(57)【要約】  本発明は、置換インドリン誘導体、前記化合物を使用することによってデングウイルス感染を予防又は治療する方法に関し、また、薬剤として使用するための、より好ましくはデングウイルス感染を治療又は予防する薬剤として使用するための前記化合物にも関する。本発明はさらに、当該化合物の医薬組成物又は配合剤、薬剤として使用するための、より好ましくはデングウイルス感染を予防又は治療するための組成物又は配合剤に関する。本発明はまた、当該化合物の調製方法にも関する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
その任意の立体化学的異性体型を含む、式（Ｉ）：
【化１】
2020512374.tif 000031
（式中、
Ｒ１はフルオロであり、Ｒ２は−ＣＨ２ＣＨ２ＯＨであり、Ｒ３はトリフルオロメチルであり、Ｒ４は水素である、又は
Ｒ１はフルオロであり、Ｒ２は−ＣＨ２ＣＨ２ＯＨであり、Ｒ３はトリフルオロメチルであり、Ｒ４はメトキシである、又は
Ｒ１はフルオロであり、Ｒ２は−ＣＨ２ＣＨ２ＯＨであり、Ｒ３はトリフルオロメトキシであり、Ｒ４は水素である、又は
Ｒ１はクロロであり、Ｒ２は−ＣＨ２ＣＨ２ＯＨであり、Ｒ３はトリフルオロメチルであり、Ｒ４は水素である、又は
Ｒ１はクロロであり、Ｒ２は−ＣＨ２ＣＨ２ＯＨであり、Ｒ３はトリフルオロメチルであり、Ｒ４はメトキシである、又は
Ｒ１はクロロであり、Ｒ２は−ＣＨ２ＣＨ２ＯＨであり、Ｒ３はトリフルオロメトキシであり、Ｒ４は水素である、又は
Ｒ１はクロロであり、Ｒ２は−（ＣＨ２）３ＣＯＯＨであり、Ｒ３はトリフルオロメチルであり、Ｒ４は水素である、又は
Ｒ１はクロロであり、Ｒ２は−（ＣＨ２）３ＣＯＯＨであり、Ｒ３はトリフルオロメチルであり、Ｒ４はメトキシである、又は
Ｒ１はクロロであり、Ｒ２は−（ＣＨ２）３ＣＯＯＨであり、Ｒ３はトリフルオロメトキシであり、Ｒ４は水素である）
の化合物、又はその薬学的に許容される塩、溶媒和物若しくは多形体。
【請求項２】
前記化合物が
【化２】
2020512374.tif 000032
から選択される、請求項１に記載の化合物。
【請求項３】
前記化合物が（＋）比旋光度を有する、請求項１に記載の化合物。
【請求項４】
前記化合物が
【化３】
2020512374.tif 000033
から選択される、請求項１に記載の化合物。
【請求項５】
請求項１〜４のいずれか一項に記載の化合物を、１種以上の薬学的に許容される添加剤、希釈剤又は担体とともに含む医薬組成物。
【請求項６】
第２の又はさらなる活性成分を含む、請求項５に記載の医薬組成物。
【請求項７】
前記第２の又はさらなる活性成分が抗ウイルス剤である、請求項６に記載の医薬組成物。
【請求項８】
医薬としての使用のための、請求項１〜４のいずれか一項に記載の式（Ｉ）の化合物。
【請求項９】
デング熱感染の治療における使用のための、及びデング熱感染に関連する疾患の予防又は治療するための、請求項１〜４のいずれか一項に記載の式（Ｉ）の化合物。
【請求項１０】
前記デング熱感染が、ＤＥＮＶ−１、ＤＥＮＶ−２、ＤＥＮＶ−３又はＤＥＮＶ−４株のウイルスによる感染である、請求項９に記載の使用のための式（Ｉ）の化合物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、置換インドリン誘導体、前記化合物を使用することによってデングウイルス感染を予防又は治療する方法に関し、また、薬剤として使用するための、より好ましくはデングウイルス感染を治療又は予防する薬剤として使用するための前記化合物にも関する。本発明はさらに、当該化合物の医薬組成物又は配合剤、薬剤として使用するための、より好ましくはデングウイルス感染を予防又は治療するための組成物又は配合剤に関する。本発明はまた、当該化合物の調製方法にも関する。
【背景技術】
【０００２】
蚊又はダニによって伝染するフラビウイルスは、脳炎及び出血熱などのヒトの生命を脅かす感染症を引き起こす。４種の、異なるが近似している血清型のフラビウイルスデング、いわゆるＤＥＮＶ−１、ＤＥＮＶ−２、ＤＥＮＶ−３及びＤＥＮＶ−４が知られている。デング熱は、世界の大抵の熱帯及び亜熱帯地域、主に都市部及び準都市部に侵淫している。世界保健機関（ＷＨＯ）によれば、２５億人（そのうちの１０億人が小児である）がＤＥＮＶ感染の危険にさらされている（ＷＨＯ、２００２）。毎年、世界で、推定５千万〜１億例のデング熱［ＤＦ］、５０万例の重症デング疾患（すなわち、デング出血熱［ＤＨＦ］及びデングショック症候群［ＤＳＳ］）、及び２０，０００人を超える死者が発生している。ＤＨＦは、侵淫地域における小児の入院及び死亡の主因となっている。総じて、デング熱はアルボウイルス病の最大の原因である。ラテンアメリカ、東南アジア及び西太平洋にある国々（ブラジル、プエルトリコ、ベネズエラ、カンボジア、インドネシア、ベトナム、タイなど）において最近デング熱が大規模に発生したため、過去数年にわたり、その症例数は著しく増加している。デング熱は新しい地域に広がっているため、この疾患の症例数が増加しているだけでなく、その発生はより深刻化する傾向にある。
【０００３】
デング熱に対するワクチンの開発が進展し、Ｄｅｎｇｖａｘｉａ（登録商標）ワクチンが利用可能になっているが、多くの問題に遭遇している。その問題として、抗体依存性感染増強（ＡＤＥ）と呼ばれる現象の存在が挙げられる。１種の血清型による感染から回復すると、その血清型に対しては生涯続く免疫が得られるが、他の３種の血清型のうち１種によるその後の感染に対しては、部分的で一過性の保護しか得られない。
【０００４】
他の血清型に感染すると、既に存在している異種抗体が、新たに感染したデングウイルスの血清型と複合体を形成するが、その病原体を中和することはない。それどころか、細胞へのウイルスの侵入が促進され、それによりウイルスの無制御な複製が生じ、ウイルス力価のピークがより高くなると考えられる。一次感染と二次感染の両方で、ウイルス力価が高くなると、より重症のデング疾患となる。移行抗体は授乳によって容易に乳児に移行することができるため、これが、小児の方が成人より重症デング疾患に冒されやすい理由の１つである可能性がある。
【０００５】
２種以上の血清型が同時に広まった地域は高侵淫地域とも呼ばれ、そこでは、より重症の二次感染に遭遇する危険性が高くなるため、重篤なデング疾患の危険性が著しく増大する。さらに、高侵淫状況では、より毒性の強い株が出現する可能性が高くなり、ひいては、デング出血熱（ＤＨＦ）又はデングショック症候群の可能性が増大する。
【０００６】
アエデス・アエギプチ（Ａｅｄｅｓ  ａｅｇｙｐｔｉ）及びアエデス・アルボピクツス（Ａｅｄｅｓ  ａｌｂｏｐｉｃｔｕｓ）（ヒトスジシマカ）などの、デング熱を運ぶ蚊は、地球上で北に移動している。米国疾病管理予防センター（Ｕｎｉｔｅｄ  Ｓｔａｔｅｓ（ＵＳ）Ｃｅｎｔｅｒｓ  ｆｏｒ  Ｄｉｓｅａｓｅ  Ｃｏｎｔｒｏｌ  ａｎｄ  Ｐｒｅｖｅｎｔｉｏｎ：ＣＤＣ）によれば、それらの蚊はいずれも、現在、テキサス州南部に遍在している。デング熱を運ぶ蚊の北への広がりは、米国に限らず、ヨーロッパでも観察されている。
【０００７】
Ｓａｎｏｆｉ  Ｐａｓｔｅｕｒが製造したデング熱ワクチンであるＤｅｎｇｖａｘｉａ（登録商標）は、最初にメキシコで承認されたが、そのうちに承認する国々が増えていった。しかしながら、特にＤＥＮＶ−１及びＤＥＮＶ−２に対して有効性が限られていること、フラビウイルス未感染対象における有効性が低いこと、及び投薬スケジュールが長期にわたることから、このワクチンには改善の余地がかなり残されている。
【０００８】
これらの欠点はあるものの、このワクチンは、人口の大きな部分を保護するであろうことから、侵淫状況下では大変革をもたらすものである。しかし、デング熱の負担が最も大きいきわめて年少の乳児に対する保護はありそうにない。加えて、投薬スケジュール、及びフラビウイルス未感染対象には有効性がきわめて限られていることのために、非侵淫地からデング熱の侵淫地へ移動する人々にとっては、このワクチンは不適であり、価値がない／費用対効果が低いということになりそうである。デング熱ワクチンの上記欠点が、曝露前予防性の抗デングウイルス薬が必要な理由である。
【０００９】
さらに、今日、デング熱ウイルス感染を治療又は予防するための特定の抗ウイルス薬は入手不可能である。動物、より特定するとヒトにおけるウイルス感染、特にフラビウイルス、より特定するとデングウイルスにより引き起こされるウイルス感染を予防又は治療する治療用物質に対する大きな未対処の医療ニーズが依然として存在するのは明らかである。抗ウイルス力が良好で、副作用がないか、若しくは少なく、複数のデングウイルス血清型に対して広域抗活性を有し、低毒性で、及び／又は薬物動態学的特性若しくは薬力学的特性が良好な化合物の必要性が高い。
【００１０】
国際公開第２０１０／０２１８７８号パンフレットは、２−フェニルピロリジン及びインドリン誘導体を、炎症性及び中枢性疾患の治療のための冷感メントール受容体拮抗剤として開示している。国際公開第２０１３／０４５５１６号パンフレットは、デングウイルス感染の治療に使用するためのインドール誘導体及びインドリン誘導体を開示している。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１１】
本発明は、今般、デングウイルスの４種の血清型すべてに対して高強力な活性を示す化合物、置換インドリン誘導体を提供する。
【課題を解決するための手段】
【００１２】
本発明は、本発明の化合物によって上記の問題のうち少なくとも１つを解決することができるという予想外の発見に基づいている。
【００１３】
本発明は、現在知られている４種の血清型すべてに対して強力な抗ウイルス活性を有することが明らかになった化合物を提供する。本発明はさらに、これらの化合物がデングウイルス（ＤＥＮＶ）の増殖を効果的に阻害することを表明する。したがって、これらの化合物は、動物、哺乳動物及びヒトにおけるウイルス感染の治療及び／又は予防に、より特定すると、デングウイルス感染の治療及び／又は予防に使用することができる有用な強力化合物群である。
【００１４】
本発明はさらに、薬剤としてのそのような化合物の使用、及びウイルス感染、特に、動物又は哺乳動物、より特定するとヒトにおけるデングウイルスファミリーに属するウイルスによる感染を治療及び／又は予防する医薬を製造するためのそのような化合物の使用に関する。本発明はまた、そのようなすべての化合物の調製方法、及びそれらを有効量で含む医薬組成物に関する。
【００１５】
本発明はまた、１種以上のそのような化合物、又はその薬学的に許容される塩の有効量を、任意選択により１種以上の他の薬剤（別の抗ウイルス剤など）と併用して、それを必要とする患者に投与することによって、ヒトのデングウイルス感染を治療又は予防する方法に関する。
【００１６】
本発明の一態様は、その任意の立体化学的異性体型を含む、式（Ｉ）：
【化１】
2020512374.tif 000002
（式中、
Ｒ１はフルオロであり、Ｒ２は−ＣＨ２ＣＨ２ＯＨであり、Ｒ３はトリフルオロメチルであり、Ｒ４は水素である、又は
Ｒ１はフルオロであり、Ｒ２は−ＣＨ２ＣＨ２ＯＨであり、Ｒ３はトリフルオロメチルであり、Ｒ４はメトキシである、又は
Ｒ１はフルオロであり、Ｒ２は−ＣＨ２ＣＨ２ＯＨであり、Ｒ３はトリフルオロメトキシであり、Ｒ４は水素である、又は
Ｒ１はクロロであり、Ｒ２は−ＣＨ２ＣＨ２ＯＨであり、Ｒ３はトリフルオロメチルであり、Ｒ４は水素である、又は
Ｒ１はクロロであり、Ｒ２は−ＣＨ２ＣＨ２ＯＨであり、Ｒ３はトリフルオロメチルであり、Ｒ４はメトキシである、又は
Ｒ１はクロロであり、Ｒ２は−ＣＨ２ＣＨ２ＯＨであり、Ｒ３はトリフルオロメトキシであり、Ｒ４は水素である、又は
Ｒ１はクロロであり、Ｒ２は−（ＣＨ２）３ＣＯＯＨであり、Ｒ３はトリフルオロメチルであり、Ｒ４は水素である、又は
Ｒ１はクロロであり、Ｒ２は−（ＣＨ２）３ＣＯＯＨであり、Ｒ３はトリフルオロメチルであり、Ｒ４はメトキシである、又は
Ｒ１はクロロであり、Ｒ２は−（ＣＨ２）３ＣＯＯＨであり、Ｒ３はトリフルオロメトキシであり、Ｒ４は水素である）
の化合物、又はその薬学的に許容される塩、溶媒和物若しくは多形体を提供することである。
【００１７】
特に上記の化合物は、以下を含む群から選択される。
【化２】
2020512374.tif 000003
【発明を実施するための形態】
【００１８】
本発明の一部はまた、上記の化合物、又はその立体異性体型、薬学的に許容される塩、溶媒和物若しくは多形体を、１種以上の薬学的に許容される添加剤、希釈剤又は担体とともに含む医薬組成物でもある。
【００１９】
前記化合物の薬学的に許容される塩として、その酸付加塩及び塩基塩が挙げられる。好適な酸付加塩は、非毒性塩を形成する酸から形成される。好適な塩基塩は、非毒性塩を形成する塩基から形成される。
【００２０】
上記の薬学的に許容される酸塩は、式（Ｉ）の化合物が形成することができる治療的に活性な非毒性の酸付加塩形態を含むことを意味する。これらの薬学的に許容される酸付加塩は、塩基形態をそのような適切な酸で処理することにより簡便に得ることができる。適切な酸としては、例えば、ハロゲン化水素酸、例えば塩酸又は臭化水素酸、硫酸、硝酸、リン酸などの酸、などの無機酸；又は、例えば、酢酸、プロパン酸、ヒドロキシ酢酸、乳酸、ピルビン酸、シュウ酸（すなわち、エタン二酸）、マロン酸、コハク酸（すなわち、ブタン二酸）、マレイン酸、フマル酸、リンゴ酸、酒石酸、クエン酸、メタンスルホン酸、エタンスルホン酸、ベンゼンスルホン酸、ｐ−トルエンスルホン酸、シクラミン酸、サリチル酸、ｐ−アミノサリチル酸、パモ酸などの酸、などの有機酸が挙げられる。
【００２１】
本発明の化合物はまた、非溶媒和形態及び溶媒和形態で存在してもよい。「溶媒和物」という用語は、本発明の化合物と、１種以上の薬学的に許容される溶媒分子、例えばエタノールとを含む分子複合体を表すために本明細書では使用される。
【００２２】
「多形体」という用語は、本発明の化合物が２つ以上の形態又は結晶構造で存在できることを指す。
【００２３】
本発明の化合物は、結晶質又は非晶質製品として投与されてもよい。それらは、沈澱、結晶化、凍結乾燥、噴霧乾燥、又は蒸発乾燥などの方法によって、例えば、固体プラグ、粉末、又はフィルムとして得ることができる。それらは、単独で、又は本発明の１種以上の他の化合物と組み合わせて、若しくは１種以上の他の薬物と組み合わせて投与されてもよい。一般に、それらは、１種以上の薬学的に許容される添加剤を伴って製剤として投与されることになる。本明細書では「添加剤」という用語は、本発明の化合物以外の任意の成分を表すために使用される。添加剤の選択は、特定の投与形態、溶解性及び安定性への添加剤の影響、及び剤形の性質などの要因に大きく左右される。
【００２４】
本発明の化合物又はその任意のサブグループは、投与目的のために様々な医薬品形態へと製剤化され得る。適切な組成物として、全身投与薬物用に通常使用されるすべての組成物を挙げることができる。本発明の医薬組成物を調製するために、活性成分として、特定の化合物の有効量を、任意選択により付加塩形態で、薬学的に許容される担体と組み合わせて均質混合物にするが、この担体は、投与に所望される製剤の形態に応じて、多種多様な形態をとり得る。これらの医薬組成物は、例えば、経口投与又は経直腸投与に好適な単位剤形であることが望ましい。例えば、組成物を経口剤形に調製する際、懸濁剤、シロップ剤、エリキシル剤、乳剤及び液剤などの経口液体製剤の場合には、例えば、水、グリコール類、油、及びアルコールなどの通常の医薬媒体のいずれかを使用することができ、又は散剤、丸剤、カプセル剤及び錠剤の場合には、デンプン、糖、カオリン、希釈剤、滑沢剤、結合剤、及び崩壊剤などの固体担体を使用することができる。投与が容易であるため、錠剤及びカプセル剤は最も有利な経口単位剤形であり、その場合、固体医薬担体が当然使用される。また、使用直前に液体形態に変換することができる固体形態の製剤も含まれる。
【００２５】
投与を容易にし、投与量を均一にするために、前述の医薬組成物を単位剤形に製剤化することは特に有利である。本明細書で使用される単位剤形とは、単位投与量として好適な物理的に個別の単位を指し、各単位は、必要な医薬担体と共同して所望の治療効果を生じるように計算された所定量の活性成分を含有する。そのような単位剤形の例は、錠剤（分割錠剤又はコーティング錠剤を含む）、カプセル剤、丸剤、粉末パケット、ウエハー、坐剤、注射液又は懸濁剤など、及びそれらの分離複合剤である。
【００２６】
感染症の治療の当業者は、以下に示される試験結果から有効量を決定することができるであろう。一般に、有効１日量は、０．０１ｍｇ／ｋｇ体重〜５０ｍｇ／ｋｇ体重、より好ましくは０．１ｍｇ／ｋｇ体重〜１０ｍｇ／ｋｇ体重であろうと考えられる。必要な用量を２回、３回、４回又はそれより多回のサブ用量として、一日の間に適切な間隔をおいて投与することが適切な場合がある。前記サブ用量は、例えば、単位剤形当たり１〜１０００ｍｇ、特に、５〜２００ｍｇの活性成分を含有する単位剤形として製剤化されてもよい。
【００２７】
正確な投与量及び投与頻度は、当業者に周知のとおり、使用される本発明の特定の化合物、治療される特定の病態、治療される病態の重症度、特定の患者の年齢、体重及び全身的な身体状態、並びに個体が摂取している可能性のある他の薬に依存する。さらに、有効量は、治療される対象の応答に応じて、及び／又は本発明の化合物を処方する医師の評価に応じて、低減又は増加されてもよいことは明らかである。したがって、上記の有効量の範囲は指針であるに過ぎず、本発明の範囲又は使用を、いかなる程度であれ限定するものではない。
【００２８】
本開示はまた、本発明の化合物に存在する原子の任意の同位体も含むものとする。例えば、水素の同位体はトリチウム及びジュウテリウムを含み、炭素の同位体はＣ−１３及びＣ−１４を含む。
【００２９】
本発明に使用される本化合物はまた、その立体化学的異性体型で存在することもでき、立体化学的異性体型とは、同じ原子が同じ結合順序で結合して構成されるが、交換不可能な異なる三次元構造を有するすべての可能な化合物と定義される。別段の言及も指示もない限り、化合物の化学名は、前記化合物が所有し得るすべての可能な立体化学的異性体型の混合物を包含する。
【００３０】
前記混合物は、前記化合物の基本分子構造のすべてのジアステレオマー及び／又はエナンチオマーを含有することができる。本発明において使用される化合物のすべての立体化学的異性体型は、純粋な形態で、又は互いの混合物で、任意のラセミ混合物又はラセミ化合物を含めて、本発明の範囲内に包含されるものとする。
【００３１】
本明細書に記載する化合物及び中間体の純粋な立体異性体型は、前記化合物又は中間体と基本分子構造が同じの他のエナンチオマー又はジアステレオマーの形態を実質的に含まない異性体と定義される。特に、「立体異性として純粋な」という用語は、立体異性体過剰率が少なくとも８０％（すなわち、１種の異性体が最低９０％と他の可能な異性体が最高１０％）から立体異性体過剰率が１００％（すなわち、１種の異性体が１００％で、他種の異性体を全く含まない）までの化合物又は中間体、より特定すると、立体異性体過剰率が９０％から１００％まで、さらにより特定すると、立体異性体過剰率が９４％から１００％まで、最も特定すると、立体異性体過剰率が９７％から１００％までの化合物又は中間体に関する。「エナンチオマーとして純粋な」及び「ジアステレオマーとして純粋な」という用語も同様に理解されるべきであるが、その場合、それらはそれぞれ、当該混合物のエナンチオマー過剰率、ジアステレオマー過剰率に関するものである。
【００３２】
本発明において使用される化合物及び中間体の純粋な立体異性体型は、当技術分野で既知の手順を適用することによって得ることができる。例えば、エナンチオマーは、光学活性な酸又は塩基を用いてそれらのジアステレオマー塩を選択的に結晶化することによって互いに分離することができる。光学活性な酸の例としては、酒石酸、ジベンゾイル酒石酸、ジトルオイル酒石酸及びカンホスルホン酸（ｃａｍｐｈｏｓｕｌｆｏｎｉｃ  ａｃｉｄ）がある。あるいは、エナンチオマーは、クロマトグラフ法により、キラル固定相を使用して分離することができる。前記純粋な立体化学的異性体型はまた、適切な出発原料の対応する純粋な立体化学的異性体型から誘導することもできるが、但し、反応は立体特異的に起こるものとする。特定の立体異性体が所望される場合、前記化合物は立体特異的な調製方法により合成されるのが好ましいであろう。これらの方法は、エナンチオマーとして純粋な出発原料を使用するのが有利であろう。
【００３３】
本発明の式（Ｉ）の化合物はすべて、下図に＊の記号をつけた炭素原子で示すように、少なくとも１個のキラル炭素原子を有する。
【化３】
2020512374.tif 000004
【００３４】
前記キラル炭素原子が存在するため、「式（Ｉ）の化合物」は、（Ｒ）−エナンチオマー、（Ｓ）−エナンチオマー、ラセミ体、又は２種の別個のエナンチオマーの任意の比での任意の可能な組合せとすることができる。エナンチオマーの（Ｒ）−又は（Ｓ）−の絶対配置が不明な場合、このエナンチオマーは、前記特定のエナンチオマーの比旋光度を測定した後に、エナンチオマーが右旋性（＋）−であるか左旋性（−）−であるかを示すことによって同定することもできる。
【００３５】
ある態様において、本発明は、式（Ｉ）の化合物群の比旋光度が（＋）である、式（Ｉ）の化合物の第１の群に関する。
【００３６】
別の態様において、本発明は、式（Ｉ）の化合物群の比旋光度が（−）である、式（Ｉ）の化合物の第２の群に関する。
【実施例】
【００３７】
ＬＣ／ＭＳ法
高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）測定は、各方法に明記したＬＣポンプ、ダイオードアレイ（ＤＡＤ）検出器又はＵＶ検出器及びカラムを使用して行った。必要に応じて、追加の検出器を含めた（下の方法の表を参照）。
【００３８】
カラムからの流れを、大気圧イオン源を装備した質量分析計（ＭＳ）に導入した。化合物の公称モノアイソトピック分子量（ＭＷ）の特定を可能にするイオンを得るために、調整パラメータ（例えば、走査範囲、データ取込時間など）を設定することは当業者の知識の範囲内である。データ取得は、適切なソフトウェアを用いて行った。
【００３９】
化合物は、その実測保持時間（Ｒｔ）及びイオンで表される。データの表に別に明記されていなければ、報告される分子イオンは、［Ｍ＋Ｈ］＋（プロトン化分子）及び／又は［Ｍ−Ｈ］−（脱プロトン化分子）に相当する。化合物が直接イオン化できなかった場合、付加体の種類を明記する（すなわち、［Ｍ＋ＮＨ４］＋、［Ｍ＋ＨＣＯＯ］−など）。複数の同位体パターンを有する分子（Ｂｒ、Ｃｌ）については、報告される値は最低同位体質量について得られた値とする。得られた結果はすべて、使用する方法に通常付随する実験上の不確実性を伴っていた。
【００４０】
以下で、「ＳＱＤ」はシングル四重極検出器を意味し、「ＭＳＤ」は質量選択検出器を意味し、「ＲＴ」は室温を意味し、「ＢＥＨ」は架橋エチルシロキサン／シリカハイブリッドを意味し、「ＤＡＤ」はダイオードアレイ検出器を意味し、「ＨＳＳ」は高強度シリカを意味する。
【００４１】
【表１】
2020512374.tif 000005
【００４２】
ＳＦＣ／ＭＳ法
ＳＦＣ測定は、二酸化炭素（ＣＯ２）及びモディファイアを供給するバイナリポンプ、オートサンプラー、カラムオーブン、４００ｂａｒまで耐用する高圧フローセルを備えたダイオードアレイ検出器で構成される分析超臨界流体クロマトグラフィー（ＳＦＣ）システムを使用して行った。質量分析計（ＭＳ）が配置されている場合、カラムからの流れを（ＭＳ）に導入した。化合物の公称モノアイソトピック分子量（ＭＷ）の特定を可能にするイオンを得るために、調整パラメータ（例えば、走査範囲、データ取込時間など）を設定することは当業者の知識の範囲内である。データ取得は、適切なソフトウェアを用いて行った。
【００４３】
【表２】
2020512374.tif 000006
【００４４】
融点
値はピーク値又は融解範囲のいずれかであり、この分析方法に通常付随する実験上の不確実性を伴って得られる。
【００４５】
ＤＳＣ８２３ｅ（ＤＳＣと示す）
複数の化合物について、ＤＳＣ８２３ｅ（Ｍｅｔｔｌｅｒ−Ｔｏｌｅｄｏ）で融点を測定した。融点は、１０℃／分の温度勾配で測定した。最高温度は３００℃とした。
【００４６】
旋光度：
旋光度は、ナトリウムランプを備えたＰｅｒｋｉｎ−Ｅｌｍｅｒ  ３４１旋光計で測定し、次のように報告した：［α］°（λ、ｃｇ／１００ｍｌ、溶媒、Ｔ℃）。［α］λＴ＝（１００α）／（ｌ×ｃ）：式中、ｌは経路長（単位：ｄｍ）であり、ｃは温度Ｔ（℃）及び波長λ（単位：ｎｍ）における試料の濃度（単位：ｇ／１００ｍｌ）である。使用した光の波長が５８９ｎｍ（ナトリウムＤ線）である場合、代わりに記号Ｄを使用することができる。旋光度の符号（＋又は−）は常に付与されるべきである。この式を使用する場合、濃度及び溶媒を旋光度の後の括弧内に常に記載する。旋光度は度を使用して報告し、濃度の単位は記載されない（ｇ／１００ｍＬであると想定する）。
【００４７】
【表３】
2020512374.tif 000007
【００４８】
実施例１：２−（４−フルオロ−２−（２−ヒドロキシエトキシ）フェニル）−２−（（３−メトキシ−５−（メチルスルホニル）フェニル）アミノ）−１−（６−（トリフルオロメチル）インドリン−１−イル）エタン−１−オン（化合物１）の合成、及びエナンチオマー１Ａ及び１Ｂへのキラル分離。
【化４】
2020512374.tif 000008
【００４９】
中間体１ａの合成：
４−フルオロ−２−メトキシフェニル酢酸［ＣＡＳ  ８８６４９８−６１−９］（１０ｇ、５４．３０ｍｍｏｌ）のＥｔＯＨ（２００ｍＬ）及びＨ２ＳＯ４（２ｍＬ）溶液を１２時間加熱還流した。水を添加し、混合物を減圧下で元の体積の半分まで濃縮した。氷を添加した。溶液をＫ２ＣＯ３で塩基性化し、ＥｔＯＡｃで抽出した。有機層をブラインで洗浄し、ＭｇＳＯ４で脱水し、濾過し、溶媒を減圧下で濃縮して、エチル２−（４−フルオロ−２−メトキシフェニル）アセテート１ａ（１１．６ｇ）を得た。この化合物をそれ以上精製せずに次の工程に使用した。
【００５０】
中間体１ｂの合成：
三臭化ホウ素（１０９．３ｍＬ、１０９．３ｍｍｏｌ）を、−３０℃まで冷やされたエチル２−（４−フルオロ−２−メトキシフェニル）アセテート１ａ（１１．６ｇ、５４．７ｍｍｏｌ）のＣＨ２Ｃｌ２（３００ｍＬ）溶液に滴加した。反応物を−２０℃で１時間撹拌し、次いでＣＨ３ＯＨで反応を停止した。飽和ＮａＨＣＯ３水溶液を加えることにより、ｐＨを８に調整した。溶液をＣＨ２Ｃｌ２で抽出し、まとめた有機層をＭｇＳＯ４で脱水し、濾過し、溶媒を減圧下で濃縮して、エチル２−（４−フルオロ−２−ヒドロキシフェニル）アセテート１ｂ（１０．８ｇ）を得た。この化合物をそれ以上精製せずに次の工程に使用した。
【００５１】
中間体１ｃの合成：
エチル２−（４−フルオロ−２−ヒドロキシフェニル）アセテート１ｂ（１．２４ｇ、６．２６ｍｍｏｌ）と炭酸セシウム（４．０８ｇ、１２．５ｍｍｏｌ）とのＤＭＦ（２０ｍＬ）中混合物に、ベンジル２−ブロモエチルエーテル［ＣＡＳ  １４６２−３７−９］（１．６１ｇ、７．５１ｍｍｏｌ）を添加した。反応混合物を室温で一晩撹拌した。水を添加し、反応混合物をＥｔＯＡｃで抽出した。有機相をＮａ２ＳＯ４で脱水し、濾過し、減圧下で濃縮した。残渣をシリカゲルのフラッシュクロマトグラフィーで、ヘプタン中のＣＨ２Ｃｌ２（１５％〜１００％）の勾配を用いて精製して、エチル２−（２−（２−（ベンジルオキシ）エトキシ）−４−フルオロフェニル）アセテート１ｃ（１．５５ｇ）を得た。
【００５２】
中間体１ｄの合成：
冷却（−７８℃）した１Ｍリチウムビス（トリメチルシリル）アミドのＴＨＦ（４．５１ｍＬ、４．５１ｍｍｏｌ）溶液に、エチル２−（２−（２−（ベンジルオキシ）エトキシ）−４−フルオロフェニル）アセテート１ｃ（０．７５０ｇ、２．２６ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（４ｍＬ）溶液を添加した。−７８℃で１時間後、クロロトリメチルシラン（０．４５８ｍＬ、３．６１ｍｍｏｌ）を添加した。反応混合物を−７８℃で１５分撹拌した。Ｎ−ブロモスクシンイミド（０．４８２ｇ、２．７１ｍｍｏｌ）を添加し、−４０℃で２時間撹拌を続けた。反応混合物をＨ２Ｏに注ぎ入れ、ＥｔＯＡｃで２回抽出した。有機相をまとめ、Ｎａ２ＳＯ４で脱水し、濾過し、減圧下で濃縮して、エチル２−（２−（２−（ベンジルオキシ）エトキシ）−４−フルオロフェニル）−２−ブロモアセテート１ｄ（０．９２０ｇ）を得、これをそれ以上精製せずに次の工程に使用した。
【００５３】
中間体１ｅの合成：
ＣＨ３ＣＮ（５ｍＬ）及びＴＨＦ（５ｍＬ）中のエチル２−（２−（２−（ベンジルオキシ）エトキシ）−４−フルオロフェニル）−２−ブロモアセテート１ｄ（０．９２０ｇ、２．２４ｍｍｏｌ）と、３−メトキシ−５−（メチルスルホニル）アニリン［ＣＡＳ  ６２６０６−０２−４］（１．３５ｇ、６．７１ｍｍｏｌ）との混合物を、６０℃で一晩撹拌した。反応混合物をＥｔＯＡｃで希釈し、１Ｎ  ＨＣｌで洗浄した。有機相を１Ｎ  ＨＣｌ、飽和ＮａＨＣＯ３水溶液、水及びブラインで洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で脱水し、濾過し、減圧下で濃縮した。残渣をシリカゲルのフラッシュクロマトグラフィーで、ヘプタン中のＥｔＯＡｃ（５％〜５０％）の勾配を用いて精製して、エチル２−（２−（２−（ベンジルオキシ）エトキシ）−４−フルオロフェニル）−２−（（３−メトキシ−５−（メチルスルホニル）フェニル）アミノ）アセテート１ｅ（０．８７０ｇ）を得た。
【００５４】
中間体１ｆの合成：
エチル２−（２−（２−（ベンジルオキシ）エトキシ）−４−フルオロフェニル）−２−（（３−メトキシ−５−（メチルスルホニル）フェニル）アミノ）アセテート１ｅ（０．８６８ｇ、１．６３ｍｍｏｌ）と１０％パラジウム炭素（０．１８０ｇ）とのＥｔＯＡｃ（３０ｍＬ）中混合物を、Ｈ２雰囲気下にて室温で一晩撹拌した。反応混合物をｃｅｌｉｔｅ（登録商標）で濾過した。濾液を減圧下で濃縮した。残渣をシリカゲルのフラッシュクロマトグラフィーで、ヘプタン中のＥｔＯＡｃ（３０％〜１００％）の勾配を用いて精製して、定量的に、エチル２−（４−フルオロ−２−（２−ヒドロキシエトキシ）フェニル）−２−（（３−メトキシ−５−（メチルスルホニル）フェニル）アミノ）アセテート１ｆを得た。
【００５５】
中間体１ｇの合成：
エチル２−（４−フルオロ−２−（２−ヒドロキシエトキシ）フェニル）−２−（（３−メトキシ−５−（メチルスルホニル）フェニル）アミノ）アセテート１ｆ（０．９１０ｇ、２．０６ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（６ｍＬ）、ＭｅＯＨ（６ｍＬ）及びＨ２Ｏ（６ｍＬ）溶液に、水酸化リチウム一水和物（０．４３２ｇ、１０．３ｍｍｏｌ）を添加した。反応混合物を室温で２時間撹拌した。反応混合物を減圧下で部分的に濃縮してＴＨＦ及びＭｅＯＨを除去した。残留水溶液を１Ｎ  ＨＣｌで酸性化し、ＣＨ２Ｃｌ２で抽出した。有機相をＮａ２ＳＯ４で脱水し、濾過し、減圧下で濃縮して、２−（４−フルオロ−２−（２−ヒドロキシエトキシ）フェニル）−２−（（３−メトキシ−５−（メチルスルホニル）フェニル）アミノ）酢酸１ｇ（０．７３６ｇ）を得、これをそれ以上精製せずに次の工程に使用した。
【００５６】
化合物１の合成、及びエナンチオマー１Ａ及び１Ｂへのキラル分離：
方法１：２−（４−フルオロ−２−（２−ヒドロキシエトキシ）フェニル）−２−（（３−メトキシ−５−（メチルスルホニル）フェニル）アミノ）酢酸１ｇ（０．２００ｇ、０．４８４ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（４ｍＬ）溶液に、ＨＡＴＵ（０．１８４ｇ、０．４８４ｍｍｏｌ）、トリエチルアミン（０．２６７ｍＬ、１．９４ｍｍｏｌ）、及び６−（トリフルオロメチル）インドリン［ＣＡＳ  １８１５１３−２９−１］（０．０９１ｇ、０．４８４ｍｍｏｌ）を添加した。反応混合物を室温で４時間撹拌した。反応混合物をＥｔＯＡｃで希釈し、１Ｎ  ＨＣｌで洗浄した。有機相を飽和ＮａＨＣＯ３水溶液、水及びブラインで洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で脱水し、濾過し、減圧下で濃縮した。残渣をシリカゲルのフラッシュクロマトグラフィーで、ＣＨ２Ｃｌ２中のＥｔＯＡｃ（２％〜４０％）の勾配を用いて精製した。所望の生成物を含有する画分をまとめ、減圧下で濃縮した。残渣を、分取ＴＬＣで、ＣＨ２Ｃｌ２中のＥｔＯＡｃ（５０％）の混合物を溶離液として使用して精製した。分取ＨＰＬＣ（カラム：Ｘ−Ｂｒｉｄｇｅ（登録商標）Ｃ１８−５μｍ  １００×１９ｍｍ、移動相：ｐＨ１０  ＮＨ４ＯＡｃのＨ２Ｏ、ＣＨ３ＣＮ溶液）によるその後の精製により、２−（４−フルオロ−２−（２−ヒドロキシエトキシ）フェニル）−２−（（３−メトキシ−５−（メチルスルホニル）フェニル）アミノ）−１−（６−（トリフルオロメチル）インドリン−１−イル）エタノン（化合物１、０．０４３ｇ）をラセミ混合物として得た。
【００５７】
方法２：Ｎ２流下の２−（４−フルオロ−２−（２−ヒドロキシエトキシ）フェニル）−２−（（３−メトキシ−５−（メチルスルホニル）フェニル）アミノ）酢酸１ｇ（０．３００ｇ、０．７２６ｍｍｏｌ）のＭｅ−ＴＨＦ（５．４ｍＬ）溶液に、６−（トリフルオロメチル）インドリン［ＣＡＳ  １８１５１３−２９−１］（０．１３６ｇ、０．７２６ｍｍｏｌ）、Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（２６４μＬ、１．５９６ｍｍｏｌ）及びプロピルホスホン酸無水物（６５３μＬ、１．０９ｍｍｏｌ）を添加した。反応物を室温で１６時間撹拌した。混合物を水に注入し、ＥｔＯＡｃで抽出した。まとめた有機層をＫ２ＣＯ３の１０％水溶液で洗浄し、水で洗浄した。有機溶液をＭｇＳＯ４で脱水し、濾過し、溶媒を減圧下で濃縮した。この画分（０．４７ｇ）を第２のバッチと合わせ（総量：０．５８５ｇ）、シリカゲルのフラッシュクロマトグラフィー（１５〜４０μＭ、２４ｇ、ＣＨ２Ｃｌ２／ＭｅＯＨ  ９９．５／０．５）で精製した。純粋な画分をまとめ、減圧下で濃縮して、２−（４−フルオロ−２−（２−ヒドロキシエトキシ）フェニル）−２−（（３−メトキシ−５−（メチルスルホニル）フェニル）アミノ）−１−（６−（トリフルオロメチル）インドリン−１−イル）エタノン（化合物１、０．１６０ｇ）をラセミ混合物として得た。
【００５８】
化合物１（１６０ｍｇ）のエナンチオマーを、分取キラルＳＦＣ（固定相：Ｃｈｉｒａｌｐａｋ（登録商標）ＡＤ−Ｈ  ５μｍ  ２５０×２０ｍｍ、移動相：７５％ＣＯ２、２５％ＥｔＯＨ（＋０．３％ｉＰｒＮＨ２））により分離した。第１の溶出生成物（７２ｍｇ）をヘプタン／ジイソプロピルエーテル中で凝固させて、エナンチオマー１Ａ（５０ｍｇ）を得た。第２の溶出生成物（８０ｍｇ）をヘプタン／ジイソプロピルエーテル中で凝固させて、エナンチオマー１Ｂ（４３ｍｇ）を得た。
【００５９】
化合物１：
１Ｈ  ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δｐｐｍ３．１０（ｓ，３Ｈ）３．２２（ｍ，２Ｈ）３．６２−３．９２（ｍ，５Ｈ）３．９７−４．２２（ｍ，３Ｈ）４．４６（ｍ，１Ｈ）４．９８（ｂｒ．ｓ．，１Ｈ）５．８２（ｄ，Ｊ＝７．９Ｈｚ，１Ｈ）６．５６（ｓ，１Ｈ）６．６２（ｓ，１Ｈ）６．８０（ｔ，Ｊ＝７．７Ｈｚ，１Ｈ）６．９２（ｓ，１Ｈ）６．９５−７．１１（ｍ，２Ｈ）７．２９−７．５３（ｍ，３Ｈ）８．３９（ｓ，１Ｈ）
ＬＣ−ＭＳ（方法ＬＣ−Ｃ）：Ｒｔ１．３７ｍｉｎ，ＭＨ＋５８３
【００６０】
エナンチオマー１Ａ：
１Ｈ  ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δｐｐｍ３．１０（ｓ，３Ｈ）３．１４−３．２９（ｍ，２Ｈ）３．７３（ｓ，３Ｈ）３．７５−３．７８（ｍ，１Ｈ）３．７８−３．８９（ｍ，１Ｈ）３．９８−４．２３（ｍ，３Ｈ）４．３７−４．５５（ｍ，１Ｈ）４．９７（ｔ，Ｊ＝５．４Ｈｚ，１Ｈ）５．８２（ｄ，Ｊ＝８．２Ｈｚ，１Ｈ）６．５６（ｓ，１Ｈ）６．６２（ｓ，１Ｈ）６．７９（ｄｔ，Ｊ＝２．２，８．５Ｈｚ，１Ｈ）６．９１（ｓ，１Ｈ）６．９８−７．０４（ｍ，２Ｈ）７．３２−７．４３（ｍ，２Ｈ）７．４６（ｄ，Ｊ＝７．９Ｈｚ，１Ｈ）８．３９（ｓ，１Ｈ）．
ＬＣ／ＭＳ（方法ＬＣ−Ａ）：Ｒｔ３．０４ｍｉｎ，ＭＨ＋５８３
［α］Ｄ２０：−４９．６°（ｃ０．２５，ＤＭＦ）
キラルＳＦＣ（方法ＳＦＣ−Ａ）：Ｒｔ２．７６ｍｉｎ，ＭＨ＋５８３，キラル純度１００％．
【００６１】
エナンチオマー１Ｂ：
１Ｈ  ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δｐｐｍ３．１０（ｓ，３Ｈ）３．１４−３．２９（ｍ，２Ｈ）３．７３（ｓ，３Ｈ）３．７５−３．７８（ｍ，１Ｈ）３．７８−３．８９（ｍ，１Ｈ）３．９８−４．２３（ｍ，３Ｈ）４．３７−４．５５（ｍ，１Ｈ）４．９７（ｔ，Ｊ＝５．４Ｈｚ，１Ｈ）５．８２（ｄ，Ｊ＝８．２Ｈｚ，１Ｈ）６．５６（ｓ，１Ｈ）６．６２（ｓ，１Ｈ）６．７９（ｄｔ，Ｊ＝２．２，８．５Ｈｚ，１Ｈ）６．９１（ｓ，１Ｈ）６．９８−７．０４（ｍ，２Ｈ）７．３２−７．４３（ｍ，２Ｈ）７．４６（ｄ，Ｊ＝７．９Ｈｚ，１Ｈ）８．３９（ｓ，１Ｈ）．
ＬＣ／ＭＳ（方法ＬＣ−Ａ）：Ｒｔ３．０４ｍｉｎ，ＭＨ＋５８３
［α］Ｄ２０：＋５１．７°（ｃ０．２３，ＤＭＦ）
キラルＳＦＣ（方法ＳＦＣ−Ａ）：Ｒｔ４．１６ｍｉｎ，ＭＨ＋５８３，キラル純度１００％．
【００６２】
実施例２：２−（４−フルオロ−２−（２−ヒドロキシエトキシ）フェニル）−２−（（３−メトキシ−５−（メチルスルホニル）フェニル）アミノ）−１−（５−メトキシ−６−（トリフルオロメチル）インドリン−１−イル）エタノン（化合物２）の合成、及びエナンチオマー２Ａ及び２Ｂへのキラル分離。
【化５】
2020512374.tif 000009
【００６３】
中間体２ａの合成：
エチル２−（４−フルオロ−２−ヒドロキシフェニル）アセテート１ｂ（１０．６ｇ、５３．５ｍｍｏｌ）と炭酸セシウム（３４．８ｇ、１０６．９ｍｍｏｌ）との１０℃のＤＭＦ（２００ｍＬ）中混合物に、（２−ブロモエトキシ）（ｔｅｒｔ−ブチル）ジメチルシラン［ＣＡＳ  ８６８６４−６０−０］（１３．８ｍＬ、６４．２ｍｍｏｌ）を添加した。反応混合物を室温で一晩撹拌した。Ｈ２Ｏを添加し、反応混合物をＥｔＯＡｃで抽出した。有機相をＭｇＳＯ４で脱水し、濾過し、減圧下で濃縮した。残渣を、シリカゲルのフラッシュクロマトグラフィー（１５〜４０μＭ、４０ｇ、ヘプタン／ＥｔＯＡｃ  ８０／２０）で精製した。純粋な画分をまとめ、溶媒を減圧下で除去して、エチル２−（２−（２−（（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル）オキシ）エトキシ）−４−フルオロフェニル）アセテート２ａ（１７．７ｇ）を得た。
【００６４】
中間体２ｂの合成：
−７８℃に冷却したＴＨＦ（２８．０５ｍＬ、２８．０５ｍｍｏｌ）中の１Ｍリチウムビス（トリメチルシリル）アミド溶液に、エチル２−（２−（２−（（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル）オキシ）エトキシ）−４−フルオロフェニル）アセテート２ａ（５ｇ、１４．０３ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（３０ｍＬ）溶液を添加した。−７８℃で１時間撹拌した後、クロロトリメチルシラン（２．８５ｍＬ、２２．４４ｍｍｏｌ）を添加した。反応混合物を−７８℃で１５分撹拌した。ＴＨＦ（３０ｍＬ）中のＮ−ブロモスクシンイミド（３ｇ、１６．８３ｍｍｏｌ）を添加し、−５５℃で２時間撹拌を続けた。反応混合物をＨ２Ｏに注ぎ入れ、ＥｔＯＡｃで２回抽出した。有機相をまとめ、ＭｇＳＯ４で脱水し、濾過し、減圧下で濃縮して、エチル２−ブロモ−２−（２−（２−（（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル）オキシ）エトキシ）−４−フルオロフェニル）アセテート２ｂ（６．５７ｇ）を得、これをそれ以上精製せずに次の工程に使用した。
【００６５】
中間体２ｃの合成：
ＣＨ３ＣＮ（６０ｍＬ）中のエチル２−ブロモ−２−（２−（２−（（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル）オキシ）エトキシ）−４−フルオロフェニル）アセテート２ｂ（３ｇ、６．８９ｍｍｏｌ）と、３−メトキシ−５−（メチルスルホニル）アニリン［ＣＡＳ  ６２６０６−０２−４］（２．０８ｇ、１０．３ｍｍｏｌ）と、ジイソプロピルエチルアミン（２．３７ｍＬ、１３．８ｍｍｏｌ）との混合物を、５０℃で一晩撹拌した。反応混合物を減圧下で濃縮した。残渣をＥｔＯＡｃで溶かし、０．５Ｎ  ＨＣｌ及び水で洗浄した。有機相をＭｇＳＯ４で脱水し、濾過し、減圧下で濃縮した。残渣をシリカゲルのフラッシュクロマトグラフィー（１５〜４０μＭ、１２０ｇ、ヘプタン／ＥｔＯＡｃ  ９０／１０〜８０／２０）で精製して、エチル２−（２−（２−（（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル）オキシ）エトキシ）−４−フルオロフェニル）−２−（（３−メトキシ−５−（メチルスルホニル）フェニル）アミノ）アセテート２ｃ（２．６ｇ）を得た。
【００６６】
中間体２ｄの合成：
水酸化リチウム一水和物（２０５ｍｇ、４．８ｍｍｏｌ）を、エチル２−（２−（２−（（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル）オキシ）エトキシ）−４−フルオロフェニル）−２−（（３−メトキシ−５−（メチルスルホニル）フェニル）アミノ）アセテート２ｃ（２．２２７ｇ、４．０９ｍｍｏｌ）のＴＨＦ／ＣＨ３ＯＨ／Ｈ２Ｏ（１／１／１）（１００ｍＬ）溶液に、１０℃で少量ずつ添加した。反応生成物を室温で４時間撹拌し、水で希釈した。０℃に冷却した後、溶液を０．５Ｎ  ＨＣｌでｐＨ６までゆっくりと酸性化し、ＥｔＯＡｃで抽出した。有機層をＭｇＳＯ４で脱水し、濾過し、溶媒を減圧下で濃縮して、２−（２−（２−（（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル）オキシ）エトキシ）−４−フルオロフェニル）−２−（（３−メトキシ−５−（メチルスルホニル）フェニル）アミノ）酢酸２ｄ（２ｇ）を得た。この化合物を、それ以上精製せずに次の工程に使用した。
【００６７】
中間体２ｅの合成：
１−メトキシ−４−ニトロ−２−（トリフルオロメチル）ベンゼン［ＣＡＳ  ６５４−７６−２］（２４．５ｇ、１１０．８ｍｍｏｌ）と、４−クロロフェノキシアセトニトリル［ＣＡＳ  ３５９８−１３−８］（２０．４ｇ、１２１．９ｍｍｏｌ）とのＤＭＦ（１００ｍＬ）中混合物を、ｔＢｕＯＫ（２７．３５ｇ、２４３．７ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（１００ｍＬ）中の撹拌溶液に、−１０℃で３０分かけて滴加した。添加後、紫色の溶液を−１０℃で１時間維持した。５００ｍＬの氷水及び５００ｍＬの６Ｎ  ＨＣｌを添加し、沈殿物を濾別し、水で洗浄し、減圧下で乾燥して、４０．４ｇの２−（５−メトキシ−２−ニトロ−４−（トリフルオロメチル）フェニル）アセトニトリル２ｅ（そのまま次の工程に使用した）を得た。
【００６８】
中間体２ｆの合成：
２−（５−メトキシ−２−ニトロ−４−（トリフルオロメチル）フェニル）アセトニトリル２ｅ（２６ｇ、９９．９ｍｍｏｌ）の、エタノール／水（９／１）（５００ｍＬ）とＡｃＯＨ（５．２ｍＬ）との溶液を、３．５Ｂａｒの圧力で１時間、触媒として１０％Ｐｄ／Ｃ（１５．３ｇ）を用いて水素化した。反応混合物をｃｅｌｉｔｅ（登録商標）のパッドで濾過し、濾過ケーキをＣＨ２Ｃｌ２とＣＨ３ＯＨとの溶媒混合物で洗浄した。濾液を減圧下で濃縮した。残渣をシリカ６０〜２００μｍを充填したガラスフィルターで、ヘプタン／ＥｔＯＡｃ  ８０／２０を溶出液として使用して濾過した。目的化合物を含有する画分をまとめ、溶媒を減圧下で濃縮して、５−メトキシ−６−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−インドール２ｆ（１５．６ｇ）を得た。
【００６９】
中間体２ｇの合成：
０℃にて、ＢＨ３−ピリジン（２３．５ｍＬ、２３２．４ｍｍｏｌ）を、５−メトキシ−６−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−インドール２ｆ（１０ｇ、４６．５ｍｍｏｌ）のＥｔＯＨ（６０ｍＬ）溶液に滴加した。温度を１０℃未満に維持しながら、６Ｎ  ＨＣｌ（１４０ｍＬ）をゆっくりと添加した。この混合物を０℃で２時間撹拌した。水（２００ｍＬ）を添加し、ＮａＯＨの濃厚水溶液で、ｐＨ８〜９まで混合物を塩基性化した（反応温度を２０℃未満に保持した）。沈殿物を濾別し、水で洗浄し（２回）、減圧下でトルエンと共蒸発させて、５−メトキシ−６−（トリフルオロメチル）インドリン２ｇ（９ｇ）を得た。
【００７０】
中間体２ｈの合成：
２−（２−（２−（（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル）オキシ）エトキシ）−４−フルオロフェニル）−２−（（３−メトキシ−５−（メチルスルホニル）フェニル）アミノ）酢酸２ｄ（１ｇ、１．９０ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（１０ｍＬ）溶液に、ＨＡＴＵ（１．０８ｇ、２．８４ｍｍｏｌ）、ジイソプロピルエチルアミン（９４０μＬ、５．６９ｍｍｏｌ）、及び５−メトキシ−６−（トリフルオロメチル）インドリン２ｇ（４１２ｍｇ、１．９０ｍｍｏｌ）を添加した。反応混合物を室温で４時間撹拌した。反応混合物を水で希釈した。沈殿物を濾別し、水で洗浄し、ＥｔＯＡｃで溶かした。有機層を１Ｎ  ＨＣｌ、水で洗浄し、ＭｇＳＯ４で脱水し、濾過し、溶媒を減圧下で濃縮して、２−（２−（２−（（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル）オキシ）エトキシ）−４−フルオロフェニル）−２−（（３−メトキシ−５−（メチルスルホニル）フェニル）アミノ）−１−（５−メトキシ−６−（トリフルオロメチル）インドリン−１−イル）エタノン２ｈ（１．３６ｇ、ＬＣによる純度：７０％）を得た。この粗化合物を直接次の反応工程に使用した。
【００７１】
化合物２の合成、及びエナンチオマー２Ａ及び２Ｂへのキラル分離：
ジオキサン（３０ｍＬ）中の４Ｍ  ＨＣｌ中の２−（２−（２−（（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル）オキシ）エトキシ）−４−フルオロフェニル）−２−（（３−メトキシ−５−（メチルスルホニル）フェニル）アミノ）−１−（５−メトキシ−６−（トリフルオロメチル）インドリン−１−イル）エタノン２ｈ（１．２９ｇ、１．７７ｍｍｏｌ）及びジオキサン（１００ｍＬ）を室温で１時間撹拌した。溶媒を減圧下で除去した。ＥｔＯＡｃとＫ２ＣＯ３の１０％水溶液とを添加した。有機相を分離し、ＭｇＳＯ４で脱水し、濾過し、溶媒を減圧下で濃縮した。残渣をシリカゲルのフラッシュクロマトグラフィー（１５〜４０μｍ、８０ｇ、ＣＨ２Ｃｌ２／ＭｅＯＨ／ＮＨ４ＯＨ  ９９／１／０．１）で精製し、ＣＨ３ＣＮから結晶化した後、２−（４−フルオロ−２−（２−ヒドロキシエトキシ）フェニル）−２−（（３−メトキシ−５−（メチルスルホニル）フェニル）アミノ）−１−（５−メトキシ−６−（トリフルオロメチル）インドリン−１−イル）エタノン（化合物２、５９５ｍｇ）をラセミ体として得た。
【００７２】
化合物２（５６０ｍｇ）のエナンチオマーを、分取キラルＳＦＣ（固定相：Ｗｈｅｌｋ  Ｏ１（Ｓ，Ｓ）（登録商標）５μｍ  ２５０×２１．１ｍｍ、移動相：５０％ＣＯ２、５０％ＥｔＯＨ（＋０．３％ｉＰｒＮＨ２））により分離した。第１の溶出エナンチオマー（２８８ｍｇ）を、ＣＨ３ＣＮ／ジイソプロピルエーテルから結晶化させて、エナンチオマー２Ａ（２４０ｍｇ）を得た。第２の溶出エナンチオマー（２９３ｍｇ）を、ＣＨ３ＣＮ／ジイソプロピルエーテルから結晶化させて、エナンチオマー２Ｂ（２３２ｍｇ）を得た。
【００７３】
化合物２：
１Ｈ  ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δｐｐｍ３．０９（ｓ，３Ｈ）３．１２−３．２９（ｍ，２Ｈ）３．７３（ｓ，３Ｈ）３．７４−３．８０（ｍ，１Ｈ）３．８０−３．９０（ｍ，４Ｈ）４．０２（ｔｄ，Ｊ＝１０．４，７．２Ｈｚ，１Ｈ）４．０５−４．１７（ｍ，２Ｈ）４．４２（ｔｄ，Ｊ＝１０．４，６．２Ｈｚ，１Ｈ）４．９７（ｔ，Ｊ＝５．７Ｈｚ，１Ｈ）５．７９（ｄ，Ｊ＝８．２０Ｈｚ，１Ｈ）６．５６（ｓ，１Ｈ）６．６１（ｓ，１Ｈ）６．７８（ｔｄ，Ｊ＝８．５１，２．５２Ｈｚ，１Ｈ）６．９０（ｓ，１Ｈ）６．９５−７．０４（ｍ，２Ｈ）７．２４（ｓ，１Ｈ）７．３７（ｄｄ，Ｊ＝８．６７，６．７８Ｈｚ，１Ｈ）８．３５（ｓ，１Ｈ）
ＬＣ−ＭＳ（方法ＬＣ−Ａ）：Ｒｔ３．０２ｍｉｎ，ＭＨ＋６１３
融点：２１５℃
【００７４】
エナンチオマー２Ａ：
１Ｈ  ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δｐｐｍ３．０９（ｓ，３Ｈ）３．１２−３．２９（ｍ，２Ｈ）３．７３（ｓ，３Ｈ）３．７４−３．８０（ｍ，１Ｈ）３．８０−３．９０（ｍ，４Ｈ）４．０２（ｔｄ，Ｊ＝１０．４，７．２Ｈｚ，１Ｈ）４．０５−４．１７（ｍ，２Ｈ）４．４２（ｔｄ，Ｊ＝１０．４，６．２Ｈｚ，１Ｈ）４．９７（ｔ，Ｊ＝５．７Ｈｚ，１Ｈ）５．７９（ｄ，Ｊ＝８．２０Ｈｚ，１Ｈ）６．５６（ｓ，１Ｈ）６．６１（ｓ，１Ｈ）６．７８（ｔｄ，Ｊ＝８．５１，２．５２Ｈｚ，１Ｈ）６．９０（ｓ，１Ｈ）６．９５−７．０４（ｍ，２Ｈ）７．２４（ｓ，１Ｈ）７．３７（ｄｄ，Ｊ＝８．６７，６．７８Ｈｚ，１Ｈ）８．３５（ｓ，１Ｈ）
ＬＣ／ＭＳ（方法ＬＣ−Ａ）：Ｒｔ３．００ｍｉｎ，ＭＨ＋６１３
［α］Ｄ２０：＋５３．５°（ｃ０．２３９２，ＤＭＦ）
キラルＳＦＣ（方法ＳＦＣ−Ｂ）：Ｒｔ１．４３ｍｉｎ，ＭＨ＋６１３，キラル純度１００％．
融点：２０４℃
【００７５】
エナンチオマー２Ｂ：
１Ｈ  ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δｐｐｍ３．０９（ｓ，３Ｈ）３．１２−３．２９（ｍ，２Ｈ）３．７３（ｓ，３Ｈ）３．７４−３．８０（ｍ，１Ｈ）３．８０−３．９０（ｍ，４Ｈ）４．０２（ｔｄ，Ｊ＝１０．４，７．２Ｈｚ，１Ｈ）４．０５−４．１７（ｍ，２Ｈ）４．４２（ｔｄ，Ｊ＝１０．４，６．２Ｈｚ，１Ｈ）４．９７（ｔ，Ｊ＝５．７Ｈｚ，１Ｈ）５．７９（ｄ，Ｊ＝８．２０Ｈｚ，１Ｈ）６．５６（ｓ，１Ｈ）６．６１（ｔ，Ｊ＝１．７３Ｈｚ，１Ｈ）６．７８（ｔｄ，Ｊ＝８．５１，２．５２Ｈｚ，１Ｈ）６．９０（ｓ，１Ｈ）６．９５−７．０４（ｍ，２Ｈ）７．２４（ｓ，１Ｈ）７．３７（ｄｄ，Ｊ＝８．６７，６．７８Ｈｚ，１Ｈ）８．３５（ｓ，１Ｈ）
ＬＣ／ＭＳ（方法ＬＣ−Ａ）：Ｒｔ３．００ｍｉｎ，ＭＨ＋６１３
［α］Ｄ２０：−５６．５°（ｃ０．２５５，ＤＭＦ）
キラルＳＦＣ（方法ＳＦＣ−Ｂ）：Ｒｔ１．７２ｍｉｎ，ＭＨ＋６１３，キラル純度９９．８％．
融点：２０６℃
【００７６】
実施例３：２−（４−フルオロ−２−（２−ヒドロキシエトキシ）フェニル）−２−（（３−メトキシ−５−（メチルスルホニル）フェニル）アミノ）−１−（６−（トリフルオロメトキシ）インドリン−１−イル）エタノン（化合物３）の合成、及びエナンチオマー３Ａ及び３Ｂへのキラル分離。
【化６】
2020512374.tif 000010
【００７７】
中間体３ａの合成：
２−（２−（２−（（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル）オキシ）エトキシ）−４−フルオロフェニル）−２−（（３−メトキシ−５−（メチルスルホニル）フェニル）アミノ）酢酸２ｄ（１ｇ、１．９０ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（１０ｍＬ）溶液に、ＨＡＴＵ（１．０８ｇ、２．８４ｍｍｏｌ）、ジイソプロピルエチルアミン（９４０μＬ、５．６９ｍｍｏｌ）、及び６−（トリフルオロメトキシ）インドリン［ＣＡＳ  ９５９２３５−９５−１］（３８５ｍｇ、１．９０ｍｍｏｌ）を添加した。反応混合物を室温で４時間撹拌した。反応混合物を水で希釈した。沈殿物を濾別し、水で洗浄し、ＥｔＯＡｃで溶かした。有機層をＫ２ＣＯ３の１０％水溶液、ＮａＣｌの飽和水溶液、水で洗浄し、ＭｇＳＯ４で脱水し、濾過し、溶媒を減圧下で濃縮して、２−（２−（２−（（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル）オキシ）エトキシ）−４−フルオロフェニル）−２−（（３−メトキシ−５−（メチルスルホニル）フェニル）アミノ）−１−（６−（トリフルオロメトキシ）インドリン−１−イル）エタノン３ａ（１．３２ｇ）を得た。この粗化合物を、精製せずに次の反応工程に使用した。
【００７８】
化合物３の合成、及びエナンチオマー３Ａ及び３Ｂへのキラル分離：
ジオキサン（３．３ｍＬ）中の４Ｍ  ＨＣｌ中の２−（２−（２−（（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル）オキシ）エトキシ）−４−フルオロフェニル）−２−（（３−メトキシ−５−（メチルスルホニル）フェニル）アミノ）−１−（６−（トリフルオロメトキシ）インドリン−１−イル）エタノン３ａ（１．１７ｇ、１．６４ｍｍｏｌ）及びジオキサン（５０ｍＬ）を室温で１時間撹拌した。溶媒を減圧下で蒸発させることにより除去した。ＥｔＯＡｃとＫ２ＣＯ３の１０％水溶液とを添加した。有機相を分離し、ＭｇＳＯ４で脱水し、濾過し、溶媒を減圧下で濃縮した。残渣をシリカゲルのフラッシュクロマトグラフィー（１５〜４０μｍ、４０ｇ、ＣＨ２Ｃｌ２／ＭｅＯＨ  ９９．５／０．５）で精製し、２−（４−フルオロ−２−（２−ヒドロキシエトキシ）フェニル）−２−（（３−メトキシ−５−（メチルスルホニル）フェニル）アミノ）−１−（６−（トリフルオロメトキシ）インドリン−１−イル）エタノン（化合物３、５０８ｍｇ）をラセミ体として得た。化合物３の分析試料をＣＨ３ＣＮ／ジイソプロピルエーテル（３５ｍｇ）から凝固させた。残りの量を使用して、化合物３のエナンチオマーを、分取キラルＳＦＣ（固定相：Ｃｈｉｒａｌｐａｋ（登録商標）ＡＤ−Ｈ  ５μｍ  ２５０×２０ｍｍ、移動相：７０％ＣＯ２、３０％ＥｔＯＨ（＋０．３％ｉＰｒＮＨ２））により分離した。第１の溶出エナンチオマー（１６６ｍｇ）を、ヘプタン／ジイソプロピルエーテルから凝固させて、エナンチオマー３Ａ（１３０ｍｇ）を得た。第２の溶出エナンチオマー（１６５ｍｇ）をヘプタン／ジイソプロピルエーテル中で凝固させて、エナンチオマー３Ｂ（１１０ｍｇ）を得た。
【００７９】
化合物３：
１Ｈ  ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δｐｐｍ３．１０（ｓ，３Ｈ）３．１１−３．２５（ｍ，２Ｈ）３．７３（ｓ，３Ｈ）３．７４−３．７９（ｍ，１Ｈ）３．７９−３．８８（ｍ，１Ｈ）３．９６−４．１９（ｍ，３Ｈ）４．４５（ｄｔ，Ｊ＝６．３，１０．４Ｈｚ，１Ｈ）４．９５（ｔ，Ｊ＝５．５２Ｈｚ，１Ｈ）５．８１（ｄ，Ｊ＝８．５１Ｈｚ，１Ｈ）６．５７（ｓ，１Ｈ）６．６２（ｔ，Ｊ＝１．８９Ｈｚ，１Ｈ）６．８０（ｔｄ，Ｊ＝８．４３，２．３６Ｈｚ，１Ｈ）６．９１（ｓ，１Ｈ）６．９６−７．０５（ｍ，３Ｈ）７．２８−７．４６（ｍ，２Ｈ）８．０５（ｓ，１Ｈ）
ＬＣ−ＭＳ（方法ＬＣ−Ａ）：Ｒｔ３．１５ｍｉｎ，ＭＨ＋５９９
【００８０】
エナンチオマー３Ａ：
１Ｈ  ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δｐｐｍ３．１０（ｓ，３Ｈ）３．１１−３．２５（ｍ，２Ｈ）３．７３（ｓ，３Ｈ）３．７４−３．７９（ｍ，１Ｈ）３．７９−３．８８（ｍ，１Ｈ）３．９６−４．１９（ｍ，３Ｈ）４．４５（ｄｔ，Ｊ＝６．３，１０．４Ｈｚ，１Ｈ）４．９７（ｔ，Ｊ＝５．５２Ｈｚ，１Ｈ）５．８１（ｄ，Ｊ＝８．５１Ｈｚ，１Ｈ）６．５７（ｓ，１Ｈ）６．６２（ｔ，Ｊ＝１．８９Ｈｚ，１Ｈ）６．８０（ｔｄ，Ｊ＝８．４３，２．３６Ｈｚ，１Ｈ）６．９１（ｓ，１Ｈ）６．９６−７．１１（ｍ，３Ｈ）７．２８−７．４６（ｍ，２Ｈ）８．０５（ｓ，１Ｈ）
ＬＣ／ＭＳ（方法ＬＣ−Ａ）：Ｒｔ３．１３ｍｉｎ，ＭＨ＋５９９
［α］Ｄ２０：−５９．０°（ｃ０．２５４２，ＤＭＦ）
キラルＳＦＣ（方法ＳＦＣ−Ｃ）：Ｒｔ１．８７ｍｉｎ，ＭＨ＋５９９，キラル純度１００％．
【００８１】
エナンチオマー３Ｂ：
１Ｈ  ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δｐｐｍ３．１０（ｓ，３Ｈ）３．１１−３．２５（ｍ，２Ｈ）３．７３（ｓ，３Ｈ）３．７４−３．７９（ｍ，１Ｈ）３．７９−３．８８（ｍ，１Ｈ）３．９６−４．１９（ｍ，３Ｈ）４．４５（ｄｔ，Ｊ＝６．３，１０．４Ｈｚ，１Ｈ）４．９７（ｔ，Ｊ＝５．５２Ｈｚ，１Ｈ）５．８１（ｄ，Ｊ＝８．５１Ｈｚ，１Ｈ）６．５７（ｓ，１Ｈ）６．６２（ｔ，Ｊ＝１．８９Ｈｚ，１Ｈ）６．８０（ｔｄ，Ｊ＝８．４３，２．３６Ｈｚ，１Ｈ）６．９１（ｓ，１Ｈ）６．９６−７．１１（ｍ，３Ｈ）７．２８−７．４６（ｍ，２Ｈ）８．０５（ｓ，１Ｈ）
ＬＣ／ＭＳ（方法ＬＣ−Ａ）：Ｒｔ３．１３ｍｉｎ，ＭＨ＋５９９
［α］Ｄ２０：＋５６．８°（ｃ０．２４６７，ＤＭＦ）
キラルＳＦＣ（方法ＳＦＣ−Ｃ）：Ｒｔ２．３４ｍｉｎ，ＭＨ＋５９９，キラル純度１００％．
【００８２】
実施例４（方法１）：２−（４−クロロ−２−（２−ヒドロキシエトキシ）フェニル）−２−（（３−メトキシ−５−（メチルスルホニル）フェニル）アミノ）−１−（６−（トリフルオロメチル）インドリン−１−イル）エタノン（化合物４）の合成。
【化７】
2020512374.tif 000011
【００８３】
中間体４ａの合成：
エチル２−（４−クロロ−２−ヒドロキシフェニル）アセテート［ＣＡＳ  １２６１８２６−３０−５］（２．８２ｇ、３．２８ｍｍｏｌ）と炭酸セシウム（８．５６ｇ、２６．３ｍｍｏｌ）とのＤＭＦ（５０ｍＬ）中混合物に、ベンジル２−ブロモエトキシエーテル［ＣＡＳ  １４６２−３７−９］（２．２９ｇ、１４．５ｍｍｏｌ）を添加した。反応混合物を室温で２４時間撹拌した。Ｈ２Ｏを添加し、反応混合物をＥｔＯＡｃで抽出した。有機相をＮａ２ＳＯ４で脱水し、濾過し、減圧下で濃縮した。残渣をシリカゲルのフラッシュクロマトグラフィーで、ヘプタン中のＥｔＯＡｃ（２％〜２０％）の勾配を用いて精製して、エチル２−（２−（２−（ベンジルオキシ）エトキシ）−４−クロロフェニル）アセテート４ａ（４．１７ｇ）を得た。
【００８４】
中間体４ｂの合成：
冷却（−７８℃）した１Ｍリチウムビス（トリメチルシリル）アミドのＴＨＦ（１１．０ｍＬ、１１．０ｍｍｏｌ）溶液に、エチル２−（２−（２−（ベンジルオキシ）エトキシ）−４−クロロフェニル）アセテート４ａ（１．８２ｇ、５．２２ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（９ｍＬ）溶液を添加した。−７８℃で１時間撹拌した後、クロロトリメチルシラン（１．１ｍＬ、８．６７ｍｍｏｌ）を添加した。反応混合物を−７８℃で１５分撹拌した。Ｎ−ブロモスクシンイミド（１．１１ｇ、８．６７ｍｍｏｌ）を添加し、−７８℃で２時間撹拌を続けた。反応混合物をＨ２Ｏに注入し、ＥｔＯＡｃで抽出した。有機相をＭｇＳＯ４で脱水し、濾過し、減圧下で濃縮して、エチル２−（２−（２−（ベンジルオキシ）エトキシ）−４−クロロフェニル）−２−ブロモアセテート４ｂ（２．２３ｇ）を得、これをそれ以上精製せずに次の工程に使用した。
【００８５】
中間体４ｃの合成：
ＣＨ３ＣＮ（２２．５ｍＬ）及びＴＨＦ（２２．５ｍＬ）中のエチル２−（２−（２−（ベンジルオキシ）エトキシ）−４−クロロフェニル）−２−ブロモアセテート４ｂ（２．２３ｇ、５．２２ｍｍｏｌ）の溶液に、３−メトキシ−５−（メチルスルホニル）アニリン［ＣＡＳ  ６２６０６−０２−４］（３．１２ｇ、１５．５ｍｍｏｌ）を添加した。反応混合物を６０℃で一晩撹拌した。反応混合物を減圧下で濃縮した。残渣をＥｔＯＡｃと１Ｎ  ＨＣｌとに分配した。水性相をＥｔＯＡｃで抽出した。有機相をまとめ、ＭｇＳＯ４で脱水し、濾過し、減圧下で濃縮した。残渣をシリカゲルのフラッシュクロマトグラフィーで、ヘプタン中のＥｔＯＡｃ（０％〜４０％）の勾配を用いて精製して、エチル２−（２−（２−（ベンジルオキシ）エトキシ）−４−クロロフェニル）−２−（（３−メトキシ−５−（メチルスルホニル）フェニル）アミノ）アセテート４ｃ（１．５７ｇ）を得た。
【００８６】
中間体４ｄの合成：
エチル２−（２−（２−（ベンジルオキシ）エトキシ）−４−クロロフェニル）−２−（（３−メトキシ−５−（メチルスルホニル）フェニル）アミノ）アセテート４ｃ（１．５７ｇ、２．８６ｍｍｏｌ）と１０％パラジウム炭素（０．３２０ｇ）とのＥｔＯＡｃ（４０ｍＬ）中混合物を、Ｈ２雰囲気下にて室温で一晩撹拌した。反応混合物をｃｅｌｉｔｅ（登録商標）で濾過した。濾液を減圧下で濃縮した。残渣をシリカゲルのフラッシュクロマトグラフィーで、ヘプタン中のＥｔＯＡｃ（３０％〜１００％）の勾配を用いて精製して、エチル２−（４−クロロ−２−（２−ヒドロキシエトキシ）フェニル）−２−（（３−メトキシ−５−（メチルスルホニル）フェニル）アミノ）アセテート４ｄ（１．１３ｇ）を得た。
【００８７】
中間体４ｅの合成：
エチル２−（４−クロロ−２−（２−ヒドロキシエトキシ）フェニル）−２−（（３−メトキシ−５−（メチルスルホニル）フェニル）アミノ）アセテート４ｄ（１．１４ｇ、２．４９ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（８ｍＬ）、ＭｅＯＨ（８ｍＬ）及びＨ２Ｏ（８ｍＬ）溶液に、水酸化リチウム一水和物（０．５２２ｇ、１２．５ｍｍｏｌ）を添加した。反応混合物を室温で３時間撹拌した。１Ｎ  ＨＣｌ及びＥｔＯＡｃを添加し、相を分離した。水性相をＥｔＯＡｃで抽出した。有機相をまとめ、ブラインで洗浄し、ＭｇＳＯ４で脱水し、濾過し、減圧下で濃縮して、定量的に２−（４−クロロ−２−（２−ヒドロキシエトキシ）フェニル）−２−（（３−メトキシ−５−（メチルスルホニル）フェニル）アミノ）酢酸４ｅを得、これをそれ以上精製せずに次の工程に使用した。
【００８８】
化合物４の合成：
６−トリフルオロメチルインドリン［ＣＡＳ  １８１５１３−２９−１］（０．２００ｇ、１．０７ｍｍｏｌ）と、２−（４−クロロ−２−（２−ヒドロキシエトキシ）フェニル）−２−（（３−メトキシ−５−（メチルスルホニル）フェニル）アミノ）酢酸４ｅ（０．４７８ｇ、１．１１ｍｍｏｌ）と、トリエチルアミン（０．５９３ｍＬ、４．２８ｍｍｏｌ）とのＤＭＦ（１０ｍＬ）溶液に、ＨＡＴＵ（０．４０６ｇ、１．０７ｍｍｏｌ）を添加した。反応混合物を一晩撹拌した。反応混合物をＨ２Ｏで希釈し、酢酸エチルで抽出した。有機相を１Ｎ  ＨＣｌ、飽和ＮａＨＣＯ３水溶液及びブラインで洗浄し、ＭｇＳＯ４で脱水し、濾過し、減圧下で濃縮した。残渣をシリカゲルのフラッシュクロマトグラフィーで、ヘプタン中のＥｔＯＡｃ（６０％〜７０％）の勾配を用いて精製した。所望の生成物を含有する画分をまとめ、減圧下で濃縮した。残渣をシリカゲルのフラッシュクロマトグラフィーで、ＣＨ２Ｃｌ２中のＥｔＯＡｃ（０％〜２５％）の勾配を用いて精製して、２−（４−クロロ−２−（２−ヒドロキシエトキシ）フェニル）−２−（（３−メトキシ−５−（メチルスルホニル）フェニル）アミノ）−１−（６−（トリフルオロメチル）インドリン−１−イル）エタン−１−オン（化合物４、０．１６２ｇ）をラセミ混合物として得た。
【００８９】
化合物４：
１Ｈ  ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δｐｐｍ３．１１（ｓ，３Ｈ）３．２２（ｍ，２Ｈ）３．６７−３．８８（ｍ，５Ｈ）４．００−４．２２（ｍ，３Ｈ）４．４４（ｍ，１Ｈ）４．９８（ｔ，Ｊ＝５．５Ｈｚ，１Ｈ）５．８３（ｄ，Ｊ＝８．３Ｈｚ，１Ｈ）６．５６（ｓ，１Ｈ）６．６３（ｓ，１Ｈ）６．９２（ｓ，１Ｈ）７．０４（ｍ，２Ｈ）７．１７（ｍ，１Ｈ）７．３１−７．５０（ｍ，３Ｈ）８．３８（ｓ，１Ｈ）
ＬＣ−ＭＳ（方法ＬＣ−Ｃ）：Ｒｔ１．８９ｍｉｎ，ＭＨ＋５９９
【００９０】
実施例４（方法２）：２−（４−クロロ−２−（２−ヒドロキシエトキシ）フェニル）−２−（（３−メトキシ−５−（メチルスルホニル）フェニル）アミノ）−１−（６−（トリフルオロメチル）インドリン−１−イル）エタノン（化合物４）の合成、及びエナンチオマー４Ａ及び４Ｂへのキラル分離。
【化８】
2020512374.tif 000012
【００９１】
中間体４ｆの合成：
ＥｔＯＨ（８０ｍＬ）とＴＨＦ（４０ｍＬ）との混合物中のエチル２−（２−（２−（ベンジルオキシ）エトキシ）−４−クロロフェニル）アセテート４ａ（４．１７ｇ、１２．０ｍｍｏｌ）の溶液に、０．５Ｎ  ＮａＯＨ（７２ｍＬ、３６．０ｍｍｏｌ）を添加した。反応混合物を室温で３時間撹拌した。反応混合物を減圧下で部分的に濃縮して有機溶媒を除去した。残渣を１Ｎ  ＨＣｌでｐＨ２〜３まで酸性化し、ＥｔＯＡｃで抽出した。有機相をＭｇＳＯ４で脱水し、濾過し、減圧下で濃縮して、２−（２−（２−（ベンジルオキシ）エトキシ）−４−クロロフェニル）酢酸４ｆ（３．８３ｇ）を得た。
【００９２】
中間体４ｇの合成：
２−（２−（２−（ベンジルオキシ）エトキシ）−４−クロロフェニル）酢酸４ｆ（７．１２ｇ、２２．２ｍｍｏｌ）の塩化チオニル（５０ｍＬ、６８９ｍｍｏｌ）溶液を、室温で１８時間攪拌した。反応混合物を減圧下で濃縮し、トルエンと共蒸発させて、２−（２−（２−（ベンジルオキシ）エトキシ）−４−クロロフェニル）アセチルクロリド４ｇ（７．５３ｇ）を得、これをそれ以上精製せずに次の工程に使用した。
【００９３】
中間体４ｈの合成：
２−（２−（２−（ベンジルオキシ）エトキシ）−４−クロロフェニル）アセチルクロリド４ｇ（５．２９ｇ、１５．６ｍｍｏｌ）のＣＨ３ＣＮ（５０ｍＬ）溶液を、Ｎ２雰囲気下で、６−（トリフルオロメチル）インドリン［ＣＡＳ  １８１５１３−２９−１］（２．９２ｇ、１５．６ｍｍｏｌ）と炭酸水素ナトリウム（１．４４ｇ、１７．１ｍｍｏｌ）とのＣＨ３ＣＮ（５０ｍＬ）中の撹拌混合物に滴加した。反応混合物を室温で６５時間撹拌し、水（５００ｍＬ）に注ぎ入れた。生成物をＥｔ２Ｏで抽出した（２×）。まとめた有機層をブラインで洗浄し、ＭｇＳＯ４で脱水し、濾過し、減圧下で蒸発させた。残渣は静置すると凝固した。生成物をジイソプロピルエーテル（２５ｍＬ）中で撹拌し、濾過し、ジイソプロピルエーテルで洗浄し（３×）、真空下、４５℃で乾燥して、２−（２−（２−（ベンジルオキシ）エトキシ）−４−クロロフェニル）−１−（６−（トリフルオロメチル）インドリン−１−イル）エタノン４ｈ（６．９７ｇ）を得た。
【００９４】
中間体４ｉの合成：
２−（２−（２−（ベンジルオキシ）エトキシ）−４−クロロフェニル）−１−（６−（トリフルオロメチル）インドリン−１−イル）エタノン４ｈ（１．０ｇ、２．０４ｍｍｏｌ）の２−Ｍｅ−ＴＨＦ（１００ｍＬ）溶液をＮ２流下で撹拌し、−７８℃まで冷却した。１Ｍリチウムビス（トリメチルシリル）アミドのＴＨＦ（４．０８ｍＬ、４．０８ｍｍｏｌ）溶液を滴加し、得られた混合物を−７８℃で１５分間撹拌した。クロロトリメチルシラン（４１７μＬ、３．２７ｍｍｏｌ）を滴加し、混合物を−７８℃で１５分間撹拌した。Ｎ−ブロモスクシンイミド（４００ｍｇ、２．２５ｍｍｏｌ）の２−Ｍｅ−ＴＨＦ（２５ｍＬ）溶液を滴加し、反応混合物を−７８℃で５０分間撹拌した。ＮＨ４Ｃｌの飽和水溶液（４０ｍＬ）を一度に添加し、得られた混合物を冷却せずに温度が０℃に達するまで撹拌した。水（１０ｍＬ）を添加し、層を分離した。有機層をＭｇＳＯ４で脱水し、濾過し、減圧下で蒸発させ、ＣＨ３ＣＮと共蒸発させて、２−（２−（２−（ベンジルオキシ）エトキシ）−４−クロロフェニル）−２−ブロモ−１−（６−（トリフルオロメチル）インドリン−１−イル）エタノン４ｉ（１．１６ｇ）を得た。この生成物を、それ以上精製せずに次の工程に使用した。
【００９５】
中間体４ｊの合成：
Ｎ２雰囲気下、ＣＨ３ＣＮ（５０ｍＬ）中の２−（２−（２−（ベンジルオキシ）エトキシ）−４−クロロフェニル）−２−ブロモ−１−（６−（トリフルオロメチル）インドリン−１−イル）エタノン４ｉ（１．１６ｇ、２．０４ｍｍｏｌ）の撹拌溶液に、３−メトキシ−５−（メチルスルホニル）アニリン［ＣＡＳ  ６２６０６−０２−４］（０．８２ｇ、４．０８ｍｍｏｌ）及びジイソプロピルエチルアミン（７０３μＬ、４．０８ｍｍｏｌ）を添加し、反応混合物を６０℃で６５時間撹拌した。混合物を室温まで冷却し、撹拌Ｈ２Ｏ（２５０ｍＬ）に注ぎ入れた。生成物をＥｔ２Ｏで抽出した（２×）。まとめた有機層をＭｇＳＯ４で脱水し、濾過し、減圧下で蒸発させた。残渣をシリカ（４０ｇ）のフラッシュクロマトグラフィーで、ヘプタン／ＥｔＯＡｃ／ＥｔＯＨの勾配１００／０／０〜４０／４５／１５を用いて精製した。所望の画分をまとめ、溶媒をｒｏｔａｖａｐｏｒ（登録商標）で３５ｍＬの残留体積まで減圧下で蒸発させた。静置すると生成物が結晶化した。沈殿物を濾別し、ＥｔＯＡｃ／ヘプタン  １／１で洗浄し（３×）、真空下、４５℃で乾燥して、２−（２−（２−（ベンジルオキシ）エトキシ）−４−クロロフェニル）−２−（（３−メトキシ−５−（メチルスルホニル）フェニル）アミノ）−１−（６−（トリフルオロメチル）インドリン−１−イル）エタノン４ｊ（８７０ｍｇ）を得た。
【００９６】
化合物４の合成、及びエナンチオマー４Ａ及び４Ｂへのキラル分離：
２−（２−（２−（ベンジルオキシ）エトキシ）−４−クロロフェニル）−２−（（３−メトキシ−５−（メチルスルホニル）フェニル）アミノ）−１−（６−（トリフルオロメチル）インドリン−１−イル）エタノン４ｊ（２１０ｍｇ、０．２８ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（３０ｍＬ）溶液を、ＥｔＯＡｃ（１０ｍＬ）中のＰｄ／Ｃ（０．５ｇ）の撹拌混合物に添加した。混合物を大気圧下、室温で１０分間水素化した。触媒をｄｉｃａｌｉｔｅ（登録商標）での濾過により除去し、溶媒を減圧下で蒸発させた。残渣を別のバッチと合わせ（総量：１．０ｇ）、逆相ＨＰＬＣ（固定相：Ｋｒｏｍａｓｉｌ  Ｃ１８  １００Ａ  ５ｕｍ（Ｅｋａ  Ｎｏｂｅｌ）、移動相：５０％アンモニア重炭酸塩（水中０．２５％）、５０％アセトニトリル〜２０％アンモニアアンモニア重炭酸塩（水中０．２５％）、８０％アセトニトリルの勾配）により精製し、化合物４（７００ｍｇ）を得た。化合物４（７００ｍｇ）のエナンチオマーを、順相キラル分離（固定相：Ｗｈｅｌｋ−Ｏ１（ＳＳ）５μｍ、リサイクルピークシェービング法、移動相：１００％エタノール）により分離した。第１の溶出エナンチオマーを含有する画分をまとめ、減圧下で蒸発させた。残渣をシリカゲル（４ｇ）のフラッシュクロマトグラフィーで、ヘプタン／ＥｔＯＡｃ／ＥｔＯＨの勾配１００／０／０〜４０／４５／１５を用いてさらに精製した。所望の画分をまとめ、蒸発させ、ＭｅＯＨで共蒸発させた。残渣をＨ２Ｏ（４ｍＬ）及びＭｅＯＨ（１ｍＬ）中、４５℃でトリチュレートし、沈殿物を濾別し、Ｈ２Ｏ／ＭｅＯＨ  ４／１で洗浄し（３×）、真空下、４５℃で乾燥して、エナンチオマー４Ａ（１９７ｍｇ）を得た。第２の溶出エナンチオマーを含有する画分をまとめ、減圧下で蒸発させた。残渣をシリカゲル（４ｇ）のフラッシュクロマトグラフィーで、ヘプタン／ＥｔＯＡｃ／ＥｔＯＨの勾配１００／０／０〜４０／４５／１５を用いてさらに精製した。所望の画分をまとめ、蒸発させ、ＭｅＯＨ／水で共蒸発させた。残渣をＨ２Ｏ（４ｍＬ）及びＭｅＯＨ（１ｍＬ）中で撹拌し、沈殿物を濾別し、Ｈ２Ｏ／ＭｅＯＨ  ４／１で洗浄し（３×）、真空下、４５℃で乾燥して、エナンチオマー４Ｂ（２０９ｍｇ）を得た。
【００９７】
エナンチオマー４Ａ：
１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δｐｐｍ３．１０（ｓ，３Ｈ）３．１６−３．２７（ｍ，２Ｈ）３．６８−３．８５（ｍ，５Ｈ）４．０４−４．２０（ｍ，３Ｈ）４．４４（ｔｄ，Ｊ＝１０．２，６．６Ｈｚ，１Ｈ）４．９４（ｔ，Ｊ＝５．６Ｈｚ，１Ｈ）５．８３（ｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，１Ｈ）６．５６（ｔ，Ｊ＝２．１Ｈｚ，１Ｈ）６．６３（ｔ，Ｊ＝１．８Ｈｚ，１Ｈ）６．９１（ｔ，Ｊ＝１．４Ｈｚ，１Ｈ）６．９７−７．０８（ｍ，２Ｈ）７．１７（ｄ，Ｊ＝２．０Ｈｚ，１Ｈ）７．３６（ｄ，Ｊ＝８．１Ｈｚ，１Ｈ）７．３９（ｄｄ，Ｊ＝７．９，０．９Ｈｚ，１Ｈ）７．４３−７．４９（ｍ，１Ｈ）８．３８（ｂｒｓ，１Ｈ）
ＬＣ／ＭＳ（方法ＬＣ−Ｄ）：Ｒｔ１．１７ｍｉｎ，ＭＨ＋５９９
［α］Ｄ２０：＋５９．８°（ｃ０．４３５，ＤＭＦ）
キラルＳＦＣ（方法ＳＦＣ−Ｉ）：Ｒｔ２．８４ｍｉｎ，ＭＨ＋５９９，キラル純度１００％．
【００９８】
エナンチオマー４Ｂ：
１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δｐｐｍ３．１０（ｓ，３Ｈ）３．１６−３．２６（ｍ，２Ｈ）３．７０−３．８５（ｍ，５Ｈ）４．０２−４．１９（ｍ，３Ｈ）４．４４（ｔｄ，Ｊ＝１０．２，６．４Ｈｚ，１Ｈ）４．９４（ｔ，Ｊ＝５．６Ｈｚ，１Ｈ）５．８３（ｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，１Ｈ）６．５６（ｔ，Ｊ＝２．０Ｈｚ，１Ｈ）６．６３（ｔ，Ｊ＝１．８Ｈｚ，１Ｈ）６．９１（ｔ，Ｊ＝１．７Ｈｚ，１Ｈ）６．９９−７．０７（ｍ，２Ｈ）７．１６（ｄ，Ｊ＝２．０Ｈｚ，１Ｈ）７．３６（ｄ，Ｊ＝８．１Ｈｚ，１Ｈ）７．３７−７．４１（ｍ，１Ｈ）７．４４−７．４８（ｍ，１Ｈ）８．３８（ｓ，１Ｈ）
ＬＣ／ＭＳ（方法ＬＣ−Ｄ）：Ｒｔ１．１７ｍｉｎ，ＭＨ＋５９９
［α］Ｄ２０：−５６．４°（ｃ０．４７，ＤＭＦ）
キラルＳＦＣ（方法ＳＦＣ−Ｉ）：Ｒｔ３．１４ｍｉｎ，ＭＨ＋５９９，キラル純度９７．０％．
【００９９】
実施例５：２−（４−クロロ−２−（２−ヒドロキシエトキシ）フェニル）−２−（（３−メトキシ−５−（メチルスルホニル）フェニル）アミノ）−１−（５−メトキシ−６−（トリフルオロメチル）インドリン−１−イル）エタノン（化合物５）の合成、及びエナンチオマー５Ａ及び５Ｂへのキラル分離。
【化９】
2020512374.tif 000013
【０１００】
中間体５ａの合成：
エチル２−（４−クロロ−２−ヒドロキシフェニル）アセテート［ＣＡＳ１２６１８２６−３０−５］（５．２ｇ、２４．２ｍｍｏｌ）と炭酸セシウム（１５．８ｇ、４８．５ｍｍｏｌ）との１０℃のＤＭＦ（９０ｍＬ）中混合物に、（２−ブロモエトキシ）（ｔｅｒｔ−ブチル）ジメチルシラン［ＣＡＳ  ８６８６４−６０−０］（６．２６ｍＬ、２９．１ｍｍｏｌ）を添加した。反応混合物を室温で一晩撹拌した。水を添加し、反応混合物をＥｔＯＡｃで抽出した。有機相をＭｇＳＯ４で脱水し、濾過し、減圧下で濃縮した。残渣を、シリカゲルのフラッシュクロマトグラフィー（１５〜４０μＭ、８０ｇ、ヘプタン／ＥｔＯＡｃ  ８０／２０）で精製した。純粋な画分をまとめ、溶媒を減圧下で除去して、エチル２−（２−（２−（（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル）オキシ）エトキシ）−４−クロロフェニル）アセテート５ａ（７．８ｇ）を得た。
【０１０１】
中間体５ｂの合成：
冷却した（−７８℃に）ＴＨＦ（４１．８ｍＬ、４１．８ｍｍｏｌ）中の１Ｍリチウムビス（トリメチルシリル）アミド溶液に、エチル２−（２−（２−（（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル）オキシ）エトキシ）−４−クロロフェニル）アセテート５ａ（７．８ｇ、２０．９ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（４５ｍＬ）溶液を添加した。−７０℃で１時間後、クロロトリメチルシラン（４．２４ｍＬ、３３．５ｍｍｏｌ）を添加した。反応混合物を−７０℃で１５分撹拌した。ＴＨＦ（４５ｍＬ）中のＮ−ブロモスクシンイミド（４．４６ｇ、２５．１ｍｍｏｌ）を添加し、−５５℃で２時間撹拌を続けた。反応混合物をＨ２Ｏに注ぎ入れ、ＥｔＯＡｃで２回抽出した。有機相をまとめ、ＭｇＳＯ４で脱水し、濾過し、減圧下で濃縮して、エチル２−ブロモ−２−（２−（２−（（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル）オキシ）エトキシ）−４−クロロフェニル）アセテート５ｂ（１０．１ｇ）を得、これをそれ以上精製せずに次の工程に使用した。
【０１０２】
中間体５ｃの合成：
ＣＨ３ＣＮ（９０ｍＬ）中のエチル２−ブロモ−２−（２−（２−（（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル）オキシ）エトキシ）−４−クロロフェニル）アセテート５ｂ（４．７５ｇ、１０．５ｍｍｏｌ）と、３−メトキシ−５−（メチルスルホニル）アニリン［ＣＡＳ  ６２６０６−０２−４］（３．１７ｇ、１５．８ｍｍｏｌ）と、ジイソプロピルエチルアミン（３．６２ｍＬ、２１．０ｍｍｏｌ）との混合物を、５０℃で一晩撹拌した。反応混合物を減圧下で濃縮した。残渣をＥｔＯＡｃで溶かし、０．５Ｎ  ＨＣｌ及び水で洗浄した。有機相をＭｇＳＯ４で脱水し、濾過し、減圧下で濃縮した。残渣をシリカゲルのフラッシュクロマトグラフィー（１５〜４０μｍ、１２０ｇ、ヘプタン／ＥｔＯＡｃ  ９０／１０〜８０／２０）で精製して、エチル２−（２−（２−（（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル）オキシ）エトキシ）−４−クロロフェニル）−２−（（３−メトキシ−５−（メチルスルホニル）フェニル）アミノ）アセテート５ｃ（３．５ｇ）を得た。
【０１０３】
中間体５ｄの合成：
水酸化リチウム一水和物（５１３ｍｇ、１２．２ｍｍｏｌ）を、エチル２−（２−（２−（（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル）オキシ）エトキシ）−４−クロロフェニル）−２−（（３−メトキシ−５−（メチルスルホニル）フェニル）アミノ）アセテート５ｃ（３．５ｇ、６．１２ｍｍｏｌ）のＴＨＦ／ＣＨ３ＯＨ／Ｈ２Ｏ（１／１／１）（７５ｍＬ）溶液に、１０℃で少量ずつ添加した。反応生成物を室温で２時間撹拌し、水で希釈し、０℃に冷却した。溶液を０．５Ｎ  ＨＣｌでｐＨ６までゆっくりと酸性化し、ＥｔＯＡｃで抽出した。有機層をＭｇＳＯ４で脱水し、濾過し、溶媒を減圧下で濃縮して、２−（２−（２−（（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル）オキシ）エトキシ）−４−クロロフェニル）−２−（（３−メトキシ−５−（メチルスルホニル）フェニル）アミノ）酢酸５ｄ（２．８５ｇ）を得た。この化合物を、それ以上精製せずに次の工程に使用した。
【０１０４】
中間体５ｅの合成：
２−（２−（２−（（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル）オキシ）エトキシ）−４−クロロフェニル）−２−（（３−メトキシ−５−（メチルスルホニル）フェニル）アミノ）酢酸５ｄ（１ｇ、１．８４ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（１０ｍＬ）溶液に、ＨＡＴＵ（１．０５ｇ、２．７６ｍｍｏｌ）、ジイソプロピルエチルアミン（９１３μＬ、５．５３ｍｍｏｌ）、及び５−メトキシ−６−（トリフルオロメチル）インドリン２ｇ（４１２ｍｇ、１．９０ｍｍｏｌ）を添加した。反応混合物を室温で２時間撹拌した。反応混合物を水で希釈した。沈殿物を濾別し、水で洗浄し、ＥｔＯＡｃで溶かした。有機層をＫ２ＣＯ３の１０％溶液、水で洗浄し、ＭｇＳＯ４で脱水し、濾過し、溶媒を減圧下で濃縮して、２−（２−（２−（（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル）オキシ）エトキシ）−４−クロロフェニル）−２−（（３−メトキシ−５−（メチルスルホニル）フェニル）アミノ）−１−（５−メトキシ−６−（トリフルオロメチル）インドリン−１−イル）エタノン５ｅ（１．４ｇ）を得た。この化合物を、それ以上精製せずに次の反応工程に使用した。
【０１０５】
化合物５の合成、及びエナンチオマー５Ａ及び５Ｂへのキラル分離：
Ｎ２流下、５℃で、ジオキサン（４．７１ｍＬ、１８．８ｍｍｏｌ）中の４Ｍ  ＨＣｌを、２−（２−（２−（（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル）オキシ）エトキシ）−４−クロロフェニル）−２−（（３−メトキシ−５−（メチルスルホニル）フェニル）アミノ）−１−（５−メトキシ−６−（トリフルオロメチル）インドリン−１−イル）エタノン５ｅ（１．４ｇ、１．８８ｍｍｏｌ）のＭｅＯＨ（２５ｍＬ）溶液に滴加した。反応物を室温で１時間撹拌した。混合物を０℃に冷却し、Ｋ２ＣＯ３の１０％水溶液で塩基性化し、ＥｔＯＡｃで抽出した。有機相を分離し、ＭｇＳＯ４で脱水し、濾過し、溶媒を減圧下で濃縮した。残渣をシリカゲルのフラッシュクロマトグラフィー（１５〜４０μｍ、４０ｇ、ＣＨ２Ｃｌ２／ＭｅＯＨ  ９８．５／１．５）で精製した。純粋な画分をまとめ、溶媒を減圧下で除去して、２−（４−クロロ−２−（２−ヒドロキシエトキシ）フェニル）−２−（（３−メトキシ−５−（メチルスルホニル）フェニル）アミノ）−１−（５−メトキシ−６−（トリフルオロメチル）インドリン−１−イル）エタノン（化合物５、１．０ｇ）をラセミ体として得た。化合物５の分析試料をＭｅＯＨ（６０ｍｇ）から結晶化した。残りの量を使用して、エナンチオマーを、分取キラルＳＦＣ（固定相：Ｃｈｉｒａｌｐａｋ（登録商標）ＩＣ  ５μｍ  ２５０×３０ｍｍ、移動相：７０％ＣＯ２、３０％ＥｔＯＨ（＋０．３％ｉＰｒＮＨ２））により分離した。第１の溶出エナンチオマー（４００ｍｇ）を、ジイソプロピルエーテルから凝固させて、エナンチオマー５Ａ（３５１ｍｇ）を得た。第２の溶出エナンチオマー（４３０ｍｇ）を、ジイソプロピルエーテルから凝固させて、エナンチオマー５Ｂ（３３６ｍｇ）を得た。
【０１０６】
化合物５：
１Ｈ  ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δｐｐｍ３．１０（ｓ，３Ｈ）３．１３−３．２７（ｍ，２Ｈ）３．７３（ｓ，３Ｈ）３．７３−３．７８（ｍ，１Ｈ）３．７８−３．８４（ｍ，１Ｈ）３．８４（ｓ，３Ｈ）３．９８−４．２２（ｍ，３Ｈ）４．４１（ｄｔ，Ｊ＝６．１，１０．１Ｈｚ，１Ｈ）４．９５（ｔ，Ｊ＝５．６Ｈｚ，１Ｈ）５．８０（ｄ，Ｊ＝８．０８Ｈｚ，１Ｈ）６．５５（ｓ，１Ｈ）６．６１（ｓ，１Ｈ）６．９０（ｓ，１Ｈ）６．９６−７．０５（ｍ，２Ｈ）７．１６（ｄ，Ｊ＝１．５２Ｈｚ，１Ｈ）７．２４（ｓ，１Ｈ）７．３５（ｄ，Ｊ＝８．０８Ｈｚ，１Ｈ）８．３４（ｓ，１Ｈ）
ＬＣ−ＭＳ（方法ＬＣ−Ａ）：Ｒｔ３．１５ｍｉｎ，ＭＨ＋６２９
融点：２２０℃
【０１０７】
エナンチオマー５Ａ：
１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δｐｐｍ３．１０（ｓ，３Ｈ）３．１３−３．２７（ｍ，２Ｈ）３．７３（ｓ，３Ｈ）３．７３−３．７８（ｍ，１Ｈ）３．７８−３．８４（ｍ，１Ｈ）３．８４（ｓ，３Ｈ）３．９８−４．２２（ｍ，３Ｈ）４．４１（ｄｔ，Ｊ＝６．１，１０．１Ｈｚ，１Ｈ）４．９５（ｔ，Ｊ＝５．６Ｈｚ，１Ｈ）５．８０（ｄ，Ｊ＝８．０８Ｈｚ，１Ｈ）６．５５（ｓ，１Ｈ）６．６１（ｓ，１Ｈ）６．９０（ｓ，１Ｈ）６．９６−７．０５（ｍ，２Ｈ）７．１６（ｄ，Ｊ＝１．５２Ｈｚ，１Ｈ）７．２４（ｓ，１Ｈ）７．３５（ｄ，Ｊ＝８．０８Ｈｚ，１Ｈ）８．３４（ｓ，１Ｈ）
ＬＣ／ＭＳ（方法ＬＣ−Ａ）：Ｒｔ３．１３ｍｉｎ，ＭＨ＋６２９
［α］Ｄ２０：−６０．４°（ｃ０．２８，ＤＭＦ）
キラルＳＦＣ（方法ＳＦＣ−Ｄ）：Ｒｔ１．０２ｍｉｎ，ＭＨ＋６２９，キラル純度１００％．
【０１０８】
エナンチオマー５Ｂ：
１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δｐｐｍ３．１０（ｓ，３Ｈ）３．１３−３．２７（ｍ，２Ｈ）３．７３（ｓ，３Ｈ）３．７３−３．７８（ｍ，１Ｈ）３．７８−３．８４（ｍ，１Ｈ）３．８４（ｓ，３Ｈ）３．９８−４．２２（ｍ，３Ｈ）４．４１（ｄｔ，Ｊ＝６．１，１０．１Ｈｚ，１Ｈ）４．９５（ｂｒｔ，Ｊ＝５．６Ｈｚ，１Ｈ）５．８０（ｄ，Ｊ＝８．０８Ｈｚ，１Ｈ）６．５５（ｓ，１Ｈ）６．６１（ｓ，１Ｈ）６．９０（ｓ，１Ｈ）６．９６−７．０５（ｍ，２Ｈ）７．１６（ｄ，Ｊ＝１．５２Ｈｚ，１Ｈ）７．２４（ｓ，１Ｈ）７．３５（ｄ，Ｊ＝８．０８Ｈｚ，１Ｈ）８．３４（ｓ，１Ｈ）
ＬＣ／ＭＳ（方法ＬＣ−Ａ）：Ｒｔ３．１５ｍｉｎ，ＭＨ＋６２９
［α］Ｄ２０：＋５６．７°（ｃ０．３，ＤＭＦ）
キラルＳＦＣ（方法ＳＦＣ−Ｄ）：Ｒｔ１．２２ｍｉｎ，ＭＨ＋６２９，キラル純度９９．７％．
【０１０９】
実施例６（方法１）：２−（４−クロロ−２−（２−ヒドロキシエトキシ）フェニル）−２−（（３−メトキシ−５−（メチルスルホニル）フェニル）アミノ）−１−（６−（トリフルオロメトキシ）インドリン−１−イル）エタノン（化合物６）の合成。
【化１０】
2020512374.tif 000014
【０１１０】
中間体６ａの合成：
２−（２−（２−（（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル）オキシ）エトキシ）−４−クロロフェニル）−２−（（３−メトキシ−５−（メチルスルホニル）フェニル）アミノ）酢酸５ｄ（１．０７ｇ、１．９７ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（１０ｍＬ）溶液に、ＨＡＴＵ（１．１２ｇ、２．９５ｍｍｏｌ）、ジイソプロピルエチルアミン（９７６μＬ、５．９１ｍｍｏｌ）、及び６−（トリフルオロメトキシ）インドリン［ＣＡＳ  ９５９２３５−９５−１］（４００ｍｇ、１．９７ｍｍｏｌ）を添加した。反応混合物を室温で２時間撹拌した。反応混合物を水で希釈した。沈殿物を濾別し、水で洗浄し、ＥｔＯＡｃで溶かした。有機層をＫ２ＣＯ３の１０％溶液、水で洗浄し、ＭｇＳＯ４で脱水し、濾過し、溶媒を減圧下で濃縮して、２−（２−（２−（（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル）オキシ）エトキシ）−４−クロロフェニル）−２−（（３−メトキシ−５−（メチルスルホニル）フェニル）アミノ）−１−（６−（トリフルオロメトキシ）インドリン−１−イル）エタノン６ａ（１．３６ｇ）を得た。この粗化合物を、精製せずに次の反応工程に使用した。
【０１１１】
化合物６の合成：
Ｎ２流下、５℃で、ジオキサン（４．６６ｍＬ、１８．６ｍｍｏｌ）中の４Ｍ  ＨＣｌを、２−（２−（２−（（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル）オキシ）エトキシ）−４−クロロフェニル）−２−（（３−メトキシ−５−（メチルスルホニル）フェニル）アミノ）−１−（６−（トリフルオロメトキシ）インドリン−１−イル）エタノン６ａ（１．３６ｇ、１．８７ｍｍｏｌ）のＭｅＯＨ（２５ｍＬ）溶液に滴加した。反応物を室温で１時間撹拌した。混合物を０℃に冷却し、Ｋ２ＣＯ３の１０％水溶液で塩基性化し、ＥｔＯＡｃで抽出した。有機相を分離し、ＭｇＳＯ４で脱水し、濾過し、溶媒を減圧下で濃縮した。残渣をシリカゲルのフラッシュクロマトグラフィー（１５〜４０μｍ、４０ｇ、ＣＨ２Ｃｌ２／ＭｅＯＨ  ９９．５／０．５）で精製した。純粋な画分をまとめ、溶媒を減圧下で除去して、２−（４−クロロ−２−（２−ヒドロキシエトキシ）フェニル）−２−（（３−メトキシ−５−（メチルスルホニル）フェニル）アミノ）−１−（６−（トリフルオロメトキシ）インドリン−１−イル）エタノン（化合物６、５４０ｍｇ）をラセミ体として得た。化合物６の分析試料をＭｅＯＨからの結晶化によって得た（３４ｍｇ）。
【０１１２】
化合物６：
１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δｐｐｍ３．０７−３．２３（ｍ，５Ｈ）３．７０−３．８３（ｍ，５Ｈ）４．０６−４．１９（ｍ，３Ｈ）４．４２（ｔｄ，Ｊ＝１０．２３，６．３２Ｈｚ，１Ｈ）４．９２（ｔ，Ｊ＝５．３１Ｈｚ，１Ｈ）５．８１（ｄ，Ｊ＝８．５９Ｈｚ，１Ｈ）６．５６（ｓ，１Ｈ）６．６１（ｓ，１Ｈ）６．９０（ｓ，１Ｈ）６．９９−７．０５（ｍ，３Ｈ）７．１６（ｄ，Ｊ＝２．０２Ｈｚ，１Ｈ）７．３０−７．４０（ｍ，２Ｈ）８．０３（ｓ，１Ｈ）
ＬＣ−ＭＳ（方法ＬＣ−Ａ）：Ｒｔ３．２８ｍｉｎ，ＭＨ＋６１５
融点：１９１℃
【０１１３】
実施例６（方法２）：２−（４−クロロ−２−（２−ヒドロキシエトキシ）フェニル）−２−（（３−メトキシ−５−（メチルスルホニル）フェニル）アミノ）−１−（６−（トリフルオロメトキシ）インドリン−１−イル）エタノン（化合物６）の合成、及びエナンチオマー６Ａ及び６Ｂへのキラル分離。
【化１１】
2020512374.tif 000015
【０１１４】
中間体６ｂの合成：
Ｎ２流下の冷却（−７０℃）した１．５Ｍリチウムビス（トリメチルシリル）アミドのＴＨＦ（２３ｍＬ、３４．４ｍｍｏｌ）溶液に、エチル２−（２−（２−（ベンジルオキシ）エトキシ）−４−クロロフェニル）アセテート４ａ（６ｇ、１７．２ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（３５ｍＬ）溶液を添加した。−７０℃で１時間後、クロロトリメチルシラン（３．５ｍＬ、２７．５ｍｍｏｌ）を添加した。反応混合物を−７０℃で１５分撹拌した。ＴＨＦ（３５ｍＬ）中のＮ−ブロモスクシンイミド（３．７ｇ、２０．６ｍｍｏｌ）を添加し、−７０℃で２時間撹拌を続けた。反応混合物をＨ２Ｏに注ぎ入れ、ＥｔＯＡｃで抽出した。有機相をまとめ、ＭｇＳＯ４で脱水し、濾過し、減圧下で濃縮して、エチル２−（２−（２−（ベンジルオキシ）エトキシ）−４−クロロフェニル）−２−ブロモアセテート６ｂ（８．２ｇ）を得、これをそれ以上精製せずに次の工程に使用した。
【０１１５】
中間体６ｃの合成：
ＣＨ３ＣＮ（１５０ｍＬ）中の２−（２−（２−（ベンジルオキシ）エトキシ）−４−クロロフェニル）−２−ブロモアセテート６ｂ（７．３６ｇ、１７．２ｍｍｏｌ）と、３−メトキシ−５−（メチルスルホニル）アニリン［ＣＡＳ  ６２６０６−０２−４］（５．２ｇ、２５．８ｍｍｏｌ）と、ジイソプロピルエチルアミン（５．９ｍＬ、２５．８ｍｍｏｌ）との混合物を、５０℃で一晩撹拌した。溶媒を減圧下で濃縮した。残渣をＥｔＯＡｃで希釈し、０．５Ｎ  ＨＣｌ及び水で洗浄した。有機層をＭｇＳＯ４で脱水し、濾過し、減圧下で濃縮した。残渣をシリカゲルのフラッシュクロマトグラフィー（１５〜４０μｍ、２２０ｇ、ＣＨ２Ｃｌ２／ＭｅＯＨ  ９９／１）で精製した。純粋な画分をまとめ、溶媒を減圧下で除去して、エチル２−（２−（２−（ベンジルオキシ）エトキシ）−４−クロロフェニル）−２−（（３−メトキシ−５−（メチルスルホニル）フェニル）アミノ）アセテート６ｃ（５．５２ｇ）を得た。
【０１１６】
中間体６ｄの合成：
１０℃で、水酸化リチウム一水和物（８４５ｍｇ、２０．１ｍｍｏｌ）を、エチル２−（２−（２−（ベンジルオキシ）エトキシ）−４−クロロフェニル）−２−（（３−メトキシ−５−（メチルスルホニル）フェニル）アミノ）アセテート６ｃ（５．５２ｇ、１０．１ｍｍｏｌ）のＭｅＯＨ／ＴＨＦ／水（１／１／１）（９０ｍＬ）溶液に添加した。この混合物を室温で２時間撹拌した。混合物を氷水で希釈し、０℃まで冷却した。得られた混合物を０．５Ｎ  ＨＣｌでｐＨ６〜７まで酸性化し、ＥｔＯＡｃで抽出した。有機層をまとめ、ＭｇＳＯ４で脱水し、濾過し、溶媒を減圧下で濃縮して、２−（２−（２−（ベンジルオキシ）エトキシ）−４−クロロフェニル）−２−（（３−メトキシ−５−（メチルスルホニル）フェニル）アミノ）酢酸６ｄ（５．２６ｇ）を得た。この化合物を、それ以上精製せずに次の反応工程に使用した。
【０１１７】
中間体６ｅの合成：
６−（トリフルオロメトキシ）インドリン［ＣＡＳ  ９５９２３５−９５−１］（１．８５ｇ、９．１２ｍｍｏｌ）と、２−（２−（２−（ベンジルオキシ）エトキシ）−４−クロロフェニル）−２−（（３−メトキシ−５−（メチルスルホニル）フェニル）アミノ）酢酸６ｄ（５．６９ｇ、１０．９ｍｍｏｌ）と、ＨＡＴＵ（５．２ｇ、１３．７ｍｍｏｌ）と、ジイソプロピルエチルアミン（４．５２ｍＬ、２７．４ｍｍｏｌ）とのＤＭＦ（４０ｍＬ）中混合物を、室温で２時間撹拌した。混合物を水で希釈した。沈殿物を濾別し、水で洗浄した。沈殿物をＥｔＯＡｃで溶かし、Ｋ２ＣＯ３の１０％水溶液、水で洗浄し、ＭｇＳＯ４で脱水し、濾過し、溶媒を減圧下で蒸発させた。シリカゲルのフラッシュクロマトグラフィー（１５〜４０μｍ、２２０ｇ、ヘプタン／ＥｔＯＡｃ  ７０／３０）により精製を行った。純粋な画分をまとめ、乾燥するまで濃縮して、２−（２−（２−（ベンジルオキシ）エトキシ）−４−クロロフェニル）−２−（（３−メトキシ−５−（メチルスルホニル）フェニル）アミノ）−１−（６−（トリフルオロメトキシ）インドリン−１−イル）エタノン６ｅ（５．６ｇ）を得た。
【０１１８】
化合物６の合成、及びエナンチオマー６Ａ及び６Ｂへのキラル分離：
２−（２−（２−（ベンジルオキシ）エトキシ）−４−クロロフェニル）−２−（（３−メトキシ−５−（メチルスルホニル）フェニル）アミノ）−１−（６−（トリフルオロメトキシ）インドリン−１−イル）エタノン６ｅ（５．６ｇ、７．９４ｍｍｏｌ）のＥｔＯＡｃ（１００ｍＬ）中混合物を、大気圧のＨ２で、触媒としてのＰｄ／Ｃ（１０％）（１．７ｇ、１．５９ｍｍｏｌ）の存在下、６分間（Ｈ２の消費が終わるまで）水素化した。反応物をＥｔＯＡｃで希釈し、ｃｅｌｉｔｅ（登録商標）のパッドで濾過した。濾液を減圧下で濃縮して、２−（４−クロロ−２−（２−ヒドロキシエトキシ）フェニル）−２−（（３−メトキシ−５−（メチルスルホニル）フェニル）アミノ）−１−（６−（トリフルオロメトキシ）インドリン−１−イル）エタノン（化合物６）をラセミ体（４．６ｇ、粗化合物）として得た。化合物６のエナンチオマーを、キラルＳＦＣ（固定相：Ｃｈｉｒａｌｃｅｌ（登録商標）ＯＪ−Ｈ  ５μｍ  ２５０×２０ｍｍ、移動相：８０％ＣＯ２、２０％ＭｅＯＨ（＋０．３％ｉＰｒＮＨ２））により分離した。第１の溶出エナンチオマー（１．９６ｇ）をキラルＳＦＣ（固定相：Ｃｈｉｒａｌｐａｋ（登録商標）ＩＡ  ５μｍ  ２５０×２０ｍｍ、移動相：７４％ＣＯ２、２６％ｉＰｒＯＨ（＋０．３％ｉＰｒＮＨ２））でさらに精製して、ヘプタン／ジイソプロピルエーテルから沈殿させた後、エナンチオマー６Ａ（１．５２７ｇ）を得た。第２の溶出エナンチオマー（２．１０ｇ）を、ヘプタン／ジイソプロピルエーテルから凝固させて、エナンチオマー６Ｂ（１．７０８ｇ）を得た。
【０１１９】
エナンチオマー６Ａ：
１Ｈ  ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δｐｐｍ３．０８−３．１８（ｍ，５Ｈ）３．７０−３．８３（ｍ，５Ｈ）４．０５−４．１９（ｍ，３Ｈ）４．４３（ｔｄ，Ｊ＝１０．３２，６．４６Ｈｚ，１Ｈ）４．９７（ｔ，Ｊ＝５．５２Ｈｚ，１Ｈ）５．８２（ｄ，Ｊ＝８．２０Ｈｚ，１Ｈ）６．５６（ｓ，１Ｈ）６．６２（ｓ，１Ｈ）６．９１（ｓ，１Ｈ）７．００−７．０８（ｍ，３Ｈ）７．１６（ｄ，Ｊ＝１．５８Ｈｚ，１Ｈ）７．３４（ｄ，Ｊ＝８．２０Ｈｚ，２Ｈ）８．０４（ｓ，１Ｈ）
ＬＣ／ＭＳ（方法ＬＣ−Ａ）：Ｒｔ３．３２ｍｉｎ，ＭＨ＋６１５
［α］Ｄ２０：＋６４．３°（ｃ０．３０５，ＤＭＦ）
キラルＳＦＣ（方法ＳＦＣ−Ｅ）：Ｒｔ２．８２ｍｉｎ，ＭＨ＋６１５，キラル純度１００％．
【０１２０】
エナンチオマー６Ｂ：
１Ｈ  ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δｐｐｍ３．０８−３．１８（ｍ，５Ｈ）３．７０−３．８３（ｍ，５Ｈ）４．０５−４．１９（ｍ，３Ｈ）４．４３（ｔｄ，Ｊ＝１０．３２，６．４６Ｈｚ，１Ｈ）４．９７（ｔ，Ｊ＝５．５２Ｈｚ，１Ｈ）５．８２（ｄ，Ｊ＝８．２０Ｈｚ，１Ｈ）６．５６（ｓ，１Ｈ）６．６２（ｓ，１Ｈ）６．９１（ｓ，１Ｈ）７．００−７．０８（ｍ，３Ｈ）７．１６（ｄ，Ｊ＝１．５８Ｈｚ，１Ｈ）７．３４（ｄ，Ｊ＝８．２０Ｈｚ，２Ｈ）８．０４（ｓ，１Ｈ）
ＬＣ／ＭＳ（方法ＬＣ−Ａ）：Ｒｔ３．３１ｍｉｎ，ＭＨ＋６１５
［α］Ｄ２０：−５３．７°（ｃ０．３，ＤＭＦ）
キラルＳＦＣ（方法ＳＦＣ−Ｅ）：Ｒｔ３．３４ｍｉｎ，ＭＨ＋６１５，キラル純度９５．７％．
【０１２１】
実施例７：４−（５−クロロ−２−（１−（（３−メトキシ−５−（メチルスルホニル）フェニル）−アミノ）−２−オキソ−２−（６−（トリフルオロメチル）インドリン−１−イル）エチル）フェノキシ）ブタン酸（化合物７）の合成、及びエナンチオマー７Ａ及び７Ｂへのキラル分離。
【化１２】
2020512374.tif 000016
【０１２２】
中間体７ａの合成：
エチル２−（４−クロロ−２−ヒドロキシフェニル）アセテート［ＣＡＳ１２６１８２６−３０−５］（８．５ｇ、３９．６ミリモル）とＣｓ２ＣＯ３（２５．８ｇ、７９．２ｍｍｏｌ）との１０℃のＤＭＦ（１３０ｍＬ）中の懸濁液に、ｔｅｒｔ−ブチル４−ブロモブタノエート［ＣＡＳ  １１０６１１−９１−１］（７ｍＬ、３９．６ｍｍｏｌ）を滴加した。この混合物を室温で一晩撹拌した。混合物をＥｔＯＡｃ及び水で希釈した。層を分離した。有機層を水で洗浄し、ＭｇＳＯ４で脱水し、濾過し、溶媒を減圧下で濃縮した。精製を、シリカゲルのフラッシュクロマトグラフィー（１５〜４０μｍ、１２０ｇ、ヘプタン／ＥｔＯＡｃ  ９０／１０）で実行した。純粋な画分をまとめ、減圧下で乾燥するまで濃縮して、ｔｅｒｔ−ブチル４−（５−クロロ−２−（２−エトキシ−２−オキソエチル）フェノキシ）ブタノエート７ａ（１２．７ｇ）を得た。
【０１２３】
中間体７ｂの合成：
Ｎ２流下で、ＴＨＦ（２３．５ｍＬ、３５．３ｍｍｏｌ）中の１．５Ｍ  ＬｉＨＭＤＳをフラスコに充填し、−７８℃まで冷却した。ｔｅｒｔ−ブチル４−（５−クロロ−２−（２−エトキシ−２−オキソエチル）フェノキシ）ブタノエート７ａ（６．３ｇ、１７．６ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（６０ｍＬ）溶液を滴加し、混合物を−７８℃で１５分間撹拌した。クロロトリメチルシラン（３．６ｍＬ、２８．３ｍｍｏｌ）を添加した。−７８℃で１５分後、ＴＨＦ（４０ｍＬ）中のＮ−ブロモスクシンイミド（３．７７ｇ、２１．２ｍｍｏｌ）を添加し、混合物を−７０℃で１時間撹拌した。水で反応を停止し、ＥｔＯＡｃで抽出した。有機層を水で洗浄し、ＭｇＳＯ４で脱水し、濾過し、溶媒を減圧下で濃縮して、ｔｅｒｔ−ブチル４−（２−（１−ブロモ−２−エトキシ−２−オキソエチル）−５−クロロフェノキシ）ブタノエート７ｂ（７．６ｇ）を得た。この化合物を、それ以上精製せずに次の反応工程に使用した。
【０１２４】
中間体７ｃの合成：
室温のｔｅｒｔ−ブチル４−（２−（１−ブロモ−２−エトキシ−２−オキソエチル）−５−クロロフェノキシ）ブタノエート７ｂ（７．６ｇ、１７．４ｍｍｏｌ）のＣＨ３ＣＮ（１４０ｍＬ）溶液に、ジイソプロピルエチルアミン（４．８ｍＬ、２７．９ｍｍｏｌ）、次いで３−メトキシ−５−（メチルスルホニル）アニリン［ＣＡＳ  ６２６０６−０２−４］（４．２ｇ、２０．９ｍｍｏｌ）を添加した。この混合物を６５℃で２４時間撹拌した。混合物をＥｔＯＡｃで希釈し、次いで０．５Ｎ  ＨＣｌ（２回）及び水で洗浄した。有機層をＭｇＳＯ４で脱水し、濾過し、溶媒を減圧下で濃縮した。シリカゲルのフラッシュクロマトグラフィー（１５〜４０μｍ、１２０ｇ、ヘプタン／ＥｔＯＡｃ  ８５／１５〜７０／３０）により精製を行った。純粋な画分をまとめ、減圧下で乾燥するまで濃縮して、ｔｅｒｔ−ブチル４−（５−クロロ−２−（２−エトキシ−１−（（３−メトキシ−５−（メチルスルホニル）フェニル）アミノ）−２−オキソエチル）フェノキシ）ブタノエート７ｃ（７．３ｇ）を得た。
【０１２５】
中間体７ｄの合成：
ＴＨＦ／水（１／１）（１８０ｍＬ）中のｔｅｒｔ−ブチル４−（５−クロロ−２−（２−エトキシ−１−（（３−メトキシ−５−（メチルスルホニル）フェニル）アミノ）−２−オキソエチル）フェノキシ）ブタノエート７ｃ（７．３ｇ、１３．１ｍｍｏｌ）と水酸化リチウム一水和物（１．６５ｇ、３９．４ｍｍｏｌ）とを、室温で３時間撹拌した。混合物を水で希釈した。水性層を３Ｎ  ＨＣｌでゆっくりと酸性化し、ＥｔＯＡｃで抽出した。まとめた有機層をＭｇＳＯ４で脱水し、濾過し、溶媒を減圧下で濃縮して、２−（２−（４−（ｔｅｒｔ−ブトキシ）−４−オキソブトキシ）−４−クロロフェニル）−２−（（３−メトキシ−５−（メチルスルホニル）フェニル）アミノ）酢酸７ｄ（６．９ｇ）を得た。この生成物を、それ以上精製せずに次の反応工程に使用した。
【０１２６】
中間体７ｅの合成：
６−（トリフルオロメチル）インドリン［ＣＡＳ  １８１５１３−２９−１］（３９０ｍｇ、２．０８ｍｍｏｌ）と、２−（２−（４−（ｔｅｒｔ−ブトキシ）−４−オキソブトキシ）−４−クロロフェニル）−２−（（３−メトキシ−５−（メチルスルホニル）フェニル）アミノ）酢酸７ｄ（１．１ｇ、２．０８ｍｍｏｌ）と、ＨＡＴＵ（１．２ｇ、３．１２ｍｍｏｌ）と、ジイソプロピルエチルアミン（１ｍＬ、６．２５ｍｍｏｌ）とのＤＭＦ（４０ｍＬ）中混合物を、室温で２時間撹拌した。混合物を水で希釈した。沈殿物を濾別し、水で洗浄した。沈殿物をＥｔＯＡｃで溶かし、Ｋ２ＣＯ３の１０％水溶液、水で洗浄し、ＭｇＳＯ４で脱水し、濾過し、溶媒を減圧下で濃縮した。シリカゲルのフラッシュクロマトグラフィー（１５〜４０μｍ、８０ｇ、ＣＨ２Ｃｌ２／ＭｅＯＨ  ９９．５／０．５）により精製を行って、ＣＨ３ＣＮから結晶化させた後に、ｔｅｒｔ−ブチル４−（５−クロロ−２−（１−（（３−メトキシ−５−（メチルスルホニル）フェニル）アミノ）−２−オキソ−２−（６−（トリフルオロメチル）インドリン−１−イル）エチル）フェノキシ）ブタノエート７ｅ（７００ｍｇ）を得た。
【０１２７】
化合物７の合成、及びエナンチオマー７Ａ及び７Ｂへのキラル分離：
ｔｅｒｔ−ブチル４−（５−クロロ−２−（１−（（３−メトキシ−５−（メチルスルホニル）フェニル）アミノ）−２−オキソ−２−（６−（トリフルオロメチル）インドリン−１−イル）エチル）フェノキシ）ブタノエート７ｅ（０．６ｇ、０．１４３ｍｍｏｌ）のジオキサン（６ｍｌ）中の４Ｍ  ＨＣｌ溶液を５℃で３時間、及び室温で８時間撹拌した。溶媒を減圧下で除去し、生成物をジイソプロピルエーテルから結晶化して、４−（５−クロロ−２−（１−（（３−メトキシ−５−（メチルスルホニル）フェニル）アミノ）−２−オキソ−２−（６−（トリフルオロメチル）インドリン−１−イル）エチル）フェノキシ）ブタン酸（化合物７、５３０ｍｇ）をラセミ体として得た。エナンチオマーを、分取キラルＳＦＣ（固定相：Ｃｈｉｒａｌｐａｋ（登録商標）ＩＣ  ５μｍ  ２５０×３０ｍｍ、移動相：６５％ＣＯ２、３５％ＭｅＯＨ）により分離した。第１の溶出エナンチオマー（２６４ｍｇ）を、ＣＨ３ＣＮ／ジイソプロピルエーテルから結晶化させて、エナンチオマー７Ａ（２０７ｍｇ）を得た。第２の溶出エナンチオマー（２６９ｍｇ）を、ＣＨ３ＣＮ／ジイソプロピルエーテルから結晶化させて、エナンチオマー７Ｂ（２１２ｍｇ）を得た。
【０１２８】
化合物７：
１Ｈ  ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δｐｐｍ１．９０−２．０９（ｍ，２Ｈ）２．３１−２．４３（ｍ，２Ｈ）３．１２（ｓ，３Ｈ）３．１７−３．２８（ｍ，２Ｈ）３．７４（ｓ，３Ｈ）３．８８−４．０７（ｍ，１Ｈ）４．０７−４．１５（ｍ，２Ｈ）４．３５−４．４５（ｍ，１Ｈ）５．７３（ｂｒｄ，Ｊ＝７．８８Ｈｚ，１Ｈ）６．５５（ｂｒｓ，１Ｈ）６．６４（ｂｒｓ，１Ｈ）６．９０（ｂｒｓ，１Ｈ）７．０４（ｂｒｓ，２Ｈ）７．１６（ｂｒｓ，１Ｈ）７．３１（ｂｒｄ，Ｊ＝７．８８Ｈｚ，１Ｈ）７．３９（ｂｒｄ，Ｊ＝７．２５Ｈｚ，１Ｈ）７．４６（ｂｒｄ，Ｊ＝７．２５Ｈｚ，１Ｈ）８．３９（ｂｒｓ，１Ｈ）１２．１２（ｂｒｓ，１Ｈ）
ＬＣ−ＭＳ（方法ＬＣ−Ａ）：Ｒｔ２．７３ｍｉｎ，ＭＨ＋６４１
融点：２１０℃
【０１２９】
エナンチオマー７Ａ：
１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δｐｐｍ１．９９（ｄｑ，Ｊ＝１３．２６，６．８６Ｈｚ，２Ｈ）２．３０−２．４６（ｍ，２Ｈ）３．１０（ｓ，３Ｈ）３．１５−３．３７（ｍ，２Ｈ）３．７４（ｓ，３Ｈ）３．９５−４．０６（ｍ，１Ｈ）４．０７−４．１７（ｍ，２Ｈ）４．３４−４．４３（ｍ，１Ｈ）５．７２（ｄ，Ｊ＝８．０８Ｈｚ，１Ｈ）６．５４（ｓ，１Ｈ）６．６３（ｓ，１Ｈ）６．８９（ｓ，１Ｈ）６．９９−７．０５（ｍ，２Ｈ）７．１４（ｄ，Ｊ＝１．５２Ｈｚ，１Ｈ）７．３１（ｄ，Ｊ＝８．０８Ｈｚ，１Ｈ）７．３８（ｄ，Ｊ＝７．５８Ｈｚ，１Ｈ）７．４５（ｄ，Ｊ＝８．０８Ｈｚ，１Ｈ）８．３８（ｓ，１Ｈ）１２．０９（ｂｒｓ，１Ｈ）
ＬＣ／ＭＳ（方法ＬＣ−Ａ）：Ｒｔ２．７３ｍｉｎ，ＭＨ＋６４１
［α］Ｄ２０：−４９．８°（ｃ０．２２５，ＤＭＦ）
キラルＳＦＣ（方法ＳＦＣ−Ｆ）：Ｒｔ３．１３ｍｉｎ，ＭＳ反応なし，キラル純度１００％．
融点：１８２℃
【０１３０】
エナンチオマー７Ｂ：
１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δｐｐｍ１．９９（ｄｑ，Ｊ＝１３．２６，６．８６Ｈｚ，２Ｈ）２．３０−２．４６（ｍ，２Ｈ）３．１０（ｓ，３Ｈ）３．１５−３．３７（ｍ，２Ｈ）３．７４（ｓ，３Ｈ）３．９５−４．０６（ｍ，１Ｈ）４．０７−４．１７（ｍ，２Ｈ）４．３４−４．４３（ｍ，１Ｈ）５．７２（ｄ，Ｊ＝８．０８Ｈｚ，１Ｈ）６．５４（ｓ，１Ｈ）６．６３（ｓ，１Ｈ）６．８９（ｓ，１Ｈ）６．９９−７．０５（ｍ，２Ｈ）７．１４（ｄ，Ｊ＝１．５２Ｈｚ，１Ｈ）７．３１（ｄ，Ｊ＝８．０８Ｈｚ，１Ｈ）７．３８（ｄ，Ｊ＝７．５８Ｈｚ，１Ｈ）７．４５（ｄ，Ｊ＝８．０８Ｈｚ，１Ｈ）８．３８（ｓ，１Ｈ）１２．０９（ｂｒｓ，１Ｈ）
ＬＣ／ＭＳ（方法ＬＣ−Ａ）：Ｒｔ２．７３ｍｉｎ，ＭＨ＋６４１
［α］Ｄ２０：＋４９．３°（ｃ０．２３３３，ＤＭＦ）
キラルＳＦＣ（方法ＳＦＣ−Ｆ）：Ｒｔ４．３４ｍｉｎ，ＭＳ反応なし，キラル純度１００％．
融点：１８０℃
【０１３１】
実施例８：４−（５−クロロ−２−（１−（（３−メトキシ−５−（メチルスルホニル）−フェニル）アミノ）−２−（５−メトキシ−６−（トリフルオロメチル）インドリン−１−イル）−２−オキソエチル）フェノキシ）−ブタン酸（化合物８）の合成、及びエナンチオマー８Ａ及び８Ｂへのキラル分離。
【化１３】
2020512374.tif 000017
【０１３２】
中間体８ａの合成：
５−メトキシ−６−（トリフルオロメチル）インドリン２ｇ（６１７ｍｇ、２．８４ｍｍｏｌ）と、２−（２−（４−（ｔｅｒｔ−ブトキシ）−４−オキソブトキシ）−４−クロロフェニル）−２−（（３−メトキシ−５−（メチルスルホニル）フェニル）アミノ）酢酸７ｄ（１．５ｇ、２．８４ｍｍｏｌ）と、ＨＡＴＵ（１．６２ｇ、４．２６ｍｍｏｌ）と、ジイソプロピルエチルアミン（１．４ｍＬ、８．５ｍｍｏｌ）とのＤＭＦ（６０ｍＬ）中混合物を、室温で１２時間撹拌した。混合物を水で希釈した。沈殿物を濾別し、水で洗浄した。沈殿物をＥｔＯＡｃで溶かし、Ｋ２ＣＯ３の１０％水溶液、水で洗浄し、ＭｇＳＯ４で脱水し、濾過し、溶媒を減圧下で濃縮した。シリカゲルのフラッシュクロマトグラフィー（１５〜４０μｍ、１２０ｇ、ヘプタン／ＥｔＯＡｃ  ６０／４０）により精製を行って、石油エーテル／ジイソプロピルエーテルから結晶化させた後に、ｔｅｒｔ−ブチル４−（５−クロロ−２−（１−（（３−メトキシ−５−（メチルスルホニル）フェニル）アミノ）−２−（５−メトキシ−６−（トリフルオロメチル）インドリン−１−イル）−２−オキソエチル）フェノキシ）ブタノエート８ａ（１．３６ｇ）を得た。
【０１３３】
化合物８の合成、及びエナンチオマー８Ａ及び８Ｂへのキラル分離：
ｔｅｒｔ−ブチル４−（５−クロロ−２−（１−（（３−メトキシ−５−（メチルスルホニル）フェニル）アミノ）−２−（５−メトキシ−６−（トリフルオロメチル）インドリン−１−イル）−２−オキソエチル）フェノキシ）ブタノエート８ａ（１．３６ｇ、１．８７ｍｍｏｌ）のジオキサン（１２ｍｌ）中の４Ｍ  ＨＣｌ溶液を５℃で３時間、及び室温で１４時間撹拌した。沈殿物を濾別し、ジオキサン／ジイソプロピルエーテルで洗浄して、４−（５−クロロ−２−（１−（（３−メトキシ−５−（メチルスルホニル）フェニル）アミノ）−２−（５−メトキシ−６−（トリフルオロメチル）インドリン−１−イル）−２−オキソエチル）フェノキシ）ブタン酸（化合物８、１．２ｇ）をラセミ体（２．２％の中間体８ａが混入）として得た。少量の画分（４０ｍｇ）をアキラルＳＦＣ（固定相：２−エチルピリジン  ６μｍ  １５０×２１．２ｍｍ、移動相：６０％ＣＯ２、４０％ｉＰｒＯＨ）によりさらに精製して、ＣＨ３ＣＮ／ジイソプロピルエーテルから結晶化させた後に、２８ｍｇの化合物８を得た。化合物８の残りの量を使用して、エナンチオマーを、分取キラルＳＦＣ（固定相：Ｃｈｉｒａｌｐａｋ（登録商標）ＩＣ  ５μｍ  ２５０×３０ｍｍ、移動相：６０％ＣＯ２、４０％ＭｅＯＨ）により分離した。第１の溶出エナンチオマー（３４０ｍｇ）を石油エーテル／ジイソプロピルエーテル中で凝固させて、エナンチオマー８Ａ（２８５ｍｇ）を得た。第２の溶出エナンチオマー（３３４ｍｇ）を石油エーテル／ジイソプロピルエーテル中で凝固させて、エナンチオマー８Ｂ（２１０ｍｇ）を得た。
【０１３４】
化合物８：
１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δｐｐｍ１．９５−２．０８（ｍ，２Ｈ）２．３２−２．４４（ｍ，２Ｈ）３．０８−３．２７（ｍ，５Ｈ）３．７３（ｓ，３Ｈ）３．８４（ｓ，３Ｈ）３．９２−４．００（ｍ，１Ｈ）４．１２（ｂｒｄ，Ｊ＝３．５４Ｈｚ，２Ｈ）４．３２−４．４０（ｍ，１Ｈ）５．６９（ｂｒｄ，Ｊ＝８．０８Ｈｚ，１Ｈ）６．５４（ｂｒｓ，１Ｈ）６．６２（ｓ，１Ｈ）６．８７（ｓ，１Ｈ）６．９８−７．０４（ｍ，２Ｈ）７．１４（ｓ，１Ｈ）７．２２（ｓ，１Ｈ）７．３１（ｄ，Ｊ＝８．０８Ｈｚ，１Ｈ）８．３４（ｓ，１Ｈ）１２．０７（ｂｒｓ，１Ｈ）
ＬＣ−ＭＳ（方法ＬＣ−Ａ）：Ｒｔ２．７４ｍｉｎ，ＭＨ＋６７１
融点：２３２℃
【０１３５】
エナンチオマー８Ａ：
１Ｈ  ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δｐｐｍ１．９５−２．０７（ｍ，２Ｈ）２．３５−２．４７（ｍ，２Ｈ）３．１１（ｓ，３Ｈ）３．１５−３．３１（ｍ，２Ｈ）３．７４（ｓ，３Ｈ）３．８５（ｓ，３Ｈ）３．９１−４．０２（ｍ，１Ｈ）４．０６−４．１９（ｍ，２Ｈ）４．３７（ｔｄ，Ｊ＝１０．２５，６．３１Ｈｚ，１Ｈ）５．７０（ｄ，Ｊ＝８．２０Ｈｚ，１Ｈ）６．５４（ｓ，１Ｈ）６．６３（ｓ，１Ｈ）６．８８（ｓ，１Ｈ）７．０２（ｄ，Ｊ＝８．２０Ｈｚ，２Ｈ）７．１２−７．１７（ｍ，１Ｈ）７．２３（ｓ，１Ｈ）７．３１（ｄ，Ｊ＝８．２０Ｈｚ，１Ｈ）８．３４（ｓ，１Ｈ）１２．１３（ｂｒｓ，１Ｈ）
ＬＣ／ＭＳ（方法ＬＣ−Ａ）：Ｒｔ２．７５ｍｉｎ，ＭＨ＋６７１
［α］Ｄ２０：−５２．９°（ｃ０．２８，ＤＭＦ）
キラルＳＦＣ（方法ＳＦＣ−Ｇ）：Ｒｔ２．５０ｍｉｎ，ＭＨ＋６７１，キラル純度１００％．
【０１３６】
エナンチオマー８Ｂ：
１Ｈ  ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δｐｐｍ１．９５−２．０７（ｍ，２Ｈ）２．３５−２．４７（ｍ，２Ｈ）３．１１（ｓ，３Ｈ）３．１５−３．３１（ｍ，２Ｈ）３．７４（ｓ，３Ｈ）３．８５（ｓ，３Ｈ）３．９１−４．０２（ｍ，１Ｈ）４．０６−４．１９（ｍ，２Ｈ）４．３７（ｔｄ，Ｊ＝１０．２５，６．３１Ｈｚ，１Ｈ）５．７０（ｄ，Ｊ＝８．２０Ｈｚ，１Ｈ）６．５４（ｓ，１Ｈ）６．６３（ｓ，１Ｈ）６．８８（ｓ，１Ｈ）７．０２（ｄ，Ｊ＝８．２０Ｈｚ，２Ｈ）７．１２−７．１７（ｍ，１Ｈ）７．２３（ｓ，１Ｈ）７．３１（ｄ，Ｊ＝８．２０Ｈｚ，１Ｈ）８．３４（ｓ，１Ｈ）１１．４４（ｂｒｓ，１Ｈ）
ＬＣ／ＭＳ（方法ＬＣ−Ａ）：Ｒｔ２．７３ｍｉｎ，ＭＨ＋６７１
［α］Ｄ２０：＋４６．４°（ｃ０．２８，ＤＭＦ）
キラルＳＦＣ（方法ＳＦＣ−Ｇ）：Ｒｔ３．３１ｍｉｎ，ＭＨ＋６７１，キラル純度１００％．
【０１３７】
実施例９：４−（５−クロロ−２−（１−（（３−メトキシ−５−（メチルスルホニル）フェニル）−アミノ）−２−オキソ−２−（６−（トリフルオロメトキシ）インドリン−１−イル）エチル）フェノキシ）ブタン酸（化合物９）の合成、及びエナンチオマー９Ａ及び９Ｂへのキラル分離。
【化１４】
2020512374.tif 000018
【０１３８】
中間体９ａの合成：
６−（トリフルオロメトキシ）インドリン［ＣＡＳ  ９５９２３５−９５−１］（５７７ｍｇ、２．８４ｍｍｏｌ）と、２−（２−（４−（ｔｅｒｔ−ブトキシ）−４−オキソブトキシ）−４−クロロフェニル）−２−（（３−メトキシ−５−（メチルスルホニル）フェニル）アミノ）酢酸７ｄ（１．５ｇ、２．８４ｍｍｏｌ）と、ＨＡＴＵ（１．６２ｇ、４．２６ｍｍｏｌ）と、ジイソプロピルエチルアミン（１．４ｍＬ、８．５ｍｍｏｌ）とのＤＭＦ（６０ｍＬ）中混合物を、室温で１２時間撹拌した。混合物を水で希釈した。沈殿物を濾別し、水で洗浄した。沈殿物をＥｔＯＡｃで溶かし、Ｋ２ＣＯ３の１０％水溶液、水で洗浄し、ＭｇＳＯ４で脱水し、濾過し、溶媒を減圧下で濃縮した。シリカゲルのフラッシュクロマトグラフィー（１５〜４０μｍ、１２０ｇ、ヘプタン／ＥｔＯＡｃ  ６０／４０）により精製を行って、石油エーテル／ジイソプロピルエーテルから結晶化させた後に、ｔｅｒｔ−ブチル４−（５−クロロ−２−（１−（（３−メトキシ−５−（メチルスルホニル）フェニル）アミノ）−２−オキソ−２−（６−（トリフルオロメトキシ）インドリン−１−イル）エチル）フェノキシ）ブタノエート９ａ（１．０２ｇ）を得た。
【０１３９】
化合物９の合成、及びエナンチオマー９Ａ及び９Ｂへのキラル分離：
ｔｅｒｔ−ブチル４−（５−クロロ−２−（１−（（３−メトキシ−５−（メチルスルホニル）フェニル）アミノ）−２−オキソ−２−（６−（トリフルオロメトキシ）インドリン−１−イル）エチル）フェノキシ）ブタノエート９ａ（１．０２ｇ、１．４３ｍｍｏｌ）のジオキサン（１０ｍｌ）中の４Ｍ  ＨＣｌ溶液を５℃で３時間、及び室温で１２時間撹拌した。沈殿物を濾別し、ジオキサン／ジイソプロピルエーテルで洗浄して、４−（５−クロロ−２−（１−（（３−メトキシ−５−（メチルスルホニル）フェニル）アミノ）−２−オキソ−２−（６−（トリフルオロメトキシ）インドリン−１−イル）エチル）フェノキシ）ブタン酸（化合物９、９３０ｍｇ、０．７８当量のＨＣｌ、０．０８当量のＨ２Ｏ、０．１６２当量のジオキサン（滴定により決定））をラセミ体として得た。エナンチオマーを、分取キラルＳＦＣ（固定相：Ｃｈｉｒａｌｐａｋ（登録商標）ＩＣ  ５μｍ  ２５０×３０ｍｍ、移動相：７０％ＣＯ２、３０％ＥｔＯＨ／ｉＰｒＯＨ（５０／５０））により分離した。第１の溶出エナンチオマーを１Ｎ  ＨＣｌとＥｔＯＡｃとの混合物中で撹拌した。有機層を分離し、ＭｇＳＯ４で脱水し、濾過し、溶媒を減圧下で濃縮した。化合物をＣＨ３ＣＮ／ジイソプロピルエーテルから結晶化させて、エナンチオマー９Ａ（１４５ｍｇ）を得た。第２の溶出エナンチオマーを１Ｎ  ＨＣｌとＥｔＯＡｃとの混合物中で撹拌した。有機層を分離し、ＭｇＳＯ４で脱水し、濾過し、溶媒を減圧下で濃縮した。化合物をＣＨ３ＣＮ／ジイソプロピルエーテルから結晶化させて、エナンチオマー９Ｂ（１５６ｍｇ）を得た。
【０１４０】
化合物９：
１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δｐｐｍ１．９９（ｄｑ，Ｊ＝１３．７１，７．０５Ｈｚ，２Ｈ）２．３２−２．４６（ｍ，２Ｈ）３．０８−３．２０（ｍ，５Ｈ）３．７４（ｓ，３Ｈ）４．００（ｔｄ，Ｊ＝１０．２３，７．３３Ｈｚ，１Ｈ）４．０７−４．１５（ｍ，２Ｈ）４．３８（ｔｄ，Ｊ＝１０．２３，６．８２Ｈｚ，１Ｈ）５．７０（ｓ，１Ｈ）６．５４（ｓ，１Ｈ）６．６３（ｓ，１Ｈ）６．８８（ｓ，１Ｈ）６．９５−７．０９（ｍ，２Ｈ）７．１４（ｄ，Ｊ＝１．５２Ｈｚ，１Ｈ）７．３０（ｂｒｄ，Ｊ＝８．０８Ｈｚ，１Ｈ）７．３３（ｂｒｄ，Ｊ＝８．５９Ｈｚ，１Ｈ）８．０３（ｓ，１Ｈ）
ＬＣ−ＭＳ（方法ＬＣ−Ａ）：Ｒｔ２．８７ｍｉｎ，ＭＨ＋６５７
融点：１７３℃
【０１４１】
エナンチオマー９Ａ：
１Ｈ  ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δｐｐｍ１．９１−２．０６（ｍ，２Ｈ）２．３２−２．４４（ｍ，２Ｈ）３．０９−３．２３（ｍ，５Ｈ）３．７４（ｓ，３Ｈ）３．９８−４．１６（ｍ，３Ｈ）４．３９（ｔｄ，Ｊ＝１０．１７，６．７８Ｈｚ，１Ｈ）５．７１（ｄ，Ｊ＝８．２０Ｈｚ，１Ｈ）６．５５（ｓ，１Ｈ）６．６３（ｓ，１Ｈ）６．８９（ｓ，１Ｈ）７．００−７．０８（ｍ，２Ｈ）７．１５（ｓ，１Ｈ）７．３０（ｄ，Ｊ＝８．２０Ｈｚ，１Ｈ）７．３４（ｄ，Ｊ＝８．２０Ｈｚ，１Ｈ）８．０４（ｓ，１Ｈ）１２．１１（ｂｒｓ，１Ｈ）
ＬＣ／ＭＳ（方法ＬＣ−Ａ）：Ｒｔ２．８６ｍｉｎ，ＭＨ＋６５７
［α］Ｄ２０：−５６．５°（ｃ０．２５５，ＤＭＦ）
キラルＳＦＣ（方法ＳＦＣ−Ｈ）：Ｒｔ４．８５ｍｉｎ，ＭＨ＋６５７，キラル純度１００％．
融点：１５４℃
【０１４２】
エナンチオマー９Ｂ：
１Ｈ  ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δｐｐｍ１．９１−２．０６（ｍ，２Ｈ）２．３２−２．４４（ｍ，２Ｈ）３．０９−３．２３（ｍ，５Ｈ）３．７４（ｓ，３Ｈ）３．９８−４．１６（ｍ，３Ｈ）４．３９（ｔｄ，Ｊ＝１０．１７，６．７８Ｈｚ，１Ｈ）５．７１（ｄ，Ｊ＝８．２０Ｈｚ，１Ｈ）６．５５（ｓ，１Ｈ）６．６３（ｓ，１Ｈ）６．８９（ｓ，１Ｈ）７．００−７．０８（ｍ，２Ｈ）７．１５（ｓ，１Ｈ）７．３０（ｄ，Ｊ＝８．２０Ｈｚ，１Ｈ）７．３４（ｄ，Ｊ＝８．２０Ｈｚ，１Ｈ）８．０４（ｓ，１Ｈ）１２．１１（ｂｒｓ，１Ｈ）
ＬＣ／ＭＳ（方法ＬＣ−Ａ）：Ｒｔ２．８６ｍｉｎ，ＭＨ＋６５７
［α］Ｄ２０：＋５５．３°（ｃ０．３０２，ＤＭＦ）
キラルＳＦＣ（方法ＳＦＣ−Ｈ）：Ｒｔ６．３４ｍｉｎ，ＭＨ＋６５７，キラル純度１００％．
融点：１５５℃
【０１４３】
【表４】
2020512374.tif 000019
【０１４４】
【表５】
2020512374.tif 000020
【０１４５】
【表６】
2020512374.tif 000021
【０１４６】
【表７】
2020512374.tif 000022
【０１４７】
本発明の化合物の抗ウイルス活性
ＤＥＮＶ−２抗ウイルスアッセイ
本発明のすべての化合物について、高感度緑色蛍光タンパク質（ｅＧＰＦ）で標識したＤＥＮＶ−２  １６６８１株に対する抗ウイルス活性を試験した。培養培地は、２％の熱失活ウシ胎仔血清、０．０４％のゲンタマイシン（５０ｍｇ／ｍＬ）及び２ｍＭのＬ−グルタミンを添加した最小必須培地からなる。ＥＣＡＣＣから得たベロ細胞を培養培地に懸濁し、２５μＬを、既に抗ウイルス化合物を含有している３８４ウェルプレートに添加した（２５００細胞／ウェル）。通常、これらのプレートは、９回の希釈工程で５倍に段階希釈した、１００％ＤＭＳＯ中の最終濃度の２００倍の試験化合物を含有する（２００ｎＬ）。さらに、各化合物濃度について４回試験する（最終濃度範囲：最も活性な化合物について２５μＭ〜０．００００６４μＭ又は２．５μＭ〜０．０００００６４μＭ）。最終的に、各プレートは、ウイルス対照（細胞及びウイルスを含有、化合物を不含）、細胞対照（細胞を含有、ウイルス及び化合物を不含）及び培地対照（培地を含有、細胞、ウイルス及び化合物を不含）として割り当てられたウェルを含有する。培地対照として割り当てられたウェルには、ベロ細胞ではなく培養培地２５μＬを添加した。細胞をプレートに添加してから、プレートを室温で３０分間インキュベートして、細胞をウェル内に均一に分布させた。次に、プレートを、十分に加湿したインキュベータ（３７℃、５％ＣＯ２）内で翌日までインキュベートした。次いで、ｅＧＦＰで標識したＤＥＮＶ−２株１６６８１を感染多重度（ＭＯＩ）０．５で添加した。したがって、１５μＬのウイルス懸濁液を、試験化合物を含有するすべてのウェルと、ウイルス対照として割り当てられたウェルとに添加した。並行して、１５μＬの培養培地を、培地対照及び細胞対照に添加した。次に、プレートを、十分に加湿したインキュベータ（３７℃、５％ＣＯ２）内で３日間インキュベートした。読み出し日に、自動蛍光顕微鏡を４８８ｎｍ（青レーザー）で使用して、ｅＧＦＰ蛍光を測定した。社内ＬＩＭＳシステムを使用して、各化合物の阻害用量反応曲線を計算し、半数効果濃度（ＥＣ５０）を決定した。したがって、試験濃度毎のパーセント阻害（Ｉ）を、次式を使用して計算する。Ｉ＝１００×（ＳＴ−ＳＣＣ）／（ＳＶＣ−ＳＣＣ）；ＳＴ、ＳＣＣ及びＳＶＣはそれぞれ、試験化合物、細胞対照及びウイルス対照の各ウェル中のｅＧＦＰシグナル量である。ＥＣ５０はウイルスの複製が５０％阻害される化合物の濃度を表し、これはｅＧＦＰ蛍光強度がウイルス対照と比較して５０％低下したことによって測定される。ＥＣ５０は、線形補間を使用して計算される（表１）。
【０１４８】
並行して、化合物の毒性を同じ各プレートで評価した。ｅＧＦＰシグナルの読み出しが終わった時点で、生存細胞染色剤ＡＴＰｌｉｔｅ  ４０μＬを、３８４ウェルプレートの全ウェルに添加した。ＡＴＰは代謝活性のあるすべての細胞に存在し、その濃度は細胞がネクローシス又はアポトーシスを起こしたときにきわめて急速に減少する。ＡＴＰＬｉｔｅアッセイシステムは、添加されたルシフェラーゼ及びＤ−ルシフェリンとＡＴＰの反応に起因する光の発生に基づいている。プレートを室温で１０分間インキュベートした。次に、プレートをＶｉｅｗＬｕｘで測定した。半数細胞毒性濃度（ＣＣ５０）も決定した。これは、蛍光シグナルを細胞対照ウェルと比較して５０％低下させるのに必要な濃度と定義される。最後に、化合物の選択指数（ＳＩ）を次のように計算して求めた：ＳＩ＝ＣＣ５０／ＥＣ５０。
【０１４９】
【表８】
2020512374.tif 000023
【０１５０】
四価逆転写酵素定量ＰＣＲ（ＲＴ−ｑＰＣＲ）アッセイ
本発明の化合物について、ＤＥＮＶ−１株ＴＣ９７４♯６６６（ＮＣＰＶ）、ＤＥＮＶ−２株１６６８１、ＤＥＮＶ−３株Ｈ８７（ＮＣＰＶ）及びＤＥＮＶ−４株Ｈ２４１（ＮＣＰＶ）に対する抗ウイルス活性を、ＲＴ−ｑＰＣＲアッセイで試験した。したがって、試験化合物の存在下又は非存在下で、ベロ細胞に、ＤＥＮＶ−１、ＤＥＮＶ−２、ＤＥＮＶ−３又はＤＥＮＶ−４を感染させた。感染３日後に、細胞を溶解し、細胞溶解物を、ウイルスの標的（ＤＥＮＶの３’ＵＴＲ；表２）及び細胞の参照遺伝子（β−アクチン、表２）の両方のｃＤＮＡの調製に使用した。その後、デュプレックスリアルタイムＰＣＲを、Ｌｉｇｈｔｃｙｃｌｅｒ４８０インスツルメントで行った。生成されたＣｐ値は、これらの標的のＲＮＡ発現量に反比例する。試験化合物によりＤＥＮＶ複製が阻害されると、３’ＵＴＲ遺伝子のＣｐ値がシフトする。他方、試験化合物が細胞に毒性であるなら、β−アクチン発現に同様の影響が観察されるであろう。比較ΔΔＣｐ法を使用して、ＥＣ５０を計算するが、これは、細胞のハウスキーピング遺伝子（β−アクチン）で正規化した標的遺伝子（３’ＵＴＲ）の相対的遺伝子発現に基づいている。さらに、ＣＣ５０値を、ハウスキーピング遺伝子β−アクチンについて取得したＣｐ値に基づいて決定する。
【０１５１】
【表９】
2020512374.tif 000024
【０１５２】
培養培地は、２％の熱失活ウシ胎仔血清、０．０４％のゲンタマイシン（５０ｍｇ／ｍＬ）及び２ｍＭのＬ−グルタミンを添加した最小必須培地からなるものとした。ＥＣＡＣＣから得たベロ細胞を培養培地に懸濁し、７５μＬ／ウェルを、既に抗ウイルス化合物を含有している９６ウェルプレートに添加した（１００００細胞／ウェル）。通常、これらのプレートは、９回の希釈工程で５倍に段階希釈した、１００％ＤＭＳＯ中の最終濃度の２００倍の試験化合物を含有する（５００ｎＬ；最終濃度範囲：最も活性な化合物について２５μＭ〜０．００００６４μＭ又は２．５μＭ〜０．０００００６４μＭ）。さらに、各プレートは、ウイルス対照（細胞及びウイルスを含有、化合物を不含）及び細胞対照（細胞を含有、ウイルス及び化合物を不含）として割り当てられたウェルを含有する。細胞をプレートに添加してから、プレートを、十分に加湿したインキュベータ（３７℃、５％ＣＯ２）内で翌日までインキュベートした。アッセイで約２２〜２４のＣｐ値を得るために、デングウイルス血清型の１型、２型、３型及び４型を希釈した。したがって、２５μＬのウイルス懸濁液を、試験化合物を含有するすべてのウェルと、ウイルス対照として割り当てられたウェルとに添加した。並行して、２５μＬの培養培地を細胞対照に添加した。次に、プレートを、十分に加湿したインキュベータ（３７℃、５％ＣＯ２）内で３日間インキュベートした。３日後に、上清をウェルから除去し、細胞を氷冷ＰＢＳ（約１００μＬ）で２回洗浄した。９６ウェルプレート内の細胞ペレットを−８０℃で少なくとも１日保管した。次に、Ｃｅｌｌｓ−ｔｏ−ＣＴ（商標）溶解キットを使用して、製造会社のガイドライン（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）に従ってＲＮＡを抽出した。細胞溶解物は−８０℃で保管することも、逆転写工程にすぐに使用することもできる。
【０１５３】
逆転写工程の準備として、ミックスＡ（表３Ａ）を調製し、９６ウェルプレートに７．５７μＬ／ウェルで分注した。細胞溶解物５μＬを添加した後、７５℃で５分間の変性工程を行った（表３Ｂ）。その後、ミックスＢを７．４３μＬ添加し（表３Ｃ）、逆転写工程を開始して（表３Ｄ）、ｃＤＮＡを生成した。
【０１５４】
最後に、ＲＴ−ｑＰＣＲミックスであるミックスＣ（表４Ａ）を調製し、９６ウェルＬｉｇｈｔＣｙｃｌｅｒ  ｑＰＣＲプレートに２２．０２μＬ／ウェルで分注し、それに３μＬのｃＤＮＡを添加し、表４Ｂの条件に従って、ＬｉｇｈｔＣｙｃｌｅｒ  ４８０でｑＰＣＲを行った。
【０１５５】
ＬｉｇｈｔＣｙｃｌｅｒソフトウェア及び社内ＬＩＭＳシステムを使用して、各化合物の用量反応曲線を計算し、半数効果濃度（ＥＣ５０）及び半数細胞毒性濃度（ＣＣ５０）を決定した（表５〜８）。
【０１５６】
【表１０】
2020512374.tif 000025
【０１５７】
【表１１】
2020512374.tif 000026
【０１５８】
【表１２】
2020512374.tif 000027
【０１５９】
【表１３】
2020512374.tif 000028
【０１６０】
【表１４】
2020512374.tif 000029
【０１６１】
【表１５】
2020512374.tif 000030
【配列表】
2020512374000001.app
【国際調査報告】
2020512374.tif 000034
2020512374.tif 000035