(57)【要約】上皮増殖因子受容体（ＥＧＦＲ）阻害剤、マイトジェン活性化プロテインキナーゼ（ＭＥＫ）１／２阻害剤、およびサイクリン依存性キナーゼ（ＣＤＫ）４／６阻害剤などの少なくとも２つの薬剤の組合せを含む、上皮性腫瘍をはじめとする癌を処置するための併用療法および関連する組成物および方法が提供される。本開示の実施形態は、適切な部分において、（ａ）上皮増殖因子受容体（ＥＧＦＲ）阻害剤；（ｂ）マイトジェン活性化プロテインキナーゼ（ＭＥＫ）１／２阻害剤；および（ｃ）サイクリン依存性キナーゼ（ＣＤＫ）４／６阻害剤から選択される２つまたはそれを超える薬剤の組合せを対象に投与することを含む、それを必要とする対象において癌を処置する方法に関する。
2020522521.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
癌の処置をそれを必要とする対象において行う方法であって、
（ａ）上皮増殖因子受容体（ＥＧＦＲ）阻害剤；
（ｂ）マイトジェン活性化プロテインキナーゼ（ＭＥＫ）１／２阻害剤；および
（ｃ）サイクリン依存性キナーゼ（ＣＤＫ）４／６阻害剤
から選択される２つまたはそれを超える薬剤の組合せを前記対象に投与することを含む方法。
【請求項２】
（ａ）が、ＥＧＦＲまたはそのリガンドと特異的に結合する小分子または抗体（またはその抗原結合フラグメント）であるか、あるいは必要に応じて、セツキシマブ、パニツムマブ、ザルツムマブ、ニモツズマブ、マツズマブ、エルロチニブ、ゲフィチニブ、アファチニブ、ラパチニブ、オシメルチニブ、ブリガチニブ、およびイコチニブの１つまたは複数から選択される、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
（ｂ）が、ＭＥＫ１／２またはそのリガンドと特異的に結合する小分子または抗体（またはその抗原結合フラグメント）であるか、あるいは必要に応じて、トラメチニブ、セルメチニブ、およびコビメチニブの１つまたは複数から選択される、請求項１または２に記載の方法。
【請求項４】
（ｃ）が、ＣＤＫ４／６またはそのリガンドと特異的に結合する小分子または抗体（またはその抗原結合フラグメント）であるか、あるいは必要に応じて、パルボシクリブ、リボシクリブ、およびアベマシクリブの１つまたは複数から選択される、請求項１から３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５】
前記（ａ）と（ｂ）の組合せを前記対象に、必要に応じて別々の組成物として、または同じ組成物の一部として一緒に投与することを含む、請求項１から４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６】
前記（ａ）と（ｃ）の組合せを前記対象に、必要に応じて別々の組成物として、または同じ組成物の一部として一緒に投与することを含む、請求項１から４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項７】
前記（ａ）、（ｂ）、および（ｃ）の組合せを前記対象に、必要に応じて別々の組成物として、または同じ組成物の一部として一緒に投与することを含む、請求項１から４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項８】
前記癌が、悪性上皮性腫瘍または癌腫である、請求項１から７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項９】
前記癌腫が、腺癌、扁平上皮癌、腺扁平上皮癌、未分化癌、大細胞癌、および小細胞癌の１または複数から選択される、請求項８に記載の方法。
【請求項１０】
前記癌腫が、上皮性新生物、扁平細胞新生物（扁平上皮癌）、基底細胞新生物（基底細胞癌）、移行上皮癌、腺癌（場合により、形成性胃炎、ＶＩＰ産生腫瘍、胆管細胞癌、肝細胞癌、腺様嚢胞癌、腎細胞癌、またはグラヴィッツ腫瘍）、皮膚付属器新生物、粘膜表皮（ｎｕｃｏｅｐｉｄｅｒｍｏｉｄ）新生物、嚢胞性粘液性または漿液性新生物（ａ  ｃｙｓｔｉｃ，  ｍｕｃｉｎｏｕｓ，  ｏｒ  Ｓｅｒｏｕｓ  Ｎｅｏｐｌａｓｍ）、乳腺組織関連腫瘍、腺房細胞性新生物（ａｃｃｉｎａｒ  ｃｅｌｌ  ｎｅｏｐｌａｓｍ）、および複合上皮性新生物の１つまたは複数から選択される、請求項８または９に記載の方法。
【請求項１１】
前記癌が、結腸癌、胃癌、肺癌（場合により、小細胞肺癌または非小細胞肺癌）、乳癌、膵臓癌、口腔癌、前立腺癌、生殖細胞系の癌、直腸癌、肝癌（場合により、肝細胞癌）、腎癌（場合により、腎細胞癌）、および卵巣癌の１つまたは複数から選択される癌腫である、請求項１から１０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１２】
前記（ａ）と（ｂ）の組合せが、（ａ）および／または（ｂ）単独と比較して、約または少なくとも約５、１０、１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、６０、７０、８０、９０、１００、２００、３００、４００、５００、６００、７００、８００、９００、１０００、２０００％またはそれを超えて、癌細胞の増殖を低下させ、かつ／または癌細胞の死滅を増加させる、請求項１から１１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１３】
前記（ａ）と（ｂ）の組合せが、（ａ）および／または（ｂ）単独と比較して、癌細胞増殖を相乗的に低下させ、かつ／または癌細胞の死滅を相乗的に増加させる、請求項１２に記載の方法。
【請求項１４】
前記（ａ）と（ｃ）の組合せが、（ａ）および／または（ｃ）単独と比較して、約または少なくとも約５、１０、１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、６０、７０、８０、９０、１００、２００、３００、４００、５００、６００、７００、８００、９００、１０００、２０００％またはそれを超えて、癌細胞の増殖を低下させ、かつ／または癌細胞の死滅を増加させる、請求項１から１１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１５】
前記（ａ）と（ｃ）の組合せが、（ａ）および／または（ｃ）単独と比較して、癌細胞増殖を相乗的に低下させ、かつ／または癌細胞の死滅を相乗的に増加させる、請求項１４に記載の方法。
【請求項１６】
前記（ａ）、（ｂ）、および（ｃ）の組合せが、（ａ）、（ｂ）、および／または（ｃ）単独と比較して、約または少なくとも約５、１０、１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、６０、７０、８０、９０、１００、２００、３００、４００、５００、６００、７００、８００、９００、１０００、２０００％またはそれを超えて、癌細胞の増殖を低下させる、請求項１から１１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１７】
前記（ａ）、（ｂ）、および（ｃ）の組合せが、（ａ）、（ｂ）、および／または（ｃ）単独と比較して、癌細胞増殖を相乗的に低下させ、かつ／または癌細胞の死滅を相乗的に増加させる、請求項１６に記載の方法。
【請求項１８】
前記（ａ）と（ｂ）、（ａ）と（ｃ）、または（ａ）、（ｂ）、および（ｃ）の組合せが、表Ｅ１〜Ｅ６の組合せから選択され、必要に応じて前記癌が表Ｅ１〜Ｅ６の癌細胞に対応する、請求項１から１７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１９】
（ａ）上皮増殖因子受容体（ＥＧＦＲ）阻害剤；
（ｂ）マイトジェン活性化プロテインキナーゼ（ＭＥＫ）１／２阻害剤；および
（ｃ）サイクリン依存性キナーゼ（ＣＤＫ）４／６阻害剤
から選択される２またはそれを超える薬剤の組合せを含む治療用組成物。
【請求項２０】
（ａ）が、ＥＧＦＲまたはそのリガンドと特異的に結合する小分子または抗体（またはその抗原結合フラグメント）であり、必要に応じて、セツキシマブ、パニツムマブ、ザルツムマブ、ニモツズマブ、マツズマブ、エルロチニブ、ゲフィチニブ、アファチニブ、ラパチニブ、オシメルチニブ、ブリガチニブ、およびイコチニブの１つまたは複数から選択される、請求項１９に記載の治療用組成物。
【請求項２１】
（ｂ）が、ＭＥＫ１／２またはそのリガンドと特異的に結合する小分子または抗体（またはその抗原結合フラグメント）であり、必要に応じて、トラメチニブ、セルメチニブ、およびコビメチニブの１つまたは複数から選択される、請求項１９または２０に記載の治療用組成物。
【請求項２２】
（ｃ）が、ＣＤＫ４／６またはそのリガンドと特異的に結合する小分子または抗体（またはその抗原結合フラグメント）であり、必要に応じて、パルボシクリブ、リボシクリブ、およびアベマシクリブの１つまたは複数から選択される、請求項１９から２１のいずれか一項に記載の治療用組成物。
【請求項２３】
前記（ａ）と（ｂ）の組合せを含む、請求項１９から２２のいずれか一項に記載の治療用組成物。
【請求項２４】
前記（ａ）と（ｃ）の組合せを含む、請求項１９から２２のいずれか一項に記載の治療用組成物。
【請求項２５】
前記（ａ）、（ｂ）、および（ｃ）の組合せを含む、請求項１９から２２のいずれか一項に記載の治療用組成物。
【請求項２６】
前記（ａ）と（ｂ）、（ａ）と（ｃ）、または（ａ）、（ｂ）、および（ｃ）の組合せが、表Ｅ１〜Ｅ６の組合せから選択され、必要に応じて前記癌が表Ｅ１〜Ｅ６の癌細胞／組織種に対応する、請求項１９から２５のいずれか一項に記載の治療用組成物。
【請求項２７】
癌の処置をそれを必要とする対象において行うために使用するためのものである、請求項１９から２６のいずれか一項に記載の治療用組成物。
【請求項２８】
前記癌が、悪性上皮性腫瘍または癌腫である、請求項２７に記載の治療用組成物。
【請求項２９】
（ａ）上皮増殖因子受容体（ＥＧＦＲ）阻害剤；
（ｂ）マイトジェン活性化プロテインキナーゼ（ＭＥＫ）１／２阻害剤；および
（ｃ）サイクリン依存性キナーゼ（ＣＤＫ）４／６阻害剤
から選択される２またはそれを超える薬剤の組合せを含む患者ケアキット。
【請求項３０】
前記（ａ）と（ｂ）の組合せを、必要に応じて別々の組成物として、または同じ組成物の一部として含む、請求項２９に記載の患者ケアキット。
【請求項３１】
前記（ａ）と（ｃ）の組合せを、必要に応じて別々の組成物として、または同じ組成物の一部として含む、請求項２９に記載の患者ケアキット。
【請求項３２】
前記（ａ）、（ｂ）、および（ｃ）の組合せを、必要に応じて別々の組成物として、または同じ組成物の一部として含む、請求項２９に記載の患者ケアキット。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願への相互参照
本願は、２０１７年６月２日に出願されたＰＣＴ／ＣＮ２０１７／０８６９１１に基づく優先権を主張しており、この出願は、その全体が参考として援用される。
【０００２】
背景
技術分野
本開示の実施形態は、上皮性腫瘍をはじめとする癌を処置するための、併用療法および関連する組成物および方法に関し、それには、上皮増殖因子受容体（ＥＧＦＲ）阻害剤、マイトジェン活性化プロテインキナーゼ（ＭＥＫ）１／２阻害剤、およびサイクリン依存性キナーゼ（ＣＤＫ）４／６阻害剤などの少なくとも２つの薬剤の組合せが含まれる。
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【０００３】
簡単な要旨
本開示の実施形態は、適切な部分において、
（ａ）上皮増殖因子受容体（ＥＧＦＲ）阻害剤；
（ｂ）マイトジェン活性化プロテインキナーゼ（ＭＥＫ）１／２阻害剤；および
（ｃ）サイクリン依存性キナーゼ（ＣＤＫ）４／６阻害剤
から選択される２つまたはそれを超える薬剤の組合せを対象に投与することを含む、それを必要とする対象において癌を処置する方法に関する。
【０００４】
ある特定の実施形態では、（ａ）は、ＥＧＦＲまたはそのリガンドと特異的に結合する小分子または抗体（またはその抗原結合フラグメント）であるか、あるいは必要に応じて、セツキシマブ、パニツムマブ、ザルツムマブ、ニモツズマブ、マツズマブ、エルロチニブ、ゲフィチニブ、アファチニブ、ラパチニブ、オシメルチニブ、ブリガチニブ、およびイコチニブの１つまたは複数から選択される。
【０００５】
ある特定の実施形態では、（ｂ）は、ＭＥＫ１／２またはそのリガンドと特異的に結合する小分子または抗体（またはその抗原結合フラグメント）であるか、あるいは必要に応じて、トラメチニブ、セルメチニブ、およびコビメチニブの１つまたは複数から選択される。
【０００６】
ある特定の実施形態では、（ｃ）は、ＣＤＫ４／６またはそのリガンドと特異的に結合する小分子または抗体（またはその抗原結合フラグメント）であるか、あるいは、必要に応じて、パルボシクリブ、リボシクリブ、およびアベマシクリブの１つまたは複数から選択される。
【０００７】
一部の実施形態は、（ａ）と（ｂ）の組合せを、必要に応じて別々の組成物として、または同じ組成物の一部として一緒に対象に投与することを含む。一部の実施形態は、（ａ）と（ｃ）の組合せを、必要に応じて別々の組成物として、または同じ組成物の一部として一緒に対象に投与することを含む。一部の実施形態は、（ａ）、（ｂ）、および（ｃ）の組合せを、必要に応じて別々の組成物として、または同じ組成物の一部として一緒に対象に投与することを含む。
【０００８】
一部の実施形態では、癌は、悪性上皮性腫瘍または癌腫である。一部の実施形態では、癌腫は、腺癌、扁平上皮癌、腺扁平上皮癌、未分化癌、大細胞癌、および小細胞癌の１つまたは複数から選択される。一部の実施形態では、癌腫は、上皮性新生物、扁平細胞新生物（扁平上皮癌）、基底細胞新生物（基底細胞癌）、移行上皮癌、腺癌（場合により、形成性胃炎、ＶＩＰ産生腫瘍、胆管細胞癌、肝細胞癌、腺様嚢胞癌、腎細胞癌、またはグラヴィッツ腫瘍）、皮膚付属器新生物、粘膜表皮（ｎｕｃｏｅｐｉｄｅｒｍｏｉｄ）新生物、嚢胞性粘液性または漿液性新生物（ａ  ｃｙｓｔｉｃ，  ｍｕｃｉｎｏｕｓ，  ｏｒ  Ｓｅｒｏｕｓ  Ｎｅｏｐｌａｓｍ）、乳腺組織関連腫瘍、腺房細胞性新生物（ａｃｃｉｎａｒ  ｃｅｌｌ  ｎｅｏｐｌａｓｍ）、および複合上皮性新生物の１つまたは複数から選択される。一部の実施形態では、癌は、結腸癌、胃癌、肺癌（場合により、小細胞肺癌または非小細胞肺癌）、乳癌、膵臓癌、口腔癌、前立腺癌、生殖細胞系の癌、直腸癌、肝癌（場合により、肝細胞癌）、腎癌（場合により、腎細胞癌）、および卵巣癌の１つまたは複数から選択される癌腫である。
【０００９】
一部の実施形態では、（ａ）と（ｂ）の組合せは、（ａ）および／または（ｂ）単独と比較して、約または少なくとも約５、１０、１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、６０、７０、８０、９０、１００、２００、３００、４００、５００、６００、７００、８００、９００、１０００、２０００％またはそれを超えて、癌細胞の増殖を低下させ、かつ／または癌細胞の死滅を増加させる。一部の実施形態では、（ａ）と（ｂ）の組合せは、（ａ）および／または（ｂ）単独と比較して、癌細胞増殖を相乗的に低下させ、かつ／または癌細胞の死滅を相乗的に増加させる。一部の実施形態では、（ａ）と（ｃ）の組合せは、（ａ）および／または（ｃ）単独と比較して、約または少なくとも約５、１０、１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、６０、７０、８０、９０、１００、２００、３００、４００、５００、６００、７００、８００、９００、１０００、２０００％またはそれを超えて、癌細胞の増殖を低下させ、かつ／または癌細胞の死滅を増加させる。一部の実施形態では、（ａ）と（ｃ）の組合せは、（ａ）および／または（ｃ）単独と比較して、癌細胞増殖を相乗的に低下させ、かつ／または癌細胞の死滅を相乗的に増加させる。一部の実施形態では、（ａ）、（ｂ）および（ｃ）の組合せは、（ａ）、（ｂ）および／または（ｃ）単独と比較して、約または少なくとも約５、１０、１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、６０、７０、８０、９０、１００、２００、３００、４００、５００、６００、７００、８００、９００、１０００、２０００％またはそれを超えて、癌細胞の増殖を低下させる。一部の実施形態では、（ａ）、（ｂ）および（ｃ）の組合せは、（ａ）、（ｂ）および／または（ｃ）単独と比較して、癌細胞増殖を相乗的に低下させ、かつ／または癌細胞の死滅を相乗的に増加させる。
【００１０】
一部の実施形態では、（ａ）と（ｂ）、（ａ）と（ｃ）、または（ａ）、（ｂ）、および（ｃ）の組合せは、表Ｅ１〜Ｅ６の組合せから選択され、必要に応じて癌は表Ｅ１〜Ｅ６の癌細胞に対応する。
また、
（ａ）上皮増殖因子受容体（ＥＧＦＲ）阻害剤；
（ｂ）マイトジェン活性化プロテインキナーゼ（ＭＥＫ）１／２阻害剤；および
（ｃ）サイクリン依存性キナーゼ（ＣＤＫ）４／６阻害剤
から選択される２つまたはそれを超える薬剤の組合せを含む治療用組成物も含まれる。
【００１１】
一部の実施形態では、（ａ）は、ＥＧＦＲまたはそのリガンドと特異的に結合する小分子または抗体（またはその抗原結合フラグメント）であり、必要に応じて、セツキシマブ、パニツムマブ、ザルツムマブ、ニモツズマブ、マツズマブ、エルロチニブ、ゲフィチニブ、アファチニブ、ラパチニブ、オシメルチニブ、ブリガチニブ、およびイコチニブの１つまたは複数から選択される。一部の実施形態では、（ｂ）は、ＭＥＫ１／２またはそのリガンドと特異的に結合する小分子または抗体（またはその抗原結合フラグメント）であり、必要に応じて、トラメチニブ、セルメチニブ、およびコビメチニブの１つまたは複数から選択される。一部の実施形態では、（ｃ）は、ＣＤＫ４／６またはそのリガンドと特異的に結合する小分子または抗体（またはその抗原結合フラグメント）であり、必要に応じて、パルボシクリブ、リボシクリブ、およびアベマシクリブの１つまたは複数から選択される。
【００１２】
ある特定の組成物は、（ａ）と（ｂ）の組合せを含む。ある特定の組成物は、（ａ）と（ｃ）の組合せを含む。ある特定の組成物は、（ａ）、（ｂ）、および（ｃ）の組合せを含む。
【００１３】
一部の実施形態では、（ａ）と（ｂ）、（ａ）と（ｃ）、または（ａ）、（ｂ）、および（ｃ）の組合せは、表Ｅ１〜Ｅ６の組合せから選択され、必要に応じて癌は表Ｅ１〜Ｅ６の癌細胞／組織型に対応する。
【００１４】
ある特定の治療用組成物は、癌の処置をそれを必要とする対象において行うために使用するためのものである。一部の実施形態では、癌は、悪性上皮性腫瘍または癌腫である。
また、
（ａ）上皮増殖因子受容体（ＥＧＦＲ）阻害剤；
（ｂ）マイトジェン活性化プロテインキナーゼ（ＭＥＫ）１／２阻害剤；および
（ｃ）サイクリン依存性キナーゼ（ＣＤＫ）４／６阻害剤
から選択される２つまたはそれを超える薬剤の組合せを含む患者ケアキットも含まれる。
【００１５】
ある特定のキットは、（ａ）と（ｂ）の組合せを、必要に応じて別々の組成物として、または同じ組成物の一部として含む。一部のキットは、（ａ）と（ｃ）の組合せを、必要に応じて別々の組成物として、または同じ組成物の一部として含む。ある特定のキットは、（ａ）、（ｂ）、および（ｃ）の組合せを、必要に応じて別々の組成物として、または同じ組成物の一部として含む。
【図面の簡単な説明】
【００１６】
【図１】図１は、薬剤または薬剤の組合せへの暴露後の患者由来の上皮腫瘍細胞の画像を示す。
【発明を実施するための形態】
【００１７】
詳細な説明
別に定義されない限り、本明細書において使用される全ての技術用語および科学用語は、本開示が属する当業者が一般に理解する意味と同じ意味を有する。本明細書に記載のものと類似または同等の任意の方法、材料、組成物、試薬、細胞を、本開示の主題の実践または試験において使用することもできるが、好ましい方法および材料が記載されている。本明細書において引用される全ての刊行物および参考文献（特許および特許出願を含むがこれらに限定されない）は、個々の刊行物または参考文献が、完全に記載されているものとして参照により本明細書に組み込まれることが具体的かつ個別に示されているかのように、その全文が参照により本明細書に組み込まれる。本出願が優先権を主張する任意の特許出願も、刊行物および参考文献について上に記載される方法でその全文が参照により本明細書に組み込まれる。
【００１８】
組換えＤＮＡ、オリゴヌクレオチド合成、および組織培養および形質転換には標準的な技法が使用されてよい（例、エレクトロポレーション、リポフェクション）。酵素反応および精製技法は、製造業者の仕様に従って、または当技術分野で一般的に達成されるように、または本明細書に記載されているように実施されてよい。これらおよび関連する技法および手順は、通常、当技術分野で周知の従来の方法に従って、さらに、本明細書を通して引用および考察される様々な一般的およびより具体的な参考文献に記載されるように、実行されてよい。特定の定義が提供されない限り、本明細書に記載されている分子生物学、分析化学、合成有機化学、および医薬品化学および医薬化学に関連して利用される命名法、ならびにそれらの実験室手順および技法は、当技術分野で周知であり、一般的に使用されているものである。組換え技術、分子生物学、微生物学、化学合成、化学分析、医薬品の調製、処方、送達、および患者の処置に、標準的な技法が使用されてよい。
【００１９】
本開示の目的において、次の用語を以下に定義する。
【００２０】
冠詞「ａ」および「ａｎ」は本明細書において、冠詞の文法的対象の１または１よりも多く（すなわち、少なくとも１つ）をさすために使用される。例として、「１つの（ａｎ）要素」とは、１つの要素または１よりも多い要素を意味する。
【００２１】
「約」とは、基準の数量、レベル、値、数、頻度、割合、寸法、サイズ、量、重量または長さに対して３０、２５、２０、１５、１０、９、８、７、６、５、４、３、２または１％だけ変化する数量、レベル、値、数、頻度、割合、寸法、サイズ、量、重量または長さを意味する。
【００２２】
用語「抗原」とは、抗体などの選択的結合剤に結合することができ、さらに、その抗原のエピトープに結合できる抗体を産生するために動物において使用することができる分子または分子の一部をさす。抗原は、１つまたは複数のエピトープを有し得る。本明細書において使用される、用語「抗原」には、適切な条件下で、物質に対する免疫応答を誘発し、免疫応答の産物と反応することができる物質が含まれる。例えば、抗原は、抗体（液性免疫応答）または感作Ｔリンパ球（Ｔヘルパーまたは細胞性免疫応答）、またはその両方によって認識され得る。抗原は、毒素および外来タンパク質などの可溶性物質、または細菌および組織細胞などの微粒子であり得る；しかし、抗原決定基（エピトープ）として公知のタンパク質または多糖類分子の部分のみが、抗体またはリンパ球上の特定の受容体に結合する。より広義には、用語「抗原」には、物質が免疫原性であるかどうかに関わらず、抗体に結合するか、またはその抗体が望まれる任意の物質が含まれる。そのような抗原に関して、抗体は、免疫反応とは無関係に組換え法によって同定することができる。
【００２３】
「アンタゴニスト」または「阻害剤」とは、別の薬剤または分子の生理学的作用を妨害するか、そうでなければ低下させる生物学的または化学的薬剤をさす。場合によっては、アンタゴニストは他の薬剤または分子に特異的に結合する。完全および部分的なアンタゴニストおよび阻害剤が含まれる。
【００２４】
「アゴニスト」とは、別の薬剤または分子の生理学的作用を増加させるかまたは低下させる生物学的構造または化学的薬剤をさす。場合によっては、アゴニストは他の薬剤または分子に特異的に結合する。完全および部分的なアゴニストが含まれる。
【００２５】
本明細書において使用される、用語「アミノ酸」は、天然に存在するアミノ酸および天然に存在しないアミノ酸の両方、ならびにアミノ酸類似体および模倣体を意味することが意図される。天然に存在するアミノ酸には、タンパク質生合成中に利用される２０の（Ｌ）−アミノ酸、ならびにその他アミノ酸、例えば４−ヒドロキシプロリン、ヒドロキシリシン、デスモシン、イソデスモシン、ホモシステイン、シトルリンおよびオルニチンなどが含まれる。天然に存在しないアミノ酸には、例えば、（Ｄ）−アミノ酸、ノルロイシン、ノルバリン、ｐ−フルオロフェニルアラニン、エチオニンなどが含まれ、これらは当業者に公知である。アミノ酸類似体には、天然に存在するアミノ酸と天然に存在しないアミノ酸の修飾形態が含まれる。そのような修飾には、例えば、アミノ酸上の化学基および部分の置換または交換、あるいはアミノ酸の誘導体化によるものが含まれ得る。アミノ酸模倣体には、例えば、基準アミノ酸に特徴的な電荷および電荷間隔などの機能的に類似した特性を示す有機構造が含まれる。例えば、アルギニン（ＡｒｇまたはＲ）を模倣する有機構造は、類似する分子空間に位置し、天然に存在するＡｒｇアミノ酸の側鎖のｅ−アミノ基と同程度の可動性を有する正電荷部分を有することになる。模倣体はまた、アミノ酸またはアミノ酸官能基の最適な間隔および電荷相互作用を維持するように、制約された構造も含む。当業者は、どの構造が機能的に同等のアミノ酸類似体およびアミノ酸模倣体を構成するかを知っているかまたは決定することができる。
【００２６】
本明細書において使用される、疾患または有害反応を発症する「リスクがある」対象は、検出可能な疾患、または疾患の症状を有していても有していなくてもよく、本明細書に記載される処置方法の前に、検出可能な疾患または疾患の症状を示していてもいなくてもよい。「リスクがある」とは、本明細書に記載され、当技術分野で公知のように、疾患の発症と相関する測定可能なパラメータである１つまたは複数のリスク因子を対象が有することを示す。１つまたは複数のこれらのリスク因子を有する対象は、１つまたは複数のこれらのリスク因子を持っていない対象よりも、疾患、または有害反応を発症する可能性がより高い。
【００２７】
「生体適合性」とは、一般に細胞または対象の生物学的機能に有害ではなく、アレルゲン性および疾患状態を含む容認できない程度の毒性をもたらさない、材料または化合物をさす。
【００２８】
用語「結合」とは、例えば、塩架橋および水架橋などの相互作用を含む、共有結合、静電気結合、疎水結合、ならびにイオン結合および／または水素結合の相互作用による、２つの分子間の直接会合をさす。
【００２９】
本開示を通して、文脈上別の意味に解釈するべき場合を除いて、「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅ）」、「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅｓ）」および「含んでいる（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」という語は、述べたステップまたは要素あるいはステップまたは要素の群を含むが、任意のその他のステップまたは要素あるいはステップまたは要素の群を除外しないことを意味すると理解される。
【００３０】
「からなる」とは、「からなる」という語句に続くものを含むこと、およびそれに限定されることを意味する。従って、語句「からなる」は、列挙された要素が必要であるかまたは必須であり、その他の要素が存在しないことを示す。「から本質的になる」とは、その語句の後に列挙された任意の要素を含むことを意味し、列挙された要素の開示で指定された活性または作用を妨害または寄与しないその他の要素に限定される。従って、語句「から本質的になる」は、列挙された要素が必要または必須であることを示すが、その他の要素は任意選択であり、列挙された要素の活性または作用に実質的に影響を及ぼすかどうかによって存在する場合と存在しない場合があることを示す。
【００３１】
用語「エンドトキシンを含まない」または「実質的にエンドトキシンを含まない」は、一般に、最大で痕跡量（例えば、対象に臨床的に有害な生理学的影響を及ぼさない量）のエンドトキシン、好ましくは検出不可能な量のエンドトキシンを含む組成物、溶媒、および／または容器に関する。エンドトキシンは、細菌、一般にグラム陰性細菌などのある特定の微生物に関連する毒素であるが、エンドトキシンはグラム陽性細菌、例えば、Ｌｉｓｔｅｒｉａ  ｍｏｎｏｃｙｔｏｇｅｎｅｓなどに見出されることもある。最も多く見られるエンドトキシンは、様々なグラム陰性細菌の外膜に見出されるリポ多糖（ＬＰＳ）またはリポオリゴ糖（ＬＯＳ）であり、これらは、これらの細菌が疾患を引き起こす能力において中心的な病原性の特徴を表す。少量のエンドトキシンはヒトにおいて、他の生理的悪影響の中でも、発熱、血圧低下、炎症および凝固の活性化を生じる可能性がある。
【００３２】
そのため、医薬品の製造において、たとえ少量でもヒトに悪影響をもたらす可能性があるので、多くの場合、製剤および／または薬剤容器からエンドトキシンのほとんどまたはすべての痕跡を除去することが望ましい。大部分のエンドトキシンを分解するためには３００℃を超える温度が一般に必要であるため、脱パイロジェンオーブンがこの目的に使用されてよい。例えば、シリンジまたはバイアルなどの一次包装材料に基づいて、２５０℃のガラス温度と３０分の保持時間の組合せが、エンドトキシンレベルの３ｌｏｇの低下を達成するのに十分である場合が多い。エンドトキシンを除去するその他の方法が企図され、それには、例えば、本明細書に記載され、当技術分野で公知のクロマトグラフィーおよび濾過方法が挙げられる。
【００３３】
エンドトキシンは当技術分野で公知の日常的な技法を使用して検出され得る。例えば、カブトガニの血液を利用するリムルスアメボサイトライセートアッセイは、エンドトキシンの存在を検出するための非常に感度の高いアッセイである。この試験では、非常に低レベルのＬＰＳが、この反応を増幅する強力な酵素カスケードにより、リムルスライセートの検出可能な凝固を引き起こし得る。エンドトキシンはまた、酵素結合免疫吸着測定法（ＥＬＩＳＡ）によって定量化することもできる。実質的にエンドトキシンを含まないためには、エンドトキシンレベルは、活性化合物１ｍｇあたり約０．００１、０．００５、０．０１、０．０２、０．０３、０．０４、０．０５、０．０６、０．０８、０．０９、０．１、０．５、１．０、１．５、２、２．５、３、４、５、６、７、８、９、または１０ＥＵであってよい。一般に、１ｎｇのリポ多糖（ＬＰＳ）は約１〜１０ＥＵに相当する。
【００３４】
用語「最大半量有効濃度」または「ＥＣ５０」とは、特定の曝露時間後にベースラインと最大値の中間の応答を誘導する、本明細書に記載される薬剤（例、小分子、抗体）の濃度をさす；そのため、段階的用量反応曲線のＥＣ５０は、その最大効果の５０％が観察される化合物の濃度を表す。ＥＣ５０はまた、生体内で最大効果の５０％を得るために必要な血漿濃度も表す。同様に、「ＥＣ９０」とは、その最大効果の９０％が観察される、薬剤または組成物の濃度をさす。「ＥＣ９０」は、「ＥＣ５０」とヒル勾配から計算され得るか、またはそれは当技術分野の日常的な知識を使用して、データから直接決定することができる。一部の実施形態では、薬剤（例、小分子、抗体）のＥＣ５０は、約０．０１、０．０５、０．１、０．２、０．３、０．４、０．５、０．６、０．７、０．８、０．９、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２５、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００、２００または５００ｎＭ未満である。一部の実施形態では、薬剤は、約１ｎＭまたはそれ未満のＥＣ５０値を有する。
【００３５】
薬剤の「半減期」は、生物の血清または組織への投与時のそのような活性と比較して、または任意のその他の定義された時点と比較して、薬剤がその薬理学的、生理学的、またはその他の活性の半分を失うのにかかる時間をさし得る。「半減期」は、生物の血清または組織への投与時のそのような量または濃度と比較して、または任意のその他の定義された時点と比較して、薬剤の量または濃度が生物の血清または組織に投与された出発量の半分に低下する時間もさし得る。半減期は、血清および／または任意の１つまたは複数の選択された組織で測定され得る。
【００３６】
用語「調節する」および「変更する」には、一般に、対照に対して統計的に有意な、または生理学的に有意な量または程度の、「増加」、「増強」または「刺激」、ならびに「低下」または「減少」が含まれる。「増加した」、「刺激された」または「増強された」量は、一般に、「統計的に有意な」量であり、それには、組成物なし（例、薬剤が不在）または対照組成物によって生成された量の１．１、１．２、１．５、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１５、２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００倍またはそれを超える（例、５００、１０００倍）の増加（全ての整数とその間の範囲、例、１．５、１．６、１．７．１．８等を含む）が含まれ得る。「減少した」または「低下した」量は、一般に、「統計学的に有意な」量であり、それには、組成物なし（例、薬剤が不在）または対照組成物によって生成された量の１％、２％、３％、４％、５％、６％、７％、８％、９％、１０％、１１％、１２％、１３％、１４％、１５％、１６％、１７％、１８％、１９％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、または１００％の減少（全ての整数とその間の範囲を含む）が含まれ得る。比較の例および「統計学的に有意な」量は本明細書に記載されている。
【００３７】
用語「ポリペプチド」、「タンパク質」および「ペプチド」は、同義的に使用され、任意の特定の長さに限定されないアミノ酸のポリマーを意味する。用語「酵素」には、ポリペプチドまたはタンパク質触媒が含まれる。これらの用語には、ミリストイル化、硫酸化、グリコシル化、リン酸化およびシグナル配列の付加または欠失などの修飾が含まれる。用語「ポリペプチド」または「タンパク質」とは、１つまたは複数のアミノ酸鎖を意味し、この際、それぞれの鎖はペプチド結合によって共有結合したアミノ酸を含み、かつ、前記ポリペプチドまたはタンパク質は、天然タンパク質の配列、つまり、天然に存在する、具体的には非組換え細胞、または遺伝子改変細胞または組換え細胞によって産生されたタンパク質を有する、ペプチド結合によって一緒に非共有結合および／または共有結合した複数の鎖を含み得、さらに、天然タンパク質のアミノ酸配列を有する分子、または天然配列のアミノ酸の欠失、付加、および／または置換の１つまたは複数を有する分子を含む。ある特定の実施形態では、ポリペプチドは、１つまたは複数の組換えＤＮＡ分子を含む組換え細胞によって産生された「組換え」ポリペプチドであり、これらは通常、そうでなければ細胞内では見出されない異種ポリヌクレオチド配列またはポリヌクレオチド配列の組合せでできている。
【００３８】
本明細書において言及される用語「単離された」ポリペプチドまたはタンパク質とは、対象タンパク質が（１）一般にそのタンパク質と共に天然に見出されるいくつかのその他のタンパク質を少なくとも含まない、（２）同じ起源由来（例、同じ種由来）のその他のタンパク質を本質的に含まない、（３）異なる種由来の細胞によって発現する、（４）天然においてそれと会合しているポリヌクレオチド、脂質、炭水化物、またはその他の材料の少なくとも約５０パーセントから分離されている、（５）「単離されたタンパク質」が天然に会合しているタンパク質の一部と（共有結合または非共有結合相互作用によって）会合していない、（６）天然に会合していないポリペプチドと（共有結合または非共有結合相互作用によって）作動可能に会合している、または（７）天然に発生しないことを意味する。そのような単離されたタンパク質は、ゲノムＤＮＡ、ｃＤＮＡ、ｍＲＮＡまたはその他のＲＮＡ（合成起源であり得る）、またはそれらの任意の組合せによってコードされ得る。ある特定の実施形態では、単離されたタンパク質は、その使用（治療、診断、予防、研究またはその他）を妨げる、その自然環境で見出されるタンパク質またはポリペプチドまたはその他の汚染物質を実質的に含まない。
【００３９】
ある特定の実施形態では、組成物中の任意の所与薬剤（例、抗体、小分子）の「純度」が定義され得る。例えば、ある特定の組成物は、例えば決して限定されないが、化合物を分離し、識別し、定量するために生化学および分析化学で頻繁に使用される周知の形式のカラムクロマトグラフィーである、高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）によって測定して、タンパク質ベースまたは重量−重量ベースで、少なくとも８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％純粋である（全ての小数およびその間の範囲を含む）ポリペプチド剤などの薬剤を含み得る。
【００４０】
用語「溶解度」とは、本明細書において提供される薬剤（例、抗体、小分子）の、液体溶媒に溶解して均質な溶液を形成する特性をさす。溶解度は、一般に、濃度として、溶媒の単位体積あたりの溶質の質量（溶媒１ｋｇ当たりの溶質のｇ、ｄＬ（１００ｍＬ）あたりのｇ、ｍｇ／ｍｌ等）、容積モル濃度、重量モル濃度、モル分率または他の同様の濃度の説明のいずれかによって表される。溶媒の量あたりに溶解することのできる溶質の最大平衡量は、温度、圧力、ｐＨ、および溶媒の性質を含む、指定された条件下でのその溶媒へのその溶質の溶解度である。ある特定の実施形態では、溶解度は、生理学的ｐＨで、またはその他のｐＨ、例えば、ｐＨ５．０、ｐＨ６．０、ｐＨ７．０、ｐＨ７．４、ｐＨ７．６、ｐＨ７．８、またはｐＨ８．０（例、約ｐＨ５〜８）で測定される。ある特定の実施形態では、溶解度は水または生理学的緩衝液、例えばＰＢＳまたはＮａＣｌ（ＮａＰを含むまたは含まない）などで測定される。特定の実施形態では、溶解度は、比較的低いｐＨ（例、ｐＨ６．０）および比較的高い塩（例、５００ｍＭ  ＮａＣｌおよび１０ｍＭ  ＮａＰ）で測定される。ある特定の実施形態では、溶解度は、血液または血清などの生体液（溶媒）中で測定される。ある特定の実施形態では、温度は、ほぼ室温（例、約２０、２１、２２、２３、２４、２５℃）またはほぼ体温（３７℃）であり得る。ある特定の実施形態では、薬剤の溶解度は、室温または３７℃で少なくとも約０．１、０．２、０．３、０．４、０．５、０．６、０．７、０．８、０．９、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２５、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０または１００ｍｇ／ｍｌである。
【００４１】
「対象」または「それを必要とする対象」または「患者」または「それを必要とする患者」には、ヒト対象などの哺乳類対象が含まれる。
【００４２】
「実質的に」または「本質的に」とは、ほぼ完全にまたは完全に、を意味し、例として、ある所与数量の９５％、９６％、９７％、９８％、９９％またはそれを超えることを意味する。
【００４３】
「統計学的に有意な」とは、結果が偶然に生じた可能性が低いことを意味する。統計学的有意性は、当技術分野で公知の任意の方法によって決定され得る。有意性のよく使用される尺度にはｐ値が挙げられる。これは、帰無仮説が真である場合に、観察される事象が起こる頻度または確率である。得られたｐ値が有意水準よりも小さい場合、帰無仮説は拒絶される。簡単な例では、有意水準は０．０５またはそれ以下のｐ値で定義される。
【００４４】
「治療応答」とは、１つまたは複数の治療薬の投与に基づく症状の改善を（持続されてもされなくても）さす。
【００４５】
本明細書において使用される、用語「治療上有効な量」、「治療用量」、「予防的有効量」、または「診断有効量」は、投与後に望ましい生物学的応答を誘発するために必要な薬剤（例、抗体、小分子）の量である。
【００４６】
本明細書において使用される、対象（例、ヒトなどの哺乳動物）または細胞の「処置」は、個体または細胞の自然経過を変えようとして使用されるあらゆる介入の種類である。処置は、限定されるものではないが、医薬組成物の投与を含み、予防的に実施されてもよいし、または病理学的事象の開始または病原体との接触の後に実施されてもよい。また、処置されている疾患または状態の進行の速度を低下させる、その疾患または状態の発症を遅らせる、あるいはその発症の重症度を低下させることを目的とした、「予防的」処置も含まれる。「処置」または「予防」は、必ずしも疾患または状態、またはその随伴症状の完全な根絶、治癒、または予防を示すものではない。
【００４７】
用語「野生型」とは、集団で最も頻繁に観察され、従って任意に設計されたその遺伝子の「正常」または「野生型」の形態である、遺伝子または遺伝子産物（例、ポリペプチド）をさす。
【００４８】
本願の各実施形態は、明確に別のものが記載されている場合を除いて、他の全ての実施形態に適用される。
経路および薬剤
【００４９】
ある特定の実施形態は、上皮増殖因子受容体（ＥＧＦＲ）活性、マイトジェン活性化プロテインキナーゼ（ＭＥＫ）１／２活性、および／またはサイクリン依存性キナーゼ（ＣＤＫ）４／６活性を阻害するかまたはそれに拮抗する任意の２つまたはそれを超える薬剤の組合せを用いる。そのような薬剤の一般的な例としては、小分子および抗体（またはその抗原結合フラグメント）が挙げられ、これらは本明細書でより詳細に説明されている。
【００５０】
ＥＧＦＲ。上皮増殖因子受容体（ＥＧＦＲ；ＥｒｂＢ−１；ヒトではＨＥＲ１）は、細胞外タンパク質リガンドの上皮成長因子ファミリー（ＥＧＦファミリー）のメンバーの受容体である膜貫通タンパク質である。ＥＧＦは、その受容体ＥＧＦＲとの結合によって細胞増殖、増殖、および分化を刺激する増殖因子である。ヒトＥＧＦは、５３のアミノ酸残基と３つの分子内ジスルフィド結合を含む６ｋＤａのタンパク質である。ＥＧＦは、細胞表面のＥＧＦＲに高い親和性で結合することにより作用する。これが、リガンド誘導性二量体化を刺激し、受容体の固有のタンパク質チロシンキナーゼ活性を活性化する。次に、チロシンキナーゼ活性は、シグナル伝達カスケードを開始させ、細胞内カルシウムレベルの上昇、解糖およびタンパク質合成の増加、ＤＮＡ合成および細胞増殖に関与する遺伝子を含むある特定の遺伝子の発現の増加をはじめとする細胞内の多様な生化学的変化をもたらす。
【００５１】
ＥＧＦＲの過剰発現または過剰活性を引き起こす突然変異は、特に、肺の扁平上皮癌、肛門癌、神経膠芽腫、および頭頸部の上皮性腫瘍をはじめとする多様な癌に関連している。従って、ある特定の実施形態では、薬剤は、ＥＧＦＲ活性またはＥＧＦＲ調節経路を阻害する。
【００５２】
例えば、ある特定の実施形態では、薬剤は、ＥＧＦＲと特異的に結合する抗体（またはその抗原結合フラグメント）であり、例えば、薬剤は、ＥＧＦＲの細胞外リガンド結合ドメインと特異的に結合し、必要に応じて、刺激性リガンドまたはＥＧＦなどのシグナル分子の結合を阻害するかまたは低下させる。例となる抗ＥＧＦＲ抗体は、例えば、参照により組み込まれる米国特許第５，８４４，０９３号；同第７，１３２，５１１号；同第７，２４７，３０１号；同第７，５９５，３７８号；同第７，７２３，４８４号；同第７，９３９，０７２号；および同第７，９６０，５１６号に記載されている。ＥＧＦＲ阻害剤抗体の具体的な限定されない例としては、セツキシマブ、パニツムマブ、ザルツムマブ、ニモツズマブ、およびマツズマブ、およびそれらのフラグメントまたは変異体を含む抗体が挙げられる。特定の実施形態では、抗体は、セツキシマブ（エルビタックス（登録商標））、またはそのフラグメントまたは変異体である。セツキシマブは、ヒトＩｇＧ１重鎖およびκ軽鎖定常（フレームワーク）領域を含むヒトＥＧＦＲのＮ末端部分に特異的な２２５ネズミＥＧＦＲモノクローナル抗体のＦｖ（可変；抗原結合）領域で構成されている。
【００５３】
また、ＥＧＦＲの小分子阻害剤、例えば、ＥＧＦＲキナーゼ活性のチロシンキナーゼ阻害剤も含まれる。小分子ＥＧＦＲ阻害剤の限定されない例としては、エルロチニブ、ゲフィチニブ、アファチニブ、ラパチニブ、オシメルチニブ、ブリガチニブ、およびイコチニブが挙げられる。従って、ある特定の実施形態では、ＥＧＦＲ阻害剤は、任意の１または複数の前述の抗体または小分子である。
【００５４】
ＭＥＫ１／２。マイトジェン活性化プロテインキナーゼ（ＭＡＰＫ）カスケードは、正常な細胞増殖の調節、生存、および分化に関与する重要なシグナル伝達経路である。ＭＡＰＫカスケードの異常な調節は、癌およびその他のヒト疾患の原因となる。特に、細胞外シグナル調節キナーゼ（ＥＲＫ）ＭＡＰＫ経路は、治療標的として多くの癌に関与してきた。ＥＲＫは、Ｒａｆセリン／トレオニンキナーゼによって活性化される、進化的に保存されたシグナル伝達モジュールの下流コンポーネントである。Ｒａｆは、ＭＡＰＫ／ＥＲＫキナーゼ（ＭＥＫ）１／２二重特異性プロテインキナーゼを活性化させ、これは次にＥＲＫ１／２を活性化させる。ヒト癌におけるＲａｆの変異活性化は、ヒトの腫瘍形成におけるこの経路の重要な役割をサポートする。さらに、Ｒａｆ−ＭＥＫ−ＥＲＫ経路は、ヒト癌において最も頻繁に変異するがん遺伝子であるＲａｓ  ｓｍａｌｌ  ＧＴＰａｓｅの重要な下流エフェクターである。最後に、Ｒａｓは、上皮増殖因子受容体（ＥＧＦＲ）の重要な下流エフェクターであり、幅広い種類のヒト癌において突然変異によって活性化し、かつ／または過剰発現する。ＥＲＫ活性化はまた、ＥＧＦＲリガンドの発現の上方制御も促進し、腫瘍増殖に不可欠な自己分泌成長ループを促進する。
【００５５】
従って、ある特定の実施形態は、例えば、ＭＥＫ１／２二重特異性プロテインキナーゼを阻害することにより、ＥＧＦＲ−Ｒａｓ−Ｒａｆ−ＭＥＫ−ＥＲＫシグナル伝達経路を調節する（例、阻害する）ことに関する。そのため、一部の実施形態には、ＭＥＫ１および／またはＭＥＫ２を阻害する小分子が含まれる。小分子ＭＥＫ１／２阻害剤の限定されない例としては、トラメチニブ、セルメチニブ、コビメチニブ、およびビニメチニブが挙げられる。ＭＥＫ１およびＭＥＫ２阻害剤のさらなる例は、例えば、参照により組み込まれる米国特許出願公開第２００９／０１２４５９５号；米国特許出願公開第２００９／０２４６１９８号；および米国特許出願公開第２０１０／０００４２３４号に記載されている。
【００５６】
ＣＤＫ４／６。サイクリン依存性キナーゼ（ＣＤＫ）は、細胞周期の調節に役割を果たすプロテインキナーゼのファミリーである。ＣＤＫ４およびＣＤＫ６は、細胞周期の細胞Ｇ１期の進行およびＧ１／Ｓの移行を調節する。ＣＤＫ４およびＣＤＫ６は、リン酸化し、従って腫瘍抑制因子である網膜芽細胞腫タンパク質の活性を調節することが示されており、多様な腫瘍で過剰発現されるか、そうでなければ不均衡である。例えば、ＣＤＫ４およびＣＤＫ６の過剰発現は、細胞周期および細胞代謝の調節解除を含む、癌のある特定の特徴を癌細胞に提供することができる。
【００５７】
従って、ある特定の実施形態は、例えば、ＣＤＫ４および／またはＣＤＫ６キナーゼを阻害することにより、ＣＤＫ４／６調節経路を調節する（例、阻害する）ことに関する。タンパク質のセリンまたはトレオニン残基をリン酸化するＣＤＫ４／６の能力または活性を阻害する薬剤、あるいはシグナル経路に関与するその他のタンパク質／リガンドとＣＤＫ４／６の相互作用を阻害する薬剤が含まれる。ＣＤＫ４およびＣＤＫ６はサイクリンＤと複合体を形成して、Ｇ１期からＳ期への細胞周期進行を調節する。ＣＤＫ４は、網膜芽細胞腫（Ｒｂ）、ＣＤＣ３７、ＣＤＫＮ１Ｂ、ＣＤＫＮ２Ｂ、ＣＤＫＮ２Ｃ、ＣＥＢＰＡ、ＣＣＮＤ１、ＣＣＮＤ３、ＤＢＮＬ、ＭｙｏＤ、Ｐ１６、ＰＣＮＡ、およびＳＥＲＴＡＤ１と相互作用することが示されている。ＣＤＫ６は、網膜芽細胞腫（ＲＢ）、ＣＤＫＮ２Ｃ、ＰＰＭ１Ｂ、サイクリンＤ３、サイクリンＤ１、およびＰＰＰ２ＣＡと相互作用することが示されている。従って、ある特定の実施形態では、ＣＤＫ４／６阻害剤は、ＣＤＫ４および／またはＣＤＫ６と、前述のタンパク質またはリガンドの１つまたは複数との相互作用を低下させる。
【００５８】
そのため、一部の実施形態には、ＣＤＫ４および／またはＣＤＫ６を阻害する小分子が含まれる。小分子ＣＤＫ４／６阻害剤の限定されない例としては、リボシクリブ、アベマシクリブ、およびパルボシクリブが挙げられる。ＣＤＫ４／６阻害剤のさらなる例は、例えば、参照により組み込まれる国際公開第２００７／１４０２２２号；国際公開第２０１０／０２０６７５号；および米国特許出願公開第２０１３／００３５３３６号に記載されている。
【００５９】
抗体。一部の実施形態では、上記のように、薬剤は、抗体または「その抗原結合フラグメント」である。抗体または抗原結合フラグメントは、本質的にどんな種類のものであってもよい。当技術分野で周知のように、抗体は、免疫グロブリン分子の可変領域に位置する少なくとも１つのエピトープ認識部位を通じて標的と特異的結合する能力がある免疫グロブリン分子である。ある特定の実施形態では、標的はＥＧＦＲ（例、ＥＧＦＲのリガンド結合ドメイン）、ＥＧＲ、ＭＥＫ１、ＭＥＫ２、ＣＤＫ４、ＣＤＫ６、またはそれらの任意の組合せ、またはその任意のリガンドである。従って、ある特定の実施形態では、抗体は、本明細書に記載される標的に、約または少なくとも約０．０１、０．０５、０．１、０．２、０．３、０．４、０．５、０．６、０．７、０．８、０．９、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、４０、または５０ｎＭ、あるいは約０．０１、０．０５、０．１、０．２、０．３、０．４、０．５、０．６、０．７、０．８、０．９、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、４０、または５０ｎＭ未満の結合親和性（Ｋｄ）で特異的に結合する。ある特定の実施形態では、本明細書に記載され、当技術分野で公知のように、抗体（またはその抗原結合フラグメント）は、ＥＧＦＲ、ＭＥＫ１、ＭＥＫ２、ＣＤＫ４、ＣＤＫ６、またはその任意の組合せ（その任意のリガンド（例、ＥＧＲ）を含む）と特異的に結合し、かつ／またはそれらを阻害する。
【００６０】
本明細書において使用される、用語「抗体」は、無傷のポリクローナル抗体またはモノクローナル抗体だけでなく、それらのフラグメント（例えばｄＡｂ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖなど）、単鎖（ＳｃＦｖ）、その合成変異体、天然に存在する変異体、要求される特異性の抗原結合フラグメントを有する抗体部分を含む融合タンパク質、ヒト化抗体、キメラ抗体、および、要求される特異性の抗原結合部位またはフラグメント（エピトープ認識部位）を含む免疫グロブリン分子の任意のその他の修飾された構成も包含する。抗体（およびその抗原結合フラグメント）のある特定の特性および特徴は、本明細書においてより詳細に説明されている。
【００６１】
用語「抗原結合フラグメント」とは、本明細書において使用される場合、目的の抗原に結合する免疫グロブリン重鎖および／または軽鎖の少なくとも１つのＣＤＲを含有するポリペプチド断片をさす。この点について、本明細書に記載される抗体の抗原結合フラグメントは、標的分子に結合する抗体のＶＨおよびＶＬ配列の１、２、３、４、５、または６つ全てのＣＤＲを含み得る。
【００６２】
用語「抗原」とは、抗体などの選択的結合剤に結合することができ、さらに、その抗原のエピトープに結合できる抗体を産生するために動物において使用することができる分子または分子の一部をさす。抗原は、１つまたは複数のエピトープを有し得る。
【００６３】
用語「エピトープ」には、免疫グロブリンまたはＴ細胞受容体と特異的に結合する能力のある任意の決定基、好ましくはポリペプチド決定基が含まれる。エピトープは、抗体によって結合される抗原の領域である。ある特定の実施形態では、エピトープ決定基には、アミノ酸、糖側鎖、ホスホリル基、またはスルホニル基などの分子の化学的に活性な表面基が含まれ、ある特定の実施形態では、エピトープ決定基は特定の三次元構造特性、および／または特定の電荷特性を有することがある。エピトープは、抗原の一次構造に関して連続または不連続であり得る。
【００６４】
抗体などの分子は、この分子が別の細胞または物質に反応または会合するよりも、特定の細胞または物質とより頻繁に、より迅速に、より長期間、および／またはより高い親和性で反応または会合する場合に、「特異的結合」または「優先的結合」を示すと言われる。抗体が他の物質に結合するよりも、例えば統計的に有意な量で、より高い親和性、結合力で、より敏速に、かつ／またはより長期間結合する場合、抗体は標的に「特異的に結合する」または「優先的に結合する」。例として、特定のエピトープに特異的または優先的に結合する抗体は、その抗体が他のエピトープに結合するよりも高い親和性、結合力で、より敏速に、かつ／またはより長期間その特定のエピトープに結合する抗体である。また、この定義を読むことにより、例えば、第１の標的に特異的にまたは優先的に結合する抗体（または部分またはエピトープ）は、第２の標的に特異的にまたは優先的に結合してもしなくてもよいことが理解される。したがって、「特異的結合」または「優先的結合」は、排他的結合を（含んでもよいが）必ずしも必要としない。一般に、必ずしもそうではないが、結合への言及は優先的結合を意味する。
【００６５】
免疫学的結合とは、一般に、例えば限定ではなく例証として、静電性、イオン性、親水性および／または疎水性の引力または斥力、立体力（ｓｔｅｒｉｃ  ｆｏｒｃｅｓ）、水素結合、ファンデルワールス力、およびその他の相互作用の結果として、免疫グロブリン分子とそれに対して免疫グロブリンが特異的である抗原との間に生じる種類の非共有相互作用をさす。免疫学的結合相互作用の強度、または親和性は、相互作用の解離定数（Ｋｄ）で表すことができ、Ｋｄが小さいほど親和性は高くなる。選択されたポリペプチドの免疫学的結合特性は、当技術分野で周知の方法を用いて数量化することができる。そのような方法の１つは、抗原結合部位／抗原複合体の形成速度および解離速度を測定することを伴い、これらの速度は、複合体のパートナーの濃度、相互作用の親和性、および両方向の速度に等しく影響を及ぼす幾何的パラメータに依存する。従って、「オン速度定数」（Ｋｏｎ）と「オフ速度定数」（Ｋｏｆｆ）の両方は、濃度ならびに実際の会合および解離速度の計算によって求めることができる。Ｋｏｆｆ／Ｋｏｎの比は、親和性に関係しない全てのパラメータを消すことを可能にするので、解離定数Ｋｄに等しい。
【００６６】
抗体は、当業者に公知の多様な技法のいずれかによって調製され得る。例えば、Ｈａｒｌｏｗ  ａｎｄ  Ｌａｎｅ，Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ，１９８８を参照されたい。目的のポリペプチドに特異的なモノクローナル抗体は、例えば、Ｋｏｈｌｅｒ  ａｎｄ  Ｍｉｌｓｔｅｉｎ，Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．６：５１１−５１９，１９７６の技法、およびそれに対する改善を使用して調製することができる。マウスなどのトランスジェニック動物を利用してヒト抗体を発現させる方法も含まれる。例えば、Ｎｅｕｂｅｒｇｅｒら、Ｎａｔｕｒｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  １４：８２６，１９９６；Ｌｏｎｂｅｒｇら、Ｈａｎｄｂｏｏｋ  ｏｆ  Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ  １１３：４９−１０１，１９９４；およびＬｏｎｂｅｒｇら、Ｉｎｔｅｒｎａｌ  Ｒｅｖｉｅｗ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  １３：６５−９３，１９９５を参照されたい。特定の例としては、ＲＥＧＥＮＥＲＥＸ（登録商標）によるＶＥＬＯＣＩＭＭＵＮＥ（登録商標）プラットフォーム（例えば、米国特許第６，５９６，５４１号参照）が挙げられる。
【００６７】
抗体は、ファージディスプレイまたは酵母ディスプレイライブラリーを用いることによって生成または同定することもできる（例えば、米国特許第７，２４４，５９２号；Ｃｈａｏら、Ｎａｔｕｒｅ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ．１：７５５−７６８，２００６参照）。利用可能なライブラリーの限定されない例としては、クローン化ライブラリーまたは合成ライブラリー、例えば、ヒト抗体レパートリーの構造的多様性が７つの重鎖と７つの軽鎖可変領域遺伝子によって表されている、Ｈｕｍａｎ  Ｃｏｍｂｉｎａｔｏｒｉａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ｌｉｂｒａｒｙ（ＨｕＣＡＬ）などが挙げられる。これらの遺伝子の組合せにより、４９のフレームワークがマスターライブラリーに生成される。これらのフレームワークに高度に可変性の遺伝子カセット（ＣＤＲ＝相補性決定領域）を重ねることにより、膨大なヒト抗体のレパートリーを再現することができる。また、軽鎖可変領域、重鎖ＣＤＲ−３、重鎖ＣＤＲ−１の多様性をコードする合成ＤＮＡ、および重鎖ＣＤＲ−２の多様性をコードする合成ＤＮＡをコードするヒトドナー由来のフラグメントで設計されたヒトライブラリーも含まれる。使用に適したその他のライブラリーは、当業者に明白であろう。
【００６８】
ある特定の実施形態では、本明細書に記載される抗体およびその抗原結合フラグメントには、ＣＤＲを支持し、互いに対するＣＤＲの空間的関係を規定する重鎖および軽鎖フレームワーク領域（ＦＲ）のセットの間にそれぞれ挿入された重鎖および軽鎖のＣＤＲセットが含まれる。本明細書において使用される、用語「ＣＤＲセット」とは、重鎖または軽鎖Ｖ領域の３つの超可変領域をさす。重鎖または軽鎖のＮ末端から進んで、これらの領域は、それぞれ「ＣＤＲ１」、「ＣＤＲ２」、および「ＣＤＲ３」と表される。そのため、抗原結合部位には、重鎖および軽鎖Ｖ領域のそれぞれからのＣＤＲセットを含む６つのＣＤＲが含まれる。単一のＣＤＲ、（例、ＣＤＲ１、ＣＤＲ２またはＣＤＲ３）を含むポリペプチドは、本明細書において「分子認識単位」と呼ばれる。多数の抗原抗体複合体の結晶解析により、ＣＤＲのアミノ酸残基が結合した抗原と広範囲に接触し、最も広範な抗原接触は重鎖ＣＤＲ３との接触であることが示された。従って、分子認識単位は主に抗原結合部位の特異性を担う。
【００６９】
本明細書において使用される、用語「ＦＲセット」とは、重鎖または軽鎖Ｖ領域のＣＤＲセットのＣＤＲを構成する４つの隣接するアミノ酸配列をさす。一部のＦＲ残基は、結合した抗原と接触することがある；しかし、ＦＲはＶ領域を抗原結合部位、特にＣＤＲに直接隣接するＦＲ残基に折り畳むことを主に担う。ＦＲ内では、ある特定のアミノ残基およびある特定の構造的特徴が非常に高度に保存されている。この点について、全てのＶ領域配列は約９０アミノ酸残基の内部ジスルフィドループを含む。Ｖ領域が結合部位に折り畳まれると、ＣＤＲは抗原結合表面を形成する突出したループモチーフとして表示される。正確なＣＤＲアミノ酸配列に関係なく、ＣＤＲループをある特定の「基準」構造に折り畳んだ形状に影響を及ぼす、ＦＲの保存された構造領域があることが一般に認識されている。さらに、ある特定のＦＲ残基は、抗体の重鎖および軽鎖の相互作用を安定化する、非共有結合性のドメイン間接触に関与することが公知である。
【００７０】
免疫グロブリン可変ドメインの構造および位置は、Ｋａｂａｔ，Ｅ．Ａ．ら、Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ．第４版、アメリカ合衆国保健福祉省、１９８７年、およびその更新版を参照して決定することができる。
【００７１】
また、均一な抗体集団をさす「モノクローナル」抗体も含まれ、ここで、モノクローナル抗体は、エピトープの選択的結合に関与するアミノ酸（天然に存在するアミノ酸および天然に存在しないアミノ酸）から構成されている。モノクローナル抗体は、高度に特異的で、単一のエピトープに対して作られている。用語「モノクローナル抗体」は、無傷のモノクローナル抗体および全長モノクローナル抗体だけでなく、そのフラグメント（例えばＦａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖなど）、単鎖（ＳｃＦｖ）、その変異体、抗原結合部分を含む融合タンパク質、ヒト化モノクローナル抗体、キメラモノクローナル抗体、ならびに、要求される特異性の抗原結合フラグメント（エピトープ認識部位）およびエピトープに結合する能力を含む免疫グロブリン分子の任意のその他の修飾された構成も包含する。抗体の供給源または作製される様式（例、ハイブリドーマ、ファージ選択、組換え発現、トランスジェニック動物による）に関して、限定されることは意図されていない。この用語には、「抗体」の定義の下で上述される全免疫グロブリンならびにフラグメント等が含まれる。
【００７２】
タンパク質分解酵素パパインは、ＩｇＧ分子を優先的に切断して数個のフラグメントを生成し、そのうちの２つ（Ｆ（ａｂ）フラグメント）はそれぞれ無傷の抗原結合部位を含む共有結合性ヘテロ二量体を含む。酵素ペプシンは、ＩｇＧ分子を切断して、両方の抗原結合部位を含むＦ（ａｂ’）２フラグメントをはじめとする数個のフラグメントを提供することが可能である。本発明のある特定の実施形態に従って使用するためのＦｖフラグメントは、ＩｇＭ免疫グロブリン分子の、そして稀にＩｇＧまたはＩｇＡ免疫グロブリン分子の優先的タンパク質分解切断によって生成され得る。しかし、Ｆｖフラグメントは、当技術分野で公知の組換え手法を使用して、より一般的に誘導される。Ｆｖフラグメントには、天然抗体分子の抗原認識および結合能力の大半を保持する抗原結合部位をはじめとする、非共有結合性ＶＨ：：ＶＬヘテロ二量体が含まれる。Ｉｎｂａｒら、ＰＮＡＳ  ＵＳＡ．６９：２６５９−２６６２，１９７２；Ｈｏｃｈｍａｎら、Ｂｉｏｃｈｅｍ．１５：２７０６−２７１０，１９７６；およびＥｈｒｌｉｃｈら、Ｂｉｏｃｈｅｍ．１９：４０９１−４０９６，１９８０を参照されたい。
【００７３】
ある特定の実施形態では、単鎖ＦｖまたはｓｃＦＶ抗体が企図される。例えば、κ体（Ｉｌｌら、Ｐｒｏｔ．Ｅｎｇ．１０：９４９−５７，１９９７）；ミニボディ（Ｍａｒｔｉｎら、ＥＭＢＯ  Ｊ  １３：５３０５−９，１９９４）；ダイアボディ（Ｈｏｌｌｉｇｅｒら、ＰＮＡＳ９０：６４４４−８，１９９３）；またはＪａｎｕｓｉｎｓ（Ｔｒａｕｎｅｃｋｅｒら、ＥＭＢＯ  Ｊ  １０：３６５５−５９，１９９１；およびＴｒａｕｎｅｃｋｅｒら、Ｉｎｔ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ  ｓｕｐｐｌ．７：５１−５２，１９９２）を、所望の特異性を有する抗体の選択に関して本願の教示に従い、標準的な分子生物学の技法を使用して調製することができる。
【００７４】
単鎖Ｆｖ（「ｓＦｖ」）ポリペプチドは、共有結合的に結合したＶＨ：：ＶＬヘテロ二量体であり、ペプチドをコードするリンカーによって連結されたＶＨコード遺伝子およびＶＬコード遺伝子を含む遺伝子融合から発現する。Ｈｕｓｔｏｎら（ＰＮＡＳ  ＵＳＡ．８５（１６）：５８７９−５８８３，１９８８）。自然に凝集されるが化学的に分離される抗体Ｖ領域由来の軽鎖および重鎖ポリペプチドを、抗原結合部位の構造と実質的に類似した三次元構造に折り畳まれるｓＦｖ分子に変換するための化学構造を識別するための多くの方法が記載されている。例えば、Ｈｕｓｔｏｎらに対する米国特許第５，０９１，５１３号および同第５，１３２，４０５号；ならびにＬａｄｎｅｒらに対する米国特許第４，９４６，７７８号を参照されたい。
【００７５】
ある特定の実施形態では、本明細書に記載される抗体は、「ダイアボディ」の形態である。ダイアボディは、ポリペプチドの多量体であり、それぞれのポリペプチドは免疫グロブリン軽鎖の結合領域を含む第１のドメインと、免疫グロブリン重鎖の結合領域を含む第２のドメインを含み、これら２つのドメインは（例えば、ペプチドリンカーによって）連結されているが、互いに会合して抗原結合部位を形成することはできない：抗原結合部位は、多量体の中の１つのポリペプチドの第１のドメインと、多量体の中の別のポリペプチドの第２のドメインとの会合によって形成される（国際公開第９４／１３８０４号）。抗体のｄＡｂフラグメントは、ＶＨドメインからなる（Ｗａｒｄら、Ｎａｔｕｒｅ  ３４１：５４４−５４６，１９８９）。ダイアボディおよびその他の多価もしくは多重特異性フラグメントは、例えば、遺伝子融合によって構築することができる（国際公開第９４／１３８０４号；およびＨｏｌｌｉｇｅｒら、ＰＮＡＳ  ＵＳＡ．９０：６４４４−６４４８，１９９３参照））
【００７６】
ＣＨ３ドメインと結合したｓｃＦｖを含むミニボディも含まれる（Ｈｕら、Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．５６：３０５５−３０６１，１９９６参照）。Ｗａｒｄら、Ｎａｔｕｒｅ．３４１：５４４−５４６，１９８９；Ｂｉｒｄら、Ｓｃｉｅｎｃｅ．２４２：４２３−４２６，１９８８；Ｈｕｓｔｏｎら、ＰＮＡＳ  ＵＳＡ．８５：５８７９−５８８３，１９８８）；ＰＣＴ／ＵＳ９２／０９９６５号；国際公開第９４／１３８０４号；およびＲｅｉｔｅｒら、Ｎａｔｕｒｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈ．１４：１２３９−１２４５，１９９６も参照されたい。
【００７７】
二重特異性抗体を使用する場合、これらは多様な方法で製造することのできる従来の二重特異性抗体（Ｈｏｌｌｉｇｅｒ  ａｎｄ  Ｗｉｎｔｅｒ，Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｏｐｉｎｉｏｎ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．４：４４６−４４９，１９９３）、例えば化学的にまたはハイブリッドハイブリドーマから調製されたものであってもよいし、または上記の二重特異性抗体フラグメントのいずれかであってもよい。ダイアボディおよびｓｃＦｖは、Ｆｃ領域を含まずに、可変ドメインのみを使用して構築することができ、潜在的に抗イディオタイプ反応の影響を減少させる。
【００７８】
二重特異性全抗体とは対照的に、二重特異性ダイアボディも大腸菌で容易に構築させ発現させることができるため、特に有用であり得る。適切な結合特異性のダイアボディ（および抗体フラグメントなどの多くのその他のポリペプチド）は、ライブラリーのファージディスプレイを使用して容易に選択することができる（国際公開第９４／１３８０４号）。ダイアボディの一方のアームを、例として抗原Ｘに対する特異性で一定に保つならば、他方のアームを変化させて適切な特異性の抗体を選択するライブラリーを作成することができる。二重特異性全抗体は、ノブ・イントゥ・ホールズ（ｋｎｏｂｓ−ｉｎｔｏ−ｈｏｌｅｓ）技術によって作製されてよい（Ｒｉｄｇｅｗａｙら、Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｅｎｇ．，９：６１６−６２１，１９９６）。
【００７９】
ある特定の実施形態では、本明細書に記載される抗体は、ＵｎｉＢｏｄｙ（登録商標）の形態で提供されてよい。ＵｎｉＢｏｄｙ（登録商標）は、ヒンジ領域が除去されたＩｇＧ４抗体である（ＧｅｎＭａｂ  Ｕｔｒｅｃｈｔ，Ｔｈｅ  Ｎｅｔｈｅｒｌａｎｄｓ参照；例えば、米国特許出願公開第２００９０２２６４２１号も参照）。この抗体技術は、現在の小型抗体形式よりも長い治療ウィンドウが予想される、安定した小型の抗体形式を作成する。ＩｇＧ４抗体は、不活性であるとみなされ、従って免疫系と相互作用しない。完全ヒトＩｇＧ４抗体は、対応する無傷のＩｇＧ４（ＧｅｎＭａｂ、ユトレヒト）と比較して異なる安定性を有する半分子フラグメントを得るために、抗体のヒンジ領域を除去することにより修飾されてよい。ＩｇＧ４分子を半分にすると、同族抗原（例、疾患標的）に結合することができるＵｎｉＢｏｄｙ（登録商標）の１つの領域だけが残るため、ＵｎｉＢｏｄｙ（登録商標）は、標的細胞の１つの部位にのみ一価結合する。ある特定の癌細胞表面抗原については、この一価の結合は、同じ抗原特異性を有する二価抗体を使用して見られるように、癌細胞の増殖を刺激しない場合があり、そのため、ＵｎｉＢｏｄｙ（登録商標）技術は、従来の抗体による処置に難治性であり得るいくつかの種類の癌の処置選択肢を提供することがあり得る。ＵｎｉＢｏｄｙ（登録商標）が小型であることは、一部の形態の癌を処置する際に大きな利点となり得、大型の固形腫瘍への分子のより良い分布を可能にし、有効性を増大させる可能性がある。
【００８０】
ある特定の実施形態では、本明細書において提供される抗体は、ナノボディの形態をとり得る。ミニボディは単一遺伝子によってコードされ、ほぼ全ての原核生物および真核生物の宿主、例えば大腸菌（米国特許第６，７６５，０８７号参照）、カビ（例えばアスペルギルスまたはトリコデルマ）および酵母（例えばサッカロミセス、クルイベロマイセス（Ｋｌｕｙｖｅｒｍｙｃｅｓ）、ハンゼヌラまたはピキア（米国特許第６，８３８，２５４号参照）において効率的に製造される。製造プロセスは拡張可能であり、数キログラムの量のナノボディが製造されてきた。ナノボディは、長い有効期間を有するすぐに使用できる溶液として処方されることもある。ナノクローン法（国際公開第０６／０７９３７２号参照）は、Ｂ細胞の自動化されたハイスループット選択に基づいて、所望の標的に対してナノボディを生成する独自の方法である。
【００８１】
ある特定の実施形態では、抗体またはその抗原結合フラグメントはヒト化されている。これらの実施形態は、一般に組換え手法を用いて調製され、抗原結合部位が非ヒト種由来の免疫グロブリンに由来し、分子の残りの免疫グロブリン構造がヒト免疫グロブリンの構造および／または配列に基づいているキメラ分子をさす。抗原結合部位は、定常ドメインに融合した完全な可変ドメインか、または可変ドメイン内の適切なフレームワーク領域にグラフトされたＣＤＲのみのいずれかを含み得る。エピトープ結合部位は、野生型であってもよいし、１つまたは複数のアミノ酸置換によって修飾されていてもよい。これにより、ヒト個体における免疫原としての定常領域は排除されるが、外来可変領域に対する免疫応答の可能性は残る（ＬｏＢｕｇｌｉｏら、ＰＮＡＳ  ＵＳＡ  ８６：４２２０−４２２４，１９８９；Ｑｕｅｅｎら、ＰＮＡＳ  ＵＳＡ．８６：１００２９−１００３３，１９８８；Ｒｉｅｃｈｍａｎｎら、Ｎａｔｕｒｅ．３３２：３２３−３２７，１９８８）。抗体をヒト化するための実例となる方法としては、米国特許第７，４６２，６９７号に記載される方法が挙げられる。
【００８２】
別のアプローチは、ヒト由来定常領域を提供するだけでなく、可変領域も同様に改変して、それらを可能な限りヒトの形態に接近するように再形成することに焦点を当てる。重鎖と軽鎖の両方の可変領域が、問題のエピトープに応じて変化して結合能力を決定する３つの相補性決定領域（ＣＤＲ）を含み、これらの相補性決定領域が、所与の種において比較的保存されていてＣＤＲの足場を提供すると推定される４つのフレームワーク領域（ＦＲ）に隣接していることは公知である。非ヒト抗体が特定のエピトープに関して作製される場合、可変領域は、改変させるヒト抗体に存在するＦＲに非ヒト抗体由来のＣＤＲをグラフトすることによって「再形成」または「ヒト化」することができる。様々な抗体へのこのアプローチの応用は、Ｓａｔｏら、Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．５３：８５１−８５６，１９９３；Ｒｉｅｃｈｍａｎｎら、Ｎａｔｕｒｅ  ３３２：３２３−３２７，１９８８；Ｖｅｒｈｏｅｙｅｎら、Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２３９：１５３４−１５３６，１９８８；Ｋｅｔｔｌｅｂｏｒｏｕｇｈら、Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ．４：７７３−３７８３，１９９１；Ｍａｅｄａら、Ｈｕｍａｎ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  Ｈｙｂｒｉｄｏｍａ  ２：１２４−１３４，１９９１；Ｇｏｒｍａｎら、ＰＮＡＳ  ＵＳＡ．８８：４１８１−４１８５，１９９１；Ｔｅｍｐｅｓｔら、Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  ９：２６６−２７１，１９９１；Ｃｏら、ＰＮＡＳ  ＵＳＡ．８８：２８６９−２８７３，１９９１；Ｃａｒｔｅｒら、ＰＮＡＳ  ＵＳＡ．８９：４２８５−４２８９，１９９２；およびＣｏら、Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４８：１１４９−１１５４，１９９２によって報告されている。いくつかの実施形態では、ヒト化抗体は全てのＣＤＲ配列を保存している（例えば、マウス抗体由来の６つ全てのＣＤＲを含むヒト化マウス抗体）。その他の実施形態では、ヒト化抗体は、元の抗体に関して変更された１つまたは複数（１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、６つ）のＣＤＲを有する。これらは元の抗体の１つまたは複数のＣＤＲに「由来する」１つまたは複数のＣＤＲとも呼ばれる。
【００８３】
ある特定の実施形態では、抗体はキメラ抗体であってよい。この点について、キメラ抗体は、異なる抗体の異種Ｆｃ部分に作動可能に連結されるか、そうでなければ融合される抗体の抗原結合フラグメントで構成される。ある特定の実施形態では、異種Ｆｃドメインはヒト起源である。その他の実施形態では、異種Ｆｃドメインは、ＩｇＡ（サブクラスＩｇＡ１およびＩｇＡ２を含む）、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ（サブクラスＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、およびＩｇＧ４を含む）、およびＩｇＭを含む、親抗体とは異なるＩｇクラスに由来し得る。さらなる実施形態では、異種Ｆｃドメインは、１つまたは複数の異なるＩｇクラス由来のＣＨ２およびＣＨ３ドメインで構成され得る。ヒト化抗体に関して上に記したように、キメラ抗体の抗原結合フラグメントは、本明細書に記載される抗体の１つまたは複数のＣＤＲ（例、本明細書に記載される抗体の１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、または６つのＣＤＲ）しか含まないか、あるいは可変ドメイン全体（ＶＬ、ＶＨまたは両方）を含み得る。
【００８４】
小分子。特定の実施形態では、阻害剤またはアンタゴニストは「小分子」である。小分子とは、合成または生物学的起源（生体分子）の有機化合物をさすが、一般にポリマーではない。有機化合物とは、その分子が炭素を含む大きなクラスの化学化合物をさし、一般に炭酸塩、炭素の単純な酸化物、またはシアン化物のみを含む分子を除く。「生体分子」とは、一般に、生きている生物によって産生される有機分子をさし、ペプチド、多糖類、核酸などの大型のポリマー分子（生体高分子）、ならびに一次二次代謝産物、脂質、リン脂質、糖脂質、ステロール、グリセロ脂質、ビタミン、およびホルモンなどの小分子が挙げられる。「ポリマー」とは、一般に、共有化学結合によって通常接続されている繰り返し構造単位で構成される大型の分子または高分子をさす。
【００８５】
ある特定の実施形態では、小分子の分子量は、約１０００〜２０００ダルトン未満、一般に約３００〜７００ダルトンの間であり、約５０、１００、１５０、２００、２５０、３００、３５０、４００、４５０、５００、５５０、５００、６５０、６００、７５０、７００、８５０、８００、９５０、１０００または２０００ダルトンが含まれる。
【００８６】
ある特定の小分子は、抗体について記載した「特異的結合」特性を有し得る。例として、一部の実施形態では、小分子は、本明細書に記載される標的に、約または少なくとも約０．０１、０．０５、０．１、０．２、０．３、０．４、０．５、０．６、０．７、０．８、０．９、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、４０、または５０ｎＭ、あるいは約０．０１、０．０５、０．１、０．２、０．３、０．４、０．５、０．６、０．７、０．８、０．９、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、４０、または５０ｎＭ未満の結合親和性（Ｋｄ）で特異的に結合する。ある特定の実施形態では、本明細書に記載され、当技術分野で公知のように、小分子は、ＥＧＦＲ、ＭＥＫ１、ＭＥＫ２、ＣＤＫ４、ＣＤＫ６、またはその任意の組合せ（その任意のリガンド（例、ＥＧＲ）を含む）と特異的に結合し、かつ／またはそれらを阻害する。
使用方法および治療用組成物
【００８７】
上記のように、本開示の実施形態は、少なくとも２つの薬剤のある特定の組み合わせが、個々の薬剤単独と比較して、原発細胞癌の生体外（ｅｘ  ｖｉｖｏ）モデルにおいて、癌細胞増殖阻害活性を有意に、かつしばしば相乗的に増加させるという発見に関する。そのため、一部の実施形態は、上皮増殖因子受容体（ＥＧＦＲ）阻害剤、マイトジェン活性化プロテインキナーゼ（ＭＥＫ）１／２阻害剤、およびサイクリン依存性キナーゼ（ＣＤＫ）４／６阻害剤から選択される２つまたはそれを超える薬剤の組合せを対象に投与することを含む、それを必要とする対象において癌を処置し、癌の症状を寛解させ、または癌の進行を阻害する方法に関する。前述の薬剤の特定の例は本明細書に記載されている。
【００８８】
ある特定の方法には、ＥＧＦＲ阻害剤とＭＥＫ１／２阻害剤の組合せを投与することが含まれる。一部の方法には、ＥＧＦＲ阻害剤とＣＤＫ４／６阻害剤の組合せを投与することが含まれる。特定の方法には、ＭＥＫ１／２阻害剤とＣＤＫ４／６阻害剤の組合せを投与することが含まれる。ある特定の方法には、ＥＧＦＲ阻害剤、ＭＥＫ１／２阻害剤、およびＣＤＫ４／６阻害剤の組合せを投与することが含まれる。場合によっては、薬剤は別々に、例えば別々の治療用組成物中に、同じまたは異なる時間に投与される。一部の実施形態では、薬剤は、同じ治療用組成物の一部として、同時に投与される。
【００８９】
一部の実施形態では、薬剤の組合せは、それぞれの個別の薬剤単独と比較して、約または少なくとも約５、１０、１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、６０、７０、８０、９０、１００、２００、３００、４００、５００、６００、７００、８００、９００、１０００、２０００％またはそれを超えて、癌細胞の増殖を低下させ、かつ／または癌細胞の死滅を増加させる。一部の実施形態では、薬剤の組合せは、それぞれの個別の薬剤単独と比較して、癌細胞増殖を相乗的に低下させ、かつ／または癌細胞の死滅を相乗的に増加させる。
【００９０】
一部の実施形態では、本明細書に記載される方法および治療用組成物は、対象の生存期間の中央値を少なくとも４週、５週、６週、７週、８週、９週、１０週、１５週、２０週、２５週、３０週、４０週、５０週、６０週、７０週、８０週、９０週、１００週、またはそれを超えて延長させる。ある特定の実施形態では、本明細書に記載される方法および治療用組成物は、対象の生存期間の中央値を少なくとも１年、２年、３年、４年、５年、またはそれを超えて延長させる。一部の実施形態では、本明細書に記載される方法および治療用組成物は、無憎悪生存期間を、２週、３週、４週、５週、６週、７週、８週、９週、１０週、１５週、２０週、２５週、３０週、４０週、５０週、６０週、７０週、８０週、９０週、１００週、またはそれを超えて延長させる。ある特定の実施形態では、本明細書に記載される方法または治療用組成物は、無憎悪生存期間を、１年、２年、３年、４年、５年、またはそれを超えて延長させる。
【００９１】
ある特定の実施形態では、本明細書に記載される方法および治療用組成物は、生存腫瘍の量の統計学的に有意な減少、例えば、少なくとも１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、１００％又はそれ以上の腫瘍量の減少によるか、または走査寸法の変更（例、統計的に有意な減少）によって示される、腫瘍退縮をもたらすのに十分である。ある特定の実施形態では、本明細書に記載される方法および治療用組成物は、安定した疾患をもたらすのに十分である。ある特定の実施形態では、本明細書に記載される方法および治療用組成物は、熟練した臨床医に公知の特定の疾患適応症の症状の臨床的に関連する減少をもたらすのに十分である。
【００９２】
一部の実施形態では、薬剤の組合せは、表Ｅ１〜Ｅ６に記載される組合せから選択される。
【００９３】
本明細書に記載される方法および治療用組成物は、多様な癌の処置で使用され得る。一部の実施形態では、癌は、悪性上皮性腫瘍または癌腫である。一部の実施形態では、癌腫は、上皮性新生物、扁平細胞新生物（扁平上皮癌）、基底細胞新生物（基底細胞癌）、移行上皮癌、腺癌（場合により、形成性胃炎、ＶＩＰ産生腫瘍、胆管細胞癌、肝細胞癌、腺様嚢胞癌、腎細胞癌、またはグラヴィッツ腫瘍）、皮膚付属器新生物、粘膜表皮（ｎｕｃｏｅｐｉｄｅｒｍｏｉｄ）新生物、嚢胞性粘液性または漿液性新生物（ａ  ｃｙｓｔｉｃ，  ｍｕｃｉｎｏｕｓ，  ｏｒ  Ｓｅｒｏｕｓ  Ｎｅｏｐｌａｓｍ）、乳腺組織関連腫瘍、腺房細胞性新生物（ａｃｃｉｎａｒ  ｃｅｌｌ  ｎｅｏｐｌａｓｍ）、および複合上皮性新生物の１つまたは複数から選択される。
【００９４】
一部の実施形態では、癌または癌腫は、結腸または結腸直腸癌、胃癌、肺癌（場合により小細胞肺癌または非小細胞肺癌）、乳癌（例えば、エストロゲン受容体陽性（ＥＲ＋）、エストロゲン受容体陰性（ＥＲ−）、Ｈｅｒ２陽性（Ｈｅｒ２＋）、Ｈｅｒ２陰性（Ｈｅｒ２−）、またはそれらの組合せ、例えば、ＥＲ＋／Ｈｅｒ２＋、ＥＲ＋／Ｈｅｒ２−、ＥＲ−／Ｈｅｒ２＋、またはＥＲ−／Ｈｅｒ２−；あるいは、エストロゲン受容体陰性、プロゲステロン受容体陰性、およびＨｅｒ２陰性である「トリプルネガティブ」乳癌）、膵臓癌、口腔癌、前立腺癌、生殖細胞系の癌、直腸癌、肝癌（場合により肝細胞癌）、腎癌（場合により腎細胞癌）、および卵巣癌の１つまたは複数から選択される。一部の実施形態では、癌または癌腫は、前述のいずれか１つの転移性癌である。
【００９５】
一部の実施形態では、癌または癌腫は、黒色腫（例、転移性黒色腫）、骨癌、中皮腫、白血病（例、リンパ性白血病、慢性骨髄性白血病、急性骨髄性白血病、再発した急性骨髄性白血病）、リンパ腫、肉腫、Ｂ細胞悪性腫瘍、神経膠腫（例、星状細胞腫、乏突起膠腫、上衣細胞腫、または脈絡膜叢乳頭腫）、多形神経膠芽腫（例、巨細胞膠芽腫または膠肉腫）、髄膜腫、下垂体腺腫、前庭神経鞘腫、原発性ＣＮＳリンパ腫、原始神経外胚葉性腫瘍（髄芽腫）、膀胱癌、子宮癌、食道癌、咽頭癌、脳癌、頭頸部癌、子宮頸癌、精巣癌、胃癌、ウイルス誘発性腫瘍、例えば、パピローマウイルス誘発性癌腫（例、子宮頸部癌腫、子宮頸癌）、腺癌、ヘルペスウイルス誘発性腫瘍（例、バーキットリンパ腫、ＥＢＶ誘発性Ｂ細胞リンパ腫）、Ｂ型肝炎誘発性腫瘍（肝細胞癌）、ＨＴＬＶ−１誘発性およびＨＴＬＶ−２誘発性リンパ腫など、聴神経腫瘍、肺癌（例、肺癌腫、気管支癌）、咽頭癌、肛門癌腫、神経膠芽腫、直腸癌腫、星状細胞腫、脳腫瘍、網膜芽細胞腫、基底細胞腫、脳転移、髄芽細胞腫、膣癌、ホジキン症状群、髄膜腫、シュネーベルガー病、下垂体腫瘍、菌状息肉症、カルチノイド、神経鞘腫、棘細胞癌、バーキットリンパ腫、腎癌、胸腺腫、体癌、骨癌、非ホジキンリンパ腫、尿道癌、ＣＵＰ症状群、頭頚部腫瘍、乏突起細胞腫、外陰癌、腸癌、食道癌、いぼ合併症、小腸の腫瘍、頭蓋咽頭腫（ｃｒａｎｉｏｐｈａｒｙｎｇｅｏｍａｓ）、性器腫瘍、子宮内膜癌、肝転移、陰茎癌、舌癌、胆嚢癌、形質細胞腫、および眼瞼腫瘍の１つまたは複数から選択される。一部の実施形態では、癌または癌腫は、前述のいずれか１つの転移性癌である。
【００９６】
一部の実施形態では、癌または癌腫は、ＥＧＦＲに関連する突然変異または変化を有し、少なくとも１つの薬剤はＥＧＦＲ阻害剤である。例としては、ＥＧＦＲ発現または過剰発現癌または癌腫が挙げられる。一部の実施形態では、癌は、ＥＧＦＲ突然変異、例えば、ＥＧＦＲエクソン１９欠失および／またはエクソン２１Ｌ８５８Ｒ置換変異を有する。
【００９７】
一部の実施形態では、癌または癌腫の種類は、表Ｅ１〜Ｅ６から選択され、場合により表Ｅ１〜Ｅ６に記載される対応する薬剤の組合せで処置される。
【００９８】
この癌を処置するための方法は、その他の治療様式と併用することができる。例えば、本明細書に記載される併用療法は、対症療法、放射線療法、手術、移植、ホルモン療法、光線力学療法、抗生物質療法、またはそれらの任意の組み合わせを含む、その他の治療的介入の前、最中、または後に対象に投与され得る。対症療法には、脳浮腫、頭痛、認知機能障害、および嘔吐を減らすための副腎皮質ステロイドの投与、および発作を減らすための抗痙攣薬の投与が含まれる。放射線療法には、全脳照射、分割放射線療法、および放射線手術、例えば、定位放射線手術などが含まれ、これらはさらに従来の手術と併用することができる。
【００９９】
本明細書に記載される１つまたは複数の疾患または状態をもつ対象を識別するための方法は、当技術分野で公知である。
【０１００】
上記のように、ヒト疾患の処置または試験のための生体内使用の場合、本明細書に記載される薬剤は一般に、投与前に１つまたは複数の治療用組成物または医薬組成物に組み込まれる。
【０１０１】
従って、ある特定の実施形態は、本明細書に記載されるＥＧＦＲ阻害剤、ＭＥＫ１／２阻害剤、およびＣＤＫ４／６阻害剤から選択される２つまたはそれを超える（例、３つ、４つ、５つ、６つ）の薬剤の組合せを含む治療用組成物に関する。一部の治療用組成物は、ＥＧＦＲ阻害剤とＭＥＫ１／２阻害剤の組合せを含む。ある特定の治療用組成物は、ＥＧＦＲ阻害剤とＣＤＫ４／６阻害剤の組合せを含む。特定の治療用組成物は、ＭＥＫ１／２阻害剤とＣＤＫ４／６阻害剤の組合せを含む。一部の治療用組成物は、ＥＧＦＲ阻害剤、ＭＥＫ１／２阻害剤、およびＣＤＫ４／６阻害剤の組合せを含む。特定の実施形態では、治療用組成物は、表Ｅ１〜Ｅ６に記載される組合せから選択される薬剤の組合せを含む。
【０１０２】
場合によっては、治療用組成物または医薬組成物は、本明細書に記載される１つまたは複数の薬剤を、薬学的にまたは生理学的に許容され得る担体または賦形剤と組み合わせて含む。ある特定の治療用組成物はさらに、本明細書に記載される少なくとも１つの癌免疫療法剤を含む。
【０１０３】
特定の実施形態では、抗体などの薬剤を含む治療用組成物は、タンパク質ベースまたは重量−重量ベースで実質的に純粋であり、例えば、この組成物の純度はタンパク質ベースまたは重量−重量ベースで少なくとも約８０％、８５％、９０％、９５％、９８％、または９９％である。
【０１０４】
一部の実施形態では、本明細書において提供される抗体は、凝集体を形成せず、望ましい溶解性を有し、かつ／または本明細書に記載され当技術分野で公知の、ヒトにおける使用に適した免疫原性プロファイルを有する。従って、一部の実施形態では、抗体剤を含む治療用組成物は、実質的に凝集体を含まない。例えば、ある特定の組成物は、約１０％未満（タンパク質ベース）の高分子量凝集タンパク質、または約５％未満の高分子量凝集タンパク質、または約４％未満の高分子量凝集タンパク質、または約３％未満の高分子量凝集タンパク質、または約２％未満の高分子量凝集タンパク質、または約１％未満の高分子量凝集タンパク質を含む。一部の組成物は、その見かけの分子量に関して少なくとも約５０％、約６０％、約７０％、約８０％、約９０％または約９５％の単分散である抗体剤を含む。
【０１０５】
一部の実施形態では、抗体剤は、約または少なくとも約０．１ｍｇ／ｍｌ、０．２ｍｇ／ｍｌ、０．３ｍｇ／ｍｌ、０．４ｍｇ／ｍｌ、０．５ｍｇ／ｍｌ、０．６、０．７、０．８、０．９、１ｍｇ／ｍｌ、２ｍｇ／ｍｌ、３ｍｇ／ｍｌ、４ｍｇ／ｍｌ、５ｍｇ／ｍｌ、６ｍｇ／ｍｌ、７ｍｇ／ｍｌ、８ｍｇ／ｍｌ、９ｍｇ／ｍｌ、１０ｍｇ／ｍｌ、１１、１２、１３、１４または１５ｍｇ／ｍｌに濃縮され、バイオ治療用途用に処方される。
【０１０６】
治療用組成物または医薬組成物を調製するために、有効量または望ましい量の１つまたは複数の薬剤を、特定の薬剤および／または投与様式に適していることが当業者に公知の、任意の１つまたは複数の薬学的担体または賦形剤と混合する。薬学的担体は、液体、半液体または固体であってよい。非経口、皮内、皮下または局所適用に使用される溶液または懸濁液には、例えば、滅菌希釈剤（水など）、生理食塩水（例、リン酸緩衝生理食塩水；ＰＢＳ）、固定油、ポリエチレングリコール、グリセリン、プロピレングリコールまたはその他の合成溶剤；抗菌剤（ベンジルアルコールおよびメチルパラベンなど）；抗酸化剤（アスコルビン酸および亜硫酸水素ナトリウムなど）およびキレート剤（エチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ）など）；緩衝液（酢酸塩、クエン酸塩およびリン酸塩など）が含まれ得る。静脈内投与（例えばＩＶ輸液により）される場合、適した担体には、生理食塩水またはリン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）、および増粘剤と可溶化剤、例えば、グルコース、ポリエチレングリコール、ポリプロピレングリコールおよびそれらの混合物などを含有する溶液が含まれる。
【０１０７】
本明細書に記載の薬剤の、純粋な形態または適切な治療用組成物または医薬組成物での投与は、同様の有用性を提供する薬剤の許容された投与様式のいずれかを介して実行され得る。治療用組成物または医薬組成物は、薬剤を含有する組成物を適切な生理学的に許容され得る担体、希釈剤または賦形剤と組み合わせることによって調製されることができ、固体、半固体、液体または気体形態の調製物、例えば、錠剤、カプセル剤、粉剤、顆粒剤、軟膏、溶液剤、坐剤、注射剤、吸入剤、ゲル、ミクロスフェア、およびエアロゾルなどに処方され得る。その上、その他の薬学的に活性な構成成分（本明細書の他所に記載のその他の小分子を含む）および／または適した賦形剤、例えば塩、緩衝液および安定剤などが、必要ではないものの、組成物内に存在していてもよい。
【０１０８】
投与は、経口、非経口、経鼻、静脈内、皮内、筋肉内、皮下または局所を含む多様な異なる経路によって達成されることができる。好ましい投与様式は、処置されるかまたは予防される状態の性質に依存する。特定の実施形態には、ＩＶ輸液による投与が含まれる。
【０１０９】
担体には、例えば、それを曝露する細胞または哺乳動物に対して、用いる投与量および濃度で無毒である、薬学的にまたは生理学的に許容され得る担体、賦形剤、または安定剤が含まれ得る。しばしば、生理学的に許容され得る担体は、ｐＨ緩衝水溶液である。生理学的に許容され得る担体の例としては、リン酸、クエン酸、およびその他の有機酸などの緩衝液；アスコルビン酸を含む抗酸化剤；低分子量（約１０残基未満）ポリペプチド；例えば血清アルブミン、ゼラチン、または免疫グロブリンなどのタンパク質；ポリビニルピロリドンなどの親水性ポリマー；グリシン、グルタミン、アスパラギン、アルギニンまたはリジンなどのアミノ酸；単糖類、二糖類、およびグルコース、マンノース、またはデキストリンを含むその他の炭水化物；ＥＤＴＡなどのキレート剤；マンニトールまたはソルビトールなどの糖アルコール；ナトリウムなどの塩形成対イオン；および／またはポリソルベート２０（ＴＷＥＥＮ（商標））ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、およびポロキサマー（ＰＬＵＲＯＮＩＣＳ（商標））、などの非イオン性界面活性剤などが挙げられる。
【０１１０】
一部の実施形態では、１つまたは複数の薬剤を、例えば、コアセルベーション技法によるかまたは界面重合（例えば、それぞれ、ヒドロキシメチルセルロースまたはゼラチンマイクロカプセルおよびポリ−（メチルメタシレート）マイクロカプセル）によって、コロイド薬物送達システム（例えば、リポソーム、アルブミンミクロスフェア、マイクロエマルジョン、ナノ粒子およびナノカプセル）に、またはマクロエマルジョンに調製されたマイクロカプセルに捕捉させることができる。そのような技法は、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ、第１６版、Ｏｓｌｏ，Ａ．編、（１９８０）に開示されている。１つまたは複数の粒子またはリポソームは、さらに、その他の治療薬または診断薬を含んでよい。
【０１１１】
正確な投与量および処置期間は、処置される疾患の関数であり、既知の試験プロトコルを使用することよるか、または当技術分野で既知のモデル系で組成物を試験し、そこから外挿することにより、経験的に決定することができる。対照臨床試験も実施されてよい。投与量はまた、軽減させる状態の重症度によっても異なり得る。医薬組成物は一般に、望ましくない副作用を最小限に抑えながら治療上有用な効果を発揮するように処方および投与される。組成物は一度に投与してもよいし、いくつかの少ない用量に分割し、時間間隔をあけて投与してもよい。特定の対象に関して、具体的な投与計画は、個々の必要性に応じて、経時的に調整されてよい。
【０１１２】
従って、これらおよび関連する治療または医薬組成物を投与する典型的な経路には、限定されないが、経口、局所、経皮、吸入、非経口、舌下、頬側、直腸、膣、および鼻腔が含まれる。本明細書で使用される非経口という用語には、皮下注射、静脈内、筋肉内、胸骨内の注射または注入技法が含まれる。本開示のある特定の実施形態による治療用または医薬組成物は、組成物を対象または患者に投与するとその中に含まれる有効成分を生体利用可能にするように処方される。対象または患者に投与されることになる組成物は、１つまたは複数の投薬単位の形をとることができ、例えば、錠剤は単一の投薬単位であってよく、本明細書に記載のエアロゾル形態の薬剤の容器は複数の投薬単位を保持してもよい。そのような剤形を調製する実際の方法は、公知であるか、または当分野の当業者には明白であろう；例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｙ、第２０版（Ｐｈｉｌａｄｅｌｐｈｉａ  Ｃｏｌｌｅｇｅ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｙ  ａｎｄ  Ｓｃｉｅｎｃｅ，２０００）を参照されたい。投与される組成物は、一般に、目的の疾患または状態の処置のために、治療上有効な量の本明細書に記載される薬剤を含有することになる。
【０１１３】
治療用または医薬組成物は、固体の形態であっても液体の形態であってもよい。一実施形態では、１つまたは複数の担体は微粒子であるため、組成物は、例えば、錠剤または粉末の形態である。１つまたは複数の担体は液体であってよく、組成物は例えば、経口オイル、注射液またはエアロゾルであってよく、これは例えば吸入投与で有用である。経口投与を意図する場合、医薬組成物は好ましくは固体かまたは液体のいずれかの形態であり、半固体、半液体、懸濁液およびゲルの形態は本明細書において固体かまたは液体のいずれかとみなされる形態の中に含まれる。ある特定の実施形態には、無菌の注射可能な溶液が含まれる。
【０１１４】
経口投与用の固体組成物として、医薬組成物は、粉剤、顆粒剤、圧縮錠剤、丸剤、カプセル剤、チューインガム、ウエハなどに処方され得る。そのような固体組成物は、一般に不活性希釈剤または食用担体の１つまたは複数を含む。さらに、以下のうちの１つまたは複数が存在していてもよい：カルボキシメチルセルロース、エチルセルロース、微結晶性セルロース、トラガカントガムまたはゼラチンなどの結合剤；デンプン、ラクトースまたはデキストリンなどの賦形剤、アルギン酸、アルギン酸ナトリウム、プリモゲル、コーンスターチなどの崩壊剤；ステアリン酸マグネシウムまたはステロテックスなどの潤滑剤；コロイド状二酸化ケイ素などの滑剤；スクロースまたはサッカリンなどの甘味剤；ペパーミント、サリチル酸メチルまたはオレンジ香味料などの香味剤；および着色剤。医薬組成物がカプセル剤、例えばゼラチンカプセル剤の形態である場合、それは、上記の種類の材料に加えて、ポリエチレングリコールまたはオイルなどの液体担体を含んでよい。
【０１１５】
治療用または医薬組成物は、液体、例えば、エリキシル、シロップ、溶液、エマルジョンまたは懸濁液の形態であってよい。液体は、２つの例として、経口投与用であってもよいし、注射による送達用であってもよい。経口投与を意図する場合、好ましい組成物は、本発明の化合物に加えて、甘味料、保存料、色素／着色剤および風味増強剤の１つまたは複数を含む。注射による投与を意図する組成物には、界面活性剤、保存料、湿潤剤、分散剤、懸濁剤、緩衝液、安定剤および等張剤の１つまたは複数が含まれてよい。
【０１１６】
液体の治療用または医薬組成物は、それらが溶液、懸濁液またはその他の同様の形態であるかどうかに関わらず、１つまたは複数の以下のアジュバントが含まれてよい：注射水、生理食塩水、好ましくは生理食塩水、リンゲル液、等張食塩水などの滅菌希釈剤、溶媒または懸濁媒体として機能し得る合成モノグリセリドまたはジグリセリドなどの固定油、ポリエチレングリコール、グリセリン、プロピレングリコールまたはその他の溶媒；ベンジルアルコールまたはメチルパラベンなどの抗菌剤；アスコルビン酸または亜硫酸水素ナトリウムなどの抗酸化剤；エチレンジアミン四酢酸などのキレート剤；酢酸塩、クエン酸塩またはリン酸塩などの緩衝液ならびに塩化ナトリウムまたはデキストロースなどの張力の調整剤。非経口調製物は、ガラスまたはプラスチック製のアンプル、使い捨てシリンジまたは複数回投与バイアルに封入され得る。生理食塩水は好ましいアジュバントである。注射可能な医薬組成物は無菌であることが好ましい。
【０１１７】
非経口投与かまたは経口投与のいずれかを意図した液体の治療用または医薬組成物は、適した投薬量が得られるような量の薬剤を含むべきである。一般に、この量は組成物中の目的の薬剤の少なくとも０．０１％である。経口投与を意図する場合、この量は組成物の重量の０．１〜約７０％の間で変動し得る。ある特定の経口治療用または医薬組成物は、約４％〜約７５％の間の目的の薬剤を含む。ある特定の実施形態では、本発明による治療用または医薬組成物および調製物は、非経口投薬単位が希釈前に０．０１〜１０重量％の目的の薬剤を含むように調製される。
【０１１８】
治療用組成物または医薬組成物は局所投与を意図してもよく、その場合、担体は好適には溶液、エマルジョン、軟膏またはゲル基剤を含み得る。基剤は、例えば、以下の１つまたは複数を含んでよい：ワセリン、ラノリン、ポリエチレングリコール、蜜ろう、鉱油、水およびアルコールなどの希釈剤、および乳化剤および安定剤。増粘剤が局所投与用の治療用または医薬組成物中に存在していてもよい。経皮投与を意図する場合、組成物には、経皮パッチまたはイオン導入装置が含まれてよい。
【０１１９】
治療用組成物または医薬組成物は、例えば、直腸内で融解して薬物を放出する、坐剤の形態で、直腸投与を意図してもよい。直腸投与用の組成物は、適した非刺激性の賦形剤として油性基剤を含んでよい。そのような基剤としては、限定されないが、ラノリン、カカオバター、およびポリエチレングリコールが挙げられる。
【０１２０】
治療用組成物または医薬組成物には、固体または液体の投薬単位の物理的な形態を改変する様々な材料が含まれてよい。例えば、組成物には、活性成分の周囲にコーティングシェルを形成する材料が含まれてよい。コーティングシェルを形成する材料は一般に不活性であり、例えば、糖、セラック、およびその他の腸溶コーティング剤から選択され得る。あるいは、有効成分はゼラチンカプセルに包まれていてよい。固体または液体形態の治療用組成物または医薬組成物には、薬剤に結合し、それにより化合物の送達を助ける成分が含まれてよい。この能力で作用する適した成分には、モノクローナルまたはポリクローナル抗体、タンパク質またはリポソームの１つまたは複数が含まれる。
【０１２１】
治療用組成物または医薬組成物は、エアロゾルとして投与され得る投薬単位から本質的になってもよい。エアロゾルという用語は、コロイド性の系から加圧パッケージからなる系に至る多様な系を表すために使用される。送達は、液化もしくは圧縮ガスによるか、または有効成分を分注する適したポンプ系によるものであってよい。エアロゾルは、１つまたは複数の有効成分を送達するために、単相、二相、または三相の系で送達され得る。エアロゾルの送達には、必要な容器、活性剤、バルブ、副容器などが含まれ、これらを一緒にしてキットを形成することができる。当業者は、過度の実験を行うことなく、好ましいエアロゾルを決定することができる。
【０１２２】
本明細書に記載される組成物は、身体からの急速な排出から薬剤を保護する担体、例えば、時限放出製剤またはコーティングなどとともに調製されてよい。そのような担体には、制御放出製剤、例えば限定されるものではないが、インプラントおよびマイクロカプセル化送達系など、および生物分解性の生体適合性ポリマー、例えば、エチレン酢酸ビニル、ポリ酸無水物、ポリグリコール酸、ポリオルソエステル、ポリ乳酸および当業者に公知のその他のものなどが含まれる。
【０１２３】
治療用組成物または医薬組成物は、薬学分野で周知の方法論によって調製されてよい。例えば、注射による投与を意図する治療用または医薬組成物は、溶液を形成するために滅菌蒸留水とともに塩、緩衝液および／または安定剤の１つまたは複数を含んでよい。均一な溶液または懸濁液の形成を促進するために界面活性剤を添加してもよい。界面活性剤は、水性送達系において薬剤の溶解または均一な懸濁を促進するために、薬剤と非共有結合的に相互作用する化合物である。
【０１２４】
本明細書に記載の併用療法には、２つまたは３つまたはそれを超える薬剤（必要に応じて１つまたはそれを超える追加の活性薬剤を含む）の組み合わせを含む単一の医薬投与製剤の投与、ならびにそれぞれの個別の薬剤をそれ自体の別々の医薬投与製剤に含む組成物の投与が含まれてよい。例えば、ＥＧＦＲ阻害剤およびＭＥＫ１／２阻害剤は、錠剤またはカプセル剤などの単一経口投与組成物中で一緒に対象に投与するか、またはそれぞれの薬剤は別々の経口投与製剤中で投与することができる。同様に、ＥＧＦＲ阻害剤およびＭＥＫ１／２阻害剤は、生理食塩水またはその他の生理学的に許容され得る溶液中などの単一非経口投与組成物中で一緒に対象に投与するか、またはそれぞれの薬剤は別々の非経口投与製剤中で投与することができる。同様に、ＥＧＦＲ阻害剤およびＣＤＫ４／６阻害剤は、錠剤またはカプセル剤などの単一経口投与組成物中で一緒に対象に投与するか、またはそれぞれの薬剤は別々の経口投与製剤中で投与することができる。また、ＥＧＦＲ阻害剤およびＣＤＫ４／６阻害剤は、生理食塩水またはその他の生理学的に許容され得る溶液中などの単一非経口投与組成物中で一緒に対象に投与するか、またはそれぞれの薬剤は別々の非経口投与製剤中で投与することができる。別の例として、ＭＥＫ１／２阻害剤およびＣＤＫ４／６阻害剤は、錠剤またはカプセル剤などの単一経口投与組成物中で一緒に対象に投与するか、またはそれぞれの薬剤は別々の経口投与製剤中で投与することができる。同様に、ＭＥＫ１／２阻害剤およびＣＤＫ４／６阻害剤は、生理食塩水またはその他の生理学的に許容され得る溶液中などの単一非経口投与組成物中で一緒に対象に投与するか、またはそれぞれの薬剤は別々の非経口投与製剤中で投与することができる。さらなる例として、ＥＧＦＲ阻害剤、ＭＥＫ１／２阻害剤、およびＣＤＫ４／６阻害剤は、錠剤またはカプセル剤などの単一経口投与組成物中で一緒に対象に投与するか、またはそれぞれの薬剤は別々の経口投与製剤中で投与することができる。同様に、ＥＧＦＲ阻害剤、ＭＥＫ１／２阻害剤、およびＣＤＫ４／６阻害剤は、生理食塩水またはその他の生理学的に許容され得る溶液中などの単一非経口投与組成物中で一緒に対象に投与するか、またはそれぞれの薬剤は別々の非経口投与製剤中で投与することができる。別々の投与製剤が使用される場合、組成物は本質的に同じ時間に、すなわち同時に投与されてもよいし、別々にずらした時間に、すなわち、順次に任意の順序で投与されてもよい；併用療法はこれらすべての投与計画を含むものと理解される。
【０１２５】
また、ＥＧＦＲ阻害剤、ＭＥＫ１／２阻害剤、およびＣＤＫ４／６阻害剤から選択される２つまたはそれを超える（例、３つ、４つ、５つ、６つ）の薬剤の組合せを含む患者ケアキットも含まれる。一部の患者ケアキットは、ＥＧＦＲ阻害剤とＭＥＫ１／２阻害剤の組合せを、必要に応じて別々の組成物として、または同じ組成物の一部として含む。ある特定の患者ケアキットは、ＥＧＦＲ阻害剤とＣＤＫ４／６阻害剤の組合せを、必要に応じて別々の組成物として、または同じ組成物の一部として含む。ある特定の患者ケアキットは、ＭＥＫ１／２阻害剤とＣＤＫ４／６阻害剤の組合せを、必要に応じて別々の組成物として、または同じ組成物の一部として含む。特定の患者ケアキットは、ＥＧＦＲ阻害剤、ＭＥＫ１／２阻害剤、およびＣＤＫ４／６阻害剤の組合せを、必要に応じて別々の組成物として、または同じ組成物の一部として含む。特定の実施形態では、患者ケアキットは、表Ｅ１〜Ｅ６に記載される組合せから選択される薬剤の組合せを、必要に応じて別々の組成物として、または同じ組成物の一部として含む。
【０１２６】
本明細書に記載されるキットはまた、処置される適応症に、または所望の診断用途に適しているかまたは望ましい１つまたは複数の追加の治療薬またはその他の成分を含んでもよい。また、本明細書に記載されるキットは、意図される送達様式を促進するために必要であるかまたは望ましい１つまたは複数のシリンジまたはその他の成分を含むこともできる（例、ステント、埋め込み式デポー等）。
【０１２７】
一部の実施形態では、患者ケアキットは、１または複数の組成物と１または複数の情報資料用の別々の容器、仕切り、または区画を含む。例えば、１または複数の組成物は、瓶、バイアル、またはシリンジに入れることができ、１または複数の情報資料は、容器に関連して入れることができる。一部の実施形態では、キットの別々の要素は、単一の分割されていない容器に入れられる。例えば、組成物は、瓶、バイアル、またはシリンジに入れられ、それには情報資料がラベルの形で取り付けられている。一部の実施形態では、キットには、複数（例、パック）の個別の容器が含まれ、それぞれが本明細書に記載される１つまたは複数の薬剤の１つまたは複数の単位剤形（例、本明細書に記載される剤形）を含有する。例えば、キットには複数のシリンジ、アンプル、ホイルパケット、またはブリスターパックが含まれ、それぞれが単回単位用量のそれぞれの薬剤を含有する。キットの容器は、気密性、防水性（例えば、水分または蒸発の変化に対して不浸透性）、かつ／または遮光性であり得る。
【０１２８】
患者ケアキットには、必要に応じて、組成物の投与に適した装置、例えば、シリンジ、吸入剤、スポイト（例えば、点眼器）、スワブ（例えば、綿棒または木軸綿棒）、またはそのような送達装置が含まれる。一部の実施形態では、装置は計量された用量の１つまたは複数の薬剤を分配する埋め込み式の装置である。また、例えば本明細書に記載される成分を組み合わせることにより、キットを提供する方法も含まれる。
【０１２９】
本明細書で引用した全ての刊行物、特許出願、および交付済み特許は、個々の刊行物、特許出願、または交付済み特許が具体的かつ個別に参照により組み込まれることが示されているかのように、参照により本明細書に組み込まれる。
【０１３０】
前述の発明は、理解を明確にする目的で、例示および例を目的としてある程度詳細に説明されているが、本発明の教示を考慮すれば、添付の特許請求の範囲の精神または範囲から逸脱することなく、ある特定の変更および修正をそれに加えることができることは、当業者には容易に明らかであろう。以下の実施例は、例示としてのみ提供されるものであり、制限する目的で提供されるものではない。当業者であれば、本質的に同様の結果をもたらすように変更または修正され得る多様な重要でないパラメータを直ちに認識するであろう。
【実施例】
【０１３１】
実施例１
条件付きリプログラミング細胞プールを使用する生体外（ｅｘ  ｖｉｖｏ）薬物試験
結腸直腸癌患者、肝臓癌患者、肺癌患者、膵臓癌、胃癌患者、および乳癌患者からの手術標本を、患者のコンセンサスを受け取った後に、北京癌病院および中国医学院の癌病院から入手した。患者由来の異種移植腫瘍標本は、患者からの手術腫瘍標本を接種したＮｏｄ／ＳＣＩＤマウスから入手した。
【０１３２】
生体外薬物感受性アッセイのために、腫瘍細胞を患者の組織試料またはＰＤＸ異種移植腫瘍組織から分離した。手短に言えば、ハサミを使用して腫瘍組織を直径１ｍｍ未満の小片に切断した。腫瘍断片を、マグネット撹拌子を取り付けた滅菌１００ｍｌ三角ガラスフラスコに移した。０．２５Ｕ／ｍｌのリベラーゼＤＨを含有する１０〜１５ｍｌの消化培地を、刻んだ腫瘍組織に添加し、酵素消化を開始した。この酵素混合物を穏やかに撹拌しながら３７℃で１〜２時間インキュベートした。消化させた腫瘍組織を１００μｍの細胞リテーナー（ｃｅｌｌ  ｒｅｔａｉｎｅｒ）で濾過した。濾液を４０μｍの細胞レストレーナー（ｃｅｌｌ  ｒｅｓｔｒａｉｎｅｒ）で再び濾過した。４０μｍの細胞レストレーナー（ｃｅｌｌ  ｒｅｓｔｒａｉｎｅｒ）に保持された腫瘍細胞クラスターを収集し、ＨＢＳＳで２回洗浄した後、いくつかの幹細胞増殖因子を補充した規定の増殖培地に再懸濁した。
【０１３３】
４０μｍの細胞レストレーナー（ｃｅｌｌ  ｒｅｓｔｒａｉｎｅｒ）に保持された腫瘍細胞クラスターを収集し、ＨＢＳＳで２回洗浄した後、細胞増殖因子および小分子阻害剤を補充した規定の増殖培地に再懸濁した。腫瘍細胞クラスターを規定の増殖培地で一晩回収した。規定の増殖培地は、ニコチンアミド、Ｗｎｔ３Ａ、ノギン（骨形成タンパク質（ＢＭＰ）阻害剤）、Ｒ−スポンジン−１（Ｗｎｔ／β−カテニンシグナル伝達アゴニスト）、およびＹ２７６３２（Ｒｈｏ関連コイルドコイル含有プロテインキナーゼ（ＲＯＣＫ−１）阻害剤）を補充したＳｔｅｍＰｒｏ（登録商標）ｈＥＳＣ  ＳＦＭ（定義済み、無血清およびフィーダーフリー培地（ＳＦＭ））であった。
【０１３４】
条件付きリプログラミングのために、回収したＣＴＯＳを単一細胞に分離し、細胞培養プレートのフィーダー細胞／Ｒｏｃｋ阻害剤（Ｙ２７６３２）共培養系に約３０００細胞／ウェルで播種し、３７℃で３日間増殖させた。
【０１３５】
生体外薬物試験のために、播種した腫瘍細胞を、７つのＥＧＦＲ阻害剤、３つのＭＥＫ１／２阻害剤、および３つのＣＤＫ４／６阻害剤に単独で、またはＥＧＦＲ阻害剤とＭＥＫ１／２阻害剤の組合せ、ＥＧＦＲ阻害剤とＣＤＫ４／６阻害剤の組合せ、ＭＥＫ１／２阻害剤とＣＤＫ４／６阻害剤の組合せ、そしてＥＧＦＲ阻害剤、ＭＥＫ１／２阻害剤、およびＣＤＫ４／６阻害剤の３剤の組合せに７２時間曝露させた。さらに７２時間、新鮮な培地に交換し、処置した腫瘍細胞を同じ薬物または薬物の組合せに再曝露させた。全ての薬物をＤＭＳＯ中で調製し、培地中のＤＭＳＯの最終濃度は０．１％であった。試験した薬物濃度および薬物の組合せは、関連するＡＵＣ濃度であった（表Ｅ１参照）。
【表１−１】
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【表１−２】
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【０１３６】
薬物による曝露の後、上皮腫瘍細胞を５−エチニル−２’−デオキシウリジン（Ｅｄｕ）で標識して、腫瘍細胞増殖率を評価した。標識は薬物曝露の存在下で２４時間続いた。対照群では、上皮腫瘍細胞は薬物曝露を受けずに培地交換を行ったが、同様にＥｄｕで標識された。標識した腫瘍細胞を固定し、０．５％  Ｔｒｉｔｏｎ  Ｘ−１００および３％  ＢＳＡを含有するブロッキングバッファー中Ｈｏｅｃｈｓｔ３３３４２によって４℃で一晩染色した。腫瘍細胞をＥｐＣＡＭ抗体（１：４０００）とともに室温で２時間インキュベートし、ＰＢＳＴですすいだ。その後、腫瘍細胞をＡｌｅｘａ  Ｆｌｕｏｒ（登録商標）６４７結合ヤギ抗マウス二次抗体とともに室温で３０分インキュベートし、ＰＢＳＴですすいだ。
【０１３７】
取り込まれたＥｄｕは、暗所で１Ｘ  Ｃｌｉｃｋ−ｉＴ  Ｅｄｕ反応バッファー、ＣｕＳＯ４、およびアジド結合Ａｌｅｘａ  Ｆｌｕｏｒ色素を含有する反応混合物とともに固定細胞をインキュベートするＣｌｉｃｋ−ｉＴ反応によって検出された。染色された細胞をＰＢＳで２回洗浄した後、画像を取得して分析した。
【０１３８】
画像の取得および分析のために、染色された腫瘍細胞をハイコンテンツスクリーニング（ＨＣＳ）プラットフォーム（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ  ＣｅｌｌｏｍｉｃｓＡｒｒａｙＳｃａｎＸＴｉ  ＨＣＳリーダー）で画像化した。１０Ｘ対物レンズを使用して画像を収集した。分析のために、各ウェルに対して２５のフィールドが画像化された。画像から３つの蛍光シグナルをＨＣＳリーダーによって得た。青色の蛍光シグナルは、Ｈｏｅｃｈｓｔ  ３３３４２で染色された核シグナルを記録し、緑色の蛍光シグナルは、新たに合成されたＤＮＡに組み込まれたＥｄｕを検出し、赤色の蛍光シグナルは、ＥｐＣＡＭ陽性上皮細胞集団を検出した（図１参照）。
【０１３９】
ＭＩ（最大阻害指数）を、ＥｐＣＡＭおよびＥｄｕ陽性の読み出し情報を用いて計算した（下の表Ｅ２および表Ｅ３を参照）。
【表２−１】
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【表２−２】
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【表３】
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【０１４０】
ＭＩ（最大阻害指数）＝対照群のＥｄｕ陽性細胞／処置群のＥｄｕ陽性細胞
【０１４１】
阻害率は、次のようにＥｐＣＡＭおよびＥｄｕ陽性の読み出し情報を用いて計算した（下の表Ｅ４および表Ｅ５を参照）。
【表４−１】
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【表４−２】
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【表５−１】
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【表５−２】
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【０１４２】
薬物Ａの阻害率（ＡＩ）＝１−Ａ処置群のＥｄｕ陽性細胞／対照群のＥｄｕ陽性細胞。
【０１４３】
薬物ＡＢの阻害率（ＡＢＩ）＝１−ＡＢ処置群のＥｄｕ陽性細胞／対照群のＥｄｕ陽性細胞。
【０１４４】
薬物ＡＢＣの阻害率（ＡＢＣＩ）＝１−ＡＢＣ処置群のＥｄｕ陽性細胞／対照群のＥｄｕ陽性細胞。
【０１４５】
薬物の組合せに対するＡＵＣ濃度での組合せ指標指数は、効果ベースの戦略下でブリス独立モデルを使用して計算された（下の表Ｅ６参照）。
【表６】
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【０１４６】
ＣＩ（ＡＢ）＝（ＡＩ＋ＢＩ−ＡＩ＊ＢＩ）／（ＡＢＩ）。
【０１４７】
薬物の３剤の組合せに対するＡＵＣ濃度での組合せ指標指数は、効果ベースの戦略下でブリス独立モデルを使用して計算された。
ＣＩ（ＡＢＣ）＝（ＡＩ＋ＢＩ＋ＣＩ−ＡＩ＊ＢＩ−ＡＩ＊ＣＩ−ＢＩ＊ＣＩ＋ＡＩ＊ＢＩ＊ＣＩ）／（ＡＢＣＩ）
ＣＩ＜１である場合、ＡとＢの組合せは相乗的である。
ＣＩ＝１である場合、ＡとＢの組合せは相加的である。
ＣＩ＞１である場合、ＡとＢの組合せは拮抗的である。
【０１４８】
これらの結果は、ＥＧＦＲ、ＭＥＫ１／２、および／またはＣＤＫ４／６阻害剤の様々な組合せが数ある中でも結腸、胃、膵臓、および肺組織をはじめとする、多様な組織の原発腫瘍細胞の生体外モデルにおいて、大幅に増加した（例えば、相乗的に増加した）腫瘍細胞殺傷活性をもたらすことを示す。
【図１】
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【国際調査報告】
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