺からの自律神経の免疫蛍光
Ｏｌｙｍｐｕｓ解剖顕微鏡をベースとしたカスタムメイドの外科用蛍光撮像システムで視覚化されたＴＡＭＲＡ−ＮＰ４１（１００ｇｍラットでは０．５μｍｏｌまたは１１．３ｍｇ／ｋｇ）のインビボ静脈内注射後、雄ラットの前立腺から疑わしい無髄神経組織を採取した。組織の５μｍ凍結切片を、Ｌｅｉｃａ  Ｃｒｙｏｓｔａｔを使用して生成し、Ｃｒｙｏｊａｎｅテープにマウントした。組織切片を１倍ＰＢＳ中の４％パラホルムアルデヒドで１０分間固定し、続いて１倍ＰＢＳですすいだ。ＰＢＳ中の１０％ヤギ血清中のＴＡＭＲＡに対するモノクローナル抗体［Ｔｈｅｒｍｏｆｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ  Ｃａｔ．Ｎｏ．ＭＡ１−０４１］（またはチロシンヒドロキシラーゼに対するポリクローナル抗体［Ｃｅｌｌ  Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ  Ｐｒｏｄ．Ｎｏ．２７９２Ｓ］）の１：２０００希釈物を切片あたり２０μｌ適用し、室温で一晩インキュベートし、続いて１倍ＰＢＳで洗浄した。ビオチン化抗マウス二次抗体の１：５００希釈物をＰＢＳ中の１０％ヤギ血清で２時間切片に適用し、続いて１倍ＰＢＳで洗浄した。Ｖｅｃｔｏｒ  ＲＴＵ（アビジンビオチン複合体）またはＡｌｅｘａ  ４０５ストレプトアビジンを１時間適用し、続いて１倍ＰＢＳで洗浄した。組織を１倍ＰＢＳでスライド上にウェットマウントした。共焦点画像を、０．４μｍ／ピクセルの解像度で２０倍空気対物で取得した。
【０３９６】
ニューロフィラメントの免疫蛍光
新鮮生存ヒト神経組織を、前立腺切除術から得、ＯＣＴブロックで凍結した。組織の１０μｍ凍結切片を、ガラスＴｒｕｅ  Ｂｏｎｄスライド上にマウントした。疎水性バリアペンを、各切片の周りのガラスに適用した。組織切片を、１倍ＰＢＳで調製した２％パラホルムアルデヒドを使用して固定し、１倍ＰＢＳで４回洗浄した。１００μｌのブロッキングバッファー（０．０１％Ｔｒｉｔｏｎ  Ｘ溶液、１０％正常ヤギ血清中の１％ＢＳＡ［Ｌｉｆｅ  ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ  ５００６２Ｚ］）を各組織切片に３０分間適用した。次いで、組織を１倍ＰＢＳで４回洗浄し、ニューロフィラメント抗体ＳＭＩ３１２抗体［Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ  Ｃａｔ．Ｎｏ．８３７９０４］の１：１０００希釈物を４℃で一晩インキュベーションのために組織に適用した。組織をＰＢＳＴで６回洗浄した。抗マウス二次抗体Ａｌｅｘａｆｌｕｏｒ  ５５５の１：１０００希釈物を４℃で２時間切片に適用し、続いて１倍ＰＢＳで洗浄した。ＤＡＰＩ［Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ  Ｐ３６９３１］を含むＰｒｏｌｏｎｇ  Ｇｏｌｄ褪色防止試薬を、カバースリッピングおよび撮像の前に添加した。
【０３９７】
Ｈ＆Ｅ染色プロトコル
組織切片を１：１の１０％緩衝ホルムアルデヒドおよび２００プルーフエタノールで１分間固定した。次いで、スライドを水で洗浄し、ヘマトキシリン染料に２分間浸漬した。次いで、スライドを蒸留水で洗浄し、青色発色溶液に３０秒間浸漬した。スライドを蒸留水で洗浄し、エオシン溶液に１分間浸漬し、続いて蒸留水で洗浄した。スライドを５０％、９５％、１００％エタノールに連続して浸して水を除去した。スライドを風乾し、シトリソルブに浸した後、カバースリップを非キシレンマウンティング溶液でマウントし、２０倍の倍率で明視野を使用してＨａｍａｍａｔｓｕ  Ｎａｎｏｚｏｏｍｅｒで撮像した。
【０３９８】
ＨＮＰ４０１−ＦＡＭの血液クリアランス
５匹の８週齢ＳＫＨ雄マウスに、１００μｌの滅菌水中の１００ｎｍｏｌ［２５ｇｍマウスでは１０．７５ｍｇ／ｋｇ］のＦＡＭ−ＨＮＰ４０１を静脈内注射した。採血の前に、マウスにケタミン：ミダゾラムの１：１カクテルで麻酔をかけた。注射後１分、１０分、２０分、３０分、１時間、および２時間にテールプリックを行って５μｌの全血を収集し、これを１００μｌのＡｇｉｌｅｎｔ  ＩＣＰ−ＭＳチューニングバッファーに溶解した。試料を遠心分離し、等体積の上清をＴｅｃａｎ蛍光プレートリーダーを使用して分析した。
【０３９９】
参考文献
2020530034.tif 000548
2020530034.tif 000549
2020530034.tif 000550
2020530034.tif 000551
2020530034.tif 000552
【０４００】
上記の例は、当業者に、本開示の組成物、システム、および方法の実施形態をどのように作製および使用するかについての完全な開示および説明を与えるために提供されており、本発明者らが彼らの開示とみなすものの範囲を限定することは意図されていない。当業者に明らかである本開示を実施するための上記の様式の修正は、以下の特許請求の範囲の範囲内にあることが意図される。本明細書中で言及されている全ての特許および刊行物は、本開示が属する技術分野の当業者の技術水準を示している。本開示において引用された全ての参考文献は、あたかも各参考文献が参照によりその全体が個別に組み込まれているのと同程度に参照により組み込まれる。
【０４０１】
全ての見出しおよびセクションの指定は、明確さおよび参照目的のためだけに使用されているにすぎず、決して限定的であるとみなされるべきではない。例えば、当業者は、本明細書に記載の本発明の趣旨および範囲に従って、必要に応じて異なる見出しおよびセクションからの様々な態様を組み合わせることの有用性を認識するであろう。
【０４０２】
本明細書に引用された全ての参考文献は、あたかも各個々の刊行物または特許または特許出願が全ての目的のためにその全体が参照により組み込まれるように具体的かつ個別に示されるのと同程度にそれらの全体が全ての目的のために本明細書に参照により組み込まれる。
【０４０３】
当業者には明らかなように、本出願の趣旨および範囲から逸脱することなく、本出願の多くの修正および変形をなすことができる。本明細書に記載された特定の実施形態および実施例は例としてのみ提供され、特許請求の範囲が権利を与えられる同等物の全範囲と共に、添付の特許請求の範囲の用語によってのみ限定されるべきである。
【図１】
2020530034.tif 000585
【図２】
2020530034.tif 000586
【図３】
2020530034.tif 000587
【図４】
2020530034.tif 000588
【図５】
2020530034.tif 000589
【図６】
2020530034.tif 000590
【図７】
2020530034.tif 000591
【図８】
2020530034.tif 000592
【図９】
2020530034.tif 000593
【図１０】
2020530034.tif 000594
【図１１】
2020530034.tif 000595
【図１２】
2020530034.tif 000596
【図１３】
2020530034.tif 000597
【図１４】
2020530034.tif 000598
【図１５】
2020530034.tif 000599
【図１６】
2020530034.tif 000600
【図１７】
2020530034.tif 000601
【図１８】
2020530034.tif 000602
【図１９】
2020530034.tif 000603
【図２０】
2020530034.tif 000604
【図２１】
2020530034.tif 000605
【図２２】
2020530034.tif 000606
【図２３】
2020530034.tif 000607
【図２４】
2020530034.tif 000608
【図２５】
2020530034.tif 000609
【図２６】
2020530034.tif 000610
【図２７】
2020530034.tif 000611
【図２８−１】
2020530034.tif 000612
【図２８−２】
2020530034.tif 000613
【図２８−３】
2020530034.tif 000614
【図２９】
2020530034.tif 000615
【図３０】
2020530034.tif 000616
【手続補正書】
【提出日】令和2年5月11日(2020.5.11)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ヒトニューロンもしくは神経またはいずれかの構成要素に特異的に結合するヒトニューロンまたは神経ターゲティング分子であって、
2020530034.tif 000617
からなる群より選択されるペプチドを含む、ヒトニューロンまたは神経ターゲティング分子。
【請求項２】
2020530034.tif 000618
からなる群より選択されるペプチドを含む、請求項１に記載のヒトニューロンまたは神経ターゲティング分子。
【請求項３】
2020530034.tif 000619
からなる群より選択されるペプチドを含む、請求項１に記載のヒトニューロンまたは神経ターゲティング分子。
【請求項４】
ペプチド
2020530034.tif 000620
を含む、請求項１に記載のヒトニューロンまたは神経ターゲティング分子。
【請求項５】
ペプチド
2020530034.tif 000621
を含む、請求項１に記載のヒトニューロンまたは神経ターゲティング分子。
【請求項６】
ペプチド
2020530034.tif 000622
を含む、請求項１に記載のヒトニューロンまたは神経ターゲティング分子。
【請求項７】
ペプチド
2020530034.tif 000623
を含む、請求項１に記載のヒトニューロンまたは神経ターゲティング分子。
【請求項８】
ペプチド
2020530034.tif 000624
を含む、請求項１に記載のヒトニューロンまたは神経ターゲティング分子。
【請求項９】
ペプチド
2020530034.tif 000625
を含む、請求項１に記載のヒトニューロンまたは神経ターゲティング分子。
【請求項１０】
ペプチド
2020530034.tif 000626
を含む、請求項１に記載のヒトニューロンまたは神経ターゲティング分子。
【請求項１１】
ペプチド
2020530034.tif 000627
を含む、請求項１に記載のヒトニューロンまたは神経ターゲティング分子。
【請求項１２】
ペプチド
2020530034.tif 000628
を含む、請求項１に記載のヒトニューロンまたは神経ターゲティング分子。
【請求項１３】
ペプチド
2020530034.tif 000629
を含む、請求項１に記載のヒトニューロンまたは神経ターゲティング分子。
【請求項１４】
ペプチド
2020530034.tif 000630
を含む、請求項１に記載のヒトニューロンまたは神経ターゲティング分子。
【請求項１５】
ペプチド
2020530034.tif 000631
を含む、請求項１に記載のヒトニューロンまたは神経ターゲティング分子。
【請求項１６】
ペプチド
2020530034.tif 000632
を含む、請求項１に記載のヒトニューロンまたは神経ターゲティング分子。
【請求項１７】
ペプチド
2020530034.tif 000633
を含む、請求項１に記載のヒトニューロンまたは神経ターゲティング分子。
【請求項１８】
ペプチド
2020530034.tif 000634
を含む、請求項１に記載のヒトニューロンまたは神経ターゲティング分子。
【請求項１９】
ペプチド
2020530034.tif 000635
を含む、請求項１に記載のヒトニューロンまたは神経ターゲティング分子。
【請求項２０】
ペプチド
2020530034.tif 000636
を含む、請求項１に記載のヒトニューロンまたは神経ターゲティング分子。
【請求項２１】
ペプチド
2020530034.tif 000637
を含む、請求項１に記載のヒトニューロンまたは神経ターゲティング分子。
【請求項２２】
2020530034.tif 000638
を含む、請求項１に記載のヒトニューロンまたは神経ターゲティング分子。
【請求項２３】
ペプチド
2020530034.tif 000639
を含む、請求項１に記載のヒトニューロンまたは神経ターゲティング分子。
【請求項２４】
ペプチド
2020530034.tif 000640
を含む、請求項１に記載のヒトニューロンまたは神経ターゲティング分子。
【請求項２５】
ペプチド
2020530034.tif 000641
を含む、請求項１に記載のヒトニューロンまたは神経ターゲティング分子。
【請求項２６】
ペプチド
2020530034.tif 000642
を含む、請求項１に記載のヒトニューロンまたは神経ターゲティング分子。
【請求項２７】
ペプチド
2020530034.tif 000643
を含む、請求項１に記載のヒトニューロンまたは神経ターゲティング分子。
【請求項２８】
薬物、蛍光部分、および光増感剤からなる群より選択されるカーゴをさらに含む、請求項１〜２６のいずれか一項に記載のヒトニューロンまたは神経ターゲティング分子。
【請求項２９】
2020530034.tif 000644
を含む、請求項２８に記載のヒトニューロンまたは神経ターゲティング分子。
【請求項３０】
前記カーゴが、前記薬物を含む、請求項２８に記載のヒトニューロンまたは神経ターゲティング分子。
【請求項３１】
前記薬物が、抗ヒスタミン剤、ＧＡＢＡ受容体調節剤、神経伝達物質再取り込み阻害剤、局所麻酔剤、抗コリン剤、ナトリウムチャネル遮断剤、カルシウムチャネル遮断剤、チロトロピン放出ホルモン、γ−セクレターゼ阻害剤、ＡＭＰＡ受容体アゴニストまたはアンタゴニスト、ＮＭＤＡ受容体アゴニストまたはアンタゴニスト、ｍＧｌｕ受容体アゴニストまたはアンタゴニスト、成長因子、制吐剤、コルチコステロイド、細胞毒性剤、抗酸化剤、鉄キレート剤、ミトコンドリア調節剤、サーチュイン調節剤、一酸化窒素（ＮＯ）および／または一酸化窒素シンターゼ（ＮＯＳ）調節剤、カリウムチャネルアゴニストまたはアンタゴニスト、プリン受容体アゴニストまたはアンタゴニスト、ならびにそれらの組み合わせからなる群より選択される、請求項３０に記載のヒトニューロンまたは神経ターゲティング分子。
【請求項３２】
前記薬物が、ベンゾカイン、カルチカイン、シンコカイン、シクロメチカイン、リドカイン、プリロカイン、プロポキシカイン、プロパラカイン、テトラカイン、トカイニド、およびトリメカイン、メトトレキサート、シクロホスファミド、サリドマイド、パクリタキセル、ペメトレキセド、ペントスタチン、ピポブロマン、ピキサントロン、プリカマイシン、プラトニン、プロカルバジン、ラルチトレキセド、レベッカマイシン、ルビテカン、ＳＮ−３８、サリノスポラミドＡ、サトラプラチン、ストレプトゾトシン、スワインソニン、タリキダール、タキサン、テガフール−ウラシル、テモゾロミド、テストラクトン、チオＴＥＰＡ、チオグアニン、トポテカン、トラベクテジン、トレチノイン、四硝酸トリプラチン、トリス（２−クロロエチル）アミン、トロキサシタビン、ウラシルマスタード、バルルビシン、ビンブラスチン、ビンクリスチン、ビノレルビン、ボリノスタット、ゾスキダル、カルバマゼピン、オキシカルバゼピン、フェニテイン、バルプロ酸、バルプロ酸ナトリウム、シンナリジン、フルナリジン、ニモジピン、脳由来神経栄養因子（ＢＤＮＦ）、毛様体神経栄養因子（ＣＮＴＦ）、グリア細胞株由来神経栄養因子（ＧＤＮＦ）、ニューロトロフィン−３、ニューロトロフィン−４、線維芽細胞成長因子（ＦＧＦ）受容体、インスリン様成長因子（ＩＧＦ）、ならびにそれらの組み合わせからなる群より選択される、請求項３０に記載のヒトニューロンまたは神経ターゲティング分子。
【請求項３３】
前記カーゴが、前記蛍光部分を含む、請求項２８に記載のヒトニューロンまたは神経ターゲティング分子。
【請求項３４】
前記蛍光部分が、蛍光タンパク質、蛍光ペプチド、蛍光色素、およびそれらの組み合わせからなる群より選択される、請求項３３に記載のヒトニューロンまたは神経ターゲティング分子。
【請求項３５】
前記蛍光部分が、キサンテン、ビマン、クマリン、芳香族アミン、ベンゾフラン、蛍光シアニン、カルバゾール、ジシアノメチレンピラン、ポリメチン、オキサベンズアントラン (oxabenzanthrane)、ピリリウム、カルボスチル、ペリレン、アクリドン、キナクリドン、ルブレン、アントラセン、コロネン、フェナントレセン、ピレン、ブタジエン、スチルベン、ポルフィリン、フタロシアニン、ランタニド金属キレート錯体、希土類金属キレート錯体、およびそれらの誘導体からなる群より選択される、請求項３３に記載のヒトニューロンまたは神経ターゲティング分子。
【請求項３６】
前記蛍光部分が、５−カルボキシフルオレセイン、フルオレセイン−５−イソチオシアネート、６−カルボキシフルオレセイン、テトラメチルローダミン−６−イソチオシアネート、５−カルボキシテトラメチルローダミン、５−カルボキシロドール誘導体、テトラメチルおよびテトラエチルローダミン、ジフェニルジメチルおよびジフェニルジエチルローダミン、ジナフチルローダミン、ローダミン１０１スルホニルクロリド、Ｃｙ３、Ｃｙ３Ｂ、Ｃｙ３．５、Ｃｙ５、Ｃｙ５．５、Ｃｙ７、インドシアニングリーン、ＩＲ８００ＣＷ、シアン蛍光タンパク質（ＣＦＰ）、ＥＧＦＰ、６−ＦＡＭ、ＦＡＭ、フルオレセイン、５，６−ジカルボキシフルオレセイン、５−（および６）−スルホフルオレセイン、スルホンフルオレセイン、スクシニルフルオレセイン、５−（および６）−カルボキシＳＮＡＲＦ−１、カルボキシフルオレセインスルホネート、カルボキシフルオレセイン双性イオン、カルボキシフルオレセイン第四級アンモニウム、カルボキシフルオレセインホスホネート、カルボキシフルオレセインＧＡＢＡ、カルボキシフルオレセイン−シス−Ｃｙ５、５’（６’）−カルボキシフルオレセイン、フルオレセイングルタチオン、ならびにそれらの組み合わせからなる群より選択される、請求項３３に記載のヒトニューロンまたは神経ターゲティング分子。
【請求項３７】
前記カーゴが、前記光増感剤を含む、請求項２９に記載のヒトニューロンまたは神経ターゲティング分子。
【請求項３８】
前記光増感剤が、ポルフィリン、クロリン、および色素からなる群より選択される、請求項３７に記載のヒトニューロンまたは神経ターゲティング分子。
【請求項３９】
前記光増感剤が、ポルフィリン、プロトポルフィリンＩＸ、プルリチン、ベルテポルフィン、ＨＰＰＨ、テモポルフィン、メチレンブルー、フォトフリン、プロトフリン、ヘマトポルフィリン、タラポルフィン、ベンゾポルフィリン誘導体一酸、５−アミノレブリン酸、ルテチウムテキサフィリン、メタロフタロシアニン、メタロナフタロシアニンスルホベンゾ−ポルフィラジン、メタロナフタロシアニン、亜鉛テトラスルホフタロシアニン、バクテリオクロリン、メタロクロリン、塩素誘導体、テトラ（ｍ−ヒドロキシフェニル）クロリン（ｍＴＨＰＣ）、フェオホルビド、ジブロモフルオレセイン（ＤＢＦ）、ＩＲ７００ＤＸ、ナフタロシアニン、およびポルフィリン誘導体からなる群より選択される、請求項３７に記載のヒトニューロンまたは神経ターゲティング分子。
【請求項４０】
前記カーゴが、前記ペプチドのＮ末端に結合されている、請求項２８〜３９のいずれか一項に記載のヒトニューロンまたは神経ターゲティング分子。
【請求項４１】
前記カーゴが、前記ペプチドのＣ末端に結合されている、請求項２８〜３９のいずれか一項に記載のヒトニューロンまたは神経ターゲティング分子。
【請求項４２】
前記カーゴが、リンカーを介して前記ペプチドに結合されている、請求項２８〜４１のいずれか一項に記載のヒトニューロンまたは神経ターゲティング分子。
【請求項４３】
前記リンカーが、直鎖もしくは分岐鎖炭素リンカー、複素環炭素リンカー、アミノ酸リンカー、親油性残基、ペプチドリンカー、ペプチド核酸リンカー、ヒドラゾンリンカー、ＳＰＤＢジスルフィド、スルホ−ＳＰＤＢ、マレイミドメチルシクロヘキサン−１−カルボキシレート（ＭＣＣ）、アミノヘキサン酸リンカー、ポリエーテルリンカー、またはポリエチレングリコールリンカーである、請求項４２に記載のヒトニューロンまたは神経ターゲティング分子。
【請求項４４】
2020530034.tif 000645
を含む、請求項１に記載のヒトニューロンまたは神経ターゲティング分子。
【請求項４５】
２つ以上のニューロンまたは神経ターゲティングペプチドを含むマルチドメインニューロンまたは神経ターゲティング分子であって、前記２つ以上のニューロンまたは神経ターゲティング分子が、ヒトニューロンもしくは神経またはいずれかの構成要素に結合し、第１のペプチドが、
2020530034.tif 000646
からなる群より選択される、マルチドメインニューロンまたは神経ターゲティング分子。
【請求項４６】
第２のペプチドが、
2020530034.tif 000647
からなる群より選択される、請求項４５に記載のマルチドメインニューロンまたは神経ターゲティング分子。
【請求項４７】
前記第１のペプチドおよび前記第２のペプチドが、同じまたは異なる、請求項４５または４６に記載のマルチドメインニューロンまたは神経ターゲティング分子。
【請求項４８】
薬物、蛍光部分、および光増感剤からなる群より選択されるカーゴをさらに含む、請求項４５〜４７のいずれか一項に記載のマルチドメインニューロンまたは神経ターゲティング分子。
【請求項４９】
前記第１のペプチドおよび第２のペプチドが、リンカーを介して結合されている、請求項４５〜４８のいずれか一項に記載のマルチドメインニューロンまたは神経ターゲティング分子。
【請求項５０】
前記第１のペプチドおよび第２のペプチドが、前記カーゴを介して結合されている、請求項４８に記載のマルチドメインニューロンまたは神経ターゲティング分子。
【請求項５１】
ヒトニューロンまたは神経を特定する方法であって、前記ヒトニューロンまたは神経を請求項３３〜３６のいずれか一項に記載のターゲティング分子と接触させることを含む、方法。
【請求項５２】
前記ヒトニューロンまたは神経が、前記ヒトニューロンまたは神経ターゲティング分子との組み合わせで遊離蛍光部分と接触させられる、請求項５１に記載の方法。
【請求項５３】
薬物をヒトニューロンまたは神経に送達する方法であって、前記ヒトニューロンまたは神経を、請求項３０〜３２のいずれか一項に記載のヒトニューロンまたは神経ターゲティング分子と接触させることを含む、方法。
【請求項５４】
光増感剤をヒトニューロンまたは神経に送達する方法であって、前記ヒトニューロンまたは神経を、請求項３７〜３９のいずれか一項に記載のヒトニューロンまたは神経ターゲティング分子と接触させることを含む、方法。
【請求項５５】
前記方法が、前記ヒトニューロンまたは神経を、前記光増感剤を活性化させる光源に曝露することをさらに含み、前記ヒトニューロンまたは神経が、活性化した前記光増感剤によってアブレーションされる、請求項５４に記載の方法。
【請求項５６】
前記ヒトニューロンまたは神経ターゲティング分子が、ヒト対象の全身静脈内注射によって投与される、請求項５１〜５５のいずれかに記載の方法。
【請求項５７】
前記ヒトニューロンまたは神経ターゲティング分子が、外科的処置の前に投与される、請求項５１〜５６のいずれかに記載の方法。
【請求項５８】
前記外科的処置が、がんの外科的処置である、請求項５７に記載の方法。
【請求項５９】
前記外科的処置が、前立腺がんの外科的処置である、請求項５８に記載の方法。
【請求項６０】
（ａ）請求項１〜４４のいずれか一項に記載のヒトニューロンもしくは神経ターゲティング分子または請求項４５〜５０のいずれか一項に記載のマルチドメインニューロンもしくは神経ターゲティング分子と、（ｂ）薬学的に許容される賦形剤とを含む、薬学的組成物。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０００８
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０００８】
本明細書では、特定の実施形態において、ヒトニューロン、ヒト神経、またはいずれかの構成要素に特異的に結合するペプチドを含むターゲティング分子が開示される。いくつかの実施形態において、ペプチドは、
2020530034.tif 000648
および／またはそれらの組み合わせからなる群より選択される。
【手続補正３】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０１６８
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０１６８】
組成物のいくつかの実施形態では、ペプチドは、カーゴに結合されている。いくつかの実施形態において、カーゴは、薬物、光増感剤、または蛍光部分である。
[本発明1001]
ヒトニューロンもしくは神経またはいずれかの構成要素に特異的に結合するヒトニューロンまたは神経ターゲティング分子であって、
2020530034.tif 000649
からなる群より選択されるペプチドを含む、ヒトニューロンまたは神経ターゲティング分子。
[本発明1002]
2020530034.tif 000650
からなる群より選択されるペプチドを含む、本発明1001のヒトニューロンまたは神経ターゲティング分子。
[本発明1003]
2020530034.tif 000651
からなる群より選択されるペプチドを含む、本発明1001のヒトニューロンまたは神経ターゲティング分子。
[本発明1004]
ペプチド
2020530034.tif 000652
を含む、本発明1001のヒトニューロンまたは神経ターゲティング分子。
[本発明1005]
ペプチド
2020530034.tif 000653
を含む、本発明1001のヒトニューロンまたは神経ターゲティング分子。
[本発明1006]
ペプチド
2020530034.tif 000654
を含む、本発明1001のヒトニューロンまたは神経ターゲティング分子。
[本発明1007]
ペプチド
2020530034.tif 000655
を含む、本発明1001のヒトニューロンまたは神経ターゲティング分子。
[本発明1008]
ペプチド
2020530034.tif 000656
を含む、本発明1001のヒトニューロンまたは神経ターゲティング分子。
[本発明1009]
ペプチド
2020530034.tif 000657
を含む、本発明1001のヒトニューロンまたは神経ターゲティング分子。
[本発明1010]
ペプチド
2020530034.tif 000658
を含む、本発明1001のヒトニューロンまたは神経ターゲティング分子。
[本発明1011]
ペプチド
2020530034.tif 000659
を含む、本発明1001のヒトニューロンまたは神経ターゲティング分子。
[本発明1012]
ペプチド
2020530034.tif 000660
を含む、本発明1001のヒトニューロンまたは神経ターゲティング分子。
[本発明1013]
ペプチド
2020530034.tif 000661
を含む、本発明1001のヒトニューロンまたは神経ターゲティング分子。
[本発明1014]
ペプチド
2020530034.tif 000662
を含む、本発明1001のヒトニューロンまたは神経ターゲティング分子。
[本発明1015]
ペプチド
2020530034.tif 000663
を含む、本発明1001のヒトニューロンまたは神経ターゲティング分子。
[本発明1016]
ペプチド
2020530034.tif 000664
を含む、本発明1001のヒトニューロンまたは神経ターゲティング分子。
[本発明1017]
ペプチド
2020530034.tif 000665
を含む、本発明1001のヒトニューロンまたは神経ターゲティング分子。
[本発明1018]
ペプチド
2020530034.tif 000666
を含む、本発明1001のヒトニューロンまたは神経ターゲティング分子。
[本発明1019]
ペプチド
2020530034.tif 000667
を含む、本発明1001のヒトニューロンまたは神経ターゲティング分子。
[本発明1020]
ペプチド
2020530034.tif 000668
を含む、本発明1001のヒトニューロンまたは神経ターゲティング分子。
[本発明1021]
ペプチド
2020530034.tif 000669
を含む、本発明1001のヒトニューロンまたは神経ターゲティング分子。
[本発明1022]
2020530034.tif 000670
を含む、本発明1001のヒトニューロンまたは神経ターゲティング分子。
[本発明1023]
ペプチド
2020530034.tif 000671
を含む、本発明1001のヒトニューロンまたは神経ターゲティング分子。
[本発明1024]
ペプチド
2020530034.tif 000672
を含む、本発明1001のヒトニューロンまたは神経ターゲティング分子。
[本発明1025]
ペプチド
2020530034.tif 000673
を含む、本発明1001のヒトニューロンまたは神経ターゲティング分子。
[本発明1026]
ペプチド
2020530034.tif 000674
を含む、本発明1001のヒトニューロンまたは神経ターゲティング分子。
[本発明1027]
ペプチド
2020530034.tif 000675
を含む、本発明1001のヒトニューロンまたは神経ターゲティング分子。
[本発明1028]
薬物、蛍光部分、および光増感剤からなる群より選択されるカーゴをさらに含む、本発明1001〜1026のいずれかのヒトニューロンまたは神経ターゲティング分子。
[本発明1029]
2020530034.tif 000676
を含む、本発明1028のヒトニューロンまたは神経ターゲティング分子。
[本発明1030]
前記カーゴが、前記薬物を含む、本発明1028のヒトニューロンまたは神経ターゲティング分子。
[本発明1031]
前記薬物が、抗ヒスタミン剤、ＧＡＢＡ受容体調節剤、神経伝達物質再取り込み阻害剤、局所麻酔剤、抗コリン剤、ナトリウムチャネル遮断剤、カルシウムチャネル遮断剤、チロトロピン放出ホルモン、γ−セクレターゼ阻害剤、ＡＭＰＡ受容体アゴニストまたはアンタゴニスト、ＮＭＤＡ受容体アゴニストまたはアンタゴニスト、ｍＧｌｕ受容体アゴニストまたはアンタゴニスト、成長因子、制吐剤、コルチコステロイド、細胞毒性剤、抗酸化剤、鉄キレート剤、ミトコンドリア調節剤、サーチュイン調節剤、一酸化窒素（ＮＯ）および／または一酸化窒素シンターゼ（ＮＯＳ）調節剤、カリウムチャネルアゴニストまたはアンタゴニスト、プリン受容体アゴニストまたはアンタゴニスト、ならびにそれらの組み合わせからなる群より選択される、本発明1030のヒトニューロンまたは神経ターゲティング分子。
[本発明1032]
前記薬物が、ベンゾカイン、カルチカイン、シンコカイン、シクロメチカイン、リドカイン、プリロカイン、プロポキシカイン、プロパラカイン、テトラカイン、トカイニド、およびトリメカイン、メトトレキサート、シクロホスファミド、サリドマイド、パクリタキセル、ペメトレキセド、ペントスタチン、ピポブロマン、ピキサントロン、プリカマイシン、プラトニン、プロカルバジン、ラルチトレキセド、レベッカマイシン、ルビテカン、ＳＮ−38、サリノスポラミドＡ、サトラプラチン、ストレプトゾトシン、スワインソニン、タリキダール、タキサン、テガフール−ウラシル、テモゾロミド、テストラクトン、チオＴＥＰＡ、チオグアニン、トポテカン、トラベクテジン、トレチノイン、四硝酸トリプラチン、トリス（2−クロロエチル）アミン、トロキサシタビン、ウラシルマスタード、バルルビシン、ビンブラスチン、ビンクリスチン、ビノレルビン、ボリノスタット、ゾスキダル、カルバマゼピン、オキシカルバゼピン、フェニテイン、バルプロ酸、バルプロ酸ナトリウム、シンナリジン、フルナリジン、ニモジピン、脳由来神経栄養因子（ＢＤＮＦ）、毛様体神経栄養因子（ＣＮＴＦ）、グリア細胞株由来神経栄養因子（ＧＤＮＦ）、ニューロトロフィン−3、ニューロトロフィン−4、線維芽細胞成長因子（ＦＧＦ）受容体、インスリン様成長因子（ＩＧＦ）、ならびにそれらの組み合わせからなる群より選択される、本発明1030のヒトニューロンまたは神経ターゲティング分子。
[本発明1033]
前記カーゴが、前記蛍光部分を含む、本発明1028のヒトニューロンまたは神経ターゲティング分子。
[本発明1034]
前記蛍光部分が、蛍光タンパク質、蛍光ペプチド、蛍光色素、およびそれらの組み合わせからなる群より選択される、本発明1033のヒトニューロンまたは神経ターゲティング分子。
[本発明1035]
前記蛍光部分が、キサンテン、ビマン、クマリン、芳香族アミン、ベンゾフラン、蛍光シアニン、カルバゾール、ジシアノメチレンピラン、ポリメチン、オキサベンズアントラン (oxabenzanthrane)、ピリリウム、カルボスチル、ペリレン、アクリドン、キナクリドン、ルブレン、アントラセン、コロネン、フェナントレセン、ピレン、ブタジエン、スチルベン、ポルフィリン、フタロシアニン、ランタニド金属キレート錯体、希土類金属キレート錯体、およびそれらの誘導体からなる群より選択される、本発明1033のヒトニューロンまたは神経ターゲティング分子。
[本発明1036]
前記蛍光部分が、5−カルボキシフルオレセイン、フルオレセイン−5−イソチオシアネート、6−カルボキシフルオレセイン、テトラメチルローダミン−6−イソチオシアネート、5−カルボキシテトラメチルローダミン、5−カルボキシロドール誘導体、テトラメチルおよびテトラエチルローダミン、ジフェニルジメチルおよびジフェニルジエチルローダミン、ジナフチルローダミン、ローダミン101スルホニルクロリド、Ｃｙ3、Ｃｙ3Ｂ、Ｃｙ3．5、Ｃｙ5、Ｃｙ5．5、Ｃｙ7、インドシアニングリーン、ＩＲ800ＣＷ、シアン蛍光タンパク質（ＣＦＰ）、ＥＧＦＰ、6−ＦＡＭ、ＦＡＭ、フルオレセイン、5，6−ジカルボキシフルオレセイン、5−（および6）−スルホフルオレセイン、スルホンフルオレセイン、スクシニルフルオレセイン、5−（および6）−カルボキシＳＮＡＲＦ−1、カルボキシフルオレセインスルホネート、カルボキシフルオレセイン双性イオン、カルボキシフルオレセイン第四級アンモニウム、カルボキシフルオレセインホスホネート、カルボキシフルオレセインＧＡＢＡ、カルボキシフルオレセイン−シス−Ｃｙ5、5’（6’）−カルボキシフルオレセイン、フルオレセイングルタチオン、ならびにそれらの組み合わせからなる群より選択される、本発明1033のヒトニューロンまたは神経ターゲティング分子。
[本発明1037]
前記カーゴが、前記光増感剤を含む、本発明1029のヒトニューロンまたは神経ターゲティング分子。
[本発明1038]
前記光増感剤が、ポルフィリン、クロリン、および色素からなる群より選択される、本発明1037のヒトニューロンまたは神経ターゲティング分子。
[本発明1039]
前記光増感剤が、ポルフィリン、プロトポルフィリンＩＸ、プルリチン、ベルテポルフィン、ＨＰＰＨ、テモポルフィン、メチレンブルー、フォトフリン、プロトフリン、ヘマトポルフィリン、タラポルフィン、ベンゾポルフィリン誘導体一酸、5−アミノレブリン酸、ルテチウムテキサフィリン、メタロフタロシアニン、メタロナフタロシアニンスルホベンゾ−ポルフィラジン、メタロナフタロシアニン、亜鉛テトラスルホフタロシアニン、バクテリオクロリン、メタロクロリン、塩素誘導体、テトラ（ｍ−ヒドロキシフェニル）クロリン（ｍＴＨＰＣ）、フェオホルビド、ジブロモフルオレセイン（ＤＢＦ）、ＩＲ700ＤＸ、ナフタロシアニン、およびポルフィリン誘導体からなる群より選択される、本発明1037のヒトニューロンまたは神経ターゲティング分子。
[本発明1040]
前記カーゴが、前記ペプチドのＮ末端に結合されている、本発明1028〜1039のいずれかのヒトニューロンまたは神経ターゲティング分子。
[本発明1041]
前記カーゴが、前記ペプチドのＣ末端に結合されている、本発明1028〜1039のいずれかのヒトニューロンまたは神経ターゲティング分子。
[本発明1042]
前記カーゴが、リンカーを介して前記ペプチドに結合されている、本発明1028〜1041のいずれかのヒトニューロンまたは神経ターゲティング分子。
[本発明1043]
前記リンカーが、直鎖もしくは分岐鎖炭素リンカー、複素環炭素リンカー、アミノ酸リンカー、親油性残基、ペプチドリンカー、ペプチド核酸リンカー、ヒドラゾンリンカー、ＳＰＤＢジスルフィド、スルホ−ＳＰＤＢ、マレイミドメチルシクロヘキサン−1−カルボキシレート（ＭＣＣ）、アミノヘキサン酸リンカー、ポリエーテルリンカー、またはポリエチレングリコールリンカーである、本発明1042のヒトニューロンまたは神経ターゲティング分子。
[本発明1044]
2020530034.tif 000677
を含む、本発明1001のヒトニューロンまたは神経ターゲティング分子。
[本発明1045]
2つ以上のニューロンまたは神経ターゲティングペプチドを含むマルチドメインニューロンまたは神経ターゲティング分子であって、前記2つ以上のニューロンまたは神経ターゲティング分子が、ヒトニューロンもしくは神経またはいずれかの構成要素に結合し、第1のペプチドが、
2020530034.tif 000678
からなる群より選択される、マルチドメインニューロンまたは神経ターゲティング分子。
[本発明1046]
第2のペプチドが、
2020530034.tif 000679
からなる群より選択される、本発明1045のマルチドメインニューロンまたは神経ターゲティング分子。
[本発明1047]
前記第1のペプチドおよび前記第2のペプチドが、同じまたは異なる、本発明1045または1046のマルチドメインニューロンまたは神経ターゲティング分子。
[本発明1048]
薬物、蛍光部分、および光増感剤からなる群より選択されるカーゴをさらに含む、本発明1045〜1047のいずれかのマルチドメインニューロンまたは神経ターゲティング分子。
[本発明1049]
前記第1のペプチドおよび第2のペプチドが、リンカーを介して結合されている、本発明1045〜1048のいずれかのマルチドメインニューロンまたは神経ターゲティング分子。
[本発明1050]
前記第1のペプチドおよび第2のペプチドが、前記カーゴを介して結合されている、本発明1048のマルチドメインニューロンまたは神経ターゲティング分子。
[本発明1051]
ヒトニューロンまたは神経を特定する方法であって、前記ヒトニューロンまたは神経を本発明1033〜1036のいずれかのターゲティング分子と接触させることを含む、方法。
[本発明1052]
前記ヒトニューロンまたは神経が、前記ヒトニューロンまたは神経ターゲティング分子との組み合わせで遊離蛍光部分と接触させられる、本発明1051の方法。
[本発明1053]
薬物をヒトニューロンまたは神経に送達する方法であって、前記ヒトニューロンまたは神経を、本発明1030〜1032のいずれかのヒトニューロンまたは神経ターゲティング分子と接触させることを含む、方法。
[本発明1054]
光増感剤をヒトニューロンまたは神経に送達する方法であって、前記ヒトニューロンまたは神経を、本発明1037〜1039のいずれかのヒトニューロンまたは神経ターゲティング分子と接触させることを含む、方法。
[本発明1055]
前記方法が、前記ヒトニューロンまたは神経を、前記光増感剤を活性化させる光源に曝露することをさらに含み、前記ヒトニューロンまたは神経が、活性化した前記光増感剤によってアブレーションされる、本発明1054の方法。
[本発明1056]
前記ヒトニューロンまたは神経ターゲティング分子が、ヒト対象の全身静脈内注射によって投与される、本発明1051〜1055のいずれかの方法。
[本発明1057]
前記ヒトニューロンまたは神経ターゲティング分子が、外科的処置の前に投与される、本発明1051〜1056のいずれかの方法。
[本発明1058]
前記外科的処置が、がんの外科的処置である、本発明1057の方法。
[本発明1059]
前記外科的処置が、前立腺がんの外科的処置である、本発明1058の方法。
[本発明1060]
（ａ）本発明1001〜1044のいずれかのヒトニューロンもしくは神経ターゲティング分子または本発明1045〜1050のいずれかのマルチドメインニューロンもしくは神経ターゲティング分子と、（ｂ）薬学的に許容される賦形剤とを含む、薬学的組成物。
【手続補正４】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】配列表
【補正方法】追加
【補正の内容】
【配列表】
2020530034000001.app
【国際調査報告】
2020530034.tif 000680
2020530034.tif 000681
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