(57)【要約】  ヒンジドメインに変異を有し、ＦｃγＲＩＩＢ（ＣＤ３２Ｂ）などのＦｃγ受容体に対する改変された結合活性を呈する、ヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ２、およびＩｇＧ４変異体。免疫細胞表面受容体およびＦｃγＲＩＩＢの両方を標的とすることができる治療剤を使用して、対象における免疫応答を選択的に活性化するための方法もまた本明細書に提供される。【選択図】図１Ａ
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
バリアントＦｃ領域を含むタンパク質であって、前記バリアントＦｃ領域が、野生型の親Ｆｃ領域と比較して２１８位〜３２９位のいずれかに変異を含み、ここで番号付けは、ＥＵインデックスに従うものである、タンパク質。
【請求項２】
前記変異が、２１８位〜３２８位のいずれかにある、請求項１に記載のタンパク質。
【請求項３】
前記変異が、アミノ酸残基置換、挿入、欠失、またはそれらの組み合わせである、請求項１または請求項２に記載のタンパク質。
【請求項４】
前記変異が、以下、
（ａ）２１９位〜２２５位のうちの１つ以上での変異、
（ｂ）２１８位と２１９位との間、または２３６位での挿入、
（ｃ）２３３位〜２３５位のうちの１つ以上でのアミノ酸残基置換、
（ｄ）２２０位〜２２３位のいずれかでの挿入、
（ｅ）２３６位〜２３８位のうちの１つ以上での欠失、ならびに
（ｆ）２６７位、２７３位、３２８位、および３２９位のうちの１つ以上でのアミノ酸置換のうちの１つ以上を含む、請求項１に記載のタンパク質。
【請求項５】
前記（ａ）の変異が、挿入、欠失、アミノ酸残基置換、またはそれらの組み合わせを含む、請求項４に記載のタンパク質。
【請求項６】
前記変異が、（ｉ）２３４位〜２３８位のうちの１つ以上での変異と、（ｉｉ）２６７位、２７３位、３２８位、および３２９位のうちの１つ以上での変異と、を含む、請求項１〜３のいずれか１項に記載のタンパク質。
【請求項７】
（ｉ）が、欠失であり、（ｉｉ）が、アミノ酸残基置換である、請求項４に記載のタンパク質。
【請求項８】
（ｉ）が、２３６位〜２３８位のうちの１つ以上での欠失を含む、請求項７に記載のタンパク質。
【請求項９】
（ｉｉ）が、アミノ酸残基置換Ｓ２６７Ｅ、Ｖ２７３Ｅ、Ｌ３２８Ｆ、Ｐ３２９Ｇ、またはそれらの組み合わせを含む、請求項７または請求項８に記載のタンパク質。
【請求項１０】
前記親Ｆｃ領域が、ＩｇＧ１分子のものである、請求項１〜９のいずれか１項に記載のタンパク質。
【請求項１１】
前記変異が、以下、
（ａ）２２８位と２２９位との間での挿入、
（ｂ）２２０位〜２２５位のうちの１つ以上での変異、
（ｃ）２３４位および２３５位でのアミノ酸置換、
（ｄ）２３６位〜２３８位のうちの１つ以上での欠失、ならびに
（ｅ）２６７位、２７３位、３２８位、および３２９位のうちの１つ以上でのアミノ酸置換のうちの１つ以上を含む、請求項１０に記載のタンパク質。
【請求項１２】
前記変異が、（ｉ）２３６位〜２３８位のうちの１つ以上での欠失を含む、請求項１１に記載のタンパク質。
【請求項１３】
前記変異が、（ｉｉ）２６７位、２７３位、および３２８位のうちの１つ以上でのアミノ酸残基置換をさらに含む、請求項１２に記載のタンパク質。
【請求項１４】
前記アミノ酸残基置換が、Ｓ２６７Ｅである、請求項１３に記載のタンパク質。
【請求項１５】
前記バリアントＦｃ領域が、Ｇ１ｍ１、Ｇ１ｍ２、Ｇ１ｍ−２、Ｇ１ｍ−４、Ｇ１ｍ５、Ｇ１ｍ７、Ｇ１ｍ８、Ｇ１ｍ９、Ｇ１ｍ１５、Ｇ１ｍ１７、Ｇ１ｍ１８、Ｇ１ｍ１９、Ｇ１ｍ２５、Ｇ１ｍ２７、Ｇ１ｍ２８、Ｇ１ｍ２９、Ｇ１ｍＡＡ、およびＧ１ｍＡＧからなる群から選択される、請求項１３に記載のタンパク質。
【請求項１６】
前記親Ｆｃ領域が、ＩｇＧ２分子のものである、請求項１〜９のいずれか１項に記載のタンパク質。
【請求項１７】
前記変異が、以下、
（ａ）２１９位〜２２５位のうちの１つ以上での変異、
（ｂ）２３３位〜２３５位のうちの１つ以上でのアミノ酸置換、
（ｃ）２１８位と２１９位との間、または２３６位での挿入、
（ｄ）２３７位および２３８位のうちの１つ以上での欠失、ならびに
（ｅ）２６７位、２７３位、および３２８位のうちの１つ以上でのアミノ酸残基置換のうちの１つを含む、請求項１６に記載のタンパク質。
【請求項１８】
前記変異が、（ｉ）２３７位および２３８位のうちの１つ以上での欠失を含む、請求項１４または請求項１５に記載のタンパク質。
【請求項１９】
前記変異が、（ｉｉ）２６７位、２７３位、および３２８位のうちの１つ以上でのアミノ酸残基置換をさらに含む、請求項１８に記載のタンパク質。
【請求項２０】
前記アミノ酸残基置換が、Ｓ２６７Ｅ、Ｌ３２８Ｆ、またはそれらの組み合わせである、請求項１９に記載のタンパク質。
【請求項２１】
前記バリアントＦｃ領域が、Ｇ２ｍ１、Ｇ２ｍ−１、Ｇ２ｍ２、Ｇ２ｍ−４、Ｇ２ｍ５、Ｇ２ｍ７、Ｇ２ｍ８、Ｇ２ｍ９、Ｇ２ｍ１０、Ｇ２ｍ１５、Ｇ２ｍ１７、Ｇ２ｍ１８、Ｇ２ｍ１９、Ｇ２ｍ２０、Ｇ２ｍ２７、Ｇ２ｍ２７、およびＧ２ｍ２８からなる群から選択される、請求項１９に記載のタンパク質。
【請求項２２】
前記親Ｆｃが、ＩｇＧ４分子のものである、請求項１〜９のいずれか１項に記載のタンパク質。
【請求項２３】
前記変異が、Ｓ２２８Ｐのアミノ酸残基置換と、以下、
（ａ）２１９位〜２２５位のうちの１つ以上での変異、
（ｂ）２３４位および２３５位のうちの１つ以上でのアミノ酸残基置換、
（ｃ）２３６位〜２３８位のうちの１つ以上での欠失、ならびに
（ｄ）２６７位、２７３位、および３２８位のうちの１つ以上でのアミノ酸残基置換のうちの１つ以上と、を含む、請求項２２に記載のタンパク質。
【請求項２４】
前記変異が、（ｉ）前記Ｓ２２８Ｐのアミノ酸残基置換と、（ｉｉ）２３６位〜２３８位のうちの１つ以上での欠失と、を含む、請求項２３に記載のタンパク質。
【請求項２５】
前記変異が、（ｉｉｉ）２６７位、２７３位、および３２８位のうちの１つ以上でのアミノ酸残基置換をさらに含む、請求項２４に記載のタンパク質。
【請求項２６】
Ｌ３２８Ｆの前記アミノ酸残基置換、請求項２５に記載のタンパク質。
【請求項２７】
前記バリアントＦｃ領域が、Ｇ４ｍ１、Ｇ４ｍ−１、Ｇ４ｍ２、Ｇ４ｍ−２、Ｇ４ｍ３、Ｇ４ｍ４、Ｇ４ｍ５、Ｇ４ｍ７、Ｇ４ｍ８、Ｇ４ｍ９、Ｇ４ｍ１０、Ｇ４ｍ１７、Ｇ４ｍ１８、Ｇ４ｍ１９、Ｇ４ｍ２０、Ｇ４ｍ２５、Ｇ４ｍ２７、Ｇ４ｍ２８、Ｇ４ｍ２９、Ｇ４ｍ３０、およびＧ４ｍＰＥからなる群から選択される、請求項２４に記載のタンパク質。
【請求項２８】
前記バリアントＦｃ領域が、前記親Ｆｃ領域と比較して、ＦｃγＲＩＩＢに対する増強した結合親和性を呈する、請求項１〜２７のいずれか１項に記載のタンパク質。
【請求項２９】
前記バリアントＦｃ領域が、前記親Ｆｃ領域と比較して、ＦｃγＲＩＩＢに対する増強した選択性を呈する、請求項１〜２８のいずれか１項に記載のタンパク質。
【請求項３０】
前記バリアントＦｃ領域が、任意のＦｃγＲに対する低い結合活性を呈するか、またはいかなるＦｃγＲに対しても結合活性を呈さない、請求項１〜２９のいずれか１項に記載のタンパク質。
【請求項３１】
前記バリアントＦｃ領域が、ＦｃＲｎに結合する、請求項１〜３０のいずれか１項に記載のタンパク質。
【請求項３２】
前記タンパク質が、抗体である、請求項１〜３１のいずれか１項に記載のタンパク質。
【請求項３３】
ＩｇＧ２またはＩｇＧ４分子のバリアントＦｃ領域を含むタンパク質であって、前記バリアントＦｃ領域が、野生型の親ＩｇＧ２またはＩｇＧ４  Ｆｃ領域と比較して２６７位、２７３位、３２８位、またはそれらの組み合わせに変異を含み、前記番号付けが、ＥＵインデックスに従うものである、タンパク質。
【請求項３４】
前記ＩｇＧ２またはＩｇＧ４分子が、ヒトＩｇＧ２またはヒトＩｇＧ４分子である、請求項３３に記載のタンパク質。
【請求項３５】
請求項１〜３４のいずれか１項に記載のタンパク質と、薬学的に許容される担体と、を含む、薬学的組成物。
【請求項３６】
対象における免疫応答を選択的に活性化するための方法であって、免疫応答の選択的な活性化を必要とする対象に有効量の治療剤を投与することを含み、前記治療剤が、免疫細胞受容体に結合する第１の部分とＦｃγＲＩＩＢに結合する第２の部分とを含む、方法。
【請求項３７】
前記免疫細胞受容体が、腫瘍壊死因子受容体スーパーファミリー（ＴＮＦＲＳＦ）のメンバーである、請求項３６に記載の方法。
【請求項３８】
ＴＮＦＲＳＦの前記メンバーが、ＦＡＳ、ＴＮＦＲＳＦ１２Ａ、４−１ＢＢ／ＣＤ１３７、ＴＮＦＲＳＦ１３Ｂ、ＴＮＦＲＳＦ１３Ｃ、ＣＤ２７／ＴＮＦＲＳＦ７、ＣＤ３０／ＴＮＦＲＳＦ８、ＣＤ４０／ＴＮＦＲＳＦ５、ＤＲ３／ＴＮＦＲＳＦ２５、ＤＲ４／ＴＮＦＲＳＦ１０Ａ、ＤＲ５／ＴＮＦＲＳＦ１０Ｂ、ＤＲ６／ＴＮＦＲＳＦ２１、ＧＩＴＲ／ＴＮＦＲＳＦ１８、ＨＶＥＭ／ＴＮＦＲＳＦ１４、ＬＴβＲ、ＯＸ４０／ＴＮＦＲＳＦ４、ＴＲＯＹ／ＴＮＦＲＳＦ１９、ＲＥＬＴ／ＴＮＦＲＳＦ１９Ｌ、ＴＮＦＲＳＦ１２Ａ、ＴＮＦＲＳＦ１３Ｂ、ＴＬ１Ａ／ＴＮＦＳＦ１５、ＴＮＦＲＳＦ１７、ＴＮＦＲＳＦ１Ａ、ＴＮＦＲＳＦ１１Ｂ、ＲＡＮＫ／ＴＮＦＲＳＦ１１Ａ、ＴＮＦＲＳＦ１１Ｂ、ＮＧＦＲ、ＥＤＡ２Ｒ、およびＴＮＦＲＳＦ１Ｂからなる群から選択される、請求項３７に記載の方法。
【請求項３９】
前記治療剤が、抗体である、請求項３６〜３８のいずれか１項に記載の方法。
【請求項４０】
前記抗体が、アゴニスト抗体である、請求項３９に記載の方法。
【請求項４１】
前記抗体が、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、またはＩｇＧ４分子である、請求項３９または請求項４０に記載の方法。
【請求項４２】
前記治療剤が、ＦｃγＲＩＩＢに選択的に結合する、請求項３６〜４１のいずれか１項に記載の方法。
【請求項４３】
前記治療剤が、野生型対応物と比較して、ＦｃγＲＩＩＢに対する増強した結合親和性および／または増強した結合選択性を有するバリアントＦｃ領域を含有する、請求項３６〜４２のいずれか１項に記載の方法。
【請求項４４】
前記バリアントＦｃ領域が、ヒトＦｃγＲＩＩＢに選択的に結合する、請求項４３に記載の方法。
【請求項４５】
前記治療剤が、二重特異性抗体であり、前記二重特異性抗体が、前記免疫細胞受容体に特異的である第１の抗原結合断片と、ＦｃγＲＩＩＢに特異的である第２の抗原結合断片と、を含む、請求項３６〜４４のいずれか１項に記載の方法。
【請求項４６】
前記対象が、癌を有するか、または癌を有することが疑われるヒト患者である、請求項３６〜４５のいずれか１項に記載の方法。
【請求項４７】
前記癌が、肺癌、胃癌、肝臓癌、乳癌、皮膚癌、膵臓癌、脳癌、前立腺癌、膀胱癌、結腸直腸癌、肉腫、骨癌、リンパ腫、および血液癌からなる群から選択される、請求項４６に記載の方法。
【請求項４８】
対象における免疫応答を選択的に活性化するための方法であって、免疫応答の選択的な活性化を必要とする対象に、有効量の請求項３５に記載の薬学的組成物を投与することを含む、方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願
本出願は、米国特許法第１１９（ｅ）条の下、２０１７年３月２８日出願の米国仮出願第６２／４７７，６６１号の利益を主張し、その全体が、参照により本明細書に組み込まれる。
【背景技術】
【０００２】
Ｆｃ受容体（ＦｃＲ）は、抗体のＦｃ部分に結合することができる免疫細胞表面タンパク質のファミリーである。Ｆｃγ受容体、Ｆｃα受容体、Ｆｃε受容体、および新生児Ｆｃ受容体（ＦｃＲｎ）を含むいくつかの異なる種類のＦｃ受容体が存在し、それぞれＩｇＧ、ＩｇＡ、ＩｇＥ、およびＩｇＧ抗体に対する異なる結合活性を有する。Ｆｃγ受容体サブファミリーには、ＦｃγＲＩ（ＣＤ６４）、ＦｃγＲＩＩＡ（ＣＤ３２ａ）、ＦｃγＲＩＩＢ（ＣＤ３２ｂ）、ＦｃγＲＩＩＢ（ＣＤ３２ｃ）、ＦｃγＲＩＩＩＡ（ＣＤ１６ａ）、およびＦｃγＲＩＩＩＢ（ＣＤ１６ｂ）が含まれる。ＦｃγＲＩは、ＩｇＧ１およびＩｇＧ３抗体に対する高い結合親和性を有し、他のＦｃγＲは、ＩｇＧ抗体に対する低い結合親和性を有する。
【０００３】
様々な種類のＦｃ受容体が、免疫系において異なる役割を果たす。例えば、ＮＫ細胞およびマクロファージ上に発現されるＦｃγＲＩＩＩ受容体は、感染細胞または侵入病原体に付着した抗体に結合し、免疫細胞の抗体媒介性食作用（ＡＤＣＰ）または抗体依存性細胞媒介性細胞傷害（ＡＤＣＣ）を引き起こし、それにより感染細胞または侵入病原体の排除をもたらす。一方、Ｂ細胞および樹状細胞上に発現されるＦｃγＲＩＩ受容体は、ＩｇＧ抗体への結合時に免疫細胞の活性を下方制御することができる。
【０００４】
活性化した免疫細胞を伴う治療法は、癌細胞などの罹患細胞を排除するための有望なアプローチである。しかしながら、そのような治療アプローチでは多くの場合、安全性についての懸念が生じる。例えば、過剰に活性化した免疫細胞は、望ましくない細胞毒性をもたらし、組織の損傷を引き起こすだろう。したがって、効果的かつ安全である新たな免疫療法の開発が、大きな関心の対象となっている。
【発明の概要】
【０００５】
本開示は少なくとも部分的に、所望のＦｃ受容体結合活性および／または選択性を呈するＩｇＧ１、ＩｇＧ２、またはＩｇＧ４分子の様々なＦｃ領域バリアントの開発に基づく。そのようなＦｃバリアントは、免疫応答を選択的に調節することができる抗体などのＦｃ含有タンパク質の構築に使用することができる。
【０００６】
したがって、本開示の一態様は、バリアントＦｃ領域を含むタンパク質（例えば、抗体）を提供し、これは、野生型の親Ｆｃ領域と比較して２１８位〜３２９位（例えば、２１８位〜３２８位）のいずれかに変異（例えば、アミノ酸残基置換、挿入、欠失、またはそれらの組み合わせ）を含む。本明細書で使用されるＦｃ番号付けシステムは、当技術分野において既知であるＥＵインデックスに従うものである。
【０００７】
いくつかの実施形態では、変異は、以下、（ａ）２１９位〜２２５位のうちの１つ以上での変異、（ｂ）２１８位と２１９位との間、または２３６位での挿入、（ｃ）２３３〜２３５のうちの１つ以上でのアミノ酸残基置換、（ｄ）２２０位〜２２３位のいずれかでの挿入、（ｅ）２３６位〜２３８位のうちの１つ以上での欠失、ならびに（ｆ）２６７位、２７３位、３２８位、および３２９位のうちの１つ以上でのアミノ酸置換（例えば、Ｓ２６７Ｅ、Ｖ２７３Ｅ、Ｌ３２８Ｆ、Ｐ３２９Ｇ、またはそれらの組み合わせ）のうちの１つ以上を含む。場合によっては、変異は、挿入および任意で欠失を含む。例えば、バリアントＦｃ領域内の変異は、（ｉ）２３４位〜２３８位のうちの１つ以上での変異と、任意で（ｉｉ）２６７位、２７３位、３２８位、および３２９位のうちの１つ以上での変異とを含み得る。いくつかの例では、（ｉ）の変異は、欠失、例えば、２３４位〜２３８位（例えば、２３６位〜２３８位）のうちの１つ以上の欠失であり得る。代替的にまたは追加的に、（ｉｉ）の変異は、アミノ酸残基置換、例えば、アミノ酸残基置換Ｓ２６７Ｅ、Ｖ２７３Ｅ、Ｌ３２８Ｆ、Ｐ３２９Ｇ、またはそれらの組み合わせであり得る。
【０００８】
いくつかの実施形態では、野生型の親Ｆｃ領域は、ＩｇＧ１分子のものである。ＩｇＧ１分子（例えば、ヒトＩｇＧ１分子）由来のＦｃバリアントを含むタンパク質は、以下、（ａ）２２８位と２２９位との間の挿入、（ｂ）２２０位〜２２５位のうちの１つ以上での変異、（ｃ）２３４位および２３５位でのアミノ酸置換、（ｄ）２３６位〜２３８位のうちの１つ以上での欠失、ならびに（ｅ）１つ以上の２６７位、２７３位、３２８位、および３２９位でのアミノ酸置換（例えば、Ｓ２６７Ｅ、Ｖ２７３Ｅ、Ｌ３２８Ｆ、および／またはＰ３２９Ｇ）のうちの１つ以上を含む変異を含み得る。一例では、変異は、（ｉ）２３６位〜２３８位（例えば、２３６位、２３７位、２３８位、またはそれらの組み合わせ）のうちの１つ以上での欠失と、任意で（ｉｉ）２６７位、２７３位、および３２８位のうちの１つ以上でのアミノ酸残基置換とを含む。例えば、変異は、２３６位の欠失または２３６位〜２３８位の欠失を含み得る。任意で、変異は、２６７位、２７３位、および２６８位のうちの１つ以上でのアミノ酸残基置換（Ｓ２６７Ｅ、Ｖ２７３Ｅ、Ｌ３２８Ｆ、またはそれらの組み合わせであり得る）をさらに含んでもよい。一例では、変異は、２３６位〜２３８位のうちの１つ以上での欠失と、Ｓ２６７Ｅのアミノ酸置換とを含む。ヒトＩｇＧ１由来の例示的なバリアントＦｃ領域は、Ｇ１ｍ１、Ｇ１ｍ２、Ｇ１ｍ−２、Ｇ１ｍ−４、Ｇ１ｍ５、Ｇ１ｍ７、Ｇ１ｍ８、Ｇ１ｍ９、Ｇ１ｍ１５、Ｇ１ｍ１７、Ｇ１ｍ１８、Ｇ１ｍ１９、Ｇ１ｍ２５、Ｇ１ｍ２７、Ｇ１ｍ２８、Ｇ１ｍ２９、Ｇ１ｍＡＡ、およびＧ１ｍＡＧのうちの１つであり得る。
【０００９】
他の実施形態では、野生型の親Ｆｃ領域は、ＩｇＧ２分子（例えば、ヒトＩｇＧ２分子）のものである。ＩｇＧ２分子（例えば、ヒトＩｇＧ２分子）由来のＦｃバリアントを含むタンパク質は、以下、（ａ）２１９位〜２２５位のうちの１つ以上での変異、（ｂ）２３３位〜２３５位のうちの１つ以上でのアミノ酸置換、（ｃ）２１８位と２１９位との間、または２３６位での挿入、（ｄ）２３７位および２３８位のうちの１つ以上の欠失、ならびに（ｅ）２６７位、２７３位、および３２８位のうちの１つ以上でのアミノ酸残基置換（例えば、Ｓ２６７Ｅ、Ｖ２７３Ｅ、Ｌ３２８Ｆ、またはそれらの組み合わせ）のうちの１つ以上を含む変異を含み得る。いくつかの例では、変異は、２３３位〜２３８位、２６７位、２７３位、および３２８位のうちの１つ以上にある。例えば、変異は、（ｉ）２３６位、２３７位、および２３８位（例えば、２３７位および／または２３８位）のうちの１つ以上での欠失と、任意で（ｉｉ）２６７位、２７３位、および３２８位のうちの１つ以上でのアミノ酸残基置換（例えば、Ｓ２６７Ｅ、Ｌ３２８Ｆ、またはそれらの組み合わせ）とを含み得る。いくつかの例では、変異は、２３６位での付加を含む。他の例では、変異は、２３３位〜２３８位のうちの１つ以上でのアミノ酸残基置換、例えば、Ｐ２３３Ｅ、Ｖ２３４ＦもしくはＶ２３４Ｖ、Ａ２３５Ｌ、Ａ２３５Ｓ、またはそれらの組み合わせを含み得る。代替的にまたは追加的に、変異は、１つ以上の２６７位、２７３位、および３２８位でのアミノ酸残基置換（Ｓ２６７Ｅ、Ｖ２７３Ｅ、および／またはＬ３２８Ｆであり得る）をさらに含む。いくつかの特定の例では、ＩｇＧ２由来のバリアントＦｃ領域は、Ｇ２ｍ１、Ｇ２ｍ−１、Ｇ２ｍ２、Ｇ２ｍ−４、Ｇ２ｍ５、Ｇ２ｍ７、Ｇ２ｍ８、Ｇ２ｍ９、Ｇ２ｍ１０、Ｇ２ｍ１５、Ｇ２ｍ１７、Ｇ２ｍ１８、Ｇ２ｍ１９、Ｇ２ｍ２０、Ｇ２ｍ２７、Ｇ２ｍ２７、およびＧ２ｍ２８のうちの１つであり得る。
【００１０】
さらに他の実施形態では、野生型の親Ｆｃは、ＩｇＧ４分子（例えば、ヒトＩｇＧ４分子）のものである。ＩｇＧ４分子（例えば、ヒトＩｇＧ４）由来のＦｃバリアントは、Ｓ２２８Ｐ置換を含み得る。代替的にまたは追加的に、ヒトＩｇＧ４分子などのＩｇＧ４分子由来のＦｃバリアントは、以下、（ａ）２１９位〜２２５位のうちの１つ以上での変異、（ｂ）１つ以上の２３４位および２３５位でのアミノ酸残基置換、（ｃ）２３６位〜２３８位のうちの１つ以上での欠失、ならびに（ｄ）２６７位、２７３位、および３２８位のうちの１つ以上でのアミノ酸残基置換（Ｓ２６７Ｅ、Ｖ２７３Ｆ、Ｌ３２８Ｆ、またはそれらの組み合わせ）のうちの１つ以上を含む変異を有し得る。いくつかの例では、ＩｇＧ４のＦｃバリアントは、Ｓ２２８Ｐのアミノ酸残基置換と、２３６位〜２３８位のうちの１つ以上での欠失とを含み得る。そのようなＦｃバリアントは、２６７位、２７３位、および３２８位のうちの１つ以上でのアミノ酸置換（例えば、Ｌ３２８Ｆ）をさらに含み得る。場合によっては、Ｆｃバリアントは、Ｓ２２８Ｐ置換と、１つ以上の２３４位〜２３８位、２６７位、２７３位、および３２８位でのさらなる変異とを含み得る。例えば、変異は、２３５位〜２３７位のうちの１つ以上の欠失を含んでも、２３５位、２３６位、またはそれらの両方でのアミノ酸残基置換（例えば、Ｆ２３４Ｖ、Ｋ２３５Ｓ、またはそれらの組み合わせ）を含んでもよい。代替的にまたは追加的に、変異は、１つ以上の２６７位、２７３位、および３２８位でのアミノ酸残基置換をさらに含む。例には、Ｓ２６７Ｅ、Ｖ２７３Ｅ、Ｌ３２８Ｆ、またはそれらの組み合わせが含まれる。いくつかの特定の例では、バリアントＦｃ領域は、Ｇ４ｍ１、Ｇ４ｍ−１、Ｇ４ｍ２、Ｇ４ｍ−２、Ｇ４ｍ３、Ｇ４ｍ４、Ｇ４ｍ５、Ｇ４ｍ７、Ｇ４ｍ８、Ｇ４ｍ９、Ｇ４ｍ１０、Ｇ４ｍ１７、Ｇ４ｍ１８、Ｇ４ｍ１９、Ｇ４ｍ２０、Ｇ４ｍ２５、Ｇ４ｍ２７、Ｇ４ｍ２８、Ｇ４ｍ２９、Ｇ４ｍ３０、およびＧ４ｍＰＥのいずれか１つである。
【００１１】
本明細書に記載のバリアントＦｃ領域のいずれも、野生型の親Ｆｃ領域と比較して、ＦｃγＲＩＩＢに対する増強した結合活性および／または増強した選択性を呈し得る。あるいは、本明細書に記載のバリアントＦｃ領域は、ＦｃγＲ受容体のいずれかに対する低い結合活性を有するか、またはＦｃγＲ受容体のいずれに対しても結合活性を有しない。代替的にまたは追加的に、バリアントＦｃ領域は、ＦｃＲｎに結合する。
【００１２】
ＩｇＧ２またはＩｇＧ４分子（例えば、ヒトＩｇＧ２またはヒトＩｇＧ４分子）のバリアントＦｃ領域を含むタンパク質もまた、本明細書に記載されている。そのようなバリアントＦｃ領域は、野生型の親ＩｇＧ２またはＩｇＧ４  Ｆｃ領域と比較して、２６７位、２７３位、３２８位、またはそれらの組み合わせに変異を含み得る。番号付けは、ＥＵインデックスに従うものである。
【００１３】
別の態様では、本明細書に記載のバリアントＦｃ領域のいずれかを含有するタンパク質と、薬学的に許容される担体とを含む薬学的組成物が、本明細書に提供される。そのような薬学的組成物を使用して、対象における免疫応答を選択的に活性化することができる。
【００１４】
さらに別の態様では、本開示は、対象における免疫応答を選択的に活性化するための方法であって、それを必要とする対象に有効量の治療剤を投与することを含み、治療剤が、免疫細胞受容体に結合する第１の部分およびＦｃγＲＩＩＢに結合する第２の部分を含む、方法を提供する。いくつかの例では、免疫細胞受容体は、腫瘍壊死因子受容体スーパーファミリー（ＴＮＦＳＦ）のメンバーである。例には、ＦＡＳ、ＴＮＦＲＳＦ１２Ａ、４−１ＢＢ／ＣＤ１３７、ＴＮＦＲＳＦ１３Ｂ、ＴＮＦＲＳＦ１３Ｃ、ＣＤ２７／ＴＮＦＲＳＦ７、ＣＤ３０／ＴＮＦＲＳＦ８、ＣＤ４０／ＴＮＦＲＳＦ５、ＤＲ３／ＴＮＦＲＳＦ２５、ＤＲ４／ＴＮＦＲＳＦ１０Ａ、ＤＲ５／ＴＮＦＲＳＦ１０Ｂ、ＤＲ６／ＴＮＦＲＳＦ２１、ＧＩＴＲ／ＴＮＦＲＳＦ１８、ＨＶＥＭ／ＴＮＦＲＳＦ１４、ＬＴβＲ、ＯＸ４０／ＴＮＦＲＳＦ４、ＴＲＯＹ／ＴＮＦＲＳＦ１９、ＲＥＬＴ／ＴＮＦＲＳＦ１９Ｌ、ＴＮＦＲＳＦ１２Ａ、ＴＮＦＲＳＦ１３Ｂ、ＴＬ１Ａ／ＴＮＦＳＦ１５、ＴＮＦＲＳＦ１７、ＴＮＦＲＳＦ１Ａ、ＴＮＦＲＳＦ１１Ｂ、ＲＡＮＫ／ＴＮＦＲＳＦ１１Ａ、ＴＮＦＲＳＦ１１Ｂ、ＮＧＦＲ、ＥＤＡ２Ｒ、およびＴＮＦＲＳＦ１Ｂが含まれるが、これらに限定されない。
【００１５】
いくつかの実施形態では、治療剤は、抗体（例えば、アゴニスト抗体）であってもよく、これは、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、またはＩｇＧ４分子（例えば、ヒトＩｇＧ１、ヒトＩｇＧ２、またはヒトＩｇＧ４分子）であり得る。
【００１６】
いくつかの実施形態では、治療剤は、ＦｃγＲＩＩＢに選択的に結合することができる。例えば、治療剤は、ＦｃγＲＩＩＢに対する選択的な結合親和性を有するバリアントＦｃ領域（例えば、本明細書に記載のバリアントＦｃ領域のいずれか）を含有し得る。代替的にまたは追加的に、バリアントＦｃ領域は、野生型の親Ｆｃ領域と比較して、ＦｃγＲＩＩＢに対する増強した結合活性を有し得る。
【００１７】
他の実施形態では、治療剤は、免疫細胞受容体に特異的な第１の抗原結合断片である第１の部分と、ＦｃγＲＩＩＢに特異的な第２の抗原結合断片である第２の部分とを含む、二重特異性抗体であり得る。
【００１８】
本明細書に記載の方法のいずれかにおいて、対象は、癌を有するか、または癌を有することが疑われるヒト患者であり得る。例示的な癌には、肺癌、胃癌、肝臓癌、乳癌、皮膚癌、膵臓癌、脳癌、前立腺癌、膀胱癌、結腸直腸癌、肉腫、骨癌、リンパ腫、および血液癌が含まれる。
【００１９】
免疫応答の増強に使用するための薬学的組成物であって、本明細書に記載のバリアントＦｃ領域のいずれかを含有するタンパク質と、薬学的に許容される担体とを含む、薬学的組成物、および意図される治療目的、例えば、癌治療を達成する上で使用するための薬物を製造するための、そのようなタンパク質の使用もまた、本開示の範囲内である。
【００２０】
本発明の１つ以上の実施形態の詳細を、以下の発明を実施するための形態に明記する。本発明の他の特徴または利点は、いくつかの実施形態の以下の図面および発明を実施するための形態から、また添付の特許請求の範囲から明らかになるであろう。
【図面の簡単な説明】
【００２１】
【図１Ａ】図１Ａ〜１Ｗは、示される様々な濃度でＣＨＯ−Ｋ１細胞上に発現される異なる種類のＦｃγ受容体に対する、示される様々なＩｇＧバリアントの結合活性を示す図表である。各ＩｇＧバリアントの濃度は、図１Ａ〜１Ｃ、１Ｅ〜Ｊ、１Ｌ〜１Ｍ、１Ｐ〜１Ｒ、および１Ｔ〜１Ｖにおいて、左から右へ、０μｇ／ｍｌ、０．３μｇ／ｍｌ、１μｇ／ｍｌ、３μｇ／ｍｌ、および１０μｇ／ｍｌである。図１Ｄ、１Ｋ、１Ｏ、１Ｓ、および１ｗについて、棒は、左から右へ、ＩｇＧバリアントの以下の濃度、０．３μｇ／ｍｌ、１μｇ／ｍｌ、３μｇ／ｍｌ、および１０μｇ／ｍｌに対応する。
【図１Ｂ】同上。
【図１Ｃ】同上。
【図１Ｄ】同上。
【図１Ｅ】同上。
【図１Ｆ】同上。
【図１Ｇ】同上。
【図１Ｈ】同上。
【図１Ｉ】同上。
【図１Ｊ】同上。
【図１Ｋ】同上。
【図１Ｌ】同上。
【図１Ｍ】同上。
【図１Ｎ】同上。
【図１Ｏ】同上。
【図１Ｐ】同上。
【図１Ｑ】同上。
【図１Ｒ】同上。
【図１Ｓ】同上。
【図１Ｔ】同上。
【図１Ｕ】同上。
【図１Ｖ】同上。
【図１Ｗ】同上。
【図２Ａ】図２Ａ〜２Ｃは、ＩＦＮ−γ分泌によって示される、いくつかのＩｇＧバリアントによる親またはＦｃγＲ発現細胞との共培養物中のヒトＣＤ８＋Ｔ細胞の刺激を示す図表である。群は、図２Ａにおいて、左から右へ、ＯＫＴなし、０．０１μｇ／ｍｌ、０．０３μｇ／ｍｌ、０．１μｇ／ｍｌ、および０．３μｇ／ｍｌに対応する。群は、図２Ｂおよび２Ｃにおいて、左から右へ、０．０１μｇ／ｍｌ、０．０３μｇ／ｍｌ、および０．１μｇ／ｍｌに対応する。
【図２Ｂ】同上。
【図２Ｃ】同上。
【図３】図３は、抗ＣＤ３抗体および／または抗４−１ＢＢ抗体の存在下での、いくつかのＩｇＧ分子によるマウスＴ細胞活性化を示す図表である。
【図４Ａ】図４Ａ〜４Ｂは、異なるＩｇＧアイソフォームの抗マウスＣＤ１３７抗体による、インビボでの抗腫瘍効果および血清ＡＬＴレベルの誘導を示す図表である。
【図４Ｂ】同上。
【図５Ａ】図５Ａ〜５Ｈは、１〜３ｍｇ／ｋｇの単回静脈内注射後の血漿中のＩｇＧバリアントの抗体濃度を示す図表である。雄のＣ５７ＢＬ／６マウスを使用し、各時点について４匹のマウスをアッセイした。図５Ａの図表は、３ｍｇ／ｋｇのＩＶ用量後のＧ１ｍ２７の血漿濃度（上のグラフ）、および１．４５ｍｇ／ｋｇのＩＶ用量後のＧ４ｍ１０の血漿濃度（下のグラフ）を示す。図５Ｂの図表は、３ｍｇ／ｋｇのＩＶ用量後のＧ１ｍ２の血漿濃度（上のグラフ）、および３ｍｇ／ｋｇのＩＶ用量後のＧ４ｍ２の血漿濃度（下のグラフ）を示す。図５Ｃの図表は、３ｍｇ／ｋｇのＩＶ用量後のＧ１ｍ２９の血漿濃度（上のグラフ）、および３ｍｇ／ｋｇのＩＶ用量後のＧ４ｍ７の血漿濃度（下のグラフ）を示す。図５Ｄの図表は、３ｍｇ／ｋｇのＩＶ用量後のＧ１ｍ２８の血漿濃度（上のグラフ）、および３ｍｇ／ｋｇのＩＶ用量後のＧ４の血漿濃度を示す。図５Ｅの図表は、１．４５ｍｇ／ｋｇのＩＶ用量後のＧ４ｍ２８の血漿濃度（上のグラフ）、および１．５ｍｇ／ｋｇのＩＶ用量後のＧ４ｍ２９の血漿濃度（下のグラフ）を示す。図５Ｆの図表は、３ｍｇ／ｋｇのＩＶ用量後のＧ４ｍ１の血漿濃度（上のグラフ）、および１．４５ｍｇ／ｋｇのＩＶ用量後のＧ４ｍ２７の血漿濃度（下のグラフ）を示す。図５Ｇは、３ｍｇ／ｋｇのＩＶ用量後のＧ２ｍ１９の血漿濃度（上のグラフ）、および３ｍｇ／ｋｇのＩＶ用量後のＧ２ｍ１の血漿濃度（下のグラフ）を示す。図５Ｈは、３ｍｇ／ｋｇのＩＶ用量後のＧ２（野生型）の血漿濃度（上のグラフ）、および３ｍｇ／ｋｇのＩＶ用量後のＧ１Ｍａａの血漿濃度（下のグラフ）を示す。
【図５Ｂ】同上。
【図５Ｃ】同上。
【図５Ｄ】同上。
【図５Ｅ】同上。
【図５Ｆ】同上。
【図５Ｇ】同上。
【図５Ｈ】同上。
【発明を実施するための形態】
【００２２】
ＦｃγＲＩＩＢ（ＣＤ３２Ｂ）に結合することができるアゴニスト抗ＴＮＦＲ抗体は、マウスモデルにおいて増強した活性を示し、マウスＩｇＧ１アイソフォームが、最良の抗腫瘍効果を示した。これらの結果は、ＦｃγＲＩＩＢ（ＣＤ３２Ｂ）に対する選択的結合活性を有するアゴニスト抗体が、免疫応答の刺激においてより良好なアゴニスト活性を有することが予想されることを示している。さらに、特定の抗腫瘍アゴニスト抗体が差次的な肝臓毒性を示すことが観察され、これは、増強した治療インデックス（例えば、高い治療効果および低い毒性）を有する治療アゴニスト抗体を設計するための新規のアプローチを示唆している。
【００２３】
したがって、ＦｃγＲＩＩＩ（ＣＤ１６）などの他のＦｃ受容体と比較して、ＦｃγＲＩＩＢ（ＣＤ３２Ｂ）に対する選択的結合活性を有するＦｃバリアントを含有するＩｇＧ分子（例えば、ヒトＩｇＧ１、ヒトＩｇＧ２、およびヒトＩｇＧ４分子などのＩｇＧ１、ＩｇＧ２、およびＩｇＧ４分子）を設計するためのアプローチ、ならびに腫瘍壊死因子受容体スーパーファミリー（ＴＮＦＳＦ）およびＦｃγＲＩＩＢの受容体などの免疫細胞受容体を架橋することができる治療剤の使用を伴う癌治療法が、本明細書に記載される。
【００２４】
Ｉ．Ｆｃバリアント
その野生型対応物と比較して、ＦｃγＲＩＩＢに対する増強した選択性を有するＦｃバリアントが、本明細書に記載される。ＦｃγＲＩＩＢに対する選択性、ＦｃγＲＩＩＢに対する選択的結合、またはＦｃγＲＩＩＢに対する特異的結合を有するＦｃ断片は、当該技術分野においてよく理解されている用語である。分子は、それが代替的な標的（例えば、ＦｃγＲＩＩＩ受容体）と反応するよりも、特定の標的抗原（例えば、ＦｃγＲＩＩＢ受容体）とより頻繁に、より迅速に、より長い持続時間、かつ／またはより大きな親和性で反応する場合に、「選択的結合」または「特異的結合」を呈すると言われる。Ｆｃ断片は、それが他のＦｃ受容体に結合するよりも、より大きな親和性、結合力で、より迅速に、かつ／またはより長い持続時間で結合する場合に、Ｆｃ受容体に「特異的に結合する」。例えば、ＦｃγＲＩＩＢに特異的に（または優先的に）結合するＦｃ断片は、それが他のＦｃ受容体に結合するよりも、より大きな親和性、結合力で、より迅速に、および／またはより長い持続時間でこのＦｃ受容体に結合するＦｃ断片である。この定義において、例えば、第１のＦｃ受容体に選択的または特異的に結合するＦｃ断片は、第２のＦｃ受容体に特異的または優先的に結合してもしなくてもよいことが理解される。したがって、「選択的結合」、「特異的結合」、または「優先的結合」は、排他的結合を必ずしも必要としない（が、それを含んでもよい）。いくつかの例では、標的Ｆｃ受容体（例えば、ＦｃγＲＩＩＢ）に「選択的に結合する」または「特異的に結合する」Ｆｃ断片は、他のＦｃ受容体に結合しなくてもよい（すなわち、通例の方法によっては検出不能な結合）。異なるＦｃ受容体に対するＩｇＧ１、ＩｇＧ２、およびＩｇＧ４の相対的な結合親和性を、以下の表１に示す。
【表１】
2020527581.tif 000003
【００２５】
本明細書に記載のＦｃバリアントは、それらの野生型対応物（Ｆｃバリアントを産生するような変異が導入されている野生型の親Ｆｃ領域）と比較して、ＦｃγＲＩＩＢに対する増強した選択性を有し得る。そのようなＦｃバリアントのＦｃγＲＩＩＢ（対別のＦｃ受容体（例えば、ＦｃγＲＩＩＩ））に対する相対な結合活性は、野生型対応物のＦｃγＲＩＩＢ（対他のＦｃ受容体（例えば、ＦｃγＲＩＩＩ））に対する相対的な結合活性よりも高い。Ｆｃバリアントは、ＦｃγＲＩＩＢに対する増強した結合活性、および／または別のＦｃ受容体、例えば、ＦｃγＲＩＩＩに対する減少した結合活性を有し得る。いくつかの実施形態では、本明細書に記載のＦｃバリアントは、ＦｃγＲＩＩＢおよび別のＦｃ受容体（例えば、ＦｃγＲＩＩＩ）の両方に対する減少した結合活性を有し得るが、他のＦｃ受容体（例えば、ＦｃγＲＩＩＩ）に対する減少した結合活性のレベルは、ＦｃγＲＩＩＢに対する減少した結合活性のレベルよりも大きい。
【００２６】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載のＦｃバリアントは、ＦｃγＲＩＩＢに対する好適な、例えば、Ｆｃバリアントが由来する野生型の親Ｆｃと比較して増強した、結合親和性を有する。本明細書で使用される場合、「結合親和性」は、見かけの会合定数またはＫＡを指す。ＫＡは、解離定数（ＫＤ）の逆数である。本明細書に記載のＦｃバリアントは、ＦｃγＲＩＩＢに対して、少なくとも１０−５、１０−６、１０−７、１０−８、１０−９、１０−１０Ｍ、またはそれよりも低い結合親和性（ＫＤ）を有し得る。結合親和性の増加は、ＫＤの減少に対応する。第２のＦｃ受容体と比較して、第１のＦｃ受容体に対するＦｃ断片のより高い親和性結合は、第２のＦｃ受容体への結合のＫＡ（または数値ＫＤ）よりも高い、第１のＦｃ受容体への結合のＫＡ（またはより小さい数値のＫＤ）によって示すことができる。そのような場合、Ｆｃバリアントは、第２のＦｃ受容体と比較して、第１のＦｃ受容体に対する特異性を有する。いくつかの実施形態では、本明細書に記載のＦｃバリアントは、ＦｃγＲＩＩＩ（ＦｃγＲＩＩＩＡまたはＦｃγＲＩＩＩＢのいずれか）に対する結合親和性と比較して、ＦｃγＲＩＩＢに対してより高い結合親和性（より高いＫＡまたはより小さいＫＤ）を有する。（例えば、特異性または他の比較のための）結合親和性の差は、少なくとも１．５、２、３、４、５、１０、１５、２０、３７．５、５０、７０、８０、９１、１００、５００、１０００、１０，０００、または１０５倍であり得る。
【００２７】
結合親和性（または結合特異性）は、平衡透析、平衡結合、ゲル濾過、ＥＬＩＳＡ、表面プラズモン共鳴、または分光法（例えば、蛍光アッセイを使用するもの）を含む様々な方法によって決定することができる。以下の実施例もまた、参照されたい。結合親和性を評価するための例示的な条件は、ＨＢＳ−Ｐ緩衝液（１０ｍＭのＨＥＰＥＳ（ｐＨ７．４）、１５０ｍＭのＮａＣｌ、０．００５％（ｖ／ｖ）の界面活性剤Ｐ２０）におけるものである。これらの技術を使用して、結合した結合タンパク質の濃度を標的タンパク質濃度の関数として測定することができる。結合した結合タンパク質の濃度（［結合］）は一般に、次の等式による、遊離標的タンパク質の濃度（［遊離］）に関連する。
［結合］＝［遊離］／（Ｋｄ＋［遊離］）
【００２８】
ＫＡの正確な決定は必ずしも必要ではないが、このことは、それが、例えば、ＥＬＩＳＡまたはＦＡＣＳ分析などの方法を使用して決定される親和性の定量的な測定値を得るのに十分であり、ＫＡに比例しており、したがって、比較（より高い、例えば、２倍高い親和性が、例えば、機能性アッセイ（インビトロもしくはインビボアッセイ）における活性によって、親和性の定量的な測定値を得るか、または親和性の推測を得るかどうかの決定など）に使用することができる場合があるためである。
【００２９】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載のＦｃバリアントは、対応するマウスＩｇＧ（例えば、マウスＩｇＧ１）におけるアミノ酸残基を考慮して、ヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ２、またはＩｇＧ４  Ｆｃ断片の野生型における１つ以上のアミノ酸残基を変異させることによって設計することができる。ヒトＩｇＧおよびマウスＩｇＧの配列比較を、以下に提供する（上から下へ、配列番号６７〜６９、６４、および６５、各々が対応するＦｃ領域の断片２１１〜２４５、２６０〜２７８、および３２０〜３３２の組み合わせを表す）：
【化１】
2020527581.tif 000004
【００３０】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載のＦｃバリアントは、Ｆｃ断片のヒンジドメインに１つ以上の変異（例えば、アミノ酸置換、欠失、または付加）を含む、ヒトＩｇＧ１、Ｇ２、またはＧ４  Ｆｃバリアントである。ヒトＩｇＧは、ヒンジドメイン（ＥＵインデックスに従う２２６位〜２２９位）にＣＰＰＣまたはＣＰＳＣのコアモチーフを含有する。２１６位〜２２５位はヒンジドメインの上部と見なされ、２３０位〜２３８位はヒンジドメインの下部と見なされる。本明細書で使用される番号付けシステムは、別段明示的に示されない限り、ＥＵインデックスに従う。いくつかの例では、１つ以上の変異が、ヒンジドメインの上部に位置してもよい。代替的にまたは追加的に、１つ以上の変異が、ヒンジドメインの下部に位置してもよい。
【００３１】
ヒトＩｇＧ  Ｆｃに対する変異は、マウスＩｇＧ１のヒンジドメインにおける対応するアミノ酸残基に従って行うことができる。例えば、マウスＩｇＧ１は、２３６位〜２３８位にＧＧＰモチーフを含有しない。したがって、このＧＧＰモチーフにおける残基のうちの１つ以上を、ヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ２、またはＩｇＧ４  Ｆｃ断片から欠失させて、本明細書に記載のＦｃバリアントを生成することができる。
【００３２】
代替的にまたは追加的に、ヒトＦｃバリアントは、ヒンジドメインの上部、下部、またはそれらの両方に１つ以上のアミノ酸置換を含有してもよい。例えば、Ｆｃバリアントは、２３３位、２３４位、２３５位、および／または２３６位のうちの１つ以上に１つ以上のアミノ酸置換を含んでもよい。そのようなアミノ酸置換は、本明細書に記述されるＧＧＰモチーフ（２３６〜２３８）のうちの１つ以上の欠失と組み合わせることができる。これらの変異を、ヒトＩｇＧ２またはＩｇＧ４  Ｆｃ断片に導入して、本明細書に記載のＦｃバリアントを生成することができる。いくつかの例では、本明細書に記載のＦｃバリアントは、２３６位〜２３８位のうちの１つ以上（例えば、２３６位、２３７位、２３８位、またはそれらの任意の組み合わせ）に欠失を含有する。
【００３３】
本明細書に記載のヒンジドメインにおける変異のいずれも、Ｆｃ受容体との相互作用に関与する１つ以上の位置での変異（例えば、アミノ酸置換）と組み合わせることができる。そのような位置には、２６７位、２７３位、３２８位、および／または３２９位が含まれるが、これらに限定されない。それらの位置での例示的なアミノ酸置換には、Ｓ２６１Ｅ、Ｖ２７１Ｅ、Ｌ３２８Ｆ、およびＰ３２９Ｇが含まれる。２６７位、２７３位、３２８位、および／または３２９位に１つ以上の変異を含有するＩｇＧ２またはＩｇＧ４分子由来のＦｃバリアントもまた、本開示の範囲内である。そのような変異には、これらの位置のうちの１つ以上でのアミノ酸置換、例えば、Ｓ２６１Ｅ、Ｖ２７１Ｅ、Ｌ３２８Ｆ、および／またはＰ３２９Ｇが含まれ得る。
【００３４】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載のＦｃバリアントは、その野生型対応物（例えば、本明細書に記載の野生型ヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ２、またはＩｇＧ４のＦｃ断片）のアミノ酸配列と少なくとも８５％（例えば、９０％、９５％、９８％、９９％、またはそれ以上）同一のアミノ酸配列を含んでもよい。２つのアミノ酸配列の「同一性パーセント」は、Ｋａｒｌｉｎ  ａｎｄ  Ａｌｔｓｃｈｕｌ  Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ９０：５８７３−７７，１９９３におけるように修正された、Ｋａｒｌｉｎ  ａｎｄ  Ａｌｔｓｃｈｕｌ  Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ８７：２２６４−６８，１９９０のアルゴリズムを使用して決定される。そのようなアルゴリズムは、Ａｌｔｓｃｈｕｌ，ｅｔ  ａｌ．Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２１５：４０３−１０，１９９０のＮＢＬＡＳＴおよびＸＢＬＡＳＴプログラム（バージョン２．０）に組み込まれている。ＸＢＬＡＳＴプログラム（スコア＝５０、ワード長＝３）によってＢＬＡＳＴタンパク質検索を実行して、対象となるタンパク質分子と相同なアミノ酸配列を得ることができる。２つの配列間にギャップが存在する場合、Ａｌｔｓｃｈｕｌ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．２５（１７）：３３８９−３４０２，１９９７に記載のギャップ付きＢＬＡＳＴを利用してもよい。ＢＬＡＳＴおよびギャップ付きＢＬＡＳＴプログラムを利用する場合、それぞれのプログラムの初期設定パラメータ（例えば、ＸＢＬＡＳＴおよびＮＢＬＡＳＴ）を使用することができる。
【００３５】
一例では、本明細書に記載のＦｃバリアントにおけるアミノ酸残基置換は、保存的なアミノ酸残基置換である。本明細書で使用される場合、「保存的アミノ酸置換」は、アミノ酸置換が行われるタンパク質の相対的な電荷またはサイズ特徴を改変しないアミノ酸置換を指す。バリアントは、そのような方法を収集した参考文献（例えば、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，Ｊ．Ｓａｍｂｒｏｏｋ，ｅｔ  ａｌ．，ｅｄｓ．，Ｓｅｃｏｎｄ  Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，１９８９、またはＣｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｆ．Ｍ．Ａｕｓｕｂｅｌ，ｅｔ  ａｌ．，ｅｄｓ．，Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ＆Ｓｏｎｓ，Ｉｎｃ．，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ）に見られるものなどの、当業者にとって既知であるポリペプチド配列を改変するための方法に従って調製することができる。アミノ酸の保存的置換には、以下のグループ、（ａ）Ｍ、Ｉ、Ｌ、Ｖ、（ｂ）Ｆ、Ｙ、Ｗ、（ｃ）Ｋ、Ｒ、Ｈ、（ｄ）Ａ、Ｇ、（ｅ）Ｓ、Ｔ、（ｆ）Ｑ、Ｎ、および（ｇ）Ｅ、Ｄにおいて、アミノ酸間で行われる置換が含まれる。
【００３６】
変異をｈＩｇＧ１、ｈＩｇＧ２、およびＩｇＧ４に導入して、本開示のための様々なＦｃバリアントを生成することができる例示的な位置を示す配列アラインメントを、以下に提供する。
【化２】
2020527581.tif 000005
【化３】
2020527581.tif 000006
【化４】
2020527581.tif 000007
【００３７】
野生型ヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ２、およびＩｇＧ４  Ｆｃ断片のアミノ酸配列、ならびにいくつかの例示的なｈＩｇＧ１、ｈＩｇＧ２、およびｈＩｇＧ４  Ｆｃバリアントを、以下に提供する。
野生型ヒトＩｇＧ１  Ｆｃ断片のアミノ酸配列：
ＶＤＫＫＶＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ（配列番号１）
野生型ヒトＩｇＧ２  Ｆｃ断片のアミノ酸配列：
ＶＤＫＴＶＥＲＫＣＣＶＥＣＰＰＣＰＡＰＰＶＡＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＱＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＦＮＳＴＦＲＶＶＳＶＬＴＶＶＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＧＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＴＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＭＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ（配列番号２）
野生型ヒトＩｇＧ４  Ｆｃ断片のアミノ酸配列：
ＶＤＫＲＶＥＳＫＹＧＰＰＣＰＳＣＰＡＰＥＦＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＱＥＤＰＥＶＱＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＦＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＧＬＰＳＳＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＱＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＲＬＴＶＤＫＳＲＷＱＥＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＬＧＫ（配列番号３）
ヒトＩｇＧ４  Ｓ２２８Ｐ  Ｆｃバリアントのアミノ酸配列：
ＶＤＫＲＶＥＳＫＹＧＰＰＣＰＰＣＰＡＰＥＦＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＱＥＤＰＥＶＱＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＦＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＧＬＰＳＳＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＱＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＲＬＴＶＤＫＳＲＷＱＥＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＬＧＫ（配列番号４）
例示的なヒトＩｇＧ１  Ｆｃバリアントのアミノ酸配列：
Ｇ１ｍ１：
ＶＤＫＫＶＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ（配列番号５）
Ｇ１ｍ２：
ＶＤＫＫＶＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ（配列番号６）
Ｇ１ｍ−２：
ＶＤＫＫＶＥＰＫＣＣＶＥＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ（配列番号７）
Ｇ１ｍ−４：
ＶＤＫＫＶＥＰＫＹＧＰＰＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ（配列番号８）
Ｇ１ｍ５：
ＶＤＫＫＶＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＥＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ（配列番号９）
Ｇ１ｍ７：
ＶＤＫＫＶＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＥＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ（配列番号１０）
Ｇ１ｍ８：
ＶＤＫＫＶＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＦＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ（配列番号１１）
Ｇ１ｍ９：
ＶＤＫＫＶＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＥＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＦＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ（配列番号１２）
Ｇ１ｍ１５：
ＶＤＫＫＶＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＥＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ（配列番号１３）
Ｇ１ｍ１７：
ＶＤＫＫＶＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＥＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ（配列番号１４）
Ｇ１ｍ１８：
ＶＤＫＫＶＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＦＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ（配列番号１５）
Ｇ１ｍ１９：
ＶＤＫＫＶＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＥＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＦＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ（配列番号１６）
Ｇ１ｍ２５：
ＶＤＫＫＶＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＥＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ（配列番号１７）
Ｇ１ｍ２７：
ＶＤＫＫＶＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＥＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ（配列番号１８）
Ｇ１ｍ２８：
ＶＤＫＫＶＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＦＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ（配列番号１９）
Ｇ１ｍ２９：
ＶＤＫＫＶＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＥＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＦＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ（配列番号２０）
Ｇ１ｍＡＡ：
ＶＤＫＫＶＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＡＡＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ（配列番号２１）
Ｇ１ｍＡＧ：
ＶＤＫＫＶＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＡＡＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＧＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ（配列番号２２）
例示的なヒトＩｇＧ２  Ｆｃバリアントのアミノ酸配列：
Ｇ２ｍ１：
ＶＤＫＴＶＥＲＫＣＣＶＥＣＰＰＣＰＡＰＰＶＡＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＱＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＦＮＳＴＦＲＶＶＳＶＬＴＶＶＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＧＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＴＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＭＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ（配列番号２３）
Ｇ２ｍ−１：
ＶＤＫＴＶＥＲＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＰＶＡＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＱＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＦＮＳＴＦＲＶＶＳＶＬＴＶＶＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＧＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＴＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＭＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ（配列番号２４）
Ｇ２ｍ２：
ＶＤＫＴＶＥＲＫＣＣＶＥＣＰＰＣＰＡＰＰＦＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＱＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＦＮＳＴＦＲＶＶＳＶＬＴＶＶＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＧＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＴＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＭＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ（配列番号２５）
Ｇ２ｍ−４：
ＶＤＫＴＶＥＲＫＹＧＰＰＣＰＰＣＰＡＰＰＶＡＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＱＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＦＮＳＴＦＲＶＶＳＶＬＴＶＶＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＧＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＴＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＭＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ（配列番号２６）
Ｇ２ｍ５：
ＶＤＫＴＶＥＲＫＣＣＶＥＣＰＰＣＰＡＰＰＶＡＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＥＱＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＦＮＳＴＦＲＶＶＳＶＬＴＶＶＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＧＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＴＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＭＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ（配列番号２７）
Ｇ２ｍ７：
ＶＤＫＴＶＥＲＫＣＣＶＥＣＰＰＣＰＡＰＰＶＡＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＥＨＥＤＰＥＶＱＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＦＮＳＴＦＲＶＶＳＶＬＴＶＶＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＧＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＴＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＭＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ（配列番号２８）
Ｇ２ｍ８：
ＶＤＫＴＶＥＲＫＣＣＶＥＣＰＰＣＰＡＰＰＶＡＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＱＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＦＮＳＴＦＲＶＶＳＶＬＴＶＶＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＧＦＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＴＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＭＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ（配列番号２９）
Ｇ２ｍ９：
ＶＤＫＴＶＥＲＫＣＣＶＥＣＰＰＣＰＡＰＰＶＡＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＥＨＥＤＰＥＶＱＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＦＮＳＴＦＲＶＶＳＶＬＴＶＶＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＧＦＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＴＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＭＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ（配列番号３０）
Ｇ２ｍ１０：
ＶＤＫＴＶＥＲＫＣＣＶＥＣＰＰＣＰＡＰＥＶＳＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＱＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＦＮＳＴＦＲＶＶＳＶＬＴＶＶＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＧＦＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＴＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＭＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ（配列番号３１）
Ｇ２ｍ１５：
ＶＤＫＴＶＥＲＫＣＣＶＥＣＰＰＣＰＡＰＰＶＡＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＥＱＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＦＮＳＴＦＲＶＶＳＶＬＴＶＶＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＧＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＴＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＭＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ（配列番号３２）
Ｇ２ｍ１７：
ＶＤＫＴＶＥＲＫＣＣＶＥＣＰＰＣＰＡＰＰＶＡＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＥＨＥＤＰＥＶＱＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＦＮＳＴＦＲＶＶＳＶＬＴＶＶＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＧＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＴＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＭＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ（配列番号３３）
Ｇ２ｍ１８：
ＶＤＫＴＶＥＲＫＣＣＶＥＣＰＰＣＰＡＰＰＶＡＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＱＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＦＮＳＴＦＲＶＶＳＶＬＴＶＶＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＧＦＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＴＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＭＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ（配列番号３４）
Ｇ２ｍ１９：
ＶＤＫＴＶＥＲＫＣＣＶＥＣＰＰＣＰＡＰＰＶＡＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＥＨＥＤＰＥＶＱＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＦＮＳＴＦＲＶＶＳＶＬＴＶＶＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＧＦＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＴＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＭＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ（配列番号３５）
Ｇ２ｍ２０：
ＶＤＫＴＶＥＲＫＣＣＶＥＣＰＰＣＰＡＰＰＶＡＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＱＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＦＮＳＴＦＲＶＶＳＶＬＴＶＶＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＧＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＴＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＭＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ（配列番号３６）
Ｇ２ｍ２７：
ＶＤＫＴＶＥＲＫＣＣＶＥＣＰＰＣＰＡＰＰＶＡＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＱＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＦＮＳＴＦＲＶＶＳＶＬＴＶＶＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＧＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＴＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＭＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ（配列番号３７）
Ｇ２ｍ２８：
ＶＤＫＴＶＥＲＫＣＣＶＥＣＰＰＣＰＡＰＰＶＡＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＥＨＥＤＰＥＶＱＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＦＮＳＴＦＲＶＶＳＶＬＴＶＶＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＧＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＴＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＭＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ（配列番号３８）
例示的なヒトＩｇＧ４  Ｆｃバリアントのアミノ酸配列：
Ｇ４ｍ１：
ＶＤＫＲＶＥＳＫＹＧＰＰＣＰＰＣＰＡＰＥＦＬＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＱＥＤＰＥＶＱＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＦＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＧＬＰＳＳＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＱＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＲＬＴＶＤＫＳＲＷＱＥＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＬＧＫ（配列番号３９）
Ｇ４ｍ−１：
ＶＤＫＲＶＥＳＫＳＣＤＫＴＨＴＰＰＣＰＰＣＰＡＰＥＦＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＱＥＤＰＥＶＱＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＦＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＧＬＰＳＳＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＱＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＲＬＴＶＤＫＳＲＷＱＥＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＬＧＫ（配列番号４０）
Ｇ４ｍ２：
ＶＤＫＲＶＥＳＫＹＧＰＰＣＰＰＣＰＡＰＥＦＬＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＱＥＤＰＥＶＱＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＦＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＧＬＰＳＳＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＱＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＲＬＴＶＤＫＳＲＷＱＥＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＬＧＫ（配列番号４１）
Ｇ４ｍ−２：
ＶＤＫＲＶＥＳＫＣＣＶＥＰＰＣＰＰＣＰＡＰＥＦＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＱＥＤＰＥＶＱＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＦＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＧＬＰＳＳＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＱＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＲＬＴＶＤＫＳＲＷＱＥＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＬＧＫ（配列番号４２）
Ｇ４ｍ３：
ＶＤＫＲＶＥＳＫＹＧＰＰＣＰＰＣＰＡＰＥＦＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＱＥＤＰＥＥＱＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＦＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＧＬＰＳＳＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＱＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＲＬＴＶＤＫＳＲＷＱＥＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＬＧＫ（配列番号４３）
Ｇ４ｍ４：
ＶＤＫＲＶＥＳＫＹＧＰＰＣＰＰＣＰＡＰＥＦＬＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＱＥＤＰＥＥＱＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＦＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＧＬＰＳＳＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＱＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＲＬＴＶＤＫＳＲＷＱＥＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＬＧＫ（配列番号４４）
Ｇ４ｍ５：
ＶＤＫＲＶＥＳＫＹＧＰＰＣＰＰＣＰＡＰＥＦＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＱＥＤＰＥＥＱＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＦＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＧＬＰＳＳＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＱＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＲＬＴＶＤＫＳＲＷＱＥＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＬＧＫ（配列番号４５）
Ｇ４ｍ７：
ＶＤＫＲＶＥＳＫＹＧＰＰＣＰＰＣＰＡＰＥＦＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＥＱＥＤＰＥＶＱＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＦＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＧＬＰＳＳＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＱＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＲＬＴＶＤＫＳＲＷＱＥＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＬＧＫ（配列番号４６）
Ｇ４ｍ８：
ＶＤＫＲＶＥＳＫＹＧＰＰＣＰＰＣＰＡＰＥＦＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＱＥＤＰＥＶＱＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＦＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＧＦＰＳＳＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＱＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＲＬＴＶＤＫＳＲＷＱＥＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＬＧＫ（配列番号４７）
Ｇ４ｍ９：
ＶＤＫＲＶＥＳＫＹＧＰＰＣＰＰＣＰＡＰＥＦＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＥＱＥＤＰＥＶＱＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＦＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＧＦＰＳＳＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＱＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＲＬＴＶＤＫＳＲＷＱＥＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＬＧＫ（配列番号４８）
Ｇ４ｍ１０：
ＶＤＫＲＶＥＳＫＹＧＰＰＣＰＰＣＰＡＰＥＶＳＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＱＥＤＰＥＶＱＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＦＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＧＦＰＳＳＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＱＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＲＬＴＶＤＫＳＲＷＱＥＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＬＧＫ（配列番号４９）
Ｇ４ｍ１５
ＶＤＫＲＶＥＳＫＹＧＰＰＣＰＰＣＰＡＰＥＦＬＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＱＥＤＰＥＥＱＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＦＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＧＬＰＳＳＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＱＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＲＬＴＶＤＫＳＲＷＱＥＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＬＧＫ（配列番号１２８）
Ｇ４ｍ１７：
ＶＤＫＲＶＥＳＫＹＧＰＰＣＰＰＣＰＡＰＥＦＬＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＥＱＥＤＰＥＶＱＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＦＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＧＬＰＳＳＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＱＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＲＬＴＶＤＫＳＲＷＱＥＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＬＧＫ（配列番号５０）
Ｇ４ｍ１８：
ＶＤＫＲＶＥＳＫＹＧＰＰＣＰＰＣＰＡＰＥＦＬＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＱＥＤＰＥＶＱＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＦＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＧＦＰＳＳＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＱＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＲＬＴＶＤＫＳＲＷＱＥＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＬＧＫ（配列番号５１）
Ｇ４ｍ１９：
ＶＤＫＲＶＥＳＫＹＧＰＰＣＰＰＣＰＡＰＥＦＬＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＥＱＥＤＰＥＶＱＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＦＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＧＦＰＳＳＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＱＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＲＬＴＶＤＫＳＲＷＱＥＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＬＧＫ（配列番号５２）
Ｇ４ｍ２０：
ＶＤＫＲＶＥＳＫＹＧＰＰＣＰＰＣＰＡＰＥＦＬＧＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＱＥＤＰＥＶＱＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＦＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＧＬＰＳＳＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＱＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＲＬＴＶＤＫＳＲＷＱＥＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＬＧＫ（配列番号５３）
Ｇ４ｍ２５：
ＶＤＫＲＶＥＳＫＹＧＰＰＣＰＰＣＰＡＰＥＦＬＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＱＥＤＰＥＥＱＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＦＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＧＬＰＳＳＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＱＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＲＬＴＶＤＫＳＲＷＱＥＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＬＧＫ（配列番号５４）
Ｇ４ｍ２７：
ＶＤＫＲＶＥＳＫＹＧＰＰＣＰＰＣＰＡＰＥＦＬＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＥＱＥＤＰＥＶＱＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＦＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＧＬＰＳＳＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＱＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＲＬＴＶＤＫＳＲＷＱＥＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＬＧＫ（配列番号５５）
Ｇ４ｍ２８：
ＶＤＫＲＶＥＳＫＹＧＰＰＣＰＰＣＰＡＰＥＦＬＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＱＥＤＰＥＶＱＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＦＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＧＦＰＳＳＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＱＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＲＬＴＶＤＫＳＲＷＱＥＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＬＧＫ（配列番号５６）
Ｇ４ｍ２９：
ＶＤＫＲＶＥＳＫＹＧＰＰＣＰＰＣＰＡＰＥＦＬＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＥＱＥＤＰＥＶＱＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＦＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＧＦＰＳＳＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＱＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＲＬＴＶＤＫＳＲＷＱＥＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＬＧＫ（配列番号５７）
Ｇ４ｍ３０：
ＶＤＫＲＶＥＳＫＹＧＰＰＣＰＰＣＰＡＰＥＦＬＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＱＥＤＰＥＶＱＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＦＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＧＬＰＳＳＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＱＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＲＬＴＶＤＫＳＲＷＱＥＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＬＧＫ（配列番号５８）
Ｇ４ｍＰＥ：
ＶＤＫＲＶＥＳＫＹＧＰＰＣＰＰＣＰＡＰＥＦＥＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＱＥＤＰＥＶＱＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＦＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＧＬＰＳＳＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＱＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＲＬＴＶＤＫＳＲＷＱＥＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＬＧＫ（配列番号５９）
【００３８】
本明細書に記載のＦｃバリアントは、野生型対応物と比較して、ＦｃγＲＩＩＢに対する増強した結合活性を呈し得る。例には、Ｇ２ｍ２、Ｇ２ｍ５、Ｇ２ｍ７、Ｇ２ｍ８、Ｇ２ｍ９、Ｇ１ｍ７、Ｇ１ｍ９、およびＧ４ｍ７が含まれる。代替的にまたは追加的に、Ｆｃバリアントは、それらの野生型対応物と比較して、ＦｃγＲＩＩＢに対する増強した選択性を呈し得る（例えば、Ｇ１ｍ１５、Ｇ１ｍ１７、Ｇ１ｍ１８、Ｇ１ｍ１９、Ｇ１ｍ２７、Ｇ１ｍ２８、Ｇ１ｍ２９、Ｇ４ｍ１、Ｇ４ｍ２、Ｇ４ｍ７、Ｇ４ｍ８、Ｇ４ｍ９、Ｇ４ｍ２５、Ｇ４ｍ２７、およびＧ４ｍ２８）。これらのＦｃバリアントを使用して、免疫受容体およびＦｃγＲＩＩＢ受容体を架橋することができる本明細書に記載の治療剤を構築することができる。
【００３９】
あるいは、本明細書に記載の特定のＦｃバリアントは、任意のＦｃγＲに対する低い結合活性を有しても、いかなるＦｃγＲに対しても結合活性を有しなくてもよい。例には、Ｇ１ｍ２、Ｇ１ｍ２５、Ｇ４ｍ５、Ｇ４ｍ１８、Ｇ４ｍ１９、およびＧ４ｍ２０が含まれる。そのようなＦｃバリアントは、ＦｃＲｎに対する結合活性を保持することができる。そのようなＦｃバリアントを含有する治療剤（例えば、抗体）は、対応する野生型と比較して、Ｆｃγ受容体を活性化する低い活性を有するか、またはそれを有さず、かつ低減した毒性を有し得る。
【００４０】
野生型対応物と比較した、例示的なＦｃバリアントの結合親和性／特異性の変化を、以下の表２〜４に提供する。「Ｎ／Ａ」は、データが入手可能ではないことを示す。Ｆｃバリアントの結合活性が、野生型対応物と比較して「変化なし」であることが見出された場合、これは、同じ実験条件下で同じアッセイによって示される、Ｆｃバリアントと野生型対応物との間に結合活性の有意な変動が存在しないことを意味する。Ｆｃバリアントの結合活性が、その野生型対応物と比較して「増加」または「減少」する場合、Ｆｃバリアントの結合活性が、同じ実験条件下で同じアッセイによって決定して、野生型対応物の結合活性よりも高いかまたは低く、かつその変動が、当業者にとって既知であるように有意（例えば、生物学的に有意）であることを意味する。Ｆｃバリアントの結合活性が、その野生型対応物と比較して「わずかに増加」または「わずかに減少」する場合、Ｆｃバリアントの結合活性が、同じ実験条件下で同じアッセイによって決定して、野生型対応物の結合活性よりも高いかまたは低く、かつその変動が、限定されたレベル（例えば、最大１０％）まで統計学的に有意であることを意味する。
【表２】
2020527581.tif 000008
【表３】
2020527581.tif 000009
【表４】
2020527581.tif 000010
【００４１】
本明細書に記載のＦｃバリアントは、本明細書に提供されるガイダンスに従って設計し、通例の組換え技術を介して生成することができる。様々なＦｃ受容体に対するその結合親和性および特異性は、通例の方法を介して決定することができる。以下の実施例もまた、参照されたい。
【００４２】
ＩＩ．免疫受容体およびＦｃγＲＩＩＢを架橋することができる治療剤
免疫受容体およびＦｃγＲＩＩＢ受容体を架橋することができる治療剤もまた、本明細書に提供される。そのような治療剤は、癌および腫瘍流入領域リンパ節などの特定の微小環境におけるＴ細胞およびＮＫ細胞などの免疫細胞を活性化するための、増強したアゴニスト効果を持つために、侵入病原体または罹患細胞に対する免疫応答を誘発または増強することが予想される。
【００４３】
（ｉ）結合部分
本明細書に記載の治療剤は、少なくとも２つの結合部分を含有する。１つの結合部分は、細胞表面上に発現される免疫細胞受容体、例えば、ＴＮＦスーパーファミリーの受容体に結合することができる。例には、Ｆａｓ受容体／ＦＡＳ、ＴＷＥＡＫ受容体／ＴＮＦＲＳＦ１２Ａ、４−１ＢＢ／ＴＮＦＲＳＦ９／ＣＤ１３７、ＴＡＣＩ／ＴＮＦＲＳＦ１３Ｂ、ＢＡＦＦ  Ｒ／ＴＮＦＲＳＦ１３Ｃ、ＣＤ２７／ＴＮＦＲＳＦ７、ＣＤ３０／ＴＮＦＲＳＦ８、ＣＤ４０／ＴＮＦＲＳＦ５、ＤＲ３／ＴＮＦＲＳＦ２５、ＤＲ４／ＴＮＦＲＳＦ１０Ａ、ＤＲ５／ＴＮＦＲＳＦ１０Ｂ、ＤＲ６／ＴＮＦＲＳＦ２１、ＧＩＴＲ／ＴＮＦＲＳＦ１８、ＨＶＥＭ／ＴＮＦＲＳＦ１４、リンホトキシン−ベータ受容体／ＬＴβＲ、ＯＸ４０／ＴＮＦＲＳＦ４、ＴＲＯＹ／ＴＮＦＲＳＦ１９、ＲＥＬＴ／ＴＮＦＲＳＦ１９Ｌ、ＴＮＦＲＳＦ１２Ａ、ＴＡＣＩ／ＴＮＦＲＳＦ１３Ｂ、ＴＬ１Ａ／ＴＮＦＳＦ１５、ＴＮＦＲＳＦ１７、ＴＮＦＲ１／ＴＮＦＲＳＦ１Ａ、ＴＮＦＲＳＦ１１Ｂ、ＲＡＮＫ／ＴＮＦＲＳＦ１１Ａ、ＴＲ１／ＴＮＦＲＳＦ１１Ｂ、ＮＧＦＲ、ＥＤＡ２Ｒ、およびＴＮＦＲＩＩ／ＴＮＦＲＳＦ１Ｂが含まれる。場合によっては、免疫細胞受容体に対する結合部分は、抗体結合断片（例えば、Ｆａｂ断片または単鎖抗体断片）である。
【００４４】
治療剤中の他の結合部分は、ＦｃγＲＩＩＢに結合することができる。場合によっては、この結合部分は、別のＦｃ受容体と比較して、ＦｃγＲＩＩＢに対して選択的結合活性を有する。そのような結合部分は、ＦｃγＲＩＩＢに選択的または特異的に結合する、本明細書に記載のＦｃバリアントのいずれかであり得る。
【００４５】
いくつかの実施形態では、免疫細胞受容体およびＦｃγＲＩＩＢを架橋する治療剤は、免疫細胞受容体に特異的な抗体であってもよく、ＦｃγＲＩＩＢに対する選択的結合活性を有するＦｃ断片（例えば、本明細書に記載のもの）を含む。例えば、治療剤は、当該技術分野において既知であるか、または本明細書に列挙されているＴＮＦスーパーファミリーメンバーのいずれかに結合する抗体（例えば、ＣＤ１３７）であってもよく、本明細書に記載のｈＩｇＧ１、ｈＩｇＧ２、またはｈＩｇＧ４  Ｆｃバリアントを有する。いくつかの例では、抗体は、アゴニスト抗体である。
【００４６】
いくつかの実施形態では、治療剤は、本明細書に記載の免疫細胞受容体に特異的な１つの抗原結合部分と、ＦｃγＲＩＩＢなどのＦｃγ受容体に特異的な別の抗原結合部分とを含む、二重特異性抗体である。
【００４７】
（ｉｉ）治療剤の調製
本明細書に記載のＴＮＦスーパーファミリーメンバーなどの免疫細胞受容体およびＦｃγＲＩＩＢの両方に結合することができる抗体は、以下のように作製することができる。免疫細胞受容体に結合する抗体は、当該技術分野において既知である任意の方法によって調製することができる。例えば、Ｈａｒｌｏｗ  ａｎｄ  Ｌａｎｅ，（１９９８）Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋを参照されたい。
【００４８】
いくつかの実施形態では、標的受容体に特異的な抗体（例えば、ＣＤ１３７）またはその細胞外ドメインは、従来のハイブリドーマ技術によって作製することができる。任意でＫＬＨなどの担体タンパク質に結合した、完全長標的受容体またはその断片を使用して、その抗原に結合する抗体を産生するように宿主動物を免疫化することができる。宿主動物の免疫化の経路およびスケジュールは一般に、本明細書にさらに記載される抗体刺激および産生のための確立された従来の技術と一致する。マウス、ヒト化、およびヒト抗体の産生のための一般的な技術は、当該技術分野において既知であり、本明細書に記載されている。ヒトを含む任意の哺乳動物対象またはそれ由来の抗体産生細胞を操作して、哺乳動物（ヒトを含む）ハイブリドーマ細胞株の生成の基礎として機能させることができることが企図される。典型的には、宿主動物に、ある量の免疫原（本明細書に記載のものを含む）を腹腔内、筋肉内、経口、皮下、足底内、および／または皮内に接種する。
【００４９】
ハイブリドーマは、Ｋｏｈｌｅｒ，Ｂ．ａｎｄ  Ｍｉｌｓｔｅｉｎ，Ｃ．（１９７５）Ｎａｔｕｒｅ２５６：４９５−４９７の一般的な体細胞ハイブリダイゼーション技術、またはＢｕｃｋ，Ｄ．Ｗ．，ｅｔ  ａｌ．，Ｉｎ  Ｖｉｔｒｏ，１８：３７７−３８１（１９８２）によって修正された技術を使用して、リンパ球および不死化骨髄腫細胞から調製することができる。Ｘ６３−Ａｇ８．６５３およびＳａｌｋ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ，Ｃｅｌｌ  Ｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎ  Ｃｅｎｔｅｒ，Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ，Ｃａｌｉｆ．，ＵＳＡからのものを含むがこれらに限定されない、入手可能な骨髄腫株を、ハイブリダイゼーションに使用することができる。一般に、この技術は、ポリエチレングリコールなどの融合剤を使用して、または当業者にとって周知である電気的手段によって、骨髄腫細胞およびリンパ系細胞を融合することを伴う。融合後、細胞を融合培地から分離し、ヒポキサンチン−アミノプテリン−チミジン（ＨＡＴ）培地などの選択的成長培地中で成長させて、ハイブリダイズしていない親細胞を排除する。血清の補充の有無に関わらず、本明細書に記載の培地のいずれかを使用しても、モノクローナル抗体を分泌するハイブリドーマを培養することができる。細胞融合技術に対する別の代替法として、ＥＢＶ不死化Ｂ細胞を使用して、本明細書に記載の抗免疫細胞受容体モノクローナル抗体を産生してもよい。所望される場合、ハイブリドーマを拡大およびサブクローニングし、従来の免疫アッセイ手順（例えば、放射免疫アッセイ、酵素免疫アッセイ、または蛍光免疫アッセイ）によって上清を抗免疫原活性についてアッセイする。
【００５０】
抗体の供給源として使用することができるハイブリドーマは、全ての誘導体、標的免疫細胞受容体の活性を調節することができるモノクローナル抗体を産生する親ハイブリドーマの子孫細胞を包含する。そのような抗体を産生するハイブリドーマは、既知の手順を使用して、インビトロまたはインビボで成長させることができる。モノクローナル抗体は、所望される場合、硫酸アンモニウム沈殿、ゲル電気泳動、透析、クロマトグラフィー、および限外濾過などの従来の免疫グロブリン精製手順によって、培養培地または体液から単離してもよい。望ましくない活性が存在する場合、例えば、固相に付着した免疫原からなる吸着剤上に調製物を流し、免疫原から所望の抗体を溶出または放出することによって除去してもよい。二官能性剤または誘導体化剤、例えば、マレイミドベンゾイルスルホスクシンイミドエステル（システイン残基を通した共役）、Ｎ−ヒドロキシスクシンイミド（リジン残基を通した共役）、グルタルアルデヒド、コハク酸無水物、ＳＯＣｌ、またはＲ１Ｎ＝Ｃ＝（式中、ＲおよびＲ１は異なるアルキル基である）ＮＲを使用して、免疫化される種において免疫原性であるタンパク質（例えば、キーホールリンペットヘモシアニン、血清アルブミン、ウシサイログロブリン、またはダイズトリプシン阻害剤）に共役した標的アミノ酸配列を含有する標的抗原または断片によって、宿主動物を免疫化することで、抗体（例えば、モノクローナル抗体）の集団をもたらすことができる。
【００５１】
所望される場合、（例えば、ハイブリドーマによって産生される）対象となる抗体（モノクローナルまたはポリクローナル）を配列決定し、その後、ポリヌクレオチド配列を発現または増殖のためにベクターにクローニングしてもよい。対象となる抗体をコードする配列は、宿主細胞内のベクターにおいて維持されてもよく、その後、宿主細胞は、将来の使用のために拡大および凍結されてもよい。代替法として、ポリヌクレオチド配列を使用して、抗体を「ヒト化」するように、または抗体の親和性（親和性成熟）もしくは抗体の他の特徴を改善するように遺伝子操作してもよい。例えば、抗体がヒトにおける臨床試験および治療に使用される場合、免疫応答を回避するために、定常領域を操作して、ヒト定常領域により似るようにしてもよい。抗体配列を遺伝子操作して、標的抗原に対するより大きな親和性、および免疫細胞受容体の活性を阻害または活性化する上でのより大きな効果を得ることが望ましくあり得る。当業者には、抗体に対して１つ以上のポリヌクレオチドの変化を行い、依然として標的受容体に対するその結合特異性を維持することができることが明らかになるであろう。
【００５２】
他の実施形態では、特定のヒト免疫グロブリンタンパク質を発現するように操作されている市販のマウスを使用することによって、完全ヒト抗体を得ることができる。より望ましい（例えば、完全ヒト抗体）またはより強固な免疫応答を生成するように設計されるトランスジェニック動物を使用して、ヒト化抗体またはヒト抗体を産生することもできる。そのような技術の例は、Ａｍｇｅｎ，Ｉｎｃ．（Ｆｒｅｍｏｎｔ，Ｃａｌｉｆ．）のＸｅｎｏｍｏｕｓｅＲＴＭおよびＭｅｄａｒｅｘ，Ｉｎｃ．（Ｐｒｉｎｃｅｔｏｎ，Ｎ．Ｊ．）のＨｕＭＡｂ−ＭｏｕｓｅＲＴＭである。別の代替法では、抗体は、ファージ提示または酵母技術によって組換えで作製することができる。例えば、米国特許第５，５６５，３３２号、同第５，５８０，７１７号、同第５，７３３，７４３号、および同第６，２６５，１５０号、ならびにＷｉｎｔｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，（１９９４）Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１２：４３３−４５５を参照されたい。
【００５３】
あるいは、ファージ提示技術（ＭｃＣａｆｆｅｒｔｙ  ｅｔ  ａｌ．，（１９９０）Ｎａｔｕｒｅ３４８：５５２−５５３）、酵母提示技術、または哺乳動物細胞提示技術などの抗体ライブラリ技術を使用して、標的免疫受容体に特異的なヒト抗体などの抗体を単離することができる。
【００５４】
無傷抗体（完全長抗体）の抗原結合断片は、通例の方法を介して調製することができる。例えば、Ｆ（ａｂ’）２断片は、抗体分子のペプシン消化によって生成することができ、Ｆ（ａｂ’）２断片のジスルフィド架橋を還元することにより生成することができるＦａｂ断片。
【００５５】
ヒト化抗体を構築するための方法もまた、当該技術分野において周知である。例えば、Ｑｕｅｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，８６：１００２９−１００３３（１９８９）を参照されたい。一例では、親非ヒト抗体のＶＨおよびＶＬの可変領域は、当該技術分野において既知である方法に従って三次元分子モデリング分析に供される。次に、同じ分子モデリング分析を使用して、正しいＣＤＲ構造の形成に重要であると予測されるフレームワークのアミノ酸残基を特定する。並行して、検索クエリーとして親ＶＨおよびＶＬ配列を使用して、任意の抗体遺伝子データベースから、親非ヒト抗体のアミノ酸配列と相同であるアミノ酸配列を有するヒトＶＨおよびＶＬ鎖を特定する。その後、ヒトＶＨおよびＶＬアクセプター遺伝子を選択する。
【００５６】
選択されたヒトアクセプター遺伝子中のＣＤＲ領域は、親非ヒト抗体またはその機能的バリアント由来のＣＤＲ領域で置き換えることができる。必要に応じて、ＣＤＲ領域と相互作用する上で重要であると予測される親鎖のフレームワーク領域内の残基（上記の記述を参照されたい）を使用して、ヒトアクセプター遺伝子中の対応する残基を置換してもよい。
【００５７】
標的免疫細胞受容体に結合することができる抗体を得た後、その抗原結合断片を、ＦｃｇＲＩＩＢに選択的に結合し得る好適なＩｇＧアイソフォームの好適なＦｃ断片、例えば、本明細書に記載のＦｃバリアントのいずれかに、通例の組換え技術を介して共役させることができる。場合によっては、抗体が結合する免疫細胞受容体を活性化する抗体のアゴニスト効果について最初に調査する。アゴニスト効果を増強するための本明細書に記載の治療剤を作製するために、そのようなアゴニスト抗体を選択してもよい。
【００５８】
結果として得られる抗体分子は、以下に例示される通例の組換え技術を介して生成することができる。本明細書に記載の抗体の重鎖および軽鎖をコードする核酸を、１つの発現ベクターにクローニングしてもよく、各ヌクレオチド配列は、好適なプロモーターに作動可能に連結している。一例では、重鎖および軽鎖をコードするヌクレオチド配列の各々は、異なるプロンプターに作動可能に連結している。あるいは、重鎖および軽鎖の両方が同じプロモーターから発現されるように、重鎖および軽鎖をコードするヌクレオチド配列は、単一のプロモーターと作動可能に連結していてもよい。必要に応じて、内部リボソーム侵入部位（ＩＲＥＳ）が、重鎖コード配列と軽鎖コード配列との間に挿入されてもよい。
【００５９】
いくつかの例では、抗体の２本の鎖をコードするヌクレオチド配列を２つのベクターにクローニングし、これを同じまたは異なる細胞に導入してもよい。２本の鎖が異なる細胞内で発現される場合、それらを発現する宿主細胞からそれらの各々を単離してもよく、抗体の形成を可能にする好適な条件下で単離された重鎖および軽鎖を混合し、インキュベートしてもよい。
【００６０】
一般に、当該技術分野において既知である方法を使用して、ある抗体の１つまたは全ての鎖をコードする核酸配列を、好適なプロモーターと作動可能に連結した好適な発現ベクターにクローニングすることができる。例えば、ヌクレオチド配列およびベクターを、好適な条件下で制限酵素と接触させて、互いに対合し、リガーゼによってともに連結され得る各分子上に、相補的末端を作製することができる。あるいは、合成核酸リンカーを、遺伝子の末端に連結させてもよい。これらの合成リンカーは、ベクター内の特定の制限部位に対応する核酸配列を含有する。発現ベクター／プロモーターの選択は、抗体の産生に使用するための宿主細胞の種類に依存するだろう。
【００６１】
サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）中間初期プロモーター、ウイルスＬＴＲ（ラウス肉腫ウイルスＬＴＲなど）、ＨＩＶ−ＬＴＲ、ＨＴＬＶ−１  ＬＴＲ、サルウイルス４０（ＳＶ４０）初期プロモーター、Ｅ．ｃｏｌｉ  ｌａｃ  ＵＶ５プロモーター、および単純ヘルペスｔｋウイルスプロモーターを含むがこれらに限定されない、様々なプロモーターを使用して、本明細書に記載の抗体を発現させることができる。
【００６２】
制御可能なプロモーターもまた、使用することができる。そのような制御可能なプロモーターには、転写モジュレーターとしてＥ．ｃｏｌｉ由来のｌａｃリプレッサーを使用して、ｌａｃオペレーター担持哺乳動物細胞プロモーターからの転写を制御するもの［Ｂｒｏｗｎ，Ｍ．ｅｔ  ａｌ．，Ｃｅｌｌ，４９：６０３−６１２（１９８７）］、テトラサイクリンリプレッサー（ｔｅｔＲ）を使用するもの［Ｇｏｓｓｅｎ，Ｍ．，ａｎｄ  Ｂｕｊａｒｄ，Ｈ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ８９：５５４７−５５５１（１９９２）、Ｙａｏ，Ｆ．ｅｔ  ａｌ．，Ｈｕｍａｎ  Ｇｅｎｅ  Ｔｈｅｒａｐｙ，９：１９３９−１９５０（１９９８）、Ｓｈｏｃｋｅｌｔ，Ｐ．，ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，９２：６５２２−６５２６（１９９５）］が含まれる。他のシステムには、ＦＫ５０６二量体、アストラジオールを使用するＶＰ１６もしくはｐ６５、ＲＵ４８６、ジフェノールムリスレロン、またはラパマイシンが含まれる。誘導システムは、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、Ｃｌｏｎｔｅｃｈ、およびＡｒｉａｄから入手可能である。
【００６３】
オペロンを有するリプレッサーを含む制御可能なプロモーターを使用してもよい。一実施形態では、Ｅ．ｃｏｌｉ由来のｌａｃリプレッサーは、転写モジュレーターとして機能して、ｌａｃオペレーター担持哺乳動物細胞プロモーターからの転写を制御することができ［Ｍ．Ｂｒｏｗｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｅｌｌ，４９：６０３−６１２（１９８７）］、Ｇｏｓｓｅｎ  ａｎｄ  Ｂｕｊａｒｄ（１９９２）；［Ｍ．Ｇｏｓｓｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，８９：５５４７−５５５１（１９９２）］は、テトラサイクリンリプレッサー（ｔｅｔＲ）を転写活性化因子（ＶＰ１６）と組み合わせて、ｔｅｔＲ−哺乳動物細胞転写活性化因子融合タンパク質であるｔＴａ（ｔｅｔＲ−ＶＰ１６）を作製し、ヒトサイトメガロウイルス（ｈＣＭＶ）主要最初期プロモーター由来のｔｅｔＯ−担持最小プロモーターと組み合わせて、哺乳動物細胞内の遺伝子発現を制御するためのｔｅｔＲ−ｔｅｔオペレーター系を作製した。一実施形態では、テトラサイクリン誘導性スイッチが使用される。ｔｅｔＲ−哺乳動物細胞転写因子融合誘導体ではなく、テトラサイクリンリプレッサー（ｔｅｔＲ）単独では、テトラサイクリンオペレーターがＣＭＶＩＥプロモーターのＴＡＴＡエレメントの下流に適切に位置付けられた場合に、強力なトランスモジュレーターとして機能して、哺乳動物細胞内の遺伝子発現を制御することができる（Ｙａｏ  ｅｔ  ａｌ．，Ｈｕｍａｎ  Ｇｅｎｅ  Ｔｈｅｒａｐｙ）。このテトラサイクリン誘導性スイッチの１つの特定の利点は、それが、その制御可能な効果を達成するのに、テトラサイクリンリプレッサー−哺乳動物細胞のトランス活性化因子またはリプレッサー融合タンパク質（これらは、場合によっては細胞に対して有毒であり得る）の使用を必要としないことである（Ｇｏｓｓｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，８９：５５４７−５５５１（１９９２）、Ｓｈｏｃｋｅｔｔ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，９２：６５２２−６５２６（１９９５））。
【００６４】
加えて、ベクターは、例えば、以下、哺乳動物細胞内の安定または一過性トランスフェクタントの選択のためのネオマイシン遺伝子などの選択可能なマーカー遺伝子；高レベルの転写のためのヒトＣＭＶの最初期遺伝子由来のエンハンサー／プロモーター配列；ｍＲＮＡ安定性のためのＳＶ４０からの転写終結およびＲＮＡプロセシングシグナル；適切なエピソーム複製のためのＳＶ４０ポリオーマ複製起点およびＣｏｌＥ１；内部リボソーム結合部位（ＩＲＥＳ）、多用途の複数のクローニング部位；ならびにセンスおよびアンチセンスＲＮＡのインビトロ転写のためのＴ７およびＳＰ６  ＲＮＡプロモーターのいくつかまたは全てを含有してもよい。導入遺伝子を含有するベクターを生成するための好適なベクターおよび方法は、当該技術分野において周知かつ利用可能である。
【００６５】
本明細書に記載の方法を実施するのに有用なポリアデニル化シグナルの例には、ヒトコラーゲンＩポリアデニル化シグナル、ヒトコラーゲンＩＩポリアデニル化シグナル、およびＳＶ４０ポリアデニル化シグナルが含まれるが、これらに限定されない。
【００６６】
抗体のいずれかをコードする核酸を含む１つ以上のベクター（例えば、発現ベクター）が、抗体の産生のために好適な宿主細胞に導入されてもよい。宿主細胞は、抗体またはその任意のポリペプチド鎖の発現に好適な条件下で培養されてもよい。そのような抗体またはそのポリペプチド鎖は、従来の方法、例えば、親和性精製を介して、培養細胞によって（例えば、細胞または培養上清から）回収することができる。必要に応じて、抗体のポリペプチド鎖は、抗体の産生を可能にする好適な期間にわたって好適な条件下でインキュベートされてもよい。
【００６７】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の抗体を調製するための方法は、本明細書に記載の抗体の重鎖および軽鎖の両方をコードする組換え発現ベクターを伴う。組換え発現ベクターは、従来の方法、例えば、リン酸カルシウム媒介トランスフェクションによって、好適な宿主細胞（例えば、ｄｈｆｒ−ＣＨＯ細胞）に導入されてもよい。陽性形質転換体宿主細胞を選択し、抗体を形成する２つのポリペプチド鎖の発現を可能にする好適な条件下で培養してもよく、抗体は、細胞または培養培地から回収することができる。必要に応じて、宿主細胞から回収された２本の鎖は、抗体の形成を可能にする好適な条件下でインキュベートされてもよい。
【００６８】
一例では、２つの組換え発現ベクターが提供され、一方は抗免疫細胞受容体抗体の重鎖をコードし、他方は同じ抗体の軽鎖をコードする。２つの組換え発現ベクターの両方は、従来の方法、例えば、リン酸カルシウム媒介トランスフェクションによって、好適な宿主細胞（例えば、ｄｈｆｒ−ＣＨＯ細胞）に導入されてもよい。あるいは、発現ベクターの各々が、好適な宿主細胞に導入されてもよい。陽性形質転換体を選択し、抗体のポリペプチド鎖の発現を可能にする好適な条件下で培養してもよい。２つの発現ベクターが同じ宿主細胞に導入される場合、そこで産生される抗体は、宿主細胞または培養培地から回収することができる。必要に応じて、宿主細胞または培養培地からポリペプチド鎖を回収し、その後、抗体の形成を可能にする好適な条件下でインキュベートしてもよい。２つの発現ベクターが異なる宿主細胞に導入される場合、それらの各々は、対応する宿主細胞または対応する培養培地から回収することができる。その後、２つのポリペプチド鎖は、抗体の形成に好適な条件下でインキュベートされてもよい。
【００６９】
標準的な分子生物学技術を使用して、組換え発現ベクターを調製し、宿主細胞をトランスフェクトし、形質転換体を選択し、宿主細胞を培養し、培養培地から抗体を回収する。例えば、いくつかの抗体は、タンパク質Ａまたはタンパク質Ｇ結合マトリックスによる親和性クロマトグラフィーによって単離することができる。
【００７０】
本明細書に記載の抗体の生物活性は、当該技術分野において既知であるアッセイまたは本明細書に記載のアッセイを使用して検証することができる。
【００７１】
（ｉｉｉ）薬学的組成物
本明細書に記載の抗体を薬学的に許容される担体（賦形剤）と混合して、標的疾患の治療に使用するための薬学的組成物を形成することができる。「許容される」は、担体が組成物の活性成分と適合し（かつ好ましくは活性成分を安定化することができ）、治療される対象にとって有害であってはならないことを意味する。緩衝液を含む薬学的に許容される賦形剤（担体）は、当該技術分野において周知である。例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｙ２０ｔｈ  Ｅｄ．（２０００）Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ  Ｗｉｌｌｉａｍｓ  ａｎｄ  Ｗｉｌｋｉｎｓ，Ｅｄ．Ｋ．Ｅ．Ｈｏｏｖｅｒを参照されたい。
【００７２】
本方法で使用される薬学的組成物は、凍結乾燥製剤または水溶液の形態の薬学的に許容される担体、賦形剤、または安定剤を含んでもよい。（Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｙ２０ｔｈ  Ｅｄ．（２０００）Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ  Ｗｉｌｌｉａｍｓ  ａｎｄ  Ｗｉｌｋｉｎｓ，Ｅｄ．Ｋ．Ｅ．Ｈｏｏｖｅｒ）。許容される担体、賦形剤、または安定剤は、使用される投薬量および濃度でレシピエントにとって非毒性であり、かつリン酸、クエン酸、および他の有機酸などの緩衝液；アスコルビン酸およびメチオニンを含む抗酸化剤；保存剤（塩化オクタデシルジメチルベンジルアンモニウム；塩化ヘキサメトニウム；塩化ベンザルコニウム；塩化ベンゼトニウム；フェノール、ブチル、もしくはベンジルアルコール；メチルもしくはプロピルパラベンなどのアルキルパラベン；カテコール；レゾルシノール；シクロヘキサノール；３−ペンタノール；およびｍ−クレゾールなど）；低分子量（約１０残基未満）ポリペプチド；血清アルブミン、ゼラチン、もしくは免疫グロブリンなどのタンパク質；ポリビニルピロリドンなどの親水性ポリマー；グリシン、グルタミン、アスパラギン、ヒスチジン、アルギニン、もしくはリジンなどのアミノ酸；単糖類、二糖類、および他の炭水化物（グルコース、マンノース、もしくはデキストランを含む）；ＥＤＴＡなどのキレート剤；スクロース、マンニトール、トレハロース、もしくはソルビトールなどの糖類；ナトリウムなどの塩形成性対イオン；金属錯体（例えば、Ｚｎ−タンパク質錯体）；ならびに／またはＴＷＥＥＮ（商標）、ＰＬＵＲＯＮＩＣＳ（商標）、もしくはポリエチレングリコール（ＰＥＧ）などの非イオン性界面活性剤を含んでもよい。
【００７３】
いくつかの例では、本明細書に記載の薬学的組成物は、Ｅｐｓｔｅｉｎ，ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ８２：３６８８（１９８５）、Ｈｗａｎｇ，ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ７７：４０３０（１９８０）、ならびに米国特許第４，４８５，０４５号および同第４，５４４，５４５号に記載のものなどの当該技術分野において既知である方法によって調製することができる抗体（またはコーディング核酸）を含有するリポソームを含む。増強した循環時間を有するリポソームは、米国特許第５，０１３，５５６号に開示されている。特に有用なリポソームは、ホスファチジルコリン、コレステロール、およびＰＥＧ誘導体化ホスファチジルエタノールアミン（ＰＥＧ−ＰＥ）を含む脂質組成物による逆相蒸発法によって生成することができる。リポソームを、定義された孔径のフィルターを通して押し出して、所望の直径を有するリポソームをもたらす。
【００７４】
抗体またはコーディング核酸（複数可）はまた、コロイド薬物送達系（例えば、リポソーム、アルブミンミクロスフェア、マイクロエマルジョン、ナノ粒子、およびナノカプセル）中またはマクロエマルジョン中の、例えば、コアセルベーション技術または界面重合によって調製されたマイクロカプセル、例えば、ヒドロキシメチルセルロースまたはゼラチンマイクロカプセルおよびポリ（メチルメタシレート）マイクロカプセルにそれぞれ封入されてもよい。そのような技術は、当該技術分野において既知であり、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ，Ｔｈｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｙ２０ｔｈ  Ｅｄ．Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ（２０００）を参照されたい。
【００７５】
他の例では、本明細書に記載の薬学的組成物は、徐放性形式で製剤化されてもよい。徐放性調製物の好適な例には、抗体を含有する固体疎水性ポリマーの半透性マトリックスが含まれ、このマトリックスは、成形物品、例えば、フィルム、またはマイクロカプセルの形態である。徐放性マトリックスの例には、ポリエステル、ヒドロゲル（例えば、ポリ（２−ヒドロキシエチル−メタクリレート）またはポリ（ビニルアルコール））、ポリ乳酸（米国特許第３，７７３，９１９号）、Ｌ−グルタミン酸および７エチル−Ｌ−グルタメートのコポリマー、非分解性エチレン−酢酸ビニル、分解性乳酸−グリコール酸コポリマー（ＬＵＰＲＯＮ  ＤＥＰＯＴ（商標）（乳酸−グリコール酸コポリマーおよび酢酸リュープロリドからなる注射可能なミクロスフェア）など）、スクロース酢酸イソブチレート、ならびにポリ−Ｄ−（−）−３−ヒドロキシ酪酸が含まれる。
【００７６】
インビボ投与に使用される薬学的組成物は、無菌でなければならない。これは、例えば、無菌濾過膜を通した濾過によって容易に達成される。治療抗体組成物は一般に、無菌アクセスポートを有する容器、例えば、静脈注射用溶液袋、または皮下注射針によって貫通可能な栓を有するバイアルに入れられる。
【００７７】
本明細書に記載の薬学的組成物は、経口、非経口、もしくは直腸投与、または吸入もしくは吹送による投与のための、錠剤、丸剤、カプセル、粉末、顆粒、溶液もしくは懸濁液、または坐剤などの単位剤形であり得る。
【００７８】
錠剤などの固体組成物を調製するために、主要な活性成分を、薬学的担体、例えば、従来の錠剤化成分（コーンスターチ、ラクトース、スクロース、ソルビトール、タルク、ステアリン酸、ステアリン酸マグネシウム、リン酸二カルシウム、またはガムなど）、および他の薬学的希釈剤、例えば、水と混合して、本発明の化合物またはその非毒性の薬学的に許容される塩の均一な混合物を含有する固体製剤化前組成物を形成してもよい。これらの製剤化前組成物を均一なものと称する場合、組成物が錠剤、丸剤、およびカプセルなどの等しく有効な単位剤形に容易に細分化され得るように、活性成分が組成物全体を通して均等に分散されていることが意味される。その後、この固体製剤化前組成物は、０．１〜約５００ｍｇの本発明の活性成分を含有する上記の種類の単位剤形に細分化される。新規の組成物の錠剤または丸剤をコーティンまたは別様に配合して、延長した作用の利点をもたらす剤形を提供することができる。例えば、錠剤または丸剤は、内部投薬構成成分および外部投薬構成成分を含んでもよく、後者は、前者を覆うエンベロープの形態である。２つの構成成分は、胃内での崩壊に抵抗し、内部構成成分の無傷での十二指腸への通過またはその放出の遅延を可能にする腸溶層によって分離されていてもよい。そのような腸溶層またはコーティングには、いくつかのポリマー酸、ならびにポリマー酸とシェラック、セチルアルコール、および酢酸セルロースなどの材料との混合物を含む、様々な材料を使用することができる。
【００７９】
好適な界面活性剤には、特に、ポリオキシエチレンソルビタン（例えば、Ｔｗｅｅｎ（商標）２０、４０、６０、８０、または８５）および他のソルビタン（例えば、Ｓｐａｎ（商標）２０、４０、６０、８０、または８５）などの非イオン性薬剤が含まれる。界面活性剤を有する組成物は好都合に０．０５〜５％の界面活性剤を含み、これは０．１〜２．５％であり得る。必要に応じて、他の成分、例えば、マンニトールまたは他の薬学的に許容されるビヒクルが添加されてもよいことが理解されるだろう。
【００８０】
好適なエマルジョンは、Ｉｎｔｒａｌｉｐｉｄ（商標）、Ｌｉｐｏｓｙｎ（商標）、Ｉｎｆｏｎｕｔｒｏｌ（商標）、Ｌｉｐｏｆｕｎｄｉｎ（商標）、およびＬｉｐｉｐｈｙｓａｎ（商標）などの市販の脂肪エマルジョンを使用して調製することができる。活性成分は、事前に混合されたエマルジョン組成物中に溶解されても、あるいはそれは、油（例えば、ダイズ油、ベニバナ油、綿実油、ゴマ油、トウモロコシ油、またはアーモンド油）中およびリン脂質（例えば、卵のリン脂質、ダイズのリン脂質、またはダイズのレシチン）と水との混合時に形成されるエマルジョン中に溶解されてもよい。エマルジョンの浸透圧を調整するために、他の成分、例えば、グリセロールまたはグルコースが添加されてもよいことが理解されるだろう。好適なエマルジョンは典型的には、最大２０％、例えば、５〜２０％の油を含有するだろう。脂肪エマルジョンは、０．１〜１．０μｍ、特に０．１〜０．５μｍの脂肪滴を含んでもよく、５．５〜８．０の範囲内のｐＨを有する。
【００８１】
エマルジョン組成物は、抗体を、Ｉｎｔｒａｌｉｐｉｄ（商標）またはその構成成分（ダイズ油、卵のリン脂質、グリセロール、および水）と混合することによって調製されたものであってもよい。
【００８２】
吸入または吹送用の薬学的組成物には、薬学的に許容される水性溶媒もしくは有機溶媒またはそれらの混合物中の溶液および懸濁液、ならびに粉末が含まれる。液体または固体組成物は、上記に提示される好適な薬学的に許容される賦形剤を含有してもよい。いくつかの実施形態では、組成物は、局所または全身効果のために経口または経鼻呼吸経路によって投与される。
【００８３】
好ましくは無菌の薬学的に許容される溶媒中の組成物は、ガスの使用によって噴霧されてもよい。噴霧された溶液を噴霧デバイスから直接呼吸しても、または噴霧デバイスをフェイスマスク、テント、もしくは間欠的陽圧呼吸機に取り付けてもよい。溶液、懸濁液、または粉末組成物は、好適な様式で製剤を送達するデバイスから、好ましくは経口または経鼻投与され得る。
【００８４】
ＩＩＩ．治療用途
本明細書に記載の免疫細胞受容体およびＦｃγＲＩＩＢを架橋することができる治療剤（例えば、抗体）はいずれも、侵入病原体および／または罹患細胞（癌細胞など）に対する免疫応答を増強するのに有用である。
【００８５】
本明細書に開示される方法を実施するために、有効量の本明細書に記載の薬学的組成物は、静脈内投与などの好適な経路を介して（例えば、ボーラスとして、または一定期間にわたる持続注入によって）、筋肉内、腹腔内、脳脊髄内、皮下、関節内、滑膜内、くも膜下腔内、経口、吸入、または局所経路によって、治療を必要とする対象（例えば、ヒト）に投与することができる。ジェット噴霧器および超音波噴霧器を含む液体製剤用の市販の噴霧器が、投与に有用である。液体製剤は直接噴霧することができ、凍結乾燥粉末は再構成後に噴霧することができる。あるいは、本明細書に記載の抗体は、フルオロカーボン製剤および定量噴霧式吸入器を使用してエアロゾル化しても、凍結乾燥および粉砕された粉末として吸入してもよい。
【００８６】
本明細書に記載の方法によって治療される対象は、哺乳動物、より好ましくはヒトであり得る。哺乳動物には、家畜、競技用動物、ペット、霊長類、ウマ、イヌ、ネコ、マウス、およびラットが含まれるが、これらに限定されない。場合によっては、対象は、肺癌、胃癌、肝臓癌、乳癌、皮膚癌、膵臓癌、脳癌、前立腺癌、膀胱癌、もしくは結腸直腸癌を含むがこれらに限定されない癌などの、細胞媒介性疾患もしくは障害を有するか、またはそのリスクがあるヒト患者である。
【００８７】
本明細書で使用される場合、「有効量」は、単独でまたは１つ以上の他の活性薬剤との併用で、対象に治療効果を与えるのに必要とされる各活性薬剤の量を指す。いくつかの実施形態では、治療効果は、標的免疫受容体を調節（例えば、活性化）し、それによりその受容体によって媒介される免疫応答を引き起こすか、またはそれを増強する。ある量の抗体が治療効果を達成したかどうかの決定は、当業者にとって明らかであるだろう。有効量は、当業者によって認識されるように、治療される特定の病態、病態の重症度、個々の患者パラメータ（年齢、身体状態、サイズ、性別、および体重を含む）、治療期間、（存在する場合）併用療法の性質、特定の投与経路、ならびに医療従事者の知識および専門知識の範囲内の類似の因子に応じて変動する。これらの因子は、当業者にとって周知であり、通例の実験のみで対処することができる。一般に、個々の構成成分またはそれらの組み合わせの最大用量、つまり健全な医学的判断に従って最も高い安全用量が使用されることが好ましい。
【００８８】
半減期などの経験的な考慮事項が一般に、投薬量の決定に寄与するだろう。例えば、ヒト化抗体または完全ヒト抗体などのヒト免疫系に適合する抗体を使用して、抗体の半減期を延長し、宿主の免疫系による抗体の攻撃を予防することができる。投与の頻度は、治療の過程にわたって決定および調整されてもよく、一般に標的疾患／障害の治療および／または抑制および／または寛解および／または遅延に基づくが、必ずしもそうである必要はない。あるいは、抗体の徐放性持続製剤が適切であり得る。徐放を達成するための様々な製剤およびデバイスが、当該技術分野において既知である。
【００８９】
一例では、本明細書に記載の抗体の投薬量は、抗体の１回以上の投与（複数可）が与えられている個体において経験的に決定され得る。個体には、漸増投薬量のアンタゴニストが与えられる。アンタゴニストの効果を評価するために、疾患／障害の指標に従ってもよい。
【００９０】
一般に、本明細書に記載の抗体などの治療剤のいずれかの投与について、初回候補投薬量は、約２ｍｇ／ｋｇであり得る。本開示の目的では、典型的な１日投薬量は、上記に言及した因子に応じて、約０．１μｇ／ｋｇ〜３μｇ／ｋｇ〜３０μｇ／ｋｇ〜３００μｇ／ｋｇ〜３ｍｇ／ｋｇのいずれかから、３０ｍｇ／ｋｇ〜１００ｍｇ／ｋｇまたはそれ以上までの範囲であり得る。数日またはそれ以上にわたる反復投与では、病態に応じて、症状の所望の抑制が生じるまで、あるいは標的の疾患もしくは障害またはその症状の緩和に十分な治療レベルが達成されるまで、治療が持続される。例示的な投薬レジメンは、約２ｍｇ／ｋｇの初回用量を投与すること、その後、約１ｍｇ／ｋｇの毎週の維持用量の抗体を続けること、または隔週の約１ｍｇ／ｋｇの維持用量を続けることを含む。しかしながら、医師が達成を望む薬物動態の減衰のパターンに応じて、他の投薬レジメンが有用であり得る。例えば、１週間に１〜４回の投薬が企図される。いくつかの実施形態では、約３μｇ／ｍｇ〜約２ｍｇ／ｋｇの範囲の投薬（約３μｇ／ｍｇ、約１０μｇ／ｍｇ、約３０μｇ／ｍｇ、約１００μｇ／ｍｇ、約３００μｇ／ｍｇ、約１ｍｇ／ｋｇ、および約２ｍｇ／ｋｇなど）が使用されてもよい。いくつかの実施形態では、投薬頻度は、１週間に１回、２週間に１回、４週間に１回、５週間に１回、６週間に１回、７週間に１回、８週間に１回、９週間に１回、または１０週間に１回、あるいは１ヶ月に１回、２ヶ月に１回、もしくは３ヶ月に１回、またはそれ以上である。この療法の進行は、従来の技術およびアッセイによって容易に監視される。投薬レジメン（使用される抗体を含む）は、経時的に変動し得る。
【００９１】
いくつかの実施形態では、正常体重の成人患者に対して、約０．３〜５．００ｍｇ／ｋｇの範囲の用量が投与され得る。いくつかの例では、本明細書に記載の抗体などの治療剤の投薬量は、１０ｍｇ／ｋｇであり得る。特定の投薬レジメン、すなわち、用量、タイミング、および反復は、特定の個体およびその個体の病歴、ならびに個々の薬剤の特性（薬剤の半減期、および当該技術分野において周知である他の考慮事項など）に依存するだろう。
【００９２】
本開示の目的では、本明細書に記載の抗体の適切な投薬量は、用いられる特定の抗体（単数）、抗体（複数）、および／または非抗体ペプチド（もしくはその組成物）、疾患／障害の種類および重症度、抗体が予防目的または治療目的で投与されるかどうか、以前の療法、患者の病歴およびアンタゴニストに対する応答、ならびに担当医の裁量に依存するだろう。典型的には、臨床医は、所望の結果を達成する投薬量に達するまで抗体を投与するだろう。いくつかの実施形態では、所望の結果は、血栓症の減少である。投薬量が所望の結果をもたらしたかどうかを決定する方法は、当業者にとって明らかであろう。１つ以上の抗体の投与は、例えば、レシピエントの生理学的状態、投与の目的が治療であるか予防であるか、および熟練した医師にとって既知である他の因子に応じて、持続的または間欠的であり得る。抗体の投与は、予め選択された期間にわたって本質的に持続的であっても、例えば、標的疾患または障害の発症前、発症中、または発症後の一連の間隔を空けた用量であってもよい。
【００９３】
本明細書で使用される場合、「治療すること」という用語は、障害、疾患の症状、または疾患もしくは障害に対する素因の治癒、治療、緩和、軽減、改変、是正、寛解、改善、またはそれへの作用を目的として、標的疾患もしくは障害、疾患／障害の症状、または疾患／障害に対する素因を有する対象に、１つ以上の活性薬剤を含む組成物を適用または投与することを指す。
【００９４】
標的疾患／障害の緩和には、疾患の発症もしくは進行の遅延、または疾患の重症度の低減が含まれる。疾患の緩和は、必ずしも治癒的な結果を必要としない。本明細書で使用される場合、標的疾患または障害の発症を「遅延させること」は、疾患の進行を保留、妨害、減速、遅延、安定化、および／または延期することを意味する。この遅延は、疾患の病歴および／または治療される個体に応じて、様々な期間の遅延であり得る。疾患の発症を「遅延」もしくは緩和させる方法、または疾患の発病を遅延させる方法は、その方法を使用しない場合と比較して、所与の時間枠内で疾患の１つ以上の症状を発症する可能性を低減し、かつ／または所与の時間枠内で症状の程度を低減する方法である。そのような比較は典型的には、統計学的に有意な結果を得るのに十分な数の対象を使用する臨床研究に基づく。
【００９５】
疾患の「発症」または「進行」は、疾患の初期症状および／または後に続く進行を意味する。疾患の発症は、当該技術分野において周知である標準的な臨床技術を使用して検出可能であり、評価することができる。しかしながら、発症はまた、検出不能であり得る進行も指す。この開示の目的では、発症または進行は、症状の生物学的経過を指す。「発症」には、発生、再発、および発病が含まれる。本明細書で使用される場合、標的疾患または障害の「発病」または「発生」には、初期発病および／または再発が含まれる。
【００９６】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の抗体は、標的受容体の活性をインビボで少なくとも２０％（例えば、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、またはそれ以上）活性化するのに十分な量で、治療を必要とする対象に投与される。
【００９７】
医学の当業者にとって既知である従来の方法を使用して、治療される疾患の種類または疾患の部位に応じて、対象に薬学的組成物を投与することができる。この組成物はまた、他の従来の経路、例えば、経口、非経口、吸入スプレー、局所、直腸、経鼻、頬側、膣内、または埋め込みリザーバーを介して投与されてもよい。本明細書で使用される場合、「非経口」という用語には、皮下、皮内、静脈内、筋肉内、関節内、動脈内、滑膜内、胸骨内、くも膜下腔内、病巣内、および頭蓋内注射または注入技術が含まれる。加えて、それは、１ヶ月、３ヶ月、または６ヶ月間の持効性の注射可能または生分解性材料および方法の使用などの、注射可能な持効性投与経路を介して対象に投与されてもよい。いくつかの例では、薬学的組成物は、眼内または硝子体内投与される。
【００９８】
注射可能な組成物は、植物油、ジメチルアクタミド、ジメチルホルムアミド、乳酸エチル、炭酸エチル、ミリスチン酸イソプロピル、エタノール、ならびにポリオール（グリセロール、プロピレングリコール、および液体ポリエチレングリコールなど）などの様々な担体を含有し得る。静脈内注射では、水溶性抗体は点滴法によって投与されてもよく、それにより抗体および生理学的に許容される賦形剤を含有する薬学的製剤が注入される。生理学的に許容される賦形剤には、例えば、５％のデキストロース、０．９％の食塩水、リンゲル液、または他の好適な賦形剤が含まれ得る。筋肉内調製物、例えば、抗体の好適な可溶性塩形態の無菌製剤は、注射用水、０．９％の食塩水、または５％のグルコース溶液などの薬学的賦形剤中に溶解させ、投与することができる。
【００９９】
本明細書に記載の方法で使用される特定の投薬レジメン、すなわち、用量、タイミング、および反復は、特定の対象およびその対象の病歴に依存するだろう。
【０１００】
いくつかの実施形態では、１つ以上の抗体、または抗体と別の好適な治療剤との組み合わせが、治療を必要とする対象に投与され得る。抗体はまた、薬剤の有効性を増強および／または補完するように機能する他の薬剤と組み合わせて使用してもよい。
【０１０１】
標的疾患／障害の治療効果は、当該技術分野において周知である方法によって評価することができる。
【０１０２】
本明細書に記載の治療剤は、癌などの標的疾患に対する他の種類の療法と組み合わせて利用してもよい。追加の抗癌療法には、化学療法、手術、放射線、および遺伝子療法などが含まれる。第２の治療剤が使用される場合、そのような薬剤は、免疫細胞受容体およびＦｃγＲＩＩＢを架橋する本明細書に記載の治療剤と同時または（任意の順序で）連続的に投与することができる。
【０１０３】
追加の治療剤と同時投与される場合、各薬剤の好適な治療有効投薬量は、相加作用または相乗効果のために低下し得る。
【０１０４】
本開示の治療は、例えば、（ＧＶＡＸ、ＤＣ系ワクチンなどを含むがこれらに限定されない）治療ワクチンまたは（ＣＴＬＡ４、ＰＤ１、ＬＡＧ３、ＴＩＭ３などを遮断する薬剤を含むがこれらに限定されない）チェックポイント阻害剤などの他の免疫調節治療と組み合わせることができる。あるいは、本開示の治療は、化学療法剤、例えば、ピリミジン類似体（５−フルオロウラシル、フロクスウリジン、カペシタビン、ゲムシタビン、およびシタラビン）、プリン類似体、葉酸アンタゴニストおよび関連阻害剤（メルカプトプリン、チオグアニン、ペントスタチン、および２−クロロデオキシアデノシン（クラドリビン））；ビンカアルカロイド（ビンブラスチン、ビンクリスチン、およびビノレルビン）などの天然物、タキサン（パクリタキセル、ドセタキセル）、ビンクリスチン、ビンブラスチン、ノコダゾール、エポチロン、およびナベルビンなどの微小管崩壊剤、エピジポドフィロトキシン（エトポシド、テニポシド）、ＤＮＡ損傷剤（アクチノマイシン、アムサクリン、アントラサイクリン、ブレオマイシン、ブスルファン、カンプトテシン、カルボプラチン、クロラムブシル、シスプラチン、シクロホスファミド、サイトキサン、ダクチノマイシン、ダウノルビシン、ドキソルビシン、エピルビシン、ヘキサメチネラミンオキサリプラチン、イフォスファミン、メルファラン、メルクロレタミン、マイトマイシン、ミトキサントロン、ニトロソウレア、プリカマイシン、プロカルバジン、タキソール、タキソテール、テニポシド、トリエチレンチオホスホラミド、およびエトポシド（ＶＰ１６））を含む、抗増殖剤／有糸分裂阻害剤；ダクチノマイシン（アクチノマイシンＤ）、ダウノルビシン、ドキソルビシン（アドリアマイシン）、イダルビシン、アントラサイクリン、ミトキサントロン、ブレオマイシン、プリカマイシン（ミトラマイシン）、およびマイトマイシンなどの抗生物質；酵素（Ｌ−アスパラギンを全身的に代謝し、それら独自のアスパラギンを合成する能力を有しない細胞を取り除く、Ｌ−アスパラギナーゼ）；抗血小板剤；ナイトロジェンマスタード（メクロレタミン、シクロホスファミドおよび類似体、メルファラン、クロラムブシル）、エチレンイミン、ならびにメチルメラミン（ヘキサメチルメラミンおよびチオテパ）、アルキルスルホネート−ブスルファン、ニトロソウレア（カルムスチン（ＢＣＮＵ）および類似体、ストレプトゾシン）、トラゼン−ダカルバジニン（ＤＴＩＣ）などの抗増殖／分裂阻害アルキル化剤；葉酸類似体（メトトレキサート）などの抗増殖／分裂阻害代謝拮抗剤；白金配位錯体（シスプラチン、カルボプラチン）、プロカルバジン、ヒドロキシウレア、ミトタン、アミノグルテチミド；ホルモン、ホルモン類似体（エストロゲン、タモキシフェン、ゴセレリン、ビカルタミド、ニルタミド）、およびアロマターゼ阻害剤（レトロゾール、アナストロゾール）；抗凝固剤（ヘパリン、合成ヘパリン塩、およびトロンビンの他の阻害剤）；線維素溶解剤（組織プラスミノーゲン活性化因子、ストレプトキナーゼ、およびウロキナーゼなど）、アスピリン、ジピリダモール、チクロピジン、クロピドグレル、アブシキシマブ；抗遊走剤；抗分泌剤（ブレベルジン）；免疫抑制剤（シクロスポリン、タクロリムス（ＦＫ−５０６）、シロリムス（ラパマイシン）、アザチオプリン、ミコフェノール酸モフェチル）；抗血管新生化合物（例えば、ＴＮＰ−４７０、ゲニステイン、ベバシズマブ）および成長因子阻害剤（例えば、線維芽細胞成長因子（ＦＧＦ）阻害剤）；アンジオテンシン受容体遮断剤；一酸化窒素ドナー；アンチセンスオリゴヌクレオチド；抗体（トラスツズマブ）；細胞周期阻害剤および分化誘導剤（トレチノイン）；ｍＴＯＲ阻害剤、トポイソメラーゼ阻害剤（ドキソルビシン（アドリアマイシン）、アムサクリン、カンプトテシン、ダウノルビシン、ダクチノマイシン、エニポシド、エピルビシン、エトポシド、イダルビシンおよびミトキサントロン、トポテカン、イリノテカン）、コルチコステロイド（コルチゾン、デキサメタゾン、ヒドロコルチゾン、メチルペドニゾロン、プレドニゾン、およびプレニゾロン）；成長因子シグナル伝達キナーゼ阻害剤；ミトコンドリア機能障害誘導剤およびカスパーゼ活性化因子；ならびにクロマチン崩壊剤と組み合わせることができる。
【０１０５】
追加の有用な薬剤の例については、Ｐｈｙｓｉｃｉａｎ’ｓ  Ｄｅｓｋ  Ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ，５９．ｓｕｐ．ｔｈ  ｅｄｉｔｉｏｎ，（２００５），Ｔｈｏｍｓｏｎ  Ｐ  Ｄ  Ｒ，Ｍｏｎｔｖａｌｅ  Ｎ．Ｊ．、Ｇｅｎｎａｒｏ  ｅｔ  ａｌ．，Ｅｄｓ．Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｔｈｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｙ２０．ｓｕｐ．ｔｈ  ｅｄｉｔｉｏｎ，（２０００），Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ  Ｗｉｌｌｉａｍｓ  ａｎｄ  Ｗｉｌｋｉｎｓ，Ｂａｌｔｉｍｏｒｅ  Ｍｄ．、Ｂｒａｕｎｗａｌｄ  ｅｔ  ａｌ．，Ｅｄｓ．Ｈａｒｒｉｓｏｎ’ｓ  Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ  ｏｆ  Ｉｎｔｅｒｎａｌ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，１５．ｓｕｐ．ｔｈ  ｅｄｉｔｉｏｎ，（２００１），ＭｃＧｒａｗ  Ｈｉｌｌ，ＮＹ、Ｂｅｒｋｏｗ  ｅｔ  ａｌ．，Ｅｄｓ．Ｔｈｅ  Ｍｅｒｃｋ  Ｍａｎｕａｌ  ｏｆ  Ｄｉａｇｎｏｓｉｓ  ａｎｄ  Ｔｈｅｒａｐｙ，（１９９２），Ｍｅｒｃｋ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，Ｒａｈｗａｙ  Ｎ．Ｊも参照されたい。
【０１０６】
ＩＶ．キット
本開示はまた、本明細書に記載の治療剤のいずれか、例えば、ＦｃγＲＩＩＢに選択的に結合する本明細書に記載のＦｃバリアントを含有する抗ＴＮＦ抗体を使用して、所望の免疫応答の増強に使用するためのキットも提供する。
【０１０７】
いくつかの実施形態では、キットは、本明細書に記載の方法のいずれかに従う使用のための指示書を含んでもよい。含まれる指示書は、本明細書に記載されるものなどの標的疾患を治療、その発症を遅延、または緩和させるための治療剤の投与についての説明を含み得る。キットは、その個体が標的疾患を有するかどうかの特定に基づいた、治療に好適な個体の選択についての説明をさらに含み得る。さらに他の実施形態では、指示書は、標的疾患のリスクがある個体への、抗体などの治療剤の投与についての説明を含む。
【０１０８】
治療剤の使用に関する指示書には、一般に、意図される治療のための投薬量、投薬スケジュール、および投与経路に関する情報が含まれる。容器は、単位用量、バルクパッケージ（例えば、複数用量パッケージ）、または下位単位用量であり得る。本発明のキットに供給される指示書は典型的には、ラベルまたは添付文書に書かれた指示書（例えば、キットに含まれる紙シート）であるが、機械読み取り可能な指示書（例えば、磁気または光学記憶ディスクに担持される指示書）もまた許容される。
【０１０９】
ラベルまたは添付文書は、組成物が、癌などの標的疾患または障害の治療、その発病の遅延、および／または緩和に使用されることを示す。本明細書に記載の方法のいずれかを実施するための指示が、提供されてもよい。
【０１１０】
本発明のキットは、好適なパッケージ内にある。好適なパッケージには、バイアル、瓶、広口瓶、および柔軟なパッケージング（例えば、密封マイラー袋またはビニル袋）などが含まれるが、これらに限定されない。吸入器、経鼻投与デバイス（例えば、噴霧器）などの特定のデバイス、またはミニポンプなどの注入デバイスと組み合わせて使用するためのパッケージもまた企図される。キットは、無菌アクセスポートを有してもよい（例えば、容器は、静脈注射用溶液袋、または皮下注射針によって貫通可能な栓を有するバイアルであってもよい）。容器もまた、無菌アクセスポートを有してもよい（例えば、容器は、静脈注射用溶液袋、または皮下注射針によって貫通可能な栓を有するバイアルであってもよい）。組成物中の少なくとも１つの活性薬剤は、本明細書に記載のものなどの治療剤である。
【０１１１】
キットは任意で、緩衝液および判断用の情報などの追加の構成要素を提供してもよい。通常、キットは、容器と、容器上または容器に関連付けられたラベルまたは添付文書（複数可）を含む。いくつかの実施形態では、本発明は、上記のキットの内容物を含む製造物品を提供する。
【０１１２】
一般的な技術
別段示されない限り、本発明の実施は、（組換え技術を含む）分子生物学、微生物学、細胞生物学、生化学、および免疫学の従来の技術を用い、これらは、当該技術分野の範囲内である。そのような技術は、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，ｓｅｃｏｎｄ  ｅｄｉｔｉｏｎ（Ｓａｍｂｒｏｏｋ，ｅｔ  ａｌ．，１９８９）Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｐｒｅｓｓ、Ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ（Ｍ．Ｊ．Ｇａｉｔ，ｅｄ．，１９８４）；Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｈｕｍａｎａ  Ｐｒｅｓｓ、Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌｏｇｙ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｎｏｔｅｂｏｏｋ（Ｊ．Ｅ．Ｃｅｌｌｉｓ，ｅｄ．，１９９８）Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ、Ａｎｉｍａｌ  Ｃｅｌｌ  Ｃｕｌｔｕｒｅ（Ｒ．Ｉ．Ｆｒｅｓｈｎｅｙ，ｅｄ．，１９８７）、Ｉｎｔｒｏｄｕｃｔｉｏｎ  ｔｏ  Ｃｅｌｌ  ａｎｄ  Ｔｉｓｓｕｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ（Ｊ．Ｐ．Ｍａｔｈｅｒ  ａｎｄ  Ｐ．Ｅ．Ｒｏｂｅｒｔｓ，１９９８）Ｐｌｅｎｕｍ  Ｐｒｅｓｓ、Ｃｅｌｌ  ａｎｄ  Ｔｉｓｓｕｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ：Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｏｃｅｄｕｒｅｓ（Ａ．Ｄｏｙｌｅ，Ｊ．Ｂ．Ｇｒｉｆｆｉｔｈｓ，ａｎｄ  Ｄ．Ｇ．Ｎｅｗｅｌｌ，ｅｄｓ．，１９９３−８）Ｊ．Ｗｉｌｅｙ  ａｎｄ  Ｓｏｎｓ、Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ（Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ，Ｉｎｃ．）、Ｈａｎｄｂｏｏｋ  ｏｆ  Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ（Ｄ．Ｍ．Ｗｅｉｒ  ａｎｄ  Ｃ．Ｃ．Ｂｌａｃｋｗｅｌｌ，ｅｄｓ．）、Ｇｅｎｅ  Ｔｒａｎｓｆｅｒ  Ｖｅｃｔｏｒｓ  ｆｏｒ  Ｍａｍｍａｌｉａｎ  Ｃｅｌｌｓ（Ｊ．Ｍ．Ｍｉｌｌｅｒ  ａｎｄ  Ｍ．Ｐ．Ｃａｌｏｓ，ｅｄｓ．，１９８７）、Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ（Ｆ．Ｍ．Ａｕｓｕｂｅｌ，ｅｔ  ａｌ．，ｅｄｓ．，１９８７）、ＰＣＲ：Ｔｈｅ  Ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ  Ｃｈａｉｎ  Ｒｅａｃｔｉｏｎ，（Ｍｕｌｌｉｓ，ｅｔ  ａｌ．，ｅｄｓ．，１９９４）、Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ（Ｊ．Ｅ．Ｃｏｌｉｇａｎ  ｅｔ  ａｌ．，ｅｄｓ．，１９９１）、Ｓｈｏｒｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ（Ｗｉｌｅｙ  ａｎｄ  Ｓｏｎｓ，１９９９）、Ｉｍｍｕｎｏｂｉｏｌｏｇｙ（Ｃ．Ａ．Ｊａｎｅｗａｙ  ａｎｄ  Ｐ．Ｔｒａｖｅｒｓ，１９９７）、Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ（Ｐ．Ｆｉｎｃｈ，１９９７）、Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：ａ  ｐｒａｃｔｉｃａｌ  ａｐｐｒｏａｃｈ（Ｄ．Ｃａｔｔｙ．，ｅｄ．，ＩＲＬ  Ｐｒｅｓｓ，１９８８−１９８９）、Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：ａ  ｐｒａｃｔｉｃａｌ  ａｐｐｒｏａｃｈ（Ｐ．Ｓｈｅｐｈｅｒｄ  ａｎｄ  Ｃ．Ｄｅａｎ，ｅｄｓ．，Ｏｘｆｏｒｄ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  Ｐｒｅｓｓ，２０００）、Ｕｓｉｎｇ  ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：ａ  ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  ｍａｎｕａｌ（Ｅ．Ｈａｒｌｏｗ  ａｎｄ  Ｄ．Ｌａｎｅ（Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ，１９９９）、Ｔｈｅ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ（Ｍ．Ｚａｎｅｔｔｉ  ａｎｄ  Ｊ．Ｄ．Ｃａｐｒａ，ｅｄｓ．，Ｈａｒｗｏｏｄ  Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ，１９９５）などの文献で完全に説明されている。
【０１１３】
さらに詳述することなく、当業者であれば、上記の説明に基づいて、本発明を最大限に利用することができると考えられる。したがって、以下の特定の実施形態は、単なる例示として解釈されるべきであり、多少なりとも本開示の残りの部分を限定するものとして解釈されるべきではない。本明細書に引用される全ての出版物は、本明細書で言及される目的または主題のために参照により組み込まれる。
【０１１４】
実施例１．選択的なＦｃγＲ２Ｂ／ＣＤ３２Ｂ結合のためのヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ２、およびＩｇＧ４の操作
ＦｃγＲ２ｂ／ＣＤ３２Ｂへの結合活性に対するヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ２、およびＩｇＧ４のヒンジドメイン内の変異の影響を検証するために、本明細書に開示されるヒトＦｃバリアントＧ１ｍ１、Ｇ１ｍ２、Ｇ２ｍ１、Ｇ２ｍ２、Ｇ２ｍ１０、Ｇ４ｍ１、Ｇ４ｍ２、Ｇ４ｍ１０、およびＧ４ｍ２０を、抗ＣＤ１３７抗体のＶＨ断片ならびに対応するＩｇＧ１、Ｇ２、およびＧ４  ＣＨ１断片に連結させて、完全長ＩｇＧ重鎖を生成した。これらの変異体ＩｇＧ重鎖をクローニングし、抗ＣＤ１３７抗体の軽鎖と同時発現させ、標準的な分子生物学および抗体プロトコルを使用して精製した。ＶＨ−ＣＨ１断片（ＶＨドメインが斜体になっている）および軽鎖のアミノ酸配列を、以下に提供する。
ＶＨ−ＣＨ１（ＩｇＧ１）：
ＥＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＥＳＬＲＩＳＣＫＧＳＧＹＳＦＳＴＹＷＩＳＷＶＲＱＭＰＧＫＧＬＥＷＭＧＫＩＹＰＧＤＳＹＴＮＹＳＰＳＦＱＧＱＶＴＩＳＡＤＫＳＩＳＴＡＹＬＱＷＳＳＬＫＡＳＤＴＡＭＹＹＣＡＲＧＹＧＩＦＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＳＳＫＳＴＳＧＧＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＱＴＹＩＣＮＶＮＨＫＰＳＮＴＫ（配列番号６０）
ＶＨ−ＣＨ１（ＩｇＧ２）：
ＥＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＥＳＬＲＩＳＣＫＧＳＧＹＳＦＳＴＹＷＩＳＷＶＲＱＭＰＧＫＧＬＥＷＭＧＫＩＹＰＧＤＳＹＴＮＹＳＰＳＦＱＧＱＶＴＩＳＡＤＫＳＩＳＴＡＹＬＱＷＳＳＬＫＡＳＤＴＡＭＹＹＣＡＲＧＹＧＩＦＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＣＳＲＳＴＳＥＳＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＮＦＧＴＱＴＹＴＣＮＶＤＨＫＰＳＮＴＫ（配列番号６１）
ＶＨ−ＣＨ１（ＩｇＧ４）：
ＥＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＥＳＬＲＩＳＣＫＧＳＧＹＳＦＳＴＹＷＩＳＷＶＲＱＭＰＧＫＧＬＥＷＭＧＫＩＹＰＧＤＳＹＴＮＹＳＰＳＦＱＧＱＶＴＩＳＡＤＫＳＩＳＴＡＹＬＱＷＳＳＬＫＡＳＤＴＡＭＹＹＣＡＲＧＹＧＩＦＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＣＳＲＳＴＳＥＳＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＫＴＹＴＣＮＶＤＨＫＰＳＮＴＫ（配列番号６２）
軽鎖：
ＳＹＥＬＴＱＰＰＳＶＳＶＳＰＧＱＴＡＳＩＴＣＳＧＤＮＩＧＤＱＹＡＨＷＹＱＱＫＰＧＱＳＰＶＬＶＩＹＱＤＫＮＲＰＳＧＩＰＥＲＦＳＧＳＮＳＧＮＴＡＴＬＴＩＳＧＴＱＡＭＤＥＡＤＹＹＣＡＴＹＴＧＦＧＳＬＡＶＦＧＧＧＴＫＬＴＶＬＧＱＰＫＡＡＰＳＶＴＬＦＰＰＳＳＥＥＬＱＡＮＫＡＴＬＶＣＬＩＳＤＦＹＰＧＡＶＴＶＡＷＫＡＤＳＳＰＶＫＡＧＶＥＴＴＴＰＳＫＱＳＮＮＫＹＡＡＳＳＹＬＳＬＴＰＥＱＷＫＳＨＲＳＹＳＣＱＶＴＨＥＧＳＴＶＥＫＴＶＡＰＴＥＣＳ（配列番号６３）
【０１１５】
Ｏｃｔｅｔ  Ｒｅｄ９６Ｓｙｓｔｅｍ（ＦｏｒｔｅＢｉｏ、モデル番号Ｒｅｄ９６）を使用して、これらのＩｇＧ変異体を、ＦｃＲｎを含むヒトＦｃ受容体（ＦｃＲ）のパネルへの結合について試験した。ヒトＦｃＲタンパク質は市販のものを購入した（ＦｃＲｎ、ＭｅｄｎａＢｉｏ、Ｅ１０３２；ＦｃＲＩ、ＭｅｄｎａＢｉｏ、Ｅ１０３１；ＦｃＲＩＩＡ、ＭｅｄｎａＢｉｏ、Ｅ１０３３；ＦｃＲＩＩＢ／Ｃ、ＭｅｄｎａＢｉｏ、Ｅ１０３４；ＦｃＲＩＩＩＡ−Ｆ１５８、ＭｅｄｎａＢｉｏ、Ｅ１０３６；ＦｃＲＩＩＩＡ−Ｖ１５８、ＭｅｄｎａＢｉｏ、Ｅ１０３５；ＦｃＲＩＩＩＢ、ＭｅｄｎａＢｉｏ、Ｅ１０３７）。全てのＦｃγ受容体アッセイはｐＨ７．２で実行し、全てのＦｃＲｎアッセイはｐＨ６で実行した。Ｆｃγ受容体を、２０μｇ／ｍｌの濃度で抗ペンタＨＩＳ１Ｋ（ＦｏｒｔｅＢｉｏ、カタログ番号１８−５１２２）バイオセンサーに充填した。その後、充填したバイオセンサーを、３００ｎＭの開始濃度で、０．１％のＢＳＡ、０．０２％のＴｗｅｅｎ−２０（ｐＨ７．２）を含むＰＢＳ中、（本明細書に記載の対照および変異体を含む）試験ＩｇＧ分子の８点の１：３の一連の希釈に浸漬した。１：１の結合モデルおよび網羅的適合を使用して、動態分析を実行した。結果を、以下の表５および６に示す。
【表５】
2020527581.tif 000011
【表６】
2020527581.tif 000012
【０１１６】
この研究で試験した特定のＩｇＧ変異体、例えば、Ｇ４ｍ２は、ＦｃγＲＩＩＢ（ＣＤ３２Ｂ）に対する選択的結合活性を示し、インビボでのＩｇＧ分子の半減期にとって重要であるＦｃＲｎに対する結合活性もまた維持した。Ｇ１ｍ２、Ｇ２ｍ１、またはＧ４ｍ２０などの他のものは、全てのＦｃγＲに対する結合を喪失した。
【０１１７】
実施例２．追加のＩｇＧ１、ＩｇＧ２、およびＩｇＧ４変異体ならびに様々なＦｃ受容体に対する結合活性
本明細書に開示されるヒトＦｃバリアントＧ１ｍ５、Ｇ１ｍ７、Ｇ１ｍ８、Ｇ１ｍ９、Ｇ２ｍ５、Ｇ２ｍ７、Ｇ２ｍ８、Ｇ２ｍ９、Ｇ４ｍ５、Ｇ４ｍ７、Ｇ４ｍ８、およびＧ４ｍ９を、抗ＣＤ１３７抗体のＶＨ断片ならびに対応するＩｇＧ１、Ｇ２、およびＧ４  ＣＨ１断片に連結させて、完全長ＩｇＧ重鎖を生成した。上記の実施例１を参照されたい。これらの変異体ＩｇＧ重鎖をクローニングし、抗ＣＤ１３７抗体の軽鎖と同時発現させ（上記の実施例１を参照されたい）、標準的な分子生物学および抗体プロトコルを使用して精製した。結果を、以下の表７〜９に示す。
【表７】
2020527581.tif 000013
【表８】
2020527581.tif 000014
【表９】
2020527581.tif 000015
【０１１８】
実施例３．ＦｃγＲＩＩＢ（ＣＤ３２Ｂ）に対する選択的結合を増強するための複合変異を有する例示的なＩｇＧ変異体
本明細書に開示されるヒトＦｃバリアントＧ１ｍ１５、Ｇ１ｍ１７、Ｇ１ｍ１８、Ｇ１ｍ１９、Ｇ２ｍ２５、Ｇ２ｍ２７、Ｇ２ｍ２８、Ｇ４ｍ１５、Ｇ４ｍ１７、Ｇ４ｍ１８、およびＧ４ｍ１９、Ｇ４ｍ２５、Ｇ４ｍ２７、Ｇ４ｍ２８、およびＧ４ｍ２９を、抗ＣＤ１３７抗体のＶＨ断片ならびに対応するＩｇＧ１、Ｇ２、およびＧ４  ＣＨ１断片に連結させて、完全長ＩｇＧ重鎖を生成した。上記の実施例１を参照されたい。これらのＦｃバリアントは、ヒンジドメイン内の１つまたは変異と、ＣＨ２および／またはＣＨ３ドメイン内の１つ以上の変異との組み合わせを含有する。これらの変異体ＩｇＧ重鎖をクローニングし、抗ＣＤ１３７抗体の軽鎖と同時発現させ（上記の実施例１を参照されたい）、標準的な分子生物学および抗体プロトコルを使用して精製した。結果を、以下の表１０〜１２に示す。
【０１１９】
実施例４．細胞性ＦｃγＲに対するヒトＩｇＧ変異体の結合活性の決定
細胞性Ｆｃ受容体に対するヒトＩｇＧ変異体の結合活性を決定するために、当該技術分野において既知であるレンチウイルス送達系を使用してＣＨＯ細胞を遺伝子操作して、ヒトＦｃγＲ（ＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩＡ（Ｈ１３１）、ＦｃγＲＩＩＡ（Ｒ１３１）、ＦｃγＲＩＩＢ、ＦｃγＲＩＩＣ、およびＦｃγＲＩＩＩ）を発現させた。
【０１２０】
Ｇ１ｍ−２、Ｇ１ｍ−４、Ｇ１ｍＡＡ、Ｇ１ｍＡＧ、Ｇ２ｍ−１  Ｇ２ｍ−４、Ｇ２ｍ１５、Ｇ２ｍ１７、Ｇ２ｍ１７、Ｇ２ｍ１８、Ｇ２ｍ１９、Ｇ２ｍ２０、Ｇ２ｍ２７、Ｇ２ｍ２８、Ｇ４ｍ−１、Ｇ４ｍ−２、Ｇ４３０、およびＧ４ＰＥ（上記に提供したアミノ酸配列）を含むＩｇＧ  Ｆｃ変異体を、本明細書の開示に従って設計および構築した。これらのＩｇＧ変異体は、示されるように、上部ヒンジドメインまたは下部ヒンジドメインのいずれかに変異を含有する。
【０１２１】
異なるＦｃγＲに対するＩｇＧ変異体の結合のＦＡＣＳ分析のために、トリプシン−ＥＤＴＡを使用してＦｃγＲ過剰発現ＣＨＯ細胞を採取し、冷染色緩衝液（ＰＢＳ中３％のＢＳＡ）中に懸濁した。染色緩衝液中に希釈した試験ＩｇＧ変異体を、細胞に添加した。混合物を４℃で２時間インキュベートした後、冷染色緩衝液で２回洗浄し、ＰＥ標識抗ヒトＩｇＧ中に再懸濁し、その後、４℃で２時間インキュベートした。混合物を染色緩衝液で２回洗浄し、ＦＡＣＳのためにＰＢＳ中２％のＰＦＡに再懸濁した。
【表１０】
2020527581.tif 000016
【表１１】
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【表１２】
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【０１２２】
図１Ａ〜１Ｗに示されるように、いくつかのヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ２、およびＩｇＧ４変異体は、細胞表面上に発現されるＦｃγＲに対する結合活性を示した。野生型対応物と比較した変異体のＦｃγ結合活性の変化の定性的な要約を、上記の表２〜４に示す。
【０１２３】
実施例５．細胞性ＦｃγＲＩＩＢに結合することができるヒトＩｇＧ変異体は、増強したアゴニスト活性を示した
細胞性ＦｃγＲ２Ｂに対する結合がＩｇＧ変異体のアゴニスト活性を増強することを検証するために、ＦｃγＲ２Ｂを発現するＣＨＯ細胞およびヒトＣＤ８陽性Ｔ細胞に関与する共培養アッセイを開発した。ＣＨＯ−ＦｃγＲＩＩＢ細胞を、９６ウェル細胞培養プレートに２×１０４個／ウェルで播種し、一晩インキュベートした。ヒトＣＤ８陽性Ｔ細胞を単離するために、健康なドナーからの新鮮な血液を等量のＤＰＢＳと穏やかに混合した。その後、血液試料をＦｉｃｏｌｌの下敷きの上に置き、ブレーキをかけずに、室温、１０００ｇで３０分間遠心分離した。ＰＢＭＣを含有するバフィーコートを新たな管に採取し、ＤＰＢＳで洗浄した。ＥａｓｙＳｅｐ（商標）ヒトＣＤ８＋Ｔ細胞単離キット（Ｓｔｅｍｃｅｌｌ番号１７９５３）をキットのマニュアルに従って使用して、ＣＤ８陽性Ｔ細胞をＰＢＭＣから単離した。ＲＰＭＩ培地中に懸濁した単離されたＣＤ８＋Ｔ細胞を、ＣＨＯ−ＦｃγＲＩＩＢ細胞とともにプレートに添加した。抗ヒトＣＤ３抗体ＯＫＴ３を、０．１ｕｇ／ｍｌの最終濃度になるように添加し、その後、所望の濃度に希釈した試験抗体を添加した。プレートを３日間培養した後、培養上清を採取して、ヒトＩＦＮ−ガンマＥＬＩＳＡ  Ｒｅａｄｙ−ＳＥＴ−ＧＯキット（ＥＢＩＯＳＣＩＥＮＣＥ、番号８８−７３１６−８８）を使用するＥＬＩＳＡによってＩＦＮｇ濃度を測定した。
【０１２４】
図２Ａ〜２Ｃに示されるように、いくつかの試験したＩｇＧ変異体は、ＩＦＮ−γの分泌によって証明されるように、ＣＨＯ−ＦｃγＲＩＩＢ細胞の存在下でヒトＣＤ８＋細胞を刺激した。
【０１２５】
実施例６．マウスモデルにおけるインビトロおよびインビボでのＩｇＧアイソタイプの影響
マウス４−１ＢＢ（ＣＤ１３７）、ＬＯＢ１２．３、および３Ｈ３に対する２つの異なる抗体を、詳細に調査した。これら２つの抗体を、マウスＩｇＧ１、ＦｃＲに結合する能力が低下していることが既知であるマウスＩｇＧ１  Ｎ２９７Ａ変異体（陰性対照として）、およびマウスＩｇＧ２ａを含む、様々なマウスＩｇＧアイソタイプとしてクローニングし、発現させた。
【０１２６】
マウスＣＤ８陽性Ｔ細胞を、溶液中の抗体によって刺激した。マウスＣＤ８  Ｔ細胞の典型的なインビトロ同時刺激アッセイでは、抗体ＬＯＢ１２．３は、インターフェロンガンマ分泌によって測定してＴ細胞を刺激することができなかった一方で、図３に示されるように、３Ｈ３抗体は、抗体アイソタイプに関わらずアゴニスト活性を呈した。
【０１２７】
インビボでの抗腫瘍活性および肝臓毒性を調査した。これら２つの抗体およびそれらのアイソタイプの活性プロファイルは、大きく異なっていた。マウス同系ＣＴ２６結腸直腸癌モデルでは、各抗体の最適なアイソタイプは異なるものの、ＬＯＢ１２．３および３Ｈ３の両方が、腫瘍の完全な拒絶を含む強固な抗腫瘍活性を示した。図４Ａ〜４Ｂ。ＬＯＢ１２．３は、インビトロでは明らかな同時刺激活性を示さなかったが、マウスＩｇＧ１アイソタイプである場合インビボでは効果的であり、これは、ＦｃγＲ２Ｂ媒介性架橋が効率的なアゴニスト活性をもたらすことを支持している。３Ｈ３は本質的にアゴニストであり、その活性はＦｃ媒介性架橋には依存しなかった。実際、Ｆｃ欠損変異体の３Ｈ３が、最も効果的であった。
【０１２８】
予想外の観察結果は、これらの抗体の肝臓毒性に対する差次的な影響であった。ＬＯＢ１２．３および３Ｈ３の両方が、腫瘍拒絶を誘導する上で効果的であったが、３Ｈ３のみが、治療した動物の血清試料中の肝臓酵素ＡＬＴの増加によって決定して、肝臓毒性を示した（図４Ｂ）。
【０１２９】
これらの実験データは、同時刺激アゴニスト抗体の治療指数の増加のためにアゴニスト抗体を選択および操作する潜在的な有用性を初めて示唆した。
【０１３０】
実施例７．キメラ抗体の薬物動態研究
選択されたキメラ抗体の薬物動態を研究するために、インビボ研究を実行した。ＰＢＳ中に製剤化した抗体を、尾静脈注射を介してＣ５７ＢＬ／６マウス（生後６〜７週間、１９〜２０ｇ、雄）に投与した。用量は、１〜３ｍｇ／ｋｇであった（１群あたりｎ＝４匹のマウス）。
【０１３１】
抗体の投与前、ならびに投与の１時間、２時間、４時間、８時間、１日、２日、３日、５日、８日、１１日、１５日、および２１日後に、血液試料を採取した。各時点あたり１０ｕＬの血液を抽出し、４０ｕＬのＰＢＳ−ＢＳＡ溶液に添加した。その後、試料をよく混合し、４℃、２０００ｇで５分間遠心分離した。上清を収集直後にドライアイス上に置き、分析まで約−７０℃で保存した。血液試料中の抗体濃度を、以下に簡潔に記載されるようにＥＬＩＳＡによって決定した。
【０１３２】
ＣＤ１３７タンパク質（ヒトＣＤ１３７−Ｈｉｓタグタンパク質（Ｓｉｎｏ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｃ．カタログ番号１０３７７−Ｈ０８Ｈ−１００）またはアカゲザルＣＤ１３７−Ｈｉｓ（Ｓｉｎｏ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｃ．カタログ番号９０３０５−Ｋ０８Ｈ−１００））を、１μｇ／ｍｌになるようにＰＢＳ中に希釈し、ＥＬＩＳＡプレート（Ｃｏｒｎｉｎｇ、カタログ番号９０１８、高結合）に５０μｌ／ウェルの濃度でコーティングするのに使用した。プレートを４℃で一晩インキュベートした。その後、プレートをデカントし、ＰＢＳ−Ｔで洗浄し、２００μｌ／ウェルのアッセイ希釈剤（１×ＰＢＳ／１％のＢＳＡ／０．０５％のＴｗｅｅｎ−２０／０．０５％のｐｒｏｃｌｉｎ３００）を添加した。室温で３時間インキュベートした後、プレートをＰＢＳ−Ｔで３回洗浄した。その後、０、０．０００００３、０．００００３、０．０００３、０．００３、０．０３、および０．３μｇ／ｍｌ（または約０、０．００００２、０．０００２、０．００２、０．０２、０．２、および２ｎＭ）になるようにアッセイ希釈剤中に希釈した抗体標準物とともに、適切な希釈度の試料をプレートに添加した（５０μｌ／ウェル）。プレートを３７℃で１時間インキュベートした後、ＰＢＳ−Ｔで３回洗浄した。１：１０，０００の希釈度の抗ヒトＩｇＧ−ＨＲＰ共役体（Ｂｅｔｈｙｌカタログ番号Ａ８０−３１９Ｐ）を、プレートに添加した（１００μｌ／ウェル）。プレートを３７℃で０．５時間インキュベートし、その後、ＰＢＳ−Ｔで３回洗浄した。ＴＭＢ基質溶液を添加した（１００μｌ／ウェル）。８分間発色させてから、１００μｌ／ウェルの２ＮのＨ２ＳＯ４で発色を停止させた。４５０ｎｍでの吸光度をＥＬＩＳＡリーダーで決定し、標準曲線の用量応答から抗体濃度を計算した。
【０１３３】
図５Ａ〜５Ｇは、１〜３ｍｇ／ｋｇの単回静脈内注射後のキメラ抗体の血漿抗体濃度を示す。調査したこれらの抗体の薬物動態パラメータを、以下の表１３に列挙し、これは、全てではないにしても、調査した変異体のほとんどが正常なＩｇＧ  ＰＫパラメータを改変しなかったことを示している。
【表１３】
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【０１３４】
他の実施形態
本明細書に開示される特徴の全ては、任意の組み合わせで組み合わせることができる。本明細書に開示される各特徴は、同じ、同等、または同様の目的を果たす代替的な特徴で置き換えることができる。したがって、別段明確に述べられない限り、開示される各特徴は、一般的な一連の同等または同様の特徴の例に過ぎない。
【０１３５】
上記の説明から、当業者は、本発明の本質的な特徴を容易に確認することができ、かつその趣旨および範囲から逸脱することなく、本発明の様々な変更および修正を行って、様々な用途および条件に適合させることができる。したがって、他の実施形態もまた、特許請求の範囲内である。
【図１Ａ】
2020527581.tif 000020
【図１Ｂ】
2020527581.tif 000021
【図１Ｃ】
2020527581.tif 000022
【図１Ｄ】
2020527581.tif 000023
【図１Ｅ】
2020527581.tif 000024
【図１Ｆ】
2020527581.tif 000025
【図１Ｇ】
2020527581.tif 000026
【図１Ｈ】
2020527581.tif 000027
【図１Ｉ】
2020527581.tif 000028
【図１Ｊ】
2020527581.tif 000029
【図１Ｋ】
2020527581.tif 000030
【図１Ｌ】
2020527581.tif 000031
【図１Ｍ】
2020527581.tif 000032
【図１Ｎ】
2020527581.tif 000033
【図１Ｏ】
2020527581.tif 000034
【図１Ｐ】
2020527581.tif 000035
【図１Ｑ】
2020527581.tif 000036
【図１Ｒ】
2020527581.tif 000037
【図１Ｓ】
2020527581.tif 000038
【図１Ｔ】
2020527581.tif 000039
【図１Ｕ】
2020527581.tif 000040
【図１Ｖ】
2020527581.tif 000041
【図１Ｗ】
2020527581.tif 000042
【図２Ａ】
2020527581.tif 000043
【図２Ｂ】
2020527581.tif 000044
【図２Ｃ】
2020527581.tif 000045
【図３】
2020527581.tif 000046
【図４Ａ】
2020527581.tif 000047
【図４Ｂ】
2020527581.tif 000048
【図５Ａ】
2020527581.tif 000049
【図５Ｂ】
2020527581.tif 000050
【図５Ｃ】
2020527581.tif 000051
【図５Ｄ】
2020527581.tif 000052
【図５Ｅ】
2020527581.tif 000053
【図５Ｆ】
2020527581.tif 000054
【図５Ｇ】
2020527581.tif 000055
【図５Ｈ】
2020527581.tif 000056
【配列表】
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【手続補正書】
【提出日】令和1年12月9日(2019.12.9)
【手続補正１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】配列表
【補正方法】追加
【補正の内容】
【配列表】
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【国際調査報告】
2020527581.tif 000057
2020527581.tif 000058
2020527581.tif 000059