(57)【要約】本発明は、重度のフォンヴィレブランド病を患う対象に、約４０ＩＵ／ｋｇ〜約１００ＩＵ／ｋｇの範囲の少なくとも１用量の組換えフォンヴィレブランド因子（ｒＶＷＦ）を投与することを含む、前記対象において消化管出血を治療するための方法に関し、第１の用量は、組換え第ＶＩＩＩ因子（ｒＦＶＩＩＩ）をさらに含む。【選択図】図１
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
重度のフォンヴィレブランド病（ＶＷＤ）を患う対象に、４０ＩＵ／ｋｇ〜約１００ＩＵ／ｋｇの範囲の少なくとも１用量の組換えフォンヴィレブランド因子（ｒＶＷＦ）を投与することを含む、前記対象において消化管出血を治療するための方法であって、第１の用量が、組換え第ＶＩＩＩ因子（ｒＦＶＩＩＩ）をさらに含む、前記方法。
【請求項２】
前記ｒＦＶＩＩＩが、約２０ＩＵ／ｋｇ〜約５０ＩＵ／ｋｇの用量で投与される、請求項１に記載の治療方法。
【請求項３】
前記方法が、前記対象に約４０ＩＵ／ｋｇ〜約１００ＩＵ／ｋｇの範囲の第２の用量の組換えフォンヴィレブランド因子（ｒＶＷＦ）を投与することをさらに含み、前記第２の用量が、組換え第ＶＩＩＩ因子（ｒＦＶＩＩＩ）を含まない、請求項１に記載の治療方法。
【請求項４】
前記ｒＶＷＦ対ＦＶＩＩＩの比率が、約１．５：０．８である、請求項１に記載の治療方法。
【請求項５】
前記ｒＶＷＦ対ＦＶＩＩＩの比率が、約１．３：１である、請求項１に記載の治療方法。
【請求項６】
前記ｒＶＷＦ対ＦＶＩＩＩの比率が、約１．１：０．８である、請求項１に記載の治療方法。
【請求項７】
前記ｒＶＷＦ対ＦＶＩＩＩの比率が、約１．５：１である、請求項１に記載の治療方法。
【請求項８】
前記ｒＶＷＦ対ＦＶＩＩＩの比率が、約１．１：１．２である、請求項１に記載の治療方法。
【請求項９】
前記ｒＶＷＦが、８〜１２時間ごとに投与される、請求項１に記載の治療方法。
【請求項１０】
前記ｒＶＷＦの４０〜６０ＩＵ／ｋｇのｒＶＷＦが投与され、前記消化管出血が、少量または中等度の消化管出血である、請求項１〜９のいずれか一項に記載の治療方法。
【請求項１１】
前記ｒＶＷＦの４０〜８０ＩＵ／ｋｇのｒＶＷＦ、前記消化管出血が、大量または重度の消化管出血である、請求項１〜９のいずれか一項に記載の治療方法。
【請求項１２】
前記ｒＶＷＦが、約３日〜約７日間、８〜１２時間ごとに投与される、請求項１〜９のいずれか一項に記載の治療方法。
【請求項１３】
前記ｒＶＷＦの４０〜６０ＩＵ／ｋｇのｒＶＷＦが、約３日〜約７日間、８〜１２時間ごとに投与され、前記消化管出血が、少量または中等度の消化管出血である、請求項１〜９のいずれか一項に記載の治療方法。
【請求項１４】
前記ｒＶＷＦの４０〜８０ＩＵ／ｋｇのｒＶＷＦが、約３日〜約７日間、８〜１２時間ごとに投与され、前記消化管出血が、大量または重度の消化管出血である、請求項１〜９のいずれか一項に記載の治療方法。
【請求項１５】
前記対象が３型ＶＷＤを有する、請求項１〜１４のいずれか一項に記載の治療方法。
【請求項１６】
前記対象が重度の１型ＶＷＤを有する、請求項１〜１４のいずれか一項に記載の治療方法。
【請求項１７】
前記対象が重度の２型ＶＷＤを有する、請求項１〜１４のいずれか一項に記載の治療方法。
【請求項１８】
前記対象が、過去１２か月以内に少なくとも１回の出血事象について治療を受けている、請求項１〜１７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１９】
前記対象が、過去１２か月以内に１回超の出血事象について治療を受けている、請求項１〜１７のいずれか一項に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願の相互参照
本出願は、２０１７年７月７日出願の米国仮特許出願第６２／５３０，０２７号に対する優先権を主張するものであり、この出願は、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。
【背景技術】
【０００２】
フォンヴィレブランド病（ＶＷＤ）などの凝固系疾患は、一般に、凝固カスケードの欠損から生じる。フォンヴィレブランド病（ＶＷＤ）は、フォンヴィレブランド因子の欠損により引き起こされる疾患の群を指す。フォンヴィレブランド因子は、血小板が一緒に凝集し、血管壁に張り付くのを助け、これは正常な血液凝固に必要なものである。
【０００３】
フォンヴィレブランド病（ＶＷＤ）は、推定有病率が１％である最も一般的な出血性疾患（Ｖｅｙｒａｄｉｅｒ  Ａ，ｅｔ  ａｌ．，Ｍｅｄｉｃｉｎｅ（Ｂａｌｔｉｍｏｒｅ）．２０１６，９５（１１）：ｅ３０３８（非特許文献１））。しかしながら、より軽度の型の疾患を除き、実際に治療を必要とする患者は約１０，０００人に１人のみである。これらの凝固障害のための現在の治療には、正常な凝固因子を含む薬学的調製物を使用する補充療法が含まれる。
【０００４】
ＶＷＦは、サイズが約５００〜２０，０００ｋＤの範囲である一連の多量体として血漿中を循環する糖タンパク質である。ＶＷＦのｃＤＮＡの全長がクローニングされており、プロポリペプチドは、全長プレプロＶＷＦのアミノ酸残基２３〜７６４に対応する（Ｅｉｋｅｎｂｏｏｍ  ｅｔ  ａｌ（１９９５）Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｉａ  １，７７  ９０（非特許文献２））。ＶＷＦの多量体形態は、ジスルフィド結合により一緒に連結した２５０ｋＤのポリペプチドサブユニットで構成される。ＶＷＦは、損傷した血管壁の内皮下層への初期血小板粘着を媒介し、より大きい多量体は、増強した止血活性を呈する。多量体化されたＶＷＦは、ＶＷＦのＡ１ドメインにおける相互作用をとおして血小板表面糖タンパク質Ｇｐ１ｂαに結合し、血小板粘着を促進する。ＶＷＦ上の他の部位は、血管壁への結合を媒介する。こうして、ＶＷＦは、剪断応力が高い条件下での血小板粘着及び一次止血に不可欠である、血小板と血管壁との間の橋を形成する。通常、内皮細胞は、より大きい重合形態のＶＷＦを分泌し、分子量がより低いＶＷＦの形態は、タンパク質分解的切断から生じる。分子量が並みはずれて大きい多量体は、内皮細胞のバイベル・パラーデ小体内に貯蔵され、トロンビン及びヒスタミンなどのアゴニストにより刺激されると放出される。
【０００５】
ＶＷＤを患う患者には、特に大手術における長期の止血の必要性を考慮して、フォンヴィレブランド因子（ＶＷＦ）補充による治療が推奨される（Ｍａｎｎｕｃｃｉ  ＰＭ  ａｎｄ  Ｆｒａｎｃｈｉｎｉ  Ｍ．，Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｉａ，２０１７，２３（２）：１８２−１８７（非特許文献３）；Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ．Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｈｅａｒｔ，Ｌｕｎｇ，ａｎｄ  Ｂｌｏｏｄ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ．Ｔｈｅ  Ｄｉａｇｎｏｓｉｓ，Ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ，ａｎｄ  Ｍａｎａｇｅｍｅｎｔ  ｏｆ  ｖｏｎ  Ｗｉｌｌｅｂｒａｎｄ  Ｄｉｓｅａｓｅ  ＮＩＨ  Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ  Ｎｏ．０８−５８３２；Ｄｅｃｅｍｂｅｒ，２００７（非特許文献４））。血漿由来ＶＷＦ治療薬は、第ＶＩＩＩ因子（ＦＶＩＩＩ）を含有し、繰り返しの投薬によりＦＶＩＩＩが蓄積する可能性がある。ＶＯＮＶＥＮＤＩ（登録商標）（フォンヴィレブランド因子［組換え］、Ｓｈｉｒｅ，Ｗｅｓｔｌａｋｅ  Ｖｉｌｌａｇｅ，ＣＡ）は、最初であり唯一の組換えＶＷＦ（ｒＶＷＦ）濃縮物である（Ｔｕｒｅｃｅｋ  ＰＬ，ｅｔ  ａｌ．Ｈａｍｏｓｔａｓｅｏｌｏｇｉｅ．２００９；２９（ｓｕｐｐｌ  １）：Ｓ３２−３８（非特許文献５）、Ｍａｎｎｕｃｃｉ  ＰＭ，ｅｔ  ａｌ．Ｂｌｏｏｄ，２０１３；１２２（５）：６４８−６５７（非特許文献６）、Ｇｉｌｌ  ＪＣ，ｅｔ  ａｌ．Ｂｌｏｏｄ，２０１５；１２６（１７）：２０３８−２０４６（非特許文献７））。
【０００６】
消化管（ＧＩ）出血事象は、フォンヴィレブランド病（ＶＷＤ）を患う患者の最大２０％において発生し、ＶＷＤを患う患者の２％〜４％において血管形成異常病変と関連して観察されている。ＧＩ出血は、フォンヴィレブランド因子（ＶＷＦ）のより高い分子量及び超大型多量体（ＵＬＭ）の非存在と密接に関連し、これは２Ａ型及び３型ＶＷＤを患う患者において最も頻繁に見られる。ＧＩ出血の消散には、通常、他の部位での出血と比較してより高い用量及びより長い期間の血漿由来ＶＷＦ補充濃縮物による療法が必要とされ、それでも治療は成功しないことがある。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【０００７】
【非特許文献１】Ｖｅｙｒａｄｉｅｒ  Ａ，ｅｔ  ａｌ．，Ｍｅｄｉｃｉｎｅ（Ｂａｌｔｉｍｏｒｅ）．２０１６，９５（１１）：ｅ３０３８
【非特許文献２】Ｅｉｋｅｎｂｏｏｍ  ｅｔ  ａｌ（１９９５）Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｉａ  １，７７  ９０
【非特許文献３】Ｍａｎｎｕｃｃｉ  ＰＭ  ａｎｄ  Ｆｒａｎｃｈｉｎｉ  Ｍ．，Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｉａ，２０１７，２３（２）：１８２−１８７
【非特許文献４】Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ．Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｈｅａｒｔ，Ｌｕｎｇ，ａｎｄ  Ｂｌｏｏｄ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ．Ｔｈｅ  Ｄｉａｇｎｏｓｉｓ，Ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ，ａｎｄ  Ｍａｎａｇｅｍｅｎｔ  ｏｆ  ｖｏｎ  Ｗｉｌｌｅｂｒａｎｄ  Ｄｉｓｅａｓｅ  ＮＩＨ  Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ  Ｎｏ．０８−５８３２；Ｄｅｃｅｍｂｅｒ，２００７
【非特許文献５】Ｔｕｒｅｃｅｋ  ＰＬ，ｅｔ  ａｌ．Ｈａｍｏｓｔａｓｅｏｌｏｇｉｅ．２００９；２９（ｓｕｐｐｌ  １）：Ｓ３２−３８
【非特許文献６】Ｍａｎｎｕｃｃｉ  ＰＭ，ｅｔ  ａｌ．Ｂｌｏｏｄ，２０１３；１２２（５）：６４８−６５７
【非特許文献７】Ｇｉｌｌ  ＪＣ，ｅｔ  ａｌ．Ｂｌｏｏｄ，２０１５；１２６（１７）：２０３８−２０４６
【発明の概要】
【０００８】
本発明は、重度のフォンヴィレブランド病（ＶＷＤ）を患う患者において消化管出血を治療するための方法を提供する。本方法は、対象に、約４０ＩＵ／ｋｇ〜約１００ＩＵ／ｋｇの範囲の少なくとも１用量の組換えフォンヴィレブランド因子（ｒＶＷＦ）を投与することを含み、第１の用量は、組換え第ＶＩＩＩ因子（ｒＦＶＩＩＩ）をさらに含む。
【０００９】
いくつかの実施形態では、ｒＦＶＩＩＩは、約２０ＩＵ／ｋｇ〜約５０ＩＵ／ｋｇの用量で投与される。
【００１０】
いくつかの実施形態では、本方法は、対象に、約４０ＩＵ／ｋｇ〜約１００ＩＵ／ｋｇの範囲の第２の用量の組換えフォンヴィレブランド因子（ｒＶＷＦ）を投与することを含み、第２の用量は、組換え第ＶＩＩＩ因子（ｒＦＶＩＩＩ）を含まない。
【００１１】
いくつかの実施形態では、ｒＶＷＦ対ＦＶＩＩＩの比率は、約１．５：０．８である。いくつかの実施形態では、ｒＶＷＦ対ＦＶＩＩＩの比率は、約１．３：１である。いくつかの実施形態では、ｒＶＷＦ対ＦＶＩＩＩの比率は、約１．１：０．８である。いくつかの実施形態では、ｒＶＷＦ対ＦＶＩＩＩの比率は、約１．５：１である。いくつかの実施形態では、ｒＶＷＦ対ＦＶＩＩＩの比率は、約１．１：１．２である。
【００１２】
いくつかの実施形態では、ｒＶＷＦは、８〜１２時間ごとに投与される。
【００１３】
いくつかの実施形態では、該ｒＶＷＦの４０〜６０ＩＵ／ｋｇのｒＶＷＦが投与され、該消化管出血は、少量または中等度の消化管出血である。
【００１４】
いくつかの実施形態では、該ｒＶＷＦの４０〜８０ＩＵ／ｋｇのｒＶＷＦが投与され、該消化管出血は、大量または重度の消化管出血である。
【００１５】
いくつかの実施形態では、ｒＶＷＦは、約３日〜約７日間、８〜１２時間ごとに投与される。
【００１６】
いくつかの実施形態では、該ｒＶＷＦの４０〜６０ＩＵ／ｋｇのｒＶＷＦが、約３日〜約７日間、８〜１２時間ごとに投与され、該消化管出血は、少量または中等度の消化管出血である。
【００１７】
いくつかの実施形態では、該ｒＶＷＦの４０〜８０ＩＵ／ｋｇのｒＶＷＦが、約３日〜約７日間、８〜１２時間ごとに投与され、該消化管出血は、大量または重度の消化管出血である。
【００１８】
いくつかの実施形態では、対象は３型ＶＷＤを有する。いくつかの実施形態では、対象は重度の１型ＶＷＤを有する。いくつかの実施形態では、対象は重度の２型ＶＷＤを有する。
【００１９】
いくつかの実施形態では、対象は、過去１２か月以内に少なくとも１回の出血事象について治療を受けている。いくつかの実施形態では、対象は、過去１２か月以内に１回超の出血事象について治療を受けている。
【００２０】
本発明の他の目的、利点、及び実施形態は、以下の詳細な説明から明らかになるであろう。
【図面の簡単な説明】
【００２１】
【図１】ＧＩ出血の治療のためのｒＶＷＦの止血効率を示す。ＢＥは出血事象、ＧＩは消化管である。４人の患者に合計６回のＧＩ出血があった。少量及び中等度のＢＥは、その出血症状を制御するために、予測よりも１〜２回多い注入が必要とされ、かつ追加のＶＷＦ含有製品が必要とされなかった場合に、「良好」と評価した。大量のＢＥは、その出血症状を制御するために、予測よりも１．５倍未満多い注入が必要とされ、かつ追加のＶＷＦ含有製品が必要とされなかった場合に、「良好」と評価した。少量、中等度、及び大量のＢＥは、注入の実施の数が、ＢＥを治療するために必要とされる予測数以下であり、かつ追加のＶＷＦ含有製品が必要とされなかった場合に、「優良」と評価した。
【図２】ＶＷＦ核酸及びアミノ酸配列を示す。
【発明を実施するための形態】
【００２２】
発明の詳細な説明
序論
本発明は、対象に、４０ＩＵ／ｋｇ〜約１００ＩＵ／ｋｇの範囲の少なくとも１用量の組換えフォンヴィレブランド因子（ｒＶＷＦ）を投与することを含む、重度のフォンヴィレブランド病（ＶＷＤ）を患う患者において消化管出血を治療するための方法を提供し、第１の用量は、組換え第ＶＩＩＩ因子（ｒＦＶＩＩＩ）をさらに含む。
【００２３】
ＰＣＴ出願公開第ＷＯ２０１２／１７１０３１号の開示は、すべての目的について、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。
【００２４】
定義
本明細書及び添付の特許請求の範囲で使用する単数形「ａ」、「ａｎ」、及び「ｔｈｅ」は、文脈が別に指示しない限り複数の言及を含む。よって、例えば、「抗体（ａｎ  ａｎｔｉｂｏｄｙ）」への言及は、複数のそのような抗体を含み、「宿主細胞（ａ  ｈｏｓｔ  ｃｅｌｌ）」への言及は、当業者に既知である１つ以上の宿主細胞及びその等価物への言及などを含む。特許請求の範囲が任意の要素を除外するように起草されてもよいことにさらに留意されたい。したがって、本記載は、特許請求の範囲の要素の列挙に関して「単に」、「のみ」などの排他的な専門用語の使用、または「否定的な」制限の使用のための先行する基準として役立つことが意図される。
【００２５】
本発明をさらに説明する前に、本発明は、記載される特定の実施形態に限定されないことを理解されたい。それは、言うまでもなく、そのような実施形態は変化し得るからである。本明細書に使用される専門用語は特定の実施形態を説明するためだけのものであり、本発明の範囲が添付の特許請求の範囲によってのみ限定されるので、限定するよう意図されないことも理解されたい。
【００２６】
本明細書で使用される場合、「ｒＶＷＦ」は組換えＶＷＦを指す。
【００２７】
本明細書で使用される場合、「ｒＦＶＩＩＩ」は組換えＦＶＩＩＩを指す。
【００２８】
「組換え」という用語は、例えば、細胞、または核酸、タンパク質、またはベクターを参照して使用されるとき、その細胞、核酸、タンパク質、またはベクターが、異種核酸もしくはタンパク質の導入、または天然核酸もしくはタンパク質の改変により修飾されていること、あるいはその細胞がそのように修飾された細胞に由来することを示す。このため、例えば、組換え細胞は、天然（非組換え）形態の細胞内に見られない遺伝子を発現するか、または異常に発現された、過少発現された、もしくは全く発現されない天然の遺伝子を発現する。
【００２９】
本明細書で使用される場合、「組換えＶＷＦ」には、組換えＤＮＡ技術により得られたＶＷＦが含まれる。ある特定の実施形態では、本発明のＶＷＦタンパク質は、構築物、例えば、組換えＶＷＦの産生方法に関して参照により本明細書に組み込まれる、１９８６年１０月２３日に公開されたＷＯ１９８６／０６０９６、及びＧｉｎｓｂｕｒｇら名義で１９９０年７月２３日に出願された米国特許出願第０７／５５９，５０９号において行われているように調製されたものを含み得る。本発明中のＶＷＦは、単量体形態及び多量体形態を含む、あらゆる可能性のある形態を含むことができる。本発明は、組み合わせて使用されるＶＷＦの異なる形態を包含することも理解されたい。例えば、本発明のＶＷＦは、異なる多量体、異なる誘導体、ならびに生物学的に活性な誘導体及び生物学的に活性でない誘導体の両方を含んでもよい。
【００３０】
本発明との関連において、組換えＶＷＦは、例えば、霊長類、ヒト、サル、ウサギ、ブタ、齧歯類、マウス、ラット、ハムスター、アレチネズミ、イヌ、ネコなどの哺乳動物に由来する、ＶＷＦファミリーの任意のメンバー、及びそれらの生物学的に活性な誘導体を含む。活性を有する変異型及び変異型ＶＷＦタンパク質も含まれ、ＶＷＦタンパク質の機能的断片及び融合タンパク質も同様である。さらに、本発明のＶＷＦは、精製、検出、またはそれらの両方を促進する標識をさらに含んでもよい。本明細書に記載のＶＷＦは、さらに、治療部分、またはインビトロもしくはインビボでの撮像に好適な部分により修飾されてもよい。
【００３１】
本明細書で使用される場合、「血漿由来ＶＷＦ（ｐｄＶＷＦ）」には、少なくとも１つのＦＶＩＩＩ分子のインビボ安定化、例えば結合の特性を有する哺乳動物から得られる成熟ＶＷＦを含む、タンパク質のすべての形態が含まれる。
【００３２】
「極めて多量体であるＶＷＦ」または「高分子量ＶＷＦ」は、少なくとも１０サブユニット、または１２、１４、もしくは１６サブユニットから、約２０、２２、２４、２６サブユニット、またはそれ以上を含むＶＷＦを指す。「サブユニット」という用語は、ＶＷＦの単量体を指す。当該技術分野で知られているように、重合してより高次の多量体を形成するのは、通常、ＶＷＦの二量体である（ここに、全体が参照により、すべての目的について、特にＶＷＦの多量体分析に関するすべての教示について本明細書に組み込まれる、Ｔｕｒｅｃｅｋ  ｅｔ  ａｌ．，Ｓｅｍｉｎ．Ｔｈｒｏｍｂ．Ｈｅｍｏｓｔ．２０１０，３６（５）：５１０−５２１を参照されたい）。
【００３３】
本明細書で使用される場合、「第ＶＩＩＩ因子」または「ＦＶＩＩＩ」は、患者にとって内因性であるか、血漿に由来するか、または組換えＤＮＡ技法の使用により産生されるかにかかわらず、第ＶＩＩＩ因子のすべての修飾形態を含めて、血液凝固第ＶＩＩＩ因子の典型的な特徴を有する任意の形態の第ＶＩＩＩ因子分子を指す。第ＶＩＩＩ因子（ＦＶＩＩＩ）は、単一遺伝子産物から生じるポリペプチドの不均一な分布として、天然に及び治療用調製物中に存在する（例えば、Ａｎｄｅｒｓｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，８３：２９７９−２９８３（１９８６））。第ＶＩＩＩ因子を含有する治療調製物の市販の例には、ＨＥＭＯＦＩＬ  Ｍ、ＡＤＶＡＴＥ、及びＲＥＣＯＭＢＩＮＡＴＥ（Ｂａｘｔｅｒ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ，Ｄｅｅｒｆｉｅｌｄ，Ｉｌｌ．，Ｕ．Ｓ．Ａ．から入手可能）の商品名で販売されているものが含まれる。
【００３４】
本明細書で使用される場合、「血漿ＦＶＩＩＩ活性」及び「インビボＦＶＩＩＩ活性」は同義に使用される。標準的なアッセイを使用して測定されるインビボＦＶＩＩＩ活性は、内因性ＦＶＩＩＩ活性であっても、治療用に投与されたＦＶＩＩＩ（組換えまたは血漿由来）の活性であってもよく、あるいは内因性ＦＶＩＩＩ活性及び投与されたＦＶＩＩＩ活性の両方であってもよい。同様に、「血漿ＦＶＩＩＩ」は、内因性ＦＶＩＩＩまたは投与された組換えもしくは血漿由来ＦＶＩＩＩを指す。
【００３５】
本明細書で使用される場合、「フォンヴィレブランド病」は、フォンヴィレブランド因子の欠損により引き起こされる疾患の群を指す。フォンヴィレブランド因子は、血小板が一緒に凝集し、血管壁に張り付くのを助け、これは正常な血液凝固に必要なものである。本明細書でさらに詳述されるように、フォンヴィレブランド病の型はいくつか存在し、これには、１型、２Ａ型、２Ｂ型、２Ｍ型、及び３型が含まれる。
【００３６】
「単離された」、「精製された」、または「生物学的に純粋な」という用語は、天然の状態で見られる場合に通常付随する成分を実質的または本質的に含まない材料を指す。純度及び均一性は、典型的には、ポリアクリルアミド電気泳動または高速液体クロマトグラフィーなどの分析化学技法を使用して決定される。ＶＷＦは、調製物中に存在する優勢種であり、実質的に精製される。「精製された」という用語は、一部の実施形態では、核酸またはタンパク質が電気泳動ゲル中で本質的に１つのバンドを生むことを示す。他の実施形態では、これは、核酸またはタンパク質が、少なくとも５０％純粋、より好ましくは、少なくとも６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、またはそれ以上純粋であることを意味する。「精製する」または「精製」は、他の実施形態では、少なくとも１つの汚染物質を、精製される組成物から除去することを意味する。この意味では、精製は、精製された化合物が、均一、例えば１００％純粋であることを必ずしも求めない。
【００３７】
本明細書で使用される場合、「投与」（及びすべての文法上の相当語）には、対象への、静脈内投与、筋肉内投与、皮下投与、経口投与、坐薬としての投与、局所接触、腹腔内、病巣内、もしくは鼻腔内投与、または徐放性デバイス、例えば小型浸透圧ポンプの埋め込みが含まれる。投与は、非経口経路及び経粘膜経路（例えば、口腔内経路、鼻腔内経路、膣内経路、直腸内経路、または経皮経路）を含む任意の経路によるものである。非経口投与には、例えば、静脈内投与、筋肉内投与、関節内投与、皮内投与、皮下投与、腹腔内投与、脳室内投与、及び頭蓋内投与が含まれる。他の送達様式には、リポソーム製剤、静脈内注入、経皮パッチなどの使用が含まれるが、これらに限定されない。
【００３８】
「治療有効量または用量」または「治療に十分な量または用量」または「有効なまたは十分な量または用量」という用語は、投与目的である治療効果を生む用量を指す。例えば、血友病の治療に有用な薬物の治療有効量は、血友病に伴う１つ以上の症状を予防または緩和することができる量であり得る。正確な用量は、治療目的に左右され、当業者により、既知の技法を使用して確認されることになる（例えば、Ｌｉｅｂｅｒｍａｎ，Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｄｏｓａｇｅ  Ｆｏｒｍｓ（ｖｏｌｓ．１−３，１９９２）、Ｌｌｏｙｄ，Ｔｈｅ  Ａｒｔ，Ｓｃｉｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｃｏｍｐｏｕｎｄｉｎｇ（１９９９）、Ｐｉｃｋａｒ，Ｄｏｓａｇｅ  Ｃａｌｃｕｌａｔｉｏｎｓ（１９９９）、及びＲｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｙ，２０ｔｈ  Ｅｄｉｔｉｏｎ，２００３，Ｇｅｎｎａｒｏ，Ｅｄ．，Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ，Ｗｉｌｌｉａｍｓ＆Ｗｉｌｋｉｎｓを参照されたい）。
【００３９】
本明細書で使用される場合、「患者」及び「対象」という用語は、同義に使用され、疾患を有するかまたは疾患に罹患する可能性を有する哺乳動物（好ましくはヒト）を指す。
【００４０】
本明細書で使用される場合、「約」という用語は、指定された値の±１０％のおよその範囲を示す。例えば、「約２０％」という言葉は、１８〜２２％の範囲を包含する。
【００４１】
本明細書で使用される場合、「半減期」という用語は、崩壊している物質の量（または試料または患者からのクリアランス）が半分に減少するまでにかかる期間を指す。
【００４２】
Ｉ．組換えフォンヴィレブランド因子（ｒＶＷＦ）
本発明は、外科手術、例えば非限定的に、大手術、小手術、または口腔手術を受ける、重度のＶＷＤを患う対象の前処置のために、フォンヴィレブランド因子（ｒＶＷＦ）を含む組成物を利用する。
【００４３】
ある特定の実施形態では、本発明のＶＷＦタンパク質は、構築物、例えば、組換えＶＷＦの産生方法に関して参照により本明細書に組み込まれる、１９８６年１０月２３日に公開されたＷＯ１９８６／０６０９６、及びＧｉｎｓｂｕｒｇら名義で１９９０年７月２３日に出願された米国特許出願第０７／５５９，５０９号において行われているように調製されたものを含んでもよい。本発明に有用なＶＷＦは、単量体及び多量体形態を含めて、あらゆる可能性のある形態を含む。１つの特に有用なＶＷＦの形態は、少なくとも２つのＶＷＦのホモ多量体である。ＶＷＦタンパク質は、生物学的に活性な誘導体であってもよく、あるいはＦＶＩＩＩのための安定化剤としてのみ使用される場合、ＶＷＦは、生物学的に活性でない形態であってもよい。本発明は、組み合わせて使用されるＶＷＦの異なる形態を包含することも理解されたい。例えば、本発明に有用な組成物は、異なる多量体、異なる誘導体、ならびに生物学的に活性な誘導体及び生物学的に活性でない誘導体の両方を含んでもよい。
【００４４】
一次止血において、ＶＷＦは、血小板と、コラーゲンなどの細胞外マトリックスの特定の成分との間の橋として働く。このプロセスにおけるＶＷＦの生物活性は、種々のインビトロアッセイによって測定することができる（Ｔｕｒｅｃｅｋ  ｅｔ  ａｌ．，Ｓｅｍｉｎ．Ｔｈｒｏｍｂ．Ｈｅｍｏｓｔ．２８：１４９−１６０，２００２）。リストセチン補因子アッセイは、ＶＷＦの存在下で抗生物質リストセチンにより誘導される新鮮なまたはホルマリン固定した血小板の凝集に基づく。
【００４５】
血小板凝集の程度は、ＶＷＦ濃度に依存し、比濁法により、例えば、血小板凝集計の使用により測定することができる（Ｗｅｉｓｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．５２：２７０８−２７１６，１９７３、Ｍａｃｆａｒｌａｎｅ  ｅｔ  ａｌ．，Ｔｈｒｏｍｂ．Ｄｉａｔｈ．Ｈａｅｍｏｒｒｈ．３４：３０６−３０８，１９７５）。第２の方法は、ＥＬＩＳＡ技術に基づくコラーゲン結合アッセイである（Ｂｒｏｗｎ  ｅｔ  Ｂｏｓａｋ，Ｔｈｒｏｍｂ．Ｒｅｓ．４３：３０３−３１１，１９８６、Ｆａｖａｌｏｒｏ，Ｔｈｒｏｍｂ．Ｈａｅｍｏｓｔ．８３：１２７−１３５，２０００）。マイクロタイタープレートをＩ型またはＩＩＩ型コラーゲンでコーティングする。次に、ＶＷＦをコラーゲン表面に結合させ、続いて酵素標識したポリクローナル抗体を用いて検出する。最後のステップは基質反応であり、これは、ＥＬＩＳＡリーダーを用いて測光法によりモニタリングできる。本明細書で提供されるように、本発明のＶＷＦの特異的リストセチン補因子活性（ＶＷＦ：ＲＣｏ）は、概して、インビトロアッセイを使用して測定したＶＷＦのｍＵ／μｇを単位として記載される。
【００４６】
ｐｄＶＷＦと比べた本発明のｒＶＷＦ組成物の利点は、ｒＶＷＦがｐｄＶＷＦよりも高い比活性を呈することである。いくつかの実施形態では、本発明のｒＶＷＦは、比活性が、少なくとも約２０、２２．５、２５、２７．５、３０、３２．５、３５、３７．５、４０、４２．５、４５、４７．５、５０、５２．５、５５、５７．５、６０、６２．５、６５、６７．５、７０、７２．５、７５、７７．５、８０、８２．５、８５、８７．５、９０、９２．５、９５、９７．５、１００、１０５、１１０、１１５、１２０、１２５、１３０、１３５、１４０、１４５、１５０ｍＵ／μｇ、またはそれ以上である。
【００４７】
本発明のｒＶＷＦは、約１０〜約４０のサブユニットを含んで、極めて多量体である。さらなる実施形態では、本発明の方法を使用して産生された多量体ｒＶＷＦは、約１０〜３０、１２〜２８、１４〜２６、１６〜２４、１８〜２２、２０〜２１のサブユニットを含む。さらなる実施形態では、ｒＶＷＦは、二量体から、４０を超えるサブユニットの多量体（１０００万ダルトン超）の多量体まで、様々なサイズの多量体で存在する。最も大きい多量体は、血小板受容体と傷害の内皮下マトリックス部位との両方と相互作用することができる複数の結合部位を提供し、最も止血活性があるＶＷＦの形態である。ＡＤＡＭＴＳ１３の適用により、超大型のｒＶＷＦ多量体は経時的に切断されるが、産生中（一般に細胞培養における発現による）、本発明のｒＶＷＦ組成物は、概してＡＤＡＭＴＳ１３に曝露せず、その極めて多量体である構造を保持する。
【００４８】
一実施形態では、本明細書に記載の方法で使用されるｒＶＷＦ組成物は、オリゴマーの９５％が６サブユニット〜２０サブユニットを有することを特徴とするｒＶＷＦオリゴマーの分布を有する。他の実施形態では、ｒＶＷＦ組成物は、オリゴマーの９５％が、すべての目的について全体が参照により本明細書に組み込まれる国際公開第ＷＯ２０１２／１７１０３１号の表２に見られる変種４５８〜６４１から選択されるサブユニットの範囲を有することを特徴とする、ｒＶＷＦオリゴマーの分布を有する。
【００４９】
一実施形態では、ｒＶＷＦ組成物は、特定のより高次のｒＶＷＦ多量体またはより大きい多量体で存在するｒＶＷＦ分子の割合（％）に従って特徴付けることができる。例えば、一実施形態では、本明細書に記載の方法で使用されるｒＶＷＦ組成物中のｒＶＷＦ分子の少なくとも２０％が、少なくとも１０サブユニットのオリゴマー複合体で存在する。別の実施形態では、本明細書に記載の方法で使用されるｒＶＷＦ組成物中のｒＶＷＦ分子の少なくとも２０％が、少なくとも１２サブユニットのオリゴマー複合体で存在する。さらに他の実施形態では、本明細書で提供される方法で使用されるｒＶＷＦ組成物は、すべての目的について全体が参照により本明細書に組み込まれる表３〜表５に見られる変種１３４〜４５７のうちのいずれか１つに従い、特定のより高次のｒＶＷＦ多量体またはより大きい多量体（例えば、少なくともＹサブユニットの多量体）で存在するｒＶＷＦ分子を最低限の割合で有する（例えば、少なくともＸ％を有する）。
【００５０】
上記に従って、対象に投与されるｒＶＷＦ組成物（ＦＶＩＩＩの有無にかかわらず）は、一般に、高分子量（ＨＭＷ）ｒＶＷＦ多量体をかなりの割合（％）で含む。さらなる実施形態では、ＨＭＷ  ｒＶＷＦ多量体組成物は、少なくとも１０％〜８０％のｒＶＷＦ十量体またはより高次の多量体を含む。さらなる実施形態では、組成物は、約１０〜９５％、２０〜９０％、３０〜８５％、４０〜８０％、５０〜７５％、６０〜７０％の十量体またはより高次の多量体を含む。さらなる実施形態では、ＨＭＷ  ｒＶＷＦ多量体組成物は、少なくとも約１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％の十量体またはより高次の多量体を含む。
【００５１】
ｒＶＷＦ多量体の数及び割合の評価は、電気泳動を使用する方法、及びＶＷＦ多量体をサイズにより分離するサイズ排除クロマトグラフィー法が含まれるがこれらに限定されない、当該技術分野で既知の方法を使用して実施することができ、これは、例えばＣｕｍｍｉｎｇらによって考察されているとおりである（全体が参照により、すべての目的について、特にＶＷＦ多量体の評価に関するすべての教示について本明細書に組み込まれる、Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ｐａｔｈｏｌ．１９９３  Ｍａｙ；４６（５）：４７０−４７３）。そのような教示は、ＶＷＦに対する放射性標識された抗体を用いてゲルを免疫ブロットした後に化学発光を検出する免疫ブロット技法（ウエスタンブロットなど）をさらに含んでもよい（例えば、全体が参照により、すべての目的について、特にＶＷＦ多量体の評価に関するすべての教示について本明細書に組み込まれる、Ｗｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，（１９９３），Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｌａｂ．Ａｎａｌ．，７：３１７−３２３を参照されたい）。ＶＷＦのためのさらなるアッセイには、ＶＷＦ：抗原（ＶＷＦ：Ａｇ）、ＶＷＦ：リストセチン補因子（ＶＷＦ：ＲＣｏｆ）、及びＶＷＦ：コラーゲン結合活性アッセイ（ＶＷＦ：ＣＢＡ）が含まれ、これらはフォンヴィレブランド病の診断及び分類に使用されることが多い（例えば、全体が参照により、すべての目的について、特にＶＷＦのアッセイに関するすべての教示について本明細書に組み込まれる、Ｆａｖａｌｏｒｏ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐａｔｈｏｌｏｇｙ，１９９７，２９（４）：３４１−４５６を参照されたい）。
【００５２】
さらなる実施形態では、本発明のより高次のｒＶＷＦ多量体は、投与から約１〜約９０時間の間、安定である。なおさらなる実施形態では、より高次のｒＶＷＦ多量体は、投与から約５〜８０、１０〜７０、１５〜６０、２０〜５０、２５〜４０、３０〜３５時間の間、安定である。またさらなる実施形態では、より高次のｒＶＷＦ多量体は、投与から少なくとも３、６、１２、１８、２４、３６、４８、７２時間の間、安定である。ある特定の実施形態では、ｒＶＷＦ多量体の安定性は、インビトロで評価される。
【００５３】
一実施形態では、本明細書で提供される組成物及び方法で使用されるより高次のｒＶＷＦ多量体は、半減期が投与から少なくとも１２時間である。別の実施形態では、より高次のｒＶＷＦ多量体は、半減期が投与から少なくとも２４時間である。さらに他の実施形態では、より高次のｒＶＷＦ多量体は、半減期が、すべての目的について全体が参照により本明細書に組み込まれる国際公開第ＷＯ２０１２／１７１０３１号の表６に見られる変種６４２〜１０４５から選択される。
【００５４】
特定の態様において、本発明に従い使用されるｒＶＷＦ（組換えまたは血漿由来）は、いずれのコンジュゲーション、翻訳後または共有結合修飾によっても修飾されない。特定の実施形態では、本発明のｒＶＷＦは、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、ポリプロピレングリコール、ポリオキシアルキレン、ポリシアル酸、ヒドロキシルエチルデンプン、ポリ炭水化物部分などを非限定的に含む水溶性重合体によって修飾されない。
【００５５】
他の態様において、本発明に従い使用されるｒＶＷＦ（組換えまたは血漿由来）は、ＮまたはＣ末端残基の修飾と、例えば、遊離スルフヒドリル基、一級アミン、及びヒドロキシル基での選択された側鎖の修飾とを含む、コンジュゲーション、翻訳後修飾、または共有結合修飾をとおして修飾される。一実施形態では、水溶性重合体は、リジン基または他の一級アミンによりタンパク質に（直接、またはリンカーを介して）連結する。一実施形態では、本発明のｒＶＷＦタンパク質は、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、ポリプロピレングリコール、ポリオキシアルキレン、ポリシアル酸、ヒドロキシルエチルデンプン、ポリ炭水化物部分などを非限定的に含む水溶性重合体のコンジュゲーションによって修飾されてもよい。
【００５６】
ｒＶＷＦ及び／またはＦＶＩＩＩの修飾に使用され得る水溶性重合体は、線形または分岐構造が含まれる。コンジュゲートされた重合体は、本発明の凝固タンパク質に直接結合してもよく、あるいは代替的に連結部分をとおして結合してもよい。水溶性重合体とのタンパク質コンジュゲーションの非限定的な例は、米国特許第４，６４０，８３５号、同第４，４９６，６８９号、同第４，３０１，１４４号、同第４，６７０，４１７号、同第４，７９１，１９２号、及び同第４，１７９，３３７号、ならびにＡｂｕｃｈｏｗｓｋｉ  ａｎｄ  Ｄａｖｉｓ”Ｅｎｚｙｍｅｓ  ａｓ  Ｄｒｕｇｓ，”Ｈｏｌｃｅｎｂｅｒｇ  ａｎｄ  Ｒｏｂｅｒｔｓ，Ｅｄｓ．，ｐｐ．３６７  ３８３，Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ａｎｄ  Ｓｏｎｓ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ（１９８１）、及びＨｅｒｍａｎｓｏｎ  Ｇ．，Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ  Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ  ２ｎｄ  Ｅｄ．，Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ，Ｉｎｃ．２００８に見い出すことができる。
【００５７】
タンパク質コンジュゲーションは、当該技術分野において周知の、いくつかの技法により行われてもよく、例えば、Ｈｅｒｍａｎｓｏｎ  Ｇ．，Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ  Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ  ２ｎｄ  Ｅｄ．，Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ，Ｉｎｃ．２００８を参照されたい。例には、凝固タンパク質または水溶性重合体部分のいずれかの一方にあるカルボキシル基ともう一方のアミン基との間のペプチド結合、または一方のカルボキシル基ともう一方のヒドロキシル基との間のエステル連結をとおした連結が含まれる。本発明の凝固タンパク質が水溶性重合体化合物にコンジュゲートされ得る別の連結は、過ヨウ素酸酸化による重合体の非還元末端に形成されたアルデヒド基と反応する重合体部分上の遊離アミノ基間の、シッフ塩基を介したものである（Ｊｅｎｎｉｎｇｓ  ａｎｄ  Ｌｕｇｏｗｓｋｉ，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１９８１；１２７：１０１１−８、Ｆｅｍａｎｄｅｓ  ａｎｄ  Ｇｒｅｇｏｎｒａｄｉｓ，Ｂｉｏｃｈｉｍ  Ｂｉｏｐｈｙｓ  Ａｃｔａ．１９９７；１３４１；２６−３４）。生成されたシッフ塩基を、ＮａＣＮＢＨ３を用いた特異的還元により安定させて、二級アミンを形成することができる。代替的な手法は、先立つ酸化後にＮＨ４Ｃｌを用いて還元的アミノ化を行うことによる重合体上の末端遊離アミノ基の生成である。２つのアミノ基または２つのヒドロキシル基を連結させるために、二機能性試薬を使用することができる。例えば、アミノ基を含有する重合体をＢＳ３（ビス（スルホスクシンイミジル）スベリン酸塩／Ｐｉｅｒｃｅ，Ｒｏｃｋｆｏｒｄ，Ｉｌｌ．）のような試薬を用いて、凝固タンパク質のアミノ基にカップリングすることができる。加えて、Ｓｕｌｆｏ−ＥＭＣＳ（Ｎ−ε−マレイミドカプロイルオキシ）スルホスクシンイミドエステル／Ｐｉｅｒｃｅ）のようなヘテロ二機能性架橋試薬を使用して、例えば、アミン基及びチオール基を連結させることができる。他の実施形態では、アルデヒド反応基、例えば、ＰＥＧアルコキシドとブロモアセトアルデヒドのジエチルアセタール、ＰＥＧとＤＭＳＯ及び無水酢酸、ならびにＰＥＧ塩化物と４−ヒドロキシベンズアルデヒドのフェノキシド、スクシンイミジル活性エステル、活性化ジチオ炭酸ＰＥＧ、２，４，５−トリクロロフェニルクロロギ酸、及びＰ−ニトロフェニルクロロギ酸活性化ＰＥＧを、凝固タンパク質のコンジュゲーションに使用してもよい。
【００５８】
いくつかの態様において、本発明の方法で使用されるｒＶＷＦは、フューリンを用いてインビトロで成熟させたものである。さらなる実施形態では、フューリンは組換えフューリンである。
【００５９】
さらなる態様において、本発明の方法で使用されるｒＶＷＦは、当該技術分野で既知の方法を使用して、哺乳動物細胞培養物中の発現により産生される。特定の実施形態では、哺乳動物培養物はＣＨＯ細胞を含む。例示的な実施形態では、本発明のｒＶＷＦは、ＣＨＯ細胞発現系から単離されたｒＶＷＦタンパク質を含む。さらなる実施形態では、プロペプチド除去は、プロＶＷＦのフューリンへの曝露をとおしてインビトロで媒介され、なおさらなる実施形態では、プロペプチド除去に使用されるフューリンは組換えフューリンである。またさらなる実施形態では、完全グリコシル化／ＡＢＯ血液型グリカンは存在しない。
【００６０】
またさらなる実施形態では、好適な真核生物宿主系中の発現による本発明の方法及び組成物で使用されるｒＶＷＦ。真核生物細胞の例には、ＣＨＯ、ＣＯＳ、ＨＥＫ２９３、ＢＨＫ、ＳＫ−Ｈｅｐ、及びＨｅｐＧ２などの哺乳動物細胞、昆虫細胞、例えば、ＳＦ９細胞、ＳＦ２１細胞、Ｓ２細胞、及びＨｉｇｈ  Ｆｉｖｅ細胞、ならびに酵母細胞、例えば、ＳａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓまたはＳｃｈｉｚｏｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ細胞が挙げられるが、これらに限定されない。一実施形態では、ＶＷＦは、酵母細胞、昆虫細胞、鳥類細胞、哺乳動物細胞などにおいて発現させることができる。例えば、ヒト細胞株、ハムスター細胞株、またはマウス細胞株中である。ひとつの特定の実施形態では、細胞株は、ＣＨＯ、ＢＨＫ、またはＨＥＫ細胞株である。典型的には、哺乳動物細胞、例えば、連続細胞株由来のＣＨＯ細胞を使用して、本発明のＶＷＦを発現させることができる。
【００６１】
ある特定の実施形態では、ＶＷＦをコードする配列を含む核酸配列は、ベクターであり得る。ベクターは、ウイルスによって送達され得るか、またはプラスミドであり得る。タンパク質をコードする核酸配列は、特定の遺伝子またはその生物学的に機能的な部分であり得る。一実施形態では、タンパク質は、少なくとも、ＶＷＦの生物学的に活性な部分である。多種多様なベクターをＶＷＦの発現に使用することができ、これらは真核生物発現ベクターから選択され得る。真核生物発現のためのベクターの例としては、（ｉ）酵母中の発現には、ＡＯＸ１、ＧＡＰ、ＧＡＬ１、ＡＵＧ１などといったプロモーターを使用する、ｐＡＯ、ｐＰＩＣ、ｐＹＥＳ、ｐＭＥＴなどのベクター、（ｉｉ）昆虫細胞中の発現には、ＰＨ、ｐ１０、ＭＴ、Ａｃ５、ＯｐＩＥ２、ｇｐ６４、ｐｏｌｈなどといったプロモーターを使用する、ｐＭＴ、ｐＡｃ５、ｐＩＢ、ｐＭＩＢ、ｐＢＡＣなどといったベクター、ならびに（ｉｉｉ）哺乳動物細胞中の発現には、ＣＭＶ、ＳＶ４０、ＥＦ−１、ＵｂＣ、ＲＳＶ、ＡＤＶ、ＢＰＶ、及びβ−アクチンなどのプロモーターを使用する、ｐＳＶＬ、ｐＣＭＶ、ｐＲｃ／ＲＳＶ、ｐｃＤＮＡ３、ｐＢＰＶなどといったベクター、及びワクシニアウイルス、アデノ関連ウイルス、ヘルペスウイルス、レトロウイルスなどといったウイルス系に由来するベクターが挙げられる。
【００６２】
本発明のいくつかの実施形態では、核酸配列は、タンパク質の制御された発現に好適な他の配列、例えば、プロモーター配列、エンハンサー、ＴＡＴＡボックス、転写開始部位、ポリリンカー、制限部位、ポリＡ配列、タンパク質プロセシング配列、選択マーカー、及び当業者には一般に既知である同様のものをさらに含む。
【００６３】
ある特定の実施形態では、本発明の細胞培養方法には、微小担体の使用が含まれてもよい。いくつかの実施形態では、実施形態の細胞培養は、高い細胞密度及びタンパク質発現を達成するための大量特化細胞表面積に好適な条件下、大型バイオリアクター中で行うことができる。そのような成長条件をもたらすためのひとつの手段は、撹拌槽型バイオリアクター中の細胞培養に微小担体を使用することである。微小担体上の細胞成長の概念は、ｖａｎ  Ｗｅｚｅｌによって最初に説明され（ｖａｎ  Ｗｅｚｅｌ，Ａ．Ｌ．，Ｎａｔｕｒｅ  ２１６：６４−５（１９６７））、細胞が、成長培地中に懸濁した小型の固体粒子の表面に付着することを可能にするものである。これらの方法により、高い表面積対体積比が得られ、その結果、効率的な養分利用が可能となる。さらに、真核生物細胞株中の分泌タンパク質の発現に対しては、表面積対体積率の増加により、分泌レベルがより高くなり、その結果、培養物の上清中のタンパク質収率がより高くなる。最後に、これらの方法により、真核生物発現培養の大規模化が容易になる。
【００６４】
ＶＷＦを発現する細胞は、細胞培養物の成長中に、球形または多孔質微小担体に結合し得る。微小担体は、デキストラン、コラーゲン、プラスチック、ゼラチン、及びセルロースに基づく微小担体、ならびにＢｕｔｌｅｒ（１９８８．Ｉｎ：Ｓｐｉｅｒ＆Ｇｒｉｆｆｉｔｈｓ，Ａｎｉｍａｌ  Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  ３：２８３−３０３）に記載されている他のものの群から選択される微小担体であり得る。細胞を球形微小担体上のバイオマスに成長させ、細胞が最終発酵槽バイオマスに達したとき、かつ多孔質微小担体上で発現するタンパク質の産生の前に、細胞を継代培養すること（逆もまた同様）も可能である。好適な球形微小担体には、滑面微小担体、例えば、Ｃｙｔｏｄｅｘ（商標）１、Ｃｙｔｏｄｅｘ（商標）２、及びＣｙｔｏｄｅ（商標）３（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）、ならびにマクロ多孔質微小担体、例えば、Ｃｙｔｏｐｏｒｅ（商標）．１、Ｃｙｔｏｐｏｒｅ（商標）２、Ｃｙｔｏｌｉｎｅ（商標）１、及びＣｙｔｏｌｉｎｅ（商標）２（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）が含まれ得る。
【００６５】
ある特定の実施形態では、ｒＶＷＦは、高分子量ｒＶＷＦを産生する細胞培地で培養された細胞中で発現される。「細胞培養溶液」、「細胞培地（単数または複数）」、及び「細胞培養上清」という用語は、当該技術分野で一般に周知である細胞培養プロセスの態様を指す。本発明との関連において、細胞培養溶液には、細胞培地及び細胞培養上清が含まれ得る。細胞培地は、任意選択でサプリメントと一緒に細胞培養溶液に外部から添加され、ＶＷＦを発現する細胞の培養のための養分及び他の成分を提供する。細胞培養上清は、細胞培地からの養分及び他の成分、ならびに培養中に細胞から放出、代謝、及び／または分泌された産物を含む、細胞培養溶液を指す。さらなる実施形態では、培地は、動物性タンパク質を含まず、化学的に定義されたものであり得る。動物性タンパク質を含まず、化学的に定義された培地を調製する方法は、当該技術分野、例えば、ともに、すべての目的について、特に細胞培地に関するすべての教示について本明細書に組み込まれる、米国第２００８／０００９０４０号及び米国第２００７／０２１２７７０号において既知である。「タンパク質を含まない」及び関連用語は、成長中にタンパク質を自然に落とす、培養中の細胞に対して外来であるかまたは培養中の細胞以外の源に由来するタンパク質を指す。別の実施形態では、培地はポリペプチドを含まない。別の実施形態では、培地は血清を含まない。別の実施形態では、培地は動物性タンパク質を含まない。別の実施形態では、培地は動物性成分を含まない。別の実施形態では、培地は、タンパク質、例えば、ウシ胎仔血清などの血清由来の動物性タンパク質を含有する。別の実施形態では、培地には、組換えタンパク質が外から添加される。別の実施形態では、タンパク質は、認定されている病原体を含まない動物に由来する。「化学的に定義された」という用語は、本明細書で使用される場合、培地が、例えば、動物性成分、臓器、腺、植物、または酵母の抽出物などの定義されていない、いかなるサプリメントも含まないことを意味するものとする。したがって、化学的に定義された培地の各成分は、正確に定義される。好ましい実施形態では、培地は、動物性成分を含まず、かつタンパク質を含まない。
【００６６】
さらなる実施形態では、哺乳動物細胞培養からの精製の後で、ｒＦＶＩＩＩは、投与前に再構成される。なおさらなる実施形態では、ｒＶＷＦは、再構成の前または後にフューリンで処理される。さらなる実施形態では、フューリンは組換えフューリンである。なおさらなる実施形態では、本発明のｒＶＷＦは、ＡＤＡＭＴＳ１３に曝露されず、その結果、超大型（即ち、１０以上のサブユニットを含む）が本発明のｒＶＷＦ組成物中に存在するようになる。
【００６７】
特定の態様において、本発明の方法で使用されるｒＶＷＦは、緩衝液、糖、及び／または糖アルコール（トレハロース及びマンニトールを非限定的に含む）、安定化剤（グリシンなど）、及び界面活性剤（ポリソルベート８０など）を含有する製剤に含まれる。さらなる実施形態では、ｒＦＶＩＩＩを含有する製剤について、製剤は、ナトリウム、ヒスチジン、カルシウム、及びグルタチオンをさらに含んでもよい。
【００６８】
一態様において、ｒＶＷＦを含む製剤は、投与前に凍結乾燥される。凍結乾燥は、当該技術分野で一般的な技法を使用して行われ、開発される組成物に対して最適化されるべきである［Ｔａｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｈａｒｍ  Ｒｅｓ．２１：１９１−２００．（２００４）、及びＣｈａｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｈａｒｍ  Ｒｅｓ．１３：２４３−９（１９９６）］。
【００６９】
薬学的製剤を調製する方法には、次のステップのうちの１つ以上が含まれ得る：凍結乾燥の前に本明細書に記載の安定化剤を該混合物に添加するステップ、凍結乾燥の前に、各々本明細書に記載されている、増量剤、浸透圧調節剤、及び界面活性剤から選択される少なくとも１つの薬剤を該混合物に添加するステップ。凍結乾燥した製剤は、一態様では、少なくとも、緩衝液、増量剤、及び安定化剤のうちの１つ以上で構成される。この態様において、界面活性剤の利用は、凍結乾燥ステップ中または再構成中の凝集が問題となる場合に、評価及び選択される。適切な緩衝剤を含めて、凍結乾燥中、製剤をｐＨの安定領域に維持する。
【００７０】
凍結乾燥した物質の標準的な再構成の実施は、ある量の純水または注射用滅菌水（ＷＦＩ）（典型的には、凍結乾燥中に除去した体積に等しい）を戻し入れることであるが、非経口投与用医薬品の製造には抗生物質の希釈溶液が使用される場合がある［Ｃｈｅｎ，Ｄｒｕｇ  Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ  ａｎｄ  Ｉｎｄｕｓｔｒｉａｌ  Ｐｈａｒｍａｃｙ，１８：１３１１−１３５４（１９９２）］。したがって、本発明の凍結乾燥した組換えＶＷＦ組成物に希釈液を添加するステップを含む、再構成された組換えＶＷＦ組成物を調製するための方法が提供される。
【００７１】
凍結乾燥した物質は、水溶液として再構成されてもよい。様々な水性担体、例えば、注射用滅菌水、複数回投与用途のための保存剤を含む水、または適量の界面活性剤を含む水（例えば、懸濁液の製造に好適な賦形剤と混合された活性化合物を含有する水性懸濁液）。様々な態様において、そのような賦形剤は、懸濁剤、例えば、非限定的に、カルボキシメチルセルロースナトリウム、メチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、アルギン酸ナトリウム、ポリビニルピロリドン、トラガントガム、及びアカシアガムであり、分散または湿潤剤は、自然発生のホスファチド、例えば、非限定的に、レシチン、またはアルキレンオキシドと脂肪酸との縮合物、例えば、非限定的に、ステアリン酸ポリオキシエチレン、またはエチレンオキシドと長鎖脂肪族アルコールとの縮合物、例えば、非限定的に、ヘプタデカエチレン−オキシセタノール、またはポリオキシエチレンソルビトールモノオレエートなどの、エチレンオキシドと脂肪酸及びヘキシトール由来の部分エステルとの縮合物、またはエチレンオキシドと脂肪酸及びヘキシトール無水物由来の部分エステルとの縮合物、例えば、非限定的に、ポリエチレンソルビタンオレイン酸モノエステルである。様々な態様において、水性懸濁液は、１つ以上の保存剤、例えば、非限定的に、エチル、またはｎ−プロピル、ｐ−ヒドロキシ安息香酸も含有する。
【００７２】
ある特定の実施形態では、本発明の組成物は、シリンジまたは他の貯蔵容器の使用を伴う投与のための液体製剤である。さらなる実施形態では、これらの液体製剤は、水溶液として再構成される本明細書に記載の凍結乾燥した物質から製造される。
【００７３】
さらなる態様において、本発明の組成物は、１つ以上の薬学的に許容される担体をさらに含む。「薬学的に」または「薬理学的に」許容されるという表現は、以下に記載のように、安定であり、凝集及び切断産物などタンパク質分解を阻害し、加えて、当該技術分野で周知の経路を使用して投与されるときにアレルギー反応または他の有害反応を生むことがない分子実体及び組成物を指す。「薬学的に許容される担体」には、上で開示された薬剤を含めて、ありとあらゆる臨床的に有用な溶媒、分散媒、コーティング、抗菌剤及び抗真菌薬剤、等張剤及び吸収遅延剤などが含まれる。
【００７４】
ＩＩ．組換えＶＷＦの産生
本発明の遊離成熟組換えフォンヴィレブランド因子（ｒＶＷＦ）は、組換えによって産生させることができる。当業者には、組換えタンパク質を宿主細胞中で発現させるための有用な方法が認識される。いくつかの例では、本方法には、ｒＶＷＦをコードする核酸配列をＣＨＯ細胞などの宿主細胞中で発現させること、及び得られた宿主細胞をある特定の条件下で培養して、ｒＶＷＦ、プレプロＶＷＦ、プロＶＷＦなどを産生させることが含まれる。
【００７５】
ある特定の実施形態では、ＶＷＦをコードする配列を含む核酸配列は、発現ベクターであり得る。ベクターは、ウイルスによって送達され得るか、またはプラスミドであり得る。タンパク質をコードする核酸配列は、特定の遺伝子またはその生物学的に機能的な部分であり得る。一実施形態では、タンパク質は、少なくとも、ＶＷＦの生物学的に活性な部分である。核酸配列は、タンパク質の制御された発現に好適な他の配列、例えば、プロモーター配列、エンハンサー、ＴＡＴＡボックス、転写開始部位、ポリリンカー、制限部位、ポリＡ配列、タンパク質プロセシング配列、選択マーカー、及び当業者には一般に既知である同様のものをさらに含み得る。
【００７６】
多種多様なベクターをＶＷＦの発現に使用することができ、これらは真核生物発現ベクターから選択され得る。真核生物発現のためのベクターの例としては、（ｉ）酵母中の発現には、ＡＯＸ１、ＧＡＰ、ＧＡＬ１、ＡＵＧ１などといったプロモーターを使用する、ｐＡＯ、ｐＰＩＣ、ｐＹＥＳ、ｐＭＥＴなどのベクター、（ｉｉ）昆虫細胞中の発現には、ＰＨ、ｐ１０、ＭＴ、Ａｃ５、ＯｐＩＥ２、ｇｐ６４、ｐｏｌｈなどといったプロモーターを使用する、ｐＭＴ、ｐＡｃ５、ｐＩＢ、ｐＭＩＢ、ｐＢＡＣなどといったベクター、ならびに（ｉｉｉ）哺乳動物細胞中の発現には、ＣＭＶ、ＳＶ４０、ＥＦ−１、ＵｂＣ、ＲＳＶ、ＡＤＶ、ＢＰＶ、及びβ−アクチンなどのプロモーターを使用する、ｐＳＶＬ、ｐＣＭＶ、ｐＲｃ／ＲＳＶ、ｐｃＤＮＡ３、ｐＢＰＶなどといったベクター、及びワクシニアウイルス、アデノ関連ウイルス、ヘルペスウイルス、レトロウイルスなどといったウイルス系に由来するベクターが挙げられる。
【００７７】
さらなる態様において、本発明の方法で使用されるｒＶＷＦは、当該技術分野で既知の方法を使用して、哺乳動物細胞培養物中の発現により産生される。特定の実施形態では、哺乳動物培養物はＣＨＯ細胞を含む。さらなる実施形態では、ｒＶＷＦは、同じ培養中で組換え第ＶＩＩＩ因子（ｒＦＶＩＩＩ）と同時発現される。そのような実施形態では、ｒＶＷＦ及びｒＦＶＩＩＩは、当該技術分野で既知の方法を使用して、一緒に精製（同時精製）されるかまたは別々に精製される。他の実施形態では、ｒＶＷＦは、ｒＦＶＩＩＩを含有しない培養中で発現される。
【００７８】
いくつかの実施形態では、ｒＶＷＦは、好適な真核生物宿主系から発現及び単離される。真核生物細胞の例には、ＣＨＯ、ＣＯＳ、ＨＥＫ２９３、ＢＨＫ、ＳＫ−Ｈｅｐ、及びＨｅｐＧ２などの哺乳動物細胞、昆虫細胞、例えば、ＳＦ９細胞、ＳＦ２１細胞、Ｓ２細胞、及びＨｉｇｈ  Ｆｉｖｅ細胞、ならびに酵母細胞、例えば、ＳａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓまたはＳｃｈｉｚｏｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ細胞が挙げられるが、これらに限定されない。一実施形態では、ＶＷＦは、酵母細胞、昆虫細胞、鳥類細胞、哺乳動物細胞などにおいて発現させることができる。例えば、ヒト細胞株、ハムスター細胞株、またはマウス細胞株中である。ひとつの特定の実施形態では、細胞株は、ＣＨＯ、ＢＨＫ、またはＨＥＫ細胞株である。典型的には、哺乳動物細胞、例えば、連続細胞株由来のＣＨＯ細胞を使用して、本発明のＶＷＦを発現させることができる。ある特定の場合、ＶＷＦタンパク質は、ＣＨＯ細胞発現系から発現及び単離される。
【００７９】
ＶＷＦは、細胞培養系中で、または当該技術分野で認識されている任意の細胞培養法に従って産生させることができる。いくつかの実施形態では、細胞培養は、高い細胞密度及びタンパク質発現を達成するための大量特化細胞表面積に好適な条件下、大型バイオリアクター中で行うことができる。そのような成長条件をもたらすためのひとつの手段は、撹拌槽型バイオリアクター中の細胞培養に微小担体を使用することである。微小担体上の細胞成長の概念は、ｖａｎ  Ｗｅｚｅｌによって最初に説明され（ｖａｎ  Ｗｅｚｅｌ，Ａ．Ｌ．，Ｎａｔｕｒｅ，１９６７，２１６：６４−５）、細胞が、成長培地中に懸濁した小型の固体粒子の表面に付着することを可能にするものである。これらの方法により、高い表面積対体積率が得られ、その結果、効率的な養分利用が可能となる。さらに、真核生物細胞株中の分泌タンパク質の発現に対しては、表面積対体積比の増加により、分泌レベルがより高くなり、その結果、培養物の上清中のタンパク質収率がより高くなる。最後に、これらの方法により、真核生物発現培養の大規模化が容易になる。
【００８０】
ＶＷＦを発現する細胞は、細胞培養物の成長中に、球形または多孔質微小担体に結合し得る。微小担体は、デキストラン、コラーゲン、プラスチック、ゼラチン、及びセルロースに基づく微小担体、ならびにＢｕｔｌｅｒ（１９８８．Ｉｎ：Ｓｐｉｅｒ＆Ｇｒｉｆｆｉｔｈｓ，Ａｎｉｍａｌ  Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  ３：２８３−３０３）。細胞を球形微小担体上のバイオマスに成長させ、細胞が最終発酵槽バイオマスに達したとき、かつ多孔質微小担体上の発現するタンパク質の産生の前に、細胞を継代培養すること（逆もまた同様）も可能である。好適な球形微小担体には、滑面微小担体、例えば、Ｃｙｔｏｄｅｘ（商標）１、Ｃｙｔｏｄｅｘ（商標）２、及びＣｙｔｏｄｅｘ（商標）３（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）、ならびにマクロ多孔質微小担体、例えば、Ｃｙｔｏｐｏｒｅ（商標）１、Ｃｙｔｏｐｏｒｅ（商標）２、Ｃｙｔｏｌｉｎｅ（商標）１、及びＣｙｔｏｌｉｎｅ（商標）２（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）が含まれ得る。
【００８１】
さらなる実施形態では、ＶＷＦプロペプチドは、プロＶＷＦのフューリンへの曝露をとおしてインビトロで非成熟ＶＷＦから切断される。いくつかの実施形態では、プロペプチド切断に使用されるフューリンは、組換えフューリンである。
【００８２】
ある特定の実施形態では、ｒＶＷＦは、高分子量ｒＶＷＦを産生する細胞培地で培養された細胞中で発現される。「細胞培養溶液」、「細胞培地（単数または複数）」、及び「細胞培養上清」という用語は、当該技術分野で一般に周知である細胞培養プロセスの態様を指す。本発明との関連において、細胞培養溶液には、細胞培地及び細胞培養上清が含まれ得る。細胞培地は、任意選択でサプリメントと一緒に細胞培養溶液に外部から添加され、ＶＷＦを発現する細胞の培養のための養分及び他の成分を提供する。細胞培養上清は、細胞培地からの養分及び他の成分、ならびに培養中に細胞から放出、代謝、及び／または分泌された産物を含む、細胞培養溶液を指す。さらなる実施形態では、培地は、動物性タンパク質を含まず、化学的に定義されたものであり得る。動物性タンパク質を含まず、化学的に定義された培地を調製する方法は、当該技術分野、例えば、ともに、すべての目的について、特に細胞培地に関するすべての教示について本明細書に組み込まれる、米国第２００６／００９４１０４号、米国第２００７／０２１２７７０号、及び米国第２００８／０００９０４０号において既知である。「タンパク質を含まない」及び関連用語は、成長中にタンパク質を自然に落とす、培養中の細胞に対して外来であるかまたは培養中の細胞以外の源に由来するタンパク質を指す。別の実施形態では、培地はポリペプチドを含まない。別の実施形態では、培地は血清を含まない。別の実施形態では、培地は動物性タンパク質を含まない。別の実施形態では、培地は動物性成分を含まない。別の実施形態では、培地は、タンパク質、例えば、ウシ胎仔血清などの血清由来の動物性タンパク質を含有する。別の実施形態では、培地には、組換えタンパク質が外から添加される。別の実施形態では、タンパク質は、認定されている病原体を含まない動物に由来する。「化学的に定義された」という用語は、本明細書で使用される場合、培地が、例えば、動物性成分、臓器、腺、植物、または酵母の抽出物などの定義されていないいかなるサプリメントも含まないことを意味するものとする。したがって、化学的に定義された培地の各成分は、正確に定義される。好ましい実施形態では、培地は、動物性成分を含まず、かつタンパク質を含まない。
【００８３】
ある特定の実施形態では、ＶＷＦを発現する細胞の培養は、少なくとも約７日、もしくは少なくとも約１４日、２１日、２８日、または少なくとも約５週、６週、７週、または少なくとも約２か月、もしくは３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８か月、またはそれ以上の間、維持され得る。組換えＶＷＦタンパク質の産生のために細胞培養が維持される細胞密度は、タンパク質発現に使用される培養条件及び培地に依存することになる。当業者であれば、ＶＷＦを産生する細胞培養のための最適な細胞密度を容易に決定することができるであろう。一実施形態では、培養は、約０．５×１０６〜４×１０７細胞／ｍｌの細胞密度で長期間維持される。他の実施形態では、細胞密度は、約１．０×１０６〜約１．０×１０７細胞／ｍｌの濃度で長期間維持される。他の実施形態では、細胞密度は、約１．０×１０６〜約４．０×１０６細胞／ｍｌの濃度で長期間維持される。他の実施形態では、細胞密度は、約１．０×１０６〜約４．０×１０６細胞／ｍｌの濃度で長期間維持される。さらに他の実施形態では、細胞密度は、約２．０×１０６〜約４．０×１０６、または約１．０×１０６〜約２．５×１０６、または約１．５×１０６〜約３．５×１０６、または任意の他の類似した範囲の濃度で長期間維持されてもよい。細胞培養中で適切な時間が経過した後、ｒＶＷＦは、当該技術分野で既知の方法を使用して発現系から単離され得る。
【００８４】
特定の実施形態では、ｒＶＷＦを産生させるための連続細胞培養の細胞密度は、２．５×１０６細胞／ｍｌを超えない濃度で長期間維持される。他の特定の実施形態では、細胞密度は、２．０×１０６細胞／ｍｌを超えない、１．５×１０６細胞／ｍｌを超えない、１．０×１０６細胞／ｍｌを超えない、０．５×１０６細胞／ｍｌを超えない、またはそれ以下を超えない濃度で維持される。一実施形態では、細胞密度は、１．５×１０６細胞／ｍｌ〜２．５×１０６細胞／ｍｌで維持される。
【００８５】
上記の細胞培養のひとつの実施形態では、細胞培養溶液は、銅を含む培地サプリメントを含む。そのような細胞培養溶液は、例えば、全体が参照により、すべての目的について、特に組換えＶＷＦの産生のための細胞培養方法及び組成物に関するすべての教示について本明細書に組み込まれる、米国特許第８，８５２，８８８号、及び米国特許第９，４０９，９７１号に記載されている。
【００８６】
プレプロＶＷＦのポリヌクレオチド及びアミノ酸配列は、それぞれ配列番号１及び配列番号２に示され、それぞれＧｅｎＢａｎｋ受託番号ＮＭ＿０００５５２（ホモサピエンスフォンヴィレブランド因子（ＶＷＦ）ｍＲＮＡ）及びＮＰ＿０００５４３で入手可能である。成熟ＶＷＦタンパク質に対応するアミノ酸配列は、配列番号３（全長プレプロＶＷＦアミノ酸配列のアミノ酸配列７６４〜２８１３に対応する）に示される。いくつかの実施形態では、ＶＷＦは、配列番号３の配列に対して、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも１００％の同一性を呈する。いくつかの実施形態では、本発明のｒＶＷＦは、配列番号３に対して、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または少なくとも１００％の同一性を呈する。例えば、米国特許第８，５９７，９１０号、米国特許公開第２０１６／０１２９０９０号、及び図６を参照されたい。
【００８７】
有用なｒＶＷＦの一形態は、少なくとも１つの第ＶＩＩＩ因子（ＦＶＩＩＩ）分子のインビボ安定化、例えば結合の特性を少なくとも有し、任意選択で薬理学的に許容されるグリコシル化パターンを有する。その特定の例には、Ａ２ドメインを含まないためにタンパク質分解に耐性であるＶＷＦ（Ｌａｎｋｈｏｆ  ｅｔ  ａｌ．，Ｔｈｒｏｍｂ．Ｈａｅｍｏｓｔ．７７：１００８−１０１３，１９９７）と、糖タンパク質ｌｂ結合ドメインならびにコラーゲン及びヘパリンのための結合部位を含む、Ｖａｌ４４９〜Ａｓｎ７３０由来のＶＷＦ断片（Ｐｉｅｔｕ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍｕｎ．１６４：１３３９−１３４７，１９８９）とが挙げられる。ＶＷＦが少なくとも１つのＦＶＩＩＩ分子を安定化する能力の決定は、一態様において、当該技術分野で既知の方法に従い、ＶＷＦ欠乏哺乳動物中で行われる。
【００８８】
本発明のｒＶＷＦは、当該技術分野で既知の任意の方法により産生させることができる。ひとつの特定の例は、組換えＶＷＦの産生方法に関して参照により本明細書に組み込まれる、１９８６年１０月２３日に公開された国際公開第ＷＯ８６／０６０９６号、１９９０年７月２３日に出願された米国特許出願第０７／５５９，５０９号で開示されている。よって、（ｉ）遺伝子操作による、例えば、ＲＮＡの逆転写及び／またはＤＮＡの増幅を介した、組換えＤＮＡの産生、（ｉｉ）トランスフェクションによる、例えば、電気穿孔またはマイクロインジェクションを介した、組換えＤＮＡの原核生物または真核生物細胞への導入、（ｉｉｉ）例えば連続式またはバッチ式による、形質転換細胞の培養、（ｉｖ）例えば構成的なまたは誘導時のＶＷＦの発現、ならびに（ｖ）例えば培地からのまたは形質転換細胞の採取によるＶＷＦの単離、その結果としての（ｖｉ）例えばアニオン交換クロマトグラフィーまたは親和性クロマトグラフィーを介した、生成されたｒＶＷＦの取得のための方法が、当該技術分野で知られている。組換えＶＷＦは、一態様において、当該技術分野で周知の組換えＤＮＡ技法を使用して、形質転換宿主細胞中で作製される。例えば、ポリペプチドをコードする配列は、好適な制限酵素を使用してＤＮＡから切除され得る。代替的に、ＤＮＡ分子は、別の態様において、ホスホロアミデート法などの化学合成技法を使用して合成される。また、なお別の態様では、これらの技法の組み合わせが使用される。
【００８９】
本発明はまた、適切な宿主において本発明のポリペプチドをコードするベクターを提供する。ベクターは、適切な発現制御配列に作動可能に連結したポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを含む。ポリヌクレオチドがベクターに挿入される前または挿入された後のいずれかにこの作動可能な連結をもたらす方法は、よく知られている。発現制御配列には、プロモーター、アクチベーター、エンハンサー、オペレーター、リボソーム結合部位、開始シグナル、停止シグナル、キャップシグナル、ポリアデニル化シグナル、及び転写または翻訳の制御に関与する他のシグナルが含まれる。中にポリヌクレオチドを有する得られたベクターを使用して、適切な宿主の形質転換を行う。この形質転換は、当該技術分野で周知の方法を使用して実行されてもよい。
【００９０】
本発明の実施には、多数の利用可能な周知の宿主細胞のうちのいずれかが使用される。特定の宿主の選択は、いくつかの当該技術分野で認識されている要因により決定され、これらの要因には、例えば、選択された発現ベクターとの適合性、ＤＮＡ分子によりコードされるペプチドの毒性、形質転換率、ペプチド回収の容易性、発現特性、生体安全性、及び費用が含まれる。必ずしもすべての宿主細胞が特定のＤＮＡ配列の発現に等しく有効であるわけではないという理解のもとに、これらの要因のバランスを取ることが必要である。これらの一般的なガイドライン内で、有用な微生物宿主細胞には、細菌、酵母及び他の菌類、昆虫、植物、哺乳動物（ヒトを含む）培養細胞、または当該技術分野で既知の他の宿主が挙げられるが、これらに限定されない。
【００９１】
形質転換宿主細胞は、所望の化合物が発現するように従来の発酵条件下で培養される。そのような発酵条件は当該技術分野で周知である。最後に、ポリペプチドは、当該技術分野で周知の方法により培地または宿主細胞自体から精製される。
【００９２】
本発明の化合物の発現に利用される宿主細胞に応じて、炭水化物（オリゴ糖）基が、タンパク質中のグリコシル化部位であることが分かっている部位に任意選択で結合する。一般に、配列Ａｓｎ−Ｘ−Ｓｅｒ／Ｔｈｒ（式中、Ｘはプロリンを除く任意のアミノ酸であり得る）の一部である場合、Ｏ連結オリゴ糖はセリン（Ｓｅｒ）またはトレオニン（Ｔｈｒ）残基に結合する一方、Ｎ連結オリゴ糖はアスパラギン（Ａｓｎ）残基に結合する。Ｘは、好ましくは、プロリンを数えずに１９個の天然に存在するアミノ酸のうちの１つである。各種類に見られるＮ連結及びＯ連結オリゴ糖及び糖残基の構造は異なる。Ｎ連結オリゴ糖及びＯ連結オリゴ糖両方に共通して見られる糖のひとつの種類は、Ｎ−アセチルアセチルノイラミン酸（シアル酸として言及される）である。シアル酸は、通常、Ｎ連結オリゴ糖及びＯ連結オリゴ糖両方の末端残基であり、その負電荷を理由に、一態様において、酸性をグリコシル化化合物に付与する。そのような部位（複数可）は、本発明の化合物のリンカーに組み込まれてもよく、好ましくは、（例えば、ＣＨＯ、ＢＨＫ、ＣＯＳなどの哺乳動物細胞中の）ポリペプチド化合物の組換え産生中に細胞によりグリコシル化される。他の態様において、そのような部位は、当該技術分野で既知の合成または半合成手順によりグリコシル化される。
【００９３】
いくつかの実施形態では、シアル化（シアリル化としても言及される）は、本明細書に記載の精製手順（アニオン交換、カチオン交換、サイズ排除、及び／または免疫親和性法を含む）の一環として、カラム上で行われ得る。いくつかの実施形態では、シアリル化により、ｒＶＷＦの安定性が、シアリル化を受けていないｒＶＷＦと比較して増加する。いくつかの実施形態では、シアリル化により、血液循環中のｒＶＷＦの安定性が、シアリル化を受けていないｒＶＷＦと比較して（例えば、対象への投与後に）増加する。いくつかの実施形態では、唾液分泌されたｒＶＷＦの増加した安定性は、シアリル化を受けていないｒＶＷＦと比較して、１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、またはそれ以上の増加を生じる。いくつかの実施形態では、シアリル化により、ｒＶＷＦの半減期が、シアリル化を受けていないｒＶＷＦと比較して増加する。いくつかの実施形態では、シアリル化により、血液循環中のｒＶＷＦの半減期が、シアリル化を受けていないｒＶＷＦと比較して（例えば、対象への投与後に）増加する。いくつかの実施形態では、シアリル化されたｒＶＷＦの増加した半減期は、シアリル化を受けていないｒＶＷＦと比較して、１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、またはそれ以上の増加を生じる。いくつかの実施形態では、シアリル化されたｒＶＷＦの増加した半減期により、シアリル化を受けていないｒＶＷＦと比較して（例えば、対象への投与後に）１時間、２時間、３時間、４時間、６時間、１２時間、２４時間、またはそれ以上、血液循環中で安定であるｒＶＷＦが得られる。いくつかの実施形態では、シアリル化により、２，３シアリル化及び／または２，６シアリル化の数が増加する。いくつかの実施形態では、シアリル化は、追加の緩衝ステップとして２，３シアリルトランスフェラーゼ及び／または２，６シアリルトランスフェラーゼとＣＭＰ−ＮＡＮＡ（シチジン−５′−モノホスホ−Ｎ−アセチルノイラミン酸ナトリウム塩）を添加することにより増大する。いくつかの実施形態では、シアリル化は、追加の緩衝ステップとして２，３シアリルトランスフェラーゼとＣＭＰ−ＮＡＮＡ（シチジン−５′−モノホスホ−Ｎ−アセチルノイラミン酸ナトリウム塩）を添加することにより増大する。いくつかの実施形態では、２，３シアリル化は、追加の緩衝ステップとして２，３シアリルトランスフェラーゼとＣＭＰ−ＮＡＮＡ（シチジン−５′−モノホスホ−Ｎ−アセチルノイラミン酸ナトリウム塩）を添加することにより増大する。
【００９４】
いくつかの実施形態では、２，６シアリル化は、追加の緩衝ステップとして２，６シアリルトランスフェラーゼとＣＭＰ−ＮＡＮＡ（シチジン−５′−モノホスホ−Ｎ−アセチルノイラミン酸ナトリウム塩）を添加することにより増大する。いくつかの実施形態では、２，３シアリル化及び／または２，６シアリル化は、追加の緩衝ステップとして２，３シアリルトランスフェラーゼ及び／または２，６シアリルトランスフェラーゼとＣＭＰ−ＮＡＮＡ（シチジン−５′−モノホスホ−Ｎ−アセチルノイラミン酸ナトリウム塩）を添加することにより増大する。いくつかの実施形態では、ＣＭＰ−ＮＡＮＡは、修飾されたシアル酸を無電位位置に移動させるように、化学修飾または酵素修飾される。いくつかの実施形態では、シアリル化は、ｒＶＷＦを樹脂上にロードすること、本明細書に記載の１つ以上の緩衝液で洗浄して、不要な不純物を枯渇させること、追加のシアリル化を可能にする濃度でシアリルトランスフェラーゼ及びＣＭＰ−ＮＡＮＡを含有する１つ以上の緩衝液を適用すること、ならびに１つ以上の緩衝液で洗浄して、過剰なシアリル化試薬を枯渇させること、ならびに増強したｒＶＷＦ（例えば、シアリル化が増加したｒＶＷＦ）を１つ以上の緩衝液で溶出することによって実行される。いくつかの実施形態では、シアリル化プロセスは、本明細書に記載のように、カチオン交換法、アニオン交換法、サイズ排除法、または免疫親和性精製法の一環として実行される。
【００９５】
代替的に、化合物は、例えば固相合成技法を使用する合成方法により作製される。好適な技法は当該技術分野で周知であり、これには、Ｍｅｒｒｉｆｉｅｌｄ（１９７３），Ｃｈｅｍ．Ｐｏｌｙｐｅｐｔｉｄｅｓ，ｐｐ．３３５−６１（Ｋａｔｓｏｙａｎｎｉｓ  ａｎｄ  Ｐａｎａｙｏｔｉｓ  ｅｄｓ．）、Ｍｅｒｒｉｆｉｅｌｄ（１９６３），Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．８５：２１４９、Ｄａｖｉｓ  ｅｔ  ａｌ．（１９８５），Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｉｎｔｌ．１０：３９４−４１４、Ｓｔｅｗａｒｔ  ａｎｄ  Ｙｏｕｎｇ（１９６９），Ｓｏｌｉｄ  Ｐｈａｓｅ  Ｐｅｐｔｉｄｅ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ、米国特許  第３，９４１，７６３号、Ｆｉｎｎ  ｅｔ  ａｌ．（１９７６）、Ｔｈｅ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ（３ｒｄ  ｅｄ．）２：１０５−２５３、及びＥｒｉｃｋｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．（１９７６），Ｔｈｅ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ（３ｒｄ  ｅｄ．）  ２：２５７−５２７’に記載されているものが含まれる。固相合成は、費用効率の良い小ペプチド作製方法であるので、個々のペプチドを作製する好ましい技法である。
【００９６】
ＶＷＦの断片、変異型、及び類似体は、当該技術分野で周知の方法に従って産生させることができる。ポリペプチドの断片は、非限定的に、酵素切断（例えば、トリプシン、キモトリプシン）を使用して、また組換え手段を使用して、特定のアミノ酸配列を有するポリペプチド断片を生成することで調製することができる。多量体化ドメインまたは当該技術分野で既知の任意の他の同定可能なＶＷＦドメインなど、特定の活性を有するタンパク質の領域を含むポリペプチド断片を作製してもよい。
【００９７】
ポリペプチド類似体の作製方法もよく知られている。ポリペプチドのアミノ酸配列類似体は、置換型、挿入型、付加型、または欠失型類似体であり得る。ポリペプチドの断片を含む欠失型類似体には、機能または免疫原性活性に不可欠でない天然タンパク質の１つ以上の残基が欠如している。挿入型類似体には、例えば、ポリペプチド中の非末端点でのアミノ酸（複数可）の付加が伴う。この類似体は、例えば、非限定的に、免疫反応性エピトープまたは単純に単個の残基の挿入を含んでもよい。ポリペプチドの断片を含む付加型類似体は、タンパク質の末端の片方または両方での１つ以上のアミノ酸の付加を含み、例えば、融合タンパク質を含む。前述の類似体の組み合わせも企図される。
【００９８】
置換型類似体は、典型的には、タンパク質内の１つ以上の部位において野生型の１つのアミノ酸を別のアミノ酸に交換し、ポリペプチドの１つ以上の特性を、他の機能または特性を完全に損失することなく修飾するよう設計されてもよい。一態様において、置換は保存的置換である。「保存的アミノ酸置換」は、アミノ酸配列を、側鎖または類似した化学特性を有するアミノ酸で置換することである。保存的置換を作製するための類似したアミノ酸には、酸性側鎖（グルタミン酸、アスパラギン酸）、塩基性側鎖（アルギニン、リジン、ヒスチジン）、極性アミン側鎖（グルタミン、アスパラギン）、疎水性脂肪族側鎖（ロイシン、イソロイシン、バリン、アラニン、グリシン）、芳香族側鎖（フェニルアラニン、トリプトファン、チロシン）、小側鎖（グリシン、アラニン、セリン、トレオニン、メチオニン）、または脂肪族ヒドロキシル側鎖（セリン、トレオニン）を有するものが含まれる。
【００９９】
一態様において、類似体は、それらが由来する組換えＶＷＦと実質的に相同または実質的に同一である。類似体には、野生型ポリペプチドの生物活性のうちの少なくとも一部、例えば血液凝固活性を保持するものが含まれる。
【０１００】
企図されるポリペプチド変異型には、ユビキチン化、ポリシアル化（またはポリシアリル化）を含むグリコシル化、治療剤または診断剤へのコンジュゲーション、標識化、ペグ化（ポリエチレングリコールによる誘導体化）などの共有重合体結合、非加水分解性結合の導入、及びヒトタンパク質中で通常発生しないオルニチンなどのアミノ酸の化学合成による挿入または置換などの技法により化学修飾されたポリペプチドが含まれるが、これらに限定されない。変異型は、本発明の非修飾分子と同じまたは本質的に同じ結合特性を保持する。そのような化学修飾には、薬剤のＶＷＦポリペプチドへの直接的または間接的な（例えば、リンカーを介した）結合が含まれてもよい。間接的結合の場合、リンカーが加水分解性であることも加水分解性でないことも企図される。
【０１０１】
ペグ化ポリペプチド類似体の調製は、一態様では、（ａ）ポリペプチドを、結合構築物ポリペプチドが１つ以上のＰＥＧ基に結合した状態となる条件下で、ポリエチレングリコール（ＰＥＧの反応性エステルまたはアルデヒド誘導体など）と反応させるステップと、（ｂ）反応産物（複数可）を得るステップとを含む。一般に、アシル化反応のための最適な反応条件は、既知のパラメータ及び所望の結果に基づいて決定される。例えば、ＰＥＧ：タンパク質の比率が大きいほど、ポリペグ化産物の割合（％）は高くなる。いくつかの実施形態では、結合構築物は、Ｎ末端に単個のＰＥＧ部分を有する。ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）を血液凝固因子に結合させて、例えば、インビボの半減期をより長くしてもよい。ＰＥＧ基は、任意の簡便な分子量のものであってもよく、線形または分岐である。ＰＥＧの平均分子量は、約２キロダルトン（「ｋＤ」）〜約１００ｋＤａ、約５ｋＤａ〜約５０ｋＤａ、または約５ｋＤａ〜約１０ｋＤａの範囲である。ある特定の態様では、ＰＥＧ基は、血液凝固因子上の反応性基（例えば、アルデヒド、アミノ、またはエステル基）への、ＰＥＧ部分上の天然のもしくは操作された反応性基（例えば、アルデヒド、アミノ、チオール、またはエステル基）をとおしたアシル化もしくは還元的アルキル化を介して、または当該技術分野で既知の任意の他の技法により、血液凝固因子に結合する。
【０１０２】
ポリシアリル化ポリペプチドを調製するための方法は、米国特許公開第２００６０１６０９４８号、Ｆｅｒｎａｎｄｅｓ  ｅｔ  Ｇｒｅｇｏｒｉａｄｉｓ；Ｂｉｏｃｈｉｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ａｃｔａ  １３４１：２６−３４，１９９７、及びＳａｅｎｋｏ  ｅｔ  ａｌ．，Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｉａ  １２：４２−５１，２００６に記載されている。簡潔に述べると、０．１ＭのＮａＩＯ４を含有するコロミン酸（ＣＡ）の溶液を室温の暗所で撹拌して、ＣＡを酸化させる。活性化したＣＡ溶液を、例えばｐＨ７．２の０．０５Ｍのリン酸ナトリウム緩衝液に対して、暗所で透析し、この溶液をｒＶＷＦ溶液に添加して、室温の暗所で１８時間、緩徐に振盪しながらインキュベートする。遊離試薬を、任意選択で、例えば限外濾過／透析濾過によりｒＶＷＦ−ポリシアル酸コンジュゲートから単離する。ｒＶＷＦのポリシアル酸とのコンジュゲーションは、グルタルアルデヒドを架橋試薬として使用して達成する（Ｍｉｇｎｅａｕｌｔ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ  ３７：７９０−７９６，２００４）。
【０１０３】
別の態様では、プレプロＶＷＦ及びプロＶＷＦポリペプチドが本発明の製剤中で治療的有用性を提供することも企図される。例えば、米国特許第７，００５，５０２号は、インビトロでトロンビン生成を誘導する、相当量のプロＶＷＦを含む薬学的調製物を記載している。組換えの天然に存在する成熟ＶＷＦの生物学的に活性な断片、変異型、または他の類似体に加えて、本発明は、プレプロＶＷＦ（配列番号２に示される）またはプロＶＷＦポリペプチド（配列番号２のアミノ酸残基２３〜７６４）の組換えの生物学的に活性な断片、変異型、または類似体を、本明細書に記載の製剤において使用することを企図する。
【０１０４】
断片、変異型、及び類似体をコードするポリヌクレオチドは、天然に存在する分子と同じまたは類似した生物活性を有する天然に存在する分子の生物学的に活性な断片、変異型、または類似体をコードするように、当業者によって容易に生成され得る。様々な態様において、これらのポリヌクレオチドは、ＰＣＲ技法、ＤＮＡコード分子の消化／ライゲーションなどを使用して調製される。よって、当業者であれば、部位特異的変異生成を含むがこれに限定されない当該技術分野で既知の任意の方法を使用して、ＤＮＡ鎖中に単一塩基変化を生成し、改変されたコドン及びミスセンス変異を生じさせることができる。本明細書で使用される場合、「中程度にストリンジェントなハイブリダイゼーション条件」という表現は、例えば、５０％のホルムアミド中、４２℃でのハイブリダイゼーション、及び０．１倍のＳＳＣ、０．１％のＳＤＳ中、６０℃での洗浄を意味する。これらの条件は、ハイブリダイゼーションを受ける配列の長さ及びＧＣヌクレオチド塩基含有量に基づいて変動することが、当業者には理解される。当該技術分野で標準とされる処方が、正確なハイブリダイゼーション条件を決定するのに適切である。Ｓａｍｂｒｏｏｋ  ｅｔ  ａｌ．，９．４７−９．５１  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ（１９８９）を参照されたい。
【０１０５】
Ａ．ＶＷＦ多量体
ｒＶＷＦ多量体の数及び割合（％）の評価は、電気泳動を使用する方法、及びＶＷＦ多量体をサイズにより分離するためのサイズ排除クロマトグラフィー法が含まれるがこれらに限定されない、当該技術分野で既知の方法を使用して実施することができ、これは、例えばＣｕｍｍｉｎｇらによって考察されているとおりである（全体が参照により、すべての目的について、特にＶＷＦ多量体の評価に関するすべての教示について本明細書に組み込まれる、Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ｐａｔｈｏｌ．，１９９３  Ｍａｙ；４６（５）：４７０−４７３）。そのような教示は、ＶＷＦに対する放射性標識された抗体を用いてゲルを免疫ブロットした後に化学発光を検出する免疫ブロット技法（ウエスタンブロットなど）をさらに含んでもよい（例えば、全体が参照により、すべての目的について、特にＶＷＦ多量体の評価に関するすべての教示について本明細書に組み込まれる、Ｗｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｌａｂ．Ａｎａｌ．，１９９３，７：３１７−３２３を参照されたい）。ＶＷＦのさらなるアッセイには、ＶＷＦ：抗原（ＶＷＦ：Ａｇ）、ＶＷＦ：リストセチン補因子（ＶＷＦ：ＲＣｏｆ）、及びＶＷＦ：コラーゲン結合活性アッセイ（ＶＷＦ：ＣＢＡ）が含まれ、これらはフォンヴィレブランド病の診断及び分類に使用されることが多い（例えば、全体が参照により、すべての目的について、特にＶＷＦのアッセイに関するすべての教示について本明細書に組み込まれる、Ｆａｖａｌｏｒｏ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐａｔｈｏｌｏｇｙ，１９９７，２９（４）：３４１−４５６、Ｓａｄｌｅｒ，ＪＥ，Ａｎｎｕ  Ｒｅｖ  Ｂｉｏｃｈｅｍ，１９９８，６７：３９５−４２４、及びＴｕｒｅｃｅｋ  ｅｔ  ａｌ．，Ｓｅｍｉｎ  Ｔｈｒｏｍｂ  Ｈｅｍｏｓｔ，２０１０，３６：５１０−５２１を参照されたい）。いくつかの実施形態では、本方法を使用して得られるｒＶＷＦは、ｒＶＷＦのローディング試料に存在する任意の多量体パターンを含む。いくつかの実施形態では、本方法を使用して得られるｒＶＷＦは、生理学的に生じる多量体パターン及び超大型ＶＷＦ多量体パターンを含む。
【０１０６】
ｂ．ＶＷＦアッセイ
一次止血において、ＶＷＦは、血小板と、コラーゲンなどの細胞外マトリックスの特定の成分との間の橋として働く。このプロセスにおけるＶＷＦの生物活性は、種々のインビトロアッセイによって測定することができる（Ｔｕｒｅｃｅｋ  ｅｔ  ａｌ．，Ｓｅｍｉｎ  Ｔｈｒｏｍｂ  Ｈｅｍｏｓｔ，２０１０，３６：５１０−５２１）。
【０１０７】
ＶＷＦ：リストセチン補因子（ＶＷＦ：ＲＣｏｆ）アッセイは、ＶＷＦの存在下で抗生物質リストセチンにより誘導された新鮮なまたはホルマリン固定した血小板の凝集に基づく。血小板凝集の程度は、ＶＷＦ濃度に依存し、比濁法により、例えば、血小板凝集計の使用により測定することができる（Ｗｅｉｓｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．，１９７３，５２：２７０８−２７１６、Ｍａｃｆａｒｌａｎｅ  ｅｔ  ａｌ．，Ｔｈｒｏｍｂ．Ｄｉａｔｈ．Ｈａｅｍｏｒｒｈ．，１９７５，３４：３０６−３０８）。本明細書で提供されるように、本発明のＶＷＦの特異的リストセチン補因子活性（ＶＷＦ：ＲＣｏ）は、概して、インビトロアッセイを使用して測定したＶＷＦのｍＵ／μｇを単位として記載される。
【０１０８】
いくつかの実施形態では、本発明の方法に従い精製されたｒＶＷＦは、比活性が、少なくとも約２０、２２．５、２５、２７，５、３０、３２．５、３５、３７．５、４０、４２．５、４５、４７．５、５０、５２．５、５５、５７．５、６０、６２．５、６５、６７．５、７０、７２．５、７５、７７．５、８０、８２．５、８５、８７．５、９０、９２．５、９５、９７．５、１００、１０５、１１０、１１５、１２０、１２５、１３０、１３５、１４０、１４５、１５０ｍＵ／μｇ、またはそれ以上である。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の方法で使用されるｒＶＷＦは、比活性が２０ｍＵ／μｇ〜１５０ｍＵ／μｇである。いくつかの実施形態では、ｒＶＷＦは、比活性が３０ｍＵ／μｇ〜１２０ｍＵ／μｇである。いくつかの実施形態では、ｒＶＷＦは、比活性が４０ｍＵ／μｇ〜９０ｍＵ／μｇである。いくつかの実施形態では、ｒＶＷＦの比活性は、以下の表３に見られる変種１〜１３３から選択される。
【０１０９】
（表３）本組成物中に見られ、本明細書で提供される方法で使用されるｒＶＷＦの比活性の例示的な実施形態
2020526525.tif 000003
Ｖａｒ．＝変種
【０１１０】
本発明のｒＶＷＦは、約１０〜約４０のサブユニットを含んで、極めて多量体である。さらなる実施形態では、本発明の方法を使用して産生された多量体ｒＶＷＦは、約１０〜３０、１２〜２８、１４〜２６、１６〜２４、１８〜２２、２０〜２１のサブユニットを含む。いくつかの実施形態では、ｒＶＷＦは、二量体から、４０を超えるサブユニットの多量体（１０００万ダルトン超）の多量体まで、様々なサイズの多量体中で存在する。最も大きい多量体は、血小板受容体と傷害の内皮下マトリックス部位との両方と相互作用することができる複数の結合部位を提供し、最も止血的に活性なＶＷＦの形態である。いくつかの実施形態では、本発明のｒＶＷＦは、超大型多量体（ＵＬＭ）を含む。一般に、高多量体及び超大型多量体は、止血に関して最も有効であるとされている（例えば、Ｔｕｒｅｃｅｋ，Ｐ．，Ｈａｍｏｓｔａｓｅｏｌｏｇｉｅ，（Ｖｏｌ．３７）：Ｓｕｐｐｌｅｍｅｎｔ  １，ｐａｇｅｓ  Ｓ１５−Ｓ２５（２０１７）を参照されたい）。いくつかの実施形態では、ｒＶＷＦは、５００ｋＤａ〜２０，０００ｋＤａである。いくつかの実施形態では、いずれの所望の多量体パターンも、記載の方法を使用して得ることができる。いくつかの実施形態では、アニオン交換及び／またはカチオン交換方法を用いる場合、１つ以上の洗浄ステップ（複数可）中の緩衝液または勾配緩衝液のｐＨ、伝導性、及び／または対イオン濃度を操作して、所望の多量体パターンを得ることができる。いくつかの実施形態では、次にサイズ排除クロマトグラフィー法を用い、収集基準を用いて、所望の多量体パターンを得ることができる。いくつかの実施形態では、記載の多量体パターンは、超大型多量体を含む。いくつかの実施形態では、超大型多量体は、少なくとも１０，０００ｋＤａ、少なくとも１１，０００ｋＤａ、少なくとも１２，０００ｋＤａ、少なくとも１３，０００ｋＤａ、少なくとも１４，０００ｋＤａ、少なくとも１５，０００ｋＤａ、少なくとも１６，０００ｋＤａ、少なくとも１７，０００ｋＤａ、少なくとも１８，０００ｋＤａ、少なくとも１９，０００ｋＤａ、少なくとも２０，０００ｋＤａである。いくつかの実施形態では、超大型多量体は、約１０，０００ｋＤａ〜２０，０００ｋＤａである。いくつかの実施形態では、超大型多量体は、約１１，０００ｋＤａ〜２０，０００ｋＤａである。いくつかの実施形態では、超大型多量体は、約１２，０００ｋＤａ〜２０，０００ｋＤａである。いくつかの実施形態では、超大型多量体は、約１３，０００ｋＤａ〜２０，０００ｋＤａである。いくつかの実施形態では、超大型多量体は、約１４，０００ｋＤａ〜２０，０００ｋＤａである。いくつかの実施形態では、超大型多量体は、約１５，０００ｋＤａ〜２０，０００ｋＤａである。いくつかの実施形態では、超大型多量体は、約１６，０００ｋＤａ〜２０，０００ｋＤａである。いくつかの実施形態では、超大型多量体は、約１７，０００ｋＤａ〜２０，０００ｋＤａである。いくつかの実施形態では、超大型多量体は、約１８，０００ｋＤａ〜２０，０００ｋＤａである。いくつかの実施形態では、超大型多量体は、約１９，０００ｋＤａ〜２０，０００ｋＤａである。いくつかの実施形態��は、本方法を使用して得られるｒＶＷＦは、ｒＶＷＦのローディング試料に存在する任意の多量体パターンを含む。いくつかの実施形態では、本方法を使用して得られるｒＶＷＦは、生理学的に生じる多量体パターン及び超大型ＶＷＦ多量体パターンを含む。
【０１１１】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の精製方法により調製されるｒＶＷＦ組成物は、オリゴマーの９５％が６サブユニット〜２０サブユニットを有することを特徴とするｒＶＷＦオリゴマーの分布を有する。いくつかの実施形態では、ｒＶＷＦ組成物は、オリゴマーの９５％が、表４に見られる変種４５８〜６４１から選択されるサブユニットの範囲を有することを特徴とする、ｒＶＷＦオリゴマーの分布を有する。
【０１１２】
（表４）本組成物中に見られ、本明細書で提供される方法で使用されるｒＶＷＦオリゴマーの分布の例示的な実施形態
2020526525.tif 000004
2020526525.tif 000005
Ｖａｒ．＝変種
【０１１３】
いくつかの実施形態では、本明細書で提供される方法により調製されるｒＶＷＦ組成物は、特定のより高次のｒＶＷＦ多量体またはより大きい多量体に存在するｒＶＷＦ分子の割合に従って特徴付けることができる。例えば、一実施形態では、本明細書に記載の方法で使用されるｒＶＷＦ組成物中のｒＶＷＦ分子の少なくとも２０％が、少なくとも１０サブユニットのオリゴマー複合体に存在する。別の実施形態では、本明細書に記載の方法で使用されるｒＶＷＦ組成物中のｒＶＷＦ分子の少なくとも２０％が、少なくとも１２サブユニットのオリゴマー複合体に存在する。さらに他の実施形態では、さらに他の実施形態では、本明細書で提供される方法で使用されるｒＶＷＦ組成物は、表５〜表７に見られる変種１３４〜４５７のうちのいずれか１つに従い、特定のより高次のｒＶＷＦ多量体またはより大きい多量体（例えば、少なくともＹサブユニットの多量体）に存在するｒＶＷＦ分子を最低限の割合（％）で有する（例えば、少なくともＸ％を有する）。
【０１１４】
（表５）本明細書で提供される組成物中に見られ、本方法で使用される特定のより高次のｒＶＷＦ多量体またはより大きい多量体に存在するｒＶＷＦ分子の割合（％）の例示的な実施形態
2020526525.tif 000006
Ｖａｒ．＝変種
【０１１５】
（表６）本明細書で提供される組成物中に見られ、本方法で使用される特定のより高次のｒＶＷＦ多量体またはより大きい多量体に存在するｒＶＷＦ分子の割合（％）の例示的な実施形態
2020526525.tif 000007
Ｖａｒ．＝変種
【０１１６】
（表７）本明細書で提供される組成物中に見られ、本方法で使用される特定のより高次のｒＶＷＦ多量体またはより大きい多量体に存在するｒＶＷＦ分子の割合の例示的な実施形態
2020526525.tif 000008
Ｖａｒ．＝変種
【０１１７】
上記に従って、ｒＶＷＦは、高分子量（ＨＭＷ）ｒＶＷＦ多量体をかなりの割合（％）で含む。さらなる実施形態では、ＨＭＷ  ｒＶＷＦ多量体組成物は、少なくとも１０％〜８０％のｒＶＷＦ十量体またはより高次の多量体を含む。さらなる実施形態では、組成物は、約１０〜９５％、２０〜９０％、３０〜８５％、４０〜８０％、５０〜７５％、６０〜７０％の十量体またはより高次の多量体を含む。さらなる実施形態では、ＨＭＷ  ｒＶＷＦ多量体組成物は、少なくとも約１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％の十量体またはより高次の多量体を含む。
【０１１８】
ｒＶＷＦ多量体の数及び割合（％）の評価は、電気泳動を使用する方法、及びｒＶＷＦ多量体をサイズにより分離するためのサイズ排除クロマトグラフィー法が含まれるがこれらに限定されない、当該技術分野で既知の方法を使用して実施することができ、これは、例えばＣｕｍｍｉｎｇらによって考察されているとおりである（全体が参照により、すべての目的について、特にｒＶＷＦ多量体の評価に関するすべての教示について本明細書に組み込まれる、Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ｐａｔｈｏｌ．１９９３  Ｍａｙ；４６（５）：４７０−４７３）。そのような教示は、ＶＷＦに対する放射性標識された抗体を用いてゲルを免疫ブロットした後に化学発光を検出する免疫ブロット技法（ウエスタンブロットなど）をさらに含んでもよい（例えば、全体が参照により、すべての目的について、特にｒＶＷＦ多量体の評価に関するすべての教示について本明細書に組み込まれる、Ｗｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，（１９９３），Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｌａｂ．Ａｎａｌ．，７：３１７−３２３を参照されたい）。ＶＷＦのためのさらなるアッセイには、フォンヴィレブランド病の診断及び分類に使用されることが多い、ＶＷＦ：抗原（ＶＷＦ：Ａｇ）、ＶＷＦ：リストセチン補因子（ＶＷＦ：ＲＣｏｆ）、及びＶＷＦ：コラーゲン結合活性アッセイ（ＶＷＦ：ＣＢＡ）が含まれ、これらはフォンヴィレブランド病の診断及び分類に使用されることが多い。（例えば、全体が参照により、すべての目的について、特にＶＷＦのアッセイに関するすべての教示について本明細書に組み込まれる、Ｆａｖａｌｏｒｏ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐａｔｈｏｌｏｇｙ，１９９７，２９（４）：３４１−４５６を参照されたい）。
【０１１９】
いくつかの実施形態では、本発明の方法に従って調製されたｒＶＷＦについてのｒＦＶＩＩＩ凝結促進活性（ＩＵ  ｒＦＶＩＩＩ：Ｃ）対ｒＶＷＦリストセチン補因子活性（ＩＵ  ｒＶＷＦ：ＲＣｏ）の比率は、３：１〜１：５である。さらなる実施形態では、この比率は、２：１〜１：４である。なおさらなる実施形態では、この比率は、５：２〜１：４である。さらなる実施形態では、この比率は、３：２〜１：３である。なおさらなる実施形態では、この比率は、約１：１、１：２、１：３、１：４、１：５、２：１、２：３、２：４、２：５、３：１、３：２、３：４、または３：５である。さらなる実施形態では、この比率は、１：１〜１：２である。またさらなる実施形態では、この比率は、１．１：１、１．２：１、１．３：１、１．４：１、１．５：１、１．６：１、１．７：１、１．８：１、１．９：１、または２：１である。ある特定の実施形態では、本明細書に記載の方法に有用な組成物中のｒＦＶＩＩＩ凝固促進活性（ＩＵ  ｒＦＶＩＩＩ：Ｃ）対ｒＶＷＦリストセチン補因子活性（ＩＵ  ｒＶＷＦ：ＲＣｏ）の比率は、表８に見られる変種１９８８〜２１４０から選択される。
【０１２０】
（表８）組成物中の及び本明細書で提供される方法で使用されるｒＦＶＩＩＩ凝固促進活性（ＩＵ  ｒＦＶＩＩＩ：Ｃ）対ｒＶＷＦリストセチン補因子活性（ＩＵ  ｒＶＷＦ：ＲＣｏ）の比率についての例示的な実施形態
2020526525.tif 000009
2020526525.tif 000010
Ｖａｒ．＝変種
【０１２１】
さらなる実施形態では、本発明のより高次のｒＶＷＦ多量体は、投与から約１〜約９０時間の間、安定である。なおさらなる実施形態では、より高次のｒＶＷＦ多量体は、投与から約５〜８０、１０〜７０、１５〜６０、２０〜５０、２５〜４０、３０〜３５時間の間、安定である。またさらなる実施形態では、より高次のｒＶＷＦ多量体は、投与から少なくとも３、６、１２、１８、２４、３６、４８、７２時間の間、安定である。ある特定の実施形態では、ｒＶＷＦ多量体の安定性は、インビトロで評価される。
【０１２２】
一実施形態では、本明細書で提供される組成物及び方法で使用されるより高次のｒＶＷＦ多量体は、半減期が投与から少なくとも１２時間である。別の実施形態では、より高次のｒＶＷＦ多量体は、半減期が投与から少なくとも２４時間である。さらに他の実施形態では、より高次のｒＶＷＦ多量体は、半減期が、表９に見られる変種６４２〜１０４５から選択される。
【０１２３】
（表９）本明細書で提供される方法により調製される組成物に見られるより高次のｒＶＷＦ多量体の半減期の例示的な実施形態
2020526525.tif 000011
2020526525.tif 000012
2020526525.tif 000013
Ｖａｒ．＝変種
【０１２４】
いくつかの実施形態では、本発明に従って精製されたプロＶＷＦ及び／または精製ｒＶＷＦは、いずれのコンジュゲーション、翻訳後または共有結合修飾によっても修飾されない。特定の実施形態では、本発明のプロＶＷＦ及び／または精製ｒＶＷＦは、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、ポリプロピレングリコール、ポリオキシアルキレン、ポリシアル酸、ヒドロキシルエチルデンプン、ポリ炭水化物部分などを非限定的に含む水溶性重合体を用いて修飾されない。
【０１２５】
いくつかの実施形態では、本発明に従って精製されたプロＶＷＦ及び／または精製ｒＶＷＦは、ＮまたはＣ末端残基の修飾と、例えば、遊離スルフヒドリル基、一級アミン、及びヒドロキシル基での選択された側鎖の修飾とを含む、コンジュゲーション、翻訳後修飾、または共有結合修飾をとおして修飾される。一実施形態では、水溶性重合体は、リジン基または他の一級アミンによりタンパク質に（直接、またはリンカーを介して）連結する。いくつかの実施形態では、本発明のプロＶＷＦ及び／または精製ｒＶＷＦは、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、ポリプロピレングリコール、ポリオキシアルキレン、ポリシアル酸、ヒドロキシルエチルデンプン、ポリ炭水化物部分などを非限定的に含む水溶性重合体のコンジュゲーションにより修飾されてもよい。
【０１２６】
プロＶＷＦ及び／または精製ｒＶＷＦの修飾に使用されてもよい水溶性重合体は、線形及び分岐構造を含む。コンジュゲートされた重合体は、本発明の凝固タンパク質に直接結合してもよく、あるいは代替的に連結部分をとおして結合してもよい。水溶性重合体とのタンパク質抱合の非限定的な例は、米国特許第４，６４０，８３５号、同第４，４９６，６８９号、同第４，３０１，１４４号、同第４，６７０，４１７号、同第４，７９１，１９２号、及び同第４，１７９，３３７号、ならびにＡｂｕｃｈｏｗｓｋｉ  ａｎｄ  Ｄａｖｉｓ“Ｅｎｚｙｍｅｓ  ａｓ  Ｄｒｕｇｓ，”Ｈｏｌｃｅｎｂｅｒｇ  ａｎｄ  Ｒｏｂｅｒｔｓ，Ｅｄｓ．，ｐｐ．３６７  ３８３，Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ａｎｄ  Ｓｏｎｓ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ（１９８１）、及びＨｅｒｍａｎｓｏｎ  Ｇ．，Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ  Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ  ２ｎｄ  Ｅｄ．，Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ，Ｉｎｃ．２００８に見ることができる。
【０１２７】
タンパク質コンジュゲーションは、当該技術分野において周知の、いくつかの技法により行われてもよく、例えば、Ｈｅｒｍａｎｓｏｎ  Ｇ．，Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ  Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ  ２ｎｄ  Ｅｄ．，Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ，Ｉｎｃ．２００８を参照されたい。例には、凝固タンパク質または水溶性重合体部分のいずれかの一方にあるカルボキシル基ともう一方のアミン基との間のペプチド結合、または一方のカルボキシル基ともう一方のヒドロキシル基との間のエステル連結をとおした連結が含まれる。本発明の凝固タンパク質が水溶性重合体化合物に抱合され得る別の連結は、過ヨウ素酸酸化による重合体の非還元末端に形成されたアルデヒド基と反応する重合体部分上の遊離アミノ基間の、シッフ塩基を介したものである（Ｊｅｎｎｉｎｇｓ  ａｎｄ  Ｌｕｇｏｗｓｋｉ，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１９８１；１２７：１０１１−８、Ｆｅｍａｎｄｅｓ  ａｎｄ  Ｇｒｅｇｏｎｒａｄｉｓ，Ｂｉｏｃｈｉｍ  Ｂｉｏｐｈｙｓ  Ａｃｔａ．１９９７；１３４１；２６−３４）。生成されたシッフ塩基を、ＮａＣＮＢＨ３を用いた特異的還元により安定させて、二級アミンを形成することができる。代替的な手法は、先立つ酸化後にＮＨ４Ｃｌを用いて還元的アミノ化を行うことによる重合体上の末端遊離アミノ基の生成である。２つのアミノ基または２つのヒドロキシル基を連結させるために、二機能性試薬を使用することができる。例えば、アミノ基を含有する重合体をＢＳ３（ビス（スルホスクシンイミジル）スベリン酸塩／Ｐｉｅｒｃｅ，Ｒｏｃｋｆｏｒｄ，Ｉｌｌ．）のような試薬を用いて、凝固タンパク質のアミノ基にカップリングすることができる。加えて、Ｓｕｌｆｏ−ＥＭＣＳ（Ｎ−ε−マレイミドカプロイルオキシ）スルホスクシンイミドエステル／Ｐｉｅｒｃｅ）のようなヘテロ二機能性架橋試薬を使用して、例えば、アミン基及びチオール基を連結させることができる。他の実施形態では、アルデヒド反応基、例えば、ＰＥＧアルコキシドとブロモアセトアルデヒドのジエチルアセタール、ＰＥＧとＤＭＳＯ及び無水酢酸、ならびにＰＥＧ塩化物と４−ヒドロキシベンズアルデヒドのフェノキシド、スクシンイミジル活性エステル、活性化ジチオ炭酸ＰＥＧ、２，４，５−トリクロロフェニルクロロギ酸、及びＰ−ニトロフェニルクロロギ酸活性化ＰＥＧを、凝固タンパク質のコンジュゲーションに使用してもよい。
【０１２８】
ＶＷＦの生物活性を測定するための別の方法は、ＥＬＩＳＡ技術に基づくコラーゲン結合アッセイである（Ｂｒｏｗｎ  ａｎｄ  Ｂｏｓａｋ，Ｔｈｒｏｍｂ．Ｒｅｓ．，１９８６，４３：３０３−３１１、Ｆａｖａｌｏｒｏ，Ｔｈｒｏｍｂ．Ｈａｅｍｏｓｔ．，２０００，８３  １２７−１３５）。マイクロタイタープレートをＩ型またはＩＩＩ型コラーゲンでコーティングする。次に、ＶＷＦをコラーゲン表面に結合させ、続いて酵素標識したポリクローナル抗体を用いて検出する。最後のステップは基質反応であり、これは、ＥＬＩＳＡリーダーを用いて測光法によりモニタリングできる。
【０１２９】
フォンヴィレブランド因子（ＶＷＦ：Ａｇ）の免疫学的アッセイは、血漿中のＶＷＦタンパク質の濃度を測定する免疫アッセイである。これらは、ＶＷＦ機能に関する兆候は示さない。ＶＷＦ：Ａｇを測定するためのいくつかの方法が存在し、これらには、酵素結合免疫吸着アッセイ（ＥＬＩＳＡ）または自動ラテックス免疫アッセイ（ＬＩＡ）の両方が含まれる。現在では多くの研究所が全自動ラテックス免疫アッセイを使用する。過去には、研究所は、Ｌａｕｒｅｌｌ電気免疫アッセイ「Ｌａｕｒｅｌｌ  Ｒｏｃｋｅｔｓ」を含む様々な技法を使用していたが、これらは、今日では大部分の研究所でほとんど使用されない。
【０１３０】
ＩＩＩ．キット
追加の態様として、本発明には、対象への投与を目的としたそれらの使用を促進する様式でパッケージされた１つ以上の凍結乾燥した組成物を含むキットが含まれる。一実施形態では、そのようなキットには、密封ボトルまたは容器などの入れ物の中にパッケージされた本明細書に記載の薬学的製剤（例えば、治療用タンパク質またはペプチドを含む組成物）が含まれ、本方法の実施における化合物または組成物の使用を説明するラベルが入れ物に貼付されているか、またはパッケージに含まれている。一実施形態では、薬学的製剤は、入れ物の上部空間の量（例えば、液体製剤と容器の上部との間の空気量）が極めて少なくなるように入れ物にパッケージされる。好ましくは、上部空間の量はごくわずかである（例えば、ないに等しい）。一実施形態では、キットには、治療用タンパク質またはペプチド組成物を含む第１の入れ物と、組成物のため生理学的に許容される再構成溶液を有する第２の入れ物とが含まれる。一態様において、薬学的製剤は、単位剤形でパッケージされる。キットには、特定の投与経路に従う薬学的製剤の投与に好適なデバイスがさらに含まれてもよい。好ましくは、キットには、薬学的製剤の使用を説明するラベルが含まれる。
【０１３１】
ＩＶ．重度のＶＷＤを患う患者においてＧＩ出血を治療する方法のためのｒＶＷＦ
手術の前処置を行うために重度のＶＷＤを患う患者にｒＶＷＦを投与することの利点のひとつは、ｐｄＶＷＦと比較してより高いｒＶＷＦの比活性により、投与されるｒＶＷＦの量及び対象への再投与の回数におけて融通がきくようになることである。理解されるように、また本明細書でさらに詳細に考察されるように、同時投与されるＦＶＩＩＩは、組換えであっても血漿由来であってもよい。
【０１３２】
ｒＶＷＦの単回または複数回投与が、治療にあたる医師により選択された用量レベル及びパターンで行われる。疾患の予防または治療に関して、適切な投薬量は、治療すべき疾患の種類（例えばフォンヴィレブランド病）、疾患の重症度及び経過、薬物が予防目的で投与されるか治療目的で投与されるか、以前の治療法、患者の病歴及び薬物への反応、ならびに主治医の裁量に依存することになる。
【０１３３】
いくつかの態様において、ｒＶＷＦは、２０〜６０ＩＵ／ｋｇの範囲、例えば、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、２０〜６０、３５〜７０、２０〜４０、３５〜６０、４５〜６０、４５〜５５、４５〜５０、５０〜６０、５５〜６０、または５０〜５５ＩＵ／ｋｇで、外科手術前に対象に投与される。いくつかの実施形態では、ｒＶＷＦは、外科手術の１２時間〜２４時間、例えば、１２時間、１３時間、１４時間、１５時間、１６時間、１７時間、１８時間、１９時間、２０時間、２１時間、２２時間、２３時間、２４時間、１２時間〜２４時間、１４時間〜２４時間、１６〜２４時間、１８時間〜２４時間、または２０時間〜２４時間前に投与される。いくつかの態様において、第ＶＩＩＩ因子（ＦＶＩＩＩ）は、外科手術の前にｒＶＷＦと共に投与されない。
【０１３４】
いくつかの実施形態では、ｒＶＷＦは、５〜９０ＩＵ／ｋｇの範囲、例えば、５〜９０、５〜５０、１０〜９０、１５〜９０、２０〜９０、３０〜９０、４０〜９０、５０〜９０、６０〜９０、７０〜９０、８０〜９０、５〜８０、１０〜７０、２０〜６０、３０〜５０、３５〜６０、５〜５０、５〜４０、５〜３０．５〜２０、１０〜９０、１０〜５０、または２０〜４０ＩＵ／ｋｇで外科手術の１時間前に対象に投与される。他の実施形態では、ｒＶＷＦは、７０〜２００ＩＵ／ｋｇ、例えば、７０〜２００、８０〜２００、９０〜２００、１００〜２００、１１０〜２００、１２０〜２００、１３０〜２００、１３０〜２００、１４０〜２００、１５０〜２００、１６０〜２００、１７０〜２００、１８０〜２００、１９０〜２００、７０〜１７０、８０〜１８０、６０〜１６０、５０〜１５０、４０〜１４０、３０、１３０、２０〜１２０、１０〜１１０、７０〜１００、または７０〜９０ＩＵ／ｋｇの用量で手術後に投与される。いくつか場合、外科手術は、大手術、小手術、または口腔手術からなる群から選択される。
【０１３５】
いくつかの実施形態では、対象に、３５〜６０ＩＵ／ｋｇのｒＶＷＦが大手術の１２時間〜２４時間前に投与される。他の実施形態では、対象に、１５〜９０ＩＵ／ｋｇのｒＶＷＦが大手術の１時間前に投与される。別の実施形態では、対象に、１５０〜２２０ＩＵ／ｋｇのｒＶＷＦが大手術の後に投与される。いくつかの例では、大手術を受ける対象に、２２０〜３２０ＩＵ／ｋｇの総用量が投与される。
【０１３６】
いくつかの実施形態では、対象に、５０〜６０ＩＵ／ｋｇのｒＶＷＦが小手術の１２時間〜２４時間前に投与される。他の実施形態では、対象に、５〜５０ＩＵ／ｋｇのｒＶＷＦが小手術の１時間前に投与される。別の実施形態では、対象に、７０〜１５０ＩＵ／ｋｇのｒＶＷＦが小手術の後に投与される。いくつかの例では、小手術を受ける対象に、１００〜２２０ＩＵ／ｋｇの総用量が投与される。
【０１３７】
いくつかの実施形態では、対象に、２０〜４０ＩＵ／ｋｇのｒＶＷＦが口腔手術の１２時間〜２４時間前に投与される。他の実施形態では、対象に、２０〜５０ＩＵ／ｋｇのｒＶＷＦが口腔手術の１時間前に投与される。別の実施形態では、対象に、１０〜５０ＩＵ／ｋｇのｒＶＷＦが口腔手術中に投与される。別の実施形態では、対象に、２０〜５０ＩＵ／ｋｇのｒＶＷＦが口腔手術の後に投与される。いくつかの例では、口腔手術を受ける対象に、７０〜１９０ＩＵ／ｋｇの総用量が投与される。
【０１３８】
ｒＶＷＦの組成物は、本明細書に記載のように、薬学的製剤中に含めることができる。そのような製剤は、経口、局所、経皮、非経口、吸入スプレーにより、経腟、経直腸、または頭蓋内注射により投与することができる。本明細書で使用される非経口という用語は、皮下注射、静脈内、筋肉内、嚢内注射、または注入技法を含む。静脈内、皮内、筋肉内、乳房内、腹腔内、髄腔内、球後、肺内注射、及びまたは特定の部位での外科的移植による投与も企図される。一般に、組成物は、発熱物質、及びレシピエントに有害であり得る他の不純物を本質的に含まない。
【０１３９】
一態様において、本発明の製剤は、薬物製品の治療的循環レベルを維持するために、最初はボーラスにより、続いて連続注入により投与される。別の例として、本発明の化合物は、一回限りの投薬として投与される。当業者であれば、良好な医療行為及び個々の患者の病態によって決定する有効な投薬量及び投与レジメンの最適化は容易であろう。投与経路は、静脈内、腹腔内、皮下、または筋肉内投与により得るが、これらに限定されない。投薬頻度は、薬剤の薬物動態パラメータ及び投与経路に依存する。最適な薬学的製剤は、投与経路及び所望の投薬量に応じて当業者により決定される。例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，１８ｔｈ  Ｅｄ．，１９９０，Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏ．，Ｅａｓｔｏｎ，Ｐａ．１８０４２  ｐａｇｅｓ  １４３５−１７１２を参照されたい。この開示は、その全体が、すべての目的、特に薬学的製品についての製剤、投与経路、及び投薬量に関するすべての教示について、参照により本明細書に組み込まれる。そのような製剤は、投与される薬剤の物理的状態、安定性、インビボ放出速度、及びインビボクリアランス速度に影響を及ぼす。投与経路に応じて、好適な用量は、体重、体表面積、または臓器サイズに従って計算される。適切な投薬量は、血中濃度投薬量を決定するための確立されているアッセイを、適切な用量応答データと組み合わせて使用することにより、確認され得る。最終投薬レジメンは、薬物の作用を変更する様々な要因、例えば、薬物の比活性、損傷の重症度及び患者の応答性、患者の年齢、状態、体重、性別、及び食習慣、あらゆる感染の重症度、投与時間、ならびに他の臨床要因を考慮して、主治医により決定される。例として、本発明の組換えＶＷＦの典型的な用量は約５０ＩＵ／ｋｇであり、これは５００μｇ／ｋｇに相当する。試験の実施につれて、様々な疾患及び状態のための適切な投薬レベル及び治療期間に関するさらなる情報が明らかになるであろう。
【０１４０】
本発明の実施には、別段に示されていない限り、当該技術分野の技能の内である、有機化学、重合体技術、分子生物学（組換え技法を含む）、細胞生物学、生化学、及び免疫学の従来の技法及び記述が用いられ得る。そのような従来の技法には、重合体アレイ合成、ハイブリダイゼーション、ライゲーション、及び標識を使用するハイブリダイゼーションの検出が含まれる。本明細書の以下の実施例を参照することで、好適な技法の具体的な例解を得ることができる。しかしながら、言うまでもなく、他の同等の従来の手順も使用することができる。そのような従来の技法及び記述は、標準的な実習手引書、例えば、Ｇｅｎｏｍｅ  Ａｎａｌｙｓｉｓ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ  Ｓｅｒｉｅｓ（Ｖｏｌｓ．Ｉ−ＩＶ）、Ｕｓｉｎｇ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ、Ｃｅｌｌｓ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ、ＰＣＲ  Ｐｒｉｍｅｒ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ、及びＭｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ（すべてＣｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓから）、Ｓｔｒｙｅｒ，Ｌ．（１９９５）Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ（４ｔｈ  Ｅｄ．）  Ｆｒｅｅｍａｎ，Ｈｉｇｈｌｙ  ｓｔａｂｉｌｉｚｅｄ  Ｙｏｒｋ，Ｇａｉｔ，”Ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ：Ａ  Ｐｒａｃｔｉｃａｌ  Ａｐｐｒｏａｃｈ”１９８４，ＩＲＬ  Ｐｒｅｓｓ，Ｌｏｎｄｏｎ、Ｎｅｌｓｏｎ  ａｎｄ  Ｃｏｘ（２０００），Ｌｅｈｎｉｎｇｅｒ，Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ  ｏｆ  Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ３ｒｄ  Ｅｄ．，Ｗ．Ｈ．Ｆｒｅｅｍａｎ  Ｐｕｂ．，Ｈｉｇｈｌｙ  ｓｔａｂｉｌｉｚｅｄ  Ｙｏｒｋ，Ｎ．Ｙ．、ならびにＢｅｒｇ  ｅｔ  ａｌ．（２００２）Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，５ｔｈ  Ｅｄ．，Ｗ．Ｈ．Ｆｒｅｅｍａｎ  Ｐｕｂ．，Ｈｉｇｈｌｙ  ｓｔａｂｉｌｉｚｅｄ  Ｙｏｒｋ，Ｎ．Ｙ．に見ることができ、これらのすべては、全目的について、全体が参照により本明細書に組み込まれる。
【０１４１】
本明細書及び添付の特許請求の範囲で使用する単数形「１つのａ」」、「１つの（ａｎ）」、及び「その（ｔｈｅ）」は、文脈が別に指示しない限り複数の言及を含むことに留意されたい。よって、例えば、「ポリメラーゼ（ａ  ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ）」は、１つの薬剤またはそのような薬剤の混合物を指し、「方法（ｔｈｅ  ｍｅｔｈｏｄ）」への言及は、当業者に既知である同等のステップ及び方法への言及などを含む。
【０１４２】
本明細書及び添付の特許請求の範囲で使用する単数形「１つの（ａ）」、「１つの（ａｎ）」、及び「その（ｔｈｅ）」は、文脈が別に指示しない限り複数の言及を含むことに留意されたい。よって、例えば、「ポリメラーゼ（ａ  ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ）」は、１つの薬剤またはそのような薬剤の混合物を指し、「方法（ｔｈｅ  ｍｅｔｈｏｄ）」への言及は、当業者に既知である同等のステップ及び方法への言及などを含む。
【０１４３】
他に特段の定めのない限り、本明細書中で使用するすべての技術用語及び科学用語は、本発明が属する技術分野の当業者によって一般的に理解される意味と同じ意味を有する。本明細書で触れるすべての出版物は、これらの出版物に記載され、本明細書に記載の発明と関連して使用され得る、デバイス、組成物、製剤、及び方法を説明及び開示する目的で、参照により本明細書に組み込まれる。
【０１４４】
値の範囲が提供される場合、文脈が別途明確に指示しない限り、下限値の単位の１０分の１までの、その範囲の上限値から下限値の間の各介在値、ならびにその表示範囲の任意の他の表示値または介在値が、本発明に包含されることが理解される。これらのより小さい範囲の上限値及び下限値は、より小さい範囲内に独立して含まれてもよく、それはまた、表示範囲内の任意の具体的な除外限度に従って、本発明内に包含される。記載範囲がその上限値及び下限値のうちの一方または両方を含む場合、それらの包含される上限値及び下限値のいずれか一方または両方を除外する範囲も本発明に包含される。
【０１４５】
以上の説明では、本発明のより完全な理解を提供するために、多くの具体的な詳細が述べられている。しかしながら、本発明がこれらの具体的な詳細のうちの１つ以上を有さずに実施され得ることは、当業者には明らかであろう。他の例では、本発明を不明瞭にすることを避けるために、周知の特徴及び当業者に周知の手順は説明されていない。
【０１４６】
本発明は主に特定の実施形態を参照して説明されるが、本開示を読むことで、当業者には他の実施形態が明らかとなることも想定され、そのような実施形態は本発明の方法に含まれることが意図される。
【０１４７】
ａ．凍結乾燥したＶＷＦ製剤
本方法はまた、本明細書で提供される治療方法で使用するためのｒＶＷＦの製剤を提供する。いくつかの実施形態では、ｒＶＷＦ組成物は、薬学的組成物の製造のために使用される。いくつかの実施形態では、ｒＶＷＦは、凍結乾燥した製剤に製剤化され得る。
【０１４８】
いくつかの実施形態では、本発明のＶＷＦポリペプチドを含む製剤は、精製後、かつ対象への投与前に凍結乾燥される。凍結乾燥は、当該技術分野で一般的な技法を使用して行われ、開発される組成物に対して最適化されるべきである（Ｔａｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｈａｒｍ  Ｒｅｓ．２１：１９１−２００，（２００４）、及びＣｈａｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｈａｒｍ  Ｒｅｓ．１３：２４３−９（１９９６））。
【０１４９】
凍結乾燥サイクルは、一態様において、凍結、一次乾燥、及び二次乾燥の３つのステップで構成される（Ａ．Ｐ．Ｍａｃｋｅｎｚｉｅ，Ｐｈｉｌ  Ｔｒａｎｓ  Ｒ  Ｓｏｃ  Ｌｏｎｄｏｎ，Ｓｅｒ  Ｂ，Ｂｉｏｌ  ２７８：１６７（１９７７））。凍結ステップでは、溶液を冷却して、氷の形成を開始する。さらに、このステップには、増量剤の結晶化が含まれる。氷は、一次乾燥段階で昇華させ、この一次乾燥段階は、昇華を促進するために、真空を使用し、熱を導入して、チャンバ圧を、氷の蒸気圧を下回るように減少させることによって実施される。最後に、吸収されたまたは結合した水を、減少したチャンバ圧及び高い棚温度のもと、二次乾燥段階で除去する。このプロセスにより、凍結乾燥ケーキとして知られる物質が産生される。その後、ケーキを滅菌水または注射に好適な希釈液のいずれかにより再構成することができる。
【０１５０】
凍結乾燥サイクルは、賦形剤の最終的な物理的状態を決定するだけでなく、再構成時間、外観、安定性、及び最終含水量などの他のパラメータにも影響を与える。凍結状態の組成物構造は、特定の温度で生じるいくつかの推移を受け（例えば、ガラス転移、湿潤、及び結晶化）、この構造を使用して、凍結乾燥プロセスを理解し最適化し得る。ガラス転移温度（Ｔｇ及び／またはＴｇ’）は、溶質の物理的状態に関する情報を提供することができ、示差走査熱量測定（ＤＳＣ）によって決定することができる。Ｔｇ及びＴｇ’は、凍結乾燥サイクルを設計する際に考慮に入れる必要がある重要なパラメータである。例えば、Ｔｇ’は、一次乾燥に重要である。さらに、乾燥状態では、ガラス転移温度により、最終製品の貯蔵温度に関する情報が得られる。
【０１５１】
ｂ．薬学的製剤及び賦形剤一般
賦形剤は、薬物製品（例えば、タンパク質）の安定性及び送達を授けるまたは強化する添加物である。それらを含める理由にかかわらず、賦形剤は、製剤の不可欠な成分であり、したがって、安全であり、患者による忍容性が良好である必要がある。タンパク質薬物については、賦形剤の選択は、薬物の有効性及び免疫原性の両方に影響し得るため、特に重要である。よって、タンパク質製剤は、好適な安定性、安全性、及び市場性をもたらす賦形剤の適切な選択を伴って開発する必要がある。
【０１５２】
凍結乾燥した製剤は、一態様では、少なくとも、緩衝液、増量剤、及び安定化剤のうちの１つ以上で構成される。この態様において、界面活性剤の利用は、凍結乾燥ステップ中または再構成中の凝集が問題となる場合に、評価及び選択される。適切な緩衝剤を含めて、凍結乾燥中、製剤をｐＨの安定領域に維持する。液体及び凍結乾燥タンパク質製剤について企図される賦形剤化合物の比較を表１０に提供する。
【０１５３】
（表１）凍結乾燥タンパク質製剤の賦形剤化合物
2020526525.tif 000014
【０１５４】
タンパク質用製剤の開発における主な課題は、製品を、製造、輸送、及び貯蔵のストレスに対して安定させることである。製剤賦形剤の役割は、これらのストレスに対する安定化を提供することである。賦形剤は、高濃度タンパク質製剤の粘度を低下させることで、それらの輸送を可能にし、患者の利便性を向上させるためにも用いられる。一般に、賦形剤は、それらが様々な化学的及び物理的ストレスに対してタンパク質を安定させる機序に基づいて分類することができる。一部の賦形剤は、特定のストレスの影響を緩和するため、または特定のタンパク質の特別な感受性を調節するために使用される。他の賦形剤は、タンパク質の物理的安定性及び共有結合安定性に対するより一般的な影響を有する。本明細書に記載の賦形剤は、それらの化学型またはそれらの製剤における機能的役割のいずれかによって編成される。安定化手段の簡単な説明が、各賦形剤種の考察時に提供される。
【０１５５】
本明細書で提供される教示及び指導を所与として、当業者であれば、バイオ医薬品（例えば、タンパク質）の安定性の保持を促進する本発明のバイオ医薬製剤を得るために任意の特定の製剤に含めることができる賦形剤の量または範囲を理解するであろう。例えば、本発明のバイオ医薬製剤に含めることができる塩の量及び種類は、最終溶液の所望の浸透圧（例えば、等張性、低張性、または高張性）、ならびに製剤に含める他の成分の量及び浸透圧に基づいて選択される。
【０１５６】
例として、約５％のソルビトールを含めることで、等張性を得ることができる一方、約９％のスクロース賦形剤が、等張性を得るために必要とされる。本発明のバイオ医薬製剤内に含めることができる１つ以上の賦形剤の量及び濃度範囲の選択は、塩、ポリオール、及び糖類を参照して上で例示されている。しかしながら、当業者であれば、本明細書に記載され、特定の賦形剤を参照してさらに例示された考察は、例えば、塩、アミノ酸、他の等張化剤、界面活性剤、安定化剤、増量剤、凍結保護剤、凍結乾燥保護剤、酸化防止剤、金属イオン、キレート剤、及び／または保存剤を含む、すべての種類及び組み合わせの賦形剤に等しく適用可能であることを理解するであろう。
【０１５７】
さらに、特定の賦形剤がモル濃度で報告される場合、当業者は、溶液の相当するパーセント（％）ｗ／ｖ（例えば、（溶液試料中の物質のグラム／溶液１ｍＬ）×１００％）も企図されることを認識するであろう。
【０１５８】
言うまでなく、当業者は、本明細書に記載の賦形剤の濃度が、特定の製剤中で相互依存性を共有することを理解するであろう。例として、例えばタンパク質濃度が高い場合、または例えば安定化剤濃度が高い場合には、増量剤の濃度を下げてもよい。加えて、増量剤を含まない特定の製剤の等張性を維持するために、安定化剤の濃度を適宜調整し得る（例えば、「等張化する」量の安定化剤を使用し得る）ことが、当業者には認識され得る。一般的な賦形剤は、当該技術分野で既知であり、Ｐｏｗｅｌｌ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｏｍｐｅｎｄｉｕｍ  ｏｆ  Ｅｘｃｉｐｉｅｎｔｓ  ｆｉｒ  Ｐａｒｅｎｔｅｒａｌ  Ｆｏｒｍｕｌａｔｉｏｎｓ（１９９８），ＰＤＡ  Ｊ．Ｐｈａｒｍ．Ｓｃｉ．Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，５２：２３８−３１１に見い出すことができる。
【０１５９】
ｃ．薬学的緩衝液及び緩衝剤
薬理学的に活性なタンパク質製剤の安定性は、通常、狭いｐＨ範囲で最大となることが観察される。この最適な安定性のｐＨ範囲は、製剤化前の試験中の早い時期に特定する必要がある。加速的安定性試験及び熱量測定スクリーニング試験などのいくつかのアプローチが、この試みに有用である（Ｒｅｍｍｅｌｅ  Ｒ．Ｌ．Ｊｒ．，ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，３８（１６）：５２４１−７（１９９９））。一度製剤を仕上げると、タンパク質を製造し、その貯蔵寿命にわたって維持する必要がある。よって、製剤のｐＨを制御するために、ほぼ常に緩衝剤が用いられる。
【０１６０】
緩衝種の緩衝能は、ｐＫａに等しいｐＨで最大であり、ｐＨがこの値から離れて上昇または低下するにつれて減少する。緩衝能の９０パーセントは、そのｐＫａの１ｐＨ単位内に存在する。緩衝能はまた、緩衝剤濃度の上昇と比例して増加する。
【０１６１】
緩衝剤の選択時、いくつかの要因を考慮する必要がある。まず初めに、緩衝種及びその濃度を、そのｐＫａ及び所望の製剤ｐＨに基づいて定義しなければならない。緩衝剤がタンパク質及び他の製剤賦形剤と適合し、いずれの分解反応にも触媒作用を及ぼさないことを確実にすることも等しく重要である。考慮すべき第３の重要な側面は、投与時に緩衝液が誘導し得る刺痛及び刺激感である。例えば、クエン酸塩は、注射の際に刺痛を生じさせることが知られている（Ｌａｕｒｓｅｎ  Ｔ，ｅｔ  ａｌ．，Ｂａｓｉｃ  Ｃｌｉｎ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌ  Ｔｏｘｉｃｏｌ．，９８（２）：２１８−２１（２００６））。刺痛及び刺激の可能性は、投与時に製剤が血液中に急速に希釈されていくＩＶ経路により投与される場合よりも比較的長い時間、薬物溶液がその部位に留まる皮下（ＳＣ）または筋肉内（ＩＭ）経路を介して投与される薬物について、より大きい。直接ＩＶ注入により投与される製剤については、緩衝剤（及び任意の他の製剤成分）の全量をモニタリングする必要がある。患者において心血管系への影響を引き起こし得るリン酸カリウム緩衝液の形態で投与されるカリウムイオンは、特に注意しなければならない（Ｈｏｌｌａｎｄｅｒ−Ｒｏｄｒｉｇｕｅｚ  ＪＣ，ｅｔ  ａｌ．，Ａｍ．Ｆａｍ．Ｐｈｙｓｉｃｉａｎ．，７３（２）：２８３−９０（２００６））。
【０１６２】
凍結乾燥した製剤のための緩衝剤は、さらなる考慮を必要とする。リン酸ナトリウムなどの一部の緩衝剤は、凍結中にタンパク質非晶相から結晶化することで、ｐＨが変化し得る。酢酸塩及びイミダゾールなどの他の一般的な緩衝剤は、凍結乾燥プロセス中に昇華または蒸発することにより、凍結乾燥中または再構成後に製剤のｐＨを変化させ得る。
【０１６３】
組成物に存在する緩衝系は、生理学的に適合するように、また薬学的製剤の所望のｐＨを維持するように選択される。一実施形態では、溶液のｐＨは、ｐＨ２．０〜ｐＨ１２．０である。例えば、溶液のｐＨは、２．０、２．３、２．５、２．７、３．０、３．３、３．５、３．７、４．０、４．３、４．５、４．７、５．０、５．３、５．５、５．７、６．０、６．３、６．５、６．７、７．０、７．３、７．５、７．７、８．０、８．３、８．５、８．７、９．０、９．３、９．５、９．７、１０．０、１０．３、１０．５、１０．７、１１．０、１１．３、１１．５、１１．７、または１２．０であってもよい。
【０１６４】
ｐＨ緩衝化合物は、製剤のｐＨを所定のレベルに維持するのに好適な任意の量で存在してもよい。一実施形態では、ｐＨ緩衝濃度は、０．１ｍＭ〜５００ｍＭ（１Ｍ）である。例えば、ｐＨ緩衝剤は、少なくとも０．１、０．５、０．７、０．８、０．９、１．０、１．２、１．５、１．７、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２５、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００、２００、または５００ｍＭであることが企図される。
【０１６５】
本明細書に示される製剤の緩衝に使用される例示的なｐＨ緩衝剤には、有機酸、グリシン、ヒスチジン、グルタミン酸塩、コハク酸塩、リン酸塩、酢酸塩、クエン酸塩、トリス、ＨＥＰＥＳ、及びアミノ酸またはアミノ酸の混合物、例えば、非限定的に、ヒスチジン及びグリシンが含まれるが、これらに限定されない。本発明の一実施形態では、緩衝剤はクエン酸塩である。
【０１６６】
ｄ．薬学的安定化剤及び増量剤
本薬学的製剤の一態様において、貯蔵により誘導される凝集及び化学分解を防止または低減するために、安定化剤（または安定化剤の組み合わせ）が添加される。再構成の際に溶液が霞んでいるまたは混濁している場合、タンパク質が沈殿または少なくとも凝集しているということである。「安定化剤」という用語は、水性状態で、凝集、または化学分解（例えば、自己分解、脱アミド化、酸化など）を含む物理的分解を防止することができる賦形剤を意味する。企図される安定化剤には、スクロース、トレハロース、マンノース、マルトース、ラクトース、グルコース、ラフィノース、セロビオース、ゲンチオビオース、イソマルトース、アラビノース、グルコサミン、フルクトース、マンニトール、ソルビトール、グリシン、アルギニンＨＣＬ、ポリ−ヒドロキシ化合物、例えば、デキストラン、デンプン、ヒドロキシエチルデンプン、シクロデキストリン、Ｎ−メチルピロリデン、セルロース、及びヒアルロン酸などの多糖類、塩化ナトリウムが含まれるが、これらに限定されない（Ｃａｒｐｅｎｔｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｄｅｖｅｌｏｐ．Ｂｉｏｌ．Ｓｔａｎｄａｒｄ  ７４：２２５，（１９９１））。本製剤中、安定化剤は、約０．１、０．５、０．７、０．８、０．９、１．０、１．２、１．５、１．７、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００、２００、５００、７００、９００、または１０００ｍＭの濃度で組み込まれる。本発明の一実施形態では、マンニトール及びトレハロースが安定化剤として使用される。
【０１６７】
所望の場合、製剤には、適量の増量剤及び浸透圧調節剤も含まれる。増量剤には、例えば、非限定的に、マンニトール、グリシン、スクロース、重合体、例えば、デキストラン、ポリビニルピロリドン、カルボキシメチルセルロース、ラクトース、ソルビトール、トレハロース、またはキシリトールが含まれる。一実施形態では、増量剤はマンニトールである。増量剤は、約０．１、０．５、０．７、０．８、０．９、１．０、１．２、１．５、１．７、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００、２００、５００、７００、９００、または１０００ｍＭの濃度で組み込まれる。
【０１６８】
ｅ．薬学的界面活性剤
タンパク質は、表面と相互作用する傾向が強く、それにより、気液、ウイルス液体、液液（シリコーン油）界面で吸収及び変性が起きやすい。この分解経路は、タンパク質濃度に反比例して依存し、可溶性及び不溶性タンパク質凝集体の形成または表面への吸収による溶液からのタンパク質の喪失のいずれかを生じさせることが観察されている。容器表面吸収に加えて、表面誘起分解は、製品の配送及び処理中に受けるような物理的撹拌によって悪化する。
【０１６９】
界面活性剤は、表面誘起分解を防止するために、タンパク質製剤中で一般に使用される。界面活性剤は、界面位置についてタンパク質に勝つ能力を有する両親媒性分子である。界面活性剤分子の疎水性部分は、界面位置（例えば、気／液）を占有する一方、分子の親水性部分は、バルク溶媒に向けて配向されたままである。十分な濃度（典型的には洗剤の臨界ミセル濃度あたり）で、界面活性剤分子の表面層は、タンパク質分子の界面での吸収を防止する働きをする。それにより、表面誘起分解が最小限に抑えられる。本明細書で企図される界面活性剤には、非限定的に、ソルビタンポリエトキシレートの脂肪酸エステル、例えば、ポリソルベート２０及びポリソルベート８０が含まれる。これら２つは、疎水性特性を分子に付与する脂肪族鎖の長さが異なるだけである（それぞれＣ−１２及びＣ−１８）。したがって、ポリソルベート８０は、ポリソルベート２０よりも、界面活性が高く、臨界ミセル濃度が低い。
【０１７０】
界面活性剤はまた、タンパク質の熱力学的立体配座安定性にも影響し得る。ここでも再び、所与の界面活性賦形剤の影響は、タンパク質に固有となる。例えば、ポリソルベートは、一部のタンパク質の安定性を減少させ、他のタンパク質の安定性を増大させることが示されている。タンパク質の界面活性剤による不安定化は、部分的にまたは完全に折り畳まれていないタンパク質状態との特異的結合に関与し得る洗剤分子の疎水性尾部の観点から、理論的に説明することができる。これらの種類の相互作用により、配座平衡において、より展開したタンパク質状態に向かった変化が生じ得る（例えば、結合するポリソルベートを補完してタンパク質分子の疎水性部分の曝露を増加させる）。あるいは、タンパク質の天然状態がいくらかの疎水性表面を呈する場合、天然状態への界面活性剤の結合により、その配座が安定し得る。
【０１７１】
ポリソルベートの別の側面は、それらが本質的に酸化的分解の影響を受けやすいことである。多くの場合、原材料として、これらは十分な量の過酸化物を含有し、タンパク質残基側鎖、特にメチオニンの酸化を引き起こす。安定化剤の添加に起因する酸化的損傷の可能性は、最小有効濃度の賦形剤を製剤中で使用するべきである点を強調する。界面活性剤については、所与のタンパク質の有効濃度は、安定化の機序に依存することになる。
【０１７２】
界面活性剤は、凍結及び乾燥中の表面関連の凝集現象を防止するためにも、適量で添加される（Ｃｈａｎｇ，Ｂ，Ｊ．Ｐｈａｒｍ．Ｓｃｉ．８５：１３２５，（１９９６））。このため、例示的な界面活性剤には、非限定的に、天然に存在するアミノ酸に由来する界面活性剤を含む、アニオン性、カチオン性、非イオン性、双性イオン性、及び両性界面活性剤が含まれる。アニオン性界面活性剤には、ラウリル硫酸ナトリウム、ジオクチルスルホコハク酸ナトリウム、及びジオクチルスルホン酸ナトリウム、ケノデオキシコール酸、Ｎ−ラウロイルサルコシンナトリウム塩、ドデシル硫酸リチウム、１−オクタンスルホン酸ナトリウム塩、コール酸ナトリウム水和物、デオキシコール酸ナトリウム、及びグリコデオキシコール酸ナトリウム塩が含まれるが、これらに限定されない。カチオン性界面活性剤には、塩化ベンザルコニウムまたは塩化ベンゼトニウム、塩化セチルピリジニウム一水和物、及び臭化ヘキサデシルトリメチルアンモニウムが含まれるが、これらに限定されない。双性イオン性界面活性剤には、ＣＨＡＰＳ、ＣＨＡＰＳＯ、ＳＢ３−１０、及びＳＢ３−１２が含まれるが、これらに限定されない。非イオン性界面活性剤には、ジギトニン、Ｔｒｉｔｏｎ  Ｘ−１００、Ｔｒｉｔｏｎ  Ｘ−１１４、ＴＷＥＥＮ−２０、及びＴＷＥＥＮ−８０が含まれるが、これらに限定されない。界面活性剤には、ラウロマクロゴール４００、ステアリン酸ポリオキシル４０、ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油１０、４０、５０、及び６０、モノステアリン酸グリセロール、ポリソルベート４０、６０、６５、及び８０、大豆レシチン、ならびに他のリン脂質、例えば、ジオレオイルフォスファチジルコリン（ＤＯＰＣ）、ジミリストイルホスファチジルグリセロール（ＤＭＰＧ）、ジミリストイルホスファチジルコリン（ＤＭＰＣ）、及び（ジオレイルホスファチジルグリセロール）ＤＯＰＧ；スクロース脂肪酸エステル、メチルセルロース、及びカルボキシメチルセルロースも含まれるが、これらに限定されない。したがって、これらの界面活性剤を含む組成物を、個々に、または異なる比での混合物としてのいずれかで含む組成物がさらに提供される。本発明の一実施形態では、界面活性剤はＴＷＥＥＮ−８０である。本製剤中、界面活性剤は、約０．０１〜約０．５ｇ／Ｌの濃度で組み込まれる。提供される製剤中、界面活性剤濃度は、０．００５、０．０１、０．０２、０．０３、０．０５、０．０６、０．０７、０．０８、０．０９、０．１、０．２、０．３、０．４、０．５、０．６、０．７、０．８、０．９、または１．０ｇ／Ｌである。
【０１７３】
ｆ．薬学的塩
多くの場合、タンパク質の可溶性、物理的安定性、及び等張性に重要であり得る、製剤のイオン強度を増加させるために、塩が添加される。塩は、様々な方法でタンパク質の物理的安定性に影響し得る。イオンは、タンパク質の表面上で荷電残基に結合することにより、タンパク質の天然状態を安定させることができる。代替的に、塩は、タンパク質骨格に沿ったペプチド基に結合することにより（−ＣＯＮＨ−）、変性状態を安定させることができる。塩はまた、タンパク質分子内の残基間の反発静電相互作用を遮断することにより、タンパク質の天然配座を安定させることができる。タンパク質製剤中の塩はまた、タンパク質の凝集及び不溶性につながり得るタンパク質分子間の求引静電相互作用を遮断することができる。提供される製剤中、塩濃度は、０．１、１、１０、２０、３０、４０、５０、８０、１００、１２０、１５０、２００、３００、及び５００ｍＭの間である。
【０１７４】
ｇ．他の一般的な賦形剤成分：薬学的アミノ酸
アミノ酸は、緩衝剤、増量剤、安定化剤、及び酸化防止剤としてタンパク質製剤中で多目的な使用が見い出されている。このため、一態様では、それぞれ、５．５〜６．５及び４．０〜５．５のｐＨ範囲でタンパク質製剤を緩衝するために、ヒスチジン及びグルタミン酸が用いられる。ヒスチジンのイミダゾール基は、ｐＫａが６．０であり、グルタミン酸側鎖のカルボキシル基は、ｐＫａが４．３であるため、これらのアミノ酸は、対応するｐＨ範囲における緩衝に好適となる。そのような場合、グルタミン酸が特に有用である。ヒスチジンは、市販のタンパク質製剤に一般的に見られ、このアミノ酸は、注射時に刺痛を伴うことが知られる緩衝剤であるクエン酸塩の代替となる。興味深いことに、ヒスチジンも、液体及び凍結乾燥両方の体裁で、高濃度で液体使用されると、凝集に関して安定化効果を有することが報告されている（Ｃｈｅｎ  Ｂ，ｅｔ  ａｌ．，Ｐｈａｒｍ  Ｒｅｓ．，２０（１２）：１９５２−６０（２００３））。ヒスチジンはまた、タンパク質濃度が高い製剤の粘度を低下させることが、他の者により観察された。しかしながら、同じ研究において、著者は、ステンレス鋼製容器中での抗体の凍結解凍研究中にヒスチジン含有製剤における凝集及び変色が増加したことを観察した。ヒスチジンの他の注意点は、ヒスチジンが金属イオンの存在下で光酸化を受けることである（Ｔｏｍｉｔａ  Ｍ，ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，８（１２）：５１４９−６０（１９６９））。メチオニンを製剤中で酸化防止剤として使用することは有望であるように見受けられ、いくつかの酸化ストレスに対して効果的であることが観察されている（Ｌａｍ  ＸＭ，ｅｔ  ａｌ．，Ｊ  Ｐｈａｒｍ  ＳｃＬ，８６（１１）：１２５０−５（１９９７））。
【０１７５】
様々な態様において、アミノ酸のグリシン、プロリン、セリン、アルギニン、及びアラニンのうちの１つ以上を含む製剤が提供され、これらは、選択的な除外の機序によりタンパク質を安定させることが示されている。グリシンは、凍結乾燥製剤中で一般的に使用される増量剤でもある。アルギニンは、凝集の阻害に効果的であることが示されており、液体及び凍結乾燥両方の製剤に中で使用されている。提供される製剤中、アミノ酸濃度は、０．１、１、１０、２０、３０、４０、５０、８０、１００、１２０、１５０、２００、３００、及び５００ｍＭの間である。本発明の一実施形態では、アミノ酸はグリシンである。
【０１７６】
ｈ．他の一般的な賦形剤成分：薬学的酸化防止剤
タンパク質残基の酸化は、いくつかの異なる発生源から生じる。特定の酸化防止剤を添加することの他に、酸化性のタンパク質損傷の防止には、製品の製造プロセス及び貯蔵にわたって、大気酸素、温度、光曝露、及び化学的汚染などのある数の因子を慎重に制御することが伴う。したがって、本発明は、還元剤、酸素／フリーラジカル捕捉剤、またはキレート剤を非限定的に含む、薬学的酸化防止剤の使用を企図する。治療用タンパク質製剤中の酸化防止剤は、一態様において、水溶性であり、製品貯蔵寿命にわたって活性なままである。還元剤及び酸素／フリーラジカル捕捉剤は、溶液中の活性酸素種を除去することによって作用する。ＥＤＴＡなどのキレート剤は、フリーラジカル形成を促進する微量金属汚染物質と結合することにより有効となる。例えば、ＥＤＴＡは、酸性線維芽細胞成長因子の液体製剤中で利用されて、金属イオンが触媒するシステイン残基の酸化を阻害した。
【０１７７】
様々な賦形剤のタンパク質酸化を防止する有効性に加えて、酸化防止剤自体がタンパク質に対して他の共有結合的または物理的変化を誘導する可能性が懸念される。例えば、還元剤により、ジスルフィドシャフリングにつながり得る分子内ジスルフィド結合の分断が生じ得る。遷移金属イオンの存在下で、アスコルビン酸及びＥＤＴＡが、いくつかのタンパク質及びペプチド中でメチオニン酸化を促進することが示されている（Ａｋｅｒｓ  ＭＪ，ａｎｄ  Ｄｅｆｅｌｉｐｐｉｓ  ＭＲ．Ｐｅｐｔｉｄｅｓ  ａｎｄ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ａｓ  Ｐａｒｅｎｔｅｒａｌ  Ｓｏｌｕｔｉｏｎｓ．Ｉｎ：  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｆｏｒｍｕｌａｔｉｏｎ  Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ  ｏｆ  Ｐｅｐｔｉｄｅｓ  ａｎｄ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ．Ｓｖｅｎ  Ｆｒｏｋｊａｅｒ，Ｌａｒｓ  Ｈｏｖｇａａｒｄ，ｅｄｉｔｏｒｓ．Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅ．Ｔａｙｌｏｒ  ａｎｄ  Ｆｒａｎｃｉｓ，ＵＫ（１９９９））、Ｆｒａｎｓｓｏｎ  Ｊ．Ｒ．，／．Ｐｈａｒｍ．Ｓｃｉ．８６（９）：４０４６−１０５０（１９９７）、Ｙｉｎ  Ｊ，ｅｔ  ａｌ．，Ｐｈａｒｍ  Ｒｅｓ．，２１（１２）：２３７７−８３（２００４））。チオ硫酸ナトリウムは、ｒｈｕＭａｂ  ＨＥＲ２において光及び温度により誘導されるメチオニン酸化のレベルを低下させることが報告されているが、チオ硫酸−タンパク質付加物の形成もこの研究において報告された（Ｌａｍ  ＸＭ，Ｙａｎｇ  ＪＹ，ｅｔ  ａｌ．，Ｊ  Ｐｈａｒｍ  Ｓｃｉ．８６（１１）：１２５０−５（１９９７））。タンパク質の特定のストレス及び感受性に従い、適切な酸化防止剤を選択する。ある特定の態様において企図される酸化防止剤には、還元剤及び酸素／フリーラジカル捕捉剤、ＥＤＴＡ、及びチオ硫酸ナトリウムが非限定的に含まれる。
【０１７８】
ｉ．他の一般的な賦形剤成分：薬学的金属イオン
一般に、遷移金属イオンは、タンパク質中で物理的及び化学的分解を触媒し得るので、タンパク質製剤においては望まれない。しかしながら、特定の金属イオンは、それらがタンパク質に対する補因子である製剤、及びそれらが配位錯体を形成するタンパク質の懸濁製剤（例えば、インスリンの亜鉛懸濁液）に含められる。近年では、アスパラギン酸のイソアスパラギン酸への異性化を阻害するために、マグネシウムイオン（１０〜１２０ｍＭ）の使用が提案されている（国際公開第ＷＯ２００４０３９３３７号）。
【０１７９】
金属イオンがタンパク質中で安定性または増大した活性を付与する２つの例は、ヒトデオキシリボヌクレアーゼ（ｒｈＤＮａｓｅ、Ｐｕｌｍｏｚｙｍｅ（登録商標））及び第ＶＩＩＩ因子である。ｒｈＤＮａｓｅの場合、Ｃａ＋２イオン（最大１００ｍＭ）により、特定の結合部位をとおして酵素の安定性が増加した（Ｃｈｅｎ  Ｂ，ｅｔ  ａｌ．，／Ｐｈａｒｍ  Ｓｃｉ．，８８（４）：４７７−８２（１９９９））。実に、ＥＧＴＡを用いて溶液からカルシウムイオンを除去することで、脱アミド化及び凝集の増大が生じた。しかしながら、この効果は、Ｃａ＋２イオンによってのみ観察され、他の二価カチオンであるＭｇ＋２、Ｍｎ＋２、及びＺｎ＋２は、ｒｈＤＮａｓｅを不安定にしたことが観察された。類似の効果が第ＶＩＩＩ因子でも観察された。Ｃａ＋２及びＳｒ＋２イオンはタンパク質を安定させたが、Ｍｇ＋２、Ｍｎ＋２、及びＺｎ＋２、Ｃｕ＋２及びＦｅ＋２などの他のものは、酵素を不安定にした（Ｆａｔｏｕｒｏｓ，Ａ．，ｅｔ  ａｌ．，Ｉｎｔ．Ｊ．Ｐｈａｒｍ．，１５５，１２１−１３１（１９９７）。第ＶＩＩＩ因子を用いた別個の研究では、Ａｌ＋３イオンの存在下で凝集率の著しい増加が観察された（Ｄｅｒｒｉｃｋ  ＴＳ，ｅｔ  ａｌ．，／．Ｐｈａｒｍ．Ｓｃｉ．，９３（１０）：２５４９−５７（２００４））。著者は、緩衝塩のような他の賦形剤が、多くの場合にＡｌ＋３イオンで汚染されていることを注記しており、製剤化した製品中で適切な量の賦形剤を使用する必要性を示している。
【０１８０】
ｊ．他の一般的な賦形剤成分：薬学的保存剤
保存剤は、同じ容器から１回超取り出すことを伴う複数回使用の非経口製剤を開発する際に必要となる。これらの主な機能は、微生物増殖を阻害し、薬物製品の貯蔵寿命または使用期間にわたって製品の滅菌状態を確実にすることである。一般的に使用される保存剤には、ベンジルアルコール、フェノール、及びｍ−クレゾールが非限定的に含まれる。保存剤は長年使用されているものの、保存剤を含むタンパク質製剤の開発は困難であり得る。保存剤は、ほぼ必ずタンパク質に対して不安定化効果（凝集）を有し、このことが、それらの複数回投与タンパク質製剤中での使用を制限する主因となっている（Ｒｏｙ  Ｓ，ｅｔ  ａｌ．，Ｊ  Ｐｈａｒｍ  ＳｃＬ，９４（２）：３８２−９６（２００５））。
【０１８１】
今日まで、ほとんどのタンパク質薬物は、単回使用のみのために製剤化されてきた。しかしながら、複数回投与製剤が可能であると、これらは、患者の便宜性、及び市場性の増大を可能にする追加の利点を有する。良い例は、保存剤入り製剤の開発によって、より簡便な複数回使用注射ペンの体裁が商用化された、ヒト成長ホルモン（ｈＧＨ）の例である。ｈＧＨの保存剤入り製剤を含む少なくとも４つのそのようなペン型デバイスが、現在市販されている。Ｎｏｒｄｉｔｒｏｐｉｎ（登録商標）（液体、Ｎｏｖｏ  Ｎｏｒｄｉｓｋ）、Ｎｕｔｒｏｐｉｎ  ＡＱ（登録商標）（液体、Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ）、及びＧｅｎｏｔｒｏｐｉｎ（凍結乾燥−デュアルチャンバカートリッジ、Ｐｈａｒｍａｃｉａ＆Ｕｐｊｏｈｎ）はフェノールを含む一方、Ｓｏｍａｔｒｏｐｅ（登録商標）（Ｅｌｉ  Ｌｉｌｌｙ）はｍ−クレゾールと共に製剤化される。
【０１８２】
保存剤入り剤形の製剤開発中には、いくつかの局面を検討する必要がある。薬物製品中の効果的な保存剤濃度を最適化しなければならない。これには、剤形中の所与の保存剤を、タンパク質安定性を障害することなく抗微生物有効性を付与する濃度範囲で試験することが必要となる。例えば、示差走査熱量測定（ＤＳＣ）を使用して、インターロイキン−１受容体（Ｉ型）のための液体製剤の開発において、３つの保存剤がスクリーニングを通過した。保存剤は、市販製品で一般的に使用される濃度での安定性に与えるその影響に基づいて、順位決定された（Ｒｅｍｍｅｌｅ  ＲＬ  Ｊｒ．，ｅｔ  ａｌ．，Ｐｈａｒｍ  Ｒｅｓ．，１５（２）：２００−８  （１９９８））。
【０１８３】
保存剤を含有する液体製剤の開発は、凍結乾燥製剤よりも困難である。凍結乾燥製品は、保存剤なしで凍結乾燥させ、使用時に、希釈剤を含有する保存剤を用いて再構成することができる。これにより、保存剤がタンパク質と接触する時間が短縮され、関連する安定性リスクが大幅に最小化される。液体製剤では、保存剤の有効性及び安定性は、製品貯蔵寿命全体（約１８〜２４か月）にかけて維持されなければならない。注記すべき重要な点は、保存剤の有効性が、活性薬物及びすべての賦形剤成分を含有する最終製剤中で示される必要があることである。
【０１８４】
一部の保存剤は、注射部位反応を引き起こし得、これは保存剤の選択時に考慮が必要な別の要因である。ノルディトロピン中の保存剤及び緩衝液の評価に焦点を当てた臨床試験では、フェノール及びベンジルアルコールを含有する製剤において、ｍ−クレゾールを含有する製剤と比較して低い疼痛知覚が観察された（Ｋａｐｐｅｌｇａａｒｄ  Ａ．Ｍ．，Ｈｏｒｍ  Ｒｅｓ．６２  Ｓｕｐｐｌ  ３：９８−１０３（２００４））。興味深いことに、一般的に使用される保存剤の中でも、ベンジルアルコールは麻酔特性を有する（Ｍｉｎｏｇｕｅ  ＳＣ，ａｎｄ  Ｓｕｎ  ＤＡ．，ＡｎｅｓｔｈＡｎａｌｇ．，１００（３）：６８３−６（２００５））。様々な態様において、保存剤の使用により、いずれの副作用にも勝る利益が得られる。
【０１８５】
ｋ．薬学的製剤の調製方法
本発明は、さらに、薬学的製剤の調製方法を企図する。
【０１８６】
本方法には、次のステップのうちの１つ以上がさらに含まれる：凍結乾燥の前に本明細書に記載の安定化剤を該混合物に添加するステップ、凍結乾燥の前に、各々本明細書に記載されている、増量剤、浸透圧調節剤、及び界面活性剤から選択される少なくとも１つの薬剤を該混合物に添加するステップ。
【０１８７】
凍結乾燥した物質の標準的な再構成の実施は、大量の純水または注射用滅菌水（ＷＦＩ）（典型的には、凍結乾燥中に除去した体積に等しい）を戻し入れることであるが、非経口投与用医薬品の製造には抗生物質の希釈溶液が使用される場合がある（Ｃｈｅｎ，Ｄｒｕｇ  Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ  ａｎｄ  Ｉｎｄｕｓｔｒｉａｌ  Ｐｈａｒｍａｃｙ，１８：１３１１−１３５４（１９９２））。したがって、本発明の凍結乾燥したｒＶＷＦ組成物に希釈液を添加するステップを含む、再構成されたｒＶＷＦ組成物を調製するための方法が提供される。
【０１８８】
凍結乾燥した物質は、水溶液として再構成されてもよい。様々な水性担体、例えば、注射用滅菌水、複数回投与用途のための保存剤を含む水、または適量の界面活性剤を含む水（例えば、水性懸濁液の製造に好適な賦形剤と混合された活性化合物を含有する水性懸濁液）。様々な態様において、そのような賦形剤は、懸濁剤、例えば、非限定的に、カルボキシメチルセルロースナトリウム、メチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、アルギン酸ナトリウム、ポリビニルピロリドン、トラガントガム、及びアカシアガムであり、分散または湿潤剤は、自然発生のホスファチド、例えば、非限定的に、レシチン、またはアルキレンオキシドと脂肪酸との縮合物、例えば、非限定的に、ステアリン酸ポリオキシエチレン、またはエチレンオキシドと長鎖脂肪族アルコールとの縮合物、例えば、非限定的に、ヘプタデカエチル−エンオキシセタノール、またはポリオキシエチレンソルビトールモノオレエートなどの、エチレンオキシドと脂肪酸及びヘキシトール由来の部分エステルとの縮合物、またはエチレンオキシドと脂肪酸及びヘキシトール無水物由来の部分エステルとの縮合物、例えば、非限定的に、ポリエチレンソルビタンオレイン酸モノエステルである。様々な態様において、水性懸濁液は、１つ以上の保存剤、例えば、非限定的に、エチル、またはｎ−プロピル、ｐ−ヒドロキシ安息香酸も含有する。
【０１８９】
ｌ．投与のための例示的なｒＶＷＦ製剤
いくつかの実施形態では、本方法は、治療の量を低減する（１００ＩＵ／ｍｌ〜１００００ＩＵ／ｍｌ）ために、高い効力（高いｒＶＷＦ濃度及び増強された長期安定性）を有する最終製品を可能にする増強された製剤を提供する。いくつかの実施形態では、投与用の製剤中のｒＶＷＦ濃度は、約１００ＩＵ／ｍｌ〜１００００ＩＵ／ｍｌである。いくつかの実施形態では、投与用の製剤中のｒＶＷＦ濃度は、約５００ＩＵ／ｍｌ〜１００００ＩＵ／ｍｌである。いくつかの実施形態では、投与用の製剤中のｒＶＷＦ濃度は、約１０００ＩＵ／ｍｌ〜１００００ＩＵ／ｍｌである。いくつかの実施形態では、投与用の製剤中のｒＶＷＦ濃度は、約２０００ＩＵ／ｍｌ〜１００００ＩＵ／ｍｌである。いくつかの実施形態では、投与用の製剤中のｒＶＷＦ濃度は、約３０００ＩＵ／ｍｌ〜１００００ＩＵ／ｍｌである。いくつかの実施形態では、投与用の製剤中のｒＶＷＦ濃度は、約４０００ＩＵ／ｍｌ〜１００００ＩＵ／ｍｌである。いくつかの実施形態では、投与用の製剤中のｒＶＷＦ濃度は、約５０００ＩＵ／ｍｌ〜１００００ＩＵ／ｍｌである。いくつかの実施形態では、投与用の製剤中のｒＶＷＦ濃度は、約６０００ＩＵ／ｍｌ〜１００００ＩＵ／ｍｌである。いくつかの実施形態では、投与用の製剤中のｒＶＷＦ濃度は、約７０００ＩＵ／ｍｌ〜１００００ＩＵ／ｍｌである。いくつかの実施形態では、投与用の製剤中のｒＶＷＦ濃度は、約８０００ＩＵ／ｍｌ〜１００００ＩＵ／ｍｌである。いくつかの実施形態では、投与用の製剤中のｒＶＷＦ濃度は、約９０００ＩＵ／ｍｌ〜１００００ＩＵ／ｍｌである。
【０１９０】
いくつかの実施形態では、投与用の製剤は、例えば、ヒスチジン、グリシン、アルギニンのようなアミノ酸を含む、１つ以上の双性イオン性化合物を含む。いくつかの実施形態では、投与用の製剤は、例えば、ポリソルベート８０、オクチルピラノシド、ジペプチド、及び／または両親媒性ペプチドを含む、最低で１つの疎水性基と１つの親水性基とを有する両親媒性特性を持つ成分を含む。いくつかの実施形態では、投与用の製剤は、例えば、ソルビトール、マンニトール、スクロース、またはトレハロースを含む、非還元糖または糖アルコールまたは二糖類を含む。いくつかの実施形態では、投与用の製剤は、生理学的浸透圧をもたらす、例えば塩化ナトリウムを含む無毒性水溶性塩を含む。いくつかの実施形態では、投与用の製剤は、ｐＨが、６．０〜８．０の範囲である。いくつかの実施形態では、投与用の製剤は、ｐＨが、約６．０、約６．５、約７、約７．５、または約８．０である。いくつかの実施形態では、投与用の製剤は、例えば、Ｃａ２＋、Ｍｇ２＋、Ｚｎ２＋、Ｍｎ２＋、及び／またはそれらの組み合わせを含む、ｒＶＷＦを安定させる１つ以上の二価カチオンを含む。いくつかの実施形態では、投与用の製剤は、投与の時点で生理学的浸透圧を有し、約７．０のｐＨで、約１ｍＭ〜約５０ｍＭのグリシン、約１ｍＭ〜約５０ｍＭのヒスチジン、約０〜約３００ｍＭの塩化ナトリウム（例えば、３００ｍＭ未満のナトリウム）、約０．０１％〜約０．０５％のポリソルベート２０（またはポリソルベート８０）、及び約０．５％〜約２０％（ｗ／ｗ）のスクロースを含む。
【０１９１】
いくつかの実施形態では、投与用の製剤は凍結乾燥することができる。いくつかの実施形態では、投与用の製剤は、安定であり、２℃〜約８℃、及び約１８℃〜約２５℃で、液体状態で貯蔵することができる。いくつかの実施形態では、投与用の製剤は、安定であり、約２℃〜約８℃で、液体状態で貯蔵することができる。いくつかの実施形態では、投与用の製剤は、安定であり、約１８℃〜約２５℃で、液体状態で貯蔵することができる。
【０１９２】
Ｖ．重度のＶＷＤを患う患者におけるＧＩ出血の治療方法のためのｒＶＷＦの投与
ＧＩ出血症状を治療するために重度のＶＷＤを患う患者にｒＶＷＦを投与することの利点のひとつは、ｐｄＶＷＦと比較してより高いｒＶＷＦの比活性により、投与されるｒＶＷＦの量及び対象への再投与の回数におけて融通がきくようになることである。理解されるように、また本明細書でさらに詳細に考察されるように、同時投与されるＦＶＩＩＩは、組換えであっても血漿由来であってもよい。
【０１９３】
組成物をヒトまたは試験動物に投与するために、一態様において、組成物は、１つ以上の薬学的に許容される担体を含む。「薬学的に」または「薬理学的に」許容されるという表現は、以下に記載のように、安定であり、凝集及び切断産物などタンパク質分解を阻害し、加えて、当該技術分野で周知の経路を使用して投与されるときにアレルギー反応または他の有害反応を生むことがない分子実体及び組成物を指す。「薬学的に許容される担体」には、上で開示される薬剤を含めて、ありとあらゆる臨床的に有用な溶媒、分散媒、コーティング、抗菌剤及び抗真菌薬剤、等張剤及び吸収遅延剤などが含まれる。
【０１９４】
薬学的製剤は、経口、局所、経皮、非経口、吸入スプレーにより、経腟、経直腸、または頭蓋内注射により投与することができる。本明細書で使用される非経口という用語は、皮下注射、静脈内、筋肉内、嚢内注射、または注入技法を含む。特定の部位での静脈内、皮内、筋肉内、乳房内、腹腔内、髄腔内、球後、及び／または肺内注射による投与も企図される。一般に、組成物は、発熱物質、及びレシピエントに有害であり得る他の不純物を本質的に含まない。
【０１９５】
ｒＶＷＦの単回または複数回投与が、治療にあたる医師により選択された用量レベル及びパターンで行われる。疾患の予防または治療に関して、適切な投薬量は、治療すべき疾患の種類（例えばフォンヴィレブランド病）、疾患の重症度及び経過、薬物が予防目的で投与されるか治療目的で投与されるか、以前の治療法、患者の病歴及び薬物への反応、ならびに主治医の裁量に依存することになる。
【０１９６】
いくつかの態様において、ｒＶＷＦは、４０〜１００ＩＵ／ｋｇの範囲、例えば、４０、４５、５０、５５、６０、６５、７０、７５、８０、９０、１００、４０〜１００、４０〜８０、５０〜８０、６０〜８０、７０〜８０、４０〜５０、４０〜６０、４０〜７０、４０〜５０、５０〜６０、６０〜７０、７０〜８０、８０〜９０、または９０〜１００ＩＵ／ｋｇで、対象に投与される。いくつかの実施形態では、ｒＶＷＦは、ＧＩ出血症状の間に少なくとも１回投与される。他の実施形態では、ｒＶＷＦは、ＧＩ出血症状の間に、２回以上、例えば、２回、３回、４回、５回、またはそれ以上投与される。いくつかの例では、対象は、１回以上のｒＶＷＦの注入を施される。各注入は、約４０〜８０ＩＵ／ｋｇの範囲のｒＶＷＦ、例えば、４０、４５、５０、５５、６０、６５、７０、７５、８０、４０〜８０、５０〜８０、６０〜８０、７０〜８０、４０〜５０、４０〜６０、４０〜７０、４０〜５０、５０〜６０、または６０〜７０ＩＵ／ｋｇのｒＶＷＦを含み得る。いくつかの実施形態では、注入の量は、実質的に等しくあり得る。例えば、第１の注入と第２の注入とは、量が実質的に等しくあり得る。いくつかの実施形態では、出血症状あたり対象に投与されるｒＶＷＦの総用量は、約４０〜１５０ＩＵ／ｋｇ、例えば、４０〜１５０、４０〜１２５、４０〜１００、４０〜９０、４０〜７５、５０〜１５０、５０〜１００、７５〜１５０、または１００〜１５０ＩＵ／ｋｇである。
【０１９７】
いくつかの実施形態では、少量及び中等度の出血事象には、その出血症状を制御するために予測よりも１〜２回のみ多い注入が必要とされ、かつ追加のＶＷＦ含有製品が必要とされなかった。いくつかの実施形態では、大量の出血事象には、その出血症状を制御するために、予測よりも１．５倍未満多い注入が必要とされ、かつ追加のＶＷＦ含有製品が必要とされなかった。いくつかの実施形態では、少量、中等度、及び大量の出血事象で、注入の実際の数が、出血事象を治療するために必要とされる予測数以下であり、かつ追加のＶＷＦ含有製品が必要とされなかった。
【０１９８】
いくつかの実施形態では、ｒＶＷＦは、少なくとも１日１回、少なくとも１日２回、８〜１２時間ごとなどで投与される。いくつかの例では、ｒＶＷＦは、合計１日間、２日間、３日間、４日間、５日間、６日間、７日間、８日間、９日間、１０日間、１１日間、１２日間、１３日間、１４日間などで投与される。いくつかの実施形態では、ｒＶＷＦは、８時間ごと、９時間ごと、１０時間ごと、１１時間ごと、または１２時間ごとに投与される。いくつかの実施形態では、ｒＶＷＦは、約３日〜約７日間、８〜１２時間ごとに投与される。
【０１９９】
いくつかの実施形態では、組換え第ＶＩＩＩ因子（ｒＦＶＩＩＩ）も、ＧＩ出血症状を治療するために、重度のＶＷＤを患う対象に投与される。いくつかの場合、施される治療には、ｒＶＷＦ及びｒＦＶＩＩＩが含まれる。他の場合には、施される治療には、ｒＦＶＩＩＩが含まれない。いくつかの実施形態では、ｒＦＶＩＩＩは、約１０〜７０ＩＵ／ｋｇの範囲、例えば、１０〜７０、１０〜６０、１０〜５０、１０〜４０、１０〜３０、１０〜２０、２０〜３０、３０〜４０、４０〜５０、５０〜６０、または６０〜７０ＩＵ／ｋｇで、対象に投与される。いくつかの例では、ｒＦＶＩＩＩは、初期（第１の）投薬または初期（第１の）注入で投与される。いくつかの場合、ｒＦＶＩＩＩは、第２の投薬または第２の注入の一環として投与されない。いくつかの実施形態では、ＧＩ出血症状を経験しているＶＷＤを患う対象に、ｒＶＷＦ及びｒＦＶＩＩＩの単回注入が施される。いくつかの実施形態では、ｒＶＷＦの第２の投与は、ＦＶＩＩＩと一緒には施されない。
【０２００】
方法に関して、いくつかの実施形態では、ｒＶＷＦ及びＦＶＩＩＩが一緒に投与されるとき、ｒＶＷＦ対ＦＶＩＩＩの比率は約１．５：０．８である。方法に関して、いくつかの実施形態では、ｒＶＷＦ及びＦＶＩＩＩが一緒に投与されるとき、ｒＶＷＦ対ＦＶＩＩＩの比率は約１．３：１である。方法に関して、いくつかの実施形態では、ｒＶＷＦ及びＦＶＩＩＩが一緒に投与されるとき、ｒＶＷＦ対ＦＶＩＩＩの比率は約１．１：０．８である。方法に関して、いくつかの実施形態では、ｒＶＷＦ及びＦＶＩＩＩが一緒に投与されるとき、ｒＶＷＦ対ＦＶＩＩＩの比率は約１．５：１である。方法に関して、いくつかの実施形態では、ｒＶＷＦ及びＦＶＩＩＩが一緒に投与されるとき、ｒＶＷＦ対ＦＶＩＩＩの比率は約１．１：１．２である。
【０２０１】
いくつかの実施形態では、消化管出血が少量または中等度の消化管出血であるとき、ｒＶＷＦの４０〜６０ＩＵ／ｋｇのｒＶＷＦが投与される。いくつかの実施形態では、消化管出血が少量または中等度の消化管出血であるとき、ｒＶＷＦの約４０ＩＵ／ｋｇのｒＶＷＦが投与される。いくつかの実施形態では、消化管出血が少量または中等度の消化管出血であるとき、ｒＶＷＦの約４５ＩＵ／ｋｇのｒＶＷＦが投与される。いくつかの実施形態では、消化管出血が少量または中等度の消化管出血であるとき、ｒＶＷＦの約５０ＩＵ／ｋｇのｒＶＷＦが投与される。いくつかの実施形態では、消化管出血が少量または中等度の消化管出血であるとき、ｒＶＷＦの約５５ＩＵ／ｋｇのｒＶＷＦが投与される。いくつかの実施形態では、消化管出血が少量または中等度の消化管出血であるとき、ｒＶＷＦの約６０ＩＵ／ｋｇのｒＶＷＦが投与される。いくつかの実施形態では、消化管出血が少量または中等度の消化管出血である場合、ｒＶＷＦの４０〜６０ＩＵ／ｋｇのｒＶＷＦが、約３日〜約７日間、８〜１２時間ごとに投与される。いくつかの実施形態では、消化管出血が少量または中等度の消化管出血であるとき、ｒＶＷＦの約４０ＩＵ／ｋｇのｒＶＷＦが、約３日〜約７日間、８〜１２時間ごとに投与される。いくつかの実施形態では、消化管出血が少量または中等度の消化管出血であるとき、ｒＶＷＦの約４５ＩＵ／ｋｇのｒＶＷＦが、約３日〜約７日間、８〜１２時間ごとに投与される。いくつかの実施形態では、消化管出血が少量または中等度の消化管出血であるとき、ｒＶＷＦの約５０ＩＵ／ｋｇのｒＶＷＦが、約３日〜約７日間、８〜１２時間ごとに投与される。いくつかの実施形態では、消化管出血が少量または中等度の消化管出血であるとき、ｒＶＷＦの約５５ＩＵ／ｋｇのｒＶＷＦが、約３日〜約７日間、８〜１２時間ごとに投与される。いくつかの実施形態では、消化管出血が少量または中等度の消化管出血であるとき、ｒＶＷＦの約６０ＩＵ／ｋｇのｒＶＷＦが、約３日〜約７日間、８〜１２時間ごとに投与される。いくつかの実施形態では、消化管出血が少量または中等度の消化管出血であるとき、ｒＶＷＦの４０〜６０ＩＵ／ｋｇのｒＶＷＦは、約３日〜約７日間、８時間ごとに投与される。いくつかの実施形態では、消化管出血が少量または中等度の消化管出血であるとき、ｒＶＷＦの４０〜６０ＩＵ／ｋｇのｒＶＷＦは、約３日〜約７日間、９時間ごとに投与される。いくつかの実施形態では、消化管出血が少量または中等度の消化管出血であるとき、ｒＶＷＦの４０〜６０ＩＵ／ｋｇのｒＶＷＦは、約３日〜約７日間、１０時間ごとに投与される。いくつかの実施形態では、消化管出血が少量または中等度の消化管出血であるとき、ｒＶＷＦの４０〜６０ＩＵ／ｋｇのｒＶＷＦは、約３日〜約７日間、１１時間ごとに投与される。いくつかの実施形態では、消化管出血が少量または中等度の消化管出血であるとき、ｒＶＷＦの４０〜６０ＩＵ／ｋｇのｒＶＷＦは、約３日〜約７日間、１２時間ごとに投与される。いくつかの実施形態では、消化管出血が少量または中等度の消化管出血であるとき、ｒＶＷＦの４０〜６０ＩＵ／ｋｇのｒＶＷＦは、約３日間、８〜１２時間ごとに投与される。いくつかの実施形態では、消化管出血が少量または中等度の消化管出血であるとき、ｒＶＷＦの４０〜６０ＩＵ／ｋｇのｒＶＷＦは、約４日間、８〜１２時間ごとに投与される。いくつかの実施形態では、消化管出血が少量または中等度の消化管出血であるとき、ｒＶＷＦの４０〜６０ＩＵ／ｋｇのｒＶＷＦは、約５日間、８〜１２時間ごとに投与される。いくつかの実施形態では、消化管出血が少量または中等度の消化管出血であるとき、ｒＶＷＦの４０〜６０ＩＵ／ｋｇのｒＶＷＦは、約６日間、８〜１２時間ごとに投与される。いくつかの実施形態では、消化管出血が少量または中等度の消化管出血であるとき、ｒＶＷＦの４０〜６０ＩＵ／ｋｇのｒＶＷＦは、約７日間、８〜１２時間ごとに投与される。いくつかの実施形態では、消化管出血が少量または中等度の消化管出血であるとき、ｒＶＷＦの約４０、約４５、約５０、約５５、または約６０ＩＵ／ｋｇのｒＶＷＦが、約３日、約４日、約５日、約６日、または約７日間、約８時間、約９時間、約１０時間、約１１時間、または約１２時間ごとに投与される。
【０２０２】
いくつかの実施形態では、該ｒＶＷＦの約４０ＩＵ／ｋｇのｒＶＷＦ、及び消化管出血が大量または重度の消化管出血であるとき。いくつかの実施形態では、該ｒＶＷＦの約４５ＩＵ／ｋｇのｒＶＷＦ、及び消化管出血が重度または重度の消化管出血であるとき。いくつかの実施形態では、該ｒＶＷＦの約５０ＩＵ／ｋｇのｒＶＷＦ、及び消化管出血が大量または重度の消化管出血であるとき。いくつかの実施形態では、該ｒＶＷＦの約５５ＩＵ／ｋｇのｒＶＷＦ、及び消化管出血が大量または重度の消化管出血であるとき。いくつかの実施形態では、該ｒＶＷＦの約６０ＩＵ／ｋｇのｒＶＷＦ、及び消化管出血が大量または重度の消化管出血であるとき。いくつかの実施形態では、該ｒＶＷＦの約６５ＩＵ／ｋｇのｒＶＷＦ、及び消化管出血が大量または重度の消化管出血であるとき。いくつかの実施形態では、該ｒＶＷＦの約７０ＩＵ／ｋｇのｒＶＷＦ、及び消化管出血が大量または重度の消化管出血であるとき。いくつかの実施形態では、該ｒＶＷＦの約７５ＩＵ／ｋｇのｒＶＷＦ、及び消化管出血が大量または重度の消化管出血であるとき。いくつかの実施形態では、該ｒＶＷＦの約８０ＩＵ／ｋｇのｒＶＷＦ、及び消化管出血が大量または重度の消化管出血であるとき。いくつかの実施形態では、消化管出血が大量または重度の消化管出血であるとき、該ｒＶＷＦの４０〜８０ＩＵ／ｋｇのｒＶＷＦが、約３日〜約７日間、８〜１２時間ごとに投与される。いくつかの実施形態では、消化管出血が大量または重度の消化管出血であるとき、該ｒＶＷＦの約４０ＩＵ／ｋｇのｒＶＷＦが、約３日〜約７日間、８〜１２時間ごとに投与される。いくつかの実施形態では、消化管出血が大量または重度の消化管出血であるとき、該ｒＶＷＦの約４５ＩＵ／ｋｇのｒＶＷＦが、約３日〜約７日間、８〜１２時間ごとに投与される。いくつかの実施形態では、消化管出血が大量または重度の消化管出血であるとき、該ｒＶＷＦの約５０ＩＵ／ｋｇのｒＶＷＦが、約３日〜約７日間、８〜１２時間ごとに投与される。いくつかの実施形態では、消化管出血が大量または重度の消化管出血であるとき、該ｒＶＷＦの約５５ＩＵ／ｋｇのｒＶＷＦが、約３日〜約７日間、８〜１２時間ごとに投与される。いくつかの実施形態では、消化管出血が大量または重度の消化管出血であるとき、該ｒＶＷＦの約６０ＩＵ／ｋｇのｒＶＷＦが、約３日〜約７日間、８〜１２時間ごとに投与される。いくつかの実施形態では、消化管出血が大量または重度の消化管出血であるとき、該ｒＶＷＦの約６５ＩＵ／ｋｇのｒＶＷＦが、約３日〜約７日間、８〜１２時間ごとに投与される。いくつかの実施形態では、消化管出血が大量または大量の消化管出血であるとき、該ｒＶＷＦの約７０ＩＵ／ｋｇのｒＶＷＦが、約３日〜約７日間、８〜１２時間ごとに投与される。いくつかの実施形態では、消化管出血が大量または重度の消化管出血であるとき、該ｒＶＷＦの約７５ＩＵ／ｋｇのｒＶＷＦが、約３日〜約７日間、８〜１２時間ごとに投与される。いくつかの実施形態では、消化管出血が大量または重度の消化管出血であるとき、該ｒＶＷＦの約８０ＩＵ／ｋｇのｒＶＷＦが、約３日〜約７日間、８〜１２時間ごとに投与される。いくつかの実施形態では、消化管出血が大量または重度の消化管出血であるとき、該ｒＶＷＦの４０〜８０ＩＵ／ｋｇのｒＶＷＦは、約３日〜約７日間、８時間ごとに投与される。いくつかの実施形態では、消化管出血が大量または重度の消化管出血であるとき、該ｒＶＷＦの４０〜８０ＩＵ／ｋｇのｒＶＷＦは、約３日〜約７日間、９時間ごとに投与される。いくつかの実施形態では、消化管出血が大量または重度の消化管出血であるとき、該ｒＶＷＦの４０〜８０ＩＵ／ｋｇのｒＶＷＦは、約３日〜約７日間、１０時間ごとに投与される。いくつかの実施形態では、消化管出血が大量または重度の消化管出血であるとき、該ｒＶＷＦの４０〜８０ＩＵ／ｋｇのｒＶＷＦは、約３日〜約７日間、１１時間ごとに投与される。いくつかの実施形態では、消化管出血が大量または重度の消化管出血であるとき、該ｒＶＷＦの４０〜８０ＩＵ／ｋｇのｒＶＷＦは、約３日〜約７日間、１２時間ごとに投与される。いくつかの実施形態では、消化管出血が大量または重度の消化管出血であるとき、該ｒＶＷＦの４０〜８０ＩＵ／ｋｇのｒＶＷＦは、約３日間、８〜１２時間ごとに投与される。いくつかの実施形態では、消化管出血が大量または重度の消化管出血であるとき、該ｒＶＷＦの４０〜８０ＩＵ／ｋｇのｒＶＷＦは、約４日間、８〜１２時間ごとに投与される。いくつかの実施形態では、消化管出血が大量または重度の消化管出血であるとき、該ｒＶＷＦの４０〜８０ＩＵ／ｋｇのｒＶＷＦは、約５日間、８〜１２時間ごとに投与される。いくつかの実施形態では、消化管出血が大量または重度の消化管出血であるとき、該ｒＶＷＦの４０〜８０ＩＵ／ｋｇのｒＶＷＦは、約６日間、８〜１２時間ごとに投与される。いくつかの実施形態では、消化管出血が大量または重度の消化管出血であるとき、該ｒＶＷＦの４０〜８０ＩＵ／ｋｇのｒＶＷＦは、約７日間、８〜１２時間ごとに投与される。いくつかの実施形態では、消化管出血が大量または重度の消化管出血であるとき、該ｒＶＷＦの約４０、約４５、約５０、約５５、約６０、約６５、約７０、約７５、または約８０ＩＵ／ｋｇのｒＶＷＦが、約３日、約４日、約５日、約６日、または約７日間、約８時間、約９時間、約１０時間、約１１時間、または約１２時間ごとに投与される。
【０２０３】
一般に、１型ＶＷＤは、３０ＩＵ／ｄＬ未満のＶＷＦ：ＲＣｏ、３０ＩＵ／ｄＬ未満のＶＷＦ：Ａｇ、低いまたは正常なＦＶＩＩＩ、及び０．５〜０．７ＩＵ／ｄＬ超のＶＷＦ：ＲＣｏ／ＶＷＦ：Ａｇ比によって表される。２Ａ型ＶＷＤは、３０ＩＵ／ｄＬ未満のＶＷＦ：ＲＣｏ、３０〜２００ＩＵ／ｄＬ未満のＶＷＦ：Ａｇ、低いまたは正常なＦＶＩＩＩ、及び０．５〜０．７ＩＵ／ｄＬ未満のＶＷＦ：ＲＣｏ／ＶＷＦ：Ａｇ比によって表される。２Ｂ型ＶＷＤは、３０〜２００ＩＵ／ｄＬ未満のＶＷＦ：ＲＣｏ、３０ＩＵ／ｄＬ未満のＶＷＦ：Ａｇ、低いまたは正常なＦＶＩＩＩ、及び通常は０．５〜０．７ＩＵ／ｄＬ未満のＶＷＦ：ＲＣｏ／ＶＷＦ：Ａｇ比によって表される。２Ｍ型ＶＷＤは、３０ＩＵ／ｄＬ未満のＶＷＦ：ＲＣｏ、３０〜２００ＩＵ／ｄＬ未満のＶＷＦ：Ａｇ、低いまたは正常なＦＶＩＩＩ、及び０．５〜０．７ＩＵ／ｄＬ未満のＶＷＦ：ＲＣｏ／ＶＷＦ：Ａｇ比によって表される。２Ｎ型ＶＷＤは、３０〜２０００ＩＵ／ｄＬのＶＷＦ：ＲＣｏ、３０〜２００ＩＵ／ｄＬのＶＷＦ：Ａｇ、非常に低いＦＶＩＩＩ、及び０．５〜０．７ＩＵ／ｄＬ超のＶＷＦ：ＲＣｏ／ＶＷＦ：Ａｇ比によって表される。３型ＶＷＤは、３ＩＵ／ｄＬ未満のＶＷＦ：ＲＣｏ、３ＩＵ／ｄＬ未満のＶＷＦ：Ａｇ、極度に低い（１０ＩＵ／ｄＬ未満の）ＦＶＩＩＩによって表され、ＶＷＦ：ＲＣｏ／ＶＷＦ：Ａｇ比は適用されない。正常は、５０〜２００ＩＵ／ｄＬのＶＷＦ：ＲＣｏ、５０〜２００ＩＵ／ｄＬのＶＷＦ：Ａｇ、正常なＦＶＩＩＩ、及び０．５〜０．７ＩＵ／ｄＬ超のＶＷＦ：ＲＣｏ／ＶＷＦ：Ａｇ比によって表される。いくつかの実施形態では、対象は３型ＶＷＤを有する。いくつかの実施形態では、対象は重度の１型ＶＷＤを有する。いくつかの実施形態では、対象は重度の２型ＶＷＤを有する。
【０２０４】
いくつかの実施形態では、対象は、過去１２か月以内に少なくとも１回の出血事象について治療を受けている。いくつかの実施形態では、対象は、過去１２か月以内に１回超の出血事象について治療を受けている。
【０２０５】
一般に、少量の出血は、大量の出血の基準を満たさず、かつ出血のための入院、医師主導の出血のための医療処置もしくは外科処置、または血栓症治療（被験薬物を含む）の変化につながった急性または亜急性の臨床的に明白な出血（Ａｒｉｓｔｏｔｌｅ臨床定義）；他のすべての出血（大量及びＩＣＨを除く）（ＲＥ−ＬＹ臨床定義）；大量の出血の基準は満たさないが、医療的介入、医師による臨時の接触（訪問または電話）、被験薬物の一時的な中断（即ち、投薬の延期）、疼痛、または日常活動の障害を必要とする明白な出血（Ｒｏｃｋｅｔ−ＡＦ臨床定義）；２５ｃｍ２超の皮膚血腫、５分超の期間の不随意的な鼻血、肉眼的血尿、不随意的な直腸出血、５分間超の歯肉出血、入院につながる任意の出血、２Ｕ未満の輸血につながる任意の出血、または治験責任医師により意義があるとみなされる任意の他の出血として定義された臨床的に意義のある出血（Ｐｅｔｒｏ臨床定義）；ならびに／あるいは急性または亜急性で、臨床的に明白であり、大量でないと定義され、かつ出血のための入院、医師主導の出血のための医療処理もしくは外科処置、または血栓症治療の変化につながる、ＣＲＮＭ（臨床的に意義のある重度でない出血）、ならびに大量の出血及びＣＲＮＭ出血のいずれの基準も満たさない急性の臨床試験に明白な事象として定義される少量の出血事象（Ａｒｉｓｔｏｔｌｅ−Ｊ臨床定義）により特徴付けられる。例えば、Ｗｅｌｌｓ  Ｇ，Ｃｏｙｌｅ  Ｄ，Ｃａｍｅｒｏｎ  Ｃ，ｅｔ  ａｌ．Ｓａｆｅｔｙ，Ｅｆｆｅｃｔｉｖｅｎｅｓｓ，ａｎｄ  Ｃｏｓｔ−Ｅｆｆｅｃｔｉｖｅｎｅｓｓ  ｏｆ  Ｎｅｗ  Ｏｒａｌ  Ａｎｔｉｃｏａｇｕｌａｎｔｓ  Ｃｏｍｐａｒｅｄ  ｗｉｔｈ  Ｗａｒｆａｒｉｎ  ｉｎ  Ｐｒｅｖｅｎｔｉｎｇ  Ｓｔｒｏｋｅ  ａｎｄ  Ｏｔｈｅｒ  Ｃａｒｄｉｏｖａｓｃｕｌａｒ  Ｅｖｅｎｔｓ  ｉｎ  Ｐａｔｉｅｎｔｓ  ｗｉｔｈ  Ａｔｒｉａｌ  Ｆｉｂｒｉｌｌａｔｉｏｎ［Ｉｎｔｅｒｎｅｔ］．Ｏｔｔａｗａ（ＯＮ）：Ｃａｎａｄｉａｎ  Ａｇｅｎｃｙ  ｆｏｒ  Ｄｒｕｇｓ  ａｎｄ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ  ｉｎ  Ｈｅａｌｔｈ；２０１２  Ａｐｒ  ９．３，ＣＬＩＮＩＣＡＬ  ＲＥＶＩＥＷを参照されたい。ウェブサイトｗｗｗ．ｎｃｂｉ．ｎｌｍ．ｎｉｈ．ｇｏｖ／ｂｏｏｋｓ／ＮＢＫ１６９８１３／で利用可能である。少量の出血は、大量または臨床的に重大な出血の基準を満たさないものとして定義された事象；創傷からの少量の出血（注射部位、鼻出血、または手術による減圧術を必要としない創傷血腫）；大量の出血の基準を満たさず、以下のうちの１つ以上を伴う明白な出血：５分超続くもしくは介入を必要とする鼻出血、最大寸法が５ｃｍ超の斑状出血もしくは血腫、尿路カテーテル関連の外傷と関連しない血尿、ＮＧ管の挿管もしくは配置に関連しないＧＩ出血、創傷血腫もしくは合併症、投薬の休止を必要とする結膜下出血；ＧＩもしくは尿路の少量の出血及び注射部位での血腫；ならびに／または大量の出血の基準を満たさない明白な出血を含み得る。例えば、Ｓｏｂｉｅｒａｊ  ＤＭ，Ｃｏｌｅｍａｎ  ＣＩ，Ｔｏｎｇｂｒａｍ  Ｖ，ｅｔ  ａｌ．Ｖｅｎｏｕｓ  Ｔｈｒｏｍｂｏｅｍｂｏｌｉｓｍ  Ｐｒｏｐｈｙｌａｘｉｓ  ｉｎ  Ｏｒｔｈｏｐｅｄｉｃ  Ｓｕｒｇｅｒｙ［Ｉ���ｔｅｒｎｅｔ］．Ｒｏｃｋｖｉｌｌｅ（ＭＤ）：Ａｇｅｎｃｙ  ｆｏｒ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  ａｎｄ  Ｑｕａｌｉｔｙ（ＵＳ）；２０１２  Ｍａｒ．（Ｃｏｍｐａｒａｔｉｖｅ  Ｅｆｆｅｃｔｉｖｅｎｅｓｓ  Ｒｅｖｉｅｗｓ，Ｎｏ．４９．）Ａｐｐｅｎｄｉｘ  Ｆ，Ａｄｄｉｔｉｏｎａｌ  Ｅｖｉｄｅｎｃｅ  Ｔａｂｌｅｓを参照されたい。ウェブサイトｗｗｗ．ｎｃｂｉ．ｎｌｍ．ｎｉｈ．ｇｏｖ／ｂｏｏｋｓ／ＮＢＫ９２３０９／から利用可能である。
【０２０６】
一般に、大量の出血は、Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  Ｓｏｃｉｅｔｙ  ｏｎ  Ｔｈｒｏｍｂｏｓｉｓ  ａｎｄ  Ｈａｅｍｏｓｔａｓｉｓ（ＩＳＴＨ）基準により特徴付けられ、任意の生命を脅かす及び／もしくは致死的な出血；決定領域もしくは臓器への症候性出血、及び頭蓋内（脳内、硬膜下）出血と頭蓋外（ＧＩ、非ＧＩ）出血に分けられた大量の出血（ＲＥ−ＬＹ臨床定義）；決定的な解剖学的部位への症候性出血（Ｒｏｃｋｅｔ−ＡＦ臨床定義）；生命を脅かす後腹膜、頭蓋内、眼内、もしくは髄腔内の出血；または外科手術を必要とする出血（Ａｒｔｉｓｔｏｔｌｅ−Ｊ臨床定義）を含む。大量の出血事象は、少なくとも２０ｇ／Ｌのヘモグロビンの減少または２単位超の全血の輸血（生命を脅かす出血の定義で言及した濃厚血球；生命を脅かす出血のＲＥ−ＬＹ定義：以下の基準のうちの１つ以上：（１）致死的な症候性頭蓋内出血；（２）少なくとも５．０ｇ／Ｌのヘモグロビン値の低下；（３）少なくとも４Ｕの全血もしくは濃厚血球の輸血；（４）静脈内強心薬の使用を必要とする低血圧を伴う；または（５）外科的介入を必要とする）；２ｇ／ｄＬ超のヘモグロビンの減少または２単位超の全血／赤血球の輸血（ＩＳＴＨまたはＲｏｃｋｅｔ−ＡＦ臨床定義）；及び／あるいは外科手術もしくは２Ｕ以上の輸血を必要とするか、または２．０ｇ／Ｌ以上のヘモグロビンの低下の症状と関連付けられる出血があるものを含み得る。例えば、Ｗｅｌｌｓ  Ｇ，Ｃｏｙｌｅ  Ｄ，Ｃａｍｅｒｏｎ  Ｃ，ｅｔ  ａｌ．Ｓａｆｅｔｙ，Ｅｆｆｅｃｔｉｖｅｎｅｓｓ，ａｎｄ  Ｃｏｓｔ−Ｅｆｆｅｃｔｉｖｅｎｅｓｓ  ｏｆ  Ｎｅｗ  Ｏｒａｌ  Ａｎｔｉｃｏａｇｕｌａｎｔｓ  Ｃｏｍｐａｒｅｄ  ｗｉｔｈ  Ｗａｒｆａｒｉｎ  ｉｎ  Ｐｒｅｖｅｎｔｉｎｇ  Ｓｔｒｏｋｅ  ａｎｄ  Ｏｔｈｅｒ  Ｃａｒｄｉｏｖａｓｃｕｌａｒ  Ｅｖｅｎｔｓ  ｉｎ  Ｐａｔｉｅｎｔｓ  ｗｉｔｈ  Ａｔｒｉａｌ  Ｆｉｂｒｉｌｌａｔｉｏｎ［Ｉｎｔｅｒｎｅｔ］．Ｏｔｔａｗａ（ＯＮ）：Ｃａｎａｄｉａｎ  Ａｇｅｎｃｙ  ｆｏｒ  Ｄｒｕｇｓ  ａｎｄ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ  ｉｎ  Ｈｅａｌｔｈ；２０１２  Ａｐｒ  ９．３，ＣＬＩＮＩＣＡＬ  ＲＥＶＩＥＷを参照されたい。ウェブサイトｗｗｗ．ｎｃｂｉ．ｎｌｍ．ｎｉｈ．ｇｏｖ／ｂｏｏｋｓ／ＮＢＫ１６９８１３／で利用可能である。大量の出血は、Ｈｂの２０ｇ／Ｌ超の減少を伴う臨床的に明白な出血；２Ｕ超の濃厚血球または全血の輸血につながる臨床的に明白なもの；致命的な後腹膜、頭蓋内、眼内、または髄腔内出血；治療休止を必要とするまたは再手術につながる出血；致死的な後腹膜、頭蓋内、髄腔内の出血；いずれかの決定臓器が関与する出血；再手術につながる出血；出血インデックスが２以上の明白な出血；創傷からの大量の出血（手術による減圧術を必要とする創傷血腫）、または創傷に関連しない大量の出血（消化管または脳内出血）；２ｇ／ｄＬ以上のＨｂの減少または２Ｕ超のＲＢＣの輸血の必要性のいずれかと関連付けられる臨床的に明白な出血；頭蓋内または後腹膜（抗凝固剤の恒久的中止をもたらす）を含み得る。例えば、Ｓｏｂｉｅｒａｊ  ＤＭ，Ｃｏｌｅｍａｎ  ＣＩ，Ｔｏｎｇｂｒａｍ  Ｖ，ｅｔ  ａｌ．Ｖｅｎｏｕｓ  Ｔｈｒｏｍｂｏｅｍｂｏｌｉｓｍ  Ｐｒｏｐｈｙｌａｘｉｓ  ｉｎ  Ｏｒｔｈｏｐｅｄｉｃ  Ｓｕｒｇｅｒｙ［Ｉｎｔｅｒｎｅｔ］．Ｒｏｃｋｖｉｌｌｅ（ＭＤ）：Ａｇｅｎｃｙ  ｆｏｒ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  ａｎｄ  Ｑｕａｌｉｔｙ（ＵＳ）；２０１２  Ｍａｒ．（Ｃｏｍｐａｒａｔｉｖｅ  Ｅｆｆｅｃｔｉｖｅｎｅｓｓ  Ｒｅｖｉｅｗｓ，Ｎｏ．４９．）  Ａｐｐｅｎｄｉｘ  Ｆ，Ａｄｄｉｔｉｏｎａｌ  Ｅｖｉｄｅｎｃｅ  Ｔａｂｌｅｓを参照されたい。ウェブサイトｗｗｗ．ｎｃｂｉ．ｎｌｍ．ｎｉｈ．ｇｏｖ／ｂｏｏｋｓ／ＮＢＫ９２３０９／から利用可能である。
【０２０７】
ｒＶＷＦの組成物は、本明細書に記載のように、薬学的製剤中に含めることができる。そのような製剤は、経口、局所、経皮、非経口、吸入スプレーにより、経腟、経直腸、または頭蓋内注射により投与することができる。本明細書で使用される非経口という用語は、皮下注射、静脈内、筋肉内、嚢内注射、または注入技法を含む。静脈内、皮内、筋肉内、乳房内、腹腔内、髄腔内、球後、肺内注射、及びまたは特定の部位での外科的移植による投与も企図される。一般に、組成物は、発熱物質、及びレシピエントに有害であり得る他の不純物を本質的に含まない。
【０２０８】
一態様において、本発明の製剤は、薬物製品の治療的循環レベルを維持するために、最初はボーラスにより、続いて連続注入により投与される。別の例として、本発明の化合物は、一回限りの投薬として投与される。当業者であれば、良好な医療行為及び個々の患者の病態によって決定する有効な投薬量及び投与レジメンの最適化は容易であろう。投与経路は、静脈内、腹腔内、皮下、または筋肉内投与により得るが、これらに限定されない。投薬頻度は、薬剤の薬物動態パラメータ及び投与経路に依存する。最適な薬学的製剤は、投与経路及び所望の投薬量に応じて当業者により決定される。例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，１８ｔｈ  Ｅｄ．，１９９０，Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏ．，Ｅａｓｔｏｎ，Ｐａ．１８０４２  ｐａｇｅｓ  １４３５−１７１２を参照されたい。この開示は、その全体が、すべての目的、特に薬学的製品についての製剤、投与経路、及び投薬量に関するすべての教示について、参照により本明細書に組み込まれる。そのような製剤は、投与される薬剤の物理的状態、安定性、インビボ放出速度、及びインビボクリアランス速度に影響を及ぼす。投与経路に応じて、好適な用量は、体重、体表面積、または臓器サイズに従って計算される。適切な投薬量は、血中濃度投薬量を決定するための確立されているアッセイを、適切な用量応答データと組み合わせて使用することにより、確認されてもよい。最終投薬レジメンは、薬物の作用を変更する様々な要因、例えば、薬物の比活性、損傷の重症度及び患者の応答性、患者の年齢、状態、体重、性別、及び食習慣、あらゆる感染の重症度、投与時間、ならびに他の臨床要因を考慮して、主治医により決定される。例として、本発明の組換えＶＷＦの典型的な用量は約５０ＩＵ／ｋｇであり、これは５００μｇ／ｋｇに相当する。試験の実施につれて、様々な疾患及び状態のための適切な投薬レベル及び治療期間に関するさらなる情報が明らかになるであろう。
【０２０９】
本発明の実施には、別段に示されていない限り、当該技術分野の技能の内である、有機化学、重合体技術、分子生物学（組換え技法を含む）、細胞生物学、生化学、及び免疫学の従来の技法及び記述が用いられ得る。そのような従来の技法には、重合体アレイ合成、ハイブリダイゼーション、ライゲーション、及び標識を使用するハイブリダイゼーションの検出が含まれる。本明細書の以下の実施例を参照することで、好適な技法の具体的な例解を得ることができる。しかしながら、言うまでもなく、他の同等である従来の手順も使用することができる。そのような従来の技法及び記述は、標準的な実習手引書、例えば、Ｇｅｎｏｍｅ  Ａｎａｌｙｓｉｓ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ  Ｓｅｒｉｅｓ（Ｖｏｌｓ．Ｉ−ＩＶ）、Ｕｓｉｎｇ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ、Ｃｅｌｌｓ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ、ＰＣＲ  Ｐｒｉｍｅｒ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ、及びＭｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ（すべてＣｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓから）、Ｓｔｒｙｅｒ，Ｌ．（１９９５）Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ（４ｔｈ  Ｅｄ．）  Ｆｒｅｅｍａｎ，Ｈｉｇｈｌｙ  ｓｔａｂｉｌｉｚｅｄ  Ｙｏｒｋ，Ｇａｉｔ，”Ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ：Ａ  Ｐｒａｃｔｉｃａｌ  Ａｐｐｒｏａｃｈ”１９８４，ＩＲＬ  Ｐｒｅｓｓ，Ｌｏｎｄｏｎ、Ｎｅｌｓｏｎ  ａｎｄ  Ｃｏｘ（２０００），Ｌｅｈｎｉｎｇｅｒ，Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ  ｏｆ  Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ３ｒｄ  Ｅｄ．，Ｗ．Ｈ．Ｆｒｅｅｍａｎ  Ｐｕｂ．，Ｈｉｇｈｌｙ  ｓｔａｂｉｌｉｚｅｄ  Ｙｏｒｋ，Ｎ．Ｙ．、ならびにＢｅｒｇ  ｅｔ  ａｌ．（２００２）Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，５ｔｈ  Ｅｄ．，Ｗ．Ｈ．Ｆｒｅｅｍａｎ  Ｐｕｂ．，Ｈｉｇｈｌｙ  ｓｔａｂｉｌｉｚｅｄ  Ｙｏｒｋ，Ｎ．Ｙ．に見ることができ、これらのすべては、全目的について、全体が参照により本明細書に組み込まれる。
【０２１０】
本明細書及び添付の特許請求の範囲で使用する単数形「１つの（ａ）」、「１つの（ａｎ）」、及び「その（ｔｈｅ）」は、文脈が別に指示しない限り複数の言及を含むことに留意されたい。よって、例えば、「ポリメラーゼ（ａ  ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ）」は、１つの薬剤またはそのような薬剤の混合物を指し、「方法（ｔｈｅ  ｍｅｔｈｏｄ）」への言及は、当業者に既知である等価のステップ及び方法への言及などを含む。
【０２１１】
本明細書及び添付の特許請求の範囲で使用する単数形「１つの（ａ）」、「１つの（ａｎ）」、及び「その（ｔｈｅ）」は、文脈が別に指示しない限り複数の言及を含むことに留意されたい。よって、例えば、「ポリメラーゼ（ａ  ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ）」は、１つの薬剤またはそのような薬剤の混合物を指し、「方法（ｔｈｅ  ｍｅｔｈｏｄ）」への言及は、当業者に既知である等価のステップ及び方法への言及などを含む。
【０２１２】
他に特段の定めのない限り、本明細書中で使用するすべての技術用語及び科学用語は、本発明が属する技術分野の当業者によって一般的に理解される意味と同じ意味を有する。本明細書で触れるすべての出版物は、これらの出版物に記載され、本明細書に記載の発明と関連して使用され得る、デバイス、組成物、製剤、及び方法を説明及び開示する目的で、参照により本明細書に組み込まれる。
【０２１３】
値の範囲が提供される場合、文脈が別途明確に指示しない限り、下限値の単位の１０分の１までの、その範囲の上限値から下限値の間の各介在値、ならびにその表示範囲の任意の他の表示値または介在値が、本発明に包含されることが理解される。これらのより小さい範囲の上限値及び下限値は、より小さい範囲内に独立して含まれてもよく、それはまた、表示範囲内の任意の具体的な除外限度に従って、本発明内に包含される。記載範囲がそれらの上限値及び下限値のうちの一方または両方を含む場合、それらの包含される上限値及び下限値のいずれか一方または両方を除外する範囲も本発明に包含される。
【０２１４】
以上の説明では、本発明のより完全な理解を提供するために、多くの具体的な詳細が述べられている。しかしながら、本発明がこれらの具体的な詳細のうちの１つ以上を有さずに実施され得ることは、当業者には明らかであろう。他の例では、本発明を不明瞭にすることを避けるために、周知の特徴及び当業者に周知の手順は説明されていない。
【０２１５】
本発明は主に特定の実施形態を参照して説明されるが、本開示を読むことで、当業者には他の実施形態が明らかとなることも想定され、そのような実施形態は本発明の方法に含まれることが意図される。
【実施例】
【０２１６】
実施例１：重度のフォンヴィレブランド病を患う患者における組換えフォンヴィレブランド因子によるＧＩ出血症状の治療：中枢第３相オンデマンド方式試験からのサブ分析
序論
消化管（ＧＩ）出血事象は、フォンヴィレブランド病（ＶＷＤ）を患う患者の最大２０％において発生し、ＶＷＤを患う患者の２％〜４％において血管形成異常病変と関連して観察されている（１〜３）。ＧＩ出血は、２Ａ型３型ＶＷＤを患う患者において最も頻繁に見られる、フォンヴィレブランド因子（ＶＷＦ）のより高い分子量及び超大型多量体（ＵＬＭ）の非存在と密接に関連する（４）。ＧＩ出血の消散には、通常、他の部位での出血と比較してより高い用量及びより長い期間の血漿由来ＶＷＦ補充濃縮物による療法が必要とされ、それでも治療は成功しないことがある（５）。ＶＯＮＶＥＮＤＩ（フォンヴィレブランド因子［組換え］、Ｂａｘａｌｔａ  ＵＳ  Ｉｎｃ．，Ｗｅｓｔｌａｋｅ  Ｖｉｌｌａｇｅ，ＣＡ）は、最も止血効果が高いＶＷＦ多量体であるＵＬＭが、製造中にＡＤＡＭＴＳ１３に曝露しないことを理由に保存される、組換えＶＷＦ（ｒＶＷＦ）濃縮物である（６）。
【０２１７】
目的
ｒＶＷＦの中枢第３相臨床試験では、重度のＶＷＤを患う患者における出血の治療について、組換え第ＶＩＩＩ因子（ｒＦＶＩＩＩ）（ＡＤＶＡＴＥ［抗血友病因子（組換え）］、Ｂａｘａｌｔａ  ＵＳ  Ｉｎｃ．，Ｗｅｓｔｌａｋｅ  Ｖｉｌｌａｇｅ，ＣＡ）を用いる場合と用いない場合とでその有効性及び安全性を評価した（７）。このサブ解析は、中枢臨床試験に参加している間にＧＩ出血事象を経験した患者からのデータを使用して行った。
【０２１８】
方法
患者人口統計、ＧＩ出血の特徴、止血有効性、治療及び出血消散のタイミング、ならびにｒＶＷＦ±ｒＦＶＩＩＩの投薬量を評価するための第３相前向き無作為化臨床試験（ＮＣＴ０１４１０２２７）。試験集団には、３型または重度の１型もしくは２型ＶＷＤを有し、登録前１２か月以内に１回以上の出血事象の治療を受けた、１８〜６５歳の男性及び女性が含まれた。出血のオンデマンド治療：少量／中等度の出血：４０〜６０ＩＵ／ｋｇのｒＶＷＦ、大量／重度の出血：最大８０ＩＵ／ｋｇのｒＶＷＦを、３〜７日間、８〜１２時間ごと。
【０２１９】
初期用量のｒＶＷＦを、ｒＦＶＩＩＩとともに、ｒＶＷＦ：ｒＦＶＩＩＩの比１．３：１±０．２で同時投与した。その後は、止血ＦＶＩＩＩ：Ｃレベルが達成されたことを条件に、ｒＶＷＦを単独で投与した。
【０２２０】
止血有効性を、４段階評価（なし＝４、中等度＝３、良好＝２、優良＝１）で評価した。
【０２２１】
有害事象のモニタリングを、試験全体をとおして行った。
【０２２２】
結果
試験中、合計１９２件の出血事象をｒＶＷＦにより治療し、止血有効性について評価した。止血有効性は、各症例において、優良（９６．９％）または良好（３．１％）のいずれかとして評価した。３型ＶＷＤを患い、年齢中央値が３２．５歳の４人の患者に、合計６件のＧＩ出血事象があった（表１）。
【０２２３】
（表１）ＧＩ出血患者人口統計サブグループ
2020526525.tif 000015
ＧＩ＝消化管、ＶＷＤ＝フォンヴィレブランド病。
【０２２４】
（表２）ＧＩ出血サブグループにおける出血の特徴及び有効性
2020526525.tif 000016
ＧＩ＝消化管。
＊出血発生から最初の注入までの日数。
†ｒＶＷＦの最初の注入から出血症状の消散までの時間。
【０２２５】
（表３）ＧＩ出血サブグループにおけるｒＶＷＦ及びｒＦＶＩＩＩの使用
2020526525.tif 000017
ＧＩ＝消化管、ｒＦＶＩＩＩ＝組換え第ＶＩＩＩ因子、ｒＶＷＦ＝組換えフォンヴィレブランド因子。
＊ｒＶＷＦ注入１の終了からｒＶＷＦ注入２の開始までの時間。
【０２２６】
（表４）ＧＩ出血サブグループにおける有害事象
2020526525.tif 000018
ＧＩ＝消化管。
＊頻脈、味覚障害、及び注入部位の知覚障害。
【０２２７】
６件のＧＩ出血のうち、各２件を、少量、中等度、及び大量／重度として報告した（表２）。６７％のＧＩ出血（４／６）は、出血治療が成功するのにｒＶＷＦの注入を１回しか必要とせず、３３％のＧＩ出血（２／６）は、止血の達成に２回の注入を必要とした。６件のうち４件の出血について分かっている消散までの時間の中央値は、８．３時間であった（範囲１．８〜１８．６時間）。ｒＶＷＦで治療したＧＩ出血の１００％が、優良（８３％［５／６］）または良好（１７％［１／６］、図１）の止血有効性を有した。
【０２２８】
ＧＩ出血があった４人の患者に、合計２８件の有害事象があった（表４）。３件の関連性がある可能性のある重篤でない有害事象が１人の患者に生じた（頻脈、味覚障害、注入部位の感覚障害）。重篤な有害事象には、各１人の患者におけるＧＩ出血及び便秘が含まれ、これらのいずれも、試験薬と関連性があるとはみなされなかった。
【０２２９】
このＧＩ出血は、最近出血の所見があった２件の慢性潰瘍から生じたものであり、治験実施計画書に従い、治験責任医師により同じ状況で健康な個人にも生じ得たと考えられたため、重篤な有害事象とみなされた。ｒＶＷＦ及びｒＦＶＩＩＩの使用を表３に示す。注入あたりの用量の中央値は、ｒＶＷＦが５８．７ＩＵ／ｋｇ（範囲５３．５〜６０．５ＩＵ／ｋｇ）、ｒＦＶＩＩＩが３３．３ＩＵ／ｋｇ（範囲１９．３〜４９．４ＩＵ／ｋｇ）であった。出血あたりの総用量の中央値は、ｒＶＷＦが６０．０ＩＵ／ｋｇ（範囲５３．６〜１２１．０ＩＵ／ｋｇ）、ｒＦＶＩＩＩが３３．３ＩＵ／ｋｇ（範囲１９．３〜４９．４ＩＵ／ｋｇ）であった。
【０２３０】
結論
中枢第３相試験のサブ分析において、ｒＶＷＦは、重度のＶＷＤを患う患者におけるＧＩ出血のオンデマンド治療に対して安全かつ有効であった。
【０２３１】
６件のＧＩ出血（少量２件、中等度２件、大量／重度２件）のうち、止血有効性を、５件（８３％）について優良、１件（１７％）について良好と評価した。ｒＶＷＦの単回注入は、４件（６７％）のＧＩ出血（少量１件、中等度２件、大量／重度１件）の治療に成功した。ＧＩ出血の消散までの時間は、４人の患者について入手でき、１．８〜１８．６時間の範囲（中央値８．３時間）であった。
【０２３２】
患者の小コホートからのこれらの調査結果により、ｒＶＷＦがＧＩ出血及び血管異形成の治療に果たす役割を、ＶＷＤを患う患者のより大きい集団においてさらに評価することが正当とされる。
【０２３３】
血管異形成と高分子量ＶＷＦ多量体の欠如との、明らかになってきた関連性により、ｒＶＷＦは、そのＵＬＭ含有量が多いことにより、この患者集団における特定の利益となり得る（８、９）。
【０２３４】
参考文献
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【０２３５】
実施例２：出血の治療における組換えフォンヴィレブランド因子（ｒＶＷＦ）の薬物動態、安全性、及び有効性
概要：
この第３相試験の目的は、ｒＶＷＦ：ｒＦＶＩＩＩ及びｒＶＷＦの薬物動態を評価すること、ならびに重度の遺伝性フォンヴィレブランド病（ＶＷＤ）を患う対象中の出血事象の治療におけるｒＶＷＦ：ｒＦＶＩＩＩ及びｒＶＷＦの安全性及び有効性を評価することである。
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【０２３６】
主要評価基準
主要評価基準：主要評価項目＃１
治療された出血症状について治療が成功した参加者の割合（％）［タイムフレーム：ｒＶＷＦ：ｒＦＶＩＩＩまたはｒＶＷＦの最初の注入から１２か月間］
【０２３７】
治療の成功は、試験期間中、被験薬（組換え第ＶＩＩＩ因子［ｒＦＶＩＩＩ］を伴うまたは伴わない組換えフォンヴィレブランド因子［ｒＶＷＦ］）で治療した参加者のＢＥについて、２．５未満の平均有効性評価スコアを使用した出血症状（ＢＥ）の制御の程度として定義した。使用した評価スコア：優良＝１ - 実際の注入が、ＢＥの治療に必要とされる注入の予測回数以下であり、追加のＶＷＦは必要とされない（全ＢＥ）；良好＝２ - ＢＥの制御に必要とされる予測よりも１〜２回超で多い注入（少量／中等度のＢＥ）または１．５回未満多い注入（大量のＢＥ）、追加のＶＷＦは必要とされない（全ＢＥ）；中等度＝３ - ３回以上の注入（少量／中等度のＢＥ）またはＢＥの制御に必要とされる予測よりも１．５回以上多い注入（大量のＢＥ）、追加のＶＷＦは必要とされない（全ＢＥ）；なし＝４ - 重篤な制御されていない出血または出血の強度に変化なし、追加のＶＷＦが必要とされる。最大の解析対象集団中の主要有効性評価が利用可能な参加者を含めた（前向き−消化管出血を除く）。
【０２３８】
副次的な評価基準
副次的な評価基準：副次的な評価項目＃１
有効性評価が「優良」または「良好」である治療された出血症状の割合（％）［タイムフレーム：ｒＶＷＦ：ｒＦＶＩＩＩまたはｒＶＷＦの最初の注入から１２か月間］
【０２３９】
被験薬（組換え第ＶＩＩＩ因子［ｒＦＶＩＩＩ］を伴うまたは伴わない組換えフォンヴィレブランド因子［ｒＶＷＦ］）による出血症状（ＢＥ）の制御についての有効性評価「優良」または「良好」は、次のように定義する：優良 - 実際の注入が、ＢＥの治療に必要とされる注入の予測数以下であり、追加のフォンヴィレブランド因子（ＶＷＦ）は必要とされない（全ＢＥ）；良好 - ＢＥの制御に必要とされる予測よりも１〜２回超で多い注入（少量／中等度のＢＥ）または１．５回未満多い注入（大量のＢＥ）、追加のＶＷＦは必要とされない（全ＢＥ）。データセットには、最大の解析対象集団中の参加者からの有効性評価が利用可能な、被験薬により治療された、前向き研究で予測されたＢＥが含まれた。
【０２４０】
副次的な評価基準：副次的な評価項目＃２
消化管出血を除く、有効性評価が「優良」または「良好」である治療された出血症状の割合（％）［タイムフレーム：ｒＶＷＦ：ｒＦＶＩＩＩまたはｒＶＷＦの最初の注入から１２か月間］
【０２４１】
被験薬（組換え第ＶＩＩＩ因子［ｒＦＶＩＩＩ］を伴うまたは伴わない組換えフォンヴィレブランド因子［ｒＶＷＦ］）による出血症状（ＢＥ）の制御についての「優良」または「良好」の有効性評価は、次のように定義する：優良 - 実際の注入が、ＢＥの治療に必要とされる注入の予測数以下であり、追加のフォンヴィレブランド因子（ＶＷＦ）は必要とされない（全ＢＥ）；良好 - ＢＥの制御に必要とされる予測よりも１〜２回超で多い注入（少量／中等度のＢＥ）または１．５回未満多い注入（大量のＢＥ）、追加のＶＷＦは必要とされない（全ＢＥ）。データセットには、最大の解析対象集団中の参加者からの有効性評価が利用可能な、被験薬により治療された、前向き研究で予測された消化管（ＧＩ）出血を除くＢＥが含まれた。
【０２４２】
副次的な評価基準：副次的な評価項目＃３
出血症状あたりのｒＶＷＦ：ｒＦＶＩＩＩ及び／またはｒＶＷＦの注入回数［タイムフレーム：ｒＶＷＦ：ｒＦＶＩＩＩまたはｒＶＷＦの最初の注入から１２か月間］
【０２４３】
出血症状（ＢＥ）の治療に必要とされる組換えフォンヴィレブランド因子：組換え第ＶＩＩＩ因子（ｒＶＷＦ：ｒＦＶＩＩＩ）及び／またはｒＶＷＦの実際の注入回数。ＢＥは、最初にｒＶＷＦ：ｒＦＶＩＩＩの注入により、続いて、利用可能な場合にはＦＶＩＩＩレベルに基づいて、ｒＦＶＩＩＩを伴ってまたは伴わずにｒＶＷＦにより治療することになっていた。ＦＶＩＩＩレベルが利用可能でない場合には、個々の参加者のＰＫデータを使用して、ｒＦＶＩＩＩ用量を決定した。データセットには、最大の解析対象集団中の参加者からの有効性評価が利用可能な、被験薬により治療された、前向き研究で予測されたＢＥが含まれた。
【０２４４】
副次的な評価基準：副次的な評価項目＃４
出血症状あたりのｒＶＷＦ：ｒＦＶＩＩＩ及び／またはｒＶＷＦの単位数［タイムフレーム：ｒＶＷＦ：ｒＦＶＩＩＩまたはｒＶＷＦの最初の注入から１２か月間］
【０２４５】
単位数は、出血症状（ＢＥ）の治療に必要とされる組換えフォンヴィレブランド因子：組換え第ＶＩＩＩ因子（ｒＶＷＦ：ｒＦＶＩＩＩ）及び／またはｒＶＷＦの実際の用量［ＩＵ／ｋｇ］として提供する。ＢＥは、最初にｒＶＷＦ：ｒＦＶＩＩＩの注入により、続いて、利用可能な場合にはＦＶＩＩＩレベルに基づいて、ｒＦＶＩＩＩを伴ってまたは伴わずにｒＶＷＦにより治療することになっていた。ＦＶＩＩＩレベルが利用可能でない場合には、個々の参加者のＰＫデータを使用して、ｒＦＶＩＩＩ用量を決定した。データセットには、最大の解析対象集団中の参加者からの有効性評価が利用可能な、ロット番号が分かっている被験薬により治療された、前向き研究で予測されたＢＥが含まれた。
【０２４６】
副次的な評価基準：副次的な評価項目＃５
ＦＶＩＩＩへの阻害性抗体を生じる参加者の割合（％）［タイムフレーム：ｒＶＷＦ：ｒＦＶＩＩＩまたはｒＶＷＦの最初の注入から１２か月間］
【０２４７】
第ＶＩＩＩ因子（ＦＶＩＩＩ）への中和抗体（阻害剤）の発生を、ベセスダアッセイのナイメゲン変法により評価した。陽性のＦＶＩＩＩ阻害剤試験は、ナイメゲン変法ベセスダアッセイによる０．４以上のベセスダ単位／ｍＬ（ＢＵ／ｍＬ）として定義し、これは、最初の試験から２〜４週後に得た独立した試料に第２の試験を行うことにより確認する。カテゴリーの表題は、そのカテゴリーについてデータを提供した参加者の数［Ｎ］を含む。
【０２４８】
副次的な評価基準：副次的な評価項目＃６
ＶＷＦへの阻害性抗体を生じる参加者の割合（％）［タイムフレーム：インフォームドコンセントの署名からｒＶＷＦ：ｒＦＶＩＩＩまたはｒＶＷＦの最初の注入後１２か月まで］
【０２４９】
フォンヴィレブランド因子リストセチン補因子（ＶＷＦ：ＲＣｏ）への中和抗体（阻害剤）、ＶＷＦコラーゲン結合（ＶＷＦ：ＣＢ）、及びＶＷＦ第ＶＩＩＩ因子結合（ＶＷＦ：ＦＶＩＩＩＢ）活性を、ベセスダアッセイのナイメゲン変法を使用して測定した。したがって、１ベセスダ単位（ＢＵ）は、アッセイにおける測定した活性を陰性対照試料の活性の５０％に減少させた阻害剤の量として定義する。アッセイは、低い（１〜２ＢＵ／ｍＬ）及び高い（約１０ＢＵ／ｍＬ）力価の阻害剤を用いた２人の３型ＶＷＤ患者由来のヒト血漿試料と、ヒトｒＶＷＦ（１００ＢＵ／ｍＬ超）で免疫した非ヒト霊長類由来の血漿試料とを使用して、正当性を確認した。カテゴリーの表題は、そのカテゴリーについてデータを提供した参加者の数［Ｎ］を含む。
【０２５０】
副次的な評価基準：副次的な評価項目＃７
ＶＷＦへの結合性抗体を生じる参加者の割合（％）［タイムフレーム：インフォームドコンセントの署名からｒＶＷＦ：ｒＦＶＩＩＩまたはｒＶＷＦの最初の注入後１２か月まで］
【０２５１】
全結合性抗ＶＷＦ抗体の存在を、ポリクローナル抗ヒト免疫グロブリン（Ｉｇ）抗体（ＩｇＧ、ＩｇＭ、及びＩｇＡ）を用いて、酵素結合免疫吸着アッセイ（ＥＬＩＳＡ）により決定した。カテゴリーの表題は、そのカテゴリーについてデータを提供した参加者の数［Ｎ］を含む。
【０２５２】
副次的な評価基準：副次的な評価項目＃８
ＣＨＯへの結合性抗体を生じる参加者の割合（％）［タイムフレーム：インフォームドコンセントの署名からｒＶＷＦ：ｒＦＶＩＩＩまたはｒＶＷＦの最初の注入後１２か月まで］
【０２５３】
全抗ＣＨＯ抗体の存在を、酵素結合免疫吸着アッセイ（ＥＬＩＳＡ）を使用して、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）タンパク質に対する全免疫グロブリン（Ｉｇ）抗体（ＩｇＧ、ＩｇＡ、ＩｇＭ）を測定することにより決定した。カテゴリーの表題は、そのカテゴリーについてデータを提供した参加者の数［Ｎ］を含む。
【０２５４】
副次的な評価基準：副次的な評価項目＃９
ｒフューリンへの結合性抗体を生じる参加者の割合（％）［タイムフレーム：インフォームドコンセントの署名からｒＶＷＦ：ｒＦＶＩＩＩまたはｒＶＷＦの最初の注入後１２か月まで］
【０２５５】
全抗ｒフューリン結合性抗体の存在を、酵素結合免疫吸着アッセイ（ＥＬＩＳＡ）を使用して、ｒフューリンタンパク質に対する全免疫グロブリン（Ｉｇ）抗体（ＩｇＧ、ＩｇＡ、ＩｇＭ）を測定することにより決定した。カテゴリーの表題は、そのカテゴリーについてデータを提供した参加者の数［Ｎ］を含む。
【０２５６】
副次的な評価基準：副次的な評価項目＃１０
マウス免疫グロブリンへの結合性抗体を生じる参加者の割合（％）［タイムフレーム：インフォームドコンセントの署名からｒＶＷＦ：ｒＦＶＩＩＩまたはｒＶＷＦの最初の注入後１２か月まで］
【０２５７】
全抗マウス（ＩｇＧ）結合性抗体の存在を、酵素結合免疫吸着アッセイ（ＥＬＩＳＡ）を使用して決定した。カテゴリーの表題は、そのカテゴリーについてデータを提供した参加者の数［Ｎ］を含む。
【０２５８】
副次的な評価基準：副次的な評価項目＃１１
血栓事象が発生した参加者の割合（％）［タイムフレーム：インフォームドコンセントの署名からｒＶＷＦ：ｒＦＶＩＩＩまたはｒＶＷＦの最初の注入後１２か月まで］
【０２５９】
副次的な評価基準：副次的な評価項目＃１２
臨床検査項目及びバイタルサインの臨床的に重大な変化を含む被験薬と関連性のある有害事象の数［タイムフレーム：ｒＶＷＦ：ｒＦＶＩＩＩまたはｒＶＷＦの最初の注入から１２か月間］
【０２６０】
被験薬（組換え第ＶＩＩＩ因子［ｒＦＶＩＩＩ］を伴うまたは伴わない組換えフォンヴィレブランド因子［ｒＶＷＦ］）と関連性のある有害事象（ＡＥ）を記載する。ＡＥとして記録される臨床的に重大な所見を伴う臨床検査項目（血液学及び臨床化学）及びバイタルサイン（理学的検査、ＥＣＧ）のみを含める。カテゴリーは、重症度−器官別大分類−基本語重篤度として示す：重篤な有害事象（ＳＡＥ）、重篤でない有害事象（ｎｓＡＥ）器官別大分類：心疾患（ＣＡＲＤ）；全般障害及び投与部位状態（ＧＥＮ）；臨床検査（ＩＮＶ）；神経系障害（ＮＥＲＶ）；皮膚及び皮下組織障害（ＳＫＮ）；血管障害（ＶＡＳ）。カテゴリーの表題は、そのカテゴリーのＡＥの数［Ｎ］を含む。
【０２６１】
副次的な評価基準：副次的な評価項目＃１３
臨床検査項目及びバイタルサインの臨床的に重大な変化を含む被験薬と関連性のある有害事象を有する参加者の数［タイムフレーム：ｒＶＷＦ：ｒＦＶＩＩＩまたはｒＶＷＦの最初の注入から１２か月間］
【０２６２】
被験薬（組換え第ＶＩＩＩ因子［ｒＦＶＩＩＩ］を伴うまたは伴わない組換えフォンヴィレブランド因子［ｒＶＷＦ］）と関連性のある有害事象（ＡＥ）を有する参加者の数を記載する。ＡＥとして記録される臨床的に重大な所見を伴う臨床検査項目（血液学及び臨床化学）及びバイタルサイン（理学的検査、ＥＣＧ）のみを含める。カテゴリーは、重症度−器官別大分類−基本語重篤度として示す：重篤な有害事象（ＳＡＥ）、重篤でない有害事象（ｎｓＡＥ）器官別大分類：心疾患（ＣＡＲＤ）；全般障害及び投与部位状態（ＧＥＮ）；臨床検査（ＩＮＶ）；神経系障害（ＮＥＲＶ）；皮膚及び皮下組織障害（ＳＫＮ）；血管障害（ＶＡＳ）。
【０２６３】
副次的な評価項目の尺度：副次的な評価項目＃１４
臨床検査項目及びバイタルサインの臨床的に重大な変化を含む被験薬と関連性のある注入による有害事象の数［タイムフレーム：ｒＶＷＦ：ｒＦＶＩＩＩまたはｒＶＷＦの最初の注入から１２か月間］
【０２６４】
被験薬（組換え第ＶＩＩＩ因子［ｒＦＶＩＩＩ］を伴うまたは伴わない組換えフォンヴィレブランド因子［ｒＶＷＦ］）と関連性のある有害事象（ＡＥ）を記載する。ＡＥとして記録される臨床的に重大な所見を伴う臨床検査項目（血液学及び臨床化学）及びバイタルサイン（理学的検査、ＥＣＧ）のみを含める。カテゴリーは、重症度−器官別大分類−基本語重篤度として示す：重篤な有害事象（ＳＡＥ）、重篤でない有害事象（ｎｓＡＥ）器官別大分類：心疾患（ＣＡＲＤ）；全般障害及び投与部位状態（ＧＥＮ）；臨床検査（ＩＮＶ）；神経系障害（ＮＥＲＶ）；皮膚及び皮下組織障害（ＳＫＮ）；血管障害（ＶＡＳ）。
【０２６５】
副次的な評価基準：副次的な評価項目＃１５
ＰＫ５０−ＶＷＦ：ＲＣｏの時間０から無限大時間の血漿濃度／時間曲線下面積（ＡＵＣ０−∞／用量）［タイムフレーム：注入前、続いて、注入後１５分、３０分、及び６０分、ならびに３時間、６時間、１２時間、２４時間、３０時間、４８時間、７２時間、及び９６時間でのＰＫ評価。注入及びウォッシュアウトの両方についてのＰＫ評価を含む、最初の被験薬注入後２８±３日間のＰＫ評価タイムフレーム］
【０２６６】
ＰＫ５０治療群（治療群１及び治療群２）中の対象に関する、３８．５ＩＵ／ｋｇの組換え第ＶＩＩＩ因子（ｒＦＶＩＩＩ）と一緒に投与した５０ＩＵ／ｋｇの組換えフォンヴィレブランド因子：フォンヴィレブランド因子リストセチン補因子（ＶＷＦ：ＲＣｏ  ｒＶＷＦ）（比１．３：１±０．２）［ｒＶＷＦ：ｒＦＶＩＩＩ］、または食塩水（プラセボ）と一緒に投与した５０ＩＵ／ｋｇのＶＷＦ：ＲＣｏ  ｒＶＷＦ［ｒＶＷＦ］を注入した後のフォンヴィレブランド因子リストセチン補因子（ＶＷＦ：ＲＣｏ）の時間０から無限大時間の血漿濃度曲線下面積（ＡＵＣ）。カテゴリーの表題は、そのカテゴリーについてデータを提供した参加者の数［Ｎ］を含む。
【０２６７】
副次的な評価基準：副次的な評価項目＃１６
ＰＫ５０−ＶＷＦ：ＲＣｏの時間０から９６時間までの血漿濃度／時間曲線下面積（ＡＵＣ０−９６時間／用量）［タイムフレーム：注入前、続いて、注入後１５分、３０分、及び６０分、ならびに３時間、６時間、１２時間、２４時間、３０時間、４８時間、７２時間、及び９６時間でのＰＫ評価。注入及びウォッシュアウトの両方についてのＰＫ評価を含む、最初の被験薬注入後２８±３日間のＰＫ評価タイムフレーム］
【０２６８】
ＰＫ５０治療群（治療群１及び治療群２）中の参加者に関する、３８．５ＩＵ／ｋｇの組換え第ＶＩＩＩ因子（ｒＦＶＩＩＩ）と一緒に投与した５０ＩＵ／ｋｇの組換えフォンヴィレブランド因子：フォンヴィレブランド因子リストセチン補因子（ＶＷＦ：ＲＣｏ  ｒＶＷＦ）（比１．３：１±０．２）［ｒＶＷＦ：ｒＦＶＩＩＩ］、または食塩水（プラセボ）と一緒に投与した５０ＩＵ／ｋｇのＶＷＦ：ＲＣｏ  ｒＶＷＦ［ｒＶＷＦ］を注入した後のフォンヴィレブランド因子リストセチン補因子（ＶＷＦ：ＲＣｏ）の時間０から９６時間の血漿濃度曲線下面積（ＡＵＣ）。カテゴリーの表題は、そのカテゴリーについてデータを提供した参加者の数［Ｎ］を含む。
【０２６９】
副次的な評価基準：副次的な評価項目＃１７
ＰＫ５０−ＶＷＦ：ＲＣｏの平均滞留時間［タイムフレーム：注入前、続いて、注入後１５分、３０分、及び６０分、ならびに３時間、６時間、１２時間、２４時間、３０時間、４８時間、７２時間、及び９６時間でのＰＫ評価。注入及びウォッシュアウトの両方についてのＰＫ評価を含む、最初の被験薬注入後２８±３日間のＰＫ評価タイムフレーム］
【０２７０】
ＰＫ５０治療群（治療群１及び治療群２）中の参加者に関する、３８．５ＩＵ／ｋｇの組換え第ＶＩＩＩ因子（ｒＦＶＩＩＩ）と一緒に投与した５０ＩＵ／ｋｇの組換えフォンヴィレブランド因子：フォンヴィレブランド因子リストセチン補因子（ＶＷＦ：ＲＣｏ  ｒＶＷＦ）（比１．３：１±０．２）［ｒＶＷＦ：ｒＦＶＩＩＩ］、または食塩水（プラセボ）と一緒に投与した５０ＩＵ／ｋｇのＶＷＦ：ＲＣｏ  ｒＶＷＦ［ｒＶＷＦ］を注入した後のフォンヴィレブランド因子リストセチン補因子（ＶＷＦ：ＲＣｏ）の平均滞留時間（ＭＲＴ）。カテゴリーの表題は、そのカテゴリーについてデータを提供した参加者の数［Ｎ］を含む。
【０２７１】
副次的な評価基準：副次的な評価項目＃１８
ＰＫ５０−ＶＷＦ：ＲＣｏのクリアランス［タイムフレーム：注入前、続いて、注入後１５分、３０分、及び６０分、ならびに３時間、６時間、１２時間、２４時間、３０時間、４８時間、７２時間、及び９６時間でのＰＫ評価。注入及びウォッシュアウトの両方についてのＰＫ評価を含む、最初の被験薬注入後２８±３日間のＰＫ評価タイムフレーム］
【０２７２】
ＰＫ５０治療群（治療群１及び治療群２）中の参加者に関する、３８．５ＩＵ／ｋｇの組換え第ＶＩＩＩ因子（ｒＦＶＩＩＩ）と一緒に投与した５０ＩＵ／ｋｇの組換えフォンヴィレブランド因子：フォンヴィレブランド因子リストセチン補因子（ＶＷＦ：ＲＣｏ  ｒＶＷＦ）（比１．３：１±０．２）［ｒＶＷＦ：ｒＦＶＩＩＩ］、または食塩水（プラセボ）と一緒に投与した５０ＩＵ／ｋｇのＶＷＦ：ＲＣｏ  ｒＶＷＦ［ｒＶＷＦ］を注入した後のフォンヴィレブランド因子リストセチン補因子（ＶＷＦ：ＲＣｏ）のクリアランス（ＣＬ）。カテゴリーの表題は、そのカテゴリーについてデータを提供した参加者の数［Ｎ］を含む。
【０２７３】
副次的な評価基準：副次的な評価項目＃１９
ＰＫ５０−ＶＷＦ：ＲＣｏの段階的回収率［タイムフレーム：注入前、続いて、注入後１５分、３０分、及び６０分、ならびに３時間、６時間、１２時間、２４時間、３０時間、４８時間、７２時間、及び９６時間でのＰＫ評価。注入及びウォッシュアウトの両方についてのＰＫ評価を含む、最初の被験薬注入後２８±３日間のＰＫ評価タイムフレーム］
【０２７４】
ＰＫ５０治療群（治療群１及び治療群２）中の参加者に関する、３８．５ＩＵ／ｋｇの組換え第ＶＩＩＩ因子（ｒＦＶＩＩＩ）と一緒に投与した５０ＩＵ／ｋｇの組換えフォンヴィレブランド因子：フォンヴィレブランド因子リストセチン補因子（ＶＷＦ：ＲＣｏ  ｒＶＷＦ）（比１．３：１±０．２）［ｒＶＷＦ：ｒＦＶＩＩＩ］、または食塩水（プラセボ）と一緒に投与した５０ＩＵ／ｋｇのＶＷＦ：ＲＣｏ  ｒＶＷＦ［ｒＶＷＦ］を注入した後のフォンヴィレブランド因子リストセチン補因子（ＶＷＦ：ＲＣｏ）の最大血漿濃度での段階的回収率（ＩＲ）。カテゴリーの表題は、そのカテゴリーについてデータを提供した参加者の数［Ｎ］を含む。
【０２７５】
副次的な評価基準：副次的な評価項目＃２０
ＰＫ５０−ＶＷＦ：Ｃｏの排出相半減期［タイムフレーム：注入前、続いて、注入後１５分、３０分、及び６０分、ならびに３時間、６時間、１２時間、２４時間、３０時間、４８時間、７２時間、及び９６時間でのＰＫ評価。注入及びウォッシュアウトの両方についてのＰＫ評価を含む、最初の被験薬注入後２８±３日間のＰＫ評価タイムフレーム］
【０２７６】
ＰＫ５０治療群（治療群１及び治療群２）中の参加者に関する、３８．５ＩＵ／ｋｇの組換え  ＦＶＩＩＩ（ｒＦＶＩＩＩ）と一緒に投与した５０ＩＵ／ｋｇの組換えフォンヴィレブランド因子：フォンヴィレブランド因子リストセチン補因子（ＶＷＦ：ＲＣｏ  ｒＶＷＦ）（比１．３：１±０．２）［ｒＶＷＦ：ｒＦＶＩＩＩ］、または食塩水（プラセボ）と一緒に投与した５０ＩＵ／ｋｇのＶＷＦ：ＲＣｏ  ｒＶＷＦ［ｒＶＷＦ］を注入した後のフォンヴィレブランド因子リストセチン補因子（ＶＷＦ：ＲＣｏ）の排出相半減期（Ｔ１／２）。カテゴリーの表題は、そのカテゴリーについてデータを提供した参加者の数［Ｎ］を含む。
【０２７７】
副次的な評価基準：副次的な評価項目＃２１
ＰＫ５０−ＶＷＦ：ＲＣｏの定常状態での分布容積［タイムフレーム：注入前、続いて、注入後１５分、３０分、及び６０分、ならびに３時間、６時間、１２時間、２４時間、３０時間、４８時間、７２時間、及び９６時間でのＰＫ評価。注入及びウォッシュアウトの両方についてのＰＫ評価を含む、最初の被験薬注入後２８±３日間のＰＫ評価タイムフレーム］
【０２７８】
ＰＫ５０治療群（治療群１及び治療群２）中の参加者に関する、３８．５ＩＵ／ｋｇの組換え第ＶＩＩＩ因子（ｒＦＶＩＩＩ）と一緒に投与した５０ＩＵ／ｋｇの組換えフォンヴィレブランド因子：フォンヴィレブランド因子リストセチン補因子（ＶＷＦ：ＲＣｏ  ｒＶＷＦ）（比１．３：１±０．２）［ｒＶＷＦ：ｒＦＶＩＩＩ］、または食塩水（プラセボ）と一緒に投与した５０ＩＵ／ｋｇのＶＷＦ：ＲＣｏ  ｒＶＷＦ［ｒＶＷＦ］を注入した後のフォンヴィレブランド因子リストセチン補因子（ＶＷＦ：ＲＣｏ）の定常状態での分布容積（Ｖｓｓ）。カテゴリーの表題は、そのカテゴリーについてデータを提供した参加者の数［Ｎ］を含む。
【０２７９】
副次的な評価基準：副次的な評価項目＃２２
ＰＫ５０−ＶＷＦ：Ａｇの時間０から無限大時間の血漿濃度／時間曲線下面積（ＡＵＣ０−∞／用量）［タイムフレーム：注入前、続いて、注入後１５分、３０分、及び６０分、ならびに３時間、６時間、１２時間、２４時間、３０時間、４８時間、７２時間、及び９６時間でのＰＫ評価。注入及びウォッシュアウトの両方についてのＰＫ評価を含む、最初の被験薬注入後２８±３日間のＰＫ評価タイムフレーム］
【０２８０】
ＰＫ５０治療群（治療群１及び治療群２）中の参加者に関する、３８．５ＩＵ／ｋｇの組換え第ＶＩＩＩ因子（ｒＦＶＩＩＩ）と一緒に投与した５０ＩＵ／ｋｇの組換えフォンヴィレブランド因子：フォンヴィレブランド因子リストセチン補因子（ＶＷＦ：ＲＣｏ  ｒＶＷＦ）（比１．３：１±０．２）［ｒＶＷＦ：ｒＦＶＩＩＩ］、または食塩水（プラセボ）と一緒に投与した５０ＩＵ／ｋｇのＶＷＦ：ＲＣｏ  ｒＶＷＦ［ｒＶＷＦ］を注入した後のフォンヴィレブランド因子抗原（ＶＷＦ：Ａｇ）の時間０から無限大時間の血漿濃度曲線下面積（ＡＵＣ）。カテゴリーの表題は、そのカテゴリーについてデータを提供した参加者の数［Ｎ］を含む。
【０２８１】
副次的な評価基準：副次的な評価項目＃２３
ＰＫ５０−ＶＷＦ：Ａｇの時間０から９６時間までの血漿濃度／時間曲線下面積（ＡＵＣ０−９６時間／用量）［タイムフレーム：注入前、続いて、注入後１５分、３０分、及び６０分、ならびに３時間、６時間、１２時間、２４時間、３０時間、４８時間、７２時間、及び９６時間でのＰＫ評価。注入及びウォッシュアウトの両方についてのＰＫ評価を含む、最初の被験薬注入後２８±３日間のＰＫ評価タイムフレーム］
【０２８２】
ＰＫ５０治療群（治療群１及び治療群２）中の参加者に関する、３８．５ＩＵ／ｋｇの組換え第ＶＩＩＩ因子（ｒＦＶＩＩＩ）と一緒に投与した５０ＩＵ／ｋｇの組換えフォンヴィレブランド因子：フォンヴィレブランド因子リストセチン補因子（ＶＷＦ：ＲＣｏ  ｒＶＷＦ）（比１．３：１±０．２）［ｒＶＷＦ：ｒＦＶＩＩＩ］、または食塩水（プラセボ）と一緒に投与した５０ＩＵ／ｋｇのＶＷＦ：ＲＣｏ  ｒＶＷＦ［ｒＶＷＦ］を注入した後のフォンヴィレブランド因子抗原（ＶＷＦ：Ａｇ）の時間０から９６時間の血漿濃度曲線下面積（ＡＵＣ）。カテゴリーの表題は、そのカテゴリーについてデータを提供した参加者の数［Ｎ］を含む。
【０２８３】
副次的な評価基準：副次的な評価項目＃２４
ＰＫ５０−ＶＷＦ：Ａｇの平均滞留時間［タイムフレーム：注入前、続いて、注入後１５分、３０分、及び６０分、ならびに３時間、６時間、１２時間、２４時間、３０時間、４８時間、７２時間、及び９６時間でのＰＫ評価。注入及びウォッシュアウトの両方についてのＰＫ評価を含む、最初の被験薬注入後２８±３日間のＰＫ評価タイムフレーム］
【０２８４】
ＰＫ５０治療群（治療群１及び治療群２）中の参加者に関する、３８．５ＩＵ／ｋｇの組換え第ＶＩＩＩ因子（ｒＦＶＩＩＩ）と一緒に投与した５０ＩＵ／ｋｇの組換えフォンヴィレブランド因子：フォンヴィレブランド因子リストセチン補因子（ＶＷＦ：ＲＣｏ  ｒＶＷＦ）（比１．３：１±０．２）［ｒＶＷＦ：ｒＦＶＩＩＩ］、または食塩水（プラセボ）と一緒に投与した５０ＩＵ／ｋｇのＶＷＦ：ＲＣｏ  ｒＶＷＦ［ｒＶＷＦ］を注入した後のフォンヴィレブランド因子抗原（ＶＷＦ：Ａｇ）の平均滞留時間（ＭＲＴ）。カテゴリーの表題は、そのカテゴリーについてデータを提供した参加者の数［Ｎ］を含む。
【０２８５】
副次的な評価基準：副次的な評価項目＃２５
ＰＫ５０−ＶＷＦ：Ａｇのクリアランス［タイムフレーム：注入前、続いて、注入後１５分、３０分、及び６０分、ならびに３時間、６時間、１２時間、２４時間、３０時間、４８時間、７２時間、及び９６時間でのＰＫ評価。注入及びウォッシュアウトの両方についてのＰＫ評価を含む、最初の被験薬注入後２８±３日間のＰＫ評価タイムフレーム］
【０２８６】
ＰＫ５０治療群（治療群１及び治療群２）中の参加者に関する、３８．５ＩＵ／ｋｇの組換え第ＶＩＩＩ因子（ｒＦＶＩＩＩ）と一緒に投与した５０ＩＵ／ｋｇの組換えフォンヴィレブランド因子：フォンヴィレブランド因子リストセチン補因子（ＶＷＦ：ＲＣｏ  ｒＶＷＦ）（比１．３：１±０．２）［ｒＶＷＦ：ｒＦＶＩＩＩ］、または食塩水（プラセボ）と一緒に投与した５０ＩＵ／ｋｇのＶＷＦ：ＲＣｏ  ｒＶＷＦ［ｒＶＷＦ］を注入した後のフォンヴィレブランド因子抗原（ＶＷＦ：Ａｇ）のクリアランス（ＣＬ）。カテゴリーの表題は、そのカテゴリーについてデータを提供した参加者の数［Ｎ］を含む。
【０２８７】
副次的な評価基準：副次的な評価項目＃２６
ＰＫ５０−ＶＷＦ：Ａｇの段階的回収率［タイムフレーム：注入前、続いて、注入後１５分、３０分、及び６０分、ならびに３時間、６時間、１２時間、２４時間、３０時間、４８時間、７２時間、及び９６時間でのＰＫ評価。注入及びウォッシュアウトの両方についてのＰＫ評価を含む、最初の被験薬注入後２８±３日間のＰＫ評価タイムフレーム］
【０２８８】
ＰＫ５０治療群（治療群１及び治療群２）中の参加者に関する、３８．５ＩＵ／ｋｇの組換え第ＶＩＩＩ因子（ｒＦＶＩＩＩ）と一緒に投与した５０ＩＵ／ｋｇの組換えフォンヴィレブランド因子：フォンヴィレブランド因子リストセチン補因子（ＶＷＦ：ＲＣｏ  ｒＶＷＦ）（比１．３：１±０．２）［ｒＶＷＦ：ｒＦＶＩＩＩ］、または食塩水（プラセボ）と一緒に投与した５０ＩＵ／ｋｇのＶＷＦ：ＲＣｏ  ｒＶＷＦ［ｒＶＷＦ］を注入した後のフォンヴィレブランド因子抗原（ＶＷＦ：Ａｇ）の最大血漿濃度での段階的回収率（ＩＲ）。カテゴリーの表題は、そのカテゴリーについてデータを提供した参加者の数［Ｎ］を含む。
【０２８９】
副次的な評価基準：副次的な評価項目＃２７
ＰＫ５０−ＶＷＦ：Ａｇの排出相半減期［タイムフレーム：注入前、続いて、注入後１５分、３０分、及び６０分、ならびに３時間、６時間、１２時間、２４時間、３０時間、４８時間、７２時間、及び９６時間でのＰＫ評価。注入及びウォッシュアウトの両方についてのＰＫ評価を含む、最初の被験薬注入後２８±３日間のＰＫ評価タイムフレーム］
【０２９０】
ＰＫ５０治療群（治療群１及び治療群２）中の参加者に関する、３８．５ＩＵ／ｋｇの組換え  ＦＶＩＩＩ（ｒＦＶＩＩＩ）と一緒に投与した５０ＩＵ／ｋｇの組換えフォンヴィレブランド因子：フォンヴィレブランド因子リストセチン補因子（ＶＷＦ：ＲＣｏ  ｒＶＷＦ）（比１．３：１±０．２）［ｒＶＷＦ：ｒＦＶＩＩＩ］、または食塩水（プラセボ）と一緒に投与した５０ＩＵ／ｋｇのＶＷＦ：ＲＣｏ  ｒＶＷＦ［ｒＶＷＦ］を注入した後のフォンヴィレブランド因子抗原（ＶＷＦ：Ａｇ）の排出相半減期（Ｔ１／２）。カテゴリーの表題は、そのカテゴリーについてデータを提供した参加者の数［Ｎ］を含む。
【０２９１】
副次的な評価基準：副次的な評価項目＃２８
ＰＫ５０−ＶＷＦ：Ａｇ定常状態での分布容積［タイムフレーム：注入前、続いて、注入後１５分、３０分、及び６０分、ならびに３時間、６時間、１２時間、２４時間、３０時間、４８時間、７２時間、及び９６時間でのＰＫ評価。注入及びウォッシュアウトの両方についてのＰＫ評価を含む、最初の被験薬注入後２８±３日間のＰＫ評価タイムフレーム］
【０２９２】
ＰＫ５０治療群（治療群１及び治療群２）中の参加者に関する、３８．５ＩＵ／ｋｇの組換え第ＶＩＩＩ因子（ｒＦＶＩＩＩ）と一緒に投与した５０ＩＵ／ｋｇの組換えフォンヴィレブランド因子：フォンヴィレブランド因子リストセチン補因子（ＶＷＦ：ＲＣｏ  ｒＶＷＦ）（比１．３：１±０．２）［ｒＶＷＦ：ｒＦＶＩＩＩ］、または食塩水（プラセボ）と一緒に投与した５０ＩＵ／ｋｇのＶＷＦ：ＲＣｏ  ｒＶＷＦ［ｒＶＷＦ］を注入した後のフォンヴィレブランド因子抗原（ＶＷＦ：Ａｇ）の定常状態での分布容積（Ｖｓｓ）。カテゴリーの表題は、そのカテゴリーについてデータを提供した参加者の数［Ｎ］を含む。
【０２９３】
副次的な評価基準：副次的な評価項目＃２９
ＰＫ５０−ＶＷＦ：ＣＢの時間０から無限大時間の血漿濃度／時間曲線下面積（ＡＵＣ０−∞／用量）［タイムフレーム：注入前、続いて、注入後１５分、３０分、及び６０分、ならびに３時間、６時間、１２時間、２４時間、３０時間、４８時間、７２時間、及び９６時間でのＰＫ評価。注入及びウォッシュアウトの両方についてのＰＫ評価を含む、最初の被験薬注入後２８±３日間のＰＫ評価タイムフレーム］
【０２９４】
ＰＫ５０治療群（治療群１及び治療群２）中の参加者に関する、３８．５ＩＵ／ｋｇの組換え第ＶＩＩＩ因子（ｒＦＶＩＩＩ）と一緒に投与した５０ＩＵ／ｋｇの組換えフォンヴィレブランド因子：フォンヴィレブランド因子リストセチン補因子（ＶＷＦ：ＲＣｏ  ｒＶＷＦ）（比１．３：１±０．２）［ｒＶＷＦ：ｒＦＶＩＩＩ］、または食塩水（プラセボ）と一緒に投与した５０ＩＵ／ｋｇのＶＷＦ：ＲＣｏ  ｒＶＷＦ［ｒＶＷＦ］を注入した後のフォンヴィレブランド因子コラーゲン結合（ＶＷＦ：ＣＢ）の時間０から無限大時間までの血漿濃度曲線下面積（ＡＵＣ）。カテゴリーの表題は、そのカテゴリーについてデータを提供した参加者の数［Ｎ］を含む。
【０２９５】
副次的な評価基準：副次的な評価項目＃３０
ＰＫ５０−ＶＷＦ：ＣＢの時間０から９６時間までの血漿濃度／時間曲線下面積（ＡＵＣ０−９６時間／用量）［タイムフレーム：注入前、続いて、注入後１５分、３０分、及び６０分、ならびに３時間、６時間、１２時間、２４時間、３０時間、４８時間、７２時間、及び９６時間でのＰＫ評価。注入及びウォッシュアウトの両方についてのＰＫ評価を含む、最初の被験薬注入後２８±３日間のＰＫ評価タイムフレーム］
【０２９６】
ＰＫ５０治療群（治療群１及び治療群２）中の参加者に関する、３８．５ＩＵ／ｋｇの組換え第ＶＩＩＩ因子（ｒＦＶＩＩＩ）と一緒に投与した５０ＩＵ／ｋｇの組換えフォンヴィレブランド因子：フォンヴィレブランド因子リストセチン補因子（ＶＷＦ：ＲＣｏ  ｒＶＷＦ）（比１．３：１±０．２）［ｒＶＷＦ：ｒＦＶＩＩＩ］、または食塩水（プラセボ）と一緒に投与した５０ＩＵ／ｋｇのＶＷＦ：ＲＣｏ  ｒＶＷＦ［ｒＶＷＦ］を注入した後のフォンヴィレブランド因子コラーゲン結合（ＶＷＦ：ＣＢ）の時間０から９６時間までの血漿濃度曲線下面積（ＡＵＣ）。カテゴリーの表題は、そのカテゴリーについてデータを提供した参加者の数［Ｎ］を含む。
【０２９７】
副次的な評価基準：副次的な評価項目＃３１
ＰＫ５０−ＶＷＦ：ＣＢの平均滞留時間［タイムフレーム：注入前、続いて、注入後１５分、３０分、及び６０分、ならびに３時間、６時間、１２時間、２４時間、３０時間、４８時間、７２時間、及び９６時間でのＰＫ評価。注入及びウォッシュアウトの両方についてのＰＫ評価を含む、最初の被験薬注入後２８±３日間のＰＫ評価タイムフレーム］
【０２９８】
ＰＫ５０治療群（治療群１及び治療群２）中の参加者に関する、３８．５ＩＵ／ｋｇの組換え第ＶＩＩＩ因子（ｒＦＶＩＩＩ）と一緒に投与した５０ＩＵ／ｋｇの組換えフォンヴィレブランド因子：フォンヴィレブランド因子リストセチン補因子（ＶＷＦ：ＲＣｏ  ｒＶＷＦ）（比１．３：１±０．２）［ｒＶＷＦ：ｒＦＶＩＩＩ］、または食塩水（プラセボ）と一緒に投与した５０ＩＵ／ｋｇのＶＷＦ：ＲＣｏ  ｒＶＷＦ［ｒＶＷＦ］を注入した後のフォンヴィレブランド因子コラーゲン結合（ＶＷＦ：ＣＢ）平均滞留時間（ＭＲＴ）。カテゴリーの表題は、そのカテゴリーについてデータを提供した参加者の数［Ｎ］を含む。
【０２９９】
副次的な評価基準：副次的な評価項目＃３２
ＰＫ５０−ＶＷＦ：ＣＢのクリアランス［タイムフレーム：注入前、続いて、注入後１５分、３０分、及び６０分、ならびに３時間、６時間、１２時間、２４時間、３０時間、４８時間、７２時間、及び９６時間でのＰＫ評価。注入及びウォッシュアウトの両方についてのＰＫ評価を含む、最初の被験薬注入後２８±３日間のＰＫ評価タイムフレーム］
【０３００】
ＰＫ５０治療群（治療群１及び治療群２）中の参加者に関する、３８．５ＩＵ／ｋｇの組換え第ＶＩＩＩ因子（ｒＦＶＩＩＩ）と一緒に投与した５０ＩＵ／ｋｇの組換えフォンヴィレブランド因子：フォンヴィレブランド因子リストセチン補因子（ＶＷＦ：ＲＣｏ  ｒＶＷＦ）（比１．３：１±０．２）［ｒＶＷＦ：ｒＦＶＩＩＩ］、または食塩水（プラセボ）と一緒に投与した５０ＩＵ／ｋｇのＶＷＦ：ＲＣｏ  ｒＶＷＦ［ｒＶＷＦ］を注入した後のフォンヴィレブランド因子コラーゲン結合（ＶＷＦ：ＣＢ）のクリアランス（ＣＬ）。カテゴリーの表題は、そのカテゴリーについてデータを提供した参加者の数［Ｎ］を含む。
【０３０１】
副次的な評価基準：副次的な評価項目＃３３
ＰＫ５０−ＶＷＦ：ＣＢの段階的回収率［タイムフレーム：注入前、続いて、注入後１５分、３０分、及び６０分、ならびに３時間、６時間、１２時間、２４時間、３０時間、４８時間、７２時間、及び９６時間でのＰＫ評価。注入及びウォッシュアウトの両方についてのＰＫ評価を含む、最初の被験薬注入後２８±３日間のＰＫ評価タイムフレーム］
【０３０２】
ＰＫ５０治療群（治療群１及び治療群２）中の参加者に関する、３８．５ＩＵ／ｋｇの組換え第ＶＩＩＩ因子（ｒＦＶＩＩＩ）と一緒に投与した５０ＩＵ／ｋｇの組換えフォンヴィレブランド因子：フォンヴィレブランド因子リストセチン補因子（ＶＷＦ：ＲＣｏ  ｒＶＷＦ）（比１．３：１±０．２）［ｒＶＷＦ：ｒＦＶＩＩＩ］、または食塩水（プラセボ）と一緒に投与した５０ＩＵ／ｋｇのＶＷＦ：ＲＣｏ  ｒＶＷＦ［ｒＶＷＦ］を注入した後のフォンヴィレブランド因子コラーゲン結合（ＶＷＦ：ＣＢ）の最大血漿濃度での段階的回収率（ＩＲ）。カテゴリーの表題は、そのカテゴリーについてデータを提供した参加者の数［Ｎ］を含む。
【０３０３】
副次的な評価基準：副次的な評価項目＃３４
ＰＫ５０−ＶＷＦ：ＣＢの排出相半減期［タイムフレーム：注入前、続いて、注入後１５分、３０分、及び６０分、ならびに３時間、６時間、１２時間、２４時間、３０時間、４８時間、７２時間、及び９６時間でのＰＫ評価。注入及びウォッシュアウトの両方についてのＰＫ評価を含む、最初の被験薬注入後２８±３日間のＰＫ評価タイムフレーム］
【０３０４】
ＰＫ５０治療群（治療群１及び治療群２）中の参加者に関する、３８．５ＩＵ／ｋｇの組換え  ＦＶＩＩＩ（ｒＦＶＩＩＩ）と一緒に投与した５０ＩＵ／ｋｇの組換えフォンヴィレブランド因子：フォンヴィレブランド因子リストセチン補因子（ＶＷＦ：ＲＣｏ  ｒＶＷＦ）（比１．３：１±０．２）［ｒＶＷＦ：ｒＦＶＩＩＩ］、または食塩水（プラセボ）と一緒に投与した５０ＩＵ／ｋｇのＶＷＦ：ＲＣｏ  ｒＶＷＦ［ｒＶＷＦ］を注入した後のフォンヴィレブランド因子コラーゲン結合（ＶＷＦ：ＣＢ）の排出相半減期（Ｔ１／２）。カテゴリーの表題は、そのカテゴリーについてデータを提供した参加者の数［Ｎ］を含む。
【０３０５】
副次的な評価基準：副次的な評価項目＃３５
ＰＫ５０−ＶＷＦ：ＣＢの定常状態での分布容積［タイムフレーム：注入前、続いて、注入後１５分、３０分、及び６０分、ならびに３時間、６時間、１２時間、２４時間、３０時間、４８時間、７２時間、及び９６時間でのＰＫ評価。注入及びウォッシュアウトの両方についてのＰＫ評価を含む、最初の被験薬注入後２８±３日間のＰＫ評価タイムフレーム］
【０３０６】
ＰＫ５０治療群（治療群１及び治療群２）中の参加者に関する、３８．５ＩＵ／ｋｇの組換え第ＶＩＩＩ因子（ｒＦＶＩＩＩ）と一緒に投与した５０ＩＵ／ｋｇの組換えフォンヴィレブランド因子：フォンヴィレブランド因子リストセチン補因子（ＶＷＦ：ＲＣｏ  ｒＶＷＦ）（比１．３：１±０．２）［ｒＶＷＦ：ｒＦＶＩＩＩ］、または食塩水（プラセボ）と一緒に投与した５０ＩＵ／ｋｇのＶＷＦ：ＲＣｏ  ｒＶＷＦ［ｒＶＷＦ］を注入した後のフォンヴィレブランド因子コラーゲン結合（ＶＷＦ：ＣＢ）の定常状態での分布容積（Ｖｓｓ）。カテゴリーの表題は、そのカテゴリーについてデータを提供した参加者の数［Ｎ］を含む。
【０３０７】
副次的な評価基準：副次的な評価項目＃３６
ＰＫ５０−ＦＶＩＩＩ：Ｃの時間０から無限大時間の血漿濃度／時間曲線下面積（ＡＵＣ０−∞／用量）［タイムフレーム：注入前、続いて、注入後１５分、３０分、及び６０分、ならびに３時間、６時間、１２時間、２４時間、３０時間、４８時間、７２時間、及び９６時間でのＰＫ評価。注入及びウォッシュアウトの両方についてのＰＫ評価を含む、最初の被験薬注入後２８±３日間のＰＫ評価タイムフレーム］
【０３０８】
ＰＫ５０治療群（治療群１及び治療群２）中の参加者に関する、３８．５ＩＵ／ｋｇの組換え第ＶＩＩＩ因子（ｒＦＶＩＩＩ）と一緒に投与した５０ＩＵ／ｋｇの組換えフォンヴィレブランド因子：フォンヴィレブランド因子リストセチン補因子（ＶＷＦ：ＲＣｏ  ｒＶＷＦ）（比１．３：１±０．２）［ｒＶＷＦ：ｒＦＶＩＩＩ］、または食塩水（プラセボ）と一緒に投与した５０ＩＵ／ｋｇのＶＷＦ：ＲＣｏ  ｒＶＷＦ［ｒＶＷＦ］を注入した後の第ＶＩＩＩ因子活性（ＦＶＩＩＩ：Ｃ）の時間０から無限大時間の血漿濃度曲線下面積（ＡＵＣ）。カテゴリーの表題は、そのカテゴリーについてデータを提供した参加者の数［Ｎ］を含む。
【０３０９】
副次的な評価基準：副次的な評価項目＃３７
ＰＫ５０−ＦＶＩＩＩ：Ｃの時間０から９６時間までの血漿濃度／時間曲線下面積（ＡＵＣ０−９６時間／用量）［タイムフレーム：注入前、続いて、注入後１５分、３０分、及び６０分、ならびに３時間、６時間、１２時間、２４時間、３０時間、４８時間、７２時間、及び９６時間でのＰＫ評価。注入及びウォッシュアウトの両方についてのＰＫ評価を含む、最初の被験薬注入後２８±３日間のＰＫ評価タイムフレーム］
【０３１０】
ＰＫ５０治療群（治療群１及び治療群２）中の参加者に関する、３８．５ＩＵ／ｋｇの組換え第ＶＩＩＩ因子（ｒＦＶＩＩＩ）と一緒に投与した５０ＩＵ／ｋｇの組換えフォンヴィレブランド因子：フォンヴィレブランド因子リストセチン補因子（ＶＷＦ：ＲＣｏ  ｒＶＷＦ）（比１．３：１±０．２）［ｒＶＷＦ：ｒＦＶＩＩＩ］、または食塩水（プラセボ）と一緒に投与した５０ＩＵ／ｋｇのＶＷＦ：ＲＣｏ  ｒＶＷＦ［ｒＶＷＦ］を注入した後の第ＶＩＩＩ因子活性（ＦＶＩＩＩ：Ｃ）の時間０から９６時間の血漿濃度曲線下面積（ＡＵＣ）。カテゴリーの表題は、そのカテゴリーについてデータを提供した参加者の数［Ｎ］を含む。
【０３１１】
副次的な評価基準：副次的な評価項目＃３８
ＰＫ５０−ＦＶＩＩＩ：Ｃの平均滞留時間［タイムフレーム：注入前、続いて、注入後１５分、３０分、及び６０分、ならびに３時間、６時間、１２時間、２４時間、３０時間、４８時間、７２時間、及び９６時間でのＰＫ評価。注入及びウォッシュアウトの両方についてのＰＫ評価を含む、最初の被験薬注入後２８±３日間のＰＫ評価タイムフレーム］
【０３１２】
ＰＫ５０治療群（治療群１及び治療群２）中の参加者に関する、３８．５ＩＵ／ｋｇの組換え第ＶＩＩＩ因子（ｒＦＶＩＩＩ）と一緒に投与した５０ＩＵ／ｋｇの組換えフォンヴィレブランド因子：フォンヴィレブランド因子リストセチン補因子（ＶＷＦ：ＲＣｏ  ｒＶＷＦ）（比１．３：１±０．２）［ｒＶＷＦ：ｒＦＶＩＩＩ］を注入した後の第ＶＩＩＩ因子活性（ＦＶＩＩＩ：Ｃ）の平均滞留時間（ＭＲＴ）。
【０３１３】
副次的な評価基準：副次的な評価項目＃３９
ＰＫ５０−ＦＶＩＩＩ：Ｃのクリアランス［タイムフレーム：注入前、続いて、注入後１５分、３０分、及び６０分、ならびに３時間、６時間、１２時間、２４時間、３０時間、４８時間、７２時間、及び９６時間でのＰＫ評価。注入及びウォッシュアウトの両方についてのＰＫ評価を含む、最初の被験薬注入後２８±３日間のＰＫ評価タイムフレーム］
【０３１４】
ＰＫ５０治療群（治療群１及び治療群２）中の参加者に関する、３８．５ＩＵ／ｋｇの組換え第ＶＩＩＩ因子（ｒＦＶＩＩＩ）と一緒に投与した５０ＩＵ／ｋｇの組換えフォンヴィレブランド因子：フォンヴィレブランド因子リストセチン補因子（ＶＷＦ：ＲＣｏ  ｒＶＷＦ）（比１．３：１±０．２）［ｒＶＷＦ：ｒＦＶＩＩＩ］を注入した後の第ＶＩＩＩ因子活性（ＦＶＩＩＩ：Ｃ）のクリアランス（ＣＬ）。
【０３１５】
副次的な評価基準：副次的な評価項目＃４０
ＰＫ５０−ＦＶＩＩＩ：Ｃの段階的回収率［タイムフレーム：注入前、続いて、注入後１５分、３０分、及び６０分、ならびに３時間、６時間、１２時間、２４時間、３０時間、４８時間、７２時間、及び９６時間でのＰＫ評価。注入及びウォッシュアウトの両方についてのＰＫ評価を含む、最初の被験薬注入後２８±３日間のＰＫ評価タイムフレーム］
【０３１６】
ＰＫ５０治療群（治療群１及び治療群２）中の参加者に関する、３８．５ＩＵ／ｋｇの組換え第ＶＩＩＩ因子（ｒＦＶＩＩＩ）と一緒に投与した５０ＩＵ／ｋｇの組換えフォンヴィレブランド因子：フォンヴィレブランド因子リストセチン補因子（ＶＷＦ：ＲＣｏ  ｒＶＷＦ）（比１．３：１±０．２）［ｒＶＷＦ：ｒＦＶＩＩＩ］を注入した後の第ＶＩＩＩ因子活性（ＦＶＩＩＩ：Ｃ）の最大血漿濃度での段階的回収率（ＩＲ）。
【０３１７】
副次的な評価基準：副次的な評価項目＃４１
ＰＫ５０−ＦＶＩＩＩ：Ｃの排出相半減期［タイムフレーム：注入前、続いて、注入後１５分、３０分、及び６０分、ならびに３時間、６時間、１２時間、２４時間、３０時間、４８時間、７２時間、及び９６時間でのＰＫ評価。注入及びウォッシュアウトの両方についてのＰＫ評価を含む、最初の被験薬注入後２８±３日間のＰＫ評価タイムフレーム］
【０３１８】
ＰＫ５０治療群（治療群１及び治療群２）中の参加者に関する、３８．５ＩＵ／ｋｇの組換えＦＶＩＩＩ（ｒＦＶＩＩＩ）と一緒に投与した５０ＩＵ／ｋｇの組換えフォンヴィレブランド因子：フォンヴィレブランド因子リストセチン補因子（ＶＷＦ：ＲＣｏ  ｒＶＷＦ）（比１．３：１±０．２）［ｒＶＷＦ：ｒＦＶＩＩＩ］を注入した後の第ＶＩＩＩ因子活性（ＦＶＩＩＩ：Ｃ）の排出相半減期（Ｔ１／２）。
【０３１９】
副次的な評価基準：副次的な評価項目＃４２
ＰＫ５０−ＦＶＩＩＩ：Ｃの定常状態での分布容積［タイムフレーム：注入前、続いて、注入後１５分、３０分、及び６０分、ならびに３時間、６時間、１２時間、２４時間、３０時間、４８時間、７２時間、及び９６時間でのＰＫ評価。注入及びウォッシュアウトの両方についてのＰＫ評価を含む、最初の被験薬注入後２８±３日間のＰＫ評価タイムフレーム］
【０３２０】
ＰＫ５０治療群（治療群１及び治療群２）中の参加者に関する、３８．５ＩＵ／ｋｇの組換え第ＶＩＩＩ因子（ｒＦＶＩＩＩ）と一緒に投与した５０ＩＵ／ｋｇの組換えフォンヴィレブランド因子：フォンヴィレブランド因子リストセチン補因子（ＶＷＦ：ＲＣｏ  ｒＶＷＦ）（比１．３：１±０．２）［ｒＶＷＦ：ｒＦＶＩＩＩ］を注入した後の第ＶＩＩＩ因子活性（ＦＶＩＩＩ：Ｃ）の定常状態での分布容積（Ｖｓｓ）。
【０３２１】
副次的な評価基準：副次的な評価項目＃４３
ＰＫ８０−ＶＷＦ：ＲＣｏの時間０から無限大時間の血漿濃度／時間曲線下面積（ＡＵＣ０−∞／用量）［タイムフレーム：注入前、続いて、注入後１５分、３０分、及び６０分、ならびに３時間、６時間、１２時間、２４時間、３０時間、４８時間、７２時間、及び９６時間でのＰＫ評価。注入及びウォッシュアウトの両方についてのＰＫ評価を含む、最初の被験薬注入後２８±３日間のＰＫ評価タイムフレーム］
【０３２２】
ＰＫ８０治療群中の参加者（ＰＫ８０データのみの治療群３からの参加者）に関する、８０ＩＵ／ｋｇの組換えフォンヴィレブランド因子：フォンヴィレブランド因子リストセチン補因子（ＶＷＦ：ＲＣｏ  ｒＶＷＦ）［ｒＶＷＦ］を注入した後のフォンヴィレブランド因子リストセチン補因子（ＶＷＦ：ＲＣｏ）の時間０から無限大時間の血漿濃度曲線下面積（ＡＵＣ）。８０ＩＵ／ｋｇのｒＷＶＦの最初の注入時に実施したＰＫ評価［ＰＫ１］、及び参加者が自身の被験薬の最初の注入から少なくとも６か月間出血症状に対してオンデマンドで治療を受けた後の８０ＩＵ／ｋｇのｒＶＷＦの２回目の注入［ＰＫ２］。カテゴリーの表題は、そのカテゴリーについてデータを提供した参加者の数［Ｎ］を含む。
【０３２３】
副次的な評価基準：副次的な評価項目＃４４
ＰＫ８０−ＶＷＦ：ＲＣｏの時間０から９６時間までの血漿濃度／時間曲線下面積（ＡＵＣ０−９６時間／用量）［タイムフレーム：注入前、続いて、注入後１５分、３０分、及び６０分、ならびに３時間、６時間、１２時間、２４時間、３０時間、４８時間、７２時間、及び９６時間でのＰＫ評価。注入及びウォッシュアウトの両方についてのＰＫ評価を含む、最初の被験薬注入後２８±３日間のＰＫ評価タイムフレーム］
【０３２４】
ＰＫ８０治療群中の参加者（ＰＫ８０データのみの治療群３からの参加者）に関する、８０ＩＵ／ｋｇの組換えフォンヴィレブランド因子：フォンヴィレブランド因子リストセチン補因子（ＶＷＦ：ＲＣｏ  ｒＶＷＦ）［ｒＶＷＦ］を注入した後のフォンヴィレブランド因子リストセチン補因子（ＶＷＦ：ＲＣｏ）の時間０から９６時間までの血漿濃度曲線下面積（ＡＵＣ）。８０ＩＵ／ｋｇのｒＷＶＦの最初の注入時に実施したＰＫ評価［ＰＫ１］、及び参加者が自身の被験薬の最初の注入から少なくとも６か月間出血症状に対してオンデマンドで治療を受けた後の８０ＩＵ／ｋｇのｒＶＷＦの２回目の注入［ＰＫ２］。カテゴリーの表題は、そのカテゴリーについてデータを提供した参加者の数［Ｎ］を含む。
【０３２５】
副次的な評価基準：副次的な評価項目＃４５
ＰＫ８０−ＶＷＦ：ＲＣｏの平均滞留時間［タイムフレーム：注入前、続いて、注入後１５分、３０分、及び６０分、ならびに３時間、６時間、１２時間、２４時間、３０時間、４８時間、７２時間、及び９６時間でのＰＫ評価。注入及びウォッシュアウトの両方についてのＰＫ評価を含む、最初の被験薬注入後２８±３日間のＰＫ評価タイムフレーム］
【０３２６】
ＰＫ８０治療群中の参加者（ＰＫ８０データのみの治療群３からの参加者）に関する、８０ＩＵ／ｋｇの組換えフォンヴィレブランド因子：フォンヴィレブランド因子リストセチン補因子（ＶＷＦ：ＲＣｏ  ｒＶＷＦ）［ｒＶＷＦ］を注入した後のフォンヴィレブランド因子リストセチン補因子（ＶＷＦ：ＲＣｏ）の平均滞留時間（ＭＲＴ）。８０ＩＵ／ｋｇのｒＷＶＦの最初の注入時に実施したＰＫ評価［ＰＫ１］、及び参加者が自身の被験薬の最初の注入から少なくとも６か月間出血症状に対してオンデマンドで治療を受けた後の８０ＩＵ／ｋｇのｒＶＷＦの２回目の注入［ＰＫ２］。カテゴリーの表題は、そのカテゴリーについてデータを提供した参加者の数［Ｎ］を含む。
【０３２７】
副次的な評価基準：副次的な評価項目＃４６
ＰＫ８０−ＶＷＦ：ＲＣｏのクリアランス［タイムフレーム：注入前、続いて、注入後１５分、３０分、及び６０分、ならびに３時間、６時間、１２時間、２４時間、３０時間、４８時間、７２時間、及び９６時間でのＰＫ評価。注入及びウォッシュアウトの両方についてのＰＫ評価を含む、最初の被験薬注入後２８±３日間のＰＫ評価タイムフレーム］
【０３２８】
ＰＫ８０治療群中の参加者（ＰＫ８０データのみの治療群３からの参加者）に関する、８０ＩＵ／ｋｇの組換えフォンヴィレブランド因子：フォンヴィレブランド因子リストセチン補因子（ＶＷＦ：ＲＣｏ  ｒＶＷＦ）［ｒＶＷＦ］を注入した後のフォンヴィレブランド因子リストセチン補因子（ＶＷＦ：ＲＣｏ）のクリアランス（ＣＬ）。８０ＩＵ／ｋｇのｒＷＶＦの最初の注入時に実施したＰＫ評価［ＰＫ１］、及び参加者が自身の被験薬の最初の注入から少なくとも６か月間出血症状に対してオンデマンドで治療を受けた後の８０ＩＵ／ｋｇのｒＶＷＦの２回目の注入［ＰＫ２］。カテゴリーの表題は、そのカテゴリーについてデータを提供した参加者の数［Ｎ］を含む。
【０３２９】
副次的な評価基準：副次的な評価項目＃４７
ＰＫ８０−ＶＷＦ：ＲＣｏの段階的回収率［タイムフレーム：注入前、続いて、注入後１５分、３０分、及び６０分、ならびに３時間、６時間、１２時間、２４時間、３０時間、４８時間、７２時間、及び９６時間でのＰＫ評価。注入及びウォッシュアウトの両方についてのＰＫ評価を含む、最初の被験薬注入後２８±３日間のＰＫ評価タイムフレーム］
【０３３０】
ＰＫ８０治療群中の参加者（ＰＫ８０データのみの治療群３からの参加者）に関する、８０ＩＵ／ｋｇの組換えフォンヴィレブランド因子：フォンヴィレブランド因子リストセチン補因子（ＶＷＦ：ＲＣｏ  ｒＶＷＦ）［ｒＶＷＦ］を注入した後のフォンヴィレブランド因子リストセチン補因子（ＶＷＦ：ＲＣｏ）の最大血漿濃度での段階的回収率（ＩＲ）時間０から無限大時間の血漿濃度曲線下面積（ＡＵＣ）。８０ＩＵ／ｋｇのｒＷＶＦの最初の注入時に実施したＰＫ評価［ＰＫ１］、及び参加者が自身の被験薬の最初の注入から少なくとも６か月間出血症状に対してオンデマンドで治療を受けた後の８０ＩＵ／ｋｇのｒＶＷＦの２回目の注入［ＰＫ２］。カテゴリーの表題は、そのカテゴリーについてデータを提供した参加者の数［Ｎ］を含む。
【０３３１】
副次的な評価基準：副次的な評価項目＃４８
ＰＫ８０−ＶＷＦ：Ｃｏの排出相半減期［タイムフレーム：注入前、続いて、注入後１５分、３０分、及び６０分、ならびに３時間、６時間、１２時間、２４時間、３０時間、４８時間、７２時間、及び９６時間でのＰＫ評価。注入及びウォッシュアウトの両方についてのＰＫ評価を含む、最初の被験薬注入後２８±３日間のＰＫ評価タイムフレーム］
【０３３２】
ＰＫ８０治療群中の参加者（ＰＫ８０データのみの治療群３からの参加者）に関する、８０ＩＵ／ｋｇの組換えフォンヴィレブランド因子：フォンヴィレブランド因子リストセチン補因子（ＶＷＦ：ＲＣｏ  ｒＶＷＦ）［ｒＶＷＦ］を注入した後のフォンヴィレブランド因子リストセチン補因子（ＶＷＦ：ＲＣｏ）の排出相半減期（Ｔ１／２）。８０ＩＵ／ｋｇのｒＷＶＦの最初の注入時に実施したＰＫ評価［ＰＫ１］、及び参加者が自身の被験薬の最初の注入から少なくとも６か月間出血症状に対してオンデマンドで治療を受けた後の８０ＩＵ／ｋｇのｒＶＷＦの２回目の注入［ＰＫ２］。カテゴリーの表題は、そのカテゴリーについてデータを提供した参加者の数［Ｎ］を含む。
【０３３３】
副次的な評価基準：副次的な評価項目＃４９
ＰＫ８０−ＶＷＦ：ＲＣｏの定常状態での分布容積［タイムフレーム：注入前、続いて、注入後１５分、３０分、及び６０分、ならびに３時間、６時間、１２時間、２４時間、３０時間、４８時間、７２時間、及び９６時間でのＰＫ評価。注入及びウォッシュアウトの両方についてのＰＫ評価を含む、最初の被験薬注入後２８±３日間のＰＫ評価タイムフレーム］
【０３３４】
ＰＫ８０治療群中の参加者（ＰＫ８０データのみの治療群３からの参加者）に関する、８０ＩＵ／ｋｇの組換えフォンヴィレブランド因子：フォンヴィレブランド因子リストセチン補因子（ＶＷＦ：ＲＣｏ  ｒＶＷＦ）［ｒＶＷＦ］を注入した後のフォンヴィレブランド因子リストセチン補因子（ＶＷＦ：ＲＣｏ）の定常状態での分布容積（Ｖｓｓ）。８０ＩＵ／ｋｇのｒＷＶＦの最初の注入時に実施したＰＫ評価［ＰＫ１］、及び参加者が自身の被験薬の最初の注入から少なくとも６か月間出血症状に対してオンデマンドで治療を受けた後の８０ＩＵ／ｋｇのｒＶＷＦの２回目の注入。８０ＩＵ／ｋｇのｒＷＶＦの最初の注入時に実施したＰＫ評価［ＰＫ１］、及び参加者が自身の被験薬の最初の注入から少なくとも６か月間出血症状に対してオンデマンドで治療を受けた後の８０ＩＵ／ｋｇのｒＶＷＦの２回目の注入［ＰＫ２］。カテゴリーの表題は、そのカテゴリーについてデータを提供した参加者の数［Ｎ］を含む。
【０３３５】
副次的な評価基準：副次的な評価項目＃５０
ＰＫ８０−ＶＷＦ：Ａｇの時間０から無限大時間の血漿濃度／時間曲線下面積（ＡＵＣ０−∞／用量）［タイムフレーム：注入前、続いて、注入後１５分、３０分、及び６０分、ならびに３時間、６時間、１２時間、２４時間、３０時間、４８時間、７２時間、及び９６時間でのＰＫ評価。注入及びウォッシュアウトの両方についてのＰＫ評価を含む、最初の被験薬注入後２８±３日間のＰＫ評価タイムフレーム］
【０３３６】
ＰＫ８０治療群中の参加者（ＰＫ８０データのみの治療群３からの参加者）に関する、８０ＩＵ／ｋｇの組換えフォンヴィレブランド因子：フォンヴィレブランド因子リストセチン補因子（ＶＷＦ：ＲＣｏ  ｒＶＷＦ）［ｒＶＷＦ］を注入した後のフォンヴィレブランド因子抗原（ＶＷＦ：Ａｇ）の時間０から無限大時間の血漿濃度曲線下面積（ＡＵＣ）。８０ＩＵ／ｋｇのｒＷＶＦの最初の注入時に実施したＰＫ評価［ＰＫ１］、及び参加者が自身の被験薬の最初の注入から少なくとも６か月間出血症状に対してオンデマンドで治療を受けた後の８０ＩＵ／ｋｇのｒＶＷＦの２回目の注入［ＰＫ２］。カテゴリーの表題は、そのカテゴリーについてデータを提供した参加者の数［Ｎ］を含む。
【０３３７】
副次的な評価基準：副次的な評価項目＃５１
ＰＫ８０−ＶＷＦ：Ａｇの時間０から９６時間までの血漿濃度／時間曲線下面積（ＡＵＣ０−９６時間／用量）［タイムフレーム：注入前、続いて、注入後１５分、３０分、及び６０分、ならびに３時間、６時間、１２時間、２４時間、３０時間、４８時間、７２時間、及び９６時間でのＰＫ評価。注入及びウォッシュアウトの両方についてのＰＫ評価を含む、最初の被験薬注入後２８±３日間のＰＫ評価タイムフレーム］
【０３３８】
ＰＫ８０治療群中の参加者（ＰＫ８０データのみの治療群３からの参加者）に関する、８０ＩＵ／ｋｇの組換えフォンヴィレブランド因子：フォンヴィレブランド因子リストセチン補因子（ＶＷＦ：ＲＣｏ  ｒＶＷＦ）［ｒＶＷＦ］を注入した後のフォンヴィレブランド因子抗原（ＶＷＦ：Ａｇ）の時間０から９６時間までの血漿濃度曲線下面積（ＡＵＣ）。８０ＩＵ／ｋｇのｒＷＶＦの最初の注入時に実施したＰＫ評価［ＰＫ１］、及び参加者が自身の被験薬の最初の注入から少なくとも６か月間出血症状に対してオンデマンドで治療を受けた後の８０ＩＵ／ｋｇのｒＶＷＦの２回目の注入［ＰＫ２］。カテゴリーの表題は、そのカテゴリーについてデータを提供した参加者の数［Ｎ］を含む。
【０３３９】
副次的な評価基準：副次的な評価項目＃５２
ＰＫ８０−ＶＷＦ：Ａｇの平均滞留時間［タイムフレーム：注入前、続いて、注入後１５分、３０分、及び６０分、ならびに３時間、６時間、１２時間、２４時間、３０時間、４８時間、７２時間、及び９６時間でのＰＫ評価。注入及びウォッシュアウトの両方についてのＰＫ評価を含む、最初の被験薬注入後２８±３日間のＰＫ評価タイムフレーム］
【０３４０】
ＰＫ８０治療群中の参加者（ＰＫ８０データのみの治療群３からの参加者）に関する、８０ＩＵ／ｋｇの組換えフォンヴィレブランド因子：フォンヴィレブランド因子リストセチン補因子（ＶＷＦ：ＲＣｏ  ｒＶＷＦ）［ｒＶＷＦ］を注入した後のフォンヴィレブランド因子抗原（ＶＷＦ：Ａｇ）の平均滞留時間（ＭＲＴ）。８０ＩＵ／ｋｇのｒＷＶＦの最初の注入時に実施したＰＫ評価［ＰＫ１］、及び参加者が自身の被験薬の最初の注入から少なくとも６か月間出血症状に対してオンデマンドで治療を受けた後の８０ＩＵ／ｋｇのｒＶＷＦの２回目の注入［ＰＫ２］。カテゴリーの表題は、そのカテゴリーについてデータを提供した参加者の数［Ｎ］を含む。
【０３４１】
副次的な評価基準：副次的な評価項目＃５３
ＰＫ８０−ＶＷＦ：Ａｇのクリアランス［タイムフレーム：注入前、続いて、注入後１５分、３０分、及び６０分、ならびに３時間、６時間、１２時間、２４時間、３０時間、４８時間、７２時間、及び９６時間でのＰＫ評価。注入及びウォッシュアウトの両方についてのＰＫ評価を含む、最初の被験薬注入後２８±３日間のＰＫ評価タイムフレーム］
【０３４２】
ＰＫ８０治療群中の参加者（ＰＫ８０データのみの治療群３からの参加者）に関する、８０ＩＵ／ｋｇの組換えフォンヴィレブランド因子：フォンヴィレブランド因子リストセチン補因子（ＶＷＦ：ＲＣｏ  ｒＶＷＦ）［ｒＶＷＦ］を注入した後のフォンヴィレブランド因子抗原（ＶＷＦ：Ａｇ）のクリアランス（ＣＬ）。８０ＩＵ／ｋｇのｒＷＶＦの最初の注入時に実施したＰＫ評価［ＰＫ１］、及び参加者が自身の被験薬の最初の注入から少なくとも６か月間出血症状に対してオンデマンドで治療を受けた後の８０ＩＵ／ｋｇのｒＶＷＦの２回目の注入［ＰＫ２］。カテゴリーの表題は、そのカテゴリーについてデータを提供した参加者の数［Ｎ］を含む。
【０３４３】
副次的な評価基準：副次的な評価項目＃５４
ＰＫ８０−ＶＷＦ：Ａｇの段階的回収率［タイムフレーム：注入前、続いて、注入後１５分、３０分、及び６０分、ならびに３時間、６時間、１２時間、２４時間、３０時間、４８時間、７２時間、及び９６時間でのＰＫ評価。注入及びウォッシュアウトの両方についてのＰＫ評価を含む、最初の被験薬注入後２８±３日間のＰＫ評価タイムフレーム］
【０３４４】
ＰＫ８０治療群中の参加者（ＰＫ８０データのみの治療群３からの参加者）に関する、８０ＩＵ／ｋｇの組換えフォンヴィレブランド因子：フォンヴィレブランド因子リストセチン補因子（ＶＷＦ：ＲＣｏ  ｒＶＷＦ）［ｒＶＷＦ］を注入した後のフォンヴィレブランド因子抗原（ＶＷＦ：Ａｇ）の最大血漿濃度での段階的回収率（ＩＲ）時間０から無限大時間の血漿濃度曲線下面積（ＡＵＣ）。８０ＩＵ／ｋｇのｒＷＶＦの最初の注入時に実施したＰＫ評価［ＰＫ１］、及び参加者が自身の被験薬の最初の注入から少なくとも６か月間出血症状に対してオンデマンドで治療を受けた後の８０ＩＵ／ｋｇのｒＶＷＦの２回目の注入［ＰＫ２］。カテゴリーの表題は、そのカテゴリーについてデータを提供した参加者の数［Ｎ］を含む。
【０３４５】
副次的な評価基準：副次的な評価項目＃５５
ＰＫ８０−ＶＷＦ：Ａｇの排出相半減期［タイムフレーム：注入前、続いて、注入後１５分、３０分、及び６０分、ならびに３時間、６時間、１２時間、２４時間、３０時間、４８時間、７２時間、及び９６時間でのＰＫ評価。注入及びウォッシュアウトの両方についてのＰＫ評価を含む、最初の被験薬注入後２８±３日間のＰＫ評価タイムフレーム］
【０３４６】
ＰＫ８０治療群中の参加者（ＰＫ８０データのみの治療群３からの参加者）に関する、８０ＩＵ／ｋｇの組換えフォンヴィレブランド因子：フォンヴィレブランド因子リストセチン補因子（ＶＷＦ：ＲＣｏ  ｒＶＷＦ）［ｒＶＷＦ］を注入した後のフォンヴィレブランド因子抗原（ＶＷＦ：Ａｇ）の排出相半減期（Ｔ１／２）。８０ＩＵ／ｋｇのｒＷＶＦの最初の注入時に実施したＰＫ評価［ＰＫ１］、及び参加者が自身の被験薬の最初の注入から少なくとも６か月間出血症状に対してオンデマンドで治療を受けた後の８０ＩＵ／ｋｇのｒＶＷＦの２回目の注入［ＰＫ２］。カテゴリーの表題は、そのカテゴリーについてデータを提供した参加者の数［Ｎ］を含む。
【０３４７】
副次的な評価基準：副次的な評価項目＃５６
ＰＫ８０−ＶＷＦ：Ａｇの定常状態での分布容積［タイムフレーム：注入前、続いて、注入後１５分、３０分、及び６０分、ならびに３時間、６時間、１２時間、２４時間、３０時間、４８時間、７２時間、及び９６時間でのＰＫ評価。注入及びウォッシュアウトの両方についてのＰＫ評価を含む、最初の被験薬注入後２８±３日間のＰＫ評価タイムフレーム］
【０３４８】
ＰＫ８０治療群中の参加者（ＰＫ８０データのみの治療群３からの参加者）に関する、８０ＩＵ／ｋｇの組換えフォンヴィレブランド因子：フォンヴィレブランド因子リストセチン補因子（ＶＷＦ：ＲＣｏ  ｒＶＷＦ）［ｒＶＷＦ］を注入した後のフォンヴィレブランド因子抗原（ＶＷＦ：Ａｇ）の定常状態での分布容積（Ｖｓｓ）。８０ＩＵ／ｋｇのｒＷＶＦの最初の注入時に実施したＰＫ評価［ＰＫ１］、及び参加者が自身の被験薬の最初の注入から少なくとも６か月間出血症状に対してオンデマンドで治療を受けた後の８０ＩＵ／ｋｇのｒＶＷＦの２回目の注入［ＰＫ２］。カテゴリーの表題は、そのカテゴリーについてデータを提供した参加者の数［Ｎ］を含む。
【０３４９】
副次的な評価基準：副次的な評価項目＃５７
ＰＫ８０−ＶＷＦ：ＣＢの時間０から無限大時間の血漿濃度／時間曲線下面積（ＡＵＣ０−∞／用量）［タイムフレーム：注入前、続いて、注入後１５分、３０分、及び６０分、ならびに３時間、６時間、１２時間、２４時間、３０時間、４８時間、７２時間、及び９６時間でのＰＫ評価。注入及びウォッシュアウトの両方についてのＰＫ評価を含む、最初の被験薬注入後２８±３日間のＰＫ評価タイムフレーム］
【０３５０】
ＰＫ８０治療群中の参加者（ＰＫ８０データのみの治療群３からの参加者）に関する、８０ＩＵ／ｋｇの組換えフォンヴィレブランド因子：フォンヴィレブランド因子リストセチン補因子（ＶＷＦ：ＲＣｏ  ｒＶＷＦ）［ｒＶＷＦ］を注入した後のフォンヴィレブランド因子コラーゲン結合（ＶＷＦ：ＣＢ）の時間０から無限大時間の血漿濃度曲線下面積（ＡＵＣ）。８０ＩＵ／ｋｇのｒＷＶＦの最初の注入時に実施したＰＫ評価［ＰＫ１］、及び参加者が自身の被験薬の最初の注入から少なくとも６か月間出血症状に対してオンデマンドで治療を受けた後の８０ＩＵ／ｋｇのｒＶＷＦの２回目の注入［ＰＫ２］。カテゴリーの表題は、そのカテゴリーについてデータを提供した参加者の数［Ｎ］を含む。
【０３５１】
副次的な評価基準：副次的な評価項目＃５８
ＰＫ８０−ＶＷＦ：ＣＢの時間０から９６時間までの血漿濃度／時間曲線下面積（ＡＵＣ０−９６時間／用量）［タイムフレーム：注入前、続いて、注入後１５分、３０分、及び６０分、ならびに３時間、６時間、１２時間、２４時間、３０時間、４８時間、７２時間、及び９６時間でのＰＫ評価。注入及びウォッシュアウトの両方についてのＰＫ評価を含む、最初の被験薬注入後２８±３日間のＰＫ評価タイムフレーム］
【０３５２】
ＰＫ８０治療群中の参加者（ＰＫ８０データのみの治療群３からの参加者）に関する、８０ＩＵ／ｋｇの組換えフォンヴィレブランド因子：フォンヴィレブランド因子リストセチン補因子（ＶＷＦ：ＲＣｏ  ｒＶＷＦ）［ｒＶＷＦ］を注入した後のフォンヴィレブランド因子コラーゲン結合（ＶＷＦ：ＣＢ）の時間０から９６時間までの血漿濃度曲線下面積（ＡＵＣ）。８０ＩＵ／ｋｇのｒＷＶＦの最初の注入時に実施したＰＫ評価［ＰＫ１］、及び参加者が自身の被験薬の最初の注入から少なくとも６か月間出血症状に対してオンデマンドで治療を受けた後の８０ＩＵ／ｋｇのｒＶＷＦの２回目の注入［ＰＫ２］。カテゴリーの表題は、そのカテゴリーについてデータを提供した参加者の数［Ｎ］を含む。
【０３５３】
副次的な評価基準：副次的な評価項目＃５９
ＰＫ８０−ＶＷＦ：ＣＢの平均滞留時間［タイムフレーム：注入前、続いて、注入後１５分、３０分、及び６０分、ならびに３時間、６時間、１２時間、２４時間、３０時間、４８時間、７２時間、及び９６時間でのＰＫ評価。注入及びウォッシュアウトの両方についてのＰＫ評価を含む、最初の被験薬注入後２８±３日間のＰＫ評価タイムフレーム］
【０３５４】
ＰＫ８０治療群中の参加者（ＰＫ８０データのみの治療群３からの参加者）に関する、８０ＩＵ／ｋｇの組換えフォンヴィレブランド因子：フォンヴィレブランド因子リストセチン補因子（ＶＷＦ：ＲＣｏ  ｒＶＷＦ）［ｒＶＷＦ］を注入した後のフォンヴィレブランド因子コラーゲン結合（ＶＷＦ：ＣＢ）の平均滞留時間（ＭＲＴ）。８０ＩＵ／ｋｇのｒＷＶＦの最初の注入時に実施したＰＫ評価［ＰＫ１］、及び参加者が自身の被験薬の最初の注入から少なくとも６か月間出血症状に対してオンデマンドで治療を受けた後の８０ＩＵ／ｋｇのｒＶＷＦの２回目の注入［ＰＫ２］。カテゴリーの表題は、そのカテゴリーについてデータを提供した参加者の数［Ｎ］を含む。
【０３５５】
副次的な評価基準：副次的な評価項目＃６０
ＰＫ８０−ＶＷＦ：ＣＢのクリアランス［タイムフレーム：注入前、続いて、注入後１５分、３０分、及び６０分、ならびに３時間、６時間、１２時間、２４時間、３０時間、４８時間、７２時間、及び９６時間でのＰＫ評価。注入及びウォッシュアウトの両方についてのＰＫ評価を含む、最初の被験薬注入後２８±３日間のＰＫ評価タイムフレーム］
【０３５６】
ＰＫ８０治療群中の参加者（ＰＫ８０データのみの治療群３からの参加者）に関する、８０ＩＵ／ｋｇの組換えフォンヴィレブランド因子：フォンヴィレブランド因子リストセチン補因子（ＶＷＦ：ＲＣｏ  ｒＶＷＦ）［ｒＶＷＦ］を注入した後のフォンヴィレブランド因子コラーゲン結合（ＶＷＦ：ＣＢ）のクリアランス（ＣＬ）。８０ＩＵ／ｋｇのｒＷＶＦの最初の注入時に実施したＰＫ評価［ＰＫ１］、及び参加者が自身の被験薬の最初の注入から少なくとも６か月間出血症状に対してオンデマンドで治療を受けた後の８０ＩＵ／ｋｇのｒＶＷＦの２回目の注入［ＰＫ２］。カテゴリーの表題は、そのカテゴリーについてデータを提供した参加者の数［Ｎ］を含む。
【０３５７】
副次的な評価基準：副次的な評価項目＃６１
ＰＫ８０−ＶＷＦ：ＣＢの段階的回収率［タイムフレーム：注入前、続いて、注入後１５分、３０分、及び６０分、ならびに３時間、６時間、１２時間、２４時間、３０時間、４８時間、７２時間、及び９６時間でのＰＫ評価。注入及びウォッシュアウトの両方についてのＰＫ評価を含む、最初の被験薬注入後２８±３日間のＰＫ評価タイムフレーム］
【０３５８】
ＰＫ８０治療群中の参加者（ＰＫ８０データのみの治療群３からの参加者）に関する、８０ＩＵ／ｋｇの組換えフォンヴィレブランド因子：フォンヴィレブランド因子リストセチン補因子（ＶＷＦ：ＲＣｏ  ｒＶＷＦ）［ｒＶＷＦ］を注入した後のフォンヴィレブランド因子コラーゲン結合（ＶＷＦ：ＣＢ）の最大血漿濃度での段階的回収率（ＩＲ）時間０から無限大時間の血漿濃度曲線下面積（ＡＵＣ）。８０ＩＵ／ｋｇのｒＷＶＦの最初の注入時に実施したＰＫ評価［ＰＫ１］、及び参加者が自身の被験薬の最初の注入から少なくとも６か月間出血症状に対してオンデマンドで治療を受けた後の８０ＩＵ／ｋｇのｒＶＷＦの２回目の注入［ＰＫ２］。カテゴリーの表題は、そのカテゴリーについてデータを提供した参加者の数［Ｎ］を含む。
【０３５９】
副次的な評価基準：副次的な評価項目＃６２
ＰＫ８０−ＶＷＦ：ＣＢの排出相半減期［タイムフレーム：注入前、続いて、注入後１５分、３０分、及び６０分、ならびに３時間、６時間、１２時間、２４時間、３０時間、４８時間、７２時間、及び９６時間でのＰＫ評価。注入及びウォッシュアウトの両方についてのＰＫ評価を含む、最初の被験薬注入後２８±３日間のＰＫ評価タイムフレーム］
【０３６０】
ＰＫ８０治療群中の参加者（ＰＫ８０データのみの治療群３からの参加者）に関する、８０ＩＵ／ｋｇの組換えフォンヴィレブランド因子：フォンヴィレブランド因子リストセチン補因子（ＶＷＦ：ＲＣｏ  ｒＶＷＦ）［ｒＶＷＦ］を注入した後のフォンヴィレブランド因子コラーゲン結合（ＶＷＦ：ＣＢ）の排出相半減期（Ｔ１／２）。８０ＩＵ／ｋｇのｒＷＶＦの最初の注入時に実施したＰＫ評価［ＰＫ１］、及び参加者が自身の被験薬の最初の注入から少なくとも６か月間出血症状に対してオンデマンドで治療を受けた後の８０ＩＵ／ｋｇのｒＶＷＦの２回目の注入［ＰＫ２］。カテゴリーの表題は、そのカテゴリーについてデータを提供した参加者の数［Ｎ］を含む。
【０３６１】
副次的な評価基準：副次的な評価項目＃６３
ＰＫ８０−ＶＷＦ：ＣＢの定常状態での分布容積［タイムフレーム：注入前、続いて、注入後１５分、３０分、及び６０分、ならびに３時間、６時間、１２時間、２４時間、３０時間、４８時間、７２時間、及び９６時間でのＰＫ評価。注入及びウォッシュアウトの両方についてのＰＫ評価を含む、最初の被験薬注入後２８±３日間のＰＫ評価タイムフレーム］
【０３６２】
ＰＫ８０治療群中の参加者（ＰＫ８０データのみの治療群３からの参加者）に関する、８０ＩＵ／ｋｇの組換えフォンヴィレブランド因子：フォンヴィレブランド因子リストセチン補因子（ＶＷＦ：ＲＣｏ  ｒＶＷＦ）［ｒＶＷＦ］を注入した後のフォンヴィレブランド因子コラーゲン結合（ＶＷＦ：ＣＢ）の定常状態での分布容積（Ｖｓｓ）。８０ＩＵ／ｋｇのｒＷＶＦの最初の注入時に実施したＰＫ評価［ＰＫ１］、及び参加者が自身の被験薬の最初の注入から少なくとも６か月間出血症状に対してオンデマンドで治療を受けた後の８０ＩＵ／ｋｇのｒＶＷＦの２回目の注入［ＰＫ２］。カテゴリーの表題は、そのカテゴリーについてデータを提供した参加者の数［Ｎ］を含む。
【０３６３】
副次的な評価基準：副次的な評価項目＃６４
ＰＫ８０−ＦＶＩＩＩ：Ｃの時間０から無限大時間の血漿濃度／時間曲線下面積（ＡＵＣ０−∞／用量）［タイムフレーム：注入前、続いて、注入後１５分、３０分、及び６０分、ならびに３時間、６時間、１２時間、２４時間、３０時間、４８時間、７２時間、及び９６時間でのＰＫ評価。注入及びウォッシュアウトの両方についてのＰＫ評価を含む、最初の被験薬注入後２８±３日間のＰＫ評価タイムフレーム］
【０３６４】
ＰＫ８０治療群中の参加者（ＰＫ８０データのみの治療群３からの参加者）に関する、８０ＩＵ／ｋｇの組換えフォンヴィレブランド因子：フォンヴィレブランド因子リストセチン補因子（ＶＷＦ：ＲＣｏ  ｒＶＷＦ）［ｒＶＷＦ］を注入した後の第ＶＩＩＩ因子活性（ＦＶＩＩＩ：Ｃ）の時間０から無限大時間の血漿濃度曲線下面積（ＡＵＣ）。８０ＩＵ／ｋｇのｒＷＶＦの最初の注入時に実施したＰＫ評価［ＰＫ１］、及び参加者が自身の被験薬の最初の注入から少なくとも６か月間出血症状に対してオンデマンドで治療を受けた後の８０ＩＵ／ｋｇのｒＶＷＦの２回目の注入［ＰＫ２］。カテゴリーの表題は、そのカテゴリーについてデータを提供した参加者の数［Ｎ］を含む。
【０３６５】
副次的な評価基準：副次的な評価項目＃６５
ＰＫ８０−ＦＶＩＩＩ：Ｃの時間０から９６時間までの血漿濃度／時間曲線下面積（ＡＵＣ０−９６時間／用量）［タイムフレーム：注入前、続いて、注入後１５分、３０分、及び６０分、ならびに３時間、６時間、１２時間、２４時間、３０時間、４８時間、７２時間、及び９６時間でのＰＫ評価。注入及びウォッシュアウトの両方についてのＰＫ評価を含む、最初の被験薬注入後２８±３日間のＰＫ評価タイムフレーム］
【０３６６】
ＰＫ８０治療群中の参加者（ＰＫ８０データのみの治療群３からの参加者）に関する、８０ＩＵ／ｋｇの組換えフォンヴィレブランド因子：フォンヴィレブランド因子リストセチン補因子（ＶＷＦ：ＲＣｏ  ｒＶＷＦ）［ｒＶＷＦ］を注入した後の第ＶＩＩＩ因子活性（ＦＶＩＩＩ：Ｃ）の時間０から９６時間までの血漿濃度曲線下面積（ＡＵＣ）。８０ＩＵ／ｋｇのｒＷＶＦの最初の注入時に実施したＰＫ評価［ＰＫ１］、及び参加者が自身の被験薬の最初の注入から少なくとも６か月間出血症状に対してオンデマンドで治療を受けた後の８０ＩＵ／ｋｇのｒＶＷＦの２回目の注入［ＰＫ２］。カテゴリーの表題は、そのカテゴリーについてデータを提供した参加者の数［Ｎ］を含む。
【０３６７】
副次的な評価基準：副次的な評価項目＃６６
ＰＫ８０−ベースライン時及び６か月後のＶＷＦ：ＲＣｏ、ＶＷＦ：Ａｇ、及びＶＷＦ：ＣＢの参加者内ＰＫの比［タイムフレーム：注入前、続いて、注入後１５分、３０分、及び６０分、ならびに３時間、６時間、１２時間、２４時間、３０時間、４８時間、７２時間、及び９６時間でのＰＫ評価。注入及びウォッシュアウトの両方についてのＰＫ評価を含む、最初の被験薬注入後２８±３日間のＰＫ評価タイムフレーム］
【０３６８】
フォンヴィレブランド因子リストセチン補因子（ＶＷＦ：ＲＣｏ）、フォンヴィレブランド因子抗原（ＶＷＦ：Ａｇ）、及びフォンヴィレブランド因子コラーゲン結合（ＶＷＦ：ＣＢ）についての用量あたりの時間０から無限大時間の血漿濃度曲線下面積（ＡＵＣ）（ＡＵＣ０−∞／用量）。各パラメータを、ＰＫ８０治療群中の参加者（ＰＫ８０データのみの治療群３からの参加者）に関する、８０ＩＵ／ｋｇの組換えフォンヴィレブランド因子：フォンヴィレブランド因子リストセチン補因子（ＶＷＦ：ＲＣｏ  ｒＶＷＦ）［ｒＶＷＦ］を注入した後の２つのＰＫ評価間で比較した。８０ＩＵ／ｋｇのｒＷＶＦの最初の注入時に実施したＰＫ評価［ＰＫ１］、及び参加者が自身の被験薬の最初の注入から少なくとも６か月間出血症状に対してオンデマンドで治療を受けた後の８０ＩＵ／ｋｇのｒＶＷＦの２回目の注入［ＰＫ２］。１３人の参加者について、この評価項目、即ちＰＫ１及びＰＫ２のデータが利用可能であった。
【０３６９】
適格性基準
１８歳〜６５歳（成人、高齢者）、すべての性別。
【０３７０】
組み入れ基準：
参加者は、以下の診断を受けていること。
・１型（フォンヴィレブランド因子：リストセチン補因子活性（ＶＷＦ：ＲＣｏ）が２０ＩＵ／ｄＬ未満）、または
・２Ａ型（ＶＷＦ：ＲＣｏが２０ＩＵ／ｄＬ未満）、２Ｂ型（表現型により診断）、２Ｎ型（第ＶＩＩＩ因子活性（ＦＶＩＩＩ：Ｃ）が１０％未満であり、遺伝子学が過去に確認されている）、２Ｍ型、または
・３型（フォンヴィレブランド因子抗原（ＶＷＦ：Ａｇ）が３ＩＵ／ｄＬ以下）、または
・出血を制御するためにフォンヴィレブランド因子濃縮物による代替療法を必要とした前歴がある重度のフォンヴィレブランド病（ＶＷＤ）
【０３７１】
出血症状の治療に参加する参加者は、登録前の１２か月の間にＶＷＦ凝固因子の補充療法を必要とした出血（病歴）が最低１回確認されていること。
【０３７２】
参加者は、Ｋａｒｎｏｆｓｋｙスコアが６０％以上であること。
【０３７３】
参加者は、登録時の年齢が少なくとも１８歳であり、６５歳以下であること。
【０３７４】
妊娠の可能性がある女性である場合、参加者は、陰性の妊娠検査を提示すること。
【０３７５】
参加者は、試験期間中、適正な避妊方法の使用に同意すること。
【０３７６】
参加者は、治験実施計画書の要件を遵守する意思があり、それが可能であること。
【０３７７】
除外基準：
偽性ＶＷＤまたはＶＷＤ以外の別の遺伝性もしくは後天性凝固障害（例えば、質的及び数的血小板障害または１．４超の上昇したＰＴ／国際標準比［ＩＮＲ］）であると診断されている参加者。
【０３７８】
ＶＷＦ：ＲＣｏ半減期が６時間未満である前歴が確認されている参加者。
【０３７９】
スクリーニング時にＶＷＦ阻害剤の前歴または存在を有する参加者。
【０３８０】
力価が０．４ＢＵ以上（ナイメゲンアッセイにより）または０．６ＢＵ以上（ベセスダ  アッセイによる）である  第ＶＩＩＩ因子（ＦＶＩＩＩ）阻害剤の前歴または存在を有する参加者。
【０３８１】
マウスまたはハムスターのタンパク質などの被験薬物の成分のいずれかに対する過感受性が分かっている参加者。
【０３８２】
季節性アレルギー性鼻炎／結膜炎、軽度の喘息、食物アレルギー、または動物アレルギーを除く免疫障害の病歴を有する参加者。
【０３８３】
血栓塞栓事象の病歴を有する参加者。
【０３８４】
ＣＤ４絶対数が２００／ｍｍ３未満のＨＩＶ陽性である参加者。
【０３８５】
心血管疾患（Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ  Ｈｅａｒｔ  Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ［ＮＹＨＡ］クラス１〜４と診断されている参加者。
【０３８６】
スクリーニング時に急性疾病（例えば、インフルエンザ、インフルエンザ様症候群、アレルギー性鼻炎／結膜炎、非季節性喘息）を有する参加者。
【０３８７】
次のうちのいずれかから明らかな重大な肝臓疾患と診断されている参加者：正常な上限の５倍である血清アラニンアミノトランスフェラーゼ（ＡＬＴ）、低アルブミン血症、門脈高血圧（例えば、他の理由では説明できない脾腫の存在、食道静脈瘤の前歴）。
【０３８８】
クレアチニンレベルが２ｍｇ／ｄＬ以上の腎臓疾患と診断されている参加者。
【０３８９】
参加者にさらなるリスクをもたらし得る臨床的に重大な合併症（例えば、制御されていない高血圧）を有すると治験責任医師により判断された参加者。
【０３９０】
登録前３０日以内に、局所治療（例えば、軟膏、鼻腔用スプレー）を除く免疫調節薬による治療を受けたことがある参加者。
【０３９１】
登録時に妊娠中または授乳中である参加者。
【０３９２】
登録前３０日以内にＩＰまたは治験医療機器が関与する別の臨床試験に参加しているか、あるいは本試験の経過中に治験薬または治験デバイスが関与する別の臨床試験に参加する予定がある参加者。
【０３９３】
登録前２年以内に薬物またはアルコール中毒の前歴を有する参加者。
【０３９４】
進行性の致死的疾患を有する及び／または寿命が３か月未満である参加者。
【０３９５】
試験手順に協力することができないまたはその意思がないと治験責任医師により特定される参加者。
【０３９６】
試験の性質、範囲、及び起こり得る結果の理解を妨げる精神状態を患う及び／または非協力的な態度が認められる参加者。
【０３９７】
規制及び／または法的命令により投獄または強制的に拘束されている参加者。
【０３９８】
割り当て前の詳細
４９人の参加者がインフォームドコンセントを提出し、試験のためのスクリーニングを受けた。このうち３７人が被験薬を受けた。中止の理由は、６件のスクリーニング失敗、３人の参加者による同意の撤回、１件の医師による決定、１人の参加者が経口処置のための高用量のｒＦＶＩＩＩを受けたが、この１人の参加者が適格とされた治療群が閉鎖されたことであった。
【０３９９】
報告群
2020526525.tif 000022
2020526525.tif 000023
【０４００】
参加者フロー：全般的試験
2020526525.tif 000024
【０４０１】
ベースライン特性
ベースラインは、試験の全参加者［Ｎ＝３７］で構成され、合計で参加者フローに記載される４つの治療群（治療群１：ＰＫ５０＋治療［Ｎ＝８］、治療群２：ＰＫ５０のみ［Ｎ＝８］、治療群３：ＰＫ８０＋治療［Ｎ＝１５］、治療群４：治療のみ［Ｎ＝６］）である。
【０４０２】
結果：
評価基準
主要評価基準：主要評価項目＃１
１．主要項目：治療された出血症状について治療が成功した参加者の割合（％）［タイムフレーム：ｒＶＷＦ：ｒＦＶＩＩＩまたはｒＶＷＦの最初の注入から１２か月間］
2020526525.tif 000025
【０４０３】
報告群
2020526525.tif 000026
【０４０４】
測定値
2020526525.tif 000027
【０４０５】
治療された出血症状について治療が成功した参加者の割合に関する統計分析１
2020526525.tif 000028
【０４０６】
副次的な評価基準：副次的な評価項目＃１
２．副次項目：有効性評価が「優良」または「良好」である治療された出血症状の割合（％）［タイムフレーム：ｒＶＷＦ：ｒＦＶＩＩＩまたはｒＶＷＦの最初の注入から１２か月間］
【０４０７】
（表１０）副次的な評価項目＃１
2020526525.tif 000029
【０４０８】
（表１１）報告群
2020526525.tif 000030
【０４０９】
（表１２）測定値
2020526525.tif 000031
有効性評価が「優良」または「良好」である治療された出血症状の割合に関する統計分析は提供せず。
【０４１０】
副次的な評価基準：副次的な評価項目＃２
３．副次項目：消化管出血を除く、有効性評価が「優良」または「良好」である治療された出血症状の割合（％）［タイムフレーム：ｒＶＷＦ：ｒＦＶＩＩＩまたはｒＶＷＦの最初の注入から１２か月間］
【０４１１】
（表１３）副次的な評価項目＃２
2020526525.tif 000032
【０４１２】
（表１４）報告群
2020526525.tif 000033
【０４１３】
（表１５）測定値
2020526525.tif 000034
消化管出血を除く、有効性評価が「優良」または「良好」である治療された出血症状の割合に関する統計分析は提供せず。
【０４１４】
副次的な評価基準：副次的な評価項目＃３
４．副次項目：出血症状あたりのｒＶＷＦ：ｒＦＶＩＩＩ及び／またはｒＶＷＦの注入回数［タイムフレーム：ｒＶＷＦ：ｒＦＶＩＩＩまたはｒＶＷＦの最初の注入から１２か月間］
【０４１５】
（表１６）副次的な評価項目＃３
2020526525.tif 000035
【０４１６】
（表１７）報告群
2020526525.tif 000036
【０４１７】
（表１８）測定値
2020526525.tif 000037
出血症状あたりのｒＶＷＦ：ｒＦＶＩＩＩ及び／またはｒＶＷＦの注入回数に関する統計分析は提供せず。
【０４１８】
副次的な評価基準：副次的な評価項目＃４
５．副次項目：出血症状あたりのｒＶＷＦ：ｒＦＶＩＩＩ及び／またはｒＶＷＦの単位数［タイムフレーム：ｒＶＷＦ：ｒＦＶＩＩＩまたはｒＶＷＦの最初の注入から１２か月間］
【０４１９】
（表１９）副次的な評価項目＃４
2020526525.tif 000038
【０４２０】
（表２０）報告群
2020526525.tif 000039
【０４２１】
（表２１）測定値
2020526525.tif 000040
出血症状あたりのｒＶＷＦ：ｒＦＶＩＩＩ及び／またはｒＶＷＦの単位数に関する統計分析は提供せず。
【０４２２】
副次的な評価基準：副次的な評価項目＃５
６．副次項目：ＦＶＩＩＩへの阻害性抗体を生じた参加者の割合（％）［タイムフレーム：ｒＶＷＦ：ｒＦＶＩＩＩまたはｒＶＷＦの最初の注入から１２か月間］
【０４２３】
（表２２）副次的な評価項目＃５
2020526525.tif 000041
【０４２４】
（表２３）報告群
2020526525.tif 000042
【０４２５】
（表２４）測定値
2020526525.tif 000043
ＦＶＩＩＩへの阻害性抗体を生じる参加者の割合（％）に関する統計分析は提供せず。
【０４２６】
副次的な評価基準：副次的な評価項目＃６
７．副次項目：ＶＷＦへの阻害性抗体を生じる参加者の割合（％）［タイムフレーム：インフォームドコンセントの署名からｒＶＷＦ：ｒＦＶＩＩＩまたはｒＶＷＦの最初の注入後１２か月まで］
【０４２７】
（表２５）副次的な評価項目＃６
2020526525.tif 000044
【０４２８】
（表２６）報告群
2020526525.tif 000045
【０４２９】
（表２７）測定値
2020526525.tif 000046
ＶＷＦへの阻害性抗体を生じる参加者の割合に関する統計分析は提供せず。
【０４３０】
副次的な評価基準：副次的な評価項目＃７
８．副次項目：ＶＷＦへの結合性抗体を生じる参加者の割合（％）［タイムフレーム：インフォームドコンセントの署名からｒＶＷＦ：ｒＦＶＩＩＩまたはｒＶＷＦの最初の注入後１２か月まで］
【０４３１】
（表２８）副次的な評価項目＃７
2020526525.tif 000047
【０４３２】
（表２９）報告群
2020526525.tif 000048
【０４３３】
（表３０）測定値
2020526525.tif 000049
ＶＷＦへの結合性抗体を生じる参加者の割合（％）に関する統計分析は提供せず。
【０４３４】
副次的な評価基準：副次的な評価項目＃８
９．副次項目：ＣＨＯへの結合性抗体を生じる参加者の割合（％）［タイムフレーム：インフォームドコンセントの署名からｒＶＷＦ：ｒＦＶＩＩＩまたはｒＶＷＦの最初の注入後１２か月まで］
【０４３５】
（表３０）副次的な評価項目＃９
2020526525.tif 000050
【０４３６】
（表３１）報告群
2020526525.tif 000051
【０４３７】
（表３２）測定値
2020526525.tif 000052
ＣＨＯへの結合性抗体を生じる参加者の割合（％）に関する統計分析は提供せず。
【０４３８】
副次的な評価基準：副次的な評価項目＃９
１０．副次項目：ｒフューリンへの結合性抗体を生じる参加者の割合（％）［タイムフレーム：インフォームドコンセントの署名からｒＶＷＦ：ｒＦＶＩＩＩまたはｒＶＷＦの最初の注入後１２か月まで］
【０４３９】
（表３３）副次的な評価項目＃９
2020526525.tif 000053
【０４４０】
（表３４）報告群
2020526525.tif 000054
【０４４１】
（表３５）測定値
2020526525.tif 000055
ｒフューリンへの結合性抗体を生じる参加者の割合（％）に関する統計分析は提供せず。
【０４４２】
副次的な評価基準：副次的な評価項目＃１０
１１．副次項目：マウス免疫グロブリンへの結合性抗体を生じる参加者の割合（％）［タイムフレーム：インフォームドコンセントの署名からｒＶＷＦ：ｒＦＶＩＩＩまたはｒＶＷＦの最初の注入後１２か月まで］
【０４４３】
（表３６）副次的な評価項目＃１０
2020526525.tif 000056
【０４４４】
（表３７）報告群
2020526525.tif 000057
【０４４５】
（表３８）測定値
2020526525.tif 000058
マウス免疫グロブリンへの結合性抗体を生じる参加者の割合（％）に関する統計分析は提供せず。
【０４４６】
副次的な評価基準：副次的な評価項目＃１１
１２．副次項目：血栓事象が発生した参加者の割合（％）［タイムフレーム：インフォームドコンセントの署名からｒＶＷＦ：ｒＦＶＩＩＩまたはｒＶＷＦの最初の注入後１２か月まで］
【０４４７】
（表３９）副次的な評価項目＃１１
2020526525.tif 000059
【０４４８】
（表４０）報告群
2020526525.tif 000060
【０４４９】
（表４１）測定値
2020526525.tif 000061
血栓事象が発生した参加者の割合（％）に関する統計分析は提供せず。
【０４５０】
副次的な評価基準：副次的な評価項目＃１２
１３．副次項目：臨床検査項目及びバイタルサインの臨床的に重大な変化を含む被験薬と関連性のある有害事象の数［タイムフレーム：ｒＶＷＦ：ｒＦＶＩＩＩまたはｒＶＷＦの最初の注入から１２か月間］
【０４５１】
（表４２）副次的な評価項目＃１２
2020526525.tif 000062
【０４５２】
（表４３）報告群
2020526525.tif 000063
【０４５３】
（表４４）測定値
2020526525.tif 000064
臨床検査項目及びバイタルサインの臨床的に重大な変化を含む被験薬と関連性のある有害事象の数に関する統計分析は提供せず。
【０４５４】
副次的な評価基準：副次的な評価項目＃１３
１４．副次項目：臨床検査項目及びバイタルサインの臨床的に重大な変化を含む被験薬と関連性のある有害事象を有する参加者の数［タイムフレーム：ｒＶＷＦ：ｒＦＶＩＩＩまたはｒＶＷＦの最初の注入から１２か月間］
【０４５５】
（表４５）副次的な評価項目＃１３
2020526525.tif 000065
【０４５６】
（表４６）報告群
2020526525.tif 000066
【０４５７】
（表４７）測定値
2020526525.tif 000067
臨床検査項目及びバイタルサインの臨床的に重大な変化を含む被験薬と関連性のある有害事象を有する参加者の数に関する統計分析は提供せず。
【０４５８】
副次的な評価項目の尺度：副次的な評価項目＃１４
１５．副次項目：臨床検査項目及びバイタルサインの臨床的に重大な変化を含む被験薬と関連性のある注入による有害事象の数［タイムフレーム：ｒＶＷＦ：ｒＦＶＩＩＩまたはｒＶＷＦの最初の注入から１２か月間］
【０４５９】
（表４８）副次的な評価項目＃１４
2020526525.tif 000068
【０４６０】
（表４９）報告群
2020526525.tif 000069
【０４６１】
（表５０）測定値
2020526525.tif 000070
臨床検査項目及びバイタルサインの臨床的に重大な変化を含む、被験薬と関連性のある注入による有害事象の数に関する統計分析は提供せず。
【０４６２】
副次的な評価基準：副次的な評価項目＃１５
１６．副次項目：ＰＫ５０−ＶＷＦ：ＲＣｏの時間０から無限大時間の血漿濃度／時間曲線下面積（ＡＵＣ０−∞／用量）［タイムフレーム：注入前、続いて、注入後１５分、３０分、及び６０分、ならびに３時間、６時間、１２時間、２４時間、３０時間、４８時間、７２時間、及び９６時間でのＰＫ評価。注入及びウォッシュアウトの両方についてのＰＫ評価を含む、最初の被験薬注入後２８±３日間のＰＫ評価タイムフレーム］
【０４６３】
（表５１）副次的な評価項目＃１５
2020526525.tif 000071
【０４６４】
（表５２）報告群
2020526525.tif 000072
【０４６５】
（表５３）測定値
2020526525.tif 000073
ＰＫ５０−ＶＷＦ：ＲＣｏの時間０から無限大時間の血漿濃度／時間曲線下面積（ＡＵＣ０−∞／用量）に関する統計分析は提供せず。
【０４６６】
副次的な評価基準：副次的な評価項目＃１６
１７．副次項目：ＰＫ５０−ＶＷＦ：ＲＣｏの時間０から９６時間までの血漿濃度／時間曲線下面積（ＡＵＣ０−９６時間／用量）［タイムフレーム：注入前、続いて、注入後１５分、３０分、及び６０分、ならびに３時間、６時間、１２時間、２４時間、３０時間、４８時間、７２時間、及び９６時間でのＰＫ評価。注入及びウォッシュアウトの両方についてのＰＫ評価を含む、最初の被験薬注入後２８±３日間のＰＫ評価タイムフレーム］
【０４６７】
（表５４）副次的な評価項目＃１６
2020526525.tif 000074
【０４６８】
（表５５）報告群
2020526525.tif 000075
【０４６９】
（表５６）測定値
2020526525.tif 000076
ＰＫ５０−ＶＷＦ：ＲＣｏの時間０から９６時間までの血漿濃度／時間曲線下面積（ＡＵＣ０−９６時間／用量）に関する統計分析は提供せず。
【０４７０】
副次的な評価基準：副次的な評価項目＃１７
１８．副次項目：ＰＫ５０−ＶＷＦ：ＲＣｏの平均滞留時間［タイムフレーム：注入前、続いて、注入後１５分、３０分、及び６０分、ならびに３時間、６時間、１２時間、２４時間、３０時間、４８時間、７２時間、及び９６時間でのＰＫ評価。注入及びウォッシュアウトの両方についてのＰＫ評価を含む、最初の被験薬注入後２８±３日間のＰＫ評価タイムフレーム］
【０４７１】
（表５７）副次的な評価項目＃１７
2020526525.tif 000077
【０４７２】
（表５８）報告群
2020526525.tif 000078
【０４７３】
（表５９）測定値
2020526525.tif 000079
ＰＫ５０−ＶＷＦ：ＲＣｏの平均滞留時間に関する統計分析は提供せず。
【０４７４】
副次的な評価基準：副次的な評価項目＃１８
１９．副次項目：ＰＫ５０−ＶＷＦ：ＲＣｏのクリアランス［タイムフレーム：注入前、続いて、注入後１５分、３０分、及び６０分、ならびに３時間、６時間、１２時間、２４時間、３０時間、４８時間、７２時間、及び９６時間でのＰＫ評価。注入及びウォッシュアウトの両方についてのＰＫ評価を含む、最初の被験薬注入後２８±３日間のＰＫ評価タイムフレーム］
【０４７５】
（表６０）副次的な評価項目＃１８
2020526525.tif 000080
【０４７６】
（表６１）報告群
2020526525.tif 000081
【０４７７】
（表６２）測定値
2020526525.tif 000082
ＰＫ５０−ＶＷＦ：ＲＣｏのクリアランスに関する統計分析は提供せず。
【０４７８】
副次的な評価基準：副次的な評価項目＃１９
２０．副次項目：ＰＫ５０−ＶＷＦ：ＲＣｏの段階的回収率［タイムフレーム：注入前、続いて、注入後１５分、３０分、及び６０分、ならびに３時間、６時間、１２時間、２４時間、３０時間、４８時間、７２時間、及び９６時間でのＰＫ評価。注入及びウォッシュアウトの両方についてのＰＫ評価を含む、最初の被験薬注入後２８±３日間のＰＫ評価タイムフレーム］
【０４７９】
（表６３）副次的な評価項目＃１９
2020526525.tif 000083
【０４８０】
（表６４）報告群
2020526525.tif 000084
【０４８１】
（表６５）測定値
2020526525.tif 000085
ＰＫ５０−ＶＷＦ：ＲＣｏの段階的回収率に関する統計分析は提供せず。
【０４８２】
副次的な評価基準：副次的な評価項目＃２０
２１．副次項目：ＰＫ５０−ＶＷＦ：Ｃｏの排出相半減期［タイムフレーム：注入前、続いて、注入後１５分、３０分、及び６０分、ならびに３時間、６時間、１２時間、２４時間、３０時間、４８時間、７２時間、及び９６時間でのＰＫ評価。注入及びウォッシュアウトの両方についてのＰＫ評価を含む、最初の被験薬注入後２８±３日間のＰＫ評価タイムフレーム］
【０４８３】
（表６６）副次的な評価項目＃２０
2020526525.tif 000086
【０４８４】
（表６７）報告群
2020526525.tif 000087
【０４８５】
（表６８）測定値
2020526525.tif 000088
ＰＫ５０−ＶＷＦ：Ｃｏの排出相半減期に関する統計分析は提供せず。
【０４８６】
副次的な評価基準：副次的な評価項目＃２１
２２．副次項目：ＰＫ５０−ＶＷＦ：ＲＣｏの定常状態での分布容積［タイムフレーム：注入前、続いて、注入後１５分、３０分、及び６０分、ならびに３時間、６時間、１２時間、２４時間、３０時間、４８時間、７２時間、及び９６時間でのＰＫ評価。注入及びウォッシュアウトの両方についてのＰＫ評価を含む、最初の被験薬注入後２８±３日間のＰＫ評価タイムフレーム］
【０４８７】
（表６９）副次的な評価項目＃２１
2020526525.tif 000089
【０４８８】
（表７０）報告群
2020526525.tif 000090
【０４８９】
（表７１）測定値
2020526525.tif 000091
ＰＫ５０−ＶＷＦ：ＲＣｏの定常状態での分布容積に関する統計分析は提供せず。
【０４９０】
副次的な評価基準：副次的な評価項目＃２２
２３．副次項目：ＰＫ５０−ＶＷＦ：Ａｇの時間０から無限大時間の血漿濃度／時間曲線下面積（ＡＵＣ０−∞／用量）［タイムフレーム：注入前、続いて、注入後１５分、３０分、及び６０分、ならびに３時間、６時間、１２時間、２４時間、３０時間、４８時間、７２時間、及び９６時間でのＰＫ評価。注入及びウォッシュアウトの両方についてのＰＫ評価を含む、最初の被験薬注入後２８±３日間のＰＫ評価タイムフレーム］
【０４９１】
（表７２）副次的な評価項目＃２３
2020526525.tif 000092
【０４９２】
（表７３）報告群
2020526525.tif 000093
【０４９３】
（表７４）測定値
2020526525.tif 000094
ＰＫ５０−ＶＷＦ：Ａｇの時間０から無限大時間の血漿濃度／時間曲線下面積（ＡＵＣ０−∞／用量）に関する統計分析は提供せず。
【０４９４】
副次的な評価基準：副次的な評価項目＃２３
２４．副次項目：ＰＫ５０−ＶＷＦ：Ａｇの時間０から９６時間までの血漿濃度／時間曲線下面積（ＡＵＣ０−９６時間／用量）［タイムフレーム：注入前、続いて、注入後１５分、３０分、及び６０分、ならびに３時間、６時間、１２時間、２４時間、３０時間、４８時間、７２時間、及び９６時間でのＰＫ評価。注入及びウォッシュアウトの両方についてのＰＫ評価を含む、最初の被験薬注入後２８±３日間のＰＫ評価タイムフレーム］
【０４９５】
（表７５）副次的な評価項目＃２４
2020526525.tif 000095
【０４９６】
（表７６）報告群
2020526525.tif 000096
【０４９７】
（表７７）測定値
2020526525.tif 000097
ＰＫ５０−ＶＷＦ：Ａｇの時間０から９６時間までの血漿濃度／時間曲線下面積（ＡＵＣ０−９６時間／用量）に関する統計分析は提供せず。
【０４９８】
副次的な評価基準：副次的な評価項目＃２４
２５．副次項目：ＰＫ５０−ＶＷＦ：Ａｇの平均滞留時間［タイムフレーム：注入前、続いて、注入後１５分、３０分、及び６０分、ならびに３時間、６時間、１２時間、２４時間、３０時間、４８時間、７２時間、及び９６時間でのＰＫ評価。注入及びウォッシュアウトの両方についてのＰＫ評価を含む、最初の被験薬注入後２８±３日間のＰＫ評価タイムフレーム］
【０４９９】
（表７８）副次的な評価項目＃２４
2020526525.tif 000098
【０５００】
（表７９）報告群
2020526525.tif 000099
【０５０１】
（表８０）測定値
2020526525.tif 000100
ＰＫ５０−ＶＷＦ：Ａｇの平均滞留時間に関する統計分析は提供せず。
【０５０２】
副次的な評価基準：副次的な評価項目＃２５
２６．副次項目：ＰＫ５０−ＶＷＦ：Ａｇのクリアランス［タイムフレーム：注入前、続いて、注入後１５分、３０分、及び６０分、ならびに３時間、６時間、１２時間、２４時間、３０時間、４８時間、７２時間、及び９６時間でのＰＫ評価。注入及びウォッシュアウトの両方についてのＰＫ評価を含む、最初の被験薬注入後２８±３日間のＰＫ評価タイムフレーム］
【０５０３】
（表８１）副次的な評価項目＃２５
2020526525.tif 000101
【０５０４】
（表８２）報告群
2020526525.tif 000102
【０５０５】
（表８３）測定値
2020526525.tif 000103
ＰＫ５０−ＶＷＦ：Ａｇのクリアランスに関する統計分析は提供せず。
【０５０６】
副次的な評価基準：副次的な評価項目＃２６
２７．副次項目：ＰＫ５０−ＶＷＦ：Ａｇの段階的回収率［タイムフレーム：注入前、続いて、注入後１５分、３０分、及び６０分、ならびに３時間、６時間、１２時間、２４時間、３０時間、４８時間、７２時間、及び９６時間でのＰＫ評価。注入及びウォッシュアウトの両方についてのＰＫ評価を含む、最初の被験薬注入後２８±３日間のＰＫ評価タイムフレーム］
【０５０７】
（表８４）副次的な評価項目＃２６
2020526525.tif 000104
【０５０８】
（表８５）報告群
2020526525.tif 000105
【０５０９】
（表８６）測定値
2020526525.tif 000106
ＰＫ５０−ＶＷＦ：Ａｇの段階的回収率に関する統計分析は提供せず。
【０５１０】
副次的な評価基準：副次的な評価項目＃２７
２８．副次項目：ＰＫ５０−ＶＷＦ：Ａｇの排出相半減期［タイムフレーム：注入前、続いて、注入後１５分、３０分、及び６０分、ならびに３時間、６時間、１２時間、２４時間、３０時間、４８時間、７２時間、及び９６時間でのＰＫ評価。注入及びウォッシュアウトの両方についてのＰＫ評価を含む、最初の被験薬注入後２８±３日間のＰＫ評価タイムフレーム］
【０５１１】
（表８７）副次的な評価項目＃２７
2020526525.tif 000107
【０５１２】
（表８８）報告群
2020526525.tif 000108
【０５１３】
（表８９）測定値
2020526525.tif 000109
ＰＫ５０−ＶＷＦ：Ａｇの排出相半減期に関する統計分析は提供せず。
【０５１４】
副次的な評価基準：副次的な評価項目＃２８
２９．副次項目：ＰＫ５０−ＶＷＦ：Ａｇの定常状態での分布容積［タイムフレーム：注入前、続いて、注入後１５分、３０分、及び６０分、ならびに３時間、６時間、１２時間、２４時間、３０時間、４８時間、７２時間、及び９６時間でのＰＫ評価。注入及びウォッシュアウトの両方についてのＰＫ評価を含む、最初の被験薬注入後２８±３日間のＰＫ評価タイムフレーム］
【０５１５】
（表９０）副次的な評価項目＃２８
2020526525.tif 000110
【０５１６】
（表９１）報告群
2020526525.tif 000111
【０５１７】
（表９２）測定値
2020526525.tif 000112
ＰＫ５０−ＶＷＦ：Ａｇの定常状態での分布容積に関する統計分析は提供せず。
【０５１８】
副次的な評価基準：副次的な評価項目＃２９
３０．副次項目：ＰＫ５０−ＶＷＦ：ＣＢの時間０から無限大時間の血漿濃度／時間曲線下面積（ＡＵＣ０−∞／用量）［タイムフレーム：注入前、続いて、注入後１５分、３０分、及び６０分、ならびに３時間、６時間、１２時間、２４時間、３０時間、４８時間、７２時間、及び９６時間でのＰＫ評価。注入及びウォッシュアウトの両方についてのＰＫ評価を含む、最初の被験薬注入後２８±３日間のＰＫ評価タイムフレーム］
【０５１９】
（表９３）副次的な評価項目＃３０
2020526525.tif 000113
【０５２０】
（表９４）報告群
2020526525.tif 000114
【０５２１】
（表９５）測定値
2020526525.tif 000115
ＰＫ５０−ＶＷＦ：ＣＢの時間０から無限大時間の血漿濃度／時間曲線下面積（ＡＵＣ０−∞／用量）に関する統計分析は提供せず。
【０５２２】
副次的な評価基準：副次的な評価項目＃３０
３１．副次項目：ＰＫ５０−ＶＷＦ：ＣＢの時間０から９６時間までの血漿濃度／時間曲線下面積（ＡＵＣ０−９６時間／用量）［タイムフレーム：注入前、続いて、注入後１５分、３０分、及び６０分、ならびに３時間、６時間、１２時間、２４時間、３０時間、４８時間、７２時間、及び９６時間でのＰＫ評価。注入及びウォッシュアウトの両方についてのＰＫ評価を含む、最初の被験薬注入後２８±３日間のＰＫ評価タイムフレーム］
【０５２３】
（表９６）副次的な評価項目＃３０
2020526525.tif 000116
【０５２４】
（表９７）報告群
2020526525.tif 000117
【０５２５】
（表９８）測定値
2020526525.tif 000118
ＰＫ５０−ＶＷＦ：ＣＢの時間０から９６時間までの血漿濃度／時間曲線下面積（ＡＵＣ０−９６時間／用量）に関する統計分析は提供せず。
【０５２６】
副次的な評価基準：副次的な評価項目＃３１
３２．副次項目：ＰＫ５０−ＶＷＦ：ＣＢの平均滞留時間［タイムフレーム：注入前、続いて、注入後１５分、３０分、及び６０分、ならびに３時間、６時間、１２時間、２４時間、３０時間、４８時間、７２時間、及び９６時間でのＰＫ評価。注入及びウォッシュアウトの両方についてのＰＫ評価を含む、最初の被験薬注入後２８±３日間のＰＫ評価タイムフレーム］
【０５２７】
（表９９）副次的な評価項目＃３１
2020526525.tif 000119
【０５２８】
（表１００）報告群
2020526525.tif 000120
【０５２９】
（表１０１）測定値
2020526525.tif 000121
ＰＫ５０−ＶＷＦ：ＣＢの平均滞留時間に関する統計分析は提供せず。
【０５３０】
副次的な評価基準：副次的な評価項目＃３２
３３．副次項目：ＰＫ５０−ＶＷＦ：ＣＢのクリアランス［タイムフレーム：注入前、続いて、注入後１５分、３０分、及び６０分、ならびに３時間、６時間、１２時間、２４時間、３０時間、４８時間、７２時間、及び９６時間でのＰＫ評価。注入及びウォッシュアウトの両方についてのＰＫ評価を含む、最初の被験薬注入後２８±３日間のＰＫ評価タイムフレーム］
【０５３１】
（表１０２）副次的な評価項目＃３２
2020526525.tif 000122
【０５３２】
（表１０３）報告群
2020526525.tif 000123
【０５３３】
（表１０４）測定値
2020526525.tif 000124
ＰＫ５０−ＶＷＦ：ＣＢのクリアランスに関する統計分析は提供せず。
【０５３４】
副次的な評価基準：副次的な評価項目＃３３
３４．副次項目：ＰＫ５０−ＶＷＦ：ＣＢの段階的回収率［タイムフレーム：注入前、続いて、注入後１５分、３０分、及び６０分、ならびに３時間、６時間、１２時間、２４時間、３０時間、４８時間、７２時間、及び９６時間でのＰＫ評価。注入及びウォッシュアウトの両方についてのＰＫ評価を含む、最初の被験薬注入後２８±３日間のＰＫ評価タイムフレーム］
【０５３５】
（表１０５）副次的な評価項目＃３３
2020526525.tif 000125
【０５３６】
（表１０６）報告群
2020526525.tif 000126
【０５３７】
（表１０７）測定値
2020526525.tif 000127
ＰＫ５０−ＶＷＦ：ＣＢの段階的回収率に関する統計分析は提供せず。
【０５３８】
副次的な評価基準：副次的な評価項目＃３４
３５．副次項目：ＰＫ５０−ＶＷＦ：ＣＢの排出相半減期［タイムフレーム：注入前、続いて、注入後１５分、３０分、及び６０分、ならびに３時間、６時間、１２時間、２４時間、３０時間、４８時間、７２時間、及び９６時間でのＰＫ評価。注入及びウォッシュアウトの両方についてのＰＫ評価を含む、最初の被験薬注入後２８±３日間のＰＫ評価タイムフレーム］
【０５３９】
（表１０８）副次的な評価項目＃３４
2020526525.tif 000128
【０５４０】
（表１０９）報告群
2020526525.tif 000129
【０５４１】
（表１１０）測定値
2020526525.tif 000130
ＰＫ５０−ＶＷＦ：ＣＢの排出相半減期に関する統計分析は提供せず。
【０５４２】
副次的な評価基準：副次的な評価項目＃３５
３６．副次項目：ＰＫ５０−ＶＷＦ：ＣＢの定常状態での分布容積［タイムフレーム：注入前、続いて、注入後１５分、３０分、及び６０分、ならびに３時間、６時間、１２時間、２４時間、３０時間、４８時間、７２時間、及び９６時間でのＰＫ評価。注入及びウォッシュアウトの両方についてのＰＫ評価を含む、最初の被験薬注入後２８±３日間のＰＫ評価タイムフレーム］
【０５４３】
（表１１１）副次的な評価項目＃３５
2020526525.tif 000131
【０５４４】
（表１１２）報告群
2020526525.tif 000132
【０５４５】
（表１１３）測定値
2020526525.tif 000133
ＰＫ５０−ＶＷＦ：ＣＢの定常状態での分布容積に関する統計分析は提供せず。
【０５４６】
副次的な評価基準：副次的な評価項目＃３６
３７．副次項目：ＰＫ５０−ＦＶＩＩＩ：Ｃの時間０から無限大時間の血漿濃度／時間曲線下面積（ＡＵＣ０〜∞／用量）［タイムフレーム：注入前、続いて、注入後１５分、３０分、及び６０分、ならびに３時間、６時間、１２時間、２４時間、３０時間、４８時間、７２時間、及び９６時間でのＰＫ評価。注入及びウォッシュアウトの両方についてのＰＫ評価を含む、最初の被験薬注入後２８±３日間のＰＫ評価タイムフレーム］
【０５４７】
（表１１４）副次的な評価項目＃３６
2020526525.tif 000134
【０５４８】
（表１１５）報告群
2020526525.tif 000135
【０５４９】
（表１１６）測定値
2020526525.tif 000136
ＰＫ５０−ＦＶＩＩＩ：Ｃの時間０から無限大時間の血漿濃度／時間曲線下面積（ＡＵＣ０−∞／用量）に関する統計分析は提供せず。
【０５５０】
副次的な評価基準：副次的な評価項目＃３７
３８．副次項目：ＰＫ５０−ＦＶＩＩＩ：Ｃの時間０から９６時間までの血漿濃度／時間曲線下面積（ＡＵＣ０−９６時間／用量）［タイムフレーム：注入前、続いて、注入後１５分、３０分、及び６０分、ならびに３時間、６時間、１２時間、２４時間、３０時間、４８時間、７２時間、及び９６時間でのＰＫ評価。注入及びウォッシュアウトの両方についてのＰＫ評価を含む、最初の被験薬注入後２８±３日間のＰＫ評価タイムフレーム］
【０５５１】
（表１１６）副次的な評価項目＃３７
2020526525.tif 000137
【０５５２】
（表１１７）報告群
2020526525.tif 000138
【０５５３】
（表１１８）測定値
2020526525.tif 000139
ＰＫ５０−ＦＶＩＩＩ：Ｃの時間０から９６時間までの血漿濃度／時間曲線下面積（ＡＵＣ０−９６時間／用量）に関する統計分析は提供せず。
【０５５４】
副次的な評価基準：副次的な評価項目＃３８
３９．副次項目：ＰＫ５０−ＦＶＩＩＩ：Ｃの平均滞留時間［タイムフレーム：注入前、続いて、注入後１５分、３０分、及び６０分、ならびに３時間、６時間、１２時間、２４時間、３０時間、４８時間、７２時間、及び９６時間でのＰＫ評価。注入及びウォッシュアウトの両方についてのＰＫ評価を含む、最初の被験薬注入後２８±３日間のＰＫ評価タイムフレーム］
【０５５５】
（表１１９）副次的な評価項目＃３８
2020526525.tif 000140
【０５５６】
（表１２０）報告群
2020526525.tif 000141
【０５５７】
（表１２１）測定値
2020526525.tif 000142
ＰＫ５０−ＦＶＩＩＩ：Ｃの平均滞留時間に関する統計分析は提供せず。
【０５５８】
副次的な評価基準：副次的な評価項目＃３９
４０．副次項目：ＰＫ５０−ＦＶＩＩＩ：Ｃのクリアランス［タイムフレーム：注入前、続いて、注入後１５分、３０分、及び６０分、ならびに３時間、６時間、１２時間、２４時間、３０時間、４８時間、７２時間、及び９６時間でのＰＫ評価。注入及びウォッシュアウトの両方についてのＰＫ評価を含む、最初の被験薬注入後２８±３日間のＰＫ評価タイムフレーム］
【０５５９】
（表１２２）副次的な評価項目＃３９
2020526525.tif 000143
【０５６０】
（表１２３）報告群
2020526525.tif 000144
【０５６１】
（表１２４）測定値
2020526525.tif 000145
ＰＫ５０−ＦＶＩＩＩ：Ｃのクリアランスに関する統計分析は提供せず。
【０５６２】
副次的な評価基準：副次的な評価項目＃４０
４１．副次項目：ＰＫ５０−ＦＶＩＩＩ：Ｃの段階的回収率［タイムフレーム：注入前、続いて、注入後１５分、３０分、及び６０分、ならびに３時間、６時間、１２時間、２４時間、３０時間、４８時間、７２時間、及び９６時間でのＰＫ評価。注入及びウォッシュアウトの両方についてのＰＫ評価を含む、最初の被験薬注入後２８±３日間のＰＫ評価タイムフレーム］
【０５６３】
（表１２５）副次的な評価項目＃４０
2020526525.tif 000146
【０５６４】
（表１２６）報告群
2020526525.tif 000147
【０５６５】
（表１２７）測定値
2020526525.tif 000148
ＰＫ５０−ＦＶＩＩＩ：Ｃの段階的回収率に関する統計分析は提供せず。
【０５６６】
副次的な評価基準：副次的な評価項目＃４１
４２．副次項目：ＰＫ５０−ＦＶＩＩＩ：Ｃの排出相半減期［タイムフレーム：注入前、続いて、注入後１５分、３０分、及び６０分、ならびに３時間、６時間、１２時間、２４時間、３０時間、４８時間、７２時間、及び９６時間でのＰＫ評価。注入及びウォッシュアウトの両方についてのＰＫ評価を含む、最初の被験薬注入後２８±３日間のＰＫ評価タイムフレーム］
【０５６７】
（表１２８）副次的な評価項目＃４１
2020526525.tif 000149
【０５６８】
（表１２９）報告群
2020526525.tif 000150
【０５６９】
（表１３０）測定値
2020526525.tif 000151
ＰＫ５０−ＦＶＩＩＩ：Ｃの排出相半減期に関する統計分析は提供せず。
【０５７０】
副次的な評価基準：副次的な評価項目＃４２
４３．副次項目：ＰＫ５０−ＦＶＩＩＩ：Ｃの定常状態での分布容積［タイムフレーム：注入前、続いて、注入後１５分、３０分、及び６０分、ならびに３時間、６時間、１２時間、２４時間、３０時間、４８時間、７２時間、及び９６時間でのＰＫ評価。注入及びウォッシュアウトの両方についてのＰＫ評価を含む、最初の被験薬注入後２８±３日間のＰＫ評価タイムフレーム］
【０５７１】
（表１３１）副次的な評価項目＃４２
2020526525.tif 000152
【０５７２】
（表１３２）報告群
2020526525.tif 000153
【０５７３】
（表１３３）測定値
2020526525.tif 000154
ＰＫ５０−ＦＶＩＩＩ：Ｃの定常状態での分布容積に関する統計分析は提供せず。
【０５７４】
副次的な評価基準：副次的な評価項目＃４３
４４．副次項目：ＰＫ８０−ＶＷＦ：ＲＣｏの時間０から無限大時間の血漿濃度／時間曲線下面積（ＡＵＣ０−∞／用量）［タイムフレーム：注入前、続いて、注入後１５分、３０分、及び６０分、ならびに３時間、６時間、１２時間、２４時間、３０時間、４８時間、７２時間、及び９６時間でのＰＫ評価。注入及びウォッシュアウトの両方についてのＰＫ評価を含む、最初の被験薬注入後２８±３日間のＰＫ評価タイムフレーム］
【０５７５】
（表１３４）副次的な評価項目＃４３
2020526525.tif 000155
【０５７６】
（表１３５）報告群
2020526525.tif 000156
【０５７７】
（表１３６）測定値
2020526525.tif 000157
ＰＫ８０−ＶＷＦ：ＲＣｏの時間０から無限大時間の血漿濃度／時間曲線下面積（ＡＵＣ０−∞／用量）に関する統計分析は提供せず。
【０５７８】
副次的な評価基準：副次的な評価項目＃４４
４５．副次項目：ＰＫ８０−ＶＷＦ：ＲＣｏの時間０から９６時間までの血漿濃度／時間曲線下面積（ＡＵＣ０−９６時間／用量）［タイムフレーム：注入前、続いて、注入後１５分、３０分、及び６０分、ならびに３時間、６時間、１２時間、２４時間、３０時間、４８時間、７２時間、及び９６時間でのＰＫ評価。注入及びウォッシュアウトの両方についてのＰＫ評価を含む、最初の被験薬注入後２８±３日間のＰＫ評価タイムフレーム］
【０５７９】
（表１３７）副次的な評価項目＃４４
2020526525.tif 000158
【０５８０】
（表１３６）報告群
2020526525.tif 000159
【０５８１】
（表１３７）測定値
2020526525.tif 000160
ＰＫ８０−ＶＷＦ：ＲＣｏの時間０から９６時間までの血漿濃度／時間曲線下面積（ＡＵＣ０−９６時間／用量）に関する統計分析は提供せず。
【０５８２】
副次的な評価基準：副次的な評価項目＃４５
４６．副次項目：ＰＫ８０−ＶＷＦ：ＲＣｏの平均滞留時間［タイムフレーム：注入前、続いて、注入後１５分、３０分、及び６０分、ならびに３時間、６時間、１２時間、２４時間、３０時間、４８時間、７２時間、及び９６時間でのＰＫ評価。注入及びウォッシュアウトの両方についてのＰＫ評価を含む、最初の被験薬注入後２８±３日間のＰＫ評価タイムフレーム］
【０５８３】
（表１３８）副次的な評価項目＃４５
2020526525.tif 000161
【０５８４】
（表１３９）報告群
2020526525.tif 000162
【０５８５】
（表１４０）測定値
2020526525.tif 000163
ＰＫ８０−ＶＷＦ：ＲＣｏの平均滞留時間に関する統計分析は提供せず。
【０５８６】
副次的な評価基準：副次的な評価項目＃４６
４７．副次項目：ＰＫ８０−ＶＷＦ：ＲＣｏのクリアランス［タイムフレーム：注入前、続いて、注入後１５分、３０分、及び６０分、ならびに３時間、６時間、１２時間、２４時間、３０時間、４８時間、７２時間、及び９６時間でのＰＫ評価。注入及びウォッシュアウトの両方についてのＰＫ評価を含む、最初の被験薬注入後２８±３日間のＰＫ評価タイムフレーム］
【０５８７】
（表１４１）副次的な評価項目＃４７
2020526525.tif 000164
【０５８８】
（表１４２）報告群
2020526525.tif 000165
【０５８９】
（表１４３）測定値
2020526525.tif 000166
ＰＫ８０−ＶＷＦ：ＲＣｏのクリアランスに関する統計分析は提供せず。
【０５９０】
副次的な評価基準：副次的な評価項目＃４７
４８．副次項目：ＰＫ８０−ＶＷＦ：ＲＣｏの段階的回収率［タイムフレーム：注入前、続いて、注入後１５分、３０分、及び６０分、ならびに３時間、６時間、１２時間、２４時間、３０時間、４８時間、７２時間、及び９６時間でのＰＫ評価。注入及びウォッシュアウトの両方についてのＰＫ評価を含む、最初の被験薬注入後２８±３日間のＰＫ評価タイムフレーム］
【０５９１】
（表１４４）副次的な評価項目＃４７
2020526525.tif 000167
【０５９２】
（表１４５）報告群
2020526525.tif 000168
【０５９３】
（表１４６）測定値
2020526525.tif 000169
ＰＫ８０−ＶＷＦ：ＲＣｏの段階的回収率に関する統計分析は提供せず。
【０５９４】
副次的な評価基準：副次的な評価項目＃４８
４９．副次項目：ＰＫ８０−ＶＷＦ：Ｃｏの排出相半減期［タイムフレーム：注入前、続いて、注入後１５分、３０分、及び６０分、ならびに３時間、６時間、１２時間、２４時間、３０時間、４８時間、７２時間、及び９６時間でのＰＫ評価。注入及びウォッシュアウトの両方についてのＰＫ評価を含む、最初の被験薬注入後２８±３日間のＰＫ評価タイムフレーム］
【０５９５】
（表１４７）副次的な評価項目＃４８
2020526525.tif 000170
【０５９６】
（表１４８）報告群
2020526525.tif 000171
【０５９７】
（表１４９）測定値
2020526525.tif 000172
ＰＫ８０−ＶＷＦ：Ｃｏの排出相半減期に関する統計分析は提供せず。
【０５９８】
副次的な評価基準：副次的な評価項目＃４９
５０．副次項目：ＰＫ８０−ＶＷＦ：ＲＣｏの定常状態での分布容積［タイムフレーム：注入前、続いて、注入後１５分、３０分、及び６０分、ならびに３時間、６時間、１２時間、２４時間、３０時間、４８時間、７２時間、及び９６時間でのＰＫ評価。注入及びウォッシュアウトの両方についてのＰＫ評価を含む、最初の被験薬注入後２８±３日間のＰＫ評価タイムフレーム］
【０５９９】
（表１５０）副次的な評価項目＃５０
2020526525.tif 000173
【０６００】
（表１５１）報告群
2020526525.tif 000174
【０６０１】
（表１５２）測定値
2020526525.tif 000175
ＰＫ８０−ＶＷＦ：ＲＣｏの定常状態での分布容積に関する統計分析は提供せず。
【０６０２】
副次的な評価基準：副次的な評価項目＃５０
５１．副次項目：ＰＫ８０−ＶＷＦ：Ａｇの時間０から無限大時間の血漿濃度／時間曲線下面積（ＡＵＣ０−∞／用量）［タイムフレーム：注入前、続いて、注入後１５分、３０分、及び６０分、ならびに３時間、６時間、１２時間、２４時間、３０時間、４８時間、７２時間、及び９６時間でのＰＫ評価。注入及びウォッシュアウトの両方についてのＰＫ評価を含む、最初の被験薬注入後２８±３日間のＰＫ評価タイムフレーム］
【０６０３】
（表１５３）副次的な評価項目＃５０
2020526525.tif 000176
【０６０４】
（表１５４）報告群
2020526525.tif 000177
【０６０５】
（表１５５）測定値
2020526525.tif 000178
ＰＫ８０−ＶＷＦ：Ａｇの時間０から無限大時間の血漿濃度／時間曲線下面積（ＡＵＣ０−∞／用量）に関する統計分析は提供せず。
【０６０６】
副次的な評価基準：副次的な評価項目＃５１
５２．副次項目：ＰＫ８０−ＶＷＦ：Ａｇの時間０から９６時間までの血漿濃度／時間曲線下面積（ＡＵＣ０−９６時間／用量）［タイムフレーム：注入前、続いて、注入後１５分、３０分、及び６０分、ならびに３時間、６時間、１２時間、２４時間、３０時間、４８時間、７２時間、及び９６時間でのＰＫ評価。注入及びウォッシュアウトの両方についてのＰＫ評価を含む、最初の被験薬注入後２８±３日間のＰＫ評価タイムフレーム］
【０６０７】
（表１５６）副次的な評価項目＃５１
2020526525.tif 000179
【０６０８】
（表１５７）報告群
2020526525.tif 000180
【０６０９】
（表１５８）測定値
2020526525.tif 000181
ＰＫ８０−ＶＷＦ：Ａｇの時間０から９６時間までの血漿濃度／時間曲線下面積（ＡＵＣ０−９６時間／用量）に関する統計分析は提供せず。
【０６１０】
副次的な評価基準：副次的な評価項目＃５２
５３．副次項目：ＰＫ８０−ＶＷＦ：Ａｇの平均滞留時間［タイムフレーム：注入前、続いて、注入後１５分、３０分、及び６０分、ならびに３時間、６時間、１２時間、２４時間、３０時間、４８時間、７２時間、及び９６時間でのＰＫ評価。注入及びウォッシュアウトの両方についてのＰＫ評価を含む、最初の被験薬注入後２８±３日間のＰＫ評価タイムフレーム］
【０６１１】
（表１５９）副次的な評価項目＃５２
2020526525.tif 000182
【０６１２】
（表１６０）報告群
2020526525.tif 000183
【０６１３】
（表１６１）測定値
2020526525.tif 000184
ＰＫ８０−ＶＷＦ：Ａｇの平均滞留時間に関する統計分析は提供せず。
【０６１４】
副次的な評価基準：副次的な評価項目＃５３
５４．副次項目：ＰＫ８０−ＶＷＦ：Ａｇのクリアランス［タイムフレーム：注入前、続いて、注入後１５分、３０分、及び６０分、ならびに３時間、６時間、１２時間、２４時間、３０時間、４８時間、７２時間、及び９６時間でのＰＫ評価。注入及びウォッシュアウトの両方についてのＰＫ評価を含む、最初の被験薬注入後２８±３日間のＰＫ評価タイムフレーム］
【０６１５】
（表１６２）副次的な評価項目＃５４
2020526525.tif 000185
【０６１６】
（表１６３）報告群
2020526525.tif 000186
【０６１７】
（表１６４）測定値
2020526525.tif 000187
ＰＫ８０−ＶＷＦ：Ａｇのクリアランスに関する統計分析は提供せず。
【０６１８】
副次的な評価基準：副次的な評価項目＃５４
５５．副次項目：ＰＫ８０−ＶＷＦ：Ａｇの段階的回収率［タイムフレーム：注入前、続いて、注入後１５分、３０分、及び６０分、ならびに３時間、６時間、１２時間、２４時間、３０時間、４８時間、７２時間、及び９６時間でのＰＫ評価。注入及びウォッシュアウトの両方についてのＰＫ評価を含む、最初の被験薬注入後２８±３日間のＰＫ評価タイムフレーム］
【０６１９】
（表１６５）副次的な評価項目＃５４
2020526525.tif 000188
【０６２０】
（表１６６）報告群
2020526525.tif 000189
【０６２１】
（表１６７）測定値
2020526525.tif 000190
ＰＫ８０−ＶＷＦ：Ａｇの段階的回収率に関する統計分析は提供せず。
【０６２２】
副次的な評価基準：副次的な評価項目＃５５
５６．副次項目：ＰＫ８０−ＶＷＦ：Ａｇの排出相半減期［タイムフレーム：注入前、続いて、注入後１５分、３０分、及び６０分、ならびに３時間、６時間、１２時間、２４時間、３０時間、４８時間、７２時間、及び９６時間でのＰＫ評価。注入及びウォッシュアウトの両方についてのＰＫ評価を含む、最初の被験薬注入後２８±３日間のＰＫ評価タイムフレーム］
【０６２３】
（表１６８）副次的な評価項目＃５６
2020526525.tif 000191
【０６２４】
（表１６９）報告群
2020526525.tif 000192
【０６２５】
（表１７０）測定値
2020526525.tif 000193
ＰＫ８０−ＶＷＦ：Ａｇの排出相半減期に関する統計分析は提供せず。
【０６２６】
副次的な評価基準：副次的な評価項目＃５６
５７．副次項目：ＰＫ８０−ＶＷＦ：Ａｇの定常状態での分布容積［タイムフレーム：注入前、続いて、注入後１５分、３０分、及び６０分、ならびに３時間、６時間、１２時間、２４時間、３０時間、４８時間、７２時間、及び９６時間でのＰＫ評価。注入及びウォッシュアウトの両方についてのＰＫ評価を含む、最初の被験薬注入後２８±３日間のＰＫ評価タイムフレーム］
【０６２７】
（表１７１）副次的な評価項目＃５７
2020526525.tif 000194
（表１７２）報告群
2020526525.tif 000195
【０６２８】
（表１７３）測定値
2020526525.tif 000196
ＰＫ８０−ＶＷＦ：Ａｇの定常状態での分布容積に関する統計分析は提供せず。
【０６２９】
副次的な評価基準：副次的な評価項目＃５７
５８．副次項目：ＰＫ８０−ＶＷＦ：ＣＢの時間０から無限大時間の血漿濃度／時間曲線下面積（ＡＵＣ０−∞／用量）［タイムフレーム：注入前、続いて、注入後１５分、３０分、及び６０分、ならびに３時間、６時間、１２時間、２４時間、３０時間、４８時間、７２時間、及び９６時間でのＰＫ評価。注入及びウォッシュアウトの両方についてのＰＫ評価を含む、最初の被験薬注入後２８±３日間のＰＫ評価タイムフレーム］
【０６３０】
（表１７４）副次的な評価項目＃５７
2020526525.tif 000197
【０６３１】
（表１７５）報告群
2020526525.tif 000198
【０６３２】
（表１７６）測定値
2020526525.tif 000199
ＰＫ８０−ＶＷＦ：ＣＢの時間０から無限大時間の血漿濃度／時間曲線下面積（ＡＵＣ０−∞／用量）に関する統計分析は提供せず。
【０６３３】
副次的な評価基準：副次的な評価項目＃５８
５９．副次項目：ＰＫ８０−ＶＷＦ：ＣＢの時間０から９６時間までの血漿濃度／時間曲線下面積（ＡＵＣ０−９６時間／用量）［タイムフレーム：注入前、続いて、注入後１５分、３０分、及び６０分、ならびに３時間、６時間、１２時間、２４時間、３０時間、４８時間、７２時間、及び９６時間でのＰＫ評価。注入及びウォッシュアウトの両方についてのＰＫ評価を含む、最初の被験薬注入後２８±３日間のＰＫ評価タイムフレーム］
【０６３４】
（表１７７）副次的な評価項目＃５８
2020526525.tif 000200
【０６３５】
（表１７８）報告群
2020526525.tif 000201
【０６３６】
（表１８８）測定値
2020526525.tif 000202
ＰＫ８０−ＶＷＦ：ＣＢの時間０から９６時間までの血漿濃度／時間曲線下面積（ＡＵＣ０−９６時間／用量）に関する統計分析は提供せず。
【０６３７】
副次的な評価基準：副次的な評価項目＃５９
６０．副次項目：ＰＫ８０−ＶＷＦ：ＣＢの平均滞留時間［タイムフレーム：注入前、続いて、注入後１５分、３０分、及び６０分、ならびに３時間、６時間、１２時間、２４時間、３０時間、４８時間、７２時間、及び９６時間でのＰＫ評価。注入及びウォッシュアウトの両方についてのＰＫ評価を含む、最初の被験薬注入後２８±３日間のＰＫ評価タイムフレーム］
【０６３８】
（表１８９）副次的な評価項目＃５９
2020526525.tif 000203
【０６３９】
（表１９０）報告群
2020526525.tif 000204
【０６４０】
（表１９１）測定値
2020526525.tif 000205
ＰＫ８０−ＶＷＦ：ＣＢの平均滞留時間に関する統計分析は提供せず。
【０６４１】
副次的な評価基準：副次的な評価項目＃６０
６１．副次項目：ＰＫ８０−ＶＷＦ：ＣＢのクリアランス［タイムフレーム：注入前、続いて、注入後１５分、３０分、及び６０分、ならびに３時間、６時間、１２時間、２４時間、３０時間、４８時間、７２時間、及び９６時間でのＰＫ評価。注入及びウォッシュアウトの両方についてのＰＫ評価を含む、最初の被験薬注入後２８±３日間のＰＫ評価タイムフレーム］
【０６４２】
（表１９２）副次的な評価項目＃６０
2020526525.tif 000206
【０６４３】
（表１９３）報告群
2020526525.tif 000207
【０６４４】
（表１９４）測定値
2020526525.tif 000208
ＰＫ８０−ＶＷＦ：ＣＢのクリアランスに関する統計分析は提供せず。
【０６４５】
副次的な評価基準：副次的な評価項目＃６１
６２．副次項目：ＰＫ８０−ＶＷＦ：ＣＢの段階的回収率［タイムフレーム：注入前、続いて、注入後１５分、３０分、及び６０分、ならびに３時間、６時間、１２時間、２４時間、３０時間、４８時間、７２時間、及び９６時間でのＰＫ評価。注入及びウォッシュアウトの両方についてのＰＫ評価を含む、最初の被験薬注入後２８±３日間のＰＫ評価タイムフレーム］
【０６４６】
（表１９５）副次的な評価項目＃６１
2020526525.tif 000209
【０６４７】
（表１９６）報告群
2020526525.tif 000210
【０６４８】
（表１９７）測定値
2020526525.tif 000211
ＰＫ８０−ＶＷＦ：ＣＢの段階的回収率に関する統計分析は提供せず。
【０６４９】
副次的な評価基準：副次的な評価項目＃６２
６３．副次項目：ＰＫ８０−ＶＷＦ：ＣＢの排出相半減期［タイムフレーム：注入前、続いて、注入後１５分、３０分、及び６０分、ならびに３時間、６時間、１２時間、２４時間、３０時間、４８時間、７２時間、及び９６時間でのＰＫ評価。注入及びウォッシュアウトの両方についてのＰＫ評価を含む、最初の被験薬注入後２８±３日間のＰＫ評価タイムフレーム］
【０６５０】
（表１９８）副次的な評価項目＃６２
2020526525.tif 000212
【０６５１】
（表１９９）報告群
2020526525.tif 000213
【０６５２】
（表２００）測定値
2020526525.tif 000214
ＰＫ８０−ＶＷＦ：ＣＢの排出相半減期に関する統計分析は提供せず。
【０６５３】
副次的な評価基準：副次的な評価項目＃６３
６４．副次項目：ＰＫ８０−ＶＷＦ：ＣＢの定常状態での分布容積［タイムフレーム：注入前、続いて、注入後１５分、３０分、及び６０分、ならびに３時間、６時間、１２時間、２４時間、３０時間、４８時間、７２時間、及び９６時間でのＰＫ評価。注入及びウォッシュアウトの両方についてのＰＫ評価を含む、最初の被験薬注入後２８±３日間のＰＫ評価タイムフレーム］
【０６５４】
（表２０１）副次的な評価項目＃６３
2020526525.tif 000215
【０６５５】
（表２０２）報告群
2020526525.tif 000216
【０６５６】
（表２０３）測定値
2020526525.tif 000217
ＰＫ８０−ＶＷＦ：ＣＢの定常状態での分布容積に関する統計分析は提供せず。
【０６５７】
副次的な評価基準：副次的な評価項目＃６４
６５．副次項目：ＰＫ８０−ＦＶＩＩＩ：Ｃの時間０から無限大時間の血漿濃度／時間曲線下面積（ＡＵＣ０−∞／用量）［タイムフレーム：注入前、続いて、注入後１５分、３０分、及び６０分、ならびに３時間、６時間、１２時間、２４時間、３０時間、４８時間、７２時間、及び９６時間でのＰＫ評価。注入及びウォッシュアウトの両方についてのＰＫ評価を含む、最初の被験薬注入後２８±３日間のＰＫ評価タイムフレーム］
【０６５８】
（表２０４）副次的な評価項目＃６５
2020526525.tif 000218
【０６５９】
（表２０５）報告群
2020526525.tif 000219
【０６６０】
（表２０６）測定値
2020526525.tif 000220
ＰＫ８０−ＦＶＩＩＩ：Ｃの時間０から無限大時間の血漿濃度／時間曲線下面積（ＡＵＣ０−∞／用量）に関する統計分析は提供せず。
【０６６１】
副次的な評価基準：副次的な評価項目＃６５
６６．副次項目：ＰＫ８０−ＦＶＩＩＩ：Ｃの時間０から９６時間までの血漿濃度／時間曲線下面積（ＡＵＣ０−９６時間／用量）［タイムフレーム：注入前、続いて、注入後１５分、３０分、及び６０分、ならびに３時間、６時間、１２時間、２４時間、３０時間、４８時間、７２時間、及び９６時間でのＰＫ評価。注入及びウォッシュアウトの両方についてのＰＫ評価を含む、最初の被験薬注入後２８±３日間のＰＫ評価タイムフレーム］
【０６６２】
（表２０７）副次的な評価項目＃６５
2020526525.tif 000221
【０６６３】
（表２０８）報告群
2020526525.tif 000222
【０６６４】
（表２０９）測定値
2020526525.tif 000223
ＰＫ８０−ＦＶＩＩＩ：Ｃの時間０から９６時間までの血漿濃度／時間曲線下面積（ＡＵＣ０−９６時間／用量）に関する統計分析は提供せず。
【０６６５】
副次的な評価基準：副次的な評価項目＃６６
６７．副次項目：ＰＫ８０−ベースライン時及び６か月後のＶＷＦ：ＲＣｏ、ＶＷＦ：Ａｇ、及びＶＷＦ：ＣＢの参加者内ＰＫの比［タイムフレーム：注入前、続いて、注入後１５分、３０分、及び６０分、ならびに３時間、６時間、１２時間、２４時間、３０時間、４８時間、７２時間、及び９６時間でのＰＫ評価。注入及びウォッシュアウトの両方についてのＰＫ評価を含む、最初の被験薬注入後２８±３日間のＰＫ評価タイムフレーム］
【０６６６】
（表２１０）副次的な評価項目＃６６
2020526525.tif 000224
【０６６７】
（表２１１）集団の説明
2020526525.tif 000225
【０６６８】
（表２１２）報告群
2020526525.tif 000226
【０６６９】
（表２１３）測定値
2020526525.tif 000227
ＰＫ８０−ベースライン時及び６か月後のＶＷＦ：ＲＣｏ、ＶＷＦ：Ａｇ、及びＶＷＦ：ＣＢの参加者内ＰＫの比に関する統計分析は提供せず。
【０６７０】
上に示した実施例は、本発明の組成物、システムス、及び方法の実施形態を作製及び使用する方法の完全な開示及び説明を当業者に付与するために提供されており、本発明者らが自身の発明とみなすものの範囲を限定することを意図しない。当業者には明らかである本発明を実行するための上記した様式の修正は、以下の特許請求の範囲の内であることが意図される。本明細書で言及するすべての特許及び刊行物は、本発明が属する分野の当業者のレベルを示す。本開示で引用されるすべての参考文献は、各参考文献全体が個別に参照により組み込まれているのと同程度に、参照により組み込まれる。
【０６７１】
すべての見出し及び節の名称は、明確化及び参照目的のみで使用されるものであり、いかようにも限定するものとして解釈すべきでない。例えば、当業者であれば、本明細書に記載の発明の主旨及び範囲に従い、適宜、異なる見出し及び節からの様々な態様を組み合わせることの有用性を理解するであろう。
【０６７２】
本明細書で引用されるすべての参考文献は、ここに、個々の刊行物または特許もしくは特許出願の各々が、すべての目的でそれらの全体が参照により組み込まれることが具体的かつ個々に示されているのと同程度に、その全体が参照により、またすべての目的で、本明細書に組み込まれる。
【０６７３】
当業者には明らかとなるように、本出願の多くの修正及び改変を、その趣旨及び範囲から逸脱することなく行うことがきできる。本明細書に記載の具体的な実施形態及び実施例は、例として提供されるにすぎず、本出願は、添付の特許請求の範囲の条項、及び特許出願の範囲が権限を有する等価物の全範囲によってのみ制限される。
【図１】
2020526525.tif 000228
【図２−１】
2020526525.tif 000229
【図２−２】
2020526525.tif 000230
【図２−３】
2020526525.tif 000231
【図２−４】
2020526525.tif 000232
【図２−５】
2020526525.tif 000233
【図２−６】
2020526525.tif 000234
【図２−７】
2020526525.tif 000235
【図２−８】
2020526525.tif 000236
【図２−９】
2020526525.tif 000237
【図２−１０】
2020526525.tif 000238
【図２−１１】
2020526525.tif 000239
【図２−１２】
2020526525.tif 000240
【図２−１３】
2020526525.tif 000241
【図２−１４】
2020526525.tif 000242
【図２−１５】
2020526525.tif 000243
【図２−１６】
2020526525.tif 000244
【図２−１７】
2020526525.tif 000245
【図２−１８】
2020526525.tif 000246
【図２−１９】
2020526525.tif 000247
【手続補正書】
【提出日】令和2年3月10日(2020.3.10)
【手続補正１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】配列表
【補正方法】追加
【補正の内容】
【配列表】
2020526525000001.app
【国際調査報告】
2020526525.tif 000248
2020526525.tif 000249
2020526525.tif 000250