(57)【要約】  本発明は，安定剤の存在により，ヨウ化物及び揮発性ヨウ素への三ヨウ化物の分解が著しく抑制される，多糖類及び三ヨウ化物を含む抗菌活性を有する固体形態に関し，さらに，その調製及び使用に関する。三ヨウ化物を含む液体形態と比較して，安定化された固体形態は，形状安定性と材料全体の体積（重量）が大幅に小さいため，はるかに幅広い用途に使用できる。多糖類がヒアルロン酸又はその化学的に修飾された誘導体，アルギン酸ナトリウム，オキシセルロース，カルボキシメチルセルロース又はヒドロキシエチルセルロースを含む理論的な多糖類の式では，2020522507.tif 000010Ｒは所望によりＮ又はＯ原子を含む，アルキル，芳香族，ヘテロ芳香族の炭素原子数１〜３０の直鎖又は枝分かれ鎖であり，Ｒ１は，所望によりＮ又はＯ原子を含む，アルキル，芳香族，ヘテロ芳香族の炭素原子数１〜３０の直鎖又は枝分かれ鎖又は−Ｈであり，該安定剤中のＲ１は独立して同一又は異なる。
2020522507.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
一種類以上の多糖類及び／又は一種類以上の化学的に修飾されたその誘導体，
一般式Ｘの安定剤：
2020522507.tif 000007
（式中，Ｒは所望によりＮ又はＯ原子を含む，アルキル，芳香族，ヘテロ芳香族の炭素原子数１〜３０の直鎖又は枝分かれ鎖であり，
Ｒ１は，所望によりＮ又はＯ原子を含む，アルキル，芳香族，ヘテロ芳香族の炭素原子数１〜３０の直鎖又は枝分かれ鎖又は−Ｈであり，該安定剤中のＲ１は独立して同一又は異なり，そして
Ｙは塩化物アニオン，臭化物アニオン又はヨウ化物アニオンである），並びに
三ヨウ化ナトリウム又は三ヨウ化カリウムを含むことを特徴とする抗菌性組成物。
【請求項２】
前記多糖類又は前記化学的に修飾されたその誘導体が，５ｘ１０３〜１ｘ１０６g.mol−１の範囲の分子量を有し，且つヒアルロン酸，アルギン酸ナトリウム，オキシセルロース，カルボキシメチルセルロース，ヒドロキシエチルセルロース又は修飾されたヒアルロン酸であって，その中のいくつかの−ＯＨ基が−Ｏ−ＣＯ−Ｒ２基で置換され，及び／又はいくつかの−ＣＯ−ＯＨ基が−ＣＯ−ＯＲ２基によって置換され，Ｒ２が炭素原子数１〜１５の直鎖又は芳香族鎖であるもの，又はそれらの混合物を含む群から選択されることを特徴とする請求項１記載の組成物。
【請求項３】
前記安定剤が，チアミン，オキシチアミン塩酸塩，５−（２−ヒドロキシエチル）−３，４−ジメチルチアゾリウムヨージド及び３−ベンジル−５−（２−ヒドロキシエチル）−４−メチルチアゾリウムブロミドを含む群から選択されることを特徴とする請求項１記載の組成物。
【請求項４】
凍結乾燥体，自己支持膜，不織布，エンドレスファイバー，織物，編物，組物又はナノファイバー層を含む群から選択される固体形態であることを特徴とする請求項１〜３いずれか１項記載の組成物。
【請求項５】
一般式Ｘ：
2020522507.tif 000008
（式中，Ｒは所望によりＮ又はＯ原子を含む，アルキル，芳香族，ヘテロ芳香族の炭素原子数１〜３０の直鎖又は枝分かれ鎖であり，
Ｒ１は，所望によりＮ又はＯ原子を含む，アルキル，芳香族，ヘテロ芳香族の炭素原子数１〜３０の直鎖又は枝分かれ鎖又は−Ｈであり，該安定剤中のＲ１は独立して同一又は異なり，そして
Ｙは塩化物アニオン，臭化物アニオン又はヨウ化物アニオンである）の安定剤，並びに
三ヨウ化ナトリウム又は三ヨウ化カリウムを，
多糖類並びに／又は化学的に修飾されたその誘導体並びに／又は多糖類及び／もしくはその誘導体の混合物を含む系に添加し，そこで該組成物の最終形態を製造することを特徴とする請求項１〜４いずれか１項記載の組成物の調製方法。
【請求項６】
すべての多糖類及び誘導体の全重量に対して０．２〜１０重量％の濃度の三ヨウ化ナトリウム又は三ヨウ化カリウム，並びに安定剤／三ヨウ化物のモル比が１／１〜５／１までの範囲，好ましくは，１．１／１の一般式Ｘの安定剤を，２０／１〜２００／１，好ましくは１００／１の体積比の水／酢酸溶媒混合物中の多糖類並びに／又は化学的に修飾されたその誘導体並びに／又は多糖類及び／もしくはその誘導体の混合物の０．２〜６重量％溶液に添加し，結果として生じた混合物から，各最終形態の組成物を調製することを特徴とする請求項５記載の組成物の調製方法。
【請求項７】
前記一般式Ｘ：
2020522507.tif 000009
（式中，Ｒは所望によりＮ又はＯ原子を含む，アルキル，芳香族，ヘテロ芳香族の炭素原子数１〜３０の直鎖又は枝分かれ鎖であり，
Ｒ１は，所望によりＮ又はＯ原子を含む，アルキル，芳香族，ヘテロ芳香族の炭素原子数１〜３０の直鎖又は枝分かれ鎖又は−Ｈであり，該安定剤中のＲ１は独立して同一又は異なり，そして
Ｙは塩化物アニオン，臭化物アニオン又はヨウ化物アニオンである）の安定剤，並びに
三ヨウ化ナトリウム又は三ヨウ化カリウムを，エタノール／水溶媒混合物中の溶液の形態で，多糖類又は化学的に修飾されたその誘導体並びに／又は多糖類及び／もしくはその誘導体の混合物をベースとする医療機器の最終形態に塗布することを特徴とする請求項１〜４いずれか１項記載の組成物の調製方法。
【請求項８】
塗布時間が１０分〜７２時間であり，温度が５℃〜４０℃の範囲であることを特徴とする請求項７記載の調製方法。
【請求項９】
前記塗布が，前記溶液の噴霧により，又は前記溶液に５〜１５時間浸漬することにより行われることを特徴とする請求項７記載の組成物の調製方法。
【請求項１０】
前記三ヨウ化物が，０．２〜１０重量％の濃度で溶液中にあり，前記安定剤／前記三ヨウ化物のモル比が１／１〜５／１までの範囲，好ましくは１．１／１であり，且つエタノール／水の体積比が３／１〜９／１までの範囲にあることを特徴とする請求項７〜９いずれか１項記載の組成物の調製方法。
【請求項１１】
前記組成物の最終形態が，凍結乾燥体，自己支持膜，ナノファイバー層，不織布，ファイバー，編物，織物及び組物を含むことを特徴とする請求項５〜１０いずれか１項記載の調製方法。
【請求項１２】
請求項１〜４いずれか１項記載の抗菌性組成物を含み，且つ創傷被覆材又は移植可能な医療機器の形態であることを特徴とする医療機器。
【請求項１３】
請求項１〜４記載の創傷被覆材の調製のための組成物の使用。
【請求項１４】
請求項１〜４記載の移植可能な医療機器の調製のための組成物の使用。
【発明の詳細な説明】
【発明の詳細な説明】
【０００１】
発明の分野
本発明は，多糖類，又はその誘導体，又は多糖類及び／もしくはその誘導体の混合物，安定化剤並びに三ヨウ化ナトリウム又は三ヨウ化カリウムを含む抗菌性組成物に関する。該組成物の組成は，多糖類及び／又はその化学的に修飾された誘導体及び／又はそれらの混合物並びに三ヨウ化物アニオン(Ｉ３−)の形態のヨウ素を含む様々なタイプの固体形態の安定化に帰する。三ヨウ化物アニオンのヨウ素（Ｉ２）及びヨウ化物（Ｉ−）への分解を著しく抑制する安定化剤(stabilizing agents)，すなわち安定剤（stabilizers）としては，一般式Ｘのカチオン性複素環式化合物が成功裏に使用される。
2020522507.tif 000003
（式中，Ｒは所望によりＮ又はＯの原子を含む，アルキル，芳香族，ヘテロ芳香族の炭素原子数１〜３０の直鎖又は枝分かれ鎖であり，
Ｒ１は，所望によりＮ原子又はＯ原子を含む，アルキル，芳香族，ヘテロ芳香族の炭素原子数１〜３０の直鎖又は枝分かれ鎖又は−Ｈであり，式Ｘの化合物中のＲ１は独立して同一又は異なり，そして
Ｙは塩化物アニオン，臭化物アニオン，又はヨウ化物アニオンである）。
【０００２】
本発明は，さらに固体形態の調製法に関し，ここでは二つの方法を使用できる。
方法１：三ヨウ化物及び安定剤を完成した最終形態の表面上に吸着させる。
方法２：最終形態を生産する前に三ヨウ化物及び安定剤をその系に加える。
【０００３】
方法１と２の違いは，方法２では，安定剤と共に三ヨウ化物アニオンが，材料のバルク中により均質に分布されるのに対し，方法１では，安定剤と共に三ヨウ化物アニオンが，それぞれの形態の表面上に選択的に分布されることである。
【０００４】
ここで使用される限り，用語「形態」は，薄膜，凍結乾燥体，ステープルファイバー層，エンドレスファイバー，織物，組物（plaited fabrics)又はナノファイバーの層のような材料のタイプに関する。
【０００５】
更に，本発明は，殺菌効果を有する生物学的適合性及び生分解性の材料が必要とされる分野における，調製された固体形態の利用に関する。これらの領域は創傷被覆材又は移植可能な医療機器を含む。
【０００６】
発明の背景
アルギン酸ナトリウムは広範囲の生物医学的な効果を有するアニオン性多糖類である。その主な利点はその生体適合性及びゲルを形成する能力であり，従って，それは，創傷治療及び組織工学の分野でハイドロゲルの調製にしばしば使用される(Lee K. Y. and David J. Mooney D. J., Progress in Polymer Science 37, 1, 106‐126, 2012)。
【０００７】
カルボキシメチルセルロースは増粘し，乳剤を安定化するために主として食品産業において使用されるアニオン性多糖類である。食品以外の製品としては，例えば滑沢剤，塗料，下剤及び洗剤に使用されてきた。この多糖類は，恐らく価格及び興味深い機械的性質が最も有利である創傷治療の分野で広く使用されてきた(Ramli A., Wong T. W., International Journal of Pharmaceutics, 403, 7, 73‐82, 2011)。
【０００８】
オキシセルロースは，環の６位がカルボン酸に酸化したセルロースである。従って，それはアニオン性多糖類であり，止血効果が特に知られており，従って，例えば創傷治療の分野で様々な医学及び製薬の用途に広く使用されており，そこでは止血性に加えて生分解性と吸収特性が大きな利点である(Bajerova M. et al., Advances in polymer technology, 28, 199‐208, 2009)。
【０００９】
ヒドロキシエチルセルロースは，一定のＯＨ基が−ＣＨ２−ＣＨ２−ＯＨ基によって修飾されたセルロース誘導体である。それは，プロトン性の系においてオキシセルロースほど良好な可溶性ではないが，そのゲル化性により化粧品，洗浄溶液及び滑沢剤に広く使用されている。創傷治療については，それは，特にジェランガムのような他の多糖類と組み合わせて使用される(Schmidt R. and Winter G., EP1888134 A2)。
【００１０】
ヒアルロン酸はＤ−グルクロン酸及びＮ−アセチル−Ｄ−グルコサミンの２つの繰り返し単位から成る，非硫酸化グリコサミノグリカンである。
2020522507.tif 000004
（式中，Ｒ１はＨ又はＮａである）。
【００１１】
５ｘ１０３〜１ｘ１０６ g.mol−１の範囲の分子量を有するこの親水性の多糖類は，皮膚，結合組織，滑膜関節液の一部を形成し，プロテオグリカン類の構成，細胞水和及び分化のような多くの生物学的プロセスにおいて重要な役割を果たす(Balazs E., Structural Chemistry, 20, 341‐349, 2009;  Aya K. L. and Stern R. Wound Repair and Regeneration 22, 579‐593, 2014)。それは人体の中に天然に存在し，従って生物分解性であるという事実により，組織工学に適する基材又は生物活性物質のキャリヤーである(Mortisen D. et al., Biomacromolecules, 11 (5), 1261‐1272, 2011; Collins M. N. and Birkinshaw C.,  Carbohydrate Polymers, 92, 1262‐79, 2013)。例えば，骨関節炎の関節中へのヒアルロン酸の注射利用はよく知られており，関節の機能における著しい改良が見られている(Muzzarelli R. A. et al., Review:  Carbohydrate Polymers, 89, 723‐739, 2012)。このポリマーはその生物学的特性により創傷治療プロセスをサポートすることも知られている（Nyman E. et al., J. Plast. Surg. Hand Surg. 47 (2), 89‐92, 2013）。
【００１２】
ヒアルロン酸の化学的修飾とその形態
ヒアルロン酸の物理的及び生物学的性質を変えるための化学的修飾の多くの方法が当該技術分野で知られている(Burdick J. A. and Prestwich G. D. Adv. Mater. 23, 41‐56, 2011)。特定用途のために溶解度の著しい変化が望まれる場合，最も一般的な解決法は，生物分解性のエステル結合の形態による疎水性鎖のポリマー構造体への共有結合形成である(Kettou et al. PV 2009‐399, Buffa et al. WO2010105582)。そのような修飾された材料から様々な形態，例えばファイバー(Scudlova et al. EP2925916 A1)，編物及び組物(Pitucha et al., CZ 306354)，自己支持膜(Foglarova et al. PV2015‐166; Foglarova M. et al. Carbohydrate Polymers 2016, 144, 68‐75)又はナノファイバー層(Ruzickova J. et al. PV2013‐913)を作ることができる。不織布は，非定常凝固浴(non-stationary coagulation bath)中での湿式スピニングによって調製されたステープルマイクロファイバーから形成される。この凝固浴は100%のＣ１‐Ｃ３アルコールからなる。その後，沈殿したファイバーを細砕により短くし，基材に濾取し，乾燥し，そして圧縮する。このようにして，分子量６０〜３，０００kg.mol−１を有するＨＡから不織布を調製することができる。得られる層は，基材に付着されたままでも良いし，５g.m−２より大きい比表面積を有する自己支持層として基材から分離されてもよい。
【００１３】
ヒアルロン酸及び三ヨウ化物
−１(Ｉ−)より高い酸化状態を有するヨウ素の形態は，生物学的適合性の殺菌及び消毒物質として良く知られている。最も普及している形態の一つは三ヨウ化物(酸化度(oxidation grade)−１／３)であり，これは分子状ヨウ素（Ｉ２）及びヨージド（Ｉ−）への可逆的な分解が課題である。分子状ヨウ素は気体状態に変化し，そのため，三ヨウ化物イオンを含む固体は，Ｉ２の昇華により徐々にそれらの酸化能力を失う。この理由で，三ヨウ化物は特に溶液の形態で使用される。一例はいわゆるルゴール溶液，即ち水中の三ヨウ化カリウムであり，これはその生体適合性と効能により，殺菌又は消毒作用に関連した広範囲の用途に適している。その軽微な欠点は，それが傷跡や皮膚の色の一時的な変化を引き起こす場合があるということである。これらの欠点はヒアルロン酸の添加によって克服されており，それは傷跡が残ることをかなり抑制し，且つ一般的には治癒プロセスに著しく寄与している。文献CZ12015は，200,000〜2,500,000の分子量を有する生理学的に許容可能なヒアルロン酸塩，ヨウ素及びヨウ化カリウムを含む包帯付着防止のための製剤を開示している。この製剤は，無菌の水溶液又はゲルの形態であり，創傷治療をより速くすることが可能である。局所的な創傷治療の用途への，ヒアルロン酸及びヨウ化カリウムの溶液(商品名Hyiodine（登録商標）)の使用は，いくつかの文献に公表されてきた((Bezdekova B. et al. Veterinarstvi 54, 516‐519, 2004; Frankova J. et al. Journal of Materials Science: Materials in Medicine 17, 891-898, 2006; Slavkovsky R. et al. Clinical and Experimental Dermatology 35, 4, 373‐379, 2010)。これらの著者は，生物学的適合性及び抗菌性の三ヨウ化物の独特な組み合わせと，治癒プロセスをサポートする生物学的適合性のヒアルロン酸の存在のおかけで優れた結果を達成した。
【００１４】
貯蔵，輸送及び可能な他の現場適用(in situ applications)の点で，溶液の形態の三ヨウ化物と多糖類との使用は著しい制限を示す。この材料(溶液)の体積は類似の固体形態の体積よりかなり大きく，さらに別の現場使用の可能性は溶液形態の不安定性(流動)によりかなり制限される。さらに，三ヨウ化物の酸化活性のため，脆弱な標準ケイ酸塩ガラス以外の，より長い保存のための他のタイプの包装材料の使用が非常に困難である点で，包装の形態によってもこの液体の形態は制限される。多糖類と三ヨウ化物を含む固形物質を調製する試みは，溶媒がない状態での三ヨウ化物の不安定性により成功していなかった。溶媒の存在は，Ｉ２分子の昇華のプロセスを抑制し，三ヨウ化物Ｉ３−の形でＩ−と再結合させる。従って，溶媒の蒸発中に，ルゴール溶液は固体物質から昇華する活性成分（Ｉ２）を急速に失い，そしてそれは三ヨウ化物含む最終形態のうちのいくつかの長期保存の観点から重大な問題である。
【００１５】
文献CZ 22394は，創傷治癒のサポート及び抗菌効果による治癒のサポートのための創傷被覆のための抗菌性混合物について記述する。該混合物は，生理学的に活性なヒアルロン酸塩又は他の多糖類，及び抗菌活性を有する物質，そしてさらに電解質(例えばヨウ化カリウム)を含む。この混合物は，化学的又は物理的混合物の形態であることが可能であり，化学的混合物の場合は好ましくは水溶液であり，物理的混合物の場合は好ましくはその構造内に抗菌性物質を含む多糖類ファイバーの層である。このドレッシング材（dressing）は体表創傷の治療に適している。この解決法の欠点は，特に，三ヨウ化物以外に抗菌剤の存在が必要で，それが局所的皮膚刺激，毒性又はアレルギー反応の危険を含むことである。
【００１６】
上記の問題は，多糖類，三ヨウ化物，及び活性ヨウ素の固体材料からの昇華を著しく遅くする安定剤を含む固体形態の製剤について記述する本発明によって解決される。この解決法は多糖類と三ヨウ化物のみの水溶液よりはるかに広い適用可能性を可能にする。
【００１７】
発明の要約
本発明の主題は，多糖類及び／もしくはその化学的に修飾された誘導体，又は多糖類及び／もしくは誘導体の混合物，三ヨウ化ナトリウム又は三ヨウ化カリウム，並びに一般式Ｘ：
2020522507.tif 000005
（式中，Ｒは所望によりＮ又はＯ原子を含む，アルキル，芳香族，ヘテロ芳香族の炭素原子数１〜３０の直鎖又は枝分かれ鎖であり，
Ｒ１は，所望によりＮ又はＯ原子を含む，アルキル，芳香族，ヘテロ芳香族の炭素原子数１〜３０の直鎖又は枝分かれ鎖又は−Ｈであり，式Ｘの化合物中のＲ１は独立して同一又は異なり，そして
Ｙは塩化物アニオン，臭化物アニオン又はヨウ化物アニオンである）
の安定剤を含む配合剤である。
【００１８】
最終的な材料は，自己支持膜，凍結乾燥体，ステープルファイバー層（不織布），エンドレスファイバー，織物，編物，組物又はナノファイバー層のような様々な固体形態として調製される。
【００１９】
使用された多糖類又は化学的に修飾されたその誘導体は５ｘ１０３〜１ｘ１０６g.mol−１までの範囲の分子量を有し，三ヨウ化物アニオンの源はヨウ化カリウム又はヨウ化ナトリウム及び分子状ヨウ素Ｉ２である。
【００２０】
多糖類は，例えば：
−ヒアルロン酸，アルギン酸ナトリウム，オキシセルロース，カルボキシメチルセルロース，ヒドロキシエチルセルロース，又はいくつかの−ＯＨ基が−Ｏ−ＣＯ−Ｒ２基で置換され及び／又は（いくつかの）−ＣＯ−ＯＨ基が−ＣＯ−ＯＲ２基で置換された（Ｒ２は炭素原子数１〜１５の直鎖又は芳香族鎖である）化学的に修飾されヒアルロン酸誘導体，
−又は個々の成分が所望の比率の様々な多糖類及び／又は多糖誘導体の混合物である。さらに，該組成物又は該最終的な医療機器は，他の物質，例えばポリエチレンオキシド，酢酸等を含み得るが，これらに限定されない。
【００２１】
さらに本発明は，安定化された三ヨウ化物の導入に２つのアプローチを使用し得る調製法に関する。
【００２２】
方法１−コーティング：
第一のアプローチは，エタノール/水の溶媒混合物中の一般式（Ｘ）の安定剤及び三ヨウ化ナトリウム又は三ヨウ化カリウムの溶液を調製し，多糖類もしくはその誘導体並びに／又は多糖類及び／もしくはその誘導体の混合物をベースとする医療機器の完成した形態にこの溶液を塗布することである。塗布時間は，好ましくは５〜４０℃の範囲の温度で１０分間〜７２時間までの範囲である。好ましくは，該溶液は該医療機器に噴霧することにより，又は該溶液へ医療機器を好ましくは５〜１５時間浸漬することにより該医療機器上に塗布することができる。より具体的には，この方法は，３／１〜９／１の体積比のエタノール／水の溶媒混合物中の１／１〜１／５，好ましくは１／１のモル比の三ヨウ化物及び安定剤Ｘの０．２〜１０％(w/w）溶液を，多糖類又はその誘導体又は多糖類の混合物の完成した最終形態の表面への塗布により，好ましくは該三ヨウ化物と該安定剤との該溶液を噴霧するか，又は多糖類又はその誘導体又は多糖類及び／もしくはその誘導体の混合物の最終形態を該三ヨウ化物及び安定剤の該溶液に浸漬することにより行われる。
【００２３】
方法２：第２のアプローチでは，多糖類及び／又は多糖誘導体及び／又はそれらの混合物，三ヨウ化カリウム又は三ヨウ化ナトリウム，並びに一般式Ｘの安定剤の系を含む混合物が調製され，それにより組成物の最終形態が形成される。より詳しくは，０．２〜１０％（全ての多糖類及び／又はそれらの誘導体の総重量をベースとして）の濃度の三ヨウ化物と，三ヨウ化物／安定剤のモル比が１／１〜１／５の範囲，好ましくは，１／１．１の安定剤Ｘを，２０／１〜２００／１，好ましくは１００／１の体積比の水及び酢酸中の多糖類又はその誘導体，又は多糖類及び／もしくはその誘導体の混合物の０．２〜６％(w/w)溶液に添加する。完全な均質化及び最終的には他の物質の添加の後，組成物の最終形態が形成される。
【００２４】
方法２を採用すると，安定剤と共に三ヨウ化物アニオンが，材料のバルクの全体にわたってより均一に分散した材料が形成される。この方法は例えば凍結乾燥体の形態の材料を調製するために使用され得る。
【００２５】
方法１を採用すると，安定剤と共に三ヨウ化物アニオンが，主としてそれぞれの形態の表面上又は表面近くに存在する材料が形成される。この方法は様々な形態：自己支持膜，凍結乾燥体，ステープルファイバー層（不織布），エンドレスファイバー，織物，編物，組物又はナノファイバー層に使用できる。
【００２６】
下記の化合物は，一般式Ｘの安定剤として使用できる:チアミン（Ｂ１），オキシチアミン塩酸塩（ＯＢ１），５−（２−ヒドロキシエチル）−３，４−ジメチルチアゾリウムヨージド（ＴＨ），３−ベンジル−５−（２−ヒドロキシエチル）−４−メチルチアゾリウムブロミド（ＢＴＨ）。
2020522507.tif 000006
【００２７】
チアゾール塩の不存在下でＩ３−を含む凍結乾燥体を調製することを試みたところ，安定剤の有効性が明白に実証された。凍結乾燥(高真空)後の活性ヨウ素の含量は安定剤を含む類似の凍結乾燥体より１００倍低かった。
【００２８】
本発明は，上記で定義されるような抗菌性組成物を含み，且つ，創傷被覆材又は移植可能な医療機器の形態である医療機器にも関する。
【図面の簡単な説明】
【００２９】
【図１】方法２(三ヨウ化物及び安定剤がより均質に分散される)によって調製されたヒアルロン酸（ＨＡ）をベースとする凍結乾燥体の抗菌活性の比較。三ヨウ化物なしの材料（ＨＡ−ＴＨ，ＨＡ−ＢＴＨ，ＨＡ−Ｂ１，ＨＡ）をコントロールとして試験したところ，抑制活性を示さなかった。抗菌性の三ヨウ化物（ＨＡ−ＴＨ−Ｉ３，ＨＡ−ＢＴＨ−Ｉ３，ＨＡ−Ｂ１−Ｉ３）を有する材料は，微生物の増殖を抑制した。全ての材料をEscherichia coli 株について試験した。
【図２】方法２(三ヨウ化物及び安定剤がより均質に分散される)によって調製されたヒアルロン酸（ＨＡ）をベースとする凍結乾燥体の抗菌活性の比較。三ヨウ化物なしの材料（ＨＡ−ＴＨ，ＨＡ−ＢＴＨ，ＨＡ−Ｂ１，ＨＡ）をコントロールとして試験したところ，抑制活性を示さなかった。抗菌性の三ヨウ化物（ＨＡ−ＴＨ−Ｉ３，ＨＡ−ＢＴＨ−Ｉ３，ＨＡ−Ｂ１−Ｉ３）を有する材料は，微生物の増殖を抑制した。全ての材料をStaphylococcus aureus株について試験した。
【図３】実施例１３で調製されたＨＡ−ビタミンＢ１−三ヨウ化物凍結乾燥体(図では，この製剤によって治癒された傷の部分はＨｙＢ１として示される)と，抗菌性のオクテニジンを含有するヒアルロナンベースの凍結乾燥体 (図中，SLとして示される)との脚の開放傷を有する患者における０日目，２日目及び５日目の創傷治療効果の比較(実施例４２に記載された方法)。図は，両方の材料の同等の効果を示す。
【００３０】
実施例
ＤＳ＝多糖類の置換度＝ １００％×(修飾された多糖類単位のモル量)／(多糖類繰り返し単位のモル量)
特記しない限り，ここで使用される用語である当量(equiv)は各多糖類の繰り返し単位に関する。
特記しない限り，パーセントは重量パーセントとして記録される。
％で表した活性ヨウ素の量は，対応する重量パーセントのＩ２を有する材料の酸化活性に相当する，材料の酸化活性率(oxidation active rate)と同等のものを意味する。チオ硫酸ナトリウムを用いる標準酸化還元滴定によって決定した。
多糖類の分子量はSEC-MALLS法によって決定された重量平均分子量である。
【００３１】
実施例１：ヒアルロナンエチルエステルの調製
水４０mL中のヒアルロナン（１g，３００kg.mol−１）の溶液に，ＮａＯＨをｐＨ９となるまで添加した。その後，ジメチルスルホキシド２０mL及びヨウ化エチル０．０８mLを添加し，該混合物を４５℃で３日間撹拌した。続いて，結果として生じた混合物を１００％イソプロパノール１４０mLによって沈殿させ，固体を濾過により分離し（filtered off)，イソプロパノールで洗浄し，真空下で乾燥させた。生成物（８９７mg）をＮＭＲによって分析した。
エステルのＤＳ：６％（ＮＭＲにより測定，Kettou et al. PV 2009-399参照）。
【００３２】
実施例２：ヒアルロナンベンジルエステルの調製
水４０mL中のヒアルロナン（１g，３００kg.mol−１）の溶液に，ＮａＯＨをｐＨ９となるまで添加した。その後，ジメチルスルホキシド２０mL及び臭化ベンジル０．０８mLを添加し，該混合物を２０℃で４日間撹拌した。続いて，結果として生じた混合物を１００％イソプロパノール１４０mLによって沈殿させ，固体を濾過により分離し，イソプロパノールで洗浄し，真空下で乾燥させた。生成物（９２０mg）をＮＭＲによって分析した。
エステルのＤＳ：３％（ＮＭＲにより測定，Kettou et al. PV 2009-399参照）。
【００３３】
実施例３：ヒアルロナンラウロイル(lauroyl hyaluronan)の調製
蒸留水１００mL中のヒアルロナン（５g，２５０kg.mol−１）の溶液に，テトラヒドロフラン７０mL，トリエチルアミン４当量及び４−ジメチルアミノピリジン０．１当量を添加した。同時に，ラウリン酸（４当量）をテトラヒドロフラン３０mL及びトリエチルアミン７mLに溶解し，この溶液に４．８mLのエチルクロロホルミエート（formiate）を０〜５℃で１５分間で添加した。生じた懸濁液を，ヒアルロナン溶液中へろ過して入れ，反応（reaction）を２０℃で５時間撹拌した。続いて，結果として生じた溶液を４００mLの１００％イソプロパノールの添加により沈殿させ，８０％イソプロパノールそして続いて１００％イソプロパノールで洗浄した。この沈殿物を４０℃で２日間乾燥させた。置換度をＮＭＲで測定したところ３７％であった。
【００３４】
実施例４：ヒアルロナンパルミトイル(palmitoyl hyaluronan)の調製
蒸留水３００mL中のヒアルロナン（１０g，２５０kg.mol−１）の溶液に，テトラヒドロフラン３００mLを添加した。続いて，トリエチルアミン２．５当量，４−ジメチルアミノピリジン０．０４当量及びパルミチン酸無水物２当量をこの溶液に添加した。結果として生じた溶液を実験室温度で３時間撹拌し，その後，１Lの１００％イソプロパノールで沈殿させ，８０％イソプロパノールで洗浄し，４０℃で２日間乾燥させた。置換度は３０％であった（ＮＭＲで測定）。
【００３５】
実施例５：エタノール／水３／１中のチアミン−ＫＩ３溶液の調製
１５０mgのＩ２及び２２５mgのＫＩを，エタノール２１mLに溶解した。２１０mgのチアミン塩酸塩を蒸留水７mLに溶解した。両溶液を２０℃で混合し，０〜５℃で保存した。
【００３６】
実施例６：エタノール／水６／１中のチアミン−ＫＩ３溶液の調製
１５０mgのＩ２及び２２５mgのＫＩをエタノール２５．７mLに溶解した。蒸留水４．３mLに２１０mgのチアミン塩酸塩を溶解した。両溶液を２０℃で混合し，０〜５℃で保存した。
【００３７】
実施例７：エタノール／水９／１中のチアミン−ＫＩ３溶液の調製
１５０mgのＩ２及び２２５mgのＫＩをエタノール２７mLに溶解した。２１０mgのチアミン塩酸塩を蒸留水３mLに溶解した。両溶液を２０℃で混合し，０〜５℃で保存した。
【００３８】
実施例８：エタノール／水３／１中のチアミン−ＮａＩ３溶液の調製
１５０mgのＩ２及び２０３mgのＮａＩをエタノール２１mLに溶解した。２１０mgのチアミン塩酸塩を蒸留水７mLに溶解した。両溶液を２０℃で混合し，０〜５℃で保存した。
【００３９】
実施例９：エタノール／水６／１中のチアミン−ＮａＩ３溶液の調製
１５０mgのＩ２及び２０３mgのＮａＩをエタノール２５．７mLに溶解した。２１０mgのチアミン塩酸塩を蒸留水４．３mLに溶解した。両溶液を２０℃で混合し，０〜５℃で保存した。
【００４０】
実施例１０：エタノール／水９／１中のチアミン−ＮａＩ３溶液の調製
１５０mgのＩ２及び２０３mgのＮａＩをエタノール２７mLに溶解した。２１０mgのチアミン塩酸塩を蒸留水３mLに溶解した。両溶液を２０℃で混合し，０〜５℃で保存した。
【００４１】
実施例１１：ヒアルロナンエチルエステル−チアミン−Ｉ３（ＨＡ−Ｂ１−Ｉ３）凍結乾燥体の調製
蒸留水１００mL及び酢酸０．５mL中の実施例１によって調製されたヒアルロナン誘導体（０．４g）の溶液に，４０mgのＫＩ及び２７mgのＩ２を添加し，結果として生じた混合物を実験室温度で２４時間撹拌した。その後，蒸留水１mL中のチアミン塩酸塩３８mgの溶液を添加し，結果として生じた溶液を均質化し，直ちに−５０℃で冷凍し，凍結乾燥させた。活性ヨウ素の量をチオ硫酸ナトリウムを用いた還元滴定によって測定したところ４．２％であった。
【００４２】
実施例１２：ヒアルロナンベンジルエステル−チアミン−Ｉ３（ＨＡ−Ｂ１−Ｉ３）凍結乾燥体の調製
蒸留水１００mL及び酢酸５mL中の実施例２によって調製されたヒアルロナン誘導体（０．４g）の溶液に，４０mgのＫＩ及び２７mgのＩ２を添加し，結果として生じた混合物を実験室温度で２４時間撹拌した。その後，蒸留水１mL中のチアミン塩酸塩３８mgの溶液を添加し，結果として生じた溶液を均質化し，直ちに−５０℃で冷凍し，凍結乾燥させた。活性ヨウ素の量をチオ硫酸ナトリウムを用いた還元滴定によって測定したところ４％であった。
【００４３】
実施例１３：ヒアルロナン−チアミン−Ｉ３（ＨＡ−Ｂ１−Ｉ３）凍結乾燥体の調製
蒸留水１００mL及び酢酸１mL中のヒアルロナン（０．４g，Mw５００kg.mol−１）の溶液に４０mgのＫＩ及び２７mgのＩ２を添加し，結果として生じた混合物を実験室温度で２４時間撹拌した。その後，蒸留水１mL中のチアミン塩酸塩３８mgの溶液を添加し，結果として生じた溶液を均質化し，直ちに−５０℃で冷凍し，凍結乾燥させた。活性ヨウ素の量をチオ硫酸ナトリウムを用いた還元滴定によって測定したところ４％であった。
【００４４】
実施例１４：ヒアルロナン−チアミン−Ｉ３（ＨＡ−Ｂ１−Ｉ３）凍結乾燥体の調製
蒸留水２００mL及び酢酸２mL中のヒアルロナン（０．４g，Mw５００kg.mol−１）の溶液に４０mgのＫＩ及び２７mgのＩ２を添加し，結果として生じた混合物を実験室温度で２４時間撹拌した。その後，蒸留水の３mL中の１７９mgのチアミン塩酸塩の溶液を添加し，結果として生じた溶液を均質化し，直ちに−５０℃で冷凍し，凍結乾燥させた。活性ヨウ素の量をチオ硫酸ナトリウムを用いた還元滴定によって測定したところ３．５％であった。
【００４５】
実施例１５：ヒアルロナン−チアミン−Ｉ３（ＨＡ−Ｂ１−Ｉ３）凍結乾燥体の調製
蒸留水１００mL及び酢酸１mL中のヒアルロナン（０．４g，Mw５００kg.mol−１）の溶液に，４０mgのＫＩ及び２７mgのＩ２を添加し，結果として生じた混合物を実験室温度で２４時間撹拌した。その後，蒸留水１mL中の３６mgのチアミン塩酸塩の溶液を添加し，結果として生じた溶液を均質化し，直ちに−５０℃で冷凍し，凍結乾燥させた。活性ヨウ素の量をチオ硫酸ナトリウムを用いた還元滴定によって測定したところ３．５％であった。
【００４６】
実施例１６：ヒアルロナン−チアミン−Ｉ３（ＨＡ−Ｂ１−Ｉ３）凍結乾燥体の調製
蒸留水２０mL及び酢酸０．１mL中のヒアルロナン（０．４g，Mw８０kg.mol−１）の溶液に，４０mgのＫＩ及び２７mgのＩ２を添加し，結果として生じた混合物を実験室温度で２４時間撹拌した。その後，蒸留水１mL中の３６mgのチアミン塩酸塩の溶液を添加し，結果として生じた溶液を均質化し，直ちに−５０℃で冷凍し，凍結乾燥させた。活性ヨウ素の量をチオ硫酸ナトリウムを用いた還元滴定によって測定したところ２％であった。
【００４７】
実施例１７：ヒアルロナン−チアミン−Ｉ３（ＨＡ−Ｂ１−Ｉ３）凍結乾燥体の調製−コーティング
凍結乾燥体の形態のヒアルロナンを，エタノール／水３／１中のＮａＩ３の溶液（実施例８）に２０℃で２４時間完全に浸漬した。その後，この凍結乾燥体をイソプロパノールに２秒間浸漬し，引き出し，該材料の両側から濾紙をあてがい乾燥させた。活性ヨウ素の量をチオ硫酸ナトリウムを用いた還元滴定によって測定したところ１．５％であった。
【００４８】
実施例１８：ヒアルロナン−チアミン−Ｉ３（ＨＡ−Ｂ１−Ｉ３）凍結乾燥体の調製−コーティング
凍結乾燥体の形態のヒアルロナンを，エタノール／水９／１中のＮａＩ３の溶液（実施例１０）に４０℃で２４時間完全に浸漬した。その後，この凍結乾燥体をイソプロパノールに２秒間浸漬し，引き出し，該材料の両側から濾紙をあてがい乾燥させた。活性ヨウ素の量をチオ硫酸ナトリウムを用いた還元滴定によって測定したところ２％であった。
【００４９】
実施例１９：ヒアルロナン−チアミン−Ｉ３（ＨＡ−Ｂ１−Ｉ３）凍結乾燥体の調製−コーティング
凍結乾燥体の形態のヒアルロナンをエタノール／水６／１中のＫＩ３の溶液（実施例６）に４０℃で１０分間完全に浸漬した。その後，この凍結乾燥体をイソプロパノールに２秒間浸漬し，引き出し，該材料の両側から濾紙をあてがい乾燥させた。活性ヨウ素の量をチオ硫酸ナトリウムを用いた還元滴定によって測定したところ１．５％であった。
【００５０】
実施例２０：ヒアルロナン−チアミン−Ｉ３（ＨＡ−Ｂ１−Ｉ３）凍結乾燥体の調製−コーティング
凍結乾燥体の形態のヒアルロナンを，エタノール／水９／１中のＫＩ３の溶液(実施例７）に５℃で４８時間完全に浸漬した。その後，この凍結乾燥体をイソプロパノールに２秒間浸漬し，引き出し，該材料の両側から濾紙をあてがい乾燥させた。活性ヨウ素の量をチオ硫酸ナトリウムを用いた還元滴定によって測定したところ２％であった。
【００５１】
実施例２１：ヒアルロナン−チアミン−Ｉ３（ＨＡ−Ｂ１−Ｉ３）凍結乾燥体の調製−コーティング
凍結乾燥体の形態のヒアルロナンをエタノール／水３／１中のＫＩ３の溶液（実施例５）に２０℃で１０時間完全に浸漬した。その後，この凍結乾燥体をイソプロパノールに２秒間浸漬し，引き出し，材料の両側から濾紙をあてがい乾燥させた。活性ヨウ素の量をチオ硫酸ナトリウムを用いた還元滴定によって測定したところ１％であった。
【００５２】
実施例２２：ヒアルロナン−チアゾリウムヨージド−Ｉ３（ＨＡ−ＴＨ−Ｉ３）凍結乾燥体の調製
蒸留水１００mL及び酢酸１mL中のヒアルロナン（０．４g，Mw５００kg.mol−１）の溶液に，４０mgのＫＩ及び２７mgのＩ２を添加し，結果として生じた混合物を実験室温度で２４時間撹拌した。その後，蒸留水１mL中の３５mgの５−（２−ヒドロキシエチル）−３，４−ジメチルチアゾリウムヨージドの溶液を添加し，結果として生じた溶液を均質化し，直ちに−５０℃で冷凍し，凍結乾燥させた。活性ヨウ素の量をチオ硫酸ナトリウムを用いた還元滴定によって測定したところ３％であった。
【００５３】
実施例２３：ヒアルロナン−ベンジルチアゾリウムブロミド−Ｉ３（ＨＡ−ＢＴＨ−Ｉ３）凍結乾燥体の調製
蒸留水１００mL及び酢酸１mL中のヒアルロナン（０．４g，Mw５００kg.mol−１）の溶液に４０mgのＫＩ及び２７mgのＩ２を添加し，結果として生じた混合物を実験室温度で２４時間撹拌した。その後，蒸留水１mL中の３７mgの３−ベンジル−５−（２−ヒドロキシエチル）−４−メチルチアゾリウムブロミドの溶液を添加し，結果として生じた溶液を均質化し，直ちに−５０℃で冷凍し，凍結乾燥させた。活性ヨウ素の量をチオ硫酸ナトリウムを用いた還元滴定によって測定したところ３．５％であった。
【００５４】
実施例２４：ヒアルロナン−オキシチアミン−Ｉ３（ＨＡ−ＯＢ１−Ｉ３）凍結乾燥体の調製
蒸留水１００mL及び酢酸１mL中のヒアルロナン（０．４g，Mw５００kg.mol−１）の溶液に，４．０mgのＫＩ及び２．７mgのＩ２を添加し，結果として生じた混合物を実験室温度で２４時間撹拌した。その後，蒸留水１mL中のオキシチアミン塩酸塩４５mgの溶液を添加し，結果として生じた溶液を均質化し，直ちに−５０℃で冷凍し，凍結乾燥させた。活性ヨウ素の量をチオ硫酸ナトリウムを用いた還元滴定によって測定したところ０．５％であった。
【００５５】
実施例２５：ヒアルロナン−チアミン−Ｉ３（ＨＡ−Ｂ１−Ｉ３）のステープルファイバーからの不織布の調製−コーティング
ＨＡの１％水溶液を，ノズルを３m.s−１で還流する室温で１００％のイソプロパノールから成る非定常凝固浴中へ０．６mmの内径を有するノズルを通して押出した。この溶液を３〜４cmの長尺繊維に沈殿させた。粗繊維を１リットルの凝固浴当たり１gのファイバーの割合で３０秒間ブレンダー中で短くした。結果として生じた３〜４mmの繊維長を有する繊維の分散液を，パッド状編織物（PAD knitted fabric）から成る基材を通して濾過し，乾燥プレート上で乾燥させ，結果として生じた織物の形状を乾燥中に固定した。結果として生じた層を，自己支持層として基材から分離した。このように形成された布を，所望のサイズにフォーマットし，エタノール／水９／１中のＮａＩ３＋Ｂ１の溶液（実施例１０）に浸漬した。この布を振とう機に置き，毎分８０振動の振とう速度で２０℃で６０分間ＮａＩ３＋Ｂ１溶液にさらした。処理された布は実験室温度で乾燥される。活性ヨウ素の量をチオ硫酸ナトリウムを用いた還元滴定によって測定したところ１．８％であった。
【００５６】
実施例２６：ヒアルロナンパルミトイル−チアミン−Ｉ３（ＨＡ−Ｂ１−Ｉ３）からのステープルファイバーからの不織布の調製−コーティング
体積比１：１の水及びイソプロパノールの混合物に溶解された１％のＨＡパルミトイル溶液（実施例４に記載されたように調製された）を，ノズルを３m.s−１で還流する室温で９０％のイソプロパノールから成る非定常凝固浴中へ０．６mmの内径を有するノズルを通して押出した。この溶液を長さ３〜４cmの繊維に沈殿させた。粗繊維を１００％のアセトン中で脱水し，１００％イソプロパノール１リットル当たり０．９gのファイバーの割合で１０秒間ブレンダー中で短くした。結果として生じた３〜４mmの繊維長を有する繊維の分散液を，ＰＡＤ編物から成る基材を通して濾過し，乾燥プレート上で４０℃で乾燥させ，結果として生じた布の形状を乾燥中に固定した。結果として生じた層を，自己支持層として基材から分離した。このように形成された布を，所望のサイズにフォーマットし，エタノール／水９／１中のＮａＩ３＋Ｂ１の溶液（実施例１０）中に浸漬した。この布を振とう機に置き，毎分８０振動の振とう速度で２０℃で７０分間ＮａＩ３＋Ｂ１溶液にさらした。処理された布は実験室温度で乾燥される。活性ヨウ素の量をチオ硫酸ナトリウムを用いた還元滴定によって測定したところ１．５％であった。
【００５７】
実施例２７：ヒアルロナン−チアミン−Ｉ３（ＨＡ−Ｂ１−Ｉ３）のナノファイバー層の調製−コーティング
ヒアルロン酸を含むナノファイバー層を調製するために下記の組成の水溶液を調製した。乾燥分における分子量８２kg.mol−１のＨＡの濃度は８０％であり，４００kg.mol−１の分子量を有するポリエチレンオキシドの濃度は５％であり，２００kg.mol−１の分子量を有するポリビニルアルコールの濃度は１５％であり，全乾燥分の濃度は６％であった。この溶液をシリンジへ充填し，ニードルフリーリニアノズル（needle-free linear nozzle），４５ｋＶの電圧及び１８cmのエミッター・コレクター間距離を用いて，プレートコレクター上に静電気的に紡績した。このファイバーの寸法は，１１０±２７nmである。この材料を，エタノール／水６／１中のＮａＩ３＋Ｂ１の溶液（実施例９）中に２０℃で４８時間完全に浸漬した。その後，この材料を集めてイソプロパノールに２秒間浸漬し，集め，実験室温度で乾燥した。活性ヨウ素の量をチオ硫酸ナトリウムを用いた還元滴定によって測定したところ８％であった。
【００５８】
実施例２８：ヒアルロナン−チアミン−Ｉ３（ＨＡ−Ｂ１−Ｉ３）からの自己支持膜の調製−コーティング
フィルムが閉鎖空間で乾燥される専門の乾燥装置の中で，フィルムの調製を行った。この装置は温度が調整可能な底板及び上板を装備している。この装置は，（Foglarova et al., PV2015-166, Foglarova M. et al., Carbohydrate Polymers 2016, 144, 68-75）にさらに記載されている。３３０kg.mol−１の分子量を有するヒアルロン酸ナトリウム２４０mgを，脱イオン水２４mLに溶解し，この混合物を少なくとも１８時間撹拌した。その後，この溶液を乾燥装置のパッド（疎水化ガラス）上に載せ，５０℃の底板温度及び２０℃の上板温度で閉鎖空間で乾燥させた。乾燥時間は２０時間であった。乾燥後，フィルムをパッドから取り出し，さらに使用するために貯蔵した。その後，この材料を，エタノール／水６／１中のＮａＩ３＋Ｂ１の溶液（実施例９）に２０℃で７２時間完全に浸漬した。その後，この材料を集めてイソプロパノールに２秒間浸漬し，集め，実験室温度で乾燥した。活性ヨウ素の量をチオ硫酸ナトリウムを用いた還元滴定によって測定したところ０．１％であった。
【００５９】
実施例２９：ヒアルロナンパルミトイル−チアミン−Ｉ３（palmＨＡ−Ｂ１−Ｉ３）からの自己支持膜の調製−コーティング
フィルム調製装置は実施例２８に記載されている。実施例４に記載されたヒアルロナンナトリウムのパルミトイル誘導体２４０mgを，２−プロパノールの水溶液（５０％w/w）２４mLに溶解し，この混合物を少なくとも１８時間撹拌した。その後，この溶液を乾燥装置のパッド（疎水化ガラス）上に載せ，５０℃の底板温度及び４０℃の上板温度で閉鎖空間で乾燥させた。乾燥時間は２０時間であった。乾燥後，フィルムをパッドから取り出し，さらに使用するために貯蔵した。その後，この材料を，エタノール／水６／１中のＮａＩ３＋Ｂ１の溶液（実施例９）に２０℃で７２時間完全に浸漬した。その後，この材料を集めてイソプロパノールに２秒間浸漬し，集め，実験室温度で乾燥した。活性ヨウ素の量をチオ硫酸ナトリウムを用いた還元滴定によって測定したところ０．２％であった。
【００６０】
実施例３０：ヒアルロナンラウロイル−チアミン−Ｉ３（laurＨＡ−Ｂ１−Ｉ３）からの自己支持膜の調製−コーティング
フィルム調製装置は実施例２８に記載されている。実施例３に記載されたヒアルロナンナトリウムのラウロイル誘導体２４０mgを，２−プロパノールの水溶液（５０％w/w）２４mLに溶解し，この混合物を少なくとも１８時間撹拌した。この溶液を乾燥装置のパッド（疎水化ガラス）上に載せ，５０℃の底板温度及び４０℃の上板温度で閉鎖空間で乾燥させた。乾燥時間は２０時間であった。乾燥後，フィルムをパッドから取り出し，さらに使用するために貯蔵した。その後，この材料を，エタノール／水６／１中のＮａＩ３＋Ｂ１の溶液（実施例９）に２０℃で２４時間完全に浸漬した。その後，この材料を集めてイソプロパノールに２秒間浸漬し，集め，実験室温度で乾燥した。活性ヨウ素の量をチオ硫酸ナトリウムを用いた還元滴定によって測定したところ０．３％であった。
【００６１】
実施例３１：ヒアルロナン−チアミン−Ｉ３（ＨＡ−Ｂ１−Ｉ３）ステープルファイバー層の調製−コーティング
非定常凝固浴中で湿式スピニング法によって調製されるステープルマイクロファイバーを結合させることにより不織布を生産した。分子量１，０００kg.mol−１のヒアルロン酸を使用した。凝固浴はイソプロパノールからなる。その後，沈殿したファイバーを細砕によって短くし，基材にろ取し，乾燥し，圧縮した。結果として生じた層を，自己支持層として基材から分離した。その後，この材料を，エタノール／水９／１中のＮａＩ３＋Ｂ１の溶液（実施例１０）に２０℃で１時間完全に浸漬した。その後，これを実験室温度で乾燥させた。活性ヨウ素の量をチオ硫酸ナトリウムを用いた還元滴定によって測定したところ１．８％であった。
【００６２】
実施例３２：ヒアルロナン−チアミン−Ｉ３（ＨＡ−Ｂ１−Ｉ３）ファイバーからの編物の調製−コーティング
６００kDaの分子量を有するヒアルロナンのエンドレスファイバーを編物を生産するために使用した；ファイバーの細さは１０テックス，強度１．１N及び延性９．８％であった。３つのファイバーがプールされ(pooled)，送り１０m/min及びスピンドル速度３，０００min−１でリング式装置(ring machine)上で撚りをかけた；結果として生じた撚りは，３００ｍ−１の値を有していた。閉じた編み目を有する２サイド（two sided）トリコット編物を二列針床経編機で撚り糸から編んだ。その後，この編物を４０℃で２０分間エタノールで洗浄した。結果として生じた編物のストリップ(strip)は幅１１mmであり，９９g.m−２の単位面積当たりの質量及び３６ｃｍ−２の編み目密度を有していた。その後，この材料を２０℃で２４時間エタノール／水６／１中のＫＩ３＋Ｂ１の溶液（実施例６）に完全に浸漬した。その後，この材料を集めてイソプロパノールに２秒間浸漬し，集め，実験室温度で乾燥した。活性ヨウ素の量をチオ硫酸ナトリウムを用いた還元滴定によって測定したところ０．１％であった。
【００６３】
実施例３３：ヒアルロナンパルミトイル−チアミン−Ｉ３（palmＨＡ−Ｂ１−Ｉ３）ファイバーからの編物の調製−コーティング
３２０kDaの分子量及び３０％の置換度（ＮＭＲによって決定された）を有するヒアルロナンパルミトイルのエンドレスファイバーを，編物を生産するために使用した；ファイバーの細さは９テックス，強度は０．６N，そして延性は２１％であった。３つのファイバーをプールし，送り１０m/min，スピンドル速度３，０００min−１でリング式装置上で加撚した；結果として生じた撚りの値は３００m-1であった。閉じた編み目を有する２サイドトリコット編物を二列針床経編機で撚り糸から編んだ。その後，この編物を４０℃で２０分間エタノールで洗浄した。結果として生じた編物のストリップは幅１１mmであり，９１g.m-2の単位面積当たりの質量及び３６cm-2の編み目密度を有していた。その後，この材料を，エタノール／水９／１中のＫＩ３＋Ｂ１の溶液（実施例７）に２０℃で１５時間完全に浸漬した。その後，この材料を集めてイソプロパノールに２秒間浸漬し，集め，実験室温度で乾燥した。活性ヨウ素の量をチオ硫酸ナトリウムを用いた還元滴定によって測定したところ０．３％であった。
【００６４】
実施例３４：アルギン酸塩−チアミン−Ｉ３凍結乾燥体の調製
４０mgのＫＩ及び２７mgのＩ２を，蒸留水１００mL及び酢酸１mL中のアルギン酸ナトリウム（０．４g，Mw４００kg.mol−１）の溶液に添加し，結果として生じた混合物を実験室温度で２４時間撹拌した。その後，蒸留水１mL中のチアミン塩酸塩３８mgの溶液を添加し，結果として生じた溶液を均質化し，直ちに−５０℃で冷凍し，凍結乾燥した。活性ヨウ素の量をチオ硫酸ナトリウムを用いた還元滴定によって測定したところ４．４％であった。
【００６５】
実施例３５：オキシセルロース−チアミン−Ｉ３凍結乾燥体の調製
４０mgのＫＩ及び２７mgのＩ２を，蒸留水１００mL及び酢酸１mL中のオキシセルロース（０．４g，Mw５０kg.mol−１）の溶液に添加し，結果として生じた混合物を実験室温度で２４時間撹拌した。その後，蒸留水１mL中のチアミン塩酸塩３８mgの溶液を添加し，結果として生じた溶液を均質化し，直ちに−５０℃で冷凍し，凍結乾燥した。活性ヨウ素の量をチオ硫酸ナトリウムを用いた還元滴定によって測定したところ３．３％であった。
【００６６】
実施例３６：ヒドロキシエチルセルロース−チアミン−Ｉ３凍結乾燥体の調製
４０mgのＫＩ及び２７mgのＩ２を，蒸留水１００mL及び酢酸１mL中のヒドロキシエチルセルロース（０．４g，Mw７２０kg.mol−１）の溶液に添加し，結果として生じた混合物を実験室温度で２４時間撹拌した。その後，蒸留水１mL中のチアミン塩酸塩３８mgの溶液を添加し，結果として生じた溶液を均質化し，直ちに−５０℃で冷凍し，凍結乾燥した。活性ヨウ素の量をチオ硫酸ナトリウムを用いた還元滴定によって測定したところ６．１％であった。
【００６７】
実施例３７：カルボキシメチルセルロース−チアミン−Ｉ３凍結乾燥体の調製
４０mgのＫＩ及び２７mgのＩ２を，蒸留水１００mL及び酢酸１mL中のカルボキシメチルセルロース（０．４g，Mw２５０kg.mol−１）の溶液に添加し，結果として生じた混合物を実験室温度で２４時間撹拌した。その後，蒸留水１mL中のチアミン塩酸塩３８mgの溶液を添加し，結果として生じた溶液を均質化し，直ちに−５０℃で冷凍し，凍結乾燥した。活性ヨウ素の量をチオ硫酸ナトリウムを用いた還元滴定によって測定したところ４．６％であった。
【００６８】
実施例３８：オキシセルロース／ヒアルロナン−チアミン−Ｉ３凍結乾燥体の調製
４０mgのＫＩ及び２７mgのＩ２を，蒸留水１００mL及び酢酸１mL中のオキシセルロース（０．３g，Mw５０kg.mol−１）及びヒアルロン酸（０．１g，Mw５００kg.mol−１）の溶液に添加し，結果として生じた混合物を実験室温度で２４時間撹拌した。その後，蒸留水１mL中のチアミン塩酸塩３８mgの溶液を添加し，結果として生じた溶液を均質化し，直ちに−５０℃で冷凍し，凍結乾燥した。活性ヨウ素の量をチオ硫酸ナトリウムを用いた還元滴定によって測定したところ４％であった。
【００６９】
実施例３９：アルギン酸塩／ヒアルロナン−チアミン−Ｉ３凍結乾燥体の調製
４０mgのＫＩ及び２７mgのＩ２を，蒸留水１００mL及び酢酸１mL中のアルギン酸ナトリウム（０．３g，Mw４００kg.mol−１）及びヒアルロン酸（０．１g，Mw５００kg.mol−１）の溶液に添加し，結果として生じた混合物を実験室温度で２４時間撹拌した。その後，蒸留水の１mL中のチアミン塩酸塩３８mgの溶液を添加し，結果として生じた溶液を均質化し，直ちに−５０℃で冷凍し，凍結乾燥した。活性ヨウ素の量をチオ硫酸ナトリウムを用いた還元滴定によって測定したところ４．３％であった。
【００７０】
実施例４０：カルボキシメチルセルロース／ヒアルロナン−チアミン−Ｉ３凍結乾燥体の調製
４０mgのＫＩ及び２７mgのＩ２を，蒸留水１００mL及び酢酸１mL中のカルボキシメチルセルロース（０．３g，Mw２５０kg.mol−１）及びヒアルロン酸（０．１g，Mw５００kg.mol−１）の溶液に添加し，結果として生じた混合物を実験室温度で２４時間撹拌した。その後，蒸留水１mL中のチアミン塩酸塩３８mgの溶液を添加し，結果として生じた溶液を均質化し，直ちに−５０℃で冷凍し，凍結乾燥した。活性ヨウ素の量をチオ硫酸ナトリウムを用いた還元滴定によって測定したところ４．２％であった。
【００７１】
実施例４１：インビトロでの抗菌活性の分析（図１及び図２）：
個々の試験微生物の懸濁液を約１０５ＣＦＵ／mLの濃度で調製した。ペトリ皿中のトリプトンソイ寒天の表面上に，１００μLの懸濁液（皿上に約１０４ＣＦＵの微生物）を塗布した。この懸濁液を，滅菌ループを用いて皿の全面に均一に広げた。この懸濁液が寒天に吸収された後，試験試料を寒天の表面上に無菌の方法で正方形の形状で移した。この細菌の試験株を有する皿を２４時間３７℃で培養した。抗菌性物質ＨＡ−Ｂ１−Ｉ３，ＨＡ−ＴＨ−Ｉ３及びＨＡ−ＢＴＨ−Ｉ３を含む凍結乾燥体（実施例１３，２２，２３により調製された）を試験し，活性物質なしの類似の凍結乾燥体ＨＡ−ＴＨ，ＨＡ−ＢＴＨ，及びＨＡ単独の凍結乾燥体をコントロールとして使用した。０．７〜１．３mgの三ヨウ化カリウムを含む又は三ヨウ化カリウムなしの，重量１５−２０mg及び寸法約１５×１５×２mmの四角片を調製した。有効性の試験については，拡散板法（２Ｄレイアウト）を選択した。非選択性の培地(soil)（トリプトンソイ寒天）を培養に使用した。これらの正方形の試料を２つの微生物Escherichia coli (G-rod) 及び Staphylococcus aureus (G + coccus)について試験した。図１及び図２は，本発明の凍結乾燥体の、三ヨウ化物なしの又はＨＡ単独の凍結乾燥体と比較して格段に高い効果を明白に示す。
【００７２】
実施例４２：許容性及び創傷治療に対する効果の試験（図３）
ＨＡ−Ｂ１−Ｉ３凍結乾燥体（実施例１３により調製された）の創傷治療の経過についての効果を比較するために，１週間の分析を行った。この研究は，主にこの製剤の許容性と，効果が実証されている標準的な創傷治療剤としてのヒアルロナン及び抗菌性物質オクテニジンの組み合わせ（ＨＡ−オクテニジン）である活性層を含むドレッシング材との効果の比較に焦点を当てた。試験については，活性層をＨＡ−Ｂ１−Ｉ３凍結乾燥体に替える以外はＨＡ−オクテニジンドレッシング材と同じ組成の包帯を使用した。この研究は，傷の半分が常にＨＡ−Ｂ１−Ｉ３凍結乾燥体包帯で（図３中のＨｙＢ１として示される）残りの半分が常に標準的なＨＡ−オクテニジンドレッシング材で常に処理された患者について行われた。
【００７３】
この患者においては，この包帯は主観的にも客観的にも不利な問題はなく，許容性であった。観察された１週間の期間中の創傷治療の経過は，ＨＡ−オクテニジン製剤を使用した場合の治療に匹敵した。ＨＡ−オクテニジン及びＨＡ−Ｂ１−Ｉ３凍結乾燥体によって覆われた傷においては，感染性又は炎症性合併症の兆候は記録されなかった。従って，新しいＨＡ−Ｂ１−Ｉ３複合体の効果がＨＡ−オクテニジンの標準的なドレッシング材のそれに匹敵することが結論付けられ得る。本発明による製剤をオクテニジン製剤と比較すると，特にオクテニジンと比較してヨウ素がはるかに生物学的適合性であり，従って例えば移植可能な材料に対してはるかに適しているという理由で，有利である。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【国際調査報告】
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