(57)【要約】  ＣＡＲ導入免疫細胞並びに少なくとも１種類のレチノイド活性剤及び／又はレキシノイド活性剤を投与することを含む、がんを処置する方法が開示される。【選択図】図１
2020526551.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
がん免疫治療を必要とする対象にキメラ抗原受容体導入免疫細胞（ＣＡＲ−ＭＩＣ）と、免疫調節性レチノイド活性剤及び／又はレキシノイド活性剤（ＲＡＲ／ＲＸＲ活性剤）と、分化誘導性ＲＡＲ活性剤とを投与することを含む、がん免疫治療法。
【請求項２】
前記免疫調節性ＲＡＲ／ＲＸＲ活性剤はレチノイン酸受容体（ＲＡＲ）活性剤を含む、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記免疫調節性ＲＡＲ／ＲＸＲ活性剤はレチノイドＸ受容体（ＲＸＲ）活性剤を含む、請求項１に記載の方法。
【請求項４】
前記免疫調節性ＲＡＲ活性剤はＲＡＲαアンタゴニストである、請求項２に記載の方法。
【請求項５】
２つの免疫調節性ＲＡＲ活性剤を投与することを含む、請求項１に記載の方法。
【請求項６】
第１の免疫調節性ＲＡＲ活性剤はＲＡＲα選択的アンタゴニストであり、第２の免疫調節性ＲＡＲ活性剤はＲＡＲγアゴニストである、又は、第１の免疫調節性ＲＡＲ活性剤はＲＡＲαアンタゴニストであり、第２の免疫調節性ＲＡＲ活性剤はＲＡＲγ選択的アゴニストである、請求項５に記載の方法。
【請求項７】
前記ＲＡＲαアンタゴニストは下記の一般式（Ｉ）の化合物である、請求項４に記載の方法。
【化１】
2020526551.tif 000097
（ただし、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、及びＲ６は、独立して、Ｈ又はＣ１−６アルキルであり、Ｒ４及びＲ５は、独立して、Ｈ又はＦであり、Ａｒは、フェニル、ピリジル、チエニル、フリル、又はナフチルであり、Ｘは、Ｃ（ＣＨ３）２、Ｏ、Ｓ、又はＮＲ７（ただし、Ｒ７は、Ｈ又はＣ１−６アルキルである。）であり、Ｘ１は、Ｈ又はハロゲン（Ｆ、Ｃｌ又はＢｒなど）であり、Ｒ８は、Ｈ又はＯＨである。）
【請求項８】
前記ＲＡＲαアンタゴニストは、
【化２】
2020526551.tif 000098
【化３】
2020526551.tif 000099
又は、
【化４】
2020526551.tif 000100
である、請求項７に記載の方法。
【請求項９】
前記ＲＡＲαアンタゴニストは下記の一般式（ＩＩ）の化合物である、請求項４に記載の方法。
【化５】
2020526551.tif 000101
（ただし、Ｒ１及びＲ２は、独立して、Ｃ１−６アルキルであり、Ｘは、Ｏ、Ｓ、又はＣＨ２であり、Ｙは、Ｏ、Ｓ、ＣＨ２、又はＮＲ３（ただし、Ｒ３はＣ１−６アルキルである。）であり、Ｚは、Ｃｌ又はＢｒであり、Ｗは、Ｈ又はＯＨであり、Ｕは、独立して、Ｈ又はＦである。）
【請求項１０】
前記ＲＡＲαアンタゴニストは、
【化６】
2020526551.tif 000102
である、請求項９に記載の方法。
【請求項１１】
前記ＲＡＲαアンタゴニストは下記の一般式（ＩＩＩ）の化合物である、請求項４に記載の方法。
【化７】
2020526551.tif 000103
（ただし、Ｒ１及びＲ２は、独立して、Ｈ又はＣ１−６アルキルであり、Ｒ３は、Ｈ又はＦであり、Ａｒは、フェニル、ピリジル、チエニル、フリル、又はナフチルであり、Ｘは、Ｏ、Ｓ、Ｎ、又はＣＨ２であり、Ｗは、Ｈ又はＯＨであり、Ｚは、Ｃｌ又はＢｒである。）
【請求項１２】
前記ＲＡＲαアンタゴニストは、
【化８】
2020526551.tif 000104
である、請求項４に記載の方法。
【請求項１３】
前記ＲＡＲαアンタゴニストは、ＢＭＳ１８５４１１、ＢＭＳ６１４、Ｒｏ４１−５２５３、又はＲｏ４６−５４７１である、請求項４に記載の方法。
【請求項１４】
前記免疫調節性ＲＡＲ活性剤はＲＡＲγアゴニストである、請求項２に記載の方法。
【請求項１５】
前記ＲＡＲγアゴニストは、
【化９】
2020526551.tif 000105
【化１０】
2020526551.tif 000106
【化１１】
2020526551.tif 000107
又は、
【化１２】
2020526551.tif 000108
である、請求項１４に記載の方法。
【請求項１６】
前記免疫調節性ＲＡＲアゴニストは下記の一般式（ＩＶ）のＲＡＲγ選択的アゴニストである、請求項１４に記載の方法。
【化１３】
2020526551.tif 000109
（ただし、Ｒ１及びＲ２は、独立して、Ｈ又はＣ１−６アルキルであり、Ｒ３は、Ｈ又はＦであり、Ｘは、Ｏ、Ｓ、ＣＨ２、Ｃ（Ｒ４）２、又はＮＲ５（ただし、Ｒ４及びＲ５は、独立して、Ｈ又はＣ１−６アルキルである。）である。）
【請求項１７】
前記ＲＡＲアゴニストは、ＣＤ４３７、ＣＤ２３２５、ＣＤ６６６、及びＢＭＳ９６１から選択されるＲＡＲγ選択的アゴニストである、請求項１４に記載の方法。
【請求項１８】
前記免疫調節性ＲＸＲ活性剤はＲＸＲアンタゴニストである、請求項３に記載の方法。
【請求項１９】
前記ＲＸＲアンタゴニストは、
【化１４】
2020526551.tif 000110
【化１５】
2020526551.tif 000111
【化１６】
2020526551.tif 000112
【化１７】
2020526551.tif 000113
又は、
【化１８】
2020526551.tif 000114
から選択される、請求項１８に記載の方法。
【請求項２０】
前記ＲＸＲアンタゴニストは、ＡＧＮ１９５３９３又はＬＧＮ１００８４９である、請求項１８に記載の方法。
【請求項２１】
前記分化誘導性ＲＡＲ活性剤はＲＡＲαアゴニストである、請求項１に記載の方法。
【請求項２２】
前記ＲＡＲαアゴニストは下記の一般式（Ｖ）の化合物である、請求項２１に記載の方法。
【化１９】
2020526551.tif 000115
（ただし、Ｒ１は、Ｈ又はＣ１−６アルキルであり、Ｒ２及びＲ３は、独立して、Ｈ又はＦであり、Ｒ４は、ハロゲンである。）
【請求項２３】
前記ＲＡＲαアゴニストは下記の一般式（ＶＩ）の化合物である、請求項２２に記載の方法。
【化２０】
2020526551.tif 000116
（ただし、Ｒ１は、Ｈ又はＣ１−６アルキルである。）
【請求項２４】
前記ＲＡＲαアゴニストは下記の一般式（ＶＩＩ）の化合物である、請求項２３に記載の方法。
【化２１】
2020526551.tif 000117
【請求項２５】
少なくとも１種類のがん化学治療剤を追加で投与することを含む、請求項１に記載の方法。
【請求項２６】
前記対象に少なくとも１種類の免疫チェックポイント阻害剤を投与することをさらに含む、請求項１に記載の方法。
【請求項２７】
前記免疫チェックポイント阻害剤は、ＣＴＬＡ−４、ＰＤ−１、ＴＩＭ−３、ＬＡＧ−３、ＰＤ−Ｌ１リガンド、Ｂ７−Ｈ３、Ｂ７−Ｈ４、ＢＴＬＡの少なくとも１種類の阻害剤である、又は、ＩＣＯＳ若しくはＯＸ４０アゴニストである、請求項２６に記載の方法。
【請求項２８】
前記免疫チェックポイント阻害剤は、ＣＴＬＡ−４、ＰＤ−１、ＴＩＭ−３、ＬＡＧ−３、ＰＤ−Ｌ１リガンド、Ｂ７−Ｈ３、Ｂ７−Ｈ４、ＢＴＬＡ、ＩＣＯＳ、又はＯＸ４０の少なくとも１種類に対して特異的な抗体である、請求項２６に記載の方法。
【請求項２９】
ＣＡＲ導入免疫細胞と、免疫調節性ＲＡＲ／ＲＸＲ活性剤と、分化誘導性ＲＡＲ活性剤とを投与することを含む、がん患者の無病生存を延ばす方法。
【請求項３０】
ＣＡＲ導入免疫細胞の毒性を減らす方法であって、それを必要とする患者に、併せた結果、前記ＣＡＲ導入免疫細胞を単独で投与する場合と比べより低い用量の前記ＣＡＲ導入免疫細胞がより高い安全性及び同じ効力で投与されるように、又は、より高い用量の前記ＣＡＲ導入免疫細胞をより高い効力且つ同じ安全性で投与することができるように、前記ＣＡＲ導入免疫細胞と併せて、免疫調節性ＲＡＲ／ＲＸＲ活性剤及び分化誘導性ＲＡＲ活性剤を投与することを含む、方法。
【請求項３１】
ＣＡＲ−ＭＩＣを受けている、受けた、又は受ける予定のがん患者に、免疫調節性ＲＡＲ／ＲＸＲ活性剤及び分化誘導性ＲＡＲ活性剤を投与することを含む、ＣＡＲ−ＭＩＣがん免疫治療法を増強する方法。
【請求項３２】
がんの処置を必要とする対象に、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）導入免疫細胞、免疫調節性ＲＡＲ／ＲＸＲ活性剤、分化誘導性ＲＡＲ活性剤、並びに、少なくとも１種類の免疫チェックポイント阻害剤を投与することを含む、がんを処置する方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
（関連出願）
本出願は、２０１７年７月１３日に出願の米国仮特許出願第６２／５３２，２３３号及び２０１７年８月３１日に出願の米国仮特許出願第６２／５５２，８１４号の利益を主張するものである。これらの出願の全内容を参照により本明細書で援用する。
【背景技術】
【０００２】
長年にわたり、がん処置の拠り所は、外科手術、化学治療法、及び放射線治療法であった。また、ここ１０年では、がん細胞で主にみられる特定の分子的変化に狙いを定めそれらの細胞を標的とする薬物である標的治療法も数々のがんの標準的処置法として浮上してきている。免疫治療法のひとつの手法として腫瘍を認識し攻撃する免疫細胞の設計が挙げられる。
【０００３】
正常造血幹細胞（ＨＳＣ）は、レチノイド（レチノイン酸受容体又はＲＡＲに特異的な化合物）への高い感受性を有する状態ではあるが、それらを生理学的レベルのレチノイドから隔離することによりレチノイドシグナル伝達ナイーブ状態に維持される。骨髄微小環境は、ＣＹＰ２６酵素によりレチノイン酸を代謝的に不活性化し、レチノイドへの骨髄の暴露を制御する。この機構（ＣＹＰ２６媒介レチノイド代謝）は、ダイナミックであり、ＨＳＣ挙動を生理学的要求に合わせるために骨髄間質により使用される。例えば、骨髄ニッチ内のレチノイドの定常状態低レベルはＨＳＣを休止状態に維持し、一方、ストレス状況（例えば、放射線又は化学療法への暴露）の間は、ＨＳＣを補充して細胞分裂させ血液生成を取り戻すために、より高いレチノイドレベルが維持される。
【０００４】
血液悪性腫瘍を有する対象では、がんＨＳＣは、正常状態と同じ様式で、間質ＣＹＰ２６によりレチノイドから守られている。しかし、アルデヒドデヒドロゲナーゼ（ＡＬＤＨ）活性における差などの血液悪性腫瘍における骨髄ニッチでの他の変化のために、レチノイドを血液悪性腫瘍の処置に役立てる治療ウィンドウが存在する。骨髄微小環境によるＣＹＰ２６の発現は全トランス型レチノイン酸（ＡＴＲＡ）からの未成熟急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）細胞の防御に寄与し、ＡＴＲＡがＡＭＬ処置に有効ではない理由を説明し得る。薬理学的濃度のＡＴＲＡの暴露は、レチノイン酸受容体γ（ＲＡＲγ）を介して働き、骨髄微小環境でのＣＹＰ２６発現を誘導し、これにより、骨髄微小環境内のがん幹細胞をレチノイド活性から守る。また、この機構は、骨髄内の非造血転移性腫瘍細胞を保護する。しかし、ＣＹＰ２６により不活性化されないレチノイドアナログの使用は、こうしたレチノイドが、防御骨髄ニッチからがんＨＳＣを最終分化させ、ひいては、取り除くことを可能とする。こうした分化はＲＡＲαにより媒介されるため、ＣＹＰ２６耐性であるＲＡＲα特異的アナログの使用はＣＹＰ２６酵素による不活性化をともなわず治療的分化誘導活性を可能とする。
【０００５】
他種のレチノイド及びレキシノイド（レチノイドＸ受容体又はＲＸＲに特異的な化合物）は、標的免疫療法を増幅し増強するのに活かされ得る免疫調節活性を有する。
【０００６】
従って、がん幹細胞の分化を誘導するためのＲＡＲアゴニストの、標的免疫療法の、及び、標的免疫療法を増強するためのＲＡＲ／ＲＸＲ活性剤の、併用は、がん処置に特に役立ち得る。
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【０００７】
標的がん免疫治療剤を増強するための化合物が本明細書に開示される。レチノイン酸受容体（ＲＡＲ）及びレチノイドＸ受容体（ＲＸＲ）に作用する化合物が、がん幹細胞の既存負荷を減らし且つ抗がん活性を増強するためにキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）導入免疫細胞（場合によっては、ＣＡＲ−ＭＩＣと略記する）と併せて用いられる。
【０００８】
レチノイド及びレキシノイドは多様な活性を有する。特定のレチノイドは、がん幹細胞を最終分化させることに基づく抗がん効果を有する。こうした分化誘導性レチノイドは、本願明細書が優先権を主張する米国仮特許出願第６２／５５２，８１４号に記載のように、免疫療法の全体の有効性を増加するために、ＣＡＲ−ＭＩＣと併せて使用できる。別の特定のレチノイド及びレキシノイドは、Ｔｒｅｇ細胞の下方制御又はＴｈ１７細胞の上方制御に例えば使用できる免疫調節活性を有する。また、こうした免疫調節性レチノイド及びレキシノイドは、本出願が優先権を主張する米国仮特許出願第６２／５５２，２３３号及び本出願と同日に出願された米国特許出願第    ／＿＿＿，＿＿＿号（Ａｔｔｙ  ｄｏｃｋｅｔ  Ｎｏ．  １９５８４８１．０００９０）（この出願の全体を参照により本明細書で援用する）に記載のように、免疫療法の全体の有効性を増加するために、ＣＡＲ−ＭＩＣと併せても使用できる。ＣＡＲ−ＭＩＣと分化誘導性レチノイドとの併用、及び、ＣＡＲ−ＭＩＣと免疫調節性レチノイド及びレキシノイドとの併用は、それぞれ独立して役立つが、これらの手法を統合することへのさらなる利点が存在する。従って、がん免疫療法における、分化誘導性レチノイド、免疫調節性レチノイド及び／又はレチノイド、及びＣＡＲ−ＭＩＣの使用に関して、統合された方法及び付随する組成物が、本明細書に開示される。
【０００９】
いくつかの実施形態では、ＣＡＲ導入免疫細胞はＣＡＲ導入Ｔ細胞である又はそれを含む。いくつかの実施形態では、ＣＡＲ導入免疫細胞はＣＡＲ導入ＮＫ細胞である又はそれを含む。いくつかの実施形態では、ＣＡＲ導入免疫細胞はＣＡＲ導入ＮＫＴ細胞である又はそれを含む。いくつかの実施形態では、ＣＡＲ導入免疫細胞はＣＡＲ導入貪食細胞である又はそれを含む。さらなる実施形態は、これらの細胞種の混合物を含み得る。最も典型的には、これらの細胞製剤は、例えば静脈内注入などの注入により投与される。対照的に、レチノイド及びレキソタンは、例えば丸剤やカプセル剤などとして経口で投与できる小分子である。従って、レチノイド及びレキシノイド並びにＣＡＲ導入免疫細胞は独立したスケジュールで投与されてもよい。
【００１０】
（免疫調節性レチノイド及びレキシノイドとＣＡＲ−ＭＩＣとの併用）
従って、一態様では、本明細書は、ＣＡＲ導入免疫細胞並びに少なくとも１種類のレチノイド活性剤及び／又はレキシノイド活性剤（まとめてＲＡＲ／ＲＸＲ活性剤と呼ぶ）を投与することを含むがんを処置する方法を提供する。いくつかの実施形態では、レチノイド活性剤はレチノイン酸受容体（ＲＡＲ）活性剤である。いくつかの実施形態では、レキシノイド活性剤はレチノイドＸ受容体（ＲＸＲ）活性剤である。いくつかの実施形態では、２種類のＲＡＲ／ＲＸＲ活性剤が用いられ、これらは、２種類のＲＡＲ活性剤でもよいし、２種類のＲＸＲ活性剤でもよいし、又は、１種類のＲＡＲ活性剤と１種類のＲＸＲ活性剤とでもよい。いくつかの実施形態では、ＲＡＲ／ＲＸＲ活性剤はその受容体のアゴニストとして作用し、一方、別の実施形態では、ＲＡＲ／ＲＸＲ活性剤はその受容体のアンタゴニストとして作用する。複数種のＲＡＲ／ＲＸＲ活性剤を利用するいくつかの実施形態では、複数種のＲＡＲ／ＲＸＲ活性剤は個別に製剤化及び投与される。これらの実施形態のいくつかの態様では、ＲＡＲ／ＲＸＲ活性剤は個別にではあるが同じ処置セッション中に投与される。これらの実施形態の別の態様では、ＲＡＲ／ＲＸＲ活性剤は異なる処置セッションで投与される。別の実施形態では、複数種のＲＡＲ／ＲＸＲ活性剤は、個別に製剤化されるものの、共投与される（すなわち、同じ処置セッション中に投与される）。さらに別の実施形態では、複数種のＲＡＲ／ＲＸＲ活性剤は単一の普通薬としてまとめて製剤化される。
【００１１】
いくつかの実施形態では、レチノイド活性剤はＲＡＲαアンタゴニストである。いくつかの実施形態では、ＲＡＲαアンタゴニストは下記の一般式（Ｉ）の化合物である。
【化１】
2020526551.tif 000003
（ただし、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、及びＲ６は、独立して、Ｈ又はＣ１−６アルキルであり、Ｒ４及びＲ５は、独立して、Ｈ又はＦであり、Ａｒは、フェニル、ピリジル、チエニル、フリル、又はナフチルであり、Ｘは、Ｃ（ＣＨ３）２、Ｏ、Ｓ、又はＮＲ７（ただし、Ｒ７は、Ｈ又はＣ１−６アルキルである。）であり、Ｘ１は、Ｈ又はハロゲン（Ｆ、Ｃｌ又はＢｒなど）であり、Ｒ８は、Ｈ又はＯＨである。）
【００１２】
いくつかの実施形態では、ＲＡＲαアンタゴニストは、ＡＧＮ１９４３０１、ＡＧＮ１９３４９１、ＡＧＮ１９３６１８、ＡＧＮ１９４２０２、又はＡＧＮ１９４５７４である。
【００１３】
いくつかの実施形態では、ＲＡＲαアンタゴニストは下記の一般式（ＩＩ）の化合物である。
【化２】
2020526551.tif 000004
（ただし、Ｒ１及びＲ２は、独立して、Ｃ１−６アルキルであり、Ｘは、Ｏ、Ｓ、又はＣＨ２であり、Ｙは、Ｏ、Ｓ、ＣＨ２、又はＮＲ３（ただし、Ｒ３はＣ１−６アルキルである。）であり、Ｚは、Ｃｌ又はＢｒであり、Ｗは、Ｈ又はＯＨであり、Ｕは、独立して、Ｈ又はＦである。）
いくつかの実施形態では、ＲＡＲαアンタゴニストは、
【化３】
2020526551.tif 000005
である。
【００１４】
いくつかの実施形態では、ＲＡＲαアンタゴニストは下記の一般式（ＩＩＩ）の化合物である。
【化４】
2020526551.tif 000006
（ただし、Ｒ１及びＲ２は、独立して、Ｈ又はＣ１−６アルキルであり、Ｒ３は、Ｈ又はＦであり、Ａｒは、フェニル、ピリジル、チエニル、フリル、又はナフチルであり、Ｘは、Ｏ、Ｓ、Ｎ、又はＣＨ２であり、Ｗは、Ｈ又はＯＨであり、Ｚは、Ｃｌ又はＢｒである。）
【００１５】
いくつかの実施形態では、ＲＡＲαアンタゴニストは、
【化５】
2020526551.tif 000007
である。
【００１６】
いくつかの実施形態では、ＲＡＲαアンタゴニストは、
【化６】
2020526551.tif 000008
【化７】
2020526551.tif 000009
【化８】
2020526551.tif 000010
又は、
【化９】
2020526551.tif 000011
である。
【００１７】
いくつかの実施形態では、レチノイド活性剤はＲＡＲγアゴニストである。いくつかの実施形態では、ＲＡＲγアゴニストは、
【化１０】
2020526551.tif 000012
【化１１】
2020526551.tif 000013
【化１２】
2020526551.tif 000014
又は、
【化１３】
2020526551.tif 000015
である。
【００１８】
いくつかの実施形態では、ＲＡＲγアゴニストは下記の一般式（ＩＶ）のＲＡＲγ選択的アゴニストである。
【化１４】
2020526551.tif 000016
（ただし、Ｒ１及びＲ２は、独立して、Ｈ又はＣ１−６アルキルであり、Ｒ３は、Ｈ又はＦであり、Ｘは、Ｏ、Ｓ、ＣＨ２、Ｃ（Ｒ４）２、又はＮＲ５（ただし、Ｒ４及びＲ５は、独立して、Ｈ又はＣ１−６アルキルである。）である。）
【００１９】
いくつかの実施形態では、ＲＡＲγアゴニストは、
【化１５】
2020526551.tif 000017
【化１６】
2020526551.tif 000018
【化１７】
2020526551.tif 000019
及び、
【化１８】
2020526551.tif 000020
から選択されるＲＡＲγ選択的アゴニストである。
【００２０】
いくつかの実施形態では、レチノイド活性剤はＲＸＲアンタゴニストである。いくつかの実施形態では、ＲＸＲアンタゴニストは、
【化１９】
2020526551.tif 000021
【化２０】
2020526551.tif 000022
【化２１】
2020526551.tif 000023
【化２２】
2020526551.tif 000024
又は、
【化２３】
2020526551.tif 000025
である。
【００２１】
いくつかの実施形態では、ＲＸＲアンタゴニストはＡＧＮ１９５３９３又はＬＧＮ１００８４９である。
【００２２】
（分化誘導性レチノイドとＣＡＲ−ＭＩＣとの併用）
こうした併用は、ＲＡＲαアゴニストを利用する。いくつかの実施形態では、ＲＡＲαアゴニストは、
【化２４】
2020526551.tif 000026
である。
【００２３】
別の実施形態では、ＲＡＲαアゴニストは、タミバロテン（ＡＭ８０）、ＡＭ５８０、又はＲｅ８０である。
【化２５】
2020526551.tif 000027
【化２６】
2020526551.tif 000028
【化２７】
2020526551.tif 000029
別の実施形態はこれらのＲＡＲαアゴニストの１種類以上を特に除外する。
【００２４】
いくつかの実施形態では、がんは、急性骨髄性白血病又は多発性骨髄腫などの血液悪性腫瘍である。いくつかの実施形態では、がんは固形腫瘍である。
【００２５】
いくつかの実施形態では、本方法は少なくとも１種類のがん化学治療剤を追加で投与することを含む。
【００２６】
いくつかの実施形態では、本方法は少なくとも２種類のレチノイド活性剤を投与することを含む。いくつかの実施形態では、２種類のレチノイド活性剤はＲＡＲαアンタゴニストとＲＡＲγアゴニストとである。
【００２７】
いくつかの実施形態では、本方法は対象に少なくとも１種類の免疫チェックポイント阻害剤を投与することをさらに含む。いくつかの実施形態では、免疫チェックポイント阻害剤は、ＣＴＬＡ−４、ＰＤ−１、ＴＩＭ−３、ＬＡＧ−３、ＰＤ−Ｌ１リガンド、Ｂ７−Ｈ３、Ｂ７−Ｈ４、ＢＴＬＡの少なくとも１種類の阻害剤である、又は、ＩＣＯＳ若しくはＯＸ４０アゴニストである。いくつかの実施形態では、免疫チェックポイント阻害剤は、ＣＴＬＡ−４、ＰＤ−１、ＴＩＭ−３、ＬＡＧ−３、ＰＤ−Ｌ１リガンド、Ｂ７−Ｈ３、Ｂ７−Ｈ４、ＢＴＬＡ、ＩＣＯＳ、又はＯＸ４０の少なくとも１種類に対して特異的な抗体である。
【００２８】
また、ＣＡＲ導入免疫細胞並びに少なくとも１種類のレチノイド活性剤及び／又はレキシノイド活性剤を投与することを含む、がん患者の無病生存を延ばす方法も本明細書に開示される。
【００２９】
また、ＣＡＲ導入免疫細胞の毒性を減らす方法であって、それを必要とする対象に、併せた結果、ＣＡＲ導入免疫細胞を単独で投与する場合と比べより低い用量のＣＡＲ導入免疫細胞がより高い安全性且つ同じ効力で投与されるように（又は、より高い用量のＣＡＲ導入免疫細胞をより高い効力且つ同じ安全性で投与することができるように）、ＣＡＲ導入免疫細胞と併せて、少なくとも１種類のレチノイド活性剤及び／又はレキシノイド活性剤を投与することを含む、方法も本明細書に開示される。
【００３０】
また、少なくとも１種類のレチノイド活性剤及び／又はレキシノイド活性剤を含む培養培地中でＣＡＲ導入免疫細胞を培養することを含む、ＣＡＲ導入免疫細胞の数を増やす方法も本明細書に開示される。いくつかの実施形態では、これは患者への（１種類又は複数種類の）ＲＡＲ／ＲＸＲ活性剤の投与の代わりに行われる。別の実施形態では、これは患者への（１種類又は複数種類の）ＲＡＲ／ＲＸＲ活性剤の投与に加えて行われる。さまざまな実施形態では、ＣＡＲ導入免疫細胞培養で用いられる（１種類又は複数種類の）ＲＡＲ／ＲＸＲ活性剤と患者に投与される（１種類又は複数種類の）ＲＡＲ／ＲＸＲ活性剤とは、異なる、同じである、又は一方の集合が他方の副集合を構成する。
【００３１】
また、がんの処置を必要とする対象に、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）導入免疫細胞、少なくとも１種類のレチノイド活性剤及び／又はレキシノイド活性剤、並びに、少なくとも１種類の免疫チェックポイント阻害剤を投与することを含む、がんを処置する方法も本明細書に開示される。
【００３２】
明確性及び修辞学的簡便性のために、本開示の多くは、免疫調節性ＲＡＲ／ＲＸＲ活性剤とＣＡＲ−ＭＩＣとの併用及び分化誘導性ＲＡＲ活性剤とＣＡＲ−ＭＩＣとの併用の態様を個別に扱うが、これらが統合療法の２つの部分をなすサブコンビネーションであることを理解されたい。これら２つの部分の他方のひとつに必ずしも特有ではない実施形態が、ＲＡＲ／ＲＸＲ活性剤などの用語が、ＲＡＲ活性剤を指し、特に、統合療法の分化誘導態様に適用される場合は、ＲＡＲαアゴニストを指し、また、特に、統合療法の免疫調節態様に適用される場合は、ＲＡＲαアンタゴニスト、ＲＡＲγアゴニスト、ＲＸＲアンタゴニスト、及びこれらの組み合わせを指すように、両方に適用されることを理解されたい。
【図面の簡単な説明】
【００３３】
【図１】トランス活性化アッセイを用いた化合物ＩＲＸ５１８３がＲＡＲα、ＲＡＲβ、及びＲＡＲγに結合しこれらからの転写を活性化する程度を示す。
【図２Ａ】図２Ａ〜Ｃは、ＲＡＲ受容体特異的アゴニストがＦｏｘＰ３、α４β７、及びＣＣＲ９の発現を制御することを示す。精製したＣＤ４＋ＣＤ２５−ＦｏｘＰ３−細胞を、それぞれのＲＡＲアゴニストを特定の濃度で含む培地で培養し、全ＣＤ４Ｔ細胞での、ＦｏｘＰ３（図２Ａ）、α４β７（図２Ｂ）、及びＣＣＲ９（図２Ｃ）の発現をフローサイトメトリーにより分析した。ＦｏｘＰ３の結果は３回の独立した実験の代表例である。ＣＣＲ９及びα４β７の結果は複数回の実験の代表例である。
【図２Ｂ】図２Ａの説明を参照。
【図２Ｃ】図２Ａの説明を参照。
【図３Ａ−Ｈ】図３Ａ〜Ｈは、ＡＧＮ（ＲＡ受容体アンタゴニストＡＧＮ１９４３１０、１μＭ）あり若しくはなしの間質の不在下（液体）で、又は、Ｒ１１５（ＣＹＰ２６阻害剤Ｒ１１５８６６、１μＭ）若しくはＩＲＸ（ＣＹＰ２６耐性レチノイドＩＲＸ５１８３、１μＭ）あり若しくはなしの骨髄間葉細胞との共培養（間質）で、５日にわたりインキュベートしたときの、多発性骨髄腫（ＭＭ）細胞株であるＨ９２９（図３Ａ〜Ｄ）又は３名の異なる患者サンプル由来のＣＤ１３８＋ＭＭ細胞（図３Ｅ〜Ｈ）での、血漿マーカーである、ＢＣＬ６（図３Ａ及びＥ）、ＢＬＩＭＰ−１（図３Ｂ及びＦ）、ＸＢＰＳ−１（図３Ｃ及びＧ）、及びＣＨＯＰ（図３Ｄ及びＨ）の相対濃度を示す。未処置液体条件での発現を１とした。データは、同様の結果となった３回の独立した実験の代表例であり、平均±標準誤差を表している。＊Ｐ≦０．０５、＊＊Ｐ≦０．０１、群間の統計的有意差を求めるための反復測定１−ｗａｙ  ＡＮＯＶＡによる。Ｐ値はダネット検定を用いて多重比較のために補正した。対照：対照群。ｍａｘ：最大値。
【図４Ａ−Ｂ】図４Ａ〜Ｂは、Ｈ９２９細胞のクローン原生回復（ＣＦＵ）（図４Ａ）又は３名の異なる患者サンプル由来の初代ＣＤ１３８＋ＭＭ細胞の細胞回復（図４Ｂ）を示す。ＭＭ細胞は、ｐａｎ−ＲＡＲ阻害剤のＡＧＮ（１μＭ）あり若しくはなしの間質の不在下（液体）で、又は、ＣＹＰ２６阻害剤のＲ１１５（１μＭ）若しくはＣＹＰ２６耐性レチノイドのＩＲＸ（１μＭ）あり若しくはなしの骨髄間葉細胞の存在化（間質）で、５日にわたりインキュベートした後に、ボルテゾミブ（ＢＴＺ；２．５ｎＭ）で処置された。クローン原生又は細胞回復はＢＴＺ不在下での各条件に対して標準化した。
【図５】ＢＴＺ（２．５ｎＭ）で処置したＨ９２９細胞のクローン原生回復を示す。ＭＭ細胞は、Ｒ１１５（１μＭ）あり若しくはなしの、骨髄間葉細胞の不在下（液体）又は存在化（間質）で、５日にわたりインキュベートされた。このプリインキュベーションの後に、Ｈ９２９細胞を、骨髄間質から分離し、新鮮な培地中で０から４８時間培養し、その後、４８時間にわたりＢＴＺ（２．５ｎＭ）で処置した。クローン原生回復はＢＴＺの不在下の各条件に対して標準化した。
【図６】全身ＭＭ異種移植の生物発光画像を示す。Ｈ９２９Ｌｕｃ＋細胞の生着後、マウスを、ＩＲＸ（ｎ＝４）、ＢＴＺ（ｎ＝５）、又は両方の組み合わせ（ｎ＝５）で、４週にわたり処置した。データは、０日からの生物発光（光子／秒）の倍率変化の平均±標準誤差を表す。
【図７Ａ−Ｃ】図７Ａ〜Ｃは、骨髄間質内のＣＹＰ２６Ａ１の発現におけるＭＭ細胞の効果を示す（Ｈ９２９（図７Ａ）、ＭＭ．１Ｓ（図７Ｂ）、Ｕ２６６（図７Ｃ））。ＭＭ細胞の不在下（対照）又は存在下（共培養又はＴｒａｎｓｗｅｌｌ）で２４時間培養したヒト骨髄間葉細胞でのＣＹＰ２６Ａ１  ｍＲＮＡの相対量。未処置骨髄間質（対照）での発現を随意に１とした。
【図８Ａ−Ｃ】図８Ａ〜Ｃは、ＭＭ細胞（Ｈ２９２、ＭＭ．１Ｓ、Ｕ２６６）の不在下（対照）又は存在下（共培養又はＴｒａｎｓｗｅｌｌ）で２４時間にわたり培養したマウス野生型（ＷＴ）又はＳｍｏ−ＫＯ型の骨髄間質でのＣＹＰ２６Ａ１  ｍＲＮＡの相対量を示す。未処置ＷＴ又はＳｍｏ−ＫＯ間質での発現を各処置条件について随意に１とした。データは、３回の独立した実験の平均±標準誤差を表す。＊Ｐ≦０．０５、＊＊Ｐ≦０．０１、対応のない、両側での、スチューデントのｔ検定による。
【図９】ＩＲＸ（１０ｍｇ／ｋｇ）、ＢＴＺ（０．５ｍｇ／ｋｇ）、又はその組み合わせでの処置の４週の間の腫瘍負荷を示すマウスの生物発光画像である。前部腫瘍はＭＭ．１Ｓルシフェラーゼ＋細胞及び対照ベクターを形質導入したＳｍｏＦｌ／Ｆｌ骨髄間質細胞（ＷＴ骨髄間質）の組み合わせからなる。後部腫瘍はＭＭ．１Ｓルシフェラーゼ＋細胞及びＣｒｅ−リコンビナーゼを形質導入したＳｍｏＦｌ／Ｆｌ骨髄間質細胞（Ｓｍｏ  ＫＯ骨髄間質）の組み合わせからなる。
【図１０】処置の４週の間の腫瘍の生物発光（光子／秒）における倍率変化を示す。１日目の各腫瘍についての生物発光での変化を１４日目及び処置の最後（２８日目）での生物発光での変化に対して標準化した。
【図１１Ａ−Ｄ】間質の不在下（対照）で、又は、ＷＴ若しくはＳｍｏ−ＫＯ間質細胞との共培養で、５日にわたり培養した、Ｈ９２９細胞（図１１Ａ）及び３名の異なる患者サンプル由来の初代ＣＤ１３８＋ＭＭ細胞（図１１Ｂ）での、ＢＣＬ６（Ｂ細胞マーカー）、ＢＬＩＭＰ、ＸＢＰ１ｓ、及びＣＨＯＰ（ＰＣマーカー）の相対量を示す。未処置液体条件での発現を１とした。データは平均±標準誤差を表す。＊Ｐ≦０．０５、＊＊Ｐ≦０．０１、処置群間の統計的有意差を求めるための反復測定１−ｗａｙ  ＡＮＯＶＡによる。Ｐ値はダネット検定を用いて多重比較のために補正した。
【図１２Ａ】図１２Ａ〜Ｃは、ＡＴＲＡ媒介性だが、ＡＭ８０又はＩＲＸ５１８３誘導性ではない、ＡＭＬの分化及び排除の間質妨害を示す。１０−７ＭのＡＴＲＡ、ＩＲＸ５１８３、又は１０−８ＭのＡＭ８０で処置したＮＢ４細胞を用いたＣＦＵ実験（図１２Ａ）、１０−６ＭのＡＴＲＡ、ＩＲＸ５１８３、又は１０−７ＭのＡＭ８０で処置したＯＣＩ−ＡＭＬ３細胞（図１２Ｂ）及びＫａｓｕｍｉ−１細胞（図１２Ｃ）は、間質があるものないものの両方の場合のＡＭ８０及びＩＲＸ５１８３で処置した対照群と比べ、クローン性増殖の減少を示した。データは３回の独立した実験にわたる。
【図１２Ｂ】図１２Ａの説明を参照。
【図１２Ｃ】図１２Ａの説明を参照。
【発明を実施するための形態】
【００３４】
キメラ抗原受容体を発現する免疫細胞（ＣＡＲ導入免疫細胞又はＣＡＲ−ＭＩＣ）の養子移入並びにレチノイド及び／又はレキシノイド化合物を含むがん治療法のための併用が本明細書に開示される。レチノイン酸受容体（ＲＡＲ）及び／又はレチノイドＸ受容体（ＲＸＲ）に作用する化合物はＣＡＲ導入免疫細胞の活性を増大させる。ＲＡＲ、特に、ＲＡＲα選択的アゴニストに作用する他の化合物は、がん幹細胞を分化させ、骨髄又は腫瘍部位から離れさせ、ＣＡＲ導入免疫細胞により攻撃され得る状態とすることにより、ＣＡＲ導入免疫細胞の活性を増強できる。
【００３５】
増強により、ＲＡＲ／ＲＸＲ活性剤がＣＡＲ導入免疫細胞とともに用いられる場合、ＲＡＲ／ＲＸＲ活性剤がＣＡＲ導入免疫細胞とともに用いられない場合に比べ、ＣＡＲ導入免疫細胞はより大きい及び／又はより迅速な効果を示すこと、又は、同様に、ＲＡＲ／ＲＸＲ活性剤をやはり用いた場合、ＲＡＲ／ＲＸＲ活性剤を用いない場合に必要とされる投与量に比べ、より少ない投与量のＣＡＲ導入免疫細胞で所与の程度の効果を得ることができることが意図される。
【００３６】
本明細書では、『増強（ｐｏｔｅｎｔｉａｔｅ）』という用語は、ＲＡＲ／ＲＸＲ活性剤（特に、ＲＡＲαアゴニスト、ＲＡＲαアンタゴニスト、ＲＡＲγアゴニスト、ＲＸＲアンタゴニスト、又はこれらの組み合わせ）と併用された場合の、この（これらの）ＲＡＲ／ＲＸＲ活性剤の非存在下でのＣＡＲ導入免疫細胞の使用に比べての、ＣＡＲ導入免疫細胞の改善された効力又は患者による改善された応答を指す。また、本明細書では、『増大（ａｕｇｍｅｎｔ）』という用語は、ＲＡＲ／ＲＸＲ活性剤が用いられた場合の、ＲＡＲ／ＲＸＲ活性剤が用いられない場合と状況を比べての、改善された効果を指す。本明細書に記載の増強は（１種類又は複数種類の）ＲＡＲ／ＲＸＲ活性剤の免疫調節活性（ｉｍｍｕｎｏｒｅｇｕｌａｔｏｒｙ／ｉｍｍｕｎｏｍｏｄｕｌａｔｏｒｙ  ａｃｔｉｖｉｔｙ）から生じる。
【００３７】
増強の複数の様式が可能である。いくつかの様式では、（１種類又は複数種類の）ＲＡＲ／ＲＸＲ活性剤はＣＡＲ導入免疫細胞に直接に作用する。以下で詳述するように、これは、用いられた特定の（１種類又は複数種類の）ＲＡＲ／ＲＸＲ活性剤に依存して、エフェクター細胞の数若しくは効能（ｐｏｔｅｎｃｙ）及び／又はＴｒｅｇ細胞の抑制を増加させることに関与し得る。こうした効果は、ＣＡＲ導入免疫細胞の予備培地に（１種類又は複数種類の）ＲＡＲ／ＲＸＲ活性剤を含めることにより、又は、ＣＡＲ導入免疫細胞の投与とともに及び／又は当該投与の後に（１種類又は複数種類の）ＲＡＲ／ＲＸＲ活性剤を投与することにより得ることができる。いくつかの様式では、（１種類又は複数種類の）ＲＡＲ／ＲＸＲ活性剤は、１）腫瘍内のＴｒｅｇ細胞の存在又は活性を減少させることで腫瘍環境を変え、これにより、腫瘍を免疫学的攻撃により感受的にすることにより、及び／又は、２）ＣＡＲ導入免疫細胞に作用しそれらの有効性を促進する炎症誘発性反応を生じさせることにより、ＣＡＲ導入免疫細胞と共同して作用する。これらの効果は（１種類又は複数種類の）ＲＡＲ／ＲＸＲ活性剤が患者に投与されることにおおよそ依存している。加えて、（１種類又は複数種類の）ＲＡＲ／ＲＸＲ活性剤により促進される患者での全身的抗腫瘍免疫応答はこれらの処置の全体的有効性をさらに増加させ得る。
【００３８】
レチノイン酸（ＲＡ）は、高薬理学的濃度では、抑制性であるＣＤ４＋制御性Ｔ細胞（Ｔｒｅｇ細胞）のレベルを増加させることにより、抗炎症作用をもたらす。この機能にＲＡはＴｒｅｇ細胞分化の主要制御因子である転写因子ＦｏｘＰ３の発現を高めることにより働きかける。また、ＲＡは炎症誘発性Ｔｈ１７細胞のレベルも減少させる。これらの効果をＲＡはレチノイン酸受容体のＲＡＲαサブタイプを活性化することにより引き起こす。ＲＡ又はＲＡＲα選択的アゴニストの上述の機能から、これらの化合物は免疫治療法への腫瘍の耐性に寄与することとなる。サプレッサーＴｒｅｇ細胞の増加したレベルは免疫治療法により産生されたＴ細胞の抗腫瘍活性を妨げる。ＲＡＲαアゴニストがＴｈ１７細胞のレベルを減少させるため、腫瘍を攻撃するＴ細胞の補体もＲＡＲαアゴニストにより減少する。反対に、ＲＡＲαアンタゴニストは抑制性Ｔｒｅｇ細胞のレベルを減少させエフェクターＴｈ１７細胞のレベルも増加させるため、ＲＡＲαのアンタゴニストは腫瘍を免疫治療法に対して感受性にする。従って、本明細書に記載の一実施形態では、標的がんはＲＡＲαアンタゴニストと併せたＣＡＲ導入免疫細胞の併用で処置される。
【００３９】
ＲＡ機能の別態様では、ＲＡの生理学的濃度がＴ細胞媒介免疫応答の発達に重要であることが示されてきている。Ｔ細胞へのＲＡシグナル伝達はＣＤ４＋Ｔ細胞エフェクター機能の重要な早期メディエーターである。ＲＡＲ機能を無効化する改変ＲＡＲαであるドミナントネガティブＲＡＲα（ｄｎＲＡＲα）を発現するＴ細胞又はＲＡＲアンタゴニストを用いて、ＲＡＲαを介したＲＡシグナル伝達が皮膚移植拒絶反応などのＴ細胞媒介機能に必要であることが示されていた。従って、がん免疫治療法に関連して、ＣＡＲ導入免疫細胞と併せてのＲＡＲαアンタゴニスト又はＲＡＲαインバースアゴニストの使用は相殺効果を有する。これは、抑制性Ｔｒｅｇ細胞のレベルを減少させることにより抗腫瘍効果を促進するが、こうしたアンタゴニストはＣＤ４＋Ｔ細胞エフェクター機能を遮断することにより抗腫瘍効果も減少させ得る。これに関連して、がん免疫治療法と併せたＲＡＲαアンタゴニストの使用は限定的な価値しかなく、さらには、有害ですらあるかもしれない。
【００４０】
本明細書に記載の別の実施形態では、抗腫瘍免疫応答に重要なＲＡシグナル伝達はＲＡＲγにより媒介される。前述のシナリオでは、がん免疫治療法と共同したＲＡＲαアンタゴニストの単独使用は、サプレッサーＴｒｅｇ細胞の減少をもたらし、結果として、免疫治療法の抗腫瘍効果の限定的強化をもたらすのみである。一方、当該手法では、ＲＡＲγを介してＣＤ４＋Ｔ細胞エフェクター機能の促進に作用するＲＡ又は他のＲＡＲアゴニストの早期作用、及び、共投与されるがん免疫治療法の抗腫瘍効果の潜在的に大きな強化を利用しない。従って、ＲＡＲγを特異的に介して作用するＲＡＲアゴニストはＴｒｅｇ細胞を増加させることなくＣＤ４＋Ｔ細胞エフェクター機能を促進するものであり、また、こうしたＲＡＲγ選択的アゴニストはがん免疫治療法の抗腫瘍効果を大きく強化するものである。さらなる別の実施形態では、がん免疫治療法はＲＡＲαアンタゴニスト及びＲＡＲγアゴニストの併用とともに腫瘍を処置するために用いられる。この場合、レチノイド化合物は免疫治療法の抗腫瘍活性を「ＲＡＲγアゴニストが健全なＣＤ４＋Ｔ細胞媒介免疫応答の発達を助ける。」、「ＲＡＲαアンタゴニストが、サプレッサーＴｒｅｇ細胞のレベルを減少させ、且つ、Ｔｈ１７細胞のレベルを維持し、これにより、免疫治療法の抗腫瘍効果の変調を最小化する。」という機序により強化する。ＲＡＲαアンタゴニストが（非選択的）ＲＡＲアゴニストのＲＡＲαアゴニスト活性を遮断するため、ＲＡＲαアンタゴニスト及び（非選択的）ＲＡＲアゴニストを用いることの効果が、ＲＡＲαアンタゴニスト及びＲＡＲγアゴニストを用いるのと同様であることを理解されたい。
【００４１】
ＲＸＲアゴニストは、サプレッサーＴｒｅｇ細胞の形成を促進し、また、エフェクターＴｈ１７細胞の形成を阻害する。従って、別の実施形態では、ＣＡＲ導入免疫細胞と併せたＲＸＲアンタゴニスト（又はインバースアゴニスト）の使用は、サプレッサーＴｒｅｇ細胞の形成を減少させ且つＴｈ１７エフェクター細胞のレベルを増加させることにより、抗腫瘍活性を強化する。
【００４２】
まとめると、ＲＡＲαアンタゴニスト、ＲＡＲγアゴニスト、及びＲＸＲアンタゴニストといった化合物の種類が、がん免疫治療法の抗腫瘍活性を増加させるために併用して使用するのに役立つものである。本明細書に記載の方法では、ＣＡＲ導入免疫細胞は、ＲＡＲ／ＲＸＲ活性剤（例えば、ＲＡＲαアンタゴニスト、ＲＡＲγアゴニスト、ＲＸＲアンタゴニスト）の１つ以上と併せて、特定のがんを処置するための他の薬剤とともに又はこうした薬剤なしで、投与される。ＲＡＲαの受容体拮抗作用の特性及びＲＡＲγの受容体作動作用の特性は同じ分子内で共存し得る。従って、同一分子が、ＲＡＲαにアンタゴニストとして作用し、Ｔｒｅｇ細胞形成を減少させ、同時に、ＲＡＲγにアゴニストとして作用し、Ｔｒｅｇ細胞形成をさらに減少させ且つＣＤ４＋Ｔ細胞エフェクター機能を促進することが可能である。同じように、ＲＸＲの受容体拮抗作用の特性は、ＲＡＲαの受容体拮抗作用又はＲＡＲγの受容体作動作用の特性と、異なる分子内に、別れた状態で、組み合わせることが可能である。本明細書では、『レチノイド活性剤』という用語は、これに限定されるものではないが、ＲＡＲに作用する任意の化合物を包含する。レチノイド活性剤の非限定的例として、ＲＡＲαアンタゴニスト及びＲＡＲγアゴニストが挙げられる。本明細書では、『レキシノイド活性剤』という用語は、これに限定されるものではないが、ＲＸＲに作用する任意の化合物を包含する。レキシノイド活性剤の非限定的例として、ＲＸＲアンタゴニストが挙げられる。
【００４３】
ほとんどではないにしても多くの悪性腫瘍が自己再生及び腫瘍維持の能力を広く維持する細胞の希少集団から生じる。こうしたがん幹細胞は疾患を特徴づける分化がん細胞の大部分とは生物学的に異なっていることが多い。例えば、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）は造血幹細胞のレベルで生じ、それらの正常対応物と同じく、ＣＭＬ幹細胞は規則的な分化を受ける。従って、従って、ＣＭＬ内の白血病質量の大部分は分化血球からなり、一方、疾患維持に関与する希少細胞は正常造血幹細胞と似ている。同様に、腫瘍性形質細胞を特徴とする多発性骨髄腫（ＭＭ）では、これらの細胞がそれらの正常対応物と同じく最終分化しているようにみえる。腫瘍の大部分を形成する骨髄腫形質細胞は、後胚中心Ｂ細胞（ｐｏｓｔ−ｇｅｒｍｉｎａｌ  ｃｅｎｔｅｒ  Ｂ  ｃｅｌｌ）に似た分化があまり進んでいないがん幹細胞の集団から生じる。他のがん（例えば、これらに限定されるわけではないものの、血液悪性腫瘍、骨髄異形成症候群、乳がん、前立腺がん、膵臓がん、結腸がん、卵巣がん、黒色腫、非黒色腫皮膚がん、及び脳腫瘍を含む）は、対応するがん幹細胞から生じることが示されてきている。
【００４４】
従って、ＣＡＲ導入免疫細胞による療法に影響を受けやすい成熟がん細胞へのがん幹細胞の分化を誘導することにより、防御骨髄ニッチ内の又は腫瘍内のがん幹細胞を標的にできる剤でがんを処置する方法が本明細書に開示される。これまでの研究から、骨髄間質細胞が骨髄内の多発性骨髄腫及び急性骨髄性白血病の細胞での未成熟薬剤耐性表現型を誘導することが示された。骨髄間質は正常細胞及び悪性細胞の分化を防ぐＣＹＰ２６を介した低レチノイン酸（低ＲＡ）環境を作る。レチノイドシグナル伝達はＰＣ分化及びＩｇ産生を促進するため、ＲＡシグナル伝達の調節は骨髄微小環境内での薬剤耐性を克服するための魅力的な治療戦略である。骨髄ニッチ内のがん幹細胞に（ＲＡＲαアゴニストはＣＹＰ２６により不活性化されないため）作用し、細胞の分化を引き起こす（そして、それらをＣＡＲ導入免疫細胞による破壊に影響を受けやすくする）ことのできるＲＡＲαアゴニストの投与は、こうした手法の一つである。ある実施形態では、本明細書に開示のＲＡＲαアゴニストでの療法の有効性は防御環境でのがん幹細胞の数の大幅な減少をまねく。
【００４５】
いくつかの実施形態では、１種類以上のＲＡＲαアゴニストとＣＡＲ導入免疫細胞との併用でがんを処置する方法が本明細書に開示される。また、１種類以上のＲＡＲαアゴニストと１種類以上の免疫チェックポイント標的がん療法剤との併用でがんを処置する方法も本明細書に開示される。また、１種類以上のＲＡＲαアゴニストと１種類以上の免疫チェックポイント標的がん療法剤とＣＡＲ導入免疫細胞とを含むがんを処置する方法も本明細書に開示される。これらの実施形態は、さらに、免疫調節性ＲＡＲ／ＲＸＲ活性剤の、一方、又は、他方、又は、組み合わせの投与を含むことができる。
【００４６】
ＲＡＲ／ＲＸＲ活性剤は、ひとまとまりとして、また、多くの場合は個別にも、作用に多面性を有する。本開示の実施形態では、ＲＡＲ／ＲＸＲ活性剤（例えば、ＲＡＲαアンタゴニスト、ＲＡＲγアゴニスト、ＲＸＲアンタゴニスト）は免疫治療剤又は免疫治療法増強剤として用いられる。これはその決定的効果が腫瘍細胞に直接にではなく免疫系の細胞にあるという点で間接的な作用機序である。これらの又は他のＲＡＲ／ＲＸＲ活性剤は、ＲＡＲ／ＲＸＲ媒介機序（例えば、ＲＸＲアンタゴニスト）又は非ＲＡＲ／ＲＸＲ媒介機序のいずれかを介してがん細胞に直接に作用することにより幾種かのがんの処置に役立ち得る他の効果を有し得る。
【００４７】
がん治療法は様々な機序を介して進行し得る。いくつかの抗がん剤は抗増殖剤に分類される。これらは、より最近になって開発された標的治療法（がん細胞において成長調節経路に作用するキナーゼ阻害剤、及び、がん細胞の細胞表面抗原を認識する抗体治療剤など）のみならず、長い伝統のある化学治療剤（一般的に細胞毒性を有する）を含む。他の治治療法として、抗血管新生剤（腫瘍に栄養を供給する腫瘍内への血管の内方成長を阻害する剤）、及び、抗ホルモン剤（ホルモン依存性の腫瘍をホルモンの供給又はシグナル伝達を阻害することで処置する剤）が挙げられる。
【００４８】
また、種々の様式の免疫治療法を分別することも可能である。例えば、抗体治療法と細胞治療法とに分別することもできるし、受動的治療法と能動的治療法とに分別することもできる。本明細書では、受動的治療法は、一次免疫治療剤（ｐｒｉｍａｒｙ  ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ  ａｇｅｎｔ）が患者に投与される治療法を指す。本明細書では、能動的治療法は、一次免疫治療剤が例えばワクチンなどの投与された剤により患者内で誘導された免疫応答の成分である治療法を指す。他の免疫治療剤は免疫調節剤として分類される。本明細書では、一次活性免疫調節剤（ｐｒｉｍａｒｙ  ａｃｔｉｖｉｔｙ  ｉｍｍｕｎｏｍｏｄｕｌａｔｏｒｙ  ａｇｅｎｔ）は、標的疾患に直接的な治療効果を持たないが、治療効果を媒介又は促進する免疫系成分の産生又は活性を増加又は減少させる。免疫系のこうした成分（細胞又は抗体）は、抗原性標的に直接に作用し又はその他のやり方で抗原刺激に反応して、こうした応答（すなわち、現在開示中の実施形態では腫瘍細胞（特に、がん細胞）に直接に作用する又はヘルパー機能を提供する免疫系成分）を促進する。従って、がん患者へのＣＡＲ導入免疫細胞の投与を含む実施形態では、ＣＡＲ導入免疫細胞は受動的細胞性免疫治療法とみなされるべきである。こうした実施形態のさらなる態様では、ＣＡＲ導入免疫細胞は直接的細胞毒性を持つ。ＲＡＲ／ＲＸＲ活性剤の使用を伴う実施形態では、ＣＡＲ導入免疫細胞培養物中にある又はがん患者に投与されるかに関わらず、当該ＲＡＲ／ＲＸＲ活性剤は免疫調節剤とみなされるべきである。同様に、免疫チェックポイント阻害剤の投与を伴うこれらの実施形態では、免疫チェックポイント阻害剤が抗体であったとしても、免疫チェックポイント阻害剤は免疫調節剤とみなされるべきである。
【００４９】
本開示の実施形態の種々の態様がひとつの免疫治療機序のみを排他的に対象としており、すなわち、ＲＡＲ／ＲＸＲ活性剤が腫瘍への免疫学的攻撃の促進に用いられ、そのＲＡＲ／ＲＸＲ活性剤が有し得る他の活性はあるとしても有効性に重要ではない。本開示の実施形態の別の態様がひとつのがん細胞分化機構のみを排他的に対象としており、すなわち、ＲＡＲαアゴニスト、特に、ＣＹＰ２６により容易に代謝されないものが、がん幹細胞の分化を誘導し、ＣＡＲ導入免疫細胞による攻撃への受けやすさを高めるために用いられ、そのＲＡＲアゴニストが有し得る他の他の活性はあるとしても有効性に重要ではない。いくつかの実施形態は、他の抗がん活性を有する剤を排除し得る。他の実施形態は、（１種類又は複数種類の）免疫調節性ＲＡＲ／ＲＸＲ活性剤、（１種類又は複数種類の）分化誘導性ＲＡＲ／ＲＸＲ活性剤、又は両方をとわず、（１種類又は複数種類の）ＲＡＲ／ＲＸＲ活性剤の追加の活性を利用し得る。同様に、いくつかの実施形態は、（１種類又は複数種類の）ＲＡＲ／ＲＸＲ活性剤及びＣＡＲ導入免疫細胞のみの投与を伴う。別の実施形態は、他の治療法及び治療剤との組み合わせを許容する。これらの実施形態のいくつかは、他の治療法及び治療剤のいずれかを特に含む。他のもの又はこれらの実施形態は、他の治療法及び治療剤のいずれかを特に含まない。他の治療法又は治療剤として、他の、免疫治療法、抗増殖治療法、化学治療法、細胞毒性剤、細胞増殖抑制剤、標的治療法、放射線治療法、抗ホルモン治療法、抗血管新生治療法、抗腫瘍抗原抗体、抗がんワクチン、免疫チェックポイント阻害剤、及び免疫チェックポイント阻害剤抗体が挙げられる。従って、例えば、いくつかの実施形態は、特に、免疫チェックポイント阻害剤の使用を含む若しくは含まず、又は、免疫チェックポイント阻害剤との組み合わせを許容しつつ、他の免疫治療剤又は他のがん治療法を許容しない。
【００５０】
本明細書では、『アゴニスト』という用語は、受容体に結合しそれを活性化して、遺伝子転写及びそれにより生じる薬理学的反応（例えば、収縮、弛緩、分泌、酵素活性化など）をもたらす化合物を意味するものと理解されたい。本明細書では、『ＲＡＲγアゴニスト』という用語は、異なるＲＡＲなどの別の分子との結合に比べて、高い親和性でＲＡＲγと結合する化合物を指す。例示的実施形態では、ＲＡＲγアゴニストはＲＡＲα及び／又はＲＡＲβよりもＲＡＲγに対して選択的である。従って、ＲＡＲ選択的アゴニストは特定のＲＡＲ受容体標的と高い結合親和性で結合する傾向がある。本明細書では、『アゴニスト』という用語は、選択的アゴニストを含む。
【００５１】
本明細書では、『アンタゴニスト』という用語は、受容体を活性化することなくアゴニストと同じ部位に結合することでアゴニストの効果を減衰させる化合物を指す。アンタゴニスト自体は占有されていない受容体の遺伝子転写活性に影響しないものである。従来通り、ＲＡＲαアンタゴニストはＲＡＲαアゴニストの活性を阻害する化学剤である。本明細書では、『ＲＸＲアンタゴニスト』という用語は、ＲＸＲに結合するが、それを活性化せず、むしろ、ＲＸＲアゴニストによりもたらされる転写をアンタゴナイズする化合物を指す。本明細書では、『アンタゴニスト』という用語は、選択的アンタゴニストを含む。
【００５２】
本明細書では、『インバースアゴニスト』という用語は、同じ受容体で依然として働くもののアゴニストの効果とは反対の効果をもたらす化合物を意味するとものと理解されたい。インバースアゴニスト自体は占有されていない受容体の基礎的遺伝子転写活性を減少させるものである。
【００５３】
（ＲＡＲαアンタゴニスト）
ある実施形態では、ＲＡＲα選択的アンタゴニストは下記の一般式（Ｉ）の化合物である。
【化２８】
2020526551.tif 000030
（ただし、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、及びＲ６は、独立して、Ｈ又はＣ１−６アルキルであり、Ｒ４及びＲ５は、独立して、Ｈ又はＦであり、Ａｒは、フェニル、ピリジル、チエニル、フリル、又はナフチルであり、Ｘは、Ｃ（ＣＨ３）２、Ｏ、Ｓ、又はＮＲ７（ただし、Ｒ７は、Ｈ又はＣ１−６アルキルである。）であり、Ｘ１は、Ｈ又はハロゲン（Ｆ、Ｃｌ又はＢｒなど）であり、Ｒ８は、Ｈ又はＯＨである。）
Ｒ基の各組み合わせ及び独立して選択されたそれらの置換基の各組み合わせは、別個の実施形態を規定する。
【００５４】
一般式（Ｉ）のＲＡＲα選択的アンタゴニストの一例として、化合物ＡＧＮ１９４３０１が挙げられる。
【化２９】
2020526551.tif 000031
【００５５】
一般式（Ｉ）の一般的な種類のＲＡＲαアンタゴニストの別の例として、これらに限定されるわけではないが、ＡＧＮ１９３４９１、ＡＧＮ１９３６１８、ＡＧＮ１９４２０２、ＡＧＮ１９３６２５、及びＡＧＮ１９４５７４が挙げられる。
【化３０】
2020526551.tif 000032
【化３１】
2020526551.tif 000033
【００５６】
別の実施形態では、ＲＡＲα選択的アンタゴニストは下記の一般式（ＩＩ）の化合物の種類に属するものである。
【化３２】
2020526551.tif 000034
（ただし、Ｒ１及びＲ２は、独立して、Ｃ１−６アルキルであり、Ｘは、Ｏ、Ｓ、又はＣＨ２であり、Ｙは、Ｏ、Ｓ、ＣＨ２、又はＮＲ３（ただし、Ｒ３はＣ１−６アルキルである。）であり、Ｚは、Ｃｌ又はＢｒであり、Ｗは、Ｈ又はＯＨであり、Ｕは、独立して、Ｈ又はＦである。）
Ｒ基の各組み合わせ及び独立して選択されたそれらの置換基の各組み合わせは、別個の実施形態を規定する。
【００５７】
本明細書に記載の方法で使用するための一般式（ＩＩ）の種類のＲＡＲα選択的アンタゴニストの一例として、下記の構造（ＶＴＰ１９６６９６）のものが挙げられる。
【化３３】
2020526551.tif 000035
【００５８】
別の実施形態では、ＲＡＲα選択的アンタゴニストは一般式（ＩＩＩ）の化合物である。
【化３４】
2020526551.tif 000036
（ただし、Ｒ１及びＲ２は、独立して、Ｈ又はＣ１−６アルキルであり、Ｒ３は、Ｈ又はＦであり、Ａｒは、フェニル、ピリジル、チエニル、フリル、又はナフチルであり、Ｘは、Ｏ、Ｓ、Ｎ、又はＣＨ２であり、Ｗは、Ｈ又はＯＨであり、Ｚは、Ｃｌ又はＢｒである。）
Ｒ基の各組み合わせ及び独立して選択されたそれらの置換基の各組み合わせは、別個の実施形態を規定する。
【００５９】
一般式（ＩＩＩ）の化合物の一例として、ＡＧＮ１９４７７７が挙げられる。
【化３５】
2020526551.tif 000037
【００６０】
ＲＡＲαアンタゴニストの別の例として、これらに限定されるわけではないが、ＢＭＳ１８５４１１、ＢＭＳ６１４、Ｒｏ４１−５２５３、及びＲｏ４６−５４７１が挙げられる。
【００６１】
さらなるＲＡＲアンタゴニスト又はインバースアゴニストが、米国特許第６，０３７，４８８号、米国特許第５，６１２，３５６号、米国特許第５，７７６，６９９号、米国特許第５，９５８，９５４号、米国特許第５，８７７，２０７号、米国特許第６，２２５，４９４号、米国特許第６，４５５，７０１号、米国特許第５，７２３，６６６号、米国特許第５，７３９，３３８号、及び米国特許第５，９１９，９７０号、並びに、米国特許出願第２００９／０１７６８６２号に記載されている。これらの文献のＲＡＲアンタゴニストの全開示についてこれらの文献を参照により本明細書に援用する。
【００６２】
（ＲＡＲγアゴニスト）
ＲＡＲγアゴニストの例が、米国特許第５，２３４，９２６号、米国特許第４，３２６，０５５号、米国特許第５，３２４，８４０号、米国特許第５，８２４，６８５号、及び米国特許第６，４５２，０３２号に記載されており、これらに限定されるわけではないが、以下の化合物が挙げられる。
【化３６】
2020526551.tif 000038
【化３７】
2020526551.tif 000039
【００６３】
ＲＡＲγアゴニストの別の例として、ＡＧＮ１９０１６８が挙げられる。
【化３８】
2020526551.tif 000040
【００６４】
ＡＧＮ１９０１８３、ＡＧＮ１９０２０５、ＡＧＮ１９０１６８（タゾロテン）などの化合物は、ＲＡＲγアゴニストではあるが、ＲＡＲα及び／又はＲＡＲβも同様に活性化するためＲＡＲγ選択的ではない。ＲＡＲαの活性化はＲＡＲγ活性化により生じるＴエフェクター細胞活性化効果をＴｒｅｇ細胞の産生の増加により打ち消すおそれがあるので、ＲＡＲγ選択的アゴニストを用いることが好ましい。一方、ＲＡＲγ選択的アゴニストはがん免疫治療剤の抗腫瘍効果を増強するものである。
【００６５】
高選択的ＲＡＲγアゴニストの一例として、化合物ＡＧＮ２０４６４７（ＩＲＸ４６４７）が挙げられる。
【化３９】
2020526551.tif 000041
【００６６】
別のＲＡＲγ選択的アゴニストとして、一般式（ＩＶ）の化合物のファミリーに属するものが挙げられる。
【化４０】
2020526551.tif 000042
（ただし、Ｒ１及びＲ２は、独立して、Ｈ又はＣ１−６アルキルであり、Ｒ３は、Ｈ又はＦであり、Ｘは、Ｏ、Ｓ、ＣＨ２、Ｃ（Ｒ４）２、又はＮＲ５（ただし、Ｒ４及びＲ５は、独立して、Ｈ又はＣ１−６アルキルである。）である。）
Ｒ基の各組み合わせ及び独立して選択されたそれらの置換基の各組み合わせは、別個の実施形態を規定する。
【００６７】
さらなるＲＡＲγ選択的アゴニストとして、これらに限定されるわけではないが、ＣＤ４３７、ＣＤ２３２５、ＣＤ６６６、及びＢＭＳ９６１が挙げられる。さらなるＲＡＲγアゴニストが、国際公開第０２／２８８１０号（Ａ２）に記載されており、ＲＡＲγアゴニストに関するこの文献の開示の全てについてこの文献を参照により本明細書に援用する。
【００６８】
（ＲＸＲアンタゴニスト）
ＲＸＲアンタゴニストの例として、これらに限定されるわけではないが、ＡＧＮ１９５３９３、ＬＧＮ１００８４９、ＨＸ５３１、ＬＧ１００７５４、ＰＡ４５１、ＰＡ４５２、及びＵＶＩ３００３が挙げられる。
【化４１】
2020526551.tif 000043
【化４２】
2020526551.tif 000044
【化４３】
2020526551.tif 000045
【化４４】
2020526551.tif 000046
又は、
【化４５】
2020526551.tif 000047
【００６９】
（ＲＡＲαアゴニスト）
レチノイド活性を有する化合物（ビタミンＡ及びその誘導体）は細胞増殖及び分化のプロセスでの活性を有する。レチノイドの多くの生物学的効果は核レチノイン酸受容体（ＲＡＲ）を調節することにより媒介される。ＲＡＲは、レチノイドＸ受容体（ＲＸＲとしてして知られる）の１つとのヘテロダイマーの形態で、ＲＡＲ応答エレメント（ＲＡＲＥ）として知られるＤＮＡ配列エレメントに結合することにより、転写を活性化する。ヒトＲＡＲの３種類のサブタイプ、ＲＡＲα、ＲＡＲβ、及びＲＡＲγ、が同定し記述されている。
【００７０】
本明細書では、『ＲＡＲα選択的アゴニスト』という用語は、ＲＡＲαに選択的に結合する化合物を指す。本明細書では、『選択的に結合』という用語は、ＲＡＲα選択的アゴニストを参照して用いられる場合、ＲＡＲα選択的アゴニストがＲＡＲβ又はＲＡＲγなどの非標的受容体とほとんど結合しないような表記の標的ＲＡＲαへのＲＡＲα選択的アゴニストの差別的な結合を指す。好適な実施形態はＲＡＲα選択的アゴニストを利用するものの、他の実施形態はＲＡＲαのみに必ずしも選択的ではないＲＡＲαアゴニストを使用できる。従って、多くの実施形態がＲＡＲα選択的アゴニストを用いて記載されているが、一般的なＲＡＲαアゴニストを用いる以外は同様の実施形態も開示されることを理解されたい。
【００７１】
ＲＡＲαへのＲＡＲαアゴニストの選択的結合は、例えば、結合親和性及び結合特異性などの結合特性を誘導する。結合親和性は、ＲＡＲαアゴニストがそのＲＡＲα結合部位に残る時間の長さを指し、ＲＡＲαアゴニストがＲＡＲαに結合する力とみなすことができる。結合特異性は、ＲＡＲαアゴニストがその結合部位を含まない例えばＲＡＲβ又はＲＡＲγなどの受容体とＲＡＲαとを区別する能力である。結合特異性を測定するひとつの方法は、ＲＡＲαアゴニストの結合部位を含まない受容体についてのＲＡＲαアゴニストの会合速度に対するＲＡＲαについてのＲＡＲαアゴニストの会合速度を比較すること、例えば、ＲＡＲβ及び／又はＲＡＲγに対するＲＡＲαについてのＲＡＲαアゴニストの会合速度定数の比較である。
【００７２】
いくつかの実施形態では、ＲＡＲαアゴニストは、例えば、少なくとも５倍高い、少なくとも１０倍高い、少なくとも１５倍高い、少なくとも２０倍高い、又は少なくとも１００倍高い、ＲＡＲβ及び／又はＲＡＲγに対するＲＡＲαでの活性の割合を有する。ＲＡＲパンアゴニストは、ＲＡＲα、ＲＡＲβ、及びＲＡＲγでの活性を有する、すなわち、ＲＡＲα、ＲＡＲβ、及びＲＡＲγでの同様の親和性を有する。
【００７３】
また、ＲＡＲαに選択的に結合するＲＡＲαアゴニストの結合特異性は、ＲＡＲαアゴニストが、その結合部位を含まない例えばＲＡＲβ又はＲＡＲγなどの受容体に対して、ＲＡＲαへの結合を介して発揮し得る活性比率により特徴づけることもできる。いくつかの実施形態では、ＲＡＲαに選択的に結合するＲＡＲαアゴニストは、少なくとも２：１、少なくとも３：１、少なくとも４：１、少なくとも５：１、少なくとも６４：１、少なくとも７：１、少なくとも８：１、少なくとも９：１、少なくとも１０：１、少なくとも１５：１、少なくとも２０：１、少なくとも２５：１、少なくとも３０：１、少なくとも３５：１、又は少なくとも４０：１の、その結合部位を含まない受容体に対するＲＡＲαを介した活性比率を有する。いくつかの実施形態では、ＲＡＲαに選択的に結合するＲＡＲαアゴニストは、少なくとも２：１、少なくとも３：１、少なくとも４：１、少なくとも５：１、少なくとも６４：１、少なくとも７：１、少なくとも８：１、少なくとも９：１、少なくとも１０：１、少なくとも１５：１、少なくとも２０：１、少なくとも２５：１、少なくとも３０：１、少なくとも３５：１、又は少なくとも４０：１の、ＲＡＲβ及び／又はＲＡＲγに対するＲＡＲαを介した活性比率を有する。
【００７４】
いくつかの実施形態では、本明細書に開示の方法に役立つＲＡＲαアゴニストは、ＣＹＰ２６により代謝されないＲＡＲαアゴニストである。ＣＹＰ２６は、レチノイン酸を代謝して細胞から容易に排除できる不活性又はより低い活性の物質とし、レチノイン酸の細胞内レベルを制御するシトクロムＰ４５０モノオキシゲナーゼである。ＣＹＰ２６により容易に代謝されるＲＡＲα選択的アゴニストは本方法の開示の範囲内ではない。
【００７５】
本明細書では、『ＣＹＰ２６耐性』という用語は、ＣＹＰ２６酵素により、代謝、分解、又はその他不活性化されず、骨髄内での活性を有する、ＲＡＲαアゴニストを指す。
【００７６】
この実施形態の一態様では、ＲＡＲαアゴニストは下記の式（Ｖ）の構造を有する化合物である。
【化４６】
2020526551.tif 000048
（ただし、Ｒ１は、Ｈ又はＣ１−６アルキルであり、Ｒ２及びＲ３は、独立して、Ｈ又はＦであり、Ｒ４は、ハロゲンである。）
【００７７】
式（Ｉ）のいくつかの実施形態では、ハロゲンは、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、又はＩである。いくつかの実施形態では、式（Ｉ）で、ハロゲンはＦである。いくつかの実施形態では、式（Ｉ）で、ハロゲンはＣｌである。いくつかの実施形態では、式（Ｉ）で、ハロゲンはＢｒである。いくつかの実施形態では、式（Ｉ）で、ハロゲンはＩである。
【００７８】
この実施形態の一態様では、ＲＡＲαアゴニストは下記の式（ＶＩ）の構造を有する化合物である。
【化４７】
2020526551.tif 000049
（ただし、Ｒ１は、Ｈ又はＣ１−６アルキルである。）
【００７９】
この実施形態の別の態様では、ＲＡＲαアゴニストは下記の式（ＶＩＩ）の構造を有する化合物である。
【化４８】
2020526551.tif 000050
【００８０】
別の実施形態では、ＲＡＲαアゴニストはタミバロテン（ＡＭ８０；４−［（５，６，７，８−テトラヒドロ−５，５，８，８−テトラメチル−２−ナフタレニル）カルバモイル］安息香酸）である。別の実施形態では、ＲＡＲαアゴニストはＡＭ５８０（４−［（５，６，７，８−テトラヒドロ−５，５，８，８−テトラメチル−２−ナフタレニル）カルボキサミド］安息香酸）である。別の実施形態では、ＲＡＲαアゴニストはＲｅ８０（４−［１−ヒドロキシ−３−オキソ−３−（５，６，７，８−テトラヒドロ−３−ヒドロキシ−５，５，８，８−テトラメチル−２−ナフタレニル）−１−プロペニル］安息香酸）である。
【００８１】
本明細書に開示の化合物として役立つ他のＲＡＲαアゴニストが、米国特許第５，８５６，４９０号、米国特許第５，９６５，６０６号、及び米国特許第６，３８７，９５０号に記載されている。これらの文献をそれぞれその全開示について参照により本明細書に援用する。また、これらの参考文献は化合物が実際にＲＡＲαアゴニストであることをしめすデータを提供する。ある化合物がＲＡＲαアゴニストであると検査し確定するためのアッセイは本技術分野で既知であり、数々の先行技術文献及び特許に記載されている。例えば、ＲＡＲα、ＲＡＲβ、ＲＡＲγ、及びＲＸＲαの受容体サブタイプでのアゴニスト様活性を検査するキメラ受容体トランス活性化アッセイは、米国特許第５，４５５，２６５号に詳細に開示されている。この文献をその全開示について参照により本明細書に援用する。
【００８２】
本明細書の態様は、ＲＡＲαアゴニストを含む組成物を部分的には提供する。ＲＡＲαアゴニストは本明細書に開示の化合物を含む。
【００８３】
（ＣＡＲ導入免疫細胞）
腫瘍細胞は主要組織適合遺伝子複合体（ＭＨＣ）発現を下方制御することが多く、さらには、腫瘍細胞がＭＨＣアレルを発現する場合、免疫優性エピトープが未知であることが多い。従って、ＭＨＣ依存性がん免疫治療法は有効でないことが多い。キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）導入免疫細胞はがん細胞上の標的抗原とＭＨＣ非依存的に反応する。ＣＡＲは抗原結合ドメインを介した標的細胞への結合を可能とし、ＣＡＲ導入細胞は、標的細胞に結合して腫瘍標的に対する導入細胞の活性化、増殖、及び細胞毒性を誘導することにより、ＭＨＣ非拘束的に標的細胞を破壊する。
【００８４】
本明細書では、『標的細胞』という用語は、ＣＡＲが結合することができる表面抗原を発現する細胞を指す。また、この抗原は『標的抗原』とも呼ばれ得る。標的抗原は、ＣＡＲががん細胞を非がん細胞よりも優先的に標的とできるようにがん細胞上で差次的に発現されている抗原である。
【００８５】
ＣＡＲ導入免疫細胞が標的抗原にいったん結合すると、内部にある刺激性ドメインが免疫細胞の完全な活性化に必要なシグナルをもたらす。この完全活性化状態では、免疫細胞はより効率的に増殖及びがん細胞への攻撃を行える。
【００８６】
ＣＡＲ導入細胞は、様々な種類の抗原を認識でき、タンパク質のみならず、腫瘍細胞表面上で典型的に発現される糖質及び糖脂質構造も認識できる。Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）認識とは異なり、抗原はＭＨＣにより処理及び提示される必要はないので、ＨＬＡ型とは無関係に同じ腫瘍抗原を発現する患者の全てに対して同じＣＡＲ分子を用いることができる。
【００８７】
ＣＡＲは、少なくとも１つの抗原結合ドメイン、膜貫通ドメイン、及び１つ又は複数の刺激性細胞内ドメイン（細胞質シグナル伝達ドメイン又は細胞内シグナル伝達ドメインとも呼ばれる）を含む組換えポリペプチド構築物を含む。抗原結合ドメインはＣＡＲ導入免疫細胞が標的組織に特異的に結合することを可能とし、膜貫通ドメインはＣＡＲを免疫細胞に固定し、刺激性細胞内ドメインは形質導入細胞での長期生存（ｐｅｒｓｉｓｔｅｎｃｅ）、細胞交通（ｔｒａｆｆｉｃｋｉｎｇ）、及びエフェクター機能を誘導する。
【００８８】
ＣＡＲの抗原結合ドメインは、モノクローナル抗体由来であることが多いが、他のリガンド（例えば、ヘレグリン、サイトカインなど）及び他の受容体（例えば、ＮＫｐ３０）も使用できる。抗原結合ドメインは抗原結合機能を持つ抗体の任意の抗体断片を含み得る。例えば、ＣＡＲ抗原結合ドメインは、モノクローナル抗体の重鎖及び軽鎖の可変領域から形成される一本鎖可変断片（ｓｃＦｖ）に寄与されることも多い。
【００８９】
一態様では、膜貫通ドメインは、Ｔ細胞受容体複合体と会合するゼータ（ζ）鎖の配列（ヒトＣＤ３ζ鎖の細胞内ドメインなど）を含む。
【００９０】
刺激性細胞内ドメインは、ＣＤ２８、４−１ＢＢ（ＣＤ１３７）、ＣＤ１３４（ＯＸ−４０）、ＩＣＯＳ、及びＣＤ４０Ｌの１つ以上を含み得る。
【００９１】
抗原結合ドメイン、膜貫通ドメイン、及び（１つ又は複数の）刺激性細胞内ドメインは、直接に又はスペーサー配列を介して、結合されている。
【００９２】
ＣＡＲ配列は発現ベクター内に組み込まれている。様々な発現ベクターが本分野で周知だが、こうしたベクターを利用してもよい。いくつかの実施形態では、ベクターはレトロウイルスベクター又はレンチウイルスベクターであるものである。別の実施形態では、ベクターはアデノ随伴ウイルスに由来するものである。
【００９３】
免疫細胞はＣＡＲを形質導入され、その後、ＣＡＲは細胞表面に発現される。典型的には、免疫細胞はＣＡＲを安定的に発現するが、いくつかの実施形態では、免疫細胞はＣＡＲを一過的に発現する。免疫細胞は、このため、ＣＡＲをコードする核酸（例えば、ｍＲＮＡ、ｃＤＮＡ、ＤＮＡ）を形質導入される。本開示の免疫細胞は、哺乳類細胞（例えば、ヒト細胞）を包含するものであり、自己細胞、同系細胞、同種異系細胞、及び、いくつかの場合では、異種細胞であってもよい。これらの細胞は、ＣＡＲを発現するように設計されるので、天然にはみられない。免疫細胞の例として、Ｔリンパ球（Ｔ細胞）、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、ＮＫＴ細胞、及び貪食細胞（単球及び樹状細胞を含む）が挙げられる。
【００９４】
その後、ＣＡＲ導入免疫細胞は、単回投与又は複数回投与に適した細胞数を得るために、培養されてその細胞集団を増やされる。ある実施形態では、１種類以上のレチノイド及び／又はレキシノイド活性剤が、培養期間中に拡大培養物に添加され、ＣＡＲ導入細胞への直接的な効果を奏する。例えば、ＣＡＲ−ＭＩＣの培養の際に、拡大培養物に添加された１種類以上のレチノイド及び／又はレキシノイド活性剤は、例えばＴｒｅｇ細胞の発生の抑制を行う能力及び／又はＴｈ１７細胞の発生を促進する能力で選ばれるだろう。いくつかの実施形態では、１種類以上のレチノイド及び／又はレキシノイド活性剤は、ＣＡＲ導入免疫細胞の拡大培養物中に含まれ、対象へ直接に投与される。
【００９５】
（免疫チェックポイント標的がん治療剤）
免疫チェックポイント治療法は、抗腫瘍活性（又は他の治療活性）を実現できるようこれらのチェックポイントを介したＴ細胞分化プログラムの進行を促進するために、Ｔ細胞の分化及び活性化における制御経路を標的とする。免疫チェックポイント治療法をもたらす剤は一般的に免疫チェックポイント阻害剤と呼ばれ、阻害されるのはＴ細胞分化での抑制（ｃｈｅｃｋ）であることを理解されたい。従って、多くの免疫チェックポイント阻害剤が受容体−リガンド対の相互作用も阻害し（例えば、抗ＰＤ−１、抗ＰＤ−Ｌ１、ＣＴＬＡ−４）、一方で、他のもの（抗ＯＸ４０及び抗ＩＣＯＳなど）はＴ細胞分化の抑制を解放して又は他のやり方で阻害して最終的にエフェクター機能の促進及び／又は制御機能の阻害を果たす標的のアゴニストとして働く。
【００９６】
ＣＡＲ導入免疫細胞と併せての、免疫チェックポイント阻害剤分子の抗腫瘍効果の増強剤としてのレチノイド及びレキシノイド受容体活性分子（ＲＡＲ／ＲＸＲ活性剤）の使用が本明細書に開示される。免疫チェックポイントタンパク質を阻害する分子として、ＰＤ−１、ＰＤ−１リガンド、ＣＴＬＡ−４、ＴＩＭ−３、ＬＡＧ−３、Ｂ７−Ｈ３、及びＢ７−Ｈ４の１つ以上に特異的な抗体が挙げられる。
【００９７】
Ｐｒｏｇｒａｍｅｄ  Ｄｅａｔｈ−１（ＰＤ−１）は、Ｔ細胞上のチェックポイントタンパク質であり、通常、Ｔ細胞が体内で他の細胞を攻撃するのを防ぐことを助ける『オフスイッチ』の一種として働く。これをなすために、ＰＤ−１は、いくつかの正常細胞及びがん細胞上のタンパク質であるＰｒｏｇｒａｍｍｅｄ  Ｄｅａｔｈ  Ｌｉｇａｎｄ−１（ＰＤ−Ｌ１）と結合する。ＰＤ−１がＰＤ−Ｌ１に結合すると、Ｔ細胞は標的細胞を攻撃しない。いくつかのがん細胞は大量のＰＤ−Ｌ１を持っており、この大量のＰＤ−Ｌ１はそれらのがん細胞が免疫攻撃を回避することを助ける。ＰＤ−１又はＰＤ−Ｌ１のいずれかを標的とするモノクローナル抗体は、がん細胞への免疫応答をブーストすることができるものであり、ある種のがんの処置にかなり有望であることが示されている。ＰＤ−１／ＰＤ−Ｌ１を標的とするモノクローナル抗体の例として、抗ＰＤ−１モノクローナル抗体である、ニボルマブ（ＯＰＤＩＶＯ（登録商標）、Ｂｒｉｓｔｏｌ−Ｍｙｅｒｓ  Ｓｑｕｉｂｂ）及びペムブロリズマブ（ＫＥＹＴＲＵＤＡ（登録商標）、Ｍｅｒｃｋ＆Ｃｏ．）、ＢＭＳ−９３６５５９（Ｂｒｉｓｔｏｌ−Ｍｙｅｒｓ  Ｓｑｕｉｂｂ）、ピジリズマブ（Ｍｅｄｉｖａｔｉｏｎ）や、抗ＰＤ−Ｌ１モノクローナル抗体である、デュルバルマブ（ＭＥＤＩ４７３６、ＩＭＦＩＮＺＩ（商標）、Ｍｅｄｉｍｍｕｎｅ）、アテゾリズマブ（ＭＰＤＬ３２８０Ａ、ＴＥＣＥＮＴＲＩＱ（登録商標）、Ｈｏｆｆｍａｎ−Ｌａ  Ｒｏｃｈｅ）、アベルマブ（ＢＡＶＥＮＣＩＯ（登録商標）、ＥＭＤ  Ｓｅｒｏｎｏ）が挙げられる。これらの抗体は、悪性黒色腫（ＭＭ）、腎細胞癌（ＲＣＣ）、メルケル細胞癌、尿路上皮癌、及び非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）をはじめとする多様な癌の処置での有用性をさまざまに示してきた。また、ＰＤ−１／ＰＤ−Ｌ１相互作用の非抗体阻害剤も開発中であり、例えば、ステフィンＡ（ｓｔｅｆｉｎ  Ａ）に基づく組み換え小タンパク質（ＡＦＦＩＭＥＲ（登録商標）分子と呼ばれる）が挙げられる。ＰＤ−１は、ＰＤ−Ｌ１に加えて、ＰＤ−Ｌ２にも結合することができる。ＰＤ−Ｌ１は、ＰＤ−１に加えて、Ｂ７−１（ＣＤ８０）にも結合することができる。
【００９８】
ＣＴＬＡ−４は、ＣＤ４及びＣＤ８Ｔ細胞の表面上やＣＤ２５＋，ＦＯＸＰ３＋Ｔ制御性（Ｔｒｅｇ）細胞上で発現する免疫チェックポイント分子である。ＣＴＬＡ−４は、Ｔ細胞応答を遮断する阻害シグナルを生成し、腫瘍成長を可能とする。抗ＣＴＬＡ−４モノクローナル抗体（イピリムマブ（ＹＥＲＶＯＹ（登録商標）、Ｂｒｉｓｔｏｌ−Ｍｙｅｒｓ  Ｓｑｕｉｂｂ）など）は、動物モデルにおいて腫瘍の収縮を引き起こす。イピリムマブは、ＭＭ患者の全生存率を改善し、ＭＭの処置についての承認を受けている。ＲＣＣ及びＮＳＣＬＣでも同様に奏効が観察されている。抗ＣＴＬＡ−４抗体の他の例として、トレメリムマブ（Ｍｅｄｉｍｍｕｎｅ）が挙げられる。
【００９９】
ＣＴＬＡ−４遮断抗体であるイピリムマブは、黒色腫患者の一部でのみ持続的奏効を示し、全生存率への効果は限定的である。このことが、ＣＴＬＡ−４遮断への耐性機序の究明や黒色腫耐性の強力なメディエーターとしての細胞質内酵素インドールアミン−２，３−ジオキシゲナーゼ（ＩＤＯ）の同定につながった。ＩＤＯは直接にエフェクターＴ細胞を抑制し且つ抑制性Ｔｒｅｇ細胞を活性化することによりＣＴＬＡ−４遮断の抗腫瘍効果を調節する。ＩＤＯの阻害剤（１−メチル−トリプトファンなど）は、Ｔ細胞依存性抗腫瘍効果を持ち、ＣＴＬＡ−４遮断抗体と相乗的に作用して腫瘍成長の制御や生存率の増加をもたらす。
【０１００】
ＴＩＭ−３（Ｔ−ｃｅｌｌ  ｉｍｍｕｎｏｇｌｏｂｕｌｉｎ  ａｎｄ  ｍｕｃｉｎ−ｄｏｍａｉｎ  ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ−３）は、ＩＦＮγ産生性ＣＤ４＋ヘルパーＴ細胞１型（Ｔｈ１）及びＣＤ８＋細胞傷害性Ｔ細胞１型（Ｔｃ１）上で選択的に発現する分子である。ＴＩＭ−３は、Ｔｈ１及びＴｃ１Ｔ細胞の応答の持続期間及び規模を特異的に制限する機能を有する免疫チェックポイント受容体である。ＴＩＭ−３に対する抗体の例が、米国特許出願公開第２０１６／００７５７８３号に記載されており、抗ＴＩＭ−３抗体に関するこの文献の開示の全てについてこの文献を参照により本明細書に援用する。
【０１０１】
ＬＡＧ−３（ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅ−ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ  ｇｅｎｅ  ３；ＣＤ２２３）は、ＣＴＬＡ−４及びＰＤ−１と同様に、Ｔ細胞の、細胞増殖、活性化、及び恒常性を負に制御し、Ｔｒｅｇの抑制性機能に関与する。ＬＡＧ−３に対する抗体の例として、ＧＳＫ２８３１７８１（ＧｌａｘｏＳｍｉｔｈＫｌｉｎｅ）、ＢＭＳ−９８６０１６（Ｂｒｉｓｔｏｌ−Ｍｙｅｒｓ  Ｓｑｕｉｂｂ）、及び米国特許出願公開第２０１１／０１５０８９２号に記載の抗体が挙げられ、抗ＬＡＧ−３抗体に関するこの文献の開示の全てについてこの文献を参照により本明細書に援用する。
【０１０２】
Ｂ７ファミリーは、抗原提示細胞の表面上で発現しＴ細胞上のリガンドと相互作用する共刺激タンパク質のファミリーである。Ｂ７−Ｈ３（ＣＤ２７６）は、このファミリーの分子の１つである。Ｂ７−Ｈ３に対する抗体であるエノブリツズマブ（ｅｎｏｂｌｉｔｕｚｕｍａｂ）（ＥＭＰＬＩＣＩＴＩ（商標）、Ｂｒｉｓｔｏｌ−Ｍｙｅｒｓ  Ｓｑｕｉｂｂ）が多発性骨髄腫の処置について承認を受けている。このファミリーの別の分子にＢ７−Ｈ４（Ｖ−ｓｅｔ  ｄｏｍａｉｎ−ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ  Ｔ−ｃｅｌｌ  ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ  １）があるが、これに対する抗体が開発中である。
【０１０３】
他の免疫チェックポイント阻害剤標的、Ｂ及びＴ細胞アテニュエーター（ＢＴＬＡ）、誘導性共刺激因子（ＩＣＯＳ）、ＯＸ４０（ｔｕｍｏｒ  ｎｅｃｒｏｓｉｓ  ｆａｃｔｏｒ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ｓｕｐｅｒｆａｍｉｌｙ，  ｍｅｍｂｅｒ  ４）などが、潜在的に本開示の方法において役立つ。いくつかの抗ＯＸ４０アゴニストモノクローナル抗体が早期がん臨床試験中であり、こうしたものとして、ＭＥＤＩ０５６２及びＭＥＤＩ６４６９（Ｍｅｄｉｍｍｕｎｅ）、ＭＯＸＲ０９１６（Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ）、並びにＰＦ−０４５１８６００（Ｐｆｉｚｅｒ）が挙げられる。同様に、抗ＩＣＯＳアゴニスト抗体では、ＪＴＸ−２０１１（Ｊｏｕｎｃｅ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ）が挙げられる。
【０１０４】
ＣＴＬＡ−４阻害剤、ＰＤ−１阻害剤、ＴＩＭ−３阻害剤、ＬＡＧ−３阻害剤、ＰＤ−１リガンド（ＰＤＬ−１など）、ＰＤ−１リガンドの阻害剤、ＯＸ４０アゴニスト、ＩＣＯＳアゴニスト、Ｂ７−Ｈ３タンパク質、Ｂ７−Ｈ３タンパク質の阻害剤、Ｂ７−Ｈ４タンパク質、及びＢ７−Ｈ４タンパク質の阻害剤を含む免疫チェックポイント標的免疫治療剤の抗がん活性を増強する方法が本明細書に開示される。ある実施形態では、阻害剤は抗体である。
【０１０５】
免疫チェックポイント標的免疫治療法抗体は全抗体又は抗体断片であり得る。本明細書では、『抗体の断片』、『抗体断片』、及び『抗体の機能性断片』といった用語は、抗原に特異的に結合する能力を持つ抗体の１種類又は複数種類の断片を互換的に意味する。抗体断片は、望ましくは、例えば、１種類又は複数種類の相補性決定領域（ＣＤＲ）、可変領域（又はその一部）、定常領域（又はその一部）、又はこれらの組み合わせを含む。抗体断片の例としては、これらに限定されるわけではないが、Ｆａｂ断片（ＶＬ、ＶＨ、ＣＬ、及びＣＨ１ドメインからなる一価断片）、Ｆ（ａｂ’）２断片（ヒンジ領域でジスルフィド架橋により結合された２つのＦａｂ断片を含む二価断片）、Ｆｖ断片（ある抗体の単腕のＶＬ及びＶＨドメインからなる断片）、一本鎖Ｆｖ（前述のＶＬ及びＶＨドメインがペプチドリンカー配列により接続されている断片）、Ｆａｂ’断片（Ｆ（ａｂ’）２断片のジスルフィド架橋をマイルドな還元条件を用いて分解することにより生じる断片）、ジスルフィド結合により安定化されたＦｖ断片（ｄｓＦｖ）、及びドメイン抗体（ｄＡｂ）（抗原に特異的に結合する、抗体の単一の可変領域ドメイン（ＶＨ又はＶＬ）のポリペプチド）が挙げられる。また、抗原結合抗体断片のこれらの形態のいずれもがＣＡＲの抗原結合ドメインを提供できることを理解されたい。
【０１０６】
代替的実施形態では、抗体は免疫チェックポイント標的分子に同様に結合する別のタンパク質で置換される。ときとして、これらの非抗体分子は免疫チェックポイント標的分子のリガンド又は結合パートナーの細胞外部分を、すなわち、少なくとも免疫チェックポイント標的分子への結合の媒介に必要な細胞外部分を含む。いくつかの実施形態では、このリガンドの細胞外結合部分は追加のポリペプチドと融合タンパク質中で接続されている。いくつかの実施形態では、この追加のポリペプチドは抗体のＦｃ領域又は定常領域を含む。
【０１０７】
（処置法）
ＣＡＲ導入免疫細胞及び１種類以上のＲＡＲ／ＲＸＲ活性剤を投与することにより哺乳類においてがんを処置する方法が本明細書で提供される。より具体的には、これらの方法は、がん免疫治療法の方法、及び、ＣＡＲ導入免疫細胞免疫治療法を増強する方法である。いくつかの実施形態では、ＣＡＲ導入免疫細胞及び１種類以上のＲＡＲ／ＲＸＲ活性剤に加えて、免疫チェックポイント阻害剤が投与される。また、がんに罹っている対象において、腫瘍負荷（ｔｕｍｏｒ  ｂｕｒｄｅｎ）を減少させる方法、及び、無病生存を増加させる方法も提供される。別の実施形態は、がんの処置における、がん免疫治療法における、及びＣＡＲ導入免疫細胞媒介免疫治療法の増強における使用のための、前述の剤を含む組成物に関する。さらに別の実施形態は、がんの処置のための、がん免疫治療法のための、及びＣＡＲ導入免疫細胞媒介免疫治療法の増強のための医薬の製造における使用のための組成物に関する。用いられる複数の剤が別々の組成物又は医薬内で提供されてもよく、これらの組成物又は医薬は別々の投与経路で及び／又は別々の時間に投与されてもよく、しなしながら、こうした複数の組成物又は医薬の使用は被投与患者が複数の薬剤の組み合わさった相互作用的な活性の利益を受けるように調整されていることを理解されたい。本明細書に記載のがんを処置する方法のそれぞれについて、対応するがん免疫治療法の方法が存在する。がんを処置する方法及びがん免疫治療法の方法のそれぞれについて、対応するがん処置／免疫治療法を増強する方法が存在する。
【０１０８】
種々の実施形態では、１種類以上のＲＡＲαアゴニストがＣＡＲ導入免疫細胞又は免疫チェックポイント阻害剤を受ける又は受ける予定の対象に投与される。これらの実施形態では、これらの分化誘導性ＲＡＲαアゴニストは、ＣＡＲ導入免疫細胞又は免疫チェックポイント阻害剤が対象内に存在するインターバルの前及び／又はその間に投与される。ＲＡＲαアゴニストはＣＹＰ２６耐性であることが好ましい。免疫調節性ＲＡＲ／ＲＸＲ活性剤の投与はＲＡＲαアゴニストの投与と連係されるが、通常は、同時には行われない。分化誘導性ＲＡＲ活性剤（例えば、ＲＡＲαアゴニスト）が免疫調節性ＲＡＲ／ＲＸＲ活性剤の投与の前の時間インターバルに投与されることが好ましい。従って、いくつかの実施形態では、患者は、ある期間にわたる分化誘導性ＲＡＲ活性剤の投与により（１種類又は複数種類の）ＲＡＲ／ＲＸＲ活性剤で前処置され、その後、（１種類又は複数種類の）免疫調節性ＲＡＲ／ＲＸＲ活性剤がある期間にわたり投与され、その後、ＣＡＲ−ＭＩＣが投与される。代替的実施形態では、分化誘導性ＲＡＲ活性剤のみがＣＡＲ−ＭＩＣの投与の前に投与され、（１種類又は複数種類の）免疫調節性ＲＡＲ／ＲＸＲ活性剤がＣＡＲ−ＭＩＣ投与時に又はその後の時点に開始して投与される。いずれかの選択肢に係る実施形態では、（１種類又は複数種類の）免疫調節性ＲＡＲ／ＲＸＲ活性剤は、ＣＡＲ−ＭＩＣが患者内に存在する間に、すなわち、ＣＡＲ−ＭＩＣ投与の時点又はそれに続く時点で、投与される。いずれかの選択肢に係る実施形態では、（１種類又は複数種類の）免疫調節性ＲＡＲ／ＲＸＲ活性剤は、投与前にＣＡＲ−ＭＩＣの培養培地に含められる。さらなる実施形態では、分化誘導性ＲＡＲ活性剤及び免疫調節性ＲＡＲ／ＲＸＲ活性剤は、ＣＡＲ−ＭＩＣが患者内に存在する間に投与される。好適な実施形態では、分化誘導性及び免疫調節性の活性剤が、特に、免疫調節性ＲＡＲ／ＲＸＲ活性剤がＲＡＲαアゴニストを含む場合、別々の時間インターバル内に与えられる。
【０１０９】
いくつかの実施形態では、本方法はＣＡＲ導入免疫細胞及びＲＡＲ活性剤を投与することを含む。いくつかの実施形態では、本方法はＣＡＲ導入免疫細胞及びＲＡＲαアンタゴニストを投与することを含む。いくつかの実施形態では、本方法はＣＡＲ導入免疫細胞及びＲＡＲγアゴニストを投与することを含む。いくつかの実施形態では、本方法はＣＡＲ導入免疫細胞及び２種類のＲＡＲ活性剤を投与することを含む。いくつかの実施形態では、本方法はＣＡＲ導入免疫細胞並びにＲＡＲαアンタゴニスト及びＲＡＲアゴニストを投与することを含む。いくつかの実施形態では、本方法はＣＡＲ導入免疫細胞並びにＲＡＲαアンタゴニスト及びＲＡＲγ選択的アゴニストを投与することを含む。ある実施形態では、ＲＡＲαアンタゴニストは、ＡＧＮ１９４３０１、ＡＧＮ１９３４９１、ＡＧＮ１９３６１８、ＡＧＮ１９４２０２、ＡＧＮ１９４５７４、ＶＴＰ１９６６９６、ＡＧＮ１９４７７、ＢＭＳ１８５４１１、ＢＭＳ６１４、Ｒｏ４１−５２５３、又はＲｏ４６−５４７１である。いくつかの実施形態では、ＲＡＲアゴニストは、ＡＧＮ１９０１８３、ＡＧＮ１９０２０５、ＡＦＮ２０４６４７、又はタザロテンである。いくつかの実施形態では、ＲＡＲγ選択的アゴニストは、ＣＤ４３７、ＣＤ２３２５、ＣＤ６６６、又はＢＭＳ９６１である。
【０１１０】
いくつかの実施形態では、本方法はＣＡＲ導入免疫細胞及びＲＸＲ活性剤を投与することを含む。いくつかの実施形態では、本方法はＣＡＲ導入免疫細胞及びＲＸＲアンタゴニストを投与することを含む。いくつかの実施形態では、ＲＸＲアンタゴニストは、ＡＧＮ１９５３９３又はＬＧＮ１００８４９である。本明細書に記載の処置実施形態の様々な使用又は方法における複数種のＲＡＲ／ＲＸＲ活性剤の使用について、本明細書に開示の一般式の群（ｇｅｎｅｒａ）、その部分群、及び、個別種のいずれも、任意の他の一般式の群、その部分群、及び、個別種と組み合わせてもよく、各組み合わせは別個の実施形態を規定する。
【０１１１】
いくつかの実施形態では、本方法は１種類以上のＲＡＲαアゴニスト及びＣＡＲ導入免疫細胞を投与することを含む。いくつかの実施形態では、本方法は１種類以上のＲＡＲαアゴニスト及び１種類以上の免疫チェックポイント阻害剤を投与することを含む。さらなる別の実施形態では、本方法は、１種類以上のＲＡＲαアゴニストとＣＡＲ導入免疫細胞、及び１種類以上のＲＡＲαアゴニストと１種類以上の免疫チェックポイント阻害剤を投与することを含む。ある実施形態では、ＲＡＲαアゴニストは、ＩＲＸ５１８３（ＡＧＮ１９５１８３）である。本明細書に開示の処置実施形態の様々な使用又は方法における複数種のＲＡＲαの使用について、本明細書に開示の一般式の群（ｇｅｎｅｒａ）、その部分群、及び、個別種のいずれも、任意の他の一般式の群、その部分群、及び、個別種と組み合わせてもよく、各組み合わせは別個の実施形態を規定する。
【０１１２】
本明細書に記載の、化合物、医薬組成物、及び方法は、がんの処置に特に役立つ。本明細書では、『がん』という用語は、制御不能な又は無調節の細胞増殖、減少した細胞分化、周囲組織に浸潤する不適切な能力、及び／又は、異所での新規成長を確立する能力を特徴とする細胞障害を指す。『がん』という用語は、これらに限定されるわけではないが、固形腫瘍及び血液腫瘍を含む。『がん』という用語は、皮膚、組織、臓器、骨、軟骨、血液、及び血管の疾患を包含する。『がん』という用語は、さらに、原発性及び転移性のがんを包含する。がん幹細胞も『がん細胞』という用語に含まれる。
【０１１３】
本開示の方法は、本技術分野で知られている任意の種類のがんの処置に用いることができ、例えば、黒色腫、腎細胞癌、肺がん、膀胱がん、乳がん、子宮頸がん、結腸がん、胆嚢がん、喉頭がん、肝がん、甲状腺がん、胃がん、唾液腺がん、前立腺がん、膵がん、血液がん、メルケル細胞癌などの処置に用いることができる。いくつかの実施形態では、血液がんは、白血病、リンパ腫、骨髄異形成症候群、又は骨髄腫である。精選実施形態では、特定種のがんが処置される。別の精選実施形態では、特定種のがんが処置から除外される。
【０１１４】
本明細書では、『処置』及び『処置する』などといった用語は、所望の薬理学的及び／又は生理学的効果を得ることを指す。好ましくは、この効果は治療的であり、すなわち、当該効果は疾患及び／又は当該疾患に起因する有害症状を部分的に又は完全に治す。『治療有効量』は、所望の治療結果を得るために、必要な期間及び投与量において、有効な量を指す。治療有効量は、個体の、病状、年齢、性別、及び体重、並びに、ＣＡＲ導入免疫細胞及び１種類以上のレチノイド及び／又はレキシノイド活性剤が個体において所望の応答を誘起する能力などの要因に応じて変わり得る。例えば、本明細書に開示のレチノイド活性剤の治療有効量は、ＣＡＲ導入免疫細胞の抗がん活性を増強する又は対象での無病生存の発生率又は期間を増加させる量である。
【０１１５】
さらに、１種類以上のレチノイド及び／又はレキシノイド活性剤は、より低い用量のＣＡＲ導入免疫細胞を同じ効力で投与することを可能とすることにより、ＣＡＲ導入免疫細胞に伴う毒性を減少させることができるし、あるいは、より高い用量のＣＡＲ導入免疫細胞が同じ安全度で投与され得る。
【０１１６】
がん幹細胞は、種々の機構により数えることができ、それにより、ＣＹＰ２６耐性ＲＡＲαアゴニストの投与の結果としてのそれらの数の減少が測定される。本明細書に開示の実施形態では、ＲＡＲαアゴニストの投与の結果として、骨髄内のがん幹細胞は、約０．５ｌｏｇより多く、約１ｌｏｇより多く、約１．５ｌｏｇより多く、約２．０ｌｏｇより多く、約２．５ｌｏｇより多く、約３．０ｌｏｇより多く、約３．５ｌｏｇより多く、約４．０ｌｏｇより多く、約４．５ｌｏｇより多く、又は約５．０ｌｏｇより多く、減少される。
【０１１７】
『処置する』又は『処置』という用語は、人又は他の動物における、疾患の、診断、緩和、又は予防をはじめとする、任意の種類の処置活動、又は、その他のやり方で、人又は他の動物の身体の構造又は任意の機能に影響する活動を広く含む。処置活動は、本明細書に記載の、医薬、剤形、及び医薬組成物を、患者に、特に、本明細書に記載の様々な処置方法に従って、医療従事者、患者自身、又は任意の別の人物によるものであるかを問わず、投与することを含む。処置活動は、医師、医師助手、実地看護師などの医療従事者の、命令、指示、及び助言であって、その後に他の医療従事者又は患者自身をはじめとする他の人物により実行されるものを含む。ある実施形態では、処置活動は、特定の医薬又はその組み合わせがある症状の処置のために選ばれるべきであり、そして、当該医薬が実際に用いられることを、保険会社又は薬剤給付管理会社などがやるように、当該医薬への保険適用を承認し、代替医薬への適用を拒否し、採用医薬品集（ｄｒｕｇ  ｆｏｒｍｕｌａｒｙ）に当該医薬を含め若しくは採用医薬品集から代替医薬を除き、又は当該医薬の使用への奨励金を提供することにより、奨励、誘導、又は命令することも含む。ある実施形態では、処置活動は、特定の医薬がある症状の処置のために選ばれるべきであり、そして、当該医薬が実際に用いられることを、病院、診療所、保健維持機構、医療又は医師の団体などが策定するように、方針又は実施基準により、奨励、誘導、又は命令することも含む。
【０１１８】
ＣＡＲ導入免疫細胞の典型的な用量は、例えば、投与当たり細胞１×１０６から３×１０１０個にできる。いくつかの実施形態では、ＣＡＲ導入免疫細胞は、少なくとも１×１０６個の投与当たりの細胞数、少なくとも３×１０６個の投与当たりの細胞数、少なくとも１×１０７個の投与当たりの細胞数、少なくとも３×１０７個の投与当たりの細胞数、少なくとも１×１０８個の投与当たりの細胞数、少なくとも３×１０８個の投与当たりの細胞数、少なくとも１×１０９個の投与当たりの細胞数、少なくとも３×１０９個の投与当たりの細胞数、少なくとも１×１０１０個の投与当たりの細胞数、少なくとも３×１０１０個の投与当たりの細胞数の用量で、又は前述の値のいずれか２つにより区切られた範囲で、投与される。いくつかの実施形態では、ＣＡＲ導入免疫細胞の典型的な用量は、例えば、患者体重の１キログラム当たり細胞１×１０５から１×１０８個の範囲にできる。いくつかの実施形態では、ＣＡＲ導入免疫細胞は、少なくとも１×１０５個のｋｇ当たりの細胞数、少なくとも３×１０５個のｋｇ当たりの細胞数、少なくとも６×１０５個のｋｇ当たりの細胞数、少なくとも１×１０６個のｋｇ当たりの細胞数、少なくとも３×１０６個のｋｇ当たりの細胞数、少なくとも６×１０６個のｋｇ当たりの細胞数、少なくとも１×１０７個のｋｇ当たりの細胞数、少なくとも３×１０７個のｋｇ当たりの細胞数、少なくとも６×１０７個のｋｇ当たりの細胞数の用量で、又は前述の値のいずれか２つにより区切られた範囲で、投与される。
【０１１９】
治療的又は予防的効力は処置患者の定期的評価により観察できる。数日又はそれよりも長期にわたる反復投与について、症状に応じて、疾患又は疾患症状の所望の抑制が得られるまで処置は反復され得る。しかし、他の投与レジメンも、有用であるかもしれず、本開示の範囲に含まれる。所望の投与量は、ＣＡＲ導入免疫細胞の、単回ボーラス投与、複数回ボーラス投与、又は持続注入投与により、送達され得る。種々の実施形態において、持続注入は、３０分、１時間、数時間、１日、又は数日にわたってもよい。処置は１回又は複数回の注入を含んでもよい。
【０１２０】
いくつかの実施形態では、ＣＡＲ導入免疫細胞は追加の剤のその他の前処置投与又は同時投与を伴って投与される。いくつかの実施形態では、ＣＡＲ導入免疫細胞を受ける予定の対象は、骨髄非破壊的リンパ球枯渇レジメントで、例えば、これに限定されるわけではないが、シクロホスファミド及び／又はフルダラビンによる処置で、前処置される。いくつかの実施形態では、ＣＡＲ導入免疫細胞はインターロイキン−２とともに投与される。
【０１２１】
ＣＡＲ導入免疫細胞は１回又は複数回対象に投与されてもよい。本細胞は、毎週、隔週、毎月、隔月で、又はがん進行の兆候がみられた際に、投与されてもよい。
【０１２２】
投与経路に加えてがんの種類及び処置対象の患者に依存して、開示の、ＲＡＲα選択的アゴニスト、ＲＡＲαアンタゴニスト、ＲＡＲγアゴニスト、及びＲＸＲアンタゴニストは、それを必要とする患者に異なる治療有効用量で投与されてもよい。
【０１２３】
一方で、哺乳類に、特に、人に、投与される用量は、本方法に関して、妥当な期間にわたり当該哺乳類で治療反応をもたらすのに十分であるべきである。当業者であれば、正確な用量及び組成の選択並びに最適な送達レジメンの選択が、特定化合物の効能、処置対象の患者の、年齢、症状、体重、性別、及び奏効、並びに疾患のステージ／重篤度に加えて、とりわけ、製剤の薬理学的特性、処置対象の症状の性質及び重篤度、並びにレシピエントの体調及び精神的鋭さにより影響されるものであることを理解するだろう。
【０１２４】
ＲＡＲαアンタゴニストの典型的な用量は、０．０１から３００ｍｇ／ｍ２／日であるが、この例の範囲を下回る又は上回る用量も本開示の範囲に含まれる。１日用量は、約０．５から１００ｍｇ／ｍ２／日、１から９０ｍｇ／ｍ２／日、５から８０ｍｇ／ｍ２／日に、又は、少なくとも、０．０２、０．０３、０．０５、０．０７、０．１、０．２、０．３、０．５、０．７、１、２、３、５、７、１０、１５、２０、２５、３０、５０、７０、若しくは１００ｍｇ／ｍ２／日に、又は、多くとも、０．１、０．２、０．３、０．５、０．７、１、２、３、５、７、１０、１５、２０、２５、３０、５０、６０、７０、８０、９０、１００、１２５、１５０、１７５、２００、２２５、２５０、２７５、若しくは３００ｍｇ／ｍ２／日に、又は、前述の値のいずれか２つにより区切られた範囲にできる。
【０１２５】
ＲＡＲγアゴニストの典型的な用量は、０．０１から３００ｍｇ／ｍ２／日であるが、この例の範囲を下回る又は上回る用量も本開示の範囲に含まれる。１日用量は、約０．５から１００ｍｇ／ｍ２／日、１から９０ｍｇ／ｍ２／日、５から８０ｍｇ／ｍ２／日に、又は、少なくとも、０．０２、０．０３、０．０５、０．０７、０．１、０．２、０．３、０．５、０．７、１、２、３、５、７、１０、１５、２０、２５、３０、５０、７０、若しくは１００ｍｇ／ｍ２／日に、又は、多くとも、０．１、０．２、０．３、０．５、０．７、１、２、３、５、７、１０、１５、２０、２５、３０、５０、６０、７０、８０、９０、１００、１２５、１５０、１７５、２００、２２５、２５０、２７５、若しくは３００ｍｇ／ｍ２／日に、又は、前述の値のいずれか２つにより区切られた範囲にできる。
【０１２６】
ＲＸＲアンタゴニストの典型的な用量は、０．０１から３００ｍｇ／ｍ２／日であるが、この例の範囲を下回る又は上回る用量も本開示の範囲に含まれる。１日用量は、約０．５から１００ｍｇ／ｍ２／日、１から９０ｍｇ／ｍ２／日、５から８０ｍｇ／ｍ２／日に、又は、少なくとも、０．０２、０．０３、０．０５、０．０７、０．１、０．２、０．３、０．５、０．７、１、２、３、５、７、１０、１５、２０、２５、３０、５０、７０、若しくは１００ｍｇ／ｍ２／日に、又は、多くとも、０．１、０．２、０．３、０．５、０．７、１、２、３、５、７、１０、１５、２０、２５、３０、５０、６０、７０、８０、９０、１００、１２５、１５０、１７５、２００、２２５、２５０、２７５、若しくは３００ｍｇ／ｍ２／日に、又は、前述の値のいずれか２つにより区切られた範囲にできる。
【０１２７】
非限定的な例として、本明細書に開示のＲＡＲαアゴニストを哺乳類に投与する場合、治療有効量は、通常、約１ｍｇ／ｍ２／日から約１００ｍｇ／ｍ２／日の範囲内であってもよい。いくつかの実施形態では、本明細書に開示のＲＡＲαアゴニストの有効量は、約５ｍｇ／ｍ２／日から約９０ｍｇ／ｍ２／日、約１０ｍｇ／ｍ２／日から約８０ｍｇ／ｍ２／日、約１５ｍｇ／ｍ２／日から約７０ｍｇ／ｍ２／日、約２０ｍｇ／ｍ２／日から約６５ｍｇ／ｍ２／日、約２５ｍｇ／ｍ２／日から約６０ｍｇ／ｍ２／日、又は約３０ｍｇ／ｍ２／日から約５５ｍｇ／ｍ２／日であってもよい。いくつかの実施形態では、本明細書に開示の化合物又は組成物の治療有効量は、少なくとも１０ｍｇ／ｍ２／日、少なくとも１５ｍｇ／ｍ２／日、少なくとも２０ｍｇ／ｍ２／日、少なくとも２５ｍｇ／ｍ２／日、少なくとも３０ｍｇ／ｍ２／日、少なくとも３５ｍｇ／ｍ２／日、少なくとも４０ｍｇ／ｍ２／日、少なくとも４５ｍｇ／ｍ２／日、少なくとも５０ｍｇ／ｍ２／日、少なくとも５５ｍｇ／ｍ２／日、少なくとも６０ｍｇ／ｍ２／日、少なくとも６５ｍｇ／ｍ２／日、又は少なくとも７５ｍｇ／ｍ２／日であってもよい。いくつかの実施形態では、本明細書に開示のＲＡＲαアゴニストの治療有効量は、多くとも１５ｍｇ／ｍ２／日、多くとも２０ｍｇ／ｍ２／日、多くとも２５ｍｇ／ｍ２／日、多くとも３０ｍｇ／ｍ２／日、多くとも３５ｍｇ／ｍ２／日、多くとも４０ｍｇ／ｍ２／日、多くとも４５ｍｇ／ｍ２／日、多くとも５０ｍｇ／ｍ２／日、多くとも５５ｍｇ／ｍ２／日、多くとも６０ｍｇ／ｍ２／日、多くとも６５ｍｇ／ｍ２／日、多くとも７０ｍｇ／ｍ２／日、多くとも８０ｍｇ／ｍ２／日、多くとも９０ｍｇ／ｍ２／日、又は多くとも１００ｍｇ／ｍ２／日であってもよい。
【０１２８】
人体の平均表面積は、成人男性で１．９ｍ２、成人女性で１．６ｍ２、１２〜１３歳の子どもで１．３３ｍ２であると、一般的に受け入れられている。これらの値を前述の段落の値に対して１日の投与についての用量範囲を計算するために用いることができる。ＲＡＲ／ＲＸＲ活性剤の１日の総投与量は、単回投与として、又は、８から１６時間又は１０から１４時間の間を置いて２４時間以内に投与される２回の投与として、投与できる。ＲＡＲ／ＲＸＲ活性剤はＣＡＲ導入免疫細胞と連携して投与され、上述のように、治療的又は予防的な効力は処置患者の定期的評価により観察できる。数日又はそれよりも長期にわたる反復投与について、症状に応じて、疾患又は疾患症状の所望の抑制が得られるまで処置は反復され得る。しかし、他の投与レジメンも、有用であるかもしれず、本開示の範囲に含まれる。所望の投与量は、組成物の、単回ボーラス投与、複数回ボーラス投与、又は持続注入投与により、送達され得る。
【０１２９】
レチノイド及び／又はレキシノイド活性剤は、非経口投与、経口投与、静脈内投与、腹腔内投与、皮下投与、肺内投与、経皮投与、筋肉内投与、鼻腔内投与、口腔投与、舌下投与、又は坐剤投与をはじめとする標準投与法を用いて哺乳類に投与できる。本明細書では、『非経口』という用語は、静脈内投与、筋肉内投与、皮下投与、直腸投与、膣内投与、及び腹腔内投与を含む。ＣＡＲ導入免疫細胞は、静脈内注射、腹腔内注射、又は皮下注射により、末梢的全身投与を用いて、哺乳類に投与される。レチノイド及び／又はレキシノイド活性剤は、例えば、丸剤、錠剤、又はカプセル剤として、経口投与に適合していることが好ましい。
【０１３０】
投与は連続的でも間欠的でもよい。また、投与量は投与の時期及び頻度により決定されてもよい。従って、本明細書に開示のＲＡＲαアゴニストは、随意に後に休薬期間（無薬剤期間）を置くかたちで、ある期間にわたり、毎日、毎週、隔週、又は毎月の頻度で与えられ得るものであり、また、この薬剤投与／休薬期間サイクルは必要なだけ繰り返され得る。ある実施形態では、ＲＡＲαアゴニストの１日の総投与量は、単回投与として、又は、８から１６時間又は１０から１４時間の間を置いて２４時間以内に投与される２回の投与として、投与できる。
【０１３１】
一実施形態では、ＲＡＲαアゴニストは、ＣＡＲ導入免疫細胞の投与の前に、ある期間にわたり、すなわち、少なくとも２日、少なくとも３日、少なくとも４日、少なくとも５日、少なくとも６日、少なくとも１週、少なくとも２週、少なくとも３週、又は少なくとも１ヶ月にわたり、毎日投与される。いくつかの実施形態では、ＲＡＲαアゴニストは、自己ＣＡＲ導入免疫細胞の生成のために患者の末梢血リンパ球を採取する１〜７日内に開始して投与される。ＣＡＲ導入免疫細胞は、通常、ＲＡＲαアゴニストが残存するであろうよりもずっと長い長期間にわたって体内に存在し続けることになる。ＲＡＲαアゴニスト療法は、ある期間にわたり毎日施され、ＣＡＲ導入免疫細胞よりも長期間にわたって与えられてもよいと期待される。いくつかの実施形態では、ＲＡＲαは、合計で３０日、９０日、１年、２年、５年、又はこれ以上などの、ＣＡＲ導入免疫細胞よりも長期にわたって、投与される。
【０１３２】
さらに、ＣＡＲ導入免疫細胞は、単回ボーラス投与として、又は、投与毎に０．５〜２０×１０６細胞の毎日の、毎週の、又は毎月の投与により、投与される。
【０１３３】
本明細書に開示のＣＡＲ導入免疫細胞並びにレチノイド及び／又はレキシノイド活性剤は、実質的に同じ時間に（互いに１時間以内に）投与されてもよいし、異なった時間に投与されてもよい。いくつかの実施形態では、対象は、ＣＡＲ導入免疫細胞の投与の、少なくとも３０分前、少なくとも１時間前、又は少なくとも２時間前に、レチノイド及び／又はレキシノイド活性剤で前処置される。好ましい実施形態では、対象は、ＣＡＲ導入免疫細胞の投与の前の、少なくとも１２時間、又は、１日、２日、３日、４日、５日にわたって、レチノイド及び／又はレキシノイド活性剤で前処置される。いくつかの実施形態では、対象は、ＣＡＲ導入免疫細胞の投与の前の、５日から１０日にわたって、例えば、６日、７日、又は８日にわたって、又は、前述の値のいずれか２つにより区切られた任意の範囲にわたって、レチノイド及び／又はレキシノイド活性剤で前処置される。いくつかの実施形態では、レチノイド及び／又はレキシノイド活性剤は、ＣＡＲ導入免疫細胞投与の開始後に、例えば、同日、翌日、二日後、三日後、一週間後などに、投与される。ＲＡＲ／ＲＸＲ療法は、ある期間にわたり毎日の頻度で実施されるものであり、ＣＡＲ導入免疫細胞よりも長期にわたり行われ得ると予想される。いくつかの実施形態では、（１種類又は複数種類の）ＲＡＲ及び／又はＲＸＲ活性剤の投与は患者が持続的完全奏効（すなわち、ＣＡＲ導入免疫細胞の投与後の少なくとも６ヶ月にわたる完全奏効）を示すようになるときまで続く。別の実施形態では、（１種類又は複数種類の）ＲＡＲ及び／又はＲＸＲ活性剤の投与は腫瘍退縮が続く又は安定状態である限り続く。
【０１３４】
例示的統合実施形態では、患者は、まず、免疫療法を始める前の腫瘍負荷を減らすために、ＣＡＲ−ＭＩＣの計画投与の前の４週から８日の時間インターバルにわたって、ＣＹＰ２６耐性ＲＡＲαアゴニストで処置される。その後、ＣＡＲ−ＭＩＣの計画投与の１週間前から開始して、患者は、例えば、ＲＡＲαアンタゴニスト及びＲＡＲγアゴニストなどの、（１種類又は複数種類の）免疫調節性ＲＡＲ／ＲＸＲ活性剤で処置される。その後、処置は、（１種類又は複数種類の）免疫調節性ＲＡＲ／ＲＸＲ活性剤の継続投与とともに、又は、分化誘導性ＲＡＲ活性剤及び（１種類又は複数種類の）免疫調節性ＲＡＲ／ＲＸＲ活性剤及び場合によってはさらなるＣＡＲ−ＭＩＣの投与（これらは全て本明細書に開示の通りである）を含む周期とともに、継続される。
【０１３５】
本明細書に開示のＣＡＲ導入免疫細胞並びにレチノイド及び／又はレキシノイド活性剤は、少なくとも１種の別の抗がん剤（例えば、本技術分野で知られている任意の化学療法剤）をはじめとする他の薬剤、電離放射線、小分子抗がん剤、がんワクチン、生物学的療法（例えば、他のモノクローナル抗体、殺がんウイルス、遺伝子療法、及び養子Ｔ細胞移植）、及び／又は、手術と併せて投与されてもよい。別の実施形態では、ＣＡＲ導入免疫細胞並びにレチノイド及び／又はレキシノイド活性剤は、投与される唯一の療法剤又は与えられる唯一の処置である、又は、抗がん免疫応答を促進することを主な用途として与えられる唯一の処置又は試薬である、又は、抗がん免疫応答を促進することを主な用途として与えられる唯一の処置又は試薬である。
【０１３６】
通常、がん療法の有効性は『奏効』の期間で測られる。奏効を監視する方法は、がんの診断に用いられる試験と同様にでき、これらに限定されるわけではないが、以下のものが挙げられる。
・いくらかのリンパ節を含む塊又は腫瘍が身体診察で外部から触知及び測定できる。
・いくらかの内蔵がん腫瘍がＸ線又はＣＴスキャンに写るものでありルーラーで測定できる。
・内臓機能を評価するものをはじめとする血液検査が行える。
・ある種のがんについて腫瘍マーカー検査が行える。
【０１３７】
用いた検査によらず、血液検査、細胞計数、又は腫瘍マーカー検査であるかを問わず、同種の前に行った検査と結果を比較できるように、検査は特定間隔で繰り返される。
【０１３８】
がん処置への奏効は数種のやり方で定義される。
・完全奏効：がん又は腫瘍の全てが消失する。疾患の徴候が存在しない。（該当する場合）腫瘍マーカーの発現レベルが正常範囲内に収まり得る。
・部分奏効：がんが百分率単位で収縮したが疾患が残存する。（該当する場合）腫瘍マーカーの発現レベルが下降（腫瘍マーカーによっては、減少した腫瘍負荷を表すものとして、増加）したかもしれないが疾患の徴候が残存する。
・安定状態：がんが増殖も収縮もしない。疾患の量が変化していない。（該当する場合）腫瘍マーカーの発現レベルが大きく変化しない。
・疾患進行：がんが増殖している。処置前よりも多くの疾患が存在する。（該当する場合）腫瘍マーカー検査が腫瘍マーカーが上昇していることを示す。
【０１３９】
がん処置の効力の別の評価法として、全生存期間（すなわち、評価中の処置の開始又は診断から測定した、原因を問わず死亡するまでの時間）、無がん生存期間（すなわち、がんが未検出のままである完全奏効後の時間の長さ）、及び無進行生存期間（すなわち、再開したがんの成長が検出されない疾患安定又は部分奏効後の時間の長さ）が挙げられる。
【０１４０】
腫瘍サイズ（腫瘍負荷）に関して固形がん処置の奏効の２つの標準的評価法として、ＷＨＯ規準とＲＥＣＩＳＴ規準がある。これらの方法は、現在の腫瘍を以前の測定値と比較する、又は、変化を将来の測定値と比較して、処置レジメンを変更するために、固形腫瘍を測定する。ＷＨＯの方法では、固形腫瘍の長軸及び短軸を測定し、その後、これらの２つの測定値の積を計算する。複数の固形腫瘍が存在する場合、全ての積の合計を計算する。ＲＥＣＩＳＴの方法では、長軸のみを測定する。複数の固形腫瘍が存在する場合、全ての長軸測定値の合計を計算する。ただし、リンパ節については、長軸ではなく短軸を測定する。
【０１４１】
いくつかの実施形態では、本方法は、処置患者の腫瘍負荷は、約５％、約１０％、約１５％、約２０％、約２５％、約３０％、約３５％、約４０％、約４５％、約５０％、約５５％  約６０％、約６５％、約７０％、約７５％、約８０％、約９０％、約９５％、約１００％だけ、又は、これらの値を境界とする任意の範囲だけ、減少する。
【０１４２】
別の実施形態では、処置対象の１年生存率は、約５％、約１０％、約１５％、約２０％、約２５％、約３０％、約３５％、約４０％、約４５％、約５０％、約５５％  約６０％、約６５％、約７０％、約７５％、約８０％、約９０％、約９５％、約１００％だけ、又は、これらの値を境界とする任意の範囲だけ、増加する。
【０１４３】
別の実施形態では、処置対象の５年生存率は、約５％、約１０％、約１５％、約２０％、約２５％、約３０％、約３５％、約４０％、約４５％、約５０％、約５５％  約６０％、約６５％、約７０％、約７５％、約８０％、約９０％、約９５％、約１００％だけ、又は、これらの値を境界とする任意の範囲だけ、増加する。
【０１４４】
別の実施形態では、処置対象の１０年生存率は、約５％、約１０％、約１５％、約２０％、約２５％、約３０％、約３５％、約４０％、約４５％、約５０％、約５５％  約６０％、約６５％、約７０％、約７５％、約８０％、約９０％、約９５％、約１００％だけ、又は、これらの値を境界とする任意の範囲だけ、増加する。
【０１４５】
さらに別の実施形態では、対象は、少なくとも６ヶ月、少なくとも７ヶ月、少なくとも８ヶ月、少なくとも９ヶ月、少なくとも１０ヶ月、少なくとも１１ヶ月、少なくとも１２ヶ月、少なくとも１４ヶ月、少なくとも１６ヶ月、少なくとも１８ヶ月、少なくとも２０ヶ月、少なくとも２２ヶ月、少なくとも２４ヶ月、少なくとも２７ヶ月、少なくとも３０ヶ月、少なくとも３３ヶ月、少なくとも３６ヶ月、少なくとも４２ヶ月、少なくとも４８ヶ月、少なくとも５４ヶ月の、又は少なくとも６０ヶ月以上の、持続的寛解を有する。
【０１４６】
別の実施形態では、本方法は、がんに関連する、症状、病状、又は障害の、処置又は緩和を助け得る。いくつかの実施形態では、これらの症状又は病状として、これらに限定されるわけではないが、貧血、無力、悪液質、クッシング症候群、倦怠感、痛風、歯周病、血尿、高カルシウム血、甲状腺機能低下、内出血、脱毛、中皮腫、嘔吐、寝汗、好中球減少、腫瘍随伴症候群、胸膜炎、リウマチ性多発筋痛、横紋筋融解、ストレス、リンパ節腫大、血小板減少、ビタミンＤ欠乏、又は体重減少が挙げられる。別の実施形態では、ＲＡＲαアゴニスト及びＣＡＲ導入免疫細胞の両方の投与は、ＣＡＲ導入免疫細胞単独での処置に比して、処置中の個体の生存を引き延ばす。
【０１４７】
（特定の実施形態の一覧）
以下の実施形態の一覧は、本明細書で明らかとなる、本発明の、幅、結合、及び副結合に関する様々な実施形態を例示するものであり、本明細書に支持される実施形態のすべてを網羅的に列挙することを意図したものではない。
［実施形態１］
がん免疫治療を必要とする対象にキメラ抗原受容体導入免疫細胞（ＣＡＲ−ＭＩＣ）並びに少なくとも２種類のレチノイド活性剤及び／又はレキシノイド活性剤（ＲＡＲ／ＲＸＲ活性剤）を投与することを含み、前記少なくとも２種類のＲＡＲ／ＲＸＲ活性剤は分化誘導性ＲＡＲ活性剤及び免疫調節性ＲＡＲ／ＲＸＲ活性剤を含む、がん免疫治療法。
［実施形態２］
がんの処置を必要とする対象にキメラ抗原受容体導入免疫細胞（ＣＡＲ−ＭＩＣ）及び少なくとも２種類のＲＡＲ／ＲＸＲ活性剤を投与することを含み、前記少なくとも２種類のＲＡＲ／ＲＸＲ活性剤は分化誘導性ＲＡＲ活性剤及び免疫調節性ＲＡＲ／ＲＸＲ活性剤を含む、がんを処置する方法。
［実施形態３］
ＣＡＲ−ＭＩＣを受けている、受けた、又は受ける予定のがん患者に少なくとも２種類のＲＡＲ／ＲＸＲ活性剤を投与することを含み、前記少なくとも２種類のＲＡＲ／ＲＸＲ活性剤は分化誘導性ＲＡＲ活性剤及び免疫調節性ＲＡＲ／ＲＸＲ活性剤を含む、ＣＡＲ−ＭＩＣがん免疫治療法を増強する方法。
［実施形態４］
がん免疫治療を必要とする対象に分化誘導性ＲＡＲ活性剤及びＣＡＲ−ＭＩＣを投与することを含み、前記ＣＡＲ−ＭＩＣは前記対象に投与される前に少なくとも１種類の免疫調節性ＲＡＲ／ＲＸＲ活性剤を含む培養培地中で培養されている、がん免疫治療法。
［実施形態５］
ＣＡＲ−ＭＩＣ及び少なくとも２種類のＲＡＲ／ＲＸＲ活性剤を投与することを含み、前記少なくとも２種類のＲＡＲ／ＲＸＲ活性剤は分化誘導性ＲＡＲ活性剤及び免疫調節性ＲＡＲ／ＲＸＲ活性剤を含む、がん患者の無病生存を延ばす方法。
［実施形態６］
ＣＡＲ−ＭＩＣの毒性を減らす方法であって、それを必要とする患者に、併せた結果、前記ＣＡＲ−ＭＩＣを単独で投与する場合と比べより低い用量の前記ＣＡＲ−ＭＩＣが投与されるように、前記ＣＡＲ−ＭＩＣと併せて、少なくとも２種類のＲＡＲ／ＲＸＲ活性剤を投与することを含み、前記少なくとも２種類のＲＡＲ／ＲＸＲ活性剤は分化誘導性ＲＡＲ活性剤及び免疫調節性ＲＡＲ／ＲＸＲ活性剤を含む、方法。
［実施形態７］
免疫調節性ＲＡＲ／ＲＸＲ活性剤を含む培養培地中でＣＡＲ−ＭＩＣを培養することを含む、インビトロでＣＡＲ−ＭＩＣの数を増やす方法。
［実施形態８］
前記ＣＡＲ−ＭＩＣは前記対象に投与される前に免疫調節性ＲＡＲ／ＲＸＲ活性剤を含む培養培地中で培養されている、実施形態１から６のいずれか１つに記載の方法。
［実施形態９］
前記免疫調節性ＲＡＲ／ＲＸＲ活性剤は、ＲＡＲαアンタゴニスト、ＲＡＲγアゴニスト、ＲＸＲアンタゴニスト、又はこれらの組み合わせである、実施形態１から８のいずれか１つに記載の方法。
［実施形態１０］
前記分化誘導性ＲＡＲ活性剤はＲＡＲαアゴニストである、実施形態１−６又は８−９のいずれか１つに記載の方法。
［実施形態１１］
前記ＲＡＲαアゴニストはＣＹＰ２６耐性である、実施形態１０に記載の方法。
［実施形態１２］
前記ＲＡＲαアゴニストはＲＡＲα選択的アゴニストである、実施形態１０又は１１に記載の方法。
［実施形態１３］
免疫チェックポイント阻害剤の投与をさらに含む、実施形態１−６又は８−１２のいずれか１つに記載の方法。
［実施形態１４］
前記免疫チェックポイント阻害剤は、ＣＴＬＡ−４、ＰＤ−１、ＴＩＭ−３、ＬＡＧ−３、ＰＤ−Ｌ１リガンド、Ｂ７−Ｈ３、Ｂ７−Ｈ４、ＢＴＬＡの少なくとも１種類の阻害剤である、又は、ＩＣＯＳ若しくはＯＸ４０アゴニストである、実施形態１３に記載の方法。
［実施形態１５］
前記免疫チェックポイント阻害剤は抗体である、実施形態１３又は１４に記載の方法。
［実施形態１６］
前記免疫調節性ＲＡＲ／ＲＸＲ活性剤はレチノイン酸受容体（ＲＡＲ）活性剤を含む、実施形態１から１５のいずれか１つに記載の方法。
［実施形態１７］
前記免疫調節性ＲＡＲ／ＲＸＲ活性剤はＲＡＲ活性剤である、実施形態１６に記載の方法。
［実施形態１８］
前記ＲＡＲ活性剤はＲＡＲαアンタゴニストである、実施形態１６又は１７に記載の方法。
［実施形態１９］
前記ＲＡＲ活性剤は選択的ＲＡＲαアンタゴニストである、実施形態１８に記載の方法。
［実施形態２０］
前記ＲＡＲ活性剤はＲＡＲγアゴニストである、実施形態１６又は１７に記載の方法。
［実施形態２１］
前記ＲＡＲ活性剤は選択的ＲＡＲγアゴニストである、実施形態２０に記載の方法。
［実施形態２２］
前記免疫調節性ＲＡＲ／ＲＸＲ活性剤はレチノイドＸ受容体（ＲＸＲ）活性剤を含む、実施形態１から１５のいずれか１つに記載の方法。
［実施形態２３］
前記免疫調節性ＲＡＲ／ＲＸＲ活性剤はレチノイドＸ受容体（ＲＸＲ）活性剤である、実施形態２２に記載の方法。
［実施形態２４］
前記ＲＸＲ活性剤はＲＸＲアンタゴニストである、実施形態２３に記載の方法。
［実施形態２５］
前記免疫調節性ＲＡＲ／ＲＸＲ活性剤は少なくとも２種類のＲＡＲ活性剤を含む、実施形態１から２４のいずれか１つに記載の方法。
［実施形態２６］
第１のＲＡＲ活性剤はＲＡＲαアンタゴニストであり、第２のＲＡＲ活性剤はＲＡＲγ選択的アゴニストである、実施形態２５に記載の方法。
［実施形態２７］
第１のＲＡＲ活性剤はＲＡＲα選択的アンタゴニストであり、第２のＲＡＲ活性剤はＲＡＲγアゴニストである、実施形態２５に記載の方法。
［実施形態２８］
第１のＲＡＲ活性剤はＲＡＲα選択的アンタゴニストであり、第２のＲＡＲ活性剤はＲＡＲγ選択的アゴニストである、実施形態２５に記載の方法。
［実施形態２９］
前記ＲＡＲαアンタゴニストは下記の一般式（Ｖ）の化合物である、実施形態９、１８−１９、又は２６−２８のいずれか１つに記載の方法。
【化４９】
2020526551.tif 000051
（ただし、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、及びＲ６は、独立して、Ｈ又はＣ１−６アルキルであり、Ｒ４及びＲ５は、独立して、Ｈ又はＦであり、Ａｒは、フェニル、ピリジル、チエニル、フリル、又はナフチルであり、Ｘは、Ｃ（ＣＨ３）２、Ｏ、Ｓ、又はＮＲ７（ただし、Ｒ７は、Ｈ又はＣ１−６アルキルである。）であり、Ｘ１は、Ｈ又はハロゲン（Ｆ、Ｃｌ又はＢｒなど）であり、Ｒ８は、Ｈ又はＯＨである。）
［実施形態３０］
前記ＲＡＲαアンタゴニストは、
【化５０】
2020526551.tif 000052
【化５１】
2020526551.tif 000053
又は、
【化５２】
2020526551.tif 000054
である、実施形態２９に記載の方法。
［実施形態３１］
前記ＲＡＲαアンタゴニストは下記の一般式（ＩＩ）の化合物である、実施形態９、１８−１９、又は２６−２８のいずれか１つに記載の方法。
【化５３】
2020526551.tif 000055
（ただし、Ｒ１及びＲ２は、独立して、Ｃ１−６アルキルであり、Ｘは、Ｏ、Ｓ、又はＣＨ２であり、Ｙは、Ｏ、Ｓ、ＣＨ２、又はＮＲ３（ただし、Ｒ３はＣ１−６アルキルである。）であり、Ｚは、Ｃｌ又はＢｒであり、Ｗは、Ｈ又はＯＨであり、Ｕは、独立して、Ｈ又はＦである。）
［実施形態３２］
前記ＲＡＲαアンタゴニストは、
【化５４】
2020526551.tif 000056
である、実施形態３１に記載の方法。
［実施形態３３］
前記ＲＡＲαアンタゴニストは下記の一般式（ＩＩＩ）の化合物である、実施形態９、１８−１９、又は２６−２８のいずれか１つに記載の方法。
【化５５】
2020526551.tif 000057
（ただし、Ｒ１及びＲ２は、独立して、Ｈ又はＣ１−６アルキルであり、Ｒ３は、Ｈ又はＦであり、Ａｒは、フェニル、ピリジル、チエニル、フリル、又はナフチルであり、Ｘは、Ｏ、Ｓ、Ｎ、又はＣＨ２であり、Ｗは、Ｈ又はＯＨであり、Ｚは、Ｃｌ又はＢｒである。）
［実施形態３４］
前記ＲＡＲαアンタゴニストは、ＢＭＳ１８５４１１、ＢＭＳ６１４、Ｒｏ４１−５２５３、Ｒｏ４６−５４７１、又は、
【化５６】
2020526551.tif 000058
である、実施形態９、１８−１９、又は２６−２８のいずれか１つに記載の方法。
［実施形態３５］
前記ＲＡＲγアゴニストは下記の一般式（ＩＶ）のＲＡＲγアゴニストである、実施形態９、１８−１９、又は２６−２８に記載の方法。
【化５７】
2020526551.tif 000059
（ただし、Ｒ１及びＲ２は、独立して、Ｈ又はＣ１−６アルキルであり、Ｒ３は、Ｈ又はＦであり、Ｘは、Ｏ、Ｓ、ＣＨ２、Ｃ（Ｒ４）２、又はＮＲ５（ただし、Ｒ４及びＲ５は、独立して、Ｈ又はＣ１−６アルキルである。）である。）
［実施形態３６］
前記ＲＡＲγアゴニストは、
【化５８】
2020526551.tif 000060
【化５９】
2020526551.tif 000061
【化６０】
2020526551.tif 000062
又は、
【化６１】
2020526551.tif 000063
である、実施形態９、１８−１９、又は２６−２８に記載の方法。
［実施形態３７］
前記ＲＡＲγアゴニストは、ＣＤ４３７、ＣＤ２３２５、ＣＤ６６６、及びＢＭＳ９６１から選択される選択的ＲＡＲγアゴニストである、実施形態９、１８−１９、又は２６−２８のいずれか１つに記載の方法。
［実施形態３８］
前記ＲＸＲアンタゴニストは、
【化６２】
2020526551.tif 000064
【化６３】
2020526551.tif 000065
【化６４】
2020526551.tif 000066
【化６５】
2020526551.tif 000067
又は、
【化６６】
2020526551.tif 000068
から選択される、実施形態９又は２２−２３のいずれか１つに記載の方法。
［実施形態３９］
前記ＲＸＲアンタゴニストはＡＧＮ１９５３９３又はＬＧＮ１００８４９である、実施形態９又は２２−２３のいずれか１つに記載の方法。
［実施形態４０］
前記ＲＡＲαアゴニストは下記の一般式（Ｖ）の化合物である、実施形態１０−１２のいずれか１つに記載の方法。
【化６７】
2020526551.tif 000069
（ただし、Ｒ１は、Ｈ又はＣ１−６アルキルであり、Ｒ２及びＲ３は、独立して、Ｈ又はＦであり、Ｒ４は、ハロゲンである。）
［実施形態４１］
Ｒ４は、Ｆ、ＣＬ、ＢＲ、又はＩである、実施形態４０に記載の方法。
［実施形態４２］
前記ＲＡＲαアゴニストは下記の一般式（ＶＩ）の化合物である、実施形態１０−１２のいずれか１つに記載の方法。
【化６８】
2020526551.tif 000070
（ただし、Ｒ１は、Ｈ又はＣ１−６アルキルである。）
［実施形態４３］
前記ＲＡＲαアゴニストは下記の一般式（ＶＩＩ）の化合物である、実施形態１０−１２のいずれか１つに記載の方法。
【化６９】
2020526551.tif 000071
［実施形態４４］
前記ＲＡＲαアゴニストはタミバロテン（ＡＭ８０；４−［（５，６，７，８−テトラヒドロ−５，５，８，８−テトラメチル−２−ナフタレニル）カルバモイル］安息香酸）である、実施形態１０−１１のいずれか１つに記載の方法。
［実施形態４５］
前記ＲＡＲαアゴニストはＡＭ５８０（４−［（５，６，７，８−テトラヒドロ−５，５，８，８−テトラメチル−２−ナフタレニル）カルボキサミド］安息香酸）である、実施形態１０−１１のいずれか１つに記載の方法。
［実施形態４６］
前記ＲＡＲαアゴニストはＲｅ８０（４−［１−ヒドロキシ−３−オキソ−３−（５，６，７，８−テトラヒドロ−３−ヒドロキシ−５，５，８，８−テトラメチル−２−ナフタレニル）−１−プロペニル］安息香酸）である、実施形態１０−１１のいずれか１つに記載の方法。
［実施形態４７］
少なくとも１種類の癌化学治療剤を投与することをさらに含む、実施形態１−６又は８−４６のいずれか１つに記載の方法。
［実施形態４８］
前記対象又は患者は前記ＣＡＲ−ＭＩＣの投与の前に少なくとも１種類のＲＡＲ／ＲＸＲ活性剤で前処置される、実施形態１−６又は８−４７のいずれか１つに記載の方法。
［実施形態４９］
前記少なくとも１種類のＲＡＲ／ＲＸＲ活性剤は免疫調節性ＲＡＲ／ＲＸＲ活性剤である、実施形態４８に記載の方法。
［実施形態５０］
前記少なくとも１種類のＲＡＲ／ＲＸＲ活性剤は分化誘導性ＲＡＲ活性剤である、実施形態４８に記載の方法。
［実施形態５１］
前記免疫調節性ＲＡＲ／ＲＸＲ活性剤は前記ＣＡＲ−ＭＩＣの投与の少なくとも１２時間前に投与される、実施形態４８又は４９に記載の方法。
［実施形態５２］
前記免疫調節性ＲＡＲ／ＲＸＲ活性剤は、前記ＣＡＲ−ＭＩＣの投与前の、少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０日にわたって投与される、実施形態５１に記載の方法。
［実施形態５３］
前記分化誘導性ＲＡＲ活性剤は、前記ＣＡＲ−ＭＩＣの投与前の、少なくとも２日、少なくとも３日、少なくとも４日、少なくとも５日、少なくとも６日、少なくとも１週、少なくとも２週、少なくとも３週、又は少なくとも１ヶ月にわたって投与される、実施形態５０に記載の方法。
［実施形態５４］
前記分化誘導性ＲＡＲ活性剤の投与は前記ＣＡＲ−ＭＩＣの投与の２から１０日前に中止される、実施形態５０又は５３に記載の方法。
［実施形態５５］
（１種類又は複数種類の）免疫調節性ＲＡＲ／ＲＸＲ活性剤の投与が前記分化誘導性ＲＡＲ活性剤の投与の中止の後で且つ前記ＣＡＲ−ＭＩＣの投与の前に始まる、実施形態５４に記載の方法。
［実施形態５６］
前記分化誘導性ＲＡＲ活性剤は前記ＣＡＲ−ＭＩＣの投与の開始が予定されるより４週前に始まり８日前に終わる期間にわたり投与され、（１種類又は複数種類の）前記免疫調節性ＲＡＲ／ＲＸＲ活性剤の投与は前記ＣＡＲ−ＭＩＣの投与の開始が予定されるより１週前に始まる、実施形態５５に記載の方法。
［実施形態５７］
前記対象又は患者は前記ＣＡＲ−ＭＩＣの投与と同時に又はその後に免疫調節性ＲＡＲ／ＲＸＲ活性剤で処置される、実施形態１−６又は８−５６のいずれか１つに記載の方法。
［実施形態５８］
（１種類又は複数種類の）前記免疫調節性ＲＡＲ／ＲＸＲ活性剤による処置（もしあるなら前処置を除く）は前記ＣＡＲ−ＭＩＣの投与又は初回投与と同日に始まる、実施形態５７に記載の方法。
［実施形態５９］
（１種類又は複数種類の）前記免疫調節性ＲＡＲ／ＲＸＲ活性剤による処置（もしあるなら前処置を除く）は前記ＣＡＲ−ＭＩＣの投与又は初回投与の１、２、３、４、５、６、又は７日後に始まる、実施形態５７に記載の方法。
［実施形態６０］
（１種類又は複数種類の）前記免疫調節性ＲＡＲ／ＲＸＲ活性剤による前記処置は前記ＣＡＲ−ＭＩＣの投与又は初回投与後の少なくとも６ヶ月にわたり続けられる、実施形態５７−６０のいずれか１つに記載の方法。
［実施形態６１］
（１種類又は複数種類の）前記免疫調節性ＲＡＲ／ＲＸＲ活性剤による前記処置は、持続的完全奏効が得られるまで、続けられる、実施形態５７−６０のいずれか１つに記載の方法。
［実施形態６２］
（１種類又は複数種類の）前記免疫調節性ＲＡＲ／ＲＸＲ活性剤による前記処置は、継続的腫瘍退縮がある限り、続けられる、実施形態５７−６０のいずれか１つに記載の方法。
［実施形態６３］
（１種類又は複数種類の）前記免疫調節性ＲＡＲ／ＲＸＲ活性剤による前記処置は、安定状態（ｓｔａｂｌｅ  ｄｉｓｅａｓｅ）である又はがんが進行しない限り、続けられる、実施形態５７−６０のいずれか１つに記載の方法。
［実施形態６４］
（１種類又は複数種類の）前記免疫調節性ＲＡＲ／ＲＸＲ活性剤の投与は、分化誘導性ＲＡＲ活性剤が投与される１から３週間の期間にわたり、中断される、実施形態５７−６３のいずれか１つに記載の方法。
［実施形態６５］
（１種類又は複数種類の）前記免疫調節性ＲＡＲ／ＲＸＲ活性剤の投与は２回以上中断され、且つ、中断は１０連続日の（１種類又は複数種類の）前記免疫調節性ＲＡＲ／ＲＸＲ活性剤による処置の後よりも早く生じることはない、実施形態６４に記載の方法。
［実施形態６６］
前記ＲＡＲ／ＲＸＲ活性剤は毎日投与される、実施形態１−６又は８−６５のいずれか１つに記載の方法。
［実施形態６７］
前記ＣＡＲ−ＭＩＣはＣＡＲ−Ｔ細胞である、実施形態１−６６のいずれか１つに記載の方法。
［実施形態６８］
前記ＣＡＲ−ＭＩＣはＣＡＲ−ＮＫＴ細胞である、実施形態１−６６のいずれか１つに記載の方法。
［実施形態６９］
前記ＣＡＲ−ＭＩＣはＣＡＲ−ＮＫ細胞である、実施形態１−６６のいずれか１つに記載の方法。
［実施形態７０］
前記ＣＡＲ−ＭＩＣはＣＡＲ−貪食細胞である、実施形態１−６６のいずれか１つに記載の方法。
［実施形態７１］
ＣＡＲ−ＭＩＣの免疫治療効果を増強する、ＣＡＲ−ＭＩＣを受けている、受けた、又は受ける予定のがん患者におけるがん免疫治療法で使用するための、分化誘導性ＲＡＲ活性剤及び免疫調節性ＲＡＲ／ＲＸＲ活性剤。
［実施形態７２］
がん免疫治療法で使用するための、ＣＡＲ−ＭＩＣ、分化誘導性ＲＡＲ活性剤、及び免疫調節性ＲＡＲ／ＲＸＲ活性剤。
［実施形態７３］
がん患者の無病生存を延ばすのに使用するための、ＣＡＲ−ＭＩＣ、分化誘導性ＲＡＲ活性剤、及び免疫調節性ＲＡＲ／ＲＸＲ活性剤。
［実施形態７４］
ＣＡＲ−ＭＩＣ治療法の毒性を減らすのに使用するための、分化誘導性ＲＡＲ活性剤及び免疫調節性ＲＡＲ／ＲＸＲ活性剤。
［実施形態７５］
がんを処置するのに使用するための、ＣＡＲ−ＭＩＣ、分化誘導性ＲＡＲ活性剤、及び免疫調節性ＲＡＲ／ＲＸＲ活性剤。
［実施形態７６］
がん処置でのＣＡＲ−ＭＩＣの免疫治療効果を増強するための医薬の製造における、分化誘導性ＲＡＲ活性剤及び免疫調節性ＲＡＲ／ＲＸＲ活性剤の使用。
［実施形態７７］
がん免疫治療法のための医薬の製造における、ＣＡＲ−ＭＩＣ、分化誘導性ＲＡＲ活性剤、及び免疫調節性ＲＡＲ／ＲＸＲ活性剤の使用。
［実施形態７８］
がん患者の無病生存を延ばすための医薬の製造における、ＣＡＲ−ＭＩＣ、分化誘導性ＲＡＲ活性剤、及び免疫調節性ＲＡＲ／ＲＸＲ活性剤の使用。
［実施形態７９］
ＣＡＲ−ＭＩＣ治療法の毒性を減らすための医薬の製造における、分化誘導性ＲＡＲ活性剤及び免疫調節性ＲＡＲ／ＲＸＲ活性剤の使用。
［実施形態８０］
がんを処置するための医薬の製造における、ＣＡＲ−ＭＩＣ、分化誘導性ＲＡＲ活性剤、及び免疫調節性ＲＡＲ／ＲＸＲ活性剤の使用。
【０１４８】
実施形態７１−８０のそれぞれが実施形態８−７０による実施形態１−６の修正と同様の修正を受け得ることは明らかであろう。
【０１４９】
実施形態５０−５９のそれぞれが実施形態８−４９による実施形態１−６の修正と同様の修正を受け得ることは明らかであろう。
【０１５０】
（実施例）
以下の非限定的な実施例は、現在考慮する代表的な実施形態のより完全な理解を助けるための例示を意図して提示するにすぎない。こうした実施例は本明細書に記載の実施形態のいずれを限定するとも解釈されるべきではない。
【０１５１】
（実施例１）
（ＲＡＲ受容体への試験化合物の結合及びレポーター遺伝子の活性化）
レチノイン酸受容体トランス活性化活性及び結合効率を、実質的に米国特許第５，２９８，４２９号及び米国特許第５，０７１，７７３号に記載のとおりに求める。これらの文献の内容を参照により本明細書に援用する。トランス活性化アッセイは、ＲＡＲα、ＲＡＲβ、及びＲＡＲγの全長受容体をコードする発現プラスミドを採用する。ヘルペスウイルスチミジンキナーゼプロモーター及び適切なレチノイン酸受容体応答エレメント（ＲＡＲＥ）を含むレポータープラスミドは、ホタルルシフェラーゼをコードするオープンコーディングリージョンの上流に位置する。
【０１５２】
結合アッセイは、クローン化した受容体であるＲＡＲ分子が先ず放射性標識オールトランスレチノイン酸（ＲＡＲ）を取り込まされ、その後、増加する試験化合物濃度により自由になる放射能の量を測定するという古典的な競合アッセイ形式を用いて行う。
【０１５３】
これらのアッセイは、本明細書で上述したような、ＲＡＲαアゴニストを特定するために用いられる。
【０１５４】
（実施例２）
（化合物ＩＲＸ５１８３はＲＡＲα特異的である）
式（Ｉ）の構造を有する化合物がＲＡＲα選択的アゴニストであるか否かを明らかにするために、アゴニスト結合親和性を測定するための置換アッセイ及びアゴニスト活性を測定するためのトランス活性化アッセイ（米国特許第５，４５５，２６５号に記載。当該文献の内容を参照により本明細書に援用する。）を用いて、ＲＡＲα、ＲＡＲβ、及びＲＡＲγへの結合能について化合物ＩＲＸ５１８３を調べた。これらの結果は、化合物ＩＲＸ５１８３が、ＲＡＲαと高い親和性で選択的に結合し（表１）、ＲＡＲαを特異的に活性化する（図１）ことを表している。こうしたＲＡＲα選択的アゴニストは、臨床研究での、皮膚粘膜毒性、頭痛、及び炎症誘発減少をはじめとするｐａｎ活性化に関連する有害効果を最小化するかもしれない。
【０１５５】
表１：ＲＡＲα、ＲＡＲβ、及びＲＡＲγへのＩＲＸ５１８３の結合親和性
【表１】
2020526551.tif 000072
【０１５６】
（実施例３）
（ＲＡＲαシグナル伝達がＦｏｘｐ３発現を誘導する）
Ｆｏｘｐ３発現の誘導にどのＲＡＲ（ＲＡＲα、ＲＡＲβ、ＲＡＲγ）のシグナル伝達経路が重要であるかを明らかにすることは重要である。これを明らかにするために、ナイーブＣＤ４＋ＣＤ２５−Ｆｏｘｐ３−細胞を、Ｆｏｘｐ３−ＧＦＰマウスから、フローサイトメトリーを用いて、ＧＦＰ−フェノタイプに基づくソート及び単離により、精製した。これらの細胞を、ＩＬ−２及びＴＧＦ−βの存在下、インビトロで、αＣＤ３によりポリクローナルに活性化した。ＲＡ誘導Ｆｏｘｐ３発現に関与するＲＡＲを特定するために、これら培養細胞を複数のＲＡＲ選択的アゴニストとともにインキュベートした。その後、培養細胞をＧＦＰ＋（Ｆｏｘｐ３＋）の頻度について数値化した。選択的アゴニストの使用について、ＲＡＲαアゴニストのみがＦｏｘｐ３の発現に顕著な効果を奏し、α４β７及びＣＣＲ９（腸ホーミング受容体）の発現の増大をともなうほぼ１００％がＦｏｘｐ３＋であるＴ細胞を誘導した（図１）。ＲＡＲγ及びＲＡＲβアゴニストは効果がなかった。こうした結果は、ＲＡＲα選択的アゴニストが炎症症状又は自己免疫疾患を減らすのに役立ち得ることを示す。反対に、ＲＡＲα選択的アンタゴニスト又はインバースアゴニストは、免疫抑制性Ｔｒｅｇ細胞の産生を下方制御し、これにより、抗がん免疫応答などの免疫応答を促進するのに役立ち得る。
【０１５７】
（実施例４）
（ＲＡＲ及びＲＸＲ受容体への試験化合物の結合とレポーター遺伝子の活性化）
レチノイン酸受容体トランス活性化活性及び結合効率を、実質的に米国特許第５，２９８，４２９号及び米国特許第５，０７１，７７３号に記載のとおりに求める。これらの文献の内容を参照により本明細書に援用する。トランス活性化アッセイは、ＲＡＲα、ＲＡＲβ、ＲＡＲγ、ＲＸＲα、ＲＸＲβ、及びＲＸＲγの全長受容体をコードする発現プラスミドを採用する。ヘルペスウイルスチミジンキナーゼプロモーター及び適切なレチノイン酸受容体応答エレメント（ＲＡＲＥ）又はレチノイドＸ受容体応答エレメント（ＲＸＲＥ）を含むレポータープラスミドは、ホタルルシフェラーゼをコードするオープンコーディングリージョンの上流に位置する。
【０１５８】
結合アッセイは、クローンした受容体であるＲＡＲ及びＲＸＲ分子が先ず放射性標識オールトランスレチノイン酸（ＲＡＲ）又は放射性標識９−ｃｉｓレチノイン酸（ＲＸＲ）のいずれかを取り込まされ、その後、増加する試験化合物濃度により自由になる放射能の量を測定するという古典的な競合アッセイ形式を用いて行う。
【０１５９】
これらのアッセイは、本明細書で上述したような、ＲＡＲα選択的アンタゴニスト、ＲＡＲγ選択的アゴニスト、及びＲＸＲ選択的アンタゴニストを特定するために用いられる。
【０１６０】
（実施例５）
（ＲＡＲγアゴニストを用いたＲＡＲγシグナル伝達の薬理学的活性化はＢ１６メラノーマ細胞の排除において抗ＣＴＬＡ−４抗体との協同作用を有する）
１０ｎＭのＲＡＲγアゴニスト（ＡＧＮ２０４６４７（ＩＲＸ４６４７））を併用しての抗ＣＴＬＡ−４抗体処置の抗腫瘍効果を、Ｂ１６Ｆ１０腫瘍細胞を移植したＣ５７ＢＬ／６マウスで調べる。ビヒクルのみで処置したマウスは未処理対照マウスを超える延命効果（０％）を示さない。抗ＣＴＬＡ−４抗体単独で処置したマウスの生存率は５０日で４０％であり、一方、ＲＡＲγアゴニスト単独で処置したマウスは同期間で３０％の生存率を有する。目覚ましいことに、抗ＣＴＬＡ−４抗体及びＲＡＲγアゴニストの両方で処置したマウスは５０日で１００％の生存率を有し、これらの２つの剤が協同してＢ１６メラノーマ細胞を排除することを示す。併用処置を受けている生存中のマウスは倍量の生腫瘍細胞での再挑戦に耐性であり、これはＢ１６特異的記憶細胞の効果的形成を示す。重要な点は、薬剤のこの組み合わせで急性毒性又は遅発毒性の兆候なく抗メラノーマ効果が得られることである。
【０１６１】
（実施例６）
（ＲＡＲα選択的アゴニストはＴ細胞分化を制御する）
ＲＡＲαアゴニストがＴ細胞分化に影響し得るか否かを明らかにするために、Ｔ細胞をＲＡＲαアゴニストとともに培養してＦｏｘｐ３発現へのその作用を求めた。ナイーブＣＤ４＋ＣＤ２５−ＦｏｘＰ３−細胞を、Ｆｏｘｐ３−ＧＦＰマウスから、フローサイトメトリーを用いて、ＧＦＰ−フェノタイプに基づくソート及び単離により、精製した。これらの細胞を、ＩＬ−２及びＴＧＦ−βの存在下、インビトロで、αＣＤ３によりポリクローナルに活性化した。その後、これらの細胞を、化合物ＩＲＸ５１８３（ＲＡＲαアゴニスト）を様々な濃度で含む培地中で培養し、ＦｏｘＰ３−ＧＦＰの発現をフローサイトメトリーにより分析した。ＲＡＲαアゴニストである化合物ＩＲＸ５１８３は、インビトロで、免疫抑制性Ｔｒｅｇ細胞の分化を増強し、ナイーブＴ細胞由来の炎症性ＴＨ１７細胞の分化を阻害した（表２）。
【０１６２】
表２：Ｔ細胞分化へのＲＡＲαアゴニストの効果
【表２】
2020526551.tif 000073
【０１６３】
上記知見を拡大するために、Ｔ細胞分化へのＲＡＲαアゴニストのインビボ効果をマウスモデルで調べた。マウスを１０日にわたり１日おきに１００μｇの化合物ＩＲＸ５１８３又は同体積のＤＭＳＯ（ビヒクル対照）で処置した。その後、血液及び脾臓からリンパ球を単離し、ＣＤ４＋Ｔ細胞でのＦｏｘＰ３発現を評価した。このデータは、化合物ＩＲＸ５１８３の投与後に処置マウスの脾臓及び血液中のＦｏｘｐ３＋Ｔ細胞の割合が顕著に増加したことを示している。
【０１６４】
表３：Ｔ細胞分化へのＲＡＲαアゴニストの効果
【表３】
2020526551.tif 000074
【０１６５】
反対に、ＲＡＲα選択的アンタゴニストの一種であるＡＧＮ１９６９９６は、上述のインビトロ及びインビボのアッセイで、Ｔｈ１７細胞の数を増やし、Ｔｒｅｇ細胞の数を減らす（データは省略する）。
【０１６６】
（実施例７）
（骨髄ニッチは多発性骨髄腫においてボルテゾミブ耐性を誘導する）
多発性骨髄腫（ＭＭ）は骨髄（ＢＭ）内での悪性形質細胞（ＰＣ）の増殖及びそれらによるモノクローナル免疫グロブリン（Ｉｇ）の産生を特徴とする。プロテアソーム阻害剤をはじめとする新規の療法はＭＭの患者の生存を顕著に延ばしはものの治療を成し遂げることはできないでいた。増加する証拠から骨髄微小環境との相互作用が化学療法中のＭＭ細胞の生存に重要な役割を果たすことが示されている。しかし、この骨髄ニッチ依存的化学防御を媒介する機序は不完全にしか理解されておらず依然として重要な研究分野である。
【０１６７】
ある種のＭＭ細胞は成熟Ｂ細胞と似ておりボルテゾミブ（ＢＴＺ）に耐性を有する。こうしたＣＤ１３８−ＭＭ細胞は、対応する正常Ｂ細胞と同じく、ＣＤ１３８＋ＰＣへとクローン性増殖及び分化する能力を有する。さらに、これらの細胞は、微小残存病変（ＭＲＤ）の最中に濃縮されることから、疾患再発での重要な役割を担うことが示唆される。ＣＤ１３８＋及びＣＤ１３８−のＭＭ細胞の差次的ＢＴＺ感受性は、それらの分泌活性により説明できるかもしれない。ＣＤ１３８＋ＰＣは、その豊富なＩｇ産生の結果、不適切に折り畳まれたタンパク質を分解するインタクトなプロテアソーム経路への依存性が高い。プロテアソームによるタンパク質分解を阻害する状態は、タンパク質合成を減少させ且つタンパク質分解を促進することによりＥＲストレスを相殺する小胞体ストレス応答（ＵＰＲ）として知られる細胞ストレス経路を活性化する。恒常性が復旧できなければ、ＵＰＲ活性化は最終的にアポトーシスにつながる。一方、ＣＤ１３８−ＭＭ細胞は、限定的なＩｇ産生及び低いＥＲストレスを示し、誤って折り畳まれたタンパク質のプロテアソーム媒介分解への依存性がより低い。
【０１６８】
これまでの研究から、骨髄間質細胞がＭＭで未成熟薬剤耐性表現型を誘導することが示された。骨髄間質は正常細胞及び悪性細胞の分化を防ぐＣＹＰ２６を介した低レチノイン酸（低ＲＡ）環境を作る。レチノイドシグナル伝達はＰＣ分化及びＩｇ産生を促進するため、本研究では骨髄ニッチが間質のＣＹＰ２６活性を介してＰＣ分化を防ぐことによりＢＴＺ耐性を誘導するか否かを明らかにした（Ａｌｏｎｓｏ  Ｓ．  ｅｔ  ａｌ．、Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．、１２６：４４６０−４４６８、２０１６）。間質のＣＹＰ２６により誘導される低ＲＡ環境は、ＭＭ細胞でのＢ細胞様ＢＴＺ耐性表現型の維持に関与する。ＣＹＰ２６の直接的な阻害、又は、ＣＹＰ２６耐性レチノイドを介した間質防御の迂回は、ＰＣ分化及びＢＴＺ感受性を取り戻させる。さらに、発明者等は、ＭＭ細胞により分泌された傍分泌ヘッジホッグが骨髄間質のＲＡ不活性化能の増加を介して防御ニッチを強化するという二方向性クロストークも記載する。これらのデータは、ＲＡシグナル伝達の調節がＭＭ骨髄微小環境でのＢＴＺ耐性を克服するための魅力的な治療戦略であることを表している。
【０１６９】
〈方法〉
《細胞培養》
全ての細胞株はアメリカン・タイプ・．  カルチャー・コレクションから購入した。Ｈ９２９、ＭＭ．１Ｓ、及びＵ２６６細胞は、１０％ＦＣＳ（ウシ胎仔血清）、２ｍＭのＬ−グルタミン、及び１００μｇ／ｍｌのペニシリン−ストレプトマイシン（Ｐ／Ｓ）を含むＲＰＭＩ１６４０で培養した。ＯＰ−９細胞は、α−ＭＥＭ（２０％ＦＣＳ、Ｌ−グルタミン、及びＰ／Ｓ）で培養した。細胞株は縦列型反復配列プロファイリングにより認証された。
【０１７０】
初代ＭＭ細胞はＩＲＢ承認済みの手順のもとＭＭに罹患したと新たに診断された又はＭＭが再発した患者から得た。簡単に説明すると、新鮮な骨髄吸引物から密度勾配遠心法（Ｆｉｃｏｌｌ−Ｐａｑｕｅ）により単核細胞を単離し、その後、ＣＤ１３８＋細胞を磁気ビーズ及びカラムを介して選択してＲＰＭＩ１６４０（１０％ＦＣＳ、Ｌ−グルタミン、及びＰ／Ｓ）において３７℃で培養した。
【０１７１】
初代ヒト骨髄間質細胞はＩＲＢ承認済みの手順のもと健康なドナーから集めた吸引物に由来する。簡単に説明すると、骨髄吸引物から単離した単核細胞を、イスコフ改変ダルベッコ培地（ＩＭＤＭ）に、１０％ウマ血清、１０％ＦＣＳ、１０−５Ｍのヒドロコルチゾン２１−ヘミスクシナート、Ｐ／Ｓ、及び０．１ｍＭのβ−メルカプトエタノール（β−ＭＥ）を添加したもの（ＦＢＭＤ１培地）で培養した。翌日に、懸濁液中の細胞をＰＢＳで２回洗うことにより除去し、培地を換えた。付着間質細胞をコンフルエントな単層が得られるまで３３℃でインキュベートした。マウス大腿骨から全骨髄単核細胞を単離した後、マウス初代骨髄間質細胞を同じ手順に従い単離した。
【０１７２】
《ベクター及びウイルス上清》
Ｓｍｏ−ＫＯ及びＷＴの間質を作るために、骨髄間質細胞をＳｍｏｆｌ／ｆｌマウスから得てＣｒｅ−リコンビナーゼをコードするレトロウイルスベクターＰＩＧ−Ｃｒｅ（Ａｄｄｇｅｎｅ、カタログ番号５０９３５）又は対照ベクター（Ａｄｄｇｅｎｅ、カタログ番号１８７５１）をそれぞれ形質導入した。感染成功細胞を、４μｇ／ｍｌのピューロマイシンを５日間使って選抜し、フローサイトメトリーを介してＧＦＰ発現により確認した。ｐＬｅｎｔｉ−ＣＭＶ−ＬＵＣ−Ｐｕｒｏレンチウイルスベクター（プラスミド１７４７７）を用いてＨ９２９のＬｕｃ＋細胞を作った。
【０１７３】
ＣＹＰ２６Ａ１過剰発現間質細胞を作るために、ＷＴ及びＳｍｏ−ＫＯの間質細胞にＣＹＰ２６Ａ１をコードするように設計されたレンチウイルスベクターｐＢＡＢＥ−ｎｅｏ（Ａｄｄｇｅｎｅ、カタログ番号１７６７）を形質導入した。簡単に説明すると、Ｃｙｐ２６ａ１  ｃＤＮＡ（Ｏｒｉｇｅｎｅ）を、ＢａｍＨＩ及びＥｃｏＲＩの制限酵素部位を含むプライマーを用いてＰＣＲにより増幅し、ｐＣＲ２．１ベクターにクローン化した。Ｃｙｐ２６ａ１  ｃＤＮＡをサンガーシーケンシングにより確認し、制限酵素であるＢａｍＨＩ及びＥｃｏＲＩで分解した後に断片を単離して、ｐＢＡＢＥベクターの対応部位にサブクローン化した。レンチウイルス粒子は前例通りに産生された。感染成功細胞を、３μｇ／ｍｌのＧ−４１８を１０日間使って選抜し、Ｃｙｐ２６ａ１の発現をｑＲＴ−ＰＣＲにより確認した。
【０１７４】
《共培養実験》
２４ウェルプレートに３７℃で３０分にわたり０．１％ゼラチンＰＢＳ溶液をコートした。ゼラチン溶液を除去した後、間質細胞を５×１０４細胞／ウェルの密度で一晩培養し、コンフルエントな単層を得た。この時点で、ＭＭ細胞株又は初代ＭＭ細胞（２ｍｌ内で１×１０５）をこの間質培養物に加えた。この間質共培養物を、ＡＧＮ１９４３１０（１μＭ、５日間）、Ｒ１１５８６６（１μＭ、５日間）、ＩＲＸ５１８３（１μＭ、５日間）、又はＢＴＺ（２．５ｎＭ、４８時間）の存在下又は不在下で、１０％ＦＣＳ、Ｌ−グルタミン、及びＰ／Ｓを含有するＲＰＭＩにおいて、３７℃でインキュベートした。
【０１７５】
《Ｔｒａｎｓｗｅｌｌ実験》
Ｔｒａｎｓｗｅｌｌ実験では、６ウェルプレートに３７℃で３０分にわたり０．１％ゼラチンＰＢＳ溶液をコートした。ゼラチン溶液を除去した後、間質細胞をＦＢＭＤ１培地において培地２ｍｌ内で１０×１０４細胞／ウェルの密度で一晩培養し、コンフルエントな単層を得た。この時点で、Ｔｒａｎｓｗｅｌｌインサート（Ｃｏｒｎｉｎｇ）を間質培養物の上方に置き、ＭＭ細胞株（１ｍｌ内で１×１０６）をＴｒａｎｓｗｅｌｌ内に３７℃で２４時間にわたり播種した。このインキュベーション後、Ｔｒａｎｓｗｅｌｌ及びＭＭ細胞を除去し、間質細胞を壁から剥がしてｑＲＴ−ＰＣＲによりＣＹＰ２６発現について分析した。
【０１７６】
《動員実験》
ウェルの近くで穏やかに数回ピペッティングすることによりＭＭ細胞を骨髄間質細胞から分離した。剥がした細胞を、遠心分離し、新鮮な培地に再懸濁し、３７℃で１時間にわたり２４ウェルプレートでインキュベートした。この短いインキュベーション期間の間に、混入していた間質細胞は壁に付着し、一方、ＭＭ細胞は懸濁液中に留まった。その後、穏やかなピペッティングでＭＭ細胞を回収した。この手順をｑＲＴ−ＰＣＲ及びＣＦＵ共培養実験について用いた。この手順を用いて得られた純度をフローサイトメトリーで確認したところ、ＭＭ細胞９８％〜９９％、混入間質２％未満であった。
【０１７７】
《クローン形成法》
処置後、ＭＭ細胞を集め、ＰＢＳで洗い、３０％ＦＢＳ、１０％ＢＳＡ、Ｌ−グルタミン、Ｐ／Ｓ、及び０．１ｍＭのβ−ＭＥを添加した１．３２％メチルセルロースの１ｍｌ内で５，０００細胞／ｍｌの密度でまいた。細胞を、トリプリケートで３５ｍｍ培養皿にまき、３７℃でインキュベートし、１４日後のコロニーの存在について記録した。
【０１７８】
《ｑＲＴ−ＰＣＲ》
ＲＮｅａｓｙ  Ｍｉｎｉ  Ｋｉｔ（ＱＩＡＧＥＮ）を製造元の指示通りに用いて全ＲＮＡを抽出した。ｉＳｃｒｉｐｔ  ｃＤＮＡ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ  Ｋｉｔ（Ｂｉｏ−Ｒａｄ）を用いた逆転写によりｃＤＮＡを合成した。配列特異的プライマーを用いてｉＴａｑ  ＳＹＢＲ  Ｇｒｅｅｎ  Ｓｕｐｅｒｍｉｘ（Ｂｉｏ−Ｒａｄ）でｑＲＴ−ＰＣＲを行った。遺伝子発現量はＧＡＰＤＨに対して標準化し、ΔΔＣｔ法を用いて相対定量を行った。全ての実験は、デュプリケートで行い、Ｂｉｏ−Ｒａｄ  ＣＲＦ９６機上で実行した。
【０１７９】
《フローサイトメトリー》
処置後、ＭＭ細胞を集め、ＰＢＳで洗い、室温で１５分にわたりフィコエリスリン結合（ＰＥ結合）抗ＣＤ１３８で染色した。細胞を洗い未結合抗体を除去し、ＦＡＣＳＣａｌｉｂｕｒ  ｓｙｓｔｅｍ（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）で評価した。間質細胞をＧＦＰ発現により同定し、生存細胞を７−アミノアクチノマイシンＤ（７−ＡＡＤ）を用いて同定した。細胞数を計算するために、生きているＧＦＰ細胞をキャリブレーションビーズに対して標準化した。
【０１８０】
《マウス異種移植》
１×１０６Ｈ９２９Ｌｕｃ＋細胞及び１×１０６マウス骨髄間質細胞を１００μｌのＭＡＴＲＩＧＥＬ（登録商標）に再懸濁し、ＲＰＭＩで希釈し（１：１）、１６週齢のオスのＮＳＧマウスに皮下注射した。４日後、ＢＴＺ（０．５ｍｇ／ｋｇ、腹腔内、毎週２回）及びＩＲＸ（１０ｍｇ／ｋｇ、腹腔内、毎日）での処置を開始した。腫瘍負荷をＩｎ  Ｖｉｖｏ  Ｉｍａｇｉｎｇ  Ｓｙｓｔｅｍ（ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ）を用いて生物発光により評価した。撮像のために、マウスを撮像の１０〜５分前に腹腔内投与を介して１２０ｍｇ／ｋｇのＤ−ルシフェリンに暴露し、イソフルランを用いて麻酔した。画像はＬｉｖｉｎｇ  Ｉｍａｇｅ  Ｓｏｆｔｗａｒｅ，  ｖｅｒｓｉｏｎ  ２．５（ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ）で分析し、データを光子／秒として定量した。
【０１８１】
全身ＭＭモデルに関しては、２×１０６Ｌｕｃ＋／ＧＦＰ＋Ｈ９２９細胞を尾の静脈を介して１６週齢のＮＳＧマウスに注射した。生着（生物発光での指数関数的増加により確認）後、マウスを毎週２回のＢＴＺ（０．５ｍｇ／ｋｇ、腹腔内）及び毎日のＩＲＸ（１０ｍｇ／ｋｇ）で処置した。腫瘍負荷は上記と同じく生物発光により評価した。
【０１８２】
《統計解析》
まず、処置群が対照群と異なるか否かを１−ｗａｙ  ＡＮＯＶＡにより評価した。ＡＮＯＶＡ検定で統計的に有意な結果が得られたら、対照群と各処置群との間の差を、多重比較のために調節したＰ値でダネット検定を用いて評価した。２組のデータのみを分析する実験に関しては、対応のない、両側での、スチューデントのｔ検定を用いて統計的有意差を評価した。相関についてのピアソンのＲ値及びＰ値はＧｒａｐｈＰａｄ  Ｐｒｉｓｍ  ７（ＧｒａｐｈＰａｄ  Ｓｏｆｔｗａｒｅ）を用いて計算した。
【０１８３】
〈結果〉
骨髄微小環境（『ニッチ』とも呼ばれる）はレチノイドシグナル伝達を調節することによりＰＣ分化を制限する。ＭＭ前駆細胞集団は、Ｂ細胞と表現型が類似するが、ＢＺＴに対して元来耐性を有し、ＭＲＤ及び再発に寄与する。骨髄ニッチがＭＭ細胞の表現型の決定に関与しているか否かを調べるために、マウス骨髄間質との共培養後に、ＭＭのＨ９２９細胞株（図３Ａ〜Ｄ）及びＭＭのＣＤ１３８＋初代細胞（図３Ｅ〜Ｈ）でのＢ細胞マーカー及びＰＣマーカーのｍＲＮＡ発現をヒト特異的プライマーを用いて分析した。Ｂ  ｃｅｌｌ  ｌｙｍｐｈｏｍａ  ６（ＢＣＬ６）（胚中心Ｂ細胞の自己再生を促進しＰＣ分化を阻害する転写抑制因子）は、骨髄間質細胞の存在化では上方調節された（図３Ａ、３Ｅ）。対照的に、骨髄間質とＭＭ細胞の共培養は、ＰＣ分化の重要なメディエーターであるＢ  ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅ−ｉｎｄｕｃｅｄ  ｍａｔｕｒａｔｉｏｎ  ｐｒｏｔｅｉｎ  １（ＢＬＩＭＰ１）及びｓｐｌｉｃｅｄ  Ｘ  ｂｏｘ−ｂｉｎｄｉｎｇ  ｐｒｏｔｅｉｎ  １（ＸＢＰ１ｓ）のｍＲＮＡ発現を減少させた（図３Ｂ、Ｃ、Ｆ、Ｇ）。同様に、ＵＰＲ経路の重要な構成要素であるＣ／ＥＢＰ  ｈｏｍｏｌｏｇｏｕｓ  ｐｒｏｔｅｉｎ（ＣＨＯＰ）は骨髄間質細胞の存在下で下方制御された（図３Ｄ、Ｈ）。
【０１８４】
骨髄ニッチはレチノイド不活性化酵素であるＣＹＰ２６を発現させることにより造血幹細胞（ＨＳＣ）分化を制御する。ＣＹＰ２６酵素は骨髄間葉細胞では高発現したが、それらの発現はＭＭ細胞では殆ど検出できなかった。レチノイドシグナル伝達はＰＣ分化を促進しＩｇ分泌を増強するので、間質ＣＹＰ２６がＭＭ細胞でのＢ細胞表現型の誘導に関与しているか否かを確かめた。このために、共培養条件をＣＹＰ２６阻害剤のＲ１１５８６６（Ｒ１１５）又はＣＹＰ２６耐性ＲＡ受容体α選択的（ＲＡＲα選択的）レチノイドＩＲＸ５１８３（ＩＲＸ）で処理した。間質共培養物をＲ１１５又はＩＲＸのいずれかとともにインキュベートすると、全てのマーカーが液体対照条件のレベルに匹敵するレベルまで回復した（図３Ａ〜Ｈ）。さらに、パンＲＡＲアンタゴニストのＡＧＮ１９４３１０（ＡＧＮ）でのＭＭ細胞の処置は骨髄間質細胞により誘導された変化を模倣し（図３Ａ−Ｈ）、ＰＣ分化を制限した。
【０１８５】
ＣＤ１３８の発現は、正常ＰＣ分化の特徴であり、また、ＭＭのＰＣの特徴でもある。ＰＣマーカーのｍＲＮＡレベルと一致して、表面ＣＤ１３８発現は骨髄間質細胞との共培養又はＡＧＮとのインキュベーションにより著しく減少した。骨髄間質細胞共培養物をＲ１１５又はＩＲＸとともにインキュベートするとＭＭ細胞でのＣＤ１３８発現が回復した。Ｒ１１５は定量逆転写ＰＣＲ（ｑＲＴ−ＰＣＲ）又はフローサイトメトリーによる液体条件での分化マーカーの発現量に顕著な影響を示さなかったが、ＩＲＸは骨髄間質の在否にかかわらず匹敵する変化を誘導した。まとめると、これらのデータは、レチノイドシグナル伝達がＭＭ細胞のＰＣ分化を促進し、このプロセスが間質ＣＹＰ２６介在性のＲＡ代謝により遮断されることを示唆している。
【０１８６】
《低ＲＡ微小環境はＢＴＺ耐性を誘導する》
減少したレチノイドシグナル伝達が骨髄ニッチ内でのＢＴＺ耐性に寄与するか否かを明らかにするために、ＭＭ細胞株及びＭＭのＣＤ１３８＋初代細胞を骨髄間質とともに５日にわたりインキュベートし、その後、ＢＴＺ処置を行った。骨髄間質の不在下（液体）では、ＭＭ細胞はＢＴＺへの感受性が高かった（図４Ａ〜Ｂ）。一方、骨髄間質とのインキュベーションはＢＴＺ耐性を誘導し、これはＲ１１５を介したＣＹＰ２６阻害により又はＣＹＰ２６耐性レチノイドＩＲＸにより克服された。さらに、パンＲＡＲアンタゴニストのＡＧＮでのＭＭ細胞の処置は骨髄間質細胞により誘導された変化を模倣し（図５）、ＢＴＺ感受性を減少させた。
【０１８７】
微小環境依存的化学防御を克服するための戦略は骨髄ニッチから末梢循環へのがん細胞の動員に集中してきていた。ＭＭ細胞の表現型及びその結果生じるＢＴＺ耐性の変化が骨髄間質からの分離（動員を模倣するプロセス）の際に失われるか否かを分析した。このために、Ｈ９２９細胞を５日間の間質共培養後に骨髄間葉細胞から分離し、０から４８時間にわたり新鮮な培地（１０％ＦＢＳを含むＲＰＭＩ）で培養し、その後、ＢＴＺで処理した。興味深いことに、ＭＭ細胞は間質から剥がした後４８時間までにわたりＢＴＺへの部分的な耐性を維持し続けた（図５）。さらに、Ｒ１１５による共培養条件の処置はＢＴＺ耐性表現型の発達を防いだ（図５）。従って、ＭＭ細胞表現型の変化により誘導された微小環境依存的ＢＴＺ耐性は腫瘍動員により即座に逆になるわけではない。
【０１８８】
レチノイドがＭＭでのＢＴＺ活性を増加させ得るか否かを検査するために、全身ＭＭ異種移植を痩せ型糖尿病重症複合免疫不全ＩＬ−２受容体γ−ＫＯ（ＮＳＧ）マウスの尾の静脈を介した２×１０６Ｈ９２９ルシフェラーゼ＋（Ｌｕｃ＋）細胞の注射により行った。被験動物は無作為化しＩＲＸ、ＢＴＺ、又はこれらの組み合わせを受けさせ、疾患負荷を生物発光イメージングにより毎週追跡した（図６）。ＢＴＺ処置マウスは未処置対照群と比べて減少した腫瘍成長を示した。一方、いくつかのＭＭ細胞は生物発光の継続的増加によって示されるようにＢＴＺへの耐性を保持し続けた。同様に、ＩＲＸ単独投与処置マウスは未処置対照群と比べて減少した腫瘍成長を示した。最も重要な点として、ＩＲＸがＭＭ細胞をＢＴＺに感受性とし、疾患負荷の有意な（Ｐ＜０．０１）減少をもたらした。まとめると、これらのデータは、間質ＣＹＰ２６により作られた低ＲＡ微小環境がＢＴＺ耐性表現型を誘導し、これが骨髄ニッチからの移動後でさえも維持されることを示した。
【０１８９】
《ＭＭ細胞は間質ＣＹＰ２６を誘導する》
最近の研究から、間質細胞が防御的微小環境を提供するのみならず、がん細胞が補強ニッチを積極的に改変し作り上げるという、二方向性クロストークの存在が示されてきていた。そこで、骨髄間質がレチノイドを不活性化する能力を強化することによりＭＭ細胞が防御的微小環境を補強するか否かを確かめた。間質ＣＹＰ２６発現はＭＭ細胞との２４時間の共培養後の骨髄間葉細胞でのｑＲＴ−ＰＣＲにより分析した。アイソエンザイムのＣＹＰ２６Ａ１は調べた３種のＭＭ細胞株の全てで高く上方制御された（図７Ａ〜Ｃ）。対照的に、アイソエンザイムのＣＹＰ２６Ｂ１は僅かから零のｍＲＮＡレベルの変化を示した。また、ＭＭ細胞由来の条件付け培地はそれほどではないものの骨髄間質細胞でＣＹＰ２６Ａ１を上方制御した。このことは、共培養実験での物理的相互作用の存在により、又は、条件付け培地実験でのＭＭ細胞による可溶性リガンドの継続的産生の欠如により、説明できる。後者と一致して、物理的接触を妨げるものの可溶性因子の拡散を許すＴｒａｎｓｗｅｌｌによりＭＭ及び骨髄間質細胞が分離されたときに間質ＣＹＰ２６Ａ１は高く上方制御された（図７Ａ〜Ｃ）。
【０１９０】
ＭＭ細胞は、骨髄間質区画に影響し得るソニックヘッジホッグ（ＳＨＨ）などのヘッジホックリガンドに加えて、サイトカイン（ＩＬ−１、ＩＬ−３、ＩＬ−６、ＴＮＦ−α）をはじめとする様々な可溶性因子を産生する。そこで、これらの因子のいずれが骨髄間質細胞で観察されたＣＹＰ２６Ａ１の上方制御に関与しているかを確かめた。調べた可溶性因子のなかで、ＳＨＨのみがＣＹＰ２６Ａ１の持続的過剰発現を生じ、ＩＬ−１、ＩＬ−３、ＩＬ−６、及びＴＮＦ−αは顕著な効果を示さなかった。ＳＨＨは、骨髄間質細胞により発現され、そのため、自己分泌様式でヘッジホッグ経路を活性化できるかもしれないが、その発現が骨髄間質で検出されるものと比べてＭＭ細胞中で相当に高かったことから、傍分泌活性化が主要な役割を担っていることを示唆している。このことと一致して、ＭＭ細胞でのＳＨＨのｍＲＮＡレベルとｐｒｏｔｅｉｎ  ｐａｔｃｈｅｄ  ｈｏｍｏｌｏｇ  １（ＰＴＣＨ１）の発現により求めた間質ヘッジホッグシグナル伝達の活性化との間には統計的に有意な相関がみられた。さらに、間質ヘッジホッグの活性化はＣＹＰ２６Ａ１上方制御と顕著に相関していた。具体的には、ＳＨＨの発現が最も高いＭＭ．１Ｓ細胞は間質細胞でのＰＴＣＨ１及びＣＹＰ２６Ａ１の両方の最も高い発現も誘導した。ＳＨＨは１時間未満の半減期を有し、このことは共培養及びＴｒａｎｓｗｅｌｌ実験で観察されたものと比べた場合の間質ＣＹＰ２６Ａ１発現へのＭＭ条件付け培地の抑制的な効果を説明できるかもしれない。
【０１９１】
この相互作用における傍分泌ヘッジホックの役割を確かめるために、ｓｍｏｏｔｈｅｎｅｄ（Ｓｍｏ）（ＳＨＨシグナル伝達を変換する膜受容体）を間葉区画において遺伝子レベルでノックアウトした。このために、Ｓｍｏｆｌ／ｆｌマウス由来の骨髄間葉細胞にＣｒｅリコンビナーゼをコードするレトロウイルスベクターを形質導入した（Ｓｍｏ−ＫＯ間質）。空のレトロウイルスベクターを形質導入したマウスＳｍｏｆｌ／ｆｌ間質細胞を対照として用いた（ＷＴ間質）。形質導入骨髄間質細胞を２４時間にわたりＭＭ細胞と共培養した。期待通り、Ｓｍｏ−ＫＯ間質はＷＴ間質に比べＭＭ細胞に反応してＣｙｐ２６ａ１を上方制御する能力が減少していた（図８Ａ〜Ｃ）。同様に、ＳＭＯ抑制剤のシクロパミンはＭＭ細胞による間質Ｃｙｐ２６ａ１上方制御を部分的に克服した。これらのデータは、ＭＭ細胞が傍分泌ＳＨＨを介して少なくとも部分的に間質ＣＹＰ２６発現を調節することを示唆している。
【０１９２】
《ＭＭ細胞により産生された傍分泌ヘッジホッグは防御的微小環境を補強する》
間質ＣＹＰ２６活性がＭＭ細胞でのＢＴＺ耐性に関与しているかもしれないという観察結果をもとに、ＭＭ細胞により分泌された傍分泌ヘッジホッグがレチノイド代謝を制御することにより化学防御ニッチを補強するか否かを評価した。まず、ヘッジホッグシグナル伝達の調節が、これまでに観察されたレチノイド依存的表現型と似ているかを調べた。Ｓｍｏ−ＫＯ間質共培養物での傍分泌ヘッジホッグシグナル伝達の阻害は、Ｈ９２９（図１１Ａ〜Ｄ）及び初代ＣＤ１３８＋ＭＭ細胞（図１１Ｅ〜Ｈ）でのＰＣ分化（ＢＣＬ６の下方制御並びにＢＬＩＭＰ１、ＸＢＰ１、及びＣＨＯＰの上方制御）を回復させた。また、ＣＤ１３８の表面発現もＳｍｏ−ＫＯ間質の存在下で回復された。期待通り、これらの知見はＷＴ間質に比べＳｍｏ−ＫＯ間質の存在下で処置したＭＭ細胞のＢＴＺへの増大した感受性を連想させるものであった。
【０１９３】
傍分泌ヘッジホッグが実際にレチノイドを不活性化する骨髄間質の能力を増加させることによりＢＴＺ耐性表現型を誘導することを確かめるために、ＷＴ（ＷＴ−Ｃｙｐ２６ａ１）及びＳｍｏ−ＫＯ（Ｓｍｏ−ＫＯ−Ｃｙｐ２６ａ１）の間質細胞で同程度のＣＹＰ２６Ａ１レベルを得るために、Ｓｍｏ−ＫＯ間質でのＣｙｐ２６ａ１発現をレンチウイルス媒介遺伝子導入（ｐＢＡＢＥ−Ｃｙｐ２６ａ１）を介して回復させた。傍分泌ヘッジホッグの役割がレチノイドシグナル伝達と独立しているならば、Ｓｍｏ−ＫＯ間質が比較的にＢ細胞表現型及びＢＴＺ耐性を誘導できないことは、Ｃｙｐ２６ａ１上方制御の後でさえも引き続きみられるはずである。しかし、Ｃｙｐ２６ａ１過剰発現は、Ｓｍｏ−ＫＯ間質がＢ細胞表現型を誘導する能力を回復させ、分化マーカーの発現及びＢＴＺ耐性をＷＴ及びＷＴ−Ｃｙｐ２６ａ１間質共培養条件で検出されるレベルに匹敵するレベルまで回復させた。これらの知見は傍分泌ヘッジホッグがＣｙｐ２６ａ１上方制御を介して防御ニッチを補強するという仮説に一致している。
【０１９４】
骨髄間質により作られＭＭ細胞により傍分泌ヘッジホッグシグナル伝達を介して強化された低ＲＡ環境がどの程度までＢＴＺ耐性に寄与するのかを調べるために、ＭＭ−ニッチ間相互作用の異種移植モデルを開発した。各マウスは２箇所の皮下腫瘍を持っており、これらの皮下腫瘍はＨ９２９のＬｕｃ＋細胞とＷＴ間質（前部腫瘍）又はＳｍｏ−ＫＯ間質（後部腫瘍）のいずれかとからなる。マウスは、ＩＲＸ（１０ｍｇ／ｋｇ、腹腔内、毎日）、ＢＴＺ（０．５ｍｇ／ｋｇ、腹腔内、毎週２回）、又はこれらの組み合わせにより処置した。ＷＴ間質又はＳｍｏ−ＫＯ間質を持つ腫瘍の成長は未処置群又はＩＲＸ処置群では異なるものではなかった（図９及び１０）。インビトロのデータと一致して、ＷＴ間質を有する腫瘍は生物発光の指数関数的増加により確かめたところＢＴＺ処置が効かなかったが、Ｓｍｏ−ＫＯ間質を持つ腫瘍は顕著な反応を示した（図８）。さらに、ＩＲＸ及びＢＴＺの併用は間質区画の表現型によらず顕著且つ同等の反応をもたらした（図１０）。ＩＲＸ及びＢＴＸを併せて受けた処置群のいくつかの腫瘍は解剖学的研究後であっても完全に退縮しているようにみえたが、この群の全てのマウスについてあてはまるわけではない。処置後の腫瘍のフローサイトメトリー分析から、ＷＴ間質又はＳｍｏ−ＫＯ間質のインビボの成長に差がないことが明らかとなった。まとめると、これらのデータは、ＭＭ細胞から分泌された傍分泌ヘッジホッグがＣＹＰ２６Ａ１上方制御を介して骨髄ニッチ内のレチノイドシグナル伝達及びＢＴＺ感受性を調節することを示唆している。
【０１９５】
ＰＣは、それらの高いＩｇ分泌を考えると、プロテアソーム阻害に特に感受性であり、これはこの薬剤ファミリーで処置したＭＭ患者で得られる高い寛解率を説明するものである。それにもかかわらず、ＢＴＺは治癒を成し遂げることができないでいた。ＭＭ細胞集団は、Ｂ細胞と表現型が類似するが、ＢＴＺ処置を生き延び、ＰＣへと分化することができ、もとの疾患を繰り返す。ＭＭのＰＣの効率的な排除にもかかわらず、これらのＭＭのＢ細胞はＢＴＺ処置を生き延びＭＲＤの最中に主要な細胞集団となる。結果として、ＭＭのＢ細胞を標的とする新規の治療戦略が必要とされる。間質ＣＹＰ２６により作られた低レチノイド微小環境はＭＭで未成熟ＢＴＺ耐性表現型を維持した。従って、これらのデータはＣＹＰ２６耐性レチノイドを用いてＭＭ微小環境でのＢＴＺ耐性を克服する治療機会を明らかにする。
【０１９６】
多くの悪性血液疾患で広く研究されているにもかかわらず、分化療法としてレチノイドの使用は急性前骨髄球性白血病（ＡＰＬ）の患者でのみ有益性が立証されている。骨髄間質細胞によるＣＹＰ２６発現は天然レチノイドの臨床的有効性がそのインビトロでの活性にもかかわらずないことを説明するかもしれない。最近の研究からがん細胞を分化させそれらを標的療法感受性にする際のＣＹＰ耐性合成レチノイドの効能を浮き彫りになった。例えば、ＡＭ８０は、ＦＭＳ−ｌｉｋｅ  ｔｙｒｏｓｉｎｅ  ｋｉｎａｓｅ  ３／ｉｎｔｅｒｎａｌ  ｔａｎｄｅｍ  ｄｕｐｌｉｃａｔｉｏｎ（ＦＬＴ３／ＩＴＤ）型急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）細胞を分化させ、ＦＬＴ３阻害剤へのそれらの感受性を増加させる。同様に、合成レチノイドは、ＢＣＲ−ＡＢＬ１＋白血病リンパ芽球での幹細胞表現型を覆し、インビボでのチロシンキナーゼ阻害剤（ＴＫＩ）療法へのそれらの反応性を大幅に増加させる。間質ＣＹＰ２６を迂回するこうした戦略はレチノイド療法の臨床的有効性を拡張し得る。
【０１９７】
ＭＭ細胞は薬剤耐性の維持及び骨髄ニッチ内での生存のために物理的接触を用いている。従って、間質化学防御を克服するための治療戦略は、ＣＸＣＲ４などの接着分子又はケモカインを標的とすることによる骨髄ニッチからの悪性細胞の動員に集中していた。低レチノイド微小環境に暴露されたＭＭ細胞は当該細胞が当該ニッチから移動した後であっても維持されるＢＴＺ耐性表現型を獲得する。初期臨床研究はＢＴＺと併せてＣＸＣＲ４阻害剤のプレリキサホルを受けている再発／難治患者での改善された奏効率を示している。一方、このデータは、こうした動員手法がＭＭのＢ細胞を排除するのに不十分であるかもしれないことを示唆している。
【０１９８】
最近の研究から、間質細胞が化学防御ニッチを提供するのみならず、がん細胞も積極的にこうした微小環境を成形及び補強するという、二方向性コミュニケーションの存在が示されてきている。傍分泌ヘッジホッグの役割が固形悪性腫瘍で広く調べられてきている。このシステムでは、がん細胞により分泌されたリガンドが隣接する間質細胞でのヘッジホッグ経路を活性化し、それらの化学防御特性を完全には理解されていない機序を介して強化する。このデータは、傍分泌ヘッジホッグが、ＣＹＰ２６の上方制御を介してレチノイドを不活性化する間質の能力を増加させることにより少なくとも部分的には働き、これにより、ＭＭでＢＴＺ耐性表現型を維持することを示唆している。興味深いことに、ＣＹＰ２６上方制御は、『活性化間質サブタイプ』、及び、傍分泌ヘッジホッグシグナル伝達が確立している疾患である膵臓がんの患者での顕著に悪化した予後と関連している。がん細胞により産生されるヘッジホッグリガンドがこの『活性化』された間質表現型及び高いＣＹＰ２６レベルにどの程度寄与するかは知られていない。さらに、骨髄間葉細胞は遊走しこうした腫瘍の間質区画内の関連細胞集団となる。
【０１９９】
骨内膜領域は、ＭＭ、ＡＭＬ、及び固形腫瘍由来の微小転移疾患の主要ニッチである。骨芽細胞領域内では、こうしたがん細胞は休止的幹細胞表現型を維持し化学療法誘導アポトーシスから守られている。こうしたがん細胞は化学療法を生き延び疾患を永らえさせるのに正常造血幹細胞と同じく骨髄微小環境由来の合図に頼っている可能性がある。骨髄微小環境はＣＹＰ３Ａ４及び他の解毒酵素の発現を介して様々な化学療法剤を直接的に不活性化することによりＭＭ及びＡＭＬ細胞を守っていた。現在、微小環境媒介薬剤耐性の別の潜在的機序として、薬剤耐性Ｂ細胞表現型を維持する低レチノイドニッチの形成が示されている。ＣＹＰ２６耐性レチノイド（ＩＲＸ５１８３）が骨髄ニッチ内でＭＭに対するＢＴＺの活性を増強したことは、この耐性機序を迂回する治療機会を提供する。
【０２００】
（実施例８）
（急性骨髄性白血病でのＩＲＸ５１８３の第Ｉ／ＩＩ相臨床研究）
急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）は若年患者の３０〜４０％及び老齢患者の極少数でしか標準化学療法レジメンによる処置が成功しない。急性前骨髄球性白血病（ＡＰＬ）でのオールトランスレチノイン酸（ＡＴＲＡ；レチノイン酸、ＲＡ）の臨床活性を考慮すると、ＡＴＲＡは他のＡＭＬサブタイプに関する魅力的な治療戦略であると考えられた。ＡＰＬ及び最も非ＡＰＬ的なＡＭＬは最終分化を経るのでインビトロではＡＴＲＡによる処置が成功する。しかし、ＡＴＲＡは臨床試験における非ＡＰＬ的なＡＭＬでの有効性が立証されていない。
【０２０１】
レチノイン酸（ＲＡ）は造血幹細胞（ＨＳＣ）の分化において重要な役割を果たす。シトクロムＰ４５０酵素のＣＹＰ２６は、骨髄（ＢＭ）間質細胞内で発現しているが、ＲＡを不活性化し、これにより、ＨＳＣの分化を制限する。数種類のＡＭＬ細胞株は、ＡＰＬ及び非ＡＰＬの両方が、ＲＡ誘導性分化に感受性だが、この効果は骨髄間質の存在化では無効化された。そこで、ＣＹＰ２６経路による代謝に耐性であるレチノイドでＡＭＬを処置することが有用であるかもしれない。ＩＲＸ５１８３は、ＣＹＰ２６代謝に耐性であるＲＡＲα選択的アゴニストである。ＡＭＬでのＩＲＸ５１８３の使用はこの疾患への新規標的手法を提供し、これはこの血液悪性腫瘍及び他の血液悪性腫瘍の予後を変える可能性を秘めている。そこで、再発／難治ＡＭＬでのＩＲＸ５１８３の第Ｉ／ＩＩ相臨床試験が行われるものである。
【０２０２】
〈研究目的〉
《用量漸増相主目的》
・用量制限毒性（ＤＬＴ）及び最大耐量（ＭＴＤ）を決定することで再発性及び難治性ＡＭＬの患者でのＩＲＸ５１８３の投与にともなう安全性及び毒性を評価する。
・末梢血中のＩＲＸ５１８３の薬物動態（ＰＫ）パラメータを決定する。
【０２０３】
《用量漸増相副目的》
・骨髄内でのＩＲＸ５１８３のＰＫパラメータを決定する。
・異なる用量レベルでの、ＩＲＸ５１８３にともなう分化プロファイル、骨髄細胞内レチノイド濃度、芽球数、及び細胞遺伝学を明確にする。
【０２０４】
《用量拡大相主目的》
・最適用量レベルでのＡＭＬ患者における、分化マーカー、骨髄レチノイド濃度、芽球数、及び細胞遺伝学を明確にする。
・患者のコホートの両方での、完全奏効（ＣＲ）、部分奏効（ＰＲ）、及び血液学的改善（ＨＩ）に関する、ＩＲＸ５１８３の予備効力データを得る。
【０２０５】
《用量拡大相副目的》
・両方の患者コホートでの最適用量でのＩＲＸ５１８３の毒性プロファイルを明確にする。
・ＩＲＸ５１８３誘導性の分化及び毒性と臨床応答との間の相関についてのデータを得る。
【０２０６】
《適格基準−用量漸増／決定》
・患者は、インフォームドコンセント書面を理解し自発的に署名を行う能力を有せねばならない。
・年齢は、インフォームドコンセント署名時点で１８〜７０歳。
・研究訪問予定及び他の要件を遵守できること。
・余命が６ヶ月より長いこと。
・同種骨髄移植の前又は後に、導入化学療法又は低メチル化剤療法の過程を以前に１回又は２回受けていた又は完全寛解後に再発した病理学的に確認済みのＡＭＬを有しており、且つ、さらなる強化化学療法が計画されていない必要がある。
・患者は、造血成長因子をはじめとする自身の疾患への他の処置（ＡＭＬ患者での芽球数を制御するためのヒドロキシウレアを除く）を試験の開始の３週間以内に受けていてはならず、以前の療法の毒性のすべてから（Ｇｒａｄｅ０又は１まで）回復しているべきである。
・治験登録時にＥＣＯＧパフォーマンスステータス≦２、又は、Ｋａｒｎｏｆｓｋｙ≧６０％。
・試験室試験結果が以下の範囲である。
・ＭＤＲＤにより計算したクレアチニンクリアランス（ＣｒＣＬ）＞５０ｍｌ／分／１．７３平方メートル。
・総ビリルビン≦２．０ｍｇ／ｄＬ（ジルベール症候群、溶血、又は無効造血のために、ＡＳＴ（ＳＧＯＴ）及びＡＬＴ（ＳＧＰＴ）≦３×ＵＬＮでない場合に限る）。
・妊娠可能な女性は妊娠検査で陰性でなければならない。
・患者は、ＣＮＳ若しくは肺白血球停滞、播種性血管内凝固症候群、又はＣＮＳ白血病の臨床的証拠を有するものであってはならない。
・患者は、重篤又は制御不能な医学的状態であってはならない。
【０２０７】
《適格基準−用量拡大》
本相は、上記の適格基準に従うものであり、照会時に以下に規定される高リスク特徴を備える病理学的に確認済み慢性骨髄単球性白血病（ＣＭＭＬ）を含む。
・ＩＮＴ−２又は高ＩＰＳＳスコア。
・５％以上の骨髄芽球、又はＲＢＣ若しくは血小板の輸血依存性、異常核型、又は増殖特徴を備えるＣＭＭＬ。
【０２０８】
《処置計画》
用量漸増相について、ＩＲＸ５１８３は毒性又は疾患が進行するまで２８日周期で継続的に１日用量で経口投与される。最初の４周期のそれぞれの間での骨髄検査は骨髄の状態及び反応を決定する。単剤のＩＲＸ５１８３の開始用量（ＤＬ１）は３０ｍｇ／ｍ２／日であり、個別の用量レベルは下記の通りである。
【０２０９】
【表４】
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【０２１０】
本研究の相−拡大パートは、本研究の相−漸増パートで特定された最適用量を用い、２６名の患者を採用するものである。
【０２１１】
ＡＭＬ患者でのＩＲＸ５１８３の毒性プロファイルを決定するために、同時に３名の対象を加入することを目的とする、典型的な３＋３デザインに従って、用量レベルを探索する。ＤＬ１を受けた３名の患者が誰もＤＬＴを経験しない場合、別の３名の患者が次に高い用量レベルで処置されることになる。一方、最初の３名の患者の１名がＤＬＴを経験する場合、さらに３名の患者が同じ用量レベルで処置されることになる。３〜６名の患者のコホートのうち少なくとも２名の患者がＤＬＴを経験するまで用量の漸増は継続する。２名以上の患者がＤＬ１でＤＬＴを経験する場合、次の患者はＤＬ（−１）に採用される。単剤のＩＲＸ５１８３のＭＴＤは、６名の対象からなるコホートで０又は１ＤＬＴがみられる最高用量となる。
【０２１２】
第２相の拡大コホートについて、２６名の患者（試験の最初の相においてＭＴＤで処置された患者を含む）を採用することを目的に、ＡＭＬの患者がＭＴＤで採用され続ける。患者は、毒性又は疾患の進行を経験するまで、単剤のＩＲＸ５１８３を続ける。患者が完全寛解を遂げた場合、患者は、移植、化学療法を統合する、及び／又は、維持ＩＲＸ５１８３を続けるという選択肢を有する。患者が部分奏功又は血液学的改善を遂げた場合、患者はＩＲＸ５１８３と併せてサルベージ療法を得るという選択肢を有する。
【０２１３】
《薬物動態分析》
ＩＲＸ５１８３の血漿濃度は、漸増相及び拡大相について、ＬＣＭ−ＭＳ（液体クロマトグラフィー−質量分析タンデム）を用いて、薬物動態により、安全及び有効レチノイドレベルを目標として、評価される。１ｐＭの標的ピークレベルは全身毒性を回避するはずだが、一方で、局所的骨髄ニッチレチノイドレベルを保存すると推定される。ＩＲＸ５１８３の血漿濃度は、１４日目に前投与を行った単一の２ｍＬ血液サンプルを用いて求められる。サンプルは指定の分析実験室に輸送され分析される。
【０２１４】
《薬物力学分析》
標準的臨床応答基準の評価に加え、骨髄細胞（正常ＨＳＣ及びＬＳＣ）濃度、末梢血及び骨髄の芽球数、分化マーカー、アポトーシス、及びクローン性増殖を決定する。骨髄吸引物及び生検は、ベースライン時、１４日目、及び、療法の最初の４周期のそれぞれの終わりに、獲得される。分化は、フローサイトメトリーを用いて、１４日目の骨髄上のＣＤ４５陽性細胞及びＡＬＤＨｉｎｔ  ＬＳＣ上の分化マーカーの発現をベースラインと比較して、評価される。また、１４日目に白血病性クローンが依然として存在するかを決定するために、ベースライン異常の患者について各周期の後にＦＩＳＨ分析が行われる。
【０２１５】
〈期待される結果〉
ＲＡＲα選択的アゴニストを受ける患者は、末梢血及び骨髄における全血球数及び白血病芽球の百分率割合をはじめとする血液学的パラメータに基づき、応答基準について監視される。改善された好中球数と、骨髄内の芽球の減少した百分率割合をともなう赤血球細胞及び血小板の減少した輸血要求と、これらの悪性芽球の分化及びアポトーシスの誘導とを有する患者は、療法に反応性であるとみなせる。研究患者へのこの療法の影響を判断するために、生活の質のパラメータ（痛み、一般状態、並びに、日常生活動作及び手段的日常生活動作への参加など）が評価される。このＲＡＲα選択的アゴニストの使用はＡＭＬ及び固形悪性腫瘍を有する患者での血液学的パラメータ及び生活の質のパラメータを改善すると期待される。加えて、ＣＹＰ２６耐性であるＲＡＲαアゴニストの使用は、分化をもたらし、ひいては、これらの患者の骨髄内の微小残存病変の排除をもたらし得る。
【０２１６】
（実施例９）
（急性骨髄性白血病でのＩＲＸ５１８３＋ＣＡＲ導入免疫細胞の臨床研究）
適格基準は実施例６と同様である。
【０２１７】
《処置計画》
本研究は、相−漸増研究（実施例６）で特定されたＩＲＸ５１８３の最適用量を用い、２６名の患者がそれぞれ採用されることになっている、ＣＡＲ導入免疫細胞のみを受ける患者の群（群１）及びＩＲＸ５１８３及びＣＡＲ導入免疫細胞の両方を受ける患者の群（群２）の２種類の独立した群を含む。
【０２１８】
全ての患者は、Ｄ−５からＤ−３の日にフルダラビンを２５ｍｇ／ｍ２で静脈内投与され、Ｄ−３の日に９００ｍｇ／ｍ２のシクロホスファミドを投与される。
【０２１９】
群１の患者は、Ｍｉｎｅｇａｗａ等（ＰＬｏＳ  Ｏｎｅ  １２：ｅ０１７２６４０、２０１７）に開示及び調製された自己ＣＤ３３−ＣＡＲ−Ｔ細胞を、単回ボーラス投与で５×１０６細胞／患者体重ｋｇの用量で静脈内投与されて、受ける。
【０２２０】
群２の患者は、自己ＣＤ３３−ＣＡＲ−Ｔ細胞療法（Ｄ−３０）を始める前に３０日にわたり毎日のＩＲＸ５１８３で処置され、６ヶ月にわたり又は毒性若しくは進行が生じるまで継続させられる。ＣＤ３３−ＣＡＲ−Ｔ細胞は、ＩＲＸ５１８３投与の開始後の３０日目に単回ボーラス投与で５×１０６細胞／患者体重ｋｇの用量で静脈内投与される。
【０２２１】
《薬物動態分析》
ＩＲＸ５１８３の血漿濃度は、漸増相及び拡大相について、ＬＣＭ−ＭＳ（液体クロマトグラフィー−質量分析タンデム）を用いて、薬物動態により、安全及び有効レチノイドレベルを目標として、評価される。１ｐＭの標的ピークレベルは全身毒性を回避するはずだが、一方で、局所的骨髄ニッチレチノイドレベルを保存すると推定される。ＩＲＸ５１８３の血漿濃度は、１４日目に前投与を行った単一の２ｍＬ血液サンプルを用いて求められる。サンプルは指定の分析実験室に輸送され分析される。
【０２２２】
《薬物力学分析》
標準的臨床応答基準の評価に加え、骨髄細胞（正常ＨＳＣ及びＬＳＣ）濃度、末梢血及び骨髄の芽球数、分化マーカー、アポトーシス、及びクローン性増殖を決定する。骨髄吸引物及び生検は、ベースライン時、１４日目、及び、療法の最初の４周期のそれぞれの終わりに、獲得される。分化は、フローサイトメトリーを用いて、１４日目の骨髄上のＣＤ４５陽性細胞及びＡＬＤＨｉｎｔ  ＬＳＣ上の分化マーカーの発現をベースラインと比較して、評価される。また、１４日目に白血病性クローンが依然として存在するかを決定するために、ベースライン異常の患者について各周期の後にＦＩＳＨ分析が行われる。
【０２２３】
〈期待される結果〉
ＲＡＲαアゴニスト＋ＣＤ３３−ＣＡＲ−Ｔ療法を受ける患者は、末梢血及び骨髄における全血球数及び白血病芽球の百分率割合をはじめとする血液学的パラメータに基づき、応答基準について監視される。改善された好中球数と、骨髄内の芽球の減少した百分率割合をともなう赤血球細胞及び血小板の減少した輸血要求と、これらの悪性芽球の分化及びアポトーシスの誘導とを有する患者は、療法に反応性であるとみなせる。研究患者へのこの療法の影響を判断するために、生活の質のパラメータ（痛み、一般状態、並びに、日常生活動作及び手段的日常生活動作への参加など）が評価される。このＲＡＲαアゴニスト＋ＣＤ３３−ＣＡＲ−Ｔ療法の使用はＡＭＬ及び固形悪性腫瘍を有する患者での血液学的パラメータ及び生活の質のパラメータを改善すると期待される。加えて、ＣＡＲ−Ｔ療法と併せたＣＹＰ２６耐性であるＲＡＲαアゴニストの使用は、分化をもたらし、ひいては、これらの患者の骨髄内の微小残存病変の排除をもたらし得る。
【０２２４】
（実施例１０）
（多発性骨髄腫でのＩＲＸ５１８３＋ＣＡＲ導入免疫細胞の臨床研究）
多発性骨髄腫（ＭＭ）は、典型的には骨髄内でみられる形質細胞として知られる白血球細胞が制御不能に増え腫瘍へと発達するときに生じる血液がんの一形態である。米国では、今年、凡そ３００００の多発性骨髄腫の新規症例が診断されるだろう。この疾患を発達させるリスク因子はほとんど知られておらず、腎臓や他の臓器に進行するまで診断につながるような兆候や症状を引き起こさない可能性がある。
【０２２５】
Ｂ細胞成熟抗原（ＢＣＭＡ）はＭＭのがん性形質細胞を含む全ての形質細胞で発現している。自己ＢＣＭＡ−ＣＡＲ−Ｔ細胞及びＭＭでのその使用は、Ａｌｉ等（Ａｌｉ  ＳＡ  ｅｔ  ａｌ、Ｂｌｏｏｄ  １２８：１６８８−１７００、２０１６）に開示されている。
【０２２６】
《採用基準》
・患者は、ＭＭ細胞がＢＣＭＡを発現し、ＩＭｉＤ及びＰＩを含む療法の２＋の以前のラインでこれまでに処置されており、難治性、持続性、又は進行性の疾患のいずれかを有している、病理学者により病理学的に確認済みのＭＭを有している必要がある。
・年齢≧１８歳
・クレアチニン≦２．０ｍｇ／ｄＬ、直接ビリルビン≦２．０ｍｇ／ｄＬ、ＡＳＴ及びＡＬＴ≦３．０×正常上限（ＵＬＮ）
・パルス酸素濃度計による部屋空気での酸素飽和度が９２％以上であることにより評価して十分な肺機能。
【０２２７】
《排除基準》
・Ｋａｒｎｏｆｓｋｙパフォーマンスステータス＜７０。
・妊娠中又は授乳中の女性。出産適齢期の女性及び男性は、本研究中に有効な避妊法を採用し、全ての処置の終了後の１年にわたり続けるべきである。
・ＥＣＨＯ又はＭＵＧＡスキャンにより評価して（ＬＶＥＦ＜４０％の）心機能減少。
・以下の心疾患の患者は排除される。
・ニューヨーク心臓協会（ＮＹＨＡ）ステージＩＩＩ又はＩＶのうっ血性心不全
・採用前の６ヶ月以内の心筋梗塞。
・臨床的に有意な心室性不整脈、又は、血管迷走神経では全くない若しくは脱水によるものではないと考えられる原因不明の失神の履歴。
・重篤な非虚血性心筋症の履歴。
・ＨＩＶ又は活動性のＢ型肝炎若しくはＣ型肝炎の感染症を有する患者は不適格である。
・経過観察又はホルモン療法を除く療法を必要とする悪性腫瘍により定義して任意の活動性重複悪性腫瘍（ただし、皮膚の扁平上皮癌及び基底細胞癌を除く）を有する患者。
・以前に同種移植を受けた患者は、全身性ステロイド又は他の全身性リンパ球毒性療法を必要としたＧｖＨＤを以前又は現在経験したのでない限り、有効。
・採取の２週間以内に全身性ステロイド（副腎補充のみを目的とするものを除く）を受けた患者。
・結合組織疾患、ぶどう膜炎、サルコイドーシス、炎症性大腸疾患、又は多発性硬化症をはじめとする活動性自己免疫疾患である、又は、長期の免疫抑制療法を必要とする（治験責任医師の判断で）重篤な自己免疫疾患の病歴を有する。
・遺伝子導入Ｔ細胞により以前の処置。
・骨髄腫による以前の又は活動性のＣＮＳ合併症（例えば、軟髄膜炎）。例えば腰椎穿刺によるこれらのスクリーニングは疑わしい症状又はＸ線写真での発見が存在する場合のみ必要である。
・形質細胞性白血病。
・既存の（活動性の又は重篤な）神経障害（例えば、既存の発作障害）。
・活動性の制御不能な急性感染症。
・処置医師の意見に基づき患者を本研究に不適切とし得る任意の他の問題点。
【０２２８】
導入Ｔ細胞注入はコンディショニング化学療法（シクロホスファミド及び任意でフルダラビン）の完了後の２〜７日に投与される。ＢＣＭＡ−ＣＡＲ−Ｔ細胞は１〜１０×１０６ＣＡＲ−Ｔ細胞／ｋｇの用量で投与される。
【０２２９】
コンディショニング化学療法は、シクロホスファミド（Ｄ−７からＤ−２の日に１回、静脈内、３０００ｍｇ／ｍ２）、又は、最終日がＤ−７からＤ−２の日に生じる低強度ｃｙ／ｆｌｕ（シクロホスファミド３００ｍｇ／ｍ２／日×３＋フルダラビン３０ｍｇ／ｍ２／日×３）を含む。
【０２３０】
本研究は、１５〜７５ｍｇ／ｍ２／日の範囲（この範囲は実施例６の臨床試験の結果に基づき狭められ得る）内のＩＲＸ５１８３の２種類の用量を用い、２６名の患者がそれぞれ採用されることになっている、ＢＣＭＡ−ＣＡＲ−Ｔ細胞単独を受ける患者の群（群１）、ＩＲＸ５１８３用量１でＩＲＸ５１８３及びＢＣＭＡ−ＣＡＲ−Ｔ細胞の両方を受ける患者の群（群２）、ＩＲＸ５１８３用量２でＩＲＸ５１８３及びＢＣＭＡ−ＣＡＲ−Ｔ細胞の両方を受ける患者の群（群３）の、３つの独立した群を含む。
【０２３１】
群１の患者は、コンディショニング化学療法後のＤ０からはじめて単回ボーラス投与で１〜１０×１０６細胞／患者体重ｋｇの用量で静脈内投与されるＢＣＭＡ−ＣＡＲ−Ｔで処置される。
【０２３２】
群２及び群３の患者は、ＢＣＭＡ−ＣＡＲ−Ｔ細胞を始める前に３０日にわたり毎日のＩＲＸ５１８３で処置され、６ヶ月にわたり又は毒性若しくは進行が生じるまで継続させられる。ＢＣＭＡ−ＣＡＲ−Ｔ細胞は、１〜１０×１０６細胞／患者体重ｋｇの単回ボーラス投与で静脈内投与される。
【０２３３】
〈期待される結果〉
ＲＡＲαアゴニスト＋ＢＣＭＡ−ＣＡＲ−Ｔ療法を受ける患者は、対象でのＢＣＭＡ−ＣＡＲ−Ｔ細胞の持続存在、腫瘍成長、転移などに基づき、応答基準について監視される。研究患者へのこの療法の影響を判断するために、生活の質のパラメータ（痛み、一般状態、並びに、日常生活動作及び手段的日常生活動作への参加など）が評価される。このＲＡＲαアゴニスト＋ＢＣＭＡ−ＣＡＲ−Ｔ療法の使用はＢＣＭＡ発現腫瘍の患者での生活の質のパラメータを改善し、疾患進行を防ぐと期待される。加えて、ＢＣＭＡ−ＣＡＲ−Ｔ療法と併せたＣＹＰ２６耐性であるＲＡＲαアゴニストの使用は、分化をもたらし、ひいては、これらの患者の骨髄内の微小残存病変の排除をもたらし得る。
【０２３４】
（実施例１１）
（メソテリン発現固形腫瘍でのＩＲＸ５１８３＋ＣＡＲ導入免疫細胞の臨床研究）
メソテリンは、４０ＫＤａの細胞表面腫瘍分化抗原であり、メソテリン遺伝子によりコードされる６９ＫＤａの前駆タンパク質に由来する。メソテリンの正常生物学的機能はほとんど知られていないままである。いくつかの研究は、メソテリンがＣＡ１２５／ＭＵＣ１６の受容体であり、メソテリン−ＣＡ１２５間の相互作用が細胞接着を媒介するものであり、また、卵巣がんの転移における臨界点であるかもしれないことを示唆している。メソテリン過剰発現は、腫瘍細胞増殖及び局所浸潤を促進し、悪化した無再発生存及び全生存などの予後不良と関連する。腫瘍マーカーとして、血清中の可溶性メソテリンは悪性胸膜中皮腫（ＭＰＭ）及び卵巣がんの患者についての治療効果を診断し監視するのに重要な役割を果たす。メソテリンは、胸膜、心膜、腹膜、精巣鞘膜をはじめとする正常組織では低レベルで発現するが、ＭＰＭ、卵巣がん、膵臓がん、及び非小細胞肺がんをはじめとする様々な悪性腫瘍では過剰発現している。正常組織での弱い発現と種々のがんでの強い発現から、メソテリンは免疫に基づく療法のための魅力的な標的である。
【０２３５】
患者は、骨髄非破壊的リンパ球枯渇準備レジメン、並びに、それに続く、自己抗メソテリンＣＡＲ組み込み細胞（ｍｅｓｏ−ＣＡＲ−Ｔ細胞；Ａｄｕｓｕｍｉｌｌｉ等（Ｓｃｉ  Ｔｒａｎｓｌ．  Ｍｅｄ．  ６（２６１）：２６ｒａ１５１、  ２０１４）に開示されている）の静脈注入と低用量静脈内アルデスロイキンを受けるだろう。
【０２３６】
白血球除去輸血により得られた末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）はＴ細胞成長を刺激するために培養されるだろう。形質導入は、抗メソテリンＣＡＲを含有するレトロウイルス上清に凡そ１〜５×１０８個の細胞を暴露することで開始される。患者は、シクロホスファミド及びフルダラビン（５日にわたり３０分以上毎日ＩＶＰＢで２５ｍｇ／ｍ２／日、及び、シクロホスファミドを１時間以上２５０ｍｌＤ５Ｗ液でＩＶで６０ｍｇ／ｋｇ／日×２日）を含む骨髄非破壊的リンパ球枯渇準備レジメン、及び、それに続く、エクスビボＣＡＲ遺伝子導入ＰＢＭＣの静脈注入と低用量アルデスロイキン（凡そ８時間（±１時間）毎に１５分以上ＩＶで７２０００ＩＵ／ｋｇ、細胞注入の２４時間以内に開始され高々５日にわたり最大１５回の投与まで続けられる）を受けるだろう・
【０２３７】
《適格性》
１８歳以上の患者は、メソテリンを発現する転移性又は切除不能性がんを有していなければならず、患者は、標準的治療を受けていたものの、当該治療に対し無応答者であった又は当該治療後に再発したものである。患者は、低用量アルデスロイキン投与について禁忌を有していてはならない。
【０２３８】
《採用基準》
・メソテリンを発現する転移性又は切除不能性の測定可能がん。上皮型中皮腫及び膵臓がんについては、これらの腫瘍の全てがメソテリンを発現することが示されているので、メソテリン発現を評価する必要はない。他の転移性又は切除不能性がんについては、ＲＴ−ＰＣＲ又は腫瘍組織上での免疫化学により評価して、メソテリンの発現が示されねばならない。二相型中皮腫は上皮成分内の細胞の５０％超がメソテリンを発現せねばならない。
・患者は、転移性又は切除不能性疾患について、当該疾患に有効であることが知られているならば、少なくとも１種の全身性の標準的治療（又は有効なサルベージ化学療法レジメン）を以前に受けており、且つ、無応答者（進行性疾患）であった又は再発したものである必要がある。
・１８歳以上且つ７０歳以下。
・永続的委任状に署名する意思。
・インフォームドコンセントを理解しサインする能力がある。
・ＥＣＯＧ０又は１の臨床パフォーマンスステータス。
・いずれの性別の患者も本研究の採用時から処置後最大４ヶ月まで避妊を実施する意思があるものでなければならない。
・血清学：
・ＨＩＶ抗体に対して血清反応陰性。
・Ｂ型肝炎抗原に対して血清反応陰性且つＣ型肝炎抗体に対して血清反応陰性。Ｃ型肝炎抗体検査で陽性である場合、患者はＲＴ−ＰＣＲにより抗原の存在についての検査を受け、ＨＣＶ  ＲＮＡ陰性でなければならない。
・胎児への処置の潜在的有害効果のため、妊娠可能な女性は妊娠検査で陰性でなければならない。
・血液学：
・フィルグラスチムのサポートなしで１０００／ｍｍ３超の絶対好中球数。
・ＷＢＣ（＞３０００／ｍｍ３）。
・１０００００／ｍｍ３超の血小板数
・８．０ｇ／ｄｌ超のヘモグロビン。
・化学分析：
・正常上限の２．５倍以下の血清ＡＬＴ／ＡＳＴ。
・１．６ｍｇ／ｄｌ以下の血清クレアチニン。
・１．５ｍｇ／ｄｌ以下の総ビリルビン（ただし、３．０ｍｇ／ｄｌ／未満の総ビリルビンでなければならないジルベール症候群の患者を除く）。
・患者が準備レジメンを受ける時点で任意の以前の全身性治療から４週より長い時間が経過しておらねばならず、且つ、患者の毒性は１以下のグレードまで回復しておらねばならない（脱毛又は白斑などの毒性は除く）。
【０２３９】
《排除基準》
・肉腫型中皮腫の患者。
・妊娠又は授乳中の妊娠可能な女性。
・既知の脳転移を有する患者。
・ｆｕｌｌ−ｄｏｓｅの抗凝固剤療法を受ける患者。
・活動性全身性感染症（例えば、抗感染処置を必要とするもの）、凝固障害、又は任意の他の主要な内科的疾患。
・任意の形態の一次免疫不全。
・同時日和見感染。
・糖尿病性網膜症の患者。
・同時全身性ステロイド療法。
・本研究に用いられる任意の剤への重篤な即時型アレルギー反応の病歴。
・冠血行再建術又は虚血状態の履歴。
・以下を有する患者で検査して４５％以下の文書化されたＬＶＥＦ：
・臨床的に有意な心房性及び／又は心室性不整脈（これらに限定されるわけではないものの、心房細動、心室頻拍、第２度又は第３度房室ブロック、胸痛、又は虚血性心疾患を含む）。
・６０歳以上の年齢。
・以下を有する患者で検査し予測して４５％以下の文書化されたＦＥＶ１：
・喫煙の長期履歴（過去２年内に２０パック／年の喫煙）。
・呼吸器疾患の症状。
・任意の他の治験薬を受けている患者。
【０２４０】
コンディショニング化学療法は、シクロホスファミド（Ｄ−７からＤ−２の日に１回、静脈内、３０００ｍｇ／ｍ２）、又は、最終日がＤ−７からＤ−２の日に生じる低強度ｃｙ／ｆｌｕ（シクロホスファミド３００ｍｇ／ｍ２／日×３＋フルダラビン３０ｍｇ／ｍ２／日×３）を含む。
【０２４１】
本研究は、１５〜７５ｍｇ／ｍ２／日の範囲（この範囲は実施例６の臨床試験の結果に基づき狭められ得る）内のＩＲＸ５１８３の２種類の用量を用い、２６名の患者がそれぞれ採用されることになっている、ｍｅｓｏ−ＣＡＲ−Ｔ細胞単独を受ける群（群１）、ＩＲＸ５１８３用量１でＩＲＸ５１８３及びｍｅｓｏ−ＣＡＲ−Ｔ細胞の両方を受ける群（群２）、ＩＲＸ５１８３用量２でＩＲＸ５１８３及びｍｅｓｏ−ＣＡＲ−Ｔ細胞の両方を受ける群（群３）の、３つの独立した群を含む。
【０２４２】
群１の患者は、コンディショニング化学療法後のＤ０からはじめて単回ボーラス投与で１〜１０×１０６細胞／患者体重ｋｇの用量で静脈内投与されるｍｅｓｏ−ＣＡＲ−Ｔで処置される。
【０２４３】
群２及び群３の患者は、ｍｅｓｏ−ＣＡＲ−Ｔ細胞を始める前に３０日にわたり毎日のＩＲＸ５１８３で処置され、６ヶ月にわたり又は毒性若しくは進行が生じるまで継続させられる。ｍｅｓｏ−ＣＡＲ−Ｔ細胞は、１〜１０×１０６細胞／患者体重ｋｇの単回ボーラス投与で静脈内投与される。
【０２４４】
〈期待される結果〉
ＲＡＲαアゴニスト＋ｍｅｓｏ−ＣＡＲ−Ｔ療法を受ける患者は、対象でのｍｅｓｏ−ＣＡＲ−Ｔ細胞の持続存在、腫瘍成長、転移などに基づき、応答基準について監視される。研究患者へのこの療法の影響を判断するために、生活の質のパラメータ（痛み、一般状態、並びに、日常生活動作及び手段的日常生活動作への参加など）が評価される。このＲＡＲαアゴニスト＋ｍｅｓｏ−ＣＡＲ−Ｔ療法の使用はｍｅｓｏ発現腫瘍の患者での生活の質のパラメータを改善し、疾患進行を防ぐと期待される。加えて、ｍｅｓｏ−ＣＡＲ−Ｔ療法と併せたＣＹＰ２６耐性であるＲＡＲαアゴニストの使用は、分化をもたらし、ひいては、これらの患者の骨髄内の微小残存病変の排除をもたらし得る。
【０２４５】
（実施例１２）
（肺がんでのＩＲＸ５１８３＋ＣＡＲ導入免疫細胞＋標的免疫療法の臨床研究）
採用基準及び実験デザインは実施例９とだいたい同じで以下の通りである。
・群１：ｍｅｓｏ−ＣＡＲ−Ｔ
・群２：ＩＲＸ５１８３（実施例９で確立された最適用量）＋ｍｅｓｏ−ＣＡＲ−Ｔ
・群３：ｍｅｓｏ−ＣＡＲ−Ｔ＋ＰＤ−１阻害
・群４：ＩＲＸ５１８３＋ｍｅｓｏ−ＣＡＲ−Ｔ＋ＰＤ−１阻害
【０２４６】
用量、併用薬、及び結果の評価は、実施例９と同様である。
【０２４７】
（実施例１３）
（ＣＡＲ導入Ｔ細胞の製造におけるＩＲＸ５１８３の使用）
自己Ｔリンパ球は、患者の末梢血から精製され、支持細胞（自己の抗原提示細胞など）及び成長因子（ＩＬ−２など）とともに培養される。
【０２４８】
活性化工程の間、Ｔ細胞はＣＡＲをコードするウイルスベクターとともにインキュベートされ、数日後、希釈及び／又は培地交換によりベクターを培地から洗い流す。ウイルスベクターは、ウイルス機構を用いて患者細胞に付着し、細胞内への侵入の際に、ベクターはＲＮＡの形態の遺伝物質を導入する。ＣＡＲ−Ｔ細胞療法の場合、この遺伝物質はＣＡＲをコードする。ＲＮＡはＤＮＡへと逆転写され、患者細胞のゲノムと永続的に一体化される。そのため、バイオリアクター内で細胞が分裂し成長して多数となる際にＣＡＲ発現は維持される。その後、ＣＡＲは患者細胞により転写及び翻訳され、ＣＡＲが細胞表面に発現される。ガンマレトロウイルスベクタよりも安全性の高い組み込み部位プロファイルを有するレンチウイルスベクターがＣＡＲ−Ｔ細胞療法の臨床試験では通常用いられる。
【０２４９】
その後、形質導入細胞はＣＡＲ−Ｔ療法を複数ラウンドのために所望の数まで培養される。培養細胞は将来の使用のために冷凍保存できる。
【０２５０】
ＲＡＲαアゴニストは、ＣＡＲ表現型の成長及び維持を促進するために、ウイルスベクターによる形質導入の前及び／又は後に培養物に含められる。
【０２５１】
特記のない限り、本明細書及び請求項において用いられる、成分、性質（分子量など）、反応条件などの量を表現する全ての数字は、全ての場合について、『約』という用語で修飾されているものとして理解されるべきである。本明細書では、『約』及び『凡そ』という用語は、１０から１５％、好ましくは、５から１０％の範囲にあることを意味する。従って、そうでないことが記載されていない限り、本明細書及び添付の特許請求の範囲に記載の数値パラメータは、本願発明により得ようとする所望の性質に依存して変わり得る概算値である。請求項の範囲への均等論の適用を制限するわけではないが、最低限、各数値パラメータは、報告した有効数字の数を考慮し、通常の丸め手法を適用して解釈されるべきである。本発明の広い範囲を規定する数値範囲及びパラメータは概算値であるものの、特定の実施例に記載の数値は可能な限り精確に報告したものである。数値は、ただし、それぞれの試験測定につきものの標準偏差から必然的に生じるいくらかの誤差を本質的に含む。
【０２５２】
本発明の文脈において（特に、添付の請求項の文脈において）用いられる単数の表記は、特記がなく且つ文脈に明白に反しない限り、単数及び複数の両方を包括するものと解釈されるべきである。本明細書において数値範囲の記載は、当該範囲に含まれる個々の数値のそれぞれを個別に参照する簡便な方法としての役割を果たすに過ぎない。本明細書に特記のない限り、これらの個々の数値のそれぞれはそれらが本明細書に個別に記載されているものとして本明細書に組み込まれる。本明細書に記載の方法の全ては、本明細書に特記がなく且つ文脈に明白に反しない限り、任意の適切な順番で実行できる。本明細書に記載の、いかなる実施例及び例示的表現（例えば、「〜など」）の使用も、本発明をより明瞭に理解できるようにすることを意図するに過ぎず、これらの実施例及び例示的表現とは異なったやり方で請求項に記載された発明の範囲になんら限定を加えるものではない。本発明に記載のいかなる表現も本発明の実施に必須であるが請求項には記載されていない要素を示すものと解釈してはならない。
【０２５３】
本明細書に記載の発明の選択的な要素又は実施形態の集合は限定と解釈すべきではない。各集合要素は、個別に参照されたり請求項に記載されたりしてもよいし、本明細書にみられる他の集合要素又は他の要素と組み合わせて参照されたり請求項に記載されたりしてもよい。ある集合の１種類以上の要素が、便宜的理由及び／又は特許的理由で、集合に加入されたり、又は、集合から削除されたりしてもよい。こうした加入や削除が生じた場合も、本明細書は修正後の集合を含むものとみなされ、特許請求の範囲に記載の請求項で用いられるマーカーッシュグループの全てについて記載要件を満たす。
【０２５４】
本明細書の特定の実施形態は、本発明の実施にあたり発明者が知る中で最善の態様を含んで、本明細書に記載されている。当然ながら、前述の記載に触れた当業者にとってこれら記載の実施形態の変形は明らかであろう。発明者は、当業者であればこうした変形を適切に採用するものと想定し、そして、本発明が本明細書に具体的に記載したのとは異なったやり方で実施されることを意図するものである。従って、本発明は、適用法令により許容されるように、特許請求の範囲に記載の請求項に記載の主題の修正例及び均等物の全てを包含する。さらに、全ての可能な変形形態の上述の要素の組み合わせのいずれも、本明細書に特記がなく且つ文脈に明白に反しない限り、本発明に包含される。
【０２５５】
本明細書に記載の特定の実施形態は、請求項において、「からなる」又は「から実質的になる」といった表現を用いてさらに限定されてもよい。出願時又は補正時に請求項で用いられる場合、「からなる」という移行句は、請求項で特定されていない、要素、工程、又は成分のいずれをも排除する。「から実質的になる」という移行句は、請求項の範囲を、特定された材料又は工程に加えて、基礎的で新規な性質に本質的な影響を与えないものを含むものに限定する。このように請求項に記載された発明の実施形態は、本明細書に内在的に又は明示的に記載されており、実施可能である。
【０２５６】
さらに、本明細書を通して特許及び刊行物への数々の参照がなされている。上述の参照及び刊行物のそれぞれはその全体を参照により本明細書で援用する。
【０２５７】
最後に、本明細書に記載の発明の実施形態は本発明の原理の例示であると理解されたい。採用可能な他の修正例も本発明の範囲に含まれる。そのため、制限ではなく、あくまで一例だが、本発明の代替的な構成を本明細書の教示に従い用いてもよい。従って、本発明は図示及び記載されるまさにそのものに限定されるわけではない。
【０２５８】
［付記］
［付記１］
がん免疫治療を必要とする対象にキメラ抗原受容体導入免疫細胞（ＣＡＲ−ＭＩＣ）と、免疫調節性レチノイド活性剤及び／又はレキシノイド活性剤（ＲＡＲ／ＲＸＲ活性剤）と、分化誘導性ＲＡＲ活性剤とを投与することを含む、がん免疫治療法。
【０２５９】
［付記２］
前記免疫調節性ＲＡＲ／ＲＸＲ活性剤はレチノイン酸受容体（ＲＡＲ）活性剤を含む、付記１に記載の方法。
【０２６０】
［付記３］
前記免疫調節性ＲＡＲ／ＲＸＲ活性剤はレチノイドＸ受容体（ＲＸＲ）活性剤を含む、付記１に記載の方法。
【０２６１】
［付記４］
前記免疫調節性ＲＡＲ活性剤はＲＡＲαアンタゴニストである、付記２に記載の方法。
【０２６２】
［付記５］
２つの免疫調節性ＲＡＲ活性剤を投与することを含む、付記１に記載の方法。
【０２６３】
［付記６］
第１の免疫調節性ＲＡＲ活性剤はＲＡＲα選択的アンタゴニストであり、第２の免疫調節性ＲＡＲ活性剤はＲＡＲγアゴニストである、又は、第１の免疫調節性ＲＡＲ活性剤はＲＡＲαアンタゴニストであり、第２の免疫調節性ＲＡＲ活性剤はＲＡＲγ選択的アゴニストである、付記５に記載の方法。
【０２６４】
［付記７］
前記ＲＡＲαアンタゴニストは下記の一般式（Ｉ）の化合物である、付記４に記載の方法。
【化７０】
2020526551.tif 000076
（ただし、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、及びＲ６は、独立して、Ｈ又はＣ１−６アルキルであり、Ｒ４及びＲ５は、独立して、Ｈ又はＦであり、Ａｒは、フェニル、ピリジル、チエニル、フリル、又はナフチルであり、Ｘは、Ｃ（ＣＨ３）２、Ｏ、Ｓ、又はＮＲ７（ただし、Ｒ７は、Ｈ又はＣ１−６アルキルである。）であり、Ｘ１は、Ｈ又はハロゲン（Ｆ、Ｃｌ又はＢｒなど）であり、Ｒ８は、Ｈ又はＯＨである。）
【０２６５】
［付記８］
前記ＲＡＲαアンタゴニストは、
【化７１】
2020526551.tif 000077
【化７２】
2020526551.tif 000078
又は、
【化７３】
2020526551.tif 000079
である、付記７に記載の方法。
【０２６６】
［付記９］
前記ＲＡＲαアンタゴニストは下記の一般式（ＩＩ）の化合物である、付記４に記載の方法。
【化７４】
2020526551.tif 000080
（ただし、Ｒ１及びＲ２は、独立して、Ｃ１−６アルキルであり、Ｘは、Ｏ、Ｓ、又はＣＨ２であり、Ｙは、Ｏ、Ｓ、ＣＨ２、又はＮＲ３（ただし、Ｒ３はＣ１−６アルキルである。）であり、Ｚは、Ｃｌ又はＢｒであり、Ｗは、Ｈ又はＯＨであり、Ｕは、独立して、Ｈ又はＦである。）
【０２６７】
［付記１０］
前記ＲＡＲαアンタゴニストは、
【化７５】
2020526551.tif 000081
である、付記９に記載の方法。
【０２６８】
［付記１１］
前記ＲＡＲαアンタゴニストは下記の一般式（ＩＩＩ）の化合物である、付記４に記載の方法。
【化７６】
2020526551.tif 000082
（ただし、Ｒ１及びＲ２は、独立して、Ｈ又はＣ１−６アルキルであり、Ｒ３は、Ｈ又はＦであり、Ａｒは、フェニル、ピリジル、チエニル、フリル、又はナフチルであり、Ｘは、Ｏ、Ｓ、Ｎ、又はＣＨ２であり、Ｗは、Ｈ又はＯＨであり、Ｚは、Ｃｌ又はＢｒである。）
【０２６９】
［付記１２］
前記ＲＡＲαアンタゴニストは、
【化７７】
2020526551.tif 000083
である、付記４に記載の方法。
【０２７０】
［付記１３］
前記ＲＡＲαアンタゴニストは、ＢＭＳ１８５４１１、ＢＭＳ６１４、Ｒｏ４１−５２５３、又はＲｏ４６−５４７１である、付記４に記載の方法。
【０２７１】
［付記１４］
前記免疫調節性ＲＡＲ活性剤はＲＡＲγアゴニストである、付記２に記載の方法。
【０２７２】
［付記１５］
前記ＲＡＲγアゴニストは、
【化７８】
2020526551.tif 000084
【化７９】
2020526551.tif 000085
【化８０】
2020526551.tif 000086
又は、
【化８１】
2020526551.tif 000087
である、付記１４に記載の方法。
【０２７３】
［付記１６］
前記免疫調節性ＲＡＲアゴニストは下記の一般式（ＩＶ）のＲＡＲγ選択的アゴニストである、付記１４に記載の方法。
【化８２】
2020526551.tif 000088
（ただし、Ｒ１及びＲ２は、独立して、Ｈ又はＣ１−６アルキルであり、Ｒ３は、Ｈ又はＦであり、Ｘは、Ｏ、Ｓ、ＣＨ２、Ｃ（Ｒ４）２、又はＮＲ５（ただし、Ｒ４及びＲ５は、独立して、Ｈ又はＣ１−６アルキルである。）である。）
【０２７４】
［付記１７］
前記ＲＡＲアゴニストは、ＣＤ４３７、ＣＤ２３２５、ＣＤ６６６、及びＢＭＳ９６１から選択されるＲＡＲγ選択的アゴニストである、付記１４に記載の方法。
【０２７５】
［付記１８］
前記免疫調節性ＲＸＲ活性剤はＲＸＲアンタゴニストである、付記３に記載の方法。
【０２７６】
［付記１９］
前記ＲＸＲアンタゴニストは、
【化８３】
2020526551.tif 000089
【化８４】
2020526551.tif 000090
【化８５】
2020526551.tif 000091
【化８６】
2020526551.tif 000092
又は、
【化８７】
2020526551.tif 000093
から選択される、付記１８に記載の方法。
【０２７７】
［付記２０］
前記ＲＸＲアンタゴニストは、ＡＧＮ１９５３９３又はＬＧＮ１００８４９である、付記１８に記載の方法。
【０２７８】
［付記２１］
前記分化誘導性ＲＡＲ活性剤はＲＡＲαアゴニストである、付記１に記載の方法。
【０２７９】
［付記２２］
前記ＲＡＲαアゴニストは下記の一般式（Ｖ）の化合物である、付記２１に記載の方法。
【化８８】
2020526551.tif 000094
（ただし、Ｒ１は、Ｈ又はＣ１−６アルキルであり、Ｒ２及びＲ３は、独立して、Ｈ又はＦであり、Ｒ４は、ハロゲンである。）
【０２８０】
［付記２３］
前記ＲＡＲαアゴニストは下記の一般式（ＶＩ）の化合物である、付記２２に記載の方法。
【化８９】
2020526551.tif 000095
（ただし、Ｒ１は、Ｈ又はＣ１−６アルキルである。）
【０２８１】
［付記２４］
前記ＲＡＲαアゴニストは下記の一般式（ＶＩＩ）の化合物である、付記２３に記載の方法。
【化９０】
2020526551.tif 000096
【０２８２】
［付記２５］
少なくとも１種類のがん化学治療剤を追加で投与することを含む、付記１に記載の方法。
【０２８３】
［付記２６］
前記対象に少なくとも１種類の免疫チェックポイント阻害剤を投与することをさらに含む、付記１に記載の方法。
【０２８４】
［付記２７］
前記免疫チェックポイント阻害剤は、ＣＴＬＡ−４、ＰＤ−１、ＴＩＭ−３、ＬＡＧ−３、ＰＤ−Ｌ１リガンド、Ｂ７−Ｈ３、Ｂ７−Ｈ４、ＢＴＬＡの少なくとも１種類の阻害剤である、又は、ＩＣＯＳ若しくはＯＸ４０アゴニストである、付記２６に記載の方法。
【０２８５】
［付記２８］
前記免疫チェックポイント阻害剤は、ＣＴＬＡ−４、ＰＤ−１、ＴＩＭ−３、ＬＡＧ−３、ＰＤ−Ｌ１リガンド、Ｂ７−Ｈ３、Ｂ７−Ｈ４、ＢＴＬＡ、ＩＣＯＳ、又はＯＸ４０の少なくとも１種類に対して特異的な抗体である、付記２６に記載の方法。
【０２８６】
［付記２９］
ＣＡＲ導入免疫細胞と、免疫調節性ＲＡＲ／ＲＸＲ活性剤と、分化誘導性ＲＡＲ活性剤とを投与することを含む、がん患者の無病生存を延ばす方法。
【０２８７】
［付記３０］
ＣＡＲ導入免疫細胞の毒性を減らす方法であって、それを必要とする患者に、併せた結果、前記ＣＡＲ導入免疫細胞を単独で投与する場合と比べより低い用量の前記ＣＡＲ導入免疫細胞がより高い安全性及び同じ効力で投与されるように、又は、より高い用量の前記ＣＡＲ導入免疫細胞をより高い効力且つ同じ安全性で投与することができるように、前記ＣＡＲ導入免疫細胞と併せて、免疫調節性ＲＡＲ／ＲＸＲ活性剤及び分化誘導性ＲＡＲ活性剤を投与することを含む、方法。
【０２８８】
［付記３１］
ＣＡＲ−ＭＩＣを受けている、受けた、又は受ける予定のがん患者に、免疫調節性ＲＡＲ／ＲＸＲ活性剤及び分化誘導性ＲＡＲ活性剤を投与することを含む、ＣＡＲ−ＭＩＣがん免疫治療法を増強する方法。
【０２８９】
［付記３２］
がんの処置を必要とする対象に、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）導入免疫細胞、免疫調節性ＲＡＲ／ＲＸＲ活性剤、分化誘導性ＲＡＲ活性剤、並びに、少なくとも１種類の免疫チェックポイント阻害剤を投与することを含む、がんを処置する方法。
【図１】
2020526551.tif 000118
【図２Ａ】
2020526551.tif 000119
【図２Ｂ】
2020526551.tif 000120
【図２Ｃ】
2020526551.tif 000121
【図３Ａ−Ｈ】
2020526551.tif 000122
【図４Ａ−Ｂ】
2020526551.tif 000123
【図５】
2020526551.tif 000124
【図６】
2020526551.tif 000125
【図７Ａ−Ｃ】
2020526551.tif 000126
【図８Ａ−Ｃ】
2020526551.tif 000127
【図９】
2020526551.tif 000128
【図１０】
2020526551.tif 000129
【図１１Ａ−Ｄ】
2020526551.tif 000130
【図１２Ａ】
2020526551.tif 000131
【図１２Ｂ】
2020526551.tif 000132
【図１２Ｃ】
2020526551.tif 000133
【手続補正書】
【提出日】令和2年3月17日(2020.3.17)
【手続補正１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００１７
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００１７】
いくつかの実施形態では、レチノイド活性剤はＲＡＲγアゴニストである。いくつかの実施形態では、ＲＡＲγアゴニストは、
【化１０】
2020526551.tif 000134
【化１１】
2020526551.tif 000135
【化１２】
2020526551.tif 000136
又は、
【化１３】
2020526551.tif 000137
である。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００６５
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００６５】
高選択的ＲＡＲγアゴニストの一例として、化合物ＩＲＸ４６４７が挙げられる。
【化３９】
2020526551.tif 000138
【手続補正３】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０１０９
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０１０９】
いくつかの実施形態では、本方法はＣＡＲ導入免疫細胞及びＲＡＲ活性剤を投与することを含む。いくつかの実施形態では、本方法はＣＡＲ導入免疫細胞及びＲＡＲαアンタゴニストを投与することを含む。いくつかの実施形態では、本方法はＣＡＲ導入免疫細胞及びＲＡＲγアゴニストを投与することを含む。いくつかの実施形態では、本方法はＣＡＲ導入免疫細胞及び２種類のＲＡＲ活性剤を投与することを含む。いくつかの実施形態では、本方法はＣＡＲ導入免疫細胞並びにＲＡＲαアンタゴニスト及びＲＡＲアゴニストを投与することを含む。いくつかの実施形態では、本方法はＣＡＲ導入免疫細胞並びにＲＡＲαアンタゴニスト及びＲＡＲγ選択的アゴニストを投与することを含む。ある実施形態では、ＲＡＲαアンタゴニストは、ＡＧＮ１９４３０１、ＡＧＮ１９３４９１、ＡＧＮ１９３６１８、ＡＧＮ１９４２０２、ＡＧＮ１９４５７４、ＶＴＰ１９６６９６、ＡＧＮ１９４７７、ＢＭＳ１８５４１１、ＢＭＳ６１４、Ｒｏ４１−５２５３、又はＲｏ４６−５４７１である。いくつかの実施形態では、ＲＡＲアゴニストは、ＡＧＮ１９０１８３、ＡＧＮ１９０２０５、ＡＧＮ２０４６４７、又はタザロテンである。いくつかの実施形態では、ＲＡＲγ選択的アゴニストは、ＣＤ４３７、ＣＤ２３２５、ＣＤ６６６、又はＢＭＳ９６１である。
【手続補正４】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０１４７
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０１４７】
（特定の実施形態の一覧）
以下の実施形態の一覧は、本明細書で明らかとなる、本発明の、幅、結合、及び副結合に関する様々な実施形態を例示するものであり、本明細書に支持される実施形態のすべてを網羅的に列挙することを意図したものではない。
［実施形態１］
がん免疫治療を必要とする対象にキメラ抗原受容体導入免疫細胞（ＣＡＲ−ＭＩＣ）並びに少なくとも２種類のレチノイド活性剤及び／又はレキシノイド活性剤（ＲＡＲ／ＲＸＲ活性剤）を投与することを含み、前記少なくとも２種類のＲＡＲ／ＲＸＲ活性剤は分化誘導性ＲＡＲ活性剤及び免疫調節性ＲＡＲ／ＲＸＲ活性剤を含む、がん免疫治療法。
［実施形態２］
がんの処置を必要とする対象にキメラ抗原受容体導入免疫細胞（ＣＡＲ−ＭＩＣ）及び少なくとも２種類のＲＡＲ／ＲＸＲ活性剤を投与することを含み、前記少なくとも２種類のＲＡＲ／ＲＸＲ活性剤は分化誘導性ＲＡＲ活性剤及び免疫調節性ＲＡＲ／ＲＸＲ活性剤を含む、がんを処置する方法。
［実施形態３］
ＣＡＲ−ＭＩＣを受けている、受けた、又は受ける予定のがん患者に少なくとも２種類のＲＡＲ／ＲＸＲ活性剤を投与することを含み、前記少なくとも２種類のＲＡＲ／ＲＸＲ活性剤は分化誘導性ＲＡＲ活性剤及び免疫調節性ＲＡＲ／ＲＸＲ活性剤を含む、ＣＡＲ−ＭＩＣがん免疫治療法を増強する方法。
［実施形態４］
がん免疫治療を必要とする対象に分化誘導性ＲＡＲ活性剤及びＣＡＲ−ＭＩＣを投与することを含み、前記ＣＡＲ−ＭＩＣは前記対象に投与される前に少なくとも１種類の免疫調節性ＲＡＲ／ＲＸＲ活性剤を含む培養培地中で培養されている、がん免疫治療法。
［実施形態５］
ＣＡＲ−ＭＩＣ及び少なくとも２種類のＲＡＲ／ＲＸＲ活性剤を投与することを含み、前記少なくとも２種類のＲＡＲ／ＲＸＲ活性剤は分化誘導性ＲＡＲ活性剤及び免疫調節性ＲＡＲ／ＲＸＲ活性剤を含む、がん患者の無病生存を延ばす方法。
［実施形態６］
ＣＡＲ−ＭＩＣの毒性を減らす方法であって、それを必要とする患者に、併せた結果、前記ＣＡＲ−ＭＩＣを単独で投与する場合と比べより低い用量の前記ＣＡＲ−ＭＩＣが投与されるように、前記ＣＡＲ−ＭＩＣと併せて、少なくとも２種類のＲＡＲ／ＲＸＲ活性剤を投与することを含み、前記少なくとも２種類のＲＡＲ／ＲＸＲ活性剤は分化誘導性ＲＡＲ活性剤及び免疫調節性ＲＡＲ／ＲＸＲ活性剤を含む、方法。
［実施形態７］
免疫調節性ＲＡＲ／ＲＸＲ活性剤を含む培養培地中でＣＡＲ−ＭＩＣを培養することを含む、インビトロでＣＡＲ−ＭＩＣの数を増やす方法。
［実施形態８］
前記ＣＡＲ−ＭＩＣは前記対象に投与される前に免疫調節性ＲＡＲ／ＲＸＲ活性剤を含む培養培地中で培養されている、実施形態１から６のいずれか１つに記載の方法。
［実施形態９］
前記免疫調節性ＲＡＲ／ＲＸＲ活性剤は、ＲＡＲαアンタゴニスト、ＲＡＲγアゴニスト、ＲＸＲアンタゴニスト、又はこれらの組み合わせである、実施形態１から８のいずれか１つに記載の方法。
［実施形態１０］
前記分化誘導性ＲＡＲ活性剤はＲＡＲαアゴニストである、実施形態１−６又は８−９のいずれか１つに記載の方法。
［実施形態１１］
前記ＲＡＲαアゴニストはＣＹＰ２６耐性である、実施形態１０に記載の方法。
［実施形態１２］
前記ＲＡＲαアゴニストはＲＡＲα選択的アゴニストである、実施形態１０又は１１に記載の方法。
［実施形態１３］
免疫チェックポイント阻害剤の投与をさらに含む、実施形態１−６又は８−１２のいずれか１つに記載の方法。
［実施形態１４］
前記免疫チェックポイント阻害剤は、ＣＴＬＡ−４、ＰＤ−１、ＴＩＭ−３、ＬＡＧ−３、ＰＤ−Ｌ１リガンド、Ｂ７−Ｈ３、Ｂ７−Ｈ４、ＢＴＬＡの少なくとも１種類の阻害剤である、又は、ＩＣＯＳ若しくはＯＸ４０アゴニストである、実施形態１３に記載の方法。
［実施形態１５］
前記免疫チェックポイント阻害剤は抗体である、実施形態１３又は１４に記載の方法。
［実施形態１６］
前記免疫調節性ＲＡＲ／ＲＸＲ活性剤はレチノイン酸受容体（ＲＡＲ）活性剤を含む、実施形態１から１５のいずれか１つに記載の方法。
［実施形態１７］
前記免疫調節性ＲＡＲ／ＲＸＲ活性剤はＲＡＲ活性剤である、実施形態１６に記載の方法。
［実施形態１８］
前記ＲＡＲ活性剤はＲＡＲαアンタゴニストである、実施形態１６又は１７に記載の方法。
［実施形態１９］
前記ＲＡＲ活性剤は選択的ＲＡＲαアンタゴニストである、実施形態１８に記載の方法。
［実施形態２０］
前記ＲＡＲ活性剤はＲＡＲγアゴニストである、実施形態１６又は１７に記載の方法。
［実施形態２１］
前記ＲＡＲ活性剤は選択的ＲＡＲγアゴニストである、実施形態２０に記載の方法。
［実施形態２２］
前記免疫調節性ＲＡＲ／ＲＸＲ活性剤はレチノイドＸ受容体（ＲＸＲ）活性剤を含む、実施形態１から１５のいずれか１つに記載の方法。
［実施形態２３］
前記免疫調節性ＲＡＲ／ＲＸＲ活性剤はレチノイドＸ受容体（ＲＸＲ）活性剤である、実施形態２２に記載の方法。
［実施形態２４］
前記ＲＸＲ活性剤はＲＸＲアンタゴニストである、実施形態２３に記載の方法。
［実施形態２５］
前記免疫調節性ＲＡＲ／ＲＸＲ活性剤は少なくとも２種類のＲＡＲ活性剤を含む、実施形態１から２４のいずれか１つに記載の方法。
［実施形態２６］
第１のＲＡＲ活性剤はＲＡＲαアンタゴニストであり、第２のＲＡＲ活性剤はＲＡＲγ選択的アゴニストである、実施形態２５に記載の方法。
［実施形態２７］
第１のＲＡＲ活性剤はＲＡＲα選択的アンタゴニストであり、第２のＲＡＲ活性剤はＲＡＲγアゴニストである、実施形態２５に記載の方法。
［実施形態２８］
第１のＲＡＲ活性剤はＲＡＲα選択的アンタゴニストであり、第２のＲＡＲ活性剤はＲＡＲγ選択的アゴニストである、実施形態２５に記載の方法。
［実施形態２９］
前記ＲＡＲαアンタゴニストは下記の一般式（Ｖ）の化合物である、実施形態９、１８−１９、又は２６−２８のいずれか１つに記載の方法。
【化４９】
2020526551.tif 000139
（ただし、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、及びＲ６は、独立して、Ｈ又はＣ１−６アルキルであり、Ｒ４及びＲ５は、独立して、Ｈ又はＦであり、Ａｒは、フェニル、ピリジル、チエニル、フリル、又はナフチルであり、Ｘは、Ｃ（ＣＨ３）２、Ｏ、Ｓ、又はＮＲ７（ただし、Ｒ７は、Ｈ又はＣ１−６アルキルである。）であり、Ｘ１は、Ｈ又はハロゲン（Ｆ、Ｃｌ又はＢｒなど）であり、Ｒ８は、Ｈ又はＯＨである。）
［実施形態３０］
前記ＲＡＲαアンタゴニストは、
【化５０】
2020526551.tif 000140
【化５１】
2020526551.tif 000141
又は、
【化５２】
2020526551.tif 000142
である、実施形態２９に記載の方法。
［実施形態３１］
前記ＲＡＲαアンタゴニストは下記の一般式（ＩＩ）の化合物である、実施形態９、１８−１９、又は２６−２８のいずれか１つに記載の方法。
【化５３】
2020526551.tif 000143
（ただし、Ｒ１及びＲ２は、独立して、Ｃ１−６アルキルであり、Ｘは、Ｏ、Ｓ、又はＣＨ２であり、Ｙは、Ｏ、Ｓ、ＣＨ２、又はＮＲ３（ただし、Ｒ３はＣ１−６アルキルである。）であり、Ｚは、Ｃｌ又はＢｒであり、Ｗは、Ｈ又はＯＨであり、Ｕは、独立して、Ｈ又はＦである。）
［実施形態３２］
前記ＲＡＲαアンタゴニストは、
【化５４】
2020526551.tif 000144
である、実施形態３１に記載の方法。
［実施形態３３］
前記ＲＡＲαアンタゴニストは下記の一般式（ＩＩＩ）の化合物である、実施形態９、１８−１９、又は２６−２８のいずれか１つに記載の方法。
【化５５】
2020526551.tif 000145
（ただし、Ｒ１及びＲ２は、独立して、Ｈ又はＣ１−６アルキルであり、Ｒ３は、Ｈ又はＦであり、Ａｒは、フェニル、ピリジル、チエニル、フリル、又はナフチルであり、Ｘは、Ｏ、Ｓ、Ｎ、又はＣＨ２であり、Ｗは、Ｈ又はＯＨであり、Ｚは、Ｃｌ又はＢｒである。）
［実施形態３４］
前記ＲＡＲαアンタゴニストは、ＢＭＳ１８５４１１、ＢＭＳ６１４、Ｒｏ４１−５２５３、Ｒｏ４６−５４７１、又は、
【化５６】
2020526551.tif 000146
である、実施形態９、１８−１９、又は２６−２８のいずれか１つに記載の方法。
［実施形態３５］
前記ＲＡＲγアゴニストは下記の一般式（ＩＶ）のＲＡＲγアゴニストである、実施形態９、１８−１９、又は２６−２８に記載の方法。
【化５７】
2020526551.tif 000147
（ただし、Ｒ１及びＲ２は、独立して、Ｈ又はＣ１−６アルキルであり、Ｒ３は、Ｈ又はＦであり、Ｘは、Ｏ、Ｓ、ＣＨ２、Ｃ（Ｒ４）２、又はＮＲ５（ただし、Ｒ４及びＲ５は、独立して、Ｈ又はＣ１−６アルキルである。）である。）
［実施形態３６］
前記ＲＡＲγアゴニストは、
【化５８】
2020526551.tif 000148
【化５９】
2020526551.tif 000149
【化６０】
2020526551.tif 000150
又は、
【化６１】
2020526551.tif 000151
である、実施形態９、１８−１９、又は２６−２８に記載の方法。
［実施形態３７］
前記ＲＡＲγアゴニストは、ＣＤ４３７、ＣＤ２３２５、ＣＤ６６６、及びＢＭＳ９６１から選択される選択的ＲＡＲγアゴニストである、実施形態９、１８−１９、又は２６−２８のいずれか１つに記載の方法。
［実施形態３８］
前記ＲＸＲアンタゴニストは、
【化６２】
2020526551.tif 000152
【化６３】
2020526551.tif 000153
【化６４】
2020526551.tif 000154
【化６５】
2020526551.tif 000155
又は、
【化６６】
2020526551.tif 000156
から選択される、実施形態９又は２２−２３のいずれか１つに記載の方法。
［実施形態３９］
前記ＲＸＲアンタゴニストはＡＧＮ１９５３９３又はＬＧＮ１００８４９である、実施形態９又は２２−２３のいずれか１つに記載の方法。
［実施形態４０］
前記ＲＡＲαアゴニストは下記の一般式（Ｖ）の化合物である、実施形態１０−１２のいずれか１つに記載の方法。
【化６７】
2020526551.tif 000157
（ただし、Ｒ１は、Ｈ又はＣ１−６アルキルであり、Ｒ２及びＲ３は、独立して、Ｈ又はＦであり、Ｒ４は、ハロゲンである。）
［実施形態４１］
Ｒ４は、Ｆ、ＣＬ、ＢＲ、又はＩである、実施形態４０に記載の方法。
［実施形態４２］
前記ＲＡＲαアゴニストは下記の一般式（ＶＩ）の化合物である、実施形態１０−１２のいずれか１つに記載の方法。
【化６８】
2020526551.tif 000158
（ただし、Ｒ１は、Ｈ又はＣ１−６アルキルである。）
［実施形態４３］
前記ＲＡＲαアゴニストは下記の一般式（ＶＩＩ）の化合物である、実施形態１０−１２のいずれか１つに記載の方法。
【化６９】
2020526551.tif 000159
［実施形態４４］
前記ＲＡＲαアゴニストはタミバロテン（ＡＭ８０；４−［（５，６，７，８−テトラヒドロ−５，５，８，８−テトラメチル−２−ナフタレニル）カルバモイル］安息香酸）である、実施形態１０−１１のいずれか１つに記載の方法。
［実施形態４５］
前記ＲＡＲαアゴニストはＡＭ５８０（４−［（５，６，７，８−テトラヒドロ−５，５，８，８−テトラメチル−２−ナフタレニル）カルボキサミド］安息香酸）である、実施形態１０−１１のいずれか１つに記載の方法。
［実施形態４６］
前記ＲＡＲαアゴニストはＲｅ８０（４−［１−ヒドロキシ−３−オキソ−３−（５，６，７，８−テトラヒドロ−３−ヒドロキシ−５，５，８，８−テトラメチル−２−ナフタレニル）−１−プロペニル］安息香酸）である、実施形態１０−１１のいずれか１つに記載の方法。
［実施形態４７］
少なくとも１種類の癌化学治療剤を投与することをさらに含む、実施形態１−６又は８−４６のいずれか１つに記載の方法。
［実施形態４８］
前記対象又は患者は前記ＣＡＲ−ＭＩＣの投与の前に少なくとも１種類のＲＡＲ／ＲＸＲ活性剤で前処置される、実施形態１−６又は８−４７のいずれか１つに記載の方法。
［実施形態４９］
前記少なくとも１種類のＲＡＲ／ＲＸＲ活性剤は免疫調節性ＲＡＲ／ＲＸＲ活性剤である、実施形態４８に記載の方法。
［実施形態５０］
前記少なくとも１種類のＲＡＲ／ＲＸＲ活性剤は分化誘導性ＲＡＲ活性剤である、実施形態４８に記載の方法。
［実施形態５１］
前記免疫調節性ＲＡＲ／ＲＸＲ活性剤は前記ＣＡＲ−ＭＩＣの投与の少なくとも１２時間前に投与される、実施形態４８又は４９に記載の方法。
［実施形態５２］
前記免疫調節性ＲＡＲ／ＲＸＲ活性剤は、前記ＣＡＲ−ＭＩＣの投与前の、少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０日にわたって投与される、実施形態５１に記載の方法。
［実施形態５３］
前記分化誘導性ＲＡＲ活性剤は、前記ＣＡＲ−ＭＩＣの投与前の、少なくとも２日、少なくとも３日、少なくとも４日、少なくとも５日、少なくとも６日、少なくとも１週、少なくとも２週、少なくとも３週、又は少なくとも１ヶ月にわたって投与される、実施形態５０に記載の方法。
［実施形態５４］
前記分化誘導性ＲＡＲ活性剤の投与は前記ＣＡＲ−ＭＩＣの投与の２から１０日前に中止される、実施形態５０又は５３に記載の方法。
［実施形態５５］
（１種類又は複数種類の）免疫調節性ＲＡＲ／ＲＸＲ活性剤の投与が前記分化誘導性ＲＡＲ活性剤の投与の中止の後で且つ前記ＣＡＲ−ＭＩＣの投与の前に始まる、実施形態５４に記載の方法。
［実施形態５６］
前記分化誘導性ＲＡＲ活性剤は前記ＣＡＲ−ＭＩＣの投与の開始が予定されるより４週前に始まり８日前に終わる期間にわたり投与され、（１種類又は複数種類の）前記免疫調節性ＲＡＲ／ＲＸＲ活性剤の投与は前記ＣＡＲ−ＭＩＣの投与の開始が予定されるより１週前に始まる、実施形態５５に記載の方法。
［実施形態５７］
前記対象又は患者は前記ＣＡＲ−ＭＩＣの投与と同時に又はその後に免疫調節性ＲＡＲ／ＲＸＲ活性剤で処置される、実施形態１−６又は８−５６のいずれか１つに記載の方法。
［実施形態５８］
（１種類又は複数種類の）前記免疫調節性ＲＡＲ／ＲＸＲ活性剤による処置（もしあるなら前処置を除く）は前記ＣＡＲ−ＭＩＣの投与又は初回投与と同日に始まる、実施形態５７に記載の方法。
［実施形態５９］
（１種類又は複数種類の）前記免疫調節性ＲＡＲ／ＲＸＲ活性剤による処置（もしあるなら前処置を除く）は前記ＣＡＲ−ＭＩＣの投与又は初回投与の１、２、３、４、５、６、又は７日後に始まる、実施形態５７に記載の方法。
［実施形態６０］
（１種類又は複数種類の）前記免疫調節性ＲＡＲ／ＲＸＲ活性剤による前記処置は前記ＣＡＲ−ＭＩＣの投与又は初回投与後の少なくとも６ヶ月にわたり続けられる、実施形態５７−６０のいずれか１つに記載の方法。
［実施形態６１］
（１種類又は複数種類の）前記免疫調節性ＲＡＲ／ＲＸＲ活性剤による前記処置は、持続的完全奏効が得られるまで、続けられる、実施形態５７−６０のいずれか１つに記載の方法。
［実施形態６２］
（１種類又は複数種類の）前記免疫調節性ＲＡＲ／ＲＸＲ活性剤による前記処置は、継続的腫瘍退縮がある限り、続けられる、実施形態５７−６０のいずれか１つに記載の方法。
［実施形態６３］
（１種類又は複数種類の）前記免疫調節性ＲＡＲ／ＲＸＲ活性剤による前記処置は、安定状態（ｓｔａｂｌｅ  ｄｉｓｅａｓｅ）である又はがんが進行しない限り、続けられる、実施形態５７−６０のいずれか１つに記載の方法。
［実施形態６４］
（１種類又は複数種類の）前記免疫調節性ＲＡＲ／ＲＸＲ活性剤の投与は、分化誘導性ＲＡＲ活性剤が投与される１から３週間の期間にわたり、中断される、実施形態５７−６３のいずれか１つに記載の方法。
［実施形態６５］
（１種類又は複数種類の）前記免疫調節性ＲＡＲ／ＲＸＲ活性剤の投与は２回以上中断され、且つ、中断は１０連続日の（１種類又は複数種類の）前記免疫調節性ＲＡＲ／ＲＸＲ活性剤による処置の後よりも早く生じることはない、実施形態６４に記載の方法。
［実施形態６６］
前記ＲＡＲ／ＲＸＲ活性剤は毎日投与される、実施形態１−６又は８−６５のいずれか１つに記載の方法。
［実施形態６７］
前記ＣＡＲ−ＭＩＣはＣＡＲ−Ｔ細胞である、実施形態１−６６のいずれか１つに記載の方法。
［実施形態６８］
前記ＣＡＲ−ＭＩＣはＣＡＲ−ＮＫＴ細胞である、実施形態１−６６のいずれか１つに記載の方法。
［実施形態６９］
前記ＣＡＲ−ＭＩＣはＣＡＲ−ＮＫ細胞である、実施形態１−６６のいずれか１つに記載の方法。
［実施形態７０］
前記ＣＡＲ−ＭＩＣはＣＡＲ−貪食細胞である、実施形態１−６６のいずれか１つに記載の方法。
［実施形態７１］
ＣＡＲ−ＭＩＣの免疫治療効果を増強する、ＣＡＲ−ＭＩＣを受けている、受けた、又は受ける予定のがん患者におけるがん免疫治療法で使用するための、分化誘導性ＲＡＲ活性剤及び免疫調節性ＲＡＲ／ＲＸＲ活性剤。
［実施形態７２］
がん免疫治療法で使用するための、ＣＡＲ−ＭＩＣ、分化誘導性ＲＡＲ活性剤、及び免疫調節性ＲＡＲ／ＲＸＲ活性剤。
［実施形態７３］
がん患者の無病生存を延ばすのに使用するための、ＣＡＲ−ＭＩＣ、分化誘導性ＲＡＲ活性剤、及び免疫調節性ＲＡＲ／ＲＸＲ活性剤。
［実施形態７４］
ＣＡＲ−ＭＩＣ治療法の毒性を減らすのに使用するための、分化誘導性ＲＡＲ活性剤及び免疫調節性ＲＡＲ／ＲＸＲ活性剤。
［実施形態７５］
がんを処置するのに使用するための、ＣＡＲ−ＭＩＣ、分化誘導性ＲＡＲ活性剤、及び免疫調節性ＲＡＲ／ＲＸＲ活性剤。
［実施形態７６］
がん処置でのＣＡＲ−ＭＩＣの免疫治療効果を増強するための医薬の製造における、分化誘導性ＲＡＲ活性剤及び免疫調節性ＲＡＲ／ＲＸＲ活性剤の使用。
［実施形態７７］
がん免疫治療法のための医薬の製造における、ＣＡＲ−ＭＩＣ、分化誘導性ＲＡＲ活性剤、及び免疫調節性ＲＡＲ／ＲＸＲ活性剤の使用。
［実施形態７８］
がん患者の無病生存を延ばすための医薬の製造における、ＣＡＲ−ＭＩＣ、分化誘導性ＲＡＲ活性剤、及び免疫調節性ＲＡＲ／ＲＸＲ活性剤の使用。
［実施形態７９］
ＣＡＲ−ＭＩＣ治療法の毒性を減らすための医薬の製造における、分化誘導性ＲＡＲ活性剤及び免疫調節性ＲＡＲ／ＲＸＲ活性剤の使用。
［実施形態８０］
がんを処置するための医薬の製造における、ＣＡＲ−ＭＩＣ、分化誘導性ＲＡＲ活性剤、及び免疫調節性ＲＡＲ／ＲＸＲ活性剤の使用。
【手続補正５】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０２７２
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０２７２】
［付記１５］
前記ＲＡＲγアゴニストは、
【化７８】
2020526551.tif 000160
【化７９】
2020526551.tif 000161
【化８０】
2020526551.tif 000162
又は、
【化８１】
2020526551.tif 000163
である、付記１４に記載の方法。
【手続補正６】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】請求項１５
【補正方法】変更
【補正の内容】
【請求項１５】
前記ＲＡＲγアゴニストは、
【化９】
2020526551.tif 000164
【化１０】
2020526551.tif 000165
【化１１】
2020526551.tif 000166
又は、
【化１２】
2020526551.tif 000167
である、請求項１４に記載の方法。
【国際調査報告】
2020526551.tif 000168
2020526551.tif 000169