(57)【要約】  本発明は、（ａ）本明細書で定義される通りのＲａｆ阻害剤又はその薬学的に許容し得る塩と、（ｂ）特に増殖性疾患の治療で使用するためのＭＥＫ阻害剤、特にトラメチニブとを含む医薬的組み合わせに関する。本発明は、増殖性疾患の治療のための医薬品の調製のためのこうした組み合わせの使用、増殖性疾患の治療を、それを必要とする対象において行う方法であって、共同で治療有効量の前記組み合わせを前記対象に投与することを含む方法、増殖性疾患の治療のためのこうした組み合わせの使用、こうした組み合わせを含む医薬組成物及びそれに対する市販用包装品にも関する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
式（Ｉ）
【化１】
2020518568.tif 000031
の化合物又はその薬学的に許容し得る塩であるＲａｆ阻害剤と、
（ｂ）ＭＥＫ阻害剤と
を含む医薬的組み合わせ。
【請求項２】
前記ＭＥＫ阻害剤は、トラメチニブ、ＰＤ０３２５９０１、ＰＤ１８４３５２、レファメチニブ、コビメチニブ、ＡＳ−７０１２５５、ＡＳ−７０１１７３、ピマセルチブ、ＲＤＥＡ４３６、ＲＯ４９８７６５５、ＲＧ７１６７及びＲＧ７４２０又はその薬学的に許容し得る塩若しくは溶媒和物を含む群から選択される、請求項１に記載の医薬的組み合わせ。
【請求項３】
前記ＭＥＫ阻害剤は、トラメチニブ又はその薬学的に許容し得る塩若しくは溶媒和物である、請求項１又は２に記載の医薬的組み合わせ。
【請求項４】
トラメチニブは、ジメチルスルホキシド溶媒和物の形態である、請求項３に記載の医薬的組み合わせ。
【請求項５】
同時、連続又は個別投与のためのものである、請求項１〜４のいずれか一項に記載の医薬的組み合わせ。
【請求項６】
固定された組み合わせである、請求項１〜５のいずれか一項に記載の医薬的組み合わせ。
【請求項７】
固定されていない組み合わせである、請求項１〜５のいずれか一項に記載の医薬的組み合わせ。
【請求項８】
請求項１〜７のいずれか一項に記載の医薬的組み合わせと、少なくとも１種の薬学的に許容し得る担体とを含む医薬組成物。
【請求項９】
癌の治療で使用するための、請求項１〜７のいずれか一項に記載の医薬的組み合わせ又は請求項８に記載の医薬組成物。
【請求項１０】
前記癌は、ＭＡＰＫ変異を発現するか、又は前記癌は、ＮＲＡＳ変異若しくはＫ−ＲＡＳ変異である、請求項９に記載の使用のための医薬的組み合わせ又は請求項９に記載の使用のための医薬組成物。
【請求項１１】
前記癌は、メラノーマ、非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）、大腸癌（ＣＲＣ）、卵巣癌、子宮頸癌又は膵管腺癌（ＰＡＤＣ）である、請求項９又は１０に記載の使用のための医薬的組み合わせ又は使用のための医薬組成物。
【請求項１２】
前記癌は、大腸癌（ＣＲＣ）である、請求項９又は１０に記載の使用のための医薬的組み合わせ又は使用のための医薬組成物。
【請求項１３】
前記癌は、メラノーマである、請求項９又は１０に記載の使用のための医薬的組み合わせ又は使用のための医薬組成物。
【請求項１４】
前記癌は、非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）である、請求項９又は１０に記載の使用のための医薬的組み合わせ又は使用のための医薬組成物。
【請求項１５】
前記癌は、ＭＵＴＹＨ関連ポリポーシス（ＭＡＰ）である大腸癌（ＣＲＣ）である、請求項９又は１０に記載の使用のための医薬的組み合わせ又は使用のための医薬組成物。
【請求項１６】
前記癌は、子宮頸癌である、請求項９又は１０に記載の使用のための医薬的組み合わせ又は使用のための医薬組成物。
【請求項１７】
前記癌は、卵巣癌である、請求項９又は１０に記載の使用のための医薬的組み合わせ又は使用のための医薬組成物。
【請求項１８】
前記癌は、膵管腺癌（ＰＡＤＣ）である、請求項９又は１０に記載の使用のための医薬的組み合わせ又は使用のための医薬組成物。
【請求項１９】
前記癌は、ＢＲＡＦ、ＮＲＡＳ、ＫＲＡＳ変異及びその組み合わせからなる群から選択される変異によって特徴付けられる、請求項９〜１８のいずれか一項に記載の使用のための医薬的組み合わせ又は使用のための医薬組成物。
【請求項２０】
前記癌は、ＫＲＡＳ変異ＮＳＣＬＣ（非小細胞肺癌）、ＮＲＡＳ変異メラノーマ、ＫＲＡＳ変異卵巣癌及びＫＲＡＳ変異膵癌（例えば、ＫＲＡＳ変異膵管腺癌（ＰＤＡＣ））からなる群から選択される、請求項９又は１０に記載の使用のための医薬的組み合わせ又は使用のための医薬組成物。
【請求項２１】
癌の治療で使用するための、式（Ｉ）
【化２】
2020518568.tif 000032
の化合物又はその薬学的に許容し得る塩と、トラメチニブ又はその薬学的に許容し得る塩若しくは溶媒和物とを含む医薬的組み合わせ。
【請求項２２】
前記癌は、Ｎ−ＲＡＳ変異メラノーマである、請求項２１に記載の使用のための医薬的組み合わせ。
【請求項２３】
前記癌は、ＮＳＣＬＣである、請求項２１に記載の使用のための医薬的組み合わせ。
【請求項２４】
前記ＮＳＣＬＣは、ＫＲＡＳ変異ＮＳＣＬＣ、ＢＲＡＦ変異ＮＳＣＬＣ又はＫＲＡＳ変異ＮＳＣＬＣとＢＲＡＦ変異ＮＳＣＬＣとの両方である、請求項２３に記載の使用のための医薬的組み合わせ。
【請求項２５】
前記ＮＳＣＬＣは、ＢＲＡＦ  Ｖ６００Ｅ変異又はＢＲＡＦ  非Ｖ６００Ｅ変異によって特徴付けられる、請求項２３に記載の使用のための医薬的組み合わせ。
【請求項２６】
前記癌は、進行した又は転移性の癌である、請求項２１〜２５のいずれか一項に記載の使用のための医薬的組み合わせ。
【請求項２７】
前記癌は、ＢＲＡＦ  Ｖ６００変異メラノーマ又はＢＲＡＦ  Ｖ６００変異ＮＳＣＬＣであり、任意選択で、前記メラノーマは、ＢＲＡＦ阻害剤、例えばダブラフェニブ若しくはベムラフェニブ及び／又はＭＥＫ阻害剤、例えばトラメチニブ若しくはコビメチニブでの治療にもはや応答していない、請求項２１に記載の使用のための医薬的組み合わせ。
【請求項２８】
前記癌は、ダブラフェニブとトラメチニブとの組み合わせでの治療に対して又はベムラフェニブとコビメチニブとの組み合わせでの治療に対して耐性であるＢＲＡＦ  Ｖ６００変異メラノーマである、請求項２７に記載の使用のための医薬的組み合わせ。
【請求項２９】
前記癌は、ダブラフェニブとトラメチニブとの組み合わせでの治療に対して耐性であるＢＲＡＦ  Ｖ６００変異ＮＳＣＬＣである、請求項２７に記載の使用のための医薬的組み合わせ。
【請求項３０】
前記癌、例えばＮＳＣＬＣ又はメラノーマは、標準治療後において又は有効な標準の治療法が存在しない人について進行している、請求項２１〜２７のいずれか一項に記載の使用のための医薬的組み合わせ。
【請求項３１】
トラメチニブ又はその薬学的に許容し得る塩若しくは溶媒和物との組み合わせ療法で使用するための、式（Ｉ）
【化３】
2020518568.tif 000033
の化合物又はその薬学的に許容し得る塩。
【請求項３２】
式（Ｉ）
【化４】
2020518568.tif 000034
の化合物又はその薬学的に許容し得る塩との組み合わせ療法で使用するための、トラメチニブ又はその薬学的に許容し得る塩若しくは溶媒和物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、（ａ）本明細書で定義される通りの式（Ｉ）の化合物若しくはその薬学的に許容し得る塩又は本明細書で定義される通りの式（ＩＩ）の化合物若しくはその薬学的に許容し得る塩からなる群から選択されるＲａｆ阻害剤と、（ｂ）ＭＥＫ阻害剤、特にトラメチニブ又はその薬学的に許容し得る塩若しくは溶媒和物とを含む医薬的組み合わせに関する。本発明は、（ａ）本明細書で定義される通りの式（Ｉ）の化合物若しくはその薬学的に許容し得る塩又は本明細書で定義される通りの式（ＩＩ）の化合物若しくはその薬学的に許容し得る塩からなる群から選択されるＲａｆ阻害剤と、トラメチニブ又はその薬学的に許容し得る塩若しくは溶媒和物とを含む医薬的組み合わせにも関する。
【０００２】
本発明は、増殖性疾患、特に癌の治療で使用するためのこうした組み合わせ、増殖性疾患、特に癌の治療のための医薬品の調製のためのこうした組み合わせの使用、増殖性疾患、特に癌の治療を、それを必要とする対象において行う方法であって、共同で治療有効量の前記組み合わせを前記対象に投与することを含む方法、増殖性疾患、特に癌の治療のためのこうした組み合わせの使用、こうした組み合わせを含む医薬組成物及びそれに対する市販用包装品にも関する。
【０００３】
本発明は、ＭＥＫ阻害剤、特にトラメチニブ又はその薬学的に許容し得る塩若しくは溶媒和物との組み合わせ療法で使用するための、本明細書で定義される通りの式（Ｉ）の化合物若しくはその薬学的に許容し得る塩又は本明細書で定義される通りの式（ＩＩ）の化合物若しくはその薬学的に許容し得る塩にも関する。本明細書で定義される通りの式（Ｉ）の化合物若しくはその薬学的に許容し得る塩との組み合わせ療法で使用するための、又は本明細書で定義される通りの式（ＩＩ）の化合物若しくはその薬学的に許容し得る塩との組み合わせ療法で使用するための、ＭＥＫ阻害剤、特にトラメチニブ又はその薬学的に許容し得る塩若しくは溶媒和物も本明細書で提供される。
【背景技術】
【０００４】
ＲＡＳ／ＲＡＦ／ＭＥＫ／ＥＲＫ又はＭＡＰＫ経路は、細胞の増殖、分化及び生存を誘導する重要なシグナル伝達カスケードである。この経路の調節不全は、多くの場合の腫瘍形成の根底にある。この経路は、低分子のＧタンパク質ＲＡＳがＧＤＰをＧＴＰと交換するのを続いて誘発する細胞外シグナルによって活性化される。活性化されたＲＡＳ低分子グアニジントリホスファターゼ（ＧＴＰアーゼ）は、ＲＡＦ（本明細書では「Ｒａｆ」とも呼ばれる）ファミリータンパク質（ＲＡＦ１としても公知であるＡＲＡＦ、ＢＲＡＦ及びＣＲＡＦ）の活性化を促進する。活性化されたＲＡＦタンパク質は、ＭＥＫ１／２タンパク質のリン酸化及び活性化をもたらし、続いて、これが細胞外シグナル制御キナーゼ（ＥＲＫ）をリン酸化及び活性化する。ＥＲＫ１／２タンパク質は、複数の転写因子を含む様々な基質をリン酸化し、増殖、分化、遊走、生存及び血管新生を含む重要な細胞活性を調節する。
【０００５】
ＭＡＰＫ経路の異常なシグナル伝達又は不適切な活性化は、メラノーマ、肺及び膵臓の癌を含む複数の腫瘍型において示されており、ＲＡＳ及びＢＲＡＦ（ｖ−Ｒａｆマウス肉腫ウイルス癌遺伝子ホモログＢ１の活性化変異を含むいくつかの異なる機構を通して起こる可能性がある。ＧＴＰアーゼのスーパーファミリーであるＲＡＳには、機能獲得型変異として公知である種々の単一点突然変異によってオンになる（活性化される）可能性がある調節されるシグナル伝達タンパク質であるＫＲＡＳ（ｖ−Ｋｉ−ｒａｓ２カーステンラット肉腫ウイルス癌遺伝子ホモログ）が含まれる。ＲＡＳ変異、特に機能獲得型（ＧＯＦ）変異は、すべての癌の９〜３０％において検出されており、ＫＲＡＳ変異は、有病率が最も高く（８６％）、ＮＲＡＳ（１１％）がそれに続き、ＨＲＡＳ（３％）は、稀である（Ｃｏｘ  ＡＤ，ｅｔ  ａｌ，Ｎａｔ  Ｒｅｖ  Ｄｒｕｇ  Ｄｉｓｃｏｖ  ２０１４；１３（１１）：８２８−５１）。活性化ＫＲＡＳ変異は、メラノーマ（Ｆｅｄｏｒｅｎｋｏ  ＩＶ，ｅｔ  ａｌ，Ｂｒ  Ｊ  Ｃａｎｃｅｒ  ２０１５；１１２（２）：２１７−２６）、膵癌（ｄｉ  Ｍａｇｌｉａｎｏ  ＭＰ＆Ｌｏｇｓｄｏｎ  ＣＤ，Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌｏｇｙ  ２０１３；１４４（６）：１２２０−９）、大腸癌（Ｋｎｉｃｋｅｌｂｅｉｎ  Ｋ＆Ｚｈａｎｇ  Ｌ，Ｇｅｎｅｓ  Ｄｉｓ  ２０１５；２（１）：４−１２）及び卵巣癌（Ｎａｋａｙａｍａ  Ｎ，ｅｔ  ａｌ，Ｂｒ  Ｊ  Ｃａｎｃｅｒ  ２００８；９９（１２）：２０２０−８）にも多くの場合に見られる。
【０００６】
ＲＡＦ、ＭＥＫ及びＥＲＫキナーゼなど、ＲＡＳの下流エフェクターを標的にする阻害剤は、ＲＡＳ誘導性の腫瘍における有意な臨床活性を示していない。例えば、ＢＲＡＦＶ６００変異メラノーマにおいて効果的であるベムラフェニブなどのＲＡＦ阻害剤は、ＲＡＳ変異癌では無効である。したがって、現在、ＫＲＡＳ変異腫瘍及びＮＲＡＳ変異腫瘍のための有効な治療法は存在しない。特に、ＢＲＡＦ変異メラノーマと異なり、ＮＲＡＳ変異メラノーマ患者のための承認された標的療法は存在しない。ＭＥＫ１／２阻害剤の治験からの最近のデータは、無増悪生存期間のわずかな増加を示したが、これらの患者における全生存期間の向上を示さなかった（Ｄｕｍｍｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｌａｎｃｅｔ  Ｏｎｃｏｌ，１８，４３５−４４５，２０１７）。
【０００７】
ＭＡＰＫ阻害剤のいくつかの垂直的組み合わせが有益であると証明されているが、可能な組み合わせの様々な置換のいずれか１つが臨床上の利益であるかどうかは、必ずしも予測可能であると限らない。例えば、ＥＲＫ１／２阻害剤ＧＤＣ−０９９４と組み合わせたＭＥＫ阻害剤コビメチニブの組み合わせが重複毒性及び蓄積毒性をもたらすことが最近報告され、これは、その著者らによれば、この特定の組み合わせのさらなる開発を制限するであろう。（Ｗｅｅｋｅｓ  ｅｔ  ａｌ  ２０１７，Ａｂｓｔｒａｃｔ  ＣＴ１０７：ＡＡＣＲ  Ａｎｎｕａｌ  Ｍｅｅｔｉｎｇ  ２０１７；Ａｐｒｉｌ  １−５，  ２０１７  Ｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎｓ）
【０００８】
肺癌は、世界中の男女が罹患する一般的な型の癌である。ＮＳＣＬＣは、肺癌の最も一般的な型（大体８５％）であり、これらの患者のおよそ７０％は、診断時、進行した疾患（ステージＩＩＩＢ又はステージＩＶ）を呈する。ＮＳＣＬＣ腫瘍の約３０％は、活性化ＫＲＡＳ変異を含有し、これらの変異は、上皮増殖因子受容体チロシンキナーゼ阻害剤（ＥＧＦＲ  ＴＫＩ）に対する耐性と関連する（Ｐａｏ  Ｗ，ｅｔ  ａｌ，ＰＬｏＳ  Ｍｅｄ  ２００５；２（１）：ｅ１７）。これまで、ＫＲＡＳ変異を有するＮＳＣＬＣ及びＶ６００ＥではないＢＲＡＦ変異を有するＮＳＣＬＣを患う患者に利用可能である承認された標的療法はない。
【０００９】
メラノーマは、世界中の男女が罹患する一般的な型の癌である。転移性皮膚メラノーマ患者の５０％は、ＢＲＡＦ活性化変異を内在し、これらの患者の２０％は、ＮＲＡＳ活性化変異を有する（Ｚｈａｎｇ  ｅｔ  ａｌ，Ｐｉｇｍｅｎｔ  Ｃｅｌｌ  Ｍｅｌａｎｏｍａ  Ｒｅｓ  ２０１６；２９：２６６−２８３。ＮＲＡＳ変異は、ステージＩＶメラノーマの診断後のより短い生存の独立予測因子と特定された（Ｊａｋｏｂ  ＪＡ  ｅｔ  ａｌ（２０１２），Ｃａｎｃｅｒ，Ｖｏｌｕｍｅ  １１８，  Ｉｓｓｕｅ  １６，Ｐａｇｅｓ  ４０１４−４０２３）。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１０】
したがって、ＫＲＡＳ及びＮＲＡＳの直接的阻害は、依然として困難であることが判明しており、これまで、ＫＲＡＳ変異ＮＳＣＬＣなどのＫＲＡＳ変異癌及びＮＲＡＳ変異メラノーマなどのＮＲＡＳ変異癌を有する患者に利用可能である承認された標的療法はない。したがって、安全であり、良好な耐容性を示し、且つ／又は伴われる発疹などの有害な副作用が少ない標的療法の必要性が存在する。臨床現場における持続的且つ維持される反応をもたらす治療法も必要とされている。
【課題を解決するための手段】
【００１１】
ＭＥＫ阻害剤と、ＣＲＡＦとＢＲＡＦとの両方の活性を強力に阻害する本明細書で定義される通りの式（Ｉ）の化合物などの選択的Ｒａｆ阻害剤との組み合わせは、ＢＲＡＦ変異腫瘍及びＲＡＳ変異誘導性の腫瘍形成を阻止するのに有効である可能性があることがここで判明した。式（Ｉ）の化合物とトラメチニブとを組み合わせることは、ＮＲＡＳ変異及びＫＲＡＳ変異細胞株などのＭＡＰＫ変異癌細胞株において相乗的であると判明した。本明細書に記載した発見に基づくと、Ｒａｆ阻害剤、特に式（Ｉ）の化合物などのＣＲＡＦ及びＢＲＡＦ阻害剤と、トラメチニブなどのＭＥＫ阻害剤との組み合わせは、ＲＡＳ変異腫瘍を患う患者において特に効果的且つ耐性を起こしにくい可能性がある。
【００１２】
式（Ｉ）の化合物とトラメチニブとの組み合わせは、ヒトＫＲＡＳ変異ＮＳＣＬＣ、ＣＲＣ及びＰＤＡＣ異種移植モデル並びにヒトＮＲＡＳ変異メラノーマ異種移植モデルにおけるいずれかの単剤療法と比較して増大した抗腫瘍反応も示した。式（ＩＩ）の化合物とトラメチニブとの組み合わせは、ヒトＨＰＡＦＩＩ膵臓異種移植マウスモデルにおけるいずれかの単剤療法と比較して腫瘍反応の効力の増大を示した。したがって、式（Ｉ）の化合物又は式（ＩＩ）の化合物は、単独で及びＭＥＫ阻害剤と組み合わせて、ＭＡＰＫ経路変化を内在する癌を有する患者の治療において有用である可能性がある。こうした癌には、ＫＲＡＳ変異ＮＳＣＬＣ（非小細胞肺癌）、ＫＲＡＳ変異膵癌（例えば、ＫＲＡＳ変異膵管腺癌（ＰＤＡＣ）、ＫＲＡＳ変異ＣＲＣ（大腸癌）及びＮＲＡＳ変異メラノーマ）が含まれる。
【００１３】
したがって、本発明は、（ａ）（ｉ）本明細書で定義される通りの式（Ｉ）の化合物若しくはその薬学的に許容し得る塩、及び（ｉｉ）本明細書で定義される通りの式（ＩＩ）の化合物若しくはその薬学的に許容し得る塩からなる群から選択されるＲａｆ阻害剤と、（ｂ）ＭＥＫ阻害剤、特にトラメチニブ又はその薬学的に許容し得る塩若しくは溶媒和物とを含む医薬的組み合わせを提供する。本発明は、増殖性疾患の治療で使用するためのこうした組み合わせも提供する。
【００１４】
さらに、本発明は、
（ａ）ＭＥＫ阻害剤、特にトラメチニブ又はその薬学的に許容し得る塩若しくは溶媒和物との組み合わせ療法で使用するための、（ｉ）本明細書で定義される通りの式（Ｉ）の化合物若しくはその薬学的に許容し得る塩、及び（ｉｉ）本明細書で定義される通りの式（ＩＩ）の化合物若しくはその薬学的に許容し得る塩からなる群から選択されるＲａｆ阻害剤、及び
（ｂ）（ｉ）本明細書で定義される通りの式（Ｉ）の化合物若しくはその薬学的に許容し得る塩、及び（ｉｉ）本明細書で定義される通りの式（ＩＩ）の化合物若しくはその薬学的に許容し得る塩からなる群から選択されるＲａｆ阻害剤との組み合わせ療法で使用するための、ＭＥＫ阻害剤、特にトラメチニブ又はその薬学的に許容し得る塩若しくは溶媒和物
を提供する。
【００１５】
式（Ｉ）の化合物は、次の構造：
【化１】
2020518568.tif 000002
を有する化合物である。
【００１６】
式（ＩＩ）の化合物は、次の構造：
【化２】
2020518568.tif 000003
を有する化合物である。
【００１７】
本発明は、特に増殖性疾患の治療における同時、個別又は連続使用のための、本明細書で定義される通りのＲａｆ阻害剤化合物又はその薬学的に許容し得る塩と、ＭＥＫ阻害剤、好ましくはトラメチニブ又はその薬学的に許容し得る塩若しくは溶媒とを含む医薬的組み合わせをさらに提供する。
【００１８】
別の好ましい実施形態では、本発明の医薬的組み合わせは、（ａ）Ｒａｆ阻害剤、式（Ｉ）の化合物又はその薬学的に許容し得る塩と、（ｂ）トラメチニブ又はその薬学的に許容し得る塩若しくは溶媒和物、特にその溶媒和物とを含む。
【００１９】
別の好ましい実施形態では、本発明の医薬的組み合わせは、（ａ）Ｒａｆ阻害剤、式（ＩＩ）の化合物又はその薬学的に許容し得る塩と、（ｂ）トラメチニブ又はその薬学的に許容し得る塩若しくは溶媒和物、特にその溶媒和物とを含む。
【００２０】
本発明は、特に、ＭＡＰＫ経路における活性化変異によって特徴付けられる、特にＲＡＳ（例えば、ＫＲＡＳ若しくはＮＲＡＳ）及び／又はＢＲＡＦにおける１つ又は複数の変異によって特徴付けられる癌の治療で使用するための本発明の組み合わせに関する。
【００２１】
本発明は、増殖性疾患、特に癌の治療のための本発明の組み合わせの使用も提供する。特に、本発明の組み合わせは、非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）、メラノーマ、膵管腺癌（ＰＤＡＣ）、子宮頸癌、卵巣癌又は大腸癌（ＣＲＣ）の治療に有用である可能性がある。
【００２２】
本発明は、増殖性疾患、特に癌の治療のための医薬品の調製のための本発明の組み合わせの使用も提供する。
【００２３】
本発明は、増殖性疾患を治療する方法であって、前記増殖性疾患に対して共同で治療的に有効である量の本発明の組み合わせを、それを必要とする対象に同時に、別々に又は連続して投与することを含む方法も提供する。
【００２４】
本発明は、増殖性疾患に対して共同で治療的に有効である、ある量の本発明の組み合わせと、任意選択で少なくとも１種の薬学的に許容し得る担体とを含む医薬組成物又は組み合わせ調製物も提供する。
【００２５】
本発明は、増殖性疾患の治療で使用するための、（ａ）（ｉ）式（Ｉ）の化合物又はその薬学的に許容し得る塩、及び（ｉｉ）式（ＩＩ）の化合物又はその薬学的に許容し得る塩からなる群から選択されるＲａｆ阻害剤の１つ又は複数の投薬単位と、（ｂ）ＭＥＫ阻害剤、好ましくはトラメチニブ又はその薬学的に許容し得る塩若しくは溶媒和物の１つ又は複数の投薬単位とを含む組み合わせ調製物も提供する。
【００２６】
本発明は、増殖性疾患、好ましくは非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）、メラノーマ、膵管腺癌（ＰＤＡＣ）、子宮頸癌、卵巣癌又は大腸癌（ＣＲＣ）の治療で使用するための、それを必要とする患者への本発明の組み合わせの同時、個別又は連続投与のための、活性成分としての本発明の組み合わせと説明書とを含む市販用包装品も提供する。
【００２７】
本発明は、増殖性疾患の治療における、ＭＥＫ阻害剤、好ましくはトラメチニブ又はその薬学的に許容し得る塩若しくは溶媒和物との同時、個別又は連続使用のための、（ｉ）式（Ｉ）の化合物又はその薬学的に許容し得る塩、及び（ｉｉ）式（ｉｉ）の化合物又はその薬学的に許容し得る塩からなる群から選択されるＲａｆ阻害剤と説明書とを含む市販用包装品も提供する。
【００２８】
本発明の種々の態様を以下でさらに詳細に記載する。追加の定義は、本明細書全体を通して説明する。
【図面の簡単な説明】
【００２９】
【図１】マウスにおける、図１）Ｃａｌｕ−６（ＫＲＡＳ（Ｑ６１Ｋ）変異）、図２）ＮＣＩ−Ｈ３５８（ＫＲＡＳ（Ｇ１２Ｃ）変異）、図３）ＨＬＵＸ１１５６（ＫＲＡＳ（Ｇ１２Ｃ）変異）、及び図４）ＮＣＩ−Ｈ７２７（ＫＲＡＳ（Ｇ１２Ｖ）変異）異種移植肺癌腫瘍モデルにおける式（Ｉ）の化合物。皮下異種移植片を有する動物は、示された通りに式（Ｉ）の化合物での治療を受けた。化合物は、示された通りに毎日（ｑｄ若しくはＱＤ）、１日２回（ｂｉｄ若しくはＢＩＤ）又は１日おきに（ｑ２ｄ若しくはＱ２Ｄ）、経口的に（ＰＯ）投与した。抗腫瘍活性は、ビヒクルで処置した群における腫瘍体積に対する治療群における腫瘍体積の割合（％  Ｔ／Ｃ）又は腫瘍退縮の割合（すなわち開始体積と比較した治療後の腫瘍の体積（退縮（％）（図１〜４では「％  Ｒｅｇ」又は「〜％  Ｒｅｇ」と示す）を評価することによって決定した。ＳＥＭ＝平均値の標準誤差、ＰＢＳ＝リン酸緩衝生理食塩水。
【図２】（上記の通り。）
【図３】（上記の通り。）
【図４】（上記の通り。）
【図５】マウスにおけるＣａｌｕ−６異種移植腫瘍モデルにおいて組み合わせて使用される式（Ｉ）の化合物及びＭＥＫ阻害剤トラメチニブの効力を描写する。Ｃａｌｕ−６の皮下異種移植片を有する動物は、示された通りに式（Ｉ）の化合物及び／又はトラメチニブでの治療を受けた。深さ（図５）と反応の持続性（図６）との両方を示した。化合物は、示された通りに毎日（ｑｄ）又は１日おきに（ｑ２ｄ）、経口的に投与した。抗腫瘍活性は、ビヒクルで処置した群における腫瘍体積に対する治療群における腫瘍体積の割合（％  Ｔ／Ｃ）又は開始体積と比較した腫瘍退縮の割合（退縮（％）、図２Ａ〜２Ｂでは「％  Ｒｅｇ」と示す）を評価することによって決定した。
【図６】（上記の通り。）
【図７】異なるＢＲＡＦ又はＲＡＳ変異を内在する細胞株を、示された濃度のＤＭＳＯ、ダブラフェニブ又は式（ＩＩ）の化合物で２時間処理した。ＭＥＫ又はＥＲＫリン酸化の阻害をウエスタンブロット分析によって測定した。式（ＩＩ）の化合物は、最小限の逆説的活性化を伴って、ＢＲＡＦ、ＮＲＡＳ又はＫＲＡＳ変異を有する腫瘍細胞における発癌性シグナル伝達及び増殖を阻害する。
【図８】ダブラフェニブ（上のパネル）又は式（ＩＩ）の化合物（下のパネル）での治療の５日後の細胞株の成長阻害を決定した。
【図９】阻害剤処理の３日後の、式（ＩＩ）の化合物又はダブラフェニブによる３５７種のヒト癌細胞株における成長阻害のＩＣ５０値のドットプロット。点線は、阻害剤に対する細胞株感受性についてのカットオフとして使用した５μＭのＩＣ５０を表す。ＢＲＡＦ変異、ＫＲＡＳ変異、ＮＲＡＳ変異又は野生型（ＷＴ）細胞中における各阻害剤に対する感受性及び耐性の細胞株の数をグラフの下に示す。フィッシャーの直接確率検定を実施して、ＷＴ細胞株に対するＢＲＡＦ又はＲＡＳ変異細胞株における阻害剤活性の統計的有意性を決定した。
【図１０】腫瘍試料を、Ｃａｌｕ−６腫瘍を有する動物におけるビヒクルの単回投与又は式（ＩＩ）の化合物の漸増投与後、示された時点で収集し、リン酸化されたＭＥＫ（ｐＭＥＫ）レベルを決定した。ｐＭＥＫレベルは、各時点でのビヒクル対照と比較した治療群におけるｐＭＥＫ／総ＭＥＫの比として表す。
【図１１】Ｃａｌｕ−６腫瘍異種移植片の成長阻害を４つの用量レベルにわたるビヒクル又は式（ＩＩ）の化合物での治療後に測定した。腫瘍体積は、治療群あたり６匹の動物の平均腫瘍体積±平均値の標準誤差（ＳＥＭ）として表す。Ｃａｌｕ−６の皮下異種移植片を有する動物は、示された通りに式（ＩＩ）の化合物での治療を受けた。式（ＩＩ）の化合物は、毎日（ｑｄ）投与した。抗腫瘍活性は、ビヒクルで処置した群における腫瘍体積に対する治療群における腫瘍体積の割合（％  Ｔ／Ｃ）又は開始体積と比較した腫瘍退縮の割合（退縮（％）、図１１では「％  Ｒｅｇ」と示す）を評価することによって決定した。
【図１２】式（ＩＩ）の化合物のインビボ抗腫瘍活性を２３人のＮＳＣＬＣ患者由来の異種移植（ＰＤＸ）モデルのパネルにおいて評価し、最初の腫瘍体積と比較した測定時の腫瘍体積の変化の％として提示した。正の値は、腫瘍成長を示し、負の値は、腫瘍退縮を示す。式（ＩＩ）の化合物は、６０ｍｇ／ｋｇ又は２００ｍｇ／ｋｇ（▼によって示す）で１日１回、経口的に投与した。各腫瘍には、ＢＲＡＦ又はＲＡＳ変異状態について注釈を付けた。比較のため、ＮＳＣＬＣ  ＰＤＸモデルのパネルにおけるパクリタキセルに対する腫瘍反応を含めた。ＧＯＦ＝機能獲得型、ＷＴ＝野生型。
【図１３】ＨＰＡＦ−ＩＩ（ＫＲＡＳ（Ｇ１２Ｄ変異）膵臓由来の細胞における、式（ＩＩ）の化合物とトラメチニブとの抗増殖性の組み合わせ活性を評価した。左上のパネル：処理の５日後の、式（ＩＩ）の化合物、トラメチニブ及び組み合わせによる、ＤＭＳＯに対する成長阻害の割合を表す用量行列。右上のパネル：Ｌｏｅｗｅモデルを使用する、組み合わせ効果と、２つの単一の薬剤の算出された相加的効果との間の偏差を表す超過阻害値。算出されたＬｏｅｗｅ相乗作用スコアを示す。下のパネル：用量行列データのアイソボログラム分析、濃い灰色の線は、データ点を表し、薄い灰色の線は、相加性を示す。５０％成長阻害での算出されたＬｏｅｗｅ組み合わせ指数（ＣＩ）を示す。
【図１４】ＨＰＡＦ−ＩＩ異種移植モデルにおける、単剤としての又は組み合わせた式（ＩＩ）の化合物及びトラメチニブのインビボ活性。ＤＵＳＰ６（二重特異性ホスファターゼ６）ｍＲＮＡレベルによって測定される単一用量の治療後のシグナル伝達阻害。さらに、効果的な投薬量は、ＭＡＰキナーゼ経路阻害を示すバイオマーカーをモニタリングすることによって決定することができる。具体的には、ＤＵＳＰ６は、この経路の公知のバイオマーカーであり、ＤＵＳＰ６のインビボレベルは、効果的な血漿中濃度を伴う式（ＩＩ）の化合物に応答して下がることが示されている。ＤＵＳＰ６レベルは、対照遺伝子ＲＰＬＰＯに対する正規化後にビヒクル群と比較した変化の割合として表す。
【図１５】ＨＰＡＦ−ＩＩ異種移植モデルにおける、単剤としての又は組み合わせた式（ＩＩ）の化合物及びトラメチニブのインビボ活性。１０日間の示された通りの治療後のインビボ腫瘍成長。化合物は、毎日（ｑｄ）投与した。抗腫瘍活性は、ビヒクルで処置した群における腫瘍体積に対する治療群における腫瘍体積の割合（％  Ｔ／Ｃ）又は開始体積と比較した腫瘍退縮の割合（退縮（％）、図１５では「％  Ｒｅｇ」と示す）を評価することによって決定した。
【図１６】ＨＣＴ１１６異種移植モデルにおける、単剤としての又は組み合わせた式（Ｉ）の化合物（図における化合物Ｉ）及びトラメチニブのインビボ活性。１７日間の示された通りの治療後のインビボ腫瘍成長。化合物は、毎日（ｑｄ）又は１日おきに（ｑ２ｄ）投与した。抗腫瘍活性は、ビヒクルで処置した群における腫瘍体積に対する治療群における腫瘍体積の割合（％  Ｔ／Ｃ）又は開始体積と比較した腫瘍退縮の割合（退縮（％）、図１６では「％  Ｒｅｇ」と示す）を評価することによって決定した。
【図１７】２０４３異種移植モデルにおける、単剤としての又は組み合わせた式（Ｉ）の化合物（図における化合物Ｉ）及びトラメチニブのインビボ活性。２１日間の示された通りの治療後のインビボ腫瘍成長。化合物は、毎日（ｑｄ）又は１日おきに（ｑ２ｄ）投与した。抗腫瘍活性は、ビヒクルで処置した群における腫瘍体積に対する治療群における腫瘍体積の割合（％  Ｔ／Ｃ）又は開始体積と比較した腫瘍退縮の割合（退縮（％）、図１７では「％  Ｒｅｇ」と示す）を評価することによって決定した。
【図１８】ＳＫＭＥＬ３０異種移植モデルにおける、単剤としての又は組み合わせた式（Ｉ）の化合物（図における化合物Ｉ）及びトラメチニブのインビボ活性。２２日間の示された通りの治療後のインビボ腫瘍成長。化合物は、毎日（ｑｄ）又は１日２回（ｂｉｄ）投与した。抗腫瘍活性は、ビヒクルで処置した群における腫瘍体積に対する治療群における腫瘍体積の割合（％  Ｔ／Ｃ）又は開始体積と比較した腫瘍退縮の割合（退縮（％）、図１８では「％  Ｒｅｇ」と示す）を評価することによって決定した。
【図１９】２０６６７異種移植モデルにおける、単剤としての又は組み合わせた式（Ｉ）の化合物（図における化合物Ｉ）及びトラメチニブのインビボ活性。示された通りの１７日間の治療（単剤）及び３１日間の組み合わせ治療後のインビボ腫瘍成長。化合物は、毎日（ｑｄ）又は１日２回（ｂｉｄ）投与した。抗腫瘍活性は、単剤について第３４日での、ビヒクルで処置した群における腫瘍体積に対する治療群における腫瘍体積の割合（％  Ｔ／Ｃ）又は組み合わせについて第４８日での、開始体積と比較した腫瘍退縮の割合（退縮（％）、図１９では「％  Ｒｅｇ」と示す）を評価することによって決定した。
【図２０】２１１２４異種移植モデルにおける、単剤としての又は組み合わせた式（Ｉ）の化合物（図における化合物Ｉ）及びトラメチニブのインビボ活性。２１日間の示された通りの治療後のインビボ腫瘍成長。化合物は、毎日（ｑｄ）又は１日２回（ｂｉｄ）投与した。抗腫瘍活性は、ビヒクルで処置した群における腫瘍体積に対する治療群における腫瘍体積の割合（％  Ｔ／Ｃ）又は開始体積と比較した腫瘍退縮の割合（退縮（％）、図２０では「％  Ｒｅｇ」と示す）を評価することによって決定した。
【図２１】２０８６４異種移植モデルにおける、単剤としての又は組み合わせた式（Ｉ）の化合物（図における化合物Ｉ）及びトラメチニブのインビボ活性。示された通りの１４日間の治療（単剤）及び３６日間の組み合わせ治療後のインビボ腫瘍成長。化合物は、毎日（ｑｄ）又は１日２回（ｂｉｄ）投与した。抗腫瘍活性は、単剤について第３３日での、ビヒクルで処置した群における腫瘍体積に対する治療群における腫瘍体積の割合（％  Ｔ／Ｃ）又は組み合わせについて第５５日での、開始体積と比較した腫瘍退縮の割合（退縮（％）、図２１では「％  Ｒｅｇ」と示す）を評価することによって決定した。
【発明を実施するための形態】
【００３０】
本発明は、（ａ）（ｉ）本明細書で定義される通りの式（Ｉ）の化合物若しくはその薬学的に許容し得る塩、及び（ｉｉ）本明細書で定義される通りの式（ＩＩ）の化合物若しくはその薬学的に許容し得る塩からなる群から選択されるＲａｆ阻害剤と、（ｂ）特に増殖性疾患の治療で使用するためのＭＥＫ阻害剤とを含む医薬的組み合わせに関する。
【００３１】
本明細書で使用する場合、用語「Ｒａｆ阻害剤」は、セリン／トレオニン−プロテインキナーゼＢ−Ｒａｆ又はＣ−Ｒａｆの少なくとも１つの活性を選択的に標的にするか、低下させるか又は阻害する、Ｂ−Ｒａｆプロテインキナーゼ（本明細書ではｂ−ＲＡＦ、ＢＲＡＦ又はｂ−Ｒａｆとも呼ばれる）及びＣ−Ｒａｆプロテインキナーゼ（本明細書ではｃ−ＲＡＦ、ＣＲＡＦ又はｃ−Ｒａｆとも呼ばれる）のアデノシン三リン酸（ＡＴＰ）競合的阻害剤を指す。Ｒａｆ阻害剤は、Ｒａｆ単量体とＲａｆ二量体との両方を優先的に阻害する。
【００３２】
本明細書で使用する場合、Ｒａｆ阻害剤は、（ｉ）本明細書で定義される通りの式（Ｉ）の化合物若しくはその薬学的に許容し得る塩、及び（ｉｉ）本明細書で定義される通りの式（ＩＩ）の化合物若しくはその薬学的に許容し得る塩からなる群から選択される。
【００３３】
式（Ｉ）の化合物は、次の構造：
【化３】
2020518568.tif 000004
を有する。
【００３４】
便宜上、この化合物及びその塩の群は、集合的に、「式（Ｉ）の化合物」又は「化合物（Ｉ）」と呼ばれ、これは、「式（Ｉ）の化合物」又は「化合物（Ｉ）」への言及が交互に化合物又はその薬学的に許容し得る塩のいずれかを指すこととなることを意味する。
【００３５】
Ｒａｆ阻害剤、式（Ｉ）の化合物及びその薬学的に許容し得る塩は、その全体が参照により本明細書に組み込まれる国際公開第２０１４／１５１６１６号パンフレットに記載されており、その調製の方法は、例えば、その中の実施例１１５６に記載されている。
【００３６】
式（ＩＩ）の化合物は、次の構造：
【化４】
2020518568.tif 000005
を有する。
【００３７】
便宜上、この化合物及びその塩の群は、集合的に、「式（ＩＩ）の化合物」又は「化合物（ＩＩ）」と呼ばれ、これは、「式（ＩＩ）の化合物」又は「化合物（ＩＩ）」への言及が交互に化合物又はその薬学的に許容し得る塩のいずれかを指すこととなることを意味する。
【００３８】
Ｒａｆ阻害剤、式（ＩＩ）の化合物及びその薬学的に許容し得る塩は、その全体が参照により本明細書に組み込まれる国際公開第２０１４／１５１６１６号パンフレットに記載されており、その調製の方法は、例えば、その中の実施例１３１に記載されている。
【００３９】
細胞に基づくアッセイでは、Ｒａｆ阻害剤、式（Ｉ）の化合物及び式（ＩＩ）の化合物は、ＭＡＰＫシグナル伝達を活性化する様々な変異を含有する細胞株における抗増殖活性を示した。インビボにおいて、式（Ｉ）の化合物又は式（ＩＩ）の化合物での治療は、ＮＳＣＬＣ由来のＣａｌｕ−６（ＫＲＡＳ  Ｑ６１Ｋ）及びＮＣＩ−Ｈ３５８（ＫＲＡＳ  Ｇ１２Ｃ）を含むいくつかのＫＲＡＳ変異モデルにおいて腫瘍退縮をもたらした。まとめると、良好な耐容性を示す用量の式（Ｉ）の化合物又は式（ＩＩ）の化合物について観察されるインビトロ及びインビボのＭＡＰＫ経路抑制及び抗増殖活性は、式（Ｉ）の化合物又は式（ＩＩ）の化合物が、ＭＡＰＫ経路における活性化損傷を内在する腫瘍を有する患者において抗腫瘍活性を有する可能性があることを示唆する。さらに、式（Ｉ）の化合物及び式（ＩＩ）の化合物は、キナーゼポケットを不活性な立体構造に保ち、それによって多くのＢ−Ｒａｆ阻害剤で見られる逆説的活性化を低下させ、変異Ｒａｓ誘導性のシグナル伝達及び細胞増殖を阻止する、Ｂ−ＲａｆとＣ−Ｒａｆとの両方の２型のＡＴＰ競合性阻害剤である。式（Ｉ）の化合物及び式（ＩＩ）の化合物は、多数のＭＡＰＫ誘導性のヒト癌細胞株において、またＫＲＡＳ、ＮＲＡＳ及びＢＲＡＦ癌遺伝子におけるヒト損傷を内在するモデル腫瘍を代表する異種移植腫瘍において効力を呈した。
【００４０】
本発明の医薬的組み合わせは、ＭＥＫ阻害剤をさらに含む。用語「ＭＥＫ阻害剤」は、本明細書では、ＭＡＰ／ＥＲＫキナーゼ１及び２（ＭＥＫ１／２）の少なくとも１つの活性を標的にするか、低下させるか又は阻害する化合物を指すように定義される。
【００４１】
本発明の組み合わせにおける使用に適したＭＥＫ阻害剤には、限定されないが、
ａ）トラメチニブ（Ｎ−（３−｛３−シクロプロピル−５−［（２−フルオロ−４−ヨードフェニル）アミノ］−６，８−ジメチル−２，４，７−トリオキソ−３，４，６，７−テトラヒドロピリド［４，３−ｄ］ピリミジン−１（２Ｈ）−イル｝フェニル）アセトアミド）（ＪＰＴ−７４０５７若しくはＧＳＫ１１２０２１２とも呼ばれる）又はその薬学的に許容し得る塩若しくは溶媒和物。トラメチニブは、その全体が参照により本明細書に組み込まれる国際公開第２００５／１２１１４２号パンフレット内の実施例４−１に開示されている。単剤療法として、トラメチニブは、Ｂ−Ｒａｆ  Ｖ６００Ｅ又はＶ６００Ｋ変異を有する切除不能又は転移性の悪性黒色腫の治療のために承認されており、また、この化合物は、Ｎｏｖａｒｔｉｓ  ＡＧから商品名Ｍｅｋｉｎｉｓｔ（登録商標）で市販品として入手可能である。
ｂ）ＰＤ０３２５９０１（Ｐｆｉｚｅｒ）（国際公開第０２／０６２１３号パンフレットに開示されている）；ＰＤ１８４３５２（Ｐｆｉｚｅｒ）；レファメチニブ（ＲＤＥＡ１１９若しくはＢａｙ  ８６−９７６６とも呼ばれる）；コビメチニブ（ＸＬ５１８とも呼ばれ、Ｒｏｃｈｅから商品名Ｃｏｔｅｌｌｉｃ（登録商標）で市販品として入手可能である）；ＡＳ−７０１２５５（Ｍｅｒｃｋ  Ｓｅｒｏｎｏ）；ＡＳ−７０１１７３（Ｍｅｒｃｋ  Ｓｅｒｏｎｏ）；ピマセルチブ（Ｐｉｍａｓｅｒｔｉｂ）（ＡＳ−７０３０２６若しくはＭＳＣ１９３６３６９Ｂとも呼ばれる）（Ｍｅｒｃｋ  Ｓｅｒｏｎｏ）；ＲＤＥＡ４３６（Ａｒｄｅａ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）；ＲＯ４９８７６５５（ＲＧ７１６７とも呼ばれる）（Ｒｏｃｈｅ）及び／又はＲＧ７４２０（ＧＤＣ−０６２３とも呼ばれる）（Ｒｏｃｈｅ）又はその薬学的に許容し得る塩
が含まれる。
【００４２】
好ましくは、ＭＥＫ阻害剤は、トラメチニブ又はその薬学的に許容し得る塩若しくは溶媒和物である。いくつかの好ましい実施形態では、トラメチニブは、ジメチルスルホキシド溶媒和物の形態である。いくつかの実施形態では、トラメチニブは、ナトリウム塩の形態である。適切には、トラメチニブは、水和物、酢酸、エタノール、ニトロメタン、クロロベンゼン、１−ペンタンコール（ｐｅｎｔａｎｃｏｌ）、イソプロピルアルコール、エチレングリコール及び３−メチル−１−ブタノールから選択される溶媒和物の形態である。これらの溶媒和物及び塩の形態は、国際公開第２００５／１２１１４２号パンフレットにおける説明から当業者によって調製され得る。
【００４３】
本発明は、特に増殖性疾患の治療における同時、個別又は連続使用のための、（ａ）（ｉ）本明細書で定義される通りの式（Ｉ）の化合物若しくはその薬学的に許容し得る塩、及び（ｉｉ）本明細書で定義される通りの式（ＩＩ）の化合物若しくはその薬学的に許容し得る塩からなる群から選択されるＲａｆ阻害剤と、（ｂ）ＭＥＫ阻害剤とを含む医薬的組み合わせにさらに関する。
【００４４】
選択された用語は、以下において且つ本出願全体を通して定義される。本発明の化合物は、標準の命名法を使用して記載する。そうでないと定義されない限り、本明細書で使用されるすべての技術及び科学用語は、本発明が属する技術分野の当業者によって一般に理解されるのと同じ意味を有する。そうでないと指定されない限り、本明細書では、以下の一般的な定義を適用するものとする。
【００４５】
本明細書で使用する場合、用語「本発明の組み合わせ」は、（ａ）（ｉ）本明細書で定義される通りの式（Ｉ）の化合物若しくはその薬学的に許容し得る塩、及び（ｉｉ）本明細書で定義される通りの式（ＩＩ）の化合物若しくはその薬学的に許容し得る塩からなる群から選択されるＲａｆ阻害剤と、（ｂ）ＭＥＫ阻害剤、特にトラメチニブ又はその薬学的に許容し得る塩若しくは溶媒和物から構成される組み合わせ投与を指す。Ｒａｆ阻害剤、式（Ｉ）の化合物又はその薬学的に許容し得る塩と、ＭＥＫ阻害剤、好ましくはトラメチニブ、又はその薬学的に許容し得る塩若しくは溶媒和物、又はＲａｆ阻害剤、式（ＩＩ）の化合物又はその薬学的に許容し得る塩と、ＭＥＫ阻害剤、好ましくはトラメチニブ又はその薬学的に許容し得る塩若しくは溶媒和物とは、両方の化合物を含む単位医薬組成物中での同時の投与により、本発明に従って組み合わせて用いることができる。或いは、この組み合わせは、それぞれがＲａｆ阻害剤及びＭＥＫ阻害剤の一方を含む別の医薬組成物中において、連続的な方式で（ここで、例えば、Ｒａｆ阻害剤又はＭＥＫ阻害剤が最初に、他方が２番目に投与される）別々に投与することができる。こうした連続投与は、時間が接近している（例えば、同時）か又は離れていることができる。
【００４６】
本明細書で使用する場合、本発明を説明する文脈における用語「１つの（ａ）」及び「１つの（ａｎ）」並びに「その（ｔｈｅ）」及び同様の言及は、本明細書内でそうでないと示されるか又は文脈によって明確に否定されるのではない限り、単数と複数との両方を包含すると解釈されるべきである。化合物、塩などについて、複数形が使用される場合、これは、単一の化合物、塩なども意味すると解釈される。
【００４７】
用語「又は」は、本明細書では、文脈によってそうでないと明確に指示されない限り、用語「及び／又は」を意味するために使用され、また用語「及び／又は」と互換的に使用される。
【００４８】
「約」及び「およそ」は、概して、測定の性質又は精度を考慮した、測定された量についての許容し得る程度の誤差を意味するものとする。例示的な誤差の程度は、所与の値又は値の範囲の２０パーセント（％）以内、典型的には１０％以内、より典型的には５％以内である。本明細書での投薬量を「約」指定された量として記載する場合、実際の投薬量は、記述した量から最大１０％変動する可能性があり、「約」のこの使用法から、所与の剤形内の厳密な量が、投与された化合物のインビボの効果に実質的に影響を与えずに、様々な理由で、意図される量とわずかに異なる可能性があることが理解される。
【００４９】
本明細書での投薬量を指定された量として、すなわち用語「約」を伴わずに記載する場合、実際の投薬量は、記述した量から最大１０％（好ましくは最大５％）変動する可能性があり、この使用法から、所与の剤形内の厳密な量が、投与された化合物のインビボの効果に実質的に影響を与えずに、様々な理由で、意図される量とわずかに異なる可能性があることが理解される。
【００５０】
用語「含むこと」及び「含まれること」は、本明細書では、そうでないと記述されない限り、そのオープンエンド及び非限定的な意味で使用される。
【００５１】
「組み合わせ」又は「と組み合わせた」は、治療法又は治療薬が物理的に混合されなければならないか、又は同時に投与され且つ／又は一緒に送達されるために製剤化されなければならないことを意味するものではないが、これらの送達の方法は、本明細書に記載した範囲の範囲内である。これらの組み合わせにおける治療薬は、１つ又は複数の他の追加の治療法又は治療薬と並行して、又はこれの前又はこれの後に投与することができる。治療薬は、あらゆる順序で投与することができる。一般に、各薬剤は、その薬剤について決定された用量及び／又はタイムスケジュールで投与されることとなる。この組み合わせにおいて利用される追加の治療薬を単一の組成物中で一緒に投与し得るか、又は異なる組成物中で別々に投与し得ることがさらに理解されるであろう。一般に、組み合わせて利用される追加の治療薬は、これらが個々に利用されるレベルを超えないレベルで利用されることが予想される。いくつかの実施形態では、組み合わせて利用されるレベルは、単剤治療法として利用されるレベルよりも低いであろう。
【００５２】
本発明の組み合わせは、治療的若しくは防御的機能又はその両方を有する。例えば、これらの分子は、本明細書に記載した通りの癌などの様々な障害を治療及び／又は予防するためにヒト対象に投与することができる。
【００５３】
本明細書で使用する場合の用語「組み合わせ」、「治療的組み合わせ」又は「医薬的組み合わせ」は、１つの投薬単位形態での固定された組み合わせ、又は固定されていない組み合わせ、又は組み合わせ投与のための要素一式を指し、ここで、２種以上の治療薬は、一緒に、同時に独立して又は時間間隔内に（特にこれらの時間間隔により、組み合わせの相手が共同的な、例えば相乗的な効果を示すことが可能になる場合に）別々に投与される可能性がある。
【００５４】
用語「組み合わせ療法」は、本開示に記載した治療的状態又は障害を治療するための２種以上の治療薬の投与を指す。こうした投与は、各活性成分について、実質的に同時の方式、例えば固定された比率の活性成分を有する単一の製剤での又は別の製剤（例えば、カプセル及び／又は静脈内製剤）でのこれらの治療薬の同時投与を包含する。さらに、こうした投与は、ほぼ同時の又は異なる時点での、連続又は個別方式でのそれぞれの種類の治療薬の使用も包含する。活性成分が単一の製剤として投与されるか又は別の製剤で投与されるかにかかわらず、薬物は、同じクールの治療法一部として同じ患者に投与される。いずれの場合でも、その治療レジメンは、本明細書に記載した状態又は障害を治療することにおける有益な効果を提供することとなる。
【００５５】
同時の治療的使用は、本発明の意味の範囲内では、同じ経路による且つ同じ時点又は実質的に同じ時点での少なくとも２種の活性成分の投与を意味する。
【００５６】
個別使用は、本発明の意味の範囲内では、特に異なる経路による同じ時点又は実質的に同じ時点での少なくとも２種の活性成分の投与を意味する。
【００５７】
連続的な治療的使用は、投与経路が同じ又は異なる、異なる時点での少なくとも２種の活性成分の投与を意味する。より具体的には、投与方法は、活性成分の１種の投与全体が、他のものの投与が開始する前に行われる方法を意味する。
【００５８】
本明細書で使用する場合の用語「固定された組み合わせ」、「固定された用量」及び「単一の製剤」は、癌の治療のために共同で治療的に有効である量の両方の治療薬を患者に送達するために製剤化される単一の担体又はビヒクル又は剤形を指す。単一のビヒクルは、ある量のそれぞれの薬剤を任意の薬学的に許容し得る担体又は賦形剤と共に送達するように設計される。いくつかの実施形態では、ビヒクルは、錠剤、カプセル、丸剤又はパッチである。他の実施形態では、ビヒクルは、溶液又は懸濁液である。
【００５９】
用語「固定されていない組み合わせ」又は「要素一式」は、本発明の組み合わせの治療薬が両方とも別の実体として、同時に、並行して又は特定の時間制限を伴わずに連続して患者に投与される（ここで、こうした投与は、それを必要とする対象の体内において、治療的に有効なレベルの２種の化合物を提供する）ことを意味する。後者は、カクテル療法、例えば３種以上の活性成分の投与にも適用する。
【００６０】
本明細書で使用する場合の用語「薬学的に許容し得る」は、妥当なベネフィット／リスク比に相応する、過剰な毒性、刺激性、アレルギー反応又は他の問題若しくは合併症を伴わない、対象、例えば哺乳類又はヒトの組織との接触に適した、適切な医学的判断の範囲内である化合物、材料、組成物及び／又は剤形を指す。
【００６１】
本明細書で使用する場合、用語「薬学的に許容し得る賦形剤」又は「薬学的に許容し得る担体」には、当業者に公知であろうあらゆる溶媒、分散媒、コーティング、界面活性剤、酸化防止剤、保存剤（例えば、抗菌剤、抗真菌剤）、等張剤、吸収遅延剤、塩、保存剤、薬物、薬物安定剤、結合剤、賦形剤、崩壊剤、滑沢剤、甘味剤、着香料、染料など、及びその組み合わせが含まれる。いずれかの従来の担体は、活性成分と適合しない場合を除いて、治療法又は医薬組成物におけるその使用が企図される。
【００６２】
用語「医薬組成物」は、本明細書では、対象に影響を与える特定の疾患又は状態を治療するために対象、例えば哺乳類又はヒトに投与されることとなる少なくとも１種の治療薬を含有する混合物又は溶液を指すと定義される。本発明の医薬的組み合わせは、糖衣錠、錠剤、カプセル、又は座剤、又はアンプルなど、経腸又は非経口投与に適した医薬組成物に製剤化することができる。そうでないと示されなければ、これらは、それ自体が公知である方式において、例えば当業者に容易に明らかな種々の従来の混合、粉砕、直接圧縮、造粒、糖衣がけ、溶解、凍結乾燥プロセス又は製造技術によって調製される。複数の投薬単位の投与により、必要な有効量に到達する可能性があるため、個々の用量の各剤形中に含有される組み合わせパートナーの単位含有量は、それ自体で有効量をなす必要がないことが理解されるであろう。医薬組成物は、約０．１％〜約９９．９％、好ましくは約１％〜約６０％の治療薬を含有することができる。当業者は、通常の実験法により、あらゆる過度の負担を伴わずに、剤形の特定の所望される特性に関して１種又は複数の前述の担体を選択することができる。使用される各担体の量は、当技術分野の通常の範囲内で変動し得る。次の参考文献は、経口剤形を製剤化するために使用される技術及び賦形剤を開示している：Ｔｈｅ  Ｈａｎｄｂｏｏｋ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｅｘｃｉｐｉｅｎｔｓ，４ｔｈ  ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｒｏｗｅ  ｅｔ  ａｌ．，Ｅｄｓ．，Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ  Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ（２００３）；及びＲｅｍｉｎｇｔｏｎ：ｔｈｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｙ，２０ｔｈ  ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｇｅｎｎａｒｏ，  Ｅｄ．，Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ  Ｗｉｌｌｉａｍｓ＆Ｗｉｌｋｉｎｓ（２００３）。これらの任意選択の追加の従来の担体は、造粒前又は造粒中に１種又は複数の従来の担体を最初の混合物に組み込むことにより、又は１種又は複数の従来の担体を、経口剤形中の薬剤の組み合わせ又は薬剤の組み合わせの個々の薬剤を含む顆粒と組み合わせることにより、経口剤形に組み込むことができる。後者の実施形態では、組み合わせられた混合物を、例えばＶ−混合器を通してさらにブレンドし、続いて錠剤、例えばモノリシック錠剤に圧縮又は成型するか、カプセルに封入するか又は小袋に充填することができる。
【００６３】
医薬組成物は、単位用量あたりであらかじめ決められた量の活性成分を含有する単位用量形態で提供することができる。ある種の実施形態では、単位用量は、各ビヒクルが、薬学的に許容し得る担体及び賦形剤と共に有効量の治療薬の少なくとも１種を含むように１種又は複数のビヒクルを含む。いくつかの実施形態では、単位用量は、患者に同時に投与される１種又は複数の錠剤、カプセル、丸剤、注射液、注入液、パッチなどである。当業者に公知である通り、用量あたりの活性成分の量は、治療される状態、投与経路並びに患者の年齢、体重及び状態に依存することとなる。好ましい単位投薬量組成物は、１日用量若しくは副用量又はその適切な分数分の活性成分を含有するものである。さらに、こうした医薬組成物は、薬学の技術分野において周知である方法のいずれかによって調製することができる。
【００６４】
本発明の医薬組成物は、「治療有効量」又は「有効量」の本発明の化合物を含むことができる。用語「薬学的に有効な量」、「治療有効量」又は「臨床的に有効な量」の治療薬の組み合わせは、組み合わせで治療される障害の臨床的に観察可能な徴候及び症状の、ベースラインに対する観察可能又は臨床的に有意な向上を提供するための、必要な投薬量及び期間での十分な量である。治療有効量は、個人の病態、年齢、性別及び体重などの因子によって変動し得る。治療有効量は、治療薬のあらゆる毒性又は有害な効果に対し、治療的に有益な効果が上回る量でもある。「治療的に有効な投薬量」は、腫瘍成長速度又は疾患進行などの測定可能なパラメータを所望の方式で調節することが好ましい。化合物が測定可能なパラメータを調節する能力は、好適な投薬レベル及びスケジュールを確立することを促進するために、ヒト腫瘍における効力を予測する動物モデル系において評価することができる。或いは、組成物のこの特性は、当業者に公知のインビトロアッセイを使用することにより、化合物が望ましくないパラメータを調節する能力を調べることによって評価することができる。
【００６５】
本明細書で使用する場合の用語「共同で治療的に活性な」又は「共同治療効果」は、治療されることとなる対象、特にヒトが依然として（好ましくは相乗的な）相互作用（共同治療効果）を示すような時間間隔で治療薬を共同で、別々に又は連続して与え得ることを意味する。特に、これが該当するかどうかは、化合物の血中濃度を追跡することによって決定することができ、少なくともある一定の時間間隔中、治療されるヒトの血液中にいずれの化合物も存在することが示される。
【００６６】
本明細書で使用する場合、用語「薬剤」は、組織、系、動物、哺乳類、ヒト又は他の対象における所望される効果を生じる物質を意味することが理解される。「薬剤」は、単一の化合物又は２種以上の化合物の組み合わせ若しくは組成物であり得ることも理解されるべきである。
【００６７】
用語「増殖性疾患」は、好ましくは、癌である。
【００６８】
本明細書で使用する場合、用語「癌」は、異常な細胞の望ましくない制御されない成長を特徴とする疾患を指す。癌細胞は、局所的に又は血流及びリンパ系を介して体の他の部分に広がることができる。本明細書で使用する場合、用語「癌」又は「腫瘍」には、前悪性の並びに悪性の癌及び腫瘍が含まれる。用語「癌」は、本明細書では、すべての固形及び血液の悪性腫瘍を含む広範な腫瘍を意味するために使用される。
【００６９】
「経口剤形」には、経口投与のために処方される又は経口投与を目的とする単位剤形が含まれる。
【００７０】
本明細書で使用する場合、用語「治療する」、「治療」及び「治療すること」は、障害、例えば増殖性障害の進行、重症度及び／又は期間の低減又は改善又は１つ又は複数の治療の施与に起因する障害の１つ又は複数の症状、適切には１つ又は複数の認識可能な症状の改善を指す。具体的実施形態では、用語「治療する」、「治療」及び「治療すること」は、患者によって必ずしも認識可能でない、腫瘍の成長などの増殖性障害の少なくとも１つの測定可能な物理的パラメータの改善を指す。他の実施形態では、用語「治療する」、「治療」及び「治療すること」は、例えば、認識可能な症状の安定化による物理的な、又は例えば物理的パラメータの安定化による生理学的な、又はその両方による増殖性障害の進行の阻害を指す。他の実施形態では、用語「治療する」、「治療」及び「治療すること」は、腫瘍サイズ又は癌細胞数の低減又は安定化を指す。
【００７１】
本開示の意味の範囲内では、用語「治療する」は、疾患を阻止し、開始（すなわち疾患の臨床的顕在化までの期間）を遅らせ、且つ／又は疾患を発症又は悪化させるリスクを低下させることも表す。用語「防御する」は、本明細書では、対象、例えば哺乳類又はヒトにおける疾患の発症、存続又は増悪を予防するか、遅らせるか若しくは治療するか又は必要に応じてこれらすべてを意味するために使用される。
【００７２】
本明細書で使用する場合の用語「対象」又は「患者」には、癌又はあらゆる障害（直接的又は間接的に癌に関与する）を患っているか又は悩まされている可能性がある動物が含まれることが意図される。対象の例としては、哺乳類、例えばヒト、類人猿、サル、イヌ、ウシ、ウマ、ブタ、ヒツジ、ヤギ、ネコ、マウス、ウサギ、ラット及びトランスジェニック非ヒト動物が挙げられる。好ましい実施形態では、対象は、ヒト、例えば癌などの増殖性疾患を患っているか、患うリスクがあるか又は潜在的に患う可能性があるヒトである。
【００７３】
用語「阻害」、「阻害剤」又は「アンタゴニスト」には、ある種のパラメータ、例えば所与の分子又は経路の活性の低下が含まれる。例えば、標的にされるキナーゼ（Ｒａｆ又はＭＥＫ）の活性の５％、１０％、２０％、３０％、４０％又はそれ以上の阻害がこの用語に含まれる。このように、阻害は、１００％であり得るが、１００％である必要はない。
【００７４】
本明細書で使用する場合、「塩」（「又はその複数の塩」又は「又はその塩」が意味するもの）は、単独で又は本発明の組み合わせの遊離の化合物（例えば、式（Ｉ）を有するＲａｆ阻害剤化合物、又は式（ＩＩ）を有するＲａｆ阻害剤化合物、又はＭＥＫ阻害剤、好ましくはトラメチニブとの混合物で存在することができ、また好ましくは薬学的に許容し得る塩である。こうした塩は、例えば、塩基性窒素原子を有する本発明の組み合わせの化合物から、好ましくは有機又は無機酸との酸付加塩、特に薬学的に許容し得る塩として形成される。用語「薬学的に許容し得る塩」は、化合物の生物学的有効性及び特性を保持し、一般的には生物学的に又は他の点で望ましくないものではない塩を指す。化合物は、アミノ基の存在のため、酸付加塩を形成することが可能である可能性がある。
【００７５】
好適な塩のリストは、例えば、“Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ”，２０ｔｈ  ｅｄ．，Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏｍｐａｎｙ，Ｅａｓｔｏｎ，Ｐａ．，（１９８５）において、また“Ｈａｎｄｂｏｏｋ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓａｌｔｓ：Ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ，Ｓｅｌｅｃｔｉｏｎ，ａｎｄ  Ｕｓｅ”ｂｙ  Ｓｔａｈｌ  ａｎｄ  Ｗｅｒｍｕｔｈ（Ｗｉｌｅｙ−ＶＣＨ，Ｗｅｉｎｈｅｉｍ，Ｇｅｒｍａｎｙ，２００２）において参照することができる。
【００７６】
単離又は精製目的では、薬学的に許容し難い塩、例えばピクリン酸塩又は過塩素酸塩を使用することも可能である。治療的使用のため、薬学的に許容し得る塩又は遊離の化合物のみが用いられ（医薬調製物の形態で適用可能な場合）、したがってこれらが好ましい。遊離の形態の新規化合物と、その塩の形態の新規化合物（例えば、その新規化合物の精製及び同定における中間体として使用することができる塩が含まれる）との間の密接な関係を考慮すると、遊離の化合物へのあらゆる言及は、適宜、対応する塩への言及でもあることを理解するべきである。本発明の組み合わせにおいて使用される化合物の塩は、薬学的に許容し得る塩であることが好ましく、好適な対イオンを形成する薬学的に許容し得る塩が当分野で公知である。そうでないと指定されない限り又は本文によって明確に指示されない限り、本明細書で提供する医薬的組み合わせにおいて有用な治療薬への言及には、化合物の遊離の塩基と、化合物のすべての薬学的に許容し得る塩との両方が含まれる。
【００７７】
本明細書で使用する場合、用語「溶媒和物」は、溶質によって形成される可変の化学量（本発明ではトラメチニブ）又はその塩と溶媒との複合体を指す。本発明の目的のこうした溶媒は、溶質の生物活性を妨げない可能性がある。好適な溶媒の例としては、限定されないが、水、メタノール、ジメチルスルホリド（ｄｉｍｅｔｈｙｌｓｕｌｆｏｒｉｄｅ）、エタノール及び酢酸が挙げられる。好適な薬学的に許容し得る溶媒の例としては、限定されないが、水、エタノール及び酢酸が挙げられる。
【００７８】
本明細書で使用する場合の用語「相乗効果」は、それ自体で投与される各薬物の効果を単純に足したものよりも大きい、例えば癌又はその症状の症候的進行を遅らせる効果をもたらす、例えば式（Ｉ）を有するＲａｆ阻害剤化合物又はその薬学的に許容し得る塩、ＭＥＫ阻害剤、好ましくはトラメチニブ若しくはその薬学的に許容し得る塩又は式（ＩＩ）を有するＲａｆ阻害剤化合物又はその薬学的に許容し得る塩、及びＭＥＫ阻害剤、好ましくはトラメチニブ若しくはその薬学的に許容し得る塩などの２種の薬剤の作用を指す。
【００７９】
一実施形態では、本発明の組み合わせは、
（ａ）（ｉ）式（Ｉ）
【化５】
2020518568.tif 000006
の化合物又はその薬学的に許容し得る塩からなる群から選択されるＲａｆ阻害剤化合物、及び
（ｉｉ）式（ＩＩ）
【化６】
2020518568.tif 000007
の化合物又はその薬学的に許容し得る塩と、
（ｂ）ＭＥＫ阻害剤と
を含む。
【００８０】
一実施形態では、本発明の組み合わせは、
（ａ）Ｒａｆ阻害剤、式（Ｉ）
【化７】
2020518568.tif 000008
の化合物又はその薬学的に許容し得る塩と、
（ｂ）ＭＥＫ阻害剤と
を含む。
【００８１】
一実施形態では、本発明の組み合わせは、
（ａ）Ｒａｆ阻害剤、式（ＩＩ）
【化８】
2020518568.tif 000009
の化合物又はその薬学的に許容し得る塩と、
（ｂ）ＭＥＫ阻害剤と
を含む。
【００８２】
一実施形態では、本発明の組み合わせは、
（ａ）Ｒａｆ阻害剤、式（Ｉ）
【化９】
2020518568.tif 000010
の化合物又はその薬学的に許容し得る塩と、
（ｂ）トラメチニブ、ＰＤ０３２５９０１、ＰＤ１８４３５２、レファメチニブ、コビメチニブ、ＡＳ−７０１２５５、ＡＳ−７０１１７３、ピマセルチブ、ＲＤＥＡ４３６、ＲＯ４９８７６５５、ＲＧ７１６７及びＲＧ７４２０を含む群から選択されるＭＥＫ阻害剤又はその薬学的に許容し得る塩若しくは溶媒和物と
を含む。
【００８３】
一実施形態では、本発明の組み合わせは、
（ａ）Ｒａｆ阻害剤、式（ＩＩ）
【化１０】
2020518568.tif 000011
の化合物又はその薬学的に許容し得る塩と、
（ｂ）トラメチニブ、ＰＤ０３２５９０１、ＰＤ１８４３５２、レファメチニブ、コビメチニブ、ＡＳ−７０１２５５、ＡＳ−７０１１７３、ピマセルチブ、ＲＤＥＡ４３６、ＲＯ４９８７６５５、ＲＧ７１６７及びＲＧ７４２０を含む群から選択されるＭＥＫ阻害剤又はその薬学的に許容し得る塩若しくは溶媒和物と
を含む。
【００８４】
好ましい実施形態では、本発明の組み合わせは、
（ａ）Ｒａｆ阻害剤、
（ｉ）式（Ｉ）
【化１１】
2020518568.tif 000012
の化合物又はその薬学的に許容し得る塩からなる群から選択される化合物、及び
（ｉｉ）式（ＩＩ）
【化１２】
2020518568.tif 000013
の化合物又はその薬学的に許容し得る塩と、
（ｂ）ＭＥＫ阻害剤若しくはトラメチニブ又はその薬学的に許容し得る塩若しくは溶媒和物と
を含む。
【００８５】
非常に好ましい実施形態では、本発明の組み合わせは、
（ａ）Ｒａｆ阻害剤、式（Ｉ）
【化１３】
2020518568.tif 000014
の化合物又はその薬学的に許容し得る塩と、
（ｂ）ＭＥＫ阻害剤若しくはトラメチニブ又はその薬学的に許容し得る塩若しくは溶媒和物（例えば、ジメチルスルホキシド溶媒和物）
を含む。
【００８６】
別の好ましい実施形態では、本発明の組み合わせは、
（ａ）Ｒａｆ阻害剤、式（ＩＩ）
【化１４】
2020518568.tif 000015
の化合物又はその薬学的に許容し得る塩と、
（ｂ）ＭＥＫ阻害剤若しくはトラメチニブ又はその薬学的に許容し得る塩若しくは溶媒和物と
を含む。
【００８７】
本発明の組み合わせは、細胞株及びヒト異種移植モデル、Ｃａｌｕ−６において、いずれかの単剤療法と比較して腫瘍反応の深さ及び持続性の向上を示し（実施例参照）、したがって増殖性疾患、特に癌の治療に有効である可能性がある。したがって、本発明は、固形腫瘍、特に１つ又は複数のＭＡＰＫ経路変化を内在する腫瘍、例えばＢＲＡＦ変異、ＫＲＡＳ変異及びＮＲＡＳ変異癌を治療するための、式（Ｉ）の化合物又はその薬学的に許容し得る塩、及び式（ＩＩ）の化合物又はその薬学的に許容し得る塩からなる群から選択されるＲａｆ阻害剤を、ＭＥＫ阻害剤、特にトラメチニブ又はその薬学的に許容し得る塩若しくは溶媒和物と組み合わせて使用する組成物及び方法を提供する。
【００８８】
好ましくは、これらの治療薬は、組み合わせられた場合に有益な効果を提供する治療的に有効な投薬量で投与される。本発明は、特に、増殖性疾患を治療するための、それを必要とする対象への個別、同時又は連続投与に有用な本発明の組み合わせに関連する。換言すると、本発明は、特に、増殖性疾患の治療で使用するための本発明の組み合わせに関連する。
【００８９】
増殖性疾患の性質は、多因子性である。ある種の状況では、作用の異なる機構を有する治療薬を組み合わせることができる。しかし、異なる作用様式を有する治療薬の任意の組み合わせのみを考えることが、好都合な効果を有する組み合わせを必ずしももたらすとは限らない。
【００９０】
本発明では、本発明の組み合わせの投与は、いずれかの単剤療法と比較して、例えば増殖性疾患又はその症状の進行遅延又は阻害に関してより有益な効果、例えば相乗的又は向上された抗増殖効果及び場合によりさらなる有益な効果、例えばより少ない副作用、例えば生活の質の向上又は例えば病的状態の減少をもたらすことが期待される。
【００９１】
本発明の組み合わせの治療薬を、それを必要とする対象に別々に、同時に又は連続して投与することができる。好ましくは、これらの治療薬は、組み合わせられた場合に有益な効果を提供する治療的に有効な投薬量で投与される。したがって、本発明の一実施形態では、本発明の組み合わせは、増殖性疾患、特に癌の治療で使用するためのものである。
【００９２】
一実施形態では、増殖性疾患は、癌である。用語「癌」は、本明細書では、すべての固形及び血液の悪性腫瘍を含む広範な腫瘍を意味するために使用される。癌は、初期、中間期又は末期であり得る。癌は、局所進行性又は転移性であり得る。
【００９３】
本明細書に記載した組み合わせ療法によって治療されることとなる癌は、標準治療後において又は有効な標準の治療法が存在しない人について進行している可能性がある。
【００９４】
本明細書に記載した組み合わせによって治療されることとなる癌は、ベムラフェニブ、ダブラフェニブなどのＢＲＡＦ阻害剤及び／又はコビメチニブ及びトラメチニブなどのＭＥＫ阻害剤での治療にもはや応答していない可能性がある。例えば、癌は、メラノーマ、例えばダブラフェニブとトラメチニブとの組み合わせでの治療に対して抵抗性であるか、又はコビメチンブとベムラフェニブとの組み合わせでの治療に対して抵抗性であるＢＲＡＦＶ６００変異（ＢＲＡＦＶ６００Ｅ変異が含まれる）メラノーマであり得る。本明細書に記載した組み合わせによって治療されることとなるＮＳＣＬＣ、例えばＢＲＡＦＶ６００変異（ＢＲＡＦＶ６００Ｅ変異が含まれる）ＮＳＣＬＣは、ダブラフェニブなどのＢＲＡＦ阻害剤とトラメチニブなどのＭＥＫ阻害剤との組み合わせでの治療に対して抵抗性であり得る。
【００９５】
一実施形態では、癌は、メラノーマ、非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）、ＭＵＴＹＨ関連ポリポーシス（ＭＡＰ）を含む大腸癌（ＣＲＣ）、膵管腺癌（ＰＡＤＣ）、子宮頸癌及び卵巣癌を含む群から選択される。
【００９６】
一実施形態では、増殖性疾患は、非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）である。
【００９７】
一実施形態では、増殖性疾患は、メラノーマである。
【００９８】
一実施形態では、増殖性疾患は、ＭＵＴＹＨ関連ポリポーシス（ＭＡＰ）を含む大腸癌（ＣＲＣ）である。
【００９９】
一実施形態では、増殖性疾患は、膵管腺癌（ＰＡＤＣ）である。
【０１００】
一実施形態では、増殖性疾患は、子宮頸癌である。
【０１０１】
一実施形態では、増殖性疾患は、卵巣癌である。
【０１０２】
本発明の組み合わせは、特に、ＫＲＡＳ変異腫瘍及びＮＲＡＳ変異腫瘍などの１つ又は複数のマイトジェン活性化プロテインキナーゼ（ＭＡＰＫ）経路変化を内在する癌並びに特に本明細書に記載した通りのＲａｓの少なくとも１つの機能獲得型変異及び／又は本明細書に記載した通りのＲａｆの少なくとも１つの機能獲得型変異を発現する腫瘍などの増殖性疾患の治療に有用である。
【０１０３】
含まれるのは、典型的であるか又は典型的でないか、すなわちＢＲＡＦＶ６００Ｅ変異ＮＳＣＬＣであるか又はＢＲＡＦ  非Ｖ６００Ｅ変異ＮＳＣＬＣであるかにかかわらず、Ｖ６００Ｄ、Ｖ６００Ｅ、Ｖ６００Ｋなどを含むＢＲＡＦ変異を有する癌又は腫瘍、例えば少なくとも１つのＶ６００Ｅ又は他のＢＲＡＦ変異を有するＮＳＣＬＣである。大抵のＢＲＡＦ変異は、２つの領域：ＮローブのグリシンリッチＰループ並びに活性化セグメント及び隣接領域にクラスター化される。Ｖ６００Ｅ変異は、様々な癌において検出されており、ヌクレオチド１７９９位でのチミンのアデニンでの置換が原因である。これは、コドン６００でグルタミン酸（Ｅ）によって置換されているバリン（Ｖ）（現在、Ｖ６００Ｅと呼ばれる）をもたらす。ＢＲＡＦ変異メラノーマには、ＢＲＡＦＶ６００Ｅ変異及びＢＲＡＦＶ６００Ｄ変異メラノーマが含まれる。
【０１０４】
含まれるのは、ＫＲＡＳ変異癌又は腫瘍である。用語「ＫＲＡＳ変異」腫瘍又は癌には、変異したＫＲＡＳタンパク質、特に機能獲得型ＫＲＡＳ変異；特にあらゆるＧ１２Ｘ、Ｇ１３Ｘ、Ｑ６１Ｘ又はＡ１４６Ｘ  ＫＲＡＳ変異（ここで、Ｘは、その位置に天然に存在するアミノ酸以外のいずれかのアミノ酸である）を呈するあらゆる腫瘍が含まれる。例えば、Ｇ１２Ｖ変異は、グリシンがコドン１２においてバリンで置換されることを意味する。腫瘍におけるＫＲＡＳ変異の例としては、Ｑ６１Ｈ、Ｑ６１Ｋ、Ｇ１２Ｖ、Ｇ１２Ｃ、Ｇ１２Ｄ、Ｇ１２Ｒ、Ｇ１２Ｓ、Ｇ１３Ｄ及びＡ１４６Ｔが挙げられる。したがって、ＫＲＡＳ変異ＮＳＣＬＣには、Ｇ１２Ｘ、Ｇ１３Ｘ、Ｑ６１Ｘ又はＡ１４６Ｘに対応する少なくとも１つのＫＲＡＳ変異、特にＱ６１Ｋ、Ｇ１２Ｖ、Ｇ１２Ｃ及びＡ１４６Ｔ  ＮＳＣＬＣから選択される少なくとも１つのＫＲＡＳ変異を有する腫瘍が含まれる。癌は、初期、中間期又は末期であり得る。
【０１０５】
ＫＲＡＳ変異癌には、ＫＲＡＳ  Ｇ１２Ｄ変異卵巣癌；ＫＲＡＳ  Ｇ１２Ｖ変異又はＧ１３Ｄ変異大腸癌；ＫＲＡＳ  Ｑ６１Ｈ変異、ＫＲＡＳ  Ｑ６１Ｋ変異、ＫＲＡＳ  Ｇ１２Ｃ変異、ＫＲＡＳ  Ｇ１２Ｓ変異又はＫＲＡＳ  Ｇ１２Ｖ変異ＮＳＣＬＣ；ＫＲＡＳ  Ｇ１２Ｄ変異、Ｇ１２Ｖ変異又はＫＲＡＳ  Ｇ１２Ｒ変異膵癌が含まれる。
【０１０６】
含まれるのは、ＮＲＡＳ変異癌又は腫瘍である。用語「ＮＲＡＳ変異」腫瘍又は癌には、変異したＮＲＡＳタンパク質、特に機能獲得型ＮＲＡＳ変異を呈するあらゆる腫瘍；特にあらゆるＧ１３Ｒ、Ｑ６１Ｋ、Ｑ６１Ｌ、Ｑ６１Ｒ、ＮＲＡＳ変異腫瘍が含まれる。したがって、ＮＲＡＳ変異メラノーマには、Ｑ６１Ｋ、Ｑ６１Ｌ又はＱ６１Ｒに対応する少なくとも１つのＮＲＡＳ変異を有するメラノーマが含まれる。癌は、ＮＲＡＳ  ＱＧ１３Ｒ変異メラノーマであり得る。癌は、初期、中間期又は末期であり得る。癌は、局所進行性又は転移性であり得る。
【０１０７】
本発明の一実施形態では、癌は、Ｂ−Ｒａｆの１つ又は複数の変異によって特徴付けられる。
【０１０８】
別の実施形態では、癌は、標準治療に対して耐性又は抵抗性である。
【０１０９】
別の実施形態では、癌は、Ｂ−Ｒａｆ阻害剤、例えばダブラフェニブでの治療に対して耐性又は抵抗性である。
【０１１０】
別の実施形態では、癌は、ＭＥＫ阻害剤、例えばトラメチニブでの治療に対して耐性又は抵抗性である。
【０１１１】
別の実施形態では、癌は、Ｂ−Ｒａｆ阻害剤、例えばダブラフェニブ及びＭＥＫ阻害剤、例えばトラメチニブでの治療に対して耐性又は抵抗性である。
【０１１２】
一実施形態では、癌は、ＢＲＡＦ及びＫＲＡＳタンパク質を含む群から選択される少なくとも１つの変異によって特徴付けられる。
【０１１３】
一実施形態では、癌は、ＢＲＡＦ、ＮＲＡＳ、ＫＲＡＳ変異及びその組み合わせからなる群から選択される変異によって特徴付けられる。
【０１１４】
一実施形態では、本発明の組み合わせは、増殖性疾患、特に癌を治療するための方法に関する。
【０１１５】
本発明の組み合わせは、ＫＲＡＳ変異ＮＳＣＬＣ、ＫＲＡＳ変異膵癌、ＫＲＡＳ変異大腸癌又はＮＲＡＳ変異メラノーマを治療するのに特に有用である可能性がある。好ましい実施形態では、治療されることとなる増殖性疾患又は癌は、ＫＲＡＳ変異ＮＳＣＬＣである。別の好ましい実施形態では、治療されることとなる増殖性疾患又は癌は、ＮＲＡＳ変異メラノーマである。
【０１１６】
一実施形態では、本明細書で提供されるのは、癌の治療を、それを必要とする対象において行うための方法であって、（ａ）（ｉ）本明細書で定義される通りの式（Ｉ）の化合物若しくはその薬学的に許容し得る塩、及び（ｉｉ）本明細書で定義される通りの式（ＩＩ）の化合物若しくはその薬学的に許容し得る塩からなる群から選択されるＲａｆ阻害剤と、（ｂ）ＭＥＫ阻害剤とを含む、治療有効量の本発明の医薬的組み合わせを投与することを含む方法である。好ましい実施形態では、ＭＥＫ阻害剤は、トラメチニブ又はその薬学的に許容し得る塩若しくは溶媒和物である。
【０１１７】
一実施形態では、本明細書で提供されるのは、癌の治療を、それを必要とする対象において行うための方法であって、（ａ）（ｉ）本明細書で定義される通りの式（Ｉ）の化合物若しくはその薬学的に許容し得る塩、及び（ｉｉ）本明細書で定義される通りの式（ＩＩ）の化合物若しくはその薬学的に許容し得る塩からなる群から選択されるＲａｆ阻害剤と、（ｂ）ＭＥＫ阻害剤とを含む、前記増殖性疾患に対して共同で治療的に有効である量の本発明の組み合わせを、それを必要とする対象に同時に、別々に又は連続して投与することを含む方法である。好ましい実施形態では、ＭＥＫ阻害剤は、トラメチニブ又はその薬学的に許容し得る塩若しくは溶媒和物である。
【０１１８】
さらなる実施形態では、本発明は、特に、１つ又は複数のマイトジェン活性化プロテインキナーゼ（ＭＡＰＫ）経路変化を内在する癌を治療する方法に関連する。一実施形態では、本発明は、ＢＲＡＳ、ＮＲＡＳ及びＫＲＡＳタンパク質を含む群から選択される少なくとも１つの変異によって特徴付けられる癌を治療する方法に関連する。一実施形態では、本発明は、増殖性疾患、特に癌の治療のための医薬品の調製のための本発明の組み合わせの使用に関する。一実施形態では、本発明の組み合わせは、癌の治療のための医薬品の調製に使用するためのものである。
【０１１９】
さらなる実施形態では、本発明は、ＭＡＰＫ経路における機能獲得型変異によって特徴付けられる癌の治療のための医薬品の調製のための本発明の組み合わせの使用に関する。
【０１２０】
一実施形態では、本明細書で提供される組み合わせ又は組成物又はその両方は、相乗効果を呈する。
【０１２１】
したがって、一態様では、本発明は、抗癌化物を別の抗癌化合物と組み合わせて使用することにより、抗癌化合物の効力を高める方法、特に（ｉ）本明細書で定義される通りの式（Ｉ）の化合物若しくはその薬学的に許容し得る塩、及び（ｉｉ）本明細書で定義される通りの式（ＩＩ）の化合物若しくはその薬学的に許容し得る塩からなる群から選択されるＲａｆ阻害剤を、ＭＥＫ阻害剤、適切にはトラメチニブ又はその薬学的に許容し得る塩若しくは溶媒和物と共に使用して、同様の用量の式（Ｉ）の化合物若しくはその薬学的に許容し得る塩、又は化合物（ＩＩ）若しくはその薬学的に許容し得る塩、又はＭＥＫ阻害剤を単剤（単剤療法）として投与することでは安全に達成することができない、高められた効力を提供する方法を提供することができる。
【０１２２】
さらなる利益は、本発明の組み合わせの、より低い用量の治療薬を使用することができ（例えば、その結果、多くの場合に投薬量をより少なくすることができるだけでなく、適用の頻度を低くすることができ）、又は組み合わせパートナー単独の１つで認められる副作用の発生率を減じるために使用し得ることである可能性がある。これは、治療されることとなる患者の願望及び要求と一致する。
【０１２３】
いくつかの実施形態では、（ｉ）本明細書で定義される通りの式（Ｉ）の化合物若しくはその薬学的に許容し得る塩、及び（ｉｉ）本明細書で定義される通りの式（ＩＩ）の化合物若しくはその薬学的に許容し得る塩又はその薬学的に許容し得る塩からなる群から選択されるＲａｆ阻害剤化合物及び／又はＭＥＫ阻害剤、好ましくはトラメチニブ又はその薬学的に許容し得る塩若しくは溶媒和物を、治療用量で又は単剤投与レベルよりも低い治療用量で投与することができる。ある種の実施形態では、阻害、例えば成長阻害又は腫瘍収縮を達成するために必要とされるある治療薬の濃度又は投薬量は、各治療薬が個々に投与される場合よりも、第１の治療薬と組み合わせて他の治療薬が使用又は投与される場合により低い。ある種の実施形態では、組み合わせ療法において、阻害、例えば成長阻害を達成するために必要とされるある治療薬の濃度又は投薬量は、単剤療法としての治療用量よりも低く、例えば１０〜２０％、２０〜３０％、３０〜４０％、４０〜５０％、５０〜６０％、６０〜７０％、７０〜８０％又は８０〜９０％低い。
【０１２４】
１種又は複数の構成成分間の相乗的相互作用を決定することにおいて、効果に対する最適な範囲及び効果に対する各構成成分の絶対的な用量範囲を、治療を必要とする患者への異なるｗ／ｗ比率範囲及び用量にわたる構成成分の投与により、確実に測定することができる。ヒトについて、患者に対する臨床試験を実施することの複雑性及び費用により、相乗作用についての一次モデルとしてのこの形態の試験の使用が実現不可能になる可能性がある。しかし、ある種の実験における相乗作用の観察（例えば、実施例２及び実施例６を参照されたい）は、他の種における効果を予測するものであり得、存在する動物モデルを使用して相乗効果をさらに定量化することができる。ある種における相乗作用の観察は、他の種における効果を予測するものであり得、本明細書に記載した通りに動物モデルを使用して相乗効果を測定することができ、こうした研究の結果をまた、薬物動態／薬力学的（ＰＫ／ＰＤ）方法の適用により、他の種において必要とされる有効な用量比率範囲及び絶対的な用量及び血漿中濃度を予測するために使用することができる。腫瘍モデルと、ヒトにおいて見られる効果との間の確立された相関は、動物における相乗作用を例えば異種移植モデルによって又は適切な細胞株において実証し得ることを示唆する。本発明の組み合わせが本明細書に記載した有益な効果をもたらすことは、確立された試験モデルによって示すことができる。当業者は、こうした有益な効果を証明するために妥当な試験モデルを選択することが十分に可能である。本発明の組み合わせの薬理活性は、例えば、本質的に本明細書に記載した通りの臨床試験において又はインビボ又はインビトロの試験手順において実証することができる。
【０１２５】
組み合わせの投与には、あらゆる好適な経路による単一の製剤又は単位剤形での組み合わせの投与、組み合わせの個々の薬剤の並行してではあるが、別々の投与又は組み合わせの個々の薬剤の連続した投与が含まれる。本発明の組み合わせの個々の組み合わせパートナーは、治療法のクール中の異なる時点で別々に、又は任意の順序で連続して、又は分割された若しくは単一の組み合わせ形態で並行して、例えば同時に又は共同で治療有効量、好ましくは相乗的に有効な量、例えば本明細書に記載した量に対応する毎日の若しくは断続的な（すなわち毎日ではない）投薬量で投与することができる。
【０１２６】
本明細書に開示した方法、治療、組み合わせ及び組成物に使用するための、式（Ｉ）の化合物又はその薬学的に許容し得る塩、及び式（ＩＩ）の化合物又はその薬学的に許容し得る塩は、ＢＲＡＦ及びＣＲＡＦの強力な阻害剤である。いくつかの実施形態では、式（Ｉ）の化合物又はその薬学的に許容し得る塩又は式（ＩＩ）の化合物又はその薬学的に許容し得る塩は、経口的に投与される。一実施形態では、式（Ｉ）の化合物又はその薬学的に許容し得る塩又は式（ＩＩ）の化合物又はその薬学的に許容し得る塩は、約５０〜１２００ｍｇ（例えば、１日あたり）の用量で投与される。式（Ｉ）の化合物又はその薬学的に許容し得る塩又は式（ＩＩ）の化合物又はその薬学的に許容し得る塩は、約５０ｍｇ、約１００ｍｇ、約１５０ｍｇ、約２００ｍｇ、約２５０ｍｇ、約３００ｍｇ、約３５０ｍｇ、約４００ｍｇ、約４５０ｍｇ、約５００ｍｇ、約５５０ｍｇ、約６００ｍｇ、約６５０ｍｇ、約７００ｍｇ、約７５０ｍｇ、約８００ｍｇ、約８５０ｍｇ、約９００ｍｇ、約９５０ｍｇ、約１０００ｍｇ、約１０５０ｍｇ、約１１００ｍｇ、約１１５０ｍｇ又は約１２００ｍｇの単位投薬量で投与することができる。単位投薬量の式（Ｉ）の化合物若しくはその薬学的に許容し得る塩、又は式（ＩＩ）の化合物若しくはその薬学的に許容し得る塩は、１日１回、又は１日２回、又は１日３回、又は１日４回投与することができ、実際の投薬量及び投与のタイミングは、患者の年齢、体重及び性別；治療されることとなる癌の程度及び重症度；及び治療を行う医師の判断などの判断基準によって決定される。好ましくは、単位投薬量の式（Ｉ）の化合物又は式（ＩＩ）の化合物は、１日１回投与される。別の好ましい実施形態では、単位投薬量の式（Ｉ）の化合物又は式（ＩＩ）の化合物は、１日２回投与される。
【０１２７】
本発明による組み合わせの一部としてのＭＥＫ阻害剤は、治療有効量でそれを必要とする対象に投与されることとなる。
【０１２８】
好ましい実施形態では、それを必要とする対象における、本発明による組み合わせの一部として投与される、ＭＥＫ阻害剤トラメチニブ又はその薬学的に許容し得る塩若しくは溶媒和物は、１日あたり約０．１２５ｍｇから約１０ｍｇから選択される量となり；適切には、この量は、１日あたり約０．２５ｍｇ〜約９ｍｇから選択されることとなり；適切には、この量は、約０．２５ｍｇ〜約８ｍｇから選択されることとなり；適切には、この量は、１日あたり約０．５ｍｇ〜約８ｍｇから選択されることとなり；適切には、この量は、１日あたり約０．５ｍｇ〜約７ｍｇから選択されることとなり；適切には、この量は、１日あたり約１ｍｇ〜約５ｍｇから選択されることとなり；適切には、この量は、１日あたり約１ｍｇ又は２ｍｇとなる。好ましい実施形態では、トラメチニブ、トラメチニブ又はその薬学的に許容し得る塩若しくは溶媒和物は、１日あたり０．５ｍｇ、１ｍｇ又は２ｍｇの１日用量で投与される。
【０１２９】
本明細書において用量又は投薬量が言及される場合、言及される量は、治療薬の量を指す。例えば、２ｍｇ投薬量のトラメチニブが投与される場合、トラメチニブは、トラメチニブジメチルスルホキシドを含有する錠剤で投与され、この錠剤は、２ｍｇトラメチニブと均等なトラメチニブジメチルスルホキシドを含有することとなる。
【０１３０】
いくつかの実施形態では、トラメチニブ又はその薬学的に許容し得る塩若しくは溶媒和物は、経口的に投与される。一実施形態では、トラメチニブは、経口送達を介する投与のために調製され、ジメチルスルホキシド中の溶媒和形態で使用することができる。いくつかの実施形態では、化合物は、経口投与のための錠剤形態で調製される。錠剤は、柔軟性のある投与のための様々な投薬量で製造することができる。
【０１３１】
単位投薬量のトラメチニブ又はその薬学的に許容し得る塩若しくは溶媒和物は、１日１回、又は１日２回、又は１日３回、又は１日４回投与することができる。総１日用量のトラメチニブ又はその薬学的に許容し得る塩若しくは溶媒和物、例えばジメチルスルホキシド溶媒和物は、１日１回又は１日２回投与することができる。
【０１３２】
例えば、組み合わせ療法の一部として、式（Ｉ）の化合物又はその薬学的に許容し得る塩を約５０ｍｇ、約１００ｍｇ、約２００ｍｇ、約３００ｍｇ、約４００ｍｇ、約５００ｍｇ、約６００ｍｇ又は約８００ｍｇの総１日用量で投与することができ、トラメチニブを例えばジメチルスルホキシド溶媒和物形態において約１．０又は２．０ｍｇの総１日用量で投与することができる。１日用量の式（１）の化合物を１日につき１回又は２回投与することができる。したがって、約２００ｍｇの式（Ｉ）の化合物の１回投与を１日につき２回（総１日用量は約４００ｍｇ）投与することができ、約１．０ｍｇ又は約２．０ｍｇのトラメチニブの１回投与を１日につき１回投与することができる。或いは、約２００ｍｇの式（Ｉ）の化合物の１回投与を１日につき２回（総１日用量は約４００ｍｇ）投与することができ、約１．０ｍｇ又は約２．０ｍｇのトラメチニブの１回投与を１日につき２回投与することができる。
【０１３３】
式（Ｉ）の化合物又はその薬学的に許容し得る塩と、ＭＥＫ阻害剤、好ましくはトラメチニブ、又はその薬学的に許容し得る塩若しくは溶媒和物、又は式（ＩＩ）の化合物若しくはその薬学的に許容し得る塩と、ＭＥＫ阻害剤、好ましくはトラメチニブ又はその薬学的に許容し得る塩若しくは溶媒和物とは、本明細書に開示した方法に従って一緒に使用することができる。本発明の治療は、２日、３日、４日、５日、６日、１週、２週、３週、４週又は４週より長い間、継続できることが企図されるため、これらの２種の化合物は、治療を行う医師に適切であると判断される通りに、またさらに好適な投薬量及び投与頻度を決定するための本明細書に記載した方法を使用して案内される通りに、意図される投薬量及び投与頻度に応じて一緒に又は別々に投与することができる。投薬の頻度は、使用される化合物及び治療されることとなる特定の状態に応じて変動する可能性がある。一般に、有効な治療法を提供するのに十分である最小の投薬量の使用が好ましく、患者の年齢、体重及び性別；治療されることとなる癌の程度及び重症度；及び治療を行う医師の判断などの判断基準によって決定することができる。患者を、一般に、当業者が熟知しているであろう治療される状態に適したアッセイを使用して治療有効性について観察することができる。
【０１３４】
本発明の組み合わせ（すなわち式（Ｉ）の化合物又はその薬学的に許容し得る塩と、ＭＥＫ阻害剤、適切にはトラメチニブ、又はその薬学的に許容し得る塩若しくは溶媒和物、又は式（ＩＩ）の化合物又はその薬学的に許容し得る塩と、ＭＥＫ阻害剤、適切にはトラメチニブ又はその薬学的に許容し得る塩若しくは溶媒和物との、毒性を伴わずに効力をもたらす最適な比率、個々の及び組み合わせられる投薬量及び組み合わせパートナーの濃度は、標的部位に対する治療薬の利用可能性の動態及び限定されないが、疾患の進行の程度；個人の年齢、体重、全身的健康、性別及び食事；投与の時間及び経路；並びに個人が受けている他の薬物療法を含む様々な因子に基づく。最適な投薬量は、当技術分野で周知である通常の試験及び手順を使用して設定することができる。例えば、単一のボーラスを投与するか、いくつかの分割用量を、時間をかけて投与するか、又は用量を、治療状況の緊急性により、示された通りに比例的に低下若しくは増大させることができる。
【０１３５】
本発明の組み合わせの治療薬は、あらゆる適切な経路によって投与することができる。好ましい経路は、例えば、組み合わせのレシピエントの状態及び治療されることとなる癌によって変動し得ることが理解されるであろう。治療薬のそれぞれを同じ又は異なる経路によって投与し得ること、また治療薬、例えば式（Ｉ）の化合物又はその薬学的に許容し得る塩と、ＭＥＫ阻害剤、適切にはトラメチニブ、又はその薬学的に許容し得る塩若しくは溶媒和物、又は式（ＩＩ）の化合物又はその薬学的に許容し得る塩と、ＭＥＫ阻害剤、適切にはトラメチニブ又はその薬学的に許容し得る塩若しくは溶媒和物とを医薬組成物中で一緒に組み合わせ得ることも理解されるであろう。
【０１３６】
式（Ｉ）の化合物又はその薬学的に許容し得る塩と、ＭＥＫ阻害剤、適切にはトラメチニブ、又はその薬学的に許容し得る塩若しくは溶媒和物、又は式（ＩＩ）の化合物又はその薬学的に許容し得る塩と、ＭＥＫ阻害剤、適切にはトラメチニブ又はその薬学的に許容し得る塩若しくは溶媒和物とは、本明細書に開示した通りに一緒に使用することができる。本発明の組み合わせの２種の治療薬は、一緒に（同時に）、連続して又は別々に投与することができる。
【０１３７】
さらに、化合物が同じ剤形中で投与されるかどうかは問題ではなく、例えば一方の化合物を局所的に投与することができ、他方の化合物を経口的に投与することができる。適切には、両方の治療薬は、経口的に投与される。
【０１３８】
したがって、一実施形態では、１つ又は複数の用量の式（Ｉ）の化合物若しくはその薬学的に許容し得る塩、又は１つ又は複数の用量の式（ＩＩ）の化合物若しくはその薬学的に許容し得る塩は、１つ又は複数の用量のＭＥＫ阻害剤、適切にはトラメチニブ又はその薬学的に許容し得る塩若しくは溶媒和物と同時に、連続して又は別々に投与される。
【０１３９】
一実施形態では、反復用量の式（Ｉ）の化合物若しくはその薬学的に許容し得る塩、又は反復用量の式（ＩＩ）の化合物若しくはその薬学的に許容し得る塩は、反復用量のＭＥＫ阻害剤、適切にはトラメチニブ又はその薬学的に許容し得る塩若しくは溶媒和物と同時に、連続して又は別々に投与される。
【０１４０】
一実施形態では、反復用量の式（Ｉ）の化合物若しくはその薬学的に許容し得る塩、又は反復用量の式（ＩＩ）の化合物若しくはその薬学的に許容し得る塩は、単一用量のＭＥＫ阻害剤、適切にはトラメチニブ又はその薬学的に許容し得る塩若しくは溶媒和物と同時に、連続して又は別々に投与される。
【０１４１】
一実施形態では、単一用量の式（Ｉ）の化合物若しくはその薬学的に許容し得る塩、又は単一用量の式（ＩＩ）の化合物若しくはその薬学的に許容し得る塩は、反復用量のＭＥＫ阻害剤、適切にはトラメチニブ又はその薬学的に許容し得る塩若しくは溶媒和物と同時に、連続して又は別々に投与される。
【０１４２】
一実施形態では、単一用量の式（Ｉ）の化合物若しくはその薬学的に許容し得る塩、又は単一用量の式（ＩＩ）の化合物若しくはその薬学的に許容し得る塩は、単一用量のＭＥＫ阻害剤、適切にはトラメチニブ又はその薬学的に許容し得る塩若しくは溶媒和物と同時に、連続して又は別々に投与される。
【０１４３】
上記のすべての実施形態では、式（Ｉ）の化合物若しくはその薬学的に許容し得る塩、又は式（ＩＩ）の化合物若しくはその薬学的に許容し得る塩を最初に投与するか、又はＭＥＫ阻害剤、適切にはトラメチニブ若しくはその薬学的に許容し得る塩若しくは溶媒和物を最初に投与することができる。
【０１４４】
（ｉ）式（Ｉ）の化合物又はその薬学的に許容し得る塩、及び（ｉｉ）式（ＩＩ）の化合物又はその薬学的に許容し得る塩を含む群から選択されるＲａｆ阻害剤及び／又はＭＥＫ阻害剤、適切にはトラメチニブ又はその薬学的に許容し得る塩若しくは溶媒和物を、治療法に使用するために未加工の化学物質として投与することも可能であるが、医薬組成物としての活性成分を提供することも可能である。したがって、一実施形態では、本明細書で提供されるのは、（ａ）式（Ｉ）の化合物又はその薬学的に許容し得る塩、及び式（ＩＩ）の化合物又はその薬学的に許容し得る塩からなる群から選択されるＲａｆ阻害剤化合物と、（ｂ）ＭＥＫ阻害剤、適切にはトラメチニブ又はその薬学的に許容し得る塩若しくは溶媒和物とを含む医薬組成物である。一実施形態では、この医薬組成物は、１種又は複数の薬学的に許容し得る希釈剤、賦形剤又は担体をさらに含む。担体、希釈剤又は賦形剤は、医薬製剤を可能にする製剤の他の成分と適合性があり、且つそのレシピエントに対して有害でないという意味で許容し得るものでなければならない。利用される医薬組成物のこうした要素は、別の医薬的組み合わせ中に提供するか、又は１つの医薬組成物に一緒に製剤化することができる。本明細書で開示した組み合わせは、単一の組成物中で一緒に投与するか、又は２種以上の異なる組成物、例えば記載した通りの組成物又は剤形中で別々に投与することができ、構成成分は、同じ製剤として又は例えば上で示した通りに別の製剤として単独で又は１種又は複数の薬学的に許容し得る担体と組み合わせて、あらゆる好適な経路によって投与することができる。
【０１４５】
本明細書で使用する場合の投薬単位形態は、治療されることとなる対象に対する単位投薬量として適合された物理的に不連続の単位を指し；各単位は、所望される治療効果をもたらすように算出された、あらかじめ決定された量の活性な化合物（例えば、式（Ｉ）の化合物又はその薬学的に許容し得る塩、式（ＩＩ）の化合物又はその薬学的に許容し得る塩又はＭＥＫ阻害剤、適切にはトラメチニブ又はその薬学的に許容し得る塩若しくは溶媒和物を、必要とされる薬剤用担体と共に含有する。単位剤形は、固定された組み合わせでもあり得る。
【０１４６】
有効な投薬量の組み合わせパートナーのそれぞれは、組み合わせ内の他の治療薬と比較して、治療薬の１つのより高頻度の投与を必要とする可能性がある。したがって、適切な投薬を可能にするために、包装された医薬生成物は、化合物の組み合わせを含有する１種又は複数の剤形及び本発明の組み合わせの治療薬の１つを含有するが、本発明の組み合わせの他の治療薬を含有しない１種又は複数の剤形を含有することができる。
【０１４７】
本発明の組み合わせ内で用いられる組み合わせパートナーが、単一の薬物として販売される形態で適用される場合、その投薬量及び投与の方式は、そうでないと言及されなければ、それぞれの販売される薬物の添付文書上に提供される情報に従うものであり得る。
【０１４８】
したがって、適切な投薬を可能にするために、包装された医薬生成物は、薬剤の組み合わせを含有する１種又は複数の剤形及び組み合わせの治療薬の１つを含有するが、組み合わせの他の治療薬を含有しない１種又は複数の剤形を含有することができる。
【０１４９】
また、本発明の範囲内であるのは、１種又は複数の他の要素を伴う、治療薬としての、本明細書に記載した通りの同時、個別又は連続投与のための本発明の組み合わせ：使用のための説明書；本発明の組み合わせと共に使用するための他の試薬；投与のための化合物を調製するための装置又は他の材料、例えば混合容器；薬学的に許容し得る担体；及び対象への投与のための装置又は他の材料、例えば注射器を含む組み合わせキットである。
【０１５０】
本明細書で使用する場合の用語「組み合わせキット」又は「要素一式」は、本発明に従って使用される医薬組成物又は組成物を意味する。両方の化合物が同時に投与される場合、組み合わせキットは、錠剤などの単一の医薬組成物中又は別の医薬組成物中において、式（Ｉ）の化合物又はその薬学的に許容し得る塩と、ＭＥＫ阻害剤、適切にはトラメチニブ、又はその薬学的に許容し得る塩若しくは溶媒和物、又は式（ＩＩ）の化合物又はその薬学的に許容し得る塩と、ＭＥＫ阻害剤、適切にはトラメチニブ又はその薬学的に許容し得る塩若しくは溶媒和物とを含有することができる。式（Ｉ）の化合物又はその薬学的に許容し得る塩と、ＭＥＫ阻害剤、適切にはトラメチニブ、又はその薬学的に許容し得る塩若しくは溶媒和物、又は式（ＩＩ）の化合物又はその薬学的に許容し得る塩と、ＭＥＫ阻害剤、適切にはトラメチニブ又はその薬学的に許容し得る塩若しくは溶媒和物が同時には投与されない場合、組み合わせキットは、単一の包装品内の別の医薬組成物中又は別の包装品内の別の医薬組成物中において、式（Ｉ）の化合物又はその薬学的に許容し得る塩、式（ＩＩ）の化合物又はその薬学的に許容し得る塩と、ＭＥＫ阻害剤、適切にはトラメチニブ又はその薬学的に許容し得る塩若しくは溶媒和物とを含有することとなる。
【０１５１】
本発明の一実施形態では、要素一式は、次の構成成分を含む：（ａ）（ｉ）式（Ｉ）の化合物又はその薬学的に許容し得る塩（薬学的に許容し得る賦形剤、希釈剤及び／又は担体と共に）、及び（ｉｉ）式（ＩＩ）の化合物又はその薬学的に許容し得る塩（薬学的に許容し得る賦形剤、希釈剤及び／又は担体と共に）からなる群から選択されるＲａｆ阻害剤化合物；並びに（ｂ）ＭＥＫ阻害剤、好ましくはトラメチニブ又はその薬学的に許容し得る塩若しくは溶媒和物（薬学的に許容し得る賦形剤、希釈剤又は担体と共に）。ここで、これらの構成成分は、連続、個別及び／又は同時投与に適した形態で提供される。組み合わせキットは、投薬及び投与の説明書などの説明書と共に提供することもできる。こうした投薬及び投与の説明書は、例えば、薬物製品ラベルによる、医師に対して提供される種類のものであり得るか、又は患者に対する説明書などの医師によって提供される種類のものであり得る。
【０１５２】
本発明の他の特徴、目的及び利点は、説明及び図面から、また特許請求の範囲から明らかであろう。
【０１５３】
以下の実施例は、上記に記載した本発明を例示する。しかし、これらの実施例は、決して本発明の範囲を限定することを意図しない。本発明の医薬的組み合わせの有益な効果は、それ自体が当業者に公知である他の試験モデルによって決定することもできる。
【実施例】
【０１５４】
以下の実施例は、限定されないが、本発明の理解を促進するために記載し、決してその範囲を限定すると解釈されるべきではない。
【０１５５】
実施例１：Ｎ−（３−（２−（２−ヒドロキシエトキシ）−６−モルホリノピリジン−４−イル）−４−メチルフェニル）−２−（トリフルオロメチル）イソニコチンアミド
式（Ｉ）の化合物は、次の構造のモルホリン置換ビアリール化合物である。
【化１５】
2020518568.tif 000016
【０１５６】
式（Ｉ）の化合物は、その内容が参照によって組み込まれる国際公開第２０１４／１５１６１６号パンフレット中の実施例１１５６である。
【０１５７】
実施例１Ａ
式（Ｉ）の化合物は、ｂ−Ｒａｆとｃ−Ｒａｆとの両方のＩＩ型の阻害剤である。
【０１５８】
【表１】
2020518568.tif 000017
【０１５９】
実施例１Ｂ
式（Ｉ）の化合物は、次の表に示す通りの、ＭＡＰＫ経路における変異を発現する多数のヒト癌細胞株に対する活性を呈する。活性は、ＢＲＡＦ又はＲＡＳにおける少なくとも１つの変異を内在する細胞株に対して特に強力である。
【０１６０】
【表２】
2020518568.tif 000018
【０１６１】
実施例１Ｃ
Ｂ−Ｒａｆ及び／又はＭＥＫ阻害剤に対して抵抗性のＢ−Ｒａｆ  Ｖ６００変異メラノーマ細胞における式（Ｉ）の化合物の活性を調べるために、ＭＥＫ１／２、ＮＲＡＳの変異又はＢＲＡＦのスプライスバリアントを発現するＢ−Ｒａｆ  Ｖ６００メラノーマ細胞株Ａ３７５由来の機構的モデルにおける式（Ｉ）の化合物の抗増殖活性を評価した。これらの変異は、Ｂ−Ｒａｆ及び／又はＭＥＫ阻害剤耐性を与えることが前臨床研究と臨床試料との両方で実証されている。親のＡ３７５細胞株及び様々な変異誘発遺伝子を発現するその誘導体における、Ｂ−Ｒａｆ阻害剤ベムラフェニブ及びＭＥＫ阻害剤セルメチニブの効力と比較した式（Ｉ）の化合物の成長阻害効果を下にまとめて示す。これらの変異は、５０倍を超えるＩＣ５０値の増大をもたらす、Ｂ−ＲａｆとＭＥＫ阻害剤との両方に対する耐性を与えた。対照的に、耐性のモデルは、式（Ｉ）の化合物に対してやはり感受性であり、ＩＣ５０は、わずか２〜３倍の増大であった。これらのデータは、Ｂ−Ｒａｆ及び／又はＭＥＫ阻害剤に対して抵抗性となっているＢ−Ｒａｆ  Ｖ６００メラノーマ患者における式（Ｉ）の化合物の使用を裏付ける。
【０１６２】
【表３】
2020518568.tif 000019
【０１６３】
実施例１Ｄ
式（Ｉ）の化合物を、経口投薬のために、当技術分野で周知の原理に従い、約５０ｍｇの式（Ｉ）の化合物を含有する錠剤に製剤化した。所望の投薬量を提供するのに十分な数の錠剤を絶食時の対象に１日１回投与した。対象を１００ｍｇの用量で１日につき１回又は２００ｍｇの用量で１日につき１回治療した。薬物動態（ＰＫ）評価のための連続的血液試料を式（Ｉ）の化合物の初回投与（第１サイクル第１日）の４８時間後まで及び反復投与（第１サイクル第１５日）の２４時間後まで収集した。暫定的な利用可能なデータは、次の通りである。単一の１００ｍｇ用量及び単一の２００ｍｇ用量の投与後４時間以内にそれぞれ４４７ｎｇ／ｍｌ及び８８９ｎｇ／ｍｌの最大血漿中濃度（Ｃｍａｘ）が得られた。投薬の第１日の２４時間の投与間隔にわたる平均血漿中曝露（ＡＵＣｔａｕ）は、式（Ｉ）の化合物の１００ｍｇ及び２００ｍｇ投与後、それぞれ５６７９ｈｒ．ｎｇ／ｍｌ及び１００１９ｈｒ．ｎｇ／ｍｌであった。半減期は、患者においておよそ２３〜２４時間であると算出される。１００ｍｇの１日１回の投薬は、１．８という蓄積の割合で血漿中の式（Ｉ）の化合物のわずかな蓄積をもたらした。これらのデータに基づいて、１日につき１回の投薬スケジュールを確立した。
【０１６４】
実施例２：ＫＲＡＳ変異ＮＳＣＬＣモデルにおける式（Ｉ）の化合物の抗腫瘍活性
細胞に基づくアッセイにおいて、式（Ｉ）の化合物は、ＭＡＰＫシグナル伝達を活性化する様々な変異を含有する細胞株における抗増殖活性を示した。例えば、式（Ｉ）の化合物は、０．２〜１．２μＭの範囲のＩＣ５０値で非小細胞肺癌細胞株Ｃａｌｕ−６（ＫＲＡＳ  Ｑ６１Ｋ）及び大腸細胞株ＨＣＴ１１６（ＫＲＡＳ  Ｇ１３Ｄ）の増殖を阻害した。
【０１６５】
式（Ｉ）の化合物の活性をいくつかの異種移植モデルにおいてインビボで試験した。図１〜４に示す通り、式（Ｉ）の化合物は、ＫＲＡＳ変異肺癌モデルにおける単剤活性を示した。
【０１６６】
Ｃａｌｕ６モデル（ＫＲＡＳ（Ｑ６１Ｋ）変異ＮＳＣＬＣ）：
腫瘍を有する雌のＣａｌｕ６ヌードマウス（ｎ＝８／群）を、平均腫瘍体積が３２４ｍｍ３であるときに治療群に無作為に分けた。異種移植片移植後第１５日目に式（Ｉ）の化合物での治療を開始した。動物には、治療のクール中、１０ｍｌ／ｋｇ（動物体重）の投薬体積において、連続する１３日間、１５ｍｇ／ｋｇ  １日２回（ｂｉｄ）、３０ｍｇ／ｋｇ  １日１回（ｑｄ）、５０ｍｇ／ｋｇ  ｂｉｄ、１００ｍｇ／ｋｇ  ｂｉｄ、２００ｍｇ／ｋｇ  ｑｄ又は３００ｍｇ／ｋｇ  １日おき（ｑ２ｄ）で経口用量のビヒクル、式（Ｉ）の化合物を投与した。腫瘍体積は、デジタルノギスを使用して、無作為化の時点で、またその後、研究期間中に週２回収集した（図１）。わずかな体重減少が２００ｍｇ／ｋｇ  ｑｄ（４％体重減少）及び３００ｍｇ／ｋｇ  ｑ２ｄ（９％体重減少）治療群において認められた。
【０１６７】
Ｈ３５８モデル（ＫＲＡＳ（Ｇ１２Ｃ）変異ＮＳＣＬＣ）：
腫瘍を有する雌のＳＣＩＤベージュＮＣＩ−Ｈ３５８マウス（ｎ＝８／群）を、平均腫瘍体積範囲が２６１ｍｍ３であった腫瘍細胞接種の１４日後に３つの群に無作為に分けた。
【０１６８】
動物には、治療のクール中、１０ｍｌ／ｋｇ（動物体重）の投薬体積において、連続する１４日間、３０ｍｇ／ｋｇ又は２００ｍｇ／ｋｇ（毎日）で経口用量のビヒクル、式（Ｉ）の化合物を投与した。腫瘍体積は、デジタルノギスによって週３回測定し、治療のクールを通してすべての動物の体重を記録した（図２）。わずかな体重減少が３０ｍｇ／ｋｇ（４％体重減少）及び２００ｍｇ／ｋｇ（６％体重減少）治療群において認められた。
【０１６９】
ＰＴＸモデルＨＬＵＸ１１５６−ＫＲＡＳ（Ｇ１２Ｃ）変異ＮＳＣＬＣ：
雌のヌードマウス腫瘍を有する患者由来の第１の肺癌異種移植ＨＬＵＸ１１５６（ｎ＝６／群）を、平均腫瘍体積範囲が２６２ｍｍ３である２つの群に無作為に分けた。異種移植片移植後第３８日目に治療を開始した。動物には、治療のクール中、１０ｍｌ／ｋｇ（動物体重）の投薬体積において、連続する１４日間、１００ｍｇ／ｋｇ（毎日）で経口用量のビヒクル又は式（Ｉ）の化合物を投与した。腫瘍体積は、デジタルノギスによって週２回測定し、治療のクールを通してすべての動物の体重を記録した（図３）。治療は、有意な体重減少がないことによって判断される通り、良好な耐容性を示した。
【０１７０】
Ｈ７２７モデル−ＫＲＡＳ（Ｇ１２Ｖ）変異ＮＳＣＬＣ：
腫瘍を有するＦｏｘｎ１雌のヌードマウスＮＣＩ−Ｈ７２７（ｎ＝８／群）を、平均腫瘍体積範囲が２７５ｍｍ３である２つの群に無作為に分けた。異種移植片移植後第２１日目に治療を開始した。動物には、治療のクール中、１０ｍｌ／ｋｇ（動物体重）の投薬体積において、連続する１４日間、１００ｍｇ／ｋｇ（毎日）で経口用量のビヒクル又は式（Ｉ）の化合物を投与した。腫瘍体積は、デジタルノギスによって週３回測定し、治療のクールを通してすべての動物の体重を記録した（図４）。わずかな体重減少が１００ｍｇ／ｋｇ（４．５％体重減少）治療群において認められた。
【０１７１】
抗腫瘍活性は、ビヒクル治療した群における腫瘍体積に対する治療群における腫瘍体積の割合（％  Ｔ／Ｃ）又は開始体積と比較した腫瘍退縮の割合（退縮（％））を評価することによって決定した。インビボで、式（Ｉ）の化合物での治療は、ＮＳＣＬＣ由来のＣａｌｕ−６（ＫＲＡＳ  Ｑ６１Ｋ）及びＮＣＩ−Ｈ３５８（ＫＲＡＳ  Ｇ１２Ｃ）を含むいくつかのＫＲＡＳ変異モデルにおいて腫瘍退縮をもたらした。すべての場合において、抗腫瘍効果は、用量依存性であった。Ｃａｌｕ−６モデルは、式（Ｉ）の化合物に対して感受性であり、マウスにおいて５０ｍｇ／ｋｇ及び１００ｍｇ／ｋｇ  １日２回（ＢＩＤ）、並びに１００及び２００ｍｇ／ｋｇ  １日１回（ＱＤ）、並びに３００ｍｇ／ｋｇ  １日おきに１回（Ｑ２Ｄ）の用量で腫瘍退縮が観察された。退縮は、２００ｍｇ／ｋｇ  ＱＤ用量において第２のヒトＮＳＣＬＣモデル、ＮＣＩ−Ｈ３５８でも実現した。さらに、Ｃａｌｕ−６異種移植における用量分割効力研究からのデータは、ＱＤ投与される及び１日２回（ＢＩＤ）分割される式（Ｉ）の化合物が、様々な投薬レベルにわたって同様のレベルの抗腫瘍活性を示すことを実証した。これらの結果は、診療所におけるＱＤ又はＢＩＤ投与レジメンの審査を促進する。
【０１７２】
まとめると、良好な耐容性を示す用量の式（Ｉ）の化合物について観察されるインビトロ及びインビボのＭＡＰＫ経路抑制及び抗増殖活性は、式（Ｉ）の化合物が、ＭＡＰＫ経路における活性化損傷を内在する腫瘍を有する患者において抗腫瘍活性を有する可能性があり、したがって特に単剤として又はＭＡＰＫ経路の別のステップに影響を与える阻害剤などの第２の薬剤と組み合わせて、ＫＲＡＳ変異を内在するＮＳＣＬＣ患者の治療のために有用であり得ることを示唆する。式（Ｉ）の化合物は、卵巣癌、膵癌及びメラノーマを含めた、ＭＡＰＫ経路、例えばＲＡＳ又はＲＡＦにおける、機能獲得型変異を発現する様々な他の癌に対する単剤としての活性を有することが示されている。
【０１７３】
実施例２：式（Ｉ）の化合物とトラメチニブとの組み合わせの細胞成長に対する相乗効果
ＮＲＡＳ変異メラノーマ、ＫＲＡＳ変異ＮＳＣＬＣ、ＫＲＡＳ変異ＰＤＡＣ及びＫＲＡＳ変異ＣＲＣにおける増殖及びシグナル伝達に対する、式（Ｉ）の化合物とＭＥＫ１／２阻害剤トラメチニブとを組み合わせることの効果を次の通りに試験した。
【０１７４】
ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ−Ｇｌｏ（登録商標）（ＣＴＧ）発光細胞生存アッセイキット（Ｐｒｏｍｅｇａ，Ｍａｄｉｓｏｎ，ＷＩ，ＵＳＡ）は、細胞の溶解後にウェル内に存在するＡＴＰの量を測定する。溶解時に放出されるＡＴＰがルシフェラーゼ及びその基質ルシフェリンを含む酵素反応において測定される。発せられる光の量は、ＡＴＰの量に比例し、これは、さらにウェル内の生細胞の数に比例する。このアッセイを使用して、薬物処理後の生存細胞の割合が決定される。
【０１７５】
ＮＲＡＳ変異メラノーマ細胞株及びＫＲＡＳ変異ＮＳＣＬＣ細胞株を適切な培地内に維持した。
【０１７６】
【表４】
2020518568.tif 000020
【０１７７】
ＮＲＡＳ変異メラノーマ系統について、０．００２〜１０μＭの範囲の式（Ｉ）の化合物濃度と、１．５２Ｅ−４〜１μＭの範囲のトラメチニブ濃度とを使用して、全グリッド行列において組み合わせを評価した。ＫＲＡＳ変異ＮＳＣＬＣ系統について、０．０１４〜１０μＭの範囲の式（Ｉ）の化合物濃度と、０．００４〜２．７μＭの範囲のトラメチニブ濃度とを使用して、全グリッド行列において又はチェッカー盤型の行列において組み合わせを評価した。特定の細胞株において組み合わせが相乗的であるかどうかを、相乗作用スコア（ＳＳ）と、５０パーセント阻害（ＣＩ５０）効果の大きさでの組み合わせ指数（ＣＩ）とを使用して決定した（Ｌｅｈａｒ  ｅｔ  ａｌ．，２００９）。各細胞株についてのこれらの値の概要を下の表に示す。
【０１７８】
【表５】
2020518568.tif 000021
【０１７９】
この研究を、ＫＲＡＳ変異ＰＤＡＣ及びＣＲＣモデルを使用して繰り返し、以下の結果を得た。
【０１８０】
【表６】
2020518568.tif 000022
【０１８１】
スコア／値の解釈のための一般的ガイドラインを下の表に提供する。
【０１８２】
【表７】
2020518568.tif 000023
【０１８３】
上記の表から示される通り、式（Ｉ）の化合物とトラメチニブとは、ＫＲＡＳ及びＮＲＡＳ変異細胞株における細胞成長に対する相乗効果を有する。式（Ｉ）の化合物とトラメチニブとを組み合わせることは、１つを除くすべての試験された細胞株において中程度乃至強度に相乗的であった。非相乗作用／相加的が認められた１つのＮＳＣＬＣ細胞株、ＮＣＩ−Ｈ２０３０では、式（Ｉ）の化合物又はトラメチニブのいずれか一方に対する単剤反応が観察されないことは、このモデルがＭＡＰＫ依存性ではないという事実に起因する可能性が非常に高い。
【０１８４】
式（Ｉ）の化合物とトラメチニブとを組み合わせることは、試験されたすべてのＮＲＡＳ変異メラノーマ細胞、ＫＲＡＳ変異ＰＤＡＣ、ＫＲＡＳ変異ＣＲＣ系統において中程度乃至強度に相乗的であった。式（Ｉ）の化合物とトラメチニブとを組み合わせることは、試験された１５種のＫＲＡＳ変異ＮＳＣＬＣ細胞株の１４種において中程度乃至強度に相乗的であった。
【０１８５】
試験されたＫＲＡＳ変異ＮＳＣＬＣ系統のうちで最も強力な相乗作用を示したＮＣＩ−Ｈ２１２２の例では、Ｌｏｅｗｅ超過グリッドは、Ｌｏｅｗｅ用量相加的モデルと、低用量の式（Ｉ）の化合物及びトラメチニブ（０．０４１〜０．３７μＭ  式（Ｉ）の化合物及び０．１１μＭ  トラメチニブ）で観察される値との間の＞４０％の差を呈する。実際、単剤の式（Ｉ）の化合物は、これらの低用量では、１μＭ用量未満の最大阻害値＜３０％でほとんど又はまったく活性を有しないが、同じ式（Ｉ）の化合物の用量でのトラメチニブとの組み合わせは、有意な相乗作用（＞４０％のＬｏｅｗｅ超過）を有する。
【０１８６】
試験されたすべてのＮＲＡＳメラノーマ細胞株のうちで最も強力な相乗作用を有していたＳＫ−ＭＥＬ−２では、いずれも低用量のトラメチニブと式（Ｉ））の化合物（０．００２〜０．３７１μＭ  式（Ｉ）の化合物と０．０００１５２〜０．００１μＭのトラメチニブ）で有意な相乗作用が存在する。２つの最も低い用量のトラメチニブ（０．０００１５２〜０．０００４５７μＭのトラメチニブ）では、０．０１４〜０．１２４μＭの範囲の式（Ｉ）の化合物用量との強力な相乗作用が存在し、単剤活性がほとんど又は全く認められない濃度での抗増殖効果がもたらされる。
【０１８７】
式（Ｉ）の化合物とトラメチニブとは、ＫＲＡＳ及びＮＲＡＳ変異細胞株における薬力学的バイオマーカーを阻害する
式（Ｉ）の化合物とトラメチニブとを組み合わせることの相乗的抗増殖効果の原因となる機構を探るために、この組み合わせのＭＡＰＫシグナル伝達に対する効果を、ウエスタンブロット分析を介して調べた。細胞を単剤及び式（Ｉ）の化合物（３００ｎＭ）とトラメチニブ（３ｎＭ）との組み合わせ投与で、４又は２４時間処理した。組み合わせ投与に対するさらなる比較として、細胞をまた１０倍高い単剤用量の式（Ｉ）の化合物及びトラメチニブについてそれぞれ３０００ｎＭ及び３０ｎＭで処理した。
【０１８８】
試験されたＮＲＡＳ変異メラノーマ（ＩＰＣ−２９８及びＭＭ４１５）細胞株とＫＲＡＳ変異ＮＳＣＬＣ（ＮＣＩ−Ｈ２３及びＮＣＩ−Ｈ３５８）細胞株との両方において、式（Ｉ）の化合物とトラメチニブとの組み合わせでの細胞の処理は、組み合わせにおけるｐＭＥＫ１／２及びｐＥＲＫ１／２レベルのいずれかの単剤処理よりも強力な抑制によって判断される通り、経路を抑制する点でいずれかの単剤単独よりも優れていた。さらに、低用量の組み合わせによってもたらされる抑制は、１０倍高いレベルの式（Ｉ）の化合物で得ることができるものよりも優れており、より高いトラメチニブレベルで観察されるのと、やや低いが同様の頑強性であった。このように、式（Ｉ）の化合物とトラメチニブとの組み合わせ治療は、ＭＡＰＫシグナル伝達の高度に相乗的な抑制をもたらした。
【０１８９】
実施例３：式（Ｉ）の化合物とトラメチニブとの組み合わせのインビボ抗腫瘍活性。
下に記載する通り、式（Ｉ）の化合物とトラメチニブとの組み合わせ治療は、ヒトＫＲＡＳ変異ＮＳＣＬＣ、ＣＲＣ、ＰＤＡＣ及びＮＲＡＳ変異メラノーマ異種移植モデルにおいて、いずれかの単剤と比較して腫瘍反応の深さ及び持続性の向上をもたらすことが判明した。したがって、式（Ｉ）の化合物とトラメチニブとの組み合わせ活性は、その癌が、活性化されたＭＡＰＫ経路を内在する患者において、より大きくより持続的な反応を達成する可能性が高いであろう。
【０１９０】
ＫＲＡＳ変異ＮＳＣＬＣ癌モデルにおける式（Ｉ）の化合物とＭＥＫ阻害剤との組み合わせの抗腫瘍活性
ＫＲＡＳ変異ＮＳＣＬＣモデルのＣａｌｕ−６  ＮＳＣＬＣ腫瘍における式（Ｉ）の化合物とＭＥＫ阻害剤との組み合わせの抗腫瘍活性を雌のヌードマウスにおいて確立した。腫瘍がおよそ２５０ｍｍ３に到達したら、マウスを腫瘍体積に従って無作為に治療群（ｎ＝７）に分けた。異種移植片移植後第１０日目に治療を開始した。抗腫瘍活性は、腫瘍細胞移植後第２７日；治療開始後１７日目に決定した。
【０１９１】
試験薬剤は、治療のクール中、１０ｍｌ／ｋｇ（動物体重）の投薬体積において、図５及び６に示された用量レベルで１日１回（ｑｄ）又は１日おきに１回（ｑ２ｄ）経口的に投与した。単剤は、２８日間投与し、式（Ｉ）の化合物とトラメチニブとの組み合わせは、５６日間投与した。腫瘍体積は、デジタルノギスによって週２回測定し、治療のクール全体を通してすべての動物の体重を記録した。
【０１９２】
抗腫瘍活性、腫瘍体積の変化の平均、体重の変化（パーセント）の平均及び治療開始の１７日後（移植の２７日後）の生存を下の表に報告する。
【０１９３】
【表８】
2020518568.tif 000024
【０１９４】
投薬の１７日後、３０ｍｇ／ｋｇ  ｑｄで投与した式（Ｉ）の化合物は、２６％  Ｔ／Ｃを達成したのに対して、０．３ｍｇ／ｋｇ  ｑｄ又は０．３ｍｇ／ｋｇ  ｑ２ｄで投与したトラメチニブは、それぞれ３６％  Ｔ／Ｃ及び５３％  Ｔ／Ｃを達成した。投薬の１７日後、３０ｍｇ／ｋｇ  ｑｄで投与される式（Ｉ）の化合物を、０．３ｍｇ／ｋｇ  ｑｄ又は０．３ｍｇ／ｋｇ  ｑ２ｄで投与されるトラメチニブと組み合わせることは、それぞれ４１％及び１３％退縮を達成した（図５）。
【０１９５】
群間の腫瘍無増悪期間を量的に評価するために、腫瘍の体積が７００ｍｍ３という任意のカットオフを超えた日を記録した。やはり、式（Ｉ）の化合物といずれかの用量のトラメチニブとの組み合わせは、単剤と比較した場合、増大した統計的に有意な抗腫瘍活性を達成した。単剤として式（Ｉ）の化合物及びトラメチニブを投与したマウスにおける腫瘍が治療中に進行したのに対し、式（Ｉ）の化合物とトラメチニブとの組み合わせは、共に単剤療法よりも長く腫瘍退縮を維持し  −  単剤と比較した場合、投薬の２８日後（腫瘍移植の３８日後）、有意な抗腫瘍活性を有していた。
【０１９６】
すべての治療群はまた、研究期間中の体重減少が最小限であり、良好な耐容性を示した。式（Ｉ）の化合物とトラメチニブとの組み合わせはまた、反応の深さの増大に加えて反応の持続性の増大をもたらした（下の表及び図６）。
【０１９７】
【表９】
2020518568.tif 000025
【０１９８】
ＫＲＡＳ変異大腸癌モデルにおける式（Ｉ）の化合物とＭＥＫ阻害剤との組み合わせの抗腫瘍活性
ＨＣＴ１１６（ＫＲＡＳ  Ｇ１３Ｄ）大腸癌（ＣＲＣ）腫瘍を雌のヌードマウスにおいて確立した。腫瘍がおよそ２３０ｍｍ３に到達したら、マウスを腫瘍体積に従って無作為に治療群（ｎ＝６）に分けた。異種移植片移植後第１４日目に治療を開始した。抗腫瘍活性は、腫瘍細胞移植後第３１日目（ビヒクル治療したマウスの最終日）に決定した。
【０１９９】
試験薬剤は、治療のクール中、１０ｍｌ／ｋｇ（動物体重）の投薬体積において、図１６（Ａ）に示された用量レベルで１日１回（ｑｄ）又は１日おきに１回（ｑ２ｄ）経口的に投与した。腫瘍体積は、デジタルノギスによって週２回測定し、治療のクール全体を通してすべての動物の体重を記録した。投薬の１７日後、１００ｍｇ／ｋｇ  ｑｄで投与した式（Ｉ）の化合物は、３０％  Ｔ／Ｃを達成したのに対して、０．３ｍｇ／ｋｇ  ｑｄで投与したトラメチニブは、４４％  Ｔ／Ｃを達成した。投薬の１７日後、１００ｍｇ／ｋｇ  ｑｄで投与される式（Ｉ）の化合物を、０．３ｍｇ／ｋｇ  ｑ２ｄで投与されるトラメチニブと組み合わせることは、２６％退縮を達成した（図１６）。腫瘍移植後の第２４日目に１匹のマウスを体重減少の増大により屠殺した。第３１日、ビヒクル治療の最終日に、式（Ｉ）の化合物で治療したマウスは、４％の合わせた体重減少を有し；トラメチニブで治療したマウスは、３．５％の体重減少を呈し、式（Ｉ）の化合物とトラメチニブとの組み合わせで治療したマウスは、９％の体重減少を示した。
【０２００】
ＰＤＡＣ癌モデルにおける式（Ｉ）の化合物とＭＥＫ阻害剤との組み合わせの抗腫瘍活性
患者由来の２０４３  ＰＤＡＣ（ＫＲＡＳＧ１２Ｄ）腫瘍を雌のヌードマウスにおいて確立した。腫瘍がおよそ２３０ｍｍ３に到達したら、マウスを腫瘍体積に従って無作為に治療群（ｎ＝６）に分けた。異種移植片移植後第５２日目に治療を開始した。抗腫瘍活性は、腫瘍細胞移植後第７３日目に決定した。
【０２０１】
試験薬剤は、治療のクール中、１０ｍｌ／ｋｇ（動物体重）の投薬体積において、図１７Ａに示された用量レベルで１日１回（ｑｄ）又は１日おきに１回（ｑ２ｄ）経口的に投与した。腫瘍体積は、デジタルノギスによって週２回測定し、治療のクール全体を通してすべての動物の体重を記録した。投薬の２１日後、１００ｍｇ／ｋｇ  ｑｄで投与した式（Ｉ）の化合物は、５５％  Ｔ／Ｃを達成したのに対して、０．３ｍｇ／ｋｇ  ｑｄで投与したトラメチニブは、３２％  Ｔ／Ｃを達成した。投薬の２１日後、１００ｍｇ／ｋｇ  ｑｄで投与される式（Ｉ）の化合物を、０．３ｍｇ／ｋｇ  ｑ２ｄで投与されるトラメチニブと組み合わせることは、３５％退縮を達成した（図１７）。腫瘍移植後の第６６日目に１匹のマウスを体重減少の増大により屠殺した。第７３日、組み合わせ治療の最終日に、式Ｉの化合物で治療したマウスは、０．６％の合わせた体重減少を有し；トラメンチニブで治療したマウスは、０．３％の体重減少を呈し、式Ｉの化合物とトラメチニブとの組み合わせで治療したマウスは、９．６％の体重減少を示した。
【０２０２】
メラノーマ癌モデルにおける式（Ｉ）の化合物とＭＥＫ阻害剤との組み合わせの抗腫瘍活性
いくつかのヒトＮＲＡＳ変異メラノーマ異種移植片における式（Ｉ）の化合物とＭＥＫ阻害剤との組み合わせの抗腫瘍活性を次の通りに研究した。
【０２０３】
（ｉ）ＳＫＭＥＬ３０メラノーマモデル
ＳＫＭＥＬ３０（ＮＲＡＳＱ６１Ｋ）メラノーマ腫瘍を雌のヌードマウスにおいて確立した。治療は、１０ｍＬ／ｋｇの用量体積で施した。腫瘍移植後第１２日目、平均腫瘍体積が１９０ｍｍ３になったとき、マウスを無作為に治療群（ｎ＝９）に分けた。抗腫瘍活性は、腫瘍細胞移植後第３４日；治療の開始の２２日後に決定した。
【０２０４】
試験薬剤は、治療のクール中、１０ｍｌ／ｋｇ（動物体重）の投薬体積において、図１８に示された用量レベルで１日１回（ｑｄ）又は１日２回（ｂｉｄ）経口的に投与した。腫瘍体積は、デジタルノギスによって週２回測定し、治療のクール全体を通してすべての動物の体重を記録した。第３４日、ビヒクル治療した群が研究される最終日に、式（Ｉ）の化合物の治療は、５％腫瘍退縮をもたらしたのに対して、０．３ｍｇ／ｋｇ  ｑｄのトラメチニブは、８％  Ｔ／Ｃをもたらした。式（Ｉ）の化合物と、０．１５ｍｇ／ｋｇ  ｑｄでのトラメチニブとの組み合わせは、ビヒクル治療した群と比較した場合、４８％腫瘍退縮という抗腫瘍活性のさらなる増大をもたらした（図１８）。すべての治療群は、研究期間中の体重減少が最小限であり、良好な耐容性を示した。単剤群は、研究期間中、継続的に投与され；式Ｉの化合物とトラメチニブの組み合わせ群において、トラメチニブのみの短い休薬日（第２８日から第３１日）が与えられ、その後、研究の最後まで完全な組み合わせを再び続けた。
【０２０５】
（ｉｉ）ＮＲＡＳ変異メラノーマモデル２０６６７
患者由来の「２０６６７」（ＮＲＡＳＱ６１Ｒ）メラノーマ腫瘍を雌のヌードマウスにおいて確立した。腫瘍がおよそ３００ｍｍ３に到達したら、マウスを腫瘍体積に従って無作為に治療群（ｎ＝７）に分けた。異種移植片移植後第１７日目に治療を開始した。単剤の抗腫瘍活性は、腫瘍細胞移植後第３４日目に決定したのに対して、式（Ｉ）の化合物とトラメチニブとの組み合わせの抗腫瘍活性は、腫瘍細胞移植後第４８日目に決定した。
【０２０６】
試験薬剤は、治療のクール中、１０ｍｌ／ｋｇ（動物体重）の投薬体積において、図１９に示された用量レベルで１日１回（ｑｄ）又は１日２回（ｂｉｄ）経口的に投与した。腫瘍体積は、デジタルノギスによって週２回測定し、治療のクール全体を通してすべての動物の体重を記録した。投薬の１７日後、１００ｍｇ／ｋｇ  ｑｄで投与した式（Ｉ）の化合物は、８７％  Ｔ／Ｃを達成したのに対して、０．３ｍｇ／ｋｇ  ｑｄで投与したトラメチニブは、８２％  Ｔ／Ｃを達成した。投薬の３１日後、５０ｍｇ／ｋｇ  ｂｉｄで投与される式（Ｉ）の化合物を、０．３ｍｇ／ｋｇ  ｑｄで投与されるトラメチニブと組み合わせることは、６８％退縮を達成した（図１９）。すべての治療群は、研究期間中の体重減少が最小限であり、良好な耐容性を示した。
【０２０７】
（ｉｉｉ）ＮＲＡＳ変異メラノーマモデル２１１２４
患者由来の「２１１２４」（ＮＲＡＳＱ６１Ｈ）メラノーマ腫瘍を雌のヌードマウスにおいて確立した。腫瘍がおよそ３００ｍｍ３に到達したら、マウスを腫瘍体積に従って無作為に治療群（ｎ＝５）に分けた。異種移植片移植後第４５日目に治療を開始した。抗腫瘍活性は、腫瘍細胞移植後第６６日目に決定した。
【０２０８】
試験薬剤は、治療のクール中、１０ｍｌ／ｋｇ（動物体重）の投薬体積において、図２０に示された用量レベルで１日１回（ｑｄ）又は１日２回（ｂｉｄ）経口的に投与した。腫瘍体積は、デジタルノギスによって週２回測定し、治療のクール全体を通してすべての動物の体重を記録した。投薬の１７日後、１００ｍｇ／ｋｇ  ｑｄで投与した式（Ｉ）の化合物は、１０％  Ｔ／Ｃを達成したのに対して、０．３ｍｇ／ｋｇ  ｑｄで投与したトラメチニブは、５４％  Ｔ／Ｃを達成した。投薬の２１日後、５０ｍｇ／ｋｇ  ｂｉｄで投与される式（Ｉ）の化合物を、０．０３７５ｍｇ／ｋｇ  ｑｄで投与されるトラメチニブと組み合わせることは、４０％退縮を達成した（図２０）。すべての治療群は、研究期間中の体重減少がなく、良好な耐容性を示した。）
【０２０９】
（ｉｖ）ＮＲＡＳ変異メラノーマモデル「２０８６４」
患者由来の「２１１２４」（ＮＲＡＳＱ６１Ｈ）メラノーマ腫瘍を雌のヌードマウスにおいて確立した。腫瘍がおよそ３００ｍｍ３に到達したら、マウスを腫瘍体積に従って無作為に治療群（ｎ＝５）に分けた。異種移植片移植後第１９日目に治療を開始した。単剤の抗腫瘍活性は、腫瘍細胞移植後第３３日目に決定したのに対して、式（Ｉ）の化合物とトラメチニブとの組み合わせの抗腫瘍活性は、腫瘍細胞移植後第５５日目に決定した。
【０２１０】
試験薬剤は、治療のクール中、１０ｍｌ／ｋｇ（動物体重）の投薬体積において、図２１に示された用量レベルで１日１回（ｑｄ）又は１日２回（ｂｉｄ）経口的に投与した。腫瘍体積は、デジタルノギスによって週２回測定し、治療のクール全体を通してすべての動物の体重を記録した。投薬の１４日後、５０ｍｇ／ｋｇ  ｂｉｄで投与した式（Ｉ）の化合物は、３０％  Ｔ／Ｃを達成したのに対して、０．３ｍｇ／ｋｇ  ｑｄで投与したトラメチニブは、８４％  Ｔ／Ｃを達成した。投薬の３６日後、５０ｍｇ／ｋｇ  ｂｉｄで投与される式（Ｉ）の化合物を、０．０３７５ｍｇ／ｋｇ  ｑｄで投与されるトラメチニブと組み合わせることは、１２％退縮を達成した（図２１）。第３３日目に組み合わせ群の２匹のマウスを薬力学的研究のために屠殺した。残りの研究について、ｎ＝３で効力が続けられた。すべての治療群は、研究期間中の体重減少が最小限であり、良好な耐容性を示した。
【０２１１】
まとめると、データは、式（Ｉ）の化合物とトラメチニブとの組み合わせ治療が、ＭＡＰＫ経路における機能獲得型変異に起因する活性化されたＭＡＰＫ経路を有する患者における、より大きく且つより持続的な反応を達成できることを示唆する。試験された組み合わせ投与のいくつかは、わずかな体重減少（最大１０％）を示したが、試験された組み合わせ投与の大部分は、最小限の体重減少によって判断される通り、良好な耐容性を示した。
【０２１２】
実施例３：ＭＡＰＫ経路変化を内在する進行した固形腫瘍を有する成人の患者における単独及びトラメチニブと組み合わせた式（Ｉ）の化合物の第Ｉ相試験
この試験における単剤としての式（Ｉ）の化合物の推奨される開始用量及びレジメンは、前臨床試験における前臨床安全性、忍容性データ、薬物動態（ＰＫ）及び／又は薬力学的（ＰＤ）データ並びに不活性な用量を受ける可能性がある患者の数を制限しながら、潜在的に毒性の薬物レベルへの曝露を最小限にするための予備的なヒトの効果的な用量範囲予測に基づき、経口的に１００ｍｇ  １日１回（ＱＤ）である。
【０２１３】
１００ｍｇ、２００ｍｇ、２５０ｍｇ、３００ｍｇ又は４００ｍｇの開始用量が想定され；２５０ｍｇ  １日１回（ＱＤ）という開始用量を示す暫定的なデータが固形腫瘍に対して有効であり得る。投薬の最大限の汎用性のために、式（Ｉ）の化合物は、経口投与のための５０ｍｇ及び／又は１００ｍｇ錠剤として調製することができる。前臨床試験では、ＱＤレジメンが効果的であり且つ耐容性を示すことが実証されている。Ｃａｌｕ６異種移植では、ＱＤ又は分割される１日２回（ＢＩＤ）レジメンを用いて同様のレベルの効力が得られ、これは、効力が全体の曝露に関連することを示唆している。予測されるヒトＰＫ及び予測される半減期（約９ｈ）も、効果的な曝露がＱＤ投薬で達成できることを示唆する。
【０２１４】
ＭＥＫ阻害剤、例えばトラメチニブと組み合わせた式（Ｉ）の化合物の用量漸増を、式（Ｉ）の化合物が単剤と識別される投薬レジメンから開始することとなる。式（Ｉ）の化合物の開始用量は、単剤用量よりも低い可能性がある。このように、この用量の選択は、優れた効力を提供するには低すぎる用量を受ける可能性がある患者の数を制限しながら、潜在的に毒性の薬物レベルへの曝露を最小限にするべきである。ＭＥＫ阻害剤、例えばトラメチニブは、単剤の推奨される投薬量である２ｍｇの一定用量で投与されることとなる。
【０２１５】
用量拡大パートでは、組み合わせアームの患者は、用量漸増データに基づく、その薬物組み合わせについて推奨される用量及びレジメンで治療されることとなる。
【０２１６】
組み合わせ研究では、１日用量の４００ｍｇの式（Ｉ）の化合物（ＱＤ）と、１日用量の１ｍｇのトラメチニブ又は１日用量の４００ｍｇの式（Ｉ）の化合物と、１日用量の２ｍｇトラメチニブとが想定される。１日用量の式（Ｉ）の化合物は、１日１回投与される１日用量のトラメチニブに対して優先的に１日２回投与することができる。他の用量、例えば下の表中の用量も投与することができる。
【０２１７】
【表１０】
2020518568.tif 000026
【０２１８】
さらに、効果的な投薬量は、ＭＡＰキナーゼ経路阻害を示すバイオマーカーをモニタリングすることによって決定することができる。具体的には、ＤＵＳＰ６（二重特異性ホスファターゼ６）は、この経路の公知のバイオマーカーであり、ＤＵＳＰ６のインビボレベルは、式（Ｉ）の化合物の効果的な血漿中濃度を伴う式（Ｉ）の化合物の投薬量を受ける対象において下がることが示されている。したがって、ＤＵＳＰ６は、単剤としてか又はＭＥＫ阻害剤と組み合わせてかにかかわらず、式（Ｉ）の化合物で治療される対象における薬力学的バイオマーカーとして使用することができる。
【０２１９】
実施例４：Ｎ−（２−メチル−５’−モルホリノ−６’−（（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−４−イル）オキシ）−［３，３’−ビピリジン］−５−イル）−３−（トリフルオロメチル）ベンズアミド
式（ＩＩ）の化合物は、次の構造のモルホリン置換ビアリール化合物である。
【化１６】
2020518568.tif 000027
【０２２０】
式（ＩＩ）の化合物は、Ｂ−Ｒａｆ及びＣ−Ｒａｆの阻害剤である。この化合物は、開示されており、その調製は、ＰＣＴ特許出願国際公開第２０１４／１５１６１６号パンフレット中の実施例１３１に記載されている。
【０２２１】
実施例４Ａ
式（ＩＩ）の化合物は、変異型及び野生型Ｂ−ＲａｆとＣ−Ｒａｆとの両方のＩＩ型の阻害剤である。
【０２２２】
【表１１】
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【０２２３】
実施例４Ｂ
式（ＩＩ）の化合物は、次の表に示す通りの、ＭＡＰＫ経路における変異を発現する多数のヒト癌細胞株に対する活性を呈する。活性は、ＢＲＡＦ又はＲＡＳにおける少なくとも１つの変異を内在する細胞株に対して特に強力である。
【０２２４】
【表１２】
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【０２２５】
実施例４Ｃ
ＢＲＡＦＶ６００、ＮＲＡＳ又はＫＲＡＳ変異を内在する細胞株における式（ＩＩ）の化合物及びダブラフェニブの活性を比較した（図７）。Ａ３７５細胞では、ダブラフェニブと式（ＩＩ）の化合物との両方は、それぞれ０．０５及び０．５μＭでほぼ完全にＭＥＫ及びＥＲＫリン酸化を阻害した。対照的に、ＮＲＡＳ又はＫＲＡＳ変異を内在する３つの細胞株では、０．０５及び０．５μＭでのダブラフェニブ処理は、ＭＥＫ及びＥＲＫリン酸化の増大をもたらし、５μＭのみ控えめな阻害を示した。比較すると、式（ＩＩ）の化合物は、３つすべてのＲＡＳ変異モデルにおいて、明らかな経路活性化を伴わずに、ＭＥＫ及びＥＲＫリン酸化の用量依存性阻害（ＩＰＣ−２９８及びＨＣＴ１１６におけるｐＭＥＫの最小限の活性化）を示した（図７）。式（ＩＩ）の化合物が経路シグナル伝達を阻害する能力は、様々なＲＡＳ変異を内在する細胞及びＢＲＡＦ  Ｖ６００変異を有するものにおいて比較可能であり、０．５μＭでｐＭＥＫ及びｐＥＲＫのほぼ完全な阻害に到達した。
【０２２６】
これらの細胞株における式（ＩＩ）の化合物及びダブラフェニブの抗増殖活性も調べた（図８）。シグナル伝達データと一致して、ダブラフェニブは、ＢＲＡＦＶ６００ＥＡ３７５細胞において最も強力な抗増殖活性（ＩＣ５０＝０．００３μＭ）、ＮＲＡＳｍｕｔＩＰＣ−２９８細胞においておよそ１００×弱い（ＩＣ５０＝０．２７μＭ）、また２つのＫＲＡＳｍｕｔ細胞株（Ｃａｌｕ−６  ＩＣ５０＝２３μＭ、ＨＣＴ１１６  ＩＣ５０＝１７μＭ）において非常にわずかな活性を示した。対照的に、式（ＩＩ）の化合物は、ＢＲＡＦｍｕｔモデルと比較して、ＲＡＳｍｕｔモデルにおいてより小さいＩＣ５０用量変化を示し、試験されたすべての細胞株において用量依存性の成長阻害を呈し、ＩＣ５０値は、Ａ３７５、ＩＰＣ−２９８、Ｃａｌｕ−６及びＨＣＴ１１６においてそれぞれ０．１３μＭ、０．０７μＭ、１．４μＭ及び０．９８μＭであった。
【０２２７】
式（Ｉ）の化合物を用いる同様の実験は、式（Ｉ）の化合物が同様の結果をもたらすことも実証した（下の表を参照されたい）。
【０２２８】
【表１３】
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【０２２９】
これらのデータは、式（Ｉ）の化合物及び式（ＩＩ）の化合物がＲＡＦ単量体阻害剤のクラスと異なる阻害の様式を呈することを実証する。ＲＡＦ単量体と二量体とを両方とも阻害するその活性は、これがＲＡＳ変異腫瘍において有効である可能性が低いダブラフェニブとは対照的に、ＢＲＡＦ又はＲＡＳ変異を内在する腫瘍を治療するのに有効であるはずであることを示唆している。
【０２３０】
実施例４Ｄ
式（ＩＩ）の化合物の抗増殖活性を、遺伝的に特徴付けられたヒト癌細胞株モデルの広いパネルにおいて分析した。ＢＲＡＦ、ＫＲＡＳ若しくはＮＲＡＳにおける変異を有する３５７種の細胞株又はＢＲＡＦとＲＡＳとの両方についての野生型において、式（ＩＩ）の化合物の活性をダブラフェニブの活性と比較した（図９）。各データ点は、３日の処理の後の細胞株における阻害剤ＩＣ５０値を表す。５μＭという阻害剤ＩＣ５０をカットオフとして使用して、感受性（ＩＣ５０＜５μＭ）及び非感受性（ＩＣ５０＞５μＭ）系統の数を式（ＩＩ）の化合物及びダブラフェニブについて各遺伝的グループ内に示した。例えば、式（ＩＩ）の化合物は、同時に存在するＫＲＡＳ変異の有無にかかわらず、非Ｖ６００変異を内在する癌細胞株（卵巣癌細胞株Ｈｅｙ−Ａ８（ＫＲＡＳＧ１２Ｄ／ＢＲＡＦＧ４６４Ｅ、ＩＣ５０＝０．６３μＭ）、乳癌細胞株ＭＤＡ−ＭＢ−２３１（ＫＲＡＳＧ１３Ｄ／ＢＲＡＦＧ４６４Ｖ、ＩＣ５０＝３．４μＭ）及び肺癌細胞株ＮＣＩ−Ｈ１６６６（ＢＲＡＦＧ４６６Ｖ、ＩＣ５０＝３．９７μＭ）が含まれる）において抗増殖活性を示す。比較すると、ＢＲＡＦ単量体阻害剤ダブラフェニブは、３つすべての細胞株モデルにおいてＩＣ５０＞３０μＭを有していた。データをフィッシャーの直接確率検定を用いて解析して、変異群における阻害剤処理に対する細胞株の感受性が野生型細胞株と比較した場合に有意に増大したかどうかを評価した。式（ＩＩ）の化合物について、Ｂ−Ｒａｆ、ＫＲＡＳ又はＮ−Ｒａｓ変異を内在する細胞株は、野生型であるものと比較すると、有意に増大した感受性を呈し、ｐ値は、それぞれ３．０９×１０−１７、１．１９×１０−４及び１．２６×１０−６であった。オッズ比は、それぞれ２８．９、４．６及び１０．６である。比較すると、ダブラフェニブに対するより高い感受性は、ＫＲＡＳ又はＮ−Ｒａｓ変異を伴わずにＢ−Ｒａｆ変異を内在する細胞株においてのみ有意であり、ｐ値は、それぞれ１．９×１０−１５、０．１１及び０．２５であった。
【０２３１】
実施例５：ＫＲＡＳ変異ＮＳＣＬＣモデルにおける式（ＩＩ）の化合物の抗腫瘍活性
式（ＩＩ）の化合物のシグナル伝達阻害と抗腫瘍効力との両方をＫＲＡＳ変異Ｃａｌｕ−６モデルにおいてインビボで調べた。Ｃａｌｕ−６腫瘍異種移植片は、５０％  Ｍａｔｒｉｇｅｌ（商標）に入れた細胞を雌のヌードマウス（６〜８週齢）の右側腹部の皮下に移植することによってもたらした。腫瘍を有するマウスを治療群に無作為に分け、広い用量範囲（１０〜２００ｍｇ／ｋｇ）にわたる式（ＩＩ）の化合物の単一の経口投与で治療した。次いで、腫瘍組織を、ＭｅｓｏＳｃａｌｅ  Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ（ＭＳＤ）プラットフォーム又は定量的ＰＣＲ（ｑＰＣＲ）によるＤＵＳＰ６  ｍＲＮＡを使用するリン酸化及び総ＭＥＫ１／２のレベルまで投与後の複数の時点で収集した。図１０に示す通り、式（ＩＩ）の化合物での治療は、程度と期間との両方において用量依存性の方式でＭＥＫリン酸化の阻害をもたらした。式（ＩＩ）の化合物は、１００ｍｇ／ｋｇと２００ｍｇ／ｋｇとの両方において、リン酸化されたＭＥＫ（ｐＭＥＫ）を５０％超まで１６時間よりも長く抑制することができた。続いて、同じ腫瘍異種移植モデルにおいて式（ＩＩ）の化合物の抗腫瘍効力を評価した（図１１）。腫瘍を有する動物に１０、３０、１００又は２００ｍｇ／ｋｇで１９日間、毎日（ｑｄ）、経口的に投与されるビヒクル、式（ＩＩ）の化合物を投与した。抗腫瘍活性は、ビヒクル治療した群における腫瘍体積に対する治療群における腫瘍体積の割合（％  Ｔ／Ｃ）又は開始体積と比較した腫瘍退縮の割合（退縮（％））を評価することによって決定した。腫瘍体積及び体重は、無作為化の時点で、また研究期間中に週２回収集した。腫瘍体積は、ノギスでの測定によって求め、変形楕円体式（ここで、腫瘍体積（ＴＶ）（ｍｍ３）＝［（（ｌ×ｗ２）×３．１４１５９））／６］であり、式中、ｌは、腫瘍の最も長い軸であり、ｗは、ｌに対して垂直である）を使用して計算した。ｐＭＥＫ阻害と一致して、式（ＩＩ）の化合物での治療は、３０ｍｇ／ｋｇから開始する、用量依存性の抗腫瘍活性をもたらした（図１１）。３０ｍｇ／ｋｇの式（ＩＩ）の化合物での治療は、５２％  Ｔ／Ｃをもたらしたのに対して、１００ｍｇ／ｋｇ及び２００ｍｇ／ｋｇでの治療は、２つのより高い用量レベルでのより持続的な経路阻害と一致して、それぞれ４７％及び８８％の腫瘍退縮をもたらした。
【０２３２】
式（ＩＩ）の化合物の抗腫瘍活性をさらに評価するために、非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）を有する患者由来の２３人の患者由来の異種移植（ＰＤＸ）モデルにおける式（ＩＩ）の化合物の効力の大規模インビボスクリーンを実施した（図１２）。腫瘍反応は、式（ＩＩ）の化合物治療での、最も良い腫瘍体積の変化の割合の平均のウォーターフォールプロットとして与え、各腫瘍には、ＲＡＳ又はＢＲＡＦのその変異状態について注釈を付けた。６０ｍｇ／ｋｇ又は２００ｍｇ／ｋｇ（▼）で毎日投与された式（ＩＩ）の化合物は、ＮＳＣＬＣ  ＰＤＸ腫瘍（ここで、Ｂ−Ｒａｆ、Ｎ−Ｒａｓ又はＫＲＡＳの変異を内在する腫瘍がより良い応答者の中から濃縮された）のサブセットにおいて腫瘍成長阻害をもたらした。Ｂ−Ｒａｆ変異腫瘍の１つ、ＨＬＵＸ１３２３は、Ｒａｆ二量体化によって媒介されるシグナル伝達を活性化することが示されているＤ５９４Ｎ変異を内在し、式（ＩＩ）の化合物は、このモデルにおいて２６％の腫瘍収縮をもたらした。これらのデータは、Ｒａｆ単量体又は二量体及び発癌性ＭＥＫ／ＥＲＫシグナル伝達を阻害することにおけるその選択的活性の結果としての、Ｒａｓ変異癌細胞とＢ−Ｒａｆ変異癌細胞との両方における式（ＩＩ）の化合物の抗癌効力をさらに裏付ける。
【０２３３】
実施例６：式（ＩＩ）の化合物とＭＥＫ阻害剤との相乗効果
広い用量範囲にわたる、単剤としての又は２つを組み合わせて用いる式（ＩＩ）の化合物又はトラメチニブでの治療後、ＨＰＡＦ−ＩＩ細胞（ＫＲＡＳ変異）の成長阻害を測定した。アイソボログラム及び相乗作用スコアを作成して組み合わせ活性を評価した。図１３に示す通り、トラメチニブと組み合わせた式（ＩＩ）の化合物は、１１．１のＬｏｅｗｅ相乗作用スコアを伴い、ＨＰＡＦ−ＩＩ細胞成長を阻害することに対する相乗効果を有していた。
【０２３４】
いずれかの薬剤単独に対する、組み合わせ治療のシグナル伝達阻害に対する効果を評価するために、ＨＰＡＦ−ＩＩ異種移植腫瘍を有するヌードマウスを１００ｍｇ／ｋｇの単一用量の式（ＩＩ）の化合物、０．３ｍｇ／ｋｇのトラメチニブ又は組み合わせられた２つの阻害剤で治療した。経路活性の測定値としてのＤＵＳＰ６  ｍＲＮＡレベルを、投与後の複数の時点で収集された腫瘍試料において決定した。図１４に示す通り、式（ＩＩ）の化合物の治療は、投与後４時間（ｈｒ）でビヒクル対照と比較してＤＵＳＰ６の８３％阻害をもたらしたが、この阻害は、投与後１６及び２４ｈｒでのＤＵＳＰ６のレベルの増大によって示される通り、持続的ではなかった。同様に、トラメチニブ治療は、ＤＵＳＰ６の部分的及び一過性の阻害をもたらした。対照的に、式（ＩＩ）の化合物とトラメチニブとの組み合わせは、より維持されるＤＵＳＰ６阻害をもたらし、投与後１６時間でも８０％超の阻害を示した。同じ腫瘍異種移植モデルにおける異なる治療の抗腫瘍効力を評価した。腫瘍を有する動物には、ビヒクル、１００ｍｇ／ｋｇ  ｑｄの式（ＩＩ）の化合物、０．３ｍｇ／ｋｇ  ｑｄのトラメチニブ又は両方の組み合わせを１０日間投与した（図１５）。ＤＵＳＰ６阻害と一致して、式（ＩＩ）の化合物とトラメチニブとの組み合わせの治療は、単剤単独のいずれかよりも大きい抗腫瘍活性をもたらし、式（ＩＩ）の化合物又はトラメチニブによるそれぞれ４０％  Ｔ／Ｃ又は５４％  Ｔ／Ｃと比較すると３３％退縮がもたらされた（図１５）。まとめると、これらのデータは、式（ＩＩ）の化合物とトラメチニブとの組み合わせ治療は、ＭＡＰＫ経路における機能獲得型変異に起因する活性化されたＭＡＰＫ経路を有する患者における、より大きく且つより持続的な反応を達成することを示唆する。トラメチニブと組み合わせた式（Ｉ）の化合物は、いずれかの治療単独よりも大きく且つ持続的な反応を達成し、ＭＡＰＫ経路における機能獲得型変異に起因する活性化されたＭＡＰＫ経路を有する患者における抗腫瘍活性の向上をもたらすことも予想される。
【０２３５】
参照による組み込み
本明細書で言及したすべての刊行物、特許及び受託番号は、それぞれ個々の刊行物又は特許があたかも具体的且つ個々に参照によって組み込まれることが示されるように、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。
【０２３６】
均等物
対象発明の具体的な実施形態を論述してきたが、上記の本明細書は、例示的であり、限定的ではない。本発明の多くの変形形態は、本明細書及び下の特許請求の範囲を見直す際に当業者に明らかとなるであろう。本発明の完全な範囲は、均等物のその完全な範囲を伴う特許請求の範囲及びその変形形態を伴う本明細書を参照することによって決定されるべきである。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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【図１４】
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【図１５】
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【図１６】
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【図１７】
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【図１８】
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【図１９】
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【図２０】
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【図２１】
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【国際調査報告】
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