(57)【要約】  候補薬剤を、ＲＡＧＥ活性を調節するその能力についてスクリーニングする方法であって、そのようなＲＡＧＥ活性は、活性な共存ＧＰＣＲによって誘導され、方法は、候補薬剤の存在下でＲＡＧＥポリペプチドをＧＰＣＲポリペプチドと接触させるステップであって、ＧＰＣＲポリペプチドは、構成的に活性であり、且つ／又はそのＧＰＣＲのアゴニスト、部分アゴニスト又はアロステリックモジュレーターの添加によって活性化される、ステップと；候補薬剤の存在によるＲＡＧＥ活性化の調節を示す効果を検出することにより、且つ／又は候補薬剤の存在によって調節されるＲＡＧＥ依存性シグナル伝達を検出することにより、候補薬剤が、活性化された共存ＧＰＣＲによるＲＡＧＥリガンド非依存性のＲＡＧＥ活性化のモジュレーターであるかどうかを検出するステップとを含む方法。【特許請求の範囲】
【請求項１】
ＲＡＧＥ活性のモジュレーターであって、前記ＲＡＧＥ活性が活性な共存ＧＰＣＲによって誘導される、モジュレーター。
【請求項２】
活性化された共存ＧＰＣＲによるＲＡＧＥリガンド非依存性のＲＡＧＥ活性化のモジュレーターである、請求項１に記載のモジュレーター。
【請求項３】
活性化された共存ＧＰＣＲによって誘導されるＲＡＧＥ依存性シグナル伝達のモジュレーターである、請求項１に記載のモジュレーター。
【請求項４】
前記共存ＧＰＣＲは、炎症に関係付けられることを特徴とする、請求項１〜３のいずれか一項に記載のモジュレーター。
【請求項５】
前記共存ＧＰＣＲは、細胞増殖に関係付けられることを特徴とする、請求項１〜４のいずれか一項に記載のモジュレーター。
【請求項６】
前記共存ＧＰＣＲは、群：ＡＤＧＲＡ２、ＡＤＧＲＢ２、ＡＤＧＲＢ３、ＡＤＧＲＦ３、ＡＤＧＲＧ４、ＡＤＧＲＶ１、ＣＥＬＳＲ１、ＣＥＬＳＲ２、ＣＥＬＳＲ３、ＯＸ１受容体、ＯＸ２受容体、ＰＴＨ１受容体、ＰＴＨ２受容体、ＡＭＹ１受容体、ＡＭＹ２受容体、ＡＭＹ３受容体、ＡＭ１受容体、ＡＭ２受容体、ＧＰＲ６３、ＧＰＲ７５、ＮＭＵ２受容体、ＯＰＮ５、Ｖ１Ｂ受容体、ｙ６受容体、５−ＨＴ４受容体、ＧＰＲ１０１、ＧＰＲ１１９、ＧＰＲ１３５、ＧＰＲ１３７、ＧＰＲ１４１、ＧＰＲ１４９、ＧＰＲ１５０、ＧＰＲ１５１、ＧＰＲ１５２、ＧＰＲ１５７、ＧＰＲ１９、ＧＰＲ２５、ＧＰＲ３７、ＧＰＲ３７Ｌ１、ＧＰＲ５０、ＧＰＲ６２、ＬＧＲ５、ＭＲＧＰＲＥ、ＭＲＧＰＲＦ、ＮＴＳ２受容体、ＯＰＮ４、ＯＰＮ４、ＯＲ１０Ａ７、ＯＲ１０ＡＧ１、ＯＲ１０Ｑ１、ＯＲ１０Ｗ１、ＯＲ１２Ｄ３、ＯＲ１３Ｃ２、ＯＲ１３Ｃ３、ＯＲ１３Ｃ４、ＯＲ１３Ｃ５、ＯＲ１３Ｃ８、ＯＲ１３Ｆ１、ＯＲ１３Ｇ１、ＯＲ１Ａ２、ＯＲ１Ｌ１、ＯＲ１Ｓ１、ＯＲ１Ｓ２、ＯＲ２ＡＫ２、ＯＲ２Ｄ２、ＯＲ２Ｄ３、ＯＲ４Ａ１５、ＯＲ４Ｃ１１、ＯＲ４Ｃ１２、ＯＲ４Ｃ１３、ＯＲ４Ｃ１５、ＯＲ４Ｃ１６、ＯＲ４Ｋ１３、ＯＲ４Ｋ１４、ＯＲ４Ｋ１５、ＯＲ４Ｋ１７、ＯＲ４Ｎ５、ＯＲ５ＡＣ２、ＯＲ５ＡＫ２、ＯＲ５ＡＰ２、ＯＲ５ＡＲ１、ＯＲ５ＡＳ１、ＯＲ５Ｂ１２、ＯＲ５Ｂ１７、ＯＲ５Ｂ２、ＯＲ５Ｂ２１、ＯＲ５Ｂ３、ＯＲ５Ｄ１３、ＯＲ５Ｄ１４、ＯＲ５Ｄ１６、ＯＲ５Ｄ１８、ＯＲ５Ｆ１、ＯＲ５Ｉ１、ＯＲ５Ｊ２、ＯＲ５Ｋ３、ＯＲ５Ｌ１、ＯＲ５Ｌ２、ＯＲ５Ｍ１、ＯＲ５Ｍ１０、ＯＲ５Ｍ１１、ＯＲ５Ｍ３、ＯＲ５Ｍ８、ＯＲ５Ｍ９、ＯＲ５Ｒ１、ＯＲ５Ｔ１、ＯＲ５Ｔ２、ＯＲ５Ｔ３、ＯＲ５Ｗ２、ＯＲ６Ｃ７４、ＯＲ６Ｋ６、ＯＲ６Ｍ１、ＯＲ６Ｑ１、ＯＲ６Ｘ１、ＯＲ８Ｈ１、ＯＲ８Ｈ２、ＯＲ８Ｈ３、ＯＲ８Ｊ１、ＯＲ８Ｊ３、ＯＲ８Ｋ１、ＯＲ８Ｋ３、ＯＲ８Ｋ５、ＯＲ８Ｕ１、ＯＲ８Ｕ８、ＯＲ９Ａ４、ＯＲ９Ｇ１、ＯＲ９Ｇ４、ＯＲ９Ｇ９、ＯＲ９Ｑ２、ＴＡＡＲ３、ＴＰＲＡ１、Ｙ４受容体、５−ＨＴ１Ｄ受容体、５−ＨＴ１Ｅ受容体、ＡＤＧＲＢ１、ＡＴ２受容体、ＢＢ１受容体、ＢＢ３受容体、ＣＧＲＰ受容体、ＣＲＦ１受容体、ＣＲＦ２受容体、ＥＴＡ受容体、ＥＴＢ受容体、ＦＺＤ４、ＦＺＤ５、ＦＺＤ７、ＦＺＤ８、ＦＺＤ９、ＧＡＢＡＢ受容体、ＧＡＢＡＢ１、ＧＡＢＡＢ２、ＧＡＬ１受容体、ＧＩＰ受容体、ＧＬＰ−１受容体、ＧＬＰ−２受容体、グルカゴン受容体、ＧｎＲＨ２受容体、ＧＰＥＲ、ＧＰＲ１０７、ＧＰＲ１３９、ＧＰＲ１５６、ＧＰＲ１５８、ＧＰＲ１６１、ＧＰＲ１７１、ＧＰＲ１７９、ＧＰＲ３９、ＧＰＲ４５、ＧＰＲ８８、ＧＰＲＣ５Ａ、ＧＰＲＣ５Ｂ、ＧＰＲＣ５Ｃ、Ｈ３受容体、ＨＣＡ１受容体、ＬＰＡ１受容体、ＬＰＡ３受容体、ＬＰＡ４受容体、ＭＣ２受容体、ＭＣ４受容体、ｍＧｌｕ２受容体、ｍＧｌｕ３受容体、モチリン受容体、ＭＲＧＰＲＤ、ＭＲＧＰＲＸ１、ＭＲＧＰＲＸ３、ＮＫ２受容体、ＮＰＦＦ１受容体、ＮＰＦＦ２受容体、ＮＰＳ受容体、ＮＴＳ１受容体、ＯＲ１Ｄ２、ＯＲ２ＡＧ１、ＯＴ受容体、ＰＡＣ１受容体、ＲＸＦＰ１受容体、セクレチン受容体、ＴＳＨ受容体、ＵＴ受容体、Ｖ１Ａ受容体、Ｖ２受容体、α２Ａ−アドレナリン受容体、α２Ｂ−アドレナリン受容体、α２Ｃ−アドレナリン受容体、β１−アドレナリン受容体、β３−アドレナリン受容体、５−ＨＴ１Ｂ受容体、５−ＨＴ１Ｆ受容体、５−ＨＴ２Ｂ受容体、５−ＨＴ２Ｃ受容体、５−ＨＴ５Ａ受容体、５−ＨＴ６受容体、５−ＨＴ７受容体、ＡＤＧＲＥ４Ｐ、ＡＤＧＲＦ１、ＡＤＧＲＧ１、ＡＤＧＲＧ３、ＡＤＧＲＧ５、カルシトニン受容体様受容体、ＣＢ１受容体、ＣＢ２受容体、ＣＣＫ１受容体、ＣＣＫ２受容体、ＣＴ受容体、Ｄ１受容体、Ｄ２受容体、Ｄ３受容体、Ｄ４受容体、Ｄ５受容体、ＦＦＡ１受容体、ＦＦＡ３受容体、ＦＳＨ受容体、ＦＺＤ１、ＦＺＤ２、ＦＺＤ３、ＧＨＲＨ受容体、ＧｎＲＨ１受容体、ＧＰＢＡ受容体、ＧＰＲ１、ＧＰＲ１１９、ＧＰＲ１２、ＧＰＲ１４２、ＧＰＲ１４３、ＧＰＲ１４６、ＧＰＲ１４８、ＧＰＲ１５３、ＧＰＲ１６０、ＧＰＲ１６２、ＧＰＲ１７、ＧＰＲ１７３、ＧＰＲ１７４、ＧＰＲ１７６、ＧＰＲ１８、ＧＰＲ１８２、ＧＰＲ２０、ＧＰＲ２２、ＧＰＲ２６、ＧＰＲ２７、ＧＰＲ３、ＧＰＲ３３、ＧＰＲ３５、ＧＰＲ６、ＧＰＲ６１、ＧＰＲ７８、ＧＰＲ８２、ＧＰＲ８３、ＧＰＲ８４、ＧＰＲ８５、ＧＰＲ８７、ＧＰＲＣ５Ｄ、ＧＰＲＣ６受容体、ＨＣＡ２受容体、ＨＣＡ３受容体、キスぺプチン受容体、ＬＧＲ４、ＬＧＲ６、ＬＨ受容体、ＬＰＡ２受容体、ＬＰＡ６受容体、Ｍ１受容体、Ｍ２受容体、Ｍ３受容体、Ｍ４受容体、Ｍ５受容体、ＭＡＳ１Ｌ、ＭＣ３受容体、ＭＣ５受容体、ＭＣＨ２受容体、ｍＧｌｕ４受容体、ｍＧｌｕ７受容体、ｍＧｌｕ８受容体、ＭＲＧＰＲＧ、ＮＯＰ受容体、ＮＰＢＷ１受容体、ＮＰＢＷ２受容体、ＯＰＮ３、ＯＲ１１Ｈ１、ＯＲ２Ａ１、ＯＲ２Ａ２、ＯＲ２Ａ４、ＯＲ２Ａ４２、ＯＲ２Ａ７、ＯＲ２Ｂ１１、ＯＲ２Ｂ６、ＯＲ２Ｃ１、ＯＲ２Ｃ３、ＯＲ２Ｊ３、ＯＲ２Ｌ１３、ＯＲ２Ｔ１１、ＯＲ２Ｔ３４、ＯＲ２Ｗ３、ＯＲ３Ａ３、ＯＲ４Ｄ１０、ＯＲ４Ｍ１、ＯＲ４Ｑ３、ＯＲ５１Ａ２、ＯＲ５１Ａ４、ＯＲ５１Ａ７、ＯＲ５１Ｂ２、ＯＲ５１Ｂ４、ＯＲ５１Ｂ５、ＯＲ５１Ｂ６、ＯＲ５１Ｄ１、ＯＲ５１Ｅ１、ＯＲ５１Ｅ１、ＯＲ５１Ｅ２、ＯＲ５１Ｆ１、ＯＲ５１Ｆ２、ＯＲ５１Ｇ１、ＯＲ５１Ｇ２、ＯＲ５１Ｉ１、ＯＲ５１Ｉ２、ＯＲ５１Ｊ１、ＯＲ５１Ｌ１、ＯＲ５１Ｍ１、ＯＲ５１Ｑ１、ＯＲ５１Ｓ１、ＯＲ５１Ｔ１、ＯＲ５１Ｖ１、ＯＲ５２Ａ１、ＯＲ５２Ａ４、ＯＲ５２Ａ５、ＯＲ５２Ｂ２、ＯＲ５２Ｂ４、ＯＲ５２Ｂ６、ＯＲ５２Ｄ１、ＯＲ５２Ｅ２、ＯＲ５２Ｅ４、ＯＲ５２Ｅ５、ＯＲ５２Ｅ６、ＯＲ５２Ｅ８、ＯＲ５２Ｈ１、ＯＲ５２Ｉ１、ＯＲ５２Ｉ２、ＯＲ５２Ｊ３、ＯＲ５２Ｋ１、ＯＲ５２Ｋ２、ＯＲ５２Ｌ１、ＯＲ５２Ｍ１、ＯＲ５２Ｎ１、ＯＲ５２Ｎ２、ＯＲ５２Ｎ４、ＯＲ５２Ｎ５、ＯＲ５２Ｒ１、ＯＲ５２Ｗ１、ＯＲ５６Ａ１、ＯＲ５６Ａ３、ＯＲ５６Ａ４、ＯＲ５６Ａ５、ＯＲ５６Ｂ１、ＯＲ５６Ｂ４、ＯＲ６Ｖ１、ＯＲ７Ｄ２、ＯＲ９Ａ２、オキソグルタル酸受容体、Ｐ２ＲＹ１０、Ｐ２ＲＹ８、Ｐ２Ｙ１２受容体、Ｐ２Ｙ４受容体、ＰｒＲＰ受容体、ＱＲＦＰ受容体、ＲＸＦＰ２受容体、ＲＸＦＰ４受容体、ｓｓｔ１受容体、ｓｓｔ２受容体、ｓｓｔ３受容体、ｓｓｔ４受容体、ｓｓｔ５受容体、ＴＡ１受容体、ＴＡＡ��２、ＴＡＡＲ５、ＴＡＡＲ６、ＴＡＡＲ８、ＴＡＡＲ９、ＴＡＳ１Ｒ１、ＴＡＳ１Ｒ２、ＴＡＳ１Ｒ３、ＴＡＳ２Ｒ１、ＴＡＳ２Ｒ１０、ＴＡＳ２Ｒ１３、ＴＡＳ２Ｒ１４、ＴＡＳ２Ｒ１６、ＴＡＳ２Ｒ１９、ＴＡＳ２Ｒ２０、ＴＡＳ２Ｒ３、ＴＡＳ２Ｒ３０、ＴＡＳ２Ｒ３１、ＴＡＳ２Ｒ３８、ＴＡＳ２Ｒ３９、ＴＡＳ２Ｒ４、ＴＡＳ２Ｒ４０、ＴＡＳ２Ｒ４１、ＴＡＳ２Ｒ４２、ＴＡＳ２Ｒ４３、ＴＡＳ２Ｒ４５、ＴＡＳ２Ｒ４６、ＴＡＳ２Ｒ５、ＴＡＳ２Ｒ５０、ＴＡＳ２Ｒ６０、ＴＡＳ２Ｒ７、ＴＡＳ２Ｒ８、ＴＡＳ２Ｒ９、ＴＲＨ１受容体、Ｙ１受容体、Ｙ２受容体、Ｙ５受容体、α１Ａ−アドレナリン受容体、α１Ｂ−アドレナリン受容体、α１Ｄ−アドレナリン受容体、δ受容体、５−ＨＴ１Ａ受容体、５−ＨＴ２Ａ受容体、Ａ１受容体、Ａ２Ａ受容体、Ａ２Ｂ受容体、Ａ３受容体、ＡＣＫＲ１、ＡＣＫＲ２、ＡＣＫＲ３、ＡＣＫＲ４、ＡＤＧＲＥ１、ＡＤＧＲＥ２、ＡＤＧＲＥ３、ＡＤＧＲＥ５、アペリン受容体、ＡＴ１受容体、Ｂ１受容体、Ｂ２受容体、ＢＢ２（ＧＲＰ）受容体、ＢＬＴ１受容体、ＢＬＴ２受容体、Ｃ３ａ受容体、Ｃ５ａ１受容体、Ｃ５ａ２受容体、ＣａＳ受容体、ＣＣＲ１、ＣＣＲ１０、ＣＣＲ２、ＣＣＲ３、ＣＣＲ４、ＣＣＲ５、ＣＣＲ６、ＣＣＲ７、ＣＣＲ８、ＣＣＲ９、ＣＣＲＬ２、ケメリン受容体、ＣＸ３ＣＲ１、ＣＸＣＲ１、ＣＸＣＲ２、ＣＸＣＲ３、ＣＸＣＲ４、ＣＸＣＲ５、ＣＸＣＲ６、ＣｙｓＬＴ１受容体、ＣｙｓＬＴ２受容体、ＤＰ１受容体、ＤＰ２受容体、ＥＰ１受容体、ＥＰ２受容体、ＥＰ３受容体、ＥＰ４受容体、ＦＦＡ２受容体、ＦＦＡ４受容体、ＦＰ受容体、ＦＰＲ１、ＦＰＲ２／ＡＬＸ、ＦＰＲ２／ＡＬＸ、ＦＰＲ３、ＦＺＤ６、ＧＡＬ２受容体、ＧＡＬ３受容体、グレリン受容体、ＧＰＲ１３２、ＧＰＲ１５、ＧＰＲ１８、ＧＰＲ１８３、ＧＰＲ２１、ＧＰＲ３１、ＧＰＲ３２、ＧＰＲ３４、ＧＰＲ４、ＧＰＲ５５、ＧＰＲ５５、ＧＰＲ６５、ＧＰＲ６８、Ｈ１受容体、Ｈ２受容体、Ｈ４受容体、ＩＰ受容体、ＬＰＡ５受容体、ＭＡＳ１、ＭＣ１受容体、ＭＣＨ１受容体、ｍＧｌｕ１受容体、ｍＧｌｕ５受容体、ＭＲＧＰＲＸ２、ＭＴ１受容体、ＭＴ２受容体、ＮＫ１受容体、ＮＫ３受容体、ＮＭＵ１受容体、ＯＸＥ受容体、Ｐ２Ｙ１受容体、Ｐ２Ｙ１１受容体、Ｐ２Ｙ１３受容体、Ｐ２Ｙ１４受容体、Ｐ２Ｙ２受容体、Ｐ２Ｙ６受容体、ＰＡＦ受容体、ＰＡＲ１、ＰＡＲ２、ＰＡＲ３、ＰＡＲ４、ＰＫＲ１、ＰＫＲ２、Ｓ１Ｐ１受容体、Ｓ１Ｐ２受容体、Ｓ１Ｐ３受容体、Ｓ１Ｐ４受容体、Ｓ１Ｐ５受容体、コハク酸受容体、ＴＰ受容体、ＶＰＡＣ１受容体、ＶＰＡＣ２受容体、ＸＣＲ１、β２−アドレナリン受容体、κ受容体、μ受容体から選択されることを特徴とする、請求項１〜５のいずれか一項に記載のモジュレーター。
【請求項７】
ＲＡＧＥの細胞外ドメインを含有しないことを特徴とする、請求項１〜６のいずれか一項に記載のモジュレーター。
【請求項８】
ＲＡＧＥの細胞外ドメインの類似体又は誘導体を含有しないことを特徴とする、請求項１〜７のいずれか一項に記載のモジュレーター。
【請求項９】
ＲＡＧＥのリガンド結合性Ｖ−Ｃ１−Ｃ２ドメインに結合しないことを特徴とする、請求項１〜８のいずれか一項に記載のモジュレーター。
【請求項１０】
活性化された共存ＧＰＣＲによって誘導されるＲＡＧＥのＣ末端細胞質側テールを介して発生するシグナル伝達を阻害又は促進することを特徴とする、請求項１〜９のいずれか一項に記載のモジュレーター。
【請求項１１】
ＲＡＧＥのＣ末端細胞質側テールに対して生じる結合を阻害することを特徴とする、請求項１〜１０のいずれか一項に記載のモジュレーター。
【請求項１２】
ＲＡＧＥの細胞質側テール又はその一部の機能的代替物であり、且つ共存ＧＰＣＲの活性化時、野生型ＲＡＧＥの発現の存在下又は非存在下で下流のＲＡＧＥ依存性シグナル伝達を誘導することができることを特徴とする、請求項１〜１１のいずれか一項に記載のモジュレーター。
【請求項１３】
ＲＡＧＥの細胞質側テール又はその一部の非機能的代替物であり、前記非機能的代替物は、共存ＧＰＣＲによって活性化されることができないか、又は下流のＲＡＧＥ依存性シグナル伝達を促進することができず、且つＲＡＧＥの細胞質側テール及びＲＡＧＥ依存シグナル伝達を介して発生するシグナル伝達を阻害することを特徴とする、請求項１〜１１のいずれか一項に記載のモジュレーター。
【請求項１４】
ＲＡＧＥの細胞質側テールを含有しないことを特徴とする、請求項１〜１１のいずれか一項に記載のモジュレーター。
【請求項１５】
ＲＡＧＥの細胞質側テールの類似体、断片又は誘導体を含有しないことを特徴とする、請求項１〜１１のいずれか一項に記載のモジュレーター。
【請求項１６】
ＲＡＧＥの膜貫通ドメインの類似体、断片又は誘導体を含有し、且つＲＡＧＥの細胞質側テール又はその断片を含有しないことを特徴とする、請求項１〜１１のいずれか一項に記載のモジュレーター。
【請求項１７】
ＲＡＧＥの膜貫通ドメインの類似体、断片又は誘導体にコンジュゲートされたＲＡＧＥの細胞外ドメイン全体を含有し、且つＲＡＧＥの細胞質側テール又はその断片を含有しないことを特徴とする、請求項１〜１１のいずれか一項に記載のモジュレーター。
【請求項１８】
長さが２０アミノ酸超、１０アミノ酸超又は５アミノ酸超であるＲＡＧＥの膜貫通ドメインの類似体、断片又は誘導体にコンジュゲートされたＲＡＧＥの細胞外ドメイン全体を含有し、且つＲＡＧＥの細胞質側テール又はその断片を含有しないことを特徴とする、請求項１〜１１のいずれか一項に記載のモジュレーター。
【請求項１９】
ＲＡＧＥのトランケート型外部ドメインを含有することを特徴とする、請求項１〜１１のいずれか一項に記載のモジュレーター。
【請求項２０】
長さが４０アミノ酸以下、２０アミノ酸以下、１０アミノ酸以下又は５アミノ酸以下であるＲＡＧＥのトランケート型外部ドメインを含有することを特徴とする、請求項１〜１１のいずれか一項に記載のモジュレーター。
【請求項２１】
ＲＡＧＥのトランケート型外部ドメインの存在下で作用することを特徴とする、請求項１〜２０のいずれか一項に記載のモジュレーター。
【請求項２２】
長さが４０アミノ酸以下、２０アミノ酸以下、１０アミノ酸以下又は５アミノ酸以下であるＲＡＧＥのトランケート型外部ドメインの存在下で作用することを特徴とする、請求項１〜２１のいずれか一項に記載のモジュレーター。
【請求項２３】
式Ｉ：
Ｚ１  Ｍ  Ｚ２  （Ｉ）
（式中、
ｉ．Ｚ１は、存在しないか、又は約１〜約５０アミノ酸残基を含むタンパク質性部分の少なくとも１つから選択され；
ｉｉ．Ｍは、配列番号１に記載のアミノ酸配列又はその類似体、断片若しくは誘導体であり；及び
ｉｉｉ．Ｚ２は、存在しないか、又は約１〜約５０アミノ酸残基を含むタンパク質性部分である）
によって表されるアミノ酸配列を含むか、それからなるか又はそれから本質的になる、単離又は精製されたペプチドを含むことを特徴とする、請求項１〜２２のいずれか一項に記載のモジュレーター。
【請求項２４】
Ｍは、ＲＡＧＥポリペプチド配列の野生型ヒトＣ末端細胞質側テールと少なくとも７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８若しくは９９％の配列同一性若しくは類似性を共有するか、又は、ＲＡＧＥポリペプチド配列の野生型ヒトＣ末端細胞質側テールと１、２、３、５、１０、１５若しくは２０アミノ酸残基以下だけ異なる、配列番号１に記載のＲＡＧＥポリペプチドの野生型ヒトＣ末端細胞質側テールの類似体であることを特徴とする、請求項２３に記載のモジュレーター。
【請求項２５】
前記Ｍは、野生型ＲＡＧＥポリペプチドのＣ末端細胞質側テールの任意の８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１又は４２アミノ酸断片を含むことを特徴とする、請求項２３に記載のモジュレーター。
【請求項２６】
前記Ｍは、前記断片と少なくとも７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８若しくは９９％の配列同一性若しくは類似性を共有するか、又はそれと１、２、３、５、１０、１５若しくは２０アミノ酸残基以下だけ異なる前記断片の類似体であることを特徴とする、請求項２３に記載のモジュレーター。
【請求項２７】
ヒト野生型ＲＡＧＥポリペプチドのＣ末端細胞質側テールのセリン３９１を欠くことを特徴とする、請求項２３〜２６のいずれか一項に記載のモジュレーター。
【請求項２８】
ヒト野生型ＲＡＧＥポリペプチドのＣ末端細胞質側テールのセリン３９１において修飾されていることを特徴とする、請求項２３〜２６のいずれか一項に記載のモジュレーター。
【請求項２９】
ヒト野生型ＲＡＧＥポリペプチドのＣ末端細胞質側テールのセリン３９１は、群：グルタミン、プロリン、スレオニン、ロイシン、アラニン、システイン、アルギニン、リジン、アスパラギン酸、グルタミン酸、グリシン、ヒスチジン、メチオニン、フェニルアラニン、バリン、アスパラギン、イソロイシン、トリプトファン又はチロシンから選択されるアミノ酸残基で置換されていることを特徴とする、請求項２３〜２６又は２８のいずれか一項に記載のモジュレーター。
【請求項３０】
ヒト野生型ＲＡＧＥポリペプチドのＣ末端細胞質側テールのセリン３９１は、群：アラニン、アスパラギン酸、フェニルアラニン、ヒスチジン、リジン、アルギニン、チロシン、アスパラギン、バリン、グリシン、システイン又はグルタミン酸から選択されるアミノ酸残基で置換されていることを特徴とする、請求項２８に記載のモジュレーター。
【請求項３１】
ヒト野生型ＲＡＧＥポリペプチドのＣ末端細胞質側テールのセリン３９１は、群：プロリン、ロイシン、イソロイシン、グルタミン、メチオニン、スレオニン又はトリプトファンから選択されるアミノ酸残基で置換されていることを特徴とする、請求項２８に記載のモジュレーター。
【請求項３２】
ＲＡＧＥとＤｉａｐｈａｎｏｕｓ−１との相互作用を調節しないことを特徴とする、請求項１〜３１のいずれか一項に記載のモジュレーター。
【請求項３３】
ヒト野生型ＲＡＧＥと比較してＤｉａｐｈａｎｏｕｓ−１に結合する能力を欠くか、又は低下した能力を有することを特徴とする、請求項１〜３２のいずれか一項に記載のモジュレーター。
【請求項３４】
ＲＡＧＥ−Ｄｉａｐｈａｎｏｕｓ−１結合部位Ｒ３６６〜Ｑ３６７を欠くことを特徴とするペプチドであることを特徴とする、請求項３２又は３３に記載のモジュレーター。
【請求項３５】
変化されたＲＡＧＥ−Ｄｉａｐｈａｎｏｕｓ−１結合部位Ｒ３６６〜Ｑ３６７を有するペプチドであることを特徴とする、請求項３２又は３３に記載のモジュレーター。
【請求項３６】
Ｒ３６６／Ｑ３６７の残基は、前記部位を損なうか又は無効にするように欠失又は他の残基で置換されていることを特徴とする、請求項３５に記載のモジュレーター。
【請求項３７】
Ｒａｓ−ＧＴＰａｓｅ活性化様タンパク質（ＩＱＧＡＰ１）、ラディキシン、エズリン又はモエシン、ＩＲＡＫ４及びＴＩＲＡＰの１つ以上への野生型ＲＡＧＥのＣ末端細胞質側テールの結合を阻害することを特徴とする、請求項１〜３６のいずれか一項に記載のモジュレーター。
【請求項３８】
嗅覚受容体２Ｔ２、ＡＤＰ／ＡＴＰトランスロカーゼ２、プロテインホスファターゼ１Ｇ、細胞間接着分子１、タンパク質ＤＪ−１（ＰＡＲＫ７）、カルポニン−３、ドレブリン、フィラミンＢ、Ｒａｓ関連タンパク質Ｒａｂ−１３、プロテオリピドタンパク質２、コロニン、Ｓ１００  Ａ１１、サクシニル−ＣｏＡリガーゼ［ＧＤＰ形成］サブユニットα、Ｈｓｃ７０相互作用タンパク質、アポトーシス阻害剤５、ニューロピリン、切断刺激因子、成長因子受容体結合タンパク質２、ｓｅｃ６１βサブユニット、Ｄｏｃｋ７又はＮｃｋ１の１つ以上への野生型ＲＡＧＥのＣ末端細胞質側テールの結合を阻害することを特徴とする、請求項１〜３７のいずれか一項に記載のモジュレーター。
【請求項３９】
Ｍは、少なくとも残基３７９〜３９０を含有する、配列番号１に記載のアミノ酸配列又はその類似体、断片若しくは誘導体であることを特徴とする、請求項２３に記載のモジュレーター。
【請求項４０】
Ｍは、配列番号１の式のペプチド又はその類似体若しくは誘導体であることを特徴とする、請求項２３に記載のモジュレーター。
【請求項４１】
Ｍは、配列番号２の式のペプチド又はその類似体若しくは誘導体であることを特徴とする、請求項２３に記載のモジュレーター。
【請求項４２】
Ｍは、配列番号５の式のペプチド又はその類似体若しくは誘導体であることを特徴とする、請求項２３に記載のモジュレーター。
【請求項４３】
Ｍは、配列番号６の式のペプチド又はその類似体若しくは誘導体であることを特徴とする、請求項２３に記載のモジュレーター。
【請求項４４】
Ｍは、配列番号７の式のペプチド又はその類似体若しくは誘導体であることを特徴とする、請求項２３に記載のモジュレーター。
【請求項４５】
Ｍは、配列番号８の式のペプチド又はその類似体若しくは誘導体であることを特徴とする、請求項２３に記載のモジュレーター。
【請求項４６】
Ｍは、配列番号９の式のペプチド又はその類似体若しくは誘導体であることを特徴とする、請求項２３に記載のモジュレーター。
【請求項４７】
Ｍは、配列番号１０の式のペプチド又はその類似体若しくは誘導体であることを特徴とする、請求項２３に記載のモジュレーター。
【請求項４８】
Ｍは、配列番号１１の式のペプチド又はその類似体若しくは誘導体であることを特徴とする、請求項２３に記載のモジュレーター。
【請求項４９】
Ｍは、配列番号１２の式のペプチド又はその類似体若しくは誘導体であることを特徴とする、請求項２３に記載のモジュレーター。
【請求項５０】
Ｍは、配列番号１３の式のペプチド又はその類似体若しくは誘導体であることを特徴とする、請求項２１３に記載のモジュレーター。
【請求項５１】
前記ペプチドと少なくとも７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８若しくは９９％の配列同一性若しくは類似性を共有するか、又は前記ペプチドと１、２、３、５若しくはさらに１０アミノ酸残基以下だけ異なる前記ペプチドの類似体であることを特徴とする、請求項４０〜５０のいずれか一項に記載のモジュレーター。
【請求項５２】
Ｚ１基は、細胞透過性ペプチド又はＲＡＧＥの細胞質側テールの断片であることを特徴とする、請求項２３〜５１のいずれか一項に記載のモジュレーター。
【請求項５３】
Ｚ２は、細胞透過性ペプチド又はＲＡＧＥの細胞質側テールの断片であることを特徴とする、請求項２３〜５２のいずれか一項に記載のモジュレーター。
【請求項５４】
群：第１の荷電又は水素結合性基（Ａ）、第２の荷電又は水素結合性基（Ｂ）、第３の荷電又は水素結合性基（Ｃ）及び疎水基（Ｄ）から選択される２つ以上の特徴を含み、前記特徴の部位点間の距離は、前記特徴間の距離の大きさが正である場合、最大±１０Å、±５Å、±２Å又は±１Åの許容差内において、以下の通りである、請求項１〜５３のいずれか一項に記載のモジュレーター。
【表１】
2020531514.tif 000091
【請求項５５】
非ペプチジルである、請求項５４に記載のモジュレーター。
【請求項５６】
ＲＡＧＥ活性の阻害剤であり、前記ＲＡＧＥ活性は、活性な共存ＧＰＣＲによって誘導される、請求項１〜５５のいずれか一項に記載のモジュレーター。
【請求項５７】
ＲＡＧＥ活性を調節する方法であって、前記ＲＡＧＥ活性は、請求項１〜５６のいずれか一項に記載のモジュレーターを使用して活性な共存ＧＰＣＲによって誘導される、方法。
【請求項５８】
候補薬剤を、ＲＡＧＥ活性を調節するその能力についてスクリーニングする方法であって、前記ＲＡＧＥ活性は、活性な共存ＧＰＣＲによって誘導され、前記方法は、
候補薬剤の存在下でＲＡＧＥポリペプチドをＧＰＣＲポリペプチドと接触させるステップと、ここで、前記ＧＰＣＲポリペプチドは、構成的に活性であり、且つ／又は前記ＧＰＣＲのアゴニスト、部分アゴニスト若しくはアロステリックモジュレーターの添加によって活性化され；
前記候補薬剤の存在によるＲＡＧＥ活性化の調節を示す効果を検出することにより、且つ／又は前記候補薬剤の存在によって調節されるＲＡＧＥ依存性シグナル伝達を検出することにより、前記候補薬剤が、活性化された共存ＧＰＣＲによるＲＡＧＥリガンド非依存性のＲＡＧＥ活性化のモジュレーターであるかどうかを検出するステップと
を含む方法。
【請求項５９】
ＲＡＧＥの細胞外ドメインに結合し、その結果としてＲＡＧＥリガンド依存的な方式でＲＡＧＥの活性化を阻害するＲＡＧＥリガンドの阻害剤を使用するステップを含む、請求項５８に記載の方法。
【請求項６０】
ＲＡＧＥポリペプチドであって、それがＲＡＧＥリガンドをその外部ドメインに結合させることができず、且つその結果としてＲＡＧＥリガンド依存的な方式で活性化されることができないように変異及び／又は切断されているＲＡＧＥポリペプチドを使用するステップを含む、請求項５８に記載の方法。
【請求項６１】
前記候補薬剤が、ＲＡＧＥポリペプチドがＧＰＣＲポリペプチドと接触されるときに検出されるＲＡＧＥ依存性シグナルを調節する場合、前記ＧＰＣＲポリペプチドが存在するときに前記ＲＡＧＥ依存性シグナルのより大きい調節をもたらす前記候補薬剤が、活性化された共存ＧＰＣＲによるＲＡＧＥリガンド非依存性のＲＡＧＥ活性化の調節について選択的であるように、前記ＧＰＣＲポリペプチドの非存在下で前記候補薬剤が前記ＲＡＧＥ依存性シグナルを調節するかどうか及び／又はその程度を決定することをさらに含む、請求項５８〜６０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６２】
前記候補薬剤が、前記ＲＡＧＥポリペプチドがＧＰＣＲポリペプチドと接触されるときに検出される前記シグナルを調節する場合、前記シグナルが前記ＲＡＧＥポリペプチドの非存在下で生成されるかどうか及び／又はその程度を決定し、且つ前記シグナルが前記ＲＡＧＥポリペプチドの非存在下で生成される場合、前記ＲＡＧＥポリペプチドが存在するときに前記シグナルのより大きい調節をもたらす前記候補薬剤が、共存ＧＰＣＲの活性化に起因するＲＡＧＥ非依存性シグナル伝達よりも、前記活性化された共存ＧＰＣＲによるＲＡＧＥリガンド非依存性のＲＡＧＥ活性化の調節について選択的であるように、前記ＲＡＧＥポリペプチドの非存在下で前記候補薬剤が前記シグナルを調節するかどうか及び／又はその程度を決定することをさらに含む、請求項５８〜６１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６３】
前記ＲＡＧＥポリペプチドの共存ＧＰＣＲへの近接性を評価するか、又はそれを評価するステップをさらに含むことを特徴とする、請求項５８〜６２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６４】
ＲＡＧＥ活性のモジュレーターであって、前記ＲＡＧＥ活性は、活性な共存ＧＰＣＲによって誘導される、モジュレーターを同定する方法であって、（１）候補の３次元構造を、群：第１の荷電又は水素結合性基（Ａ）、第２の荷電又は水素結合性基（Ｂ）、第３の荷電又は水素結合性基（Ｃ）及び疎水基（Ｄ）から選択される２つ以上の特徴を含むＲＡＧＥのＣ末端細胞質側テールのファーマコフォアモデルであって、前記特徴間の距離の大きさが正である場合、前記特徴間の前記距離は、最大±１０Å、±５Å、±２Å又は±１Åの許容差内において、以下の通りである、ファーマコフォアモデルと比較するステップと；
【表２】
2020531514.tif 000092
（２）疎水性及び／又は荷電若しくは水素結合性化学部分がそのように配置される場合にモジュレーターとしての候補を選択するステップとを含む方法。
【請求項６５】
ぺプチジル又は非ペプチジルである、請求項５８〜６４のいずれか一項に記載の方法のいずれか１つによって同定されるモジュレーター。
【請求項６６】
ＲＡＧＥ関連障害の処置、予防又は管理を、前記処置を必要とする患者において行う方法であって、有効量の、請求項１〜５６又は６５のいずれか一項に記載のモジュレーターの投与を含む方法。
【請求項６７】
ＲＡＧＥ関連障害の処置、予防又は管理を、前記処置を必要とする患者において行うための、請求項１〜５６又は６５のいずれか一項に記載のモジュレーターの使用。
【請求項６８】
ＲＡＧＥ関連障害の処置、予防又は管理を、前記処置を必要とする患者において行うための薬剤の製造のための、請求項１〜５６又は６５のいずれか一項に記載のモジュレーターの使用。
【請求項６９】
前記ＲＡＧＥ関連障害は、群：心血管障害；消化器疾患；がん；神経障害；呼吸器障害；結合組織障害；腎臓障害；生殖器障害；皮膚障害；眼障害；及び内分泌障害から選択される障害であることを特徴とする、請求項６６〜６８のいずれか一項に記載の方法又は使用。
【請求項７０】
前記ＲＡＧＥ関連障害は、群：アテローム性動脈硬化症、虚血性心疾患、心筋炎、心内膜炎、心筋症、急性リウマチ熱、慢性リウマチ性心疾患、脳血管疾患／脳卒中、心不全、血管石灰化、末梢血管疾患及びリンパ管炎から選択される心血管障害であることを特徴とする、請求項６９に記載の方法又は使用。
【請求項７１】
前記ＲＡＧＥ関連障害は、群：歯周炎、食道炎、胃炎、胃十二指腸潰瘍、クローン病、潰瘍性大腸炎、虚血性大腸炎、腸炎及び小腸結腸炎、腹膜炎、アルコール性肝疾患、肝炎、中毒性肝疾患、胆汁性肝硬変、肝線維症／肝硬変、非アルコール性脂肪肝／非アルコール性脂肪性肝炎（ＮＡＦＬＤ／ＮＡＳＨ）、肝外傷並びに肝障害、外傷又は手術からの回復から選択される消化器系障害であることを特徴とする、請求項６９に記載の方法又は使用。
【請求項７２】
前記ＲＡＧＥ関連障害は、群：唇、口腔及び咽頭の悪性新生物、消化器の悪性新生物、呼吸器及び胸腔内器官の悪性新生物、骨及び関節軟骨の悪性新生物、黒色腫及び皮膚の他の悪性新生物、中皮及び軟組織の悪性新生物、乳房の悪性新生物、女性生殖器の悪性新生物、男性生殖器の悪性新生物、尿路の悪性新生物、眼、脳及び中枢神経系の他の部分の悪性新生物、甲状腺及び他の内分泌腺の悪性新生物、リンパ系、造血系及び関連する組織の悪性新生物、不明確な、二次及び／又は特定されていない部位の悪性新生物から選択されるがんであることを特徴とする、請求項６９に記載の方法又は使用。
【請求項７３】
前記ＲＡＧＥ関連障害は、神経障害であり、且つ群：中枢神経系の炎症性疾患、主に中枢神経系に影響を与える全身性萎縮、錐体外路及び運動障害、パーキンソン病、中枢神経系の脱髄性疾患、アルツハイマー病、限局性脳萎縮、レビー小体病、てんかん、片頭痛、神経障害性疼痛、糖尿病性神経障害、多発性神経障害、神経膠腫の発生及び進行、脊髄外傷及び虚血性脳損傷／脳卒中、脳外傷並びに脳損傷、外傷又は手術からの回復から選択されることを特徴とする、請求項６９に記載の方法又は使用。
【請求項７４】
前記ＲＡＧＥ関連障害は、精神障害であり、且つ群：認知症、アルツハイマー病、血管性認知症、嗜癖、統合失調症、主要な情動障害、抑うつ、躁病、双極性障害及び不安障害から選択されることを特徴とする、請求項６９に記載の方法又は使用。
【請求項７５】
前記ＲＡＧＥ関連障害は、呼吸器（肺）障害であり、且つ群：急性上気道感染症、鼻炎、鼻咽頭炎、副鼻腔炎、喉頭炎、インフルエンザ及び肺炎、急性気管支炎、急性細気管支炎、喘息、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、気管支拡張症、肺気腫、外因による慢性肺疾患、急性呼吸窮迫症候群（ＡＲＤＳ）、肺好酸球増加症及び胸膜炎、肺外傷並びに肺損傷、外傷又は手術からの回復から選択されることを特徴とする、請求項６９に記載の方法又は使用。
【請求項７６】
前記ＲＡＧＥ関連障害は、結合組織障害であり、且つ群：変形性関節炎、感染性関節炎、関節リウマチ、乾癬性及び腸疾患性関節症、若年性関節炎、痛風及び他の結晶性関節症、糖尿病性関節症、結節性多発性動脈炎、チャーグ・ストラウス、粘膜皮膚リンパ節症候群［川崎］、過敏性血管炎、グッドパスチャー症候群、血栓性微小血管症、ウェゲナー肉芽腫症、大動脈弓症候群［高安］、巨細胞性動脈炎、リウマチ性多発筋痛、顕微鏡的多発性血管炎、低補血性血管炎、全身性エリテマトーデス、皮膚多発性筋炎、多発性筋炎、全身性硬化症、ＣＲ（Ｅ）ＳＴ症候群、乾燥症候群［シェーグレン］、混合性結合組織病、ベーチェット病、外傷性筋損傷、捻挫、筋挫傷並びに骨折から選択されることを特徴とする、請求項６９に記載の方法又は使用。
【請求項７７】
前記ＲＡＧＥ関連障害は、腎障害であり、且つ群：糸球体腎炎、腎炎、糖尿病性腎疾患、間質性腎炎、閉塞性及び逆流性腎症、急性腎不全並びに慢性腎疾患から選択されることを特徴とする、請求項６９に記載の方法又は使用。
【請求項７８】
前記ＲＡＧＥ関連障害は、生殖器障害であり、且つ群：前立腺炎、前立腺肥大、前立腺異形成、卵管炎、卵巣炎、骨盤内炎症性疾患（ＰＩＤ）、多嚢胞性卵巣症候群、子宮頸管炎、子宮頸部異形成、膣炎、外陰炎から選択されることを特徴とする、請求項６９に記載の方法又は使用。
【請求項７９】
前記ＲＡＧＥ関連障害は、群：皮膚炎、湿疹、天疱瘡／類天疱瘡、乾癬、ばら色粃糠疹、扁平苔癬、蕁麻疹、多形性紅斑、結節性紅斑、日焼け、角化症、光老化性皮膚潰瘍、表在性皮膚損傷及び開放創から選択される皮膚障害であることを特徴とする、請求項６９に記載の方法又は使用。
【請求項８０】
前記ＲＡＧＥ関連障害は、群：角膜炎、結膜炎、網膜炎、緑内障、強膜炎、上強膜炎、脈絡網膜炎症、糖尿病性網膜症、黄斑浮腫、未熟児網膜症及び視神経炎、眼の外傷並びに眼の損傷、外傷又は手術からの回復から選択される眼障害であることを特徴とする、請求項６９に記載の方法又は使用。
【請求項８１】
前記ＲＡＧＥ関連障害は、群：糖尿病、インスリン抵抗性、耐糖能障害及び甲状腺炎から選択される内分泌障害であることを特徴とする、請求項６９に記載の方法又は使用。
【請求項８２】
ＲＡＧＥ関連障害の処置、予防又は管理を、前記処置を必要とする患者において行う方法であって、有効量の、請求項１〜５６又は６５のいずれか一項に記載の阻害剤と、共存ＧＰＣＲの阻害剤及び／又は共存ＧＰＣＲシグナル伝達経路の阻害剤との組み合わせの投与を含む方法。
【請求項８３】
有効量の、請求項１〜５６又は６５のいずれか一項に記載の阻害剤と、前記共存ＧＰＣＲの阻害剤及び／又は前記共存ＧＰＣＲシグナル伝達経路の阻害剤との組み合わせの投与を含み、前記共存ＧＰＣＲの前記阻害剤及び／又は前記共存ＧＰＣＲシグナル伝達経路の前記阻害剤が、前記共存ＧＰＣＲに関連する障害の処置のために通常投与されるよりも低い用量で投与されることを特徴とする、請求項８２に記載の方法。
【請求項８４】
有効量の、請求項１〜５６又は６５のいずれか一項に記載の阻害剤と、前記共存ＧＰＣＲの阻害剤及び／又は前記共存ＧＰＣＲシグナル伝達経路の阻害剤との組み合わせの投与を含み、前記共存ＧＰＣＲの前記阻害剤及び／又は前記共存ＧＰＣＲシグナル伝達経路の前記阻害剤が、ＲＡＧＥに関連する障害の処置のために通常投与されるよりも低い用量で投与されることを特徴とする、請求項８２に記載の方法。
【請求項８５】
ＲＡＧＥ関連障害の処置、予防又は管理を、前記処置を必要とする患者において行う方法であって、有効量の、請求項１〜５６又は６５のいずれか一項に記載の阻害剤と、ＲＡＧＥリガンド依存性シグナル伝達経路の阻害剤との組み合わせの投与を含む方法。
【請求項８６】
有効量の、請求項１〜５６又は６５のいずれか一項に記載の阻害剤と、ＲＡＧＥリガンド依存性シグナル伝達経路の阻害剤との組み合わせの投与を含み、前記ＲＡＧＥリガンド依存性シグナル伝達経路の前記阻害剤が、ＲＡＧＥに関連する障害の処置のために通常投与されるよりも低い用量で投与されることを特徴とする、請求項８５に記載の方法。
【請求項８７】
請求項１〜５６又は６５のいずれか一項に記載のペプチドモジュレーターをコードする核酸配列であって、それから、前記ペプチドモジュレーターは、遺伝子送達後に続いて生成される、核酸配列。
【請求項８８】
請求項１〜５６又は６５のいずれか一項に記載のペプチドモジュレーターの誘導体であって、１つ以上アミノ酸置換、切断、化学的及び／若しくは生化学的修飾（アセチル化、カルボキシル化、リン酸化、グリコシル化、ユビキチン化）、放射性ヌクレオチド若しくはハロゲンでの標識、Ｄ−アミノ酸、非従来型アミノ酸、グリコシル化アミノ酸；ピログルタミン酸；２−アミノアジピン酸；３−アミノアジピン酸；β−アラニン；β−アミノプロピオン酸；２−アミノ酪酸；４−アミノ酪酸；ピペリジン酸；６−アミノカプロン酸；２−アミノヘプタン酸；２−アミノイソ酪酸；３−アミノイソ酪酸；２−アミノピメリン酸；２，４−ジアミノ酪酸；デスモシン；２，２’’−ジアミノピメリン酸；２，３−ジアミノプロピオン酸；Ｎ−エチルグリシン；Ｎ−エチルアスパラギン；ヒドロキシリジン；アロ−ヒドロキシリジン；３−ヒドロキシプロリン；４−ヒドロキシプロリン；イソデスモシン；アロ−イソロイシン；Ｎ−メチルグリシン；サルコシン；Ｎ−メチルイソロイシン；Ｎ−メチルバリン；ノルバリン；ノルロイシン；オルニチン；スタチン；ハロゲン化アミノ酸；硫黄部分を有するアミノ酸、レトロ逆位配列、環状ペプチド、ペプトイド、β−ペプチド又は非ペプチド薬物、非ペプチド標識、非ペプチド担体若しくは非ペプチド樹脂への連結を含む誘導体。
【請求項８９】
治療有効量の、請求項１〜５６又は６５のいずれか一項に記載のモジュレーターを含む医薬組成物。
【請求項９０】
１つ以上の賦形剤を含むことを特徴とする、請求項８９に記載の医薬組成物。
【請求項９１】
請求項８９又は９０に記載の医薬組成物を投与するステップを含む、請求項６６又は６９〜８６のいずれか一項に記載の、ＲＡＧＥ関連障害の処置、予防又は管理を、前記処置を必要とする患者において行う方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、概して、特定の疾患及び／又は状態に関連する受容体の活性化のモジュレーターを同定するためのスクリーニングアッセイ、そのようなモジュレーター、そのようなモジュレーターの投与を含む処置方法に関する。より具体的には、本発明は、Ｓ１００Ａ８／Ａ９、終末糖化産物（ＡＧＥ）及びＨＭＧＢ１を含むＲＡＧＥリガンドによるＲＡＧＥの活性化の調節も伴う又は伴わない、活性化１型アンジオテンシン受容体（ＡＴ１Ｒ）及び活性化ＣＣケモカイン受容体２（ＣＣＲ２）を含む、特定の共存活性化Ｇタンパク質共役受容体（ＧＰＣＲ）によるＲＡＧＥリガンド非依存性メカニズム（ＲＡＧＥのＲＡＧＥリガンド非依存性トランス活性化としても知られる）を介した終末糖化産物受容体（ＲＡＧＥ）の活性化のモジュレーターに関する。本発明は、そのようなモジュレーターを同定するためのスクリーニングアッセイ及び前記モジュレーターを使用したＲＡＧＥ関連障害の処置方法にも関する。
【背景技術】
【０００２】
終末糖化産物受容体（ＲＡＧＥ）は、免疫グロブリン（Ｉｇ）スーパーファミリーに属する多価Ｉ型膜貫通糖タンパク質である（Ｎｅｅｐｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，１９９２）。５０〜５５ｋＤａのグリコシル化ＲＡＧＥタンパク質は、限られた範囲の細胞（例えば、血管内皮、ＩＩ型肺細胞、白血球）で構成的に発現されるが、ＲＡＧＥ発現は、傷害及び炎症後の大半の細胞型及び組織で誘導され得る（Ｂａｌｌｉｎｇｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，２００５）。ＲＡＧＥ発現は、心血管疾患（ＣＶＤ）、がん、糖尿病、慢性腎疾患（ＣＫＤ）、虚血性傷害及びアルツハイマー病を含むが、これらに限定されない重要な炎症性及び代謝性障害で著しく上方制御される（Ｙａｎ  ｅｔ  ａｌ．，２０１０）。
【０００３】
ＲＡＧＥをコードするＡＧＥＲ遺伝子の遺伝的欠失は、いくつかのがん（Ｍａｌｉｋ  ｅｔ  ａｌ．，２０１５）及びアテローム性動脈硬化症及び糖尿病性合併症を含む炎症性疾患（Ｃｈｕａｈ  ｅｔ  ａｌ．，２０１３）を含む、マウスにおける多数の疾患及び疾患プロセスからの保護をもたらすことが以前に実証されている。例えば、アポリポタンパク質Ｅ（ａｐｏＥ）ノックアウト（ＫＯ）マウスでは、ＲＡＧＥの欠失により、加齢に伴うプラークの蓄積がより少なくなり、糖尿病によって加速されるアテローム性動脈硬化が軽減される（Ｓｏｒｏ−Ｐａａｖｏｎｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，２００８）。同様に、ＡＧＥＲの欠失は、グルコース制御に影響を与えることなく、糖尿病マウスの腎障害を軽減することができる（Ｔｈｏｍａｓ  ｅｔ  ａｌ．，２００５）。
【０００４】
ＡＧＥＲ遺伝子の多型は、関節炎、アテローム性動脈硬化症及び糖尿病性合併症、がんのリスク、肥満、てんかん並びにアルツハイマー病を含む認知障害を含むが、これらに限定されない、ヒトにおける多数の疾患及び疾患プロセスに関連付けられてきた。
【０００５】
終末糖化産物（ＡＧＥ）及び非ＡＧＥリガンド（タンパク質のＳ１００カルグラニュリンファミリーのメンバー、ＨＭＧＢ１、アミロイド及びＭａｃ−１を含む）によるＲＡＧＥの細胞外ドメインへの結合は、核因子カッパＢ（ＮＦκＢ）及びレニン−アンジオテンシンアルドステロンシステム（ＲＡＡＳ）を含む、炎症、損傷及び機能障害に関与する一連のシグナル伝達カスケードを活性化する。
【０００６】
実験モデルでは、可溶性デコイ受容体を使用したＲＡＧＥのリガンド媒介性活性化の阻害は、アテローム形成及び血管損傷を減弱し（Ｓｃｈｍｉｄｔ  ｅｔ  ａｌ．１９９９）、これは、ＲＡＧＥの病理学的作用がこのような設定におけるＲＡＧＥのリガンド媒介性活性化によって部分的に媒介されることを意味する。
【０００７】
ＲＡＧＥが活性化され、全てのその生物学的効果を主張する正確な分子メカニズムは、十分に理解されておらず、そのため、これらの臨床的に重要なシグナル伝達経路を標的とする能力は、臨床設定では依然として見出されていない。
【０００８】
レニン−アンジオテンシンアルドステロンシステム（ＲＡＡＳ）は、多くの一般的な疾患及び疾患プロセスの発生及び進行にも関与している重要な恒常性の経路である。アンジオテンシン変換酵素（ＡＣＥ）阻害剤又はアンジオテンシンＩＩ受容体１型（ＡＴ１Ｒ）ブロッカー（阻害剤）によるレニン−アンジオテンシンアルドステロンシステム（ＲＡＡＳ）の阻害は、高血圧、心血管疾患（ＣＶＤ）、心不全、慢性腎疾患（ＣＫＤ）及び糖尿病性合併症を含む多くの疾患及び／又は状態の管理に広く使用されている。ＲＡＡＳ阻害は、糖尿病の予防（Ｔｉｋｅｌｌｉｓ  ｅｔ  ａｌ．，２００４）、神経保護（Ｔｈｏｅｎｅ−Ｒｅｉｎｅｋｅ  ｅｔ  ａｌ．，２０１１）、特定のがんの成長の緩和（Ｓｈｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，２０１６）及びマウスに長い寿命を与えるＡＴ１Ｒの遺伝子欠失によって加齢においても（Ｂｅｎｉｇｎｉ  ｅｔ  ａｌ．，２００９）利点を有することが示されている。
【０００９】
ＲＡＡＳブロッカーのこれらの作用は、ＲＡＡＳブロッカーによって付与される血圧低下に付加され、且つそれから独立したものである。これは、他の薬剤と同等の血圧低下は同じ利点を付与しないためである（Ｌｅｅ  ｅｔ  ａｌ．，１９９３）。特に、アンジオテンシンＩＩ（Ａｎｇ  ＩＩ）によるＡＴ１Ｒの活性化は、血管収縮を引き起こす経路と異なる経路を介して酸化ストレスの誘導、核因子κＢ（ＮＦκＢ）の活性化及び炎症を引き起こす。
【００１０】
レニン−アンジオテンシンアルドステロンシステム（ＲＡＡＳ）の活性化は、アテローム性動脈硬化の重要なメディエーターであることが知られている（Ｌｅｅ  ｅｔ  ａｌ．，１９９３；及びＪａｃｏｂｙ  ｅｔ  ａｌ．，２００３）。アテローム形成は、アンジオテンシン（Ａｎｇ）ＩＩの注入後に増加し、実験モデルでは、その血圧の恒常性への効果とは独立して、低塩食（Ｔｉｋｅｌｌｉｓ  ｅｔ  ａｌ．，２０１２）、糖尿病（Ｇｏｌｄｉｎ  ｅｔ  ａｌ．，２００６；及びＳｏｒｏ−Ｐａａｖｏｎｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，２００８）及びアンジオテンシン変換酵素２（Ａｃｅ２）の遺伝的欠失（Ｔｈｏｍａｓ  ｅｔ  ａｌ．，２０１０）を含む生理学的ＲＡＡＳ活性化に関連する。同様に、ＲＡＡＳの阻害は、全身血圧の低下に付加され、且つそれから独立した抗アテローム性動脈硬化作用を有する（Ｃａｎｄｉｄｏ  ｅｔ  ａｌ．，２００２；Ｃａｎｄｉｄｏ  ｅｔ  ａｌ．，２００４；及びＫｎｏｗｌｅｓ  ｅｔ  ａｌ．，２０００）。Ａｎｇ  ＩＩは、酸化ストレスの誘導（Ｒａｊａｇｏｐａｌａｎ  ｅｔ  ａｌ．，１９９６）、血管癒着（Ｇｒａｆｅ  ｅｔ  ａｌ．，１９９７）及び炎症（Ｍａｒｖａｒ  ｅｔ  ａｌ．，２０１０）を含む多数の直接的なアテローム性動脈硬化促進効果を有する（Ｄａｕｇｈｅｒｔｙ  ｅｔ  ａｌ．，２０００；Ｆｅｒｒａｒｉｏ  ｅｔ  ａｌ．，２００６；及びＥｋｈｏｌｍ  ｅｔ  ａｌ．，２００９）。
【００１１】
これらのアテローム性動脈硬化促進作用は、主に１型アンジオテンシン受容体（ＡＴ１Ｒ）の活性化及びそれに続く活性酸素種（ＲＯＳ）の誘導並びにＮＦκＢシグナル伝達の活性化（Ｌｉ  ｅｔ  ａｌ．，２００８）によって媒介されると考えられている。しかしながら、ＡＴ１Ｒを介した従来の血管収縮シグナル伝達からの相対的な独立性を含む、これらの作用の根底にあるシグナル伝達メカニズムは、十分に理解されていない。
【００１２】
また、アテローム性動脈硬化の病因には特定のケモカインシグナル伝達経路が関与し、動脈病変へのマクロファージの浸潤がこの異常型炎症性疾患に直接寄与していることも示されている（Ｂｏｉｓｖｅｒｔ  ｅｔ  ａｌ．，２００４）。実際、全ての既知のＣＣ及びＣＸＣケモカイン受容体並びにＣＸ３ＣＲ１及びＸＣＲ１は、炎症に関係付けられている（Ｍｕｒｐｈｙ  ｅｔ  ａｌ．２０００；Ｚｌｏｔｎｉｋ  ａｎｄ  Ｙｏｓｈｉｅ  ２０００）。ケモカインリガンド（ＣＣＬ）の主要な生理学的機能は、「定期的な免疫監視、炎症及び発生中の細胞移動」の調節である。（Ａｌｌｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，２００７）。ＣＣＬは、炎症促進性サイトカインに応答して放出され、ケモカインに対する生理学的応答を媒介するＧタンパク質共役受容体の大きいファミリーに選択的に結合する。ケモカインは、元来、走化性サイトカインと称されていた。
【００１３】
慢性炎症性疾患の動物モデル研究は、アンタゴニストによる、ＭＣＰ−１（単球走化性タンパク質１、別名単球化学誘引タンパク質１、単球走化性及び活性化因子（ＭＣＡＦ）並びにケモカイン（Ｃ−Ｃモチーフ）リガンド２（ＣＣＬ２））とＣＣＲ２（ケモカイン（Ｃ−Ｃモチーフ）受容体２）との間の結合の阻害が炎症反応を抑制することを実証した。ＭＣＰ−１とその認識受容体ＣＣＲ２との間の相互作用は、ブドウ膜炎、アテローム性動脈硬化症、関節リウマチ、多発性硬化症、クローン病、腎炎、臓器移植片拒絶反応、肺線維症、腎不全、糖尿病及び糖尿病性合併症、糖尿病性腎症、糖尿病性網膜症、糖尿病性網膜炎、糖尿病性微小血管症、結核、サルコイドーシス、侵襲性ブドウ球菌感染症、白内障手術後の炎症、アレルギー性鼻炎、アレルギー性結膜炎、慢性蕁麻疹、アレルギー性喘息、歯周病、歯周炎、歯肉炎、歯肉疾患、拡張期心筋症、心筋梗塞、心筋炎、慢性心不全、血管狭窄、再狭窄、再灌流障害、糸球体腎炎、固形腫瘍及びがん、慢性リンパ性白血病、慢性骨髄性白血病、多発性骨髄腫、悪性骨髄腫、ホジキン病並びに膀胱、乳房、子宮頸部、結腸、肺、前立腺又は胃の癌腫などの炎症性疾患の病状に関係付けられている（Ｒｏｌｌｉｎｓ，１９９６；Ｄａｗｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，２００３）。
【００１４】
ＭＣＰ−１及びＣＣＲ２の両方のＫＯマウスは、これらのシグナル伝達経路の非存在下で炎症性病変への単球浸潤が有意に減少することを実証している。さらに、このようなＫＯマウスは、実験的アレルギー性脳脊髄炎（ＥＡＥ、ヒト多発性硬化症のモデル）、ゴキブリアレルゲン誘導性喘息、アテローム性動脈硬化症及びブドウ膜炎の発症に耐性がある。関節リウマチ及びクローン病患者は、ＭＣＰ−１発現及び浸潤マクロファージ数の減少と相関する用量レベルでのＴＮＦαアンタゴニスト（例えば、モノクローナル抗体及び可溶性受容体）による処置中に改善した。
【００１５】
ＭＣＰ−１は、季節性及び慢性アレルギー性鼻炎の病因に関係付けられており、チリダニアレルギーを有する大半の患者の鼻粘膜で発見されている。ＭＣＰ−１は、インビトロで好塩基球からのヒスタミン放出を誘導することも見出されている。アレルギー状態中、アレルゲンとヒスタミンの両方は、アレルギー性鼻炎を有する人の鼻粘膜におけるＭＣＰ−１及び他のケモカインの発現を引き起こす（すなわち上方制御する）ことが示されており、これは、そのような患者におけるポジティブフィードバックループの存在を示唆している。
【００１６】
腎疾患は、腎マクロファージの蓄積を特徴とする慢性炎症に関連している。糖尿病腎による単球化学誘引タンパク質１（ＭＣＰ−１／ＣＣＬ２）の産生は、糖尿病性腎症から生じる腎疾患におけるマクロファージ蓄積に影響を与える主要な要因として特定されている（Ｔｅｓｃｈ  ｅｔ  ａｌ．，２００８）。様々な動物モデルにおいて、ＣＣＲ２の阻害、及び／又は特定のＣＣＲ２経路の阻害、及び／又はＣＣＲ２リガンドＭＣＰ−１の阻害が腎障害を軽減することが示されている（Ｔｅｓｃｈ  ｅｔ  ａｌ．，２００８；Ｒａｏ  Ｖ  ｅｔ  ａ．，２００６；Ｋａｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，２０１０；Ｋｉｔａｇａｗａ  ｅｔ  ａｌ．，２００４；Ｐａｒｋ  Ｊ  ｅｔ  ａｌ．，２００８）。
【００１７】
Ｔｅｓｃｈ（２００８）は、ＭＣＰ−１の選択的標的化が、糖尿病性腎症を含む腎疾患の動物モデルの抑制において効果的な処置であると証明されたことに注目している。ＣＣＲ２の小分子アンタゴニスト（ＩＮＣＢ３３４４、プロパゲルマニウム、ＲＳ−５０４３９３）を含む処置は、マウスモデルで多発性硬化症、腎虚血再灌流障害、尿管閉塞及び糖尿病性腎症並びにラットモデルで関節炎の炎症を抑制することが示されている。ＣＣＲ２の人工生物学的アンタゴニストも効果的であることが証明されている。ＭＣＰ−１の欠損不活性型を発現するベクターを形質導入した細胞の皮下注入は、ループス腎炎のマウスモデルで腎炎症の発症を抑制することが見出されている。同様に、７ＮＤ（ＭＣＰ−１の変異体）による筋肉形質導入は、腎虚血再灌流障害、ループス腎炎及び糖尿病性腎症のマウスモデルにおける腎炎症を軽減する。現在まで、炎症性疾患に対するケモカイン単剤療法のヒト試験は、薬物の承認に至っていない。Ａｎｄｅｒｓ  ＨＪらは、単一のケモカインアンタゴニスト処置が疾患の処置に効果的でなかった理由を検討し、単一のケモカインメディエーターの冗長性及びケモカイン受容体の可変発現パターンを含む可能な説明を議論している（Ａｎｄｅｒｓ  ＨＪ  ｅｔ  ａｌ．２０１０）。したがって、ＣＣＲ２経路の活性化により引き起こされる疾患の効果的な処置に対する技術的必要性が存在する。
【００１８】
本発明の主題である、活性化された共存ＧＰＣＲを介してＲＡＧＥがＲＡＧＥリガンド非依存性に活性化され得るという概念は、多数のＧＰＣＲ、特に炎症及び細胞増殖に関連するＧＰＣＲのために意味を有することに注意することが重要である。
【００１９】
ＡＴ１Ｒ及びＣＣＲ２を含む特定の活性化された共存ＧＰＣＲとＲＡＧＥとの間にＲＡＧＥリガンド非依存性な新規機能的相互作用が説明されるのは、この背景技術に反するものである。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００２０】
ＲＡＧＥシグナル伝達、レニンアンジオテンシンアルドステロンシステム（ＲＡＡＳ）及び特定のケモカインシグナル伝達経路は、血管合併症の発生及び進行に関与する経路で機能的に相互作用することが知られている。例えば、ＲＡＧＥリガンドのＲＡＧＥへの結合は、炎症促進性シグナル伝達を誘導することができ、これは、ＡＴ１Ｒのアンタゴニスト（阻害剤）によって減少させることができる（例えば、Ｆｕｋａｍｉ  ｅｔ  ａｌ．２００４）。同様に、Ａｎｇ  ＩＩによるＡＴ１Ｒ受容体の活性化は、ＲＡＧＥリガンドの形成及び放出を増加させ、ＲＡＧＥへのＲＡＧＥリガンド結合の阻害又はＲＡＧＥリガンドを減少させる介入は、Ａｎｇ  ＩＩ−ＡＴ１Ｒ誘導性損傷を減弱させることができる（例えば、Ｔｈｏｍａｓ  ｅｔ  ａｌ．２００５）。ＲＡＧＥリガンドによるＲＡＧＥの活性化後に誘導される下流シグナル伝達経路及びメディエーターの一部、特に炎症を引き起こすものは、Ａｎｇ  ＩＩによるＡＴ１Ｒの活性化（例えば、ＮＦκＢ活性化）後に誘導されるシグナル伝達経路及びメディエーターにも類似している。
【００２１】
この先行技術は、ＲＡＧＥと、ＡＴ１Ｒなどのアンジオテンシン受容体又はＣＣＲ２などの特定のケモカイン受容体などのＧＰＣＲとの複合体形成に関する証拠を示唆も開示もしていない。また、これにより、Ａｎｇ  ＩＩによるアンジオテンシン受容体又はＭＣＰ−１によるＣＣＲ２など、ＧＰＣＲの認識リガンドによる共存ＧＰＣＲの活性化は、ＲＡＧＥ、特にＲＡＧＥの細胞質側テールの活性化を直接的にもたらすであろうことも、いかなるＲＡＧＥリガンドも不存在での、又はＲＡＧＥのＲＡＧＥリガンド結合外部ドメインの存在を実際に必要としない、ＲＡＧＥを介したその後のシグナル伝達の誘導も予想されるものではない。したがって、ＲＡＧＥの細胞質側テールのリガンド非依存活性化の調節に、Ａｎｇ  ＩＩのＡＴ１Ｒへの結合又はＭＣＰ−１のＣＣＲ２への結合によるものなど、特定の共存ＧＰＣＲの活性化後に誘導されるシグナル伝達の調節が関与するであろうことは、予想できなかった。
【００２２】
ＲＡＧＥの顕著な特徴の１つは、阻害を受けやすい単一のリガンド及び単一の結合部位ではなく、外部ドメイン上の複数部位での複数リガンドによる活性化である。ＲＡＧＥは、終末糖化産物（ＡＧＥ）及び高移動度群ボックス１（ＨＭＧＢ−１）、Ｓ−１００／カルグラニュリン、ＳＡＡ、Ａβ、Ｃ３ａ、ヒートショックプロテイン７０（ＨＳＰ７０）、母細胞傷害関連糖タンパク質、酸性且つシステイン豊富な分泌タンパク質（ＳＰＡＲＣ）、β２−インテグリンＭａｃ−１（ＣＤ１１ｂ）、ホスファチジルセリン（ＰＳ）、二本鎖ＤＮＡ（ｄｓＤＮＡ）、二本鎖ＲＮＡ（ｄｓＲＮＡ）、リポ多糖（ＬＰＳ）及びタンパク質過酸化物を含む他の非ＡＧＥリガンドによって活性化され得る。
【００２３】
ＲＡＧＥリガンドによるＲＡＧＥの細胞外ドメインの活性化は、ＮＦκＢの活性化並びにその後の炎症、酸化ストレス、線維形成及び細胞増殖につながるＮＦκＢ駆動遺伝子発現を引き起こす（Ｂｉｅｒｈａｕｓ  ｅｔ  ａｌ．，２００１）。
【００２４】
ＲＡＧＥリガンド誘導性シグナル伝達は、ＲＡＧＥリガンド−受容体相互作用がＮＦκＢ活性化を介してＲＡＧＥの発現を増加させるポジティブフィードバックループも引き起こし、それにより後続のＲＡＧＥ誘導性細胞活性化を増強する。実際、本発明者らがＲＡＧＥ発現を強く下方制御することを知っている唯一の手段は、ＲＡＧＥの活性化を低減することである。この状況は、リガンドのレベルが増加すると受容体の発現が低下する低密度リポタンパク質（ＬＤＬ）受容体などの他の受容体とは対照的である。
【００２５】
重要なことに、本発明者らは、Ａｎｇ  ＩＩによるＡＴ１Ｒ又はＭＣＰ−１によるＣＣＲ２など、特定の共存ＧＰＣＲの活性化後、いかなるＲＡＧＥリガンド又はＲＡＧＥの細胞外ドメインからも独立して、ＲＡＧＥの細胞質側テールが活性化され、炎症、酸化ストレス、線維形成、細胞増殖及び細胞生存に関与する重要な転写因子であるＮＦκＢの活性化につながる下流シグナル伝達を開始することを示した。ＲＡＧＥ発現の不存在、具体的にはＲＡＧＥの細胞質側テールにおける重要なドメインの発現の不存在は、ＲＡＧＥの細胞外ドメインの発現とは独立して、Ａｎｇ  ＩＩによるＡＴ１Ｒ又はＭＣＰ−１によるＣＣＲ２など、共存ＧＰＣＲの活性化後のＮＦκＢ活性化の誘導を防止する。理論に拘束されることを望むものではないが、本発明者らは、ＡＴ１Ｒ及びＣＣＲ２を含む特定の共存活性化ＧＰＣＲによるＲＡＧＥの細胞質側テールのＲＡＧＥリガンド非依存性活性化が、ＲＡＧＥを活性化する支配的経路であると考える。さらに、再び理論に拘束されることを望むものではないが、本発明者らは、例えば、損傷、ストレス又は低酸素症に曝された細胞におけるＲＡＧＥのデノボ発現が、確立されたＧＰＣＲシグナル伝達の活性化を介して発生する炎症促進性シグナル伝達の導管を提供するものと考える。
【００２６】
本発明者らは、Ａｎｇ  ＩＩによるＡＴ１Ｒ又はＭＣＰ−１によるＣＣＲ２など、特定の共存ＧＰＣＲの活性化後のＲＡＧＥの細胞質側テールのＲＡＧＥリガンド非依存性活性化も、ＲＡＧＥ発現を増加させるシグナル伝達を引き起こすことを示した。
【００２７】
ＲＡＧＥは、腫瘍細胞の増殖、移動及び浸潤を含む、腫瘍生物学の多くの側面に関係付けられている（Ｍａｌｉｋ  ｅｔ  ａｌ．，２０１５；Ａｂｅ  ｅｔ  ａｌ．，２００８）。多くのがんは、より高いレベルのＲＡＧＥを有する（例として、乳がん、結腸がん、腎臓がん及び胃がんがある；Ｔａｇｕｃｈｉ  ｅｔ  ａｌ．，２０００）。ＲＡＧＥは、肺機能の正常な部分であり、肺細胞が分化して悪性になると失われるため、ＲＡＧＥ発現が低下する肺がんは、例外である（Ｍａｒｉｎａｋｉｓ  ｅｔ  ａｌ．，２０１４）。Ｃ６神経膠腫細胞では、ＲＡＧＥが遮断された細胞で構成される腫瘍において腫瘍体積が著しく減少する。対照的に、ＲＡＧＥを過剰発現する腫瘍は、急速に成長し、周囲の組織に非常に効率的に浸潤した（Ｔａｇｕｃｈｉ  ｅｔ  ａｌ．，２０００）。がん処置としてのＲＡＧＥシグナル伝達を遮断するための治療薬の要求は、多形神経膠腫／髄芽腫（Ｔａｇｕｃｈｉ  ｅｔ  ａｌ．，２０００）；膵臓がん（Ｍａｌｉｋ  ｅｔ  ａｌ．，２０１５；Ｌｅｃｌｅｒｃ  ｅｔ  ａｌ．，２０１５）；黒色腫（Ｍａｌｉｋ  ｅｔ  ａｌ．，２０１５）；前立腺がん（Ｍａｌｉｋ  ｅｔ  ａｌ．，２０１５）；乳がん（Ｍａｌｉｋ  ｅｔ  ａｌ．，２０１５）；肝臓がん／肝がん（Ｌｏｇｓｄｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，２００７；Ｖｏｌｚ  ｅｔ  ａｌ．，２０１０）；及び結腸がん（Ｓｐａｒｖｅｒｏ  ｅｔ  ａｌ．，２００９）を含むが、これらに限定されない多くの一般的ながんに対してなされてきた。
【００２８】
ＲＡＧＥ阻害剤がその処置に有用であり得ることを前臨床及び臨床研究が裏付けているアルツハイマー病を含むがこれに限定されない広範な脳障害に、ＲＡＧＥは関係付けられてきた（Ｃａｉ  ｅｔ  ａｌ．，２０１６）。ＲＡＧＥシグナル伝達が関係する他の脳の状態には、筋萎縮性側索硬化症（Ｒａｙ  ｅｔ  ａｌ  ２０１６）；ハンチントン病（Ｒａｙ  ｅｔ  ａｌ  ２０１６）；クロイツフェルト・ヤコブ病（Ｒａｙ  ｅｔ  ａｌ  ２０１６）；糖尿病性神経障害、家族性アミロイド多発性神経障害、シャルコー神経関節症及び血管炎性神経障害などの神経変性状態（Ｒａｙ  ｅｔ  ａｌ  ２０１６）；神経障害性疼痛（Ｗａｎ  ｅｔ  ａｌ．，２０１６）；神経膠腫の発生及び進行（Ａｎｇｅｌｏｐｏｕｌｏｕ  ｅｔ  ａｌ．，２０１６）；並びに虚血性脳損傷／脳卒中（Ｘｉａ  ｅｔ  ａｌ  ２０１０）が含まれるが、これらに限定されない。
【００２９】
健康な状態では、肺のＲＡＧＥの発現は、全ての組織の中で最高である。しかしながら、肺におけるＲＡＧＥ発現は、通常、１型肺細胞でのみ見られる。肺の他の細胞及び他の部位におけるＲＡＧＥシグナル伝達の上方制御は、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）／肺気腫（Ｓｕｋｋａｒ  ｅｔ  ａｌ．，２０１２）；喘息（Ｓｕｋｋａｒ  ｅｔ  ａｌ．，２０１２）；喫煙／汚染による負傷；急性肺損傷／急性呼吸窮迫症候群（ＡＲＤＳ）（Ｇｕｏ  ｅｔ  ａｌ．，２０１２）；及び肺線維症を含むが、これらに限定されない広範な肺障害に関係付けられてきた。
【００３０】
ＲＡＧＥは、多くの炎症性疾患に決定的に関与し、その結果、その処置の潜在的な治療標的となる。そのような状態には、炎症性関節炎（Ｓｐａｒｖｅｒｏ  ｅｔ  ａｌ．，２００９；Ｃｈｕａｈ  ｅｔ  ａｌ．，２０１３）；変形性関節炎（Ｘｉｅ  ｅｔ  ａｌ．，２０１３）；網膜疾患（Ｂａｒｉｌｅ  ｅｔ  ａｌ．，２００７）；アテローム性動脈硬化症（Ｓｏｒｏ−Ｐａａｖｏｎｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，２００８；Ｓｃｈｍｉｄｔ  ｅｔ  ａｌ．，１９９９；Ｐａｒｋ  ｅｔ  ａｌ．，１９９８；Ｚｈｏｕ  ｅｔ  ａｌ．，２００３；Ｙａｎ  ｅｔ  ａｌ．，２０１０）；血管石灰化（Ｏｔｔ  ｅｔ  ａｌ．，２０１４）；心筋症（Ｖｏｌｚ  ｅｔ  ａｌ．，２０１０；Ｒｕｓｓｏ  ｅｔ  ａｌ．，２０１６）；虚血性心疾患／心臓リモデリング／線維症（Ｙａｎ  ｅｔ  ａｌ．，２０１０；Ｒａｍａｓａｍｙ  ｅｔ  ａｌ．，２０１２）；心不全（Ｒａｍａｓａｍｙ  ｅｔ  ａｌ．，２０１２）；糖尿病性及び非糖尿病性腎疾患（Ｆｕｋａｍｉ  ｅｔ  ａｌ．，２０１５；Ｇｕｇｌｉｕｃｃｉ  ｅｔ  ａｌ．，２０１４）；炎症性腸疾患（Ｏｔｔ  ｅｔ  ａｌ．，２０１４）；子癇前症（Ｄａｆｆｕ  ｅｔ  ａｌ．，２０１３）；多嚢胞性卵巣症候群（Ｇａｒｇ  ｅｔ  ａｌ．，２０１５）；肝脂肪症、線維症、虚血性及び非虚血性肝損傷（Ｙａｍａｇｉｓｈｉ  ｅｔ  ａｌ．，２０１５）；脊髄損傷（Ｙａｍａｇｉｓｈｉ  ｅｔ  ａｌ．，２０１５）；皮膚の炎症及び老化（Ｔｏｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，２０１４）；並びに角膜炎（Ｔｏｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，２０１４）が含まれるが、これらに限定されない。
【課題を解決するための手段】
【００３１】
本発明は、ＲＡＧＥが、ＡＴ１Ｒ及びＣＣＲ２を含む特定の共存ＧＰＣＲと共に細胞膜内に受容体ヘテロマー複合体を形成するという本発明者らによる判定から部分的に生じる。
【００３２】
さらに、本発明は、ＡＴ１Ｒの形態のアンジオテンシン受容体（この場合、Ａｎｇ  ＩＩによる）又はＣＣＲ２などの特定のケモカイン受容体（この場合、ＭＣＰ−１による）など、特定の共存ＧＰＣＲの活性化がＲＡＧＥの細胞質側テールのＲＡＧＥリガンド非依存性活性化を引き起こすという本発明者らによる認識から部分的に生じる。
【００３３】
本発明者らは、Ａｎｇ  ＩＩによるＡＴ１Ｒ又はＭＣＰ−１によるＣＣＲ２など、特定の共存ＧＰＣＲの活性化が共通のメカニズムを介してＲＡＧＥの細胞質側テールのドメインの活性化をもたらすことを示した。トランス活性化のこの経路は、ＲＡＧＥリガンドの遊離を必要としないか、又はＲＡＧＥの細胞外ドメインへの結合を必要としない（すなわち、これは、ＲＡＧＥリガンド非依存性のＲＡＧＥ活性化である）。
【００３４】
ＲＡＧＥの細胞質側テールがリン酸化されていることを示唆する公開されたデータがあるが（Ｓａｋａｇｕｃｈｉ  ｅｔ  ａｌ．，２０１１）、本発明者らは、Ａｎｇ  ＩＩによるＡＴ１Ｒ受容体など、特定の共存ＧＰＣＲの活性化後に誘導されるＲＡＧＥリガンド非依存性シグナル伝達が、ＲＡＧＥの細胞質側テールがセリン３９１又はＲＡＧＥの細胞質側テールの他の部位でリン酸化されることを必要としないことを示した。さらに、本発明者らは、他の哺乳類からのＲＡＧＥホモログやリン酸化を維持できるいかなる残基も有しないＲＡＧＥ変異体も、ＲＡＧＥのリガンド依存性活性化及びＲＡＧＥリガンド非依存性活性化に応答して活性化され、シグナル伝達を誘導することができることから、ＲＡＧＥの細胞外ドメインへのＲＡＧＥリガンド（例えば、Ｓ１００Ａ８／Ａ９など）結合後に誘導されるＲＡＧＥリガンド依存性シグナル伝達が、細胞質側テールがセリン３９１又はＲＡＧＥの細胞質側テールの他の部位でリン酸化されることを必ずしも必要とするものではないことも示した。さらに、ＲＡＧＥのＮ末端トランケート型構築物（例えば、Ｓ３９１Ａ−ＲＡＧＥ３６２−４０４）の阻害機能は、ＲＡＧＥリン酸化のターゲットの非存在下でも維持され、これにより、本発明者らによって説明されたＲＡＧＥ構築物の調節効果がＲＡＧＥのリン酸化に依存しないことが確認される。
【００３５】
従来技術は、ＰＫＣζの阻害剤が、ＲＡＧＥを介したＲＡＧＥリガンド依存性（例えば、ｓ１００誘導性）シグナル伝達及び他の多くのＰＫＣζ依存性経路を阻害することを実証している。ヒト及び動物では、ＰＫＣζの遺伝的欠失により重篤な疾患が生じる。研究者らは、ＰＫＣζの阻害剤が、全長型ＲＡＧＥを介したＲＡＧＥリガンド非依存性（すなわちトランス活性化誘導）シグナル伝達も阻害することを示した。しかしながら、ＲＡＧＥのＮ末端トランケート型構築物（例えば、ＲＡＧＥ３６２−４０４）の調節機能は、ＰＫＣζの阻害に影響されず、このことにより、本発明者らによって説明されたＲＡＧＥ構築物の調節効果がＰＫＣζに依存しないことが確認される。
【００３６】
ＲＡＧＥ活性化に続いて誘導される共有経路の阻害剤（例えば、ｍｙＤ８８、ＴＩＲＡＰ、インターロイキン−１受容体関連キナーゼ４（ＩＲＡＫ４）又はＮＦκＢ）は、ＲＡＧＥリガンド依存性（例えば、ｓ１００誘導性）及びＲＡＧＥリガンド非依存性（すなわちトランス活性化誘導性）の両方のＲＡＧＥを介したシグナル伝達を非特異的に遮断する。他の受容体（例えば、ＴＬＲ）もこれらのシグナル伝達分子／経路を使用するため、これらのメディエーターのいずれかの阻害は、ＲＡＧＥシグナル伝達に特異的ではなく、これらのシグナル伝達メディエーターの他の多くの機能に影響を与え、これは、ヒトの健康に有害であり得る（例えば、ｍｙＤ８８、ＴＩＲＡＰ、ＩＲＡＫ４又はＮＦκＢの遺伝子欠失は、ＲＡＧＥ欠失と異なり、ヒト及び動物に有害である）。
【００３７】
本発明者らは、さらに、ＲＡＧＥリガンド非依存性シグナル伝達の阻害などの選択的調節が、ＲＡＧＥの細胞質側テールを介したシグナル伝達を選択的に標的化することによって達成できることを示し、本発明者らのアッセイ及びそこから同定されたモジュレーターが、このトランス活性化（ＲＡＧＥリガンド非依存性のＲＡＧＥ活性化）プロセスに作用することを示した。
【００３８】
本発明者らは、さらに、ＲＡＧＥのＲＡＧＥリガンド依存性活性化及びＲＡＧＥシグナル伝達のＲＡＧＥリガンド非依存性トランス活性化の二重阻害も、ＲＡＧＥの細胞質側テールを介して媒介されるシグナル伝達を選択的に標的化することで達成できることを示し、本発明者らのアッセイ及びそこから同定されたモジュレーターが、共有メディエーターによるＲＡＧＥ活性化の両方の方式に同時に作用することができることを示した。これは、可溶性ＲＡＧＥ２２−３３１、ＲＡＧＥ中和抗体及びＲＡＧＥの細胞外ドメインに選択的に結合してＲＡＧＥのＲＡＧＥリガンド依存性活性化のみを阻害する可能性のある低分子とは直接区別される。
【００３９】
本発明者らは、さらに、ＲＡＧＥの細胞質側テールを介して媒介されるシグナル伝達を選択的に標的化することによる、ＲＡＧＥシグナル伝達のＲＡＧＥリガンド依存性シグナル伝達及び／又はＲＡＧＥリガンド非依存性トランス活性化の調節が、従来技術（Ｍａｎｉｇｒａｓｓｏ，Ｍ．Ｂ．，ｅｔ  ａｌ  ２０１６）が示唆するリガンド依存性ＲＡＧＥ活性化のモジュレーターである可能性があるＤｉａｐｈａｎｏｕｓ−１（Ｄｉａｐｈ１）とＲＡＧＥとの相互作用を調節することなく達成することができることを示した。さらに、ＲＡＧＥのＮ末端トランケート型構築物（例えば、ＲＡＧＥ３６２−４０４）の調節機能は、Ｄｉａｐｈ１の非存在下で維持され、これにより、本発明者らによって説明されたＲＡＧＥ構築物の調節効果がＤｉａｐｈ１に依存しないことが確認される。
【００４０】
Ｓａｋａｇｕｃｈｉ及び共同研究者は、細胞がＲＡＧＥリガンド、Ｓ１００Ａ１１、Ｓ１００Ａ１２、ＨＭＧＢ１又はＡＧＥで処置された場合、一般的な炎症促進性アダプタータンパク質ＴＩＲＡＰ、ＭｙＤ８８及びＩＲＡＫが、主にＨＥＫ２９３細胞で過剰発現したＲＡＧＥと共沈し、ＲＡＧＥのＲＡＧＥリガンド依存活性化をもたらすことを見出した。ＴＩＲＡＰ、ＭｙＤ８８及びＩＲＡＫは、ＮＦκＢの転写を活性化するＴＬＲ−３を除く全てのｔｏｌｌ様受容体（ＴＬＲ）のアダプタータンパク質としても機能するため、これらの相互作用は、ＲＡＧＥに特異的ではない。
【００４１】
この研究に続き、同グループは、Ｓ３９１Ｅ−ＲＡＧＥ３８７−３９５（ＲＡＧＥ（Ｅ）−Ｉ）を、ＲＡＧＥのリン酸化状態を模倣し、アダプタータンパク質ＴＩＲＡＰを隔離することにより、内因性ＲＡＧＥシグナル伝達を防止することを介した、ＲＡＧＥリガンド依存性シグナル伝達の特定の側面（すなわちアポトーシス、細胞移動及び浸潤の阻害）の阻害剤として提案する研究を発表した（Ｐｕｔｒａｎｔｏ  ｅｔ  ａｌ．，２０１３）。しかしながら、本発明者らは、リン酸化がＲＡＧＥ活性化に必要でないことを示した。さらに、これらの一般的なアダプタータンパク質を隔離することは、ＴＬＲ（例えば、ＴＬＲ−２及びＴＬＲ−４）を介したシグナル伝達にも影響を及ぼし、その一部は、ＲＡＧＥリガンド（例えば、ｓ１００タンパク質）によっても活性化される可能性があり、これは、Ｐｕｒａｎｔｏらの発見を説明するようである。同じ実験で、Ｐｕｒａｎｔｏらは、Ｓ３９１Ａ−ＲＡＧＥ３８７−３９５が、ＴＩＲＡＰへの認識できるほどの結合を示さず、ＲＡＧＥリガンドＳ１００Ｂによって誘導されるアポトーシスを減衰させなかったため、適切な阻害剤でないことも主張した（Ｐｕｔｒａｎｔｏ  ｅｔ  ａｌ．，２０１３）。Ｐｕｒａｎｔｏらは、細胞内アデノシン三リン酸含有量を決定することにより評価されるように、Ｕ−８７ＭＧ細胞の成長が有意に影響を受けなかったため、Ｓ３９１Ｅ−ＲＡＧＥ３８７−３９５が全てのＲＡＧＥリガンド誘導性シグナル伝達経路を阻害しなかったことにも注目した（Ｐｕｔｒａｎｔｏ  ｅｔ  ａｌ．，２０１３）。したがって、Ｐｕｔｒａｎｔｏ及び共同研究者によって推定的に阻害されたＲＡＧＥリガンド依存性経路及びＰｕｒａｎｔｏらが利用したＲＡＧＥの細胞質側テールの断片は、本発明の主題である、共存活性化ＧＰＣＲ及びモジュレーターによるＲＡＧＥリガンド非依存性のＲＡＧＥ活性化と明らかに異なる。実際、Ｓ３９１Ａ−ＲＡＧＥ３８７−３９５に関するＰｕｒａｎｔｏらの否定的な知見は、本発明から遠ざかることを教示している。Ｐｕｔｒａｎｔｏ  ｅｔ  ａｌは、この刊行物のいずれの点においても、共存ＧＰＣＲによるＲＡＧＥの細胞質側テールのＲＡＧＥリガンド非依存性活性化を企図していない。
【００４２】
欧州特許出願公開第１４１５９９７−Ａ１号明細書は、ＲＡＧＥの細胞質側テールに直接的又は間接的に結合し、それにより、リガンドのＲＡＧＥへの結合から生じるシグナル伝達及びその後のＮＦκＢの活性化と、その活性化から生じる下流経路とを阻害又は増強するポリペプチドの同定及び使用を詳述している。本発明は、多くの点でこの教示と異なる。第一に、この教示は、ＲＡＧＥを介したＲＡＧＥリガンド非依存性シグナル伝達又はＲＡＧＥを介したＲＡＧＥリガンド依存性シグナル伝達とＲＡＧＥリガンド非依存性シグナル伝達との二重阻害を企図するものではない。第二に、欧州特許出願公開第１４１５９９７  Ａ１号明細書の特許請求の範囲は、ＲＡＧＥの細胞質側テールの未同定要素に結合するためのポリペプチドの使用に関する。対照的に、本発明者らは、ＲＡＧＥの細胞質側テールをコードするポリペプチド及びその変異型が、ＲＡＧＥを介したＲＡＧＥリガンド非依存性シグナル伝達又はＲＡＧＥを介したＲＡＧＥリガンド依存性シグナル伝達及びＲＡＧＥリガンド非依存性シグナル伝達と関連するシグナル伝達分子を選択的に結合するために使用することができ、その後のＮＦκＢの活性化と、その活性化から生じる下流経路との調節を導くことを実証した。第三に、本発明者らは、ＲＡＧＥの細胞質側テールの重要な要素を含有する選択的に修飾されたポリペプチドを使用して、ＲＡＧＥを介してＲＡＧＥリガンド非依存性シグナル伝達を調節する能力を実証した。第四に、ＲＡＧＥを介したＲＡＧＥリガンド依存性シグナル伝達の調節は、欧州特許出願公開第１４１５９９７−Ａ１号明細書に示されていない。さらに、欧州特許第１４１５９９７−Ａ１号明細書で具体的に同定されたＲＡＧＥリガンド依存性シグナル伝達を調節できる唯一のポリペプチドは、全長型ＲＡＧＥの周知の結合パートナー及びシグナル伝達メディエーターであるＰＫＣζである。本発明者らは、ＰＫＣζがそれらのモジュレーターの作用に必要でないことを示している。
【００４３】
ＲＡＧＥは、ＣｐＧ−ＤＮＡの結合後、サイトゾル残基Ｋ３７４でＦ−ｂｏｘタンパク質ＦＢＸＯ１０によってモノユビキチン化され、そのエンドサイトーシス及びリソソーム媒介分解を引き起こす（Ｅｖａｎｋｏｖｉｃｈ  ｅｔ  ａｌ．２０１７）。エンドサイトーシス及び／又はＲＡＧＥのユビキチン化は、他の炎症促進性ＲＡＧＥリガンドでは観察されていない。
【００４４】
ＲＡＧＥのユビキチン化は、Ｓ３９１に部分的に依存しており、Ｓ３９１Ａ−ＲＡＧＥ変異体は、ＦＢＸＯ１０過剰発現後のユビキチン化及びその後の分解に対して部分的に耐性がある。
【００４５】
これらのデータは、Ｋ３７４Ｒ及びＳ３９１Ａ−ＲＡＧＥ変異体が特定の状況下でユビキチン化に耐性を有し得、それにより野生型ＲＡＧＥよりも高いレベルで蓄積できることを示唆している。しかしながら、この潜在的に増加した分解に対する安定性／耐性は、以下に詳述するように、共存ＧＰＣＲの活性化後のＲＡＧＥリガンド非依存性のＲＡＧＥ活性化の急速な調節及び１０００倍過剰に送達される野生型ＲＡＧＥの存在下でもＳ３９１Ａ−ＲＡＧＥ変異体によって達成されるＲＡＧＥシグナル伝達のＲＡＧＥリガンド非依存性活性化の阻害を説明することができず、この調節は、Ｋ３７４の存在下及び非存在下で同様に発生するものでもない。
【００４６】
本発明の以下の説明の普遍性を制限するものではないが、本発明者らは、Ａｎｇ  ＩＩなどによるＡＴ１Ｒ又はＭＣＰ−１などによるＣＣＲ２など、特定の共存ＧＰＣＲの活性化がＲＡＧＥの共存細胞質側テールの活性化を引き起こすことを実証した。この活性化は、ＲＡＧＥの細胞外ドメインの非存在下で起こり、したがってＲＡＧＥリガンド又はＲＡＧＥの細胞外ドメインとのそれらの相互作用とは完全に独立している。理論に拘束されることを望むものではないが、本発明者らは、特定の共存ＧＰＣＲによるＲＡＧＥのこのトランス活性化がＲＡＧＥ活性化の主要なメカニズムを表すと考える。この前提と一致して、本発明者らは、ＲＡＧＥ−リガンド依存性シグナル伝達が完全に不存在のままであっても、ＡＧＥＲ／ａｐｏＥダブルＫＯ（ＤＫＯ）マウスにおけるＲＡＧＥリガンド非依存性ＲＡＧＥシグナル伝達の選択的回復が、ＲＡＧＥに富むａｐｏＥ−ＫＯマウスで観察されたものと有意に異ならないレベルにアテローム形成を回復することを実証した。
【００４７】
ＡＴ１Ｒの活性化によって誘導される有害なシグナル伝達事象の多くは、ＲＡＧＥ発現が不存在である場合（例えば、遺伝子の欠失若しくはサイレンシング、又はＲＡＧＥを発現しない健康な細胞内、又は活性化ＡＴ１ＲによるＲＡＧＥのリガンド非依存性活性化が防止又は阻害される場合）に減衰する。
【００４８】
同時に、ＡＴ１Ｒアンタゴニストによって阻害されるイノシトールリン酸及びカルシウム流入の誘導につながるＡＴ１Ｒ活性化によって誘導されるＧｑシグナル伝達経路などのＲＡＧＥ非依存性ＡＴ１Ｒシグナル伝達経路は、ＲＡＧＥ欠失、ＲＡＧＥ発現のサイレンシング又はＲＡＧＥ機能の阻害の影響を受けない。
【００４９】
そのため、ＡＴ１Ｒ又はＣＣＲ２などの特定の活性化された共存ＧＰＣＲによるＲＡＧＥリガンド非依存性のＲＡＧＥ活性化の調節、特に阻害は、共存ＧＰＣＲの活性化後にＲＡＧＥを介して誘導される病原性シグナル伝達を標的とした治療的介入に特定の利点を提供する。例えば、そのようなモジュレーターは、特定の実施形態において、血圧調節を損なうことなく、又はＲＡＡＳ阻害剤の使用を制限するＡＴ１Ｒ阻害後に起こるものなどのＡＴ１Ｒ阻害からのフィードバック「回避」を誘導することなく、ＡＴ１Ｒの有害効果の積極的な標的化を可能にする。そのようなモジュレーターは、このトランス活性化経路が構成的に活性化されるか（例えば、白血球、内皮細胞）又は誘導された（例えば、炎症及び損傷の部位）細胞及び組織にのみ影響し得、ＲＡＧＥも発現しない細胞（例えば、健常平滑筋細胞）におけるＲＡＡＳ及び他のＧＰＣＲ媒介シグナル伝達を影響されないままとする。
【００５０】
ＡＴ１Ｒの活性化は、血行動態効果及び非血行動態効果の両方を有する。血行動態効果とは、血流の変化につながるものであり、血液量、血圧、流量又は速度、抵抗、心拍出量、乱流及び壁張力の変化が含まれる。ＡＴ１Ｒブロッカー（阻害剤）は、血行動態（例えば、血圧を下げる、抵抗力及び心拍出量を変える）及び非血行動態効果（例えば、酸化ストレス及び炎症を引き起こす）の両方を示すことができる。ＲＡＡＳが活性化した状態（例えば、心疾患、腎疾患、高血圧）では、血行動態と非血行動態との両方の経路が活性化される。
【００５１】
活性化ＡＴ１ＲによるＲＡＧＥリガンド非依存性のＲＡＧＥ活性化は、ＡＴ１Ｒ活性化の非血行動態（非血流効果）のみのメディエーターである。本発明者らは、ＲＡＧＥの全体的な遺伝子欠失が直接的な血行動態効果を有さず（例えば、血圧、血管抵抗又は血流、血液量に影響を及ぼさない）、ＡＴ１Ｒ活性化又は阻害の血行動態効果を変化させないことを観察した。活性化ＡＴ１ＲによるＲＡＧＥリガンド非依存性のＲＡＧＥ活性化を標的とする主な利点は、それにより、有害な血行動態の効果により前記処置が安全でなくなる前にどの程度血圧低下が可能かを制限する血圧調節の制約に制限されないことである。
【００５２】
さらに、血流の変化は、自動的にフィードバック（恒常性）応答を引き起こし、血流を一定レベルに維持する。これらのフィードバック応答は、ＡＴ１Ｒ阻害又はアンジオテンシン変換酵素（ＡＣＥ）の阻害によるＲＡＡＳの阻害の血行動態効果を相殺又は回避するように作用する。対照的に、ＡＴ１Ｒなどの活性化アンジオテンシン受容体によるＲＡＧＥリガンド非依存性のＲＡＧＥ活性化の阻害を介して達成されるＲＡＡＳの活性化後に誘導される非血行動態経路の選択的阻害は、フィードバック／回避応答に関連しない。そのようなフィードバック応答の欠如は、そのような阻害の耐久性及び有効性を裏付ける。
【００５３】
＜活性化された共存ＧＰＣＲによるＲＡＧＥリガンド非依存性のＲＡＧＥ活性化のモジュレーター＞
一形態において、本発明は、ＲＡＧＥ活性のモジュレーターを含み、そのようなＲＡＧＥ活性は、特定の活性な共存ＧＰＣＲによって誘導される。
【００５４】
一形態において、本発明は、特定の活性化された共存ＧＰＣＲによるＲＡＧＥリガンド非依存性のＲＡＧＥ活性化のモジュレーターを含む。
【００５５】
一形態において、本発明は、特定の活性化された共存ＧＰＣＲによって誘導されるＲＡＧＥ依存性シグナル伝達のモジュレーターであるモジュレーターを含む。
【００５６】
本発明の一形態では、特定の活性化された共存ＧＰＣＲによるＲＡＧＥリガンド非依存性のＲＡＧＥ活性化のモジュレーターは、ＲＡＧＥリガンドの非存在下で作用する。
【００５７】
本発明の一形態では、特定の活性化された共存ＧＰＣＲによるＲＡＧＥリガンド非依存性のＲＡＧＥ活性化のモジュレーターは、ＲＡＧＥの切断された外部ドメインの存在下で作用する。
【００５８】
本発明の一形態では、特定の活性化された共存ＧＰＣＲによるＲＡＧＥリガンド非依存性のＲＡＧＥ活性化のモジュレーターは、長さが４０アミノ酸以下、２０アミノ酸以下、１０アミノ酸以下又は５アミノ酸以下である、ＲＡＧＥの切断された外部ドメインの存在下で作用する。
【００５９】
本発明の一形態では、特定の活性化された共存ＧＰＣＲによるＲＡＧＥリガンド非依存性のＲＡＧＥ活性化のモジュレーターは、長さが５アミノ酸超、１０アミノ酸超又は２０アミノ酸超である、ＲＡＧＥの膜貫通ドメインの類似体、断片又は誘導体にコンジュゲートされたＲＡＧＥの細胞外ドメイン全体を含有する。
【００６０】
本発明の一形態では、特定の活性化された共存ＧＰＣＲによるＲＡＧＥリガンド非依存性のＲＡＧＥ活性化のモジュレーターは、ＲＡＧＥのＲＡＧＥリガンド結合外部ドメインの非存在下で作用する。
【００６１】
本発明の一形態では、特定の活性化された共存ＧＰＣＲによるＲＡＧＥリガンド非依存性のＲＡＧＥ活性化のモジュレーターは、ＲＡＧＥの細胞外ドメインを含有しない。
【００６２】
本発明の一形態では、特定の活性化された共存ＧＰＣＲによるＲＡＧＥリガンド非依存性のＲＡＧＥ活性化のモジュレーターは、ＲＡＧＥの細胞外ドメインの類似体、断片又は誘導体を含有しない。
【００６３】
本発明の一形態では、特定の活性化された共存ＧＰＣＲによるＲＡＧＥリガンド非依存性のＲＡＧＥ活性化のモジュレーターは、ＲＡＧＥの細胞外ドメインの断片を含有する。
【００６４】
本発明の一形態では、特定の活性化された共存ＧＰＣＲによるＲＡＧＥリガンド非依存性のＲＡＧＥ活性化のモジュレーターは、長さが４０アミノ酸以下、２０アミノ酸以下、１０アミノ酸以下又は５アミノ酸以下であるＲＡＧＥの細胞外ドメインの断片を含有する。
【００６５】
本発明の一形態では、特定の活性化された共存ＧＰＣＲによるＲＡＧＥリガンド非依存性のＲＡＧＥ活性化のモジュレーターは、ＲＡＧＥの細胞外ドメインに結合しない。
【００６６】
本発明の一形態では、特定の活性化された共存ＧＰＣＲによるＲＡＧＥリガンド非依存性のＲＡＧＥ活性化のモジュレーターは、活性化された共存ＧＰＣＲによって誘導されるＲＡＧＥのＣ末端細胞質側テールを介して発生するシグナル伝達を阻害又は促進する。
【００６７】
本発明の一形態では、特定の活性化された共存ＧＰＣＲによるＲＡＧＥリガンド非依存性のＲＡＧＥ活性化のモジュレーターは、ＲＡＧＥのＣ末端細胞質側テールに発生する結合を阻害する。
【００６８】
本発明の一形態では、特定の活性化された共存ＧＰＣＲによるＲＡＧＥリガンド非依存性のＲＡＧＥ活性化のモジュレーターは、ＲＡＧＥの膜貫通ドメインと特定のＧＰＣＲとの間の相互作用を阻害又は促進する。
【００６９】
本発明の一形態では、特定の活性化された共存ＧＰＣＲによるＲＡＧＥリガンド非依存性のＲＡＧＥ活性化のモジュレーターは、ＲＡＧＥの膜貫通ドメインと特定のＧＰＣＲとの相互作用を阻害する。
【００７０】
本発明の一形態では、特定の活性化された共存ＧＰＣＲによるＲＡＧＥリガンド非依存性のＲＡＧＥ活性化のモジュレーターは、ＲＡＧＥの膜貫通ドメイン及び特定のＧＰＣＲの近接性に依存するＲＡＧＥ依存性シグナル伝達を調節する活性化ＧＰＣＲの能力を阻害又は促進する。
【００７１】
本発明の一形態では、特定の活性化された共存ＧＰＣＲによるＲＡＧＥリガンド非依存性のＲＡＧＥ活性化のモジュレーターは、ＲＡＧＥの膜貫通ドメイン及び特定のＧＰＣＲの近接性に依存するＲＡＧＥ依存性シグナル伝達を調節する活性化ＧＰＣＲの能力を阻害する。
【００７２】
本発明の一形態では、特定の活性化された共存ＧＰＣＲによるＲＡＧＥリガンド非依存性のＲＡＧＥ活性化のモジュレーターは、ＲＡＧＥの膜貫通ドメイン及び特定のＧＰＣＲの近接性に依存するＲＡＧＥ依存性シグナル伝達を調節する活性化ＧＰＣＲの能力を阻害又は促進し、且つ活性化された共存ＧＰＣＲによって誘導されるＲＡＧＥのＣ末端細胞質側テールを介して発生するシグナル伝達を阻害又は促進する。
【００７３】
本発明の一形態では、特定の活性化された共存ＧＰＣＲによるＲＡＧＥリガンド非依存性のＲＡＧＥ活性化のモジュレーターは、ＲＡＧＥの膜貫通ドメイン及び特定のＧＰＣＲの近接性に依存するＲＡＧＥ依存性シグナル伝達を調節する活性化ＧＰＣＲの能力を阻害し、且つ活性化された共存ＧＰＣＲによって誘導されるＲＡＧＥのＣ末端細胞質側テールを介して発生するシグナル伝達を阻害する。
【００７４】
本明細書全体を通して、文脈がそうでないことを要しない限り、共存ＧＰＣＲは、内因的に又は形質導入の結果として、ＲＡＧＥと同じ細胞で共発現するＧタンパク質共役型受容体スーパーファミリーのメンバー（ＧＰＣＲ；７回膜貫通ドメイン受容体、７ＴＭ受容体、ヘプタヘリカル受容体、セルペンチン受容体及びＧタンパク質連結受容体としても知られる；他のいくつかの７ＴＭタンパク質は、ＧＰＲ１０７、ＧＰＲ１３７、ＯＲ５１Ｅ１、ＴＰＲＡ１、ＧＰＲ１４３及びＧＰＲ１５７を含む、Ｇタンパク質共役型受容体スーパーファミリーのメンバーとして分類されている）を意味する。このスーパーファミリーの全てのメンバーがＧタンパク質に共役するわけではなく、これに関連して、ＧＰＣＲという用語には、Ｇタンパク質に共役しないスーパーファミリーのメンバーが含まれることに注意されたい。同一細胞での共発現は、共免疫沈降、生物発光共鳴エネルギー移動（ＢＲＥＴ）、蛍光共鳴エネルギー移動（ＦＲＥＴ）及び顕微鏡検査を含む、当業者に知られている多くの技術によって実証され得る。共存ＧＰＣＲは、好ましくは、ＧＰＣＲとＲＡＧＥとの間で機能的相互作用が生じるようにＲＡＧＥに十分に近接したＧＰＣＲである。さらにより好ましくは、共存ＧＰＣＲは、適切な近接アッセイがこの近接を検出できるほどＲＡＧＥに十分に近接したＧＰＣＲである。適切な近接アッセイの例は、ＢＲＥＴ、ＦＲＥＴ、酵素断片補完、スプリットルシフェラーゼ補完、スプリットフルオロフォア補完、ＴＡＮＧＯアッセイ、ＮａｎｏＬｕｃ  Ｂｉｎａｒｙ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ（ＮａｎｏＢＩＴ）アッセイ、近接性ライゲーションアッセイ（ＰＬＡ）又はこれらのタンパク質の１つ以上がアッセイの使用を容易にするために標識又はタグ付けされているかどうかにかかわらず、２つのタンパク質の近接性を検出できる他の任意の近接性アッセイである。そのような近接性アッセイは、異なる方法で構成でき、受容体−ヘテロマー調査技術（Ｒｅｃｅｐｔｏｒ−ＨＩＴ）の構成及びその派生は、そのような近接性アッセイの好ましい構成である（国際公開第２００８／０５５３１３号パンフレット；Ｊａｅｇｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，２０１４）。
【００７５】
本明細書全体を通して、文脈がそうでないことを要しない限り、活性化されたＧＰＣＲは、アゴニスト、部分アゴニスト及び／若しくはアロステリックモジュレーターの結合から生じ得、且つ／又はリガンド結合を必要としない構成的活性の結果としての活性状態にあるＧＰＣＲを意味する。
【００７６】
本明細書全体を通して、文脈がそうでないことを要しない限り、本発明の特定の活性化された共存ＧＰＣＲは、ＲＡＧＥと同じ細胞で発現され、ＲＡＧＥ活性化の調節及び／又はＲＡＧＥ依存性シグナル伝達の誘導の調節を示すＲＡＧＥへの影響が、特定の共存ＧＰＣＲの認識リガンドによる活性化時又はＧＰＣＲが構成的に活性である場合に検出される、ＧＰＣＲである。
【００７７】
一実施形態では、ＲＡＧＥ活性化の調節を示すＲＡＧＥへの影響は、共存ＧＰＣＲの認識リガンドの付加時に生物発光共鳴エネルギー移動（ＢＲＥＴ）を使用して、ルシフェラーゼコンジュゲートＲＡＧＥ（ＲＡＧＥ／Ｒｌｕｃ８など）の、フルオロフォアで標識されたＲａｂ１、Ｒａｂ４、Ｒａｂ５、Ｒａｂ６、Ｒａｂ７、Ｒａｂ８、Ｒａｂ９及び／又はＲａｂ１１などのＲａｂ（Ｖｅｎｕｓ−Ｒａｂ１、Ｖｅｎｕｓ−Ｒａｂ４、Ｖｅｎｕｓ−Ｒａｂ５、Ｖｅｎｕｓ−Ｒａｂ６、Ｖｅｎｕｓ−Ｒａｂ７、Ｖｅｎｕｓ−Ｒａｂ８、Ｖｅｎｕｓ−Ｒａｂ９及び／又はＶｅｎｕｓ−Ｒａｂ１１など）などの細胞内コンパートメントマーカー及び／又はＫ−ｒａｓ（Ｖｅｎｕｓ−Ｋ−ｒａｓなど）のフルオロフォアコンジュゲート断片などの原形質膜マーカーへの近接性の変化によって検出されるものなどの細胞内輸送の変化である（Ｔｉｕｌｐａｋｏｖ  ｅｔ  ａｌ．，２０１６）。
【００７８】
別の実施形態では、ＲＡＧＥに対する効果は、ルシフェラーゼコンジュゲートＲＡＧＥ（ＲＡＧＥ−Ｒｌｕｃ８など）の、ＩＱＧＡＰ−１、プロテインキナーゼＣゼータ（ＰＫＣζ）、Ｄｏｃｋ７、ＭｙＤ８８、ＴＩＲＡＰ、ＥＲＫ１／２（Ｊｕｌｅｓ  ｅｔ  ａｌ．，２０１３；Ｒａｍａｓａｍｙ  ｅｔ  ａｌ．，２０１６）、嗅覚受容体２Ｔ２、ＡＤＰ／ＡＴＰトランスロカーゼ２、プロテインホスファターゼ１Ｇ、細胞間接着分子１、タンパク質ＤＪ−１（ＰＡＲＫ７）、カルポニン−３、ドレブリン、フィラミンＢ、Ｒａｓ関連タンパク質Ｒａｂ−１３、ラディキシン／エズリン／モエシン、プロテオリピドタンパク質２、コロニン、Ｓ１００  Ａ１１、サクシニル−ＣｏＡリガーゼ［ＧＤＰ形成］サブユニットα、Ｈｓｃ７０相互作用タンパク質、アポトーシス阻害剤５、ニューロピリン、切断刺激因子、成長因子受容体結合タンパク質２、ｓｅｃ６１βサブユニット又はＮｃｋ１など、ＲＡＧＥの細胞質側テールと相互作用するフルオロフォア標識タンパク質などのＲＡＧＥ相互作用群への近接性の変化によって検出されるものなど、ＲＡＧＥ依存性シグナル伝達の変化である。
【００７９】
別の実施形態において、ＲＡＧＥに対する効果は、以下の１つ以上によって測定される認識リガンドによる特定の共存ＧＰＣＲの活性化時のＮＦκＢの標準的活性化の変化により検出されるものなど、ＲＡＧＥ依存性シグナル伝達の変化である。
・ＧＳＴ−ＩκＢαなどの基質のインビトロでのリン酸化をモニタリングすることによるＩｋＢキナーゼ（ＩＫＫ）の活性；
・ＩκＢ及び／又はＩκＢ−αのリン酸化／ユビキチン化及び／又は分解を含む、ＩｋＢ分解動態の検出；
・抗体、ゲルシフト、ＥＭＳＡ及び／又は質量分析の使用などによるｐ６５（Ｒｅｌ−Ａ）のリン酸化／ユビキチン化の検出；
・ｐ６５／ホスホｐ６５などのＮＦκＢ成分／サブユニットのサイトゾルから核への輸送／転移の検出；
・ＮＦκＢサブユニットの二量体化／複合体形成の検出；
・電気泳動移動度シフトアッセイ又はゲルシフトアッセイ、ＳＥＬＥＸ、タンパク質結合マイクロアレイ又は配列に基づくアプローチの使用などによる、ＮＦκＢ応答要素／コンセンサスＮＦκＢ結合モチーフを含む固定化ＤＮＡ配列／オリゴヌクレオチドへの結合による活性ＮＦκＢ成分／サブユニットの検出；
・特定の遺伝子のプロモーター及びエンハンサーへの、ＤＮＡへのＮＦκＢのインサイチュー結合を検出するクロマチン免疫沈降（ＣｈＩＰ）アッセイ；
・ＮＦκＢキナーゼ活性に対するインビトロキナーゼアッセイ；
・プラスミド形質導入、レポーター細胞株、ミニサークル、レトロウイルス又はレンチウイルスなどのアプローチを使用した、ＬａｃＺ  Ｆｌｕｃ、ｅＧＦＰ  ＳＥＡＰ及びＮＦ−ｇｌｕｃなどのレポーター構築物の導入遺伝子発現を介したＮＦκＢレポーターアッセイを使用したＮＦκＢ転写活性の測定；
・サイトカイン、成長因子、接着分子及びリアルタイムＰＣＲによるミトコンドリア抗アポトーシス遺伝子、タンパク質又は機能的アッセイなど、ＮＦκＢの下流標的の発現の変化の測定（ＮＦκＢの多面的性質は、現在およそ５００個の転写標的に反映されていることに注意されたい（２０１７年８月２日時点のｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｂｕ．ｅｄｕ／ｎｆ−ｋｂ／ｇｅｎｅ−ｒｅｓｏｕｒｃｅｓ／ｔａｒｇｅｔ−ｇｅｎｅｓ／を参照されたい））；及び
・Ｔ細胞でのＰＯＬＫＡＤＯＴＳ、内皮細胞での接着、白血球での活性化又は腫瘍形成など、ＮＦκＢ依存性シグナル伝達によって誘導される機能又は構造の変化の測定。
【００８０】
別の実施形態では、ＲＡＧＥに対する効果は、以下の１つ以上を測定することによりＮＦκＢの非標準的な活性化の変化によって検出されるものなど、ＲＡＧＥシグナル伝達の変化である。
・ＮＩＫ（ＮＦκＢ誘導キナーゼ）の検出；
・ＩＫＫαの活性化／リン酸化の検出；
・キナーゼアッセイを実行することによる、基質を自己リン酸化又はリン酸化する能力によるＮＩＫキナーゼ活性の検出；
・ｐ５２／ＲｅｌＢなどのｐ５２含有ＮＦκＢダイマーの生成；
・ホスホＮＦκＢ２ｐ１００（Ｓｅｒ８６６／８７０）の検出；
・前駆体ｐ１００のｐ５２への部分的分解（処理と呼ばれる）の検出；
・核へのｐ５２／ＲｅｌＢ転移の検出；
・ＮＦκＢ部位へのｐ５２／ＲｅｌＢ結合の検出；
・プラスミド形質導入、レポーター細胞株、ミニサークル、レトロウイルス又はレンチウイルスなどのアプローチを使用した、ＬａｃＺ  Ｆｌｕｃ、ｅＧＦＰ  ＳＥＡＰ、ＮＦ−ｇｌｕｃなどのレポーター構築物の導入遺伝子発現を介したＮＦκＢレポーターアッセイを使用したＮＦκＢ転写活性の測定；及び
・リアルタイムＰＣＲ、タンパク質発現又はＣＸＣＬ１２など、機能的アッセイによるＮＦκＢの非標準シグナル伝達の下流標的の発現の変化の測定。
【００８１】
＜共存ＧＰＣＲ＞
一実施形態では、本発明の特定の活性化された共存ＧＰＣＲは、ＲＡＧＥと同じ細胞で発現され、且つＲＡＧＥ関連障害に関連付けられるＧＰＣＲである。
【００８２】
一実施形態では、本発明の特定の活性化された共存ＧＰＣＲは、ＲＡＧＥと同じ細胞で発現され、ＲＡＧＥ関連障害に関連付けられ、且つそれらの除去及び／又は阻害によりＲＡＧＥ関連障害の軽減又は緩和がもたらされるＧＰＣＲである。
【００８３】
一実施形態では、本発明の特定の活性化された共存ＧＰＣＲは、炎症に関係付けられるＧＰＣＲである。
【００８４】
一実施形態では、本発明の特定の活性化された共存ＧＰＣＲは、炎症に関係付けられ、且つそれらの除去及び／又は阻害により炎症の軽減又は緩和がもたらされるＧＰＣＲである。
【００８５】
一実施形態では、本発明の特定の活性化された共存ＧＰＣＲは、細胞増殖に関係付けられるＧＰＣＲである。
【００８６】
一実施形態では、本発明の特定の活性化された共存ＧＰＣＲは、細胞増殖に関係付けられ、且つそれらの除去及び／又は阻害により細胞増殖の軽減又は緩和がもたらされるＧＰＣＲである。
【００８７】
実際、多くのＧＰＣＲがある程度炎症に関与している証拠があり、これらのレベルは、証拠のレベルに応じて区別することができる。
１  −  現在までに証拠が発見されなかった；
２  −  受容体構造又は受容体内のモチーフは、既知の炎症／免疫受容体又は炎症／免疫プロセスに関与するモチーフと類似している；
３  −  受容体は、炎症／免疫プロセスを媒介するリガンドに結合する；
４  −  受容体は、炎症性疾患／免疫疾患に関連付けられる／関与する；
５  −  炎症／免疫プロセスにおける受容体の直接的な関与について記述した少なくとも１つの論文；
６  −  受容体は、炎症／免疫細胞で発現する；及び
７  −  炎症／免疫プロセスにおける受容体の関与が十分に特徴付けられている（ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｇｕｉｄｅｔｏｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ．ｏｒｇデータベースに記載されている通り）。
【００８８】
ファミリーＡのＧＰＣＲ（嗅覚、鋤鼻、オプシンを除く）と、その炎症への関与の現在の証拠レベル（上記キーを参照されたい）：
【００８９】
【表１】
2020531514.tif 000002
【００９０】
【表２】
2020531514.tif 000003
【００９１】
【表３】
2020531514.tif 000004
【００９２】
【表４】
2020531514.tif 000005
【００９３】
【表５】
2020531514.tif 000006
【００９４】
【表６】
2020531514.tif 000007
【００９５】
【表７】
2020531514.tif 000008
【００９６】
【表８】
2020531514.tif 000009
【００９７】
ファミリーＡ嗅覚ＧＰＣＲと、その炎症への関与の現在の証拠レベル（上記キーを参照されたい）：
【００９８】
【表９】
2020531514.tif 000010
【００９９】
【表１０】
2020531514.tif 000011
【０１００】
【表１１】
2020531514.tif 000012
【０１０１】
【表１２】
2020531514.tif 000013
【０１０２】
【表１３】
2020531514.tif 000014
【０１０３】
【表１４】
2020531514.tif 000015
【０１０４】
【表１５】
2020531514.tif 000016
【０１０５】
【表１６】
2020531514.tif 000017
【０１０６】
【表１７】
2020531514.tif 000018
【０１０７】
ファミリーＡ鋤鼻及びオプシンＧＰＣＲと、その炎症への関与の現在の証拠レベル（上記キーを参照されたい）：
【０１０８】
【表１８】
2020531514.tif 000019
【０１０９】
ファミリーＢのＧＰＣＲと、その炎症への関与の現在の証拠レベル（上記キーを参照されたい）：
【０１１０】
【表１９】
2020531514.tif 000020
【０１１１】
【表２０】
2020531514.tif 000021
【０１１２】
ファミリーＣのＧＰＣＲと、その炎症への関与の現在の証拠レベル（上記キーを参照されたい）：
【０１１３】
【表２１】
2020531514.tif 000022
【０１１４】
ＦｒｉｚｚｌｅｄファミリーＧＰＣＲと、その炎症への関与の現在の証拠レベル（上記キーを参照されたい）：
【０１１５】
【表２２】
2020531514.tif 000023
【０１１６】
ＧＰＣＲスーパーファミリーのメンバーとして分類されている他の７ＴＭタンパク質と、その炎症への関与の現在の証拠レベル（上記キーを参照されたい）：
【０１１７】
【表２３】
2020531514.tif 000024
【０１１８】
一実施形態では、本発明の特定の活性化された共存ＧＰＣＲは、群：：ＡＤＧＲＡ２、ＡＤＧＲＢ２、ＡＤＧＲＢ３、ＡＤＧＲＦ３、ＡＤＧＲＧ４、ＡＤＧＲＶ１、ＣＥＬＳＲ１、ＣＥＬＳＲ２、ＣＥＬＳＲ３、ＯＸ１受容体、ＯＸ２受容体、ＰＴＨ１受容体、ＰＴＨ２受容体、ＡＭＹ１受容体、ＡＭＹ２受容体、ＡＭＹ３受容体、ＡＭ１受容体、ＡＭ２受容体、ＧＰＲ６３、ＧＰＲ７５、ＮＭＵ２受容体、ＯＰＮ５、Ｖ１Ｂ受容体、ｙ６受容体、５−ＨＴ４受容体、ＧＰＲ１０１、ＧＰＲ１１９、ＧＰＲ１３５、ＧＰＲ１３７、ＧＰＲ１４１、ＧＰＲ１４９、ＧＰＲ１５０、ＧＰＲ１５１、ＧＰＲ１５２、ＧＰＲ１５７、ＧＰＲ１９、ＧＰＲ２５、ＧＰＲ３７、ＧＰＲ３７Ｌ１、ＧＰＲ５０、ＧＰＲ６２、ＬＧＲ５、ＭＲＧＰＲＥ、ＭＲＧＰＲＦ、ＮＴＳ２受容体、ＯＰＮ４、ＯＰＮ４、ＯＲ１０Ａ７、ＯＲ１０ＡＧ１、ＯＲ１０Ｑ１、ＯＲ１０Ｗ１、ＯＲ１２Ｄ３、ＯＲ１３Ｃ２、ＯＲ１３Ｃ３、ＯＲ１３Ｃ４、ＯＲ１３Ｃ５、ＯＲ１３Ｃ８、ＯＲ１３Ｆ１、ＯＲ１３Ｇ１、ＯＲ１Ａ２、ＯＲ１Ｌ１、ＯＲ１Ｓ１、ＯＲ１Ｓ２、ＯＲ２ＡＫ２、ＯＲ２Ｄ２、ＯＲ２Ｄ３、ＯＲ４Ａ１５、ＯＲ４Ｃ１１、ＯＲ４Ｃ１２、ＯＲ４Ｃ１３、ＯＲ４Ｃ１５、ＯＲ４Ｃ１６、ＯＲ４Ｋ１３、ＯＲ４Ｋ１４、ＯＲ４Ｋ１５、ＯＲ４Ｋ１７、ＯＲ４Ｎ５、ＯＲ５ＡＣ２、ＯＲ５ＡＫ２、ＯＲ５ＡＰ２、ＯＲ５ＡＲ１、ＯＲ５ＡＳ１、ＯＲ５Ｂ１２、ＯＲ５Ｂ１７、ＯＲ５Ｂ２、ＯＲ５Ｂ２１、ＯＲ５Ｂ３、ＯＲ５Ｄ１３、ＯＲ５Ｄ１４、ＯＲ５Ｄ１６、ＯＲ５Ｄ１８、ＯＲ５Ｆ１、ＯＲ５Ｉ１、ＯＲ５Ｊ２、ＯＲ５Ｋ３、ＯＲ５Ｌ１、ＯＲ５Ｌ２、ＯＲ５Ｍ１、ＯＲ５Ｍ１０、ＯＲ５Ｍ１１、ＯＲ５Ｍ３、ＯＲ５Ｍ８、ＯＲ５Ｍ９、ＯＲ５Ｒ１、ＯＲ５Ｔ１、ＯＲ５Ｔ２、ＯＲ５Ｔ３、ＯＲ５Ｗ２、ＯＲ６Ｃ７４、ＯＲ６Ｋ６、ＯＲ６Ｍ１、ＯＲ６Ｑ１、ＯＲ６Ｘ１、ＯＲ８Ｈ１、ＯＲ８Ｈ２、ＯＲ８Ｈ３、ＯＲ８Ｊ１、ＯＲ８Ｊ３、ＯＲ８Ｋ１、ＯＲ８Ｋ３、ＯＲ８Ｋ５、ＯＲ８Ｕ１、ＯＲ８Ｕ８、ＯＲ９Ａ４、ＯＲ９Ｇ１、ＯＲ９Ｇ４、ＯＲ９Ｇ９、ＯＲ９Ｑ２、ＴＡＡＲ３、ＴＰＲＡ１、Ｙ４受容体、５−ＨＴ１Ｄ受容体、５−ＨＴ１Ｅ受容体、ＡＤＧＲＢ１、ＡＴ２受容体、ＢＢ１受容体、ＢＢ３受容体、ＣＧＲＰ受容体、ＣＲＦ１受容体、ＣＲＦ２受容体、ＥＴＡ受容体、ＥＴＢ受容体、ＦＺＤ４、ＦＺＤ５、ＦＺＤ７、ＦＺＤ８、ＦＺＤ９、ＧＡＢＡＢ受容体、ＧＡＢＡＢ１、ＧＡＢＡＢ２、ＧＡＬ１受容体、ＧＩＰ受容体、ＧＬＰ−１受容体、ＧＬＰ−２受容体、グルカゴン受容体、ＧｎＲＨ２受容体、ＧＰＥＲ、ＧＰＲ１０７、ＧＰＲ１３９、ＧＰＲ１５６、ＧＰＲ１５８、ＧＰＲ１６１、ＧＰＲ１７１、ＧＰＲ１７９、ＧＰＲ３９、ＧＰＲ４５、ＧＰＲ８８、ＧＰＲＣ５Ａ、ＧＰＲＣ５Ｂ、ＧＰＲＣ５Ｃ、Ｈ３受容体、ＨＣＡ１受容体、ＬＰＡ１受容体、ＬＰＡ３受容体、ＬＰＡ４受容体、ＭＣ２受容体、ＭＣ４受容体、ｍＧｌｕ２受容体、ｍＧｌｕ３受容体、モチリン受容体、ＭＲＧＰＲＤ、ＭＲＧＰＲＸ１、ＭＲＧＰＲＸ３、ＮＫ２受容体、ＮＰＦＦ１受容体、ＮＰＦＦ２受容体、ＮＰＳ受容体、ＮＴＳ１受容体、ＯＲ１Ｄ２、ＯＲ２ＡＧ１、ＯＴ受容体、ＰＡＣ１受容体、ＲＸＦＰ１受容体、セクレチン受容体、ＴＳＨ受容体、ＵＴ受容体、Ｖ１Ａ受容体、Ｖ２受容体、α２Ａ−アドレナリン受容体、α２Ｂ−アドレナリン受容体、α２Ｃ−アドレナリン受容体、β１−アドレナリン受容体、β３−アドレナリン受容体、５−ＨＴ１Ｂ受容体、５−ＨＴ１Ｆ受容体、５−ＨＴ２Ｂ受容体、５−ＨＴ２Ｃ受容体、５−ＨＴ５Ａ受容体、５−ＨＴ６受容体、５−ＨＴ７受容体、ＡＤＧＲＥ４Ｐ、ＡＤＧＲＦ１、ＡＤＧＲＧ１、ＡＤＧＲＧ３、ＡＤＧＲＧ５、カルシトニン受容体様受容体、ＣＢ１受容体、ＣＢ２受容体、ＣＣＫ１受容体、ＣＣＫ２受容体、ＣＴ受容体、Ｄ１受容体、Ｄ２受容体、Ｄ３受容体、Ｄ４受容体、Ｄ５受容体、ＦＦＡ１受容体、ＦＦＡ３受容体、ＦＳＨ受容体、ＦＺＤ１、ＦＺＤ２、ＦＺＤ３、ＧＨＲＨ受容体、ＧｎＲＨ１受容体、ＧＰＢＡ受容体、ＧＰＲ１、ＧＰＲ１１９、ＧＰＲ１２、ＧＰＲ１４２、ＧＰＲ１４３、ＧＰＲ１４６、ＧＰＲ１４８、ＧＰＲ１５３、ＧＰＲ１６０、ＧＰＲ１６２、ＧＰＲ１７、ＧＰＲ１７３、ＧＰＲ１７４、ＧＰＲ１７６、ＧＰＲ１８、ＧＰＲ１８２、ＧＰＲ２０、ＧＰＲ２２、ＧＰＲ２６、ＧＰＲ２７、ＧＰＲ３、ＧＰＲ３３、ＧＰＲ３５、ＧＰＲ６、ＧＰＲ６１、ＧＰＲ７８、ＧＰＲ８２、ＧＰＲ８３、ＧＰＲ８４、ＧＰＲ８５、ＧＰＲ８７、ＧＰＲＣ５Ｄ、ＧＰＲＣ６受容体、ＨＣＡ２受容体、ＨＣＡ３受容体、キスぺプチン受容体、ＬＧＲ４、ＬＧＲ６、ＬＨ受容体、ＬＰＡ２受容体、ＬＰＡ６受容体、Ｍ１受容体、Ｍ２受容体、Ｍ３受容体、Ｍ４受容体、Ｍ５受容体、ＭＡＳ１Ｌ、ＭＣ３受容体、ＭＣ５受容体、ＭＣＨ２受容体、ｍＧｌｕ４受容体、ｍＧｌｕ７受容体、ｍＧｌｕ８受容体、ＭＲＧＰＲＧ、ＮＯＰ受容体、ＮＰＢＷ１受容体、ＮＰＢＷ２受容体、ＯＰＮ３、ＯＲ１１Ｈ１、ＯＲ２Ａ１、ＯＲ２Ａ２、ＯＲ２Ａ４、ＯＲ２Ａ４２、ＯＲ２Ａ７、ＯＲ２Ｂ１１、ＯＲ２Ｂ６、ＯＲ２Ｃ１、ＯＲ２Ｃ３、ＯＲ２Ｊ３、ＯＲ２Ｌ１３、ＯＲ２Ｔ１１、ＯＲ２Ｔ３４、ＯＲ２Ｗ３、ＯＲ３Ａ３、ＯＲ４Ｄ１０、ＯＲ４Ｍ１、ＯＲ４Ｑ３、ＯＲ５１Ａ２、ＯＲ５１Ａ４、ＯＲ５１Ａ７、ＯＲ５１Ｂ２、ＯＲ５１Ｂ４、ＯＲ５１Ｂ５、ＯＲ５１Ｂ６、ＯＲ５１Ｄ１、ＯＲ５１Ｅ１、ＯＲ５１Ｅ１、ＯＲ５１Ｅ２、ＯＲ５１Ｆ１、ＯＲ５１Ｆ２、ＯＲ５１Ｇ１、ＯＲ５１Ｇ２、ＯＲ５１Ｉ１、ＯＲ５１Ｉ２、ＯＲ５１Ｊ１、ＯＲ５１Ｌ１、ＯＲ５１Ｍ１、ＯＲ５１Ｑ１、ＯＲ５１Ｓ１、ＯＲ５１Ｔ１、ＯＲ５１Ｖ１、ＯＲ５２Ａ１、ＯＲ５２Ａ４、ＯＲ５２Ａ５、ＯＲ５２Ｂ２、ＯＲ５２Ｂ４、ＯＲ５２Ｂ６、ＯＲ５２Ｄ１、ＯＲ５２Ｅ２、ＯＲ５２Ｅ４、ＯＲ５２Ｅ５、ＯＲ５２Ｅ６、ＯＲ５２Ｅ８、ＯＲ５２Ｈ１、ＯＲ５２Ｉ１、ＯＲ５２Ｉ２、ＯＲ５２Ｊ３、ＯＲ５２Ｋ１、ＯＲ５２Ｋ２、ＯＲ５２Ｌ１、ＯＲ５２Ｍ１、ＯＲ５２Ｎ１、ＯＲ５２Ｎ２、ＯＲ５２Ｎ４、ＯＲ５２Ｎ５、ＯＲ５２Ｒ１、ＯＲ５２Ｗ１、ＯＲ５６Ａ１、ＯＲ５６Ａ３、ＯＲ５６Ａ４、ＯＲ５６Ａ５、ＯＲ５６Ｂ１、ＯＲ５６Ｂ４、ＯＲ６Ｖ１、ＯＲ７Ｄ２、ＯＲ９Ａ２、オキソグルタル酸受容体、Ｐ２ＲＹ１０、Ｐ２ＲＹ８、Ｐ２Ｙ１２受容体、Ｐ２Ｙ４受容体、ＰｒＲＰ受容体、ＱＲＦＰ受容体、ＲＸＦＰ２受容体、ＲＸＦＰ４受容体、ｓｓｔ１受容体、ｓｓｔ２受容体、ｓｓｔ３受容体、ｓｓｔ４受容��、ｓｓｔ５受容体、ＴＡ１受容体、ＴＡＡＲ２、ＴＡＡＲ５、ＴＡＡＲ６、ＴＡＡＲ８、ＴＡＡＲ９、ＴＡＳ１Ｒ１、ＴＡＳ１Ｒ２、ＴＡＳ１Ｒ３、ＴＡＳ２Ｒ１、ＴＡＳ２Ｒ１０、ＴＡＳ２Ｒ１３、ＴＡＳ２Ｒ１４、ＴＡＳ２Ｒ１６、ＴＡＳ２Ｒ１９、ＴＡＳ２Ｒ２０、ＴＡＳ２Ｒ３、ＴＡＳ２Ｒ３０、ＴＡＳ２Ｒ３１、ＴＡＳ２Ｒ３８、ＴＡＳ２Ｒ３９、ＴＡＳ２Ｒ４、ＴＡＳ２Ｒ４０、ＴＡＳ２Ｒ４１、ＴＡＳ２Ｒ４２、ＴＡＳ２Ｒ４３、ＴＡＳ２Ｒ４５、ＴＡＳ２Ｒ４６、ＴＡＳ２Ｒ５、ＴＡＳ２Ｒ５０、ＴＡＳ２Ｒ６０、ＴＡＳ２Ｒ７、ＴＡＳ２Ｒ８、ＴＡＳ２Ｒ９、ＴＲＨ１受容体、Ｙ１受容体、Ｙ２受容体、Ｙ５受容体、α１Ａ−アドレナリン受容体、α１Ｂ−アドレナリン受容体、α１Ｄ−アドレナリン受容体、δ受容体、５−ＨＴ１Ａ受容体、５−ＨＴ２Ａ受容体、Ａ１受容体、Ａ２Ａ受容体、Ａ２Ｂ受容体、Ａ３受容体、ＡＣＫＲ１、ＡＣＫＲ２、ＡＣＫＲ３、ＡＣＫＲ４、ＡＤＧＲＥ１、ＡＤＧＲＥ２、ＡＤＧＲＥ３、ＡＤＧＲＥ５、アペリン受容体、ＡＴ１受容体、Ｂ１受容体、Ｂ２受容体、ＢＢ２（ＧＲＰ）受容体、ＢＬＴ１受容体、ＢＬＴ２受容体、Ｃ３ａ受容体、Ｃ５ａ１受容体、Ｃ５ａ２受容体、ＣａＳ受容体、ＣＣＲ１、ＣＣＲ１０、ＣＣＲ２、ＣＣＲ３、ＣＣＲ４、ＣＣＲ５、ＣＣＲ６、ＣＣＲ７、ＣＣＲ８、ＣＣＲ９、ＣＣＲＬ２、ケメリン受容体、ＣＸ３ＣＲ１、ＣＸＣＲ１、ＣＸＣＲ２、ＣＸＣＲ３、ＣＸＣＲ４、ＣＸＣＲ５、ＣＸＣＲ６、ＣｙｓＬＴ１受容体、ＣｙｓＬＴ２受容体、ＤＰ１受容体、ＤＰ２受容体、ＥＰ１受容体、ＥＰ２受容体、ＥＰ３受容体、ＥＰ４受容体、ＦＦＡ２受容体、ＦＦＡ４受容体、ＦＰ受容体、ＦＰＲ１、ＦＰＲ２／ＡＬＸ、ＦＰＲ２／ＡＬＸ、ＦＰＲ３、ＦＺＤ６、ＧＡＬ２受容体、ＧＡＬ３受容体、グレリン受容体、ＧＰＲ１３２、ＧＰＲ１５、ＧＰＲ１８、ＧＰＲ１８３、ＧＰＲ２１、ＧＰＲ３１、ＧＰＲ３２、ＧＰＲ３４、ＧＰＲ４、ＧＰＲ５５、ＧＰＲ５５、ＧＰＲ６５、ＧＰＲ６８、Ｈ１受容体、Ｈ２受容体、Ｈ４受容体、ＩＰ受容体、ＬＰＡ５受容体、ＭＡＳ１、ＭＣ１受容体、ＭＣＨ１受容体、ｍＧｌｕ１受容体、ｍＧｌｕ５受容体、ＭＲＧＰＲＸ２、ＭＴ１受容体、ＭＴ２受容体、ＮＫ１受容体、ＮＫ３受容体、ＮＭＵ１受容体、ＯＸＥ受容体、Ｐ２Ｙ１受容体、Ｐ２Ｙ１１受容体、Ｐ２Ｙ１３受容体、Ｐ２Ｙ１４受容体、Ｐ２Ｙ２受容体、Ｐ２Ｙ６受容体、ＰＡＦ受容体、ＰＡＲ１、ＰＡＲ２、ＰＡＲ３、ＰＡＲ４、ＰＫＲ１、ＰＫＲ２、Ｓ１Ｐ１受容体、Ｓ１Ｐ２受容体、Ｓ１Ｐ３受容体、Ｓ１Ｐ４受容体、Ｓ１Ｐ５受容体、コハク酸受容体、ＴＰ受容体、ＶＰＡＣ１受容体、ＶＰＡＣ２受容体、ＸＣＲ１、β２−アドレナリン受容体、κ受容体、μ受容体から選択されるＧＰＣＲである。
【０１１９】
一実施形態では、本発明の特定の活性化された共存ＧＰＣＲは、ＣＣＲ４を除いて、本出願の国際公開公報における段落［０００９５］の群から選択されるＧＰＣＲである。
【０１２０】
一実施形態では、本発明の特定の活性化された共存ＧＰＣＲは、ＣＣＲ５を除いて、本出願の国際公開公報における段落［０００９５］の群から選択されるＧＰＣＲである。
【０１２１】
一実施形態では、本発明の特定の活性化された共存ＧＰＣＲは、ＣＣＲ４及びＣＣＲ５を除いて、本出願の国際公開公報における段落［０００９５］の群から選択されるＧＰＣＲである。
【０１２２】
一実施形態では、本発明の特定の活性化された共存ＧＰＣＲは、ＣＣＲ４、ＣＣＲ５、ＣＣＲ１０及びＣＸＣＲ３を除いて、本出願の国際公開公報における段落［０００９５］の群から選択されるＧＰＣＲである。
【０１２３】
一実施形態では、本発明の特定の活性化された共存ＧＰＣＲは、アデノシンＡ２Ａ受容体、アデノシンＡ２Ｂ受容体、アデノシンＡ３受容体、アドレナリンα２Ａ受容体、アドレナリンα２Ｃ受容体、アドレナリンβ１受容体、アドレナリンβ２受容体、アドレナリンβ３受容体、アペリン受容体、ＣＣＲ８、ＣＣＲ１０、ＣＸＣＲ１、ＣＸＣＲ３、ＣＸＣＲ６、ＣＸＣＲ７、ドーパミンＤ２受容体、グルカゴン様ペプチド受容体１、ニューロテンシンＮＴＳ２受容体、血小板活性化因子受容体、プロスタグランジンＥ２受容体、プロスタグランジンＥ３受容体、プロスタグランジンＥ４受容体、ソマトスタチン１受容体及びソマトスタチン３受容体を除いて、本出願の国際公開公報における本出願の国際公開公報における段落［０００９５］の群から選択されるＧＰＣＲである。
【０１２４】
一実施形態では、本発明の特定の活性化された共存ＧＰＣＲは、アデノシンＡ２Ａ受容体、アデノシンＡ２Ｂ受容体、アデノシンＡ３受容体、アドレナリンα２Ａ受容体、アドレナリンα２Ｃ受容体、アドレナリンβ１受容体、アドレナリンβ２受容体、アドレナリンβ３受容体、アペリン受容体、ＣＣＲ４、ＣＣＲ５、ＣＣＲ８、ＣＣＲ１０、ＣＸＣＲ１、ＣＸＣＲ３、ＣＸＣＲ６、ＣＸＣＲ７、ドーパミンＤ２受容体、グルカゴン様ペプチド受容体１、ニューロテンシンＮＴＳ２受容体、血小板活性化因子受容体、プロスタグランジンＥ２受容体、プロスタグランジンＥ３受容体、プロスタグランジンＥ４受容体、ソマトスタチン１受容体及びソマトスタチン３受容体を除いて、本出願の国際公開公報における段落［０００９５］の群から選択されるＧＰＣＲである。
【０１２５】
一実施形態では、本発明の特定の活性化された共存ＧＰＣＲは、アドレナリンα１Ａ受容体、ＣＣＲ３、Ｍ２受容体及びＯＸ１受容体を除いて、本出願の国際公開公報における段落［０００９５］の群から選択されるＧＰＣＲである。
【０１２６】
一実施形態では、本発明の特定の活性化された共存ＧＰＣＲは、アドレナリンα１Ａ受容体、ＣＣＲ３、ＣＣＲ４、Ｍ２受容体及びＯＸ１受容体を除いて、本出願の国際公開公報における段落［０００９５］の群から選択されるＧＰＣＲである。
【０１２７】
一実施形態では、本発明の特定の活性化された共存ＧＰＣＲは、アドレナリンα１Ａ受容体、ＣＣＲ３、ＣＣＲ５、Ｍ２受容体及びＯＸ１受容体を除いて、本出願の国際公開公報における段落［０００９５］の群から選択されるＧＰＣＲである。
【０１２８】
一実施形態では、本発明の特定の活性化された共存ＧＰＣＲは、アドレナリンα１Ａ受容体、ＣＣＲ３、ＣＣＲ４、ＣＣＲ５、Ｍ２受容体及びＯＸ１受容体を除いて、本出願の国際公開公報における段落［０００９５］の群から選択されるＧＰＣＲである。
【０１２９】
一実施形態では、本発明の特定の活性化された共存ＧＰＣＲは、アデノシンＡ２Ａ受容体、アデノシンＡ２Ｂ受容体、アデノシンＡ３受容体、アドレナリンα１Ａ受容体、アドレナリンα２Ａ受容体、アドレナリンα２Ｃ受容体、アドレナリンβ１受容体、アドレナリンβ２受容体、アドレナリンβ３受容体、アペリン受容体、ＣＣＲ３、ＣＣＲ８、ＣＣＲ１０、ＣＸＣＲ１、ＣＸＣＲ３、ＣＸＣＲ６、ＣＸＣＲ７、ドーパミンＤ２受容体、グルカゴン様ペプチド受容体１、Ｍ２受容体、ニューロテンシンＮＴＳ２受容体、ＯＸ１受容体、血小板活性化因子受容体、プロスタグランジンＥ２受容体、プロスタグランジンＥ３受容体、プロスタグランジンＥ４受容体、ソマトスタチン１受容体及びソマトスタチン３受容体を除いて、本出願の国際公開公報における段落［０００９５］の群から選択されるＧＰＣＲである。
【０１３０】
一実施形態では、本発明の特定の活性化された共存ＧＰＣＲは、アドレナリンα１Ａ受容体、ＣＣＲ３、ＣＣＲ４、ＣＣＲ５、ＣＣＲ１０、ＣＸＣＲ３、Ｍ２受容体、ＯＸ１受容体を除いて、本出願の国際公開公報における段落［０００９５］の群から選択されるＧＰＣＲである。
【０１３１】
一実施形態では、本発明の特定の活性化された共存ＧＰＣＲは、アデノシンＡ２Ａ受容体、アデノシンＡ２Ｂ受容体、アデノシンＡ３受容体、アドレナリンα１Ａ受容体、アドレナリンα２Ａ受容体、アドレナリンα２Ｃ受容体、アドレナリンβ１受容体、アドレナリンβ２受容体、アドレナリンβ３受容体、アペリン受容体、ＣＣＲ３、ＣＣＲ４、ＣＣＲ５、ＣＣＲ８、ＣＣＲ１０、ＣＸＣＲ１、ＣＸＣＲ３、ＣＸＣＲ６、ＣＸＣＲ７、ドーパミンＤ２受容体、グルカゴン様ペプチド受容体１、Ｍ２受容体、ニューロテンシンＮＴＳ２受容体、ＯＸ１受容体、血小板活性化因子受容体、プロスタグランジンＥ２受容体、プロスタグランジンＥ３受容体、プロスタグランジンＥ４受容体、ソマトスタチン１受容体及びソマトスタチン３受容体を除いて、本出願の国際公開公報における段落［０００９５］の群から選択されるＧＰＣＲである。
【０１３２】
一実施形態では、本発明の特定の活性化された共存ＧＰＣＲは、群：：ＯＸ１受容体、ＯＸ２受容体、ＰＴＨ１受容体、ＰＴＨ２受容体、ＡＭＹ１受容体、ＡＭＹ２受容体、ＡＭＹ３受容体、ＡＭ１受容体、ＡＭ２受容体、ＧＰＲ６３、ＧＰＲ７５、ＮＭＵ２受容体、ＯＰＮ５、Ｖ１Ｂ受容体、ｙ６受容体、５−ＨＴ４受容体、ＧＰＲ１０１、ＧＰＲ１１９、ＧＰＲ１３５、ＧＰＲ１３７、ＧＰＲ１４１、ＧＰＲ１４９、ＧＰＲ１５０、ＧＰＲ１５１、ＧＰＲ１５２、ＧＰＲ１５７、ＧＰＲ１９、ＧＰＲ２５、ＧＰＲ３７、ＧＰＲ３７Ｌ１、ＧＰＲ５０、ＧＰＲ６２、ＬＧＲ５、ＭＲＧＰＲＥ、ＭＲＧＰＲＦ、ＮＴＳ２受容体、ＯＰＮ４、ＯＰＮ４、ＯＲ１０Ａ７、ＯＲ１０ＡＧ１、ＯＲ１０Ｑ１、ＯＲ１０Ｗ１、ＯＲ１２Ｄ３、ＯＲ１３Ｃ２、ＯＲ１３Ｃ３、ＯＲ１３Ｃ４、ＯＲ１３Ｃ５、ＯＲ１３Ｃ８、ＯＲ１３Ｆ１、ＯＲ１３Ｇ１、ＯＲ１Ａ２、ＯＲ１Ｌ１、ＯＲ１Ｓ１、ＯＲ１Ｓ２、ＯＲ２ＡＫ２、ＯＲ２Ｄ２、ＯＲ２Ｄ３、ＯＲ４Ａ１５、ＯＲ４Ｃ１１、ＯＲ４Ｃ１２、ＯＲ４Ｃ１３、ＯＲ４Ｃ１５、ＯＲ４Ｃ１６、ＯＲ４Ｋ１３、ＯＲ４Ｋ１４、ＯＲ４Ｋ１５、ＯＲ４Ｋ１７、ＯＲ４Ｎ５、ＯＲ５ＡＣ２、ＯＲ５ＡＫ２、ＯＲ５ＡＰ２、ＯＲ５ＡＲ１、ＯＲ５ＡＳ１、ＯＲ５Ｂ１２、ＯＲ５Ｂ１７、ＯＲ５Ｂ２、ＯＲ５Ｂ２１、ＯＲ５Ｂ３、ＯＲ５Ｄ１３、ＯＲ５Ｄ１４、ＯＲ５Ｄ１６、ＯＲ５Ｄ１８、ＯＲ５Ｆ１、ＯＲ５Ｉ１、ＯＲ５Ｊ２、ＯＲ５Ｋ３、ＯＲ５Ｌ１、ＯＲ５Ｌ２、ＯＲ５Ｍ１、ＯＲ５Ｍ１０、ＯＲ５Ｍ１１、ＯＲ５Ｍ３、ＯＲ５Ｍ８、ＯＲ５Ｍ９、ＯＲ５Ｒ１、ＯＲ５Ｔ１、ＯＲ５Ｔ２、ＯＲ５Ｔ３、ＯＲ５Ｗ２、ＯＲ６Ｃ７４、ＯＲ６Ｋ６、ＯＲ６Ｍ１、ＯＲ６Ｑ１、ＯＲ６Ｘ１、ＯＲ８Ｈ１、ＯＲ８Ｈ２、ＯＲ８Ｈ３、ＯＲ８Ｊ１、ＯＲ８Ｊ３、ＯＲ８Ｋ１、ＯＲ８Ｋ３、ＯＲ８Ｋ５、ＯＲ８Ｕ１、ＯＲ８Ｕ８、ＯＲ９Ａ４、ＯＲ９Ｇ１、ＯＲ９Ｇ４、ＯＲ９Ｇ９、ＯＲ９Ｑ２、ＴＡＡＲ３、ＴＰＲＡ１、Ｙ４受容体、５−ＨＴ１Ｄ受容体、５−ＨＴ１Ｅ受容体、ＡＤＧＲＢ１、ＡＴ２受容体、ＢＢ１受容体、ＢＢ３受容体、ＣＧＲＰ受容体、ＣＲＦ１受容体、ＣＲＦ２受容体、ＥＴＡ受容体、ＥＴＢ受容体、ＦＺＤ４、ＦＺＤ５、ＦＺＤ７、ＦＺＤ８、ＦＺＤ９、ＧＡＢＡＢ受容体、ＧＡＢＡＢ１、ＧＡＢＡＢ２、ＧＡＬ１受容体、ＧＩＰ受容体、ＧＬＰ−１受容体、ＧＬＰ−２受容体、グルカゴン受容体、ＧｎＲＨ２受容体、ＧＰＥＲ、ＧＰＲ１０７、ＧＰＲ１３９、ＧＰＲ１５６、ＧＰＲ１５８、ＧＰＲ１６１、ＧＰＲ１７１、ＧＰＲ１７９、ＧＰＲ３９、ＧＰＲ４５、ＧＰＲ８８、ＧＰＲＣ５Ａ、ＧＰＲＣ５Ｂ、ＧＰＲＣ５Ｃ、Ｈ３受容体、ＨＣＡ１受容体、ＬＰＡ１受容体、ＬＰＡ３受容体、ＬＰＡ４受容体、ＭＣ２受容体、ＭＣ４受容体、ｍＧｌｕ２受容体、ｍＧｌｕ３受容体、モチリン受容体、ＭＲＧＰＲＤ、ＭＲＧＰＲＸ１、ＭＲＧＰＲＸ３、ＮＫ２受容体、ＮＰＦＦ１受容体、ＮＰＦＦ２受容体、ＮＰＳ受容体、ＮＴＳ１受容体、ＯＲ１Ｄ２、ＯＲ２ＡＧ１、ＯＴ受容体、ＰＡＣ１受容体、ＲＸＦＰ１受容体、セクレチン受容体、ＴＳＨ受容体、ＵＴ受容体、Ｖ１Ａ受容体、Ｖ２受容体、α２Ａ−アドレナリン受容体、α２Ｂ−アドレナリン受容体、α２Ｃ−アドレナリン受容体、β１−アドレナリン受容体、β３−アドレナリン受容体、５−ＨＴ１Ｂ受容体、５−ＨＴ１Ｆ受容体、５−ＨＴ２Ｂ受容体、５−ＨＴ２Ｃ受容体、５−ＨＴ５Ａ受容体、５−ＨＴ６受容体、５−ＨＴ７受容体、ＡＤＧＲＥ４Ｐ、ＡＤＧＲＦ１、ＡＤＧＲＧ１、ＡＤＧＲＧ３、ＡＤＧＲＧ５、カルシトニン受容体様受容体、ＣＢ１受容体、ＣＢ２受容体、ＣＣＫ１受容体、ＣＣＫ２受容体、ＣＴ受容体、Ｄ１受容体、Ｄ２受容体、Ｄ３受容体、Ｄ４受容体、Ｄ５受容体、ＦＦＡ１受容体、ＦＦＡ３受容体、ＦＳＨ受容体、ＦＺＤ１、ＦＺＤ２、ＦＺＤ３、ＧＨＲＨ受容体、ＧｎＲＨ１受容体、ＧＰＢＡ受容体、ＧＰＲ１、ＧＰＲ１１９、ＧＰＲ１２、ＧＰＲ１４２、ＧＰＲ１４３、ＧＰＲ１４６、ＧＰＲ１４８、ＧＰＲ１５３、ＧＰＲ１６０、ＧＰＲ１６２、ＧＰＲ１７、ＧＰＲ１７３、ＧＰＲ１７４、ＧＰＲ１７６、ＧＰＲ１８、ＧＰＲ１８２、ＧＰＲ２０、ＧＰＲ２２、ＧＰＲ２６、ＧＰＲ２７、ＧＰＲ３、ＧＰＲ３３、ＧＰＲ３５、ＧＰＲ６、ＧＰＲ６１、ＧＰＲ７８、ＧＰＲ８２、ＧＰＲ８３、ＧＰＲ８４、ＧＰＲ８５、ＧＰＲ８７、ＧＰＲＣ５Ｄ、ＧＰＲＣ６受容体、ＨＣＡ２受容体、ＨＣＡ３受容体、キスぺプチン受容体、ＬＧＲ４、ＬＧＲ６、ＬＨ受容体、ＬＰＡ２受容体、ＬＰＡ６受容体、Ｍ１受容体、Ｍ２受容体、Ｍ３受容体、Ｍ４受容体、Ｍ５受容体、ＭＡＳ１Ｌ、ＭＣ３受容体、ＭＣ５受容体、ＭＣＨ２受容体、ｍＧｌｕ４受容体、ｍＧｌｕ７受容体、ｍＧｌｕ８受容体、ＭＲＧＰＲＧ、ＮＯＰ受容体、ＮＰＢＷ１受容体、ＮＰＢＷ２受容体、ＯＰＮ３、ＯＲ１１Ｈ１、ＯＲ２Ａ１、ＯＲ２Ａ２、ＯＲ２Ａ４、ＯＲ２Ａ４２、ＯＲ２Ａ７、ＯＲ２Ｂ１１、ＯＲ２Ｂ６、ＯＲ２Ｃ１、ＯＲ２Ｃ３、ＯＲ２Ｊ３、ＯＲ２Ｌ１３、ＯＲ２Ｔ１１、ＯＲ２Ｔ３４、ＯＲ２Ｗ３、ＯＲ３Ａ３、ＯＲ４Ｄ１０、ＯＲ４Ｍ１、ＯＲ４Ｑ３、ＯＲ５１Ａ２、ＯＲ５１Ａ４、ＯＲ５１Ａ７、ＯＲ５１Ｂ２、ＯＲ５１Ｂ４、ＯＲ５１Ｂ５、ＯＲ５１Ｂ６、ＯＲ５１Ｄ１、ＯＲ５１Ｅ１、ＯＲ５１Ｅ１、ＯＲ５１Ｅ２、ＯＲ５１Ｆ１、ＯＲ５１Ｆ２、ＯＲ５１Ｇ１、ＯＲ５１Ｇ２、ＯＲ５１Ｉ１、ＯＲ５１Ｉ２、ＯＲ５１Ｊ１、ＯＲ５１Ｌ１、ＯＲ５１Ｍ１、ＯＲ５１Ｑ１、ＯＲ５１Ｓ１、ＯＲ５１Ｔ１、ＯＲ５１Ｖ１、ＯＲ５２Ａ１、ＯＲ５２Ａ４、ＯＲ５２Ａ５、ＯＲ５２Ｂ２、ＯＲ５２Ｂ４、ＯＲ５２Ｂ６、ＯＲ５２Ｄ１、ＯＲ５２Ｅ２、ＯＲ５２Ｅ４、ＯＲ５２Ｅ５、ＯＲ５２Ｅ６、ＯＲ５２Ｅ８、ＯＲ５２Ｈ１、ＯＲ５２Ｉ１、ＯＲ５２Ｉ２、ＯＲ５２Ｊ３、ＯＲ５２Ｋ１、ＯＲ５２Ｋ２、ＯＲ５２Ｌ１、ＯＲ５２Ｍ１、ＯＲ５２Ｎ１、ＯＲ５２Ｎ２、ＯＲ５２Ｎ４、ＯＲ５２Ｎ５、ＯＲ５２Ｒ１、ＯＲ５２Ｗ１、ＯＲ５６Ａ１、ＯＲ５６Ａ３、ＯＲ５６Ａ４、ＯＲ５６Ａ５、ＯＲ５６Ｂ１、ＯＲ５６Ｂ４、ＯＲ６Ｖ１、ＯＲ７Ｄ２、ＯＲ９Ａ２、オキソグルタル酸受容体、Ｐ２ＲＹ１０、Ｐ２ＲＹ８、Ｐ２Ｙ１２受容体、Ｐ２Ｙ４受容体、ＰｒＲＰ受容体、ＱＲＦＰ受容体、ＲＸＦＰ２受容体、ＲＸＦＰ４受容体、ｓｓｔ１受容体、ｓｓｔ２受容体、ｓｓｔ３受容体、ｓｓｔ４受容体、ｓｓｔ５受容体、ＴＡ１受容体、ＴＡＡＲ２、ＴＡＡＲ５、ＴＡＡＲ６、ＴＡＡＲ８、ＴＡＡＲ９、ＴＡＳ１Ｒ１、ＴＡＳ１Ｒ２、ＴＡ��１Ｒ３、ＴＡＳ２Ｒ１、ＴＡＳ２Ｒ１０、ＴＡＳ２Ｒ１３、ＴＡＳ２Ｒ１４、ＴＡＳ２Ｒ１６、ＴＡＳ２Ｒ１９、ＴＡＳ２Ｒ２０、ＴＡＳ２Ｒ３、ＴＡＳ２Ｒ３０、ＴＡＳ２Ｒ３１、ＴＡＳ２Ｒ３８、ＴＡＳ２Ｒ３９、ＴＡＳ２Ｒ４、ＴＡＳ２Ｒ４０、ＴＡＳ２Ｒ４１、ＴＡＳ２Ｒ４２、ＴＡＳ２Ｒ４３、ＴＡＳ２Ｒ４５、ＴＡＳ２Ｒ４６、ＴＡＳ２Ｒ５、ＴＡＳ２Ｒ５０、ＴＡＳ２Ｒ６０、ＴＡＳ２Ｒ７、ＴＡＳ２Ｒ８、ＴＡＳ２Ｒ９、ＴＲＨ１受容体、Ｙ１受容体、Ｙ２受容体、Ｙ５受容体、α１Ａ−アドレナリン受容体、α１Ｂ−アドレナリン受容体、α１Ｄ−アドレナリン受容体、δ受容体、５−ＨＴ１Ａ受容体、５−ＨＴ２Ａ受容体、Ａ１受容体、Ａ２Ａ受容体、Ａ２Ｂ受容体、Ａ３受容体、ＡＣＫＲ１、ＡＣＫＲ２、ＡＣＫＲ３、ＡＣＫＲ４、ＡＤＧＲＥ１、ＡＤＧＲＥ２、ＡＤＧＲＥ３、ＡＤＧＲＥ５、アペリン受容体、ＡＴ１受容体、Ｂ１受容体、Ｂ２受容体、ＢＢ２（ＧＲＰ）受容体、ＢＬＴ１受容体、ＢＬＴ２受容体、Ｃ３ａ受容体、Ｃ５ａ１受容体、Ｃ５ａ２受容体、ＣａＳ受容体、ＣＣＲ１、ＣＣＲ１０、ＣＣＲ２、ＣＣＲ３、ＣＣＲ４、ＣＣＲ５、ＣＣＲ６、ＣＣＲ７、ＣＣＲ８、ＣＣＲ９、ＣＣＲＬ２、ケメリン受容体、ＣＸ３ＣＲ１、ＣＸＣＲ１、ＣＸＣＲ２、ＣＸＣＲ３、ＣＸＣＲ４、ＣＸＣＲ５、ＣＸＣＲ６、ＣｙｓＬＴ１受容体、ＣｙｓＬＴ２受容体、ＤＰ１受容体、ＤＰ２受容体、ＥＰ１受容体、ＥＰ２受容体、ＥＰ３受容体、ＥＰ４受容体、ＦＦＡ２受容体、ＦＦＡ４受容体、ＦＰ受容体、ＦＰＲ１、ＦＰＲ２／ＡＬＸ、ＦＰＲ２／ＡＬＸ、ＦＰＲ３、ＦＺＤ６、ＧＡＬ２受容体、ＧＡＬ３受容体、グレリン受容体、ＧＰＲ１３２、ＧＰＲ１５、ＧＰＲ１８、ＧＰＲ１８３、ＧＰＲ２１、ＧＰＲ３１、ＧＰＲ３２、ＧＰＲ３４、ＧＰＲ４、ＧＰＲ５５、ＧＰＲ５５、ＧＰＲ６５、ＧＰＲ６８、Ｈ１受容体、Ｈ２受容体、Ｈ４受容体、ＩＰ受容体、ＬＰＡ５受容体、ＭＡＳ１、ＭＣ１受容体、ＭＣＨ１受容体、ｍＧｌｕ１受容体、ｍＧｌｕ５受容体、ＭＲＧＰＲＸ２、ＭＴ１受容体、ＭＴ２受容体、ＮＫ１受容体、ＮＫ３受容体、ＮＭＵ１受容体、ＯＸＥ受容体、Ｐ２Ｙ１受容体、Ｐ２Ｙ１１受容体、Ｐ２Ｙ１３受容体、Ｐ２Ｙ１４受容体、Ｐ２Ｙ２受容体、Ｐ２Ｙ６受容体、ＰＡＦ受容体、ＰＡＲ１、ＰＡＲ２、ＰＡＲ３、ＰＡＲ４、ＰＫＲ１、ＰＫＲ２、Ｓ１Ｐ１受容体、Ｓ１Ｐ２受容体、Ｓ１Ｐ３受容体、Ｓ１Ｐ４受容体、Ｓ１Ｐ５受容体、コハク酸受容体、ＴＰ受容体、ＶＰＡＣ１受容体、ＶＰＡＣ２受容体、ＸＣＲ１、β２−アドレナリン受容体、κ受容体、μ受容体から選択されるＧＰＣＲである。
【０１３３】
一実施形態では、本発明の特定の活性化された共存ＧＰＣＲは、ＣＣＲ４を除いて、本出願の国際公開公報における段落［０００１０９］の群から選択されるＧＰＣＲである。
【０１３４】
一実施形態では、本発明の特定の活性化された共存ＧＰＣＲは、ＣＣＲ５を除いて、本出願の国際公開公報における段落［０００１０９］の群から選択されるＧＰＣＲである。
【０１３５】
一実施形態では、本発明の特定の活性化された共存ＧＰＣＲは、ＣＣＲ４及びＣＣＲ５を除いて、本出願の国際公開公報における段落［０００１０９］の群から選択されるＧＰＣＲである。
【０１３６】
一実施形態では、本発明の特定の活性化された共存ＧＰＣＲは、ＣＣＲ４、ＣＣＲ５、ＣＣＲ１０及びＣＸＣＲ３を除いて、本出願の国際公開公報における段落［０００１０９］の群から選択されるＧＰＣＲである。
【０１３７】
一実施形態では、本発明の特定の活性化された共存ＧＰＣＲは、アデノシンＡ２Ａ受容体、アデノシンＡ２Ｂ受容体、アデノシンＡ３受容体、アドレナリンα２Ａ受容体、アドレナリンα２Ｃ受容体、アドレナリンβ１受容体、アドレナリンβ２受容体、アドレナリンβ３受容体、アペリン受容体、ＣＣＲ８、ＣＣＲ１０、ＣＸＣＲ１、ＣＸＣＲ３、ＣＸＣＲ６、ＣＸＣＲ７、ドーパミンＤ２受容体、グルカゴン様ペプチド受容体１、ニューロテンシンＮＴＳ２受容体、血小板活性化因子受容体、プロスタグランジンＥ２受容体、プロスタグランジンＥ３受容体、プロスタグランジンＥ４受容体、ソマトスタチン１受容体及びソマトスタチン３受容体を除いて、本出願の国際公開公報における段落［０００１０９］の群から選択されるＧＰＣＲである。
【０１３８】
一実施形態では、本発明の特定の活性化された共存ＧＰＣＲは、アデノシンＡ２Ａ受容体、アデノシンＡ２Ｂ受容体、アデノシンＡ３受容体、アドレナリンα２Ａ受容体、アドレナリンα２Ｃ受容体、アドレナリンβ１受容体、アドレナリンβ２受容体、アドレナリンβ３受容体、アペリン受容体、ＣＣＲ４、ＣＣＲ５、ＣＣＲ８、ＣＣＲ１０、ＣＸＣＲ１、ＣＸＣＲ３、ＣＸＣＲ６、ＣＸＣＲ７、ドーパミンＤ２受容体、グルカゴン様ペプチド受容体１、ニューロテンシンＮＴＳ２受容体、血小板活性化因子受容体、プロスタグランジンＥ２受容体、プロスタグランジンＥ３受容体、プロスタグランジンＥ４受容体、ソマトスタチン１受容体及びソマトスタチン３受容体を除いて、本出願の国際公開公報における段落［０００１０９］の群から選択されるＧＰＣＲである。
【０１３９】
一実施形態では、本発明の特定の活性化された共存ＧＰＣＲは、群：ＯＸ１受容体、ＯＸ２受容体、ＰＴＨ１受容体、ＰＴＨ２受容体、ＡＭＹ１受容体、ＡＭＹ２受容体、ＡＭＹ３受容体、ＡＭ１受容体、ＡＭ２受容体から選択されるＧＰＣＲである。
【０１４０】
一実施形態では、本発明の特定の活性化された共存ＧＰＣＲは、アドレナリンα１Ａ受容体、ＣＣＲ３、Ｍ２受容体及びＯＸ１受容体を除いて、本出願の国際公開公報における段落［０００１０９］の群から選択されるＧＰＣＲである。
【０１４１】
一実施形態では、本発明の特定の活性化された共存ＧＰＣＲは、アドレナリンα１Ａ受容体、ＣＣＲ３、ＣＣＲ４、Ｍ２受容体及びＯＸ１受容体を除いて、本出願の国際公開公報における段落［０００１０９］の群から選択されるＧＰＣＲである。
【０１４２】
一実施形態では、本発明の特定の活性化された共存ＧＰＣＲは、アドレナリンα１Ａ受容体、ＣＣＲ３、ＣＣＲ５、Ｍ２受容体及びＯＸ１受容体を除いて、本出願の国際公開公報における段落［０００１０９］の群から選択されるＧＰＣＲである。
【０１４３】
一実施形態では、本発明の特定の活性化された共存ＧＰＣＲは、アドレナリンα１Ａ受容体、ＣＣＲ３、ＣＣＲ４、ＣＣＲ５、Ｍ２受容体及びＯＸ１受容体を除いて、本出願の国際公開公報における段落［０００１０９］の群から選択されるＧＰＣＲである。
【０１４４】
一実施形態では、本発明の特定の活性化された共存ＧＰＣＲは、アデノシンＡ２Ａ受容体、アデノシンＡ２Ｂ受容体、アデノシンＡ３受容体、アドレナリンα１Ａ受容体、アドレナリンα２Ａ受容体、アドレナリンα２Ｃ受容体、アドレナリンβ１受容体、アドレナリンβ２受容体、アドレナリンβ３受容体、アペリン受容体、ＣＣＲ３、ＣＣＲ８、ＣＣＲ１０、ＣＸＣＲ１、ＣＸＣＲ３、ＣＸＣＲ６、ＣＸＣＲ７、ドーパミンＤ２受容体、グルカゴン様ペプチド受容体１、Ｍ２受容体、ニューロテンシンＮＴＳ２受容体、ＯＸ１受容体、血小板活性化因子受容体、プロスタグランジンＥ２受容体、プロスタグランジンＥ３受容体、プロスタグランジンＥ４受容体、ソマトスタチン１受容体及びソマトスタチン３受容体を除いて、本出願の国際公開公報における段落［０００１０９］の群から選択されるＧＰＣＲである。
【０１４５】
一実施形態では、本発明の特定の活性化された共存ＧＰＣＲは、アドレナリンα１Ａ受容体、ＣＣＲ３、ＣＣＲ４、ＣＣＲ５、ＣＣＲ１０、ＣＸＣＲ３、Ｍ２受容体及びＯＸ１受容体を除いて、本出願の国際公開公報における段落［０００１０９］の群から選択されるＧＰＣＲである。
【０１４６】
一実施形態では、本発明の特定の活性化された共存ＧＰＣＲは、アデノシンＡ２Ａ受容体、アデノシンＡ２Ｂ受容体、アデノシンＡ３受容体、アドレナリンα１Ａ受容体、アドレナリンα２Ａ受容体、アドレナリンα２Ｃ受容体、アドレナリンβ１受容体、アドレナリンβ２受容体、アドレナリンβ３受容体、アペリン受容体、ＣＣＲ３、ＣＣＲ４、ＣＣＲ５、ＣＣＲ８、ＣＣＲ１０、ＣＸＣＲ１、ＣＸＣＲ３、ＣＸＣＲ６、ＣＸＣＲ７、ドーパミンＤ２受容体、グルカゴン様ペプチド受容体１、Ｍ２受容体、ニューロテンシンＮＴＳ２受容体、ＯＸ１受容体、血小板活性化因子受容体、プロスタグランジンＥ２受容体、プロスタグランジンＥ３受容体、プロスタグランジンＥ４受容体、ソマトスタチン１受容体及びソマトスタチン３受容体を除いて、本出願の国際公開公報における段落［０００１０９］の群から選択されるＧＰＣＲである。
【０１４７】
一実施形態では、本発明の特定の活性化された共存ＧＰＣＲは、群：５−ＨＴ４受容体、ＧＰＲ１０１、ＧＰＲ１１９、ＧＰＲ１３５、ＧＰＲ１３７、ＧＰＲ１４１、ＧＰＲ１４９、ＧＰＲ１５０、ＧＰＲ１５１、ＧＰＲ１５２、ＧＰＲ１５７、ＧＰＲ１９、ＧＰＲ２５、ＧＰＲ３７、ＧＰＲ３７Ｌ１、ＧＰＲ５０、ＧＰＲ６２、ＬＧＲ５、ＭＲＧＰＲＥ、ＭＲＧＰＲＦ、ＮＴＳ２受容体、ＯＰＮ４、ＯＰＮ４、ＯＲ１０Ａ７、ＯＲ１０ＡＧ１、ＯＲ１０Ｑ１、ＯＲ１０Ｗ１、ＯＲ１２Ｄ３、ＯＲ１３Ｃ２、ＯＲ１３Ｃ３、ＯＲ１３Ｃ４、ＯＲ１３Ｃ５、ＯＲ１３Ｃ８、ＯＲ１３Ｆ１、ＯＲ１３Ｇ１、ＯＲ１Ａ２、ＯＲ１Ｌ１、ＯＲ１Ｓ１、ＯＲ１Ｓ２、ＯＲ２ＡＫ２、ＯＲ２Ｄ２、ＯＲ２Ｄ３、ＯＲ４Ａ１５、ＯＲ４Ｃ１１、ＯＲ４Ｃ１２、ＯＲ４Ｃ１３、ＯＲ４Ｃ１５、ＯＲ４Ｃ１６、ＯＲ４Ｋ１３、ＯＲ４Ｋ１４、ＯＲ４Ｋ１５、ＯＲ４Ｋ１７、ＯＲ４Ｎ５、ＯＲ５ＡＣ２、ＯＲ５ＡＫ２、ＯＲ５ＡＰ２、ＯＲ５ＡＲ１、ＯＲ５ＡＳ１、ＯＲ５Ｂ１２、ＯＲ５Ｂ１７、ＯＲ５Ｂ２、ＯＲ５Ｂ２１、ＯＲ５Ｂ３、ＯＲ５Ｄ１３、ＯＲ５Ｄ１４、ＯＲ５Ｄ１６、ＯＲ５Ｄ１８、ＯＲ５Ｆ１、ＯＲ５Ｉ１、ＯＲ５Ｊ２、ＯＲ５Ｋ３、ＯＲ５Ｌ１、ＯＲ５Ｌ２、ＯＲ５Ｍ１、ＯＲ５Ｍ１０、ＯＲ５Ｍ１１、ＯＲ５Ｍ３、ＯＲ５Ｍ８、ＯＲ５Ｍ９、ＯＲ５Ｒ１、ＯＲ５Ｔ１、ＯＲ５Ｔ２、ＯＲ５Ｔ３、ＯＲ５Ｗ２、ＯＲ６Ｃ７４、ＯＲ６Ｋ６、ＯＲ６Ｍ１、ＯＲ６Ｑ１、ＯＲ６Ｘ１、ＯＲ８Ｈ１、ＯＲ８Ｈ２、ＯＲ８Ｈ３、ＯＲ８Ｊ１、ＯＲ８Ｊ３、ＯＲ８Ｋ１、ＯＲ８Ｋ３、ＯＲ８Ｋ５、ＯＲ８Ｕ１、ＯＲ８Ｕ８、ＯＲ９Ａ４、ＯＲ９Ｇ１、ＯＲ９Ｇ４、ＯＲ９Ｇ９、ＯＲ９Ｑ２、ＴＡＡＲ３、ＴＰＲＡ１、Ｙ４受容体、５−ＨＴ１Ｄ受容体、５−ＨＴ１Ｅ受容体、ＡＤＧＲＢ１、ＡＴ２受容体、ＢＢ１受容体、ＢＢ３受容体、ＣＧＲＰ受容体、ＣＲＦ１受容体、ＣＲＦ２受容体、ＥＴＡ受容体、ＥＴＢ受容体、ＦＺＤ４、ＦＺＤ５、ＦＺＤ７、ＦＺＤ８、ＦＺＤ９、ＧＡＢＡＢ受容体、ＧＡＢＡＢ１、ＧＡＢＡＢ２、ＧＡＬ１受容体、ＧＩＰ受容体、ＧＬＰ−１受容体、ＧＬＰ−２受容体、グルカゴン受容体、ＧｎＲＨ２受容体、ＧＰＥＲ、ＧＰＲ１０７、ＧＰＲ１３９、ＧＰＲ１５６、ＧＰＲ１５８、ＧＰＲ１６１、ＧＰＲ１７１、ＧＰＲ１７９、ＧＰＲ３９、ＧＰＲ４５、ＧＰＲ８８、ＧＰＲＣ５Ａ、ＧＰＲＣ５Ｂ、ＧＰＲＣ５Ｃ、Ｈ３受容体、ＨＣＡ１受容体、ＬＰＡ１受容体、ＬＰＡ３受容体、ＬＰＡ４受容体、ＭＣ２受容体、ＭＣ４受容体、ｍＧｌｕ２受容体、ｍＧｌｕ３受容体、モチリン受容体、ＭＲＧＰＲＤ、ＭＲＧＰＲＸ１、ＭＲＧＰＲＸ３、ＮＫ２受容体、ＮＰＦＦ１受容体、ＮＰＦＦ２受容体、ＮＰＳ受容体、ＮＴＳ１受容体、ＯＲ１Ｄ２、ＯＲ２ＡＧ１、ＯＴ受容体、ＰＡＣ１受容体、ＲＸＦＰ１受容体、セクレチン受容体、ＴＳＨ受容体、ＵＴ受容体、Ｖ１Ａ受容体、Ｖ２受容体、α２Ａ−アドレナリン受容体、α２Ｂ−アドレナリン受容体、α２Ｃ−アドレナリン受容体、β１−アドレナリン受容体、β３−アドレナリン受容体、５−ＨＴ１Ｂ受容体、５−ＨＴ１Ｆ受容体、５−ＨＴ２Ｂ受容体、５−ＨＴ２Ｃ受容体、５−ＨＴ５Ａ受容体、５−ＨＴ６受容体、５−ＨＴ７受容体、ＡＤＧＲＥ４Ｐ、ＡＤＧＲ��１、ＡＤＧＲＧ１、ＡＤＧＲＧ３、ＡＤＧＲＧ５、カルシトニン受容体様受容体、ＣＢ１受容体、ＣＢ２受容体、ＣＣＫ１受容体、ＣＣＫ２受容体、ＣＴ受容体、Ｄ１受容体、Ｄ２受容体、Ｄ３受容体、Ｄ４受容体、Ｄ５受容体、ＦＦＡ１受容体、ＦＦＡ３受容体、ＦＳＨ受容体、ＦＺＤ１、ＦＺＤ２、ＦＺＤ３、ＧＨＲＨ受容体、ＧｎＲＨ１受容体、ＧＰＢＡ受容体、ＧＰＲ１、ＧＰＲ１１９、ＧＰＲ１２、ＧＰＲ１４２、ＧＰＲ１４３、ＧＰＲ１４６、ＧＰＲ１４８、ＧＰＲ１５３、ＧＰＲ１６０、ＧＰＲ１６２、ＧＰＲ１７、ＧＰＲ１７３、ＧＰＲ１７４、ＧＰＲ１７６、ＧＰＲ１８、ＧＰＲ１８２、ＧＰＲ２０、ＧＰＲ２２、ＧＰＲ２６、ＧＰＲ２７、ＧＰＲ３、ＧＰＲ３３、ＧＰＲ３５、ＧＰＲ６、ＧＰＲ６１、ＧＰＲ７８、ＧＰＲ８２、ＧＰＲ８３、ＧＰＲ８４、ＧＰＲ８５、ＧＰＲ８７、ＧＰＲＣ５Ｄ、ＧＰＲＣ６受容体、ＨＣＡ２受容体、ＨＣＡ３受容体、キスぺプチン受容体、ＬＧＲ４、ＬＧＲ６、ＬＨ受容体、ＬＰＡ２受容体、ＬＰＡ６受容体、Ｍ１受容体、Ｍ２受容体、Ｍ３受容体、Ｍ４受容体、Ｍ５受容体、ＭＡＳ１Ｌ、ＭＣ３受容体、ＭＣ５受容体、ＭＣＨ２受容体、ｍＧｌｕ４受容体、ｍＧｌｕ７受容体、ｍＧｌｕ８受容体、ＭＲＧＰＲＧ、ＮＯＰ受容体、ＮＰＢＷ１受容体、ＮＰＢＷ２受容体、ＯＰＮ３、ＯＲ１１Ｈ１、ＯＲ２Ａ１、ＯＲ２Ａ２、ＯＲ２Ａ４、ＯＲ２Ａ４２、ＯＲ２Ａ７、ＯＲ２Ｂ１１、ＯＲ２Ｂ６、ＯＲ２Ｃ１、ＯＲ２Ｃ３、ＯＲ２Ｊ３、ＯＲ２Ｌ１３、ＯＲ２Ｔ１１、ＯＲ２Ｔ３４、ＯＲ２Ｗ３、ＯＲ３Ａ３、ＯＲ４Ｄ１０、ＯＲ４Ｍ１、ＯＲ４Ｑ３、ＯＲ５１Ａ２、ＯＲ５１Ａ４、ＯＲ５１Ａ７、ＯＲ５１Ｂ２、ＯＲ５１Ｂ４、ＯＲ５１Ｂ５、ＯＲ５１Ｂ６、ＯＲ５１Ｄ１、ＯＲ５１Ｅ１、ＯＲ５１Ｅ１、ＯＲ５１Ｅ２、ＯＲ５１Ｆ１、ＯＲ５１Ｆ２、ＯＲ５１Ｇ１、ＯＲ５１Ｇ２、ＯＲ５１Ｉ１、ＯＲ５１Ｉ２、ＯＲ５１Ｊ１、ＯＲ５１Ｌ１、ＯＲ５１Ｍ１、ＯＲ５１Ｑ１、ＯＲ５１Ｓ１、ＯＲ５１Ｔ１、ＯＲ５１Ｖ１、ＯＲ５２Ａ１、ＯＲ５２Ａ４、ＯＲ５２Ａ５、ＯＲ５２Ｂ２、ＯＲ５２Ｂ４、ＯＲ５２Ｂ６、ＯＲ５２Ｄ１、ＯＲ５２Ｅ２、ＯＲ５２Ｅ４、ＯＲ５２Ｅ５、ＯＲ５２Ｅ６、ＯＲ５２Ｅ８、ＯＲ５２Ｈ１、ＯＲ５２Ｉ１、ＯＲ５２Ｉ２、ＯＲ５２Ｊ３、ＯＲ５２Ｋ１、ＯＲ５２Ｋ２、ＯＲ５２Ｌ１、ＯＲ５２Ｍ１、ＯＲ５２Ｎ１、ＯＲ５２Ｎ２、ＯＲ５２Ｎ４、ＯＲ５２Ｎ５、ＯＲ５２Ｒ１、ＯＲ５２Ｗ１、ＯＲ５６Ａ１、ＯＲ５６Ａ３、ＯＲ５６Ａ４、ＯＲ５６Ａ５、ＯＲ５６Ｂ１、ＯＲ５６Ｂ４、ＯＲ６Ｖ１、ＯＲ７Ｄ２、ＯＲ９Ａ２、オキソグルタル酸受容体、Ｐ２ＲＹ１０、Ｐ２ＲＹ８、Ｐ２Ｙ１２受容体、Ｐ２Ｙ４受容体、ＰｒＲＰ受容体、ＱＲＦＰ受容体、ＲＸＦＰ２受容体、ＲＸＦＰ４受容体、ｓｓｔ１受容体、ｓｓｔ２受容体、ｓｓｔ３受容体、ｓｓｔ４受容体、ｓｓｔ５受容体、ＴＡ１受容体、ＴＡＡＲ２、ＴＡＡＲ５、ＴＡＡＲ６、ＴＡＡＲ８、ＴＡＡＲ９、ＴＡＳ１Ｒ１、ＴＡＳ１Ｒ２、ＴＡＳ１Ｒ３、ＴＡＳ２Ｒ１、ＴＡＳ２Ｒ１０、ＴＡＳ２Ｒ１３、ＴＡＳ２Ｒ１４、ＴＡＳ２Ｒ１６、ＴＡＳ２Ｒ１９、ＴＡＳ２Ｒ２０、ＴＡＳ２Ｒ３、ＴＡＳ２Ｒ３０、ＴＡＳ２Ｒ３１、ＴＡＳ２Ｒ３８、ＴＡＳ２Ｒ３９、ＴＡＳ２Ｒ４、Ｔ��Ｓ２Ｒ４０、ＴＡＳ２Ｒ４１、ＴＡＳ２Ｒ４２、ＴＡＳ２Ｒ４３、ＴＡＳ２Ｒ４５、ＴＡＳ２Ｒ４６、ＴＡＳ２Ｒ５、ＴＡＳ２Ｒ５０、ＴＡＳ２Ｒ６０、ＴＡＳ２Ｒ７、ＴＡＳ２Ｒ８、ＴＡＳ２Ｒ９、ＴＲＨ１受容体、Ｙ１受容体、Ｙ２受容体、Ｙ５受容体、α１Ａ−アドレナリン受容体、α１Ｂ−アドレナリン受容体、α１Ｄ−アドレナリン受容体、δ受容体、５−ＨＴ１Ａ受容体、５−ＨＴ２Ａ受容体、Ａ１受容体、Ａ２Ａ受容体、Ａ２Ｂ受容体、Ａ３受容体、ＡＣＫＲ１、ＡＣＫＲ２、ＡＣＫＲ３、ＡＣＫＲ４、ＡＤＧＲＥ１、ＡＤＧＲＥ２、ＡＤＧＲＥ３、ＡＤＧＲＥ５、アペリン受容体、ＡＴ１受容体、Ｂ１受容体、Ｂ２受容体、ＢＢ２（ＧＲＰ）受容体、ＢＬＴ１受容体、ＢＬＴ２受容体、Ｃ３ａ受容体、Ｃ５ａ１受容体、Ｃ５ａ２受容体、ＣａＳ受容体、ＣＣＲ１、ＣＣＲ１０、ＣＣＲ２、ＣＣＲ３、ＣＣＲ４、ＣＣＲ５、ＣＣＲ６、ＣＣＲ７、ＣＣＲ８、ＣＣＲ９、ＣＣＲＬ２、ケメリン受容体、ＣＸ３ＣＲ１、ＣＸＣＲ１、ＣＸＣＲ２、ＣＸＣＲ３、ＣＸＣＲ４、ＣＸＣＲ５、ＣＸＣＲ６、ＣｙｓＬＴ１受容体、ＣｙｓＬＴ２受容体、ＤＰ１受容体、ＤＰ２受容体、ＥＰ１受容体、ＥＰ２受容体、ＥＰ３受容体、ＥＰ４受容体、ＦＦＡ２受容体、ＦＦＡ４受容体、ＦＰ受容体、ＦＰＲ１、ＦＰＲ２／ＡＬＸ、ＦＰＲ２／ＡＬＸ、ＦＰＲ３、ＦＺＤ６、ＧＡＬ２受容体、ＧＡＬ３受容体、グレリン受容体、ＧＰＲ１３２、ＧＰＲ１５、ＧＰＲ１８、ＧＰＲ１８３、ＧＰＲ２１、ＧＰＲ３１、ＧＰＲ３２、ＧＰＲ３４、ＧＰＲ４、ＧＰＲ５５、ＧＰＲ５５、ＧＰＲ６５、ＧＰＲ６８、Ｈ１受容体、Ｈ２受容体、Ｈ４受容体、ＩＰ受容体、ＬＰＡ５受容体、ＭＡＳ１、ＭＣ１受容体、ＭＣＨ１受容体、ｍＧｌｕ１受容体、ｍＧｌｕ５受容体、ＭＲＧＰＲＸ２、ＭＴ１受容体、ＭＴ２受容体、ＮＫ１受容体、ＮＫ３受容体、ＮＭＵ１受容体、ＯＸＥ受容体、Ｐ２Ｙ１受容体、Ｐ２Ｙ１１受容体、Ｐ２Ｙ１３受容体、Ｐ２Ｙ１４受容体、Ｐ２Ｙ２受容体、Ｐ２Ｙ６受容体、ＰＡＦ受容体、ＰＡＲ１、ＰＡＲ２、ＰＡＲ３、ＰＡＲ４、ＰＫＲ１、ＰＫＲ２、Ｓ１Ｐ１受容体、Ｓ１Ｐ２受容体、Ｓ１Ｐ３受容体、Ｓ１Ｐ４受容体、Ｓ１Ｐ５受容体、コハク酸受容体、ＴＰ受容体、ＶＰＡＣ１受容体、ＶＰＡＣ２受容体、ＸＣＲ１、β２−アドレナリン受容体、κ受容体、μ受容体から選択されるＧＰＣＲである。
【０１４８】
一実施形態では、本発明の特定の活性化された共存ＧＰＣＲは、ＣＣＲ４を除いて、本出願の国際公開公報における段落［０００１２４］の群から選択されるＧＰＣＲである。
【０１４９】
一実施形態では、本発明の特定の活性化された共存ＧＰＣＲは、ＣＣＲ５を除いて、本出願の国際公開公報における段落［０００１２４］の群から選択されるＧＰＣＲである。
【０１５０】
一実施形態では、本発明の特定の活性化された共存ＧＰＣＲは、ＣＣＲ４及びＣＣＲ５を除いて、本出願の国際公開公報における段落［０００１２４］の群から選択されるＧＰＣＲである。
【０１５１】
一実施形態では、本発明の特定の活性化された共存ＧＰＣＲは、ＣＣＲ４、ＣＣＲ５、ＣＣＲ１０及びＣＸＣＲ３を除いて、本出願の国際公開公報における段落［０００１２４］の群から選択されるＧＰＣＲである。
【０１５２】
一実施形態では、本発明の特定の活性化された共存ＧＰＣＲは、アデノシンＡ２Ａ受容体、アデノシンＡ２Ｂ受容体、アデノシンＡ３受容体、アドレナリンα２Ａ受容体、アドレナリンα２Ｃ受容体、アドレナリンβ１受容体、アドレナリンβ２受容体、アドレナリンβ３受容体、アペリン受容体、ＣＣＲ８、ＣＣＲ１０、ＣＸＣＲ１、ＣＸＣＲ３、ＣＸＣＲ６、ＣＸＣＲ７、ドーパミンＤ２受容体、グルカゴン様ペプチド受容体１、ニューロテンシンＮＴＳ２受容体、血小板活性化因子受容体、プロスタグランジンＥ２受容体、プロスタグランジンＥ３受容体、プロスタグランジンＥ４受容体、ソマトスタチン１受容体及びソマトスタチン３受容体を除いて、本出願の国際公開公報における段落［０００１２４］の群から選択されるＧＰＣＲである。
【０１５３】
一実施形態では、本発明の特定の活性化された共存ＧＰＣＲは、アデノシンＡ２Ａ受容体、アデノシンＡ２Ｂ受容体、アデノシンＡ３受容体、アドレナリンα２Ａ受容体、アドレナリンα２Ｃ受容体、アドレナリンβ１受容体、アドレナリンβ２受容体、アドレナリンβ３受容体、アペリン受容体、ＣＣＲ４、ＣＣＲ５、ＣＣＲ８、ＣＣＲ１０、ＣＸＣＲ１、ＣＸＣＲ３、ＣＸＣＲ６、ＣＸＣＲ７、ドーパミンＤ２受容体、グルカゴン様ペプチド受容体１、ニューロテンシンＮＴＳ２受容体、血小板活性化因子受容体、プロスタグランジンＥ２受容体、プロスタグランジンＥ３受容体、プロスタグランジンＥ４受容体、ソマトスタチン１受容体及びソマトスタチン３受容体を除いて、本出願の国際公開公報における段落［０００１２４］の群から選択されるＧＰＣＲである。
【０１５４】
一実施形態では、本発明の特定の活性化された共存ＧＰＣＲは、アドレナリンα１Ａ受容体、ＣＣＲ３及びＭ２受容体を除いて、本出願の国際公開公報における段落［０００１２４］の群から選択されるＧＰＣＲである。
【０１５５】
一実施形態では、本発明の特定の活性化された共存ＧＰＣＲは、アドレナリンα１Ａ受容体、ＣＣＲ３、ＣＣＲ４及びＭ２受容体を除いて、本出願の国際公開公報における段落［０００１２４］の群から選択されるＧＰＣＲである。
【０１５６】
一実施形態では、本発明の特定の活性化された共存ＧＰＣＲは、アドレナリンα１Ａ受容体、ＣＣＲ３、ＣＣＲ５及びＭ２受容体を除いて、本出願の国際公開公報における段落［０００１２４］の群から選択されるＧＰＣＲである。
【０１５７】
一実施形態では、本発明の特定の活性化された共存ＧＰＣＲは、アドレナリンα１Ａ受容体、ＣＣＲ３、ＣＣＲ４、ＣＣＲ５及びＭ２受容体を除いて、本出願の国際公開公報における段落［０００１２４］の群から選択されるＧＰＣＲである。
【０１５８】
一実施形態では、本発明の特定の活性化された共存ＧＰＣＲは、アデノシンＡ２Ａ受容体、アデノシンＡ２Ｂ受容体、アデノシンＡ３受容体、アドレナリンα１Ａ受容体、アドレナリンα２Ａ受容体、アドレナリンα２Ｃ受容体、アドレナリンβ１受容体、アドレナリンβ２受容体、アドレナリンβ３受容体、アペリン受容体、ＣＣＲ３、ＣＣＲ８、ＣＣＲ１０、ＣＸＣＲ１、ＣＸＣＲ３、ＣＸＣＲ６、ＣＸＣＲ７、ドーパミンＤ２受容体、グルカゴン様ペプチド受容体１、Ｍ２受容体、ニューロテンシンＮＴＳ２受容体、血小板活性化因子受容体、プロスタグランジンＥ２受容体、プロスタグランジンＥ３受容体、プロスタグランジンＥ４受容体、ソマトスタチン１受容体及びソマトスタチン３受容体を除いて、本出願の国際公開公報における段落［０００１２４］の群から選択されるＧＰＣＲである。
【０１５９】
一実施形態では、本発明の特定の活性化された共存ＧＰＣＲは、アドレナリンα１Ａ受容体、ＣＣＲ３、ＣＣＲ４、ＣＣＲ５、ＣＣＲ１０、ＣＸＣＲ３及びＭ２受容体を除いて、本出願の国際公開公報における段落［０００１２４］の群から選択されるＧＰＣＲである。
【０１６０】
一実施形態では、本発明の特定の活性化された共存ＧＰＣＲは、アデノシンＡ２Ａ受容体、アデノシンＡ２Ｂ受容体、アデノシンＡ３受容体、アドレナリンα１Ａ受容体、アドレナリンα２Ａ受容体、アドレナリンα２Ｃ受容体、アドレナリンβ１受容体、アドレナリンβ２受容体、アドレナリンβ３受容体、アペリン受容体、ＣＣＲ３、ＣＣＲ４、ＣＣＲ５、ＣＣＲ８、ＣＣＲ１０、ＣＸＣＲ１、ＣＸＣＲ３、ＣＸＣＲ６、ＣＸＣＲ７、ドーパミンＤ２受容体、グルカゴン様ペプチド受容体１、Ｍ２受容体、ニューロテンシンＮＴＳ２受容体、血小板活性化因子受容体、プロスタグランジンＥ２受容体、プロスタグランジンＥ３受容体、プロスタグランジンＥ４受容体、ソマトスタチン１受容体及びソマトスタチン３受容体を除いて、本出願の国際公開公報における段落［０００１２４］の群から選択されるＧＰＣＲである。
【０１６１】
一実施形態では、本発明の特定の活性化された共存ＧＰＣＲは、群：５−ＨＴ１Ｄ受容体、５−ＨＴ１Ｅ受容体、ＡＤＧＲＢ１、ＡＴ２受容体、ＢＢ１受容体、ＢＢ３受容体、ＣＧＲＰ受容体、ＣＲＦ１受容体、ＣＲＦ２受容体、ＥＴＡ受容体、ＥＴＢ受容体、ＦＺＤ４、ＦＺＤ５、ＦＺＤ７、ＦＺＤ８、ＦＺＤ９、ＧＡＢＡＢ受容体、ＧＡＢＡＢ１、ＧＡＢＡＢ２、ＧＡＬ１受容体、ＧＩＰ受容体、ＧＬＰ−１受容体、ＧＬＰ−２受容体、グルカゴン受容体、ＧｎＲＨ２受容体、ＧＰＥＲ、ＧＰＲ１０７、ＧＰＲ１３９、ＧＰＲ１５６、ＧＰＲ１５８、ＧＰＲ１６１、ＧＰＲ１７１、ＧＰＲ１７９、ＧＰＲ３９、ＧＰＲ４５、ＧＰＲ８８、ＧＰＲＣ５Ａ、ＧＰＲＣ５Ｂ、ＧＰＲＣ５Ｃ、Ｈ３受容体、ＨＣＡ１受容体、ＬＰＡ１受容体、ＬＰＡ３受容体、ＬＰＡ４受容体、ＭＣ２受容体、ＭＣ４受容体、ｍＧｌｕ２受容体、ｍＧｌｕ３受容体、モチリン受容体、ＭＲＧＰＲＤ、ＭＲＧＰＲＸ１、ＭＲＧＰＲＸ３、ＮＫ２受容体、ＮＰＦＦ１受容体、ＮＰＦＦ２受容体、ＮＰＳ受容体、ＮＴＳ１受容体、ＯＲ１Ｄ２、ＯＲ２ＡＧ１、ＯＴ受容体、ＰＡＣ１受容体、ＲＸＦＰ１受容体、セクレチン受容体、ＴＳＨ受容体、ＵＴ受容体、Ｖ１Ａ受容体、Ｖ２受容体、α２Ａ−アドレナリン受容体、α２Ｂ−アドレナリン受容体、α２Ｃ−アドレナリン受容体、β１−アドレナリン受容体、β３−アドレナリン受容体、５−ＨＴ１Ｂ受容体、５−ＨＴ１Ｆ受容体、５−ＨＴ２Ｂ受容体、５−ＨＴ２Ｃ受容体、５−ＨＴ５Ａ受容体、５−ＨＴ６受容体、５−ＨＴ７受容体、ＡＤＧＲＥ４Ｐ、ＡＤＧＲＦ１、ＡＤＧＲＧ１、ＡＤＧＲＧ３、ＡＤＧＲＧ５、カルシトニン受容体様受容体、ＣＢ１受容体、ＣＢ２受容体、ＣＣＫ１受容体、ＣＣＫ２受容体、ＣＴ受容体、Ｄ１受容体、Ｄ２受容体、Ｄ３受容体、Ｄ４受容体、Ｄ５受容体、ＦＦＡ１受容体、ＦＦＡ３受容体、ＦＳＨ受容体、ＦＺＤ１、ＦＺＤ２、ＦＺＤ３、ＧＨＲＨ受容体、ＧｎＲＨ１受容体、ＧＰＢＡ受容体、ＧＰＲ１、ＧＰＲ１１９、ＧＰＲ１２、ＧＰＲ１４２、ＧＰＲ１４３、ＧＰＲ１４６、ＧＰＲ１４８、ＧＰＲ１５３、ＧＰＲ１６０、ＧＰＲ１６２、ＧＰＲ１７、ＧＰＲ１７３、ＧＰＲ１７４、ＧＰＲ１７６、ＧＰＲ１８、ＧＰＲ１８２、ＧＰＲ２０、ＧＰＲ２２、ＧＰＲ２６、ＧＰＲ２７、ＧＰＲ３、ＧＰＲ３３、ＧＰＲ３５、ＧＰＲ６、ＧＰＲ６１、ＧＰＲ７８、ＧＰＲ８２、ＧＰＲ８３、ＧＰＲ８４、ＧＰＲ８５、ＧＰＲ８７、ＧＰＲＣ５Ｄ、ＧＰＲＣ６受容体、ＨＣＡ２受容体、ＨＣＡ３受容体、キスぺプチン受容体、ＬＧＲ４、ＬＧＲ６、ＬＨ受容体、ＬＰＡ２受容体、ＬＰＡ６受容体、Ｍ１受容体、Ｍ２受容体、Ｍ３受容体、Ｍ４受容体、Ｍ５受容体、ＭＡＳ１Ｌ、ＭＣ３受容体、ＭＣ５受容体、ＭＣＨ２受容体、ｍＧｌｕ４受容体、ｍＧｌｕ７受容体、ｍＧｌｕ８受容体、ＭＲＧＰＲＧ、ＮＯＰ受容体、ＮＰＢＷ１受容体、ＮＰＢＷ２受容体、ＯＰＮ３、ＯＲ１１Ｈ１、ＯＲ２Ａ１、ＯＲ２Ａ２、ＯＲ２Ａ４、ＯＲ２Ａ４２、ＯＲ２Ａ７、ＯＲ２Ｂ１１、ＯＲ２Ｂ６、ＯＲ２Ｃ１、ＯＲ２Ｃ３、ＯＲ２Ｊ３、ＯＲ２Ｌ１３、ＯＲ２Ｔ１１、ＯＲ２Ｔ３４、ＯＲ２Ｗ３、ＯＲ３Ａ３、ＯＲ４Ｄ１０、ＯＲ４Ｍ１、ＯＲ４Ｑ３、ＯＲ５１Ａ２、ＯＲ５１Ａ４、ＯＲ５１��７、ＯＲ５１Ｂ２、ＯＲ５１Ｂ４、ＯＲ５１Ｂ５、ＯＲ５１Ｂ６、ＯＲ５１Ｄ１、ＯＲ５１Ｅ１、ＯＲ５１Ｅ１、ＯＲ５１Ｅ２、ＯＲ５１Ｆ１、ＯＲ５１Ｆ２、ＯＲ５１Ｇ１、ＯＲ５１Ｇ２、ＯＲ５１Ｉ１、ＯＲ５１Ｉ２、ＯＲ５１Ｊ１、ＯＲ５１Ｌ１、ＯＲ５１Ｍ１、ＯＲ５１Ｑ１、ＯＲ５１Ｓ１、ＯＲ５１Ｔ１、ＯＲ５１Ｖ１、ＯＲ５２Ａ１、ＯＲ５２Ａ４、ＯＲ５２Ａ５、ＯＲ５２Ｂ２、ＯＲ５２Ｂ４、ＯＲ５２Ｂ６、ＯＲ５２Ｄ１、ＯＲ５２Ｅ２、ＯＲ５２Ｅ４、ＯＲ５２Ｅ５、ＯＲ５２Ｅ６、ＯＲ５２Ｅ８、ＯＲ５２Ｈ１、ＯＲ５２Ｉ１、ＯＲ５２Ｉ２、ＯＲ５２Ｊ３、ＯＲ５２Ｋ１、ＯＲ５２Ｋ２、ＯＲ５２Ｌ１、ＯＲ５２Ｍ１、ＯＲ５２Ｎ１、ＯＲ５２Ｎ２、ＯＲ５２Ｎ４、ＯＲ５２Ｎ５、ＯＲ５２Ｒ１、ＯＲ５２Ｗ１、ＯＲ５６Ａ１、ＯＲ５６Ａ３、ＯＲ５６Ａ４、ＯＲ５６Ａ５、ＯＲ５６Ｂ１、ＯＲ５６Ｂ４、ＯＲ６Ｖ１、ＯＲ７Ｄ２、ＯＲ９Ａ２、オキソグルタル酸受容体、Ｐ２ＲＹ１０、Ｐ２ＲＹ８、Ｐ２Ｙ１２受容体、Ｐ２Ｙ４受容体、ＰｒＲＰ受容体、ＱＲＦＰ受容体、ＲＸＦＰ２受容体、ＲＸＦＰ４受容体、ｓｓｔ１受容体、ｓｓｔ２受容体、ｓｓｔ３受容体、ｓｓｔ４受容体、ｓｓｔ５受容体、ＴＡ１受容体、ＴＡＡＲ２、ＴＡＡＲ５、ＴＡＡＲ６、ＴＡＡＲ８、ＴＡＡＲ９、ＴＡＳ１Ｒ１、ＴＡＳ１Ｒ２、ＴＡＳ１Ｒ３、ＴＡＳ２Ｒ１、ＴＡＳ２Ｒ１０、ＴＡＳ２Ｒ１３、ＴＡＳ２Ｒ１４、ＴＡＳ２Ｒ１６、ＴＡＳ２Ｒ１９、ＴＡＳ２Ｒ２０、ＴＡＳ２Ｒ３、ＴＡＳ２Ｒ３０、ＴＡＳ２Ｒ３１、ＴＡＳ２Ｒ３８、ＴＡＳ２Ｒ３９、ＴＡＳ２Ｒ４、ＴＡＳ２Ｒ４０、ＴＡＳ２Ｒ４１、ＴＡＳ２Ｒ４２、ＴＡＳ２Ｒ４３、ＴＡＳ２Ｒ４５、ＴＡＳ２Ｒ４６、ＴＡＳ２Ｒ５、ＴＡＳ２Ｒ５０、ＴＡＳ２Ｒ６０、ＴＡＳ２Ｒ７、ＴＡＳ２Ｒ８、ＴＡＳ２Ｒ９、ＴＲＨ１受容体、Ｙ１受容体、Ｙ２受容体、Ｙ５受容体、α１Ａ−アドレナリン受容体、α１Ｂ−アドレナリン受容体、α１Ｄ−アドレナリン受容体、δ受容体、５−ＨＴ１Ａ受容体、５−ＨＴ２Ａ受容体、Ａ１受容体、Ａ２Ａ受容体、Ａ２Ｂ受容体、Ａ３受容体、ＡＣＫＲ１、ＡＣＫＲ２、ＡＣＫＲ３、ＡＣＫＲ４、ＡＤＧＲＥ１、ＡＤＧＲＥ２、ＡＤＧＲＥ３、ＡＤＧＲＥ５、アペリン受容体、ＡＴ１受容体、Ｂ１受容体、Ｂ２受容体、ＢＢ２（ＧＲＰ）受容体、ＢＬＴ１受容体、ＢＬＴ２受容体、Ｃ３ａ受容体、Ｃ５ａ１受容体、Ｃ５ａ２受容体、ＣａＳ受容体、ＣＣＲ１、ＣＣＲ１０、ＣＣＲ２、ＣＣＲ３、ＣＣＲ４、ＣＣＲ５、ＣＣＲ６、ＣＣＲ７、ＣＣＲ８、ＣＣＲ９、ＣＣＲＬ２、ケメリン受容体、ＣＸ３ＣＲ１、ＣＸＣＲ１、ＣＸＣＲ２、ＣＸＣＲ３、ＣＸＣＲ４、ＣＸＣＲ５、ＣＸＣＲ６、ＣｙｓＬＴ１受容体、ＣｙｓＬＴ２受容体、ＤＰ１受容体、ＤＰ２受容体、ＥＰ１受容体、ＥＰ２受容体、ＥＰ３受容体、ＥＰ４受容体、ＦＦＡ２受容体、ＦＦＡ４受容体、ＦＰ受容体、ＦＰＲ１、ＦＰＲ２／ＡＬＸ、ＦＰＲ２／ＡＬＸ、ＦＰＲ３、ＦＺＤ６、ＧＡＬ２受容体、ＧＡＬ３受容体、グレリン受容体、ＧＰＲ１３２、ＧＰＲ１５、ＧＰＲ１８、ＧＰＲ１８３、ＧＰＲ２１、ＧＰＲ３１、ＧＰＲ３２、ＧＰＲ３４、ＧＰＲ４、ＧＰＲ５５、ＧＰＲ５５、ＧＰＲ６５、ＧＰＲ６８、Ｈ１受容体、Ｈ２受容体、Ｈ４受容体、ＩＰ受容体、ＬＰＡ５受容体、ＭＡＳ１、ＭＣ１受容体、ＭＣＨ１受容体、ｍＧｌｕ１受容体、ｍＧｌｕ５受容体、ＭＲＧＰＲＸ２、ＭＴ１受容体、ＭＴ２受容体、ＮＫ１受容体、ＮＫ３受容体、ＮＭＵ１受容体、ＯＸＥ受容体、Ｐ２Ｙ１受容体、Ｐ２Ｙ１１受容体、Ｐ２Ｙ１３受容体、Ｐ２Ｙ１４受容体、Ｐ２Ｙ２受容体、Ｐ２Ｙ６受容体、ＰＡＦ受容体、ＰＡＲ１、ＰＡＲ２、ＰＡＲ３、ＰＡＲ４、ＰＫＲ１、ＰＫＲ２、Ｓ１Ｐ１受容体、Ｓ１Ｐ２受容体、Ｓ１Ｐ３受容体、Ｓ１Ｐ４受容体、Ｓ１Ｐ５受容体、コハク酸受容体、ＴＰ受容体、ＶＰＡＣ１受容体、ＶＰＡＣ２受容体、ＸＣＲ１、β２−アドレナリン受容体、κ受容体、μ受容体から選択されるＧＰＣＲである。
【０１６２】
一実施形態では、本発明の特定の活性化された共存ＧＰＣＲは、ＣＣＲ４を除いて、本出願の国際公開公報における段落［０００１３８］の群から選択されるＧＰＣＲである。
【０１６３】
一実施形態では、本発明の特定の活性化された共存ＧＰＣＲは、ＣＣＲ５を除いて、本出願の国際公開公報における段落［０００１３８］の群から選択されるＧＰＣＲである。
【０１６４】
一実施形態では、本発明の特定の活性化された共存ＧＰＣＲは、ＣＣＲ４及びＣＣＲ５を除いて、本出願の国際公開公報における段落［０００１３８］の群から選択されるＧＰＣＲである。
【０１６５】
一実施形態では、本発明の特定の活性化された共存ＧＰＣＲは、ＣＣＲ４、ＣＣＲ５、ＣＣＲ１０及びＣＸＣＲ３を除いて、本出願の国際公開公報における段落［０００１３８］の群から選択されるＧＰＣＲである。
【０１６６】
一実施形態では、本発明の特定の活性化された共存ＧＰＣＲは、アデノシンＡ２Ａ受容体、アデノシンＡ２Ｂ受容体、アデノシンＡ３受容体、アドレナリンα２Ａ受容体、アドレナリンα２Ｃ受容体、アドレナリンβ１受容体、アドレナリンβ２受容体、アドレナリンβ３受容体、アペリン受容体、ＣＣＲ８、ＣＣＲ１０、ＣＸＣＲ１、ＣＸＣＲ３、ＣＸＣＲ６、ＣＸＣＲ７、ドーパミンＤ２受容体、グルカゴン様ペプチド受容体１、血小板活性化因子受容体、プロスタグランジンＥ２受容体、プロスタグランジンＥ３受容体、プロスタグランジンＥ４受容体、ソマトスタチン１受容体及びソマトスタチン３受容体を除いて、本出願の国際公開公報における段落［０００１３８］の群から選択されるＧＰＣＲである。
【０１６７】
一実施形態では、本発明の特定の活性化された共存ＧＰＣＲは、アデノシンＡ２Ａ受容体、アデノシンＡ２Ｂ受容体、アデノシンＡ３受容体、アドレナリンα２Ａ受容体、アドレナリンα２Ｃ受容体、アドレナリンβ１受容体、アドレナリンβ２受容体、アドレナリンβ３受容体、アペリン受容体、ＣＣＲ４、ＣＣＲ５、ＣＣＲ８、ＣＣＲ１０、ＣＸＣＲ１、ＣＸＣＲ３、ＣＸＣＲ６、ＣＸＣＲ７、ドーパミンＤ２受容体、グルカゴン様ペプチド受容体１、血小板活性化因子受容体、プロスタグランジンＥ２受容体、プロスタグランジンＥ３受容体、プロスタグランジンＥ４受容体、ソマトスタチン１受容体及びソマトスタチン３受容体を除いて、本出願の国際公開公報における段落［０００１３８］の群から選択されるＧＰＣＲである。
【０１６８】
一実施形態では、本発明の特定の活性化された共存ＧＰＣＲは、アドレナリンα１Ａ受容体、ＣＣＲ３及びＭ２受容体を除いて、本出願の国際公開公報における段落［０００１３８］の群から選択されるＧＰＣＲである。
【０１６９】
一実施形態では、本発明の特定の活性化された共存ＧＰＣＲは、アドレナリンα１Ａ受容体、ＣＣＲ３、ＣＣＲ４及びＭ２受容体を除いて、本出願の国際公開公報における段落［０００１３８］の群から選択されるＧＰＣＲである。
【０１７０】
一実施形態では、本発明の特定の活性化された共存ＧＰＣＲは、アドレナリンα１Ａ受容体、ＣＣＲ３、ＣＣＲ５及びＭ２受容体を除いて、本出願の国際公開公報における段落［０００１３８］の群から選択されるＧＰＣＲである。
【０１７１】
一実施形態では、本発明の特定の活性化された共存ＧＰＣＲは、アドレナリンα１Ａ受容体、ＣＣＲ３、ＣＣＲ４、ＣＣＲ５及びＭ２受容体を除いて、本出願の国際公開公報における段落［０００１３８］の群から選択されるＧＰＣＲである。
【０１７２】
一実施形態では、本発明の特定の活性化された共存ＧＰＣＲは、アデノシンＡ２Ａ受容体、アデノシンＡ２Ｂ受容体、アデノシンＡ３受容体、アドレナリンα１Ａ受容体、アドレナリンα２Ａ受容体、アドレナリンα２Ｃ受容体、アドレナリンβ１受容体、アドレナリンβ２受容体、アドレナリンβ３受容体、アペリン受容体、ＣＣＲ３、ＣＣＲ８、ＣＣＲ１０、ＣＸＣＲ１、ＣＸＣＲ３、ＣＸＣＲ６、ＣＸＣＲ７、ドーパミンＤ２受容体、グルカゴン様ペプチド受容体１、Ｍ２受容体、ニューロテンシンＮＴＳ２受容体、血小板活性化因子受容体、プロスタグランジンＥ２受容体、プロスタグランジンＥ３受容体、プロスタグランジンＥ４受容体、ソマトスタチン１受容体及びソマトスタチン３受容体を除いて、本出願の国際公開公報における段落［０００１３８］の群から選択されるＧＰＣＲである。
【０１７３】
一実施形態では、本発明の特定の活性化された共存ＧＰＣＲは、アドレナリンα１Ａ受容体、ＣＣＲ３、ＣＣＲ４、ＣＣＲ５、ＣＣＲ１０、ＣＸＣＲ３及びＭ２受容体を除いて、本出願の国際公開公報における段落［０００１３８］の群から選択されるＧＰＣＲである。
【０１７４】
一実施形態では、本発明の特定の活性化された共存ＧＰＣＲは、アデノシンＡ２Ａ受容体、アデノシンＡ２Ｂ受容体、アデノシンＡ３受容体、アドレナリンα１Ａ受容体、アドレナリンα２Ａ受容体、アドレナリンα２Ｃ受容体、アドレナリンβ１受容体、アドレナリンβ２受容体、アドレナリンβ３受容体、アペリン受容体、ＣＣＲ３、ＣＣＲ４、ＣＣＲ５、ＣＣＲ８、ＣＣＲ１０、ＣＸＣＲ１、ＣＸＣＲ３、ＣＸＣＲ６、ＣＸＣＲ７、ドーパミンＤ２受容体、グルカゴン様ペプチド受容体１、Ｍ２受容体、ニューロテンシンＮＴＳ２受容体、血小板活性化因子受容体、プロスタグランジンＥ２受容体、プロスタグランジンＥ３受容体、プロスタグランジンＥ４受容体、ソマトスタチン１受容体及びソマトスタチン３受容体を除いて、本出願の国際公開公報における段落［０００１３８］の群から選択されるＧＰＣＲである。
【０１７５】
一実施形態では、本発明の特定の活性化された共存ＧＰＣＲは、群：５−ＨＴ１Ｂ受容体、５−ＨＴ１Ｆ受容体、５−ＨＴ２Ｂ受容体、５−ＨＴ２Ｃ受容体、５−ＨＴ５Ａ受容体、５−ＨＴ６受容体、５−ＨＴ７受容体、ＡＤＧＲＥ４Ｐ、ＡＤＧＲＦ１、ＡＤＧＲＧ１、ＡＤＧＲＧ３、ＡＤＧＲＧ５、カルシトニン受容体様受容体、ＣＢ１受容体、ＣＢ２受容体、ＣＣＫ１受容体、ＣＣＫ２受容体、ＣＴ受容体、Ｄ１受容体、Ｄ２受容体、Ｄ３受容体、Ｄ４受容体、Ｄ５受容体、ＦＦＡ１受容体、ＦＦＡ３受容体、ＦＳＨ受容体、ＦＺＤ１、ＦＺＤ２、ＦＺＤ３、ＧＨＲＨ受容体、ＧｎＲＨ１受容体、ＧＰＢＡ受容体、ＧＰＲ１、ＧＰＲ１１９、ＧＰＲ１２、ＧＰＲ１４２、ＧＰＲ１４３、ＧＰＲ１４６、ＧＰＲ１４８、ＧＰＲ１５３、ＧＰＲ１６０、ＧＰＲ１６２、ＧＰＲ１７、ＧＰＲ１７３、ＧＰＲ１７４、ＧＰＲ１７６、ＧＰＲ１８、ＧＰＲ１８２、ＧＰＲ２０、ＧＰＲ２２、ＧＰＲ２６、ＧＰＲ２７、ＧＰＲ３、ＧＰＲ３３、ＧＰＲ３５、ＧＰＲ６、ＧＰＲ６１、ＧＰＲ７８、ＧＰＲ８２、ＧＰＲ８３、ＧＰＲ８４、ＧＰＲ８５、ＧＰＲ８７、ＧＰＲＣ５Ｄ、ＧＰＲＣ６受容体、ＨＣＡ２受容体、ＨＣＡ３受容体、キスぺプチン受容体、ＬＧＲ４、ＬＧＲ６、ＬＨ受容体、ＬＰＡ２受容体、ＬＰＡ６受容体、Ｍ１受容体、Ｍ２受容体、Ｍ３受容体、Ｍ４受容体、Ｍ５受容体、ＭＡＳ１Ｌ、ＭＣ３受容体、ＭＣ５受容体、ＭＣＨ２受容体、ｍＧｌｕ４受容体、ｍＧｌｕ７受容体、ｍＧｌｕ８受容体、ＭＲＧＰＲＧ、ＮＯＰ受容体、ＮＰＢＷ１受容体、ＮＰＢＷ２受容体、ＯＰＮ３、ＯＲ１１Ｈ１、ＯＲ２Ａ１、ＯＲ２Ａ２、ＯＲ２Ａ４、ＯＲ２Ａ４２、ＯＲ２Ａ７、ＯＲ２Ｂ１１、ＯＲ２Ｂ６、ＯＲ２Ｃ１、ＯＲ２Ｃ３、ＯＲ２Ｊ３、ＯＲ２Ｌ１３、ＯＲ２Ｔ１１、ＯＲ２Ｔ３４、ＯＲ２Ｗ３、ＯＲ３Ａ３、ＯＲ４Ｄ１０、ＯＲ４Ｍ１、ＯＲ４Ｑ３、ＯＲ５１Ａ２、ＯＲ５１Ａ４、ＯＲ５１Ａ７、ＯＲ５１Ｂ２、ＯＲ５１Ｂ４、ＯＲ５１Ｂ５、ＯＲ５１Ｂ６、ＯＲ５１Ｄ１、ＯＲ５１Ｅ１、ＯＲ５１Ｅ１、ＯＲ５１Ｅ２、ＯＲ５１Ｆ１、ＯＲ５１Ｆ２、ＯＲ５１Ｇ１、ＯＲ５１Ｇ２、ＯＲ５１Ｉ１、ＯＲ５１Ｉ２、ＯＲ５１Ｊ１、ＯＲ５１Ｌ１、ＯＲ５１Ｍ１、ＯＲ５１Ｑ１、ＯＲ５１Ｓ１、ＯＲ５１Ｔ１、ＯＲ５１Ｖ１、ＯＲ５２Ａ１、ＯＲ５２Ａ４、ＯＲ５２Ａ５、ＯＲ５２Ｂ２、ＯＲ５２Ｂ４、ＯＲ５２Ｂ６、ＯＲ５２Ｄ１、ＯＲ５２Ｅ２、ＯＲ５２Ｅ４、ＯＲ５２Ｅ５、ＯＲ５２Ｅ６、ＯＲ５２Ｅ８、ＯＲ５２Ｈ１、ＯＲ５２Ｉ１、ＯＲ５２Ｉ２、ＯＲ５２Ｊ３、ＯＲ５２Ｋ１、ＯＲ５２Ｋ２、ＯＲ５２Ｌ１、ＯＲ５２Ｍ１、ＯＲ５２Ｎ１、ＯＲ５２Ｎ２、ＯＲ５２Ｎ４、ＯＲ５２Ｎ５、ＯＲ５２Ｒ１、ＯＲ５２Ｗ１、ＯＲ５６Ａ１、ＯＲ５６Ａ３、ＯＲ５６Ａ４、ＯＲ５６Ａ５、ＯＲ５６Ｂ１、ＯＲ５６Ｂ４、ＯＲ６Ｖ１、ＯＲ７Ｄ２、ＯＲ９Ａ２、オキソグルタル酸受容体、Ｐ２ＲＹ１０、Ｐ２ＲＹ８、Ｐ２Ｙ１２受容体、Ｐ２Ｙ４受容体、ＰｒＲＰ受容体、ＱＲＦＰ受容体、ＲＸＦＰ２受容体、ＲＸＦＰ４受容体、ｓｓｔ１受容体、ｓｓｔ２受容体、ｓｓｔ３受容体、ｓｓｔ４受容体、ｓｓｔ５受容体、ＴＡ１受容体、ＴＡＡＲ２、ＴＡＡＲ５、ＴＡＡＲ６、ＴＡＡＲ８、ＴＡＡＲ９、ＴＡＳ１Ｒ１、ＴＡＳ１Ｒ２、ＴＡＳ１Ｒ３、ＴＡＳ２Ｒ１、ＴＡＳ２Ｒ１０、ＴＡＳ２Ｒ１３、ＴＡＳ２Ｒ１４、ＴＡＳ２Ｒ１６、ＴＡＳ２Ｒ１９、ＴＡＳ２Ｒ２０、ＴＡＳ２Ｒ３、ＴＡＳ２Ｒ３０、ＴＡＳ２Ｒ３１、ＴＡＳ２Ｒ３８、ＴＡＳ２Ｒ３９、ＴＡＳ２Ｒ４、ＴＡＳ２Ｒ４０、ＴＡＳ２Ｒ４１、ＴＡＳ２Ｒ４２、ＴＡＳ２Ｒ４３、ＴＡＳ２Ｒ４５、ＴＡＳ２Ｒ４６、ＴＡＳ２Ｒ５、ＴＡＳ２Ｒ５０、ＴＡＳ２Ｒ６０、ＴＡＳ２Ｒ７、ＴＡＳ２Ｒ８、ＴＡＳ２Ｒ９、ＴＲＨ１受容体、Ｙ１受容体、Ｙ２受容体、Ｙ５受容体、α１Ａ−アドレナリン受容体、α１Ｂ−アドレナリン受容体、α１Ｄ−アドレナリン受容体、δ受容体、５−ＨＴ１Ａ受容体、５−ＨＴ２Ａ受容体、Ａ１受容体、Ａ２Ａ受容体、Ａ２Ｂ受容体、Ａ３受容体、ＡＣＫＲ１、ＡＣＫＲ２、ＡＣＫＲ３、ＡＣＫＲ４、ＡＤＧＲＥ１、ＡＤＧＲＥ２、ＡＤＧＲＥ３、ＡＤＧＲＥ５、アペリン受容体、ＡＴ１受容体、Ｂ１受容体、Ｂ２受容体、ＢＢ２（ＧＲＰ）受容体、ＢＬＴ１受容体、ＢＬＴ２受容体、Ｃ３ａ受容体、Ｃ５ａ１受容体、Ｃ５ａ２受容体、ＣａＳ受容体、ＣＣＲ１、ＣＣＲ１０、ＣＣＲ２、ＣＣＲ３、ＣＣＲ４、ＣＣＲ５、ＣＣＲ６、ＣＣＲ７、ＣＣＲ８、ＣＣＲ９、ＣＣＲＬ２、ケメリン受容体、ＣＸ３ＣＲ１、ＣＸＣＲ１、ＣＸＣＲ２、ＣＸＣＲ３、ＣＸＣＲ４、ＣＸＣＲ５、ＣＸＣＲ６、ＣｙｓＬＴ１受容体、ＣｙｓＬＴ２受容体、ＤＰ１受容体、ＤＰ２受容体、ＥＰ１受容体、ＥＰ２受容体、ＥＰ３受容体、ＥＰ４受容体、ＦＦＡ２受容体、ＦＦＡ４受容体、ＦＰ受容体、ＦＰＲ１、ＦＰＲ２／ＡＬＸ、ＦＰＲ２／ＡＬＸ、ＦＰＲ３、ＦＺＤ６、ＧＡＬ２受容体、ＧＡＬ３受容体、グレリン受容体、ＧＰＲ１３２、ＧＰＲ１５、ＧＰＲ１８、ＧＰＲ１８３、ＧＰＲ２１、ＧＰＲ３１、ＧＰＲ３２、ＧＰＲ３４、ＧＰＲ４、ＧＰＲ５５、ＧＰＲ５５、ＧＰＲ６５、ＧＰＲ６８、Ｈ１受容体、Ｈ２受容体、Ｈ４受容体、ＩＰ受容体、ＬＰＡ５受容体、ＭＡＳ１、ＭＣ１受容体、ＭＣＨ１受容体、ｍＧｌｕ１受容体、ｍＧｌｕ５受容体、ＭＲＧＰＲＸ２、ＭＴ１受容体、ＭＴ２受容体、ＮＫ１受容体、ＮＫ３受容体、ＮＭＵ１受容体、ＯＸＥ受容体、Ｐ２Ｙ１受容体、Ｐ２Ｙ１１受容体、Ｐ２Ｙ１３受容体、Ｐ２Ｙ１４受容体、Ｐ２Ｙ２受容体、Ｐ２Ｙ６受容体、ＰＡＦ受容体、ＰＡＲ１、ＰＡＲ２、ＰＡＲ３、ＰＡＲ４、ＰＫＲ１、ＰＫＲ２、Ｓ１Ｐ１受容体、Ｓ１Ｐ２受容体、Ｓ１Ｐ３受容体、Ｓ１Ｐ４受容体、Ｓ１Ｐ５受容体、コハク酸受容体、ＴＰ受容体、ＶＰＡＣ１受容体、ＶＰＡＣ２受容体、ＸＣＲ１、β２−アドレナリン受容体、κ受容体、μ受容体から選択されるＧＰＣＲである。
【０１７６】
一実施形態では、本発明の特定の活性化された共存ＧＰＣＲは、ＣＣＲ４を除いて、本出願の国際公開公報における段落［０００１５２］の群から選択されるＧＰＣＲである。
【０１７７】
一実施形態では、本発明の特定の活性化された共存ＧＰＣＲは、ＣＣＲ５を除いて、本出願の国際公開公報における段落［０００１５２］の群から選択されるＧＰＣＲである。
【０１７８】
一実施形態では、本発明の特定の活性化された共存ＧＰＣＲは、ＣＣＲ４及びＣＣＲ５を除いて、本出願の国際公開公報における段落［０００１５２］の群から選択されるＧＰＣＲである。
【０１７９】
一実施形態では、本発明の特定の活性化された共存ＧＰＣＲは、ＣＣＲ４、ＣＣＲ５、ＣＣＲ１０及びＣＸＣＲ３を除いて、本出願の国際公開公報における段落［０００１５２］の群から選択されるＧＰＣＲである。
【０１８０】
一実施形態では、本発明の特定の活性化された共存ＧＰＣＲは、アデノシンＡ２Ａ受容体、アデノシンＡ２Ｂ受容体、アデノシンＡ３受容体、アドレナリンβ２受容体、アペリン受容体、ＣＣＲ８、ＣＣＲ１０、ＣＸＣＲ１、ＣＸＣＲ３、ＣＸＣＲ６、ＣＸＣＲ７、ドーパミンＤ２受容体、血小板活性化因子受容体、プロスタグランジンＥ２受容体、プロスタグランジンＥ３受容体、プロスタグランジンＥ４受容体、ソマトスタチン１受容体及びソマトスタチン３受容体を除いて、本出願の国際公開公報における段落［０００１５２］の群から選択されるＧＰＣＲである。
【０１８１】
一実施形態では、本発明の特定の活性化された共存ＧＰＣＲは、アデノシンＡ２Ａ受容体、アデノシンＡ２Ｂ受容体、アデノシンＡ３受容体、アドレナリンβ２受容体、アペリン受容体、ＣＣＲ４、ＣＣＲ５、ＣＣＲ８、ＣＣＲ１０、ＣＸＣＲ１、ＣＸＣＲ３、ＣＸＣＲ６、ＣＸＣＲ７、ドーパミンＤ２受容体、血小板活性化因子受容体、プロスタグランジンＥ２受容体、プロスタグランジンＥ３受容体、プロスタグランジンＥ４受容体、ソマトスタチン１受容体及びソマトスタチン３受容体を除いて、本出願の国際公開公報における段落［０００１５２］の群から選択されるＧＰＣＲである。
【０１８２】
一実施形態では、本発明の特定の活性化された共存ＧＰＣＲは、アドレナリンα１Ａ受容体、ＣＣＲ３及びＭ２受容体を除いて、本出願の国際公開公報における段落［０００１５２］の群から選択されるＧＰＣＲである。
【０１８３】
一実施形態では、本発明の特定の活性化された共存ＧＰＣＲは、アドレナリンα１Ａ受容体、ＣＣＲ３、ＣＣＲ４及びＭ２受容体を除いて、本出願の国際公開公報における段落［０００１５２］の群から選択されるＧＰＣＲである。
【０１８４】
一実施形態では、本発明の特定の活性化された共存ＧＰＣＲは、アドレナリンα１Ａ受容体、ＣＣＲ３、ＣＣＲ５及びＭ２受容体を除いて、本出願の国際公開公報における段落［０００１５２］の群から選択されるＧＰＣＲである。
【０１８５】
一実施形態では、本発明の特定の活性化された共存ＧＰＣＲは、アドレナリンα１Ａ受容体、ＣＣＲ３、ＣＣＲ４、ＣＣＲ５及びＭ２受容体を除いて、本出願の国際公開公報における段落［０００１５２］の群から選択されるＧＰＣＲである。
【０１８６】
一実施形態では、本発明の特定の活性化された共存ＧＰＣＲは、アデノシンＡ２Ａ受容体、アデノシンＡ２Ｂ受容体、アデノシンＡ３受容体、アドレナリンα１Ａ受容体、アドレナリンα２Ａ受容体、アドレナリンα２Ｃ受容体、アドレナリンβ１受容体、アドレナリンβ２受容体、アドレナリンβ３受容体、アペリン受容体、ＣＣＲ３、ＣＣＲ８、ＣＣＲ１０、ＣＸＣＲ１、ＣＸＣＲ３、ＣＸＣＲ６、ＣＸＣＲ７、ドーパミンＤ２受容体、グルカゴン様ペプチド受容体１、Ｍ２受容体、ニューロテンシンＮＴＳ２受容体、血小板活性化因子受容体、プロスタグランジンＥ２受容体、プロスタグランジンＥ３受容体、プロスタグランジンＥ４受容体、ソマトスタチン１受容体及びソマトスタチン３受容体を除いて、本出願の国際公開公報における段落［０００１５２］の群から選択されるＧＰＣＲである。
【０１８７】
一実施形態では、本発明の特定の活性化された共存ＧＰＣＲは、アドレナリンα１Ａ受容体、ＣＣＲ３、ＣＣＲ４、ＣＣＲ５、ＣＣＲ１０、ＣＸＣＲ３及びＭ２受容体を除いて、本出願の国際公開公報における段落［０００１５２］の群から選択されるＧＰＣＲである。
【０１８８】
一実施形態では、本発明の特定の活性化された共存ＧＰＣＲは、アデノシンＡ２Ａ受容体、アデノシンＡ２Ｂ受容体、アデノシンＡ３受容体、アドレナリンα１Ａ受容体、アドレナリンα２Ａ受容体、アドレナリンα２Ｃ受容体、アドレナリンβ１受容体、アドレナリンβ２受容体、アドレナリンβ３受容体、アペリン受容体、ＣＣＲ３、ＣＣＲ４、ＣＣＲ５、ＣＣＲ８、ＣＣＲ１０、ＣＸＣＲ１、ＣＸＣＲ３、ＣＸＣＲ６、ＣＸＣＲ７、ドーパミンＤ２受容体、グルカゴン様ペプチド受容体１、Ｍ２受容体、ニューロテンシンＮＴＳ２受容体、血小板活性化因子受容体、プロスタグランジンＥ２受容体、プロスタグランジンＥ３受容体、プロスタグランジンＥ４受容体、ソマトスタチン１受容体及びソマトスタチン３受容体を除いて、本出願の国際公開公報における段落［０００１５２］の群から選択されるＧＰＣＲである。
【０１８９】
一実施形態では、本発明の特定の活性化された共存ＧＰＣＲは、群：５−ＨＴ１Ａ受容体、５−ＨＴ２Ａ受容体、Ａ１受容体、Ａ２Ａ受容体、Ａ２Ｂ受容体、Ａ３受容体、ＡＣＫＲ１、ＡＣＫＲ２、ＡＣＫＲ３、ＡＣＫＲ４、ＡＤＧＲＥ１、ＡＤＧＲＥ２、ＡＤＧＲＥ３、ＡＤＧＲＥ５、アペリン受容体、ＡＴ１受容体、Ｂ１受容体、Ｂ２受容体、ＢＢ２（ＧＲＰ）受容体、ＢＬＴ１受容体、ＢＬＴ２受容体、Ｃ３ａ受容体、Ｃ５ａ１受容体、Ｃ５ａ２受容体、ＣａＳ受容体、ＣＣＲ１、ＣＣＲ１０、ＣＣＲ２、ＣＣＲ３、ＣＣＲ４、ＣＣＲ５、ＣＣＲ６、ＣＣＲ７、ＣＣＲ８、ＣＣＲ９、ＣＣＲＬ２、ケメリン受容体、ＣＸ３ＣＲ１、ＣＸＣＲ１、ＣＸＣＲ２、ＣＸＣＲ３、ＣＸＣＲ４、ＣＸＣＲ５、ＣＸＣＲ６、ＣｙｓＬＴ１受容体、ＣｙｓＬＴ２受容体、ＤＰ１受容体、ＤＰ２受容体、ＥＰ１受容体、ＥＰ２受容体、ＥＰ３受容体、ＥＰ４受容体、ＦＦＡ２受容体、ＦＦＡ４受容体、ＦＰ受容体、ＦＰＲ１、ＦＰＲ２／ＡＬＸ、ＦＰＲ２／ＡＬＸ、ＦＰＲ３、ＦＺＤ６、ＧＡＬ２受容体、ＧＡＬ３受容体、グレリン受容体、ＧＰＲ１３２、ＧＰＲ１５、ＧＰＲ１８、ＧＰＲ１８３、ＧＰＲ２１、ＧＰＲ３１、ＧＰＲ３２、ＧＰＲ３４、ＧＰＲ４、ＧＰＲ５５、ＧＰＲ５５、ＧＰＲ６５、ＧＰＲ６８、Ｈ１受容体、Ｈ２受容体、Ｈ４受容体、ＩＰ受容体、ＬＰＡ５受容体、ＭＡＳ１、ＭＣ１受容体、ＭＣＨ１受容体、ｍＧｌｕ１受容体、ｍＧｌｕ５受容体、ＭＲＧＰＲＸ２、ＭＴ１受容体、ＭＴ２受容体、ＮＫ１受容体、ＮＫ３受容体、ＮＭＵ１受容体、ＯＸＥ受容体、Ｐ２Ｙ１受容体、Ｐ２Ｙ１１受容体、Ｐ２Ｙ１３受容体、Ｐ２Ｙ１４受容体、Ｐ２Ｙ２受容体、Ｐ２Ｙ６受容体、ＰＡＦ受容体、ＰＡＲ１、ＰＡＲ２、ＰＡＲ３、ＰＡＲ４、ＰＫＲ１、ＰＫＲ２、Ｓ１Ｐ１受容体、Ｓ１Ｐ２受容体、Ｓ１Ｐ３受容体、Ｓ１Ｐ４受容体、Ｓ１Ｐ５受容体、コハク酸受容体、ＴＰ受容体、ＶＰＡＣ１受容体、ＶＰＡＣ２受容体、ＸＣＲ１、β２−アドレナリン受容体、κ受容体、μ受容体から選択されるＧＰＣＲである。
【０１９０】
一実施形態では、本発明の特定の活性化された共存ＧＰＣＲは、ＣＣＲ４を除いて、本出願の国際公開公報における段落［０００１６６］の群から選択されるＧＰＣＲである。
【０１９１】
一実施形態では、本発明の特定の活性化された共存ＧＰＣＲは、ＣＣＲ５を除いて、本出願の国際公開公報における段落［０００１６６］の群から選択されるＧＰＣＲである。
【０１９２】
一実施形態では、本発明の特定の活性化された共存ＧＰＣＲは、ＣＣＲ４及びＣＣＲ５を除いて、本出願の国際公開公報における段落［０００１６６］の群から選択されるＧＰＣＲである。
【０１９３】
一実施形態では、本発明の特定の活性化された共存ＧＰＣＲは、ＣＣＲ４、ＣＣＲ５、ＣＣＲ１０及びＣＸＣＲ３を除いて、本出願の国際公開公報における段落［０００１６６］の群から選択されるＧＰＣＲである。
【０１９４】
一実施形態では、本発明の特定の活性化された共存ＧＰＣＲは、アデノシンＡ２Ａ受容体、アデノシンＡ２Ｂ受容体、アデノシンＡ３受容体、アドレナリンβ２受容体、アペリン受容体、ＣＣＲ８、ＣＣＲ１０、ＣＸＣＲ１、ＣＸＣＲ３、ＣＸＣＲ６、ＣＸＣＲ７、血小板活性化因子受容体、プロスタグランジンＥ２受容体、プロスタグランジンＥ３受容体及びプロスタグランジンＥ４受容体を除いて、本出願の国際公開公報における段落［０００１６６］の群から選択されるＧＰＣＲである。
【０１９５】
一実施形態では、本発明の特定の活性化された共存ＧＰＣＲは、アデノシンＡ２Ａ受容体、アデノシンＡ２Ｂ受容体、アデノシンＡ３受容体、アドレナリンβ２受容体、アペリン受容体、ＣＣＲ４、ＣＣＲ５、ＣＣＲ８、ＣＣＲ１０、ＣＸＣＲ１、ＣＸＣＲ３、ＣＸＣＲ６、ＣＸＣＲ７、血小板活性化因子受容体、プロスタグランジンＥ２受容体、プロスタグランジンＥ３受容体及びプロスタグランジンＥ４受容体を除いて、本出願の国際公開公報における段落［０００１６６］の群から選択されるＧＰＣＲである。
【０１９６】
一実施形態では、本発明の特定の活性化された共存ＧＰＣＲは、ＣＣＲ３を除いて、本出願の国際公開公報における段落［０００１６６］の群から選択されるＧＰＣＲである。
【０１９７】
一実施形態では、本発明の特定の活性化された共存ＧＰＣＲは、ＣＣＲ３及びＣＣＲ４を除いて、本出願の国際公開公報における段落［０００１６６］の群から選択されるＧＰＣＲである。
【０１９８】
一実施形態では、本発明の特定の活性化された共存ＧＰＣＲは、ＣＣＲ３及びＣＣＲ５を除いて、本出願の国際公開公報における段落［０００１６６］の群から選択されるＧＰＣＲである。
【０１９９】
一実施形態では、本発明の特定の活性化された共存ＧＰＣＲは、ＣＣＲ３、ＣＣＲ４及びＣＣＲ５を除いて、本出願の国際公開公報における段落［０００１６６］の群から選択されるＧＰＣＲである。
【０２００】
一実施形態では、本発明の特定の活性化された共存ＧＰＣＲは、アデノシンＡ２Ａ受容体、アデノシンＡ２Ｂ受容体、アデノシンＡ３受容体、アドレナリンα２Ａ受容体、アドレナリンα２Ｃ受容体、アドレナリンβ１受容体、アドレナリンβ２受容体、アドレナリンβ３受容体、アペリン受容体、ＣＣＲ３、ＣＣＲ８、ＣＣＲ１０、ＣＸＣＲ１、ＣＸＣＲ３、ＣＸＣＲ６、ＣＸＣＲ７、ドーパミンＤ２受容体、グルカゴン様ペプチド受容体１、ニューロテンシンＮＴＳ２受容体、血小板活性化因子受容体、プロスタグランジンＥ２受容体、プロスタグランジンＥ３受容体、プロスタグランジンＥ４受容体、ソマトスタチン１受容体及びソマトスタチン３受容体を除いて、本出願の国際公開公報における段落［０００１６６］の群から選択されるＧＰＣＲである。
【０２０１】
一実施形態では、本発明の特定の活性化された共存ＧＰＣＲは、ＣＣＲ３、ＣＣＲ４、ＣＣＲ５、ＣＣＲ１０及びＣＸＣＲ３を除いて、本出願の国際公開公報における段落［０００１６６］の群から選択されるＧＰＣＲである。
【０２０２】
一実施形態では、本発明の特定の活性化された共存ＧＰＣＲは、アデノシンＡ２Ａ受容体、アデノシンＡ２Ｂ受容体、アデノシンＡ３受容体、アドレナリンα２Ａ受容体、アドレナリンα２Ｃ受容体、アドレナリンβ１受容体、アドレナリンβ２受容体、アドレナリンβ３受容体、アペリン受容体、ＣＣＲ３、ＣＣＲ４、ＣＣＲ５、ＣＣＲ８、ＣＣＲ１０、ＣＸＣＲ１、ＣＸＣＲ３、ＣＸＣＲ６、ＣＸＣＲ７、ドーパミンＤ２受容体、グルカゴン様ペプチド受容体１、ニューロテンシンＮＴＳ２受容体、血小板活性化因子受容体、プロスタグランジンＥ２受容体、プロスタグランジンＥ３受容体、プロスタグランジンＥ４受容体、ソマトスタチン１受容体及びソマトスタチン３受容体を除いて、本出願の国際公開公報における段落［０００１６６］の群から選択されるＧＰＣＲである。
【０２０３】
一実施形態では、本発明の特定の活性化された共存ＧＰＣＲは、群：ＡＴ１Ｒを含むアンジオテンシン受容体並びにＣＣＲ１、ＣＣＲ２、ＣＣＲ６、ＣＣＲ７、ＣＸＣＲ２、ＣＸＣＲ４、ＣＸＣＲ６及びＣＸＣＲ７を含む特定のケモカイン受容体から選択されるＧＰＣＲである。
【０２０４】
一実施形態では、本発明の特定の活性化された共存ＧＰＣＲは、群：ＡＴ１Ｒを含むアンジオテンシン受容体並びにＣＣＲ１、ＣＣＲ２、ＣＣＲ６、ＣＣＲ７、ＣＸＣＲ１、ＣＸＣＲ２、ＣＸＣＲ４、ＣＸＣＲ６及びＣＸＣＲ７を含む特定のケモカイン受容体から選択されるＧＰＣＲである。
【０２０５】
一実施形態では、本発明の特定の活性化された共存ＧＰＣＲは、群：ＡＴ１Ｒを含むアンジオテンシン受容体並びにＣＣＲ１、ＣＣＲ２、ＣＣＲ６、ＣＣＲ７、ＣＸＣＲ１、ＣＸＣＲ２、ＣＸＣＲ４及びＣＸＣＲ６を含む特定のケモカイン受容体から選択されるＧＰＣＲである。
【０２０６】
一実施形態では、本発明の特定の活性化された共存ＧＰＣＲは、群：ＡＴ１Ｒを含むアンジオテンシン受容体並びにＣＣＲ１、ＣＣＲ２、ＣＣＲ６、ＣＣＲ７、ＣＸＣＲ２、ＣＸＣＲ４及びＣＸＣＲ６を含む特定のケモカイン受容体から選択されるＧＰＣＲである。
【０２０７】
一実施形態では、本発明の特定の活性化された共存ＧＰＣＲは、群：ＡＴ１Ｒを含むアンジオテンシン受容体並びにＣＣＲ１、ＣＣＲ２、ＣＣＲ６、ＣＣＲ７、ＣＸＣＲ１、ＣＸＣＲ２及びＣＸＣＲ６を含む特定のケモカイン受容体から選択されるＧＰＣＲである。
【０２０８】
一実施形態では、本発明の特定の活性化された共存ＧＰＣＲは、群：ＡＴ１Ｒを含むアンジオテンシン受容体並びにＣＣＲ１、ＣＣＲ２、ＣＣＲ６、ＣＣＲ７、ＣＸＣＲ２及びＣＸＣＲ６を含む特定のケモカイン受容体から選択されるＧＰＣＲである。
【０２０９】
一実施形態では、本発明の活性化された共存ＧＰＣＲは、バソプレシン受容体２である。
【０２１０】
一実施形態では、特定のケモカイン受容体は、ＲＡＧＥと同じ細胞内で共発現されるケモカイン受容体である。
【０２１１】
一実施形態では、特定のケモカイン受容体は、ＲＡＧＥと同じ細胞内で共発現され、炎症に関係付けられ、且つ群：ＣＣＲ１、ＣＣＲ２、ＣＣＲ３、ＣＣＲ４、ＣＣＲ５、ＣＣＲ６、ＣＣＲ７、ＣＣＲ８、ＣＣＲ９、ＣＣＲ１０、ＣＸＣＲ１、ＣＸＣＲ２、ＣＸＣＲ３、ＣＸＣＲ４、ＣＸＣＲ５、ＣＸＣＲ６、ＣＸＣＲ７、ＣＸ３ＣＲ１、ＸＣＲ１から選択されるケモカイン受容体である。
【０２１２】
一実施形態では、特定のケモカイン受容体は、ＲＡＧＥと同じ細胞内で共発現され、炎症に関係付けられ、且つ群：ＣＣＲ１、ＣＣＲ２、ＣＣＲ３、ＣＣＲ４、ＣＣＲ６、ＣＣＲ７、ＣＣＲ８、ＣＣＲ９、ＣＣＲ１０、ＣＸＣＲ１、ＣＸＣＲ２、ＣＸＣＲ３、ＣＸＣＲ４、ＣＸＣＲ５、ＣＸＣＲ６、ＣＸＣＲ７、ＣＸ３ＣＲ１、ＸＣＲ１から選択されるケモカイン受容体である。
【０２１３】
一実施形態では、特定のケモカイン受容体は、ＲＡＧＥと同じ細胞内で共発現され、炎症に関係付けられ、且つ群：ＣＣＲ１、ＣＣＲ２、ＣＣＲ３、ＣＣＲ５、ＣＣＲ６、ＣＣＲ７、ＣＣＲ８、ＣＣＲ９、ＣＣＲ１０、ＣＸＣＲ１、ＣＸＣＲ２、ＣＸＣＲ３、ＣＸＣＲ４、ＣＸＣＲ５、ＣＸＣＲ６、ＣＸＣＲ７、ＣＸ３ＣＲ１、ＸＣＲ１から選択されるケモカイン受容体である。
【０２１４】
一実施形態では、特定のケモカイン受容体は、ＲＡＧＥと同じ細胞内で共発現され、炎症に関係付けられ、且つ群：ＣＣＲ１、ＣＣＲ２、ＣＣＲ３、ＣＣＲ６、ＣＣＲ７、ＣＣＲ８、ＣＣＲ９、ＣＣＲ１０、ＣＸＣＲ１、ＣＸＣＲ２、ＣＸＣＲ３、ＣＸＣＲ４、ＣＸＣＲ５、ＣＸＣＲ６、ＣＸＣＲ７、ＣＸ３ＣＲ１、ＸＣＲ１から選択されるケモカイン受容体である。
【０２１５】
一実施形態では、特定のケモカイン受容体は、ＲＡＧＥと同じ細胞内で共発現され、炎症に関係付けられ、且つ群：ＣＣＲ１、ＣＣＲ２、ＣＣＲ３、ＣＣＲ６、ＣＣＲ７、ＣＣＲ８、ＣＣＲ９、ＣＸＣＲ１、ＣＸＣＲ２、ＣＸＣＲ４、ＣＸＣＲ５、ＣＸＣＲ６、ＣＸＣＲ７、ＣＸ３ＣＲ１、ＸＣＲ１から選択されるケモカイン受容体である。
【０２１６】
一実施形態では、特定のケモカイン受容体は、ＲＡＧＥと同じ細胞内で共発現され、炎症に関係付けられ、且つ群：ＣＣＲ１、ＣＣＲ２、ＣＣＲ４、ＣＣＲ５、ＣＣＲ６、ＣＣＲ７、ＣＣＲ８、ＣＣＲ９、ＣＣＲ１０、ＣＸＣＲ１、ＣＸＣＲ２、ＣＸＣＲ３、ＣＸＣＲ４、ＣＸＣＲ５、ＣＸＣＲ６、ＣＸＣＲ７、ＣＸ３ＣＲ１、ＸＣＲ１から選択されるケモカイン受容体である。
【０２１７】
一実施形態では、特定のケモカイン受容体は、ＲＡＧＥと同じ細胞内で共発現され、炎症に関係付けられ、且つ群：ＣＣＲ１、ＣＣＲ２、ＣＣＲ４、ＣＣＲ６、ＣＣＲ７、ＣＣＲ８、ＣＣＲ９、ＣＣＲ１０、ＣＸＣＲ１、ＣＸＣＲ２、ＣＸＣＲ３、ＣＸＣＲ４、ＣＸＣＲ５、ＣＸＣＲ６、ＣＸＣＲ７、ＣＸ３ＣＲ１、ＸＣＲ１から選択されるケモカイン受容体である。
【０２１８】
一実施形態では、特定のケモカイン受容体は、ＲＡＧＥと同じ細胞内で共発現され、炎症に関係付けられ、且つ群：ＣＣＲ１、ＣＣＲ２、ＣＣＲ５、ＣＣＲ６、ＣＣＲ７、ＣＣＲ８、ＣＣＲ９、ＣＣＲ１０、ＣＸＣＲ１、ＣＸＣＲ２、ＣＸＣＲ３、ＣＸＣＲ４、ＣＸＣＲ５、ＣＸＣＲ６、ＣＸＣＲ７、ＣＸ３ＣＲ１、ＸＣＲ１から選択されるケモカイン受容体である。
【０２１９】
一実施形態では、特定のケモカイン受容体は、ＲＡＧＥと同じ細胞内で共発現され、炎症に関係付けられ、且つ群：ＣＣＲ１、ＣＣＲ２、ＣＣＲ６、ＣＣＲ７、ＣＣＲ８、ＣＣＲ９、ＣＣＲ１０、ＣＸＣＲ１、ＣＸＣＲ２、ＣＸＣＲ３、ＣＸＣＲ４、ＣＸＣＲ５、ＣＸＣＲ６、ＣＸＣＲ７、ＣＸ３ＣＲ１、ＸＣＲ１から選択されるケモカイン受容体である。
【０２２０】
一実施形態では、特定のケモカイン受容体は、ＲＡＧＥと同じ細胞内で共発現され、炎症に関係付けられ、且つ群：ＣＣＲ１、ＣＣＲ２、ＣＣＲ６、ＣＣＲ７、ＣＣＲ８、ＣＣＲ９、ＣＸＣＲ１、ＣＸＣＲ２、ＣＸＣＲ４、ＣＸＣＲ５、ＣＸＣＲ６、ＣＸＣＲ７、ＣＸ３ＣＲ１、ＸＣＲ１から選択されるケモカイン受容体である。
【０２２１】
一実施形態では、特定のケモカイン受容体は、ＲＡＧＥと同じ細胞内で共発現され、炎症に関係付けられ、且つ群：ＣＣＲ１、ＣＣＲ２、ＣＣＲ３、ＣＣＲ６、ＣＣＲ７、ＣＣＲ８、ＣＣＲ９、ＣＸＣＲ１、ＣＸＣＲ２、ＣＸＣＲ５、ＣＸＣＲ６、ＣＸＣＲ７、ＣＸ３ＣＲ１、ＸＣＲ１から選択されるケモカイン受容体である。
【０２２２】
一実施形態では、特定のケモカイン受容体は、ＲＡＧＥと同じ細胞内で共発現され、炎症に関係付けられ、且つ群：ＣＣＲ１、ＣＣＲ２、ＣＣＲ３、ＣＣＲ６、ＣＣＲ７、ＣＣＲ８、ＣＣＲ９、ＣＸＣＲ２、ＣＸＣＲ４、ＣＸＣＲ５、ＣＸＣＲ６、ＣＸＣＲ７、ＣＸ３ＣＲ１、ＸＣＲ１から選択されるケモカイン受容体である。
【０２２３】
一実施形態では、特定のケモカイン受容体は、ＲＡＧＥと同じ細胞内で共発現され、炎症に関係付けられ、且つ群：ＣＣＲ１、ＣＣＲ２、ＣＣＲ３、ＣＣＲ６、ＣＣＲ７、ＣＣＲ８、ＣＣＲ９、ＣＸＣＲ２、ＣＸＣＲ５、ＣＸＣＲ６、ＣＸＣＲ７、ＣＸ３ＣＲ１、ＸＣＲ１から選択されるケモカイン受容体である。
【０２２４】
一実施形態では、特定のケモカイン受容体は、ＲＡＧＥと同じ細胞内で共発現され、炎症に関係付けられ、且つ群：ＣＣＲ１、ＣＣＲ２、ＣＣＲ６、ＣＣＲ７、ＣＣＲ８、ＣＣＲ９、ＣＸＣＲ１、ＣＸＣＲ２、ＣＸＣＲ５、ＣＸＣＲ６、ＣＸＣＲ７、ＣＸ３ＣＲ１、ＸＣＲ１から選択されるケモカイン受容体である。
【０２２５】
一実施形態では、特定のケモカイン受容体は、ＲＡＧＥと同じ細胞内で共発現され、炎症に関係付けられ、且つ群：ＣＣＲ１、ＣＣＲ２、ＣＣＲ６、ＣＣＲ７、ＣＣＲ８、ＣＣＲ９、ＣＸＣＲ２、ＣＸＣＲ４、ＣＸＣＲ５、ＣＸＣＲ６、ＣＸＣＲ７、ＣＸ３ＣＲ１、ＸＣＲ１から選択されるケモカイン受容体である。
【０２２６】
一実施形態では、特定のケモカイン受容体は、ＲＡＧＥと同じ細胞内で共発現され、炎症に関係付けられ、且つ群：ＣＣＲ１、ＣＣＲ２、ＣＣＲ６、ＣＣＲ７、ＣＣＲ８、ＣＣＲ９、ＣＸＣＲ２、ＣＸＣＲ５、ＣＸＣＲ６、ＣＸＣＲ７、ＣＸ３ＣＲ１、ＸＣＲ１から選択されるケモカイン受容体である。
【０２２７】
本発明の一形態では、本発明の特定の活性化された共存ＧＰＣＲは、群：アデノシン１Ａ受容体、アドレナリンα１Ａ受容体、アドレナリンα１Ｂ受容体、アドレナリンα２Ｂ受容体、アンジオテンシン受容体ＡＴ１Ｒ、ブラジキニン受容体Ｂ２、ＣＣＲ１、ＣＣＲ２、ＣＣＲ３、ＣＣＲ４、ＣＣＲ５、ＣＣＲ６、ＣＣＲ７、ＣＣＲ９、ＣＸＣＲ２、ＣＸＣＲ４、ＣＸＣＲ５、ドーパミンＤ１受容体、エンドセリン受容体Ａ型、エンドセリン受容体Ｂ型、ヒスタミンＨ３受容体、ムスカリンＭ１受容体、ムスカリンＭ２受容体、ムスカリンＭ３受容体、ニューロペプチドＹ１受容体、ニューロテンシン１受容体、オレキシン受容体１、オレキシン受容体２、プロスタグランジンＥ１受容体、セロトニン５−ＨＴ１ａ受容体、セロトニン５−ＨＴ２ａ受容体、セロトニン５−ＨＴ２ｂ受容体、セロトニン５−ＨＴ２ｃ受容体、セロトニン５−ＨＴ４ｂ受容体、ソマトスタチン２受容体、スフィンゴシン１−リン酸受容体Ｓ１Ｐ１、スフィンゴシン１−リン酸受容体Ｓ１Ｐ３、サイロトロピン放出ホルモン受容体１、バソプレシン受容体１Ａ、バソプレシン受容体１Ｂ又はバソプレシン受容体２から選択されるＧＰＣＲである。
【０２２８】
一実施形態では、本発明の特定の活性化された共存ＧＰＣＲは、ＣＣＲ４を除いて、本出願の国際公開公報における段落［０００２０４］の群から選択されるＧＰＣＲである。
【０２２９】
一実施形態では、本発明の特定の活性化された共存ＧＰＣＲは、ＣＣＲ５を除いて、本出願の国際公開公報における段落［０００２０４］の群から選択されるＧＰＣＲである。
【０２３０】
一実施形態では、本発明の特定の活性化された共存ＧＰＣＲは、ＣＣＲ４及びＣＣＲ５を除いて、本出願の国際公開公報における段落［０００２０４］の群から選択されるＧＰＣＲである。
【０２３１】
一実施形態では、本発明の特定の活性化された共存ＧＰＣＲは、ＣＣＲ４、ＣＣＲ５及びＣＸＣＲ４を除いて、本出願の国際公開公報における段落［０００２０４］の群から選択されるＧＰＣＲである。
【０２３２】
一実施形態では、本発明の特定の活性化された共存ＧＰＣＲは、アドレナリンα１Ａ受容体、ＣＣＲ３、ムスカリンＭ２受容体及びオレキシン受容体１を除いて、本出願の国際公開公報における段落［０００２０４］の群から選択されるＧＰＣＲである。
【０２３３】
一実施形態では、本発明の特定の活性化された共存ＧＰＣＲは、アドレナリンα１Ａ受容体、ＣＣＲ３、ＣＣＲ４、ムスカリンＭ２受容体及びオレキシン受容体１を除いて、本出願の国際公開公報における段落［０００２０４］の群から選択されるＧＰＣＲである。
【０２３４】
一実施形態では、本発明の特定の活性化された共存ＧＰＣＲは、アドレナリンα１Ａ受容体、ＣＣＲ３、ＣＣＲ５、ムスカリンＭ２受容体及びオレキシン受容体１を除いて、本出願の国際公開公報における段落［０００２０４］の群から選択されるＧＰＣＲである。
【０２３５】
一実施形態では、本発明の特定の活性化された共存ＧＰＣＲは、アドレナリンα１Ａ受容体、ＣＣＲ３、ＣＣＲ４、ＣＣＲ５、ムスカリンＭ２受容体及びオレキシン受容体１を除いて、本出願の国際公開公報における段落［０００２０４］の群から選択されるＧＰＣＲである。
【０２３６】
一実施形態では、本発明の特定の活性化された共存ＧＰＣＲは、アドレナリンα１Ａ受容体、ＣＣＲ３、ＣＸＣＲ４、ムスカリンＭ２受容体及びオレキシン受容体１を除いて、本出願の国際公開公報における段落［０００２０４］の群から選択されるＧＰＣＲである。
【０２３７】
本発明の好ましい形態では、本発明の特定の活性化された共存ＧＰＣＲは、群：アドレナリンα１Ａ受容体、アドレナリンα１Ｂ受容体、アンジオテンシン受容体ＡＴ１Ｒ、ブラジキニン受容体Ｂ２、ＣＣＲ２、ＣＣＲ３、ＣＣＲ４、ＣＣＲ６、ＣＣＲ９、ＣＸＣＲ４、ＣＸＣＲ５、ドーパミンＤ１受容体、エンドセリン受容体Ｂ型、ヒスタミンＨ３受容体、ムスカリンＭ２受容体、ニューロペプチドＹ１受容体、ニューロテンシン１受容体、オレキシン受容体１、オレキシン受容体２、プロスタグランジンＥ１受容体、セロトニン５−ＨＴ２ｂ受容体、セロトニン５−ＨＴ２ｃ受容体、セロトニン５−ＨＴ４ｂ受容体、ソマトスタチン２受容体、スフィンゴシン１−リン酸受容体Ｓ１Ｐ３、バソプレシン受容体１Ａ又はバソプレシン受容体１Ｂから選択されるＧＰＣＲである。
【０２３８】
一実施形態では、本発明の特定の活性化された共存ＧＰＣＲは、ＣＣＲ４を除いて、本出願の国際公開公報における段落［０００２１４］の群から選択されるＧＰＣＲである。
【０２３９】
一実施形態では、本発明の特定の活性化された共存ＧＰＣＲは、ＣＣＲ４及びＣＸＣＲ４を除いて、本出願の国際公開公報における段落［０００２１４］の群から選択されるＧＰＣＲである。
【０２４０】
一実施形態では、本発明の特定の活性化された共存ＧＰＣＲは、アドレナリンα１Ａ受容体、ＣＣＲ３、ムスカリンＭ２受容体及びオレキシン受容体１を除いて、本出願の国際公開公報における段落［０００２１４］の群から選択されるＧＰＣＲである。
【０２４１】
一実施形態では、本発明の特定の活性化された共存ＧＰＣＲは、アドレナリンα１Ａ受容体、ＣＣＲ３、ＣＣＲ４、ムスカリンＭ２受容体及びオレキシン受容体１を除いて、本出願の国際公開公報における段落［０００２１４］の群から選択されるＧＰＣＲである。
【０２４２】
一実施形態では、本発明の特定の活性化された共存ＧＰＣＲは、アドレナリンα１Ａ受容体、ＣＣＲ３、ＣＣＲ４、ＣＸＣＲ４、ムスカリンＭ２受容体及びオレキシン受容体１を除いて、本出願の国際公開公報における段落［０００２１４］の群から選択されるＧＰＣＲである。
【０２４３】
本発明の特に好ましい形態では、本発明の特定の活性化された共存ＧＰＣＲは、群：アドレナリンα１Ａ受容体、アドレナリンα１Ｂ受容体、アンジオテンシン受容体ＡＴ１Ｒ、ブラジキニン受容体Ｂ２、ＣＣＲ２、ＣＣＲ６、ＣＣＲ９、ＣＸＣＲ４、ＣＸＣＲ５、ドーパミンＤ１受容体、エンドセリン受容体Ｂ型、ヒスタミンＨ３受容体、ムスカリンＭ２受容体、ニューロペプチドＹ１受容体、オレキシン受容体１、オレキシン受容体２、プロスタグランジンＥ１受容体、セロトニン５−ＨＴ２ｃ受容体、セロトニン５−ＨＴ４ｂ受容体、ソマトスタチン２受容体、スフィンゴシン１−リン酸受容体Ｓ１Ｐ３、バソプレシン受容体１Ａ又はバソプレシン受容体１Ｂから選択されるＧＰＣＲである。
【０２４４】
一実施形態では、本発明の特定の活性化された共存ＧＰＣＲは、ＣＸＣＲ４を除いて、本出願の国際公開公報における段落［０００２２０］の群から選択されるＧＰＣＲである。
【０２４５】
一実施形態では、本発明の特定の活性化された共存ＧＰＣＲは、アドレナリンα１Ａ受容体、ＣＣＲ３、ムスカリンＭ２受容体及びオレキシン受容体１を除いて、本出願の国際公開公報における段落［０００２２０］の群から選択されるＧＰＣＲである。
【０２４６】
一実施形態では、本発明の特定の活性化された共存ＧＰＣＲは、アドレナリンα１Ａ受容体、ＣＣＲ３、ＣＸＣＲ４、ムスカリンＭ２受容体及びオレキシン受容体１を除いて、本出願の国際公開公報における段落［０００２２０］の群から選択されるＧＰＣＲである。
【０２４７】
本発明の一形態では、本発明の特定の活性化された共存ＧＰＣＲは、群：アデノシンＡ１受容体（ＡＤＯＲＡ１）、アドレナリンα２Ｂ受容体、アンジオテンシン受容体ＡＴ１（ＡＴ１Ｒ）、ブラジキニン受容体２（Ｂ２Ｒ）、ＣＣＲ１、ＣＣＲ２、ＣＣＲ４、ＣＣＲ５、ＣＣＲ６、ＣＣＲ７、ＣＣＲ９、ＣＸＣＲ２、ＣＸＣＲ４、ＣＸＣＲ５、ニューロペプチドＹ１受容体（ＮＰＹ１Ｒ）、オレキシン受容体２、スフィンゴシン１リン酸受容体１（Ｓ１ＰＲ１）、甲状腺刺激ホルモン放出ホルモン受容体１（ＴＲＨＲ１）、バソプレシン受容体１Ａ（Ｖ１ａＲ）、バソプレシン受容体１Ｂ（Ｖ１ｂＲ）及びバソプレシン受容体２（Ｖ２Ｒ）から選択されるＧＰＣＲである。
【０２４８】
一実施形態では、本発明の特定の活性化された共存ＧＰＣＲは、ＣＣＲ４を除いて、本出願の国際公開公報における段落［０００２２４］の群から選択されるＧＰＣＲである。
【０２４９】
一実施形態では、本発明の特定の活性化された共存ＧＰＣＲは、ＣＣＲ５を除いて、本出願の国際公開公報における段落［０００２２４］の群から選択されるＧＰＣＲである。
【０２５０】
一実施形態では、本発明の特定の活性化された共存ＧＰＣＲは、ＣＣＲ４及びＣＣＲ５を除いて、本出願の国際公開公報における段落［０００２２４］の群から選択されるＧＰＣＲである。
【０２５１】
一実施形態では、本発明の特定の活性化された共存ＧＰＣＲは、ＣＸＣＲ４を除いて、本出願の国際公開公報における段落［０００２２４］の群から選択されるＧＰＣＲである。
【０２５２】
一実施形態では、本発明の特定の活性化された共存ＧＰＣＲは、ＣＣＲ４、ＣＣＲ５及びＣＸＣＲ４を除いて、本出願の国際公開公報における段落［０００２２４］の群から選択されるＧＰＣＲである。
【０２５３】
本発明の好ましい一形態では、本発明の特定の活性化された共存ＧＰＣＲは、群：アドレナリンα２Ｂ受容体、アンジオテンシン受容体ＡＴ１（ＡＴ１Ｒ）、ブラジキニン受容体２（Ｂ２Ｒ）、ＣＣＲ１、ＣＣＲ２、ＣＣＲ４、ＣＣＲ５、ＣＣＲ６、ＣＣＲ９、ＣＸＣＲ２、ＣＸＣＲ４、ニューロペプチドＹ１受容体（ＮＰＹ１Ｒ）、オレキシン受容体２、スフィンゴシン１リン酸受容体１（Ｓ１ＰＲ１）、甲状腺刺激ホルモン放出ホルモン受容体１（ＴＲＨＲ１）、バソプレシン受容体１Ａ（Ｖ１ａＲ）、バソプレシン受容体１Ｂ（Ｖ１ｂＲ）及びバソプレシン受容体２（Ｖ２Ｒ）から選択されるＧＰＣＲである。
【０２５４】
一実施形態では、本発明の特定の活性化された共存ＧＰＣＲは、ＣＣＲ４を除いて、本出願の国際公開公報における段落［０００２３０］の群から選択されるＧＰＣＲである。
【０２５５】
一実施形態では、本発明の特定の活性化された共存ＧＰＣＲは、ＣＣＲ５を除いて、本出願の国際公開公報における段落［０００２３０］の群から選択されるＧＰＣＲである。
【０２５６】
一実施形態では、本発明の特定の活性化された共存ＧＰＣＲは、ＣＣＲ４及びＣＣＲ５を除いて、本出願の国際公開公報における段落［０００２３０］の群から選択されるＧＰＣＲである。
【０２５７】
一実施形態では、本発明の特定の活性化された共存ＧＰＣＲは、ＣＸＣＲ４を除いて、本出願の国際公開公報における段落［０００２３０］の群から選択されるＧＰＣＲである。
【０２５８】
一実施形態では、本発明の特定の活性化された共存ＧＰＣＲは、ＣＣＲ４、ＣＣＲ５及びＣＸＣＲ４を除いて、本出願の国際公開公報における段落［０００２３０］の群から選択されるＧＰＣＲである。
【０２５９】
本発明の特定の形態では、本発明の活性化された共存ＧＰＣＲは、アンジオテンシン受容体である。
【０２６０】
本発明の特定の形態では、本発明の活性化された共存ＧＰＣＲは、ＡＴ１Ｒである。
【０２６１】
本発明の特定の形態では、本発明の活性化された共存ＧＰＣＲは、群：ＣＣＲ１、ＣＣＲ２、ＣＣＲ６、ＣＣＲ７、ＣＸＣＲ２、ＣＸＣＲ４、ＣＸＣＲ６及びＣＸＣＲ７から選択される特定のケモカイン受容体である。
【０２６２】
本発明の特定の形態では、本発明の活性化された共存ＧＰＣＲは、群：ＣＣＲ１、ＣＣＲ２、ＣＣＲ６、ＣＣＲ７、ＣＸＣＲ１、ＣＸＣＲ２及びＣＸＣＲ６から選択される特定のケモカイン受容体である。
【０２６３】
本発明の特定の形態では、本発明の活性化された共存ＧＰＣＲは、群：ＣＣＲ１、ＣＣＲ２、ＣＣＲ６、ＣＣＲ７、ＣＸＣＲ２及びＣＸＣＲ６から選択される特定のケモカイン受容体である。
【０２６４】
本発明の特定の形態では、本発明の活性化された共存ＧＰＣＲは、ＣＣＲ２及びＣＣＲ６から選択される特定のケモカイン受容体である。
【０２６５】
本発明の特定の形態では、本発明の活性化された共存ＧＰＣＲは、ＣＣＲ２である。
【０２６６】
本発明の特定の形態では、本発明の活性化された共存ＧＰＣＲは、ＣＸＣＲ４である。
【０２６７】
本発明の一形態では、ＲＡＧＥリガンドは、ＲＡＧＥの細胞外ドメインと相互作用してＲＡＧＥの活性化を調節するリガンドである。したがって、本発明のこの形態では、ＲＡＧＥリガンド非依存性のＲＡＧＥ活性化は、ＲＡＧＥの細胞外ドメインと相互作用するリガンドを介して発生しないＲＡＧＥの活性化を意味する。
【０２６８】
好ましくは、ＲＡＧＥリガンドは、ＲＡＧＥの細胞外ドメインと相互作用してＲＡＧＥの活性化を調節し、ＲＡＧＥの膜貫通ドメイン又は細胞質側テール又はその中に含まれるモチーフと相互作用しないリガンドである。したがって、本発明のこの好ましい形態では、ＲＡＧＥリガンド非依存性のＲＡＧＥ活性化は、リガンドがＲＡＧＥの膜貫通ドメイン若しくは細胞質側テール又はそれに含有されるモチーフとも相互作用しない限り、ＲＡＧＥの細胞外ドメインと相互作用するリガンドを介して発生しないＲＡＧＥの活性化を意味する。
【０２６９】
ＲＡＧＥの細胞外ドメイン（外部ドメインとも呼ばれる）は、３つの免疫グロブリン様領域：Ｎ末端Ｖ型ドメインと、それに続く２つのＣ型ドメイン（Ｃ及びＣ’又は代わりにＣ１及びＣ２と称される）とを含む。主要なリガンド結合部分は、Ｖドメインであるが、ＲＡＧＥの活性化は、Ｃドメインへのリガンド結合によっても媒介され得る。リガンドは、負に帯電する傾向があるため、大半のリガンドは、Ｖドメイン及び／又はＣ１ドメインに結合する傾向があるが、Ｃ２ドメインに結合するリガンドの例が少なくとも１つある（Ｓ１００Ａ６；Ｌｅｃｌｅｒｃ  ｅｔ  ａｌ．，２００７）。Ｃ１及びＣ２ドメインは、一般にリガンドに直接結合しないことがあり得るが、それらは、リガンドとの相互作用を媒介するためにＶドメインを安定化する上で重要な役割を有する可能性がある。ＲＡＧＥは、単一の膜貫通ドメイン及び細胞質側テールを有する。ヒトでは、ＲＡＧＥの細胞質側テールは、４３アミノ酸長（残基３６２〜残基４０４）である。この細胞質側テールは、ＲＡＧＥ依存性細胞活性化に重要なモチーフを含有する。
【０２７０】
本発明の一形態では、ＲＡＧＥリガンドは、ＲＡＧＥの細胞外ドメインの細胞外Ｖ、Ｃ１及び／又はＣ２ドメインと相互作用してＲＡＧＥを活性化するリガンドである。本発明のこの形態では、ＲＡＧＥリガンド非依存性のＲＡＧＥ活性化は、ＲＡＧＥの細胞外ドメインの細胞外Ｖ、Ｃ１又はＣ２ドメインと相互作用するリガンドを介して発生しないＲＡＧＥの活性化を意味する。
【０２７１】
好ましくは、ＲＡＧＥリガンドは、ＲＡＧＥの膜貫通ドメイン若しくは細胞質側テール又はそれに含有されるモチーフと相互作用しない。本発明のこの形態では、ＲＡＧＥリガンド非依存性のＲＡＧＥ活性化は、リガンドがＲＡＧＥの膜貫通ドメイン若しくは細胞質側テール又はそれに含有されるモチーフとも相互作用しない限り、ＲＡＧＥの細胞外ドメインの細胞外Ｖ、Ｃ１又はＣ２ドメインと相互作用するリガンドを介して発生しないＲＡＧＥの活性化を意味する。
【０２７２】
本発明の一形態では、ＡＴ１Ｒなどの活性化アンジオテンシン受容体又はＣＣＲ２など、活性化された共存ＧＰＣＲによるＲＡＧＥリガンド非依存性のＲＡＧＥ活性化を調節するモジュレーターは、ＲＡＧＥのＲＡＧＥリガンド依存性活性化も調節する。
【０２７３】
本発明の好ましい実施形態では、本発明のモジュレーターは、特定の活性化された共存ＧＰＣＲに関連するＲＡＧＥ非依存性シグナル伝達経路を調節しないか、又は異なって調節するか、又は異なる程度に調節する。
【０２７４】
好ましい実施形態では、本発明のモジュレーターは、１つ以上のＲＡＧＥ非依存性の特定の共存ＧＰＣＲシグナル伝達経路を阻害しないか又はより少ない程度に阻害する。
【０２７５】
本発明の一形態では、ＲＡＧＥ非依存性の特定の共存ＧＰＣＲシグナル伝達経路は、Ｇｑシグナル伝達経路である。本発明の一形態では、ＲＡＧＥ非依存性の特定の共存ＧＰＣＲシグナル伝達経路は、Ｇｉ／ｏシグナル伝達経路である。本発明の一形態では、ＲＡＧＥ非依存性の特定の共存ＧＰＣＲシグナル伝達経路は、Ｇｓシグナル伝達経路である。本発明の一形態では、ＲＡＧＥ非依存性の特定の共存ＧＰＣＲシグナル伝達経路は、カルシウムシグナル伝達経路である。本発明の一形態では、ＲＡＧＥ非依存性の特定の共存ＧＰＣＲシグナル伝達経路は、ホスホリパーゼＣシグナル伝達経路である。本発明の別の形態では、ＲＡＧＥ非依存性の特定の共存ＧＰＣＲシグナル伝達経路は、βアレスチン媒介細胞外調節キナーゼ（ＥＲＫ）シグナル伝達である。
【０２７６】
活性化された共存ＧＰＣＲが、活性化されたＡＴ１Ｒである特に好ましい実施形態では、本発明のモジュレーターは、１つ以上のＲＡＧＥ非依存性ＡＴ１Ｒシグナル伝達経路を調節しないか又はより少ない程度に調節する。
【０２７７】
活性化された共存ＧＰＣＲが、活性化されたＡＴ１Ｒである特に好ましい実施形態では、本発明のモジュレーターは、１つ以上のＲＡＧＥ非依存性ＡＴ１Ｒシグナル伝達経路を阻害しないか又はより少ない程度に阻害する。
【０２７８】
本発明の一形態では、ＲＡＧＥ非依存性ＡＴ１Ｒシグナル伝達経路は、Ｇｑシグナル伝達経路である。本発明の別の形態では、ＲＡＧＥ非依存性ＡＴ１Ｒシグナル伝達経路は、βアレスチン媒介細胞外調節キナーゼ（ＥＲＫ）シグナル伝達である。
【０２７９】
活性化された共存ＧＰＣＲが、活性化されたＣＣＲ２である別の特に好ましい実施形態では、本発明のモジュレーターは、１つ以上のＲＡＧＥ非依存性ＣＣＲ２シグナル伝達経路を調節しないか又はより少ない程度に調節する。
【０２８０】
活性化された共存ＧＰＣＲが、活性化されたＣＣＲ２である別の特に好ましい実施形態では、本発明のモジュレーターは、１つ以上のＲＡＧＥ非依存性ＣＣＲ２シグナル伝達経路を阻害しないか又はより少ない程度に阻害する。
【０２８１】
本発明の一形態では、ＲＡＧＥ非依存性ＡＴ１Ｒシグナル伝達経路は、Ｇｉ／ｏシグナル伝達経路である。本発明の別の形態では、ＲＡＧＥ非依存性ＣＣＲ２シグナル伝達経路は、βアレスチン媒介細胞外調節キナーゼ（ＥＲＫ）シグナル伝達である。本発明の別の形態では、ＲＡＧＥ非依存性ＣＣＲ２シグナル伝達経路は、ホスホリパーゼＣシグナル伝達経路である。
【０２８２】
＜モジュレーター＞
本発明の一形態では、本発明のモジュレーターは、活性化剤、阻害剤、アロステリックモジュレーター又はＲＡＧＥの細胞質側テールの機能的又は非機能的な代替物である。機能的代替物は、特定の共存ＧＰＣＲの存在下でＲＡＧＥの細胞質側テールに代わるモジュレーターであり、それらによって活性化されて、野生型ＲＡＧＥの発現の存在下又は非存在下で下流のＲＡＧＥ依存性シグナル伝達を誘導することができる。非機能的代替物は、特定の共存ＧＰＣＲの存在下でＲＡＧＥの細胞質側テールに代わるモジュレーターであり、それらによって活性化されることができないか、又は下流のＲＡＧＥ依存性シグナル伝達を誘導することができず、且つＲＡＧＥの細胞質側テールの活性化及びそれにより生じるＲＡＧＥ依存シグナル伝達を通して通常発生するシグナル伝達を阻害する。
【０２８３】
本発明の一形態では、本発明のモジュレーターは、活性化剤、阻害剤、アロステリックモジュレーター又はＲＡＧＥの膜貫通ドメイン若しくはその一部の非機能的代替物である。
【０２８４】
非機能的代替物は、特定の共存ＧＰＣＲの存在下でＲＡＧＥの膜貫通ドメインに代わるモジュレーターであり、それらによって活性化されることができないか、又は下流のＲＡＧＥ依存性シグナル伝達を誘導することができず、且つＲＡＧＥの細胞質側テールの活性化及びそれにより生じるＲＡＧＥ依存シグナル伝達を通して通常発生するシグナル伝達を阻害する。
【０２８５】
本発明の一形態では、モジュレーターは、ＲＡＧＥの膜貫通ドメイン又はその一部及びＲＡＧＥの細胞外ドメインの断片を含む。
【０２８６】
本発明の一形態では、モジュレーターは、ＲＡＧＥの膜貫通ドメイン又はその一部及びＲＡＧＥの細胞質側テールの断片を含む。
【０２８７】
本発明の一形態では、モジュレーターは、ＲＡＧＥの膜貫通ドメイン又はその一部、及びＲＡＧＥの細胞外ドメインの断片、及びＲＡＧＥの細胞質側テールの断片を含む。
【０２８８】
本発明の一形態では、本発明のモジュレーターは、長さが４０アミノ酸以下、２０アミノ酸以下、１０アミノ酸以下又は５アミノ酸以下であるＲＡＧＥの細胞外ドメインの断片を含有する。
【０２８９】
モジュレーターの例として、本発明者らは、ＲＡＧＥ３６２−４０４がＲＡＧＥの機能的代替物であり、ＡＴ１Ｒ及びＣＣＲ２などの特定の共存ＧＰＣＲによって活性化することができ、野生型ＲＡＧＥの発現の存在下又は非存在下において、ＲＡＧＥリガンド非依存性のＲＡＧＥ活性化に起因する下流のＲＡＧＥ依存性シグナル伝達を誘導することを実証した。さらに、ＲＡＧＥ３６２−４０４が細胞透過性ペプチド（ＴＡＴ）及びマーカータンパク質（ｍＣｈｅｒｒｙ）に融合すると、Ａｎｇ  ＩＩによるＡＴ１Ｒの活性化に続くＴＡＴ−ｍＣｈｅｒｒｙ−ＲＡＧＥ３６２−４０４オリゴペプチドによる処置は、野生型ＲＡＧＥの発現の非存在下においてＡＧＥＲ／ａｐｏＥ−ＤＫＯマウスのＡｎｇ  ＩＩ依存性炎症及びアテローム形成を回復することができる。
【０２９０】
ＲＡＧＥ３６２−４０４の配列は、配列番号１である。
【化１】
2020531514.tif 000025
【０２９１】
モジュレーターの追加の例として、本発明者らは、Ｓ３９１Ａ−ＲＡＧＥ３６２−４０４が、特定の共存ＧＰＣＲの存在下でそれらによって活性化されず、ＲＡＧＥ依存性シグナル伝達を阻害するＲＡＧＥの非機能的代替物であることを実証した。Ｓ３９１Ａ−ＲＡＧＥ３６２−４０４の発現は、活性化ＡＴ１Ｒによる野生型ＲＡＧＥリガンド非依存性のＲＡＧＥ活性化及びＲＡＧＥリガンドＳ１００Ａ８／Ａ９による野生型ＲＡＧＥのＲＡＧＥリガンド依存性活性化を阻害する。さらに、Ｓ３９１Ａ−ＲＡＧＥ３６２−４０４が細胞透過性ペプチド（ＴＡＴ）及びマーカータンパク質（ｍＣｈｅｒｒｙ）に融合すると、ＴＡＴ−ｍＣｈｅｒｒｙ−Ｓ３９１Ａ−ＲＡＧＥ３６２−４０４オリゴペプチドによる処置は、活性化されたＡＴ１ＲによるＲＡＧＥリガンド非依存性のＲＡＧＥ活性化を阻害して、アポリポタンパク質ＥノックアウトマウスにおけるＡｎｇ  ＩＩ依存性炎症及びアテローム形成を減弱させる。さらなる例を以下に提供する。
【０２９２】
Ｓ３９１Ａ−ＲＡＧＥ３６２−４０４の配列は、配列番号２である。
【化２】
2020531514.tif 000026
【０２９３】
モジュレーターの別の例として、本発明者らは、ＲＡＧＥ３３８−３６１が、活性化ＡＴ１Ｒによる野生型ＲＡＧＥリガンド非依存性のＲＡＧＥ活性化を阻害することを実証した。この阻害は、ｍＣｈｅｒｒｙ−ＲＡＧＥ３６２−４０４の共発現によって克服される。
【０２９４】
ＲＡＧＥ３３８−３６１の配列は、配列番号３である。
［Ｌ３３８ＧＴＬＡＬＡＬＧＩＬＧＧＬＧＴＡＡＬＬＩＧＶＩ３６１］
【０２９５】
一形態において、本発明は、ＡＴ１Ｒなどのアンジオテンシン受容体又はＣＣＲ２などのケモカイン受容体など、そのような特定の活性化された共存ＧＰＣＲの活性化により引き起こされるＲＡＧＥの細胞質側テールのトランス活性化を調節する、特定の活性化された共存ＧＰＣＲによるＲＡＧＥリガンド非依存性のＲＡＧＥ活性化のモジュレーターを含む。
【０２９６】
一形態において、本発明は、プロテインキナーゼＣゼータ（ＰＫＣζ）、Ｄｏｃｋ７、ＭｙＤ８８、ＴＩＲＡＰ、ＩＲＡＫ４、ＥＲＫ１／２、嗅覚受容体２Ｔ２、ＡＤＰ／ＡＴＰトランスロカーゼ２、プロテインホスファターゼ１Ｇ、細胞間接着分子１、タンパク質ＤＪ−１（ＰＡＲＫ７）、カルポニン−３、ドレブリン、フィラミンＢ、Ｒａｓ関連タンパク質Ｒａｂ−１３、ラディキシン／エズリン／モエシン、プロテオリピドタンパク質２、コロニン、Ｓ１００  Ａ１１、サクシニル−ＣｏＡリガーゼ［ＧＤＰ形成］サブユニットα、Ｈｓｃ７０相互作用タンパク質、アポトーシス阻害剤５、ニューロピリン、切断刺激因子、成長因子受容体結合タンパク質２、ｓｅｃ６１βサブユニット若しくはＮｃｋ１を含む、Ｒａｓ−ＧＴＰａｓｅ活性化様タンパク質（ＩＱＧＡＰ１）若しくは他のＲＡＧＥ関連タンパク質に結合するか、又はＡＴ１Ｒなどのアンジオテンシン受容体若しくはＣＣＲ２などのケモカイン受容体など、特定の活性化された共存ＧＰＣＲによるＲＡＧＥトランス活性化を調節するために、これらの要素のＲＡＧＥへの結合を破壊する、特定の活性化された共存ＧＰＣＲによるＲＡＧＥの細胞質側テールのＲＡＧＥリガンド非依存性活性化のモジュレーターを含む。
【０２９７】
本発明の一形態では、本発明のモジュレーターは、ＩＱＧＡＰ−１、ＰＫＣζ、Ｄｏｃｋ７、ＭｙＤ８８、ＴＩＲＡＰ、ＩＲＡＫ４、ＥＲＫ１／２、嗅覚受容体２Ｔ２、ＡＤＰ／ＡＴＰトランスロカーゼ２、プロテインホスファターゼ１Ｇ、細胞間接着分子１、タンパク質ＤＪ−１（ＰＡＲＫ７）、カルポニン−３、ドレブリン、フィラミンＢ、Ｒａｓ関連タンパク質Ｒａｂ−１３、ラディキシン／エズリン／モエシン、プロテオリピドタンパク質２、コロニン、Ｓ１００  Ａ１１、サクシニル−ＣｏＡリガーゼ［ＧＤＰ形成］サブユニットα、Ｈｓｃ７０相互作用タンパク質、アポトーシス阻害剤５、ニューロピリン、切断刺激因子、成長因子受容体結合タンパク質２、ｓｅｃ６１βサブユニット若しくはＮｃｋ１を含む、特定の活性化された共存ＧＰＣＲの細胞質ゾル要素、ＲＡＧＥ及び／又はいずれかと複合体化した要素に結合して、ＡＴ１Ｒなどのアンジオテンシン受容体など、若しくはＣＣＲ２などのケモカイン受容体など、特定の活性化された共存ＧＰＣＲによるＲＡＧＥトランス活性化に必要なこれらのシグナル伝達要素を調節することにより、ＲＡＧＥの細胞質側テールを介したＲＡＧＥリガンド非依存性シグナル伝達を調節する。
【０２９８】
本発明の一形態では、特定の活性化された共存ＧＰＣＲによるＲＡＧＥリガンド非依存性のＲＡＧＥ活性化のモジュレーターは、ＲＡＧＥのサイトゾル要素及び／又はサイトゾルのＲＡＧＥと複合する要素（ＩＱＧＡＰ−１、ＰＫＣζ、Ｄｏｃｋ７、ＭｙＤ８８、ＩＲＡＫ４、ＴＩＲＡＰ、ＥＲＫ１／２、嗅覚受容体２Ｔ２、ＡＤＰ／ＡＴＰトランスロカーゼ２、プロテインホスファターゼ１Ｇ、細胞間接着分子１、タンパク質ＤＪ−１（ＰＡＲＫ７）、カルポニン−３、ドレブリン、フィラミンＢ、Ｒａｓ関連タンパク質Ｒａｂ−１３、ラディキシン／エズリン／モエシン、プロテオリピドタンパク質２、コロニン、Ｓ１００  Ａ１１、サクシニル−ＣｏＡリガーゼ［ＧＤＰ形成］サブユニットα、Ｈｓｃ７０相互作用タンパク質、アポトーシス阻害剤５、ニューロピリン、切断刺激因子、成長因子受容体結合タンパク質２、ｓｅｃ６１βサブユニット又はＮｃｋ１など）に結合することにより、ＲＡＧＥの細胞質側テールのＲＡＧＥリガンド依存性活性化も調節して、これらの要素を介したＲＡＧＥリガンド媒介シグナル伝達を阻害する。
【０２９９】
特定の実施形態では、モジュレーターは、配列番号１に記載のアミノ酸配列又はその類似体、断片若しくは誘導体を含むか、それからなるか又はそれから本質的になる。
【０３００】
いくつかの実施形態では、モジュレーターは、遺伝子送達（エレクトロポレーション、マイクロインジェクション、遺伝子銃、インペイルフェクション（ｉｍｐａｌｅｆｅｃｔｉｏｎ）、静水圧、持続注入、超音波処理、リポフェクション、リポソーム、ナノバブル及び高分子遺伝子担体など、ウイルス又は人工の非ウイルス遺伝子送達を使用することによるものなど）によって導入され、ペプチドフラグメント、生物学的に活性な類似体又は誘導体が転写及び翻訳プロセスの結果として細胞によって生成される。
【０３０１】
この態様のいくつかの実施形態では、モジュレーターは、ＡＴ１Ｒ又はＣＣＲ２などの特定の共存ＧＰＣＲ又はそれらと複合する要素と複合体を形成するための改変された能力を有する。例えば、ＲＡＧＥ類似体又は誘導体は、少なくとも１つのアミノ酸残基の置換、付加若しくは欠失又は異常若しくは非従来型アミノ酸又は非アミノ酸残基の付加若しくは置換により、野生型ＲＡＧＥポリペプチド又は断片配列と区別され得る。
【０３０２】
いくつかの実施形態では、モジュレーターは、野生型ヒトＲＡＧＥポリペプチドに通常存在するセリン３９１の修飾を欠くか又はこれを有する。このタイプの例示的な例では、ＲＡＧＥの細胞質側テールの断片、類似体又は誘導体は、野生型ＲＡＧＥ配列の３９１位のセリンを欠いている（例えば、ＲＡＧＥ３７０−３９０構築物は、Ｇｌｕ３９０で切断されている）。適切には、３９１位のセリンは、共存ＧＰＣＲの活性化後にこの部位のセリンによって付与されるシグナル伝達を損なうか又は無効にするように欠失されているか、又は別のアミノ酸残基、類似体又は誘導体で置換されている。一実施形態では、３９１位のセリンは、欠失しているか、又は群：アラニン、アスパラギン酸、フェニルアラニン、ヒスチジン、リジン、アルギニン、チロシン、アスパラギン、バリン、グリシン、システイン若しくはグルタミン酸から選択される別のアミノ酸残基で置換されている。
【０３０３】
いくつかの実施形態では、モジュレーターは、野生型ヒトＲＡＧＥポリペプチドに通常存在するセリン３９１を保持しているか、又は３９１位でセリンと同じ機能を保持する別のアミノ酸若しくはその類似体若しくは誘導体で置換されている。このタイプの例では、ＲＡＧＥの細胞質側テールの断片は、野生型ＲＡＧＥ配列の３９１位のセリンを保持している（例えば、ＲＡＧＥ３７０−４０４構築物）。適切には、３９１位のセリンは、この部位にセリンを含有するＲＡＧＥ構築物による共存ＧＰＣＲの活性化後に付与されるシグナル伝達を複製するために、別のアミノ酸残基又はその類似体若しくは誘導体で置換されている。一実施形態では、３９１位のセリンは、群：プロリン、グルタミン、スレオニン、ロイシン、イソロイシン、メチオニン又はトリプトファンから選択される別のアミノ酸残基で置換されている。
【０３０４】
いくつかの実施形態では、モジュレーターは、ヒト野生型ＲＡＧＥと比較してＤｉａｐｈａｎｏｕｓ  １（Ｄｉａｐｈ１）に結合する能力を欠くか又は低下した能力を有する。このタイプの例示的な例では、ペプチド又はその類似体、断片若しくは誘導体は、ＲＡＧＥ−Ｄｉａｐｈ１結合部位（ＲＡＧＥ３７０−３９０、ＲＡＧＥ３７４−３９０又はＲＡＧＥ３７９−３９０など）を欠くか、又はこの部位を無効にするか又は損なうように変化されたＤｉａｐｈ１結合部位（３６６Ａ／３６７Ａなど）を有する。適切には、３６６／３６７の残基は、この部位を損なうか又は無効にするように欠失されているか、又は他の残基（アラニンなど）で置換されており、そうすることでＤｉａｐｈ１への野生型の結合によって引き起こされる制約を減らすことにより、他の標的への結合の親和性を改善する。
【０３０５】
本発明の一態様では、本発明のモジュレーターは、式Ｉ：
Ｚ１  Ｍ  Ｚ２  （Ｉ）
（式中、
Ｚ１は、存在しないか、又は約１〜約５０アミノ酸残基を含むタンパク質性部分の少なくとも１つから選択され；
Ｍは、配列番号１に記載のアミノ酸配列又はその類似体、断片若しくは誘導体であり；及び
Ｚ２は、存在しないか、又は約１〜約５０アミノ酸残基を含むタンパク質性部分である）
によって表されるアミノ酸配列を含むか、それからなるか又はそれから本質的になる、単離又は精製されたペプチドを含む。
【０３０６】
上記の本発明のいくつかの実施形態では、モジュレーター（上記及び本明細書の他の箇所に広く記載されているＲＡＧＥの細胞質側テールの断片、その類似体又は誘導体など）は、細胞膜を透過することができる。このタイプの非限定的な例では、ＲＡＧＥモジュレーターは、細胞膜透過分子（例えば、以下の配列番号４に記載のＨＩＶ−ＴＡＴモチーフ）にコンジュゲート、融合又は他の方法で連結されている。
【０３０７】
配列番号４：
［ＹＧＲＫＫＲＲＱＲＲＲ］。
【０３０８】
本発明のいくつかの形態では、モジュレーターは、特定の活性化された共存ＧＰＣＲによるＲＡＧＥリガンド非依存性のＲＡＧＥ活性化に関連する要素に結合及び／又は干渉する能力を上記のペプチドモジュレーターと共有する非ペプチド分子である。これらの非ペプチドモジュレーターは、ペプチドモジュレーターに含まれる機能的に重要なドメインに対する構造的類似性を含む場合及び含まない場合があり得る。
【０３０９】
好ましい形態において、非ペプチドモジュレーターは、本出願の国際公開公報における段落［０００３１８］に記載のファーマコフォアによって表されるように、ペプチドモジュレーターに含まれる機能的に重要なドメインと構造的類似性を含む。
【０３１０】
本発明の好ましい形態では、モジュレーターは、阻害剤である。
【０３１１】
本発明の特定の形態では、特定の活性化された共存ＧＰＣＲによるＲＡＧＥリガンド非依存性のＲＡＧＥ活性化の阻害剤であることに加えて、モジュレーターは、特定の共存ＧＰＣＲの阻害剤及び／又は特定の共存ＧＰＣＲシグナル伝達経路の阻害剤である。
【０３１２】
本発明の特定の形態では、特定の活性化された共存ＧＰＣＲによるＲＡＧＥリガンド非依存性のＲＡＧＥ活性化の阻害剤であることに加えて、モジュレーターは、ＲＡＧＥのＲＡＧＥリガンド依存性活性化の阻害剤、及び／又は構成的活性型ＲＡＧＥの阻害剤、及び／又はＲＡＧＥシグナル伝達経路の阻害剤である。
【０３１３】
特定の共存ＧＰＣＲがＡＴ１Ｒである本発明の特定の形態では、ＲＡＧＥリガンド非依存性のＲＡＧＥ活性化の阻害剤であることに加えて、モジュレーターは、ＡＴ１Ｒ阻害剤及び／又はＡＴ１Ｒシグナル伝達経路の阻害剤である。
【０３１４】
本発明の特定の形態では、活性化アンジオテンシン受容体、好ましくは活性化ＡＴ１ＲによるＲＡＧＥリガンド非依存性のＲＡＧＥ活性化の阻害剤であることに加えて、モジュレーターは、ＲＡＧＥのＲＡＧＥリガンド依存性活性化の阻害剤、及び／又は構成的活性型ＲＡＧＥの阻害剤、及び／又はＲＡＧＥシグナル伝達経路の阻害剤である。
【０３１５】
本発明の特定の形態では、特定の活性化された共存ＧＰＣＲによるＲＡＧＥリガンド非依存性のＲＡＧＥ活性化の阻害剤であることに加えて、モジュレーターは、特定の共存ＧＰＣＲの阻害剤及び／又は特定の共存ＧＰＣＲシグナル伝達経路の阻害剤であり、ＲＡＧＥのＲＡＧＥリガンド依存性活性化の阻害剤、及び／又は構成的活性型ＲＡＧＥの阻害剤、及び／又はＲＡＧＥシグナル伝達経路の阻害剤である。
【０３１６】
本発明の特定の形態では、活性化アンジオテンシン受容体、好ましくは活性化ＡＴ１ＲによるＲＡＧＥリガンド非依存性のＲＡＧＥ活性化の阻害剤であることに加えて、モジュレーターは、ＡＴ１Ｒ阻害剤及び／又はＡＴ１Ｒシグナル伝達経路の阻害剤であり、ＲＡＧＥのＲＡＧＥリガンド依存性活性化の阻害剤、及び／又は構成的活性型ＲＡＧＥの阻害剤、及び／又はＲＡＧＥシグナル伝達経路の阻害剤である。
【０３１７】
特定の共存ＧＰＣＲが特定のケモカイン受容体、好ましくはＣＣＲ２である本発明の特定の形態では、ＲＡＧＥリガンド非依存性のＲＡＧＥ活性化の阻害剤であることに加えて、モジュレーターは、特定のケモカイン受容体阻害剤、好ましくはＣＣＲ２阻害剤及び／又は特定のケモカインシグナル伝達経路、好ましくはＣＣＲ２シグナル伝達経路の阻害剤である。
【０３１８】
本発明の特定の形態では、活性化された特定のケモカイン受容体、好ましくは活性化ＣＣＲ２によるＲＡＧＥリガンド非依存性のＲＡＧＥ活性化の阻害剤であることに加えて、モジュレーターは、ＲＡＧＥのＲＡＧＥリガンド依存性活性化の阻害剤、及び／又は構成的活性型ＲＡＧＥの阻害剤、及び／又はＲＡＧＥシグナル伝達経路の阻害剤である。
【０３１９】
本発明の特定の形態では、活性化ケモカイン受容体、好ましくは活性化ＣＣＲ２によるＲＡＧＥリガンド非依存性のＲＡＧＥ活性化の阻害剤であることに加えて、モジュレーターは、特定のケモカイン受容体阻害剤、好ましくはＣＣＲ２阻害剤及び／又は特定のケモカインシグナル伝達経路、好ましくはＣＣＲ２シグナル伝達経路の阻害剤であり、ＲＡＧＥのＲＡＧＥリガンド依存性活性化の阻害剤、及び／又は構成的活性型ＲＡＧＥの阻害剤、及び／又はＲＡＧＥシグナル伝達経路の阻害剤である。
【０３２０】
本発明の特定の形態では、モジュレーターは、ＲＡＧＥの細胞質側テール又はその一部の機能的代替物であり、活性化ＡＴ１Ｒ及び活性化ＣＣＲ２などの特定の共存ＧＰＣＲによって活性化することができ、野生型ＲＡＧＥの発現の存在下又は非存在下で下流のＲＡＧＥ依存性シグナル伝達を誘導する。
【０３２１】
本発明の特定の形態では、モジュレーターは、ＲＡＧＥの細胞質側テール又はその一部の非機能的代替物であり、非機能的代替物は、共存ＧＰＣＲによって活性化されることができないか、又は下流のＲＡＧＥ依存性シグナル伝達を促進できず、且つＲＡＧＥの細胞質側テール及びＲＡＧＥ依存シグナル伝達を通して発生するシグナル伝達を阻害する。
【０３２２】
本発明の特定の形態では、モジュレーターは、ＲＡＧＥの膜貫通ドメイン又はその一部の非機能的代替物であり、非機能的代替物は、共存ＧＰＣＲによって活性化されることができないか、又は下流のＲＡＧＥ依存性シグナル伝達を促進できず、且つＲＡＧＥの細胞質側テール及びＲＡＧＥ依存シグナル伝達を通して発生するシグナル伝達を阻害する。
【０３２３】
本発明の特定の形態では、モジュレーターは、ＲＡＧＥの膜貫通ドメイン又はその一部及びＲＡＧＥの細胞外ドメインの断片を含む。本発明の特定の形態では、モジュレーターは、ＲＡＧＥの膜貫通ドメイン又はその一部及びＲＡＧＥの細胞質側テールの断片を含む。
【０３２４】
本発明の特定の形態では、モジュレーターは、ＲＡＧＥの膜貫通ドメイン又はその一部、及びＲＡＧＥの細胞外ドメインの断片、及びＲＡＧＥの細胞質側テールの断片を含む。
【０３２５】
本発明の特定の形態では、特定の活性化された共存ＧＰＣＲによるＲＡＧＥリガンド非依存性のＲＡＧＥ活性化のモジュレーターは、長さが４０アミノ酸以下、２０アミノ酸以下、１０アミノ酸以下又は５アミノ酸以下であるヒト野生型ＲＡＧＥのリガンド結合外部ドメインの断片を含有する。
【０３２６】
本発明者らは、ＲＡＧＥの細胞質側テールの残基３７０〜３９０を含むペプチド（配列番号５を参照されたい）が、野生型ＲＡＧＥリガンド非依存性のＲＡＧＥ活性化とＲＡＧＥリガンド依存性活性化との両方を阻害する阻害ペプチドであることをさらに発見した。
【０３２７】
配列番号５：
［Ｇ３７０ＥＥＲＫＡＰＥＮＱＥＥＥＥＥＲＡＥＬＮＱ３９０］。
【０３２８】
ＲＡＧＥ３６３−４０４について、溶液ＮＭＲ構造物が存在し（Ｒａｉ  Ｖ  ｅｔ  ａｌ．，２０１２）、このペプチドのＮ末端（残基３６３〜３７６）が秩序化されていることが示されている。ＲＡＧＥ−３６２−４０４（モデル４）のＲｏｓｅｔｔａ由来モデルが存在し、ＮＭＲ構造と一致し（ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｒｃｓｂ．ｏｒｇ／ｐｄｂ／ｅｘｐｌｏｒｅ／ｅｘｐｌｏｒｅ．ｄｏ？ｓｔｒｕｃｔｕｒｅＩｄ＝２ＬＭＢ、２０１６年８月２５日アクセス））、ペプチドの残りの部分がαヘリックスを形成することも示唆している。
【０３２９】
ＲＡＧＥ３７０−３９０の初期モデルは、モデル４（モデル４＿３７０−３９０）を切断することによって構築された。モデル４は、Ｉ−Ｔａｓｓｅｒ  Ｗｅｂサーバー（ｈｔｔｐ：／／ｚｈａｎｇｌａｂ．ｃｃｍｂ．ｍｅｄ．ｕｍｉｃｈ．ｅｄｕ／Ｉ−ＴＡＳＳＥＲ／）に配列を入力することによって生成されるＲＡＧＥの細胞質側テールの理論モデルである。Ｙａｎｇ  ｅｔ  ａｌ（２０１５）、Ｒｏｙ  ｅｔ  ａｌ（２０１０）及びＹ  Ｚｈａｎｇ（２００８）も参照されたい。Ｉ−Ｔａｓｓｅｒサーバーによって提示された５つのモデルは、全て領域３７０−３９０がヘリックスを形成すると予測した。モデルとＮＭＲ構造は、ペプチド配列の骨格のＣα炭素によってアラインされた。モデル４のＤｉａｐｈａｎｏｕｓ  １結合部位に対応する領域の予測構造は、この領域について記録されたＮＭＲ構造に最も近いため、モデル４が優先モデルとして選択された。
【０３３０】
ＧＲＯＭＡＣＳを使用して、水中のモデル４の２０ｎｓの分子動態シミュレーションを実行した（Ｈｅｓｓ  ｅｔ  ａｌ．，２００８）。分子動態シミュレーションは、モデル４＿３７０−３９０のαヘリックス領域が安定していることを示唆している。多数の荷電側鎖間に強い相互作用が観察され、これにより、これらの相互作用が折り畳み構造を安定化し、これらの残基の任意の保存がペプチド構造の安定化における役割に起因し得ることが示唆される。
【０３３１】
Ｂｌａｓｔ検索を使用して、ＲＡＧＥ３７０−３９０の相同配列を同定した。配列は次のようにアラインされた。
ＣＬＵＳＴＡＬ  ２．０．１０多重配列アライメント
【化３】
2020531514.tif 000027
【化４】
2020531514.tif 000028
【化５】
2020531514.tif 000029
【０３３２】
この分析により、以下のようにマークされた、ＲＡＧＥ３７０−３９０における多数の強力に保存された残基が特定された。＊（アスタリスク）は、単一の完全に保存された残基を有する位置を示す。：（コロン）は、強く類似した特性を有する基間の保存を示す（Ｇｏｎｎｅｔ  ＰＡＭ  ２５０マトリックスにおけるスコア＞０．５）。．（ピリオド）は、弱く類似した特性を有する基間の保存を示す（Ｇｏｎｎｅｔ  ＰＡＭ  ２５０マトリックスにおけるスコア＝＜０．５）。
【０３３３】
【表２４】
2020531514.tif 000030
【０３３４】
高度に保存された残基は、構造的な役割を果たす可能性がある。下線が引かれた残基は、ヘリックスの一面に位置し、結合ファーマコフォアを表す可能性がある。
【０３３５】
モデル４＿ＲＡＧＥ３７０−３９０の構造及び分子動態シミュレーションの結果を検討すると、構造内に多数の塩橋が存在していることがわかる。分子動態シミュレーションは、これらの相互作用が重要な構造的特徴であることを示す。構造的機能は、これらのアミノ酸の保存された性質について可能性のある理由である。
【０３３６】
多くの強固に保存されたアミノ酸は、塩橋形成に関与していない。これらは、ＲＡＧＥ３７０−３９０ヘリックスの片面に存在し、結合インターフェースを表す可能性がある。これらは、Ｇｌｕ３８０、Ｇｌｕ３８４、Ｇｌｕ３８７及びＬｅｕ３８８である。別の高度に保存された残基であるＧｌｕ３７７も、ペプチドのこの面に存在し、Ｌｙｓ３７４へのαヘリックス安定化塩橋の形成に加えて、結合にも関与し得る。
【０３３７】
主要な疎水性残基Ｌ３８８のアラニン（例えば、Ｌ３８８Ａ−ＲＡＧＥ３７０−３９０）での置換は、野生型ＲＡＧＥに作用する場合、ＲＡＧＥ３７０−３９０によって達成される阻害の損失をもたらす。３８０及び３８４の両方を排除するＲＡＧＥのＮ末端トランケート（例えば、ＲＡＧＥ３８５−３９０及びＲＡＧＥ３８５−４０４）は、これらのＲＡＧＥ構築物の調節作用の損失をもたらす。対照的に、３７４及び３７７の両方を排除するＲＡＧＥのＮ末端トランケートは、阻害剤（ＲＡＧＥ３７９−３９０）として又は野生型ＲＡＧＥの機能的代替物（例えば、ＲＡＧＥ３７９−４０４）としてのＲＡＧＥペプチドの機能の損失をもたらさず、これは、これらの保存された残基（３７４及び３７７）が、ＲＡＧＥの細胞質側テールのαヘリカル三次構造を安定化する役割を果たし得る場合でも調節活性に必須でないことを示している。
【０３３８】
本発明者らは、結合面を表すこれら４つのアミノ酸の保存された性質と一致して、ＲＡＧＥの細胞質側テールの残基３７９〜３９０のみを含むペプチド（すなわちＲＡＧＥ３７９−３９０）が、野生型ＲＡＧＥのリガンド非依存性活性化とリガンド依存性活性化との両方を阻害する阻害ペプチドであること及びＲＡＧＥ３７９−４０４がＣＨＯ細胞中の特定の共存ＧＰＣＲによって活性化できることをさらに発見した。
【０３３９】
本発明の好ましい形態では、ＡＴ１Ｒなどのアンジオテンシン受容体又はＣＣＲ２などの特定のケモカイン受容体など、特定の活性化された共存ＧＰＣＲによるＲＡＧＥリガンド非依存性のＲＡＧＥ活性化のモジュレーターは、配列番号６に記載のＥペプチドＱ３７９ＥＥＥＥＥＲＡＥＬＮＱ３９０又はその誘導体である。
【０３４０】
配列番号６：
［Ｑ３７９ＥＥＥＥＥＲＡＥＬＮＱ３９０］
【０３４１】
構造モデル４＿ＲＡＧＥ３７０−３９０に由来するＲＡＧＥ３７９−３９０ペプチドのファーマコフォアを以下に示す。
【化６】
2020531514.tif 000031
【０３４２】
Ｈ４は、疎水性残基であり、Ｐ１〜Ｐ３は、極性残基であり、距離は、オングストロームで示される。部位点間の距離のマトリックスは、次の通りであり、ここで、Ｐは、極性部位点（水素結合又は荷電）を表し、Ｈは、疎水性部位点を表す。距離は、オングストロームである。各ポイントの位置に許容差が適用されるべきである。
【０３４３】
【表２５】
2020531514.tif 000032
【０３４４】
分子動態シミュレーションは、ＲＡＧＥ３７９−３９０の相互作用基が可動性であり、部位間の距離の大きさが正の場合、各基の位置に最大±１０Åの許容差が適用されるべきであることを示している。
【０３４５】
当業者に理解されるように、上記のサブセットを取ることにより、追加のより小さいファーマコフォアを生成することができ、本発明は、そのようなファーマコフォア、化合物を同定するためのそのような使用方法及びそのように同定された化合物を包含する。
【０３４６】
一形態において、本発明は、群：第１の荷電又は水素結合性基（Ａ）、第２の荷電又は水素結合性基（Ｂ）、第３の荷電又は水素結合性基（Ｃ）及び疎水基（Ｄ）から選択される２つ以上の特徴を含む、特定の活性化された共存ＧＰＣＲによるＲＡＧＥリガンド非依存性のＲＡＧＥ活性化のモジュレーターをさらに含み、特徴の部位点間の距離は、部位点間の距離の大きさが正である場合、最大±１０Å以内の許容差内において、以下の通りである。
【０３４７】
【表２６】
2020531514.tif 000033
【０３４８】
本発明の好ましい形態では、部位点間の距離の大きさが正である場合、許容差は、最大±５Åである。本発明の好ましい形態では、部位点間の距離の大きさが正である場合、許容差は、最大±２Åである。本発明の好ましい形態では、部位点間の距離の大きさが正である場合、許容差は、最大±１Åである。
【０３４９】
本発明の好ましい形態では、モジュレーターは、上記で特定された群から選択される３つ以上の特徴を含む。
【０３５０】
本発明の好ましい形態では、モジュレーターは、上記で特定された群からの４つの特徴を含む。
【０３５１】
本発明の一形態では、次の組み合わせ：ＡＢ、ＡＣ、ＡＤ、ＢＣ、ＢＤ及びＣＤの１つから選択される少なくとも２つの特徴を含むことを特徴とするモジュレーターが提供される。
【０３５２】
本発明の一形態では、次の組み合わせ：ＡＢＣ、ＡＢＤ、ＡＣＤ及びＢＣＤの１つから選択される少なくとも３つの特徴を含むことを特徴とするモジュレーターが提供される。
【０３５３】
本発明の一形態では、次の組み合わせ：ＡＢＣＤの１つから選択される少なくとも４つの特徴を含むことを特徴とするモジュレーターが提供される。
【０３５４】
本発明の一形態では、モジュレーターは、ＲＡＧＥ３７０−３９０のＥ３７７の保存された安定化作用と一致する追加の荷電又は水素結合性基（Ｐ１）を含み、したがって、群：第１の荷電又は水素結合性基（Ａ）、第２の荷電又は水素結合性基（Ｂ）、第３の荷電又は水素結合性基（Ｃ）、第４の荷電又は水素基（Ｄ）及び疎水基（Ｅ）から選択される２つ以上の特徴を含むことを特徴とするモジュレーターが提供され、特徴の部位点間の距離は、±１０Å以内の許容差内において、以下の通りである。
【０３５５】
【表２７】
2020531514.tif 000034
【０３５６】
【化７】
2020531514.tif 000035
ＲＡＧＥリガンド非依存性のＲＡＧＥ活性化のモジュレーターは、ペプチド又は非ペプチジル化合物であり得る。
【０３５７】
本発明の一形態では、疎水性基は、群：Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｈｅ、Ｔｒｐ、Ｔｙｒから選択されるアミノ酸残基である。
【０３５８】
本発明の一形態では、疎水性基は、群：Ｃ１〜８アルキル、Ｃ１〜８アルケニル、Ｃ３〜６シクロアルキル、アリール、置換アリール、アルキルアリール、ヘテロアリール、アルキルヘテロアリールから選択される化学部分である。
【０３５９】
「アルキル」は、脂肪族炭化水素基を意味し、直鎖又は分岐鎖であり得、鎖に約１個〜約２０個の炭素原子を含む。好ましいアルキル基は、鎖に約１個〜約１２個の炭素原子を含む。好ましいアルキル基は、鎖に約１個〜約６個の炭素原子を含む。分岐鎖は、メチル、エチル又はプロピルなどの１つ以上の低級アルキル基が直鎖アルキル鎖に結合していることを意味する。
【０３６０】
「低級アルキル」は、直鎖又は分岐鎖であり得る、鎖に約１個〜約６個の炭素原子を有する基を意味する。アルキル基は、任意選択により同一であるか又は異なり得る１つ以上の置換基で置換され得、各置換基は、ハロ、アルキル、アリール、シクロアルキル、シアノ、ヒドロキシ、アルコキシ、アルキルチオ、アミノ、−ＮＨ（アルキル）、−ＮＨ（シクロアルキル）、−Ｎ（アルキル）２、カルボキシ及び−Ｃ（Ｏ）Ｏ−アルキルからなる群から独立して選択される。適切なアルキル基の非限定的な例には、メチル、エチル、ｎ−プロピル、イソプロピル及びｔ−ブチルが含まれる。
【０３６１】
「アルケニル」は、直鎖又は分岐鎖であり得、鎖に約２個〜約１５個の炭素原子を含む、少なくとも１つの炭素−炭素二重結合を含む脂肪族炭化水素基を意味する。好ましいアルケニル基は、鎖に約２個〜約１２個の炭素原子、より好ましくは、鎖に約２個〜約４個の炭素原子を有する。分岐鎖は、メチル、エチル又はプロピルなどの１つ以上の低級アルキル基が直鎖アルケニル鎖に結合していることを意味する。
【０３６２】
「低級アルケニル」は、直鎖又は分岐鎖であり得る、鎖中の約２個〜約６個の炭素原子を意味する。適切なアルケニル基の非限定的な例には、エテニル、プロペニル、２−ブテニル及び３−メチルブテニルが含まれる。「置換アルケニル」という用語は、アルケニル基が同一であるか又は異なり得る１つ以上の置換基で置換され得ることを意味し、各置換基は、アルキル、アリール及びシクロアルキルからなる群から独立して選択される。
【０３６３】
「アルキニル」は、直鎖又は分岐鎖であり得、鎖に約２個〜約１５個の炭素原子を含む、少なくとも１つの炭素−炭素三重結合を含む脂肪族炭化水素基を意味する。好ましいアルキニル基は、鎖に約２個〜約１２個の炭素原子、より好ましくは鎖に約２個〜約４個の炭素原子を有する。分岐鎖は、メチル、エチル又はプロピルなどの１つ以上の低級アルキル基が直鎖アルキニル鎖に結合していることを意味する。
【０３６４】
「低級アルキニル」は、直鎖又は分岐鎖であり得る、鎖中の約２個〜約６個の炭素原子を意味する。適切なアルキニル基の非限定的な例には、エチニル、プロピニル、２−ブチニル及び３−メチルブチニルが含まれる。「置換アルキニル」という用語は、アルキニル基が同一であるか又は異なり得る１つ以上の置換基で置換され得ることを意味し、各置換基は、アルキル、アリール及びシクロアルキルからなる群から独立して選択される。
【０３６５】
「脂肪族」は、パラフィン、オレフィン又はアセチレン炭素原子の直鎖又は分岐鎖を意味し、これらを含む。脂肪族基は、任意選択により同一であるか又は異なり得る１つ以上の置換基で置換することができ、各置換基は、Ｈ、ハロ、ハロゲン、アルキル、アリール、シクロアルキル、シクロアルキルアミノ、アルケニル、複素環、アルキニル、シクロアルキルアミノカルボニル、ヒドロキシル、チオ、シアノ、ヒドロキシ、アルコキシ、アルキルチオ、アミノ、−ＮＨ（アルキル）、−ＮＨ（シクロアルキル）、−Ｎ（アルキル）２）カルボキシル、−Ｃ（Ｏ）Ｏ−アルキル、ヘテロアリール、アラルキル、アルキルアリール、アラルケニル、ヘテロアラルキル、アルキルヘテロアリール、ヘテロアラルケニル、ヘテロアルキル、カルボニル、ヒドロキシアルキル、アリールオキシ、アラルコキシ、アシル、アロイル、ニトロ、アミノ、アミド、エステル、カルボン酸アリールオキシカルボニル、アラルコキシカルボニル、アルキルスルホニル、アリールスルホニル、ヘテロアリールスルホニル、アルキルスルフィニル、アリールスルフィニル、ヘテロアリールスルフィニル、アルキルチオ、アリールチオ、ヘテロアリールチオ、アラルキルチオ、ヘテロアラルキルチオ、シクロアルケニル、ヘテロシクリル、ヘテロシクレニル、カルバメート、尿素、ケトン、アルデヒド、シアノ、スルホンアミド、スルホキシド、スルホン、スルホニル尿素、スルホニル、ヒドラジド、ヒドロキサメート、Ｓ（アルキル）Ｙ１Ｙ２Ｎ−アルキル−、Ｙ１Ｙ２Ｎ−アルキル−、Ｙ１Ｙ２ＮＣ（Ｏ）−及びＹ１Ｙ２ＮＳＯ２−からなる群から独立して選択され、ここで、Ｙ１及びＹ２は、同じであるか又は異なり得、水素、アルキル、アリール及びアラルキルからなる群から独立して選択される。
【０３６６】
「ヘテロ脂肪族」は、少なくとも１つのヘテロ原子（酸素、窒素、硫黄など）を含有し、それ以外の点では脂肪族基であるものを意味する。ヘテロ脂肪族という用語には、置換ヘテロ脂肪族が含まれる。
【０３６７】
「アリール」は、約６個〜約１４個の炭素原子、好ましくは約６個〜約１０個の炭素原子を含む芳香族単環式又は多環式環系を意味する。アリール基は、同一であるか又は異なり得、本明細書で定義された通りである１つ以上の「環系置換基」で任意選択により置換することができる。適切なアリール基の非限定的な例には、フェニル及びナフチルが含まれる。
【０３６８】
「ヘテロアルキル」は、１つ以上の水素原子がＮ、Ｓ又はＯから選択されるヘテロ原子で置換された、上記で定義されるアルキルを意味する。
【０３６９】
「ヘテロアリール」は、約５個〜約１４個の環原子、好ましくは約５〜約１０個の環原子を含む芳香族単環式又は多環式環系を意味し、ここで、１つ以上の環原子は、炭素以外の元素、例えば窒素、酸素又は硫黄の単独又は組み合わせである。好ましいヘテロアリールは、約５個〜約６個の環原子を含む。「ヘテロアリール」は、同一であるか又は異なり得、本明細書で定義された通りである１つ以上の「環系置換基」で任意選択により置換することができる。ヘテロアリールのルート名の前の接頭辞のアザ、オキサ又はチアは、それぞれ少なくとも窒素、酸素又は硫黄原子が環原子として存在することを意味する。ヘテロアリールの窒素原子は、任意選択により、対応するＮ−オキシドに酸化することができる。適切なヘテロアリールの非限定的な例には、ピリジル、ピラジニル、フラニル、チエニル、ピリミジニル、ピリドン（Ｎ−置換ピリドンを含む）、イソオキサゾリル、イソチアゾリル、オキサゾリル、チアゾリル、ピラゾリル、フラザニル、ピロリル、ピラゾリル、トリアゾリル、１，２，４−チアジアゾリル、ピラジニル、ピリダジニル、キノキサリニル、フタラジニル、オキシインドリル、イミダゾ［１，２−ａ］ピリジニル、イミダゾ［２，１−ｂ］チアゾリル、ベンゾフラザニル、インドリル、アザインドリル、ベンズイミダゾリル、ベンゾチエニル、キノリニル、イミダゾリル、チエノピリジル、キナゾリニル、チエノピリミジル、ピロロピリジル、イミダゾピリジル、イソキノリニル、ベンゾアザインドリル、１，２，４−トリアジニル、ベンゾチアゾリルなどが含まれる。「ヘテロアリール」という用語は、例えば、テトラヒドロイソキノリル、テトラヒドロキノリルなどの部分飽和ヘテロアリール部分も指す。
【０３７０】
「アラルキル」又は「アリールアルキル」は、アリール及びアルキルが前述の通りであるアリール−アルキル−基を意味する。好ましいアラルキルは、低級アルキル基を含む。適切なアラルキル基の非限定的な例には、ベンジル、２−フェネチル及びナフタレニルメチルが含まれる。親部分への結合は、アルキルを介する。
【０３７１】
「アルキルアリール」は、アルキル及びアリールが前述の通りであるアルキル−アリール−基を意味する。好ましいアルキルアリールは、低級アルキル基を含む。適切なアルキルアリール基の非限定的な例は、トリルである。親部分への結合は、アリールを介する。
【０３７２】
「シクロアルキル」は、約３個〜約１０個の炭素原子、好ましくは約５個〜約１０個の炭素原子を含む非芳香族単環式又は多環式環系を意味する。好ましいシクロアルキル環は、約５個〜約７個の環原子を含む。シクロアルキルは、同一であるか又は異なり得、上記で定義された通りである１つ以上の「環系置換基」で任意選択により置換することができる。適切な単環式シクロアルキルの非限定的な例には、シクロプロピル、シクロペンチル、シクロヘキシル、シクロヘプチルなどが含まれる。適切な多環式シクロアルキルの非限定的な例には、１−デカリニル、ノルボルニル、アダマンチルなど、及び例えばインダニル、テトラヒドロナフチルなどの部分飽和種が含まれる。「ハロゲン」は、フッ素、塩素、臭素又はヨウ素を意味する。フッ素、塩素及び臭素が好ましい。
【０３７３】
「環系置換基」は、例えば、環系上の利用可能な水素を置き換える、芳香族又は非芳香族環系に結合した置換基を意味する。環系置換基は、同一であるか又は異なり得、それぞれアルキル、アルケニル、アルキニル、アリール、ヘテロアリール、アラルキル、アルキルアリール、ヘテロアラルキル、ヘテロアリールアルケニル、ヘテロアリールアルキニル、アルキルヘテロアリール、ヒドロキシ、ヒドロキシアルキル、アルコキシ、アリールオキシ、アラルコキシ、アシル、アロイル、ハロ、ニトロ、シアノ、カルボキシ、アルコキシカルボニル、アリールオキシカルボニル、アラルコキシカルボニル、アルキルスルホニル、アリールスルホニル、ヘテロアリールスルホニル、アルキルチオ、アリールチオ、ヘテロアリールチオ、アラルキルチオ、ヘテロアラルキルチオ、シクロアルキル、ヘテロシクリル、−Ｃ（＝Ｎ−ＣＮ）−ＮＨ２、−Ｃ（＝ＮＨ）−ＮＨ２、−Ｃ（＝ＮＨ）−ＮＨ（アルキル）、Ｙ１Ｙ２Ｎ−、Ｙ１Ｙ２Ｎ−アルキル−、Ｙ１Ｙ２ＮＣ（Ｏ）−、Ｙ１Ｙ２ＮＳＯ２−及び−ＳＯ２ＮＹ１Ｙ２からなる群から独立して選択され、ここで、Ｙ１及びＹ２は、同一であるか又は異なり得、水素、アルキル、アリール、シクロアルキル及びアラルキルからなる群から独立して選択される。「環系置換基」は、環系における２つの隣接する炭素原子上の２つの利用可能な水素（各炭素上の１つのＨ）を同時に置き換える単一の部分も意味し得る。そのような部分の例は、例えば、以下のような部分を形成するメチレンジオキシ、エチレンジオキシ、−Ｃ（ＣＨ３）２−などである。
【化８】
2020531514.tif 000036
【０３７４】
本発明のヘテロ原子含有環系では、Ｎ、Ｏ又はＳ１に隣接する炭素原子上にヒドロキシル基がなく、また別のヘテロ原子に隣接する炭素上にＮ又はＳ基がないことに留意されたい。したがって、例えば、環において、
【化９】
2020531514.tif 000037
２及び５と標識された炭素に直接結合する−ＯＨはない。
【０３７５】
例えば、化学部分：
【化１０】
2020531514.tif 000038
などの互変異性形態も、本発明の特定の実施形態では均等物であると考えられることに留意されたい。
【０３７６】
「アルキニルアルキル」は、アルキニル及びアルキルが前述の通りであるアルキニル−アルキル−基を意味する。好ましいアルキニルアルキルは、低級アルキニル及び低級アルキル基を含む。親部分への結合は、アルキルを介する。適切なアルキニルアルキル基の非限定的な例には、プロパルギルメチルが含まれる。
【０３７７】
「ヘテロアラルキル」は、ヘテロアリール及びアルキルが前述の通りであるヘテロアリール−アルキル−基を意味する。好ましいヘテロアラルキルは、低級アルキル基を含む。適切なアラルキル基の非限定的な例には、ピリジルメチル及びキノリン−３−イルメチルが含まれる。親部分への結合は、アルキルを介する。
【０３７８】
「ヒドロキシアルキル」は、アルキルが先に定義された通りであるＨＯ−アルキル−基を意味する。好ましいヒドロキシアルキルは、低級アルキルを含む。適切なヒドロキシアルキル基の非限定的な例には、ヒドロキシメチル及び２−ヒドロキシエチルが含まれる。
【０３７９】
「アシル」は、Ｈ−Ｃ（Ｏ）−、アルキル−Ｃ（Ｏ）−又はシクロアルキル−Ｃ（Ｏ）−基を意味し、様々な基は、前述の通りである。親部分への結合は、カルボニルを介する。好ましいアシルは、低級アルキルを含む。適切なアシル基の非限定的な例には、ホルミル、アセチル及びプロパノイルが含まれる。
【０３８０】
「アロイル」は、アリール基が前述の通りであるアリール−Ｃ（Ｏ）−基を意味する。親部分への結合は、カルボニルを介する。適切な基の非限定的な例には、ベンゾイル及び１−ナフトイルが含まれる。
【０３８１】
「アルコキシ」は、アルキル基が前述の通りであるアルキル−Ｏ−基を意味する。適切なアルコキシ基の非限定的な例には、メトキシ、エトキシ、ｎ−プロポキシ、イソプロポキシ及びｎ−ブトキシが含まれる。親部分への結合は、エーテル酸素を介する。
【０３８２】
「アリールオキシ」は、アリール基が前述の通りであるアリール−Ｏ−基を意味する。適切なアリールオキシ基の非限定的な例には、フェノキシ及びナフトキシが含まれる。親部分への結合は、エーテル酸素を介する。
【０３８３】
「アルキルチオ」は、アルキル基が前述の通りであるアルキル−Ｓ−基を意味する。適切なアルキルチオ基の非限定的な例には、メチルチオ及びエチルチオが含まれる。親部分への結合は、硫黄を介する。
【０３８４】
「アリールチオ」は、アリール基が前述の通りであるアリール−Ｓ−基を意味する。適切なアリールチオ基の非限定的な例には、フェニルチオ及びナフチルチオが含まれる。親部分への結合は、硫黄を介する。
【０３８５】
「アラルキルチオ」は、アラルキル基が前述の通りであるアラルキル−Ｓ−基を意味する。適切なアラルキルチオ基の非限定的な例は、ベンジルチオである。親部分への結合は、硫黄を介する。
【０３８６】
「アルコキシカルボニル」は、アルキル−Ｏ−ＣＯ−基を意味する。適切なアルコキシカルボニル基の非限定的な例には、メトキシカルボニル及びエトキシカルボニルが含まれる。親部分への結合は、カルボニルを介する。
【０３８７】
「アラルコキシカルボニル」は、アラルキル−Ｏ−Ｃ（Ｏ）−基を意味する。適切なアラルコキシカルボニル基の非限定的な例は、ベンジルオキシカルボニルである。親部分への結合は、カルボニルを介する。
【０３８８】
「アルキルスルホニル」は、アルキル−Ｓ（Ｏ２）−基を意味する。好ましい基は、アルキル基が低級アルキルであるものである。親部分への結合は、スルホニルを介する。
【０３８９】
「アリールスルホニル」は、アリール−Ｓ（Ｏ２）−基を意味する。親部分への結合は、スルホニルを介する。
【０３９０】
「置換」という用語は、指定された原子の現況での通常の原子価を超えず、置換が安定な化合物をもたらす場合、指定された原子上の１つ以上の水素が指定された基からの選択で置き換えられることを意味する。置換基及び／又は変数の組み合わせは、そのような組み合わせが安定な化合物をもたらす場合にのみ許容される。
【０３９１】
「安定な化合物」又は「安定な構造」は、反応混合物からの有用な純度への単離及び有効な治療剤への製剤に耐えるのに十分に強い化合物を意味する。
【０３９２】
「任意選択により置換された」という用語は、特定の基、ラジカル又は部分での任意選択による置換を意味する。
【０３９３】
化合物における官能基が「保護された」と称される場合、これは、化合物が反応に供されたとき、保護された部位での望ましくない副反応を防ぐために基が修飾された形態にあることを意味する。適切な保護基は、当業者によって認識され、また例えばＧｒｅｅｎｅ  ｅｔ  ａｌ（１９９１）などの標準的なテキストを参照することによって認識されるであろう。
【０３９４】
任意の構成要素又は本発明において、任意の変数（例えば、アリール、複素環、Ｒ２）が複数回出現する場合、各出現におけるその定義は、他の全ての出現におけるその定義とは独立したものである。
【０３９５】
本発明の一形態では、荷電又は水素結合基のそれぞれは、群：Ａｓｐ、Ｇｌｕから独立して選択されるアミノ酸残基である。
【０３９６】
本発明の一形態では、荷電又は水素結合基のそれぞれは、カルボン酸部分を有するアミノ酸残基である。
【０３９７】
本発明の一形態では、荷電又は水素結合基のそれぞれは、群：カルボン酸、ヒドロキシ酸、ホスホン酸及びホスフィン酸、スルホン酸及びスルフィン酸、スルホンアミド、アシルスルホンアミド及びスルホニル尿素、２，２，２−トリフルオロエタン−１−オール及びトリフルオロメチルケトン、テトラゾール、５−オキソ−１，２，４−オキサジアゾール及び５−オキソ−１，２，４−チアジアゾール、チアゾリジンジオン、オキサゾリジンジオン及びオキサジアゾリジン−ジオン、３−ヒドロキシイソキサゾール及び３−ヒドロキシイソチアゾール、置換フェノール、スクアリン酸、３−及び４−ヒドロキシキノリン−２−オン、テトラン酸及びテトラミン酸、シクロペンタン−１，３−ジオン及びボロン酸、メルカプトアゾール、スルホニミダミドを含む（Ｂａｌｌａｔｏｒｅ  ｅｔ  ａｌ．，２０１３）他の環状及び非環状構造から独立して選択される化学部分である。
【０３９８】
一形態では、本発明は、ＡＴ１Ｒなどのアンジオテンシン受容体又はＣＣＲ２などの特定のケモカイン受容体など、特定の活性化された共存ＧＰＣＲによるＲＡＧＥリガンド非依存性のＲＡＧＥ活性化のモジュレーターを同定するための方法を提供し、前記方法は、（１）化合物の三次元構造を、群：第１の荷電又は水素結合性基（Ａ）、第２の荷電又は水素結合性基（Ｂ）、第３の荷電又は水素結合性基（Ｃ）及び疎水基（Ｄ）から選択される２つ以上の特徴を含むファーマコフォアと比較するステップであって、特徴間の距離は、±１０Å以内の許容差内において、以下の通りである、ステップと、
【０３９９】
【表２８】
2020531514.tif 000039
（２）そのように配置された疎水性及び／又は荷電若しくは水素結合性化学部分を有する化合物を選択するステップとを含む。
【０４００】
ファーマコフォアとの比較を含む上述の方法によって同定されたＲＡＧＥリガンド非依存性のＲＡＧＥ活性化のモジュレーターは、ペプチド又は非ペプチジル化合物であり得る。
【０４０１】
本発明の好ましい形態では、部位点間の距離の大きさが正である場合、許容差は、最大±５Åである。本発明の好ましい形態では、部位点間の距離の大きさが正である場合、許容差は、最大±２Åである。本発明の好ましい形態では、部位点間の距離の大きさが正である場合、許容差は、最大±１Åである。
【０４０２】
本発明の好ましい形態では、モジュレーターは、上記で特定された群から選択される３つ以上の特徴を含む。
【０４０３】
本発明の好ましい形態では、モジュレーターは、上記で特定された群からの４つの特徴を含む。
【０４０４】
本発明の一形態では、化合物の三次元構造とファーマコフォアとの比較は、化合物の最小エネルギー構造とファーマコフォアとの比較を伴う。
【０４０５】
潜在的に多数の化合物から化合物を選択する効率的な手段は、化合物の三次元化学構造の１つ以上のコンピューター化されたデータベースをスクリーニングするために、コンピュータープログラム、例えばＣａｔａｌｙｓｔ（ＭＳｌ）を使用して、本発明のファーマコフォアと化合物を比較することを含む。
【０４０６】
本発明の一形態では、ＡＴ１Ｒなどのアンジオテンシン受容体又はＣＣＲ２などの特定のケモカイン受容体など、特定の活性化された共存ＧＰＣＲによるＲＡＧＥリガンド非依存性のＲＡＧＥ活性化のモジュレーターは、配列番号１に記載のアミノ酸配列を有するペプチド又は少なくとも残基３７９〜３９０を含有するその類似体、断片若しくは誘導体である。
【０４０７】
本発明の一形態では、ＡＴ１Ｒなどのアンジオテンシン受容体又はＣＣＲ２などの特定のケモカイン受容体など、特定の活性化された共存ＧＰＣＲによるＲＡＧＥリガンド非依存性のＲＡＧＥ活性化のモジュレーターは、配列番号１の式のペプチド又はその類似体若しくは誘導体である。
【０４０８】
本発明の一形態では、ＡＴ１Ｒなどのアンジオテンシン受容体又はＣＣＲ２などの特定のケモカイン受容体など、特定の活性化された共存ＧＰＣＲによるＲＡＧＥリガンド非依存性のＲＡＧＥ活性化のモジュレーターは、配列番号２の式のペプチド又はその類似体若しくは誘導体である。
【０４０９】
本発明の一形態では、ＡＴ１Ｒなどのアンジオテンシン受容体又はＣＣＲ２などの特定のケモカイン受容体など、特定の活性化された共存ＧＰＣＲによるＲＡＧＥリガンド非依存性のＲＡＧＥ活性化のモジュレーターは、配列番号５の式のペプチド又はその類似体若しくは誘導体である。
【０４１０】
本発明の一形態では、ＡＴ１Ｒなどのアンジオテンシン受容体又はＣＣＲ２などの特定のケモカイン受容体など、特定の活性化された共存ＧＰＣＲによるＲＡＧＥリガンド非依存性のＲＡＧＥ活性化のモジュレーターは、配列番号６の式のペプチド又はその類似体若しくは誘導体である。
【０４１１】
本発明の一形態では、ＡＴ１Ｒなどのアンジオテンシン受容体又はＣＣＲ２などの特定のケモカイン受容体など、特定の活性化された共存ＧＰＣＲによるＲＡＧＥリガンド非依存性のＲＡＧＥ活性化のモジュレーターは、配列番号７に記載のＳ３９１Ａ−Ｅ３９２Ｘ−ＲＡＧＥペプチド又はその類似体若しくは誘導体である。
【０４１２】
配列番号７：
［Ｌ３６２ＷＱＲＲＱＲＲＧＥＥＲＫＡＰＥＮＱＥＥＥＥＥＲＡＥＬＮＱＡ３９１］
【０４１３】
本発明の一形態では、ＡＴ１Ｒなどのアンジオテンシン受容体又はＣＣＲ２などの特定のケモカイン受容体など、特定の活性化された共存ＧＰＣＲによるＲＡＧＥリガンド非依存性のＲＡＧＥ活性化のモジュレーターは、配列番号８に記載のＳ３９１Ｘ−ＲＡＧＥペプチド又はその類似体若しくは誘導体である。
【０４１４】
配列番号８：
［Ｌ３６２ＷＱＲＲＱＲＲＧＥＥＲＫＡＰＥＮＱＥＥＥＥＥＲＡＥＬＮＱ３９０］
【０４１５】
好ましい特定の誘導体は、以下の配列番号９に記載のＱ３７９ＥＥＥＥＥＲＡＥＬＮＲ３９０、配列番号１０に記載のＱ３７９ＥＥＥＥＥＲＡＥＬＮＫ３９０、配列番号１１に記載のＫ３７９ＥＥＥＥＥＲＡＥＬＮＱ３９０、配列番号１２に記載のＫ３７９ＥＥＥＥＲＡＥＬＮＫ３９０及び配列番号１３に記載のＫ３７９ＥＥＥＥＥＲＡＥＬＮＲ３９０を含む。
配列番号９：［Ｑ３７９ＥＥＥＥＥＲＡＥＬＮＲ３９０］
配列番号１０：［Ｑ３７９ＥＥＥＥＥＲＡＥＬＮＫ３９０］
配列番号１１：［Ｋ３７９ＥＥＥＥＥＲＡＥＬＮＱ３９０］
配列番号１２：［Ｋ３７９ＥＥＥＥＥＲＡＥＬＮＫ３９０］
配列番号１３：［Ｋ３７９ＥＥＥＥＥＲＡＥＬＮＲ３９０］
【０４１６】
配列番号１、２、５〜１３などの本発明のモジュレーターに関連して本明細書で使用される「誘導体」という用語は、その一次構造がＲＡＧＥのＣ末端細胞質側テール又はその断片から取得されたか又はそれに由来するが、アミノ酸の付加、置換、切断、化学的及び／又は生化学的修飾（アセチル化、カルボキシル化、リン酸化、グリコシル化、ユビキチン化、側鎖メチル化）、放射性ヌクレオチド又はハロゲンでの標識、異常又は人工アミノ酸（Ｄ−アミノ酸、Ｎ−メチル化アミノ酸、四置換、β−ペプチド、ピログルタミン酸；２−アミノアジピン酸；３−アミノアジピン酸；β−アラニン；β−アミノプロピオン酸；２−アミノ酪酸；４−アミノ酪酸；ピペリジン酸；６−アミノカプロン酸；２−アミノヘプタン酸；２−アミノイソ酪酸；３−アミノイソ酪酸；２−アミノピメリン酸；２，４−ジアミノ酪酸；デスモシン；２，２’’−ジアミノピメリン酸；２，３−ジアミノプロピオン酸；Ｎ−エチルグリシン；Ｎ−エチルアスパラギン；ヒドロキシリジン；アロ−ヒドロキシリジン；３−ヒドロキシプロリン；４−ヒドロキシプロリン；イソデスモシン；アロ−イソロイシン；Ｎ−メチルグリシン；サルコシン；Ｎ−メチルイソロイシン；Ｎ−メチルバリン；ノルバリン；ノルロイシン；オルニチン；スタチンなど）、レトロ逆位配列、環状ペプチド、ペプトイド又は非ペプチド薬物、非ペプチド標識、非ペプチド担体若しくは非ペプチド樹脂への連結を含むことを特徴とするモジュレーターを指す。
【０４１７】
本発明者らは、野生型ＲＡＧＥの残基３４３〜３６１を含むペプチド（配列番号１４）が、ＲＡＧＥリガンド非依存性のＲＡＧＥ活性化とＲＡＧＥリガンド依存性活性化との両方を阻害する阻害ペプチドであることをさらに発見した。
【０４１８】
置換は、アミノ酸が異なる天然又は非従来のアミノ酸残基で置換されるアミノ酸変化を包含する。そのような置換は、「保存的」として分類することができ、この場合、ポリペプチドに含まれるアミノ酸残基は、極性、側鎖官能性又はサイズのいずれかに関して類似した性質の別の天然アミノ酸で置換され、例えばＳｅｒ⇔Ｔｈｒ⇔Ｐｒｏ⇔Ｈｙｐ⇔Ｇｌｙ⇔Ａｌａ、Ｖａｌ⇔Ｉｌｅ⇔Ｌｅｕ、Ｈｉｓ⇔Ｌｙｓ⇔Ａｒｇ、Ａｓｎ⇔Ｇｌｎ⇔Ａｓｐ⇔Ｇｌｕ又はＰｈｅ⇔Ｔｒｐ⇔Ｔｙｒである。いくつかの非従来型アミノ酸も、天然に存在するアミノ酸の適切な代替物となり得ることを理解されたい。例えば、オルニチン、ホモアルギニン及びジメチルリジンは、Ｈｉｓ、Ａｒｇ及びＬｙｓに関連している。
【０４１９】
本発明に包含される置換は、「非保存的」であり得、ポリペプチドに存在するアミノ酸残基が、異なる群からの天然に存在するアミノ酸などの異なる特性を有するアミノ酸で置換されているか（例えば、荷電又は疎水性アミノ酸をアラニンで置換する）、又は代わりに天然に存在するアミノ酸が非従来型のアミノ酸で置換される。
【０４２０】
アミノ酸置換は、典型的には、単一の残基の置換であるが、クラスター化又は分散した複数の残基の置換であり得る。好ましくは、アミノ酸置換は、保存的である。
【０４２１】
付加は、１つ以上の天然又は非従来型アミノ酸残基の付加を包含する。欠失は、１つ以上のアミノ酸残基の欠失を包含する。
【０４２２】
上記のように、本発明は、１つ以上のアミノ酸が側鎖修飾を受けたペプチドを含む。本発明によって企図される側鎖修飾の例には、アルデヒドとの反応及びそれに続くＮａＢＨ４での還元による還元的アルキル化；メチルアセトイミデートによるアミジン化；無水酢酸によるアシル化；シアネートによるアミノ基のカルバモイル化；２，４，６−トリニトロベンゼンスルホン酸（ＴＮＢＳ）によるアミノ基のトリニトロベンジル化；無水コハク酸及び無水テトラヒドロフタル酸によるアミノ基のアシル化；及びピリドキサール−５−リン酸によるリジンのピリドキシル化とそれに続くＮａＢＨ４による還元などによるアミノ基の修飾が含まれる。
【０４２３】
アルギニン残基のグアニジン基は、２，３−ブタンジオン、フェニルグリオキサール及びグリオキサールなどの試薬との複素環縮合生成物の形成により修飾され得る。
【０４２４】
カルボキシル基は、Ｏ−アシルイソウレア形成を介したカルボジイミド活性化及びそれに続く誘導体化、例えば対応するアミドへの誘導体化により修飾され得る。スルフヒドリル基は、ヨード酢酸又はヨードアセトアミドによるカルボキシメチル化；過ギ酸のシステイン酸への酸化；他のチオール化合物との混合ジスルフィドの形成；マレイミド、無水マレイン酸又は他の置換マレイミドとの反応；４−クロロ水銀安息香酸、４−クロロ水銀フェニルスルホン酸、塩化フェニル水銀、２−クロロ水銀−４−ニトロフェノール及び他の水銀剤を使用した水銀誘導体の形成；アルカリ性ｐＨでのシアネートによるカルバモイル化などの方法により修飾され得る。本発明の好ましい形態では、システイン残基のいかなる修飾も、必要なジスルフィド結合を形成するペプチドの能力に影響してはならない。システインのスルフヒドリル基をセレン等価物で置き換えて、ペプチドが１つ以上のジスルフィド結合の代わりにジセレン結合を形成することも可能である。
【０４２５】
トリプトファン残基は、例えば、Ｎ−ブロモスクシンイミドによる酸化又は２−ヒドロキシ−５−ニトロベンジルブロミド若しくはスルフェニルハライドによるインドール環のアルキル化により修飾され得る。他方では、チロシン残基は、テトラニトロメタンによるニトロ化によって変化して、３−ニトロチロシン誘導体を形成し得る。
【０４２６】
ヒスチジン残基のイミダゾール環の修飾は、ヨード酢酸誘導体によるアルキル化又はジエチルピロカルボネートによるＮ−カルボエトキシル化によって達成され得る。プロリン残基は、例えば、４位のヒドロキシル化により修飾され得る。
【０４２７】
修飾された側鎖を有するいくつかのアミノ酸及び他の非天然アミノ酸のリストを次の表に示す。
【０４２８】
【表２９】
2020531514.tif 000040
【０４２９】
これらの種類の修飾は、個人に投与される場合又は診断試薬として使用される場合、ペプチドを安定化するために重要であり得る。
【０４３０】
本明細書で使用される保存的アミノ酸置換は、群のメンバー間の置換が分子の生物学的活性を保存する（例えば、Ｇｒａｎｔｈａｍ，Ｒ．，１９７４を参照されたい）ように、十分に類似した物理化学的特性を有する群内のアミノ酸残基を含み得る。特に、保存的アミノ酸置換は、アミノ酸が同じクラスのアミノ酸（例えば、塩基性アミノ酸、酸性アミノ酸、極性アミノ酸、脂肪族側鎖を有するアミノ酸、正又は負に荷電した側鎖を有するアミノ酸、側鎖に芳香族基を有するアミノ酸、水素架橋に入ることができる側鎖、例えばヒドロキシル官能基を有する側鎖を有するアミノ酸）に由来する置換であることが好ましい。保存的置換は、本件の場合、例えば、塩基性アミノ酸残基（Ｌｙｓ、Ａｒｇ、Ｈｉｓ）を別の塩基性アミノ酸残基（Ｌｙｓ、Ａｒｇ、Ｈｉｓ）に置換すること、脂肪族アミノ酸残基（Ｇｌｙ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、ｌｉｅ）を別の脂肪族アミノ酸残基に置換すること、芳香族アミノ酸残基（Ｐｈｅ、Ｔｙｒ、Ｔｒｐ）を別の芳香族アミノ酸残基に置換すること、トレオニンをセリンに又はロイシンをイソロイシンに置換することである。さらなる保存的アミノ酸交換が当業者に知られているであろう。異性体形態は、好ましくは、維持されるべきであり、例えば、Ｋは、好ましくは、Ｒ又はＨを置換し、ｋは、好ましくは、ｒ及びｈを置換する。
【０４３１】
アミノ酸の置換を検討する場合、本発明の好ましい置換は、Ｇｒａｎｔｈａｍ，Ｒ．（１９７４）に１００未満のＤを有すると記載されているものであり、その内容は、参照により組み込まれる。最も好ましい代替物は、５０未満のＤを有すると説明されているものである。
【０４３２】
本発明のペプチドモジュレーターは、配列番号１、２、５、６、７、８、９、１０、１１、１２又は１３のレトロインベルソ異性体又は改変若しくは置換されたバリアント又は付加若しくは欠失によって形成されるペプチドを含む（Ｌｉ  ｅｔ  ａｌ．，２０１０）。
【０４３３】
＜ＲＡＧＥ関連障害の処置、予防又は管理方法＞
別の関連する態様では、本発明は、ＲＡＧＥ関連障害の処置、予防又は管理を、そのような処置を必要とする患者において行う方法を提供し、方法は、本発明の特定の活性化された共存ＧＰＣＲによるＲＡＧＥリガンド非依存性のＲＡＧＥ活性化のモジュレーターの有効量の投与を含む。
【０４３４】
別の態様では、本発明は、ＲＡＧＥ関連障害の処置、予防又は管理を、そのような処置を必要とする患者において行うための薬剤の製造のための、特定の活性化された共存ＧＰＣＲによるＲＡＧＥリガンド非依存性のＲＡＧＥ活性化のモジュレーターの使用を含む。
【０４３５】
別の態様では、本発明は、ＲＡＧＥ関連障害の処置、予防又は管理を、そのような処置を必要とする患者において行うための、特定の活性化された共存ＧＰＣＲによるＲＡＧＥリガンド非依存性のＲＡＧＥ活性化のモジュレーターの使用を含む。
【０４３６】
本発明の好ましい形態では、特定の共存ＧＰＣＲは、アンジオテンシン受容体である。本発明の好ましい形態では、特定の共存ＧＰＣＲは、ＡＴ１Ｒである。
【０４３７】
本発明の好ましい形態では、特定の共存ＧＰＣＲは、特定のケモカイン受容体である。本発明の好ましい形態では、特定の共存ＧＰＣＲは、ＣＣＲ２である。
【０４３８】
さらに、本発明は、ＲＡＧＥ関連障害の処置、予防又は管理を、そのような処置を必要とする患者において行う方法を提供し、方法は、有効量の、本発明の特定の活性化された共存ＧＰＣＲによるＲＡＧＥリガンド非依存性のＲＡＧＥ活性化のモジュレーターと、特定の共存ＧＰＣＲのモジュレーター及び／又は特定の共存ＧＰＣＲシグナル伝達経路のモジュレーターとの組み合わせの投与を含む。
【０４３９】
本発明の好ましい形態では、特定の共存ＧＰＣＲは、アンジオテンシン受容体である。本発明の好ましい形態では、特定の共存ＧＰＣＲは、ＡＴ１Ｒである。
【０４４０】
本発明の好ましい形態では、特定の共存ＧＰＣＲは、特定のケモカイン受容体である。本発明の好ましい形態では、特定の共存ＧＰＣＲは、ＣＣＲ２である。
【０４４１】
方法は、有効量の、本発明の活性化された特定の共存ＧＰＣＲによるＲＡＧＥリガンド非依存性のＲＡＧＥ活性化のモジュレーターと、特定の共存ＧＰＣＲのモジュレーター及び／又は特定の共存ＧＰＣＲシグナル伝達経路のモジュレーターとの組み合わせの投与を含み得、ここで、特定の共存ＧＰＣＲのモジュレーター及び／又は特定の共存ＧＰＣＲシグナル伝達経路のモジュレーターは、特定の共存ＧＰＣＲに関する障害の処置のために通常投与されるよりも低い用量で投与される。
【０４４２】
方法は、有効量の、本発明の活性化された特定の共存ＧＰＣＲによるＲＡＧＥリガンド非依存性のＲＡＧＥ活性化のモジュレーターと、特定の共存ＧＰＣＲのモジュレーター及び／又は特定の共存ＧＰＣＲシグナル伝達経路のモジュレーターとの組み合わせの投与を含み得、ここで、特定の共存ＧＰＣＲのモジュレーター及び／又は特定の共存ＧＰＣＲシグナル伝達経路のモジュレーターは、ＲＡＧＥに関する障害の処置のために通常投与されるよりも低い用量で投与される。
【０４４３】
本発明の特に好ましい形態では、方法は、有効量の、本発明の活性化アンジオテンシン受容体によるＲＡＧＥリガンド非依存性のＲＡＧＥ活性化のモジュレーターと、ＡＴ１Ｒのモジュレーター及び／又はＡＴ１Ｒシグナル伝達経路のモジュレーターとの組み合わせの投与を含み、ここで、ＡＴ１Ｒのモジュレーター及び／又はＡＴ１Ｒシグナル伝達経路のモジュレーターは、ＡＴ１Ｒ関連障害の処置のために通常投与されるよりも低い用量で投与される。
【０４４４】
本発明の別の特に好ましい形態では、方法は、有効量の、本発明の活性化された特定のケモカイン受容体によるＲＡＧＥリガンド非依存性のＲＡＧＥ活性化のモジュレーターと、ＣＣＲ２のモジュレーター及び／又はＣＣＲ２シグナル伝達経路のモジュレーターとの組み合わせの投与を含み、ここで、ＣＣＲ２のモジュレーター及び／又はＣＣＲ２シグナル伝達経路のモジュレーターは、ＣＣＲ２関連障害の処置のために通常投与されるよりも低い用量で投与される。
【０４４５】
さらに、本発明は、ＲＡＧＥ関連障害の処置、予防又は管理を、そのような処置を必要とする患者において行う方法を提供し、方法は、有効量の、本発明の活性化された特定の共存ＧＰＣＲによるＲＡＧＥリガンド非依存性のＲＡＧＥ活性化のモジュレーターと、ＲＡＧＥのＲＡＧＥリガンド依存性活性化のモジュレーター、及び／又は構成的活性型ＲＡＧＥのモジュレーター、及び／又はＲＡＧＥシグナル伝達経路のモジュレーターとの組み合わせの投与を含む。
【０４４６】
本発明の特に好ましい形態では、方法は、有効量の、本発明の活性化された特定の共存ＧＰＣＲによるＲＡＧＥリガンド非依存性のＲＡＧＥ活性化のモジュレーターと、ＲＡＧＥのＲＡＧＥリガンド依存性活性化のモジュレーター、及び／又は構成的活性型ＲＡＧＥのモジュレーター、及び／又はＲＡＧＥシグナル伝達経路のモジュレーターとの組み合わせの投与を含み、ここで、ＲＡＧＥのＲＡＧＥリガンド依存性活性化のモジュレーター、及び／又は構成的活性型ＲＡＧＥのモジュレーター、及び／又はＲＡＧＥシグナル伝達経路のモジュレーターは、ＲＡＧＥ関連障害の処置のために通常投与されるよりも低い用量で投与される。
【０４４７】
さらに、本発明は、ＲＡＧＥ関連障害の処置、予防又は管理を、そのような処置を必要とする患者において行う方法を提供し、方法は、有効量の、本発明の活性化された特定の共存ＧＰＣＲによるＲＡＧＥリガンド非依存性のＲＡＧＥ活性化のモジュレーターと、特定の共存ＧＰＣＲのモジュレーター及び／又は特定の共存ＧＰＣＲシグナル伝達経路のモジュレーターとの組み合わせの投与を含む。
【０４４８】
例えば、本発明は、ＲＡＧＥ関連障害の処置、予防又は管理を、そのような処置を必要とする患者において行う方法を提供し、方法は、有効量の、本発明の活性化アンジオテンシン受容体によるＲＡＧＥリガンド非依存性のＲＡＧＥ活性化のモジュレーターと、ＲＡＧＥのＲＡＧＥリガンド依存性活性化のモジュレーター、及び／又は構成的活性型ＲＡＧＥのモジュレーター、及び／又はＲＡＧＥシグナル伝達経路のモジュレーター並びにＡＴ１Ｒのモジュレーター及び／又はＡＴ１Ｒシグナル伝達経路のモジュレーターとの組み合わせの投与を含む。
【０４４９】
例えば、本発明は、ＲＡＧＥ関連障害の処置、予防又は管理を、そのような処置を必要とする患者において行う方法を提供し、方法は、有効量の、本発明の活性化された特定のケモカイン受容体によるＲＡＧＥリガンド非依存性のＲＡＧＥ活性化のモジュレーターと、ＲＡＧＥのＲＡＧＥリガンド依存性活性化のモジュレーター、及び／又は構成的活性型ＲＡＧＥのモジュレーター、及び／又はＲＡＧＥシグナル伝達経路のモジュレーター並びにＣＣＲ２のモジュレーター及び／又はＣＣＲ２シグナル伝達経路のモジュレーターとの組み合わせの投与を含む。
【０４５０】
本発明の特に好ましい形態では、方法は、有効量の、本発明の活性化された特定の共存ＧＰＣＲによるＲＡＧＥリガンド非依存性のＲＡＧＥ活性化のモジュレーターと、特定の共存ＧＰＣＲのモジュレーター及び／又は特定の共存ＧＰＣＲのシグナル伝達経路のモジュレーター並びにＲＡＧＥのＲＡＧＥリガンド依存性活性化のモジュレーター、及び／又は構成的活性型ＲＡＧＥのモジュレーター、及び／又はＲＡＧＥシグナル伝達経路のモジュレーターとの組み合わせの投与を含み、ここで、ＲＡＧＥのＲＡＧＥリガンド依存性活性化のモジュレーター、及び／又は構成的活性型ＲＡＧＥのモジュレーター、及び／又はＲＡＧＥシグナル伝達経路のモジュレーターは、ＲＡＧＥ関連障害の処置のために通常投与されるよりも低い用量で投与され、且つ／又は特定の共存ＧＰＣＲのモジュレーター及び／又は特定の共存ＧＰＣＲのシグナル伝達経路のモジュレーターは、ＧＰＣＲに関する障害の処置のために通常投与されるよりも低い用量で投与される。
【０４５１】
本発明の特に好ましい形態では、方法は、有効量の、本発明の活性化アンジオテンシン受容体によるＲＡＧＥリガンド非依存性のＲＡＧＥ活性化のモジュレーターと、ＡＴ１Ｒのモジュレーター及び／又はＡＴ１Ｒシグナル伝達経路のモジュレーター並びにＲＡＧＥのＲＡＧＥリガンド依存性活性化のモジュレーター、及び／又は構成的活性型ＲＡＧＥのモジュレーター、及び／又はＲＡＧＥシグナル伝達経路のモジュレーターとの組み合わせの投与を含み、ここで、ＲＡＧＥのＲＡＧＥリガンド依存性活性化のモジュレーター、及び／又は構成的活性型ＲＡＧＥのモジュレーター、及び／又はＲＡＧＥシグナル伝達経路のモジュレーターは、ＲＡＧＥ関連障害の処置のために通常投与されるよりも低い用量で投与され、且つ／又はＡＴ１Ｒのモジュレーター及び／又はＡＴ１Ｒシグナル伝達経路のモジュレーターは、ＡＴ１Ｒ関連障害の処置のために通常投与されるよりも低い用量で投与される。
【０４５２】
本発明の特に好ましい形態では、方法は、有効量の、本発明の活性化された特定のケモカイン受容体によるＲＡＧＥリガンド非依存性のＲＡＧＥ活性化のモジュレーターと、ＣＣＲ２のモジュレーター及び／又はＣＣＲ２シグナル伝達経路のモジュレーター並びにＲＡＧＥのＲＡＧＥリガンド依存性活性化のモジュレーター、及び／又は構成的活性型ＲＡＧＥのモジュレーター、及び／又はＲＡＧＥシグナル伝達経路のモジュレーターとの組み合わせの投与を含み、ここで、ＲＡＧＥのＲＡＧＥリガンド依存性活性化のモジュレーター、及び／又は構成的活性型ＲＡＧＥのモジュレーター、及び／又はＲＡＧＥシグナル伝達経路のモジュレーターは、ＲＡＧＥ関連障害の処置のために通常投与されるよりも低い用量で投与され、且つ／又はＣＣＲ２のモジュレーター及び／又はＣＣＲ２シグナル伝達経路のモジュレーターは、ＣＣＲ２関連障害の処置のために通常投与されるよりも低い用量で投与される。
【０４５３】
ＲＡＧＥ関連障害は、ＲＡＧＥの発現に依存する障害として定義される。これは、ＲＡＧＥの発現にも依存しているＡＴ１Ｒ関連障害又はＣＣＲ２関連障害など、特定の共存ＧＰＣＲに関連する障害を除外するものではない。実際、障害は、ＲＡＧＥ関連である場合と、ＡＴ１Ｒ関連又はＣＣＲ２関連を含む特定の共存ＧＰＣＲに関連している場合との両方があり得る。
【０４５４】
特定の共存ＧＰＣＲに関連する障害は、特定の共存ＧＰＣＲの発現に依存する障害として定義される。これは、特定の共存ＧＰＣＲの発現にも依存しているＲＡＧＥ関連障害を除外するものではない。実際、障害は、ＲＡＧＥ関連である場合と、ＡＴ１Ｒ関連又はＣＣＲ２関連を含む特定の共存ＧＰＣＲに関連している場合との両方があり得る。
【０４５５】
本発明の一形態では、ＲＡＧＥ関連障害は、群：心血管障害；消化器疾患；がん；神経障害、呼吸器障害、結合組織障害、腎臓障害、生殖器障害、皮膚障害、眼障害、内分泌障害から選択される障害である。
【０４５６】
本発明の一形態では、ＲＡＧＥ関連障害は、群：アテローム性動脈硬化症、虚血性心疾患、心筋炎、心内膜炎、心筋症、急性リウマチ熱、慢性リウマチ性心疾患、脳血管疾患／脳卒中、心不全、血管石灰化、末梢血管疾患、リンパ管炎から選択される心血管障害である。
【０４５７】
本発明の一形態では、ＲＡＧＥ関連障害は、群：歯周炎、食道炎、胃炎、胃十二指腸潰瘍、クローン病、潰瘍性大腸炎、虚血性大腸炎、腸炎及び小腸結腸炎、腹膜炎、アルコール性肝疾患、肝炎、中毒性肝疾患、胆汁性肝硬変、肝線維症／肝硬変、非アルコール性脂肪肝／非アルコール性脂肪性肝炎（ＮＡＦＬＤ／ＮＡＳＨ）、肝外傷及び肝障害、外傷又は手術からの回復から選択される消化器系障害である。
【０４５８】
本発明の一形態では、ＲＡＧＥ関連障害は、群：唇、口腔及び咽頭の悪性新生物、消化器の悪性新生物、呼吸器及び胸腔内器官の悪性新生物、骨及び関節軟骨の悪性新生物、黒色腫及び皮膚の他の悪性新生物、中皮及び軟組織の悪性新生物、乳房の悪性新生物、女性生殖器の悪性新生物、男性生殖器の悪性新生物、尿路の悪性新生物、眼、脳及び中枢神経系の他の部分の悪性新生物、甲状腺及び他の内分泌腺の悪性新生物、リンパ系、造血系及び関連する組織の悪性新生物、不明確な、二次及び／又は特定されていない部位の悪性新生物から選択されるがんである。
【０４５９】
本発明の一形態では、ＲＡＧＥ関連障害は、神経障害であり、且つ群：中枢神経系の炎症性疾患、主に中枢神経系に影響を与える全身性萎縮、錐体外路及び運動障害、パーキンソン病、中枢神経系の脱髄性疾患、アルツハイマー病、限局性脳萎縮、レビー小体病、てんかん、片頭痛、神経障害性疼痛、糖尿病性神経障害、多発性神経障害、神経膠腫の発生及び進行、脊髄外傷、虚血性脳損傷／脳卒中、脳外傷及び脳損傷、外傷又は手術からの回復から選択される。
【０４６０】
本発明の一形態では、ＲＡＧＥ関連障害は、精神障害であり、且つ群：認知症、アルツハイマー病、血管性認知症、嗜癖、統合失調症、主要な情動障害、抑うつ、躁病、双極性障害、不安障害から選択される。
【０４６１】
本発明の一形態では、ＲＡＧＥ関連障害は、呼吸器（肺）障害であり、且つ群：急性上気道感染症、鼻炎、鼻咽頭炎、副鼻腔炎、喉頭炎、インフルエンザ及び肺炎、急性気管支炎、急性細気管支炎、喘息、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、気管支拡張症、肺気腫、外因による慢性肺疾患、急性呼吸窮迫症候群（ＡＲＤＳ）、肺好酸球増加症及び胸膜炎、肺外傷並びに肺損傷、外傷又は手術からの回復から選択される。
【０４６２】
本発明の一形態では、ＲＡＧＥ関連障害は、結合組織障害であり、且つ群：変形性関節炎、感染性関節炎、関節リウマチ、乾癬性及び腸疾患性関節症、若年性関節炎、痛風及び他の結晶性関節症、糖尿病性関節症、結節性多発性動脈炎、チャーグ・ストラウス、粘膜皮膚リンパ節症候群［川崎］、過敏性血管炎、グッドパスチャー症候群、血栓性微小血管症、ウェゲナー肉芽腫症、大動脈弓症候群［高安］、巨細胞性動脈炎、リウマチ性多発筋痛、顕微鏡的多発性血管炎、低補血性血管炎、全身性エリテマトーデス、皮膚多発性筋炎、多発性筋炎、全身性硬化症、ＣＲ（Ｅ）ＳＴ症候群、乾燥症候群［シェーグレン］、混合性結合組織病、ベーチェット病、外傷性筋損傷、捻挫、筋挫傷及び骨折から選択される。
【０４６３】
本発明の一形態では、ＲＡＧＥ関連障害は、腎障害であり、且つ群：糸球体腎炎、腎炎、糖尿病性腎疾患、間質性腎炎、閉塞性及び逆流性腎症、急性腎不全及び慢性腎疾患から選択される。
【０４６４】
本発明の一形態では、ＲＡＧＥ関連障害は、生殖器障害であり、且つ群：前立腺炎、前立腺肥大、前立腺異形成、卵管炎、卵巣炎、骨盤内炎症性疾患（ＰＩＤ）、多嚢胞性卵巣症候群、子宮頸管炎、子宮頸部異形成、膣炎、外陰炎から選択される。
【０４６５】
本発明の一形態では、ＲＡＧＥ関連障害は、群：皮膚炎、湿疹、天疱瘡／類天疱瘡、乾癬、ばら色粃糠疹、扁平苔癬、蕁麻疹、多形性紅斑、結節性紅斑、日焼け、角化症、光老化性皮膚潰瘍、表在性皮膚損傷及び開放創から選択される皮膚障害である。
【０４６６】
本発明の一形態では、ＲＡＧＥ関連障害は、群：角膜炎、結膜炎、網膜炎、緑内障、強膜炎、上強膜炎、脈絡網膜炎症、糖尿病性網膜症、黄斑浮腫、未熟児網膜症及び視神経炎、眼の外傷並びに眼の損傷、外傷又は手術からの回復から選択される眼障害である。
【０４６７】
本発明の一形態では、ＲＡＧＥ関連障害は、群：糖尿病、インスリン抵抗性、耐糖能障害及び甲状腺炎から選択される内分泌障害である。
【０４６８】
本発明の一形態では、ＡＴ１Ｒを阻害するか、又はＡＴ１Ｒシグナル伝達経路を阻害する阻害剤は、群：エプロサルタン（商品名Ｔｅｖｅｔｅｎ（登録商標）、Ａｂｂｏｔｔ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ  ＵＳＡ）、ロサルタン（商品名Ｃｏｚａａｒ（登録商標）、Ｍｅｒｃｋ＆Ｃｏ）、バルサルタン（商品名Ｄｉｏｖａｎ（登録商標）、Ｎｏｖａｒｔｉｓ）、テルミサルタン（商品名Ｍｉｃａｒｄｉｓ（登録商標）、Ｂｏｅｈｒｉｎｇｅｒ  Ｉｎｇｅｌｈｅｉｍ）、イルベサルタン（商品名Ａｖａｐｒｏ（登録商標）、ＳａｎｏｆｉＡｖｅｎｔｉｓ）、オルメサルタン（商品名Ｂｅｎｉｃａｒ（登録商標）、Ｄａｉｉｃｈｉ  Ｓａｎｋｙｏ  Ｉｎｃ）、アジルサルタン（商品名Ｅｄａｒｂｉ、Ｔａｋｅｄａ）、カンデサルタン（商品名Ａｔａｃａｎｄ（登録商標）、ＡｓｔｒａＺｅｎｅｃａ）、ＺＤ−７１１５、サララシン（（Ｓａｒ１−Ａｌａ８）Ａｎｇ  ＩＩ）、サルスラン（（Ｓａｒ１−Ｔｈｒ８）Ａｎｇ  ＩＩ）及びＤｕＰ７５３から選択される。このリストには、これらの阻害剤のプロドラッグも含まれ、これは、カンデサルタン（カンデサルタンシレキセチル）、アジルサルタン（アジルサルタンメドキソミル）及びオルメサルタン（オルメサルタンメドキソミル）を含み、それらが投与される形態及び活性代謝産物（ロサルタンの活性代謝産物であるＥＸＰ−３１７４など）であり得る。部分アゴニストは、アゴニズムを示しても最大の効果をもたらさないため、部分アゴニストは内因性Ａｎｇ  ＩＩを阻害するように作用することができ、したがって治療的に阻害剤として作用し得ることに留意されたい。
【０４６９】
本発明の一形態では、特定のケモカイン受容体を阻害するか、又は特定のケモカインシグナル伝達経路を阻害する阻害剤は、群：プロパゲルマニウム（３−［（２−カルボキシエチル−オキソゲルミル）オキシ−オキソゲルミル］プロパン酸としても知られる、プロキシゲルマニウム、Ｇｅ−１３２、ビス（２−カルボキシエチルゲルマニウム）セスキオキシド（ＣＥＧＳ）、２−カルボキシエチルゲルマセスキオキサン、ＳＫ−８１８、有機ゲルマニウム、ゲルマニウムセスキオキシド、３，３’−（１，３−ジオキソ−１，３−ジゲルマノキサンジイル）ビスプロピオン酸、３−オキシゲルミルプロピオン酸ポリマー、ポリ−トランス−（２−カルボキシエチル）ゲルマセスキオキサン、プロキシゲルマニウム、レパゲルマニウム及びセロシオン；ＣＣＲ２）、ＢＭＳ  ＣＣＲ２  ２２（ＣＣＲ２）、レスベラトロール（ＣＣＲ２）、ＲＳ５０４３９３（ＣＣＲ２）、ＲＳ１０２８９５（ＣＣＲ２）、ＭＬＮ−１２０２（Ｍｉｌｌｅｎｎｉｕｍ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ；ＣＣＲ２）、ＩＮＣＢ８６９６（Ｉｎｃｙｔｅ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ；ＣＣＲ２）、ＭＫ−０８１２（Ｍｅｒｃｋ；ＣＣＲ２）、ＣＣＸ１４０（ＣｈｅｍｏＣｅｎｔｒｙｘ；ＣＣＲ２）、ＰＦ−４１３６３０９（Ｐｆｉｚｅｒ；ＣＣＲ２）、ＢＭＳ−７４１６７２（Ｂｒｉｓｔｏｌ−Ｍｙｅｒｓ  Ｓｑｕｉｂｂ；ＣＣＲ２）；レペルタキシン（ＣＸＣＲ２）、ＴＡＫ−７７９（ＣＣＲ５）、ＴＡＫ−２２０（ＣＣＲ５）、ＴＡＫ−６５２（ＣＣＲ５）、ＡＫ６９２（ＣＣＲ５）、ＣＭＰＤ１６７（ＣＣＲ５）、ＢＸ−４７１（ＣＣＲ１）、ＡＭＤ３１００（ＣＸＣＲ４）、ＡＭＤ１１０７０（ＣＸＣＲ４）、ＦＣ１３１（ＣＸＣＲ４）、ＭＬＮ３８９７（ＣＣＲ１）、ＣＰ−４８１７１５（ＣＣＲ１）、ＧＷ−８７３１４０（ＣＣＲ５）、ＳＢ  ２２５００２（ＣＸＣＲ２）及びＳＢ  ２６５６１０（ＣＸＣＲ２）から選択される。
【０４７０】
本発明の一形態では、ＣＣＲ２を阻害するか、又はＣＣＲ２シグナル伝達経路を阻害する阻害剤は、群：プロパゲルマニウム（３−［（２−カルボキシエチル−オキソゲルミル）オキシ−オキソゲルミル］プロパン酸としても知られる、プロキシゲルマニウム、Ｇｅ−１３２、ビス（２−カルボキシエチルゲルマニウム）セスキオキシド（ＣＥＧＳ）、２−カルボキシエチルゲルマセスキオキサン、ＳＫ−８１８、有機ゲルマニウム、三酸化ゲルマニウム、３，３’−（１，３−ジオキソ−１，３−ジゲルマノキサンジイル）ビスプロピオン酸、３−オキシゲルミルプロピオン酸ポリマー、ポリ−トランス−（２−カルボキシエチル）ゲルマセスキオキサン、プロキシゲルマニウム、レパゲルマニウム及びセロシオン）、ＢＭＳ  ＣＣＲ２  ２２（ＣＣＲ２）、レスベラトロール（ＣＣＲ２）、ＲＳ５０４３９３、ＲＳ１０２８９５、ＭＬＮ−１２０２（Ｍｉｌｌｅｎｎｉｕｍ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ）、ＩＮＣＢ８６９６（Ｉｎｃｙｔｅ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ）、ＭＫ−０８１２（Ｍｅｒｃｋ）、ＣＣＸ１４０（ＣｈｅｍｏＣｅｎｔｒｙｘ）、ＰＦ−４１３６３０９（Ｐｆｉｚｅｒ）、ＢＭＳ−７４１６７２（ブリストル・マイヤーズスクイブ）から選択される。
【０４７１】
本発明の一形態では、ＲＡＧＥのＲＡＧＥリガンド依存性活性化の阻害剤、及び／又は構成的活性型ＲＡＧＥの阻害剤、及び／又はＲＡＧＥシグナル伝達経路の阻害剤は、群：アゼリラゴン（ＴＴＰ４８８／ＰＦ−０４４９４７００）（Ｖドメインを標的とするＲＡＧＥ−リガンド相互作用の経口低分子阻害剤）；ＴＴＰ４０００（米国特許第７９８１４２３号明細書に記載のヒトＩｇ  Ｆｃドメインに連結されたＲＡＧＥのリガンド結合外部ドメインを使用した、ＲＡＧＥの可溶性融合タンパク質阻害剤）；国際公開第２００７１０９７４７号パンフレットに記載のＲＡＧＥ及びそのＲＡＧＥ結合フラグメントに特異的に結合する抗体；ＦＰＳ−ＺＭ１２７（高親和性でＡβ／ＲＡＧＥ相互作用を遮断する三級アミド）；米国特許出願公開第２０１００２４９０３８号明細書に記載のＲＡＧＥリガンド誘導性シグナル伝達に拮抗するペプチド；国際公開第２０１２１０９５６９号パンフレットに記載のリゾホスファチジン酸（ＬＰＡ）アンタゴニスト；Ｈａｎ  ｅｔ  ａｌ（２０１２）に記載の２−アミノピリミジン；Ｈａｎ  ｅｔ  ａｌ（２０１４）に記載のピラゾール−５−カルボキサミド；Ｈａｎ  ｅｔ  ａｌ（２０１５）に記載の４，６−ビスフェニル−２−（３−アルコキシアニリノ）ピリミジン；Ｍａｎｉｇｒａｓｓｏ  ｅｔ  ａｌ（２０１６）に記載のリガンド刺激ＲＡＧＥ−ＤＩＡＰＨ１シグナル伝達の小分子阻害剤；米国特許出願公開第２００９０２２０４８４号明細書に記載の、ＲＡＧＥの細胞質側テールの全て若しくは一部から本質的になるか、又はＲＡＧＥの細胞質側テールに結合するＤｉａｐｈａｎｏｕｓ−１の一部から本質的になるポリペプチドから選択される。
【０４７２】
特定の実施形態では、モジュレーターは、本明細書で広範に記載されるスクリーニング方法又はモジュレーターを同定するための方法を使用して、ＡＴ１Ｒなどのアンジオテンシン受容体又はＣＣＲ２などの特定のケモカイン受容体など、活性化された特定の共存ＧＰＣＲによるＲＡＧＥリガンド非依存性のＲＡＧＥ活性化のモジュレーターとして同定されることに基づいて対象に投与される。
【０４７３】
ＡＴ１Ｒ関連障害は、ＡＴ１Ｒの発現に依存する障害として定義される。これは、ＡＴ１Ｒの発現にも依存しているＲＡＧＥ関連障害を除外するものではない。実際、障害は、ＲＡＧＥ関連及びＡＴ１Ｒ関連の両方であり得る。
【０４７４】
特定のケモカイン受容体関連障害は、特定のケモカイン受容体の発現に依存する障害として定義される。これは、特定のケモカイン受容体の発現にも依存しているＲＡＧＥ関連障害を除外するものではない。実際、障害は、ＲＡＧＥ関連及び特定のケモカイン受容体関連の両方であり得る。
【０４７５】
ＣＣＲ２関連障害は、ＣＣＲ２の発現に依存する障害として定義される。これは、ＣＣＲ２の発現にも依存しているＲＡＧＥ関連障害を除外するものではない。実際、障害は、ＲＡＧＥ関連及びＣＣＲ２関連の両方であり得る。
【０４７６】
組み合わせ薬剤について、以下の用量が「通常」投与される。
【０４７７】
【表３０】
2020531514.tif 000041
【０４７８】
＜候補薬剤のスクリーニング方法＞
一形態では、本発明は、候補薬剤を、活性な共存ＧＰＣＲによって誘導されるＲＡＧＥ活性を調節するその能力についてスクリーニングする方法を含み、方法は、候補薬剤の存在下でＲＡＧＥポリペプチドをＧＰＣＲポリペプチドと接触させるステップと、ここで、ＧＰＣＲポリペプチドは、構成的に活性であり、且つ／又はそのＧＰＣＲのアゴニスト、部分アゴニスト若しくはアロステリックモジュレーターの添加によって活性化され；候補薬剤の存在によるＲＡＧＥ活性化の調節を示す効果を検出することにより、且つ／又は候補薬剤の存在によって調節されるＲＡＧＥ依存性シグナル伝達を検出することにより、候補薬剤が、活性化された共存ＧＰＣＲによるＲＡＧＥリガンド非依存性のＲＡＧＥ活性化のモジュレーターであるかどうかを検出するステップとを含む。
【０４７９】
一形態では、本発明は、候補薬剤を、ＡＴ１Ｒなどのアンジオテンシン受容体又はＣＣＲ２などの特定のケモカイン受容体など、活性化された特定の共存ＧＰＣＲによるＲＡＧＥリガンド非依存性のＲＡＧＥ活性化（ＲＡＧＥのＲＡＧＥリガンド非依存性トランス活性化としても知られる）を調節（すなわち活性化、阻害又はアロステリック調節）するその能力についてスクリーニングする方法を含む。これらの方法は、一般に、
ａ．候補薬剤の存在下でＲＡＧＥポリペプチドをＧＰＣＲポリペプチドと接触させること、ここで、ＧＰＣＲポリペプチドは、構成的に活性であり、且つ／又はそのＧＰＣＲのアゴニスト、部分アゴニスト若しくはアロステリックモジュレーターの添加によって活性化される；及び
ｂ．候補薬剤の存在によるＲＡＧＥ活性化の調節を示す効果を検出することにより、且つ／又は候補薬剤の存在によって調節されるＲＡＧＥ依存性シグナル伝達を検出することにより、候補薬剤が、活性化された共存ＧＰＣＲによるＲＡＧＥリガンド非依存性のＲＡＧＥ活性化のモジュレーターであるかどうかを検出すること
を含むか、それからなるか又はそれから本質的になる。
【０４８０】
いくつかの実施形態では、スクリーニング方法は、ＲＡＧＥの存在下又は非存在下において、候補薬剤が、ＡＴ１Ｒなどのアンジオテンシン受容体若しくはＣＣＲ２などの特定のケモカイン受容体など、特定の共存ＧＰＣＲのモジュレーター（活性化剤、阻害剤、アロステリックモジュレーターなど）又はＡＴ１Ｒシグナル伝達経路などのアンジオテンシン受容体シグナル伝達経路など、若しくはＣＣＲ２シグナル伝達経路などの特定のケモカイン受容体シグナル伝達経路など、特定の共存ＧＰＣＲのシグナル伝達経路のモジュレーター（活性化剤、阻害剤、アロステリックモジュレーターなど）であるかどうかを検出することをさらに含む。いくつかの実施形態では、ＲＡＧＥポリペプチドが存在する場合、それが存在しない場合と比較してより大きいシグナルの調節をもたらす候補薬剤は、共存ＧＰＣＲの活性化に起因するＲＡＧＥ非依存性シグナル伝達よりも、活性化された共存ＧＰＣＲによるＲＡＧＥリガンド非依存性のＲＡＧＥ活性化の調節について選択的である。
【０４８１】
一形態では、本発明は、前記方法によってモジュレーターとして同定されたペプチドを含む。一形態では、本発明は、前記方法によってモジュレーターとして同定された化合物を含む。
【０４８２】
いくつかの実施形態では、スクリーニング方法は、ＡＴ１Ｒなどのアンジオテンシン受容体など、又はＣＣＲ２などの特定のケモカイン受容体など、特定の共存ＧＰＣＲの存在下又は非存在下において、候補薬剤が、ＲＡＧＥ又はＲＡＧＥシグナル伝達経路のモジュレーター（活性化剤、阻害剤、アロステリックモジュレーター又は機能的代替物など）であるかどうかを検出することをさらに含む。いくつかの実施形態では、ＧＰＣＲポリペプチドが存在する場合、それが存在しない場合と比較してＲＡＧＥ依存性シグナルのより大きい調節をもたらす候補薬剤は、活性化された共存ＧＰＣＲによるＲＡＧＥリガンド非依存性のＲＡＧＥ活性化の調節について選択的である。
【０４８３】
いくつかの実施形態では、スクリーニング方法は、候補薬剤が、ＲＡＧＥポリペプチド又はＲＡＧＥシグナル伝達経路及びＡＴ１Ｒなどのアンジオテンシン受容体若しくはＣＣＲ２などの特定のケモカイン受容体など、特定の共存ＧＰＣＲ又はＡＴ１Ｒシグナル伝達経路などのアンジオテンシン受容体シグナル伝達経路など、若しくはＣＣＲ２シグナル伝達経路などの特定のケモカイン受容体シグナル伝達経路など、特定の共存ＧＰＣＲのシグナル伝達経路のモジュレーター（活性化剤、阻害剤、アロステリックモジュレーター又は機能的代替物など）であるかどうかを検出することをさらに含む。
【０４８４】
いくつかの実施形態では、スクリーニング方法は、ＲＡＧＥの細胞外ドメインに結合し、したがってＲＡＧＥリガンド依存的な方式でＲＡＧＥの活性化を阻害するＲＡＧＥリガンドの阻害剤を使用することをさらに含む。
【０４８５】
いくつかの実施形態において、スクリーニング方法は、ＲＡＧＥポリペプチドであって、それがＲＡＧＥリガンドをその外部ドメインに結合させることができず、且つしたがってＲＡＧＥリガンド依存的な方式で活性化されることができないように変異及び／又は切断されているＲＡＧＥポリペプチドの使用をさらに含む。
【０４８６】
いくつかの実施形態では、ＲＡＧＥへのＲＡＧＥリガンドの結合を調節するモジュレーターに細胞を曝露することにより、ＲＡＧＥの細胞外ドメインへのＲＡＧＥリガンドの結合が損なわれる。
【０４８７】
いくつかの実施形態において、それがＲＡＧＥリガンドを結合させることができず、且つしたがってＲＡＧＥリガンド依存的な方式で活性化されることができないように変異及び／又は切断されたＲＡＧＥポリペプチドの使用は、ＲＡＧＥリガンドに結合できるＲＡＧＥポリペプチドが関与するスクリーニング前、後又はそれに並行して発生する。
【０４８８】
適切には、ＡＴ１Ｒなどのアンジオテンシン受容体又はＣＣＲ２などの特定のケモカイン受容体など、活性化された特定の共存ＧＰＣＲによるＲＡＧＥリガンド非依存性のＲＡＧＥ活性化を調節し、適切にはＡＴ１Ｒなどのアンジオテンシン受容体若しくはＣＣＲ２などの特定のケモカイン受容体など、特定の共存ＧＰＣＲ及び／又はＡＴ１Ｒシグナル伝達経路などのアンジオテンシン受容体シグナル伝達経路など、若しくはＣＣＲ２シグナル伝達経路などの特定のケモカイン受容体シグナル伝達経路など、特定の共存ＧＰＣＲのシグナル伝達経路を調節し、且つ／又はＲＡＧＥのＲＡＧＥリガンド依存性活性化を阻害し、且つ／又は構成的活性型ＲＡＧＥ及び／又はＲＡＧＥシグナル伝達経路を阻害する候補薬剤又は候補薬剤の誘導体は、ＲＡＧＥ関連障害の処置、予防又は管理に特に有用である。
【０４８９】
本発明のスクリーニング方法の特定の実施形態では、候補薬剤が、ＲＡＧＥポリペプチドがＧＰＣＲポリペプチドと接触されるときに検出されるＲＡＧＥ依存性シグナルを調節する場合、方法は、ＧＰＣＲポリペプチドが存在する場合にＲＡＧＥ依存性シグナルのより大きい調節をもたらす候補薬剤が、活性化された共存ＧＰＣＲによるＲＡＧＥリガンド非依存性のＲＡＧＥ活性化の調節について選択的であるように、ＧＰＣＲポリペプチドの非存在下で候補薬剤がＲＡＧＥ依存性シグナルを調節するかどうか及び／又はその程度を決定することをさらに含む。
【０４９０】
本発明のスクリーニング方法の特定の実施形態では、候補薬剤が、ＲＡＧＥポリペプチドがＧＰＣＲポリペプチドと接触されるときに検出されるシグナルを調節する場合、方法は、シグナルがＲＡＧＥポリペプチドの非存在下で生成されるかどうか及び／又はその程度を決定し、且つシグナルがＲＡＧＥポリペプチドの非存在下で生成される場合、ＲＡＧＥポリペプチドが存在する場合にシグナルのより大きい調節をもたらす候補薬剤が、共存ＧＰＣＲの活性化に起因するＲＡＧＥ非依存性シグナル伝達よりも、活性化された共存ＧＰＣＲによるＲＡＧＥリガンド非依存性のＲＡＧＥ活性化の調節について選択的であるように、ＲＡＧＥポリペプチドの非存在下で候補薬剤がシグナルを調節するかどうか及び／又はその程度を決定することをさらに含む。
【０４９１】
特定の実施形態では、スクリーニング方法は、近接（ｐｒｏｘｉｍｉｔｙ）スクリーニングアッセイを使用して、ＲＡＧＥポリペプチドの、ＡＴ１Ｒなどのアンジオテンシン受容体又はＣＣＲ２などの特定のケモカイン受容体など、特定の共存ＧＰＣＲとの近接性を評価する。このタイプの例示的な例では、ＲＡＧＥポリペプチドは、第１のレポーター成分にカップリング（例えば、コンジュゲート又は他の方法で連結）し、ＡＴ１Ｒなどのアンジオテンシン受容体又はＣＣＲ２などの特定のケモカイン受容体など、特定の共存ＧＰＣＲは、第２のレポーター成分にカップリング（例えば、コンジュゲート又は他の方法で連結）する。第１及び第２のレポーター成分の近接により、検出器による検出が可能なシグナルが生成される。第１及び第２のレポーター成分は、本発明の機能に明らかな影響を与えることなく、第１のレポーター成分が第２のレポーター成分と交換され得るという意味で相補的な対を構成する。第１及び第２のレポーター成分は、同じであるか又は異なり得る。
【０４９２】
一実施形態では、近接スクリーニングアッセイは、Ｒｅｃｅｐｔｏｒ  Ｈｅｔｅｒｏｍｅｒ  Ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｉｏｎ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ又はＲｅｃｅｐｔｏｒ−ＨＩＴ（Ｊａｅｇｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，２０１４）としても知られる、国際公開第２００８０５５３１３号パンフレット（Ｄｉｍｅｒｉｘ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ  Ｐｔｙ  Ｌｔｄ；また米国特許第８２８３１２７号明細書、米国特許第８５６８９９７号明細書、欧州特許第２０８００１２号明細書、カナダ特許第２６６９０８８号明細書、中国特許第１０１６５７７１５号明細書）に記載のものである。この方法では、ＲＡＧＥは第１のレポーター成分にカップリングされ、ＡＴ１Ｒなどのアンジオテンシン受容体又はＣＣＲ２などの特定のケモカイン受容体など、特定の共存ＧＰＣＲは、近接スクリーニングアッセイに関して標識されず、ＧＰＣＲ相互作用基は、相補的な第２のレポーター成分に連結され、複合体とのその相互作用は、非標識ＧＰＣＲ又は特にヘテロマー複合体に選択的なリガンドに結合したときに調節される。ＧＰＣＲ相互作用基の好ましい例は、アレスチン、Ｇタンパク質及びリガンドである。代わりに、ＡＴ１Ｒなどのアンジオテンシン受容体又はＣＣＲ２などの特定のケモカイン受容体などの特定の共存ＧＰＣＲは、第１のレポーター成分にカップリングされ、ＲＡＧＥは、近接スクリーニングアッセイに関して標識されず、ＲＡＧＥ相互作用基は、相補的な第２のレポーター成分に連結され、複合体とのその相互作用は、非標識ＲＡＧＥ又は特にヘテロマー複合体に選択的なリガンドに結合したときに調節される。ＲＡＧＥ相互作用基の好ましい例は、ＩＱＧＡＰ−１、Ｄｉａｐｈａｎｏｕｓ  １、Ｄｏｃｋ７、ＭｙＤ８８、ＴＩＲＡＰ、ＩＲＡＫ４、ＥＲＫ１／２及びＰＫＣζなどのＲＡＧＥの細胞質側テールと相互作用するタンパク質である（Ｊｕｌｅｓ  ｅｔ  ａｌ．，２０１３；Ｒａｍａｓａｍｙ  ｅｔ  ａｌ．，２０１６）。
【０４９３】
レポーター成分は、酵素、発光又は生物発光分子、蛍光分子及び酵素切断部位を組み込んだリンカーによりＲＡＧＥ、特定の共存ＧＰＣＲ又は相互作用基にカップリングした転写因子又は他の分子を含み得る。要するに、それらの空間的近接の結果として検出可能なシグナルを発することができる、有機又は無機のタンパク質性若しくは非タンパク質性又はそれらの複合体の既知の分子である。
【０４９４】
好ましくは、レポーター成分開始剤の存在下で第１及び第２のレポーター成分の近接によって生成されるシグナルは、発光、蛍光及び比色変化からなる群から選択される。
【０４９５】
いくつかの実施形態では、発光は、ルシフェラーゼ、ガラクトシダーゼ、ラクタマーゼ、ペルオキシダーゼ又は適切な基質の存在下で発光可能な任意のタンパク質からなる群から選択される生物発光タンパク質によって産生される。
【０４９６】
第１及び第２のレポーター成分の好ましい組み合わせには、米国特許第８，２８３，１２７号明細書に詳述されているものが含まれるが、第１及び第２のレポーター成分の有用な組み合わせは、決してこれらに限定されるものではない。
【０４９７】
いくつかの実施形態では、スクリーニング方法は、第１及び第２のレポーター成分の相互の近接を検出して、それにより、候補薬剤が、ＲＡＧＥポリペプチドとＡＴ１Ｒなどのアンジオテンシン受容体又はＣＣＲ２などの特定のケモカイン受容体など、特定の共存ＧＰＣＲとの間の相互作用を調節するかどうかを判断することをさらに含む。一般的に、これは、第１及び第２のレポーター成分の近接が、ＲＡＧＥポリペプチドと、ＡＴ１Ｒなどのアンジオテンシン受容体又はＣＣＲ２などの特定のケモカイン受容体など、特定の共存ＧＰＣＲとの間の近接の候補薬剤による調節によって変化された近接シグナルを生成したときに達成される。
【０４９８】
ＡＴ１Ｒなどのアンジオテンシン受容体又はＣＣＲ２などのケモカイン受容体など、ＲＡＧＥ及び特定の共存ＧＰＣＲの一方又は両方は、可溶性形態であるか、又は細胞表面に発現し得る。
【０４９９】
いくつかの実施形態では、ＡＴ１Ｒなどのアンジオテンシン受容体又はＣＣＲ２などの特定のケモカイン受容体など、ＲＡＧＥ及び特定の共存ＧＰＣＲは、単一の膜中に位置するか、又は部分的にその中に位置するか、又はその上に位置し、例えば両方とも宿主細胞の表面で発現される。
【０５００】
本発明の別の実施形態では、ＡＴ１Ｒなどのアンジオテンシン受容体又はＣＣＲ２などの特定のケモカイン受容体など、特定の共存ＧＰＣＲは、細胞膜で事前に形成された複合体において事前にＲＡＧＥと共に組み立てられる。
【０５０１】
本発明の別の実施形態では、ＡＴ１Ｒなどのアンジオテンシン受容体又はＣＣＲ２などの特定のケモカイン受容体など、特定の共存ＧＰＣＲの、ＡＴ１ＲについてＡｎｇ  ＩＩ又はＣＣＲ２についてＭＣＰ−１などの認識リガンドの会合による活性化後、ＲＡＧＥの細胞質側テールに関与するシグナル伝達が引き起こされる。
【０５０２】
本発明の一実施形態では、ＲＡＧＥの細胞質側テールの活性化は、その構造的立体構造及び／又は結合パートナーに対する親和性の変化に関連している。
【０５０３】
本発明の一実施形態では、ＲＡＧＥの構造的立体構造及び／又は結合パートナーに対する親和性のモニタリングは、ＲＡＧＥリガンド又は特定の活性化された共存ＧＰＣＲによるＲＡＧＥリガンド非依存性のＲＡＧＥ活性化によって活性化され得なくなるように、ＲＡＧＥの細胞質側テールが変異及び／又は切断されたときに発生する。
【０５０４】
本発明の一実施形態では、構造的立体構造及び／又は結合パートナーに対する親和性のモニタリングは、ＲＡＧＥリガンド又は特定の活性化された共存ＧＰＣＲによるＲＡＧＥリガンド非依存性のＲＡＧＥ活性化による、ＲＡＧＥの結合及び／又は活性化を阻害する薬剤の存在下で発生する。
【０５０５】
本発明の一実施形態では、結合パートナーの動員のモニタリングは、ＲＡＧＥリガンド又は特定の活性化された共存ＧＰＣＲによるＲＡＧＥリガンド非依存性のＲＡＧＥ活性化によるＲＡＧＥの活性化前に発生する。
【０５０６】
本発明の一実施形態では、シグナル伝達メディエーター及び／又はＲＡＧＥの細胞質側テールへの結合パートナーの動員及び活性化のモニタリングは、ＲＡＧＥリガンド又は特定の活性化された共存ＧＰＣＲによるＲＡＧＥリガンド非依存性のＲＡＧＥ活性化によるＲＡＧＥの活性化後に発生する。
【０５０７】
本発明の一実施形態では、ＲＡＧＥリガンド又は特定の活性化された共存ＧＰＣＲによるＲＡＧＥリガンド非依存性のＲＡＧＥ活性化によるＲＡＧＥの活性化後の結合パートナーの動員のモニタリングは、ＲＡＧＥリガンドによるＲＡＧＥの結合及び／又は活性化を阻害する薬剤の存在下で発生する。
【０５０８】
本発明のさらなる実施形態は、候補薬剤を、ＡＴ１Ｒなどのアンジオテンシン受容体又はＣＣＲ２などの特定のケモカイン受容体など、特定の共存ＧＰＣＲによるＲＡＧＥリガンド非依存性のＲＡＧＥ活性化を調節（活性化、阻害又は他の方法での調節など）するその能力について、ＲＡＧＥに媒介されるシグナル伝達の調節を検出することによってスクリーニングする方法を含む。そのような方法は、以下の１つ以上を測定することにより、ＮＦκＢの標準的な活性化を測定するステップが含まれ得る。
・ＧＳＴ−ＩκＢαなどの基質のインビトロでのリン酸化をモニタリングすることによるＩｋＢキナーゼ（ＩＫＫ）の活性；
・ＩκＢ及び／又はＩκＢ−αのリン酸化／ユビキチン化及び／又は分解を含む、ＩｋＢ分解動態の検出；
・抗体、ゲルシフト、ＥＭＳＡ又は質量分析の使用などによるｐ６５（Ｒｅｌ−Ａ）のリン酸化／ユビキチン化の検出；
・ｐ６５／ホスホｐ６５などのＮＦκＢ成分／サブユニットの細胞質から核への輸送／転移の検出；
・ＮＦκＢサブユニットの二量体化／複合体形成の検出；
・電気泳動移動度シフトアッセイ又はゲルシフトアッセイ、ＳＥＬＥＸ、タンパク質結合マイクロアレイ又は配列に基づくアプローチの使用などによる、ＮＦκＢ応答要素／コンセンサスＮＦκＢ結合を含む固定化ＤＮＡ配列／オリゴヌクレオチドへの結合による活性ＮＦκＢ成分／サブユニットの検出；
・特定の遺伝子のプロモーター及びエンハンサーへの、ＤＮＡへのＮＦκＢのインサイチュー結合を検出するクロマチン免疫沈降（ＣｈＩＰ）アッセイ；
・ＮＦκＢキナーゼ活性に対するインビトロキナーゼアッセイ；
・プラスミド形質導入、レポーター細胞株、ミニサークル、レトロウイルス、レンチウイルスなどのアプローチを使用した、ＬａｃＺ  Ｆｌｕｃ、ｅＧＦＰ  ＳＥＡＰ、ＮＦ−ｇｌｕｃなどのレポーター構築物の導入遺伝子発現を介したＮＦκＢレポーターアッセイを使用したＮＦκＢ転写活性の測定；
・ＮＦκＢの下流標的の発現の変化の測定（サイトカイン、成長因子、接着分子及びリアルタイムＰＣＲによるミトコンドリア抗アポトーシス遺伝子、タンパク質又は機能的アッセイなど）（ＮＦκＢの多面的性質は、現在５００を超える数のその転写標的に反映されていることに注意されたい（ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｂｕ．ｅｄｕ／ｎｆ−ｋｂ／ｇｅｎｅ−ｒｅｓｏｕｒｃｅｓ／ｔａｒｇｅｔ−ｇｅｎｅｓ／、２０１７年８月２日アクセスを参照されたい））；及び
・Ｔ細胞でのＰＯＬＫＡＤＯＴＳ、内皮細胞での接着、白血球での活性化又は腫瘍形成など、ＮＦκＢ依存性シグナル伝達によって誘導される機能又は構造の変化の測定。
【０５０９】
追加又は代替として、このような方法は、以下の１つ以上を測定することにより、ＮＦ−κＢの非標準的作用から生じるシグナルを測定することを含み得る。
・ＮＩＫ（ＮＦκＢ誘導キナーゼ）の検出；
・ＩＫＫαの活性化／リン酸化の検出；
・キナーゼアッセイを実行することによる、基質を自己リン酸化又はリン酸化する能力によるＮＩＫキナーゼ活性の検出；
・ｐ５２／ＲｅｌＢなどのｐ５２含有ＮＦκＢダイマーの生成；
・ホスホＮＦκＢ２ｐ１００（Ｓｅｒ８６６／８７０）の検出；
・前駆体ｐ１００のｐ５２への部分的分解（処理と呼ばれる）の検出；
・核へのｐ５２／ＲｅｌＢ転移の検出；
・κＢ部位へのｐ５２／ＲｅｌＢ結合の検出；
・プラスミド形質導入、レポーター細胞株、ミニサークル、レトロウイルス又はレンチウイルスなどのアプローチを使用した、ＬａｃＺ  Ｆｌｕｃ、ｅＧＦＰ  ＳＥＡＰ、ＮＦ−ｇｌｕｃなどのレポーター構築物の導入遺伝子発現を介したＮＦκＢレポーターアッセイを使用したＮＦκＢ転写活性の測定；
・リアルタイムＰＣＲ、タンパク質発現又は機能的アッセイによるＮＦκＢの非標準シグナル伝達の下流標的（ＣＸＣＬ１２など）の発現の変化の測定。
【０５１０】
別の態様では、本発明は、Ａｎｇ  ＩＩによるＡＴ１Ｒ又はＭＣＰ−１によるＣＣＲ２などの認識リガンドによる特定の共存ＧＰＣＲの活性化後又は特定の共存ＧＰＣＲが構成的に活性である場合、ＲＡＧＥリガンド非依存性のＲＡＧＥ活性化を調節（すなわち活性化、阻害又は他の方法で調節）し、適切にはＡＴ１Ｒなどのアンジオテンシン受容体又はＣＣＲ２などの特定のケモカイン受容体など、特定の共存ＧＰＣＲを調節し、且つ／又はＲＡＧＥポリペプチド又はＲＡＧＥシグナル伝達経路を調節するモジュレーター（活性化剤、阻害剤、アロステリックモジュレーター又は機能的代替物など）を同定する方法を提供する。本発明の好ましい形態では、そのようなモジュレーターは、ＡＴ１Ｒなどのアンジオテンシン受容体若しくはＣＣＲ２などの特定のケモカイン受容体など、ＲＡＧＥ若しくは特定の共存ＧＰＣＲの一方又は両方の阻害剤又はＲＡＧＥシグナル伝達経路の阻害剤である。本発明の特に好ましい形態では、ＲＡＧＥシグナル伝達経路の調節は、Ｇｑシグナル伝達経路などのＡＴ１Ｒシグナル伝達経路又はＧｉシグナル伝達経路などのＣＣＲ２シグナル伝達経路などの古典的な特定の共存ＧＰＣＲシグナル伝達経路の調節と異なり、且つ／又は有意に異なる程度で発生する。本発明の特に好ましい形態では、ＲＡＧＥシグナル伝達経路の阻害は、Ｇｑシグナル伝達経路などのＡＴ１Ｒシグナル伝達経路又はＧｉシグナル伝達経路などのＣＣＲ２シグナル伝達経路などの古典的な特定の共存ＧＰＣＲシグナル伝達経路の阻害と異なり、且つ／又はそれより大きい。
【０５１１】
＜構築物＞
関連する態様では、本発明は、ＲＡＧＥと、ＡＴ１Ｒなどのアンジオテンシン受容体又はＣＣＲ２などの特定のケモカイン受容体など、特定の共存ＧＰＣＲとの間の近接性のモジュレーターを同定するための構築物系を提供する。
【０５１２】
いくつかの実施形態では、これらの構築物系は、第１のコード配列に作動可能に接続された調節配列を含む第１の構築物であって、第１のコーディング配列は、ＲＡＧＥポリペプチドに対応するポリペプチドをコードする核酸配列及び近接シグナル又はエネルギー供与体分子をコードする核酸配列を含む、第１の構築物；並びに第２のコード配列に作動可能に接続された調節配列を含む第２の構築物であって、第２のコーディング配列は、ＡＴ１Ｒなどのアンジオテンシン受容体又はＣＣＲ２などの特定のケモカイン受容体などの特定の共存ＧＰＣＲに対応するポリペプチドをコードする核酸配列及び近接シグナル又はエネルギー受容体分子をコードする核酸配列を含む、第２の構築物を含む。特定の実施形態では、エネルギー供与体分子は、生物発光又は蛍光分子であり、エネルギー受容体分子は、蛍光受容体分子である。
【０５１３】
他の実施形態では、本発明の構築物系は、第１のコード配列に作動可能に接続された調節配列を含む第１の構築物であって、第１のコーディング配列は、ＡＴ１Ｒなどのアンジオテンシン受容体又はＣＣＲ２などの特定のケモカイン受容体などの特定の共存ＧＰＣＲに対応するポリペプチドをコードする核酸配列及び近接シグナル又はエネルギー供与体分子をコードする核酸配列を含む、第１の構築物；並びに第２のコード配列に作動可能に接続された調節配列を含む第２の構築物であって、第２のコーディング配列は、ＲＡＧＥポリペプチドに対応するポリペプチドをコードする核酸配列及び近接シグナル又はエネルギー受容体分子をコードする核酸配列を含む、第２の構築物を含む。特定の実施形態では、エネルギー供与体分子は、生物発光又は蛍光分子であり、エネルギー受容体分子は、蛍光受容体分子である。
【０５１４】
他の実施形態では、本発明の構築物系は、第１のコード配列に作動可能に接続された調節配列を含む第１の構築物であって、第１のコーディング配列は、ＡＴ１Ｒなどのアンジオテンシン受容体又はＣＣＲ２などの特定のケモカイン受容体などの特定の共存ＧＰＣＲに対応するポリペプチドをコードする核酸配列を含む、第１の構築物；並びに第２のコード配列に作動可能に接続された調節配列を含む第２の構築物であって、第２のコーディング配列は、ＲＡＧＥポリペプチドに対応するポリペプチドをコードする核酸配列を含み、これにより、ＲＡＧＥポリペプチドが天然配列の外部ドメインの１つ以上を欠失させた、第２の構築物を含む。
【０５１５】
＜ＲＡＧＥリガンド非依存性のＲＡＧＥ活性化の調節方法＞
関連する態様では、本発明は、動物又は動物起源（ヒト又はヒト起源であってもなくてもよい）の細胞又は組織において、ＡＴ１Ｒなどのアンジオテンシン受容体又はＣＣＲ２などの特定のケモカイン受容体など、活性化された特定の共存ＧＰＣＲによるＲＡＧＥリガンド非依存性のＲＡＧＥ活性化を調節する方法を提供する。
【０５１６】
＜ＲＡＧＥリガンド非依存性のＲＡＧＥ活性化の特異的調節方法＞
別の関連する態様では、本発明は、特に、ＡＴ１Ｒなどのアンジオテンシン受容体又はＣＣＲ２などの特定のケモカイン受容体など、活性化された特定の共存ＧＰＣＲによるＲＡＧＥリガンド非依存性のＲＡＧＥ活性化及びその後の細胞内の下流シグナル伝達経路を調節する方法を提供する。これらの方法は、ＲＡＧＥリガンドがその外部ドメインに結合できないように、又は細胞をＲＡＧＥリガンドのＲＡＧＥへの結合を調節するモジュレーターに曝露することによりＲＡＧＥリガンドのその外部ドメインへの結合が損なわれるようにＲＡＧＥを切断するか又は変異させることを含む。
【０５１７】
本発明の好ましい形態では、ＲＡＧＥリガンド非依存性シグナル伝達経路の調節は、ＲＡＧＥリガンド依存性シグナル伝達経路の調節と異なり、且つ／又はそれより有意に大きい。
【０５１８】
本発明の特に好ましい形態では、ＲＡＧＥリガンド非依存性シグナル伝達経路の阻害は、ＲＡＧＥリガンド依存性シグナル伝達経路の阻害と異なり、且つ／又はそれより有意に大きい。
【０５１９】
＜ＲＡＧＥリガンド依存性及びＲＡＧＥリガンド非依存性の両方のＲＡＧＥ活性化の調節方法＞
別の関連する態様では、本発明は、特定の活性化された共存ＧＰＣＲによるＲＡＧＥリガンド非依存性のＲＡＧＥ活性化を調節することに加え、ＲＡＧＥリガンドによるＲＡＧＥのＲＡＧＥリガンド依存活性化（ＡＧＥ修飾タンパク質、脂質又はＤＮＡ、タンパク質のＳ１００カルグラニュリンファミリーのメンバー、ＨＭＧＢ１、アミロイド及びＭａｃ−１を含む）及び細胞、組織又は動物におけるその後の下流シグナル伝達経路を阻害する方法を提供する。
【０５２０】
本発明の一態様では、これらの方法は、結合相互作用において、ＲＡＧＥの細胞質側テールの代わりに、ＲＡＧＥの細胞質側テールの断片、類似体又は誘導体を含む、本明細書に記載のモジュレーターを使用して、特定の活性化された共存ＧＰＣＲによる、ＲＡＧＥのＲＡＧＥリガンド依存性活性化とＲＡＧＥリガンド非依存性のＲＡＧＥ活性化との両方の活性化を防止することを含む。本発明の一態様では、細胞を、ＲＡＧＥの細胞質側テールへのシグナル伝達要素の結合を阻害する阻害剤に曝露することにより、ＲＡＧＥ依存性シグナル伝達が損なわれ、ＲＡＧＥリガンドが媒介するＲＡＧＥの活性化と、特定の活性化された共存ＧＰＣＲによるＲＡＧＥリガンド非依存性のＲＡＧＥ活性化との両方の阻害をもたらす。
【０５２１】
本発明の一態様では、これらの方法は、ＲＡＧＥの膜貫通ドメインの代わりに、ＲＡＧＥの膜貫通ドメインの断片、類似体又は誘導体を含む、本明細書に記載のモジュレーターを使用して、特定の活性化された共存ＧＰＣＲによる、ＲＡＧＥのＲＡＧＥリガンド依存性活性化とＲＡＧＥリガンド非依存性のＲＡＧＥ活性化との両方の活性化を防止することを含む。本発明の一態様では、モジュレーターは、ＲＡＧＥの膜貫通ドメイン又はその一部及びＲＡＧＥの細胞外ドメインの断片を含む。本発明の一態様では、モジュレーターは、ＲＡＧＥの膜貫通ドメイン又はその一部及びＲＡＧＥの細胞質側テールの断片を含む。本発明の一態様では、モジュレーターは、ＲＡＧＥの膜貫通ドメイン又はその一部、及びＲＡＧＥの細胞外ドメインの断片、及びＲＡＧＥの細胞質側テールの断片を含む。
【０５２２】
本発明の一態様では、特定の活性化された共存ＧＰＣＲによるＲＡＧＥリガンド非依存性のＲＡＧＥ活性化のモジュレーターは、長さが４０アミノ酸以下、２０アミノ酸以下、１０アミノ酸以下又は５アミノ酸以下であるＲＡＧＥのリガンド結合外部ドメインの断片を含有する。
【０５２３】
一態様では、ＲＡＧＥのＲＡＧＥリガンド依存性活性化の阻害は、特定の活性化された共存ＧＰＣＲによるＲＡＧＥリガンド非依存性のＲＡＧＥ活性化の阻害と同時に発生する。
【０５２４】
一態様では、これらの方法は、ＲＡＧＥ又はその類似体、フラグメント若しくは誘導体が野生型ＲＡＧＥの細胞質側テール又はその一部の非機能的代替物となるようなＲＡＧＥのサイレンシング、切断、修飾又は変異を含み、これは、ＲＡＧＥリガンド依存性又はＲＡＧＥリガンド非依存性経路（Ｓ３９１Ａ−ＲＡＧＥ変異など）のいずれによっても活性化されないか、又は下流のＲＡＧＥ依存性シグナル伝達を促進できず、したがってＲＡＧＥの細胞質側テール及びＲＡＧＥ依存シグナル伝達を通して発生するシグナル伝達を阻害する。
【０５２５】
一態様では、これらの方法は、ＲＡＧＥ又はその類似体、フラグメント若しくは誘導体が野生型ＲＡＧＥの膜貫通ドメイン又はその一部の非機能的代替物となるようなＲＡＧＥのサイレンシング、切断、修飾又は変異を含み、これは、ＲＡＧＥリガンド依存性又はＲＡＧＥリガンド非依存性経路のいずれによっても活性化されないか、又は下流のＲＡＧＥ依存性シグナル伝達を促進できず、したがってＲＡＧＥの細胞質側テール及びＲＡＧＥ依存シグナル伝達を通して発生するシグナル伝達を阻害する。本発明の一態様では、モジュレーターは、ＲＡＧＥの膜貫通ドメイン又はその一部及びＲＡＧＥの細胞外ドメインの断片を含む。本発明の一態様では、モジュレーターは、ＲＡＧＥの膜貫通ドメイン又はその一部及びＲＡＧＥの細胞質側テールの断片を含む。本発明の一態様では、モジュレーターは、ＲＡＧＥの膜貫通ドメイン又はその一部、及びＲＡＧＥの細胞外ドメインの断片、及びＲＡＧＥの細胞質側テールの断片を含む。
【０５２６】
一態様では、特定の活性化された共存ＧＰＣＲによるＲＡＧＥリガンド非依存性のＲＡＧＥ活性化のモジュレーターは、長さが４０アミノ酸以下、２０アミノ酸以下、１０アミノ酸以下又は５アミノ酸以下であるＲＡＧＥのリガンド結合外部ドメインの断片を含有する。
【０５２７】
一態様では、これらの方法は、ＲＡＧＥ又はその類似体、フラグメント若しくは誘導体がＲＡＧＥの細胞質側テールによって媒介されるシグナル伝達に関与する一般的な要素（ＰＫＣζ、Ｄｉａｐｈ１、ＭｙＤ８８、ＴＩＲＡＰ、ＮＦκＢなど）を調節するようなＲＡＧＥのサイレンシング、切断、修飾又は変異を含む。ＲＡＧＥリガンド依存性又はＲＡＧＥリガンド非依存性活性化経路のいずれかによるＲＡＧＥの活性化との関連である。
【０５２８】
一態様では、これらの方法は、ＲＡＧＥのＲＡＧＥリガンド依存性活性化（ＲＡＧＥの細胞外ドメインへのＲＡＧＥリガンドの結合を調節するモジュレーターによるものなど）を調節するモジュレーターに加えて、ＡＴ１Ｒなどのアンジオテンシン受容体又はＣＣＲ２などの特定のケモカイン受容体など、活性化された特定の共存ＧＰＣＲによるＲＡＧＥリガンド非依存性のＲＡＧＥ活性化を調節するモジュレーターの使用を含む。
【０５２９】
＜特定の共存ＧＰＣＲを介してＲＡＧＥ非依存性シグナル伝達も調節しつつ、特定の活性化された共存ＧＰＣＲによるＲＡＧＥリガンド非依存性のＲＡＧＥ活性化を調節する方法＞
一態様では、本発明は、特定の活性化された共存ＧＰＣＲによるＲＡＧＥリガンド非依存性のＲＡＧＥ活性化を調節するだけでなく、認識リガンドによる活性化後に誘導されるＲＡＧＥ非依存性の特定の共存ＧＰＣＲシグナル伝達経路をも調節する方法を提供する。
【０５３０】
一形態では、本発明は、特定の活性化された共存ＧＰＣＲによるＲＡＧＥリガンド非依存性のＲＡＧＥ活性化を調節するのと同時に、認識リガンドによる活性化後に誘導されるＲＡＧＥ非依存性の特定の共存ＧＰＣＲシグナル伝達経路を調節する方法を提供する。
【０５３１】
一形態では、認識リガンドによる活性化後に誘導されるＲＡＧＥ非依存性の特定の共存ＧＰＣＲシグナル伝達経路は、Ａｎｇ  ＩＩにより活性化されるＡＴ１ＲなどのＧｑシグナル伝達経路である。別の形態では、ＲＡＧＥ非依存性の特定の共存ＧＰＣＲシグナル伝達経路は、ＭＣＰ−１により活性化されるＣＣＲ２などのＧｉシグナル伝達経路である。別の形態では、ＲＡＧＥ非依存性の特定の共存ＧＰＣＲシグナル伝達経路は、βアレスチン媒介細胞外調節キナーゼ（ＥＲＫ）シグナル伝達である。別の形態では、ＲＡＧＥ非依存性の特定の共存ＧＰＣＲシグナル伝達経路は、細胞内シグナル伝達媒介物（イノシトールリン酸又はカルシウムなど）の変化である。
【図面の簡単な説明】
【０５３２】
【図１Ａ】雄性ａｐｏＥ−ＫＯマウス及びＡＧＥＲ／ａｐｏＥダブルノックアウト（ＤＫＯ）マウスにおける４週間のＡｎｇ  ＩＩ（１μｇ／ｋｇ／ｍｉｎ）又はビヒクル対照注入後のＳｕｄａｎ  ＩＶ染色陽性の大動脈弓表面積の割合として表される定量プラーク面積。
【図１Ｂ】４週間のＡｎｇ  ＩＩ（１μｇ／ｋｇ／ｍｉｎ）又はビヒクル対照注入後のａｐｏＥ−ＫＯマウス及びＡＧＥＲ／ａｐｏＥ−ＤＫＯマウスからの大動脈ホモジネートでのリアルタイムＲＴ−ＰＣＲによって測定される、ＡＧＥＲ自体、接着分子（ＩＣＡＭ−１、ＶＣＡＭ−１）、炎症性サイトカイン及びケモカイン（ＴＮＦα、ＭＣＰ−１及びＩＬ−６）並びにマクロファージマーカー（Ｍａｃ−１／Ｃｄ１１ｂ）を含む、アテローム性動脈硬化誘発メディエーターの発現。
【図１Ｃ】（ｉ）酸化的ＤＮＡ損傷のマーカーであるプラズマ８−ヒドロキシデオキシグアノシン（８−ＯＨ−ｄＧ）、並びに（ｉｉ）大動脈ホモジネートでのリアルタイムＲＴ−ＰＣＲにより推定される、ａｐｏＥ−ＫＯマウス及びＡＧＥＲ／ａｐｏＥ−ＤＫＯマウスの大動脈におけるＮＡＤＰＨオキシダーゼサブユニット、ＮＯＸ−１及びＮＯＸ−４の遺伝子発現の誘導によって推定される、ａｐｏＥ−ＫＯマウス及びＡＧＥＲ／ａｐｏＥ−ＤＫＯマウスにおける４週間のＡｎｇ  ＩＩ（１μｇ／ｋｇ／ｍｉｎ）又はビヒクル対照注入後の酸化ストレスのマーカー。
【図１Ｄ】（ｉ）市販のＥＬＩＳＡによって測定される、Ｓ１００Ａ８／Ａ９の循環血漿レベル、（ｉｉ）自社のＥＬＩＳＡによって測定される、血漿ＡＧＥレベル、（ｉｉｉ）Ａｎｇ  ＩＩ（１μｇ／ｋｇ／ｍｉｎ）又はビヒクルの４週間注入後のａｐｏＥ−ＫＯマウス及びＡＧＥＲ／ａｐｏＥ−ＤＫＯマウスでのＨＰＬＣによって測定される、ＡＧＥ前駆体であるメチルグリオキサールの循環レベルを含む、ＲＡＧＥリガンドの発現。
【図１Ｅ】ａｐｏＥ−ＫＯマウス及びＡＧＥＲ／ａｐｏＥ−ＤＫＯマウスにおける４週間のＡｎｇ  ＩＩ（１μｇ／ｋｇ／ｍｉｎ）又はビヒクル対照注入後の、テールカフプレチスモグラフィーによって測定される収縮期血圧。データは、平均±ＳＥＭ；１群あたりｎ＝８、＊は、対照ａｐｏＥ−ＫＯマウスに対して、＃は、ａｐｏＥ−ＫＯ＋Ａｎｇ  ＩＩに対して、ｐ＜０．０５。
【図２Ａ】６週間の０．０５％（低）ナトリウム食又は通常飼料後のａｐｏＥ−ＫＯマウス及びＡＧＥＲ／ａｐｏＥ−ＤＫＯマウスでのＳｕｄａｎ  ＩＶ染色陽性の大動脈弓表面積の割合として表される定量プラーク面積。
【図２Ｂ】６週間の０．０５％（低）ナトリウム食又は通常飼料後のａｐｏＥ−ＫＯマウス及びＡＧＥＲ／ａｐｏＥ−ＤＫＯマウスの大動脈ホモジネートでのリアルタイムＲＴ−ＰＣＲによって測定される、ＡＧＥＲ自体、接着分子（ＩＣＡＭ−１、ＶＣＡＭ−１）、炎症性サイトカイン及びケモカイン（ＴＮＦα、ＭＣＰ−１及びＩＬ−６）並びにマクロファージマーカー（Ｍａｃ−１／Ｃｄ１１ｂ）を含む、アテローム性動脈硬化誘発メディエーターの発現。
【図２Ｃ】（ｉ）酸化的ＤＮＡ損傷のマーカーであるプラズマ８−ヒドロキシデオキシグアノシン（８−ＯＨ−ｄＧ）、並びに（ｉｉ）大動脈ホモジネートでのリアルタイムＲＴ−ＰＣＲにより推定される、ａｐｏＥ−ＫＯマウス及びＡＧＥＲ／ａｐｏＥ−ＤＫＯマウスの大動脈におけるＮＡＤＰＨオキシダーゼサブユニット、ＮＯＸ−１及びＮＯＸ−４の遺伝子発現の誘導によって推定される、６週間の０．０５％（低）ナトリウム食又は通常飼料後のａｐｏＥ−ＫＯマウス及びＡＧＥＲ／ａｐｏＥ−ＤＫＯマウスでの酸化ストレスのマーカー。
【図２Ｄ】６週間にわたり０．０５％（低）ナトリウム食又は通常飼料に曝露されたａｐｏＥ−ＫＯマウス及びＡＧＥＲ／ａｐｏＥ−ＤＫＯマウスでのＥＬＩＳＡによって測定される、可溶性ＭＣＰ−１及びＩＣＡＭ−１の循環レベル。
【図２Ｅ】動的フローアッセイによって測定される、低ナトリウム食又は通常飼料への１週間前の曝露後のａｐｏＥ−ＫＯマウス及びＡＧＥＲ／ａｐｏＥ−ＤＫＯマウスの大動脈表面にエクスビボで付着する標識白血球の数。
【図２Ｆ】（ｉ）市販のＥＬＩＳＡによって測定される、Ｓ１００Ａ８／Ａ９の循環血漿レベル、（ｉｉ）自社のＥＬＩＳＡによって測定される、血漿ＡＧＥレベル、及び（ｉｉｉ）６週間の０．０５％（低）ナトリウム食又は通常飼料後のａｐｏＥ−ＫＯマウス及びＡＧＥＲ／ａｐｏＥ−ＤＫＯマウスでのＨＰＬＣによって測定される、ＡＧＥ前駆体であるメチルグリオキサールの循環レベルを含む、ＲＡＧＥリガンドの発現。
【図２Ｇ】６週間の０．０５％（低）ナトリウム食又は通常飼料後のａｐｏＥ−ＫＯマウス及びＡＧＥＲ／ａｐｏＥ−ＤＫＯマウスでのテールカフプレチスモグラフィーによって測定される、収縮期血圧。
【図２Ｈ】６週間の０．０５％（低）ナトリウム食又は通常飼料後のａｐｏＥ−ＫＯマウス及びＡＧＥＲ／ａｐｏＥ−ＤＫＯマウスでのラジオイムノアッセイによって測定される、（ｉ）ナトリウム排泄の減少、（ｉｉ）血漿レニン活性の増加、（ｉｉｉ）血漿アルドステロンレベルの増加を含む、ＲＡＡＳの活性化のマーカー。データは、平均±ＳＥＭ；１群あたりｎ＝８、＊は、通常飼料のａｐｏＥ−ＫＯマウスに対して、ｐ＜０．０５。＃は、ａｐｏＥ−ＫＯマウス＋低ナトリウムに対するものである。
【図３Ａ】ラジオイムノアッセイによって測定される、遺伝的Ａｃｅ２欠損を有するか又は有しない、ａｐｏＥ−ＫＯマウス及びＡＧＥＲ／ａｐｏＥ−ＫＯマウスにおける血中Ａｎｇ  ＩＩ濃度。
【図３Ｂ】遺伝的Ａｃｅ２欠損を有するか又は有しない、１８週齢のａｐｏＥ−ＫＯマウス及びＡＧＥＲ／ａｐｏＥ−ＫＯマウスにおける、テールカフプレチスモグラフィーによって測定される収縮期血圧。
【図３Ｃ】遺伝的Ａｃｅ２欠損を有するか又は有しない、１８週齢のａｐｏＥ−ＫＯマウス及びＡＧＥＲ／ａｐｏＥ−ＫＯマウスにおける、Ｓｕｄａｎ  ＩＶ染色陽性の大動脈弓表面積の割合として表される定量プラーク面積。
【図３Ｄ】Ａｃｅ２及び／又はＲＡＧＥの存在下又は非存在下における、ａｐｏＥ−ＫＯマウスからの大動脈ホモジネートでのリアルタイムＲＴ−ＰＣＲによって測定される、ＡＧＥＲ自体、接着分子（ＩＣＡＭ−１、ＶＣＡＭ−１）、炎症性サイトカイン及びケモカイン（ＴＮＦα、ＭＣＰ−１及びＩＬ−６）並びにマクロファージマーカー（Ｍａｃ−１／Ｃｄ１１ｂ）を含む、アテローム性動脈硬化誘発メディエーターの大動脈発現。
【図３Ｅ】酸化的ＤＮＡ損傷のマーカーであるプラズマ８−ヒドロキシデオキシグアノシン（８−ＯＨ−ｄＧ）によって推定される、１８週齢のａｐｏＥ−ＫＯマウス、Ａｃｅ２／ａｐｏＥ−ＤＫＯマウス、ＡＧＥＲ／ａｐｏＥ−ＤＫＯ及びＡｃｅ２／ＡＧＥＲ／ａｐｏＥトリプルＫＯ（ＴＫＯ）マウスの酸化ストレス。
【図３Ｆ】（ｉ）市販のＥＬＩＳＡによって測定される、Ｓ１００Ａ８／Ａ９の循環血漿レベル、（ｉｉ）１８週齢のａｐｏＥ−ＫＯマウス、Ａｃｅ２／ａｐｏＥ−ＤＫＯマウス、ＡＧＥＲ／ａｐｏＥ−ＤＫＯ及びＡｃｅ２／ＡＧＥＲ／ａｐｏＥ  ＴＫＯマウスにおいて、自社のＥＬＩＳＡによって測定される、血漿ＡＧＥレベルを含む、ＲＡＧＥリガンドの発現。データは、平均±ＳＥＭ；１群あたりｎ＝８、＊は、ａｐｏＥ−ＫＯ対照に対して；＃は、Ａｃｅ２／ａｐｏＥ−ＤＫＯマウスに対するものである。
【図４Ａ】Ａｎｇ  ＩＩ又はビヒクルにエクスビボで曝露した後の大動脈ホモジネートでのリアルタイムＲＴ−ＰＣＲにより測定される、ａｐｏＥ−ＫＯマウス及びＡＧＥＲ／ａｐｏＥ−ＤＫＯにおける、ＡＧＥＲ自体、接着分子（ＩＣＡＭ−１、ＶＣＡＭ−１）、炎症性サイトカイン及びケモカイン（ＴＮＦα、ＭＣＰ−１及びＩＬ−６）並びにマクロファージマーカー（Ｍａｃ−１／Ｃｄ１１ｂ）を含む、アテローム性動脈硬化誘発メディエーターの大動脈発現。データは、平均±ＳＥＭ；１群あたりｎ＝６、＊は、未処置ａｐｏＥ−ＫＯ対照に対して；＃は、ａｐｏＥ−ＫＯ＋Ａｎｇ  ＩＩに対して；ｐ＜０．０５。
【図４Ｂ】動的フローアッセイによって測定される、Ａｎｇ  ＩＩ（１μＭ）又はビヒクル対照への４時間のエクスビボ曝露後の内皮活性化のマーカーとしての、ａｐｏＥ−ＫＯマウス及びＡＧＥＲ／ａｐｏＥ−ＤＫＯの大動脈表面に付着する標識白血球の数。データは、平均±ＳＥＭ；１群あたりｎ＝６、＊は、未処置ａｐｏＥ−ＫＯ対照に対して；＃は、ａｐｏＥ−ＫＯ＋Ａｎｇ  ＩＩに対するＡＧＥＲ／ａｐｏＥ−ＤＫＯ＋Ａｎｇ  ＩＩである；ｐ＜０．０５。
【図４Ｃ】Ａｎｇ  ＩＩによる前処理（１μＭで２時間）の存在下又は非存在下における、Ｃ５７ｂｌ６又はＡＧＥＲ−ＫＯマウスからの一次マウス大動脈内皮細胞（ＰＭＡＥＣ）の単層に付着した標識ＴＨＰ−１単球の数。
【図４Ｄ】Ｃ５７ｂｌ６からの一次マウス大動脈内皮細胞（ＰＭＡＥＣ）及びＡｎｇ  ＩＩ（１μＭ）又はビヒクル対照への曝露後のＡＧＥＲ−ＫＯマウスからのＰＭＡＥＣでのリアルタイムＲＴ−ＰＣＲにより測定される、ＡＧＥＲ自体、重要な接着分子（ＩＣＡＭ−１、ＶＣＡＭ−１）、炎症性サイトカイン及びケモカイン（ＴＮＦα及びＭＣＰ−１）を含む、アテローム性動脈硬化誘発メディエーターの発現。
【図４Ｅ】（ｉ）フローチャンバーアッセイにおけるＤＣＦＨ蛍光の誘導、及び（ｉｉ）ＧＴＰ活性化ＮＡＤＰＨオキシダーゼサブユニット、Ｒａｃ−１のレベル、及び（ｉｉｉ）酸化型グルタチオンのレベルによって推定される、ｃ５７ｂｌ６マウス及びＡＧＥＲ−ＫＯマウスからのＰＭＡＥＣにおけるＡｎｇ  ＩＩ又はビヒクル対照への曝露後の酸化ストレスのマーカー。
【図４Ｆ】Ａｎｇ  ＩＩへの曝露後のＣ５７ｂｌ６及びＡＧＥＲ−ＫＯマウスからの一次マウス大動脈内皮細胞（ＰＭＡＥＣ）の単層における、ＶＣＡＭ−１及びＮＦκＢ（それぞれＣＸＣＬ１２及びＣＸＣＬ２）を介した非標準及び標準シグナル伝達のマーカーの遺伝子発現。リアルタイムＲＴ−ＰＣＲによって測定されるＰＭＡＥＣ。ＴＮＦαは、標準的な特定の対照として示される。ＶＣＡＭ−１は、図４Ｄでデータを複製する標的特異的対照として示される。
【図４Ｇ】リアルタイムＲＴ−ＰＣＲによって測定される、ＲＡＧＥリガンド、Ｓ１００Ａ８／Ａ９（５ｎｇ／ｍＬ）で処置されたＣ５７ｂｌ６及びＡＧＥＲ−ＫＯマウスからの一次マウス大動脈内皮細胞（ＰＭＡＥＣ）における、接着分子（ＩＣＡＭ−１、ＶＣＡＭ−１）及び炎症性サイトカイン及びケモカイン（ＴＮＦα及びＭＣＰ−１）を含む、アテローム性動脈硬化誘発メディエーターの発現。データは、平均±ＳＥＭ；１群あたりｎ＝６、記号は、＊が未処置野生型ＰＭＡＥＣに対して；＃がＳ１００Ａ８／Ａ９で処置された野生型ＰＭＡＥＣに対するものを意味する、ｐ＜０．０５。
【図４Ｈ】リアルタイムＲＴ−ＰＣＲによって推定される、ＲＡＧＥ若しくはＮＦκＢサブユニットｐ６５の発現がｓｉＲＮＡを用いて選択的にサイレンシングされたか、又は変化させず（スクランブルＲＮＡ対照）、続いてＡｎｇ  ＩＩ（１μＭ）若しくはＲＡＧＥリガンド、Ｓ１００Ａ８／Ａ９（５ｎｇ／ｍＬ）に曝露された、ＰＭＡＥＣの単層における重要な接着タンパク質であるＶＣＡＭ−１の遺伝子発現。
【図４Ｉ】（ｉ）ＩＰ−１によって推定されるイノシトールリン酸合成の誘導、及び（ｉｉ）初期増殖応答遺伝子（ＥＧＲ１）の下流誘導を含む、ｃ５７ｂｌ６マウス及びＡＧＥＲ−ＫＯマウスからのＰＭＡＥＣの単層におけるＡｎｇ  ＩＩ（１μＭ）によるＡＴ１Ｒの活性化後に誘導されるＧｑ媒介シグナル伝達のマーカー。データは、平均±ＳＥＭ；１群あたりｎ＝６、特に明記しない限り、＊は、未処置野生型対照ＰＭＡＥＣに対して、＃は、Ａｎｇ  ＩＩ処置野生型対照に対して、ｐ＜０．０５。
【図５Ａ】全長型ヒトＲＡＧＥの追加的な発現を伴い又は伴わず、ヒトＡＴ１Ｒの発現の存在下又は非存在下において、ＣＨＯ細胞のＩＰ−１レベルによって推定される、外因性Ａｎｇ  ＩＩに対する古典的な反応性のマーカーである、Ａｎｇ  ＩＩ（１μＭ）に反応したイノシトールリン酸合成の誘導。
【図５Ｂ】全長型ヒトＲＡＧＥの追加的な発現を伴い又は伴わず、ヒトＡＴ１Ｒの発現の存在下又は非存在下において、ＣＨＯ細胞におけるＥＧＲ１遺伝子の下流誘導によって推定される、外因性Ａｎｇ  ＩＩに対する反応性のマーカーである、Ａｎｇ  ＩＩ（１μＭ）に反応したＥＧＲ１発現の誘導。
【図５Ｃ】（ｉ）化学発光ＳＥＡＰレポーター遺伝子アッセイ、及び（ｉｉ）全長型ヒトＲＡＧＥの追加的な発現を伴い又は伴わない、ヒトＡＴ１ＲのＣＨＯ細胞における発現の存在下又は非存在下におけるＮＦκＢサブユニットｐ６５の遺伝子発現の誘導、及び（ｉｉｉ）ＣＨＯ細胞におけるＲＡＧＥシグナル伝達の完全性の対照としてのＲＡＧＥリガンド、Ｓ１００Ａ８／Ａ９（５ｎｇ／ｍＬ）への曝露後によって測定される、Ａｎｇ  ＩＩ（１μＭ）への曝露後のＮＦκＢ活性化。
【図５Ｄ】全長ヒトＲＡＧＥ及びＮ末端トランケート型ｍＣｈｅｒｒｙ−ＲＡＧＥ構築物の発現の存在下又は非存在下において、ＮＦκＢサブユニットｐ６５の遺伝子発現の誘導及びＮＦκＢ活性の化学発光ＳＥＡＰレポーター遺伝子アッセイによって測定される、ＡＴ１Ｒ−ＣＨＯ細胞におけるＡｎｇ  ＩＩ（１μＭ）への曝露後のＮＦκＢ活性化。データは、平均±ＳＥＭ、１群あたりｎ＝６、＊は、ベクター（ｎｅｏ）−形質導入ＡＴ１Ｒ−ＣＨＯに対して、ｐ＜０．０５。
【図５Ｅ】全長ヒトＲＡＧＥ及びＣ欠損型ｍＣｈｅｒｒｙ−ＲＡＧＥ構築物の発現の存在下又は非存在下において、ＮＦκＢサブユニットｐ６５の遺伝子発現の誘導及びＮＦκＢ活性の化学発光ＳＥＡＰレポーター遺伝子アッセイによって推定される、ＡＴ１Ｒ−ＣＨＯにおけるＡｎｇ  ＩＩ（１μＭ）への曝露後のＮＦκＢ活性化。データは、平均±ＳＥＭ、１群あたりｎ＝６、＊は、ベクター（ｎｅｏ）−形質導入ＡＴ１Ｒ−ＣＨＯに対して、ｐ＜０．０５。
【図５Ｆ】全長ヒトＲＡＧＥ及びＮ末端トランケート型ｍＣｈｅｒｒｙ−ＲＡＧＥ構築物の発現の存在下又は非存在下において、ＮＦκＢサブユニットｐ６５の遺伝子発現の誘導によって推定される、ＡＴ１Ｒ−ＣＨＯにおけるＳ１００Ａ８／Ａ９（５ｎｇ／ｍＬ）又はＡｎｇ  ＩＩ（１μＭ）への曝露後のＮＦκＢ活性化。データは、平均±ＳＥＭ、１群あたりｎ＝６、＊は、ベクター（ｎｅｏ）−形質導入ＡＴ１Ｒ−ＣＨＯに対して、ｐ＜０．０５。
【図５Ｇ】全長ヒトＲＡＧＥ及びＣ欠損型ｍＣｈｅｒｒｙ−ＲＡＧＥ構築物の発現の存在下又は非存在下において、ＮＦκＢサブユニットｐ６５の遺伝子発現の誘導によって推定される、ＡＴ１Ｒ−ＣＨＯにおけるＳ１００Ａ８／Ａ９（５ｎｇ／ｍＬ）又はＡｎｇ  ＩＩ（１μＭ）への曝露後のＮＦκＢ活性化。データは、平均±ＳＥＭ、１群あたりｎ＝６、＊は、ベクター（ｎｅｏ）−形質導入ＡＴ１Ｒ−ＣＨＯに対して、ｐ＜０．０５。
【図５Ｈ】ｍＣｈｅｒｒｙと融合していないＮ末端トランケート型ＲＡＧＥ構築物の発現の存在下において、ＮＦκＢサブユニットｐ６５の遺伝子発現の誘導によって推定される、ＡＴ１Ｒ−ＣＨＯにおけるＡｎｇ  ＩＩ（１μＭ）への曝露後のＮＦκＢ活性化。データは、平均±ＳＥＭ；１群あたりｎ＝６、＊は、特に明記しない限り、未処置ＡＴ１Ｒ−ＣＨＯに対して、ｐ＜０．０５。
【図６Ａ】ＲＡＧＥの細胞外ドメイン（ＲＡＧＥａｂ）又はリガンド結合親和性を有するデコイ受容体（可溶性ＲＡＧＥ２２−３３１）を標的とするＲＡＧＥ中和抗体は、ＲＴ−ＰＣＲによって測定されるＮＦκＢサブユニットｐ６５の発現によって推定されるように、ＲＡＧＥ−ＡＴ１Ｒ−ＣＨＯ細胞においては、ＲＡＧＥリガンドＳ１００Ａ８／Ａ９によるが、Ａｎｇ  ＩＩ（１μＭ）によらず、炎症促進性シグナル伝達の誘導を阻害する。データは、平均±ＳＥＭを示す；１群あたりｎ＝６、＊は、ビヒクル単体に対して、ｐ＜０．０５。
【図６Ｂ】ＲＡＧＥの細胞外ドメイン（ＲＡＧＥａｂ）又はリガンド結合親和性を有するデコイ受容体（可溶性ＲＡＧＥ２２−３３１；ｓＲＡＧＥ）を標的とするＲＡＧＥ中和抗体は、主要な接着遺伝子であるＩＣＡＭ−１及びＶＣＡＭ−１並びに炎症性ケモカイン遺伝子（ＭＣＰ−１）の誘導によって推定されるように、野生型マウスからのＰＭＡＥＣにおいては、Ａｎｇ  ＩＩ（１μＭ）により炎症促進性シグナル伝達の誘導を阻害しない。ＡＧＥＲ−ＫＯマウスからのデータがネガティブコントロールとして示されている。データは、平均±ＳＥＭを示す；１群あたりｎ＝６、＊は、ビヒクル単体で処置された対照細胞に対して（白のバー）、＃は、Ａｎｇ  ＩＩ単体で処置された対照細胞に対して、ｐ＜０．０５。
【図６Ｃ】ＲＡＧＥの細胞外ドメイン（ＲＡＧＥａｂ）又はリガンド結合親和性を有するデコイ受容体（可溶性ＲＡＧＥ２２−３３１）を標的とするＲＡＧＥ中和抗体は、主要な接着遺伝子であるＩＣＡＭ−１の誘導によって推定されるように、野生型マウスからのＰＭＡＥＣにおいては、ＲＡＧＥリガンドＳ１００Ａ８／Ａ９により炎症促進性シグナル伝達の誘導を阻害する。データは、平均±ＳＥＭを示す；１群あたりｎ＝６、＊は、ビヒクル単体で処置された対照細胞に対して（白のバー）、＃は、Ｓ１００Ａ８／Ａ９単体で処置された対照細胞に対して、ｐ＜０．０５。
【図７Ａ】ＮＦκＢサブユニットｐ６５の遺伝子発現の誘導によって測定される、全長野生型ＲＡＧＥ２２−４０４又は選択されたＳ３９１−ＲＡＧＥ２２−４０４変異体も発現するＡＴ１Ｒ−ＣＨＯ細胞におけるＲＡＧＥリガンドＳ１００Ａ８／Ａ９（５ｎｇ／ｍｌ；灰色のバー）又はＡｎｇ  ＩＩ（１μＭ；黒のバー）による炎症性シグナル伝達の誘導。データは、平均±ＳＥＭを示す；１群あたりｎ＝６〜８、＊は、全長ＲＡＧＥを発現するビヒクル処置ＡＴ１Ｒ−ＣＨＯ細胞に対して、ｐ＜０．０５。
【図７Ｂ】ＡＴ１Ｒ−ＣＨＯ細胞において、ＮＦκＢサブユニットｐ６５の遺伝子発現の誘導によって測定される、Ｓ３９１（キメラＲＡＧＥ；ｃＲＡＧＥ）以外の細胞質側テールにリン酸化可能なモチーフを欠くキメラＲＡＧＥ及び細胞質側テールにいかなるリン酸化可能なモチーフも完全に欠くＳ３９１−ｃＲＡＧＥ変異体も発現するＡＴ１Ｒ−ＣＨＯ細胞におけるＲＡＧＥリガンドＳ１００Ａ８／Ａ９（５ｎｇ／ｍｌ）又はＡｎｇ  ＩＩ（１μＭ）による炎症促進性シグナル伝達の誘導。データは、平均±ＳＥＭを示す；１群あたりｎ＝６〜８、＊は、全長キメラＲＡＧＥを発現するビヒクル処置ＡＴ１Ｒ−ＣＨＯ細胞に対して；ｐ＜０．０５。
【図７Ｃ】ＮＦκＢサブユニットｐ６５の遺伝子発現の誘導によって測定される、全長又はＮ末端トランケート型Ｓ３９１Ａ−ＲＡＧＥ変異体も発現するＡＴ１Ｒ−ＣＨＯ細胞におけるＡｎｇ  ＩＩ（１μＭ）による炎症促進性シグナル伝達の誘導。データは、平均±ＳＥＭを示す；１群あたりｎ＝６〜８、＊は、ベクター形質導入ＡＴ１Ｒ−ＣＨＯ細胞に対して、ｐ＜０．０５。
【図７Ｄ】ＮＦκＢサブユニットｐ６５の遺伝子発現の誘導によって測定される、Ｓ３９１−ＲＡＧＥ３６２−４０４変異体も発現するＡＴ１Ｒ−ＣＨＯ細胞における野生型ｍＣｈｅｒｒｙ−ＲＡＧＥ３６２−４０４の存在下でのＡｎｇ  ＩＩ（１μＭ）による炎症促進性シグナル伝達の誘導。データは、平均±ＳＥＭを示す；１群あたりｎ＝６〜８、＊は、ビヒクル対照に対して、ｐ＜０．０５。
【図８Ａ】リアルタイムＲＴ−ＰＣＲによって測定されるＩＣＡＭ−１の発現によって推定される、Ｃ５７ｂｌ６マウスからのＰＭＡＥＣの単層におけるＲＡＧＥリガンドＳ１００Ａ８／Ａ９（５ｎｇ／ｍｌ）による炎症性シグナル伝達のＲＡＧＥリガンド依存性誘導の誘導に対するｓｉＲＮＡ又はスクランブル対照を使用したＭｙＤ８８発現の選択的抑制の効果。ｓｉＲＮＡを使用したＲＡＧＥシグナル伝達の別の下流メディエーターである、ｐ６５発現の選択的抑制は、ポジティブコントロールとして示されている。
【図８Ｂ】リアルタイムＲＴ−ＰＣＲによって測定されるＩＣＡＭ−１の発現によって推定される、Ａｎｇ  ＩＩ（１μＭ）による炎症性シグナル伝達のＲＡＧＥリガンド非依存性誘導の誘導に対するＣ５７ｂｌ６マウスからのＰＭＡＥＣの単層におけるｓｉＲＮＡ又はスクランブル対照を使用したＭｙＤ８８発現の選択的抑制の効果。
【図８Ｃ】リアルタイムＲＴ−ＰＣＲによって測定されるＭＣＰ−１の発現によって推定される、ＲＡＧＥ３６２−４０４の存在下及び非存在下におけるＡｎｇ  ＩＩ（１μＭ）による炎症性シグナル伝達のＲＡＧＥリガンド非依存性誘導の誘導に対するＨＭＥＣの単層におけるｓｉＲＮＡ又はスクランブル対照を使用したＭｙＤ８８発現の選択的抑制の効果。データは、平均±ＳＥＭ；１群あたりｎ＝６〜８、＊は、スクランブル対照に対して、ｐ＜０．０５。
【図９Ａ】リアルタイムＲＴ−ＰＣＲによって測定されるＩＣＡＭ−１の発現によって推定される、ＲＡＧＥリガンドＳ１００Ａ８／Ａ９によるＲＡＧＥリガンド依存性シグナル伝達の誘導に対する、Ｃ５７ｂｌ６マウスからのＰＭＡＥＣの単層におけるＰＫＣζ（ｉＰＫＣｚ）の偽基質又はＰＫＣζ（ｓｉＰＫＣｚ）若しくはＲＡＧＥ（ｓｉＲＡＧＥ）若しくはスクランブル対照の発現を標的とするｓｉＲＮＡを使用したＰＫＣζの選択的抑制の効果。
【図９Ｂ】リアルタイムＲＴ−ＰＣＲによって測定されるＩＣＡＭ−１の遺伝子発現によって推定される、Ａｎｇ  ＩＩ（１μＭ）による炎症性シグナル伝達のＲＡＧＥリガンド非依存性誘導に対するＣ５７ｂｌ６マウスからのＰＭＡＥＣの単層における、ＰＫＣζ（ｉＰＫＣζ）の偽基質又はＰＫＣζ（ｓｉＰＫＣζ）を標的とするｓｉＲＮＡを使用した、ＰＫＣζ発現の選択的抑制の効果。列１及び２には、スクランブルｓｉＲＮＡ対照が含まれる。
【図９Ｃ】リアルタイムＲＴ−ＰＣＲによって測定されるＲｅｌＡ／ｐ６５及びＰＣＮＡの遺伝子発現によって推定される、Ｓ３９１（ｃＲＡＧＥ）以外の細胞質側テールにリン酸化可能なモチーフを欠くキメラＲＡＧＥ及びＳ３９１Ｑ−ＲＡＧＥ変異（Ｓ３１９Ｑ−ｃＲＡＧＥ）も含有し、それにより細胞質側テールの全てのリン酸化部位を除去するｃＲＡＧＥを発現するＣＨＯ細胞における、Ａｎｇ  ＩＩ（１μＭ）によるｐ６５及びＰＣＮＡのＲＡＧＥリガンド非依存性誘導に対するＰＫＣζ（ＰＫＣζｉ）の偽基質を使用したＰＫＣζ発現の選択的抑制の効果。
【図９Ｄ】リアルタイムＲＴ−ＰＣＲによって測定されるＭＣＰ−１の発現によって推定される、ＲＡＧＥ３６２−４０４の存在下及び非存在下におけるＡｎｇ  ＩＩ（１μＭ）による炎症性シグナル伝達のＲＡＧＥリガンド非依存性誘導の誘導に対するＨＭＥＣの単層におけるｓｉＲＮＡ又はスクランブル対照を使用したＰＫＣζ発現の選択的抑制の効果。データは、平均±ＳＥＭ；１群あたりｎ＝６〜８、＊は、未処置対照に対して、ｐ＜０．０５。
【図１０Ａ】リアルタイムＲＴ−ＰＣＲによって測定されるＩＣＡＭ−１の発現によって推定される、ＲＡＧＥリガンドＳ１００Ａ８／Ａ９によるＲＡＧＥリガンド依存性シグナル伝達の誘導に対する、Ｃ５７ｂｌ６マウスからのＰＭＡＥＣの単層におけるｓｉＲＮＡを使用したＤｉａｐｈ１発現の選択的抑制の効果。ｓｉＲＡＧＥのデータは、対照として含まれている。
【図１０Ｂ】ＡＴ１Ｒ−ＣＨＯ細胞における、ＲＡＧＥリガンドＳ１００Ａ８／Ａ９によって誘導されるシグナル伝達及びＡｎｇ  ＩＩによって誘導されるＲＡＧＥリガンド非依存性シグナル伝達に対する、荷電パッチであって、それを介してＤｉａｐｈ１とＲＡＧＥが推定的に相互作用するものを選択的に破壊するＲ３６６Ａ−Ｑ３６７Ａ−ＲＡＧＥ変異の特異的効果。
【図１０Ｃ】リアルタイムＲＴ−ＰＣＲによって測定されるＩＣＡＭ−１及びＶＣＡＭ−１の発現によって推定される、Ａｎｇ  ＩＩ（１μＭ）によって誘導されるＲＡＧＥリガンド非依存性シグナル伝達の誘導に対する、Ｃ５７ｂｌ６マウスからのＰＭＡＥＣの単層におけるｓｉＲＮＡを使用したＤｉａｐｈ１発現の選択的抑制の効果。データは、平均±ＳＥＭ；１群あたりｎ＝６、＊は、スクランブル対照に対して、ｐ＜０．０５。
【図１０Ｄ】Ａｎｇ  ＩＩへの暴露後の内皮単層への白血球接着の誘導に対する、ＳＶＥＣの単層における、スクランブル制御とは対照的に、ｓｉＲＮＡを使用した、Ｄｉａｐｈ１又はＡＧＥＲ発現の選択的抑制。データは、平均±ＳＥＭ；１群あたりｎ＝６〜８、＊は、スクランブル対照に対して、ｐ＜０．０５。
【図１０Ｅ】ＡＴ１Ｒ−ＣＨＯ細胞において、ＮＦκＢサブユニットｐ６５の遺伝子発現の誘導によって測定される、Ａｎｇ  ＩＩによって誘導されるシグナル伝達に対する、荷電パッチであって、それを介してＤｉａｐｈ１とＲＡＧＥが推定的に相互作用するものが破壊又は欠失されるＲ３６６Ａ−Ｑ３６７Ａ−ＲＡＧＥ変異体による形質導入の効果。データは、平均±ＳＥＭ；１群あたりｎ＝６、＊は、ｍＣｈｅｒｒｙ対照に対して、ｐ＜０．０５。
【図１０Ｆ】リアルタイムＲＴ−ＰＣＲによって測定されるＭＣＰ−１の発現によって推定される、ＲＡＧＥ３６２−４０４の存在下及び非存在下におけるＡｎｇ  ＩＩ（１μＭ）による炎症性シグナル伝達のＲＡＧＥリガンド非依存性誘導の誘導に対するＨＭＥＣの単層におけるｓｉＲＮＡ又はスクランブル対照を使用したＤｉａｐｈ１発現の選択的抑制の効果。データは、平均±ＳＥＭ；１群あたりｎ＝６〜８、＊は、スクランブルｓｉＲＮＡで処置したビヒクル対照に対して、ｐ＜０．０５。
【図１０Ｇ】ＮＦκＢサブユニットｐ６５の遺伝子発現の誘導によって測定される、Ａｎｇ  ＩＩによって誘導されるシグナル伝達に対する、阻害性ペプチドＳ３９１Ａ−ＲＡＧＥ３６２−４０４で前処理されたＡＴ１Ｒ−ＣＨＯ細胞における、全長型ＲＡＧＥ、トランケート型ＲＡＧＥ又はＲＡＧＥ変異体による形質導入の効果。データは、平均±ＳＥＭ；１群あたりｎ＝６〜８、＊は、ｍＣｈｅｒｒｙ対照に対して、ｐ＜０．０５。特に明記しない限り、データは、平均±ＳＥＭ；１群あたりｎ＝６〜８、＊は、ビヒクル対照に対して、ｐ＜０．０５。
【図１１Ａ】リアルタイムＲＴ−ＰＣＲによって測定されるＩＣＡＭ−１の発現によって推定される、Ａｎｇ  ＩＩ（１μＭ）による炎症性シグナル伝達のＲＡＧＥリガンド非依存性誘導の誘導に対するＣ５７ｂｌ６マウスからのＰＭＡＥＣの単層における、スクランブル対照と対比した、ＩＱＧＡＰ−１を標的とするｓｉＲＮＡを使用したＩＱＧＡＰ−１発現の選択的抑制の効果。
【図１１Ｂ】リアルタイムＲＴ−ＰＣＲによって測定されるＩＣＡＭ−１及びＶＣＡＭ−１の発現によって推定される、ＲＡＧＥリガンドＳ１００Ａ８／Ａ９による炎症性シグナル伝達のＲＡＧＥリガンド依存性誘導の誘導に対するＣ５７ｂｌ６マウスからのＰＭＡＥＣの単層における、スクランブル対照と対比した、ｓｉＲＮＡを使用したＩＱＧＡＰ−１発現の選択的抑制の効果。
【図１１Ｃ】変異体ＲＡＧＥの細胞質側テール（Ｓ３９１Ａ−ＲＡＧＥ３６２−４０４）でコーティングされたカラムを使用して他のサイトゾル成分からＩＱＧＡＰ−１として同定されるタンパク質並びにＩＱＧＡＰ−１関連タンパク質、エズリン／ラディキシン／モエシン及びＧＰＣＲ嗅覚受容体２Ｔ２のプルダウン。
【図１１Ｄ】リアルタイムＲＴ−ＰＣＲによって測定されるＭＣＰ−１の発現によって推定される、ＲＡＧＥ３６２−４０４の存在下及び非存在下におけるＡｎｇ  ＩＩ（１μＭ）による炎症性シグナル伝達のＲＡＧＥリガンド非依存性誘導の誘導に対するＨＭＥＣの単層におけるｓｉＲＮＡ又はスクランブル対照を使用したＩＱＧＡＰ−１発現の選択的抑制の効果。データは、平均±ＳＥＭ；１群あたりｎ＝６〜８、＊は、スクランブル対照に対して、ｐ＜０．０５、＃は、スクランブル＋リガンド（Ａｎｇ  ＩＩ又は適切な場合にはｓ１００Ａ８／Ａ９）に対して、ｐ＜０．０５。
【図１２Ａ】ＲＴ−ＰＣＲによって測定される、対照としてのベクター単体（ｐｃ−Ｎｅｏ）と比較した、Ａｎｇ  ＩＩによるＩＣＡＭ−１の誘導に対するマウスＳＶＥＣのＲＡＧＥ又はＲＡＧＥ変異体による形質導入の効果。データは、平均±ＳＥＭ；１群あたりｎ＝６〜８、＊は、未処置対照に対して；＃は、ｎｅｏ＋Ａｎｇ  ＩＩに対して、ｐ＜０．０５。
【図１２Ｂ】阻害活性を有する最小の断片を同定するための、マウスＳＶＥＣにおけるＡｎｇ  ＩＩによるＩＣＡＭ−１の誘導に対するトランケート型ＲＡＧＥ変異体による形質導入の効果。データは、平均±ＳＥＭ；１群あたりｎ＝６〜８、＊は、未処置対照に対して、ｐ＜０．０５。
【図１２Ｃ】ｍＣｈｅｒｒｙと融合していない変異体及びＮ末端トランケート型ＲＡＧＥ構築物の発現の存在下において、ＮＦκＢサブユニットｐ６５の遺伝子発現の誘導によって推定される、ＲＡＧＥ−ＡＴ１Ｒ−ＣＨＯにおけるＡｎｇ  ＩＩ（１μＭ）への曝露後のＮＦκＢ活性化の阻害。データは、平均±ＳＥＭ；１群あたりｎ＝６〜８、＊は、未処置対照に対して、ｐ＜０．０５。
【図１２Ｄ】マウスＳＶＥＣのＡｎｇ  ＩＩによるＩＣＡＭ−１の誘導に対するＲＡＧＥ３７０−３９０の単一部位特異的アラニン又はリジン変異体による形質導入の効果。データは、平均±ＳＥＭ；１群あたりｎ＝６〜８、＊は、未処置対照に対して、ｐ＜０．０５。
【図１２Ｅ】ＲＡＧＥ３７９−３９０とストレプトマイセスの抗炎症タンパク質及び他の微生物からのタンパク質との配列相同性。
【図１３Ａ】ＴＡＴ−Ｃｈｅｒｒｙ単体（８μｇ）と比較した場合の、ＡＴ１Ｒ−ＣＨＯ細胞におけるＡｎｇ  ＩＩ（１μＭ；黒のバー）によるＮＦκＢサブユニットｐ６５の遺伝子発現の誘導に対する、Ｓ３９１Ａ−ＲＡＧＥ変異を伴わない又は伴うＴＡＴ−ｍＣｈｅｒｒｙ−ＲＡＧＥ３６２−４０４（０．４ｎｇ／ｍｌ）の効果。データは、平均±ＳＥＭ；１群あたりｎ＝６〜８、＊は、未処置対照に対して、ｐ＜０．０５。
【図１３Ｂ】ＡＴ１Ｒ−ＣＨＯ細胞におけるＮＦκＢサブユニットｐ６５の遺伝子発現のＡｎｇ  ＩＩ依存性誘導に対するＳ３９１Ａ−ＲＡＧＥ３６２−４０４ペプチドによって達成されるシグナル伝達の阻害は、野生型ＲＡＧＥ３６２−４０４ペプチドでの前処置によって逆転しない。データは、平均±ＳＥＭ；１群あたりｎ＝６〜８、＊は、未処置対照に対して；ｐ＜０．０５。
【図１３Ｃ】ＡＴ１Ｒ−ＣＨＯ細胞におけるＮＦκＢサブユニットｐ６５の遺伝子発現のＡｎｇ  ＩＩ依存性誘導に対するＳ３９１Ａ−ＲＡＧＥ３６２−４０４ペプチドによって達成されるシグナル伝達の阻害は、千倍過剰の野生型ＲＡＧＥ３６２−４０４ペプチドでの後処置にかかわらず観察される。データは、平均±ＳＥＭ；１群あたりｎ＝６〜８、＊は、未処置対照に対して、ｐ＜０．０５。
【図１３Ｄ】リン酸化に利用可能な標的のない全長型Ｓ３９１Ｑ−ｃＲＡＧＥで形質導入したＡＴ１Ｒ−ＣＨＯ細胞におけるＡｎｇ  ＩＩに応答したｐ６５及びＰＣＮＡ遺伝子発現の誘導に対するＳ３９１Ａ−ＲＡＧＥ３６２−４０４ペプチドの阻害効果。データは、平均±ＳＥＭ；１群あたりｎ＝６〜８、＊は、Ａｎｇ  ＩＩに対して、＃は、全長野生型ＲＡＧＥに対して；ｐ＜０．０５。
【図１３Ｅ】Ａｎｇ  ＩＩに応答したＲＡＧＥ欠損ＰＭＡＥＣの炎症促進性遺伝子発現の誘導に対する野生型ＲＡＧＥ３６２−４０４ペプチド（０．４ｎｇ／ｍｌ）の効果。データは、平均±ＳＥＭ；１群あたりｎ＝６〜８、＊は、未処置対照に対して、ｐ＜０．０５。
【図１３Ｆ】対照としてのＴＮＦαへの応答と、Ａｎｇ  ＩＩに応答するＰＭＡＥＣにおける炎症促進性ＶＣＡＭ−１、ＣＸＣＬ２及びＣＸＣＬ１２遺伝子発現の誘導に対するＳ３９１Ａ−ＲＡＧＥ３６２−４０４ペプチドの効果。データは、平均±ＳＥＭ；１群あたりｎ＝６〜８、＊は、ビヒクル及び処置対照（ＴＡＴ）に対して、＃は、Ａｎｇ  ＩＩ及び処置対照（ＴＡＴ）に対して；ｐ＜０．０５。
【図１３Ｇ】ＨＡＥＣのＡｎｇ  ＩＩに応答した炎症促進性遺伝子発現の誘導に対するＳ３９１Ａ−ＲＡＧＥ３６２−４０４ペプチド及びＡＴ１Ｒブロッカー、イルベサルタンの効果。
【図１３Ｈ】（ｉ）対照として示された不活性な全長型Ｓ３９１Ａ−ＲＡＧＥ変異体を発現するＡＴ１Ｒ−ＣＨＯ細胞と、全長型ＲＡＧＥも発現するＡＴ１Ｒ−ＣＨＯ細胞におけるＲＡＧＥリガンドＳ１００Ａ８／Ａ９に応答した炎症促進性遺伝子発現（ｐ６５）の誘導に対するＳ３９１Ａ−ＲＡＧＥ３６２−４０４ペプチドの阻害効果。（ｉｉ）ＲＡＧＥ中、内因的に十分に存在するＰＭＡＥＣ細胞におけるＡｎｇ  ＩＩ又はＲＡＧＥリガンドＳ１００Ａ８／Ａ９に応答した炎症促進性遺伝子発現（ＶＣＡＭ−１）の誘導に対するＳ３９１Ａ−ＲＡＧＥ３６２−４０４ペプチドの阻害効果。特に明記しない限り、データは、平均±ＳＥＭ；１群あたりｎ＝６〜８、＊は、ビヒクル対照に対して、ｐ＜０．０５、＃は、対照＋Ａｎｇ  ＩＩに対して、ｐ＜０．０５。
【図１４Ａ】ａｐｏＥ−ＫＯマウスからの大動脈全体をＡｎｇ  ＩＩ（１μＭ）にエクスビボで曝露した後の炎症促進性マーカーのＡｎｇ  ＩＩ依存性誘導に対するＳ３９１Ａ−ＲＡＧＥ３６２−４０４の効果。データは、平均±ＳＥＭ；１群あたりｎ＝６、＊は、ａｐｏＥ−ＫＯ＋ビヒクル＋ＴＡＴ−ｍＣｈｅｒｒｙ対照に対して、ｐ＜０．０５、＃は、ａｐｏＥ−ＫＯ＋ＴＡＴ−ｍＣｈｅｒｒｙ対照＋Ａｎｇ  ＩＩに対して、ｐ＜０．０５。
【図１４Ｂ】ＡＧＥＲ／ａｐｏＥ−ＫＯマウスからの大動脈全体をＡｎｇ  ＩＩ（１μＭ）にエクスビボで曝露した後の炎症促進性マーカーのＡｎｇ  ＩＩ依存性誘導に対する野生型ＲＡＧＥ３６２−４０４の効果。データは、平均±ＳＥＭ；１群あたりｎ＝８、＊は、ａｐｏＥ−ＫＯ＋ビヒクル＋ＴＡＴ−ｍＣｈｅｒｒｙ対照に対して、ｐ＜０．０５。
【図１５Ａ】ａｐｏＥ−ＫＯ及びＡｃｅ２／ＡＧＥＲ／ａｐｏＥトリプルＫＯマウスにおける大動脈硬化のＡｎｇ  ＩＩ依存性誘導に対する、ｍＣｈｅｒｒｙ蛍光タンパク質で標識されたＲＡＧＥのＣ末端の４２アミノ酸及び細胞透過を促進するＨＩＶ−ＴＡＴモチーフを含むＴＡＴ−ｍＣｈｅｒｒｙ−ＲＡＧＥ３６２−４０４のアテローム性動脈硬化誘発効果。これは、Ａｃｅ２／ａｐｏＥ−ＤＫＯマウスにおける大動脈アテローム性動脈硬化のＡｎｇ  ＩＩ依存性誘導に対するＴＡＴ−ｍＣｈｅｒｒｙ−Ｓ３９１Ａ−ＲＡＧＥ３６２−４０４の抗アテローム性動脈硬化効果と比較される。データは、平均±ＳＥＭ；１群あたりｎ＝８；＊は、ａｐｏＥ−ＫＯ対照に対して；＃は、Ａｃｅ２／ａｐｏＥ−ＤＫＯ対照に対して；ｐ＜０．０５。
【図１５Ｂ】糖尿病ａｐｏＥ−ＫＯ及び糖尿病ＡＧＥＲ／ａｐｏＥ−ＤＫＯマウスにおける大動脈硬化のＡｎｇ  ＩＩ依存性誘導に対する、ｍＣｈｅｒｒｙ蛍光タンパク質で標識されたＲＡＧＥのＣ末端の４２アミノ酸及び細胞透過を促進するＨＩＶ−ＴＡＴモチーフを含むＴＡＴ−ｍＣｈｅｒｒｙ−ＲＡＧＥ３６２−４０４ペプチドのアテローム性動脈硬化誘発効果。これは、糖尿病ａｐｏＥ−ＫＯマウスにおける大動脈アテローム性動脈硬化のＡｎｇ  ＩＩ依存性誘導に対するＴＡＴ−ｍＣｈｅｒｒｙ−Ｓ３９１Ａ−ＲＡＧＥ３６２−４０４の抗アテローム性動脈硬化効果と比較される。データは、平均±ＳＥＭ；１群あたりｎ＝８；＊は、ａｐｏＥ−ＫＯ対照に対して、＃は、糖尿病ａｐｏＥ  ＤＫＯ対照に対して；ｐ＜０．０５。
【図１５Ｃ】示される通り、ＡＧＥＲ発現を伴う又は伴わない、マウス及び糖尿病ａｐｏＥ−ＫＯマウスの収縮期血圧に対する、ＴＡＴ−ｍＣｈｅｒｒｙ−ＲＡＧＥ３６２−４０４及びＴＡＴ−ｍＣｈｅｒｒｙ−Ｓ３９１Ａ−ＲＡＧＥ３６２−４０４の効果の欠如。
【図１６Ａ】ＡＴ１／Ｒｌｕｃ８及びＲＡＧＥ／ＶｅｎｕｓによるＢＲＥＴ飽和曲線は、可溶性ＲＡＧＥ２２−３３１（ｓＲＡＧＥ）を伴う又は伴わないＡｎｇ  ＩＩ又はビヒクル添加の６０分後に生成された。データは、３つの独立した実験から結合される。
【図１６Ｂ】対照としてのＡＴ１／Ｒｌｕｃ８へのβａｒｒｅｓｔｉｎ２／ＶｅｎｕｓのＡｎｇ  ＩＩ誘導性動員及びＣＣＲ４／Ｒｌｕｃ８へのβａｒｒｅｓｔｉｎ２／ＶｅｎｕｓのＣＣＬ２２誘導性動員。
【図１６Ｃ】Ａｎｇ  ＩＩへの曝露後のＡＴ１受容体の存在下であり、ＣＣＬ２２への曝露後のＣＣＲ４の存在下ではない、ＲＡＧＥ／Ｒｌｕｃ８に近接したβ−アレスチン２／ＶｅｎｕｓのＡｎｇ  ＩＩ誘導性動員。
【図１６Ｄ】Ｇαｉ／Ｎｌｕｃ及びＧγ２／Ｖｅｎｕｓが非標識ＣＣＲ４の存在下で共発現されると、ＣＣＬ２２誘導ＢＲＥＴシグナルが観察される。
【図１７Ａ】ＡＴ１受容体の非存在下ではなく存在下でのＲＡＧＥ／Ｒｌｕｃ８に近接したβ−アレスチン２／Ｖｅｎｕｓ（β−ａｒｒ２／Ｖｅｎｕｓ）のＡｎｇ  ＩＩ誘導性動員。ＡＴ１／Ｒｌｕｃ８へのβａｒｒｅｓｔｉｎ２／ＶｅｎｕｓのＡｎｇ  ＩＩ誘導性動員は、対照として含まれている。
【図１７Ｂ】ＴＲＨ受容体１（ＴＲＨＲ１）の非存在下ではなく存在下でのＲＡＧＥ／Ｒｌｕｃ８に近接したβ−アレスチン２／Ｖｅｎｕｓ（β−ａｒｒ２／Ｖｅｎｕｓ）のサイロトロピン放出ホルモン（ＴＲＨ）誘導性の弱い動員。ＴＲＨＲ１／Ｒｌｕｃ８へのβａｒｒｅｓｔｉｎ２／ＶｅｎｕｓのＴＲＨ誘導性動員は、対照として含まれている。挿入図は、ｙ軸スケールを拡大した同一のデータを示す。
【図１７Ｃ】オレキシン受容体１（ＯｘＲ１）の非存在下ではなく存在下でのＲＡＧＥ／Ｒｌｕｃ８に近接したβ−アレスチン２／Ｖｅｎｕｓ（β−ａｒｒ２／Ｖｅｎｕｓ）のオレキシンＡ（ＯｘＡ）誘導性動員。ＯｘＲ１／Ｒｌｕｃ８へのβａｒｒｅｓｔｉｎ２／ＶｅｎｕｓのＯｘＡ誘導性動員は、対照として含まれている。
【図１７Ｄ】ＢＤＫ受容体２（ＢＤＫＲ）の非存在下ではなく存在下でのＲＡＧＥ／Ｒｌｕｃ８に近接したβ−アレスチン２／Ｖｅｎｕｓ（β−ａｒｒ２／Ｖｅｎｕｓ）のブラジキニン（ＢＤＫ）誘導性の弱い動員。ＢＤＫＲ／Ｒｌｕｃ８へのβａｒｒｅｓｔｉｎ２／ＶｅｎｕｓのＢＤＫ誘導性動員は、対照として含まれている。挿入図は、ｙ軸スケールを拡大した同一のデータを示す。
【図１７Ｅ】バソプレシン受容体２（Ｖ２Ｒ）の非存在下ではなく存在下でのＲＡＧＥ／Ｒｌｕｃ８に近接したβ−アレスチン２／Ｖｅｎｕｓ（β−ａｒｒ２／Ｖｅｎｕｓ）のアルギニンバソプレシン（ＡＶＰ）誘導性動員。Ｖ２Ｒ／Ｒｌｕｃ８へのβａｒｒｅｓｔｉｎ２／ＶｅｎｕｓのＡＶＰ誘導性動員は、対照として含まれている。
【図１７Ｆ】ＣＣＲ２の非存在下ではなく存在下でのＲＡＧＥ／Ｒｌｕｃ８に近接したβ−アレスチン２／Ｖｅｎｕｓ（β−ａｒｒ２／Ｖｅｎｕｓ）のＣＣＬ２（ＭＣＰ１）誘導性動員。ＣＣＲ２／Ｒｌｕｃ８へのβａｒｒｅｓｔｉｎ２／ＶｅｎｕｓのＭＣＰ−１誘導性動員は、対照として含まれている。
【図１７Ｇ】特にＣＣＲ５の非存在下での対照と比較した、ＭＩＰ１βへの曝露後のＣＣＲ５の存在下でのＲＡＧＥ／Ｒｌｕｃ８に近接したβ−アレスチン２／Ｖｅｎｕｓ（β−ａｒｒ２／Ｖｅｎｕｓ）の、ＣＣＬ４（ＭＩＰ１β）誘導性の特に弱い動員。ＣＣＲ５／Ｒｌｕｃ８へのβａｒｒｅｓｔｉｎ２／ＶｅｎｕｓのＭＩＰ１β誘導性動員は、さらなる対照として含まれている。挿入図は、ｙ軸スケールを拡大した同一のデータを示す。全てのデータは、３回の独立した実験の平均±ＳＥＭである。
【図１８Ａ】ＣＣＲ１の存在下でのＲＡＧＥ／Ｒｌｕｃ８に近接したβ−ａｒｒ２／ＶｅｎｕｓのＣＣＬ３誘導性動員。
【図１８Ｂ】ＣＣＲ２の存在下でのＲＡＧＥ／Ｒｌｕｃ８に近接したβ−ａｒｒ２／ＶｅｎｕｓのＣＣＬ２誘導性動員。
【図１８Ｃ】ＣＣＲ４の存在下での、ＲＡＧＥ／Ｒｌｕｃ８に近接したβ−ａｒｒ２／ＶｅｎｕｓのＣＣＬ２２誘導性動員の欠如。
【図１８Ｄ】ＣＣＲ５の存在下での、ＲＡＧＥ／Ｒｌｕｃ８に近接したβ−ａｒｒ２／ＶｅｎｕｓのＣＣＬ４誘導性動員の欠如。
【図１８Ｅ】ＣＣＲ６の存在下での、ＲＡＧＥ／Ｒｌｕｃ８に近接したβ−ａｒｒ２／ＶｅｎｕｓのＣＣＬ２０誘導性動員。
【図１８Ｆ】ＣＣＲ７の存在下での、ＲＡＧＥ／Ｒｌｕｃ８に近接したβ−ａｒｒ２／ＶｅｎｕｓのＣＣＬ１９誘導性動員。
【図１８Ｇ】ＣＣＲ１０の存在下での、ＲＡＧＥ／Ｒｌｕｃ８に近接したβ−ａｒｒ２／ＶｅｎｕｓのＣＣＬ２７誘導性動員の欠如。
【図１８Ｈ】ＣＸＣＲ１の存在下での、ＲＡＧＥ／Ｒｌｕｃ８に近接したβ−ａｒｒ２／ＶｅｎｕｓのＣＸＣＬ８誘導性動員。
【図１８Ｉ】ＣＸＣＲ２の存在下での、ＲＡＧＥ／Ｒｌｕｃ８に近接したβ−ａｒｒ２／ＶｅｎｕｓのＣＸＣＬ８誘導性動員。
【図１８Ｊ】ＣＸＣＲ３の存在下での、ＲＡＧＥ／Ｒｌｕｃ８に近接したβ−ａｒｒ２／ＶｅｎｕｓのＣＸＣＬ１１誘導性動員の欠如。
【図１８Ｋ】ＣＸＣＲ４の存在下での、ＲＡＧＥ／Ｒｌｕｃ８へのβ−ａｒｒ２／Ｖｅｎｕｓの近接性のＣＸＣＬ１２誘導性減少。
【図１８Ｌ】ＣＸＣＲ６の存在下での、ＲＡＧＥ／Ｒｌｕｃ８に近接したβ−ａｒｒ２／ＶｅｎｕｓのＣＸＣＬ１６誘導性動員。全てのデータは、３回の独立した実験の平均±ＳＥＭである。
【図１９Ａ−ＯＯ】時間ゼロで、示された濃度で、示されたリガンドによって活性化された、示された非ＢＲＥＴ標識ＧＰＣＲの存在下における、Ｖｅｎｕｓ標識された示された細胞内コンパートメントマーカーへのＲｌｕｃ８標識ＲＡＧＥの近接。
【図２０Ａ】ＲＡＧＥ共発現の存在下又は非存在下でＣＣＲ２を発現するＣＨＯ細胞におけるＣＣＬ２（ＭＣＰ−１）によるＮＦκＢサブユニットｐ６５の遺伝子発現の誘導により測定されるＮＦκＢの活性化。
【図２０Ｂ】ＲＡＧＥ共発現の存在下又は非存在下でＣＸＣＲ２を発現するＣＨＯ細胞におけるＣＸＣＬ２（ＩＬ−８）によるＮＦκＢサブユニットｐ６５の遺伝子発現の誘導により測定されるＮＦκＢの活性化。
【図２０Ｃ】ＲＡＧＥ活性化のペプチド阻害剤、Ｓ３９１Ａ−ＲＡＧＥ３６２−４０４の存在下又は非存在下で骨髄由来初代マクロファージにおけるＣＣＬ２（ＭＣＰ−１）によるＮＦκＢサブユニットｐ６５の遺伝子発現の誘導により測定されるＮＦκＢの活性化。
【図２０Ｄ】ＲＡＧＥ活性化のペプチド阻害剤、Ｓ３９１Ａ−ＲＡＧＥ３６２−４０４の存在下又は非存在下でＨＭＥＣにおけるＣＣＬ２（ＭＣＰ−１）によるＭＣＰ−１の遺伝子発現の自己誘導により測定されるＮＦκＢの活性化。
【図２０Ｅ】ＲＡＧＥ活性化のペプチド阻害剤、Ｓ３９１Ａ−ＲＡＧＥ３６２−４０４の存在下又は非存在下でＣＸＣＲ２を発現するＨＭＥＣにおけるＩＬ−８によるＭＣＰ−１の遺伝子発現の誘導により測定されるＮＦκＢの活性化。
【図２１Ａ】ｍＣｈｅｒｒｙ／ＲＡＧＥ３３８−３６１とＮｌｕｃ／ＡＴ１間のＢＲＥＴは、Ａｎｇ  ＩＩで増加する。データは、平均値±ＳＥＭとして表され、ｎ＝３〜５である。
【図２１Ｂ】示されるように、細胞が２００ｎｇ又は４００ｎｇのｍＣｈｅｒｒｙ／ＲＡＧＥ３３８−３６１ｃＤＮＡによっても形質導入された場合のＡＴ１／Ｒｌｕｃ８及びＲＡＧＥ／ＶｅｎｕｓによるＢＲＥＴ飽和曲線は、ビヒクル又はＡｎｇ  ＩＩの添加の６０分後に生成された。データは、３つの独立した実験から結合される。
【図２１Ｃ】示されるように、細胞が０、５０、１００、２００、３００又は４００ｎｇのｍＣｈｅｒｒｙ／ＲＡＧＥ３３８−３６１ｃＤＮＡ又はｐｃＤＮＡ３制御プラスミドによっても形質導入された場合のＡＴ１／Ｒｌｕｃ８とＲＡＧＥ／Ｖｅｎｕｓとの間のＢＲＥＴシグナルのＡｎｇ  ＩＩ誘導性調節。データは、平均値±ＳＥＭとして表され、ｎ＝３〜４である。フィルター：Ｖｅｎｕｓ  ５５０ｎｍ／Ｒｌｕｃ８  ４５０ｎｍ。
【図２１Ｄ】示されるように、細胞が５０ｎｇのＡＴ１／Ｒｌｕｃ８  ｃＤＮＡ、３００ｎｇのＲＡＧＥ／Ｖｅｎｕｓ  ｃＤＮＡ及び０、５０、１００、２００、３００又は４００ｎｇのｍＣｈｅｒｒｙ／ＲＡＧＥ３３８−３６１ｃＤＮＡ又はｐｃＤＮＡ３制御プラスミドによって形質導入された場合のＡＴ１／Ｒｌｕｃ８とｍＣｈｅｒｒｙ／ＲＡＧＥ３３８−３６１との間のＡｎｇ  ＩＩ誘導性ＢＲＥＴシグナルの欠如。データは、平均値±ＳＥＭとして表され、ｎ＝３〜４である。フィルター：ｍＣｈｅｒｒｙ  ６５０ｎｍ／Ｒｌｕｃ８  ４５０  ｎｍ。
【図２１Ｅ】図２１Ｃ及び２１Ｄに示す実験におけるＡＴ１／Ｒｌｕｃ８からの発光、ＲＡＧＥ／Ｖｅｎｕｓからの蛍光、ｍＣｈｅｒｒｙ／ＲＡＧＥ３３８−３６１からの蛍光。データは、平均値±ＳＥＭとして表され、ｎ＝３〜４である。
【図２１Ｆ】示されるように、細胞がｍＣｈｅｒｒｙ／ＲＡＧＥ３３８−３６１ｃＤＮＡ又はｐｃＤＮＡ３制御プラスミドによっても形質導入された場合のＧＰＣＲ／Ｒｌｕｃ８とＲＡＧＥ／Ｖｅｎｕｓとの間のＢＲＥＴシグナルのリガンド誘導性調節。データは、平均値±ＳＥＭとして表され、ｎ＝２〜４である。フィルター：Ｖｅｎｕｓ  ５５０ｎｍ／Ｒｌｕｃ８  ４５０ｎｍ。形質導入されたｃＤＮＡの量：５０ｎｇ  ＧＰＣＲ／Ｒｌｕｃ８＋３００ｎｇ  ＲＡＧＥ／Ｖｅｎｕｓ＋４００ｎｇのｍＣｈｅｒｒｙ／ＲＡＧＥ３３８−３６１又はｐｃＤＮＡ３。示された濃度、時間ゼロで、示されたリガンドによって活性化された示されたＲｌｕｃ８標識ＧＰＣＲ。
【図２１Ｇ】ｍＣｈｅｒｒｙ／ＲＡＧＥ３３８−３６１によって阻害されたＨＭＥＣ１におけるＡｎｇ  ＩＩ媒介炎症促進性シグナル伝達（ＩＣＡＭ−１発現）は、ｍＣｈｅｒｒｙ／ＲＡＧＥ３６２−４０４によってレスキューされる。データは、平均値±ＳＥＭとして表され、ｎ＝６〜８である。
【図２１Ｈ】リアルタイムＲＴ−ＰＣＲを使用して測定されるＩＣＡＭ−１の発現によって表されるように、ＨＭＥＣ細胞におけるＡｎｇ  ＩＩによる炎症誘発性シグナル伝達の誘導は、発現をモニターするためのＮ末端ｍＣｈｅｒｒｙ融合を有する又は有しないＲＡＧＥ膜貫通ドメインＲＡＧＥ３４３−３６１の過剰発現により阻害される。データは、平均値±ＳＥＭとして表され、ｎ＝６〜８である。
【図２１Ｉ】リアルタイムＲＴ−ＰＣＲを使用して測定されるｐ６５の発現によって表されるように、ＲＡＧＥ−ＣＨＯ細胞におけるＲＡＧＥリガンドＳ１００Ａ８／Ａ９による炎症誘発性シグナル伝達の誘導は、ＲＡＧＥ膜貫通ドメインＲＡＧＥ３４３−３６１単独又はＲＡＧＥ３７０−３９０の過剰発現により阻害される。データは、平均値±ＳＥＭとして表され、ｎ＝６〜８である。
【図２１Ｊ】リアルタイムＲＴ−ＰＣＲによって測定されるＩＣＡＭ−１の発現によって表されるように、ＨＭＥＣ細胞におけるＡｎｇ  ＩＩによる炎症誘発性シグナル伝達の誘導は、Ｄｉａｐｈ１又はＰＫＣｚを標的とするｓｉＲＮＡによって阻害される。この阻害は、ＲＡＧＥ３６２−４０４によってレスキューされるが、ＲＡＧＥ３４３−４０４によってレスキューされない。データは、平均値±ＳＥＭとして表され、ｎ＝６〜８である。
【発明を実施するための形態】
【０５３３】
［配列の簡単な説明］
【０５３４】
【表３１】
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【０５３５】
［発明の詳細な説明］
＜１．定義＞
別に定義されない限り、本明細書で使用される全ての技術用語及び科学用語は、本発明が属する技術分野の当業者によって一般に理解されるのと同じ意味を有する。本明細書に記載のものと類似の又は均等な任意の方法及び材料を本発明の実施又は試験に使用することができるが、好ましい方法及び材料が記載される。本発明の目的のために、次に以下の用語を定義する。
【０５３６】
「受容体ヘテロマー」は、「個々の成分の生化学的特性と明らかに異なる生化学的特性を備えた少なくとも２つの（機能的）受容体ユニットで構成される高分子複合体。」と定義される（Ｆｅｒｒｅ  ｅｔ  ａｌ．，２００９）。
【０５３７】
冠詞「１つの（ａ）」及び「１つの（ａｎ）」は、本明細書では、冠詞の文法的対象の１つ又は２つ以上（すなわち少なくとも１つ）を指すために使用される。例として、「要素」は、１つの要素又は複数の要素を意味する。
【０５３８】
「約」とは、基準測定値、量、レベル、値、数、頻度、割合、寸法、サイズ、量、重量又は長さに対して、１０、９、８、７、６、５、４、３、２又は１％異なる測定値、数量、レベル、値、数、頻度、割合、寸法、サイズ、量、重量又は長さを意味する。
【０５３９】
本明細書で使用される「及び／又は」は、関連する列挙された項目の１つ以上のあらゆる組み合わせ及び代替（又は）で解釈される場合の組み合わせの欠如を指し、包含する。
【０５４０】
「薬剤」、「候補薬剤」、「調節剤」、「モジュレーター」、「代替物」、「機能的代替物」、「非機能的代替物」又は「阻害剤」という用語は、所望の薬理学的及び／又は生理学的効果を誘導する、化合物、化合物の混合物、生体高分子、生物学的材料からの抽出物、生物学的有機体若しくはその一部又は他の材料を含む。これらの用語は、塩、エステル、アミド、プロドラッグ、活性代謝物、類似体なども含むが、これらに限定されない、本明細書で具体的に言及される化合物の薬学的に許容される薬理学的活性成分も包含する。上記の用語が使用される場合、これには、活性薬剤それ自体並びに薬学的に許容される薬理学的に活性な塩、エステル、アミド、プロドラッグ、代謝産物及び類似体が含まれることを理解されたい。「薬剤」、「調節剤」、「代替物」又は「阻害剤」という用語は、狭く解釈されるべきではなく、小分子、ペプチド、ポリペプチド及びタンパク質などのタンパク性分子、並びにそれらを含む組成物、並びにＲＮＡ、ＤＮＡ及びその模倣物及び化学的類似体などの遺伝的分子、並びに細胞剤まで及ぶ。「薬剤」、「モジュレーター」、「代替物」又は「阻害剤」という用語は、本明細書で言及されるポリペプチド及びそのポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチドを産生及び分泌することができる細胞を含む。したがって、「薬剤」、「モジュレーター」、「代替物」又は「阻害剤」という用語は、細胞の範囲での発現及び分泌のための、ウイルス又は非ウイルスベクターなどのベクター、発現ベクター及びプラスミドを含む核酸構築物まで及ぶ。
【０５４１】
「阻害剤」という用語は、その最も広い意味で使用され、別の分子の活性、活性化又は機能の少なくとも１つの側面を減少させる、タンパク質、ポリペプチド、ペプチド、抗体、抗体断片、高分子又は低分子（１０ｋＤａ未満）を含む任意の化合物を含む。例えば、阻害剤は、ＲＡＧＥ及び／又はＡＴ１Ｒなどのアンジオテンシン受容体又はＣＣＲ２などの特定のケモカイン受容体などの特定の共存ＧＰＣＲの活性、活性化又は機能及び／又は適切にはＡＴ１Ｒなどのアンジオテンシン受容体又はＣＣＲ２などの特定のケモカイン受容体など、活性化された特定の共存ＧＰＣＲによるＲＡＧＥリガンド非依存性のＲＡＧＥ活性化を減少させ得る。したがって、「特定の活性化された共存ＧＰＣＲによるＲＡＧＥリガンド非依存性のＲＡＧＥ活性化の阻害剤」とは、特定の活性化された共存ＧＰＣＲによるＲＡＧＥリガンド非依存性のＲＡＧＥ活性化を実質的に低減、阻害、拮抗、遮断、負の調節及び／又は軽減できる薬剤を指す。阻害剤による特定の活性化された共存ＧＰＣＲによるＲＡＧＥリガンド非依存性のＲＡＧＥ活性化の阻害は、細胞による炎症促進性サイトカインを含む炎症促進性メディエーターの産生又はＲＡＧＥ疾患の症状の異常なＲＡＧＥリガンド非依存性活性化に関連する他の細胞要素の調節を含む、その生物学的効果を適切に低減又は阻害する。部分アゴニストは、アゴニズムを示しても最大の効果をもたらさないため、阻害剤として作用することができることに留意されたい。したがって、内因性アゴニストなどのより効果的なアゴニストのアゴニスト活性に競合又は調整することにより、それが存在しない場合と比較してシグナル伝達出力を減少させるため、それは、受容体ポリペプチド及び／又はそのシグナル伝達経路の阻害剤として効果的に作用し得る。その結果、部分アゴニストは、治療設定において阻害剤として作用し得る。阻害剤は、別の分子の活性、活性化又は機能の全ての側面を必ずしも阻害するわけではなく、実際、いくつかの側面を阻害する一方、他の側面を活性化し、且つ／又はさらなる側面を調節しない可能性がある。したがって、阻害剤は、リガンドバイアスを示し得る。
【０５４２】
「リガンドバイアス」という用語は、同じ受容体に対して、異なるシグナル伝達経路の活性化を選択的に促進又は阻害する別個のリガンド安定化受容体状態が存在できる現象を指す（Ｍｕｓｔａｆａ  ｅｔ  ａｌ．，２０１０）。この現象には、リガンドバイアスシグナル伝達、リガンド誘導バイアスシグナル伝達、受容体シグナルのアゴニスト輸送、細胞ベースの機能的選択性、受容体活性状態ベースの選択性、刺激輸送、バイアスアゴニズム、副次的有効性及びリガンド誘導性選択的シグナル伝達（Ｍｕｓｔａｆａ  ｅｔ  ａｌ．，２０１０）を含むが、これらに限定されない複数の名称が付けられている。例として、これは、全てのアゴニストが、多くの場合に内因性アゴニストである参照アゴニストによって通常活性化される全てのシグナル伝達経路を活性化するわけではないという概念を含む。アゴニストは、参照と比較して、いくつかの経路を活性化するが、他の経路は活性化しない可能性があり、それによってバイアスを示す。さらに、アンタゴニスト又は逆アゴニスト又は阻害剤は、一部の経路のみを阻害し、他の経路は阻害しない可能性があり、オルソステリックリガンド結合部位及び／又はアロステリック結合部位で作用する可能性がある。オルソステリック及びアロステリック結合部位は、当技術分野で一般的に知られているように定義されており、アロステリズムは、ある受容体へのリガンドの結合が同じ高分子複合体の別の受容体のアロステリック調節を引き起こし得るように、ある受容体から別の受容体に複合体を越えて起こり得る。アロステリックモジュレーターもリガンドバイアスを示し得、いくつかのシグナル伝達経路を調節できるが、他のものを調節することはできない。リガンドは、例えば、あるシグナル伝達経路のアゴニストとして作用する一方、別のシグナル伝達経路の阻害剤として作用し、且つ／又は第３のシグナル伝達経路に影響を与えない可能性があることも当技術分野で知られている。実際、シグナル伝達調節効果の複数のバリエーションと組み合わせが発生し得る。リガンドバイアスは、例えば、リガンドが１つの経路を介してシグナル伝達を完全に阻害することなく低下させ、且つ／又は別のシグナル伝達経路を不完全に活性化し得るという点でも絶対的ではない。経路は、異なる程度に調節することができ、これは、複数のパラメーターによって測定できる。これには、シグナル伝達の効力、及び／若しくは有効性、及び／若しくは時間的側面並びに／又はシグナル伝達の空間的側面の違いが含まれるが、これらに限定されない。
【０５４３】
「機能的代替物」という用語は、その最も広い意味で使用され、別の分子の活性、活性化又は機能の少なくとも１つの側面をその分子の代わりに模倣するか又は増加できる、タンパク質、ポリペプチド、ペプチド、抗体、抗体断片、高分子又は低分子（１０ｋＤａ未満）を含む任意の化合物を含む。例えば、ＲＡＧＥの機能的代替物は、そうでなければＲＡＧＥ発現を欠くシステムにおいて、ＲＡＧＥ及び／又はＡＴ１Ｒなどのアンジオテンシン受容体又はＣＣＲ２などの特定のケモカイン受容体などの特定の共存ＧＰＣＲの活性、活性化又は機能及び／又は適切にはＡＴ１Ｒなどのアンジオテンシン受容体又はＣＣＲ２などの特定のケモカイン受容体など、活性化された特定の共存ＧＰＣＲによるＲＡＧＥリガンド非依存性のＲＡＧＥ活性化を再現し得る。したがって、特定の活性化された共存ＧＰＣＲによるＲＡＧＥリガンド非依存性のＲＡＧＥ活性化の「機能的代替物」とは、特定の活性化された共存ＧＰＣＲによるＲＡＧＥリガンド非依存性のＲＡＧＥ活性化を実質的に増加、増強、アゴナイズ及び／又は正に調節できる薬剤を指す。機能的代替物による特定の活性化された共存ＧＰＣＲによるＲＡＧＥリガンド非依存性のＲＡＧＥ活性化のシグナル伝達能力の回復は、細胞による炎症促進性サイトカインを含む炎症促進性メディエーターの産生又はＲＡＧＥ疾患の症状のＲＡＧＥリガンド非依存性活性化に関連する他の細胞要素の調節を含む、その生物学的効果を適切に回復又は増強する。機能的代替物は、別の分子の活性、活性化又は機能の全ての側面を必ずしも模倣するわけではなく、実際、いくつかの側面を阻害する一方、他の側面を活性化し、且つ／又はさらなる側面を調節しない可能性がある。したがって、機能的代替物もリガンドバイアスを示し得る。
【０５４４】
「非機能的代替物」という用語は、その最も広い意味で使用され、別の分子の活性、活性化又は機能の少なくとも１つの側面をその分子の代わりに阻害、アンタゴナイズ又は減少できる、タンパク質、ポリペプチド、ペプチド、抗体、抗体断片、高分子又は低分子（１０ｋＤａ未満）を含む任意の化合物を含む。例えば、ＲＡＧＥの非機能的代替物は、ＲＡＧＥ及び／又はＡＴ１Ｒなどのアンジオテンシン受容体又はＣＣＲ２などの特定のケモカイン受容体などの特定の共存ＧＰＣＲの活性、活性化又は機能及び／又は適切にはＡＴ１Ｒなどのアンジオテンシン受容体又はＣＣＲ２などの特定のケモカイン受容体など、活性化された特定の共存ＧＰＣＲによるＲＡＧＥリガンド非依存性のＲＡＧＥ活性化を阻害し得る。したがって、特定の活性化された共存ＧＰＣＲによるＲＡＧＥリガンド非依存性のＲＡＧＥ活性化の「非機能的代替物」とは、特定の活性化された共存ＧＰＣＲによるＲＡＧＥリガンド非依存性のＲＡＧＥ活性化を実質的に低減、阻害、拮抗及び／又は負に調節できる薬剤を指す。非機能的代替物による特定の活性化された共存ＧＰＣＲによるＲＡＧＥリガンド非依存性のＲＡＧＥ活性化のシグナル伝達能力の低減は、細胞による炎症促進性サイトカインを含む炎症促進性メディエーターの産生又はＲＡＧＥ疾患の症状のＲＡＧＥリガンド非依存性活性化に関連する他の細胞要素の調節を含む、その生物学的効果を適切に低減又は阻害する。部分アゴニストは、アゴニズムを示しても最大の効果をもたらさないため、阻害剤として作用することもできることに留意されたい。したがって、内因性アゴニストなどのより効果的なアゴニストのアゴニスト活性に競合又は調整することにより、それが存在しない場合と比較してシグナル伝達出力を減少させるため、それは、受容体ポリペプチド及び／又はそのシグナル伝達経路の阻害剤として効果的に作用し得る。その結果、部分アゴニストは、治療設定において阻害剤として作用し得る。非機能的代替物は、別の分子の活性、活性化又は機能の全ての側面を必ずしも低減するわけではなく、実際、いくつかの側面を阻害する一方、他の側面を促進し、且つ／又はさらなる側面を調節しない可能性がある。したがって、非機能的代替物もリガンドバイアスを示し得る。
【０５４５】
「結合」という用語及びその文法的均等物は、例えば、生理学的条件下での共有、静電、疎水性及びイオン及び／又は水素結合相互作用による、分子間の物理的会合を指し、塩橋及び水橋などの相互作用並びに他の従来のあらゆる結合手段を含む。結合は、直接又は１つ以上の他の中間分子との相互作用を介して発生し得る。
【０５４６】
本明細書全体を通して、文脈がそうでないことを要しない限り、「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅ）」、「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅｓ）」及び「含んでいる」という語は、述べられたステップ若しくは要素又はステップ若しくは要素の群の包含を意味するが、他のいかなるステップ若しくは要素又はステップ若しくは要素の群の除外でもないことが理解されるであろう。したがって、「含んでいる」などの用語の使用は、列挙された要素が必要又は必須であるが、他の要素が、任意選択により、存在する場合と存在しない場合とがあることを示す。「からなる」とは、「からなる」という語句に続くものを含むこと及びそれに限定されることを意味する。したがって、「からなる」という語句は、列挙された要素が必要又は必須であり、他の要素が存在しない可能性があることを示す。「から本質的になる」とは、語句の後に列挙された任意の要素を含み、列挙された要素の開示において指定された活動又は行動に干渉又は貢献しない他の要素に限定されることを意味する。したがって、「から本質的になる」という語句は、列挙された要素が必要又は必須であるが、列挙された要素の活動又は行動に影響するかどうかに依存して、他の要素が、任意選択により、存在する場合と存在しない場合とがあることを示す。
【０５４７】
「構築物」という用語は、異なる供給源からの１つ以上の単離された核酸配列を含む組換え遺伝子分子を指す。したがって、構築物は、異なる起源の２つ以上の核酸配列が単一の核酸分子に組み立てられ、（１）天然には一緒に見られない調節及びコード配列を含む核酸配列（すなわち、ヌクレオチド配列の少なくとも１つは、他のヌクレオチド配列の少なくとも１つに関して異種である）、又は（２）天然には隣接していない機能的ＲＮＡ分子又はタンパク質の一部をコードする配列、又は（３）天然には隣接していないプロモーターの部分を含有する任意の構築物を含む、キメラ分子である。代表的な構築物には、任意の供給源に由来し、ゲノム統合又は自己複製が可能であり、１つ以上の核酸分子が作動可能に連結されている核酸分子を含む、プラスミド、コスミド、ウイルス、自己複製ポリヌクレオチド分子、ファージ又は線状若しくは環状の一本鎖若しくは二本鎖のＤＮＡ若しくはＲＮＡ核酸分子などの任意の組換え核酸分子が含まれる。本発明の構築物は、一般に、例えば標的核酸配列又はモジュレーター核酸配列など、構築物にも含まれる目的の核酸配列の発現を指示するために必要な要素を含む。そのような要素は、目的の核酸配列に（その転写を指示するように）作動可能に連結されたプロモーターなどの制御要素を含み得、多くの場合、ポリアデニル化配列も含む。本発明の特定の実施形態において、構築物は、ベクター内に含有され得る。構築物の成分に加えて、ベクターは、例えば、１つ以上の選択可能なマーカー、原核生物及び真核生物の起点などの１つ以上の複製起点、少なくとも１つの多回クローニングサイト及び／又は宿主細胞のゲノムへの構築物の安定した組み込みを容易にする要素を含み得る。２つ以上の構築物は、単一のベクターなどの単一の核酸分子内に含有され得るか、又は２つ以上の別個のベクターなどの２つ以上の別個の核酸分子内に含まれ得る。「発現構築物」は、一般に、少なくとも目的のヌクレオチド配列に作動可能に連結された制御配列を含む。このようにして、例えば、発現されるべきヌクレオチド配列と作動可能に連結されたプロモーターは、生物体又は宿主細胞を含むその一部における発現のための発現構築物で提供される。本発明の実施のための、構築物及び宿主細胞を調製及び使用するための従来の組成物及び方法は、当業者に周知である。例えば、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，３ｒｄ  ｅｄｉｔｉｏｎ  Ｖｏｌｕｍｅｓ  １，２  ａｎｄ  ３．Ｊ．Ｆ．Ｓａｍｂｒｏｏｋ，Ｄ．Ｗ．Ｒｕｓｓｅｌｌ  ａｎｄ  Ｎ．Ｉｒｗｉｎ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ，２０００を参照されたい。
【０５４８】
「対応する」又は「対応している」とは、参照核酸配列に対して実質的な配列同一性（例えば、参照核酸配列の全体又は一部に対して少なくとも約５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、９７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９％又は１００％までの配列同一性）を示す核酸配列又は参照アミノ酸配列に対して実質的な配列類似性若しくは同一性（例えば、参照アミノ酸配列の全体又は一部に対して少なくとも５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、９７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９％又は１００％までの配列類似性又は同一性）を示すアミノ酸配列を意味する。
【０５４９】
「有効量」とは、状態を処置又は予防することに関連して、そのような処置又は予防を必要とする個体への、阻害剤などの薬剤若しくはモジュレーター又は組成物の量の、症状の発生の防止、そのような症状の抑制及び／又はその状態の既存の症状の処置に効果的である単回用量又は一連の用量の一部のいずれかでの投与を意味する。有効量は、処置される個体の健康及び身体的状態、処置される個体の分類群、組成物の処方、医学的状況の評価及び他の関連要因に応じて異なる。その量は、定期的な試験を通じて決定できる比較的広い範囲に収まると予想される。
【０５５０】
本明細書で使用される「コードする」、「コードしている」などの用語は、別の核酸又はポリペプチドを提供する核酸の能力を指す。例えば、核酸配列は、転写及び／若しくは翻訳されてポリペプチドを生成できる場合又は転写及び／若しくは翻訳されてポリペプチドを生成できる形態に処理できる場合、ポリペプチドを「コードする」と言われる。そのような核酸配列は、コード配列又はコード配列と非コード配列との両方を含み得る。したがって、「コードする」、「コードしている」などの用語は、ＤＮＡ分子の転写から生じるＲＮＡ産物、ＲＮＡ分子の翻訳から生じるタンパク質、ＤＮＡ分子がＲＮＡ産物を形成するための転写及びその後のＲＮＡ産物の翻訳から生じるタンパク質又はＲＮＡ産物を提供するためのＤＮＡ分子の転写、処理されたＲＮＡ産物（例えば、ｍＲＮＡ）を提供するためのＲＮＡ産物の処理及びその後の処理されたＲＮＡ産物の翻訳から生じるタンパク質を含む。
【０５５１】
遺伝子配列に関する「発現」という用語は、ＲＮＡ転写物（例えば、ｍＲＮＡ、アンチセンスＲＮＡ、ｓｉＲＮＡ、ｓｈＲＮＡ、ｍｉＲＮＡ）を産生する遺伝子の転写及び必要に応じて得られたｍＲＮＡ転写物のタンパク質への翻訳を指す。したがって、文脈から明らかとなるように、コーディング配列の発現は、コーディング配列の転写及び翻訳から生じる。逆に、非コーディング配列の発現は、非コーディング配列の転写から生じる。「発現」は、細胞コンパートメント又は構造を含む細胞内、細胞上又は細胞外の遺伝子産物の位置も指し、その例示的な例には、細胞質、核、リボソーム、リソソーム及び細胞膜又は表面が含まれる。
【０５５２】
「発現ベクター」とは、ベクター内に含有されるポリヌクレオチドの転写及び適切にはポリヌクレオチドによってコードされるペプチド又はポリペプチドの合成を指示することができる任意の遺伝要素を意味する。そのような発現ベクターは、当業者に知られている。
【０５５３】
本明細書で使用される「機能」という用語は、生物学的、酵素的又は治療的機能を指す。
【０５５４】
本明細書で使用される「遺伝子」という用語は、ｍＲＮＡ、アンチセンスＲＮＡ、ｓｉＲＮＡ、ｓｈＲＮＡ、ｍｉＲＮＡなどを産生するために使用することができる核酸分子を指す。遺伝子は、機能性タンパク質の産生に使用できる場合とできない場合とがあり得る。遺伝子は、コーディング領域と非コーディング領域との両方を含み得る（例えば、イントロン、調節エレメント、プロモーター、エンハンサー、終止配列並びに５’及び３’非翻訳領域など）。
【０５５５】
「宿主細胞」という用語は、ポリヌクレオチド又は核酸構築物が導入される細胞を指す。本発明の宿主細胞には、細菌、酵母及び動物（本明細書で定義される「対象」という用語の範囲内に含まれる脊椎動物を含む）のものが含まれるが、これらに限定される必要はない。宿主細胞は、単細胞であり得るか、又は液体培養、単層などとしての組織培養で増殖し得る。宿主細胞は、組織に直接又は間接的に由来し得るか、又は動物（本明細書で定義される「対象」という用語の範囲内にある脊椎動物を含む）を含む生物体内に存在し得る。
【０５５６】
「相互作用」という用語は、２つの分子間の分子間力に基づく効果を指し、その例は、イオン間相互作用、水素結合による相互作用、双極子間相互作用、疎水性相互作用及びそれらの組み合わせを含み、分子間の結合を含む。相互作用は、直接又は１つ以上の他の中間分子を介して発生し得る。
【０５５７】
「機能的相互作用」という用語は、１つの分子が別の分子の機能に影響を与えることを指し、２つの分子が互いに物理的に相互作用していることを必ずしも意味しない。
【０５５８】
「ルシフェラーゼ」という用語は、ルシフェラーゼタンパク質に対応するポリペプチドを意味し、その基質が酸化されると発光する。例示的なルシフェラーゼタンパク質は、セレンテラジンを酸化するウミシイタケルシフェラーゼ又はその誘導体である。別のルシフェラーゼタンパク質の例は、ＮａｎｏＬｕｃである。
【０５５９】
「類似体」という用語は、内因性ペプチドとの構造的類似性により、類似するペプチドの少なくとも１つの生物学的機能を模倣することができる小分子を指す。「ペプチド類似体」とは、ペプチド結合を含み、アミノ酸又はそれらの誘導体で構成されるモジュラー構造を含有する天然のペプチドである類似体である。「非ペプチド類似体」とは、ペプチド結合を含まず、構成要素としてアミノ酸又はそれらの誘導体で構成されるモジュラー構造を含有しない、天然のペプチドではない類似体である。
【０５６０】
例として、ＲＡＧＥ類似体は、ＡＴ１Ｒとヘテロマー複合体を形成するＲＡＧＥの能力を模倣し得るが、ＡＴ１Ｒを介して作用するＡＴ１ＲリガンドによるＲＡＧＥのトランス活性化を適切に阻害する。
【０５６１】
「誘導体」という用語は、その一次構造がＲＡＧＥの細胞質側テール又はその断片から取得されたか、それに由来するが、アミノ酸の付加、置換、切断、化学的及び／又は生化学的修飾、レトロ逆位配列、環状ペプチド、ペプトイド、β−ペプチド又は非ペプチド薬物、非ペプチド標識、非ペプチド担体若しくは非ペプチド樹脂への連結を含む分子を指す。
【０５６２】
本明細書で使用される場合、用語「調節する」、「制御する」及びそれらの文法的均等物は、生物学的活性又は効果を変更する効果を指す（例えば、サイトカイン産生、細胞接着、ＧＰＣＲシグナル伝達、ＲＡＧＥシグナル伝達）。例えば、特定の生体分子のアゴニスト、アンタゴニスト、逆アゴニスト又はアロステリックモジュレーターは、受容体などの生体分子の活性又は効果（例えば、サイトカイン産生、細胞接着、受容体シグナル伝達）を、増加／刺激（例えば、アゴニスト、活性化剤、正のアロステリックモジュレーター）又は減少／阻害（例えば、アンタゴニスト、阻害剤、逆アゴニスト、負のアロステリックモジュレーター）することにより、その生体分子、例えば受容体の活性を調節する。
【０５６３】
本明細書で使用される「動作可能に接続された」又は「動作可能に連結された」という用語は、そのように説明された成分が意図した方法で機能できる関係にある並置を指す。例えば、コード配列に「作動可能に連結された」調節配列は、調節配列に適合した条件下でのコード配列の発現を可能にするための、コード配列に対する調節配列の位置決め及び／又は配向を指す。
【０５６４】
「薬学的に許容される担体」とは、生物学的に又は他の点で望ましくないものではない物質から構成される医薬用ビヒクルを意味し、すなわち、物質は、選択された活性剤又はモジュレーター、例えば阻害剤と共に、有害反応を全く又は実質的に引き起こすことなく対象に投与され得る。担体は、賦形剤及び希釈剤、洗剤、着色剤、湿潤剤又は乳化剤、ｐＨ緩衝剤、防腐剤、形質導入剤などの他の添加物を含み得る。
【０５６５】
同様に、本明細書で提供される化合物の「薬理学的に許容される」塩、エステル、アミド、プロドラッグ又は誘導体は、生物学的に又は他の点で望ましくないものではない塩、エステル、アミド、プロドラッグ又は誘導体である。
【０５６６】
「ポリヌクレオチド」、「核酸」及び「ヌクレオチド配列」という用語には、ＲＮＡ、ｃＤＮＡ、ゲノムＤＮＡ、合成形態及び混合ポリマー、センス鎖及びアンチセンス鎖の両方が含まれ、当業者に容易に理解されるように、化学的又は生化学的に修飾され得、非天然又は誘導体化ヌクレオチド塩基を含み得る。
【０５６７】
「ポリペプチド」、「タンパク質性分子」、「ペプチド」及び「タンパク質」という用語は、本明細書において互換的に使用されて、アミノ酸残基のポリマー並びにそのバリアント及び合成類似体を指す。したがって、これらの用語は、１つ以上のアミノ酸残基が対応する天然アミノ酸の化学的類似体などの合成非天然アミノ酸であるアミノ酸ポリマー並びに天然に存在するアミノ酸ポリマーに適用される。これらの用語は、修飾、例えばグリコシル化、アセチル化、リン酸化などを除外するものではない。主題のタンパク質性分子の可溶性形態が特に有用である。定義には、例えば、非天然アミノ酸又は置換された連結を有するポリペプチドを含む、アミノ酸の１つ以上の類似体を含むポリペプチドが含まれる。
【０５６８】
「ポリペプチドバリアント」という用語は、１つ以上のアミノ酸が異なるアミノ酸で置換されているポリペプチドを指す。以下に記載するように、ポリペプチドの活性の性質を変えることなく、いくつかのアミノ酸を広く類似した特性を有する他のものに変え得ること（保存的置換）は、当技術分野で十分に理解されるであろう。これらの用語は、１つ以上のアミノ酸が付加若しくは欠失した又は異なるアミノ酸で置換されたポリペプチドも包含する。
【０５６９】
本明細書で使用する「予防する」、「予防される」又は「予防している」という用語は、疾患又は状態の発症に対する対象の抵抗性を増加させるか、又は換言すれば、対象が疾患又は状態を発症する可能性を減少させる予防的処置及び疾患又は状態が始まった後、それを軽減するか、又は全て排除するか、又は悪化を防ぐための処置を指す。これらの用語は、その範囲内に、疾患又は状態の素因があり得るが、依然としてそれを有すると診断されていない対象に疾患又は状態が発生するのを予防することも含む。
【０５７０】
本明細書における「プロモーター」への言及は、その最も広い文脈でとられるべきであり、発達及び／又は環境刺激に応じて、又は組織特異的又は細胞型特異的な方法で遺伝子発現を変化させるＣＣＡＡＴボックス配列及び追加の調節要素（すなわち上流の活性化配列、エンハンサー及びサイレンサー）を伴い又は伴わず、正確な転写開始に必要なＴＡＴＡボックスを含む、古典的なゲノム遺伝子の転写調節配列を含む。プロモーターは、必ずしもではないが、通常、発現を調節する構造遺伝子の上流又は５’に位置している。さらに、プロモーターを含む調節要素は、通常、遺伝子の転写開始部位から２ｋｂ以内に位置している。本発明による好ましいプロモーターは、細胞における発現をさらに増強し、且つ／又は作動可能に接続される構造遺伝子の発現のタイミングを変更するための１つ以上の特定の調節エレメントの追加のコピーを含み得る。
【０５７１】
「近接性」とは、２つの完全体（一般にポリペプチド）間の距離を指す。例えば、ＲＡＧＥポリペプチドとＧＰＣＲポリペプチドとの近接性は、２つのポリペプチド間の相対的距離を意味する。２つのポリペプチドが直接相互作用する場合、それらは、空間的に互いに近いと見なされるか、又は近接近（ｃｌｏｓｅ  ｐｒｏｘｉｍｉｔｙ）にあると説明される。２つのポリペプチドが同一のヘテロマー及び／又は高分子複合体の一部であるが、直接相互作用していない場合も、それらは、近接近にあると見なされる。より具体的には、本発明の目的のために、約３０ｎｍ以下、１０ｎｍ以下又は５ｎｍ以下の距離は近接近にあると見なされる。
【０５７２】
「近接スクリーニングアッセイ」とは、検出可能な近接性シグナルを生成するために第１及び第２のレポーター成分を近接させることを含むアッセイ、システム又は実験的アプローチを意味する。第１及び第２のレポーター成分の近接により、検出器による検出が可能な近接シグナルが生成される。第１及び第２のレポーター成分は、本発明の機能に明らかな影響を与えることなく、第１のレポーター成分が第２のレポーター成分と交換され得る（すなわちＲＡＧＥポリペプチドにカップリングされた第１のレポーター成分及びＧＰＣＲポリペプチドにカップリングされた第２のレポーター成分又はＧＰＣＲポリペプチドにカップリングされた第１のレポーター成分及びＲＡＧＥポリペプチドにカップリングされた第２のレポーター成分）という意味で相補的な対を構成する。ＲＡＧＥポリペプチドとＧＰＣＲポリペプチドとの間又はレポーター成分間の直接の物理的接触は、必要でなく、１つ以上の連結分子によって媒介され得る。好ましくは、レポーター成分開始剤の存在下で第１及び第２のレポーター成分の近接により生成される近接シグナルは、発光、蛍光及び比色変化からなる群から選択される。いくつかの実施形態では、発光は、ルシフェラーゼ、ガラクトシダーゼ、ラクタマーゼ、ペルオキシダーゼ又は適切な基質の存在下で発光可能な任意のタンパク質からなる群から選択される生物発光タンパク質によって産生される。
【０５７３】
「レポーター成分」という用語は、別のレポーター成分に近接すると検出可能な近接シグナルの放出を生じることができる、有機又は無機、タンパク質性又は非タンパク質性又はその複合体の任意の既知の化合物であり得る。いくつかの実施形態では、レポーター成分は、ＲＡＧＥポリペプチド及び／又はＡＴ１Ｒなどのアンジオテンシン受容体又はＣＣＲ２などの特定のケモカイン受容体などの特定の共存ＧＰＣＲポリペプチドとカップリングした酵素、発光分子又はその一部、蛍光分子又はその一部及び転写因子又は他の分子を含むか、それからなるか又はそれから本質的になる群から選択される。いくつかの実施形態では、レポーター成分は、酵素、発光又は生物発光分子、蛍光分子及び酵素切断部位を組み込んだリンカーにより、ＲＡＧＥポリペプチド及び／又は特定の共存ＧＰＣＲポリペプチドにカップリングした転写因子又は他の分子を含み得る。
【０５７４】
本発明のいくつかの態様では、近接レポーターシステムは、ドナー及び／又はアクセプター分子となることができるレポーター成分の対の組み合わせを含む。したがって、本発明に従って使用することができるレポーター成分は、その物理的特性に基づいて選択することができ、共鳴エネルギー移動（ＲＥＴ）の技術分野で知られているように、２つは、それらが一緒にＲＥＴペアのドナー分子及びアクセプター分子を構成するように選択される。ＲＥＴペア内のレポーター成分の１つが生物発光タンパク質である場合、ＲＥＴは、生物発光ＲＥＴ（ＢＲＥＴ）として知られている。ＲＥＴペアを形成する両方のレポーター成分がフルオロフォアである場合、得られるＲＥＴは、蛍光ＲＥＴ（ＦＲＥＴ）として知られている。既知の適切なドナーとアクセプターの対の例は、ウミシイタケルシフェラーゼ（又はそのバリアント）及び黄色蛍光タンパク質；ウミシイタケルシフェラーゼ（又はそのバリアント）及び緑色蛍光タンパク質（又はそのバリアント）；ＮａｎｏＬｕｃ及び黄色蛍光タンパク質；ＮａｎｏＬｕｃ及びｍＣｈｅｒｒｙ蛍光タンパク質；ＮａｎｏＬｕｃ及びＨａｌｏＴａｇ（適切なＨａｌｏＴａｇリガンドを伴う）；シアン蛍光タンパク質及び黄色蛍光タンパク質；フルオレセイン及びテトラメチルローダミン；５−（２’−アミノエチル）アミノナフタレン−１−スルホン酸（ＥＤＡＮＳ）及びフルオレセインを含む（一般的に、Ｒ．Ｈａｕｇｌａｎｄ、Ｈａｎｄｂｏｏｋ  ｏｆ  Ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｔ  Ｐｒｏｂｅｓ  ａｎｄ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｃｈｅｍｉｃａｌｓ、Ｓｉｘｔｈ  Ｅｄ．１９９５を参照されたい）。フルオロフォアの一方又は両方は、緑色蛍光タンパク質などの蛍光タンパク質であり得、ＲＡＧＥポリペプチド又は特定の共存ＧＰＣＲポリペプチドと蛍光タンパク質との融合タンパク質を調製することにより、フルオロフォアとして蛍光タンパク質を使用することが特に有利である。
【０５７５】
第１及び第２のレポーター成分の好ましい組み合わせには、蛍光レポーター成分を伴う発光レポーター成分、非蛍光消光剤を伴う発光レポーター成分、非蛍光消光剤を伴う蛍光レポーター成分、共鳴エネルギー移動が可能な第１及び第２の蛍光レポーター成分が含まれる。しかしながら、第１及び第２のレポーター成分の有用な組み合わせは、決してこれらに限定されるものではない。本発明によって利用され得る第１及び第２のレポーター成分の代替の組み合わせには、米国特許第６８９３８２７号明細書（Ａｐｐｌｅｒａ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ）；米国特許第６８００４４５号明細書（Ａｐｐｌｅｒａ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ）；米国特許第７０４９０７６号明細書（Ｓｅｎｔｉｇｅｎ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｉｎｃ．及びＴｈｅ  Ｔｒｕｓｔｅｅｓ  ｏｆ  Ｃｏｌｕｍｂｉａ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｃｉｔｙ  ｏｆ  Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ）；米国特許第６１１０６９３号明細書（Ｄｕｋｅ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ）；米国特許第５８９１６４６号明細書（Ｄｕｋｅ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ）；国際公開第２００５／０３１３０９号パンフレット（ＯＤＹＳＳＥＹ  ＴＨＥＲＡ  ＩＮＣ．）；及び米国特許第８１０１３７３号明細書（ＤｉｓｃｏｖｅＲｘ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ）に例示されるものが含まれる。
【０５７６】
本明細書で使用される「カップリング」、「直接的にカップリング」及び「間接的にカップリング」という用語は、レポーター構成要素が、ＲＡＧＥポリペプチド及び／又は特定の共存ＧＰＣＲポリペプチドに付着又は会合して、分析又は検出されることができる実体を形成することを意味する。レポーター成分のＲＡＧＥポリペプチド及び／又は特定の共存ＧＰＣＲポリペプチドへの直接的又は間接的カップリングは、化学架橋、タンパク質の化学修飾、アミノ酸の化学修飾、核酸の化学修飾、炭水化物の化学修飾、脂質の化学修飾、他の有機又は無機分子の化学修飾、ビオチン−アビジン相互作用、抗原抗体相互作用及び核酸ハイブリダイゼーションを含む、２つの分子をカップリングする任意の既知の共有又は非共有手段によるものであり得る。本発明の一形態では、レポーター成分は、リンカーによってＲＡＧＥポリペプチド及び／又は特定の共存ＧＰＣＲポリペプチドに間接的にカップリングされる。いくつかの実施形態では、リンカーは、酵素切断部位を含む。ＲＡＧＥポリペプチド及び／又は特定の共存ＧＰＣＲポリペプチドと、タンパク質性レポーター成分とを結合する直接的方法の例は、遺伝子融合であり、ＲＡＧＥポリペプチド及び／又は特定の共存ＧＰＣＲポリペプチドをコードする遺伝子と、生物発光又は蛍光タンパク質とが融合して単一のポリペプチド鎖を生成する。直接的カップリング法の別の例は、コンジュゲートであり、ＲＡＧＥポリペプチド及び／又は特定の共存ＧＰＣＲポリペプチドとレポーター成分とのカップリングは、リガーゼ、ヒドロラーゼ、特にホスファターゼ、エステラーゼ及びグリコシダーゼ又はオキシドレダクターゼ、特にペルオキシダーゼなどの酵素を使用する。
【０５７７】
本発明の好ましい実施形態では、ＲＡＧＥポリペプチドは、レポーター成分と共に単一のポリペプチド鎖を形成し、且つ／又は特定の共存ＧＰＣＲポリペプチドはレポーター成分と共に単一のポリペプチド鎖を形成する。本発明の特に好ましい形態では、レポーター成分は、異なる。追加の機能性は、同じポリペプチド鎖の一部を形成し得る。例えば、単一のポリペプチド鎖は、融合構築物のアフィニティー精製に使用されるペプチド配列をコードする配列；及び／又は融合構築物を真核細胞の細胞内コンパートメントに導くペプチド配列をコードする配列；及び／又は真核細胞膜の透過を促進するペプチド配列をコードする配列；及び／又は抗体の使用又は他の方法によって発現レベルを評価することを可能にする配列をさらに含む。
【０５７８】
「調節配列」とは、特定の宿主細胞において作動可能に連結されたヌクレオチド配列（例えば、コード配列）を発現させる核酸配列（例えば、ＤＮＡ）を意味する。原核細胞に適した調節配列には、例えば、プロモーターが含まれ、任意選択により、オペレーター配列及びリボソーム結合部位などのシス作用性配列が含まれる。真核細胞に適した制御配列には、ｍＲＮＡの安定性を調節するプロモーター、ポリアデニル化シグナル、転写エンハンサー、翻訳エンハンサー、リーダー又はトレーリング配列及び転写されたポリヌクレオチドによってコードされる産物を細胞における細胞内コンパートメント又は細胞外環境に標的化する標的化配列が含まれる。
【０５７９】
「塩」、「誘導体」及び「プロドラッグ」という用語には、レシピエントへの投与時に本発明の化合物又はその活性代謝物若しくは残基を（直接的又は間接的に）提供することができる任意の薬学的に許容される塩、エステル、水和物又は他の化合物が含まれる。適切な薬学的に許容される塩には、塩酸、硫酸、リン酸、硝酸、炭酸、ホウ酸、スルファミン酸及び臭化水素酸などの薬学的に許容される無機酸の塩又は酢酸、プロピオン酸、酪酸、酒石酸、マレイン酸、ヒドロキシマレイン酸、フマル酸、クエン酸、乳酸、ムチン酸、グルコン酸、安息香酸、コハク酸、シュウ酸、フェニル酢酸、メタンスルホン酸、トルエンスルホン酸、ベンゼンスルホン酸、サリチル酸、スルファニル酸、アスパラギン酸、グルタミン酸、エデト酸、ステアリン酸、パルミチン酸、オレイン酸、ラウリン酸、パントテン酸、タンニン酸、アスコルビン酸及び吉草酸などの薬学的に許容される有機酸の塩が含まれる。塩基塩には、ナトリウム、カリウム、リチウム、カルシウム、マグネシウム、アンモニウム及びアルキルアンモニウムなどの薬学的に許容される陽イオンで形成されるものが含まれるが、これらに限定されない。また、塩基性窒素含有基は、メチル、エチル、プロピル及びブチル塩化物、臭化物及びヨウ化物などの低級アルキルハロゲン化物；硫酸ジメチル及びジエチルのような硫酸ジアルキル；他の薬剤で四級化され得る。しかしながら、薬学的に許容されない塩も薬学的に許容される塩の調製に有用であり得るため、本発明の範囲に含まれることが理解されるであろう。塩及びプロドラッグ及び誘導体の調製は、当技術分野で公知の方法により実施することができる。例えば、金属塩は、本発明の化合物と金属水酸化物との反応により調製することができる。酸塩は、適切な酸を本発明の化合物と反応させることにより調製することができる。
【０５８０】
「選択的」という用語は、ＲＡＧＥポリペプチド又は特定の共存ＧＰＣＲポリペプチドの別の生物学的相互作用を実質的に調節することなく、ＲＡＧＥポリペプチドと特定の共存ＧＰＣＲポリペプチドとの間の相互作用、適切には物理的相互作用（例えば、結合）を調節する化合物を指す。したがって、直接のＲＡＧＥ−特定の共存ＧＰＣＲ相互作用に対して選択的である化合物は、ＲＡＧＥの別の結合活性又は別の基質若しくは結合パートナーへの特定の共存ＧＰＣＲの別の結合活性の調節に関して約２倍、５倍、１０倍、２０倍、５０倍超又は約１００超の選択性を示す。
【０５８１】
本明細書で使用される「配列同一性」という用語は、比較ウィンドウにわたってヌクレオチドごとに又はアミノ酸ごとに配列が同一である程度を指す。したがって、「配列同一性の割合」は、比較ウィンドウにわたって２つの最適にアラインされた配列を比較すること、同一の核酸塩基（例えば、Ａ、Ｔ、Ｃ、Ｇ、Ｉ）又は同一のアミノ酸残基（例えば、Ａｌａ、Ｐｒｏ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｇｌｙ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｈｅ、Ｔｙｒ、Ｔｒｐ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、Ｈｉｓ、Ａｓｐ、Ｇｌｕ、Ａｓｎ、Ｇｌｎ、Ｃｙｓ及びＭｅｔ）が両方の配列で発生する位置の数を決定して、一致する位置の数を得ること、一致する位置の数を比較ウィンドウ内の位置の総数（すなわちウィンドウサイズ）で除すこと及び結果に１００を掛けて配列同一性の割合を求めることによって計算される。本発明の目的のために、「配列同一性」は、適切な方法によって計算された「一致割合」を意味すると理解されるであろう。例えば、配列同一性解析は、ソフトウェアに付属の参照マニュアルで使用されている標準のデフォルトを使用して、ＤＮＡＳＩＳコンピュータープログラム（Ｗｉｎｄｏｗｓ用バージョン２．５、Ｈｉｔａｃｈｉ  Ｓｏｆｔｗａｒｅ  Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ  Ｃｏ．，Ｌｔｄ．，Ｓｏｕｔｈ  Ｓａｎ  Ｆｒａｎｃｉｓｃｏ，Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ，ＵＳＡから入手可能）を使用して実行され得る。
【０５８２】
「類似性」とは、以下で定義されるように、同一であるか又は保存的置換を構成するアミノ酸のパーセンテージを指す。
【０５８３】
【表３２】
2020531514.tif 000043
【０５８４】
類似性は、ＧＡＰ（Ｄｅｖｅｒａｕｘ  ｅｔ  ａｌ．１９８４，Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  １２，３８７−３９５）などの配列比較プログラムを使用して決定され得る。この方法では、本明細書で引用したものと類似又は実質的に異なる長さの配列は、アライメントにギャップを挿入することにより比較され得、そのようなギャップは、例えばＧＡＰにより使用される比較アルゴリズムにより決定される。
【０５８５】
２つ以上のポリヌクレオチド又はポリペプチド間の配列関係を説明するために使用される用語には、「参照配列」、「比較ウィンドウ」、「配列同一性」、「配列同一性の割合」及び「実質的同一性」が含まれる。「参照配列」は、その長さが、ヌクレオチド及びアミノ酸残基を含む、少なくとも１２モノマー単位であるが、多くの場合に１５〜１８モノマー単位であり、多くの場合少なくとも２５モノマー単位である。２つのポリヌクレオチドは、それぞれ（１）２つのポリヌクレオチド間で類似している配列（すなわち、完全なポリヌクレオチド配列の一部のみ）、及び（２）２つのポリヌクレオチド間で異なっている配列を含み得、２つ（又はそれ以上）のポリヌクレオチド間の配列比較は、典型的には、「比較ウィンドウ」にわたって２つのポリヌクレオチドの配列を比較して、配列類似性の局所領域を同定及び比較することにより行われる。「比較ウィンドウ」とは、少なくとも６つの連続した位置、一般的には約５０〜約１００、より一般的には約１００〜約１５０の概念的なセグメントを指し、２つの配列が最適にアラインされた後、配列は、同じ数の連続した位置の参照配列と比較される。比較ウィンドウは、２つの配列の最適なアライメントのために、参照配列（付加又は欠失を含まない）と比較して約２０％以下の付加又は欠失（すなわちギャップ）を含み得る。比較ウィンドウをアラインするための配列の最適なアライメントは、アルゴリズムのコンピューター化された実装（ＧＡＰ、ＢＥＳＴＦＩＴ、ＦＡＳＴＡ及びＴＦＡＳＴＡ、Ｗｉｓｃｏｎｓｉｎ  Ｇｅｎｅｔｉｃｓ  Ｓｏｆｔｗａｒｅ  Ｐａｃｋａｇｅ  Ｒｅｌｅａｓｅ  ７．０，Ｇｅｎｅｔｉｃｓ  Ｃｏｍｐｕｔｅｒ  Ｇｒｏｕｐ，５７５  Ｓｃｉｅｎｃｅ  Ｄｒｉｖｅ  Ｍａｄｉｓｏｎ，ＷＩ，ＵＳＡ）又は検査及び選択された様々な方法のいずれかによって生成された最良のアラインメント（すなわち比較ウィンドウにわたって最高の相同性割合をもたらす）によって行われ得る。例えば、Ａｌｔｓｃｈｕｌ  ｅｔ  ａｌ．，１９９７，Ｎｕｃｌ．Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．２５：３３８９に開示されるように、ＢＬＡＳＴファミリーのプログラムを参照し得る。配列分析の詳細な議論は、Ａｕｓｕｂｅｌ  ｅｔ  ａｌ．，“Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，”  Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ＆Ｓｏｎｓ  Ｉｎｃ，１９９４−１９９８，Ｃｈａｐｔｅｒ  １５のＵｎｉｔ  １９．３に見ることができる。
【０５８６】
本明細書で使用される「小分子」とは、３キロダルトン（ｋＤａ）未満、典型的には１．５キロダルトン未満、より好ましくは約１キロダルトン未満の分子量を有する組成物を指す。小分子は、核酸、ペプチド、ポリペプチド、ペプチド模倣物、炭水化物、脂質又は他の有機（炭素含有）又は無機分子であり得る。当業者に理解されるように、本説明に基づいて、多くの場合、真菌、細菌又は藻類の抽出物である、化学的及び／又は生物学的混合物の広範なライブラリを本発明のアッセイのいずれかでスクリーニングして、生物活性を調節する化合物を同定し得る。「小有機分子」とは、３ｋＤａ未満、１．５ｋＤａ未満又はさらに約１ｋＤａ未満の分子量を有する有機化合物（又は無機化合物（金属など）と複合した有機化合物）である。
【０５８７】
本明細書で使用される「ストリンジェンシー」とは、ハイブリダイゼーション及び洗浄手順中の温度及びイオン強度条件並びに特定の有機溶媒の有無を指す。ストリンジェンシーが高いほど、固定化された標的ヌクレオチド配列と洗浄後に標的にハイブリダイズしたままであるプローブヌクレオチド配列との間の相補性の程度が高くなる。ストリンジェンシー条件には、低、中、高及び非常に高いストリンジェンシー条件が含まれ、ハイブリダイゼーション及び洗浄の特定の条件を表す。ハイブリダイゼーション反応を行うためのガイダンスは、Ａｕｓｕｂｅｌ  ｅｔ  ａｌ．，（１９９８、上掲），セクション６．３．１〜６．３．６に見出すことができる。その参照文献には、水性及び非水性の方法が記載されており、どちらも使用することができる。本明細書における低ストリンジェンシー条件への言及は、４２℃でのハイブリダイゼーションについて少なくとも約１％ｖ／ｖ〜少なくとも約１５％ｖ／ｖのホルムアミド及び少なくとも約１Ｍ〜少なくとも約２Ｍの塩並びに４２℃での洗浄について少なくとも約１Ｍ〜少なくとも約２Ｍの塩を含み、包含する。低ストリンジェンシー条件は、６５℃でのハイブリダイゼーションについて１％ウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）、１ｍＭ  ＥＤＴＡ、０．５Ｍ  ＮａＨＰＯ４（ｐＨ７．２）、７％ＳＤＳ及び室温での洗浄について、（ｉ）２×ＳＳＣ、０．１％ＳＤＳ；又は（ｉｉ）０．５％ＢＳＡ、１ｍＭ  ＥＤＴＡ、４０ｍＭ  ＮａＨＰＯ４（ｐＨ７．２）、５％ＳＤＳも含み得る。低ストリンジェンシー条件の一実施形態は、約４５°Ｃの６×塩化ナトリウム／クエン酸ナトリウム（ＳＳＣ）中でのハイブリダイゼーション、その後、少なくとも５０°Ｃの０．２×ＳＳＣ、０．１％ＳＤＳ中での２回洗浄（洗浄液の温度は、低ストリンジェンシー条件について５５℃に上げることができる）を含む。中ストリンジェンシー条件は、４２℃でのハイブリダイゼーションについて少なくとも約１６％ｖ／ｖ〜少なくとも約３０％ｖ／ｖのホルムアミド及び少なくとも約０．５Ｍ〜少なくとも約０．９Ｍの塩並びに５５℃での洗浄について少なくとも約０．１Ｍ〜少なくとも約０．２Ｍの塩を含み、包含する。中ストリンジェンシー条件は、６５℃でのハイブリダイゼーションについて１％ウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）、１ｍＭ  ＥＤＴＡ、０．５Ｍ  ＮａＨＰＯ４（ｐＨ７．２）、７％ＳＤＳ及び６０〜６５℃での洗浄について、（ｉ）２××ＳＳＣ、０．１％ＳＤＳ；又は（ｉｉ）０．５％ＢＳＡ、１ｍＭ  ＥＤＴＡ、４０ｍＭ  ＮａＨＰＯ４（ｐＨ７．２）、５％ＳＤＳも含み得る。中ストリンジェンシー条件の一実施形態は、約４５℃の６××ＳＳＣ中でのハイブリダイダイゼーション、その後、６０°Ｃの０．２××ＳＳＣ、０．１％ＳＤＳ中での１回以上の洗浄を含む。高ストリンジェンシー条件は、４２℃でのハイブリダイゼーションについて少なくとも約３１％ｖ／ｖ〜少なくとも約５０％ｖ／ｖのホルムアミド及び約０．０１Ｍ〜約０．１５Ｍの塩並びに５５℃での洗浄について約０．０１Ｍ〜約０．０２Ｍの塩を含み、包含する。高ストリンジェンシー条件は、６５℃でのハイブリダイゼーションについて１％ＢＳＡ、１ｍＭ  ＥＤＴＡ、０．５Ｍ  ＮａＨＰＯ４（ｐＨ７．２）、７％ＳＤＳ及び６５℃を超える温度での洗浄について、（ｉ）０．２××ＳＳＣ、０．１％ＳＤＳ；又は（ｉｉ）０．５％ＢＳＡ、１ｍＭ  ＥＤＴＡ、４０ｍＭ  ＮａＨＰＯ４（ｐＨ７．２）、１％ＳＤＳも含み得る。高ストリンジェンシー条件の一実施形態は、約４５℃の６××ＳＳＣ中でのハイブリダイダイゼーション、その後、６５°Ｃの０．２××ＳＳＣ、０．１％ＳＤＳ中での１回以上の洗浄を含む。特定の実施形態では、ペプチド又はポリペプチドは、非常に高いストリンジェンシー条件下で参照ヌクレオチド配列にハイブリダイズするポリヌクレオチドによってコードされる。非常に高いストリンジェンシー条件の一実施形態は、約６５℃の０．５Ｍリン酸ナトリウム、７％ＳＤＳのハイブリダイダイゼーション、その後、６５°Ｃの０．２×ＳＳＣ、１％ＳＤＳでの１回以上の洗浄を含む。他のストリンジェンシー条件は、当技術分野で周知であり、当業者は、ハイブリダイゼーションの特異性を最適化するために様々な因子を操作できることを認識するであろう。最終洗浄のストリンジェンシーの最適化は、高度なハイブリダイゼーションを保証するのに役立ち得る。詳細な例については、Ａｕｓｕｂｅｌ  ｅｔ  ａｌ．，上掲、２．１０．１〜２．１０．１６ページ及びＳａｍｂｒｏｏｋ  ｅｔ  ａｌ．（１９８９、上掲），セクション１．１０１〜１．１０４を参照されたい。ストリンジェントな洗浄は、典型的には約４２℃〜６８℃の温度で実施されるが、当業者は、他の温度がストリンジェントな条件に適し得ることを理解するであろう。ＤＮＡ−ＤＮＡハイブリッドの形成では、典型的には、最大ハイブリダイゼーション速度はＴｍの約２０℃〜２５℃下で発生する。Ｔｍが融解温度又は２つの相補的ポリヌクレオチド配列が解離する温度であることは、当技術分野で周知である。Ｔｍを推定する方法は、当技術分野で周知である（上掲のＡｕｓｕｂｅｌ  ｅｔ  ａｌ．，２．１０．８ページを参照されたい）。一般に、完全に一致したＤＮＡの二重鎖のＴｍは、次式により近似値として予測され得る。
Ｔｍ＝８１．５＋１６．６（ｌｏｇ１０Ｍ）＋０．４１（％Ｇ＋Ｃ）−０．６３（％ホルムアミド）−（６００／長さ）
式中、Ｍは、Ｎａ＋の濃度であり、好ましくは０．０１モル〜０．４モルの範囲であり；％Ｇ＋Ｃは、塩基の総数の割合としてのグアノシン塩基とシトシン塩基の合計であり、３０％〜７５％Ｇ＋Ｃの範囲内であり；％ホルムアミドは、体積によるパーセントホルムアミド濃度であり；長さは、ＤＮＡ二重鎖における塩基対の数である。二重鎖ＤＮＡのＴｍは、無作為にミスマッチした塩基対の数が１％増加するごとにおよそ１℃減少する。洗浄は、通常、高ストリンジェンシーの場合にはＴｍ−１５℃で、中ストリンジェンシーの場合にはＴｍ−３０°℃で実行される。ハイブリダイゼーション手順の一例では、固定化ＤＮＡを含有する膜（例えば、ニトロセルロース膜又はナイロン膜）は、標識プローブを含有するハイブリダイゼーション緩衝液（５０％脱イオン化ホルムアミド、５×ＳＳＣ、５×デンハート溶液（０．１％フィコール、０．１％ポリビニルピロリドン及び０．１％ウシ血清アルブミン）、０．１％ＳＤＳ及び２００ｍｇ／ｍＬ変性サケ精子ＤＮＡ）中、４２°℃で一晩ハイブリダイズされる。次いで、膜を２回連続して中程度のストリンジェンシー洗浄（すなわち４５℃で１５分間、２×ＳＳＣ、０．１％ＳＤＳ、その後、５０℃で１５分間、２×ＳＳＣ、０．１％ＳＤＳ）に供し、その後、２回連続して、より高いストリンジェンシー洗浄（すなわち５５℃で１２分間、０．２×ＳＳＣ、０．１％ＳＤＳ、その後、６５〜６８℃で１２分間、０．２×ＳＳＣ及び０．１％ＳＤＳ溶液に供する。
【０５８８】
本明細書で互換的に使用される「対象」、「宿主」、「個体」又は「患者」という用語は、治療又は予防が望まれる任意の対象、特に脊椎動物対象、さらにより具体的には哺乳類対象を指す。本発明の範囲に含まれる適切な脊椎動物には、霊長類（例えば、ヒト、サル及び類人猿並びにマカク属（例えば、Ｍａｃａｃａ  ｆａｓｃｉｃｕｌａｒｉｓなどのカニクイザル及び／又はアカゲザル（Ｍａｃａｃａ  ｍｕｌａｔｔａ）など）及びヒヒ（Ｐａｐｉｏ  ｕｒｓｉｎｕｓ）並びにマーモセット（Ｃａｌｌｉｔｈｒｉｘ属の種）、リスザル（Ｓａｉｍｉｒｉ属の種）及びタマリン（Ｓａｇｕｉｎｕｓ属の種）並びにチンパンジー（Ｐａｎ  ｔｒｏｇｌｏｄｙｔｅｓ）などの類人猿の種などのサルの種を含む）、げっ歯類（例えば、マウス、ラット、モルモット）、ウサギ類（例えば、ウサギ、ノウサギ）、ウシ（ｂｏｖｉｎｅ）（例えば、ウシ（ｃａｔｔｌｅ））、ヒツジ（ｏｖｉｎｅ）（例えば、ヒツジ（ｓｈｅｅｐ））、ヤギ（ｃａｐｒｉｎｅ）（例えば、ヤギ（ｇｏａｔ））、ブタ（ｐｏｒｃｉｎｅ）（例えば、ブタ（ｐｉｇ））、ウマ（ｅｑｕｉｎｅ）（例えば、ウマ（ｈｏｒｓｅ））、イヌ（ｃａｒｉｎｅ）（例えば、イヌ（ｄｏｇ））、ネコ（ｆｅｌｉｎｅ）（例えば、ネコ（ｃａｔ））、鳥類（例えば、ニワトリ、シチメンチョウ、アヒル、ガチョウ及びカナリア、セキセイインコなどのコンパニオンバード）、海洋哺乳類（例えば、イルカ、クジラ）、爬虫類（例えば、ヘビ、カエル、トカゲ）及び魚を含む、脊索動物門の任意のメンバーが含まれるが、これらに限定されない。特定の実施形態では、対象は、ヒトなどの霊長類である。ただし、「患者」、「対象」、「宿主」又は「個人」という用語は、症状が存在することを意味するものではないことを理解されたい。
【０５８９】
本明細書で使用される「処置」、「処置している」などの用語は、所望の薬理学的及び／又は生理学的効果を得ることを指す。その効果は、疾患又は状態（例えば、血液悪性腫瘍）及び／又は疾患又は状態に起因する有害効果の部分的又は完全な治癒の点で治療的であり得る。これらの用語は、哺乳動物、特にヒトの状態又は疾患の任意の処置にも適用され、（ａ）疾患又は状態を阻害すること、すなわちその発症を阻止すること；又は（ｂ）疾患又は状態を緩和すること、すなわち疾患又は状態の退行を引き起こすことを含む。
【０５９０】
「バリアント」という用語は、参照野生型タンパク質と何らかの形で異なるタンパク質を指すために広く使用されており、タンパク質は、参照野生型タンパク質の生物学的特性を保持し得るか、又は参照野生型タンパク質と異なる生物学的特性を有し得る。主題のタンパク質の「生物学的特性」という用語には、最大発光、量子収量、明るさなどのスペクトル特性；インビボ及び／又はインビトロでの安定性（例えば、半減期）などが含まれるが、これらに限定されない。バリアントは、単一アミノ酸の変化（置換）、１つ以上のアミノ酸の欠失（点欠失）、Ｎ末端切断、Ｃ末端切断、挿入などを含み得る。ポリペプチドバリアントは、分子生物学で周知の標準的な手法を使用して生成できる。
【０５９１】
「ベクター」とは、核酸分子、好ましくは例えばプラスミド、バクテリオファージ又は植物ウイルスに由来するＤＮＡ分子を意味し、その中に核酸配列が挿入又はクローニングされ得る。ベクターは、好ましくは、１つ以上の固有の制限部位を含有し、標的細胞若しくは組織又は前駆細胞若しくはその組織を含む定義された宿主細胞で自己複製可能であり得るか、又はクローン化された配列が複製可能であるように、定義された宿主のゲノムと統合可能であり得る。したがって、ベクターは、自律的に複製するベクター、すなわち染色体外実体として存在するベクターであり、その複製は、染色体複製とは独立したもの、例えば線形又は閉環状プラスミド、染色体外要素、ミニ染色体又は人工染色体である。ベクターは、自己複製を保証するための任意の手段を含有し得る。代わりに、ベクターは、宿主細胞に導入されたときにゲノムに組み込まれ、組み込まれた染色体と共に複製されるものであり得る。ベクターシステムは、単一のベクター又はプラスミド又は２つ以上のベクター又はプラスミドを含み得、これらは、一緒になって宿主細胞のゲノムに導入される全ＤＮＡ又はトランスポゾンを含む。ベクターの選択は、典型的には、ベクターが導入される宿主細胞とのベクターの互換性に依存するであろう。ベクターは、適切な形質転換体の選択に使用できる抗生物質耐性遺伝子などの選択マーカーを含み得る。そのような耐性遺伝子の例は、当業者に周知である。
【０５９２】
文脈がそうでないことを要しない限り、「ＲＡＧＥ」又は「ＲＡＧＥポリペプチド」は、ＡＧＥＲヌクレオチド若しくはＡＧＥＲポリヌクレオチド又はＲＡＧＥヌクレオチド若しくはＲＡＧＥポリヌクレオチドとしても知られるＡＧＥＲ遺伝子の転写及び翻訳及び／又は選択的スプライシングから生成される１つ又は複数のタンパク質産物を示すものとする。
【０５９３】
文脈がそうでないことを要しない限り、「ＡＴ１Ｒ」、又は「ＡＴ１Ｒポリペプチド」、又は「ＡＴ１受容体」、又は「ＡＴ１Ｒ」は、ＡＴ１Ｒヌクレオチド又はＡＴ１Ｒポリヌクレオチドとしても知られるＡＧＴＲ１、Ａｇｔｒ１ａ又はＡｇｔｒ１ｂ遺伝子の転写及び翻訳及び／又は選択的スプライシングから生成される１つ又は複数のタンパク質産物を示すものとする。例えば、ヒトでは、１つの遺伝子が染色体３ｑ２１〜ｑ２５に位置するＡＴ１Ｒをコードしている（ＩＵＰＨＡＲデータベース、ｗｗｗ．ｇｕｉｄｅｔｏｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ．ｏｒｇ）。マウスでは、２つの遺伝子、染色体１３  １６．０  ｃＭに位置するＡｇｔｒ１ａ及び染色体３  ７．６  ｃＭに位置するＡｇｔｒ１ｂがＡＴ１Ｒをコードする（ＩＵＰＨＡＲデータベース、ｗｗｗ．ｇｕｉｄｅｔｏｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ．ｏｒｇ）。ラットでは、２つの遺伝子、染色体１７ｑ１２に位置するＡｇｔｒ１ａ及び染色体２ｑ２４に位置するＡｇｔｒ１ｂがＡＴ１Ｒをコードする（ＩＵＰＨＡＲデータベース、ｗｗｗ．ｇｕｉｄｅｔｏｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ．ｏｒｇ）。
【０５９４】
いくつかの場合、Ａｇｔｒ１ａ遺伝子の１つ又は複数のタンパク質産物は、ＡＴ１ａＲと称される場合があり、Ａｇｔｒ１ｂ遺伝子の１つ又は複数のタンパク質産物は、ＡＴ１ｂＲと称される場合があるが、Ａｇｔｒ１ａ及びＡｇｔｒ１ｂ遺伝子の１つ又は複数のタンパク質産物は、両方ともＡＴ１Ｒと称され得る。
【０５９５】
本明細書に記載の各実施形態は、特に明記しない限り、必要な変更を加えて各実施形態に適用されるものとする。
【０５９６】
＜２．略語＞
次の略語は、本出願全体で使用される。
ａａ＝アミノ酸；
ｄ＝日；
ｈ＝時間；
ｋｂ＝キロ塩基又はキロ塩基対；
ｋＤａ＝キロダルトン；
ｎｍ＝ナノメートル；
ｎｔ＝ヌクレオチド；
ｎｔｓ＝ヌクレオチド（複数）；
ｓ＝秒
【０５９７】
＜３．受容体ポリペプチド並びにポリペプチドをコードする構築物及びヌクレオチド配列＞
一部の実施形態では、受容体ポリペプチドをコードするポリヌクレオチドは、生物発光又は蛍光ドナー分子又は蛍光アクセプター分子又は近接スクリーニングアッセイの他の適切なレポーター成分をコードする核酸配列に作動可能に接続される。所望のポリペプチドのコード配列が単離又は合成されると、それらは、発現（例えば、一時的発現又は安定発現）に適した任意の構築物にクローン化することができる。クローニング及び発現ベクターを含む多数の構築物が当業者に知られており、適切な構築物の選択は、当業者の技術の範囲内である。
【０５９８】
いくつかの実施形態では、ＤＮＡ合成、ＰＣＲ突然変異誘発及び制限エンドヌクレアーゼ消化とその後のＰＣＲ連結を含む通常の技術及び分子生物学的方法を使用して、受容体ポリヌクレオチドコード配列が適切な構築物内の位置に挿入される。コアタンパク質の任意のコード配列は、本発明のキメラポリペプチドをコードする核酸配列を調製するのに適している。
【０５９９】
クローニング、突然変異などの本発明に適用可能な分子生物学的手法を説明する一般的なテキストには、Ｂｅｒｇｅｒ  ａｎｄ  Ｋｉｍｍｅｌ，Ｇｕｉｄｅ  ｔｏ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ  Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ，Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ  ｖｏｌｕｍｅ  １５２  Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ，Ｉｎｃ．，Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ，Ｃａｌｉｆ．（Ｂｅｒｇｅｒ）；Ｓａｍｂｒｏｏｋ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ-Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ（３ｒｄ  Ｅｄ．），Ｖｏｌ．１−３，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ，Ｎ．Ｙ．，２０００（“Ｓａｍｂｒｏｏｋ”）及びＣｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｆ．Ｍ．Ａｕｓｕｂｅｌ  ｅｔ  ａｌ．，ｅｄｓ．，Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ，ａ  ｊｏｉｎｔ  ｖｅｎｔｕｒｅ  ｂｅｔｗｅｅｎ  Ｇｒｅｅｎｅ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ａｓｓｏｃｉａｔｅｓ，Ｉｎｃ．及びＪｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ＆Ｓｏｎｓ，Ｉｎｃ．，（“Ａｕｓｕｂｅｌ”）が含まれる。これらのテキストは、突然変異誘発、ベクターの使用、プロモーター及び例えばキメラコアタンパク質のクローニング及び発現に関連する他の多くの関連トピックを説明している。
【０６００】
＜３．１  終末糖化産物受容体（ＲＡＧＥ）ポリペプチド＞
ＲＡＧＥの重要な役割は、メイラード反応によりアミノ基が非酵素的に修飾された糖化タンパク質を含む終末糖化産物（ＡＧＥ）に結合することである。ＲＡＧＥは、一般的なモチーフを介してリガンドのクラスを検出するその能力のため、多くの場合にパターン認識受容体と称される。
【０６０１】
本発明の特定の実施形態では、ＲＡＧＥポリペプチドは、ＲＡＧＥタンパク質配列を含むか、又はＲＡＧＥタンパク質配列と少なくとも７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８又は９９％の配列同一性又は類似性を共有する。いくつかの実施形態では、ＲＡＧＥタンパク質配列は、哺乳動物ＲＡＧＥタンパク質配列に対応する。いくつかの実施形態では、ＲＡＧＥタンパク質配列は、ヒト（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｑ１５１０９）、マウス（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｑ６２１５１）ウシ（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｑ２８１７３）、ラット（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｑ６３４９５）、マカク（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｇ７Ｐ２Ｑ８）及びイヌ（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｑ２０ＪＶ７）からなる群から選択される哺乳動物に由来する。好ましい実施形態では、ＲＡＧＥタンパク質配列は、ヒト野生型ＲＡＧＥタンパク質配列（例えば、ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｑ１５１０９）又はこの配列の機能的断片に対応する。ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｑ１５１０９で定義されるヒト全長野生型タンパク質配列は、以下の通りである。
【化１１】
2020531514.tif 000044
【０６０２】
野生型ＲＡＧＥは、５つの異なるドメインを含む。ＲＡＧＥの細胞外ドメインは、３つの免疫グロブリン様（Ｉｇ）ドメイン、Ｖ、Ｃ１及びＣ２ドメイン（配列番号１４の残基２３〜３４２）を保有する。これらのＩｇドメインは、それぞれＶ型、Ｃ型及びＳ型に属する。第４のドメインは、単一の膜貫通（ＴＭ）ヘリックス（配列番号１４の残基３４３〜３６１）及び最後にキナーゼ活性を欠き、構造化されていないと推定される（Ｎｅｅｐｅｒｓ，１９９２を参照されたい）細胞質側テール（配列番号１４の残基３６２〜４０４、配列番号１に記載）を含む。さらに、ヒト野生型ＲＡＧＥタンパク質配列は、２２アミノ酸のＮ末端シグナルペプチドを含み、これは、ＲＡＧＥタンパク質の原形質膜への輸送における役割を果たすことが以前に示されている。
【０６０３】
本明細書全体を通して、文脈がそうでないことを要しない限り、ＲＡＧＥの細胞外ドメインへの言及は、野生型ＲＡＧＥ（配列番号１４）のアミノ酸残基２３〜３４２への言及を意味する。
【０６０４】
本明細書全体を通して、文脈がそうでないことを要しない限り、ＲＡＧＥの膜貫通ドメインへ（又はＴＭ）の言及は、野生型ＲＡＧＥ（配列番号１４）のアミノ酸残基３４３〜３６１への言及を意味する。
【０６０５】
本明細書全体を通して、文脈がそうでないことを要しない限り、ＲＡＧＥの細胞質側テールへの言及は、野生型ＲＡＧＥ（配列番号１４）のアミノ酸残基３６２〜４０４への言及を意味する。
【０６０６】
本発明の一形態では、ＲＡＧＥポリペプチドは、哺乳動物野生型ＲＡＧＥタンパク質配列のトランケート型を含む。例えば、ＲＡＧＥポリペプチド配列は、ＲＡＧＥリガンド誘導性シグナル伝達を損なうようにＲＡＧＥの細胞外ドメインの１つ以上のリガンド結合領域（Ｖ、Ｃ又はＳ型Ｉｇドメイン）が変異又は欠失したヒト野生型ＲＡＧＥタンパク質配列を含み得る。非限定的な例として、本発明での使用に適したＲＡＧＥポリペプチドは、配列番号１に記載のヒト野生型ＲＡＧＥタンパク質配列のアミノ酸残基３６２〜４０４を含んでいた。
【０６０７】
ＲＡＧＥの細胞質側テール（配列番号１の残基３６２〜４０４）は、シグナル伝達の原因である。いくつかの実施形態では、本発明のＲＡＧＥポリペプチドは、ＲＡＧＥの細胞質側テール又はその断片又は変異、切断（トランケート）若しくは融合断片を含むか、それからなるか又はそれから本質的になる。例えば、ＲＡＧＥポリペプチドは、配列番号１に記載のヒト野生型ＲＡＧＥの残基３６２〜４０４を含むか、それからなるか又はそれから本質的になり得る。
【０６０８】
＜３．２  ＲＡＧＥポリペプチドをコードするベクター及びヌクレオチド配列＞
本発明は、上記及び本明細書の他の箇所に広く記載されているように、ＲＡＧＥポリペプチドをコードする単離ポリヌクレオチド配列及び構築物も包含する。これらのポリヌクレオチド配列又は構築物を含む宿主細胞も企図される。
【０６０９】
いくつかの実施形態では、ポリヌクレオチド配列は、例えば、ＧｅｎＢａｎｋ受託番号Ｌ３３４１２．１、ＥＵ５７０２４７．１、ＥＵ５７０２４６．１、ＥＵ５７０２４５．１、ＥＵ５７０２４４．１、ＥＵ５７０２４２．１、ＥＵ５７０２４１．１、ＥＵ５７０２４０．１に記載の、マウスＡＧＥＲヌクレオチド配列に対応する配列を含む。
【０６１０】
いくつかの実施形態では、ポリヌクレオチド配列は、例えば、ＧｅｎＢａｎｋ受託番号Ｍ９１２１２．１又はＮＭ＿１７３９８２．３に記載の、ウシＡＧＥＲヌクレオチド配列に対応する配列を含む。
【０６１１】
いくつかの実施形態では、ポリヌクレオチド配列は、例えば、ＧｅｎＢａｎｋ受託番号Ｌ３３４１３．１、ＮＭ＿０５３３３６．２に記載の、ラットＡＧＥＲヌクレオチド配列に対応する配列を含む。
【０６１２】
いくつかの実施形態では、ポリヌクレオチド配列は、例えば、ＧｅｎＢａｎｋ受託番号ＣＭ００１２７９．１、ＮＭ＿００１２０５１１７．１、ＧＵ１３９４０８．１、ＧＵ１３９４０９．１、ＧＵ１３９４１０．１、ＧＵ１３９４１１．１、ＧＵ１３９４１２．１、ＧＵ１３９４１３．１、ＧＵ１３９４１４．１、ＧＵ１３９４１５．１、ＧＵ１３９４１６．１、ＧＵ１３９４１７．１、ＧＵ１３９４１８．１、ＧＵ１３９４１９．１、ＧＵ１３９４２０．１、ＧＵ１３９４２１．１、ＧＵ１３９４２２．１に記載の、マカクＡＧＥＲヌクレオチド配列に対応する配列を含む。
【０６１３】
いくつかの実施形態では、ポリヌクレオチド配列は、例えば、ＧｅｎＢａｎｋ受託番号ＤＱ１２５９３６．１、ＤＱ１２５９３７．１、ＤＱ１２５９３８．１、ＤＱ１２５９４０．１又はＤＱ１２５９３９に記載の、イヌＡＧＥＲヌクレオチド配列に対応する配列を含む。
【０６１４】
いくつかの実施形態では、ポリヌクレオチド配列は、例えば、ＧｅｎＢａｎｋ受託番号ＡＦ００１０９５．１、ＡＢ０６１６６８．１、ＡＪ０１２７５３．１、Ｙ１８０６０．１、ＥＵ８２６６２０．１、ＥＵ８２６６１８．１、ＥＵ８２６６１７．１、ＥＵ８２６６１６．１、ＡＦ０６５２１３．１、ＡＦ０６５２１２．１、ＡＦ０６５２１０．１、ＣＵ６９０９７７．１、ＣＵ６９０９７６．１、ＡＪ２３８８９６．１、Ｙ１８７６２．１に記載の、ヒトＡＧＥＲヌクレオチド配列に対応する配列を含む。このタイプのいくつかの実施形態では、ポリヌクレオチドは、これらの配列のいずれか１つと少なくとも７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８又は９９％の配列同一性を共有するＡＧＥＲヌクレオチド配列を含む。
【０６１５】
いくつかの実施形態では、ＡＧＥＲポリヌクレオチドコード配列は、野生型哺乳類ＲＡＧＥタンパク質と少なくとも５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９２％、９５％、９９％若しくは１００％の配列同一性を有するポリペプチドをコードするヌクレオチド配列又はその断片を含む。いくつかの実施形態では、ＡＧＥＲポリヌクレオチドは、低、中又は高ストリンジェンシー条件下で野生型哺乳類ＲＡＧＥタンパク質のオープンリーディングフレームにハイブリダイズするヌクレオチド配列又はその断片を含む。
【０６１６】
＜３．３  １型アンジオテンシンＩＩ受容体（ＡＴ１Ｒ）ポリペプチド＞
ＡＴ１ＲによるＧタンパク質依存性シグナル伝達は、正常な心血管ホメオスタシスに不可欠であるが、慢性機能障害には有害であり、これは、細胞死及び組織線維症に関連し、心肥大及び心不全を引き起こす（Ｍａ  ｅｔ  ａｌ．，２０１０）。
【０６１７】
その高い医学的関連性及び数十年の研究にもかかわらず、ＡＴ１Ｒの構造及び十分に確立されたＡＴ１Ｒブロッカー（ＡＲＢ）の結合モードは、最近解明されたに過ぎない（Ｚｈａｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，２０１５）。この構造は、ＡＴ１Ｒの細胞外部分がヘリックスＩＩ及びＩＩＩを連結するＮ末端セグメントＥＣＬ１（ヒトＡＴ１ＲのＧｌｕ９１〜Ｐｈｅ９６）、ヘリックスＩＶ及びＶを連結するＥＣＬ２（ヒトＡＴ１ＲのＨｉｓ１６６〜Ｉｌｅ１９１）並びにヘリックスＶＩをＶＩＩに連結するＥＣＬ３（ヒトＡＴ１ＲのＩｌｅ２７０〜Ｃｙｓ２７４）からなることを示していた。２つのジスルフィド結合は、Ｎ末端とＥＣＬ３を接続するＣｙｓ１８〜Ｃｙｓ２７４及びヘリックスＩＩＩとＥＣＬ２（ＡＴ１Ｒと約３６％の配列同一性を共有するケモカイン受容体ＣＸＣＲ４に類似）を接続するＣｙｓ１０１〜Ｃｙｓ１８０によるＡＴ１Ｒの細胞外側の形成を促進する。
【０６１８】
本発明の特定の実施形態では、ＡＴ１Ｒポリペプチドは、ＡＴ１Ｒタンパク質配列を含むか、又はＡＴ１Ｒタンパク質配列と少なくとも７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８又は９９％の配列同一性又は類似性を共有する。
【０６１９】
いくつかの実施形態では、ＡＴ１Ｒタンパク質配列は、哺乳動物ＡＴ１Ｒタンパク質配列に対応する。適当なＡＴ１Ｒ配列は、適切には、ヒト（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｐ３０５５６）、ヒツジ（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｏ７７５９０）、ウシ（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｐ２５１０４）、ウサギ（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｐ３４９７６）、モルモット（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｑ９ＷＶ２６）、ブタ（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｐ３０５５５）、チンパンジー（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｑ９ＧＬＮ９）、スナネズミ（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｏ３５２１０、ラット（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｐ２９０８９）、マウス（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｐ２９７５４）、ネコ（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｍ３ＶＶＡ２）、タスマニアデビル（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｇ３Ｗ０Ｍ６）、ウマ（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｆ７Ｄ１Ｎ０）及びパンダ（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｄ２ＨＷＤ９）を含む群から選択される哺乳動物からのものであり得る。
【０６２０】
いくつかの好ましい実施形態では、ＡＴ１Ｒタンパク質配列は、ヒトＡＴ１Ｒタンパク質配列に対応する。いくつかの実施形態では、ＡＴ１Ｒポリペプチドは、以下に記載のヒト全長野生型ＡＴ１Ｒタンパク質配列（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｐ３０５５６）又は野生型ＡＴ１Ｒタンパク質配列の機能的断片を含む。
【化１２】
2020531514.tif 000045
【０６２１】
本発明の一形態では、ＡＴ１Ｒポリペプチドは、哺乳動物野生型ＡＴ１Ｒタンパク質配列のトランケート型を含む。例えば、ＡＴ１Ｒポリペプチド配列は、Ｃ末端切断を有するヒト野生型ＡＴ１Ｒタンパク質配列を含み得る（例えば、アミノ酸残基３２０〜３５９は、切断され得る）。代わりに又はさらに、ＡＴ１Ｒポリペプチド配列は、Ｎ末端切断を有する野生型ＡＴ１Ｒタンパク質配列を含み得る。Ｃ末端又はＮ末端切断の代替として又はそれに加えて、野生型ＡＴ１Ｒタンパク質配列の内部セクションを除去するために切断が行われ得る（例えば、アミノ酸残基７〜１６は、切断され得る）。非限定的な例として、本発明での使用に適したＡＴ１Ｒポリペプチドは、配列番号１６に記載のヒト野生型ＡＴ１Ｒタンパク質配列のアミノ酸残基２〜６及び１７〜３１９を含んでいた。
【０６２２】
＜３．４  ＡＴ１Ｒポリペプチドをコードする構築物及びヌクレオチド配列＞
本発明は、上記及び本明細書の他の箇所に広く記載されているように、ＡＴ１Ｒポリペプチドをコードする単離ポリヌクレオチド配列及び構築物も包含する。これらのポリヌクレオチド配列又は構築物を含む宿主細胞も企図される。
【０６２３】
いくつかの実施形態では、ポリヌクレオチド配列は、例えば、ＧｅｎＢａｎｋ受託番号ＫＲ７１１４２４．１、ＫＲ７１１４２３．１、ＫＲ７１１４２２．１、ＫＲ７１１４２１．１、ＫＪ８９６３９９．１、ＫＪ８９６３９８．１、ＮＭ＿０３２０４９．３、ＮＭ＿０３１８５０．３、ＮＭ＿００４８３５．４、ＮＭ＿０００６８５．４、ＮＭ＿００９５８５．３、ＤＱ８９５６０１．２、ＢＣ０６８４９４．１、ＢＣ０２２４４７．１、ＤＱ８９２３８８．２及びＡＫ２９１５４１．１に記載の、ヒトＡＴ１Ｒヌクレオチドに対応する（すなわちＡＧＴＲ１遺伝子に対応する）配列を含む。このタイプの代表的な例では、ポリヌクレオチドは、これらの配列のいずれか１つと少なくとも７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８又は９９％の配列同一性を共有するＡＴ１Ｒヌクレオチド配列を含む。
【０６２４】
いくつかの実施形態では、ＡＴ１Ｒポリヌクレオチドコード配列は、野生型哺乳類ＡＴ１Ｒポリヌクレオチドと少なくとも５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９２％、９５％、９９％若しくは１００％の配列同一性を有するポリペプチドをコードするヌクレオチド配列又はその断片を含む。いくつかの実施形態では、ＡＴ１Ｒポリヌクレオチドは、低、中又は高ストリンジェンシー条件下で野生型哺乳類ＡＴ１Ｒタンパク質のオープンリーディングフレームにハイブリダイズするヌクレオチド配列又はその断片を含む。
【０６２５】
＜３．５  アデノシン１受容体（Ａ１Ｒ）ポリペプチド＞
Ａ１Ｒは、心血管系の重要なレギュレーターであり、神経、代謝及び骨格プロセスにおけるものなどの様々な他の役割も有する（Ｆｒｅｄｈｏｌｍ  ｅｔ  ａｌ．，２０１１）。
【０６２６】
現在まで、Ａ１Ｒの結晶構造は、依然として公開されておらず、受容体の構造的機能及びリガンド結合機能は、突然変異誘発及び相同性モデリングなどの間接的なアプローチを通じて推測しなければならない。Ａ１Ｒの細胞外部分は、Ｎ末端セグメント（ヒトＡ１ＲのＭｅｔ１〜Ｓｅｒ４）、ヘリックスＩＩ及びＩＩＩを連結するＥＣＬ１（ヒトＡ１ＲのＰｒｏ７３〜Ｔｈｒ７５）、ヘリックスＩＶ及びＶを連結するＥＣＬ２（ヒトＡ１ＲのＴｒｐ１４６〜Ｉｌｅ１７５）及びヘリックスＶＩをＶＩＩに連結するＥＣＬ３（ヒトＡ１ＲのＰｒｏ２６１〜Ｌｙｓ２６５）からなる。４つのジスルフィド結合がＡ１Ｒの細胞外側に形成され得（Ａ２Ａの結晶構造で見られるように）、これがリガンド結合溝の安定化を促進すると考えられている（Ｐｉｉｒａｉｎｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，２０１１）。
【０６２７】
本発明の特定の実施形態では、Ａ１Ｒポリペプチドは、Ａ１Ｒタンパク質配列を含むか、又はＡ１Ｒタンパク質配列と少なくとも７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８又は９９％の配列同一性又は類似性を共有する。
【０６２８】
いくつかの実施形態では、Ａ１Ｒタンパク質配列は、哺乳動物Ａ１Ｒタンパク質配列に対応する。適当なＡ１Ｒ配列は、適切には、チンパンジー（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｈ２Ｑ０Ｘ８）、ウシ（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｐ２８１９０）、イヌ（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｐ１１６１６）、モルモット（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｐ４７７４５）、ウマ（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｆ６ＲＡＮ５）、ヒト（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｐ３０５４２）、マウス（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｑ６０６１２）、パンダ（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｇ１Ｍ０Ｗ２）、ブタ（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｉ３ＬＥＮ５）、ウサギ（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号。Ｐ３４９７０）、ラット（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｏ０８７６６）、ラット（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｐ２５０９９）、ヒツジ（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｗ５ＮＳＹ０）、タスマニアデビル（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｇ３ＷＶＡ４）を含む群から選択される哺乳動物からのものであり得る。
【０６２９】
いくつかの好ましい実施形態では、Ａ１Ｒタンパク質配列は、ヒトＡ１Ｒタンパク質配列に対応する。いくつかの実施形態では、Ａ１Ｒポリペプチドは、以下に記載のヒト全長野生型Ａ１Ｒタンパク質配列（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｐ３０５４２）又は野生型Ａ１Ｒタンパク質配列の機能的断片を含む。
【化１３】
2020531514.tif 000046
【０６３０】
本発明の一形態では、Ａ１Ｒポリペプチドは、哺乳動物野生型Ａ１Ｒタンパク質配列のトランケート型を含む。例えば、Ａ１Ｒポリペプチド配列は、Ｃ末端切断を有するヒト野生型Ａ１Ｒタンパク質配列を含み得る（例えば、アミノ酸残基３１５〜３２６は、切断され得る）。代わりに又はさらに、Ａ１Ｒポリペプチド配列は、Ｎ末端切断を有する野生型Ａ１Ｒタンパク質配列を含み得る。Ｃ末端又はＮ末端切断の代替として又はそれに加えて、野生型Ａ１Ｒタンパク質配列の内部セクションを除去するために切断が行われ得る（例えば、アミノ酸残基１５４〜１６１は、切断され得る）。非限定的な例として、本発明での使用に適したＡ１Ｒポリペプチドは、配列番号１７に記載のヒト野生型Ａ１Ｒタンパク質配列のアミノ酸残基２〜１５３及び１６２〜３１４を含んでいた。
【０６３１】
＜３．６  Ａ１Ｒポリペプチドをコードする構築物及びヌクレオチド配列＞
本発明は、上記及び本明細書の他の箇所に広く記載されているように、Ａ１Ｒポリペプチドをコードする単離ポリヌクレオチド配列及び構築物も包含する。これらのポリヌクレオチド配列又は構築物を含む宿主細胞も企図される。
【０６３２】
いくつかの実施形態では、ポリヌクレオチド配列は、例えば、ＧｅｎＢａｎｋ受託番号ＣＲ５４１７４９．１、ＮＭ＿０００６７４．２、ＮＭ＿００１０４８２３０．１、ＮＧ＿０５２９１７．１、ＫＣ８８４７４４．１、ＫＣ８８１１０８．１、Ｌ２２２１４．１、ＡＹ１３６７４６．１及びＢＣ０２６３４０．１に記載の、ヒトＡ１Ｒヌクレオチドに対応する（すなわちＡＤＯＲＡ１遺伝子に対応する）配列を含む。このタイプの代表的な例では、ポリヌクレオチドは、これらの配列のいずれか１つと少なくとも７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８又は９９％の配列同一性を共有するＡ１Ｒヌクレオチド配列を含む。
【０６３３】
いくつかの実施形態では、Ａ１Ｒポリヌクレオチドコード配列は、野生型哺乳類Ａ１Ｒポリヌクレオチドと少なくとも５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９２％、９５％、９９％若しくは１００％の配列同一性を有するポリペプチドをコードするヌクレオチド配列又はその断片を含む。いくつかの実施形態では、Ａ１Ｒポリヌクレオチドは、低、中又は高ストリンジェンシー条件下で野生型哺乳類Ａ１Ｒタンパク質のオープンリーディングフレームにハイブリダイズするヌクレオチド配列又はその断片を含む。
【０６３４】
＜３．７  アドレナリン作動性α１Ａ受容体（α１Ａ−ＡＲ）ポリペプチド＞
α１Ａ−ＡＲは、心血管系の調節に関与し、特に血圧及び心収縮性の増加を媒介するようである（Ｃｈｅｎ＆Ｍｉｎｎｅｍａｎ，２００５）。
【０６３５】
現在まで、α１Ａ−ＡＲの結晶構造は、依然として公開されておらず、受容体の構造的機能及びリガンド結合機能は、突然変異誘発及び相同性モデリングなどの間接的なアプローチを通じて推測しなければならない。α１Ａ−ＡＲの細胞外部分は、Ｎ末端セグメント（ヒトα１Ａ−ＡＲのＭｅｔ１〜Ａｓｎ２２）、ヘリックスＩＩ及びＩＩＩを連結するＥＣＬ１（ヒトα１Ａ−ＡＲのＧｌｙ９０〜Ｐｈｅ９４）、ヘリックスＩＶ及びＶを連結するＥＣＬ２（ヒトα１Ａ−ＡＲのＴｒｐ１６５〜Ｇｌｕ１８０）及びヘリックスＶＩをＶＩＩに連結するＥＣＬ３（ヒトα１Ａ−ＡＲのＰｒｏ２９９〜Ｐｒｏ３０３）からなる。大半のＧＰＣＲのように、α１Ａ−ＡＲは、ＥＣＬ１とＥＣＬ２とを接続するジスルフィド結合を含有する可能性がある（Ｆｉｎｃｈ  ｅｔ  ａｌ．，２００６）。
【０６３６】
本発明の特定の実施形態では、α１Ａ−ＡＲポリペプチドは、α１Ａ−ＡＲタンパク質配列を含むか、又はα１Ａ−ＡＲタンパク質配列と少なくとも７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８又は９９％の配列同一性又は類似性を共有する。
【０６３７】
いくつかの実施形態では、α１Ａ−ＡＲタンパク質配列は、哺乳動物α１Ａ−ＡＲタンパク質配列に対応する。適当なα１Ａ−ＡＲ配列は、適切には、ネコ（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｍ３ＷＲＵ５）、チンパンジー（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｈ２Ｒ０Ｔ２）、ウシ（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｆ１ＭＹＩ６）、イヌ（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ａ０Ａ０Ａ０ＭＰＢ９）、スナネズミ（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｅ０ＡＥ５５）、ゴリラ（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｇ３ＱＥ１７）、モルモット（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｑ９ＷＵ２５）、ウマ（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｆ６ＵＴＱ３）、ヒト（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｅ７ＥＷ１６）、マウス（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｑ８ＢＵＥ５）、ウサギ（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｇ１ＴＭ０７）、ラット（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｐ７０６４８）、アカゲザル（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｆ７ＤＬＫ７）、ヒツジ（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｗ５ＰＪ３４）を含む群から選択される哺乳動物からのものであり得る。
【０６３８】
いくつかの好ましい実施形態では、α１Ａ−ＡＲタンパク質配列は、ヒトα１Ａ−ＡＲタンパク質配列に対応する。いくつかの実施形態では、α１Ａ−ＡＲポリペプチドは、以下に記載のヒト全長野生型α１Ａ−ＡＲタンパク質配列（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｅ７ＥＷ１６）又は野生型α１Ａ−ＡＲタンパク質配列の機能的断片を含む。
【化１４】
2020531514.tif 000047
【０６３９】
本発明の一形態では、α１Ａ−ＡＲポリペプチドは、哺乳動物野生型α１Ａ−ＡＲタンパク質配列のトランケート型を含む。例えば、α１Ａ−ＡＲポリペプチド配列は、Ｃ末端切断を有するヒト野生型α１Ａ−ＡＲタンパク質配列を含み得る（例えば、アミノ酸残基３４２〜４１３は、切断され得る）。代わりに又はさらに、α１Ａ−ＡＲポリペプチド配列は、Ｎ末端切断を有する野生型α１Ａ−ＡＲタンパク質配列を含み得る。Ｃ末端又はＮ末端切断の代替として又はそれに加えて、野生型α１Ａ−ＡＲタンパク質配列の内部セクションを除去するために切断が行われ得る（例えば、アミノ酸残基１７４〜１８５は、切断され得る）。非限定的な例として、本発明での使用に適したα１Ａ−ＡＲポリペプチドは、配列番号１８に記載のヒト野生型α１Ａ−ＡＲタンパク質配列のアミノ酸残基２〜１７３及び１８６〜３４１を含んでいた。
【０６４０】
＜３．８  α１Ａ−ＡＲポリペプチドをコードする構築物及びヌクレオチド配列＞
本発明は、上記及び本明細書の他の箇所に広く記載されているように、α１Ａ−ＡＲポリペプチドをコードする単離ポリヌクレオチド配列及び構築物も包含する。これらのポリヌクレオチド配列又は構築物を含む宿主細胞も企図される。
【０６４１】
いくつかの実施形態では、ポリヌクレオチド配列は、例えば、ＧｅｎＢａｎｋ受託番号ＡＹ３８９５０５．１、ＮＧ＿０２９３９５．１、ＮＭ＿００１３２２５０４．１、ＮＭ＿００１３２２５０２．１、ＮＭ＿０３３３０４．３、ＮＭ＿０３３３０３．４、ＮＭ＿０３３３０２．３、ＮＲ＿１３６３４３．１、ＮＭ＿０００６８０．３、ＮＭ＿００１３２２５０３．１、ＡＹ４９１７８１．１、ＡＹ４９１７８０．１、ＡＹ４９１７７９．１、ＡＹ４９１７７８．１、ＡＹ４９１７７７．１及びＡＹ４９１７７６．１に記載の、ヒトα１Ａ−ＡＲヌクレオチドに対応する（すなわちＡＤＲＡ１Ａ遺伝子に対応する）配列を含む。このタイプの代表的な例では、ポリヌクレオチドは、これらの配列のいずれか１つと少なくとも７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８又は９９％の配列同一性を共有するα１Ａ−ＡＲヌクレオチド配列を含む。
【０６４２】
いくつかの実施形態では、α１Ａ−ＡＲポリヌクレオチドコード配列は、野生型哺乳類α１Ａ−ＡＲポリヌクレオチドと少なくとも５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９２％、９５％、９９％若しくは１００％の配列同一性を有するポリペプチドをコードするヌクレオチド配列又はその断片を含む。いくつかの実施形態では、α１Ａ−ＡＲポリヌクレオチドは、低、中又は高ストリンジェンシー条件下で野生型哺乳類α１Ａ−ＡＲタンパク質のオープンリーディングフレームにハイブリダイズするヌクレオチド配列又はその断片を含む。
【０６４３】
＜３．９  アドレナリン作動性α１Ｂ受容体（α１Ｂ−ＡＲ）ポリペプチド＞
α１Ｂ−ＡＲは、心血管系の調節、自発運動及びグルコース代謝に関与する（Ｃｈｅｎ＆Ｍｉｎｎｅｍａｎ，２００５）。
【０６４４】
現在まで、α１Ｂ−ＡＲの結晶構造は、依然として公開されておらず、受容体の構造的機能及びリガンド結合機能は、突然変異誘発及び相同性モデリングなどの間接的なアプローチを通じて推測しなければならない。α１Ｂ−ＡＲの細胞外部分は、Ｎ末端セグメント（ヒトα１Ｂ−ＡＲのＭｅｔ１〜Ｔｈｒ３６）、ヘリックスＩＩ及びＩＩＩを連結するＥＣＬ１（ヒトα１Ｂ−ＡＲのＧｌｙ１０９〜Ｌｅｕ１１３）、ヘリックスＩＶ及びＶを連結するＥＣＬ２（ヒトα１Ｂ−ＡＲのＬｙｓ１８５〜Ｇｌｕ１９９）及びヘリックスＶＩをＶＩＩに連結するＥＣＬ３（ヒトα１Ｂ−ＡＲのＳｅｒ３２１〜Ｐｒｏ３２５）からなる。大半のＧＰＣＲのように、α１Ｂ−ＡＲはＥＣＬ１とＥＣＬ２を接続するジスルフィド結合を含有する可能性がある（Ｆｉｎｃｈ  ｅｔ  ａｌ．，２００６）。
【０６４５】
本発明の特定の実施形態では、α１Ｂ−ＡＲポリペプチドは、α１Ｂ−ＡＲタンパク質配列を含むか、又はα１Ｂ−ＡＲタンパク質配列と少なくとも７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８又は９９％の配列同一性又は類似性を共有する。
【０６４６】
いくつかの実施形態では、α１Ｂ−ＡＲタンパク質配列は、哺乳動物α１Ｂ−ＡＲタンパク質配列に対応する。適当なα１Ｂ−ＡＲ配列は、適切には、チンパンジー（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｈ２ＱＲＸ４）、ウシ（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｆ１ＭＧＡ６）、イヌ（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｆ１ＰＫ７１）、ゴリラ（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｇ３Ｓ９７７）、モルモット（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｈ０ＷＢＱ９）、ハムスター（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｐ１８８４１）、ウマ（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｆ７ＡＴＭ９）、ヒト（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｐ３５３６８）、マーモセット（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｕ３ＤＲ８６）、マウス（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｐ９７７１７）、ブタ（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｆ１ＲＲ３６）、ウサギ（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｕ３ＫＭ５９）、ラット（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｐ１５８２３）、タスマニアデビル（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｇ３ＶＷＸ９）を含む群から選択される哺乳動物からのものであり得る。
【０６４７】
いくつかの好ましい実施形態では、α１Ｂ−ＡＲタンパク質配列は、ヒトα１Ｂ−ＡＲタンパク質配列に対応する。いくつかの実施形態では、α１Ｂ−ＡＲポリペプチドは、以下に記載のヒト全長野生型α１Ｂ−ＡＲタンパク質配列（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｐ３５３６８）又は野生型α１Ｂ−ＡＲタンパク質配列の機能的断片を含む。
【化１５】
2020531514.tif 000048
【０６４８】
本発明の一形態では、α１Ｂ−ＡＲポリペプチドは、哺乳動物野生型α１Ｂ−ＡＲタンパク質配列のトランケート型を含む。例えば、α１Ｂ−ＡＲポリペプチド配列は、Ｃ末端切断を有するヒト野生型α１Ｂ−ＡＲタンパク質配列を含み得る（例えば、アミノ酸残基３６５〜５２０は、切断され得る）。代わりに又はさらに、α１Ｂ−ＡＲポリペプチド配列は、Ｎ末端切断を有する野生型α１Ｂ−ＡＲタンパク質配列を含み得る。Ｃ末端又はＮ末端切断の代替として又はそれに加えて、野生型α１Ｂ−ＡＲタンパク質配列の内部セクションを除去するために切断が行われ得る（例えば、アミノ酸残基１８６〜１９６は、切断され得る）。非限定的な例として、本発明での使用に適したα１Ｂ−ＡＲポリペプチドは、配列番号１９に記載のヒト野生型α１Ｂ−ＡＲタンパク質配列のアミノ酸残基２〜１８５及び１９７〜３６４を含んでいた。
【０６４９】
＜３．１０  α１Ｂ−ＡＲポリペプチドをコードする構築物及びヌクレオチド配列＞
本発明は、上記及び本明細書の他の箇所に広く記載されているように、α１Ｂ−ＡＲポリペプチドをコードする単離ポリヌクレオチド配列及び構築物も包含する。これらのポリヌクレオチド配列又は構築物を含む宿主細胞も企図される。
【０６５０】
いくつかの実施形態では、ポリヌクレオチド配列は、例えば、ＧｅｎＢａｎｋ受託番号ＮＭ＿０００６７９．３、ＡＹ５３０１９１．１、ＥＵ３３２８３１．１、ＢＣ１３６５６９．１及びＢＣ１３６５６８．１に記載の、ヒトα１Ｂ−ＡＲヌクレオチドに対応する（すなわちＡＤＲＡ１Ｂ遺伝子に対応する）配列を含む。このタイプの代表的な例では、ポリヌクレオチドは、これらの配列のいずれか１つと少なくとも７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８又は９９％の配列同一性を共有するα１Ｂ−ＡＲヌクレオチド配列を含む。
【０６５１】
いくつかの実施形態では、α１Ｂ−ＡＲポリヌクレオチドコード配列は、野生型哺乳類α１Ｂ−ＡＲポリヌクレオチドと少なくとも５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９２％、９５％、９９％若しくは１００％の配列同一性を有するポリペプチドをコードするヌクレオチド配列又はその断片を含む。いくつかの実施形態では、α１Ｂ−ＡＲポリヌクレオチドは、低、中又は高ストリンジェンシー条件下で野生型哺乳類α１Ｂ−ＡＲタンパク質のオープンリーディングフレームにハイブリダイズするヌクレオチド配列又はその断片を含む。
【０６５２】
＜３．１１  アドレナリン作動性α２Ｂ受容体（α２Ｂ−ＡＲ）ポリペプチド＞
α２Ｂ−ＡＲは、十分に特徴付けられていないＧＰＣＲであるが、血圧調節に関与し、発達過程における役割も有しているようである（Ｋａｂｌｅ  ｅｔ  ａｌ．，２０００）。
【０６５３】
現在まで、α２Ｂ−ＡＲの結晶構造は、依然として公開されておらず、受容体の構造的機能及びリガンド結合機能は、突然変異誘発及び相同性モデリングなどの間接的なアプローチを通じて推測しなければならない。α２Ｂ−ＡＲの細胞外部分は、Ｎ末端セグメント（ヒトα２Ｂ−ＡＲのＭｅｔ１〜Ｓｅｒ８）、ヘリックスＩＩ及びＩＩＩを連結するＥＣＬ１（ヒトα２Ｂ−ＡＲのＧｌｙ７６〜Ｐｈｅ８０）、ヘリックスＩＶ及びＶを連結するＥＣＬ２（ヒトα２Ｂ−ＡＲのＬｙｓ１５１〜Ｇｌｎ１６８）及びヘリックスＶＩをＶＩＩに連結するＥＣＬ３（ヒトα２Ｂ−ＡＲのＰｒｏ３９５〜Ｖａｌ４００）からなる。
【０６５４】
本発明の特定の実施形態では、α２Ｂ−ＡＲポリペプチドは、α２Ｂ−ＡＲタンパク質配列を含むか、又はα２Ｂ−ＡＲタンパク質配列と少なくとも７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８又は９９％の配列同一性又は類似性を共有する。
【０６５５】
いくつかの実施形態では、α２Ｂ−ＡＲタンパク質配列は、哺乳動物α２Ｂ−ＡＲタンパク質配列に対応する。適当なα２Ｂ−ＡＲ配列は、適切には、ネコ（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｍ３Ｘ１Ｆ７）、チンパンジー（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｈ２ＲＨＺ６）、ウシ（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｇ３Ｘ６Ｓ２）、イヌ（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｆ１Ｑ１Ｑ４）、ゴリラ（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｇ３ＲＭＷ６）、モルモット（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｑ６０４７５）、ウマ（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｆ７ＢＷ５４）、ヒト（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｐ１８０８９）、マーモセット（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｆ７ＩＰＲ３）、マウス（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｐ３０５４５）、ブタ（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｑ３８ＰＴ０）、ウサギ（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｇ１ＴＱＬ５）、ラット（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｐ１９３２８）、タスマニアデビル（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｇ３ＶＷＺ４）を含む群から選択される哺乳動物からのものであり得る。
【０６５６】
いくつかの好ましい実施形態では、α２Ｂ−ＡＲタンパク質配列は、ヒトα２Ｂ−ＡＲタンパク質配列に対応する。いくつかの実施形態では、α２Ｂ−ＡＲポリペプチドは、以下に記載のヒト全長野生型α２Ｂ−ＡＲタンパク質配列（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｐ１８０８９）又は野生型α２Ｂ−ＡＲタンパク質配列の機能的断片を含む。
【化１６】
2020531514.tif 000049
【０６５７】
本発明の一形態では、α２Ｂ−ＡＲポリペプチドは、哺乳動物野生型α２Ｂ−ＡＲタンパク質配列のトランケート型を含む。例えば、α２Ｂ−ＡＲポリペプチド配列は、Ｃ末端切断を有するヒト野生型α２Ｂ−ＡＲタンパク質配列を含み得る（例えば、アミノ酸残基４４０〜４４７は、切断され得る）。代わりに又はさらに、α２Ｂ−ＡＲポリペプチド配列は、Ｎ末端切断を有する野生型α２Ｂ−ＡＲタンパク質配列を含み得る。Ｃ末端又はＮ末端切断の代替として又はそれに加えて、野生型α２Ｂ−ＡＲタンパク質配列の内部セクションを除去するために切断が行われ得る（例えば、アミノ酸残基１５３〜１６１は、切断され得る）。非限定的な例として、本発明での使用に適したα２Ｂ−ＡＲポリペプチドは、配列番号２０に記載のヒト野生型α２Ｂ−ＡＲタンパク質配列のアミノ酸残基２〜１５２及び１６２〜４３９を含んでいた。
【０６５８】
＜３．１２  α２Ｂ−ＡＲポリペプチドをコードする構築物及びヌクレオチド配列＞
本発明は、上記及び本明細書の他の箇所に広く記載されているように、α２Ｂ−ＡＲポリペプチドをコードする単離ポリヌクレオチド配列及び構築物も包含する。これらのポリヌクレオチド配列又は構築物を含む宿主細胞も企図される。
【０６５９】
いくつかの実施形態では、ポリヌクレオチド配列は、例えば、ＧｅｎＢａｎｋ受託番号ＮＭ＿０００６８２．６、ＨＦ５８３４９４．１、ＥＵ３３２８４７．１、ＮＧ＿０３２９５０．１、ＡＦ３１６８９５．１、ＤＱ０５７０７６．１、ＢＣ１３６５３７．１、ＢＣ１３３０２１．１及びＡＹ５４８１６７．１に記載の、ヒトα２Ｂ−ＡＲヌクレオチドに対応する（すなわちＡＤＲＡ２Ｂ遺伝子に対応する）配列を含む。このタイプの代表的な例では、ポリヌクレオチドは、これらの配列のいずれか１つと少なくとも７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８又は９９％の配列同一性を共有するα２Ｂ−ＡＲヌクレオチド配列を含む。
【０６６０】
いくつかの実施形態では、α２Ｂ−ＡＲポリヌクレオチドコード配列は、野生型哺乳類α２Ｂ−ＡＲポリヌクレオチドと少なくとも５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９２％、９５％、９９％若しくは１００％の配列同一性を有するポリペプチドをコードするヌクレオチド配列又はその断片を含む。いくつかの実施形態では、α２Ｂ−ＡＲポリヌクレオチドは、低、中又は高ストリンジェンシー条件下で野生型哺乳類α２Ｂ−ＡＲタンパク質のオープンリーディングフレームにハイブリダイズするヌクレオチド配列又はその断片を含む。
【０６６１】
＜３．１３  ブラジキニン受容体Ｂ２（Ｂ２Ｒ）ポリペプチド＞
Ｂ２Ｒは、血管拡張並びに水分及び塩分減少の媒介を通じて血圧降下作用を有することと最も一般的に関連付けられるが、炎症、増殖、アポトーシス、血管新生にも関与する（Ｂｌａｅｓ＆Ｇｉｒｏｌａｍｉ，２０１３）。
【０６６２】
現在まで、Ｂ２Ｒの結晶構造は、依然として公開されておらず、受容体の構造的機能及びリガンド結合機能は、突然変異誘発及び相同性モデリングなどの間接的なアプローチを通じて推測しなければならない。Ｂ２Ｒの細胞外部分は、Ｎ末端セグメント（ヒトＢ２ＲのＭｅｔ１〜Ｇｌｙ５４）、ヘリックスＩＩ及びＩＩＩを連結するＥＣＬ１（ヒトＢ２ＲのＡｓｎ１２０〜Ｐｈｅ１２５）、ヘリックスＩＶ及びＶを連結するＥＣＬ２（ヒトＢ２ＲのＴｈｒ１９７〜Ｉｌｅ２１９）及びヘリックスＶＩをＶＩＩに連結するＥＣＬ３（ヒトＢ２ＲのＩｌｅ３００〜Ｓｅｒ３０２）からなる。大半のＧＰＣＲのように、Ｂ２Ｒは、ＥＣＬ１とＥＣＬ２を接続するジスルフィド結合を含有する可能性がある（Ｌｅｅｂ−Ｌｕｎｄｂｅｒｇ  ｅｔ  ａｌ．，２００５）。
【０６６３】
本発明の特定の実施形態では、Ｂ２Ｒポリペプチドは、Ｂ２Ｒタンパク質配列を含むか、又はＢ２Ｒタンパク質配列と少なくとも７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８又は９９％の配列同一性又は類似性を共有する。
【０６６４】
いくつかの実施形態では、Ｂ２Ｒタンパク質配列は、哺乳動物Ｂ２Ｒタンパク質配列に対応する。適当なＢ２Ｒ配列は、適切には、コウモリ（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｇ１Ｑ１５８）、ネコ（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｍ３ＷＲ０５）、チンパンジー（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｈ２Ｑ８Ｗ１）、ウシ（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｆ１ＭＷＫ０）、イヌ（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｑ９ＢＤＱ４）、モルモット（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｏ７０５２６）、ヒト（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｐ３０４１１）、マーモセット（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｕ３ＣＶＳ９）、マウス（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｐ３２２９９）、パンダ（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｇ１ＬＡＺ３）、ブタ（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｑ９ＧＬＸ８）、ウサギ（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｑ２８６４２）、ラット（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｐ２５０２３）、ヒツジ（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｗ５Ｑ３８２）を含む群から選択される哺乳動物からのものであり得る。
【０６６５】
いくつかの好ましい実施形態では、Ｂ２Ｒタンパク質配列は、ヒトＢ２Ｒタンパク質配列に対応する。いくつかの実施形態では、Ｂ２Ｒポリペプチドは、以下に記載のヒト全長野生型Ｂ２Ｒタンパク質配列（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｐ３０４１１）又は野生型Ｂ２Ｒタンパク質配列の機能的断片を含む。
【化１７】
2020531514.tif 000050
【０６６６】
本発明の一形態では、Ｂ２Ｒポリペプチドは、哺乳動物野生型Ｂ２Ｒタンパク質配列のトランケート型を含む。例えば、Ｂ２Ｒポリペプチド配列は、Ｃ末端切断を有するヒト野生型Ｂ２Ｒタンパク質配列を含み得る（例えば、アミノ酸残基３５１〜３９１は、切断され得る）。代わりに又はさらに、Ｂ２Ｒポリペプチド配列は、Ｎ末端切断を有する野生型Ｂ２Ｒタンパク質配列を含み得る。Ｃ末端又はＮ末端切断の代替として又はそれに加えて、野生型Ｂ２Ｒタンパク質配列の内部セクションを除去するために切断が行われ得る（例えば、アミノ酸残基１９９〜２０８は、切断され得る）。非限定的な例として、本発明での使用に適したＢ２Ｒポリペプチドは、配列番号２１に記載のヒト野生型Ｂ２Ｒタンパク質配列のアミノ酸残基２〜１９８及び２０９〜３５０を含んでいた。
【０６６７】
＜３．１４  Ｂ２Ｒポリペプチドをコードする構築物及びヌクレオチド配列＞
本発明は、上記及び本明細書の他の箇所に広く記載されているように、Ｂ２Ｒポリペプチドをコードする単離ポリヌクレオチド配列及び構築物も包含する。これらのポリヌクレオチド配列又は構築物を含む宿主細胞も企図される。
【０６６８】
いくつかの実施形態では、ポリヌクレオチド配列は、例えば、ＧｅｎＢａｎｋ受託番号ＨＦ５８３４３０．１、ＡＹ２７５４６５．１、ＮＭ＿０００６２３．３、ＫＪ９５０６２８．１、ＡＦ３７８５４２．２、ＢＣ０７４８９４．２及びＢＣ０７４８９５．２に記載の、ヒトＢ２Ｒヌクレオチドに対応する（すなわちＢＤＫＲＢ２遺伝子に対応する）配列を含む。このタイプの代表的な例では、ポリヌクレオチドは、これらの配列のいずれか１つと少なくとも７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８又は９９％の配列同一性を共有するＢ２Ｒヌクレオチド配列を含む。
【０６６９】
いくつかの実施形態では、Ｂ２Ｒポリヌクレオチドコード配列は、野生型哺乳類Ｂ２Ｒポリヌクレオチドと少なくとも５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９２％、９５％、９９％若しくは１００％の配列同一性を有するポリペプチドをコードするヌクレオチド配列又はその断片を含む。いくつかの実施形態では、Ｂ２Ｒポリヌクレオチドは、低、中又は高ストリンジェンシー条件下で野生型哺乳類Ｂ２Ｒタンパク質のオープンリーディングフレームにハイブリダイズするヌクレオチド配列又はその断片を含む。
【０６７０】
＜３．１５  ＣＣケモカイン受容体ＣＣＲ１（ＣＣＲ１）ポリペプチド＞
全てのケモカイン受容体と同様に、ＣＣＲ１は、炎症プロセスの媒介に関与する。これは、Ｔ細胞、単球、好酸球及び好塩基球に見られ、関節リウマチ及び多発性硬化症に関連付けられる（Ｃｈａｒｏ＆Ｒａｎｓｏｈｏｆｆ，２００６）。
【０６７１】
現在まで、ＣＣＲ１の結晶構造は、依然として公開されておらず、受容体の構造的機能及びリガンド結合機能は、突然変異誘発及び相同性モデリングなどの間接的なアプローチを通じて推測しなければならない。ＣＣＲ１の細胞外部分は、Ｎ末端セグメント（ヒトＣＣＲ１のＭｅｔ１〜Ａｓｎ２８）、ヘリックスＩＩ及びＩＩＩを連結するＥＣＬ１（ヒトＣＣＲ１のＡｓｐ９７〜Ｐｈｅ１０１）、ヘリックスＩＶ及びＶを連結するＥＣＬ２（ヒトＣＣＲ１のＬｙｓ１７３〜Ｓｅｒ１９１）及びヘリックスＶＩをＶＩＩに連結するＥＣＬ３（ヒトＣＣＲ１のＴｈｒ２７０〜Ｈｉｓ２７１）からなる。全てのケモカイン受容体と同様に、Ｎ末端は、リガンド結合及び受容体活性化に重要であるようである（Ｋｕｆａｒｅｖａ  ｅｔ  ａｌ．，２０１５）。
【０６７２】
本発明の特定の実施形態では、ＣＣＲ１ポリペプチドは、ＣＣＲ１タンパク質配列を含むか、又はＣＣＲ１タンパク質配列と少なくとも７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８又は９９％の配列同一性又は類似性を共有する。
【０６７３】
いくつかの実施形態では、ＣＣＲ１タンパク質配列は、哺乳動物ＣＣＲ１タンパク質配列に対応する。適当なＣＣＲ１配列は、適切には、ネコ（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｂ６ＤＸＦ４）、チンパンジー（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｈ２ＱＭＧ４）、ウシ（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ａ０ＪＮ７２）、イヌ（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｑ２Ｖ０Ｑ７）、ゴリラ（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｇ３ＲＬ２９）、ウマ（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｆ６Ｕ０Ｄ１）、ヒト（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｐ３２２４６）、マーモセット（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｑ９ＭＹＪ８）、マウス（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｐ５１６７５）、ブタ（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｑ６ＹＳＴ０）、ウサギ（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｑ９ＭＹＪ９）、ラット（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｑ９ＪＬＹ８）、アカゲザル（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｆ６ＱＪＲ２）、ヒツジ（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｗ５ＰＸＸ５）を含む群から選択される哺乳動物からのものであり得る。
【０６７４】
いくつかの好ましい実施形態では、ＣＣＲ１タンパク質配列は、ヒトＣＣＲ１タンパク質配列に対応する。いくつかの実施形態では、ＣＣＲ１ポリペプチドは、以下に記載のヒト全長野生型ＣＣＲ１タンパク質配列（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｐ３２２４６）又は野生型ＣＣＲ１タンパク質配列の機能的断片を含む。
【化１８】
2020531514.tif 000051
【０６７５】
本発明の一形態では、ＣＣＲ１ポリペプチドは、哺乳動物野生型ＣＣＲ１タンパク質配列のトランケート型を含む。例えば、ＣＣＲ１ポリペプチド配列は、Ｃ末端切断を有するヒト野生型ＣＣＲ１タンパク質配列を含み得る（例えば、アミノ酸残基３１８〜３５５は、切断され得る）。代わりに又はさらに、ＣＣＲ１ポリペプチド配列は、Ｎ末端切断を有する野生型ＣＣＲ１タンパク質配列を含み得る。Ｃ末端又はＮ末端切断の代替として又はそれに加えて、野生型ＣＣＲ１タンパク質配列の内部セクションを除去するために切断が行われ得る（例えば、アミノ酸残基１７４〜１８２は、切断され得る）。非限定的な例として、本発明での使用に適したＣＣＲ１ポリペプチドは、配列番号２２に記載のヒト野生型ＣＣＲ１タンパク質配列のアミノ酸残基２〜１７３及び１８３〜３１７を含んでいた。
【０６７６】
＜３．１６  ＣＣＲ１ポリペプチドをコードする構築物及びヌクレオチド配列＞
本発明は、上記及び本明細書の他の箇所に広く記載されているように、ＣＣＲ１ポリペプチドをコードする単離ポリヌクレオチド配列及び構築物も包含する。これらのポリヌクレオチド配列又は構築物を含む宿主細胞も企図される。
【０６７７】
いくつかの実施形態では、ポリヌクレオチド配列は、例えば、ＧｅｎＢａｎｋ受託番号ＮＭ＿００１２９５．２、ＡＦ０５１３０５．１、ＢＣ０６４９９１．１及びＢＣ０５１３０６．１に記載の、ヒトＣＣＲ１ヌクレオチドに対応する（すなわちＣＣＲ１遺伝子に対応する）配列を含む。このタイプの代表的な例では、ポリヌクレオチドは、これらの配列のいずれか１つと少なくとも７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８又は９９％の配列同一性を共有するＣＣＲ１ヌクレオチド配列を含む。
【０６７８】
いくつかの実施形態では、ＣＣＲ１ポリヌクレオチドコード配列は、野生型哺乳類ＣＣＲ１ポリヌクレオチドと少なくとも５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９２％、９５％、９９％若しくは１００％の配列同一性を有するポリペプチドをコードするヌクレオチド配列又はその断片を含む。いくつかの実施形態では、ＣＣＲ１ポリヌクレオチドは、低、中又は高ストリンジェンシー条件下で野生型哺乳類ＣＣＲ１タンパク質のオープンリーディングフレームにハイブリダイズするヌクレオチド配列又はその断片を含む。
【０６７９】
＜３．１７  ＣＣケモカイン受容体ＣＣＲ２（ＣＣＲ２）ポリペプチド＞
全てのケモカイン受容体と同様に、ＣＣＲ２は、炎症プロセスの媒介に関与する。これは、単球、樹状細胞及び記憶Ｔ細胞に見られ、アテローム性動脈硬化症、関節リウマチ、多発性硬化症、細胞内病原体への耐性、２型糖尿病に関連付けられる（Ｃｈａｒｏ＆Ｒａｎｓｏｈｏｆｆ，２００６）。
【０６８０】
ＣＣＲ２の結晶構造が最近公開され（Ｚｈｅｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，２０１６）、そのリガンド結合モード及び活性化プロセスに対する見識を提供している。ＣＣＲ２の細胞外部分は、Ｎ末端セグメント（ヒトＣＣＲ２のＭｅｔ１〜Ｄ３６）、ヘリックスＩＩ及びＩＩＩを連結するＥＣＬ１（ヒトＣＣＲ２のＧｌｕ１０５〜Ｐｈｅ１０８）、ヘリックスＩＶ及びＶを連結するＥＣＬ２（ヒトＣＣＲ２のＬｙｓ１８０〜Ｐｈｅ１９４）及びヘリックスＶＩをＶＩＩに連結するＥＣＬ３（ヒトＣＣＲ２のＬｅｕ２７４〜Ｓｅｒ２７５）からなる。全てのケモカイン受容体と同様に、ＣＣＲ２は、その外部ドメインに２つの保存されたジスルフィド結合を有することが予想される（Ｚｈｅｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，２０１６）。
【０６８１】
本発明の特定の実施形態では、ＣＣＲ２ポリペプチドは、ＣＣＲ２タンパク質配列を含むか、又はＣＣＲ２タンパク質配列と少なくとも７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８又は９９％の配列同一性又は類似性を共有する。
【０６８２】
いくつかの実施形態では、ＣＣＲ２タンパク質配列は、哺乳動物ＣＣＲ２タンパク質配列に対応する。適当なＣＣＲ２配列は、適切には、チンパンジー（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｈ２ＱＭＧ５）、ウシ（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｄ９ＺＤＤ９）、ゴリラ（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｇ３Ｓ６Ｔ３）、モルモット（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｈ０ＶＩＩ５）、ウマ（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｂ３ＳＰＸ１）、ヒト（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｐ４１５９７）、マーモセット（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｆ７ＤＴ７０）、マウス（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｐ５１６８３）、パンダ（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｇ１ＭＭＦ１）、ブタ（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｑ６ＹＴ４２）、ウサギ（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｇ１ＳＫ５７）、ラット（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｏ５５１９３）、アカゲザル（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｏ１８７９３）、ヒツジ（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｗ５ＰＸＵ４）を含む群から選択される哺乳動物からのものであり得る。
【０６８３】
いくつかの好ましい実施形態では、ＣＣＲ２タンパク質配列は、ヒトＣＣＲ２タンパク質配列に対応する。いくつかの実施形態では、ＣＣＲ２ポリペプチドは、以下に記載のヒト全長野生型ＣＣＲ２タンパク質配列（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｐ４１５９７）又は野生型ＣＣＲ２タンパク質配列の機能的断片を含む。
【化１９】
2020531514.tif 000052
【０６８４】
本発明の一形態では、ＣＣＲ２ポリペプチドは、哺乳動物野生型ＣＣＲ２タンパク質配列のトランケート型を含む。例えば、ＣＣＲ２ポリペプチド配列は、Ｃ末端切断を有するヒト野生型ＣＣＲ２タンパク質配列を含み得る（例えば、アミノ酸残基３２２〜３７４は、切断され得る）。代わりに又はさらに、ＣＣＲ２ポリペプチド配列は、Ｎ末端切断を有する野生型ＣＣＲ２タンパク質配列を含み得る。Ｃ末端又はＮ末端切断の代替として又はそれに加えて、野生型ＣＣＲ２タンパク質配列の内部セクションを除去するために切断が行われ得る（例えば、アミノ酸残基１８２〜１９９は、切断され得る）。非限定的な例として、本発明での使用に適したＣＣＲ２ポリペプチドは、配列番号２３に記載のヒト野生型ＣＣＲ２タンパク質配列のアミノ酸残基２〜１８１及び２００〜３２１を含んでいた。
【０６８５】
＜３．１８  ＣＣＲ２ポリペプチドをコードする構築物及びヌクレオチド配列＞
本発明は、上記及び本明細書の他の箇所に広く記載されているように、ＣＣＲ２ポリペプチドをコードする単離ポリヌクレオチド配列及び構築物も包含する。これらのポリヌクレオチド配列又は構築物を含む宿主細胞も企図される。
【０６８６】
いくつかの実施形態では、ポリヌクレオチド配列は、例えば、ＧｅｎＢａｎｋ受託番号ＮＭ＿００１１２３３９６．１、ＮＭ＿００１１２３０４１．２、ＮＧ＿０２１４２８．１、ＫＣ２４８０７９．１、ＫＣ２４８０７８．１、ＫＣ２４８０７７．１、ＫＣ２４８０７６．１、ＫＣ２４８０７５．１、ＫＣ２４８０７４．１、ＫＣ２４８０７３．１、ＫＣ２４８０７２．１、ＫＣ２４８０７１．１、ＫＣ２４８０７０．１、ＡＦ５４５４８０．１、ＢＣ１２６４５２．１及びＢＣ０９５５４０．１に記載の、ヒトＣＣＲ２ヌクレオチドに対応する（すなわちＣＣＲ２遺伝子に対応する）配列を含む。このタイプの代表的な例では、ポリヌクレオチドは、これらの配列のいずれか１つと少なくとも７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８又は９９％の配列同一性を共有するＣＣＲ２ヌクレオチド配列を含む。
【０６８７】
いくつかの実施形態では、ＣＣＲ２ポリヌクレオチドコード配列は、野生型哺乳類ＣＣＲ２ポリヌクレオチドと少なくとも５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９２％、９５％、９９％若しくは１００％の配列同一性を有するポリペプチドをコードするヌクレオチド配列又はその断片を含む。いくつかの実施形態では、ＣＣＲ２ポリヌクレオチドは、低、中又は高ストリンジェンシー条件下で野生型哺乳類ＣＣＲ２タンパク質のオープンリーディングフレームにハイブリダイズするヌクレオチド配列又はその断片を含む。
【０６８８】
＜３．１９  ＣＣケモカイン受容体ＣＣＲ３（ＣＣＲ３）ポリペプチド＞
全てのケモカイン受容体と同様に、ＣＣＲ３は、炎症プロセスの媒介に関与する。これは、好酸球、好塩基球、マスト細胞、Ｔｈ２細胞及び血小板に見られ、アレルギー性喘息及び鼻炎に関連付けられる（Ｃｈａｒｏ＆Ｒａｎｓｏｈｏｆｆ，２００６）。
【０６８９】
現在まで、ＣＣＲ３の結晶構造は、依然として公開されておらず、受容体の構造的機能及びリガンド結合機能は、突然変異誘発及び相同性モデリングなどの間接的なアプローチを通じて推測しなければならない。ＣＣＲ３の細胞外部分は、Ｎ末端セグメント（ヒトＣＣＲ３のＭｅｔ１〜Ａｓｐ２８）、ヘリックスＩＩ及びＩＩＩを連結するＥＣＬ１（ヒトＣＣＲ３のＨｉｓ９７〜Ｐｈｅ１０１）、ヘリックスＩＶ及びＶを連結するＥＣＬ２（ヒトＣＣＲ３のＧｌｕ１７３〜Ｔｈｒ１９１）及びヘリックスＶＩをＶＩＩに連結するＥＣＬ３（ヒトＣＣＲ３のＧｌｙ２７０〜Ａｓｎ２７１）からなる。全てのケモカイン受容体と同様に、ＣＣＲ３は、その外部ドメインに２つの保存されたジスルフィド結合を有することが予想される（Ｚｈｅｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，２０１６）。
【０６９０】
本発明の特定の実施形態では、ＣＣＲ３ポリペプチドは、ＣＣＲ３タンパク質配列を含むか、又はＣＣＲ３タンパク質配列と少なくとも７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８又は９９％の配列同一性又は類似性を共有する。
【０６９１】
いくつかの実施形態では、ＣＣＲ３タンパク質配列は、哺乳動物ＣＣＲ３タンパク質配列に対応する。適当なＣＣＲ３配列は、適切には、ネコ（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｍ３ＷＺ２７）、チンパンジー（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｈ２Ｒ０Ｚ４）、ウシ（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｆ１ＭＰ１６）、イヌ（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｑ６４Ｈ３４）、モルモット（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｑ９Ｚ２Ｉ３）、ウマ（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｆ６ＵＨ１２）、ヒト（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｐ５１６７７）、マーモセット（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｆ７ＤＴＡ４）、マウス（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｑ８ＢＨＢ８）、パンダ（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｇ１ＭＭＣ８）、ブタ（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｑ７５ＺＨ４）、ウサギ（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｂ５ＳＵ３９）、ラット（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｏ５４８１４）、ヒツジ（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｗ５ＰＸＷ１）を含む群から選択される哺乳動物からのものであり得る。
【０６９２】
いくつかの好ましい実施形態では、ＣＣＲ３タンパク質配列は、ヒトＣＣＲ３タンパク質配列に対応する。いくつかの実施形態では、ＣＣＲ３ポリペプチドは、以下に記載のヒト全長野生型ＣＣＲ３タンパク質配列（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｐ５１６７７）又は野生型ＣＣＲ３タンパク質配列の機能的断片を含む。
【化２０】
2020531514.tif 000053
【０６９３】
本発明の一形態では、ＣＣＲ３ポリペプチドは、哺乳動物野生型ＣＣＲ３タンパク質配列のトランケート型を含む。例えば、ＣＣＲ３ポリペプチド配列は、Ｃ末端切断を有するヒト野生型ＣＣＲ３タンパク質配列を含み得る（例えば、アミノ酸残基３１８〜３５５は、切断され得る）。代わりに又はさらに、ＣＣＲ３ポリペプチド配列は、Ｎ末端切断を有する野生型ＣＣＲ３タンパク質配列を含み得る。Ｃ末端又はＮ末端切断の代替として又はそれに加えて、野生型ＣＣＲ３タンパク質配列の内部セクションを除去するために切断が行われ得る（例えば、アミノ酸残基１７５〜１８７は、切断され得る）。非限定的な例として、本発明での使用に適したＣＣＲ３ポリペプチドは、配列番号２４に記載のヒト野生型ＣＣＲ３タンパク質配列のアミノ酸残基２〜１７４及び１８８〜３１７を含んでいた。
【０６９４】
＜３．２０  ＣＣＲ３ポリペプチドをコードする構築物及びヌクレオチド配列＞
本発明は、上記及び本明細書の他の箇所に広く記載されているように、ＣＣＲ３ポリペプチドをコードする単離ポリヌクレオチド配列及び構築物も包含する。これらのポリヌクレオチド配列又は構築物を含む宿主細胞も企図される。
【０６９５】
いくつかの実施形態では、ポリヌクレオチド配列は、例えば、ＧｅｎＢａｎｋ受託番号ＮＭ＿１７８３２９．２、ＮＭ＿００１８３７．３、ＮＭ＿００１１６４６８０．１、ＮＭ＿１７８３２８．１、ＡＨ００９８６７．２、ＡＦ２４７３６１．１、ＡＦ２６２３０３．１、ＡＦ２６２３０２．１、ＡＦ２６２３０１．１、ＡＦ２６２３００．１、ＡＦ２６２２９９．１、ＡＨ０１０６９１．２、ＡＦ２２４４９５．１、ＡＦ２４７３６０．１、ＡＦ２４７３５９．１及びＡＦ０２６５３５．１に記載の、ヒトＣＣＲ３ヌクレオチドに対応する（すなわちＣＣＲ３遺伝子に対応する）配列を含む。このタイプの代表的な例では、ポリヌクレオチドは、これらの配列のいずれか１つと少なくとも７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８又は９９％の配列同一性を共有するＣＣＲ３ヌクレオチド配列を含む。
【０６９６】
いくつかの実施形態では、ＣＣＲ３ポリヌクレオチドコード配列は、野生型哺乳類ＣＣＲ３ポリヌクレオチドと少なくとも５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９２％、９５％、９９％若しくは１００％の配列同一性を有するポリペプチドをコードするヌクレオチド配列又はその断片を含む。いくつかの実施形態では、ＣＣＲ３ポリヌクレオチドは、低、中又は高ストリンジェンシー条件下で野生型哺乳類ＣＣＲ３タンパク質のオープンリーディングフレームにハイブリダイズするヌクレオチド配列又はその断片を含む。
【０６９７】
＜３．２１  ＣＣケモカイン受容体ＣＣＲ４（ＣＣＲ４）ポリペプチド＞
全てのケモカイン受容体と同様に、ＣＣＲ４は、炎症プロセスの媒介に関与する。これは、Ｔ細胞（Ｔｈ２）、樹状細胞（成熟）、好塩基球、マクロファージ及び血小板に見られ、寄生虫感染、移植片拒絶及びＴ細胞の皮膚へのホーミングに関連付けられる（Ｃｈａｒｏ＆Ｒａｎｓｏｈｏｆｆ，２００６）。
【０６９８】
現在まで、ＣＣＲ４の結晶構造は、依然として公開されておらず、受容体の構造的機能及びリガンド結合機能は、突然変異誘発及び相同性モデリングなどの間接的なアプローチを通じて推測しなければならない。ＣＣＲ４の細胞外部分は、Ｎ末端セグメント（ヒトＣＣＲ４のＭｅｔ１〜Ｇｌｙ３３）、ヘリックスＩＩ及びＩＩＩを連結するＥＣＬ１（ヒトＣＣＲ４のＧｌｎ１０２〜Ｐｈｅ１０５）、ヘリックスＩＶ及びＶを連結するＥＣＬ２（ヒトＣＣＲ４のＴｈｒ１７７〜Ａｓｎ１９４）及びヘリックスＶＩをＶＩＩに連結するＥＣＬ３（ヒトＣＣＲ４のＬｅｕ２７３〜Ｇｌｎ２７４）からなる。全てのケモカイン受容体と同様に、ＣＣＲ４は、その外部ドメインに２つの保存されたジスルフィド結合を有することが予想される（Ｚｈｅｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，２０１６）。
【０６９９】
本発明の特定の実施形態では、ＣＣＲ４ポリペプチドは、ＣＣＲ４タンパク質配列を含むか、又はＣＣＲ４タンパク質配列と少なくとも７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８又は９９％の配列同一性又は類似性を共有する。
【０７００】
いくつかの実施形態では、ＣＣＲ４タンパク質配列は、哺乳動物ＣＣＲ４タンパク質配列に対応する。適当なＣＣＲ４配列は、適切には、ネコ（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｍ３ＶＺＥ０）、チンパンジー（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｈ２ＱＭ９１）、牛（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ａ６ＱＬＡ５）、犬（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｑ８ＭＪＷ８）、ゴリラ（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｇ３ＲＣ１７）、モルモット（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｈ０Ｖ３Ａ３）、ウマ（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｆ６ＲＪＴ２）、ヒト（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｐ５１６７９）、マーモセット（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｆ７Ｆ２Ｂ０）、マウス（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｐ５１６８０）、ブタ（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｉ３Ｌ５５２）、ウサギ（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｇ１ＴＸＶ０）、ラット（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｑ９１ＺＨ４）、ヒツジ（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｗ５Ｑ１Ａ７）を含む群から選択される哺乳動物からのものであり得る。
【０７０１】
いくつかの好ましい実施形態では、ＣＣＲ４タンパク質配列は、ヒトＣＣＲ４タンパク質配列に対応する。いくつかの実施形態では、ＣＣＲ４ポリペプチドは、以下に記載のヒト全長野生型ＣＣＲ４タンパク質配列（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｐ５１６７９）又は野生型ＣＣＲ４タンパク質配列の機能的断片を含む。
【化２１】
2020531514.tif 000054
【０７０２】
本発明の一形態では、ＣＣＲ４ポリペプチドは、哺乳動物野生型ＣＣＲ４タンパク質配列のトランケート型を含む。例えば、ＣＣＲ４ポリペプチド配列は、Ｃ末端切断を有するヒト野生型ＣＣＲ４タンパク質配列を含み得る（例えば、アミノ酸残基３２１〜３６０は、切断され得る）。代わりに又はさらに、ＣＣＲ４ポリペプチド配列は、Ｎ末端切断を有する野生型ＣＣＲ４タンパク質配列を含み得る。Ｃ末端又はＮ末端切断の代替として又はそれに加えて、野生型ＣＣＲ４タンパク質配列の内部セクションを除去するために切断が行われ得る（例えば、アミノ酸残基１７９〜１８９は、切断され得る）。非限定的な例として、本発明での使用に適したＣＣＲ４ポリペプチドは、配列番号２５に記載のヒト野生型ＣＣＲ４タンパク質配列のアミノ酸残基２〜１７８及び１９０〜３２０を含んでいた。
【０７０３】
＜３．２２  ＣＣＲ４ポリペプチドをコードする構築物及びヌクレオチド配列＞
本発明は、上記及び本明細書の他の箇所に広く記載されているように、ＣＣＲ４ポリペプチドをコードする単離ポリヌクレオチド配列及び構築物も包含する。これらのポリヌクレオチド配列又は構築物を含む宿主細胞も企図される。
【０７０４】
いくつかの実施形態では、ポリヌクレオチド配列は、例えば、ＧｅｎＢａｎｋ受託番号ＡＹ３２２５３９．１、ＮＣ＿０００００５．１０、ＮＭ＿００５５０８．４、ＥＦ０６４７５９．１、ＢＣ０７４９３５．２、ＢＣ０７１７５１．１及びＢＣ０６９１３９．１に記載の、ヒトＣＣＲ４ヌクレオチドに対応する（すなわちＣＣＲ４遺伝子に対応する）配列を含む。このタイプの代表的な例では、ポリヌクレオチドは、これらの配列のいずれか１つと少なくとも７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８又は９９％の配列同一性を共有するＣＣＲ４ヌクレオチド配列を含む。
【０７０５】
いくつかの実施形態では、ＣＣＲ４ポリヌクレオチドコード配列は、野生型哺乳類ＣＣＲ４ポリヌクレオチドと少なくとも５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９２％、９５％、９９％若しくは１００％の配列同一性を有するポリペプチドをコードするヌクレオチド配列又はその断片を含む。いくつかの実施形態では、ＣＣＲ４ポリヌクレオチドは、低、中又は高ストリンジェンシー条件下で野生型哺乳類ＣＣＲ４タンパク質のオープンリーディングフレームにハイブリダイズするヌクレオチド配列又はその断片を含む。
【０７０６】
＜３．２３  ＣＣケモカイン受容体ＣＣＲ５（ＣＣＲ５）ポリペプチド＞
全てのケモカイン受容体と同様に、ＣＣＲ５は、炎症プロセスの媒介に関与する。これは、Ｔ細胞及び単球に見られ、ＨＩＶ−１感染及び移植拒絶に関連付けられる（Ｃｈａｒｏ＆Ｒａｎｓｏｈｏｆｆ，２００６）。
【０７０７】
ＣＣＲ５の結晶構造が解明されており（Ｔａｎ  ｅｔ  ａｌ．，２０１３）、そのリガンド結合モード及び活性化プロセスに対する見識を提供している。ＣＣＲ５の細胞外部分は、Ｎ末端セグメント（ヒトＣＣＲ５のＭｅｔ１〜Ａｓｎ２４）、ヘリックスＩＩ及びＩＩＩを連結するＥＣＬ１（ヒトＣＣＲ５のＧｌｎ９３〜Ｐｈｅ９６）、ヘリックスＩＶ及びＶを連結するＥＣＬ２（ヒトＣＣＲ５のＡｒｇ１６８〜Ｇｌｎ１８６）及びヘリックスＶＩをＶＩＩに連結するＥＣＬ３（ヒトＣＣＲ５のＬｅｕ２６６〜Ａｓｎ２６７）からなる。全てのケモカイン受容体で予想されるように、ＣＣＲ５は、その外部ドメインに２つの保存されたジスルフィド結合を有する（Ｔａｎ  ｅｔ  ａｌ．，２０１３）。
【０７０８】
本発明の特定の実施形態では、ＣＣＲ５ポリペプチドは、ＣＣＲ５タンパク質配列を含むか、又はＣＣＲ５タンパク質配列と少なくとも７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８又は９９％の配列同一性又は類似性を共有する。
【０７０９】
いくつかの実施形態では、ＣＣＲ５タンパク質配列は、哺乳動物ＣＣＲ５タンパク質配列に対応する。適当なＣＣＲ５配列は、適切には、ネコ（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ａ４ＺＹ８３）、チンパンジー（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｐ５６４４０）、ウシ（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｑ２ＨＪ１７）、イヌ（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｑ５ＥＣＲ９）、ヤギ（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｆ５Ｂ６Ｌ８）、ゴリラ（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｐ５６４３９）、ウマ（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ａ４ＺＺ５４）、ヒト（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｐ５１６８１）、マーモセット（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｑ６ＷＮ９８）、マウス（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｐ５１６８２）、ブタ（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｑ６ＹＴ４１）、ウサギ（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｑ１ＺＹ２２）、ラット（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｏ０８５５６）、ヒツジ（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｂ７Ｔ９０３）を含む群から選択される哺乳動物からのものであり得る。
【０７１０】
いくつかの好ましい実施形態では、ＣＣＲ５タンパク質配列は、ヒトＣＣＲ５タンパク質配列に対応する。いくつかの実施形態では、ＣＣＲ５ポリペプチドは、以下に記載のヒト全長野生型ＣＣＲ５タンパク質配列（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｐ５１６８１）又は野生型ＣＣＲ５タンパク質配列の機能的断片を含む。
【化２２】
2020531514.tif 000055
【０７１１】
本発明の一形態では、ＣＣＲ５ポリペプチドは、哺乳動物野生型ＣＣＲ５タンパク質配列のトランケート型を含む。例えば、ＣＣＲ５ポリペプチド配列は、Ｃ末端切断を有するヒト野生型ＣＣＲ５タンパク質配列を含み得る（例えば、アミノ酸残基３１４〜３５２は、切断され得る）。代わりに又はさらに、ＣＣＲ５ポリペプチド配列は、Ｎ末端切断を有する野生型ＣＣＲ５タンパク質配列を含み得る。Ｃ末端又はＮ末端切断の代替として又はそれに加えて、野生型ＣＣＲ５タンパク質配列の内部セクションを除去するために切断が行われ得る（例えば、アミノ酸残基１７１〜１８１は、切断され得る）。非限定的な例として、本発明での使用に適したＣＣＲ５ポリペプチドは、配列番号２６に記載のヒト野生型ＣＣＲ５タンパク質配列のアミノ酸残基２〜１７０及び１８２〜３１３を含んでいた。
【０７１２】
＜３．２４  ＣＣＲ５ポリペプチドをコードする構築物及びヌクレオチド配列＞
本発明は、上記及び本明細書の他の箇所に広く記載されているように、ＣＣＲ５ポリペプチドをコードする単離ポリヌクレオチド配列及び構築物も包含する。これらのポリヌクレオチド配列又は構築物を含む宿主細胞も企図される。
【０７１３】
いくつかの実施形態では、ポリヌクレオチド配列は、例えば、ＧｅｎＢａｎｋ受託番号ＡＹ４６３２１５．１、ＧＱ１２１０３５．１、ＡＨ００５７８６．２、ＮＭ＿０００５７９．３、ＮＭ＿００１１００１６８．１、ＡＦ０５６０１９．１、ＡＢ１８２９９０．１、ＡＢ１８２９８４．１、ＡＢ１８２９８６．１、ＡＦ０１１５３７．１、ＡＦ０１１５３２．１、ＡＦ０１１５２５．１、ＡＦ０１１５２１．１、ＪＱ２９１２３２．１、ＥＦ２０２０８９．１、ＡＦ０５２５３９．１に記載の、ヒトＣＣＲ５ヌクレオチドに対応する（すなわちＣＣＲ５遺伝子に対応する）配列を含む。このタイプの代表的な例では、ポリヌクレオチドは、これらの配列のいずれか１つと少なくとも７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８又は９９％の配列同一性を共有するＣＣＲ５ヌクレオチド配列を含む。
【０７１４】
いくつかの実施形態では、ＣＣＲ５ポリヌクレオチドコード配列は、野生型哺乳類ＣＣＲ５ポリヌクレオチドと少なくとも５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９２％、９５％、９９％若しくは１００％の配列同一性を有するポリペプチドをコードするヌクレオチド配列又はその断片を含む。いくつかの実施形態では、ＣＣＲ５ポリヌクレオチドは、低、中又は高ストリンジェンシー条件下で野生型哺乳類ＣＣＲ５タンパク質のオープンリーディングフレームにハイブリダイズするヌクレオチド配列又はその断片を含む。
【０７１５】
＜３．２５  ＣＣケモカイン受容体ＣＣＲ６（ＣＣＲ６）ポリペプチド＞
全てのケモカイン受容体と同様に、ＣＣＲ６は、炎症プロセスの媒介に関与する。これは、Ｔ細胞（Ｔ調節及び記憶）、Ｂ細胞及び樹状細胞に見られ、粘膜液性免疫、アレルギー性喘息、腸Ｔ細胞ホーミングに関連付けられる（Ｃｈａｒｏ＆Ｒａｎｓｏｈｏｆｆ，２００６）。
【０７１６】
現在まで、ＣＣＲ４の結晶構造は、依然として公開されておらず、受容体の構造的機能及びリガンド結合機能は、突然変異誘発及び相同性モデリングなどの間接的なアプローチを通じて推測しなければならない。ＣＣＲ６の細胞外部分は、Ｎ末端セグメント（ヒトＣＣＲ６のＭｅｔ１〜Ｇｌｕ４０）、ヘリックスＩＩ及びＩＩＩを連結するＥＣＬ１（ヒトＣＣＲ６のＧｌｙ１０９〜Ｐｈｅ１１３）、ヘリックスＩＶ及びＶを連結するＥＣＬ２（ヒトＣＣＲ６のＧｌｎ１８７〜Ｇｌｕ２０６）及びヘリックスＶＩをＶＩＩに連結するＥＣＬ３（ヒトＣＣＲ６のＡｓｎ２８５〜Ａｒｇ２８６）からなる。全てのケモカイン受容体と同様に、ＣＣＲ６は、その外部ドメインに２つの保存されたジスルフィド結合を有することが予想される（Ｚｈｅｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，２０１６）。
【０７１７】
本発明の特定の実施形態では、ＣＣＲ６ポリペプチドは、ＣＣＲ６タンパク質配列を含むか、又はＣＣＲ６タンパク質配列と少なくとも７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８又は９９％の配列同一性又は類似性を共有する。
【０７１８】
いくつかの実施形態では、ＣＣＲ６タンパク質配列は、哺乳動物ＣＣＲ６タンパク質配列に対応する。適当なＣＣＲ６配列は、適切には、ネコ（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｍ３ＷＰＪ２）、チンパンジー（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｈ２ＱＵ１３）、牛（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｆ１ＭＴ５６）、犬（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｊ９Ｐ４Ｚ８）、ゴリラ（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｇ３Ｒ６Ｓ８）、モルモット（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｈ０ＷＢＴ８）、ウマ（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｆ６ＰＰ７７）、ヒト（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｐ５１６８４）、マーモセット（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｆ６ＰＭＺ８）、マウス（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｏ５４６８９）、ブタ（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｉ３ＬＢＩ５）、ウサギ（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｇ１Ｕ０４１）、ラット（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｑ５ＢＫ５８）、ヒツジ（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｗ５Ｐ４Ｄ１）を含む群から選択される哺乳動物からのものであり得る。
【０７１９】
いくつかの好ましい実施形態では、ＣＣＲ６タンパク質配列は、ヒトＣＣＲ６タンパク質配列に対応する。いくつかの実施形態では、ＣＣＲ６ポリペプチドは、以下に記載のヒト全長野生型ＣＣＲ６タンパク質配列（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｐ５１６８４）又は野生型ＣＣＲ６タンパク質配列の機能的断片を含む。
【化２３】
2020531514.tif 000056
【０７２０】
本発明の一形態では、ＣＣＲ６ポリペプチドは、哺乳動物野生型ＣＣＲ６タンパク質配列のトランケート型を含む。例えば、ＣＣＲ６ポリペプチド配列は、Ｃ末端切断を有するヒト野生型ＣＣＲ６タンパク質配列を含み得る（例えば、アミノ酸残基３３３〜３７４は、切断され得る）。代わりに又はさらに、ＣＣＲ６ポリペプチド配列は、Ｎ末端切断を有する野生型ＣＣＲ６タンパク質配列を含み得る。Ｃ末端又はＮ末端切断の代替として又はそれに加えて、野生型ＣＣＲ６タンパク質配列の内部セクションを除去するために切断が行われ得る（例えば、アミノ酸残基１９１〜２０２は、切断され得る）。非限定的な例として、本発明での使用に適したＣＣＲ６ポリペプチドは、配列番号２７に記載のヒト野生型ＣＣＲ６タンパク質配列のアミノ酸残基２〜１９０及び２０３〜３３２を含んでいた。
【０７２１】
＜３．２６  ＣＣＲ６ポリペプチドをコードする構築物及びヌクレオチド配列＞
本発明は、上記及び本明細書の他の箇所に広く記載されているように、ＣＣＲ６ポリペプチドをコードする単離ポリヌクレオチド配列及び構築物も包含する。これらのポリヌクレオチド配列又は構築物を含む宿主細胞も企図される。
【０７２２】
いくつかの実施形態では、ポリヌクレオチド配列は、例えば、ＧｅｎＢａｎｋ受託番号ＮＭ＿００４３６７．５、ＮＭ＿０３１４０９．３、ＡＹ２４２１２６．１、ＢＣ０３７９６０．１及びＵ４５９８４．１に記載の、ヒトＣＣＲ６ヌクレオチドに対応する（すなわちＣＣＲ６遺伝子に対応する）配列を含む。このタイプの代表的な例では、ポリヌクレオチドは、これらの配列のいずれか１つと少なくとも７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８又は９９％の配列同一性を共有するＣＣＲ６ヌクレオチド配列を含む。
【０７２３】
いくつかの実施形態では、ＣＣＲ６ポリヌクレオチドコード配列は、野生型哺乳類ＣＣＲ６ポリヌクレオチドと少なくとも５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９２％、９５％、９９％若しくは１００％の配列同一性を有するポリペプチドをコードするヌクレオチド配列又はその断片を含む。いくつかの実施形態では、ＣＣＲ６ポリヌクレオチドは、低、中又は高ストリンジェンシー条件下で野生型哺乳類ＣＣＲ６タンパク質のオープンリーディングフレームにハイブリダイズするヌクレオチド配列又はその断片を含む。
【０７２４】
＜３．２７  ＣＣケモカイン受容体ＣＣＲ７（ＣＣＲ７）ポリペプチド＞
全てのケモカイン受容体と同様に、ＣＣＲ７は、炎症プロセスの媒介に関与する。これは、Ｔ細胞及び成熟樹状細胞に見られ、Ｔ細胞及び樹状細胞のリンパ節への輸送、抗原提示並びに細胞性免疫に関連付けられる（Ｃｈａｒｏ＆Ｒａｎｓｏｈｏｆｆ，２００６）。
【０７２５】
現在まで、ＣＣＲ７の結晶構造は、依然として公開されておらず、受容体の構造的機能及びリガンド結合機能は、突然変異誘発及び相同性モデリングなどの間接的なアプローチを通じて推測しなければならない。ＣＣＲ７の細胞外部分は、Ｎ末端セグメント（ヒトＣＣＲ７のＭｅｔ１〜Ａｓｐ５２）、ヘリックスＩＩ及びＩＩＩを連結するＥＣＬ１（ヒトＣＣＲ７のＳｅｒ１２１〜Ｐｈｅ１２４）、ヘリックスＩＶ及びＶを連結するＥＣＬ２（ヒトＣＣＲ７のＡｓｐ１９８〜Ｖａｌ２１７）及びヘリックスＶＩをＶＩＩに連結するＥＣＬ３（ヒトＣＣＲ７のＴｈｒ２９４〜Ｓｅｒ２９６）からなる。全てのケモカイン受容体と同様に、ＣＣＲ７は、その外部ドメインに２つの保存されたジスルフィド結合を有することが予想される（Ｚｈｅｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，２０１６）。
【０７２６】
本発明の特定の実施形態では、ＣＣＲ７ポリペプチドは、ＣＣＲ７タンパク質配列を含むか、又はＣＣＲ７タンパク質配列と少なくとも７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８又は９９％の配列同一性又は類似性を共有する。
【０７２７】
いくつかの実施形態では、ＣＣＲ７タンパク質配列は、哺乳動物ＣＣＲ７タンパク質配列に対応する。適当なＣＣＲ７配列は、適切には、マウス（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｐ４７７７４）、ヒト（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｐ３２２４８）、ラット（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｑ６Ｕ２Ｄ６）、ブタ（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｑ８６１Ｓ１）、牛（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ａ０ＪＮＡ６）、犬（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｊ９Ｐ８９３）、ウサギ（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｇ１ＴＫＪ１）、マーモセット（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｆ６Ｒ３Ａ６）、チンパンジー（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｈ２Ｒ９Ｐ０）、タスマニアデビル（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｇ３ＷＡＦ３）、ヒツジ（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｗ５ＰＺＧ４）、モルモット（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｈ０ＶＬ６５）、ネコ（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｍ３ＷＢＵ１）、ウマ（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｆ６ＳＰＨ５）を含む群から選択される哺乳動物からのものであり得る。
【０７２８】
いくつかの好ましい実施形態では、ＣＣＲ７タンパク質配列は、ヒトＣＣＲ７タンパク質配列に対応する。いくつかの実施形態では、ＣＣＲ７ポリペプチドは、以下に記載のヒト全長野生型ＣＣＲ７タンパク質配列（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｐ３２２４８）又は野生型ＣＣＲ７タンパク質配列の機能的断片を含む。
【化２４】
2020531514.tif 000057
【０７２９】
本発明の一形態では、ＣＣＲ７ポリペプチドは、哺乳動物野生型ＣＣＲ７タンパク質配列のトランケート型を含む。例えば、ＣＣＲ７ポリペプチド配列は、Ｃ末端切断を有するヒト野生型ＣＣＲ７タンパク質配列を含み得る（例えば、アミノ酸残基３５８〜３７８は、切断され得る）。代わりに又はさらに、ＣＣＲ７ポリペプチド配列は、Ｎ末端切断を有する野生型ＣＣＲ７タンパク質配列を含み得る。Ｃ末端又はＮ末端切断の代替として又はそれに加えて、野生型ＣＣＲ７タンパク質配列の内部セクションを除去するために切断が行われ得る（例えば、アミノ酸残基２０１〜２０９は、切断され得る）。非限定的な例として、本発明での使用に適したＣＣＲ７ポリペプチドは、配列番号２８に記載のヒト野生型ＣＣＲ７タンパク質配列のアミノ酸残基２〜２００及び２１０〜３５７を含んでいた。
【０７３０】
＜３．２８  ＣＣＲ７ポリペプチドをコードする構築物及びヌクレオチド配列＞
本発明は、上記及び本明細書の他の箇所に広く記載されているように、ＣＣＲ７ポリペプチドをコードする単離ポリヌクレオチド配列及び構築物も包含する。これらのポリヌクレオチド配列又は構築物を含む宿主細胞も企図される。
【０７３１】
いくつかの実施形態では、ポリヌクレオチド配列は、例えば、ＧｅｎＢａｎｋ受託番号ＮＭ＿００１３０１７１８．１、ＮＭ＿００１３０１７１７．１、ＮＭ＿００１３０１７１６．１、ＮＭ＿００１３０１７１４．１、ＮＭ＿００１８３８．３、ＥＦ０６４７５８．１、ＮＣ＿００００１７．１１、ＮＣ＿０１８９２８．２、ＣＭ０００２６８．１、ＢＣ０３５３４３．１に記載の、ヒトＣＣＲ７ヌクレオチドに対応する（すなわちＣＣＲ７遺伝子に対応する）配列を含む。このタイプの代表的な例では、ポリヌクレオチドは、これらの配列のいずれか１つと少なくとも７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８又は９９％の配列同一性を共有するＣＣＲ７ヌクレオチド配列を含む。
【０７３２】
いくつかの実施形態では、ＣＣＲ７ポリヌクレオチドコード配列は、野生型哺乳類ＣＣＲ７ポリヌクレオチドと少なくとも５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９２％、９５％、９９％若しくは１００％の配列同一性を有するポリペプチドをコードするヌクレオチド配列又はその断片を含む。いくつかの実施形態では、ＣＣＲ７ポリヌクレオチドは、低、中又は高ストリンジェンシー条件下で野生型哺乳類ＣＣＲ７タンパク質のオープンリーディングフレームにハイブリダイズするヌクレオチド配列又はその断片を含む。
【０７３３】
＜３．２９  ＣＣケモカイン受容体ＣＣＲ９（ＣＣＲ９）ポリペプチド＞
全てのケモカイン受容体と同様に、ＣＣＲ９は、炎症プロセスの媒介に関与する。これは、Ｔ細胞及びＩｇＡ＋プラズマ細胞に見られ、Ｔ細胞及びＩｇＡ＋プラズマ細胞の腸及び炎症性腸疾患へのホーミングに関連付けられる（Ｃｈａｒｏ＆Ｒａｎｓｏｈｏｆｆ，２００６）。
【０７３４】
現在まで、ＣＣＲ９の結晶構造は、依然として公開されておらず、受容体の構造的機能及びリガンド結合機能は、突然変異誘発及び相同性モデリングなどの間接的なアプローチを通じて推測しなければならない。ＣＣＲ９の細胞外部分は、Ｎ末端セグメント（ヒトＣＣＲ９のＭｅｔ１〜Ａｓｎ４２）、ヘリックスＩＩ及びＩＩＩを連結するＥＣＬ１（ヒトＣＣＲ９のＧｌｎ１１１〜Ｐｈｅ１１４）、ヘリックスＩＶ及びＶを連結するＥＣＬ２（ヒトＣＣＲ９のＧｌｎ１８８〜Ｇｌｕ２０６）及びヘリックスＶＩをＶＩＩに連結するＥＣＬ３（ヒトＣＣＲ９のＰｈｅ２８５〜Ｓｅｒ２８７）からなる。全てのケモカイン受容体と同様に、ＣＣＲ９は、その外部ドメインに２つの保存されたジスルフィド結合を有することが予想される（Ｚｈｅｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，２０１６）。
【０７３５】
本発明の特定の実施形態では、ＣＣＲ９ポリペプチドは、ＣＣＲ９タンパク質配列を含むか、又はＣＣＲ９タンパク質配列と少なくとも７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８又は９９％の配列同一性又は類似性を共有する。
【０７３６】
いくつかの実施形態では、ＣＣＲ９タンパク質配列は、哺乳動物ＣＣＲ９タンパク質配列に対応する。適当なＣＣＲ９配列は、適切には、ネコ（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｍ３Ｗ６Ｋ０）、チンパンジー（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｈ２ＱＭＧ２）、ウシ（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｆ６ＲＭＫ７）、イヌ（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｅ２ＲＱ２１）、ゴリラ（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｇ３ＱＱ１８）、モルモット（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｈ０ＶＷＰ５）、ウマ（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｆ６Ｘ７Ｎ４）、ヒト（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｐ５１６８６）、マーモセット（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｆ７Ｆ０２３）、マウス（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｑ９ＷＵＴ７）、パンタ（ｐａｎｔａ）（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｇ１Ｍ０Ｔ５）、ブタ（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｑ６ＹＴ４７）、ウサギ（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｇ１ＳＵＱ１）、ヒツジ（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｑ１ＷＬＰ９）を含む群から選択される哺乳動物からのものであり得る。
【０７３７】
いくつかの好ましい実施形態では、ＣＣＲ９タンパク質配列は、ヒトＣＣＲ９タンパク質配列に対応する。いくつかの実施形態では、ＣＣＲ９ポリペプチドは、以下に記載のヒト全長野生型ＣＣＲ９タンパク質配列（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｐ５１６８６）又は野生型ＣＣＲ９タンパク質配列の機能的断片を含む。
【化２５】
2020531514.tif 000058
【０７３８】
本発明の一形態では、ＣＣＲ９ポリペプチドは、哺乳動物野生型ＣＣＲ９タンパク質配列のトランケート型を含む。例えば、ＣＣＲ９ポリペプチド配列は、Ｃ末端切断を有するヒト野生型ＣＣＲ９タンパク質配列を含み得る（例えば、アミノ酸残基３３４〜３６９は、切断され得る）。代わりに又はさらに、ＣＣＲ９ポリペプチド配列は、Ｎ末端切断を有する野生型ＣＣＲ９タンパク質配列を含み得る。Ｃ末端又はＮ末端切断の代替として又はそれに加えて、野生型ＣＣＲ９タンパク質配列の内部セクションを除去するために切断が行われ得る（例えば、アミノ酸残基１９０〜２０４は、切断され得る）。非限定的な例として、本発明での使用に適したＣＣＲ９ポリペプチドは、配列番号２９に記載のヒト野生型ＣＣＲ９タンパク質配列のアミノ酸残基２〜１８９及び２０５〜３３３を含んでいた。
【０７３９】
＜３．３０  ＣＣＲ９ポリペプチドをコードする構築物及びヌクレオチド配列＞
本発明は、上記及び本明細書の他の箇所に広く記載されているように、ＣＣＲ９ポリペプチドをコードする単離ポリヌクレオチド配列及び構築物も包含する。これらのポリヌクレオチド配列又は構築物を含む宿主細胞も企図される。
【０７４０】
いくつかの実施形態では、ポリヌクレオチド配列は、例えば、ＧｅｎＢａｎｋ受託番号ＡＹ２４２１２７．１、ＮＭ＿００１２５６３６９．１、ＮＭ＿０３１２００．２、ＮＭ＿００６６４１．３、ＡＦ１４５２０７．１、ＮＧ＿０２９４７２．１、ＡＦ１４５４４０．１、ＡＦ１４５４３９．１、ＢＣ０９５５１６．１、ＢＣ０６９６７８．１及びＡＪ１３２３３７．１に記載の、ヒトＣＣＲ９ヌクレオチドに対応する（すなわちＣＣＲ９遺伝子に対応する）配列を含む。このタイプの代表的な例では、ポリヌクレオチドは、これらの配列のいずれか１つと少なくとも７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８又は９９％の配列同一性を共有するＣＣＲ９ヌクレオチド配列を含む。
【０７４１】
いくつかの実施形態では、ＣＣＲ９ポリヌクレオチドコード配列は、野生型哺乳類ＣＣＲ９ポリヌクレオチドと少なくとも５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９２％、９５％、９９％若しくは１００％の配列同一性を有するポリペプチドをコードするヌクレオチド配列又はその断片を含む。いくつかの実施形態では、ＣＣＲ９ポリヌクレオチドは、低、中又は高ストリンジェンシー条件下で野生型哺乳類ＣＣＲ９タンパク質のオープンリーディングフレームにハイブリダイズするヌクレオチド配列又はその断片を含む。
【０７４２】
＜３．３１  ＣＸＣケモカイン受容体ＣＸＣＲ２（ＣＸＣＲ２）ポリペプチド＞
全てのケモカイン受容体と同様に、ＣＸＣＲ２は、炎症プロセスの媒介に関与する。これは、好中球、単球、微小血管内皮細胞に見られ、炎症性肺疾患、ＣＯＰＤに関連付けられ、腫瘍成長の血管新生を示す（Ｃｈａｒｏ＆Ｒａｎｓｏｈｏｆｆ、２００６）。
【０７４３】
現在まで、ＣＸＣＲ２の結晶構造は、依然として公開されておらず、受容体の構造的機能及びリガンド結合機能は、突然変異誘発及び相同性モデリングなどの間接的なアプローチを通じて推測しなければならない。ＣＸＣＲ２の細胞外部分は、Ｎ末端セグメント（ヒトＣＸＣＲ２のＭｅｔ１〜Ｇｌｕ４２）、ヘリックスＩＩ及びＩＩＩを連結するＥＣＬ１（ヒトＣＸＣＲ２のＧｌｙ１１１〜Ｐｈｅ１１４）、ヘリックスＩＶ及びＶを連結するＥＣＬ２（ヒトＣＸＣＲ２のＡｒｇ１８５〜Ａｌａ２０５）及びヘリックスＶＩをＶＩＩに連結するＥＣＬ３（ヒトＣＸＣＲ２のＶａｌ２８１〜Ｇｌｕ２８４）からなる。全てのケモカイン受容体と同様に、ＣＸＣＲ２は、その外部ドメインに２つの保存されたジスルフィド結合を有することが予想される（Ｚｈｅｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，２０１６）。
【０７４４】
本発明の特定の実施形態では、ＣＸＣＲ２ポリペプチドは、ＣＸＣＲ２タンパク質配列を含むか、又はＣＸＣＲ２タンパク質配列と少なくとも７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８又は９９％の配列同一性又は類似性を共有する。
【０７４５】
いくつかの実施形態では、ＣＸＣＲ２タンパク質配列は、哺乳動物ＣＸＣＲ２タンパク質配列に対応する。適当なＣＸＣＲ２配列は、適切には、ヒト（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｐ２５０２５）、マウス（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｐ３５３４３）、ラット（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｐ３５４０７）、ウサギ（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｐ３５３４４）、イヌ（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｏ９７５７１）、ウシ（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｑ２８００３）、チンパンジー（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｑ２８８０７）、ゴリラ（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｑ２８４２２）、マーモセット（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｆ６ＹＩ１８）、コウモリ（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｇ１Ｐ３Ｆ４）、ネコ（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｍ３ＸＦＨ４）モルモット（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｑ８１０Ｔ４）、ブタ（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｆ１ＳＳ０５）、ヒツジ（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｗ５ＱＤＸ４）を含む群から選択される哺乳動物からのものであり得る。
【０７４６】
いくつかの好ましい実施形態では、ＣＸＣＲ２タンパク質配列は、ヒトＣＸＣＲ２タンパク質配列に対応する。いくつかの実施形態では、ＣＸＣＲ２ポリペプチドは、以下に記載のヒト全長野生型ＣＸＣＲ２タンパク質配列（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｐ２５０２５）又は野生型ＣＸＣＲ２タンパク質配列の機能的断片を含む。
【化２６】
2020531514.tif 000059
【０７４７】
本発明の一形態では、ＣＸＣＲ２ポリペプチドは、哺乳動物野生型ＣＸＣＲ２タンパク質配列のトランケート型を含む。例えば、ＣＸＣＲ２ポリペプチド配列は、Ｃ末端切断を有するヒト野生型ＣＸＣＲ２タンパク質配列を含み得る（例えば、アミノ酸残基３４６〜３６０は、切断され得る）。代わりに又はさらに、ＣＸＣＲ２ポリペプチド配列は、Ｎ末端切断を有する野生型ＣＸＣＲ２タンパク質配列を含み得る。Ｃ末端又はＮ末端切断の代替として又はそれに加えて、野生型ＣＸＣＲ２タンパク質配列の内部セクションを除去するために切断が行われ得る（例えば、アミノ酸残基１８７〜２０２は、切断され得る）。非限定的な例として、本発明での使用に適したＣＸＣＲ２ポリペプチドは、配列番号３０に記載のヒト野生型ＣＸＣＲ２タンパク質配列のアミノ酸残基２〜１８６及び２０３〜３４５を含んでいた。
【０７４８】
＜３．３２  ＣＸＣＲ２ポリペプチドをコードする構築物及びヌクレオチド配列＞
本発明は、上記及び本明細書の他の箇所に広く記載されているように、ＣＸＣＲ２ポリペプチドをコードする単離ポリヌクレオチド配列及び構築物も包含する。これらのポリヌクレオチド配列又は構築物を含む宿主細胞も企図される。
【０７４９】
いくつかの実施形態では、ポリヌクレオチド配列は、例えば、ＧｅｎＢａｎｋ受託番号ＮＭ＿００１１６８２９８．１、ＮＭ＿００１５５７．３、ＡＢ０３２７３４．１、ＡＢ０３２７３３．１、ＮＧ＿０５２９７５．１、ＸＭ＿０１７００３９９２．１、ＸＭ＿０１７００３９９１．１、ＸＭ＿０１７００３９９０．１、ＸＭ＿００５２４６５３０．３に記載の、ヒトＣＸＣＲ２ヌクレオチドに対応する（すなわちＣＸＣＲ２遺伝子に対応する）配列を含む。このタイプの代表的な例では、ポリヌクレオチドは、これらの配列のいずれか１つと少なくとも７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８又は９９％の配列同一性を共有するＣＸＣＲ２ヌクレオチド配列を含む。
【０７５０】
いくつかの実施形態では、ＣＸＣＲ２ポリヌクレオチドコード配列は、野生型哺乳類ＣＸＣＲ２ポリヌクレオチドと少なくとも５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９２％、９５％、９９％若しくは１００％の配列同一性を有するポリペプチドをコードするヌクレオチド配列又はその断片を含む。いくつかの実施形態では、ＣＸＣＲ２ポリヌクレオチドは、低、中又は高ストリンジェンシー条件下で野生型哺乳類ＣＸＣＲ２タンパク質のオープンリーディングフレームにハイブリダイズするヌクレオチド配列又はその断片を含む。
【０７５１】
＜３．３３  ＣＸＣケモカイン受容体ＣＸＣＲ４（ＣＸＣＲ４）ポリペプチド＞
全てのケモカイン受容体と同様に、ＣＸＣＲ４は、炎症プロセスの媒介に関与する。これは、免疫系全体に広く発現し、ＨＩＶ感染、腫瘍転移及び造血に関連付けられる（Ｃｈａｒｏ＆Ｒａｎｓｏｈｏｆｆ，２００６）。
【０７５２】
現在まで、２つの研究でＣＸＣＲ４の結晶構造の解明が報告されており、そのリガンドへどのように結合するかについて見識を提供している（Ｗｕ  ｅｔ  ａｌ．，２０１０；Ｑｉｎ  ｅｔ  ａｌ．，２０１５）。ＣＸＣＲ４の細胞外部分は、Ｎ末端セグメント（ヒトＣＸＣＲ４のＭｅｔ１〜Ｐｈｅ２９）、ヘリックスＩＩ及びＩＩＩを連結するＥＣＬ１（ヒトＣＸＣＲ４のＡｓｎ１０１〜Ｐｈｅ１０４）、ヘリックスＩＶ及びＶを連結するＥＣＬ２（ヒトＣＸＣＲ４のＡｓｎ１７６〜Ａｓｎ１９２）及びヘリックスＶＩをＶＩＩに連結するＥＣＬ３（ヒトＣＸＣＲ４のＩｌｅ２６９〜Ｇｌｎ２７２）からなる。大半のケモカイン受容体で予想されるように、ＣＸＣＲ４は、その外部ドメインに２つの保存されたジスルフィド結合を有する（Ｗｕ  ｅｔ  ａｌ．，２０１０）。
【０７５３】
本発明の特定の実施形態では、ＣＸＣＲ４ポリペプチドは、ＣＸＣＲ４タンパク質配列を含むか、又はＣＸＣＲ４タンパク質配列と少なくとも７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８又は９９％の配列同一性又は類似性を共有する。
【０７５４】
いくつかの実施形態では、ＣＸＣＲ４タンパク質配列は、哺乳動物ＣＸＣＲ４タンパク質配列に対応する。適当なＣＸＣＲ４配列は、適切には、ネコ（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｐ５６４９８）、チンパンジー（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｐ６１０７２）、ウシ（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｐ２５９３０）、イヌ（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｑ３ＬＳＬ６）、ハリネズミ（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ａ０Ａ１Ｓ２ＺＶ５２）、ウマ（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｆ６Ｙ９Ｍ７）、ヒト（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｐ６１０７３）、ライオン（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｂ５ＬＶＸ６）、マーモセット（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｑ８ＨＺＵ１）、マウス（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託Ａ０Ａ０Ｒ４Ｊ０Ｎ８）、ブタ（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｑ７６４Ｍ９）、ウサギ（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｇ１ＳＧＦ１）、ラット（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ａ０Ａ０Ｇ２Ｋ９Ｕ１）、ヒツジ（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｗ５ＰＬＡ４）を含む群から選択される哺乳動物からのものであり得る。
【０７５５】
いくつかの好ましい実施形態では、ＣＸＣＲ４タンパク質配列は、ヒトＣＸＣＲ４タンパク質配列に対応する。いくつかの実施形態では、ＣＸＣＲ４ポリペプチドは、以下に記載のヒト全長野生型ＣＸＣＲ４タンパク質配列（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｐ６１０７３）又は野生型ＣＸＣＲ４タンパク質配列の機能的断片を含む。
【化２７】
2020531514.tif 000060
【０７５６】
本発明の一形態では、ＣＸＣＲ４ポリペプチドは、哺乳動物野生型ＣＸＣＲ４タンパク質配列のトランケート型を含む。例えば、ＣＸＣＲ４ポリペプチド配列は、Ｃ末端切断を有するヒト野生型ＣＸＣＲ４タンパク質配列を含み得る（例えば、アミノ酸残基３１９〜３５２は、切断され得る）。代わりに又はさらに、ＣＸＣＲ４ポリペプチド配列は、Ｎ末端切断を有する野生型ＣＸＣＲ４タンパク質配列を含み得る。Ｃ末端又はＮ末端切断の代替として又はそれに加えて、野生型ＣＸＣＲ４タンパク質配列の内部セクションを除去するために切断が行われ得る（例えば、アミノ酸残基１７９〜１８８は、切断され得る）。非限定的な例として、本発明での使用に適したＣＸＣＲ４ポリペプチドは、配列番号３１に記載のヒト野生型ＣＸＣＲ４タンパク質配列のアミノ酸残基２〜１７８及び１８９〜３１８を含んでいた。
【０７５７】
＜３．３４  ＣＸＣＲ４ポリペプチドをコードする構築物及びヌクレオチド配列＞
本発明は、上記及び本明細書の他の箇所に広く記載されているように、ＣＸＣＲ４ポリペプチドをコードする単離ポリヌクレオチド配列及び構築物も包含する。これらのポリヌクレオチド配列又は構築物を含む宿主細胞も企図される。
【０７５８】
いくつかの実施形態では、ポリヌクレオチド配列は、例えば、ＧｅｎＢａｎｋ受託番号ＡＹ２４２１２９．１、ＡＪ２２４８６９．１、ＮＭ＿００３４６７．２、ＮＭ＿００１００８５４０．２、ＮＭ＿００１３４８０５６．１、ＮＭ＿００１３４８０６０．１、ＮＭ＿００１３４８０５９．１、ＡＦ１４７２０４．２、ＡＹ８２６７７３．１、ＫＵ２４５６４７．１、ＫＵ２４５６４６．１、Ｙ１４７３９．１、ＡＦ０２５３７５．１、ＡＦ０５２５７２．１、ＡＦ３４８４９１．１及びＵ８１００３．１に記載の、ヒトＣＸＣＲ４ヌクレオチドに対応する（すなわちＣＸＣＲ４遺伝子に対応する）配列を含む。このタイプの代表的な例では、ポリヌクレオチドは、これらの配列のいずれか１つと少なくとも７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８又は９９％の配列同一性を共有するＣＸＣＲ４ヌクレオチド配列を含む。
【０７５９】
いくつかの実施形態では、ＣＸＣＲ４ポリヌクレオチドコード配列は、野生型哺乳類ＣＸＣＲ４ポリヌクレオチドと少なくとも５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９２％、９５％、９９％若しくは１００％の配列同一性を有するポリペプチドをコードするヌクレオチド配列又はその断片を含む。いくつかの実施形態では、ＣＸＣＲ４ポリヌクレオチドは、低、中又は高ストリンジェンシー条件下で野生型哺乳類ＣＸＣＲ４タンパク質のオープンリーディングフレームにハイブリダイズするヌクレオチド配列又はその断片を含む。
【０７６０】
＜３．３５  ＣＸＣケモカイン受容体ＣＸＣＲ５（ＣＸＣＲ５）ポリペプチド＞
全てのケモカイン受容体と同様に、ＣＸＣＲ５は、炎症プロセスの媒介に関与する。これは、Ｂ細胞及び濾胞性ヘルパーＴ細胞で発現し、Ｂ細胞濾胞の形成に関与する（Ｃｈａｒｏ＆Ｒａｎｓｏｈｏｆｆ，２００６）。
【０７６１】
現在まで、ＣＣＲ９の結晶構造は、依然として公開されておらず、受容体の構造的機能及びリガンド結合機能は、突然変異誘発及び相同性モデリングなどの間接的なアプローチを通じて推測しなければならない。ＣＸＣＲ５の細胞外部分は、Ｎ末端セグメント（ヒトＣＸＣＲ５のＭｅｔ１〜Ｇｌｕ４２）、ヘリックスＩＩ及びＩＩＩを連結するＥＣＬ１（ヒトＣＸＣＲ５のＧｌｙ１１４〜Ｌｅｕ１１７）、ヘリックスＩＶ及びＶを連結するＥＣＬ２（ヒトＣＸＣＲ５のＬｙｓ１８９〜Ｇｌｕ２１１）及びヘリックスＶＩをＶＩＩに連結するＥＣＬ３（ヒトＣＸＣＲ５のＡｌａ２８９〜Ａｓｎ２９２）からなる。全てのケモカイン受容体と同様に、ＣＣＲ９は、その外部ドメインに２つの保存されたジスルフィド結合を有することが予想される（Ｚｈｅｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，２０１６）。
【０７６２】
本発明の特定の実施形態では、ＣＸＣＲ５ポリペプチドは、ＣＸＣＲ５タンパク質配列を含むか、又はＣＸＣＲ５タンパク質配列と少なくとも７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８又は９９％の配列同一性又は類似性を共有する。
【０７６３】
いくつかの実施形態では、ＣＸＣＲ５タンパク質配列は、哺乳動物ＣＸＣＲ５タンパク質配列に対応する。適当なＣＸＣＲ５配列は、適切には、ネコ（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｍ３ＸＡＳ４）、チンパンジー（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｈ２Ｑ４Ｗ８）、ウシ（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｇ３Ｎ３Ｕ０）、イヌ（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｅ２ＲＲ０３）、ゴリラ（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｇ３ＲＤＷ５）、モルモット（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｈ０Ｗ６Ｉ１）、ヒト（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｐ３２３０２）、マーモセット（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｆ７Ａ１Ｓ１）、マウス（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｑ０４６８３）、パンダ（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｇ１ＫＺＫ８）、ブタ（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｆ１ＳＡＪ４）、ウサギ（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｇ１ＴＮＧ１）、ラット（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｐ３４９９７）、ヒツジ（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｗ５ＰＰＷ１）を含む群から選択される哺乳動物からのものであり得る。
【０７６４】
いくつかの好ましい実施形態では、ＣＸＣＲ５タンパク質配列は、ヒトＣＸＣＲ５タンパク質配列に対応する。いくつかの実施形態では、ＣＸＣＲ５ポリペプチドは、以下に記載のヒト全長野生型ＣＸＣＲ５タンパク質配列（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｐ３２３０２）又は野生型ＣＸＣＲ５タンパク質配列の機能的断片を含む。
【化２８】
2020531514.tif 000061
【０７６５】
本発明の一形態では、ＣＸＣＲ５ポリペプチドは、哺乳動物野生型ＣＸＣＲ５タンパク質配列のトランケート型を含む。例えば、ＣＸＣＲ５ポリペプチド配列は、Ｃ末端切断を有するヒト野生型ＣＸＣＲ５タンパク質配列を含み得る（例えば、アミノ酸残基３３９〜３７２は、切断され得る）。代わりに又はさらに、ＣＸＣＲ５ポリペプチド配列は、Ｎ末端切断を有する野生型ＣＸＣＲ５タンパク質配列を含み得る。Ｃ末端又はＮ末端切断の代替として又はそれに加えて、野生型ＣＸＣＲ５タンパク質配列の内部セクションを除去するために切断が行われ得る（例えば、アミノ酸残基１９３〜２０８は、切断され得る）。非限定的な例として、本発明での使用に適したＣＸＣＲ５ポリペプチドは、配列番号３２に記載のヒト野生型ＣＸＣＲ５タンパク質配列のアミノ酸残基２〜１９２及び２０９〜３３８を含んでいた。
【０７６６】
＜３．３６  ＣＸＣＲ５ポリペプチドをコードする構築物及びヌクレオチド配列＞
本発明は、上記及び本明細書の他の箇所に広く記載されているように、ＣＸＣＲ５ポリペプチドをコードする単離ポリヌクレオチド配列及び構築物も包含する。これらのポリヌクレオチド配列又は構築物を含む宿主細胞も企図される。
【０７６７】
いくつかの実施形態では、ポリヌクレオチド配列は、例えば、ＧｅｎＢａｎｋ受託番号ＮＭ＿００１７１６．４、ＮＭ＿０３２９６６．２及びＢＣ１１０３５２．１に記載の、ヒトＣＸＣＲ５ヌクレオチドに対応する（すなわちＣＸＣＲ５遺伝子に対応する）配列を含む。このタイプの代表的な例では、ポリヌクレオチドは、これらの配列のいずれか１つと少なくとも７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８又は９９％の配列同一性を共有するＣＸＣＲ５ヌクレオチド配列を含む。
【０７６８】
いくつかの実施形態では、ＣＸＣＲ５ポリヌクレオチドコード配列は、野生型哺乳類ＣＸＣＲ５ポリヌクレオチドと少なくとも５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９２％、９５％、９９％若しくは１００％の配列同一性を有するポリペプチドをコードするヌクレオチド配列又はその断片を含む。いくつかの実施形態では、ＣＸＣＲ５ポリヌクレオチドは、低、中又は高ストリンジェンシー条件下で野生型哺乳類ＣＸＣＲ５タンパク質のオープンリーディングフレームにハイブリダイズするヌクレオチド配列又はその断片を含む。
【０７６９】
＜３．３７  ＣＸＣケモカイン受容体ＣＸＣＲ６（ＣＸＣＲ６）ポリペプチド＞
全てのケモカイン受容体と同様に、ＣＸＣＲ６は、炎症プロセスの媒介に関与する。これは、ＣＤ８＋Ｔ細胞、ナチュラルキラー細胞及び記憶ＣＤ４＋Ｔ細胞に見られ、炎症性肝疾患及びアテローム性動脈硬化症に関連付けられる（Ｃｈａｒｏ＆Ｒａｎｓｏｈｏｆｆ，２００６）。
【０７７０】
現在まで、ＣＸＣＲ６の結晶構造は、依然として公開されておらず、受容体の構造的機能及びリガンド結合機能は、突然変異誘発及び相同性モデリングなどの間接的なアプローチを通じて推測しなければならない。ＣＸＣＲ６の細胞外部分は、Ｎ末端セグメント（ヒトＣＸＣＲ６のＭｅｔ１〜Ａｓｐ２５）、ヘリックスＩＩ及びＩＩＩを連結するＥＣＬ１（ヒトＣＸＣＲ６のＧｌｕ９４〜Ｐｈｅ９７）、ヘリックスＩＶ及びＶを連結するＥＣＬ２（ヒトＣＸＣＲ６のＡｓｎ１７１〜Ｇｌｕ１８５）及びヘリックスＶＩをＶＩＩに連結するＥＣＬ３（ヒトＣＸＣＲ６のＴｒｐ２５８〜Ａｌａ２６２）からなる。全てのケモカイン受容体と同様に、ＣＸＣＲ６は、その外部ドメインに２つの保存されたジスルフィド結合を有することが予想される（Ｚｈｅｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，２０１６）。
【０７７１】
本発明の特定の実施形態では、ＣＸＣＲ６ポリペプチドは、ＣＸＣＲ６タンパク質配列を含むか、又はＣＸＣＲ６タンパク質配列と少なくとも７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８又は９９％の配列同一性又は類似性を共有する。
【０７７２】
いくつかの実施形態では、ＣＸＣＲ６タンパク質配列は、哺乳動物ＣＸＣＲ６タンパク質配列に対応する。適当なＣＸＣＲ６配列は、適切には、ヒト（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｏ００５７４）、チンパンジー（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｑ９ＴＶ１６）、マウス（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｑ９ＥＱ１６）、ラット（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ａ７ＩＳＤ５）、ブタ（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｑ６ＹＴ４４）、ウシ（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｑ５ＥＡ９４）、イヌ（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｆ１ＰＭＵ３）、タスマニアデビル（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｇ３Ｗ５Ｚ９）、マーモセット（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｆ７ＤＴＲ０）、ネコ（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｍ３Ｗ６Ｋ１）、コウモリ（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｇ１Ｐ８Ｃ６）、ウサギ（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｇ１ＳＬＪ０）、モルモット（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｈ０Ｗ８２３）、ウマ（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｆ６ＸＱ８８）を含む群から選択される哺乳動物からのものであり得る。
【０７７３】
いくつかの好ましい実施形態では、ＣＸＣＲ６タンパク質配列は、ヒトＣＸＣＲ６タンパク質配列に対応する。いくつかの実施形態では、ＣＸＣＲ６ポリペプチドは、以下に記載のヒト全長野生型ＣＸＣＲ６タンパク質配列（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｏ００５７４）又は野生型ＣＸＣＲ６タンパク質配列の機能的断片を含む。
【化２９】
2020531514.tif 000062
【０７７４】
本発明の一形態では、ＣＸＣＲ６ポリペプチドは、哺乳動物野生型ＣＸＣＲ６タンパク質配列のトランケート型を含む。例えば、ＣＸＣＲ６ポリペプチド配列は、Ｃ末端切断を有するヒト野生型ＣＸＣＲ６タンパク質配列を含み得る（例えば、アミノ酸残基３１８〜３４２は、切断され得る）。代わりに又はさらに、ＣＸＣＲ６ポリペプチド配列は、Ｎ末端切断を有する野生型ＣＸＣＲ６タンパク質配列を含み得る。Ｃ末端又はＮ末端切断の代替として又はそれに加えて、野生型ＣＸＣＲ６タンパク質配列の内部セクションを除去するために切断が行われ得る（例えば、アミノ酸残基１７２〜１８０は、切断され得る）。非限定的な例として、本発明での使用に適したＣＸＣＲ６ポリペプチドは、配列番号３３に記載のヒト野生型ＣＸＣＲ６タンパク質配列のアミノ酸残基２〜１７１及び１８１〜３１７を含んでいた。
【０７７５】
＜３．３８  ＣＸＣＲ６ポリペプチドをコードする構築物及びヌクレオチド配列＞
本発明は、上記及び本明細書の他の箇所に広く記載されているように、ＣＸＣＲ６ポリペプチドをコードする単離ポリヌクレオチド配列及び構築物も包含する。これらのポリヌクレオチド配列又は構築物を含む宿主細胞も企図される。
【０７７６】
いくつかの実施形態では、ポリヌクレオチド配列は、例えば、ＧｅｎＢａｎｋ受託番号ＮＭ＿００６５６４．１、ＸＭ＿００５２６４８０９．２、ＸＭ＿０１１５３３２９１．２、ＸＭ＿０１１５３３２９０．２、ＥＵ０７６９７４．１、ＥＦ０６４７４１．１、ＡＫ３１３７５４．１に記載の、ヒトＣＸＣＲ６ヌクレオチドに対応する（すなわちＣＸＣＲ６遺伝子に対応する）配列を含む。このタイプの代表的な例では、ポリヌクレオチドは、これらの配列のいずれか１つと少なくとも７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８又は９９％の配列同一性を共有するＣＸＣＲ６ヌクレオチド配列を含む。
【０７７７】
いくつかの実施形態では、ＣＸＣＲ６ポリヌクレオチドコード配列は、野生型哺乳類ＣＸＣＲ６ポリヌクレオチドと少なくとも５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９２％、９５％、９９％若しくは１００％の配列同一性を有するポリペプチドをコードするヌクレオチド配列又はその断片を含む。いくつかの実施形態では、ＣＸＣＲ６ポリヌクレオチドは、低、中又は高ストリンジェンシー条件下で野生型哺乳類ＣＸＣＲ６タンパク質のオープンリーディングフレームにハイブリダイズするヌクレオチド配列又はその断片を含む。
【０７７８】
＜３．３９  ＣＸＣケモカイン受容体ＣＸＣＲ７（非定型ケモカイン受容体３；ＡＣＫＲ３としても知られる）ポリペプチド＞
全てのケモカイン受容体と同様に、ＣＸＣＲ７は、炎症プロセスの媒介に関与する。これは、網状赤血球、毛細血管細静脈、腎臓及び肺の上皮細胞並びに小脳ニューロンに見られる。ＣＸＣＲ７は、様々な自己免疫疾患、移植合併症、ＨＩＶ感染、子癇前症及び悪性腫瘍に関連付けられている（Ｈｏｒｎｅ＆Ｗｏｏｌｌｅｙ、２００９）。
【０７７９】
現在まで、ＣＸＣＲ７の結晶構造は、依然として公開されておらず、受容体の構造的機能及びリガンド結合機能は、突然変異誘発及び相同性モデリングなどの間接的なアプローチを通じて推測しなければならない。ＣＸＣＲ７の細胞外部分は、Ｎ末端セグメント（ヒトＣＸＣＲ７のＭｅｔ１〜Ｓｅｒ４１）、ヘリックスＩＩ及びＩＩＩを連結するＥＣＬ１（ヒトＣＸＣＲ７のＨｉｓ１０７〜Ｍｅｔ１１２）、ヘリックスＩＶ及びＶを連結するＥＣＬ２（ヒトＣＸＣＲ７のＬｙｓ１８４〜Ｇｌｕ２０７）及びヘリックスＶＩをＶＩＩに連結するＥＣＬ３（ヒトＣＸＣＲ７のＴｙｒ２８２〜Ｐｈｅ２８５）からなる。細胞外アミノ末端ドメインは、残基１６、２７及び３３に３つの潜在的なＮグリコシル化部位を保有する（Ｃｚｅｒｗｉｎｓｋｉ  ｅｔ  ａｌ．，２００７）。
【０７８０】
本発明の特定の実施形態では、ＣＸＣＲ７ポリペプチドは、ＣＸＣＲ７タンパク質配列を含むか、又はＣＸＣＲ７タンパク質配列と少なくとも７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８又は９９％の配列同一性又は類似性を共有する。
【０７８１】
いくつかの実施形態では、ＣＸＣＲ７タンパク質配列は、哺乳動物ＣＸＣＲ７タンパク質配列に対応する。適当なＣＸＣＲ７配列は、適切には、ヒト（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｐ２５１０６）、ラット（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｏ８９０３９）、マウス（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｐ５６４８５）、イヌ（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｐ１１６１３）、ウシ（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ａ４ＩＦ７７）、マカク（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｆ７ＧＴＬ４）、マーモセット（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｆ７ＨＺＸ１）、チンパンジー（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｈ２ＱＪＰ１）、ミンク（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｕ６ＤＥ１９）を含む群から選択される哺乳動物からのものであり得る。
【０７８２】
いくつかの好ましい実施形態では、ＣＸＣＲ７タンパク質配列は、ヒトＣＸＣＲ７タンパク質配列に対応する。いくつかの実施形態では、ＣＸＣＲ７ポリペプチドは、以下に記載のヒト全長野生型ＣＸＣＲ７タンパク質配列（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｐ２５１０６）又は野生型ＣＸＣＲ７タンパク質配列の機能的断片を含む。
【化３０】
2020531514.tif 000063
【０７８３】
本発明の一形態では、ＣＸＣＲ７ポリペプチドは、哺乳動物野生型ＣＸＣＲ７タンパク質配列のトランケート型を含む。例えば、ＣＸＣＲ７ポリペプチド配列は、Ｃ末端切断を有するヒト野生型ＣＸＣＲ７タンパク質配列を含み得る（例えば、アミノ酸残基３３９〜３６２は、切断され得る）。代わりに又はさらに、ＣＸＣＲ７ポリペプチド配列は、Ｎ末端切断を有する野生型ＣＸＣＲ７タンパク質配列を含み得る。Ｃ末端又はＮ末端切断の代替として又はそれに加えて、野生型ＣＸＣＲ７タンパク質配列の内部セクションを除去するために切断が行われ得る（例えば、アミノ酸残基１８７〜２０４は、切断され得る）。非限定的な例として、本発明での使用に適したＣＸＣＲ７ポリペプチドは、配列番号３４に記載のヒト野生型ＣＸＣＲ７タンパク質配列のアミノ酸残基２〜１８６及び２０５〜３３８を含んでいた。
【０７８４】
＜３．４０  ＣＸＣＲ７ポリペプチドをコードする構築物及びヌクレオチド配列＞
本発明は、上記及び本明細書の他の箇所に広く記載されているように、ＣＸＣＲ７ポリペプチドをコードする単離ポリヌクレオチド配列及び構築物も包含する。これらのポリヌクレオチド配列又は構築物を含む宿主細胞も企図される。
【０７８５】
いくつかの実施形態では、ポリヌクレオチド配列は、例えば、ＧｅｎＢａｎｋ受託番号ＮＭ＿０２０３１１．２、ＸＭ＿０１７００４５１６．１、ＸＭ＿００５２４６０９８．３、ＸＭ＿００５２４６０９７．２、ＢＣ０３６６６１．２に記載の、ヒトＣＸＣＲ７ヌクレオチドに対応する（すなわちＡＣＫＲ３遺伝子に対応する）配列を含む。このタイプの代表的な例では、ポリヌクレオチドは、これらの配列のいずれか１つと少なくとも７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８又は９９％の配列同一性を共有するＣＸＣＲ７ヌクレオチド配列を含む。
【０７８６】
いくつかの実施形態では、ＣＸＣＲ７ポリヌクレオチドコード配列は、野生型哺乳類ＣＸＣＲ７ポリヌクレオチドと少なくとも５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９２％、９５％、９９％若しくは１００％の配列同一性を有するポリペプチドをコードするヌクレオチド配列又はその断片を含む。いくつかの実施形態では、ＣＸＣＲ７ポリヌクレオチドは、低、中又は高ストリンジェンシー条件下で野生型哺乳類ＣＸＣＲ７タンパク質のオープンリーディングフレームにハイブリダイズするヌクレオチド配列又はその断片を含む。
【０７８７】
＜３．４１  ドーパミンＤ１受容体（Ｄ１Ｒ）ポリペプチド＞
中枢神経系（ＣＮＳ）において、Ｄ１Ｒは、自発運動の刺激、報酬及び強化メカニズムへの関与並びに学習、記憶及び他の認知機能における役割を含む、多数の機能を有する。ＣＮＳ以外では、Ｄ１Ｒは、レニン分泌及び腎機能の維持を調節する（Ｂｅａｕｌｉｅｕ＆Ｇａｉｎｅｔｄｉｎｏｖ，２０１１）。
【０７８８】
現在まで、Ｄ１Ｒの結晶構造は、依然として公開されておらず、受容体の構造的機能及びリガンド結合機能は、突然変異誘発及び相同性モデリングなどの間接的なアプローチを通じて推測しなければならない。Ｄ１Ｒの細胞外部分は、Ｎ末端セグメント（ヒトＤ１ＲのＭｅｔ１〜Ｌｅｕ１４）、ヘリックスＩＩ及びＩＩＩを連結するＥＣＬ１（ヒトＤ１ＲのＡｌａ８７〜Ｐｈｅ９２）、ヘリックスＩＶ及びＶを連結するＥＣＬ２（ヒトＤ１ＲのＴｒｐ１６３〜Ｌｅｕ１９０）及びヘリックスＶＩをＶＩＩに連結するＥＣＬ３（ヒトＤ１ＲのＧｌｙ２９９〜Ｐｒｏ３０５）からなる。
【０７８９】
本発明の特定の実施形態では、Ｄ１Ｒポリペプチドは、Ｄ１Ｒタンパク質配列を含むか、又はＤ１Ｒタンパク質配列と少なくとも７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８又は９９％の配列同一性又は類似性を共有する。
【０７９０】
いくつかの実施形態では、Ｄ１Ｒタンパク質配列は、哺乳動物Ｄ１Ｒタンパク質配列に対応する。適当なＤ１Ｒ配列は、適切には、ネコ（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｍ３ＶＶＤ１）、チンパンジー（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｈ２ＱＳ１８）、ウシ（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｑ９５１３６）、イヌ（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｆ１ＰＩ２１）、ゴリラ（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｇ３ＲＸＥ８）、モルモット（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｈ０ＶＥＳ０）、ヒト（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｐ２１７２８）、マウス（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｑ６１６１６）、パンダ（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｇ１ＬＫ０７）、ブタ（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｐ５０１３０）、ウサギ（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｇ１ＳＭＬ２）、ラット（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｐ１８９０１）、ヒツジ（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｗ５ＰＰＫ６）、タスマニアデビル（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｇ３ＶＤＤ８）を含む群から選択される哺乳動物からのものであり得る。
【０７９１】
いくつかの好ましい実施形態では、Ｄ１Ｒタンパク質配列は、ヒトＤ１Ｒタンパク質配列に対応する。いくつかの実施形態では、Ｄ１Ｒポリペプチドは、以下に記載のヒト全長野生型Ｄ１Ｒタンパク質配列（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｐ２１７２８）又は野生型Ｄ１Ｒタンパク質配列の機能的断片を含む。
【化３１】
2020531514.tif 000064
【０７９２】
本発明の一形態では、Ｄ１Ｒポリペプチドは、哺乳動物野生型Ｄ１Ｒタンパク質配列のトランケート型を含む。例えば、Ｄ１Ｒポリペプチド配列は、Ｃ末端切断を有するヒト野生型Ｄ１Ｒタンパク質配列を含み得る（例えば、アミノ酸残基３４８〜４４６は、切断され得る）。代わりに又はさらに、Ｄ１Ｒポリペプチド配列は、Ｎ末端切断を有する野生型Ｄ１Ｒタンパク質配列を含み得る。Ｃ末端又はＮ末端切断の代替として又はそれに加えて、野生型Ｄ１Ｒタンパク質配列の内部セクションを除去するために切断が行われ得る（例えば、アミノ酸残基１６６〜１８６は、切断され得る）。非限定的な例として、本発明での使用に適したＤ１Ｒポリペプチドは、配列番号３５に記載のヒト野生型Ｄ１Ｒタンパク質配列のアミノ酸残基２〜１６５及び１８７〜３４７を含んでいた。
【０７９３】
＜３．４２  Ｄ１Ｒポリペプチドをコードする構築物及びヌクレオチド配列＞
本発明は、上記及び本明細書の他の箇所に広く記載されているように、Ｄ１Ｒポリペプチドをコードする単離ポリヌクレオチド配列及び構築物も包含する。これらのポリヌクレオチド配列又は構築物を含む宿主細胞も企図される。
【０７９４】
いくつかの実施形態では、ポリヌクレオチド配列は、例えば、ＧｅｎＢａｎｋ受託番号ＣＲ５４１９２２．１、ＥＵ２４９２９７．１、ＫＲ７１２１３３．１、ＫＲ７１２１３２．１、ＫＲ７１２１３１．１、ＫＲ７１２１３０．１、ＫＪ８９６７２６．１、ＮＭ＿０００７９４．３及びＮＧ＿０１１８０２．１に記載の、ヒトＤ１Ｒヌクレオチドに対応する（すなわちＤＲＤ１遺伝子に対応する）配列を含む。このタイプの代表的な例では、ポリヌクレオチドは、これらの配列のいずれか１つと少なくとも７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８又は９９％の配列同一性を共有するＤ１Ｒヌクレオチド配列を含む。
【０７９５】
いくつかの実施形態では、Ｄ１Ｒポリヌクレオチドコード配列は、野生型哺乳類Ｄ１Ｒポリヌクレオチドと少なくとも５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９２％、９５％、９９％若しくは１００％の配列同一性を有するポリペプチドをコードするヌクレオチド配列又はその断片を含む。いくつかの実施形態では、Ｄ１Ｒポリヌクレオチドは、低、中又は高ストリンジェンシー条件下で野生型哺乳類Ｄ１Ｒタンパク質のオープンリーディングフレームにハイブリダイズするヌクレオチド配列又はその断片を含む。
【０７９６】
＜３．４３  エンドセリン受容体Ａ型（ＥＴＡＲ）ポリペプチド＞
ＥＴＡＲは、血管収縮、心血管リモデリング、細胞増殖、細胞分化、細胞外マトリックス産生並びに水及びナトリウム分泌の制御を含む、多くの機能を媒介する。これは、肺高血圧、アテローム性動脈硬化、糖尿病及び心筋虚血後の心臓リモデリングなどの様々な疾患の発症にも関係付けられる（Ｈｏｒｉｎｏｕｃｈｉ  ｅｔ  ａｌ．，２０１３）。
【０７９７】
現在まで、ＥＴＡＲの結晶構造は、依然として公開されておらず、受容体の構造的機能及びリガンド結合機能は、突然変異誘発及び相同性モデリングなどの間接的なアプローチを通じて推測しなければならない。ＥＴＡＲの細胞外部分は、Ｎ末端セグメント（ヒトＥＴＡＲのＭｅｔ１〜Ｃｙｓ６９）、ヘリックスＩＩ及びＩＩＩを連結するＥＣＬ１（ヒトＥＴＡＲのＧｌｙ１４４〜Ｐｈｅ１４８）、ヘリックスＩＶ及びＶを連結するＥＣＬ２（ヒトＥＴＡＲのＶａｌ２２５〜Ｓｅｒ２４５）及びヘリックスＶＩをＶＩＩに連結するＥＣＬ３（ヒトＥＴＡＲのＡｓｎ３３４〜Ａｓｎ３３９）からなる。
【０７９８】
本発明の特定の実施形態では、ＥＴＡＲポリペプチドは、ＥＴＡＲタンパク質配列を含むか、又はＥＴＡＲタンパク質配列と少なくとも７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８又は９９％の配列同一性又は類似性を共有する。
【０７９９】
いくつかの実施形態では、ＥＴＡＲタンパク質配列は、哺乳動物ＥＴＡＲタンパク質配列に対応する。適当なＥＴＡＲ配列は、適切には、ネコ（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｍ３ＷＭＪ５）、チンパンジー（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｈ２ＱＱ９４）、ウシ（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｐ２１４５０）、イヌ（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｑ５ＫＳＵ９）、ウマ（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｆ７ＣＨＦ１）、ヒト（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｐ２５１０１）、マーモセット（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｆ６ＹＮ６８）、マウス（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｑ６１６１４）、パンダ（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｇ１Ｌ５Ｆ１）、ブタ（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｑ２９０１０）、ウサギ（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ａ５Ａ８Ｋ３）、ラット（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｐ２６６８４）、ヒツジ（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｑ９５Ｌ５５）、タスマニアデビル（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｇ３ＶＸＫ８）を含む群から選択される哺乳動物からのものであり得る。
【０８００】
いくつかの好ましい実施形態では、ＥＴＡＲタンパク質配列は、ヒトＥＴＡＲタンパク質配列に対応する。いくつかの実施形態では、ＥＴＡＲポリペプチドは、以下に記載のヒト全長野生型ＥＴＡＲタンパク質配列（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｐ２５１０１）又は野生型ＥＴＡＲタンパク質配列の機能的断片を含む。
【化３２】
2020531514.tif 000065
【０８０１】
本発明の一形態では、ＥＴＡＲポリペプチドは、哺乳動物野生型ＥＴＡＲタンパク質配列のトランケート型を含む。例えば、ＥＴＡＲポリペプチド配列は、Ｃ末端切断を有するヒト野生型ＥＴＡＲタンパク質配列を含み得る（例えば、アミノ酸残基３８７〜４２７は、切断され得る）。代わりに又はさらに、ＥＴＡＲポリペプチド配列は、Ｎ末端切断を有する野生型ＥＴＡＲタンパク質配列を含み得る。Ｃ末端又はＮ末端切断の代替として又はそれに加えて、野生型ＥＴＡＲタンパク質配列の内部セクションを除去するために切断が行われ得る（例えば、アミノ酸残基２２８〜２４２は、切断され得る）。非限定的な例として、本発明での使用に適したＥＴＡＲポリペプチドは、配列番号３６に記載のヒト野生型ＥＴＡＲタンパク質配列のアミノ酸残基２〜２２７及び２４３〜３８６を含んでいた。
【０８０２】
＜３．４４  ＥＴＡＲポリペプチドをコードする構築物及びヌクレオチド配列＞
本発明は、上記及び本明細書の他の箇所に広く記載されているように、ＥＴＡＲポリペプチドをコードする単離ポリヌクレオチド配列及び構築物も包含する。これらのポリヌクレオチド配列又は構築物を含む宿主細胞も企図される。
【０８０３】
いくつかの実施形態では、ポリヌクレオチド配列は、例えば、ＧｅｎＢａｎｋ受託番号ＮＭ＿００１９５７．３、ＮＧ＿０１３３４３．１、ＮＲ＿０４５９５８．１、ＮＭ＿００１２５６２８３．１、ＮＭ＿００１１６６０５５．１、ＡＹ２７５４６２．１、Ｌ０６６２２．１及びＡＹ４２２９８９．１に記載の、ヒトＥＴＡＲヌクレオチドに対応する（すなわちＥＤＮＲＡ遺伝子に対応する）配列を含む。このタイプの代表的な例では、ポリヌクレオチドは、これらの配列のいずれか１つと少なくとも７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８又は９９％の配列同一性を共有するＥＴＡＲヌクレオチド配列を含む。
【０８０４】
いくつかの実施形態では、ＥＴＡＲポリヌクレオチドコード配列は、野生型哺乳類ＥＴＡＲポリヌクレオチドと少なくとも５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９２％、９５％、９９％若しくは１００％の配列同一性を有するポリペプチドをコードするヌクレオチド配列又はその断片を含む。いくつかの実施形態では、ＥＴＡＲポリヌクレオチドは、低、中又は高ストリンジェンシー条件下で野生型哺乳類ＥＴＡＲタンパク質のオープンリーディングフレームにハイブリダイズするヌクレオチド配列又はその断片を含む。
【０８０５】
＜３．４５  エンドセリン受容体Ｂ型（ＥＴＢＲ）ポリペプチド＞
ＥＴＢＲは、一酸化窒素及びプロスタサイクリンの内皮産生を通して血管拡張を媒介すると考えられている。さらに、内在性リガンドのレベルを枯渇させることにより、ＥＴＡＲの多くの病理学的作用を減弱させると考えられている（Ｈｏｒｉｎｏｕｃｈｉ  ｅｔ  ａｌ．，２０１３）。
【０８０６】
ＥＴＢＲの結晶構造が最近解明され、そのリガンド結合モード及び活性化プロセスに対する見識を提供している（Ｓｈｉｈｏｙａ  ｅｔ  ａｌ．，２０１６）。ＥＴＢＲの細胞外部分は、Ｎ末端セグメント（ヒトＥＴＢＲのＭｅｔ１〜Ｃｙｓ９０）、ヘリックスＩＩ及びＩＩＩを連結するＥＣＬ１（ヒトＥＴＢＲのＧｌｕ１６５〜Ｐｈｅ１６９）、ヘリックスＩＶ及びＶを連結するＥＣＬ２（ヒトＥＴＢＲのＡｓｐ２４１〜Ｔｈｒ２６３）及びヘリックスＶＩをＶＩＩに連結するＥＣＬ３（ヒトＥＴＢＲのＡｓｎ３５１〜Ａｓｎ３５６）からなる。ＥＴＢＲは、その外部ドメインに２つのジスルフィド結合を含有する（Ｓｈｉｈｏｙａ  ｅｔ  ａｌ．，２０１６）。
【０８０７】
本発明の特定の実施形態では、ＥＴＢＲポリペプチドは、ＥＴＢＲタンパク質配列を含むか、又はＥＴＢＲタンパク質配列と少なくとも７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８又は９９％の配列同一性又は類似性を共有する。
【０８０８】
いくつかの実施形態では、ＥＴＢＲタンパク質配列は、哺乳動物ＥＴＢＲタンパク質配列に対応する。適当なＥＴＢＲ配列は、適切には、ネコ（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｍ３ＷＲＰ２）、チンパンジー（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｋ７ＤＥＡ２）、ウシ（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｐ２８０８８）、イヌ（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｐ５６４９７）、キツネ（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｉ６ＵＧ９７）、ゴリラ（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｇ３ＲＥＳ６）、ウマ（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｏ６２７０９）、ヒト（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｐ２４５３０）、マウス（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｐ４８３０２）、パンダ（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｇ１ＬＧＣ８）、ブタ（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｐ３５４６３）、ウサギ（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｑ９Ｎ０Ｗ７）、ラット（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｐ２１４５１）、ヒツジ（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｗ５ＮＰＰ６）を含む群から選択される哺乳動物からのものであり得る。
【０８０９】
いくつかの好ましい実施形態では、ＥＴＢＲタンパク質配列は、ヒトＥＴＢＲタンパク質配列に対応する。いくつかの実施形態では、ＥＴＢＲポリペプチドは、以下に記載のヒト全長野生型ＥＴＢＲタンパク質配列（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｐ２４５３０）又は野生型ＥＴＢＲタンパク質配列の機能的断片を含む。
【化３３】
2020531514.tif 000066
【０８１０】
本発明の一形態では、ＥＴＢＲポリペプチドは、哺乳動物野生型ＥＴＢＲタンパク質配列のトランケート型を含む。例えば、ＥＴＢＲポリペプチド配列は、Ｃ末端切断を有するヒト野生型ＥＴＢＲタンパク質配列を含み得る（例えば、アミノ酸残基４０４〜４４２は、切断され得る）。代わりに又はさらに、ＥＴＢＲポリペプチド配列は、Ｎ末端切断を有する野生型ＥＴＢＲタンパク質配列を含み得る。Ｃ末端又はＮ末端切断の代替として又はそれに加えて、野生型ＥＴＢＲタンパク質配列の内部セクションを除去するために切断が行われ得る（例えば、アミノ酸残基２４５〜２６０は、切断され得る）。非限定的な例として、本発明での使用に適したＥＴＢＲポリペプチドは、配列番号３７に記載のヒト野生型ＥＴＢＲタンパク質配列のアミノ酸残基２〜２４４及び２６１〜４０３を含んでいた。
【０８１１】
＜３．４６  ＥＴＢＲポリペプチドをコードする構築物及びヌクレオチド配列＞
本発明は、上記及び本明細書の他の箇所に広く記載されているように、ＥＴＢＲポリペプチドをコードする単離ポリヌクレオチド配列及び構築物も包含する。これらのポリヌクレオチド配列又は構築物を含む宿主細胞も企図される。
【０８１２】
いくつかの実施形態では、ポリヌクレオチド配列は、例えば、ＧｅｎＢａｎｋ受託番号ＡＹ２７５４６３．１、ＮＭ＿０００１１５．４、ＮＭ＿００１１２２６５９．２、ＮＭ＿００３９９１．３、ＮＭ＿００１２０１３９７．１、Ｌ０６６２３．１、ＮＧ＿０１１６３０．２、ＡＹ５４７３１２．１、ＡＹ２７５４６３．１、ＡＢ２０９１９８．１及びＢＣ０１４４７２．１に記載の、ヒトＥＴＢＲヌクレオチドに対応する（すなわちＥＤＮＲＢ遺伝子に対応する）配列を含む。このタイプの代表的な例では、ポリヌクレオチドは、これらの配列のいずれか１つと少なくとも７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８又は９９％の配列同一性を共有するＥＴＢＲヌクレオチド配列を含む。
【０８１３】
いくつかの実施形態では、ＥＴＢＲポリヌクレオチドコード配列は、野生型哺乳類ＥＴＢＲポリヌクレオチドと少なくとも５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９２％、９５％、９９％若しくは１００％の配列同一性を有するポリペプチドをコードするヌクレオチド配列又はその断片を含む。いくつかの実施形態では、ＥＴＢＲポリヌクレオチドは、低、中又は高ストリンジェンシー条件下で野生型哺乳類ＥＴＢＲタンパク質のオープンリーディングフレームにハイブリダイズするヌクレオチド配列又はその断片を含む。
【０８１４】
＜３．４７  ヒスタミンＨ３受容体（Ｈ３Ｒ）ポリペプチド＞
Ｈ３Ｒは、セロトニン作動性、ノルアドレナリン作動性、コリン作動性及びドーパミン作動性の神経伝達物質放出を調節し、自発運動、哺乳動物の冬眠及び胃酸分泌に関与する。これは、免疫応答及び多発性硬化症においても役割を有し得る（Ｐａｎｕｌａ  ｅｔ  ａｌ．，２０１５）。
【０８１５】
現在まで、Ｈ３Ｒの結晶構造は、依然として公開されておらず、受容体の構造的機能及びリガンド結合機能は、突然変異誘発及び相同性モデリングなどの間接的なアプローチを通じて推測しなければならない。Ｈ３Ｒの細胞外部分は、Ｎ末端セグメント（ヒトＨ３ＲのＭｅｔ１〜Ｓｅｒ３０）、ヘリックスＩＩ及びＩＩＩを連結するＥＣＬ１（ヒトＨ３ＲのＧｌｙ９８〜Ｐｈｅ１０２）、ヘリックスＩＶ及びＶを連結するＥＣＬ２（ヒトＨ３ＲのＴｒｐ１７４〜Ｔｙｒ１９４）及びヘリックスＶＩをＶＩＩに連結するＥＣＬ３（ヒトＨ３ＲのＨｉｓ３８５〜Ｖａｌ３８９）からなる。
【０８１６】
本発明の特定の実施形態では、Ｈ３Ｒポリペプチドは、Ｈ３Ｒタンパク質配列を含むか、又はＨ３Ｒタンパク質配列と少なくとも７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８又は９９％の配列同一性又は類似性を共有する。
【０８１７】
いくつかの実施形態では、Ｈ３Ｒタンパク質配列は、哺乳動物Ｈ３Ｒタンパク質配列に対応する。適当なＨ３Ｒ配列は、適切には、チンパンジー（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｈ２Ｒ２Ｎ９）、ウシ（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｆ１ＭＭＬ８）、イヌ（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｆ１ＰＳＪ０）、ゴリラ（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｇ３ＳＪＮ４）、モルモット（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｑ９ＪＩ３５）、ウマ（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｆ６ＵＭＹ９）、ヒト（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｑ９Ｙ５Ｎ１）、マーモセット（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｕ３ＥＰＴ７）、マウス（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｐ５８４０６）、オランウータン（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｈ２Ｐ２Ｉ０）、カモノハシ（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｆ６ＶＡ７２）、ラット（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｑ９ＱＹＮ８）、ヒツジ（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｗ５ＰＹ０９）、タスマニアデビル（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｇ３ＷＱＶ４）を含む群から選択される哺乳動物からのものであり得る。
【０８１８】
いくつかの好ましい実施形態では、Ｈ３Ｒタンパク質配列は、ヒトＨ３Ｒタンパク質配列に対応する。いくつかの実施形態では、Ｈ３Ｒポリペプチドは、以下に記載のヒト全長野生型Ｈ３Ｒタンパク質配列（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｑ９Ｙ５Ｎ１）又は野生型Ｈ３Ｒタンパク質配列の機能的断片を含む。
【化３４】
2020531514.tif 000067
【０８１９】
本発明の一形態では、Ｈ３Ｒポリペプチドは、哺乳動物野生型Ｈ３Ｒタンパク質配列のトランケート型を含む。例えば、Ｈ３Ｒポリペプチド配列は、Ｃ末端切断を有するヒト野生型Ｈ３Ｒタンパク質配列を含み得る（例えば、アミノ酸残基４２９〜４４５は、切断され得る）。代わりに又はさらに、Ｈ３Ｒポリペプチド配列は、Ｎ末端切断を有する野生型Ｈ３Ｒタンパク質配列を含み得る。Ｃ末端又はＮ末端切断の代替として又はそれに加えて、野生型Ｈ３Ｒタンパク質配列の内部セクションを除去するために切断が行われ得る（例えば、アミノ酸残基１７７〜１９２は、切断され得る）。非限定的な例として、本発明での使用に適したＨ３Ｒポリペプチドは、配列番号３８に記載のヒト野生型Ｈ３Ｒタンパク質配列のアミノ酸残基２〜１７６及び１９３〜４２８を含んでいた。
【０８２０】
＜３．４８  Ｈ３Ｒポリペプチドをコードする構築物及びヌクレオチド配列＞
本発明は、上記及び本明細書の他の箇所に広く記載されているように、Ｈ３Ｒポリペプチドをコードする単離ポリヌクレオチド配列及び構築物も包含する。これらのポリヌクレオチド配列又は構築物を含む宿主細胞も企図される。
【０８２１】
いくつかの実施形態では、ポリヌクレオチド配列は、例えば、ＧｅｎＢａｎｋ受託番号ＮＭ＿００７２３２．２、ＡＦ３４６９０４．１、ＡＦ３４６９０３．１、ＡＦ３２１９１３．１、ＡＦ３２１９１２．１、ＡＦ３２１９１１．１、ＡＦ３２１９１０．１、ＡＦ３６３７９１．１、ＢＣ０９６８４０．１、ＡＪ２９６６５２．１及びＡＪ２７８２５０．１に記載の、ヒトＨ３Ｒヌクレオチドに対応する（すなわちＨＲＨ３遺伝子に対応する）配列を含む。このタイプの代表的な例では、ポリヌクレオチドは、これらの配列のいずれか１つと少なくとも７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８又は９９％の配列同一性を共有するＨ３Ｒヌクレオチド配列を含む。
【０８２２】
いくつかの実施形態では、Ｈ３Ｒポリヌクレオチドコード配列は、野生型哺乳類Ｈ３Ｒポリヌクレオチドと少なくとも５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９２％、９５％、９９％若しくは１００％の配列同一性を有するポリペプチドをコードするヌクレオチド配列又はその断片を含む。いくつかの実施形態では、Ｈ３Ｒポリヌクレオチドは、低、中又は高ストリンジェンシー条件下で野生型哺乳類Ｈ３Ｒタンパク質のオープンリーディングフレームにハイブリダイズするヌクレオチド配列又はその断片を含む。
【０８２３】
＜３．４９  ムスカリンＭ１受容体（Ｍ１Ｒ）ポリペプチド＞
Ｍ１Ｒは、学習、記憶及び認知において重要な役割を果たす。これは、アルツハイマー病、統合失調症及び薬物嗜癖など、様々なＣＮＳ障害の有望な標的と見られる（Ｔｈａｌ  ｅｔ  ａｌ．，２０１６）。
【０８２４】
Ｍ１Ｒの結晶構造が最近解明され、そのリガンド結合モード及び活性化プロセスに対する見識を提供している（Ｔｈａｌ  ｅｔ  ａｌ．，２０１６）。Ｍ１Ｒの細胞外部分は、Ｎ末端セグメント（ヒトＭ１ＲのＭｅｔ１〜Ｇｌｙ２１）、ヘリックスＩＩ及びＩＩＩを連結するＥＣＬ１（ヒトＭ１ＲのＧｌｙ８９〜Ｌｅｕ９３）、ヘリックスＩＶ及びＶを連結するＥＣＬ２（ヒトＭ１ＲのＧｌｕ１７０〜Ｓｅｒ１８４）及びヘリックスＶＩをＶＩＩに連結するＥＣＬ３（ヒトＭ１ＲのＬｙｓ３９２〜Ｖａｌ３９５）からなる。これは、外部ドメインにジスルフィド架橋を含有する（Ｔｈａｌ  ｅｔ  ａｌ．，２０１６）。
【０８２５】
本発明の特定の実施形態では、Ｍ１Ｒポリペプチドは、Ｍ１Ｒタンパク質配列を含むか、又はＭ１Ｒタンパク質配列と少なくとも７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８又は９９％の配列同一性又は類似性を共有する。
【０８２６】
いくつかの実施形態では、Ｍ１Ｒタンパク質配列は、哺乳動物Ｍ１Ｒタンパク質配列に対応する。適当なＭ１Ｒ配列は、適切には、ネコ（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｍ３ＶＵＫ２）、チンパンジー（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｈ２Ｑ３Ｘ５）、ウシ（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｆ１Ｎ５Ｃ５）、イヌ（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｆ１ＰＴ２３）、ゴリラ（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｇ３ＲＪＰ５）、モルモット（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｈ０Ｗ４Ｒ２）、ハリネズミ（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ａ０Ａ１Ｓ３ＷＦＭ０）、ウマ（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｆ６ＳＬＧ５）、ヒト（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｐ１１２２９）、マーモセット（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｆ７ＩＰＹ９）、マウス（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｐ１２６５７）ブタ（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｐ０４７６１）、ウサギ（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｇ１ＳＲ５５）、ラット（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｐ０８４８２）を含む群から選択される哺乳動物からのものであり得る。
【０８２７】
いくつかの好ましい実施形態では、Ｍ１Ｒタンパク質配列は、ヒトＭ１Ｒタンパク質配列に対応する。いくつかの実施形態では、Ｍ１Ｒポリペプチドは、以下に記載のヒト全長野生型Ｍ１Ｒタンパク質配列（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｐ１１２２９）又は野生型Ｍ１Ｒタンパク質配列の機能的断片を含む。
【化３５】
2020531514.tif 000068
【０８２８】
本発明の一形態では、Ｍ１Ｒポリペプチドは、哺乳動物野生型Ｍ１Ｒタンパク質配列のトランケート型を含む。例えば、Ｍ１Ｒポリペプチド配列は、Ｃ末端切断を有するヒト野生型Ｍ１Ｒタンパク質配列を含み得る（例えば、アミノ酸残基４３５〜４６０は、切断され得る）。代わりに又はさらに、Ｍ１Ｒポリペプチド配列は、Ｎ末端切断を有する野生型Ｍ１Ｒタンパク質配列を含み得る。Ｃ末端又はＮ末端切断の代替として又はそれに加えて、野生型Ｍ１Ｒタンパク質配列の内部セクションを除去するために切断が行われ得る（例えば、アミノ酸残基１７１〜１８２は、切断され得る）。非限定的な例として、本発明での使用に適したＭ１Ｒポリペプチドは、配列番号３９に記載のヒト野生型Ｍ１Ｒタンパク質配列のアミノ酸残基２〜１７０及び１８３〜４３４を含んでいた。
【０８２９】
＜３．５０  Ｍ１Ｒポリペプチドをコードする構築物及びヌクレオチド配列＞
本発明は、上記及び本明細書の他の箇所に広く記載されているように、Ｍ１Ｒポリペプチドをコードする単離ポリヌクレオチド配列及び構築物も包含する。これらのポリヌクレオチド配列又は構築物を含む宿主細胞も企図される。
【０８３０】
いくつかの実施形態では、ポリヌクレオチド配列は、例えば、ＧｅｎＢａｎｋ受託番号ＮＭ＿０００７３８．２、ＢＣ００７７４０．２、ＢＣ０２２９８４．１、ＢＴ００７１６６．１及びＡＦ３８５５８７．１に記載の、ヒトＭ１Ｒヌクレオチドに対応する（すなわちＣＨＲＭ１遺伝子に対応する）配列を含む。このタイプの代表的な例では、ポリヌクレオチドは、これらの配列のいずれか１つと少なくとも７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８又は９９％の配列同一性を共有するＭ１Ｒヌクレオチド配列を含む。
【０８３１】
いくつかの実施形態では、Ｍ１Ｒポリヌクレオチドコード配列は、野生型哺乳類Ｍ１Ｒポリヌクレオチドと少なくとも５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９２％、９５％、９９％若しくは１００％の配列同一性を有するポリペプチドをコードするヌクレオチド配列又はその断片を含む。いくつかの実施形態では、Ｍ１Ｒポリヌクレオチドは、低、中又は高ストリンジェンシー条件下で野生型哺乳類Ｍ１Ｒタンパク質のオープンリーディングフレームにハイブリダイズするヌクレオチド配列又はその断片を含む。
【０８３２】
＜３．５１  ムスカリンＭ２受容体（Ｍ２Ｒ）ポリペプチド＞
Ｍ２Ｒは、心機能の調節において重要な役割を果たし、認知及び疼痛知覚を含む、多くのＣＮＳプロセスにも関与する（Ｋｒｕｓｅ  ｅｔ  ａｌ．，２０１３）。
【０８３３】
現在まで、Ｍ２Ｒの２つの結晶構造が公開されており（Ｈａｇａ  ｅｔ  ａｌ．，２０１２；Ｋｒｕｓｅ  ｅｔ  ａｌ．，２０１３）、受容体のリガンド結合及び活性化メカニズムに対する見識を提供している。Ｍ２Ｒの細胞外部分は、Ｎ末端セグメント（ヒトＭ２ＲのＭｅｔ１〜Ｔｙｒ１８）、ヘリックスＩＩ及びＩＩＩを連結するＥＣＬ１（ヒトＭ２ＲのＧｌｙ８７〜Ｌｅｕ９１）、ヘリックスＩＶ及びＶを連結するＥＣＬ２（ヒトＭ２ＲのＶａｌ１６８〜Ｓｅｒ１８２）及びヘリックスＶＩをＶＩＩに連結するＥＣＬ３（ヒトＭ２ＲのＡｌａ４１４〜Ｉｌｅ４１７）からなる。これは、外部ドメインに２つのジスルフィド架橋を含有する（Ｈａｇａ  ｅｔ  ａｌ．，２０１２）。
【０８３４】
本発明の特定の実施形態では、Ｍ２Ｒポリペプチドは、Ｍ２Ｒタンパク質配列を含むか、又はＭ２Ｒタンパク質配列と少なくとも７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８又は９９％の配列同一性又は類似性を共有する。
【０８３５】
いくつかの実施形態では、Ｍ２Ｒタンパク質配列は、哺乳動物Ｍ２Ｒタンパク質配列に対応する。適当なＭ２Ｒ配列は、適切には、コウモリ（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｇ１ＰＷＺ４）、ネコ（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｍ３ＷＳＧ４）、チンパンジー（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｈ２ＲＡＰ９）、ウシ（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｐ４１９８５）、イヌ（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｆ１ＰＷＲ７）、ゴリラ（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｇ３ＱＫＢ８）、ヒト（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｐ０８１７２）、マーモセット（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｆ７ＡＰＥ０）、マウス（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｑ９ＥＲＺ４）、ブタ（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｐ０６１９９）、ウサギ（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｇ１ＴＢＸ１）、ラット（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｐ１０９８０）、ヒツジ（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｗ５ＮＳＷ２）、タスマニアデビル（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｇ３ＶＸ７５）を含む群から選択される哺乳動物からのものであり得る。
【０８３６】
いくつかの好ましい実施形態では、Ｍ２Ｒタンパク質配列は、ヒトＭ２Ｒタンパク質配列に対応する。いくつかの実施形態では、Ｍ２Ｒポリペプチドは、以下に記載のヒト全長野生型Ｍ２Ｒタンパク質配列（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｐ０８１７２）又は野生型Ｍ２Ｒタンパク質配列の機能的断片を含む。
【化３６】
2020531514.tif 000069
【０８３７】
本発明の一形態では、Ｍ２Ｒポリペプチドは、哺乳動物野生型Ｍ２Ｒタンパク質配列のトランケート型を含む。例えば、Ｍ２Ｒポリペプチド配列は、Ｃ末端切断を有するヒト野生型Ｍ２Ｒタンパク質配列を含み得る（例えば、アミノ酸残基４５７〜４６６は、切断され得る）。代わりに又はさらに、Ｍ２Ｒポリペプチド配列は、Ｎ末端切断を有する野生型Ｍ２Ｒタンパク質配列を含み得る。Ｃ末端又はＮ末端切断の代替として又はそれに加えて、野生型Ｍ２Ｒタンパク質配列の内部セクションを除去するために切断が行われ得る（例えば、アミノ酸残基１７２〜１７７は、切断され得る）。非限定的な例として、本発明での使用に適したＭ２Ｒポリペプチドは、配列番号４０に記載のヒト野生型Ｍ２Ｒタンパク質配列のアミノ酸残基２〜１７１及び１７８〜４５６を含んでいた。
【０８３８】
＜３．５２  Ｍ２Ｒポリペプチドをコードする構築物及びヌクレオチド配列＞
本発明は、上記及び本明細書の他の箇所に広く記載されているように、Ｍ２Ｒポリペプチドをコードする単離ポリヌクレオチド配列及び構築物も包含する。これらのポリヌクレオチド配列又は構築物を含む宿主細胞も企図される。
【０８３９】
いくつかの実施形態では、ポリヌクレオチド配列は、例えば、ＧｅｎＢａｎｋ受託番号ＡＦ４９８９１６．１、ＮＭ＿００１００６６３２．１、ＮＭ＿００１００６６３１．１、ＮＭ＿００１００６６３０．１、ＮＭ＿００１００６６２９．１、ＮＭ＿００１００６６２８．１、ＮＭ＿００１００６６２７．１、ＮＭ＿００１００６６２６．１、ＮＭ＿０００７３９．２、ＮＧ＿０１１８４６．２及びＭ１６４０４．１に記載の、ヒトＭ２Ｒヌクレオチドに対応する（すなわちＣＨＲＭ２遺伝子に対応する）配列を含む。このタイプの代表的な例では、ポリヌクレオチドは、これらの配列のいずれか１つと少なくとも７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８又は９９％の配列同一性を共有するＭ２Ｒヌクレオチド配列を含む。
【０８４０】
いくつかの実施形態では、Ｍ２Ｒポリヌクレオチドコード配列は、野生型哺乳類Ｍ２Ｒポリヌクレオチドと少なくとも５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９２％、９５％、９９％若しくは１００％の配列同一性を有するポリペプチドをコードするヌクレオチド配列又はその断片を含む。いくつかの実施形態では、Ｍ２Ｒポリヌクレオチドは、低、中又は高ストリンジェンシー条件下で野生型哺乳類Ｍ２Ｒタンパク質のオープンリーディングフレームにハイブリダイズするヌクレオチド配列又はその断片を含む。
【０８４１】
＜３．５３  ムスカリンＭ３受容体（Ｍ３Ｒ）ポリペプチド＞
Ｍ３Ｒは、ＣＮＳ及び末梢組織の両方に広く分布している。これは、シェーグレン症候群、２型糖尿病、肥満、消化性潰瘍疾患、過活動膀胱、慢性閉塞性肺疾患、過敏性腸症候群及び胃腸痙攣を含む、いくつかの疾患の潜在的な治療標的である（Ｗｅｓｓ  ｅｔ  ａｌ．，２００７）。
【０８４２】
現在まで、Ｍ３Ｒの結晶構造は、依然として公開されておらず、受容体の構造的機能及びリガンド結合機能は、突然変異誘発及び相同性モデリングなどの間接的なアプローチを通じて推測しなければならない。Ｍ３Ｒの細胞外部分は、Ｎ末端セグメント（ヒトＭ３ＲのＭｅｔ１〜Ｔｈｒ６４）、ヘリックスＩＩ及びＩＩＩを連結するＥＣＬ１（ヒトＭ３ＲのＡｓｎ１３２〜Ｌｅｕ１３６）、ヘリックスＩＶ及びＶを連結するＥＣＬ２（ヒトＭ３ＲのＬｙｓ２１３〜Ｓｅｒ２２７）及びヘリックスＶＩをＶＩＩに連結するＥＣＬ３（ヒトＭ３ＲのＡｓｐ５１８〜Ｉｌｅ５２１）からなる。
【０８４３】
本発明の特定の実施形態では、Ｍ３Ｒポリペプチドは、Ｍ３Ｒタンパク質配列を含むか、又はＭ３Ｒタンパク質配列と少なくとも７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８又は９９％の配列同一性又は類似性を共有する。
【０８４４】
いくつかの実施形態では、Ｍ３Ｒタンパク質配列は、哺乳動物Ｍ３Ｒタンパク質配列に対応する。適当なＭ３Ｒ配列は、適切には、コウモリ（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｇ１Ｑ９Ｚ８）、ネコ（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｍ３Ｘ７Ａ６）、チンパンジー（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｑ９Ｎ２Ａ４）、ウシ（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｐ４１９８４）、イヌ（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｆ１ＰＧＺ２）、ゴリラ（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｑ９Ｎ２Ａ３）、ヒト（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｐ２０３０９）、マーモセット（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｕ３Ｄ４１７）、マウス（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｑ９ＥＲＺ３）、パンダ（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｇ１ＭＰ５６）、ブタ（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｐ１１４８３）、ウサギ（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｇ１Ｕ３０８）、ラット（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｐ０８４８３）、ヒツジ（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｗ５Ｑ８Ｒ１）を含む群から選択される哺乳動物からのものであり得る。
【０８４５】
いくつかの好ましい実施形態では、Ｍ３Ｒタンパク質配列は、ヒトＭ３Ｒタンパク質配列に対応する。いくつかの実施形態では、Ｍ３Ｒポリペプチドは、以下に記載のヒト全長野生型Ｍ３Ｒタンパク質配列（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｐ２０３０９）又は野生型Ｍ３Ｒタンパク質配列の機能的断片を含む。
【化３７】
2020531514.tif 000070
【０８４６】
本発明の一形態では、Ｍ３Ｒポリペプチドは、哺乳動物野生型Ｍ３Ｒタンパク質配列のトランケート型を含む。例えば、Ｍ３Ｒポリペプチド配列は、Ｃ末端切断を有するヒト野生型Ｍ３Ｒタンパク質配列を含み得る（例えば、アミノ酸残基５６０〜５９０は、切断され得る）。代わりに又はさらに、Ｍ３Ｒポリペプチド配列は、Ｎ末端切断を有する野生型Ｍ３Ｒタンパク質配列を含み得る。Ｃ末端又はＮ末端切断の代替として又はそれに加えて、野生型Ｍ３Ｒタンパク質配列の内部セクションを除去するために切断が行われ得る（例えば、アミノ酸残基２１６〜２２１は、切断され得る）。非限定的な例として、本発明での使用に適したＭ３Ｒポリペプチドは、配列番号４１に記載のヒト野生型Ｍ３Ｒタンパク質配列のアミノ酸残基２〜２１５及び２２２〜５５９を含んでいた。
【０８４７】
＜３．５４  Ｍ３Ｒポリペプチドをコードする構築物及びヌクレオチド配列＞
本発明は、上記及び本明細書の他の箇所に広く記載されているように、Ｍ３Ｒポリペプチドをコードする単離ポリヌクレオチド配列及び構築物も包含する。これらのポリヌクレオチド配列又は構築物を含む宿主細胞も企図される。
【０８４８】
いくつかの実施形態では、ポリヌクレオチド配列は、例えば、ＧｅｎＢａｎｋ受託番号ＡＦ４９８９１７．１、ＮＧ＿０３２０４６．２、ＮＭ＿００１３４７７１６．１、ＮＭ＿０００７４０．３、ＡＨ０１１６７２．２、ＡＦ３８５５８９．１、Ｕ２９５８９．１、ＡＢ０４１３９５．１、ＢＣ０９６８４４．１及びＢＣ１２１０２６．２に記載の、ヒトＭ３Ｒヌクレオチドに対応する（すなわちＣＨＲＭ３遺伝子に対応する）配列を含む。このタイプの代表的な例では、ポリヌクレオチドは、これらの配列のいずれか１つと少なくとも７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８又は９９％の配列同一性を共有するＭ３Ｒヌクレオチド配列を含む。
【０８４９】
いくつかの実施形態では、Ｍ３Ｒポリヌクレオチドコード配列は、野生型哺乳類Ｍ３Ｒポリヌクレオチドと少なくとも５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９２％、９５％、９９％若しくは１００％の配列同一性を有するポリペプチドをコードするヌクレオチド配列又はその断片を含む。いくつかの実施形態では、Ｍ３Ｒポリヌクレオチドは、低、中又は高ストリンジェンシー条件下で野生型哺乳類Ｍ３Ｒタンパク質のオープンリーディングフレームにハイブリダイズするヌクレオチド配列又はその断片を含む。
【０８５０】
＜３．５５  ニューロペプチドＹ１受容体（Ｙ１Ｒ）ポリペプチド＞
Ｙ１Ｒは、脳、心臓、腎臓及び胃腸管を含む、様々な組織で発現し、初期の研究では、血管収縮及び抗不安作用を媒介することが示された（Ｍｉｃｈｅｌ  ｅｔ  ａｌ．，１９９８）。これは、肥満、不安及び抑うつ、アルコール依存、骨代謝、疼痛、がん、心血管疾患、腸疾患、概日性障害、アルツハイマー病などの様々な疾患に関係付けられている（Ｂｒｏｔｈｅｒｓ＆Ｗａｈｌｅｓｔｅｄｔ，２０１０）。
【０８５１】
現在まで、Ｙ１Ｒの結晶構造は、依然として公開されておらず、受容体の構造的機能及びリガンド結合機能は、突然変異誘発及び相同性モデリングなどの間接的なアプローチを通じて推測しなければならない。Ｙ１Ｒの細胞外部分は、Ｎ末端セグメント（ヒトＹ１ＲのＭｅｔ１〜Ａ３８）、ヘリックスＩＩ及びＩＩＩを連結するＥＣＬ１（ヒトＹ１ＲのＧｌｕ１０４〜Ｐｈｅ１０８）、ヘリックスＩＶ及びＶを連結するＥＣＬ２（ヒトＹ１ＲのＶａｌ１７８〜Ｓｅｒ２０４）及びヘリックスＶＩをＶＩＩに連結するＥＣＬ３（ヒトＹ１ＲのＨｉｓ２９０〜Ａｌａ２９４）からなる。
【０８５２】
本発明の特定の実施形態では、Ｙ１Ｒポリペプチドは、Ｙ１Ｒタンパク質配列を含むか、又はＹ１Ｒタンパク質配列と少なくとも７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８又は９９％の配列同一性又は類似性を共有する。
【０８５３】
いくつかの実施形態では、Ｙ１Ｒタンパク質配列は、哺乳動物Ｙ１Ｒタンパク質配列に対応する。適当なＹ１Ｒ配列は、適切には、コウモリ（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｇ１Ｐ０４７）、ネコ（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｍ３Ｗ４Ｘ９）、チンパンジー（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｈ２ＱＱＤ５）、ウシ（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｑ１ＲＭＵ８）、イヌ（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｏ０２８１３）、ゴリラ（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｇ３ＱＰ８９）、モルモット（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｑ９ＷＶＤ０）、ヒト（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｐ２５９２９）、マーモセット（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｆ７Ｉ８Ａ１）、マウス（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｑ０４５７３）、ブタ（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｏ０２８３５）、ウサギ（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｂ６ＶＲＳ４）、ラット（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｐ２１５５５）、ヒツジ（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｗ５ＰＷ２５）を含む群から選択される哺乳動物からのものであり得る。
【０８５４】
いくつかの好ましい実施形態では、Ｙ１Ｒタンパク質配列は、ヒトＹ１Ｒタンパク質配列に対応する。いくつかの実施形態では、Ｙ１Ｒポリペプチドは、以下に記載のヒト全長野生型Ｙ１Ｒタンパク質配列（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｐ２５９２９）又は野生型Ｙ１Ｒタンパク質配列の機能的断片を含む。
【化３８】
2020531514.tif 000071
【０８５５】
本発明の一形態では、Ｙ１Ｒポリペプチドは、哺乳動物野生型Ｙ１Ｒタンパク質配列のトランケート型を含む。例えば、Ｙ１Ｒポリペプチド配列は、Ｃ末端切断を有するヒト野生型Ｙ１Ｒタンパク質配列を含み得る（例えば、アミノ酸残基３３６〜３８４は、切断され得る）。代わりに又はさらに、Ｙ１Ｒポリペプチド配列は、Ｎ末端切断を有する野生型Ｙ１Ｒタンパク質配列を含み得る。Ｃ末端又はＮ末端切断の代替として又はそれに加えて、野生型Ｙ１Ｒタンパク質配列の内部セクションを除去するために切断が行われ得る（例えば、アミノ酸残基１８３〜１９５は、切断され得る）。非限定的な例として、本発明での使用に適したＹ１Ｒポリペプチドは、配列番号４２に記載のヒト野生型Ｙ１Ｒタンパク質配列のアミノ酸残基２〜１８２及び１９６〜３３５を含んでいた。
【０８５６】
＜３．５６  Ｙ１Ｒポリペプチドをコードする構築物及びヌクレオチド配列＞
本発明は、上記及び本明細書の他の箇所に広く記載されているように、Ｙ１Ｒポリペプチドをコードする単離ポリヌクレオチド配列及び構築物も包含する。これらのポリヌクレオチド配列又は構築物を含む宿主細胞も企図される。
【０８５７】
いくつかの実施形態では、ポリヌクレオチド配列は、例えば、ＧｅｎＢａｎｋ受託番号ＡＹ５４８１６８．１、ＮＭ＿０００９０９．５、ＢＣ０７１７２０．１、ＢＣ０３６６５７．２及びＡＫ３１２５７８．１に記載の、ヒトＹ１Ｒヌクレオチドに対応する（すなわちＮＰＹ１Ｒ遺伝子に対応する）配列を含む。このタイプの代表的な例では、ポリヌクレオチドは、これらの配列のいずれか１つと少なくとも７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８又は９９％の配列同一性を共有するＹ１Ｒヌクレオチド配列を含む。
【０８５８】
いくつかの実施形態では、Ｙ１Ｒポリヌクレオチドコード配列は、野生型哺乳類Ｙ１Ｒポリヌクレオチドと少なくとも５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９２％、９５％、９９％若しくは１００％の配列同一性を有するポリペプチドをコードするヌクレオチド配列又はその断片を含む。いくつかの実施形態では、Ｙ１Ｒポリヌクレオチドは、低、中又は高ストリンジェンシー条件下で野生型哺乳類Ｙ１Ｒタンパク質のオープンリーディングフレームにハイブリダイズするヌクレオチド配列又はその断片を含む。
【０８５９】
＜３．５７  ニューロテンシン１受容体（ＮＴＳ１Ｒ）ポリペプチド＞
ＮＴＳ１Ｒは、ドーパミン神経伝達の調節、低体温、抗侵害受容及びがん細胞の成長促進など、ニューロテンシンの既知の効果の大半を媒介する。これは、パーキンソン病及び統合失調症発病にも関係付けられている（Ｗｈｉｔｅ  ｅｔ  ａｌ．，２０１２）。
【０８６０】
現在まで、ＮＴＳ１Ｒの結晶構造が公開されており（Ｗｈｉｔｅ  ｅｔ  ａｌ．，２０１２）、受容体のリガンド結合及び活性化メカニズムに対する見識を提供している。ＮＴＳ１Ｒの細胞外部分は、Ｎ末端セグメント（ヒトＮＴＳ１ＲのＭｅｔ１〜Ａｓｐ５９）、ヘリックスＩＩ及びＩＩＩを連結するＥＣＬ１（ヒトＮＴＳ１ＲのＨｉｓ１３１〜Ｐｈｅ１３６）、ヘリックスＩＶ及びＶを連結するＥＣＬ２（ヒトＮＴＳ１ＲのＧｌｙ２０８〜Ｈｉｓ２２９）及びヘリックスＶＩをＶＩＩに連結するＥＣＬ３（ヒトＮＴＳ１ＲのＳｅｒ３３０〜Ｔｒｐ３３４）からなる。これは、ヘリックスＥＣＬ２及びＩＩＩを連結するジスルフィド結合を有する（Ｗｈｉｔｅ  ｅｔ  ａｌ．，２０１２）。
【０８６１】
本発明の特定の実施形態では、ＮＴＳ１Ｒポリペプチドは、ＮＴＳ１Ｒタンパク質配列を含むか、又はＮＴＳ１Ｒタンパク質配列と少なくとも７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８又は９９％の配列同一性又は類似性を共有する。
【０８６２】
いくつかの実施形態では、ＮＴＳ１Ｒタンパク質配列は、哺乳動物ＮＴＳ１Ｒタンパク質配列に対応する。適当なＮＴＳ１Ｒ配列は、適切には、ネコ（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｍ３Ｘ９Ｊ３）、チンパンジー（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｈ２ＱＫＲ３）、ウシ（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｆ１ＭＷＧ２）、イヌ（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｅ２ＲＮ６３）、ゴリラ（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｇ３ＲＬＦ９）、モルモット（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｈ０Ｗ４Ｐ３）、ハリネズミ（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ａ０Ａ１Ｓ２ＺＪＴ３）、ウマ（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｆ７ＢＳＲ０）、ヒト（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｐ３０９８９）、マーモセット（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｕ３Ｄ２Ｇ１）、マウス（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｏ８８３１９）、ラット（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｐ２０７８９）、ヒツジ（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｗ５ＰＳＭ７）、タスマニアデビル（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｇ３ＶＥ６９）を含む群から選択される哺乳動物からのものであり得る。
【０８６３】
いくつかの好ましい実施形態では、ＮＴＳ１Ｒタンパク質配列は、ヒトＮＴＳ１Ｒタンパク質配列に対応する。いくつかの実施形態では、ＮＴＳ１Ｒポリペプチドは、以下に記載のヒト全長野生型ＮＴＳ１Ｒタンパク質配列（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｐ３０９８９）又は野生型ＮＴＳ１Ｒタンパク質配列の機能的断片を含む。
【化３９】
2020531514.tif 000072
【０８６４】
本発明の一形態では、ＮＴＳ１Ｒポリペプチドは、哺乳動物野生型ＮＴＳ１Ｒタンパク質配列のトランケート型を含む。例えば、ＮＴＳ１Ｒポリペプチド配列は、Ｃ末端切断を有するヒト野生型ＮＴＳ１Ｒタンパク質配列を含み得る（例えば、アミノ酸残基３８０〜４１８は、切断され得る）。代わりに又はさらに、ＮＴＳ１Ｒポリペプチド配列は、Ｎ末端切断を有する野生型ＮＴＳ１Ｒタンパク質配列を含み得る。Ｃ末端又はＮ末端切断の代替として又はそれに加えて、野生型ＮＴＳ１Ｒタンパク質配列の内部セクションを除去するために切断が行われ得る（例えば、アミノ酸残基２１３〜２２３は、切断され得る）。非限定的な例として、本発明での使用に適したＮＴＳ１Ｒポリペプチドは、配列番号４３に記載のヒト野生型ＮＴＳ１Ｒタンパク質配列のアミノ酸残基２〜２１２及び２２４〜３７９を含んでいた。
【０８６５】
＜３．５８  ＮＴＳ１Ｒポリペプチドをコードする構築物及びヌクレオチド配列＞
本発明は、上記及び本明細書の他の箇所に広く記載されているように、ＮＴＳ１Ｒポリペプチドをコードする単離ポリヌクレオチド配列及び構築物も包含する。これらのポリヌクレオチド配列又は構築物を含む宿主細胞も企図される。
【０８６６】
いくつかの実施形態では、ポリヌクレオチド配列は、例えば、ＧｅｎＢａｎｋ受託番号ＡＹ４２９１０６．１及びＮＭ＿００２５３１．２に記載の、ヒトＮＴＳ１Ｒヌクレオチドに対応する（すなわちＮＴＳ１Ｒ遺伝子に対応する）配列を含む。このタイプの代表的な例では、ポリヌクレオチドは、これらの配列のいずれか１つと少なくとも７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８又は９９％の配列同一性を共有するＮＴＳ１Ｒヌクレオチド配列を含む。
【０８６７】
いくつかの実施形態では、ＮＴＳ１Ｒポリヌクレオチドコード配列は、野生型哺乳類ＮＴＳ１Ｒポリヌクレオチドと少なくとも５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９２％、９５％、９９％若しくは１００％の配列同一性を有するポリペプチドをコードするヌクレオチド配列又はその断片を含む。いくつかの実施形態では、ＮＴＳ１Ｒポリヌクレオチドは、低、中又は高ストリンジェンシー条件下で野生型哺乳類ＮＴＳ１Ｒタンパク質のオープンリーディングフレームにハイブリダイズするヌクレオチド配列又はその断片を含む。
【０８６８】
＜３．５９  オレキシン受容体１（ＯＸ１Ｒ）ポリペプチド＞
ＯＸ１Ｒは、摂食、報酬、侵害受容及びストレスの調節において重要な役割を有する。ＯＸ１Ｒの拮抗作用は、睡眠障害、肥満、疼痛及び嗜癖の処置において有益であり得ると考えられている（Ｙｉｎ  ｅｔ  ａｌ．，２０１６）。
【０８６９】
現在まで、ＯＸ１Ｒの結晶構造が公開されており（Ｙｉｎ  ｅｔ  ａｌ．，２０１６）、受容体のリガンド結合及び活性化メカニズムに対する見識を提供している。ＯＸ１Ｒの細胞外部分は、Ｎ末端セグメント（ヒトＯＸ１ＲのＭｅｔ１〜Ｔｙｒ４５）、ヘリックスＩＩ及びＩＩＩを連結するＥＣＬ１（ヒトＯＸ１ＲのＧｌｕ１１０〜Ｐｈｅ１１４）、ヘリックスＩＶ及びＶを連結するＥＣＬ２（ヒトＯＸ１ＲのＧｌｕ１８４〜Ａｓｐ２０８）及びヘリックスＶＩをＶＩＩに連結するＥＣＬ３（ヒトＯＸ１ＲのＧｌｙ３２５〜Ａｓｐ３３２）からなる。
【０８７０】
本発明の特定の実施形態では、ＯＸ１Ｒポリペプチドは、ＯＸ１Ｒタンパク質配列を含むか、又はＯＸ１Ｒタンパク質配列と少なくとも７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８又は９９％の配列同一性又は類似性を共有する。
【０８７１】
いくつかの実施形態では、ＯＸ１Ｒタンパク質配列は、哺乳動物ＯＸ１Ｒタンパク質配列に対応する。適当なＯＸ１Ｒ配列は、適切には、ネコ（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｍ３ＷＮ１３）、チンパンジー（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｈ２ＰＹＪ１）、ウシ（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｑ０ＧＢＺ５）、イヌ（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｅ２Ｒ２Ａ３）、モルモット（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｈ０Ｖ９Ｆ２）、ウマ（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｆ６Ｙ１Ｕ３）、ヒト（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｏ４３６１３）、マーモセット（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｆ７Ｈ２Ｍ７）、マウス（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｐ５８３０７）、ブタ（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｆ１ＳＶＡ１）、ブタ（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｏ９７６６１）、ウサギ（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｇ１ＳＰＪ３）、ラット（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｐ５６７１８）、ヒツジ（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｗ５ＮＴＥ０）を含む群から選択される哺乳動物からのものであり得る。
【０８７２】
いくつかの好ましい実施形態では、ＯＸ１Ｒタンパク質配列は、ヒトＯＸ１Ｒタンパク質配列に対応する。いくつかの実施形態では、ＯＸ１Ｒポリペプチドは、以下に記載のヒト全長野生型ＯＸ１Ｒタンパク質配列（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｏ４３６１３）又は野生型ＯＸ１Ｒタンパク質配列の機能的断片を含む。
【化４０】
2020531514.tif 000073
【０８７３】
本発明の一形態では、ＯＸ１Ｒポリペプチドは、哺乳動物野生型ＯＸ１Ｒタンパク質配列のトランケート型を含む。例えば、ＯＸ１Ｒポリペプチド配列は、Ｃ末端切断を有するヒト野生型ＯＸ１Ｒタンパク質配列を含み得る（例えば、アミノ酸残基３７４〜４２５は、切断され得る）。代わりに又はさらに、ＯＸ１Ｒポリペプチド配列は、Ｎ末端切断を有する野生型ＯＸ１Ｒタンパク質配列を含み得る。Ｃ末端又はＮ末端切断の代替として又はそれに加えて、野生型ＯＸ１Ｒタンパク質配列の内部セクションを除去するために切断が行われ得る（例えば、アミノ酸残基１８９〜１９６は、切断され得る）。非限定的な例として、本発明での使用に適したＯＸ１Ｒポリペプチドは、配列番号４４に記載のヒト野生型ＯＸ１Ｒタンパク質配列のアミノ酸残基２〜１８８及び１９７〜３７３を含んでいた。
【０８７４】
＜３．６０  ＯＸ１Ｒポリペプチドをコードする構築物及びヌクレオチド配列＞
本発明は、上記及び本明細書の他の箇所に広く記載されているように、ＯＸ１Ｒポリペプチドをコードする単離ポリヌクレオチド配列及び構築物も包含する。これらのポリヌクレオチド配列又は構築物を含む宿主細胞も企図される。
【０８７５】
いくつかの実施形態では、ポリヌクレオチド配列は、例えば、ＧｅｎＢａｎｋ受託番号ＡＦ０４１２４３．１、ＮＭ＿００１５２５．２及びＢＣ０７４７９６．２に記載の、ヒトＯＸ１Ｒヌクレオチドに対応する（すなわちＨＣＲＴＲ１遺伝子に対応する）配列を含む。このタイプの代表的な例では、ポリヌクレオチドは、これらの配列のいずれか１つと少なくとも７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８又は９９％の配列同一性を共有するＯＸ１Ｒヌクレオチド配列を含む。
【０８７６】
いくつかの実施形態では、ＯＸ１Ｒポリヌクレオチドコード配列は、野生型哺乳類ＯＸ１Ｒポリヌクレオチドと少なくとも５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９２％、９５％、９９％若しくは１００％の配列同一性を有するポリペプチドをコードするヌクレオチド配列又はその断片を含む。いくつかの実施形態では、ＯＸ１Ｒポリヌクレオチドは、低、中又は高ストリンジェンシー条件下で野生型哺乳類ＯＸ１Ｒタンパク質のオープンリーディングフレームにハイブリダイズするヌクレオチド配列又はその断片を含む。
【０８７７】
＜３．６１  オレキシン受容体２（ＯＸ２Ｒ）ポリペプチド＞
ＯＸ１Ｒのように、ＯＸ２Ｒは、睡眠障害、肥満、疼痛及び嗜癖の処置において有益であり得ると考えられている。しかし、ＯＸ２Ｒは、オレキシンペプチドの覚醒促進効果を優勢に媒介するため、ＯＸ１Ｒと異なる生理学的機能を有する（Ｙｉｎ  ｅｔ  ａｌ．，２０１６）。
【０８７８】
現在まで、ＯＸ２Ｒの結晶構造が公開されており（Ｙｉｎ  ｅｔ  ａｌ．，２０１５）、受容体のリガンド結合及び活性化メカニズムに対する見識を提供している。ＯＸ２Ｒの細胞外部分は、Ｎ末端セグメント（ヒトＯＸ２ＲのＭｅｔ１〜Ｇｕ５２）、ヘリックスＩＩ及びＩＩＩを連結するＥＣＬ１（ヒトＯＸ２ＲのＧｌｕ１１８〜Ｐｈｅ１２２）、ヘリックスＩＶ及びＶを連結するＥＣＬ２（ヒトＯＸ２ＲのＧｌｕ１９２〜Ｇｌｙ２１６）及びヘリックスＶＩをＶＩＩに連結するＥＣＬ３（ヒトＯＸ２ＲのＧｌｙ３３１〜Ａｓｐ３３８）からなる。
【０８７９】
本発明の特定の実施形態では、ＯＸ２Ｒポリペプチドは、ＯＸ２Ｒタンパク質配列を含むか、又はＯＸ２Ｒタンパク質配列と少なくとも７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８又は９９％の配列同一性又は類似性を共有する。
【０８８０】
いくつかの実施形態では、ＯＸ２Ｒタンパク質配列は、哺乳動物ＯＸ２Ｒタンパク質配列に対応する。適当なＯＸ２Ｒ配列は、適切には、ネコ（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｍ３Ｘ９６１）、チンパンジー（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｈ２ＱＴ８２）、ウシ（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｆ１ＭＧ２３）、イヌ（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｑ９ＴＵＰ７）、ゴリラ（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｇ３ＳＩＩ０）、ウマ（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｆ６ＸＳ１３）、ヒト（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｏ４３６１４）、マーモセット（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｆ７Ｄ３Ｘ８）、マウス（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｐ５８３０８）、パンダ（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｇ１ＭＧＦ７）、ブタ（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｏ６２８０９）、ウサギ（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｇ１ＳＴＱ８）、ラット（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｐ５６７１９）、ヒツジ（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｗ５Ｐ９Ｄ８）を含む群から選択される哺乳動物からのものであり得る。
【０８８１】
いくつかの好ましい実施形態では、ＯＸ２Ｒタンパク質配列は、ヒトＯＸ２Ｒタンパク質配列に対応する。いくつかの実施形態では、ＯＸ２Ｒポリペプチドは、以下に記載のヒト全長野生型ＯＸ２Ｒタンパク質配列（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｏ４３６１４）又は野生型ＯＸ２Ｒタンパク質配列の機能的断片を含む。
【化４１】
2020531514.tif 000074
【０８８２】
本発明の一形態では、ＯＸ２Ｒポリペプチドは、哺乳動物野生型ＯＸ２Ｒタンパク質配列のトランケート型を含む。例えば、ＯＸ２Ｒポリペプチド配列は、Ｃ末端切断を有するヒト野生型ＯＸ２Ｒタンパク質配列を含み得る（例えば、アミノ酸残基３８０〜４４４は、切断され得る）。代わりに又はさらに、ＯＸ２Ｒポリペプチド配列は、Ｎ末端切断を有する野生型ＯＸ２Ｒタンパク質配列を含み得る。Ｃ末端又はＮ末端切断の代替として又はそれに加えて、野生型ＯＸ２Ｒタンパク質配列の内部セクションを除去するために切断が行われ得る（例えば、アミノ酸残基１９５〜２０４は、切断され得る）。非限定的な例として、本発明での使用に適したＯＸ２Ｒポリペプチドは、配列番号４５に記載のヒト野生型ＯＸ２Ｒタンパク質配列のアミノ酸残基２〜１９４及び２０５〜３７９を含んでいた。
【０８８３】
＜３．６２  ＯＸ２Ｒポリペプチドをコードする構築物及びヌクレオチド配列＞
本発明は、上記及び本明細書の他の箇所に広く記載されているように、ＯＸ２Ｒポリペプチドをコードする単離ポリヌクレオチド配列及び構築物も包含する。これらのポリヌクレオチド配列又は構築物を含む宿主細胞も企図される。
【０８８４】
いくつかの実施形態では、ポリヌクレオチド配列は、例えば、ＧｅｎＢａｎｋ受託番号ＡＦ０４１２４５．２、ＮＭ＿００１５２６．４、ＫＣ８１２５００．１、ＫＣ８１２４９９．１、ＮＧ＿０１２４４７．２及びＡＦ２８３７６０．１に記載の、ヒトＯＸ２Ｒヌクレオチドに対応する（すなわちＨＣＲＴＲ２遺伝子に対応する）配列を含む。このタイプの代表的な例では、ポリヌクレオチドは、これらの配列のいずれか１つと少なくとも７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８又は９９％の配列同一性を共有するＯＸ２Ｒヌクレオチド配列を含む。
【０８８５】
いくつかの実施形態では、ＯＸ２Ｒポリヌクレオチドコード配列は、野生型哺乳類ＯＸ２Ｒポリヌクレオチドと少なくとも５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９２％、９５％、９９％若しくは１００％の配列同一性を有するポリペプチドをコードするヌクレオチド配列又はその断片を含む。いくつかの実施形態では、ＯＸ２Ｒポリヌクレオチドは、低、中又は高ストリンジェンシー条件下で野生型哺乳類ＯＸ２Ｒタンパク質のオープンリーディングフレームにハイブリダイズするヌクレオチド配列又はその断片を含む。
【０８８６】
＜３．６３  プロスタグランジンＥ１受容体（ＥＰ１Ｒ）ポリペプチド＞
ＥＰ１Ｒは、ストレス反応（ＡＣＴＨ分泌及びストレス行動）を媒介し、化学発がんを促進し、炎症性熱性痛覚過敏を媒介する（Ｓｕｇｉｍｏｔｏ＆Ｎａｒｕｍｉｙａ，２００７）。
【０８８７】
現在まで、ＥＰ１Ｒの結晶構造は、依然として公開されておらず、受容体の構造的機能及びリガンド結合機能は、突然変異誘発及び相同性モデリングなどの間接的なアプローチを通じて推測しなければならない。ＥＰ１Ｒの細胞外部分は、Ｎ末端セグメント（ヒトＥＰ１ＲのＭｅｔ１〜Ｓｅｒ２７）、ヘリックスＩＩ及びＩＩＩを連結するＥＣＬ１（ヒトＥＰ１ＲのＡｌａ１０１〜Ａｌａ１０６）、ヘリックスＩＶ及びＶを連結するＥＣＬ２（ヒトＥＰ１ＲのＶａｌ１７６〜Ａｒｇ１９９）及びヘリックスＶＩをＶＩＩに連結するＥＣＬ３（ヒトＥＰ１ＲのＴｒｐ３２４〜Ｓｅｒ３２８）からなる。
【０８８８】
本発明の特定の実施形態では、ＥＰ１Ｒポリペプチドは、ＥＰ１Ｒタンパク質配列を含むか、又はＥＰ１Ｒタンパク質配列と少なくとも７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８又は９９％の配列同一性又は類似性を共有する。
【０８８９】
いくつかの実施形態では、ＥＰ１Ｒタンパク質配列は、哺乳動物ＥＰ１Ｒタンパク質配列に対応する。適当なＥＰ１Ｒ配列は、適切には、ヒト（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｐ３４９９５）、コウモリ（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｇ１ＰＢＢ３）、ウシ（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｆ１ＭＵＹ４）、イヌ（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｑ９ＢＧＬ８）、カエル（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｆ７Ｃ７Ｎ３）、ゴリラ（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｇ３Ｓ６Ｍ０）、マカク（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｑ５６４Ｈ５）、マーモセット（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｆ７ＨＴＨ９）、サル（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ａ０Ａ０Ｄ９Ｒ１Ｙ９）、マウス（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｐ３５３７５）、パンダ（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｇ１Ｍ４Ｃ２）、ラット（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｐ７０５９７）、タスマニアデビル（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｇ３ＶＰＳ１）を含む群から選択される哺乳動物からのものであり得る。
【０８９０】
いくつかの好ましい実施形態では、ＥＰ１Ｒタンパク質配列は、ヒトＥＰ１Ｒタンパク質配列に対応する。いくつかの実施形態では、ＥＰ１Ｒポリペプチドは、以下に記載のヒト全長野生型ＥＰ１Ｒタンパク質配列（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｐ３４９９５）又は野生型ＥＰ１Ｒタンパク質配列の機能的断片を含む。
【化４２】
2020531514.tif 000075
【０８９１】
本発明の一形態では、ＥＰ１Ｒポリペプチドは、哺乳動物野生型ＥＰ１Ｒタンパク質配列のトランケート型を含む。例えば、ＥＰ１Ｒポリペプチド配列は、Ｃ末端切断を有するヒト野生型ＥＰ１Ｒタンパク質配列を含み得る（例えば、アミノ酸残基３７８〜４０２は、切断され得る）。代わりに又はさらに、ＥＰ１Ｒポリペプチド配列は、Ｎ末端切断を有する野生型ＥＰ１Ｒタンパク質配列を含み得る。Ｃ末端又はＮ末端切断の代替として又はそれに加えて、野生型ＥＰ１Ｒタンパク質配列の内部セクションを除去するために切断が行われ得る（例えば、アミノ酸残基１８５〜１８９は、切断され得る）。非限定的な例として、本発明での使用に適したＥＰ１Ｒポリペプチドは、配列番号４６に記載のヒト野生型ＥＰ１Ｒタンパク質配列のアミノ酸残基２〜１８４及び１９０〜３７７を含んでいた。
【０８９２】
＜３．６４  ＥＰ１Ｒポリペプチドをコードする構築物及びヌクレオチド配列＞
本発明は、上記及び本明細書の他の箇所に広く記載されているように、ＥＰ１Ｒポリペプチドをコードする単離ポリヌクレオチド配列及び構築物も包含する。これらのポリヌクレオチド配列又は構築物を含む宿主細胞も企図される。
【０８９３】
いくつかの実施形態では、ポリヌクレオチド配列は、例えば、ＧｅｎＢａｎｋ受託番号ＡＹ２７５４７０．１、ＮＭ＿０００９５５．２及びＢＣ０２９７６８．１に記載の、ヒトＥＰ１Ｒヌクレオチドに対応する（すなわちＰＴＧＥＲ１遺伝子に対応する）配列を含む。このタイプの代表的な例では、ポリヌクレオチドは、これらの配列のいずれか１つと少なくとも７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８又は９９％の配列同一性を共有するＥＰ１Ｒヌクレオチド配列を含む。
【０８９４】
いくつかの実施形態では、ＥＰ１Ｒポリヌクレオチドコード配列は、野生型哺乳類ＥＰ１Ｒポリヌクレオチドと少なくとも５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９２％、９５％、９９％若しくは１００％の配列同一性を有するポリペプチドをコードするヌクレオチド配列又はその断片を含む。いくつかの実施形態では、ＥＰ１Ｒポリヌクレオチドは、低、中又は高ストリンジェンシー条件下で野生型哺乳類ＥＰ１Ｒタンパク質のオープンリーディングフレームにハイブリダイズするヌクレオチド配列又はその断片を含む。
【０８９５】
＜３．６５  セロトニン５−ＨＴ１ａ受容体（５−ＨＴ１ａＲ）ポリペプチド＞
５−ＨＴ１ａＲは、不安、ストレス反応、抑うつ、統合失調症及び嗜癖の媒介に関与する。これは、虚血性脳損傷に対する神経保護作用を有するとも考えられている（Ｎｉｃｈｏｌｓ＆Ｎｉｃｈｏｌｓ，２００８）。
【０８９６】
現在まで、５−ＨＴ１ａＲの結晶構造は、依然として公開されておらず、受容体の構造的機能及びリガンド結合機能は、突然変異誘発及び相同性モデリングなどの間接的なアプローチを通じて推測しなければならない。５−ＨＴ１ａＲの細胞外部分は、Ｎ末端セグメント（ヒト５−ＨＴ１ａＲのＭｅｔ１〜Ｔｈｒ３２）、ヘリックスＩＩ及びＩＩＩを連結するＥＣＬ１（ヒト５−ＨＴ１ａＲのＡｓｎ１００〜Ｌｅｕ１０４）、ヘリックスＩＶ及びＶを連結するＥＣＬ２（ヒト５−ＨＴ１ａＲのＴｒｐ１７５〜Ｌｙｓ１９１）及びヘリックスＶＩをＶＩＩに連結するＥＣＬ３（ヒト５−ＨＴ１ａＲのＣｙｓ３７１〜Ｍｅｔ３７７）からなる。ヘリックスＩＩＩとＥＣＬ２との間にジスルフィド架橋を形成すると考えられている（Ｎｉｃｈｏｌｓ＆Ｎｉｃｈｏｌｓ，２００８）。
【０８９７】
本発明の特定の実施形態では、５−ＨＴ１ａＲポリペプチドは、５−ＨＴ１ａＲタンパク質配列を含むか、又は５−ＨＴ１ａＲタンパク質配列と少なくとも７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８又は９９％の配列同一性又は類似性を共有する。
【０８９８】
いくつかの実施形態では、５−ＨＴ１ａＲタンパク質配列は、哺乳動物５−ＨＴ１ａＲタンパク質配列に対応する。適当な５−ＨＴ１ａＲ配列は、適切には、ヒト（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｐ０８９０８）、ワニ（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ａ０Ａ１５１ＭＸＥ８）、ニワトリ（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｄ２Ｋ８Ｐ９）、チンパンジー（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｑ９Ｎ２９８）、イヌ（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｑ６ＸＸＸ９）、キツネ（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｑ６ＸＸＹ０）、カエル（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｑ９８９９８）、ゴリラ（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｑ９Ｎ２９７）、ウマ（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｑ０ＥＡＢ６）、マウス（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｑ６４２６４）、オランウータン（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｑ９Ｎ２９６）、ラット（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｐ１９３２７）を含む群から選択される哺乳動物からのものであり得る。
【０８９９】
いくつかの好ましい実施形態では、５−ＨＴ１ａＲタンパク質配列は、ヒト５−ＨＴ１ａＲタンパク質配列に対応する。いくつかの実施形態では、５−ＨＴ１ａＲポリペプチドは、以下に記載のヒト全長野生型５−ＨＴ１ａＲタンパク質配列（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｐ０８９０８）又は野生型５−ＨＴ１ａＲタンパク質配列の機能的断片を含む。
【化４３】
2020531514.tif 000076
【０９００】
本発明の一形態では、５−ＨＴ１ａＲポリペプチドは、哺乳動物野生型５−ＨＴ１ａＲタンパク質配列のトランケート型を含む。例えば、５−ＨＴ１ａＲポリペプチド配列は、Ｃ末端切断を有するヒト野生型５−ＨＴ１ａＲタンパク質配列を含み得る（例えば、アミノ酸残基４１６〜２は、切断され得る）。代わりに又はさらに、５−ＨＴ１ａＲポリペプチド配列は、Ｎ末端切断を有する野生型５−ＨＴ１ａＲタンパク質配列を含み得る。Ｃ末端又はＮ末端切断の代替として又はそれに加えて、野生型５−ＨＴ１ａＲタンパク質配列の内部セクションを除去するために切断が行われ得る（例えば、アミノ酸残基１８１〜１８７は、切断され得る）。非限定的な例として、本発明での使用に適した５−ＨＴ１ａＲポリペプチドは、配列番号４７に記載のヒト野生型５−ＨＴ１ａＲタンパク質配列のアミノ酸残基２〜１８０及び１８８〜４１５を含んでいた。
【０９０１】
＜３．６６  ５−ＨＴ１ａＲポリペプチドをコードする構築物及びヌクレオチド配列＞
本発明は、上記及び本明細書の他の箇所に広く記載されているように、５−ＨＴ１ａＲポリペプチドをコードする単離ポリヌクレオチド配列及び構築物も包含する。これらのポリヌクレオチド配列又は構築物を含む宿主細胞も企図される。
【０９０２】
いくつかの実施形態では、ポリヌクレオチド配列は、例えば、ＧｅｎＢａｎｋ受託番号ＮＭ＿０００５２４．３、ＡＦ４９８９７８．１、ＮＧ＿０３２８１６．１、ＡＢ０４１４０３．１、ＢＣ１３６２６３．１及びＢＣ０６９１５９．１に記載の、ヒト５−ＨＴ１ａＲヌクレオチドに対応する（すなわちＨＴＲ１Ａ遺伝子に対応する）配列を含む。このタイプの代表的な例では、ポリヌクレオチドは、これらの配列のいずれか１つと少なくとも７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８又は９９％の配列同一性を共有する５−ＨＴ１ａＲヌクレオチド配列を含む。
【０９０３】
いくつかの実施形態では、５−ＨＴ１ａＲポリヌクレオチドコード配列は、野生型哺乳類５−ＨＴ１ａＲポリヌクレオチドと少なくとも５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９２％、９５％、９９％若しくは１００％の配列同一性を有するポリペプチドをコードするヌクレオチド配列又はその断片を含む。いくつかの実施形態では、５−ＨＴ１ａＲポリヌクレオチドは、低、中又は高ストリンジェンシー条件下で野生型哺乳類５−ＨＴ１ａＲタンパク質のオープンリーディングフレームにハイブリダイズするヌクレオチド配列又はその断片を含む。
【０９０４】
＜３．６７  セロトニン５−ＨＴ２ａ受容体（５−ＨＴ２ａＲ）ポリペプチド＞
ＣＮＳにおいて、５−ＨＴ２ａＲは、幻覚作用の重要部位の１つである。末梢では、５−ＨＴ２ａＲは、動脈線維芽細胞の増殖、大動脈平滑筋細胞の遊走、動脈血管収縮及び鎮痛を含む、様々な他の機能を有する（Ｎｉｃｈｏｌｓ＆Ｎｉｃｈｏｌｓ，２００８）。
【０９０５】
現在まで、５−ＨＴ２ａＲの結晶構造は、依然として公開されておらず、受容体の構造的機能及びリガンド結合機能は、突然変異誘発及び相同性モデリングなどの間接的なアプローチを通じて推測しなければならない。５−ＨＴ２ａＲの細胞外部分は、Ｎ末端セグメント（ヒト５−ＨＴ２ａＲのＭｅｔ１〜Ｇｌｕ７３）、ヘリックスＩＩ及びＩＩＩを連結するＥＣＬ１（ヒト５−ＨＴ２ａＲのＧｌｙ１３８〜Ｌｅｕ１４３）、ヘリックスＩＶ及びＶを連結するＥＣＬ２（ヒト５−ＨＴ２ａＲのＬｅｕ２１５〜Ａｌａ２３０）及びヘリックスＶＩをＶＩＩに連結するＥＣＬ３（ヒト５−ＨＴ２ａＲのＬｙｓ３５０〜Ａｓｎ３５４）からなる。ヘリックスＩＩＩとＥＣＬ２との間にジスルフィド架橋を形成すると考えられている（Ｎｉｃｈｏｌｓ＆Ｎｉｃｈｏｌｓ，２００８）。
【０９０６】
本発明の特定の実施形態では、５−ＨＴ２ａＲポリペプチドは、５−ＨＴ２ａＲタンパク質配列を含むか、又は５−ＨＴ２ａＲタンパク質配列と少なくとも７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８又は９９％の配列同一性又は類似性を共有する。
【０９０７】
いくつかの実施形態では、５−ＨＴ２ａＲタンパク質配列は、哺乳動物５−ＨＴ２ａＲタンパク質配列に対応する。適当な５−ＨＴ２ａＲ配列は、適切には、ヒト（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｐ２８２２３）、ニワトリ（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｅ１ＢＶＩ５）、ウシ（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｑ７５Ｚ８９）、イヌ（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｏ４６６３５）、ハムスター（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｐ１８５９９）、ハリネズミ（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ａ０Ａ１Ｓ２ＺＬＭ４）、マカク（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｐ５０１２８）、マウス（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｐ３５３６３）、オランウータン（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｑ５Ｒ４Ｑ６）、ブタ（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｐ５０１２９）、ラット（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｐ１４８４２）を含む群から選択される哺乳動物からのものであり得る。
【０９０８】
いくつかの好ましい実施形態では、５−ＨＴ２ａＲタンパク質配列は、ヒト５−ＨＴ２ａＲタンパク質配列に対応する。いくつかの実施形態では、５−ＨＴ２ａＲポリペプチドは、以下に記載のヒト全長野生型５−ＨＴ２ａＲタンパク質配列（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｐ２８２２３）又は野生型５−ＨＴ２ａＲタンパク質配列の機能的断片を含む。
【化４４】
2020531514.tif 000077
【０９０９】
本発明の一形態では、５−ＨＴ２ａＲポリペプチドは、哺乳動物野生型５−ＨＴ２ａＲタンパク質配列のトランケート型を含む。例えば、５−ＨＴ２ａＲポリペプチド配列は、Ｃ末端切断を有するヒト野生型５−ＨＴ２ａＲタンパク質配列を含み得る（例えば、アミノ酸残基３９６〜４７１は、切断され得る）。代わりに又はさらに、５−ＨＴ２ａＲポリペプチド配列は、Ｎ末端切断を有する野生型５−ＨＴ２ａＲタンパク質配列を含み得る。Ｃ末端又はＮ末端切断の代替として又はそれに加えて、野生型５−ＨＴ２ａＲタンパク質配列の内部セクションを除去するために切断が行われ得る（例えば、アミノ酸残基２１９〜２２４は、切断され得る）。非限定的な例として、本発明での使用に適した５−ＨＴ２ａＲポリペプチドは、配列番号４８に記載のヒト野生型５−ＨＴ２ａＲタンパク質配列のアミノ酸残基２〜２１８及び２２５〜３９７を含んでいた。
【０９１０】
＜３．６８  ５−ＨＴ２ａＲポリペプチドをコードする構築物及びヌクレオチド配列＞
本発明は、上記及び本明細書の他の箇所に広く記載されているように、５−ＨＴ２ａＲポリペプチドをコードする単離ポリヌクレオチド配列及び構築物も包含する。これらのポリヌクレオチド配列又は構築物を含む宿主細胞も企図される。
【０９１１】
いくつかの実施形態では、ポリヌクレオチド配列は、例えば、ＧｅｎＢａｎｋ受託番号ＮＭ＿０００６２１．４、ＮＭ＿００１１６５９４７．２、ＮＧ＿０１３０１１．１、ＡＦ４９８９８２．１、ＥＵ７９６４２４．１、ＥＵ７９６４２９．１、ＥＵ７９６４３４．１、ＫＣ６０３６１３．１、ＢＣ０７４８４９．２、ＢＣ０７４８４８．２、ＢＣ０６９５７６．１及びＢＣ０６９３５６．１に記載の、ヒト５−ＨＴ２ａＲヌクレオチドに対応する（すなわちＨＴＲ２Ａ遺伝子に対応する）配列を含む。このタイプの代表的な例では、ポリヌクレオチドは、これらの配列のいずれか１つと少なくとも７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８又は９９％の配列同一性を共有する５−ＨＴ２ａＲヌクレオチド配列を含む。
【０９１２】
いくつかの実施形態では、５−ＨＴ２ａＲポリヌクレオチドコード配列は、野生型哺乳類５−ＨＴ２ａＲポリヌクレオチドと少なくとも５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９２％、９５％、９９％若しくは１００％の配列同一性を有するポリペプチドをコードするヌクレオチド配列又はその断片を含む。いくつかの実施形態では、５−ＨＴ２ａＲポリヌクレオチドは、低、中又は高ストリンジェンシー条件下で野生型哺乳類５−ＨＴ２ａＲタンパク質のオープンリーディングフレームにハイブリダイズするヌクレオチド配列又はその断片を含む。
【０９１３】
＜３．６９  セロトニン５−ＨＴ２ｂ受容体（５−ＨＴ２ｂＲ）ポリペプチド＞
ＣＮＳにおいて、５−ＨＴ２ｂＲは、聴覚系における役割を有するようであり、薬物乱用に対する脆弱性と関連付けられる。しかし、これは、発達中に重要な末梢において、より高度に発現され、心臓及び脳の適切な形成を調整する（Ｎｉｃｈｏｌｓ＆Ｎｉｃｈｏｌｓ，２００８）。
【０９１４】
現在まで、２つの研究でＣＸＣＲ４の結晶構造の解明が報告されており、そのリガンドへどのように結合するかについて見識を提供している（Ｌｉｕ  ｅｔ  ａｌ．，２０１３；Ｗａｃｋｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，２０１３）。５−ＨＴ２ｂＲの細胞外部分は、Ｎ末端セグメント（ヒト５−ＨＴ２ｂＲのＭｅｔ１〜Ｌｙｓ５３）、ヘリックスＩＩ及びＩＩＩを連結するＥＣＬ１（ヒト５−ＨＴ２ｂＲのＧｌｕ１１８〜Ｌｅｕ１２３）、ヘリックスＩＶ及びＶを連結するＥＣＬ２（ヒト５−ＨＴ２ｂＲのＩｌｅ１９５〜Ａｒｇ２１３）及びヘリックスＶＩをＶＩＩに連結するＥＣＬ３（ヒト５−ＨＴ２ｂＲのＡｓｐ３５１〜Ａｓｎ３５４）からなる。ヘリックスＩＩＩとＥＣＬ２との間にジスルフィド架橋を形成すると考えられている（Ｎｉｃｈｏｌｓ＆Ｎｉｃｈｏｌｓ，２００８）。
【０９１５】
本発明の特定の実施形態では、５−ＨＴ２ｂＲポリペプチドは、５−ＨＴ２ｂＲタンパク質配列を含むか、又は５−ＨＴ２ｂＲタンパク質配列と少なくとも７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８又は９９％の配列同一性又は類似性を共有する。
【０９１６】
いくつかの実施形態では、５−ＨＴ２ｂＲタンパク質配列は、哺乳動物５−ＨＴ２ｂＲタンパク質配列に対応する。適当な５−ＨＴ２ｂＲ配列は、適切には、ヒト（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｐ４１５９５）、ネコ（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｍ３ＷＲＨ８）、ナマズ（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｗ５ＵＡＨ８）、チンパンジー（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｈ２ＱＪＬ０）、ウシ（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｆ６ＱＩ７８）、カエル（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｆ６ＷＧＪ８）、モルモット（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ａ３ＲＬ３４）、ハリネズミ（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ａ０Ａ１Ｓ２ＺＨＫ９）、ウマ（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｆ６Ｖ７１４）、マカク（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｆ７ＨＱＦ４）、マウス（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｑ０２１５２）、ラット（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｐ３０９９４）、ヒツジ（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｗ５ＱＨＮ７）、ゼブラフィッシュ（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｑ０ＧＨ７４）を含む群から選択される哺乳動物からのものであり得る。
【０９１７】
いくつかの好ましい実施形態では、５−ＨＴ２ｂＲタンパク質配列は、ヒト５−ＨＴ２ｂＲタンパク質配列に対応する。いくつかの実施形態では、５−ＨＴ２ｂＲポリペプチドは、以下に記載のヒト全長野生型５−ＨＴ２ｂＲタンパク質配列（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｐ４１５９５）又は野生型５−ＨＴ２ｂＲタンパク質配列の機能的断片を含む。
【化４５】
2020531514.tif 000078
【０９１８】
本発明の一形態では、５−ＨＴ２ｂＲポリペプチドは、哺乳動物野生型５−ＨＴ２ｂＲタンパク質配列のトランケート型を含む。例えば、５−ＨＴ２ｂＲポリペプチド配列は、Ｃ末端切断を有するヒト野生型５−ＨＴ２ｂＲタンパク質配列を含み得る（例えば、アミノ酸残基３９６〜４８１は、切断され得る）。代わりに又はさらに、５−ＨＴ２ｂＲポリペプチド配列は、Ｎ末端切断を有する野生型５−ＨＴ２ｂＲタンパク質配列を含み得る。Ｃ末端又はＮ末端切断の代替として又はそれに加えて、野生型５−ＨＴ２ｂＲタンパク質配列の内部セクションを除去するために切断が行われ得る（例えば、アミノ酸残基２００〜２０８は、切断され得る）。非限定的な例として、本発明での使用に適した５−ＨＴ２ｂＲポリペプチドは、配列番号４９に記載のヒト野生型５−ＨＴ２ｂＲタンパク質配列のアミノ酸残基２〜１９９及び２０９〜３９５を含んでいた。
【０９１９】
＜３．７０  ５−ＨＴ２ｂＲポリペプチドをコードする構築物及びヌクレオチド配列＞
本発明は、上記及び本明細書の他の箇所に広く記載されているように、５−ＨＴ２ｂＲポリペプチドをコードする単離ポリヌクレオチド配列及び構築物も包含する。これらのポリヌクレオチド配列又は構築物を含む宿主細胞も企図される。
【０９２０】
いくつかの実施形態では、ポリヌクレオチド配列は、例えば、ＧｅｎＢａｎｋ受託番号ＮＭ＿００１３２０７５８．１、ＮＭ＿０００８６７．４、ＥＵ７９６４３９．１、ＥＵ７９６４４４．１、ＡＹ１１４１０３．１、ＡＨ００７８１９．３、ＡＹ１３６７５１．１及びＢＣ０６３１２３．１に記載の、ヒト５−ＨＴ２ｂＲヌクレオチドに対応する（すなわちＨＴＲ２Ｂ遺伝子に対応する）配列を含む。このタイプの代表的な例では、ポリヌクレオチドは、これらの配列のいずれか１つと少なくとも７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８又は９９％の配列同一性を共有する５−ＨＴ２ＢＲヌクレオチド配列を含む。
【０９２１】
いくつかの実施形態では、５−ＨＴ２ｂＲポリヌクレオチドコード配列は、野生型哺乳類５−ＨＴ２ｂＲポリヌクレオチドと少なくとも５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９２％、９５％、９９％若しくは１００％の配列同一性を有するポリペプチドをコードするヌクレオチド配列又はその断片を含む。いくつかの実施形態では、５−ＨＴ２ｂＲポリヌクレオチドは、低、中又は高ストリンジェンシー条件下で野生型哺乳類５−ＨＴ２ｂＲタンパク質のオープンリーディングフレームにハイブリダイズするヌクレオチド配列又はその断片を含む。
【０９２２】
＜３．７１  セロトニン５−ＨＴ２ｃ受容体（５−ＨＴ２ｃＲ）ポリペプチド＞
５−ＨＴ２ｃＲは中脳辺縁系ドーパミン作動性機能を調節することが示されている。さらに、これらは、不安、体重調節及び精神刺激薬乱用の媒介において役割を果たすと考えられている（Ｎｉｃｈｏｌｓ＆Ｎｉｃｈｏｌｓ，２００８）。
【０９２３】
現在まで、５−ＨＴ２ｃＲの結晶構造は、依然として公開されておらず、受容体の構造的機能及びリガンド結合機能は、突然変異誘発及び相同性モデリングなどの間接的なアプローチを通じて推測しなければならない。５−ＨＴ２ｃＲの細胞外部分は、Ｎ末端セグメント（ヒト５−ＨＴ２ｃＲのＭｅｔ１〜Ｖａｌ５２）、ヘリックスＩＩ及びＩＩＩを連結するＥＣＬ１（ヒト５−ＨＴ２ｃＲのＡｓｐ１１７〜Ｌｅｕ１２２）、ヘリックスＩＶ及びＶを連結するＥＣＬ２（ヒト５−ＨＴ２ｃＲのＬｅｕ１９４〜Ａｓｎ２１０）及びヘリックスＶＩをＶＩＩに連結するＥＣＬ３（ヒト５−ＨＴ２ｃＲのＧｌｕ３３８〜Ａｓｎ３４２）からなる。ヘリックスＩＩＩとＥＣＬ２との間にジスルフィド架橋を形成すると考えられている（Ｎｉｃｈｏｌｓ＆Ｎｉｃｈｏｌｓ，２００８）。
【０９２４】
本発明の特定の実施形態では、５−ＨＴ２ｃＲポリペプチドは、５−ＨＴ２ｃＲタンパク質配列を含むか、又は５−ＨＴ２ｃＲタンパク質配列と少なくとも７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８又は９９％の配列同一性又は類似性を共有する。
【０９２５】
いくつかの実施形態では、５−ＨＴ２ｃＲタンパク質配列は、哺乳動物５−ＨＴ２ｃＲタンパク質配列に対応する。適当な５−ＨＴ２ｃＲ配列は、適切には、ヒト（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｐ２８３３５）、ワニ（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ａ０Ａ１５１Ｎ７Ｄ９）、ヒヒ（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ａ０Ａ０９６ＭＰＨ１、ネコ（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｍ３Ｘ５Ｍ０）、ニワトリ（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｆ１Ｎ９８９）、チンパンジー（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｑ５ＩＳ６６）、イヌ（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｑ６０Ｆ９７）、カエル（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｆ７ＡＺＳ９）、ハリネズミ（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ａ０Ａ１Ｓ３ＡＤＣ２）、ウマ（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｆ６ＰＳＵ６）、ヒト（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｐ２８３３５）、マカク（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｆ７Ａ５７８）、マウス（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｐ３４９６８）、ブタ（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｇ８ＹＹ０３）、ラット（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｐ０８９０９）を含む群から選択される哺乳動物からのものであり得る。
【０９２６】
いくつかの好ましい実施形態では、５−ＨＴ２ｃＲタンパク質配列は、ヒト５−ＨＴ２ｃＲタンパク質配列に対応する。いくつかの実施形態では、５−ＨＴ２ｃＲポリペプチドは、以下に記載のヒト全長野生型５−ＨＴ２ｃＲタンパク質配列（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｐ２８３３５）又は野生型５−ＨＴ２ｃＲタンパク質配列の機能的断片を含む。
【化４６】
2020531514.tif 000079
【０９２７】
本発明の一形態では、５−ＨＴ２ｃＲポリペプチドは、哺乳動物野生型５−ＨＴ２ｃＲタンパク質配列のトランケート型を含む。例えば、５−ＨＴ２ｃＲポリペプチド配列は、Ｃ末端切断を有するヒト野生型５−ＨＴ２ｃＲタンパク質配列を含み得る（例えば、アミノ酸残基３８４〜４５８は、切断され得る）。代わりに又はさらに、５−ＨＴ２ｃＲポリペプチド配列は、Ｎ末端切断を有する野生型５−ＨＴ２ｃＲタンパク質配列を含み得る。Ｃ末端又はＮ末端切断の代替として又はそれに加えて、野生型５−ＨＴ２ｃＲタンパク質配列の内部セクションを除去するために切断が行われ得る（例えば、アミノ酸残基１９８〜２０５は、切断され得る）。非限定的な例として、本発明での使用に適した５−ＨＴ２ｃＲポリペプチドは、配列番号５０に記載のヒト野生型５−ＨＴ２ｃＲタンパク質配列のアミノ酸残基２〜１９７及び２０６〜３８３を含んでいた。
【０９２８】
＜３．７２  ５−ＨＴ２ｃＲポリペプチドをコードする構築物及びヌクレオチド配列＞
本発明は、上記及び本明細書の他の箇所に広く記載されているように、５−ＨＴ２ｃＲポリペプチドをコードする単離ポリヌクレオチド配列及び構築物も包含する。これらのポリヌクレオチド配列又は構築物を含む宿主細胞も企図される。
【０９２９】
いくつかの実施形態では、ポリヌクレオチド配列は、例えば、ＧｅｎＢａｎｋ受託番号ＮＭ＿００１２５６７６０．２、ＮＭ＿０００８６８．３、ＮＭ＿００１２５６７６１．２、ＮＧ＿０１２０８２．２、ＥＵ７９６４５４．１、ＡＦ４９８９８３．１及びＢＣ０９５５４３．１に記載の、ヒト５−ＨＴ２ｃＲヌクレオチドに対応する（すなわちＨＴＲ２Ｃ遺伝子に対応する）配列を含む。このタイプの代表的な例では、ポリヌクレオチドは、これらの配列のいずれか１つと少なくとも７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８又は９９％の配列同一性を共有する５−ＨＴ２ＣＲヌクレオチド配列を含む。
【０９３０】
いくつかの実施形態では、５−ＨＴ２ｃＲポリヌクレオチドコード配列は、野生型哺乳類５−ＨＴ２ｃＲポリヌクレオチドと少なくとも５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９２％、９５％、９９％若しくは１００％の配列同一性を有するポリペプチドをコードするヌクレオチド配列又はその断片を含む。いくつかの実施形態では、５−ＨＴ２ｃＲポリヌクレオチドは、低、中又は高ストリンジェンシー条件下で野生型哺乳類５−ＨＴ２ｃＲタンパク質のオープンリーディングフレームにハイブリダイズするヌクレオチド配列又はその断片を含む。
【０９３１】
＜３．７３  セロトニン５−ＨＴ４受容体（５−ＨＴ４Ｒ）ポリペプチド＞
ＣＮＳにおいて、５−ＨＴ４Ｒは、学習及び記憶並びに自発運動の媒介に関与すると考えられている。末梢では、これらは胃腸及び心血管機能において役割を果たす（Ｎｉｃｈｏｌｓ＆Ｎｉｃｈｏｌｓ，２００８）。
【０９３２】
現在まで、５−ＨＴ４Ｒの結晶構造は、依然として公開されておらず、受容体の構造的機能及びリガンド結合機能は、突然変異誘発及び相同性モデリングなどの間接的なアプローチを通じて推測しなければならない。５−ＨＴ４Ｒの細胞外部分は、Ｎ末端セグメント（ヒト５−ＨＴ４ＲのＭｅｔ１〜Ｓｅｒ１０）、ヘリックスＩＩ及びＩＩＩを連結するＥＣＬ１（ヒト５−ＨＴ４ＲのＧｌｕ８４〜Ｔｙｒ８８）、ヘリックスＩＶ及びＶを連結するＥＣＬ２（ヒト５−ＨＴ４ＲのＴｒｐ１６１〜Ｖａｌ１８８）及びヘリックスＶＩをＶＩＩに連結するＥＣＬ３（ヒト５−ＨＴ４ＲのＧｌｕ２８６〜Ｖａｌ２８９）からなる。ヘリックスＩＩＩとＥＣＬ２との間にジスルフィド架橋を形成すると考えられている（Ｎｉｃｈｏｌｓ＆Ｎｉｃｈｏｌｓ，２００８）。
【０９３３】
本発明の特定の実施形態では、５−ＨＴ４Ｒポリペプチドは、５−ＨＴ４Ｒタンパク質配列を含むか、又は５−ＨＴ４Ｒタンパク質配列と少なくとも７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８又は９９％の配列同一性又は類似性を共有する。
【０９３４】
いくつかの実施形態では、５−ＨＴ４Ｒタンパク質配列は、哺乳動物５−ＨＴ４Ｒタンパク質配列に対応する。適当な５−ＨＴ４Ｒ配列は、適切には、ヒト（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｑ１３６３９）、ワニ（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ａ０Ａ１５１Ｍ６Ｌ１）、ウシ（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｑ５Ｅ９Ｑ５）、カエル（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｆ７ＢＩＡ５）、モルモット（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｏ７０５２８）、ハリネズミ（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ａ０Ａ１Ｓ２ＺＡＫ９）、ウマ（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｄ２Ｙ０Ｚ２）、マーモセット（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｆ７ＦＥ４３）、マウス（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｐ９７２８８）、ブタ（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｆ１ＲＬＢ０）、ラット（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｑ６２７５８）を含む群から選択される哺乳動物からのものであり得る。
【０９３５】
いくつかの好ましい実施形態では、５−ＨＴ４Ｒタンパク質配列は、ヒト５−ＨＴ４Ｒタンパク質配列に対応する。いくつかの実施形態では、５−ＨＴ４Ｒポリペプチドは、以下に記載のヒト全長野生型５−ＨＴ４Ｒタンパク質配列（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｑ１３６３９）又は野生型５−ＨＴ４Ｒタンパク質配列の機能的断片を含む。
【化４７】
2020531514.tif 000080
【０９３６】
本発明の一形態では、５−ＨＴ４Ｒポリペプチドは、哺乳動物野生型５−ＨＴ４Ｒタンパク質配列のトランケート型を含む。例えば、５−ＨＴ４Ｒポリペプチド配列は、Ｃ末端切断を有するヒト野生型５−ＨＴ４Ｒタンパク質配列を含み得る（例えば、アミノ酸残基３２９〜３８８は、切断され得る）。代わりに又はさらに、５−ＨＴ４Ｒポリペプチド配列は、Ｎ末端切断を有する野生型５−ＨＴ４Ｒタンパク質配列を含み得る。Ｃ末端又はＮ末端切断の代替として又はそれに加えて、野生型５−ＨＴ４Ｒタンパク質配列の内部セクションを除去するために切断が行われ得る（例えば、アミノ酸残基１６６〜１８３は、切断され得る）。非限定的な例として、本発明での使用に適した５−ＨＴ４Ｒポリペプチドは、配列番号５１に記載のヒト野生型５−ＨＴ４Ｒタンパク質配列のアミノ酸残基２〜１６５及び１８４〜３２８を含んでいた。
【０９３７】
＜３．７４  ５−ＨＴ４Ｒポリペプチドをコードする構築物及びヌクレオチド配列＞
本発明は、上記及び本明細書の他の箇所に広く記載されているように、５−ＨＴ４Ｒポリペプチドをコードする単離ポリヌクレオチド配列及び構築物も包含する。これらのポリヌクレオチド配列又は構築物を含む宿主細胞も企図される。
【０９３８】
いくつかの実施形態では、ポリヌクレオチド配列は、例えば、ＧｅｎＢａｎｋ受託番号ＮＭ＿０００８７０．６、ＮＭ＿００１２８６４１０．１、ＮＭ＿００１０４０１７３．２、ＮＭ＿００１０４０１７２．２、ＮＭ＿００１０４０１６９．２、ＮＭ＿１９９４５３．３、ＮＲ＿１０４４４５．１、ＮＧ＿０２９０５２．１、ＡＭ７１２９１２．１、ＡＪ６３３６４５．１、ＡＪ２７８９８２．１、ＡＪ２７８９８１．１、ＡＪ２７８９８０．１、ＡＪ２７８９７９．１、ＡＢ０７０６２０．２及びＡＢ０７０６２１．１に記載の、ヒト５−ＨＴ４Ｒヌクレオチドに対応する（すなわちＨＴＲ４遺伝子に対応する）配列を含む。このタイプの代表的な例では、ポリヌクレオチドは、これらの配列のいずれか１つと少なくとも７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８又は９９％の配列同一性を共有する５−ＨＴ４Ｒヌクレオチド配列を含む。
【０９３９】
いくつかの実施形態では、５−ＨＴ４Ｒポリヌクレオチドコード配列は、野生型哺乳類５−ＨＴ４Ｒポリヌクレオチドと少なくとも５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９２％、９５％、９９％若しくは１００％の配列同一性を有するポリペプチドをコードするヌクレオチド配列又はその断片を含む。いくつかの実施形態では、５−ＨＴ４Ｒポリヌクレオチドは、低、中又は高ストリンジェンシー条件下で野生型哺乳類５−ＨＴ４Ｒタンパク質のオープンリーディングフレームにハイブリダイズするヌクレオチド配列又はその断片を含む。
【０９４０】
＜３．７５  ソマトスタチン２受容体（ＳＳＴ２Ｒ）ポリペプチド＞
ＳＳＴ２Ｒは、脳、肺、心臓、胃、腎臓、肝臓及び多くのタイプの免疫細胞を含む、体全体に広く発現する（Ｄｅ  Ｍａｒｔｉｎｏ  ｅｔ  ａｌ．，２０１０）。これは、細胞周期調節、アポトーシス及び転写調節を媒介するとも考えられている（Ｔｈｅｏｄｏｒｏｐｏｕｌｏｕ＆Ｓｔａｌｌａ，２０１３）。
【０９４１】
現在まで、ＳＳＴ２Ｒの結晶構造は、依然として公開されておらず、受容体の構造的機能及びリガンド結合機能は、突然変異誘発及び相同性モデリングなどの間接的なアプローチを通じて推測しなければならない。ＳＳＴ２Ｒの細胞外部分は、Ｎ末端セグメント（ヒトＳＳＴ２ＲのＭｅｔ１〜Ｇｌｕ３９）、ヘリックスＩＩ及びＩＩＩを連結するＥＣＬ１（ヒトＳＳＴ２ＲのＶａｌ１０６〜Ｐｈｅ１１０）、ヘリックスＩＶ及びＶを連結するＥＣＬ２（ヒトＳＳＴ２ＲのＧｌｙ１８２〜Ｇｌｕ２００）及びヘリックスＶＩをＶＩＩに連結するＥＣＬ３（ヒトＳＳＴ２ＲのＡｌａ２８３〜Ｐｒｏ２８６）からなる。ヘリックスＩＩＩとＥＣＬ２との間にジスルフィド架橋を形成すると考えられている（Ｐａｔｅｌ，１９９９）。
【０９４２】
本発明の特定の実施形態では、ＳＳＴ２Ｒポリペプチドは、ＳＳＴ２Ｒタンパク質配列を含むか、又はＳＳＴ２Ｒタンパク質配列と少なくとも７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８又は９９％の配列同一性又は類似性を共有する。
【０９４３】
いくつかの実施形態では、ＳＳＴ２Ｒタンパク質配列は、哺乳動物ＳＳＴ２Ｒタンパク質配列に対応する。適当なＳＳＴ２Ｒ配列は、適切には、ヒト（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｐ３０８７４）、ワニ（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ａ０Ａ１５１Ｎ２６０）、コイ（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｂ２Ｄ１Ｔ６）、ネコ（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｍ３Ｗ２Ｑ８）、ニワトリ（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｑ５８Ｇ８４）、チンパンジー（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｇ２ＨＦＨ４）、ウシ（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｐ３４９９３）、イヌ（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｑ４９ＬＸ６）、カエル（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｆ６Ｔ８８８）、マカク（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｇ７ＮＪＤ６）、マウス（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｐ３０８７５）、ブタ（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｐ３４９９４）、ウサギ（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｇ１ＳＸ１３）、ラット（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｐ３０６８０）、ヒツジ（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｗ５ＮＰＴ８）を含む群から選択される哺乳動物からのものであり得る。
【０９４４】
いくつかの好ましい実施形態では、ＳＳＴ２Ｒタンパク質配列は、ヒトＳＳＴ２Ｒタンパク質配列に対応する。いくつかの実施形態では、ＳＳＴ２Ｒポリペプチドは、以下に記載のヒト全長野生型ＳＳＴ２Ｒタンパク質配列（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｐ３０８７４）又は野生型ＳＳＴ２Ｒタンパク質配列の機能的断片を含む。
【化４８】
2020531514.tif 000081
【０９４５】
本発明の一形態では、ＳＳＴ２Ｒポリペプチドは、哺乳動物野生型ＳＳＴ２Ｒタンパク質配列のトランケート型を含む。例えば、ＳＳＴ２Ｒポリペプチド配列は、Ｃ末端切断を有するヒト野生型ＳＳＴ２Ｒタンパク質配列を含み得る（例えば、アミノ酸残基３２９〜３６９は、切断され得る）。代わりに又はさらに、ＳＳＴ２Ｒポリペプチド配列は、Ｎ末端切断を有する野生型ＳＳＴ２Ｒタンパク質配列を含み得る。Ｃ末端又はＮ末端切断の代替として又はそれに加えて、野生型ＳＳＴ２Ｒタンパク質配列の内部セクションを除去するために切断が行われ得る（例えば、アミノ酸残基１８３〜１９３は、切断され得る）。非限定的な例として、本発明での使用に適したＳＳＴ２Ｒポリペプチドは、配列番号５２に記載のヒト野生型ＳＳＴ２Ｒタンパク質配列のアミノ酸残基２〜１８２及び１９４〜３２８を含んでいた。
【０９４６】
＜３．７６  ＳＳＴ２Ｒポリペプチドをコードする構築物及びヌクレオチド配列＞
本発明は、上記及び本明細書の他の箇所に広く記載されているように、ＳＳＴ２Ｒポリペプチドをコードする単離ポリヌクレオチド配列及び構築物も包含する。これらのポリヌクレオチド配列又は構築物を含む宿主細胞も企図される。
【０９４７】
いくつかの実施形態では、ポリヌクレオチド配列は、例えば、ＧｅｎＢａｎｋ受託番号ＮＭ＿００１０５０．２、ＮＧ＿０２９３７１．１、Ｌ３４６８９．１、ＡＹ２３６５４２．１、Ｍ８１８３０．１、ＡＦ１８４１７４．１、Ｌ１３０３３．１、ＢＣ０９５４９５．１及びＢＣ０１９６１０．１に記載の、ヒトＳＳＴ２Ｒヌクレオチドに対応する（すなわちＳＳＴＲ２遺伝子に対応する）配列を含む。このタイプの代表的な例では、ポリヌクレオチドは、これらの配列のいずれか１つと少なくとも７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８又は９９％の配列同一性を共有するＳＳＴ２Ｒヌクレオチド配列を含む。
【０９４８】
いくつかの実施形態では、ＳＳＴ２Ｒポリヌクレオチドコード配列は、野生型哺乳類ＳＳＴ２Ｒポリヌクレオチドと少なくとも５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９２％、９５％、９９％若しくは１００％の配列同一性を有するポリペプチドをコードするヌクレオチド配列又はその断片を含む。いくつかの実施形態では、ＳＳＴ２Ｒポリヌクレオチドは、低、中又は高ストリンジェンシー条件下で野生型哺乳類ＳＳＴ２Ｒタンパク質のオープンリーディングフレームにハイブリダイズするヌクレオチド配列又はその断片を含む。
【０９４９】
＜３．７７  スフィンゴシン１−リン酸受容体１（Ｓ１Ｐ１Ｒ）ポリペプチド＞
Ｓ１Ｐ１Ｒは、星状細胞の遊走、Ｂ細胞の走化性及び放出阻害、Ｔ細胞の走化性及び放出阻害、心筋細胞の陽性変力作用の増加、血管系の早期発達並びに神経幹細胞の遊走を含む、様々な生理学的機能を媒介する（Ｒｏｓｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，２００９）。
【０９５０】
現在まで、Ｓ１Ｐ１Ｒの結晶構造が公開されており（Ｈａｎｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，２０１２）、受容体のリガンド結合及び活性化メカニズムに対する見識を提供している。Ｓ１Ｐ１Ｒの細胞外部分は、Ｎ末端セグメント（ヒトＳ１Ｐ１ＲのＭｅｔ１〜Ｌｙｓ４１）、ヘリックスＩＩ及びＩＩＩを連結するＥＣＬ１（ヒトＳ１Ｐ１ＲのＳｅｒ１０５〜Ｌｅｕ１１２）、ヘリックスＩＶ及びＶを連結するＥＣＬ２（ヒトＳ１Ｐ１ＲのＴｒｐ１８２〜Ｔｙｒ１９８）及びヘリックスＶＩをＶＩＩに連結するＥＣＬ３（ヒトＳ１Ｐ１ＲのＬｙｓ２８３〜Ｃｙｓ２８７）からなる。２つのジスルフィド結合は、Ｓ１Ｐ１Ｒの細胞外側の形成を促進する（Ｈａｎｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，２０１２）。
【０９５１】
本発明の特定の実施形態では、Ｓ１Ｐ１Ｒポリペプチドは、Ｓ１Ｐ１Ｒタンパク質配列を含むか、又はＳ１Ｐ１Ｒタンパク質配列と少なくとも７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８又は９９％の配列同一性又は類似性を共有する。
【０９５２】
いくつかの実施形態では、Ｓ１Ｐ１Ｒタンパク質配列は、哺乳動物Ｓ１Ｐ１Ｒタンパク質配列に対応する。適当なＳ１Ｐ１Ｒ配列は、適切には、ヒト（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｐ２１４５３）、ワニ（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ａ０Ａ１５１Ｍ４Ｓ４）、ネコ（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｍ３Ｗ６Ｒ４）、チンパンジー（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｈ２ＰＺＩ１）、ウシ（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｑ５Ｅ９Ｐ３）、イヌ（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｗ５ＶＮＦ７）、モルモット（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｈ０Ｖ７Ｇ９）、ハリネズミ（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ａ０Ａ１Ｓ３Ａ３９９）、マカク（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｈ９ＥＵＷ９）、マーモセット（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｆ７ＨＢＩ１）、マウス（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｏ０８５３０）、ウサギ（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｇ１Ｔ９Ｒ２）、ラット（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｐ４８３０３）、タスマニアデビル（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｇ３ＷＦＦ９）、カメ（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｋ７Ｆ１５０）を含む群から選択される哺乳動物からのものであり得る。
【０９５３】
いくつかの好ましい実施形態では、Ｓ１Ｐ１Ｒタンパク質配列は、ヒトＳ１Ｐ１Ｒタンパク質配列に対応する。いくつかの実施形態では、Ｓ１Ｐ１Ｒポリペプチドは、以下に記載のヒト全長野生型Ｓ１Ｐ１Ｒタンパク質配列（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｐ２１４５３）又は野生型Ｓ１Ｐ１Ｒタンパク質配列の機能的断片を含む。
【化４９】
2020531514.tif 000082
【０９５４】
本発明の一形態では、Ｓ１Ｐ１Ｒポリペプチドは、哺乳動物野生型Ｓ１Ｐ１Ｒタンパク質配列のトランケート型を含む。例えば、Ｓ１Ｐ１Ｒポリペプチド配列は、Ｃ末端切断を有するヒト野生型Ｓ１Ｐ１Ｒタンパク質配列を含み得る（例えば、アミノ酸残基３２８〜３８２は、切断され得る）。代わりに又はさらに、Ｓ１Ｐ１Ｒポリペプチド配列は、Ｎ末端切断を有する野生型Ｓ１Ｐ１Ｒタンパク質配列を含み得る。Ｃ末端又はＮ末端切断の代替として又はそれに加えて、野生型Ｓ１Ｐ１Ｒタンパク質配列の内部セクションを除去するために切断が行われ得る（例えば、アミノ酸残基１８７〜１９３は、切断され得る）。非限定的な例として、本発明での使用に適したＳ１Ｐ１Ｒポリペプチドは、配列番号５３に記載のヒト野生型Ｓ１Ｐ１Ｒタンパク質配列のアミノ酸残基２〜１８６及び１９４〜３２７を含んでいた。
【０９５５】
＜３．７８  Ｓ１Ｐ１Ｒポリペプチドをコードする構築物及びヌクレオチド配列＞
本発明は、上記及び本明細書の他の箇所に広く記載されているように、Ｓ１Ｐ１Ｒポリペプチドをコードする単離ポリヌクレオチド配列及び構築物も包含する。これらのポリヌクレオチド配列又は構築物を含む宿主細胞も企図される。
【０９５６】
いくつかの実施形態では、ポリヌクレオチド配列は、例えば、ＧｅｎＢａｎｋ受託番号ＮＭ＿００１３２０７３０．１、ＮＭ＿００１４００．４、ＮＧ＿０１６１８１．１及びＢＣ０１８６５０．１に記載の、ヒトＳ１Ｐ１Ｒヌクレオチドに対応する（すなわちＳ１ＰＲ１遺伝子に対応する）配列を含む。このタイプの代表的な例では、ポリヌクレオチドは、これらの配列のいずれか１つと少なくとも７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８又は９９％の配列同一性を共有するＳ１Ｐ１Ｒヌクレオチド配列を含む。
【０９５７】
いくつかの実施形態では、Ｓ１Ｐ１Ｒポリヌクレオチドコード配列は、野生型哺乳類Ｓ１Ｐ１Ｒポリヌクレオチドと少なくとも５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９２％、９５％、９９％若しくは１００％の配列同一性を有するポリペプチドをコードするヌクレオチド配列又はその断片を含む。いくつかの実施形態では、Ｓ１Ｐ１Ｒポリヌクレオチドは、低、中又は高ストリンジェンシー条件下で野生型哺乳類Ｓ１Ｐ１Ｒタンパク質のオープンリーディングフレームにハイブリダイズするヌクレオチド配列又はその断片を含む。
【０９５８】
＜３．７９  スフィンゴシン１−リン酸受容体３（Ｓ１Ｐ３Ｒ）ポリペプチド＞
Ｓ１Ｐ３Ｒは、脳、心臓、脾臓、肝臓、肺、胸腺、腎臓、精巣及び骨格筋に見られる。これは、虚血再灌流及び樹状細胞の致死／炎症／凝固後の心筋細胞の生存を含む、様々な生理学的機能を媒介する（Ｒｏｓｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，２００９）。
【０９５９】
現在まで、Ｓ１Ｐ３Ｒの結晶構造は、依然として公開されておらず、受容体の構造的機能及びリガンド結合機能は、突然変異誘発及び相同性モデリングなどの間接的なアプローチを通じて推測しなければならない。Ｓ１Ｐ３Ｒの細胞外部分は、Ｎ末端セグメント（ヒトＳ１Ｐ３ＲのＭｅｔ１〜Ａｌａ３５）、ヘリックスＩＩ及びＩＩＩを連結するＥＣＬ１（ヒトＳ１Ｐ３ＲのＳｅｒ９９〜Ｌｅｕ１０６）、ヘリックスＩＶ及びＶを連結するＥＣＬ２（ヒトＳ１Ｐ３ＲのＴｒｐ１７６〜Ｔｙｒ１９２）及びヘリックスＶＩをＶＩＩに連結するＥＣＬ３（ヒトＳ１Ｐ３ＲのＡｒｇ２７０〜Ｃｙｓ２７４）からなる。
【０９６０】
本発明の特定の実施形態では、Ｓ１Ｐ３Ｒポリペプチドは、Ｓ１Ｐ３Ｒタンパク質配列を含むか、又はＳ１Ｐ３Ｒタンパク質配列と少なくとも７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８又は９９％の配列同一性又は類似性を共有する。
【０９６１】
いくつかの実施形態では、Ｓ１Ｐ３Ｒタンパク質配列は、哺乳動物Ｓ１Ｐ３Ｒタンパク質配列に対応する。適当なＳ１Ｐ３Ｒ配列は、適切には、ヒト（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｑ９９５００）、チンパンジー（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｈ２ＲＢＬ８）、ウシ（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ａ６ＱＲ１７）、イヌ（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｅ２ＲＦ７４）、モルモット（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｈ０ＷＤＨ２）、ハリネズミ（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ａ０Ａ１Ｓ３ＡＳＩ７）、マカク（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｇ７ＮＥＭ６）、マーモセット（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｆ７Ｆ４Ｈ４）、マウス（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｑ９Ｚ０Ｕ９）、オランウータン（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｋ７ＥＶＱ８）、ウサギ（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｇ１Ｔ９Ａ８）、ラット（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｆ１Ｍ９Ｄ３）、サーモン（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ａ０Ａ１Ｓ３ＬＵ５２）、タスマニアデビル（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｇ３ＶＰＤ８）を含む群から選択される哺乳動物からのものであり得る。
【０９６２】
いくつかの好ましい実施形態では、Ｓ１Ｐ３Ｒタンパク質配列は、ヒトＳ１Ｐ３Ｒタンパク質配列に対応する。いくつかの実施形態では、Ｓ１Ｐ３Ｒポリペプチドは、以下に記載のヒト全長野生型Ｓ１Ｐ３Ｒタンパク質配列（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｑ９９５００）又は野生型Ｓ１Ｐ３Ｒタンパク質配列の機能的断片を含む。
【化５０】
2020531514.tif 000083
【０９６３】
本発明の一形態では、Ｓ１Ｐ３Ｒポリペプチドは、哺乳動物野生型Ｓ１Ｐ３Ｒタンパク質配列のトランケート型を含む。例えば、Ｓ１Ｐ３Ｒポリペプチド配列は、Ｃ末端切断を有するヒト野生型Ｓ１Ｐ３Ｒタンパク質配列を含み得る（例えば、アミノ酸残基３１５〜３７８は、切断され得る）。代わりに又はさらに、Ｓ１Ｐ３Ｒポリペプチド配列は、Ｎ末端切断を有する野生型Ｓ１Ｐ３Ｒタンパク質配列を含み得る。Ｃ末端又はＮ末端切断の代替として又はそれに加えて、野生型Ｓ１Ｐ３Ｒタンパク質配列の内部セクションを除去するために切断が行われ得る（例えば、アミノ酸残基１８１〜１８８は、切断され得る）。非限定的な例として、本発明での使用に適したＳ１Ｐ３Ｒポリペプチドは、配列番号５４に記載のヒト野生型Ｓ１Ｐ３Ｒタンパク質配列のアミノ酸残基２〜１８０及び１８９〜３１４を含んでいた。
【０９６４】
＜３．８０  Ｓ１Ｐ３Ｒポリペプチドをコードする構築物及びヌクレオチド配列＞
本発明は、上記及び本明細書の他の箇所に広く記載されているように、Ｓ１Ｐ３Ｒポリペプチドをコードする単離ポリヌクレオチド配列及び構築物も包含する。これらのポリヌクレオチド配列又は構築物を含む宿主細胞も企図される。
【０９６５】
いくつかの実施形態では、ポリヌクレオチド配列は、例えば、ＧｅｎＢａｎｋ受託番号ＮＭ＿００５２２６．３、ＢＣ０６０８２７．１及びＢＣ０６９５７９．１に記載の、ヒトＳ１Ｐ３Ｒヌクレオチドに対応する（すなわちＳ１ＰＲ３遺伝子に対応する）配列を含む。このタイプの代表的な例では、ポリヌクレオチドは、これらの配列のいずれか１つと少なくとも７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８又は９９％の配列同一性を共有するＳ１Ｐ３Ｒヌクレオチド配列を含む。
【０９６６】
いくつかの実施形態では、Ｓ１Ｐ３Ｒポリヌクレオチドコード配列は、野生型哺乳類Ｓ１Ｐ３Ｒポリヌクレオチドと少なくとも５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９２％、９５％、９９％若しくは１００％の配列同一性を有するポリペプチドをコードするヌクレオチド配列又はその断片を含む。いくつかの実施形態では、Ｓ１Ｐ３Ｒポリヌクレオチドは、低、中又は高ストリンジェンシー条件下で野生型哺乳類Ｓ１Ｐ３Ｒタンパク質のオープンリーディングフレームにハイブリダイズするヌクレオチド配列又はその断片を含む。
【０９６７】
＜３．８１  サイロトロピン放出ホルモン受容体１（ＴＲＨ１Ｒ）ポリペプチド＞
ＴＲＨ１Ｒは、プロラクチン及び甲状腺刺激ホルモンの放出を刺激し（Ｐｅｒｒｅｔ  ｅｔ  ａｌ．，１９８８）、ＴＲＨ１Ｒに対するＴＲＨの作用は、甲状腺軸の正常な機能に不可欠である（Ｈｏｌｌｅｎｂｅｒｇ，２００８）。
【０９６８】
現在まで、ＴＲＨ１Ｒの結晶構造は、依然として公開されておらず、受容体の構造的機能及びリガンド結合機能は、突然変異誘発及び相同性モデリングなどの間接的なアプローチを通じて推測しなければならない。ＴＲＨ１Ｒの細胞外部分は、Ｎ末端セグメント（ヒトＴＲＨ１ＲのＭｅｔ１〜Ａｌａ２１）、ヘリックスＩＩ及びＩＩＩを連結するＥＣＬ１（ヒトＴＲＨ１ＲのＴｙｒ８８〜Ｔｙｒ９３）、ヘリックスＩＶ及びＶを連結するＥＣＬ２（ヒトＴＲＨ１ＲのＡｓｐ１６５〜Ｉｌｅ１８３）及びヘリックスＶＩをＶＩＩに連結するＥＣＬ３（ヒトＴＲＨ１ＲのＳｅｒ２９３〜Ｇｌｎ２９７）からなる。
【０９６９】
本発明の特定の実施形態では、ＴＲＨ１Ｒポリペプチドは、ＴＲＨ１Ｒタンパク質配列を含むか、又はＴＲＨ１Ｒタンパク質配列と少なくとも７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８又は９９％の配列同一性又は類似性を共有する。
【０９７０】
いくつかの実施形態では、ＴＲＨ１Ｒタンパク質配列は、哺乳動物ＴＲＨ１Ｒタンパク質配列に対応する。適当なＴＲＨ１Ｒ配列は、適切には、ヒト（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｐ３４９８１）、ワニ（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ａ０Ａ１５１Ｐ２Ｂ９）、ニワトリ（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｏ９３６０３）、ウシ（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｏ４６６３９）、カエル（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｆ６Ｘ１１５）、ハリネズミ（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ａ０Ａ１Ｓ２ＺＴＦ７）、マカク（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｆ７ＤＷＭ０）、マウス（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｐ２１７６１）、ブタ（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｄ５ＦＵＨ１）、ラット（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｑ０１７１７）、ヒツジ（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｑ２８５９６）を含む群から選択される哺乳動物からのものであり得る。
【０９７１】
いくつかの好ましい実施形態では、ＴＲＨ１Ｒタンパク質配列は、ヒトＴＲＨ１Ｒタンパク質配列に対応する。いくつかの実施形態では、ＴＲＨ１Ｒポリペプチドは、以下に記載のヒト全長野生型ＴＲＨ１Ｒタンパク質配列（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｐ３４９８１）又は野生型ＴＲＨ１Ｒタンパク質配列の機能的断片を含む。
【化５１】
2020531514.tif 000084
【０９７２】
本発明の一形態では、ＴＲＨ１Ｒポリペプチドは、哺乳動物野生型ＴＲＨ１Ｒタンパク質配列のトランケート型を含む。例えば、ＴＲＨ１Ｒポリペプチド配列は、Ｃ末端切断を有するヒト野生型ＴＲＨ１Ｒタンパク質配列を含み得る（例えば、アミノ酸残基３３７〜３９８は、切断され得る）。代わりに又はさらに、ＴＲＨ１Ｒポリペプチド配列は、Ｎ末端切断を有する野生型ＴＲＨ１Ｒタンパク質配列を含み得る。Ｃ末端又はＮ末端切断の代替として又はそれに加えて、野生型ＴＲＨ１Ｒタンパク質配列の内部セクションを除去するために切断が行われ得る（例えば、アミノ酸残基１６７〜１７５は、切断され得る）。非限定的な例として、本発明での使用に適したＴＲＨ１Ｒポリペプチドは、配列番号５５に記載のヒト野生型ＴＲＨ１Ｒタンパク質配列のアミノ酸残基２〜１６６及び１７６〜３３６を含んでいた。
【０９７３】
＜３．８２  ＴＲＨ１Ｒポリペプチドをコードする構築物及びヌクレオチド配列＞
本発明は、上記及び本明細書の他の箇所に広く記載されているように、ＴＲＨＲポリペプチドをコードする単離ポリヌクレオチド配列及び構築物も包含する。これらのポリヌクレオチド配列又は構築物を含む宿主細胞も企図される。
【０９７４】
いくつかの実施形態では、ポリヌクレオチド配列は、例えば、ＧｅｎＢａｎｋ受託番号ＮＭ＿００３３０１．５、ＮＧ＿０１７１６１．１、ＡＪ０１１７０１．１、ＢＣ１１３３６０．１、ＢＣ１０５０４５．１及びＡＹ４９３３７３．１に記載の、ヒトＴＲＨＲヌクレオチドに対応する（すなわちＴＲＨＲ遺伝子に対応する）配列を含む。このタイプの代表的な例では、ポリヌクレオチドは、これらの配列のいずれか１つと少なくとも７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８又は９９％の配列同一性を共有するＴＲＨＲヌクレオチド配列を含む。
【０９７５】
いくつかの実施形態では、ＴＲＨ１Ｒポリヌクレオチドコード配列は、野生型哺乳類ＴＲＨ１Ｒポリヌクレオチドと少なくとも５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９２％、９５％、９９％若しくは１００％の配列同一性を有するポリペプチドをコードするヌクレオチド配列又はその断片を含む。いくつかの実施形態では、ＴＲＨ１Ｒポリヌクレオチドは、低、中又は高ストリンジェンシー条件下で野生型哺乳類ＴＲＨ１Ｒタンパク質のオープンリーディングフレームにハイブリダイズするヌクレオチド配列又はその断片を含む。
【０９７６】
＜３．８３  バソプレシン受容体１Ａ（Ｖ１ＡＲ）ポリペプチド＞
Ｖ１ＡＲは、肝臓、血管平滑筋細胞及び脳を含む、多くの組織で発現する。血管系では、受容体は、血管収縮を仲介し、脳では不安及び攻撃を引き起こす反応を媒介する（Ｍａｎｎｉｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，２００８）。
【０９７７】
現在まで、Ｖ１ＡＲの結晶構造は、依然として公開されておらず、受容体の構造的機能及びリガンド結合機能は、突然変異誘発及び相同性モデリングなどの間接的なアプローチを通じて推測しなければならない。Ｖ１ＡＲの細胞外部分は、Ｎ末端セグメント（ヒトＶ１ＡＲのＭｅｔ１〜Ａｓｎ４７）、ヘリックスＩＩ及びＩＩＩを連結するＥＣＬ１（ヒトＶ１ＡＲのＴｈｒ１１４〜Ｐｈｅ１１７）、ヘリックスＩＶ及びＶを連結するＥＣＬ２（ヒトＶ１ＡＲのＳｅｒ１９０〜Ｉｌｅ２０８）及びヘリックスＶＩをＶＩＩに連結するＥＣＬ３（ヒトＶ１ＡＲのＰｒｏ３１８〜Ｔｒｐ３２２）からなる。
【０９７８】
本発明の特定の実施形態では、Ｖ１ＡＲポリペプチドは、Ｖ１ＡＲタンパク質配列を含むか、又はＶ１ＡＲタンパク質配列と少なくとも７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８又は９９％の配列同一性又は類似性を共有する。
【０９７９】
いくつかの実施形態では、Ｖ１ＡＲタンパク質配列は、哺乳動物Ｖ１ＡＲタンパク質配列に対応する。適当なＶ１ＡＲ配列は、適切には、ヒト（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｐ３７２８８）、ネコ（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｍ３ＷＫＫ５）、チンパンジー（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｈ２Ｑ６Ｄ６）、ウシ（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ａ２ＶＤＳ９）、イヌ（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｅ２Ｒ８Ｄ３）、カエル（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｆ７Ｂ８３６）、ウマ（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｆ６ＱＬＰ１）、マカク（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｆ６ＺＸＱ６）、マウス（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｑ６２４６３）、ブタ（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ａ０Ａ１Ｄ５ＮＸＳ１）、ウサギ（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｇ１ＴＬＭ４）、ラット（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｐ３０５６０）、ヒツジ（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｐ４８０４３）、カメ（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｋ７ＦＳＳ７）、ハタネズミ（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｑ９ＷＴＶ８）を含む群から選択される哺乳動物からのものであり得る。
【０９８０】
いくつかの好ましい実施形態では、Ｖ１ＡＲタンパク質配列は、ヒトＶ１ＡＲタンパク質配列に対応する。いくつかの実施形態では、Ｖ１ＡＲポリペプチドは、以下に記載のヒト全長野生型Ｖ１ＡＲタンパク質配列（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｐ３７２８８）又は野生型Ｖ１ＡＲタンパク質配列の機能的断片を含む。
【化５２】
2020531514.tif 000085
【０９８１】
本発明の一形態では、Ｖ１ＡＲポリペプチドは、哺乳動物野生型ＴＶ１ＡＲタンパク質配列のトランケート型を含む。例えば、Ｖ１ＡＲポリペプチド配列は、Ｃ末端切断を有するヒト野生型Ｖ１ＡＲタンパク質配列を含み得る（例えば、アミノ酸残基３６５〜４１８は、切断され得る）。代わりに又はさらに、Ｖ１ＡＲポリペプチド配列は、Ｎ末端切断を有する野生型Ｖ１ＡＲタンパク質配列を含み得る。Ｃ末端又はＮ末端切断の代替として又はそれに加えて、野生型Ｖ１ＡＲタンパク質配列の内部セクションを除去するために切断が行われ得る（例えば、アミノ酸残基１９２〜２０５は、切断され得る）。非限定的な例として、本発明での使用に適したＶ１ＡＲポリペプチドは、配列番号５６に記載のヒト野生型Ｖ１ＡＲタンパク質配列のアミノ酸残基２〜１９１及び２０６〜３６４を含んでいた。
【０９８２】
＜３．８４  Ｖ１ＡＲポリペプチドをコードする構築物及びヌクレオチド配列＞
本発明は、上記及び本明細書の他の箇所に広く記載されているように、Ｖ１ＡＲポリペプチドをコードする単離ポリヌクレオチド配列及び構築物も包含する。これらのポリヌクレオチド配列又は構築物を含む宿主細胞も企図される。
【０９８３】
いくつかの実施形態では、ポリヌクレオチド配列は、例えば、ＧｅｎＢａｎｋ受託番号ＮＭ＿０００７０６．４、ＫＪ５３４７８０．１、ＫＪ５３４７７９．１、ＢＣ０７４８０３．２、ＢＣ０７４８０４．２、ＡＦ２０８５４１．１及びＡＹ３２２５５０．１に記載の、ヒトＶ１ＡＲヌクレオチドに対応する（すなわちＡＶＰＲ１Ａ遺伝子に対応する）配列を含む。このタイプの代表的な例では、ポリヌクレオチドは、これらの配列のいずれか１つと少なくとも７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８又は９９％の配列同一性を共有するＶ１ＡＲヌクレオチド配列を含む。
【０９８４】
いくつかの実施形態では、Ｖ１ＡＲポリヌクレオチドコード配列は、野生型哺乳類Ｖ１ＡＲポリヌクレオチドと少なくとも５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９２％、９５％、９９％若しくは１００％の配列同一性を有するポリペプチドをコードするヌクレオチド配列又はその断片を含む。いくつかの実施形態では、Ｖ１ＡＲポリヌクレオチドは、低、中又は高ストリンジェンシー条件下で野生型哺乳類Ｖ１ＡＲタンパク質のオープンリーディングフレームにハイブリダイズするヌクレオチド配列又はその断片を含む。
【０９８５】
＜３．８５  バソプレシン受容体１Ｂ（Ｖ１ＢＲ）ポリペプチド＞
Ｖ１ＢＲは、脳、腎臓及び副腎髄質を含む多くの組織で発現する。下垂体前葉では、これは、副腎皮質刺激ホルモンの放出を刺激し、不安及びストレス反応を媒介すると考えられている（Ｍａｎｎｉｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，２００８）。
【０９８６】
現在まで、Ｖ１ＢＲの結晶構造は、依然として公開されておらず、受容体の構造的機能及びリガンド結合機能は、突然変異誘発及び相同性モデリングなどの間接的なアプローチを通じて推測しなければならない。Ｖ１ＢＲの細胞外部分は、Ｎ末端セグメント（ヒトＶ１ＢＲのＭｅｔ１〜Ｇｌｕ３０）、ヘリックスＩＩ及びＩＩＩを連結するＥＣＬ１（ヒトＶ１ＢＲのＴｈｒ９７〜Ｐｈｅ１００）、ヘリックスＩＶ及びＶを連結するＥＣＬ２（ヒトＶ１ＢＲのＳｅｒ１７３〜Ｇｌｙ１９１）及びヘリックスＶＩをＶＩＩに連結するＥＣＬ３（ヒトＶ１ＢＲのＬｙｓ３０８〜Ｇｌｕ３１２）からなる。
【０９８７】
本発明の特定の実施形態では、Ｖ１ＢＲポリペプチドは、Ｖ１ＢＲタンパク質配列を含むか、又はＶ１ＢＲタンパク質配列と少なくとも７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８又は９９％の配列同一性又は類似性を共有する。
【０９８８】
いくつかの実施形態では、Ｖ１ＢＲタンパク質配列は、哺乳動物Ｖ１ＢＲタンパク質配列に対応する。適当なＶ１ＢＲ配列は、適切には、ヒト（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｐ４７９０１）、ネコ（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｍ３Ｗ６Ｅ７）、ニワトリ（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｆ１ＮＶＷ１）、チンパンジー（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｈ２Ｒ１Ｑ０）、ウシ（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｆ１ＭＥ８５）、イヌ（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｆ１Ｐ９Ｄ６）、カエル（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｆ７ＥＨＹ９）、モルモット（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｈ０Ｖ８Ｍ７）、ウマ（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｆ７ＢＮＵ０）、マカク（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｆ７ＢＡＵ２）、マウス（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｑ９ＷＵ０２）、ブタ（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｆ１ＳＦ０６）、ウサギ（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｇ１ＳＳＶ５）、ラット（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｐ４８９７４）、タスマニアデビル（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｇ３ＷＸ９５）を含む群から選択される哺乳動物からのものであり得る。
【０９８９】
いくつかの好ましい実施形態では、Ｖ１ＢＲタンパク質配列は、ヒトＶ１ＢＲタンパク質配列に対応する。いくつかの実施形態では、Ｖ１ＢＲポリペプチドは、以下に記載のヒト全長野生型Ｖ１ＢＲタンパク質配列（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｐ４７９０１）又は野生型Ｖ１ＢＲタンパク質配列の機能的断片を含む。
【化５３】
2020531514.tif 000086
【０９９０】
本発明の一形態では、Ｖ１ＢＲポリペプチドは、哺乳動物野生型ＴＶ１ＢＲタンパク質配列のトランケート型を含む。例えば、Ｖ１ＢＲポリペプチド配列は、Ｃ末端切断を有するヒト野生型Ｖ１ＢＲタンパク質配列を含み得る（例えば、アミノ酸残基３５５〜４２４は、切断され得る）。代わりに又はさらに、Ｖ１ＢＲポリペプチド配列は、Ｎ末端切断を有する野生型Ｖ１ＢＲタンパク質配列を含み得る。Ｃ末端又はＮ末端切断の代替として又はそれに加えて、野生型Ｖ１ＢＲタンパク質配列の内部セクションを除去するために切断が行われ得る（例えば、アミノ酸残基１７５〜１８３は、切断され得る）。非限定的な例として、本発明での使用に適したＶ１ＢＲポリペプチドは、配列番号５７に記載のヒト野生型Ｖ１ＢＲタンパク質配列のアミノ酸残基２〜１７４及び１８４〜３５４を含んでいた。
【０９９１】
＜３．８６  Ｖ１ＢＲポリペプチドをコードする構築物及びヌクレオチド配列＞
本発明は、上記及び本明細書の他の箇所に広く記載されているように、Ｖ１ＢＲポリペプチドをコードする単離ポリヌクレオチド配列及び構築物も包含する。これらのポリヌクレオチド配列又は構築物を含む宿主細胞も企図される。
【０９９２】
いくつかの実施形態では、ポリヌクレオチド配列は、例えば、ＧｅｎＢａｎｋ受託番号ＮＭ＿０００７０７．３、ＤＱ１９４８１６．１及びＥＵ４３２１１１．１に記載の、ヒトＶ１ＢＲヌクレオチドに対応する（すなわちＡＶＰＲ１Ｂ遺伝子に対応する）配列を含む。このタイプの代表的な例では、ポリヌクレオチドは、これらの配列のいずれか１つと少なくとも７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８又は９９％の配列同一性を共有するＶ１ＢＲヌクレオチド配列を含む。
【０９９３】
いくつかの実施形態では、Ｖ１ＢＲポリヌクレオチドコード配列は、野生型哺乳類Ｖ１ＢＲポリヌクレオチドと少なくとも５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９２％、９５％、９９％若しくは１００％の配列同一性を有するポリペプチドをコードするヌクレオチド配列又はその断片を含む。いくつかの実施形態では、Ｖ１ＢＲポリヌクレオチドは、低、中又は高ストリンジェンシー条件下で野生型哺乳類Ｖ１ＢＲタンパク質のオープンリーディングフレームにハイブリダイズするヌクレオチド配列又はその断片を含む。
【０９９４】
＜３．８７  バソプレシン受容体２（Ｖ２Ｒ）ポリペプチド＞
Ｖ２Ｒは、腎臓の集合管に存在する受容体を介して抗利尿を媒介する。さらに、これは、バソプレシンによって誘導される疼痛反応を媒介するようである（Ｍａｎｎｉｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，２００８）。
【０９９５】
現在まで、Ｖ２Ｒの結晶構造は、依然として公開されておらず、受容体の構造的機能及びリガンド結合機能は、突然変異誘発及び相同性モデリングなどの間接的なアプローチを通じて推測しなければならない。Ｖ２Ｒの細胞外部分は、Ｎ末端セグメント（ヒトＶ２ＲのＭｅｔ１〜Ｇｌｕ３３）、ヘリックスＩＩ及びＩＩＩを連結するＥＣＬ１（ヒトＶ２ＲのＴｈｒ１０２〜Ｐｈｅ１０５）、ヘリックスＩＶ及びＶを連結するＥＣＬ２（ヒトＶ２ＲのＡｌａ１７９〜Ａｌａ１９７）及びヘリックスＶＩをＶＩＩに連結するＥＣＬ３（ヒトＶ２ＲのＰｒｏ２９８〜Ｌｅｕ３０２）からなる。
【０９９６】
本発明の特定の実施形態では、Ｖ２Ｒポリペプチドは、Ｖ２Ｒタンパク質配列を含むか、又はＶ２Ｒタンパク質配列と少なくとも７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８又は９９％の配列同一性又は類似性を共有する。
【０９９７】
いくつかの実施形態では、Ｖ２Ｒタンパク質配列は、哺乳動物Ｖ２Ｒタンパク質配列に対応する。適当なＶ２Ｒ配列は、適切には、ヒト（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｐ３０５１８）、ネコ（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｍ３ＷＦ０７）、ニワトリ（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｆ１ＮＶ７４）、チンパンジー（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｈ２ＲＣＣ１）、ウシ（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｐ４８０４４）、イヌ（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｏ７７８０８）、ウマ（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｆ６ＵＸ０８）、マウス（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｏ８８７２１）、ブタ（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｐ３２３０７）、ラット（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｑ００７８８）、ヒツジ（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｗ５ＮＴＬ０）、シチメンチョウ（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｇ１ＮＡＩ７）、カメ（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｋ７ＦＪ４５）を含む群から選択される哺乳動物からのものであり得る。
【０９９８】
いくつかの好ましい実施形態では、Ｖ２Ｒタンパク質配列は、ヒトＶ２Ｒタンパク質配列に対応する。いくつかの実施形態では、Ｖ２Ｒポリペプチドは、以下に記載のヒト全長野生型Ｖ２Ｒタンパク質配列（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｐ３０５１８）又は野生型Ｖ２Ｒタンパク質配列の機能的断片を含む。
【化５４】
2020531514.tif 000087
【０９９９】
本発明の一形態では、Ｖ２Ｒポリペプチドは、哺乳動物野生型Ｖ２Ｒタンパク質配列のトランケート型を含む。例えば、Ｖ２Ｒポリペプチド配列は、Ｃ末端切断を有するヒト野生型Ｖ２Ｒタンパク質配列を含み得る（例えば、アミノ酸残基３４２〜３７１は、切断され得る）。代わりに又はさらに、Ｖ２Ｒポリペプチド配列は、Ｎ末端切断を有する野生型Ｖ２Ｒタンパク質配列を含み得る。Ｃ末端又はＮ末端切断の代替として又はそれに加えて、野生型Ｖ２Ｒタンパク質配列の内部セクションを除去するために切断が行われ得る（例えば、アミノ酸残基１８７〜１９１は、切断され得る）。非限定的な例として、本発明での使用に適したＶ２Ｒポリペプチドは、配列番号５８に記載のヒト野生型Ｖ２Ｒタンパク質配列のアミノ酸残基２〜１８６及び１９２〜３４１を含んでいた。
【１０００】
＜３．８８  Ｖ２Ｒポリペプチドをコードする構築物及びヌクレオチド配列＞
本発明は、上記及び本明細書の他の箇所に広く記載されているように、Ｖ２Ｒポリペプチドをコードする単離ポリヌクレオチド配列及び構築物も包含する。これらのポリヌクレオチド配列又は構築物を含む宿主細胞も企図される。
【１００１】
いくつかの実施形態では、ポリヌクレオチド配列は、例えば、ＧｅｎＢａｎｋ受託番号ＮＭ＿００００５４．４、ＮＭ＿００１１４６１５１．１、ＮＲ＿０２７４１９．１、Ｕ０４３５７．１、ＮＧ＿００８６８７．１、ＢＣ１１２１８１．１及びＢＣ１０１４８４．１に記載の、ヒトＶ２Ｒヌクレオチドに対応する（すなわちＡＶＰＲ２遺伝子に対応する）配列を含む。このタイプの代表的な例では、ポリヌクレオチドは、これらの配列のいずれか１つと少なくとも７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８又は９９％の配列同一性を共有するＶ２Ｒヌクレオチド配列を含む。
【１００２】
いくつかの実施形態では、Ｖ２Ｒポリヌクレオチドコード配列は、野生型哺乳類Ｖ２Ｒポリヌクレオチドと少なくとも５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９２％、９５％、９９％若しくは１００％の配列同一性を有するポリペプチドをコードするヌクレオチド配列又はその断片を含む。いくつかの実施形態では、Ｖ２Ｒポリヌクレオチドは、低、中又は高ストリンジェンシー条件下で野生型哺乳類Ｖ２Ｒタンパク質のオープンリーディングフレームにハイブリダイズするヌクレオチド配列又はその断片を含む。
【１００３】
＜４．特定の共存ＧＰＣＲ及び／又はＲＡＧＥを発現する細胞＞
ＡＴ１Ｒなどのアンジオテンシン受容体又はＣＣＲ２などの特定のケモカイン受容体など、特定の共存ＧＰＣＲ及び／又はＲＡＧＥをコードする核酸分子（好ましくはベクターを含む構築物の形態）は、宿主細胞、適切には安定な細胞株を含む任意の細胞株に、一時的又は安定的に形質導入又は同時形質導入することができる。好ましい実施形態では、細胞株は哺乳動物由来の細胞株である。好ましい細胞株は、ＲＡＧＥ及び特定の共存ＧＰＣＲが由来するものと同じ生物体に由来するものである。したがって、使用する細胞株は、それぞれ特定の目的ごとに最適化することができ、例えば、前記細胞で発現されるポリヌクレオチドがヒトタンパク質（又はヒトタンパク質に由来するポリペプチド）をコードする場合、ヒト細胞に由来する細胞株が最も適している可能性が高い。しかしながら、これは、異なる生物体に由来するポリペプチド及び細胞の使用を除外するものではない。一例は、ラット又はマウス由来のポリペプチドをヒト由来細胞の表面に発現させることである。別の例は、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞などのハムスター由来細胞の表面にラット又はヒト由来のポリペプチドを発現させることである。
【１００４】
本発明を実施するのに適したヒト由来細胞株の一例は、ＨＥＫ２９３細胞株（例えば、ＨＥＫ２９３細胞株又はＨＥＫ２９３ＦＴ細胞株）である。適切な細胞株の他の例には、ＣＯＳ−１細胞株、又はＣＯＳ−７細胞株、又はＣＨＯ細胞株、又はＨｅＬａ細胞株が含まれるが、これらに限定されない。
【１００５】
したがって、本発明の細胞は、ＲＡＧＥと、ＡＴ１Ｒなどのアンジオテンシン受容体又はＣＣＲ２などの特定のケモカイン受容体など、特定の共存ＧＰＣＲとを発現する。
【１００６】
＜５．候補薬剤＞
特定の態様では、本発明は、ＡＴ１Ｒ及びＣＣＲ２を含む特定の共存活性化ＧＰＣＲによるＲＡＧＥリガンド非依存性のＲＡＧＥ活性化に起因する細胞におけるシグナル伝達を調節する薬剤をスクリーニングする方法を提供する。薬剤は、それが特定の共存活性化ＧＰＣＲによるＲＡＧＥリガンド非依存性のＲＡＧＥ活性化を調節する（例えば、阻害又はシグナル伝達する）場合、特定の共存活性化ＧＰＣＲ及びＲＡＧＥの一方又は両方及び／又はいずれかと複合体を形成したタンパク質に結合できる。代表的な薬剤は、特定の共存活性化ＧＰＣＲ及びＲＡＧＥの任意のドメイン又はＲＡＧＥと複合体を形成する他のタンパク質及び／又はＲＡＧＥの細胞外ドメイン以外の特定の共存活性化ＧＰＣＲに結合できる。いかなる理論又は作動形態にも拘束されることを望むものではないが、本発明者らは、特定の共存活性化ＧＰＣＲによるＲＡＧＥリガンド非依存性のＲＡＧＥ活性化を媒介する部位は、膜の細胞質（サイトゾル）側に存在すると仮定する。そのようなものとして、いくつかの実施形態では、スクリーニングされる候補薬剤は、細胞透過性である（すなわち原形質膜を介して輸送できる）と決定されるか、細胞透過性となるように修飾される。一実施形態では、本発明の細胞は、外部ドメイン及び特定の共存活性化ＧＰＣＲを欠くＲＡＧＥポリペプチドを発現する。別の実施形態において、本発明の細胞は、ＲＡＧＥの細胞質側テール又はその断片及び特定の共存活性化ＧＰＣＲを発現する。別の実施形態では、本発明の細胞は、特定の共存活性化ＧＰＣＲを発現するが、内因性ＲＡＧＥを発現しない。
【１００７】
任意の既知のタイプのスクリーニングアッセイは、特定の共存活性化ＧＰＣＲによるＲＡＧＥリガンド非依存性のＲＡＧＥ活性化のモジュレーターであるものとしての候補薬剤を同定するのに適していることが企図される。一実施形態では、近接スクリーニングアッセイが使用される。実行する近接スクリーニングアッセイの一例は、特定の共存活性化ＧＰＣＲとＲＡＧＥと間の近接性の変化を調査するための生物発光共鳴エネルギー移動（ＢＲＥＴ）アッセイである。いくつかの実施形態では、可溶性組換えポリペプチドを使用し、インビトロで実施されるスクリーニングアッセイが想定される。そのようなスクリーニングアッセイの例は、従来のツーハイブリッド、表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）又は補完システムである。別の実施形態では、例えば、特定の共存活性化ＧＰＣＲ及び／又はＲＡＧＥに結合する蛍光標識ペプチド又は他の薬剤を使用する、結合アッセイが利用される。これは、ＢＲＥＴを利用するために、特定の共存活性化ＧＰＣＲ又はＲＡＧＥにコンジュゲートしたＮａｎｏＬｕｃと共に使用される場合とされない場合があり得る（Ｓｔｏｄｄａｒｔ  ｅｔ  ａｌ．，２０１５）。特定の共存活性化ＧＰＣＲ又はＲＡＧＥへのＮａｎｏＬｕｃの融合は、特定の共存活性化ＧＰＣＲ又はＲＡＧＥポリペプチド内のＮ末端、Ｃ末端又は別の適切な部位で発生し得る。
【１００８】
イムノアッセイは、特定の結合を分析するためにも使用でき、ほんの数例を挙げれば、ウエスタンブロット、ラジオイムノアッセイ、ＥＬＩＳＡ（酵素結合免疫吸着アッセイ）、「サンドイッチ」イムノアッセイ、免疫沈降アッセイ、沈降反応、ゲル拡散沈降反応、免疫拡散アッセイ、凝集アッセイ、補体固定アッセイ、免疫放射分析アッセイ、蛍光イムノアッセイ、プロテインＡイムノアッセイなどの技術を使用した競合及び非競合アッセイシステムが含まれるが、これらに限定されない。そのようなアッセイは、日常的なものであり、当技術分野で周知である（例えば、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる、Ａｕｓｕｂｅｌ  ｅｔ  ａｌ．，ｅｄｓ．，１９９４，Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｖｏｌ．１，Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ＆Ｓｏｎｓ，Ｉｎｃ．，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋを参照されたい）。いくつかの実施形態では、ＲＡＧＥポリペプチドは、ＥＬＩＳＡを使用して、ＡＴ１Ｒなどのアンジオテンシン受容体又はＣＣＲ２などの特定のケモカイン受容体など、特定の共存ＧＰＣＲへの結合についてアッセイされる。このタイプの例示的な例では、組換えＲＡＧＥポリペプチド又は特定の組換え共存ＧＰＣＲポリペプチドのいずれかを候補薬剤と共に、その底面が他の結合パートナー、例えば標的の制限量でコーティングされた、マイクロタイタープレートに接触させる。プレートを緩衝液で洗浄して、非特異的に結合したポリペプチドと過剰な候補薬剤とを除去する。次いで、プレート上の標的に結合するＲＡＧＥポリペプチド又は特定の共存ＧＰＣＲポリペプチドの量は、ＲＡＧＥポリペプチド又は特定の共存ＧＰＣＲポリペプチド、例えば、ポリペプチドの標識又は定常部分を認識することができる抗体でプレートをプローブすることによって決定される。抗体は、検出システム（例えば、適切な基質が提供された場合に比色産物を生成するアルカリホスファターゼ又はホースラディッシュペルオキシダーゼ（ＨＲＰ）などの酵素）に連結されている。
【１００９】
他の実施形態では、候補薬剤が特定の共存ＧＰＣＲポリペプチドへのＲＡＧＥポリペプチドの結合を調節する能力は、均質アッセイを使用して分析され、すなわちアッセイの全ての成分が追加された後、追加の流体操作は不要である。例えば、蛍光共鳴エネルギー移動（ＦＲＥＴ）を均質アッセイとして使用することができる（例えば、米国特許第５，６３１，１６９号明細書；及び米国特許第４，８６８，１０３号明細書を参照されたい）。ＲＡＧＥポリペプチドが特定の共存ＧＰＣＲポリペプチドに近接している場合、共鳴エネルギーが第２の分子（例えば、特定の共存ＧＰＣＲポリペプチド）上の蛍光アクセプターによって吸収され得るように、第１の分子（例えば、ＲＡＧＥポリペプチド）上のフルオロフォア標識が選択される。特定の共存ＧＰＣＲポリペプチドの蛍光アクセプターは、移動されたエネルギーを吸収すると蛍光を発する。標識間のエネルギー移動の効率は分子を隔てる距離に関連しているため、分子間の空間的な関係を評価できる。ポリペプチドが近接した状況では、アッセイにおける蛍光アクセプターの蛍光発光が検出可能であるべきである。ＦＲＥＴは、標準的な蛍光検出手段、例えば蛍光計を使用して、便利に測定できる。
【１０１０】
他の実施形態では、ＲＡＧＥポリペプチドと特定の共存ＧＰＣＲポリペプチドとの間の相互作用は、表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）を使用して分析される。ＳＰＲ又は生体分子相互作用分析（ＢＩＡ）は、いかなる相互作用物質も標識せずに、リアルタイムで生体特異的相互作用を検出する。ＢＩＡチップの結合表面での質量の変化（結合イベントを示す）は、表面近くの光の屈折率が変化をもたらす（表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）の光学現象）。屈折率の変化は、検出可能なシグナルを生成し、これは、生体分子間のリアルタイム反応の指標として測定される。ＳＰＲを使用するための方法は、例えば、米国特許第５，６４１，６４０号明細書；Ｒａｅｔｈｅｒ，１９８８；Ｓｊｏｌａｎｄｅｒ  ａｎｄ  Ｕｒｂａｎｉｃｚｋｙ（１９９１），Ｓｚａｂｏ  ｅｔ  ａｌ．（１９９５）及びＢＩＡｃｏｒｅ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  ＡＢ（Ｕｐｐｓａｌａ，Ｓｗｅｄｅｎ）によって提供されるオンラインリソースに記載されている。
【１０１１】
候補薬剤のＲＡＧＥポリペプチドとＡＴ１Ｒなどのアンジオテンシン受容体など、特定の共存活性化ＧＰＣＲ又はＣＣＲ２などの特定のケモカイン受容体ととの間の相互作用を調節する能力が特定されると、候補薬剤の毒性及び／又は有効性は、例えばＬＤ５０（集団の５０％に致命的な用量）及びＥＤ５０（集団の５０％で治療上有効な用量）を決定するために、細胞培養又は実験動物における標準的な製薬手順によって決定することができる。毒性効果と治療効果との用量比は、治療指数であり、ＬＤ５０／ＥＤ５０比として表すことができる。大きい治療指数を示す治療が好ましい。有毒な副作用を示す治療法も使用され得るが、感染していない細胞への潜在的な損傷を最小限に抑え、それにより副作用を減らすために、影響を受ける組織の部位にそのような薬剤を標的とする送達システムを設計するように注意すべきである。
【１０１２】
細胞培養アッセイ及び動物研究から得られたデータは、ヒトを含む哺乳動物で使用するための予防薬及び／又は治療薬の投与量の範囲を処方する際に使用できる。そのような薬剤の投与量は、適切には、毒性がほとんど又は全くないＥＤ５０を含む血中濃度の範囲内にある。投与量は、使用される剤形及び利用される投与経路に依存してこの範囲内で変動し得る。本発明の方法で使用される任意の治療について、治療有効用量は、最初に細胞培養アッセイから推定することができる。細胞培養で決定されるＩＣ５０（すなわち症状の最大阻害の半分を達成する試験化合物の濃度）を含む血中血漿濃度範囲を達成するために、動物モデルで用量を処方し得る。このような情報は、ヒトにおける有用な用量をより正確に決定するために使用できる。血漿中のレベルは、例えば、高速液体クロマトグラフィーによって測定され得る。
【１０１３】
候補薬剤は、多数の化学クラスを包含するが、典型的には、それらは、有機分子であり、好ましくは分子量が５０ダルトンより大きく約２，５００ダルトンより小さい、小さい有機化合物である。候補薬剤は、タンパク質との構造的相互作用、特に水素結合に必要な官能基を含み、典型的には、少なくともアミン、カルボニル、ヒドロキシル又はカルボキシル基、望ましくは少なくとも２つの官能化学基を含む。候補薬剤は、多くの場合、上記の官能基の１つ以上で置換された環状炭素若しくは複素環構造又は芳香族若しくは多芳香族構造を含む。候補薬剤は、ペプチド、糖類、脂肪酸、ステロイド、プリン、ピリミジン、誘導体、構造類似体又はそれらの組み合わせを含むが、これらに限定されない生体分子中にも見られる。
【１０１４】
小（非ペプチド）分子モジュレーターは、特に有利である。この点に関して、小分子は、経口投与後により容易に吸収されるか、潜在的な抗原決定基がより少ないか、より大きいタンパク質ベースの医薬品よりも細胞膜を通過する可能性が高いため、望ましい。また、小さい有機分子は、適切な細胞への侵入を獲得し、遺伝子の発現に影響を与え得るか（例えば、遺伝子発現に関与する調節領域又は転写因子と相互作用することによる）；又はアクセサリー分子の結合を阻害又は強化することにより、遺伝子の活性に影響を与え得る。
【１０１５】
代わりに、細菌、真菌、植物及び動物の抽出物の形態での天然化合物のライブラリが入手可能であるか、容易に生成される。さらに、天然又は合成で産生されたライブラリ及び化合物は、従来の化学的、物理的及び生化学的手段により容易に変更され、コンビナトリアルライブラリーを産生するために使用され得る。既知の薬剤は、アシル化、アルキル化、エステル化又はアミド化などの指向的又は無作為な化学修飾に供され、構造的類似体を生成し得る。
【１０１６】
スクリーニングは、既知の薬理学的に活性な化合物及びその化学的類似体も対象とし得る。
【１０１７】
動物モデルで化合物をさらに試験して、最も強力なインビボ効果を有する化合物を特定し得る。これらの分子は、例えば、化合物を逐次修飾、分子モデリング及び合理的な薬物設計で使用される他の日常的な手順に供することにより、医薬品のさらなる開発のための「リード化合物」として役立ち得る。
【１０１８】
＜５．１  ＲＡＧＥポリペプチドの断片、類似体及び誘導体＞
いくつかの実施形態では、候補薬剤は、ＲＡＧＥの細胞質側テールの断片であり、候補薬剤は、ＲＡＧＥポリペプチドの断片又は遺伝子送達後に続いて断片が生成されるＲＡＧＥポリペプチドをコードするＤＮＡを含む。適切には、候補薬剤は、ＲＡＧＥポリペプチド配列の細胞質側テールの断片と少なくとも７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８又は９９％の配列同一性又は類似性を共有するか、又はそれと１、２、３、５又は１０、１５若しくは２０アミノ酸残基以下が異なる、ペプチドである。上記のように、本発明のいくつかの実施形態では、ＲＡＧＥ断片アミノ酸配列は、野生型ＲＡＧＥポリペプチドの細胞質側テールに対応する（例えば、野生型ＲＡＧＥタンパク質のアミノ酸残基３６２〜４０４（配列番号１又はその断片）。
【１０１９】
いくつかの好ましい例では、断片は、野生型ＲＡＧＥタンパク質のＣ末端細胞質側テールに対応する（すなわち配列番号１に記載のアミノ酸配列のアミノ酸残基３６２〜４０４）。ペプチド類似体は、そのＮ末端又はＣ末端に追加のアミノ酸残基又はその誘導体を含み得る。同様に、類似体は、野生型ＲＡＧＥタンパク質又はその誘導体のＣ末端細胞質側テールの任意の８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１又は４２アミノ酸断片を含み得る。
【１０２０】
そのようなものとして、ペプチドは、以下のアミノ酸配列：［配列番号１］を含み得る。
【１０２１】
代わりに、類似体は、配列番号１に記載の配列と少なくとも７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８又は９９％の配列同一性又は類似性を共有し得るか、又はそれと１、２、３、５又は１０アミノ酸残基以下が異なる。
【１０２２】
いくつかの実施形態では、候補薬剤は、活性化剤、阻害剤、アロステリックモジュレーター又はＲＡＧＥの膜貫通ドメイン若しくはその一部の非機能的代替物であり、候補薬剤は、ＲＡＧＥポリペプチドの断片又は遺伝子送達後に続いて断片が生成されるＲＡＧＥポリペプチドをコードするＤＮＡを含む。適切には、候補薬剤は、ＲＡＧＥの膜貫通ドメイン又はその断片を含む、ＲＡＧＥポリペプチド配列の断片と少なくとも７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８又は９９％の配列同一性又は類似性を共有するか、又はそれと１、２、３、５又は１０、１５若しくは２０アミノ酸残基以下が異なるペプチドである。非機能的代替物は、特定の共存ＧＰＣＲの存在下でＲＡＧＥの膜貫通ドメインに代わる候補物質であり、それらによって活性化できないか、又は下流のＲＡＧＥ依存性シグナル伝達を誘導できず、且つＲＡＧＥの細胞質側テールの活性化及びそれにより生じるＲＡＧＥ依存シグナル伝達を介して通常発生するシグナル伝達を阻害する。いくつかの実施形態では、候補薬剤は、ＲＡＧＥの膜貫通ドメイン又はその一部及びＲＡＧＥの細胞外ドメインの断片を含む。いくつかの実施形態では、候補薬剤は、ＲＡＧＥの膜貫通ドメイン又はその一部及びＲＡＧＥの細胞質側テールの断片を含む。いくつかの実施形態では、候補薬剤は、ＲＡＧＥの膜貫通ドメイン又はその一部並びにＲＡＧＥの細胞外ドメイン及び／又はＲＡＧＥの細胞質側テールの断片を含む。
【１０２３】
いくつかの実施形態では、類似体アミノ酸配列は、少なくとも１つの（例えば、少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０）アミノ酸残基の置換、付加又は欠失によって野生型ＲＡＧＥポリペプチド配列と区別され、これは、ＡＴ１Ｒなどのアンジオテンシン受容体又はＣＣＲ２などの特定のケモカイン受容体など、特定の活性化された共存ＧＰＣＲによる細胞質側テールの活性化の調節をもたらす。
【１０２４】
いくつかの実施形態では、ペプチド、類似体、断片又はその誘導体は、特定の共存ＧＰＣＲを活性化する認識リガンドから生じるシグナル伝達を適切に阻害する。
【１０２５】
したがって、いくつかの実施形態では、ペプチド、類似体、断片又はその誘導体は、特定の活性化された共存ＧＰＣＲ結合部位が損なわれたＲＡＧＥポリペプチド配列に対応する。少なくとも１つのアミノ酸の置換、付加又は欠失は、ＲＡＧＥと、ＡＴ１Ｒなどのアンジオテンシン受容体又はＣＣＲ２などの特定のケモカイン受容体など、特定の活性化された共存ＧＰＣＲとの間の相互作用において重要な残基に対応する任意の位置に適切に配置される。このタイプの例では、ペプチド類似体アミノ酸配列は、別のアミノ酸残基による野生型ＲＡＧＥタンパク質の細胞質側テールのアミノ酸残基位置Ｓ３９１（配列番号１に記載）での置換、付加又は欠失により、野生型ＲＡＧＥポリペプチド配列と区別される。
【１０２６】
いくつかの実施形態では、ペプチド、類似体、断片又はその誘導体は、特定の活性化された共存ＧＰＣＲがその機能的相互作用を発揮する部位が損なわれたＲＡＧＥポリペプチド配列に対応する。少なくとも１つのアミノ酸の置換付加又は欠失は、ＲＡＧＥと、ＡＴ１Ｒなどのアンジオテンシン受容体又はＣＣＲ２などの特定のケモカイン受容体など、特定の活性化された共存ＧＰＣＲとの間の機能的相互作用において重要な残基に対応する任意の位置に適切に配置される。
【１０２７】
アミノ酸位置３９１の残基は、ＡＴ１Ｒ及びＣＣＲ２などの特定の活性化された共存ＧＰＣＲによるＲＡＧＥリガンド非依存性のＲＡＧＥ活性化において重要であると本発明者らが判定した部位である。適切には、これらの実施形態では、セリン３９１は、ＲＡＧＥの細胞質側テールの活性化を阻害するために、除去されているか、又は別のアミノ酸（アラニン、アスパラギン酸、フェニルアラニン、ヒスチジン、リジン、アルギニン、チロシン、アスパラギン、バリン、グリシン、システイン若しくはグルタミン酸など）で置換されている。他の実施形態では、セリン３９１は、特定の共存ＧＰＣＲの活性化後に活性化されるように、別のアミノ酸（プロリン、グルタミン、ロイシン、イソロイシンメチオニン、スレオニン又はトリプトファンなど）を保持するか、又はそれで置換され、これにより、野生型ＲＡＧＥの発現を必要として又は必要とせずに、ＲＡＧＥ依存性シグナル伝達を誘導する。理論に拘束されることを望むものではないが、本発明者らは、Ｓ３９１の置換又は欠失が、この残基（すなわちＲＡＧＥ３７９−３９０）に近接するαヘリカルコイル（例えば、ＲＡＧＥ３７９−３９０）の立体構造及び／又は結合パートナーに対する親和性に影響すると考えている。
【１０２８】
このタイプの他の例では、ペプチド、類似体、断片又はその誘導体は、Ｓ３９１部位に近接したαヘリックスの立体構造にとって重要な任意のアミノ酸（例えば、アミノ酸位置Ｓ３９１に直接隣接するアミノ酸）の置換、付加又は欠失によって野生型ＲＡＧＥポリペプチド配列と区別される。例えば、野生型ＲＡＧＥタンパク質配列のアミノ酸位置３９０のグルタミン残基は、極性アミノ酸（例えば、アルギニン又はリジン）で置換された場合、そのＣ末端でのαヘリックスのキャッピングを強化し得る［例えば、配列番号９及び１０］。そのような置換により、ＡＴ１Ｒなどのアンジオテンシン受容体又はＣＣＲ２などの特定のケモカイン受容体など、特定の活性化された共存ＧＰＣＲによるＲＡＧＥリガンド非依存性のＲＡＧＥ活性化の阻害剤であるペプチドが生じる。
【１０２９】
代わりに、ペプチド、類似体、断片又はその誘導体は、配列番号５に記載の配列と少なくとも７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８又は９９％の配列同一性又は類似性を共有するか、又はそれと１、２、３、５又は１０アミノ酸残基以下が異なる。上記のペプチド、その類似体、断片又は誘導体の、Ｃ末端又はＮ末端のいずれか又は両方での任意の切断も企図される。したがって、配列番号５に記載の配列からの８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１又は４２アミノ酸を含む断片は、それらが細胞質側テールの野生型ＲＡＧＥアミノ酸配列の位置Ｓｅｒ３９１（配列番号１に記載の通り）に対応する置換又は欠失を含む場合、ペプチド、類似体、断片又はその誘導体として適切である。
【１０３０】
いくつかの実施形態において、本発明のＲＡＧＥペプチド模倣物は、天然又は合成タンパク質形質導入ドメイン又は模倣物にコンジュゲート、融合又は他の方法で連結されるか、非共有結合担体系（例えば、リポソーム、ＰＥＰ−１）に配置され、これは、ＲＡＧＥペプチドを細胞の細胞内成分に適切に標的化し、当技術分野で周知である。そのような分子の非限定的な例には、ＨＩＶ−ＴＡＴモチーフ（配列番号４：ＹＧＲＫＫＲＲＱＲＲＲ、Ｓｃｈｗａｒｚｅ  ｅｔ  ａｌ．，２０００でレビューされている）を含む、天然の細胞膜透過性ペプチド並びに例えば米国特許出願番号第２０１４／０２１３７７５号明細書、同第２０１４／０１４１４５２号明細書及び同第２０１３／０１３６７４２号明細書に記載のものなどの天然及び／又は合成の細胞膜透過性ペプチドとの融合が含まれ、これらの文献は、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。
【１０３１】
＜６．近接スクリーニングアッセイ＞
特定の実施形態では、スクリーニング方法は、ＲＡＧＥポリペプチドのＡＴ１Ｒ特定の活性化された共存ＧＰＣＲへの近接性の変化を評価することにより、候補薬剤が、ＲＡＧＥポリペプチドとＡＴ１Ｒなどのアンジオテンシン受容体など、特定の活性化された共存ＧＰＣＲ又はＣＣＲ２などの特定のケモカイン受容体との間の相互作用を調節できるかどうかを評価する。このタイプの例示的な例では、ＲＡＧＥポリペプチドは、第１のレポーター成分にカップリング（例えば、コンジュゲート、融合、そうでなければ連結）し、特定の活性化された共存ＧＰＣＲは第２のレポーター成分にカップリング（例えば、コンジュゲート、そうでなければ連結）する。第１及び第２のレポーター成分は、同じであるか又は異なり得る。例えば、一方のレポーター成分は、近接シグナル又はエネルギー供与体であり得、他方は、近接シグナル又はエネルギー受容体であり得る。第１及び第２のレポーター成分は、近接近にある場合に検出可能なシグナルを発することができる任意の既知の分子（例えば、有機分子、無機分子、タンパク質性分子、非タンパク質性分子又はそれらの組み合わせ）であり得る。
【１０３２】
相互作用するポリペプチドの近接性を評価するのに適したスクリーニングアッセイは、当技術分野で十分に確立されており、そのようなアッセイの任意の形式は、上記及び本明細書の他の箇所に記載の本発明の方法に適している。例えば、米国特許第８，２８３，１２７号明細書は、分子会合の検出のためのそのような適切なシステムの１つを記載しており、その内容は、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。
【１０３３】
一般的な例として、候補薬剤が、ＲＡＧＥポリペプチドとＡＴ１Ｒなどのアンジオテンシン受容体又はＣＣＲ２などの特定のケモカイン受容体など、特定の活性化された共存ＧＰＣＲとの間の相互作用を調節できるかどうかを判断するために、３つの成分（すなわち（ｉ）第１のレポーター成分にカップリングしたＲＡＧＥポリペプチド、（ｉｉ）第２のレポーター成分にカップリングした特定の活性化された共存ＧＰＣＲ、及び（ｉｉｉ）候補薬剤）のそれぞれがアッセイシステムに提供される。第１及び第２のレポーター成分からの近接シグナルが観測され、候補薬剤の非存在下において、相互作用するＲＡＧＥと特定の活性化された共存ＧＰＣＲとから放出される参照近接シグナル（すなわちＲＡＧＥポリペプチドと、ＡＴ１Ｒなどのアンジオテンシン受容体又はＣＣＲ２などの特定のケモカイン受容体など、特定の活性化された共存ＧＰＣＲとが自由に相互作用できる場合の第１及び第２のレポーター成分が発する近接シグナル）と比較される。候補薬剤がＲＡＧＥポリペプチドと特定の活性化された共存ＧＰＣＲとの間の相互作用を調節しない場合、参照近接シグナルへの変化は観察されない。しかしながら、候補薬剤がＲＡＧＥポリペプチドと特定の活性化された共存ＧＰＣＲとの間の相互作用を調節できる場合、第１及び第２のレポーター成分から発せられた近接シグナルの変化は、アッセイシステムへの候補薬剤の存在時に観察される。典型的には、参照近接シグナルと比較した場合の近接シグナルの減少は、候補薬剤が、ＲＡＧＥポリペプチドとＡＴ１Ｒなどのアンジオテンシン受容体又はＣＣＲ２などの特定のケモカイン受容体など、特定の活性化された共存ＧＰＣＲとの間の相互作用に拮抗することを示すか、そうでなければ阻害することを示す。逆に、参照近接シグナルと比較した場合の近接シグナルの増加は、候補薬剤が、ＲＡＧＥポリペプチドと特定の活性化された共存ＧＰＣＲとの間の相互作用を作動することを一般的に示すか、そうでなければ刺激することを示す。代表的なレポーター成分は、適切には、生物発光ドナー分子及び蛍光アクセプター分子から選択される。いくつかの例示的な実施形態では、生物発光ドナー分子及び蛍光アクセプター分子は、タンパク質である。
【１０３４】
ＡＴ１Ｒなどのアンジオテンシン受容体又はＣＣＲ２などの特定のケモカイン受容体など、特定の活性化された共存ＧＰＣＲ及び／又はＲＡＧＥポリペプチドの、レポーター成分へのカップリングは、直接的又は間接的なカップリングによるものであり得、２つの分子をカップリングする任意の既知の共有又は非共有手段によるものであり得る。カップリング方法の例には、化学架橋、タンパク質の化学修飾、アミノ酸の化学修飾、核酸の化学修飾、炭水化物の化学修飾、脂質の化学修飾、他の有機又は無機分子の化学修飾、ビオチン−アビジン相互作用、抗原抗体相互作用及び核酸ハイブリダイゼーションが含まれる。本発明のいくつかの形態では、第１及び／又は第２のレポーター成分は、リンカーにより、ＲＡＧＥ及び／又はＡＴ１Ｒなどのアンジオテンシン受容体又はＣＣＲ２などの特定のケモカイン受容体などの特定の活性化された共存ＧＰＣＲに間接的にカップリングされる。いくつかの実施形態では、リンカーは、酵素切断部位を含む。
【１０３５】
代わりに、ＲＡＧＥポリペプチド及び／又はＡＴ１Ｒなどのアンジオテンシン受容体又はＣＣＲ２などの特定のケモカイン受容体など、特定の活性化された共存ＧＰＣＲは、タンパク質性レポーター成分に直接的にカップリングされ得る。タンパク質性分子を直接的にコンジュゲートするためのアプローチは、例えば、遺伝子融合により、十分に確立されており、ＲＡＧＥポリペプチドをコードする核酸及び／又は特定の活性化された共存ＧＰＣＲ並びに第１及び／又は第２のレポーター成分は融合して、単一のポリペプチドをコードする核酸を生成する。
【１０３６】
本発明の特に好ましい実施形態では、ＲＡＧＥポリペプチド及び／又はＡＴ１Ｒなどのアンジオテンシン受容体又はＣＣＲ２などの特定のケモカイン受容体など、特定の活性化された共存ＧＰＣＲ及び第１及び／又は第２のレポーター成分は、それぞれ単一のポリペプチドの一部を形成する。追加の機能性は、同じポリペプチドの一部を形成し得る。例えば、ＲＡＧＥ及び／又は特定の活性化された共存ＧＰＣＲ並びに第１及び／又は第２のレポーター成分は、それぞれ親和性精製のためのアミノ酸配列；ポリペプチドを真核細胞の細胞内コンパートメントに指向させるアミノ酸配列；真核細胞膜の透過を促進するアミノ酸配列；及び抗体の使用又は他の方法によって発現レベルを評価することを可能にするアミノ酸配列のいずれか１つ以上をさらに含む単一のポリペプチドの一部を形成する。
【１０３７】
一部の実施形態では、スクリーニングアッセイは、ＡＴ１Ｒなどのアンジオテンシン受容体又はＣＣＲ２などの特定のケモカイン受容体など、特定の活性化された共存ＧＰＣＲと、ＲＡＧＥポリペプチドとの間の相互作用を評価するためにエネルギー供与体及びエネルギー受容体分子を使用する。２つの分子間のエネルギー移動の原理は、互いの近接性及び配向性の相対的変化に関する情報を提供する手段として活用できる。共鳴エネルギー移動（ＲＥＴ）は、励起状態のエネルギーのドナー分子からアクセプター分子への移動である。フェルスター又は蛍光共鳴エネルギー移動（ＦＲＥＴ）は、２つの色素分子の電子励起状態間の距離依存性相互作用であり、光子の放出を伴わずドナー分子からアクセプター分子に励起が移動する。これは、アクセプター分子の吸収スペクトルがドナーの発光スペクトルと重複する場合にのみ発生できる。フェルスターは、エネルギードナー及びエネルギーアクセプター間の共鳴エネルギー移動の程度は、２つの分子間の距離の６乗に反比例すると判定した。ＦＲＥＴの場合、特定の波長の外部光源を使用して、ドナー分子を励起する。
【１０３８】
生物発光共鳴エネルギー移動（ＢＲＥＴ）は、Ｐｆｌｅｇｅｒ  ａｎｄ  Ｅｉｄｎｅ（２００６）、米国特許第８，２８３，１２７号明細書、Ｊａｅｇｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，２０１４及びＳｔｏｄｄａｒｔ  ｅｔ  ａｌ．２０１５に記載される。ＢＲＥＴで使用されているルシフェラーゼには、ホタル、ウミシイタケ（Ｒｅｎｉｌｌａ  ｒｅｎｉｆｏｒｍｉｓ）、ガウシア・プリンケプス（Ｇａｕｓｓｉａ  ｐｒｉｎｃｅｐｓ）及びＮａｎｏＬｕｃルシフェラーゼ（Ｐｒｏｍｅｇａ）からのものが含まれる。
【１０３９】
特定の実施形態では、スクリーニングアッセイは、ＢＲＥＴ技術又はアッセイを使用する。ＢＲＥＴスクリーニングを実行するには、生物発光ドナー、モジュレーター及び蛍光アクセプターの３つの成分が必要である。蛍光アクセプターは、これらの成分が適切な特別な関係にあり、適切な基質（生物発光開始化合物）が存在する場合、生物発光ドナーからエネルギーを受容でき、発光を生成する。モジュレーターは、生物発光ドナー及び蛍光アクセプターの近接性及び／又は配向性に影響を与え、それにより、成分間のエネルギー移動を調節することができるか、又は生物発光ドナーによって生成された発光と蛍光アクセプターとの間のエネルギー移動に影響を与えることにおいて異なる役割を果たすことができる。
【１０４０】
ＢＲＥＴ技術の利点の１つは、生細胞におけるタンパク質−タンパク質相互作用をリガンドによる活性化後にリアルタイムでモニター及び／又は決定できることである。
【１０４１】
いくつかの実施形態では、特定の活性化された共存ＧＰＣＲ（ＡＴ１Ｒなどのアンジオテンシン受容体又はＣＣＲ２などのケモカイン受容体など）又はＲＡＧＥポリペプチドは、生物発光ドナーに融合されるか、そうでなければ連結される。いくつかの実施形態では、特定の活性化された共存ＧＰＣＲ又はＲＡＧＥポリペプチドは、蛍光アクセプターに融合されるか、そうでなければ連結される。例えば、一実施形態では、特定の活性化された共存ＧＰＣＲは、生物発光ドナーに融合されるか、そうでなければ連結され、ＲＡＧＥポリペプチドは、蛍光アクセプターに融合されるか、そうでなければ連結される。
【１０４２】
＜６．１  生物発光ドナー＞
上記のように、生物発光ドナーは、第１の標的タンパク質（ＲＡＧＥポリペプチド又はＡＴ１Ｒなどのアンジオテンシン受容体若しくはＣＣＲ２などの特定のケモカイン受容体など、特定の活性化された共存ＧＰＣＲ）及び生物発光ドナー分子を含むが、これらに限定されない。生物発光ドナー分子は、ウミシイタケルシフェラーゼ及びその断片；ウミシイタケルシフェラーゼのポリペプチドバリアント；などを含み得るが、これらに限定されない。特に、生物発光ドナー分子は、以下のウミシイタケルシフェラーゼタンパク質配列のいずれかを含み得るが、これらに限定されない。
野生型ウミシイタケルシフェラーゼ：
【化５５】
2020531514.tif 000088
Ｃｙｓ１２４Ａｌａ／Ｍｅｔ１８５Ｖａｌバリアントウミシイタケルシフェラーゼ：
【化５６】
2020531514.tif 000089
ＲＬｕｃ８バリアントウミシイタケルシフェラーゼ：
【化５７】
2020531514.tif 000090
【１０４３】
他の適切な生物発光ドナー分子は、ＮａｎｏＬｕｃルシフェラーゼ（Ｐｒｏｍｅｇａ）、甲虫ルシフェラーゼ、ホタル（Ｐｈｏｔｉｎｕｓ  ｐｙｒａｌｉｓ）ルシフェラーゼ（ｆＬｕｃ）、ガウシアルシフェラーゼ、ヒカリキノコバエ属（Ａｒａｃｈｎｏｃａｍｐａ  ｓｐ）ルシフェラーゼ、コメツキムシ赤色ルシフェラーゼ及びエクオリン発光タンパク質など、他のルシフェラーゼ又は発光タンパク質を含み得るが、これらに限定されない。本発明で使用できる代替の非ルシフェラーゼ生物発光ドナー分子は、適切な基質に作用して発光シグナルを生成することができる任意の酵素である。そのような酵素の特定の例は、β−ガラクトシダーゼ、ラクタマーゼ、西洋ワサビペルオキシダーゼ、アルカリ性ホスファターゼ、β−グルクロニダーゼ及びβ−グルコシダーゼである。これらの酵素の合成発光基質は、当技術分野で周知であり、Ｔｒｏｐｉｘ  Ｉｎｃ．（Ｂｅｄｆｏｒｄ，Ｍａｓｓ．，ＵＳＡ）などの企業から市販されている。
【１０４４】
好ましい実施形態では、低分子量の生物発光ドナー分子を使用して、立体障害による相互作用の阻害を防止又は最小化する。生物発光ドナーは、好ましくは、単一のポリペプチド鎖からなる。また、生物発光タンパク質は、好ましくは、オリゴマー又は凝集体を形成しない。生物発光ドナー分子であるウミシイタケルシフェラーゼ、ガウシアルシフェラーゼ、ホタルルシフェラーゼ及びＮａｎｏＬｕｃは、これらの基準の全て又は大部分を満たす。いくつかの好ましい実施形態では、生物発光ドナーは、上記で広く定義されるような、特定の活性化された共存ＧＰＣＲ（ＡＴ１Ｒなどのアンジオテンシン受容体又はＣＣＲ２などの特定のケモカイン受容体など）を含む。
【１０４５】
いくつかの実施形態では、生物発光ドナーは、ルシフェラーゼバリアントを含む。ルシフェラーゼバリアントは、ルシフェラーゼ活性を保持する（すなわち分子酸素の存在下でセレンテラジン基質の発光産物への変換を触媒する）。ルシフェラーゼバリアントは、対応する参照野生型タンパク質と比較して、以下の特性：強化された光出力；調節された発光波長の最大値；調節された基質利用の少なくとも１つを有し得る。特定の実施形態では、本発明に適したルシフェラーゼバリアントは、上記特性の２つ以上（例えば、調節された安定性及び強化された輝度、強化された光出力及び調節された発光の最大値、調節された安定性及び調節された発光の最大値など）を含むか、又は上記特性の３つ以上（例えば、調節された安定性、強化された光出力及び調節された発光の最大値）を含む。
【１０４６】
上記のように、特に企図されるそのようなバリアントウミシイタケルシフェラーゼタンパク質の１つには、野生型アミノ酸配列（配列番号６１）と比較して８個のアミノ酸置換が含まれるが、これらに限定されない。これらのアミノ酸置換には、Ａｌａ５５Ｔｈｒ、Ｃｙｓ１２４Ａｌａ、Ｓｅｒ１３０Ａｌａ、Ｌｙｓ１３６Ａｒｇ、Ａｌａ１４３Ｍｅｔ、Ｍｅｔ１８５Ｖａｌ、Ｍｅｔ２５３Ｌｅｕ及びＳｅｒ２８７Ｌｅｕが含まれる。さらに、バリアントウミシイタケルシフェラーゼタンパク質は、保存的に修飾されたバリアントが変異ウミシイタケルシフェラーゼタンパク質の特性を保持している限り、１つ以上の追加の保存的置換を含み得る。
【１０４７】
＜６．２  生物発光ドナーエンコーディングベクター＞
いくつかの実施形態では、生物発光ドナーをコードするベクターは、生物発光ドナーをコードするポリヌクレオチド（例えば、ＲＬｕｃ８に融合されているか、そうでなければ連結されている、ＡＴ１Ｒなどのアンジオテンシン受容体又はＣＣＲ２などの特定のケモカイン受容体など、特定の活性化された共存ＧＰＣＲ）を含み得るが、これに限定されない。ベクター（例えば、ウイルス及び非ウイルス）及びポリヌクレオチドを産生する方法は、当技術分野で周知である。生物発光ドナーは、他の発現システムを使用して発現させることができ、生物発光ドナーベクターは、単なる例示的な実施形態であることに留意されたい。
【１０４８】
＜６．３  蛍光アクセプター＞
上記のように、蛍光アクセプターは、限定されないが、第２の標的タンパク質を含み、ここで、第２の標的タンパク質は、ＲＡＧＥポリペプチド又はＡＴ１Ｒなどのアンジオテンシン受容体若しくはＣＣＲ２などの特定のケモカイン受容体など、特定の活性化された共存ＧＰＣＲのいずれかと、蛍光アクセプター分子とからなる。一般に、フルオロフォアは、ある波長で電磁エネルギー及び／又は共鳴エネルギーを吸収し、第２の波長で電磁エネルギーを放出する。いくつかの好ましい実施形態では、蛍光アクセプターは、上記及び本明細書の他の箇所で広く定義されるＲＡＧＥポリペプチドを含む。
【１０４９】
代表的な蛍光アクセプター分子（すなわちフルオロフォア）には、ｓｇＧＦＰ、ｓｇＢＦＰ、ブルーシフトＧＦＰ（Ｙ６６Ｈ）、青色蛍光タンパク質（ＢＦＰ）、シアン蛍光タンパク質（ＣＦＰ）、シアンＧＦＰ、ＤｓＲｅｄ、ＤｓＲｅｄ２、単量体ＲＦＰ、強化ＢＦＰ（ＥＢＦＰ）、強化ＣＦＰ（ＥＣＦＰ）、強化ＧＦＰ（ＥＧＦＰ）、不安定化ＥＧＦＰ、不安定化ＥＣＦＰ、不安定化ＥＹＦＰ、ＧＦＰ（Ｓ６５Ｔ）、レッドシフトＧＦＰ（ｒｓＧＦＰ）、野生型ＧＦＰ（ＧＦＰ）、ＧＦＰｕｖ、ＨｃＲｅｄ、ｔ−ＨｃＲｅｄ、ｒｓＧＦＰ、Ｓａｐｐｈｉｒｅ  ＧＦＰ、ｓｇＢＦＰ（商標）、ｓｇＢＦＰ（商標）（スーパーグローＢＦＰ）、ｓｇＧＦＰ（商標）、ｓｇＧＦＰ（商標）（スーパーグローＧＦＰ）、野生型ＧＦＰ、黄色バリアントＧＦＰ、ＹＦＰ、Ｖｅｎｕｓ、Ｅｍｅｒａｌｄ、Ｔｏｐａｚ、Ｃｉｔｒｉｎｅ、ＹＰｅｔ、ｔ−ｄｉｍｅｒ２、ｔ  ｄｉｍｅｒ２（１２）、ｍＲＦＰ１、ポシロポリン、ウミシイタケＧＦＰ、モンスターＧＦＰ、ｐａＧＦＰ及びカエデタンパク質が含まれるが、これらに限定されない。好ましくは、Ｖｅｎｕｓは、ＹＦＰ配列と比較してアミノ酸置換を含有し、これは、成熟の律速段階である３７℃での発色団の酸化を加速する。また、Ｖｅｎｕｓは、フルオロフォアが十分に折り畳まれることを許容し、アシドーシス及びＣｌ−に対するタンパク質の耐性を改善する他の置換（例えば、Ｆ６３Ｌ、Ｍ１５３Ｔ、Ｖ１６３Ａ及びＳ１７５Ｇ）を有する。
【１０５０】
他の代表的な蛍光アクセプター分子（すなわちフルオロフォア）には、Ａｌｅｘａ  Ｆｌｕｏｒ誘導体、ＢＯＤＩＰＹ誘導体及び米国特許第８，２８３，１２７号明細書で参照されているもの、１，５  ＩＡＥＤＡＮＳ；１，８−ＡＮＳ；４−メチルウンベリフェロン；５−カルボキシ−２，７−ジクロロフルオレセイン；５−カルボキシフルオレセイン（５−ＦＡＭ）；５−カルボキシナフトフルオレセイン；５−カルボキシテトラメチルローダミン（５−ＴＡＭＲＡ）；５−ＦＡＭ（５−カルボキシフルオレセイン）；５−ＨＡＴ（ヒドロキシトリプタミン）；５−ヒドロキシトリプタミン（ＨＡＴ）；５−ＲＯＸ（カルボキシ−Ｘ−ローダミン）；５−ＴＡＭＲＡ（５−カルボキシテトラメチルローダミン）；６−カルボキシローダミン６Ｇ；６−ＣＲ  ６Ｇ；６−ＪＯＥ；７−アミノ−４−メチルクマリン；７−アミノアクチノマイシンＤ（７−ＡＡＤ）；７−ヒドロキシ−４−メチルクマリン；９−アミノ−６−クロロ−２−メトキシアクリジン；ＡＢＱ；酸フクシン；ＡＣＭＡ（９−アミノ−６−クロロ−２−メトキシアクリジン）；アクリジンオレンジ；アクリジンレッド；アクリジンイエロー；アクリフラビン；アクリフラビンフォイルゲンＳＩＴＳＡ；エクオリン（発光タンパク質）；ＡＦＰ−自己蛍光タンパク質−（Ｑｕａｎｔｕｍ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）；ＡＬＥＸＡ  ＦＬＵＯＲ  ３５０（商標）；ＡＬＥＸＡ  ＦＬＵＯＲ  ４３０（商標）；ＡＬＥＸＡ  ＦＬＵＯＲ  ４８８（商標）；ＡＬＥＸＡ  ＦＬＵＯＲ  ５３２（商標）；ＡＬＥＸＡ  ＦＬＵＯＲ  ５４６（商標）；ＡＬＥＸＡ  ＦＬＵＯＲ  ５６８（商標）；ＡＬＥＸＡ  ＦＬＵＯＲ  ５９４（商標）；ＡＬＥＸＡ  ＦＬＵＯＲ  ６３３（商標）；ＡＬＥＸＡ  ＦＬＵＯＲ  ６４７（商標）；ＡＬＥＸＡ  ＦＬＵＯＲ  ６６０（商標）；ＡＬＥＸＡ  ＦＬＵＯＲ  ６８０（商標）；アリザリンコンプレクソン；アリザリンレッド；アロフィコシアニン（ＡＰＣ）；ＡＭＣ、ＡＭＣＡ−Ｓ；ＡＭＣＡ（アミノメチルクマリン）；ＡＭＣＡ−Ｘ；アミノアクチノマイシンＤ；アミノクマリン；アミノメチルクマリン（ＡＭＣＡ）；アニリンブルー；ステアリン酸アントロシル；ＡＰＣ（アロフィコシアニン）；ＡＰＣ−Ｃｙ７；ＡＰＴＲＡ−ＢＴＣ；ＡＰＴＳ；アストラゾンブリリアントレッド４Ｇ；アストラゾンオレンジＲ；アストラゾンレッド６Ｂ；アストラゾンイエロー７  ＧＬＬ；アタブリン；ＡＴＴＯ−ＴＡＧ（商標）ＣＢＱＣＡ；ＡＴＴＯ−ＴＡＧ（商標）ＦＱ；オーラミン；オーロホスフィンＧ；オーロホスフィン；ＢＡＯ  ９（ビスアミノフェニルオキサジアゾール）；ＢＣＥＣＦ（高ｐＨ）；ＢＣＥＣＦ（低ｐＨ）；ベルベリン硫酸；βラクタマーゼ；ビマン；ビスベンズアミド；ビスベンズイミド（Ｈｏｅｃｈｓｔ）；ｂｉｓ−ＢＴＣ；Ｂｌａｎｃｏｐｈｏｒ  ＦＦＧ；ＢｌａｎｃｏｐｈｏｒＳＶ；ＢＯＢＯ（商標）−１；ＢＯＢＯ（商標）−３；Ｂｏｄｉｐｙ４９２／５１５；Ｂｏｄｉｐｙ４９３／５０３；Ｂｏｄｉｐｙ５００／５１０；Ｂｏｄｉｐｙ５０５／５１５；Ｂｏｄｉｐｙ５３０／５５０；Ｂｏｄｉｐｙ５４２／５６３；Ｂｏｄｉｐｙ５５８／５６８；Ｂｏｄｉｐｙ５６４／５７０；Ｂｏｄｉｐｙ５７６／５８９；Ｂｏｄｉｐｙ５８１／５９１；Ｂｏｄｉｐｙ６３０／６５０−Ｘ；Ｂｏｄｉｐｙ６５０／６６５−Ｘ；Ｂｏｄｉｐｙ６６５／６７６；Ｂｏｄｉｐｙ  Ｆｌ；Ｂｏｄｉｐｙ  ＦＬ  ＡＴＰ；Ｂｏｄｉｐｙ  Ｆｌ−セラミド；Ｂｏｄｉｐｙ  Ｒ６Ｇ  ＳＥ；Ｂｏｄｉｐｙ  ＴＭＲ；Ｂｏｄｉｐｙ  ＴＭＲ−Ｘコンジュゲート；Ｂｏｄｉｐｙ  ＴＭＲ−Ｘ、ＳＥ；Ｂｏｄｉｐｙ  ＴＲ；Ｂｏｄｉｐｙ  ＴＲ  ＡＴＰ；Ｂｏｄｉｐｙ  ＴＲ−Ｘ  ＳＥ；ＢＯ−ＰＲＯ（商標）−１；ＢＯ−ＰＲＯ（商標）−３；ブリリアントスルホフラビンＦＦ；ＢＴＣ；ＢＴＣ−５Ｎ；カルセイン；カルセインブルー；ＣＡＬＣＩＵＭ  ＣＲＩＭＳＯＮ（商標）；カルシウムグリーン；カルシウムグリーン−１  Ｃａ２＋染料；カルシウムグリーン−２  Ｃａ２＋；カルシウムグリーン−５Ｎ  Ｃａ２＋；カルシウムグリーン−Ｃ１８  Ｃａ２＋；カルシウムオレンジ；Ｃａｌｃｏｆｌｕｏｒ  Ｗｈｉｔｅ；カルボキシ−Ｘ−ローダミン（５−ＲＯＸ）；カスケードブルー（商標）；カスケードイエロー；カテコールアミン；ＣＣＦ２（ＧｅｎｅＢｌａｚｅｒ）；ＣＦＤＡ；クロロフィル；クロモマイシンＡ；クロモマイシンＡ；ＣＬ−ＮＥＲＦ；ＣＭＦＤＡ；クマリンファロイジン；Ｃ−フィコシアニン；ＣＰＭメチルクマリン；ＣＴＣ；ＣＴＣホルマザン；Ｃｙ２（商標）；Ｃｙ３．１８；Ｃｙ３．５（商標）；Ｃｙ３（商標）；Ｃｙ５．１８；Ｃｙ５．５（商標）；Ｃｙ５（商標）；Ｃｙ７（商標）；サイクリックＡＭＰフルオロセンサー（ＦｉＣＲｈＲ）；ダブシル；ダンシル；ダンシルアミン；ダンシルカダベリン；塩化ダンシル；ダンシルＤＨＰＥ；フッ化ダンシル；ＤＡＰＩ；ダポキシル；ダポキシル２；Ｄａｐｏｘｙｌ  ３’ＤＣＦＤＡ；ＤＣＦＨ（ジクロロジヒドロフルオレセイン二酢酸）；ＤＤＡＯ；ＤＨＲ（ジヒドロローダミン１２３）；Ｄｉ−４−ＡＮＥＰＰＳ；Ｄｉ−８−ＡＮＥＰＰＳ（非比率）；ＤｉＡ（４−Ｄｉ−１６−ＡＳＰ）；ジクロロジヒドロフルオレセインジアセテート（ＤＣＦＨ）；ＤｉＤ親油性トレーサー；ＤｉＤ（ＤｉｌＣ１８（５））；ＤＩＤＳ；ジヒドロローダミン１２３（ＤＨＲ）；Ｄｉｌ（ＤｉｌＣ１８（３））；ジニトロフェノール；ＤｉＯ（ＤｉＯＣ１８（３））；ＤｉＲ；ＤｉＲ（ＤｉｌＣ１８（７））；ＤＭ−ＮＥＲＦ（高ｐＨ）；ＤＮＰ；ドーパミン；ＤＴＡＦ；ＤＹ−６３０−ＮＨＳ；ＤＹ−６３５−ＮＨＳ；ＥＬＦ  ９７；エオシン；エリスロシン；エリスロシンＩＴＣ；臭化エチジウム；エチジウムホモダイマー−１（ＥｔｈＤ−１）；Ｅｕｃｈｒｙｓｉｎ；ＥｕｋｏＬｉｇｈｔ；塩化ユーロピウム（ＩＩＩ）；ＥＹＦＰ；ファストブルー；ＦＤＡ；フォイルゲン（パラロサニリン）；ＦＩＦ（ホルムアルデヒド誘起蛍光）；ＦＩＴＣ；フラゾオレンジ；Ｆｌｕｏ−３；Ｆｌｕｏ−４；フルオレセイン（ＦＩＴＣ）；フルオレセインジアセテート；フルオロエメラルド；フルオロゴールド（ヒドロキシスチルバミジン）；フルオロルビー；ＦｌｕｏｒＸ；ＦＭ  １−４３（商標）；ＦＭ  ４−４６；Ｆｕｒａ  Ｒｅｄ（商標）（高ｐＨ）；Ｆｕｒａ  Ｒｅｄ（商標）／Ｆｌｕｏ−３；Ｆｕｒａ−２；Ｆｕｒａ−２／ＢＣＥＣＦ；ジェンアクリルブリリアントレッドＢ；ジェンアクリルブリリアントイエロー１０��Ｆ；ジェンアクリルピンク３Ｇ；ジェンアクリルイエロー５ＧＦ；ＧｅｎｅＢｌａｚｅｒ（ＣＣＦ２）；グロキサリン酸；グラニュラーブルー；ヘマトポルフィリン；Ｈｏｅｃｈｓｔ  ３３２５８；Ｈｏｅｃｈｓｔ  ３３３４２；Ｈｏｅｃｈｓｔ  ３４５８０；ＨＰＴＳ；ヒドロキシクマリン；ヒドロキシスチルバミジン（フルオロゴールド）；ヒドロキシトリプタミン；Ｉｎｄｏ−１、高カルシウム；Ｉｎｄｏ−１、低カルシウム；インドジカルボシアニン（ＤｉＤ）；インドトリカルボシアニン（ＤｉＲ）；イントラホワイトＣｆ；ＪＣ−１；ＪＯ−ＪＯ−１；ＪＯ−ＰＲＯ−１；ＬａｓｅｒＰｒｏ；Ｌａｕｒｏｄａｎ；ＬＤＳ  ７５１（ＤＮＡ）；ＬＤＳ  ７５１（ＲＮＡ）；Ｌｅｕｃｏｐｈｏｒ  ＰＡＦ；Ｌｅｕｃｏｐｈｏｒ  ＳＦ；Ｌｅｕｃｏｐｈｏｒ  ＷＳ；リサミンローダミン；リサミンローダミンＢ；カルセイン／エチジウムホモダイマー；ＬＯＬＯ−１；ＬＯ−ＰＲＯ−１；ルシファーイエロー；リゾトラッカーブルー；リゾトラッカーブルーホワイト；リゾトラッカーグリーン；リゾトラッカーレッド；リゾトラッカーイエロー；リゾセンサーブルー；リゾセンサーグリーン；リゾセンサーイエロー／ブルー；マググリーン；マグダラレッド（フロキシンＢ）；Ｍａｇ−Ｆｕｒａ  Ｒｅｄ；Ｍａｇ−Ｆｕｒａ−２；Ｍａｇ−Ｆｕｒａ−５；Ｍａｇ−Ｉｎｄｏ−１；マグネシウムグリーン；マグネシウムオレンジ；マラカイトグリーン；マリーナブルー；マキシロンブリリアントフラビン１０  ＧＦＦ；マキシロンブリリアントフラビン８  ＧＦＦ；メロシアニン；メトキシクマリン；ミトトラッカーグリーンＦＭ；ミトトラッカーオレンジ；ミトトラッカーレッド；ミトラマイシン；モノブロモビマン；モノブロモビマン（ｍＢＢｒ−ＧＳＨ）；モノクロロビマン；ＭＰＳ（メチルグリーンピロニンスチルベン）；ＮＢＤ；ＮＢＤアミン；ナイルレッド；ニトロベンゾオキサジドール；ノルアドレナリン；ニュークリアファストレッド；ニュークリアイエロー；ナイロサンブリリアントラビンＥ８Ｇ；オレゴングリーン；オレゴングリーン４８８−Ｘ；Ｏｒｅｇｏｎ  Ｇｒｅｅｎ（商標）；Ｏｒｅｇｏｎ  Ｇｒｅｅｎ（商標）４８８；Ｏｒｅｇｏｎ  Ｇｒｅｅｎ（商標）５００；Ｏｒｅｇｏｎ  Ｇｒｅｅｎ（商標）５１４；パシフィックブルー；パラロサニリン（フォイルゲン）；ＰＢＦＩ；ＰＥ−Ｃｙ５；ＰＥ−Ｃｙ７；ＰｅｒＣＰ；ＰｅｒＣＰ−Ｃｙ５．５；ＰＥ−テキサスレッド［赤色６１３］；フロキシンＢ（マグダラレッド）；Ｐｈｏｒｗｉｔｅ  ＡＲ；Ｐｈｏｒｗｉｔｅ  ＢＫＬ；Ｐｈｏｒｗｉｔｅ  Ｒｅｖ；Ｐｈｏｒｗｉｔｅ  ＲＰＡ；ホスフィン３Ｒ；フォトレジスト；フィコエリスリンＢ［ＰＥ］；フィコエリスリンＲ［ＰＥ］；ＰＫＨ２６（Ｓｉｇｍａ）；ＰＫＨ６７；ＰＭＩＡ；ポントクロームブルーブラック；ＰＯＰＯ−１；ＰＯＰＯ−３；ＰＯ−ＰＲＯ−１；ＰＯ−ＰＲＯ−３；プリムリン；プロシオンイエロー；プロピジウムロジッド（ＰＩ）；ＰｙＭＰＯ；ピレン；ピロニン；ピロニンＢ；Ｐｙｒｏｚａｌブリリアントフラビン７ＧＦ；ＱＳＹ  ７；キナクリンマスタード；赤色６１３［ＰＥ−テキサスレッド］；レゾルフィン；ＲＨ４１４；Ｒｈｏｄ−２；ローダミン；ローダミン１１０；���ーダミン１２３；ローダミン５  ＧＬＤ；ローダミン６Ｇ；ローダミンＢ；ローダミンＢ  ２００；ローダミンＢエキストラ；ローダミンＢＢ；ローダミンＢＧ；ローダミングリーン；ローダミンファリシジン；ローダミンファロイジン；ローダミンレッド；ローダミンＷＴ；ローズベンガル；Ｒ−フィコシアニン；Ｒ−フィコエリスリン（ＰＥ）；Ｓ６５Ａ；Ｓ６５Ｃ；Ｓ６５Ｌ；Ｓ６５Ｔ；ＳＢＦＩ；セロトニン；セブロンブリリアントレッド２Ｂ；セブロンブリリアントレッド４Ｇ；セブロンブリリアントレッドＢ；セブロンオレンジ；セブロンイエローＬ；ＳＩＴＳ；ＳＩＴＳ（プリムリン）；ＳＩＴＳ（スチルベンイソチオスルホン酸）；ＳＮＡＦＬカルセイン；ＳＮＡＦＬ−１；ＳＮＡＦＬ−２；ＳＮＡＲＦカルセイン；ＳＮＡＲＦ１；ナトリウムグリーン；スペクトラムアクア；スペクトラムグリーン；スペクトラムオレンジ；スペクトラムレッド；ＳＰＱ（６−メトキシ−Ｎ−（３−スルホプロピル）キノリニウム）；スチルベン；スルホローダミンＢ  ｃａｎ  Ｃ；スルホローダミンエキストラ；ＳＹＴＯ  １１；ＳＹＴＯ  １２；ＳＹＴＯ  １３；ＳＹＴＯ  １４；ＳＹＴＯ  １５；ＳＹＴＯ  １６；ＳＹＴＯ  １７；ＳＹＴＯ  １８；ＳＹＴＯ  ２０；ＳＹＴＯ  ２１；ＳＹＴＯ  ２２；ＳＹＴＯ  ２３；ＳＹＴＯ  ２４；ＳＹＴＯ  ２５；ＳＹＴＯ  ４０；ＳＹＴＯ  ４１；ＳＹＴＯ  ４２；ＳＹＴＯ  ４３；ＳＹＴＯ  ４４；ＳＹＴＯ  ４５；ＳＹＴＯ  ５９；ＳＹＴＯ  ６０；ＳＹＴＯ  ６１；ＳＹＴＯ  ６２；ＳＹＴＯ  ６３；ＳＹＴＯ  ６４；ＳＹＴＯ  ８０；ＳＹＴＯ  ８１；ＳＹＴＯ  ８２；ＳＹＴＯ  ８３；ＳＹＴＯ  ８４；ＳＹＴＯ  ８５；ＳＹＴＯＸブルー；ＳＹＴＯＸグリーン；ＳＹＴＯＸオレンジ；テトラサイクリン；テトラメチルローダミン（ＴＲＩＴＣ）；ＴＥＸＡＳ  ＲＥＤ（商標）；ＴＥＸＡＳ  ＲＥＤ−Ｘ（商標）コンジュゲート；チアジカルボシアニン（ＤｉＳＣ３）；チアジンレッドＲ；チアゾールオレンジ；チオフラビン５；チオフラビンＳ；チオフラビンＴＣＮ；チオライト；チオゾールオレンジ；チノポールＣＢＳ（Ｃａｌｃｏｆｌｕｏｒ  Ｗｈｉｔｅ）；ＴＭＲ；ＴＯ−ＰＲＯ−１；ＴＯ−ＰＲＯ−３；ＴＯ−ＰＲＯ−５；ＴＯＴＯ−１；ＴＯＴＯ−３；ＴｒｉＣｏｌｏｒ（ＰＥ−Ｃｙ５）；ＴＲＩＴＣ  ＴｅｔｒａｍｅｔｈｙｌＲｏｄａｍｉｎ
ｅｌｓｏＴｈｉｏＣｙａｎａｔｅ；トゥルーブルー；トゥルーレッド；ウルトラライト；ウラニンＢ；Ｕｖｉｔｅｘ  ＳＦＣ；ＷＷ  ７８１；Ｘ−ローダミン；ＸＲＩＴＣ；キシレンオレンジ；Ｙ６６Ｆ；Ｙ６６Ｈ；Ｙ６６Ｗ；ＹＯ−ＰＲＯ−１；ＹＯ−ＰＲＯ−３；ＹＯＹＯ−１；ＹＯＹＯ−３、Ｓｙｂｒグリーン、チアゾールオレンジ（インターキレート色素）又はこれらの組み合わせが含まれるが、これらに限定されない。
【１０５１】
蛍光アクセプター分子は、別の分子の付着を可能にする分子にコンジュゲートしたフルオロフォアであり得る。別の分子への結合を可能にする分子の例は、ＨａｌｏＴａｇである。ＨａｌｏＴａｇに付着して使用される場合又は使用されない場合があり、結果としてＨａｌｏＴａｇリガンドとして説明される場合又は説明されない場合があるフルオロフォアの例は、オレゴングリーン、テトラメチルローダミン（ＴＭＲ）及び非クロロＴＯＭ（ＮＣＴ）である。
【１０５２】
＜６．４  蛍光アクセプターベクター＞
蛍光アクセプターベクターは、蛍光アクセプター融合タンパク質（例えば、ＲＡＧＥポリペプチド及び緑色蛍光タンパク質バリアント、Ｖｅｎｕｓ）及びその縮重ヌクレオチド配列をコードするポリヌクレオチドを含み得るが、これらに限定されない。ポリヌクレオチド及びベクター（例えば、ウイルス性及び非ウイルス性）を産生する方法は、当技術分野で周知である。蛍光融合タンパク質は、他の発現システムを使用して発現させることができ、蛍光ベクターは、単なる例示的な実施形態であることに留意されたい。
【１０５３】
＜６．５  生物発光開始化合物＞
生物発光開始化合物の選択は、生物発光ドナーによって生成される光の波長及び強度に影響を与え得る。
【１０５４】
ＢＲＥＴ技術に適していることが知られている例示的な生物発光開始化合物は、セレンテラジンである。セレンテラジンは、刺胞動物、カイアシ類、毛顎類、有櫛動物、十脚類のエビ、アミ類のエビ、放散虫及びいくつかの魚の分類群で発生する（Ｇｒｅｅｒ  ａｎｄ  Ｓｚａｌａｙ，２００２）。ウミシイタケルシフェラーゼ及びウミシイタケルシフェラーゼのバリアントについて、４１８〜５１２ｎｍの発光をもたらすセレンテラジン類似体及びその機能的誘導体が利用できる（Ｉｎｏｕｙｅ  ｅｔ  ａｌ．，１９９７）。いくつかのセレンテラジン類似体及びその機能的誘導体は、４１８ｎｍ未満の波長で発光し得る。ビスデオキシセレンテラジン（ＤｅｅｐＢｌｕｅＣとしても知られ、コレレンテラジン４００ａとしても知られている）及びその誘導体は、４１８ｎｍ未満の発光及び４１８ｎｍを超える発光を含む発光スペクトルを有する基質の例である。
【１０５５】
生物発光開始化合物には、セレンテラジン及び類似体並びにその機能的誘導体が含まれ得るが、これらに限定されない。セレンテラジンの例示的な誘導体には、セレンテラジン４００ａ、セレンテラジンｃｐ、セレンテラジンｆ、セレンテラジンｆｃｐ、セレンテラジンｈ、セレンテラジンｈｃｐ；セレンテラジンｉｐ、セレンテラジンｎ、セレンテラジンＯ、セレンテラジンｃ、セレンテラジンｃ、セレンテラジンｉ、セレンテラジンｉｃｐ、セレンテラジン２−メチル、ベンジルセレンテラジンビスデオキシセレンテラジン、ＥｎｄｕＲｅｎ、ＶｉｖｉＲｅｎ、ディープブルーセレンテラジン（ＤＢＣ；ＤｅｅｐＢｌｕｅＣ）（米国特許第６，０２０，１９２号明細書、同第５，９６８，７５０号明細書及び同第５，８７４，３０４号明細書においてより詳細に説明される）、フリマジン及びそのバリアントが含まれるが、これらに限定されない。
【１０５６】
一般に、セレンテラジンは、多様な生物発光タンパク質、特にルシフェラーゼの作用を受けると発光することが知られている。有用であるが、非限定的なセレンテラジンは、米国特許出願公開第１０／０５３，４８２号明細書に開示され、その開示は、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。セレンテラジンは、Ｐｒｏｍｅｇａ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ（Ｕ．Ｓ．Ａ．）及びＭｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｐｒｏｂｅｓ，Ｉｎｃ．（Ｕ．Ｓ．Ａ．）から入手できる。セレンテラジンは、例えば、Ｓｈｉｍｏｍｕｒａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｊ．２６１：９１３−２０，１９８９；Ｉｎｏｕｙｅ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍ．２３３：３４９−５３，１９９７；及びＴｅｒａｎｉｓｈｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ａｎａｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．２４９：３７−４３，１９９７に記載のように合成され得る。
【１０５７】
＜６．６  ＢＲＥＴアッセイの実施方法＞
上記のように、本発明は、ＢＲＥＴシステムを使用して、ＲＡＧＥポリペプチドと、生細胞、組織若しくは器官又は生物体内のＡＴ１Ｒポリペプチドとの間の近接性を決定する（すなわち検出、局在化又は定量化する）方法を含む。例えば、ＢＲＥＴシステムを使用して、ＲＡＧＥポリペプチドとＡＴ１Ｒポリペプチドとの近接性及びその近接度を測定することにより、生きている動物を画像化することができる。このアプローチは、基本的な細胞生物学を理解するためのタンパク質間相互作用の研究を促進し、ＲＡＧＥ−ＡＴ１Ｒ複合体のモジュレーターであると特定された候補薬剤のインビボ試験を可能にする。
【１０５８】
例えば、ＢＲＥＴシステムを使用して、生細胞内のＲＡＧＥとＡＴ１Ｒとの近接性を測定及び定量し、投与された候補薬剤が近接性を調整（すなわち増加又は減少）する能力を判断できる。さらに、ＢＲＥＴシステムを使用して、ＲＡＧＥ−ＡＴ１Ｒ複合体を標的とする候補薬剤の効果を測定できる。
【１０５９】
いくつかの実施形態では、ＲＡＧＥポリペプチド及びＡＴ１Ｒポリペプチドのコード領域を利用して開発された上記及び本明細書の他の箇所に記載のベクター構築物で形質導入された細胞株は、その後、適切なマイクロプレートリーダーでの測定又は光学イメージングにより、候補薬剤の存在下及び非存在下でのＲＡＧＥとＡＴ１Ｒとの間の近接性を定量して、前記候補薬剤がＲＡＧＥとＡＴ１Ｒとの間の近接性を調節する（すなわち刺激又は阻害する）かどうかを判定する。当業者に理解されるように、この技術は、インビボでの試験を可能にすることにより、候補薬剤の検証を有意に加速するであろう。
【１０６０】
当業者に理解されるように、そのようなスクリーニングは、細胞培養で行われ得る。好ましくは、スクリーニングされた化合物は、哺乳動物への投与に適している。さらにより好ましくは、スクリーニングされた化合物は、ヒトへの投与に適している。
【１０６１】
＜６．７  ＢＲＥＴキット＞
本発明は、以下：生物発光ドナー（これは、例えば、生物発光ドナー分子ＲＬｕｃ８に融合又は他の方法で連結されたＡＴ１Ｒポリペプチドを含む）；生物発光ドナーを含むベクター；蛍光アクセプター（これは、例えば、蛍光アクセプター分子Ｖｅｎｕｓに融合又は他の方法で連結されたＲＡＧＥポリペプチドを含む）；蛍光アクセプターを含むベクター；生物発光開始化合物；候補薬剤；及び説明書（使用のために書かれた取扱説明書）の２つ以上、３つ以上、４つ以上又は全てを含み得るキットを包含する。したがって、いくつかの実施形態では、生物発光ドナーは、ＡＴ１Ｒポリペプチドを含み、蛍光アクセプターは、ＲＡＧＥポリペプチドを含むであろう。キットは、上記で列挙した成分の様々な組み合わせを宿主細胞又は宿主生物に投与するための、当技術分野で知られている適切な緩衝液及び試薬も含み得る。
【１０６２】
特定の例示的な例として、キットは、生物発光ドナー分子Ｒｌｕｃ８に融合又は他の方法で連結されたＡＴ１Ｒポリペプチドを含む生物発光ドナー；及び蛍光アクセプター分子Ｖｅｎｕｓに融合又は他の方法で連結されたＲＡＧＥポリペプチドを含む蛍光アクセプターを含み得る。
【１０６３】
特定の例示的な例として、ＢＲＥＴアッセイを実施するために、生物発光ドナー及び蛍光アクセプターは、上記で広く説明されているように細胞内で共発現される。強力で飽和可能なＢＲＥＴシグナルの生成は、ＡＴ１ＲポリペプチドとＲＡＧＥポリペプチドとの間の近接性（例えば、１０ｎｍ未満）を示し、ドナーによる細胞透過性セレンテラジン基質の酸化から生じるエネルギーがアクセプターに移動することを可能にし、これは、より長い特性波長で蛍光を発する。したがって、ＡＴ１ＲポリペプチドとＲＡＧＥポリペプチドとの近接性のモジュレーターとしての候補薬剤の同定は、細胞が候補薬剤に曝露された結果としての、標識されたＡＴ１Ｒポリペプチド及び標識されたＲＡＧＥポリペプチドを共発現する細胞によって生成されるＢＲＥＴシグナルの変化（例えば、増加又は減少）に基づいて行われる。具体的には、候補薬剤への曝露に応答して細胞によって生成されるＢＲＥＴシグナルの減少により、薬剤がＲＡＧＥとＡＴ１Ｒとの間の近接の阻害剤であることが特定される。反対に、候補薬剤への曝露に応答して細胞によって生成されるＢＲＥＴシグナルの増加により、薬剤がＲＡＧＥとＡＴ１Ｒとの間の近接の誘導剤であることが特定される。
【１０６４】
＜７．システムの構築＞
本発明によれば、ＲＡＧＥポリペプチドとＡＴ１Ｒポリペプチドとの間の近接性のモジュレーターを同定するための構築物系が提供される。１つの広範な形態では、システムは、ＲＡＧＥポリペプチド及びエネルギードナー分子（例えば、生物発光ドナー分子）をコードする第１の合成構築物；及びＡＴ１Ｒポリペプチド及びエネルギーアクセプター分子（例えば、蛍光アクセプター分子）をコードする第２の合成構築物を含む。別の広範な形態では、システムは、ＡＴ１Ｒポリペプチド及びエネルギードナー分子（例えば、生物発光ドナー分子）をコードする第１の合成構築物；及びＲＡＧＥポリペプチド及びエネルギーアクセプター分子（例えば、蛍光アクセプター分子）をコードする第２の合成構築物を含む。
【１０６５】
本発明の合成構築物は、それぞれ生物発光ドナーコード配列又は蛍光アクセプターコード配列に作動可能に接続された調節配列を含む。調節配列は、適切には、転写及び／又は翻訳制御配列を含み、これらは、目的の細胞又は生物体での発現に適合する。典型的には、転写及び翻訳調節制御配列は、プロモーター配列、５’非コード領域、転写調節タンパク質又は翻訳調節タンパク質の機能的結合部位などのシス調節領域、上流のオープンリーディングフレーム、リボソーム結合配列、転写開始部位、翻訳開始部位及び／又はリーダー配列、終止コドン、翻訳停止部位及び３’非翻訳領域をコードするヌクレオチド配列を含むが、これらに限定されない。当技術分野で知られている構成的又は誘導性プロモーターは、本発明により企図される。プロモーターは、天然に存在するプロモーター又は２つ以上のプロモーターの要素を組み合わせたハイブリッドプロモーターのいずれかであり得る。本発明によって企図されるプロモーター配列は、目的の生物体に固有のものであるか、又は選択された生物体において領域が機能的である代替源に由来し得る。プロモーターの選択は、目的の宿主によって異なる。例えば、植物での発現に使用できるプロモーターには、ＣａＭＶ３５Ｓ植物プロモーター、ＣａＭＶ１９Ｓ植物プロモーター、ＦＭＶ３４Ｓ植物プロモーター、サトウキビ桿菌バドナウイルス植物プロモーター、ＣｓＶＭＶ植物プロモーター、シロイヌナズナＡＣＴ２／ＡＣＴ８アクチン植物プロモーター、シロイヌナズナユビキチンＵＢＱ１植物プロモーター、オオムギ葉チオニンＢＴＨ６植物プロモーター及びコメアクチン植物プロモーターをその例に含む構成的植物プロモーター；マメファゼオリン貯蔵タンパク質植物プロモーター、ＤＬＥＣ植物プロモーター、ＰＨＳβ植物プロモーター、ゼイン貯蔵タンパク質植物プロモーター、ダイズからのコングルチンγ植物プロモーター、ＡＴ２Ｓ１遺伝子植物プロモーター、シロイヌナズナからのＡＣＴ１１アクチン植物プロモーター、セイヨウアブラナからのｎａｐＡ植物プロモーター及びジャガイモパタチン遺伝子植物プロモーターをその例に含む、組織特異的植物プロモーター；並びにエンドウマメｒｂｃＳ遺伝子に由来する光誘導性植物プロモーター、アルファルファｒｂｃＳ遺伝子からの植物プロモーター、干ばつにおいて活発なＤＲＥ、ＭＹＣ及びＭＹＢ植物プロモーターをその例に含む誘導性植物プロモーター；高塩分及び浸透圧ストレスにおいて活性なＩＮＴ、ＩＮＰＳ、ｐｒｘＥａ、Ｈａ  ｈｓｐ１７．７Ｇ４及びＲＤ２１植物プロモーター並びに病原性ストレスにおいて活性なｈｓｒ２０３Ｊ及びｓｔｒ２４６Ｃ植物プロモーターなどの植物プロモーターが含まれる。代わりに、哺乳動物での発現に使用できるプロモーターには、カドミウムなどの重金属に反応して誘導されるメタロチオネインプロモーター、β−アクチンプロモーター及びＳＶ４０ラージＴ抗原プロモーター、ヒトサイトメガロウイルス（ＣＭＶ）即時型（ＩＥ）プロモーター、ラウス肉腫ウイルスＬＴＲプロモーター、アデノウイルスプロモーター又はＨＰＶプロモーターなどのウイルスプロモーターが含まれ、特にＨＰＶ上流調節領域（ＵＲＲ）も使用され得る。これらのプロモータ���は、全て十分に記載されており、当技術分野で容易に入手可能である。
【１０６６】
本発明の合成構築物は、３’非翻訳配列も含み得る。３’非翻訳配列は、ポリアデニル化シグナル及びｍＲＮＡプロセシング又は遺伝子発現をもたらすことができる他の任意の調節シグナルを含有する、ＤＮＡセグメントを含む遺伝子の部分を指す。ポリアデニル化シグナルは、ｍＲＮＡ前駆体の３’末端にポリアデニル酸領域を付加することを特徴とする。ポリアデニル化シグナルは、一般的に、標準形態５’ＡＡＴＡＡＡ−３’との相同性の存在によって認識されるが、変異型は、異常でない。３’非翻訳調節ＤＮＡ配列は、好ましくは、約５０〜１，０００ヌクレオチド塩基対を含み、ポリアデニル化シグナル及びｍＲＮＡプロセシング又は遺伝子発現をもたらすことができる他の任意の調節シグナルに加えて、転写及び翻訳終結配列を含み得る。
【１０６７】
特定の実施形態では、合成構築物は、合成構築物を含有する生物体又はその前駆体の選択を可能にする選択可能マーカー遺伝子をさらに含む。選択遺伝子は、当技術分野で周知であり、目的の細胞若しくは生物又はその前駆細胞若しくは前駆体での発現に適合する。
【１０６８】
いくつかの実施形態では、本発明の合成構築物は、染色体外要素として複製する能力を有する、シミアンウイルス４０（ＳＶ４０）又はウシパピローマウイルス（ＢＰＶ）などのウイルスベクターの形態である（Ｅｕｋａｒｙｏｔｉｃ  Ｖｉｒａｌ  Ｖｅｃｔｏｒｓ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ，Ｇｌｕｚｍａｎ  ｅｄ．，１９８２；Ｓａｒｖｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，１９８１，Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．１：４８６）。ウイルスベクターは、ポリヌクレオチド又は導入遺伝子の発現を細胞に導入及び誘導するために改変された、レトロウイルス（レンチウイルス）、アデノ随伴ウイルス（例えば、Ｏｋａｄａ，１９９６，Ｇｅｎｅ  Ｔｈｅｒ．３：９５７−９６４；Ｍｕｚｙｃｚｋａ，１９９４，Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｓｔ．９４：１３５１；ＡＡＶベクターについて記載する米国特許第６，１５６，３０３号明細書、同第６，１４３，５４８号明細書、同第５，９５２，２２１号明細書を参照されたい；また米国特許第６，００４，７９９号明細書、同第５，８３３，９９３号明細書も参照されたい）、アデノウイルス（例えば、米国特許第６，１４０，０８７号明細書、同第６，１３６，５９４号明細書、同第６，１３３，０２８号明細書、同第６，１２０，７６４号明細書を参照されたい）、レオウイルス、ヘルペスウイルス又はロタウイルスゲノムを含む。レトロウイルスベクターは、マウス白血病ウイルス（例えば、米国特許第６，１３２，７３１号明細書を参照されたい）、テナガザル白血病ウイルス（例えば、米国特許第６，０３３，９０５号明細書を参照されたい）、サル免疫不全ウイルス、ヒト免疫不全ウイルス（例えば、米国特許第５，９８５，６４１号明細書を参照されたい）及びそれらの組み合わせに基づくものを含み得る。
【１０６９】
ベクターは、インビボで動物細胞（例えば、幹細胞）に遺伝子を効率的に送達するものも含む（例えば、米国特許第５，８２１，２３５号明細書及び同第５，７８６，３４０号明細書；Ｃｒｏｙｌｅ  ｅｔ  ａｌ．，１９９８，Ｇｅｎｅ  Ｔｈｅｒ．５：６４５；Ｃｒｏｙｌｅ  ｅｔ  ａｌ．，１９９８，Ｐｈａｒｍ．Ｒｅｓ．１５：１３４８；Ｃｒｏｙｌｅ  ｅｔ  ａｌ．，１９９８，Ｈｕｍ．Ｇｅｎｅ  Ｔｈｅｒ．９：５６１；Ｆｏｒｅｍａｎ  ｅｔ  ａｌ．，１９９８，Ｈｕｍ．Ｇｅｎｅ  Ｔｈｅｒ．９：１３１３；Ｗｉｒｔｚ  ｅｔ  ａｌ．，１９９９，Ｇｕｔ  ４４：８００を参照されたい）。インビボ送達に適したアデノウイルス及びアデノ随伴ウイルスベクターは、例えば、米国特許第５，７００，４７０号明細書、同第５，７３１，１７２号明細書及び同第５，６０４，０９０号明細書に記載される。インビボ送達に適した追加のベクターは、単純ヘルペスウイルスベクター（例えば、米国特許第５，５０１，９７９号明細書を参照されたい）、レトロウイルスベクター（例えば、米国特許第５，６２４，８２０号明細書、同第５，６９３，５０８号明細書及び同第５，６７４，７０３号明細書；並びに国際公開第９２／０５２６６号パンフレット及び国際公開第９２／１４８２９号パンフレットを参照されたい）、ウシパピローマウイルス（ＢＰＶ）ベクター（例えば、米国特許第５，７１９，０５４号明細書を参照されたい）、ＣＭＶベースのベクター（例えば、米国特許第５，５６１，０６３号明細書を参照されたい）及びパルボウイルス、ロタウイルス及びノーウォークウイルスベクターを含む。レンチウイルスベクターは、分裂細胞及び非分裂細胞を感染させるのに有用である（例えば、米国特許第６，０１３，５１６号明細書を参照されたい）。
【１０７０】
昆虫細胞発現のためのベクターは、一般的に、バキュロウイルス及び他の核多角体ウイルスの組換えバリエーション、例えばＢｏｍｂｙｘ  ｍｏｒｉ核多角体ウイルスベクターを使用する（例えば、Ｃｈｏｉ，２０００，Ａｒｃｈ．Ｖｉｒｏｌ．１４５：１７１−１７７を参照されたい）。例えば、鱗翅目及び鞘翅目細胞は、バキュロウイルスを複製するために使用されて、バキュロウイルスによって運ばれる外来遺伝子の発現を促進し、例えば、スポドプテラ・フルギペルダ（Ｓｐｏｄｏｐｔｅｒａ  ｆｒｕｇｉｐｅｒｄａ）細胞は、異種の、例えばヒトの、コード配列を運ぶ組換えオートグラファ・カリフォルニカ（Ａｕｔｏｇｒａｐｈａ  ｃａｌｉｆｏｒｎｉｃａ）核多角体病ウイルス（ＡｃＮＰＶ）に感染している（例えば、Ｌｅｅ，２０００，Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．７４：１１８７３−１１８８０；Ｗｕ，２０００，Ｊ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．８０：７５−８３を参照されたい）。例えば、鱗翅目及び鞘翅目昆虫細胞株のゲノムに核酸を安定して統合するための、寄生性スズメバチＧｌｙｐｔａｐａｎｔｅｌｅｓ  ｉｎｄｉｅｎｓｉｓのポリドナウイルスの使用を説明する米国特許第６，１４３，５６５号明細書を参照されたい。米国特許第６，１３０，０７４号明細書；同第５，８５８，３５３号明細書；同第５，００４，６８７号明細書も参照されたい。
【１０７１】
本発明は、本発明の合成構築物を含有する細胞をさらに企図する。これに関して、本発明の構築物系は、原核生物及び真核生物の宿主細胞に適用可能であり、例えば単細胞生物並びに限定されないが、酵母、植物及び哺乳類、爬虫類、魚類及び鳥類などの脊椎動物及び後生動物、海綿、蠕虫、軟体動物、線虫、甲殻類及び棘皮動物などの無脊椎動物を含む動物などの多細胞生物に由来する細胞を含むことが理解されるであろう。特定の実施形態では、構築物系を使用して、植物細胞又は動物細胞における異なる同義コドンの翻訳効率を決定するか、又はＲＡＧＥポリペプチドとＡＴ１Ｒポリペプチドとの間の近接性を調節する候補薬剤の能力を決定する。
【１０７２】
真核生物の例示的な例は、アスペルギルス（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ）、トリコデルマ（Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ）及びニューロスポラ（Ｎｅｕｒｏｓｐｏｒａ）の種を含む、酵母及び糸状菌などの真菌；例示的な例として魚類（例えば、サーモン、マス、ティラピア、マグロ、コイ、カレイ、オヒョウ、メカジキ、タラ及びゼブラフィッシュ）、鳥類（例えば、ニワトリ、アヒル、ウズラ、キジ及びシチメンチョウ並びに他の野鳥又は狩猟鳥）及び哺乳動物（例えば、イヌ、ネコ、ウマ、ウシ、水牛、シカ、ヒツジ、ウサギ並びにマウス、ラット、ハムスター及びモルモットなどのげっ歯類、ヤギ、ブタ、霊長類、イルカ及びクジラなどの海洋哺乳類並びに任意の組織又は幹細胞タイプのヒト又は他の哺乳動物細胞株（例えば、ＣＯＳ、ＮＩＨ  ３Ｔ３  ＣＨＯ、ＢＨＫ、ＨＥＫ２９３又はＨｅＬａ細胞）などの細胞株、並びに多能性及び非多能性及び胚性幹細胞を含む幹細胞、並びに非ヒト受精卵）、並びに例示的な例として線虫（代表的な属には、限定されないが、鉤虫属（Ａｎｃｙｌｏｓｔｏｍａ）、鶏回虫属（Ａｓｃａｒｉｄｉａ）、回虫属（Ａｓｃａｒｉｓ）、ブノストムム属（Ｂｕｎｏｓｔｏｍｕｍ）、線虫属（Ｃａｅｎｏｒｈａｂｄｉｔｉｓ）、毛細線虫属（Ｃａｐｉｌｌａｒｉａ）、シャベルティア属（Ｃｈａｂｅｒｔｉａ）、クーペリア属（Ｃｏｏｐｅｒｉａ）、ディクチオカウルス属（Ｄｉｃｔｙｏｃａｕｌｕｓ）、捻転胃虫属（Ｈａｅｒｎｏｎｃｈｕｓ）、ヘテラキス属（Ｈｅｔｅｒａｋｉｓ）、ネマトジルス属（Ｎｅｍａｔｏｄｉｒｕｓ）、腸結節虫属（Ｏｅｓｏｐｈａｇｏｓｔｏｍｕｍ）、オステルタギア属（Ｏｓｔｅｒｔａｇｉａ）、蟯虫属（Ｏｘｙｕｒｉｓ）、パラスカリス属（Ｐａｒａｓｃａｒｉｓ）、円虫属（Ｓｔｒｏｎｇｙｌｕｓ）、トキサスカリス属（Ｔｏｘａｓｃａｒｉｓ）、鞭虫属（Ｔｒｉｃｈｕｒｉｓ）、毛様線虫属（Ｔｒｉｃｈｏｓｔｒｏｎｇｙｌｕｓ）、トフリコネマ属（Ｔｆｌｉｃｈｏｎｅｍａ）、トキソカラ属（Ｔｏｘｏｃａｒａ）、ウンシナリア属（Ｕｎｃｉｎａｒｉａ）など、動物に感染するもの、並びに限定されないが、ブルサファレンクス属（Ｂｕｒｓａｐｈａｌｅｎｃｈｕｓ）、クリコネリエラ属（Ｃｒｉｃｏｎｅｒｒｉｅｌｌａ）、ジイレンクス属（Ｄｉｉｙｌｅｎｃｈｕｓ）、クキセンチュウ属（Ｄｉｔｙｌｅｎｃｈｕｓ）、シストセンチュウ属（Ｇｌｏｂｏｄｅｒａ）、ラセンセンチュウ属（Ｈｅｌｉｃｏｔｙｌｅｎｃｈｕｓ）、ヘテロデラ属（Ｈｅｔｅｒｏｄｅｒａ）、ロンジドルス属（Ｌｏｎｇｉｄｏｒｕｓ）、メロドイジン属（Ｍｅｌｏｄｏｉｇｙｎｅ）、ナコブス属（Ｎａｃｏｂｂｕｓ）、ピンセンチュウ属（Ｐａｒａｔｙｌｅｎｃｈｕｓ）、ネグサレセンチュウ属（Ｐｒａｔｙｌｅｎｃｈｕｓ）、ネモグリセンチュウ属（Ｒａｄｏｐｈｏｌｕｓ）、ロテリンクス属（Ｒｏｔｅｌｙｎｃｈｕｓ）、ハリセンチュウ属（Ｔｙｌｅｎｃｈｕｓ）及びキシフィネルナ属（Ｘｉｐｈｉｎｅｒｎａ）などの植物に感染するものが含まれる）を含む無脊椎動物並びに他の蠕虫、ショウジョウバエ及び他の昆虫（ミツバチ科（Ａｐｉｄａｅ）、ゾウムシ科（Ｃｕｒｃｕｌｉｏｎｉｄａｅ）、コガネムシ科（Ｓｃａｒａｂａｅｉｄａｅ）、ミバエ科（Ｔｅｐｈｒｉｔ��ｄａｅ）、ハマキガ科（Ｔｏｒｔｒｉｃｉｄａｅ）からものなど、その代表的な目は、甲虫目（Ｃｏｌｅｏｐｔｅｒａ）、双翅目（Ｄｉｐｔｅｒａ）、鱗翅目（Ｌｅｐｉｄｏｐｔｅｒａ）及び単翅目（Ｈｏｍｏｐｔｅｒａ）が含まれる）を含む、脊椎動物を含む動物宿主を含むが、これらに限定されない。
【１０７３】
本発明の合成構築物は、エクスビボで直接又は細胞培養で目的の細胞に導入され得る。本発明の合成構築物は、任意の適切な方法を使用して目的の細胞に導入され得、使用される方法の種類は、目的の企図される細胞タイプに応じて異なる。例えば、核酸分子を細胞に送達するための方法について、４つの一般的なクラス：（１）リン酸カルシウム沈殿、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）媒介沈殿及びリポフェクションなどの化学的方法；（２）マイクロインジェクション、エレクトロポレーション、加速法、真空浸透などの物理的方法；（３）細菌及びウイルスベクター媒介形質転換などのベクターベースの方法；及び（４）受容体媒介が説明されている。これらのクラス及び他のクラスに含まれる形質転換技術は、当業者に周知であり、新しい技術が継続的に知られている。形質転換技術の特定の選択は、特定の宿主種を形質転換する効率及び特定の選択方法論により本発明を実施する人の経験及び選好によって決定される。本発明の合成構築物を細胞に導入する形質転換システムの特定の選択は、許容されるレベルの核酸導入を達成する限り、本発明にとって必須又は制限とはならないことは、当業者に明らかであろう。したがって、合成構築物は、ウイルス感染、ファージ感染、マイクロインジェクション、エレクトロポレーション又は小胞の融合、リポフェクション、アグロバクテリウム・ツメファシエンス（Ａｇｒｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｔｕｍｅｆａｃｉｅｎｓ）又はアグロバクテリウム・リゾゲネス（Ａ．ｒｈｉｚｏｇｅｎｅｓ）による感染又はプロトプラスト融合を含む任意の数の経路によって組織又は宿主細胞に導入される。ジェット注射も筋肉内投与に使用され得る（例えば、Ｆｕｒｔｈ  ｅｔ  ａｌ．，１９９２，Ａｎａｌ  Ｂｉｏｃｈｅｍ  ２０５：３６５−３６８に記載される通り）。合成構築物を微小発射体上にコーティングし、粒子衝撃装置又は「遺伝子銃」により宿主細胞又は組織に送達することができる（例えば、Ｔａｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，１９９２，Ｎａｔｕｒｅ  ３５６：１５２−１５４を参照されたい）。代わりに、合成構築物は、宿主生物に直接供給するか若しくは注入することができるか、又は細胞に（すなわち細胞内に）導入され得るか、又は細胞外で空洞、間質空間、生物体の循環中に導入され得るか、又は経口的に導入され得る。経口導入の方法には、合成構築物と生物体の食物との直接混合が含まれる。特定の実施形態では、流体力学的核酸投与プロトコルが使用される（例えば、Ｃｈａｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，２００１，Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．７５：３４６９−３４７３；Ｌｉｕ  ｅｔ  ａｌ．，１９９９，Ｇｅｎｅ  Ｔｈｅｒ．６：１２５８−１２６６；Ｗｏｌｆｆ  ｅｔ  ａｌ．，１９９０，Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２４７：１４６５−１４６８；Ｚｈａｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，１９９９，Ｈｕｍ．Ｇｅｎｅ  Ｔｈｅｒ．１０：１７３５−１７３７；及びＺｈａｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，１９９９，Ｇｅｎｅ  Ｔｈｅｒ．７：１３４４−１３４９を参照されたい）。核酸送達の他の方法には、リポソーム媒介転移、ネイキッドＤＮＡ送達（直接注射）及び受容体媒介転移（リガンド−ＤＮＡ複合体）が含まれるが、これらに限定されない。
【１０７４】
＜８．ＲＡＧＥの活性化により媒介される下流シグナル伝達を検出するアッセイ＞
ＲＡＧＥの活性化は、特定の細胞タイプ、その状態及び刺激の持続時間に応じて、細胞機能の特定の側面に関与する多くの細胞内シグナル伝達経路を引き起こすことが知られている。これらのシグナル伝達経路は、ＮＡＤＰＨオキシダーゼを介したＲＯＳの生成及び細胞外シグナル調節キナーゼ１／２（ＥＲＫ１／２）、ストレス活性化タンパク質キナーゼ（ＳＡＰＫ）／ｃ−Ｊｕｎ  Ｎ末端キナーゼ（ＪＮＫ）、タンパク質キナーゼＣ（ＰＫＣ）、ｐ３８−ＭＡＰキナーゼ；Ｒｈｏキナーゼ（Ｒｈｏ）、ＡＭＰキナーゼ（ＡＭＰＫ）、ホスホイノシチド３キナーゼ／Ａｋｔ（ＰＩ３Ｋ／Ａｋｔ）；ヤヌス活性化キナーゼ（ＪＡＫ）／シグナル伝達性転写因子（ＳＴＡＴ）；グリコーゲンシンターゼキナーゼ３β（ＧＳＫ３β）（Ｂａｔｋｕｌｗａｒ  ＫＢ  ｅｔ  ａｌ  ２０１５）など、マイトジェン活性化プロテインキナーゼ（ＭＡＰＫ）を含む様々なキナーゼの活性化によって活性化される。これらのキナーゼは、下流のシグナル伝達分子をリン酸化し、転写因子核因子カッパＢ（ＮＦ−κＢ）、ｅｇｒ１及び特異性タンパク質１（ＳＰ１）の活性化を介して特定の細胞応答を引き起こし、それにより、炎症、細胞運動、接着及び構造を含む特定の細胞プロセスを調節する。
【１０７５】
ＲＡＧＥの活性化後のＲＯＳの生成は、ＲＯＳ自体を検出するアッセイ（ＲＯＳによるプローブの修飾及びその付加物の検出）、内因性又は合成基質上でＲＯＳによって誘導される修飾の測定又はそれらに起因するシグナル伝達経路の誘導によって測定することができる。
【１０７６】
ＲＡＧＥの活性化後のこれらの特定の下流シグナルは、これらのキナーゼの活性化を検出するアッセイ（すなわちキナーゼ活性アッセイ）、キナーゼ活性の合成又は内因性標的のリン酸化又は転写因子の下流誘導（例えば、ＮＦκＢ、ＡＰ−１、ＥＧＲ−１）、遺伝子発現、タンパク質発現の変化又はそれらに起因する細胞機能／表現型の変化によって測定することができる。
【１０７７】
＜９．医薬組成物＞
一般的に、ＡＴ１Ｒなどのアンジオテンシン受容体など、特定の活性化された共存ＧＰＣＲ又はＣＣＲ２などの特定のケモカイン受容体によるＲＡＧＥリガンド非依存性のＲＡＧＥ活性化のモジュレーターとして、したがって、治療可能性を有するものとして選択された候補薬剤を同定するにあたり、薬剤は、薬学的に許容される担体、賦形剤及び／又は安定剤を任意選択により含む医薬組成物の形態で製造される（Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ  １６ｔｈ  ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｏｓｏｌ，Ａ．Ｅｄ．（１９８０））。これらの組成物は、一般に、凍結乾燥製剤又は水性溶液の形態である。抗体結晶も企図される（米国特許出願公開第２００２／０１３６７１９号明細書を参照されたい）。許容される担体、賦形剤又は安定剤は、使用される投与量及び濃度でレシピエントに無害であり、リン酸、クエン酸、他の有機酸などの緩衝剤；アスコルビン酸及びメチオニンを含む抗酸化剤；防腐剤（塩化オクタデシルジメチルベンジルアンモニウム、塩化ヘキサメトニウム、塩化ベンザルコニウム、塩化ベンゼトニウム、フェノール、ブチル又はベンジルアルコール、メチル又はプロピルパラベンなどのアルキルパラベン、カテコール、レゾルシノール、シクロヘキサノール、３−ペンタノール及びｍ−クレゾールなど）；低分子量（約１０残基未満）ポリペプチド；血清アルブミン、ゼラチン、免疫グロブリンなどのタンパク質；ポリビニルピロリドンなどの親水性ポリマー；グリシン、グルタミン、アスパラギン、ヒスチジン、アルギニン、リジンなどのアミノ酸；単糖類、二糖類及びグルコース、マンノース又はデキストリンを含む他の炭水化物；ＥＤＴＡなどのキレート剤；スクロース、マンニトール、トレハロース又はソルビトールなどの糖；ナトリウムなどの塩を形成する対イオン；金属錯体（例えば、Ｚｎ−タンパク質錯体）；及び／又はＴＷＥＥＮ（商標）、ＰＬＵＲＯＮＩＣＳ（商標）、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）などの非イオン性界面活性剤を含む。凍結乾燥された抗体製剤は、国際公開第９７／０４８０１号パンフレットに記載されている。
【１０７８】
医薬組成物は、処置される特定の適応症に必要な活性化合物、望ましくは互いに悪影響を及ぼさない相補的活性を有するものを含む。そのような分子は、適切には、意図する目的に有効な量で組み合わされて存在する。
【１０７９】
活性成分はまた、例えば、コアセルベーション技術又は界面重合により調製されたマイクロカプセル、例えばそれぞれコロイド状薬物送達システム（例えば、リポソーム、アルブミンミクロスフェア、マイクロエマルジョン、ナノ粒子及びナノカプセル）中又はマクロエマルジョン中のヒドロキシメチルセルロース又はゼラチン−マイクロカプセル及びポリ−（メチルメタクリレート）マイクロカプセルに封入され得る。そのような技術は、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ  １６ｔｈ  ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｏｓｏｌ，Ａ．Ｅｄ．（１９８０）に開示されている。
【１０８０】
徐放性製剤が調製され得る。徐放性調製物の適切な例には、抗体を含有する固体疎水性ポリマーの半透性マトリックスが含まれ、そのマトリックスは、成形品、例えばフィルム又はマイクロカプセルの形態である。徐放性マトリックスの例には、ポリエステル、ハイドロゲル（例えば、ポリ（２−ヒドロキシエチル−メタクリレート）又はポリ（ビニルアルコール））、ポリラクチド（米国特許第３，７７３，９１９号明細書）、Ｌ−グルタミン酸とγ−エチル−Ｌ−グルタミン酸のコポリマー、非分解性エチレン−酢酸ビニル、分解性乳酸−グリコール酸共重合体、ＬＵＰＲＯＮ  ＤＥＰＯＴ（商標）（乳酸−グリコール酸共重合体及び酢酸ロイプロリドで構成される注射用ミクロスフェア）、ポリ−Ｄ−（−）−３−ヒドロキシ酪酸が含まれる。
【１０８１】
いくつかの実施形態では、意図する投与方式に応じて、組成物は、一般に、約０．０００００１重量％〜９０重量％、約０．０００１重量％〜５０重量％又は約０．０１重量％〜約２５重量％のモジュレーターを含有し、残りは、適切な薬学的担体、希釈剤又は賦形剤である。モジュレーターの投与量は、投与方法、影響を受ける対象の種、年齢、性別、体重及び一般的な健康状態などの様々な要因に依存し得、当業者は、標準的なプロトコルを使用して容易に決定することができる。投与量は、モジュレーターのその結合パートナー（すなわちＡＴ１Ｒ及び／又はＲＡＧＥなどの共存ＧＰＣＲ）への結合親和性、そのバイオアベイラビリティ及びそのインビボ及び薬物動態特性も考慮する。これに関し、投与のための薬剤の正確な量は、施術者の判断にも依存し得る。心血管代謝性疾患及び／又は状態の処置又は予防において投与される薬剤の有効量を決定する際、医師又は獣医は、経時的な疾患又は状態の進行を評価し得る。いずれの事象においても、当業者は、過度の実験を行うことなく、本発明の薬剤の適切な投与量を容易に決定し得る。患者に投与される活性物質の投与量は、患者の経時的な有益な反応並びに／又は心代謝性疾患及び／若しくは状態の処置及び／若しくは予防をもたらすのに十分であるべきである。用量は、心臓代謝性疾患及び／又は状態の症状を改善するために適切な間隔で投与され得る。そのような間隔は、当業者に知られている日常的な手順を使用して確認することができ、使用される活性薬剤のタイプ及びその製剤に応じて変化し得る。例えば、間隔は、毎日、隔日、毎週、隔週、毎月、隔月、四半期ごと、半年ごと又は毎年である。
【１０８２】
本発明の方法を用いて同定された任意のモジュレーターについて、治療有効用量は、最初に細胞培養アッセイから推定することができる。例えば、細胞培養で決定されるＩＣ５０を含む血中濃度範囲（例えば、ＡＴ１Ｒなどのアンジオテンシン受容体又はＣＣＲ２などの特定のケモカイン受容体など、活性化された共存ＧＰＣＲによるＲＡＧＥリガンド非依存性のＲＡＧＥ活性化の最大阻害の半分を達成するモジュレーターの濃度）を達成するために、動物モデルで用量を処方し得る。このような情報は、ヒトを含む哺乳動物における有用な用量をより正確に決定するために使用できる。
【１０８３】
投与量及び間隔は、治療効果を維持するのに十分な活性剤の血漿レベルを提供するために個別に調整され得る。全身投与のための通常の患者の投与量は、１〜２０００ｍｇ／日、一般的には１〜２５０ｍｇ／日及び典型的には１０〜１５０ｍｇ／日である。患者の体重の観点から、通常の投与量は、０．０２〜２５ｍｇ／ｋｇ／日、一般的には０．０２〜３ｍｇ／ｋｇ／日、典型的には．２〜１．５ｍｇ／ｋｇ／日の範囲である。患者の体表面積の観点からは、通常の投与量は、０．５〜１２００ｍｇ／ｍ２／日、一般的には０．５〜１５０ｍｇ／ｍ２／日、典型的には５〜１００ｍｇ／ｍ２／日の範囲である。
【１０８４】
モジュレーターは、対象の心代謝性疾患及び／又は状態の症状を処置若しくは改善するか、又はその発生若しくは進行を逆転又は阻害する少なくとも１つの補助療法と同時に投与され得る。モジュレーターは、補助療法後に治療的に使用され得、療法が投与される前に又は療法と共に使用され得る。したがって、本発明は、モジュレーター及び補助療法（例えば、医学的処置）の同時投与を使用する併用療法を企図し、その非限定的な例には、利尿剤、βブロッカー、α阻害剤、ＡＣＥ阻害剤及びアンジオテンシン受容体ブロッカーが含まれる。
【１０８５】
本発明を容易に理解し、実際の効果をもたらすために、特定の好ましい実施形態を以下の非限定的な例により説明する。
【実施例】
【１０８６】
以下の実施例１〜２１のそれぞれでは、独立して、文脈がそうでないことを要しない限り、以下の一般的な材料及び方法が適用される。
【１０８７】
＜動物モデル＞
Ｃ５７ｂｌ６マウス、ＡＧＥＲノックアウト（ＫＯ）マウス、ａｐｏＥ−ＫＯマウス、ＡＧＥＲ／ａｐｏＥダブルノックアウト（ＤＫＯ）、Ａｃｅ２／ａｐｏＥ−ＤＫＯ及びＡＧＥＲ／Ａｃｅ２／ａｐｏＥトリプルノックアウト（ＴＫＯ）マウスは、ＡＭＰＲＥＰアニマルハウスにおいて、社内で調達及び生成した。全てのマウスはＣ５７ｂｌ６バックグラウンドで飼育された。実験研究では、６〜８週齢で体重２０〜２５ｇの雄性マウスを使用し、インビボ研究では１群あたり少なくとも８匹、エクスビボ研究ではｎ＝６／群であった。研究を通して、動物はマウス飼料及び水への自由なアクセスが与えられていた。全ての実験は、Ａｌｆｒｅｄ  Ｍｅｄｉｃａｌ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｐｒｅｃｉｎｃｔの動物倫理委員会によって承認され、米国国立衛生研究所によって公開された実験動物の管理と使用に関するガイド（Ｇｕｉｄｅ  ｆｏｒ  ｔｈｅ  Ｃａｒｅ  ａｎｄ  Ｕｓｅ  ｏｆ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ａｎｉｍａｌｓ）（ＮＩＨ  Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ  Ｎｏ．８５−２３、１９９６年改訂版）に従って実施された。
【１０８８】
＜大動脈プラーク面積定量方法＞
マウスから大動脈弓を取り除き、過剰な脂肪を取り、１０％中性緩衝ホルマリンに入れ、続いてＳｕｄａｎ  ＩＶ−ハークスハイマー溶液（０．５％ｗ／ｖｏｌ；Ｇｕｒｒ、ＢＤＨ  Ｌｉｍｉｔｅｄ、Ｐｏｏｌｅ、ＵＫ）で染色した。その後、大動脈を縦方向に切開し、ワックスパッドにピンで平らに固定した。大動脈弓を横切るプラーク蓄積を、赤く染色された面積の割合として定量化した。
【１０８９】
＜定量的リアルタイムＰＣＲによる炎症促進性メディエーターの大動脈発現＞
各研究期間の終わりに、胸部及び腹部大動脈をＴＲＩＺＯＬに入れ、急速凍結し、−８０℃で保存した。ＲＮＡ抽出及びｃＤＮＡ合成は、トリゾール法を使用して大動脈ホモジネートで行われた。接着分子、サイトカイン、炎症性、酸化ストレス及びマクロファージマーカーを含む、アテローム形成促進メディエーターの遺伝子発現は、大動脈ホモジネートにおいて、蓄積性蛍光のリアルタイム検出に基づいたＴａｑＭａｎシステムを使用して実行された定量的リアルタイムＲＴ−ＰＣＲによって推定された（ＡＢＩ  Ｐｒｉｓｍ  ７７００、Ｐｅｒｋｉｎ−Ｅｌｍｅｒ  Ｉｎｃ、ＰＥ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ，Ｆｏｓｔｅｒ  Ｃｉｔｙ、ＣＡ、ＵＳＡ）。遺伝子発現は１８Ｓ  ｍＲＮＡに正規化され、未処置対照マウス／細胞の発現レベル（１の任意値とした）と比較した倍率変化として報告された。
【１０９０】
＜酸化ストレスの誘導＞
各動物モデルにおける酸化ストレスの誘導は、ＯｘｉＳｅｌｅｃｔ  Ｏｘｉｄａｔｉｖｅ  ＤＮＡ  Ｄａｍａｇｅ  ＥＬＩＳＡキット（８−ＯＨｄＧ定量；Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌａｂｓ，Ｉｎｃ）を使用して、８−ヒドロキシデオキシグアノシンの血漿レベルを測定することにより推定され、製造元の指示に従って実施された。さらに、スーパーオキシド産生ＮＡＤＰＨオキシダーゼサブユニット、ＮＯＸ−１及びＮＯＸ−４の遺伝子発現は、上記のようにリアルタイムＲＴ−ＰＣＲを使用してマウスの大動脈で定量された。
【１０９１】
＜ＲＡＧＥリガンドの血中濃度＞
ＲＡＧＥリガンドの循環レベルにおける変化を動物モデルで評価した。Ｓ１００Ａ８／Ａ９レベルは、製造元の取扱説明書に従って実行したＥＬＩＳＡ（Ｉｍｍｕｎｄｉａｇｎｏｓｔｉｋ、ドイツ）によって推定された。血漿ＡＧＥは自社のＥＬＩＳＡによって測定された。ＡＧＥの反応性前駆体である血漿メチルグリオキサールをＨＰＬＣで測定した。
【１０９２】
＜収縮期血圧測定＞
収縮期血圧は、コンピューター化された非侵襲性のテールカフシステム（Ｋｅｎｔ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、ＵＳＡ）を使用して、事前に温めた意識のあるマウスのテールカフプレチスモグラフィーで測定した。正確な測定を保証するために、圧力を測定する前に動物を装置に慣れさせた。
【１０９３】
＜インビトロ研究＞
＜細胞培養＞
一次大動脈内皮細胞（ＰＭＡＥＣ）は、（野生型）Ｃ５７ｂｌ６マウス及びＡＧＥＲ−ＫＯマウスの大動脈から分離され、ダルベッコ改良イーグル培地（ＤＭＥＭ）／Ｆ１２内皮細胞増殖サプリメント（ＥＣＧＳ）補充培地で培養された。チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞を、Ｆ１２培地（２ｍＭグルタミンを含む１０％ＦＣＳ）を使用して培養した。ヒト微小血管内皮細胞（ＨＭＥＣ）をＭＣＤＢ１３１培地（１０ｍＭグルタミン、ＥＧＦ及びヒドロコルチゾンを含む１０％ＦＣＳ）で培養した。
【１０９４】
＜トランスジェニックチャイニーズハムスター卵巣細胞の生成＞
Ｌｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅ２０００（Ｔｈｅｒｍｏ）を使用して、１００ｎｇのＡＴ１Ｒ−Ｒｌｕｃ８構築物をＣＨＯ細胞に形質導入した。Ｇ４１８を使用して安定トランスフェクタントを選択した。次いで、ＡＴ１Ｒ−ＣＨＯは、Ｌｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅ２０００（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）を使用して、ＲＡＧＥ構築物を一時的に形質導入し、１６時間インキュベートした。ヒト（Ｈｏｍｏ  ｓａｐｉｅｎｓ）ＡＧＥＲ転写バリアント１コード配列（ＮＭ＿００１１３６）を合成し、ｐＣＩｎｅｏ（Ｐｒｏｍｅｇａ）のＮｈｅＩ及びＸｂａＩ部位間でクローニングして、ベクターｐＣＩｎｅｏ−ＲＡＧＥを生成した。次いで、このプラスミドを使用して、変異体ＡＧＥＲクローンのライブラリ（ＮＰ＿００１１２７）を生成した。プライマー１−ＲＡＧＥ−ＳＰ−５’及びｍＣｈｅｒｒｙ−ＸｈｏＩ−ＮｏｔＩ−３’を使用して、ベクターｐｍＣｈｅｒｒｙ−Ｃ１からｍＣｈｅｒｒｙのコード配列を増幅した。次いで、得られたＰＣＲ産物を、プライマー２−ＲＡＧＥ−ＳＰ−５’及びｍＣｈｅｒｒｙ−ＸｈｏＩ−ＮｏｔＩ−３’を使用した第２のＰＣＲのテンプレートとして使用した。生成したＰＣＲ産物はＮｈｅＩ及びＮｏｔＩで消化され、ｐＣＩｎｅｏのＮｈｅＩ及びＮｏｔＩ部位間に挿入されて、ｐＣＩｎｅｏ−ＳＰ−ｍＣｈｅｒｒｙを生成した。挿入物の配列は、ＤＮＡ配列決定（Ｍｉｃｒｏｍｏｎ、Ｍｏｎａｓｈ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ）により確認された。トランケート型ＲＡＧＥ構築物について、プライマー１−ＲＡＧＥ−ＳＰ−５’及びｍＣｈｅｒｒｙ−ＸｈｏＩ−ＮｏｔＩ−３’を使用して、ベクターｐｍＣｈｅｒｒｙ−Ｃ１からｍＣｈｅｒｒｙのコード配列を増幅した。次いで、得られたＰＣＲ産物を、プライマー２−ＲＡＧＥ−ＳＰ−５’及びｍＣｈｅｒｒｙ−ＸｈｏＩ−ＮｏｔＩ−３’を使用した第２のＰＣＲのテンプレートとして使用した。生成したＰＣＲ産物はＮｈｅＩ及びＮｏｔＩで消化され、ｐＣＩｎｅｏのＮｈｅＩ及びＮｏｔＩ部位間に挿入されて、ｐＣＩｎｅｏ−ＳＰ−ｍＣｈｅｒｒｙを生成した。挿入物の配列は、ＤＮＡ配列決定（Ｍｉｃｒｏｍｏｎ、Ｍｏｎａｓｈ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ）により確認された。
【１０９５】
＜定量的リアルタイムＰＣＲによる炎症促進性マーカー及びメディエーターの細胞発現＞
Ａｎｇ  ＩＩ（１μＭ）又はＲＡＧＥリガンドへの２時間の曝露後、Ｓ１００Ａ８／Ａ９（５ｎｇ／ｍＬ）細胞をＴｒｉｚｏｌに入れ、ｍＲＮＡを抽出し、ｃＤＮＡを合成した。ＮＦκＢサブユニットｐ６５（ＲｅｌＡ）又はＮＦκＢ活性化標的遺伝子（例えば、ＩＣＡＭ−１、ＶＣＡＭ−１）の遺伝子発現の変化は、蓄積性蛍光のリアルタイム検出に基づいたＴａｑＭａｎシステムを使用して実行された定量的リアルタイムＲＴ−ＰＣＲによって推定された（ＡＢＩ  Ｐｒｉｓｍ  ７７００、Ｐｅｒｋｉｎ−Ｅｌｍｅｒ  Ｉｎｃ、ＰＥ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ，Ｆｏｓｔｅｒ  Ｃｉｔｙ、ＣＡ、ＵＳＡ）。遺伝子発現は１８  ＳｍＲＮＡに正規化され、未処置対照マウス／細胞の発現レベル（１の任意値とした）と比較した倍率変化として報告された。
【１０９６】
＜ｓｉＲＮＡを使用した遺伝子発現の選択的サイレンシング＞
Ｃ５７ｂｌ６マウスのＰＭＡＥＣも、製造元の取扱説明書に従ってＬｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅ  ＲＮＡｉＭＡＸ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）を使用して、ｓｉＲＮＡで、ＲＡＧＥ（２ｎＭ）Ａｍｂｉｏｎ、ＩＤ：ｓ６２１１９）、ｐ６５（ＲｅｌＡ）（１０ｎＭ；Ａｍｂｉｏｎ、ＩＤ：ｓ７２８５７）、ＭｙＤ８８（１０ｎＭ；Ａｍｂｉｏｎ、ＩＤ：ｓ２０１７１９）、ＰＫＣζ（１０ｎＭ；Ａｍｂｉｏｎ、ＩＤ：ｓ７１７１６）、ＩＱＧＡＰ−１  、Ａｍｂｉｏｎ、ＩＤ：ｓ７８１１９）、Ｄｉａｐｈ１（１０ｎＭ；センス５’−ＵＡＣＡＧＡＧＧＡＡＧＣＵＧＡＵＡＵＵＧＡＡＧＣＣ、アンチセンス３’−ＧＧＣＵＵＣＡＡＵＡＵＣＡＧＣＵＵＣＣＵＣＵＧＵＡ；Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）又はスクランブル対照＃１（２ｎＭ又は１０ｎＭ；Ａｍｂｉｏｎ）に形質導入した。シグナル伝達対照として、１μＭ  Ａｎｇ  ＩＩ又は５ｎｇ／ｍｌのＲＡＧＥリガンド、Ｓ１００Ａ８／Ａ９で処置する前に、１０％ＦＢＳを含有する培地で細胞を１６時間回復させた。
【１０９７】
＜ペプチドの生成＞
オリゴペプチド（Ｃｈｅｒｒｙ−ＴＡＴ（対照）、ｍＣｈｅｒｒｙ−ＴＡＴ−ＲＡＧＥ３６２−４０４及びｍＣｈｅｒｒｙ−Ｓ３９１Ａ−ＴＡＴ−ＲＡＧＥ３６２−４０４は、大腸菌（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ  ｃｏｌｉ）株ＣｌｅａｒＣｏｌｉ  ＢＬ２１（ＤＥ３；Ｌｕｃｉｇｅｎ）の形質転換によって生成された。単一の形質転換コロニーを、１００μｇ／ｍｌアンピシリンを含む５０ｍｌ  ２ＹＴ培地に接種し、培養物を２５０ｒｅｖ／分で振盪しながら３７℃で一晩増殖させた。１０ｍｌの一晩培養液を使用して、１００μｇ／ｍｌアンピシリンを含む１リットルの２ＹＴ培地に接種し、培養液を２５０ｒｅｖ／ｍｉｎで振盪しながら３７℃で増殖させた。培養物のＯＤ６００が０．８に達すると、温度を１５℃に３０分間シフトし、その後、１ｍＭイソプロピルβ−Ｄ−１−チオガラクトピラノシド（ＩＰＴＧ）の添加によりタンパク質発現を誘導した。ＩＰＴＧの添加に続いて、培養物を２５０回転／分で振盪しながら１５℃で約１６時間増殖させた。遠心分離（３５００ｇ、４°Ｃ、２０分）により細胞を回収し、氷冷溶解緩衝液（５０ｍＭ  Ｔｒｉｓ  ｐＨ７．４、３００ｍＭ  ＮａＣｌ、１０  ｍＭイミダゾール、５ｍＭβメルカプトエタノール）に再懸濁した。再懸濁した細胞を超音波処理し、不溶性物質を遠心分離（１３０００ｇ、４℃、３０分）でペレット化した。上清をろ過（０．２μｍ）し、溶解緩衝液で事前に平衡化した１ｍｌのＮｉ−ＮＴＡアガロース樹脂総容積（Ｑｉａｇｅｎ）を備えた重力流カラムに供した。上清を樹脂に通した後、カラムを１００ｍｌの洗浄緩衝液（２０ｍＭイミダゾール、５０ｍＭ  Ｔｒｉｓ  ｐＨ７．４、１５０ｍＭ  ＮａＣｌ、５ｍＭ  β−メルカプトエタノール）で洗浄した。Ｈｉｓ標識ＴＡＴ−ｍＣｈｅｒｒｙ及びＴＡＴ−ｍＣｈｅｒｒｙ−ＲＡＧＥペプチドは、溶出緩衝液（２５０ｍＭイミダゾール、５０ｍＭ  Ｔｒｉｓ  ｐＨ７．４、１５０ｍＭ  ＮａＣｌ、５ｍＭ  β−メルカプトエタノール）を使用して樹脂から溶出した。精製タンパク質の純度は、ＳＤＳ−ＰＡＧＥで評価した。典型的には、培養液１リットルあたり１０ｍｇのタンパク質が生成された。タンパク質を含有する溶出画分をプールし、Ｎａｎｏｄｒｏｐ  Ｓｐｅｃｔｒｏｐｈｏｔｏｍｅｔｒｙ（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）及びＢＣＡ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ａｓｓａｙ（Ｐｉｅｒｃｅ）で定量した。
【１０９８】
＜生物発光共鳴エネルギー移動（ＢＲＥＴ）＞
ＢＲＥＴは、特にＧＰＣＲを含む、生細胞におけるタンパク質−タンパク質近接性を研究するための確立された技術である（Ｐｆｌｅｇｅｒ  ａｎｄ  Ｅｉｄｎｅ，２００６）。目的の１つのタンパク質は、生物発光ドナー酵素であるＲｌｕｃ８、ウミシイタケルシフェラーゼのバリアントに連結され、第２のタンパク質は、アクセプターフルオロフォアであるＶｅｎｕｓ、緑色蛍光タンパク質のバリアントに連結された。近接近にある場合（＜１０ｎｍ）、ドナーによる細胞透過性セレンテラジン基質の急速な酸化から生じるエネルギーがアクセプターに移動でき、これは、より長い特性波長で蛍光を発する。
【１０９９】
プラスミドは、ヒト胚性腎臓（ＨＥＫ）２９３ＦＴ細胞で一時的に共発現され、ＢＲＥＴ測定は、ＰＯＬＡＲｓｔａｒ  Ｏｍｅｇａ又はＬＵＭＩｓｔａｒプレートリーダー（ＢＭＧ  Ｌａｂｔｅｃｈ、Ｍｏｒｎｉｎｇｔｏｎ、Ｖｉｃｔｏｒｉａ、オーストラリア）を使用して、４６０〜４９０ｎｍ（「ドナー放出」）及び５２０〜５５０ｎｍ（「アクセプター放出」）フィルターで、又はＶＩＣＴＯＲ  Ｌｉｇｈｔプレートリーダー（Ｐｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ、Ｇｌｅｎ  Ｗａｖｅｒｌｅｙ、Ｖｉｃｔｏｒｉａ、オーストラリア）を使用して、４００〜４７５ｎｍ（「ドナー放出」）及び５２０〜５４０ｎｍ（「アクセプター放出」）フィルターで、又はＣＬＡＲＩＯｓｔａｒプレートリーダー（ＢＭＧ  Ｌａｂｔｅｃｈ、Ｍｏｒｎｉｎｇｔｏｎ、Ｖｉｃｔｏｒｉａ、オーストラリア）を使用して、４２０〜４８０ｎｍ（「ドナー放出」）及び５２０〜６２０ｎｍ（「アクセプター放出」）フィルターで、３７°Ｃで行われた。
【１１００】
ＢＲＥＴ比は、Ｒｌｕｃ８及びＶｅｎｕｓ標識タンパク質の両方を発現する細胞サンプルと同じ比率から、Ｒｌｕｃ８標識タンパク質のみを発現する細胞サンプルの「ドナー放出」に対する「アクセプター放出」の比率を引くことにより計算された。代わりに、リガンド誘導ＢＲＥＴシグナルは、アゴニストで処置した同じ細胞の第２のアリコートと同じ比率から、ビヒクルで処置した細胞サンプルの「ドナー放出」に対する「アクセプター放出」の比率を引くことにより計算された。
【１１０１】
ＢＲＥＴ動態アッセイの場合、最終的な処置前の読み取り値は、ゼロ時点（リガンド／ビヒクルの添加時点）で表示される。飽和アッセイでは、４８５／１４励起フィルター、５３５／２５発光フィルター及びＤ５０５ミラーを使用して、ＥｎＶｉｓｉｏｎ  ２１０２マルチラベルプレートリーダー（ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ、Ｇｌｅｎ  Ｗａｖｅｒｌｅｙ、Ｖｉｃｔｏｒｉａ、オーストラリア）で光励起後の蛍光を測定した。蛍光／発光比率は、任意単位の蛍光値（ＥｎＶｉｓｉｏｎで取得）を任意単位の発光値（ＢＲＥＴアッセイの一部として取得）で除算することによって生成された。
【１１０２】
ＲＡＧＥ／Ｒｌｕｃ８及びβ−アレスチン２／Ｖｅｎｕｓを用いたＲｅｃｅｐｔｏｒ−ＨＩＴアッセイでは、ＢＲＥＴシステムに関して非標識のＧＰＣＲがＨＥＫ２９３ＦＴ細胞で共発現した。次いで、これらの細胞を、共発現ＧＰＣＲに選択的な適切な認識アゴニストで処置して、そのＧＰＣＲへのβ−アレスチン２／Ｖｅｎｕｓの動員を促進した。リガンド誘導ＢＲＥＴシグナルは、ＲＡＧＥ／Ｒｌｕｃ８に近接したβ−アレスチン２／Ｖｅｎｕｓの動員を示し、それによりＲＡＧＥと活性化ＧＰＣＲとが近接近にあることを示した。
【１１０３】
図２１Ｂ、Ｃ、ＤのＢＲＥＴ測定は、３７℃で、ＣＬＡＲＩＯｓｔａｒプレートリーダー（ＢＭＧ  Ｌａｂｔｅｃｈ、Ｍｏｒｎｉｎｇｔｏｎ、Ｖｉｃｔｏｒｉａ、オーストラリア）を使用して、４２０〜４８０ｎｍ（「ドナー放出」）及び５２０〜５８０ｎｍ（「アクセプター放出」）フィルターで行われた。図２１Ｅの発光測定値は、ＢＲＥＴ測定値（「ドナー放出」）の一部として取得された。図２１Ｅの蛍光測定は、ＣＬＡＲＩＯｓｔａｒプレートリーダーを使用して、Ｖｅｎｕｓについて４９７／１５ｎｍ励起フィルター、５４０／２０ｎｍ発光フィルター及び５１７．２ｎｍダイクロイックミラーで、ｍＣｈｅｒｒｙについて５８０／８ｎｍ励起フィルター、６１５／１０ｎｍ発光フィルター及び５９７ｎｍダイクロイックミラーで行われた。
【１１０４】
＜統計＞
連続データは平均±ＳＥＭとして表される。群間の平均差は、両側ＡＮＯＶＡを使用して比較された。群間の有意差を検出するために、Ｓｔｕｄｅｎｔ−Ｎｅｗｍａｎ−Ｋｅｕｌｓ事後分析によりペアごとの多重比較が行われた。Ｐ＜０．０５は統計的に有意と見なされた。
【１１０５】
［実施例１  ＡＮＧ  ＩＩの注入に伴うアテローム発生は、ＡＧＥＲ／ＡＰＯＥ−ＤＫＯマウスで減少する］
この実施例は、ＲＡＧＥの発現が、アテローム性動脈硬化感受性ａｐｏＥ−ＫＯマウスのアテローム発生を増加させるために、アンジオテンシンＩＩ（Ａｎｇ  ＩＩ）の注入に必要であることを示している。
【１１０６】
４週間のＡｎｇ  ＩＩ（１μｇ／ｋｇ／ｍｉｎ）の注入は、アテローム硬化性プラークの存在を表すＳｕｄａｎ  ＩＶ染色陽性の大動脈弓表面積の割合の増加によって示されるように、未処置のａｐｏＥ−ＫＯマウスと比較して、アテローム性動脈硬化感受性ａｐｏＥ−ＫＯマウスのアテローム形成を増加させる（図１Ａ）。
【１１０７】
４週間のＡｎｇ  ＩＩ（１μｇ／ｋｇ／ｍｉｎ）の注入は、アテローム形成促進メディエーター（図１Ｂ）及び酸化ストレスのマーカー（図１Ｃ）をコードする遺伝子の大動脈発現も増加する。
【１１０８】
ａｐｏＥ−ＫＯマウスでは、４週間のＡｎｇ  ＩＩ（１μｇ／ｋｇ／ｍｉｎ）の注入は、Ｓ１００Ａ８／Ａ９、ＡＧＥ及びそれらの反応性ジカルボニル前駆体（図１Ｄ）を含むＲＡＧＥリガンドの循環レベルも増加し、Ａｎｇ  ＩＩ処置マウスの大動脈におけるＲＡＧＥリガンドＭａｃ１／ＣＤ１１ｂの遺伝子発現も増加する。（図１Ｂ）。
【１１０９】
ＲＡＧＥの遺伝子欠失は、ＡＧＥＲ／ａｐｏＥ−ＤＫＯマウスへのＡｎｇ  ＩＩ（１μｇ／ｋｇ／ｍｉｎ）の４週間注入後に観察されるアテローム形成の増加を防ぎ（図１Ａ）、アテローム形成促進メディエーターのＡｎｇ  ＩＩ誘導大動脈発現（図１Ｂ）、Ａｎｇ  ＩＩ誘導酸化ストレス（図１Ｃ）及びＡｎｇ  ＩＩ注入後のａｐｏＥ−ＫＯマウスで観察されるＲＡＧＥリガンドのＡｎｇ  ＩＩ誘導循環レベル（図１Ｄ）も防ぐ。
【１１１０】
収縮期血圧レベルは、ａｐｏＥ−ＫＯ及びＡＧＥＲ／ａｐｏＥ−ＤＫＯマウス（図１Ｅ）の両方にＡｎｇ  ＩＩ（１μｇ／ｋｇ／ｍｉｎ）を４週間注入した後、同程度に増加し、ＲＡＧＥ欠乏がＡＴ１Ｒを介してＡｎｇ  ＩＩによって誘導される血行動態シグナル伝達に影響を与えないことを示す。
【１１１１】
＜追加の材料と方法＞
＜アンジオテンシン注入モデル＞
６〜８週齢の雄のａｐｏＥ−ＫＯ及びＡＧＥＲ／ａｐｏＥ−ＤＫＯマウス（ｎ＝８／グループ）を無作為化して、Ａｎｇ  ＩＩ（１μｇ／ｋｇ／ｍｉｎ；Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ、Ｃａｓｔｌｅ  Ｈｉｌ、オーストラリア）又はケタミン（１５０ｍｇ／ｋｇ）及びキシラジン（１０ｍｇ／ｋｇ）の腹腔内注射により、全身麻酔下で各マウスの背側正中線に沿った皮下腔に配置した浸透圧ミニポンプ（Ｍｏｄｅｌ  ２００４、ＡＬＺＥＴ、ＢｉｏＳｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、Ｇｙｍｅａ、オーストラリア）を使用し４週間の皮下注入を介した溶媒を摂取した。各モデルの各研究期間の最後に、ＣＯ２窒息とそれに続く心臓穿刺による放血を使用してマウスを人道的に殺処分した。
【１１１２】
［実施例２  ＲＡＡＳを活性化する低ナトリウム食に関連するアテローム形成は、ＡＧＥＲ／ＡＰＯＥ−ＤＫＯマウスで減少する］
この実施例は、アテローム性動脈硬化感受性ａｐｏＥ−ＫＯマウスでアテローム形成を誘導するために、低ナトリウム食に関連するＲＡＡＳ活性化にＲＡＧＥの発現が必要であることを示している。
【１１１３】
低ナトリウム食は、生理的レニン−アンジオテンシン−アルドステロン系（ＲＡＡＳ）活性化の一般に認められている実験モデルであり、ホメオスタシス機能の一部として適切に塩を保持するＲＡＡＳの能力のテストである。
【１１１４】
０．０５％（低）ナトリウム食の６週間の曝露は、アテローム硬化性プラークの存在を表すＳｕｄａｎ  ＩＶ染色陽性の大動脈弓表面積の割合の増加によって示されるように、ａｐｏＥ−ＫＯマウスにおけるＲＡＡＳ依存性プラーク蓄積の増加をもたらす（図２Ａ）。
【１１１５】
０．０５％（低）ナトリウム食への６週間の曝露は、アテローム形成促進メディエーターの大動脈発現の増加（図２Ｂ）、酸化ストレスのマーカーの増加（図２Ｃ）及び可溶性ＭＣＰ−１及びＩＣＡＭ−１の血中濃度の増加（図２Ｄ）ももたらす。
【１１１６】
通常食を与えたａｐｏＥ−ＫＯマウスの大動脈と比較して、低ナトリウム食の１週間の曝露後、ａｐｏＥ−ＫＯマウスから採取した大動脈により多くの白血球が接着する（図２Ｅ）。
【１１１７】
ａｐｏＥ−ＫＯマウスでは、低塩食は、Ｓ１００Ａ８／Ａ９、ＡＧＥ及びその反応性ジカルボニル前駆体（図２Ｆ）を含むＲＡＧＥリガンドの循環レベルを増加させ、大動脈におけるＲＡＧＥリガンドＭａｃ１／ＣＤ１１ｂの遺伝子発現も増加させる（図２Ｂ）。
【１１１８】
ＲＡＧＥの遺伝子欠失は、同じ食餌を与えたａｐｏＥ−ＫＯマウスと比較した場合、低ナトリウム食の４週間後のＡＧＥＲ／ａｐｏＥ−ＤＫＯマウスにおけるアテローム形成の誘導を防ぎ（図２Ａ）、また、血管炎症のマーカーの大動脈発現の増加、酸化ストレスのマーカーの増加又は循環炎症マーカーの増加（図２Ｂ、２Ｃ及び２Ｄ）も防ぐ。
【１１１９】
低ナトリウム食を１週間与えたＡＧＥＲ／ａｐｏＥ−ＤＫＯから採取した大動脈は、同じ食餌を与えたａｐｏＥ−ＫＯマウスと比較して、エクスビボで大動脈内皮への標識された白血球の接着性の増加を示さない（図２Ｅ）。
【１１２０】
ａｐｏＥ−ＫＯマウスで見られる低ナトリウム食の摂取に応じたＲＡＧＥリガンド、Ｓ１００Ａ８／Ａ９及びＡＧＥの循環レベルの増加は、同じ低ナトリウム食で４週間処置したＡＧＥＲ／ａｐｏＥ−ＫＯマウスでは観察されない（図２Ｆ）。
【１１２１】
血圧レベルは、ａｐｏＥ−ＫＯ又はＡＧＥＲ／ａｐｏＥ−ＤＫＯマウスのいずれにおいても低ナトリウム食によって変更されない（図２Ｇ）。
【１１２２】
ＲＡＡＳ活性化のマーカーの生理学的誘導（例えば、血漿アルドステロン、血漿レニン）及び低ナトリウム食に関連するナトリウム保持は、ａｐｏＥ−ＫＯマウス及びＡＧＥＲ／ａｐｏＥ−ＤＫＯマウス間で有意差はない（図２Ｈ）。
【１１２３】
＜追加の材料と方法＞
＜マウスの０．０５％（低）ナトリウム食への曝露＞
低ナトリウム食（０．０５％ナトリウム）への曝露は、生理学的ＲＡＡＳ活性化の認められた実験モデルである（Ｔｉｋｅｌｌｉｓ  ｅｔ  ａｌ．２０１２）。この研究では、ａｐｏＥ−ＫＯ及びＡＧＥＲ／ａｐｏＥ−ＤＫＯマウス（ｎ＝８／グループ）を無作為化して、共に６％の脂肪を含む（Ｓｐｅｃｉａｌｔｙ  Ｆｅｅｄｓ、パース、オーストラリア）低塩分（０．０５％ナトリウム）又は通常の塩分（０．３％ナトリウム）を含む等カロリー食を１週間又は６週間、摂取した。
【１１２４】
＜血漿レニン及びアルドステロン＞
ＲＡＡＳの活性化は、アルドステロン及び（プロ）レニンの循環レベルの増加と関連している。これらのＲＡＡＳ成分は、グループごとに市販のラジオイムノアッセイ（ＰｒｏＳｅａｒｃｈ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ、Ｍａｌｖｅｒｎ、オーストラリア）によって推定された。
【１１２５】
＜可溶性ＭＣＰ−１及びＩＣＡＭ−１の循環＞
可溶性ＭＣＰ−１及びＩＣＡＭ−１の循環は、製造元の取扱説明書に従ってそれぞれ実施されたＥＬＩＳＡ（Ｒ＆Ｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ）によって推定された。
【１１２６】
＜尿中ナトリウム排泄＞
６週間の通常又は低ナトリウム食後、マウスを個々の代謝ケージ（Ｉｆｆａ  Ｃｒｅｄｏ、Ｌ’Ａｒｂｒｅｓｅｌｅ、フランス）に２４時間入れ、体重、水及び食物（ナトリウム）の摂取量と尿排泄量を記録した。（ＣＯＢＡＳ  ＩＮＴＥＧＲＡ  ４００オートアナライザー；（Ｒｏｃｈｅ  Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ、Ｉｎｄｉａｎａｐｏｌｉｓ、ＵＳＡ）により、イオン感受性電極を使用して希釈尿中のナトリウム濃度を測定し、総ナトリウム排泄量（μｍｏｌ／日）を総尿排泄量に乗じて推定した。
【１１２７】
＜標識白血球の大動脈への接着＞
低ナトリウム又は通常ナトリウム食の１週間後、ａｐｏＥ−ＫＯ及びＡＧＥＲ／ａｐｏＥ−ＤＫＯ動物は人道的に殺処分された。大動脈を摘出し、脂肪が取り除かれ、クレブス緩衝液で満たされた血管チャンバーに標本として入れ、前述のとおり、３７℃の緩衝液を通過し、カルボゲンガス（９５％Ｏ２、５％ＣＯ２）を注入することにより生理学的ｐＨに維持された。次に、ＤｉｌＣ１８（１：１０００）で標識した全血を、０．１２ｍｌ／ｍｉｎで大動脈に灌流した。ポジティブコントロールとして、血管（ｎ＝６／グループ）をＴＮＦα（４ｎｇ／ｍｌ）で４時間、３７°Ｃ又はＡｎｇ  ＩＩ（１μＭ）で前処置した。血管壁細胞の相互作用の画像とビデオを、蛍光顕微鏡（Ｚｅｉｓｓ  Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ．Ｖ２０）を使用して取得し、デジタルカメラ（ＨＡＭＡＭＡＴＳＵ  ＯＲＣＡ−ＥＲ）と組み合わせて、ＡｘｉｏＶｉｓｏｎソフトウェアで分析した。各時点で２〜３フレームを撮影し、１フレームあたりの接着細胞の数を記録した。
【１１２８】
［実施例３  ＡＣＥ２／ＡＰＯＥダブルＫＯマウスのアテローム形成は、ＡＣＥ２／ＡＧＥＲ／ＡＰＯＥトリプルＫＯマウスで減少する］
この実施例は、ＲＡＧＥの発現がアテローム性動脈硬化感受性Ａｃｅ２／ａｐｏＥ−ＤＫＯマウスのアテローム形成の増加を誘導するために遺伝的Ａｃｅ２欠損に必要であることを示している。
【１１２９】
ＡＣＥ２は、ＲＡＡＳの主要なエフェクターであるＡｎｇ  ＩＩを代謝する酵素である。Ａｃｅ２／ａｐｏＥ−ＤＫＯマウスにおけるＡｃｅ２の遺伝的欠損は、Ａｎｇ  ＩＩの循環レベルの増加（図３Ａ）、収縮期血圧の増加（図３Ｂ）及びＡｃｅ２を構成的に十分にあるａｐｏＥ−ＫＯマウスと比較した場合の大動脈弓におけるプラーク蓄積の増大に関連するＲＡＡＳの構成的活性化（図３Ｃ）をもたらす。
【１１３０】
Ａｃｅ２／ａｐｏＥ−ＤＫＯマウスの大動脈も、ａｐｏＥ−ＫＯマウスと比較して、アテローム形成促進メディエーターの発現の増加を示している（図３Ｄ）。
【１１３１】
Ａｃｅ２／ａｐｏＥ−ＫＯマウスは、ａｐｏＥ−ＫＯマウス（図３Ｆ）と比較して、酸化ストレスの循環マーカーを増加させ（図３Ｅ）、Ｓ１００Ａ８／Ａ９及びＡＧＥを含むＲＡＧＥリガンドの循環レベルを上昇させた。
【１１３２】
Ａｃｅ２／ＡＧＥＲ／ａｐｏＥ  ＴＫＯマウスのＲＡＧＥをコードするＡＧＥＲ遺伝子の遺伝子欠失は、アテローム形成の増加（図３Ｃ）及びＡｃｅ２／ａｐｏＥ−ＤＫＯマウスで観察される炎症促進性マーカー（図３Ｄ）、酸化ストレスのマーカー（図３Ｅ）及びＲＡＧＥリガンドの誘導（図３Ｆ）を防ぎ、これらのマーカーはａｐｏＥ−ＫＯマウスで観察されたものと同様のレベルに回復した。
【１１３３】
Ａｎｇ  ＩＩの血圧レベル及び血中濃度は、Ａｃｅ２／ａｐｏＥ−ＤＫＯ又はＡｃｅ２／ＡＧＥＲ／ａｐｏＥ  ＴＫＯ間で有意差はない（図３Ａ及び３Ｂ）。
【１１３４】
＜追加の材料と方法＞
＜ａｐｏＥ−ＫＯマウスにおけるＡｃｅ２の遺伝子欠損＞
Ａｃｅ２は、血管系でＡｎｇ  ＩＩを代謝する主要な酵素である。アテローム性動脈硬化感受性ａｐｏＥ−ＫＯマウスにおけるＡｃｅ２の遺伝子欠損は、野生型ａｐｏＥ−ＫＯマウスと比較した場合、Ａｎｇ  ＩＩの循環レベルの増加及びプラーク蓄積の増加をもたらす（Ｔｈｏｍａｓ  ｅｔ  ａｌ  ２０１２）。これらの研究では、雄のＡｃｅ２／ａｐｏＥ−ＤＫＯ及びＡＧＥＲ／Ａｃｅ２／ａｐｏＥ  ＴＫＯマウスを１６〜１８週齢まで追跡した。これは、Ａｃｅ２／ａｐｏＥ−ＤＫＯマウスにおけるプラーク蓄積の増加に関連する時点である。
【１１３５】
＜血漿アンジオテンシンＩＩ＞
血漿アンジオテンシンＩＩレベルは、市販のラジオイムノアッセイ（ＰｒｏＳｅａｒｃｈ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ、Ｍａｌｖｅｒｎ、オーストラリア）によって推定された。
【１１３６】
［実施例４  アンジオテンシンＩＩへの曝露による大動脈及び内皮における炎症促進性シグナル伝達の誘導は、ＲＡＧＥ発現に依存している］
この実施例は、ＲＡＧＥの発現がＡｎｇ  ＩＩへの曝露に必要であり、大動脈及びそれらから採取された大動脈内皮細胞の炎症促進性シグナル伝達を誘導することを示している。
【１１３７】
ａｐｏＥ−ＫＯマウスから摘出された大動脈をＡｎｇ  ＩＩ（１μＭ）にエクスビボで曝露すると、アテローム形成促進メディエーターの発現が増加し（図４Ａ）、未処置の大動脈と比較した場合、接着白血球数が増加する（図４Ｂ）。
【１１３８】
ＡＧＥＲ／ｐｏＥ  ＤＫＯマウスでのＲＡＧＥの遺伝子欠失は、ａｐｏＥ−ＫＯマウスからの大動脈と比較した場合、Ａｎｇ  ＩＩ（１μＭ）への曝露後、これらのアテローム生成メディエーターの誘導（図４Ａ）又はプライミング白血球の大動脈への内皮接着性の増加（図４Ｂ）を防ぐ。
【１１３９】
Ｃ５７ｂｌ６マウスの大動脈から摘出された一次マウス大動脈内皮細胞（ＰＭＡＥＣ）では、Ａｎｇ  ＩＩ（１μＭ）への曝露により、炎症促進性シグナル伝達も誘導される。これは、標識ＴＨＰ−１（単球型）細胞のＡｎｇ  ＩＩ処置ＰＭＡＥＣの単層への接着の増加（図４Ｃ）及び主要な炎症促進性遺伝子の発現の増加（図４Ｄ）並びにＲＯＳ及び酸化ストレスの他のマーカーの産生、ｒａｃ−１及び酸化グルタチオンの活性化において急速な増加に関連している（図４Ｅ）。
【１１４０】
Ｃ５７ｂｌ６マウスの大動脈から摘出されたＰＭＡＥＣでは、古典的なマーカーＣＸＣＬ２及びＣＸＣＬ１２の誘導によって実証されるように、Ａｎｇ  ＩＩへの曝露は、ＮＦκＢの下流の標準的及び非標準的なシグナル伝達の誘導ももたらす（図４Ｆ）。ＴＮＦαは、ＮＦκＢ活性化の下流への標準シグナル伝達を選択的に誘導する能力のポジティブコントロールとして示されている。ＶＣＡＭ−１の発現は、図４Ｄのデータを複製する追加の標的応答遺伝子として示されている。
【１１４１】
Ｃ５７ｂｌ６マウスの大動脈から摘出されたＰＭＡＥＣでは、ＲＡＧＥリガンド、Ｓ１００Ａ８／Ａ９への曝露により、ＩＣＡＭ−１、ＶＣＡＭ−１、ＴＮＦα及びＭＣＰー１などの標的ＮＦκＢ依存性炎症促進性遺伝子も誘導される（図４Ｇ）。
【１１４２】
ＡＧＥＲ−ＫＯマウスから摘出されたＰＭＡＥＣでは、Ａｎｇ  ＩＩによる処置は、主要な炎症促進性遺伝子（図４Ｄ）、ＮＦκＢの標準的又は非標準的活性化のマーカー（図４Ｆ）、ＲＯＳ生産及び酸化ストレス（図４Ｅ）の増加又は内皮接着性の機能的増加（図４Ｃ）の誘導を引き起こさない。
【１１４３】
ＡＧＥＲ−ＫＯマウスから摘出されたＰＭＡＥＣでは、ＲＡＧＥリガンド、Ｓ１００Ａ８／Ａ９で処置は、ＩＣＡＭ−１、ＶＣＡＭ−１及びＭＣＰ−１などの炎症促進性遺伝子の誘導を引き起こさない（図４Ｇ）。
【１１４４】
ｓｉＲＮＡを使用したＰＭＡＥＣでのＡＧＥＲ発現のサイレンシングは、遺伝的ＲＡＧＥ欠失と同様の表現型を実現し、Ａｎｇ  ＩＩ又はＲＡＧＥリガンド、Ｓ１００Ａ８／Ａ９によるＶＣＡＭ−１遺伝子発現のＮＦκＢ依存性誘導を防ぐ（図４Ｈ）。ｐ６５発現のサイレンシングは、このシグナル伝達経路のＮＦκＢ依存性のポジティブコントロールとして示されている。
【１１４５】
これらを総合すると、ＡＧＥＲ−ＫＯマウスの内皮細胞及びＲＡＧＥ発現がｓｉＲＮＡにより抑制されたＰＭＡＥＣにおける発見は、どちらもこれらの細胞におけるＳ１００Ａ８／Ａ９の作用がＲＡＧＥを介して特異的に媒介されること、及びＳ１００Ａ８／Ａ９がＮＦκＢを活性化する可能性のある他の受容体及び他の細胞系（例えば、白血球及びグリア細胞など）に存在する下流のシグナル伝達経路（例えば、Ｔｏｌｌ様受容体など）は、ＰＭＡＥＣにおけるこの現象には重要な役割を果たさない。
【１１４６】
ＲＡＧＥ欠損ＰＭＡＥＣのＡｎｇ  ＩＩへの曝露はイノシトールリン酸合成の同様の増加をもたらすため、ＡＧＥＲ−ＫＯマウス由来のＰＭＡＥＣにおけるＡｎｇ  ＩＩの効果の観察された減衰は、ＲＡＧＥ非存在下でのＲＡＡＳシグナル伝達の喪失によるものではないＩＰ−１の増加及び初期増殖応答遺伝子（ＥＧＲ１）の下流誘導により推定されるように、両方とも適格性があるＡｎｇ  ＩＩを介したシグナル伝達のマーカーであると考えられる（図４Ｉ）。
【１１４７】
＜追加の材料と方法＞
＜摘出大動脈のエクスビボ研究＞
大動脈はａｐｏＥ−ＫＯ及びＡＧＥＲ／ａｐｏＥ−ＤＫＯマウスから摘出され、分割されてクレブス緩衝液に入れられた。そして、３７°Ｃの緩衝液を通してカルボゲンガス（９５％Ｏ２；５％ＣＯ２）を注入することにより生理的ｐＨに維持された。次に、血管（ｎ＝６／グループ）をＡｎｇ  ＩＩ（１μＭ）で４時間処置した。その後、ＤｉｌＣ１８（１：１０００）で標識された全血を大動脈に０．１２ｍｌ／ｍｉｎで灌流した。血管壁細胞の相互作用の画像とビデオを、蛍光顕微鏡（Ｚｅｉｓｓ  Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ．Ｖ２０）を使用して観察し、デジタルカメラ（ＨＡＭＡＭＡＴＳＵ  ＯＲＣＡ−ＥＲ）と組み合わせて、ＡｘｉｏＶｉｓｏｎソフトウェアで分析した。
【１１４８】
＜静的接着アッセイ＞
Ａｎｇ  ＩＩに対する機能的応答性は、ＰＭＡＥＣで静的接着アッセイを使用して決定した。このアッセイでは、ＰＭＡＥＣを１ウェルあたり５０，０００細胞で６ウェルプレートに播種し、１μＭ  Ａｎｇ  ＩＩで２４時間処置する前に７０％コンフルエントに成長させた。血管内の単球及びマクロファージを模倣するヒトＴＨＰ−１細胞は、製造元の取扱説明書に従ってＣｅｌｌＶｕｅ  Ｂｕｒｇｕｎｄｙ  Ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｔ  Ｃｅｌｌラベリングキット（ＬＩＣＯＲ）を使用して染色し、その後、１ウェルあたり３×１０５の生存細胞で内皮細胞単層に播種し、２０分間３７℃でインキュベートした。内皮細胞単層に接着していなかった細胞を取り除き、ウェルをＰＢＳで洗浄した後、ＰＢＳ中の４％ホルマリンで３０分間固定した。次に、ＯＤＹＳＳＥＹ赤外線イメージャー（Ｌｉｃｏｒ）を使用して、細胞の接着を定量化した。さらに、光学顕微鏡（Ｏｌｙｍｐｕｓ  ＣＫＸ４１）を使用して、接着細胞を２０倍で撮影した。
【１１４９】
＜スーパーオキシドの生成及び酸化ストレスの追加マーカー＞
Ａｎｇ  ＩＩによって誘導されるスーパーオキシド産生を定量化するために、ＡＧＥＲ−ＫＯ及びＣ５７Ｂｌ６大動脈からのＰＭＡＥＣでリアルタイムに総細胞質及びミトコンドリアスーパーオキシド産生を測定するために、血管チャンバーアッセイが使用された。ＰＭＡＥＣは、コラーゲンでコーティングされたカバースリップ上で成長し、８０％コンフルエントになったときに密閉されたガラスチャンバーに取り付けられた。チャンバーをクレブス緩衝液で１時間灌流し、１０分ごとに蛍光測定値を取得してベースライン測定値を確立した。その後、細胞に１μＭ  Ａｎｇ  ＩＩを６０分間灌流し、さらに１０分間１分ごとに蛍光測定を行った。蛍光測定値は、ベースラインからの蛍光任意単位の変化（Δ）として表された。製造元の取扱説明書に従って、Ｒａｃ−１  Ｇ−ＬＩＳＡ活性化アッセイ（Ｃｙｔｏｓｋｅｌｅｔｏｎ）を使用して、Ａｎｇ  ＩＩに曝露した後の細胞溶解物の活性化ＮＡＤＰＨオキシダーゼサブユニットのレベル、Ｒａｃ−１活性化も測定した。製造元の取扱説明書に従って実施される酸化型グルタチオンのレベルを含む酸化ストレスの追加マーカー（Ｃａｙｍａｎ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｃｏｍｐａｎｙ、ＵＳ）も分析された。
【１１５０】
＜ＡＴ１Ｒを介したシグナル伝達の整合性＞
ＡＴ１Ｒシグナル伝達カスケードがＡＧＥＲ−ＫＯからのＰＭＡＥＣで機能することを確認するために、製造元の取扱説明書及びＥＧＲ１の遺伝子発現の変化を使用したＩＰ−ｏｎｅ  ＨＴＲＦアッセイ（ＣｉｓＢｉｏ  ｂｉｏａｓｓａｙｓ，Ｂａｇｎｏｌｓ−ｓｕｒ−Ｃｅｚｅ  Ｃｅｄｅｘ，フランス）を使用し、Ｇｑ受容体活性化後に細胞内に蓄積するイノシトールリン酸（ＩＰ３）の安定した下流代謝物であるミオ−イノシトールリン酸（ＩＰ１）を測定した。その後、リアルタイムＲＴ−ＰＣＲによって評価された１μＭ  Ａｎｇ  ＩＩへの曝露の２時間後にＡＴ１Ｒは決定された。
【１１５１】
［実施例５  ＡＴ１Ｒ−ＣＨＯ細胞での炎症促進性シグナル伝達に対する全長型及び切断されたヒトＲＡＧＥ構造の調節効果］
この実施例は、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞で主要な炎症促進性転写因子ｐ６５−ＮＦκＢの発現を誘導し、ＮＦκＢ活性を増加させるためのＡｎｇ  ＩＩへの曝露には、ＡＴ１ＲとＲＡＧＥの両方の発現も必要であることを示している。
【１１５２】
ＣＨＯ細胞は細胞表面受容体をほとんど発現せず、特に表面に内因性ＡＴ１Ｒ又はＲＡＧＥを発現しないため、ＡＴ１Ｒ−ＲＡＧＥ相互作用の役割を探求する理想的なシステムである。さらに、ＣＨＯ細胞は、ＲＡＧＥリガンドに結合し、それらによって活性化される能力を潜在的に有するＴＬＲを発現せず、ＮＦκＢの活性化をもたらす。
【１１５３】
ヒトＡＴ１Ｒ遺伝子によるＣＨＯ細胞の安定した形質導入により、ＡＴ１Ｒ−ＣＨＯ細胞が生成され、イノシトールリン酸合成の誘導（図５Ａ）及び初期増殖応答遺伝子、ＥＧＲ１（図５Ｂ）の誘導によって実証されるように、外因性Ａｎｇ  ＩＩ（１μＭ）に対する古典的な応答性が付与される。
【１１５４】
対照的に、外因性のＡｎｇ  ＩＩ（１μＭ）は、主要な炎症促進性転写因子であるｐ６５−ＮＦκＢの発現を誘導することも、ＡＴ１Ｒ−ＣＨＯ細胞におけるＮＦκＢ活性化を高めることもできない（図５Ｃ）。
【１１５５】
外因性Ａｎｇ  ＩＩ（１μＭ）は、ＡＴ１Ｒ−ＣＨＯ細胞に全長型のヒトＲＡＧＥポリペプチドを形質導入し、発現させた場合にのみ、主要な炎症促進性転写因子ｐ６５−ＮＦκＢの活性化を誘導できる（図５Ｃ）。ＲＡＧＥリガンドであるＳ１００Ａ８／Ａ９（５ｎｇ／ｍＬ）は、細胞がＲＡＧＥポリペプチドも発現している場合にのみ、主要な炎症促進性転写因子ｐ６５−ＮＦκＢの活性化を誘導することができる（図５Ｃ）。これは、ＲＡＧＥのトランスジェニック発現及び形質導入されたＣＨＯ細胞におけるそのシグナル伝達経路の完全性のポジティブコントロールとしての役割を果たす。
【１１５６】
（ｉ）ＲＡＧＥの細胞外ドメインを欠く（すなわちｍＣｈｅｒｒｙ−ＲＡＧＥ３４２−４０４）、（ｉｉ）ＲＡＧＥの細胞外ドメイン及び膜貫通ドメインを欠く（すなわちｍＣｈｅｒｒｙ−ＲＡＧＥ３６２−４０４）、又は（ｉｉｉ）ＲＡＧＥの細胞外ドメイン、膜貫通ドメイン及びＤｉａｐｈａｎｏｕｓ−１結合ドメイン（３６６−３６７）を欠く（すなわちｍＣｈｅｒｒｙ−ＲＡＧＥ３７０−４０４）Ｎ末端トランケート型ｍＣｈｅｒｒｙ−ＲＡＧＥ構築物によるＡＴ１Ｒ−ＣＨＯ細胞の形質導入は、Ｑ３７９が保持される条件で、空プラスミド（ベクター）のみと比較した場合、Ａｎｇ  ＩＩ応答性の炎症促進性シグナル伝達を媒介する全長型ＲＡＧＥ２２−４０４の能力を保持する（図５Ｄ）。Ｑ３７９を超えるＮ切断（例えば、ｍＣｈｅｒｒｙ−ＲＡＧＥ３８０−４０４）は、Ａｎｇ  ＩＩ応答性の炎症促進性シグナル伝達を媒介することのできない不活性な変異ＲＡＧＥペプチドをもたらす。
【１１５７】
Ａｎｇ  ＩＩ応答性のＡＴ１Ｒ−ＣＨＯ細胞へのＣ末端トランケート型ＲＡＧＥ構築物の形質導入は、野生型ＲＡＧＥのＣ末端の少なくともＳｅｒ３９１が無傷のままであるという条件で、炎症促進性シグナル伝達を媒介する能力を保持する（すなわちＲＡＧＥ２２−３９１；図５Ｅ）。
【１１５８】
ＡＴ１Ｒ−ＣＨＯ細胞でＡｎｇ  ＩＩ応答性の炎症促進性シグナル伝達を媒介する能力を保持している最小の構築物は、１３−ｍｅｒの構築物ｍＣｈｅｒｒｙ−ＲＡＧＥ３７９−３９１である（図５Ｅ）。
【１１５９】
ＲＡＧＥリガンドＳ１００Ａ８／Ａ９（図５Ｆ）応答性のＡＴ１Ｒ−ＣＨＯ細胞に形質導入した場合、ＲＡＧＥリガンド結合外部ドメインを欠くＮ末端トランケート型ｍＣｈｅｒｒｙ−ＲＡＧＥ構築物は、シグナル伝達を促進できない。これは、ＲＡＧＥリガンド依存性ＲＡＧＥ活性化は、リガンドに結合するためこのリガンド結合外部ドメインを必要としているためである。ＲＡＧＥの他の部分に加えて、その後、そのシグナル伝達を転送し、細胞内シグナル伝達カスケードを動員し活性化する。
【１１６０】
Ｃ末端トランケート型ＲＡＧＥ構築物は、Ｓ１００Ａ８／Ａ９応答性のＡＴ１Ｒ−ＣＨＯ細胞に形質導入され、野生型ＲＡＧＥのＣ末端の少なくともＳｅｒ３９１が無傷のままである場合に、炎症促進性シグナル伝達を媒介する能力を保持できる（すなわちＲＡＧＥ２２−３９１；図５Ｇ）。
【１１６１】
追加のｍＣｈｅｒｒｙタンパク質は、細胞モデルでの導入遺伝子構築物の発現を確実にする実用的な手段を提供する。ただし、（ｉ）ｍＣｈｅｒｒｙの発現自体はシグナル伝達経路に影響を及ぼさない（すなわち図５ＦのｍＣｈｅｒｒｙ対照）、且つ（ｉｉ）ｍＣｈｅｒｒｙタンパク質が取り除かれたＮ末端トランケート型ＲＡＧＥ構築物（図５Ｈ）は、Ａｎｇ  ＩＩに応答して、ｍＣｈｅｒｒｙ−ＲＡＧＥ融合タンパク質を発現するものと同じレベルのシグナル伝達機能を達成する（図５Ｄ、５Ｆ）ため、Ｎ末端トランケート型ＲＡＧＥの炎症促進性シグナル伝達作用に関与しない。同様に、Ｑ３７９を超えるＮ切断によりαヘリックスが不安定になり、ｍＣｈｅｒｒｙ−ＲＡＧＥ融合の有無にかかわらず、構造物のシグナル伝達機能が失われる（それぞれ図５Ｆ及び５Ｈ）。
【１１６２】
＜追加の材料と方法＞
＜古典的なＧＰＣＲシグナル伝達＞
製造元の取扱説明書に従い使用したＩＰ−ｏｎｅ  ＨＴＲＦアッセイ（ＣｉｓＢｉｏ  ｂｉｏａｓｓａｙｓ、Ｂａｇｎｏｌｓ−ｓｕｒ−Ｃｅｚｅ  Ｃｅｄｅｘ、フランス）を使用し、Ｇｑ受容体活性化後に細胞内に蓄積するＩＰ３の安定した下流代謝物であるミオイノシトールリン酸（ＩＰ１）の誘導により、１μＭ  Ａｎｇ  ＩＩで処置した細胞内で古典的ＧＰＣＲシグナル伝達が確認された。
【１１６３】
＜ＮＦκＢ活性アッセイ＞
１μＭ  Ａｎｇ  ＩＩ又はシグナル伝達コントロールとして５ｎｇ／ｍｌのＲＡＧＥリガンドＳ１００Ａ８／Ａ９によるＮＦκＢ活性の誘導を測定するために、製造元の取扱説明書に従い使用したＬｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅ２０００（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）を使用してＮＦκＢ−ＳＥＡＰ又はβ−ガラクトシダーゼ（β−Ｇａｌ）をコードする０．４μｇプラスミドでＡＴ１Ｒ−ＣＨＯ細胞を形質導入した。２４時間後、各プラスミドの組み合わせで形質導入した細胞をＡｎｇ  ＩＩ（１μＭ）で処置するか又は未処置のまま４時間インキュベートしてから、細胞上清と細胞溶解物を回収した。化学発光ＳＥＡＰレポーター遺伝子アッセイ（Ｒｏｃｈｅ  Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｓｃｉｅｎｃｅ）を使用して細胞上清を分析し、処置後のＳＥＡＰ産生を検出した。形質導入効率を制御するために、市販のキット（Ｐｒｏｍｅｇａ）を使用して、細胞溶解物でβ−Ｇａｌを分析した。
【１１６４】
［実施例６  ＡＮＧ  ＩＩによるＡＴ１Ｒの活性化後の、ＲＡＧＥリガンド非依存ＲＡＧＥ活性化］
この実施例は、Ａｎｇ  ＩＩのＡＴ１Ｒへの結合後に続くＲＡＧＥの活性化が、ＲＡＧＥリガンドの遊離を介してでなく、ＲＡＧＥリガンド非依存性経路を介して起こることを示している。
【１１６５】
ＡＴ１Ｒの活性化は、膜テザーリガンドのプロテアーゼ媒介細胞外「シェディング」につながる経路の活性化によりチロシン−キナーゼ受容体の活性化を引き起こすことが知られており、これらは、その後、これらのチロシン−キナーゼ受容体に自由に結合して活性化することができる。
【１１６６】
ＲＡＧＥのリガンド結合外部ドメイン（ＲＡＧＥａｂ）又はリガンド結合親和性を有する可溶性ＲＡＧＥデコイ（ｓＲＡＧＥ２２−３３１）を標的とする中和抗体による前処置は、両方とも全長型ＲＡＧＥ及びＡＴ１Ｒの両方を発現するＲＡＧＥ−ＡＴ１Ｒ−ＣＨＯ細胞のＲＡＧＥリガンドＳ１００Ａ８／Ａ９による炎症促進性シグナル伝達のＲＡＧＥリガンド依存性誘導をブロックする（図６Ａ）。
【１１６７】
ＲＡＧＥのリガンド結合外部ドメイン（ＲＡＧＥａｂ）又はリガンド結合親和性を有する可溶性ＲＡＧＥデコイ（ｓＲＡＧＥ２２−３３１）を標的とする中和抗体による前処置は、ＲＡＧＥ−ＡＴ１Ｒ−ＣＨＯのＡｎｇ  ＩＩによる炎症促進性シグナル伝達のＲＡＧＥリガンド非依存性誘導に影響しない（図６Ａ）。
【１１６８】
ＲＡＧＥのリガンド結合外部ドメイン（ＲＡＧＥａｂ）又はリガンド結合親和性を有する可溶性ＲＡＧＥデコイ（ｓＲＡＧＥ２２−３３１）を標的とする中和抗体による前処置も、ＡＴ１Ｒ及びＲＡＧＥの両方を内因的に十分にあるＰＭＡＥＣでの炎症促進性シグナル伝達のＡｎｇ  ＩＩ−ＡＴ１Ｒ依存性誘導を減衰しない（図６Ｂ）。ＡＧＥＲ−ＫＯマウスからのＰＭＡＥＣがネガティブコントロールとして示されている。
【１１６９】
対照的に、ＲＡＧＥのリガンド結合外部ドメイン（ＲＡＧＥａｂ）又はリガンド結合親和性を有する可溶性ＲＡＧＥデコイ（ｓＲＡＧＥ２２−３３１）を標的とする中和抗体による前処置は、ＡＴ１Ｒ及びＲＡＧＥの両方を内因的に十分にあるＰＭＡＥＣでのＲＡＧＥリガンドＳ１００Ａ８／Ａ９への曝露後に誘導される炎症促進性シグナル伝達を減衰させることができる（図６Ｃ）。
【１１７０】
実施例５で詳述するＮ末端トランケート型ＲＡＧＥ構築物を使用した発見と併せて、これらのデータは、Ａｎｇ  ＩＩへの曝露後のＲＡＧＥ受容体の活性化が、そのような遊離リガンドによるＲＡＧＥリガンドの遊離又はＲＡＧＥの細胞外ドメインの活性化に依存しないことを確認する。
【１１７１】
＜追加の材料と方法＞
１μＭ  Ａｎｇ  ＩＩ又は５ｎｇ／ｍｌのＲＡＧＥリガンド、Ｓ１００Ａ８／Ａ９に曝露する前に、ＲＡＧＥ（ＲＡＧＥａｂ；Ｒ＆Ｄシステム；１μｇ／ｍＬ）又は可溶性ＲＡＧＥ２２−３３１（ｓＲＡＧＥ；１μｇ／ｍＬ）に対する中和抗体での１時間の前処置の有無で追加実験を実施した。
【１１７２】
［実施例７  共存ＧＰＣＲによるＲＡＧＥリガンド非依存性ＲＡＧＥ活性化は、炎症促進性シグナル伝達を誘導するために細胞質側テールのリン酸化反応を必要としない］
この実施例は、特定の共存ＧＰＣＲによるＲＡＧＥリガンド非依存性ＲＡＧＥ活性化は、炎症促進性シグナル伝達を誘導するためにＲＡＧＥのリン酸化反応を必要としないことを示している。
【１１７３】
Ｓｅｒ３９１のリン酸化反応は、ＲＡＧＥを介したリガンド依存性シグナル伝達に重要であると以前考えられていた。おそらく、ＲＡＧＥの細胞質側テールへのタンパク質アダプターの動員を促進することにより、炎症促進性シグナル伝達を変換する。
【１１７４】
しかし、他の多くの哺乳動物は、ＲＡＧＥの３９１位にリン酸化できないセリン以外の別のアミノ酸を有する。例えば、ラクダは３９１にグルタミンを有し、プロリンは牛、羊、山羊、豚、鹿、他の哺乳類の同じ位置に生まれながらに見られる。これらの残基はリン酸化反応を維持できないが、これらの動物には無傷のＲＡＧＥシグナル伝達経路がある。
【１１７５】
Ｓ３９１がグルタミン（Ｓ３９１Ｑ−ＲＡＧＥ）又はプロリン（Ｓ３９１Ｐ−ＲＡＧＥ）に変異した全長型ＲＡＧＥ構築物によるＡＴ１Ｒ−ＣＨＯ細胞の形質導入により、この部位での潜在的なリン酸化反応をブロックし、ｐ６５−ＮＦκＢ遺伝子発現のＡｎｇ  ＩＩ依存性誘導を媒介し続ける。Ｓ３９１の推定リン酸化部位がグルタミン（Ｓ３９１Ｑ−ＲＡＧＥ）又はプロリン（Ｓ３９１Ｐ−−ＲＡＧＥ）に変異した全長型ＲＡＧＥ構築物での形質導入も、ＡＴ１Ｒ−ＣＨＯ細胞におけるＮＦκＢ発現のＳ１００Ａ８／Ａ９依存性誘導を媒介し続ける（図７Ａ）。
【１１７６】
ＲＡＧＥの３９４〜４０４の最後の１１個のＣ末端残基を、生まれながらに潜在的リン酸化反応部位を含まないマウスＲＡＧＥの細胞質側テールに確認されるそれらの残基に置き換えることにより、ヒトＲＡＧＥの細胞質側テール上（Ｓ３９９、Ｓ４００及びＴ４０１）の他の全ての潜在的リン酸化反応部位を遮断した（すなわちｈＲＡＧＥ３９４−４０４；Ｐ３９４ＥＡＧＥＳＳＴＧＧＰは、ｍＲＡＧＥ３９２−４０４；Ａ３９４ＥＭＰＥＮＧＡＧＧＰに置き換えられ、リン酸化反応のための潜在的部位を含まないキメラＲＡＧＲ（ｃＲＡＧＥ）を生成する（Ｓ３９１Ｑ−ｃＲＡＧＥ）。特に、この構築物は、Ａｎｇ  ＩＩ応答性のＡＴ１Ｒ−ＣＨＯ細胞における野生型ＲＡＧＥ（図７Ｂ）と同様のシグナル伝達が可能であった。ＲＡＧＥを介したリガンド非依存性炎症促進性シグナル伝達にはＲＡＧＥのシグナル伝達誘導性リン酸化反応は不要であり、他の部位はＳ３９１が変異した場合のＲＡＧＥリン酸化反応のための冗長性を伝達しない。
【１１７７】
Ｓ３９１Ｑ−ｃＲＡＧＥは、ＡＴ１Ｒ−ＣＨＯ細胞でＳ１００Ａ８／Ａ９誘導性シグナル伝達を媒介することも示された（図７Ｂ）。これらのデータは、ＲＡＧＥのシグナル伝達誘導性リン酸化反応も、ＲＡＧＥを介したリガンド依存性炎症促進性シグナル伝達に必要ではないこと、又はＳ３９１が変異した場合に細胞質側テールの他のリン酸化反応部位がＲＡＧＥリン酸化反応の冗長性を伝達できることを確認する。
【１１７８】
Ｓ３９１を欠失したＲＡＧＥ構築物（例えば、ＲＡＧＥ２２−３９０）は、ＡＴ１Ｒ−ＣＨＯ細胞においてＮＦκＢ活性化又はｐ６５発現のＡｎｇ  ＩＩ依存性誘導を媒介する能力を有さない（実施例５、図５Ｇを参照されたい）。
【１１７９】
Ｓ３９１のみがアラニンに変異した全長型のＲＡＧＥ構築物（Ｓ３９１Ａ−ＲＡＧＥ）は、ヒトＲＡＧＥのＳ３９９、Ｓ４００及びＴ４０１に他の潜在的なリン酸化反応部位が存在するにもかかわらず、ＡＴ１Ｒ−ＣＨＯ細胞において、ＮＦκＢ発現又は活性（ｐ６５発現により決定される）のＡｎｇ  ＩＩ依存性又はＳ１００Ａ８／Ａ９依存性誘導を媒介する能力を有さない（図７Ａ）。
【１１８０】
Ｓ３９１のみが選択的にアラニンに変異した全長型及びＮ末端トランケート型ＲＡＧＥ構築物（Ｓ３９１Ａ−ＲＡＧＥ）は、ＡＴ１Ｒ−ＣＨＯ細胞において、ＮＦκＢ発現又は活性（ｐ６５発現により決定される）のＡｎｇ  ＩＩ依存性誘導を媒介する能力も有さない（図７Ｃ）。
【１１８１】
Ｓ３９１のみがシステインに変異したＲＡＧＥ構築物（Ｓ３９１−ＣＲＡＧＥ）は、ＡＴ１Ｒ−ＣＨＯ細胞において、ＮＦκＢ発現又は活性（ｐ６５発現により決定される）のＡｎｇ  ＩＩ依存性又はＳ１００Ａ８／Ａ９依存性誘導を媒介する能力も有さない（図７Ａ）。
【１１８２】
Ｓ３９１がロイシンに変異した全長型ＲＡＧＥ構築物（Ｓ３９１Ｌ−ＲＡＧＥ）は、ＡＴ１Ｒ−ＣＨＯ細胞において、ＮＦκＢ発現のＡｎｇ  ＩＩ依存性誘導を媒介する能力を保持するが、ＲＡＧＥリガンドＳ１００Ａ８／Ａ９によって誘導されるシグナル伝達を失う（図７Ａ）。
【１１８３】
対照的に、Ｓ３９１がグルタミン酸に変異した全長型ＲＡＧＥ構築物（Ｓ３９１Ｅ−ＲＡＧＥ）は、ＡＴ１Ｒ−ＣＨＯ細胞において、ＮＦκＢ発現のＡｎｇ  ＩＩ依存性誘導を媒介する能力を失う（図７Ａ）が、ＲＡＧＥリガンド、Ｓ１００Ａ８／Ａ９への曝露後にシグナル伝達の能力を保持する（図７Ａ）。
【１１８４】
Ｓ３９１がイソロイシン、メチオニン、スレオニン又はトリプトファンに変異したＮ末端トランケートｍＣｈｅｒｒｙ−ＲＡＧＥ３６２−４０４構築物によるＡＴ１Ｒ−ＣＨＯ細胞の形質導入は、ＮＦκＢ発現（ｐ６５発現により決定される）のＡｎｇ  ＩＩ依存性誘導を媒介する野生型ＲＡＧＥ３６２−４０４の形質導入能力を保持する（図７Ｄ）。対照的に、Ｓ３９１がアラニン、アスパラギン酸、グルタミン酸、フェニルアラニン、グリシン、ヒスチジン、リジン、アスパラギン、アルギニン、バリン又はチロシンに変異したＮ末端トランケート型ＲＡＧＥ３６２−４０４構築物での形質導入では、野生型ＲＡＧＥと比較した場合、ＡＴ１Ｒ−ＣＨＯ細胞において、ＮＦκＢ発現又は活性（ｐ６５発現により決定される）のＡｎｇ  ＩＩ依存性誘導の回復ができない（図７Ｄ）。
【１１８５】
［実施例８  共存ＧＰＣＲによるＲＡＧＥリガンド非依存性ＲＡＧＥ活性化及びＲＡＧＥリガンド依存性ＲＡＧＥ活性化におけるＭＹＤ８８の共通の役割］
この実施例では、特定の共存ＧＰＣＲによるＲＡＧＥリガンド非依存性ＲＡＧＥ活性化及びＲＡＧＥリガンド依存性ＲＡＧＥ活性化におけるミエロイド系分化因子８８（ｍｙＤ８８）の共通の役割について説明する。
【１１８６】
共通アダプタータンパク質ｍｙＤ８８は、ＲＡＧＥ及びＴＬＲ−３を除く全てのＴｏｌｌ様受容体（ＴＬＲ）を含む他の多くの受容体だけではなくＲＡＧＥ活性化後の下流の炎症促進性シグナル伝達に重要であることが以前に示されている。リガンド依存性ＲＡＧＥ活性化は、ＭｙＤ８８及びＲＡＧＥの細胞質側テールへのアダプタータンパク質（ＴＩＲＡＰ）を含むトルインターロイキン−１受容体ドメインを含む他の一般的なアダプタータンパク質の動員を促進すると考えられており、ＩＲＡＫ４を通じて動員及びシグナル伝達を変換し、最終的には、ＮＦκＢの活性化につながる。
【１１８７】
ｓｉＲＮＡを使用したｍｙＤ８８発現のサイレンシングは、ＰＭＡＥＣのＲＡＧＥリガンドＳ１００Ａ８／Ａ９によって誘導される、主要な接着分子であるＩＣＡＭ−１のＮＦκＢ依存性誘導を阻害する（図８Ａ）。この効果は、この下流標的であるｐ６５のサイレンシングに匹敵する。
【１１８８】
ｓｉＲＮＡを使用したＭｙＤ８８発現のサイレンシングは、主要な接着分子であるＩＣＡＭ−１の遺伝子発現のＮＦκＢ依存性活性化を含む、ＰＭＡＥＣのＡｎｇ  ＩＩによるＲＡＧＥリガンド非依存性ＲＡＧＥ活性化によって誘導されるシグナル伝達も阻害する（図８Ｂ）。
【１１８９】
ｓｉＲＮＡを使用したＭｙＤ８８発現のサイレンシングは、主要な接着分子の遺伝子発現のＮＦκＢ依存性活性化、ＨＭＥＣのＡｎｇ  ＩＩによるＲＡＧＥリガンド非依存性ＲＡＧＥ活性化によって誘導されるＭＣＰ−１も阻害する（図８Ｃ）。この阻害はＲＡＧＥ３６２−４０４によってレスキューされ（図８Ｃ）、本発明者らによって同定されたＲＡＧＥの機能的代替物は、ＭｙＤ８８が無関係に機能していることを確認している。
【１１９０】
［実施例９  共存ＧＰＣＲによるＲＡＧＥリガンド非依存性ＲＡＧＥ活性化及びＲＡＧＥリガンド依存性ＲＡＧＥ活性化におけるＰＫＣ−ＺＥＴＡの共通の役割］
この実施例では、特定の共存ＧＰＣＲ及びＲＡＧＥリガンド依存性ＲＡＧＥ活性化によるＲＡＧＥリガンド非依存性ＲＡＧＥ活性化におけるＰＫＣζの共通の役割について説明する。
【１１９１】
非定型ＰＫＣであるＰＫＣζは、ＲＡＧＥリガンド依存性ＲＡＧＥ活性化及びその後の下流経路の活性化に重要であることが以前に示されている。ＰＫＣζは、ＲＡＧＥの細胞質側テール及び別のＲＡＧＥ結合パートナーであるＤｉａｐｈ１に結合することが示されている。
【１１９２】
ＰＫＣζは、ＭＡＰキナーゼシグナル伝達、ＮＦκＢ活性化、細胞極性、インスリン媒介グルコース取り込み及び長期記憶増強などを含む多くのシグナル伝達経路に関与する多面性キナーゼである。ＰＫＣζは、炎症促進性シグナル伝達のＴＬＲ２／４依存性誘導を含む他の多くのシグナル伝達経路にも関与している。ＰＫＣζは、受容体の下流のシグナル伝達及び機能における主要なイベントである活性化ＧＰＣＲのリン酸化状態も調節する。
【１１９３】
ｓｉＲＮＡを使用したＰＫＣζ発現のサイレンシング又は偽基質（ｉＰＫＣζ）によるＰＫＣζの阻害は、ＲＡＧＥ発現のサイレンシングと同等の効果で、ＰＭＡＥＣのＲＡＧＥリガンドＳ１００Ａ８／Ａ９によって誘導されるシグナル伝達を阻害する（図９Ａ）。これは、ＰＫＣζのサイレンシング又は阻害が、ＴＬＲ２／４を介してＳ１００Ａ８／Ａ９のシグナル伝達をサイレンシングすることで作用するのではなく、むしろ具体的には全長型ＲＡＧＥを通じて、特にシグナル伝達を変更することによって作用することをさらに確認しする。
【１１９４】
ｓｉＲＮＡを使用したＰＫＣζ発現のサイレンシング又は偽基質（ｉＰＫＣζ）によるＰＫＣζの阻害は、主要接着分子であるＩＣＡＭ−１のＮＦκＢ依存性活性化を含む、Ａｎｇ  ＩＩによる全長型ＲＡＧＥリガンド非依存性ＲＡＧＥ活性化によって誘導されるシグナル伝達も阻害する（図９Ｂ）。
【１１９５】
ＡＴ１Ｒ−ＣＨＯ細胞でのＡｎｇ  ＩＩへの曝露後のｐ６５及びＰＣＮＡのＮＦκＢ依存性活性化により評価されるように（図９Ｃ）、偽基質（ＰＫＣζｉ）によるＰＫＣζの阻害は、全長型Ｓ３９１Ｑ−ｃＲＡＧＥ２２−４０４（リン酸化可能な細胞質側テールにセリン又はスレオニンを含まない）のＲＡＧＥリガンド非依存性活性化によって誘導されるシグナル伝達も阻害し、ＲＡＧＥのリン酸化反応を誘導することによるＲＡＧＥシグナル伝達経路にＰＫＣζが作用していないことを確認する。
【１１９６】
対照的に、ｓｉＲＮＡを使用したＰＫＣζ発現のサイレンシングは、主要な接着分子の遺伝子発現のＮＦκＢ依存性活性化、ＨＭＥＣにおけるＡｎｇ  ＩＩによるＲＡＧＥ３６２−４０４のリガンド非依存性ＲＡＧＥ活性化によって誘導されるＭＣＰ−１を阻害せず（図９Ｄ）、本発明者らによって同定されたＲＡＧＥの機能的代替物は、ＰＫＣζが無関係に機能していることを確認する。
【１１９７】
＜追加の材料と方法＞
ＰＫＣζ（ｉＰＫＣζ、５μＭ、Ｔｏｃｒｉｓ）の偽基質による１時間の前処置の有無で追加実験を実施した。
【１１９８】
［実施例１０  ＲＡＧＥリガンド依存性ＲＡＧＥ活性化と比較した共存ＧＰＣＲによるＲＡＧＥリガンド非依存性ＲＡＧＥ活性化におけるＤＩＡＰＨＡＮＯＵＳ−１の異なる役割］
この実施例では、ＲＡＧＥリガンド依存性ＲＡＧＥ活性化と比較した特定の共存ＧＰＣＲによるＲＡＧＥリガンド非依存性ＲＡＧＥ活性化におけるＤｉａｐｈａｎｏｕｓ―１（Ｄｉａｐｈ１）の異なる役割について述べる。具体的には、ＲＡＧＥの荷電パッチ（Ｒ３６６〜Ｑ３６７）及びＤｉａｐｈ１と複合することが知られている安定化するαターンへの依存性を述べ、ＲＡＧＥリガンド依存性及びＲＡＧＥを介したＲＡＧＥリガンド非依存性（トランス活性化）誘導性シグナル伝達の主要な違いを示している。
【１１９９】
フォルミン型タンパク質、Ｄｉａｐｈａｎｏｕｓ−１（Ｄｉａｐｈ１）は、ＲＡＧＥリガンドによって誘導される炎症促進性シグナル伝達の主要な要素と見なされている。
【１２００】
Ｄｉａｐｈ１発現のサイレンシングは、ネガティブコントロールとして作用するＲＡＧＥのサイレンシングと同等の効果で、ＰＭＡＥＣのＲＡＧＥリガンドであるＳ１００Ａ８／Ａ９（５ｎｇ／ｍＬ）によって誘導された全長型ＲＡＧＥを介したリガンド依存性シグナル伝達を減衰させる（図１０Ａ）。
【１２０１】
ＲＡＧＥの帯電したパッチ（Ｒ３６６〜Ｑ３６７）は、Ｄｉａｐｈ１との複合体を安定化させるαターンを形成すると考えられている（Ｒａｉ，ｅｔ  ａｌ．２０１６）。Ｄｉａｐｈ１とＲＡＧＥが相互作用すると考えられる帯電したパッチを選択的に破壊するＲ３６６〜Ｑ３６７の突然変異は、全長型Ｒ３６６Ａ−Ｑ３６７Ａ−ＲＡＧＥを発現するＡＴ１Ｒ  ＣＨＯ細胞でのＳ１００Ａ８／Ａ９誘導性シグナル伝達を防ぐことができる（図１０Ｂ）。
【１２０２】
Ｄｉａｐｈ１発現のサイレンシングは、ＰＭＡＥＣでのＩＣＡＭ−１及びＶＣＡＭ−１発現の誘導（図１０Ｃ）を含む、Ａｎｇ  ＩＩによって誘導された全長型ＲＡＧＥを介したリガンド非依存性ＲＡＧＥシグナル伝達も減衰し、Ａｎｇ  ＩＩへの曝露後、内皮単層への白血球接着の機能的誘導を阻害する（図１０Ｄ）。
【１２０３】
対照的に、変異した全長型Ｒ３６６Ａ−Ｑ３６７Ａ−ＲＡＧＥ２２−４０４及びＮ末端トランケート型ｍＣｈｅｒｒｙ−Ｒ３６６Ａ−Ｑ３６７Ａ−ＲＡＧＥ３６２−４０４では、Ｄｉａｐｈ１及びＲＡＧＥが相互作用すると考えられる帯電したパッチが破壊され、ＡＴ１Ｒ−ＣＨＯ細胞でのＡｎｇ  ＩＩによって誘導されるＲＡＧＥリガンド非依存性シグナル伝達を媒介する（図１０Ｂ）。
【１２０４】
さらに、Ｄｉａｐｈ１及びＲＡＧＥが相互作用すると考えられる帯電したパッチを欠失しても（例えば、ＲＡＧＥ３７０−４０４）、ＲＡＧＥリガンド非依存性ＲＡＧＥ活性化及びＡＴ１Ｒ−ＣＨＯ細胞のＡｎｇ  ＩＩによって誘導される炎症促進性シグナル伝達を防ぐことをしない（図１０Ｅ）。
【１２０５】
さらに、ｓｉＲＮＡを使用したＤｉａｐｈ１発現のサイレンシングは、ＨＭＥＣにおけるＡｎｇ  ＩＩによるＲＡＧＥ３６２−４０４のリガンド非依存性ＲＡＧＥ活性化によって誘導されるＭＣＰ−１遺伝子発現のＮＦκＢ依存性活性化を阻害せず（図１０Ｆ）、本発明者らによって同定されたＲＡＧＥの機能的代替物は、Ｄｉａｐｈ１が無関係に機能していることを確認する。
【１２０６】
これらを総合すると、これらのデータは、ＲＡＧＥの帯電したパッチ及びＤｉａｐｈ１間の相互作用を破壊する方法が、特定の共存ＧＰＣＲによるＲＡＧＥを介したＲＡＧＥリガンド非依存性シグナル伝達に直接影響しないことを意味する。
【１２０７】
理論に拘束されることを望むものではないが、本発明者らは、Ｄｉａｐｈ１及び全長型ＲＡＧＥが相互作用すると考えられている帯電したパッチの突然変異及び欠失が、この相互作用を通じて生じる結合制限の緩和に作用すると考えられている。つまり、この結合ドメインのないＮ末端トランケート型ＲＡＧＥペプチド（例えば、ＲＡＧＥ３７０−４０４）又はこのドメインが変更された変異ペプチド（例えば、Ｒ３６６Ａ−Ｑ３６７Ａ−ＲＡＧＥ３６２−４０４）は、帯電したパッチが存在している構築物であるｍＣｈｅｒｒｙ−Ｓ３９１Ａ−ＲＡＧＥ３６２−４０４（０．４ｎｇ／ｍｌ）による前処置により与えられるトランス活性化の阻害を克服することができる（図１０Ｇ）。
【１２０８】
［実施例１１  共存ＧＰＣＲによるＲＡＧＥリガンド非依存性ＲＡＧＥ活性化及びＲＡＧＥリガンド依存性ＲＡＧＥ活性化におけるＩＱＧＡＰ−１の共通の役割］
この実施例では、ＲＡＧＥの活性化におけるＩＱＧＡＰ−１の役割について説明する。
【１２０９】
ＩＱＧＡＰ−１は、アクチン細胞骨格の組織、転写及び細胞接着から細胞周期の調節に至るまで、種々の細胞プロセスの調節に関与する足場タンパク質である。ＩＱＧＡＰ−１は、Ｃｄｃ４２、Ｒａｃ−１、カルモジュリン−１及びＥＲＫ１／２の活性型を含むＲＡＧＥエフェクター分子に結合することが知られている。
【１２１０】
ＩＱＧＡＰ−１発現のサイレンシングは、ＰＭＡＥＣのＡｎｇ  ＩＩによって誘導されるＲＡＧＥを介したＲＡＧＥリガンド非依存性シグナル伝達（図１１Ａ）及びＰＭＡＥｃのＳ１００Ａ８／Ａ９によって誘導されるＲＡＧＥリガンド依存性シグナル伝達（図１１Ｂ）を減衰させる。
【１２１１】
ＲＡＧＥの細胞質側テールの変異型であるＳ３９１Ａ−ＲＡＧＥ３６２−４０４は、Ｓ３９１Ａ−ＲＡＧＥ３６２−４０４でコーティングされたカラムを使用して他のサイトゾル成分から特異的に精製される能力によって示されるように、ＩＱＧＡＰ−１と優先的に結合する（図１１Ｃ）。この戦略は、ＩＱＧＡＰ−１に関連するタンパク質、エズリン／ラディキシン／モエシンも破壊した。
【１２１２】
ｓｉＲＮＡを使用したＩＱＧＡＰ−１発現のサイレンシングは、ＨＭＥＣのＡｎｇ  ＩＩによるＲＡＧＥ３６２−４０４のＲＡＧＥリガンド非依存性活性化によって誘導されるＭＣＰ−１遺伝子発現のＮＦκＢ依存性活性化も阻害し（図１１Ｄ）、本発明者らによって同定されたＲＡＧＥの機能的代替物は、ＩＱＧＡＰ−１に機能的に依存することを確認する。
【１２１３】
＜追加の材料と方法＞
＜プルダウン実験の方法＞
ＴＡＴ−Ｃｈｅｒｒｙ−Ｓ３９１Ａ−ＲＡＧＥ３６２−４０４ペプチド及びＴＡＴ−ｍＣｈｅｒｒｙ対照ペプチドを重力流ＮｉＮＴＡカラムに結合し、溶解緩衝液（５０ｍＭ  Ｔｒｉｓ  ｐＨ７．５、３００ｍＭ  ＮａＣｌ、５ｍＭ  β−メルカプトエタノール、１０ｍＭイミダゾールを使用して平衡化した。Ｈｓ−ＡＴ１Ｒで安定的に形質導入された５×１０７のＣＨＯ細胞をＲＩＰＡ緩衝液（１％ＮＰ−４０、０．５％Ｎａ−デオキシコール酸、プロテアーゼ及びホスファターゼ阻害剤を添加した１×ＰＢＳ）で溶解し、溶解緩衝液で５０ｍｌに希釈し、重力流によりＮｉ−ＮＴＡカラムに２回通した。１ｍｌカラムを徹底的に洗浄した（２００ｍｌの洗浄緩衝液：５０ｍＭ  Ｔｒｉｓ  ｐＨ７．４、３００ｍＭ  ＮａＣｌ、５ｍＭ  β−メルカプトエタノール、２０ｍＭイミダゾール）。洗浄後、２ｍｌの溶出緩衝液（５０ｍＭ  Ｔｒｉｓ  ｐＨ７．４、３００ｍＭ  ＮａＣｌ、５ｍＭ  β−メルカプトエタノール、２５０ｍＭイミダゾール）をカラムに充填し、Ａペプチド又はＴＡＴ−ｍＣｈｅｒｒｙ対照ペプチドのいずれかに結合したタンパク質の溶出に使用した。質量分析法によるプロテオーム解析のために、サンプル１ｍｌが提供された。Ｖｅｎｎｙ２．１．０を使用して、２つのタンパク質に特異的に結合したタンパク質のリストを生成した。
【１２１４】
［実施例１２  マウスＳＶＥＣにおける共存ＧＰＣＲによるＲＡＧＥリガンド非依存性ＲＡＧＥ活性化の阻害］
この実施例では、ＲＡＧＥの細胞質側テールの特定の成分を使用して、Ａｎｇ  ＩＩへの曝露後のマウスＳＶＥＣでＲＡＧＥを介して誘導されるＲＡＧＥリガンド非依存性シグナル伝達を阻害する方法について説明する。
【１２１５】
全長型Ｓ３９１Ａ−ＲＡＧＥ２２−４０４及びＮ末端トランケート型ｍＣｈｅｒｒｙ−Ｓ３９１Ａ−ＲＡＧＥ３６２−４０４によるマウスＳＶＥＣの形質導入は、ＲＡＧＥ発現を内因的に十分にあるマウスＳＶＥＣのＡｎｇ  ＩＩによるＩＣＡＭ−１遺伝子発現の誘導を防ぐことができる（図１２Ａ）。
【１２１６】
全長型（ＲＡＧＥ２２−４０４）及び野生型コンフォメーション（Ｓ３９１）を保持するＮ末端トランケート型ｍＣｈｅｒｒｙ−ＲＡＧＥ構築物によるマウスＳＶＥＣの形質導入は、Ａｎｇ  ＩＩへの曝露後のＩＣＡＭ−１遺伝子発現の誘導に影響しない（図１２Ａ）。
【１２１７】
Ｃ末端トランケート型Ｓ３９１Ｘ−ＲＡＧＥ変異体（すなわちＲＡＧＥ２２−３９０及びｍ−Ｃｈｅｒｒｙ−ＲＡＧＥ３７０−３９０）によるマウスＳＶＥＣの形質導入は、ＲＡＧＥ発現を内因的に十分にあるマウスＳＶＥＣのＡｎｇ  ＩＩによるＩＣＡＭ−１の誘導も防止する（図１２Ａ）。
【１２１８】
ＳＶＥＣでＲＡＧＥシグナル伝達を阻害することが実証されている最小の配列は、ｍＣｈｅｒｒｙ−ＲＡＧＥ３７９−３９０である（図１２Ｂ）。さらにＮ末端又はＣ末端の欠損（例えば、ｍＣｈｅｒｒｙ−ＲＡＧＥ３８０−３９０）又は細胞質側テールの他の成分を含むがＲＡＧＥ３７９−３９０ドデカペプチドを含まないペプチドは、ＲＡＧＥ活性化を介したＡｎｇ  ＩＩの炎症促進性作用に対する阻害効果を示さない。
【１２１９】
追加のｍＣｈｅｒｒｙタンパク質は、細胞モデルでの導入遺伝子構築物の発現を確実にする実用的な手段を提供する。ただし、（ｉ）ｍＣｈｅｒｒｙ（対照）の発現自体はシグナル伝達経路に阻害効果を有さず（図１２Ｂ）、且つ（ｉｉ）ｍＣｈｅｒｒｙタンパク質が取り除かれたＮ末端トランケート型ＲＡＧＥ構築物は、ｍＣｈｅｒｒｙ−ＲＡＧＥ融合タンパク質を発現する構築物として、ＲＡＧＥ−ＡＴ１Ｒ−ＣＨＯ細胞でのＡｎｇ  ＩＩ依存性シグナル伝達の同様の阻害を達成した（図１２Ｃ）ため、上記で詳述した（図１２Ｂ）ように、Ｎ末端トランケート型ＲＡＧＥの機能的阻害作用には関与しない。
【１２２０】
このＲＡＧＥ配列から生じるペプチドは、αヘリックスであると予測される。αヘリックスは、キャッピングアミノ酸への変化によって安定化又は破壊される可能性があるため、追加の選択的変異が行われた。特に、アラニン置換によるグルタミン３７９又はグルタミン３９０のいずれかの損失は、ヘリックスを不安定にし、阻害の損失をもたらした。その上、グルタミンからリジンへの変異体Ｑ３９０Ｋ−ＲＡＧＥ３７０−３９０及びＱ３７９Ｋ−ＲＡＧＥ３７０―３９０は最大の阻害効果を保持するように見えたが、末端のリジン又はアルギニンが、αヘリックス立体構造のドデカペプチドの安定化においてより大きい効果を有するという既知の技術と一致する（図１２Ｄ）。
【１２２１】
ドデカペプチドＲＡＧＥ３７９−３９０のこの配列は、ストレプトマイセスを含む共生生物由来の免疫調節性細菌タンパク質の配列と相同性がある（図１２Ｅ）。哺乳類のみがＲＡＧＥの遺伝子を保有するが、病原体におけるＲＡＧＥ阻害配列の存在は、炎症を含む哺乳類の宿主防御を回避／減衰する生存メカニズムと一致している。
【１２２２】
ＳＶＥＣ細胞におけるＡｎｇ  ＩＩを用いたＡＴ１Ｒの活性化後のＩＣＡＭ−１発現の誘導を阻害するＲＡＧＥ３７０−３９０の能力は、以下のグルタミンからアラニンへの突然変異：Ｑ３９０Ａ−ＲＡＧＥ３７０−３９０又はＱ３７９Ａ−ＲＡＧＥ３７０−３９０（図１２Ｄ）、Ｌ３８８Ａ−ＲＡＧＥ３７０−３９０、Ｅ３８４Ａ−ＲＡＧＥ３７０−３９０、Ｅ３８２Ａ−ＲＡＧＥ３７０−３９０及びＥ３８０Ａ−ＲＡＧＥ３７０−３９０により失われるが、ＳＶＥＣ細胞のシグナル伝達を野生型ＲＡＧＥ３７０−３９０として抑制し続ける。
【１２２３】
＜追加の材料と方法＞
内因性ＲＡＧＥのトランス活性化を阻害するＲＡＧＥ構築物の可能性を調べるため、２５ｍＭグルコースを含む１０％ＦＢＳ／ＤＭＥＭで培養した不死化マウス内皮細胞（Ｓｖｅｃ４−１０、ＡＴＣＣ）で追加実験を行った。ＳＶＥＣには、製造元の取扱説明書に従ってＬｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅ２０００（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）を使用して、切断されたＲＡＧＥ構築物を形質導入するか、又はＲＡＧＥオリゴペプチド（２８０ｐＭ）で処置した。１μＭ  Ａｎｇ  ＩＩで処置する前に、細胞を、１０％ＦＢＳを含む培地で１６時間回復させた。
【１２２４】
［実施例１３  インビトロでの共存ＧＰＣＲによるＲＡＧＥリガンド非依存ＲＡＧＥ活性化の標的化］
この実施例では、特定の共存ＧＰＣＲによるＲＡＧＥリガンド非依存ＲＡＧＥ活性化の細胞膜透過性ペプチドモジュレーターによる細胞の処置が、細胞培養内で、ＲＡＧＥリガンド非依存性ＲＡＧＥ活性化を介して炎症促進性シグナル伝達の誘導を調節できることを実証する。
【１２２５】
ＲＡＧＥの細胞質側テールの活性化を介してＡＴ１Ｒ依存性シグナル伝達を標的化する治療可能性を検証するため、ｍＣｈｅｒｒｙ蛍光タンパク質（発現と伝達を定量化するため）及びＨＩＶ−ＴＡＴモチーフ（細胞透過を促進するため）で標識されたＲＡＧＥのＣ末端４３アミノ酸を構成するオリゴペプチドは、代替品として機能するために生成された。１つのバージョンでは、３９１のセリン残基は、内因性ＲＡＧＥの活性化を阻害する能力をシグナル化及び強化する能力を中和するために、アラニンに変更された（Ｓ３９１Ａ−ＲＡＧＥ３６２−４０４；配列番号１）。
【１２２６】
活性化する野生型構築物からの１つのアミノ酸残基のみが異なるＴＡＴ−ｍＣｈｅｒｒｙ−Ｓ３９１Ａ−ＲＡＧＥ３６２−４０４融合タンパク質０．４ｎｇ／ｍｌ）によるＡＴ１Ｒ−ＣＨＯ細胞（ＲＡＧＥを発現しない）の処置は、Ａｎｇ  ＩＩによるｐ６５−ＮＦκＢの発現の誘導を促進しない（図１３Ａ）。
【１２２７】
野生型ＴＡＴ−ｍＣｈｅｒｒｙ−ＲＡＧＥ３６２−４０４融合ペプチド（１ｎｇ／ｍｌ）で前処置され、その後、ＴＡＴ−ｍＣｈｅｒｒｙ−Ｓ３９１Ａ−ＲＡＧＥ３６２−４０４融合タンパク質（１ｎｇ／ｍｌ）で処置されたＡＴ１Ｒ−ＣＨＯ細胞では、野生型ペプチドによるＡｎｇ  ＩＩ誘導性の炎症促進性シグナル伝達の回復を防ぐことができる（図１３Ｂ）。
【１２２８】
ＴＡＴ−ｍＣｈｅｒｒｙ−Ｓ３９１Ａ−ＲＡＧＥ３６２−４０４融合タンパク質（１ｎｇ／ｍｌ）で処置したＡＴ１Ｒ−ＣＨＯ細胞では、１０００倍過剰であっても、野生型ＴＡＴ−ｍＣｈｅｒｒｙ−ＲＡＧＥ３６２−４０４融合ペプチドの後続処置によっては、未処置の細胞と比較した場合、ｐ６５のＡｎｇ  ＩＩ誘導性発現に対する応答性を回復することはできない（図１３Ｃ）。
【１２２９】
Ｓ３９１Ｑ−ｃＲＡＧＥ２２−４０４（すなわちリン酸化可能な要素を含まない構築物）を発現するＡＴ１Ｒ−ＣＨＯ細胞では、ＴＡＴ−ｍＣｈｅｒｒｙ−Ｓ３９１Ａ−ＲＡＧＥ３６２−４０４融合タンパク質（０．４ｎｇ／ｍｌ）での後続処置により、ｐ６５−ＮＦκＢ及び増殖マーカーＰＣＮＡのＡｎｇ  ＩＩ誘導導入を防止でき、ＲＡＧＥのリン酸化反応とは無関係に調節が達成されることを確認した（図１３Ｄ）。
【１２３０】
野生型ＴＡＴ−ｍＣｈｅｒｒｙ−ＲＡＧＥ３６２−４０４融合ペプチド（０．４ｎｇ／ｍｌ）によるＡＧＥＲ−ＫＯマウス（ＲＡＧＥ欠損）のＰＭＡＥＣの処置は、ｐ６５−ＮＦκＢ及びＮＦκＢ依存性炎症促進性遺伝子、ＩＣＡＭ−１、ＶＣＡＭ−１及びＭＣＰ−１の発現のＡｎｇ  ＩＩを介した誘導を回復することができる。（図１３Ｅ）。
【１２３１】
ＴＡＴ−ｍＣｈｅｒｒｙ−Ｓ３９１Ａ−ＲＡＧＥ３６２−４０４融合タンパク質（０．４ｎｇ／ｍｌ）によるｃ５７ｂｌ６マウスから得られたＲＡＧＥに富んだＰＭＡＥＣの処置は、ＮＦκＢ活性化の標準的及び非標準的経路の活性化（それぞれＣＸＣＬ１２及びＣＸＣＬ２の発現の誘導により検出される）及びＶＣＡＭ−１遺伝子発現の下流のＮＦκＢ依存性誘導（図１３Ｆ）につながる下流シグナル伝達のＡｎｇ  ＩＩ誘導導入をブロックする。ＴＮＦαは、標準ＮＦκＢシグナル伝達のポジティブコントロールとして示されており、ＴＡＴ−ｍＣｈｅｒｒｙ−Ｓ３９１Ａ−ＲＡＧＥ３６２−４０４融合タンパク質の影響を受けない。
【１２３２】
ＴＡＴ−ｍＣｈｅｒｒｙ−Ｓ３９１Ａ−ＲＡＧＥ３６２−４０４融合タンパク質（０．４ｎｇ／ｍｌ）によるＲＡＧＥに富んだヒトＡＥＣの処置は、炎症促進性遺伝子、ＩＣＡＭ−１、ＶＣＡＭ−１、ＭＣＰ−１、ＴＮＦα及びＩＬ−６のＮＦκＢ依存性誘導につながるＡｎｇ  ＩＩ誘導性の下流シグナル伝達もブロックする（図１３Ｇ）。阻害効果は、ＡＴ１ＲブロッカーであるＨＡＥＣのイルベサルタンで達成される効果に匹敵する。
【１２３３】
ＴＡＴ−ｍＣｈｅｒｒｙ−Ｓ３９１Ａ−ＲＡＧＥ３６２−４０４融合タンパク質（０．４ｎｇ／ｍｌ）での処置は、（ｉ）ＲＡＧＥ−ＡＴ１Ｒ−ＣＨＯ細胞において、且つ（ｉｉ）ＲＡＧＥに富んだＰＭＡＥＣにおいて、ＲＡＧＥリガンド、Ｓ１００Ａ８／Ａ９による炎症促進性遺伝子発現のその後の誘導も阻害する（図１３Ｈ）。
【１２３４】
＜追加の材料と方法＞
ヒト組織への抑制戦略の適用性を確認するために、ヒト由来の一次大動脈内皮細胞（Ｌｏｎｚａ）で追加実験が行われた。ＨＡＥＣはＥＧＭ−２培地で成長した。Ａｎｇ  ＩＩ（１μＭ）又はＳ１００Ａ８／Ａ９（２μｇ／ｍｌ；Ｒ＆Ｄ  ｓｙｓｔｅｍｓ）のいずれかで２時間前処置し、いずれの場合も、０．４ｎｇ／ｍｌの用量でｍＣｈｅｒｒｙ−ＴＡＴ（対照）、ＴＡＴ−ｍＣｈｅｒｒｙ−ＲＡＧＥ３６２−４０４（野生型）又はＴＡＴ−ｍＣｈｅｒｒｙ−Ｓ３９１Ａ−ＲＡＧＥ３６２−４０４で３０分間処置した。さらなる対照として、ＡＴ１Ｒブロッカーイルベサルタンの阻害効果（１μＭ；Ａｎｇ  ＩＩ投与の３０分前）もＨＡＥＣで調査した。
【１２３５】
［実施例１４  エクスビボの大動脈での共存ＧＰＣＲによるＲＡＧＥリガンド非依存ＲＡＧＥ活性化の標的化］
この実施例では、ＲＡＧＥリガンド非依存性ＲＡＧＥ活性化の細胞膜透過性ペプチド阻害剤（ＴＡＴ−ｍＣｈｅｒｒｙ−Ｓ３９１Ａ−ＲＡＧＥ３６２−４０４融合タンパク質、８ｎｇ／ｍｌ）による大動脈の処置がエクスビボでのＲＡＡＳ媒介炎症の誘導を防ぐことができることを実証する。
【１２３６】
実施例４でも詳述するように、Ａｎｇ  ＩＩへのエクスビボ曝露は、ａｐｏＥ−ＫＯマウスから摘出された大動脈におけるアテローム形成促進メディエーターの発現を増加させる（図１４Ａ）。対照的に、Ａｎｇ  ＩＩによるＡＧＥＲ／ａｐｏＥ−ＤＫＯマウスから採取した大動脈のエクスビボでの処置は、これらのアテローム生成メディエーターの誘導を引き起こさない（図１４Ｂ）。
【１２３７】
ＲＡＧＥリガンド非依存性ＲＡＧＥ活性化の細胞膜透過性ペプチド阻害剤（ＴＡＴ−ｍＣｈｅｒｒｙ−Ｓ３９１Ａ−ＲＡＧＥ３６２−４０４融合タンパク質、８ｎｇ／ｍｌ）によるａｐｏＥ−ＫＯマウス由来の大動脈の前処置は、Ａｎｇ  ＩＩ依存性の接着分子の誘導を防ぎ、リアルタイムＲＴ−ＰＣＲで測定された遺伝子発現で検出される（図１４Ａ）。
【１２３８】
ＡＧＥＲ／ａｐｏＥ−ＤＫＯマウス由来の大動脈を細胞膜透過性野生型ＲＡＧＥペプチド（ＴＡＴ−ｍＣｈｅｒｒｙ−ＲＡＧＥ３６２−４０４融合タンパク質、８μｇ／ｍｌ）で前処置は、Ａｎｇ  ＩＩ依存性の接着分子及び炎症マーカーの誘導が回復し、リアルタイムＲＴ−ＰＣＲで測定した遺伝子発現で検出された（図１４Ｂ）。
【１２３９】
＜追加の材料と方法＞
大動脈はａｐｏＥ−ＫＯ及びＡＧＥＲ／ａｐｏＥ−ＤＫＯマウスから摘出され、分割されてクレブス緩衝液に入れられた。そして、３７°Ｃの緩衝液を通してカルボゲンガス（９５％Ｏ２；５％ＣＯ２）を注入することにより生理的ｐＨに維持された。大動脈を無作為化して、ｍＣｈｅｒｒｙ−ＴＡＴ（対照）、ｍＣｈｅｒｒｙ−ＴＡＴ−ＲＡＧＥ３６２−４０４（野生型）又はｍＣｈｅｒｒｙ−ＴＡＴ−Ｓ３９１Ａ−ＲＡＧＥ３６２−４０４オリゴペプチド（全て８ｎｇ／ｍＬ）で前処置を行った。３０分後、大動脈はＡｎｇ  ＩＩ（１μＭ）に４時間曝露された。インキュベーションの最後に、大動脈をトリゾールに入れ、ｍＲＮＡを抽出し、ｃＤＮＡを合成した。次に、上記で詳述したように、アテローム形成促進メディエーターの遺伝子発現を定量的リアルタイムＲＴ−ＰＣＲにより推定した。
【１２４０】
［実施例１５  ライブマウスでの共存ＧＰＣＲ（トランス活性化）によるＲＡＧＥリガンド非依存性ＲＡＧＥ活性化の標的化］
この実施例では、ＲＡＧＥリガンド非依存性ＲＡＧＥ活性化の細胞膜透過性ペプチド阻害剤による処置が、ａｐｏＥ−ＫＯマウスにおけるＲＡＡＳ媒介アテローム性動脈硬化の誘発を防ぐことができることを実証する。
【１２４１】
実施例３に詳述するように、Ａｃｅ２／ａｐｏＥ−ＤＫＯマウスにおけるＡｃｅ２の遺伝的欠損は、Ａｃｅ２が十分にあるａｐｏＥ−ＫＯマウスと比較した場合、１６週齢でのプラーク蓄積の増加をもたらす。Ａｃｅ２／ＡＧＥＲ／ａｐｏＥトリプルＫＯマウスは、遺伝的Ａｃｅ２欠損に関連するアテローム性動脈硬化のこの増加に対して保護されている（図１５Ａ）。
【１２４２】
Ａｃｅ２／ａｐｏＥ−ＤＫＯマウスのＲＡＧＥリガンド非依存性ＲＡＧＥ活性化の細胞膜透過性ペプチド阻害剤による処置（ＴＡＴ−ｍＣｈｅｒｒｙ−Ｓ３９１Ａ−ＲＡＧＥ３６２−４０４融合タンパク質（Ｓ３９１Ａ）；１０週間隔日ごとに１０μｇ／ｋｇ／ＩＰ）は、このモデルでＡｎｇ  ＩＩ依存性アテローム性動脈硬化を減衰させる（図１５Ａ）。
【１２４３】
Ａｃｅ２／ＡＧＥＲ／ａｐｏＥトリプルＫＯマウスのＲＡＧＥリガンド非依存活性化ＲＡＧＥの細胞膜透過性ペプチドトランスデューサー（ＴＡＴ−ｍＣｈｅｒｒｙ−ＲＡＧＥ３６２−４０４融合タンパク質（ＷＴ）；１０μｇ／ｋｇ／ＩＰの１０週間隔日）による処置は、シグナル伝達可能なＲＡＧＥの細胞質側テールのみを復元し、全長型ＲＡＧＥ及びその関連リガンド結合ドメインの継続的な不在にもかかわらず、ＲＡＧＥに富んだＡｃｅ２／ａｐｏＥ−ＤＫＯマウスで観察されるアテローム性動脈硬化を復元する（図１５Ａ）。
【１２４４】
Ａｃｅ２／ａｐｏＥ−ＤＫＯマウスのＲＡＧＥリガンド非依存性ＲＡＧＥ活性化の細胞膜透過性ペプチド阻害剤（ＴＡＴ−ｍＣｈｅｒｒｙ−Ｓ３９１Ａ−ＲＡＧＥ３６２−４０４融合タンパク質；１０週間隔日１０μｇ／ｋｇ／ＩＰ）による処置は血圧レベルに影響しない（図１５Ｃ）。
【１２４５】
また、ストレプトゾトシン誘導糖尿病は、ＲＡＡＳの活性化及びアテローム性動脈硬化の増加に関連するモデルであり、血圧を低下させたり、グルコース制御を変更したりすることなく、ＲＡＡＳ阻害によって予防される（Ｃａｎｄｉｄｏ  ｅｔ  ａｌ．，２００２）。
【１２４６】
ＡＧＥＲ／ａｐｏＥ−ＤＫＯマウスは、糖尿病の誘発後のアテローム性動脈硬化症の増加に対して保護されている（Ｓｏｒｏ−Ｐａａｖｏｎｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，２００８）。
【１２４７】
糖尿病ａｐｏＥ−ＫＯマウスのＲＡＧＥリガンド非依存性ＲＡＧＥ活性化の細胞透過性ペプチド阻害剤（ＴＡＴ−ｍＣｈｅｒｒｙ−Ｓ３９１Ａ−ＲＡＧＥ３６２−４０４融合タンパク質（Ｓ３９１Ａ）；１０μｇ／ｋｇ／ＩＰで１０週間隔日）による処置は、血圧レベルに影響を与えず（図１５Ｂ）、このモデルのアテローム性動脈硬化を減衰させる（図１５Ｃ）。
【１２４８】
糖尿病ａｐｏＥ−ＫＯマウスのＲＡＧＥリガンド非依存性ＲＡＧＥ活性化の細胞透過性ペプチドトランスデューサー（ＴＡＴ−ｍＣｈｅｒｒｙ−ＲＡＧＥ３６２−４０４融合タンパク質；１０μｇ／ｋｇ／ＩＰで１０週間隔日）による処置は、シグナル伝達可能なＲＡＧＥの細胞質側テールのみを復元し、全長型ＲＡＧＥ及びその関連リガンド結合ドメインの継続的な不在にもかかわらず、糖尿病単独で見られる以上にアテローム性動脈硬化が増加する（図１５Ｂ）。
【１２４９】
糖尿病ＡＧＥＲ／ａｐｏＥ−ＤＫＯマウスをＲＡＧＥリガンド非依存性ＲＡＧＥ活性化の細胞透過性ペプチドトランスデューサー（ＴＡＴ−ｍＣｈｅｒｒｙ−ＲＡＧＥ３６２−４０４融合タンパク質、１０μｇ／ｋｇ／ＩＰで１０週間隔日）による処置は、シグナル伝達可能なＲＡＧＥの細胞質側テールのみを復元し、全長型ＲＡＧＥ及びその関連するリガンド結合ドメインの継続的な不在にもかかわらず、遺伝的ＲＡＧＥ欠失により与えられた保護を覆し、ＲＡＧＥに富んだマウスで観察されるレベルまでアテローム性動脈硬化が増加する（図１５Ｂ）。
【１２５０】
＜追加の材料と方法＞
雄性ａｐｏＥ−ＫＯマウス、Ａｃｅ２／ａｐｏＥ−ＤＫＯマウス及びＡｃｅ２／ＡＧＥＲ／ａｐｏＥ  ＴＫＯマウスを無作為化して、ＴＡＴ−Ｃｈｅｒｒｙ−Ｓ３９１Ａ−ＲＡＧＥ３６２−４０４（阻害剤）ペプチド（１０μｇ／ｋｇ／ＩＰ隔日）、ＴＡＴ−Ｃｈｅｒｒｙ−ＲＡＧＥ３６２−４０４（野生型；１０μｇ／ｋｇ／ＩＰ隔日）オリゴペプチド又はｍＣｈｅｒｒｙ−ＴＡＴ（対照；１０μｇ／ｋｇ／ＩＰ隔日）１０週間投与し、その時点でそれらは人道的に殺処分された。
【１２５１】
Ａｎｇ  ＩＩ依存性アテローム性動脈硬化の２番目のモデルでは、ａｐｏＥ−ＫＯマウス及びＡＧＥＲ／ａｐｏＥ−ＤＫＯを無作為に割り当てて、ストレプトゾトシン（５５ｍｇ／ｋｇ、Ｓｉｇｍａ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｃｏ、Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ、ＭＯ、ＵＳＡ）又は緩衝液（クエン酸ナトリウム緩衝液ｐＨ４．５）を１日５回連日投与で腹腔内投与した（Ｓｏｒｏ−Ｐａｖｉｎｏｎｅｎ  ｅｔ  ａｌ．２００８）。このレジメンは、高血糖症（血中グルコース約３０ｍＭ）に関連する糖尿病のインスリン欠乏型を誘導するが、ケトーシスを防止するか、又はインスリンの補充を必要とするのに十分なβ細胞機能を備えている。糖尿病の存在は、ストレプトゾトシンの初回投与１週間後、空腹時血糖値が１５ｍＭを超えることで確認された。糖尿病マウスは、全て１０週間後にＨｂＡ１ｃ＞８％（中央値１１．２％）を達成した。糖尿病の１週間後、マウスをさらに無作為化して、ｍＣｈｅｒｒｙ−ＴＡＴ−Ｓ３９１Ａ−ＲＡＧＥ３６２−４０４（阻害剤）ペプチド（１００μｇ／ｋｇ／ＩＰ隔日）、ｍＣｈｅｒｒｙ−ＴＡＴ−ＲＡＧＥ３６２−４０４（野生型、１００μｇ／ｋｇ／ＩＰ隔日）オリゴペプチド又はｍＣｈｅｒｒｙ−ＴＡＴ（対照；１００μｇ／ｋｇ／ＩＰ隔日）１０週間投与し、その時点でそれらは人道的に殺処分された。
【１２５２】
［実施例１６  ＢＲＥＴは、生細胞で共発現したときのＡＴ１Ｒ及びＲＡＧＥの近接近を示す］
この実施例では、ＨＥＫ２９３ＦＴ細胞でのＲｌｕｃ８標識ＡＴ１Ｒ（ＡＴ１Ｒ／Ｒｌｕｃ８）及びヴィーナス（Ｖｅｎｕｓ）標識ＲＡＧＥ（ＲＡＧＥ／Ｖｅｎｕｓ）の共発現により、その近接性と一致する強力且つ飽和可能なＢＲＥＴシグナルの生成をもたらし、Ａｎｇ  ＩＩで処置すると減少することを示す（図１６Ａ）。可溶性ＲＡＧＥ２２−３３１（ｓＲＡＧＥ）の存在は、これらの結果を変えない（図１６Ａ）。
【１２５３】
ＡＴ１Ｒ／Ｒｌｕｃ８及びβ−アレスチン２／ヴィーナスをＡｎｇ  ＩＩで共発現する細胞の処置は、ＡＴ１Ｒへのβ−アレスチン２の動員と一致する頑強で安定したリガンド誘導ＢＲＥＴシグナルの誘導をもたらす（図１６Ｂ）。ケモカイン（Ｃ−Ｃ  Ｍｏｔｉｆ）受容体４（ＣＣＲ４）／Ｒｌｕｃ８及びβ−アレスチン２／ヴィーナスをその認識リガンドＣＣＬ２２で共発現する細胞の処置はまた、ＣＣＲ４へのβ−アレスチン２の動員と一致する頑強なリガンド誘導ＢＲＥＴシグナルの誘導をもたらす（図１６Ｂ）。
【１２５４】
ＲＡＧＥ／Ｒｌｕｃ８及びβ−アレスチン２／ヴィーナスをＡｎｇ  ＩＩで共発現する細胞の処置は、非標識ＡＴ１Ｒの存在下でＢＲＥＴシグナルを誘導し、ＲＡＧＥ及びＡＴ１Ｒが近接近にあることを示す（図１６Ｃ）。
【１２５５】
対照として、これは、認識リガンドＣＣＬ２２で処置した場合、非標識ＣＣＲ４の存在下では観察されない（図１６Ｃ）。
【１２５６】
非標識ＣＣＲ４の発現／機能を実証するための追加の対照として、Ｇαｉ／Ｎｌｕｃ及びＧγ２／ヴィーナスを共発現させると、ＣＣＬ２２誘導ＢＲＥＴシグナルが観察される（図１６Ｄ）。
【１２５７】
＜追加の材料と方法＞
Ｒｌｕｃ８の代替ＢＲＥＴドナーはＮａｎｏｌｕｃ（Ｎｌｕｃ）であり、これは、Ｔｉｕｌｐａｋｏｖ  ｅｔ  ａｌ．，２０１６に記載されているように、これをヴィーナスとフリマジン基質との組み合わせで使用することができる。このアプローチは、ＣＣＲ４の機能を評価するためにＧαｉ／Ｎｌｕｃ及びＧγ２／ヴィーナスの近接をモニタリングするときに使用された。
【１２５８】
［実施例１７  ＢＲＥＴは、生細胞で共発現した場合、ＡＴ１Ｒに加えて特定の活性化ＧＰＣＲに対するＲＡＧＥの近接近を示す］
この実施例では、上記の実施例１６で説明した生細胞におけるＲＡＧＥ及びＡＴ１Ｒ間の近接近が、ＲＡＧＥ及び特定の他の活性化された共存ＧＰＣＲ間でも観察されることを実証する。
【１２５９】
Ｒｌｕｃ８標識ＧＰＣＲ及びβ−アレスチン２／ヴィーナスをそのＧＰＣＲに適切な認識アゴニストと共発現する細胞の処置は、活性化Ｒｌｕｃ８標識ＧＰＣＲへのβ−アレスチン２の動員と一致する頑強なリガンド誘導ＢＲＥＴシグナルの誘導をもたらした。これは、Ａｎｇ  ＩＩを含むＡＴ１Ｒ（図１７Ａ）、ＴＲＨを含むＴＲＨＲ１（図１７Ｂ）、ＯｘＡを含むＯｘＲ１（図１７Ｃ）、ブラジキニンを含むブラジキニン受容体２（ＢＤＫＲ）（図１７Ｄ）、ＡＶＰを含むＶ２Ｒ（図１７Ｅ）、ＭＣＰ１を含むＣＣＲ２（図１７Ｆ）及びＭＩＰ１βを含むＣＣＲ５で観察された（図１７Ｇ）。
【１２６０】
受容体−ＨＩＴ：ＡＴ１Ｒ（図１７Ａ）、ＯｘＲ１（図１７Ｃ）、Ｖ２Ｒ（図１７Ｅ）又はＣＣＲ２（図１７Ｆ）の存在下で、そのＧＰＣＲに適切な認識アゴニストでＲｌｕｃ８標識ＲＡＧＥ（ＲＡＧＥ／Ｒｌｕｃ８）及びβ−アレスチン２／ヴィーナスを共発現する細胞の処置は、そのＧＰＣＲに対するβ−アレスチン２の動員と一致する明確なリガンド誘導ＢＲＥＴシグナルの誘導をもたらした。このことは、活性化されたＧＰＣＲに対しＲＡＧＥ近接も示す。共発現ＧＰＣＲの非存在下では、リガンド誘導ＢＲＥＴシグナルは観察されなかった。
【１２６１】
ＴＲＨＲ１（図１７Ｂ）又はブラジキニン受容体２（ＢＤＫＲ；図１７Ｄ）の存在下で、そのＧＰＣＲに適切な認識アゴニストでＲｌｕｃ８標識ＲＡＧＥ（ＲＡＧＥ／Ｒｌｕｃ８）及びβ−アレスチン２／ヴィーナスを共発現する細胞の処置は、共発現ＧＰＣＲの非存在下で観察され、ＧＰＣＲに対するβ−アレスチン２の動員と一致する共発現ＧＰＣＲの存在下でリガンド誘導ＢＲＥＴシグナルの不足から識別可能な弱いリガンド誘導ＢＲＥＴシグナルの誘導をもたらした。このことは、活性化されたＧＰＣＲに対しＲＡＧＥ近接も示し得るが、ＡＴ１Ｒ、ＯｘＲ１、Ｖ２Ｒ又はＣＣＲ２で観察されるほど明確ではない。
【１２６２】
ＣＣＲ５の存在下でＲｌｕｃ８標識ＲＡＧＥ（ＲＡＧＥ／Ｒｌｕｃ８）及びβ−アレスチン２／ヴィーナスをＭＩＰ１βで共発現する細胞の処置（図１７Ｇ）は、共発現されたＧＰＣＲの非存在下で観察されるものから識別しにくい弱いリガンド誘導ＢＲＥＴシグナルの誘導をもたらした。
【１２６３】
［実施例１８  ＢＲＥＴは、生細胞で共発現したときに特定の活性化されたケモカイン受容体へのＲＡＧＥの近接近を示す］
この実施例では、Ｒｅｃｅｐｔｏｒ−ＨＩＴアッセイ立体構造を使用して、ＲＡＧＥ及び特定のケモカイン受容体の近接近が生細胞で観察されることを実証する。
【１２６４】
ＣＣＲ１（図１８Ａ）、ＣＣＲ２（図１８Ｂ）、ＣＣＲ６（図１８Ｅ）、ＣＣＲ７（図１８Ｆ）、ＣＸＣＲ２（図１８Ｉ）又はＣＸＣＲ６（図１７Ｆ）の存在下で、そのＧＰＣＲの適切な認識アゴニスト（標識）でＲｌｕｃ８標識ＲＡＧＥ（ＲＡＧＥ／Ｒｌｕｃ８）及びβ−アレスチン２／ヴィーナスを共発現する細胞の処理は、ＧＰＣＲに対するβ−アレスチン２の動員と一致するＢＲＥＴシグナルの明確なリガンド誘導性増加の誘導をもたらした。このことは、活性化されたＧＰＣＲに対しＲＡＧＥ近接も示す。
【１２６５】
ＣＸＣＲ１（図１８Ｈ）の存在下で、ＣＸＣＬ８のＲｌｕｃ８標識ＲＡＧＥ（ＲＡＧＥ／Ｒｌｕｃ８）及びβ−アレスチン２／ヴィーナスの共発現する細胞の処置は、ＧＰＣＲに対するβ−アレスチン２の動員と一致するＢＲＥＴシグナルの識別可能なリガンド誘導性増加の誘導をもたらした。このことは、活性化されたＧＰＣＲに対しＲＡＧＥ近接を示しているが、前述の受容体ほど明確でもない。
【１２６６】
ＣＸＣＲ４の存在下で、ＣＸＣＬ１２とＲｌｕｃ８標識ＲＡＧＥ（ＲＡＧＥ／Ｒｌｕｃ８）及びβ−アレスチン２／ヴィーナスを共発現する細胞の処置（図１８Ｋ）は、β―アレスチン２及びＲＡＧＥ間の近接の減少に一致するＢＲＥＴシグナルの明確なリガンド誘導性減少又はＲｌｕｃ８及びヴィーナス間の少ない共鳴エネルギー移動がもたらすコンフォメーション変化がもたらされた。このことは、β−アレスチン２／ヴィーナスが動員される活性化されたＧＰＣＲに対するＲＡＧＥの近接の変化も示す。
【１２６７】
ＣＣＲ４（図１８Ｃ）、ＣＣＲ５（図１８Ｄ）、ＣＣＲ１０（図１８Ｇ）又はＣＸＣＲ３（図１７Ｊ）の存在下で、そのＧＰＣＲの適切な認識アゴニスト（標識）でＲｌｕｃ８標識ＲＡＧＥ（ＲＡＧＥ／Ｒｌｕｃ８）及びβ―アレスチン２／ヴィーナスを共発現する細胞の処置は、ＢＲＥＴシグナルの識別可能なリガンド誘導性変化の誘導をもたらさなかった。これは、ＣＣＲ４／Ｒｌｕｃ８に対するβ―アレスチン２／ヴィーナスへのＣＣＬ２２誘導動員（図１６Ｂ）及びＣＣＲ５／Ｒｌｕｃ８に対するβ―アレスチン２／ヴィーナスへのＣＣＬ４誘導動員に観察される非常に強力なリガンド誘導ＢＲＥＴシグナルにあるにもかかわらずである（ｎ＝３；データは示さず）。より弱いが、それでも依然として明確なリガンド誘導ＢＲＥＴシグナルは、ＣＣＲ１０／Ｒｌｕｃ８に対するβ―アレスチン２／ヴィーナスへのＣＣＬ２７誘導動員及びＣＸＣＲ３／Ｒｌｕｃ８に対するβ―アレスチン２／ヴィーナスのＣＸＣＬ１１誘導動員でも観察された（ｎ＝３；データは示さず）。
【１２６８】
［実施例１９  ＢＲＥＴは、共存ＧＰＣＲ活性化が生細胞におけるＲＡＧＥ細胞内局在の変化をもたらすことを示す］
この実施例では、特定の共存するＧＰＣＲの活性化によりＲＡＧＥ及び細胞内コンパートメントマーカー間の近接が変化することを示しており、多数のＧＰＣＲのＲＡＧＥ機能に対するＧＰＣＲ活性化の効果を示すことを示す。
【１２６９】
使用されたヴィーナス標識細胞内コンパートメントマーカーは、原形質膜マーカーＫＲＡＳ及びＲａｂＧＴＰアーゼＲａｂ１（シスゴルジへの小胞体輸送）、Ｒａｂ４（初期エンドソームリサイクル）、Ｒａｂ５（初期エンドソーム）、Ｒａｂ７（後期エンドソーム／リソソーム）、Ｒａｂ８（原形質膜へのトランスゴルジネットワーク）、Ｒａｂ９（トランスゴルジネットワークへの後期エンドソーム輸送）及びＲａｂ１１（リサイクルエンドソーム）であった。Ｒｌｕｃ８標識ＲＡＧＥのヴィーナス標識細胞内コンパートメントマーカーへの近接は、ＧＰＣＲの適切な認識アゴニストを時間０及び指定濃度で添加する前後にリアルタイムで評価された。
【１２７０】
アドレナリンα１Ａ受容体、アドレナリンα１Ｂ受容体、アンジオテンシン受容体ＡＴ１Ｒ、ブラジキニン受容体Ｂ２、ＣＣＲ２、ＣＣＲ６、ＣＣＲ９、ＣＸＣＲ４、ＣＸＣＲ５、ドーパミンＤ１受容体、エンドセリン受容体Ｂ型、ヒスタミンＨ３受容体、ムスカリンＭ２受容体、ニューロペプチドＹ１受容体、オレキシン受容体１、オレキシン受容体２、プロスタグランジンＥ１受容体、セロトニン５−ＨＴ２ｃ受容体、セロトニン５−ＨＴ４ｂ受容体、ソマトスタチン２受容体、スフィンゴシン１−リン酸受容体Ｓ１Ｐ３、バソプレシン受容体１Ａ及びバソプレシン受容体１Ｂでは、少なくとも１つの細胞内コンパートメントマーカーへの近接の変化の兆候を示す特にリガンド誘導ＢＲＥＴシグナルの明確な変化は、リガンド添加の結果として観察された。
【１２７１】
ＣＣＲ３、ＣＣＲ４、ニューロテンシン１受容体及びセロトニン５−ＨＴ２ｂ受容体では、少なくとも１つの細胞内コンパートメントマーカーへの近接の変化兆候を示すリガンド誘導ＢＲＥＴシグナルの明確な変化は、リガンド添加の結果として観察された。
【１２７２】
アデノシンＡ１受容体、アドレナリンα２Ｂ受容体、ＣＣＲ１、ＣＣＲ５、ＣＣＲ７、ＣＸＣＲ２、エンドセリン受容体Ａ型、ムスカリンＭ１受容体、ムスカリンＭ３受容体、セロトニン５−ＨＴ１ａ受容体、セロトニン５−ＨＴ２ａ受容体、スフィンゴシン１−リン酸受容体Ｓ１Ｐ１、甲状腺刺激ホルモン放出ホルモン受容体１及びバソプレッシン受容体２では、少なくとも１つの細胞内コンパートメントマーカーへの近接の変化の兆候を示すリガンド誘導ＢＲＥＴシグナルの小さいながらも識別可能な変化が、リガンド添加の結果として観察された。
【１２７３】
アデノシンＡ２Ａ受容体、アデノシンＡ２Ｂ受容体、アデノシンＡ３受容体、アドレナリンα２Ａ受容体、アドレナリンα２Ｃ受容体、アドレナリンβ１受容体、アドレナリンβ２受容体、アドレナリンβ３受容体、アペリン受容体、ＣＣＲ８、ＣＣＲ１０、ＣＸＣＲ１、ＣＸＣＲ３、ＣＸＣＲ６、ＣＸＣＲ７、ドーパミンＤ２受容体、グルカゴン様ペプチド受容体１、ニューロテンシン２受容体、血小板活性化因子受容体、プロスタグランジンＥ２受容体、プロスタグランジンＥ３受容体、プロスタグランジンＥ４受容体、ソマトスタチン１受容体及びソマトスタチン３受容体では、細胞内コンパートメントマーカーのいずれかに対するリガンド誘導ＢＲＥＴシグナルの識別可能な変化は、リガンドの添加の結果としてほとんど観察されなかった（データは示さず）。
【１２７４】
［実施例２０  ＡＴ１受容体以外の特定の活性化された共存ＧＰＣＲによるＲＡＧＥのリガンド非依存性ＲＡＧＥ活性化］
この実施例では、主要な炎症促進性転写因子であるｐ６５−ＮＦκＢの発現を誘導する認識リガンド（それぞれＭＣＰ―１及びＣＸＣＬ８）による特定のケモカイン受容体（ＣＣＲ２及びＣＸＣＲ２）の活性化は、ＲＡＧＥの共発現も必要であることを実証する。
【１２７５】
ＣＣＲ２をコードし、その表面にＣＣＲ２を発現するプラスミドで安定的に形質導入したＣＨＯ細胞（ＣＣＲ２−ＣＨＯ細胞）は、ＲＡＧＥでの形質導入及びＣＣＲ２の認識リガンドであるＭＣＰ−１（１０−７）への曝露により、ＮＦκＢの活性化及びｐ６５の発現の誘導をもたらす（図２０Ａ）。ＲＡＧＥ共発現の非存在下で、ＭＣＰ−１はＮＦκＢの活性化を誘導せず、ＣＣＲ２−ＣＨＯ細胞におけるｐ６５の発現を誘導しない。
【１２７６】
ＣＸＣＲ２をコードし、その表面にＣＸＣＲ２を発現するプラスミドで安定に形質導入されたＣＨＯ細胞（ＣＸＣＲ２−ＣＨＯ細胞）は、ＲＡＧＥでの形質導入と認識リガンドＩＬ−８（ＣＸＣＬ８）への曝露により、共発現したＲＡＧＥの存在下で、ｐ６５の発現の増加をもたらす（図２０Ｂ）。ＲＡＧＥの非存在下では、ＩＬ−８はＮＦκＢの活性化を誘導せず、ＣＸＣＲ２−ＣＨＯ細胞でｐ６５の発現を誘導しない。
【１２７７】
骨髄由来の一次マウスマクロファージでは、ＣＣＲ２の認識リガンドであるＭＣＰ−１（１０−７Ｍ）に曝露すると、ＮＦκＢが活性化され、ｐ６５の発現の誘導をもたらす（図２０Ｃ）。一次マクロファージにおけるＭＣＰ−１によるｐ６５−ＮＦκＢの発現の誘導は、ＴＡＴ−ｍＣｈｅｒｒｙ−Ｓ３９１Ａ−ＲＡＧＥ３６２−４０４融合タンパク質（０．４ｎｇ／ｍｌ）での前処置によりブロックされる。
【１２７８】
ＭＣＰ−１（１０−７Ｍ）へのＨＭＥＣ曝露では、ＣＣＲ２の認識リガンドは、ＮＦκＢの活性化及びＭＣＰ−１の発現の自動誘導をもたらす（図２０Ｄ）。ＨＭＥＣのＭＣＰ−１発現の自動誘導は、ＴＡＴ−ｍＣｈｅｒｒｙ−Ｓ３９１Ａ−ＲＡＧＥ３６２−４０４融合タンパク質（０．４ｎｇ／ｍｌ）による前処置によりブロックされる。これらを総合すると、これらのデータは、ＭＣＰ−１／ＣＣＲ２シグナル伝達プロセスにおける共存内因性ＲＡＧＥの役割が確認される。
【１２７９】
ＩＬ−８（１０−７Ｍ）へのＣＸＣＲ２発現ＨＭＥＣの曝露では、ＣＸＣＲ２の認識リガンドは、ＮＦκＢの活性化及びＭＣＰ−１の発現の誘導をもたらす（図２０Ｅ）。ＨＭＥＣのＭＣＰ−１発現の誘導は、ＴＡＴ−ｍＣｈｅｒｒｙ−Ｓ３９１Ａ−ＲＡＧＥ３６２−４０４融合タンパク質（０．４ｎｇ／ｍｌ）による前処置によってブロックされる。これらのデータを総合すると、ＩＬ―８／ＣＸＣＲ２シグナル伝達プロセスにおける共存内在性ＲＡＧＥの役割が確認される。
【１２８０】
＜追加の材料と方法＞
＜トランスジェニックチャイニーズハムスター卵巣細胞の生成＞
Ｌｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅ２０００（Ｔｈｅｒｍｏ）を使用して、１００ｎｇのＣＣＲ２−Ｒｌｕｃ８構築物又はＣＸＣＲ２−Ｒｌｕｃ８をＣＨＯ細胞に形質導入した。Ｇ４１８を使用して安定トランスフェクタントを選択した。次いで、ＣＣＲ２−ＣＨＯ及びＣＸＣＲ２−ＣＨＯ細胞は、Ｌｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅ２０００（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）を使用して、全長型のＲＡＧＥ構築物を一時的に形質導入し、１６時間インキュベートした。次に、ＣＣＲ２−ＣＨＯ細胞をＣＣＲ２の認識リガンドであるＭＣＰ−１（１０−７）に２時間曝露した。ＣＸＣＲ２−ＣＨＯ細胞を認識リガンドＩＬ−８（ＣＸＣＬ８）に２時間暴露した。次に、細胞をトリゾールに入れ、ｍＲＮＡを抽出し、ｃＤＮＡを合成した。ＮＦκＢサブユニットｐ６５（ＲｅｌＡ）の遺伝子発現の変化は、一般的な方法に詳述されているように、蓄積性蛍光のリアルタイム検出に基づいたＴａｑＭａｎシステムを使用して実行された定量的リアルタイムＲＴ−ＰＣＲによって決定された（ＡＢＩ  Ｐｒｉｓｍ  ７７００、Ｐｅｒｋｉｎ−Ｅｌｍｅｒ  Ｉｎｃ、ＰＥ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ，Ｆｏｓｔｅｒ  Ｃｉｔｙ、ＣＡ、ＵＳＡ）。
【１２８１】
＜一次骨髄由来マクロファージ＞
一次骨髄由来マクロファージを、ＲＡＧＥ３６２−４０４、変異体ＲＡＧＥペプチド、Ｓ３９１Ａ−ＲＡＧＥ３６２−４０４又はＴＡＴ−ｃｈｅｒｒｙ対照で１時間前処置した。次いで、細胞を、ＣＣＲ２の認識リガンドであるＭＣＰ−１（１０−７Ｍ）に２時間曝露した。次に、細胞をトリゾールに入れ、ｍＲＮＡを抽出し、ｃＤＮＡを合成した。ＮＦκＢサブユニットｐ６５（ＲｅｌＡ）の遺伝子発現の変化は、一般的な方法に詳述されているように、蓄積性蛍光のリアルタイム検出に基づいたＴａｑＭａｎシステムを使用して実行された定量的リアルタイムＲＴ−ＰＣＲによって決定された（ＡＢＩ  Ｐｒｉｓｍ  ７７００、Ｐｅｒｋｉｎ−Ｅｌｍｅｒ  Ｉｎｃ、ＰＥ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ，Ｆｏｓｔｅｒ  Ｃｉｔｙ、ＣＡ、ＵＳＡ）。
【１２８２】
［実施例２１  特定の共存ＧＰＣＲによるＲＡＧＥリガンド非依存ＲＡＧＥ活性化は、ＲＡＧＥの膜貫通ドメインを標的にすることにより阻害される］
この実施例は、特定の共存ＧＰＣＲによるＲＡＧＥリガンド非依存性ＲＡＧＥ活性化及びＲＡＧＥリガンドによるＲＡＧＥ活性化が、ＲＡＧＥの膜貫通ドメイン（ＴＭＤ）の調節後に阻害されることを示している。
【１２８３】
ＲＡＧＥは、単一の膜貫通ヘリックス（配列番号１４の残基３４３−３６１）を含む１型膜貫通タンパク質である。ＲＡＧＥ−ＴＭＤは、全ての哺乳類種で高度に保存されている。
【１２８４】
ＲＡＧＥ−ＴＭＤは、この疎水性ドメインを欠損するＲＡＧＥアイソフォーム（例えば、可溶性ＲＡＧＥ；ｓＲＡＧＥ）が分泌され、原形質膜に保持されないため、膜の標的化とアンカリングに重要である。
【１２８５】
細胞表面のＲＡＧＥのホモ二量体化は、ＲＡＧＥ媒介のシグナル伝達に不可欠である。ＲＡＧＥの細胞外部分のＶ、Ｃ１及びＣ２ドメインには、ＲＡＧＥの二量体化を促進する要素が含まれており（例えば、ＲＡＧＥ２２−３３１はホモ二量体化できる）、ＲＡＧＥの二量体化はｓＲＡＧＥの過剰発現によって阻害され得る。ＲＡＧＥのＴＭＤも潜在的にオリゴマー化において積極的役割を果たし、ＴＭＤはＲＡＧＥ細胞外部ドメインとは無関係にホモ二量体化することが以前に示されている（Ｓｕ  ｅｔ  ａｌ．２０１３）。
【１２８６】
ＲＡＧＥ−ＴＭＤは、外部ドメインからサイトゾルドメインのシグナル伝達要素へのＲＡＧＥリガンド誘導シグナルの伝達にも必要である。理論に拘束されることを望むものではないが、本発明者らは、リガンド結合後の立体構造変化（Ｃ末端間の距離を１００Åに増加させるハサミ様運動など）の伝達により、これが起こると考えている（Ｘｕｅ  ｅｔ  ａｌ．２０１７）。
【１２８７】
ＲＡＧＥリガンド結合は、セクレターゼＡＤＡＭ１０／１７及びＭＭＰ９によるＲＡＧＥ２２−３３１の外部ドメインシェディングを誘導することが知られており、その後、ＲＡＧＥの残りの膜結合Ｃ末端断片は、膜内切断プロテアーゼであるγ−セクレターゼによって処理される。γ−セクレターゼの阻害により、ＲＡＧＥリガンド結合後の膜におけるＲＡＧＥのＣ末端断片の保持が増加し、及びＲＡＧＥリガンド誘導性シグナル伝達の阻害がもたらされ、ＲＡＧＥ膜貫通ドメインの膜内タンパク質分解がＲＡＧＥリガンド依存性シグナル伝達の重要なステップであることを示唆している（Ｂｒａｌｅｙ  ｅｔ  ａｌ．２０１６）。
【１２８８】
これらを総合すると、これらのデータは、特定の共存ＧＰＣＲの活性化に続くＲＡＧＥリガンド非依存性ＲＡＧＥ活性化を調節する手段として、ＲＡＧＥ−ＴＭＤを標的とする根拠を提供する。
【１２８９】
Ｎ末端タグｍＣｈｅｒｒｙ−ＲＡＧＥ３３８−３６１（ｍＣｈｅｒｒｙに連結された細胞外膜近傍断片を有するＲＡＧＥ−ＴＭＤ）及び細胞外ルシフェラーゼ標識ＡＴ１受容体（Ｎｌｕｃ−ＡＴ１；図２１Ａ）間でＢＲＥＴシグナルが観察されることを実証し、ＴＭＤがＲＡＧＥ及び特定のＧＰＣＲ間の相互作用にも関与していることを確認する。
【１２９０】
ｍＣｈｅｒｒｙ−ＲＡＧＥ３３８−３６１の過剰発現は、用量依存的に全長型ＲＡＧＥ及びＡＴ１間のＢＲＥＴを調節し、ＢＲＥＴ飽和アッセイ（図２１Ｂ）及び動態アッセイ（図２１Ｃ）で実証され、全長型ＲＡＧＥ及びＡＴ１間のＢＲＥＴは、外部ドメインの膜近傍部を有するＲＡＧＥ−ＴＭＤの非機能的代替物により阻害されることを確認した。特に、ｓＲＡＧＥ（すなわちＲＡＧＥの細胞外リガンド結合性Ｖ−Ｃ１−Ｃ２ドメイン；ＲＡＧＥ２２−３３１）は、ＡＴ１Ｒ及びＲＡＧＥ間のＢＲＥＴを阻害しない（図１６Ａ）。
【１２９１】
対照実験を図２１Ｄに示し、適切なフィルターセットを使用しても、ＡＴ１／Ｒｌｕｃ８及びｍＣｈｅｒｒｙ／ＲＡＧＥ３３８−３６１間にリガンド誘導ＢＲＥＴシグナルがないことを示している。図２１Ｅに示すように、外部光源による励起後にｍＣｈｅｒｒｙタグを使用し、ｍＣｈｅｒｒｙ／ＲＡＧＥ３３８−３６１融合タンパク質の相対発現レベルを個別に評価する。図２１Ｅにも示されているように、ルシフェラーゼからの同様の相対発光により、種々の形質導入にわたるＡＴ１／Ｒｌｕｃ８の同様の発現レベルが実証される。さらに、種々の形質導入にわたるＲＡＧＥ／ヴィーナスの同様の発現レベルは、外部光源による励起後のヴィーナスの発光波長での同様の相対蛍光発光によって示される。
【１２９２】
アドレナリンα２Ｂ受容体、アンジオテンシン受容体ＡＴ１（ＡＴ１Ｒ）、ブラジキニン受容体２（Ｂ２Ｒ）、ＣＣＲ１、ＣＣＲ２、ＣＣＲ４、ＣＣＲ５、ＣＣＲ６、ＣＣＲ９、ＣＸＣＲ２、ＣＸＣＲ４、ニューロペプチドＹ１受容体（ＮＰＹ１Ｒ）、オレキシン受容体２、スフィンゴシン１リン酸受容体１（Ｓ１ＰＲ１）、甲状腺刺激ホルモン放出ホルモン受容体１（ＴＲＨＲ１）、バソプレシン受容体１Ａ（Ｖ１ａＲ）、バソプレシン受容体１Ｂ（Ｖ１ｂＲ）及びバソプレシン受容体２（Ｖ２Ｒ）では、Ｒｌｕｃ８標識ＧＰＣＲ及びＲＡＧＥ／ヴィーナス間のリガンド誘導ＢＲＥＴシグナルでの変化の特に明確な阻害は、ｍＣｈｅｒｒｙ−ＲＡＧＥ３３８−３６１を共発現させたときに観察され（図２１Ｆ）、全長型ＲＡＧＥ及びこれらのＧＰＣＲ間のＢＲＥＴが、外部ドメインの膜近傍部を有するＲＡＧＥ−ＴＭＤのＲの非機能的代替物によって阻害されることを確認した。
【１２９３】
アデノシンＡ１受容体（ＡＤＯＲＡ１）、ＣＣＲ７及びＣＸＣＲ５では、ｍＣｈｅｒｒｙ−ＲＡＧＥ３３８−３６１を共発現させた場合、Ｒｌｕｃ８標識ＧＰＣＲ及びＲＡＧＥ／ヴィーナス間のリガンド誘導ＢＲＥＴシグナルの変化の小さいながらも識別可能な阻害が観察され（図２１Ｆ）、全長型ＲＡＧＥ及びこれらのＧＰＣＲ間のＢＲＥＴが、外部ドメインの膜近傍部を有するＲＡＧＥ−ＴＭＤの非機能的代替物によって阻害されることを確認する。
【１２９４】
アドレナリンα１Ａ受容体、ＣＣＲ３、ムスカリン性アセチルコリン受容体２（ＣＨＲＭ２）及びオレキシン受容体１では、Ｒｌｕｃ８標識ＧＰＣＲ及びＲＡＧＥ／ヴィーナス間でリガンド誘導ＢＲＥＴシグナルの識別可能な変化はほとんど認められず、ｍＣｈｅｒｒｙ−ＲＡＧＥ３３８−３６１の共発現の効果は決定できなかった（図２１Ｆ）。
【１２９５】
上記で詳述したように、ＲＡＧＥのトランス活性化にはサイトゾルドメイン（ＲＡＧＥ３７９―３９１）の発現が必要であるため、それに続くＲＡＧＥ３３８−３６１は活性化できない。しかし、ヒト微小血管内皮細胞（ＨＭＥＣ）の全長型ＲＡＧＥのトランス活性化後に誘導されるＩＣＡＭ−１遺伝子発現によって示されるように、Ａｎｇ  ＩＩを媒介した炎症促進性シグナル伝達は、ＲＡＧＥ３３８−３６１の形質導入によって阻害される。この阻害は、ｍＣｈｅｒｒｙ−ＲＡＧＥ３６２−４０４の追加の発現（すなわちＲＡＧＥのサイトゾルドメイン；図２１Ｇ）によってレスキューされる。これは、ＴＭＤ及びサイトゾルドメインが独立して機能することができるが、全長型ＲＡＧＥ構築物では相互依存を示唆している。特に、ｓＲＡＧＥ（すなわちＲＡＧＥの細胞外ドメイン）は、特定の共存ＧＰＣＲの活性化に続くＲＡＧＥリガンド非依存性ＲＡＧＥ活性化を阻害しない。
【１２９６】
ＲＡＧＥのＴＭＤのみが、特定の共存ＧＰＣＲによるＲＡＧＥリガンド非依存性ＲＡＧＥ活性化の阻害剤として作用するという仮説を検証するために、ＨＭＥＣにＲＡＧＥのＴＭＤ（ＲＡＧＥ３４３−３６１）又はｍＣｈｅｒｒｙ−ＴＭＤ融合のみを形質導入した。いずれかの構築物の発現は、ＲＡＧＥ発現が内因的に十分にあるＨＭＥＣのＡｎｇ  ＩＩによるＭＣＰ１及びＩＣＡＭ１遺伝子発現の両方の誘導を防ぐことができた（図２１Ｈ）。
【１２９７】
ＲＡＧＥのＴＭＤのみがＲＡＧＥリガンド依存性ＲＡＧＥの活性化の阻害剤としても作用するという仮説を検証するために、全長型ヒトＲＡＧＥを発現するＣＨＯ細胞を、ＲＡＧＥのＴＭＤのみを発現する構築物の形質導入の有無でＲＡＧＥリガンドＳ１００Ａ８／Ａ９で処理した（ＲＡＧＥ３４３−３６１）。この構築物の発現は、ＲＡＧＥ３７０−３９０と同様に、Ｓ１００Ａ８／Ａ９によるｐ６５遺伝子発現の誘導を防ぐことができた（図２１Ｉ）。
【１２９８】
ＲＡＧＥトランス活性化におけるｍＤｉａｐｈ１及びＰＫＣζの作用は、ＲＡＧＥ−ＴＭＤでのそれらの作用により媒介され、ｓｉＲＮＡを使用したｍＤｉａｐｈ１及びＰＫＣζのサイレンシングは、ＲＡＧＥ３６２−４０４ではなくＲＡＧＥ３４３−４０４によって誘導されるシグナル伝達を阻害するためである（図２１Ｊ）。
【１２９９】
これらのデータを総合すると、ＲＡＧＥ−ＴＭＤの特定の調節が、特定の共存ＧＰＣＲによるＲＡＧＥのトランス活性化と、ＲＡＧＥの細胞外ドメインの活性化に続くＲＡＧＥリガンド依存性シグナル伝達とを阻害できることが確認される。
【１３００】
［実施例２２  ＲＡＧＥリガンド非依存性ＲＡＧＥ活性化の潜在的阻害剤に対するスクリーニングの仮想実施例］
以下のアッセイは、特定の共存ＧＰＣＲの活性化を介してＲＡＧＥリガンド非依存性ＲＡＧＥシグナル伝達の潜在的な阻害剤を特定するために、本明細書に記載の本発明を論理的に適用する方法の仮想実施例である（例えば、ＡＴ１Ｒ誘導又はＲＡＧＥのＣＣＲ２媒介トランス活性化）。
【１３０１】
アッセイ１：ＲＡＧＥの細胞質側テール（全長型又は欠損型、野生型又は阻害性変異体）及びＩＱＧＡＰ−１又はその断片との間の結合の阻害を測定する競合アッセイ。
【１３０２】
方法：サンドイッチアッセイでは、ＩＱＧＡＰ又はＲＡＧＥの細胞質側テールがプレート又はカラムに結合している（全長型又は欠損型）。試験化合物／モジュレーターの段階希釈の存在下で結合パートナー（すなわちＲＡＧＥのＩＱＧＡＰ又は細胞質側テール）を追加する。固有標識（蛍光標識、酵素融合）又は検出プローブ（例えば、結合パートナーに対して標識をもたらす抗体）によって測定された結合パートナーの存在。結合パートナーの不在は、追加された試験化合物がサイトゾルＲＡＧＥ及びＩＱＧＡＰ−１又はその断片間の結合の競合的阻害剤であることを示す。
【１３０３】
アッセイ２：ＲＡＧＥ及びＩＱＧＡＰ−１の細胞質側テール間の結合を測定するために使用される酵母２ハイブリッド。
【１３０４】
方法：酵母２ハイブリッドアッセイは、ＩＱＧＡＰ−１及びサイトゾルＲＡＧＥ（全長型又は欠損型、野生型又は阻害性変異体）を発現する。固有標識（例えば、蛍光標識、酵素融合、レポーターシステム（例えば、ＫＩＳＳ））によって測定された結合パートナーの存在。結合パートナーの不在は、追加された試験化合物がＲＡＧＥの細胞質側テール及びＩＱＧＡＰ−１又はその断片間の結合の競合的阻害剤であることを示す。
【１３０５】
アッセイ３：ＲＡＧＥの細胞質側テール（全長型又は欠損型、野生型又は阻害性変異体）及びＩＱＧＡＰ−１間の結合を測定するために使用されるＢＲＥＴ。
【１３０６】
方法：ＢＲＥＴアッセイは、標識ＩＱＧＡＰ及びサイトゾルＲＡＧＥを発現し、それらの間の共鳴エネルギーの移動を測定し、それらの近接性を示す。試験化合物／モジュレーターの添加によるＢＲＥＴシグナルの阻害は、試験化合物／モジュレーターがサイトゾルＲＡＧＥ及びＩＱＧＡＰ又はその断片間の相互作用の競合的阻害剤であることを示す。
【１３０７】
アッセイ４：ＲＡＧＥを介した下流シグナル伝達の誘導を検出することにより、特定の活性化された共存ＧＰＣＲ（例えば、ＡＴ１Ｒ誘導）によるＲＡＧＥリガンド非依存性ＲＡＧＥ活性化の阻害。
【１３０８】
ＲＡＧＥリガンド非依存性（例えば、ＡＴ１Ｒ誘導トランス活性化）ＲＡＧＥシグナル伝達の阻害剤は、Ａｎｇ  ＩＩ（又はその認識リガンドに曝露された別のＧＰＣＲ）に曝露されたＡＴ１Ｒ及びＲＡＧＥの両方を発現するＣＨＯ細胞でＲＡＧＥ依存性の下流ＮＦκＢ活性化を減少される試験化合物により示されるが、Ｓ１００Ａ８／Ａ９又はＳ１００Ａ８／Ａ９によって誘導される下流ＮＦκＢ活性化又は他のＲＡＧＥリガンドによって誘導されるＲＡＧＥシグナル伝達ではないか、又はＡｎｇ  ＩＩによるＡＴ１Ｒの活性化後に誘導されるＲＡＧＥ非依存性Ｇｑシグナル伝達を示す（例えば、カルシウム流入、イノシトールリン酸レベル、ＥＧＲなどの発現マーカー）。
【１３０９】
アッセイ５：ＲＡＧＥ３７９−３９０の結合パートナー。
【１３１０】
方法：ＲＡＧＥ３７９−３９０がＲＡＧＥリガンド非依存性ＲＡＧＥ活性化の調節に重要なシグナル伝達要素であることを実証した後、ＲＡＧＥ３７９−３９０への高親和性特異的結合パートナーの同定は、インシリコ（ｉｎ  ｓｉｌｉｃｏ）又はインビトロでペプチド及び非ペプチドライブラリーのスクリーニング（すなわち化学物質）又は構造に基づく薬物設計が行われる。
【１３１１】
［結論］
ＭＣＰ−１によるＡｎｇ  ＩＩ及びＣＣＲ２のＡＴ１Ｒの活性化など、認識リガンドによる特定の共存ＧＰＣＲの活性化は、例えばカルシウム流入、イノシトールリン酸合成及びＰＫＡの活性化を誘導するＧＰＣＲを介した古典的な標準シグナル伝達と異なる経路を通じて炎症を引き起こす。ここで、本発明者らは、特定の共存ＧＰＣＲによるＲＡＧＥの細胞質側テールのＲＡＧＥリガンド非依存性ＲＡＧＥ活性化が、この分裂の主要な決定因子であることを示している。本発明者らは、多くのＧＰＣＲの炎症促進性シグナル伝達下流に重要であるＮＦκＢの活性化が、共存ＲＡＧＥリガンド非依存性のＲＡＧＥ活性化によって媒介されることを実証する。その結果、例えば、Ａｎｇ  ＩＩ−ＡＴ１Ｒの活性化によって誘導される血管の有害な変化の多くは、ＲＡＧＥが欠失したとき又はＲＡＧＥの活性化が阻害されたときに減衰する。対照的に、古典的なＧｑ経路を介したＡＴ１Ｒ依存性シグナル伝達は、ＲＡＧＥ発現の影響を受けず、ＲＡＧＥ欠失は、Ａｎｇ  ＩＩの塩欠乏又は血圧反応性において血管恒常性に有害な影響を及ぼさない。
【１３１２】
本発明者らは、ＡＴ１Ｒ又はＣＣＲ２を含むＲＡＧＥ及びＧＰＣＲがヘテロ複合体を形成し、明確な受容体−ＨＩＴ  ＢＲＥＴシグナルの生成を伴うという特定の証拠を本明細書に提供する。これは、ヘテロ複合体の形成及びトランス活性化が、外部ドメインの追加の膜近傍断片の有無にかかわらず、ＲＡＧＥの膜貫通ドメインの非機能的置換の発現によって阻害されるという本発明者らによって本明細書に提供された特定の証拠によりさらに裏付けられている。ＧＰＣＲの不活性状態での事前組み立ては、シグナル伝達成分を含む一時的な複合体を形成し、急速で拡張した応答性が可能であると考えられている。理論に拘束されることを望むものではないが、本発明者らは、特定の共存ＧＰＣＲとＲＡＧＥとの事前組み立てが同様の役割を果たし、ＧＰＣＲの活性化後にＲＡＧＥの細胞質側テールの迅速なＲＡＧＥリガンド非依存性活性化及び下流の炎症促進性シグナル伝達を可能にすると考えている。
【１３１３】
本発明者らは、１つのアミノ酸（セリン３９１）のみが異なる野生型ＲＡＧＥと異なり、Ａｎｇ  ＩＩによるＡＴ１Ｒなど、Ｓ３９１Ａ−ＲＡＧＥ及び３９０Ｘ−ＲＡＧＥ変異体が、特定の共存ＧＰＣＲの活性化後に炎症促進性シグナル伝達を誘導しないことから、ＲＡＧＥの残基３９１の立体構造がＧＰＣＲ依存性炎症促進性シグナル伝達にとって重要であることも示す。これは、以前に示唆されたように、ＲＡＧＥ活性化後にＳｅｒ３９１がリン酸化されるためではなく、この位置に異なるアミノ酸を含むＲＡＧＥ、すなわちＱ３９１及びＰ３９１（それぞれラクダ及びウシに生まれながらに見られる）もＲＡＧＥリガンド及び特定の活性化された共存ＧＰＣＲによるＲＡＧＥリガンド非依存性活性化によって活性化され得るからである。（実施例７を参照されたい）。ＰＫＣζ阻害は、全長型ＲＡＧＥの活性化を防ぐことができるが、ＲＡＧＥのリン酸化を防ぐことにより作用するのではなく、リン酸化を持続できるアミノ酸を含まない全長型Ｓ３９１ＱキメラＲＡＧＥ変異体を介したシグナル伝達も阻害する。（すなわちセリン、スレオニン又はチロシンではない）。
【１３１４】
ＲＡＧＥの細胞質側テールとＤｉａｐｈ１との相互作用は、炎症促進シグナル伝達に重要であることが知られており、おそらくＤｉａｐｈ１も結合するＰＫＣζの動員と活性化、及びその後、膜貫通ドメインとの相互作用を介したＲＡＧＥ媒介構造の「ハサミ様」変化を促進するためである。本発明者らの実験では、Ｄｉａｐｈ１又はＰＫＣζのサイレンシングは、全長型ＲＡＧＥ及びＲＡＧＥ−ＴＭＤを保持するＮ末端トランケート型ＲＡＧＥ構築物によって媒介されるＡｎｇ  ＩＩとのシグナル伝達を介してＡｎｇ  ＩＩ及びｓ１００誘導炎症促進性シグナル伝達の両方を阻害する。ただし、ＲＡＧＥ−ＴＭＤが欠落しているＮ末端トランケート型ＲＡＧＥ構築物は、Ｄｉａｐｈ１又はＰＫＣζのサイレンシング後に続くＡｎｇ  ＩＩにより依然として活性化され得る。Ｄｉａｐｈ１は、小さい帯電したパッチを介してサイトゾルのＲＡＧＥと相互作用すると考えられている。この帯電したパッチのアラニン置換（Ｒ３６６Ａ−Ｑ３６７Ａ）は、ＲＡＧＥリガンドであるｓ１００Ａ８／Ａ９によって媒介されるシグナル伝達を防ぐ。ただし、この帯電したパッチの突然変異又はそれが安定化するαループの欠失（例えば、ＲＡＧＥ３７０−４０４）は、Ａｎｇ  ＩＩによるＡＴ１Ｒなどの特定の共存ＧＰＣＲの活性化後のＲＡＧＥの細胞質側テールのＲＡＧＥリガンド非依存性活性化に影響しない。その結果、小分子又は他の阻害剤を使用してＤｉａｐｈ−１のＲＡＧＥへの結合を破壊する提案された方法（Ｒａｍａｓａｍｙ  ｅｔ  ａｌ．２０１６）は、特定の活性化された共存ＧＰＣＲによるＲＡＧＥリガンド非依存性ＲＡＧＥ活性化に影響しない。さらに、Ｎ末端トランケート型ＲＡＧＥ３６２−４０４の特定の共存ＧＰＣＲ、例えばＡＴ１Ｒなどによって活性化される能力は、ｓｉＲＮＡを使用したＰＫＣζ又はＤｉａｐｈ−１の阻害によって阻害されず、このドメインの作用機序はこれら両方のＲＡＧＥ結合パートナーと無関係であることが確認されている。
【１３１５】
ＲＡＧＥの細胞外ドメインは歴史的にその機能に不可欠であると考えられてきたが、理論に拘束されることを望むものではないが、本発明者らは、特定の活性化された共存ＧＰＣＲによるＲＡＧＥの細胞質側テールのＲＡＧＥリガンド非依存性活性化が下流のエフェクターの活性化及びシグナル伝達を誘導する主要なメカニズムであるようだと考えている。この仮説と一致して、野生型ＲＡＧＥ３６２−４０４オリゴペプチドによる処置は、糖尿病のＡＧＥＲ／ａｐｏＥ−ＤＫＯマウスのアテローム形成を回復し、ＡＧＥＲ−ＫＯマウスで観察される相対的な血管保護は、このＲＡＧＥリガンド非依存性トランス活性化経路の阻害を介して媒介されることを示唆し、その病態生理学的重要性及び特定の活性化された共存ＧＰＣＲによるＲＡＧＥの細胞質側テールのＲＡＧＥリガンド非依存性活性化の阻害に対する理論的根拠をさらに強調する。
【１３１６】
一部の細胞（例えば、内皮細胞、白血球）のみが通常条件下でＲＡＧＥを発現する。これは、本発明者らが説明する特定の活性化された共存ＧＰＣＲによるＲＡＧＥリガンド非依存性ＲＡＧＥ活性化は、通常条件下でこれらの細胞タイプに限定されることを意味する。他のほとんどの細胞型は、通常条件下ではＲＡＧＥを発現しない。ＲＡＧＥ発現はＡＴ１Ｒ活性化後に誘導される古典的なＧｑシグナル伝達に影響を及ぼさないという発見に加えて、発現のこの限られた分布は、ＲＡＧＥの欠失／阻害が血圧、ナトリウム利尿又は全身性ＲＡＡＳの他の恒常性機能に影響を与えない理由を部分的に説明し得る。しかし、損傷、炎症、ストレス又は低酸素症後、ＲＡＧＥの新生（ｄｅ  ｎｏｖｏ）又は強化された発現は、局所ＧＰＣＲ活性化の炎症促進性効果の導管を提供し得る。
【１３１７】
現在、ＧＰＣＲ媒介シグナル伝達の全身性拮抗薬（例えば、ＡＴ１Ｒ拮抗薬、ＣＣＲ２拮抗薬）が存在するが、この戦略によって達成される阻害は、それぞれのブロックされたＧＰＣＲから生じる全てのシグナル伝達を取り除く。これは、阻害からのフィードバックエスケープを誘導するか、生理学的シグナル伝達阻害から生じる望ましくない効果をもたらし得るため、状況によっては最適ではない可能性がある。例えば、ＡＴ１Ｒの阻害は、血圧の低下をもたらすが、これは、一部の設定（例えば、下記の心筋梗塞、脳卒中又は重度の心不全など）で望ましくない場合があり、及びＲＡＡＳのフィードバック「エスケープ」活性化を引き起こす。ＲＡＧＥのこのＲＡＧＥリガンド非依存性ＲＡＧＥ活性化が作動している主要の細胞のみを標的とし、ＧＰＣＲ活性化から生じる炎症促進性シグナルのみを標的とする潜在的な利点は、全身阻害の制限が適用されないことである。
【１３１８】
原理の証明として、本発明者らは、内皮細胞においてＲＡＧＥ及びＡＴ１Ｒの両方が十分にあり、Ｓ３９１Ａ−ＲＡＧＥの過剰発現又はＴＡＴ−Ｓ３９１Ａ−ＲＡＧＥ３６２−４０４オリゴペプチドでの処置が、ＡＴ１Ｒブロッカーと同じくらい効果的であるが、標準的なＩＰ−１依存シグナル伝達を変更することなく、Ａｎｇ  ＩＩ−ＡＴ１Ｒ依存性炎症促進性シグナル伝達を阻害することができることを示す。エクスビボで大動脈に適用された同じオリゴペプチドは、Ａｎｇ  ＩＩへの曝露後の炎症促進性分子の誘導を遮断することもできる。さらに、Ａｃｅ２／ａｐｏＥ−ＤＫＯマウス又は糖尿病ａｐｏＥ−ＫＯマウスに１０週間投与した場合、Ｓ３９１Ａ−ＲＡＧＥ３６２−４０４ペプチドは、血圧レベルに影響を与えることなくＲＡＡＳ依存性アテローム性動脈硬化を減衰させることができた。さらに、本発明者らは、ＲＡＧＥ３３８−３６１又はＲＡＧＥ３４３−３６１が、ＲＡＧＥ及びＡＴ１Ｒの両方を豊富に含む内皮細胞におけるＡｎｇ  ＩＩ−ＡＴ１Ｒ依存性炎症促進性シグナル伝達も阻害できることを示した。これらのデータは、この新規炎症促進性シグナル伝達経路を特異的に標的とする治療の可能性を強調している。
【１３１９】
Ｓ３９１Ａ−ＲＡＧＥ３６２−４０４オリゴペプチドで達成された阻害は、過剰な野生型ＲＡＧＥ３６２−４０４によって克服されないが、低濃度のＳ３９１Ａ−ＲＡＧＥ３６２−４０４オリゴペプチドは既存の野生型ＲＡＧＥを克服し、その作用は単純な競合ではないことを示唆している。さらに、ドデカペプチドＲＡＧＥ３７９−３９０を使用して同等の阻害を達成できることは、αヘリックスの小さい領域、特にこの領域の主要な残基の変化が、ＩＱＧＡＰ−１を含むシグナル伝達メディエーターに対するそのようなＲＡＧＥ変異体の親和性を変えることを示しており、その後、野生型ＲＡＧＥにより内因性シグナル伝達がブロックされる。
【１３２０】
特に、共存ＧＰＣＲ（例えば、ＭＣＰ−１によるＣＣＲ２）の活性化後に誘導される炎症促進性シグナル伝達の阻害におけるＳ３９１Ａ−ＲＡＧＥ３６２−４０４の有効性及び認識リガンドによるＧＰＣＲの活性化後のＮＦκＢの活性化の媒介によるＲＡＧＥの作用（例えば、ＭＣＰによるＣＣＲ２−ＣＨＯ細胞又はＩＬ−８によるＣＸＣＲ２−ＣＨＯ細胞の活性化）は、ＲＡＧＥリガンド非依存性ＲＡＧＥ活性化をもたらす活性化された共存ＧＰＣＲの効果がＡＴ１Ｒに限定されず、特定の他の共存ＧＰＣＲの活性化に続いて誘導される炎症促進性シグナル伝達が一般化可能であることを確認する。理論に拘束されることを望むものではないが、本発明者らは、本明細書で同定された主要なＲＡＧＥファーマコフォアは、炎症促進効果を伴う多くのＧＰＣＲに共通のシグナル伝達要素と相互作用するか又は野生型ＲＡＧＥとの相互作用によると考えている。
【１３２１】
本発明者らは、ＲＡＧＥ−ＧＰＣＲヘテロマーの機構的理解が、生理学的シグナル伝達を損なうことなく、又はそれらの阻害からフィードバック「エスケープ」誘導なしで、特定の活性化された共存ＧＰＣＲによるＲＡＧＥリガンド非依存性ＲＡＧＥ活性化の有害作用を特異的に標的とすることができる新規治療法の開発に直接つながると予想する。これらのデータは、アテローム性動脈硬化症、神経変性疾患、悪性腫瘍、糖尿病合併症並びに他の重要な炎症性及び増殖性の状態を含む、ＲＡＧＥ媒介のシグナル伝達が関係する広範囲の状態に適用し得る。
【１３２２】
本明細書に引用される全ての特許、特許出願及び刊行物の開示は、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。
【１３２３】
本明細書における任意の参考文献の引用は、そのような参考文献が本出願の「先行技術」として利用可能であることの承認として解釈されるべきではない。
【１３２４】
本明細書を通して、目的は、本発明をいずれか１つの実施形態又は特定の特徴の集合に限定することなく、本発明の好ましい実施形態を説明することであった。したがって、当業者は、本開示に照らして、本発明の範囲から逸脱することなく、例示された特定の実施形態に対する様々な修正形態及び変更形態がなされ得ることを理解するであろう。そのような修正形態及び変更形態は、全て添付の特許請求の範囲内に含まれることが意図されている。
【１３２５】
本明細書で使用する「単離された」とは、本発明のペプチドモジュレーターを説明する場合、自然状態ではない本明細書に記載のペプチドを意味する（例えば、より大きいタンパク質分子又はそれが自然に発生するか又は通常関連する細胞組織片から解離している）か、又は天然タンパク質の非天然の断片である（例えば、ペプチドは、天然タンパク質の２５％未満、好ましくは１０％未満、最も好ましくは５％未満を含包する）。単離は、ペプチドのアミノ酸配列が自然に発生しないことも意味し得る。例えば、配列は天然に存在する配列から修正されるためであり（例えば、アルギニン、トリプトファン又はリジンなどの塩基性（すなわちカチオン性）アミノ酸を含む特定のアミノ酸の変更により）又は配列に自然界に存在する隣接するアミノ酸が含まれていないためである。「単離された」という用語は、ペプチド又はアミノ酸配列が人工の配列又はポリペプチドであり、非天然であることを意味する場合がある。
【１３２６】
同様に、ペプチドをコードする核酸に関連して使用される「単離された」は、前述の全てを包含し、例えば、単離された核酸は、それらが自然に結び付いている隣接ヌクレオチドから分離されており、生物学的抽出物からの精製などにより、組換え的、合成的に生産することができる。単離された核酸は、前述のペプチドの１つをコードする部分と、別のペプチド又はタンパク質をコードする別の部分を含むことができる。単離された核酸は標識することもできる。核酸には、動物、細菌、植物又は真菌の使用に好ましいコドンが含まれる。特定の実施形態では、単離された核酸は、発現ベクターなどのベクターであり、前述の単離されたペプチドの１つをコードする核酸を含む。所望のＤＮＡ配列の構築物のための一般的な方法が提供され、例えば、前出のＢｒｏｗｎ  Ｊ．ｅｔ  ａｌ．（１９７９），Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ，６８：１０９；Ｓａｍｂｒｏｏｋ  Ｊ，Ｍａｎｉａｔｉｓ  Ｔ（１９８９）である。
【１３２７】
本明細書で使用される「アミノ酸」又は「残基」という用語は、２０の天然アミノ酸のいずれか、天然アミノ酸のいずれか１つのＤ型、非天然アミノ酸及び誘導体、その類似体及び模倣物を含む。天然に存在するアミノ酸を含む任意のアミノ酸は、商業的に購入するか、又は当技術分野で知られている方法により合成することができる。非天然アミノ酸の例には、ノルロイシン（「Ｎｌｅ」）、ノルバリン（「Ｎｖａ」）、β−アラニン、Ｌ−又はＤ−ナフタラニン、オルニチン（「Ｏｒｎ」）、ホモアルギニン（ホモＡｒｇ）などが含まれ、Ｍ．Ｂｏｄａｎｚｓｋｙ，“Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ  ｏｆ  Ｐｅｐｔｉｄｅ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，”第１及び第２改訂版，Ｓｐｒｉｎｇｅｒ−Ｖｅｒｌａｇ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，Ｎ．Ｙ．，１９８４  ａｎｄ  １９９３及びＳｔｅｗａｒｔ  ａｎｄ  Ｙｏｕｎｇ，“Ｓｏｌｉｄ  Ｐｈａｓｅ  Ｐｅｐｔｉｄｅ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，”第２版，Ｐｉｅｒｃｅ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｃｏ．，Ｒｏｃｋｆｏｒｄ，Ｉｌｌ．，１９８４などにこれらが記載されていることを含む当ペプチド技術などでよく知られており、両方とも参照により本明細書に組み込まれる。
【１３２８】
一般的なアミノ酸は、フルネーム、標準の１文字表記（ＩＵＰＡＣ）又は標準の３文字表記で称され得る。例えば、Ａ、Ａｌａ、アラニン；Ｃ、Ｃｙｓ、システイン；Ｄ、Ａｓｐ、アスパラギン酸（アスパラギン酸塩）；Ｅ、Ｇｌｕ、グルタミン酸（グルタミン酸塩）；Ｆ、Ｐｈｅ、フェニルアラニン；Ｇ、Ｇｌｙ、グリシン；Ｈ、Ｈｉｓ、ヒスチジン；Ｉ、Ｉｌｅ、イソロイシン；Ｋ、Ｌｙｓ、リジン；Ｌ、Ｌｅｕ、ロイシン；Ｍ、Ｍｅｔ、メチオニン；Ｎ、Ａｓｎ、アスパラギン；Ｐ、Ｐｒｏ、プロリン；Ｑ、Ｇｌｎ、グルタミン；Ｒ、Ａｒｇ、アルギニン；Ｓ、Ｓｅｒ、セリン；Ｔ、Ｔｈｒ、スレオニン；Ｖ、Ｖａｌ、バリン；Ｗ、Ｔｒｐ、トリプトファン；Ｘ、Ｈｙｐ、ヒドロキシプロリン；Ｙ、Ｔｙｒ、チロシン。本明細書の組成物中のあらゆるアミノ酸は、天然、合成及びその誘導体又はその模倣物であり得る。
【１３２９】
ペプチドの非ペプチド類似体、例えば、安定化構造又は生分解の軽減を提供するものも考えられる。ペプチド模倣類似体は、非ペプチド部分による１つ以上の残基の置換により、選択されたペプチドに基づいて調製することができる。好ましくは、非ペプチド部分は、ペプチドがその天然の立体構造を保持するか、又は好ましい立体構造、例えば、生物活性などを安定化させることを可能にする。ペプチドからの非ペプチド模倣類似体の調製方法の一例は、Ｎａｃｈｍａｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｒｅｇｕｌ．Ｐｅｐｔ．５７：３５９−３７０（１９９５）に記載されている。本明細書で使用される「ペプチド」という用語は、前述の全てを包含する。
【１３３０】
上記のように、本発明のペプチドは、天然アミノ酸、すなわちＬ−アミノ酸又はＤ−アミノ酸、すなわち天然配列と比較してレトロ−インベルソ（ｒｅｔｒｏ−ｉｎｖｅｒｓｏ）順でＤ−アミノ酸を含むアミノ酸配列のいずれかで構成され得る。「レトロ−インベルソ（ｒｅｔｒｏ−ｉｎｖｅｒｓｏ）」という用語は、配列の方向が逆で、各アミノ酸残基のキラリティが反転している直鎖ペプチドの異性体を指す。したがって、Ｌ型で存在する本明細書の任意の配列も、Ｄ−エナンチオマー（レトロ−インベルソ）ペプチド配列として本明細書で本質的に開示される。本発明によればＤ−エナンチオマー（レトロ−インベルソ）ペプチド配列は、例えば、対応する天然Ｌ−アミノ酸配列のアミノ酸配列の逆を合成することにより、構築することができる。Ｄ−レトロ−インベルソエナンチオマーペプチド、例えば単離されたペプチドの成分である各単一アミド結合のカルボニル基とアミノ基の位置は交換され、各α炭素の側鎖基の位置は保存される。
【１３３１】
上記で定義されたＤ−エナンチオマーアミノ酸を有する本発明の実施形態の単離ペプチドモジュレーターの成分調製は、対応する天然に存在するＬ型アミノ酸配列の逆アミノ酸配列を化学的に合成することにより、又は当業者に知られている任意の他の適切な方法により達成することができる。代わりに、ペプチド又はその成分のＤ−レトロ−インベルソ（Ｄ−ｒｅｔｒｏ−ｉｎｖｅｒｓｏ）エナンチオマー型は、Ｄ−レトロ−インベルソ−エナンチオマー型の化学合成のためのマトリックスとして、Ｌ型ペプチド又はその成分を利用し、上記に開示の化学合成を使用して調整し得る。
【１３３２】
本発明の実施形態のペプチドモジュレーターが機能する方法に影響を与えないか、又は本発明の実施形態のペプチドモジュレーターが機能する方法に有利に影響する様々な側基の追加を含む様々な変更を行うことができる。そのような変化には、電荷基の追加又は削除、アミノ酸の置換、結合には影響しないが、血液脳関門を通過する輸送を促進する本発明の実施形態のペプチドモジュレーターの全体的な電荷特性に影響を与える親油性部分の追加などが含まれ得る。そのような各変化について、分子が本発明に従って機能するかどうかを試験するために、日常的な実験のみが必要とされる。単に所望の変更を行うか、所望のペプチドを選択して、実施例で詳細に説明された方法で適用する。
【１３３３】
本発明の一形態では、本明細書で定義される「配列同一性」という用語は、配列が以下のように比較されることを意味する。２つのアミノ酸配列のパーセント同一性を決定するために、最適な比較目的のために配列をアライメントすることができる（例えば、最初のアミノ酸配列の配列にギャップを導入できる）。次に、対応するアミノ酸位置のアミノ酸を比較できる。最初の配列の位置が、２番目の配列の対応する位置と同じアミノ酸で占められている場合、分子はその位置で同一である。２つの配列間の同一性パーセントは、配列が共有する同一位置の数の関数である。例えば、特定のペプチドが定義された長さの参照ポリペプチドに対して特定のパーセント同一性を有すると言われる場合、パーセント同一性は参照ペプチドに対するものである。したがって、１００アミノ酸長の参照ポリペプチドと５０％同一のペプチドは、参照ポリペプチドの５０アミノ酸長の部分と完全に同一である５０アミノ酸ポリペプチドであり得る。また、その全長が参照ポリペプチドと５０％同一である１００アミノ酸長のポリペプチドであり得た。このような２つの配列のパーセント同一性パーセントの決定は、数学的アルゴリズムを使用して達成できる。
【１３３４】
２つの配列の比較に利用される数学的アルゴリズムの好ましい非限定的な例は、ａｌｇｏｒｉｔｈｍ  ｏｆ  Ｋａｒｌｉｎ  ｅｔ  ａｌ．（１９９３），ＰＮＡＳ  ＵＳＡ，９０：５８７３−５８７７である。そのようなアルゴリズムは、本発明のアミノ酸配列に対して所望の同一性を有する配列を識別するために使用し得るＮＢＬＡＳＴプログラムに組み込まれている。比較の目的でギャップのあるアラインメントを取得するには、Ａｌｔｓｃｈｕｌ  ｅｔ  ａｌ．，（１９９７），Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ，２５：３３８９−３４０２に記載されているように、ギャップありＢＬＡＳＴ（Ｇａｐｐｅｄ  ＢＬＡＳＴ）を利用することができる。ＢＬＡＳＴ及びギャップありＢＬＡＳＴプログラムを利用する場合、それぞれのプログラムのデフォルトパラメータ（例えば、ＮＢＬＡＳＴ）を使用することができる。さらに配列は、Ｇｅｎｅｔｉｃ  Ｃｏｍｐｕｔｉｎｇ  Ｇｒｏｕｐ’ｓ  ＧＡＰ（グローバルアラインメントプログラム）のバージョン９を用い、デフォルト（ＢＬＯＳＵＭ６２）マトリックス（値−４から＋１１）、ギャップオープンペナルティ―１２（最初のｎｕｌｌギャップに関して）及び−４のギャップ延長ペナルティ（ギャップ内の連続するヌルが追加されるごと）を使用しアライメントすることができる。アラインメント後、要求された配列内のアミノ酸の数の割合として一致した数を表すことにより、同一性の割合が計算される。２つのアミノ酸配列のパーセント同一性を決定する記載された方法は、核酸配列に対応して適用することができる。
【１３３５】
一実施形態において、本発明の実施形態のペプチドモジュレーターは、直接的又はリンカーを介して連結され得る。これに関連して、「リンカー」は、通常、ペプチド、オリゴペプチド又はポリペプチドであり、複数のペプチドを互いに連結するために使用され得る。互いに連結されるように選択された本発明のペプチドは、同一の配列であるか、又は本発明のペプチドのいずれかから選択される。リンカーは、１―１０アミノ酸の長さ、より好ましくは１―５アミノ酸の長さ及び最も好ましくは１―３アミノ酸の長さを有することができる。特定の実施形態では、リンカーは、二次構造形成特性を有する必要はない、すなわちα―ヘリックス又はβ―シート構造形成傾向を必要としない。例えば、リンカーがグリシン残基の少なくとも３５％で構成されている場合である。前述のように、リンカーは、通常の細胞過程によって細胞内で切断できるＭＭＰペプチドなどの切断可能なペプチドであり、毒性と見なさないほどに細胞外用量を十分低く保ちながら、以前に連結されたペプチドの細胞内用量を効果的に上昇させることができる。リンカーとして細胞内／内因的に切断可能なペプチド、オリゴペプチド又はポリペプチド配列の使用により、標的細胞への伝達後にペプチドを互いに分離することができる。これに関連して、切断可能なオリゴ又はポリペプチド配列には、プロテアーゼ切断可能なオリゴ又はポリペプチド配列も含まれ、プロテアーゼ切断部位は、通常、処理細胞により内因的に発現されるプロテアーゼに応じて選択される。上記で定義されたリンカーは、オリゴ又はポリペプチド配列として存在する場合、Ｄ―アミノ酸又は天然アミノ酸、すなわちＬ―アミノ酸のいずれかで構成され得る。上記の代替として、ペプチドのカップリング又は融合は、カップリング剤又はコンジュゲート剤、例えば架橋試薬を介して達成され得る。
【１３３６】
利用できるいくつかの分子間架橋試薬があり、例えば、Ｍｅａｎｓ  ａｎｄ  Ｆｅｅｎｅｙ，Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｍｏｄｉｆｉｃａｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ，Ｈｏｌｄｅｎ−Ｄａｙ，１９７４，ｐｐ．３９−４３を参照されたい。これらの試薬には、例えば、Ｎ−スクシンイミジル３―（２―ピリジルジチオ）プロピオネート（ＳＰＤＰ）又はＮ、Ｎ’―（１，３―フェニレン）ビスマレイミドがあり、Ｎ、Ｎ’―エチレン―ビス―（ヨードアセトアミド）又は６―１１個の炭素メチレン架橋を有する他のそのような試薬及び１，５―ジフルオロ―２，４―ジニトロベンゼンなどがある。この目的に有用な他の架橋試薬には、ｐ、ｐ’―ジフルオロ―ｍ、ｍ’―ジニトロジフェニルスルホン；アジピン酸ジメチル；フェノール―１，４―ジスルホニルクロリド；ヘキサメチレンジイソシアネート又はジイソチオシアネート又はアゾフェニル―ｐ―ジイソシアネート；グルタルアルデヒド及びジジアゾベンジジンなどが含まれる。架橋試薬は、ホモ二官能性、すなわち同じ反応を受ける２つの官能基を有し得る。好ましいホモ二官能性架橋結合試薬は、ビスマレイミドヘキサン（ＢＭＨ）である。ＢＭＨには２つのマレイミド官能基が含まれており、穏やかな条件下（ｐＨ  ６．５―７．７）でスルフヒドリル含有化合物と特異的に反応する。２つのマレイミド基は炭化水素鎖で接続されている。したがって、ＢＭＨは、システイン残基を含むタンパク質（又はポリペプチド）の不可逆的な架橋に有用である。架橋試薬はヘテロ二官能性でもあり得る。ヘテロ二官能性架橋試薬は、２つの異なる官能基、例えば、遊離アミンとチオールをそれぞれ有する２つのタンパク質を架橋するアミン反応性基及びチオール反応性基を有する。ヘテロ二官能性架橋試薬の例は、スクシンイミジル４―（Ｎ―マレイミドメチル）シクロヘキサン―１―カルボキシレート（ＳＭＣＣ）、ｍ―マレイミドベンゾイル―Ｎ―ヒドロキシスクシンイミドエステル（ＭＢＳ）及びＭＢＳの伸びきり鎖アナログであるスクシンイミド４―（ｐ―マレイミドフェニル）ブチレート（ＳＭＰＢ）などである。これらの架橋試薬のスクシンイミジル基と第一級アミン及びチオール反応性マレイミドは、システイン残基のチオールと共有結合を形成する。架橋試薬は、多くの場合に水溶性が低いため、スルホン酸基などの親水性部分を架橋試薬に加え得、その水溶性を改善する。スルホＭＢＳ及びスルホＳＭＣＣは、水溶性に修飾された架橋試薬の例である。多くの架橋試薬は、細胞条件下で基本的に切断不可能なコンジュゲートを生じる。したがって、架橋試薬は、細胞条件下で切断可能なジスルフィドなどの共有結合を含んでいるものもある。例えば、トラウト試薬（Ｔｒａｕｔ’ｓ  ｒｅａｇｅｎｔ）、ジチオビス（スクシンイミジルプロピオネート）（ＤＳＰ）及びＮ−スクシンイミジル３―（２―ピリジルジチオ）プロピオネート（ＳＰＤＰ）は、周知の切断可能な架橋剤である。切断可能な架橋試薬の使用により、必要があれば、細胞が架橋試薬の特定の配列を切断できる場合、標的細胞への伝達後にペプチドを分離することができる。この目的のために、直接的なジスルフィド結合も有用であり得る。化学的架橋には、スペーサーアームの使用も含まれ���可能性がある。スペーサーアームは、分子内の柔軟性を提供するか、又は共役部分間の分子内距離を調整し、それによって生物学的活性を維持するのに役立ち可能性がある。スペーサーアームは、例えば、プロリンなどのスペーサーアミノ酸を含むタンパク質（又はポリペプチド）部分の形態であり得る。代わりに、スペーサーアームは、「長鎖ＳＰＤＰ」のような架橋試薬の一部であり得る（Ｐｉｅｒｃｅ  Ｃｈｅｍ．Ｃｏ．，Ｒｏｃｋｆｏｒｄ，Ｉｌｌ．，ｃａｔ．Ｎｏ．２１６５１Ｈ）。上記のものを含む多くの架橋試薬が市販されている。それらの使用に関する詳細な使用説明書は、商業供給者から容易に入手できる。架橋タンパク質及びコンジュゲートの調製に関する一般的なリファレンスは；Ｗｏｎｇ，Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｃｏｎｊｕｇａｔｉｏｎ  ａｎｄ  Ｃｒｏｓｓ−Ｌｉｎｋｉｎｇ，ＣＲＣ  Ｐｒｅｓｓ（１９９１）である。
【１３３７】
一実施形態では、ペプチドモジュレーターは、「誘導体」、「バリアント」又は「機能的断片」を含み得る。すなわち、アミノ酸配列の１つ以上の部位で１つ以上のアミノ酸の置換、天然配列の任意の部位での１つ以上のアミノ酸の欠失及び／又は天然ペプチド配列の１つ以上の部位での１つ以上のアミノ酸の挿入により、上記で定義したように、本発明の天然に存在するペプチド（Ｌ−アミノ酸）の配列に由来する。「誘導体」は、本発明のペプチドとして使用される場合、それらの生物学的活性を保持するものとする。本発明に関連して、誘導体は、上記で定義されたそれらのＬ―又はＤ―アミノ酸配列又はその両方の形で存在し得る。
【１３３８】
本発明のペプチドの誘導体の調製のためにアミノ酸の置換が行われる場合、同類（アミノ酸）置換が好ましい。同類（アミノ酸）置換には、通常、次のグループ内の置換が含まれる。グリシン及びアラニン；バリン、イソロイシン及びロイシン；アスパラギン酸（アスパラギン酸塩）及びグルタミン酸（グルタミン酸塩）；アスパラギン及びグルタミン；セリン及びスレオニン；リジン及びアルギニン；フェニルアラニン及びチロシンなどである。したがって、好ましい同類置換基は、アスパラギン酸塩―グルタミン酸塩；アスパラギン−グルタミン；バリン−ロイシン−イソロイシン；アラニン−バリン；及びフェニルアラニン−チロシンである。そのような突然変異により、例えばペプチドの安定性及び／又は有効性が強化し得る。ペプチドに突然変異が導入された場合、ペプチドは（機能的に）相同のままである。例えば、順番、機能及び抗原特性又は他の機能が相同のままである。ペプチドのそのような変異成分は、特定の用途（例えば、ｐＨ最適化の増加、温度安定性の増加など）のために、本発明のペプチドの変更されていない配列よりも有利であり得る変更された特性を有することが可能である。
【１３３９】
一実施形態では、本発明のペプチドの誘導体は、本発明のペプチドの非修飾配列と実質的な同一性を有すると定義される。天然に存在する類似体に対して、特に好ましいのは、少なくとも３０％の配列同一性、好ましくは少なくとも５０％の配列同一性、さらに好ましくは少なくとも６０％の配列同一性、さらに好ましくは少なくとも７５％の配列同一性、さらにより好ましくは少なくとも８０％のアミノ酸配列、さらになおも好ましくは９０％の配列同一性及び最も好ましくは少なくとも９５％又はさらに９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列である。本発明のペプチドの機能的誘導体の合成又は単離並びに２つのアミノ酸配列のパーセント同一性の決定のための適切な方法は上記されている。さらに、上記に開示のペプチドの誘導体の製造方法は周知であり、当業者に周知の標準的な方法に従って実施することができる（例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋ  Ｊ，Ｍａｎｉａｔｉｓ  Ｔ（１９８９）を参照されたい）。
【１３４０】
さらなる実施形態として、本発明は、本明細書で定義されるモジュレーターを含む医薬組成物又は薬物を提供する。特定の実施形態では、そのような医薬組成物又は医薬品は、本明細書で定義されるように、モジュレーター及び任意選択によるリンカーを含む。
【１３４１】
さらに、そのような医薬組成物又は医薬は、医薬的に許容される担体、アジュバント又はビヒクルを含むことができる。本発明による「薬学的に許容される担体、アジュバント又はビヒクル」とは、製剤化されるモジュレーターの薬理学的活性又は生理学的標的を破壊しない非毒性の担体、アジュバント又はビヒクルを指す。本発明の医薬組成物に使用できる薬学的に許容される担体、アジュバント又はビヒクルには、頭蓋又は頭蓋内に適用できるもの又は血液脳関門（ＢＢＢ）を通過できるものが含まれるが、これらに限定されない。それにもかかわらず、本発明の医薬組成物は、イオン交換体、アルミナ、ステアリン酸アルミニウム、レシチン、ヒト血清アルブミンなどの血清タンパク質、リン酸などの緩衝物質、グリシン、ソルビン酸、ソルビン酸カリウム、飽和植物脂肪酸の部分的グリセリド混合物、水、リン酸水素二ナトリウム、リン酸水素カリウム、塩化ナトリウム、亜鉛塩、コロイドシリカ、三ケイ酸マグネシウムなどの塩又は電解質、ポリビニルピロリドン、セルロース系物質、ポリエチレングリコール、カルボキシメチルセルロースナトリウム、ポリアクリレート、ワックス、ポリエチレン−ポリオキシプロピレンブロックポリマー、ポリエチレングリコール及びラノリン（ｗｏｏｌ  ｆａｔ）などを含むことができる。
【１３４２】
本発明の医薬組成物は、経口的に、吸入スプレー、局所的、直腸、経鼻的、頬側的、経膣的、脳又は埋め込みリザーバを介することによる非経口的に投与され得る。
【１３４３】
ＲＡＧＥの任意のドメインに関して又は任意の他のポリペプチド配列に関して、本明細書で使用される「断片」という用語は、ＲＡＧＥのドメイン又はそれが参照する他の任意のポリペプチド配列よりも少ない１つ以上のアミノ酸残基を意味すると理解されるべきである。
【１３４４】
本明細書で使用する非経口という用語には、皮下、静脈内、筋肉内、関節内、滑液嚢内、胸骨内、くも膜下腔内、肝内、病巣内及び頭蓋内注射又は注入技術が含まれる。医薬組成物は、経口、腹腔内又は静脈内投与される。本発明の医薬組成物の無菌注射可能形態は、水性又は油性懸濁液であり得る。これらの懸濁液は、適切な分散剤又は湿潤剤及び懸濁剤を使用して、当技術分野で周知の技術に従って製剤され得る。無菌注射製剤は、例えば１，３−ブタンジオール溶液など、非毒性の非経口的に許容される希釈剤又は溶媒中の無菌注射溶液又は懸濁液であり得る。使用可能な許容されるビヒクル及び溶媒の中には、水、リンゲル液及び等張性塩化ナトリウム溶液がある。加えて、無菌の固定油が、溶媒又は懸濁化剤として従来から使用されている。
【１３４５】
そのようなものとして、合成モノ又はジグリセリドを含む任意の刺激の少ない固定油を使用することができる。オレイン酸及びそのグリセリド誘導体などの脂肪酸は、特にそれらのポリオキシエチル化バージョンのオリーブ油又はヒマシ油などの天然の薬学的に許容される油と同様に、注射剤の調製に有用である。これらの油剤又は懸濁液は、カルボキシメチルセルロースなどの長鎖アルコール希釈剤又は分散剤又は乳濁液及び懸濁液を含む薬学的に許容される剤形の製剤に一般的に使用される類似の分散剤も含み得る。薬学的に許容される固体、液体又は他の剤形の製造に一般的に使用される、Ｔｗｅｅｎｓ、Ｓｐａｎｓ及び他の乳化剤又はバイオアベイラビリティ増強剤などの他の一般的に使用される界面活性剤も製剤の目的に使用され得る。
【１３４６】
本明細書の薬学的に許容される組成物は、カプセル、錠剤、水性懸濁液又は溶液を含む任意の経口的に許容される剤形で経口投与することができるが、これらに限定されるものではない。経口使用のための錠剤の場合、一般的に使用される担体には、乳糖とコーンスターチが含まれる。通常、ステアリン酸マグネシウムなどの潤滑剤も添加される。カプセル剤での経口投与の場合、有用な希釈剤には、乳糖及び乾燥コーンスターチが含まれる。経口使用に水性懸濁液が必要な場合、有効成分を乳化剤及び懸濁剤と組み合わせる。必要に応じて、特定の甘味料、香料、着色料を追加し得る。
【１３４７】
代わりに、本明細書で定義される医薬組成物は、直腸投与用の坐剤の剤形で投与し得る。そのような坐剤は、室温では固体であるが直腸温度では液体であり、したがって直腸で溶けて薬物を放出する適切な非刺激性賦形剤と薬剤を混合することにより調製することができる。そのような材料には、カカオバター、蜜蝋、ポリエチレングリコールが含まれる。
【１３４８】
本明細書で定義される医薬組成物は、特に処置の標的が、脳、他の頭蓋内組織、目又は皮膚の疾患を含む局所適用により容易にアクセス可能な領域又は器官を含む場合、局所投与することもでき得る。適切な製剤は、これらの領域又は臓器のそれぞれに対して迅速に調製される。
【１３４９】
局所適用のために、本明細書で定義される医薬組成物は、本明細書で特定されるモジュレーターを含む適切な軟膏に製剤化され、１つ以上の担体に懸濁又は溶解され得る。ペプチドの局所投与のための担体には、鉱油、流動ワセリン、白色ワセリン、プロピレングリコール、ポリオキシエチレン、ポリオキシプロピレン化合物、乳化ワックス及び水が含まれるが、これらに限定されるものではない。代わりに、本明細書で定義される医薬組成物は、１つ以上の薬学的に許容される担体に懸濁又は溶解したペプチドを含む適切なローション又はクリームに製剤化することができる。適切な担体には、鉱油、モノステアリン酸ソルビタン、ポリソルベート６０、セチルエステルワックス、セテアリルアルコール、２−オクチルドデカノール、ベンジルアルコール及び水が含まれるが、これらに限定されるものではない。
【１３５０】
本明細書で定義される医薬組成物は、経鼻エアロゾル又は吸入によって投与することもできる。そのような組成物は、医薬製剤の技術分野で周知の技術に従って調製することができ、ベンジルアルコール又は他の適切な防腐剤、バイオアベイラビリティ―を増強する吸収促進剤、フルオロカーボン及び／又は他の従来の可溶化剤又は分散剤を使用する生理食塩水中の溶液として調整し得る。本明細書の薬学的に許容される組成物又は薬剤は、経口又は非経口投与用、例えば、注射による投与に製剤化される。
【１３５１】
処置目的のために、非毒性の有効量のモジュレーターを上記で定義された医薬組成物の調製に使用し得る。したがって、モジュレーターのある量を担体材料と組み合わせて、上記で定義された組成物を生成することができる。
【１３５２】
医薬組成物は、典型的には、単一の（又は複数の）剤形で調製され、これは、処置される宿主及び特定の投与方式に応じて異なる。通常、医薬組成物は、０．０００１から１００ｍｇ／ｋｇ体重／日のペプチドの用量あたりの投与量範囲が医薬組成物を投与されている患者に投与できるように製剤化される。用量範囲あたりの好ましい投与範囲は、０．０１ｍｇ／ｋｇ体重／日から５０ｍｇ／ｋｇ体重／日まで変化し、さらに好ましい用量範囲あたりの投与量範囲は、０．１ｍｇ／ｋｇ体重／日から１０ｍｇ／ｋｇ体重／日である。
【１３５３】
ただし、上記の投与量範囲及び処置計画は、使用する特定のモジュレーターの活性、年齢、体重、健康状態、性別、食習慣、投与時間、排泄率、併用薬、処置する医師の判断及び処置されている特定の疾患の重症度などを含む、種々の要因に応じて任意の特定の患者に適切に適合して得る。これに関連して、投与は初期投与量範囲で行われ得、例えば、上記のとおり、その範囲内で初期用量範囲を増減することにより、処置期間中にわたって変化し得る。代わりに、投与は、特定の投与量範囲を投与することにより連続的な方法で実施され、それにより、処置の全時間にわたって初期投与量範囲を維持することができる。さらに、両方の投与形態を組み合わせ得、例えば、処置の種々の期間で投与量範囲を調整（増加又は減少）するが、単一の期間内で一定に保ち、それにより、種々の期間の投与量範囲が互いに異なる場合である。
【１３５４】
治療的に使用される場合、本発明のモジュレーターは治療有効量で投与される。一般に、治療有効量とは、処置される特定の状態の発症を遅らせるか、進行を阻害するか、又は完全に停止するのに必要な量を意味する。一般に、治療有効量は、対象の年齢及び状態並びに対象の疾患の性質及び程度によって異なり、これらは、全て当業者によって決定されることができる。特に合併症が発生した場合、個々の医師が投与量を調整することができる。
【１３５５】
上記のように、本発明の一側面は、ストリンジェントな条件下で単離されたペプチドモジュレーター又はそのバリアントをコードする核酸配列及びそれらの誘導体並びに上記のヌクレオチド配列からなる核酸分子にハイブリダイズする他の核酸配列に関連している。本明細書で使用される「ストリンジェントな条件」という用語は、当業者が精通しているパラメーターを指す。核酸ハイブリダイゼーションのパラメーターは、そのような方法を蓄積した参考文献にあり得る。例えばＭｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，Ｊ．Ｓａｍｂｒｏｏｋ，ｅｔ  ａｌ．，ｅｄｓ．，Ｓｅｃｏｎｄ  Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ，Ｎ．Ｙ．，１９８９又はＣｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｆ．Ｍ．Ａｕｓｕｂｅｌ，ｅｔ  ａｌ．，ｅｄｓ．，Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ＆Ｓｏｎｓ，Ｉｎｃ．，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ。より具体的には、本明細書で使用されるストリンジェントな条件は、ハイブリダイゼーション緩衝液（３．５×ＳＳＣ、０．０２％フィコール、０．０２％ポリビニルピロリドン、０．０２％ウシ血清アルブミン、２５  ｍＭＮａＨ２ＰＯ４（ｐＨ７）、０．５％ＳＤＳ、２ｍＭ  ＥＤＴＡ）における６５℃でのハイブリダイゼーションを指す。ＳＳＣは０．１５Ｍ塩化ナトリウム／０．１５  Ｍクエン酸ナトリウム、ｐＨ７であり、ＳＤＳはドデシル硫酸ナトリウム並びにＥＤＴＡはエチレンジアミン四酢酸である。ハイブリダイゼーション後、ＤＮＡが転写された膜を室温で２×ＳＳＣで洗浄し、次に６５℃で、０．１×ＳＳＣ／０．１×ＳＤＳで洗浄する。
【１３５６】
本発明は、上記製剤の少なくとも１つの上記医薬組成物（１つ以上の容器内）及び医薬組成物の適用に関する指示及び／又は情報に関する取扱説明書又は情報パンフレットを含むキットをさらに提供する。
【１３５７】
本発明の分野の当業者は、本明細書に記載された本発明が、具体的に記載されたもの以外の変形形態及び修正形態が可能であることを理解するであろう。本発明は、そのような機能的変形形態及び修正形態を全て含むことを理解されたい。本発明は、本明細書において個々に又は集合的に参照又は示される全てのステップ、特徴、組成物及び化合物並びに前記ステップ又は特徴のあらゆる組み合わせ又は任意の２つ以上も含む。本発明は、例示のみを目的とする本明細書に記載の特定の実施形態によって範囲が限定されるものではない。本明細書に記載されているように、機能的に均等な製品、組成物及び方法は、明らかに本発明の範囲内である。さらに、本発明は、特に明記しない限り、分子生物学、微生物学、神経生物学、ウイルス学、組換えＤＮＡ技術、溶液中のペプチド合成、固相ペプチド合成及び免疫学の従来の技術又は本明細書で引用した技術を使用して、過度な実験を行うことなく実行される。
【１３５８】
［参考文献一覧］
１．Ａｂｅ，Ｒ．＆Ｙａｍａｇｉｓｈｉ，Ｓ．（２００８）ＡＧＥ−ＲＡＧＥ  ｓｙｓｔｅｍ  ａｎｄ  ｃａｒｃｉｎｏｇｅｎｅｓｉｓ．Ｃｕｒｒｅｎｔ  ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  ｄｅｓｉｇｎ，１４：９４０−９４５．
２．Ａｈｍａｄ，Ａ．，Ｂｈａｔｔａｃｈａｒｙａ，Ｓ．，Ｓｒｉｄｈａｒ，Ａ．，Ｉｑｂａｌ，Ａ．Ｍ．＆Ｍａｒｉａｎｉ，Ｔ．Ｊ．（２０１６）Ｒｅｃｕｒｒｅｎｔ  ｃｏｐｙ  ｎｕｍｂｅｒ  ｖａｒｉａｎｔｓ  ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ  ｗｉｔｈ  ｂｒｏｎｃｈｏｐｕｌｍｏｎａｒｙ  ｄｙｓｐｌａｓｉａ．Ｐｅｄｉａｔｒｉｃ  ｒｅｓｅａｒｃｈ，７９，９４０−９４５．
３．Ａｈｏ，Ｖ．，Ｏｌｌｉｌａ，Ｈ．Ｍ．，Ｒａｎｔａｎｅｎ，Ｖ．，Ｋｒｏｎｈｏｌｍ，Ｅ．，Ｓｕｒａｋｋａ，Ｉ．，ｖａｎ  Ｌｅｅｕｗｅｎ，Ｗ．Ｍ．Ａ．，Ｌｅｈｔｏ，Ｍ．，Ｍａｔｉｋａｉｎｅｎ，Ｓ．，Ｒｉｐａｔｔｉ，Ｓ．，Ｈａｅｒｍａｅ，Ｍ．，Ｓａｌｌｉｎｅｎ，Ｍ．，Ｓａｌｏｍａａ，Ｖ．，Ｊａｕｈｉａｉｎｅｎ，Ｍ．，Ａｌｅｎｉｕｓ，Ｈ．，Ｐａｕｎｉｏ，Ｔ．＆Ｐｏｒｋｋａ−Ｈｅｉｓｋａｎｅｎ，Ｔ．（２０１３）Ｐａｒｔｉａｌ  Ｓｌｅｅｐ  Ｒｅｓｔｒｉｃｔｉｏｎ  Ａｃｔｉｖａｔｅｓ  Ｉｍｍｕｎｅ  Ｒｅｓｐｏｎｓｅ−Ｒｅｌａｔｅｄ  Ｇｅｎｅ  Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  Ｐａｔｈｗａｙｓ：Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ  ａｎｄ  Ｅｐｉｄｅｍｉｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｓｔｕｄｉｅｓ  ｉｎ  Ｈｕｍａｎｓ．ＰＬｏＳ  ＯＮＥ，８，ｅ７７１８４．
４．Ａｌｅｘａｎｄｅｒ，Ｓ．，Ｍａｔｈｉｅ，Ａ．＆Ｐｅｔｅｒ，Ｊ．（２０１１）Ｇｕｉｄｅ  ｔｏ  Ｒｅｃｅｐｔｏｒｓ  ａｎｄ  Ｃｈａｎｎｅｌｓ（ＧＲＡＣ），５ｔｈ  ｅｄｉｔｉｏｎ．Ｂｒ．Ｊ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．，１６４，Ｓ１−Ｓ３２４．
５．Ａｌｌｅｎ，Ｓ．ｅｔ  ａｌ．Ｃｈｅｍｏｋｉｎｅ：Ｒｅｃｅｐｔｏｒ  Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ，Ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎｓ  ａｎｄ  Ａｎｔａｇｏｎｉｓｍ．Ａｎｎｕａｌ  Ｒｅｖｉｅｗ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，２００７，２５：７８７−８２０．
６．Ａｌｌｅｎｄｅ，Ｍ．Ｌ．，Ｂｅｋｔａｓ，Ｍ．，Ｌｅｅ，Ｂ．Ｇ．，Ｂｏｎｉｆａｃｉｎｏ，Ｅ．，Ｋａｎｇ，Ｊ．，Ｔｕｙｍｅｔｏｖａ，Ｇ．，Ｃｈｅｎ，Ｗ．，Ｓａｂａ，Ｊ．Ｄ．＆Ｐｒｏｉａ，Ｒ．Ｌ．（２０１１）Ｓｐｈｉｎｇｏｓｉｎｅ−１−ｐｈｏｓｐｈａｔｅ  ｌｙａｓｅ  ｄｅｆｉｃｉｅｎｃｙ  ｐｒｏｄｕｃｅｓ  ａ  ｐｒｏ−ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ  ｒｅｓｐｏｎｓｅ  ｗｈｉｌｅ  ｉｍｐａｉｒｉｎｇ  ｎｅｕｔｒｏｐｈｉｌ  ｔｒａｆｆｉｃｋｉｎｇ．Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，２８６，７３４８−７３５８．
７．Ａｎ，Ｓ．，Ｂｌｅｕ，Ｔ．，Ｈａｌｌｍａｒｋ，Ｏ．Ｇ．＆Ｇｏｅｔｚｌ，Ｅ．Ｊ．（１９９８）Ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ  ｏｆ  ａ  ｎｏｖｅｌ  ｓｕｂｔｙｐｅ  ｏｆ  ｈｕｍａｎ  Ｇ  ｐｒｏｔｅｉｎ−ｃｏｕｐｌｅｄ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ｆｏｒ  ｌｙｓｏｐｈｏｓｐｈａｔｉｄｉｃ  ａｃｉｄ．Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，２７３，７９０６−７９１０．
８．Ａｎｄｅｒｓ  ＨＪ  ｅｔ  ａｌ．（２０１０）Ｑｕｅｓｔｉｏｎｓ  ａｂｏｕｔ  Ｃｈｅｍｏｋｉｎｅ  ａｎｄ  Ｃｈｅｍｏｋｉｎｅ  Ｒｅｃｅｐｔｏｒ  Ａｎｔａｇｏｎｉｓｍ  ｉｎ  Ｒｅｎａｌ  Ｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎ，Ｎｅｐｈｒｏｎ  Ｅｘｐ  Ｎｅｐｈｒｏｌ，１１４：ｅ３３−ｅ３８．
９．Ａｎｇｅｌｏｐｏｕｌｏｕ，Ｅ．，Ｐｉｐｅｒｉ，Ｃ．，Ａｄａｍｏｐｏｕｌｏｓ，Ｃ．＆Ｐａｐａｖａｓｓｉｌｉｏｕ，Ａ．Ｇ．（２０１６）Ｐｉｖｏｔａｌ  ｒｏｌｅ  ｏｆ  ｈｉｇｈ−ｍｏｂｉｌｉｔｙ  ｇｒｏｕｐ  ｂｏｘ  １（ＨＭＧＢ１）ｓｉｇｎａｌｌｉｎｇ  ｐａｔｈｗａｙｓ  ｉｎ  ｇｌｉｏｍａ  ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ  ａｎｄ  ｐｒｏｇｒｅｓｓｉｏｎ．Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  ｍｅｄｉｃｉｎｅ，ｄｏｉ：１０．１００７／ｓ００１０９−０１６−１４３５−ｙ
１０．Ａｎｔｏｎｉａｋ，Ｓ．，Ｏｗｅｎｓ，Ａ．Ｐ．，Ｂａｕｎａｃｋｅ，Ｍ．，Ｗｉｌｌｉａｍｓ，Ｊ．Ｃ．，Ｌｅｅ，Ｒ．Ｄ．，Ｗｅｉｔｈａｅｕｓｅｒ，Ａ．，Ｓｈｅｒｉｄａｎ，Ｐ．Ａ．，Ｍａｌｚ，Ｒ．，Ｌｕｙｅｎｄｙｋ，Ｊ．Ｐ．＆Ｅｓｓｅｒｍａｎ，Ｄ．Ａ．（２０１３）ＰＡＲ−１  ｃｏｎｔｒｉｂｕｔｅｓ  ｔｏ  ｔｈｅ  ｉｎｎａｔｅ  ｉｍｍｕｎｅ  ｒｅｓｐｏｎｓｅ  ｄｕｒｉｎｇ  ｖｉｒａｌ  ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ．Ｔｈｅ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  ｃｌｉｎｉｃａｌ  ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｉｏｎ，１２３，１３１０−１３２２．
１１．Ａｒｉｔａ，Ｍ．，Ｏｈｉｒａ，Ｔ．，Ｓｕｎ，Ｙ．−Ｐ．，Ｅｌａｎｇｏｖａｎ，Ｓ．，Ｃｈｉａｎｇ，Ｎ．＆Ｓｅｒｈａｎ，Ｃ．Ｎ．（２００７）Ｒｅｓｏｌｖｉｎ  Ｅ１  ｓｅｌｅｃｔｉｖｅｌｙ  ｉｎｔｅｒａｃｔｓ  ｗｉｔｈ  ｌｅｕｋｏｔｒｉｅｎｅ  Ｂ４  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ＢＬＴ１  ａｎｄ  ＣｈｅｍＲ２３  ｔｏ  ｒｅｇｕｌａｔｅ  ｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎ．Ｔｈｅ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，１７８，３９１２−３９１７．
１２．Ａｗｏｊｏｏｄｕ，Ａ．Ｏ．，Ｏｇｌｅ，Ｍ．Ｅ．，Ｓｅｆｃｉｋ，Ｌ．Ｓ．，Ｂｏｗｅｒｓ，Ｄ．Ｔ．，Ｍａｒｔｉｎ，Ｋ．，Ｂｒａｙｍａｎ，Ｋ．Ｌ．，Ｌｙｎｃｈ，Ｋ．Ｒ．，Ｐｅｉｒｃｅ−Ｃｏｔｔｌｅｒ，Ｓ．Ｍ．＆Ｂｏｔｃｈｗｅｙ，Ｅ．（２０１３）Ｓｐｈｉｎｇｏｓｉｎｅ  １−ｐｈｏｓｐｈａｔｅ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ３  ｒｅｇｕｌａｔｅｓ  ｒｅｃｒｕｉｔｍｅｎｔ  ｏｆ  ａｎｔｉ−ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ  ｍｏｎｏｃｙｔｅｓ  ｔｏ  ｍｉｃｒｏｖｅｓｓｅｌｓ  ｄｕｒｉｎｇ  ｉｍｐｌａｎｔ  ａｒｔｅｒｉｏｇｅｎｅｓｉｓ．Ｐｒｏｃｅｅｄｉｎｇｓ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ａｃａｄｅｍｙ  ｏｆ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，１１０，１３７８５−１３７９０．
１３．Ａｙｅｒ，Ｌ．Ｍ．，Ｗｉｌｓｏｎ，Ｓ．Ｍ．，Ｔｒａｖｅｓ，Ｓ．Ｌ．，Ｐｒｏｕｄ，Ｄ．＆Ｇｉｅｍｂｙｃｚ，Ｍ．Ａ．（２００８）４，５−Ｄｉｈｙｄｒｏ−１Ｈ−ｉｍｉｄａｚｏｌ−２−ｙｌ）−［４−（４−ｉｓｏｐｒｏｐｏｘｙ−ｂｅｎｚｙｌ）−ｐｈｅｎｙｌ］−ａｍｉｎｅ（ＲＯ１１３８４５２）ｉｓ  ａ  ｓｅｌｅｃｔｉｖｅ，ｐｓｅｕｄｏ−ｉｒｒｅｖｅｒｓｉｂｌｅ  ｏｒｔｈｏｓｔｅｒｉｃ  ａｎｔａｇｏｎｉｓｔ  ａｔ  ｔｈｅ  ｐｒｏｓｔａｃｙｃｌｉｎ（ＩＰ）−ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ｅｘｐｒｅｓｓｅｄ  ｂｙ  ｈｕｍａｎ  ａｉｒｗａｙ  ｅｐｉｔｈｅｌｉａｌ  ｃｅｌｌｓ：ＩＰ−ｒｅｃｅｐｔｏｒ−ｍｅｄｉａｔｅｄ  ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ  ｏｆ  ＣＸＣＬ９  ａｎｄ  ＣＸＣＬ１０  ｒｅｌｅａｓｅ．Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ  ａｎｄ  Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ，３２４，８１５−８２６．
１４．Ｂａｂｕｓｙｔｅ，Ａ．，Ｋｏｔｔｈｏｆｆ，Ｍ．，Ｆｉｅｄｌｅｒ，Ｊ．＆Ｋｒａｕｔｗｕｒｓｔ，Ｄ．（２０１３）Ｂｉｏｇｅｎｉｃ  ａｍｉｎｅｓ  ａｃｔｉｖａｔｅ  ｂｌｏｏｄ  ｌｅｕｋｏｃｙｔｅｓ  ｖｉａ  ｔｒａｃｅ  ａｍｉｎｅ−ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ  ｒｅｃｅｐｔｏｒｓ  ＴＡＡＲ１  ａｎｄ  ＴＡＡＲ２．Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  ｌｅｕｋｏｃｙｔｅ  ｂｉｏｌｏｇｙ，９３，３８７−３９４．
１５．Ｂａｄｅｒ，Ｍ．，Ａｌｅｎｉｎａ，Ｎ．，Ａｎｄｒａｄｅ−Ｎａｖａｒｒｏ，Ｍ．Ａ．＆Ｓａｎｔｏｓ，Ｒ．Ａ．（２０１４）ＭＡＳ  ａｎｄ  ｉｔｓ  ｒｅｌａｔｅｄ  Ｇ  ｐｒｏｔｅｉｎ−ｃｏｕｐｌｅｄ  ｒｅｃｅｐｔｏｒｓ，Ｍｒｇｐｒｓ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．Ｒｅｖ．，６６，１０８０−１１０５．
１６．Ｂａｌｌａｔｏｒｅ  Ｃ．，Ｈｕｒｙｎ  Ｄ．Ｍ．ａｎｄ  Ｓｍｉｔｈ  Ａ．Ｂ．Ｃａｒｂｏｘｙｌｉｃ  Ａｃｉｄ（Ｂｉｏ）Ｉｓｏｓｔｅｒｅｓ  ｉｎ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｓｉｇｎ．ＣｈｅｍＭｅｄＣｈｅｍ，２０１３，８：３８５−３９５．
１７．Ｂａｌｌｉｎｇｅｒ，Ｍ．Ｌ．，ｅｔ  ａｌ．Ｇｌｙｃａｔｅｄ  ａｎｄ  ｃａｒｂｏｘｙ−ｍｅｔｈｙｌａｔｅｄ  ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｄｏ  ｎｏｔ  ｄｉｒｅｃｔｌｙ  ａｃｔｉｖａｔｅ  Ｈｕｍａｎ  ｖａｓｃｕｌａｒ  ｓｍｏｏｔｈ  ｍｕｓｃｌｅ  ｃｅｌｌｓ．Ｋｉｄｎｅｙ  Ｉｎｔ，２００５，６８：２７５６−２７６５．
１８．Ｂａｎｄｙｏｐａｄｈｙａｙ，Ｓ．，Ｊｅｏｎｇ，Ｋ．Ｈ．，Ｈａｎｓｅｎ，Ｊ．Ｔ．，Ｖａｓｓｉｌｅｖ，Ｐ．Ｍ．，Ｂｒｏｗｎ，Ｅ．Ｍ．＆Ｃｈａｔｔｏｐａｄｈｙａｙ，Ｎ．（２００７）Ｃａｌｃｉｕｍ‐ｓｅｎｓｉｎｇ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ｓｔｉｍｕｌａｔｅｓ  ｓｅｃｒｅｔｉｏｎ  ｏｆ  ａｎ  ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎ‐γ‐ｉｎｄｕｃｅｄ  ｍｏｎｏｋｉｎｅ（ＣＸＣＬ１０）ａｎｄ  ｍｏｎｏｃｙｔｅ  ｃｈｅｍｏａｔｔｒａｃｔａｎｔ  ｐｒｏｔｅｉｎ‐３  ｉｎ  ｉｍｍｏｒｔａｌｉｚｅｄ  ＧｎＲＨ  ｎｅｕｒｏｎｓ．Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  ｎｅｕｒｏｓｃｉｅｎｃｅ  ｒｅｓｅａｒｃｈ，８５，８８２−８９５．
１９．Ｂａｒｉｌｅ，Ｇ．Ｒ．＆Ｓｃｈｍｉｄｔ，Ａ．Ｍ．（２００７）ＲＡＧＥ  ａｎｄ  ｉｔｓ  ｌｉｇａｎｄｓ  ｉｎ  ｒｅｔｉｎａｌ  ｄｉｓｅａｓｅ．Ｃｕｒｒｅｎｔ  ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  ｍｅｄｉｃｉｎｅ，７：７５８−７６５．
２０．Ｂａｒｏｎｉ，Ａ．，Ｐｅｒｆｅｔｔｏ，Ｂ．，Ｃａｎｏｚｏ，Ｎ．，Ｂｒａｃａ，Ａ．，Ｆａｒｉｎａ，Ｅ．，Ｍｅｌｉｔｏ，Ａ．，Ｄｅ  Ｍａｒｉａ，Ｓ．＆Ｃａｒｔｅｎｉ，Ｍ．（２００８）Ｂｏｍｂｅｓｉｎ：Ａ  ｐｏｓｓｉｂｌｅ  ｒｏｌｅ  ｉｎ  ｗｏｕｎｄ  ｒｅｐａｉｒ．Ｐｅｐｔｉｄｅｓ，２９，１１５７−１１６６．
２１．Ｂａｔｈｇａｔｅ，Ｒ．，Ｈａｌｌｓ，Ｍ．，Ｖａｎ  Ｄｅｒ  Ｗｅｓｔｈｕｉｚｅｎ，Ｅ．，Ｃａｌｌａｎｄｅｒ，Ｇ．，Ｋｏｃａｎ，Ｍ．＆Ｓｕｍｍｅｒｓ，Ｒ．（２０１３）Ｒｅｌａｘｉｎ  ｆａｍｉｌｙ  ｐｅｐｔｉｄｅｓ  ａｎｄ  ｔｈｅｉｒ  ｒｅｃｅｐｔｏｒｓ．Ｐｈｙｓｉｏｌｏｇｉｃａｌ  ｒｅｖｉｅｗｓ，９３，４０５−４８０．
２２．Ｂａｔｋｕｌｗａｒ  ＫＢ，Ｂａｎｓｏｄｅ  ＳＢ，Ｐａｔｉｌ  ＧＶ，Ｇｏｄｂｏｌｅ  ＲＫ，Ｋａｚｉ  ＲＳ，Ｃｈｉｎｎａｔｈａｍｂｉ  Ｓ，Ｓｈａｎｍｕｇａｍ  Ｄ，Ｋｕｌｋａｒｎｉ  ＭＪ（２０１５）Ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｐｈｏｓｐｈｏｐｒｏｔｅｏｍｅ  ｉｎ  ＲＡＧＥ  ｓｉｇｎａｌｌｉｎｇ．Ｐｒｏｔｅｏｍｉｃｓ，１５，２４５−２５９．
２３．Ｂｅａｕｌｉｅｕ，Ｊ．Ｍ．＆Ｇａｉｎｅｔｄｉｎｏｖ，Ｒ．Ｒ．（２０１１）Ｔｈｅ  ｐｈｙｓｉｏｌｏｇｙ，ｓｉｇｎａｌｌｉｎｇ，ａｎｄ  ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ  ｏｆ  ｄｏｐａｍｉｎｅ  ｒｅｃｅｐｔｏｒｓ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ  Ｒｅｖ，６３，１８２−２１７．
２４．Ｂｅｎｉｇｎｉ  Ａ，Ｃｏｒｎａ  Ｄ，Ｚｏｊａ  Ｃ，ｅｔ  ａｌ．（２００９）Ｄｉｓｒｕｐｔｉｏｎ  ｏｆ  ｔｈｅ  ａｎｇｉｏｔｅｎｓｉｎ  ＩＩ  ｔｙｐｅ  １  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ｐｒｏｍｏｔｅｓ  ｌｏｎｇｅｖｉｔｙ  ｉｎ  ｍｉｃｅ．Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ｉｎｖｅｓｔ，１１９：５２４−５３０．
２５．Ｂｅｎｉｇｎｉ，Ａ．，Ｃａｓｓｉｓ，Ｐ．ａｎｄ  Ｒｅｍｕｚｚｉ，Ｇ．（２０１０）Ａｎｇｉｏｔｅｎｓｉｎ  ＩＩ  ｒｅｖｉｓｉｔｅｄ：ｎｅｗ  ｒｏｌｅｓ  ｉｎ  ｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎ，ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  ａｎｄ  ａｇｉｎｇ．ＥＭＢＯ  Ｍｏｌ  Ｍｅｄ，２：２４７−２５７．
２６．Ｂｅｎｙａ，Ｒ．Ｖ．，Ｍａｔｋｏｗｓｋｙｊ，Ｋ．Ａ．，Ｄａｎｉｌｋｏｖｉｃｈ，Ａ．＆Ｈｅｃｈｔ，Ｇ．（１９９８）Ｇａｌａｎｉｎ  Ｃａｕｓｅｓ  Ｃｌ−Ｓｅｃｒｅｔｉｏｎ  ｉｎ  ｔｈｅ  Ｈｕｍａｎ  Ｃｏｌｏｎ：Ｐｏｔｅｎｔｉａｌ  Ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｃｅ  ｏｆ  Ｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎ‐Ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ  ＮＦ‐κＢ  Ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ  ｏｎ  Ｇａｌａｎｉｎ‐１  Ｒｅｃｅｐｔｏｒ  Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  ａｎｄ  Ｆｕｎｃｔｉｏｎ．Ａｎｎａｌｓ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ  Ａｃａｄｅｍｙ  ｏｆ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，８６３，６４−７７．
２７．Ｂｅｒｎａｒｄｉ，Ｓ．，Ｃａｎｄｉｄｏ，Ｒ．，Ｔｏｆｆｏｌｉ，Ｂ．，Ｃａｒｒｅｔｔａ，Ｒ．＆Ｆａｂｒｉｓ，Ｂ．（２０１１）Ｐｒｅｖｅｎｔｉｏｎ  ｏｆ  ａｃｃｅｌｅｒａｔｅｄ  ａｔｈｅｒｏｓｃｌｅｒｏｓｉｓ  ｂｙ  ＡＴ１  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ｂｌｏｃｋａｄｅ  ｉｎ  ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ  ｒｅｎａｌ  ｆａｉｌｕｒｅ．Ｎｅｐｈｒｏｌｏｇｙ，ｄｉａｌｙｓｉｓ，ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ：ｏｆｆｉｃｉａｌ  ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｅｕｒｏｐｅａｎ  Ｄｉａｌｙｓｉｓ  ａｎｄ  Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔ  Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ−Ｅｕｒｏｐｅａｎ  Ｒｅｎａｌ  Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ，２６：８３２−８３８．
２８．Ｂｈａｖｅ，Ｇ．，Ｋａｒｉｍ，Ｆ．，Ｃａｒｌｔｏｎ，Ｓ．＆Ｇｅｒｅａｕ  Ｉｖ，Ｒ．（２００１）Ｐｅｒｉｐｈｅｒａｌ  ｇｒｏｕｐ  Ｉ  ｍｅｔａｂｏｔｒｏｐｉｃ  ｇｌｕｔａｍａｔｅ  ｒｅｃｅｐｔｏｒｓ  ｍｏｄｕｌａｔｅ  ｎｏｃｉｃｅｐｔｉｏｎ  ｉｎ  ｍｉｃｅ．Ｎａｔｕｒｅ  ｎｅｕｒｏｓｃｉｅｎｃｅ，４，４１７−４２３．
２９．Ｂｉｅｒｈａｕｓ，Ａ．，ｅｔ  ａｌ．（２００１）Ｄｉａｂｅｔｅｓ−ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ  ｓｕｓｔａｉｎｅｄ  ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ  ｆａｃｔｏｒ  ｎｕｃｌｅａｒ  ｆａｃｔｏｒ−ｋａｐｐａＢ．Ｄｉａｂｅｔｅｓ，５０：２７９２−２８０８．
３０．Ｂｉｌｌｉｎｇｓ，Ｅ．Ａ．，Ｌｅｅ，Ｃ．Ｓ．，Ｏｗｅｎ，Ｋ．Ａ．，Ｄ’Ｓｏｕｚａ，Ｒ．Ｓ．，Ｒａｖｉｃｈａｎｄｒａｎ，Ｋ．Ｓ．＆Ｃａｓａｎｏｖａ，Ｊ．Ｅ．（２０１６）Ｔｈｅ  ａｄｈｅｓｉｏｎ  ＧＰＣＲ  ＢＡＩ１  ｍｅｄｉａｔｅｓ  ｍａｃｒｏｐｈａｇｅ  ＲＯＳ  ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ  ａｎｄ  ｍｉｃｒｏｂｉｃｉｄａｌ  ａｃｔｉｖｉｔｙ  ａｇａｉｎｓｔ  Ｇｒａｍ−ｎｅｇａｔｉｖｅ  ｂａｃｔｅｒｉａ．Ｓｃｉ．Ｓｉｇｎａｌ．，９，ｒａ１４−ｒａ１４．
３１．Ｂｌａｅｓ，Ｎ．＆Ｇｉｒｏｌａｍｉ，Ｊ．−Ｐ．（２０１３）Ｔａｒｇｅｔｉｎｇ  ｔｈｅ  ‘Ｊａｎｕｓ  ｆａｃｅ’ｏｆ  ｔｈｅ  Ｂ２−ｂｒａｄｙｋｉｎｉｎ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ．Ｅｘｐｅｒｔ  Ｏｐｉｎｉｏｎ  ｏｎ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ  Ｔａｒｇｅｔｓ，１７，１１４５−１１６６．
３２．Ｂｏｄｙ，Ｊ．−Ｊ．，Ｇｌｉｂｅｒｔ，Ｆ．，Ｎｅｊａｉ，Ｓ．，Ｆｅｒｎａｎｄｅｚ，Ｇ．，Ｖａｎ  Ｌａｎｇｅｎｄｏｎｃｋ，Ａ．＆Ｂｏｒｋｏｗｓｋｉ，Ａ．（１９９０）Ｃａｌｃｉｔｏｎｉｎ  Ｒｅｃｅｐｔｏｒｓ  ｏｎ  Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｎｇ  Ｎｏｒｍａｌ  Ｈｕｍａｎ  Ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅｓ＊．Ｔｈｅ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌｏｇｙ＆Ｍｅｔａｂｏｌｉｓｍ，７１，６７５−６８１．
３３．Ｂｏｉｅ，Ｙ．，Ｎ．Ｓａｗｙｅｒ，Ｄ．Ｍ．Ｓｌｉｐｅｔｚ，Ｋ．Ｍ．Ｍｅｔｔｅｒｓ，ａｎｄ  Ｍ．Ａｂｒａｍｏｖｉｔｚ．Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  ｃｌｏｎｉｎｇ  ａｎｄ  ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｈｕｍａｎ  ｐｒｏｓｔａｎｏｉｄ  ＤＰ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ．Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ，１９９５，２７０：１８９１０−６．
３４．Ｂｏｉｅ，Ｙ．，Ｔ．Ｈ．Ｒｕｓｈｍｏｒｅ，Ａ．Ｄａｒｍｏｎ−Ｇｏｏｄｗｉｎ，Ｒ．Ｇｒｙｇｏｒｃｚｙｋ，Ｄ．Ｍ．Ｓｌｉｐｅｔｚ，ａｎｄ  Ｋ．Ｍ．Ｍｅｔｔｅｒｓ．Ｃｌｏｎｉｎｇ  ａｎｄ  ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  ｏｆ  ａ  ｃＤＮＡ  ｆｏｒ  ｔｈｅ  ｈｕｍａｎ  ｐｒｏｓｔａｎｏｉｄ  ＩＰ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ．Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ，１９９４，２６９：１２１７３−８．
３５．Ｂｏｉｓｖｅｒｔ，Ｗ．Ａ．（２００４）Ｍｏｄｕｌａｔｉｏｎ  ｏｆ  ａｔｈｅｒｏｇｅｎｅｓｉｓ  ｂｙ  ｃｈｅｍｏｋｉｎｅｓ．Ｔｒｅｎｄｓ  ｉｎ  Ｃａｒｄｉｏｖａｓｃｕｌａｒ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，１４：１６１−１６５．
３６．Ｂｏｓｓａｒｄ，Ｃ．，Ｓｏｕａｚｅ，Ｆ．，Ｊａｒｒｙ，Ａ．，Ｂｅｚｉｅａｕ，Ｓ．，Ｍｏｓｎｉｅｒ，Ｊ．−Ｆ．，Ｆｏｒｇｅｚ，Ｐ．＆Ｌａｂｏｉｓｓｅ，Ｃ．Ｌ．（２００７）Ｏｖｅｒ−ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  ｏｆ  ｎｅｕｒｏｔｅｎｓｉｎ  ｈｉｇｈ−ａｆｆｉｎｉｔｙ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  １（ＮＴＳ１）ｉｎ  ｒｅｌａｔｉｏｎ  ｗｉｔｈ  ｉｔｓ  ｌｉｇａｎｄ  ｎｅｕｒｏｔｅｎｓｉｎ（ＮＴ）ａｎｄ  ｎｕｃｌｅａｒ  ｓｓ−ｃａｔｅｎｉｎ  ｉｎ  ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ  ｂｏｗｅｌ  ｄｉｓｅａｓｅ−ｒｅｌａｔｅｄ  ｏｎｃｏｇｅｎｅｓｉｓ．Ｐｅｐｔｉｄｅｓ，２８，２０３０−２０３５．
３７．Ｂｏｕｌａｙ，Ｆ．，Ｍ．Ｔａｒｄｉｆ，Ｌ．Ｂｒｏｕｃｈｏｎ，ａｎｄ  Ｐ．Ｖｉｇｎａｉｓ．Ｔｈｅ  ｈｕｍａｎ  Ｎ−ｆｏｒｍｙｌｐｅｐｔｉｄｅ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ：ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｔｗｏ  ｃＤＮＡ  ｉｓｏｌａｔｅｓ  ａｎｄ  ｅｖｉｄｅｎｃｅ  ｆｏｒ  ａ  ｎｅｗ  ｓｕｂｆａｍｉｌｙ  ｏｆ  Ｇ−ｐｒｏｔｅｉｎ−ｃｏｕｐｌｅｄ  ｒｅｃｅｐｔｏｒｓ．Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，１９９０，２９：１１１２３−３３．
３８．Ｂｏｘａｌｌ，Ｓ．，Ｂｅｒｔｈｅｌｅ，Ａ．，Ｌａｕｒｉｅ，Ｄ．，Ｓｏｍｍｅｒ，Ｂ．，Ｚｉｅｇｌｇａｅｎｓｂｅｒｇｅｒ，Ｗ．，Ｕｒｂａｎ，Ｌ．＆Ｔｏｅｌｌｅ，Ｔ．（１９９７）Ｅｎｈａｎｃｅｄ  ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  ｏｆ  ｍｅｔａｂｏｔｒｏｐｉｃ  ｇｌｕｔａｍａｔｅ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ３  ｍｅｓｓｅｎｇｅｒ  ＲＮＡ  ｉｎ  ｔｈｅ  ｒａｔ  ｓｐｉｎａｌ  ｃｏｒｄ  ｄｕｒｉｎｇ  ｕｌｔｒａｖｉｏｌｅｔ  ｉｒｒａｄｉａｔｉｏｎ  ｉｎｄｕｃｅｄ  ｐｅｒｉｐｈｅｒａｌ  ｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎ．Ｎｅｕｒｏｓｃｉｅｎｃｅ，８２，５９１−６０２．
３９．Ｂｏｙｄ，Ｊ．Ｈ．，Ｈｏｌｍｅｓ，Ｃ．Ｌ．，Ｗａｎｇ，Ｙ．，Ｒｏｂｅｒｔｓ，Ｈ．＆Ｗａｌｌｅｙ，Ｋ．Ｒ．（２００８）Ｖａｓｏｐｒｅｓｓｉｎ  ｄｅｃｒｅａｓｅｓ  ｓｅｐｓｉｓ−ｉｎｄｕｃｅｄ  ｐｕｌｍｏｎａｒｙ  ｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎ  ｔｈｒｏｕｇｈ  ｔｈｅ  Ｖ２Ｒ．Ｒｅｓｕｓｃｉｔａｔｉｏｎ，７９，３２５−３３１．
４０．Ｂｒａｌｅｙ  Ａ．，Ｋｗａｋ  Ｔ．，Ｊｕｌｅｓ  Ｊ．，Ｈａｒｊａ  Ｅ．，Ｌａｎｄｇｒａｆ  Ｒ．，Ｈｕｄｓｏｎ  Ｂ．Ｉ．（２０１６）Ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ｆｏｒ  Ａｄｖａｎｃｅｄ  Ｇｌｙｃａｔｉｏｎ  Ｅｎｄ  Ｐｒｏｄｕｃｔｓ（ＲＡＧＥ）Ｅｃｔｏｄｏｍａｉｎ  Ｓｈｅｄｄｉｎｇ  ａｎｄ  Ｉｔｓ  Ｒｏｌｅ  ｉｎ  Ｃｅｌｌ  Ｆｕｎｃｔｉｏｎ．Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ．２９１，１２０５７−７３．
４１．Ｂｒａｅｕｎｅｒ−Ｏｓｂｏｒｎｅ，Ｈ．，Ｊｅｎｓｅｎ，Ａ．Ａ．，Ｓｈｅｐｐａｒｄ，Ｐ．Ｏ．，Ｂｒｏｄｉｎ，Ｂ．，Ｋｒｏｇｓｇａａｒｄ−Ｌａｒｓｅｎ，Ｐ．＆Ｏ’Ｈａｒａ，Ｐ．（２００１）Ｃｌｏｎｉｎｇ  ａｎｄ  ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ  ｏｆ  ａ  ｈｕｍａｎ  ｏｒｐｈａｎ  ｆａｍｉｌｙ  Ｃ  Ｇ−ｐｒｏｔｅｉｎ  ｃｏｕｐｌｅｄ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ＧＰＲＣ５Ｄ．Ｂｉｏｃｈｉｍｉｃａ  ｅｔ  Ｂｉｏｐｈｙｓｉｃａ  Ａｃｔａ（ＢＢＡ）−Ｇｅｎｅ  Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ  ａｎｄ  Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ，１５１８，２３７−２４８．
４２．Ｂｒｅｙｅｒ，Ｒ．Ｍ．，Ｃ．Ｋ．Ｂａｇｄａｓｓａｒｉａｎ，Ｓ．Ａ．Ｍｙｅｒｓ，ａｎｄ  Ｍ．Ｄ．Ｂｒｅｙｅｒ．Ｐｒｏｓｔａｎｏｉｄ  ｒｅｃｅｐｔｏｒｓ：ｓｕｂｔｙｐｅｓ  ａｎｄ  ｓｉｇｎａｌｌｉｎｇ．Ａｎｎｕ  Ｒｅｖ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌ  Ｔｏｘｉｃｏｌ，２００１，４１：６６１−９０．
４３．Ｂｒｅｚｉｌｌｏｎ，Ｓ．，Ｌａｎｎｏｙ，Ｖ．，Ｆｒａｎｓｓｅｎ，Ｊ．−Ｄ．，Ｌｅ  Ｐｏｕｌ，Ｅ．，Ｄｕｐｒｉｅｚ，Ｖ．，Ｌｕｃｃｈｅｔｔｉ，Ｊ．，Ｄｅｔｈｅｕｘ，Ｍ．＆Ｐａｒｍｅｎｔｉｅｒ，Ｍ．（２００３）Ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｎａｔｕｒａｌ  ｌｉｇａｎｄｓ  ｆｏｒ  ｔｈｅ  ｏｒｐｈａｎ  Ｇ  ｐｒｏｔｅｉｎ−ｃｏｕｐｌｅｄ  ｒｅｃｅｐｔｏｒｓ  ＧＰＲ７  ａｎｄ  ＧＰＲ８．Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，２７８，７７６−７８３．
４４．Ｂｒｉｓｃｏｅ，Ｃ．Ｐ．，Ｔａｄａｙｙｏｎ，Ｍ．，Ａｎｄｒｅｗｓ，Ｊ．Ｌ．，Ｂｅｎｓｏｎ，Ｗ．Ｇ．，Ｃｈａｍｂｅｒｓ，Ｊ．Ｋ．，Ｅｉｌｅｒｔ，Ｍ．Ｍ．，Ｅｌｌｉｓ，Ｃ．，Ｅｌｓｈｏｕｒｂａｇｙ，Ｎ．Ａ．，Ｇｏｅｔｚ，Ａ．Ｓ．＆Ｍｉｎｎｉｃｋ，Ｄ．Ｔ．（２００３）Ｔｈｅ  ｏｒｐｈａｎ  Ｇ  ｐｒｏｔｅｉｎ−ｃｏｕｐｌｅｄ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ＧＰＲ４０  ｉｓ  ａｃｔｉｖａｔｅｄ  ｂｙ  ｍｅｄｉｕｍ  ａｎｄ  ｌｏｎｇ  ｃｈａｉｎ  ｆａｔｔｙ  ａｃｉｄｓ．Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，２７８，１１３０３−１１３１１．
４５．Ｂｒｏｔｈｅｒｓ，Ｓ．Ｐ．＆Ｗａｈｌｅｓｔｅｄｔ，Ｃ．（２０１０）Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ  ｐｏｔｅｎｔｉａｌ  ｏｆ  ｎｅｕｒｏｐｅｐｔｉｄｅ  Ｙ（ＮＰＹ）ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ｌｉｇａｎｄｓ．ＥＭＢＯ  Ｍｏｌ  Ｍｅｄ，２，４２９−４３９．
４６．Ｂｒｏｗｎ，Ａ．Ｊ．，Ｇｏｌｄｓｗｏｒｔｈｙ，Ｓ．Ｍ．，Ｂａｒｎｅｓ，Ａ．Ａ．，Ｅｉｌｅｒｔ，Ｍ．Ｍ．，Ｔｃｈｅａｎｇ，Ｌ．，Ｄａｎｉｅｌｓ，Ｄ．，Ｍｕｉｒ，Ａ．Ｉ．，Ｗｉｇｇｌｅｓｗｏｒｔｈ，Ｍ．Ｊ．，Ｋｉｎｇｈｏｒｎ，Ｉ．＆Ｆｒａｓｅｒ，Ｎ．Ｊ．（２００３）Ｔｈｅ  Ｏｒｐｈａｎ  Ｇ  ｐｒｏｔｅｉｎ−ｃｏｕｐｌｅｄ  ｒｅｃｅｐｔｏｒｓ  ＧＰＲ４１  ａｎｄ  ＧＰＲ４３  ａｒｅ  ａｃｔｉｖａｔｅｄ  ｂｙ  ｐｒｏｐｉｏｎａｔｅ  ａｎｄ  ｏｔｈｅｒ  ｓｈｏｒｔ  ｃｈａｉｎ  ｃａｒｂｏｘｙｌｉｃ  ａｃｉｄｓ．Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，２７８，１１３１２−１１３１９．
４７．Ｂｕｃｈｅｒ，Ｍ．，Ｈｏｂｂｈａｈｎ，Ｊ．，Ｔａｅｇｅｒ，Ｋ．＆Ｋｕｒｔｚ，Ａ．（２００２）Ｃｙｔｏｋｉｎｅ−ｍｅｄｉａｔｅｄ  ｄｏｗｎｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｖａｓｏｐｒｅｓｓｉｎ  Ｖ１Ａ  ｒｅｃｅｐｔｏｒｓ  ｄｕｒｉｎｇ  ａｃｕｔｅ  ｅｎｄｏｔｏｘｅｍｉａ  ｉｎ  ｒａｔｓ．Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｐｈｙｓｉｏｌｏｇｙ−Ｒｅｇｕｌａｔｏｒｙ，Ｉｎｔｅｇｒａｔｉｖｅ  ａｎｄ  Ｃｏｍｐａｒａｔｉｖｅ  Ｐｈｙｓｉｏｌｏｇｙ，２８２，Ｒ９７９−Ｒ９８４．
４８．Ｂｕｌｅｒ，Ｍ．，Ａａｔｓｉｎｋｉ，Ｓ．−Ｍ．，Ｓｋｏｕｍａｌ，Ｒ．，Ｋｏｍｋａ，Ｚ．，Ｔｏｔｈ，Ｍ．，Ｋｅｒｋｅｌａｅ，Ｒ．，Ｇｅｏｒｇｉａｄｉ，Ａ．，Ｋｅｒｓｔｅｎ，Ｓ．＆Ｈａｋｋｏｌａ，Ｊ．（２０１２）Ｅｎｅｒｇｙ−ｓｅｎｓｉｎｇ  Ｆａｃｔｏｒｓ  Ｃｏａｃｔｉｖａｔｏｒ  Ｐｅｒｏｘｉｓｏｍｅ  Ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｏｒ−ａｃｔｉｖａｔｅｄ  Ｒｅｃｅｐｔｏｒ  γ  Ｃｏａｃｔｉｖａｔｏｒ  １−α（ＰＧＣ−１α）ａｎｄ  ＡＭＰ−ａｃｔｉｖａｔｅｄ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｋｉｎａｓｅ  Ｃｏｎｔｒｏｌ  Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  ｏｆ  Ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ  Ｍｅｄｉａｔｏｒｓ  ｉｎ  Ｌｉｖｅｒ  ＩＮＤＵＣＴＩＯＮ  ＯＦ  ＩＮＴＥＲＬＥＵＫＩＮ  １  ＲＥＣＥＰＴＯＲ  ＡＮＴＡＧＯＮＩＳＴ．Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，２８７，１８４７−１８６０．
４９．Ｂｕｒｇｅｓｓ，Ｇ．Ｍ．，Ｍ．Ｎ．Ｐｅｒｋｉｎｓ，Ｈ．Ｐ．Ｒａｎｇ，Ｅ．Ａ．Ｃａｍｐｂｅｌｌ，Ｍ．Ｃ．Ｂｒｏｗｎ，ａｎｄ  Ｐ．ＭｃＩｎｔｙｒｅ．Ｂｒａｄｙｚｉｄｅ，ａ  ｐｏｔｅｎｔ  ｎｏｎ−ｐｅｐｔｉｄｅ  Ｂ（２）ｂｒａｄｙｋｉｎｉｎ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ａｎｔａｇｏｎｉｓｔ  ｗｉｔｈ  ｌｏｎｇ−ｌａｓｔｉｎｇ  ｏｒａｌ  ａｃｔｉｖｉｔｙ  ｉｎ  ａｎｉｍａｌ  ｍｏｄｅｌｓ  ｏｆ  ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ  ｈｙｐｅｒａｌｇｅｓｉａ．Ｂｒ  Ｊ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌ，２０００，１２９：７７−８６．
５０．Ｃａｉ，Ｚ．，ｅｔ  ａｌ．Ｒｏｌｅ  ｏｆ  ＲＡＧＥ  ｉｎ  Ａｌｚｈｅｉｍｅｒ’ｓ  Ｄｉｓｅａｓｅ．Ｃｅｌｌｕｌａｒ  ａｎｄ  ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  ｎｅｕｒｏｂｉｏｌｏｇｙ，２０１６，３６：４８３−４９５．
５１．Ｃａｌｄｅｒｏｎ−Ｇａｒｃｉｄｕｅｎａｓ，Ｌ．，Ｋａｖａｎａｕｇｈ，Ｍ．，Ｂｌｏｃｋ，Ｍ．，Ｄ’Ａｎｇｉｕｌｌｉ，Ａ．，Ｄｅｌｇａｄｏ−Ｃｈａｖｅｚ，Ｒ．，Ｔｏｒｒｅｓ−Ｊａｒｄｏｎ，Ｒ．，Ｇｏｎｚａｌｅｚ−Ｍａｃｉｅｌ，Ａ．，Ｒｅｙｎｏｓｏ−Ｒｏｂｌｅｓ，Ｒ．，Ｏｓｎａｙａ，Ｎ．＆Ｖｉｌｌａｒｒｅａｌ−Ｃａｌｄｅｒｏｎ，Ｒ．（２０１２）Ｎｅｕｒｏｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎ，ｈｙｐｅｒｐｈｏｓｐｈｏｒｙｌａｔｅｄ  ｔａｕ，ｄｉｆｆｕｓｅ  ａｍｙｌｏｉｄ  ｐｌａｑｕｅｓ，ａｎｄ  ｄｏｗｎ−ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｃｅｌｌｕｌａｒ  ｐｒｉｏｎ  ｐｒｏｔｅｉｎ  ｉｎ  ａｉｒ  ｐｏｌｌｕｔｉｏｎ  ｅｘｐｏｓｅｄ  ｃｈｉｌｄｒｅｎ  ａｎｄ  ｙｏｕｎｇ  ａｄｕｌｔｓ．Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ａｌｚｈｅｉｍｅｒ’ｓ  Ｄｉｓｅａｓｅ，２８，９３−１０７．
５２．Ｃａｌｏｎｇｅ，Ｍ．，ｄｅ  Ｓａｌａｍａｎｃａ，Ａ．Ｅ．，Ｓｉｅｍａｓｋｏ，Ｋ．Ｆ．，Ｄｉｅｂｏｌｄ，Ｙ．，Ｇａｏ，Ｊ．，Ｊｕａｒｅｚ−Ｃａｍｐｏ，Ｍ．＆Ｓｔｅｒｎ，Ｍ．Ｅ．（２００５）Ｖａｒｉａｔｉｏｎ  ｉｎ  ｔｈｅ  Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  ｏｆ  Ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ  Ｍａｒｋｅｒｓ  ａｎｄ  Ｎｅｕｒｏｒｅｃｅｐｔｏｒｓ  ｉｎ  Ｈｕｍａｎ  Ｃｏｎｊｕｎｃｔｉｖａｌ  Ｅｐｉｔｈｅｌｉａｌ  Ｃｅｌｌｓ．Ｔｈｅ  Ｏｃｕｌａｒ  Ｓｕｒｆａｃｅ，３，Ｓ−１４５−Ｓ−１４８．
５３．Ｃａｍｉｎｓｃｈｉ，Ｉ．，Ｖａｎｄｅｎａｂｅｅｌｅ，Ｓ．，Ｓｏｆｉ，Ｍ．，Ｍｃｋｎｉｇｈｔ，Ａ．Ｊ．，Ｗａｒｄ，Ｎ．，Ｂｒｏｄｎｉｃｋｉ，Ｔ．Ｃ．，Ｔｏｙ，Ｔ．，Ｌａｈｏｕｄ，Ｍ．，Ｍａｒａｓｋｏｖｓｋｙ，Ｅ．＆Ｓｈｏｒｔｍａｎ，Ｋ．（２００６）Ｇｅｎｅ  ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ  ａｎｄ  ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔ  ａｎａｌｙｓｉｓ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｈｕｍａｎ  ａｎｄ  ｍｏｕｓｅ  ＥＧＦ−ＴＭ７  ｍｏｌｅｃｕｌｅ，ＦＩＲＥ：Ｆｕｌｌ  Ｌｅｎｇｔｈ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｐａｐｅｒ．ＤＮＡ  Ｓｅｑｕｅｎｃｅ，１７，８−１４．
５４．Ｃａｎｄｉｄｏ，Ｒ．，ｅｔ  ａｌ．（２００２）Ｐｒｅｖｅｎｔｉｏｎ  ｏｆ  ａｃｃｅｌｅｒａｔｅｄ  ａｔｈｅｒｏｓｃｌｅｒｏｓｉｓ  ｂｙ  ａｎｇｉｏｔｅｎｓｉｎ−ｃｏｎｖｅｒｔｉｎｇ  ｅｎｚｙｍｅ  ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ  ｉｎ  ｄｉａｂｅｔｉｃ  ａｐｏｌｉｐｏｐｒｏｔｅｉｎ  Ｅ−ｄｅｆｉｃｉｅｎｔ  ｍｉｃｅ．Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ，１０６：２４６−２５３．
５５．Ｃａｎｄｉｄｏ，Ｒ．，ｅｔ  ａｌ．（２００４）Ｉｒｂｅｓａｒｔａｎ  ｂｕｔ  ｎｏｔ  ａｍｌｏｄｉｐｉｎｅ  ｓｕｐｐｒｅｓｓｅｓ  ｄｉａｂｅｔｅｓ−ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ  ａｔｈｅｒｏｓｃｌｅｒｏｓｉｓ．Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ，１０９：１５３６−１５４２．
５６．Ｃａｎｉ，Ｐ．Ｄ．，Ｐｏｓｓｅｍｉｅｒｓ，Ｓ．，Ｖａｎ  ｄｅ  Ｗｉｅｌｅ，Ｔ．，Ｇｕｉｏｔ，Ｙ．，Ｅｖｅｒａｒｄ，Ａ．，Ｒｏｔｔｉｅｒ，Ｏ．，Ｇｅｕｒｔｓ，Ｌ．，Ｎａｓｌａｉｎ，Ｄ．，Ｎｅｙｒｉｎｃｋ，Ａ．＆Ｌａｍｂｅｒｔ，Ｄ．Ｍ．（２００９）Ｃｈａｎｇｅｓ  ｉｎ  ｇｕｔ  ｍｉｃｒｏｂｉｏｔａ  ｃｏｎｔｒｏｌ  ｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎ  ｉｎ  ｏｂｅｓｅ  ｍｉｃｅ  ｔｈｒｏｕｇｈ  ａ  ｍｅｃｈａｎｉｓｍ  ｉｎｖｏｌｖｉｎｇ  ＧＬＰ−２−ｄｒｉｖｅｎ  ｉｍｐｒｏｖｅｍｅｎｔ  ｏｆ  ｇｕｔ  ｐｅｒｍｅａｂｉｌｉｔｙ．Ｇｕｔ，５８，１０９１−１１０３．
５７．Ｃａｎｔａｇｒｅｌ，Ｖ．，Ｌｏｓｓｉ，Ａ．，Ｂｏｕｌａｎｇｅｒ，Ｓ．，Ｄｅｐｅｔｒｉｓ，Ｄ．，Ｍａｔｔｅｉ，Ｍ．，Ｇｅｃｚ，Ｊ．，Ｓｃｈｗａｒｔｚ，Ｃ．，Ｖａｎ  Ｍａｌｄｅｒｇｅｍ，Ｌ．＆Ｖｉｌｌａｒｄ，Ｌ．（２００４）Ｄｉｓｒｕｐｔｉｏｎ  ｏｆ  ａ  ｎｅｗ  Ｘ  ｌｉｎｋｅｄ  ｇｅｎｅ  ｈｉｇｈｌｙ  ｅｘｐｒｅｓｓｅｄ  ｉｎ  ｂｒａｉｎ  ｉｎ  ａ  ｆａｍｉｌｙ  ｗｉｔｈ  ｔｗｏ  ｍｅｎｔａｌｌｙ  ｒｅｔａｒｄｅｄ  ｍａｌｅｓ．Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  ｍｅｄｉｃａｌ  ｇｅｎｅｔｉｃｓ，４１，７３６−７４２．
５８．Ｃａｎｔａｒｅｌｌａ，Ｇ．，Ｓｃｏｌｌｏ，Ｍ．，Ｌｅｍｐｅｒｅｕｒ，Ｌ．，Ｓａｃｃａｎｉ−Ｊｏｔｔｉ，Ｇ．，Ｂａｓｉｌｅ，Ｆ．＆Ｂｅｒｎａｒｄｉｎｉ，Ｒ．（２０１１）Ｅｎｄｏｃａｎｎａｂｉｎｏｉｄｓ  ｉｎｈｉｂｉｔ  ｒｅｌｅａｓｅ  ｏｆ  ｎｅｒｖｅ  ｇｒｏｗｔｈ  ｆａｃｔｏｒ  ｂｙ  ｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎ−ａｃｔｉｖａｔｅｄ  ｍａｓｔ  ｃｅｌｌｓ．Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ  ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ，８２，３８０−３８８．
５９．Ｃａｐｒａ，Ｖ．，Ｒａｖａｓｉ，Ｓ．，Ａｃｃｏｍａｚｚｏ，Ｍ．Ｒ．，Ｃｉｔｒｏ，Ｓ．，Ｇｒｉｍｏｌｄｉ，Ｍ．，Ａｂｂｒａｃｃｈｉｏ，Ｍ．Ｐ．＆Ｒｏｖａｔｉ，Ｇ．Ｅ．（２００５）ＣｙｓＬＴ１  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ｉｓ  ａ  ｔａｒｇｅｔ  ｆｏｒ  ｅｘｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒ  ｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ−ｉｎｄｕｃｅｄ  ｈｅｔｅｒｏｌｏｇｏｕｓ  ｄｅｓｅｎｓｉｔｉｚａｔｉｏｎ：ａ  ｐｏｓｓｉｂｌｅ  ｆｅｅｄｂａｃｋ  ｍｅｃｈａｎｉｓｍ  ｉｎ  ｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎ．Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｃｅｌｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅ，１１８，５６２５−５６３６．
６０．Ｃａｒｏｎｔｉ，Ｂ．，Ｃａｌｄｅｒａｒｏ，Ｃ．，Ｐａｓｓａｒｅｌｌｉ，Ｆ．，Ｐａｌｌａｄｉｎｉ，Ｇ．＆Ｐｏｎｔｉｅｒｉ，Ｆ．Ｅ．（１９９８）Ｄｏｐａｍｉｎｅ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ｍＲＮＡｓ  ｉｎ  ｔｈｅ  ｒａｔ  ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅｓ．Ｌｉｆｅ  ｓｃｉｅｎｃｅｓ，６２，１９１９−１９２５．
６１．Ｃａｒｒｉｌｌｏ−Ｖｉｃｏ，Ａ．，ＧＡＲＣＩＡ，Ｓ．，Ｃａｌｖｏ，Ｊ．Ｒ．＆Ｇｕｅｒｒｅｒｏ，Ｊ．Ｍ．（２００３）Ｍｅｌａｔｏｎｉｎ  ｃｏｕｎｔｅｒａｃｔｓ  ｔｈｅ  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ  ｅｆｆｅｃｔ  ｏｆ  ＰＧＥ２  ｏｎ  ＩＬ−２  ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ  ｉｎ  ｈｕｍａｎ  ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅｓ  ｖｉａ  ｉｔｓ  ｍｔ１  ｍｅｍｂｒａｎｅ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ．Ｔｈｅ  ＦＡＳＥＢ  Ｊｏｕｒｎａｌ，１７，７５５−７５７．
６２．Ｃａｒｕｓｏ，Ｃ．，Ｄｕｒａｎｄ，Ｄ．，Ｓｃｈｉｏｔｈ，Ｈ．Ｂ．，Ｒｅｙ，Ｒ．，Ｓｅｉｌｉｃｏｖｉｃｈ，Ａ．＆Ｌａｓａｇａ，Ｍ．（２００７）Ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｍｅｌａｎｏｃｏｒｔｉｎ  ４  ｒｅｃｅｐｔｏｒｓ  ｒｅｄｕｃｅｓ  ｔｈｅ  ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ  ｒｅｓｐｏｎｓｅ  ａｎｄ  ｐｒｅｖｅｎｔｓ  ａｐｏｐｔｏｓｉｓ  ｉｎｄｕｃｅｄ  ｂｙ  ｌｉｐｏｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅ  ａｎｄ  ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎ−ｇａｍｍａ  ｉｎ  ａｓｔｒｏｃｙｔｅｓ．Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌｏｇｙ，１４８，４９１８−４９２６．
６３．Ｃｈａｒｏ，Ｉ．Ｆ．＆Ｒａｎｓｏｈｏｆｆ，Ｒ．Ｍ．（２００６）Ｔｈｅ  ｍａｎｙ  ｒｏｌｅｓ  ｏｆ  ｃｈｅｍｏｋｉｎｅｓ  ａｎｄ  ｃｈｅｍｏｋｉｎｅ  ｒｅｃｅｐｔｏｒｓ  ｉｎ  ｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎ．Ｎ  Ｅｎｇｌ  Ｊ  Ｍｅｄ，３５４，６１０−６２１．
６４．Ｃｈｅｎ，Ａ．，Ｄｏｎｇ，Ｌ．，Ｌｅｆｆｌｅｒ，Ｎ．Ｒ．，Ａｓｃｈ，Ａ．Ｓ．，Ｗｉｔｔｅ，Ｏ．Ｎ．＆Ｙａｎｇ，Ｌ．Ｖ．（２０１１）Ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ  ｏｆ  ＧＰＲ４  ｂｙ  ａｃｉｄｏｓｉｓ  ｉｎｃｒｅａｓｅｓ  ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ  ｃｅｌｌ  ａｄｈｅｓｉｏｎ  ｔｈｒｏｕｇｈ  ｔｈｅ  ｃＡＭＰ／Ｅｐａｃ  ｐａｔｈｗａｙ．ＰｌｏＳ  ｏｎｅ，６，ｅ２７５８６．
６５．Ｃｈｅｎ，Ｈ．Ｆ．，Ｊｅｕｎｇ，Ｅ．Ｂ．，Ｓｔｅｐｈｅｎｓｏｎ，Ｍ．＆Ｌｅｕｎｇ，Ｐ．Ｃ．（１９９９）Ｈｕｍａｎ  ｐｅｒｉｐｈｅｒａｌ  ｂｌｏｏｄ  ｍｏｎｏｎｕｃｌｅａｒ  ｃｅｌｌｓ  ｅｘｐｒｅｓｓ  ｇｏｎａｄｏｔｒｏｐｉｎ−ｒｅｌｅａｓｉｎｇ  ｈｏｒｍｏｎｅ（ＧｎＲＨ），ＧｎＲＨ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ，ａｎｄ  ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ−２  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ｇａｍｍａ−ｃｈａｉｎ  ｍｅｓｓｅｎｇｅｒ  ｒｉｂｏｎｕｃｌｅｉｃ  ａｃｉｄｓ  ｔｈａｔ  ａｒｅ  ｒｅｇｕｌａｔｅｄ  ｂｙ  ＧｎＲＨ  ｉｎ  ｖｉｔｒｏ．Ｔｈｅ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  ｃｌｉｎｉｃａｌ  ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌｏｇｙ  ａｎｄ  ｍｅｔａｂｏｌｉｓｍ，８４，７４３−７５０．
６６．Ｃｈｅｎ，Ｈ．Ｆ．，Ｊｅｕｎｇ，Ｅ．Ｂ．，Ｓｔｅｐｈｅｎｓｏｎ，Ｍ．＆Ｌｅｕｎｇ，Ｐ．Ｃ．（１９９９）Ｈｕｍａｎ  ｐｅｒｉｐｈｅｒａｌ  ｂｌｏｏｄ  ｍｏｎｏｎｕｃｌｅａｒ  ｃｅｌｌｓ  ｅｘｐｒｅｓｓ  ｇｏｎａｄｏｔｒｏｐｉｎ−ｒｅｌｅａｓｉｎｇ  ｈｏｒｍｏｎｅ（ＧｎＲＨ），ＧｎＲＨ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ，ａｎｄ  ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ−２  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ｇａｍｍａ−ｃｈａｉｎ  ｍｅｓｓｅｎｇｅｒ  ｒｉｂｏｎｕｃｌｅｉｃ  ａｃｉｄｓ  ｔｈａｔ  ａｒｅ  ｒｅｇｕｌａｔｅｄ  ｂｙ  ＧｎＲＨ  ｉｎ  ｖｉｔｒｏ．Ｔｈｅ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  ｃｌｉｎｉｃａｌ  ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌｏｇｙ  ａｎｄ  ｍｅｔａｂｏｌｉｓｍ，８４，７４３−７５０．
６７．Ｃｈｅｎ，Ｔ．−Ｙ．，Ｈｗａｎｇ，Ｔ．−Ｌ．，Ｌｉｎ，Ｃ．−Ｙ．，Ｌｉｎ，Ｔ．−Ｎ．，Ｌａｉ，Ｈ．−Ｙ．，Ｔｓａｉ，Ｗ．−Ｐ．＆Ｌｉｎ，Ｈ．−Ｈ．（２０１１）ＥＭＲ２  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ｌｉｇａｔｉｏｎ  ｍｏｄｕｌａｔｅｓ  ｃｙｔｏｋｉｎｅ  ｓｅｃｒｅｔｉｏｎ  ｐｒｏｆｉｌｅｓ  ａｎｄ  ｃｅｌｌ  ｓｕｒｖｉｖａｌ  ｏｆ  ｌｉｐｏｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅ−ｔｒｅａｔｅｄ  ｎｅｕｔｒｏｐｈｉｌｓ．Ｃｈａｎｇ  Ｇｕｎｇ  Ｍｅｄ  Ｊ，３４，４６８−４７７．
６８．Ｃｈｅｎ，Ｙ．，Ｃｏｒｒｉｄｅｎ，Ｒ．，Ｉｎｏｕｅ，Ｙ．，Ｙｉｐ，Ｌ．，Ｈａｓｈｉｇｕｃｈｉ，Ｎ．，Ｚｉｎｋｅｒｎａｇｅｌ，Ａ．，Ｎｉｚｅｔ，Ｖ．，Ｉｎｓｅｌ，Ｐ．Ａ．＆Ｊｕｎｇｅｒ，Ｗ．Ｇ．（２００６）ＡＴＰ  ｒｅｌｅａｓｅ  ｇｕｉｄｅｓ  ｎｅｕｔｒｏｐｈｉｌ  ｃｈｅｍｏｔａｘｉｓ  ｖｉａ  Ｐ２Ｙ２  ａｎｄ  Ａ３  ｒｅｃｅｐｔｏｒｓ．Ｓｃｉｅｎｃｅ，３１４，１７９２−１７９５．
６９．Ｃｈｅｎ，Ｚ．Ｊ．＆Ｍｉｎｎｅｍａｎ，Ｋ．Ｐ．（２００５）Ｒｅｃｅｎｔ  ｐｒｏｇｒｅｓｓ  ｉｎ  ａｌｐｈａ１−ａｄｒｅｎｅｒｇｉｃ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ｒｅｓｅａｒｃｈ．Ａｃｔａ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌ  Ｓｉｎ，２６，１２８１−１２８７．
７０．Ｃｈｈａｊｌａｎｉ，Ｖ．（１９９６）Ｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎ  ｏｆ  ｃＤＮＡ  ｆｏｒ  ｍｅｌａｎｏｃｏｒｔｉｎ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ｓｕｂｔｙｐｅｓ  ｉｎ  ｈｕｍａｎ  ｔｉｓｓｕｅｓ．Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ａｎｄ  ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  ｂｉｏｌｏｇｙ  ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ，３８，７３−８０．
７１．Ｃｈｈｕｏｎ，Ｃ．，Ｐｒａｎｋｅ，Ｉ．，Ｂｏｒｏｔ，Ｆ．，Ｔｏｎｄｅｌｉｅｒ，Ｄ．，Ｌｉｐｅｃｋａ，Ｊ．，Ｆｒｉｔｓｃｈ，Ｊ．，Ｃｈａｎｓｏｎ，Ｍ．，Ｅｄｅｌｍａｎ，Ａ．，Ｏｌｌｅｒｏ，Ｍ．＆Ｇｕｅｒｒｅｒａ，Ｉ．（２０１６）Ｃｈａｎｇｅｓ  ｉｎ  ｌｉｐｉｄ  ｒａｆｔ  ｐｒｏｔｅｏｍｅ  ｕｐｏｎ  ＴＮＦ−α  ｓｔｉｍｕｌａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｃｙｓｔｉｃ  ｆｉｂｒｏｓｉｓ  ｃｅｌｌｓ．Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｏｍｉｃｓ，１４５，２４６−２５３．
７２．Ｃｈｕａｈ，Ｙ．Ｋ．，Ｂａｓｉｒ，Ｒ．，Ｔａｌｉｂ，Ｈ．，Ｔｉｅ，Ｔ．Ｈ．＆Ｎｏｒｄｉｎ，Ｎ．Ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ｆｏｒ  ａｄｖａｎｃｅｄ  ｇｌｙｃａｔｉｏｎ  ｅｎｄ  ｐｒｏｄｕｃｔｓ  ａｎｄ  ｉｔｓ  ｉｎｖｏｌｖｅｍｅｎｔ  ｉｎ  ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ  ｄｉｓｅａｓｅｓ．Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  ｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎ，２０１３，２０１３：４０３４６０．
７３．Ｃｏｎｓｏｒｔｉｕｍ，Ｉ．Ｇ．ｏ．Ａ．Ｓ．（２０１３）Ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｍｕｌｔｉｐｌｅ  ｒｉｓｋ  ｖａｒｉａｎｔｓ  ｆｏｒ  ａｎｋｙｌｏｓｉｎｇ  ｓｐｏｎｄｙｌｉｔｉｓ  ｔｈｒｏｕｇｈ  ｈｉｇｈ−ｄｅｎｓｉｔｙ  ｇｅｎｏｔｙｐｉｎｇ  ｏｆ  ｉｍｍｕｎｅ−ｒｅｌａｔｅｄ  ｌｏｃｉ．Ｎａｔｕｒｅ  ｇｅｎｅｔｉｃｓ，４５，７３０−７３８．
７４．Ｃｏｏｋ，Ｉ．Ｈ．，Ｅｖａｎｓ，Ｊ．，Ｍａｌｄｏｎａｄｏ−Ｐｅｒｅｚ，Ｄ．，Ｃｒｉｔｃｈｌｅｙ，Ｈ．Ｏ．，Ｓａｌｅｓ，Ｋ．Ｊ．＆Ｊａｂｂｏｕｒ，Ｈ．Ｎ．（２０１０）Ｐｒｏｋｉｎｅｔｉｃｉｎ（ＰＲＯＫ１）ｍｏｄｕｌａｔｅｓ  ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ（ＩＬ）−１１  ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  ｖｉａ  ｐｒｏｋｉｎｅｔｉｃｉｎ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  １（ＰＲＯＫＲ１）ａｎｄ  ｔｈｅ  ｃａｌｃｉｎｅｕｒｉｎ／ＮＦＡＴ  ｓｉｇｎａｌｌｉｎｇ  ｐａｔｈｗａｙ．Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  ｈｕｍａｎ  ｒｅｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ，１６，１５８−１６９．
７５．Ｃｏｓｔａ，Ａ．，Ｔｏｓｃｈｉ，Ａ．，Ｍｕｒｆｕｎｉ，Ｉ．，ｅｔ  ａｌ．Ｌｏｃａｌ  Ｏｖｅｒｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  ｏｆ  Ｖ１ａ−Ｖａｓｏｐｒｅｓｓｉｎ  Ｒｅｃｅｐｔｏｒ  Ｅｎｈａｎｃｅｓ  Ｒｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ  ｉｎ  Ｔｕｍｏｒ  Ｎｅｃｒｏｓｉｓ  Ｆａｃｔｏｒ−Ｉｎｄｕｃｅｄ  Ｍｕｓｃｌｅ  Ａｔｒｏｐｈｙ．ＢｉｏＭｅｄ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ，２０１４，Ａｒｔｉｃｌｅ  ＩＤ  ２３５４２６，ｄｏｉ：１０．１１５５／２０１４／２３５４２６．
７６．Ｃｕｄｄｉｈｙ，Ｒ．Ｍ．，Ｄｕｔｔｏｎ，Ｃ．Ｍ．＆Ｂａｈｎ，Ｒ．Ｓ．（１９９５）Ａ  ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍ  ｉｎ  ｔｈｅ  ｅｘｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒ  ｄｏｍａｉｎ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｔｈｙｒｏｔｒｏｐｉｎ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ｉｓ  ｈｉｇｈｌｙ  ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ  ｗｉｔｈ  ａｕｔｏｉｍｍｕｎｅ  ｔｈｙｒｏｉｄ  ｄｉｓｅａｓｅ  ｉｎ  ｆｅｍａｌｅｓ．Ｔｈｙｒｏｉｄ，５，８９−９５．
７７．Ｃｕｎｎｉｎｇｈａｍ，Ｍ．Ａ．，Ｅ．Ｒｏｎｄｅａｕ，Ｘ．Ｃｈｅｎ，Ｓ．Ｒ．Ｃｏｕｇｈｌｉｎ，Ｓ．Ｒ．Ｈｏｌｄｓｗｏｒｔｈ，ａｎｄ  Ｐ．Ｇ．Ｔｉｐｐｉｎｇ．Ｐｒｏｔｅａｓｅ−ａｃｔｉｖａｔｅｄ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  １  ｍｅｄｉａｔｅｓ  ｔｈｒｏｍｂｉｎ−ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ，ｃｅｌｌ−ｍｅｄｉａｔｅｄ  ｒｅｎａｌ  ｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎ  ｉｎ  ｃｒｅｓｃｅｎｔｉｃ  ｇｌｏｍｅｒｕｌｏｎｅｐｈｒｉｔｉｓ．Ｊ  Ｅｘｐ  Ｍｅｄ，２０００，１９１：４５５−６２．
７８．Ｃｚｅｐｉｅｌｅｗｓｋｉ，Ｒ．Ｓ．，Ｐｏｒｔｏ，Ｂ．Ｎ．，Ｒｉｚｚｏ，Ｌ．Ｂ．，Ｒｏｅｓｌｅｒ，Ｒ．，Ａｂｕｊａｍｒａ，Ａ．Ｌ．，Ｐｉｎｔｏ，Ｌ．Ｇ．，Ｓｃｈｗａｒｔｓｍａｎｎ，Ｇ．，ｄｅ  Ｑｕｅｉｒｏｚ  Ｃｕｎｈａ，Ｆ．＆Ｂｏｎｏｒｉｎｏ，Ｃ．（２０１２）Ｇａｓｔｒｉｎ−ｒｅｌｅａｓｉｎｇ  ｐｅｐｔｉｄｅ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ（ＧＲＰＲ）ｍｅｄｉａｔｅｓ  ｃｈｅｍｏｔａｘｉｓ  ｉｎ  ｎｅｕｔｒｏｐｈｉｌｓ．Ｐｒｏｃｅｅｄｉｎｇｓ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ａｃａｄｅｍｙ  ｏｆ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，１０９，５４７−５５２．
７９．Ｃｚｅｒｗｉｎｓｋｉ，Ｍ．，Ｋｅｒｎ，Ｊ．，Ｇｒｏｄｅｃｋａ，Ｍ．，Ｐａｐｒｏｃｋａ，Ｍ．，Ｋｒｏｐ−Ｗａｔｏｒｅｋ，Ａ．＆Ｗａｓｎｉｏｗｓｋａ，Ｋ．（２００７）Ｍｕｔａｔｉｏｎａｌ  ａｎａｌｙｓｉｓ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｎ−ｇｌｙｃｏｓｙｌａｔｉｏｎ  ｓｉｔｅｓ  ｏｆ  Ｄｕｆｆｙ  ａｎｔｉｇｅｎ／ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ｆｏｒ  ｃｈｅｍｏｋｉｎｅｓ．Ｂｉｏｃｈｅｍ  Ｂｉｏｐｈｙｓ  Ｒｅｓ  Ｃｏｍｍｕｎ，３５６，８１６−８２１．
８０．Ｄ’Ａｎｄｒｅａ，Ｇ．，Ｔｅｒｒａｚｚｉｎｏ，Ｓ．，Ｆｏｒｔｉｎ，Ｄ．，Ｆａｒｒｕｇｇｉｏ，Ａ．，Ｒｉｎａｌｄｉ，Ｌ．＆Ｌｅｏｎ，Ａ．（２００３）ＨＰＬＣ  ｅｌｅｃｔｒｏｃｈｅｍｉｃａｌ  ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ  ｏｆ  ｔｒａｃｅ  ａｍｉｎｅｓ  ｉｎ  ｈｕｍａｎ  ｐｌａｓｍａ  ａｎｄ  ｐｌａｔｅｌｅｔｓ  ａｎｄ  ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  ｏｆ  ｍＲＮＡ  ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｓ  ｏｆ  ｔｒａｃｅ  ａｍｉｎｅ  ｒｅｃｅｐｔｏｒｓ  ｉｎ  ｃｉｒｃｕｌａｔｉｎｇ  ｌｅｕｋｏｃｙｔｅｓ．Ｎｅｕｒｏｓｃｉｅｎｃｅ  ｌｅｔｔｅｒｓ，３４６，８９−９２．
８１．Ｄ’Ａｍａｔｏ，Ｍ．，Ｂｒｕｃｅ，Ｓ．，Ｂｒｅｓｓｏ，Ｆ．，Ｚｕｃｃｈｅｌｌｉ，Ｍ．，Ｅｚｅｒ，Ｓ．，Ｐｕｌｋｋｉｎｅｎ，Ｖ．，Ｌｉｎｄｇｒｅｎ，Ｃ．，Ａｓｔｅｇｉａｎｏ，Ｍ．，Ｒｉｚｚｅｔｔｏ，Ｍ．＆Ｇｉｏｎｃｈｅｔｔｉ，Ｐ．（２００７）Ｎｅｕｒｏｐｅｐｔｉｄｅ  ｓ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  １  ｇｅｎｅ  ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍ  ｉｓ  ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ  ｗｉｔｈ  ｓｕｓｃｅｐｔｉｂｉｌｉｔｙ  ｔｏ  ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ  ｂｏｗｅｌ  ｄｉｓｅａｓｅ．Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌｏｇｙ，１３３，８０８−８１７．
８２．Ｄ’Ａｎｄｒｅａ，Ｇ．，Ｄ’Ａｒｒｉｇｏ，Ａ．，Ｆａｃｃｈｉｎｅｔｔｉ，Ｆ．，Ｄｅｌ  Ｇｉｕｄｉｃｅ，Ｅ．，Ｃｏｌａｖｉｔｏ，Ｄ．，Ｂｅｒｎａｒｄｉｎｉ，Ｄ．＆Ｌｅｏｎ，Ａ．（２０１２）Ｏｃｔｏｐａｍｉｎｅ，ｕｎｌｉｋｅ  ｏｔｈｅｒ  ｔｒａｃｅ  ａｍｉｎｅｓ，ｉｎｈｉｂｉｔｓ  ｒｅｓｐｏｎｓｅｓ  ｏｆ  ａｓｔｒｏｇｌｉａ−ｅｎｒｉｃｈｅｄ  ｃｕｌｔｕｒｅｓ  ｔｏ  ｌｉｐｏｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅ  ｖｉａ  ａ  β−ａｄｒｅｎｏｒｅｃｅｐｔｏｒ−ｍｅｄｉａｔｅｄ  ｍｅｃｈａｎｉｓｍ．Ｎｅｕｒｏｓｃｉｅｎｃｅ  ｌｅｔｔｅｒｓ，５１７，３６−４０．
８３．ｄａ  Ｓｉｌｖｅｉｒａ，Ｋ．Ｄ．，Ｃｏｅｌｈｏ，Ｆ．Ｍ．，Ｖｉｅｉｒａ，Ａ．Ｔ．，Ｓａｃｈｓ，Ｄ．，Ｂａｒｒｏｓｏ，Ｌ．Ｃ．，Ｃｏｓｔａ，Ｖ．Ｖ．，Ｂｒｅｔａｓ，Ｔ．Ｌ．Ｂ．，Ｂａｄｅｒ，Ｍ．，ｄｅ  Ｓｏｕｓａ，Ｌ．Ｐ．＆ｄａ  Ｓｉｌｖａ，Ｔ．Ａ．（２０１０）Ａｎｔｉ−ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ  ｅｆｆｅｃｔｓ  ｏｆ  ｔｈｅ  ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｔｈｅ  ａｎｇｉｏｔｅｎｓｉｎ−（１−７）ｒｅｃｅｐｔｏｒ，ＭＡＳ，ｉｎ  ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ  ｍｏｄｅｌｓ  ｏｆ  ａｒｔｈｒｉｔｉｓ．Ｔｈｅ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，１８５，５５６９−５５７６．
８４．Ｄａｆｆｕ，Ｇ．，ｅｔ  ａｌ．Ｒａｄｉｃａｌ  ｒｏｌｅｓ  ｆｏｒ  ＲＡＧＥ  ｉｎ  ｔｈｅ  ｐａｔｈｏｇｅｎｅｓｉｓ  ｏｆ  ｏｘｉｄａｔｉｖｅ  ｓｔｒｅｓｓ  ｉｎ  ｃａｒｄｉｏｖａｓｃｕｌａｒ  ｄｉｓｅａｓｅｓ  ａｎｄ  ｂｅｙｏｎｄ．Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  ｓｃｉｅｎｃｅｓ，２０１３，１４：１９８９１−１９９１０．
８５．Ｄａｕｇｈｅｒｔｙ，Ａ．，Ｍａｎｎｉｎｇ，Ｍ．Ｗ．＆Ｃａｓｓｉｓ，Ｌ．Ａ．（２０００）Ａｎｇｉｏｔｅｎｓｉｎ  ＩＩ  ｐｒｏｍｏｔｅｓ  ａｔｈｅｒｏｓｃｌｅｒｏｔｉｃ  ｌｅｓｉｏｎｓ  ａｎｄ  ａｎｅｕｒｙｓｍｓ  ｉｎ  ａｐｏｌｉｐｏｐｒｏｔｅｉｎ  Ｅ−ｄｅｆｉｃｉｅｎｔ  ｍｉｃｅ．Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ｉｎｖｅｓｔ，１０５：１６０５−１６１２．
８６．Ｄａｖｉｄｓｏｎ，Ｃ．，Ａｓａｄｕｚｚａｍａｎ，Ｍ．，Ａｒｉｚｍｅｎｄｉ，Ｎ．，Ｐｏｌｌｅｙ，Ｄ．，Ｗｕ，Ｙ．，Ｇｏｒｄｏｎ，Ｊ．，Ｈｏｌｌｅｎｂｅｒｇ，Ｍ．，Ｃａｍｅｒｏｎ，Ｌ．＆Ｖｌｉａｇｏｆｔｉｓ，Ｈ．（２０１３）Ｐｒｏｔｅｉｎａｓｅ‐ａｃｔｉｖａｔｅｄ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ‐２  ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ  ｐａｒｔｉｃｉｐａｔｅｓ  ｉｎ  ａｌｌｅｒｇｉｃ  ｓｅｎｓｉｔｉｚａｔｉｏｎ  ｔｏ  ｈｏｕｓｅ  ｄｕｓｔ  ｍｉｔｅ  ａｌｌｅｒｇｅｎｓ  ｉｎ  ａ  ｍｕｒｉｎｅ  ｍｏｄｅｌ．Ｃｌｉｎｉｃａｌ＆Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ  Ａｌｌｅｒｇｙ，４３，１２７４−１２８５．
８７．Ｄａｗｓｏｎ，Ｊ．，Ｍｉｌｔｚ，Ｗ．，Ｍｉｒ，Ａ．Ｋ．，＆Ｗｉｅｓｓｎｅｒ，Ｃ．（２００３）Ｔａｒｇｅｔｉｎｇ  ｍｏｎｏｃｙｔｅ  ｃｈｅｍｏａｔｔｒａｃｔａｎｔ  ｐｒｏｔｅｉｎ−１  ｓｉｇｎａｌｌｉｎｇ  ｉｎ  ｄｉｓｅａｓｅ．Ｅｘｐｅｒｔ  Ｏｐｉｎ  Ｔｈｅｒ  Ｔａｒｇｅｔｓ，７：３５−４８．
８８．Ｄｅ  Ｍａｒｔｉｎｏ，Ｍ．Ｃ．，Ｈｏｆｌａｎｄ，Ｌ．Ｊ．＆Ｌａｍｂｅｒｔｓ，Ｓ．Ｗ．（２０１０）Ｓｏｍａｔｏｓｔａｔｉｎ  ａｎｄ  ｓｏｍａｔｏｓｔａｔｉｎ  ｒｅｃｅｐｔｏｒｓ：ｆｒｏｍ  ｂａｓｉｃ  ｃｏｎｃｅｐｔｓ  ｔｏ  ｃｌｉｎｉｃａｌ  ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ．Ｐｒｏｇ  Ｂｒａｉｎ  Ｒｅｓ，１８２，２５５−２８０．
８９．Ｄｅｎｇ，Ｊ．，Ｆｕｊｉｍｏｔｏ，Ｊ．，Ｙｅ，Ｘ．−Ｆ．，Ｍｅｎ，Ｔ．−Ｙ．，Ｖａｎ  Ｐｅｌｔ，Ｃ．Ｓ．，Ｃｈｅｎ，Ｙ．−Ｌ．，Ｌｉｎ，Ｘ．−Ｆ．，Ｋａｄａｒａ，Ｈ．，Ｔａｏ，Ｑ．＆Ｌｏｔａｎ，Ｄ．（２０１０）Ｋｎｏｃｋｏｕｔ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｔｕｍｏｒ  ｓｕｐｐｒｅｓｓｏｒ  ｇｅｎｅ  Ｇｐｒｃ５ａ  ｉｎ  ｍｉｃｅ  ｌｅａｄｓ  ｔｏ  ＮＦ−κＢ  ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ  ｉｎ  ａｉｒｗａｙ  ｅｐｉｔｈｅｌｉｕｍ  ａｎｄ  ｐｒｏｍｏｔｅｓ  ｌｕｎｇ  ｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎ  ａｎｄ  ｔｕｍｏｒｉｇｅｎｅｓｉｓ．Ｃａｎｃｅｒ  ｐｒｅｖｅｎｔｉｏｎ  ｒｅｓｅａｒｃｈ，３，４２４−４３７．
９０．Ｄｉｊｋｓｔｅｒｈｕｉｓ，Ｊ．，Ｐｅｔｅｒｓｅｎ，Ｊ．＆Ｓｃｈｕｌｔｅ，Ｇ．（２０１４）ＷＮＴ／Ｆｒｉｚｚｌｅｄ  ｓｉｇｎａｌｌｉｎｇ：ｒｅｃｅｐｔｏｒ−ｌｉｇａｎｄ  ｓｅｌｅｃｔｉｖｉｔｙ  ｗｉｔｈ  ｆｏｃｕｓ  ｏｎ  ＦＺＤ‐Ｇ  ｐｒｏｔｅｉｎ  ｓｉｇｎａｌｌｉｎｇ  ａｎｄ  ｉｔｓ  ｐｈｙｓｉｏｌｏｇｉｃａｌ  ｒｅｌｅｖａｎｃｅ：ＩＵＰＨＡＲ  Ｒｅｖｉｅｗ  ３．Ｂｒｉｔｉｓｈ  ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ，１７１，１１９５−１２０９．
９１．Ｄｉｘｉｔ，Ｖ．Ｄ．，Ｓｃｈａｆｆｅｒ，Ｅ．Ｍ．，Ｐｙｌｅ，Ｒ．Ｓ．，Ｃｏｌｌｉｎｓ，Ｇ．Ｄ．，Ｓａｋｔｈｉｖｅｌ，Ｓ．Ｋ．，Ｐａｌａｎｉａｐｐａｎ，Ｒ．，Ｌｉｌｌａｒｄ，Ｊ．Ｗ．＆Ｔａｕｂ，Ｄ．Ｄ．（２００４）Ｇｈｒｅｌｉｎ  ｉｎｈｉｂｉｔｓ  ｌｅｐｔｉｎ−ａｎｄ  ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ−ｉｎｄｕｃｅｄ  ｐｒｏｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ  ｃｙｔｏｋｉｎｅ  ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  ｂｙ  ｈｕｍａｎ  ｍｏｎｏｃｙｔｅｓ  ａｎｄ  Ｔ  ｃｅｌｌｓ．Ｔｈｅ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  ｃｌｉｎｉｃａｌ  ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｉｏｎ，１１４，５７−６６．
９２．Ｄｏｉ，Ｙ．，Ｔ．Ｍｉｎａｍｉ，Ｍ．Ｎｉｓｈｉｚａｗａ，Ｔ．Ｍａｂｕｃｈｉ，Ｈ．Ｍｏｒｉ，ａｎｄ  Ｓ．Ｉｔｏ．Ｃｅｎｔｒａｌ  ｎｏｃｉｃｅｐｔｉｖｅ  ｒｏｌｅ  ｏｆ  ｐｒｏｓｔａｃｙｃｌｉｎ（ＩＰ）ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ｉｎｄｕｃｅｄ  ｂｙ  ｐｅｒｉｐｈｅｒａｌ  ｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎ．Ｎｅｕｒｏｒｅｐｏｒｔ，２００２，１３：９３−６．
９３．Ｄｏｎｏｇｈｕｅ，Ｍ．，ｅｔ  ａｌ．Ａ  ｎｏｖｅｌ  ａｎｇｉｏｔｅｎｓｉｎ−ｃｏｎｖｅｒｔｉｎｇ  ｅｎｚｙｍｅ−ｒｅｌａｔｅｄ  ｃａｒｂｏｘｙｐｅｐｔｉｄａｓｅ（ＡＣＥ２）ｃｏｎｖｅｒｔｓ  ａｎｇｉｏｔｅｎｓｉｎ  Ｉ  ｔｏ  ａｎｇｉｏｔｅｎｓｉｎ  １−９．Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ  ｒｅｓｅａｒｃｈ，２０００，８７：Ｅ１−９．
９４．Ｄｏｒｓｃｈ，Ｍ．，Ｑｉｕ，Ｙ．，Ｓｏｌｅｒ，Ｄ．，Ｆｒａｎｋ，Ｎ．，Ｄｕｏｎｇ，Ｔ．，Ｇｏｏｄｅａｒｌ，Ａ．，Ｏ’Ｎｅｉｌ，Ｓ．，Ｌｏｒａ，Ｊ．＆Ｆｒａｓｅｒ，Ｃ．Ｃ．（２００５）ＰＫ１／ＥＧ−ＶＥＧＦ  ｉｎｄｕｃｅｓ  ｍｏｎｏｃｙｔｅ  ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ  ａｎｄ  ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ．Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｌｅｕｋｏｃｙｔｅ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，７８，４２６−４３４．
９５．Ｄｒａｚｅｎ，Ｄ．Ｌ．＆Ｎｅｌｓｏｎ，Ｒ．Ｊ．（２００１）Ｍｅｌａｔｏｎｉｎ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ｓｕｂｔｙｐｅ  ＭＴ２（Ｍｅｌ  １ｂ）ａｎｄ  ｎｏｔ  ｍｔ１（Ｍｅｌ  １ａ）ｉｓ  ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ  ｗｉｔｈ  ｍｅｌａｔｏｎｉｎ−ｉｎｄｕｃｅｄ  ｅｎｈａｎｃｅｍｅｎｔ  ｏｆ  ｃｅｌｌ−ｍｅｄｉａｔｅｄ  ａｎｄ  ｈｕｍｏｒａｌ  ｉｍｍｕｎｉｔｙ．Ｎｅｕｒｏｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌｏｇｙ，７４，１７８−１８４．
９６．Ｄｕｃｈｅｎｅ，Ｊ．，ａｎｄ  Ａ．Ａｈｌｕｗａｌｉａ．Ｔｈｅ  ｋｉｎｉｎ  Ｂ（１）ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ａｎｄ  ｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎ：ｎｅｗ  ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ  ｔａｒｇｅｔ  ｆｏｒ  ｃａｒｄｉｏｖａｓｃｕｌａｒ  ｄｉｓｅａｓｅ．Ｃｕｒｒ  Ｏｐｉｎ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌ，２００９，９：１２５−３１．
９７．Ｄｕｆｆｙ，Ｒ．Ａ．Ｐｏｔｅｎｔｉａｌ  ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ  ｔａｒｇｅｔｓ  ｆｏｒ  ｎｅｕｒｏｋｉｎｉｎ−１  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ａｎｔａｇｏｎｉｓｔｓ．Ｅｘｐｅｒｔ  Ｏｐｉｎ  Ｅｍｅｒｇ  Ｄｒｕｇｓ，２００４，９：９−２１．
９８．Ｅｈｒｅｎｆｅｌｄ，Ｐ．，Ｍｉｌｌａｎ，Ｃ．，Ｍａｔｕｓ，Ｃ．，Ｆｉｇｕｅｒｏａ，Ｊ．，Ｂｕｒｇｏｓ，Ｒ．，Ｎｕａｌａｒｔ，Ｆ．，Ｂｈｏｏｌａ，Ｋ．＆Ｆｉｇｕｅｒｏａ，Ｃ．（２００６）Ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｋｉｎｉｎ  Ｂ１  ｒｅｃｅｐｔｏｒｓ  ｉｎｄｕｃｅｓ  ｃｈｅｍｏｔａｘｉｓ  ｏｆ  ｈｕｍａｎ  ｎｅｕｔｒｏｐｈｉｌｓ．Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  ｌｅｕｋｏｃｙｔｅ  ｂｉｏｌｏｇｙ，８０，１１７−１２４．
９９．Ｅｋｈｏｌｍ，Ｍ．，Ｋａｈａｎ，Ｔ．，Ｊｏｒｎｅｓｋｏｇ，Ｇ．，Ｂｒｏｉｊｅｒｓｅｎ，Ａ．＆Ｗａｌｌｅｎ，Ｎ．Ｈ．（２００９）Ａｎｇｉｏｔｅｎｓｉｎ  ＩＩ  ｉｎｆｕｓｉｏｎ  ｉｎ  ｍａｎ  ｉｓ  ｐｒｏｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ  ｂｕｔ  ｈａｓ  ｎｏ  ｓｈｏｒｔ−ｔｅｒｍ  ｅｆｆｅｃｔｓ  ｏｎ  ｔｈｒｏｍｂｉｎ  ｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ  ｉｎ  ｖｉｖｏ．Ｔｈｒｏｍｂ  Ｒｅｓ，１２４：１１０−１１５．
１００．Ｅｌｌｉｏｔｔ，Ｓ．Ｅ．，Ｐａｒｃｈｉｍ，Ｎ．Ｆ．，Ｋｅｌｌｅｍｓ，Ｒ．Ｅ．，Ｘｉａ，Ｙ．，Ｓｏｆｆｉｃｉ，Ａ．Ｒ．＆Ｄａｕｇｈｅｒｔｙ，Ｐ．Ｓ．（２０１６）Ａ  ｐｒｅ−ｅｃｌａｍｐｓｉａ−ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ  Ｅｐｓｔｅｉｎ−Ｂａｒｒ  ｖｉｒｕｓ  ａｎｔｉｂｏｄｙ  ｃｒｏｓｓ−ｒｅａｃｔｓ  ｗｉｔｈ  ｐｌａｃｅｎｔａｌ  ＧＰＲ５０．Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，１６８，６４−７１．
１０１．Ｅｌｓａｓｓｅｒ，Ｔ．Ｈ．＆Ｋａｈｌ，Ｓ．（２００２）Ａｄｒｅｎｏｍｅｄｕｌｌｉｎ  ｈａｓ  ｍｕｌｔｉｐｌｅ  ｒｏｌｅｓ  ｉｎ  ｄｉｓｅａｓｅ  ｓｔｒｅｓｓ：ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ  ａｎｄ  ｒｅｍｉｓｓｉｏｎ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ  ｒｅｓｐｏｎｓｅ．Ｍｉｃｒｏｓｃｏｐｙ  ｒｅｓｅａｒｃｈ  ａｎｄ  ｔｅｃｈｎｉｑｕｅ，５７，１２０−１２９．
１０２．Ｅｎｇｅｌ，Ｋ．Ｍ．，Ｓｃｈｒｏｅｃｋ，Ｋ．，Ｔｅｕｐｓｅｒ，Ｄ．，Ｈｏｌｄｔ，Ｌ．Ｍ．，Ｔｏｅｎｊｅｓ，Ａ．，Ｋｅｒｎ，Ｍ．，Ｄｉｅｔｒｉｃｈ，Ｋ．，Ｋｏｖａｃｓ，Ｐ．，Ｋｒｕｅｇｅｌ，Ｕ．＆Ｓｃｈｅｉｄｔ，Ｈ．Ａ．（２０１１）Ｒｅｄｕｃｅｄ  ｆｏｏｄ  ｉｎｔａｋｅ  ａｎｄ  ｂｏｄｙ  ｗｅｉｇｈｔ  ｉｎ  ｍｉｃｅ  ｄｅｆｉｃｉｅｎｔ  ｆｏｒ  ｔｈｅ  Ｇ  ｐｒｏｔｅｉｎ−ｃｏｕｐｌｅｄ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ＧＰＲ８２．ＰＬｏＳ  Ｏｎｅ，６，ｅ２９４００．
１０３．Ｅｎｇｌｉｓｈ，Ｄ．，Ａ．Ｔ．Ｋｏｖａｌａ，Ｚ．Ｗｅｌｃｈ，Ｋ．Ａ．Ｈａｒｖｅｙ，Ｒ．Ａ．Ｓｉｄｄｉｑｕｉ，ａｎｄ  Ｄ．Ｎ．Ｂｒｉｎｄｌｅｙ．Ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ  ｏｆ  ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ  ｃｅｌｌ  ｃｈｅｍｏｔａｘｉｓ  ｂｙ  ｓｐｈｉｎｇｏｓｉｎｅ  １−ｐｈｏｓｐｈａｔｅ  ａｎｄ  ｓｔａｂｉｌｉｚａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ  ｍｏｎｏｌａｙｅｒ  ｂａｒｒｉｅｒ  ｆｕｎｃｔｉｏｎ  ｂｙ  ｌｙｓｏｐｈｏｓｐｈａｔｉｄｉｃ  ａｃｉｄ，ｐｏｔｅｎｔｉａｌ  ｍｅｄｉａｔｏｒｓ  ｏｆ  ｈｅｍａｔｏｐｏｉｅｔｉｃ  ａｎｇｉｏｇｅｎｅｓｉｓ．Ｊ  Ｈｅｍａｔｏｔｈｅｒ  Ｓｔｅｍ  Ｃｅｌｌ  Ｒｅｓ，１９９９，８：６２７−３４．
１０４．Ｅｖａｎｋｏｖｉｃｈ，Ｊ．，Ｌｅａｒ，Ｔ．，Ｍｃｋｅｌｖｅｙ，Ａ．，Ｄｕｎｎ，Ｓ．，Ｌｏｎｄｉｎｏ，Ｊ．，Ｌｉｕ，Ｙ．，Ｃｈｅｎ，Ｂ．Ｂ．，Ｍａｌｌａｍｐａｌｌｉ，Ｒ．Ｋ．（２０１７）Ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ｆｏｒ  ａｄｖａｎｃｅｄ  ｇｌｙｃａｔｉｏｎ  ｅｎｄ  ｐｒｏｄｕｃｔｓ  ｉｓ  ｔａｒｇｅｔｅｄ  ｂｙ  ＦＢＸＯ１０  ｆｏｒ  ｕｂｉｑｕｉｔｉｎａｔｉｏｎ  ａｎｄ  ｄｅｇｒａｄａｔｉｏｎ．ＦＡＳＥＢ  Ｊ．ｄｏｉ：１０．１０９６／ｆｊ．２０１７０００３１Ｒ．
１０５．Ｆａｌｌａｒｉｎｏ，Ｆ．，Ｖｏｌｐｉ，Ｃ．，Ｆａｚｉｏ，Ｆ．，Ｎｏｔａｒｔｏｍａｓｏ，Ｓ．，Ｖａｃｃａ，Ｃ．，Ｂｕｓｃｅｔｉ，Ｃ．，Ｂｉｃｃｉａｔｏ，Ｓ．，Ｂａｔｔａｇｌｉａ，Ｇ．，Ｂｒｕｎｏ，Ｖ．＆Ｐｕｃｃｅｔｔｉ，Ｐ．（２０１０）Ｍｅｔａｂｏｔｒｏｐｉｃ  ｇｌｕｔａｍａｔｅ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ−４  ｍｏｄｕｌａｔｅｓ  ａｄａｐｔｉｖｅ  ｉｍｍｕｎｉｔｙ  ａｎｄ  ｒｅｓｔｒａｉｎｓ  ｎｅｕｒｏｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎ．Ｎａｔｕｒｅ  ｍｅｄｉｃｉｎｅ，１６，８９７−９０２．
１０６．Ｆａｒｚａｎ，Ｍ．，Ｃｈｏｅ，Ｈ．，Ｍａｒｔｉｎ，Ｋ．，Ｍａｒｃｏｎ，Ｌ．，Ｈｏｆｍａｎｎ，Ｗ．，Ｋａｒｌｓｓｏｎ，Ｇ．，Ｓｕｎ，Ｙ．，Ｂａｒｒｅｔｔ，Ｐ．，Ｍａｒｃｈａｎｄ，Ｎ．＆Ｓｕｌｌｉｖａｎ，Ｎ．（１９９７）Ｔｗｏ  ｏｒｐｈａｎ  ｓｅｖｅｎ−ｔｒａｎｓｍｅｍｂｒａｎｅ  ｓｅｇｍｅｎｔ  ｒｅｃｅｐｔｏｒｓ  ｗｈｉｃｈ  ａｒｅ  ｅｘｐｒｅｓｓｅｄ  ｉｎ  ＣＤ４−ｐｏｓｉｔｉｖｅ  ｃｅｌｌｓ  ｓｕｐｐｏｒｔ  ｓｉｍｉａｎ  ｉｍｍｕｎｏｄｅｆｉｃｉｅｎｃｙ  ｖｉｒｕｓ  ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ．Ｔｈｅ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ  ｍｅｄｉｃｉｎｅ，１８６，４０５−４１１．
１０７．Ｆｅｉｎｇｏｌｄ，Ｅ．Ａ．，Ｐｅｎｎｙ，Ｌ．Ａ．，Ｎｉｅｎｈｕｉｓ，Ａ．Ｗ．＆Ｆｏｒｇｅｔ，Ｂ．Ｇ．（１９９９）Ａｎ  ｏｌｆａｃｔｏｒｙ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ｇｅｎｅ  ｉｓ  ｌｏｃａｔｅｄ  ｉｎ  ｔｈｅ  ｅｘｔｅｎｄｅｄ  ｈｕｍａｎ  β−ｇｌｏｂｉｎ  ｇｅｎｅ  ｃｌｕｓｔｅｒ  ａｎｄ  ｉｓ  ｅｘｐｒｅｓｓｅｄ  ｉｎ  ｅｒｙｔｈｒｏｉｄ  ｃｅｌｌｓ．Ｇｅｎｏｍｉｃｓ，６１，１５−２３．
１０８．Ｆｅｒｒａｒｉｏ，Ｃ．Ｍ．＆Ｓｔｒａｗｎ，Ｗ．Ｂ．（２００６）Ｒｏｌｅ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｒｅｎｉｎ−ａｎｇｉｏｔｅｎｓｉｎ−ａｌｄｏｓｔｅｒｏｎｅ  ｓｙｓｔｅｍ  ａｎｄ  ｐｒｏｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ  ｍｅｄｉａｔｏｒｓ  ｉｎ  ｃａｒｄｉｏｖａｓｃｕｌａｒ  ｄｉｓｅａｓｅ．Ａｍ  Ｊ  Ｃａｒｄｉｏｌ，９８：１２１−１２８．
１０９．Ｆｅｒｒｅ，Ｓ．，Ｂａｌｅｒ，Ｒ．，Ｂｏｕｖｉｅｒ，Ｍ．，Ｃａｒｏｎ，Ｍ．Ｇ．，Ｄｅｖｉ，Ｌ．Ａ．，Ｄｕｒｒｏｕｘ，Ｔ．，Ｆｕｘｅ，Ｋ．，Ｇｅｏｒｇｅ，Ｓ．Ｒ．，Ｊａｖｉｔｃｈ，Ｊ．Ａ．，Ｌｏｈｓｅ，Ｍ．Ｊ．，Ｍａｃｋｉｅ，Ｋ．，Ｍｉｌｌｉｇａｎ，Ｇ．，Ｐｆｌｅｇｅｒ，Ｋ．Ｄ．Ｇ．，Ｐｉｎ，Ｊ．Ｐ．，Ｖｏｌｋｏｗ，Ｎ．，Ｗａｌｄｈｏｅｒ，Ｍ．，Ｗｏｏｄｓ，Ａ．Ｓ．ａｎｄ  Ｆｒａｎｃｏ  Ｒ．（２００９）Ｂｕｉｌｄｉｎｇ  ａ  ｎｅｗ  ｃｏｎｃｅｐｔｕａｌ  ｆｒａｍｅｗｏｒｋ  ｆｏｒ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ｈｅｔｅｒｏｍｅｒｓ．Ｎａｔ  Ｃｈｅｍ  Ｂｉｏｌ，５：１３１−１３４．
１１０．Ｆｅｒｒｅｉｒａ，Ｍ．，Ｂａｒｃｅｌｏｓ，Ｌ．Ｓ．，Ｃａｍｐｏｓ，Ｐ．Ｐ．，Ｖａｓｃｏｎｃｅｌｏｓ，Ａ．Ｃ．，Ｔｅｉｘｅｉｒａ，Ｍ．Ｍ．＆Ａｎｄｒａｄｅ，Ｓ．Ｐ．（２００４）Ｓｐｏｎｇｅ‐ｉｎｄｕｃｅｄ  ａｎｇｉｏｇｅｎｅｓｉｓ  ａｎｄ  ｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎ  ｉｎ  ＰＡＦ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ‐ｄｅｆｉｃｉｅｎｔ  ｍｉｃｅ（ＰＡＦＲ‐ＫＯ）．Ｂｒｉｔｉｓｈ  ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ，１４１，１１８５−１１９２．
１１１．Ｆｅｒｒｉｅｒ  Ｌ，Ｓｅｒｒａｄｅｉｌ−Ｌｅ  Ｇａｌ  Ｃ，Ｓｃｈｕｌｔｅ  ＡＭ，Ｖａｓｉｎａ  Ｖ，Ｇａｕｌｔｉｅｒ  Ｅ，Ｓｃｈｒｏｅｄｅｌ  Ｓ，Ｕｒｓｉｎｏ  ＭＧ，Ｃｈａｕｍａｚ  Ｇ，Ｐａｓｃａｌ  Ｍ，Ｄｅ  Ｐｏｎｔｉ  Ｆ，Ｂｕｅｎｏ  Ｌ．Ｐｒｏｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ  ｒｏｌｅ  ｏｆ  ｖａｓｏｐｒｅｓｓｉｎ  ｔｈｒｏｕｇｈ  Ｖ１ｂ  ｒｅｃｅｐｔｏｒｓ  ｉｎ  ｈａｐｔｅｎ−ｉｎｄｕｃｅｄ  ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ  ｃｏｌｉｔｉｓ  ｉｎ  ｒｏｄｅｎｔｓ：ｉｍｐｌｉｃａｔｉｏｎ  ｉｎ  ＩＢＤ．Ａｍ  Ｊ  Ｐｈｙｓｉｏｌ  Ｇａｓｔｒｏｉｎｔｅｓｔ  Ｌｉｖｅｒ  Ｐｈｙｓｉｏｌ，２０１０，２９９：Ｇ１２９８−３０７．
１１２．Ｆｉｎｃｈ，Ａ．Ｍ．，Ｓａｒｒａｍｅｇｎａ，Ｖ．＆Ｇｒａｈａｍ，Ｒ．Ｍ．（２００６）Ｌｉｇａｎｄ  Ｂｉｎｄｉｎｇ，Ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ，ａｎｄ  Ａｇｏｎｉｓｔ  Ｔｒａｆｆｉｃｋｉｎｇ．Ｉｎ  Ｐｅｒｅｚ，Ｄ．Ｍ．（ｅｄ）Ｔｈｅ  Ａｄｒｅｎｅｒｇｉｃ  Ｒｅｃｅｐｔｏｒｓ：Ｉｎ  ｔｈｅ  ２１ｓｔ  Ｃｅｎｔｕｒｙ．Ｈｕｍａｎａ  Ｐｒｅｓｓ，Ｔｏｔｏｗａ，ＮＪ，ｐｐ．２５−８５．
１１３．Ｆｉｓｃｈｅｒ，Ａ．，Ｓｃｈｍｉｄ，Ｂ．，Ｅｌｌｉｎｇｈａｕｓ，Ｄ．，Ｎｏｔｈｎａｇｅｌ，Ｍ．，Ｇａｅｄｅ，Ｋ．Ｉ．，Ｓｃｈｕｅｒｍａｎｎ，Ｍ．，Ｌｉｐｉｎｓｋｉ，Ｓ．，Ｒｏｓｅｎｓｔｉｅｌ，Ｐ．，Ｚｉｓｓｅｌ，Ｇ．＆Ｈｏｅｈｎｅ，Ｋ．（２０１２）Ａ  ｎｏｖｅｌ  ｓａｒｃｏｉｄｏｓｉｓ  ｒｉｓｋ  ｌｏｃｕｓ  ｆｏｒ  Ｅｕｒｏｐｅａｎｓ  ｏｎ  ｃｈｒｏｍｏｓｏｍｅ  １１ｑ１３．１．Ａｍｅｒｉｃａｎ  ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  ｒｅｓｐｉｒａｔｏｒｙ  ａｎｄ  ｃｒｉｔｉｃａｌ  ｃａｒｅ  ｍｅｄｉｃｉｎｅ，１８６，８７７−８８５．
１１４．Ｆｌｅｇｅｌ，Ｃ．，Ｍａｎｔｅｎｉｏｔｉｓ，Ｓ．，Ｏｓｔｈｏｌｄ，Ｓ．，Ｈａｔｔ，Ｈ．＆Ｇｉｓｓｅｌｍａｎｎ，Ｇ．（２０１３）Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  Ｐｒｏｆｉｌｅ  ｏｆ  Ｅｃｔｏｐｉｃ  Ｏｌｆａｃｔｏｒｙ  Ｒｅｃｅｐｔｏｒｓ  Ｄｅｔｅｒｍｉｎｅｄ  ｂｙ  Ｄｅｅｐ  Ｓｅｑｕｅｎｃｉｎｇ．ＰＬｏＳ  ＯＮＥ，８，ｅ５５３６８．
１１５．Ｆｌｅｉｓｃｈｍａｎｎ，Ａ．，Ｌａｅｄｅｒａｃｈ，Ｕ．，Ｆｒｉｅｓｓ，Ｈ．，Ｂｕｅｃｈｌｅｒ，Ｍ．Ｗ．＆Ｒｅｕｂｉ，Ｊ．Ｃ．（２０００）Ｂｏｍｂｅｓｉｎ  ｒｅｃｅｐｔｏｒｓ  ｉｎ  ｄｉｓｔｉｎｃｔ  ｔｉｓｓｕｅ  ｃｏｍｐａｒｔｍｅｎｔｓ  ｏｆ  ｈｕｍａｎ  ｐａｎｃｒｅａｔｉｃ  ｄｉｓｅａｓｅｓ．Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｉｏｎ，８０，１８０７−１８１７．
１１６．Ｆｏｒｎａｒｉ，Ｔ．Ａ．，Ｄｏｎａｔｅ，Ｐ．Ｂ．，Ｍａｃｅｄｏ，Ｃ．，Ｓａｋａｍｏｔｏ−Ｈｏｊｏ，Ｅ．Ｔ．，Ｄｏｎａｄｉ，Ｅ．Ａ．＆Ｐａｓｓｏｓ，Ｇ．Ａ．（２０１１）Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ  ｏｆ  ｔｙｐｅ  １  ｄｉａｂｅｔｅｓ  ｍｅｌｌｉｔｕｓ  ｉｎ  ｎｏｎｏｂｅｓｅ  ｄｉａｂｅｔｉｃ  ｍｉｃｅ  ｆｏｌｌｏｗｓ  ｃｈａｎｇｅｓ  ｉｎ  ｔｈｙｍｏｃｙｔｅ  ａｎｄ  ｐｅｒｉｐｈｅｒａｌ  Ｔ  ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅ  ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎａｌ  ａｃｔｉｖｉｔｙ．Ｃｌｉｎｉｃａｌ  ａｎｄ  Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔａｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，２０１１．
１１７．Ｆｏｓｔｅｒ，Ｈ．Ｒ．，Ｆｕｅｒｓｔ，Ｅ．，Ｂｒａｎｃｈｅｔｔ，Ｗ．，Ｌｅｅ，Ｔ．Ｈ．，Ｃｏｕｓｉｎｓ，Ｄ．Ｊ．＆Ｗｏｓｚｃｚｅｋ，Ｇ．（２０１６）Ｌｅｕｋｏｔｒｉｅｎｅ  Ｅ４  ｉｓ  ａ  ｆｕｌｌ  ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ  ａｇｏｎｉｓｔ  ｆｏｒ  ｈｕｍａｎ  ｃｙｓｔｅｉｎｙｌ  ｌｅｕｋｏｔｒｉｅｎｅ  ｔｙｐｅ  １  ｒｅｃｅｐｔｏｒ−ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ  ｇｅｎｅ  ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ．Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ  ｒｅｐｏｒｔｓ，６．
１１８．Ｆｒａｓｃｈ，Ｓ．Ｃ．，Ｂｅｒｒｙ，Ｋ．Ｚ．，Ｆｅｒｎａｎｄｅｚ−Ｂｏｙａｎａｐａｌｌｉ，Ｒ．，Ｊｉｎ，Ｈ．−Ｓ．，Ｌｅｓｌｉｅ，Ｃ．，Ｈｅｎｓｏｎ，Ｐ．Ｍ．，Ｍｕｒｐｈｙ，Ｒ．Ｃ．＆Ｂｒａｔｔｏｎ，Ｄ．Ｌ．（２００８）ＮＡＤＰＨ  ｏｘｉｄａｓｅ−ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ  ｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｌｙｓｏｐｈｏｓｐｈａｔｉｄｙｌｓｅｒｉｎｅ  ｅｎｈａｎｃｅｓ  ｃｌｅａｒａｎｃｅ  ｏｆ  ａｃｔｉｖａｔｅｄ  ａｎｄ  ｄｙｉｎｇ  ｎｅｕｔｒｏｐｈｉｌｓ  ｖｉａ  Ｇ２Ａ．Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，２８３，３３７３６−３３７４９．
１１９．Ｆｒｅｄｈｏｌｍ，Ｂ．Ｂ．，ＡＰ，Ｉ．Ｊ．，Ｊａｃｏｂｓｏｎ，Ｋ．Ａ．，Ｌｉｎｄｅｎ，Ｊ．＆Ｍｕｌｌｅｒ，Ｃ．Ｅ．（２０１１）Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  Ｕｎｉｏｎ  ｏｆ  Ｂａｓｉｃ  ａｎｄ  Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ．ＬＸＸＸＩ．Ｎｏｍｅｎｃｌａｔｕｒｅ  ａｎｄ  ｃｌａｓｓｉｆｉｃａｔｉｏｎ  ｏｆ  ａｄｅｎｏｓｉｎｅ  ｒｅｃｅｐｔｏｒｓ−−ａｎ  ｕｐｄａｔｅ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ  Ｒｅｖ，６３，１−３４．
１２０．Ｆｒｅｉｒｅ‐Ｇａｒａｂａｌ，Ｍ．，Ｎｕｎｅｚ，Ｍ．，Ｂａｌｂｏａ，Ｊ．，Ｌｏｐｅｚ‐Ｄｅｌｇａｄｏ，Ｐ．，Ｇａｌｌｅｇｏ，Ｒ．，Ｇａｒｃｉａ‐Ｃａｂａｌｌｅｒｏ，Ｔ．，Ｆｅｒｎａｎｄｅｚ‐Ｒｏｅｌ，Ｍ．，Ｂｒｅｎｌｌａ，Ｊ．＆Ｒｅｙ‐Ｍｅｎｄｅｚ，Ｍ．（２００３）Ｓｅｒｏｔｏｎｉｎ  ｕｐｒｅｇｕｌａｔｅｓ  ｔｈｅ  ａｃｔｉｖｉｔｙ  ｏｆ  ｐｈａｇｏｃｙｔｏｓｉｓ  ｔｈｒｏｕｇｈ  ５‐ＨＴ１Ａ  ｒｅｃｅｐｔｏｒｓ．Ｂｒｉｔｉｓｈ  ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ，１３９，４５７−４６３．
１２１．Ｆｕｊｉｔａ，Ｔ．，Ｍａｔｓｕｏｋａ，Ｔ．，Ｈｏｎｄａ，Ｔ．，Ｋａｂａｓｈｉｍａ，Ｋ．，Ｈｉｒａｔａ，Ｔ．＆Ｎａｒｕｍｉｙａ，Ｓ．（２０１１）Ａ  ＧＰＲ４０  ａｇｏｎｉｓｔ  ＧＷ９５０８  ｓｕｐｐｒｅｓｓｅｓ  ＣＣＬ５，ＣＣＬ１７，ａｎｄ  ＣＸＣＬ１０  ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ  ｉｎ  ｋｅｒａｔｉｎｏｃｙｔｅｓ  ａｎｄ  ａｔｔｅｎｕａｔｅｓ  ｃｕｔａｎｅｏｕｓ  ｉｍｍｕｎｅ  ｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎ．Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｉｖｅ  Ｄｅｒｍａｔｏｌｏｇｙ，１３１，１６６０−１６６７．
１２２．Ｆｕｊｉｔａ，Ｔ．，Ｔｏｚａｋｉ‐Ｓａｉｔｏｈ，Ｈ．＆Ｉｎｏｕｅ，Ｋ．（２００９）Ｐ２Ｙ１  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ｓｉｇｎａｌｌｉｎｇ  ｅｎｈａｎｃｅｓ  ｎｅｕｒｏｐｒｏｔｅｃｔｉｏｎ  ｂｙ  ａｓｔｒｏｃｙｔｅｓ  ａｇａｉｎｓｔ  ｏｘｉｄａｔｉｖｅ  ｓｔｒｅｓｓ  ｖｉａ  ＩＬ‐６  ｒｅｌｅａｓｅ  ｉｎ  ｈｉｐｐｏｃａｍｐａｌ  ｃｕｌｔｕｒｅｓ．Ｇｌｉａ，５７，２４４−２５７．
１２３．Ｆｕｋａｍｉ  Ｋ，Ｕｅｄａ  Ｓ，Ｙａｍａｇｉｓｈｉ  Ｓ，Ｋａｔｏ  Ｓ，Ｉｎａｇａｋｉ  Ｙ，Ｔａｋｅｕｃｈｉ  Ｍ，Ｍｏｔｏｍｉｙａ  Ｙ，Ｂｕｃａｌａ  Ｒ，Ｉｉｄａ  Ｓ，Ｔａｍａｋｉ  Ｋ，Ｉｍａｉｚｕｍｉ  Ｔ，Ｃｏｏｐｅｒ  ＭＥ，Ｏｋｕｄａ  Ｓ．（２００４）ＡＧＥｓ  ａｃｔｉｖａｔｅ  ｍｅｓａｎｇｉａｌ  ＴＧＦ−β−Ｓｍａｄ  ｓｉｇｎａｌｌｉｎｇ  ｖｉａ  ａｎ  ａｎｇｉｏｔｅｎｓｉｎ  ＩＩ  ｔｙｐｅ  Ｉ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎ．Ｋｉｄｎｅｙ  Ｉｎｔ，６６：２１３７−２１４７．
１２４．Ｆｕｋａｍｉ，Ｋ．，Ｔａｇｕｃｈｉ，Ｋ．，Ｙａｍａｇｉｓｈｉ，Ｓ．＆Ｏｋｕｄａ，Ｓ．Ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ｆｏｒ  ａｄｖａｎｃｅｄ  ｇｌｙｃａｔｉｏｎ  ｅｎｄｐｒｏｄｕｃｔｓ  ａｎｄ  ｐｒｏｇｒｅｓｓｉｖｅ  ｋｉｄｎｅｙ  ｄｉｓｅａｓｅ．Ｃｕｒｒｅｎｔ  ｏｐｉｎｉｏｎ  ｉｎ  ｎｅｐｈｒｏｌｏｇｙ  ａｎｄ  ｈｙｐｅｒｔｅｎｓｉｏｎ，２０１５，２４：５４−６０．
１２５．Ｇａｌｉｅｇｕｅ，Ｓ．，Ｍａｒｙ，Ｓ．，Ｍａｒｃｈａｎｄ，Ｊ．，Ｄｕｓｓｏｓｓｏｙ，Ｄ．，Ｃａｒｒｉｅｒｅ，Ｄ．，Ｃａｒａｙｏｎ，Ｐ．，Ｂｏｕａｂｏｕｌａ，Ｍ．，Ｓｈｉｒｅ，Ｄ．，Ｌｅ  Ｆｕｒ，Ｇ．＆Ｃａｓｅｌｌａｓ，Ｐ．（１９９５）Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  ｏｆ  Ｃｅｎｔｒａｌ  ａｎｄ  Ｐｅｒｉｐｈｅｒａｌ  Ｃａｎｎａｂｉｎｏｉｄ  Ｒｅｃｅｐｔｏｒｓ  ｉｎ  Ｈｕｍａｎ  Ｉｍｍｕｎｅ  Ｔｉｓｓｕｅｓ  ａｎｄ  Ｌｅｕｋｏｃｙｔｅ  Ｓｕｂｐｏｐｕｌａｔｉｏｎｓ．Ｅｕｒｏｐｅａｎ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，２３２，５４−６１．
１２６．Ｇａｌｌｅ，Ｊ．，Ｓｉｔｔｉｇ，Ｄ．，Ｈａｎｉｓｃｈ，Ｉ．，Ｗｏｂｕｓ，Ｍ．，Ｗａｎｄｅｌ，Ｅ．，Ｌｏｅｆｆｌｅｒ，Ｍ．＆Ａｕｓｔ，Ｇ．（２００６）Ｉｎｄｉｖｉｄｕａｌ  ｃｅｌｌ−ｂａｓｅｄ  ｍｏｄｅｌｓ  ｏｆ  ｔｕｍｏｒ−ｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔ  ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎｓ：Ｍｕｌｔｉｐｌｅ  ｅｆｆｅｃｔｓ  ｏｆ  ＣＤ９７  ｏｎ  ｔｕｍｏｒ  ｉｎｖａｓｉｏｎ．Ａｍ  Ｊ  Ｐａｔｈｏｌ，１６９，１８０２−１８１１．
１２７．Ｇａｎｔｚ，Ｉ．，Ｍｕｒａｏｋａ，Ａ．，Ｙａｎｇ，Ｙ．−Ｋ．，Ｓａｍｕｅｌｓｏｎ，Ｌ．Ｃ．，Ｚｉｍｍｅｒｍａｎ，Ｅ．Ｍ．，Ｃｏｏｋ，Ｈ．＆Ｙａｍａｄａ，Ｔ．（１９９７）Ｃｌｏｎｉｎｇ  ａｎｄ  ｃｈｒｏｍｏｓｏｍａｌ  ｌｏｃａｌｉｚａｔｉｏｎ  ｏｆ  ａ  ｇｅｎｅ（ＧＰＲ１８）ｅｎｃｏｄｉｎｇ  ａ  ｎｏｖｅｌ  ｓｅｖｅｎ  ｔｒａｎｓｍｅｍｂｒａｎｅ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ｈｉｇｈｌｙ  ｅｘｐｒｅｓｓｅｄ  ｉｎ  ｓｐｌｅｅｎ  ａｎｄ  ｔｅｓｔｉｓ．Ｇｅｎｏｍｉｃｓ，４２，４６２−４６６．
１２８．Ｇａｏ，Ｚ．−Ｇ．，Ｄｉｎｇ，Ｙ．＆Ｊａｃｏｂｓｏｎ，Ｋ．Ａ．（２０１０）Ｐ２Ｙ  １３  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ｉｓ  ｒｅｓｐｏｎｓｉｂｌｅ  ｆｏｒ  ＡＤＰ−ｍｅｄｉａｔｅｄ  ｄｅｇｒａｎｕｌａｔｉｏｎ  ｉｎ  ＲＢＬ−２Ｈ３  ｒａｔ  ｍａｓｔ  ｃｅｌｌｓ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌ  ｒｅｓｅａｒｃｈ，６２，５００−５０５．
１２９．Ｇａｒｃｉａ−Ｖｉｖａｓ，Ｊ．Ｍ．，Ｇａｌａｖｉｚ−Ｈｅｒｎａｎｄｅｚ，Ｃ．，Ｆｅｒｎａｎｄｅｚ−Ｒｅｔａｎａ，Ｊ．，Ｐｅｄｒｏｚａ−Ｔｏｒｒｅｓ，Ａ．，Ｐｅｒｅｚ−Ｐｌａｓｅｎｃｉａ，Ｃ．，Ｌｏｐｅｚ−Ｃａｍａｒｉｌｌｏ，Ｃ．＆Ｍａｒｃｈａｔ，Ｌ．Ａ．（２０１６）Ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｏｍｉｃ  Ｐｒｏｆｉｌｉｎｇ  ｏｆ  Ａｄｉｐｏｓｅ  Ｔｉｓｓｕｅ  ｉｎ  Ｏｂｅｓｅ  Ｗｏｍｅｎ  ｉｎ  Ｒｅｓｐｏｎｓｅ  ｔｏ  Ａｃｕｐｕｎｃｔｕｒｅ  Ｃａｔｇｕｔ  Ｅｍｂｅｄｄｉｎｇ  Ｔｈｅｒａｐｙ  ｗｉｔｈ  Ｍｏｘｉｂｕｓｔｉｏｎ．Ｔｈｅ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ａｌｔｅｒｎａｔｉｖｅ  ａｎｄ  Ｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔａｒｙ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，２２，６５８−６６８．
１３０．Ｇａｒｃｉａ，Ｊ．Ｇ．，Ａ．Ｓｉｆｌｉｎｇｅｒ−Ｂｉｒｎｂｏｉｍ，Ｒ．Ｂｉｚｉｏｓ，Ｐ．Ｊ．Ｄｅｌ  Ｖｅｃｃｈｉｏ，Ｊ．Ｗ．Ｆｅｎｔｏｎ，２ｎｄ，ａｎｄ  Ａ．Ｂ．Ｍａｌｉｋ．Ｔｈｒｏｍｂｉｎ−ｉｎｄｕｃｅｄ  ｉｎｃｒｅａｓｅ  ｉｎ  ａｌｂｕｍｉｎ  ｐｅｒｍｅａｂｉｌｉｔｙ  ａｃｒｏｓｓ  ｔｈｅ  ｅｎｄｏｔｈｅｌｉｕｍ．Ｊ  Ｃｅｌｌ  Ｐｈｙｓｉｏｌ，１９８６，１２８：９６−１０４．
１３１．Ｇａｒｇ，Ｄ．＆Ｍｅｒｈｉ，Ｚ．Ａｄｖａｎｃｅｄ  Ｇｌｙｃａｔｉｏｎ  Ｅｎｄ  Ｐｒｏｄｕｃｔｓ：Ｌｉｎｋ  ｂｅｔｗｅｅｎ  Ｄｉｅｔ  ａｎｄ  Ｏｖｕｌａｔｏｒｙ  Ｄｙｓｆｕｎｃｔｉｏｎ  ｉｎ  ＰＣＯＳ？Ｎｕｔｒｉｅｎｔｓ，２０１５，７：１０１２９−１０１４４．
１３２．Ｇａｔｔｏ，Ｄ．，Ｗｏｏｄ，Ｋ．＆Ｂｒｉｎｋ，Ｒ．（２０１１）ＥＢＩ２  ｏｐｅｒａｔｅｓ  ｉｎｄｅｐｅｎｄｅｎｔｌｙ  ｏｆ  ｂｕｔ  ｉｎ  ｃｏｏｐｅｒａｔｉｏｎ  ｗｉｔｈ  ＣＸＣＲ５  ａｎｄ  ＣＣＲ７  ｔｏ  ｄｉｒｅｃｔ  Ｂ  ｃｅｌｌ  ｍｉｇｒａｔｉｏｎ  ａｎｄ  ｏｒｇａｎｉｚａｔｉｏｎ  ｉｎ  ｆｏｌｌｉｃｌｅｓ  ａｎｄ  ｔｈｅ  ｇｅｒｍｉｎａｌ  ｃｅｎｔｅｒ．Ｔｈｅ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，１８７，４６２１−４６２８．
１３３．Ｇａｖｅｒｉａｕｘ，Ｃ．，Ｐｅｌｕｓｏ，Ｊ．，Ｓｉｍｏｎｉｎ，Ｆ．，Ｌａｆｏｒｅｔ，Ｊ．＆Ｋｉｅｆｆｅｒ，Ｂ．（１９９５）Ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｋａｐｐａ−  ａｎｄ  ｄｅｌｔａ−ｏｐｉｏｉｄ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｓ  ｉｎ  ｉｍｍｕｎｅ  ｃｅｌｌｓ．ＦＥＢＳ  Ｌｅｔｔ，３６９，２７２−２７６．
１３４．Ｇａｚｅｌ，Ａ．，Ｒｏｓｄｙ，Ｍ．，Ｂｅｒｔｉｎｏ，Ｂ．，Ｔｏｒｎｉｅｒ，Ｃ．，Ｓａｈｕｃ，Ｆ．＆Ｂｌｕｍｅｎｂｅｒｇ，Ｍ．（２００６）Ａ  ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃ  ｓｕｂｓｅｔ  ｏｆ  ｐｓｏｒｉａｓｉｓ−ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ  ｇｅｎｅｓ  ｉｓ  ｉｎｄｕｃｅｄ  ｂｙ  ｏｎｃｏｓｔａｔｉｎ−Ｍ  ｉｎ  ｒｅｃｏｎｓｔｉｔｕｔｅｄ  ｅｐｉｄｅｒｍｉｓ．Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｉｖｅ  ｄｅｒｍａｔｏｌｏｇｙ，１２６，２６４７−２６５７．
１３５．Ｇｅｒｖａｉｓ，Ｆ．Ｇ．，Ｃｒｕｚ，Ｒ．Ｐ．，Ｃｈａｔｅａｕｎｅｕｆ，Ａ．，Ｇａｌｅ，Ｓ．，Ｓａｗｙｅｒ，Ｎ．，Ｎａｎｔｅｌ，Ｆ．，Ｍｅｔｔｅｒｓ，Ｋ．Ｍ．＆Ｏ’Ｎｅｉｌｌ，Ｇ．Ｐ．（２００１）Ｓｅｌｅｃｔｉｖｅ  ｍｏｄｕｌａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｃｈｅｍｏｋｉｎｅｓｉｓ，ｄｅｇｒａｎｕｌａｔｉｏｎ，ａｎｄ  ａｐｏｐｔｏｓｉｓ  ｉｎ  ｅｏｓｉｎｏｐｈｉｌｓ  ｔｈｒｏｕｇｈ  ｔｈｅ  ＰＧＤ  ２  ｒｅｃｅｐｔｏｒｓ  ＣＲＴＨ２  ａｎｄ  ＤＰ．Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ａｌｌｅｒｇｙ  ａｎｄ  Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，１０８，９８２−９８８．
１３６．Ｇｅｔｔｉｎｇ，Ｓ．Ｊ．，Ｇｉｂｂｓ，Ｌ．，Ｃｌａｒｋ，Ａ．Ｊ．，Ｆｌｏｗｅｒ，Ｒ．Ｊ．＆Ｐｅｒｒｅｔｔｉ，Ｍ．（１９９９）ＰＯＭＣ  ｇｅｎｅ−ｄｅｒｉｖｅｄ  ｐｅｐｔｉｄｅｓ  ａｃｔｉｖａｔｅ  ｍｅｌａｎｏｃｏｒｔｉｎ  ｔｙｐｅ  ３  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ｏｎ  ｍｕｒｉｎｅ  ｍａｃｒｏｐｈａｇｅｓ，ｓｕｐｐｒｅｓｓ  ｃｙｔｏｋｉｎｅ  ｒｅｌｅａｓｅ，ａｎｄ  ｉｎｈｉｂｉｔ  ｎｅｕｔｒｏｐｈｉｌ  ｍｉｇｒａｔｉｏｎ  ｉｎ  ａｃｕｔｅ  ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ  ｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎ．Ｔｈｅ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，１６２，７４４６−７４５３．
１３７．Ｇｉａｎｎｉｎｉ，Ｅ．，Ｌａｔｔａｎｚｉ，Ｒ．，Ｎｉｃｏｔｒａ，Ａ．，Ｃａｍｐｅｓｅ，Ａ．Ｆ．，Ｇｒａｚｉｏｌｉ，Ｐ．，Ｓｃｒｅｐａｎｔｉ，Ｉ．，Ｂａｌｂｏｎｉ，Ｇ．，Ｓａｌｖａｄｏｒｉ，Ｓ．，Ｓａｃｅｒｄｏｔｅ，Ｐ．＆Ｎｅｇｒｉ，Ｌ．（２００９）Ｔｈｅ  ｃｈｅｍｏｋｉｎｅ  Ｂｖ８／ｐｒｏｋｉｎｅｔｉｃｉｎ  ２  ｉｓ  ｕｐ−ｒｅｇｕｌａｔｅｄ  ｉｎ  ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ  ｇｒａｎｕｌｏｃｙｔｅｓ  ａｎｄ  ｍｏｄｕｌａｔｅｓ  ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ  ｐａｉｎ．Ｐｒｏｃｅｅｄｉｎｇｓ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ａｃａｄｅｍｙ  ｏｆ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，１０６，１４６４６−１４６５１．
１３８．Ｇｏｌｄｉｎ，Ａ．，Ｂｅｃｋｍａｎ，Ｊ．Ａ．，Ｓｃｈｍｉｄｔ，Ａ．Ｍ．，ａｎｄ  ＣｒｅＡＧＥＲ，Ｍ．Ａ．（２００６）Ａｄｖａｎｃｅｄ  ｇｌｙｃａｔｉｏｎ  ｅｎｄ  ｐｒｏｄｕｃｔｓ：ｓｐａｒｋｉｎｇ  ｔｈｅ  ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ  ｏｆ  ｄｉａｂｅｔｉｃ  ｖａｓｃｕｌａｒ  ｉｎｊｕｒｙ  Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ，１１４：５９７−６０５．
１３９．Ｇｒａｆｅ，Ｍ．，ｅｔ  ａｌ．（１９９７）Ａｎｇｉｏｔｅｎｓｉｎ  ＩＩ−ｉｎｄｕｃｅｄ  ｌｅｕｋｏｃｙｔｅ  ａｄｈｅｓｉｏｎ  ｏｎ  ｈｕｍａｎ  ｃｏｒｏｎａｒｙ  ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ  ｃｅｌｌｓ  ｉｓ  ｍｅｄｉａｔｅｄ  ｂｙ  Ｅ−ｓｅｌｅｃｔｉｎ．Ｃｉｒｃ  Ｒｅｓ，８１：８０４−８１１．
１４０．Ｇｒａｎａｄｏｓ−Ｓｏｔｏ，Ｖ．，Ａｒｇｕｅｅｌｌｅｓ，Ｃ．Ｆ．，Ｒｏｃｈａ−Ｇｏｎｚａｌｅｚ，Ｈ．Ｉ．，Ｇｏｄｉｎｅｚ−Ｃｈａｐａｒｒｏ，Ｂ．，Ｆｌｏｒｅｓ−Ｍｕｒｒｉｅｔａ，Ｆ．Ｊ．＆Ｖｉｌｌａｌｏｎ，Ｃ．Ｍ．（２０１０）Ｔｈｅ  ｒｏｌｅ  ｏｆ  ｐｅｒｉｐｈｅｒａｌ  ５−ＨＴ１Ａ，５−ＨＴ１Ｂ，５−ＨＴ１Ｄ，５−ＨＴ１Ｅ  ａｎｄ  ５−ＨＴ１Ｆ  ｓｅｒｏｔｏｎｅｒｇｉｃ  ｒｅｃｅｐｔｏｒｓ  ｉｎ  ｔｈｅ  ｒｅｄｕｃｔｉｏｎ  ｏｆ  ｎｏｃｉｃｅｐｔｉｏｎ  ｉｎ  ｒａｔｓ．Ｎｅｕｒｏｓｃｉｅｎｃｅ，１６５，５６１−５６８．
１４１．Ｇｒａｎｔｈａｍ，Ｒ．（１９７４）Ａｍｉｎｏ  ａｃｉｄ  ｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅ  ｆｏｒｍｕｌａ  ｔｏ  ｈｅｌｐ  ｅｘｐｌａｉｎ  ｐｒｏｔｅｉｎ  ｅｖｏｌｕｔｉｏｎ．Ｓｃｉｅｎｃｅ，１８５：８６２−８６４．
１４２．Ｇｒａｅｓｓｅｌ，Ｓ．，Ｏｐｏｌｋａ，Ａ．，Ａｎｄｅｒｓ，Ｓ．，Ｓｔｒａｕｂ，Ｒ．Ｈ．，Ｇｒｉｆｋａ，Ｊ．，Ｌｕｇｅｒ，Ｔ．Ａ．＆Ｂｏｅｈｍ，Ｍ．（２００９）Ｔｈｅ  ｍｅｌａｎｏｃｏｒｔｉｎ  ｓｙｓｔｅｍ  ｉｎ  ａｒｔｉｃｕｌａｒ  ｃｈｏｎｄｒｏｃｙｔｅｓ：Ｍｅｌａｎｏｃｏｒｔｉｎ  ｒｅｃｅｐｔｏｒｓ，ｐｒｏ−ｏｐｉｏｍｅｌａｎｏｃｏｒｔｉｎ，ｐｒｅｃｕｒｓｏｒ  ｐｒｏｔｅａｓｅｓ，ａｎｄ  ａ  ｒｅｇｕｌａｔｏｒｙ  ｅｆｆｅｃｔ  ｏｆ  α−ｍｅｌａｎｏｃｙｔｅ−ｓｔｉｍｕｌａｔｉｎｇ  ｈｏｒｍｏｎｅ  ｏｎ  ｐｒｏｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ  ｃｙｔｏｋｉｎｅｓ  ａｎｄ  ｅｘｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒ  ｍａｔｒｉｘ  ｃｏｍｐｏｎｅｎｔｓ．Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ＆Ｒｈｅｕｍａｔｉｓｍ，６０，３０１７−３０２７．
１４３．Ｇｒｅｅｎｅ  Ｔ．Ｗ．ｅｔ  ａｌ．Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ  ｇｒｏｕｐｓ  ｉｎ  ｏｒｇａｎｉｃ  ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，１９９１，Ｗｉｌｅｙ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ．
１４４．Ｇｒｅｇｏｒｙ，Ｍ．Ａ．，Ｐｈａｎｇ，Ｔ．Ｌ．，Ｎｅｖｉａｎｉ，Ｐ．，Ａｌｖａｒｅｚ−Ｃａｌｄｅｒｏｎ，Ｆ．，Ｅｉｄｅ，Ｃ．Ａ．，Ｏ’Ｈａｒｅ，Ｔ．，Ｚａｂｅｒｅｚｈｎｙｙ，Ｖ．，Ｗｉｌｌｉａｍｓ，Ｒ．Ｔ．，Ｄｒｕｋｅｒ，Ｂ．Ｊ．＆Ｐｅｒｒｏｔｔｉ，Ｄ．（２０１０）Ｗｎｔ／Ｃａ  ２＋／ＮＦＡＴ  ｓｉｇｎａｌｌｉｎｇ  ｍａｉｎｔａｉｎｓ  ｓｕｒｖｉｖａｌ  ｏｆ  Ｐｈ＋  ｌｅｕｋｅｍｉａ  ｃｅｌｌｓ  ｕｐｏｎ  ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｂｃｒ−Ａｂｌ．Ｃａｎｃｅｒ  ｃｅｌｌ，１８，７４−８７．
１４５．Ｇｕｅｎａｒｄ，Ｆ．，Ｌａｍｏｎｔａｇｎｅ，Ｍ．，Ｂｏｓｓｅ，Ｙ．，Ｄｅｓｈａｉｅｓ，Ｙ．，Ｃｉａｎｆｌｏｎｅ，Ｋ．，Ｋｒａｌ，Ｊ．Ｇ．，Ｍａｒｃｅａｕ，Ｐ．＆Ｖｏｈｌ，Ｍ．−Ｃ．（２０１５）Ｉｎｆｌｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｇｅｓｔａｔｉｏｎａｌ  Ｏｂｅｓｉｔｙ  ｏｎ  Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎｓ  ｂｅｔｗｅｅｎ  Ｇｅｎｏｔｙｐｅｓ  ａｎｄ  Ｇｅｎｅ  Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  Ｌｅｖｅｌｓ  ｉｎ  Ｏｆｆｓｐｒｉｎｇ  ｆｏｌｌｏｗｉｎｇ  Ｍａｔｅｒｎａｌ  Ｇａｓｔｒｏｉｎｔｅｓｔｉｎａｌ  Ｂｙｐａｓｓ  Ｓｕｒｇｅｒｙ  ｆｏｒ  Ｏｂｅｓｉｔｙ．ＰｌｏＳ  ｏｎｅ，１０，ｅ０１１７０１１．
１４６．Ｇｕｇｌｉｕｃｃｉ，Ａ．＆Ｍｅｎｉｎｉ，Ｔ．Ｔｈｅ  ａｘｉｓ  ＡＧＥ−ＲＡＧＥ−ｓｏｌｕｂｌｅ  ＲＡＧＥ  ａｎｄ  ｏｘｉｄａｔｉｖｅ  ｓｔｒｅｓｓ  ｉｎ  ｃｈｒｏｎｉｃ  ｋｉｄｎｅｙ  ｄｉｓｅａｓｅ．Ａｄｖａｎｃｅｓ  ｉｎ  ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ  ｍｅｄｉｃｉｎｅ  ａｎｄ  ｂｉｏｌｏｇｙ，２０１４，８２４：１９１−２０８．
１４７．Ｇｕｏ，Ｗ．Ａ．，Ｋｎｉｇｈｔ，Ｐ．Ｒ．＆Ｒａｇｈａｖｅｎｄｒａｎ，Ｋ．Ｔｈｅ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ｆｏｒ  ａｄｖａｎｃｅｄ  ｇｌｙｃａｔｉｏｎ  ｅｎｄ  ｐｒｏｄｕｃｔｓ  ａｎｄ  ａｃｕｔｅ  ｌｕｎｇ  ｉｎｊｕｒｙ／ａｃｕｔｅ  ｒｅｓｐｉｒａｔｏｒｙ  ｄｉｓｔｒｅｓｓ  ｓｙｎｄｒｏｍｅ．Ｉｎｔｅｎｓｉｖｅ  ｃａｒｅ  ｍｅｄｉｃｉｎｅ，２０１２，３８：１５８８−１５９８．
１４８．Ｈａｇａ，Ｋ．，Ｋｒｕｓｅ，Ａ．Ｃ．，Ａｓａｄａ，Ｈ．，Ｙｕｒｕｇｉ−Ｋｏｂａｙａｓｈｉ，Ｔ．，Ｓｈｉｒｏｉｓｈｉ，Ｍ．，Ｚｈａｎｇ，Ｃ．，Ｗｅｉｓ，Ｗ．Ｉ．，Ｏｋａｄａ，Ｔ．，Ｋｏｂｉｌｋａ，Ｂ．Ｋ．，Ｈａｇａ，Ｔ．＆Ｋｏｂａｙａｓｈｉ，Ｔ．（２０１２）Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｈｕｍａｎ  Ｍ２  ｍｕｓｃａｒｉｎｉｃ  ａｃｅｔｙｌｃｈｏｌｉｎｅ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ｂｏｕｎｄ  ｔｏ  ａｎ  ａｎｔａｇｏｎｉｓｔ．Ｎａｔｕｒｅ，４８２，５４７−５５１．
１４９．Ｈａｇｎｅｒ，Ｓ．，Ｓｔａｈｌ，Ｕ．，Ｋｎｏｂｌａｕｃｈ，Ｂ．，ＭｃＧｒｅｇｏｒ，Ｇ．＆Ｌａｎｇ，Ｒ．（２００２）Ｃａｌｃｉｔｏｎｉｎ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ−ｌｉｋｅ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ：ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ  ａｎｄ  ｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎ  ｉｎ  ｈｕｍａｎ  ｐｅｒｉｐｈｅｒａｌ  ｔｉｓｓｕｅｓ．Ｃｅｌｌ  ａｎｄ  ｔｉｓｓｕｅ  ｒｅｓｅａｒｃｈ，３１０，４１−５０．
１５０．Ｈａｎ，Ｙ．Ｔ．，ｅｔ  ａｌ．Ｆｉｎｅ  ｔｕｎｉｎｇ  ｏｆ  ４，６−ｂｉｓｐｈｅｎｙｌ−２−（３−ａｌｋｏｘｙａｎｉｌｉｎｏ）ｐｙｒｉｍｉｄｉｎｅ  ｆｏｃｕｓｉｎｇ  ｏｎ  ｔｈｅ  ａｃｔｉｖｉｔｙ−ｓｅｎｓｉｔｉｖｅ  ａｍｉｎｏａｌｋｏｘｙ  ｍｏｉｅｔｙ  ｆｏｒ  ａ  ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃａｌｌｙ  ｕｓｅｆｕｌ  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ  ｏｆ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ｆｏｒ  ａｄｖａｎｃｅｄ  ｇｌｙｃａｔｉｏｎ  ｅｎｄ  ｐｒｏｄｕｃｔｓ（ＲＡＧＥ）．Ｂｉｏｏｒｇａｎｉｃ＆ｍｅｄｉｃｉｎａｌ  ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，２０１５，２３：５７９−５８７．
１５１．Ｈａｎ，Ｙ．Ｔ．，ｅｔ  ａｌ．Ｌｉｇａｎｄ−ｂａｓｅｄ  ｄｅｓｉｇｎ，ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，ａｎｄ  ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ  ｏｆ  ２−ａｍｉｎｏｐｙｒｉｍｉｄｉｎｅｓ，ａ  ｎｏｖｅｌ  ｓｅｒｉｅｓ  ｏｆ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ｆｏｒ  ａｄｖａｎｃｅｄ  ｇｌｙｃａｔｉｏｎ  ｅｎｄ  ｐｒｏｄｕｃｔｓ（ＲＡＧＥ）ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ．Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  ｍｅｄｉｃｉｎａｌ  ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，２０１２，５５：９１２０−９１３５．
１５２．Ｈａｎ，Ｙ．Ｔ．，ｅｔ  ａｌ．Ｐｙｒａｚｏｌｅ−５−ｃａｒｂｏｘａｍｉｄｅｓ，ｎｏｖｅｌ  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ  ｏｆ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ｆｏｒ  ａｄｖａｎｃｅｄ  ｇｌｙｃａｔｉｏｎ  ｅｎｄ  ｐｒｏｄｕｃｔｓ（ＲＡＧＥ）．Ｅｕｒｏｐｅａｎ  ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  ｍｅｄｉｃｉｎａｌ  ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，２０１４，７９：１２８−１４２．
１５３．Ｈａｎｄｌｅｙ，Ｄ．Ａ．，Ｃ．Ｍ．Ａｒｂｅｅｎｙ，Ｍ．Ｌ．Ｌｅｅ，Ｒ．Ｇ．Ｖａｎ  Ｖａｌｅｎ，ａｎｄ  Ｒ．Ｎ．Ｓａｕｎｄｅｒｓ．Ｅｆｆｅｃｔ  ｏｆ  ｐｌａｔｅｌｅｔ  ａｃｔｉｖａｔｉｎｇ  ｆａｃｔｏｒ  ｏｎ  ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ  ｐｅｒｍｅａｂｉｌｉｔｙ  ｔｏ  ｐｌａｓｍａ  ｍａｃｒｏｍｏｌｅｃｕｌｅｓ．Ｉｍｍｕｎｏｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ，１９８４，８：１３７−４２．
１５４．Ｈａｎｓｅｎ，Ｗ．，Ｗｅｓｔｅｎｄｏｒｆ，Ａ．，Ｔｏｅｐｆｅｒ，Ｔ．，Ｍａｕｅｌ，Ｓ．，Ｇｅｆｆｅｒｓ，Ｒ．，Ｇｒｕｂｅｒ，Ａ．＆Ｂｕｅｒ，Ｊ．（２０１０）Ｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎ  ｉｎ  ｖｉｖｏ  ｉｓ  ｍｏｄｕｌａｔｅｄ  ｂｙ  ＧＰＲ８３  ｉｓｏｆｏｒｍ−４  ｂｕｔ  ｎｏｔ  ＧＰＲ８３  ｉｓｏｆｏｒｍ−１  ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  ｉｎ  ｒｅｇｕｌａｔｏｒｙ  Ｔ  ｃｅｌｌｓ．Ｇｅｎｅｓ  ａｎｄ  ｉｍｍｕｎｉｔｙ，１１，３５７−３６１．
１５５．Ｈａｎｓｏｎ，Ｍ．Ａ．，Ｒｏｔｈ，Ｃ．Ｂ．，Ｊｏ，Ｅ．，Ｇｒｉｆｆｉｔｈ，Ｍ．Ｔ．，Ｓｃｏｔｔ，Ｆ．Ｌ．，Ｒｅｉｎｈａｒｔ，Ｇ．，Ｄｅｓａｌｅ，Ｈ．，Ｃｌｅｍｏｎｓ，Ｂ．，Ｃａｈａｌａｎ，Ｓ．Ｍ．，Ｓｃｈｕｅｒｅｒ，Ｓ．Ｃ．，Ｓａｎｎａ，Ｍ．Ｇ．，Ｈａｎ，Ｇ．Ｗ．，Ｋｕｈｎ，Ｐ．，Ｒｏｓｅｎ，Ｈ．＆Ｓｔｅｖｅｎｓ，Ｒ．Ｃ．（２０１２）Ｃｒｙｓｔａｌ  ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ  ｏｆ  ａ  ｌｉｐｉｄ  Ｇ  ｐｒｏｔｅｉｎ−ｃｏｕｐｌｅｄ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ．Ｓｃｉｅｎｃｅ，３３５，８５１−８５５．
１５６．Ｈａｒｔｍａｎｎ，Ｋ．，Ｈｅｎｚ，Ｂ．Ｍ．，Ｋｒｕｅｇｅｒ−Ｋｒａｓａｇａｋｅｓ，Ｓ．，Ｋｏｅｈｌ，Ｊ．，Ｂｕｒｇｅｒ，Ｒ．，Ｇｕｈｌ，Ｓ．，Ｈａａｓｅ，Ｉ．，Ｌｉｐｐｅｒｔ，Ｕ．＆Ｚｕｂｅｒｂｉｅｒ，Ｔ．（１９９７）Ｃ３ａ  ａｎｄ  Ｃ５ａ  ｓｔｉｍｕｌａｔｅ  ｃｈｅｍｏｔａｘｉｓ  ｏｆ  ｈｕｍａｎ  ｍａｓｔ  ｃｅｌｌｓ．Ｂｌｏｏｄ，８９，２８６３−２８７０．
１５７．Ｈａｒｔｍｅｙｅｒ，Ｍ．，Ｓｃｈｏｌｚｅｎ，Ｔ．，Ｂｅｃｈｅｒ，Ｅ．，Ｂｈａｒｄｗａｊ，Ｒ．，Ｓｃｈｗａｒｚ，Ｔ．＆Ｌｕｇｅｒ，Ｔ．（１９９７）Ｈｕｍａｎ  ｄｅｒｍａｌ  ｍｉｃｒｏｖａｓｃｕｌａｒ  ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ  ｃｅｌｌｓ  ｅｘｐｒｅｓｓ  ｔｈｅ  ｍｅｌａｎｏｃｏｒｔｉｎ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ｔｙｐｅ  １  ａｎｄ  ｐｒｏｄｕｃｅ  ｉｎｃｒｅａｓｅｄ  ｌｅｖｅｌｓ  ｏｆ  ＩＬ−８  ｕｐｏｎ  ｓｔｉｍｕｌａｔｉｏｎ  ｗｉｔｈ  ａｌｐｈａ−ｍｅｌａｎｏｃｙｔｅ−ｓｔｉｍｕｌａｔｉｎｇ  ｈｏｒｍｏｎｅ．Ｔｈｅ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，１５９，１９３０−１９３７．
１５８．Ｈａｒｖｅｙ，Ｒ．Ｃ．，Ｍｕｌｌｉｇｈａｎ，Ｃ．Ｇ．，Ｗａｎｇ，Ｘ．，Ｄｏｂｂｉｎ，Ｋ．Ｋ．，Ｄａｖｉｄｓｏｎ，Ｇ．Ｓ．，Ｂｅｄｒｉｃｋ，Ｅ．Ｊ．，Ｃｈｅｎ，Ｉ．−Ｍ．，Ａｔｌａｓ，Ｓ．Ｒ．，Ｋａｎｇ，Ｈ．＆Ａｒ，Ｋ．（２０１０）Ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｎｏｖｅｌ  ｃｌｕｓｔｅｒ  ｇｒｏｕｐｓ  ｉｎ  ｐｅｄｉａｔｒｉｃ  ｈｉｇｈ−ｒｉｓｋ  Ｂ−ｐｒｅｃｕｒｓｏｒ  ａｃｕｔｅ  ｌｙｍｐｈｏｂｌａｓｔｉｃ  ｌｅｕｋｅｍｉａ  ｗｉｔｈ  ｇｅｎｅ  ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  ｐｒｏｆｉｌｉｎｇ：ｃｏｒｒｅｌａｔｉｏｎ  ｗｉｔｈ  ｇｅｎｏｍｅ−ｗｉｄｅ  ＤＮＡ  ｃｏｐｙ  ｎｕｍｂｅｒ  ａｌｔｅｒａｔｉｏｎｓ，ｃｌｉｎｉｃａｌ  ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｓ，ａｎｄ  ｏｕｔｃｏｍｅ．Ｂｌｏｏｄ，１１６，４８７４−４８８４．
１５９．Ｈａｔａ，Ａ．Ｎ．，ａｎｄ  Ｒ．Ｍ．Ｂｒｅｙｅｒ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ  ａｎｄ  ｓｉｇｎａｌｌｉｎｇ  ｏｆ  ｐｒｏｓｔａｇｌａｎｄｉｎ  ｒｅｃｅｐｔｏｒｓ：ｍｕｌｔｉｐｌｅ  ｒｏｌｅｓ  ｉｎ  ｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎ  ａｎｄ  ｉｍｍｕｎｅ  ｍｏｄｕｌａｔｉｏｎ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ  Ｔｈｅｒ，２００４，１０３：１４７−６６．
１６０．Ｈａｗｏｒｔｈ，Ｏ．，Ｃｅｒｎａｄａｓ，Ｍ．＆Ｌｅｖｙ，Ｂ．Ｄ．（２０１１）ＮＫ  ｃｅｌｌｓ  ａｒｅ  ｅｆｆｅｃｔｏｒｓ  ｆｏｒ  ｒｅｓｏｌｖｉｎ  Ｅ１  ｉｎ  ｔｈｅ  ｔｉｍｅｌｙ  ｒｅｓｏｌｕｔｉｏｎ  ｏｆ  ａｌｌｅｒｇｉｃ  ａｉｒｗａｙ  ｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎ．Ｔｈｅ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，１８６，６１２９−６１３５．
１６１．Ｈｅｓｓ  Ｂ，Ｋｕｔｚｎｅｒ  Ｃ，Ｖａｎ  Ｄｅｒ  Ｓｐｏｅｌ  Ｄ，Ｌｉｎｄａｈｌ  Ｅ．ＧＲＯＭＡＣＳ  ４：Ａｌｇｏｒｉｔｈｍｓ  ｆｏｒ  ｈｉｇｈｌｙ  ｅｆｆｉｃｉｅｎｔ，ｌｏａｄ−ｂａｌａｎｃｅｄ，ａｎｄ  ｓｃａｌａｂｌｅ  ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  ｓｉｍｕｌａｔｉｏｎ．Ｊ  Ｃｈｅｍ  Ｔｈｅｏｒｙ  Ｃｏｍｐｕｔ，２００８，４：４３５．
１６２．Ｈｅｕｂｌｅｉｎ，Ｓ．，Ｌｅｎｈａｒｄ，Ｍ．，Ｖｒｅｋｏｕｓｓｉｓ，Ｔ．，Ｓｃｈｏｅｐｆｅｒ，Ｊ．，Ｋｕｈｎ，Ｃ．，Ｆｒｉｅｓｅ，Ｋ．，Ｍａｋｒｉｇｉａｎｎａｋｉｓ，Ａ．，Ｍａｙｒ，Ｄ．＆Ｊｅｓｃｈｋｅ，Ｕ．（２０１２）Ｔｈｅ  Ｇ−ｐｒｏｔｅｉｎ−ｃｏｕｐｌｅｄ  ｅｓｔｒｏｇｅｎ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ（ＧＰＥＲ）ｉｓ  ｅｘｐｒｅｓｓｅｄ  ｉｎ  ｎｏｒｍａｌ  ｈｕｍａｎ  ｏｖａｒｉｅｓ  ａｎｄ  ｉｓ  ｕｐｒｅｇｕｌａｔｅｄ  ｉｎ  ｏｖａｒｉａｎ  ｅｎｄｏｍｅｔｒｉｏｓｉｓ  ａｎｄ  ｐｅｌｖｉｃ  ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ  ｄｉｓｅａｓｅ  ｉｎｖｏｌｖｉｎｇ  ｔｈｅ  ｏｖａｒｙ．Ｒｅｐｒｏｄｕｃｔｉｖｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，１９，１１９７−１２０４．
１６３．Ｈｉｌｌ，Ｊ．，Ｄｕｃｋｗｏｒｔｈ，Ｍ．，Ｍｕｒｄｏｃｋ，Ｐ．，Ｒｅｎｎｉｅ，Ｇ．，Ｓａｂｉｄｏ−Ｄａｖｉｄ，Ｃ．，Ａｍｅｓ，Ｒ．Ｓ．，Ｓｚｅｋｅｒｅｓ，Ｐ．，Ｗｉｌｓｏｎ，Ｓ．，Ｂｅｒｇｓｍａ，Ｄ．Ｊ．＆Ｇｌｏｇｅｒ，Ｉ．Ｓ．（２００１）Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  ｃｌｏｎｉｎｇ  ａｎｄ  ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ  ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ  ｏｆ  ＭＣＨ２，ａ  ｎｏｖｅｌ  ｈｕｍａｎ  ＭＣＨ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ．Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，２７６，２０１２５−２０１２９．
１６４．Ｈｏｈｅｎｈａｕｓ，Ｄ．Ｍ．，Ｓｃｈａａｌｅ，Ｋ．，Ｌｅ  Ｃａｏ，Ｋ．−Ａ．，Ｓｅｏｗ，Ｖ．，Ｉｙｅｒ，Ａ．，Ｆａｉｒｌｉｅ，Ｄ．Ｐ．＆Ｓｗｅｅｔ，Ｍ．Ｊ．（２０１３）Ａｎ  ｍＲＮＡ  ａｔｌａｓ  ｏｆ  Ｇ  ｐｒｏｔｅｉｎ−ｃｏｕｐｌｅｄ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  ｄｕｒｉｎｇ  ｐｒｉｍａｒｙ  ｈｕｍａｎ  ｍｏｎｏｃｙｔｅ／ｍａｃｒｏｐｈａｇｅ  ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ  ａｎｄ  ｌｉｐｏｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅ−ｍｅｄｉａｔｅｄ  ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ  ｉｄｅｎｔｉｆｉｅｓ  ｔａｒｇｅｔａｂｌｅ  ｃａｎｄｉｄａｔｅ  ｒｅｇｕｌａｔｏｒｓ  ｏｆ  ｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎ．Ｉｍｍｕｎｏｂｉｏｌｏｇｙ，２１８，１３４５−１３５３．
１６５．Ｈｏｌｌｅｎｂｅｒｇ，Ａ．Ｎ．（２００８）Ｔｈｅ  ｒｏｌｅ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｔｈｙｒｏｔｒｏｐｉｎ−ｒｅｌｅａｓｉｎｇ  ｈｏｒｍｏｎｅ（ＴＲＨ）ｎｅｕｒｏｎ  ａｓ  ａ  ｍｅｔａｂｏｌｉｃ  ｓｅｎｓｏｒ．Ｔｈｙｒｏｉｄ，１８，１３１−１３９．
１６６．Ｈｏｎｇ，Ｋ．Ｗ．，Ｓｈｉｎ，Ｍ．Ｓ．，Ａｈｎ，Ｙ．Ｂ．，Ｌｅｅ，Ｈ．Ｊ．＆Ｋｉｍ，Ｈ．Ｄ．（２０１５）Ｇｅｎｏｍｅｗｉｄｅ  ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ  ｓｔｕｄｙ  ｏｎ  ｃｈｒｏｎｉｃ  ｐｅｒｉｏｄｏｎｔｉｔｉｓ  ｉｎ  Ｋｏｒｅａｎ  ｐｏｐｕｌａｔｉｏｎ：ｒｅｓｕｌｔｓ  ｆｒｏｍ  ｔｈｅ  Ｙａｎｇｐｙｅｏｎｇ  ｈｅａｌｔｈ  ｃｏｈｏｒｔ．Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  ｃｌｉｎｉｃａｌ  ｐｅ  ｒｉｏｄｏｎｔｏｌｏｇｙ，４２，７０３−７１０．
１６７．Ｈｏｑｕｅ，Ｒ．，Ｆａｒｏｏｑ，Ａ．，Ｇｈａｎｉ，Ａ．，Ｇｏｒｅｌｉｃｋ，Ｆ．＆Ｍｅｈａｌ，Ｗ．Ｚ．（２０１４）Ｌａｃｔａｔｅ  ｒｅｄｕｃｅｓ  ｌｉｖｅｒ  ａｎｄ  ｐａｎｃｒｅａｔｉｃ  ｉｎｊｕｒｙ  ｉｎ  Ｔｏｌｌ−ｌｉｋｅ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ−ａｎｄ  ｉｎｆｌａｍｍａｓｏｍｅ−ｍｅｄｉａｔｅｄ  ｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎ  ｖｉａ  ＧＰＲ８１−ｍｅｄｉａｔｅｄ  ｓｕｐｐｒｅｓｓｉｏｎ  ｏｆ  ｉｎｎａｔｅ  ｉｍｍｕｎｉｔｙ．Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌｏｇｙ，１４６，１７６３−１７７４．
１６８．Ｈｏｒｉｎｏｕｃｈｉ，Ｔ．，Ｔｅｒａｄａ，Ｋ．，Ｈｉｇａｓｈｉ，Ｔ．＆Ｍｉｗａ，Ｓ．（２０１３）Ｅｎｄｏｔｈｅｌｉｎ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ｓｉｇｎａｌｌｉｎｇ：ｎｅｗ  ｉｎｓｉｇｈｔ  ｉｎｔｏ  ｉｔｓ  ｒｅｇｕｌａｔｏｒｙ  ｍｅｃｈａｎｉｓｍｓ．Ｊ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌ  Ｓｃｉ，１２３，８５−１０１．
１６９．Ｈｏｒｎｅ，Ｋ．＆Ｗｏｏｌｌｅｙ，Ｉ．Ｊ．（２００９）Ｓｈｅｄｄｉｎｇ  ｌｉｇｈｔ  ｏｎ  ＤＡＲＣ：ｔｈｅ  ｒｏｌｅ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｄｕｆｆｙ  ａｎｔｉｇｅｎ／ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ｆｏｒ  ｃｈｅｍｏｋｉｎｅｓ  ｉｎ  ｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎ，ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ  ａｎｄ  ｍａｌｉｇｎａｎｃｙ．Ｉｎｆｌａｍｍ  Ｒｅｓ，５８，４３１−４３５．１６７．Ｈｏｒｔｏｎ，Ｊ．，Ｙａｍａｍｏｔｏ，Ｓ．＆Ｂｒｙａｎｔ−Ｇｒｅｅｎｗｏｏｄ，Ｇ．（２０１２）Ｒｅｌａｘｉｎ  ａｕｇｍｅｎｔｓ  ｔｈｅ  ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ  ＩＬ６  ｒｅｓｐｏｎｓｅ  ｉｎ  ｔｈｅ  ｃｈｏｒｉｏｄｅｃｉｄｕａ．Ｐｌａｃｅｎｔａ，３３，３９９−４０７．
１７０．Ｈｓｕ，Ｓ．Ｙ．，Ｎａｋａｂａｙａｓｈｉ，Ｋ．，Ｎｉｓｈｉ，Ｓ．，Ｋｕｍａｇａｉ，Ｊ．，Ｋｕｄｏ，Ｍ．，Ｓｈｅｒｗｏｏｄ，Ｏ．Ｄ．＆Ｈｓｕｅｈ，Ａ．Ｊ．（２００２）Ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｏｒｐｈａｎ  ｒｅｃｅｐｔｏｒｓ  ｂｙ  ｔｈｅ  ｈｏｒｍｏｎｅ  ｒｅｌａｘｉｎ．Ｓｃｉｅｎｃｅ，２９５，６７１−６７４．
１７１．Ｉｃｈｉｍｏｎｊｉ，Ｉ．，Ｔｏｍｕｒａ，Ｈ．，Ｍｏｇｉ，Ｃ．，Ｓａｔｏ，Ｋ．，Ａｏｋｉ，Ｈ．，Ｈｉｓａｄａ，Ｔ．，Ｄｏｂａｓｈｉ，Ｋ．，Ｉｓｈｉｚｕｋａ，Ｔ．，Ｍｏｒｉ，Ｍ．＆Ｏｋａｊｉｍａ，Ｆ．（２０１０）Ｅｘｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒ  ａｃｉｄｉｆｉｃａｔｉｏｎ  ｓｔｉｍｕｌａｔｅｓ  ＩＬ−６  ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ  ａｎｄ  Ｃａ２＋  ｍｏｂｉｌｉｚａｔｉｏｎ  ｔｈｒｏｕｇｈ  ｐｒｏｔｏｎ−ｓｅｎｓｉｎｇ  ＯＧＲ１  ｒｅｃｅｐｔｏｒｓ  ｉｎ  ｈｕｍａｎ  ａｉｒｗａｙ  ｓｍｏｏｔｈ  ｍｕｓｃｌｅ  ｃｅｌｌｓ．Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｐｈｙｓｉｏｌｏｇｙ−Ｌｕｎｇ  Ｃｅｌｌｕｌａｒ  ａｎｄ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｐｈｙｓｉｏｌｏｇｙ，２９９，Ｌ５６７−Ｌ５７７．
１７２．Ｉｇｎａｔｏｖ，Ａ．，Ｒｏｂｅｒｔ，Ｊ．，Ｇｒｅｇｏｒｙ‐Ｅｖａｎｓ，Ｃ．＆Ｓｃｈａｌｌｅｒ，Ｈ．（２００６）ＲＡＮＴＥＳ  ｓｔｉｍｕｌａｔｅｓ  Ｃａ２＋  ｍｏｂｉｌｉｚａｔｉｏｎ  ａｎｄ  ｉｎｏｓｉｔｏｌ  ｔｒｉｓｐｈｏｓｐｈａｔｅ（ＩＰ３）ｆｏｒｍａｔｉｏｎ  ｉｎ  ｃｅｌｌｓ  ｔｒａｎｓｆｅｃｔｅｄ  ｗｉｔｈ  Ｇ  ｐｒｏｔｅｉｎ‐ｃｏｕｐｌｅｄ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ７５．Ｂｒｉｔｉｓｈ  ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ，１４９，４９０−４９７．
１７３．Ｉｍｐｒｏｔａ，Ｇ．，Ｃａｒｐｉｎｏ，Ｆ．，Ｐｅｔｒｏｚｚａ，Ｖ．，Ｇｕｇｌｉｅｔｔａ，Ａ．，Ｔａｂａｃｃｏ，Ａ．＆Ｂｒｏｃｃａｒｄｏ，Ｍ．（２００３）Ｃｅｎｔｒａｌ  ｅｆｆｅｃｔｓ  ｏｆ  ｓｅｌｅｃｔｉｖｅ  ＮＫ  １  ａｎｄ  ＮＫ  ３  ｔａｃｈｙｋｉｎｉｎ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ａｇｏｎｉｓｔｓ  ｏｎ  ｔｗｏ  ｍｏｄｅｌｓ  ｏｆ  ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌｌｙ−ｉｎｄｕｃｅｄ  ｃｏｌｉｔｉｓ  ｉｎ  ｒａｔｓ．Ｐｅｐｔｉｄｅｓ，２４，９０３−９１１．
１７４．Ｉｎｂｅ，Ｈ．，Ｗａｔａｎａｂｅ，Ｓ．，Ｍｉｙａｗａｋｉ，Ｍ．，Ｔａｎａｂｅ，Ｅ．＆Ｅｎｃｉｎａｓ，Ｊ．Ａ．（２００４）Ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ  ａｎｄ  ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ  ｏｆ  ａ  ｃｅｌｌ−ｓｕｒｆａｃｅ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ，Ｐ２Ｙ１５，ｆｏｒ  ＡＭＰ  ａｎｄ  ａｄｅｎｏｓｉｎｅ．Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，２７９，１９７９０−１９７９９．
１７５．Ｉｒｕｋａｙａｍａ−Ｔｏｍｏｂｅ，Ｙ．，Ｔａｎａｋａ，Ｈ．，Ｙｏｋｏｍｉｚｏ，Ｔ．，Ｈａｓｈｉｄａｔｅ−Ｙｏｓｈｉｄａ，Ｔ．，Ｙａｎａｇｉｓａｗａ，Ｍ．＆Ｓａｋｕｒａｉ，Ｔ．（２００９）Ａｒｏｍａｔｉｃ  Ｄ−ａｍｉｎｏ  ａｃｉｄｓ  ａｃｔ  ａｓ  ｃｈｅｍｏａｔｔｒａｃｔａｎｔ  ｆａｃｔｏｒｓ  ｆｏｒ  ｈｕｍａｎ  ｌｅｕｋｏｃｙｔｅｓ  ｔｈｒｏｕｇｈ  ａ  Ｇ  ｐｒｏｔｅｉｎ−ｃｏｕｐｌｅｄ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ，ＧＰＲ１０９Ｂ．Ｐｒｏｃｅｅｄｉｎｇｓ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ａｃａｄｅｍｙ  ｏｆ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，１０６，３９３０−３９３４．
１７６．Ｉｓｅｒｉ，Ｓ．Ｏｅ．，Ｓｅｎｅｒ，Ｇ．，Ｓａｇｌａｍ，Ｂ．，Ｇｅｄｉｋ，Ｎ．，Ｅｒｃａｎ，Ｆ．＆Ｙｅｇｅｎ，Ｂ．Ｃ．（２００５）Ｏｘｙｔｏｃｉｎ  ａｍｅｌｉｏｒａｔｅｓ  ｏｘｉｄａｔｉｖｅ  ｃｏｌｏｎｉｃ  ｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎ  ｂｙ  ａ  ｎｅｕｔｒｏｐｈｉｌ−ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ  ｍｅｃｈａｎｉｓｍ．Ｐｅｐｔｉｄｅｓ，２６，４８３−４９１．
１７７．Ｉｓｈｉｈａｒａ，Ｈ．，Ｃｏｎｎｏｌｌｙ，Ａ．Ｊ．，Ｚｅｎｇ，Ｄ．，Ｋａｈｎ，Ｍ．Ｌ．，Ｚｈｅｎｇ，Ｙ．Ｗ．，Ｔｉｍｍｏｎｓ，Ｃ．，Ｔｒａｍ，Ｔ．＆Ｃｏｕｇｈｌｉｎ，Ｓ．Ｒ．（１９９７）Ｐｒｏｔｅａｓｅ−ａｃｔｉｖａｔｅｄ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ３  ｉｓ  ａ  ｓｅｃｏｎｄ  ｔｈｒｏｍｂｉｎ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ｉｎ  ｈｕｍａｎｓ．
１７８．Ｉｔｏ，Ｙ．，Ｂａｎｎｏ，Ｒ．，Ｓｈｉｂａｔａ，Ｍ．，Ａｄａｃｈｉ，Ｋ．，Ｈａｇｉｍｏｔｏ，Ｓ．，Ｈａｇｉｗａｒａ，Ｄ．，Ｏｚａｗａ，Ｙ．，Ｇｏｔｏ，Ｍ．，Ｓｕｇａ，Ｈ．＆Ｓｕｇｉｍｕｒａ，Ｙ．（２０１３）ＧＡＢＡ  ｔｙｐｅ  Ｂ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ｓｉｇｎａｌｌｉｎｇ  ｉｎ  ｐｒｏｏｐｉｏｍｅｌａｎｏｃｏｒｔｉｎ  ｎｅｕｒｏｎｓ  ｐｒｏｔｅｃｔｓ  ａｇａｉｎｓｔ  ｏｂｅｓｉｔｙ，ｉｎｓｕｌｉｎ  ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ，ａｎｄ  ｈｙｐｏｔｈａｌａｍｉｃ  ｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎ  ｉｎ  ｍａｌｅ  ｍｉｃｅ  ｏｎ  ａ  ｈｉｇｈ−ｆａｔ  ｄｉｅｔ．Ｔｈｅ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｎｅｕｒｏｓｃｉｅｎｃｅ，３３，１７１６６−１７１７３．
１７９．Ｉｗａｓａ，Ｔ．，Ｍａｔｓｕｚａｋｉ，Ｔ．，Ｔｕｎｇａｌａｇｓｕｖｄ，Ａ．，Ｍｕｎｋｈｚａｙａ，Ｍ．，Ｋａｗａｍｉ，Ｔ．，Ｎｉｋｉ，Ｈ．，Ｋａｔｏ，Ｔ．，Ｋｕｗａｈａｒａ，Ａ．，Ｕｅｍｕｒａ，Ｈ．，Ｙａｓｕｉ，Ｔ．＆Ｉｒａｈａｒａ，Ｍ．（２０１４）Ｈｙｐｏｔｈａｌａｍｉｃ  Ｋｉｓｓ１  ａｎｄ  ＲＦＲＰ  ｇｅｎｅ  ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｓ  ａｒｅ  ｃｈａｎｇｅｄ  ｂｙ  ａ  ｈｉｇｈ  ｄｏｓｅ  ｏｆ  ｌｉｐｏｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅ  ｉｎ  ｆｅｍａｌｅ  ｒａｔｓ．Ｈｏｒｍｏｎｅｓ  ａｎｄ  Ｂｅｈａｖｉｏｒ，６６，３０９−３１６．
１８０．Ｉｚｅｂｏｕｄ，Ｃ．Ａ．，Ｖｅｒｍｅｕｌｅｎ，Ｒ．Ｍ．，Ｚｗａｒｔ，Ａ．，Ｖｏｓｓ，Ｈ．−Ｐ．，ｖａｎ  Ｍｉｅｒｔ，Ａ．Ｓ．Ｊ．Ｐ．Ａ．Ｍ．＆Ｗｉｔｋａｍｐ，Ｒ．Ｆ．（２０００）Ｓｔｅｒｅｏｓｅｌｅｃｔｉｖｉｔｙ  ａｔ  ｔｈｅ  β２−ａｄｒｅｎｏｃｅｐｔｏｒ  ｏｎ  ｍａｃｒｏｐｈａｇｅｓ  ｉｓ  ａ  ｍａｊｏｒ  ｄｅｔｅｒｍｉｎａｎｔ  ｏｆ  ｔｈｅ  ａｎｔｉ−ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ  ｅｆｆｅｃｔｓ  ｏｆ  β２−ａｇｏｎｉｓｔｓ．Ｎａｕｎｙｎ−Ｓｃｈｍｉｅｄｅｂｅｒｇ’ｓ  Ａｒｃｈｉｖｅｓ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ，３６２，１８４−１８９．
１８１．Ｊａｃｏｂｙ，Ｄ．Ｓ．，ａｎｄ  Ｒａｄｅｒ，Ｄ．Ｊ．（２００３）Ｒｅｎｉｎ−ａｎｇｉｏｔｅｎｓｉｎ  ｓｙｓｔｅｍ  ａｎｄ  ａｔｈｅｒｏｔｈｒｏｍｂｏｔｉｃ  ｄｉｓｅａｓｅ：ｆｒｏｍ  ｇｅｎｅｓ  ｔｏ  ｔｒｅａｔｍｅｎｔ．Ａｒｃｈ  Ｉｎｔｅｒｎ  Ｍｅｄ，１６３：１１５５−６４．
１８２．Ｊａｅｇｅｒ，Ｗ．Ｃ．，Ａｒｍｓｔｒｏｎｇ，Ｓ．Ｐ．，Ｈｉｌｌ，Ｓ．Ｊ．ａｎｄ  Ｐｆｌｅｇｅｒ，Ｋ．Ｄ．Ｇ．，Ｂｉｏｐｈｙｓｉｃａｌ  ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ  ｏｆ  ｄｉｖｅｒｓｉｔｙ  ａｎｄ  ｂｉａｓ  ｉｎ  ＧＰＣＲ  ｆｕｎｃｔｉｏｎ．Ｆｒｏｎｔ  Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ，２０１４，５：２６．
１８３．Ｊａｆｆｒｅ，Ｆ．，Ｂｏｎｎｉｎ，Ｐ．，Ｃａｌｌｅｂｅｒｔ，Ｊ．，Ｄｅｂｂａｂｉ，Ｈ．，Ｓｅｔｏｌａ，Ｖ．，Ｄｏｌｙ，Ｓ．，Ｍｏｎａｓｓｉｅｒ，Ｌ．，Ｍｅｔｔａｕｅｒ，Ｂ．，Ｂｌａｘａｌｌ，Ｂ．Ｃ．＆Ｌａｕｎａｙ，Ｊ．−Ｍ．（２００９）Ｓｅｒｏｔｏｎｉｎ  ａｎｄ  ａｎｇｉｏｔｅｎｓｉｎ  ｒｅｃｅｐｔｏｒｓ  ｉｎ  ｃａｒｄｉａｃ  ｆｉｂｒｏｂｌａｓｔｓ  ｃｏｒｅｇｕｌａｔｅ  ａｄｒｅｎｅｒｇｉｃ−ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ  ｃａｒｄｉａｃ  ｈｙｐｅｒｔｒｏｐｈｙ．Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ  ｒｅｓｅａｒｃｈ，１０４，１１３−１２３．
１８４．Ｊａｈｎｓｅｎ，Ｊ．，Ｆａｌｃｈ，Ｊ．，Ｍｏｗｉｎｃｋｅｌ，Ｐ．＆Ａａｄｌａｎｄ，Ｅ．（２００２）Ｖｉｔａｍｉｎ  Ｄ  ｓｔａｔｕｓ，ｐａｒａｔｈｙｒｏｉｄ  ｈｏｒｍｏｎｅ  ａｎｄ  ｂｏｎｅ  ｍｉｎｅｒａｌ  ｄｅｎｓｉｔｙ  ｉｎ  ｐａｔｉｅｎｔｓ  ｗｉｔｈ  ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ  ｂｏｗｅｌ  ｄｉｓｅａｓｅ．Ｓｃａｎｄｉｎａｖｉａｎ  ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌｏｇｙ，３７，１９２−１９９．
１８５．Ｊｅｎｎｅ，Ｃ．Ｎ．，Ｅｎｄｅｒｓ，Ａ．，Ｒｉｖｅｒａ，Ｒ．，Ｗａｔｓｏｎ，Ｓ．Ｒ．，Ｂａｎｋｏｖｉｃｈ，Ａ．Ｊ．，Ｐｅｒｅｉｒａ，Ｊ．Ｐ．，Ｘｕ，Ｙ．，Ｒｏｏｔｓ，Ｃ．Ｍ．，Ｂｅｉｌｋｅ，Ｊ．Ｎ．＆Ｂａｎｅｒｊｅｅ，Ａ．（２００９）Ｔ−ｂｅｔ−ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ  Ｓ１Ｐ５  ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  ｉｎ  ＮＫ  ｃｅｌｌｓ  ｐｒｏｍｏｔｅｓ  ｅｇｒｅｓｓ  ｆｒｏｍ  ｌｙｍｐｈ  ｎｏｄｅｓ  ａｎｄ  ｂｏｎｅ  ｍａｒｒｏｗ．Ｔｈｅ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ  ｍｅｄｉｃｉｎｅ，２０６，２４６９−２４８１．
１８６．Ｊｉａ，Ｒ．−Ｚ．，Ｚｈａｎｇ，Ｘ．，Ｈｕ，Ｐ．，Ｌｉｕ，Ｘ．−Ｍ．，Ｈｕａ，Ｘ．−Ｄ．，Ｗａｎｇ，Ｘ．＆Ｄｉｎｇ，Ｈ．−Ｊ．（２０１２）Ｓｃｒｅｅｎｉｎｇ  ｆｏｒ  ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｌ  ｍｅｔｈｙｌａｔｉｏｎ  ｓｔａｔｕｓ  ｉｎ  ｈｕｍａｎ  ｐｌａｃｅｎｔａ  ｉｎ  ｐｒｅｅｃｌａｍｐｓｉａ  ｕｓｉｎｇ  ａ  ＣｐＧ  ｉｓｌａｎｄ  ｐｌｕｓ  ｐｒｏｍｏｔｅｒ  ｍｉｃｒｏａｒｒａｙ．Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  ｍｅｄｉｃｉｎｅ，３０，１３３．
１８７．Ｊｉｍｅｎｅｚ−Ａｎｄｒａｄｅ，Ｊ．Ｍ．，Ｚｈｏｕ，Ｓ．，Ｄｕ，Ｊ．，Ｙａｍａｎｉ，Ａ．，Ｇｒａｄｙ，Ｊ．Ｊ．，Ｃａｓｔａｎｅｄａ−Ｈｅｒｎａｎｄｅｚ，Ｇ．＆Ｃａｒｌｔｏｎ，Ｓ．Ｍ．（２００４）Ｐｒｏ−ｎｏｃｉｃｅｐｔｉｖｅ  ｒｏｌｅ  ｏｆ  ｐｅｒｉｐｈｅｒａｌ  ｇａｌａｎｉｎ  ｉｎ  ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ  ｐａｉｎ．Ｐａｉｎ，１１０，１０−２１．
１８８．Ｊｏｈｎｓ，Ｄ．Ｇ．，Ａｏ，Ｚ．，Ｎａｓｅｌｓｋｙ，Ｄ．，Ｈｅｒｏｌｄ，Ｃ．Ｌ．，Ｍａｎｉｓｃａｌｃｏ，Ｋ．，Ｓａｒｏｖ−Ｂｌａｔ，Ｌ．，Ｓｔｅｐｌｅｗｓｋｉ，Ｋ．，Ａｉｙａｒ，Ｎ．＆Ｄｏｕｇｌａｓ，Ｓ．Ａ．（２００４）Ｕｒｏｔｅｎｓｉｎ−ＩＩ−ｍｅｄｉａｔｅｄ  ｃａｒｄｉｏｍｙｏｃｙｔｅ  ｈｙｐｅｒｔｒｏｐｈｙ：ｅｆｆｅｃｔ  ｏｆ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ａｎｔａｇｏｎｉｓｍ  ａｎｄ  ｒｏｌｅ  ｏｆ  ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ  ｍｅｄｉａｔｏｒｓ．Ｎａｕｎｙｎ−Ｓｃｈｍｉｅｄｅｂｅｒｇ’ｓ  ａｒｃｈｉｖｅｓ  ｏｆ  ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ，３７０，２３８−２５０．
１８９．Ｊｏｓｓａｒｔ，Ｃ．，Ｍｕｌｕｍｂａ，Ｍ．，Ｇｒａｎａｔａ，Ｒ．，Ｇａｌｌｏ，Ｄ．，Ｇｈｉｇｏ，Ｅ．，Ｍａｒｌｅａｕ，Ｓ．，Ｓｅｒｖａｎｔ，Ｍ．Ｊ．＆Ｏｎｇ，Ｈ．（２０１３）Ｐｙｒｏｇｌｕｔａｍｙｌａｔｅｄ  ＲＦ−ａｍｉｄｅ  ｐｅｐｔｉｄｅ（ＱＲＦＰ）ｇｅｎｅ  ｉｓ  ｒｅｇｕｌａｔｅｄ  ｂｙ  ｍｅｔａｂｏｌｉｃ  ｅｎｄｏｔｏｘｅｍｉａ．Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌｏｇｙ，２８，６５−７９．
１９０．Ｊｕｌｅｓ  Ｊ，Ｍａｉｇｕｅｌ  Ｄ，Ｈｕｄｓｏｎ  ＢＩ，Ａｌｔｅｒｎａｔｉｖｅ  Ｓｐｌｉｃｉｎｇ  ｏｆ  ｔｈｅ  ＲＡＧＥ  Ｃｙｔｏｐｌａｓｍｉｃ  Ｄｏｍａｉｎ  Ｒｅｇｕｌａｔｅｓ  Ｃｅｌｌ  Ｓｉｇｎａｌｌｉｎｇ  ａｎｄ  Ｆｕｎｃｔｉｏｎ．ＰＬｏＳ  ＯＮＥ，２０１３，８：ｅ７８２６７．
１９１．Ｊｕｒｉｓｉｃ，Ｇ．，Ｓｕｎｄｂｅｒｇ，Ｊ．，Ｂｌｅｉｃｈ，Ａ．，Ｌｅｉｔｅｒ，Ｅ．，Ｂｒｏｍａｎ，Ｋ．，Ｂｕｅｃｈｌｅｒ，Ｇ．，Ａｌｌｅｙ，Ｌ．，Ｖｅｓｔｗｅｂｅｒ，Ｄ．＆Ｄｅｔｍａｒ，Ｍ．（２０１０）Ｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅ  ｌｙｍｐｈａｔｉｃ  ｖｅｓｓｅｌ  ｔｒａｉｔ  ａｎａｌｙｓｉｓ  ｓｕｇｇｅｓｔｓ  Ｖｃａｍ１  ａｓ  ｃａｎｄｉｄａｔｅ  ｍｏｄｉｆｉｅｒ  ｇｅｎｅ  ｏｆ  ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ  ｂｏｗｅｌ  ｄｉｓｅａｓｅ．Ｇｅｎｅｓ  ａｎｄ  ｉｍｍｕｎｉｔｙ，１１，２１９−２３１．
１９２．Ｋａｂａｓｈｉｍａ，Ｋ．，Ｓａｊｉ，Ｔ．，Ｍｕｒａｔａ，Ｔ．，Ｎａｇａｍａｃｈｉ，Ｍ．，Ｍａｔｓｕｏｋａ，Ｔ．，Ｓｅｇｉ，Ｅ．，Ｔｓｕｂｏｉ，Ｋ．，Ｓｕｇｉｍｏｔｏ，Ｙ．，Ｋｏｂａｙａｓｈｉ，Ｔ．＆Ｍｉｙａｃｈｉ，Ｙ．（２００２）Ｔｈｅ  ｐｒｏｓｔａｇｌａｎｄｉｎ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ＥＰ４  ｓｕｐｐｒｅｓｓｅｓ  ｃｏｌｉｔｉｓ，ｍｕｃｏｓａｌ  ｄａｍａｇｅ  ａｎｄ  ＣＤ４  ｃｅｌｌ  ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ  ｉｎ  ｔｈｅ  ｇｕｔ．Ｔｈｅ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  ｃｌｉｎｉｃａｌ  ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｉｏｎ，１０９，８８３−８９３．
１９３．Ｋａｂｌｅ，Ｊ．Ｗ．，Ｍｕｒｒｉｎ，Ｌ．Ｃ．＆Ｂｙｌｕｎｄ，Ｄ．Ｂ．（２０００）Ｉｎ  ｖｉｖｏ  ｇｅｎｅ  ｍｏｄｉｆｉｃａｔｉｏｎ  ｅｌｕｃｉｄａｔｅｓ  ｓｕｂｔｙｐｅ−ｓｐｅｃｉｆｉｃ  ｆｕｎｃｔｉｏｎｓ  ｏｆ  ａｌｐｈａ（２）−ａｄｒｅｎｅｒｇｉｃ  ｒｅｃｅｐｔｏｒｓ．Ｊ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌ  Ｅｘｐ  Ｔｈｅｒ，２９３，１−７．
１９４．Ｋａｈｎ，Ｍ．Ｌ．，Ｙ．Ｗ．Ｚｈｅｎｇ，Ｗ．Ｈｕａｎｇ，Ｖ．Ｂｉｇｏｒｎｉａ，Ｄ．Ｚｅｎｇ，ａｎｄ  Ｓ．Ｍｏｆｆ．Ａ  ｄｕａｌ  ｔｈｒｏｍｂｉｎ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ｓｙｓｔｅｍ  ｆｏｒ  ｐｌａｔｅｌｅｔ  ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ．Ｎａｔｕｒｅ，１９９８，３９４：６９０−４．
１９５．Ｋａｌｂｅ，Ｂ．，Ｋｎｏｂｌｏｃｈ，Ｊ．，Ｓｃｈｕｌｚ，Ｖ．Ｍ．，Ｗｅｃｋｅｒ，Ｃ．，Ｓｃｈｌｉｍｍ，Ｍ．，Ｓｃｈｏｌｚ，Ｐ．，Ｊａｎｓｅｎ，Ｆ．，Ｓｔｏｅｌｂｅｎ，Ｅ．，Ｐｈｉｌｉｐｐｏｕ，Ｓ．，Ｈｅｃｋｅｒ，Ｅ．，Ｌｕｅｂｂｅｒｔ，Ｈ．，Ｋｏｃｈ，Ａ．，Ｈａｔｔ，Ｈ．＆Ｏｓｔｅｒｌｏｈ，Ｓ．（２０１６）Ｏｌｆａｃｔｏｒｙ  Ｒｅｃｅｐｔｏｒｓ  Ｍｏｄｕｌａｔｅ  Ｐｈｙｓｉｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｐｒｏｃｅｓｓｅｓ  ｉｎ  ｈｕｍａｎ  Ａｉｒｗａｙ  Ｓｍｏｏｔｈ  Ｍｕｓｃｌｅ  Ｃｅｌｌｓ．Ｆｒｏｎｔｉｅｒｓ  ｉｎ  Ｐｈｙｓｉｏｌｏｇｙ，７．
１９６．Ｋａｍｉｎｓｋｉ，Ｎ．Ｅ．Ｉｍｍｕｎｅ  ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ  ｂｙ  ｃａｎｎａｂｉｎｏｉｄ  ｃｏｍｐｏｕｎｄｓ  ｔｈｒｏｕｇｈ  ｔｈｅ  ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｃｙｃｌｉｃ  ＡＭＰ  ｓｉｇｎａｌｌｉｎｇ  ｃａｓｃａｄｅ  ａｎｄ  ａｌｔｅｒｅｄ  ｇｅｎｅ  ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ．Ｂｉｏｃｈｅｍ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌ，１９９６，５２：１１３３−４０．
１９７．Ｋａｎａｚａｗａ，Ｍ．，Ｗａｔａｎａｂｅ，Ｓ．，Ｔａｎａ，Ｃ．，Ｋｏｍｕｒｏ，Ｈ．，Ａｏｋｉ，Ｍ．＆Ｆｕｋｕｄｏ，Ｓ．（２０１１）Ｅｆｆｅｃｔ  ｏｆ  ５‐ＨＴ４  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ａｇｏｎｉｓｔ  ｍｏｓａｐｒｉｄｅ  ｃｉｔｒａｔｅ  ｏｎ  ｒｅｃｔｏｓｉｇｍｏｉｄ  ｓｅｎｓｏｒｉｍｏｔｏｒ  ｆｕｎｃｔｉｏｎ  ｉｎ  ｐａｔｉｅｎｔｓ  ｗｉｔｈ  ｉｒｒｉｔａｂｌｅ  ｂｏｗｅｌ  ｓｙｎｄｒｏｍｅ．Ｎｅｕｒｏｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌｏｇｙ＆Ｍｏｔｉｌｉｔｙ，２３，７５４−ｅ３３２．
１９８．Ｋａｎｇ，Ｙ．Ｓ  ｅｔ  ａｌ．（２０１０）ＣＣＲ２  ａｎｔａｇｏｎｉｓｍ  ｉｍｐｒｏｖｅｓ  ｉｎｓｕｌｉｎ  ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ，ｌｉｐｉｄ  ｍｅｔａｂｏｌｉｓｍ，ａｎｄ  ｄｉａｂｅｔｉｃ  ｎｅｐｈｒｏｐａｔｈｙ  ｉｎ  ｔｙｐｅ  ２  ｄｉａｂｅｔｉｃ  ｍｉｃｅ．Ｋｉｄｎｅｙ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ，７８：８８３−８９４．
１９９．Ｋａｗａｍａｔａ，Ｙ．，Ｆｕｊｉｉ，Ｒ．，Ｈｏｓｏｙａ，Ｍ．，Ｈａｒａｄａ，Ｍ．，Ｙｏｓｈｉｄａ，Ｈ．，Ｍｉｗａ，Ｍ．，Ｆｕｋｕｓｕｍｉ，Ｓ．，Ｈａｂａｔａ，Ｙ．，Ｉｔｏｈ，Ｔ．＆Ｓｈｉｎｔａｎｉ，Ｙ．（２００３）ＡＧ  ｐｒｏｔｅｉｎ−ｃｏｕｐｌｅｄ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ｒｅｓｐｏｎｓｉｖｅ  ｔｏ  ｂｉｌｅ  ａｃｉｄｓ．Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，２７８，９４３５−９４４０．
２００．Ｋａｚｅｍｉａｎ，Ｐ．，Ｋａｚｅｍｉ−Ｂａｊｅｓｔａｎｉ，Ｓ．Ｍ．，Ａｌｈｅｒｂｉｓｈ，Ａ．，Ｓｔｅｅｄ，Ｊ．＆Ｏｕｄｉｔ，Ｇ．Ｙ．（２０１２）Ｔｈｅ  ｕｓｅ  ｏｆ  ω−３  ｐｏｌｙ−ｕｎｓａｔｕｒａｔｅｄ  ｆａｔｔｙ  ａｃｉｄｓ  ｉｎ  ｈｅａｒｔ  ｆａｉｌｕｒｅ：ａ  ｐｒｅｆｅｒｅｎｔｉａｌ  ｒｏｌｅ  ｉｎ  ｐａｔｉｅｎｔｓ  ｗｉｔｈ  ｄｉａｂｅｔｅｓ．Ｃａｒｄｉｏｖａｓｃｕｌａｒ  ｄｒｕｇｓ  ａｎｄ  ｔｈｅｒａｐｙ，２６，３１１−３２０．
２０１．Ｋｅｅｒｍａｎｎ，Ｍ．，Ｋｏｋｓ，Ｓ．，Ｒｅｉｍａｎｎ，Ｅ．，Ｐｒａｎｓ，Ｅ．，Ａｂｒａｍ，Ｋ．＆Ｋｉｎｇｏ，Ｋ．（２０１５）Ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎａｌ  ｌａｎｄｓｃａｐｅ  ｏｆ  ｐｓｏｒｉａｓｉｓ  ｉｄｅｎｔｉｆｉｅｓ  ｔｈｅ  ｉｎｖｏｌｖｅｍｅｎｔ  ｏｆ  ＩＬ３６  ａｎｄ  ＩＬ３６ＲＮ．ＢＭＣ  ｇｅｎｏｍｉｃｓ，１６，１．
２０２．Ｋｈａｓａｒ，Ｓ．Ｇ．，Ｍ．Ｓ．Ｇｏｌｄ，ａｎｄ  Ｊ．Ｄ．Ｌｅｖｉｎｅ．Ａ  ｔｅｔｒｏｄｏｔｏｘｉｎ−ｒｅｓｉｓｔａｎｔ  ｓｏｄｉｕｍ  ｃｕｒｒｅｎｔ  ｍｅｄｉａｔｅｓ  ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ  ｐａｉｎ  ｉｎ  ｔｈｅ  ｒａｔ．Ｎｅｕｒｏｓｃｉ  Ｌｅｔｔ，１９９８，２５６：１７−２０．
２０３．Ｋｉｍ，Ｓ．Ｖ．，Ｘｉａｎｇ，Ｗ．Ｖ．，Ｋｗａｋ，Ｃ．，Ｙａｎｇ，Ｙ．，Ｌｉｎ，Ｘ．Ｗ．，Ｏｔａ，Ｍ．，Ｓａｒｐｅｌ，Ｕ．，Ｒｉｆｋｉｎ，Ｄ．Ｂ．，Ｘｕ，Ｒ．＆Ｌｉｔｔｍａｎ，Ｄ．Ｒ．（２０１３）ＧＰＲ１５−ｍｅｄｉａｔｅｄ  ｈｏｍｉｎｇ  ｃｏｎｔｒｏｌｓ  ｉｍｍｕｎｅ  ｈｏｍｅｏｓｔａｓｉｓ  ｉｎ  ｔｈｅ  ｌａｒｇｅ  ｉｎｔｅｓｔｉｎｅ  ｍｕｃｏｓａ．Ｓｃｉｅｎｃｅ，３４０，１４５６−１４５９．
２０４．Ｋｉｍ，Ｙ．−Ｊ．，Ｓａｎｏ，Ｔ．，Ｎａｂｅｔａｎｉ，Ｔ．，Ａｓａｎｏ，Ｙ．＆Ｈｉｒａｂａｙａｓｈｉ，Ｙ．（２０１２）ＧＰＲＣ５Ｂ  ａｃｔｉｖａｔｅｓ  ｏｂｅｓｉｔｙ−ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ  ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ  ｓｉｇｎａｌｌｉｎｇ  ｉｎ  ａｄｉｐｏｃｙｔｅｓ．Ｓｃｉ．Ｓｉｇｎａｌ．，５，ｒａ８５−ｒａ８５．
２０５．Ｋｉｔａｇａｗａ  Ｋ  ｅｔ  ａｌ．（２００４）Ｂｌｏｃｋａｄｅ  ｏｆ  ＣＣＲ２  Ａｍｅｌｉｏｒａｔｅｓ  Ｐｒｏｇｒｅｓｓｉｖｅ  Ｆｉｂｒｏｓｉｓ  ｉｎ  Ｋｉｄｎｅｙ，Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｐａｔｈｏｌｏｇｙ，１６５：２３７−２４６．
２０６．Ｋｎｏｗｌｅｓ，Ｊ．Ｗ．，ｅｔ  ａｌ．（２０００）Ｅｎｈａｎｃｅｄ  ａｔｈｅｒｏｓｃｌｅｒｏｓｉｓ  ａｎｄ  ｋｉｄｎｅｙ  ｄｙｓｆｕｎｃｔｉｏｎ  ｉｎ  ｅＮＯＳ（−／−）ＡｐｏＥ（−／−）ｍｉｃｅ  ａｒｅ  ａｍｅｌｉｏｒａｔｅｄ  ｂｙ  ｅｎａｌａｐｒｉｌ  ｔｒｅａｔｍｅｎｔ．Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ｉｎｖｅｓｔ，１０５：４５１−４５８．
２０７．Ｋｏｄｅｒａ，Ｒ．，Ｓｈｉｋａｔａ，Ｋ．，Ｋａｔａｏｋａ，Ｈ．，Ｔａｋａｔｓｕｋａ，Ｔ．，Ｍｉｙａｍｏｔｏ，Ｓ．，Ｓａｓａｋｉ，Ｍ．，Ｋａｊｉｔａｎｉ，Ｎ．，Ｎｉｓｈｉｓｈｉｔａ，Ｓ．，Ｓａｒａｉ，Ｋ．＆Ｈｉｒｏｔａ，Ｄ．（２０１１）Ｇｌｕｃａｇｏｎ−ｌｉｋｅ  ｐｅｐｔｉｄｅ−１  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ａｇｏｎｉｓｔ  ａｍｅｌｉｏｒａｔｅｓ  ｒｅｎａｌ  ｉｎｊｕｒｙ  ｔｈｒｏｕｇｈ  ｉｔｓ  ａｎｔｉ−ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ  ａｃｔｉｏｎ  ｗｉｔｈｏｕｔ  ｌｏｗｅｒｉｎｇ  ｂｌｏｏｄ  ｇｌｕｃｏｓｅ  ｌｅｖｅｌ  ｉｎ  ａ  ｒａｔ  ｍｏｄｅｌ  ｏｆ  ｔｙｐｅ  １  ｄｉａｂｅｔｅｓ．Ｄｉａｂｅｔｏｌｏｇｉａ，５４，９６５−９７８．
２０８．Ｋｏｎｏｎｉｋｈｉｎ，Ａ．，Ｆｅｄｏｒｃｈｅｎｋｏ，Ｋ．Ｙ．，Ｒｙａｂｏｋｏｎ，Ａ．，Ｓｔａｒｏｄｕｂｔｓｅｖａ，Ｎ．，Ｐｏｐｏｖ，Ｉ．，Ｚａｖｉａｌｏｖａ，Ｍ．，Ａｎａｅｖ，Ｅ．，Ｃｈｕｃｈａｌｉｎ，Ａ．，Ｖａｒｆｏｌｏｍｅｅｖ，Ｓ．＆Ｎｉｋｏｌａｅｖ，Ｅ．（２０１６）Ｐｒｏｔｅｏｍｉｃ  ａｎａｌｙｓｉｓ  ｏｆ  ｅｘｈａｌｅｄ  ｂｒｅａｔｈ  ｃｏｎｄｅｎｓａｔｅ  ｆｏｒ  ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ  ｏｆ  ｒｅｓｐｉｒａｔｏｒｙ  ｓｙｓｔｅｍ  ｄｉｓｅａｓｅｓ．Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ（Ｍｏｓｃｏｗ）Ｓｕｐｐｌｅｍｅｎｔ  Ｓｅｒｉｅｓ  Ｂ：Ｂｉｏｍｅｄｉｃａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，１０，２３０−２３４．
２０９．Ｋｏｔｔｙａｎ，Ｌ．Ｃ．，Ｃｏｌｌｉｅｒ，Ａ．Ｒ．，Ｃａｏ，Ｋ．Ｈ．，Ｎｉｅｓｅ，Ｋ．Ａ．，Ｈｅｄｇｅｂｅｔｈ，Ｍ．，Ｒａｄｕ，Ｃ．Ｇ．，Ｗｉｔｔｅ，Ｏ．Ｎ．，Ｈｅｒｓｈｅｙ，Ｇ．Ｋ．Ｋ．，Ｒｏｔｈｅｎｂｅｒｇ，Ｍ．Ｅ．＆Ｚｉｍｍｅｒｍａｎｎ，Ｎ．（２００９）Ｅｏｓｉｎｏｐｈｉｌ  ｖｉａｂｉｌｉｔｙ  ｉｓ  ｉｎｃｒｅａｓｅｄ  ｂｙ  ａｃｉｄｉｃ  ｐＨ  ｉｎ  ａ  ｃＡＭＰ−ａｎｄ  ＧＰＲ６５−ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ  ｍａｎｎｅｒ．Ｂｌｏｏｄ，１１４，２７７４−２７８２．
２１０．Ｋｒｉｓｈｎａｍｏｏｒｔｈｙ，Ｓ．，Ｒｅｃｃｈｉｕｔｉ，Ａ．，Ｃｈｉａｎｇ，Ｎ．，Ｆｒｅｄｍａｎ，Ｇ．＆Ｓｅｒｈａｎ，Ｃ．Ｎ．（２０１２）Ｒｅｓｏｌｖｉｎ  Ｄ１  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ｓｔｅｒｅｏｓｅｌｅｃｔｉｖｉｔｙ  ａｎｄ  ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎ  ａｎｄ  ｐｒｏｒｅｓｏｌｖｉｎｇ  ｍｉｃｒｏＲＮＡｓ．Ｔｈｅ  Ａｍｅｒｉｃａｎ  ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  ｐａｔｈｏｌｏｇｙ，１８０，２０１８−２０２７．
２１１．Ｋｒｉｓｈｎａｍｏｏｒｔｈｙ，Ｓ．，Ｒｅｃｃｈｉｕｔｉ，Ａ．，Ｃｈｉａｎｇ，Ｎ．，Ｙａｃｏｕｂｉａｎ，Ｓ．，Ｌｅｅ，Ｃ．−Ｈ．，Ｙａｎｇ，Ｒ．，Ｐｅｔａｓｉｓ，Ｎ．Ａ．＆Ｓｅｒｈａｎ，Ｃ．Ｎ．（２０１０）Ｒｅｓｏｌｖｉｎ  Ｄ１  ｂｉｎｄｓ  ｈｕｍａｎ  ｐｈａｇｏｃｙｔｅｓ  ｗｉｔｈ  ｅｖｉｄｅｎｃｅ  ｆｏｒ  ｐｒｏｒｅｓｏｌｖｉｎｇ  ｒｅｃｅｐｔｏｒｓ．Ｐｒｏｃｅｅｄｉｎｇｓ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ａｃａｄｅｍｙ  ｏｆ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，１０７，１６６０−１６６５．
２１２．Ｋｒｕｓｅ，Ａ．Ｃ．，Ｒｉｎｇ，Ａ．Ｍ．，Ｍａｎｇｌｉｋ，Ａ．，Ｈｕ，Ｊ．，Ｈｕ，Ｋ．，Ｅｉｔｅｌ，Ｋ．，Ｈｕｂｎｅｒ，Ｈ．，Ｐａｒｄｏｎ，Ｅ．，Ｖａｌａｎｔ，Ｃ．，Ｓｅｘｔｏｎ，Ｐ．Ｍ．，Ｃｈｒｉｓｔｏｐｏｕｌｏｓ，Ａ．，Ｆｅｌｄｅｒ，Ｃ．Ｃ．，Ｇｍｅｉｎｅｒ，Ｐ．，Ｓｔｅｙａｅｒｔ，Ｊ．，Ｗｅｉｓ，Ｗ．Ｉ．，Ｇａｒｃｉａ，Ｋ．Ｃ．，Ｗｅｓｓ，Ｊ．＆Ｋｏｂｉｌｋａ，Ｂ．Ｋ．（２０１３）Ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ  ａｎｄ  ａｌｌｏｓｔｅｒｉｃ  ｍｏｄｕｌａｔｉｏｎ  ｏｆ  ａ  ｍｕｓｃａｒｉｎｉｃ  ａｃｅｔｙｌｃｈｏｌｉｎｅ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ．Ｎａｔｕｒｅ，５０４，１０１−１０６．
２１３．Ｋｕｄｕｋ，Ｓ．Ｄ．，ａｎｄ  Ｍ．Ｇ．Ｂｏｃｋ．Ｂｒａｄｙｋｉｎｉｎ  Ｂ１  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ａｎｔａｇｏｎｉｓｔｓ  ａｓ  ｎｏｖｅｌ  ａｎａｌｇｅｓｉｃｓ：ａ  ｒｅｔｒｏｓｐｅｃｔｉｖｅ  ｏｆ  ｓｅｌｅｃｔｅｄ  ｍｅｄｉｃｉｎａｌ  ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔｓ．Ｃｕｒｒ  Ｔｏｐ  Ｍｅｄ  Ｃｈｅｍ，２００８，８：１４２０−３０．
２１４．Ｋｕｆａｒｅｖａ，Ｉ．，Ｓａｌａｎｇａ，Ｃ．Ｌ．＆Ｈａｎｄｅｌ，Ｔ．Ｍ．（２０１５）Ｃｈｅｍｏｋｉｎｅ  ａｎｄ  ｃｈｅｍｏｋｉｎｅ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ  ａｎｄ  ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎｓ：ｉｍｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ  ｆｏｒ  ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ  ｓｔｒａｔｅｇｉｅｓ．Ｉｍｍｕｎｏｌ  Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌ，９３，３７２−３８３．
２１５．Ｋｕｎｉｋａｔａ，Ｔ．，Ｙａｍａｎｅ，Ｈ．，Ｓｅｇｉ，Ｅ．，Ｍａｔｓｕｏｋａ，Ｔ．，Ｓｕｇｉｍｏｔｏ，Ｙ．，Ｔａｎａｋａ，Ｓ．，Ｔａｎａｋａ，Ｈ．，Ｎａｇａｉ，Ｈ．，Ｉｃｈｉｋａｗａ，Ａ．＆Ｎａｒｕｍｉｙａ，Ｓ．（２００５）Ｓｕｐｐｒｅｓｓｉｏｎ  ｏｆ  ａｌｌｅｒｇｉｃ  ｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎ  ｂｙ  ｔｈｅ  ｐｒｏｓｔａｇｌａｎｄｉｎ  Ｅ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ｓｕｂｔｙｐｅ  ＥＰ３．Ｎａｔｕｒｅ  ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，６，５２４−５３１．
２１６．Ｋｕｐｐ，Ｌ．Ｉ．，Ｋｏｓｃｏ，Ｍ．Ｈ．，Ｓｃｈｅｎｋｅｉｎ，Ｈ．Ａ．＆Ｔｅｗ，Ｊ．Ｇ．（１９９１）Ｃｈｅｍｏｔａｘｉｓ  ｏｆ  ｇｅｒｍｉｎａｌ  ｃｅｎｔｅｒｓ  Ｂ  ｃｅｌｌｓ  ｉｎ  ｒｅｓｐｏｎｓｅ  ｔｏ  Ｃ５ａ．Ｅｕｒｏｐｅａｎ  ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，２１，２６９７−２７０１．
２１７．Ｋｗｏｎ，Ｊ．Ｙ．，Ｐａｒｋ，Ｍ．Ｋ．，Ｓｅｏ，Ｙ．Ｒ．＆Ｓｏｎｇ，Ｊ．−Ｊ．（２０１４）Ｇｅｎｏｍｉｃ−ｂａｓｅｄ  ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｎｏｖｅｌ  ｐｏｔｅｎｔｉａｌ  ｂｉｏｍａｒｋｅｒｓ  ａｎｄ  ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  ｓｉｇｎａｌｌｉｎｇ  ｎｅｔｗｏｒｋｓ  ｉｎ  ｒｅｓｐｏｎｓｅ  ｔｏ  ｄｉｅｓｅｌ  ｅｘｈａｕｓｔ  ｐａｒｔｉｃｌｅｓ  ｉｎ  ｈｕｍａｎ  ｍｉｄｄｌｅ  ｅａｒ  ｅｐｉｔｈｅｌｉａｌ  ｃｅｌｌｓ．Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ＆Ｃｅｌｌｕｌａｒ  Ｔｏｘｉｃｏｌｏｇｙ，１０，９５−１０５．
２１８．Ｌａｆｒａｎｃｅ，Ｍ．，Ｒｏｕｓｓｙ，Ｇ．，Ｂｅｌｌｅｖｉｌｌｅ，Ｋ．，Ｍａｅｎｏ，Ｈ．，Ｂｅａｕｄｅｔ，Ｎ．，Ｗａｄａ，Ｋ．＆Ｓａｒｒｅｔ，Ｐ．（２０１０）Ｉｎｖｏｌｖｅｍｅｎｔ  ｏｆ  ＮＴＳ２  ｒｅｃｅｐｔｏｒｓ  ｉｎ  ｓｔｒｅｓｓ−ｉｎｄｕｃｅｄ  ａｎａｌｇｅｓｉａ．Ｎｅｕｒｏｓｃｉｅｎｃｅ，１６６，６３９−６５２．
２１９．Ｌａｉｒｄ，Ｊ．Ｍ．，Ｏｌｉｖａｒ，Ｔ．，Ｌｏｐｅｚ−Ｇａｒｃｉａ，Ｊ．Ａ．，Ｍａｇｇｉ，Ｃ．Ａ．＆Ｃｅｒｖｅｒｏ，Ｆ．（２００１）Ｒｅｓｐｏｎｓｅｓ  ｏｆ  ｒａｔ  ｓｐｉｎａｌ  ｎｅｕｒｏｎｓ  ｔｏ  ｄｉｓｔｅｎｓｉｏｎ  ｏｆ  ｉｎｆｌａｍｅｄ  ｃｏｌｏｎ：ｒｏｌｅ  ｏｆ  ｔａｃｈｙｋｉｎｉｎ  ＮＫ２  ｒｅｃｅｐｔｏｒｓ．Ｎｅｕｒｏｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ，４０，６９６−７０１．
２２０．Ｌａｍａｓ，Ｏ．，Ｍａｒｔｉｎｅｚ，Ｊ．Ａ．＆Ｍａｒｔｉ，Ａ．（２００３）Ｅｆｆｅｃｔｓ  ｏｆ  ａ  β３−ａｄｒｅｎｅｒｇｉｃ  ａｇｏｎｉｓｔ  ｏｎ  ｔｈｅ  ｉｍｍｕｎｅ  ｒｅｓｐｏｎｓｅ  ｉｎ  ｄｉｅｔ−ｉｎｄｕｃｅｄ（ｃａｆｅｔｅｒｉａ）ｏｂｅｓｅ  ａｎｉｍａｌｓ．Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｐｈｙｓｉｏｌｏｇｙ  ａｎｄ  Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，５９，１８３−１９１．
２２１．Ｌａｔｔｉｎ，Ｊ．Ｅ．，Ｓｃｈｒｏｄｅｒ，Ｋ．，Ｓｕ，Ａ．Ｉ．，Ｗａｌｋｅｒ，Ｊ．Ｒ．，Ｚｈａｎｇ，Ｊ．，Ｗｉｌｔｓｈｉｒｅ，Ｔ．，Ｓａｉｊｏ，Ｋ．，Ｇｌａｓｓ，Ｃ．Ｋ．，Ｈｕｍｅ，Ｄ．Ａ．＆Ｋｅｌｌｉｅ，Ｓ．（２００８）Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  ａｎａｌｙｓｉｓ  ｏｆ  Ｇ  Ｐｒｏｔｅｉｎ−Ｃｏｕｐｌｅｄ  Ｒｅｃｅｐｔｏｒｓ  ｉｎ  ｍｏｕｓｅ  ｍａｃｒｏｐｈａｇｅｓ．Ｉｍｍｕｎｏｍｅ  ｒｅｓｅａｒｃｈ，４，１．
２２２．Ｌａｕｋｏｖａ，Ｍ．，Ｖａｒｇｏｖｉｃ，Ｐ．，Ｋｒｉｚａｎｏｖａ，Ｏ．＆Ｋｖｅｔｎａｎｓｋｙ，Ｒ．（２０１０）Ｒｅｐｅａｔｅｄ  Ｓｔｒｅｓｓ  Ｄｏｗｎ−Ｒｅｇｕｌａｔｅｓ  β２−  ａｎｄ  α２Ｃ−Ａｄｒｅｎｅｒｇｉｃ  Ｒｅｃｅｐｔｏｒｓ  ａｎｄ  Ｕｐ−Ｒｅｇｕｌａｔｅｓ  Ｇｅｎｅ  Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  ｏｆ  ＩＬ−６  ｉｎ  ｔｈｅ  Ｒａｔ  Ｓｐｌｅｅｎ．Ｃｅｌｌｕｌａｒ  ａｎｄ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｎｅｕｒｏｂｉｏｌｏｇｙ，３０，１０７７−１０８７．
２２３．Ｌａｚｅｎｎｅｃ，Ｇ．＆Ｒｉｃｈｍｏｎｄ，Ａ．（２０１０）Ｃｈｅｍｏｋｉｎｅｓ  ａｎｄ  ｃｈｅｍｏｋｉｎｅ  ｒｅｃｅｐｔｏｒｓ：ｎｅｗ  ｉｎｓｉｇｈｔｓ  ｉｎｔｏ  ｃａｎｃｅｒ−ｒｅｌａｔｅｄ  ｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎ．Ｔｒｅｎｄｓ  ｉｎ  ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  ｍｅｄｉｃｉｎｅ，１６，１３３−１４４．
２２４．Ｌｅｅｂ−Ｌｕｎｄｂｅｒｇ，Ｌ．Ｍ．，Ｍａｒｃｅａｕ，Ｆ．，Ｍｕｌｌｅｒ−Ｅｓｔｅｒｌ，Ｗ．，Ｐｅｔｔｉｂｏｎｅ，Ｄ．Ｊ．＆Ｚｕｒａｗ，Ｂ．Ｌ．（２００５）Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  ｕｎｉｏｎ  ｏｆ  ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ．ＸＬＶ．Ｃｌａｓｓｉｆｉｃａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｋｉｎｉｎ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ｆａｍｉｌｙ：ｆｒｏｍ  ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  ｍｅｃｈａｎｉｓｍｓ  ｔｏ  ｐａｔｈｏｐｈｙｓｉｏｌｏｇｉｃａｌ  ｃｏｎｓｅｑｕｅｎｃｅｓ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ  Ｒｅｖ，５７，２７−７７．
２２５．Ｌｅ  Ｐｏｕｌ，Ｅ．，Ｌｏｉｓｏｎ，Ｃ．，Ｓｔｒｕｙｆ，Ｓ．，Ｓｐｒｉｎｇａｅｌ，Ｊ．−Ｙ．，Ｌａｎｎｏｙ，Ｖ．，Ｄｅｃｏｂｅｃｑ，Ｍ．−Ｅ．，Ｂｒｅｚｉｌｌｏｎ，Ｓ．，Ｄｕｐｒｉｅｚ，Ｖ．，Ｖａｓｓａｒｔ，Ｇ．＆Ｖａｎ  Ｄａｍｍｅ，Ｊ．（２００３）Ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ  ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｈｕｍａｎ  ｒｅｃｅｐｔｏｒｓ  ｆｏｒ  ｓｈｏｒｔ  ｃｈａｉｎ  ｆａｔｔｙ  ａｃｉｄｓ  ａｎｄ  ｔｈｅｉｒ  ｒｏｌｅ  ｉｎ  ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｏｎｕｃｌｅａｒ  ｃｅｌｌ  ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ．Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，２７８，２５４８１−２５４８９．
２２６．Ｌｅ，Ｙ．，Ｇｏｎｇ，Ｗ．，Ｌｉ，Ｂ．，Ｄｕｎｌｏｐ，Ｎ．Ｍ．，Ｓｈｅｎ，Ｗ．，Ｓｕ，Ｓ．Ｂ．，Ｒｉｃｈａｒｄ，Ｄ．Ｙ．＆Ｗａｎｇ，Ｊ．Ｍ．（１９９９）Ｕｔｉｌｉｚａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｔｗｏ  ｓｅｖｅｎ−ｔｒａｎｓｍｅｍｂｒａｎｅ，Ｇ  ｐｒｏｔｅｉｎ−ｃｏｕｐｌｅｄ  ｒｅｃｅｐｔｏｒｓ，ｆｏｒｍｙｌ  ｐｅｐｔｉｄｅ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ−ｌｉｋｅ  １  ａｎｄ  ｆｏｒｍｙｌ  ｐｅｐｔｉｄｅ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ，ｂｙ  ｔｈｅ  ｓｙｎｔｈｅｔｉｃ  ｈｅｘａｐｅｐｔｉｄｅ  ＷＫＹＭＶｍ  ｆｏｒ  ｈｕｍａｎ  ｐｈａｇｏｃｙｔｅ  ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ．Ｔｈｅ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，１６３，６７７７−６７８４．
２２７．Ｌｅｃｌｅｒｃ  Ｅ，Ｆｒｉｔｚ  Ｇ，Ｗｅｉｂｅｌ  Ｍ，Ｈｅｉｚｍａｎｎ  ＣＷ，Ｇａｌｉｃｈｅｔ  Ａ．（２００７）Ｓ１００Ｂ  ａｎｄ  Ｓ１００Ａ６  ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｌｌｙ  ｍｏｄｕｌａｔｅ  ｃｅｌｌ  ｓｕｒｖｉｖａｌ  ｂｙ  ｉｎｔｅｒａｃｔｉｎｇ  ｗｉｔｈ  ｄｉｓｔｉｎｃｔ  ＲＡＧＥ（ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ｆｏｒ  ａｄｖａｎｃｅｄ  ｇｌｙｃａｔｉｏｎ  ｅｎｄ  ｐｒｏｄｕｃｔｓ）ｉｍｍｕｎｏｇｌｏｂｕｌｉｎ  ｄｏｍａｉｎｓ．Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ，２８２：３１３１７−３１３３１．
２２８．Ｌｅｃｌｅｒｃ，Ｅ．＆Ｖｅｔｔｅｒ，Ｓ．Ｗ．（２０１５）Ｔｈｅ  ｒｏｌｅ  ｏｆ  Ｓ１００  ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ａｎｄ  ｔｈｅｉｒ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ＲＡＧＥ  ｉｎ  ｐａｎｃｒｅａｔｉｃ  ｃａｎｃｅｒ．Ｂｉｏｃｈｉｍｉｃａ  ｅｔ  ｂｉｏｐｈｙｓｉｃａ  ａｃｔａ，１８５２：２７０６−２７１１．
２２９．Ｌｅｅ，Ｂ．−Ｃ．，Ｃｈｅｎｇ，Ｔ．，Ａｄａｍｓ，Ｇ．Ｂ．，Ａｔｔａｒ，Ｅ．Ｃ．，Ｍｉｕｒａ，Ｎ．，Ｌｅｅ，Ｓ．Ｂ．，Ｓａｉｔｏ，Ｙ．，Ｏｌｓｚａｋ，Ｉ．，Ｄｏｍｂｋｏｗｓｋｉ，Ｄ．＆Ｏｌｓｏｎ，Ｄ．Ｐ．（２００３）Ｐ２Ｙ−ｌｉｋｅ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ，ＧＰＲ１０５（Ｐ２Ｙ１４），ｉｄｅｎｔｉｆｉｅｓ  ａｎｄ  ｍｅｄｉａｔｅｓ  ｃｈｅｍｏｔａｘｉｓ  ｏｆ  ｂｏｎｅ−ｍａｒｒｏｗｈｅｍａｔｏｐｏｉｅｔｉｃ  ｓｔｅｍ  ｃｅｌｌｓ．Ｇｅｎｅｓ＆ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ，１７，１５９２−１６０４．
２３０．Ｌｅｅ，Ｂ．−Ｙ．，Ｃｈｏ，Ｓ．，Ｓｈｉｎ，Ｄ．Ｈ．＆Ｋｉｍ，Ｈ．（２０１１）Ｇｅｎｏｍｅ−ｗｉｄｅ  ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ  ｓｔｕｄｙ  ｏｆ  ｃｏｐｙ  ｎｕｍｂｅｒ  ｖａｒｉａｔｉｏｎｓ  ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ  ｗｉｔｈ  ｐｕｌｍｏｎａｒｙ  ｆｕｎｃｔｉｏｎ  ｍｅａｓｕｒｅｓ  ｉｎ  Ｋｏｒｅａ  Ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ  Ｒｅｓｏｕｒｃｅ（ＫＡＲＥ）ｃｏｈｏｒｔｓ．Ｇｅｎｏｍｉｃｓ，９７，１０１−１０５．
２３１．Ｌｅｅ，Ｊ．Ｅ．，Ｈｏｎｇ，Ｅ．Ｊ．，Ｎａｍ，Ｈ．Ｙ．，Ｋｉｍ，Ｊ．Ｗ．，Ｈａｎ，Ｂ．Ｇ．＆Ｊｅｏｎ，Ｊ．Ｐ．（２０１１）ＭｉｃｒｏＲＮＡ  ｓｉｇｎａｔｕｒｅｓ  ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ  ｗｉｔｈ  ｉｍｍｏｒｔａｌｉｚａｔｉｏｎ  ｏｆ  ＥＢＶ‐ｔｒａｎｓｆｏｒｍｅｄ  ｌｙｍｐｈｏｂｌａｓｔｏｉｄ  ｃｅｌｌ  ｌｉｎｅｓ  ａｎｄ  ｔｈｅｉｒ  ｃｌｉｎｉｃａｌ  ｔｒａｉｔｓ．Ｃｅｌｌ  ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ，４４，５９−６６．
２３２．Ｌｅｅ，Ｍ．Ａ．，Ｂｏｈｍ，Ｍ．，Ｐａｕｌ，Ｍ．，ａｎｄ  Ｇａｎｔｅｎ，Ｄ．（１９９３）Ｔｉｓｓｕｅ  ｒｅｎｉｎ−ａｎｇｉｏｔｅｎｓｉｎ  ｓｙｓｔｅｍｓ．Ｔｈｅｉｒ  ｒｏｌｅ  ｉｎ  ｃａｒｄｉｏｖａｓｃｕｌａｒ  ｄｉｓｅａｓｅ．Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ，８７：ＩＶ７−１３．
２３３．Ｌｅｅｂ−Ｌｕｎｄｂｅｒｇ，Ｌ．Ｍ．，Ｆ．Ｍａｒｃｅａｕ，Ｗ．Ｍｕｌｌｅｒ−Ｅｓｔｅｒｌ，Ｄ．Ｊ．Ｐｅｔｔｉｂｏｎｅ，ａｎｄ  Ｂ．Ｌ．Ｚｕｒａｗ．（２００５）Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  Ｕｎｉｏｎ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ．ＸＬＶ．Ｃｌａｓｓｉｆｉｃａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｋｉｎｉｎ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ｆａｍｉｌｙ：ｆｒｏｍ  ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  ｍｅｃｈａｎｉｓｍｓ  ｔｏ  ｐａｔｈｏｐｈｙｓｉｏｌｏｇｉｃａｌ  ｃｏｎｓｅｑｕｅｎｃｅｓ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ  Ｒｅｖ，５７：２７−７７．
２３４．Ｌｅｖｉｔｅ，Ｍ．，Ｃｈｏｗｅｒｓ，Ｙ．，Ｇａｎｏｒ，Ｙ．，Ｂｅｓｓｅｒ，Ｍ．，Ｈｅｒｓｈｋｏｖｉｔｓ，Ｒ．＆Ｃａｈａｌｏｎ，Ｌ．（２００１）Ｄｏｐａｍｉｎｅ  ｉｎｔｅｒａｃｔｓ  ｄｉｒｅｃｔｌｙ  ｗｉｔｈ  ｉｔｓ  Ｄ３  ａｎｄ  Ｄ２  ｒｅｃｅｐｔｏｒｓ  ｏｎ  ｎｏｒｍａｌ  ｈｕｍａｎ  Ｔ  ｃｅｌｌｓ，ａｎｄ  ａｃｔｉｖａｔｅｓ  β１  ｉｎｔｅｇｒｉｎ  ｆｕｎｃｔｉｏｎ．Ｅｕｒｏｐｅａｎ  ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，３１，３５０４−３５１２．
２３５．Ｌｉ  Ｃ．，Ｐａｚｇｉｅｒ  Ｍ．，Ｌｉ  Ｊ．，Ｌｉ  Ｃ．，Ｌｉｕ  Ｍ．，Ｚｏｕ  Ｇ．，Ｌｉ  Ｚ．，Ｃｈｅｎ  Ｊ．，Ｔａｒａｓｏｖ  Ｓ．Ｇ．，Ｌｕ  Ｗ．Ｙ．，Ｌｕ  Ｗ．Ｌｉｍｉｔａｔｉｏｎｓ  ｏｆ  ｐｅｐｔｉｄｅ  ｒｅｔｒｏ−ｉｎｖｅｒｓｏ  ｉｓｏｍｅｒｉｚａｔｉｏｎ  ｉｎ  ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  ｍｉｍｉｃｒｙ．Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ，２０１０，２８５：１９５７２−１９５８１．
２３６．Ｌｉ  Ｘ．Ｃ．，ａｎｄ  Ｚｈｕｏ  Ｊ，Ｌ．（２００８）Ｎｕｃｌｅａｒ  ｆａｃｔｏｒ−ｋａｐｐａＢ  ａｓ  ａ  ｈｏｒｍｏｎａｌ  ｉｎｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒ  ｓｉｇｎａｌｌｉｎｇ  ｍｏｌｅｃｕｌｅ：ｆｏｃｕｓ  ｏｎ  ａｎｇｉｏｔｅｎｓｉｎ  ＩＩ−ｉｎｄｕｃｅｄ  ｃａｒｄｉｏｖａｓｃｕｌａｒ  ａｎｄ  ｒｅｎａｌ  ｉｎｊｕｒｙ．Ｃｕｒｒｅｎｔ  ｏｐｉｎｉｏｎ  ｉｎ  ｎｅｐｈｒｏｌｏｇｙ  ａｎｄ  ｈｙｐｅｒｔｅｎｓｉｏｎ．１７：３７−４３
２３７．Ｌｉ，Ｘ．＆Ｔａｉ，Ｈ．Ｈ．（２０１３）Ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｔｈｒｏｍｂｏｘａｎｅ  Ａ２  ｒｅｃｅｐｔｏｒ（ＴＰ）ｉｎｃｒｅａｓｅｓ  ｔｈｅ  ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  ｏｆ  ｍｏｎｏｃｙｔｅ  ｃｈｅｍｏａｔｔｒａｃｔａｎｔ  ｐｒｏｔｅｉｎ−１（ＭＣＰ−１）／ｃｈｅｍｏｋｉｎｅ（Ｃ−Ｃ  ｍｏｔｉｆ）ｌｉｇａｎｄ  ２（ＣＣＬ２）ａｎｄ  ｒｅｃｒｕｉｔｓ  ｍａｃｒｏｐｈａｇｅｓ  ｔｏ  ｐｒｏｍｏｔｅ  ｉｎｖａｓｉｏｎ  ｏｆ  ｌｕｎｇ  ｃａｎｃｅｒ  ｃｅｌｌｓ．ＰＬｏＳ  Ｏｎｅ，８，ｅ５４０７３．
２３８．Ｌｉａｎｇ，Ｍ．，Ｎｉｕ，Ｊ．，Ｚｈａｎｇ，Ｌ．，Ｄｅｎｇ，Ｈ．，Ｍａ，Ｊ．，Ｚｈｏｕ，Ｗ．，Ｄｕａｎ，Ｄ．，Ｚｈｏｕ，Ｙ．，Ｘｕ，Ｈ．＆Ｃｈｅｎ，Ｌ．（２０１６）Ｇｅｎｅ  ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  ｐｒｏｆｉｌｉｎｇ  ｒｅｖｅａｌｓ  ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ  ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  ｐａｔｔｅｒｎｓ  ｉｎ  Ｇ−ｐｒｏｔｅｉｎ  ｃｏｕｐｌｅｄ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ｓｉｇｎａｌｌｉｎｇ  ｐａｔｈｗａｙｓ  ｂｅｔｗｅｅｎ  ｅａｒｌｙ−ａｎｄ  ｌａｔｅ−ｏｎｓｅｔ  ｐｒｅｅｃｌａｍｐｓｉａ．Ｐｌａｃｅｎｔａ，４０，５２−５９．
２３９．Ｌｉｎ，Ｃ．−Ｉ．，Ｃｈｅｎ，Ｃ．−Ｎ．，Ｌｉｎ，Ｐ．−Ｗ．，Ｃｈａｎｇ，Ｋ．−Ｊ．，Ｈｓｉｅｈ，Ｆ．−Ｊ．＆Ｌｅｅ，Ｈ．（２００７）Ｌｙｓｏｐｈｏｓｐｈａｔｉｄｉｃ  ａｃｉｄ  ｒｅｇｕｌａｔｅｓ  ｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎ−ｒｅｌａｔｅｄ  ｇｅｎｅｓ  ｉｎ  ｈｕｍａｎ  ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ  ｃｅｌｌｓ  ｔｈｒｏｕｇｈ  ＬＰＡ  １  ａｎｄ  ＬＰＡ  ３．Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ  ａｎｄ  ｂｉｏｐｈｙｓｉｃａｌ  ｒｅｓｅａｒｃｈ  ｃｏｍｍｕｎｉｃａｔｉｏｎｓ，３６３，１００１−１００８．
２４０．Ｌｉｎ，Ｅ．−Ｊ．Ｄ．，Ｓａｉｎｓｂｕｒｙ，Ａ．，Ｌｅｅ，Ｎ．Ｊ．，Ｂｏｅｙ，Ｄ．，Ｃｏｕｚｅｎｓ，Ｍ．，Ｅｎｒｉｑｕｅｚ，Ｒ．，Ｓｌａｃｋ，Ｋ．，Ｂｌａｎｄ，Ｒ．，Ｄｕｒｉｎｇ，Ｍ．Ｊ．＆Ｈｅｒｚｏｇ，Ｈ．（２００６）Ｃｏｍｂｉｎｅｄ  ｄｅｌｅｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｙ１，Ｙ２，ａｎｄ  Ｙ４  ｒｅｃｅｐｔｏｒｓ  ｐｒｅｖｅｎｔｓ  ｈｙｐｏｔｈａｌａｍｉｃ  ｎｅｕｒｏｐｅｐｔｉｄｅ  Ｙ  ｏｖｅｒｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ−ｉｎｄｕｃｅｄ  ｈｙｐｅｒｉｎｓｕｌｉｎｅｍｉａ  ｄｅｓｐｉｔｅ  ｐｅｒｓｉｓｔｅｎｃｅ  ｏｆ  ｈｙｐｅｒｐｈａｇｉａ  ａｎｄ  ｏｂｅｓｉｔｙ．Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌｏｇｙ，１４７，５０９４−５１０１．
２４１．Ｌｉｎ，Ｈ．Ｈ．，Ｆａｕｎｃｅ，Ｄ．Ｅ．，Ｓｔａｃｅｙ，Ｍ．볯뒼뷯銽뷯誽뷯鞽뷯莽뷯貼볯躼볯꺼뷯讽뷯趽뷯銽뷯貼볯躼볯몼뷯膽뷯螽裢ꢼ뷯辽뷯薽뷯貼볯躼볯ꮼ뷯銽뷯薽뷯貼볯躼볯궼뷯莽뷯躽뷯讽뷯貼볯躼볯躼볯Ꞽ뷯銽뷯辽뷯貼볯躼볯뎼뷯薽뷯躽裢뎼뷯銽뷯覽뷯薽뷯躽볯ꪼ볯袼볯邼볯閼볯뒼뷯薽†뷯膽뷯銽뷯邽뷯膽뷯薽†볯钼볯颼볯ₐ銽뷯莽뷯邽뷯辽뷯ₒ覽뷯ₓ銽뷯醽뷯覽뷯薽뷯₄蚽뷯銽†뷯袽뷯₅覽뷯蒽뷯莽뷯覽뷯躽†뷯蚽†뷯躽뷯覽뷯薽뷯銈뷯邽뷯莽뷯蚽뷯莽†뷯蚽뷯薽뷯薽뷯钽†뷯薽뷯閽뷯膽뷯辽뷯馽†볯₴莽뷯貽뷯鎽†뷯躽†뷯薽뷯覽뷯袽뷯銽뷯貽†뷯辽뷯薽뷯膽뷯莽뷯躼볯₪ꖼ뷯邽†볯薽뷯貼볯邼볯貼볯隼볯閼裢醼볯銼볯躼戼㹲銼볯銼볯겼뷯躽뷯貼볯躼볯꺼뷯辽볯ꮼ볯貼볯螽뷯馽뷯躽볯뎼볯貼볯袽뷯銽뷯辽뷯蒽볯늼볯겼볯貼볯蒽뷯膽뷯蒽뷯貼볯躼볯躼볯ꮼ뷯銽뷯鎽뷯辽뷯貼볯躼볯ꚼ뷯躽뷯邀볯薽뷯躽뷯貼볯躼볯躼볯銼볯邼볯覼볯覽뷯钽뷯趽뷯躽뷯ꢼ볯ₔ銽뷯莽뷯邽뷯辽뷯ₒ趽뷯蒽뷯膽뷯薽뷯ₓ薽뷯鎽뷯躽뷯邽뷯覽뷯₌莽뷯薽뷯辽뷯膽뷯覽뷯ₓ鞽뷯钽뷯₈莽뷯貽뷯₌鎽뷯膽뷯薽†뷯袽뷯躽뷯薽†뷯躽뷯₄膽뷯袽뷯鎽뷯辽뷯₎趽뷯貽뷯莽뷯貽뷯₅閽뷯銽뷯螽뷯貽뷯钽뷯辽뷯躼볯銽뷯钽뷯鎽뷯₈誽뷯閽뷯躽뷯貽†뷯蚽†뷯袽뷯銽뷯膽뷯辽뷯辽뷯馽볯醼볯銼볯醼볯醼裢醼볯醼볯㲎牢ਾ볯钼볯躼볯覽뷯貼볯躼볯ꮼ뷯薽뷯貼볯躼볯뎼뷯钽뷯辽뷯貼볯躼볯ꎼ뷯薽뷯貼볯躼볯ꊼ뷯躽뷯隽뷯躽뷯閽뷯薽볯낼볯貼볯閽볯ꪼ볯貼볯薽뷯辽뷯閽뷯薽뷯辽볯꒼볯貼볯膽뷯趽뷯貼볯躼볯뒼뷯膽뷯貼볯躼裢뒼볯蚼볯袽뷯貼볯躼볯銼볯邼볯覼볯꺼볯겼볯ₕ覽뷯ₓ膽†뷯覽뷯袽†뷯蚽뷯覽뷯覽뷯馽†뷯邽뷯莽뷯蚽뷯莽†뷯螽뷯躽뷯鎽뷯ₔ蚽뷯銽†볯낼볯늼볯钼볯袼볯낼볯醼볯邼볯躼볯辽뷯銽뷯膽뷯₌辽뷯₆ꊼ뷯辽뷯辽뷯覽뷯膽뷯₌ꎼ뷯薽뷯覽뷯钽뷯馽볯銼볯邼볯銼볯銼裢鎼볯邼볯㲎牢ਾ볯钼볯躼볯覽뷯貼볯躼볯ꖼ뷯莽뷯薽뷯貼볯躼볯ꦼ뷯邽뷯辽뷯薽뷯₄膽뷯鎽뷯馽†뷯薽뷯鎽뷯钽뷯隽뷯钽뷯ₙ辽뷯₆膽뷯₎薽뷯螽뷯躽뷯薽뷯薽뷯₄鎽뷯莽뷯薽뷯薽뷯₄늼뷯躽뷯貽뷯膽†뷯閽뷯覽뷯薽뷯膽뷯薽볯Ꞽ뷯躽뷯貼볯馼볯馼볯銼볯鞼볯醼볯骼볯閼볯銈볯躼戼㹲銼볯閼볯겼뷯閽볯뎼볯貼볯覽뷯躽볯림볯貼볯覽볯겼볯貼볯薽뷯貼볯躼볯Ꞽ뷯膽뷯貼볯躼볯낼뷯躽볯ꢼ볯貼볯閽뷯躽볯뢼볯貼볯袽뷯躽뷯貼볯躼볯겼뷯貼볯躼볯몼뷯膽뷯貼볯躼볯銼볯醼볯覼볯螽뷯钼†뷯薽뷯薽†뷯薽뷯覽뷯覽뷯躽뷯馽†뷯躽뷯銽뷯膽뷯薽뷯ₓ鎽뷯鎽뷯薽뷯钽뷯芽뷯貽뷯钽뷯ₙ膽뷯蒽†뷯薽뷯薽뷯覽뷯馽†뷯蚽†뷯薽뷯钽뷯膽뷯₎鎽뷯蒽뷯閽뷯₍鎽뷯貽뷯膽뷯薽裢覽뷯蒽뷯莽뷯蒽†뷯躽뷯貽뷯趽뷯膽뷯辽뷯馽†뷯辽뷯薽뷯₌蒽뷯鎽뷯膽뷯薽†뷯躽†뷯覽뷯薽볯ꪼ뷯閽뷯躽뷯貽†뷯蚽†볯覽뷯貽뷯螽뷯莽뷯貽†볯袽뷯趽뷯鎽뷯銽뷯貼볯颼볯貼볯鞼볯钼裢颼볯邼볯躼戼㹲銼볯隼볯겼뷯閽볯랼볯貼볯膽뷯讽뷯銽볯꒼볯貼볯膽뷯覽볯ꎼ볯貼볯膽뷯貼볯躼볯躼볯ꪼ뷯趽뷯鎽볯꒼볯貼볯膽뷯螽볯꒼볯貼볯薽뷯鎽뷯躽볯Ꞽ볯貼볯薽뷯薽뷯鎽뷯膽뷯貽볯떼볯貼볯膽뷯銽뷯钽뷯袽볯뚼볯貼볯膽뷯钽뷯貼볯躼볯몼뷯钽뷯薽뷯覽뷯貼볯躼볯躼볯겼뷯貼볯躼볯궼뷯鎽뷯薽뷯鎽뷯袽뷯覽뷯钽볯궼볯貼볯辽뷯钽뷯钽볯뎼볯貼볯覽뷯貽뷯膽뷯鎽볯Ꞽ볯ꪼ볯貼볯辽뷯貽뷯躽볯ꪼ볯ꖼ볯貼볯薽뷯芽뷯銽뷯貼볯躼볯躼볯랼뷯躽뷯貼볯躼볯뎼뷯膽뷯貼볯躼볯躼볯ꊼ뷯鎽뷯貼볯躼볯ꚼ뷯辽뷯趽뷯貼볯躼볯ꮼ뷯邽뷯钽뷯貼볯躼볯늼뷯躽뷯薽뷯貼볯躼볯躼볯Ꞽ뷯辽뷯誽뷯袽뷯躽뷯貼볯躼볯ꚼ뷯辽뷯趽뷯貼볯躼볯ꮼ뷯銽뷯膽뷯貼볯躼볯躼볯ꊼ뷯馽뷯銽뷯薽뷯躽볯ꮼ볯늼볯貼볯袽뷯钽뷯貼볯躼볯躼볯ꎼ뷯膽뷯趽뷯躽볯ꢼ볯꺼볯貼볯膽뷯蚽뷯薽뷯貼볯躼볯뎼뷯薽뷯莽뷯貼볯躼볯躼볯뎼뷯薽뷯薽뷯鎽볯늼볯ꎼ볯蚼볯袽뷯銽뷯骽뷯隽볯뚼볯袼볯邼볯鎼볯뎼뷯銽뷯膽뷯₌蚽뷯趽뷯辽뷯薽뷯辽뷯蒽†뷯銽뷯鎽뷯膽뷯貽뷯螽뷯膽뷯袽뷯ₙ辽뷯₆Ꞽ†뷯銽뷯钽뷯覽뷯銈뷯辽뷯邽뷯薽뷯₄銽뷯莽뷯邽뷯辽뷯鎽볯뎼뷯覽뷯躽뷯薽볯鎼볯銼볯醼볯銼볯銈볯閼볯钼볯㲎牢ਾ볯钼볯躼볯辽뷯鎽뷯辽뷯貼볯躼볯躼볯ꚼ뷯薽뷯钽뷯鎽볯궼볯ꮼ볯貼볯閽뷯躽뷯貼볯躼볯躼볯ꆼ뷯閽뷯閽뷯膽뷯貼볯躼볯銼볯邼볯覼볯ꆼ볯ꖼ†뷯躽뷯₄늼볯Ꞽ볯₥貽뷯螽뷯躽뷯鎽†뷯躽†뷯膽뷯莽뷯銽볯ꎼ뷯銽뷯薽뷯钽†뷯辽뷯薽뷯閽뷯膽뷯ₒ趽뷯蒽뷯莽뷯躽뷯貼볯骼볯鞼볯銈볯颼볯躼戼㹲銼볯颼볯겼뷯貼볯躼볯몼뷯膽뷯貼볯躼볯뒼뷯鞽뷯钽뷯辽볯늼볯貼볯辽뷯钽뷯趽볯ꢼ볯ꊼ볯貼볯薽뷯貼볯躼볯겼뷯辽뷯覽볯겼볯궼볯貼볯覽뷯邽뷯貼볯躼볯躼볯ꎼ뷯銽뷯貼볯躼볯ꎼ뷯銽뷯辽뷯貼볯躼볯躼볯銼볯邼볯覼볯莽뷯覽뷯膽뷯覽뷯躽†뷯蚽†뷯袽뷯₅랼뷯钽†뷯覽뷯躽뷯貽뷯覽뷯螽†뷯膽뷯袽뷯膽뷯ₙ覽뷯₎莽뷯銽뷯躽뷯莽†뷯馽뷯邽뷯辽뷯馽뷯覽뷯₃貽뷯閽뷯薽뷯覽뷯躼볯銽뷯莽뷯薽뷯覽뷯螽뷯ₓ辽뷯₆钽뷯薽†볯膽뷯覽뷯躽뷯貽†볯莽뷯蒽뷯趽뷯ₙ辽뷯₆뎼뷯覽뷯躽뷯薽뷯ₓ辽뷯₆钽뷯薽†볯躽뷯钽뷯蒽†볯钽뷯钽뷯鎽†뷯蚽†볯趽뷯銽뷯莽뷯貼볯邼볯貼볯醼볯颼裢鎼볯銼볯躼戼㹲銼볯馼볯겼뷯貼볯躼볯躼볯겼뷯覽볯꺼볯뎼볯貼볯閽볯ꢼ볯ꎼ볯貼볯閽뷯躽뷯貼볯躼볯躼볯ꢼ뷯覽뷯袽볯뎼볯ꎼ볯蚼볯閽볯ꎼ볯겼볯袼볯邼볯邼볯ꆼ뷯钽뷯銈뷯覽뷯銽뷯貽뷯覽뷯膽뷯薽뷯₄邽뷯辽뷯薽뷯躽†뷯躽뷯覽뷯辽뷯覽뷯鎽†뷯覽뷯蒽†뷯閽뷯蚽뷯莽뷯邀뷯颽뷯銽뷯鎽뷯薽뷯₄莽뷯钽뷯閽뷯貽뷯躽뷯钽뷯蒽†볯銽뷯鞼볯ₘ辽뷯₎趽뷯躽뷯莽뷯钽뷯込뷯膽뷯銽뷯邽뷯膽뷯薽뷯ₓ膽뷯蒽†뷯钽뷯趽뷯貽뷯钽뷯₅钽뷯趽뷯銽†뷯薽뷯銽뷯鎽뷯鎽†뷯膽뷯钽뷯銽†뇎†뷯銽뷯蒽뷯莽뷯覽뷯躽볯ꆼ뷯钽뷯銽뷯钽뷯鎽볯늼뷯薽뷯趽뷯钽뷯鎽뷯貼볯銼볯醼볯醼볯銈볯銼볯鎼볯㲎牢ਾ볯閼볯躼볯閽뷯蒽뷯醽뷯覽뷯钽볯ꆼ볯蚼볯辽뷯莽뷯貼볯躼볯躼볯銼볯醼볯覼볯낼볯閼†뷯鎽†뷯芽뷯躽뷯膽뷯钽뷯馽†뷯颽뷯銽뷯鎽뷯薽뷯₄芽뷯ₙ袽뷯趽뷯躽†뷯膽뷯钽†뷯薽뷯貽뷯ₓ膽뷯蒽†뷯趽뷯辽뷯钽뷯躽뷯ₔ蚽뷯銽†뷯馽뷯辽뷯袽뷯鎽뷯袽뷯钽뷯蒽뷯莽†뷯莽뷯蒽†뷯躽뷯閽뷯薽뷯₄궼볯낼裢醼닎†뷯薽뷯薽뷯鎽뷯躼볯겼뷯뎼†볯躽뷯貼볯貼뷯醼볯醼볯銼볯㲎牢ਾ볯閼볯躼볯膽볯뒼볯ꮼ볯貼볯膽뷯貼볯躼볯躼볯림뷯躽볯ꊼ볯낼볯貼볯膽뷯貼볯躼볯躼볯늼뷯躽뷯躽裢膽뷯螽뷯辽뷯薽뷯鎽뷯躽裢膽뷯蒽뷯鎽뷯薽뷯辽뷯薽†뷯馽뷯钽뷯趽†뷯貽뷯莽뷯膽뷯薽†뷯辽뷯ₒ莽뷯銽뷯覽뷯隽뷯鎽뷯閽뷯膽뷯ₒ蒽뷯鎽뷯膽뷯薽뷯骼뷯閽뷯銽뷯躽뷯ₔ鎽뷯膽뷯閽뷯貼볯銽†볯₪낼뷯膽뷯趽뷯莽뷯貽볯銼볯醼볯貼볯隼볯骼볯銼볯鎼裢醼볯馼볯躼戼㹲銼볯銼볯궼뷯薽뷯膽뷯膽볯ꆼ볯貼볯膽뷯薽뷯钽뷯覽뷯銽뷯貼볯躼볯ꆼ뷯鎽뷯薽뷯貼볯躼볯躼볯ꮼ뷯躽뷯辽뷯膽볯림볯袼볯邼볯馼볯Ꞽ볯늼볯鞼†뷯鎽†뷯₁躽뷯螽뷯钽뷯隽뷯₅銽뷯螽뷯貽뷯钽뷯銽†뷯蚽†뷯袽뷯₅莽뷯鎽뷯薽뷯躽뷯貽†뷯薽뷯讽뷯钽뷯覽뷯躽뷯₅醼†뷯薽뷯薽뷯钽뷯銽†뷯薽뷯邽뷯躽뷯薽†뷯辽†뷯薽뷯讽뷯钽뷯覽뷯躽뷯₅꒼볯躼볯銽뷯莽뷯薽뷯覽뷯螽뷯ₓ辽뷯₆钽뷯薽†볯膽뷯覽뷯躽뷯貽†볯莽뷯蒽뷯趽뷯ₙ辽뷯₆뎼뷯覽뷯躽뷯薽뷯貼볯邼볯貼볯醼볯颼볯銈볯醼볯馼볯躼戼㹲銼볯鎼볯궼뷯貽뷯讽볯낼볯貼볯袽뷯閽뷯袽뷯馽볯꺼볯貼볯覽뷯钽뷯貽볯늼볯蚼볯閽뷯袽뷯銽뷯薽뷯貼볯躼볯躼볯銼볯醼볯覼볯辽뷯薽†뷯蚽†뷯薽뷯薽뷯钽뷯銽†뷯辽뷯ₒ膽뷯隽뷯躽뷯薽뷯₄螽뷯馽뷯膽뷯覽뷯躽†뷯躽뷯₄邽뷯辽뷯閽뷯钽뷯ₓ覽뷯₎钽뷯薽†뷯辽뷯邽뷯覽뷯膽뷯覽뷯躽†뷯躽뷯₄邽뷯辽뷯銽뷯鎽뷯覽뷯躽†뷯蚽†뷯膽뷯覽뷯閽뷯ₓ钽뷯邽뷯鎽†뷯蚽†뷯膽뷯莽뷯銽뷯躼볯覽뷯莽뷯覽뷯覽뷯膽†뷯钽†뷯覽뷯邽뷯馽뷯覽뷯膽†뷯莽뷯膽볯醼볯閼볯骼볯颼볯颼裢醼볯邼볯躼戼㹲銼볯钼볯궼뷯貽뷯覽볯ꆼ볯貼볯覽뷯蒽뷯薽뷯貼볯躼볯ꚼ뷯覽뷯讽뷯貼볯躼볯ꊼ뷯貽뷯鞽뷯螽볯ꦼ볯貼볯蚽뷯蚽뷯貽볯궼볯랼볯蚼볯銽뷯閽뷯鞽뷯銽뷯钽볯꒼볯袼볯邼볯閼볯ꎼ뷯膽뷯鎽†볯₩辽뷯辽뷯膽뷯钽†뷯薽뷯薽뷯钽뷯銽뷯貼볯ꆼ볯醼볯₲膽뷯蒽†볯ꆼ볯銼볯₲钽뷯鎽뷯薽†뷯薽뷯薽뷯钽뷯銽뷯貼뷯銽뷯₅趽뷯銽뷯薽뷯鎽†뷯辽뷯ₒ鎽뷯芽뷯辽뷯閽뷯膽뷯覽뷯躽뷯ₓ辽뷯₆莽뷯銽뷯閽뷯膽뷯覽뷯螽†뷯薽뷯讽뷯莽뷯钽뷯鎽볯ꪼ뷯閽뷯躽뷯貽†뷯蚽†뷯薽뷯讽뷯莽뷯钽뷯₅芽뷯辽뷯辽뷯馽볯馼볯貼볯鎼볯銈볯钼볯躼戼㹲銼볯閼볯궼뷯貽뷯覽볯ꆼ볯貼볯覽뷯蒽뷯薽뷯貼볯躼볯ꚼ뷯覽뷯讽뷯貼볯躼볯ꊼ뷯貽뷯鞽뷯螽볯ꦼ볯貼볯蚽뷯蚽뷯貽볯궼볯랼볯蚼볯銽뷯閽뷯鞽뷯銽뷯钽볯꒼볯袼볯邼볯閼볯ꎼ뷯膽뷯鎽†볯₩辽뷯辽뷯膽뷯钽†뷯薽뷯薽뷯钽뷯銽뷯貼볯ꆼ볯醼볯₲膽뷯蒽†볯ꆼ볯銼볯₲钽뷯鎽뷯薽†뷯薽뷯薽뷯钽뷯銽뷯貼뷯銽뷯₅趽뷯銽뷯薽뷯鎽†뷯辽뷯ₒ鎽뷯芽뷯辽뷯閽뷯膽뷯覽뷯躽뷯ₓ辽뷯₆莽뷯銽뷯閽뷯膽뷯覽뷯螽†뷯薽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膽뷯蒽†뷯覽뷯邽뷯馽뷯覽뷯膽뷯₌銽뷯鎽뷯膽뷯莽뷯₈莽뷯趽뷯閽뷯覽뷯膽뷯覽뷯躽뷯貼볯鞼볯貼볯鞼볯銈볯颼볯躼戼㹲銼볯醼볯궼뷯钽뷯閽뷯閽뷯膽볯뒼볯貼볯馽뷯趽뷯貼볯躼볯ꮼ뷯骽뷯讽뷯銈볯膽뷯膽볯ꢼ볯貼볯鎽뷯覽뷯膽뷯膽볯ꮼ볯貼볯躽뷯閽뷯貼볯躼볯궼뷯钽뷯貼볯躼볯뎼뷯趽뷯膽볯ꮼ볯蚼볯躽뷯閽뷯貼볯躼裢覽볯袼볯邼볯邼볯ꦼ뷯薽뷯钽뷯蚽뷯莽뷯钽뷯辽뷯₎辽뷯₆ꊼ볯ꆼ볯銈볯€膽뷯ₓ膽†뷯薽뷯膽뷯覽뷯薽†뷯薽뷯閽뷯膽뷯辽뷯ₒ辽뷯₆钽뷯薽†볯겼볯₲鎽뷯螽뷯膽뷯貽뷯躽뷯銈뷯躽뷯閽뷯薽뷯₄邽뷯辽뷯閽뷯钽뷯辽뷯₎辽뷯₆ꦼ볯銈볯ₖ膽뷯蒽†볯겼裢醼볯ₐ覽뷯₎趽뷯莽뷯辽뷯袽뷯螽뷯鎽†뷯馽†뷯馽뷯辽뷯覽뷯薽†뷯袽뷯鎽뷯袽뷯邽뷯辽뷯薽뷯趽뷯莽뷯躼볯覽뷯莽뷯薽뷯覽뷯膽뷯₌膽뷯蒽†볯覽뷯邽뷯馽뷯覽뷯膽뷯₌늼뷯鎽뷯膽뷯莽뷯₈ꎼ뷯趽뷯閽뷯覽뷯膽뷯覽뷯躽뷯貼볯邼볯貼볯隼볯銈볯鞼볯躼戼㹲銼볯銼볯궼뷯钽뷯閽뷯讽뷯貼볯躼볯궼볯ꢼ뷯銽뷯钽뷯貼볯躼볯膽뷯膽뷯膽볯림볯뒼뷯讽뷯袽뷯鎽뷯覽볯뒼볯궼뷯銽뷯钽뷯貼뷯躽뷯₄ꮼ볯ꮼ뷯芽뷯鎽뷯覽뷯膽볯낼뷯辽뷯钽뷯螽뷯膽뷯蒽뷯躽†볯銼†뷯鎽†뷯₁趽뷯蒽뷯膽뷯辽뷯ₒ辽뷯₆膽뷯貽뷯銽뷯覽뷯₃膽뷯钽뷯趽뷯躼볯莽뷯薽뷯莽뷯貼볯邼볯邼볯銼볯鞼볯銼볯醼볯銈볯躼戼㹲銼볯鎼볯궼뷯钽뷯薽뷯莽뷯覽볯ꎼ볯貼볯覽뷯閽뷯辽뷯辽볯ꆼ볯貼볯覽뷯覽뷯膽뷯蒽뷯邀볯膽뷯貽뷯芽뷯躽뷯貼볯躼볯낼뷯貽뷯趽뷯銽뷯貼볯躼볯躼볯늼뷯鎽뷯貼볯躼볯궼뷯鎽뷯覽뷯辽볯ꆼ볯蚼볯膽뷯膽뷯覽볯ꖼ볯袼볯邼볯邼볯뒼뷯膽뷯鎽뷯銽뷯邽뷯覽뷯躽†뷯銽뷯蚽뷯貽뷯₅辽뷯₆袽뷯趽뷯躽†뷯馽뷯邽뷯辽뷯馽뷯薽뷯ₓ蚽뷯貽뷯辽뷯覽뷯螽†뷯躽†뷯覽뷯銽뷯₏钽뷯薽뷯钽뷯薽뷯钽†뷯覽뷯袽†뷯袽뷯趽뷯鎽뷯躽†뷯貽뷯袽뷯邀볯躼볯躽뷯膽뷯鎽†뷯蚽†뷯袽뷯₅꺼뷯鞽†볯辽뷯讽†볯莽뷯蒽뷯趽뷯ₙ辽뷯₆뎼뷯覽뷯躽뷯薽뷯貼볯醼볯钼볯隼裢醼볯躼戼㹲銼볯钼볯궼뷯낼뷯薽뷯鎽뷯躽볯ꪼ볯ꆼ볯貼볯膽뷯銽뷯躽뷯袽뷯閽뷯貼볯躼볯躼볯ꊼ뷯鎽뷯辽뷯貼볯躼볯躼볯뎼뷯躽뷯薽뷯鎽볯ꪼ볯궼볯貼볯覽뷯螽뷯銽볯ꪼ볯궼볯貼볯薽뷯鎽뷯貽뷯膽뷯袽뷯銽볯뎼볯ꖼ볯貼볯覽뷯邽뷯薽볯겼볯랼볯貼볯辽뷯薽뷯鎽볯ꖼ볯늼볯貼볯膽뷯蒽뷯躽뷯貽뷯貼볯躼볯뎼뷯貽뷯覽뷯膽뷯貼볯躼볯銼볯邼볯覼볯蒽뷯躽뷯鎽뷯躽뷯₅ꆼ볯ꆼ†뷯薽뷯薽뷯钽뷯銽†뷯钽뷯趽뷯貽뷯钽뷯辽뷯₎銽뷯蒽뷯莽뷯鎽†뷯躽뷯貽뷯趽뷯膽뷯覽뷯躽†뷯躽뷯₄躽뷯辽뷯躽뷯覽뷯膽뷯₌螽뷯辽뷯钽뷯₈覽뷯₎膽†뷯閽뷯覽뷯薽†뷯膽뷯辽뷯覽뷯₄貽뷯螽뷯钽뷯辽뷯₎趽뷯蒽뷯貽볯ꆼ뷯钽뷯銽뷯辽뷯莽뷯薽뷯辽뷯覽뷯貼볯袽뷯辽뷯芽뷯鎽뷯鎽볯膽뷯蒽†볯膽뷯莽뷯貽뷯銽†볯覽뷯貽뷯螽뷯貼볯醼볯鞼볯醼裢鞼볯隼볯㲎牢ਾ볯鞼볯躼볯莽볯閽뷯鎽뷯辽뷯貼볯躼볯겼뷯芽뷯銽뷯辽볯ꎼ볯蚼볯薽뷯₌낼뷯薽뷯膽볯궼볯袼볯邼볯醼볯늼뷯貽뷯₅辽뷯₆鎽뷯袽뷯躽뷯辽뷯覽뷯薽裢醼裢邽뷯辽뷯邽뷯膽뷯薽볯뎼볯낼볯膽뷯蒽†볯醼볯₰銽뷯莽뷯邽뷯辽뷯ₒ銼†뷯躽†뷯袽뷯₅邽뷯膽뷯辽뷯馽뷯辽뷯覽뷯ₓ辽뷯₆ꎼ뷯馽뷯钽뷯莽뷯莽뷯閽뷯ₓ躽뷯辽뷯辽뷯趽뷯躽뷯ₓ芽뷯ₙ膽뷯隽뷯辽뷯膽뷯ₒ趽뷯莽뷯辽뷯袽뷯螽뷯鎽볯궼뷯莽뷯辽뷯覽뷯貽뷯螽뷯貼볯閼볯貼볯钼볯隼裢醼볯銼볯躼戼㹲銼볯隼볯궼뷯뚼뷯銽뷯馽볯ꊼ볯ꪼ볯貼볯躼볯薽뷯螽볯낼볯궼볯ꢼ뷯鎽뷯辽뷯躽볯뎼볯뎼뷯趽뷯膽뷯覽볯ꊼ볯ꆼ볯뎼뷯趽뷯躽볯膽뷯蒽†볯躼볯躼볯膽뷯莽뷯膽볯뎼뷯袽뷯躽뷯辽뷯覽뷯薽†볯銈뷯袽뷯鎽뷯袽뷯钽뷯₅銽뷯蒽뷯莽뷯鎽†뷯膽뷯莽뷯貽뷯銽†뷯薽뷯讽†뷯躽†뷯閽뷯覽뷯薽†뷯躽뷯₄莽뷯躽뷯躽뷯₅趽뷯蒽뷯貽뷯ₓ辽뷯₆膽뷯閽뷯薽†뷯閽뷯螽†뷯躽뷯閽뷯馽볯ꆼ뷯₍ꪼ†볯薽뷯邽뷯銽†볯銽뷯钽†볯膽뷯薽†볯薽뷯貼볯邼볯钼볯醼볯邼볯馼볯鞼裢馼볯躼戼㹲銼볯鞼볯궼뷯袽뷯膽볯꒼볯貼볯躼볯辽뷯鎽뷯膽뷯钽뷯閽뷯膽뷯覽볯Ꞽ볯떼볯ꆼ뷯趽뷯薽뷯貼뷯躽뷯₄ꆼ볯ꊼ볯궼뷯貽뷯讽볯뎼뷯袽뷯躽뷯辽뷯覽뷯薽†볯銈뷯袽뷯鎽뷯袽뷯钽뷯銈뷯躽뷯閽뷯薽뷯₄趽뷯芽뷯貽뷯骽뷯钽뷯辽뷯₎辽뷯₆覽뷯钽뷯膽뷯薽뷯貽뷯貽뷯銽†볯膽볯讼†뷯薽뷯覽뷯钽뷯鎽†뷯膽뷯₃膽뷯钽뷯隽뷯钽뷯辽뷯₎膽뷯蒽†뷯蒽뷯薽뷯薽뷯鎽†뷯閽뷯莽뷯覽뷯躽†뷯鎽뷯薽뷯芽뷯馽†뷯躽†뷯躽뷯辽뷯袽뷯貽뷯膽뷯₌莽뷯貽뷯鎽볯ꪼ†볯覽뷯貽†볯袽뷯趽볯銼볯邼볯貼볯颼볯骼볯鞼볯銼볯銈볯躼戼㹲銼볯颼볯궼뷯貽뷯膽뷯辽볯궼볯貼볯薽뷯躽뷯躽뷯薽뷯銈볯螽뷯貽뷯辽볯뒼볯貼볯辽뷯銽뷯螽뷯薽뷯銈볯銽뷯蒽뷯貼볯躼볯躼볯Ꞽ뷯銽뷯覽뷯₁뎼뷯躽†볯銽뷯钽뷯鎽볯궼볯貼뷯薽†뷯膽†볯薽뷯膽볯낼볯貼볯膽뷯钽뷯躽뷯骽裢ꆼ볯ꎼ볯蚼볯辽뷯钽뷯馽뷯貼볯躼볯醼볯馼볯覼볯颽뷯銽뷯鎽뷯覽뷯躽†뷯躽뷯貽뷯鎽뷯鎽†뷯蚽†뷯袽뷯₅钽뷯馽뷯辽뷯銽뷯邽뷯躽裢銽뷯貽뷯膽뷯覽뷯螽†뷯辽뷯趽뷯躽뷯₅銽뷯莽뷯邽뷯辽뷯袼볯늼볯늼볯覽뷯₎钽뷯薽†뷯趽뷯閽뷯薽†뷯馽뷯钽뷯趽†뷯鎽뷯躽뷯₇膽뷯辽뷯覽뷯钽†뷯躽뷯覽裢뒼볯ꢼ볯₲趽뷯躽뷯莽뷯辽뷯膽뷯₌膽뷯钽뷯芽뷯蒽뷯薽뷯躼볯ꖼ볯뎼†볯薽뷯钽뷯銽뷯貼볯閼볯貼볯邼볯銈볯醼볯躼戼㹲銼볯馼볯궼뷯莽뷯薽뷯貼볯躼볯躼볯ꊼ뷯莽뷯銈볯覽뷯讽뷯躽뷯薽뷯貼볯躼볯ꎼ뷯颽볯ꢼ볯貼볯辽뷯蒽뷯貼볯躼볯躼볯ꢼ뷯銽뷯辽뷯貼볯躼볯겼뷯銽뷯膽뷯趽뷯銽볯꒼볯貼볯閽뷯銽뷯辽뷯貼볯躼볯뎼뷯袽뷯膽뷯钽뷯貼볯躼볯랼뷯鎽뷯蚽뷯貽뷯貼볯躼볯醼볯馼볯覼볯뚼볯躼볯躽뷯薽뷯躽뷯钽뷯辽뷯膽뷯₌떼뷯覽뷯躽†뷯蚽†볯袽뷯銽뷯膽뷯辽뷯辽뷯馽†뷯薽뷯辽뷯趽뷯躽뷯膽뷯覽뷯躽뷯ₓ蚽뷯銽†뷯袽뷯₅躽뷯趽뷯躽뷯貽뷯钽뷯銽뷯₅辽뷯₆躽뷯閽뷯辽뷯薽뷯钽뷯蒽뷯₅림볯邽뷯邽뷯覽뷯薽†볯림볯膽뷯蒽†뷯膽뷯莽뷯薽뷯钽뷯莽†뷯辽뷯馽뷯薽뷯钽뷯蒽뷯₅銽뷯莽뷯邽뷯辽뷯鎽볯낼뷯膽뷯趽뷯莽뷯貽†볯薽뷯貼볯邼볯醼볯鎼裢醼볯邼볯㲎牢ਾ볯颼볯躼볯覽뷯膽뷯覽볯뒼볯貼볯躼볯膽뷯膽뷯辽볯뒼볯ꮼ뷯芽뷯馽뷯鎽뷯覽볯림볯뎼뷯螽뷯趽뷯钽뷯貼볯躼볯鎽뷯覽뷯閽뷯覽볯膽뷯蒽†볯躼볯莽뷯覽뷯膽뷯膽볯ꎼ뷯膽뷯膽뷯钽뷯銽뷯骽뷯钽뷯辽뷯₎辽뷯₆ꖼ볯₰銽뷯莽뷯邽뷯辽뷯ₒ鎽뷯芽뷯馽뷯薽뷯ₓ銽뷯鎽뷯辽뷯鎽뷯芽뷯薽†뷯辽뷯ₒ邽뷯辽뷯钽뷯螽뷯膽뷯蒽뷯躽†볯銼裢覽뷯蒽뷯莽뷯蒽†뷯膽뷯躽†뷯薽뷯邽뷯躽뷯薽뷯ₓ芽뷯ₙ閽뷯薽†뷯蚽†볯낼볯ₑ膽뷯蒽†볯낼볯ₓ銽뷯莽뷯邽뷯辽뷯ₒ讽뷯辽뷯讽뷯閽뷯ₔ趽뷯莽뷯躼볯銽†볯₪낼뷯膽뷯趽뷯莽뷯貽볯銼볯邼볯貼볯鎼볯骼볯鎼볯銈볯钼볯㲎牢ਾ볯颼볯躼볯覽뷯覽뷯貼볯躼볯뎼뷯膽뷯辽뷯薽뷯覽뷯貼볯躼볯ꮼ뷯鎽뷯銽뷯趽뷯隽뷯莽볯꺼볯貼볯閽뷯覽뷯貼볯躼볯꒼뷯趽뷯钽뷯覽뷯薽뷯覽뷯貼볯躼볯銼볯醼볯覼볯薽뷯銽뷯邽뷯邽뷯覽뷯薽†볯₹趽뷯蒽뷯貽뷯钽뷯鎽†뷯閽뷯莽뷯覽뷯躽뷯ₓ辽뷯₆覽뷯蚽뷯膽뷯趽뷯钽뷯銽뷯ₙ莽뷯貽뷯鎽†뷯躽†뷯袽뷯₅銽뷯钽볯꒼뷯鎽뷯覽뷯莽뷯ₔ銽뷯貽뷯₅蚽뷯銽†볯醼볯림볯ₒ膽뷯蒽†볯閼†뷯薽뷯薽뷯钽뷯銽뷯躼볯薽뷯钽뷯蒽뷯鎽볯鎼볯貼볯隼볯隼裢醼볯鎼볯躼戼㹲銼볯銼볯궼뷯钽뷯閽뷯膽뷯袽뷯貼볯躼볯궼뷯钽뷯閽뷯膽뷯袽뷯貼볯躼볯낼뷯馽뷯躽볯꒼볯袼볯馼볯馼볯궼뷯貽뷯覽뷯貽뷯₅鎽뷯螽뷯膽뷯貽뷯躽뷯₇邽뷯钽뷯鞽뷯馽뷯ₓ辽뷯₆袽뷯鎽뷯膽뷯覽뷯薽볯銼†뷯薽뷯薽뷯钽뷯銽뷯躼볯蒽뷯躽뷯覽뷯覽뷯膽뷯覽뷯躽†뷯蚽†뷯躽†볯銼†뷯薽뷯薽뷯钽뷯銽裢蒽뷯邽뷯躽뷯薽뷯钽†볯膽볯讼†뷯辽뷯覽뷯覽뷯膽뷯覽뷯躽†뷯膽뷯袽뷯膽뷯ₙ覽뷯₎袽뷯趽뷯躽†볯겼裢隼볯ₐ邽뷯辽뷯馽뷯貽뷯莽뷯钽뷯莽†뷯薽뷯讽뷯趽뷯膽†뷯薽뷯貽뷯躼볯辽뷯銽뷯膽뷯₌辽뷯₆ꊼ뷯辽뷯辽뷯覽뷯膽뷯₌ꎼ뷯薽뷯覽뷯钽뷯馽볯銼볯钼볯醼볯鎼볯隼裢醼볯鎼볯銼볯㲎牢ਾ볯颼볯躼볯辽볯ꪼ볯貼볯膽뷯螽볯ꆼ볯貼볯袽뷯躽볯몼볯貼볯袽뷯辽볯뒼볯貼볯袽뷯躽뷯貼볯躼볯ꎼ뷯薽뷯貼볯躼볯銼볯醼볯覼볯薽뷯銽뷯躽뷯鎽뷯膽뷯覽뷯₎膽뷯薽뷯覽뷯銽뷯钽뷯鎽†뷯辽뷯覽뷯趽†뷯膽뷯銽뷯莽뷯辽뷯膽뷯薽裢覽뷯蒽뷯莽뷯蒽†뷯莽뷯钽뷯₅邽뷯躽뷯銽뷯膽뷯覽뷯覽뷯ₓ覽뷯₎銽뷯钽뷯躼볯覽뷯薽뷯钽뷯隽뷯₅蒽뷯鎽뷯膽뷯薽뷯ₓ膽뷯蒽†뷯莽뷯薽뷯莽뷯鎽볯閼볯貼볯馼볯鎼裢銼볯邼볯躼戼㹲銼볯钼볯궼뷯辽뷯薽볯꒼볯ꪼ볯貼볯袽뷯趽뷯薽뷯鎽볯ꪼ볯ꮼ볯貼볯膽뷯貽뷯躽볯ꪼ볯銈볯躼볯뒼뷯躽볯ꮼ볯ꊼ볯貼볯辽뷯銽뷯貼볯躼볯躼볯ꪼ뷯躽뷯覽뷯鎽볯꾼볯貼볯趽뷯辽뷯貼볯躼볯躼볯궼뷯銽뷯辽뷯讽볯낼볯늼볯袼볯邼볯醼볯ꖼ뷯邽뷯薽뷯鎽뷯辽뷯₎邽뷯钽뷯薽뷯躽†뷯蚽†뷯閽뷯膽뷯₎낼볯림†뷯薽뷯薽뷯钽뷯銽†뷯閽뷯钽뷯邽뷯鎽볯膽†뷯閽뷯躽뷯覽뷯膽뷯覽뷯薽†뷯薽뷯薽뷯鎽뷯₅钽뷯膽뷯鎽뷯銽뷯邽뷯覽뷯躽裢邽뷯貽뷯趽뷯銽뷯鎽뷯₅莽뷯膽뷯躽†뷯薽뷯莽뷯覽뷯躽†뷯钽뷯蒽뷯躼볯覽뷯莽뷯覽뷯覽뷯膽†뷯钽†볯覽뷯邽뷯馽뷯覽뷯膽†볯莽뷯膽볯ꊼ볯ꆼ볯銈볯薽뷯薽†볯钽뷯閽뷯钽뷯銽뷯₅膽뷯蒽†볯颽뷯銽뷯鎽뷯覽뷯躽볯醼볯銼볯貼볯邼볯銈볯醼볯躼戼㹲銼볯閼볯궼뷯銽뷯馽뷯趽뷯貼볯躼볯뎼뷯钽뷯貼볯躼볯ꦼ뷯辽뷯薽볯ꢼ볯貼볯閽뷯閽뷯膽뷯膽볯뎼볯貼볯薽뷯膽뷯覽뷯袽뷯貼볯躼볯ꮼ뷯躽뷯膽뷯膽볯ꮼ볯貼볯膽뷯辽볯뒼볯貼볯辽뷯袽뷯趽뷯銽뷯貼볯躼볯ꮼ뷯誽뷯趽뷯貼볯躼볯銼볯邼볯覼볯袽뷯₅躽뷯閽뷯辽뷯薽뷯钽뷯蒽뷯₅躽뷯閽뷯辽뷯薽뷯覽뷯₎떼†뷯銽뷯趽뷯钽뷯鎽†뷯躽뷯貽뷯趽뷯膽뷯覽뷯躽†뷯馽†뷯覽뷯薽뷯钽†뷯莽뷯覽뷯膽뷯覽뷯躽†뷯蚽†뷯膽뷯钽†뷯薽뷯貽뷯躼볯袽뷯₅ꪼ뷯閽뷯躽뷯貽†뷯蚽†뷯颽뷯薽뷯覽뷯薽뷯钽뷯貽†뷯薽뷯覽뷯覽뷯薽볯銼볯銼볯銼볯鞼裢銼볯钼볯㲎牢ਾ볯颼볯躼볯辽뷯辽뷯讽뷯₁ꢼ볯ꦼ뷯膽뷯膽뷯膽†볯貼볯膽뷯膽뷯覽†볯貼볯膽뷯膽뷯薽†볯貼볯讽뷯袽뷯鎽뷯覽†볯貼볯膽뷯膽뷯辽†볯貼볯閽뷯覽뷯覽†볯貼볯覽뷯膽뷯膽뷯覽†볯躼볯袽뷯辽뷯覽뷯₃膽뷯趽뷯躽뷯鎽뷯銽뷯钽뷯辽뷯₎辽뷯₆辽뷯膽뷯₌隽뷯鎽뷯邽뷯薽뷯鎽뷯躽†뷯馽뷯薽†볯ₒ銽뷯莽뷯邽뷯辽뷯ₒ膽뷯钽뷯螽뷯躽뷯鎽뷯ₔ钽뷯貽뷯膽뷯钽뷯躽†뷯颽뷯銽뷯鎽†뷯辽뷯袽†뷯馽뷯莽뷯銽뷯覽뷯貽†뷯躽뷯₄銽뷯躽뷯貽†뷯銽뷯钽뷯莽뷯覽뷯薽†뷯蚽뷯薽뷯钽뷯ₓ覽뷯₎銽뷯钽뷯ₓ鞽뷯钽뷯₈袽뷯邽뷯銽뷯薽뷯鎽뷯隽뷯₅袽뷯膽뷯钽†뷯膽뷯貽뷯銽뷯躼볯覽뷯莽†볯薽뷯銽뷯ₔꚼ뷯覽뷯貼볯邼볯銼볯閼볯钼볯钼裢馼볯躼戼㹲銼볯鞼볯궼뷯覽뷯貼볯躼볯躼볯ꎼ뷯膽뷯芽뷯銽뷯膽뷯躽볯겼볯貼볯貽뷯袽뷯閽뷯芽뷯螽뷯貼볯躼볯躼볯궼뷯莽뷯膽뷯辽뷯覽뷯袽볯꒼볯貼볯辽뷯銽뷯貼볯躼볯躼볯ꎼ뷯貽뷯趽뷯銽뷯貼볯躼볯뎼뷯薽뷯薽뷯薽뷯貼볯躼볯躼볯뎼뷯銽뷯閽볯ꢼ볯궼볯貼볯袽뷯趽뷯薽뷯鎽볯ꪼ볯ꮼ볯蚼볯閽뷯蒽뷯莽뷯貼볯躼볯銼볯邼볯覼볯뢼볯늼볯銼볯膽†뷯辽뷯薽뷯₌袽뷯趽뷯躽†볯₧邽뷯辽뷯薽뷯躽裢莽뷯閽뷯貽뷯蒽†뷯薽뷯薽뷯钽뷯銽볯膽뷯钽뷯隽뷯钽뷯蒽†뷯馽†뷯袽뷯₅邽뷯邽뷯覽뷯薽†볯覽볯뎼裢醼볯ꪼ뷯閽뷯躽뷯貽†뷯蚽†볯覽뷯貽뷯螽뷯莽뷯貽†볯袽뷯趽뷯鎽뷯銽뷯貼볯鞼볯貼볯颼볯隼볯銈볯颼볯鞼볯躼戼㹲銼볯颼볯궼뷯銽뷯钽뷯貼볯躼볯ꚼ볯떼뷯袽뷯讽뷯芽뷯貼볯躼볯膽뷯鎽뷯辽뷯膽볯궼볯ꢼ뷯銽뷯钽뷯貼볯躼볯膽뷯膽뷯膽뷯覽볯膽뷯蒽†볯躼볯閽뷯覽뷯辽뷯辽볯ꆼ뷯钽뷯銽뷯蒽†뷯膽뷯躽†뷯薽뷯莽뷯邽뷯覽뷯躽†뷯躽뷯₄覽뷯蚽뷯膽뷯趽뷯钽뷯銽뷯ₙ銽뷯鎽뷯辽뷯鎽뷯₅覽뷯₎趽뷯莽뷯₅貽뷯莽뷯覽뷯螽†뷯銽뷯鎽뷯膽뷯馽뷯貽뷯躽†뷯薽뷯薽뷯钽뷯銽볯꺼뷯钽뷯銽뷯貼볯馼볯鞼볯鎼볯颼볯隼볯颼裢颼볯躼戼㹲銼볯馼볯궼뷯銽뷯袽뷯貼볯躼볯躼볯궼볯ꊼ뷯螽뷯覽뷯貽뷯躽뷯貼볯躼볯躼볯袽뷯銽뷯貼볯躼볯躼볯薽뷯薽뷯钽볯늼볯ꢼ뷯銽뷯讽볯膽뷯蒽†볯躼볯膽뷯鎽뷯鎽뷯覽뷯膽볯袼볯邼볯邼볯ꦼ뷯钽뷯銽뷯膽뷯覽뷯躽뷯貽†볯躽뷯辽뷯₎辽뷯₆낼뷯膽뷯趽뷯莽뷯貽뷯螽뷯躼볯뢼볯ꦼ볯꺼뷯趽뷯躽뷯貽뷯钽뷯銽뷯₅蚽뷯銽†뷯袽뷯趽뷯讽뷯躽뷯₅銽뷯莽뷯邽뷯辽뷯鎽볯낼뷯膽뷯趽뷯莽뷯貽†볯薽뷯貼볯銼볯醼볯閼裢鞼볯躼戼㹲銼볯邼볯궼뷯鎽뷯膽뷯膽볯뎼볯貼볯馽뷯閽뷯貼볯躼볯躼뷯躽뷯₄낼뷯貽뷯螽뷯銽볯ꮼ볯꒼볯Ꞽ볯貼볯銼볯醼볯覼볯躽뷯辽뷯薽뷯覽뷯螽†볯낼볯늼†뷯薽뷯薽뷯辽뷯薽뷯銈뷯覽뷯鎽뷯蒽†뷯覽뷯膽뷯蒽뷯躼볯銽뷯螽†볯覽뷯莽뷯隽†볯辽뷯膽뷯ₙ뒼뷯莽뷯躽뷯貽볯鞼볯薽볯鞼裢薽볯閼볯㲎牢ਾ볯馼볯躼볯閽뷯钽뷯蚽뷯貼볯躼볯뎼뷯薽볯ꢼ볯ꊼ볯貼볯薽뷯芽뷯銽볯늼볯궼볯貼볯銽뷯鎽뷯銽뷯躽뷯貼볯躼볯躼볯랼뷯覽뷯薽볯ꎼ볯랼볯貼볯薽뷯钽뷯銽뷯貼볯躼볯ꆼ뷯辽뷯芽볯궼볯ꆼ볯貼뷯躽뷯₄낼뷯貽뷯螽뷯銽볯ꮼ볯꒼볯貼볯蒽뷯躽뷯覽뷯覽뷯膽뷯覽뷯躽†뷯躽뷯₄邽뷯辽뷯覽뷯覽뷯螽†뷯蚽†뷯辽뷯薽뷯₌膽뷯邽뷯膽볯ꆼ裢膽뷯銽뷯躽뷯莽뷯邽뷯辽뷯銈볯뢼볯₣莽뷯薽뷯辽뷯覽뷯薽†뷯薽뷯薽뷯钽뷯銽†볯袽뷯钽뷯銽뷯趽뷯銽볯ꪼ†볯覽뷯貽†볯袽뷯趽볯銼볯醼볯貼볯颼볯骼볯銼볯閼볯銈볯閼볯㲎牢ਾ볯馼볯躼볯膽뷯膽뷯膽뷯袽뷯貼볯躼볯뎼뷯讽뷯钽뷯貼볯躼볯ꮼ뷯芽뷯鎽뷯覽뷯膽볯ꮼ볯貼볯閽뷯閽뷯膽뷯袽뷯讽뷯貼볯躼볯궼뷯銽뷯钽뷯貼볯躼볯뎼뷯螽뷯銈볯覽뷯袽뷯蒽뷯貼볯躼볯뎼뷯辽뷯钽뷯膽뷯膽볯ꮼ볯貼볯膽뷯鎽뷯辽뷯膽볯뒼볯貼볯覽뷯膽뷯袽뷯貼볯躼볯꺼뷯銽뷯趽뷯馽뷯貼볯躼볯銼볯邼볯覼볯膽뷯覽뷯覽뷯膽뷯覽뷯躽†뷯蚽†볯袽볯銈뷯薽뷯覽뷯钽뷯蒽†뷯趽뷯閽뷯薽†뷯薽뷯邽뷯躽뷯薽†뷯馽†뷯銽뷯鎽뷯膽뷯貽뷯躽뷯覽뷯₎ꖼ†뷯薽뷯薽뷯钽뷯銽†볯낼볯躼볯袽뷯₅ꪼ뷯閽뷯躽뷯貽†뷯蚽†뷯颽뷯薽뷯覽뷯薽뷯钽뷯貽†뷯薽뷯覽뷯覽뷯薽볯銼볯钼볯銼볯隼볯銈볯颼볯钼볯㲎牢ਾ볯馼볯躼볯薽뷯邽뷯銽볯궼볯貼볯莽뷯趽뷯蒽뷯貼볯躼볯躼볯ꊼ뷯薽뷯钽볯ꪼ볯貼볯膽뷯貼볯躼볯躼볯랼뷯躽뷯貼볯躼볯낼뷯躽볯림볯ꎼ볯貼볯貽뷯覽뷯钽뷯躽볯ꮼ볯貼볯钽뷯銽뷯貼볯躼볯뎼뷯膽뷯貼볯躼볯ꎼ뷯辽뷯覽뷯螽†뷯躽뷯₄薽뷯邽뷯薽뷯鎽뷯辽뷯₎辽뷯₆膽†뷯薽뷯貽†뷯閽뷯蚽뷯莽뷯₅銽뷯莽뷯邽뷯辽뷯ₒ蚽뷯銽†뷯蒽뷯膽뷯莽뷯蒽†뷯貽뷯莽뷯鎽뷯貽뷯钽뷯辽뷯₎薽뷯蒽†뷯銽뷯蒽뷯莽뷯鎽†뷯蚽†뷯銽뷯钽뷯覽뷯鎽볯ꪼ†볯覽뷯貽†볯袽뷯趽볯醼볯馼볯貼볯隼볯骼볯醼볯醼볯馼볯颼裢閼볯邼볯躼戼㹲銼볯钼볯꺼뷯趽뷯钽뷯貼볯躼볯躼볯겼뷯钽뷯貼볯躼볯躼볯ꎼ뷯辽뷯膽볯ꊼ볯貼볯薽뷯钽뷯袽볯ꖼ볯ꆼ볯貼볯薽뷯芽뷯隽뷯莽뷯貼볯躼볯躼볯Ꞽ뷯閽뷯薽볯랼볯ꎼ볯貼볯辽뷯薽볯궼볯貼볯膽뷯袽뷯銽볯낼볯貼볯覽뷯覽볯ꖼ볯뎼볯蚼볯膽뷯讽뷯貼볯躼볯銼볯邼볯覼볯蒽뷯躽뷯鎽뷯躽뷯₅膽뷯螽뷯薽뷯钽뷯ₓꦼ볯銈볯邼†뷯銽뷯蒽뷯莽뷯覽뷯躽†뷯馽†뷯膽뷯銽뷯邽뷯膽뷯薽뷯ₓ钽뷯銽뷯閽뷯袽†뷯躽†볯銼볯₢銽뷯莽뷯邽뷯辽뷯銈뷯薽뷯覽뷯钽뷯蒽†뷯辽뷯钽뷯銽뷯躽뷯莽뷯覽뷯钽뷯辽뷯膽뷯₌趽뷯莽뷯膽뷯覽뷯趽볯뒼뷯薽†볯辽뷯銽뷯膽뷯₌辽뷯₆ꦼ뷯趽뷯躽뷯貽뷯螽뷯貼볯鞼볯貼볯銼볯邼裢颼볯鞼볯躼戼㹲銼볯閼볯꺼뷯閽뷯膽뷯躽볯ꪼ볯貼볯莽뷯膽뷯貽뷯貼볯躼볯ꚼ뷯銽뷯膽뷯貼볯躼볯ꖼ뷯蒽뷯銽뷯膽뷯躽볯뒼볯貼볯貽뷯薽뷯貼볯躼볯躼볯ꖼ뷯貽뷯銽뷯貼볯躼볯늼뷯覽뷯覽뷯螽볯꺼볯袼볯邼볯邼볯ꚼ뷯覽뷯骽뷯薽뷯醼†뷯鎽†뷯₁趽뷯銽뷯薽뷯ₒ辽뷯₆覽뷯蚽뷯膽뷯趽뷯钽뷯銽뷯ₙ趽뷯莽뷯辽뷯袽뷯螽뷯鎽볯膽뷯蒽†뷯钽뷯ₓ貽뷯螽뷯躽뷯₄랼뷯钽볯膽†뷯鎽†뷯躽뷯辽뷯隽뷯蒽†뷯躽†뷯薽뷯銽뷯螽뷯膽뷯趽뷯躽뷯₇궼뷯莽뷯芽뷯莽뷯薽뷯覽뷯趽†뷯閽뷯薽뷯莽뷯貽뷯鎽뷯鎽裢覽뷯蚽뷯莽뷯薽뷯₄趽뷯莽뷯辽뷯袽뷯螽뷯鎽볯뒼뷯薽†볯ꆼ볯ꖼ볯₢ꪼ뷯閽뷯躽뷯貽볯銼볯貼볯閼볯馼裢钼볯醼볯躼戼㹲銼볯隼볯꺼뷯莽뷯辽뷯鎽볯꒼볯ꖼ볯蚼볯覽뷯袽뷯貽뷯貼볯躼볯躼볯銼볯邼볯覼볯薽뷯辽뷯辽뷯覽뷯₎銽뷯莽뷯邽뷯辽뷯鎽볯ꎼ뷯薽뷯₍늼뷯隽볯醼볯颼볯醼볯醼볯銈볯隼볯醼볯㲎牢ਾ볯馼볯躼볯覽뷯貼볯躼볯궼뷯貼볯躼볯躼볯ꎼ뷯膽뷯貼볯躼볯躼볯뢼뷯貼볯躼볯뢼뷯貼볯躼볯銼볯醼볯覼볯貽뷯莽뷯鎽뷯銈뷯薽뷯薽뷯蒽뷯躽뷯ₔ覽뷯鎽뷯貽뷯躽뷯钽뷯辽뷯覽뷯₃邽뷯邽뷯覽뷯薽†뷯趽뷯膽뷯銽뷯ₓ覽뷯鎽뷯貽뷯躽†뷯覽뷯躽뷯貽뷯覽뷯螽†뷯覽뷯₁覽뷯蒽뷯莽뷯躽뷯₇膽뷯覽뷯辽뷯馽뷯薽†뷯躽뷯貽뷯趽뷯膽뷯覽뷯躽†뷯躽†뷯貽뷯莽뷯鎽뷯銈뷯薽뷯薽뷯蒽뷯躽뷯ₔ覽뷯鎽뷯貽뷯躽뷯钽뷯辽뷯覽뷯₃邽뷯邽뷯覽뷯薽†뷯薽뷯薽뷯钽뷯銽裢辽뷯薽뷯薽뷯邽뷯薽뷯鎽뷯躽뷯₇膽뷯覽뷯辽뷯馽뷯薽뷯躼볯袽뷯₅ꚼ볯뎼볯ꊼ†볯辽뷯銽뷯膽뷯貼볯隼볯銼볯颼볯銈볯鎼볯鎼볯㲎牢ਾ볯馼볯躼볯覽뷯蒽뷯銽뷯芽뷯銽뷯貼볯躼볯뒼뷯躽뷯銽뷯貼볯躼볯ꊼ뷯膽뷯讽뷯钽볯ꆼ볯貼볯銽뷯膽뷯覽볯ꆼ볯蚼볯辽뷯钽뷯躽뷯鎽볯ꖼ볯袼볯邼볯鎼볯뎼뷯袽뷯躽뷯辽뷯覽뷯薽†볯銈뷯袽뷯鎽뷯袽뷯钽뷯₅膽뷯蒽†뷯覽뷯貽뷯辽뷯貽뷯袽뷯鎽뷯袽뷯钽뷯蒽뷯莽†뷯莽뷯蒽†뷯銽뷯₅貽뷯鞽†뷯蚽뷯覽뷯覽뷯馽†뷯螽뷯躽뷯鎽뷯鎽†뷯辽뷯ₒ钽뷯薽†뷯銽뷯袽뷯躽†뷯薽뷯薽뷯钽뷯銽†볯낼볯隼볯躼볯薽뷯貽뷯貽뷯銽†볯覽뷯躽뷯貽뷯覽뷯螽볯醼볯貼볯鎼볯銈볯钼볯躼戼㹲銼볯馼볯꺼뷯誽뷯薽뷯誽뷯銽볯뎼볯貼볯覽뷯莽뷯薽뷯貼볯躼볯躼볯겼뷯閽뷯鎽볯늼볯袼볯邼볯隼볯ꆼ뷯袽뷯鎽뷯辽뷯₎Ꞽ볯ꎼ볯鎽†뷯躽†뷯趽뷯閽뷯辽뷯辽뷯馽볯ꊼ뷯辽뷯袽뷯趽뷯莽뷯貽†뷯袽뷯銽뷯膽뷯辽뷯辽뷯馽볯㲎牢ਾ볯邼볯躼볯覽뷯袽뷯辽볯늼볯貼볯膽뷯鎽뷯趽뷯銽뷯貼볯躼볯뎼뷯覽뷯覽볯뒼볯貼볯膽뷯螽볯랼볯貼볯膽뷯膽뷯膽볯뒼볯貼볯躽뷯貼볯躼볯뎼뷯鎽뷯馽뷯趽뷯貼볯躼볯醼볯馼볯覼볯薽뷯辽뷯膽뷯覽뷯薽볯膽†닎볯銈뷯蒽뷯薽뷯薽뷯螽뷯莽†뷯螽뷯躽뷯鎽뷯貼뷯銽뷯貽뷯躽뷯鎽†뷯閽뷯隽뷯隽뷯貽†뷯躽†뷯₁趽뷯銽뷯躽뷯₅趽뷯蒽뷯貽†뷯蚽†뷯辽뷯螽뷯鎽뷯覽뷯薽†뷯薽뷯銽뷯ₔ蚽뷯覽뷯閽뷯薽†뷯躽뷯閽뷯薽뷯₄芽뷯ₙ隽뷯銽뷯貽†뷯馽뷯莽뷯銽뷯覽뷯覽뷯骼뷯閽뷯邽뷯薽뷯鎽뷯辽뷯₎辽뷯₆钽뷯趽뷯銽†뷯薽뷯銽뷯鎽뷯鎽†뷯膽뷯钽뷯銽裢캒₱邽뷯辽뷯閽뷯钽뷯辽뷯₎覽뷯₎钽뷯薽†뷯薽뷯銽뷯躼볯辽뷯銽뷯膽뷯₌辽뷯₆钽뷯薽†볯趽뷯銽뷯莽뷯躽†볯辽뷯貽뷯螽뷯₅辽뷯₆ꎼ뷯銽뷯覽뷯貽뷯螽뷯貼볯銼볯颼볯颼裢颼볯閼볯㲎牢ਾ볯邼볯躼볯芽뷯躽뷯钽뷯貼볯躼뷯躽뷯₄ꢼ뷯膽볯뒼볯貼볯邽뷯覽뷯螽뷯鎽뷯躽뷯₅醼裢邽뷯辽뷯邽뷯膽뷯薽†뷯躽†뷯辽뷯螽뷯貽뷯钽뷯辽뷯₎膽뷯蒽†뷯躽뷯貽뷯趽뷯膽뷯覽뷯躽볯뎼뷯趽뷯躽†볯趽뷯閽뷯辽뷯膽뷯袽뷯貽볯銼볯醼볯貼볯钼볯鞼볯銈볯醼볯㲎牢ਾ볯邼볯躼볯袽뷯袽뷯趽뷯貼볯躼볯림뷯趽뷯螽뷯莽뷯覽볯꺼볯貼볯覽뷯袽뷯辽뷯膽볯ꮼ볯貼볯覽뷯膽볯뒼볯貼볯鎽뷯覽뷯貼볯躼볯떼뷯薽뷯袽뷯钽뷯銈볯膽뷯膽뷯貼볯躼볯ꮼ뷯芽뷯馽뷯鎽뷯覽볯ꢼ볯貼볯袽뷯趽뷯骽뷯貼볯躼볯ꮼ뷯钽뷯蒽뷯貼볯躼볯랼뷯讽뷯钽뷯躽뷯貼볯躼볯銼볯邼볯覼볯躽뷯膽뷯莽뷯蒽†뷯辽뷯膽뷯₌邽뷯辽뷯閽뷯钽뷯辽뷯₎辽뷯₆辽뷯钽뷯辽뷯辽뷯钽뷯躽†뷯躽†뷯袽뷯閽뷯膽뷯辽뷯蒽†뷯辽뷯躽뷯鎽볯뒼뷯薽†볯辽뷯銽뷯膽뷯₌辽뷯₆늼뷯薽뷯趽뷯钽뷯貽뷯螽뷯貼볯馼볯銼볯隼볯銈볯邼볯鞼볯㲎牢ਾ볯邼볯躼볯讽뷯趽뷯钽뷯貼볯躼볯ꦼ뷯芽뷯貼볯躼볯궼뷯銽뷯讽뷯鞽뷯貼볯躼볯ꦼ뷯辽뷯貼볯躼볯뎼뷯讽뷯趽뷯钽뷯貼볯躼볯꺼뷯趽뷯钽뷯貼볯躼볯뎼뷯躽뷯膽볯ꖼ볯袼볯邼볯銼볯閼裢ꢼ볯銼볯₡銽뷯莽뷯邽뷯辽뷯ₒ鎽뷯芽뷯馽뷯薽†뷯躽†뷯袽뷯₅邽뷯銽뷯邽뷯薽뷯膽뷯₌芽뷯膽뷯莽뷯₈辽뷯₆鎽뷯躽뷯辽뷯馽†뷯覽뷯薽뷯鎽†뷯鎽†뷯躽뷯辽뷯隽뷯蒽†뷯躽†뷯袽뷯₅邽뷯钽뷯躽뷯覽뷯钽뷯辽뷯₎辽뷯₆覽뷯蚽뷯膽뷯趽뷯钽뷯銽뷯ₙ邽뷯覽뷯₎覽뷯₎銽뷯钽뷯躼볯膽뷯躽볯馼볯貼볯鎼볯銈볯钼볯躼戼㹲鎼볯钼볯꾼뷯芽뷯銽뷯貼볯躼볯궼뷯꺼뷯貽뷯鎽볯ꪼ볯貼볯膽뷯莽뷯薽뷯銈볯貽뷯隽뷯骽볯궼볯貼볯膽뷯閽뷯蒽뷯銽볯뎼볯貼볯閽볯궼볯貼볯覽볯낼볯貼볯袽뷯薽뷯薽볯겼볯貼볯辽뷯覽뷯膽뷯膽볯ꢼ볯貼볯覽뷯貼볯躼볯躼볯ꢼ뷯覽뷯銽뷯莽뷯鎽뷯辽뷯蚽뷯貼볯躼볯銼볯醼볯覼볯₧邽뷯辽뷯薽뷯躽裢莽뷯閽뷯貽뷯蒽†뷯薽뷯薽뷯钽뷯銽†볯醼†뷯薽뷯薽뷯覽뷯躽†뷯趽뷯銽뷯隽뷯鎽†뷯躽뷯閽뷯覽뷯₎鎽뷯躽뷯覽뷯覽뷯覽뷯馽†뷯躽†뷯覽뷯钽裢覽뷯蒽뷯莽뷯蒽†뷯芽뷯鎽뷯₅趽뷯莽뷯躼볯袽뷯₅ꪼ뷯閽뷯躽뷯貽†뷯蚽†뷯貽뷯躽뷯莽뷯貽†뷯躽뷯薽뷯钽뷯螽뷯钽뷯辽뷯貼볯銼볯貼볯钼볯钼裢銼볯閼볯躼戼㹲鎼볯閼볯꾼뷯袽뷯膽뷯貼볯躼볯躼볯Ꞽ뷯馽뷯膽뷯薽뷯覽뷯骽볯ꊼ볯貼볯覽뷯躽뷯辽뷯鎽뷯膽裢Ꞽ뷯薽뷯膽볯ꊼ볯貼볯覽뷯莽뷯莽볯궼볯貼볯覽뷯钽뷯莽뷯薽뷯貼볯躼볯궼뷯貽뷯貼볯躼볯躼볯ꎼ뷯銽뷯薽뷯銽뷯貼볯躼볯躼볯궼뷯馽뷯銽볯ꊼ볯貼볯膽뷯骽뷯躽뷯貼볯躼볯겼뷯薽뷯銽볯뒼볯袼볯邼볯閼볯꺼뷯隽뷯貽†볯銽뷯邽뷯覽뷯₃늼뷯膽뷯銽뷯躽뷯薽뷯薽뷯钽뷯ₓ覽뷯₎ꆼ뷯閽뷯钽†볯銈볯薽뷯貽†볯銽뷯莽뷯銽뷯辽뷯ₒꆼ뷯閽뷯薽†볯馽뷯邽뷯辽뷯貽뷯鎽뷯覽뷯₃겼뷯閽뷯薽뷯覽뷯₁ꦼ뷯隽뷯貽뷯覽뷯螽†뷯袽뷯₅궼볯겼†볯薽뷯薽볯ꪼ뷯閽뷯躽뷯貽†뷯蚽†볯覽뷯钽뷯莽뷯薽뷯覽뷯钽뷯馽볯ꎼ뷯钽뷯莽뷯薽뷯覽뷯钽뷯馽볯邼볯銼볯醼볯閼볯醼볯閼볯隼볯邼볯躼戼㹲鎼볯隼볯꾼뷯钽볯ꎼ볯貼뷯钽†뷯貽볯늼뷯貽뷯₅辽뷯₆膽뷯隽뷯躽뷯薽뷯₄螽뷯馽뷯膽뷯覽뷯躽†뷯躽뷯₄邽뷯辽뷯閽뷯钽뷯ₓ覽뷯₎莽뷯貽뷯閽뷯膽뷯ₒ鎽뷯螽뷯膽뷯貽뷯躽뷯躼볯薽뷯辽뷯ₘ芽뷯辽뷯辽뷯馽볯銼볯醼볯貼볯骼볯醼볯銈볯銼볯躼戼㹲鎼볯鞼볯낼뷯膽뷯辽뷯薽뷯貼볯躼볯랼뷯钽뷯辽뷯貼볯躼볯躼볯겼뷯₉ꪼ볯貼볯膽뷯隽뷯躽뷯躽볯ꮼ볯貼볯辽뷯钽뷯膽볯ꆼ볯貼볯膽뷯讽뷯躽볯ꆼ볯ꎼ볯貼볯膽뷯覽뷯貼볯躼볯ꎼ뷯閽뷯袽뷯膽뷯貼볯躼볯躼볯꒼뷯薽뷯貼볯躼볯躼볯겼뷯躽뷯膽뷯钽뷯銽볯Ꞽ볯ꦼ볯貼볯袽뷯趽뷯鎽볯궼볯貼볯辽뷯芽뷯鎽볯ꪼ볯궼볯貼볯膽뷯銽뷯钽뷯貼볯躼볯躼볯ꊼ뷯薽뷯袽뷯閽뷯ₓꆼ볯貼볯辽뷯邽뷯銽†볯躼볯躼볯膽뷯蒽†볯膽뷯蒽뷯貽뷯覽뷯銈볯膽뷯趽†볯躼볯躼볯薽뷯薽뷯钽뷯銽†뷯辽뷯ₒ膽뷯隽뷯躽뷯薽뷯₄螽뷯馽뷯膽뷯覽뷯躽†뷯躽뷯₄邽뷯辽뷯閽뷯钽뷯袼볯ꆼ볯ꖼ볯蒽뷯蚽뷯莽뷯薽뷯莽뷯ₙ膽뷯钽뷯躽뷯膽뷯薽뷯ₓ钽뷯薽†뷯薽뷯薽뷯辽뷯趽뷯躽뷯ₔ辽뷯₆膽뷯袽뷯銽뷯鎽뷯貽뷯銽뷯鎽뷯鎽†뷯躽†뷯覽뷯芽뷯钽뷯鎽볯꒼뷯膽뷯薽뷯薽뷯躼볯邼볯颼볯閼볯骼볯钼볯醼裢馼볯㲎牢ਾ볯邼볯躼볯膽뷯閽뷯膽볯낼볯貼볯袽뷯骽뷯钽볯낼볯겼볯貼볯辽뷯膽뷯钽볯궼볯貼볯閽뷯骽뷯薽뷯貼볯躼볯겼뷯閽뷯鎽볯늼볯貼볯覽뷯貼볯躼볯躼볯뎼뷯膽뷯讽볯ꢼ볯貼볯袽뷯銽뷯辽뷯蒽볯늼볯겼볯蚼볯膽뷯鎽볯ꢼ볯겼볯袼볯邼볯閼볯ꦼ뷯钽뷯銽뷯膽뷯覽뷯躽뷯貽†볯躽뷯辽뷯₎辽뷯₆ꊼ뷯鎽뷯莽†뷯躽뷯₄ꎼ뷯覽뷯覽뷯膽뷯₌낼뷯膽뷯趽뷯莽뷯貽뷯螽뷯躼볯ꎼ볯ꦼ볯ꦼ볯ꢼ뷯鎽뷯膽뷯覽뷯薽†볯薽뷯薽뷯钽뷯銽뷯躼볯袽뷯銽뷯膽뷯辽뷯₌늼뷯隽볯隼볯貼볯邼볯銈볯閼볯躼戼㹲鎼볯馼볯낼뷯銽뷯₋ꪼ†뷯钽†뷯貽볯袼볯邼볯颼볯궼볯낼裢醼볯ꎼ볯늼볯ₒ鎽뷯鎽뷯薽뷯₍覽뷯ₓ覽뷯隽뷯貽뷯薽뷯₄覽뷯₎袽뷯螽뷯₈螽뷯閽뷯辽뷯薽裢覽뷯蒽뷯莽뷯蒽†뷯覽뷯銽뷯躽뷯莽뷯覽뷯₎膽뷯蒽†뷯馽뷯薽†볯뚼†뷯辽뷯貽뷯螽뷯躽†뷯颽뷯銽뷯鎽뷯覽뷯躽†뷯躽†뷯閽뷯钽뷯銽뷯蒽†뷯薽뷯膽뷯螽뷯膽뷯₌莽뷯貽뷯鎽볯ꆼ뷯₍ꪼ†볯袽뷯鎽뷯辽뷯₌늼뷯躽뷯貽†볯袽뷯鎽뷯辽뷯貼볯馼볯骼볯鞼볯馼裢ꚼ볯閼볯躼戼㹲鎼볯邼볯낼뷯銽뷯貼볯躼볯薽뷯ₔ膽뷯躼볯醼볯馼볯覼볯閽뷯邽뷯薽뷯鎽뷯辽뷯₎辽뷯₆膽뷯莽뷯貽뷯銽뷯钽뷯蒽†뷯覽뷯芽뷯钽뷯莽†뷯钽뷯薽뷯辽뷯莽뷯薽뷯辽뷯覽뷯ₓ芽뷯ₙ钽뷯薽†뷯辽뷯閽뷯貽뷯₅銽뷯莽뷯邽뷯辽뷯ₒ蚽뷯銽†뷯蒽뷯膽뷯莽뷯蒽†뷯貽뷯莽뷯钽뷯辽뷯₎薽뷯蒽뷯銽뷯蒽뷯莽뷯鎽볯꺼뷯钽뷯銽뷯₅趽뷯蒽뷯莽뷯躽뷯貼볯骼볯邼볯閼裢醼볯鎼볯躼戼㹲鎼볯醼볯낼뷯銽뷯薽뷯貼볯躼볯ꢼ뷯芽뷯芽볯ꆼ볯貼볯辽뷯薽뷯鎽볯Ꞽ볯貼볯銽뷯芽뷯貽뷯貼볯躼볯늼뷯覽뷯膽뷯躽볯ꚼ볯袼볯邼볯馼볯꺼뷯钽뷯覽뷯躽뷯銈뷯薽뷯薽뷯蒽뷯躽뷯ₔ鎽뷯莽뷯薽뷯覽뷯躽†뷯蚽†뷯貽뷯莽뷯鎽뷯銈뷯薽뷯薽뷯蒽뷯躽뷯ₔ覽뷯鎽뷯貽뷯躽뷯钽뷯辽뷯覽뷯₃邽뷯貽뷯邽뷯邽뷯覽뷯薽†뷯銽뷯趽†뷯銽뷯趽뷯銽뷯ₙ趽뷯銽뷯躽뷯₅ꮼ†뷯薽뷯貽뷯躼볯覽뷯芽뷯钽뷯貽뷯螽뷯膽볯閼볯貼볯颼볯銈볯馼볯躼戼㹲鎼볯銼볯낼뷯鎽뷯薽뷯躽뷯莽뷯貼볯躼볯躼볯隽뷯躽†볯閽뷯螽뷯貽뷯薽뷯貼볯躼볯ꆼ뷯₌ꆼ뷯辽뷯蒽볯ꮼ볯貼볯薽뷯貼볯躼裢ꆼ볯貼볯閽뷯鎽뷯袽뷯躽뷯辽뷯蚽볯ꚼ볯貼볯辽뷯鎽볯ꮼ볯貼볯覽뷯貽뷯薽뷯貼볯躼볯躼볯궼뷯貽뷯薽뷯覽뷯螽뷯貼볯躼볯躼볯ꚼ뷯膽뷯骽볯뒼볯蚼볯膽뷯覽뷯薽뷯貼볯躼볯銼볯邼볯覼볯₧邽뷯辽뷯薽뷯躽裢莽뷯閽뷯貽뷯蒽†뷯薽뷯薽뷯钽뷯銽†볯銼볯閼†뷯躽뷯₄覽뷯鎽†뷯覽뷯膽뷯蒽†볯낼볯₡膽뷯薽†뷯躽뷯辽뷯隽뷯蒽†뷯躽†뷯膽뷯躽뷯薽뷯膽뷯莽뷯₅辽뷯₆袽뷯趽뷯躽†뷯膽뷯銽†뷯銽뷯鞽뷯袽볯꺼뷯钽뷯銽뷯₅螽뷯躽뷯钽뷯莽뷯貼볯邼볯鎼볯馼裢鎼볯钼볯㲎牢ਾ볯醼볯躼볯膽뷯薽뷯貼볯躼볯躼볯醼볯馼볯覼볯辽뷯膽뷯辽뷯钽뷯钽뷯躽†뷯躽뷯₄覽뷯鎽†뷯薽뷯薽뷯钽뷯銽†뷯膽뷯覽뷯馽볯ꚼ뷯辽뷯钽†볯薽뷯銽뷯薽뷯蒽뷯莽뷯覽뷯辽뷯貼볯邼볯醼볯鞼裢醼볯颼볯㲎牢ਾ볯醼볯躼볯薽뷯閽뷯辽볯ꪼ볯貼볯膽볯辽뷯螽뷯貼볯躼볯躼볯궼뷯钽뷯袽뷯鎽볯ꢼ볯랼볯貼볯銽뷯薽뷯貼볯躼볯躼볯ꮼ뷯薽뷯蚽뷯銽볯ꊼ볯겼볯蚼볯膽뷯薽뷯覽뷯閽뷯銈볯閽뷯蚽볯ꎼ볯袼볯馼볯颼볯꒼뷯鎽뷯銽뷯芽뷯钽뷯辽뷯₎辽뷯₆躽뷯莽뷯莽뷯邽뷯覽뷯込뷯銽뷯袽뷯躽뷯躽†볯놼†뷯薽뷯薽뷯钽뷯銽†뷯銽뷯躽뷯莽뷯覽뷯钽†뷯躽†뷯閽뷯膽뷯₎莽뷯躽뷯銽뷯貽†뷯薽뷯隽뷯閽뷯ₓ鎽뷯鎽뷯薽뷯₍膽뷯蒽†뷯趽뷯閽뷯薽†뷯薽뷯貽뷯躼볯辽뷯銽뷯膽뷯₌辽뷯₆躽뷯閽뷯辽뷯趽뷯閽뷯辽뷯辽뷯馽볯颼볯貼볯颼볯銈볯馼볯躼戼㹲鎼볯閼볯낼뷯躽뷯貼볯躼裢궼볯貼뷯膽뷯₎蒽뷯₅Ꞽ뷯銽뷯薽볯궼볯꒼볯貼볯袽뷯躽뷯貼볯躼裢ꚼ볯貼볯膽뷯銽뷯貼볯躼볯躼볯늼뷯趽뷯薽뷯鎽뷯膽뷯貽볯ꖼ볯ꊼ볯貼뷯膽뷯₎겼뷯薽뷯貼볯躼볯躼볯궼뷯莽뷯膽뷯貼볯躼볯躼볯겼뷯躽볯ꢼ볯銈볯躼볯ꢼ뷯趽뷯躽뷯貼볯躼볯銼볯醼볯覼볯邽뷯莽뷯蚽뷯莽†뷯颽뷯銽뷯鎽뷯覽뷯躽†뷯蚽†볯낼볯閼볯ₖ芽뷯ₙ袽뷯趽뷯躽†뷯馽뷯辽뷯辽뷯覽뷯₃貽뷯趽뷯袽뷯莽뷯钽뷯鎽볯ꪼ뷯閽뷯躽뷯貽†뷯蚽†뷯薽뷯讽뷯莽뷯钽뷯₅芽뷯辽뷯辽뷯馽볯馼볯貼볯鎼볯銈볯钼볯躼戼㹲鎼볯隼볯낼뷯銽뷯薽뷯貼볯躼볯뚼뷯貽뷯躽뷯覽볯낼볯貼볯閽뷯閽뷯鎽볯ꪼ볯꺼볯貼볯膽뷯鎽뷯貼볯躼볯떼뷯骽뷯躽볯ꊼ볯袼볯馼볯颼볯떼뷯薽†뷯蚽†뷯₁邽뷯膽뷯趽뷯莽뷯讽뷯躽뷯钽뷯莽†뷯辽뷯薽뷯₌钽뷯₏莽뷯膽뷯膽뷯钽뷯銽뷯骽뷯₅钽뷯薽†뷯袽뷯銽뷯钽뷯辽뷯覽뷯袼볯뎼볯覼뷯躽뷯₄邽뷯辽뷯膽뷯钽뷯躽볯낼볯겼볯銽뷯鎽뷯辽뷯鎽뷯₅钽뷯₏钽뷯馽뷯辽뷯銽뷯邽뷯躽裢銽뷯貽뷯膽뷯覽뷯螽†뷯辽뷯趽뷯躽뷯袼볯ꢼ볯覼뷯躽†뷯膽뷯躼볯薽뷯袽뷯蒽뷯ₓ膽뷯蒽†뷯覽뷯蒽뷯躽뷯鎽†뷯躽†뷯颽뷯薽뷯覽뷯薽뷯钽뷯貽†뷯躽뷯₄莽뷯覽뷯覽뷯膽뷯₌邽뷯膽뷯趽뷯莽뷯貽뷯螽뷯貼볯邼볯鎼볯鞼裢鎼볯醼볯㲎牢ਾ볯醼볯躼볯薽뷯薽뷯鎽뷯躽볯ꢼ볯蚼볯馽뷯薽뷯貼볯躼볯醼볯鞼볯覼볯薽뷯銽뷯钽뷯躽†뷯辽뷯薽裢銽뷯鎽뷯辽뷯鎽뷯₅覽뷯₎袽뷯膽뷯钽뷯₈膽뷯蒽†뷯袽뷯辽뷯覽뷯₃邽뷯躽뷯銽뷯膽뷯覽뷯₃覽뷯蚽뷯膽뷯趽뷯钽뷯銽뷯ₙ蒽뷯鎽뷯膽뷯薽볯뎼뷯膽뷯蒽뷯躽뷯隽뷯膽뷯₎誽뷯閽뷯躽뷯貽†뷯蚽†뷯膽뷯钽뷯辽뷯躽뷯薽뷯辽뷯辽뷯馽볯醼볯貼볯閼볯銈볯隼볯躼戼㹲鎼볯颼볯낼뷯貽뷯螽뷯銽볯ꮼ볯꒼볯蚼볯覽뷯躽뷯貼볯躼볯躼볯銼볯邼볯覼볯貽뷯閽뷯覽뷯膽뷯覽뷯螽†뷯躽뷯覽뷯袽뷯鎽†뷯躽뷯辽†뷯銽뷯钽뷯覽뷯銈뷯銽뷯钽뷯覽뷯₎覽뷯钽뷯銽뷯莽뷯覽뷯躽뷯ₓ閽뷯覽뷯螽†뷯覽뷯貽뷯趽뷯躽뷯鎽뷯薽뷯莽뷯₅銽뷯鎽뷯躽뷯躽뷯薽†뷯躽뷯銽뷯馽†뷯銽뷯躽뷯蚽뷯銽볯ꊼ볯ꖼ볯覼볯꺼뷯钽†볯薽뷯袽뷯蒽뷯ₓ鎼볯醼볯閼裢醼볯钼볯㲎牢ਾ볯醼볯躼볯覽뷯銽뷯覽뷯薽뷯貼볯躼볯ꆼ뷯袽뷯讽볯림볯貼볯膽뷯薽뷯膽뷯貼볯躼볯躼볯ꪼ뷯膽뷯辽뷯膽볯뚼볯낼볯袼볯邼볯醼볯뎼뷯銽뷯莽뷯閽뷯膽뷯₌蚽뷯膽뷯閽뷯薽뷯ₓ辽뷯₆膽뷯薽뷯辽뷯覽뷯薽†뷯薽뷯薽뷯钽뷯銽뷯骼뷯銽뷯趽†뷯銽뷯鎽뷯膽뷯₌钽뷯₏蚽뷯躽뷯钽뷯辽뷯躼볯覽뷯莽뷯覽뷯₍ꊼ뷯辽뷯袽뷯鎽†볯莽뷯膽볯醼볯邼볯貼볯銼볯鎼裢醼볯钼볯躼戼㹲鎼볯邼볯낼뷯貽뷯膽뷯貼볯躼볯躼볯ꎼ뷯閽뷯薽뷯鎽볯꒼볯ꪼ볯貼볯膽뷯躽뷯鎽볯ꆼ볯ꆼ볯貼볯閽뷯讽뷯薽뷯貼볯躼볯躼볯ꎼ뷯覽뷯躽뷯貼볯躼볯躼볯ꢼ뷯鎽뷯覽뷯螽볯겼볯ꮼ볯貼볯膽뷯薽뷯辽뷯貼볯躼裢ꆼ볯貼볯貽뷯躽뷯貼볯躼볯躼볯ꚼ뷯貽뷯馽볯ꪼ볯ꪼ볯蚼볯銽뷯薽뷯貼볯躼볯銼볯邼볯覼볯₡莽뷯蒽뷯躽뷯₇邽뷯貽뷯趽뷯銽뷯袽뷯鎽뷯₍覽뷯₎钽뷯薽†볯림볯겼볯銼†뷯薽뷯薽뷯钽뷯銽†뷯覽뷯袽†뷯薽뷯閽뷯薽뷯₄膽뷯蚽뷯躽뷯钽뷯ₙ钽뷯₏겼볯꒼볯ₔ覽뷯ₓ膽뷯鎽뷯莽뷯膽뷯薽뷯₄鞽뷯钽뷯₈膽뷯钽뷯趽뷯躼볯袽뷯銽뷯膽뷯辽뷯薽뷯薽뷯覽뷯鎽†뷯躽뷯₄Ꞽ뷯躽뷯趽뷯莽뷯貼볯钼볯隼볯鞼裢隼볯鎼볯㲎牢ਾ볯銼볯躼볯覽뷯趽뷯貽뷯覽볯꒼볯貼볯躼볯覽뷯蚽뷯銽뷯蒽뷯貼볯躼볯膽뷯覽뷯躽뷯躽뷯貼뷯躽뷯₄ꚼ볯늼뷯蒽뷯覽뷯閽뷯骽†뷯薽†볯辽뷯鎽뷯莽뷯躼볯袽뷯₅薽뷯蒽뷯莽뷯躽뷯膽뷯覽뷯辽뷯蒽†뷯馽뷯钽뷯趽†뷯鎽†뷯₁钽뷯銽뷯薽뷯ₔ蚽뷯銽†뷯袽뷯銽뷯邽뷯閽뷯覽뷯₃蒽뷯閽뷯鎽볯뒼뷯薽뷯蒽뷯ₓ낼뷯膽뷯趽뷯莽뷯貽†볯莽뷯貼볯邼볯邼볯銼볯骼볯醼볯銈볯钼볯㲎牢ਾ볯銼볯躼볯辽뷯辽뷯辽볯꺼볯ꪼ볯貼볯銽뷯閽뷯膽뷯钽볯낼볯貼볯覽뷯辽뷯膽뷯閽볯ꆼ볯貼볯膽뷯螽볯ꪼ볯蚼볯辽뷯蒽뷯膽뷯蒽볯꒼볯ꚼ볯袼볯邼볯鎼볯낼볯ꖼ†볯ₒ蒽뷯蚽뷯薽뷯薽뷯钽뷯膽뷯貽뷯ₙ銽뷯螽뷯貽뷯钽뷯鎽†뷯辽뷯辽뷯馽뷯薽裢蒽뷯銽뷯隽뷯蒽†뷯薽뷯蒽뷯覽뷯覽뷯₃莽뷯貽뷯₌莽뷯钽뷯讽뷯躽뷯₅銽뷯鎽뷯辽뷯鎽뷯鎽†뷯薽뷯薽뷯蒽뷯躽뷯₇辽뷯₎銽뷯莽뷯邽뷯辽뷯ₒ閽뷯膽뷯薽볯ꖼ볯₰銼볯ꖼ볯₰钼볯躼볯辽뷯薽뷯閽뷯膽뷯ₒ覽뷯趽뷯躽뷯貽뷯螽뷯貼볯钼볯銼볯钼裢銼볯閼볯㲎牢ਾ볯銼볯躼볯辽뷯薽뷯貽볯랼볯뎼볯蚼볯辽뷯膽뷯袽볯ꪼ볯袼볯邼볯鎼볯뒼뷯薽†뷯辽뷯覽뷯辽뷯袽뷯貽†뷯袽뷯趽뷯膽뷯钽뷯膽뷯钽뷯躽뷯ₔ閼裢辽뷯辽裢ꖼ볯ꖼ†뷯躽뷯₄钽뷯薽†볯뢼볯₥銽뷯莽뷯邽뷯辽뷯躼볯銽뷯螽뷯薽뷯鎽†뷯躽†뷯覽뷯覽뷯₄銽뷯鎽뷯膽뷯莽뷯貼볯銼볯隼볯醼裢隼볯閼볯㲎牢ਾ볯銼볯躼볯閽뷯銽뷯躽뷯辽†볯랼볯궼뷯銽뷯钽뷯₁ꢼ볯림뷯趽뷯趽뷯钽뷯₏ꮼ볯ꮼ뷯钽뷯辽뷯膽†볯貼볯膽뷯膽뷯膽†볯貼볯閽뷯膽뷯覽†볯貼볯膽뷯膽뷯閽뷯袽뷯₉궼볯ꢼ뷯袽†볯ꢼ볯銼볯醼볯覼볯躽뷯覽뷯覽뷯覽뷯躽†뷯蚽†볯ꆼ볯ꖼ†뷯覽뷯躽뷯貽뷯覽뷯螽†뷯袽뷯辽뷯螽뷯₈钽뷯薽†뷯躽뷯銽뷯莽뷯貽뷯閽뷯膽뷯ₒ蒽뷯貽뷯隽뷯銽뷯ₙ辽뷯₆覽뷯袽뷯芽뷯钽뷯銽†뷯薽뷯钽뷯蒽뷯鎽†뷯馽†볯ꖼ볯₩莽뷯钽뷯辽뷯覽뷯膽뷯覽뷯躽볯ꦼ뷯钽†볯₪궼뷯貽†볯薽뷯躼볯鎼볯貼볯鎼볯銈볯钼볯躼戼㹲鎼볯閼볯놼뷯躽볯겼볯貼볯閽뷯膽뷯薽뷯膽볯ꦼ볯貼볯辽뷯蒽뷯躽볯겼볯Ꞽ볯貼볯膽뷯螽볯ꎼ볯貼볯袽뷯躽뷯貼볯躼볯몼뷯膽뷯貼볯躼볯ꚼ뷯躽뷯貽뷯覽볯Ꞽ볯貼볯閽볯ꢼ볯貼볯膽뷯貼볯躼볯躼볯ꎼ뷯薽뷯薽뷯辽뷯貼볯躼볯ꆼ뷯膽뷯馽뷯躽볯늼볯貼볯钽뷯隽뷯躽뷯貼볯躼볯躼볯ꢼ뷯躽뷯薽뷯貼볯躼볯躼볯銼볯醼볯覼볯钽뷯閽뷯钽뷯銽뷯貽†뷯覽뷯貽뷯螽뷯躼볯銽뷯鎽뷯膽뷯₌鎽뷯銽뷯莽뷯閽뷯薽†뷯蚽†뷯袽뷯₅莽뷯薽뷯辽뷯覽뷯薽†뷯薽뷯薽뷯钽뷯銽†볯뢼볯늼볯ₔ覽뷯₎莽뷯趽뷯貽뷯颽†뷯覽뷯袽†뷯₁隽뷯銽뷯貽†뷯袽뷯趽뷯讽뷯躽뷯躼볯莽뷯薽뷯莽뷯貼볯钼볯貼볯醼볯鞼裢醼볯銼볯躼戼㹲鎼볯隼볯놼뷯貼볯躼볯ꚼ뷯躽볯꺼볯貼볯膽볯ꎼ볯貼볯膽뷯螽볯뒼볯貼볯膽뷯貼볯躼볯ꚼ뷯貼볯躼볯랼뷯躽뷯貼볯躼볯뎼뷯覽뷯膽뷯膽볯뎼볯Ꞽ볯貼볯辽뷯螽볯뢼볯蚼볯膽볯辽뷯钽뷯貼볯躼볯躼볯銼볯醼볯覼볯躽뷯膽뷯莽뷯蒽†뷯颽뷯覽뷯膽뷯覽뷯覽뷯馽†뷯蚽†볯늼볯낼볯ꆼ볯銈뷯躽뷯₄궼볯Ꞽ볯늼볯銈뷯辽뷯覽뷯覽뷯薽†뷯辽뷯覽뷯薽뷯钽뷯銽뷯ₓ覽뷯₎膽†뷯辽뷯薽뷯₌辽뷯₆覽뷯蚽뷯膽뷯趽뷯钽뷯銽뷯ₙ覽뷯莽뷯₈膽뷯蒽†뷯膽뷯躽볯ꊼ뷯膽뷯躽볯醼볯鞼볯醼볯鎼볯銈볯邼볯邼볯㲎牢ਾ볯銼볯躼볯閽뷯螽뷯薽뷯貼볯躼볯躼볯뒼뷯貼볯躼볯躼볯낼뷯銽뷯骽裢겼뷯鎽뷯蒽뷯貼볯躼볯낼뷯貽뷯銽뷯鎽뷯辽볯ꚼ볯Ꞽ볯貼볯膽뷯貼볯躼裢ꢼ볯貼볯膽뷯膽뷯薽볯ꢼ볯貼볯覽뷯骽뷯躽뷯薽뷯貼볯躼볯躼볯ꊼ뷯貽뷯膽뷯躽볯ꆼ볯袼볯邼볯馼볯Ꞽ뷯躽뷯钽뷯莽†뷯銽뷯袽뷯钽뷯莽뷯閽뷯薽†뷯蚽†뷯辽뷯鎽뷯₅鎽뷯覽뷯₎覽뷯蚽뷯膽뷯趽뷯钽뷯辽뷯₎膽뷯蒽†뷯閽뷯辽뷯銽†뷯閽뷯莽뷯邽뷯覽뷯覽뷯覽뷯馽볯꺼뷯钽뷯銽뷯貼볯閼볯貼볯邼볯銈볯邼볯躼戼㹲鎼볯颼볯늼뷯薽뷯袽뷯銽†볯躼볯閽뷯蚽뷯莽뷯₅邽뷯膽뷯趽뷯躽뷯ₓ辽뷯₎鎽뷯辽뷯钽뷯₈膽뷯蒽†뷯辽뷯螽뷯₈鎽뷯銽뷯膽뷯薽뷯ₓ膽뷯蒽†뷯躽†뷯銽뷯钽뷯躽뷯鎽볯覽뷯₎뎼뷯銽뷯薽뷯ₓ뎼뷯銽뷯躽뷯薽뷯ₒ뒼뷯膽뷯钽뷯ₓ覽뷯₎궼뷯蒽뷯銽뷯₎낼뷯馽뷯覽뷯鎽볯醼볯颼볯貼볯邽뷯覽뷯螽뷯銽裢뚼뷯銽뷯膽뷯₇ꊼ뷯銽뷯覽뷯₎ꢼ뷯覽뷯薽뷯芽뷯銽뷯躼戼㹲鎼볯馼볯늼뷯覽†볯貼볯膽뷯蒽뷯躽뷯蒽뷯₏ꆼ볯貼볯閽뷯骽†볯뎼볯늼뷯隽뷯銽뷯膽뷯钽뷯₏뎼볯뎼뷯袽뷯覽뷯钽†볯궼†뷯躽뷯₄뎼뷯薽뷯袽뷯趽뷯躽†볯鮼볯覽뷯躽뷯貽†볯銽뷯躽뷯蒽뷯莽뷯覽뷯躽†뷯躽†볯薽뷯薽뷯钽뷯銽†뷯辽뷯ₒꆼ뷯隽뷯躽뷯薽뷯₄Ꞽ뷯馽뷯膽뷯覽뷯躽†볯躽뷯₄낼뷯辽뷯閽뷯钽뷯袼볯ꆼ볯ꖼ볯貼볯₪ꊼ뷯辽뷯₌ꎼ뷯薽뷯貼볯邼볯銼볯銼볯鞼볯閼볯鎼볯銈볯钼볯㲎牢ਾ볯鎼볯躼볯膽뷯膽뷯辽뷯膽뷯膽뷯貼볯躼볯ꮼ뷯銽뷯貼볯躼볯궼뷯躽뷯薽뷯貼볯躼볯뒼뷯銽뷯薽뷯貼볯躼볯ꚼ뷯薽뷯趽뷯躽볯ꊼ볯ꆼ볯貼볯銽뷯薽뷯蒽뷯覽뷯螽볯ꮼ볯ꮼ볯膽뷯蒽†볯膽뷯銽뷯鎽뷯躽볯꒼볯Ꞽ볯貼볯醼볯馼볯覼볯躽뷯覽뷯钽뷯躽뷯覽뷯₎ꦼ볯銈뷯薽뷯覽뷯钽뷯蒽†뷯馽뷯薽뷯钽뷯躽뷯覽뷯躽†뷯躽†뷯袽뷯₅銽뷯钽†뷯躽뷯銽뷯膽뷯薽뷯ₓ隽뷯鎽뷯閽뷯膽뷯ₒ鎽뷯邽뷯銽뷯颽뷯蒽뷯₅邽뷯辽뷯閽뷯钽뷯辽뷯₎隽뷯膽†뷯薽뷯芽뷯膽뷯薽†볯ꆼ볯ꢼ볯꺼볯꒼볯ꢼ†뷯颽뷯蒽뷯鎽뷯₅膽뷯钽뷯隽뷯钽뷯辽뷯躼볯辽뷯钽뷯覽뷯閽뷯覽뷯躽†뷯辽†뷯貽뷯薽뷯膽뷯覽뷯躽뷯ₓ辽뷯₆隽뷯鎽뷯趽뷯钽뷯銽†뷯辽뷯薽볯ꪼ†볯貽뷯躽†볯躽뷯薽뷯钽볯貼볯鞼볯醼볯醼볯銈볯鎼볯㲎牢ਾ볯鎼볯躼볯膽뷯膽뷯膽뷯馽†볯貼볯袽뷯讽뷯钽뷯膽뷯₎ꆼ볯뎼뷯袽뷯覽뷯钽†볯궼볯뒼뷯薽†뷯閽뷯钽뷯邽뷯薽†뷯膽뷯薽뷯ₓ辽뷯₆늼볯Ꞽ볯銈뷯邽뷯辽뷯钽뷯躽뷯钽뷯薽뷯ₓ蚽뷯銽†뷯袽뷯銽뷯邽뷯閽뷯覽뷯₃覽뷯钽뷯銽뷯薽뷯钽뷯辽뷯₎覽뷯₎膽뷯覽뷯螽†뷯躽뷯₄莽뷯銽뷯躽뷯莽†뷯覽뷯薽뷯鎽뷯躼볯颽뷯薽뷯钽†볯邽뷯躽†볯袽뷯銽†볯膽뷯螽뷯钽뷯貼볯邼볯隼볯銼볯骼볯鎼볯銈볯钼볯躼戼㹲鎼볯銼볯늼뷯趽뷯鎽뷯趽뷯貼볯躼볯뎼뷯袽뷯覽뷯钽볯ꆼ볯궼볯늼뷯莽뷯邽뷯辽뷯ₒ蚽뷯銽†뷯蒽뷯膽뷯莽뷯蒽†뷯貽뷯莽뷯钽뷯辽뷯₎薽뷯蒽†뷯銽뷯蒽뷯莽뷯鎽볯늼볯Ꞽ볯覼뷯躽뷯₄覽뷯邽뷯覽뷯膽뷯覽뷯躽뷯ₓ蚽뷯銽†뷯袽뷯₅邽뷯钽뷯辽뷯袽뷯鎽뷯辽뷯辽뷯馽†뷯蚽†뷯薽뷯銽뷯ₔ蚽뷯覽뷯閽뷯薽볯ꎼ뷯銽뷯薽뷯钽†뷯薽뷯銽뷯ₔ蚽뷯覽뷯閽뷯薽†뷯薽뷯辽뷯钽뷯貼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鎽뷯螽뷯钽뷯ₓ覽뷯钽뷯₏邽뷯貽뷯螽뷯躽뷯莽†뷯躽뷯薽뷯覽뷯膽뷯莽뷯₅辽뷯₆袽뷯鎽뷯銈뷯覽뷯蚽뷯貽뷯₍蒽뷯鎽뷯醽뷯覽뷯覽뷯銽뷯膽†뷯躽†뷯薽뷯覽뷯蒽뷯躽뷯覽뷯覽뷯躼볯辽뷯銽뷯膽뷯₌辽뷯₆邽뷯銽뷯辽뷯辽뷯钽뷯貽†뷯薽뷯薽뷯銽뷯袽볯㲎牢ਾ볯隼볯躼볯誽뷯貽뷯躽뷯薽뷯ₒ뎼†뷯躽뷯₄떼뷯芽뷯躽뷯莽뷯讽뷯ₙꎼ볯ꦼ뷯钽뷯螽뷯膽뷯薽뷯₄蚽뷯閽뷯蒽†뷯膽뷯蒽뷯覽뷯螽†뷯馽뷯钽뷯趽†뷯辽뷯ₒ芽뷯辽뷯辽뷯薽뷯閽뷯膽뷯ₒ覽뷯钽뷯銽뷯莽뷯覽뷯躽†뷯躽뷯貽뷯鎽뷯鎽볯ꆼ뷯膽뷯躼볯袽뷯趽볯貼볯馼볯醼볯隼볯骼볯鎼볯颼裢銼볯钼볯躼戼㹲鎼볯鞼볯뎼뷯袽뷯貼볯躼裢ꢼ볯貼볯袽뷯躽뷯貼볯躼裢뎼볯貼볯辽볯ꖼ볯貼볯薽뷯躽뷯貼볯躼裢誽볯貼볯覽뷯貼볯躼裢ꢼ볯貼볯薽뷯躽뷯貼볯躼裢ꢼ볯貼볯覽뷯貼볯躼볯뎼뷯覽뷯貼볯躼볯ꢼ뷯躽뷯貼볯躼볯ꊼ뷯薽볯ꢼ볯袼볯邼볯馼볯뒼뷯薽†뷯薽뷯辽뷯薽裢鞽뷯蒽뷯₅薽뷯邽뷯薽뷯鎽뷯辽뷯₎邽뷯辽뷯覽뷯薽†뷯蚽†볯薽뷯閽뷯芽뷯躽뷯鎽†뷯薽뷯薽뷯₎辽뷯₎貽뷯邽뷯邽뷯貽뷯鎽뷯莽뷯袽뷯銽뷯蒽뷯銈뷯钽뷯趽뷯貽뷯钽뷯蒽†볯뚼裢銼†뷯覽뷯銽뷯螽뷯覽뷯貽†뷯薽뷯貽뷯躼볯覽뷯貽뷯螽뷯莽뷯貽†뷯躽뷯₄낼뷯膽뷯趽뷯莽뷯閽뷯覽뷯膽뷯₌ꊼ뷯貽뷯薽뷯覽뷯貼볯銼볯醼볯醼볯銈볯邼볯邼볯㲎牢ਾ볯隼볯躼볯辽뷯覽뷯鎽뷯覽볯ꢼ볯ꪼ볯貼볯薽뷯薽뷯趽뷯躽뷯貼볯躼볯늼뷯钽뷯薽볯ꮼ볯貼볯辽뷯讽뷯辽뷯蚽볯ꦼ볯貼볯閽뷯薽뷯趽뷯躽뷯貼볯躼볯ꊼ뷯薽뷯钽볯ꆼ볯袼볯邼볯鎼볯ꢼ뷯趽뷯躽†볯膽뷯銈볯薽뷯膽뷯薽뷯₄Ꞽ†볯銽뷯钽뷯覽뷯銈볯辽뷯邽뷯薽뷯₄늼뷯莽뷯邽뷯辽뷯鎽裢뢼볯ₑꦼ뷯蒽뷯莽뷯₅ꎼ뷯薽뷯辽뷯覽뷯薽†볯薽뷯薽뷯钽뷯銽†볯ₒꖼ뷯邽뷯薽뷯鎽뷯辽뷯₎覽뷯₎늼뷯钽†볯辽뷯鎽뷯貽†볯辽뷯钽†볯膽뷯螽뷯覽뷯₁꺼뷯閽뷯辽뷯鎽†뷯躽뷯₄늼뷯貽뷯膽뷯薽†뷯蚽†볯袽뷯趽뷯讽뷯躽뷯₅겼뷯螽뷯躽뷯₄銼†뷯銽뷯趽†뷯袽뷯₅袽뷯趽뷯躽†볯ꆼ볯銈볯ₒ궼뷯鎽뷯ₔꎼ뷯貽뷯₌겼뷯躽뷯躼볯겼뷯뎼†볯꺼볯貼볯貼뷯閼볯鞼볯隼볯㲎牢ਾ볯隼볯躼볯辽뷯辽뷯薽볯림볯貼볯膽뷯膽뷯薽볯ꢼ볯貼볯膽뷯膽뷯膽뷯薽볯뒼볯蚼볯膽뷯膽뷯辽볯ꮼ볯袼볯邼볯钼볯늼뷯螽뷯貽뷯钽뷯辽뷯₎辽뷯₆ꎼ뷯躽†볯銈뷯薽뷯薽뷯蒽뷯躽뷯ₔ莽뷯钽뷯讽뷯躽뷯₅邽뷯辽뷯閽뷯钽뷯辽뷯₎蚽뷯辽뷯₍ꎼ볯钼볯₋膽뷯蒽†볯꒼볯讼†볯₴貽뷯趽뷯袽뷯莽뷯钽뷯鎽†뷯馽†뷯閽뷯辽뷯薽뷯銽뷯钽뷯辽뷯₎辽뷯₆袽뷯鎽뷯膽뷯覽뷯薽볯ꦼ뷯蚽뷯膽뷯趽뷯钽뷯辽뷯₎늼뷯鎽뷯膽뷯莽뷯貼볯鎼볯颼볯銈볯銼볯㲎牢ਾ볯鞼볯躼볯辽뷯辽뷯膽볯꺼볯貼볯膽뷯膽뷯閽뷯袽뷯貼볯躼볯뒼뷯鎽뷯覽뷯辽볯ꢼ볯貼볯袽뷯膽볯뒼볯貼볯覽뷯袽뷯趽뷯銽뷯貼볯躼볯궼뷯躽뷯螽뷯鎽뷯覽볯뒼볯蚼볯讽뷯趽뷯銽뷯貼볯躼볯銼볯邼볯覼볯颽뷯銽뷯鎽뷯覽뷯躽†뷯蚽†뷯膽뷯覽뷯躽뷯ₔ貽뷯钽뷯覽뷯覽뷯覽뷯螽†뷯辽뷯趽뷯躽뷯込뷯袽뷯銽뷯辽뷯覽뷯₃螽뷯躽뷯蒽뷯钽뷯辽뷯覽뷯₎銽뷯莽뷯邽뷯辽뷯鎽†뷯躽뷯₄蒽뷯螽뷯膽뷯膽뷯覽뷯躽†뷯蚽†뷯袽뷯銽뷯辽뷯覽뷯₃螽뷯躽뷯蒽뷯钽뷯辽뷯覽뷯₎覽뷯₎袽뷯趽뷯躽†뷯袽뷯銽뷯辽뷯覽뷯₃隽뷯貽뷯辽뷯鎽†뷯膽뷯銽뷯邽뷯膽뷯薽뷯躼볯貽뷯莽뷯躽뷯膽볯銼볯貼볯馼볯銈볯邼볯躼戼㹲鎼볯醼볯뎼뷯銽뷯銈볯膽뷯隽뷯躽뷯躽볯ꆼ볯貼볯膽뷯鎽뷯躽볯ꆼ볯躼볯뒼뷯辽뷯膽뷯貼볯躼볯躼볯薽뷯ₔ膽뷯躼볯銼볯邼볯覼볯薽뷯薽뷯钽뷯銽†뷯辽뷯ₒ膽뷯隽뷯躽뷯薽뷯₄螽뷯馽뷯膽뷯覽뷯躽†뷯躽뷯₄邽뷯辽뷯閽뷯钽뷯袼볯ꆼ볯ꖼ볯蒽뷯蚽뷯莽뷯薽뷯莽뷯ₙ膽뷯钽뷯躽뷯膽뷯薽뷯ₓ钽뷯薽†뷯薽뷯薽뷯辽뷯趽뷯躽뷯ₔ辽뷯₆膽뷯袽뷯銽뷯鎽뷯貽뷯銽뷯鎽뷯鎽†뷯躽†뷯覽뷯芽뷯钽뷯鎽볯꒼뷯膽뷯薽뷯薽뷯貼볯鞼볯銼볯隼볯銈볯钼볯馼볯㲎牢ਾ볯鞼볯躼볯辽뷯骽뷯貼볯躼볯躼볯겼뷯趽뷯骽볯ꖼ볯뎼볯겼볯貼볯覽뷯袽뷯貼볯躼볯낼뷯鎽뷯閽뷯銽뷯貼볯躼볯躼볯ꊼ뷯蒽뷯銽볯궼볯貼볯薽뷯醽뷯薽뷯辽볯ꪼ볯겼볯蚼볯薽뷯颽뷯覽뷯膽볯궼볯궼볯袼볯邼볯钼볯늼뷯貽뷯₅辽뷯₆ꊼ뷯膽뷯馽뷯覽뷯覽뷯₎ꊼ볯ₒ膽뷯蒽†볯醼†볯薽뷯薽뷯钽뷯銽뷯ₓ覽뷯₎钽뷯薽†볯辽뷯膽뷯貼볯薽뷯辽뷯薽볯膽뷯蒽†볯馽뷯钽뷯趽뷯莽†볯躽뷯貽뷯趽뷯膽뷯辽뷯馽†볯薽뷯邽뷯躽뷯薽뷯ₓ뒼뷯膽뷯ₔꚼ뷯貽뷯辽뷯ₗꦼ뷯钽뷯鎽뷯覽뷯膽뷯₌ꦼ뷯莽뷯薽뷯覽뷯₁膽뷯蒽†볯薽뷯薽뷯蚽뷯鎽뷯辽뷯₎ꦼ뷯誽뷯銽뷯躼볯袽뷯₅ꪼ뷯閽뷯躽뷯貽†뷯蚽†볯趽뷯閽뷯辽뷯辽뷯馽볯醼볯銼볯銼볯钼볯銈볯閼볯颼볯㲎牢ਾ볯鞼볯躼볯邽뷯銽뷯薽뷯辽볯겼볯ꪼ볯貼뷯钽†뷯貽볯袼볯邼볯馼볯늼볯Ꞽ볯袼볯薽뷯薽뷯钽뷯銽†뷯辽뷯ₒꆼ뷯隽뷯躽뷯薽뷯₄Ꞽ뷯馽뷯膽뷯覽뷯躽†볯躽뷯邽뷯辽뷯閽뷯钽뷯覼볯늼볯Ꞽ볯₥貽뷯螽뷯躽뷯鎽볯膽뷯蒽†뷯袽뷯覽뷯ₒ銽뷯貽뷯₅覽뷯₎莽뷯躽뷯薽뷯ₒ膽뷯蒽†뷯躽뷯貽뷯趽뷯膽뷯覽뷯躽볯ꪼ뷯閽뷯躽뷯貽†뷯蚽†뷯銽뷯躽뷯貽뷯钽뷯辽뷯膽뷯₌趽뷯蒽뷯莽뷯躽뷯貼볯骼볯鞼볯㲎牢ਾ볯鞼볯躼볯钽뷯莽뷯馽볯궼볯貼볯覽뷯貼볯躼裢ꢼ볯貼볯覽뷯馽뷯銽뷯貼볯躼볯躼볯Ꞽ뷯銽뷯辽뷯貼볯躼볯궼뷯ꮼ뷯覽뷯袽뷯貼볯躼볯躼볯銼볯邼볯覼볯閽뷯膽뷯₎薽뷯覽뷯薽뷯趽뷯貽†뷯銽뷯鞽뷯袽†뷯膽뷯钽뷯銽볯ꖼ볯ꚼ볯趽뷯蒽뷯貽뷯銈뷯辽뷯钽뷯覽뷯覽뷯螽†뷯閽뷯覽뷯銈뷯覽뷯薽†뷯辽뷯趽뷯躽뷯₅銽뷯莽뷯邽뷯辽뷯ₒ鎼†뷯鎽†뷯₁躽뷯鞽†뷯薽뷯芽뷯銽†뷯蚽†뷯袽뷯₅ꖼ볯ꚼ裢뒼볯鞼†뷯膽뷯覽뷯馽†뷯袽뷯钽†뷯薽뷯辽뷯躽뷯骽뷯鎽†뷯₁貽뷯螽뷯躽뷯₄辽뷯₎袽뷯趽뷯躽†뷯膽뷯銽뷯邽뷯膽뷯薽뷯ₓ膽뷯蒽†뷯莽뷯覽뷯膽뷯薽뷯₄躽뷯閽뷯銽뷯邽뷯覽뷯鎽볯ꪼ뷯閽뷯躽뷯貽†뷯蚽†볯覽뷯貽뷯螽뷯莽뷯貽†볯袽뷯趽뷯鎽뷯銽뷯貼볯鞼볯貼볯颼볯隼볯銈볯颼볯鞼볯躼戼㹲鎼볯閼볯뎼뷯薽뷯閽뷯誽볯ꪼ볯貼볯薽뷯躽뷯誽볯ꊼ볯貼볯覽뷯覽뷯銈볯膽뷯躽볯겼볯貼볯覽뷯躽뷯銽볯ꦼ볯蚼볯莽뷯膽뷯薽뷯鎽뷯薽뷯躽볯ꮼ볯袼볯邼볯邼볯趽볯꺼볯₡薽뷯邽뷯薽뷯鎽뷯辽뷯₎辽뷯₆鎽뷯銽뷯钽뷯躽뷯躽†뷯薽뷯薽뷯钽뷯銽뷯ₓ覽뷯₎莽뷯貽뷯鎽†뷯蚽†뷯袽뷯₅覽뷯趽뷯躽뷯₅钽뷯鎽뷯閽뷯鎽†뷯蚽†뷯袽뷯₅銽뷯钽볯ꊼ뷯膽뷯躽볯芽뷯袽뷯隽뷯辽뷯貼뷯躽뷯₄覽뷯趽뷯躽뷯钽뷯貼볯钼볯銼볯馼裢銼볯钼볯㲎牢ਾ볯鞼볯躼볯钽뷯莽뷯袽뷯趽뷯薽뷯貼볯躼볯躼볯늼뷯閽뷯薽뷯蒽뷯貼볯躼볯랼뷯钽뷯覽뷯讽볯ꚼ볯늼볯貼볯銽뷯覽뷯貼볯躼볯躼볯궼뷯覽뷯薽뷯貼볯躼볯躼볯뎼뷯膽뷯躽뷯貼볯躼볯躼볯銼볯醼볯覼볯銽뷯躽뷯莽뷯覽뷯钽뷯趽뷯₅膽뷯膽뷯馽뷯覽뷯ₓ辽뷯₆뒼뷯膽뷯隼†뷯閽뷯莽뷯覽뷯躽†뷯躽†뷯袽뷯₅覽뷯躽뷯钽뷯₅覽뷯趽뷯躽뷯₅銽뷯鎽뷯辽뷯鎽뷯₅辽뷯₆骽뷯芽뷯膽뷯覽뷯袽†뷯趽뷯銽뷯辽뷯躼볯辽뷯薽뷯閽뷯膽뷯ₒ覽뷯趽뷯躽뷯貽뷯螽뷯貼볯颼볯醼볯馼裢醼볯邼볯㲎牢ਾ볯鞼볯躼볯钽뷯蒽뷯膽뷯钽†볯ꆼ볯ꪼ뷯袽뷯鎽뷯辽뷯薽†볯ꮼ볯貼볯袽뷯膽뷯₌ꆼ볯貼볯辽뷯貽뷯覽뷯螽†볯貼볯辽뷯薽뷯鎽†볯ꊼ볯궼뷯莽뷯貽뷯覽뷯钽†볯貼볯辽뷯蒽†볯뚼볯ꢼ뷯貽뷯₌뎼볯₪膽뷯蒽†볯蚽뷯薽뷯薽뷯ₒꮼ볯Ꞽ볯ꆼ뷯邽뷯覽뷯膽뷯覽뷯躽†뷯蚽†볯늼볯뒼†뷯辽†뷯辽뷯覽뷯辽뷯ₒ貽뷯螽뷯躽뷯₄芽뷯躽뷯覽뷯螽†뷯辽†볯낼볯늼뷯躼볯膽뷯ₔ궼뷯钽뷯辽뷯鎽볯銼볯醼볯貼볯銼볯隼볯醼裢隼볯鎼볯㲎牢ਾ볯鞼볯躼볯閽†볯躼볯躼볯ꊼ뷯銽뷯薽뷯ₒꊼ볯랼볯袼볯邼볯鎼볯ꆼ†뷯辽뷯薽뷯₌膽뷯鎽뷯馽†뷯辽뷯ₒ膽뷯鎽뷯鎽뷯覽뷯螽†뷯閽뷯钽뷯趽뷯趽뷯銽뷯躽뷯₅膽뷯蒽†뷯銽뷯躽뷯趽뷯趽뷯銽뷯躽뷯₅蒽뷯趽뷯覽뷯₎覽뷯钽뷯銽뷯莽뷯覽뷯躽뷯ₓ覽뷯邽뷯銽뷯膽뷯钽†뷯辽뷯ₒ銽뷯莽뷯邽뷯辽뷯ₒ袽뷯钽뷯銽뷯蒽뷯趽뷯銽뷯骽뷯钽뷯辽뷯躼볯₪궼뷯貽†볯覽뷯貽볯钼볯閼볯钼볯閼볯銈볯隼볯颼볯㲎牢ਾ볯鞼볯躼볯閽뷯銽뷯趽뷯躽뷯膽뷯貼볯躼볯Ꞽ뷯邽뷯膽볯ꮼ볯貼볯閽뷯貼볯躼볯낼뷯覽뷯薽볯늼볯蚼볯貽뷯貼볯躼볯銼볯醼볯覼볯膽뷯銈뷯薽뷯膽뷯薽뷯₄Ꞽ뷯躽뷯₅뢼볯袼볯銽뷯뢼볯覼볯鎽†뷯₁꺼뷯隽뷯貽†볯₧낼뷯辽뷯薽뷯躽裢莽뷯閽뷯貽뷯蒽†볯薽뷯薽뷯钽뷯銽†뷯辽뷯ₒ钽뷯薽†볯躽뷯覽뷯覽뷯銽뷯芽뷯膽뷯₌낼뷯邽뷯覽뷯薽†볯겼裢鎼볯ₗ覽뷯₎ꢼ뷯趽뷯躽†볯膽뷯钽†볯薽뷯貽뷯ₓ늼볯뎼볯뎼볯ꆼ볯ꎼ볯₥뒼볯₯늼볯ꎼ볯낼볯꾼볯₲낼볯꾼볯낼볯꾼볯림볯ꆼ볯ꦼ볯꺼볯꒼볯뎼볯꺼볯ꦼ볯ꦼ볯ꆼ볯ꦼ볯꺼볯ꆼ볯꒼†볯꺼볯ꖼ볯꺼볯겼볯몼볯뒼볯꾼볯躼볯辽뷯銽뷯膽뷯₌辽뷯₆ꊼ뷯辽뷯辽뷯覽뷯膽뷯₌ꎼ뷯薽뷯覽뷯钽뷯馽볯銼볯隼볯钼볯鞼볯馼裢钼볯鞼볯馼볯㲎牢ਾ볯颼볯躼볯閽뷯覽뷯辽뷯辽볯뒼볯貼볯膽뷯钽뷯貼볯躼볯궼뷯莽뷯覽뷯閽뷯覽볯뎼볯貼볯膽뷯膽뷯膽뷯薽볯림볯貼볯膽뷯袽뷯趽뷯钽뷯貼볯躼볯ꮼ뷯鞽뷯鎽뷯覽뷯膽볯ꢼ볯袼볯馼볯钼볯궼뷯貽뷯莽뷯貽뷯銽†뷯貽뷯躽뷯躽뷯₇膽뷯蒽†뷯閽뷯莽뷯覽뷯躽뷯貽†뷯颽뷯銽뷯鎽뷯覽뷯躽†뷯蚽†뷯₁莽볯꺼볯₡薽뷯莽뷯蒽뷯躽뷯₇钽뷯薽†뷯閽뷯膽뷯₎뚼볯芽†뷯膽뷯辽뷯銽뷯鎽뷯覽뷯₎銽뷯莽뷯邽뷯辽뷯躼볯辽뷯銽뷯膽뷯₌辽뷯₆ꊼ뷯辽뷯辽뷯覽뷯膽뷯₌ꎼ뷯薽뷯覽뷯钽뷯馽볯銼볯馼볯銼볯邼볯颼裢銼볯邼볯銼볯㲎牢ਾ볯颼볯躼볯閽뷯覽뷯辽뷯辽볯림볯蚼볯膽뷯閽뷯覽뷯膽볯뎼볯袼볯邼볯鞼볯낼뷯辽뷯钽뷯螽뷯膽뷯蒽뷯躽†볯₥銽뷯莽뷯邽뷯辽뷯鎽볯ꪼ†볯覽뷯貽†볯袽뷯趽볯銼볯銼볯醼볯隼볯鎼裢醼볯隼볯鞼볯㲎牢ਾ볯颼볯躼볯閽뷯辽볯뒼볯貼볯膽뷯袽뷯趽뷯钽뷯貼볯躼볯ꎼ뷯覽뷯膽뷯鎽뷯貼볯躼볯궼뷯銽뷯讽뷯趽뷯貼볯躼볯ꮼ뷯讽뷯讽뷯鞽뷯貼볯躼볯뎼뷯钽뷯貼볯躼볯ꮼ뷯讽뷯莽뷯覽볯ꮼ볯貼볯膽뷯覽볯뒼볯貼볯膽뷯膽뷯膽볯궼볯蚼볯螽뷯貼볯躼볯銼볯邼볯覼볯蒽뷯躽뷯覽뷯覽뷯膽뷯覽뷯躽†뷯蚽†뷯₁貽뷯鎽뷯邽뷯辽뷯邽뷯膽뷯覽뷯馽뷯鎽뷯銽뷯躽뷯₅銽뷯莽뷯邽뷯辽뷯ₒ辽뷯₎趽뷯鎽뷯ₔ莽뷯貽뷯鎽볯ꊼ뷯辽뷯袽뷯趽뷯莽뷯貽†뷯躽뷯₄芽뷯辽뷯袽뷯鎽뷯莽뷯貽†뷯薽뷯薽뷯銽뷯袽†뷯辽뷯趽뷯躽뷯莽뷯钽뷯辽뷯鎽볯鎼볯醼볯醼볯鞼볯銈볯邼볯鞼볯㲎牢ਾ볯颼볯躼볯閽뷯讽뷯銽볯궼볯ꊼ볯貼뷯钽†뷯貽볯늼볯Ꞽ볯骼뷯₁躽뷯鞽†뷯銽뷯躽뷯覽뷯銽†뷯躽†뷯袽뷯辽뷯覽뷯₃膽뷯銽뷯膽뷯鎽†뷯覽뷯薽뷯鎽뷯躼볯銽뷯钽뷯鎽뷯₈ꪼ뷯閽뷯躽뷯貽†뷯蚽†볯袽뷯銽뷯膽뷯辽뷯辽뷯馽볯銼볯醼볯貼볯隼볯骼볯醼볯醼裢醼볯鞼볯躼戼㹲鎼볯钼볯뎼뷯躽뷯鞽뷯銽볯겼볯貼볯薽뷯覽뷯覽볯궼볯貼볯辽뷯薽뷯貼볯躼볯뎼뷯讽뷯薽뷯貼볯躼볯ꢼ뷯銽뷯袽뷯覽뷯讽뷯貽볯궼볯袼볯邼볯隼볯뒼뷯薽†뷯覽뷯莽†뷯薽뷯鎽뷯躽뷯₇銽뷯莽뷯邽뷯辽뷯貼볯躽볯込볯낼볯鎼볯貼뷯銽뷯螽뷯薽뷯鎽†뷯薽뷯膽뷯辽뷯銽뷯邽뷯莽†뷯膽뷯莽뷯閽뷯₍鎽뷯螽뷯膽뷯貽뷯躽뷯₇覽뷯₎莽뷯貽뷯躽뷯莽뷯钽뷯鎽†뷯躽뷯₄銽뷯螽뷯貽뷯钽뷯鎽†뷯莽뷯貽뷯蒽뷯躽†뷯薽뷯辽뷯薽뷯馽†뷯躽†뷯颽뷯薽뷯覽뷯薽뷯钽뷯貽†뷯辽뷯覽뷯覽뷯躼볯袽뷯貽볯뒼뷯膽뷯鎽볯늼볯뎼뷯莽볯ꊼ볯鎼볯醼볯銼볯醼볯邼볯銼볯躼戼㹲鎼볯閼볯뎼뷯骽뷯讽뷯貼볯躼볯랼뷯躽볯ꮼ볯銈볯躼볯ꢼ뷯銽뷯螽뷯莽뷯覽볯ꮼ볯貼볯覽뷯辽뷯袽뷯钽뷯貼볯躼볯ꢼ뷯銽뷯貼볯躼볯뒼뷯銽뷯袽뷯鎽뷯覽볯뎼볯貼볯辽뷯辽뷯膽뷯覽볯ꖼ볯貼볯钽뷯袽볯ꮼ볯貼볯覽뷯膽뷯膽뷯膽볯ꮼ볯蚼볯膽뷯蒽볯뎼볯궼볯袼볯邼볯钼볯궼뷯鎽뷯閽뷯膽뷯覽뷯ₓ覽뷯蚽뷯膽뷯趽뷯钽뷯辽뷯₎膽뷯蒽†뷯袽뷯₅貽뷯鎽뷯ₓ辽뷯₆覽뷯钽뷯銽뷯钽뷯钽뷯膽뷯₌莽뷯貽뷯鎽†뷯蚽†볯膽뷯膽뷯₌覽뷯₎钽뷯薽†뷯躽뷯辽뷯袽뷯貽뷯躽†볯뒼볯₢銽뷯莽뷯邽뷯辽뷯ₒ躽뷯貽뷯₌銽뷯钽볯ꆼ뷯薽뷯覽뷯膽뷯₎ꪼ뷯閽뷯躽뷯貽†뷯蚽†볯袽뷯鎽뷯辽뷯辽뷯馽裢Ꞽ뷯鎽뷯銽뷯覽뷯钽뷯鎽뷯覽뷯膽뷯₌膽뷯蒽†볯覽뷯薽뷯ₒ낼뷯馽뷯覽뷯貽뷯螽뷯貼볯颼볯貼볯隼볯颼裢Ꞽ볯钼볯躼戼㹲鎼볯隼볯뎼뷯膽뷯貼볯躼볯꒼뷯銽뷯閽뷯覽뷯銽볯꺼볯낼볯貼볯膽뷯邽뷯薽뷯貽볯ꖼ볯貼볯膽뷯钽뷯閽뷯貼볯躼볯ꢼ뷯鎽뷯覽뷯螽뷯貼볯躼볯꒼뷯讽뷯鎽볯Ꞽ볯ꖼ볯貼볯辽뷯貼볯躼볯ꮼ뷯貽뷯馽볯ꚼ볯궼볯貼볯覽뷯蒽뷯貼볯躼볯겼뷯躽뷯辽뷯貼볯躼볯躼볯銼볯醼볯覼볯蒽뷯躽뷯覽뷯馽뷯躽뷯₇膽뷯蒽†뷯薽뷯钽뷯躽뷯₇莽뷯躽뷯覽뷯膽뷯薽†뷯薽뷯薽뷯覽뷯₃邽뷯貽뷯趽뷯銽뷯袽뷯鎽뷯鎽†뷯躽†뷯袽뷯₅覽뷯銽뷯钽뷯芽뷯薽†뷯辽뷯薽뷯₌鎽뷯躽뷯銽뷯趽뷯袼볯ꊼ볯覼볯膽뷯鎽뷯莽뷯膽뷯覽뷯躽†뷯覽뷯袽†볯꺼볯뎼볯醼볯ₕ膽뷯蒽†볯꺼볯캦躼볯閽뷯貼볯銼볯馼볯閼裢馼볯钼볯㲎牢ਾ볯颼볯躼볯鞽뷯躽뷯馽볯ꪼ볯貼볯袽뷯邽뷯膽뷯貼볯躼볯ꎼ뷯銽뷯薽뷯貼볯躼볯뎼뷯薽뷯芽뷯躽뷯貼볯躼볯ꊼ뷯躽뷯薽뷯貼볯躼볯낼뷯辽뷯膽뷯辽뷯覽뷯袽볯낼볯貼볯膽뷯膽뷯貼볯躼볯ꊼ뷯莽뷯薽뷯貼볯躼볯뎼뷯躽뷯覽뷯覽볯ꆼ볯蚼볯閽뷯莽뷯覽뷯鎽뷯躽볯ꪼ볯袼볯邼볯邼볯ꆼ†뷯辽뷯薽뷯貼뷯銽뷯貽뷯馽†뷯莽뷯覽뷯薽†볯낼볯醼†뷯薽뷯薽뷯钽뷯銽†뷯躽뷯膽뷯辽뷯覽뷯钽†뷯躽뷯覽뷯覽뷯鎽†뷯閽뷯螽†뷯覽뷯銽뷯鎽뷯鎽†뷯躽†뷯袽뷯₅趽뷯閽뷯薽†뷯貽뷯辽뷯馽뷯覽뷯₎趽뷯蒽뷯貽볯ꊼ뷯覽뷯覽뷯袽†뷯辽뷯銽뷯膽뷯₌辽뷯₆邽뷯膽뷯趽뷯莽뷯貽뷯螽뷯貼볯隼볯貼볯隼볯馼裢醼볯醼볯躼戼㹲鎼볯颼볯뎼뷯膽뷯辽볯ꆼ볯貼볯钽뷯貽뷯貼볯躼뷯躽뷯₄Ꞽ뷯膽뷯骽뷯鞽볯늼볯뎼뷯銽뷯膽뷯薽†뷯貽뷯鎽뷯辽뷯₎銽뷯鎽뷯躽뷯躽뷯薽†뷯躽뷯₄覽뷯鎽†뷯鎽뷯₅覽뷯₎芽뷯辽뷯辽뷯薽뷯閽뷯膽뷯ₒ覽뷯钽뷯銽뷯莽뷯覽뷯躽†뷯躽뷯貽뷯鎽뷯鎽볯ꊼ볯ꆼ볯躼볯閽뷯銽†볯邽뷯躽†볯钽뷯閽뷯钽†볯覽뷯貽볯醼볯馼볯貼볯骼볯馼볯銈볯邼볯躼戼㹲鎼볯馼볯뒼뷯螽뷯莽뷯覽볯ꆼ볯貼뷯钽†뷯貽볯袼볯邼볯邼볯ꊼ뷯辽뷯讽뷯蒽뷯₅辽뷯₆늼볯Ꞽ볯銈뷯趽뷯袽뷯钽뷯銽뷯躽†뷯覽뷯躽뷯貽뷯覽뷯螽†뷯閽뷯邽뷯薽뷯鎽뷯鎽†뷯閽뷯辽뷯銽†뷯銽뷯鞽뷯袽†뷯躽뷯₄趽뷯钽뷯鎽뷯膽뷯薽뷯躼볯膽뷯閽뷯薽볯钼볯閼볯鎼볯钼裢鎼볯邼볯㲎牢ਾ볯馼볯躼볯膽뷯膽뷯膽뷯膽볯ꮼ볯貼볯閽뷯讽뷯貼볯躼볯꾼뷯辽볯ꮼ볯貼볯閽뷯覽뷯辽볯뒼볯貼볯膽뷯膽볯ꆼ볯貼볯膽뷯膽뷯膽볯뒼볯貼볯閽뷯覽뷯膽뷯膽볯뎼볯貼볯膽뷯覽뷯薽볯ꢼ볯貼볯讽뷯蒽뷯貼볯躼볯뒼뷯讽뷯袽뷯钽뷯貼볯躼볯뒼뷯躽뷯螽뷯莽뷯覽볯뒼볯貼볯覽뷯覽뷯膽볯뒼볯貼볯鞽뷯鎽뷯讽뷯貼볯躼볯꺼뷯銽뷯趽뷯馽뷯貼볯躼볯떼뷯袽뷯讽뷯芽뷯貼볯躼볯銼볯邼볯覼볯袽뷯辽뷯芽뷯颽뷯躽뷯₅ꆼ볯ₒ膽뷯蒽†뷯銽뷯鎽뷯膽뷯貽뷯躽뷯覽뷯₎ꚼ볯膽뷯邽뷯膽†뷯薽뷯覽뷯钽뷯₅覽뷯蚽뷯膽뷯趽뷯钽뷯銽뷯ₙ钽뷯莽뷯馽뷯膽뷯蒽뷯膽볯꺼뷯钽†볯薽뷯貼볯醼볯閼볯銼裢閼볯隼볯㲎牢ਾ볯馼볯躼볯膽뷯薽뷯辽뷯莽뷯覽볯늼볯貼볯躽뷯閽뷯貼볯躼볯ꮼ뷯趽뷯薽볯림볯蚼볯覽뷯膽뷯膽볯ꆼ볯袼볯邼볯銼볯꺼裢膽뷯膽뷯袽뷯蒽뷯躽뷯馽뷯₌螽뷯馽뷯覽뷯薽†뷯躽뷯閽뷯薽뷯ₓ趽뷯莽뷯辽뷯袽뷯螽뷯₅膽뷯辽뷯钽뷯鎽뷯鎽†뷯覽뷯₁Ꞽ볯늼볯颼볯ꊼ뷯辽뷯袽뷯趽뷯莽뷯貽†뷯躽뷯₄芽뷯辽뷯袽뷯鎽뷯莽뷯貽†뷯薽뷯薽뷯銽뷯袽†뷯辽뷯趽뷯躽뷯莽뷯钽뷯辽뷯鎽볯钼볯颼볯鎼볯隼裢鎼볯醼볯㲎牢ਾ볯馼볯躼볯膽뷯貼볯躼볯몼뷯閽볯림볯貼볯覽볯ꪼ볯貼볯袽뷯躽볯몼볯貼볯膽뷯貼볯躼볯躼볯ꮼ뷯蚽뷯銽뷯隽뷯貼볯躼볯겼뷯貼볯躼볯궼뷯貼볯躼볯ꚼ뷯躽뷯貽뷯覽볯Ꞽ볯貼볯覽볯ꪼ볯貼볯袽뷯躽뷯貼볯躼볯뢼뷯薽볯뢼볯貼볯膽뷯螽볯ꢼ볯貼볯覽뷯躽뷯貼볯躼볯ꎼ뷯薽뷯薽뷯辽뷯貼볯躼볯겼뷯閽볯ꢼ볯貼볯钽뷯隽뷯躽뷯貼볯躼볯躼볯몼뷯膽뷯貼볯躼볯랼뷯貼볯躼볯銼볯醼볯覼볯钽뷯閽뷯钽뷯銽뷯₅辽뷯₆钽뷯薽†볯ꎼ볯閼†뷯袽뷯趽뷯讽뷯躽뷯₅銽뷯莽뷯邽뷯辽뷯銈볯ꦼ볯₶薽뷯钽뷯馽†뷯躽뷯覽뷯覽뷯辽뷯ₒ趽뷯銽뷯隽뷯銽뷯莽†뷯辽뷯邽뷯薽뷯躼볯莽뷯薽뷯莽뷯貼볯钼볯貼볯鎼볯鞼裢醼볯馼볯躼戼㹲鎼볯鎼볯뒼뷯躽뷯馽뷯趽뷯貼볯躼볯뎼뷯骽뷯讽뷯貼볯躼볯궼뷯讽뷯趽뷯貼볯躼볯궼뷯銽뷯馽뷯貼볯躼볯뎼뷯钽뷯趽뷯貼볯躼볯뎼뷯鎽뷯躽뷯貼볯躼볯銼볯邼볯覼볯馽뷯钽뷯趽뷯莽†뷯覽뷯钽뷯覽뷯閽뷯覽뷯躽†뷯蚽†뷯辽뷯膽뷯辽뷯钽뷯钽뷯躽†뷯薽뷯薽뷯钽뷯銽†뷯閽뷯钽뷯邽뷯鎽†뷯躽†뷯閽뷯膽뷯骼뷯躽†뷯趽뷯閽뷯辽뷯覽뷯钽뷯莽뷯薽뷯覽뷯膽뷯₌鎽뷯閽뷯馽볯ꖼ뷯蒽뷯莽뷯覽뷯薽†뷯辽뷯銽뷯膽뷯貼볯銼볯隼볯閼裢隼볯醼볯㲎牢ਾ볯馼볯躼볯膽뷯閽뷯钽볯꺼볯貼볯袽뷯貽뷯邽뷯薽볯ꎼ볯貼볯薽뷯趽뷯躽뷯貼볯躼裢궼볯蚼볯閽뷯貽뷯銽볯ꎼ볯꒼볯袼볯邼볯銼볯ꦼ뷯蚽뷯膽뷯趽뷯钽뷯銽뷯ₙꊼ뷯鞽뷯貽†볯覽뷯薽뷯鎽뷯₅Ꞽ裢낼뷯辽뷯薽뷯躽†볯辽뷯邽뷯薽뷯₄늼뷯莽뷯邽뷯辽뷯鎽볯Ꞽ볯ꎼ볯鎽볯ꖼ뷯邽뷯薽뷯鎽뷯辽뷯₎낼뷯辽뷯覽뷯覽뷯螽†뷯覽뷯袽†볯覽뷯銽뷯蚽뷯閽뷯蒽뷯莽†볯膽뷯蒽뷯躼戼㹲鎼볯閼볯뒼뷯閽뷯貼볯躼볯躼볯ꖼ뷯鎽뷯躽뷯钽뷯覽뷯貼볯躼볯躼볯Ꞽ뷯貽뷯薽뷯貼볯躼볯躼볯ꆼ뷯貽뷯銽볯궼볯랼볯蚼볯辽뷯薽뷯鎽볯뒼볯ꪼ볯袼볯馼볯醼볯ꦼ뷯趽뷯躽뷯趽뷯蒽뷯貽뷯钽뷯銽뷯ₙ膽뷯钽뷯隽뷯钽뷯ₙ辽뷯₆趽뷯銈뷯躽뷯₄讽뷯邽뷯膽裢鎽뷯貽뷯莽뷯覽뷯薽†뷯邽뷯辽뷯蒽†뷯螽뷯躽뷯鎽뷯鎽볯낼뷯辽뷯薽뷯蒽뷯躽뷯鎽†뷯蚽†뷯袽뷯₅꺼뷯钽뷯辽뷯膽뷯₌ꆼ뷯膽뷯薽뷯馽†뷯蚽†볯莽뷯薽뷯莽뷯鎽볯颼볯貼볯隼볯銈볯隼볯躼戼㹲鎼볯隼볯뒼뷯馽뷯芽뷯钽뷯貼볯躼볯ꊼ뷯辽뷯骽뷯钽뷯覽볯ꖼ볯貼볯辽뷯銽뷯₁꒼뷯₉ꎼ뷯貽뷯膽볯뎼볯貼볯閽뷯膽뷯薽뷯辽볯낼볯貼볯覽뷯莽뷯貼볯躼볯늼뷯鎽뷯辽뷯覽뷯覽뷯膽볯ꦼ볯貼볯莽뷯薽뷯膽볯궼볯貼볯莽뷯覽뷯隽뷯躽뷯貼볯躼볯뚼뷯螽뷯覽뷯貼볯躼볯ꆼ뷯薽뷯钽뷯貼볯躼볯銼볯邼볯覼볯躽†뷯覽뷯閽†뷯馽뷯銽뷯蒽뷯骽뷯钽뷯辽뷯₎膽뷯蒽†뷯趽뷯閽뷯辽뷯馽뷯辽뷯袽뷯趽뷯鎽뷯銽뷯ₙ辽뷯₆膽뷯邽뷯膽볯邀뷯蒽뷯薽뷯辽뷯薽뷯钽뷯銽뷯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꺼볯ꢼ볯貼볯辽뷯袽뷯貼볯躼볯랼뷯钽뷯躽뷯芽뷯貼볯躼볯뒼뷯閽뷯袽뷯馽뷯貼볯躼볯ꢼ뷯鎽뷯馽뷯趽뷯蒽뷯貼볯躼볯銼볯醼볯覼볯膽뷯銽뷯邽뷯膽뷯薽†뷯覽뷯銽뷯钽뷯辽뷯₎覽뷯袽뷯芽뷯钽뷯銽뷯ₙ蚽뷯莽뷯辽뷯ₒ覽뷯ₓ膽†뷯辽뷯鎽뷯芽뷯薽†뷯膽뷯蒽뷯蒽뷯钽뷯₅蚽뷯銽†뷯袽뷯₅覽뷯蒽뷯莽뷯覽뷯躽†뷯蚽†뷯覽뷯銽뷯膽뷯芽뷯趽뷯躽뷯銽뷯膽†뷯躽†뷯覽뷯芽뷯钽뷯莽†뷯芽볯蒽뷯₂趽뷯莽뷯躼볯覽뷯貽뷯螽뷯莽뷯貽†뷯躽뷯₄낼뷯膽뷯趽뷯莽뷯閽뷯覽뷯膽뷯₌ꊼ뷯貽뷯薽뷯覽뷯貼볯隼볯鞼볯醼裢鞼볯鞼볯㲎牢ਾ볯銼볯躼볯膽뷯薽뷯鎽볯ꮼ볯궼볯貼볯膽뷯貼볯躼볯Ꞽ뷯躽뷯钽뷯鎽볯꒼볯ꎼ볯貼볯薽뷯趽뷯貼볯躼볯림뷯貽뷯辽뷯貽뷯馽볯ꎼ볯ꖼ볯蚼볯膽뷯覽뷯貼볯躼볯躼볯銼볯邼볯覼볯꺼볯₡趽뷯莽뷯辽뷯銽뷯膽뷯ₙ膽뷯膽뷯馽뷯覽뷯ₓ銽뷯隽뷯膽뷯鎽†뷯₁銽뷯貽뷯₅蚽뷯銽†뷯馽뷯辽뷯袽뷯鎽뷯袽뷯钽뷯蒽뷯莽†뷯莽뷯蒽†뷯躽†뷯袽뷯₅銽뷯螽뷯貽뷯钽뷯辽뷯₎辽뷯₆膽뷯钽뷯銈뷯躽뷯貽뷯趽뷯膽뷯辽뷯馽†뷯薽뷯薽뷯ₓ覽뷯₎궼볯鎼볯鎼裢ꖼ볯ₑ莽뷯貽뷯鎽볯ꊼ뷯躽뷯貼볯醼볯颼볯鎼裢颼볯醼볯㲎牢ਾ볯鎼볯躼볯薽뷯貽뷯躽뷯辽뷯邽뷯貼볯躼볯ꊼ뷯膽뷯閽뷯薽뷯銈볯鎽뷯辽뷯躽뷯貼볯躼볯銼볯邼볯覼볯辽뷯薽뷯閽뷯膽뷯ₒ莽뷯辽뷯覽뷯螽볯薽뷯邽뷯薽뷯鎽뷯辽뷯貼뷯躽뷯₄鎽뷯醽뷯薽뷯莽뷯₅膽뷯膽뷯馽뷯覽뷯ₓ辽뷯₆Ꞽ볯늼볯隼볯貼뷯₁躽뷯隽뷯貽†뷯膽뷯覽뷯馽†볯₣Ꞽ裢邽뷯辽뷯薽뷯躽裢莽뷯閽뷯貽뷯蒽†뷯薽뷯薽뷯钽뷯銽볯Ꞽ뷯躽뷯貼볯鎼볯貼볯鞼裢钼볯躼戼㹲钼볯醼볯랼뷯躽뷯趽뷯躽볯ꢼ볯貼볯膽뷯螽뷯銽뷯貼볯躼볯ꪼ뷯袽뷯躽뷯鎽뷯躽볯ꆼ볯貼볯銽뷯誽뷯莽볯궼볯貼볯膽뷯辽뷯躽뷯隽뷯貼볯躼볯겼뷯躽뷯薽뷯閽뷯鎽뷯貼볯躼볯늼뷯薽뷯躽뷯薽뷯螽볯ꖼ볯蚼볯薽뷯貽뷯銽볯Ꞽ볯袼볯邼볯銼볯뒼뷯趽뷯銽裢趽뷯鎽뷯ₔ莽뷯貽뷯₌覽뷯钽뷯銽뷯莽뷯覽뷯躽뷯骼볯躽뷯閽뷯钽뷯辽뷯₎辽뷯₆邽뷯辽裢钽뷯趽뷯銽뷯螽뷯躽뷯莽†뷯薽뷯薽뷯ₓ膽뷯蒽†뷯躽뷯覽裢钽뷯趽뷯銽뷯螽뷯躽뷯莽†볯銈볯ꊼ볯₢覽뷯₎궼볯鎽†뷯躽†뷯薽뷯邽뷯躽뷯薽†뷯辽†볯薽뷯覽뷯ₓ겼뷯躽뷯₇ꎼ뷯銽뷯覽뷯辽뷯膽볯궼뷯貽뷯莽뷯貽뷯銽†뷯趽뷯閽뷯辽뷯辽뷯馽볯閼볯貼볯醼볯銈볯醼볯躼戼㹲钼볯銼볯랼뷯鎽뷯貼볯躼볯ꖼ뷯貽뷯躽볯늼볯궼볯蚼볯膽뷯钽뷯趽볯꒼볯袼볯邼볯鞼볯궼뷯鎽뷯膽뷯覽뷯覽뷯₃膽뷯薽뷯馽뷯莽뷯辽뷯覽뷯薽†뷯薽뷯薽뷯钽뷯銽뷯骼뷯閽뷯膽뷯钽†뷯覽뷯薽†뷯銽뷯隽뷯蒽뷯₅躽뷯鞽†뷯躽뷯覽뷯袽뷯鎽†뷯辽뷯ₒ蒽뷯閽뷯₇蒽뷯隽뷯貽뷯邽뷯薽뷯钽볯꺼뷯钽†볯薽뷯ₖ꒼뷯閽뷯₇꒼뷯鎽뷯辽뷯貼볯貼볯銼볯銈볯鎼볯躼戼㹲钼볯鎼볯랼뷯覽뷯薽볯ꪼ볯ꚼ볯貼볯辽뷯躽뷯誽볯꺼볯貼볯袽뷯芽뷯钽뷯貼볯躼볯겼뷯隽뷯貼볯躼볯ꮼ뷯辽뷯鎽볯ꊼ볯貼볯閽볯ꚼ볯貼볯隽뷯骽뷯薽뷯辽뷯覽뷯銈볯薽뷯薽뷯覽뷯貼볯躼볯뎼뷯膽뷯貼볯躼볯뎼뷯覽뷯辽뷯莽뷯貼볯躼볯뒼뷯钽뷯貼볯躼볯躼볯Ꞽ뷯覽뷯鎽뷯膽뷯趽뷯銽볯늼볯袼볯邼볯銼볯뎼뷯銽뷯莽뷯閽뷯薽†뷯蚽†뷯袽뷯₅膽뷯辽뷯覽뷯钽裢芽뷯閽뷯蒽†뷯薽뷯銽뷯钽뷯躽뷯覽뷯₎銽뷯莽뷯邽뷯辽뷯躼볯膽뷯閽뷯薽볯钼볯邼볯閼볯颼裢閼볯鎼볯㲎牢ਾ볯鎼볯躼볯袽뷯钽뷯貼볯躼볯躼볯ꎼ뷯覽뷯躽뷯貼볯躼볯랼뷯螽뷯貽뷯鎽뷯辽뷯钽뷯貼볯躼볯Ꞽ뷯鎽뷯薽볯늼볯貼볯覽뷯薽뷯貼볯躼볯랼뷯覽뷯薽볯꺼볯貼볯膽뷯貽볯뎼볯貼볯袽뷯貼볯躼볯궼뷯閽뷯覽뷯貼볯躼볯뎼뷯隽뷯螽뷯貼볯躼볯銼볯邼볯覼볯蒽뷯躽뷯覽뷯覽뷯膽뷯覽뷯躽†뷯蚽†뷯₁躽뷯隽뷯貽†뷯鎽뷯袽뷯膽†뷯閽뷯莽뷯邽뷯覽뷯覽뷯覽뷯馽†뷯薽뷯薽†뷯躽†뷯袽뷯辽뷯辽뷯辽뷯薽†볯醽뷯薽뷯ₒ膽뷯蒽†뷯钽뷯ₓ蚽뷯躽뷯钽뷯辽뷯膽뷯₌薽뷯膽뷯閽뷯钽뷯辽뷯躼볯閽뷯膽뷯₎趽뷯貽뷯莽뷯貽뷯銽†뷯薽뷯薽뷯覽뷯鎽볯醼볯貼볯颼볯邼裢醼볯邼볯躼戼㹲钼볯閼볯랼뷯覽뷯袽뷯貼볯躼볯躼볯ꚼ뷯銽뷯邀볯閽뷯莽뷯覽뷯鎽뷯躽볯ꆼ볯랼볯貼볯袽뷯蒽뷯薽볯ꮼ볯蚼볯薽뷯钽뷯銽뷯貼볯躼볯躼볯銼볯邼볯覼볯袽뷯₅袽뷯趽뷯躽†뷯銽뷯鎽뷯膽뷯辽뷯蒽†볯낼†뷯薽뷯薽뷯钽뷯銽†뷯钽뷯趽뷯貽뷯钽뷯鎽†뷯閽뷯覽뷯₎鎽뷯莽뷯薽뷯覽뷯躽†뷯躽†볯뎼볯鞼볯뒼†뷯薽뷯貽뷯躼볯銽뷯钽뷯鎽뷯₈誽뷯閽뷯躽뷯貽†뷯蚽†뷯袽뷯銽뷯膽뷯辽뷯辽뷯馽볯醼볯醼볯醼볯鎼볯銈볯閼볯閼볯㲎牢ਾ볯鎼볯躼볯閽볯ꊼ볯貼볯袽뷯薽뷯貼볯躼볯躼볯궼뷯貽볯ꎼ볯꒼볯貼볯薽뷯膽뷯钽뷯貼볯躼볯겼뷯閽볯랼볯貼볯膽뷯銽뷯钽뷯袽볯뚼볯貼볯芽뷯螽뷯膽뷯貼볯躼볯ꊼ뷯辽뷯閽뷯貼볯躼볯랼뷯貽뷯鎽볯낼볯貼볯覽볯ꚼ볯ꎼ볯貼볯膽뷯薽뷯貼볯躼볯躼볯ꮼ뷯袽뷯貼볯躼볯ꢼ뷯躽뷯薽뷯貼볯躼볯躼볯ꎼ뷯薽뷯薽뷯辽뷯貼볯躼볯뎼뷯薽뷯薽뷯鎽볯늼볯ꎼ볯袼볯邼볯邼볯뎼뷯銽뷯莽뷯閽뷯薽뷯ₓ辽뷯₆钽뷯薽†볯뢼볯늼볯ₔ莽뷯薽뷯辽뷯覽뷯薽†볯낼볯늼†뷯覽뷯袽†뷯趽뷯貽뷯銈뷯辽뷯薽뷯閽뷯薽†뷯躽뷯₄莽뷯莽뷯覽뷯₃邽뷯邽뷯覽뷯薽†뷯躽뷯膽뷯辽뷯覽뷯钽뷯躼볯莽뷯薽뷯莽뷯貼볯鎼볯貼볯邼볯隼裢醼볯鞼볯躼戼㹲钼볯鞼볯랼뷯貼볯躼裢겼볯貼볯覽뷯銽뷯貽뷯貼볯躼볯늼뷯躽뷯薽뷯趽볯ꖼ볯ꆼ볯袼볯邼볯馼볯꒼뷯鎽뷯薽뷯閽뷯膽뷯覽뷯躽†뷯蚽†볯銽뷯骽뷯貽뷯蒽†볯ₖ覽뷯ₓ膽†뷯銽뷯钽뷯莽뷯貽†뷯辽뷯邽뷯躽뷯躽뷯ₔ辽뷯₆ꊼ裢莽뷯貽뷯₌貽뷯閽뷯薽뷯辽뷯薽뷯薽뷯覽뷯ₓ覽뷯₎膽†뷯辽뷯鎽뷯₅趽뷯蒽뷯貽†뷯蚽†뷯袽뷯辽뷯覽뷯₃貽뷯趽뷯袽뷯莽뷯钽뷯莽†뷯薽뷯讽뷯趽뷯膽볯ꊼ뷯辽뷯蒽볯醼볯鎼볯鎼볯鎼볯銈볯邼볯馼볯㲎牢ਾ볯鎼볯躼볯覽뷯貼볯躼볯ꢼ뷯躽볯ꪼ볯貼볯閽뷯躽뷯貼볯躼볯림뷯躽뷯貼볯躼볯躽뷯貽뷯趽뷯膽뷯覽뷯躽†뷯躽†뷯鎽뷯袽뷯薽뷯覽뷯₃芽뷯膽뷯躽†뷯躽뷯閽뷯馽볯莽뷯銽뷯薽뷯钽†뷯蒽뷯膽뷯莽뷯鎽†뷯躽뷯₄蚽뷯钽뷯銽뷯₅邽뷯銽뷯邽뷯莽뷯覽뷯薽뷯躼볯貽뷯躽뷯莽뷯貽†뷯躽뷯₄薽뷯邽뷯銽뷯趽뷯躽뷯膽뷯₌邽뷯膽뷯趽뷯莽뷯貽뷯螽뷯蚼뷯袽뷯鎽뷯辽뷯辽뷯馽볯銼볯醼볯貼볯鞼볯銼볯鎼裢銼볯颼볯㲎牢ਾ볯鎼볯躼볯覽뷯貼볯躼볯궼뷯躽뷯薽뷯貼볯躼볯躼볯궼뷯躽뷯薽뷯銈볯膽뷯薽뷯骽뷯薽뷯膽볯뚼볯蚼볯螽뷯覽뷯膽뷯銈볯薽뷯躽뷯躽뷯薽뷯貼볯躼볯躼볯薽뷯貽뷯貽뷯銽†뷯覽뷯躽뷯貽뷯覽뷯螽†뷯蚽†뷯袽뷯₅銽뷯莽뷯邽뷯辽뷯ₒ蚽뷯銽†뷯蒽뷯膽뷯莽뷯蒽†뷯貽뷯莽뷯钽뷯辽뷯₎薽뷯蒽†뷯銽뷯蒽뷯莽뷯鎽볯늼볯Ꞽ볯覼볯ꎼ뷯貽뷯閽뷯膽뷯ₒ鎽뷯螽뷯膽뷯貽뷯躽뷯貼볯邼볯鎼볯銼볯骼볯醼볯閼裢銼볯馼볯躼戼㹲钼볯邼볯뢼뷯辽뷯螽볯뢼볯貼볯袽뷯钽뷯貼볯躼볯躼볯뢼뷯貼볯躼볯림뷯躽뷯貼볯躼볯뎼뷯躽볯뢼볯貼볯辽뷯貼볯躼볯낼뷯鎽뷯閽뷯貽볯ꎼ볯貼볯膽뷯閽뷯膽뷯貼볯躼볯Ꞽ뷯蚽뷯膽뷯蒽볯늼볯Ꞽ볯蚼볯覽뷯貼볯躼볯躼볯銼볯醼볯覼볯覽뷯覽뷯膽뷯覽뷯躽†뷯蚽†뷯閽뷯覽뷯薽†뷯辽뷯膽뷯₌莽뷯銽뷯芽뷯膽뷯₌覽뷯莽뷯薽뷯覽뷯₁芽뷯ₙ钽뷯薽†뷯馽뷯辽뷯銽뷯钽뷯躽볯辽뷯薽뷯覽뷯₎鎽뷯鎽뷯薽뷯₍覽뷯ₓ膽뷯鎽뷯莽뷯膽뷯薽뷯₄鞽뷯钽뷯₈銽뷯蒽뷯莽뷯蒽†뷯躽뷯貽뷯趽뷯膽뷯覽뷯躽볯뎼뷯銽뷯讽뷯貼볯钼볯鞼볯钼裢鞼볯邼볯㲎牢ਾ볯钼볯躼볯閽뷯₅ꪼ볯貼볯膽뷯覽뷯銽뷯鎽뷯辽†볯躼볯뎼뷯膽뷯膽뷯銽뷯躽†볯躼볯늼뷯覽†볯躼볯늼뷯隽뷯銽뷯膽뷯钽뷯₏뎼볯貼볯閽뷯骽†볯躼볯躼볯ꚼ뷯芽뷯覽뷯ₓ꒼볯貼볯莽뷯趽뷯蒽뷯ₔꆼ볯궼볯貼볯袽뷯讽뷯钽뷯膽뷯₎ꆼ볯袼볯邼볯隼볯ꎼ뷯膽뷯螽뷯₅覽뷯₎钽뷯薽†볯辽뷯薽뷯閽뷯膽뷯ₒ꒼뷯趽뷯躽뷯覽뷯躽†뷯蚽†뷯₁늼볯Ꞽ볯銈볯覽뷯膽뷯蒽†볯辽뷯邽뷯薽뷯ₘ뒼뷯覽뷯螽뷯銽뷯ₓ늼볯Ꞽ볯₥뎼뷯螽뷯膽뷯覽뷯螽볯뎼뷯銽뷯莽뷯閽뷯薽볯銼볯貼볯閼볯馼裢銼볯躼戼㹲钼볯銼볯림뷯蒽뷯隽볯궼볯貼볯閽뷯躽뷯貼볯躼裢ꎼ볯蚼볯辽뷯钽뷯貽볯ꖼ볯ꪼ볯袼볯邼볯醼볯뚼볯ꆼ볯醼볯隽뷯鎽뷯膽뷯钽뷯隽뷯₅覽뷯钽뷯鎽뷯覽뷯膽뷯₌邽뷯邽뷯覽뷯薽볯뚼볯낼볯銽뷯莽뷯邽뷯辽뷯ₒ钽뷯邽뷯₅醼볯Ꞽ†뷯銽뷯钽뷯覽뷯銈뷯辽뷯邽뷯薽뷯₄銽뷯莽뷯邽뷯辽뷯ₒ趽뷯蒽뷯膽뷯覽뷯躽†뷯蚽†볯ꦼ볯₰薽뷯袽뷯躽뷯薽뷯薽뷯钽†뷯蚽†뷯閽뷯覽뷯薽†뷯颽뷯薽뷯覽뷯薽뷯钽뷯貽†뷯辽뷯覽뷯覽뷯躼볯薽뷯貽뷯貽뷯銽†뷯趽뷯閽뷯辽뷯辽뷯馽볯銼볯鞼볯醼볯钼裢醼볯銼볯㲎牢ਾ볯钼볯躼볯膽뷯膽뷯覽뷯袽뷯貼볯躼볯궼뷯钽뷯閽뷯貼볯躼볯辽뷯薽†뷯蚽†뷯薽뷯薽뷯钽뷯銽†뷯辽뷯ₒ膽뷯隽뷯躽뷯薽뷯₄螽뷯馽뷯膽뷯覽뷯躽†뷯躽뷯₄邽뷯辽뷯閽뷯钽뷯袼볯ꆼ볯ꖼ볯覽뷯₎貽뷯隽뷯銽†뷯覽뷯薽뷯鎽뷯躼볯閽뷯辽뷯薽뷯躽†뷯辽뷯銽뷯膽뷯₌辽뷯₆趽뷯蒽뷯莽뷯貽†뷯薽뷯薽뷯銽뷯袽볯銼볯醼볯貼볯邼볯醼볯躼戼㹲钼볯钼볯림뷯躽볯뎼볯ꚼ볯貼볯膽뷯膽뷯膽뷯馽볯늼볯貼볯莽뷯趽뷯蒽뷯貼볯躼볯躼볯뒼뷯薽†볯ꆼ볯ꖼ†뷯颽뷯鎽볯ꆼ†뷯閽뷯蒽뷯趽뷯躽뷯膽뷯₌趽뷯莽뷯膽뷯覽뷯趽†뷯覽뷯躽뷯貽뷯覽뷯螽†뷯膽뷯螽뷯銽†뷯辽†뷯袽뷯₅隽뷯貽뷯薽뷯膽뷯貽뷯₅隽뷯鎽뷯閽뷯膽뷯閽뷯薽볯ꎼ뷯銽뷯₃늼뷯鎽볯銼볯醼볯貼볯邼볯骼볯钼볯銈볯閼볯躼戼㹲钼볯閼볯림뷯躽뷯₇ꪼ볯림뷯躽†볯貼볯辽뷯ₙꆼ볯뢼뷯ₕ꒼볯낼뷯覽뷯鎽뷯躽†볯貼볯袽뷯躽뷯₇림볯뒼뷯薽†볯銈볯ꆼ볯뎼볯늼†볯閽뷯钽뷯骼볯銽뷯钽뷯覽뷯₎鎽뷯銽뷯莽뷯閽뷯薽†뷯躽뷯₄蚽뷯躽뷯钽뷯辽뷯₎邽뷯薽뷯覽뷯钽뷯辽뷯貼볯膽뷯閽뷯薽†볯薽뷯袽뷯蒽뷯貼볯邼볯閼볯醼볯骼볯銈볯躼戼㹲钼볯隼볯림뷯躽뷯貼볯躼볯ꎼ뷯薽뷯貼볯躼볯Ꞽ뷯銽뷯骽볯ꊼ볯貼볯薽볯늼볯貼볯袽뷯貽뷯閽뷯鎽뷯趽뷯膽뷯覽볯궼볯貼볯薽볯늼볯꒼볯蚼볯邽뷯薽뷯袽뷯覽뷯貼볯躼볯躼볯銼볯邼볯覼볯閽뷯膽뷯₎蒽뷯躽뷯銽뷯钽뷯莽†뷯薽뷯貽뷯ₓ薽뷯邽뷯薽뷯鎽†뷯閽뷯莽뷯覽뷯躽뷯貽†뷯辽뷯趽뷯貽†뷯薽뷯钽뷯蒽뷯₅銽뷯莽뷯邽뷯辽뷯銈뷯覽뷯薽裢銼볯ꚼ볯늼볯銼볯钽뷯銽뷯閽뷯袽뷯閽뷯ₔ趽뷯钽뷯銽뷯钽뷯辽뷯躼볯₪겼뷯閽뷯辽뷯₃ꊼ뷯辽뷯貼볯銼볯閼볯颼裢隼볯鞼볯㲎牢ਾ볯钼볯躼볯膽뷯螽볯ꢼ볯銈볯躼볯ꦼ뷯蒽뷯銽뷯貽뷯貼볯躼볯銼볯邼볯覼볯莽뷯覽뷯膽뷯覽뷯躽†뷯蚽†뷯邽뷯躽뷯貽†뷯薽뷯銽뷯邽뷯邽뷯覽뷯薽†볯ꚼ†뷯躽뷯₄钽뷯薽†뷯薽뷯銽뷯邽뷯邽뷯覽뷯薽†볯ꚼ†뷯薽뷯薽뷯钽뷯銽†볯ₒ蒽뷯銽뷯躽뷯₇覽뷯蚽뷯膽뷯趽뷯钽뷯銽뷯ₙ袽뷯邽뷯銽뷯貽뷯薽뷯覽뷯₁覽뷯₎銽뷯钽뷯躼볯薽뷯銽뷯鎽뷯覽뷯躽뷯薽볯醼볯颼볯醼볯馼裢醼볯鞼볯㲎牢ਾ볯钼볯躼볯薽볯늼볯꒼볯貼볯躼볯辽뷯貽뷯馽볯ꪼ볯궼볯랼뷯躽뷯貼볯躼볯膽뷯貽뷯銽뷯躽볯ꎼ볯Ꞽ뷯銽뷯銽뷯貼뷯躽뷯₄궼볯낼뷯銽뷯薽뷯钽뷯薽뷯躼볯躽뷯薽뷯躽뷯钽뷯辽뷯膽뷯₌떼뷯覽뷯躽†뷯蚽†볯膽뷯覽뷯₃膽뷯蒽†볯貽뷯躽뷯莽뷯貽†볯袽뷯銽뷯膽뷯辽뷯辽뷯馽볯겼볯뢼볯ꦼ볯躼볯辽뷯薽뷯莽뷯膽뷯閽뷯薽†뷯辽뷯ₒ钽뷯薽†뷯辽뷯趽뷯貽†뷯薽뷯钽뷯蒽뷯₅銽뷯莽뷯邽뷯辽뷯袼볯낼볯覼뷯膽뷯覽뷯馽볯낼뷯膽뷯趽뷯莽뷯貽†볯薽뷯貼볯邼볯馼볯隼볯骼볯醼볯銈볯醼볯㲎牢ਾ볯钼볯躼볯覽볯뒼볯貼볯薽뷯貼볯躼裢뎼볯貼볯薽뷯躽볯궼볯銈볯躼볯ꮼ뷯辽뷯貼볯躼볯躼볯뎼뷯躽뷯貼볯躼볯躼볯銼볯醼볯覼볯薽뷯薽†뷯颽뷯銽뷯鎽뷯覽뷯躽†뷯銽뷯蚽뷯貽뷯₅銽뷯隽뷯膽뷯鎽†뷯袽뷯钽†볯뒼볯뒼볯ₒ覽뷯ₓ覽뷯隽뷯貽뷯薽뷯₄覽뷯₎钽뷯薽†뷯趽뷯閽뷯辽뷯閽뷯邽뷯薽뷯鎽뷯隽뷯₅蚽뷯躽뷯钽뷯辽뷯₎辽뷯₆袽뷯趽뷯躽†뷯辽뷯薽†뷯膽뷯銽뷯鞽裢蒽뷯銽뷯隽뷯蒽†뷯薽뷯薽뷯莽뷯馽뷯膽뷯₌鎽뷯薽뷯₍莽뷯貽뷯鎽볯Ꞽ뷯躽뷯貼볯馼볯貼볯鎼볯銈볯鎼볯躼戼㹲钼볯邼볯림뷯躽볯ꪼ볯貼볯膽뷯膽뷯螽뷯閽볯ꮼ볯貼볯銽뷯閽뷯覽뷯膽뷯貼볯躼볯躼볯ꎼ뷯膽뷯讽볯겼볯貼볯袽뷯辽볯몼볯貼볯莽뷯薽뷯薽뷯趽뷯躽뷯貼볯躼볯躼볯ꢼ뷯銽뷯薽뷯貽볯ꎼ볯궼볯貼볯辽뷯钽뷯銽볯ꆼ볯겼볯貼볯辽뷯莽뷯薽뷯貼볯躼볯躼볯랼뷯躽뷯辽뷯貼볯躼볯躼볯늼뷯躽뷯薽뷯貼볯躼볯躼볯ꎼ뷯貽뷯趽뷯躽볯낼볯ꪼ볯蚼볯辽뷯薽뷯芽뷯閽뷯貼볯躼볯躼볯銼볯醼볯覼볯钽뷯閽뷯钽뷯銽뷯₅膽뷯蒽†뷯覽뷯膽뷯蒽裢芽뷯躽뷯覽뷯螽†뷯薽뷯袽뷯躽뷯鎽뷯₍辽뷯₆钽뷯薽†뷯閽뷯膽뷯₎꾼볯醼†뷯躽뷯₄꾼볯銼†뷯銽뷯颽뷯躽†뷯薽뷯薽뷯钽뷯銽뷯躼볯膽뷯ₔ뎼뷯銽뷯莽뷯ₔ궼뷯貽†볯覽뷯貽볯銼볯貼볯馼볯銈볯馼볯躼戼㹲钼볯醼볯림뷯躽볯ꪼ볯貼볯辽뷯膽뷯薽뷯貼볯躼볯躼볯ꮼ뷯貽뷯貼볯躼볯늼뷯鎽뷯躽뷯膽뷯趽볯꒼볯궼볯袼볯邼볯閼볯ꎼ뷯馽뷯钽뷯貽†뷯钽뷯閽뷯钽뷯銽뷯₅辽뷯₆钽뷯薽†뷯閽뷯膽뷯₎꾼볯銼†뷯銽뷯颽뷯躽†뷯薽뷯薽뷯钽뷯銽†뷯辽뷯躽뷯₄钽뷯₏钽뷯薽†뷯躽뷯辽뷯躽뷯膽†뷯銽뷯螽†뷯閽뷯辽뷯薽뷯膽뷯钽볯꺼뷯钽뷯銽뷯貼볯醼볯貼볯钼볯銈볯閼볯躼戼㹲钼볯銼볯림뷯躽볯뢼볯貼볯袽뷯躽뷯貼볯躼볯겼뷯躽볯림볯貼볯膽뷯貼볯躼볯ꎼ뷯覽볯림볯貼볯袽뷯閽볯ꚼ볯貼볯袽뷯躽볯ꎼ볯貼볯閽뷯貼볯躼볯몼뷯薽뷯螽볯뢼볯蚼볯袽뷯躽뷯貼볯躼볯銼볯醼볯覼볯覽뷯薽†뷯薽뷯閽뷯膽뷯辽뷯馽†뷯薽뷯薽뷯ₓ蒽뷯钽뷯莽뷯薽뷯₄芽뷯ₙ趽뷯钽뷯袽뷯躽뷯₇鎽뷯螽뷯膽뷯閽뷯薽뷯ₓ辽뷯₆薽볯뒼볯€膽뷯蒽†볯랼볯뎼†뷯躽†뷯鎽뷯銽뷯膽뷯覽뷯躼볯辽뷯銽뷯膽뷯₌辽뷯₆蒽뷯銽뷯膽뷯辽뷯辽뷯覽뷯膽뷯₌鎽뷯覽뷯躽뷯薽볯鞼볯貼볯鎼볯銈볯钼볯躼戼㹲钼볯鎼볯림뷯讽뷯趽뷯骽뷯貼볯躼볯ꮼ뷯钽뷯貼볯躼볯뒼뷯銽뷯鞽뷯讽뷯貼볯躼볯ꦼ뷯閽뷯覽볯뒼볯蚼볯袽뷯趽뷯骽뷯貼볯躼볯銼볯邼볯覼볯₡뎼뷯莽뷯躽뷯₄겼뷯閽뷯辽뷯銽뷯薽뷯薽†볯钼†볯薽뷯薽뷯钽뷯銽볯ꊼ뷯钽볯ₒꆼ†볯薽뷯ₗ뒼뷯薽뷯膽뷯薽뷯钽뷯莽†볯膽뷯螽뷯钽†뷯躽†볯躽뷯貽뷯趽뷯膽뷯覽뷯躽†뷯躽뷯₄ꦼ뷯趽뷯躽뷯貽뷯螽뷯莽뷯貽†볯覽뷯辽뷯蒽뷯銽뷯躼볯袽뷯₅ꪼ뷯閽뷯躽뷯貽†뷯蚽†뷯颽뷯薽뷯覽뷯薽뷯钽뷯貽†뷯薽뷯覽뷯覽뷯薽볯醼볯銼볯钼볯醼裢钼볯銼볯㲎牢ਾ볯閼볯躼볯辽뷯钽볯ꎼ볯ꎼ볯貼볯躼볯躼볯薽뷯銽뷯莽뷯貼뷯躽뷯₄Ꞽ볯ꆼ볯몼뷯趽뷯薽뷯趽뷯躽볯뒼뷯薽†뷯貽뷯钽뷯貽뷯钽†뷯莽뷯覽뷯膽뷯覽뷯螽†뷯膽뷯钽뷯銽볯낼볯ꚼ볯鎽뷯螽뷯膽뷯貽뷯躽뷯₇莽뷯鎽뷯膽뷯薽†뷯躽†뷯馽뷯钽뷯趽뷯莽†뷯躽뷯貽뷯趽뷯膽뷯辽뷯馽†뷯薽뷯邽뷯躽뷯薽뷯躼볯覽뷯莽뷯覽뷯覽뷯貼볯邼볯邼볯馼볯骼볯馼볯銈볯躼戼㹲钼볯閼볯림뷯閽볯ꪼ볯貼볯螽뷯馽뷯躽볯ꆼ볯뚼볯貼볯貽뷯薽뷯鎽볯ꎼ볯Ꞽ볯貼볯覽뷯貼볯躼볯ꢼ뷯貽뷯辽뷯芽뷯貼볯躼볯躼볯銼볯邼볯覼볯躽뷯ₔ邽뷯钽뷯鞽뷯馽裢銽뷯貽뷯钽뷯蒽†뷯薽뷯薽†뷯颽뷯銽뷯鎽뷯覽뷯躽†뷯躽†뷯躽뷯貽뷯趽뷯膽뷯辽뷯馽†뷯辽뷯薽뷯₌蒽뷯鎽뷯膽뷯薽볯꒼뷯螽뷯鎽뷯覽뷯薽†뷯覽뷯薽뷯鎽뷯鎽†뷯躽뷯₄鎽뷯覽뷯躽뷯薽뷯貼볯鎼볯醼볯醼볯銈볯邼볯馼볯㲎牢ਾ볯閼볯躼볯膽뷯趽뷯钽뷯銽뷯貼볯躼볯ꎼ뷯覽뷯莽뷯覽뷯貼볯躼볯궼뷯躽뷯膽뷯膽볯궼볯ꎼ볯貼볯銽뷯蚽뷯莽뷯躽뷯薽볯ꆼ볯貼볯辽뷯膽뷯覽볯ꆼ볯貼볯覽뷯辽뷯薽뷯钽뷯貼볯躼볯Ꞽ뷯銽뷯膽뷯貼볯躼볯躼볯銼볯醼볯覼뷯Ꞽ뷯閽볯ₒ趽뷯钽뷯芽뷯钽뷯辽뷯覽뷯₃螽뷯閽뷯膽뷯膽뷯薽†뷯薽뷯薽뷯钽뷯銽뷯ₓ銽뷯鎽뷯銽뷯覽뷯₎覽뷯蚽뷯膽뷯趽뷯钽뷯銽뷯ₙ邽뷯覽뷯₎膽뷯蒽†뷯薽뷯覽뷯钽뷯₅钽뷯薽†뷯躽뷯貽뷯薽뷯覽뷯₃膽뷯钽뷯隽뷯钽뷯ₙ辽뷯₆蒽뷯膽뷯₌趽볯貽뷯銼볯趽볯貽뷯鎼†뷯薽뷯薽뷯钽뷯銽†뷯螽뷯躽뷯鎽뷯鎽볯궼뷯貽뷯莽뷯貽뷯銽†뷯膽뷯躽볯鞼볯醼볯㲎牢ਾ볯閼볯躼볯薽뷯螽볯ꢼ볯貼볯躼볯銽볯Ꞽ볯늼뷯隽볯ꪼ볯Ꞽ볯ꢼ뷯袽뷯膽뷯躽볯궼볯꺼볯낼뷯隽뷯辽뷯膽볯ꊼ볯ꆼ볯뎼뷯袽뷯趽뷯蚽볯膽뷯蒽†볯躼볯閽볯꺼뷯閽뷯辽뷯薽뷯覽뷯₎떼†뷯薽뷯薽뷯钽뷯銽†볯銈뷯薽뷯覽뷯覽뷯躽뷯ₔ趽뷯莽뷯₅蒽뷯鎽뷯貽뷯馽†뷯覽뷯蚽뷯銽뷯躽뷯覽뷯貽†뷯薽뷯邽뷯躽뷯薽뷯ₓ覽뷯₎鎽뷯躽뷯辽뷯馽†뷯薽뷯莽뷯邽뷯覽뷯躽볯鎽뷯銽뷯鎽뷯貼뷯躽뷯₄蚽뷯薽뷯覽뷯螽볯궼뷯貽†볯薽뷯貽†볯覽뷯貽볯銼볯邼볯貼볯隼볯馼볯閼볯銈볯鎼볯㲎牢ਾ볯閼볯躼볯袽뷯躽뷯₇림볯ꦼ裢뒼볯뎼볯ꖼ볯₲鎽뷯銽뷯薽뷯ₒ蚽뷯銽†뷯銽뷯钽뷯覽뷯₎鎼볯₤鎽뷯銽뷯莽뷯閽뷯薽†뷯銽뷯蒽뷯莽뷯覽뷯躽볯ꊼ볯ꎼ†볯覽뷯覽뷯蚽뷯銽뷯膽뷯覽뷯鎽볯銼볯邼볯貼볯骼볯邼볯㲎牢ਾ볯閼볯躼볯袽뷯躽뷯貼볯躼볯랼뷯貼볯躼볯놼뷯膽뷯螽볯뢼볯貼볯袽뷯閽볯궼볯蚼볯膽뷯螽볯낼볯袼볯邼볯邼뷯覼볯躽뷯膽뷯辽뷯覽뷯趽†뷯蚽†뇎볯ꆼ裢膽뷯銽뷯躽뷯莽뷯邽뷯辽뷯骼뷯₁躽뷯隽뷯貽†뷯邽뷯銽뷯膽뷯袽†뷯辽†뷯躽뷯覽뷯覽뷯ₔ覽뷯蚽뷯膽뷯趽뷯钽뷯銽뷯ₙ銽뷯鎽뷯辽뷯鎽뷯鎽†뷯躽†뷯薽뷯鎽뷯鎽볯ꪼ뷯閽뷯躽뷯貽†뷯蚽†볯辽뷯薽뷯閽뷯膽뷯ₒ궼뷯蒽뷯莽뷯躽뷯貼볯颼볯銼볯馼裢銼볯隼볯㲎牢ਾ볯隼볯躼볯袽뷯躽뷯貼볯躼볯떼뷯膽뷯貼볯躼볯Ꞽ뷯钽뷯貼볯躼볯랼뷯躽†볯膽뷯貼볯躼볯겼뷯閽볯랼볯貼볯膽뷯鎽뷯邽뷯躽볯꺼볯ꆼ볯貼볯膽뷯薽뷯貼볯躼볯랼뷯躽뷯貼볯躼볯꺼뷯貽뷯辽뷯貼볯躼볯랼뷯覽뷯銽뷯钽뷯貽뷯貼볯躼볯뎼뷯鞽뷯馽뷯貼볯躼볯躼볯뢼뷯貼볯躼볯궼뷯鎽뷯薽뷯鎽뷯袽뷯覽뷯钽볯궼볯貼볯覽뷯貽뷯膽뷯鎽볯Ꞽ볯ꪼ볯貼볯辽뷯钽뷯钽볯뎼볯貼볯薽뷯膽뷯辽뷯貼볯躼볯躼볯랼뷯覽뷯薽볯뒼볯貼볯躼볯랼뷯躽뷯貼볯躼볯ꦼ뷯袽뷯袽뷯躽뷯辽볯ꆼ볯貼볯覽뷯閽뷯閽뷯膽볯ꮼ볯ꎼ볯貼볯薽뷯躽뷯馽뷯銽볯薽뷯ₔ膽뷯躼볯뎼뷯銽뷯莽뷯閽뷯薽†뷯蚽†뷯袽뷯₅ꆼ뷯螽뷯辽뷯薽뷯鎽뷯躽†볯薽뷯薽뷯钽뷯銽†볯薽뷯薽뷯貽뷯蒽†뷯馽†볯薽뷯覽뷯貽†볯薽뷯钽뷯鎽뷯莽뷯躽뷯₄ꎼ뷯馽뷯钽뷯貽뷯辽뷯銽뷯邽뷯馽볯ꎼ뷯貽뷯貼볯邼볯閼볯醼볯醼볯钼볯颼볯鎼裢颼볯钼볯㲎牢ਾ볯隼볯躼볯袽뷯躽뷯貼볯躼볯뎼뷯袽뷯閽뷯蒽뷯貼볯躼볯겼뷯閽뷯辽뷯躽뷯薽뷯貼볯躼볯낼뷯躽뷯薽뷯貼볯躼볯ꎼ뷯膽뷯讽볯ꪼ볯貼볯辽뷯躽뷯螽볯낼볯貼볯薽뷯膽뷯蒽볯꺼볯貼볯薽뷯膽뷯蒽볯ꎼ볯貼볯覽뷯貽뷯銈볯膽뷯邽볯궼볯蚼볯辽뷯袽뷯貼볯躼볯銼볯醼볯芽볯ꆼ†뷯銽뷯钽뷯莽뷯貽†뷯辽뷯薽†뷯辽뷯ₒꎼ볯겼볯ₒ覽뷯₎钽뷯薽†뷯膽뷯袽뷯螽뷯躽뷯鎽뷯鎽†뷯蚽†뷯颽뷯薽뷯覽뷯薽뷯钽뷯貽†뷯貽뷯薽뷯螽뷯莽†뷯鎽뷯袽뷯膽볯ꪼ뷯閽뷯躽뷯貽†뷯蚽†뷯趽뷯閽뷯辽뷯辽뷯馽볯ꊼ뷯貽뷯覽뷯辽뷯薽볯궼뷯躼볯醼볯閼볯覼볯醼볯閼볯隼볯钼볯躼戼㹲钼볯銼볯몼뷯膽뷯貼볯躼볯ꢼ뷯貼볯躼볯뚼뷯銽뷯袽뷯鎽뷯貼볯躼볯림뷯趽뷯貽볯뎼볯貼볯膽뷯鎽裢꾼胢ꎼ뷯躽뷯辽뷯貼볯躼볯Ꞽ뷯銽뷯辽뷯貼볯躼볯ꮼ뷯膽뷯貽뷯貼볯躼볯ꚼ뷯薽뷯銽뷯貼볯躼볯ꢼ뷯銽뷯閽뷯閽뷯覽뷯躽볯뚼볯蚼볯膽뷯覽뷯薽뷯钽뷯貼볯躼볯躼볯銼볯醼볯覼볯薽뷯銽뷯膽뷯薽뷯₄貽뷯隽뷯貽†뷯蚽†뷯貽뷯膽뷯钽뷯銽뷯ₙ銽뷯莽뷯邽뷯辽뷯鎽†뷯躽†뷯貽뷯辽뷯₄莽뷯貽뷯鎽†뷯辽뷯貽뷯鞽뷯躽뷯₇钽뷯膽뷯趽뷯钽뷯莽†뷯銽뷯覽뷯₎覽뷯誽뷯銽뷯ₙ膽뷯蒽†뷯辽뷯薽뷯钽뷯膽뷯₌膽뷯鎽뷯莽뷯膽뷯覽뷯躽†뷯覽뷯袽†뷯膽뷯辽뷯膽뷯袽뷯躼볯辽뷯銽뷯膽뷯₌辽뷯₆ꆼ뷯骽뷯薽뷯趽뷯銽胢鎽†볯覽뷯薽뷯鎽뷯貼볯钼볯钼볯鞼裢钼볯馼볯㲎牢ਾ볯隼볯躼볯袽뷯辽볯몼볯貼볯薽뷯貼볯躼볯躼볯ꊼ뷯貽뷯覽뷯覽볯ꆼ볯蚼볯膽뷯讽뷯馽볯ꎼ볯뒼볯袼볯馼볯閼볯ꆼ†볯閽뷯膽뷯₎ꢼ뷯趽뷯貽뷯螽뷯薽†뷯蚽†뷯袽뷯₅꒼뷯辽뷯辽뷯袽뷯貽뷯₁낼뷯貽뷯銽뷯钽뷯ₙꞼ뷯躽뷯₅蚽뷯覽뷯骽뷯薽뷯₄ꢼ뷯鎽†볯薽뷯躽†볯蒽뷯躽뷯覽뷯覽뷯蒽†뷯躽뷯₄궼뷯邽뷯薽뷯₄钽뷯₏醼볯醽볯醼볯醼볯Ꞽ뷯躽뷯趽뷯莽뷯貼볯鞼볯鎼볯邼裢鎼볯鎼볯㲎牢ਾ볯隼볯躼볯袽뷯躽뷯貼볯躼볯놼뷯躽볯겼볯貼볯膽뷯膽뷯覽뷯鎽볯꺼볯뚼볯貼뷯薽†볯銽뷯薽뷯貼볯躼볯ꢼ뷯躽볯Ꞽ볯랼볯貼볯閽뷯钽뷯隽뷯鎽뷯躽볯궼볯貼볯膽뷯銽뷯鎽볯궼볯貼볯袽뷯辽볯ꎼ볯貼볯袽뷯銽뷯薽뷯貼볯躼볯躼볯ꎼ뷯銽뷯薽뷯貼볯躼볯뎼뷯膽뷯辽뷯貼볯躼볯ꆼ뷯膽뷯馽뷯躽볯늼볯貼볯袽뷯銽뷯骽뷯隽볯뚼볯貼볯钽뷯隽뷯躽뷯貼볯躼볯躼볯ꆼ볯貼볯躼볯躼볯ꢼ뷯覽뷯趽뷯躽볯겼볯ꢼ볯貼볯薽뷯芽뷯躽볯ꆼ볯貼볯閽뷯膽뷯薽뷯膽볯ꦼ볯蚼볯膽뷯蒽뷯貽볯뒼볯궼볯袼볯邼볯隼볯뎼뷯銽뷯莽뷯閽뷯薽†뷯蚽†볯ꎼ†뷯袽뷯趽뷯讽뷯躽뷯₅銽뷯莽뷯邽뷯辽뷯ₒ銼†뷯覽뷯袽†뷯銽뷯袽뷯鎽뷯薽뷯覽뷯₃膽뷯蒽†뷯貽뷯辽뷯钽뷯銽뷯莽†뷯躽뷯膽뷯辽뷯覽뷯钽뷯躼볯膽뷯閽뷯薽볯閼볯邼볯钼볯颼裢钼볯醼볯㲎牢ਾ볯隼볯躼볯袽뷯躽뷯貼볯躼볯뎼뷯貽뷯讽뷯隽볯뎼볯Ꞽ볯貼볯辽뷯覽뷯膽볯ꪼ볯Ꞽ볯貼볯膽뷯芽뷯銽뷯貼볯躼볯躼볯ꪼ뷯莽뷯芽뷯辽뷯貼볯躼볯躼볯뒼뷯貽뷯薽뷯貼볯躼볯躼볯ꊼ뷯膽뷯讽뷯閽뷯躽볯궼볯늼볯袼볯邼볯鎼볯ꆼ뷯钽뷯隽뷯钽뷯辽뷯₎辽뷯₆趽뷯銽뷯躽뷯₅貽뷯躽뷯₇趽뷯鎽뷯ₔ莽뷯貽뷯鎽†뷯馽†뷯袽뷯₅膽뷯薽뷯辽뷯覽뷯薽†볯鎼†뷯薽뷯薽뷯钽뷯銽볯뒼뷯薽†볯辽뷯銽뷯膽뷯₌辽뷯₆ꦼ뷯趽뷯躽뷯貽뷯螽뷯貼볯鞼볯貼볯鎼볯銈볯钼볯躼戼㹲钼볯隼볯몼뷯辽뷯貼볯躼볯ꚼ뷯躽볯뢼볯貼볯閽뷯袽뷯膽뷯貼볯躼볯ꚼ뷯躽뷯貼볯躼볯낼뷯钽뷯貽볯ꎼ볯ꆼ볯貼볯閽볯辽뷯鎽볯Ꞽ볯ꎼ볯蚼볯辽뷯薽뷯膽뷯钽뷯貼볯躼볯躼볯銼볯邼볯覼볯薽뷯貽裢莽뷯貽뷯₌蚽뷯鎽뷯辽뷯₎膽뷯蒽†뷯躽뷯薽뷯躽뷯貽뷯骽뷯钽뷯辽뷯₎辽뷯₆钽뷯薽†볯꺼볯銈뷯膽뷯薽뷯貼볯ꦼ볯銈볯ₑ莽뷯銈뷯薽뷯薽뷯钽뷯銽볯ꆼ볯ꪼ볯뚼뷯銽뷯貽뷯螽뷯貼볯邼볯貼볯銼裢鎼볯躼戼㹲钼볯鞼볯몼뷯辽뷯貼볯躼볯薽뷯ₔ膽뷯躼볯薽뷯薽뷯钽뷯銽†뷯辽뷯ₒꆼ볯ꖼ볯늼볯Ꞽ볯覼뷯薽뷯覽뷯钽뷯鎽†뷯薽뷯覽뷯钽뷯趽뷯貽†뷯辽뷯趽뷯钽뷯辽뷯₎覽뷯₎銽뷯鎽뷯辽뷯鎽뷯₅钽뷯₏膽뷯钽뷯銽뷯膽뷯₌覽뷯誽뷯銽뷯躼볯覽뷯莽뷯貽뷯钽뷯辽뷯貼볯邼볯鎼볯醼볯鞼볯銼볯鎼볯銈볯銼볯鎼볯㲎牢ਾ볯隼볯躼볯袽뷯貼볯躼볯뎼뷯躽볯랼볯貼볯袽뷯躽뷯貼볯躼볯뎼뷯躽뷯貼볯躼볯겼뷯躽볯뎼볯袼볯邼볯隼볯뒼뷯薽†뷯辽뷯薽†뷯蚽†뷯薽뷯銽뷯邽뷯邽뷯覽뷯薽†볯₹覽뷯₎钽뷯薽†뷯膽뷯袽뷯邽뷯馽뷯覽뷯貽뷯螽뷯ₙ辽뷯₆膽뷯袽뷯銽뷯鎽뷯貽뷯銽뷯钽뷯莽†뷯膽뷯蒽뷯辽뷯膽뷯莽뷯貽뷯銽†뷯覽뷯薽뷯鎽뷯躼볯躽뷯薽뷯躽뷯钽뷯辽뷯膽뷯₌ꪼ뷯閽뷯躽뷯貽†뷯蚽†볯膽뷯蒽뷯辽뷯辽뷯馽볯銼볯邼볯銼볯閼裢銼볯醼볯㲎牢ਾ볯隼볯躼볯覽뷯螽뷯鎽볯꒼볯ꎼ볯貼볯銽뷯鎽裢궼뷯銽뷯貽뷯薽뷯貼볯躼볯궼뷯鎽뷯膽뷯膽볯뎼볯貼볯薽뷯螽뷯銽볯ꊼ볯궼볯貼볯膽뷯膽뷯覽뷯躽볯늼볯궼볯貼볯膽뷯薽뷯貼볯躼볯躼볯ꚼ뷯覽뷯銽볯뎼볯꺼볯貼볯辽뷯辽뷯貼볯躼볯뒼뷯薽뷯螽볯림볯銈볯躼볯ꮼ뷯讽뷯辽뷯辽뷯貼볯躼볯銼볯醼볯覼볯躽뷯覽裢趽뷯貽뷯躽뷯躽裢莽뷯躽뷯薽뷯钽뷯膽뷯覽뷯螽†뷯辽뷯趽뷯躽뷯₅钽뷯薽뷯钽뷯薽뷯钽†뷯钽뷯薽뷯閽뷯钽뷯鎽†뷯袽뷯辽뷯覽뷯₃薽뷯邽뷯銽뷯趽뷯躽뷯膽뷯₌莽뷯貽뷯钽뷯鎽†뷯躽뷯₄蚽뷯芽뷯辽뷯覽뷯躼볯趽뷯銽뷯莽뷯躽†볯辽뷯銽뷯膽뷯₌辽뷯₆낼뷯馽뷯覽뷯貽뷯螽뷯銈볯膽뷯钽뷯辽뷯躽뷯薽뷯钽뷯躽뷯貽†뷯躽뷯₄겼뷯隽뷯銽†볯袽뷯鎽뷯辽뷯辽뷯馽볯鎼볯钼볯Ꞽ볯鞼볯銈볯颼볯钼볯㲎牢ਾ볯鞼볯躼볯貽뷯钽뷯覽뷯貼볯躼볯膽뷯蒽†볯躼볯辽뷯袽뷯薽볯袼볯邼볯邼볯ꎼ뷯薽뷯辽뷯覽뷯薽뷯骼뷯₁躽뷯鞽†뷯貽뷯鎽뷯覽뷯覽뷯膽뷯覽뷯躽†뷯馽뷯钽뷯趽†뷯躽뷯₄钽뷯薽뷯銽†뷯辽뷯薽†뷯躽†뷯趽뷯閽뷯覽뷯馽볯ꦼ뷯趽뷯躽뷯钽뷯貼볯銼볯醼볯醼裢鞼볯઎⼼䥄㹖㰊䐯噉ਾ䐼噉㰾䥄㹖胣뎛볯ꆼ胣㲑䐯噉ਾ††††††䐼噉㰾⁡牨晥∽〲〲㌵㔱㐱琮晩㸢〲〲㌵㔱㐱琮晩ꃂ〰〰㌹⼼㹡⼼䥄㹖 †††㰠䥄㹖胣뎛볯ꊼ胣㲑䐯噉ਾ††††††䐼噉㰾⁡牨晥∽〲〲㌵㔱㐱琮晩㸢〲〲㌵㔱㐱琮晩ꃂ〰〰㐹⼼㹡⼼䥄㹖 †††㰠䥄㹖胣뎛볯ꎼ胣㲑䐯噉ਾ††††††䐼噉㰾⁡牨晥∽〲〲㌵㔱㐱琮晩㸢〲〲㌵㔱㐱琮晩ꃂ〰〰㔹⼼㹡⼼䥄㹖 †††㰠䥄㹖胣뎛볯꒼볯醼볯醀⼼䥄㹖 †††††㰠䥄㹖愼栠敲㵦㈢㈰㔰ㄳㄵ⸴楴≦㈾㈰㔰ㄳㄵ⸴楴쉦゠〰㤰㰶愯㰾䐯噉ਾ††††䐼噉邀鯥醼볯袼볯覼胣㲑䐯噉ਾ††††††䐼噉㰾⁡牨晥∽〲〲㌵㔱㐱琮晩㸢〲〲㌵㔱㐱琮晩ꃂ〰〰㜹⼼㹡⼼䥄㹖 †††㰠䥄㹖胣뎛볯ꖼ胣㲑䐯噉ਾ††††††䐼噉㰾⁡牨晥∽〲〲㌵㔱㐱琮晩㸢〲〲㌵㔱㐱琮晩ꃂ〰〰㠹⼼㹡⼼䥄㹖 †††㰠䥄㹖胣뎛볯ꆼ胣㲑䐯噉ਾ††††††䐼噉㰾⁡牨晥∽〲〲㌵㔱㐱琮晩㸢〲〲㌵㔱㐱琮晩ꃂ〰〰㤹⼼㹡⼼䥄㹖 †††㰠䥄㹖胣뎛볯ꊼ胣㲑䐯噉ਾ††††††䐼噉㰾⁡牨晥∽〲〲㌵㔱㐱琮晩㸢〲〲㌵㔱㐱琮晩ꃂ〰㄰〰⼼㹡⼼䥄㹖 †††㰠䥄㹖胣뎛볯ꎼ胣㲑䐯噉ਾ††††††䐼噉㰾⁡牨晥∽〲〲㌵㔱㐱琮晩㸢〲〲㌵㔱㐱琮晩ꃂ〰㄰㄰⼼㹡⼼䥄㹖 †††㰠䥄㹖胣뎛볯꒼胣㲑䐯噉ਾ††††††䐼噉㰾⁡牨晥∽〲〲㌵㔱㐱琮晩㸢〲〲㌵㔱㐱琮晩ꃂ〰㄰㈰⼼㹡⼼䥄㹖 †††㰠䥄㹖胣뎛볯ꖼ胣㲑䐯噉ਾ††††††䐼噉㰾⁡牨晥∽〲〲㌵㔱㐱琮晩㸢〲〲㌵㔱㐱琮晩ꃂ〰㄰㌰⼼㹡⼼䥄㹖 †††㰠䥄㹖胣뎛볯ꚼ볯醼볯醀⼼䥄㹖 †††††㰠䥄㹖愼栠敲㵦㈢㈰㔰ㄳㄵ⸴楴≦㈾㈰㔰ㄳㄵ⸴楴쉦゠〰〱㰴愯㰾䐯噉ਾ††††䐼噉邀鯥銼볯袼볯覼胣㲑䐯噉ਾ††††††䐼噉㰾⁡牨晥∽〲〲㌵㔱㐱琮晩㸢〲〲㌵㔱㐱琮晩ꃂ〰㄰㔰⼼㹡⼼䥄㹖 †††㰠䥄㹖胣뎛볯Ꞽ胣㲑䐯噉ਾ††††††䐼噉㰾⁡牨晥∽〲〲㌵㔱㐱琮晩㸢〲〲㌵㔱㐱琮晩ꃂ〰㄰㘰⼼㹡⼼䥄㹖 †††㰠䥄㹖胣뎛볯ꢼ胣㲑䐯噉ਾ††††††䐼噉㰾⁡牨晥∽〲〲㌵㔱㐱琮晩㸢〲〲㌵㔱㐱琮晩ꃂ〰㄰㜰⼼㹡⼼䥄㹖 †††㰠䥄㹖胣뎛볯ꆼ胣㲑䐯噉ਾ††††††䐼噉㰾⁡牨晥∽〲〲㌵㔱㐱琮晩㸢〲〲㌵㔱㐱琮晩ꃂ〰㄰㠰⼼㹡⼼䥄㹖 †††㰠䥄㹖胣뎛볯ꊼ胣㲑䐯噉ਾ††††††䐼噉㰾⁡牨晥∽〲〲㌵㔱㐱琮晩㸢〲〲㌵㔱㐱琮晩ꃂ〰㄰㤰⼼㹡⼼䥄㹖 †††㰠䥄㹖胣뎛볯ꎼ胣㲑䐯噉ਾ††††††䐼噉㰾⁡牨晥∽〲〲㌵㔱㐱琮晩㸢〲〲㌵㔱㐱琮晩ꃂ〰㄰〱⼼㹡⼼䥄㹖 †††㰠䥄㹖胣뎛볯꒼胣㲑䐯噉ਾ††††††䐼噉㰾⁡牨晥∽〲〲㌵㔱㐱琮晩㸢〲〲㌵㔱㐱琮晩ꃂ〰㄰ㄱ⼼㹡⼼䥄㹖 †††㰠䥄㹖胣뎛볯ꖼ胣㲑䐯噉ਾ††††††䐼噉㰾⁡牨晥∽〲〲㌵㔱㐱琮晩㸢〲〲㌵㔱㐱琮晩ꃂ〰㄰㈱⼼㹡⼼䥄㹖 †††㰠䥄㹖胣뎛볯ꚼ胣㲑䐯噉ਾ††††††䐼噉㰾⁡牨晥∽〲〲㌵㔱㐱琮晩㸢〲〲㌵㔱㐱琮晩ꃂ〰㄰㌱⼼㹡⼼䥄㹖 †††㰠䥄㹖胣뎛볯ꆼ胣㲑䐯噉ਾ††††††䐼噉㰾⁡牨晥∽〲〲㌵㔱㐱琮晩㸢〲〲㌵㔱㐱琮晩ꃂ〰㄰㐱⼼㹡⼼䥄㹖 †††㰠䥄㹖胣뎛볯ꊼ胣㲑䐯噉ਾ††††††䐼噉㰾⁡牨晥∽〲〲㌵㔱㐱琮晩㸢〲〲㌵㔱㐱琮晩ꃂ〰㄰㔱⼼㹡⼼䥄㹖 †††㰠䥄㹖胣뎛볯ꎼ胣㲑䐯噉ਾ††††††䐼噉㰾⁡牨晥∽〲〲㌵㔱㐱琮晩㸢〲〲㌵㔱㐱琮晩ꃂ〰㄰㘱⼼㹡⼼䥄㹖 †††㰠䥄㹖胣뎛볯꒼胣㲑䐯噉ਾ††††††䐼噉㰾⁡牨晥∽〲〲㌵㔱㐱琮晩㸢〲〲㌵㔱㐱琮晩ꃂ〰㄰㜱⼼㹡⼼䥄㹖 †††㰠䥄㹖胣뎛볯ꖼ볯醼볯醀⼼䥄㹖 †††††㰠䥄㹖愼栠敲㵦㈢㈰㔰ㄳㄵ⸴楴≦㈾㈰㔰ㄳㄵ⸴楴쉦゠〰ㄱ㰸愯㰾䐯噉ਾ††††䐼噉邀鯥钼볯袼볯覼胣㲑䐯噉ਾ††††††䐼噉㰾⁡牨晥∽〲〲㌵㔱㐱琮晩㸢〲〲㌵㔱㐱琮晩ꃂ〰㄰㤱⼼㹡⼼䥄㹖 †††㰠䥄㹖胣뎛볯ꚼ볯醼볯醀⼼䥄㹖 †††††㰠䥄㹖愼栠敲㵦㈢㈰㔰ㄳㄵ⸴楴≦㈾㈰㔰ㄳㄵ⸴楴쉦゠〰㈱㰰愯㰾䐯噉ਾ††††䐼噉邀鯥钼볯袼볯覼胣㲑䐯噉ਾ††††††䐼噉㰾⁡牨晥∽〲〲㌵㔱㐱琮晩㸢〲〲㌵㔱㐱琮晩ꃂ〰㄰ㄲ⼼㹡⼼䥄㹖 †††㰠䥄㹖胣뎛볯Ꞽ胣㲑䐯噉ਾ††††††䐼噉㰾⁡牨晥∽〲〲㌵㔱㐱琮晩㸢〲〲㌵㔱㐱琮晩ꃂ〰㄰㈲⼼㹡⼼䥄㹖 †††㰠䥄㹖胣뎛볯ꢼ胣㲑䐯噉ਾ††††††䐼噉㰾⁡牨晥∽〲〲㌵㔱㐱琮晩㸢〲〲㌵㔱㐱琮晩ꃂ〰㄰㌲⼼㹡⼼䥄㹖 †††㰠䥄㹖胣뎛볯ꦼ胣㲑䐯噉ਾ††††††䐼噉㰾⁡牨晥∽〲〲㌵㔱㐱琮晩㸢〲〲㌵㔱㐱琮晩ꃂ〰㄰㐲⼼㹡⼼䥄㹖 †††㰠䥄㹖胣뎛볯ꆼ胣㲑䐯噉ਾ††††††䐼噉㰾⁡牨晥∽〲〲㌵㔱㐱琮晩㸢〲〲㌵㔱㐱琮晩ꃂ〰㄰㔲⼼㹡⼼䥄㹖 †††㰠䥄㹖胣뎛볯ꊼ胣㲑䐯噉ਾ††††††䐼噉㰾⁡牨晥∽〲〲㌵㔱㐱琮晩㸢〲〲㌵㔱㐱琮晩ꃂ〰㄰㘲⼼㹡⼼䥄㹖 †††㰠䥄㹖胣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