(57)【要約】前立腺がんの内部放射線療法のための前立腺特異的膜抗原をターゲットとした高親和性薬剤が開示される。【選択図】図１
2020522506.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
式（I）の化合物：
【化１】
2020522506.tif 000060
(I)；
ここで、
Z はテトラゾール又は CO2Q であり；
Q は H 又は保護基であり；
mは、1, 2, 3, 4 及び 5 からなる群から選択される整数であり；
Rは、独立して、H 又は -CH2-R1 であり；
R1 は、置換アリール、置換ピリジン、及び非置換イソキノリンからなる群から選択され；
Lは、C1-C6 アルキレン及び C3-C6 シクロアルキレン並びにアリーレンからなる群から選択されるリンカーであり；
Wは -NR2-(C=O)-, -NR2-(C=S)-, -(C=O)-NR2-, 及び -(C=S)-NR2- からなる群から選択され；ここで、L 及び W の各出現は同じであっても異なっていても良く；
R2 は H 又は C1-C4 アルキルであり； 
nは、1, 2 及び 3 からなる群から選択される整数であり；
Ch は、金属又は放射性金属を含むことができるキレート剤である；
並びにその薬学的に許容される塩である。
【請求項２】
R1 が、以下：
【化２】
2020522506.tif 000061
ここで、 X は独立して Br 又は I である、
からなる群から選択される、請求項１に記載の化合物。
【請求項３】
前記キレート剤が、以下：
【化３】
2020522506.tif 000062
からなる群から選択される、請求項１に記載の化合物。
【請求項４】
前記金属キレート剤が、以下：Y, Lu, Tc, Zr, In, Sm, Re, Cu, Pb, Ac, Bi, Al, Ga, Re, Ho 及び Sc からなる群から選択される金属を含む、請求項１に記載の化合物。
【請求項５】
前記金属が放射性金属であり、以下：68Ga, 64Cu, 86Y, 90Y, 89Zr, 111In, 99mTc, 177Lu, 153Sm, 186Re, 188Re, 67Cu,212Pb, 225Ac, 213Bi, 212Bi, 212Pb, 67Ga, 203Pb, 47Sc 及び 166Ho からなる群から選択される、請求項４に記載の化合物。
【請求項６】
式（I）の化合物が、以下：
【化４】
2020522506.tif 000063
【化５】
2020522506.tif 000064
【化６】
2020522506.tif 000065
【化７】
2020522506.tif 000066
【化８】
2020522506.tif 000067
【化９】
2020522506.tif 000068
【化１０】
2020522506.tif 000069
【化１１】
2020522506.tif 000070
【化１２】
2020522506.tif 000071
【化１３】
2020522506.tif 000072
【化１４】
2020522506.tif 000073
;
からなる群から選択される、請求項１に記載の化合物。
【請求項７】
1 つ以上の PSMA を発現する腫瘍又は細胞を、有効量の式（I）の化合物に接触させることを含む方法であって、前記式（I）の化合物が、以下：
【化１５】
2020522506.tif 000074
(I)
ここで、
Z はテトラゾール又は CO2Q であり；
Q は H 又は保護基であり；
mは、1, 2, 3, 4 及び 5 からなる群から選択される整数であり；
Rは、独立して、H 又は -CH2-R1 であり；
R1 は、置換アリール、置換ピリジン、及び非置換イソキノリンからなる群から選択され；
Lは、C1-C6 アルキレン及び C3-C6 シクロアルキレン並びにアリーレンからなる群から選択されるリンカーであり；
Wは -NR2-(C=O)-, -NR2-(C=S)-, -(C=O)-NR2-, 及び -(C=S)-NR2- からなる群から選択され；ここで、L 及び W の各出現は同じであっても異なっていても良く；
R2 は H 又は C1-C4 アルキルであり；
nは、1, 2 及び 3 からなる群から選択される整数であり；
Ch は、放射線療法に適した放射性金属を含むキレート剤である；
並びにその薬学的に許容される塩、
を含む、1 つ以上の PSMA を発現する腫瘍又は細胞を治療するための方法。
【請求項８】
R1 が、以下：
【化１６】
2020522506.tif 000075
ここで、 X は独立して Br 又は I である、
からなる群から選択される、請求項７に記載の方法。
【請求項９】
前記キレート剤が、以下：
【化１７】
2020522506.tif 000076
からなる群から選択される、請求項７に記載の方法。
【請求項１０】
前記放射性金属が、以下：90Y, 177Lu, 211At, 111In, 153Sm, 186Re, 188Re, 67Cu, 212Pb, 225Ac, 213Bi, 212Bi, 212Pb 及び 67Ga からなる群から選択される、請求項７に記載の方法。
【請求項１１】
前記化合物が、以下：
【化１８】
2020522506.tif 000077
【化１９】
2020522506.tif 000078
【化２０】
2020522506.tif 000079
【化２１】
2020522506.tif 000080
【化２２】
2020522506.tif 000081
【化２３】
2020522506.tif 000082
【化２４】
2020522506.tif 000083
【化２５】
2020522506.tif 000084
【化２６】
2020522506.tif 000085
【化２７】
2020522506.tif 000086
；
からなる群から選択される、請求項７に記載の方法。
【請求項１２】
前記1つ以上の PSMA を発現する腫瘍又は細胞が、以下：前立腺腫瘍又は細胞、転移した前立腺腫瘍又は細胞、肺腫瘍又は細胞、腎腫瘍又は細胞、膠芽細胞腫、膵臓腫瘍又は細胞、膀胱腫瘍又は細胞、肉腫、メラノーマ、乳房腫瘍又は細胞、結腸腫瘍又は細胞、生殖細胞、褐色細胞腫、食道腫瘍又は細胞、胃腫瘍又は 細胞、及びそれらの組み合わせからなる群から選択される、請求項7に記載の方法。
【請求項１３】
前記 1 つ以上の PSMA を発現する腫瘍又は細胞が前立腺腫瘍又は細胞である、請求項７に記載の方法。
【請求項１４】
前記 1 つ以上の PSMA を発現する腫瘍又は細胞が in vitro、in vivo 又は ex vivo にある、請求項７に記載の方法。
【請求項１５】
前記 1 つ以上の PSMA を発現する腫瘍又は細胞が被験体に存在する、請求項７に記載の方法。
【請求項１６】
前記被験体がヒトである、請求項１５に記載の方法。
【請求項１７】
前記方法が前記腫瘍の増殖の阻害をもたらす、請求項７に記載の方法。
【請求項１８】
式(I)の化合物が以下：
【化２８】
2020522506.tif 000087
ここで、
XはH又は4-ベンジルブロミン（benzylbromine）である；並びに
Mは177 Lu、 225 Ac、 213 Bi、及び 203 Pbからなる群から選択される、
からなる群から選択される、請求項１に記載の化合物。
【請求項１９】
式(I)の化合物が以下：
【化２９】
2020522506.tif 000088
ここで、
XはH又は4-ベンジルブロミン（benzylbromine）である；並びに
Mは177 Lu、 225 Ac、 213 Bi、及び 203 Pbからなる群から選択される、
からなる群から選択される、請求項７に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【関連出願の相互参照】
【０００１】
本出願は、2017 年 5 月 30 日に出願された米国仮出願第 62/512,515 号の利益を主張し、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。
【０００２】
連邦政府の資金支援を受けた研究又は開発
本発明は、米国国立衛生研究所（NIH）によって供与された K25CA148901-01A1 及び U54CA1346751 に基づく政府の支援によってなされた。米国政府は本発明に一定の権利を有する。
【背景技術】
【０００３】
前立腺がんは、米国の人々における主要ながんであり、男性におけるがん死亡の第 2 の原因である。局所進行性疾患の治療については議論あるままであり、ますます多くの異なる選択肢が利用可能となってきている。前立腺がんのための新しい、高親和性、放射線療法の薬剤が、前立腺特異的膜抗原（PSMA）をターゲットとして用いて開発された。PSMAはアンドロゲン非依存性疾患のマーカーであり、これは固形（非前立腺）腫瘍の新生血管系でも発現している。
【０００４】
［課題を解決するための手段］
要約
ある態様では、本明細書で開示されている発明は、式（I）の化合物：
【化１】
2020522506.tif 000003
(I)
ここで、Z はテトラゾール又は CO2Q であり；Q は H 又は保護基であり；m は 1, 2, 3, 4 及び 5 からなる群から選択される整数であり；R は独立して、H 又は -CH2-R1 であり；R1 は置換アリール、置換ピリジン、及び非置換イソキノリンからなる群から選択され；L は C1-C6 アルキレン及び C3-C6 シクロアルキレン並びにアリーレンからなる群から選択されるリンカーであり；W は -NR2-(C=O)-, -NR2-(C=S)-, -(C=O)-NR2- 及び -(C=S)-NR2- からなる群から選択され；ここで、L 及び W の各出現は同じであっても異なっていても良く；R2 は H 又は C1-C4 アルキルであり；n は 1, 2 及び 3 からなる群から選択される整数であり；Ch は金属又は放射性金属を含むことができるキレート剤であり；並びにその薬学的に許容される塩、を提供する。
【０００５】
式（I）の化合物の具体的態様において、R1 は、以下：
【化２】
2020522506.tif 000004
ここで、X は独立して Br 又は I である、
からなる群から選択される。
【０００６】
式（I）の化合物のさらに具体的態様において、前記キレート剤は、以下：
【化３】
2020522506.tif 000005
からなる群から選択される。
【０００７】
他の態様では、本明細書で開示されている発明は、1 つ以上の PSMA を発現する腫瘍又は細胞を、有効量の式（I）の化合物に接触させることを含む方法であって、前記式（I）の化合物が、以下：
【化４】
2020522506.tif 000006
(I)；
ここで、Z はテトラゾール又は CO2Q であり；Q は H 又は保護基であり；m は 1, 2, 3, 4 及び 5 からなる群から選択される整数であり；R は、独立して、H 又は -CH2-R1であり；R1 は置換アリール、置換ピリジン、及び非置換イソキノリンであり；L は C1-C6 アルキレン及び C3-C6 シクロアルキレン並びにアリーレンからなる群から選択されるリンカーであり；W は -NR2-(C=O)-, -NR2-(C=S)-, -(C=O)-NR2- 及び -(C=S)-NR2- からなる群から選択され；ここで、L 及び W の各出現は同じであっても異なっていても良く；R2 は H 又は C1-C4アルキルであり；n は 1, 2 及び 3 からなる群から選択される整数であり；Ch は放射線療法に適した放射性金属を含むキレート剤であり；並びにその薬学的に許容される塩、
を含む、1 つ以上の PSMA を発現する腫瘍又は細胞を治療する方法を提供する。
【０００８】
他の態様では、本明細書に開示される発明は、1 つ以上の前立腺特異的膜抗原（PSMA）腫瘍又は細胞をイメージングする方法を提供し、前記方法は、1 つ以上の腫瘍又は細胞を、有効量の式（I）の化合物に接触させること、及びイメージングすることを含む。
【０００９】
さらに他の態様において、本明細書で開示されている発明は、式（I）の化合物を含むキットを提供する。
【００１０】
本明細書で前述した本明細書で開示されている発明のある態様は、本明細書で開示されている発明によって全体的又は部分的に記載され、他の態様は、以下に最もよく説明されるように、添付の実施例及び図面と関連付けて記載されながら明らかになるであろう。
【図面の簡単な説明】
【００１１】
本明細書で開示された発明を一般的な用語で説明したので、添付図面を参照するが、必ずしも一定の縮尺で描かれていない。ここで：
【図１】代表的な放射線療法薬剤の化学構造を示す；
【図２】177Lu-8 並びに既知の薬剤 SR6, PSMA-617 及び PSMA-I&T のクローン原性の有効性に関する比較研究を示す；
【図３】177Lu-8, 177Lu-1, 177Lu-SR6, 177Lu-PSMA-617 及び 177Lu-PSMA-I&T の腎臓に対する PSMA+ 腫瘍の分布割合を示す；
【図４】3 mCi の単回投与を用いた治療についての研究中における 177Lu-8 の SPECT-CT イメージングを示す；
【図５】治療についての研究中におけるマウスの相対的な体重を示す；
【図６】図６Ａと図６Ｂは、治療についての研究中におけるマウスの相対的な腫瘍体積（図６Ａ）及び治療後 60 日までのカプラン‐マイヤー生存曲線（図６Ｂ）を示す；
【図７】図7は、(左側)37℃における213Bi-1のインビトロ細胞取り込みを示す。PSMA(+)PC3 PIP電池(ブルー)及びそれに続くPSMA(-)PC3 flu電池(ブラック)における特異的電池取り込み、及び1mMのZJ43(赤色)による遮断。(中右)37℃で2時間後に213Bi-1及び225 Ac-1に対する特異的細胞死滅;
【図８】図8は、213Bi-1(% ID/g)の組織生体内分布を示す;
【図９】図9は、PSMA+ PIP側腹部腫瘍モデル(雄NSGマウス)における225 Ac-1の有効性を示す(上)。(中)処理試験中の体重の変化。(下)微小転移性PC3-ML-Luc-PSMAモデルを用いた処理試験のカプランマイヤー生存曲線、51日間(未処理)対52日間(177Lu-PSMA-617(37MBq)、225Ac-1(37kBq)は56日間、225Ac-1(74kBq)は79日間;
【図１０】図10は、203Pb-2及び203Pb-3(14.8MBq.)の(上)SPECT-CT画像化及び(下)組織生体内分布データを示す。T+: PSMA(+)PC3 PIP、T(-) PC3 flu;
【図１１】図11A、11B、11C、11D、及び11Eは、αカメラ画像によって記録されたPSMA+ PC3 PIP腫瘍(T)及び腎臓(K)における213Bi-1(+2nmol 9)(B)の0.37MBq225Ac-1(A)及び1.85MBqの分布を示す。2 nmolの9の同時注射は腎皮質からの活性の特異的除去を生じたが、PSMA+腫瘍からは生じなかった。(C)PSMA+腫瘍のIHC処理225Ac-9は未処理PSMA+腫瘍と比較して24時間後にPSMA-発現の低下を示し、(A)と同じマウス由来の腎臓の(D、E)PSMA+染色(IHC)は2時間後に低下した;
【図１２】図12は177Lu-1の体内分布を示し、1の量が増加し、2時間で部分的腎遮断リガンドを示す;
【図１３】図13A及び図13Bは、(図13A)I型(高い腫瘍及び腎臓取り込みを伴う)及びII型(高い腫瘍及び低い腎臓取り込みを伴う)造影剤、射出後2時間、及び(図13B)68 Ga-2でスキャンされた広範な転移病変を有する最初の患者を示す。サブセンチメートルの肺門周囲及び胸椎のリンパ節転移(軸方向パネル、矢印)(左側)(参考文献34);選択された68 Ga/177 Lu標識PSMA結合剤(右側);
【図１４】図14は、選択された化合物についての比較細胞取り込み及び内部移行データを示す(直接研究);
【図１５】図15は、選択された化合物についての比較組織生体分布データを示す(直接研究);
【図１６】図16は選択された化合物についての比較組織生体分布データを示す(図15にも示すように、頭から頭への研究);
【図１７】図17は、177 Lu-1、177 Lu-7、177 Lu-8、177 Lu-9、177 Lu-10、及び177 Lu-14の体内分布データを示す;
【図１８】図18A及び図18Bは、177 Lu-1(37MBq)を用いたSPECT/CT撮像を示す(図18A);図18B。37MBqの177Lu-1を併用又は非併用で投与したPC3 PIP腫瘍のPSMA式の免疫組織化学;
【図１９】図19は、177Lu-14の静脈内投与後のSPECT/CT画像を示す;
【図２０】図20は、射出後2後における177Lu-1及び177Lu-9の部分的自己遮断を示す;
【図２１】図21A及び図21Bは、Lu-1、177 Lu-3、177 Lu-5及び177Lu-PSMA-617を177するPSMAベースの177Lu標識低分子量剤の放射性核種治療を示す。個々の薬剤の尾静脈注射による~111MBqの単回投与及び生理食塩水注射による制御(177 Lu-1、177 Lu-3、177 Lu-5についてはn = 10、177 Lu-PSMA-617についてはn = 9)後の腫瘍増殖抑制(図21A)及び生存率(図21B)。個々のマウスの相対腫瘍体積及び体重を、処置の4週間後及び8週間後に示す;
【図２２】図22は、177Lu-PSMA-617及び177Lu-1の111MBqの相対体積、体重及び生存率(%)を示す;
【図２３】図23は、177 Lu-1, 177 Lu-3, 177 Lu-5, 177 Lu-PSMA-617を用いた放射線治療の8週間後のヘモグロビン及び血球数を示す。データは、n = 3/群の平均± 走査型電子顕微鏡である;
【図２４】図24は111MBqを尾静脈注射により単回投与し、制御を生理食塩水注射により投与した後の、Lu-1を177する放射性核種治療を示す(177 Lu-1、177 Lu-3、177 Lu-5についてはn = 10、177 Lu-PSMA-617についてはn = 9)。個々のマウスの相対腫瘍体積及び体重は処置後4週及び8週で示される。
【図２５】図25A、図25B、図25C、図25D、及び図25 Eはヘマトキシリン及びエオシン(H & E)汚染を示す。(図25A、図25B、図25C)眼窩外涙腺、図25A。制御未処理;図25B。隣接する耳下腺(矢じり)は省かれている;図25C。涙腺に影響を及ぼす慢性及び活動性炎症を伴う腺房消失を示す、図25Bのより高い倍率(177Lu-PSMA-617)(図25D、及び図25 E)。精巣図25D。制御の未処理の活精子形成、1つの細管(矢頭)はセルトリ細胞のみを含む。これは、精巣網付近で予想される;図25E。精子形成はなく、びまん性精細管はAよりも小さく(同じ倍率)、セルトリ細胞のみで覆われており、いくつかの細管には少数の生殖細胞がある。間質細胞は、この検体中の細管の間で顕著である。特許又は出願書類は、色彩で作成された少なくとも1つの図面を含む。色彩図面を伴う本特許又は特許出願公開のコピーは、要求及び所要の手数料の納付に応じて特許庁によって提供される。
【発明を実施するための形態】
【００１２】
詳細な説明
本明細書で開示されている発明は、添付の図面を参照して、より完全に以下で説明されるが、その中では、本明細書に開示された発明のいくつかの実施形態が示されるが、すべてが示されるわけではない。同様の番号は、全体を通して同様の要素を指す。本明細書で開示されている発明は、多くの異なる形態で具体化されても良く、本明細書に記載の実施形態に限定されると解釈されるべきではない；むしろ、これらの実施形態は、本開示が適用可能な法的要件を満たすように提供される。実際に、前述の説明及び添付する図面に提示された教示の利益を有し、本明細書で開示されている発明に関する当業者には、本明細書に記載された本明細書に開示された発明の多くの改変及び他の実施形態が思い浮かぶであろう。したがって、本明細書で開示された発明は、開示された特定の実施形態に限定されるものではなく、改変及び他の実施形態も、添付の特許請求の範囲内に含まれることが意図されていることを理解されたい。
【００１３】
I．前立腺がんの内部放射線療法のための前立腺特異的膜抗原をターゲットとした高親和性薬剤
【００１４】
Ａ．式（I）の化合物
【００１５】
したがって、ある態様では、本明細書で開示されている発明は、式（I）の化合物：
【化５】
2020522506.tif 000007
(I)；
ここで、Z はテトラゾール又は CO2Q であり；Q は H 又は保護基であり；m は 1, 2, 3, 4 及び 5 からなる群から選択される整数であり；R は独立して、H 又は -CH2-R1 であり；R1 は、置換アリール、置換ピリジン、及び非置換イソキノリンからなる群から選択され；L は C1-C6 アルキレン及び C3-C6 シクロアルキレン並びにアリーレンからなる群から選択されるリンカーであり；W は -NR2-(C=O)-, -NR2-(C=S)-, -(C=O)-NR2- 及び -(C=S)-NR2- からなる群から選択され；ここで、L 及び W の各出現は同じであっても異なっていても良く；R2 は H 又は C1-C4 アルキルであり；n は 1, 2 及び 3 からなる群から選択される整数であり；Ch は金属又は放射性金属を含むことができるキレート剤であり；並びにその薬学的に許容される塩、を提供する。
【００１６】
「ここで、L 及び W の各出現は同じであっても異なっていても良く（wherein each occurrence of L and W can be the same or different）」という語句は、前記変数「n」が 2 又は 3 である場合、ある「L」基が C1-C6 アルキレンであっても良く、ここで、他方の「L」基又は複数の「L」基は C3-C6 シクロアルキレン又はアリーレンであっても良い、又は他の実施形態では、各「L」基は、例えば C1-C6 アルキレンであっても良い。同様に、例えば、「n」が 2 又は 3 である場合、ある「W」基が -(C=O)-NR2- であっても良く及び他方の「W」基又は複数の「W」基は -(C=S)-NR2- であっても良い、又は他の実施形態では、各「W」は、例えば、-(C=O)-NR2- であっても良い。
【００１７】
前記式（I）の化合物の具体的実施形態において、R1 は、以下：
【化６】
2020522506.tif 000008
ここで、X は独立して Br 又は I である、
からなる群から選択される。
【００１８】
前記式（I）の化合物のさらに具体的態様において、前記キレート剤は、以下：
【化７】
2020522506.tif 000009
からなる群から選択される。
【００１９】
前記式（I）の化合物のさらに具体的な実施形態において、前記キレート剤は、以下：Y, Lu, Tc, Zr, In, Sm, Re, Cu, Pb, Ac, Bi, Al, Ga, Re, Ho 及び Sc からなる群から選択される金属を含む。式（I）の化合物のさらなる具体的な実施形態では、前記金属は放射性金属であり、以下：68Ga, 64Cu, 86Y, 90Y, 89Zr, 111In, 99mTc, 177Lu, 153Sm, 186Re, 188Re, 67Cu, 212Pb, 225Ac, 213Bi, 212Bi, 212Pb, 67Ga, 203Pb, 47Sc 及び 166Ho からなる群から選択される。
【００２０】
ある具体的な実施形態では、前記式（I）の化合物は、以下：
【化８】
2020522506.tif 000010
【化９】
2020522506.tif 000011
【化１０】
2020522506.tif 000012
【化１１】
2020522506.tif 000013
【化１２】
2020522506.tif 000014
【化１３】
2020522506.tif 000015
【化１４】
2020522506.tif 000016
【化１５】
2020522506.tif 000017
【化１６】
2020522506.tif 000018
【化１７】
2020522506.tif 000019
【化１８】
2020522506.tif 000020
；
からなる群から選択される。
【００２１】
Ｂ．1 つ以上の PSMA を発現する腫瘍又は細胞を治療するための式（I）の化合物の使用方法
【００２２】
ある実施形態では、本明細書で開示されている発明は、1 つ以上の PSMA を発現する腫瘍又は細胞を、有効量の式（I）の化合物に接触させることを含む方法であって、前記式（I）の化合物が、以下：
【化１９】
2020522506.tif 000021
(I)
ここで、Z はテトラゾール又は CO2Q であり；Q は H 又は保護基であり；m は 1, 2, 3, 4 及び 5 からなる群から選択される整数であり；R は独立して、H 又は -CH2-R1 であり；R1 は、置換アリール、置換ピリジン、及び非置換イソキノリンからなる群から選択され；L は C1-C6 アルキレン及び C3-C6 シクロアルキレン並びにアリーレンからなる群から選択されるリンカーであり；W は -NR2-(C=O)-, -NR2-(C=S)-, -(C=O)-NR2- 及び -(C=S)-NR2- からなる群から選択され；ここで、L 及び W の各出現は同じであっても異なっていても良く；R2 は H 又は C1-C4 アルキルであり；n は 1, 2 及び 3 からなる群から選択される整数であり；Ch は放射線療法に適した放射性金属を含むキレート剤であり；並びにその薬学的に許容される塩、
を含む、1 つ以上の PSMA を発現する腫瘍又は細胞を治療するための方法を提供する。
【００２３】
「接触させること（contacting）」は、少なくとも 1 つの PSMA を発現する腫瘍又は細胞と物理的に接触する、本明細書に開示される発明の治療剤を含む少なくとも 1 つの化合物を生じる結果となる任意の作用を意味する。接触させることは、少なくとも 1 つの化合物を少なくとも 1 つの細胞又は腫瘍と接触させるのに十分な量で前記化合物に前記細胞又は腫瘍を曝露することを含むことがある。前記方法は、培養ディッシュ又はチューブのようなコントロールされた環境に、前記化合物及び細胞又は腫瘍を置き、好ましくは混合することによって、in vitro 又は ex vivo で実施することができる。前記方法を in vivo で実施することができ、この場合、接触させることは、前記化合物を被験体に任意の適切な経路で投与するなど、被験体の少なくとも 1 つの細胞又は腫瘍を少なくとも 1 つの本明細書で開示されている発明の化合物に曝露することを意味する。
【００２４】
本明細書中で使用される場合、用語「治療する（treating）」は、そのような用語が適用される疾患（disease）、障害（disorder）若しくは病気（condtion）、又はそのような疾患、障害若しくは病気の 1 つ以上の症状（symptoms）若しくは兆候（manifestations）の進行を逆転、緩和、阻害し、これらの可能性を予防、若しくは減ずることを含むことがある。予防とは、疾患、障害、病気又はそのような症状若しくは兆候が引き起こされること、又はその重症度が悪化すること、が起きないようにすることを意味する。したがって、本発明の化合物を予防的に投与して、疾患、障害若しくは病気の発生若しくは再発を予防又は軽減することができる。
【００２５】
一般に、活性薬剤の「有効量（effective amount）」は、所望の生物学的応答を誘発するのに必要な量を指す。当業者には理解されるように、薬剤又はデバイスの有効量は、所望の生物学的エンドポイント、送達される薬剤、前記医薬組成物の構成、ターゲット組織などの要因に応じて変化することがある。
【００２６】
用語「組み合わせ（combination）」は、その最も広い意味で使用され、少なくとも 2 つの薬剤、より具体的には式（I）の化合物及び少なくとも 1 種類の他の活性薬剤が被験体に投与されることを意味する。より具体的には、用語「組み合わせて（in combination）」は、例えば単一の疾患状態の治療のために、2 種類（又はそれ以上）の活性薬剤を同時に投与することを意味する。本明細書中で使用される場合、前記活性薬剤は、単一剤に組み合わせて投与されても良く、別々の剤として同時に投与されても良く、又は同じ日又は別々の日に交互に又は順次に投与される別個の剤として投与されても良い。本明細書に開示されている発明のある実施形態では、前記活性薬剤を単一剤に組み合わせて投与する。別の実施形態においては、前記活性薬剤を別々の剤で投与する（例えば、一方の量を変化させ、他方の量を変化させないことが望ましい）。前記単一剤は、疾患状態を治療するための活性薬剤を追加して含むことがある。
【００２７】
具体的な実施形態において、R1は、以下：
【化２０】
2020522506.tif 000022
ここで、X は独立して Br 又は I である、
からなる群から選択される。
【００２８】
さらに具体的な実施形態において、前記キレート剤は、以下：
【化２１】
2020522506.tif 000023
からなる群から選択される。
【００２９】
さらに具体的な実施形態において、放射線療法に適した前記放射性金属は、以下：90Y, 177Lu, 211At, 111In, 153Sm, 186Re, 188Re, 67Cu, 212Pb, 225Ac, 213Bi, 212Bi, 212Pb 及び 67Ga からなる群から選択される。
【００３０】
さらに具体的な実施形態では、前記式（I）の化合物は、以下：
【化２２】
2020522506.tif 000024
【化２３】
2020522506.tif 000025
【化２４】
2020522506.tif 000026
【化２５】
2020522506.tif 000027
【化２６】
2020522506.tif 000028
【化２７】
2020522506.tif 000029
【化２８】
2020522506.tif 000030
【化２９】
2020522506.tif 000031
【化３０】
2020522506.tif 000032
【化３１】
2020522506.tif 000033
；
からなる群から選択される。
【００３１】
他の実施形態では、1 つ以上の PSMA を発現する腫瘍又は細胞は、以下：前立腺腫瘍又は細胞、転移した前立腺腫瘍又は細胞、肺腫瘍又は細胞、腎腫瘍又は細胞、膠芽細胞腫、膵臓腫瘍又は細胞、膀胱腫瘍又は細胞、肉腫、メラノーマ、乳房腫瘍又は細胞、結腸腫瘍又は細胞、生殖細胞、褐色細胞腫、食道腫瘍又は細胞、胃腫瘍又は細胞、及びそれらの組み合わせ、からなる群から選択される。ある他の実施形態において、前記 1 つ以上の PSMA を発現する腫瘍又は細胞は、前立腺腫瘍又は細胞である。
【００３２】
他の実施形態では、前記 1 つ以上の PSMA を発現する腫瘍又は細胞は、in vitro、in vitro 又は ex vivo にある。さらに他の実施形態では、前記 1 つ以上の PSMA を発現する腫瘍又は細胞は被験体に存在する。
【００３３】
本明細書に記載の方法は、用語「被験体（subject）」に含まれることが意図されるすべての脊椎動物種に対して有効であると理解されるべきであるが、多くの実施形態において、本発明の方法によって治療を受ける被験体は、望ましくはヒト被験体である。したがって、「被験体（subject）」は、既存の病気若しくは疾患を治療する、又は病気若しくは疾患の発症を予防するために予防的治療をするなどの医療目的のためのヒト被験体、又は医療、獣医学目的、若しくは開発目的のための動物（非ヒト）被験体、を含むことがある。適した動物被験体としては、限定されないが、霊長類（例えば、ヒト、サル、類人猿など）；ウシ亜科の動物（bovines）（例えば、畜牛、雄ウシなど）；ヒツジ（ovines）（例えば、ヒツジ（sheep）など）；ヤギ（caprines）（例えば、ヤギ（goats）など）；ブタ（porcines）（例えば、ブタ（pigs）、イノシシ（hogs）など）；ウマ科（equines）（例えば、ウマ（horses）、ロバ（donkeys）、シマウマ（zebras）など）；ネコ科（felines）（野生及びペットのネコ（cats）を含む）；イヌ科（canines）（イヌ（dogs）を含む）；ウサギ目（lagomorphs）（ウサギ（rabbits）、野ウサギ（hares）などを含む）；げっ歯類（rodents）（ネズミ（mice）、ラット（rats）などを含む）；などを含む哺乳動物が含まれる。動物は、トランスジェニック動物であっても良い。ある実施形態では、前記被験体は、限定されるものではないが、胎児、新生児、幼児、若年及び成年被験体などを含むヒトである。さらに、「被験体（subject）」は、病気又は疾患に罹患しているか、又は罹患している疑いがある患者を含むことがある。したがって、用語「被験者（subject）」及び「患者（patient）」は、本明細書では交換可能に使用される。
【００３４】
さらにある他の実施形態では、前記方法は前記腫瘍の増殖の阻害をもたらす。
【００３５】
Ｃ．1 つ以上の PSMA を発現する腫瘍又は細胞をイメージングするための式（I）の化合物の使用方法
【００３６】
他の実施形態では、本明細書で開示されている発明は、1 つ以上の PSMA を発現する腫瘍又は細胞を、有効量の式（I）の化合物に接触させ、イメージングすることを含む方法であって、前記式（I）の化合物が、以下：
【化３２】
2020522506.tif 000034
(I)
ここで、Z はテトラゾール又は CO2Q であり；Q は H 又は保護基であり；m は 1, 2, 3, 4 及び 5 からなる群から選択される整数であり；R は、独立して、H 又は -CH2-R1 であり；R1 は置換アリール、置換ピリジン、及び非置換イソキノリンからなる群から選択され；L は、C1-C6 アルキレン及び C3-C6 シクロアルキレン並びにアリーレンからなる群から選択されるリンカーであり；W は -NR2-(C=O)-, -NR2-(C=S)-, -(C=O)-NR2- 及び -(C=S)-NR2- からなる群から選択され；ここで、L 及び W の各出現は同じであっても異なっていても良く；R2 は H 又は C1-C4 アルキルであり； n は 1, 2 及び 3 からなる群から選択される整数であり；Ch はイメージングに適した放射性金属を含むキレート剤であり；並びにその薬学的に許容される塩、
を含む、1 つ以上の PSMA を発現する腫瘍又は細胞をイメージングする為の方法を提供する。
【００３７】
Ｄ．キット
【００３８】
さらに他の実施形態では、本明細書で開示されている発明は、式（I）の化合物を含むキットを提供する。
【００３９】
ある実施形態において、前記キットは、薬学的に許容される担体及び本発明の化合物を含むパッケージされた医薬組成物を提供する。ある実施形態では、前記パッケージされた医薬組成物は、放射性標識前駆体と組み合わせた本発明の化合物を生成するのに必要な反応前駆体を含む。本発明により提供される他のパッケージされた医薬組成物は、以下の内の少なくとも 1 つを含む説明書を更に含む：供給された前駆体から本発明に係る化合物を調製するための説明書、PSMA を発現する細胞又は組織をイメージングするための前記組成物の使用説明書、ストレス関連障害に罹患している患者におけるグルタミン酸作動性神経伝達をイメージングするための前記化合物の使用説明書、又は前立腺がんをイメージングするための前記組成物の使用説明書。
【００４０】
Ｅ．医薬品組成物及び投与
【００４１】
別の態様では、本発明は、式（I）の化合物を単独で、又は薬学的に許容される賦形剤と混合した 1 つ以上のさらなる治療薬剤と組み合わせて含む医薬組成物を提供する。当業者のある者は、前記医薬組成物が上記の化合物の薬学的に許容される塩を含むことを認識するであろう。薬学的に許容される塩は、一般に当業者に周知であり、本明細書に記載の化合物に見られる特定の置換基部分に応じて、比較的非毒性の酸又は塩基で調製される活性化合物の塩を含む。本発明の化合物が比較的酸性の官能基を含む場合、塩基付加塩は、このような化合物の中性形態を、そのまま若しくは適切な不活性溶媒中で、十分な量の所望の塩基に接触させることによって、又はイオン交換（イオン性錯体中の塩基性対イオン（塩基）が別のものに置換される）によって得ることができる。薬学的に許容される塩基付加塩の例には、ナトリウム、カリウム、カルシウム、アンモニウム、有機アミノ、又はマグネシウム塩、又は同様の塩が含まれる。
【００４２】
本発明の化合物が比較的塩基性の官能基を含む場合、酸付加塩は、このような化合物の中性形態を、そのまま若しくは適切な不活性溶媒中で、十分な量の所望の酸と接触させる、又はイオン交換（イオン性錯体中の酸性対イオン（酸）が別のものに置換される）によって、得ることができる。薬学的に許容される酸付加塩の例としては、塩酸、臭化水素酸、硝酸、炭酸、炭酸一水素（monohydrogencarbonic）酸、リン酸、リン酸一水素（monohydrogenphosphoric）酸、リン酸二水素（dihydrogenphosphoric）酸、硫酸、硫酸一水素（monohydrogensulfuric）酸、ヨウ化水素酸、又は亜リン酸など無機酸に由来する塩、並びに酢酸、プロピオン酸、イソ酪酸、マレイン酸、マロン酸、安息香酸、コハク酸、スベリン酸、フマル酸、乳酸、マンデル酸、フタル酸、ベンゼンスルホン酸、p-トルエンスルホン酸、クエン酸、酒石酸、メタンスルホン酸などの比較的非毒性の有機酸に由来する塩、が含まれる。また、アルギン酸塩などのアミノ酸の塩、及びグルクロン酸又はガラクツロン酸などの有機酸の塩も含まれる（例えば、Bergeら、"Pharmaceutical Salts", Journal of Pharmaceutical Science, 1977, 66, 1-19）。本明細書のある具体的な化合物は、前記化合物が塩基付加塩又は酸付加塩のいずれかに変換されることを可能にする塩基性官能基及び酸性官能基の両方を含む。
【００４３】
したがって、本明細書に開示される発明と一緒に使用するのに適した薬学的に許容される塩には、限定されるものではない例として、酢酸塩、ベンゼンスルホン酸塩、安息香酸塩、重炭酸塩、酒石酸水素塩、臭化物塩、エデト酸カルシウム、カルンシレート（carnsylate）、炭酸塩、クエン酸塩、エデト酸塩、エジシル酸塩、エストレート、エシレート、フマル酸塩、グルセプト酸塩、グルコン酸塩、グルタミン酸塩、グリコリルアルサニレート（glycollylarsanilate）、ヘキシルレゾルシン酸塩、ヒドラバミン、臭化水素酸塩、塩酸塩、ヒドロキシナフトエ酸塩、ヨウ化物塩、イセチオン酸塩、乳酸塩、ラクトビオン酸塩、リンゴ酸塩、マレイン酸塩、マンデル酸塩、メシル酸塩、ムチン酸塩、ナプシル酸塩、硝酸塩、パモ酸塩（エンボン酸塩）、パントテン酸塩、リン酸塩／二リン酸塩、ポリガラクツロ酸塩、サリチル酸塩、ステアリン酸塩、塩基性酢酸塩、コハク酸塩、硫酸塩、タンニン酸塩、酒石酸塩、又はテオクル酸塩が含まれる。他の薬学的に許容される塩は、例えば、Remington：The Science and Practice of Pharmacy (20th ed.), Lippincott, Williams＆Wilkins (2000) に見ることができる。
【００４４】
治療的及び／又は診断的応用において、本発明の化合物を、全身投与、局所（topical）又は限局した（localized）投与を含む、様々な投与様式のために製剤化することができる。技術及び製剤は、一般に、Remington：The Science and Practice of Pharmacy (20th ed.), Lippincott, Williams＆Wilkins (2000) に見ることができる。
【００４５】
治療を受ける具体的な病気に依存して、このような薬剤を、液体又は固体剤形に製剤化し、全身又は局所投与することができる。前記薬剤を、例えば、当業者に知られているように、徐放又は持続徐放形態でデリバリすることができる。製剤及び投与のための技術は、Remington：The Science and Practice of Pharmacy (20th ed.), Lippincott, Williams＆Wilkins (2000) に見ることができる。適切な経路には、経口、口腔、吸入スプレー、舌下、直腸、経皮、経膣、経粘膜、経鼻若しくは腸内投与；筋肉内、皮下、髄内注射、並びに髄腔内、直接脳室内、静脈内、関節内、胸骨内、滑液嚢内（intra-synovial）、肝臓内、病巣内、頭蓋内、腹腔内、鼻腔内、若しくは眼内注射などを含む非経口デリバリ又は他のデリバリ様式が含まれることがある。
【００４６】
注射のために、本発明の薬剤を、ハンクス溶液、リンゲル溶液又は生理食塩水緩衝液のような生理学的に適合性のある緩衝液中などの水溶液中で製剤化及び希釈化することができる。このような経粘膜投与のためには、浸透すべき障壁に適した浸透剤が製剤化に使用される。そのような浸透剤は、当該分野において一般的に知られている。
【００４７】
本発明を実施するために、本明細書に開示された化合物を全身投与に適した剤に製剤化するための薬学的に許容される不活性担体の使用は、本発明の範囲内である。担体及び製造行為を適切に選択して、本発明の組成物、特に溶液として製剤化された組成物を、静脈内注射など非経口的に投与することができる。前記化合物を、当技術分野で周知の薬学的に許容される担体を用いて、経口投与に適した剤に容易に製剤化することができる。そのような担体によって、本発明の化合物を、治療を受ける被験体（例えば、患者）が経口摂取するためのタブレット、ピル、カプセル、液体、ゲル、シロップ、スラリー、懸濁液などとして製剤化することが可能になる。
【００４８】
鼻又は吸入デリバリのためには、本発明の薬剤をまた、当業者に公知の方法によって製剤化することができ、そして例えば、限定されるものではないが、生理食塩水のような可溶化、希釈化又は分散化剤の例；ベンジルアルコールのような防腐剤；吸収促進剤；及びフルオロカーボン；を含むことがある。
【００４９】
本発明における使用に適した医薬組成物には、有効成分がその意図された目的を達成するのに有効な量で含まれる組成物が含まれる。前記有効量を決定することは、特に本明細書で提供される詳細な開示に照らして、十分に当業者の能力の範囲内である。一般に、本発明に係る化合物は、広い用量範囲にわたって有効である。例えば、成人の治療において、1 日あたり 0.01 から 1000 mg、0.5 から 100 mg、1 から 50 mg、及び 1 日あたり 5 から 40 mgの用量が、使用され得る用量の例である。非限定的な用量は、1 日あたり 10 から 30 mgである。正確な用量は、投与経路、前記化合物が投与される形態、治療を受ける被験体、治療を受ける被験体の体重、前記化合物のバイオアベイラビリティ（bioavailability）、前記化合物の吸収、分布、代謝及び排泄（ADME）、毒性並びに主治医の好み及び経験に依存する。
【００５０】
前記活性成分に加えて、これらの医薬組成物は、薬学的に使用することができる製剤に前記活性化合物を加工することを容易にする賦形剤及び助剤を含む、適切な薬学的に許容される担体を含むことがある。経口投与用に製剤化された製剤は、タブレット、糖衣錠、カプセル又は溶液の形態をとることがある。
【００５１】
必要に応じて、タブレット又は糖衣錠のコアを得るために、適切な助剤を加えた後、前記活性化合物を固体賦形剤と混合し、得られる混合物を任意選択的に粉砕し、その顆粒混合物を加工することにより、経口使用のための医薬製剤を得ることができる。適切な賦形剤は、特に、ラクトース、スクロース、マンニトール、又はソルビトールなどを含む糖などの充填剤；例えば、とうもろこしデンプン、小麦デンプン、米デンプン、ポテト・デンプン、ゼラチン、トラガカント・ゴム、メチル・セルロース、ヒドロキシプロピルメチル‐セルロース、カルボキシメチル‐セルロース・ナトリウム（CMC）、及び／又はポリビニルピロリドン（PVP：ポビドン）のようなセルロース調製物である。必要に応じて、架橋ポリビニルピロリドン、寒天、又はアルギン酸若しくはその塩（例えばアルギン酸ナトリウム）などの崩壊剤を添加しても良い。
【００５２】
糖衣錠コアには適切なコーティングが施される。この目的のために、アラビア・ゴム、タルク、ポリビニルピロリドン、カルボポール・ゲル、ポリエチレン・グリコール（PEG）、及び／又は二酸化チタン、ラッカー溶液、並びに適切な有機溶媒若しくは溶媒混合物を任意選択的に含む濃縮糖溶液を使用することができる。色素材料（dye-stuffs）又は色素（pigments）を、活性化合物の用量の異なる組み合わせがわかるように又は特徴付けるために、タブレット又は糖衣錠コーティングに添加しても良い。
【００５３】
経口的に使用することができる医薬製剤には、ゼラチン製のプッシュ‐フィット・カプセル、ゼラチン製のソフト密封カプセル、及びグリセロール又はソルビトールなどの可塑剤が含まれる。プッシュ‐フィット・カプセルは、前記活性成分を、ラクトースなどの充填剤、デンプンなどの結合剤、及び／又はタルク若しくはステアリン酸マグネシウムなどの滑沢剤、並びに任意選択的に安定剤との混合剤として含むことがある。ソフト・カプセルでは、前記活性化合物を、脂肪油、流動パラフィン、又は液体ポリエチレン・グリコール（PEG）のような適切な液体に溶解又は懸濁させることができる。さらに、安定剤を添加しても良い。
【００５４】
II．一般的な定義
【００５５】
本明細書では具体的な用語を使用しているが、それらは一般的かつ説明的な意味でのみ使用され、限定するために使用されるものではない。他に定義されない限り、本明細書で使用される全ての技術用語及び科学用語は、本明細書で記載される発明が属する技術分野の当業者のある者によって共通に理解されるのと同じ意味を有する。
【００５６】
式（I）の化合物に関連する以下の用語は、当業者のある者によって十分に理解されると考えられるが、本明細書で開示されている発明についての説明を容易にするために、以下の定義を記載する。これらの定義は、本発明を検討する際に当業者のある者にとっては明白であろう定義を補足し説明することを意図するものであって、排除するものではない。
【００５７】
本明細書中で使用される場合、置換されている（substituted）、及び置換（substituent）という用語は、用語「任意選択的に（optionally）」が先に記載されているかどうかに関わらず、当業者に理解されるように、すべての原子の原子価が維持されるという条件の下で、分子上のある官能基を別の官能基に変えることができることを意味する。任意の所与の構造における 1 つより多い位置が、特定の基から選択される 1 つより多くの置換基で置換され得る場合、前記置換基は、あらゆる位置で同じであっても異なっていても良い。前記置換基は、さらに置換されていても良い（例えば、アリール基の置換基は、1 つ以上の位置でさらに置換された、別のアリール基のような別の置換基に代わっていても良い）。
【００５８】
置換基又は連結基が、左から右に書かれたそれらの従来の化学式によって特定される場合、それらは、前記構造を右から左に書くことによって生じるであろう化学的に同一の置換基を等しく包含する（例えば、-CH2O- は -OCH2- と等価である；-C(=O)O- は -OC(=O)- と等価である；-OC(=O)NR- は -NRC(=O)O- と等価であるなど）。
【００５９】
用語「独立して選択される（independently selected）」が使用される場合、言及される置換（例えば、基 R1、R2 などの R 基、又は「m」及び「n」などの変数）は同一又は異なることがある。例えば、R1 及び R2 の両方が置換アルキルであることがあり、又は R1 が水素で、R2 が置換アルキルというようなこともある。
【００６０】
用語「a」、「an」又は「a（n）」は、本明細書中の置換基の群に関して使用される場合、少なくとも 1 つを意味する。例えば、化合物が「an」アルキル又はアリールで置換されている場合、前記化合物は、任意選択的に、少なくとも 1 つのアルキル及び／又は少なくとも 1 つのアリールで置換されている。さらに、部分が R 置換基で置換されている場合、その基を「R‐置換（R-substituted）」と称すことがある。部分が R‐置換されている場合、前記部分は少なくとも 1 つの R 置換基で置換され、各 R 置換基は任意選択的に異なる。
【００６１】
名前の付いた「R」又は基は、一般に、本明細書中で特に明記しない限り、その名称を有する基に対応するものとして当該技術分野において認識される構造を有する。説明の目的のために、上記のある代表的な「R」基を以下に定義する。
【００６２】
本発明の化合物の記載は、当業者に知られている化学結合の原理によって限定される。したがって、1 つの基が 1 つ以上の置換基で置換されていても良い場合、そのような置換基は化学結合の原理に従うように選択され、本質的に不安定ではなく、及び／又は水性、中性及びいくつかの既知の生理学的条件のような周囲環境の条件下では不安定である可能性があるものとして、当業者のある者であれば認識している。例えば、ヘテロシクロアルキル又はヘテロアリールは、当業者に知られている化学結合の原理に従って、環ヘテロ原子を介して分子の残りに結合し、それによって本質的に不安定な化合物を回避する。
【００６３】
他に明示的に定義しない限り、本明細書で使用される「置換基（substituent group）」は、本明細書で定義される以下の部分の 1 つ以上から選択される官能基を含む：
【００６４】
用語炭化水素（hydrocarbon）は、本明細書で使用される場合、水素及び炭素を含む任意の化学基を指す。前記炭化水素は置換されていても置換されていなくても良い。当業者であれば知っているように、すべての原子価は、いかなる置換を行う際に満たされなければならない。前記炭化水素は、不飽和、飽和、分枝、非分枝、環式、多環式又は複素環式であっても良い。例示的な炭化水素は、本明細書において以下にさらに定義され、例えばメチル、エチル、n-プロピル、イソプロピル、シクロプロピル、アリル、ビニル、n-ブチル、tert-ブチル、エチニル、シクロヘキシルなどを含む。
【００６５】
用語「アルキル（alkyl）」は、単独で又は別の置換基の一部として、特に明記しない限り、直鎖（すなわち、「非分枝」）、分枝鎖、非環式若しくは環式の炭化水素基、又はそれらの組合せを意味し、それらは完全に飽和した、一不飽和又は多不飽和のことがあり、二価及び多価の基を含むことがあり、指定した数の炭素原子数を有する（即ち、C1-C10 は 1 から 10 個の炭素を意味し、1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 及び 10 個の炭素を含む）。具体的な実施形態では、用語「アルキル（alkyl）」は、1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 及び 20 個の炭素を含むという C1-20 包括的な、線状（すなわち、「直鎖（straight-chain）」）、分枝、若しくは環式、飽和又は 1 から 20 個の炭素原子を含有する炭化水素部分から、1 個の水素原子を除去することにより誘導される少なくとも部分的に、場合によっては完全に不飽和の（即ち、アルケニル及びアルキニル）炭化水素ラジカル、を意味する。
【００６６】
限定されるものではないが、代表的な飽和炭化水素基には、メチル、エチル、n-プロピル、イソプロピル、n-ブチル、イソブチル、sec-ブチル、tert-ブチル、n-ペンチル、sec-ペンチル、イソペンチル、ネオペンチル、n-ヘキシル、sec-ヘキシル、n-ヘプチル、n-オクチル、n-デシル、n-ウンデシル、ドデシル、シクロヘキシル、（シクロヘキシル）メチル、シクロプロピルメチル、及びそれらの同族体及び異性体が含まれる。
【００６７】
「分枝（Branched）」は、メチル、エチル又はプロピルなどの低級アルキル基が線状アルキル鎖に結合しているアルキル基を指す。「低級アルキル（Lower alkyl）」は、1 から約 8 個の炭素原子、例えば、1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 又は 8 個の炭素原子を有するアルキル基（すなわち、C1-8 アルキル）を指す。「高級アルキル（Higher alkyl）」は、約 10 から約 20 個の炭素原子、例えば、10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 又は 20 個の炭素原子を有するアルキル基を指す。ある実施形態において、「アルキル（alkyl）」は、特に、C1-8 直鎖アルキルを指す。他の実施形態では、「アルキル（alkyl）」は、特に、C1-8 分岐鎖アルキルを指す。
【００６８】
アルキル基は、任意選択的に 1 以上のアルキル基置換基で置換されていても良く（「置換アルキル（substituted alkyl）」）、置換基は同じであっても異なっていても良い。用語「アルキル基置換基（alkyl group substituent）」は、制限されるものではないが、アルキル、置換アルキル、ハロ、アリールアミノ、アシル、ヒドロキシル、アリールオキシル、アルコキシル、アルキルチオ、アリールチオ、アラルキルオキシル（aralkyloxyl）、アラルキルチオ、カルボキシル、アルコキシカルボニル、オキソ及びシクロアルキルを含む。任意選択的に、アルキル鎖に沿って 1 個以上の酸素、硫黄又は置換若しくは非置換の窒素原子が挿入されても良く、ここで、前記窒素置換基は水素、低級アルキル（本明細書では「アルキルアミノアルキル（alkylaminoalkyl）」とも呼ばれる）又はアリールである。
【００６９】
したがって、本明細書で使用される場合、用語「置換アルキル（substituted alkyl）」は、アルキル基の 1 つ以上の原子又は官能基が別の原子又は官能基（例えば、アルキル、置換アルキル、ハロゲン、アリール、置換アリール、アルコキシル、ヒドロキシル、ニトロ、アミノ、アルキルアミノ、ジアルキルアミノ、硫酸、及びメルカプトなどを含む）で置換された、本明細書で定義されるアルキル基を含む。
【００７０】
用語「ヘテロアルキル（heteroalkyl）」は、単独で又は別の用語と組み合わせて、特に明記しない限り、安定な直鎖若しくは分枝鎖若しくは環状炭化水素基又はこれらの組合せであって、少なくとも 1 個の炭素原子及び O, N, P, Si 及び S からなる群から選択される少なくとも 1 個のヘテロ原子からなり、ここで、前記窒素原子、リン原子及び硫黄原子は任意選択的に酸化されていても良く、前記窒素ヘテロ原子は任意選択的に四級化されていても良い。前記ヘテロ原子 O, N, P, S 及び Si は、ヘテロアルキル基の任意の内部位置に、又はアルキル基が分子の残りに結合している位置に配置されることがある。限定されるものではないが、例としては、-CH2-CH2-O-CH3, -CH2-CH2-NH-CH3, -CH2-CH2-N(CH3)-CH3, -CH2-S-CH2-CH3, -CH2-CH25-S(O)-CH3, -CH2-CH2-S(O)2-CH3, -CH=CH-O-CH3, -Si(CH3)3, -CH2-CH=N-OCH3, -CH=CH-N(CH3)-CH3, O-CH3, -O-CH2-CH3 及び -CN が含まれる。例えば、-CH2-NH-OCH3 及び -CH2-O-Si(CH3)3のように、2 個又は 3 個までのヘテロ原子が連続していても良い。
【００７１】
上述のように、本明細書で使用される場合、ヘテロアルキル基は、-C(O)NR’, -NR’R”, -OR’, -SR, -S(O)R 及び／又は -S(O2)R’ のようなヘテロ原子を介して前記分子の残りに結合した基を含む。「ヘテロアルキル（heteroalkyl）」が記載され、続いて -NR'R などのような特定のヘテロアルキル基が列記される場合、用語ヘテロアルキル（heteroalkyl）及び -NR'R” は重複又は相互排他的ではないことが理解される。むしろ、明瞭にするために、その具体的なヘテロアルキル基が列記される。したがって、用語「ヘテロアルキル（heteroalkyl）」は、-NR'R” などのような特定のヘテロアルキル基を排除するものとして本明細書中で解釈されるべきではない。
【００７２】
「環式（Cyclic）」及び「シクロアルキル（cycloalkyl）」は、約 3 から約 10 個の炭素原子（例えば3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 又は 10 個の炭素原子）の非芳香族単環式又は多環式環系を意味する。前記シクロアルキル基は、任意選択的に部分的に不飽和であっても良い。前記シクロアルキル基はまた、任意選択的に、本明細書で定義されるアルキル基置換基、オキソ及び／又はアルキレンで置換されていても良い。環式アルキル鎖に沿って 1 個以上の酸素、硫黄又は置換若しくは非置換窒素原子が挿入されても良く、ここで、前記窒素置換基は水素、非置換アルキル、置換アルキル、アリール又は置換アリールであり、このようにして複素環基が提供される。代表的な単環式シクロアルキル環には、シクロペンチル、シクロヘキシル及びシクロヘプチルが含まれる。多環式シクロアルキル環には、アダマンチル、オクタヒドロナフチル、デカリン、カンファー、カンファン及びノルアダマンチル、並びに、例えばジヒドロ‐及びテトラヒドロナフタレンなど縮合環系、が含まれる。
【００７３】
本明細書で使用する用語「シクロアルキルアルキル（cycloalkylalkyl）」は、上記定義したシクロアルキル基を指し、やはり上記定義したアルキル基を介して親分子部分に結合している。シクロアルキルアルキル基の例としては、シクロプロピルメチル及びシクロペンチルエチルが含まれる。
【００７４】
用語「シクロヘテロアルキル（cycloheteroalkyl）」又は「ヘテロシクロアルキル（heterocycloalkyl）」は、非芳香族環系、不飽和又は部分不飽和環系を言う。例えば、3 から 10 員の置換又は非置換シクロアルキル環系で、1 つ以上のヘテロ原子を含み、ヘテロ原子は同じでも異なっていても良く、ヘテロ原子は窒素（N）、酸素（O）、硫黄（S）、リン（P）及びケイ素（Si）からなる群から選択され、任意選択的に 1 つ以上の二重結合を含むことある。
【００７５】
シクロヘテロアルキル環は、任意選択的に、他のシクロヘテロアルキル環及び／又は非芳香族炭化水素環に縮合していても良いし、結合していても良い。複素環は、酸素、硫黄及び窒素から独立して選択される 1 から 3 個のヘテロ原子を有する複素環を含み、酸素、硫黄及び窒素の中で、前記窒素及び硫黄ヘテロ原子は任意選択的に酸化されても良く、前記窒素ヘテロ原子は任意選択的に四級化されても良い。ある実施形態では、用語複素環（heterocylic）は、非芳香族 5, 6 若しくは 7 員環、又は少なくとも 1 つの環原子がO, S 及び N から選択されるヘテロ原子（ここで、前記窒素及び硫黄ヘテロ原子は任意選択的に酸化されていても良い）である多環式基を指し、限定されるものではないが、二環式基又は三環式基を含み、酸素、硫黄及び窒素から独立して選択される 1 つから 3 つのヘテロ原子を有する縮合 6 員環を含み、ここで、（i）各 5 員環は 0 から 2 個の二重結合を有し、各 6 員環は 0 から 2 個の二重結合を有し、並びに各 7 員環は 0 から 3 個の二重結合を有し、（ii）前記窒素及び硫黄ヘテロ原子は、任意選択的に酸化されていても良く、（iii）前記窒素ヘテロ原子は、任意選択的に四級化されていても良く、及び（iv）上記複素環のいずれかがアリール環又はヘテロアリール環に縮合していても良い。限定されるものではないが、代表的なシクロヘテロアルキル環系には、ピロリジニル、ピロリニル、イミダゾリジニル、イミダゾリニル、ピラゾリジニル、ピラゾリニル、ピペリジル、ピペラジニル、インドリニル、キヌクリジニル、モルホリニル、チオモルホリニル、チアジアジナニル（thiadiazinanyl）、テトラヒドロフラニルなどが含まれる。
【００７６】
用語「シクロアルキル（cycloalkyl）」及び「ヘテロシクロアルキル（heterocycloalkyl）」は、単独で又は他の用語との組み合わせで、特に明記しない限り、それぞれ「アルキル（alkyl）」及び「ヘテロアルキル（heteroalkyl）」の環式バージョンを表す。さらに、ヘテロシクロアルキルの場合、ヘテロ原子が、前記複素環が前記分子の残りに結合している位置を占めることがある。限定されるものではないが、シクロアルキルの例としては、シクロペンチル、シクロヘキシル、1-シクロヘキセニル、3-シクロヘキセニル、シクロヘプチルなどが含まれる。限定されるものではないが、ヘテロシクロアルキルの例としては、1-(1,2,5,6- テトラヒドロピリジル）、1-ピペリジニル、2-ピペリジニル、3-ピペリジニル、4-モルホリニル、3-モルホリニル、テトラヒドロフラン-2-イル、テトラヒドロフラン-3-イル、テトラヒドロチエン-2-イル、テトラヒドロチエン-3-イル、1-ピペラジニル、2-ピペラジニルなどが含まれる。用語「シクロアルキレン（cycloalkylene）」及び「ヘテロシクロアルキレン（heterocycloalkylene）」は、それぞれシクロアルキル及びヘテロシクロアルキルの二価誘導体を指す。
【００７７】
不飽和アルキル基は、1 つ以上の二重結合又は三重結合を有するアルキル基である。限定されるものではないが、不飽和アルキル基の例には、ビニル、2-プロペニル、クロチル、2-イソペンテニル、2-（ブタジエニル）、2,4-ペンタジエニル、3-(1,4-ペンタジエニル)、エチニル、1 - 及び3-プロピニル、3-ブチニル、及び高級同族体及び異性体が含まれる。炭化水素基に限定されるアルキル基は、「ホモアルキル（homoalkyl）」と呼ばれる。
【００７８】
より具体的には、本明細書で使用される用語「アルケニル（alkenyl）」は、単一の水素分子の除去による少なくとも 1 つの炭素‐炭素二重結合を有し、C1-20 を包括する直鎖又は分枝炭化水素部分から誘導される一価の基を指す。アルケニル基としては、例えば、エテニル（すなわち、ビニル）、プロペニル、ブテニル、1-メチル-2-ブテン-1-イル、ペンテニル、ヘキセニル、オクテニル、アレニル及びブタジエニルが含まれる。
【００７９】
本明細書で使用される用語「シクロアルケニル（cycloalkenyl）」は、少なくとも 1 つの炭素‐炭素二重結合を含む環状炭化水素を指す。シクロアルケニル基の例には、シクロプロペニル、シクロブテニル、シクロペンテニル、シクロペンタジエン、シクロヘキセニル、1,3-シクロヘキサジエン、シクロヘプテニル、シクロヘプタトリエニル及びシクロオクテニルが含まれる。
【００８０】
本明細書で使用される用語「アルキニル（alkynyl）」は、少なくとも 1 つの炭素‐炭素三重結合を含む、意図した数の炭素原子の直鎖又は分枝鎖の C1-20 炭化水素から誘導される一価の基を指す。「アルキニル（alkynyl）」の例としては、エチニル、2-プロピニル（プロパルギル）、1-プロピニル、ペンチニル、ヘキシニル、及びヘプチニル基などが含まれる。
【００８１】
用語「アルキレン（alkylene）」は、単独で又は別の置換基の一部は、1 から約 20 個の炭素原子（例えば、1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 又は 20 個の炭素原子）を有するアルキル基から誘導される直鎖又は分枝鎖の二価の脂肪族炭化水素基を指す。前記アルキレン基は、直鎖、分枝鎖又は環式であることがある。前記アルキレン基はまた、任意選択的に不飽和及び／又は 1 個以上の「アルキル基置換基（alkyl group substituents）」で置換されていても良い。1つ以上の酸素、硫黄又は置換若しくは非置換の窒素原子（本明細書中では「アルキルアミノアルキル（alkylaminoalkyl）」とも呼ばれる）をアルキレン基に沿って任意選択的に挿入することができ、ここで、前記窒素置換基は先に記載したようにアルキルである。例示的なアルキレン基には、メチレン（-CH2-）；エチレン（-CH2-CH2-）；プロピレン（-(CH2)3-）；シクロヘキシレン（-C6H10-）；-CH=CH-CH=CH-；-CH=CH-CH2-；-CH2CH2CH2CH2-, -CH2CH=CHCH2-, -CH2CsCCH2-, -CH2CH2CH(CH2CH2CH3)CH2-, -(CH2)q-N(R)-(CH2)r- が含まれ、ここで、q 及び r の各々は、独立して、0 から約 20 の整数（0, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 又は 20）であり、R は水素又は低級アルキル；メチレンジオキシル（-O-CH2-O-）；及びエチレンジオキシル（-O-(CH2)2-O-）である。アルキレン基は、約 2 から約 3 個の炭素原子を有することがあり、さらに 6 から 20 個の炭素を有することがある。典型的には、アルキル（又はアルキレン）基は 1 から 24 個の炭素原子を有し、10 個以下の炭素原子を有する基は本発明のいくつかの実施形態である。「低級アルキル（lower alkyl）」又は「低級アルキレン（lower alkylene）」は、一般に 8 個以下の炭素原子を有する、より短い鎖のアルキル又はアルキレン基である。
【００８２】
用語「ヘテロアルキレン（heteroalkylene）」は、単独で又は別の置換基の一部として、ヘテロアルキルから誘導される二価基を意味し、例えば、限定されるものではないが、-CH2-CH2-S-CH2-CH2- 及び -CH2-S-CH2-CH2-NH-CH2- が例示される。ヘテロアルキレン基の場合、ヘテロ原子はまた、鎖末端のどちらか又は両方を占有することがある（例えば、アルキレンオキソ、アルキレンジオキソ、アルキレンアミノ、アルキレンジアミノなど）。さらに、アルキレン及びヘテロアルキレン連結基の場合、前記連結基の配向は、前記連結基の式が書かれている方向によって示唆されていない。例えば、式 -C(O)OR’- は、-C(O)OR’- 及び -R’OC(O)- の両方を表す。
【００８３】
用語「アリール（aryl）」は、特に明記しない限り、一緒に縮合しているか又は共有結合している単環又は多環（例えば 1 から 3 環）のことがある芳香族炭化水素置換基を意味する。用語「ヘテロアリール（heteroaryl）」は、N、O 及び S から選択される 1 から 4 個のヘテロ原子を含有する（複数の環の場合はそれぞれ別個の環にある）アリール基（又は環）を指し、ここで、前記窒素及び硫黄原子は任意選択的に酸化されていて、前記窒素原子は任意選択的に四級化されている。ヘテロアリール基は、炭素又はヘテロ原子を介して前記分子の残りに結合することがある。アリール及びヘテロアリール基の非限定的な例には、フェニル、1-ナフチル、2-ナフチル、4-ビフェニル、1-ピロリル、2-ピロリル、3-ピロリル、3-ピラゾリル、2-イミダゾリル、4-イミダゾリル、ピラジニル、2-オキサゾリル、4-オキサゾリル、2-フェニル-4-オキサゾリル、5-オキサゾリル、3-イソオキサゾリル、4-イソオキサゾリル、5-イソオキサゾリル、2-チアゾリル、4-チアゾリル、5-チアゾリル、2-フリル、3-フリル、2-チエニル、3-チエニル、2-ピリジル、3-ピリジル、4-ピリジル、2-ピリミジル、4-ピリミジル、5-ベンゾチアゾリル、プリニル、2-ベンズイミダゾリル、5-インドリル、1-イソキノリル、5-イソキノリル、2-キノキサリニル、5-キノキサリニル、3-キノリル及び 6-キノリルが含まれる。上記アリール及びヘテロアリール環系のそれぞれの置換基は、以下に記載される許容される置換基の群から選択される。用語「アリーレン（arylene）」及び「ヘテロアリーレン（heteroarylene）」は、それぞれアリール及びヘテロアリールの二価の形態をいう。
【００８４】
簡潔にするために、用語「アリール（aryl）」は、他の用語（例えば、アリールオキシ、アリールチオキシ、アリールアルキル）と組み合わせて使用される場合、上記で定義したアリール環及びヘテロアリール環の両方を含む。したがって、用語「アリールアルキル（arylalkyl）」及び「ヘテロアリールアルキル（heteroarylalkyl）」は、アリール又はヘテロアリール基が、アルキル基（例えば、ベンジル、フェネチル、ピリジルメチル、フリルメチルなど）に結合している基を含むことを意味し、炭素原子（例えば、メチレン基）が例えば酸素原子で置換された（例えば、フェノキシメチル、2-ピリジルオキシメチル、3-(1-ナフチルオキシ)プロピルなど）アルキル基を含む。しかしながら、本明細書で使用される用語「ハロアリール（haloaryl）」は、1 つ以上のハロゲンで置換されたアリールのみを包含することを意味する。
【００８５】
ヘテロアルキル、ヘテロシクロアルキル又はヘテロアリールが特定の数の員（例えば「3 から 7 員（3 to 7 membered）」）を含む場合、用語「員（member）」は炭素又はヘテロ原子を指す。
【００８６】
さらに、式：
【化３３】
2020522506.tif 000035
で一般的に表される構造は、本明細書で使用されるように、環構造を意味し、例えば、限定されるものではないが、3-炭素、4-炭素、5-炭素、6-炭素、7-炭素などの脂肪族及び／又は芳香族環式化合物であり、飽和環構造、部分的に飽和した環構造及び不飽和環構造を含み、置換基 R 基を含み、ここで、前記 R 基は存在しても存在しなくても良く、存在している場合は、1 つ以上の R 基は、前記環構造の 1 つ以上の利用可能な炭素原子上でそれぞれ置換されていても良い。R 基の有無及び R 基の数は、変数「n」の値によって決定され、n は一般に 0 から置換可能な環上の炭素原子の数を範囲とする値を有する整数である。各 R 基は、複数存在する場合、別の R 基よりも寧ろ、前記環構造の利用可能な炭素において置換される。例えば、n が 0 から 2 である上記の構造は、限定されるものではないが、以下を含む化合物群を含むであろう：
【化３４】
2020522506.tif 000036
など。
【００８７】
環式環構造中の結合を表す破線は、前記結合が前記環内に存在することも存在しないこともあることを示す。すなわち、環式環構造中の結合を表す破線は、前記環構造が飽和環構造、部分飽和環構造及び不飽和環構造からなる群から選択されることを示す。
【００８８】
記号
【化３５】
2020522506.tif 000037
は、前記分子の残部への部分の結合点を示す。
【００８９】
芳香族環又は複素環式芳香族環の指定原子が「存在しない（absent）」と定義される場合、指定された原子は直接結合によって置換される。
【００９０】
上記の各用語（例えば、「アルキル（alkyl）」、「ヘテロアルキル（heteroalkyl）」、「シクロアルキル（cycloalkyl）」及び「ヘテロシクロアルキル（heterocycloalkyl）」、「アリール（aryl）」、「ヘテロアリール（heteroaryl）」、「ホスホネート（phosphonate）」及び「スルホネート（sulfonate）」並びにそれらの二価誘導体）は、示された基の置換型及び非置換型の両方を含むことを意味する。各タイプの基についての任意選択的な置換基を以下に示す。
【００９１】
アルキル、ヘテロアルキル、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル一価及び二価誘導体基（アルキレン、アルケニル、ヘテロアルキレン、ヘテロアルケニル、アルキニル、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、シクロアルケニル及びヘテロシクロアルケニルとしばしば呼ばれる基を含む）の置換基は、限定されるものではないが、以下から選択される 1 つ以上の様々な基であることがある：ゼロから (2m’+l) の範囲にある数の -OR’, =O, =NR’, =N-OR’, -NR’R”, -SR’, -ハロゲン, -SiR’R”R’”, -OC(O)R’, -C(O)R’, -CO2R’, -C(O)NR’R”, -OC(O)NR’R”, -NR”C(O)R’, -NR’-C(O)NR”R’”, -NR”C(O)OR’, -NR-C(NR’R”)=NR’”, -S(O)R’, -S(O)2R’, -S(O)2NR’R”, -NRSO2R’, -CN 及び -NO2 （ここで、m 'はこのような基における炭素原子の総数である）。R’, R”, R’” 及び R”” はそれぞれ独立して水素、置換若しくは非置換ヘテロアルキル、置換若しくは非置換シクロアルキル、置換若しくは非置換ヘテロシクロアルキル、置換若しくは非置換アリール（例えば、1 から3個のハロゲンで置換されたアリール）、置換若しくは非置換アルキル、アルコキシ若しくはチオアルコキシ基、又はアリールアルキル基を意味することがある。本明細書で使用する「アルコキシ（alkoxy）」基は、二価の酸素を介して分子の残部に結合したアルキルである。本発明の化合物が 2 つ以上の R 基を含む場合、例えば、R 基の各々は、各 R’, R”, R’” 及び R”” 基が、これらの基の 2 つ以上が存在する場合に、独立して選択されるように、独立して選択される。R' 及び R" が同じ窒素原子に結合している場合、それらは窒素原子と合わさって 4-, 5-, 6-, 又は 7-員環を形成することがある。例えば、-NR'R" は、限定されるものではないが、1-ピロリジニル及び4-モルホリニルを含むことを意味する。置換基の上記考察から、当業者のある者は、用語「アルキル（alkyl）」は、ハロアルキル（例えば、-CF3 及び -CH2CF3）並びにアシル（例えば、-C(O)CH3, -C(O)CF3, -C(O)CH2OCH3 など）のような水素基以外の基に結合した炭素原子を含む基を含むことを意味すると理解するであろう。
【００９２】
上記のアルキル基について記載した置換基と同様に、アリール基及びヘテロアリール基（並びにそれらの二価誘導体）の例示的な置換基は様々であり、例えば、以下から選択される：ゼロから芳香族環系における空いている価数の総数までの範囲にある数の、ハロゲン, -OR’, -NR’R”, -SR’, -SiR’R”R’”, -OC(O)R’, -C(O)R’, -CO2R’, -C(O)NR’R”, -OC(O)NR’R”, -NR”C(O)R’, -NR’-C(O)NR”R’”, -NR”C(O)OR’, -NR-C(NR’R”R’”)=NR””, -NR-C(NR’R”)=NR’” -S(O)R’, -S(O)2R’, -S(O)2NR’R”, -NRSO2R’, -CN 及び -NO2, -R’, -N3, -CH(Ph)2, フルオロ(C1-C4)アルコキソ, 及び フルオロ(C1-C4)アルキル；ここで、R’, R”, R’” 及び R”” は、独立して、水素、置換又は非置換アルキル、置換又は非置換ヘテロアルキル、置換又は非置換シクロアルキル、置換又は非置換ヘテロシクロアルキル、置換又は非置換アリール及び置換又は非置換ヘテロアリールから選択されることがある。本発明の化合物が 2 つ以上の R 基を含む場合、例えば、R 基の各々は、各 R’, R”, R’” 及び R”” 基が、これらの基の 2 つ以上が存在する場合、独立して選択されるように、独立して選択される。
【００９３】
アリール又はヘテロアリール環の隣接原子上の 2 つの置換基は、式-T-C(O)-(CRR’)q-U- の環を任意選択的に形成することがあり、式中、T 及び U は独立して -NR-, -O-, -CRR’- 又は単結合であり、q は 0 から 3 の整数である。あるいは、アリール環又はヘテロアリール環の隣接原子上の 2 つの置換基は、式 -A-(CH2)r-B- の置換基で置換されていても良く、式中、A 及び B は独立して -CRR’-, -O-, -NR-, -S-, -S(O)-, -S(O)2-, -S(O)2NR’- 又は単結合であり、r は 1 から 4 の整数である。
【００９４】
このようにして形成された新しい環の単結合の 1 つは、任意選択的に二重結合で置換されていても良い。あるいは、アリール環又はヘテロアリール環の隣接原子上の 2 つの置換基は、式 -(CRR’)s-X’- (C”R’”)d- の置換基で置換されていても良く、ここで、 s 及び d は独立して 0 から 3 の整数であり、X' は、-O-, -NR’-, -S-, -S(O)-, -S(O)2- 又は -S(O)2NR’-である。前記置換基 R, R’, R” 及び R’” は、水素、置換又は非置換アルキル、置換又は非置換シクロアルキル、置換又は非置換ヘテロシクロアルキル、置換又は非置換アリール、及び置換又は非置換ヘテロアリールから独立して選択することができる。
【００９５】
本明細書で使用される場合、用語「アシル（acyl）」は有機酸基を意味し、ここで、カルボキシル基の -OH が別の置換基で置換されていて、一般式RC(=O)-（式中、本明細書で定義されるように、R はアルキル、アルケニル、アルキニル、アリール 、炭素環式、複素環式、又は芳香族複素環式基である）である。そのようなものとして、用語「アシル（acyl）」には、具体的には、2-(フラン-2-イル)アセチル)- 及び 2-フェニルアセチル基などのアリールアシル基が含まれる。アシル基の具体例には、アセチル及びベンゾイルが含まれる。アシル基にはまた、アミド、-RC(=O)NR’、エステル、-RC(=O)OR’、ケトン、-RC(=O)R’ 及びアルデヒド、-RC(=O)H が含まれることが意図される。
【００９６】
用語「アルコキシル（alkoxyl）」又は「アルコキシ（alkoxy）」は、本明細書では互換的に使用され、酸素原子を介して親分子部分に結合した飽和（すなわち、アルキル-O-）又は不飽和（すなわち、アルケニル-O- 及びアルキニル-O-）基を意味する。ここで、用語「アルキル（alkyl）」、「アルケニル（alkenyl）」及び「アルキニル（alkynyl）」は先に記載した通りであり、例えば C1-20 包括的な、直鎖、分岐又は環式の、飽和又は不飽和オキソ炭化水素鎖が含まれることがあり、例えば、メトキシ、エトキシ、プロポキシル、イソプロポキシル、n-ブトキシル、sec-ブトキシル、tert-ブトキシル、及び n-ペントキシル、ネオペントキシル、n-ヘキソキシルなどが含まれる。
【００９７】
本明細書で使用される用語「アルコキシアルキル（alkoxyalkyl）」は、アルキル-O-アルキルエーテルを意味し、例えばメトキシエチル又はエトキシメチル基である。
【００９８】
「アリールオキシル（Aryloxyl）」はアリール-O- 基を意味し、ここで、前記アリール基は先に記載した通りであり、置換アリールを含む。本明細書で使用される用語「アリールオキシル（Aryloxyl）」は、フェニルオキシル若しくはヘキシルオキシル、及びアルキル、置換アルキル、ハロ若しくはアルコキシル置換フェニルオキシル又はヘキシルオキシルを意味することがある。
【００９９】
「アラルキル（Aralkyl）」は、アリール‐アルキル基を意味し、ここで、アリール及びアルキルは先に記載した通りであり、置換アリール及び置換アルキルを含む。例示的なアラルキル基には、ベンジル、フェニルエチル及びナフチルメチルが含まれる。
【０１００】
「アラルキルオキシル（Aralkyloxyl）」は、アラルキル-O- 基を意味し、ここで、前記アラルキル基は先に記載したとおりである。例示的なアラルキルオキシル基はベンジルオキシル、すなわち C6H5-CH2-O- である。アラルキルオキシル基は、任意選択的に置換されることがある。
【０１０１】
「アルコキシカルボニル（Alkoxycarbonyl）」は、アルキル-O-C(=O)- 基を意味する。例示的なアルコキシカルボニル基としては、メトキシカルボニル、エトキシカルボニル、ブチルオキシカルボニル、及び tert-ブチルオキシカルボニルが含まれる。
【０１０２】
「アリールオキシカルボニル（Aryloxycarbonyl）」は、アリール-O-C(=O)- 基を意味する。例示的なアリールオキシカルボニル基には、フェノキシ‐及びナフトキシ‐カルボニルが含まれる。
【０１０３】
「アラルコキシカルボニル（Aralkoxycarbonyl）」は、アラルキル-O-C(=O)- 基を意味する。例示的なアラルコキシカルボニル基は、ベンジルオキシカルボニルである。
【０１０４】
「カルバモイル（Carbamoyl）」は、式 -C(=O)NH2 のアミド基を意味する。「アルキルカルバモイル（Alkylcarbamoyl）」は、R’RN-C(=O)- 基を意味し、式中、R 及び R' の一方が水素であり、R 及び R' の他方が前記のようなアルキル及び／又は置換アルキルである。「ジアルキルカルバモイル（Dialkylcarbamoyl）」は、R’RN-C(=O)- 基を意味し、式中、R 及び R' の各々は、独立して、先に記載したようなアルキル及び／又は置換アルキルである。
【０１０５】
本明細書で使用される用語カルボニルジオキシル（carbonyldioxyl）は、式 -O-C(=O)-OR の炭酸塩基を指す。
【０１０６】
「アシルオキシル（Acyloxyl）」とは、アシル-O- 基を意味し、ここで、アシルは先に記載したとおりである。
【０１０７】
用語「アミノ（amino）」は、-NH2 基を意味し、1 つ以上の水素ラジカルを有機ラジカルによって置換したアンモニアに由来する当技術分野で知られている窒素含有基をも意味する。例えば、用語「アシルアミノ（acylamino）」及び「アルキルアミノ（alkylamino）」は、それぞれアシル及びアルキル置換基を有する特定の N-置換有機ラジカルを意味する。
【０１０８】
本明細書で使用する「アミノアルキル（aminoalkyl）」は、アルキレンリンカーに共有結合したアミノ基を意味する。より具体的には、本明細書で使用される用語アルキルアミノ（alkylamino）、ジアルキルアミノ（dialkylamino）及びトリアルキルアミノ（trialkylamino）は、窒素原子を介して親分子部分に結合した、それぞれ 1, 2 又は 3 個の、先に定義したようなアルキル基を意味する。用語アルキルアミノ（alkylamino）は、構造式 -NHR' を有する基を意味し、式中、R' は、前に定義したようなアルキル基である；用語ジアルキルアミノ（dialkylamino）は、構造式 -NR'R" を有する基を意味し、式中、R' 及び R" は、それぞれ独立して、アルキル基からなる群から選択される；用語トリアルキルアミノ（trialkylamino）は、構造式 -NR'R"R"' を有する基を意味し、式中、R', R'' 及び R''' は、それぞれ独立してアルキル基からなる群から選択される。さらに、R', R'' 及び／又は R''' はまとまって、任意選択的に -(CH2)k- であることがあり、ここで、k は 2 から 6 の整数である。限定されるものではないが、例には、メチルアミノ、ジメチルアミノ、エチルアミノ、ジエチルアミノ、ジエチルアミノカルボニル、メチルエチルアミノ、イソプロピルアミノ、ピペリジノ、トリメチルアミノ及びプロピルアミノが含まれる。
【０１０９】
アミノ基は -NR'R" であり、ここで、 R' 及び R" は典型的には、水素、置換若しくは非置換アルキル、置換若しくは非置換ヘテロアルキル、置換若しくは非置換シクロアルキル、置換若しくは非置換ヘテロシクロアルキル、置換若しくは非置換アリール、又は置換若しくは非置換ヘテロアリールから選択される。
【０１１０】
用語アルキルチオエーテル（alkylthioether）及びチオアルコキシル（thioalkoxyl）は、硫黄原子を介して親分子部分に結合した飽和（すなわち、アルキル-S-）又は不飽和（すなわち、アルケニル-S- 及びアルキニル-S-）基を意味する。限定されるものではないが、チオアルコキシル部分の例としては、メチルチオ、エチルチオ、プロピルチオ、イソプロピルチオ、n-ブチルチオなどが含まれる。
【０１１１】
「アシルアミノ（Acylamino）」とは、アシル-NH- 基を意味し、ここで、アシルは上記のとおりである。「アロイルアミノ（Aroylamino）」は、アロイル-NH- 基を意味し、ここで、アロイルは上記のとおりである。
【０１１２】
用語「カルボニル（carbonyl）」は -C(=O)- 基を意味し、一般式 R-C(=O)H で表されるアルデヒド基を含むことがある。
【０１１３】
用語「カルボキシル（carboxyl）」は、-COOH 基を意味する。そのような基は、本明細書では「カルボン酸（carboxylic acid）」部分とも呼ばれる。
【０１１４】
本明細書で使用する用語「ハロ（halo）」、「ハロゲン化物（halide）」又は「ハロゲン（halogen）」は、フルオロ、クロロ、ブロモ及びヨード基を意味する。さらに、「ハロアルキル（haloalkyl）」などの用語は、モノハロアルキル及びポリハロアルキルを含むことを意味する。例えば、限定されるものではないが、用語「ハロ(C1-C4)アルキル（halo(C1-C4)alkyl）」は、トリフルオロメチル、2,2,2-トリフルオロエチル、4-クロロブチル、3-ブロモプロピルなどを含むことを意味する。
【０１１５】
用語「ヒドロキシル（hydroxyl）」は、-OH 基を意味する。
【０１１６】
用語「ヒドロキシアルキル（hydroxyalkyl）」は、-OH 基で置換されたアルキル基を意味する。
【０１１７】
用語「メルカプト（mercapto）」は、-SH 基を意味する。
【０１１８】
本明細書で使用する用語「オキソ（oxo）」は、炭素原子又は他の元素に二重結合している酸素原子を意味する。
【０１１９】
用語「ニトロ（nitro）」は、-NO2 基を意味する。
【０１２０】
用語「チオ（thio）」は、本明細書中で前に記載された化合物を意味し、ここで、炭素又は酸素原子が硫黄原子によって置換されている。
【０１２１】
用語「硫酸（sulfate）」は、-SO4 基を意味する。
【０１２２】
本明細書で使用される用語チオヒドロキシル（thiohydroxyl）又はチオール（thiol）は、式 -SH の基を意味する。
【０１２３】
より具体的には、用語「スルフィド（sulfide）」は、式 -SR の基を有する化合物を意味する。
【０１２４】
用語「スルホン（sulfone）」は、スルホニル基 -S(O2)R を有する化合物を意味する。
【０１２５】
用語「スルホキシド（sulfoxide）」は、スルフィニル基 -S(O)R を有する化合物を意味する。
【０１２６】
用語ウレイド（ureido）は、式 -NH-CO-NH2 の尿素基を意味する。
【０１２７】
式（I）の化合物に関して用語「保護基（protecting group）」は、前記分子中の再生官能基（regenerated functional group）又は他の官能基を攻撃しない、容易に入手可能な試薬によって選択的に除去することができる化学的置換基を指す。適切な保護基は、当技術分野で公知であり、引き続き開発されている。適切な保護基は、例えば、Wutz et al（「Greene's Protective Groups in Organic Synthesis, 第 4 版」Wiley-Interscience, 2007）に見出すことができる。Wutz らによって記載されているように（533-643 頁）、カルボキシル基の保護のための保護基は、ある実施形態において使用される。ある実施形態では、前記保護基は酸処理により除去可能である。限定されるものではないが、保護基の代表的な例には、ベンジル、p-メトキシベンジル（PMB）、tert-ブチル（t-Bu）、メトキシメチル（MOM）、メトキシエトキシメチル（MEM）、メチルチオメチル（MTM）、テトラヒドロピラニル（THP）、テトラヒドロフラニル（THF）、ベンジルオキシメチル（BOM）、トリメチルシリル（TMS）、トリエチルシリル（TES）、t-ブチルジメチルシリル（TBDMS）及びトリフェニルメチル（トリチル、Tr）が含まれる。当業者は、保護基を必要とする適切な状況を認識し、特定の状況で使用するために適切な保護基を選択することができるであろう。
【０１２８】
明細書及び特許請求の範囲全体を通して、所与の化学式又は名称は、すべての互変異性体、同族体及び光学異性体及び立体異性体、並びにそのような異性体及び混合物が存在するラセミ混合物を包含する。
【０１２９】
本発明のある化合物は、不斉炭素原子（光学的又はキラル中心）又は二重結合を有することがあり；鏡像異性体（enantiomers）、ラセミ体（racemates）、ジアステレオマー（diastereomers）、互変異性体（tautomers）、幾何異性体（geometric isomers）、絶対立体化学的に、(R)- 若しくは (S)- として、又はアミノ酸の D- 若しくは L- として定義されることがある立体異性体（stereoisometric forms）、並びに個々の異性体は本発明の範囲内に包含される。本発明の化合物は、あまりにも不安定で合成及び／又は単離することができないものと当技術分野で知られている化合物を含まない。本発明は、ラセミ体、スカレミック体（scalemic）、及び光学的に純粋な形態にある化合物を含むことを意味する。光学活性な (R)- 及び (S)- 又は D- 及び L- 異性体は、キラルなシントン又はキラル試薬を用いて調製することができ、又は従来の技術を用いて分割することができる。本明細書に記載の化合物がオレフィン結合又は他の幾何学的非対称中心を含む場合、他に特定しない限り、前記化合物は E 及び Z 幾何異性体の両方を含むことが意図される。
【０１３０】
特に明記しない限り、本明細書に示される構造はまた、前記構造の全ての立体化学的形態（即ち、各不斉中心についての R 及び S 立体配置）を含むことを意味する。したがって、本発明の化合物の単一の立体化学異性体並びに鏡像異性体（enantiomeric）及びジアステレオマーの混合物は、本発明の範囲内である。
【０１３１】
本発明のある化合物が互変異性体の形態で存在し得ることは、当業者のある者には明らかであり、前記化合物のそのような全ての互変異性体形態は、本発明の範囲内である。本明細書で使用される用語「互変異性体（tautomer）」は、平衡状態で存在し、1 つの異性体形態から別の異性体形態に容易に変換される 2 つ以上の構造異性体のうちの 1 つを意味する。
【０１３２】
特に明記しない限り、本明細書に示される構造は、1 つ以上の同位体濃縮原子が存在している点においてのみ異なる化合物も含むことを意味する。例えば、重水素若しくはトリチウムによる水素の置換、又は 13C- 若しくは I4C- 富化炭素による炭素の置換を伴う本発明の構造を有する化合物は、本発明の範囲内である。
【０１３３】
本発明の化合物はまた、そのような化合物を構成する原子の 1 つ以上に、自然にはない割合の原子同位体を含むことがある。例えば、前記化合物は、例えばトリチウム（3H）、ヨウ素-125（125I）又は炭素-14（14C）のような放射性同位元素で放射性標識されても良い。放射性であろうとなかろうと、本発明の化合物の全ての同位体のバリエーションは、本発明の範囲内に包含される。
【０１３４】
本発明の化合物は、塩として存在しても良い。本発明は、そのような塩を含む。適用可能な塩形態の例には、塩酸塩、臭化水素酸塩、硫酸塩、メタンスルホン酸塩、硝酸塩、マレイン酸塩、酢酸塩、クエン酸塩、フマル酸塩、酒石酸塩（例えば、(+)-酒石酸塩、(-)-酒石酸塩又はラセミ混合物を含むそれらの混合物）、コハク酸塩、安息香酸塩及びグルタミン酸のようなアミノ酸の塩が含まれる。これらの塩は、当業者に公知の方法によって調製することができる。また、ナトリウム、カリウム、カルシウム、アンモニウム、有機アミノ若しくはマグネシウム塩などの塩基付加塩又は類似の塩も含まれる。本発明の化合物が比較的塩基性の官能基を含む場合、酸付加塩は、このような化合物の中性形態を、そのまま若しくは適切な不活性溶媒中で、十分な量の所望の酸と接触させる、又はイオン交換によって、得ることができる。許容される酸付加塩の例は、塩酸、臭化水素酸、硝酸、炭酸、炭酸一水素（monohydrogencarbonic）、リン酸、リン酸一水素（monohydrogenphosphoric）、リン酸二水素（dihydrogenphosphoric）、硫酸、硫酸一水素（monohydrogensulfuric）、ヨウ化水素酸又は亜リン酸などの無機酸に由来する塩、並びに酢酸、プロピオン酸、イソ酪酸、マレイン酸、マロン酸、安息香酸、コハク酸、スベリン酸、フマル酸、乳酸、マンデル酸、フタル酸、ベンゼンスルホン酸、p-トリルスルホン酸、クエン酸、酒石酸、メタンスルホン酸などの有機酸に由来する塩が含まれる。また、アルギン酸塩などのアミノ酸の塩、及びグルクロン酸又はガラクツロン酸などの有機酸の塩も含まれる。本発明のある具体的な化合物は、化合物が塩基付加塩又は酸付加塩のいずれかに変換されることを可能にする塩基性官能基及び酸性官能基の両方を含む。
【０１３５】
前記化合物の中性形態は、前記塩を塩基又は酸と接触させ、親化合物を従来の方法で単離することによって再生することができる。前記化合物の親形態は、極性溶媒への溶解性などのある物理的性質において、様々な塩形態とは異なる。
【０１３６】
本発明のある化合物は、非溶媒和形態並びに水和形態を含む溶媒和形態で存在することがある。一般に、前記溶媒和形態は、非溶媒和形態と均等であり、本発明の範囲内に包含される。本発明のある化合物は、多結晶又は非晶質形態で存在することがある。一般に、すべての物理的形態は、本発明によって企図される使用と均等であり、本発明の範囲内にあることが意図される。
【０１３７】
塩形態に加えて、本発明は、プロドラッグ形態である化合物を提供する。本明細書に記載の化合物のプロドラッグは、生理的条件下で容易に化学変化を受けて本発明の化合物を提供する化合物である。さらに、プロドラッグを、生体外環境において化学的又は生化学的方法によって本発明の化合物に変換することができる。例えば、プロドラッグを、適切な酵素又は化学試薬を用いて経皮パッチ・リザーバーに入れた場合に、本発明の化合物にゆっくりと変換するようにしても良い。
【０１３８】
長年にわたる特許法の慣例に従い、用語「a」、「an」及び「the」は、特許請求の範囲を含む本出願で使用される場合、「1 つ以上（one or more）」を意味する。したがって、例えば、「被験体（a subject）」との記載は、文脈が明らかに反対（例えば、複数の被験体（a plurality of subjects））でない限り、複数の被験体（a plurality of subjects）なども含む。
【０１３９】
本明細書及び特許請求の範囲を通して、文脈が排他的であることを求める場合を除いて、用語「含む（comprise）」、「含む（comprises）」及び「含む（comprising）」は、非排他的な意味で使用される。同様に、用語「含む（include）」及びその文法上の変形は非限定的であることが意図され、リスト内に項目を列挙することは、リストされた項目と置換され得る又はこれに追加され得る他の同様の項目を除外するものではない。
【０１４０】
本明細書及び添付の特許請求の範囲の目的において、他に示さない限り、本明細書及び特許請求の範囲で使用される量、大きさ、寸法、割合、形状、剤形、パラメーター、パーセンテージ、量、特徴及び他の数値を表現する全ての数字は、用語「約（about）」がその値、量又は範囲と共に明示的に現れなくても、すべての場合において、「約（about）」という用語によって修飾されると理解されるべきである。したがって、反対のことが示されていない限り、以下の明細書及び添付の特許請求の範囲に記載された数値パラメータは、正確ではなく及び正確である必要はないが、本明細書に開示される発明によって得られることが求められる所望の特性に応じて、許容誤差、換算係数、四捨五入、測定誤差など、及び当業者に知られている他の因子を考慮しながら、所望のように近似するものであり及び／又はより大きい若しくはより小さいものである。例えば、値を指す場合、用語「約（about）」は、特定の量から、ある実施形態では± 100 ％、ある実施形態では± 50 ％、ある実施形態では± 20 ％、ある実施形態では± 10 ％、ある実施形態では± 5 ％、ある実施形態では± 1 ％、ある実施形態では± 0.5 ％、ある実施形態では± 0.1 ％のバリエーションを包含することを意味し、そのようなバリエーションは本発明の方法を実施し、本発明の化合物を使用するのに適切である。
【０１４１】
さらに、用語「約（about）」は、1 つ以上の数字又は数値範囲と関連して使用される場合、ある範囲内のすべての数値を含むようなすべての数値を意味するものと理解されるべきであり、記載された数値の上及び下の境界を拡張することによってその範囲を変更する。エンドポイントによって数値範囲を記載することは、その範囲内に包含される全ての数、例えば、整数全体、その分数を含み（例えば、1 から 5 を記載することは 1, 2, 3, 4 及び 5 を含み、並びに、それらの分数（例えば1.5, 2.25, 3.75, 4.1 など）を含む、及びその範囲内の任意の範囲を含む。
【実施例】
【０１４２】
以下に示す実施例は、本明細書で開示されている発明の代表的な実施態様を実施するのに、当業者のある者に指針を提供するために含まれている。本発明及び当業者の一般的なレベルに照らして、当業者であれば、以下の実施例は例示的なものに過ぎず、本明細書で開示されている発明の範囲から逸脱することなく多くの変更、改変、修正を行い得るものとして理解できるであろう。以下の合成の説明及び具体的な実施例は、説明のためにのみ意図されており、他の方法による本発明の化合物の製造方法を制限するものとして解釈されるべきではない。
【０１４３】
実施例１    
要旨
PSMA を発現する腫瘍のイメージング及び可能な放射線療法のために、キレート化した放射性金属に種々の連結基を介して結合させた PSMA 結合尿素を使用することは、以前にいくつかの特許出願及び刊行物に報告されている（Tykvart ら (2015) Journal of medicinal chemistry 58, 4357-63； Banerjee ら (2015) Journal of nuclear medicine 56, 628-34；Benesova ら (2015) Journal of nuclear medicine 56, 914-20；Weineisen ら (2014) EJNMMI Res 4, 1-15；WO 2009002529 A2；WO 2009070302 A1）。新しいクラスの高親和性結合剤が、p-Br-ベンジル基を有するεアミン位置の尿素リンカーを修飾することによって調製されきている。本発明の化合物の構造を図１に示す。
【０１４４】
いずれかの特定の理論に拘束されることを望まないが、Lys-Glu 尿素部分のリジンのイプシロンアミノ基を p-Br-ベンジル基で修飾した場合、前立腺特異的膜抗原（PSMA）をターゲットとする放射性金属をキレート化した Glu- リジン尿素ベースのセラノスティクス（theranostic）薬剤は、PSMA を発現する腫瘍では PSMA に対して高い結合親和性と高い取り込みを示し、前立腺がんの標準的なマウスモデルでは腎臓への低い取り込みを示すものと信じられている。ある実施形態は、即ち 177Lu-1 は、PSMA + PC3 腫瘍を有するマウスについて、約 50 ％の寛解という有意な放射線治療効果を示した。
【０１４５】
実施例２
材料と方法
8 の 化学合成。化合物 1 の合成をスキーム 1 に記載する。ブロモベンズアルデヒド（121.0 mg、0.654 mmol）を、氷冷浴した 5 ml のメタノール中の Boc 保護尿素 4（300.0 mg、0.615 mmol）の撹拌溶液に、ゆっくりと添加し、室温まで温めた。1時間後、シアノ水素化ホウ素ナトリウム（158.0 mg、2.5 mmol）を加え、反応物を一晩撹拌したままにした。粗反応混合物を蒸発させ、ジクロロメタンに再溶解し、順相シリカ・クロマトグラフィー（95:5、塩化メチレン：メタノール）で精製し、真空中で乾燥して良好な収率で 5 を得た。収率：80 ％。ESI-MS：656.56 [M+H]+、実測値：656.5。TSTU（32.6 mg、108 μmol）、Boc-5-アミノ吉草酸（23.5 mg、108 μmol）及び DIPEA（37.7 μL、216 μmol）を 300 μL の DMF に溶解し、室温で攪拌した。1 時間後、化合物 5（71.0 mg、108 μmol）を DMF（各 50 μL）で 3 回リンスをして加えた。前記反応混合物を 4 時間撹拌し、4 ℃で一晩保存した。粗反応混合物を C18 カラムのセミ分取 HPLC により精製した（40 ％水（0.1 TFA）/60 ％ ACN（0.1 TFA）/5 分、60-90 ％、20 分以上）。Rt は 21 分である。精製画分を合わせ、蒸発させ、高真空下で 10 分間乾燥させた。ESI-MS：572.44 [M+H]+、実測値：572.4。化合物 6 をジクロロメタン（1.5 mL）に溶解し、氷浴で冷却した。平衡化後、TFA（1.5 mL）を添加し、混合物を 3 時間撹拌して、工程中に室温まで温めた。混合物を窒素気流下で乾燥させ、水に溶解し、凍結乾燥して化合物 7 を 31.8 mg 得た。収率：54 μmol、54 %。40 ℃に平衡化した DMSO（130 μL）中の 6（12.2 mgの TFA 塩）及び DIPEA（15.2 μL、87.0 μmol）の撹拌溶液に、p-SCN-bn-DOTA（12.2 mg、17.7 μmol）を加えた。反応混合物を 40 ℃で 4 時間撹拌し、4 ℃で一晩保存した。反応混合物を逆相 HPLC によって精製した（20 ％ ACN を 5 分間保持した後、19 分かけて 20-40 ％とした）。Rt は約 12 分とした。精製画分を合わせ、回転蒸発させて体積を減少させ、次いで凍結乾燥した。ESI-MS：1138.37 [M+H]+、実測値：1138.5。前記化合物 1 を、勾配法を用いた HPLC によりさらに精製した。前記 HPLC 法は、移動相 88 ％水（0.1 ％ TFA 含有）及び 22 ％ CH3CN（0.1 ％ TFA）を 1 から 5 分間、次に 88 ％水（0.1 ％ TFA を含む）及び 12 ％ CH3CN（0.1 ％ TFA）を 0 から 5 分間、及び 88 ％水から 44 ％水及び 12 ％アセトニトリルから 56 ％アセトニトリルを流速 8 mL/分で 5 から 25 分間を含む勾配法である。
【０１４６】
2 の 化学合成。この化合物を同じ中間体 7 を用いて合成し、市販の DOTA-NHS エステルに結合させた。ESI-MS：974.86 [M+H]+、実測値：974.5。
【０１４７】
3 の 化学合成。この化合物を中間体 4 を用いて合成し、市販の Boc-5-アミノ吉草酸及び DOTA-NHS エステルとカップリングさせた。ESI-MS：970.05 [M+H]+、実測値：970.1。
【０１４８】
177Lu-1 の放射性標識。0.1 N HCl 中の 1.0 μl の 177LuCl3（1 mCi）を、70 μl の NH4OAc 緩衝液（0.2 M、pH 4）に添加し、及び 0.2 M NH4OAc 中で 2 mM の 5 μl になるように添加した。前記混合物の pH は約 4.0 であった。前記混合物を 80 ℃で 1 時間保ち、HPLC で精製した。前記 HPLC 法は、移動相 77 ％水（0.1 ％ TFAを含む）及び 23 ％ CH3CN（0.1 ％ TFA）を 1 から 5 分、続いて 5 から 25 分、77 ％から 57 ％の水及び 23 ％から 43 ％のアセトニトリル； 25.01 から 30 分、5 ％から 5 ％の水及び 95 ％から 95 ％のアセトニトリル、30.01 から 37 分、77 ％から 77 ％の水及び 23 ％から 23 ％のアセトニトリルを含む勾配法である。流速：1.0 ml/分；λ：200 nm、及び C8 カラム（25×4.6 mm）、Varian microsob-MV 100-5。放射性標識した 177Lu-1 は 17.1 から 20 分で溶出したが、非標識のキレート剤は 21 から 22 分で溶出した。
【０１４９】
前記 HPLC 法を、177Lu-1 及び 177Lu-7 を調製するために使用した：前記 HPLC 法は、移動相 88 ％水（0.1 ％ TFA 含有）及び 22 ％ CH3CN（0.1 ％ TFA）を 1 から 5 分、続いて 5 から 27 分、88 %から 75 ％の水及び 12 ％から 25 ％のアセトニトリル；27.01 から 32 分、5 ％から 5 ％の水及び 95 ％から 95 ％のアセトニトリル、32.01 から 37 分、88 ％から 18 ％の水及び 12 ％から 22 ％のアセトニトリルを含む勾配法である。流速：1.0 ml/分；λ：200 nm、C8 カラム（25×4.6 mm）、Varian microsob-MV 100-5。放射性標識 177Lu-2 は 13.1 から 15.0分で溶出され、非標識キレート剤は 16 から 17 分で溶出された.。放射標識 177Lu-3 は 13.1 から 15.0 分で溶出され、非標識キレート剤は 10 から 12 分、18 から 20 分で溶出され、非標識薬剤は 14 から 16 分で溶出した。
【０１５０】
スキーム1．化合物１の合成
【化３６】
2020522506.tif 000038
a. 4-ブロモベンズアルデヒド、NaBH3CN、MeOH、1 % 酢酸；
b. BocNH(CH2)4CO2H, HATU, DIEA, DMF; c. TFA/CH2Cl2;
d. DOTA-Bn-SCN, DMSO, DIEA
【０１５１】
実施例３
結果と考察
化学合成及び放射化学合成及び特性評価。文献手順（Tykvart ら (2015) Journal of medicinal Chemistry 58, 4357-63）に従って、Glu-Lys 尿素（2）の p-ブロモベンジル基で修飾されたものを、メタノール中、ナトリウム・シアノボロヒドリドの存在下、p-ブロモベンズアルデヒドで 2 を還元的なアルキル化をすることにより良好な収率で調製し、4 を得た。小さな脂肪族リンカーである Boc-5-アミノ吉草酸を 4 の同じ ε-Lys アミンに結合させ、続いて BOC 基を除去し、市販の DOTA-Bn-SCN と 6 とを結合させ、中程度の収率で 1 を得た。前記化合物 2 は、DOTA-NHS エステルを前記キレート剤として使用し、同じ中間体 6 とカップリングさせることによって合成した。化合物 3 は、p-ブロモベンジル基を全く用いずにコントロール剤として合成した。3 剤すべてを、80 ℃の酢酸アンモニウム緩衝液中、pH 4 で良好な収率及び純度で 177Lu で放射性標識した。前記新規化合物の結合親和性を表１に示す。p-ブロモ‐ベンジル基で修飾した 1 及び 2 の両方が、3 と比較して高い結合親和性を示した。
【０１５２】
【表１】
2020522506.tif 000039
【０１５３】
細胞結合特性。前記 177Lu 剤を、標準的な同起源細胞株 PSMA+ PC3 PIP 及び PSMA 陰性 PC3 flu 細胞を用いて細胞及び動物でさらに評価した。177Lu-1 及び 177Lu-2 の両方は、177Lu-3 と比較して PSMA+ PC3 細胞においてより高い取り込みを示した。さらに、内部移行について研究をすると、177Lu-1 が 177Lu-3 に比べて 2 倍近く高い内部移行活性を有することが明らかになった。3 種の薬剤はすべて、PSMA 陰性 PC3 flu 細胞で、有意に低い取込みを示した。前記 177Lu-1 を、クローン原性アッセイにおける治療有効性についてさらに評価し、先のリード化合物 SR6（Banerjee ら (2015) Journal of nuclear medicine 56, 628-34）並びに 177Lu-PSMA-617（Benesova ら (2015) Journal of nuclear medicine 56, 914-20）及び 177Lu PSMA-I＆T（Weineisen ら (2014) EJNMMI Res 4, 1-15）を含む臨床試験中の薬剤と比較した。177Lu-1 は、PSMA+ PC3 PIP 細胞において、10 μCi 用量を用いて約 100 ％の殺細胞効果を生じさせることができたが、PSMA- PC3 flu 細胞に対しては有意な毒性は見られなかった。
【０１５４】
【表２】
2020522506.tif 000040
【０１５５】
生体内分布。177Lu-1 及び 177Lu-2 について in vivo 組織生体内分布の研究を行った。結果を表３及び４に列挙する。PSMA+ PC3 PIP 腫瘍への取込みにおいて、177Lu-1 は、177Lu-2 よりも高い取込み及び保持を示した。有意に 177Lu-2 剤は、177Lu-1 よりも 5 倍低い腎臓取り込みを示し、図３に示すように、本発明の化合物の腫瘍／腎臓を、先のリード 177Lu-SR6, 177Lu-PSMA-617 及び 177Lu-PSMA-I＆T のものと比較した。177Lu-2 の PSMA+ PC3 PIP 腫瘍対腎臓の比率は 177Lu-1 より高かった。より高い腫瘍による取込み及び保持を示したので、177Lu-1 について、少数の動物群を用いたパイロット研究において、セラノスティクス（theranostic）な有効性（イメージング及び治療効果）をさらに評価した。
【０１５６】
【表３】
2020522506.tif 000041
【０１５７】
【表４】
2020522506.tif 000042
【０１５８】
小動物の SPECT イメージング及び治療効果。図４は、注射後 1 から 8 日にわたる治療についての研究期間における 177Lu-1 の SPECT イメージングを示す。PSMA+ PC3 PIP 腫瘍（サイズ 3-5 mm）を有するマウス（n = 10）に 3 mCi の単回用量を尾静脈注射により投与した。コントロールとして生理食塩水をもう一つ別の群のマウス（n = 10）に投与した。週2回、体重腫瘍サイズを測定してマウスをモニターした。コントロール群のマウスは、腫瘍の大きさが > 12 mm と超えたため、4 から 8 週間後に安楽死させた。治療群では、50 ％のマウスで腫瘍が完全に根絶した。これらのマウスは、2 週間後に、元の体重に回復し、最初にこれを超えた。結果を図５に示す。図６Ａと図６Ｂは、生理食塩水を用いたコントロール群と比較した、177Lu-1 の治療有効性（腫瘍体積の減少）を示した。5 匹のマウスに疾患の完全寛解が認められ、5 ヵ月超生存している。
【０１５９】
要約すると、Lys-Glu-尿素部分のリジンのイプシロン・アミノ基上を p-Br-ベンジル基で修飾した場合、前立腺特異的膜抗原（PSMA）をターゲットとする放射性金属をキレート化した Glu-リジン尿素ベースのセラノスティック薬剤（theranostic agents）は、PSMA を発現する腫瘍では PSMA に対して高い結合親和性と高い取り込みを示し、前立腺がんの標準的なマウスモデルでは腎臓への低い取り込みを示した。1 つの代表的な化合物 177Lu-1 は、PSMA+ PC3 腫瘍を有するマウスで約 50 ％の寛解という有意な放射線治療効果を示した。
【０１６０】
実施例4
前立腺癌に対するPSMAベースの高LET薬剤
概要。いくつかの実施形態に、本開示の主題は、PSMAをターゲットとする放射性金属系薬剤の薬物動態学的最適化に関する。この分野における以前の研究は国際PCT特許出願公開数WO2009/002529 A2及びWO2010/108125A2に記載されており、これらの各々は、その全体が参照により援用される。より詳細にはいくつかの実施形態すると、現在開示されている主題は213 Bi(t 1/246 min、E mean8.4MeV)、212 Pb(t 1/210.6h、E mean7.8MeV)、及び225 Ac(t 1/210d、E mean6MeV、4α)を含むが、これらに限定されないα放射性金属で標識されたPSMAをターゲットした低分子量(LMW)セラノスティクス剤を提供し、この有望な治療法の広範な普及を現在妨げるオフターゲット効果を低減することを目標とする。
【０１６１】
現在開示されている合理的に設計されたα放出剤及びその使用方法は、薬物動態(PK)、放射性金属の物理的な半減期に注目深く注目を払った詳細な調査を通して、及び正常な組織取り込みを減少させるためのレセプター遮断によって開発されている。αカメラ画像化の誘導は治療研究の前に、サブ器官局在化(ホットスポット)及びそれらの遮断を迅速に同定するために利用されてきた。
【０１６２】
したがって、いくつかの実施形態に、本開示の主題は、前立腺特異的メンブラン抗体(PSMA)をターゲットとするLys-Glu-尿素部分のリジンのεアミノ基上のp-Br-ベンジル基で修飾された放射性金属キレート化Glu-リジン尿素ベースのセラノスティック剤を含む。これらの化合物はPSMAに対してより高い結合親和性を示し、前立腺がんの通常のマウスモデルにおいて、PSMA発現腫瘍において有意に低い腎臓取り込み及び高い腫瘍取り込みを示した。これらの最適化された薬剤は、Bi、212Pb、及び225 Acを213する高毒性放射性金属で放射性標識されている。
例。
【化３７】
2020522506.tif 000043
【０１６３】
前記リガンドを上記のように合成した。以下の化合物も、現在開示されている方法によって合成することができる：
【化３８】
2020522506.tif 000044
【０１６４】
213 Bi-1/225 Ac-1/203Pb-1の放射標識。すべての放射性標識化合物は、213Bi-1に記載されている一般的な方法に従って調製した。213 Biがオーク隆起部国立研究所が製造した225 Ac/213 Bi-generatorから溶出した。新たに溶出した213Bi(18.2MBq)を1液10μgに加え、3M NH 4 OAc液を用いて4~5に調整した。この溶液を、マイクロ波オーブン中、95℃で5分間、電力40ワットで5分間加熱した。次に、10μLの1mMのNa-DTPA溶液を、錯体を含まない213Biに加えた。213 Bi-1の比活性はすべての実験213で>7.4MBq/μgであった。Bi-1を、Phenomenex C 18Luna 10×250 mm2カラム及びVarian Prostar System(Palo Alto、CA)を使用して精製し、Varian ProStar 325 UV-Vis可変波長検出部及びBioscan(Poway、CA)フローカウントインライン放射能検出部を備え、これらはすべてGalaxieソフトウェアによって制御された。流速は、溶出溶媒として水(0.1% TFA)(A)及びCH 3 CN(0.1% TFA)(B)を用いて1mL/分であった。均一な純度を確保するために、80% A及び20% Bのアイソクラティック溶液を使用して、放射性標識化合物から余分なリガンドを分離した。比放射能は、分取HPLC純化中の生成物の滞留時間で溶出する放射能の、UV吸収曲線下面積に対応する質量に対する比率として計算した。試験化合物の純度は、254nmでの吸光度を用いた分析HPLCによって測定したところ、>95%であった。また、移動相として0.9%塩化ナトリウムを用いたシリカゲルインスタントTLC(ITLC)を用いて放射標識降伏を評価した。放射性標識サンプルを10mMジエチレントリアミン五酢酸(DTPA)で約4に希釈した。3マイクロリットルの希釈サンプルをITLCシリカゲルストリップ上にスポットし、クロマトグラフィー室内で展開させた。溶剤前面への移動が完了したら、ITLCサンプルストリップを乾燥させ、半分に切断し、Wallac Wizard γ-カウンター(Perkin-Elmer、Boston、MA)で計数して、放射標識収率を決定した。放射化学的純度は、高速液体クロマトグラフィー(HPLC)分析によって評価した。
【０１６５】
図7、8、9、10、11及び12に、in vitro及びin vivoの特徴付けを示す。225 Ac-1の体内分布は表5のとおりであった。
【表５】
2020522506.tif 000045
【０１６６】
正常臓器に対するレセプター遮断の発現。
1の遮断作用を177 Lu‐1を用いて正常組織で定量した。PSMA(+)腫瘍における高い取り込みを維持しながら、腎臓取り込みの劇的な減少が観察された(図12)。これらの遮断試験では唾液腺への取り込みの低下が観察されたが、結果は統計的に有意ではなく、177Lu-1の取り込みが非常に低い(2時間で0.5%未満)ことに関連する実験誤差が高かったためと思われる。
【０１６７】
ブロック戦略。
すべての遮断試験は半減期が長く、減衰した娘核種である213 Bi及び221 Frに起因する毒性が関連するため、最良の性能を有する225のAc標識剤(例えば、225 Ac-1)を用いて実施する。これらの娘はいったん形成されると、α崩壊の結果としての高い原子リコイルエネルギーのために、キレート構築物と会合しそうにない。225 Ac-PSMA-617に起因する急性唾液腺毒性は何らかの特定の説に拘束されることを望まないが、PSMAに基づく薬剤の内在化に続いて線条体導管又は腺房における娘細胞の放出に起因する可能性が最も高いと考えられている。データを解釈するために、生体内分布データ及びαカメライメージングの両方が使用される。腎臓及び唾液腺の放射線毒性を回避するために、異なる薬理学的薬剤を評価する。コム注射に加えて、30分の注射前遮断の15分が、薬剤の短い血液半減期に起因する任意の有意な変化を提供するかどうかを調査する。2つ又は3つの有効な遮断配合組成が組み合わされて、組み合わされた配合組成が何らかの向上を示すかどうかを検査する。
【０１６８】
以下の実験は、本開示の主題の範囲内で実施することができる:
【０１６９】
レセプター遮断(自己遮断)試験、例えば、225Ac-1の遊離リガンド 1(図12のように);
【０１７０】
PSMAを発現する正常組織中の213Biを捕捉して相乗的なレセプター遮断及び金属イオン捕捉を提供するための、ジチオールキレート化による競合的遮断;
【０１７１】
2,3-ジメルカプト-1-プロパンスルホン酸(DMPS)オフターゲット効果をDMPSとして用いることにより、遊離213Biを除去するためのジチオールキレート剤の使用これは、ジチオールキレート剤が種々の動物、並びにヒトにおける213Bi又は他の重金属排泄を増強することが示されているためである;
【０１７２】
フランシウム(Fr)はナトリウム及びカリウムのようなアルカリ金属であり、したがって、腺房細胞液及び電解質分泌のための重要な移動手段であるNa +/K +/2Cl-共移動手段(NKCC1)移動手段によって唾液腺管によって吸収され得る。
【０１７３】
したがって、米国食品医薬品局承認の利尿薬フロセミド及びブメタニドは報告されているように、Na +及びK +と同様の再吸収を防止することにより、221 Frの脱離を促進するために使用することができる;また、報告されているように、次硝酸ビスマス懸濁液(100mg/kg)による競合的金属遮断を用いることができる。腎尿細管細胞における213ビリルビン又は冷間Bi +3の取り込み又はその結合部位(メタロチオネイン様タンパク質)のいずれかの競合的金属遮断の有効性を評価することができる。
【０１７４】
実施例5
177のLu標識低分子量化合物
PSMAベースの放射線医薬療法
【０１７５】
5.1   概要
前立腺特異的メンブラン抗体(PSMA)は、転移性去勢抵抗性前立腺癌の治療のための放射性核種療法の重大なターゲットである。本開示の主題の1つの目的は、転移性去勢抵抗性前立腺がんをターゲット化した照射性核種治療のためのβ粒子の低直鎖状エネルギ伝達照射を使用する最適化された薬剤を開発することである。この目的のために、新規のPSMAベースの177Lu標識放射性リガンドが合成され、インビトロ結合親和性及びインビボ腫瘍ターゲティングのために評価されている。新しいリガンドの放射性標識を高(>98%)放射化学的収率及び比活性で合成した。細胞取り込み及び内部移行データは、全ての薬剤についてのPSMA(+)PC3 PIP細胞における特異的取り込みを示した。選択された薬剤について、クローン形成細胞生存アッセイを行った。PSMA(-)PC3インフルエンザ電池と比較して、48時間のインキュベーション後にのみ、PSMA(+)PC3 PIP電池生存の有意な減少が観察された。選択された化合物は、原発性前立腺がんモデルにおける生体内薬物動態及び治療効果について、臨床薬177 Lu-PSMA-617及び177 Lu-PSMA-I & Tとの直接比較検討でさらに評価された。生物流通データは、72時間までの新規薬剤に対するPSMA表現PC3 PIPがん中の同等がん取り込みを明らかにした。これらの薬剤はまた、未処置マウス(n = 10)と比較して、111MBq(3 mCi)の静脈内投与後8週で効率的な腫瘍退縮を示した。代表的な化合物、177 Lu‐L1は、有意に高生存率の向上を示した。選択された薬剤について担癌マウスを用いた8週間後の剖検討及び無腫瘍マウス(177 Lu-L1、111MBq)を用いた1年間の後処理討では、放射線腎症は認められなかった。
【０１７６】
5.2 背景
グルタミン酸カルボキシペプチダーゼII[GCPII]又はN‐アセチル‐1‐アスパルチル‐1‐グルタミン酸ペプチダーゼI[NAALADase I]としても知られる前立腺特異的メンブラン抗体(PSMA)はII型細胞表面金属酵素であり、前立腺癌の有用な臨床バイオマーカーであることが証明されている。1 2 約80%を超える前立腺腫瘍、並びに他の固形腫瘍は、腫瘍関連血管新生に似た新たに形成された血管内で強力なPSMA式を示す。より低いレベルは生理学的に正常な組織(例えば、腎臓、唾液腺、及び小腸)において見出される。前立腺腫瘍における示差PSMA式は臨床医及び放射線化学者に、PET、SPECT、ナノ粒子、光学薬剤などを使用して広範囲の診断用及び治療用放射性核種を送達するためのターゲットとしてのPSMAの使用を探求させてきた。PSMAベースの低分子量ポリエチレンテレフタレート画像診断薬、68 Ga-PSMA-113及び18 F-DCFPyL4は前立腺がん男性の早期診断に革命をもたらし、今後数年のうちに米国食品医薬品局で新薬申請手続きを受ける可能性が高い。近年導入されたPSMAベースの放射性核種OOBLu-PSMA-617及び177 Lu-PSMA-I & T 5-11(表6)及びハロゲン131I-MIP10952, 12, 13の治療可能性は有望であるが、放射性核種治療に必要とされる安全で効果的な投与のためのより広範な研究が必要である。例えば、グレード1~3の血液毒性は口腔乾燥症及び粘膜炎13を引き起こす唾液腺における強い集積と共に、131I-MIP1095で報告された。An 225のAcベースのLMW剤もまた、唾液腺14に関連する同様の合併症を示す臨床試験中である。よく設計された臨床試験で収集されたプロスペクティブデータは、これらのLMW放射性治療薬の主要な安全性の懸念であるPSMAベースの放射性核種治療の長期腎毒性に取り組むにはまだ不足している。
【０１７７】
安全かつ有効な臨床適用のための高い腫瘍/バックグラウンド比を有する薬剤の薬物動態(図13)は、前立腺癌の画像化及び治療の両方について調査されている。これらの薬剤の全生物学的輪郭は、レセプター特異的結合によってのみならず、非特異的相互作用によっても決定され、分子量、充電、親水性、及び代謝安定性に関連し得る。これまでのところ、2種類の高親和性剤(Ki<20nm)が我々の研究から出現した:(i)I型薬剤これらの薬剤は高PSMA特異的腫瘍取り込み及び長期滞留を示すが、腎皮質及び脾臓を含む多くのPSMA発現正常組織において高い取り込みを示す。15の例としては99m Tc-オキソ、1664Cu-1,4,7-トリアザシクロノナン-1,4,7-2-トリ酢酸(NOTA)17(図13A)、68 Ga-PSMA-11, 18剤及び68 Ga-/177 Lu-PSMA-I & T、第2世代)(図13B)が挙げられ、これらはいくつかの臨床試験において患者6、7、19、20に投与されている。これらの薬剤は、単に元のリンカー/尿素構築物21上のキレート剤又はリンカーを変更することによって生成され、PSMA親和性の改良につながった。近年、アルブミン結合p‐(ヨードフェニル)酪酸部分22-25を用いて高い腫瘍保持を示すいくつかの高親和性放射性リガンドが開発され、マウス腎皮質及び他の正常臓器においても長期高線量をもたらした。(ii)II型薬剤。これらの薬剤は腎臓及び唾液腺を含む大部分の正常組織から高い腫瘍の取り込み及び貯留及び速いクリアランスを示し、その結果高い腫瘍対バックグラウンド比を生じる16、 17タイプII剤には、本発明者らにより開発された薬剤(図13A)26及びPSMA-617, 5が含まれる(図13B)。第2剤は最近のファースト・イン・マン検討の27を受けた。PSMA発現腎からの腎クリアランスがPSMA+腫瘍よりも速いという類似のパターンが観察されており、これは異種移植片の比較的解体された血管系と比較して、正常に組織化された腎血管系を通るより速い流れと関連していると思われる。26, 28, 29
【０１７８】
は部分的には現在開示されている主題が転移性前立腺癌の治療のためのターゲット化セラノスティック放射性医薬品処理の開発のためのPSMAをターゲットとする新しい一連の低分子化合物の前臨床評価を含む。2‐[3‐[1‐カルボキシ‐5‐(4‐125 I‐ヨード‐ベンゾイルアミノ)‐ペンチル基]‐ウレイド]‐ペンタンジオ酸(125 I‐DCIBzL)のヒトPC異種移植片における少なくとも48時間の持続的な腫瘍取り込みのために、Lys‐尿素‐Gluの4‐ハロベンジル誘導体を他の尿素ベースの候補について調べ、薬剤はその高直鎖状エネルギ移動とオージェ電子の短距離放射(<10mm)のために有意な腫瘍退縮を示した。30 DCIBzLは当技術分野で知られている最も強力なPSMA結合剤の1つ(Ki=0.01 nM)。さらに、α粒子放出211 At標識型DCIBzLは、逃げ面腫瘍モデル及び微小転移モデル31の両方において有意な治療効果を示した。従って、本開示の金属ベースの放射線治療剤は薬剤の結合親和性及び薬物動態を改善するために、リンカー及びキレート剤に何らかの合理的な修飾を施したDCIBzLの構造に由来するハロ-ベンジル尿素-Gluを含有するように設計された。いくつかの代表的な化合物を合成して、薬剤の腫瘍ターゲティング及び薬物動態特性を評価した。この方法は、PSMAに基づくターゲット化放射性核種治療のための177Lu, 212Pb又は225Acのオフターゲット効果を低減した最適化薬剤につながる可能性がある。
【０１７９】
5.3 試験結果
5.3.1 合成スキーム。一連の代表的な化合物を、図13に示されるように、高親和性剤DCIBzLに基づいて、構造及び活性関係(SAR)研究のために合成した。全てのリガンドは、コントロール剤として設計されたリガンドL8及びL14を除いて、(Br/I)-ベンジルLys-尿素-Gluターゲティング部分を含有するように設計された。リガンドL1-L4、L7-L9及びL13は短く柔軟なリンカーを有するように設計されたが、L12は剛性芳香族リンカーを含有する。対照的に、リガンドL5、L6及びL14は以前のリード剤26と同様に、より長いリンカーを有するように設計された。キレート剤の影響を、実施リガンドL7及びL8において、L1におけるようなキレート剤DOTA-モノアミドをDOTA-Bn-SCNに置き換えることによって、及びDOTAGAキレート剤を用いてL9において調査した。リガンドL10及びL11はそれぞれL1及びL9と比較して、硬質リンカー及びキレート剤に対する影響をチェックするために、DOTA-モノアミド及びDOTAGAキレート剤を有するPSMA-617におけるような硬質シクロヘキシルリンカーを有するように設計された。リガンドL13はBr-ベンジルLys-尿素-Gluを、F-DCFPYL 32を18する臨床用ポリエチレンテレフタレート造影剤に由来するBr-ピリジルLys-尿素-Gluに置き換えることにより、別のターゲティング部分を有するように設計された。リガンドL14は生体内分布特性に及ぼす4‐(p‐ヨードフェニル)の影響を調べるために22-25, 33な幾つかの研究グループによって近年研究されたように、以前に報告されたPSMA結合ターゲティングプラットフォーム上にアルブミン結合部分4‐(p‐ヨードフェニル)酪酸を有するように設計された。
【０１８０】
全ての化合物は、リンカー及びキレート剤のためのGlu-Lys尿素誘導体及び関連する共役化学を調製するための十分に確立された方法に基づいて、液相化学で合成した。リガンドL1及びL2を、スキーム2に記載のように合成した。
【化３９】
2020522506.tif 000046
スキーム2．a試薬条件:(a)NaBH 3 CN、MeOH;(b)Boc-5-アミノバレリック酸TSTU、DIPEA、DMF又はBoc-6-アミノヘキサノ酸N-オキシシシシニドエステル、Et 3 N、DMF、オーバーナイト、rt;(c)50%TFA/CH 2 Cl 2; c)3a又は3c、DOTA-モノアミドNHS、DIPEA、DMSO、rt、3h;(d)177 pH Lu +3/ Lu +3,  ~4-50.2 NH 4 OAC、5 分のマイクロ波。
【０１８１】
尿素‐リジン中間体ジ‐tert‐ブチル((((S)‐1‐(tert‐ブトキシ)‐6‐((4‐ヨード/ブロモベンジル)アミノ)‐1‐オキソヘキサン‐2‐イル)カルバモイル)‐L‐グルタミン酸、1a又は1b(5‐X‐Bn)‐Lys‐尿素‐Glu(X = Br/I)を、特許文献方法34のいくらかの改変後に合成した。 これらの2つの中間体化合物をまた使用して、L3、L4、L5、L6、L8、L9、L10、L11及びL12を合成した。簡単に述べると、Boc-5-アミノ吉草酸を1a及び1bに結合させて2a及び2cを得た後、tert-But及びN-Boc基を同時に取り除いて、それぞれ3a及び3cを90%を超える降伏で生成した。次いで、化合物3a及び3cをDOTA-モノアミドのN-ヒドロキソスクシンイミド(NHS)-エステルと反応させて、ターゲット・リガンドL1及びL2を高収率で得た。リガンドL3及びL4は、スキーム3に示すように合成した。
【化４０】
2020522506.tif 000047
スキーム3．aの試薬及び状態:(a)DIPEA、DMF、rt、16h;(b)TSTU、TEA、DMSO、4h;(c)50%TFA/CH 2 Cl 2;(d)3b又は3d、DIPEA、DMSO。
【０１８２】
剛性リンカーp‐aminomethyl安息香酸とDOTA‐monoamide NHS esterを用いて共働反応を行い、化合物4を定量的に求めた。次に、化合物4をトリメチルアミンの存在下でTSTUで処理し、次いでTFA/CH 2 Cl 2を用いてtert-ブチル基を除くことにより化合物5を得て、反応性中間体6を高収率で生成した。リガンドL3及びL4は、6と3b及び3dとの間の簡単な共役後に良好収率で得られた。リガンドL5及びL6を、スキーム4に示す合成経路に従って合成した。
【化４１】
2020522506.tif 000048
スキーム4．試薬と条件:(a)DSS、TEA、DMF(b)50% TFA/CH 2 Cl 2(c)4、DIPEA、DMSO、3h。
【０１８３】
最初に、化合物7を、先に報告した35のように1aとジスクシンイミジルスベレート(DSS)とを反応させることによって合成した。化合物 次いで、7を50% TFA/CH 2 Cl 2で処理してt-ブチル基を除去して化合物8を合成し、次いでこれをBoc-5-アミノ吉草酸とカップリングさせ、続いてBoc基を除去し、化合物6とカップリングさせてL5を得た。さらに、スキーム2に記載された合成ルートに従い、DOTA-モノアミドをDOTA-Bn-SCN(L7及びL8)及びDOTAGA(L9)に置き換えることにより、L1の3種類の類似性を合成した。DOTA‐Bn‐SCNの接合反応を40°Cで4h行った。対照的に、キレート剤DOTAGAについては、反応混合物を最初に室温で1時間超音波処理して、高収率共役反応を提供した。シクロヘキシルリンカーを使用するL1の類似体である2つのリガンドL10及びL11もまた、スキーム5に示すように合成した。
【化４２】
2020522506.tif 000049
スキーム5．aの試薬及び状態:(a)(i)trans-4-(Fmoc-アミノメチルシクロヘキサンカルボン酸)、TSTU、DIPEA、DMF、室温で1時間;(ii)20%ピペリジン/DMF;(c)DOTA-GA無水物、DIPEA、DMSO、3時間(c)50% TFA/CH 2 Cl 2。
【０１８４】
まず、trans-4-(Fmoc-アミノメチルシクロヘキサンカルボン酸)のNHS-エステルをin situで合成し、これを1aと反応させて10を得た。Fmoc及びtert-ブチル基を連続的に取り出し、対応するキレート剤と結合させた後、DOTAGA及びDOTA-モノアミド、L10及びL11を優れた収率で得た。リガンドL12をスキーム6に示すように合成した。簡単に述べると、化合物1aを中間体6と反応させた後、Lys-尿素-Gluからtert-ブチル基を取り除いて、>80%の収率でL12を得た。
【化４３】
2020522506.tif 000050
スキーム6．(a)6、DIPEA, DMSO;(b)50%TFA/CH 2 Cl 2。
【０１８５】
しかしながら、リガンドL13は腫瘍ターゲッティング及び薬剤の薬物動態に対するファーマコフォアの影響を調べるために、p-ブロモベンジルをp-ブロモピリジル基で置き換えることによって、スキーム7に従って合成した。リガンドL14をスキーム7に従って合成した。p‐(ヨードフェニル)酪酸、化合物12の最初のNHS‐エステルを定量的収率で合成し、これを以前に報告した二官能性化合物1435と反応させてin優れたものでL14を得た。新しく合成されたリガンドはすべてHPLCで精製し、凍結乾燥して無色の吸湿性固形化合物を得、質量分析及びNMRを含む通常の分光分析ツールで特徴付けた。全てのリガンドは、-20℃で少なくとも6ヶ月間安定であることが見出された。
【化４４】
2020522506.tif 000051
スキーム7．試薬と条件:(a)TSTU、DIEA、DMF(b)13、DIPEA、DMSO、2 h。
【０１８６】
全ての新しいリガンドを70℃で1時間インキュベートした後、HPLC純化して放射性標識化合物から未反応リガンドを除去し、最高の放射化学的純度>99%及び比活性(及びgt; 37MBq/nmol)を確保した。さらに、L1及び関連リガンド(L7、L8、L9、L11、L12及びL13を含む)に対して、迅速で簡便なマイクロ波支援放射性標識法が開発され、40℃で~4pHで5分以内に優れた収率(& gt;90%)で新しい177Lu標識剤(177 Lu-L)が合成された。マイクロ波支援法はp-ヨードベンジル尿素誘導体(例えば、L4及びL6)、リガンド長いリンカー(例えば、L3及びL5)及び剛性リンカー(例えば、L12)を用いたリガンドのための多数の放射性標識製品を生成した。すべての177Lu標識化合物は室温で4時間、4℃で24時間まで安定であり、有意な放射線分解は認められなかった。しかし、高い安定性を確保するために、最終配合組成で放射性ラベル表示化合物にLアスコルビ酸を追加し、ここで報告するインビボ実験に使用した。L-アスコルビン酸を添加せずに、細胞取り込み及び内部移行実験を直ちに行った。
【０１８７】
5.3.2 In Vitro結合及び細胞取り込み。新しいリガンドは全て、0.03~8 nMの範囲のKi値で、PSMAへの高い結合親和性を示した(表6)。L1の安定なルテチウム類似体(Lu-L1)が合成され、これは、L1よりも結合親和性において3倍の向上を示した(表6)。L1~L14を含む2時間インキュベーションでの比較細胞取り込み研究は、PSMA- PC3インフルエンザ細胞と比較して、PSMA+ PC3 PIP細胞における約100倍高い取り込みを明らかにした。選択された化合物の細胞取り込み及び内部移行データを図14及び表7に示す。化合物の総取り込み及び内部移行は、1時間から24時間まで徐々に増加した。177 Lu-PSMA-I & T及び177 Lu-PSMA-617の両方はPSMA(+)PC3 PIP電池内で有意に高い総取り込み、それぞれインキュベート照射量の約60%及び約40%を示したが、177 Lu-L1、177 Lu-L3及び177 Lu-L5は30%の範囲内で取り込みを示した。しかしながら、インターナリゼーションのパーセントは、化合物について1時間で約18~24%から24時間で25~30%の範囲であった。PSMA(+)PC3 PIP細胞における取り込みは、全ての化合物について、余剰既知のPSMAインヒビター、ZJ43での処理によってブロックすることができた(表7)。177 Lu‐7及び177 Lu‐8の細胞内移行についても、培養後24時間まで検討した。Bromo-ベンジル基修飾177 Lu-8は、すべての時間で、Lu-7を含まない配位子177と比較して、ほぼ>1.5倍高い内部移行を示した。有意に、DOTAGAキレート化を伴う177 Lu-9は、同一キレート剤を含む177 Lu-PSMA-I & Tに匹敵する細胞取り込み及び内在化(約70%)を示した(表7)。対照的に、剛性シクロヘキシルリンカーで修飾した場合、DOTAGAキレート剤を有する177 Lu-10は、177 Lu-8及び177 Lu-9と比較して、より低い取り込み及び内在化を示した。同様に、シクロヘキシルリンカーも含有するDOTA-モノアミド修飾177 Lu-L11は、177 Lu-L1と比較して>1.5倍低い取り込み及び177 Lu-10と比較して低い取り込みを示した。さらに、剛性芳香族リンカーを有する177Lu‐L12は、一連由来のほとんどの薬剤と比較して、低取り込みを示した。p‐ブロモピリジル修飾177Lu‐13は、177Lu‐1と同等の細胞取り込みとインターナリゼーション特性を示した。アルブミン結合4‐(p‐ヨードフェニル)‐酪酸修飾177Lu‐14は、2時間でPSMA(+)PC3 PIP電池において比較的高い取り込みを示した。
【０１８８】
【表６】
2020522506.tif 000052
【０１８９】
【表７】
2020522506.tif 000053
【０１９０】
【表８】
2020522506.tif 000054
【０１９１】
5.3.3 生体内分布試験。PSMA+ PC3 PIPとPSMA‐PC3 flu腫瘍の両方を上限逃げ面に有する雄NOD‐SCIDマウスを用いて生体内分布試験を行うことにより、新しく開発された177 Lu化合物の腫瘍取り込みとインビボ薬物動態を評価した。放射性トレーサー用量~1.67±0.2MBq(~45±5μCi)を、ここに提示されたすべての研究のために静脈内投与した。射出後24日目の最初の生体内分布研究に基づいて、72~96時間までのより長い時点での詳細な生体内分布研究のためにいくつかのリガンドを選択した。Lu-7を177する化合物(Br-ベンジル修飾尿素基を含まない)及び剛性リンカー 177 Lu-11及び177 Lu-12を除いて、全ての化合物は射出後24時間後に18% ID/gを超える高いPSMA(+)腫瘍取り込みを示した。雄NOD-SCIDマウスにおける177 Lu-PSMA-617、177 Lu-PSMA-I及びT、177 Lu-1、177 Lu-3及び177 Lu-5の組織内分布は図15及び図16のとおりである。マウスの体重及び腫瘍の重量を表9に示した。
【０１９２】
【表９】
2020522506.tif 000055
【０１９３】
射出後3時間で、177Lu‐3、52.6±4.9%ID/g、及び177Lu‐5(56.3±18.3)に対して有意に高い腫瘍取り込みが観察されたが、177Lu‐1における腫瘍取り込みは177Lu‐PSMA‐617及び177Lu‐PSMA‐I & Tと同等であった。しかし、24時間後には、177 Lu-3及び177 Lu-5はいずれもPSMA+ PC3 PIP腫瘍取り込みからの活性の速いクリアランスを示し、177Lu-PSMA-617及び177 Lu-PSMA-I & Tに匹敵する腫瘍取り込みを引き起こした。対照的に、177Lu‐1は177Lu‐PSMA‐617と比較して有意に低い腫瘍取り込みを示した。注射の72時間後に、本発明者らは、化合物についての腫瘍取り込みにおける有意な差異を観察しなかった。PC3インフルエンザ腫瘍における取り込みは、射出後3時間で開始する全ての化合物について低かった(<0.3% ID/g)がリガンドの高い結合親和性と一致する化合物の高い特異性を実証した。
【０１９４】
薬剤は射出後72時間までほぼ同様の腫瘍取り込みを示したが、薬剤の正常組織取り込みに有意な変化が観察された。PSMA発現正常臓器、例えば、腎臓及び唾液腺及び脾臓は177 Lu-PSMA-I & Tで有意に高かった。腎臓の取り込みは177 Lu-PSMA-I & Tでは射出後3時間で93.39±13.35% ID/gであったが、系列からの残りの薬剤は取り込み<10% ID/g;177Lu-PSMA-617(9.81±6.54% ID/g)、177Lu-1(5.17±2.38% ID/g)、177 Lu-3(7.49±3.21% ID/g)を示した。177 Lu‐PSMA‐I & Tは24時間で30.39±12.49%ID/gの速い腎クリアランスを示したが、薬剤は72時間まで24時間毎に約3倍の腎取り込みの低下を示した。対照的に、177 Lu-3及び残りの化合物は24時間後に腎クリアランスの速度がはるかに速く~10倍クリアランスし、結果として腎臓取り込みが<0.5 ID/gとなった。177 Lu-PSMA-I & Tを除き、肝臓、肺、胃、膵臓、脾臓、脂肪、副腎、筋肉、小腸、大腸、骨及び唾液腺を含む血液及び正常組織取り込みは投与量の3時間後に<0.5%ID/gであった。177 Lu-PSMA-I & Tが3時間後に脾臓及び唾液腺で高い取り込みを示したが、それにもかかわらず、これらの組織では他の一連の薬剤によって示されたように、24時間内に同等の取り込み(<1% ID/g)を示す速いクリアランスを示した。
【０１９５】
177 Lu-1のp-ヨードベンジル類似体及びハロベンジル修飾尿素ターゲティング部分、177 Lu-L7及び177 Lu-L14、並びにブロモベンジル修飾剤、177 Lu-L8、177 Lu-L9及び177 Lu-L10を含まないリガンドの選択された組織生体内分布データを図17に示す。薬剤177Lu‐2は177Lu‐L1と比較して射出後3時間で有意に高い腫瘍取り込みを示したが、72時間まで腫瘍取り込みと保持を維持した。177Lu‐L7と177Lu‐L8はDOTA‐Bn‐SCNキレート剤で修飾されたが、腫瘍取り込みと177Lu‐L8の保持は177Lu‐L7と比較して全ての時間で有意に高かった。さらに、腫瘍保持に対するブロモベンジル基の重要性を強調した(2時間で55.4±7.2対25.4±7.2% ID/g;24時間で40.6±7.0対7.0±1.5% ID/g;48時間で27.0±7.0対7.0±3.3% ID/g及び24.9±2.3対2.3±0.0% ID/g)。また、両剤は177 Lu-PSMA-I & Tと比較して、はるかに速い腎クリアランスを示した。
【０１９６】
DOTAGAキレート剤を有する177Lu‐L9は射出後72時間まで、177Lu‐PSMA‐I & Tと比較して有意に高い腫瘍取り込みと貯留を示したが、24時間内ではるかに速い腎クリアランス、約30倍の腎クリアランスを示した(2時間で149.7±32.0対24時間で5.9±2.7% ID/g)。剛性シクロヘキシルリンカーはL1と比較して、高細胞取り込み、177 Lu‐L10及び177 Lu‐L11を生成せず、それぞれ177 Lu‐L9及び177 Lu‐L1と比較して、類似又は低取り込みを示した。異なるターゲティングリガンド(2‐ピリジル)リガンドを有する薬剤177Lu‐L13は177Lu‐L1と同様の腫瘍取り込みを維持しながら、はるかに速い正常組織クリアランスを示した。
【０１９７】
177 Lu-14の体内分布は報告されているアルブミン結合剤と一致しており、射出後24時間に到達した腫瘍取り込みが最も高く、48時間まで高値を示した。本剤は当初、177 Lu‐PSMA‐I & Tと比較して49.49±19.55% ID/gと低い初期腎取り込みを示したが、活性の約3倍のクリアランスのみが観察され、活性の10倍低下と比較して48時間で17.47±4.18%ID/gであった(24時間で93.39±13.35%ID/g対48時間で9.55±3.85%ID/g)。薬剤はまた、シリーズからの最高の血液取り込み、射出後2時間で16.13±2.33%ID/g、続いて2時間で5.05±0.05%ID/g及び48時間で2.48±0.44%ID/gを示した。脾臓及び唾液腺の両方が、このシリーズからの最高の非特異的取り込みを示した。
【０１９８】
5.3.4 SPECT/CTイメージング。
また、177 Lu-1及び177 Lu-14によるSPECT/CT画像を行い、生体内薬物動態を確認した。体内分布データから予想されるように、177 Lu-1による投与後2~192時間のSPECT/CT画像は予想通り、PSMA+ PC3 PIP腫瘍(右側)では高い取り込みを確認したが、PSMA- PC3 flu腫瘍(左側)では確認しなかった。また、生体内分布データーと一致して、リガンドは、腎臓及びすべての正常組織において非常に低い取り込みを示した。PSMA(+)PC3 PIP腫瘍内のPSMA式の状態もまた、画像化実験の間に調査した。図18Bに示されるように、コントロール腫瘍(放射能射出なし)と比較して、177Lu-1(37MBq)で処理した腫瘍の1日目から12日目の後に、PC3 PIP腫瘍内のPSMA(+)染色の有意な低下が観察された。これは、部分的にはPSMA式のダウンレギュレーションを生じさせた処理効果、及び処理した腫瘍におけるかなりの数のPSMA結合部位における177Lu-1の結合に起因する可能性がある。それにもかかわらず、8日後及び12日後の比較的高い染色は、腫瘍からの177Lu‐1のクリアランスと一致する。
【０１９９】
177 Lu-PSMA 617、177 Lu-2、177 Lu-4及び177 Lu-6の111MBq(3 mCi)を8週間投与したマウス群(n= 3)の血液学的検査及び血液生化学的検査パラメータを表10に示す。
【０２００】
【表１０】
2020522506.tif 000056
【０２０１】
5.3.5 細胞及び動物モデルにおける放射性核種療法。Lu-1及び177 Lu-8を48時間177して培養した後のPSMA(+)PC3 PIP細胞のクローン形成能を図26に示す。細胞生存分率は、細胞を2時間及び24時間インキュベートした場合、薬剤について>0.8であった。48時間のインキュベーション後、コロニー生存の有意な損失が観察された。177 Lu‐1と177 Lu‐8のD 0(37%生存)は0.3~0.6μCi/mLであった。
【０２０２】
PSMA+ PC3 PIP腫瘍を有するNOD/SCIDマウス(各群10例)を用い、Lu-PSMA-617、177 Lu-1、177 Lu-3及び177 Lu-5を177する薬剤を111MBq(3 mCi)単回静脈内投与し、コントロール群(生理食塩水投与)とした予備治療試験が実施された(表8)。すべてのコントロール群マウスの体積は、14日以内にそれらの初期腫瘍体積の5倍を超えた。射出後4週間以内に処置群について安楽死させたマウスは主に突然の体重減少によるものであり、腫瘍増殖に関連しなかった。全ての処置群は、8週間まで有意な腫瘍退縮を示した。治療群間の差は対数順位検定により、未治療群と比較して統計的に有意であった(P = 0.002)。表8に示すように、177 Lu-3及び177Lu-PSMA-617で処理した群からの1匹のマウスのみが、この高用量で>4の腫瘍体積に達し、177 Lu-4からの2匹のマウスに達した。8週間後、各処置群からの3匹のマウスを、詳細な血液分析及び剖検討のために使用した。選択された代謝及び全血球数データーを、表3、図24及び図25に提供する。放射線療法検討を受けた全ての動物は、正常なクレアチニン(0.3~0.4mg/dL)及び血中尿素窒素レベルを有していた。図11に示すように、Lu-PSMA-617を治療した群から、上昇した中性真菌数(3.5±3.8K/mlまで;制御後、2.6K/ml)を示したのは1頭のみであった。加えて、177 Lu‐PSMA‐617からの3つの処置マウス全てに対する血小板の有意な低下は、コントロール群と他の処置群を比較した。
【０２０３】
広範なパネルの正常組織のH&E汚染の病理学的検査は、コントロール群と比較して、処置群において中程度の変化のみを明らかにした。すべての処置群について、精巣及び涙腺において、主に(図25)有意な変化及び関連する変化が同定された。177 Lu‐5を持つマウス1匹と177 Lu‐PSMA‐617で処理したマウス3匹全てが精巣で最も有意な変化を示した。腎臓の変化はごくわずかであり、全ての処置群についてわずかな尿細管変化のみが見られた。耳下腺は通常眼窩外涙腺に隣接しており、目立って温存されており、Lu-PSMA-617177を投与した群では軽度の変化が認められた。加えて、眼窩下涙腺は、177 Lu‐PSMA‐617で処置したマウス内で、眼窩外涙腺に類似した変化を示した。177 Lu‐5で処理した1匹のマウスは胸腺リンパ腫を有し、形態はNOD/SCIDマウスで予想される死因である胸腺Tリンパ芽球性リンパ腫と一致し、通常約6か月で始まる。Tリンパ芽球性リンパ腫は、照射及びいくつかの発癌物質によって促進され、NOD/SCIDマウス株における内因性レトロウイルス/レトロエレメントの相互作用と関連する。177 Lu-PSMA-617で処理した群の1匹のマウスは、肺(<1mm)、並びに腫瘍細胞血管内、体キャビティ、漿膜表面(癌腫症)、及び血液塗抹標本で明らかな腫瘍及び転移を示した。電池は25μmまで大きく、非常に大きな核(マウスの場合)は通常2~3個の核小体を有し、有糸分裂速度が高い。精巣及び涙腺の変性変化は、この動物が他の処置マウスと同様の処置を受けたことを示す。
【０２０４】
試験した全ての動物は、正常なクレアチニン値(0.3~0.4mg/dL)及び血中尿素窒素濃度を有していた。
【０２０５】
177 Lu-4及び177 Lu-6については治療モニタリングを終了したが、177 Lu-1及び177Lu-PSMA-617については事前に設定したエンドポイント(腫瘍体積1800 mm3及び体重減少>15%)に達するまで治療試験を継続した。図18は、177Lu-1及び177Lu-PSMA-617の生存データを示す。177 Lu-PSMA-617の生存期間中央値は133日であったのに対し、177 Lu-1では234日であった。対照的に、処置群は、いかなる変化も示さなかった。各動物についての個々の腫瘍体積測定値を図24に示す。177 Lu-1が良好治療効果を示したことを考慮し、90日までの18.5MBq(0.5 mCi)、37MBq(1 mCi)及び111 mMBq(3 mCi)(基n = 5)からの照射量を用いて増殖遅延検討を実施した。図23に示されるように、177 Lu-1は実際に、全ての処置群に対して、無処置群と比較して有意な腫瘍増殖遅延を示した。0.5 mCi照射量で処置した5匹のマウスのうち4匹は処置後8週目に相対体積>5に達したが、37MBq照射量で処置した群からの1匹のマウスのみが同様の効果を示した。37MBq及び111MBqの両方を処置した3匹のマウスは120日まで完全な腫瘍退縮を示し、第1の処置実験から観察されたのとほぼ同様の処置効果を実証した。
【０２０６】
PC3 PIP側腹部腫瘍モデルを用いて、治療24時間後から192時間後まで、111MBq投与を用いて、Lu-8(n= 10)177にセラノスティック(SPECT/CT画像及び治療)検討も実施した。SPECT/CT画像診断は177Lu‐1と非常に類似した輪郭、低正常組織及び腎臓取込を明らかにしたにもかかわらず、生体内分布データから予想されるように、177Lu‐1と比較して比較的高い背景取込を明らかにした。3匹のマウス(SPECT/CT画像に使用)の予想外の死が観察されたが、8週間後には相対体積>5の腫瘍増殖を示したマウスは2匹のみであった。残りの処置マウスは10ヶ月間無腫瘍生存し、毒性について評価した。
【０２０７】
5.3.6 議論
転移性前立腺癌177患者の治療のために、PSMAベースの低分子量177Lu標識セラノスティクス剤の新しい一連のSARを検討した。Luは、131 I及び90 Yよりも良好な放出特性、製造可能性、及び放射線安全の問題を有するため、PSMAをターゲットとした他がん治療用途に選択される現行のβ放出同位体である。この調査の主な動機は分子と構造の起源、すなわち、タイプIと大きく異なったPKを説明するPSMA結合部位におけるPSMA-ターゲティング部分Lys-Glu-尿素の相互作用を理解する必要があることである。II型薬剤。177 Lu-PSMA-617及び177 Lu-PSMA I & Tと比較して、放射線関連の副作用が少ないII型薬剤の探索を進める。本開示のセラノスティック剤は、十分に研究された、長いリンカーに基づくターゲット化プラットホーム17, 21, 26, 36-42に基づいて構築される。厳密な合成の観点から、PSMAに結合する化合物のための放射線療法剤及び化学空間の範囲を拡張することが意図された。低分子量のPSMAベースの放射性核種治療を開発するための他の同様に集中的な合成努力は、当技術分野では知られていない。
【０２０８】
現在開示されている化合物は、最適化された溶液相化学を用いて合成された。したがって、本開示の方法は工業規模の調製に容易に適合させることができ、固相ペプチド合成方式と比較してより安価であると予想される。これらの放射性標識治療剤は放射性ピークから遊離リガンドを分離することにより、できるだけ高い比放射能で合成された。また、マイクロ波支援放射標識法は、低温40℃で迅速かつ高放射標識を生成した。系統的な細胞取り込み及び内部移行、続いて組織生体内分布研究は、いくつかの重要な知見を明らかにした。
【０２０９】
第一に、PSMAターゲティングGlu-Lys-尿素へのp-ハロベンジル部分の付着は、高腫瘍取り込み及び低非特異的正常組織結合を提供した。第二に、大環状キレート剤DOTA-Bn-SCN(177 Lu-8)及びDOTAGA(177 Lu-9)を4つの酢酸ドナーアームを有する薬剤は3つのアセチル化アームを有するDOTA-モナミドキレート剤(例えば、177 Lu-1)と比較して、より高い腫瘍の取り込み及び貯留をもたらすことがSAR検討によって実証された。また、これらの薬剤は177 Lu-PSMA I & Tと比較して、177 Lu-1と比較して高い血漿結合を示し、また、高い初期腎臓取り込み及びはるかに速い腎臓クリアランスを示した。3番目に、剛性リンカーと比較して、p-ブロモベンジル部分を有する薬剤は高い腫瘍取り込み及び直鎖状リンカーとの保持を示した(例えば、177 Lu-1対177 Lu-11及び177 Lu-9対177 Lu-10)。177 Lu‐10/177 Lu‐11を有するシクロヘキシルリンカーでは細胞内移行が高かったが、この知見は細胞取り込み研究にも反映された。
【０２１０】
第四に、アルブミン結合部分の付着は近年他の研究者らが報告したように、血清半減期43, 44を増加させることによって、177Lu-14に対するより長い腫瘍保持をもたらした。しかしながら、他の薬剤で報告されているように、これらの薬剤は、臨床薬剤177 Lu-PSMA-617又は177 Lu-PSMA-I & Tと比較して有意に高い腎臓貯留と関連している。これらの薬剤がI型薬剤に関連する明確な特徴を示したことを考慮すると、これらの薬剤は131 I-MIP10952, 12, 13で認められたように、177 Lu-PSMA-617と比較して、唾液腺及び涙腺への取り込みがはるかに高いことが予想される。涙腺では正常臓器の重篤な異常が見られたことから、これらの177Lu‐PSMA剤の代用臓器として涙腺が使用できることが剖検研究で明らかになった。ほとんどの前臨床試験では涙腺への取り込みは報告されていないが、実際、アルブミン結合剤CTT1403は涙腺への高い取り込みを22示した。
【０２１１】
第5に、自己遮断試験では腎取り込みが低い177 Lu-1は腫瘍取り込みに有意な変化をもたらさず、10倍の腎遮断を生じ、一方、初期腎取り込みが高い177 Lu-9では有意な腫瘍取り込み遮断が生じ、同様の効果が生じたことが明らかになった。これはD‐リジン/ポリグルタミン酸のようなアミノ酸ベースの腎保護剤が177Lu‐PSMA I & Tのための腎取り込み低下の向上を提供することに成功しないことが示されたため、輸入所見である。45.この試験結果は腎近位尿細管細胞における取り込みが部分的にPSMA式に起因することを確認した。46腎毒性が177のLu‐PSMA放射性核種療法の主要な問題ではないが、遮断戦略は225Ac‐PSMA‐61747によるPSMAベースのα粒子療法及びしばしばα粒子ベースのRPT31, 48で得られる長期腎毒性のための唾液腺関連放射線毒性に役立つことができる。
【０２１２】
5.4 物質と方法
商業的供給源から購入した溶媒及び化学薬品は分析等級又はそれ以上であり、さらに純化することなく使用した。ジイソプロピルエチルアミン(DIEA)、トリエチルアミン(TEA)、硝酸ルテチウム(III)、N, N,N',N'-テトラメチル-O-(N-スクシンイミジル)ウロニウムテトラフルオロボレート(TSTU)、p-アミノメチル安息香酸、Boc-5-アミノ吉草酸、Boc-6-アミノヘキサン酸-N-ヒドロキシスクシンイミド及びジスクシンイミジルスベレートをSigma-Aldrichから購入した。DOTA-tris(t-ブチルエステル)-モノ酸(B270)及びDOTA-NHS-ester(B280)はMacrocyclicics、Inc.(TX、ダラス)から購入した。キャリアフリー[177 Lu]Cl 3(NEZ307000MC)をPerkinElmer Health Sciences Inc(米国シェルトン)から購入した。分析用薄層クロマトグラフィー(TLC)を、アルドリッチアルミニウム裏打ち0.2mmシリカゲルZ19、329-1プレートを用いて実施し、紫外光(254nm)、I 2及びエタノール中1%ニンヒドリンによって可視化した。フラッシュクロマトグラフィーは、ボドマン(アストンPA)、MP SiliTech 32-63 D 60Aから購入したシリカゲルを用いて実施した。すべての実験は再現性を確実にするために、二重又は三重で行った。非放射性標識化合物のHPLC純化はPhenomenex C 18 Luna 10×250 mm2カラムを用いて、アジレント 1260無限LCシステム(Santa Clara、CA)上で行い、水(0.1% TFA)(A)及びCH 3 CN(0.1% TFA)(B)で溶出した。移動層88/22の水/CH 3 CNを1~5分間、続いて0~5分間の水88/12の水/CH3CN及び5~25分間の88/22の水/CH 3 CNから44/56の水/アセトニトリルまで流速 8mL/分の1を含む傾きHPLC法を使用した。H Bruker Ultrashield登録商標500MHzスペクトロメーターでNMRスペクトルを記録した。化学シフト(δ)は、NMR溶媒の不完全重水素化に起因するプロトン共鳴を参照して、ppmダウンフィールドで報告される。Bruker Daltonics Esquire 3000 Plus分光計で低分解能のESIマススペクトルを得た。Notre Dame mass Spectrometry & Proteomics Facility、Notre Dame、IN University of Notre Dame mass Spectrometry、Notre Dame、INにより、Bruker micrOTOF-II上での直接注入によるか、又はBruker micrOTOF-Q IIと結合したC18カラムを用いた超高圧Dionex RSLCによるLC溶出のいずれかにより。化合物、Di‐tert‐ブチル((((S)‐6‐((4‐ブロモベンジル)アミノ)‐1‐(tert‐ブトキシ)‐1‐(tert‐ブトヘキサン‐2‐イル)カルバモイル)‐L‐グルタミン酸、5a、及びDi‐tert‐ブチル((((S)‐1‐(tert‐ブトキシ)‐6‐(((4‐ヨードベンジル)アミノ)‐1‐オキソヘキサン‐2‐イル)カルバモイル)‐L‐グルタミン酸、5b)を、少量の修飾49を用いて以下の報告方法を用いて調製した。 70~80% MeOH/H 2 Oで溶出するC 18カラムクロマトグラフィーを用いて粗生成物を精製して、0.90g(62%)の油状物質を得た。
【０２１３】
5.4.1 代表的化合物の分析データ
式(I)の代チャート的な化合物をチャート1に示す。
チャート1：
【化４５】
2020522506.tif 000057
【０２１４】
以下の化合物は、式(I)の化合物の代表例である：
【化４６−１】
2020522506.tif 000058
【化４６−２】
2020522506.tif 000059
【０２１５】
リガンドL1及びL2はスキーム2に示すように、通常の合成経路に従って合成した。以下、L2について詳細に説明する。
【０２１６】
(14S,18S)-9-(4-ブロモベンジル)-2,8,16-トリオキソ-1-(4,7,10-トリス(カルボキシメチル)-1,4,7,10-テトラアザシクロドデカン-1-イル)-3,9,15,17-テトラアザイコサン-14,18,20-トリカルボン酸(L1)。Boc-5-アミノ吉草酸(0.087g、0.40mmol)、TSTU(0.121g、0.40mmol)及びDIPEA(0.103g、0.80mmol)の混合物を、DMF(1mL)中、室温で1時間撹拌した。DMF (1mL)で希釈した後、化合物1a(0.264g、0.40mmol)を滴下した。反応液を4時間撹拌し、濃縮し、C 18カラムクロマトグラフィーで100%(0.1% TFA中)で溶出し、化合物2a.1h NMR(500MHz、DMSO-d6)δ.7ppm(s、1H)、7.40(d、10Hz、1H)、7.34(d、10Hz、1H)、7.24(s、1H)、7.04(d、5Hz、1H)、6.97(d、10Hz、1H)、5.48-5.44(m、1H)、4.87-4.83(m、1H)、4.48-4.36(m、2H)、4.26-4.21(m、2H)、3.66-3.63(m、1H)、3.12- 2.95(m、4H)、2.90(s、1H)、2.81(s、1H)、2.73(s、2H)、2.33~2.27(s、1H)、2.26~2.23(m、3H)、2.00~1.98(m、1H)、1.77(m、1H)、1.66~1.60(m、2H)、1.37(s、36H)、1.26~1.07(m、2H)、。50% TFA/CH 2 Cl 2(2ml)の冷溶液を2a(0.145g、0.17ミリモル)に加え、室温で2時間撹拌した。反応混合物を濃縮し、40%アセトニトリル/水で溶出するC 18カラムクロマトグラフィーで精製し、白色固形製品0.067g(67%)を化合物3.1H NMR(500MHz、DMSO-d6)δ7.7ppm(d、J = 5.0Hz、1H)、7.48(d、J = 5.0Hz、1H)、7.7~19.7.15(m、2H)、4.62~4.53(m、2H)、4.33~4.27(m、2H)、3.40(s、1H)、2.98~2.92(m、2H)、2.83(s、1H)、2.56(s、1H)、2.44(s、3H)、2.16(bs、1H)、1.67-1.60(m、5H)、1.41-1.40(m、2H); ESMS m/z: 589.1(M + H)+. DOTA-NHS-ester (0.090g、0.12mmol)、3a(0.069g、0.08mmol)及びDIPEA(0.102g、0.79mmol)の反応混合物をRTで3h蒸留した。The reaction mixture was concentrated and purified by HPLC to provide desired ligand L1.1 H NMR(500 MHz、DMSO-d6)δ ppm 12.50(bs、5H)、8.38(bs、1H)、7.57(d、J = 5 Hz、1H)、7.51(d、J = 5 Hz、1H)、7.18-7.12(m、2H)、6.55(bs、1H)、6.37-6.29(m、2H)、4.53(s、1H)、4.46(s、1H)、4.11-4.04(m、3H)、3.80(bs、4H)、3.25-2.77(m、10 H)、2.39-2.37(m、2H)、2.27-2.20(m、4H)、1.94-1.92(m、1H)、1.72-1.63(m、2H)、1.65-1.39(m、9H)、1.28-1.22(m、4H); HRESI-MS: Calcd. C 40H 62 BrN8 O 15、973.3513[M+H]+、973.3542を見出した。
【０２１７】
(14S,18S)-9-(4-ヨードベンジル)-2,8,16-トリオキソ-1-(4,7,10-トリス(カルボキシメチル)-1,4,7,10-テトラアザシクロドデカン-1-イル)-3,9,15,17-テトラアザイコサン-14,18,20-トリカルボン酸(L2)。化合物L3は、出発反応物として1b及び中間体として2c及び3cを使用することによって、スキーム3と同じ工程に従って調製した。化合物7cは、出発物質として5bを用いて、7aについて記載したのと同じ手法を用いて調製した。粗生成物を10% アセトン/ CH 2 Cl 2で溶出するカラムクロマトグラフィーを用いて精製し、無色の油状物質.1Hを得た NMR (500 MHz、DMSO-d6)δ ppm 7.45(m、1H)、7.35(t、J = 5 Hz、1H)、7.29(m、1H)、7.21(m、1H)、7.15(d、J = 5 Hz、1H)、5.70(m、1H)、4.58-4.47(m、1H)、4.35-4.27(m、2H)、4.09(m、1H)、3.40-3.30(m、1H)、3.16-3.08(m、2H)、2.80(s、2H)、2.41-2.26(m、4H)、2.09-2.04(1H)、1.85-1.80(m、1H)、1.75-1.62(m、4H)、1.58-1 52.m、3H、1.44(m、27H)、1.35(m、6H)。
【０２１８】
化合物3cを、出発物質として2cを用いて、3aについて記載したのと同じ手法を用いて調製した。粗生成物をHPLCを用いて精製した。Spectral data for L2:1 H NMR(500 MHz、DMSO-d6)δ ppm 8.39(bs、1H)、7.38(t、J = 10 Hz、1H)、7.31(m、1H)、7.21-7.18(m、2H)、6.36-6.29(m、2H)、4.56-4.50(m、2H)、4.11-4.01(m、3H)、3.82(s、3H)、3.59(s、4H)、3.19-3.17(m、9H)、3.06(s、9H)、2.39(t、J = 5 Hz、1H)、2.30-2.23(m、3H)、1.91(m、1H)、1.73(m、1H)、1.63-1.39(m、8H)、1.24(m、2H); HRESI-MS: Calcd. for C 40 H 61IN 8 O 15、1020.3301[M+H]+.
【０２１９】
(14S,18S)-9-(4-Bromobenzyl)-1,8,16-trioxo-1-(4-(4,7,10-tris(carboxymethyl)-1,4,7,10-tetraazacyclododecan-1-yl)acetamido)methyl)phenyl)-2,9,15,17-tetraaazaicosane-14,18,20-tricarboxylic acid(L3):7bを7aと同様の方法で、Boc-5-amino valeric acidをBoc-6- 0.115g(46%)の油状物質.1Hを生成する NMR (500 MHz、DMSO-d6)δ ppm 7.41(d、J = 10 Hz、1H)、7.35(d、J = 10 Hz、1H)、7.04(d、J = 5 Hz、1H)、6.97(d、J = 10 Hz、1H)、5.47(d、J = 10 Hz、1H)、5.10-5.03(M、1H)、4.63-4.56(M、1H)、4.44(s、1H)、4.39(s、1H)、4.27-4.22(M、2H)、3.29-3.21(M、1H)、3.07-3.01(M、5H)、2.30-2.19(M、4H)、2.03-1.98(M、1H)、1.80-1.75(M、1H)、1.66-1.58(M、7H)、1.49-1.45(M、4H)、1.38(M、27H)、1.27-1.04(M、5H); ESMS M/z: 871.3(m + H)+. 化合物3bを、出発物質として2bを用いて、3aについて記載したのと同じ手法を用いて調製した。純化.1 Hを添加せず、そのまま原体を用いて次工程を実施した NMR (500 MHz、DMSO-d6)δ ppm 7.73(bs、3H)、7.76(d、J = 10.0 Hz、1H)、7.50(d、J = 10.0 Hz、1H)、7.18-7.14(M、2H)、6.34(M、2H)、4.53(s、1H)、4.46(M、2H)、3.22-3.17(M、2H)、2.82-2.73(M、2H)、2.51(s、1H)、2.37(s、1H)、2.25(M、2H)、1.93(s、1H)、1.74-1.71(M、1H)、1.64(s、1H)、1.55-1.40(M、6H)、1.35-1.33(M、1H)、1.25(s、4H); ESMS M/z: 603.2(m + H)+. 4(0.065g、0.08mmol)、3b(0.047g、0.08mmol)及びDIPEA(0.101g、0.80mmol)の反応混合物物を、DMSO(1ml)中、室温で3時間撹拌した。The reaction mixture was concentrated and purified by HPLC.1 H NMR(500 MHz、DMSO-d6)δ ppm 12.65(brs、5H)、8.42-8.39(m、1H)、7.84-7.81(m、2H)、7.56(d、J = 10.0 Hz、1H)、7.49(d、J = 10.0 Hz、1H)、7.38(d、J = 5.0 Hz、2H)、7.17-7.12(m、2H)、6.36-6.30(m、2H)、4.53(m、3H)、4.46 -4.40(m、5H)、4.10-3.98(m、9H)、3.63(bs、5H)、3.26-3.14(m、13H)、2.38(m、2H)、2.31-2.20(m、3H)、1.93-1.92(m、1H)、1.72-1.71(m、1H)、1.63-1.41(m、8H)、1.34(m、1H)、1.25(brs、3H); HRESI-MS: Calcd. C 49H 71 BrN9 O 16、1120.4197[M+H]+、1120.4200を見出した。
【０２２０】
(14S,18S)-9-(4-ヨードベンジル)-1,8,16-トリオキソ-1-(4-(4,7,10-トリス(カルボキシメチル)-1,4,7,10-テトラアザシクロドデカン-1-イル)アセトアミド)メチル)フェニル)-2,9,15,17-テトラアザイコサン-14,18,20-トリカルボン酸(L4)。中間体化合物2dは、Boc-5-アミノ吉草酸をBoc-6-アミノヘキサン酸-N-ヒドロキシスクシンイミドに置き換え、1aを反応物として1bに置き換えることによって、2aについて記載したのと同じ方法に従って調製した。Spectral data for 2d.1 H NMR(500 MHz、DMSO-d6)δ ppm 7.66(brs、1H)、7.61(d、J = 10 Hz、1H)、7.55(d、J = 10 Hz、1H)、7.15(brs、1H)、6.90(d、J = 5 Hz、1H)、6.84(d、J = 10 Hz、1H)、5.30(M、1H)、5.09-5.03(M、1H)、4.63-4.58(M、1H)、4.43(s、1H)、4.39-4.35(M、1H)、4.26-4.20(M、3H)、3.07-3.00(M、3H)、2.30-2.22(M、5H)、2.00-1.98(M、1H)、1.80-1.74(M、2H)、1.70-1.64(M、3H)、1.62-1.61(M、2H)、1.38(s、36H)、1.32-1.09(M 3H); ESMS M/z: 917.3(m + H)+. Spectral data for 3d.1 H NMR(500 MHz、DMSO-d6)δ ppm 7.87(d、J = 10 Hz、1H)、7.72(d、J = 10 Hz、1H)、7.66(d、J = 10 Hz、1H)、7.30(d、J = 10 Hz、1H)、7.04-6.99(M、1H)、4.59-4.51(M、1H)、4.32-4.25(M、3H)、3.69-3.66(M、1H)、3.38-3.35(M、1H)、3.09(M、1H)、2.96-2.89(M、1H)、2.51-2.45(M、1H)、2.43-2.39(M、3H)、2.17-2.14(M、1H)、1.91-1.72(M、2H)、1.71-1.62(M、6H)、1.45-1.28(M、8H); ESMS M/z: 649.2(m + H)+. Spectral data for L4.1H NMR(500 MHz、DMSO-d6)δ ppm 9.16(bs、4H)、8.41(m、4H)、7.82(t、J = 10.0 Hz、2H)、7.72(d、J = 10.0 Hz、1H)、7.66(d、J = 10.0 Hz、1H)、7.37(d、J = 10.0 Hz、2H)、7.01(d、J = 5.0 Hz、2H)、6.37-6.30(m、2H)、4.44-4.39(m、8H)、4.11-3.97(m、9H)、3.66-3.61(m、5H)、3.16-3.08(m、13H)、2.30(m、1H)、2.29-2.20(m、2H)、1.94-1.92(m、1H)、1.71(m、1H)、1.66-1.64(m、2H)、1.55-1.47(m、8H); HRESI-MS: Calcd. C 49H 71 IN 9 O 16では、1168.4058[M+H]+(1168.4045)であった。
【０２２１】
(21S,25S)-16-(4-(4-ブロモベンジル)-1,8,15,23-テトラオキソ-1,23-(4,7,10-トリス(カルボキシメチル)-1,4,7,10-テトラアザシクロドデカン-1-イル)アセトアミド)メチル)-2,7,16,22,24-ペンタアザヘプタコサン-21,25,27-トリカルボン酸(L5)。リガンドL5はスキーム4に示すように、多段階有機合成法に従って調製した。1a(0.190g、0.29mmol)、Et 3 N(0.029g、0.29mmol)及びDMF(1mL)の溶液を、DMF(1mL)中のジスクシンイミジルスベレート(0.223g、0.61mmol)の撹拌溶液に滴下した。反応混合物物を一晩撹拌し、濃縮し、30% アセトニトリル/CH 2 Cl 2で溶出するフラッシュカラムクロマトグラフィーによって精製して、0.120g(46%)の油状物質を得た。ESMS M/z: 911.3(M + H)+. 化合物8を、10について記載したのと同じ方法を用いて調製した。40~60% アセトニトリル/ CH 2 Cl 2で溶出するカラムクロマトグラフィーにより粗生成物を精製し、0.090g(40%)の油状物質.1Hを得た NMR (500 MHz、CDCDMSO-d6)δ ppm 7.70(brs、1H)、7.62(d、J = 5.0 Hz、1H)、7.55(d、J = 10.0 Hz、1H)、6.91(d、J = 5.0 Hz、1H)、6.85(d、J = 5.0 Hz、1H)、5.41(d、J = 5.0 Hz、1H)、5.33(d、J = 10.0 Hz、1H)、5.09-5.02(M、1H)、4.45-4.35(M、2H)、4.25-4.19(M、3H)、3.41-3.34(M、1H)、3.12-3.05(M、2H)、2.57-2.50(M、2H)、2.31-2.18(M、5H)、1.97(M、1H)、1.86-1.77(M、3H)、1.71-1.63(M、5H)、1.57-1.46(M、5H)、1.37(M、27 H); ESMS M/z: 957.2(m + H)+. 化合物12を、3aについて記載したのと同じ方法を用いて調製した。粗生成物を、40~50%アセトニトリル/水で溶出するC-18カラムクロマトグラフィーによって精製して、0.057g(58%)の生成物を得た。ESMS M/z: 743.2(M + H)+. 化合物L6は、出発物質として化合物1a及び12を用いて、L1について記載したのと同じ手法を用いて調製した。HPLC・1H NMR(500MHz、DMSO-d6)δ ppm 8.97(brs、1H)、8.43(t、5.0Hz、1H)、7.83(d、10.0Hz、2H)、7.83(d、J = 10.0Hz、2H)、7.78-7.73(m、1H)、7.56(d、10.0Hz、1H)、7.50(d、10.0Hz、2H)、7.38(d、10.0Hz、2H)、7.17-7.14(m、2H)、6.36-6.30(m、2H)、4.52-4.39(m、8H)、4.09-4.00(m、6H 11H)、3.07-3.04(m、3H)、2.36-2.33(m、1H)、2.27-2.22(m、2H)、2.06-2.01(m、2H)、1.93-1.92(m、1H)、1.73-1.64(m、2H)、1.51-1.43(m、11H)、1.26-1.19(m、6H); HRESI-MS: Calcd. C 55 H 82BrN10 O 17、1233.5037[M+H]+、1233.5029が見つかった。
【０２２２】
(21S,25S)-16-(4-ヨードベンジル)-1,8,15,23-テトラオキソ-1(4-(4,7,10-トリス(カルボキシメチル)-1,4,7,10-テトラアザシクロドデカン-1-イル)アセトアミド)メチル)-2,7,16,22,24-ペンタアザヘプタコサン-21,25,27-トリカルボン酸(L6)。化合物L7を、L5について記載したのと同じ方法を用いて調製した。粗生成物をHPLC.1H NMR(500MHz、DMSO-d6)δ ppm 8.97(brs、1H)、8.43(t、J = 5.0Hz、1H)、7.83(d、J = 10.0Hz、2H)、7.78-7.72(m、2H)、7.67(d、J = 5、1H)、7.55(bs、1H)、7.39(d、J = 10.0Hz、2H)、7.03-6.99(m、2H)、6.36-6.30(m、2H)、4.52-4.39(m、4H)、4.11-4.00(m、6H)、3.64(m、4H)、3..27-2.22(m、3H)、2.20-2.01(m、2H)、1.93-1.92(m、1H)、1.73-1.62(m、2H)、1.51-1.43(m、11H)、1.26-1.19(m、6H); HRESI-MS: Calcd. C 55 H 82 IN 10 O 17については、1281.4899[M+H]+、所見: 1281.4889。
【０２２３】
(13S,17S)‐8‐(4‐ブロモベンジル)‐7,15‐(4‐ブロモベンジル)‐7,15‐(4,7,10‐テトラキス(カルボキシメチル)‐1,4,7,10‐テトラアザシクロドデカン‐2‐イル)メチル)アミノ)‐1‐チオキソ‐2,8,14,16‐テトラアザノナデカン‐13,17,19‐トリカルボン酸(L8)。p-SCN-Bn-DOTA(12.2mg、17.7μmol)を、40℃に平衡化したDMSO(130μL)中の5a(12.2mg)及びDIPEA(15.2μL、87.0 umol)の撹拌溶液に添加した。反応混合物物を40℃で4時間撹拌し、4℃で一晩保存した。反応混合物を逆相HPLC(20% ACNを5分間、次いで20~40%を19分間保持)によって精製した。約12分R t。精製した画分を合わせ、回転蒸発させて体積を減少させ、次いで凍結乾燥した。ESI-MS: 1138.37[M+H]+、found: 1138.5. HPLC法を用いたHPLC勾配法により、化合物1をさらに精製した:移動層88%水(0.1% TFAを含む)及び22% CH 3 CN(0.1% TFA)を1~5分間、続いて0~5分間、水88%(0.1% TFAを含む)及び12% CH 3 CN(0.1% TFA)、並びに5~25分間、88%水から44%水及び12% アセトニトリルへ、流速 8mL/分で56% アセトニトリルまで。
【０２２４】
(13S,17S)-1-((4-((1,4,7,10-テトラアザシクロドデカン-2-イル)メチル)フェニル)アミノ)-1-チオキソ-2,8,14,16-テトラアザノナデカン-13,17,19-トリカルボン酸。(L7)p-SCN-Bn-DOTA(8.0mg、11.6 umol)を、40℃に平衡化したDMSO(150 uL)中の5a及びDIPEA(10.1 uL、58 umol)の撹拌溶液に添加した。反応混合物物を40℃で4時間撹拌し、続いて室温に冷却し、水で希釈し、最後に逆相HPLC(12% ACNを5分間保持し、次いで12~32%を20分間保持)によって精製した。Rt約12分。精製した画分を合わせ、蒸発させて体積を減少させ、次いで凍結乾燥した。M/Z計算値、970.41。M/Z発見、970.4...ESI-MS: 970.05[M+H]+、発見: 970.1.
【０２２５】
(3S,7S)-12-(4-ブロモベンジル)-5,13,19-トリオキソ-22-(4,7,10-トリス(カルボキシメチル)-1,4,7,10-テトラアザシクロドデカン-1-イル)-4,6,12,18-テトラアザドコサン-1,3,7,22-テトラカルボン酸(L9)。DOTA-GA無水物化物(0.087g、0.19mmol)、8a(0.075g、0.13mmol)及びDIPEA(0.066g、0.51mmol)を1hの室温で停止し、さらに2hの室温で混ぜる。反応混合物を濃縮し、HPLCで精製した。ESMS M/z: 1047.2(m + H)+.1 H NMR(500 MHz、DMSO-d6)δ ppm 12.66(bs、4H)、7.86-7.82(M、1H)、7.56(d、J = 10 Hz、1H)、7.50(d、J = 10 Hz、1H)、7.15(M、2H)、6.34-6.29(M、2H)、4.52(s、1H)、4.45(s、2H)、4.12-4.04(M、5H)、3.50(M、4H)、3.29(M、3H)、3.19(M、3H)、3.07-2.90(M、8H)、2.38(M、3H)、2.25(M、3H)、1.94-1.90(M、3H)、1.71(M、2H)、1.53-1.43(M、6H)、1.42(M、1H)、1.41-1.23(M、3H); ESMS M/z: 1047.2(m + H)+. HRESI-MS: Calcd. C 43 H 65 BrN 8 O 17, 1047.3714[M+H]+の場合: 1045.3705。
【０２２６】
(((1S)-5-((1R,4r)-N-(4-ブロモベンジル)-4-((4-カルボキシ-4-(4,7,10-トリス(カルボキシメチル)-1,4,7,10-テトラアザシクロドデカン-1-イル)ブタンアミド)メチル)シクロヘキサン-1-カルボキシペンチル)-1-カルバモイル)-L-グルタミン酸(L11)(VK03-51)。trans-4-(Fmoc-アミノメチルシクロヘキサンカルボン酸)(0.069g、0.18mmol)、TSTU(0.055g、0.18mmol)及びDIPEA(0.064g、0.50mmol)の混合物を、DMF(1mL)中、室温で1時間撹拌した。DMF (1mL)で希釈した後、化合物5a(0.110g、0.17mmol)を滴下した。反応混合物を4時間撹拌し、2% MeOH/CH 2 Cl 2で溶出するシリカゲルクロマトグラフィーにより濃縮精製し、0.90g(52.94%)の油状生成物1を得た。H NMR (500 MHz、CDCl 3)δ ppm 8.02(s、1H)、7.78(d、J = 5.0 Hz、3H)、7.60(d、J = 10.0 Hz、3H)、7.41(t、J = 10.0 Hz、4H)、7.33(d、J = 10.0 Hz、3H)、7.08(m、1H)、4.79(m、1H)、4.46(m、3H)、4.22(m、3H)、3.15(m、1H)、3.08(m、2H)、2.81(s、1H)、2.59(t、J = 10.0 Hz、1H)、2.32(m、1H)、2.20(s、2H)、2.08(m、1H)、1.85(m、4H)、1.60-1.44(m、27H)、1.26(s、1H)、1.05-0.88(m、3H)。次いで、油状生成物を20%ピペリジン/DMFに溶解し、N 2しながら室温で3時間撹拌した。反応混合物を濃縮し、溶離剤として10% MeOH/CH 2 Cl 2を用いてクロマトグラフィーにかけて、製品0.030g(降伏=42.8%)を得た。ESMS M/z: 795.2(M + H)+. 製品(0.030g、0.04mmol)はDOTA-GAアンヒドリド(0.028g、1mlで0.05mmol)及びDIPEA(0.024g、0.18mmol)の停止中に追加され、rtでは1h、続いてRTで2hのスパイラルとなった。反応混合物を濃縮し、70~80%ACN/H 2 OをエルエントとしてSep-Pak柱で浄化した。ESMS M/z: 1253.4(M + H)+.
【０２２７】
((((S)-5-(N-(4-ブロモベンジル)-4-((2-(4,7,10-トリス(カルボキシメチル)-1,4,7,10-テトラアザシクロドデカン-1-イル)アセトアミド)メチル)ベンズアミド)-1-カルボキシペンチル)カルバモイル)-L-グルタミン酸(L12)。
L1はスキーム2に記載されるように、多段階有機合成に続いて合成された。DOTA-tBu-エステルの溶液に、1(7mlのDMF中0.4g、0.5mmol)をp-アミノメチル安息香酸(0.076g、0.5mmol)に加え、溶液を室温で一晩撹拌した。得られた溶液を高真空下で蒸発させた。固形残留分を20/80 アセトニトリル/水に溶解し、C 18セプパックカラムで精製した。生成物を60/40及び50/50及び40/60のアセトニトリル/水画分で溶出した。画分を一緒に合わせ、蒸発させ、続いて凍結乾燥させて、無色の固体を得た。収率: 0.36g(80%). ESMS M/z: 706.5(M + H)+. 化合物2(0.2g、DMF中0.29mmol)の溶液にTSTU(0.1g、0.34mmol)及びDMAP(0.17g、0.1mmol)を加え、室温で一晩撹拌した。溶液を高真空下で蒸発させた。固形残留分を20/80 アセトニトリル/水に溶解し、C 18セプパックカラムで精製した。生成物である化合物3を50/50及び40/60 アセトニトリル/水画分で溶出し、凍結乾燥して無色固形物を得た。降伏:0.23g,90%、ESMS M/z: 802.96(M + H)+。化合物3(0.2g、0.23ミリモル)を氷冷TFA/CH 2 Cl 2(1:1)に溶解し、18時間一晩攪拌した。反応液を50~60% アセトニトリル/水で溶離し、良好収率(0.16g、約60%)4 in良好で溶出するC 18カラムクロマトグラフィーにより濃縮精製し、δ-d 6NMR(500MHz、DMSO-d)δ ppm 9.03(bs、1H)、8.09(bs、1H)、8.09(J = 10.0Hz、2H)、7.93(d、J = 10.0Hz、1H)、7.59(d、J = 5.0Hz、3H)、7.43(d、J = 10.0Hz、1H)、4.49(m、3H)、4.04~3.99(m、6H)、3.66(m、5H)、2.91(s、6H 3(M + H)+. 化合物6をDMSO(1mL)中に4(0.200g、0.36mmol)及び5a49(0.050g、0.16mmol)を添加し、続いてDIPEA(0.406g、3.65mmol)を添加して合成し、反応混合物をRTで一晩撹拌した。粗生成物を濃縮し、さらに純化することなく使用した。50% TFA/CH 2 Cl 2(2ml)の冷溶液を6(0.050g、0.04ミリモル)に加え、室温で2時間撹拌した。反応混合物を濃縮し、HPLCにより精製し、良好収率1で最終製品L1を得た。H NMR (500 MHz、DMSO-d6)δ ppm 12.80(brs、3H)、8.94(s、1H)、7.56(m、3H)、7.38-7.34(m、4H)、7.15(m、1H)、6.35(d、J = 10 Hz、2H)、4.64(m、4H)、4.43-4.39(m、5H)、4.13-3.99(m、7H)、3.63(bs、4H)、3.14(m、9H)、2.37-2.18(m、2H)、1.95-1.89(m、1H)、1.74-1.68(m、1H)、1.55-1.49(m、3H)、1.39-1.30(m、2H)、1.05(m、1H); HRESI-MS: Calcd. C 43 H 60 BrN8 O 15、1007.3356[M+H]+、1007.3367が見出された。
【０２２８】
(14S,18S)-9-((6-ブロモピリジン-3-イル)メチル)-2,8,16-トリオキソ-1-(4,7,10-トリス(カルボキシメチル)-1,4,7,10-テトラアザシクロドデカン-1-イル)-3,9,15,17-テトラアザイコサン-14,18,20-トリカルボン酸(L13)(VK02-112 1)H NMR (500 MHz、DMSO-d 6)δ ppm 7.21(M、1H)、7.13(M、2H)、6.12(bs、1H)、5.90(bs、1H)、4.29(s、1H)、4.19-4.15(M、2H)、3.26(M、1H)、2.93(M、2H)、2.34-2.23(M、3H)、2.07-2.02(M、1H)、1.82-1.76(M、1H)、1.70-1.64(M、3H)、1.56-1.53(M、1H)、1.43-1.37(M、27H)、1.27(d、J = 5 Hz、2H); ESMS M/z: 657.2(m + H)+. 生成物は、C-18 Sep-Pak柱1上の70~90% ACN/H 2 Oを用いて精製した。H NMR (500 MHz、DMSO-d 6)δ ppm 8.25(s、1H)、7.49(M、1H)、7.43(M、1H)、5.95(M、1H)、5.36(M、1H)、4.80(s、1H)、4.51(M、2H)、4.36-4.33(M、3H)、3.24-3.09(M、5H)、2.40-2.29(M、6H)、2.10-2.05(M、2H)、1.85-1.76(M、3H)、1.72-1.66(M、3H)、1.60-1.36(M、36H); ESMS M/z: 856.3(m + H)+. 生成物を、溶離液として3% MeOH/CH 2 Cl 2を用いてシリカゲル上で精製した。降伏17.4%の製品を、C-18 Sep-Pak柱上で50~60%のACN/H 2 Oを用いて精製した。降伏82.6%1 H NMR(500MHz、DMSO-d 6)δ ppm 8(27.8MHz、1H)、7.80(M、1H)、7.26-7.13(M、1H)、6.41-6.36(M、1H)、4.48(dd、J = 2.0、1.5Hz、1H)、4.11(M、2H M/z: 588.2(m + H)+.
【０２２９】
(3S,7S,26S,29R)-38-(4-ヨードフェニル)-5,13,20,28,35-ペンタオキソ-29-(2-(4,7,10-トリス(カルボキシメチル)-1,4,7,10-テトラアザシクロドデカン-1-イル)アセトアミド)-4,6,12,21,27,34-ヘキサアザオクタトリアコンタン-1,3,7,26-テトラカルボン酸(L14)(SR-IX-14 A)。
5.4.2 放射線標識及び血清安定性。200mM NaOAc(pH4~5)反応177 LuのmCi当たり約1 nmolの放射性リガンドを95℃で5分間マイクロ波中で加熱し、40wの出力を与えた。反応溶液を300μLの水で希釈した。錯体形成を、20~40μLの溶液のアリコートをHPLC上に注入することによってモニターした。放射性標識製品[177 Lu]Xは約98%の放射化学的収率で得られ、放射化学的純度は99%以上であった。全ての放射性標識化合物を、Phenomenex C 18 Luna 10×250 mm2 カラム、及びVarian ProStar 325 UV-Vis可変波長検出部及びBioscan(Poway、CA)フローカウントインライン放射能検出部を備えたAgilent Prostar System(Palo Alto、CA)を使用して精製し、全てGalaxieソフトウェアによって制御した。流速は、溶出溶媒として水(0.1% TFA)(A)及びCH 3 CN(0.1% TFA)(B)を用いて1mL/分であった。均一な純度を確保するために、放射性標識化合物から余分なリガンドを分離するためにアイソクラティック溶液を使用した。比放射能は、分取HPLC純化中の生成物の滞留時間で溶出する放射能の、UV吸収曲線下面積に対応する質量に対する比率として計算した。試験化合物の純度は、254nmでの吸光度を用いた分析HPLCによって測定したところ、>95%であった。
【０２３０】
放射性標識のHPLC法及びHPLCクロマトグラムを得た(データーは示さず)。化合物の比活性は>37MBq/nmol(n >12)であった。酸性溶出液を50μLの1M Na 2 CO 3液で中和し、溶出液の体積を減圧乾固した。固形残留分を生理食塩水及び2μlのアスコルビン酸(200mg/mL)で希釈して、生体内分布、画像化及び処置研究を含むすべての生物学的研究のための所望の放射能濃度とした。また、移動相で10mMジエチレントリアミン五酢酸(DTPA)を用いたシリカゲルインスタントTLC(ITLC)を用いて放射標識降伏を評価した。3マイクロリットルの希釈サンプルをITLCシリカゲルストリップ上にスポットし、クロマトグラフィー室内で展開させた。溶剤前面への移動が完了したら、ITLCサンプルストリップを乾燥させ、半分に切断し、Wallac Wizard γ-カウンター(Perkin-Elmer、Boston、MA)で計数して、放射標識収率を決定した。放射化学的純度は、高速液体クロマトグラフィー(HPLC)分析によって評価した。
【０２３１】
5.4.3 細胞株。進行したアンドロゲン非独立骨転移に由来するアンドロゲン非独立PC3ヒト前立腺癌細胞株のサブラインを使用した。これらのサブラインは、高いレベルのPSMA[PSMA陽性(+)PC3 PIP]を発現するように改変されているか、又はターゲット[PSMA陰性(-)PC3 flu]を欠いている。それらは、Dr.Warren Heston(Cleveland Clinic)によって寛大に提供された。電池を、10%ウシ胎児血清(FBS)(Sigma-Aldrich、St.Louis、MO)及び1%ペニシリン-ストレプトマイシン(Corning Cellgro、Manassas、VA)を含有するRPMI 1640培地(Corning Cellgro、Manassas、VA)中で増殖させた。PSMA+ PC3 PIP電池を、20μg/mLのピューロマイシンの存在下で増殖させて、PSMA式を維持した。全ての培養物を、加湿インキュベーター中、37.0℃で、5% 炭酸ガス(CO 2)を含む大気中で維持した。
【０２３２】
5.4.4 細胞取り込み及び内部移行の判定。細胞取り込み研究は、以前に報告された50と同様に行った。細胞 (1 6ウェルプレート中の増殖培地中で、37kBq/mL(1μCi/mL)の各放射標識剤と共にインキュベートした。特異的細胞取り込みを決定するために、細胞をZJ43で10μMの最終濃度まで予備ブロックした。細胞取り込みを、1mLの氷冷PBSで洗浄することによって終了させた。37℃で20分間及び60分間インキュベートした後、電池を結合バッファーで洗浄し、非酵素バッファーを用いてトリプシン処理し、電池関連活性をγ分光計(1282 Compugamma CS; Pharmacia/LKB Nuclear、Inc.)で測定した。インターナリゼーションアッセイのために、非酵素バッファーを用いて電池を分離し、試験管当たり100万個の電池のアリコートを、1ミリリットル当たり37kBq(1μCi)のそれぞれの放射標識剤と共に、37℃で1、2、4及び24時間インキュベートした。4℃でのレセプターエンドサイトーシスが最小であると仮定して、37℃でインキュベートした電池のみを用いてインターナリゼーションアッセイを行った。1、2、4及び24時間で培地を除去し、電池を結合バッファーで1回洗浄し、続いて4℃で5分間、穏やかな酸性バッファー(50mMグリシン、150mM NaCl[pH 3.0])で洗浄した。次いで、酸性バッファーを回収し、電池を結合バッファーで2回洗浄した。プールした洗浄液(細胞表面に結合した177Lu標識剤を含む)及び細胞ペレット(細胞内に取り込まれた177Lu標識を含む)を、標準と共に自動γカウンターで計数した。放射能値の全てを、100万電池当たりのインキュベートされた用量(%ID)のパーセンテージに変換した。実験を3連で行い、3回繰り返した。データーを、PRIZMソフトウェアを使用する直鎖状回帰式分析に従ってフィットさせた。
【０２３３】
5.4.5 生体内分布。PSMA(+)PC3 PIP及びPSMA(-)PC3 flu腫瘍異種移植片を有するマウスに、150μLの生理食塩水(n = 4)中の1.11~1.85MBq(30~50μCi)の177Lu‐Xを尾静脈を介して注射した。注射の10分後、30分後、60分後及び120分後に、マウスを頸部脱臼により屠殺し、そして血液を心臓穿刺により直ちに収集した。心臓、肺、肝臓、胃、膵臓、脾臓、脂肪、腎臓、筋肉、小腸及び大腸、尿中ブラダ、PSMA(+)PC3 PIP及びPSMA(-)PC3インフルエンザ腫瘍を収集した。各器官を秤量し、組織放射能を自動ガンマカウンター(1282 Compugamma CS、Pharmacia/ LKBNuclear、Inc、Mt.Waverly、Vic.Australia)で測定した。組織1g当たりの注射照射量の割合(% ID/g)を、最初の照射量の標準希釈のサンプルと比較することによって計算した。全ての測定値を減衰について補正した。
【０２３４】
5.4.6 血漿タンパク質結合試験及びインビボでの代謝。マウス(n = 2/群)に177Lu‐1及び177Lu‐9放射性トレーサー(150μL生理食塩水中3.7mBq)を鉱脈内尾鉱脈注射により投与した。投与2時間後にマウスを殺した。血液をヘパリン処理したチューブに集め、血漿単離のために遠心分離した(5分、1700g)。血漿サンプル(50μL)を限外濾過デバイス[無遠心限外濾過デバイス(ミリポアシグマ、米国)]に移し、遠心分離してタンパク質を分離した。濾液及びタンパク質画分のサンプルをガンマカウンターで測定した。さらに、ITLCを行って、水溶性血液画分中の放射性トレーサー安定性を評価した。
【０２３５】
5.4.7 小動物SPECT/CTイメージング。選択した放射性トレーサー(177 Lu-1及び177 Lu-14)を、生体内分布試験に用いたのと同じPSMA(+)PC3 PIP及びPSMA(-)PC3 flu担癌モデルの両方を有する異種移植モデル(n = 2)を用いて撮像した。放射線治療のためのSPECT‐CT画像は、PSMA(+)PC3 PIP腫瘍軸受マウスのみを用いて行った。放射性医薬品注射の前及び最中に、0.6L/分で流れる酸素中の1%イソフルランガスを用いてマウスを麻酔した。
【０２３６】
マウスに、150μLの生理食塩水(pH 7)中に製剤化された177 Lu-Xの約37MBq(1 mCi)又は111MBq(治療研究のために3 mCi)を尾静脈から注射した。2時間の放射性医薬品の取り込みを可能にした後、麻酔したマウスをスキャナガントリ上に置き、麻酔剤の流量を0.8L/分に増加させながら医療用テープで固定した。マウスの体温はマウスを数層のChux使い捨てパッドで覆い、走査中に切開ランプで照明することによって維持した。開口径1.0mmの単一ピンホール中央エネルギー(PHME)コリメータと、全360°回転で64 突起部角度、45インクリメントの段階的回転をSPECT画像に使用した。頭部からブラダにかけてマウス体を覆う7.5cmの視野を提供する6.5cmに設定した。シンチグラフィーの前に、解剖学的位置合わせ及び減衰補正の両方のためにCT 14走査を行った。全部で512 突起部を、全360°の回転をカバーする2分間の連続回転モードで取得した。データを再構築し、ベンダー(GammaMedica)からの市販のソフトウェアを用いて融合した。アミドソフトウェアを用いてデータを分析した。
【０２３７】
5.4.8 腫瘍放射性医薬品療法。PC3 PIP逃げ面腫瘍増殖遅延モデルを用いて、177 Lu-L1、177 Lu-L3、177 Lu-L5及び177Lu-PSMA-617を生理食塩水と比較して単回静脈内投与したときの治療効果を検討するため、抗腫瘍効果試験が実施された。これは、頭から頭への比較研究であり、腫瘍を有するマウス及び放射能の同じバッチであった。異種移植片の接種から14~18日後に、全マウスが約60~85mmの3の腫瘍体積を有する試験を開始した(表8)。全ての生存マウスを8週間モニターし、成長遅延をモニターした。マウスの体重及び腫瘍体積を、実験を通して3日毎にモニターした。治験実施医療機関によって定義されたエンドポイント基準は、体重減少>=15%、腫瘍体積>1800 mm3、腫瘍の活動性潰瘍化、又は疼痛又は不穏を示す異常行動であった。8週間後、各群からの3匹のマウスを詳細な剖検及び血液分析に供した。177 Lu-1及び177Lu-PSMA-617を投与したマウス群は、エンドポイントまでモニタリングを継続した。これらの定義は、Kaplan-Meier分析にも用いられた。最初の腫瘍体積の5倍に達する確率を、Kaplan-Meier曲線を用いて特徴付け、対数順位検定を用いて比較を行った。腫瘍体積の算出に用いた公式はV=幅2×長/2であった。8週間後の177 Lu投与群及び111MBqを投与した健康なCD-1(n = 3)マウスにおける毒性を、血清代謝パネル、血球数、腎臓、唾液腺及び涙腺の詳細な組織病理学を含む全剖検により、ジョンズホプキンス病理学コア施設での病理学的検査により評価した。
【０２３８】
5.4.9 データ解析. データーは、平均±標準偏差(標準偏差)として表す。Prismソフトウェア(GraphPAD、San Diego、California)を用いて統計的有意性を決定した。統計的有意性は、対t検定を用いて計算した。P値<0.05を有意とみなした。
【０２３９】
5.5 参考文献
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【０２４０】
参考文献
本明細書において言及された全ての刊行物、特許出願、特許及び他の参考文献は、本明細書に開示される発明に関係する当業者のレベルを示すものである。本明細書で言及される全ての刊行物、特許出願、特許及び他の参考文献（例えば、ウェブサイト、データベースなど）は、個々の刊行物、特許出願、特許及び他の参考文献が、具体的かつ個々に、参照により取込まれることが示されているかのような程度において、その全体が本明細書に参照により取込まれる。多数の特許出願、特許及び他の参考文献が本明細書で参照されているが、そのような参照が、これらの文献のどれもが当該技術分野において共通する一般知識の一部をなすことを認めるものではないことと理解される。本明細書と何れの組込まれた参考文献との間に矛盾がある場合、本明細書（組込まれた参考文献に基づくかもしれない、そのいかなる修正を含む）が優先するものとする。本明細書では、特に明記しない限り、標準的な技術的に受け入れられた用語の意味が用いられる。本明細書では、様々な用語の標準的な略語を使用する。
【０２４１】
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【０２４２】
前述の発明は、理解を明確にするための説明及び実施例によってある程度詳細に記載されているが、当業者には、添付の特許請求の範囲内で、変更及び修正が実施され得ることが理解されるであろう。
【図１】
2020522506.tif 000089
【図２】
2020522506.tif 000090
【図３】
2020522506.tif 000091
【図４】
2020522506.tif 000092
【図５】
2020522506.tif 000093
【図６】
2020522506.tif 000094
【図７】
2020522506.tif 000095
【図８】
2020522506.tif 000096
【図９】
2020522506.tif 000097
【図１０】
2020522506.tif 000098
【図１１】
2020522506.tif 000099
【図１２】
2020522506.tif 000100
【図１３】
2020522506.tif 000101
【図１４】
2020522506.tif 000102
【図１５】
2020522506.tif 000103
【図１６】
2020522506.tif 000104
【図１７】
2020522506.tif 000105
【図１８】
2020522506.tif 000106
【図１９】
2020522506.tif 000107
【図２０】
2020522506.tif 000108
【図２１】
2020522506.tif 000109
【図２２】
2020522506.tif 000110
【図２３】
2020522506.tif 000111
【図２４】
2020522506.tif 000112
【図２５】
2020522506.tif 000113
【国際調査報告】
2020522506.tif 000114
2020522506.tif 000115
2020522506.tif 000116
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