(57)【要約】  本開示の主題は、動物のサンプル中のマグネシウムの量を決定すること、及び該動物に治療計画を提供することを含む、動物における慢性腎臓病（ＣＫＤ）を診断及び治療する方法に関する。ある特定の実施態様では、治療計画は、有効量のマグネシウムを投与することを含む。
2020522463.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
それを必要とする動物の慢性腎臓病（ＣＫＤ）を治療又はその進行を遅延させる方法であって、
ａ．前記動物の血液サンプル中のマグネシウムの量を決定すること；
ｂ．前記マグネシウムの量を所定の基準値と比較すること（ここで、前記所定の基準値は対照集団における血中の平均マグネシウムレベルに基づいている）；及び
ｃ．前記マグネシウムの量が前記所定の基準値を下回る場合に、前記動物を治療するために前記動物にマグネシウム又はその塩を含む組成物を提供すること
を含む、方法。
【請求項２】
それを必要とする動物の慢性腎臓病（ＣＫＤ）を治療又はその進行を遅延させる方法であって、前記動物が所定の基準値と比較してマグネシウム欠乏症を有し、前記方法が、
有効量のマグネシウム又はその塩を含む組成物を投与すること
を含み、
前記所定の基準値が対照集団の血中の平均マグネシウムレベルに基づいている、
方法。
【請求項３】
それを必要とする動物の慢性腎臓病（ＣＫＤ）を治療又はその進行を遅延させる方法であって、
ａ．前記動物の血液サンプル中のマグネシウムの量を決定すること；
ｂ．前記マグネシウムの量を所定の基準値と比較すること（ここで、前記所定の基準値は対照集団の血中の平均マグネシウムレベルに基づいている）；及び
ｃ．前記マグネシウムの量が第１の所定の値を下回るか、又は第２の所定の基準値を上回る場合に、前記動物に治療計画を提供すること
を含む、方法。
【請求項４】
前記治療計画が、有効量のマグネシウム又はその塩を含む組成物の投与、リン酸摂取の低減、タンパク質摂取の低減、多価不飽和脂肪酸の投与、リン酸結合剤療法の実施、カリウムの投与、食餌性ナトリウム摂取の低減、及びそれらの組合せからなる群より選択される少なくとも１つの治療計画を含む、請求項３に記載の方法。
【請求項５】
前記治療計画が、食餌療法、血液透析、腎代替療法、腎臓を損傷する化合物の除去、腎臓移植、腎臓を損傷する処置の遅延又は回避、利尿剤投与の変更、及びそれらの組合せからなる群より選択される少なくとも１つの治療計画を含む、請求項３に記載の方法。
【請求項６】
前記動物の血液サンプル中のＦＧＦ２３の量を決定するステップ；及び、前記ＦＧＦ２３の量を第３の所定の基準値と比較するステップをさらに含み、ここで、前記所定の基準値は対照集団における血中の平均ＦＧＦ２３レベルに基づいており、前記第２の所定の基準値と比較して高いＦＧＦ２３レベルが効果的な治療の可能性が高いことを示している、請求項１〜５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項７】
慢性腎臓病（ＣＫＤ）のリスクがある動物を診断及び治療する方法であって、
ａ．前記動物から血液サンプルを得ること；
ｂ．前記動物の前記血液サンプル中のマグネシウムの量を決定すること；
ｃ．前記マグネシウムの量を所定の基準値と比較すること（ここで、前記所定の基準値は、対照集団の血中の平均マグネシウムレベルに基づいている）；
ｄ．前記マグネシウムの量が第１の所定の値を下回るか、又は第２の所定の基準値を上回る場合に、前記ＣＫＤのリスクがあると前記動物を診断すること；及び
ｅ．前記マグネシウムの量が第１の所定の値を下回るか、又は第２の所定の基準値を上回る場合に、前記動物に治療計画を提供すること
を含む、方法。
【請求項８】
前記動物の前記血液サンプル中のＦＧＦ２３の量を決定するステップ；前記ＦＧＦ２３の量を第３の所定の基準値と比較するステップをさらに含み、ここで、前記所定の基準値が対照集団における血中の平均ＦＧＦ２３レベルに基づいており、前記第２の所定の基準値と比較して高いＦＧＦ２３レベルが効果的な治療の可能性が高いことを示している、請求項７に記載の方法。
【請求項９】
前記治療計画が、有効量のマグネシウム又はその塩を含む組成物の投与、リン酸摂取の低減、タンパク質摂取の低減、多価不飽和脂肪酸の投与、リン酸結合剤療法の実施、カリウムの投与、食餌性ナトリウム摂取の低減、及びそれらの組合せからなる群より選択される少なくとも１つの治療計画を含む、請求項１〜８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１０】
前記治療計画が、食餌療法、血液透析、腎代替療法、腎臓を損傷する化合物の除去、腎臓移植、腎臓を損傷する処置の遅延又は回避、利尿剤投与の変更、及びそれらの組合せからなる群より選択される少なくとも１つの治療計画を含む、請求項１〜９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１１】
ａ．前記血液サンプル中のリン酸塩、クレアチニン、血中尿窒素（ＢＵＮ）、及び副甲状腺ホルモン（ＰＴＨ）からなる群より選択される少なくとも１つのさらなるバイオマーカーの量を決定すること、及び
ｂ．前記少なくとも１つのさらなるバイオマーカーの量を第４の所定の基準値と比較すること
をさらに含み、
リン酸塩、クレアチニン、血中尿窒素（ＢＵＮ）、及び／又は副甲状腺ホルモン（ＰＴＨ）の量が前記第４の所定の基準値を上回っていることが、効果的な治療の可能性が高いことを示す、
請求項１〜１０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１２】
前記動物における前記ＦＧＦ２３の量を低下させるのに十分な期間、前記動物を前記組成物で維持することをさらに含む、請求項１〜１１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１３】
前記血液サンプル中のマグネシウムの量が対照集団の血中のマグネシウムの平均量の約５０％未満である、請求項１〜１２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１４】
前記血液サンプル中のＦＧＦ２３又は前記さらなるバイオマーカーの量が、対照集団の血中のＦＧＦ２３又は前記さらなるバイオマーカーの平均量の少なくとも約１５０％である、請求項１〜１３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１５】
前記動物の血圧を決定すること、前記血圧を第５の所定の基準値と比較すること、及び、前記血圧が前記第５の所定の基準値を上回る場合に、高血圧の予防又は治療計画を実施することをさらに含む、請求項１〜１４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１６】
前記血圧が収縮期血圧又は拡張期血圧である、請求項１５に記載の方法。
【請求項１７】
前記マグネシウムがマグネシウム配位錯体内にある、請求項１〜１６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１８】
前記治療計画が、有効量のマグネシウム又はその塩を含む組成物を投与することである、請求項９に記載の方法。
【請求項１９】
前記マグネシウムの量が、約５０ｍｇ／１０００Ｋｃａｌ〜約５００ｍｇ／１０００Ｋｃａｌの範囲である、請求項１８に記載の方法。
【請求項２０】
マグネシウムを含む前記組成物が、少なくとも１日に１回、前記動物に提供される、請求項１〜１９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２１】
前記マグネシウムの量が質量分析、蛍光、又は発光によって決定される、請求項１〜２０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２２】
ＦＧＦ２３の量が酵素免疫測定法（ＥＬＩＳＡ）によって決定される、請求項１〜２１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２３】
前記動物がイヌ又はネコなどの愛玩動物である、請求項１〜２２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２４】
それを必要とする動物の慢性腎臓病（ＣＫＤ）の進行を治療又は遅延させるために有効量のマグネシウム又はその塩を含む、ペットフード組成物。
【請求項２５】
前記マグネシウムがマグネシウム配位錯体内にある、請求項２４に記載のペットフード組成物。
【請求項２６】
前記マグネシウムの量が、約５０ｍｇ／１０００Ｋｃａｌ〜約５００ｍｇ／１０００Ｋｃａｌである、請求項２４に記載のペットフード組成物。
【請求項２７】
前記マグネシウムの量が、１日分又は単位用量あたり約５０ｍｇ〜約１００ｍｇである、請求項２４に記載のペットフード組成物。
【請求項２８】
前記マグネシウムの量が、前記ペットフード組成物の質量で約０．２５質量％以下である、請求項２４に記載のペットフード組成物。
【請求項２９】
それを必要とする動物の慢性腎臓病（ＣＫＤ）を治療又はその進行を遅延させるためのマグネシウムの使用であって、前記動物が、所定の基準値と比較してマグネシウム欠乏症を有し、前記所定の基準値が対照集団における血中の平均マグネシウムレベルに基づいている、使用。
【請求項３０】
動物の慢性腎臓病を予測及び／又は定量化するためのバイオマーカーとしての血中のマグネシウムレベルの使用であって、所定の基準値と比較したマグネシウムレベルが、それを必要とする前記動物の前記慢性腎臓病を治療するための食餌介入の必要性の基礎を提供する、使用。
【請求項３１】
動物の慢性腎臓病（ＣＫＤ）を診断する方法において、
ａ．前記動物の血液サンプル中のマグネシウムの量を決定するステップ；
ｂ．前記マグネシウムの量を所定の基準値と比較するステップであって、前記所定の基準値が、対照集団における血中の平均マグネシウムレベルに基づいている、ステップ
を含み、
第１の所定の値を下回る又は第２の所定の基準値を上回るマグネシウムの量が、ＣＫＤの存在又は可能性を示す、
方法。
【発明の詳細な説明】
【関連出願の相互参照】
【０００１】
本特許出願は、その各々の内容がここに参照することによってそれらの全体が本明細書に援用され、その優先権が主張される、２０１７年５月３１日出願の米国仮特許出願第６２／５１３，３９６号及び２０１７年１０月３日出願の米国仮特許出願第６２／５６７，６２３号に対する優先権を主張する。
【技術分野】
【０００２】
本開示の主題は、家畜又はペット（例えば、ネコ又はイヌ）などの動物における慢性腎臓病（ＣＫＤ）を診断及び治療する方法に関する。
【背景技術】
【０００３】
慢性腎疾患又は慢性腎不全としても知られる慢性腎臓病（ＣＫＤ）は、数ヶ月又は数年にわたる進行性の腎機能低下である。ＣＫＤはさまざまな条件及び機構によって引き起こされる可能性があり、人間と他の哺乳動物の両方、特にネコに影響を及ぼす。老齢のネコの腎機能は経時とともに徐々に低下し、末期疾患につながる。
【０００４】
腎疾患に罹患している動物では、幾つかの血液指標を使用して疾患の重症度を判断する。これらの指標には、血中尿素窒素（ＢＵＮ）、リン、線維芽細胞成長因子２３（ＦＧＦ２３）、副甲状腺ホルモン（ＰＴＨ）、及びクレアチニンが含まれる。動物の腎臓に損傷を与えると腎臓が老廃物をろ過するのに不十分になることから、腎不全の過程で血流中のＢＵＮ、リン、及びクレアチニンのレベルが増加する。慢性腎臓病の早期にリン滞留が起こり、結果的にＦＧＦ２３及びＰＴＨの血清濃度が上昇する。ＦＧＦ２３及びＰＴＨの血清濃度の増加も腎疾患の進行に寄与し、さらに、慢性腎疾患の骨ミネラル代謝異常に寄与する可能性がある。
【０００５】
食餌療法、高血圧の制御、及び血液透析を含む、ＣＫＤの進行を治療又は遅延させるさまざまな手法が試みられている。現在の食餌療法には、食品タンパク質とリンの量を減らすことが含まれる。しかしながら、動物のタンパク質のニーズが満たされていないため、このような食事は他の問題を引き起こす可能性がある。したがって、当技術分野には依然として、ＣＫＤの進行を治療又は遅延させることができるペットフード組成物が必要とされている。
【０００６】
ネコ及びイヌでＣＫＤを病期分類するためのスキームは、国際獣医腎臓病研究グループ（ＩＲＩＳ）によって開発された（www.iris-kidney.com。非特許文献１も参照）。病期分類システムの基礎は、血漿クレアチニン濃度である。この病期分類システムは幅広く採用されているが、しかしながら、当技術分野ではＣＫＤの進行の他の側面を監視し、治療オプションを最適化する方法の必要性が依然として必要とされている。
【０００７】
高リン血症は、ネコのＣＫＤの明確に文書化されている後遺症であり１−５、死亡及び高窒素血症の進行のリスク増加と関連している６−８。リン酸の滞留は、腎臓が食事摂取のバランスをとるのに十分なリン酸を排泄できないことに起因する９，１０。正常な血中リン酸塩値を維持するための身体の作用は、続発性腎性副甲状腺機能亢進症及びＦＧＦ−２３過剰をもたらす１０。これらのホルモン異常は、ＣＫＤの初期段階での明白な高リン血症を予防するが１１、骨の病理及び軟組織石灰化に寄与すると考えられており、リン酸カルシウム恒常性の障害は、ＣＫＤ−骨ミネラル代謝異常（ＣＫＤ−ＭＢＤ）を含む１０，１２，１３。ＦＧＦ−２３自体は、ＣＫＤを患うネコの生存及び進行の強力な予測因子である５。食餌リン酸制限は、ネコのＣＫＤ管理の中心であり、血漿リン酸、ＦＧＦ−２３、及びＰＴＨ濃度を低下させ、生存率を改善することが示されている１４−１８。
【０００８】
最近、ヒトＣＫＤ−ＭＢＤにおけるマグネシウムの役割に対する関心が高まっている。多くの細胞内プロセスに不可欠なミネラルであることに加えて１９、マグネシウムは、血管石灰化２０−２２及び線維化促進性サイトカインの放出２３の阻害剤であると考えられている。ヒトＣＫＤ患者の死亡率２４−２８及びおそらくは腎機能低下２３，２４の危険因子として低マグネシウム血症が特定された。高いリン酸値は、血清総マグネシウム濃度（ｔＭｇ）が低い患者の死亡率２７及び末期腎疾患への進行２３のより高いリスクとのみ関連していたことから、ｔＭｇはさらに、ＣＫＤを患うヒトの高リン血症に関連するリスクを修正するように見えた。興味深いことに、これら２つの変数間の逆相関が血液透析中のヒトＣＫＤ患者で観察され２９、マグネシウム欠乏食を与えられたげっ歯類ではＦＧＦ−２３濃度が増加したことから３０，３１、マグネシウムはＦＧＦ−２３調節に関与している可能性がある。
【０００９】
ネコＣＫＤ−ＭＢＤにおけるマグネシウムの役割についてはほとんど知られていない。高窒素ＣＫＤを患うネコを対象とした研究では、末期疾患で血漿ｔＭｇの有意な増加が見られたが、ＣＫＤの初期段階のネコでは最大２５％で低血漿ｔＭｇが観察された３。マグネシウムの状態の予後的意義も、マグネシウムとＦＧＦ−２３との関係も、ＣＫＤを患うネコについては調査されていない。したがって、これに関するさらなる調査が必要とされている。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【００１０】
【非特許文献１】Elliott et al., Dietary therapy for feline chronic kidney disease, Encyclopedia of feline clinical nutrition, 2nd edition, 2015
【発明の概要】
【００１１】
ある特定の非限定的な実施態様では、本開示の主題は、それを必要とする動物の慢性腎臓病（ＣＫＤ）を治療又はその進行を遅延させる方法を提供する。ある特定の実施態様では、本方法は、動物の血液サンプル中のマグネシウムの量を決定すること；マグネシウムの量を所定の基準値と比較すること（ここで、所定の基準値は対照集団の血中の平均マグネシウムレベルに基づいている）；及び、マグネシウムの量が第１の所定の値を下回る場合に、該動物にマグネシウム又はその塩を含む組成物を提供して該動物を治療することを含む。
【００１２】
ある特定の非限定的な実施態様では、本開示の主題は、それを必要とする動物におけるＣＫＤを治療する、又はその進行を遅延させる方法を提供し、ここで、該動物は、所定の基準値と比較してマグネシウム欠乏症を有している。ある特定の実施態様では、本方法は、有効量のマグネシウム又はその塩を含む組成物を投与することを含み、所定の基準値は、対照集団の血中の平均マグネシウムレベルに基づいている。
【００１３】
ある特定の非限定的な実施態様では、本開示の主題は、それを必要とする動物におけるＣＫＤを治療又はその進行を遅延させる方法を提供する。ある特定の実施態様では、本方法は、動物の血液サンプル中のマグネシウムの量を決定すること；マグネシウムの量を所定の基準値と比較すること（ここで、所定の基準値は対照集団の血中の平均マグネシウムレベルに基づいている）；及び、マグネシウムの量が第１の所定の値を下回るか、第２の所定の基準値を上回る場合に、該動物に治療計画を提供すること、を含む。
【００１４】
ある特定の非限定的な実施態様では、本開示の主題は、ＣＫＤのリスクのある動物を診断及び治療する方法を提供する。ある特定の実施態様では、本方法は、動物から血液サンプルを得ること；動物の血液サンプル中のマグネシウムの量を決定すること；マグネシウムの量を所定の基準値と比較すること（ここで、所定の基準値は対照集団の血中の平均マグネシウムレベルに基づいている）；マグネシウムの量が第１の所定の値を下回るか、第２の所定の基準値を上回る場合に、ＣＫＤのリスクがあると動物を診断すること；及び、マグネシウムの量が第１の所定の値を下回るか、第２の所定の基準値を上回る場合に、該動物に治療計画を提供することを含む。
【００１５】
ある特定の実施態様では、本開示の主題で提供される方法は、動物の血液サンプル中のＦＧＦ２３の量を決定するステップ；ＦＧＦ２３の量を第３の所定の基準値と比較するステップをさらに含み、ここで、所定の基準値は対照集団における血中の平均ＦＧＦ２３レベルに基づいており、第２の所定の基準値と比較して高いＦＧＦ２３レベルは効果的な治療の可能性が高いことを示している。
【００１６】
ある特定の実施態様では、本開示の主題で提供される治療計画は、有効量のマグネシウム又はその塩を含む組成物の投与、リン酸摂取の低減、タンパク質摂取の低減、多価不飽和脂肪酸の投与、リン酸結合剤療法の実施、カリウムの投与、食餌性ナトリウム摂取の低減、及びそれらの組合せからなる群より選択される少なくとも１つの治療計画を含む。
【００１７】
ある特定の実施態様では、本開示の主題で提供される治療計画は、食餌療法、血液透析、腎代替療法、腎臓を損傷する化合物の除去、腎臓移植、腎臓を損傷する処置の遅延又は回避、利尿剤投与の変更、及びそれらの組合せからなる群より選択される少なくとも１つの治療計画を含む。
【００１８】
ある特定の実施態様では、本開示の主題で提供される方法はさらに、血液サンプル中のリン酸塩、クレアチニン、血中尿窒素（ＢＵＮ）、及び副甲状腺ホルモン（ＰＴＨ）からなる群より選択される少なくとも１つのさらなるバイオマーカーの量を決定すること、並びに少なくとも１つのさらなるバイオマーカーの量を第４の所定の基準値と比較することを含み、ここで、第４の所定の基準値を上回るリン酸塩、クレアチニン、血中尿窒素（ＢＵＮ）及び／又は副甲状腺ホルモン（ＰＴＨ）の量は、効果的な治療の可能性が高いことを示す。
【００１９】
ある特定の実施態様では、本開示の主題で提供される方法は、動物におけるＦＧＦ２３の量を低下させるのに十分な期間、動物を組成物で維持することをさらに含む。
【００２０】
ある特定の実施態様では、血液サンプル中のマグネシウムの量は、対照集団の血中のマグネシウムの平均量の約５０％未満である。
【００２１】
ある特定の実施態様では、血液サンプル中のＦＧＦ２３又はさらなるバイオマーカーの量は、対照集団の血中におけるＦＧＦ２３又はさらなるバイオマーカーの平均量の少なくとも約１５０％である。
【００２２】
ある特定の実施態様では、本開示の主題で提供される方法はさらに、動物の血圧を決定すること、該血圧を第５の所定の基準値と比較すること、及び血圧が第５の所定の基準値を上回る場合に、高血圧の予防又は治療計画を実施することを含む。
【００２３】
ある特定の実施態様では、マグネシウムは、マグネシウム配位錯体内にある。
【００２４】
ある特定の実施態様では、治療計画は、有効量のマグネシウム又はその塩を含む組成物を投与することである。
【００２５】
ある特定の実施態様では、マグネシウムの量は、約５０ｍｇ／１０００Ｋｃａｌ〜約５００ｍｇ／１０００Ｋｃａｌである。
【００２６】
ある特定の実施態様では、マグネシウムを含む組成物は、少なくとも１日に１回、動物に供給される。
【００２７】
ある特定の実施態様では、マグネシウムの量は、質量分析、蛍光、又は発光によって決定される。
【００２８】
ある特定の実施態様では、ＦＧＦ２３の量は、酵素免疫測定法（ＥＬＩＳＡ）によって決定される。
【００２９】
ある特定の実施態様では、動物はイヌ又はネコなどの愛玩動物である。
【００３０】
ある特定の非限定的な実施態様では、本開示の主題は、それを必要とする動物において、ＣＫＤを治療又はその進行を遅延させるために有効量のマグネシウム又はその塩を含むペットフード組成物を提供する。
【００３１】
ある特定の実施態様では、マグネシウムの量は、１日分又は単位用量あたり約５０ｍｇ〜約１００ｍｇである。
【００３２】
ある特定の実施態様では、マグネシウムの量は、ペットフード組成物に質量で約０．２５質量％以下である。
【００３３】
ある特定の非限定的な実施態様では、本開示の主題は、それを必要とする動物にＣＫＤを治療又はその進行を遅延させるためのマグネシウムの使用を提供し、ここで、該動物は、所定の基準値と比較してマグネシウム欠乏症を有し、所定の基準値は対照集団の血中の平均マグネシウムレベルに基づいている。
【００３４】
ある特定の非限定的な実施態様では、本開示の主題は、動物の慢性腎臓病を予測及び／又は定量化するためのバイオマーカーとしての血中のマグネシウムレベルの使用を提供し、ここで、所定の基準値と比較したマグネシウムレベルは、それを必要とする動物の慢性腎臓病を治療するための食餌介入の必要性の基礎を提供する。
【００３５】
ある特定の非限定的な実施態様では、本開示の主題は、動物の血液サンプル中のマグネシウムの量を決定すること；マグネシウムの量を所定の基準値と比較することを含む、動物における慢性腎臓病（ＣＫＤ）を診断するための方法を提供し、ここで、所定の基準値は対照集団における血中の平均マグネシウムレベルに基づいており、第１の所定の値を下回る又は第２の所定の基準値を上回るマグネシウムの量は、ＣＫＤの存在又は可能性を示す。
【図面の簡単な説明】
【００３６】
【図１】血漿総マグネシウム濃度によって四分位に分類された高窒素ＣＫＤのＩＲＩＳステージ２〜３を患うネコの血漿ＦＧＦ−２３濃度を示すグラフ
【図２Ａ】血中の総マグネシウムに対するマグネシウム補給剤の効果を示すグラフ。破線は、老齢のネコの血漿ＦＧＦ２３の基準範囲の上限（７００ｐｇ／ｍＬ）を表している。
【図２Ｂ】血中のＦＧＦ２３に対するマグネシウム補給剤の効果を示すグラフ。破線は、老齢のネコの血漿ＦＧＦ２３の基準範囲の上限（７００ｐｇ／ｍＬ）を表している。
【図２Ｃ】血中のリン酸に対するマグネシウム補給剤の効果を示すグラフ。破線は、老齢のネコの血漿ＦＧＦ２３の基準範囲の上限（７００ｐｇ／ｍＬ）を表している。
【図３Ａ】高窒素ＣＫＤのＩＲＩＳステージ２〜３を患うネコの総マグネシウムに対するマグネシウム補給剤の効果を示すグラフ
【図３Ｂ】高窒素ＣＫＤのＩＲＩＳステージ２〜３を患うネコのＦＧＦ２３に対するマグネシウム補給剤の効果を示すグラフ
【図３Ｃ】高窒素ＣＫＤのＩＲＩＳステージ２〜３を患うネコのクレアチニンに対するマグネシウム補給剤の効果を示すグラフ
【図３Ｄ】高窒素ＣＫＤのＩＲＩＳステージ２〜３を患うネコの対称ジメチルアルギニン（ＳＤＭＡ）に対するマグネシウム補給剤の効果を示すグラフ
【図３Ｅ】高窒素ＣＫＤのＩＲＩＳステージ２〜３を患うネコのリン酸に対するマグネシウム補給剤の効果を示すグラフ
【図３Ｆ】高窒素ＣＫＤのＩＲＩＳステージ２〜３を患うネコの収縮期血圧に対するマグネシウム補給剤の効果を示すグラフ
【図３Ｇ】高窒素ＣＫＤのＩＲＩＳステージ２〜３を患うネコのカリウムに対するマグネシウム補給剤の効果を示すグラフ
【図３Ｈ】高窒素ＣＫＤのＩＲＩＳステージ２〜３を患うネコのカルシウムに対するマグネシウム補給剤の効果を示すグラフ
【図３Ｉ】高窒素ＣＫＤのＩＲＩＳステージ２〜３を患うネコの副甲状腺ホルモン（ＰＴＨ）に対するマグネシウム補給剤の効果を示すグラフ
【図４】ＩＲＩＳステージ２〜４のＣＫＤを患うネコの血漿総マグネシウム濃度を示すグラフ。ＩＲＩＳステージ４のＣＫＤを患うネコでは、ＩＲＩＳステージ２のＣＫＤ（平均，２．０４ｍｇ／ｄＬ；ＳＤ，０．２６１）及び３のＣＫＤ（平均，２．０４ｍｇ／ｄＬ；ＳＤ，０．３６１）を患うネコと比較して、有意に高い血漿マグネシウム濃度が観察された（平均，３．０１ｍｇ／ｄＬ；ＳＤ，１．２０６；Ｐ＜０．００１）。低マグネシウム血症の有病率（９５％ＣＩ）は、ＩＲＩＳステージ２、３、及び４で、それぞれ、９％（４〜１４）、１８％（７〜２９）、及び１０％（０〜２７）であった。高マグネシウム血症の有病率は、ＩＲＩＳステージ２（３％；９５％ＣＩ，０〜６）及び３（６％；９５％ＣＩ，０〜１３）と比較して、ＩＲＩＳステージ４で有意に高かった（５０％；９５％ＣＩ，１９−８１；Ｐ＜０．００１）。箱は２５パーセンタイルと７５パーセンタイルの中央値を表しており、ひげは範囲を表している。破線は、血漿総マグネシウムの基準範囲の下限及び上限（１．７３〜２．５７ｍｇ／ｄＬ）を示している。
【図５】マグネシウム状態によってさらに分割されたＩＲＩＳステージ２〜４のＣＫＤを患うネコの血漿ＦＧＦ−２３濃度を示すグラフ。低マグネシウム血症を患うネコ（ｔＭｇ＜１．７３ｍｇ／ｄＬ）は、各ステージにおいて、正常マグネシウム血のネコと比較して有意に高い血漿ＦＧＦ−２３を有していた。箱は２５パーセンタイルと７５パーセンタイルの中央値を表しており、ひげは範囲を表している。破線は、血漿ＦＧＦ−２３の基準範囲の上限（７００ｐｇ／ｍＬ）を示している。
【図６】血漿ｔＭｇ濃度の中央値（２．０４ｍｇ／ｄＬ）でさらに分割されたＩＲＩＳステージ２及び３のＣＫＤを患う、正常なリン酸血（ＮＰ）及び高リン血症（ＨＰ）のネコの血漿ＦＧＦ−２３濃度を示すグラフ。正常なリン酸血（Ｐ＝０．００３）のネコ及び高リン血症のネコ（Ｐ＝０．００４）の両方において、中央値を下回るｔＭｇを有するネコの血漿ＦＧＦ−２３が有意に高かった。箱は２５パーセンタイルと７５パーセンタイルの中央値を表しており、ひげは範囲を表している。破線は、血漿ＦＧＦ−２３の基準範囲の上限（７００ｐｇ／ｍＬ）を示している。
【図７】マグネシウム状態によって分類された高窒素血ＣＫＤを患うネコの生存を示す、カプラン・マイヤー曲線を示すグラフ。高窒素ＣＫＤの診断での低マグネシウム血症を患うネコ（青い曲線；１／２０打ち切り；ＨＲ，２．９２；９５％ＣＩ，１．７８〜４．８２；Ｐ＜０．００１）及び高マグネシウム血症を患うネコ（灰色の曲線；０／１１打ち切り；ＨＲ，２．８８；９５％ＣＩ，１．５４〜５．３８；Ｐ＝０．００１）は、正常マグネシウム血のネコ（黒い曲線；２３／１４３打ち切り）と比較して死亡のリスクが増加していた。単変量解析では、低マグネシウム血症のネコと高マグネシウム血症のネコとの間で生存率に有意な差は認められなかった（Ｐ＝０．９５１）。打ち切り例にはチェックマークを入れる。
【発明を実施するための形態】
【００３７】
今日まで、ＣＫＤを治療するためのペットフード組成物、並びにＣＫＤの進行を監視し治療計画を最適化する方法が依然として必要性とされている。本出願は、マグネシウム及びＦＧＦ２３を含むがこれらに限定されない、動物のＣＫＤを診断するためのバイオマーカー、並びにそれを使用してＣＫＤを治療する方法に関する。本出願はまた、ＣＫＤを治療するための有効量のマグネシウムを含むペットフード製品も提供する。明確にするためであって限定はしないが、現在開示されている主題の詳細な説明は、以下のサブセクションに分けられている：
１．定義；
２．バイオマーカー；
３．治療方法；及び
４．最終製品。
【００３８】
１．定義
本明細書で用いられる用語は、概して、本発明の文脈内及び各用語が使用される特定の文脈内で、当技術分野における通常の意味を有する。本発明の方法及び組成物並びにそれらを製造及び使用する方法を説明する際に、実施者に追加のガイダンスを提供するために、以下又は本明細書の他の場所で、ある特定の用語が論じられる。
【００３９】
本明細書で用いられる場合、特許請求の範囲及び／又は明細書で「含む」という用語と併せて用いられる単語「ａ」又は「ａｎ」の使用は、「１つ」を意味する場合もあるが、「１つ以上」、「少なくとも１つ」、及び「１つ又はそれより多く」と言う意味とも一致する。さらには、「有する」、「含む」、「含有する」、及び「包含する」という用語は交換可能であり、当業者はこれらの用語がオープンエンドの用語であることを認識している。
【００４０】
「約」又は「およそ」という用語は、当業者によって決定される特定の値の許容誤差範囲内であることを意味し、これは、一部には、値を測定又は決定する方法、すなわち、測定システムの制限に依存するものである。例えば、「約」は、当技術分野の慣行に従って、３以内又は３を超える標準偏差を意味しうる。あるいは、「約」は、所与の値の２０％まで、好ましくは１０％まで、さらに好ましくは５％まで、さらになお好ましくは１％までの範囲を意味しうる。あるいは、特に生物学的システム又はプロセスに関して、この用語は、値の１桁以内、好ましくは５倍以内、さらに好ましくは２倍以内を意味しうる。
【００４１】
物質の「効果的な治療」又は「有効量」という用語は、臨床結果を含む有益又は望ましい結果をもたらすのに十分な治療又は物質の量を意味し、したがって、「効果的な治療」又は「有効量」は、それが適用される文脈に依存する。ＣＫＤのリスクを低減するための組成物の投与、及び／又はＣＫＤの進行を治療又は遅延させるための組成物の投与の文脈において、本明細書に記載される組成物の有効量は、ＣＫＤを治療及び／又は改善、並びに、ＣＫＤの症状を軽減及び／又は可能性を低減するのに十分な量である。本明細書に記載される効果的な治療は、ＣＫＤを治療及び／又は改善、並びに、ＣＫＤの症状を軽減及び／又は可能性を低減するのに十分な治療である。低減は、ＣＫＤの症状の重症度又はＣＫＤの可能性の１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、９８％、又は９９％の低下でありうる。有効量は、１回以上の投与回数で投与することができる。本明細書に記載される効果的な治療の可能性は、治療が有効である、すなわち、ＣＫＤを治療及び／又は改善，並びに症状を軽減するのに十分な可能性である。
【００４２】
本明細書で用いられる場合、当技術分野で十分に理解されているように、「治療」は、臨床結果を含む有益な又は望ましい結果を得るための手法である。この主題の目的のために、有益な又は望ましい臨床結果には、１つ以上の症状の緩和又は改善、疾患の程度の減少、疾患の安定した（すなわち悪化しない）状態、疾患の予防、疾患の進行の遅延又は減速、及び／又は疾患状態の改善又は緩和が含まれるが、これらに限定されない。低減は、合併症又は症状の重症度の１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、９８％、又は９９％の低下でありうる。「治療」はまた、治療を受けていない場合に予想される生存期間と比較して、生存期間を延長することも意味しうる。
【００４３】
用語「ペットフード」又は「ペットフード組成物」又は「ペットフード製品」又は「最終ペットフード製品」とは、ネコ、イヌ、モルモット、ウサギ、トリ、又はウマなどの愛玩動物による消費を目的とする製品又は組成物を意味する。例えば、限定はしないが、愛玩動物は、例えば、イエイヌ（Canis lupus familiaris）などの「飼い」イヌでありうる。ある特定の実施態様では、愛玩動物は、イエネコ（Felis domesticus）などの「飼い」ネコでありうる。「ペットフード」又は「ペットフード組成物」又は「ペットフード製品」又は「最終ペットフード製品」には、任意の食品、飼料、スナック、栄養補給剤、液体、飲料、おやつ、おもちゃ（噛むことができるおもちゃ及び／又は消費できるおもちゃ）、食事代用品、又は食事代替品が含まれる。
【００４４】
本明細書で用いられる場合、「所定の基準値」又は「基準値」という用語はバイオマーカーの閾値レベルを指し、これと比較することにより、ＣＫＤの診断を行うことができる。基準値は、閾値又は基準範囲でありうる。ある特定の実施態様では、基準値は、ＲＯＣ曲線解析から導出することができ、特異度をユーザ定義の閾値より上に保ちつつ、感度を最大化するものとして基準値を選択する。ある特定の実施態様では、基準値は、感度を、例えば８０％の感度など、ユーザ定義の閾値よりも高く保ちつつ、特異度を最大化するものとして選択することができる。ある特定の実施態様では、ＣＫＤを有する被験体においてバイオマーカーが増加する場合、すなわち所定のアルゴリズムが正論理である場合、基準値は健康な被験体の集団から生成されるバイオマーカーレベルの範囲の上限とすることができる。逆に、ＣＫＤを有する被験体においてバイオマーカーが減少する場合、すなわちアルゴリズムが負論理である場合、基準値はバイオマーカーレベルの範囲の下限であるか、あるいは健康な被験体の集団から生成することができる。
【００４５】
「対照集団」という用語は、慢性腎臓病を有しておらず、かつ変数が操作されていない動物の対照群を意味する。対照群に含まれる動物の選択は、遺伝的背景、平均健康状態、年齢、栄養履歴、予防接種、又は予防的治療に基づくことができる。ある特定の実施態様では、対照集団は、同様の遺伝的背景、年齢、及び平均健康状態を有する少なくとも３匹、好ましくは少なくとも１０匹、さらに好ましくは少なくとも５０匹の動物の群でありうる。
【００４６】
２．バイオマーカー
ある特定の非限定的な実施態様では、本開示の主題は、慢性腎臓病（ＣＫＤ）のリスクがある動物を診断及び／又はＣＫＤの進行を決定するバイオマーカー及びその使用方法を提供する。
【００４７】
本明細書で用いられる「バイオマーカー」という用語は、目的の疾患の漸進的発達に関連する任意の生体化合物を指す。特に、ＣＫＤを診断するためのバイオマーカーは、ＣＫＤの進行に関連する任意の生体化合物である。腎疾患の治療は、ＣＫＤの進行に関連するバイオマーカーが示すＣＫＤの進行に応じて調整することができ、回復の予測はバイオマーカーを監視することによって決定することができる。
【００４８】
ある特定の実施態様では、バイオマーカーはマグネシウムである。ある特定の実施態様では、バイオマーカーは、動物の血中の総マグネシウムである。ある特定の実施態様では、バイオマーカーは、動物の血清中のマグネシウムである。ある特定の実施態様では、バイオマーカーは、動物の血漿中のマグネシウムである。ある特定の実施態様では、バイオマーカーは、動物の尿サンプル中のマグネシウムである。
【００４９】
ある特定の実施態様では、マグネシウムレベルの変化はＣＫＤと関連している。ある特定の実施態様では、マグネシウムレベルの増加は、ＣＫＤの進行及び／又はＣＫＤを発症するリスクの増加を示唆する。ある特定の実施態様では、マグネシウムレベルの低下は、ＣＫＤの進行及び／又はＣＫＤを発症するリスクの増加を示唆する。ある特定の実施態様では、対照集団の血中の平均マグネシウムレベルに基づく所定の基準値と比較して高いマグネシウムレベルは、ＣＫＤの進行及び／又はＣＫＤ発症リスクの増加を示唆する。ある特定の実施態様では、対照集団の血中の平均マグネシウムレベルに基づく所定の基準値と比較して低いマグネシウムレベルは、ＣＫＤの進行及び／又はＣＫＤ発症リスクの増加を示唆する。
【００５０】
ある特定の実施態様では、マグネシウムレベルの変化は、死亡率及び／又は生存率と関連している。ある特定の実施態様では、マグネシウムレベルの増加は、死亡率の増加及び／又は生存率の低下を示唆する。ある特定の実施態様では、マグネシウムレベルの低下は、死亡率の増加及び／又は生存率の低下を示唆する。ある特定の実施態様では、対照集団の血中の平均マグネシウムレベルに基づく所定の参照値と比較してより高いマグネシウムレベルは、より高い死亡率及び／又はより低い生存率を示唆する。ある特定の実施態様では、対照集団の血中の平均マグネシウムレベルに基づく所定の参照値と比較してより低いマグネシウムレベルは、より高い死亡率及び／又はより低い生存率を示唆する。
【００５１】
ある特定の実施態様では、マグネシウムレベルの変化は、高リン血症動物の死亡率の増加と関連している。ある特定の実施態様では、マグネシウムレベルの増加は、高リン血症動物の死亡率の増加を示唆する。ある特定の実施態様では、マグネシウムレベルの低下は、高リン血症動物の死亡率の増加を示唆する。ある特定の実施態様では、対照集団の血中の平均マグネシウムレベルに基づく所定の基準値と比較して高いマグネシウムレベルは、高リン血症動物のより高い死亡率を示唆する。ある特定の実施態様では、対照集団の血中の平均マグネシウムレベルに基づく所定の基準値と比較して低いマグネシウムレベルは、高リン血症動物のより高い死亡率を示唆する。
【００５２】
ある特定の実施態様では、慢性腎臓病（ＣＫＤ）のリスクがある動物を診断及び治療する方法は、動物から血液サンプルを得ること；動物の血液サンプル中のマグネシウムの量を決定すること；マグネシウムの量を所定の基準値と比較すること（ここで、所定の基準値は対照集団の血中の平均マグネシウムレベルに基づいている）；マグネシウムの量が第１の所定の値を下回るか、第２の所定の基準値を上回る場合に、ＣＫＤのリスクがあると動物を診断すること；及び、マグネシウムの量が第１の所定の値を下回るか、第２の所定の基準値を上回る場合に、該動物に治療計画を提供することを含む。
【００５３】
ある特定の実施態様では、バイオマーカーはさらに、線維芽細胞成長因子２３（ＦＧＦ２３）を含む。ある特定の実施態様では、バイオマーカーは、動物の血中の総ＦＧＦ２３である。ある特定の実施態様では、バイオマーカーは、動物の血清中のＦＧＦ２３である。ある特定の実施態様では、バイオマーカーは、動物の血漿中のＦＧＦ２３である。ある特定の実施態様では、バイオマーカーは、動物の尿サンプル中のＦＧＦ２３である。
【００５４】
ある特定の実施態様では、マグネシウムレベルは、動物のＦＧＦ２３レベルと逆相関している。ある特定の実施態様では、マグネシウムレベルの低下は、動物のＦＧＦ２３レベルの増加を示唆する。ある特定の実施態様では、マグネシウムレベルの増加は、動物のＦＧＦ２３レベルの低下を示唆する。
【００５５】
ある特定の実施態様では、慢性腎臓病（ＣＫＤ）のリスクがある動物を診断及び治療する方法はさらに、動物の血液サンプル中のＦＧＦ２３の量を決定するステップ；ＦＧＦ２３の量を第３の所定の基準値と比較するステップを含み、ここで、所定の基準値は対照集団における血中の平均ＦＧＦ２３レベルに基づいており、第２の所定の基準値と比較して高いＦＧＦ２３レベルは効果的な治療の可能性が高いことを示唆する。
【００５６】
ある特定の実施態様では、バイオマーカーは、少なくとも１つのさらなるバイオマーカーを含む。ある特定の実施態様では、少なくとも１つのさらなるバイオマーカーは、米国特許出願公開第２０１２／００７７６９０号明細書、同第２０１３／０３２３７５１号明細書、欧州特許出願公開第３，１１２，８７１号明細書、同第２，４６２，４４５号明細書、及び同第３，０５４，３０１号明細書に開示されている腎バイオマーカーから選択される。ある特定の実施態様では、少なくとも１つのさらなるバイオマーカーは、リン酸塩、クレアチニン、血中尿窒素（ＢＵＮ）、及び副甲状腺ホルモン（ＰＴＨ）からなる群より選択され、ある特定の実施態様では、少なくとも１つのさらなるバイオマーカーは、リン酸塩、クレアチニン、血中尿窒素（ＢＵＮ）、副甲状腺ホルモン（ＰＴＨ）、対称ジメチルアルギニン（ＳＤＭＡ）、収縮期血圧、カリウム、総カルシウム、ヒアルロン酸、細胞死受容体５、トランスフォーミング増殖因子−β１、フェリチン、ベータグロビン、カタラーゼ、アルファグロビン、上皮成長因子受容体経路基質８、ムチンアイソフォーム前駆体、エズリン、デルタグロビン、モエシン、リンタンパク質アイソフォーム、アネキシンＡ２、ミオグロビン、ヘモペキシン、セリンプロテアーゼ阻害剤、セルピンペプチダーゼ阻害剤、ＣＤ１４抗原前駆体、フィブロネクチンアイソフォームプレタンパク質、アンジオテンシノーゲンプレタンパク質、補体成分前駆体、炭酸脱水酵素、ウロモジュリン前駆体、補体因子Ｈ、補体成分４ＢＰ、ヘパラン硫酸プロテオグリカン２、オルファクトメジン−４、ロイシンリッチアルファ−２グリコプロテイン、リングフィンガータンパク質１６７、インターアルファグロブリン阻害剤Ｈ４、ヘパラン硫酸プロテオグリカン２、Ｎ−アシルシンゴシンアミノヒドロラーゼ、セリンプロテアーゼ阻害剤クレードＡメンバー１、ムチン１、クラステリンアイソフォーム１、ＢＡＳＰ１（brain abundant membrane attached signal protein 1）、ジペプチダーゼ１、フィブロネクチン１アイソフォーム５プレタンパク質、アンギオテンシノーゲンプレプロタンパク質、炭酸脱水酵素、ウロモジュリン前駆体、メタロプロテアーゼ阻害剤２、インスリン様成長因子結合タンパク質７、免疫グロブリンＡ、免疫グロブリンＧ１、免疫グロブリンＧ２、アルファ−１アンチトリプシン、血清アミロイドＰ成分、肝細胞成長因子、細胞間接着分子１、ベータ−２−グリコプロテイン１、インターロイキン−１ベータ、好中球エラスターゼ、腫瘍壊死因子受容体スーパーファミリーメンバー１１Ｂ、インターロイキン−１１、カテプシンＤ、Ｃ−Ｃモチーフケモカイン２４、Ｃ−Ｘ−Ｃモチーフケモカイン６、Ｃ−Ｃモチーフケモカイン１３、Ｃ−Ｘ−Ｃモチーフケモカイン−１、−２、及び−３、マトリライシン、インターロイキン−２受容体アルファ鎖、インスリン様成長因子結合タンパク質３、マクロファージコロニー刺激因子１、アポリポタンパク質Ｃ−Ｉ、アポリポタンパク質Ｃ−ＩＩ、フィブリノーゲンアルファ鎖、フィブリノーゲンＡ−アルファ鎖、キニノーゲン、インター−アルファ阻害剤Ｈ４（ＩＴＩＨ４）、ケラチンＩ型サイトケレトール１０シスタチンＡ、シスタチンＢ、及びそれらの組合せからなる群より選択される。
【００５７】
ある特定の実施態様では、マグネシウムレベルは動物の血圧と逆相関している。ある特定の実施態様では、マグネシウムレベルの低下は、血圧の上昇、高血圧、及び／又は動物の高血圧を発症するリスクの増加を示唆する。ある特定の実施態様では、マグネシウムレベルの増加は、動物の血圧の低下を示唆する。ある特定の実施態様では、動物の１つの群における平均レベルと比較して低いマグネシウムレベルは、高血圧又は動物の高血圧を発症するリスクの増加を示唆する。ある特定の実施態様では、血圧は、収縮期血圧、拡張期血圧、全身動脈圧、平均動脈圧、脈圧、全身静脈圧肺圧、及びそれらの組合せからなる群より選択される。ある特定の実施態様では、血圧は収縮期血圧として測定される。ある特定の実施態様では、血圧は拡張期血圧として測定される。
【００５８】
ある特定の実施態様では、少なくとも１つのさらなるバイオマーカーは動物の血中にある。ある特定の実施態様では、少なくとも１つのさらなるバイオマーカーは動物の血清中にある。ある特定の実施態様では、少なくとも１つのさらなるバイオマーカーは動物の血漿中にある。ある特定の実施態様では、少なくとも１つのさらなるバイオマーカーは動物の尿サンプル中にある。
【００５９】
ある特定の実施態様では、慢性腎臓病（ＣＫＤ）のリスクがある動物を診断及び治療する方法はさらに、血液サンプル中の少なくとも１つのさらなるバイオマーカーの量を決定すること、並びに少なくとも１つのさらなるバイオマーカーの量を第４の所定の基準値と比較することを含む。ある特定の実施態様では、第４の所定の基準値を上回る少なくとも１つのさらなるバイオマーカーの量は、効果的な治療の可能性が高いことを示す。ある特定の実施態様では、第４の所定の基準値を下回る少なくとも１つのさらなるバイオマーカーの量は、効果的な治療の可能性が高いことを示す。
【００６０】
ある特定の実施態様では、バイオマーカーの所定の基準値は、対照集団における試験された血液中のバイオマーカーの平均量に基づくことができる。対照集団は、同様の遺伝的背景、年齢、及び平均健康状態を有する少なくとも３匹、好ましくは少なくとも１０匹、さらに好ましくは少なくとも５０匹の動物の群でありうる。
【００６１】
ある特定の実施態様では、血液サンプル中のマグネシウムの第１の所定の基準値は、対照集団の血中のマグネシウムの平均量の約９０％未満、８０％未満、７０％未満、６０％未満、５０％未満、４０％未満、３０％未満、２０％未満、１０％未満、５％未満、２％未満、又は１％未満である。ある特定の実施態様では、血液サンプル中のマグネシウムの第１の所定の基準値は、対照集団の血中のマグネシウムの平均量の約５０％未満である。ある特定の実施態様では、血液サンプル中のマグネシウムの第２の所定の基準値は、対照集団の血中のマグネシウムの平均量の約１１０％超、１２０％超、１３０％超、１４０％超、１５０％超、１６０％超、１７０％超、１８０％超、１９０％超、２００％超、２５０％超、３００％超、４００％超、５００％超、６００％超、７００％超、８００％超、９００％超、又は１０００％超である。ある特定の実施態様では、血液サンプル中のマグネシウムの第２の所定の基準値は、対照集団の血中のマグネシウムの平均量の約１２０％超である。
【００６２】
ある特定の実施態様では、血液サンプル中のＦＧＦ２３の第３の所定の基準値は、対照集団の血中のＦＧＦ２３の平均量の約１１０％超、１２０％超、１３０％超、１４０％超、１５０％超、１６０％超、１７０％超、１８０％超、１９０％超、２００％超、２５０％超、３００％超、４００％超、５００％超、６００％超、７００％超、８００％超、９００％超、又は１０００％超である。ある特定の実施態様では、血液サンプル中のＦＧＦ２３の第２の所定の基準値は、対照集団の血中のＦＧＦ２３の平均量の約１５０％超である。
【００６３】
ある特定の実施態様では、動物内のバイオマーカーの量は、当該分野で知られている任意の手段によって検出及び定量化することができる。ある特定の実施態様では、マグネシウムの量は、質量分析、例えば、ＵＰＬＣ−ＥＳＩ−ＭＳ／ＭＳ又は誘導結合プラズマ質量分析（ＩＣＰ−ＭＳ）、蛍光法、若しくは発光法によって決定される。ある特定の実施態様では、マグネシウムの量の決定には、マグネシウムグリーン、Ｍａｇ−Ｆｕｒａ−２及び／又はＭａｇ−Ｉｎｄｏ−１が用いられる。
【００６４】
ある特定の実施態様では、ＦＧＦ２３の量は、抗体ベースの検出方法によって決定される。ある特定の実施態様では、ＦＧＦ２３抗体は、ＦＧＦ２３の量の決定に用いられる。ある特定の実施態様では、ＦＧＦ２３の量は、酵素免疫測定法（ＥＬＩＳＡ）によって決定される。ある特定の実施態様では、ＦＧＦ２３の量は、サンドイッチＥＬＩＳＡによって決定される。
【００６５】
ある特定の実施態様では、他の分光法、クロマトグラフィ法、標識技術、又は定量化学法など、他の検出法を使用することができる。ある特定の実施態様では、動物内のバイオマーカーの量及び基準値は、同じ方法によって決定される。
【００６６】
３．治療方法
ある特定の非限定的な実施態様では、本開示の主題は、それを必要とする動物の慢性腎臓病（ＣＫＤ）を治療又はその進行を遅延させる方法を提供する。ある特定の実施態様では、本方法は、該動物にマグネシウム又はその塩を含む組成物を提供して該動物を治療することを含む。
【００６７】
本開示の主題の組成物及び方法は、非ヒト霊長類（例えば、サル、チンパンジーなど）、ペット／愛玩動物（例えば、イヌ、ネコ、ウマなど）、家畜（例えば、ヤギ、ヒツジ、ブタ、ウシなど）、実験動物（例えば、マウス、ラットなど）、並びに野生動物及び動物園の動物（例えば、オオカミ、クマ、シカなど）など、非ヒト哺乳動物を含むさまざまな哺乳動物に有用でありうる。
【００６８】
本開示の主題のある特定の非限定的な実施態様では、例えば、動物は、例えば非ヒト霊長類、イヌ、ネコ、ウサギ、ウマ、又はブタなどの単胃哺乳動物（すなわち、単一の胃を有する哺乳動物）である。
【００６９】
本開示の主題のある特定の非限定的な実施態様では、動物は肉食性の哺乳動物、すなわち、肉を食べる哺乳動物である。
【００７０】
本開示の主題の他の実施態様では、動物は雑食性の哺乳動物、すなわち植物と肉の両方を食べる哺乳動物である。
【００７１】
ある特定の非限定的な実施態様では、被験体はネコ又はイヌである。
【００７２】
ある特定の非限定的な実施態様では、被験体は慢性腎臓病のリスクがある。
【００７３】
ある特定の非限定的な実施態様では、被験体は、慢性腎臓病のリスクがあることが知られていない。
【００７４】
ある特定の非限定的な実施態様では、被験体は慢性腎臓病に罹患している。
【００７５】
ある特定の非限定的な実施態様では、被験体は、慢性腎臓病に罹患していることが知られていない。
【００７６】
ある特定の非限定的な実施態様では、被験体は慢性腎臓病の治療下にある。ある特定の非限定的な実施態様では、治療は食餌療法である。
【００７７】
ある特定の非限定的な実施態様では、本開示の主題は、動物における慢性腎臓病（ＣＫＤ）を治療又はその進行を遅延させる方法を提供し、該方法は、動物の血液サンプル中のマグネシウムの量を決定すること；マグネシウムの量を所定の基準値と比較すること（ここで、所定の基準値は対照集団の血中の平均マグネシウムレベルに基づいている）；及び、マグネシウムの量が所定の値を下回る場合に、該動物にマグネシウム又はその塩を含む組成物を提供して該動物を治療すること、を含む。
【００７８】
ある特定の非限定的な実施態様では、本開示の主題は、それを必要とする動物の慢性腎臓病（ＣＫＤ）を治療又はその進行を遅延させる方法を提供し、ここで、動物は、所定の基準値と比較してマグネシウム欠乏症を有しており、本方法は、有効量のマグネシウム又はその塩を含む組成物を投与することを含み、かつ、所定の基準値は、対照集団の血中の平均マグネシウムレベルに基づいている。
【００７９】
ある特定の非限定的な実施態様では、本開示の主題は、それを必要とする動物の慢性腎臓病（ＣＫＤ）を治療又はその進行を遅延させる方法を提供し、該方法は、動物の血液サンプル中のマグネシウムの量を決定すること；マグネシウムの量を所定の基準値と比較すること（ここで、所定の基準値は対照集団の血中の平均マグネシウムレベルに基づいている）；及び、マグネシウムの量が第１の所定の値を下回るか、第２の所定の基準値を上回る場合に、該動物に治療計画を提供すること、を含む。
【００８０】
ある特定の非限定的な実施態様では、本開示の主題は、慢性腎臓病（ＣＫＤ）のリスクがある動物を診断及び治療する方法を提供し、該方法は、動物から血液サンプルを得ること；動物の血液サンプル中のマグネシウムの量を決定すること；マグネシウムの量を所定の基準値と比較すること（ここで、所定の基準値は対照集団の血中の平均マグネシウムレベルに基づいている）；マグネシウムの量が第１の所定の値を下回るか、第２の所定の基準値を上回る場合に、ＣＫＤのリスクがあると動物を診断すること；及び、マグネシウムの量が第１の所定の値を下回るか、第２の所定の基準値を上回る場合に、該動物に治療計画を提供すること、を含む。
【００８１】
ある特定の実施態様では、本方法は、動物の血液サンプル中のＦＧＦ２３の量を決定するステップ；ＦＧＦ２３の量を第３の所定の基準値と比較するステップ、をさらに含み、ここで、所定の基準値は対照集団における血中の平均ＦＧＦ２３レベルに基づいており、第２の所定の基準値と比較して高いＦＧＦ２３レベルは、効果的な治療の可能性が高いことを示す。
【００８２】
ある特定の実施態様では、慢性腎臓病（ＣＫＤ）のリスクがある動物を診断及び治療する方法はさらに、血液サンプル中の少なくとも１つのさらなるバイオマーカーの量を決定すること、及び少なくとも１つのさらなるバイオマーカーの量を第４の所定の基準値と比較すること、を含む。ある特定の実施態様では、第４の所定の基準値を上回る少なくとも１つのさらなるバイオマーカーの量は、効果的な治療の可能性が高いことを示す。ある特定の実施態様では、第４の所定の基準値を下回る少なくとも１つのさらなるバイオマーカーの量は、効果的な治療の可能性が高いことを示す。
【００８３】
ある特定の実施態様では、本方法は、血液サンプル中のリン酸塩、クレアチニン、血中尿窒素（ＢＵＮ）、及び副甲状腺ホルモン（ＰＴＨ）からなる群より選択される少なくとも１つのさらなるバイオマーカーの量を決定すること、並びに少なくとも１つのさらなるバイオマーカーの量を第４の所定の基準値と比較すること、をさらに含み、ここで、第４の所定の基準値を上回るリン酸塩、クレアチニン、血中尿窒素（ＢＵＮ）及び／又は副甲状腺ホルモン（ＰＴＨ）の量は、効果的な治療の可能性が高いことを示す。
【００８４】
ある特定の実施態様では、１つのさらなるバイオマーカーの第４の所定の基準値は、対照集団における１つのさらなるバイオマーカーの約１１０％超である、又は平均値を上回る（平均値より１０％大きいことを意味する）。他の実施態様では、１つのさらなるバイオマーカーの第４の所定の基準値は、対照集団における１つのさらなるバイオマーカーの平均値の約１２０％超、１３０％超、１４０％超、１５０％超、１６０％超、１７０％超、１８０％超、１９０％超、２００％超、２５０％超、３００％超、４００％超、５００％超、６００％超、７００％超、８００％超、９００％超、１０００％超、又はそれを超える。
【００８５】
ある特定の実施態様では、本方法はさらに、動物におけるＦＧＦ２３の量を低下させるのに十分な期間、動物を組成物で維持することを含む。
【００８６】
ある特定の実施態様では、本開示の主題で提供される方法はさらに、動物の血圧を決定すること、該血圧を第５の所定の基準値と比較すること、及び血圧が第５の所定の基準値を上回る場合に、高血圧の予防又は治療計画を実施すること、を含む。ある特定の実施態様では、血圧は、収縮期血圧、拡張期血圧、全身動脈圧、平均動脈圧、脈圧、全身静脈圧肺圧、及びそれらの組合せからなる群より選択される。ある特定の実施態様では、血圧は収縮期血圧である。ある特定の実施態様では、血圧は拡張期血圧である。
【００８７】
ある特定の実施態様では、血圧の第５の所定の基準値は、対照集団の平均血圧の約１１０％超、１２０％超、１３０％超、１４０％超、１５０％超、１６０％超、１７０％超、１８０％超、１９０％超、２００％超、又はそれを超える。ある特定の実施態様では、第５の所定の基準値は、対照集団の平均血圧の約１２０％超である。
【００８８】
ある特定の実施態様では、治療計画は、食餌療法、血液透析、腎代替療法、腎臓を損傷する化合物の除去、腎臓移植、腎臓を損傷する処置の遅延又は回避、利尿剤投与の変更、及びそれらの組合せからなる群より選択される少なくとも１つの治療計画を含む。ある特定の実施態様では、治療計画は、有効量のマグネシウム又はその塩を含む組成物の投与、リン酸摂取の低減、タンパク質摂取の低減、多価不飽和脂肪酸の投与、リン酸結合剤療法の実施、カリウムの投与、食餌性ナトリウム摂取の低減、アルカリ補給剤の投与、及びそれらの組合せからなる群より選択される少なくとも１つの治療計画を含む。ある特定の実施態様では、治療計画は、その内容全体が参照することによって本明細書に組み込まれる、Jonathan D. Forster, Update on Mineral and Bone Disorders in Chronic Kidney Disease. Vet Clin North Am Small Anim Pract. 2016 Nov;46(6):1131-49に記載される任意の治療方法を含む。
【００８９】
ある特定の実施態様では、治療計画は食餌療法である。ある特定の実施態様では、食餌療法は、高マグネシウム食、低リン食、低タンパク質食、低ナトリウム食、高カリウム食、多価不飽和脂肪酸（ＰＵＦＡ）食、及びそれらの組合せからなる群より選択される食事を含む。ある特定の実施態様では、食餌療法は、その内容全体が参照することによって本明細書に組み込まれる、Elliott et al., Dietary therapy for feline chronic kidney disease, Encyclopedia of feline clinical nutrition, 2nd edition, 2015に記載される食餌療法のうちのいずれか１つである。
【００９０】
ある特定の実施態様では、組成物はペットフード製品である。ある特定の実施態様では、マグネシウムの量は、約２００ｍｇ／１０００Ｋｃａｌ〜約５００ｍｇ／１０００Ｋｃａｌである。
【００９１】
ある特定の実施態様では、組成物は栄養補給剤である。ある特定の実施態様では、ペットフード製品に加えられるマグネシウムの量は、約５０ｍｇ／１０００Ｋｃａｌ〜約２００ｍｇ／１０００Ｋｃａｌである。
【００９２】
ある特定の実施態様では、組成物中のマグネシウムは、約１０ｍｇ／ｋｃａｌ〜約１０００ｍｇ／ｋｃａｌの量である。例えば、限定はしないが、マグネシウムは、約１０ｍｇ／ｋｃａｌ〜約１００ｍｇ／ｋｃａｌ、約２０ｍｇ／ｋｃａｌ〜約１００ｍｇ／ｋｃａｌ、約１０ｍｇ／ｋｃａｌ〜約２００ｍｇ／ｋｃａｌ、約２０ｍｇ／ｋｃａｌ〜約２００ｍｇ／ｋｃａｌ、約５０ｍｇ／ｋｃａｌ〜約１００ｍｇ／ｋｃａｌ、約５０ｍｇ／ｋｃａｌ〜約２００ｍｇ／ｋｃａｌ、約５０ｍｇ／ｋｃａｌ〜約３００ｍｇ／ｋｃａｌ、約１００ｍｇ／ｋｃａｌ〜約２００ｍｇ／ｋｃａｌ、約１００ｍｇ／ｋｃａｌ〜約３００ｍｇ／ｋｃａｌ、約１００ｍｇ／ｋｃａｌ〜約４００ｍｇ／ｋｃａｌ、約１００ｍｇ／ｋｃａｌ〜約５００ｍｇ／ｋｃａｌ、約２００ｍｇ／ｋｃａｌ〜約５００ｍｇ／ｋｃａｌ、約３００ｍｇ／ｋｃａｌ〜約５００ｍｇ／ｋｃａｌ、約２００ｍｇ／ｋｃａｌ〜約６００ｍｇ／ｋｃａｌ、約２００ｍｇ／ｋｃａｌ〜約７００ｍｇ／ｋｃａｌ、約２００ｍｇ／ｋｃａｌ〜約８００ｍｇ／ｋｃａｌ、約３００ｍｇ／ｋｃａｌ〜約６００ｍｇ／ｋｃａｌ、約３００ｍｇ／ｋｃａｌ〜約７００ｍｇ／ｋｃａｌ、約３００ｍｇ／ｋｃａｌ〜約８００ｍｇ／ｋｃａｌ、約４００ｍｇ／ｋｃａｌ〜約６００ｍｇ／ｋｃａｌ、約４００ｍｇ／ｋｃａｌ〜約７００ｍｇ／ｋｃａｌ、約４００ｍｇ／ｋｃａｌ〜約８００ｍｇ／ｋｃａｌ又は約５００ｍｇ／ｋｃａｌ〜約８００ｍｇ／ｋｃａｌの量でありうる。ある特定の実施態様では、組成物中のマグネシウムは、約２００ｍｇ／ｋｃａｌ〜約５００ｍｇ／ｋｃａｌ、例えば、約３００ｍｇ／ｋｃａｌの量である。ある特定の実施態様では、組成物中のマグネシウムは、約５０ｍｇ／ｋｃａｌ〜約２００ｍｇ／ｋｃａｌ、例えば、約１００ｍｇ／ｋｃａｌの量である。
【００９３】
本明細書に開示される主題の組成物及び方法に用いられるマグネシウムは、マグネシウム塩又はマグネシウム配位錯体の形態でありうる。
【００９４】
ある特定の実施態様では、マグネシウムは、例えば、限定はしないが、酢酸塩、ＴＦＡ塩、又はギ酸塩などのマグネシウム塩である。ある特定の実施態様では、マグネシウム塩は、イオン結合を介してＭｇ２＋と結合したアニオン（−）（例えば、限定はしないが、アミノ酸アニオン、Ｃｌ−、Ｆ−、Ｂｒ−、Ｏ２−、ＣＯ３２−、ＨＣＯ３−、ＯＨ−、ＮＯ３−、ＰＯ４３−、ＳＯ４２−、ＣＨ３ＣＯＯ−、ＨＣＯＯ−、Ｃ２Ｏ４２−及びＣＮ−）を含む。
【００９５】
ある特定の実施態様では、マグネシウムは、無機マグネシウム塩の形態をしている。ある特定の実施態様では、マグネシウムは酸化マグネシウムである。ある特定の実施態様では、酸化マグネシウムは、動物に提供される組成物（例えば、ペットフード又は栄養補給剤）の質量で、０．２５質量％以下の量である。ある特定の実施態様では、酸化マグネシウムは、組成物の質量で０．２２質量％以下の量である。ある特定の実施態様では、酸化マグネシウムは、組成物の質量で０．２質量％以下の量である。ある特定の実施態様では、マグネシウムは、有機マグネシウム塩の形態をしている。
【００９６】
ある特定の実施態様では、マグネシウム化合物はマグネシウム配位錯体である。ある特定の実施態様では、マグネシウム配位錯体はクロロフィルである。ある特定の実施態様では、マグネシウム化合物は、クロロフィルａ、クロロフィルｂ、クロロフィルｃ１、クロロフィルｃ２、クロロフィルｄ、クロロフィルｆ、又はそれらの組合せである。
【００９７】
ある特定の実施態様では、マグネシウムは、毎日３回、毎日２回、毎日１回、２日ごと、３日ごと、４日ごと、５日ごと、６日ごと、１週間ごと、２週間ごと、３週間ごと、又は毎月１回、動物に給餌することができる。ある特定の実施態様では、マグネシウムは、１日に１回以上、動物に給餌することができる。例えば、限定はしないが、マグネシウムは、１日に１回、２回、３回、４回、５回、又はそれ以上、投与されうる。ある特定の実施態様では、例えば、動物がマグネシウムを含むペットフード組成物を絶えず利用可能な状態で放牧されている場合には、マグネシウムを絶えず動物に給餌することができる。
【００９８】
４．最終製品
ある特定の非限定的な実施態様では、本開示の主題は、慢性腎臓病（ＣＫＤ）を治療する、又はその進行を遅延させるのに適した製品を提供する。ある特定の実施態様では、製品はペットフード組成物である。ある特定の実施態様では、ペットフード組成物は、有効量のマグネシウムを含む。ある特定の実施態様では、ペットフード組成物中のマグネシウムは、マグネシウム塩又はマグネシウム配位錯体の形態でありうる。ある特定の実施態様では、マグネシウムは、詳細な説明のセクション３に記載された形態のいずれかである。
【００９９】
ある特定の実施態様では、ペットフード組成物中のマグネシウムは、約１０ｍｇ／ｋｃａｌ〜約１０００ｍｇ／ｋｃａｌの量である。例えば、限定はしないが、マグネシウムは、約１０ｍｇ／ｋｃａｌ〜約１００ｍｇ／ｋｃａｌ、約２０ｍｇ／ｋｃａｌ〜約１００ｍｇ／ｋｃａｌ、約１０ｍｇ／ｋｃａｌ〜約２００ｍｇ／ｋｃａｌ、約２０ｍｇ／ｋｃａｌ〜約２００ｍｇ／ｋｃａｌ、約５０ｍｇ／ｋｃａｌ〜約１００ｍｇ／ｋｃａｌ、約５０ｍｇ／ｋｃａｌ〜約２００ｍｇ／ｋｃａｌ、約５０ｍｇ／ｋｃａｌ〜約３００ｍｇ／ｋｃａｌ、約１００ｍｇ／ｋｃａｌ〜約２００ｍｇ／ｋｃａｌ、約１００ｍｇ／ｋｃａｌ〜約３００ｍｇ／ｋｃａｌ、約１００ｍｇ／ｋｃａｌ〜約４００ｍｇ／ｋｃａｌ、約１００ｍｇ／ｋｃａｌ〜約５００ｍｇ／ｋｃａｌ、約２００ｍｇ／ｋｃａｌ〜約５００ｍｇ／ｋｃａｌ、約３００ｍｇ／ｋｃａｌ〜約５００ｍｇ／ｋｃａｌ、約２００ｍｇ／ｋｃａｌ〜約６００ｍｇ／ｋｃａｌ、約２００ｍｇ／ｋｃａｌ〜約７００ｍｇ／ｋｃａｌ、約２００ｍｇ／ｋｃａｌ〜約８００ｍｇ／ｋｃａｌ、約３００ｍｇ／ｋｃａｌ〜約６００ｍｇ／ｋｃａｌ、約３００ｍｇ／ｋｃａｌ〜約７００ｍｇ／ｋｃａｌ、約３００ｍｇ／ｋｃａｌ〜約８００ｍｇ／ｋｃａｌ、約４００ｍｇ／ｋｃａｌ〜約６００ｍｇ／ｋｃａｌ、約４００ｍｇ／ｋｃａｌ〜約７００ｍｇ／ｋｃａｌ、約４００ｍｇ／ｋｃａｌ〜約８００ｍｇ／ｋｃａｌ又は約５００ｍｇ／ｋｃａｌ〜約８００ｍｇ／ｋｃａｌの量でありうる。ある特定の実施態様では、ペットフード組成物中のマグネシウムは、約２００ｍｇ／ｋｃａｌ〜約５００ｍｇ／ｋｃａｌ、例えば、約３００ｍｇ／ｋｃａｌの量である。ある特定の実施態様では、ペットフード組成物中のマグネシウムは、約５０ｍｇ／ｋｃａｌ〜約２００ｍｇ／ｋｃａｌ、例えば、約１００ｍｇ／ｋｃａｌの量である。
【０１００】
ある特定の実施態様では、ペットフード組成物中のマグネシウムは、１日分又は単位用量あたり約１０ｍｇ〜約１０００ｍｇの量である。例えば、限定はしないが、マグネシウムは、１日分又は単位用量あたり約１０ｍｇ〜約５００ｍｇ、１日分又は単位用量あたり約１０ｍｇ〜約４００ｍｇ、１日分又は単位用量あたり約１０ｍｇ〜約３００ｍｇ、１日分又は単位用量あたり約１０ｍｇ〜約２００ｍｇ、１日分又は単位用量あたり約２０ｍｇ〜約２００ｍｇ、１日分又は単位用量あたり約３０ｍｇ〜約２００ｍｇ、１日分又は単位用量あたり約４０ｍｇ〜約２００ｍｇ、１日分又は単位用量あたり約５０ｍｇ〜約２００ｍｇ、１日分又は単位用量あたり約５０ｍｇ〜約１５０ｍｇ、１日分又は単位用量あたり約５０ｍｇ〜約１４０ｍｇ、１日分又は単位用量あたり約５０ｍｇ〜約１３０ｍｇ、１日分又は単位用量あたり約５０ｍｇ〜約１２０ｍｇ、１日分又は単位用量あたり約５００ｍｇ〜約１１０ｍｇ、１日分又は単位用量あたり約５０ｍｇ〜約１００ｍｇ、１日分又は単位用量あたり約１０ｍｇ〜約５０ｍｇ、１日分又は単位用量あたり約１００ｍｇ〜約１５０ｍｇ、１日分又は単位用量あたり約１５０ｍｇ〜約２００ｍｇ、１日分又は単位用量あたり約１００ｍｇ〜約２００ｍｇ、１日分又は単位用量あたり約１００ｍｇ〜約３００ｍｇ、１日分又は単位用量あたり約１００ｍｇ〜約４００ｍｇ、１日分又は単位用量あたり約１００ｍｇ〜約５００ｍｇ、１日分又は単位用量あたり約２００ｍｇ〜約５００ｍｇ、１日分又は単位用量あたり約３００ｍｇ〜約５００ｍｇ、１日分又は単位用量あたり約２００ｍｇ〜約８００ｍｇ、１日分又は単位用量あたり又は約５００ｍｇ〜約１０００ｍｇの量でありうる。ある特定の実施態様では、ペットフード組成物中のマグネシウムは、１日分又は単位用量あたり約２０ｍｇ〜約２００ｍｇ、例えば、約１００ｍｇの量である。ある特定の実施態様では、ペットフード組成物中のマグネシウムは、１日分又は単位用量あたり約５０ｍｇ〜約１００ｍｇ、例えば、約７５ｍｇの量である。ある特定の実施態様では、ペットフード組成物中のマグネシウムは、１日分又は単位用量あたり約６０ｍｇ〜約９０ｍｇの量である。
【０１０１】
ある特定の実施態様では、ペットフード組成物中のマグネシウムは、質量で、ペットフード組成物の約０．００１％〜約１０質量％の量である。例えば、及び限定はしないが、マグネシウムは、質量で約０．００１％〜約０．０１質量％、質量で約０．０１％〜約０．１質量％、質量で約０．１％〜約１質量％、質量で約１％〜約１０質量％、質量で約０．０１％〜約０．５質量％、質量で約０．０１％〜約０．２５質量％、質量で約０．０１％〜約０．２質量％、質量で約０．０１％〜約０．１５質量％、質量で約０．０１％〜約０．１質量％、質量で約０．０１％〜約０．０５質量％、質量で約０．１％〜約０．１５質量％、質量で約０．１％〜約０．２質量％、質量で約０．１％〜約０．２５質量％、質量で約０．１％〜約０．５質量％、質量で約０．５％〜約１質量％、質量で約０．１％〜約２質量％、質量で約０．１％〜約５質量％、質量で約０．１％〜約１０質量％、質量で約２％〜約１０質量％、質量で及び約５％〜約１０質量％の量でありうる。ある特定の実施態様では、ペットフード組成物中のマグネシウムは、質量で約０．２５質量％以下の量である。ある特定の実施態様では、ペットフード組成物中のマグネシウムは、質量で約０．２質量％以下の量である。ある特定の実施態様では、ペットフード組成物中のマグネシウムは、質量で約０．１５質量％以下の量である。ある特定の実施態様では、ペットフード組成物中のマグネシウムは、質量で約０．１質量％以下の量である。ある特定の実施態様では、ペットフード組成物中のマグネシウムは、質量で約０．０５質量％以下の量である。
【０１０２】
ある特定の実施態様では、本開示の主題のペットフード組成物は、毎日３回、毎日２回、毎日１回、２日ごと、３日ごと、４日ごと、５日ごと、６日ごと、１週間ごと、２週間ごと、３週間ごと、又は毎月１回、動物に給餌することができる。ある特定の実施態様では、ペットフード組成物は、１日に１回以上、動物に給餌することができる。例えば、限定はしないが、ペットフード組成物は、１日に１回、２回、３回、４回、５回、又はそれ以上、投与されうる。ある特定の実施態様では、例えば、動物がペットフード組成物を絶えず利用可能な状態で放牧されている場合には、ペットフード組成物を絶えず動物に給餌することができる。
【０１０３】
ある特定の実施態様では、本開示の主題の製剤は、追加の活性薬剤をさらに含むことができる。本開示の主題の製剤内に存在しうる追加の活性薬剤の非限定的な例には、栄養剤（例えば、アミノ酸、タンパク質、脂肪酸、炭水化物、糖、核酸、ヌクレオチド、ビタミン、ミネラルなど）、抗血管新生剤、ステロイド、ｍＴＯＲ阻害剤（例えば、エベロリムス）、ベータ遮断薬（例えば、プロプラノロール）、及び／又は血圧を低下させる薬剤が含まれる。
【０１０４】
ある特定の実施態様では、ペットフード組成物は、当技術分野で知られている添加剤をさらに含むことができる。ある特定の実施態様では、このような添加剤は、本明細書で開示される主題によって提供される目的及び効果を損なわない量で存在する。考えられる添加剤の例には、腎機能の改善に機能的に有益な物質、安定化効果のある物質、感覚刺激物質、加工助剤、嗜好性を高める物質、着色物質、及び栄養上の利点をもたらす物質が含まれるが、これらに限定されない。ある特定の実施態様では、安定化物質には、組成物の貯蔵寿命を延長する傾向がある物質が含まれるが、これらに限定されない。ある特定の実施態様では、このような物質には、保存剤、相乗剤及び金属イオン封鎖剤、包装ガス、安定剤、乳化剤、増粘剤、ゲル化剤、並びに湿潤剤が含まれるが、これらに限定されない。ある特定の実施態様では、乳化剤及び／又は増粘剤には、例えば、ゼラチン、セルロースエーテル、デンプン、デンプンエステル、デンプンエーテル、及び加工デンプンが含まれる。
【０１０５】
ある特定の実施態様では、着色、嗜好性、及び栄養の目的のための添加剤には、例えば、着色料；酸化鉄、塩化ナトリウム、クエン酸カリウム、塩化カリウム、及び他の食用塩；ビタミン；ミネラル；並びにフレーバーが含まれる。組成物中のこのような添加剤の量は、典型的には最大約５％である（組成物の乾燥基準）。
【０１０６】
ある特定の実施態様では、ペットフード組成物は栄養補給剤である。ある特定の実施態様では、栄養補給剤は、例えば、全体の栄養バランス又は性能を改善するために別の飼料とともに用いられる飼料を含む。ある特定の実施態様では、補給剤には、他の飼料への補給剤として希釈せずに供給される組成物、個別に入手可能な動物の飼料の他の部分との自由な選択を提供される組成物、又は完全な飼料を生産するために動物の通常の飼料と希釈及び混合される組成物が含まれる。ＡＡＦＣＯは、例えば、the American Feed Control Officials, Incorp. Official Publication, p. 220 (2003)で、補給剤に関する議論を提供している。補給剤は、例えば、粉末、液体、シロップ、丸薬、カプセル化された組成物などを含むさまざまな形態でありうる。
【０１０７】
ある特定の実施態様では、ペットフード組成物はおやつである。ある特定の実施態様では、おやつには、例えば、食事時間以外に動物の気を引くために動物に与えられる組成物が含まれる。ある特定の実施態様では、ペットフード組成物は、例えばイヌの骨を含むイヌ科用のおやつである。おやつは栄養的であってよく、ここで、組成物は、１つ以上の栄養素を含み、例えば、食物のための上記のような組成物を有しうる。非栄養的なおやつには、非毒性の任意の他のおやつが含まれる。
【０１０８】
ある特定の実施態様では、本開示の主題のマグネシウムは、組成物の他の成分の混合中及び／又は混合後など、製剤の処理中に組成物に組み込むことができる。組成物内へのこれらの成分の分配は、従来の手段により達成することができる。
【０１０９】
ある特定の実施態様では、本開示の主題のペットフード組成物は、従来のペットフードプロセスを使用して、缶詰形態又は湿潤形態で調製することができる。ある特定の実施態様では、粉砕した動物（例えば、哺乳動物、家禽、及び／又は魚）のタンパク質組織は、魚油、穀物、他の栄養バランス成分、特殊目的添加物（例えば、ビタミンとミネラルの混合物、無機塩、セルロース及びビートパルプ、増量剤など）を含めた他の成分と混合され、処理に十分な水もまた加えられる。これらの原料は、成分を混合しながら加熱するのに適した容器内で混合される。混合物の加熱は、例えば、直接蒸気注入により、又は熱交換器を備えた容器を使用することによってなど、任意の適切な方法を使用して行うことができる。最後の原料の添加後、混合物は約５０°Ｆ（約１０℃）から約２１２°Ｆ（約１００℃）の温度範囲に加熱される。この範囲外の温度は許容できるが、他の加工助剤の使用なしでは商業的に実用的ではない可能性がある。適切な温度に加熱されると、材料は通常、濃厚な液体の形態になる。濃厚な液体を缶に入れる。蓋をして、容器を密閉する。次に、密封した缶を、内容物を滅菌するように設計された従来の機器に入れる。これは通常、適切な時間（例えば、使用される温度及び組成に応じて決まる）、約２３０°Ｆ（約１１０℃）を超える温度に加熱することにより達成される。
【０１１０】
ある特定の実施態様では、本開示の主題のペットフード組成物は、従来のプロセスを使用して乾燥形態で調製することができる。ある特定の実施態様では、例えば、動物性タンパク質源、植物性タンパク質源、穀粒などを含む乾燥原料は、粉砕され、一緒に混合される。ある特定の実施態様では、次いで、脂肪、油、動物性タンパク質源、水などを含む、湿った又は液体の原料が、乾燥混合物に加えられ、混合される。ある特定の実施態様では、次に、混合物は、キブル又は同様の乾燥片へと加工される。ある特定の実施態様では、ペットフード組成物はキブルである。ある特定の実施態様では、キブルは、乾燥原料と湿潤原料の混合物を高圧及び高温で機械加工に供し、小さな開口部から押し出し、回転ナイフでキブルへと切断する、押出プロセスを使用して形成される。ある特定の実施態様では、次に、湿ったキブルを乾燥させ、例えば、フレーバー、脂肪、油、粉末などを含んでよい１つ以上の局所コーティングで任意選択的にコーティングする。ある特定の実施態様では、押出ではなくベーキングプロセスを使用して生地からキブルを作ることもでき、この場合、生地は乾熱処理の前に型に入れられる。
【０１１１】
ある特定の実施態様では、本明細書に開示される主題のおやつは、例えば、乾燥食品について上述したものと同様の押出またはベーキングプロセスによって調製することができる。
【実施例】
【０１１２】
本開示の主題は、限定としてではなく、本発明の例示として提供される以下の実施例を参照することにより、より良く理解されよう。
【０１１３】
使用されている略語のリストを以下に示す：
ＣＫＤ          慢性腎臓病
ＣＫＤ−ＭＢＤ  慢性腎臓病−骨ミネラル代謝異常
ＦＥ            分画排泄率
ＦＧＦ−２３    線維芽細胞成長因子２３
ＨＣＯ３−        静脈血の重炭酸濃度
ＨＲ            ハザード比
ＩＲＩＳ        国際獣医腎臓病研究グループ
ＯＲ            オッズ比
ＰＴＨ          副甲状腺ホルモン
ＳＢＰ          収縮期血圧
ＵＳＧ          尿比重
実施例１：総マグネシウムは慢性腎臓病を患うネコの生存時間の予測因子である
低マグネシウム血症は、慢性腎臓病（ＣＫＤ）を患うヒトの生存期間の低下に関連する。ネコＣＫＤにおけるマグネシウムの予後値についてはほとんど知られていない。この研究の目的は、ＣＫＤの診断時の血漿総マグネシウム濃度がネコの生存時間と関連していたかどうかを評価することであった。線維芽細胞成長因子２３（ＦＧＦ２３）の濃度の影響も調査され、ネコのＣＫＤにおける重要な予後因子であることを示唆する最近の証拠が示された。
【０１１４】
高窒素ＣＫＤの診断時にネコから得られたヘパリン加保存血漿サンプルで、総マグネシウム濃度（ｔＭｇ）を測定した。臨床データを中央値［２５，７５パーセンタイル］として提示した。ｔＭｇに基づいてネコを四分位（ＭｇＱ１〜４）に分類し、一元配置分散分析で群間のベースライン変数の比較を行った。２つの多変量Ｃｏｘ回帰モデルを使用して、生存時間（全死因死亡率）の予測因子としての高窒素ＣＫＤの診断時の血漿ｔＭｇの有用性を評価した：モデル１は、年齢、血漿クレアチニン、リン酸塩、インタクト副甲状腺ホルモン、アルブミン、ｔＭｇ、及びカテゴリ変数としての高血圧の診断、並びに連続変数としてのヘマトクリット値（ＰＣＶ）を含み、モデル２は、モデル１に含まれるものに加えて、カテゴリ変数としてＦＧＦ２３を含む。
【０１１５】
この後ろ向き観察コホート研究には、ＩＲＩＳステージ２（ｎ＝１１０）及び３（ｎ＝５０）のＣＫＤを患う１６０匹のネコが含まれていた。この研究のｔＭｇの中央値は２．０４［１．８５，２．２４］ｍｇ／ｄＬで、範囲は１．２９〜２．９０ｍｇ／ｄＬであった。ＭｇＱ１のネコは、上位４分の３のすべてと比較して、ＦＧＦ２３濃度が有意に高く（２００８．７［７６２．１，８１９４．４］ｐｇ／ｍＬ）、互いに有意な差はなかった（ＭｇＱ２：８９５．３［４５５．０，１９４８．２］；ＭｇＱ３：４９３．９［３４４．２，２０３５．５］；ＭｇＱ４：４７７．８［３１６．９，９７５．７］ｐｇ／ｍＬ、Ｐ＜０．００１）。ＭｇＱ１とＭｇＱ３のネコは、年齢（Ｑ１：１６．４［１４．１，１８．７］；Ｑ３：１３．４［１２．０，１５．９］歳、Ｐ＝０．０２２）及びリン酸塩濃度（Ｑ１：５．１５［３．８９，６．５４］；Ｑ３：４．０９［３．５０，５．０５］ｍｇ／ｄＬ、Ｐ＝０．０１３）が異なっていた。クレアチニン濃度は、ＭｇＱ３とＭｇＱ４の間でのみ、異なっていた（ＭｇＱ３：２．３７［２．１４，２．６８］；ＭｇＱ４：２．６８［２．３８，３．３０］ｍｇ／ｄＬ，Ｐ＝０．０２９）。Ｃｏｘ回帰モデル１では、生存率は、ＰＣＶとは正の関連を示し（Ｐ＜０．００１）、年齢（Ｐ＜０．００１）、クレアチニン（Ｐ＝０．００３）、ｔＭｇ（Ｐ＝０．００７）、高血圧の診断（Ｐ＝０．０４６）とは負の関連を示した。ＭｇＱ２のネコは、ＭｇＱ１（ハザード比（ＨＲ）：０．４３４、Ｐ＝０．００３）及びＭｇＱ４（ＨＲ：０．４３３、Ｐ＝０．００２）の両方と比較して死亡のリスクが低下していた。モデル２では、生存率は、ＰＣＶとは正の関連を示し（Ｐ＜０．００１）、年齢（Ｐ＜０．００１）、ＦＧＦ２３（Ｐ＝０．００４）、高血圧（Ｐ＝０．０１４）、及びｔＭｇ（Ｐ＝０．０３６）とは負の関連を示した。ＭｇＱ２のネコは、ＭｇＱ４（ＨＲ：０．４５２，Ｐ＝０．００５）と比較して死亡リスクが大幅に低下したが、ＭｇＱ１（ＨＲ：０．６２２，Ｐ＝０．１２６）とは比較できなくなった。
【０１１６】
結論として、ＣＫＤの診断時の血漿マグネシウム濃度が高くなると、ＦＧＦ２３の影響を考慮した後の全死因死亡のリスクが増加した。中間のマグネシウム濃度は生存率を改善した。低マグネシウム濃度を特徴とするネコは、全死因死亡のリスクが高い（モデル１）が、このリスク増加は、マグネシウム濃度の高い四半分（モデル２）と比較して、ＦＧＦ２３濃度が高いことに関連しているように見えた。マグネシウムが修正可能なリスク要因であるかどうか、及びマグネシウム濃度とＦＧＦ２３濃度の関係がネコＣＫＤの新しい管理戦略の開発につながる可能性があるかどうかを調査するためには、さらなる研究が必要である。
【０１１７】
実施例２：ネコの慢性腎臓病（ＣＫＤ）−骨ミネラル代謝異常（ＭＢＤ）の管理における経口マグネシウム補給の利点
慢性腎臓病（ＣＫＤ）のネコ１６０匹を対象とした後ろ向き研究のデータは、血漿マグネシウム濃度が生存と関連していることを示した。ＣＫＤの診断時の低マグネシウム濃度と高マグネシウム濃度の両方が、単変量Ｃｏｘ回帰分析の通常濃度よりも高いハザード比を有していた。しかしながら、高マグネシウムレベルは生存時間の低下と独立して関連していたのに対し、低マグネシウム群の死亡リスクの増加は、この群の線維芽細胞成長因子２３（ＦＧＦ２３）濃度が有意に高いことに関連しているように思われ（図１）、したがって、低血清マグネシウムではなくＦＧＦ２３が多変量モデルにとどまった。線形回帰は、総マグネシウムがＦＧＦ２３濃度の独立した予測因子であることを示した。マグネシウム補給によって、ＣＫＤの診断でマグネシウム濃度が低いネコのＦＧＦ２３レベルを低下させ、生存期間を改善できるかどうかを調査するための前向き研究が必要とされた。したがって、ＣＫＤ罹患ネコの骨ミネラル代謝異常を管理するための新しい手法である経口マグネシウム補給が血清ＦＧＦ２３を低下させるかどうかを決定するために研究を行った。
【０１１８】
研究の目的
主な目的は、高窒素血症のＣＫＤと診断され、同時に血漿マグネシウム濃度が低いネコへの経口マグネシウム補給が、これらの動物の血漿ＦＧＦ２３濃度を低下させるかどうかを決定することであった。
【０１１９】
二次的な目的は、１）経口マグネシウム補給がマグネシウムの状態を改善するかどうか、及びどの程度まで改善するかを決定すること；２）マグネシウム補給と他の臨床病理学的変数（リン酸塩、イオン化カルシウム、ＰＴＨ、カルシトリオール、カリウム、収縮期血圧）の変化との関連の評価；及び、３）マグネシウム補給の可能性のある副作用（すなわち、高マグネシウム血症、ストルバイト尿路結石症、下痢）の発生の評価であった。
【０１２０】
研究プロトコル
登録
高窒素ＣＫＤ及び低マグネシウム血症を患うネコを臨床試験に採用した。スクリーニングの前処理は以下を含んでいた：１）血漿生化学（総チロキシン及び総マグネシウムを含む）、ヘマトクリット、並びに総タンパク質；２）尿検査；３）収縮期血圧測定；及び、４）血漿ＦＧＦ２３及びＰＴＨの測定。
【０１２１】
選択基準は、１）安定した高窒素ＣＫＤのＩＲＩＳステージ２又は３の診断；２）血漿総マグネシウム濃度＜０．８０ｍｍｏｌ／Ｌ；及び、３）過去２か月間の安定した食事（研究中に食事の変更は認めなかった）であった。
【０１２２】
除外基準は、１）甲状腺機能亢進症（総サイロキシン濃度＜４０ｎｍｏｌ／Ｌ）；２）高血圧の診断；３）尿検査で特定されたストルバイト結晶（尿が濃縮されている場合、ストルバイト結晶が観察されるのが一般的である；大量の結晶が存在する場合にのみ除外が適用される）；４）過去１年以内のＦＬＵＴＤ；又は、５）腸のリン酸塩結合剤の使用、であった。
【０１２３】
治療
飼い主の同意を得て、ネコは、好ましくはグリシン酸マグネシウムとして、食物と一緒に、１日あたり６３．６〜９０．１ミリグラムの元素マグネシウムからなる経口マグネシウム補給を受けた。
【０１２４】
特に、ネコの食事には、体重１キログラムあたり１００ｍｇのグリシン酸Ｍｇ（１４．１ｍｇのＭｇ／ｋｇに相当する）が補給された。例えば、５ｋｇのネコは、１日あたり約２００ｋｃａｌを必要とし、１日あたり７０ｍｇ／１０００ｋｃａｌの補給を消費する必要がある。マグネシウム補給剤は、ネコの餌に含まれる既存のマグネシウムに追加され、ネコの食事では２６０〜３３０ｍｇのＭｇ／１０００ｋｃａｌの範囲であった。
【０１２５】
追跡
４〜６週間の経口マグネシウム補給の後に評価を行った。この機会に、収縮期血圧測定、及び血液と尿のサンプルを得た。次の場合に参加終了とした：１）ネコがマグネシウム補給剤の摂取を拒否した場合；２）マグネシウムの補給時に、ネコが腎臓食を拒否し、その結果、毎日のカロリー摂取量の５０％未満が腎臓食で構成された場合；３）血漿総マグネシウム濃度が１．０ｍｍｏｌ／Ｌを超えた場合；４）尿沈渣にリン酸マグネシウムアンモニウム結晶が認められた場合；５）ネコが下痢を発症した場合；６）ネコが、追加の治療を必要とする、又は安楽死を必要とする、高窒素ＣＫＤ以外の重大な病状を発症した場合；７）食餌療法の中止を必要とする副作用、例えば、臨床症状を併発するイオン化高カルシウム血症が観察された場合；又は、８）飼い主が追跡治療のためにネコを連れてこなかった場合。
【０１２６】
分析
マグネシウムとＦＧＦ２３の状態に対する経口マグネシウム補給の効果を、１）ベースラインに対する血漿総マグネシウム濃度の変化、及び２）ベースラインに対する血漿ＦＧＦ２３濃度の変化によって決定した。
【０１２７】
ネコＣＫＤに関与する他のパラメータに対する経口マグネシウム補給の効果を、１）ベースラインに対する血漿インタクトＰＴＨ濃度の変化；２）ベースラインに対する血漿カルシトリオール濃度の変化；３）ベースラインに対する血漿リン酸塩濃度の変化；４）ベースラインに対する収縮期血圧の変化；及び、５）ベースラインに対する全血カリウム濃度の変化から決定した。
【０１２８】
結果
図１は、血漿総マグネシウム濃度によって四分位に分類された高窒素ＣＫＤのＩＲＩＳステージ２〜３を患うネコの血漿ＦＧＦ２３濃度を示している。総マグネシウム濃度の中央値は０．８４［０．７５，０．９２］ｍｍｏｌ／Ｌであった。マグネシウム四分位が最も低いネコは、上位４分の３のすべてと比較して、ＦＧＦ２３濃度が著しく高く（２００８．７［７６２．１，８１９４．４］ｐｇ／ｍＬ）、互いに有意な差はなかった（ＭｇＱ２：８９５．３［４５５．０，１９４８．２］；ＭｇＱ３：４９３．９［３４４．２，２０３５．５］；ＭｇＱ４：４７７．８［３１６．９，９７５．７］ｐｇ／ｍＬ，Ｐ＜０．００５）。破線は、老齢のネコの血漿ＦＧＦ２３の基準範囲の上限（７００ｐｇ／ｍＬ）を表している。図１のＹ軸は対数目盛である。
【０１２９】
高窒素ＣＫＤのＩＲＩＳステージ２〜３を患うネコの血液サンプル中の総マグネシウム、ＦＧＦ２３、及びリン酸塩に対するマグネシウム補給剤の効果が図２Ａ〜２Ｃに示されている。図２Ａは、４匹のネコの補給前後の総血清Ｍｇを示している。図２Ｂは、Ｍｇ補給前後の血清ＦＧＦ２３を示している。Ｍｇ補給は、４匹中３匹のネコのＦＧＦ２３の大幅な低下と関連していた。ＦＧＦ２３は、血清リン蓄積の既知のマーカーであり、ＦＧＦ２３の低下は腎疾患の進行の低減と相関していた。図２Ｃは、補給前後の血清リン酸塩を示している。
【０１３０】
図３Ａ〜３Ｉはさらに、高窒素ＣＫＤのＩＲＩＳステージ２〜３を患うネコにおける、総マグネシウム（Ａ）、ＦＧＦ２３（Ｂ）、クレアチニン（Ｃ）、対称ジメチルアルギニン（ＳＤＭＡ）（Ｄ）、リン酸塩（Ｅ）、収縮期血圧（Ｆ）、カリウム（Ｇ）、カルシウム（Ｈ）、及び副甲状腺ホルモン（ＰＴＨ）（Ｉ）に対するマグネシウム補給の効果を示している。
【０１３１】
実施例３：高窒素血症性慢性腎疾患に罹患したネコのコホートにおける血漿総マグネシウムの予後の重要性に関する観察
本実施例は、高窒素ＣＫＤを患うネコにおけるマグネシウム障害の有病率及び危険因子、血漿ｔＭｇとＦＧＦ−２３及び他の臨床病理学的変数との関係、並びに、高窒素ＣＫＤを患うネコのコホートにおける全死因死亡及び腎機能低下に対するマグネシウム障害の予後的意義を調査する。
【０１３２】
方法
被験体
ネコは、ロンドン中心部の２回の一次診療（first opinion practices）で行われた、老ネコの診療所の記録から特定された（People’s Dispensary for Sick Animals in Bow and Beaumont Sainsbury Animal Hospital in Camden）。９歳以上の顧客が飼っているネコは、一般的な健康診断のためにこれらの診療所を訪れ、その後、病気の管理のために高窒素ＣＫＤと診断された。この研究に登録されたネコは、飼い主の同意が得られ、ロイヤル・ベタリナリー大学の倫理福祉委員会の承認が与えられた、より大きい観察コホートの一部であった。
【０１３３】
２００１年９月から２０１３年９月の間に見られた１２０匹の見かけ上健康なネコの一群が、高齢ネコの血漿ｔＭｇの基準範囲を確立するために選択された。ネコは、病歴、身体検査、又は血液及び尿の検査で重大な異常が検出されなかった場合、及び薬が処方されなかった場合に、明らかに健康であるとみなされた。含めるには、ヘパリン加保存血漿サンプルがｔＭｇの測定に利用可能でなければならなかった。
【０１３４】
１９９９年８月から２０１３年７月の間に高窒素ＣＫＤと診断されたネコのコホートを選択して、ネコＣＫＤのベースライン血漿ｔＭｇの臨床的意義を調査した。高窒素ＣＫＤの診断基準は、１．０３５未満の尿比重（ＵＳＧ）で血漿クレアチニン濃度が２ｍｇ／ｄＬ以上、若しくは２〜４週間間隔で２回連続して血漿クレアチニン濃度が２ｍｇ／ｄＬ以上であった。登録するためには、血漿ＦＧＦ−２３濃度とｔＭｇの測定のための残りのヘパリン加保存血漿サンプルに関するデータは、ＣＫＤの診断時から利用可能でなければならなかった。甲状腺機能亢進症の臨床徴候、血漿総サイロキシン濃度が４０ｎｍｏｌ／Ｌ超、甲状腺機能亢進症の治療、糖尿病、又はコルチコステロイド治療のネコは、すべての分析から除外された。全身性高血圧の治療のためにベシル酸アムロジピンを投与されたネコは含めた。
【０１３５】
データ収集
診療所の訪問は、病歴及び身体検査、収縮期血圧（ＳＢＰ）測定、並びに血液と尿の収集で構成されていた。高窒素ＣＫＤの診断の日に得られたベースラインデータは、電子臨床記録から検索され、年齢、品種、性別、体重、体調スコア（ＢＣＳ）、収縮期血圧（ＳＢＰ）、血漿総サイロキシン濃度、ＰＣＶ、ルーチンの血漿生化学的変数（総タンパク質、アルブミン、グロブリン、クレアチニン、ナトリウム、カリウム、塩化物、リン酸塩、総カルシウム濃度）、イオン化カルシウム濃度、静脈血の重炭酸（ＨＣＯ３−）及びｐＨ値、血漿カルシジオール、カルシトリオール、ＦＧＦ−２３及びＰＴＨ濃度、ＵＳＧ、尿培養結果、尿タンパク質対クレアチニン比（ＵＰＣ）、並びにマグネシウム値の分画排泄率（ＦＥ）が含まれていた。死亡日及び高窒素血症の進行が起こったかどうか（以下に定義）についても文書化された。電子記録からの異常又は欠落データは、物理的な患者記録を参照することによって検証された。ＣＫＤの重症度とリン酸塩の状態は、国際獣医腎臓病研究グループ（ＩＲＩＳ）のガイドラインに従って分類された８８。収縮期血圧はドップラー法８９を使用して評価し、すべてのネコに間接検眼鏡検査を実施し、ＳＢＰ＞１６０ｍｍＨｇが確認された。全身性高血圧は、１〜２週間の間隔を空けた少なくとも２回のＳＢＰが１７０ｍｍＨｇ超、若しくは眼の標的器官障害と関連した単一のＳＢＰが１６０ｍｍＨｇ超であると定義された。
【０１３６】
血液サンプルは頸静脈穿刺から、尿サンプルは膀胱穿刺から得た。総マグネシウムは、通常の生化学分析も行っていた実験室によって、−８０℃で保存された残留ヘパリン加血漿で測定された９０。ＦＧＦ−２３及びＰＴＨは、それぞれ有効なＥＬＩＳＡ９１及び免疫放射測定９２アッセイを使用して、ＥＤＴＡ血漿で測定された４，３２。ＦＧＦ−２３の測定では、標準曲線の読み取りを実現するために、サンプルをゼロ標準で希釈した。ＰＴＨアッセイの検出限界は５．２ｐｇ／ｍＬであり、この値を下回る濃度のサンプルには、２．６ｐｇ／ｍＬの任意のＰＴＨ濃度が割り当てられた。イオン化カルシウム、静脈血ガス、及びビタミンＤ代謝産物の結果は、一部のネコからのみ入手可能であった。静脈穿刺直後にポイント・オブ・ケア分析器９３を使用して、非ヘパリン加全血のイオン化カルシウム濃度及び血液ガスを測定した。ビタミンＤ代謝物は、外部の実験室で測定した９４。尿検査には、屈折計、ディップスティック分析、及び尿沈渣顕微鏡検査によるＵＳＧのインハウス測定が含まれていた。尿生化学検査は、商業研究所によって行われた。分画排泄率の値は、スポットサンプルの手法を使用して決定した３３。
【０１３７】
統計分析
統計分析は、統計ソフトウェアパッケージを使用して行った９５。報告されたすべての分析について、有意性の両側検定を実施し、アルファレベル≦０．０５で統計的有意性を定義した。継続的な臨床データは、必要に応じて平均（ＳＤ）又は中央値［２５，７５パーセンタイル］として表わされる。シャピロ・ウィルク検定及びＱ−Ｑプロットの目視検査により、数値変数の分布の正規性について評価した。群間のベースライン特性は、独立したサンプルｔ検定（２つの群）又は正規分布を有する連続変数についてのボンフェローニの事後比較付き一元配置分散分析（３群以上）のいずれかを使用して、あるいは、マン・ホイットニーのＵ検定（２つの群）又はクラスカル・ウォリス検定に続いて、歪んだ分布を有する変数についてのボンフェローニ補正付きのマン・ホイットニーＵ検定（３群以上）を使用して比較した。フィッシャーの正確確率検定を使用して、割合を比較した。
【０１３８】
マグネシウム障害に関連する有病率及び要因
パラメトリック法（すなわち、平均±２ＳＤ）を使用して計算した、高齢のネコの血漿ｔＭｇの導出基準範囲の下限及び上限に基づいて、ネコを３つの群に分類した。高窒素ＣＫＤの診断時の低マグネシウム血症及び高マグネシウム血症の有病率は、この基準範囲、比較される３つのマグネシウム群間のベースライン特性、及び低マグネシウム血症又は高マグネシウム血症のいずれかの危険因子を調べるために行われた二元ロジスティック回帰を使用して計算した。これらの条件に大きく関連する変数を、多変量二元ロジスティック回帰モデルに投入した。手動の変数減少法によって最終的なモデルを導出した。ホスマー・レメショウ検定を用いてモデルの適合度を評価した。結果はオッズ比（ＯＲ；９５％信頼区間［ＣＩ］）として報告される。
【０１３９】
血漿総マグネシウムと血漿ＦＧＦ−２３及び他の臨床病理学的変数との関連
各ＩＲＩＳステージ内の低マグネシウム血症、正常マグネシウム血、及び高マグネシウム血症のネコの間、並びに、ＩＲＩＳステージ２及び３のＣＫＤを患うネコの正常なリン酸血及び高リン血症下位群（各ステージの血漿リン酸塩のＩＲＩＳ標的に基づく）内の血漿ｔＭｇが中央値（＜２．０４ｍｇ／ｄＬ及び≧２．０４ｍｇ／ｄＬ）を下回る及び上回る血漿ｔＭｇを有するネコ間で、血漿ＦＧＦ−２３濃度を比較した。
【０１４０】
血漿ｔＭｇと対数変換されたＦＧＦ−２３濃度との関連を評価するために、ピアソン相関係数（ｒ）を計算した（自然対数［ｌｎ］）。血漿ＦＧＦ−２３の既知の予測因子であるｌｎ［クレアチニン］及びｌｎ［リン酸塩］の交絡効果を除去した、これら２つの変数間の関連の強さを測定するために、部分相関を行った４。
【０１４１】
どの変数が連続変数として血漿ｔＭｇと関連しているかを調べるために、ＩＲＩＳステージ用に調整された単変量の一般線形モデルを構築した。年齢、体重、ＰＣＶ、血漿アルブミン、ナトリウム、カリウム、塩化物、総カルシウム、ｌｎ［ＦＧＦ−２３］、ｌｎ［ＰＴＨ］、ｌｎ［クレアチニン］、ｌｎ［リン酸塩］濃度、及びｌｎ［ＵＰＣ］を、連続共変量として評価した。ＩＲＩＳステージ及び高血圧状態を固定因子として投入した。アルファレベル＜０．１０の血漿ｔＭｇに関連する共変量をＩＲＩＳステージとの統計的相互作用について評価し、有意な相互作用項を含む多変量線形回帰モデルに投入した。最終的な回帰モデルを、変数減少法によって導出した。正規性の仮定及び変数間の線形関係の仮定を、残差のヒストグラムおよび適合値に対する残差の散布図の目視検査によって確認した。結果を回帰係数（β；９５％ＣＩ）で報告する。
【０１４２】
血漿総マグネシウムと生存との関連
血漿ｔＭｇが生存に関連しているかどうかを評価するために、登録されたすべてのネコを生存分析に含め、高窒素ＣＫＤの診断日をベースラインとして指定し、全死因死亡率が興味対象となる事象であったため、追跡不能となったネコ又は２０１６年７月１日にまだ生存していたネコに対して打ち切りを行った。追跡不能となったネコは、生存がわかっている最後の日で打ち切りとした。正常マグネシウム血群のカプラン・マイヤー曲線を、ログランク検定を使用して低マグネシウム血症及び高マグネシウム血症のネコの曲線と比較し、単変量時不変Ｃｏｘ比例ハザード分析を用いて、ハザード比（ＨＲ）を計算した。可能性のある交絡因子について調整するために、次のベースライン変数の生存との関連を単変数Ｃｏｘ回帰分析で評価した：血漿ｔＭｇ、クレアチニン、リン酸塩、総カルシウム、ナトリウム、塩化物、カリウム、アルブミン、ＦＧＦ−２３、及びＰＴＨ濃度、年齢、ＰＣＶ、体重、ＢＣＳ、高血圧の状態、ＵＳＧ、及びＵＰＣ。血漿ＰＴＨは、大きく歪んだ分布であったため、対数変換した。カプラン・マイヤー曲線の検査と各変数と時間との統計的相互作用の評価によって判断された比例ハザードの仮定が満たされなかった場合に、連続変数を分類した。グループ化は、可能であれば臨床的に関連するマージン（血漿ｔＭｇ、高血圧状態、ＢＣＳ）、又は三分位数（リン酸塩、ＦＧＦ−２３、ナトリウム、ＵＳＧ、体重）に基づいていた。欠測データ補完は行わなかった。アルファレベル＜０．１０の生存に関連する変数を、マグネシウム状態との相互作用について評価し、その後、統計的に有意な相互作用項（Ｐ＜０．０５）とともに多変量分析に投入した。手動の変数減少法によって最終的な多変量モデルを導出した。Ｃｏｘモデルの全体的な適合は、Ｃｏｘ−Ｓｎｅｌｌ残差プロットの目視検査によって確認した。結果をＨＲ（９５％ＣＩ）として報告する。
【０１４３】
死亡率との非線形関係を考慮して、血漿ｔＭｇは、主要な分析で導出された基準範囲の下限と上限で分割されたカテゴリ変数として分析した。連続的なスケールで血漿ｔＭｇの生存に対する影響を調査するために、サブ分析を行った。ネコはｔＭｇの中央値折半で分割され、ｔＭｇはカテゴリ変数としてではなく、連続変数として、十分に調整されたＣｏｘモデルに投入した。
【０１４４】
加えて、全死因死亡率に関連する血漿マグネシウム濃度とリン酸塩状態の間の事前定義された相互作用について調査した。ＩＲＩＳステージ２及び３のＣＫＤを患うネコを、ＩＲＩＳリン酸塩標的ガイドライン９６に従って、リン酸塩の状態に基づいて、かつ、血漿ｔＭｇの中央値折半によって分割した。これにより、次の４つのカテゴリが作成された：正常なリン酸血−低マグネシウム（ＮＰ−ＬＭ：ＩＲＩＳ正常なリン酸血；血漿マグネシウム＜２．０４ｍｇ／ｄＬ）、正常なリン酸血−高マグネシウム（ＮＰ−ＨＭ：ＩＲＩＳ正常なリン酸血；血漿マグネシウム≧２．０４ｍｇ／ｄＬ）、高リン血症−低マグネシウム（ＨＰ−ＬＭ：ＩＲＩＳ高リン血症；血漿マグネシウム＜２．０４ｍｇ／ｄＬ）、及び、高リン血症−高マグネシウム（ＨＰ−ＨＭ：ＩＲＩＳ高リン血症；血漿マグネシウム≧２．０４ｍｇ／ｄＬ）。生存に関連するマグネシウムとリン酸塩の間の統計的相互作用を、単変量Ｃｏｘ回帰を使用して４つのリン酸塩−マグネシウム群の危険性を比較することによって調査した。ＮＰ−ＨＭ群は、ＨＰ−ＬＭ群の相互作用（ＲＥＲＩ、すなわち、予想されるリスクと観測されたリスクとの差）による相対的な過剰リスクを計算するために、曝露なしの結合参照カテゴリとして選択された３４，９７。
【０１４５】
血漿総マグネシウムとＣＫＤの進行との関連
マグネシウムの状態がＣＫＤの進行と関連していたかどうかを、二元ロジスティック回帰を使用して調査した。ネコを次の２つの群に分類した：診断の最初の１２か月以内に血漿クレアチニン濃度の２５％超の増加を示した、進行性ＣＫＤ群、及び増加を示さなかった安定したＣＫＤ群。追跡期間が１２か月以上の安定したネコのみをこの分析に含めた。マグネシウムの状態、血漿クレアチニン、リン酸塩、総カルシウム、カリウム、アルブミン、ｌｎ［ＦＧＦ−２３］、及びｌｎ［ＰＴＨ］、年齢、ＰＣＶ、体重、ＢＣＳ、高血圧の状態、ＵＳＧ、及びＵＰＣを、単変数の二元ロジスティック回帰に投入した。単変量解析でアルファレベル＜０．１０の進行性疾患に関連する変数を、多変量回帰に投入した。手動の変数減少法によって最終的なモデルを導出した。ホスマー・レメショウ検定を用いて適合度を評価した。結果をＯＲ（９５％ＣＩ）として報告する。ＣＫＤの進行に関連する血漿マグネシウム濃度とリン酸塩状態の間の事前定義された相互作用を、単変量ロジスティック回帰を使用して４つのリン酸−マグネシウム群（上記で定義）のＯＲを比較することによって調査した。
【０１４６】
結果
血漿総マグネシウム濃度と、血漿ＦＧＦ−２３、全死因死亡率、及び高窒素ＣＫＤを患うネコの疾患進行との関連を調べるために、ＩＲＩＳステージ２〜４のＣＫＤの１７４匹の顧客が飼っているネコの記録を分析した。ベースライン血漿総マグネシウム濃度と、ＦＧＦ−２３濃度並びに死亡及び進行のリスクとの可能な関連性を、一般診療に由来する高窒素ＣＫＤのネコのコホートでのそれぞれ線形、Ｃｏｘ、及びロジスティック回帰を使用して調査した（１９９９〜２０１３）。結果は、血漿クレアチニン濃度を制御すると、血漿総マグネシウム濃度（基準範囲、１．７３〜２．５７ｍｇ／ｄＬ）が血漿ＦＧＦ−２３と逆相関することを示している（部分相関係数、−０．５０；Ｐ＜０．００１）。低マグネシウム血症は、ネコの１２％（２０／１７４）で観察され、死亡リスクの増加と独立して関連していた（調整ハザード比、２．４０；９５％信頼区間［ＣＩ］、１．１８〜４．８６；Ｐ＝０．０１６）。高マグネシウム血症（有病率、６％；１１匹／１７４匹のネコ）と生存（ハザード比、２．８８；９５％ＣＩ，１．５４〜５．３８；Ｐ＝０．００１）との未調整の関連、並びに低マグネシウム血症と進行性ＣＫＤ（オッズ比、１７．６８；９５％ＣＩ，２．０４〜１５３．５９；Ｐ＝０．００９）との未調整の関連は、多変量解析で有意性を失った。
【０１４７】
高齢ネコの血漿総マグネシウム濃度の９５％基準範囲の決定
参照集団は、５３匹のオスネコと６７匹のメスネコで構成され、１匹の未去勢のオスと１匹の未去勢のメスを含んでいた。ネコは次の品種であった：ドメスティックショートヘア（ｎ＝９７）、ドメスティックロングヘア（ｎ＝１２）、ビルマ（ｎ＝４）、ペルシャ、ブリティッシュショートヘア、及びロシアンブルー各２匹、ブリティッシュブルー１匹。さらなる特徴は表１に見出すことができる。血漿ｔＭｇの分布はガウス分布であり、平均濃度は２．１５（ＳＤ、０．２０９）ｍｇ／ｄＬであり、１．７３〜２．５７ｍｇ／ｄＬ（０．７１〜１．０６ｍｍｏｌ／Ｌ）の９５％基準範囲をもたらした。
【０１４８】
【表１】
2020522463.tif 000003
【０１４９】
高窒素ＣＫＤを患うネコの血漿総マグネシウム
１９９９年８月から２０１３年７月までの間に、合計５１７匹のネコが高窒素ＣＫＤを患っていると診断されたが、そのうち９６匹は次の理由で除外された：同時性甲状腺機能亢進症（ｎ＝７９）、ＣＫＤの診断の研究基準を満たしていない（ｎ＝１６）、又はプレドニゾロン投与（ｎ＝１）。４２１匹の適格なネコのうち、８８匹はｔＭｇの測定に利用可能な残留血漿サンプルがなく、１５７匹は血漿ＦＧＦ−２３濃度に関するベースライン情報がなく、２つのサンプルは著しく溶血した。したがって、１７４匹のネコがこの研究に登録され、そのうちの一部は以前の研究に含まれていた５，８。１７４匹のネコと、残留血漿サンプル又は血漿ＦＧＦ−２３測定値の欠如のために分析から除外された２４７匹の適格なネコとのベースライン特性間に有意差は観察されなかった（データは示さず）。
【０１５０】
研究対象母集団は、８８匹のメス（うち１匹は未去勢）、８６匹のオス（うち３匹は未去勢）で構成されていた。ドメスティックショートヘアが最も一般的な品種であり（ｎ＝１２７）、次にドメスティックロングヘア（ｎ＝２０）、ペルシャ（ｎ＝１０）、ビルマ（ｎ＝７）、ブリティッシュショートヘア（ｎ＝２）、シャム（ｎ＝２）、及びアビシニアン、アメリカンショートヘア、チンチラ、オシキャット、ロシアンブルー、及びティファニーが各１匹であった。国際獣医腎臓病研究グループ（ＩＲＩＳ）の病期分類システムによれば、１１４匹のネコがステージ２、５０匹のネコがステージ３、１０匹のネコがステージ４のＣＫＤであった。研究対象母集団は、血漿ｔＭｇの基準範囲が導き出されたネコの群よりも高齢であった（平均，１４．４年；ＳＤ，３．２年対１２．７年；それぞれＳＤ，２．２）。
【０１５１】
マグネシウム障害に関連する有病率及び要因
この研究対象母集団の血漿ｔＭｇの中央値は２．０７［１．８７，２．２６］ｍｇ／ｄＬ（範囲，１．２９〜５．７９）であった。１７４匹中２０匹のネコが低マグネシウム血症（有病率，１２％；９５％ＣＩ，７〜１７）、１１匹のネコが高マグネシウム血症（有病率，６％；９５％ＣＩ，３〜１０）を患っていると診断された。ＩＲＩＳステージ４のネコでは、高マグネシウム血症が主に観察された（図４）。低マグネシウム血症、正常マグネシウム血、及び高マグネシウム血症のネコのベースライン特性が表２に示されている。
【０１５２】
マグネシウム障害に関連する危険因子が表３に記載されている。多変量回帰は、より高い血漿ｌｎ［ＦＧＦ−２３］（ＯＲ，２．０７；９５％ＣＩ，１．４８〜２．９０；Ｐ＜０．００１）及び全身性高血圧の診断（ＯＲ，４．２４；９５％ＣＩ，１．４１〜１２．７８；Ｐ＝０．０１０）が、ＣＫＤを患うネコの低マグネシウム血症と独立して関連していたことを示した（Ｎａｇｅｌｋｅｒｋｅ  Ｒ２，０．３０）。全身性高血圧を患うネコの下位群の血漿ｔＭｇの中央値は、正常血圧群の２．０９［１．９０，２．２９］ｍｇ／ｄＬと比較して、１．９７［１．６９，２．１４］ｍｇ／ｄＬであった（Ｐ＝０．００４）。高マグネシウム血症の症例数が比較的少なかったため、高マグネシウム血症についての多変量解析は行わなかった。
【０１５３】
【表２−１】
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【０１５４】
【表２−２】
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【０１５５】
【表３】
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【０１５６】
血漿総マグネシウムと血漿ＦＧＦ−２３及び他の臨床病理学的変数との関連
低マグネシウム血症のネコは、各ＩＲＩＳステージ内で正常マグネシウム血のネコよりも高いＦＧＦ−２３濃度を有していた（図５）。血漿クレアチニン及びリン酸塩の濃度は、マグネシウム群間で有意差はなかった。血漿ｔＭｇとｌｎ［ＦＧＦ２３］との間に相関は認められなかった（ｒ，−０．０６；Ｐ＝０．４２５）。しかしながら、血漿クレアチニンとリン酸を制御すると、血漿ｔＭｇとＦＧＦ−２３との間に有意な逆相関が生じた（部分ｒ，−０．５０；Ｐ＜０．００１）。一般的な線形モデルからの単変量及び多変量の結果が表４に示されている。線維芽細胞成長因子２３は、３つのＩＲＩＳステージのすべてにおいてマグネシウムの重要な独立した予測因子であり、ステージ４で最も強い効果があった。
【０１５７】
正常なリン酸血及び高リン血症のネコの下位群分析（各ステージの血漿リン酸塩のＩＲＩＳ標的に基づく）では、血漿ＦＧＦ−２３濃度は、血漿ｔＭｇの高いネコと比較して血漿ｔＭｇの低いネコで有意に高かった（図６）。ＩＲＩＳステージについて調整された一般線形モデルでは、ｌｎ［ＦＧＦ−２３］は正常なリン酸血のネコ（β，−０．１１；９５％ＣＩ，−０．１７〜−０．０５；Ｐ＝０．００１）及び高リン血症ネコ（β，−０．１７；９５％ＣＩ，−０．２４〜−０．１０；Ｐ＜０．００１）の両方で血漿ｔＭｇと負の関連があった。
【０１５８】
【表４−１】
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【０１５９】
【表４−２】
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【０１６０】
血漿総マグネシウムと生存との関連
２７０．４観察年（中央値，１．３［０．５，２．３］年）の合計追跡期間中に、１５０匹のネコが死亡し、２０匹が追跡不能となり、４匹が２０１６年７月１日以降生存していた。高窒素ＣＫＤの診断後の最初の１２か月における全死因死亡のリスクは、全集団で４３％（７２／１６７）、ベースラインで正常マグネシウム血のネコで３５％（４８／１３６）、低マグネシウム血症を患うネコで８０％（１６／２０）、高マグネシウム血症を患うネコで７３％（８／１１）であった。全死因死亡の発生率は、すべてのネコで観察年あたり０．５６、正常マグネシウム血症のネコで観察年あたり０．４８、ＣＫＤの診断で低マグネシウム血症を患うネコ及び高マグネシウム血症を患うネコで観察年あたり１．３４であった。
【０１６１】
３つのマグネシウムカテゴリのベースライン特性が表５に示されている。打ち切りは、正常マグネシウム血のネコで１６％（２３／１４３）、低マグネシウム血症のネコで５％（１／２０）発生し、高マグネシウム血症のネコではいずれも発生しなかった。打ち切りされた症例の割合は、マグネシウムのカテゴリ間で有意差はなかった（Ｐ＝０．２４０）。Ｃｏｘ回帰により、低マグネシウム血症と高マグネシウム血症が死亡リスクの増加と関連していることが示された（表５Ａ及び図７）。交絡因子の調整後、低マグネシウム血症は死亡率の独立した予測因子のままであった。最終回帰モデルに組み込まれたネコ（ｎ＝１１９）のベースライン特性と、情報の欠落により除外されたネコ（ｎ＝５５、データは示さず）のベースライン特性との間に統計的に有意な差は観察されなかった。
【０１６２】
十分に調整されたモデルで連続変数として扱われた血漿ｔＭｇは、血漿ｔＭｇ＜２．０７ｍｇ／ｄＬのネコの死亡率と逆相関していた（ＨＲ，０．０４；９５％ＣＩ，０．０１〜０．２７；Ｐ＝０．００１；ｎ＝５７；平均ｔＭｇ，１．８３ｍｇ／ｄＬ）。この関連は、ｔＭｇ≧２．０７ｍｇ／ｄＬのネコでは非線形であり、有意ではなかった（ＨＲ，０．６７；９５％ＣＩ，０．２４〜１．８５；Ｐ＝０．４３８；ｎ＝６５；平均ｔＭｇ，２．３７ｍｇ／ｄＬ）。しかしながら、最高四分位では、ｔＭｇは死亡率と有意に関連していた（ｔＭｇ≧２．２６ｍｇ／ｄＬ：ＨＲ，０．１２；９５％ＣＩ，０．０２〜０．７６；Ｐ＝０．０２５；ｎ＝３１，平均ｔＭｇ，２．６２ｍｇ／ｄＬ）。
【０１６３】
血漿マグネシウム濃度と、全死因死亡率に関連するリン酸塩状態との間の事前定義された相互作用を、単変量Ｃｏｘ比例ハザード分析で調査した。ＣＫＤの診断時にＩＲＩＳステージで高リン酸血症であったネコ（ｎ＝８５）は、正常なリン酸血のネコ（ｎ＝８９）と比較して、死亡リスクが増加した（ＨＲ，１．５７；９５％ＣＩ，１．１３〜２．１６；Ｐ＝０．００７）。しかしながら、血漿マグネシウム濃度を考慮に入れると、血漿マグネシウムが低い高リン酸血症のネコのみが、正常なリン酸血のネコ（ＮＰ−ＨＭ：ＨＲ，０．５３；９５％ＣＩ，０．３３〜０．８４；Ｐ＝０．００８、及びＮＰ−ＬＭ：ＨＲ，０．５１；９５％ＣＩ，０．３１〜０．８３；Ｐ＝０．００７）、及び、高血漿マグネシウムの高リン血症ネコ（ＨＰ−ＨＭ：ＨＲ，０．６０；９５％ＣＩ，０．３６〜０．９９；Ｐ＝０．０４３）と比較して死亡リスクが有意に増加した。曝露なしの結合参照カテゴリとしてのＮＰ−ＨＭ群と比較して、ＨＰ−ＬＭ群では相対過剰リスクが０．７９の相加性からの逸脱が観察され、マグネシウムとリン酸塩の相互作用が生存に関連していることが示唆された（表５Ｂ）。
【０１６４】
【表５−１】
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【０１６５】
【表５−２】
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【０１６６】
血漿総マグネシウムとＣＫＤの進行との関連
８１匹のネコは、進行解析に含めるのに利用可能な十分な追跡データを有しており、そのうち２９匹（３６％）は、診断の最初の１２ヶ月以内にＣＫＤの進行を示した。低マグネシウム血症のネコは、かなり高い割合で進行性のＣＫＤを有していた（表２）。低マグネシウム血症は、単変量ロジスティック回帰分析で進行性疾患のオッズの増加と関連していたが、マグネシウムの効果は追加変数の調整後に有意性を失った。最終回帰モデルでは、より高いベースライン血漿ＦＧＦ−２３のみが、依然として、進行性ＣＫＤのリスクに関連する有意な予測因子のままであった（Ｎａｇｅｌｋｅｒｋｅ  Ｒ２，０．２１；表６）。高リン血症のネコと正常なリン酸血のネコの間（Ｐ＝０．１９４）、又は４つのリン酸塩−マグネシウム群の間（Ｐ＝０．６２８）で、進行リスクの統計的に有意な差は認められなかった。したがって、進行性のＣＫＤに関連する血漿マグネシウムとリン酸塩の結合曝露の影響はさらに調査しなかった。
【０１６７】
【表６】
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【０１６８】
考察
観察コホートの結果は、高窒素ＣＫＤのネコにおける血漿ｔＭｇと血漿ＦＧＦ−２３濃度との間の逆相関を示している。低マグネシウム血症と全死因死亡のリスク増加との間に有意な独立した関連性が観察された。マグネシウムの状態と進行性ＣＫＤのリスクとの間の独立した関連性についての不十分な証拠が見つかった。追加の分析では、低マグネシウム血症と全身性高血圧との関連の可能性が確認され、高リン酸血症に関連する死亡のリスクは、血漿ｔＭｇの上昇により緩和されるように思われた。
【０１６９】
この研究で見つかったＣＫＤのさまざまなステージにわたるマグネシウム障害の分布は、少数のネコで以前に報告されたものと同等であった３。高マグネシウム血症は、腎臓が十分なマグネシウムを濾過できないために起こると考えられており３５，３６、重度の腎機能障害を患うネコのほとんどに見られた。ＣＫＤにおける低マグネシウム血症は、腸吸収の障害又はマグネシウムの腎排泄の増加に続発すると考えられ、骨及び筋肉の蓄えが枯渇する３５，３７−３９。尿中マグネシウムの排泄は、低マグネシウム血症のネコでより高く見えたが、これは、腎マグネシウムの消耗が根本的な原因であることを示唆している可能性がある３９，４０。しかしながら、これは少数の観察に基づいており、マグネシウムのＦＥを評価するために用いられるスポットサンプル法はネコにおける精度に欠けている４１。
【０１７０】
低マグネシウム血症は全身性高血圧と独立して関連していた。マグネシウムは、細胞内カルシウム濃度の調節、一酸化窒素の産生、及び血管の石灰化などのさまざまな機構を介して、血管抵抗に積極的な役割を果たす４２−５１。マグネシウムと血圧との関係は、人間の医学ではよく知られており３９，５２−５７、イヌへのマグネシウム注入は血管抵抗とＳＢＰの低減をもたらした５８。高アルドステロン症は、全身性高血圧の高窒素血症ネコで一般に観察され５９，６０、アルドステロンは尿中マグネシウム排泄を刺激するが６１，６２、マグネシウムはアルドステロンの放出を阻害するため、低マグネシウム血症と高血圧との間のリ可能なリンクである可能性がある６３，６４。この研究に含まれるネコの血漿アルドステロン濃度に関する情報は入手できなかった。低カリウム血症及び低カルシウム血症は、ネコ、イヌ、及びヒトのマグネシウム欠乏と関連していたが９８、コホートでの一般的な同時所見ではなかった。
【０１７１】
血漿ｔＭｇとＦＧＦ−２３との逆相関は、ＣＫＤを患うネコの集団に見出されたが、これは、血液透析中のヒトＣＫＤ患者で以前に特定されていた６９。げっ歯類研究の結果は、血漿ＦＧＦ−２３濃度が食事によるマグネシウム摂取による影響を受け３０，３１，７０、マグネシウム含有緩下剤又はリン酸塩結合剤の投与を受けた血液透析患者は、ＰＯマグネシウムの投与を受けていない患者よりも血清ＦＧＦ−２３濃度が低かったことを示唆している６９，７１。他方では、ヒトＣＫＤのステージ３及び４の患者の血清石灰化傾向に対する経口マグネシウム補給の効果を調べる研究において、ＦＧＦ−２３濃度の有意な低下は報告されていない７２。マグネシウムとＦＧＦ−２３の関係の根底にある機構は依然として解明されていないが、尿細管のリン酸塩７３，７４、カルシウム７５、及びナトリウム７６の再吸収を調節することが示されていることから、ＦＧＦ−２３が腎マグネシウムの対処に影響を与えると仮定することができよう。アルドステロンは骨芽細胞によるＦＧＦ−２３の発現を刺激するため７７、低マグネシウム血症の原因としての、又は低マグネシウム血症に続発する、高アルドステロン症は、おそらくは、より高い循環ＦＧＦ−２３に寄与する可能性がある。
【０１７２】
高窒素ＣＫＤの診断時の低マグネシウム血症は、ネコの死亡率の独立した予測因子であった。低マグネシウム血症と高マグネシウム血症の両方が集中治療室に入院したネコの生存率の低下と関連していたが７８、マグネシウム状態の影響を評価した、ＣＫＤを患うネコの生存研究は以前にはなかった５−７。ヒトＣＫＤ患者の複数の観察研究は、血液透析患者２５，２８と非透析依存ＣＫＤ患者２４，２６の両方で、低マグネシウム血症と死亡率の増加との関連性を報告している。さらには、高リン血症に関連する死亡リスクは、血液透析患者の血清マグネシウム濃度によって変化するように見える２７。高リン血症はネコＣＫＤでよく知られている危険因子であり６，７、結果は、マグネシウムが高いとネの高リン血症に関連する死亡のリスクが軽減されることを示唆している。ＣＫＤを患うネコの軟組織と血管石灰化に関するわずかな報告のみが存在するが２，７９，８０、考えられる説明としては、リン酸塩誘発性の血管石灰化に対するマグネシウムの抑制的役割でありうる２１。加えて、リン酸塩とマグネシウムの両方が血漿ＦＧＦ−２３に影響を与え、これは、ＣＫＤを患うネコの重要な予後因子として特定されているが５、ここに示す分析では生存の有意な予測因子ではなかった。ベースラインＦＧＦ−２３は、ＣＫＤを患うヒトの上記の生存モデルには含まれていなかった。ネコの高マグネシウム血症に関連した高い死亡リスクは、追加の変数の調整後に失われたが、これは、おそらくは終末期ＣＫＤにおける優位性によって引き起こされた。しかしながら、この結果は少数の観測に基づいているため、９５％信頼区間が広くなっていることに留意する必要がある。
【０１７３】
低マグネシウム血症はネコの高窒素血症の進行の危険因子だったが２４、ヒトと同様に、多変量解析では関連性が失われた。さらには、マグネシウムは、マウス近位尿細管細胞へのリン酸塩誘発性損傷２３、及びヒトＣＫＤ患者の高リン血症に関連する腎機能低下の程度を抑制することが示されている２３。高リン血症と腎線維症の関係はＣＫＤを患うネコではよく知られているが８，８１−８３、本研究では、高リン血症が進行に及ぼす効果の証拠も、高窒素血症の進行に関連するマグネシウムとリン酸塩の相互作用も見られなかった。追跡期間が短い場合、血漿クレアチニンの漸進的な増加を示すことはより困難であることから、これらの分析は、マグネシウム障害を患うネコの短い生存期間の影響を受けた可能性がある。
【０１７４】
ネコのコホートへの登録後に血漿ｔＭｇを測定したため、選択プロセスは対象とする曝露に対して盲検化した。しかしながら、血漿ＦＧＦ−２３に関する情報を有するネコのみが選択された。この潜在的なバイアスの原因には、含まれているネコと情報が欠落しているために除外されたネコのベースラインデータを比較することによって対処した。これらの頻度は所与の時間間隔ではなく単一の時点で評価されたため、低マグネシウム血症と高マグネシウム血症の有病率は過小評価された可能性があるが、これらの障害を患っているネコは死亡のリスクがより高くなるという特徴があった。
【０１７５】
進行及び生存に対する低マグネシウム血症と高マグネシウム血症の真の影響は、誤分類バイアスを原因として過小評価された可能性がある。第一に、単一のベースライン測定に基づいた異なるマグネシウムカテゴリにあるネコをグループ化することにより、回帰希釈バイアスが導入された可能性がある。ベースラインのマグネシウム濃度は、ＣＫＤの過程で低マグネシウム血症を発症するヒト患者では低くなるが２４、ＣＫＤを患うネコの血漿マグネシウムがどのように経時変化するかは不明である。第二に、ｔＭｇは、イオン化、タンパク質結合、及び複合マグネシウムの３つの画分で構成されている１９。イオン化マグネシウムの状態は、ネコ腎移植レシピエント及び糖尿病を患うネコのｔＭｇによって過大評価されており６５，８４、したがって、イオン化低マグネシウム血症を患うネコは正常マグネシウム血のカテゴリに含まれている可能性があり、これは、低マグネシウムで観察された効果がｔＭｇ状態ではなくイオン化によるものである場合に、系統的でない誤分類を導入してしまうであろう。しかしながら、体内マグネシウムのわずか１％しか細胞外液には存在せず、ｔＭｇの測定又は生物学的に活性なイオン化マグネシウムの測定がマグネシウムの状態を最もよく表すかどうかに関するコンセンサスは存在しておらず、これらの方法間ではよい一致は得られていない３５，３９，８５。多変量解析を行ったが、残留交絡の可能性を排除することはできず、ビタミンＤ代謝産物、血液ガス、骨パラメータ、及び血漿アルドステロン濃度に関する不完全な情報によって、マグネシウムとこれらの変数との関係の調査が妨げられた。
【０１７６】
この研究では、低い血漿総マグネシウムが、より高い血漿ＦＧＦ−２３濃度に関連し、ネコＣＫＤの生存率を低下させることが確認されたが、これは、ｔＭｇとＦＧＦ−２３との関係及びＣＫＤを患うヒトの生存率を調査した研究の結果と一致している２４，２６，２８，６９，７１。これらの観察結果は、自然発生的なＣＫＤを用いた一次診療からの顧客が飼っているネコに対して行われたものであり、他のペットネコ集団に関連するはずである。しかしながら、ネコの比較的小さなコホートで複数の観察が行われたため、結果は、ネコの異なる集団での他の研究による検証を必要とする。血漿ｔＭｇの連続測定により、この研究で検討した関連性の縦断的分析が可能になり、特に血漿マグネシウムと高窒素血症の進行との関係の評価に有益であると思われる。この分析物は予後情報を追加し、骨ミネラル代謝異常が著しいネコを特定するのに役立つことから、この知見は、ＣＫＤを患うネコで評価される通常の血漿生化学パネルに血漿マグネシウムを追加すべきであることを示唆している。
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【０１７７】
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【０１７８】
本開示の主題及びその利点を詳細に説明してきたが、添付の特許請求の範囲によって定義される本発明の精神及び範囲から逸脱することなく、本明細書にさまざまな変更、置換、及び修正を行うことができることが理解されるべきである。さらには、本出願の範囲は、本明細書に記載されるプロセス、機械、製造、物質の組成、手段、方法、及びステップの特定の実施態様に制限されることは意図されていない。本開示の主題、プロセス、機械、製造、物質の組成、手段、方法、又はステップの開示から、当業者が容易に認識するように、本明細書に記載される対応する実施形態と実質的に同じ機能を実行するか又は実質的に同じ結果を達成する、既存のもの又は今後開発されるものは、本開示の主題に従って利用することができる。したがって、添付の特許請求の範囲は、そのようなプロセス、機械、製造、物質の組成、手段、方法、又はステップをその範囲内に含むことを意図している。
【０１７９】
特許、特許出願、刊行物、製品説明、及びプロトコルは、本出願全体を通して引用されており、その開示は、あらゆる目的のために参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。
【図１】
2020522463.tif 000012
【図２Ａ】
2020522463.tif 000013
【図２Ｂ】
2020522463.tif 000014
【図２Ｃ】
2020522463.tif 000015
【図３Ａ】
2020522463.tif 000016
【図３Ｂ】
2020522463.tif 000017
【図３Ｃ】
2020522463.tif 000018
【図３Ｄ】
2020522463.tif 000019
【図３Ｅ】
2020522463.tif 000020
【図３Ｆ】
2020522463.tif 000021
【図３Ｇ】
2020522463.tif 000022
【図３Ｈ】
2020522463.tif 000023
【図３Ｉ】
2020522463.tif 000024
【図４】
2020522463.tif 000025
【図５】
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【図６】
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【図７】
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【国際調査報告】
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