(57)【要約】  ガイダンス分子、例えばペプチドまたはタンパク質または核酸の複合体、および、リンカーの連続的な病原体削減処理のための修飾ユニット３７が記載され、該ユニットは、緩衝液中ガイダンス分子を含む少なくとも１つのリザーバー１、および／または、緩衝液中ガイダンス分子を含む生成物ストリーム用の少なくとも１つの入口と、溶液中リンカーを含む少なくとも１つのリザーバー２と、少なくとも１つの混合デバイス３と、１つはガイダンス分子の投与用、もう１つはリンカー分子の投与用である少なくとも２つのバルブ７、８と、ガイダンス分子−リンカー複合物を含む該ストリーム用の少なくとも１つの出口および／または該複合物を取り出すためのリザーバー５とを含み、定義された滞留時間を保証する、すなわち、混合後、ガイダンス分子とリンカー分子が連続プロセス中、常に同様の時間滞留するようにする、少なくとも１つの滞留時間デバイスをさらに含む。
2020527155.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ガイダンス分子、例えばペプチドまたはタンパク質または核酸、および、リンカーの連続的な病原体削減処理のための修飾ユニット（３７）であって、次の要素：
−緩衝液中ガイダンス分子を含む少なくとも１つのリザーバー（１）、および／または、緩衝液中ガイダンス分子を含む生成物ストリーム用の少なくとも１つの入口と、
−溶液中リンカーを含む少なくとも１つのリザーバー（２）と、
−少なくとも１つの混合デバイス（３）と、
−１つはガイダンス分子の投与用、もう１つはリンカー分子の投与用である少なくとも２つのバルブ（７、８）と、
−ガイダンス分子−リンカー複合物を含む生成物ストリーム用の少なくとも１つの出口および／またはガイダンス分子−リンカー複合物を取り出すためのリザーバー（５）とを含み、
−定義された滞留時間を保証する、すなわち、混合後、ガイダンス分子とリンカー分子が連続プロセス中、常に同様の時間滞留するようにする少なくとも１つの滞留時間デバイスをさらに含む、修飾ユニット。
【請求項２】
少なくとも３つのバルブをさらに含む、請求項１に記載の修飾ユニット。
【請求項３】
前記滞留時間デバイスがＣＦＩまたはＨＦＩである、請求項１または２に記載の修飾ユニット。
【請求項４】
前記ガイダンス分子がタンパク質であり、前記タンパク質が抗体である、請求項１〜３のいずれか一項に記載の修飾ユニット。
【請求項５】
少なくとも１つのポンプをさらに含む、請求項１〜４のいずれか一項に記載の修飾ユニット。
【請求項６】
前記少なくとも２つのバルブの代わりに少なくとも２つのポンプを含む、請求項１〜５のいずれか一項に記載の修飾ユニット。
【請求項７】
少なくとも１つの廃棄物出口（６）をさらに含む、請求項１〜６のいずれか一項に記載の修飾ユニット。
【請求項８】
ガイダンス分子薬物複合体、例えば、ペプチドまたはタンパク質または核酸と薬物との複合体の連続的な病原体削減生産および／または処理のためのモジュールシステムであって、次のユニット：
−請求項１〜６に記載の少なくとも１つの修飾ユニットと、
−少なくとも１つの混合デバイス、定義された滞留時間を保証する、すなわち、混合後、ガイダンス分子とリンカー分子が連続プロセス中、常に同様の時間滞留するようにする少なくとも１つの滞留時間デバイス、および、生物活性物質を含む少なくとも１つのリザーバー、を含む少なくとも１つの複合ユニットと、
−少なくとも１つの緩衝液リザーバーおよび少なくとも１つの限外ろ過デバイスを含む、少なくとも１つの濃縮および再緩衝ユニットと、
−少なくとも１つの緩衝液リザーバーおよび少なくとも１つのダイアフィルトレーションデバイスを含む、少なくとも１つの濃縮および再緩衝ユニットと、
−少なくとも１つのフィルターと、
を含むモジュールシステム。
【請求項９】
前記モジュールシステムが閉鎖したシステムである、請求項７に記載のモジュールシステム。
【請求項１０】
ガイダンス分子薬物複合体、例えば、ペプチドまたはタンパク質または核酸と薬物との複合体の連続的な病原体削減生産および／または処理のための方法あって：
−ガイダンス分子、例えば、ペプチドまたはタンパク質または核酸を提供する工程と、
−リンカーを提供する工程と、
−リンカーとガイダンス分子の付加工程と、
−ガイダンス分子−リンカー複合物と生物活性物質の複合工程と、
−少なくとも１回の連続限外ろ過工程と、
−少なくとも１回の生成物ストリームの連続ダイアフィルトレーション工程と、
−少なくとも１回の生成物ストリームのろ過工程とを含み、
プロセスはモジュール方式で実行される、方法。
【請求項１１】
前記方法は、閉鎖された方法で実行される、請求項１０に記載の方法。
【請求項１２】
前記方法は、請求項１〜７に記載の修飾ユニットを用いて実行される請求項１１に記載の方法。
【請求項１３】
不均質な細胞培養液混合物由来の抗体−薬物−複合体の連続的な病原体削減生産および／または処理のプロセス用の、請求項９〜１１に記載の方法であって：
−抗体を含む不均質な細胞培養液混合物から生成物ストリームの形で粒子を含まない液体を調製する工程と、
−少なくとも１回のろ過工程と、
−それぞれ少なくとも２つのクロマトグラフィーカラムおよび／または膜吸着器による洗浄を含む、抗体を洗浄するための少なくとも１回のクロマトグラフィー工程と、
−少なくとも１回のウイルスクリアランス工程と、
−少なくとも１回の連続限外ろ過工程と、
−少なくとも１回の連続ダイアフィルトレーション工程と、
−請求項９〜１１に記載の方法を用いて前記連続ダイアフィルトレーションで得た抗体を処理して抗体−薬物−複合体を得る工程であって、前記プロセスが、連続的に、閉鎖されたモジュール方式で実行される、工程と、
を含む方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
抗体薬物複合体（ＡＤＣ）は、生物学的に活性な、例えば、細胞毒性物質に付加された抗体を含む。治療薬としては、ＡＤＣは、健康な組織と病気の組織の区別が可能となる抗体の精巧な特異性を、細胞毒性薬物の細胞を殺す能力と組み合わせたものである。すなわち、例えば、抗体は、細胞毒性物質を例えばがんといった病気の細胞へ直接送達し、細胞内で放出するために使用される。このようにすれば、健康な細胞は、従来の化学療法で発する有害な副作用からほぼ免れる。
【背景技術】
【０００２】
詳細には、ＡＤＣは３つの異なる要素：抗体、活性物質−例えばトキソフォアとも呼ばれる細胞毒性活性成分といった薬物−、および、抗体と活性物質を結びつけるリンカー、からなる。抗体は特定のタンパク質分子、例えば腫瘍細胞表面の腫瘍マーカーを認識して結合する。この結合プロセスにより、ＡＤＣを細胞内に輸送するメカニズムが誘発され、細胞内で活性物質が抗体から分離し、例えば重要な細胞機能をブロックすることによりプログラム細胞死（アポトーシス）を引き起こすことで、細胞に作用することができる。あるいは、抗体は前記タンパク質分子、例えば腫瘍細胞表面の腫瘍マーカーを認識して結合し、活性物質が腫瘍細胞に作用する。
【０００３】
ＡＤＣによる治療の成功には、複合体が体内を通過する際に活性物質を失わず、病気の細胞内に入るまでその活性物質を放出しないことが不可欠である。さらに、抗体は病気の細胞を特異的に標的にしなければならない。したがって、リンカーを介して生物活性物質を付加させるプロセスは、抗体への影響を可能な限り少なくし、スケールアップおよび製造中に同等のＡＤＣを送達することが望ましい。
【０００４】
したがって、ＡＤＣの需要の拡大とともに、スケールアップが容易で、とりわけ上記したＡＤＣシステム事項を考慮した、より柔軟な生産プロセスが有利となる。
【発明の概要】
【０００５】
したがって、本発明の目的は、様々なプロセス条件下でも信頼性が高く、強力および再現性があり、スケールアップが容易で、抗体に影響を与えない、より柔軟な生産プロセスを提供することであった。
【０００６】
この目的は、ガイダンス分子、例えばペプチドまたはタンパク質または核酸の複合体、および、リンカーの連続的な病原体削減処理のための修飾ユニット（３７）を提供することにより達成され、前記修飾ユニットは次の要素：
−緩衝液中ガイダンス分子を含む少なくとも１つのリザーバー（１）、および／または、緩衝液中ガイダンス分子を含む生成物ストリーム用の少なくとも１つの入口、
−溶液中リンカーを含む少なくとも１つのリザーバー（２）、
−少なくとも１つの混合デバイス（３）
−１つはガイダンス分子の投与用、もう１つはリンカー分子の投与用である少なくとも２つのバルブ（７、８）、
−ガイダンス分子−リンカー複合物を含む生成物ストリーム用の少なくとも１つの出口および／またはガイダンス分子−リンカー複合物を取り出すためのリザーバー（５）、を含む修飾ユニットであって、
−定義された滞留時間を保証する、すなわち、混合後、ガイダンス分子とリンカー分子が連続プロセス中、常に同様の時間滞留するようにする、少なくとも１つの滞留時間デバイスをさらに含む。
【０００７】
この修飾ユニットにより、リンカーをガイダンス分子、例えばペプチドまたはタンパク質または核酸の複合体に連続的に付加しながら、ガイダンス分子の優れた安定性を維持することが可能になる。理論に束縛されるものではないが、バッチプロセスと比較して表面積が大きい連続プロセスにおいて、表面積とガイダンス分子とが好ましくない相互作用をもたらすと予想されたため、この発見は驚くものであった。大きな表面積は、比較的小さなチューブ類および同様に小さな混合デバイスによるものであり、より大きな表面積とともに、より大きな割合のガイダンス分子が前記より大きな表面積と相互作用し、ガイダンス分子の品質に悪影響、特に凝集体状態に寄与することが予想された。
【０００８】
さらに、このユニットは生産規模へのスケールアップ、すなわち、生成物の総量、例えば週あたりのＡＤＣの量（ｇ）を増やすことが非常に簡単である。これは、生成物の量をより多くするためには出発材料をより多く提供する必要があり、全体のプロセス時間が増加するためである。ただし、より大きな生産プラント／施設を建設したり、別の生産プラント／施設を検証したり、生物製剤の際に必要となる広範な同等性の研究を行う必要はない。
【発明を実施するための形態】
【０００９】
本明細書で使用される用語は、特定の実施形態を説明するためのみのものであり、限定することを意図するものではないことが理解される。本明細書および添付の特許請求の範囲で使用される単数形「ａ」、「ａｎ」、および、「ｔｈｅ」は、文脈から明らかでない限り、複数の指示対象を含む。したがって、例えば、単数の「デバイス」への言及には、２つ以上のそのようなデバイスの組み合わせが包含される。
【００１０】
本明細書で使用される「ガイダンス分子」という用語は、特定の標的を発見および／または相互作用することができる実体を指す。
【００１１】
ガイダンス分子の例としては、ペプチド、タンパク質、および、ＤＮＡやＲＮＡｉ分子を含むＲＮＡ分子などの核酸が挙げられる。
【００１２】
本明細書で使用される「ペプチド」という用語は、比較的短い長さのアミノ酸のポリマーを指す（例えば、アミノ酸５０個未満）。ポリマーは、線状または分岐状であってもよく、修飾アミノ酸を含んでもなり得、非アミノ酸によって中断されていてもよい。この用語には、修飾されたアミノ酸ポリマーも含まれる：例えば、ジスルフィド結合の形成、グリコシル化、脂質化、アセチル化、リン酸化、または、限定はされないが蛍光マーカー、粒子、ビオチン、ビーズ、タンパク質、放射性標識、ケミルミネセンスタグ、バイオルミネセンス標識などの標識成分との結合などといった、いかなる他の操作が包含される。
【００１３】
本明細書で使用される「タンパク質」という用語は、アミノ酸のポリペプチドを指す。この用語は、完全長、野生型、またはその断片であり得るタンパク質を包含する。タンパク質は、ヒト、非ヒト、ならびに、対応する天然アミノ酸および天然アミノ酸ポリマーおよび非天然アミノ酸ポリマーの人工または化学模倣物であってもよい。さらに、特定のアミノ酸が交換され、例えば活性物質の「部位特異的複合」を可能にするタンパク質も包含される。
【００１４】
本明細書で使用される「核酸」という用語は、一本鎖または二本鎖形態のデオキシリボヌクレオチドまたはリボヌクレオチドおよびそれらのポリマーを指す。特に限定されない限り、この用語は、参照核酸と同様の結合特性を有し、天然に存在するヌクレオチドと同様の方法で代謝される、天然ヌクレオチドの類似体を含む核酸を包含する。特に明記しない限り、特定の核酸配列には、明示的に示された配列だけでなく、その保存的に修飾された変異体（例えば縮重コドン置換）および相補的配列も黙示的に包含される。さらに、特定の塩基対が交換され、例えば活性物質の「部位特異的複合」を可能にする核酸も包含される。
【００１５】
好ましい実施形態では、ガイダンス分子は抗体および／または抗原結合断片である。
【００１６】
本明細書で使用される「抗体」という用語は、免疫グロブリンまたは免疫グロブリンの免疫学的に活性な部分、すなわち抗原結合部位を含む分子といった結合分子を指す。
【００１７】
いくつかの実施形態では、抗体はグリコシル化されている。
【００１８】
本明細書で使用される「抗体−薬物−複合体（ＡＤＣ）」という用語は、少なくとも１つの抗体、少なくとも１つの薬物、および、抗体を薬物を結びつける少なくとも１つの「リンカー」を含む複合物を指す。本明細書で使用される「抗原結合抗体断片」または「抗原結合断片」という用語は、抗体／免疫グロブリンの抗原結合ドメインを依然として含む抗体／免疫グロブリンの断片（例えばＩｇＧの可変領域）を指す。抗体の「抗原結合ドメイン」は通常、抗体の１つまたは複数の超可変領域を含む。
【００１９】
本明細書で使用される「生物活性物質」、「活性物質」、「活性剤」、「薬物」または「治療薬」という用語は、疾患または感染の治療、医療画像、モニタリング、避妊、化粧品、栄養補助、医薬および予防用途を包含する診断または治療のために有機体に投与される任意の原子および／もしくは分子、分子複合物または物質を指す。
【００２０】
「薬物」という用語は、生物または生体適合構造に化学的に修飾および／または機能的に付加された、そのような任意の原子および／もしくは分子、分子複合物または物質を包含する。「プロドラッグ」という用語は、インビボでその治療的に活性または利用可能な形態に変換されるまで完全には活性または利用可能でない薬物、薬物前駆体または修飾された薬物を指す。
【００２１】
本明細書で使用される「トキソフォア」という用語は、細胞に投与された場合に毒性効果を生じる化学基を指す。
【００２２】
すなわち、例えば、活性物質は、トリウム同位体などの放射活性剤といった原子、または、有糸分裂阻害剤であり得る。
【００２３】
したがって、当業者であれば、抗体−薬物−複合体に関する本明細書に記載された方法およびデバイスが標的トリウム複合体（ＴＴＣ）にも適用可能であることが即座に分かる。
【００２４】
本明細書で使用される「ユニット」または「ユニット操作」という用語は、抗体といったガイダンス分子および／または抗体薬物複合体の生産プロセスにおいて１つのプロセス工程を実行するデバイスまたはデバイスの組み合わせを指す。すなわち、最終的なガイダンス分子、つまり生成物を提供するために、前記生成物はいくつかのユニットを通過しなくてはいけない。
【００２５】
リンカーをガイダンス分子に付加する工程は一般に修飾と呼ばれるため、この付加を可能にするデバイスを修飾ユニットと呼ぶ。
【００２６】
本明細書で使用される「連続」という用語は、処理される要素および／または生成物ストリームの例えば修飾ユニットといったユニットへの投入、ならびに、処理された要素および／または生成物ストリームの例えば修飾ユニットといった前記ユニットからの除去が、中断することなく実行されることを指す。すなわち、後続のユニット操作は、最初のユニット操作が生成物ストリームの処理を完了する前に、生成物ストリームの処理を開始し得る。
【００２７】
本明細書で使用される「バッチ式」という用語は、通常別々の生産サイクルまたは生産工程がバッチ式で不連続に処理され、次の生産工程を開始する前に生成物全体が回収および貯められる、または、生産サイクルの完了後に生成物全体が除去されることを指す。再度生産するには、別の新しい生産サイクル／バッチを開始する必要がある。
【００２８】
規制が厳しい医薬品の生産には、殺菌生成物を確保するべく、洗浄および殺菌された施設を提供するために時間、技術、および、人員の面で多大な努力が必要となる。さらに、多目的システムまたは２つの生成物バッチ間で生成物を切り替える場合の相互汚染を確実に回避するには、複雑な洗浄検証が必須であり、これにも時間と人員の面で多大な労力を要する。したがって、ＡＤＣ生産の連続プロセスが有利となる。ＡＤＣ生産のためのこの連続プロセスは、非常に強力な活性物質を大量に使用するバッチ操作と比較して、少量の反応量で閉鎖システムを介して、例えばトキソフォアといった非常に強力な活性物質のより安全な取り扱いを可能にするという利点もある。
【００２９】
本明細書で使用する「病原体削減」という用語は「微生物削減」および「削減した病原体」と交換可能に使用され、ウイルス数の削減を含む病原体数が削減した状態、すなわち、面積または体積単位あたりの病原体数がゼロに近い状態を指し、これは、適切な除菌方法により達成可能であり、この除菌方法は、ガンマ線照射、ベータ線照射、オートクレーブ処理、酸化エチレン（ＥＴＯ）処理、オゾン処理、「定置蒸気滅菌（ＳＩＰ）」および／もしくは定置熱滅菌処理もしくは１ＭのＮａＯＨといった消毒剤による処理または除菌ろ過から選択され得る。すなわち、本明細書では、「病原体削減」、「微生物削減」および「細菌削減」という用語は、バイオバーデンが管理された状態も指す。
【００３０】
本明細書で使用される「生成物ストリーム」という用語は、本明細書に記載の限外ろ過および精製ユニットを通過するガイダンス分子を含む流体を指す。すなわち、限外ろ過および精製ユニットに入る前は、生成物ストリームは供給とも呼ばれ、限外ろ過および精製ユニットを出ると、生成物ストリームは保持液とも呼ばれる。
【００３１】
本明細書で使用される「リザーバー」という用語は、プロセスで必要とされる要素、例えば緩衝液、抗体、リンカーまたは活性物質を含むサージバッグなどの保管コンテイナーを指す。
【００３２】
本明細書で使用される「混合デバイス」という用語は、不均質な物理的システムをより均質にする装置またはメカニズムを指す。徹底した混合を達成するために、小スペースを有するデバイスが好ましい。
【００３３】
適切な混合デバイスの例としては、Ｔピース、マイクロブレードミキサー、および、異なる混合原理のスタティックミキサー、例えばスリットまたはヘリカルスタティックミキサーが挙げられる。
【００３４】
本明細書で使用される「リンカー」という用語は、抗体および活性物質に結合する分子を指す。したがって、「リンカー」という用語は、非切断および切断可能なリンカーならびにキレート剤を表す。
【００３５】
驚くべきことに、上記の利点に加えて、修飾ユニットにより、安定で一貫したリンカー−抗体比が容易にもたらされることがわかった。これは、安定した一貫した薬物−抗体比（ＤＡＲ）を促進するため重要である。抗体１つあたり、安定および一貫した分子数の付加した生物活性物質のみが、同等のインビボ活性を保証する。
【００３６】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載される修飾ユニットは、２つを超えるバルブを含む。当業者であれば、所与のユニットにいくつのバルブが必要かが分かる。
【００３７】
本明細書で使用する「滞留時間デバイス」という用語は、定義された滞留時間を保証する、すなわち、混合後、ガイダンス分子とリンカー分子が連続プロセス中、常に同様の時間滞留するようにするデバイスを指す。これは、生産されたガイダンス分子−リンカー分子複合物の一貫した特性を容易に確保できるという効果をもたらす。所与の滞留時間デバイスにおける滞留時間分布を決定するために、トレーサー実験を用い得る。
【００３８】
ただし、生産されたガイダンス分子−リンカー分子複合物の一貫した特性は、適切な混合デバイスを選択することでも実現され得る。
【００３９】
いくつかの実施形態では、滞留時間デバイスは、容器、チューブ、直線チューブ、１つ以上のくぼみを備えたチューブ、１つ以上のオリフィスを備えたチューブ、１つ以上の突起を備えたチューブ、円形チューブ、楕円チューブといった非円形チューブ、および／または、コイルチューブからなる群から選択される。好ましい実施形態では、生成物ストリームの各ポーションは、混合デバイスを通過した後に滞留時間デバイスを通過する。
【００４０】
いくつかの実施形態では、滞留時間デバイスは、プラグ流反応器、すなわち、理想的には流体が軸方向ではなく半径方向に混合されるデバイスである。
【００４１】
本明細書で使用される「プラグ流反応器」という用語は、理想的には流体が軸方向（前方または後方）ではなく半径方向に混合されるデバイスを指す。プラグ流反応器内を流れるとき、流体ストリームの各ポーションの滞留時間は反応器内における位置の関数をとり、すなわち、プラグ流反応器内の生成物ストリームの滞留時間は限られている。すなわち、理想的には、流体ストリームのどの部分も、流体ストリームの他の部分と同じ時間、プラグ流反応器内に滞留し、こうして、生産されたガイダンス分子−リンカー分子複合物の一貫した特性を確実に保証する。
【００４２】
いくつかの実施形態では、滞留時間デバイス内の流れは、０．１〜１００００、好ましくは５〜１０００、最も好ましくは８〜３００のレイノルズ数によって特徴付けられる。レイノルズ数は次のように定義される。
【００４３】
【数１】
2020527155.tif 000003
【００４４】
式中、
ρは流体の密度（ＳＩ単位：ｋｇ／ｍ３）であり、
ｕは、物体に対する流体の速度（ｍ／ｓ）であり、
Ｌは特性線形寸法（ｍ）であり、
μは、流体の動的粘度（Ｐａ・ｓまたはＮ・ｓ／ｍ２またはｋｇ／ｍ・ｓ）であり、
νは、流体の運動学的粘度（ｍ２／ｓ）である。
【００４５】
好ましい実施形態では、滞留時間デバイスは、コイルドフローインバーター（ＣＦＩ）またはヘリカルフローインバーター（ＨＦＩ）である。
ＣＦＩはＫｌｕｔｚらによって、連続的な低ｐＨウイルス不活性化のツールとして導入された（Klutz, S. et al. 2015, Journal of Biotechnology 213, pp. 120-130）。
【００４６】
ヘリカルフローインバーターは、欧州特許出願、出願番号EP17208952に記載されている。
【００４７】
あるいは、ＣＦＩおよび／もしくはＨＦＩの代わりに、または、ＣＦＩおよび／もしくはＨＦＩに加えて、連続攪拌タンク反応器を使用することができる。
【００４８】
連続攪拌タンク反応器を使用する場合、本明細書に記載の修飾ユニットはさらに流出を含む。
【００４９】
好ましい実施形態では、修飾ユニットは使い捨ておよび／または１回きりの使用である。これには、ステンレススチール機器に依存した従来のプラントに比べ、使い捨て機器を使用すると時間あたりの生産量を増やすために数を増やすことがはるかに簡単であるという利点がある。ステンレススチール機器に依存した従来のプラントは洗浄インフラストラクチャが複雑であり、理由としては、例えば洗浄インフラストラクチャもステンレススチール機器に対して数を増やす必要があるためである。
【００５０】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載される修飾ユニットは、少なくとも１つのポンプをさらに含む。
【００５１】
この実施形態では、重力または圧力を考慮する必要なく修飾ユニットを組み立てることができるという利点がある。すなわち、ポンプがない場合、重力または圧力によって生成物ストリームが各種デバイスを流れるように、修飾ユニットを設計する必要がある。ポンプを使用することにより、特にＣＦＩまたはＨＦＩを滞留時間デバイスとして使用することが容易となる。
【００５２】
さらに、修飾ユニットはいくつかのポンプを含むことが好ましい。これにより、少なくとも２つのバルブの自動制御、したがって自動プロセスも可能となる。
【００５３】
いくつかの実施形態では、バルブはポンプとして実現され、すなわち、本明細書の修飾ユニットは、少なくとも２つのバルブの代わりに少なくとも２つのポンプを含む。
【００５４】
更なる実施形態では、本明細書で説明される修飾ユニットは、少なくとも１つの廃棄物出口を含む。通常、修飾ユニットが所望のガイダンス分子−リンカー複合物を生産する生産段階の前に開始段階が必要となる。この開始段階では、材料がすでに生産され得、廃棄物出口に導かれ得る。したがって、廃棄物出口には、パラメータ、例えばガイダンス分子−リンカー複合物の品質特性が狭い範囲内となるような効果を有する。
【００５５】
さらに、一般的に、廃棄物出口によって、生産ストリームのポーションを廃棄する可能性が生まれる。これは例えば、ポンプ速度などのプロセスパラメータが所与の関連範囲内にない場合に望ましい。そのような場合、パラメータが範囲外であると影響を受ける生産ストリームのポーションを廃棄し得る。
【００５６】
別の態様では、本発明はガイダンス分子薬物複合体、例えば、ペプチドまたはタンパク質または核酸と薬物との複合体の連続的な病原体削減生産および／または処理のためのモジュールシステムに関し、前記モジュールシステムは次のユニット：
・少なくとも１つの上記修飾ユニット、
・少なくとも１つの混合デバイス、少なくとも１つの滞留時間デバイスおよび生物活性物質を含む少なくとも１つのリザーバーを含む、少なくとも１つの複合ユニット、
・少なくとも１つの緩衝液リザーバーおよび少なくとも１つの限外ろ過デバイスを含む、少なくとも１つの濃縮および再緩衝ユニット、
・少なくとも１つの緩衝液リザーバーおよび少なくとも１つのダイアフィルトレーションデバイスを含む、少なくとも１つの濃縮および再緩衝ユニット、
・少なくとも１つのフィルター、を含む。
【００５７】
好ましくは、ガイダンス分子薬物複合体の連続的な病原体削減生産および／または処理のための前記モジュールシステムは、１つを超えるフィルターを含む。
【００５８】
前記フィルターは、好ましくは０．１μｍ〜４μｍ、より好ましくは０．５μｍ〜２．５μｍ、最も好ましくは０．２μｍ〜２μｍの孔径を有する。
【００５９】
当業者であれば、所与のプロセスに濃縮および再緩衝ユニットがいくつ必要であるか分かる。さらに、ガイダンス分子薬物複合体の連続的な病原体削減生産および／または処理のためのモジュールシステムは、以下のユニット：
・少なくとも１つの同時修飾および複合ユニットであって、緩衝液中ガイダンス分子を含む少なくとも１つのリザーバーおよび／または緩衝液中ガイダンス分子を含む生成物ストリーム用の少なくとも１つの入口、リンカー溶液を含む少なくとも１つのリザーバーおよび少なくとも生物活性物質を含む１つのリザーバー、少なくとも１つの混合デバイス、ならびに、定義された滞留時間を保証する、すなわち、混合後、ガイダンス分子とリンカー分子が連続プロセス中、常に同様の時間滞留するようにする少なくとも１つの滞留時間デバイスを含む前記同時修飾および複合ユニット、
・少なくとも１つの緩衝液リザーバーおよび少なくとも１つの限外ろ過デバイスを含む、少なくとも１つの濃縮および再緩衝ユニット、
・少なくとも１つの緩衝液リザーバーおよび少なくとも１つのダイアフィルトレーションデバイスを含む、少なくとも１つの濃縮および再緩衝ユニット、
・少なくとも１つのフィルター、も含み得る。
【００６０】
リンカー溶液を含む少なくとも１つのリザーバーおよび生物活性物質を含む少なくとも１つのリザーバーの代わりに、生物活性物質およびリンカーの両方を含む少なくとも１つのリザーバーも提供され得ることに留意する。この実施形態の好ましい例では、生物活性物質とリンカーは、前記生物活性物質とリンカーの両方を含む前記少なくとも１つのリザーバーに提供される前に結合している。
【００６１】
好ましくは、ガイダンス分子薬物複合体の連続的な病原体削減生産および／または処理のための前記モジュールシステムは、１つを超えるフィルターを含む。
【００６２】
前記フィルターは、好ましくは０．１μｍ〜４μｍ、より好ましくは０．５μｍ〜２．５μｍ、最も好ましくは０．２μｍ〜２μｍの孔径を有する。
【００６３】
本明細書で使用される「モジュールシステム」という用語は、「生産プラント」という用語と交換可能に使用され、生成物、例えばＡＤＣを製造するために接続される２つ以上のユニットを指す。
【００６４】
好ましい実施形態では、本明細書に記載のモジュールシステムは、閉鎖されたモジュールシステムである。
【００６５】
ＡＤＣの連続生産を可能にするこのようなモジュールシステムには、閉鎖システムに相当するという大きな利点がある。したがって、非常に危険な生物活性物質を提供する必要があるだけで、その後は処理されない。したがって、とりわけ、労働上の安全が大幅に改善される。
【００６６】
本明細書で使用する「閉鎖」という用語は、記載されたモジュールシステムが、生成物ストリームの汚染および危険の可能性がある生物活性物質への暴露を最小限に抑えるために、流体ストリームが室内環境にさらされないように操作されることを意味する。材料、物体、緩衝液などを外部から添加できるが、この添加は、流体ストリームが室内環境にさらされるのを避けるように行われる。したがって、環境内汚染物質から効果的なバリアを提供するため、殺菌フィルターを使用し得る。閉鎖システムの例としては、無菌接続デバイスが一体化して組み込まれた殺菌済みの使い捨てバッグが挙げられる。さらに、プロセスシステムはオープンであり得るが、殺菌、無菌、または低バイオバーデンのいずれであろうと、プロセス要件に適切または一貫した洗浄、消毒、および／または、殺菌プロセスにより「閉鎖される」。例としては、各使用ごとにＣＩＰおよびＳＩＰを施したプロセス容器が挙げられる。特定のシステムのセットアップ中に適切な対策が講じられる場合、クロマトグラフィーや一部ろ過システムなどの非殺菌システムも、低バイオバーデン操作で閉鎖され得る。本明細書で使用される「閉鎖」という用語は、「閉鎖された」システムだけでなく「機能的に閉鎖された」システムの両方を指し、前述のように、一般に、記載されたモジュールシステムが、流体ストリームが室内環境にさらされないように操作されることを指す。
【００６７】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載のモジュールシステムは、殺菌された環境で操作される。この実施形態では、生成物ストリームの汚染を最小限に抑えるために、モジュールシステムを閉鎖する必要はない。
【００６８】
さらに、適切な場合は、殺菌環境における本明細書に記載のモジュールシステムの適切な操作を、モジュールシステムの閉鎖した操作と組み合わせてもよい。
【００６９】
好ましい実施形態では、モジュールシステムは使い捨ておよび／または１回きりの使用である。
【００７０】
いくつかの実施形態では、フィルターは沈殿物を保持し、および／または、バイオバーデンの低減のために使用される。いくつかの実施形態では、沈殿物をろ過するために最初にデプスフィルターが使用され、その後、バイオバーデン低減のために０．２μｍフィルターが使用される。
【００７１】
いくつかの実施形態において、本明細書に記載の閉鎖モジュールシステムは、０．２μｍのろ過ユニットを少なくとも２つ含み、それにより、閉鎖モジュールシステムのそれぞれの箇所でろ過ユニットの並列操作を可能にする。このような並列操作は、生成物ストリームが他のろ過ユニットを通過できると同時に詰まったまたは破損したろ過ユニットの交換が可能なため、有利である。すなわち、この実施形態は、本当に連続的なプロセスを促進する。
【００７２】
殺菌性の維持は、抗体およびＡＤＣの（半）連続生産における課題である。したがって、好ましくは、修飾ユニットおよびモジュールシステムにおいて、すべての要素は、チューブ、特に使い捨てチューブによって一緒に接続される。プラントの他の要素も使い捨て要素であることが好ましい；特に、使い捨てろ過要素、使い捨てバルブチューブ類、使い捨てセンサー（流れ、ｐＨ、導電率、ＵＶ、圧力）、使い捨てチューブ、使い捨ての膜、使い捨てコネクター、使い捨てのコンテイナー、使い捨てミキサー、使い捨てサンプリングシステムからなる群から選択された要素が使用される。液体を搬送する手段、特にポンプも、使い捨てポンプ、すなわち唯一の接触面が使い捨てチューブ類であるポンプまたはペリスタリックポンプであることが好ましい。
【００７３】
いくつかの実施形態では、ガイダンス分子薬物複合体、例えば、ペプチドまたはタンパク質または核酸と薬物との複合体の連続的な病原体削減生産および/または処理のためのモジュールシステムは、WO 2016/180798 A1に開示されている生産プラントであり、および/または、WO 2016/180798 A1に記載されているプロセス制御のためのコンピュータ実装方法を使用して制御される。
【００７４】
別の態様では、本発明はガイダンス分子薬物複合体、例えば、ペプチドまたはタンパク質または核酸と薬物との複合体の連続的な病原体削減生産および／または処理の方法に関し、前記方法は：
・ガイダンス分子を提供する工程、
・リンカーを提供する工程、
・リンカーとガイダンス分子の付加工程、
・ガイダンス分子−リンカー複合物と生物活性物質の複合工程、
・任意で少なくとも１回の生成物ストリームの連続限外ろ過工程、
・少なくとも１回の生成物ストリームの連続ダイアフィルトレーション工程、
・少なくとも１回の生成物ストリームのろ過工程、を含む。
【００７５】
好ましくは、プロセスは閉鎖された方法で実行される。
【００７６】
少なくとも１回の生成物ストリームのろ過工程は、通常、生成物ストリームの連続ダイアフィルトレーションに続いて実行される。所与のプロセスにとって有利である場合、生成物ストリームの連続ダイアフィルトレーションに続く少なくとも１回のろ過に加え、または代替として、生成物ストリームのろ過を別に実施し得る。
【００７７】
いくつかの実施形態では、上記した、ガイダンス分子薬物複合体、例えば、ペプチドまたはタンパク質または核酸と薬物との複合体の連続的な病原体削減生産および／または処理の方法は、上記した修飾ユニットを用いて実行される：
【００７８】
または、ガイダンス分子薬物複合体、例えば、ペプチドまたはタンパク質または核酸と薬物との複合体の連続的な病原体削減生産および／または処理の方法は：
・ガイダンス分子を提供する工程、
・リンカー−生物活性物質基質を提供する工程、
・ガイダンス分子とリンカー−生物活性物質基質の複合工程、
・少なくとも１回の生成物ストリームの連続限外ろ過工程、
・少なくとも１回の生成物ストリームの連続ダイアフィルトレーション工程、
・少なくとも１回の生成物ストリームのろ過工程、を含み得、
ここで、プロセスはモジュール方式で実行される。
【００７９】
少なくとも１回の生成物ストリームのろ過工程は、通常、生成物ストリームの連続ダイアフィルトレーションに続いて実行される。所与のプロセスにとって有利である場合、生成物ストリームの連続ダイアフィルトレーションに加え、または代替として、生成物ストリームのろ過を別に実施し得る。
【００８０】
または、ガイダンス分子薬物複合体、例えば、ペプチドまたはタンパク質または核酸と薬物との複合体の連続的な病原体削減生産および／または処理の方法は：
・ガイダンス分子、例えば、ペプチドまたはタンパク質または核酸を提供する工程、
・リンカーを提供する工程、
・生物活性物質を提供する工程、
・前記ガイダンス分子、前記リンカーおよび前記生物活性物質を結合させガイダンス分子−リンカー−活性物質複合体を形成する工程、
・少なくとも１回の生成物ストリームの連続限外ろ過工程、
・少なくとも１回の生成物ストリームの連続ダイアフィルトレーション工程、
・少なくとも１回の生成物ストリームのろ過工程、を含み得、
ここで、プロセスはモジュール方式で実行される。
【００８１】
すなわち、最初にリンカーをガイダンス分子に付加するか、最初にリンカーを生物活性物質に付加するか、３つすべての要素を同時に結合させることが可能である。
【００８２】
少なくとも１回の生成物ストリームのろ過工程は、通常、生成物ストリームの連続ダイアフィルトレーションに続いて実行される。所与のプロセスにとって有利である場合、生成物ストリームの連続ダイアフィルトレーションに加え、または代替として、生成物ストリームのろ過を別に実施し得る。
【００８３】
更なる態様において、本明細書に記載のガイダンス分子−薬物−複合体の連続的な病原体削減生産および／または処理の方法は、不均質な細胞培養液混合物由来の、抗体−薬物−複合体の連続的な病原体削減生産および／または処理のプロセスで使用され、前記プロセスは：
・抗体を含む不均質な細胞培養液混合物から生成物ストリームの形で粒子を含まない流体を調製する工程、
・少なくとも１回のろ過工程、
・それぞれ少なくとも２つのクロマトグラフィーカラムおよび／または膜吸着器による洗浄を含む、抗体を洗浄するための少なくとも１回のクロマトグラフィー工程、
・少なくとも１回のウイルスクリアランス工程、
・少なくとも１回の連続限外ろ過工程、
・少なくとも１回の生成物ストリームの連続ダイアフィルトレーション工程、
・上記の方法を用いて前記連続ダイアフィルトレーションの後に得られた抗体を処理して、抗体−薬物−複合体を得る工程、を含み、
プロセスは連続かつモジュール方式で実行される。
【００８４】
したがって、上記の不均質な細胞培養液混合物由来の、抗体−薬物−複合体の連続的な病原体削減生産および／または処理のプロセスの第１の工程は、連続的に細胞保持を行って抗体を含む不均質な細胞培養液混合物を提供することを含む連続発酵、および、／または、例えばバッチまたは流加培養方式で調製した抗体を含む不均質な細胞培養液混合物の提供であり得る。
【００８５】
さらに、製剤化のためのユニット操作、例えば安定剤の添加や最終医薬品のｐＨ調整を、最終生成物を保管するためのリザーバー下流に追加してもよい。
【実施例】
【００８６】
一般的な考慮事項：
モジュールおよび好ましくは閉鎖プロセスにおいて、連続的な病原体削減条件下で抗体−薬物−複合体を提供するために、以下のユニットと付随するプロセス工程を備える生産プラントを製作する：
【００８７】
特に指定がない限り、イージーロードＩＩのポンプヘッドを備えたマスターフレックスペリスタルティックポンプをプロセスで使用する。マスターフレックスまたはＣフレックスまたはサニピュアをチューブとして使用する。生成物と接触するすべての要素に２５ｋＧｙのガンマ線を照射する。例外的なケースでは、材料技術に関連する理由でガンマ線照射が許可されない場合、要素を１２１℃で少なくとも２０分間オートクレーブにかける。可能であれば、ガンマ線照射ユニットとして、すぐに使用できる使い捨て製品（「使い捨て製品」、「すぐに使用できる製品」）を使用する。原則として、バッグはすべてユニットに接続されている。各ユニットの間には、１回使用のガンマ線照射バッグを、ユニットｎ−１の出口からの流れとユニットｎの入口への流れの間に均等化タンクとして配置する。原則として、各ユニットにはその時点で入口と出口に流れが存在する。生成物液の排出が有利な場合は、容器を０．２μｍの疎水性フィルターを介して外部環境から密閉する。さらに、プロセスは、ＰＣＳ７プロセスシステムによって制御されることが好ましい。
【００８８】
抗体溶液、例えばＩｇＧを含む保管コンテイナーを提供する。さらに、リンカー溶液を含む保管バッグを提供する。
【００８９】
抗体溶液およびリンカー溶液は、保管バッグとも呼ばれるリザーバーからポンプで汲み出され、混合および反応が可能であり、それによって両要素の修飾を促し、抗体−リンカー基質を調製する。複合は次の工程で実行され、生物活性物質を含む溶液、例えば、トキソフォアを含む溶液を、抗体−リンカー複合物を含む流体ストリームに加え、例えばスタティックミキサーを使用してすべての要素を混合し、抗体−リンカー−トキソフォア複合体を調製する。トキソフォアの付加量は、２つの特定の波長でのＵＶ吸収によって測定される。抗体薬物複合体および非結合トキソフォアを含む、得られた生成物ストリームは、デプスフィルターを通過させてもよく、その後、抗体を濃縮するために限外ろ過にかける。次に、生成物ストリームをダイアフィルトレーションにかけ、例えば、生成物ストリームを、キャピラリー限外ろ過ユニットの少なくとも１つのキャピラリー限外ろ過膜を介して洗浄液で洗浄するが、ここで、生成物ストリームはキャピラリー内で運ばれ、洗浄液はキャピラリーの外側で運ばれ、生成物ストリームおよび洗浄液がキャピラリー限外ろ過ユニットに連続的に供給され、キャピラリー限外ろ過ユニットから連続的に除去され、生成物ストリームおよび洗浄液はキャピラリー限外ろ過ユニット内を循環せず、生成物ストリームの除去は、望ましくない正味の流れがキャピラリー内部からキャピラリー外部へ通過する、またはその逆に通過することがないように調整され、少なくとも１つのキャピラリー限外ろ過ユニットを生成物ストリームの方向に出る流体はすべて、少なくとも１つのガード精製器を通過する。生成物ストリーム（=供給ストリーム）をキャピラリーに、そして洗浄液（=透過液）を限外ろ過ユニットのキャピラリーの外側に運ぶために、それぞれポンプを１つ使用する。キャピラリーから生成物ストリーム（保持液）を制御して除去するためには、ポンプをさらにもう１つ使用する。このポンプ（=保持液ポンプ）の使用により、保持液の除去の制御が簡素化される。この連続プロセスで通常使用される低流量（≦１００ｍｌ／分）を確実に測定する適切な流量センサーがないため、これは有利である。特に好ましくは、使い捨てペリスタルティックポンプが市販されているという利点を踏まえ、ペリスタルティックポンプをここで使用してもよく、殺菌性だけでなく使い捨て技術も利用できる。さらに、ポンプは洗浄液（透過液）の制御した除去に使用される。
【００９０】
あるいは、上記の連続ダイアフィルトレーションの代わりに、限外ろ過／ダイアフィルトレーションシステムのダイアフィルトレーションの薄片を含むシステムを使用してもよい。
【００９１】
最後に、生成物ストリームは、並行して操作される０．２μｍフィルター２枚を使用してろ過する。フィルターとチューブアセンブリの両方にガンマ線を照射する。入口と出口のラインは、殺菌コネクターを使用してガンマ線照射バッグに接続されており、ガンマ線照射バッグは、変動する流量の体積を均等化するのに機能する。通気に関しては、フィルターは疎水性で０．２μｍのエアフィルターに連結されているため、本発明の意味の範囲内でユニットを閉鎖する。エアフィルターは、ポールコーポレーション社のエンフロンＩＩまたはザルトリウス・ステディム社のＭｉｄｉｓａｒｔ  ２０００のいずれかである。通気バルブは、閉じている場合でも透過性があるが、環境に対して確実に密閉されるように修飾を施している。
【００９２】
具体例
実施例１：連続修飾
抗体溶液は、初期濃度が１５．３ｍｇ／ｍＬであったものを、１００ｍＭリン酸カリウム（ＫＰｉ）−緩衝液（ｐＨ７．５）で最終濃度１０．７２ｇ／Ｌに希釈した。リンカー溶液として、ここでは、ＤＭＡ中ＳＰＤＢリンカー（Ｎ−スクシンイミジル−４−（２−ピリジルジチオ）ブタノエート）を１．５６ｇ／Ｌの濃度で調製した。
【００９３】
これらの溶液をリザーバーに充填し、システムが定常状態に達するまで、抗体溶液に関しては２８４．３ｍＬ／ｈ、リンカー溶液に関しては２０ｍＬ／ｈの特定の流量でポンプ輸送した。システムが定常状態に達するのに必要な時間、例えば、基本的に一定であるポンプ速度を起動段階と呼んだ。この実施例では、起動段階は最初の５回分の滞留時間として定義し、ここで、１回の滞留間隔は、生成物ストリームの特定のポーションが修飾ユニットを通過するのに必要な時間に等しい。起動時において、生産されたすべての材料は廃棄物出口に送った。
【００９４】
起動段階後、システムを起動モードから生産モードに切り替えた。したがって、抗体溶液およびリンカー溶液を、抗体溶液に関しては２８４．３ｍＬ／ｈ、リンカー溶液に関しては２０ｍＬ／ｈの特定の流量で混合デバイスへポンプ輸送で送り、ここでは、エアフェルド社のスタティックカスケード−マイクロミキサーを最大内径１５０μｍ、１１回の混合ステージの設定で使用した。混合デバイスを通過した後、生成物ストリームは滞留時間デバイスを通過した。ここでは、内径が３．１ｍｍで、総容量が６．３ｍＬのマスターフレックスタイゴンチューブを使用した。その後、生成物ストリームをリザーバーで回収し、ここでは、ボラコネクターを備えたショット社のフラスコを用いた。
【００９５】
サンプル材料の収集のために、生成物ストリームをサンプルリザーバーにも送った。実験中にサンプル２０ｍＬを採取した。
【００９６】
プロセスをシャットダウンするために、流れを再び廃棄物出口に向け、ポンプを停止し、相互接続された部品をすべて溶媒と水で洗浄し、溶媒と水を、洗浄のため、抗体およびリンカー溶液を最初に収容していたそれぞれのリザーバーへ充填した。使い捨ての機器が使用していた場合、廃棄した。
【００９７】
修飾反応が連続プロセス条件下で成功したことを証明するために、生産した抗体−リンカー複合物が、バッチプロセスで生産した抗体−リンカー複合物と同じ特性を有することを実証する必要があった。そのために、生産した抗体−リンカー複合物を標準条件下でトキソフォアと複合させ、その単量体含有量および二量体含有量ならびに達成した薬物対抗体比を決定した。
【００９８】
上記の分析のため、２．２５ｍＬに分注したサンプルを２ｍＬのリン酸緩衝液と０．２０９ｍＬのジメチルアセトアミド（ＤＭＡ）で希釈した。その後、２０ｍＭトキソフォアのＤＭＡ溶液を４０．９μＬ加えた。１８時間の反応時間後、ＰＤ１０カラムによるＨｉｓ／Ｇｌｙ（ｐＨ５．５）への緩衝液交換により反応を停止させた。サイズ排除クロマトグラフィーによれば、９６．４％の単量体含有量および２．８％の二量体含有量を示した。別に分注したサンプルを希釈およびＵＶ測定により分析すると、３．４の薬物対抗体比（ＤＡＲ）を示した。ＵＬＡＲ（非複合リンカー対抗体比）は、特定のＨＰＬＣ分析を使用して０．０３未満であり、この場合、サンプルはジスルフィド開裂剤で処理され、タンパク質が除去され、ＨＰＬＣにより、放出されたメルカプトピリジンが検出される。
【００９９】
すなわち、連続プロセス条件が最終複合体の安定性には影響を与えないことがわかった。仮に影響を与える場合、単量体含有量はもっと低くなるからである。さらに、連続条件下で生産した抗体−リンカー複合物は、１つの抗体−リンカー複合物に対してバッチプロセスと同じ量のトキソフォアを必要とする。そうでない場合、ＤＡＲおよびＵＬＡＲ値はもっと高く、または、低くなるからである。
【０１００】
実施例２：連続複合
複合反応を、ＡＤＣ生産のモデルプロセスにおいて上記の修飾に続く２番目の反応工程として用いた。デバイスのセットアップは、修飾反応について上記で説明したセットアップと同様であった。
【０１０１】
修飾された抗体の溶液を、１００ｍＭのＫＰｉ緩衝液（ｐＨ７．５）で最終濃度約６ｇ／Ｌまで希釈した。ＤＭＡ中メイタンシノイドＤＭ４（１４Ｓ，１６Ｓ，３２Ｓ，３３Ｓ，２Ｒ，４Ｓ，１０Ｅ，１２Ｅ，１４Ｒ）−８６−クロロ−１４−ヒドロキシ−８５，１４−ジメトキシ−３３，２，７，１０−テトラメチル−１２，６−ジオキソ−７−アザ−１（６，４）−オキサジナナ−３（２，３）−オキシラナ−８（１，３）−ベンゼナシクロテトラデカファン−１０．１２−ジエン−４−イルＮ−（４−メルカプト−４−メチルペンタノイル）−Ｎ−メチル−Ｌ−アラニネート）の３．３ｍＭ溶液を調製した。
【０１０２】
これらの溶液をリザーバーに充填し、システムが定常状態に達するまで、抗体−リンカー−溶液に関しては１６９．６ｍＬ／ｈ、ＤＭ４−溶液に関しては１０．０ｍＬ／ｈの特定の流量でポンプ輸送した。プロセス起動時において、生産されたすべての材料は廃棄物出口に送った。サンプル材料の回収のために、流れをサンプルリザーバーに送った。実験中、２時間３６分の反応時間の後、２０ｍＬのサンプルを採取した。
【０１０３】
プロセスのシャットダウンでは、流れを廃棄物出口に向け、ポンプを停止し、リザーバーを洗浄液（洗浄用に水、ＤＭ４をクエンチするために１ｍｏｌのＮａＯＨ）に変更し、セットアップ全体を水およびＮａＯＨ溶液で流して洗浄した。または、１回使用の場合であれば、セットアップを廃棄することもできた。
【０１０４】
反応後、溶液を濃縮し、緩衝液を限外ろ過／ダイアフィルトレーション（ＵＦ／ＤＦ）によりＨｉｓ／Ｇｌｙ（ｐＨ５．５）に交換した。得られた混合物をＳＥＣ（サイズ排除クロマトグラフィー）にかけると、９６．７％の単量体含有量および３．０３％の二量体含有量を示した。このサンプルを分注して希釈し、ＵＶ測定により分析したところ、薬物対抗体比は３．３であった。この反応の収率は、ＵＦ／ＤＦ後、８７％であった。
【０１０５】
したがって、全体として、これらの結果は、本明細書に記載の複合ユニットを使用した連続プロセスで生産した抗体−リンカー複合物が、バッチプロセスで生産されたものに匹敵することを示した。
【図面の簡単な説明】
【０１０６】
【図１】図１は、ガイダンス分子とリンカーの連続的な病原体削減処理のための本明細書記載の修飾ユニットの一例の図であり、前記修飾ユニットは次の要素：緩衝液中ガイダンス分子を含むリザーバー（１）、溶液中リンカーを含むリザーバー（２）、混合デバイス（３）、滞留時間デバイス（４）、ガイダンス分子の投与用ポンプ（７）、リンカー分子の投与用ポンプ（８）、ガイダンス分子−リンカー複合物を取り出すためのリザーバー（５）、廃棄物出口（６）、および、滞留時間デバイス（４）から出る生成物ストリームを廃棄物出口（６）またはガイダンス分子−リンカー複合物を取り出すためのリザーバー（５）へ方向づける三方バルブ（９）を含む。操作中、緩衝液中のガイダンス分子とリンカー溶液を、２つのポンプ（７）および（８）を介して制御された方法で混合デバイス（３）へ添加する。混合後、この例において、生成物ストリームは滞留時間デバイス（４）を通過する。その後、生成物ストリームはリザーバー（５）で回収される。
【０１０７】
【図２】図２は、ガイダンス分子とリンカーの連続的な病原体削減処理のための本明細書記載の修飾ユニットの一例の概略図を示す。この例では、修飾ユニットは下流ユニットと流体連通している。したがって、生成物ストリームは次のユニット操作に連続的に流れるため、ガイダンス分子リンカー複合物を取り込むためのリザーバーは必要ない。この例では、修飾ユニットは次の要素：緩衝液中ガイダンス分子を含むリザーバー（１）、溶液中リンカーを含むリザーバー（２）、混合デバイス（３）、滞留時間デバイス（４）、ガイダンス分子の投与用ポンプ（７）、リンカー分子の投与用ポンプ（８）、廃棄物出口（６）、および、次のユニット操作への接続（１０）を含む。操作中、緩衝液中のガイダンス分子とリンカー溶液を、２つのポンプ（７）および（８）を介して制御された方法で混合デバイス（３）へ添加する。混合後、この例において、生成物ストリームはプラグ流反応器（４）を通過する。その後、生成物ストリームは接続（１０）を介して例えば図３に示される次のユニット操作に連続的に流れる。
【０１０８】
利点がある場合、次のユニット操作への接続（１０）に中間リザーバー／保管コンテイナー（図示せず）を含んでもよいことに留意されたい。
【０１０９】
さらに、上述したように、リザーバー（１）に抗体を提供する代わりに、前記抗体を連続的に生産および精製する上流プロセスから提供してもよいことに留意されたい。
【０１１０】
さらに、この例では、２つの質量流量制御（２６）を任意で使用した。
【０１１１】
【図３】図３は、複合を実行する例示的なユニット操作の概略図である。この例では、前記複合ユニット操作は、前のユニット操作への接続（１０）および後続のユニット操作への接続（１１）、緩衝液を含むリザーバー（１２）、トキソフォアを含むリザーバー（１３）、ここではスタティックミキサーである混合デバイス（１４）、滞留時間デバイス（１５）、２つの均質化ループ（１６）および（１７）、異なる流体ストリームの投与量を制御するための複数のポンプ（１８ａ−ｆ）、２つの廃棄物出口（１９ａおよび１９ｂ）、ならびに後続のユニット操作用の緩衝液を含むリザーバー（２０）を含む。
【０１１２】
操作中、前のユニット操作、すなわち、本明細書に記載の修飾ユニットで生産した抗体−リンカー複合物を含む生成物ストリームは、接続（１０）を介して複合ユニット操作に入り、均質化ループ（１６）を介してリザーバー（１２）から緩衝液が添加され、そして、トキソフォアを含むリザーバー（１３）から、トキソフォア溶液が、抗体−リンカー複合物を含む生成物ストリームに投与される。次に、抗体−リンカー複合物およびトキソフォアを含む生成物ストリームを混合し、デバイス（１４）で混合した後、この例において、生成物ストリームはプラグ流反応器（１５）に流れ、任意でＵＶ測定で分析にかける。その後、ｐＨおよび濃度を調整するために、リザーバー（２０）から均質化ループ（１７）を介して緩衝液を生成物ストリームに添加し、抗体−リンカー−トキソフォア複合体は、後続のユニット操作、例えば図４に示されるユニット操作へ流れる。
【０１１３】
【図４】図４は、前のユニット操作への接続（１１）および後続のユニット操作への接続（２１）、限外ろ過デバイス（２２）、デプスフィルター（２３）、廃棄物出口（２４）、別のフィルター（２５）、検出デバイス（２６）、サージバッグ（２７）、ならびに流体の流れを制御するための複数のポンプ（２８ａ−ｄ）を含む、連続限外ろ過のための例示的なユニットの概略図である。
【０１１４】
この例において、操作中、抗体−リンカー−トキソフォア複合体を含む生成物ストリームは、接続（１１）を介してこのユニット操作に入り、フィルター（２５）、限外ろ過デバイス（２２）、検出デバイス（２６）、サージバッグ（２７）およびデプスフィルター（２３）を通過し、そして接続（２１）を介して、図５に示される後続のユニット操作に流れる。
【０１１５】
【図５】図５は、前のユニット操作からの接続（２１）、緩衝液を含むリザーバー（２９）、透析モジュール（３０）、検出デバイス（３１）、廃棄物出口（３２）、フィルター（３３）、最終生成物、すなわち限外ろ過および透析された抗体−リンカー−トキソフォア複合体を保管するためのリザーバー（３４）、ならびに流体ストリームを制御するためのポンプ（３５−ｂ）を含む連続透析のための例示的なユニットの概略図である。
【０１１６】
この例において、操作中、抗体−リンカー−トキソフォア複合体を含む生成物ストリームは、接続（２１）を介してこのユニット操作に入り、透析モジュール（３０）へ流れ、ここで、リザーバー（２９）からの緩衝液を、抗体−リンカー−トキソフォア複合体のその前の緩衝液と交換する。前の緩衝液は廃棄物出口（３２）に廃棄される。抗体−リンカー−トキソフォア複合体を含む生成物ストリームは、限外ろ過モジュールから検出デバイス（３１）およびフィルター（３３）を介して最終生成物を保管するためのリザーバー（３４）に流れる。
【０１１７】
上記のように、抗体を生産する連続細胞培養のためのユニット操作、連続細胞分離および抗体の連続精製を上流に追加し、細胞発酵から始まる抗体リンカー複合体の連続生産も可能であり得る。
【０１１８】
さらに、製剤化のためのユニット操作、例えば安定剤の添加や最終医薬品のｐＨ調整を、最終生成物を保管するためのリザーバー下流に追加してもよい。
【０１１９】
【図６】図６は、ガイダンス分子リンカー複合物および生物活性物質の連続的な病原体削減処理のための本明細書記載の複合ユニット（３８）の一例の図であり、前記複合ユニットは次の要素：緩衝液中ガイダンス分子リンカー複合物を含むリザーバー（３９）、溶液中生物活性物質、ここではトキソフォアを含むリザーバー（４０）、混合デバイス（３）、滞留時間デバイス（４）、ガイダンス分子リンカー複合物の投与用ポンプ（７）、トキソフォアの投与用ポンプ（８）、ガイダンス分子リンカートキソフォア複合体を取り出すためのリザーバー（５）、廃棄物出口（６）、および、滞留時間デバイス（４）から出る生成物ストリームを廃棄物出口（６）またはガイダンス分子リンカートキソフォア複合体を取り出すためのリザーバー（５）へ方向づける三方バルブ（９）を含む。操作中、緩衝液中のガイダンス分子リンカー複合物およびトキソフォア溶液を、２つのポンプ（７）および（８）を介して制御された方法で混合デバイス（３）へ添加する。混合後、この例において、生成物ストリームはプラグ流反応器（４）を通過する。その後、生成物ストリームはリザーバー（５）で回収される。
【符号の説明】
【０１２０】
１．ガイダンス分子を含むリザーバー（１）
２．溶液中リンカーを含むリザーバー（２）
３．混合デバイス（３）
４．滞留時間デバイス（４）
５．リザーバー（５）
６．廃棄物出口（６）
７．ポンプ（７）
８．ポンプ（8）
９．三方バルブ（９）
１０．ユニット間の接続（１０）
１１．ユニット間の接続（１１）
１２．緩衝液を含むリザーバー（１２）
１３．トキソフォアを含むリザーバー（１３）
１４．混合デバイス（１４）
１５．滞留時間デバイス（１５）
１６．均質化ループ（１６）
１７．均質化ループ（17）
１８．ポンプ（１８ａ−ｆ）
１９．廃棄物出口（１９ａおよび１９ｂ）
２０．緩衝液を含むリザーバー（２０）
２１．ユニット間の接続（２１）
２２．限外ろ過デバイス（２２）
２３．デプスフィルター（２３）
２４．廃棄物出口（２４）
２５．フィルター（２５）
２６．検出デバイス（２６）
２７．サージバッグ（２７）
２８．ポンプ（２８ａ−ｄ）
２９．緩衝液を含むリザーバー（２９）
３０．透析モジュール（３０）
３１．検出デバイス（３１）
３２．廃棄物出口（３２）
３３．フィルター（３３）
３４．最終生成物を保管するためのリザーバー（３４）
３５．ポンプ（３５ａおよび３５ｂ）
３６．質量流量制御（３６）
３７．修飾ユニット（３７）
３８．複合ユニット（３８）
３９．修飾した抗体を含むリザーバー（３９）
４０．トキソフォアを含むリザーバー（４０）
【図１】
2020527155.tif 000004
【図２】
2020527155.tif 000005
【図３】
2020527155.tif 000006
【図４】
2020527155.tif 000007
【図５】
2020527155.tif 000008
【図６】
2020527155.tif 000009
【国際調査報告】
2020527155.tif 000010
2020527155.tif 000011