(57)【要約】  バチルス・コアグランスの菌株由来の部分精製細胞外代謝産物調製物を含むヘアケア組成物を開示する。具体的には、発毛、５α−レダクターゼの阻害、および毛包真皮乳頭細胞の増殖を増加させるための、およびアンドロゲン性脱毛症の管理における、バチルス・コアグランスの菌株由来の細胞外代謝産物調製物を含む組成物の使用を開示する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
薬学的に／機能性化粧品として許容される賦形剤、補助剤、基剤、希釈剤、担体、コンディショニング剤および保存剤と製剤化されたバチルス・コアグランス菌株由来の細胞外代謝産物調製物を含む、ヘアケア組成物。
【請求項２】
ヘアケア成分を含む製剤と組み合わせられる、および／またはこれらに組み込まれることが可能であり、クリーム、ゲル、ローション、シャンプー、美容液、オイル、懸濁液、エマルジョン、およびコンパクトの形態で局所投与されることが可能である、請求項１に記載の組成物。
【請求項３】
バチルス・コアグランスの前記菌株が、バチルス・コアグランスＭＴＣＣ５８５６、バチルス・コアグランスＡＴＣＣ３１２８４およびバチルス・コアグランスＡＴＣＣ７０５０からなる群から選択される、請求項１に記載の組成物。
【請求項４】
哺乳動物における発毛を増加させる方法であって、有効濃度のバチルス・コアグランスの菌株由来の細胞外代謝産物調製物を前記哺乳動物に投与して、発毛の増加をもたらすステップを含む、方法。
【請求項５】
前記発毛の増加が、ａ）真皮乳頭におけるＴＧＦ−β２およびＶＥＧＦの発現の増加、およびｂ）毛包真皮乳頭細胞の増殖の増加によってもたらされる、請求項４に記載の方法。
【請求項６】
前記細胞外代謝産物調製物の有効濃度が、前記組成物全体の０．０１ｖ／ｖ％〜２．０ｖ／ｖ％である、請求項４に記載の方法。
【請求項７】
バチルス・コアグランスの前記菌株が、バチルス・コアグランスＭＴＣＣ５８５６、バチルス・コアグランスＡＴＣＣ３１２８４およびバチルス・コアグランスＡＴＣＣ７０５０からなる群から選択される、請求項４に記載の方法。
【請求項８】
５α−レダクターゼ活性を阻害する方法であって、毛包真皮乳頭細胞を、有効濃度のバチルス・コアグランスの菌株由来の細胞外代謝産物調製物と接触させて、前記毛包真皮乳頭細胞において５α−レダクターゼ阻害をもたらすステップを含む、方法。
【請求項９】
前記細胞外代謝産物調製物の有効濃度が、前記組成物全体の０．０１ｖ／ｖ％〜２．０ｖ／ｖ％である、請求項８に記載の方法。
【請求項１０】
バチルス・コアグランスの前記菌株が、バチルス・コアグランスＭＴＣＣ５８５６、バチルス・コアグランスＡＴＣＣ３１２８４およびバチルス・コアグランスＡＴＣＣ７０５０からなる群から選択される、請求項８に記載の方法。
【請求項１１】
哺乳動物におけるアンドロゲン性脱毛症の治療的管理方法であって、バチルス・コアグランス菌株由来の細胞外代謝産物調製物を含む有効濃度の組成物を、そのような療法を必要とする哺乳動物に投与するステップを含む、方法。
【請求項１２】
前記組成物が、薬学的に／機能性化粧品として許容される賦形剤、補助剤、基剤、希釈剤、担体、コンディショニング剤および保存剤と製剤化され、および／またはヘアケア成分を含む製剤に組み込まれ、クリーム、ゲル、ローション、シャンプー、美容液、オイル、懸濁液、エマルジョン、およびコンパクトの形態で局所投与される、請求項１１に記載の方法。
【請求項１３】
前記組成物中の前記細胞外代謝産物調製物の前記有効濃度が、前記組成物全体の０．０１ｖ／ｖ％〜２．０ｖ／ｖ％である、請求項１１に記載の方法。
【請求項１４】
バチルス・コアグランスの前記菌株が、バチルス・コアグランスＭＴＣＣ５８５６、バチルス・コアグランスＡＴＣＣ３１２８４およびバチルス・コアグランスＡＴＣＣ７０５０からなる群から選択される、請求項１１に記載の方法。
【請求項１５】
前記哺乳動物が好ましくはヒトである、請求項１１に記載の方法。
【請求項１６】
哺乳動物における脂漏性皮膚炎の治療的管理方法であって、有効濃度のバチルス・コアグランス菌株由来の細胞外代謝産物調製物を含む組成物を、標準的なフケ防止成分とともに、そのような療法を必要とする哺乳動物に投与するステップを含む、方法。
【請求項１７】
前記組成物が、薬学的に／機能性化粧品として許容される賦形剤、補助剤、基剤、希釈剤、担体、コンディショニング剤および保存剤と製剤化され、クリーム、ゲル、ローション、シャンプー、美容液、オイル、懸濁液、エマルジョン、およびコンパクトの形態で局所投与される、請求項１６に記載の方法。
【請求項１８】
前記フケ防止成分が、これらに限定されるものではないが、コリウス油、ティーツリー油、チョウジ油、バジル油およびバジル抽出物、ローズマリー油、ニーム抽出物、シダーウッド油、硫化セレン、ジンクピリチオン、サリチル酸、ケトコナゾール、クリンバゾール、並びにシクロピロックスオラミンからなる群から選択される、請求項１６に記載の方法。
【請求項１９】
前記組成物中の前記細胞外代謝産物調製物の前記有効濃度が、前記組成物全体の０．０１ｖ／ｖ％〜２．０％ｖ／ｖである、請求項１６に記載の方法。
【請求項２０】
バチルス・コアグランスの前記菌株が、バチルス・コアグランスＭＴＣＣ５８５６、バチルス・コアグランスＡＴＣＣ３１２８４およびバチルス・コアグランスＡＴＣＣ７０５０からなる群から選択される、請求項１６に記載の方法。
【請求項２１】
前記哺乳動物が好ましくはヒトである、請求項１６に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願の相互参照
これは、２０１７年６月６日に出願された米国仮特許出願第６１５１６０７７号から優先権を主張するＰＣＴ出願である。
本発明は、一般にヘアケア組成物に関する。より詳細には、本発明は、バチルス・コアグランス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｃｏａｇｕｌａｎｓ）由来の部分精製細胞外代謝産物調製物を含むヘアケア組成物に関する。
【背景技術】
【０００２】
毛髪は、最も急速に成長する人体の組織の１つである。毛包は、成長期（急速な成長、活性期）、退行期（アポトーシス駆動退行、生理学的退縮期）、およびテロゲン（休止期）の３つの段階からなる反復再生サイクルを経る。成長期の短縮により、毛包の矮小化および脱毛がもたらされる可能性がある。したがって、成長期を延長することは、脱毛の予防に効果的な治療である。
【０００３】
毛包乳頭細胞の成長および増殖は、毛包の数を増加させ、それによって発毛を促進するために重要である。真皮乳頭細胞は未分化表皮の下に蓄積し、次いで表皮は刺激されて毛「杭」を形成する。毛杭と真皮乳頭細胞との相互作用により、成熟した毛包への分化が促進される。成長期の間、真皮乳頭細胞は、インスリン様成長因子（ＩＧＦ−１）、毛幹の増殖および伸長を刺激する線維芽細胞成長因子（ＦＧＦ−７）のようないくつかの成長因子を分泌する。したがって、十分な発毛を確保するには、真皮乳頭が十分な数だけ存在している必要がある。アンドロゲン性脱毛症、脂漏性皮膚炎（フケ）などのある特定の臨床状態は、真皮乳頭の数を減少させ、脱毛を増加させる。ＴＧＦ−β２は、ヒト真皮乳頭細胞において特異的に発現する。ＴＧＦ−βは、成人の発毛サイクルにおいて早発性の毛包退縮を誘発することにより、固有の多方向効果を発揮することが示されており、毛包形成（ｈａｉｒ  ｆｏｌｌｉｃｕｌｏｇｅｎｅｓｉｓ）に必要である。ＴＧＦ−βの役割は、以下の参考文献に詳しく記載されている：
2020522548.tif 000002
【０００４】
血管内皮成長因子（ＶＥＧＦ）は、血管新生および血管透過性に不可欠であり、成長期成長段階（ａｎａｇｅｎ  ｇｒｏｗｔｈ  ｐｈａｓｅ）の間、毛包の周りに適切な脈管構造を維持することに関与している。ＶＥＧＦ  ｍＲＮＡは、成長期には真皮乳頭細胞（ＤＰＣ）において強く発現するが、退行期および休止期の間には、ＶＥＧＦ  ｍＲＮＡは、あまり強く発現しない（Kozlowska et al., Expression of vascular endothelial growth factor (VEGF) in various compartments of the human hair follicle  Arch Dermatol Res (1998) 290 :661-668; Yano et al., Control of hair growth and follicle size by VEGF-mediated angiogenesis J Clin Invest. 2001;107(4):409-417）。ＶＥＧＦとＴＧＦ−β２は両方とも、真皮乳頭細胞の増殖を促進し、それにより発毛を増加させる。
【０００５】
真皮乳頭は、テストステロンをジヒドロテストステロン（ＤＨＴ）に変換するＮＡＤＰＨ依存酵素である５α−レダクターゼ（３−オキソ−５α−ステロイド−デルタ４−デヒドロゲナーゼ）と呼ばれる酵素も生成する。５α−レダクターゼの過剰生成により、毛包でのテストステロンのＤＨＴへの変換が増加し、それにより、自然な毛周期を混乱させ、脱毛およびアンドロゲン性脱毛症の発症をもたらす。
キノコ、緑茶などの天然５α−レダクターゼ阻害剤は、ＤＨＴの生成を遅らせ、脱毛を防ぐ。プロバイオティクスが脱毛に関与している皮膚のマイクロバイオームを変えることができるという事実により、ヘアケアにおけるプロバイオティクスの使用が現在注目を集めている。米国特許第７３７４７５０号は、ヘアケア用のプロバイオティクス生物を含む組成物を開示している。プロバイオティクスの発毛および毛包真皮乳頭の増加に対する有益な効果は、Levkovich et al. (2013); Probiotic Bacteria Induce a ‘Glow of Health”, PLoS One. 2013; 8(1): e53867によって十分に記載されている。プロバイオティクスおよびそれらの細胞外産物は、優れた抗真菌活性を示し、個別に、またはフケ防止組成物における補助剤として貴重な添加物となっていることも報告されている。
科学技術分野では、プロバイオティクスまたはその製品の生物学的効果が菌株特異的であり、属、種、および菌株間で一般化することができないことは周知である（Probiotics:In Depth/NCCIH、アメリカ合衆国保健福祉省、アメリカ国立衛生研究所）。したがって、５α−レダクターゼを阻害することにより、真皮乳頭細胞の成長を促進し、脱毛を防ぐ優れたプロバイオティクス菌株およびその細胞外産物を見出す必要がある。また、プロバイオティクスから得られた細胞外産物が発毛に及ぼす有益な効果については、まだ検証されていない。本発明は、真皮乳頭増殖に対するバチルス・コアグランスの部分精製細胞外代謝産物調製物の有益な効果を開示することにより、上記の問題を解決する。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
本発明の主な目的は、発毛を増加させるための、バチルス・コアグランスの部分精製細胞外代謝産物調製物を含む組成物を開示することである。
本発明の別の目的は、５α−レダクターゼの活性を阻害するための、バチルス・コアグランスの部分精製細胞外代謝産物調製物を含む組成物を開示することである。
本発明のさらに別の目的は、アンドロゲン性脱毛症の治療的管理に使用するための、バチルス・コアグランスの部分精製細胞外代謝産物調製物を含む組成物を開示することである。
【０００７】
生物材料の寄託
本願において言及されている受託番号ＭＴＣＣ５８５６の生物材料バチルス・コアグランスの寄託は、２０１３年９月１９日にＭｉｃｒｏｂｉａｌ  Ｔｙｐｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ  ＆  Ｇｅｎｅ  Ｂａｎｋ  （ＭＴＣＣ）、ＣＳＩＲ−Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ  ｏｆ  Ｍｉｃｒｏｂｉａｌ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ、Ｓｅｃｔｏｒ  ３９−Ａ、  Ｃｈａｎｄｉｇａｒｈ  −  １６００３６、Ｉｎｄｉａにおいて行われた。
【課題を解決するための手段】
【０００８】
本発明は、バチルス・コアグランスの菌株から単離された部分精製細胞外代謝産物調製物を含むヘアケア組成物を開示する。より詳細には、本発明は、増殖毛包真皮乳頭細胞の増加および５α−レダクターゼの阻害により発毛を促進するための、バチルス・コアグランスの菌株から単離された細胞外代謝産物を含む組成物の使用を開示する。
【図面の簡単な説明】
【０００９】
【図１ａ】対照と比較した、バチルス・コアグランスＭＴＣＣ５８５６由来の部分精製細胞外代謝産物調製物による真皮乳頭細胞増殖の増加百分率のグラフ図である。
【図１ｂ】バチルス・コアグランスＭＴＣＣ５８５６由来の部分精製細胞外代謝産物調製物の存在下での、真皮乳頭細胞の増殖の用量依存的増加を示すグラフ図である。
【図１ｃ】バチルス・コアグランスＭＴＣＣ５８５６由来の部分精製細胞外代謝産物調製物の存在下での、真皮乳頭細胞の増殖の用量依存的増加を示すグラフ図である。
【図２】バチルス・コアグランスＭＴＣＣ５８５６由来の部分精製細胞外代謝産物調製物の存在下での、真皮乳頭細胞におけるＴＧＦ−β２の発現の増加百分率のグラフ図である。
【図３】バチルス・コアグランスＭＴＣＣ５８５６由来の部分精製細胞外代謝産物調製物の存在下での、真皮乳頭細胞におけるＶＥＧＦの発現の増加百分率のグラフ図である。
【図４ａ】バチルス・コアグランスＭＴＣＣ５８５６由来の部分精製細胞外代謝産物調製物による５α−レダクターゼの阻害百分率を示すグラフ図である。
【図４ｂ】バチルス・コアグランスＭＴＣＣ５８５６由来の部分精製細胞外代謝産物調製物による５α−レダクターゼ活性の阻害によるジヒドロテストステロン濃度の減少を示すグラフ図である。
【発明を実施するための形態】
【００１０】
最も好ましい実施形態において、本発明は、薬学的に／機能性化粧品として許容される賦形剤、補助剤、基剤、希釈剤、担体、コンディショニング剤および保存剤と製剤化されたバチルス・コアグランス菌株由来の部分精製細胞外代謝産物調製物を含むヘアケア組成物を開示する。関連する実施形態では、バチルス・コアグランスの菌株由来の部分精製細胞外代謝産物調製物を含む組成物は、ヘアケア成分を含む製剤と組み合わせられる、および／またはこれらに組み込まれることが可能である。別の関連する実施形態では、ヘアケア組成物は、クリーム、ゲル、ローション、シャンプー、美容液、オイル、懸濁液、エマルジョン、およびコンパクトの形態で局所投与される。別の実施形態では、バチルス・コアグランスの菌株は、バチルス・コアグランスＭＴＣＣ５８５６、バチルス・コアグランスＡＴＣＣ３１２８４およびバチルス・コアグランスＡＴＣＣ７０５０からなる群から選択される。
【００１１】
別の関連する実施形態では、本発明は、哺乳動物における発毛を増加させる方法であって、有効濃度のバチルス・コアグランスの菌株由来の部分精製細胞外代謝産物調製物を前記哺乳動物に投与して、発毛の増加をもたらすステップを含む、方法に関する。関連する実施形態では、発毛の増加は、ａ）分泌因子の発現の増加、およびｂ）毛包真皮乳頭細胞の増殖の増加によってもたらされる。別の関連する実施形態では、分泌因子は、血管内皮成長因子（ＶＥＧＦ）およびトランスフォーミング成長因子−β（ＴＧＦ−β）からなる群から選択される。別の関連する実施形態では、部分精製細胞外代謝産物調製物の有効濃度は、組成物全体の０．０１ｖ／ｖ％〜２．０ｖ／ｖ％である。別の実施形態では、バチルス・コアグランスの菌株は、バチルス・コアグランスＭＴＣＣ５８５６、バチルス・コアグランスＡＴＣＣ３１２８４およびバチルス・コアグランスＡＴＣＣ７０５０からなる群から選択される。
【００１２】
別の好ましい実施形態では、本発明は、５α−レダクターゼ活性を阻害する方法であって、前記毛包真皮乳頭細胞を、有効濃度のバチルス・コアグランスの菌株由来の部分精製細胞外代謝産物調製物と接触させて、毛包真皮乳頭細胞において５α−レダクターゼ阻害をもたらすステップを含む、方法に関する。関連する実施形態では、組成物中の部分精製細胞外代謝産物調製物の有効濃度は、組成物全体の０．０１ｖ／ｖ％〜２．０ｖ／ｖ％である。別の実施形態では、バチルス・コアグランスの菌株は、バチルス・コアグランスＭＴＣＣ５８５６、バチルス・コアグランスＡＴＣＣ３１２８４およびバチルス・コアグランスＡＴＣＣ７０５０からなる群から選択される。
別の好ましい実施形態では、本発明は、哺乳動物におけるアンドロゲン性脱毛症の治療的管理方法であって、有効濃度のバチルス・コアグランス菌株由来の部分精製細胞外代謝産物調製物を含む組成物を、そのような療法を必要とする哺乳動物に投与するステップを含む、方法を開示する。関連する実施形態では、組成物は、薬学的に／機能性化粧品として許容される賦形剤、補助剤、基剤、希釈剤、担体、コンディショニング剤および保存剤と製剤化され、および／またはヘアケア成分を含む製剤に組み込まれ、クリーム、ゲル、ローション、シャンプー、美容液、オイル、懸濁液、エマルジョン、およびコンパクトの形態で局所投与される。関連する実施形態では、組成物中の部分精製細胞外代謝産物調製物の有効濃度は、組成物全体の０．０１ｖ／ｖ％〜２．０ｖ／ｖ％である。別の実施形態では、バチルス・コアグランスの菌株は、バチルス・コアグランスＭＴＣＣ５８５６、バチルス・コアグランスＡＴＣＣ３１２８４およびバチルス・コアグランスＡＴＣＣ７０５０からなる群から選択される。別の関連する実施形態では、哺乳動物は好ましくはヒトである。
【００１３】
別の好ましい実施形態では、本発明は、哺乳動物における脂漏性皮膚炎の治療的管理方法であって、有効濃度のバチルス・コアグランス菌株由来の部分精製細胞外代謝産物調製物を含む組成物を、標準的なフケ防止成分とともに、そのような療法を必要とする哺乳動物に投与するステップを含む、方法を開示する。関連する実施形態では、組成物は、薬学的に／機能性化粧品として許容される賦形剤、補助剤、基剤、希釈剤、担体、コンディショニング剤および保存剤と製剤化され、クリーム、ゲル、ローション、シャンプー、美容液、オイル、懸濁液、エマルジョン、およびコンパクトの形態で局所投与される。別の実施形態では、フケ防止成分は、コリウス油、ティーツリー油、チョウジ油、バジル油およびバジル抽出物、ローズマリー油、ニーム抽出物、シダーウッド油、硫化セレン、ジンクピリチオン、サリチル酸、ケトコナゾール、クリンバゾール、シクロピロックスオラミンからなる群から選択されるが、これらに限定されない。関連する実施形態では、組成物中の部分精製細胞外代謝産物調製物の有効濃度は、組成物全体の０．０１ｖ／ｖ％〜２．０ｖ／ｖ％である。別の実施形態では、バチルス・コアグランスの菌株は、バチルス・コアグランスＭＴＣＣ５８５６、バチルス・コアグランスＡＴＣＣ３１２８４およびバチルス・コアグランスＡＴＣＣ７０５０からなる群から選択される。別の関連する実施形態では、哺乳動物は好ましくはヒトである。
【実施例】
【００１４】
最も好ましい実施形態を明示する特定の例示的な例は、本明細書において以下に含まれる。
（例１）
真皮乳頭の増殖
細胞外代謝産物の単離
バチルス・コアグランスＭＴＣＣ５８５６由来の細胞外代謝産物は、米国特許第９５９６８６１号に概説されているステップに従って単離した。この製品は、Ｓａｂｉｎｓａ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ、ＵＳＡからＬＡＣＴＯＳＰＯＲＩＮ（登録商標）の商標名（ＩＮＣＩ：バチルス発酵濾液抽出物）にて市販されている。
【００１５】
材料および方法
細胞：真皮乳頭細胞（ヒトＨＦＤＰＣ）はＰｒｏｍｏｃｅｌｌ  （Ｇｅｒｍａｎｙ）から購入し、加湿５％ＣＯ2インキュベーター内で、３７℃で線維芽細胞成長培地（Ｐｒｏｍｏｃｅｌｌ、Ｇｅｒｍａｎｙ）にて単層培養物として維持した。真皮乳頭細胞は、１０％ＦＢＳを補充したＤＭＥＭにて培養した。トリプシン処理によりコンフルエントな培養物を採取し、さらに２回継代して増殖させて実験に使用した。培地およびその他の培養成分は４８〜７２時間後に新しくした。すべての細胞培養物を、ＣＯ2インキュベーター内で９５％空気および５％ＣＯ2にて３７℃で維持した。
真皮乳頭細胞を、２４ウェル透明底マイクロプレートのウェル当たりＤＭＥＭ中２０００細胞の播種密度でアッセイに使用し、ＣＯ2インキュベーター内で９５％空気および５％ＣＯ2にて３７℃で２４時間インキュベートした。細胞単層を５０％（ｗ／ｖ）トリクロロ酢酸で、４℃で１時間固定し、０．４％ＳＲＢで３０分間染色した。過剰の色素は、１％（ｖ／ｖ）酢酸で繰り返し洗浄することにより除去した。タンパク質結合色素を１０ｍＭ  トリス塩基溶液中に溶解させ、マイクロプレートリーダーを使用して光学密度（ＯＤ）を４９２ｎｍで読み取った。試料の存在下における細胞増殖は、試験試料の非存在下における対照と比較した増殖の百分率として、生存細胞による光学密度の増加に基づいて計算した。
【００１６】
結果
結果は、細胞外代謝産物調製物が真皮乳頭細胞の増殖を増加させることを示した（図１ａ、図１ｂおよび図１ｃ）。また、細胞外代謝産物調製物は、毛包細胞の成長の成長期を刺激し、ヘアケア化粧品としての可能性を示している。
【００１７】
分泌因子の発現
材料および方法
細胞：真皮乳頭細胞（ヒトＨＦＤＰＣ）はＰｒｏｍｏｃｅｌｌ  （Ｇｅｒｍａｎｙ）から購入し、加湿５％ＣＯ2インキュベーター内で、３７℃で線維芽細胞成長培地（Ｐｒｏｍｏｃｅｌｌ、Ｇｅｒｍａｎｙ）にて単層培養物として維持した。真皮乳頭細胞は、１０％ＦＢＳを補充したＤＭＥＭにて培養した。トリプシン処理によりコンフルエントな培養物を採取し、さらに２回継代して増殖させて実験に使用した。培地およびその他の培養成分は４８〜７２時間後に新しくした。すべての細胞培養物を、ＣＯ2インキュベーター内で９５％空気および５％ＣＯ2にて３７℃で維持した。
真皮乳頭細胞を、９６ウェル透明底マイクロプレートのウェル当たりＤＭＥＭ中５０００細胞の播種密度でアッセイに使用し、ＣＯ2インキュベーター中で９５％空気および５％ＣＯ2にて３７℃で２４時間インキュベートした。培養物上清を収集し、−８０℃で保存した後、使用した。ＴＧＦ−βおよびＶＥＧＦ−１は、製造元の指示に従って、ＥＬＩＳＡキット（ヒトＴＧＦ−β２およびヒトＶＥＧＦキット用のＱｕａｎｔｉｋｉｎｅ（登録商標）ＥＬＩＳＡキット、Ｋｒｉｓｈｇｅｎ  ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ）を使用して検出した。
【００１８】
結果
細胞外代謝産物は、０．５ｖ／ｖ％の濃度でＴＧＦ−β２の発現を７０．３％増加させたが（図２）、一方、ＶＥＧＦ発現の３０％増加（図３）が観察され、バチルス・コアグランスＭＴＣＣ５８５６由来の細胞外代謝産物は、真皮乳頭の増殖を増加させ、それにより発毛を促進することを示している。
（例２）
５α−レダクターゼ阻害
細胞外代謝産物の単離
バチルス・コアグランスＭＴＣＣ５８５６由来の細胞外代謝産物は、米国特許第９５９６８６１号に概説されているステップに従って単離した。この製品は、Ｓａｂｉｎｓａ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ、ＵＳＡからＬＡＣＴＯＳＰＯＲＩＮ（登録商標：バチルス発酵濾液抽出物）の商標名（ＩＮＣＩ）にて市販されている。
【００１９】
材料および方法
細胞：真皮乳頭細胞（ヒトＨＦＤＰＣ）はＰｒｏｍｏｃｅｌｌ  （Ｇｅｒｍａｎｙ）から購入し、加湿５％ＣＯ2インキュベーター内で、３７℃で線維芽細胞成長培地（Ｐｒｏｍｏｃｅｌｌ、Ｇｅｒｍａｎｙ）にて単層培養物として維持した。真皮乳頭細胞（ＤＰＣ）を、１０％ＦＢＳを含むＤＭＥＭ培地にて培養し、９６ウェル組織培養プレートに播種した。播種の２４時間後、ＤＰＣを、テスト試料を加えて／加えずに、５０ｎＭのテストステロンで処理し、５％ＣＯ2インキュベーター内で、３７℃で４８時間インキュベートした。４８時間後、各ウェルから上清を収集した。処理を施した種々のＤＰＣによって産生された５α−ＤＨＴの量を、ＥＬＩＳＡを使用して定量し、マイクロプレートリーダーを使用して４５０ｎｍで吸光度を測定した。
【００２０】
結論
結果は、細胞外代謝産物の調製により、５α−レダクターゼ活性が約１６．２％阻害され（図４ａ）、インビトロでのジヒドロテストステロンレベル（図４ｂ）が０．５％であり、アンドロゲン性脱毛症などの臨床状態を治療するための強力な５α−レダクターゼ阻害剤としての可能性を示している。
（例３）
バチルス・コアグランス由来の細胞外代謝産物調製物を含むヘアケア製剤
表１は、バチルス・コアグランスＭＴＣＣ５８５６（バチルス発酵濾液抽出物）由来の部分精製細胞外代謝産物調製物を含むヘアケア製剤の例示的な例を提供する。
【００２１】
【表１】
2020522548.tif 000003
【００２２】
【表２】
2020522548.tif 000004
【００２３】
【表３】
2020522548.tif 000005
【００２４】
【表４】
2020522548.tif 000006
【００２５】
【表５】
2020522548.tif 000007
【００２６】
上記の製剤は、単に例示的な例である。前記の目的のために意図された上記の活性成分を含む任意の製剤は、同等とみなされる。
本発明に対する他の改変および変更は、前述の開示および教示から当業者には明らかであろう。したがって、本明細書では本発明のある特定の実施形態のみを具体的に説明してきたが、本発明の趣旨および範囲から逸脱することなく本明細書に多数の改変を加えることができることは明らかであろう。本発明の範囲は添付の特許請求の範囲と併せてのみ解釈されるべきである。
【図１ａ】
2020522548.tif 000008
【図１ｂ】
2020522548.tif 000009
【図１ｃ】
2020522548.tif 000010
【図２】
2020522548.tif 000011
【図３】
2020522548.tif 000012
【図４ａ】
2020522548.tif 000013
【図４ｂ】
2020522548.tif 000014
【国際調査報告】
2020522548.tif 000015
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