(57)【要約】  ＫＣａ３．１（ＩＫチャネル）アゴニストなどのカリウムチャネルアゴニストを使用して腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）を増殖させる方法及び癌などの疾患の処置におけるそのような増殖されたＴＩＬの使用が本明細書で開示される。
2020503351.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）の集団を用いて癌を処置する方法であって、
（ａ）患者から腫瘍を切除するステップであって、前記腫瘍は、ＴＩＬの第１の集団を含む、ステップ；
（ｂ）前記腫瘍を腫瘍断片に断片化するステップ；
（ｃ）前記腫瘍断片を第１の細胞培養培地と接触させるステップ；
（ｄ）前記第１の細胞培養培地中で前記ＴＩＬの第１の集団の初期増殖を行ってＴＩＬの第２の集団を得るステップであって、前記ＴＩＬの第２の集団の数は、前記ＴＩＬの第１の集団よりも少なくとも５倍多く、前記第１の細胞培養培地は、ＩＬ−２を含む、ステップ；
（ｅ）第２の細胞培養培地中で前記ＴＩＬの第２の集団の急速増殖を行ってＴＩＬの第３の集団を得るステップであって、前記ＴＩＬの第３の集団の数は、前記急速増殖の開始から７日後に前記ＴＩＬの第２の集団よりも少なくとも５０倍多く、前記第２の細胞培養培地は、ＩＬ−２、ＯＫＴ−３（抗ＣＤ３抗体）及び照射同種異系末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）を含み、前記急速増殖は、１４日以下の期間にわたって行われる、ステップ；
（ｆ）前記ＴＩＬの第３の集団を回収するステップ；及び
（ｇ）前記ＴＩＬの第３の集団の治療有効部分を、前記癌を有する患者に投与するステップ
を含み、前記第１の細胞培養培地若しくは前記第２の細胞培養培地のいずれか又は前記第１の細胞培養培地及び前記第２の細胞培養培地の両方は、カリウムチャネルアゴニストをさらに含む、方法。
【請求項２】
前記カリウムチャネルアゴニストは、ＫＣａ３．１（ＩＫチャネル）アゴニストである、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記第１の細胞培養培地及び前記第２の細胞培養培地の両方は、前記ＫＣａ３．１アゴニストをさらに含む、請求項２に記載の方法。
【請求項４】
前記第１の細胞培養培地中の前記ＫＣａ３．１アゴニストの濃度は、１〜１０００ｎＭである、請求項２又は３に記載の方法。
【請求項５】
前記第１の細胞培養培地中の前記ＫＣａ３．１アゴニストの濃度は、約１００ｎＭである、請求項２〜４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６】
前記第２の細胞培養培地中の前記ＫＣａ３．１アゴニストの濃度は、０．１〜１００ｍＭである、請求項２〜５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項７】
前記第２の細胞培養培地中の前記ＫＣａ３．１アゴニストの濃度は、約５０ｍＭである、請求項２〜６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項８】
前記初期増殖は、２１日以下の期間にわたって行われる、請求項１〜７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項９】
前記初期増殖は、１１日以下の期間にわたって行われる、請求項１〜８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１０】
前記急速増殖は、７日以下の期間にわたって行われる、請求項１〜９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１１】
前記ＫＣａ３．１アゴニストは、式（１）：
【化１】
2020503351.tif 000068
（式中、
Ｒａは、ハロ、シアノ、ヒドロキシ、チオール、（Ｃ１〜６）アルキル、−ＮＨ２及び−ＮＲ１Ｒ２から選択され；
Ｒ１及びＲ２は、独立して、Ｈ又は（Ｃ１〜６）アルキルであり；
Ｘは、Ｓ、Ｏ及びＮＨからなる群から選択され；
Ｒｂ及びＲｃは、水素、（Ｃ１〜６）アルキル、（Ｃ１〜６）アルコキシル、ハロ、ニトロ、アリール、ヘテロアリール、（Ｃ１〜６）アルキル及び（Ｃ３〜７）シクロアルキルからなる群から独立して選択されるか、又はＲｂ及びＲｃは、それらが結合されている炭素原子と共に、アリール、ナフチル、アントリル、ヘテロアリール、シクロアルキル及びヘテロシクロアルキル環からなる群から選択される環を形成し；及び
Ｒｄ及びＲｅは、水素、（Ｃ１〜６）アルキル、（Ｃ１〜６）アルコキシル、ハロ、ニトロ、アリール、ヘテロアリール、（Ｃ１〜６）アルキル及び（Ｃ３〜７）シクロアルキルからなる群から独立して選択されるか、又はＲｄ及びＲｅは、それらが結合されている炭素原子と共に、アリール、ナフチル、アントリル、ヘテロアリール、シクロアルキル及びヘテロシクロアルキル環からなる群から選択される環を形成し；
ただし、ＲｂとＲｃとが環を形成する場合、ＲｄとＲｅとは、環を形成せず、及びＲｄとＲｅとが環を形成する場合、ＲｂとＲｃとは、環を形成しない）
による化合物又はその薬学的に許容される塩、共結晶、溶媒和物若しくはプロドラッグである、請求項２〜１０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１２】
前記ＫＣａ３．１アゴニストは、ナフト［１，２−ｄ］チアゾール−２−イルアミン（ＳＫＡ−３１）：
【化２】
2020503351.tif 000069
又はその薬学的に許容される塩、共結晶、溶媒和物若しくはプロドラッグである、請求項１１に記載の方法。
【請求項１３】
前記ＫＣａ３．１アゴニストは、アントラ［２，１−ｄ］チアゾール−２−イルアミン（ＳＫＡ−２０）：
【化３】
2020503351.tif 000070
又はその薬学的に許容される塩、共結晶、溶媒和物若しくはプロドラッグである、請求項１１に記載の方法。
【請求項１４】
前記ＫＣａ３．１アゴニストは、６，７−ジクロロ−１Ｈ−インドール−２，３−ジオン３−オキシム（ＮＳ３０９）：
【化４】
2020503351.tif 000071
又はその薬学的に許容される塩、共結晶、溶媒和物若しくはプロドラッグである、請求項２〜１０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１５】
前記ＫＣａ３．１アゴニストは、リルゾール：
【化５】
2020503351.tif 000072
又はその薬学的に許容される塩、共結晶、溶媒和物若しくはプロドラッグである、請求項２〜１０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１６】
前記ＫＣａ３．１アゴニストは、
５−メチルナフト［１，２−ｄ］オキサゾール−２−アミン；
５−エチルナフト［１，２−ｄ］オキサゾール−２−アミン；
５−プロピルナフト［１，２−ｄ］オキサゾール−２−アミン；
５−シクロプロピルナフト［１，２−ｄ］オキサゾール−２−アミン；
５−（ｔｅｒｔ−ブチル）ナフト［１，２−ｄ］オキサゾール−２−アミン；
５−フルオロナフト［１，２−ｄ］オキサゾール−２−アミン；
５−クロロナフト［１，２−ｄ］オキサゾール−２−アミン；
５−ブロモナフト［１，２−ｄ］オキサゾール−２−アミン；
５−ヨードナフト［１，２−ｄ］オキサゾール−２−アミン；
２−アミノナフト［１，２−ｄ］オキサゾール−５−カルボニトリル；
ナフト［１，２−ｄ］オキサゾール−２，５−ジアミン；
Ｎ５−メチルナフト［１，２−ｄ］オキサゾール−２，５−ジアミン；
Ｎ５，Ｎ５−ジメチルナフト［１，２−ｄ］オキサゾール−２，５−ジアミン；
Ｎ５−エチルナフト［１，２−ｄ］オキサゾール−２，５−ジアミン；
５−（ピロリジン−１−イル）ナフト［１，２−ｄ］オキサゾール−２−アミン；
５−メトキシナフト［１，２−ｄ］オキサゾール−２−アミン；
５−トリフルオロメチルナフト［１，２−ｄ］オキサゾール−２−アミン；
５−メチルナフト［２，１−ｄ］オキサゾール−２−アミン；
５−エチルナフト［２，１−ｄ］オキサゾール−２−アミン；
５−プロピルナフト［２，１−ｄ］オキサゾール−２−アミン；
５−シクロプロピルナフト［２，１−ｄ］オキサゾール−２−アミン；
５−（ｔｅｒｔ−ブチル）ナフト［２，１−ｄ］オキサゾール−２−アミン；
５−フルオロナフト［２，１−ｄ］オキサゾール−２−アミン；
５−クロロナフト［２，１−ｄ］オキサゾール−２−アミン；
５−ブロモナフト［２，１−ｄ］オキサゾール−２−アミン；
５−ヨードナフト［２，１−ｄ］オキサゾール−２−アミン；
２−アミノナフト［２，１−ｄ］オキサゾール−５−カルボニトリル；
ナフト［２，１−ｄ］オキサゾール−２，５−ジアミン；
Ｎ５−メチルナフト［２，１−ｄ］オキサゾール−２，５−ジアミン；
Ｎ５，Ｎ５−ジメチルナフト［２，１−ｄ］オキサゾール−２，５−ジアミン；
Ｎ５−エチルナフト［２，１−ｄ］オキサゾール−２，５−ジアミン；
５−（ピロリジン−１−イル）ナフト［２，１−ｄ］オキサゾール−２−アミン；
５−メトキシナフト［２，１−ｄ］オキサゾール−２−アミン；
５−トリフルオロメチルナフト［２，１−ｄ］オキサゾール−２−アミン；及び
その薬学的に許容される塩、共結晶、溶媒和物又はプロドラッグ
からなる群から選択される、請求項２〜１０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１７】
前記ＩＬ−２は、前記第１の細胞培養培地中に１０００ＩＵ／ｍＬ〜６０００ＩＵ／ｍＬの初期濃度で存在する、請求項１〜１６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１８】
前記第２の細胞培養培地中において、前記ＩＬ−２は、１０００ＩＵ／ｍＬ〜６０００ＩＵ／ｍＬの初期濃度で存在し、及び前記ＯＫＴ−３抗体は、約３０ｎｇ／ｍＬの初期濃度で存在する、請求項１〜１７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１９】
前記初期増殖は、ガス透過性容器を使用して行われる、請求項１〜１８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２０】
前記急速増殖は、ガス透過性容器を使用して行われる、請求項１〜１９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２１】
前記第１の細胞培養培地は、ＩＬ−４、ＩＬ−７、ＩＬ−１５、ＩＬ−２１及びそれらの組み合わせからなる群から選択されるサイトカインをさらに含む、請求項１〜２０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２２】
前記第２の細胞培養培地は、ＩＬ−４、ＩＬ−７、ＩＬ−１５、ＩＬ−２１及びそれらの組み合わせからなる群から選択されるサイトカインをさらに含む、請求項１〜２１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２３】
前記患者への前記ＴＩＬの第３の集団の投与の翌日に開始する、前記カリウムチャネルアゴニストで前記患者を処置するステップをさらに含む、請求項１〜２２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２４】
前記患者から腫瘍を切除する前記ステップ前に前記カリウムチャネルアゴニストで前記患者を処置するステップをさらに含む、請求項１〜２３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２５】
前記ＴＩＬの第３の集団を前記患者に投与する前に骨髄非破壊的リンパ球枯渇レジメンで前記患者を処置するステップをさらに含む、請求項１〜２４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２６】
前記骨髄非破壊的リンパ球枯渇レジメンは、６０ｍｇ／ｍ２／日の用量で２日間にわたってシクロホスファミドを投与し、続いて２５ｍｇ／ｍ２／日の用量で５日間にわたってフルダラビンを投与するステップを含む、請求項２５に記載の方法。
【請求項２７】
前記患者への前記ＴＩＬの第３の集団の投与の翌日に開始する、高用量ＩＬ−２レジメンで前記患者を処置するステップをさらに含む、請求項１〜２６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２８】
前記高用量ＩＬ−２レジメンは、許容量まで８時間ごとに１５分のボーラス静脈内注入として投与される６００，０００又は７２０，０００ＩＵ／ｋｇのアルデスロイキン又はそのバイオシミラー若しくは変異体を含む、請求項２７に記載の方法。
【請求項２９】
前記ＴＩＬの第２の集団は、前記カリウムチャネルアゴニストなしで得られたＴＩＬの参照集団に対して増加している、ＣＤ８＋ＣＤ２８＋、ＣＤ８＋ＣＤ２７＋、ＣＤ８＋ＣＤ２７＋ＣＤ２８＋、ＣＣＲ７＋、ＣＤ２５＋及びそれらの組み合わせからなる群から選択される表現型を有するＴ細胞の集団を含み、前記ＴＩＬの第２の集団における前記表現型は、前記ＴＩＬの参照集団に対して少なくとも５％増加している、請求項１〜２８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３０】
前記ＴＩＬの第３の集団は、前記カリウムチャネルアゴニストなしで得られたＴＩＬの参照集団に対して増加している、ＣＤ８＋ＣＤ２８＋、ＣＤ８＋ＣＤ２７＋、ＣＤ８＋ＣＤ２７＋ＣＤ２８＋、ＣＣＲ７＋、ＣＤ２５＋及びそれらの組み合わせからなる群から選択される表現型を有するＴ細胞の集団を含み、前記ＴＩＬの第３の集団における前記表現型は、前記ＴＩＬの参照集団に対して少なくとも５％増加している、請求項１〜２８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３１】
前記ＴＩＬの第２の集団は、前記カリウムチャネルアゴニストなしで得られたＴＩＬの参照集団に対して分化度が低い表現型を有するＴ細胞の集団を含む、請求項１〜２８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３２】
前記ＴＩＬの第３の集団は、前記カリウムチャネルアゴニストなしで得られたＴＩＬの参照集団に対して分化度が低い表現型を有するＴ細胞の集団を含む、請求項１〜２８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３３】
前記癌は、黒色腫、卵巣癌、子宮頸癌、肺癌、膀胱癌、乳癌、頭頸部癌、腎細胞癌、急性骨髄性白血病、結腸直腸癌及び肉腫からなる群から選択される、請求項１〜３２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３４】
前記癌は、非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）、エストロゲン受容体陽性（ＥＲ＋）乳癌、プロゲステロン受容体陽性（ＰＲ＋）乳癌、ヒト上皮増殖因子受容体２（ＨＥＲ２＋）乳癌、トリプルポジティブ乳癌（ＥＲ＋／ＰＲ＋／ＨＥＲ２＋）、トリプルネガティブ乳癌（ＥＲ−／ＰＲ−／ＨＥＲ２−）、二重抵抗性黒色腫及びブドウ膜（眼内）黒色腫からなる群から選択される、請求項１〜３２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３５】
腫瘍から腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）の集団を調製するための方法であって、
（ａ）前記腫瘍を断片化するステップ；
（ｂ）第１の細胞培養培地中でＴＩＬの第１の集団の初期増殖を行ってＴＩＬの第２の集団を得るステップであって、前記ＴＩＬの第２の集団の数は、前記ＴＩＬの第１の集団よりも少なくとも５倍多く、前記第１の細胞培養培地は、ＩＬ−２を含む、ステップ；
（ｂ）第２の細胞培養培地中で前記ＴＩＬの第２の集団の急速増殖を行ってＴＩＬの第３の集団を得るステップであって、前記ＴＩＬの第３の集団の数は、前記急速増殖の開始から７日後に前記ＴＩＬの第２の集団よりも少なくとも５０倍多く、前記第２の細胞培養培地は、ＩＬ−２、ＯＫＴ−３（抗ＣＤ３抗体）、照射同種異系末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）を含み、前記急速増殖は、１４日以下の期間にわたって行われる、ステップ；
（ｃ）前記ＴＩＬの第３の集団を回収するステップ
を含み、前記第１の細胞培養培地若しくは前記第２の細胞培養培地のいずれか又は前記第１の細胞培養培地及び前記第２の細胞培養培地の両方は、カリウムチャネルアゴニストをさらに含む、方法。
【請求項３６】
前記ＴＩＬの第１の集団は、腫瘍又はその一部から得られる、請求項３５に記載の方法。
【請求項３７】
前記腫瘍又はその一部は、患者から切除されたものである、請求項３５に記載の方法。
【請求項３８】
前記カリウムチャネルアゴニストは、ＫＣａ３．１（ＩＫチャネル）アゴニストである、請求項３５〜３７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３９】
前記第１の細胞培養培地及び前記第２の細胞培養培地の両方は、前記ＫＣａ３．１アゴニストをさらに含む、請求項３８に記載の方法。
【請求項４０】
前記第１の細胞培養培地中の前記ＫＣａ３．１アゴニストの濃度は、１〜１０００ｎＭである、請求項３８又は３９に記載の方法。
【請求項４１】
前記第１の細胞培養培地中の前記ＫＣａ３．１アゴニストの濃度は、約１００ｎＭである、請求項３８〜４０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４２】
前記第２の細胞培養培地中の前記ＫＣａ３．１アゴニストの濃度は、０．１〜１００ｍＭである、請求項３８〜４１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４３】
前記第２の細胞培養培地中の前記ＫＣａ３．１アゴニストの濃度は、約５０ｍＭである、請求項３８〜４２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４４】
前記初期増殖は、２１日以下の期間にわたって行われる、請求項３５〜４３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４５】
前記初期増殖は、１１日以下の期間にわたって行われる、請求項３５〜４４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４６】
前記急速増殖は、７日以下の期間にわたって行われる、請求項３５〜４５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４７】
前記ＫＣａ３．１アゴニストは、式（１）：
【化６】
2020503351.tif 000073
（式中、
Ｒａは、ハロ、シアノ、ヒドロキシ、チオール、（Ｃ１〜６）アルキル、−ＮＨ２及び−ＮＲ１Ｒ２から選択され；
Ｒ１及びＲ２は、独立して、Ｈ又は（Ｃ１〜６）アルキルであり；
Ｘは、Ｓ、Ｏ及びＮＨからなる群から選択され；
Ｒｂ及びＲｃは、水素、（Ｃ１〜６）アルキル、（Ｃ１〜６）アルコキシル、ハロ、ニトロ、アリール、ヘテロアリール、（Ｃ１〜６）アルキル及び（Ｃ３〜７）シクロアルキルからなる群から独立して選択されるか、又はＲｂ及びＲｃは、それらが結合されている炭素原子と共に、アリール、ナフチル、アントリル、ヘテロアリール、シクロアルキル及びヘテロシクロアルキル環からなる群から選択される環を形成し；及び
Ｒｄ及びＲｅは、水素、（Ｃ１〜６）アルキル、（Ｃ１〜６）アルコキシル、ハロ、ニトロ、アリール、ヘテロアリール、（Ｃ１〜６）アルキル及び（Ｃ３〜７）シクロアルキルからなる群から独立して選択されるか、又はＲｄ及びＲｅは、それらが結合されている炭素原子と共に、アリール、ナフチル、アントリル、ヘテロアリール、シクロアルキル及びヘテロシクロアルキル環からなる群から選択される環を形成し；
ただし、ＲｂとＲｃとが環を形成する場合、ＲｄとＲｅとは、環を形成せず、及びＲｄとＲｅとが環を形成する場合、ＲｂとＲｃとは、環を形成しない）
による化合物又はその薬学的に許容される塩、共結晶、溶媒和物若しくはプロドラッグである、請求項３８〜４６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４８】
前記ＫＣａ３．１アゴニストは、ナフト［１，２−ｄ］チアゾール−２−イルアミン（ＳＫＡ−３１）：
【化７】
2020503351.tif 000074
又はその薬学的に許容される塩、共結晶、溶媒和物若しくはプロドラッグである、請求項４７に記載の方法。
【請求項４９】
前記ＫＣａ３．１アゴニストは、アントラ［２，１−ｄ］チアゾール−２−イルアミン（ＳＫＡ−２０）：
【化８】
2020503351.tif 000075
又はその薬学的に許容される塩、共結晶、溶媒和物若しくはプロドラッグである、請求項４８に記載の方法。
【請求項５０】
前記ＫＣａ３．１アゴニストは、６，７−ジクロロ−１Ｈ−インドール−２，３−ジオン３−オキシム（ＮＳ３０９）：
【化９】
2020503351.tif 000076
又はその薬学的に許容される塩、共結晶、溶媒和物若しくはプロドラッグである、請求項３８〜４６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５１】
前記ＫＣａ３．１アゴニストは、リルゾール：
【化１０】
2020503351.tif 000077
又はその薬学的に許容される塩、共結晶、溶媒和物若しくはプロドラッグである、請求項３８〜４６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５２】
前記ＫＣａ３．１アゴニストは、
５−メチルナフト［１，２−ｄ］オキサゾール−２−アミン；
５−エチルナフト［１，２−ｄ］オキサゾール−２−アミン；
５−プロピルナフト［１，２−ｄ］オキサゾール−２−アミン；
５−シクロプロピルナフト［１，２−ｄ］オキサゾール−２−アミン；
５−（ｔｅｒｔ−ブチル）ナフト［１，２−ｄ］オキサゾール−２−アミン；
５−フルオロナフト［１，２−ｄ］オキサゾール−２−アミン；
５−クロロナフト［１，２−ｄ］オキサゾール−２−アミン；
５−ブロモナフト［１，２−ｄ］オキサゾール−２−アミン；
５−ヨードナフト［１，２−ｄ］オキサゾール−２−アミン；
２−アミノナフト［１，２−ｄ］オキサゾール−５−カルボニトリル；
ナフト［１，２−ｄ］オキサゾール−２，５−ジアミン；
Ｎ５−メチルナフト［１，２−ｄ］オキサゾール−２，５−ジアミン；
Ｎ５，Ｎ５−ジメチルナフト［１，２−ｄ］オキサゾール−２，５−ジアミン；
Ｎ５−エチルナフト［１，２−ｄ］オキサゾール−２，５−ジアミン；
５−（ピロリジン−１−イル）ナフト［１，２−ｄ］オキサゾール−２−アミン；
５−メトキシナフト［１，２−ｄ］オキサゾール−２−アミン；
５−トリフルオロメチルナフト［１，２−ｄ］オキサゾール−２−アミン；
５−メチルナフト［２，１−ｄ］オキサゾール−２−アミン；
５−エチルナフト［２，１−ｄ］オキサゾール−２−アミン；
５−プロピルナフト［２，１−ｄ］オキサゾール−２−アミン；
５−シクロプロピルナフト［２，１−ｄ］オキサゾール−２−アミン；
５−（ｔｅｒｔ−ブチル）ナフト［２，１−ｄ］オキサゾール−２−アミン；
５−フルオロナフト［２，１−ｄ］オキサゾール−２−アミン；
５−クロロナフト［２，１−ｄ］オキサゾール−２−アミン；
５−ブロモナフト［２，１−ｄ］オキサゾール−２−アミン；
５−ヨードナフト［２，１−ｄ］オキサゾール−２−アミン；
２−アミノナフト［２，１−ｄ］オキサゾール−５−カルボニトリル；
ナフト［２，１−ｄ］オキサゾール−２，５−ジアミン；
Ｎ５−メチルナフト［２，１−ｄ］オキサゾール−２，５−ジアミン；
Ｎ５，Ｎ５−ジメチルナフト［２，１−ｄ］オキサゾール−２，５−ジアミン；
Ｎ５−エチルナフト［２，１−ｄ］オキサゾール−２，５−ジアミン；
５−（ピロリジン−１−イル）ナフト［２，１−ｄ］オキサゾール−２−アミン；
５−メトキシナフト［２，１−ｄ］オキサゾール−２−アミン；
５−トリフルオロメチルナフト［２，１−ｄ］オキサゾール−２−アミン；及び
その薬学的に許容される塩、共結晶、溶媒和物又はプロドラッグ
からなる群から選択される、請求項３８〜４６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５３】
前記ＩＬ−２は、前記第１の細胞培養培地中に１０００ＩＵ／ｍＬ〜６０００ＩＵ／ｍＬの初期濃度で存在する、請求項３５〜５２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５４】
前記第２の細胞培養培地中において、前記ＩＬ−２は、１０００ＩＵ／ｍＬ〜６０００ＩＵ／ｍＬの初期濃度で存在し、及び前記ＯＫＴ−３抗体は、約３０ｎｇ／ｍＬの初期濃度で存在する、請求項３５〜５３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５５】
前記初期増殖は、ガス透過性容器を使用して行われる、請求項３５〜５４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５６】
前記急速増殖は、ガス透過性容器を使用して行われる、請求項３５〜５５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５７】
前記第１の細胞培養培地は、ＩＬ−４、ＩＬ−７、ＩＬ−１５、ＩＬ−２１及びそれらの組み合わせからなる群から選択されるサイトカインをさらに含む、請求項３５〜５６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５８】
前記第２の細胞培養培地は、ＩＬ−４、ＩＬ−７、ＩＬ−１５、ＩＬ−２１及びそれらの組み合わせからなる群から選択されるサイトカインをさらに含む、請求項３５〜５７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５９】
エクスビボ方法である、請求項３５〜５８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６０】
前記ＴＩＬの第２の集団は、前記カリウムチャネルアゴニストなしで得られたＴＩＬの参照集団に対して増加している、ＣＤ８＋ＣＤ２８＋、ＣＤ８＋ＣＤ２７＋、ＣＤ８＋ＣＤ２７＋ＣＤ２８＋、ＣＣＲ７＋及びそれらの組み合わせからなる群から選択される表現型を有するＴ細胞の集団を含み、前記ＴＩＬの第２の集団における前記表現型は、前記ＴＩＬの参照集団に対して少なくとも５％増加している、請求項３５〜５９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６１】
前記ＴＩＬの第３の集団は、前記カリウムチャネルアゴニストなしで得られたＴＩＬの参照集団に対して増加している、ＣＤ８＋ＣＤ２８＋、ＣＤ８＋ＣＤ２７＋、ＣＤ８＋ＣＤ２７＋ＣＤ２８＋、ＣＣＲ７＋及びそれらの組み合わせからなる群から選択される表現型を有するＴ細胞の集団を含み、前記ＴＩＬの第３の集団における前記表現型は、前記ＴＩＬの参照集団に対して少なくとも５％増加している、請求項３５〜５９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６２】
前記ＴＩＬの第２の集団は、前記カリウムチャネルアゴニストなしで得られたＴＩＬの参照集団に対して分化度が低い表現型を有するＴ細胞の集団を含む、請求項３５〜５９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６３】
前記ＴＩＬの第３の集団は、前記カリウムチャネルアゴニストなしで得られたＴＩＬの参照集団に対して分化度が低い表現型を有するＴ細胞の集団を含む、請求項３５〜５９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６４】
患者における癌の処置のためのＴＩＬの集団であって、請求項３５〜６３のいずれか一項に記載の方法によって得ることができるＴＩＬの集団。
【請求項６５】
前記癌は、黒色腫、卵巣癌、子宮頸癌、肺癌、膀胱癌、乳癌、頭頸部癌、腎細胞癌、急性骨髄性白血病、結腸直腸癌、肉腫、非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）又はトリプルネガティブ乳癌、二重抵抗性黒色腫及びブドウ膜（眼内）黒色腫から選択される、請求項６４に記載のＴＩＬの集団。
【請求項６６】
腫瘍内注射又は静脈内注入によって前記患者に投与するためのものである、請求項６５に記載のＴＩＬの集団。
【請求項６７】
化学療法剤と組み合わせて投与するためのものである、請求項６４〜６６のいずれか一項に記載のＴＩＬの集団。
【請求項６８】
ＩＬ−２と、カリウムチャネルアゴニストとを含む細胞培養培地。
【請求項６９】
抗ＣＤ３抗体又はその断片、変異体若しくはバイオシミラーと、末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）とをさらに含む、請求項６８に記載の細胞培養培地。
【請求項７０】
前記カリウムチャネルアゴニストは、ＫＣａ３．１アゴニストである、請求項６８又は６９に記載の細胞培養培地。
【請求項７１】
前記ＫＣａ３．１アゴニストは、式（１）：
【化１１】
2020503351.tif 000078
（式中、
Ｒａは、ハロ、シアノ、ヒドロキシ、チオール、（Ｃ１〜６）アルキル、−ＮＨ２及び−ＮＲ１Ｒ２から選択され；
Ｒ１及びＲ２は、独立して、Ｈ又は（Ｃ１〜６）アルキルであり；
Ｘは、Ｓ、Ｏ及びＮＨからなる群から選択され；
Ｒｂ及びＲｃは、水素、（Ｃ１〜６）アルキル、（Ｃ１〜６）アルコキシル、ハロ、ニトロ、アリール、ヘテロアリール、（Ｃ１〜６）アルキル及び（Ｃ３〜７）シクロアルキルからなる群から独立して選択されるか、又はＲｂ及びＲｃは、それらが結合されている炭素原子と共に、アリール、ナフチル、アントリル、ヘテロアリール、シクロアルキル及びヘテロシクロアルキル環からなる群から選択される環を形成し；及び
Ｒｄ及びＲｅは、水素、（Ｃ１〜６）アルキル、（Ｃ１〜６）アルコキシル、ハロ、ニトロ、アリール、ヘテロアリール、（Ｃ１〜６）アルキル及び（Ｃ３〜７）シクロアルキルからなる群から独立して選択されるか、又はＲｄ及びＲｅは、それらが結合されている炭素原子と共に、アリール、ナフチル、アントリル、ヘテロアリール、シクロアルキル及びヘテロシクロアルキル環からなる群から選択される環を形成し；
ただし、ＲｂとＲｃとが環を形成する場合、ＲｄとＲｅとは、環を形成せず、及びＲｄとＲｅとが環を形成する場合、ＲｂとＲｃとは、環を形成しない）
による化合物又はその薬学的に許容される塩、共結晶、溶媒和物若しくはプロドラッグである、請求項７０に記載の細胞培養培地。
【請求項７２】
前記ＫＣａ３．１アゴニストは、ナフト［１，２−ｄ］チアゾール−２−イルアミン（ＳＫＡ−３１）：
【化１２】
2020503351.tif 000079
又はその薬学的に許容される塩、共結晶、溶媒和物若しくはプロドラッグである、請求項７１に記載の細胞培養培地。
【請求項７３】
前記ＫＣａ３．１アゴニストは、アントラ［２，１−ｄ］チアゾール−２−イルアミン（ＳＫＡ−２０）：
【化１３】
2020503351.tif 000080
又はその薬学的に許容される塩、共結晶、溶媒和物若しくはプロドラッグである、請求項７１に記載の細胞培養培地。
【請求項７４】
前記ＫＣａ３．１アゴニストは、６，７−ジクロロ−１Ｈ−インドール−２，３−ジオン３−オキシム（ＮＳ３０９）：
【化１４】
2020503351.tif 000081
又はその薬学的に許容される塩、共結晶、溶媒和物若しくはプロドラッグである、請求項７０に記載の細胞培養培地。
【請求項７５】
前記ＫＣａ３．１アゴニストは、リルゾール：
【化１５】
2020503351.tif 000082
又はその薬学的に許容される塩、共結晶、溶媒和物若しくはプロドラッグである、請求項７０に記載の細胞培養培地。
【請求項７６】
前記ＫＣａ３．１アゴニストは、
５−メチルナフト［１，２−ｄ］オキサゾール−２−アミン；
５−エチルナフト［１，２−ｄ］オキサゾール−２−アミン；
５−プロピルナフト［１，２−ｄ］オキサゾール−２−アミン；
５−シクロプロピルナフト［１，２−ｄ］オキサゾール−２−アミン；
５−（ｔｅｒｔ−ブチル）ナフト［１，２−ｄ］オキサゾール−２−アミン；
５−フルオロナフト［１，２−ｄ］オキサゾール−２−アミン；
５−クロロナフト［１，２−ｄ］オキサゾール−２−アミン；
５−ブロモナフト［１，２−ｄ］オキサゾール−２−アミン；
５−ヨードナフト［１，２−ｄ］オキサゾール−２−アミン；
２−アミノナフト［１，２−ｄ］オキサゾール−５−カルボニトリル；
ナフト［１，２−ｄ］オキサゾール−２，５−ジアミン；
Ｎ５−メチルナフト［１，２−ｄ］オキサゾール−２，５−ジアミン；
Ｎ５，Ｎ５−ジメチルナフト［１，２−ｄ］オキサゾール−２，５−ジアミン；
Ｎ５−エチルナフト［１，２−ｄ］オキサゾール−２，５−ジアミン；
５−（ピロリジン−１−イル）ナフト［１，２−ｄ］オキサゾール−２−アミン；
５−メトキシナフト［１，２−ｄ］オキサゾール−２−アミン；
５−トリフルオロメチルナフト［１，２−ｄ］オキサゾール−２−アミン；
５−メチルナフト［２，１−ｄ］オキサゾール−２−アミン；
５−エチルナフト［２，１−ｄ］オキサゾール−２−アミン；
５−プロピルナフト［２，１−ｄ］オキサゾール−２−アミン；
５−シクロプロピルナフト［２，１−ｄ］オキサゾール−２−アミン；
５−（ｔｅｒｔ−ブチル）ナフト［２，１−ｄ］オキサゾール−２−アミン；
５−フルオロナフト［２，１−ｄ］オキサゾール−２−アミン；
５−クロロナフト［２，１−ｄ］オキサゾール−２−アミン；
５−ブロモナフト［２，１−ｄ］オキサゾール−２−アミン；
５−ヨードナフト［２，１−ｄ］オキサゾール−２−アミン；
２−アミノナフト［２，１−ｄ］オキサゾール−５−カルボニトリル；
ナフト［２，１−ｄ］オキサゾール−２，５−ジアミン；
Ｎ５−メチルナフト［２，１−ｄ］オキサゾール−２，５−ジアミン；
Ｎ５，Ｎ５−ジメチルナフト［２，１−ｄ］オキサゾール−２，５−ジアミン；
Ｎ５−エチルナフト［２，１−ｄ］オキサゾール−２，５−ジアミン；
５−（ピロリジン−１−イル）ナフト［２，１−ｄ］オキサゾール−２−アミン；
５−メトキシナフト［２，１−ｄ］オキサゾール−２−アミン；
５−トリフルオロメチルナフト［２，１−ｄ］オキサゾール−２−アミン；及び
その薬学的に許容される塩、共結晶、溶媒和物又はプロドラッグ
からなる群から選択される、請求項７０に記載の細胞培養培地。
【請求項７７】
請求項６８〜７６のいずれか一項に記載の細胞培養培地を含むキット。
【請求項７８】
腫瘍をさらに含む、請求項７７に記載のキット。
【請求項７９】
癌の処置のためのＴＩＬの集団の製造におけるカリウムチャネルアゴニストの使用。
【請求項８０】
前記カリウムチャネルアゴニストは、ＫＣａ３．１アゴニストである、請求項７９に記載の使用。
【請求項８１】
前記ＫＣａ３．１アゴニストは、請求項７１〜７６のいずれか一項に定義されるようなものである、請求項８０に記載の使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願の相互参照
[0001]  本国際出願は、２０１７年５月１０日に出願された米国仮特許出願第６２／５０４，３８５号、２０１７年３月３日に出願された米国仮特許出願第６２／４６６，９２１号及び２０１７年１月６日に出願された米国仮特許出願第６２／４４３，５１９号に対する優先権の利益を主張し、それらの全体が参照により本明細書に組み込まれる。
【０００２】
発明の分野
[0002]  ＫＣａ３．１を含むカリウムチャネルアゴニストを使用して腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）を増殖させる方法及びそれから得られるＴＩＬの集団の組成物が本明細書で開示される。さらに、癌などの疾患の処置を含む、カリウムチャネルアゴニストを使用して増殖されたＴＩＬの治療的使用が本明細書で開示される。
【背景技術】
【０００３】
発明の背景
[0003]  腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）の養子自己移植を用いた嵩高く難治性の癌の処置は、予後不良の患者に対する治療への強力なアプローチとなる。Gattinoni,et al, Nat.Rev. Immunol.2006, 6, 383-393。ＴＩＬは、Ｔ細胞が優勢であり、ＩＬ−２に基づくＴＩＬ増殖とそれに続く「急速増殖プロセス」（ＲＥＰ）とは、そのスピード及び効率のため、ＴＩＬ増殖のための好ましい方法となっている。Dudley, et al, Science 2002, 298, 850-54；Dudley, et al, J. Clin.Oncol.2005, 23,2346-57；Dudley, et al, J. Clin.Oncol.2008, 26, 5233-39；Riddell, et al, Science 1992, 257, 238-41；Dudley,et al, J. Immunother.2003, 26, 332-42。黒色腫におけるＴＩＬ療法に対する応答を改善し、ＴＩＬ療法を他の種類の腫瘍に拡大するためのいくつかのアプローチが探求されているが、成功が限られており、この分野は、依然として課題となっている。Goff, et al., J. Clin.Oncol.2016, 34, 2389-97；Dudley, et al, J. Clin.Oncol.2008, 26,5233-39；Rosenberg, et al, Clin.Cancer Res.2011, 17, 4550-57。
【０００４】
[0004]  カリウムチャネル（Ｋ＋チャネル）は、細胞に一般に見られる膜貫通イオン伝導チャネルの一種である。Ｋ＋チャネルは、４つの主要なクラス、（１）開くか又は膜内外電圧の変動に応答する電位依存性カリウムチャネル（Ｋｖ）；（２）カルシウムイオン又は他のシグナル伝達分子の存在に応答して開くカルシウム活性化カリウムチャネル（ＫＣａ）；（３）正電荷をより容易に細胞内に通過させる内向き整流性カリウムチャネル（ＫＩＲ）；及び（４）構成的に開いているか又は高い基礎活性化を有するタンデムポア型カリウムチャネル（Ｋ２ｐ）に分類されている。これらの４つのクラス内で非常に多数のＫ＋チャネルサブタイプが認識されている。しかしながら、Ｔ細胞によって発現されることが知られているのは、２つのＫ＋チャネルサブタイプのみである。活性化エフェクターＴ細胞は、高レベルのＫｖ１．３を発現し（電位依存性カリウムチャネル、シェーカー関連サブファミリーメンバー３、ＫＣＮＡ３でエンコードされる）、活性化ナイーブ及びセントラルメモリーＴ細胞サブセットは、高レベルのＫＣａ３．１を発現する（中間コンダクタンスＣａ２＋活性化Ｋ＋チャネル、ＩＫチャネル又はＳＫ４チャネルとしても知られ、ＫＣＮＮ４によってエンコードされる）。Feske, et al., Annu.Rev. Immunol.2015, 33, 291-353；Di, et al, Proc.Nat’l Acad.Sci.USA 2010, 107, 1541-46。ＫＣａ３．１の阻害は、マウスＴ細胞増殖及びサイトカイン産生を抑制する。Di, et al,Proc.Nat’l Acad.Sci.USA 2010, 107, 1541-46。壊死組織は、細胞外空間にＫ＋の高細胞内貯蔵を放出し、高細胞内Ｋ＋濃度は、Ｔ細胞におけるインターフェロン−γ（ＩＦＮ−γ）産生を抑制し、マウスＴ細胞におけるＫｖ１．３の過剰発現は、抗腫瘍免疫及び宿主生存を改善する。Eil,et al., Nature 2016, 537, 539-543。しかしながら、癌などの疾患の治療としてのＴＩＬの増殖及び性能に対するＫ＋チャネル操作の影響は調査されていない。
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【０００５】
[0005]  本発明は、ＫＣａ３．１チャネルアゴニスト、オープナー又はアクチベーターを含むＫ＋チャネルアゴニスト、オープナー又はアクチベーターが、ＴＩＬ増殖プロセスにおいて使用されると、改善されたＴＩＬ表現型特性及びより少ないＴＩＬ分化をもたらすという驚くべき知見を提供する。
【０００６】
発明の概要
[0006]  一実施形態では、本発明は、腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）の集団を用いて癌を処置する方法であって、
（ａ）患者から腫瘍を切除するステップであって、腫瘍は、ＴＩＬの第１の集団を含む、ステップ；
（ｂ）腫瘍を腫瘍断片に断片化するステップ；
（ｃ）腫瘍断片を第１の細胞培養培地と接触させるステップ；
（ｄ）第１の細胞培養培地中でＴＩＬの第１の集団の初期増殖を行ってＴＩＬの第２の集団を得るステップであって、ＴＩＬの第２の集団の数は、ＴＩＬの第１の集団よりも少なくとも５倍多く、第１の細胞培養培地は、ＩＬ−２を含む、ステップ；
（ｅ）第２の細胞培養培地中でＴＩＬの第２の集団の急速増殖を行ってＴＩＬの第３の集団を得るステップであって、ＴＩＬの第３の集団の数は、急速増殖の開始から７日後にＴＩＬの第２の集団よりも少なくとも５０倍多く、第２の細胞培養培地は、ＩＬ−２、ＯＫＴ−３（抗ＣＤ３抗体）及び照射同種異系末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）を含み、急速増殖は、１４日以下の期間にわたって行われる、ステップ；
（ｆ）ＴＩＬの第３の集団を回収するステップ；及び
（ｇ）ＴＩＬの第３の集団の治療有効部分を、癌を有する患者に投与するステップ
を含み、第１の細胞培養培地若しくは第２の細胞培養培地のいずれか又は第１の細胞培養培地及び第２の細胞培養培地の両方は、カリウムチャネルアゴニストをさらに含む、方法を提供する。
【０００７】
[0007]  一実施形態では、本発明は、腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）の集団を用いて癌を処置する方法であって、
（ａ）患者から腫瘍を切除するステップであって、腫瘍は、ＴＩＬの第１の集団を含む、ステップ；
（ｂ）腫瘍を腫瘍断片に断片化するステップ；
（ｃ）腫瘍断片を第１の細胞培養培地と接触させるステップ；
（ｄ）第１の細胞培養培地中でＴＩＬの第１の集団の初期増殖を行ってＴＩＬの第２の集団を得るステップであって、ＴＩＬの第２の集団の数は、ＴＩＬの第１の集団よりも少なくとも５倍多く、第１の細胞培養培地は、ＩＬ−２を含む、ステップ；
（ｅ）第２の細胞培養培地中でＴＩＬの第２の集団の急速増殖を行ってＴＩＬの第３の集団を得るステップであって、ＴＩＬの第３の集団の数は、急速増殖の開始から７日後にＴＩＬの第２の集団よりも少なくとも５０倍多く、第２の細胞培養培地は、ＩＬ−２、ＯＫＴ−３（抗ＣＤ３抗体）及び照射同種異系末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）を含み、急速増殖は、１４日以下の期間にわたって行われる、ステップ；
（ｆ）ＴＩＬの第３の集団を回収するステップ；及び
（ｇ）ＴＩＬの第３の集団の治療有効部分を、癌を有する患者に投与するステップ
を含み、第１の細胞培養培地若しくは第２の細胞培養培地のいずれか又は第１の細胞培養培地及び第２の細胞培養培地の両方は、カリウムチャネルアゴニストをさらに含み、カリウムチャネルアゴニストは、ＫＣａ３．１（ＩＫチャネル）アゴニストである、方法を提供する。
【０００８】
[0008]  一実施形態では、本発明は、腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）の集団を用いて癌を処置する方法であって、
（ａ）患者から腫瘍を切除するステップであって、腫瘍は、ＴＩＬの第１の集団を含む、ステップ；
（ｂ）腫瘍を腫瘍断片に断片化するステップ；
（ｃ）腫瘍断片を第１の細胞培養培地と接触させるステップ；
（ｄ）第１の細胞培養培地中でＴＩＬの第１の集団の初期増殖を行ってＴＩＬの第２の集団を得るステップであって、ＴＩＬの第２の集団の数は、ＴＩＬの第１の集団よりも少なくとも５倍多く、第１の細胞培養培地は、ＩＬ−２を含む、ステップ；
（ｅ）第２の細胞培養培地中でＴＩＬの第２の集団の急速増殖を行ってＴＩＬの第３の集団を得るステップであって、ＴＩＬの第３の集団の数は、急速増殖の開始から７日後にＴＩＬの第２の集団よりも少なくとも５０倍多く、第２の細胞培養培地は、ＩＬ−２、ＯＫＴ−３（抗ＣＤ３抗体）及び照射同種異系末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）を含み、急速増殖は、１４日以下の期間にわたって行われる、ステップ；
（ｆ）ＴＩＬの第３の集団を回収するステップ；及び
（ｇ）ＴＩＬの第３の集団の治療有効部分を、癌を有する患者に投与するステップ
を含み、第１の細胞培養培地若しくは第２の細胞培養培地のいずれか又は第１の細胞培養培地及び第２の細胞培養培地の両方は、カリウムチャネルアゴニストをさらに含み、カリウムチャネルアゴニストは、ＫＣａ３．１（ＩＫチャネル）アゴニストであり、ＴＩＬの第２の集団は、カリウムチャネルアゴニストなしで得られたＴＩＬの参照集団に対して増加している、ＣＤ８＋ＣＤ２８＋、ＣＤ８＋ＣＤ２７＋、ＣＤ８＋ＣＤ２７＋ＣＤ２８＋、ＣＣＲ７＋及びそれらの組み合わせからなる群から選択される表現型を有するＴ細胞の集団を含み、ＴＩＬの第２の集団における表現型は、ＴＩＬの参照集団に対して少なくとも５％増加している、方法を提供する。いくつかの例では、増加は、約１０％、約１５％、約２０％、約２５％、約３０％、約３５％、約４０％、約４５％、約５０％、約５５％、約６０％、約６５％、約７０％、約７５％、約８０％、約８５％、約９０％、約９５％、約１００％、約２００％、約３００％、約４００％、約５００％、約６００％、約７００％、約８００％、約９００％又は約１０００％である。
【０００９】
[0009]  一実施形態では、本発明は、腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）の集団を用いて癌を処置する方法であって、
（ａ）患者から腫瘍を切除するステップであって、腫瘍は、ＴＩＬの第１の集団を含む、ステップ；
（ｂ）腫瘍を腫瘍断片に断片化するステップ；
（ｃ）腫瘍断片を第１の細胞培養培地と接触させるステップ；
（ｄ）第１の細胞培養培地中でＴＩＬの第１の集団の初期増殖を行ってＴＩＬの第２の集団を得るステップであって、ＴＩＬの第２の集団の数は、ＴＩＬの第１の集団よりも少なくとも５倍多く、第１の細胞培養培地は、ＩＬ−２を含む、ステップ；
（ｅ）第２の細胞培養培地中でＴＩＬの第２の集団の急速増殖を行ってＴＩＬの第３の集団を得るステップであって、ＴＩＬの第３の集団の数は、急速増殖の開始から７日後にＴＩＬの第２の集団よりも少なくとも５０倍多く、第２の細胞培養培地は、ＩＬ−２、ＯＫＴ−３（抗ＣＤ３抗体）及び照射同種異系末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）を含み、急速増殖は、１４日以下の期間にわたって行われる、ステップ；
（ｆ）ＴＩＬの第３の集団を回収するステップ；及び
（ｇ）ＴＩＬの第３の集団の治療有効部分を、癌を有する患者に投与するステップ
を含み、第１の細胞培養培地若しくは第２の細胞培養培地のいずれか又は第１の細胞培養培地及び第２の細胞培養培地の両方は、カリウムチャネルアゴニストをさらに含み、カリウムチャネルアゴニストは、ＫＣａ３．１（ＩＫチャネル）アゴニストであり、ＴＩＬの第３の集団は、カリウムチャネルアゴニストなしで得られたＴＩＬの参照集団に対して増加している、ＣＤ８＋ＣＤ２８＋、ＣＤ８＋ＣＤ２７＋、ＣＤ８＋ＣＤ２７＋ＣＤ２８＋、ＣＣＲ７＋及びそれらの組み合わせからなる群から選択される表現型を有するＴ細胞の集団を含み、ＴＩＬの第３の集団における表現型は、ＴＩＬの参照集団に対して少なくとも５％増加している、方法を提供する。いくつかの例では、増加は、約１０％、約１５％、約２０％、約２５％、約３０％、約３５％、約４０％、約４５％、約５０％、約５５％、約６０％、約６５％、約７０％、約７５％、約８０％、約８５％、約９０％、約９５％、約１００％、約２００％、約３００％、約４００％、約５００％、約６００％、約７００％、約８００％、約９００％又は約１０００％である。
【００１０】
[0010]  一実施形態では、本発明は、腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）の集団を用いて癌を処置する方法であって、
（ａ）患者から腫瘍を切除するステップであって、腫瘍は、ＴＩＬの第１の集団を含む、ステップ；
（ｂ）腫瘍を腫瘍断片に断片化するステップ；
（ｃ）腫瘍断片を第１の細胞培養培地と接触させるステップ；
（ｄ）第１の細胞培養培地中でＴＩＬの第１の集団の初期増殖を行ってＴＩＬの第２の集団を得るステップであって、ＴＩＬの第２の集団の数は、ＴＩＬの第１の集団よりも少なくとも５倍多く、第１の細胞培養培地は、ＩＬ−２を含む、ステップ；
（ｅ）第２の細胞培養培地中でＴＩＬの第２の集団の急速増殖を行ってＴＩＬの第３の集団を得るステップであって、ＴＩＬの第３の集団の数は、急速増殖の開始から７日後にＴＩＬの第２の集団よりも少なくとも５０倍多く、第２の細胞培養培地は、ＩＬ−２、ＯＫＴ−３（抗ＣＤ３抗体）及び照射同種異系末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）を含み、急速増殖は、１４日以下の期間にわたって行われる、ステップ；
（ｆ）ＴＩＬの第３の集団を回収するステップ；及び
（ｇ）ＴＩＬの第３の集団の治療有効部分を、癌を有する患者に投与するステップ
を含み、カリウムチャネルアゴニストは、ＫＣａ３．１（ＩＫチャネル）アゴニストであり、第１の細胞培養培地の両方は、ＫＣａ３．１アゴニストをさらに含み、第２の細胞培養培地は、ＫＣａ３．１アゴニストをさらに含む、方法を提供する。
【００１１】
[0011]  一実施形態では、本発明は、腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）の集団を用いて癌を処置する方法であって、
（ａ）患者から腫瘍を切除するステップであって、腫瘍は、ＴＩＬの第１の集団を含む、ステップ；
（ｂ）腫瘍を腫瘍断片に断片化するステップ；
（ｃ）腫瘍断片を第１の細胞培養培地と接触させるステップ；
（ｄ）第１の細胞培養培地中でＴＩＬの第１の集団の初期増殖を行ってＴＩＬの第２の集団を得るステップであって、ＴＩＬの第２の集団の数は、ＴＩＬの第１の集団よりも少なくとも５倍多く、第１の細胞培養培地は、ＩＬ−２を含む、ステップ；
（ｅ）第２の細胞培養培地中でＴＩＬの第２の集団の急速増殖を行ってＴＩＬの第３の集団を得るステップであって、ＴＩＬの第３の集団の数は、急速増殖の開始から７日後にＴＩＬの第２の集団よりも少なくとも５０倍多く、第２の細胞培養培地は、ＩＬ−２、ＯＫＴ−３（抗ＣＤ３抗体）及び照射同種異系末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）を含み、急速増殖は、１４日以下の期間にわたって行われる、ステップ；
（ｆ）ＴＩＬの第３の集団を回収するステップ；及び
（ｇ）ＴＩＬの第３の集団の治療有効部分を、癌を有する患者に投与するステップ
を含み、第１の細胞培養培地若しくは第２の細胞培養培地のいずれか又は第１の細胞培養培地及び第２の細胞培養培地の両方は、カリウムチャネルアゴニストをさらに含み、カリウムチャネルアゴニストは、ＫＣａ３．１（ＩＫチャネル）アゴニストであり、第１の細胞培養培地中のＫＣａ３．１アゴニストの濃度は、１〜１０００ｎＭである、方法を提供する。
【００１２】
[0012]  一実施形態では、本発明は、腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）の集団を用いて癌を処置する方法であって、
（ａ）患者から腫瘍を切除するステップであって、腫瘍は、ＴＩＬの第１の集団を含む、ステップ；
（ｂ）腫瘍を腫瘍断片に断片化するステップ；
（ｃ）腫瘍断片を第１の細胞培養培地と接触させるステップ；
（ｄ）第１の細胞培養培地中でＴＩＬの第１の集団の初期増殖を行ってＴＩＬの第２の集団を得るステップであって、ＴＩＬの第２の集団の数は、ＴＩＬの第１の集団よりも少なくとも５倍多く、第１の細胞培養培地は、ＩＬ−２を含む、ステップ；
（ｅ）第２の細胞培養培地中でＴＩＬの第２の集団の急速増殖を行ってＴＩＬの第３の集団を得るステップであって、ＴＩＬの第３の集団の数は、急速増殖の開始から７日後にＴＩＬの第２の集団よりも少なくとも５０倍多く、第２の細胞培養培地は、ＩＬ−２、ＯＫＴ−３（抗ＣＤ３抗体）及び照射同種異系末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）を含み、急速増殖は、１４日以下の期間にわたって行われる、ステップ；
（ｆ）ＴＩＬの第３の集団を回収するステップ；及び
（ｇ）ＴＩＬの第３の集団の治療有効部分を、癌を有する患者に投与するステップ
を含み、第１の細胞培養培地若しくは第２の細胞培養培地のいずれか又は第１の細胞培養培地及び第２の細胞培養培地の両方は、カリウムチャネルアゴニストをさらに含み、カリウムチャネルアゴニストは、ＫＣａ３．１（ＩＫチャネル）アゴニストであり、第１の細胞培養培地中のＫＣａ３．１アゴニストの濃度は、約１００ｎＭである、方法を提供する。
【００１３】
[0013]  一実施形態では、本発明は、腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）の集団を用いて癌を処置する方法であって、
（ａ）患者から腫瘍を切除するステップであって、腫瘍は、ＴＩＬの第１の集団を含む、ステップ；
（ｂ）腫瘍を腫瘍断片に断片化するステップ；
（ｃ）腫瘍断片を第１の細胞培養培地と接触させるステップ；
（ｄ）第１の細胞培養培地中でＴＩＬの第１の集団の初期増殖を行ってＴＩＬの第２の集団を得るステップであって、ＴＩＬの第２の集団の数は、ＴＩＬの第１の集団よりも少なくとも５倍多く、第１の細胞培養培地は、ＩＬ−２を含む、ステップ；
（ｅ）第２の細胞培養培地中でＴＩＬの第２の集団の急速増殖を行ってＴＩＬの第３の集団を得るステップであって、ＴＩＬの第３の集団の数は、急速増殖の開始から７日後にＴＩＬの第２の集団よりも少なくとも５０倍多く、第２の細胞培養培地は、ＩＬ−２、ＯＫＴ−３（抗ＣＤ３抗体）及び照射同種異系末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）を含み、急速増殖は、１４日以下の期間にわたって行われる、ステップ；
（ｆ）ＴＩＬの第３の集団を回収するステップ；及び
（ｇ）ＴＩＬの第３の集団の治療有効部分を、癌を有する患者に投与するステップ
を含み、第１の細胞培養培地若しくは第２の細胞培養培地のいずれか又は第１の細胞培養培地及び第２の細胞培養培地の両方は、カリウムチャネルアゴニストをさらに含み、カリウムチャネルアゴニストは、ＫＣａ３．１（ＩＫチャネル）アゴニストであり、第２の細胞培養培地中のＫＣａ３．１アゴニストの濃度は、０．１〜１００ｍＭである、方法を提供する。
【００１４】
[0014]  一実施形態では、本発明は、腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）の集団を用いて癌を処置する方法であって、
（ａ）患者から腫瘍を切除するステップであって、腫瘍は、ＴＩＬの第１の集団を含む、ステップ；
（ｂ）腫瘍を腫瘍断片に断片化するステップ；
（ｃ）腫瘍断片を第１の細胞培養培地と接触させるステップ；
（ｄ）第１の細胞培養培地中でＴＩＬの第１の集団の初期増殖を行ってＴＩＬの第２の集団を得るステップであって、ＴＩＬの第２の集団の数は、ＴＩＬの第１の集団よりも少なくとも５倍多く、第１の細胞培養培地は、ＩＬ−２を含む、ステップ；
（ｅ）第２の細胞培養培地中でＴＩＬの第２の集団の急速増殖を行ってＴＩＬの第３の集団を得るステップであって、ＴＩＬの第３の集団の数は、急速増殖の開始から７日後にＴＩＬの第２の集団よりも少なくとも５０倍多く、第２の細胞培養培地は、ＩＬ−２、ＯＫＴ−３（抗ＣＤ３抗体）及び照射同種異系末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）を含み、急速増殖は、１４日以下の期間にわたって行われる、ステップ；
（ｆ）ＴＩＬの第３の集団を回収するステップ；及び
（ｇ）ＴＩＬの第３の集団の治療有効部分を、癌を有する患者に投与するステップ
を含み、第１の細胞培養培地若しくは第２の細胞培養培地のいずれか又は第１の細胞培養培地及び第２の細胞培養培地の両方は、カリウムチャネルアゴニストをさらに含み、カリウムチャネルアゴニストは、ＫＣａ３．１（ＩＫチャネル）アゴニストであり、第２の細胞培養培地中のＫＣａ３．１アゴニストの濃度は、約５０ｍＭである、方法を提供する。
【００１５】
[0015]  一実施形態では、本発明は、腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）の集団を用いて癌を処置する方法であって、
（ａ）患者から腫瘍を切除するステップであって、腫瘍は、ＴＩＬの第１の集団を含む、ステップ；
（ｂ）腫瘍を腫瘍断片に断片化するステップ；
（ｃ）腫瘍断片を第１の細胞培養培地と接触させるステップ；
（ｄ）第１の細胞培養培地中でＴＩＬの第１の集団の初期増殖を行ってＴＩＬの第２の集団を得るステップであって、ＴＩＬの第２の集団の数は、ＴＩＬの第１の集団よりも少なくとも５倍多く、第１の細胞培養培地は、ＩＬ−２を含む、ステップ；
（ｅ）第２の細胞培養培地中でＴＩＬの第２の集団の急速増殖を行ってＴＩＬの第３の集団を得るステップであって、ＴＩＬの第３の集団の数は、急速増殖の開始から７日後にＴＩＬの第２の集団よりも少なくとも５０倍多く、第２の細胞培養培地は、ＩＬ−２、ＯＫＴ−３（抗ＣＤ３抗体）及び照射同種異系末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）を含み、急速増殖は、１４日以下の期間にわたって行われる、ステップ；
（ｆ）ＴＩＬの第３の集団を回収するステップ；及び
（ｇ）ＴＩＬの第３の集団の治療有効部分を、癌を有する患者に投与するステップ
を含み、第１の細胞培養培地若しくは第２の細胞培養培地のいずれか又は第１の細胞培養培地及び第２の細胞培養培地の両方は、カリウムチャネルアゴニストをさらに含み、カリウムチャネルアゴニストは、ＫＣａ３．１（ＩＫチャネル）アゴニストであり、初期増殖は、２１日以下の期間にわたって行われる、方法を提供する。
【００１６】
[0016]  一実施形態では、本発明は、腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）の集団を用いて癌を処置する方法であって、
（ａ）患者から腫瘍を切除するステップであって、腫瘍は、ＴＩＬの第１の集団を含む、ステップ；
（ｂ）腫瘍を腫瘍断片に断片化するステップ；
（ｃ）腫瘍断片を第１の細胞培養培地と接触させるステップ；
（ｄ）第１の細胞培養培地中でＴＩＬの第１の集団の初期増殖を行ってＴＩＬの第２の集団を得るステップであって、ＴＩＬの第２の集団の数は、ＴＩＬの第１の集団よりも少なくとも５倍多く、第１の細胞培養培地は、ＩＬ−２を含む、ステップ；
（ｅ）第２の細胞培養培地中でＴＩＬの第２の集団の急速増殖を行ってＴＩＬの第３の集団を得るステップであって、ＴＩＬの第３の集団の数は、急速増殖の開始から７日後にＴＩＬの第２の集団よりも少なくとも５０倍多く、第２の細胞培養培地は、ＩＬ−２、ＯＫＴ−３（抗ＣＤ３抗体）及び照射同種異系末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）を含み、急速増殖は、１４日以下の期間にわたって行われる、ステップ；
（ｆ）ＴＩＬの第３の集団を回収するステップ；及び
（ｇ）ＴＩＬの第３の集団の治療有効部分を、癌を有する患者に投与するステップ
を含み、第１の細胞培養培地若しくは第２の細胞培養培地のいずれか又は第１の細胞培養培地及び第２の細胞培養培地の両方は、カリウムチャネルアゴニストをさらに含み、カリウムチャネルアゴニストは、ＫＣａ３．１（ＩＫチャネル）アゴニストであり、初期増殖は、１１日以下の期間にわたって行われる、方法を提供する。
【００１７】
[0017]  一実施形態では、本発明は、腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）の集団を用いて癌を処置する方法であって、
（ａ）患者から腫瘍を切除するステップであって、腫瘍は、ＴＩＬの第１の集団を含む、ステップ；
（ｂ）腫瘍を腫瘍断片に断片化するステップ；
（ｃ）腫瘍断片を第１の細胞培養培地と接触させるステップ；
（ｄ）第１の細胞培養培地中でＴＩＬの第１の集団の初期増殖を行ってＴＩＬの第２の集団を得るステップであって、ＴＩＬの第２の集団の数は、ＴＩＬの第１の集団よりも少なくとも５倍多く、第１の細胞培養培地は、ＩＬ−２を含む、ステップ；
（ｅ）第２の細胞培養培地中でＴＩＬの第２の集団の急速増殖を行ってＴＩＬの第３の集団を得るステップであって、ＴＩＬの第３の集団の数は、急速増殖の開始から７日後にＴＩＬの第２の集団よりも少なくとも５０倍多く、第２の細胞培養培地は、ＩＬ−２、ＯＫＴ−３（抗ＣＤ３抗体）及び照射同種異系末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）を含み、急速増殖は、１４日以下の期間にわたって行われる、ステップ；
（ｆ）ＴＩＬの第３の集団を回収するステップ；及び
（ｇ）ＴＩＬの第３の集団の治療有効部分を、癌を有する患者に投与するステップ
を含み、第１の細胞培養培地若しくは第２の細胞培養培地のいずれか又は第１の細胞培養培地及び第２の細胞培養培地の両方は、カリウムチャネルアゴニストをさらに含み、カリウムチャネルアゴニストは、ＫＣａ３．１（ＩＫチャネル）アゴニストであり、急速増殖は、７日以下の期間にわたって行われる、方法を提供する。
【００１８】
[0018]  一実施形態では、本発明は、腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）の集団を用いて癌を処置する方法であって、
（ａ）患者から腫瘍を切除するステップであって、腫瘍は、ＴＩＬの第１の集団を含む、ステップ；
（ｂ）腫瘍を腫瘍断片に断片化するステップ；
（ｃ）腫瘍断片を第１の細胞培養培地と接触させるステップ；
（ｄ）第１の細胞培養培地中でＴＩＬの第１の集団の初期増殖を行ってＴＩＬの第２の集団を得るステップであって、ＴＩＬの第２の集団の数は、ＴＩＬの第１の集団よりも少なくとも５倍多く、第１の細胞培養培地は、ＩＬ−２を含む、ステップ；
（ｅ）第２の細胞培養培地中でＴＩＬの第２の集団の急速増殖を行ってＴＩＬの第３の集団を得るステップであって、ＴＩＬの第３の集団の数は、急速増殖の開始から７日後にＴＩＬの第２の集団よりも少なくとも５０倍多く、第２の細胞培養培地は、ＩＬ−２、ＯＫＴ−３（抗ＣＤ３抗体）及び照射同種異系末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）を含み、急速増殖は、１４日以下の期間にわたって行われる、ステップ；
（ｆ）ＴＩＬの第３の集団を回収するステップ；及び
（ｇ）ＴＩＬの第３の集団の治療有効部分を、癌を有する患者に投与するステップ
を含み、第１の細胞培養培地若しくは第２の細胞培養培地のいずれか又は第１の細胞培養培地及び第２の細胞培養培地の両方は、カリウムチャネルアゴニストをさらに含み、カリウムチャネルアゴニストは、ＫＣａ３．１（ＩＫチャネル）アゴニストであり、ＫＣａ３．１アゴニストは、式（１）：
【化１】
2020503351.tif 000003
（式中、
Ｒａは、ハロ、シアノ、ヒドロキシ、チオール、（Ｃ１〜６）アルキル、−ＮＨ２及び−ＮＲ１Ｒ２から選択され；
Ｒ１及びＲ２は、独立して、Ｈ又は（Ｃ１〜６）アルキルであり；
Ｘは、Ｓ、Ｏ及びＮＨからなる群から選択され；
Ｒｂ及びＲｃは、水素、（Ｃ１〜６）アルキル、（Ｃ１〜６）アルコキシル、ハロ、ニトロ、アリール、ヘテロアリール、（Ｃ１〜６）アルキル及び（Ｃ３〜７）シクロアルキルからなる群から独立して選択されるか、又はＲｂ及びＲｃは、それらが結合されている炭素原子と共に、アリール、ナフチル、アントリル、ヘテロアリール、シクロアルキル及びヘテロシクロアルキル環からなる群から選択される環を形成し；及び
Ｒｄ及びＲｅは、水素、（Ｃ１〜６）アルキル、（Ｃ１〜６）アルコキシル、ハロ、ニトロ、アリール、ヘテロアリール、（Ｃ１〜６）アルキル及び（Ｃ３〜７）シクロアルキルからなる群から独立して選択されるか、又はＲｄ及びＲｅは、それらが結合されている炭素原子と共に、アリール、ナフチル、アントリル、ヘテロアリール、シクロアルキル及びヘテロシクロアルキル環からなる群から選択される環を形成し；
ただし、ＲｂとＲｃとが環を形成する場合、ＲｄとＲｅとは、環を形成せず、及びＲｄとＲｅとが環を形成する場合、ＲｂとＲｃとは、環を形成しない）
による化合物又はその薬学的に許容される塩、共結晶、溶媒和物若しくはプロドラッグである、方法を提供する。
【００１９】
[0019]  一実施形態では、本発明は、腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）の集団を用いて癌を処置する方法であって、
（ａ）患者から腫瘍を切除するステップであって、腫瘍は、ＴＩＬの第１の集団を含む、ステップ；
（ｂ）腫瘍を腫瘍断片に断片化するステップ；
（ｃ）腫瘍断片を第１の細胞培養培地と接触させるステップ；
（ｄ）第１の細胞培養培地中でＴＩＬの第１の集団の初期増殖を行ってＴＩＬの第２の集団を得るステップであって、ＴＩＬの第２の集団の数は、ＴＩＬの第１の集団よりも少なくとも５倍多く、第１の細胞培養培地は、ＩＬ−２を含む、ステップ；
（ｅ）第２の細胞培養培地中でＴＩＬの第２の集団の急速増殖を行ってＴＩＬの第３の集団を得るステップであって、ＴＩＬの第３の集団の数は、急速増殖の開始から７日後にＴＩＬの第２の集団よりも少なくとも５０倍多く、第２の細胞培養培地は、ＩＬ−２、ＯＫＴ−３（抗ＣＤ３抗体）及び照射同種異系末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）を含み、急速増殖は、１４日以下の期間にわたって行われる、ステップ；
（ｆ）ＴＩＬの第３の集団を回収するステップ；及び
（ｇ）ＴＩＬの第３の集団の治療有効部分を、癌を有する患者に投与するステップ
を含み、第１の細胞培養培地若しくは第２の細胞培養培地のいずれか又は第１の細胞培養培地及び第２の細胞培養培地の両方は、カリウムチャネルアゴニストをさらに含み、カリウムチャネルアゴニストは、ＫＣａ３．１（ＩＫチャネル）アゴニストであり、ＫＣａ３．１アゴニストは、ナフト［１，２−ｄ］チアゾール−２−イルアミン（ＳＫＡ−３１）：
【化２】
2020503351.tif 000004
又はその薬学的に許容される塩、共結晶、溶媒和物若しくはプロドラッグである、方法を提供する。
【００２０】
[0020]  一実施形態では、本発明は、腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）の集団を用いて癌を処置する方法であって、
（ａ）患者から腫瘍を切除するステップであって、腫瘍は、ＴＩＬの第１の集団を含む、ステップ；
（ｂ）腫瘍を腫瘍断片に断片化するステップ；
（ｃ）腫瘍断片を第１の細胞培養培地と接触させるステップ；
（ｄ）第１の細胞培養培地中でＴＩＬの第１の集団の初期増殖を行ってＴＩＬの第２の集団を得るステップであって、ＴＩＬの第２の集団の数は、ＴＩＬの第１の集団よりも少なくとも５倍多く、第１の細胞培養培地は、ＩＬ−２を含む、ステップ；
（ｅ）第２の細胞培養培地中でＴＩＬの第２の集団の急速増殖を行ってＴＩＬの第３の集団を得るステップであって、ＴＩＬの第３の集団の数は、急速増殖の開始から７日後にＴＩＬの第２の集団よりも少なくとも５０倍多く、第２の細胞培養培地は、ＩＬ−２、ＯＫＴ−３（抗ＣＤ３抗体）及び照射同種異系末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）を含み、急速増殖は、１４日以下の期間にわたって行われる、ステップ；
（ｆ）ＴＩＬの第３の集団を回収するステップ；及び
（ｇ）ＴＩＬの第３の集団の治療有効部分を、癌を有する患者に投与するステップ
を含み、第１の細胞培養培地若しくは第２の細胞培養培地のいずれか又は第１の細胞培養培地及び第２の細胞培養培地の両方は、カリウムチャネルアゴニストをさらに含み、カリウムチャネルアゴニストは、ＫＣａ３．１（ＩＫチャネル）アゴニストであり、ＫＣａ３．１アゴニストは、アントラ［２，１−ｄ］チアゾール−２−イルアミン（ＳＫＡ−２０）：
【化３】
2020503351.tif 000005
又はその薬学的に許容される塩、共結晶、溶媒和物若しくはプロドラッグである、方法を提供する。
【００２１】
[0021]  一実施形態では、本発明は、腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）の集団を用いて癌を処置する方法であって、
（ａ）患者から腫瘍を切除するステップであって、腫瘍は、ＴＩＬの第１の集団を含む、ステップ；
（ｂ）腫瘍を腫瘍断片に断片化するステップ；
（ｃ）腫瘍断片を第１の細胞培養培地と接触させるステップ；
（ｄ）第１の細胞培養培地中でＴＩＬの第１の集団の初期増殖を行ってＴＩＬの第２の集団を得るステップであって、ＴＩＬの第２の集団の数は、ＴＩＬの第１の集団よりも少なくとも５倍多く、第１の細胞培養培地は、ＩＬ−２を含む、ステップ；
（ｅ）第２の細胞培養培地中でＴＩＬの第２の集団の急速増殖を行ってＴＩＬの第３の集団を得るステップであって、ＴＩＬの第３の集団の数は、急速増殖の開始から７日後にＴＩＬの第２の集団よりも少なくとも５０倍多く、第２の細胞培養培地は、ＩＬ−２、ＯＫＴ−３（抗ＣＤ３抗体）及び照射同種異系末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）を含み、急速増殖は、１４日以下の期間にわたって行われる、ステップ；
（ｆ）ＴＩＬの第３の集団を回収するステップ；及び
（ｇ）ＴＩＬの第３の集団の治療有効部分を、癌を有する患者に投与するステップ
を含み、第１の細胞培養培地若しくは第２の細胞培養培地のいずれか又は第１の細胞培養培地及び第２の細胞培養培地の両方は、カリウムチャネルアゴニストをさらに含み、カリウムチャネルアゴニストは、ＫＣａ３．１（ＩＫチャネル）アゴニストであり、ＫＣａ３．１アゴニストは、６，７−ジクロロ−１Ｈ−インドール−２，３−ジオン３−オキシム（ＮＳ３０９）：
【化４】
2020503351.tif 000006
又はその薬学的に許容される塩、共結晶、溶媒和物若しくはプロドラッグである、方法を提供する。
【００２２】
[0022]  一実施形態では、本発明は、腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）の集団を用いて癌を処置する方法であって、
（ａ）患者から腫瘍を切除するステップであって、腫瘍は、ＴＩＬの第１の集団を含む、ステップ；
（ｂ）腫瘍を腫瘍断片に断片化するステップ；
（ｃ）腫瘍断片を第１の細胞培養培地と接触させるステップ；
（ｄ）第１の細胞培養培地中でＴＩＬの第１の集団の初期増殖を行ってＴＩＬの第２の集団を得るステップであって、ＴＩＬの第２の集団の数は、ＴＩＬの第１の集団よりも少なくとも５倍多く、第１の細胞培養培地は、ＩＬ−２を含む、ステップ；
（ｅ）第２の細胞培養培地中でＴＩＬの第２の集団の急速増殖を行ってＴＩＬの第３の集団を得るステップであって、ＴＩＬの第３の集団の数は、急速増殖の開始から７日後にＴＩＬの第２の集団よりも少なくとも５０倍多く、第２の細胞培養培地は、ＩＬ−２、ＯＫＴ−３（抗ＣＤ３抗体）及び照射同種異系末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）を含み、急速増殖は、１４日以下の期間にわたって行われる、ステップ；
（ｆ）ＴＩＬの第３の集団を回収するステップ；及び
（ｇ）ＴＩＬの第３の集団の治療有効部分を、癌を有する患者に投与するステップ
を含み、第１の細胞培養培地若しくは第２の細胞培養培地のいずれか又は第１の細胞培養培地及び第２の細胞培養培地の両方は、カリウムチャネルアゴニストをさらに含み、カリウムチャネルアゴニストは、ＫＣａ３．１（ＩＫチャネル）アゴニストであり、ＫＣａ３．１アゴニストは、リルゾール：
【化５】
2020503351.tif 000007
又はその薬学的に許容される塩、共結晶、溶媒和物若しくはプロドラッグである、方法を提供する。
【００２３】
[0023]  一実施形態では、本発明は、腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）の集団を用いて癌を処置する方法であって、
（ａ）患者から腫瘍を切除するステップであって、腫瘍は、ＴＩＬの第１の集団を含む、ステップ；
（ｂ）腫瘍を腫瘍断片に断片化するステップ；
（ｃ）腫瘍断片を第１の細胞培養培地と接触させるステップ；
（ｄ）第１の細胞培養培地中でＴＩＬの第１の集団の初期増殖を行ってＴＩＬの第２の集団を得るステップであって、ＴＩＬの第２の集団の数は、ＴＩＬの第１の集団よりも少なくとも５倍多く、第１の細胞培養培地は、ＩＬ−２を含む、ステップ；
（ｅ）第２の細胞培養培地中でＴＩＬの第２の集団の急速増殖を行ってＴＩＬの第３の集団を得るステップであって、ＴＩＬの第３の集団の数は、急速増殖の開始から７日後にＴＩＬの第２の集団よりも少なくとも５０倍多く、第２の細胞培養培地は、ＩＬ−２、ＯＫＴ−３（抗ＣＤ３抗体）及び照射同種異系末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）を含み、急速増殖は、１４日以下の期間にわたって行われる、ステップ；
（ｆ）ＴＩＬの第３の集団を回収するステップ；及び
（ｇ）ＴＩＬの第３の集団の治療有効部分を、癌を有する患者に投与するステップ
を含み、第１の細胞培養培地若しくは第２の細胞培養培地のいずれか又は第１の細胞培養培地及び第２の細胞培養培地の両方は、カリウムチャネルアゴニストをさらに含み、カリウムチャネルアゴニストは、ＫＣａ３．１（ＩＫチャネル）アゴニストであり、ＫＣａ３．１アゴニストは、
５−メチルナフト［１，２−ｄ］オキサゾール−２−アミン；
５−エチルナフト［１，２−ｄ］オキサゾール−２−アミン；
５−プロピルナフト［１，２−ｄ］オキサゾール−２−アミン；
５−シクロプロピルナフト［１，２−ｄ］オキサゾール−２−アミン；
５−（ｔｅｒｔ−ブチル）ナフト［１，２−ｄ］オキサゾール−２−アミン；
５−フルオロナフト［１，２−ｄ］オキサゾール−２−アミン；
５−クロロナフト［１，２−ｄ］オキサゾール−２−アミン；
５−ブロモナフト［１，２−ｄ］オキサゾール−２−アミン；
５−ヨードナフト［１，２−ｄ］オキサゾール−２−アミン；
２−アミノナフト［１，２−ｄ］オキサゾール−５−カルボニトリル；
ナフト［１，２−ｄ］オキサゾール−２，５−ジアミン；
Ｎ５−メチルナフト［１，２−ｄ］オキサゾール−２，５−ジアミン；
Ｎ５，Ｎ５−ジメチルナフト［１，２−ｄ］オキサゾール−２，５−ジアミン；
Ｎ５−エチルナフト［１，２−ｄ］オキサゾール−２，５−ジアミン；
５−（ピロリジン−１−イル）ナフト［１，２−ｄ］オキサゾール−２−アミン；
５−メトキシナフト［１，２−ｄ］オキサゾール−２−アミン；
５−トリフルオロメチルナフト［１，２−ｄ］オキサゾール−２−アミン；
５−メチルナフト［２，１−ｄ］オキサゾール−２−アミン；
５−エチルナフト［２，１−ｄ］オキサゾール−２−アミン；
５−プロピルナフト［２，１−ｄ］オキサゾール−２−アミン；
５−シクロプロピルナフト［２，１−ｄ］オキサゾール−２−アミン；
５−（ｔｅｒｔ−ブチル）ナフト［２，１−ｄ］オキサゾール−２−アミン；
５−フルオロナフト［２，１−ｄ］オキサゾール−２−アミン；
５−クロロナフト［２，１−ｄ］オキサゾール−２−アミン；
５−ブロモナフト［２，１−ｄ］オキサゾール−２−アミン；
５−ヨードナフト［２，１−ｄ］オキサゾール−２−アミン；
２−アミノナフト［２，１−ｄ］オキサゾール−５−カルボニトリル；
ナフト［２，１−ｄ］オキサゾール−２，５−ジアミン；
Ｎ５−メチルナフト［２，１−ｄ］オキサゾール−２，５−ジアミン；
Ｎ５，Ｎ５−ジメチルナフト［２，１−ｄ］オキサゾール−２，５−ジアミン；
Ｎ５−エチルナフト［２，１−ｄ］オキサゾール−２，５−ジアミン；
５−（ピロリジン−１−イル）ナフト［２，１−ｄ］オキサゾール−２−アミン；
５−メトキシナフト［２，１−ｄ］オキサゾール−２−アミン；
５−トリフルオロメチルナフト［２，１−ｄ］オキサゾール−２−アミン；及び
その薬学的に許容される塩、共結晶、溶媒和物又はプロドラッグ
からなる群から選択される、方法を提供する。
【００２４】
[0024]  一実施形態では、本発明は、腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）の集団を用いて癌を処置する方法であって、
（ａ）患者から腫瘍を切除するステップであって、腫瘍は、ＴＩＬの第１の集団を含む、ステップ；
（ｂ）腫瘍を腫瘍断片に断片化するステップ；
（ｃ）腫瘍断片を第１の細胞培養培地と接触させるステップ；
（ｄ）第１の細胞培養培地中でＴＩＬの第１の集団の初期増殖を行ってＴＩＬの第２の集団を得るステップであって、ＴＩＬの第２の集団の数は、ＴＩＬの第１の集団よりも少なくとも５倍多く、第１の細胞培養培地は、ＩＬ−２を含む、ステップ；
（ｅ）第２の細胞培養培地中でＴＩＬの第２の集団の急速増殖を行ってＴＩＬの第３の集団を得るステップであって、ＴＩＬの第３の集団の数は、急速増殖の開始から７日後にＴＩＬの第２の集団よりも少なくとも５０倍多く、第２の細胞培養培地は、ＩＬ−２、ＯＫＴ−３（抗ＣＤ３抗体）及び照射同種異系末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）を含み、急速増殖は、１４日以下の期間にわたって行われる、ステップ；
（ｆ）ＴＩＬの第３の集団を回収するステップ；及び
（ｇ）ＴＩＬの第３の集団の治療有効部分を、癌を有する患者に投与するステップ
を含み、第１の細胞培養培地若しくは第２の細胞培養培地のいずれか又は第１の細胞培養培地及び第２の細胞培養培地の両方は、カリウムチャネルアゴニストをさらに含み、ＩＬ−２は、第１の細胞培養培地中に１０００ＩＵ／ｍＬ〜６０００ＩＵ／ｍＬの初期濃度で存在する、方法を提供する。
【００２５】
[0025]  一実施形態では、本発明は、腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）の集団を用いて癌を処置する方法であって、
（ａ）患者から腫瘍を切除するステップであって、腫瘍は、ＴＩＬの第１の集団を含む、ステップ；
（ｂ）腫瘍を腫瘍断片に断片化するステップ；
（ｃ）腫瘍断片を第１の細胞培養培地と接触させるステップ；
（ｄ）第１の細胞培養培地中でＴＩＬの第１の集団の初期増殖を行ってＴＩＬの第２の集団を得るステップであって、ＴＩＬの第２の集団の数は、ＴＩＬの第１の集団よりも少なくとも５倍多く、第１の細胞培養培地は、ＩＬ−２を含む、ステップ；
（ｅ）第２の細胞培養培地中でＴＩＬの第２の集団の急速増殖を行ってＴＩＬの第３の集団を得るステップであって、ＴＩＬの第３の集団の数は、急速増殖の開始から７日後にＴＩＬの第２の集団よりも少なくとも５０倍多く、第２の細胞培養培地は、ＩＬ−２、ＯＫＴ−３（抗ＣＤ３抗体）及び照射同種異系末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）を含み、急速増殖は、１４日以下の期間にわたって行われる、ステップ；
（ｆ）ＴＩＬの第３の集団を回収するステップ；及び
（ｇ）ＴＩＬの第３の集団の治療有効部分を、癌を有する患者に投与するステップ
を含み、第１の細胞培養培地若しくは第２の細胞培養培地のいずれか又は第１の細胞培養培地及び第２の細胞培養培地の両方は、カリウムチャネルアゴニストをさらに含み、第２の細胞培養培地中において、ＩＬ−２は、１０００ＩＵ／ｍＬ〜６０００ＩＵ／ｍＬの初期濃度で存在し、及びＯＫＴ−３抗体は、約３０ｎｇ／ｍＬの初期濃度で存在する、方法を提供する。
【００２６】
[0026]  一実施形態では、本発明は、腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）の集団を用いて癌を処置する方法であって、
（ａ）患者から腫瘍を切除するステップであって、腫瘍は、ＴＩＬの第１の集団を含む、ステップ；
（ｂ）腫瘍を腫瘍断片に断片化するステップ；
（ｃ）腫瘍断片を第１の細胞培養培地と接触させるステップ；
（ｄ）第１の細胞培養培地中でＴＩＬの第１の集団の初期増殖を行ってＴＩＬの第２の集団を得るステップであって、ＴＩＬの第２の集団の数は、ＴＩＬの第１の集団よりも少なくとも５倍多く、第１の細胞培養培地は、ＩＬ−２を含む、ステップ；
（ｅ）第２の細胞培養培地中でＴＩＬの第２の集団の急速増殖を行ってＴＩＬの第３の集団を得るステップであって、ＴＩＬの第３の集団の数は、急速増殖の開始から７日後にＴＩＬの第２の集団よりも少なくとも５０倍多く、第２の細胞培養培地は、ＩＬ−２、ＯＫＴ−３（抗ＣＤ３抗体）及び照射同種異系末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）を含み、急速増殖は、１４日以下の期間にわたって行われる、ステップ；
（ｆ）ＴＩＬの第３の集団を回収するステップ；及び
（ｇ）ＴＩＬの第３の集団の治療有効部分を、癌を有する患者に投与するステップ
を含み、第１の細胞培養培地若しくは第２の細胞培養培地のいずれか又は第１の細胞培養培地及び第２の細胞培養培地の両方は、カリウムチャネルアゴニストをさらに含み、初期増殖は、ガス透過性容器を使用して行われる、方法を提供する。
【００２７】
[0027]  一実施形態では、本発明は、腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）の集団を用いて癌を処置する方法であって、
（ａ）患者から腫瘍を切除するステップであって、腫瘍は、ＴＩＬの第１の集団を含む、ステップ；
（ｂ）腫瘍を腫瘍断片に断片化するステップ；
（ｃ）腫瘍断片を第１の細胞培養培地と接触させるステップ；
（ｄ）第１の細胞培養培地中でＴＩＬの第１の集団の初期増殖を行ってＴＩＬの第２の集団を得るステップであって、ＴＩＬの第２の集団の数は、ＴＩＬの第１の集団よりも少なくとも５倍多く、第１の細胞培養培地は、ＩＬ−２を含む、ステップ；
（ｅ）第２の細胞培養培地中でＴＩＬの第２の集団の急速増殖を行ってＴＩＬの第３の集団を得るステップであって、ＴＩＬの第３の集団の数は、急速増殖の開始から７日後にＴＩＬの第２の集団よりも少なくとも５０倍多く、第２の細胞培養培地は、ＩＬ−２、ＯＫＴ−３（抗ＣＤ３抗体）及び照射同種異系末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）を含み、急速増殖は、１４日以下の期間にわたって行われる、ステップ；
（ｆ）ＴＩＬの第３の集団を回収するステップ；及び
（ｇ）ＴＩＬの第３の集団の治療有効部分を、癌を有する患者に投与するステップ
を含み、第１の細胞培養培地若しくは第２の細胞培養培地のいずれか又は第１の細胞培養培地及び第２の細胞培養培地の両方は、カリウムチャネルアゴニストをさらに含み、急速増殖は、ガス透過性容器を使用して行われる、方法を提供する。
【００２８】
[0028]  一実施形態では、本発明は、腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）の集団を用いて癌を処置する方法であって、
（ａ）患者から腫瘍を切除するステップであって、腫瘍は、ＴＩＬの第１の集団を含む、ステップ；
（ｂ）腫瘍を腫瘍断片に断片化するステップ；
（ｃ）腫瘍断片を第１の細胞培養培地と接触させるステップ；
（ｄ）第１の細胞培養培地中でＴＩＬの第１の集団の初期増殖を行ってＴＩＬの第２の集団を得るステップであって、ＴＩＬの第２の集団の数は、ＴＩＬの第１の集団よりも少なくとも５倍多く、第１の細胞培養培地は、ＩＬ−２を含む、ステップ；
（ｅ）第２の細胞培養培地中でＴＩＬの第２の集団の急速増殖を行ってＴＩＬの第３の集団を得るステップであって、ＴＩＬの第３の集団の数は、急速増殖の開始から７日後にＴＩＬの第２の集団よりも少なくとも５０倍多く、第２の細胞培養培地は、ＩＬ−２、ＯＫＴ−３（抗ＣＤ３抗体）及び照射同種異系末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）を含み、急速増殖は、１４日以下の期間にわたって行われる、ステップ；
（ｆ）ＴＩＬの第３の集団を回収するステップ；及び
（ｇ）ＴＩＬの第３の集団の治療有効部分を、癌を有する患者に投与するステップ
を含み、第１の細胞培養培地若しくは第２の細胞培養培地のいずれか又は第１の細胞培養培地及び第２の細胞培養培地の両方は、カリウムチャネルアゴニストをさらに含み、第１の細胞培養培地は、ＩＬ−４、ＩＬ−７、ＩＬ−１５、ＩＬ−２１及びそれらの組み合わせからなる群から選択されるサイトカインをさらに含む、方法を提供する。
【００２９】
[0029]  一実施形態では、本発明は、腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）の集団を用いて癌を処置する方法であって、
（ａ）患者から腫瘍を切除するステップであって、腫瘍は、ＴＩＬの第１の集団を含む、ステップ；
（ｂ）腫瘍を腫瘍断片に断片化するステップ；
（ｃ）腫瘍断片を第１の細胞培養培地と接触させるステップ；
（ｄ）第１の細胞培養培地中でＴＩＬの第１の集団の初期増殖を行ってＴＩＬの第２の集団を得るステップであって、ＴＩＬの第２の集団の数は、ＴＩＬの第１の集団よりも少なくとも５倍多く、第１の細胞培養培地は、ＩＬ−２を含む、ステップ；
（ｅ）第２の細胞培養培地中でＴＩＬの第２の集団の急速増殖を行ってＴＩＬの第３の集団を得るステップであって、ＴＩＬの第３の集団の数は、急速増殖の開始から７日後にＴＩＬの第２の集団よりも少なくとも５０倍多く、第２の細胞培養培地は、ＩＬ−２、ＯＫＴ−３（抗ＣＤ３抗体）及び照射同種異系末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）を含み、急速増殖は、１４日以下の期間にわたって行われる、ステップ；
（ｆ）ＴＩＬの第３の集団を回収するステップ；及び
（ｇ）ＴＩＬの第３の集団の治療有効部分を、癌を有する患者に投与するステップ
を含み、第１の細胞培養培地若しくは第２の細胞培養培地のいずれか又は第１の細胞培養培地及び第２の細胞培養培地の両方は、カリウムチャネルアゴニストをさらに含み、第２の細胞培養培地は、ＩＬ−４、ＩＬ−７、ＩＬ−１５、ＩＬ−２１及びそれらの組み合わせからなる群から選択されるサイトカインをさらに含む、方法を提供する。
【００３０】
[0030]  一実施形態では、本発明は、腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）の集団を用いて癌を処置する方法であって、
（ａ）患者から腫瘍を切除するステップであって、腫瘍は、ＴＩＬの第１の集団を含む、ステップ；
（ｂ）腫瘍を腫瘍断片に断片化するステップ；
（ｃ）腫瘍断片を第１の細胞培養培地と接触させるステップ；
（ｄ）第１の細胞培養培地中でＴＩＬの第１の集団の初期増殖を行ってＴＩＬの第２の集団を得るステップであって、ＴＩＬの第２の集団の数は、ＴＩＬの第１の集団よりも少なくとも５倍多く、第１の細胞培養培地は、ＩＬ−２を含む、ステップ；
（ｅ）第２の細胞培養培地中でＴＩＬの第２の集団の急速増殖を行ってＴＩＬの第３の集団を得るステップであって、ＴＩＬの第３の集団の数は、急速増殖の開始から７日後にＴＩＬの第２の集団よりも少なくとも５０倍多く、第２の細胞培養培地は、ＩＬ−２、ＯＫＴ−３（抗ＣＤ３抗体）及び照射同種異系末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）を含み、急速増殖は、１４日以下の期間にわたって行われる、ステップ；
（ｆ）ＴＩＬの第３の集団を回収するステップ；及び
（ｇ）ＴＩＬの第３の集団の治療有効部分を、癌を有する患者に投与するステップ
を含み、第１の細胞培養培地若しくは第２の細胞培養培地のいずれか又は第１の細胞培養培地及び第２の細胞培養培地の両方は、カリウムチャネルアゴニストをさらに含み、方法は、患者へのＴＩＬの第３の集団の投与の翌日に開始する、カリウムチャネルアゴニストで患者を処置するステップをさらに含む、方法を提供する。
【００３１】
[0031]  一実施形態では、本発明は、腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）の集団を用いて癌を処置する方法であって、
（ａ）患者から腫瘍を切除するステップであって、腫瘍は、ＴＩＬの第１の集団を含む、ステップ；
（ｂ）腫瘍を腫瘍断片に断片化するステップ；
（ｃ）腫瘍断片を第１の細胞培養培地と接触させるステップ；
（ｄ）第１の細胞培養培地中でＴＩＬの第１の集団の初期増殖を行ってＴＩＬの第２の集団を得るステップであって、ＴＩＬの第２の集団の数は、ＴＩＬの第１の集団よりも少なくとも５倍多く、第１の細胞培養培地は、ＩＬ−２を含む、ステップ；
（ｅ）第２の細胞培養培地中でＴＩＬの第２の集団の急速増殖を行ってＴＩＬの第３の集団を得るステップであって、ＴＩＬの第３の集団の数は、急速増殖の開始から７日後にＴＩＬの第２の集団よりも少なくとも５０倍多く、第２の細胞培養培地は、ＩＬ−２、ＯＫＴ−３（抗ＣＤ３抗体）及び照射同種異系末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）を含み、急速増殖は、１４日以下の期間にわたって行われる、ステップ；
（ｆ）ＴＩＬの第３の集団を回収するステップ；及び
（ｇ）ＴＩＬの第３の集団の治療有効部分を、癌を有する患者に投与するステップ
を含み、第１の細胞培養培地若しくは第２の細胞培養培地のいずれか又は第１の細胞培養培地及び第２の細胞培養培地の両方は、カリウムチャネルアゴニストをさらに含み、方法は、患者から腫瘍を切除するステップ前にカリウムチャネルアゴニストで患者を処置するステップをさらに含む、方法を提供する。
【００３２】
[0032]  一実施形態では、本発明は、腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）の集団を用いて癌を処置する方法であって、
（ａ）患者から腫瘍を切除するステップであって、腫瘍は、ＴＩＬの第１の集団を含む、ステップ；
（ｂ）腫瘍を腫瘍断片に断片化するステップ；
（ｃ）腫瘍断片を第１の細胞培養培地と接触させるステップ；
（ｄ）第１の細胞培養培地中でＴＩＬの第１の集団の初期増殖を行ってＴＩＬの第２の集団を得るステップであって、ＴＩＬの第２の集団の数は、ＴＩＬの第１の集団よりも少なくとも５倍多く、第１の細胞培養培地は、ＩＬ−２を含む、ステップ；
（ｅ）第２の細胞培養培地中でＴＩＬの第２の集団の急速増殖を行ってＴＩＬの第３の集団を得るステップであって、ＴＩＬの第３の集団の数は、急速増殖の開始から７日後にＴＩＬの第２の集団よりも少なくとも５０倍多く、第２の細胞培養培地は、ＩＬ−２、ＯＫＴ−３（抗ＣＤ３抗体）及び照射同種異系末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）を含み、急速増殖は、１４日以下の期間にわたって行われる、ステップ；
（ｆ）ＴＩＬの第３の集団を回収するステップ；及び
（ｇ）ＴＩＬの第３の集団の治療有効部分を、癌を有する患者に投与するステップ
を含み、第１の細胞培養培地若しくは第２の細胞培養培地のいずれか又は第１の細胞培養培地及び第２の細胞培養培地の両方は、カリウムチャネルアゴニストをさらに含み、方法は、ＴＩＬの第３の集団を患者に投与する前に骨髄非破壊的リンパ球枯渇レジメンで患者を処置するステップをさらに含む、方法を提供する。
【００３３】
[0033]  一実施形態では、本発明は、腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）の集団を用いて癌を処置する方法であって、
（ａ）患者から腫瘍を切除するステップであって、腫瘍は、ＴＩＬの第１の集団を含む、ステップ；
（ｂ）腫瘍を腫瘍断片に断片化するステップ；
（ｃ）腫瘍断片を第１の細胞培養培地と接触させるステップ；
（ｄ）第１の細胞培養培地中でＴＩＬの第１の集団の初期増殖を行ってＴＩＬの第２の集団を得るステップであって、ＴＩＬの第２の集団の数は、ＴＩＬの第１の集団よりも少なくとも５倍多く、第１の細胞培養培地は、ＩＬ−２を含む、ステップ；
（ｅ）第２の細胞培養培地中でＴＩＬの第２の集団の急速増殖を行ってＴＩＬの第３の集団を得るステップであって、ＴＩＬの第３の集団の数は、急速増殖の開始から７日後にＴＩＬの第２の集団よりも少なくとも５０倍多く、第２の細胞培養培地は、ＩＬ−２、ＯＫＴ−３（抗ＣＤ３抗体）及び照射同種異系末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）を含み、急速増殖は、１４日以下の期間にわたって行われる、ステップ；
（ｆ）ＴＩＬの第３の集団を回収するステップ；及び
（ｇ）ＴＩＬの第３の集団の治療有効部分を、癌を有する患者に投与するステップ
を含み、第１の細胞培養培地若しくは第２の細胞培養培地のいずれか又は第１の細胞培養培地及び第２の細胞培養培地の両方は、カリウムチャネルアゴニストをさらに含み、方法は、ＴＩＬの第３の集団を患者に投与する前に骨髄非破壊的リンパ球枯渇レジメンで患者を処置するステップをさらに含み、骨髄非破壊的リンパ球枯渇レジメンは、６０ｍｇ／ｍ２／日の用量で２日間にわたってシクロホスファミドを投与し、続いて２５ｍｇ／ｍ２／日の用量で５日間にわたってフルダラビンを投与するステップを含む、方法を提供する。
【００３４】
[0034]  一実施形態では、本発明は、腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）の集団を用いて癌を処置する方法であって、
（ａ）患者から腫瘍を切除するステップであって、腫瘍は、ＴＩＬの第１の集団を含む、ステップ；
（ｂ）腫瘍を腫瘍断片に断片化するステップ；
（ｃ）腫瘍断片を第１の細胞培養培地と接触させるステップ；
（ｄ）第１の細胞培養培地中でＴＩＬの第１の集団の初期増殖を行ってＴＩＬの第２の集団を得るステップであって、ＴＩＬの第２の集団の数は、ＴＩＬの第１の集団よりも少なくとも５倍多く、第１の細胞培養培地は、ＩＬ−２を含む、ステップ；
（ｅ）第２の細胞培養培地中でＴＩＬの第２の集団の急速増殖を行ってＴＩＬの第３の集団を得るステップであって、ＴＩＬの第３の集団の数は、急速増殖の開始から７日後にＴＩＬの第２の集団よりも少なくとも５０倍多く、第２の細胞培養培地は、ＩＬ−２、ＯＫＴ−３（抗ＣＤ３抗体）及び照射同種異系末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）を含み、急速増殖は、１４日以下の期間にわたって行われる、ステップ；
（ｆ）ＴＩＬの第３の集団を回収するステップ；及び
（ｇ）ＴＩＬの第３の集団の治療有効部分を、癌を有する患者に投与するステップ
を含み、第１の細胞培養培地若しくは第２の細胞培養培地のいずれか又は第１の細胞培養培地及び第２の細胞培養培地の両方は、カリウムチャネルアゴニストをさらに含み、方法は、患者へのＴＩＬの第３の集団の投与の翌日に開始する、高用量ＩＬ−２レジメンで患者を処置するステップをさらに含む、方法を提供する。
【００３５】
[0035]  一実施形態では、本発明は、腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）の集団を用いて癌を処置する方法であって、
（ａ）患者から腫瘍を切除するステップであって、腫瘍は、ＴＩＬの第１の集団を含む、ステップ；
（ｂ）腫瘍を腫瘍断片に断片化するステップ；
（ｃ）腫瘍断片を第１の細胞培養培地と接触させるステップ；
（ｄ）第１の細胞培養培地中でＴＩＬの第１の集団の初期増殖を行ってＴＩＬの第２の集団を得るステップであって、ＴＩＬの第２の集団の数は、ＴＩＬの第１の集団よりも少なくとも５倍多く、第１の細胞培養培地は、ＩＬ−２を含む、ステップ；
（ｅ）第２の細胞培養培地中でＴＩＬの第２の集団の急速増殖を行ってＴＩＬの第３の集団を得るステップであって、ＴＩＬの第３の集団の数は、急速増殖の開始から７日後にＴＩＬの第２の集団よりも少なくとも５０倍多く、第２の細胞培養培地は、ＩＬ−２、ＯＫＴ−３（抗ＣＤ３抗体）及び照射同種異系末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）を含み、急速増殖は、１４日以下の期間にわたって行われる、ステップ；
（ｆ）ＴＩＬの第３の集団を回収するステップ；及び
（ｇ）ＴＩＬの第３の集団の治療有効部分を、癌を有する患者に投与するステップ
を含み、第１の細胞培養培地若しくは第２の細胞培養培地のいずれか又は第１の細胞培養培地及び第２の細胞培養培地の両方は、カリウムチャネルアゴニストをさらに含み、カリウムチャネルアゴニストは、ＫＣａ３．１（ＩＫチャネル）アゴニストであり、方法は、患者へのＴＩＬの第３の集団の投与の翌日に開始する、高用量ＩＬ−２レジメンで患者を処置するステップをさらに含み、高用量ＩＬ−２レジメンは、許容量まで８時間ごとに１５分のボーラス静脈内注入として投与される６００，０００又は７２０，０００ＩＵ／ｋｇのアルデスロイキン又はそのバイオシミラー若しくは変異体を含む、方法を提供する。
【００３６】
[0036]  一実施形態では、本発明は、腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）の集団を用いて癌を処置する方法であって、
（ａ）患者から腫瘍を切除するステップであって、腫瘍は、ＴＩＬの第１の集団を含む、ステップ；
（ｂ）腫瘍を腫瘍断片に断片化するステップ；
（ｃ）腫瘍断片を第１の細胞培養培地と接触させるステップ；
（ｄ）第１の細胞培養培地中でＴＩＬの第１の集団の初期増殖を行ってＴＩＬの第２の集団を得るステップであって、ＴＩＬの第２の集団の数は、ＴＩＬの第１の集団よりも少なくとも５倍多く、第１の細胞培養培地は、ＩＬ−２を含む、ステップ；
（ｅ）第２の細胞培養培地中でＴＩＬの第２の集団の急速増殖を行ってＴＩＬの第３の集団を得るステップであって、ＴＩＬの第３の集団の数は、急速増殖の開始から７日後にＴＩＬの第２の集団よりも少なくとも５０倍多く、第２の細胞培養培地は、ＩＬ−２、ＯＫＴ−３（抗ＣＤ３抗体）及び照射同種異系末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）を含み、急速増殖は、１４日以下の期間にわたって行われる、ステップ；
（ｆ）ＴＩＬの第３の集団を回収するステップ；及び
（ｇ）ＴＩＬの第３の集団の治療有効部分を、癌を有する患者に投与するステップ
を含み、第１の細胞培養培地若しくは第２の細胞培養培地のいずれか又は第１の細胞培養培地及び第２の細胞培養培地の両方は、カリウムチャネルアゴニストをさらに含み、カリウムチャネルアゴニストは、ＫＣａ３．１（ＩＫチャネル）アゴニストであり、癌は、黒色腫、卵巣癌、子宮頸癌、肺癌、膀胱癌、乳癌、頭頸部癌、腎細胞癌、急性骨髄性白血病、結腸直腸癌及び肉腫からなる群から選択される、方法を提供する。
【００３７】
[0037]  一実施形態では、本発明は、腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）の集団を用いて癌を処置する方法であって、
（ａ）患者から腫瘍を切除するステップであって、腫瘍は、ＴＩＬの第１の集団を含む、ステップ；
（ｂ）腫瘍を腫瘍断片に断片化するステップ；
（ｃ）腫瘍断片を第１の細胞培養培地と接触させるステップ；
（ｄ）第１の細胞培養培地中でＴＩＬの第１の集団の初期増殖を行ってＴＩＬの第２の集団を得るステップであって、ＴＩＬの第２の集団の数は、ＴＩＬの第１の集団よりも少なくとも５倍多く、第１の細胞培養培地は、ＩＬ−２を含む、ステップ；
（ｅ）第２の細胞培養培地中でＴＩＬの第２の集団の急速増殖を行ってＴＩＬの第３の集団を得るステップであって、ＴＩＬの第３の集団の数は、急速増殖の開始から７日後にＴＩＬの第２の集団よりも少なくとも５０倍多く、第２の細胞培養培地は、ＩＬ−２、ＯＫＴ−３（抗ＣＤ３抗体）及び照射同種異系末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）を含み、急速増殖は、１４日以下の期間にわたって行われる、ステップ；
（ｆ）ＴＩＬの第３の集団を回収するステップ；及び
（ｇ）ＴＩＬの第３の集団の治療有効部分を、癌を有する患者に投与するステップ
を含み、第１の細胞培養培地若しくは第２の細胞培養培地のいずれか又は第１の細胞培養培地及び第２の細胞培養培地の両方は、カリウムチャネルアゴニストをさらに含み、癌は、非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）、エストロゲン受容体陽性（ＥＲ＋）乳癌、プロゲステロン受容体陽性（ＰＲ＋）乳癌、ヒト上皮増殖因子受容体２（ＨＥＲ２＋）乳癌、トリプルポジティブ乳癌（ＥＲ＋／ＰＲ＋／ＨＥＲ２＋）、トリプルネガティブ乳癌（ＥＲ−／ＰＲ−／ＨＥＲ２−）、二重抵抗性黒色腫及びブドウ膜（眼内）黒色腫からなる群から選択される、方法を提供する。
【００３８】
[0038]  一実施形態では、本発明は、腫瘍から腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）の集団を調製するためのプロセスであって、
（ａ）腫瘍を断片化するステップ；
（ｂ）第１の細胞培養培地中でＴＩＬの第１の集団の初期増殖を行ってＴＩＬの第２の集団を得るステップであって、ＴＩＬの第２の集団の数は、ＴＩＬの第１の集団よりも少なくとも５倍多く、第１の細胞培養培地は、ＩＬ−２を含む、ステップ；
（ｂ）第２の細胞培養培地中でＴＩＬの第２の集団の急速増殖を行ってＴＩＬの第３の集団を得るステップであって、ＴＩＬの第３の集団の数は、急速増殖の開始から７日後にＴＩＬの第２の集団よりも少なくとも５０倍多く、第２の細胞培養培地は、ＩＬ−２、ＯＫＴ−３（抗ＣＤ３抗体）、照射同種異系末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）を含み、急速増殖は、１４日以下の期間にわたって行われる、ステップ；
（ｃ）ＴＩＬの第３の集団を回収するステップ
を含み、第１の細胞培養培地若しくは第２の細胞培養培地のいずれか又は第１の細胞培養培地及び第２の細胞培養培地の両方は、カリウムチャネルアゴニストをさらに含む、プロセスを提供する。
【００３９】
[0039]  一実施形態では、本発明は、腫瘍から腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）の集団を調製するためのプロセスであって、
（ａ）腫瘍を断片化するステップ；
（ｂ）第１の細胞培養培地中でＴＩＬの第１の集団の初期増殖を行ってＴＩＬの第２の集団を得るステップであって、ＴＩＬの第２の集団の数は、ＴＩＬの第１の集団よりも少なくとも５倍多く、第１の細胞培養培地は、ＩＬ−２を含む、ステップ；
（ｂ）第２の細胞培養培地中でＴＩＬの第２の集団の急速増殖を行ってＴＩＬの第３の集団を得るステップであって、ＴＩＬの第３の集団の数は、急速増殖の開始から７日後にＴＩＬの第２の集団よりも少なくとも５０倍多く、第２の細胞培養培地は、ＩＬ−２、ＯＫＴ−３（抗ＣＤ３抗体）、照射同種異系末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）を含み、急速増殖は、１４日以下の期間にわたって行われる、ステップ；
（ｃ）ＴＩＬの第３の集団を回収するステップ
を含み、第１の細胞培養培地若しくは第２の細胞培養培地のいずれか又は第１の細胞培養培地及び第２の細胞培養培地の両方は、カリウムチャネルアゴニストをさらに含み、ＴＩＬの第１の集団は、腫瘍又はその一部から得られる、プロセスを提供する。
【００４０】
[0040]  一実施形態では、本発明は、腫瘍から腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）の集団を調製するためのプロセスであって、
（ａ）腫瘍を断片化するステップ；
（ｂ）第１の細胞培養培地中でＴＩＬの第１の集団の初期増殖を行ってＴＩＬの第２の集団を得るステップであって、ＴＩＬの第２の集団の数は、ＴＩＬの第１の集団よりも少なくとも５倍多く、第１の細胞培養培地は、ＩＬ−２を含む、ステップ；
（ｂ）第２の細胞培養培地中でＴＩＬの第２の集団の急速増殖を行ってＴＩＬの第３の集団を得るステップであって、ＴＩＬの第３の集団の数は、急速増殖の開始から７日後にＴＩＬの第２の集団よりも少なくとも５０倍多く、第２の細胞培養培地は、ＩＬ−２、ＯＫＴ−３（抗ＣＤ３抗体）、照射同種異系末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）を含み、急速増殖は、１４日以下の期間にわたって行われる、ステップ；
（ｃ）ＴＩＬの第３の集団を回収するステップ
を含み、第１の細胞培養培地若しくは第２の細胞培養培地のいずれか又は第１の細胞培養培地及び第２の細胞培養培地の両方は、カリウムチャネルアゴニストをさらに含み、腫瘍又はその一部は、患者から切除されたものである、プロセスを提供する。
【００４１】
[0041]  一実施形態では、本発明は、腫瘍から腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）の集団を調製するためのプロセスであって、
（ａ）腫瘍を断片化するステップ；
（ｂ）第１の細胞培養培地中でＴＩＬの第１の集団の初期増殖を行ってＴＩＬの第２の集団を得るステップであって、ＴＩＬの第２の集団の数は、ＴＩＬの第１の集団よりも少なくとも５倍多く、第１の細胞培養培地は、ＩＬ−２を含む、ステップ；
（ｂ）第２の細胞培養培地中でＴＩＬの第２の集団の急速増殖を行ってＴＩＬの第３の集団を得るステップであって、ＴＩＬの第３の集団の数は、急速増殖の開始から７日後にＴＩＬの第２の集団よりも少なくとも５０倍多く、第２の細胞培養培地は、ＩＬ−２、ＯＫＴ−３（抗ＣＤ３抗体）、照射同種異系末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）を含み、急速増殖は、１４日以下の期間にわたって行われる、ステップ；
（ｃ）ＴＩＬの第３の集団を回収するステップ
を含み、第１の細胞培養培地若しくは第２の細胞培養培地のいずれか又は第１の細胞培養培地及び第２の細胞培養培地の両方は、カリウムチャネルアゴニストをさらに含み、カリウムチャネルアゴニストは、ＫＣａ３．１（ＩＫチャネル）アゴニストである、プロセスを提供する。
【００４２】
[0042]  一実施形態では、本発明は、腫瘍から腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）の集団を調製するためのプロセスであって、
（ａ）腫瘍を断片化するステップ；
（ｂ）第１の細胞培養培地中でＴＩＬの第１の集団の初期増殖を行ってＴＩＬの第２の集団を得るステップであって、ＴＩＬの第２の集団の数は、ＴＩＬの第１の集団よりも少なくとも５倍多く、第１の細胞培養培地は、ＩＬ−２を含む、ステップ；
（ｂ）第２の細胞培養培地中でＴＩＬの第２の集団の急速増殖を行ってＴＩＬの第３の集団を得るステップであって、ＴＩＬの第３の集団の数は、急速増殖の開始から７日後にＴＩＬの第２の集団よりも少なくとも５０倍多く、第２の細胞培養培地は、ＩＬ−２、ＯＫＴ−３（抗ＣＤ３抗体）、照射同種異系末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）を含み、急速増殖は、１４日以下の期間にわたって行われる、ステップ；
（ｃ）ＴＩＬの第３の集団を回収するステップ
を含み、第１の細胞培養培地若しくは第２の細胞培養培地のいずれか又は第１の細胞培養培地及び第２の細胞培養培地の両方は、カリウムチャネルアゴニストをさらに含み、ＴＩＬの第２の集団は、カリウムチャネルアゴニストなしで得られたＴＩＬの参照集団に対して増加している、ＣＤ８＋ＣＤ２８＋、ＣＤ８＋ＣＤ２７＋、ＣＤ８＋ＣＤ２７＋ＣＤ２８＋、ＣＣＲ７＋及びそれらの組み合わせからなる群から選択される表現型を有するＴ細胞の集団を含み、ＴＩＬの第２の集団における表現型は、ＴＩＬの参照集団に対して少なくとも５％増加している、プロセスを提供する。いくつかの例では、増加は、約１０％、約１５％、約２０％、約２５％、約３０％、約３５％、約４０％、約４５％、約５０％、約５５％、約６０％、約６５％、約７０％、約７５％、約８０％、約８５％、約９０％、約９５％、約１００％、約２００％、約３００％、約４００％、約５００％、約６００％、約７００％、約８００％、約９００％又は約１０００％である。
【００４３】
[0043]  一実施形態では、本発明は、腫瘍から腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）の集団を調製するためのプロセスであって、
（ａ）腫瘍を断片化するステップ；
（ｂ）第１の細胞培養培地中でＴＩＬの第１の集団の初期増殖を行ってＴＩＬの第２の集団を得るステップであって、ＴＩＬの第２の集団の数は、ＴＩＬの第１の集団よりも少なくとも５倍多く、第１の細胞培養培地は、ＩＬ−２を含む、ステップ；
（ｂ）第２の細胞培養培地中でＴＩＬの第２の集団の急速増殖を行ってＴＩＬの第３の集団を得るステップであって、ＴＩＬの第３の集団の数は、急速増殖の開始から７日後にＴＩＬの第２の集団よりも少なくとも５０倍多く、第２の細胞培養培地は、ＩＬ−２、ＯＫＴ−３（抗ＣＤ３抗体）、照射同種異系末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）を含み、急速増殖は、１４日以下の期間にわたって行われる、ステップ；
（ｃ）ＴＩＬの第３の集団を回収するステップ
を含み、第１の細胞培養培地若しくは第２の細胞培養培地のいずれか又は第１の細胞培養培地及び第２の細胞培養培地の両方は、カリウムチャネルアゴニストをさらに含み、ＴＩＬの第３の集団は、カリウムチャネルアゴニストなしで得られたＴＩＬの参照集団に対して増加している、ＣＤ８＋ＣＤ２８＋、ＣＤ８＋ＣＤ２７＋、ＣＤ８＋ＣＤ２７＋ＣＤ２８＋、ＣＣＲ７＋及びそれらの組み合わせからなる群から選択される表現型を有するＴ細胞の集団を含み、ＴＩＬの第３の集団における表現型は、ＴＩＬの参照集団に対して少なくとも５％増加している、プロセスを提供する。いくつかの例では、増加は、約１０％、約１５％、約２０％、約２５％、約３０％、約３５％、約４０％、約４５％、約５０％、約５５％、約６０％、約６５％、約７０％、約７５％、約８０％、約８５％、約９０％、約９５％、約１００％、約２００％、約３００％、約４００％、約５００％、約６００％、約７００％、約８００％、約９００％又は約１０００％である。
【００４４】
[0044]  一実施形態では、本発明は、腫瘍から腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）の集団を調製するためのプロセスであって、
（ａ）腫瘍を断片化するステップ；
（ｂ）第１の細胞培養培地中でＴＩＬの第１の集団の初期増殖を行ってＴＩＬの第２の集団を得るステップであって、ＴＩＬの第２の集団の数は、ＴＩＬの第１の集団よりも少なくとも５倍多く、第１の細胞培養培地は、ＩＬ−２を含む、ステップ；
（ｂ）第２の細胞培養培地中でＴＩＬの第２の集団の急速増殖を行ってＴＩＬの第３の集団を得るステップであって、ＴＩＬの第３の集団の数は、急速増殖の開始から７日後にＴＩＬの第２の集団よりも少なくとも５０倍多く、第２の細胞培養培地は、ＩＬ−２、ＯＫＴ−３（抗ＣＤ３抗体）、照射同種異系末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）を含み、急速増殖は、１４日以下の期間にわたって行われる、ステップ；
（ｃ）ＴＩＬの第３の集団を回収するステップ
を含み、第１の細胞培養培地若しくは第２の細胞培養培地のいずれか又は第１の細胞培養培地及び第２の細胞培養培地の両方は、カリウムチャネルアゴニストをさらに含み、カリウムチャネルアゴニストは、ＫＣａ３．１（ＩＫチャネル）アゴニストであり、第１の細胞培養培地の両方は、ＫＣａ３．１アゴニストをさらに含み、第２の細胞培養培地は、ＫＣａ３．１アゴニストをさらに含む、プロセスを提供する。
【００４５】
[0045]  一実施形態では、本発明は、腫瘍から腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）の集団を調製するためのプロセスであって、
（ａ）腫瘍を断片化するステップ；
（ｂ）第１の細胞培養培地中でＴＩＬの第１の集団の初期増殖を行ってＴＩＬの第２の集団を得るステップであって、ＴＩＬの第２の集団の数は、ＴＩＬの第１の集団よりも少なくとも５倍多く、第１の細胞培養培地は、ＩＬ−２を含む、ステップ；
（ｂ）第２の細胞培養培地中でＴＩＬの第２の集団の急速増殖を行ってＴＩＬの第３の集団を得るステップであって、ＴＩＬの第３の集団の数は、急速増殖の開始から７日後にＴＩＬの第２の集団よりも少なくとも５０倍多く、第２の細胞培養培地は、ＩＬ−２、ＯＫＴ−３（抗ＣＤ３抗体）、照射同種異系末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）を含み、急速増殖は、１４日以下の期間にわたって行われる、ステップ；
（ｃ）ＴＩＬの第３の集団を回収するステップ
を含み、第１の細胞培養培地若しくは第２の細胞培養培地のいずれか又は第１の細胞培養培地及び第２の細胞培養培地の両方は、カリウムチャネルアゴニストをさらに含み、カリウムチャネルアゴニストは、ＫＣａ３．１（ＩＫチャネル）アゴニストであり、第１の細胞培養培地中のＫＣａ３．１アゴニストの濃度は、１〜１０００ｎＭである、プロセスを提供する。
【００４６】
[0046]  一実施形態では、本発明は、腫瘍から腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）の集団を調製するためのプロセスであって、
（ａ）腫瘍を断片化するステップ；
（ｂ）第１の細胞培養培地中でＴＩＬの第１の集団の初期増殖を行ってＴＩＬの第２の集団を得るステップであって、ＴＩＬの第２の集団の数は、ＴＩＬの第１の集団よりも少なくとも５倍多く、第１の細胞培養培地は、ＩＬ−２を含む、ステップ；
（ｂ）第２の細胞培養培地中でＴＩＬの第２の集団の急速増殖を行ってＴＩＬの第３の集団を得るステップであって、ＴＩＬの第３の集団の数は、急速増殖の開始から７日後にＴＩＬの第２の集団よりも少なくとも５０倍多く、第２の細胞培養培地は、ＩＬ−２、ＯＫＴ−３（抗ＣＤ３抗体）、照射同種異系末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）を含み、急速増殖は、１４日以下の期間にわたって行われる、ステップ；
（ｃ）ＴＩＬの第３の集団を回収するステップ
を含み、第１の細胞培養培地若しくは第２の細胞培養培地のいずれか又は第１の細胞培養培地及び第２の細胞培養培地の両方は、カリウムチャネルアゴニストをさらに含み、カリウムチャネルアゴニストは、ＫＣａ３．１（ＩＫチャネル）アゴニストであり、第１の細胞培養培地中のＫＣａ３．１アゴニストの濃度は、約１００ｎＭである、プロセスを提供する。
【００４７】
[0047]  一実施形態では、本発明は、腫瘍から腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）の集団を調製するためのプロセスであって、
（ａ）腫瘍を断片化するステップ；
（ｂ）第１の細胞培養培地中でＴＩＬの第１の集団の初期増殖を行ってＴＩＬの第２の集団を得るステップであって、ＴＩＬの第２の集団の数は、ＴＩＬの第１の集団よりも少なくとも５倍多く、第１の細胞培養培地は、ＩＬ−２を含む、ステップ；
（ｂ）第２の細胞培養培地中でＴＩＬの第２の集団の急速増殖を行ってＴＩＬの第３の集団を得るステップであって、ＴＩＬの第３の集団の数は、急速増殖の開始から７日後にＴＩＬの第２の集団よりも少なくとも５０倍多く、第２の細胞培養培地は、ＩＬ−２、ＯＫＴ−３（抗ＣＤ３抗体）、照射同種異系末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）を含み、急速増殖は、１４日以下の期間にわたって行われる、ステップ；
（ｃ）ＴＩＬの第３の集団を回収するステップ
を含み、第１の細胞培養培地若しくは第２の細胞培養培地のいずれか又は第１の細胞培養培地及び第２の細胞培養培地の両方は、カリウムチャネルアゴニストをさらに含み、カリウムチャネルアゴニストは、ＫＣａ３．１（ＩＫチャネル）アゴニストであり、第２の細胞培養培地中のＫＣａ３．１アゴニストの濃度は、０．１〜１００ｍＭである、プロセスを提供する。
【００４８】
[0048]  一実施形態では、本発明は、腫瘍から腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）の集団を調製するためのプロセスであって、
（ａ）腫瘍を断片化するステップ；
（ｂ）第１の細胞培養培地中でＴＩＬの第１の集団の初期増殖を行ってＴＩＬの第２の集団を得るステップであって、ＴＩＬの第２の集団の数は、ＴＩＬの第１の集団よりも少なくとも５倍多く、第１の細胞培養培地は、ＩＬ−２を含む、ステップ；
（ｂ）第２の細胞培養培地中でＴＩＬの第２の集団の急速増殖を行ってＴＩＬの第３の集団を得るステップであって、ＴＩＬの第３の集団の数は、急速増殖の開始から７日後にＴＩＬの第２の集団よりも少なくとも５０倍多く、第２の細胞培養培地は、ＩＬ−２、ＯＫＴ−３（抗ＣＤ３抗体）、照射同種異系末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）を含み、急速増殖は、１４日以下の期間にわたって行われる、ステップ；
（ｃ）ＴＩＬの第３の集団を回収するステップ
を含み、第１の細胞培養培地若しくは第２の細胞培養培地のいずれか又は第１の細胞培養培地及び第２の細胞培養培地の両方は、カリウムチャネルアゴニストをさらに含み、カリウムチャネルアゴニストは、ＫＣａ３．１（ＩＫチャネル）アゴニストであり、第１の細胞培養培地中のＫＣａ３．１アゴニストの濃度は、約５０ｍＭである、プロセスを提供する。
【００４９】
[0049]  一実施形態では、本発明は、腫瘍から腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）の集団を調製するためのプロセスであって、
（ａ）腫瘍を断片化するステップ；
（ｂ）第１の細胞培養培地中でＴＩＬの第１の集団の初期増殖を行ってＴＩＬの第２の集団を得るステップであって、ＴＩＬの第２の集団の数は、ＴＩＬの第１の集団よりも少なくとも５倍多く、第１の細胞培養培地は、ＩＬ−２を含む、ステップ；
（ｂ）第２の細胞培養培地中でＴＩＬの第２の集団の急速増殖を行ってＴＩＬの第３の集団を得るステップであって、ＴＩＬの第３の集団の数は、急速増殖の開始から７日後にＴＩＬの第２の集団よりも少なくとも５０倍多く、第２の細胞培養培地は、ＩＬ−２、ＯＫＴ−３（抗ＣＤ３抗体）、照射同種異系末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）を含み、急速増殖は、１４日以下の期間にわたって行われる、ステップ；
（ｃ）ＴＩＬの第３の集団を回収するステップ
を含み、第１の細胞培養培地若しくは第２の細胞培養培地のいずれか又は第１の細胞培養培地及び第２の細胞培養培地の両方は、カリウムチャネルアゴニストをさらに含み、初期増殖は、２１日以下の期間にわたって行われる、プロセスを提供する。
【００５０】
[0050]  一実施形態では、本発明は、腫瘍から腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）の集団を調製するためのプロセスであって、
（ａ）腫瘍を断片化するステップ；
（ｂ）第１の細胞培養培地中でＴＩＬの第１の集団の初期増殖を行ってＴＩＬの第２の集団を得るステップであって、ＴＩＬの第２の集団の数は、ＴＩＬの第１の集団よりも少なくとも５倍多く、第１の細胞培養培地は、ＩＬ−２を含む、ステップ；
（ｂ）第２の細胞培養培地中でＴＩＬの第２の集団の急速増殖を行ってＴＩＬの第３の集団を得るステップであって、ＴＩＬの第３の集団の数は、急速増殖の開始から７日後にＴＩＬの第２の集団よりも少なくとも５０倍多く、第２の細胞培養培地は、ＩＬ−２、ＯＫＴ−３（抗ＣＤ３抗体）、照射同種異系末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）を含み、急速増殖は、１４日以下の期間にわたって行われる、ステップ；
（ｃ）ＴＩＬの第３の集団を回収するステップ
を含み、第１の細胞培養培地若しくは第２の細胞培養培地のいずれか又は第１の細胞培養培地及び第２の細胞培養培地の両方は、カリウムチャネルアゴニストをさらに含み、初期増殖は、１１日以下の期間にわたって行われる、プロセスを提供する。
【００５１】
[0051]  一実施形態では、本発明は、腫瘍から腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）の集団を調製するためのプロセスであって、
（ａ）腫瘍を断片化するステップ；
（ｂ）第１の細胞培養培地中でＴＩＬの第１の集団の初期増殖を行ってＴＩＬの第２の集団を得るステップであって、ＴＩＬの第２の集団の数は、ＴＩＬの第１の集団よりも少なくとも５倍多く、第１の細胞培養培地は、ＩＬ−２を含む、ステップ；
（ｂ）第２の細胞培養培地中でＴＩＬの第２の集団の急速増殖を行ってＴＩＬの第３の集団を得るステップであって、ＴＩＬの第３の集団の数は、急速増殖の開始から７日後にＴＩＬの第２の集団よりも少なくとも５０倍多く、第２の細胞培養培地は、ＩＬ−２、ＯＫＴ−３（抗ＣＤ３抗体）、照射同種異系末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）を含み、急速増殖は、１４日以下の期間にわたって行われる、ステップ；
（ｃ）ＴＩＬの第３の集団を回収するステップ
を含み、第１の細胞培養培地若しくは第２の細胞培養培地のいずれか又は第１の細胞培養培地及び第２の細胞培養培地の両方は、カリウムチャネルアゴニストをさらに含み、急速増殖は、７日以下の期間にわたって行われる、プロセスを提供する。
【００５２】
[0052]  一実施形態では、本発明は、腫瘍から腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）の集団を調製するためのプロセスであって、
（ａ）腫瘍を断片化するステップ；
（ｂ）第１の細胞培養培地中でＴＩＬの第１の集団の初期増殖を行ってＴＩＬの第２の集団を得るステップであって、ＴＩＬの第２の集団の数は、ＴＩＬの第１の集団よりも少なくとも５倍多く、第１の細胞培養培地は、ＩＬ−２を含む、ステップ；
（ｂ）第２の細胞培養培地中でＴＩＬの第２の集団の急速増殖を行ってＴＩＬの第３の集団を得るステップであって、ＴＩＬの第３の集団の数は、急速増殖の開始から７日後にＴＩＬの第２の集団よりも少なくとも５０倍多く、第２の細胞培養培地は、ＩＬ−２、ＯＫＴ−３（抗ＣＤ３抗体）、照射同種異系末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）を含み、急速増殖は、１４日以下の期間にわたって行われる、ステップ；
（ｃ）ＴＩＬの第３の集団を回収するステップ
を含み、第１の細胞培養培地若しくは第２の細胞培養培地のいずれか又は第１の細胞培養培地及び第２の細胞培養培地の両方は、カリウムチャネルアゴニストをさらに含み、カリウムチャネルアゴニストは、ＫＣａ３．１（ＩＫチャネル）アゴニストであり、ＫＣａ３．１アゴニストは、式（１）：
【化６】
2020503351.tif 000008
（式中、
Ｒａは、ハロ、シアノ、ヒドロキシ、チオール、（Ｃ１〜６）アルキル、−ＮＨ２及び−ＮＲ１Ｒ２から選択され；
Ｒ１及びＲ２は、独立して、Ｈ又は（Ｃ１〜６）アルキルであり；
Ｘは、Ｓ、Ｏ及びＮＨからなる群から選択され；
Ｒｂ及びＲｃは、水素、（Ｃ１〜６）アルキル、（Ｃ１〜６）アルコキシル、ハロ、ニトロ、アリール、ヘテロアリール、（Ｃ１〜６）アルキル及び（Ｃ３〜７）シクロアルキルからなる群から独立して選択されるか、又はＲｂ及びＲｃは、それらが結合されている炭素原子と共に、アリール、ナフチル、アントリル、ヘテロアリール、シクロアルキル及びヘテロシクロアルキル環からなる群から選択される環を形成し；及び
Ｒｄ及びＲｅは、水素、（Ｃ１〜６）アルキル、（Ｃ１〜６）アルコキシル、ハロ、ニトロ、アリール、ヘテロアリール、（Ｃ１〜６）アルキル及び（Ｃ３〜７）シクロアルキルからなる群から独立して選択されるか、又はＲｄ及びＲｅは、それらが結合されている炭素原子と共に、アリール、ナフチル、アントリル、ヘテロアリール、シクロアルキル及びヘテロシクロアルキル環からなる群から選択される環を形成し；
ただし、ＲｂとＲｃとが環を形成する場合、ＲｄとＲｅとは、環を形成せず、及びＲｄとＲｅとが環を形成する場合、ＲｂとＲｃとは、環を形成しない）
による化合物又はその薬学的に許容される塩、共結晶、溶媒和物若しくはプロドラッグである、プロセスを提供する。
【００５３】
[0053]  一実施形態では、本発明は、腫瘍から腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）の集団を調製するためのプロセスであって、
（ａ）腫瘍を断片化するステップ；
（ｂ）第１の細胞培養培地中でＴＩＬの第１の集団の初期増殖を行ってＴＩＬの第２の集団を得るステップであって、ＴＩＬの第２の集団の数は、ＴＩＬの第１の集団よりも少なくとも５倍多く、第１の細胞培養培地は、ＩＬ−２を含む、ステップ；
（ｂ）第２の細胞培養培地中でＴＩＬの第２の集団の急速増殖を行ってＴＩＬの第３の集団を得るステップであって、ＴＩＬの第３の集団の数は、急速増殖の開始から７日後にＴＩＬの第２の集団よりも少なくとも５０倍多く、第２の細胞培養培地は、ＩＬ−２、ＯＫＴ−３（抗ＣＤ３抗体）、照射同種異系末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）を含み、急速増殖は、１４日以下の期間にわたって行われる、ステップ；
（ｃ）ＴＩＬの第３の集団を回収するステップ
を含み、第１の細胞培養培地若しくは第２の細胞培養培地のいずれか又は第１の細胞培養培地及び第２の細胞培養培地の両方は、カリウムチャネルアゴニストをさらに含み、カリウムチャネルアゴニストは、ＫＣａ３．１（ＩＫチャネル）アゴニストであり、ＫＣａ３．１アゴニストは、ナフト［１，２−ｄ］チアゾール−２−イルアミン（ＳＫＡ−３１）：
【化７】
2020503351.tif 000009
又はその薬学的に許容される塩、共結晶、溶媒和物若しくはプロドラッグである、プロセスを提供する。
【００５４】
[0054]  一実施形態では、本発明は、腫瘍から腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）の集団を調製するためのプロセスであって、
（ａ）腫瘍を断片化するステップ；
（ｂ）第１の細胞培養培地中でＴＩＬの第１の集団の初期増殖を行ってＴＩＬの第２の集団を得るステップであって、ＴＩＬの第２の集団の数は、ＴＩＬの第１の集団よりも少なくとも５倍多く、第１の細胞培養培地は、ＩＬ−２を含む、ステップ；
（ｂ）第２の細胞培養培地中でＴＩＬの第２の集団の急速増殖を行ってＴＩＬの第３の集団を得るステップであって、ＴＩＬの第３の集団の数は、急速増殖の開始から７日後にＴＩＬの第２の集団よりも少なくとも５０倍多く、第２の細胞培養培地は、ＩＬ−２、ＯＫＴ−３（抗ＣＤ３抗体）、照射同種異系末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）を含み、急速増殖は、１４日以下の期間にわたって行われる、ステップ；
（ｃ）ＴＩＬの第３の集団を回収するステップ
を含み、第１の細胞培養培地若しくは第２の細胞培養培地のいずれか又は第１の細胞培養培地及び第２の細胞培養培地の両方は、カリウムチャネルアゴニストをさらに含み、カリウムチャネルアゴニストは、ＫＣａ３．１（ＩＫチャネル）アゴニストであり、ＫＣａ３．１アゴニストは、アントラ［２，１−ｄ］チアゾール−２−イルアミン（ＳＫＡ−２０）：
【化８】
2020503351.tif 000010
又はその薬学的に許容される塩、共結晶、溶媒和物若しくはプロドラッグである、プロセスを提供する。
【００５５】
[0055]  一実施形態では、本発明は、腫瘍から腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）の集団を調製するためのプロセスであって、
（ａ）腫瘍を断片化するステップ；
（ｂ）第１の細胞培養培地中でＴＩＬの第１の集団の初期増殖を行ってＴＩＬの第２の集団を得るステップであって、ＴＩＬの第２の集団の数は、ＴＩＬの第１の集団よりも少なくとも５倍多く、第１の細胞培養培地は、ＩＬ−２を含む、ステップ；
（ｂ）第２の細胞培養培地中でＴＩＬの第２の集団の急速増殖を行ってＴＩＬの第３の集団を得るステップであって、ＴＩＬの第３の集団の数は、急速増殖の開始から７日後にＴＩＬの第２の集団よりも少なくとも５０倍多く、第２の細胞培養培地は、ＩＬ−２、ＯＫＴ−３（抗ＣＤ３抗体）、照射同種異系末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）を含み、急速増殖は、１４日以下の期間にわたって行われる、ステップ；
（ｃ）ＴＩＬの第３の集団を回収するステップ
を含み、第１の細胞培養培地若しくは第２の細胞培養培地のいずれか又は第１の細胞培養培地及び第２の細胞培養培地の両方は、カリウムチャネルアゴニストをさらに含み、カリウムチャネルアゴニストは、ＫＣａ３．１（ＩＫチャネル）アゴニストであり、ＫＣａ３．１アゴニストは、６，７−ジクロロ−１Ｈ−インドール−２，３−ジオン３−オキシム（ＮＳ３０９）：
【化９】
2020503351.tif 000011
又はその薬学的に許容される塩、共結晶、溶媒和物若しくはプロドラッグである、プロセスを提供する。
【００５６】
[0056]  一実施形態では、本発明は、腫瘍から腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）の集団を調製するためのプロセスであって、
（ａ）腫瘍を断片化するステップ；
（ｂ）第１の細胞培養培地中でＴＩＬの第１の集団の初期増殖を行ってＴＩＬの第２の集団を得るステップであって、ＴＩＬの第２の集団の数は、ＴＩＬの第１の集団よりも少なくとも５倍多く、第１の細胞培養培地は、ＩＬ−２を含む、ステップ；
（ｂ）第２の細胞培養培地中でＴＩＬの第２の集団の急速増殖を行ってＴＩＬの第３の集団を得るステップであって、ＴＩＬの第３の集団の数は、急速増殖の開始から７日後にＴＩＬの第２の集団よりも少なくとも５０倍多く、第２の細胞培養培地は、ＩＬ−２、ＯＫＴ−３（抗ＣＤ３抗体）、照射同種異系末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）を含み、急速増殖は、１４日以下の期間にわたって行われる、ステップ；
（ｃ）ＴＩＬの第３の集団を回収するステップ
を含み、第１の細胞培養培地若しくは第２の細胞培養培地のいずれか又は第１の細胞培養培地及び第２の細胞培養培地の両方は、カリウムチャネルアゴニストをさらに含み、カリウムチャネルアゴニストは、ＫＣａ３．１（ＩＫチャネル）アゴニストであり、ＫＣａ３．１アゴニストは、リルゾール：
【化１０】
2020503351.tif 000012
又はその薬学的に許容される塩、共結晶、溶媒和物若しくはプロドラッグである、プロセスを提供する。
【００５７】
[0057]  一実施形態では、本発明は、腫瘍から腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）の集団を調製するためのプロセスであって、
（ａ）腫瘍を断片化するステップ；
（ｂ）第１の細胞培養培地中でＴＩＬの第１の集団の初期増殖を行ってＴＩＬの第２の集団を得るステップであって、ＴＩＬの第２の集団の数は、ＴＩＬの第１の集団よりも少なくとも５倍多く、第１の細胞培養培地は、ＩＬ−２を含む、ステップ；
（ｂ）第２の細胞培養培地中でＴＩＬの第２の集団の急速増殖を行ってＴＩＬの第３の集団を得るステップであって、ＴＩＬの第３の集団の数は、急速増殖の開始から７日後にＴＩＬの第２の集団よりも少なくとも５０倍多く、第２の細胞培養培地は、ＩＬ−２、ＯＫＴ−３（抗ＣＤ３抗体）、照射同種異系末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）を含み、急速増殖は、１４日以下の期間にわたって行われる、ステップ；
（ｃ）ＴＩＬの第３の集団を回収するステップ
を含み、第１の細胞培養培地若しくは第２の細胞培養培地のいずれか又は第１の細胞培養培地及び第２の細胞培養培地の両方は、カリウムチャネルアゴニストをさらに含み、カリウムチャネルアゴニストは、ＫＣａ３．１（ＩＫチャネル）アゴニストであり、ＫＣａ３．１アゴニストは、
５−メチルナフト［１，２−ｄ］オキサゾール−２−アミン；
５−エチルナフト［１，２−ｄ］オキサゾール−２−アミン；
５−プロピルナフト［１，２−ｄ］オキサゾール−２−アミン；
５−シクロプロピルナフト［１，２−ｄ］オキサゾール−２−アミン；
５−（ｔｅｒｔ−ブチル）ナフト［１，２−ｄ］オキサゾール−２−アミン；
５−フルオロナフト［１，２−ｄ］オキサゾール−２−アミン；
５−クロロナフト［１，２−ｄ］オキサゾール−２−アミン；
５−ブロモナフト［１，２−ｄ］オキサゾール−２−アミン；
５−ヨードナフト［１，２−ｄ］オキサゾール−２−アミン；
２−アミノナフト［１，２−ｄ］オキサゾール−５−カルボニトリル；
ナフト［１，２−ｄ］オキサゾール−２，５−ジアミン；
Ｎ５−メチルナフト［１，２−ｄ］オキサゾール−２，５−ジアミン；
Ｎ５，Ｎ５−ジメチルナフト［１，２−ｄ］オキサゾール−２，５−ジアミン；
Ｎ５−エチルナフト［１，２−ｄ］オキサゾール−２，５−ジアミン；
５−（ピロリジン−１−イル）ナフト［１，２−ｄ］オキサゾール−２−アミン；
５−メトキシナフト［１，２−ｄ］オキサゾール−２−アミン；
５−トリフルオロメチルナフト［１，２−ｄ］オキサゾール−２−アミン；
５−メチルナフト［２，１−ｄ］オキサゾール−２−アミン；
５−エチルナフト［２，１−ｄ］オキサゾール−２−アミン；
５−プロピルナフト［２，１−ｄ］オキサゾール−２−アミン；
５−シクロプロピルナフト［２，１−ｄ］オキサゾール−２−アミン；
５−（ｔｅｒｔ−ブチル）ナフト［２，１−ｄ］オキサゾール−２−アミン；
５−フルオロナフト［２，１−ｄ］オキサゾール−２−アミン；
５−クロロナフト［２，１−ｄ］オキサゾール−２−アミン；
５−ブロモナフト［２，１−ｄ］オキサゾール−２−アミン；
５−ヨードナフト［２，１−ｄ］オキサゾール−２−アミン；
２−アミノナフト［２，１−ｄ］オキサゾール−５−カルボニトリル；
ナフト［２，１−ｄ］オキサゾール−２，５−ジアミン；
Ｎ５−メチルナフト［２，１−ｄ］オキサゾール−２，５−ジアミン；
Ｎ５，Ｎ５−ジメチルナフト［２，１−ｄ］オキサゾール−２，５−ジアミン；
Ｎ５−エチルナフト［２，１−ｄ］オキサゾール−２，５−ジアミン；
５−（ピロリジン−１−イル）ナフト［２，１−ｄ］オキサゾール−２−アミン；
５−メトキシナフト［２，１−ｄ］オキサゾール−２−アミン；
５−トリフルオロメチルナフト［２，１−ｄ］オキサゾール−２−アミン；及び
その薬学的に許容される塩、共結晶、溶媒和物又はプロドラッグ
からなる群から選択される、プロセスを提供する。
【００５８】
[0058]  一実施形態では、本発明は、腫瘍から腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）の集団を調製するためのプロセスであって、
（ａ）腫瘍を断片化するステップ；
（ｂ）第１の細胞培養培地中でＴＩＬの第１の集団の初期増殖を行ってＴＩＬの第２の集団を得るステップであって、ＴＩＬの第２の集団の数は、ＴＩＬの第１の集団よりも少なくとも５倍多く、第１の細胞培養培地は、ＩＬ−２を含む、ステップ；
（ｂ）第２の細胞培養培地中でＴＩＬの第２の集団の急速増殖を行ってＴＩＬの第３の集団を得るステップであって、ＴＩＬの第３の集団の数は、急速増殖の開始から７日後にＴＩＬの第２の集団よりも少なくとも５０倍多く、第２の細胞培養培地は、ＩＬ−２、ＯＫＴ−３（抗ＣＤ３抗体）、照射同種異系末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）を含み、急速増殖は、１４日以下の期間にわたって行われる、ステップ；
（ｃ）ＴＩＬの第３の集団を回収するステップ
を含み、第１の細胞培養培地若しくは第２の細胞培養培地のいずれか又は第１の細胞培養培地及び第２の細胞培養培地の両方は、カリウムチャネルアゴニストをさらに含み、ＩＬ−２は、第１の細胞培養培地中に１０００ＩＵ／ｍＬ〜６０００ＩＵ／ｍＬの初期濃度で存在する、プロセスを提供する。
【００５９】
[0059]  一実施形態では、本発明は、腫瘍から腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）の集団を調製するためのプロセスであって、
（ａ）腫瘍を断片化するステップ；
（ｂ）第１の細胞培養培地中でＴＩＬの第１の集団の初期増殖を行ってＴＩＬの第２の集団を得るステップであって、ＴＩＬの第２の集団の数は、ＴＩＬの第１の集団よりも少なくとも５倍多く、第１の細胞培養培地は、ＩＬ−２を含む、ステップ；
（ｂ）第２の細胞培養培地中でＴＩＬの第２の集団の急速増殖を行ってＴＩＬの第３の集団を得るステップであって、ＴＩＬの第３の集団の数は、急速増殖の開始から７日後にＴＩＬの第２の集団よりも少なくとも５０倍多く、第２の細胞培養培地は、ＩＬ−２、ＯＫＴ−３（抗ＣＤ３抗体）、照射同種異系末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）を含み、急速増殖は、１４日以下の期間にわたって行われる、ステップ；
（ｃ）ＴＩＬの第３の集団を回収するステップ
を含み、第１の細胞培養培地若しくは第２の細胞培養培地のいずれか又は第１の細胞培養培地及び第２の細胞培養培地の両方は、カリウムチャネルアゴニストをさらに含み、第２の細胞培養培地中において、ＩＬ−２は、１０００ＩＵ／ｍＬ〜６０００ＩＵ／ｍＬの初期濃度で存在し、及びＯＫＴ−３抗体は、約３０ｎｇ／ｍＬの初期濃度で存在する、プロセスを提供する。
【００６０】
[0060]  一実施形態では、本発明は、腫瘍から腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）の集団を調製するためのプロセスであって、
（ａ）腫瘍を断片化するステップ；
（ｂ）第１の細胞培養培地中でＴＩＬの第１の集団の初期増殖を行ってＴＩＬの第２の集団を得るステップであって、ＴＩＬの第２の集団の数は、ＴＩＬの第１の集団よりも少なくとも５倍多く、第１の細胞培養培地は、ＩＬ−２を含む、ステップ；
（ｂ）第２の細胞培養培地中でＴＩＬの第２の集団の急速増殖を行ってＴＩＬの第３の集団を得るステップであって、ＴＩＬの第３の集団の数は、急速増殖の開始から７日後にＴＩＬの第２の集団よりも少なくとも５０倍多く、第２の細胞培養培地は、ＩＬ−２、ＯＫＴ−３（抗ＣＤ３抗体）、照射同種異系末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）を含み、急速増殖は、１４日以下の期間にわたって行われる、ステップ；
（ｃ）ＴＩＬの第３の集団を回収するステップ
を含み、第１の細胞培養培地若しくは第２の細胞培養培地のいずれか又は第１の細胞培養培地及び第２の細胞培養培地の両方は、カリウムチャネルアゴニストをさらに含み、初期増殖は、ガス透過性容器を使用して行われる、プロセスを提供する。
【００６１】
[0061]  一実施形態では、本発明は、腫瘍から腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）の集団を調製するためのプロセスであって、
（ａ）腫瘍を断片化するステップ；
（ｂ）第１の細胞培養培地中でＴＩＬの第１の集団の初期増殖を行ってＴＩＬの第２の集団を得るステップであって、ＴＩＬの第２の集団の数は、ＴＩＬの第１の集団よりも少なくとも５倍多く、第１の細胞培養培地は、ＩＬ−２を含む、ステップ；
（ｂ）第２の細胞培養培地中でＴＩＬの第２の集団の急速増殖を行ってＴＩＬの第３の集団を得るステップであって、ＴＩＬの第３の集団の数は、急速増殖の開始から７日後にＴＩＬの第２の集団よりも少なくとも５０倍多く、第２の細胞培養培地は、ＩＬ−２、ＯＫＴ−３（抗ＣＤ３抗体）、照射同種異系末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）を含み、急速増殖は、１４日以下の期間にわたって行われる、ステップ；
（ｃ）ＴＩＬの第３の集団を回収するステップ
を含み、第１の細胞培養培地若しくは第２の細胞培養培地のいずれか又は第１の細胞培養培地及び第２の細胞培養培地の両方は、カリウムチャネルアゴニストをさらに含み、急速増殖は、ガス透過性容器を使用して行われる、プロセスを提供する。
【００６２】
[0062]  一実施形態では、本発明は、腫瘍から腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）の集団を調製するためのプロセスであって、
（ａ）腫瘍を断片化するステップ；
（ｂ）第１の細胞培養培地中でＴＩＬの第１の集団の初期増殖を行ってＴＩＬの第２の集団を得るステップであって、ＴＩＬの第２の集団の数は、ＴＩＬの第１の集団よりも少なくとも５倍多く、第１の細胞培養培地は、ＩＬ−２を含む、ステップ；
（ｂ）第２の細胞培養培地中でＴＩＬの第２の集団の急速増殖を行ってＴＩＬの第３の集団を得るステップであって、ＴＩＬの第３の集団の数は、急速増殖の開始から７日後にＴＩＬの第２の集団よりも少なくとも５０倍多く、第２の細胞培養培地は、ＩＬ−２、ＯＫＴ−３（抗ＣＤ３抗体）、照射同種異系末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）を含み、急速増殖は、１４日以下の期間にわたって行われる、ステップ；
（ｃ）ＴＩＬの第３の集団を回収するステップ
を含み、第１の細胞培養培地若しくは第２の細胞培養培地のいずれか又は第１の細胞培養培地及び第２の細胞培養培地の両方は、カリウムチャネルアゴニストをさらに含み、第１の細胞培養培地は、ＩＬ−４、ＩＬ−７、ＩＬ−１５、ＩＬ−２１及びそれらの組み合わせからなる群から選択されるサイトカインをさらに含む、プロセスを提供する。
【００６３】
[0063]  一実施形態では、本発明は、腫瘍から腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）の集団を調製するためのプロセスであって、
（ａ）腫瘍を断片化するステップ；
（ｂ）第１の細胞培養培地中でＴＩＬの第１の集団の初期増殖を行ってＴＩＬの第２の集団を得るステップであって、ＴＩＬの第２の集団の数は、ＴＩＬの第１の集団よりも少なくとも５倍多く、第１の細胞培養培地は、ＩＬ−２を含む、ステップ；
（ｂ）第２の細胞培養培地中でＴＩＬの第２の集団の急速増殖を行ってＴＩＬの第３の集団を得るステップであって、ＴＩＬの第３の集団の数は、急速増殖の開始から７日後にＴＩＬの第２の集団よりも少なくとも５０倍多く、第２の細胞培養培地は、ＩＬ−２、ＯＫＴ−３（抗ＣＤ３抗体）、照射同種異系末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）を含み、急速増殖は、１４日以下の期間にわたって行われる、ステップ；
（ｃ）ＴＩＬの第３の集団を回収するステップ
を含み、第１の細胞培養培地若しくは第２の細胞培養培地のいずれか又は第１の細胞培養培地及び第２の細胞培養培地の両方は、カリウムチャネルアゴニストをさらに含み、第２の細胞培養培地は、ＩＬ−４、ＩＬ−７、ＩＬ−１５、ＩＬ−２１及びそれらの組み合わせからなる群から選択されるサイトカインをさらに含む、プロセスを提供する。
【００６４】
[0064]  一実施形態では、本発明は、腫瘍から腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）の集団を調製するためのプロセスであって、
（ａ）腫瘍を断片化するステップ；
（ｂ）第１の細胞培養培地中でＴＩＬの第１の集団の初期増殖を行ってＴＩＬの第２の集団を得るステップであって、ＴＩＬの第２の集団の数は、ＴＩＬの第１の集団よりも少なくとも５倍多く、第１の細胞培養培地は、ＩＬ−２を含む、ステップ；
（ｂ）第２の細胞培養培地中でＴＩＬの第２の集団の急速増殖を行ってＴＩＬの第３の集団を得るステップであって、ＴＩＬの第３の集団の数は、急速増殖の開始から７日後にＴＩＬの第２の集団よりも少なくとも５０倍多く、第２の細胞培養培地は、ＩＬ−２、ＯＫＴ−３（抗ＣＤ３抗体）、照射同種異系末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）を含み、急速増殖は、１４日以下の期間にわたって行われる、ステップ；
（ｃ）ＴＩＬの第３の集団を回収するステップ
を含み、第１の細胞培養培地若しくは第２の細胞培養培地のいずれか又は第１の細胞培養培地及び第２の細胞培養培地の両方は、カリウムチャネルアゴニストをさらに含み、カリウムチャネルアゴニストは、ＫＣａ３．１（ＩＫチャネル）アゴニストであり、プロセスは、エクスビボ方法である、プロセスを提供する。
【００６５】
[0065]  一実施形態では、本発明は、患者における癌の処置のためのＴＩＬの集団であって、前述のプロセスのいずれか１つによって得ることができるＴＩＬの集団を提供する。一実施形態では、本発明は、患者における癌の処置のためのＴＩＬの集団であって、前述のプロセスのいずれか１つによって得ることができ、前記癌は、黒色腫、卵巣癌、子宮頸癌、肺癌、膀胱癌、乳癌、頭頸部癌、腎細胞癌、急性骨髄性白血病、結腸直腸癌、肉腫、非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）又はトリプルネガティブ乳癌、二重抵抗性黒色腫及びブドウ膜（眼内）黒色腫から選択される、ＴＩＬの集団を提供する。一実施形態では、本発明は、患者における腫瘍内注射又は静脈内注入による癌の処置のためのＴＩＬの集団であって、前述のプロセスのいずれか１つによって得ることができ、前記癌は、黒色腫、卵巣癌、子宮頸癌、肺癌、膀胱癌、乳癌、頭頸部癌、腎細胞癌、急性骨髄性白血病、結腸直腸癌、肉腫、非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）又はトリプルネガティブ乳癌、二重抵抗性黒色腫及びブドウ膜（眼内）黒色腫から選択される、ＴＩＬの集団を提供する。前述の実施形態のいずれにおいても、ＴＩＬの集団は、化学療法剤と組み合わせて投与され得る。
【００６６】
[0066]  一実施形態では、本発明は、ＩＬ−２と、カリウムチャネルアゴニストとを含む細胞培養培地を提供する。
【００６７】
[0067]  一実施形態では、本発明は、ＩＬ−２、抗ＣＤ３抗体又はその断片、変異体若しくはバイオシミラー、末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）及びカリウムチャネルアゴニストを含む細胞培養培地を提供する。
【００６８】
[0068]  一実施形態では、本発明は、ＩＬ−２と、カリウムチャネルアゴニストとを含む細胞培養培地であって、カリウムチャネルアゴニストは、ＫＣａ３．１アゴニストである、細胞培養培地を提供する。
【００６９】
[0069]  一実施形態では、本発明は、ＩＬ−２、抗ＣＤ３抗体又はその断片、変異体若しくはバイオシミラー、末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）及びカリウムチャネルアゴニストを含む細胞培養培地であって、カリウムチャネルアゴニストは、ＫＣａ３．１である、細胞培養培地を提供する。
【００７０】
[0070]  一実施形態では、本発明は、ＩＬ−２と、カリウムチャネルアゴニストとを含む細胞培養培地であって、カリウムチャネルアゴニストは、ＫＣａ３．１アゴニストであり、ＫＣａ３．１アゴニストは、式（１）：
【化１１】
2020503351.tif 000013
（式中、
Ｒａは、ハロ、シアノ、ヒドロキシ、チオール、（Ｃ１〜６）アルキル、−ＮＨ２及び−ＮＲ１Ｒ２から選択され；
Ｒ１及びＲ２は、独立して、Ｈ又は（Ｃ１〜６）アルキルであり；
Ｘは、Ｓ、Ｏ及びＮＨからなる群から選択され；
Ｒｂ及びＲｃは、水素、（Ｃ１〜６）アルキル、（Ｃ１〜６）アルコキシル、ハロ、ニトロ、アリール、ヘテロアリール、（Ｃ１〜６）アルキル及び（Ｃ３〜７）シクロアルキルからなる群から独立して選択されるか、又はＲｂ及びＲｃは、それらが結合されている炭素原子と共に、アリール、ナフチル、アントリル、ヘテロアリール、シクロアルキル及びヘテロシクロアルキル環からなる群から選択される環を形成し；及び
Ｒｄ及びＲｅは、水素、（Ｃ１〜６）アルキル、（Ｃ１〜６）アルコキシル、ハロ、ニトロ、アリール、ヘテロアリール、（Ｃ１〜６）アルキル及び（Ｃ３〜７）シクロアルキルからなる群から独立して選択されるか、又はＲｄ及びＲｅは、それらが結合されている炭素原子と共に、アリール、ナフチル、アントリル、ヘテロアリール、シクロアルキル及びヘテロシクロアルキル環からなる群から選択される環を形成し；
ただし、ＲｂとＲｃとが環を形成する場合、ＲｄとＲｅとは、環を形成せず、及びＲｄとＲｅとが環を形成する場合、ＲｂとＲｃとは、環を形成しない）
による化合物又はその薬学的に許容される塩、共結晶、溶媒和物若しくはプロドラッグである、細胞培養培地を提供する。
【００７１】
[0071]  一実施形態では、本発明は、ＩＬ−２と、カリウムチャネルアゴニストとを含む細胞培養培地であって、カリウムチャネルアゴニストは、ＫＣａ３．１アゴニストであり、ＫＣａ３．１アゴニストは、ナフト［１，２−ｄ］チアゾール−２−イルアミン（ＳＫＡ−３１）：
【化１２】
2020503351.tif 000014
又はその薬学的に許容される塩、共結晶、溶媒和物若しくはプロドラッグである、細胞培養培地を提供する。
【００７２】
[0072]  一実施形態では、本発明は、ＩＬ−２と、カリウムチャネルアゴニストとを含む細胞培養培地であって、カリウムチャネルアゴニストは、ＫＣａ３．１アゴニストであり、ＫＣａ３．１アゴニストは、アントラ［２，１−ｄ］チアゾール−２−イルアミン（ＳＫＡ−２０）：
【化１３】
2020503351.tif 000015
又はその薬学的に許容される塩、共結晶、溶媒和物若しくはプロドラッグである、細胞培養培地を提供する。
【００７３】
[0073]  一実施形態では、本発明は、ＩＬ−２と、カリウムチャネルアゴニストとを含む細胞培養培地であって、カリウムチャネルアゴニストは、ＫＣａ３．１アゴニストであり、ＫＣａ３．１アゴニストは、６，７−ジクロロ−１Ｈ−インドール−２，３−ジオン３−オキシム（ＮＳ３０９）：
【化１４】
2020503351.tif 000016
又はその薬学的に許容される塩、共結晶、溶媒和物若しくはプロドラッグである、細胞培養培地を提供する。
【００７４】
[0074]  一実施形態では、本発明は、ＩＬ−２と、カリウムチャネルアゴニストとを含む細胞培養培地であって、カリウムチャネルアゴニストは、ＫＣａ３．１アゴニストであり、ＫＣａ３．１アゴニストは、リルゾール：
【化１５】
2020503351.tif 000017
又はその薬学的に許容される塩、共結晶、溶媒和物若しくはプロドラッグである、細胞培養培地を提供する。
【００７５】
[0075]  一実施形態では、本発明は、ＩＬ−２と、カリウムチャネルアゴニストとを含む細胞培養培地であって、カリウムチャネルアゴニストは、ＫＣａ３．１アゴニストであり、ＫＣａ３．１アゴニストは、
５−メチルナフト［１，２−ｄ］オキサゾール−２−アミン；
５−エチルナフト［１，２−ｄ］オキサゾール−２−アミン；
５−プロピルナフト［１，２−ｄ］オキサゾール−２−アミン；
５−シクロプロピルナフト［１，２−ｄ］オキサゾール−２−アミン；
５−（ｔｅｒｔ−ブチル）ナフト［１，２−ｄ］オキサゾール−２−アミン；
５−フルオロナフト［１，２−ｄ］オキサゾール−２−アミン；
５−クロロナフト［１，２−ｄ］オキサゾール−２−アミン；
５−ブロモナフト［１，２−ｄ］オキサゾール−２−アミン；
５−ヨードナフト［１，２−ｄ］オキサゾール−２−アミン；
２−アミノナフト［１，２−ｄ］オキサゾール−５−カルボニトリル；
ナフト［１，２−ｄ］オキサゾール−２，５−ジアミン；
Ｎ５−メチルナフト［１，２−ｄ］オキサゾール−２，５−ジアミン；
Ｎ５，Ｎ５−ジメチルナフト［１，２−ｄ］オキサゾール−２，５−ジアミン；
Ｎ５−エチルナフト［１，２−ｄ］オキサゾール−２，５−ジアミン；
５−（ピロリジン−１−イル）ナフト［１，２−ｄ］オキサゾール−２−アミン；
５−メトキシナフト［１，２−ｄ］オキサゾール−２−アミン；
５−トリフルオロメチルナフト［１，２−ｄ］オキサゾール−２−アミン；
５−メチルナフト［２，１−ｄ］オキサゾール−２−アミン；
５−エチルナフト［２，１−ｄ］オキサゾール−２−アミン；
５−プロピルナフト［２，１−ｄ］オキサゾール−２−アミン；
５−シクロプロピルナフト［２，１−ｄ］オキサゾール−２−アミン；
５−（ｔｅｒｔ−ブチル）ナフト［２，１−ｄ］オキサゾール−２−アミン；
５−フルオロナフト［２，１−ｄ］オキサゾール−２−アミン；
５−クロロナフト［２，１−ｄ］オキサゾール−２−アミン；
５−ブロモナフト［２，１−ｄ］オキサゾール−２−アミン；
５−ヨードナフト［２，１−ｄ］オキサゾール−２−アミン；
２−アミノナフト［２，１−ｄ］オキサゾール−５−カルボニトリル；
ナフト［２，１−ｄ］オキサゾール−２，５−ジアミン；
Ｎ５−メチルナフト［２，１−ｄ］オキサゾール−２，５−ジアミン；
Ｎ５，Ｎ５−ジメチルナフト［２，１−ｄ］オキサゾール−２，５−ジアミン；
Ｎ５−エチルナフト［２，１−ｄ］オキサゾール−２，５−ジアミン；
５−（ピロリジン−１−イル）ナフト［２，１−ｄ］オキサゾール−２−アミン；
５−メトキシナフト［２，１−ｄ］オキサゾール−２−アミン；
５−トリフルオロメチルナフト［２，１−ｄ］オキサゾール−２−アミン；及び
その薬学的に許容される塩、共結晶、溶媒和物又はプロドラッグ
からなる群から選択される、細胞培養培地を提供する。
【００７６】
[0076]  一実施形態では、本発明は、ＩＬ−２と、カリウムチャネルアゴニストとを含む細胞培養培地であって、カリウムチャネルアゴニストは、ＫＣａ３．１アゴニストである、細胞培養培地を提供する。
【００７７】
[0077]  一実施形態では、本発明は、ＩＬ−２と、カリウムチャネルアゴニストとを含む細胞培養培地を含むキットであって、カリウムチャネルアゴニストは、ＫＣａ３．１アゴニストである、キットを提供する。
【００７８】
[0078]  一実施形態では、本発明は、ＩＬ−２、カリウムチャネルアゴニスト及び腫瘍を含む細胞培養培地を含むキットであって、カリウムチャネルアゴニストは、ＫＣａ３．１アゴニストである、キットを提供する。
【００７９】
[0079]  一実施形態では、本発明は、癌の処置のためのＴＩＬの集団の製造におけるカリウムチャネルアゴニストの使用を提供する。適切には、カリウムチャネルアゴニストは、ＫＣａ３．１（ＩＫチャネル）アゴニストである。
【００８０】
[0080]  一実施形態では、本発明は、癌の処置のためのＴＩＬの集団の製造におけるカリウムチャネルアゴニストの使用であって、カリウムチャネルアゴニストは、ＫＣａ３．１アゴニストである、使用を提供する。一実施形態では、本発明は、癌の処置のためのＴＩＬの集団の製造におけるカリウムチャネルアゴニストの使用であって、カリウムチャネルアゴニストは、本明細書に記載のＫＣａ３．１アゴニストである、使用を提供する。適切には、カリウムチャネルアゴニストは、ＳＫＡ−３１、ＳＫＡ−２０、ＮＳ３０９、リルゾール又はその薬学的に許容される塩、共結晶、溶媒和物若しくはプロドラッグである。
【００８１】
図面の簡単な説明
[0081]  前述の概要及び以下の本発明の詳細な説明は、添付の図面と併せて読むことでよりよく理解されるであろう。
【図面の簡単な説明】
【００８２】
【図１】[0082]Ｔ細胞サブセットにおけるＫＣａ３．１発現の分析のためのフローサイトメトリー実験で使用された選別戦略を例示する。
【図２】[0083]図１に示す戦略を使用して行ったフローサイトメトリー実験の結果を示す。上のパネルは、ＣＤ３＋ＣＤ４＋サブセットを示し、下のパネルは、ＣＤ３＋ＣＤ８＋サブセットを示す。ＫＣａ３．１＋とＫＣａ３．１−との両方のサブセットが示される。
【図３】[0084]４つのＴ細胞サブセット：ナイーブ、セントラルメモリー（ＴＣＭ）、エフェクターメモリー（ＴＥＦ）及びエフェクターメモリーＲＡ＋（ＴＥＭＲＡ）細胞の発現を示す。上のパネルは、ＣＤ３＋ＣＤ４＋サブセットを示し、下のパネルは、ＣＤ３＋ＣＤ８＋サブセットを示す。ＫＣａ３．１＋とＫＣａ３．１−との両方のサブセットが示される。
【図４】[0085]２つの健常ドナー末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）株及び３つの黒色腫ＴＩＬ株におけるＫＣａ３．１の動的発現を示す。細胞を回収し、活性化後１、３及び７日目に抗ＣＤ３、抗ＣＤ８、抗ＫＣａ３．１及びAmcyanで染色して、ＫＣａ３．１の動的発現を決定した。
【図５】[0086]ＴＣＲ活性化後０日目及び３日目のＣＤ３＋ＣＤ４＋サブセット（上）及びＣＤ３＋ＣＤ８＋サブセット（下）中のＫＣａ３．１のパーセンテージを示すフローサイトメトリーデータを示す。
【図６】[0087]ＣＤ３＋ＣＤ４＋（上）及びＣＤ３＋ＣＤ８＋サブセット（下）における３日の時間経過内のＫＣａ３．１の動的発現を示す。
【図７】[0088]ＴＩＬと比較した健常ドナーＰＢＭＣのＣＤ３＋ＣＤ４＋（上）及びＣＤ３＋ＣＤ８＋（下）サブセットにおけるＫＣａ３．１発現を示すフローサイトメトリーデータを示す。
【図８】[0089]ＴＩＬと比較した健常ドナーＰＢＭＣのＣＤ３＋ＣＤ４＋（上）及びＣＤ３＋ＣＤ８＋（下）サブセットにおいて観察されたＫＣａ３．１発現のパーセンテージを示す（ｐ値は、スチューデントの片側Ｔ検定を使用して、正常ＰＢＭＣとプレＲＥＰ−ＴＩＬとの間の差を表し、０．０５未満のｐ値は、統計的に有意であると見なされる）。
【図９】[0090]ＳＫＡ−３１なしで行われた対照実験（「処置なし」）と比較した、ＫＣａ３．１アゴニストＳＫＡ−３１の存在下での異なる株からのＴＩＬ（「ＳＫＡ−３１」）の増殖倍率を示す。
【図１０】[0091]ＲＥＰ中にＳＫＡ−３１なしで処置したＴＩＬ（「処置なし」）と比較した、ＫＣａ３．１アゴニストＳＫＡ−３１で処置したＴＩＬ（「Ｋ＋アゴニスト」）において観察されたＣＤ８＋ＣＤ２７＋ＣＤ２８＋Ｔ細胞サブセットのパーセンテージを示す。
【図１１】[0092]ＲＥＰ中にＳＫＡ−３１なしで処置したＴＩＬ（「処置なし」）と比較した、ＫＣａ３．１アゴニストＳＫＡ−３１で処置したＴＩＬ（「Ｋ＋アゴニスト」）において観察されたＣＤ８＋ＣＤ２８＋Ｔ細胞サブセットのパーセンテージを示す。
【図１２】[0093]ＲＥＰ中にＳＫＡ−３１なしで処置したＴＩＬ（「処置なし」）と比較した、ＫＣａ３．１アゴニストＳＫＡ−３１で処置したＴＩＬ（「Ｋ＋アゴニスト」）において観察されたＣＤ８＋ＣＤ２７＋Ｔ細胞サブセットのパーセンテージを示す。
【図１３】[0094]プレＲＥＰ中にＳＫＡ−３１なしで処置したＴＩＬ（「処置なし」）と比較した、ＫＣａ３．１アゴニストＳＫＡ−３１で処置した３つの腫瘍断片（腎臓、エストロゲン受容体陽性（ＥＲ＋）乳房及び黒色腫）から得られたＣＤ４＋及びＣＤ８＋ＴＩＬ（「Ｋ＋アゴニスト」）におけるＣＣＲ７＋発現の増加を示す。
【図１４】[0095]ＣＣＲ７＋発現を測定するために行った代表的なフローサイトメトリー実験の結果を示す。
【図１５】[0096]１４個の腫瘍断片から得られたＣＤ４＋及びＣＤ８＋ＴＩＬにおける統計的に有意なＣＣＲ７＋発現の増加を示す。
【図１６】[0097]ＣＣＲ７＋発現を測定するために行った代表的なフローサイトメトリー実験の結果を示す。
【図１７】[0098]１６個の腫瘍断片から得られたＣＤ４＋及びＣＤ８＋ＴＩＬにおける統計的に有意なＣＤ２５＋発現の増加を示す。
【図１８】[0099]ＣＤ２５＋発現を測定するために行った代表的なフローサイトメトリー実験の結果を示す。
【図１９】[00100]ＳＫＡ−３１なしで処置したＴＩＬ（「処置なし」）と比較した、ＫＣａ３．１アゴニストＳＫＡ−３１で処置したプレＲＥＰ（「ＳＫＡ−３１」）中の卵巣腫瘍について得られた絶対細胞数を示す。
【図２０】[00101]ＳＫＡ−３１なしで処置したＴＩＬ（「処置なし」）と比較した、ＫＣａ３．１アゴニストＳＫＡ−３１で処置したプレＲＥＰ（「ＳＫＡ−３１」）中の乳房腫瘍について得られた絶対細胞数を示す。
【図２１】[00102]ＳＫＡ−３１を伴って又は伴わずに調製したＴＩＬを用いて、３：１のエフェクター：標的（Ｅ：Ｔ）比で２４時間、メラノーマ腫瘍細胞とＴＩＬとを共に共培養した後のＴＩＬからのＩＦＮ−γ分泌の結果を示す。ＮＴは、無処置（すなわちＳＫＡ−３１なしで調製されたＴＩＬ）を指す。
【図２２】[00103]ＭＨＣ−Ｉ遮断あり（抗体を使用）及びＭＨＣ−Ｉ遮断なし（「非遮断」）のＭ１０３２  ＴＩＬ細胞株の異なるＥ：Ｔ比での殺傷力価（カスパーゼ−３で測定）を示す。
【図２３】[00104]ＭＨＣ−Ｉ遮断あり（抗体を使用）及びＭＨＣ−Ｉ遮断なし（「非遮断」）のＭ１０４１  ＴＩＬ細胞株の異なるＥ：Ｔ比での殺傷力価（カスパーゼ−３で測定）を示す。
【図２４】[00105]ＴＩＬ増殖及び処置プロセスを図示する。本開示の１つ以上のＫＣａ３．１アゴニストを含む、本開示のカリウムチャネルアゴニストは、プレＲＥＰ段階（図の上半分）及び／又はＲＥＰ段階（図の下半分）の両方で使用され得、ＩＬ−２を各細胞培養物に添加するときに添加され得る。ステップ１は、１０個のG-Rex10フラスコへの４つの腫瘍断片の添加を指す。ステップ２では、およそ４０×１０６ＴＩＬ以上が得られる。ステップ３では、ＲＥＰのために３６個のG-Rex100フラスコへの分割が生じる。ステップ４では、ＴＩＬを遠心分離によって回収する。新鮮ＴＩＬ生成物は、およそ４３日の合計プロセス時間後にステップ５で得られ、その時点でＴＩＬが患者に注入され得る。
【図２５】[00106]本開示のカリウムチャネルアゴニストで増殖されたＴＩＬを伴う使用のための処置プロトコルを示す。手術（及び腫瘍切除）は、開始時に行われ、リンパ球枯渇化学療法は、本明細書の他の箇所に記載されているように、化学療法を伴う骨髄非破壊的リンパ球枯渇を指す。本開示のカリウムチャネルアゴニストは、ＴＩＬの投与後、本明細書中に記載されるように治療中にも使用され得る。
【発明を実施するための形態】
【００８３】
配列表の簡単な説明
[00107]  配列番号１は、ムロモナブの重鎖のアミノ酸配列である。
【００８４】
[00108]  配列番号２は、ムロモナブの軽鎖のアミノ酸配列である。
【００８５】
[00109]  配列番号３は、組換えヒトＩＬ−２タンパク質のアミノ酸配列である。
【００８６】
[00110]  配列番号４は、アルデスロイキンのアミノ酸配列である。
【００８７】
[00111]  配列番号５は、組換えヒトＩＬ−４タンパク質のアミノ酸配列である。
【００８８】
[00112]  配列番号６は、組換えヒトＩＬ−７タンパク質のアミノ酸配列である。
【００８９】
[00113]  配列番号７は、組換えヒトＩＬ−１５タンパク質のアミノ酸配列である。
【００９０】
[00114]  配列番号８は、組換えヒトＩＬ−２１タンパク質のアミノ酸配列である。
【００９１】
発明の詳細な説明
[00115]  他に定義されない限り、本明細書中で使用される全ての技術的及び科学的用語は、本発明が属する技術分野の当業者によって一般的に理解されるのと同じ意味を有する。本明細書で言及された全ての特許及び刊行物は、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。
【００９２】
定義
[00116]  本明細書で使用される「共投与」、「共投与すること」、「〜と組み合わせて投与される」、「〜と組み合わせて投与すること」、「同時（simultaneous）」及び「同時（concurrent）」という用語は、両方の活性医薬成分及び／又はそれらの代謝産物が同時に対象内に存在するための、２つ以上の活性医薬成分（本発明の好ましい実施形態では、例えば複数のＴＩＬと組み合わせた少なくとも１つのカリウムチャネルアゴニスト）の対象への投与を包含する。共投与には、別々の組成物中での同時投与、別々の組成物中での異なる時点における投与又は２つ以上の活性医薬成分が存在する組成物での投与が含まれる。別々の組成物での同時投与及び両方の薬剤が存在する組成物での投与が好ましい。
【００９３】
[00117]  「インビボ」という用語は、哺乳動物対象の体内で起こる事象を指す。
【００９４】
[00118]  「エクスビボ」という用語は、人工環境において哺乳動物対象の体の外側で起こる事象を指す。
【００９５】
[00119]  「インビトロ」という用語は、試験系で起こる事象を指す。インビトロアッセイは、生存細胞又は死細胞が使用され得る細胞ベースのアッセイを包含し、無傷細胞が使用されない無細胞アッセイも包含し得る。
【００９６】
[00120]  「急速増殖」という用語は、１週間の期間にわたって少なくとも約３倍（又は４倍、５倍、６倍、７倍、８倍若しくは９倍）、より好ましくは１週間の期間にわたって少なくとも約１０倍（又は２０倍、３０倍、４０倍、５０倍、６０倍、７０倍、８０倍若しくは９０倍）、又は最も好ましくは１週間の期間にわたって少なくとも約１００倍の抗原特異的ＴＩＬの数の増加を意味する。いくつかの急速増殖プロトコルが本明細書に記載されている。
【００９７】
[00121]  腫瘍を破砕するプロセスを説明するために本明細書で使用される「断片化」、「断片」及び「断片化された」という用語には、腫瘍組織の破砕、スライス、分割及び細切並びに腫瘍組織の物理的構造を破砕する他の方法などの機械的断片化方法が含まれる。
【００９８】
[00122]  本明細書における「腫瘍浸潤リンパ球」又は「ＴＩＬ」とは、対象の血流を離れて腫瘍に遊走した、白血球として元来得られる細胞の集団を意味する。ＴＩＬには、ＣＤ８＋細胞傷害性Ｔ細胞（リンパ球）、Ｔｈ１及びＴｈ１７  ＣＤ４＋Ｔ細胞、ナチュラルキラー細胞、樹状細胞及びＭ１マクロファージが含まれるが、これらに限定されるものではない。ＴＩＬは、プライマリ及びセカンダリＴＩＬの両方を含む。「プライマリＴＩＬ」は、本明細書で概説するように患者の組織サンプルから取得した（「新鮮に回収した」と称されることもある）ものであり、「セカンダリＴＩＬ」は、バルクＴＩＬ及び増殖ＴＩＬを含むが、これらに限定されない、本明細書で議論されるように増殖（expand）又は増殖（proliferate）された任意のＴＩＬ細胞集団である（「ＲＥＰ  ＴＩＬ」又は「ＲＥＰ後ＴＩＬ」）。ＴＩＬ細胞集団は、遺伝子組換えＴＩＬを含み得る。
【００９９】
[00123]  本明細書における「細胞の集団」（ＴＩＬを含む）とは、共通の形質を共有するいくつかの細胞を意味する。一般的に、集団は、一般に１×１０６〜１×１０１０の数の範囲であり、異なるＴＩＬ集団は、異なる数を含む。例えば、ＩＬ−２の存在下でのプライマリＴＩＬの初期増殖は、およそ１×１０８細胞のバルクＴＩＬの集団をもたらす。ＲＥＰ増殖は、一般的に、注入のために１．５×１０９〜１．５×１０１０個の細胞の集団を提供するために行われる。
【０１００】
[00124]  本明細書において「凍結保存されたＴＩＬ」とは、プライマリ、バルク又は増殖（ＲＥＰ  ＴＩＬ）のいずれかのＴＩＬが約−１５０℃〜−６０℃の範囲で処置及び保存されることを意味する。凍結保存のための一般的な方法も、実施例を含む本明細書の他の箇所に記載されている。明確性のために、「凍結保存ＴＩＬ」は、プライマリＴＩＬの供給源として使用され得る凍結組織サンプルと区別可能である。
【０１０１】
[00125]  本明細書において「解凍した凍結保存ＴＩＬ」とは、以前に凍結保存され、次いで細胞培養温度又はＴＩＬが患者に投与され得る温度を含むが、これらに限定されない室温以上に戻るように処置されたＴＩＬの集団を意味する。
【０１０２】
[00126]  ＴＩＬは、一般的に、細胞表面マーカーを使用して生化学的に、又は腫瘍に浸潤し、処置に影響を及ぼすそれらの能力によって機能的に定義することができる。ＴＩＬは、一般的に、次のバイオマーカー：ＣＤ４、ＣＤ８、ＴＣＲαβ、ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＣＤ５６、ＣＣＲ７、ＣＤ４５Ｒａ、ＣＤ９５、ＰＤ−１及びＣＤ２５の１つ以上を発現することによって分類することができる。追加的及び代替的に、ＴＩＬは、患者への再導入時に固形腫瘍に浸潤するそれらの能力によって機能的に定義することができる。
【０１０３】
[00127]  「セントラルメモリーＴ細胞」という用語は、ヒトにおいてＣＤ４５Ｒ０＋であり、ＣＣＲ７（ＣＣＲ７ｈｉ）及びＣＤ６２Ｌ（ＣＤ６２ｈｉ）を構成的に発現するＴ細胞のサブセットを指す。セントラルメモリーＴ細胞の表面表現型は、ＴＣＲ、ＣＤ３、ＣＤ１２７（ＩＬ−７Ｒ）及びＩＬ−１５Ｒも含む。セントラルメモリーＴ細胞の転写因子は、ＢＣＬ−６、ＢＣＬ−６Ｂ、ＭＢＤ２及びＢＭＩ１を含む。セントラルメモリーＴ細胞は、ＴＣＲトリガー後にエフェクター分子として主にＩＬ−２及びＣＤ４０Ｌを分泌する。セントラルメモリーＴ細胞は、血中のＣＤ４区画において優勢であり、ヒトではリンパ節及び扁桃腺において比例的に濃縮されている。
【０１０４】
[00128]  「エフェクターメモリーＴ細胞」という用語は、セントラルメモリーＴ細胞と同様に、ＣＤ４５Ｒ０＋であるが、ＣＣＲ７の構成的発現を喪失し（ＣＣＲ７ｌｏ）、ＣＤ６２Ｌ発現について不均一であるか又は低い（ＣＤ６２Ｌｌｏ）ヒト又は哺乳動物のＴ細胞のサブセットを指す。セントラルメモリーＴ細胞の表面表現型は、ＴＣＲ、ＣＤ３、ＣＤ１２７（ＩＬ−７Ｒ）及びＩＬ−１５Ｒも含む。セントラルメモリーＴ細胞の転写因子は、ＢＬＩＭＰ１を含む。エフェクターメモリーＴ細胞は、抗原刺激後、インターフェロン−γ、ＩＬ−４及びＩＬ−５を含む、高レベルの炎症性サイトカインを急速に分泌する。エフェクターメモリーＴ細胞は、血中のＣＤ８区画において優勢であり、ヒトでは肺、肝臓及び腸において比例的に濃縮されている。ＣＤ８＋エフェクターメモリーＴ細胞は、大量のパーフォリンを保有する。
【０１０５】
[00129]  「閉鎖系」という用語は、外部環境に対して閉鎖された系を指す。細胞培養方法に適した任意の閉鎖系を本発明の方法と共に使用することができる。閉鎖系としては、例えば、密閉Ｇ容器（G-container）が挙げられるが、これに限定されるものではない。腫瘍セグメントが閉鎖系に添加されると、ＴＩＬが患者に投与される準備ができるまで、系は、外部環境に対して開放されない。
【０１０６】
[00130]  「末梢血単核細胞」及び「ＰＢＭＣ」という用語は、リンパ球（Ｔ細胞、Ｂ細胞、ＮＫ細胞）及び単球を含む、円形核を有する末梢血細胞を指す。好ましくは、末梢血単核細胞は、照射同種異系末梢血単核細胞である。
【０１０７】
[00131]  「抗ＣＤ３抗体」という用語は、抗体又はその変異体、例えばモノクローナル抗体を指し、成熟Ｔ細胞のＴ細胞抗原受容体中のＣＤ３受容体に対して指向されたヒト、ヒト化、キメラ又はマウス抗体を含む。抗ＣＤ３抗体は、ムロモナブとしても知られるＯＫＴ−３を含む。他の抗ＣＤ３抗体には、例えば、オテリキシズマブ、テプリズマブ及びビジリズマブが含まれる。
【０１０８】
[00132]  「ＯＫＴ−３」（本明細書では「ＯＫＴ３」とも称される）という用語は、成熟Ｔ細胞のＴ細胞抗原受容体中のＣＤ３受容体に対して指向されたヒト、ヒト化、キメラ又はマウス抗体を含む、モノクローナル抗体若しくはバイオシミラー又はその変異体を指し、ＯＫＴ−３（３０ｎｇ／ｍＬ、MACSGMP CD3 pure、Miltenyi Biotech, Inc., San Diego, CA, USA）及びムロモナブ又はその変異体、保存的アミノ酸置換、グリコフォーム若しくはバイオシミラーなどの市販の形態を含む。ムロモナブの重鎖及び軽鎖のアミノ酸配列を表１に示す（配列番号１及び配列番号２）。ＯＫＴ−３を産生することができるハイブリドーマは、AmericanType Culture Collectionに寄託されており、ＡＴＣＣ受託番号ＣＲＬ  ８００１が割り当てられている。ＯＫＴ−３を産生することができるハイブリドーマもEuropeanCollection of Authenticated Cell Cultures（ＥＣＡＣＣ）に寄託されており、カタログ番号８６０２２７０６が割り当てられている。
【０１０９】
【表１】
2020503351.tif 000018
【０１１０】
[00133]  「ＩＬ−２」（本明細書では「ＩＬ２」とも称される）という用語は、インターロイキン−２として知られるＴ細胞増殖因子を指し、ヒト及び哺乳動物の形態、保存的アミノ酸置換、グリコフォーム、バイオシミラー及びその変異体を含む全ての形態のＩＬ−２を含む。ＩＬ−２は、例えば、Nelson,J. Immunol.2004, 172, 3983-88及びMalek, Annu.Rev. Immunol.2008, 26, 453-79に記載され、その開示は、参照により本明細書に組み込まれる。本発明における使用に適した組換えヒトＩＬ−２のアミノ酸配列を表２に示す（配列番号３）。例えば、ＩＬ−２という用語は、アルデスロイキン（PROLEUKIN、単回使用バイアルあたり２２００万ＩＵで複数の供給元から市販されている）並びにCellGenix,Inc., Portsmouth, NH, USA（CELLGRO GMP）又はProSpec-Tany TechnoGene Ltd., East Brunswick,NJ, USA（カタログ番号ＣＹＴ−２０９−ｂ）から市販で供給される組換えＩＬ−２の形態及び他の販売業者からの他の市販の均等物などのＩＬ−２のヒト組換え型を包含する。アルデスロイキン（デス−アラニル−１、セリン−１２５ヒトＩＬ−２）は、分子量がおよそ１５ｋＤａの非グリコシル化ヒト組換え型ＩＬ−２である。本発明における使用に適したアルデスロイキンのアミノ酸配列を表２に示す（配列番号４）。ＩＬ−２という用語は、本明細書に記載されているように、NektarTherapeutics, South San Francisco, CA, USAから入手可能なペグ化ＩＬ２プロドラッグＮＫＴＲ−２１４を含む、ペグ化形態のＩＬ−２も包含する。本発明での使用に適したＮＫＴＲ−２１４及びペグ化ＩＬ−２は、米国特許出願公開第２０１４／０３２８７９１Ａ１号及び国際公開第２０１２／０６５０８６Ａ１号に記載され、その開示は、参照により本明細書に組み込まれる。本発明での使用に適したコンジュゲートＩＬ−２の代替形態は、米国特許第４，７６６，１０６号、同第５，２０６，３４４号、同第５，０８９，２６１号及び同第４９０２，５０２号に記載され、その開示は、参照により本明細書に組み込まれる。本発明における使用に適したＩＬ−２の製剤は、米国特許第６，７０６，２８９号に記載されており、その開示は、参照により本明細書に組み込まれる。
【０１１１】
【表２】
2020503351.tif 000019
【０１１２】
[00134]  「ＩＬ−４」（本明細書では「ＩＬ４」とも称される）という用語は、インターロイキン４として知られるサイトカインを指し、これは、Ｔｈ２  Ｔ細胞並びに好酸球、好塩基球及び肥満細胞によって産生される。ＩＬ−４は、ナイーブヘルパーＴ細胞（Ｔｈ０細胞）からＴｈ２  Ｔ細胞への分化を調節する。Steinkeand Borish, Respir.Res.2001, 2, 66-70。ＩＬ−４によって活性化されると、Ｔｈ２  Ｔ細胞は、続いて、ポジティブフィードバックループにおいてさらなるＩＬ−４を産生する。ＩＬ−４は、Ｂ細胞増殖及びクラスＩＩ  ＭＨＣ発現を刺激し、Ｂ細胞からのＩｇＥ及びＩｇＧ１発現へのクラス切り替えも誘導する。本発明における使用に適した組換えヒトＩＬ−４は、ProSpec-TanyTechnoGene Ltd., East Brunswick, NJ, USA（カタログ番号ＣＹＴ−２１１）及びThermoFisher Scientific,Inc., Waltham, MA, USA（ヒトＩＬ−４組換えタンパク質、カタログ番号Ｇｉｂｃｏ  ＣＴＰ００４３）を含む複数の供給元から市販されている。本発明における使用に適した組換えヒトＩＬ−４のアミノ酸配列を表２に示す（配列番号５）。
【０１１３】
[00135]  「ＩＬ−７」（本明細書では「ＩＬ７」とも呼ばれる）という用語は、インターロイキン７として知られるグリコシル化組織由来サイトカインを指し、これは、間質細胞及び上皮細胞並びに樹状細胞から得られ得る。Fryand Mackall, Blood 2002, 99, 3892-904。ＩＬ−７は、Ｔ細胞の発現を刺激することができる。ＩＬ−７は、胸腺内のＴ細胞発生及び末梢内での生存に重要な一連のシグナルにおいて、ＩＬ−７受容体アルファ及び一般的なガンマ鎖受容体からなるヘテロ二量体であるＩＬ−７受容体に結合する。本発明における使用に適した組換えヒトＩＬ−７は、ProSpec-TanyTechnoGene Ltd., East Brunswick, NJ, USA（カタログ番号ＣＹＴ−２５４）及びThermoFisher Scientific,Inc., Waltham, MA, USA（ヒトＩＬ−７組換えタンパク質、カタログ番号Ｇｉｂｃｏ  ＰＨＣ００７１）を含む複数の供給元から市販されている。本発明における使用に適した組換えヒトＩＬ−７のアミノ酸配列を表２に示す（配列番号６）。
【０１１４】
[00136]  「ＩＬ−１５」（本明細書では「ＩＬ１５」とも称される）という用語は、インターロイキン−１５として知られるＴ細胞増殖因子を指し、ヒト及び哺乳動物の形態、保存的アミノ酸置換、グリコフォーム、バイオシミラー及びその変異体を含む全ての形態のＩＬ−１５を含む。ＩＬ−１５は、例えば、Fehnigerand Caligiuri, Blood 2001, 97, 14-32に記載され、その開示は、参照により本明細書に組み込まれる。ＩＬ−１５は、β及びγシグナル伝達受容体サブユニットをＩＬ−２と共有する。組換えヒトＩＬ−１５は、分子量１２．８ｋＤａの１１４個のアミノ酸（及びＮ末端メチオニン）を含有する単一の非グリコシル化ポリペプチド鎖である。組換えヒトＩＬ−１５は、ProSpec-TanyTechnoGene Ltd., East Brunswick, NJ, USA（カタログ番号ＣＹＴ−２３０−ｂ）及びThermoFisher Scientific,Inc., Waltham, MA, USA（ヒトＩＬ−１５組換えタンパク質、カタログ番号３４−８１５９−８２）を含む複数の供給元から市販されている。本発明における使用に適した組換えヒトＩＬ−１５のアミノ酸配列を表２に示す（配列番号７）。
【０１１５】
[00137]  「ＩＬ−２１」（本明細書では「ＩＬ２１」とも称される）という用語は、インターロイキン−２１として知られる多面発現性サイトカインタンパク質を指し、ヒト及び哺乳動物の形態、保存的アミノ酸置換、グリコフォーム、バイオシミラー及びその変異体を含む全ての形態のＩＬ−２１を含む。ＩＬ−２１は、例えば、Spolskiand Leonard, Nat.Rev. Drug.Disc.2014, 13, 379-95に記載され、その開示は、参照により本明細書に組み込まれる。ＩＬ−２１は、主にナチュラルキラーＴ細胞及び活性化ヒトＣＤ４＋Ｔ細胞によって産生される。組換えヒトＩＬ−２１は、分子量が１５．４ｋＤａの１３２個のアミノ酸を含有する単一の非グリコシル化ポリペプチド鎖である。組換えヒトＩＬ−２１は、ProSpec-TanyTechnoGene Ltd., East Brunswick, NJ, USA（カタログ番号ＣＹＴ−４０８−ｂ）及びThermoFisher Scientific,Inc., Waltham, MA, USA（ヒトＩＬ−２１組換えタンパク質、カタログ番号１４−８２１９−８０）を含む複数の供給元から市販されている。本発明における使用に適した組換えヒトＩＬ−２１のアミノ酸配列を表２に示す（配列番号８）。
【０１１６】
[00138]  「抗腫瘍有効量」、「腫瘍抑制有効量」又は「治療量」が示されている場合、投与される本発明の組成物の正確な量は、年齢、体重、腫瘍サイズ、感染又は転移の程度及び患者（対象）の状態の個人差を考慮して医師によって決定され得る。一般的に、本明細書に記載の腫瘍浸潤リンパ球（例えば、二次ＴＩＬ又は遺伝子組換え細胞傷害性リンパ球）を含む医薬組成物は、これらの範囲内の全ての整数値を含む、１０４〜１０１１細胞／ｋｇ体重（例えば、１０５〜１０６、１０５〜１０１０、１０５〜１０１１、１０６〜１０１０、１０６〜１０１１，１０７〜１０１１、１０７〜１０１０、１０８〜１０１１、１０８〜１０１０、１０９〜１０１１又は１０９〜１０１０細胞／ｋｇ体重）の投与量で投与され得ると述べることができる。腫瘍浸潤リンパ球（いくつかの場合、遺伝子組換え細胞傷害性リンパ球を含む）組成物もこれらの投与量で複数回投与され得る。腫瘍浸潤リンパ球（いくつかの場合、遺伝的を含む）は、免疫療法において一般的に知られている注入技術を使用することによって投与することができる（例えば、Rosenberget al., New Eng.J. of Med.319:1676, 1988を参照されたい）。特定の患者に対する最適な投与量及び処置レジメンは、疾患の徴候について患者をモニターし、それに応じて処置を調整することにより、医学の当業者によって容易に決定され得る。
【０１１７】
[00139]  「液体腫瘍」という用語は、本来流動性である異常な細胞塊を指す。液体腫瘍癌としては、白血病、骨髄腫及びリンパ腫並びに他の血液悪性腫瘍が挙げられるが、これらに限定されるものではない。液体腫瘍から得られたＴＩＬは、本明細書では骨髄浸潤リンパ球（ＭＩＬ）とも称される。
【０１１８】
[00140]  「血液悪性腫瘍」という用語は、血液、骨髄、リンパ節及びリンパ系の組織を含むが、これらに限定されない哺乳動物の癌及び造血系及びリンパ系組織の腫瘍を指す。血液悪性腫瘍は、「液体腫瘍」とも称される。血液悪性腫瘍には、急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）、慢性リンパ性リンパ腫（ＣＬＬ）、小リンパ性リンパ腫（ＳＬＬ）、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、急性単球性白血病（ＡＭｏＬ）、ホジキンリンパ腫及び非ホジキンリンパ腫が含まれるが、これらに限定されるものではない。「Ｂ細胞血液悪性腫瘍」という用語は、Ｂ細胞に影響を及ぼす血液悪性腫瘍を指す。
【０１１９】
[00141]  「固形腫瘍」という用語は、嚢胞又は液体領域を通常含まない異常な組織塊を指す。固形腫瘍は、良性又は悪性であり得る。「固形腫瘍癌」という用語は、悪性、新生物性又は癌性の固形腫瘍を指す。固形腫瘍癌としては、肺癌、乳癌、前立腺癌、結腸癌、直腸癌及び膀胱癌などの肉腫、癌腫及びリンパ腫が挙げられるが、これらに限定されるものではない。固形腫瘍の組織構造は、柔組織（癌細胞）を含む相互依存的組織コンパートメント及び癌細胞が分散し支持微小環境を提供し得る支持間質細胞を含む。
【０１２０】
[00142]  本明細書で使用される「微小環境」という用語は、全体としての固形又は血液腫瘍微小環境又は微小環境内の細胞の個々のサブセットを指し得る。本明細書で使用される腫瘍微小環境は、Swartz,et al., Cancer Res., 2012, 72, 2473に記載されているように、「新生物性形質転換を促進し、腫瘍の成長及び浸潤をサポートし、腫瘍を宿主の免疫から保護し、治療抵抗性を培い、優勢な転移を成功させるニッチを提供する、細胞、可溶性因子、シグナル伝達分子、細胞外マトリックス及び機械的手がかり」の複合的な混合物を指す。腫瘍は、Ｔ細胞によって認識されるべき抗原を発現するが、免疫系による腫瘍の排除は、微小環境による免疫抑制のために希少である。
【０１２１】
[00143]  「薬学的に許容される塩」という用語は、当技術分野において公知の様々な有機及び無機対イオンから誘導される塩を指す。薬学的に許容される酸付加塩は、無機酸及び有機酸を用いて形成することができる。塩を誘導することができる好ましい無機酸には、例えば、塩酸、臭化水素酸、硫酸、硝酸及びリン酸が含まれる。塩を誘導することができる好ましい有機酸には、例えば、酢酸、プロピオン酸、グリコール酸、ピルビン酸、シュウ酸、マレイン酸、マロン酸、コハク酸、フマル酸、酒石酸、クエン酸、安息香酸、ケイ皮酸、マンデル酸、メタンスルホン酸、エタンスルホン酸、ｐ−トルエンスルホン酸及びサリチル酸が含まれる。薬学的に許容される塩基付加塩は、無機塩基及び有機塩基を用いて形成することができる。塩を誘導することができる無機塩基には、例えば、ナトリウム、カリウム、リチウム、アンモニウム、カルシウム、マグネシウム、鉄、亜鉛、銅、マンガン及びアルミニウムが含まれる。塩を誘導することができる有機塩基には、例えば、一級、二級及び三級アミン、天然に存在する置換アミンを含む置換アミン、環状アミン及び塩基性イオン交換樹脂が含まれる。具体例には、イソプロピルアミン、トリメチルアミン、ジエチルアミン、トリエチルアミン、トリプロピルアミン、エタノールアミンが含まれる。いくつかの実施形態では、薬学的に許容される塩基付加塩は、アンモニウム塩、カリウム塩、ナトリウム塩、カルシウム塩及びマグネシウム塩から選択される。「共結晶」という用語は、当技術分野において公知のいくつかの共結晶形成剤から誘導される分子複合体を指す。塩と異なり、共結晶は、典型的には、共結晶と薬物との間の水素移動を伴わず、代わりに結晶構造中の共結晶形成体と薬物との間の水素結合、芳香環スタッキング又は分散力などの分子間相互作用を伴う。
【０１２２】
[00144]  「薬学的に許容される担体」又は「薬学的に許容される賦形剤」という用語は、あらゆる溶媒、分散媒体、コーティング、抗菌剤及び抗真菌剤、等張剤及び吸収遅延剤並びに不活性成分を含むことを意図している。活性医薬成分のためのそのような薬学的に許容される担体又は薬学的に許容される賦形剤の使用は、当技術分野において周知である。任意の従来の薬学的に許容される担体又は薬学的に許容される賦形剤が活性医薬成分と適合しない場合を除いて、本発明の治療用組成物におけるその使用が企図される。他の薬物などの追加の活性医薬成分も記載の組成物及び方法に組み込むことができる。
【０１２３】
[00145]  「溶媒和物」という用語は、１つ以上の分子の薬学的に許容される溶媒と物理的に会合している化合物を指す。溶媒和物という用語は、水が固体状態の化合物と物理的に会合している水和物及び有機溶媒和物を含む。
【０１２４】
[00146]  「プロドラッグ」という用語は、生理学的条件下で又は加溶媒分解によって本明細書に記載の生物学的に活性な化合物に変換され得る化合物を説明することを意図している。したがって、「プロドラッグ」という用語は、薬学的に許容される生物学的に活性な化合物の前駆体を指す。プロドラッグは、対象に投与されたときに不活性であり得るが、例えば加水分解によってインビボで活性化合物に変換される。プロドラッグ化合物は、多くの場合、哺乳動物における溶解性、組織適合性又は遅延放出の利点を提供する（例えば、Bundgaard,H., Design of Prodrugs (1985) (Elsevier, Amsterdam)を参照されたい。「プロドラッグ」という用語は、対象に投与されたときにインビボで活性化合物を放出する、任意の共有結合した担体を含むことも意図している。本明細書に記載の活性化合物のプロドラッグは、ルーチン操作又はインビボのいずれかにおいて、改変が切断されて活性親化合物を生じるような方法で、活性化合物中に存在する官能基を改変することによって調製され得る。プロドラッグは、例えば、ヒドロキシ、アミノ又はメルカプト基が、活性化合物のプロドラッグが哺乳動物対象に投与されたときに切断して、遊離ヒドロキシ、遊離アミノ又は遊離メルカプト基をそれぞれ形成する任意の基に結合している化合物を含む。プロドラッグの例には、活性化合物中の、アルコールの酢酸塩、ギ酸塩及び安息香酸塩誘導体、カルボン酸の種々のエステル誘導体又はアミン官能基のアセトアミド、ホルムアミド及びベンズアミド誘導体が含まれるが、これらに限定されるものではない。
【０１２５】
[00147]  「アルキル」とは、１〜１０個の炭素原子を有する、不飽和を含有しない、炭素原子及び水素原子のみからなる直鎖又は分岐の炭化水素鎖ラジカル（例えば、（Ｃ１〜１０）アルキル又はＣ１〜１０アルキル）を指す。本明細書に示されるときには常に、「１〜１０」などの数値範囲は、所与の範囲内の各整数を指し、例えば、「１〜１０個の炭素原子」は、アルキル基が１個の炭素原子、２個の炭素原子、３個の炭素原子などの最大１０個の炭素原子からなり得ることを意味するが、その定義は、数値範囲が具体的に指定されていない場合、「アルキル」という用語の出現を網羅することも意図している。典型的なアルキル基としては、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ｎ−ブチル、イソブチル、ｓｅｃ−ブチルイソブチル、ｔｅｒｔ−ブチル、ペンチル、イソペンチル、ネオペンチル、ヘキシル、セプチル、オクチル、ノニル及びデシルが挙げられるが、これらに限定されるものではない。アルキル部分は、例えば、メチル（Ｍｅ）、エチル（Ｅｔ）、ｎ−プロピル（Ｐｒ）、１−メチルエチル（イソプロピル）、ｎ−ブチル、ｎ−ペンチル、１，１−ジメチルエチル（ｔ−ブチル）及び３−メチルヘキシルなどの単結合によって分子の残りの部分に結合し得る。本明細書において他に特段の記載がない限り、アルキル基は、独立して、ヘテロアルキル、アルケニル、アルキニル、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アリール、アリールアルキル、ヘテロアリール、ヘテロアリールアルキル、ヒドロキシ、ハロ、シアノ、トリフルオロメチル、トリフルオロメトキシ、ニトロ、トリメチルシラニル、−ＯＲａ、−ＳＲａ、−ＯＣ（Ｏ）−Ｒａ、−Ｎ（Ｒａ）２、−Ｃ（Ｏ）Ｒａ、−Ｃ（Ｏ）ＯＲａ、−ＯＣ（Ｏ）Ｎ（Ｒａ）２、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒａ）２、−Ｎ（Ｒａ）Ｃ（Ｏ）ＯＲａ、−Ｎ（Ｒａ）Ｃ（Ｏ）Ｒａ、−Ｎ（Ｒａ）Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒａ）２、Ｎ（Ｒａ）Ｃ（ＮＲａ）Ｎ（Ｒａ）２、−Ｎ（Ｒａ）Ｓ（Ｏ）ｔＲａ（ｔは１又は２）、−Ｓ（Ｏ）ｔＯＲａ（ｔは１又は２）、−Ｓ（Ｏ）ｔＮ（Ｒａ）２（ｔは１又は２）又はＰＯ３（Ｒａ）２（各Ｒａは、独立して、水素、フルオロアルキル、カルボシクリル、カルボシクリルアルキル、アリール、アラルキル、ヘテロシクロアルキル、ヘテロシクロアルキルアルキル、ヘテロアリール又はヘテロアリールアルキルである）である、１つ以上の置換基によって任意選択により置換されている。
【０１２６】
[00148]  「アルコキシ」とは、酸素を介して親構造に結合した、直鎖、分岐、環状配置及びそれらの組み合わせの１〜８個の炭素原子を含む−Ｏ−アルキル基を指す。例としては、メトキシ、エトキシ、プロポキシ、イソプロポキシ、シクロプロピルオキシ及びシクロヘキシルオキシが挙げられるが、これらに限定されるものではない。「低級アルコキシ」は、１〜６個の炭素を含有するアルコキシ基を指す。「置換アルコキシ」という用語は、アルキル構成要素が置換されているアルコキシ（すなわち−Ｏ−（置換アルキル））を指す。本明細書において他に特段の記載がない限り、アルコキシ基のアルキル部分は、独立して、アルキル、ヘテロアルキル、アルケニル、アルキニル、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アリール、アリールアルキル、ヘテロアリール、ヘテロアリールアルキル、ヒドロキシ、ハロ、シアノ、トリフルオロメチル、トリフルオロメトキシ、ニトロ、トリメチルシラニル、−ＯＲａ、−ＳＲａ、−ＯＣ（Ｏ）−Ｒａ、−Ｎ（Ｒａ）２、−Ｃ（Ｏ）Ｒａ、−Ｃ（Ｏ）ＯＲａ、−ＯＣ（Ｏ）Ｎ（Ｒａ）２、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒａ）２、−Ｎ（Ｒａ）Ｃ（Ｏ）ＯＲａ、−Ｎ（Ｒａ）Ｃ（Ｏ）Ｒａ、−Ｎ（Ｒａ）Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒａ）２、Ｎ（Ｒａ）Ｃ（ＮＲａ）Ｎ（Ｒａ）２、−Ｎ（Ｒａ）Ｓ（Ｏ）ｔＲａ（ｔは１又は２）、−Ｓ（Ｏ）ｔＯＲａ（ｔは１又は２）、−Ｓ（Ｏ）ｔＮ（Ｒａ）２（ｔは１又は２）又はＰＯ３（Ｒａ）２（各Ｒａは、独立して、水素、アルキル、フルオロアルキル、カルボシクリル、カルボシクリルアルキル、アリール、アラルキル、ヘテロシクロアルキル、ヘテロシクロアルキルアルキル、ヘテロアリール又はヘテロアリールアルキルである）である、１つ以上の置換基によって任意選択により置換されている。
【０１２７】
[00149]  「アミノ」又は「アミン」は、他に特段の記載がない限り、−Ｎ（Ｒａ）２ラジカル基を指し、各Ｒａは、独立して、水素、アルキル、フルオロアルキル、カルボシクリル、カルボシクリルアルキル、アリール、アラルキル、ヘテロシクロアルキル、ヘテロシクロアルキルアルキル、ヘテロアリール又はヘテロアリールアルキルである。−Ｎ（Ｒａ）２基が水素以外の２個のＲａ置換基を有する場合、それらは、窒素原子と一緒になって４、５、６又は７員環を形成することができる。例えば、−Ｎ（Ｒａ）２は、１−ピロリジニル及び４−モルホリニルを含むことを意図しているが、これらに限定されるものではない。本明細書において他に特段の記載がない限り、アミノ基は、独立して、アルキル、ヘテロアルキル、アルケニル、アルキニル、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アリール、アリールアルキル、ヘテロアリール、ヘテロアリールアルキル、ヒドロキシ、ハロ、シアノ、トリフルオロメチル、トリフルオロメトキシ、ニトロ、トリメチルシラニル、−ＯＲａ、−ＳＲａ、−ＯＣ（Ｏ）−Ｒａ、−Ｎ（Ｒａ）２、−Ｃ（Ｏ）Ｒａ、−Ｃ（Ｏ）ＯＲａ、−ＯＣ（Ｏ）Ｎ（Ｒａ）２、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒａ）２、−Ｎ（Ｒａ）Ｃ（Ｏ）ＯＲａ、−Ｎ（Ｒａ）Ｃ（Ｏ）Ｒａ、−Ｎ（Ｒａ）Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒａ）２、Ｎ（Ｒａ）Ｃ（ＮＲａ）Ｎ（Ｒａ）２、−Ｎ（Ｒａ）Ｓ（Ｏ）ｔＲａ（ｔは１又は２）、−Ｓ（Ｏ）ｔＯＲａ（ｔは１又は２）、−Ｓ（Ｏ）ｔＮ（Ｒａ）２（ｔは１又は２）又はＰＯ３（Ｒａ）２（各Ｒａは、独立して、水素、アルキル、フルオロアルキル、カルボシクリル、カルボシクリルアルキル、アリール、アラルキル、ヘテロシクロアルキル、ヘテロシクロアルキルアルキル、ヘテロアリール又はヘテロアリールアルキルである）である、１つ以上の置換基によって任意選択により置換されている。「置換アミノ」という用語は、それぞれ上記の通り、基−ＮＨＲｄ及びＮＲｄＲｄのＮ−オキシドも指す。Ｎ−オキシドは、対応するアミノ基を例えば過酸化水素又はｍ−クロロペルオキシ安息香酸で処置することによって調製することができる。
【０１２８】
[00150]  「芳香族」又は「アリール」又は「Ａｒ」は、炭素環式共役π電子系を有する少なくとも１つの環（例えば、フェニル、フルオレニル及びナフチル）を有する、６〜１４個の環原子を有する芳香族ラジカル（例えば、Ｃ６〜Ｃ１４芳香族又はＣ６〜Ｃ１４アリール）を指す。置換ベンゼン誘導体から形成され、環原子に自由原子価を有する二価ラジカルは、置換フェニレンラジカルと呼ばれる。自由原子価を有する炭素原子から１つの水素原子を除去することによって「−イル」で終わる名称の一価多環式炭化水素ラジカルから誘導される二価ラジカルは、対応する一価ラジカルの名称に「−イデン」を加えることによって命名され、例えば、２つの結合点を有するナフチル基は、ナフチリデンである。本明細書に示されるときには常に、「６〜１０」などの数値範囲は、所与の範囲内の各整数を指し、例えば、「６〜１０個の環原子」は、アリール基が６個の環原子、７個の環原子などの最大１０個の環原子からなり得ることを意味する。この用語は、単環式又は縮合環多環式（すなわち隣接する対の環原子を共有する環）の基を含む。本明細書において他に特段の記載がない限り、アリール部分は、独立して、アルキル、ヘテロアルキル、アルケニル、アルキニル、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アリール、アリールアルキル、ヘテロアリール、ヘテロアリールアルキル、ヒドロキシ、ハロ、シアノ、トリフルオロメチル、トリフルオロメトキシ、ニトロ、トリメチルシラニル、−ＯＲａ、−ＳＲａ、−ＯＣ（Ｏ）−Ｒａ、−Ｎ（Ｒａ）２、−Ｃ（Ｏ）Ｒａ、−Ｃ（Ｏ）ＯＲａ、−ＯＣ（Ｏ）Ｎ（Ｒａ）２、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒａ）２、−Ｎ（Ｒａ）Ｃ（Ｏ）ＯＲａ、−Ｎ（Ｒａ）Ｃ（Ｏ）Ｒａ、−Ｎ（Ｒａ）Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒａ）２、Ｎ（Ｒａ）Ｃ（ＮＲａ）Ｎ（Ｒａ）２、−Ｎ（Ｒａ）Ｓ（Ｏ）ｔＲａ（ｔは１又は２）、−Ｓ（Ｏ）ｔＯＲａ（ｔは１又は２）、−Ｓ（Ｏ）ｔＮ（Ｒａ）２（ｔは１又は２）又はＰＯ３（Ｒａ）２（各Ｒａは、独立して、水素、アルキル、フルオロアルキル、カルボシクリル、カルボシクリルアルキル、アリール、アラルキル、ヘテロシクロアルキル、ヘテロシクロアルキルアルキル、ヘテロアリール又はヘテロアリールアルキルである）である、１つ以上の置換基によって任意選択により置換されている。
【０１２９】
[00151]  「シクロアルキル」は、炭素及び水素のみを含有し、飽和又は部分的に不飽和であり得る単環式又は多環式ラジカルを指す。シクロアルキル基は、３〜１０個の環原子を有する基（すなわち（Ｃ３〜１０）シクロアルキル又はＣ３〜１０シクロアルキル）を含む。本明細書に示されるときには常に、「３〜１０」などの数値範囲は、所与の範囲内の各整数を指し、例えば、「３〜１０個の炭素原子」は、シクロアルキル基が３個の炭素原子などの最大１０個の炭素原子からなり得ることを意味する。シクロアルキル基を説明する例としては、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロペンテニル、シクロヘキシル、シクロヘキセニル、シクロヘプチル、シクロオクチル、シクロノニル、シクロデシル、ノルボルニルなどの部分が挙げられるが、これに限定されるものではない。本明細書において他に特段の記載がない限り、シクロアルキル基は、独立して、アルキル、ヘテロアルキル、アルケニル、アルキニル、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アリール、アリールアルキル、ヘテロアリール、ヘテロアリールアルキル、ヒドロキシ、ハロ、シアノ、トリフルオロメチル、トリフルオロメトキシ、ニトロ、トリメチルシラニル、−ＯＲａ、−ＳＲａ、−ＯＣ（Ｏ）−Ｒａ、−Ｎ（Ｒａ）２、−Ｃ（Ｏ）Ｒａ、−Ｃ（Ｏ）ＯＲａ、−ＯＣ（Ｏ）Ｎ（Ｒａ）２、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒａ）２、−Ｎ（Ｒａ）Ｃ（Ｏ）ＯＲａ、−Ｎ（Ｒａ）Ｃ（Ｏ）Ｒａ、−Ｎ（Ｒａ）Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒａ）２、Ｎ（Ｒａ）Ｃ（ＮＲａ）Ｎ（Ｒａ）２、−Ｎ（Ｒａ）Ｓ（Ｏ）ｔＲａ（ｔは１又は２）、−Ｓ（Ｏ）ｔＯＲａ（ｔは１又は２）、−Ｓ（Ｏ）ｔＮ（Ｒａ）２（ｔは１又は２）又はＰＯ３（Ｒａ）２（各Ｒａは、独立して、水素、アルキル、フルオロアルキル、カルボシクリル、カルボシクリルアルキル、アリール、アラルキル、ヘテロシクロアルキル、ヘテロシクロアルキルアルキル、ヘテロアリール又はヘテロアリールアルキルである）である、１つ以上の置換基によって任意選択により置換されている。
【０１３０】
[00152]  「シクロアルコキシ」は、酸素を介して親構造に結合しているシクロアルキル基を指す。例としては、シクロプロピルオキシル及びシクロヘキシルオキシルが挙げられるが、これらに限定されるものではない。
【０１３１】
[00153]  「シアノ」は、−ＣＮラジカルを指す。
【０１３２】
[00154]  「フルオロアルキル」は、上記で定義されたような１つ以上のフルオロラジカルで置換された、上記で定義されたようなアルキルラジカル、例えばトリフルオロメチル、ジフルオロメチル、２，２，２−トリフルオロエチル、１−フルオロメチル−２−フルオロエチルなどを指す。フルオロアルキルラジカルのアルキル部分は、アルキル基について上で定義したように、任意選択により置換され得る。
【０１３３】
[00155]  「ハロ」、「ハロゲン化物」又は代替的に「ハロゲン」は、フルオロ、クロロ、ブロモ又はヨードを意味することを意図している。「ハロＣｎ〜ｍアルキル」という用語は、１つ以上のハロ基又はその組み合わせで置換されているＣｎ〜ｍアルキル構造を含む。例えば、「フルオロアルキル」及び「トリフルオロアルキル」という用語は、ハロがフッ素であるハロアルキルを含む。
【０１３４】
[00156]  「ヘテロアリール」、又は「ヘテロ芳香族」、又は「ＨｅｔＡｒ」は、窒素、酸素及び硫黄から選択される１つ以上の環ヘテロ原子を含み、単環式、二環式、三環式又は四環式環系であり得る５〜１８員芳香族ラジカル（例えば、Ｃ５〜Ｃ１３ヘテロアリール）を指す。本明細書に示されるときには常に、「５〜１８」などの数値範囲は、所与の範囲内の各整数を指し、例えば、「５〜１８個の環原子」は、ヘテロアリール基が５個の環原子、６個の環原子などの最大１８個の環原子からなり得ることを意味する。自由原子価を有する原子から１つの水素原子を除去することによって「−イル」で終わる名称の一価ヘテロアリールラジカルから誘導される二価ラジカルは、対応する一価ラジカルの名称に「−イデン」を加えることによって命名され、例えば、２つの結合点を有するピリジル基は、ピリジリデンである。Ｎ含有「ヘテロ芳香族」又は「ヘテロアリール」部分は、環の骨格原子の少なくとも１つが窒素原子である芳香族基を指す。多環式ヘテロアリール基は、縮合型又は非縮合型であり得る。ヘテロアリールラジカル中のヘテロ原子は、任意選択により酸化されたものである。１つ以上の窒素原子が存在する場合、それは、任意選択により四級化されたものである。ヘテロアリールは、環の任意の原子を介して残りの分子に結合し得る。ヘテロアリールの例には、これらに限定されないが、アゼピニル、アクリジニル、ベンズイミダゾリル、ベンズインドリル、１，３−ベンゾジオキソリル、ベンゾフラニル、ベンゾオキサゾリル、ベンゾ［ｄ］チアゾリル、ベンゾチアジアゾリル、ベンゾ［ｂ］［１，４］ジオキセピニル、ベンゾ［ｂ］［１，４］オキサジニル、１，４−ベンゾジオキサニル、ベンゾナフトフラニル、ベンゾオキサゾリル、ベンゾジオキソリル、ベンゾジオキシニル、ベンゾオキサゾリル、ベンゾピラニル、ベンゾピラノニル、ベンゾフラニル、ベンゾフラノニル、ベンゾフラザニル、ベンゾチアゾリル、ベンゾチエニル（ベンゾチオフェニル）、ベンゾチエノ［３，２−ｄ］ピリミジニル、ベンゾトリアゾリル、ベンゾ［４，６］イミダゾ［１，２−ａ］ピリジニル、カルバゾリル、シンノリニル、シクロペンタ［ｄ］ピリミジニル、６，７−ジヒドロ−５Ｈ−シクロペンタ［４，５］チエノ［２，３−ｄ］ピリミジニル、５，６−ジヒドロベンゾ［ｈ］キナゾリニル、５，６−ジヒドロベンゾ［ｈ］シンノリニル、６，７−ジヒドロ−５Ｈ−ベンゾ［６，７］シクロヘプタ［１，２−ｃ］ピリダジニル、ジベンゾフラニル、ジベンゾチオフェニル、フラニル、フラザニル、フラノニル、フロ［３，２−ｃ］ピリジニル、５，６，７，８，９，１０−ヘキサヒドロシクロオクタ［ｄ］ピリミジニル、５，６，７，８，９，１０−ヘキサヒドロシクロオクタ［ｄ］ピリダジニル、５，６，７，８，９，１０−ヘキサヒドロシクロオクタ［ｄ］ピリジニル、イソチアゾリル、イミダゾリル、インダゾリル、インドリル、インダゾリル、イソインドリル、インドリニル、イソインドリニル、イソキノリル、インドリジニル、イソキサゾリル、５，８−メタノ−５，６，７，８−テトラヒドロキナゾリニル、ナフチリジニル、１，６−ナフチリジノニル、オキサジアゾリル、２−オキソアゼピニル、オキサゾリル、オキシラニル、５，６，６ａ，７，８，９，１０，１０ａ−オクタヒドロベンゾ［ｈ］キナゾリニル、１−フェニル−１Ｈ−ピロリル、フェナジニル、フェノチアジニル、フェノキサジニル、フタラジニル、プテリジニル、プリニル、ピラニル、ピロリル、ピラゾリル、ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジニル、ピリジニル、ピリド［３，２−ｄ］ピリミジニル、ピリド［３，４−ｄ］ピリミジニル、ピラジニル、ピリミジニル、ピリダジニル、ピロリル、キナゾリニル、キノキサリニル、キノリニル、イソキノリニル、テトラヒドロキノリニル、５，６，７，８−テトラヒドロキナゾリニル、５，６，７，８−テトラヒドロベンゾ［４，５］チエノ［２，３−ｄ］ピリミジニル、６，７，８，９−テトラヒドロ−５Ｈ−シクロヘプタ［４，５］チエノ［２，３−ｄ］ピリミジニル、５，６，７，８−テトラヒドロピリド［４，５−ｃ］ピリダジニル、チアゾリル、チアジアゾリル、チアピラニル、トリアゾリル、テトラゾリル、トリアジニル、チエノ［２，３−ｄ］ピリミジニル、チエノ［３，２−ｄ］ピリミジニル、チエノ［２，３−ｃ］ピリジニル及びチオフェニル（すなわちチエニル）が含まれる。本明細書において他に特段の記載がない限り、ヘテロアリール部分は、独立して、アルキル、ヘテロアルキル、アルケニル、アルキニル、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アリール、アリールアルキル、ヘテロアリール、ヘテロアリールアルキル、ヒドロキシ、ハロ、シアノ、ニトロ、オキソ、チオキソ、トリメチルシラニル、−ＯＲａ、−ＳＲａ、−ＯＣ（Ｏ）−Ｒａ、−Ｎ（Ｒａ）２、−Ｃ（Ｏ）Ｒａ、−Ｃ（Ｏ）ＯＲａ、−ＯＣ（Ｏ）Ｎ（Ｒａ）２、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒａ）２、−Ｎ（Ｒａ）Ｃ（Ｏ）ＯＲａ、−Ｎ（Ｒａ）Ｃ（Ｏ）Ｒａ、−Ｎ（Ｒａ）Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒａ）２、Ｎ（Ｒａ）Ｃ（ＮＲａ）Ｎ（Ｒａ）２、−Ｎ（Ｒａ）Ｓ（Ｏ）ｔＲａ（ｔは１又は２）、−Ｓ（Ｏ）ｔＯＲａ（ｔは１又は２）、−Ｓ（Ｏ）ｔＮ（Ｒａ）２（ｔは１又は２）又はＰＯ３（Ｒａ）２（各Ｒａは、独立して、水素、アルキル、フルオロアルキル、カルボシクリル、カルボシクリルアルキル、アリール、アラルキル、ヘテロシクロアルキル、ヘテロシクロアルキルアルキル、ヘテロアリール又はヘテロアリールアルキルである）である、１つ以上の置換基によって任意選択により置換されている。置換ヘテロアリールは、例えば、ピリジニルＮ−オキシドなどの１つ以上のオキシド（−Ｏ−）置換基で置換された環系も含む。複素環の他の非限定的な例には、アゼチジン、ピロリジン、イミダゾリジン、ピペリジン及びピペラジンが含まれる。
【０１３５】
[00157]  「ヒドロキシ」は、−ＯＨラジカルを指す。
【０１３６】
[00158]  「ニトロ」は、−ＮＯ２ラジカルを指す。
【０１３７】
[00159]  「抗体」及びその複数形の「抗体」という用語は、免疫グロブリン全体及び任意の抗原結合断片（「抗原結合部分」）又はそれらの単鎖を指す。「抗体」は、ジスルフィド結合によって相互連結された少なくとも２つの重（Ｈ）鎖及び２つの軽（Ｌ）鎖を含む糖タンパク質又はその抗原結合部分をさらに指す。各重鎖は、重鎖可変領域（本明細書ではＶＨと略す）及び重鎖定常領域で構成される。重鎖定常領域は、３つのドメイン、ＣＨ１、ＣＨ２及びＣＨ３で構成される。各軽鎖は、軽鎖可変領域（本明細書ではＶＬと略す）及び軽鎖定常領域で構成される。軽鎖定常領域は、１つのドメイン、ＣＬで構成される。抗体のＶＨ及びＶＬ領域は、相補性決定領域（ＣＤＲ）又は超可変領域（ＨＶＲ）と称され、より保存された領域（フレームワーク領域（ＦＲ）と呼ばれる）に分散することができる、超可変性を有する領域にさらに細分化され得る。各ＶＨ及びＶＬは、アミノ末端からカルボキシ末端に向かってＦＲ１、ＣＤＲ１、ＦＲ２、ＣＤＲ２、ＦＲ３、ＣＤＲ３、ＦＲ４の順に配置された３つのＣＤＲ及び４つのＦＲで構成される。重鎖及び軽鎖の可変領域は、１つ又は複数の抗原エピトープと相互作用する結合ドメインを含有する。抗体の定常領域は、免疫系の様々な細胞（例えば、エフェクター細胞）及び古典的補体系の第１の成分（Ｃｌｑ）を含む宿主組織又は因子への免疫グロブリンの結合を媒介し得る。
【０１３８】
[00160]  「抗原」という用語は、免疫応答を誘導する物質を指す。いくつかの実施形態では、抗原は、主要組織適合遺伝子複合体（ＭＨＣ）分子によって提示される場合、抗体又はＴＣＲによって結合され得る分子である。本明細書で使用される場合、「抗原」という用語は、Ｔ細胞エピトープも包含する。抗原は、免疫系によってさらに認識され得る。いくつかの実施形態では、抗原は、Ｂリンパ球及び／又はＴリンパ球の活性化をもたらす体液性免疫応答又は細胞性免疫応答を誘導することができる。いくつかの場合、これは、抗原がＴｈ細胞エピトープを含有するか又はそれに結合していることを要し得る。抗原は、１つ以上のエピトープ（例えば、Ｂエピトープ及びＴエピトープ）も有し得る。いくつかの実施形態では、抗原は、好ましくは、典型的には高度に特異的且つ選択的な態様でその対応する抗体又はＴＣＲと反応し、他の抗原によって誘導され得る多数の他の抗体又はＴＣＲと反応しない。
【０１３９】
[00161]  「モノクローナル抗体」、「ｍＡｂ」、「モノクローナル抗体組成物」という用語又はそれらの複数形は、単一分子組成の抗体分子の調製物を指す。モノクローナル抗体組成物は、特定のエピトープに対して単一の結合特異性及び親和性を示す。特定の受容体に特異的なモノクローナル抗体は、試験対象に適切な抗原を注射し、次いで所望の配列又は機能的特徴を有する抗体を発現するハイブリドーマを単離するという当技術分野における知識及び技術を用いて作製することができる。モノクローナル抗体をコードするＤＮＡは、従来の手順を用いて（例えば、モノクローナル抗体の重鎖及び軽鎖をコードする遺伝子に特異的に結合することができるオリゴヌクレオチドプローブを使用することにより）容易に単離及び配列決定される。ハイブリドーマ細胞は、そのようなＤＮＡの好ましい供給源としての役割を果たす。ＤＮＡは、単離されると発現ベクター中に入れられ得、次いでこれを大腸菌（E.coli）細胞、サルＣＯＳ細胞、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞又は他の方法では免疫グロブリンタンパク質を産生しない骨髄腫細胞などの宿主細胞にトランスフェクトして、組換え宿主細胞中でモノクローナル抗体の合成を得る。抗体の組換え産生は、以下により詳細に記載される。
【０１４０】
[00162]  本明細書で使用される場合、抗体の「抗原結合部分」又は「抗原結合断片」（又は単に「抗体部分」若しくは「断片」）という用語は、特異的に抗原に結合する能力を保持する抗体の１つ以上の断片を指す。抗体の抗原結合機能は、全長抗体の断片によって行われ得ることが示されている。抗体の「抗原結合部分」という用語に包含される結合断片の例には、（ｉ）ＶＬ、ＶＨ、ＣＬ及びＣＨ１ドメインからなる一価断片であるＦａｂ断片；（ｉｉ）ヒンジ領域でジスルフィド架橋により連結された２つのＦａｂ断片を含む二価断片であるＦ（ａｂ’）２断片；（ｉｉｉ）ＶＨ及びＣＨ１ドメインからなるＦｄ断片；（ｉｖ）抗体の単一アームのＶＬ及びＶＨドメインからなるＦｖ断片、（ｖ）ＶＨ又はＶＬドメインからなり得るドメイン抗体（ｄＡｂ）断片（Ward,et al, Nature, 1989, 341, 544-546）；並びに（ｖｉ）単離された相補性決定領域（ＣＤＲ）が含まれる。さらに、Ｆｖ断片の２つのドメイン、ＶＬ及びＶＨは、別々の遺伝子によってコードされているが、それらは、組換え法を用いて、ＶＬ及びＶＨ領域ペアが単鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）として知られる一価分子を形成する単一のタンパク質鎖としてそれらが作製されることを可能にする、合成リンカーによって連結され得；例えば、Bird,et al., Science 1988, 242, 423-426；及びHuston, et al, Proc.Natl.Acad.Sci.USA 1988,85, 5879-5883を参照されたい）。そのようなｓｃＦｖ抗体は、抗体の「抗原結合部分」又は「抗原結合断片」という用語内に包含されることも意図している。これらの抗体断片は、当業者に公知の従来技術を使用して得られ、断片は、無傷の抗体と同じ方法で有用性についてスクリーニングされる。
【０１４１】
[00163]  本明細書で使用される「ヒト抗体」という用語は、フレームワーク領域及びＣＤＲ領域の両方がヒト生殖細胞系免疫グロブリン配列に由来する可変領域を有する抗体を含むことを意図している。さらに、抗体が定常領域を含有する場合、定常領域もヒト生殖細胞系免疫グロブリン配列に由来する。本発明のヒト抗体は、ヒト生殖細胞系免疫グロブリン配列によってコードされないアミノ酸残基（例えば、インビトロでのランダム若しくは部位特異的変異誘発又はインビボでの体細胞変異によって導入された変異）を含み得る。本明細書で使用される「ヒト抗体」という用語は、マウスなどの別の哺乳動物種の生殖細胞系に由来するＣＤＲ配列がヒトフレームワーク配列に移植されている抗体を含むことを意図しない。
【０１４２】
[00164]  「ヒトモノクローナル抗体」という用語は、フレームワーク領域及びＣＤＲ領域の両方がヒト生殖細胞系免疫グロブリン配列に由来する可変領域を有する単一の結合特異性を示す抗体を指す。一実施形態では、ヒトモノクローナル抗体は、トランスジェニック非ヒト動物、例えばトランスジェニックマウスから得られ、不死化細胞に融合したヒト重鎖導入遺伝子及び軽鎖導入遺伝子を含むゲノムを有するＢ細胞を含むハイブリドーマによって産生される。
【０１４３】
[00165]  本明細書で使用される「組換えヒト抗体」という用語は、（ａ）ヒト免疫グロブリン遺伝子のトランスジェニック若しくはトランス染色体である動物（マウスなど）又はそれから調製されたハイブリドーマ（以下でさらに説明する）から単離された抗体、（ｂ）ヒト抗体を発現するように形質転換された宿主細胞、例えばトランスフェクトーマ（transfectoma）から単離された抗体、（ｃ）組換えコンビナトリアルヒト抗体ライブラリーから単離された抗体、及び（ｄ）ヒト免疫グロブリン遺伝子配列の他のＤＮＡ配列へのスプライシングを含む任意の他の手段により調製、発現、生成又は単離された抗体など、組換え手段によって調製、発現、生成又は単離された全てのヒト抗体を含む。そのような組換えヒト抗体は、フレームワーク領域及びＣＤＲ領域がヒト生殖細胞系免疫グロブリン配列に由来する可変領域を有する。しかしながら、特定の実施形態では、そのような組換えヒト抗体は、インビトロ変異誘発（又はヒトＩｇ配列についてトランスジェニックな動物を使用する場合、インビボ体細胞変異誘発）に供することができ、したがって、組換え抗体のＶＨ及びＶＬ領域のアミノ酸配列は、ヒト生殖細胞系のＶＨ及びＶＬ配列に由来し、それらに関係している一方、インビボでのヒト抗体生殖細胞系レパートリー内に天然に存在し得ない配列である。
【０１４４】
[00166]  本明細書で使用される場合、「アイソタイプ」とは、重鎖定常領域遺伝子によってコードされる抗体クラス（例えば、ＩｇＭ又はＩｇＧ１）を指す。
【０１４５】
[00167]  「抗原を認識する抗体」及び「抗原に特異的な抗体」という句は、本明細書において、「抗原に特異的に結合する抗体」という用語と互換的に使用される。
【０１４６】
[00168]  「ヒト抗体誘導体」という用語は、抗体と別の活性医薬成分又は抗体とのコンジュゲートを含む、ヒト抗体の任意の変異形態を指す。「コンジュゲート」、「抗体−薬物コンジュゲート」、「ＡＤＣ」又は「イムノコンジュゲート」という用語は、別の治療部分にコンジュゲートされた抗体又はその断片を指し、これは、当技術分野で利用可能な方法を使用して本明細書に記載の抗体にコンジュゲートすることができる。
【０１４７】
[00169]  １つ又は複数の「ヒト化抗体」及び「ヒト化」という用語は、マウスなどの別の哺乳動物種の生殖細胞系に由来するＣＤＲ配列がヒトフレームワーク配列に移植されている抗体を指すことを意図する。ヒトフレームワーク配列内でさらなるフレームワーク領域の改変がなされ得る。ヒト化形態の非ヒト（例えば、マウス）抗体は、非ヒト免疫グロブリンに由来する最小配列を含有するキメラ抗体である。ほとんどの部分について、ヒト化抗体は、レシピエントの超可変領域由来の残基が、所望の特異性、親和性及び能力を有する、マウス、ラット、ウサギ又は非ヒト霊長類などの非ヒト種の１５個の超可変領域（ドナー抗体）由来の残基によって置換されている、ヒト免疫グロブリン（レシピエント抗体）である。いくつかの例では、ヒト免疫グロブリンのＦｖフレームワーク領域（ＦＲ）残基は、対応する非ヒト残基によって置換されている。さらに、ヒト化抗体は、レシピエント抗体にもドナー抗体にも見られない残基を含み得る。これらの改変は、抗体性能をさらに改良するために行われる。一般的に、ヒト化抗体は、少なくとも１つ、典型的には２つの可変ドメインの実質的に全てを含み、ここで、超可変ループの全て又は実質的に全てが非ヒト免疫グロブリンのものに対応し、ＦＲ領域の全て又は実質的に全てがヒト免疫グロブリン配列のものである。ヒト化抗体は、任意選択により、免疫グロブリン定常領域（Ｆｃ）の少なくとも一部、典型的にはヒト免疫グロブリンのものも含む。さらなる詳細については、Jones,et al, Nature 1986, 321, 522-525；Riechmann, et al, Nature 1988, 332, 323-329；及びPresta,Curr.Op.Struct.Biol 1992, 2, 593-596を参照されたい。本明細書に記載の抗体は、エフェクター機能及び／又はＦｃＲ結合に改善（例えば、減少）を付与することが知られている任意のＦｃ変異体を使用するようにも改変され得る。Ｆｃ変異体は、例えば、国際公開第１９８８／０７０８９Ａ１号、同第１９９６／１４３３９Ａ１号、同第１９９８／０５７８７Ａ１号、同第１９９８／２３２８９Ａ１号、同第１９９９／５１６４２Ａ１号、同第９９／５８５７２Ａ１号、同第２０００／０９５６０Ａ２号、同第２０００／３２７６７Ａ１号、同第２０００／４２０７２Ａ２号、同第２００２／４４２１５Ａ２号、同第２００２／０６０９１９Ａ２号、同第２００３／０７４５６９Ａ２号、同第２００４／０１６７５０Ａ２号、同第２００４／０２９２０７Ａ２号、同第２００４／０３５７５２Ａ２号、同第２００４／０６３３５１Ａ２号、同第２００４／０７４４５５Ａ２号、同第２００４／０９９２４９Ａ２号、同第２００５／０４０２１７Ａ２号、同第２００５／０７０９６３Ａ１号、同第２００５／０７７９８１Ａ２号、同第２００５／０９２９２５Ａ２号、同第２００５／１２３７８０Ａ２号、同第２００６／０１９４４７Ａ１号、同第２００６／０４７３５０Ａ２号及び同第２００６／０８５９６７Ａ２号；及び米国特許第５，６４８，２６０号；同第５，７３９，２７７号；同第５，８３４，２５０号；同第５，８６９，０４６号；同第６，０９６，８７１号；同第６，１２１，０２２号；同第６，１９４，５５１号；同第６，２４２，１９５号；同第６，２７７，３７５号；同第６，５２８，６２４号；同第６，５３８，１��４号；同第６，７３７，０５６号；同第６，８２１，５０５号；同第６，９９８，２５３号；及び同第７，０８３，７８４号に開示されるアミノ酸置換のいずれか１つを含み得、その開示は、参照により本明細書に組み込まれる。
【０１４８】
[00170]  「キメラ抗体」という用語は、可変領域配列がマウス抗体に由来し、定常領域配列がヒト抗体に由来する抗体など、可変領域配列が１つの種に由来し、定常領域配列が別の種に由来する抗体を指すことを意図する。
【０１４９】
[00171]  「ダイアボディ」は、２つの抗原結合部位を有する小さい抗体断片である。断片は、同じポリペプチド鎖（ＶＨ−ＶＬ又はＶＬ−ＶＨ）内の軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）に接続された重鎖可変ドメイン（ＶＨ）を含む。同一鎖上の２つのドメイン間で対形成させるには短すぎるリンカーを使用することにより、そのドメインは、別の鎖の相補的ドメインと対形成し、２つの抗原結合部位を生成することを強いられる。ダイアボディは、例えば、欧州特許４０４，０９７号、国際公開第９３／１１１６１号；及びBolliger,et al, Proc.Natl.Acad.Sci.USA 1993, 90, 6444-6448にさらに十分に記載されている。
【０１５０】
[00172]  「グリコシル化」という用語は、抗体の改変誘導体を指す。アグリコシル化抗体は、グリコシル化を欠く。グリコシル化は、例えば、抗原に対する抗体の親和性を増加させるために改変することができる。そのような炭水化物改変は、例えば、抗体配列内の１つ以上のグリコシル化部位を変えることによって達成することができる。例えば、１つ以上の可変領域フレームワークグリコシル化部位の除去をもたらし、それによってその部位でのグリコシル化を除去する１つ以上のアミノ酸置換を行うことができる。米国特許第５，７１４，３５０号及び同第６，３５０，８６１号に記載されているように、アグリコシル化は、抗原に対する抗体の親和性を増加させ得る。追加的又は代替的に、減少したフコシル残基の量を有する低フコシル化抗体又は増加したバイセクティング（bisecting）ＧｌｃＮａｃ構造を有する抗体など、グリコシル化の種類が変更された抗体を作製することができる。そのような改変されたグリコシル化パターンは、抗体の能力を増大させることが実証されている。そのような炭水化物改変は、例えば、グリコシル化機構を変えて宿主細胞中で抗体を発現させることによって達成することができる。グリコシル化機構が改変された細胞は、当技術分野において記載されており、本発明の組換え抗体を発現させ、それによって改変されたグリコシル化を有する抗体を産生するための宿主細胞として使用することができる。例えば、細胞株Ｍｓ７０４、Ｍｓ７０５及びＭｓ７０９は、フコシルトランスフェラーゼ遺伝子、ＦＵＴ８（アルファ（１，６）フコシルトランスフェラーゼ）を欠いているため、Ｍｓ７０４、Ｍｓ７０５及びＭｓ７０９細胞株で発現される抗体は、それらの炭水化物上でフコースを欠いている。Ｍｓ７０４、Ｍｓ７０５及びＭｓ７０９  ＦＵＴ８−／−細胞株は、２つの置換ベクターを使用して、ＣＨＯ／ＤＧ４４細胞中のＦＵＴ８遺伝子を標的とした破壊によって生成された（例えば、米国特許出願公開第２００４／０１１０７０４号又はYamane-Ohnuki,et al, Biotechnol.Bioeng., 2004, 87, 614-622を参照されたい）。別の例として、欧州特許第１，１７６，１９５号には、そのような細胞株で発現される抗体が、アルファ１，６結合関連酵素を減少させるか又は排除することにより低フコシル化を示すように、フコシルトランスフェラーゼをコードする機能的に破壊されたＦＵＴ８遺伝子を有する細胞株が記載され、また、抗体のＦｃ領域に結合するＮ−アセチルグルコサミンにフコースを加える酵素活性が低いか又は酵素活性を有しない細胞株、例えばラット骨髄腫細胞株ＹＢ２／０（ＡＴＣＣ  ＣＲＬ  １６６２）も記載されている。国際公開第０３／０３５８３５号には、Ａｓｎ（２９７）が連結した炭水化物にフコースを結合する能力が低下し、また、その宿主細胞で発現した抗体の低フコシル化をもたらす変異体ＣＨＯ細胞株、Ｌｅｃ１３細胞が記載されている（Shields,et al, J. Biol Chem.2002, 277, 26733-26740も参照されたい。国際公開第９９／５４３４２号には、操作された細胞株で発現された抗体が、抗体のＡＤＣＣ活性の増加をもたらす増加したバイセクティングＧｌｃＮａｃ構造を示すように、糖タンパク質改変グリコシルトランスフェラーゼを発現するよう操作された細胞株（例えば、ベータ（１，４）−Ｎ−アセチルグルコサミニルトランスフェラーゼＩＩＩ（ＧｎＴＩＩＩ））が記載されている（Umana,et al., Nat.Biotech.1999, 77, 176-180も参照されたい）。代替的に、抗体のフコース残基は、フコシダーゼ酵素を使用して切断され得る。例えば、フコシダーゼであるアルファ−Ｌ−フコシダーゼは、Tarentino,et al., Biochem.1975, 14, 5516-5523に記載されるように抗体由来のフコシル残基を除去する。
【０１５１】
[00173]  「ペグ化」とは、１つ以上のＰＥＧ基が抗体又は抗体断片に結合するようになる条件下において、典型的には、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）の反応性エステル又はアルデヒド誘導体などのＰＥＧと反応する修飾抗体又はその断片を指す。ペグ化は、例えば、抗体の生物学的（例えば、血清）半減期を増加させ得る。好ましくは、ペグ化は、反応性ＰＥＧ分子（又は類似の反応性水溶性ポリマー）とのアシル化反応又はアルキル化反応を介して行われる。本明細書で使用される場合、「ポリエチレングリコール」という用語は、モノ（Ｃ１〜Ｃ１０）アルコキシ−若しくはアリールオキシ−ポリエチレングリコール又はポリエチレングリコール−マレイミドなどの他のタンパク質を誘導体化するために使用されているＰＥＧの形態のいずれも包含することを意図する。ペグ化される抗体は、アグリコシル化抗体であり得る。ペグ化の方法は、当技術分野において公知であり、例えば欧州特許第０１５４３１６号及び同第０４０１３８４号並びに米国特許第５，８２４，７７８号に記載されているように本発明の抗体に適用することができ、そのそれぞれの開示は、参照により本明細書に組み込まれる。
【０１５２】
[00174]  「融合タンパク質」又は「融合ポリペプチド」という用語は、２つ以上の個々のタンパク質の特性を組み合わせたタンパク質を指す。そのようなタンパク質は、直接又はアミノ酸リンカーを介して共有結合した少なくとも２つの異種ポリペプチドを有する。融合タンパク質を形成するポリペプチドは、典型的にはＣ末端からＮ末端に連結しているが、Ｃ末端からＣ末端、Ｎ末端からＮ末端又はＮ末端からＣ末端に連結することもできる。融合タンパク質のポリペプチドは、任意の順序であり得、構成ポリペプチドのいずれか２つ以上又は両方を含み得る。この用語は、融合タンパク質を構成する抗原の保存的に改変された変異体、多型変異体、対立遺伝子、突然変異体、部分配列、種間同族体及び免疫原性断片を包含する。本開示の融合タンパク質は、成分抗原又はその免疫原性断片のさらなるコピーも含み得る。融合タンパク質は、互いに結合し、ＩｇＧ  ＦｃドメインなどのＦｃドメインにさらに結合した１つ以上の結合ドメインを含み得る。融合タンパク質は、モノクローナル抗体を模倣し、６つ以上の結合ドメインを提供するために共にさらに連結され得る。融合タンパク質は、当技術分野において公知であるように組換え法によって産生され得る。融合タンパク質の調製は、当技術分野で公知であり、例えば国際公開第１９９５／０２７７３５Ａ１号、同第２００５／１０３０７７Ａ１号、同第２００８／０２５５１６Ａ１号、同第２００９／００７１２０Ａ１号、同第２０１０／００３７６６Ａ１号、同第２０１０／０１００５１Ａ１号、同第２０１０／０７８９６６Ａ１号、米国特許出願公開第２０１５／０１２５４１９Ａ１号及び同第２０１６／０２７２６９５Ａ１号並びに米国特許第８，９２１，５１９号に記載され、そのそれぞれの開示は、参照により本明細書に組み込まれる。
【０１５３】
[00175]  核酸又はタンパク質の部分に関して使用される場合の「異種」という用語は、その核酸又はタンパク質が、天然には互いに同じ関係で見出されない２つ以上の部分配列を含むことを示す。例えば、核酸は、典型的には組換え的に産生され、新しい機能性核酸を作成するように配置された無関係の遺伝子由来の２つ以上の配列、例えば１つの供給源からのプロモーター及び別の供給源からのコーディング領域又は異なる供給源からのコーディング領域を有する。同様に、異種タンパク質は、そのタンパク質が、天然には互いに同じ関係で見出されない２つ以上の部分配列を含むことを示す（例えば、融合タンパク質）。
【０１５４】
[00176]  「保存的アミノ酸置換」という用語は、抗体又は融合タンパク質の抗原への結合を無効にしないアミノ酸配列改変を意味する。保存的アミノ酸置換には、あるクラスのアミノ酸の同じクラスのアミノ酸での置換が含まれ、ここで、クラスは、例えば、標準Dayhoff頻度交換行列又はBLOSUM行列によって決定されるように、一般的な物理化学的アミノ酸側鎖特性及び天然に見られる相同タンパク質における高い置換頻度によって定義される。６つの一般的なクラスのアミノ酸側鎖が分類されており、クラスＩ（Ｃｙｓ）；クラスＩＩ（Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｐｒｏ、Ａｌａ、Ｇｌｙ）；クラスＩＩＩ（Ａｓｎ、Ａｓｐ、Ｇｌｎ、Ｇｌｕ）；クラスＩＶ（Ｈｉｓ、Ａｒｇ、Ｌｙｓ）；クラスＶ（Ｉｌｅ、Ｌｅｕ、Ｖａｌ、Ｍｅｔ）；及びクラスＶＩ（Ｐｈｅ、Ｔｙｒ、Ｔｒｐ）を含む。例えば、Ａｓｎ、Ｇｌｎ又はＧｌｕなど、別のクラスＩＩＩ残基へのＡｓｐの置換は、保存的置換である。したがって、抗体中の予測される非必須アミノ酸残基は、好ましくは、同じクラスからの別のアミノ酸残基で置換される。抗原結合を排除しないアミノ酸保存的置換を同定する方法は、当技術分野において周知である（例えば、Brummell,et al., Biochemistry 1993, 32, 1180-1187；Kobayashi, et al., Protein Eng.1999, 12,879-884 (1999)；及びBurks, et al, Proc.Natl.Acad.Sci.USA 1997, 94, 412-417を参照されたい。
【０１５５】
[00177]  ２つ以上の核酸又はポリペプチドに関連して、「配列同一性」、「パーセント同一性」及び「配列パーセント同一性」（又はそれらの同義語、例えば「９９％同一」）という用語は、配列同一性の一部として保存的アミノ酸置換を考慮せずに、最大限の対応について比較し、整合させた場合（必要に応じてギャップを導入する）、同じであるか、又は同じヌクレオチド若しくはアミノ酸残基の特定のパーセンテージを有する２つ以上の配列又は部分配列を指す。同一性パーセントは、配列比較ソフトウェア若しくはアルゴリズムを使用するか、又は目視検査によって測定することができる。アミノ酸又はヌクレオチド配列のアラインメントを得るために使用することができる様々なアルゴリズム及びソフトウェアが当技術分野において公知である。パーセント配列同一性を決定するための適切なプログラムには、例えば、米国政府の国立バイオテクノロジー情報センター（NationalCenter for Biotechnology Information）のＢＬＡＳＴウェブサイトから入手可能なＢＬＡＳＴプログラム一式が含まれる。２つの配列間の比較は、ＢＬＡＳＴＮ又はＢＬＡＳＴＰアルゴリズムのいずれかを使用して実施することができる。ＢＬＡＳＴＮは、核酸配列を比較するために使用される一方、ＢＬＡＳＴＰは、アミノ酸配列を比較するために使用される。ALIGN、ALIGN-2（Genentech,South San Francisco, California）又はDNASTARから入手可能なMegAlignは、配列を整合するために使用することができる公に入手可能なさらなるソフトウェアプログラムである。当業者は、特定のアラインメントソフトウェアによって最大アラインメントのための適切なパラメータを決定することができる。特定の実施形態では、アラインメントソフトウェアのデフォルトパラメータが使用される。
【０１５６】
[00178]  本明細書で使用される「変異体」という用語は、参照抗体のアミノ酸配列内又はそれに隣接する特定の位置での１つ以上の置換、欠失及び／又は付加により、参照抗体のアミノ酸配列と異なる、アミノ酸配列を含む抗体又は融合タンパク質を包含するが、これに限定されるものではない。変異体は、参照抗体のアミノ酸配列と比較してそのアミノ酸配列中に１つ以上の保存的置換を含み得る。保存的置換は、例えば、同様に荷電又は非荷電であるアミノ酸の置換を含み得る。変異体は、参照抗体の抗原に特異的に結合する能力を保持している。変異体という用語は、ペグ化抗体又はタンパク質も含む。
【０１５７】
[00179]  核酸配列は、明示的に示される配列と同様に、その保存的に改変された変異体（例えば、縮重コドン置換）及び相補的配列も非明示的に包含する。具体的には、縮重コドン置換は、１つ以上の選択された（又は全ての）コドンの第３の位置が混合塩基及び／又はデオキシイノシン残基で置換されている配列を生成することによって達成され得る。Batzer, et al, Nucleic Acid Res.1991, 79, 5081；Ohtsuka, et al, J. Biol.Chem.1985, 260,2605-2608；Rossolini, et al., Mol.Cell.Probes 1994, 8, 91-98。核酸という用語は、ｃＤＮＡ、ｍＲＮＡ、オリゴヌクレオチド及びポリヌクレオチドと互換的に使用される。
【０１５８】
[00180]  「バイオシミラー」という用語は、モノクローナル抗体又はタンパク質を含む生物学的産物を意味し、これは、臨床的に不活性な成分におけるわずかな違いにもかかわらず、米国の認可された参照生物学的製品と高度に類似しており、製品の安全性、純度及び効力の点で生物学的製品と参照製品との間に臨床的に有意義な違いはない。さらに、類似の生物学的又は「バイオシミラー」医薬は、欧州医薬品庁により使用がすでに認可されている、別の生物学的医薬と類似の生物学的医薬である。「バイオシミラー」という用語は、他の国及び地域の規制機関によっても同義的に使用される。生物学的製剤又は生物学的医薬品は、細菌又は酵母などの生物学的供給源によって作製されるか又はそれに由来する医薬品である。それらは、ヒトインスリン又はエリスロポエチンなどの比較的小さい分子又はモノクローナル抗体などの複雑な分子からなり得る。例えば、参照ＩＬ−２タンパク質がアルデスロイキン（PROLEUKIN）である場合、アルデスロイキンに関して医薬品規制当局によって承認されたタンパク質は、アルデスロイキン「に対するバイオシミラー」又はアルデスロイキンの「そのバイオシミラー」である。欧州では、類似の生物学的又は「バイオシミラー」医薬は、欧州医薬品庁（ＥＭＡ）により使用がすでに認可されている、別の生物学的医薬と類似の生物学的医薬である。ヨーロッパにおける同様の生物学的用途の関連法的根拠は、改正された規則（ＥＣ）Ｎｏ７２６／２００４の第６条及び指令２００１／８３／ＥＣの第１０条（４）であり、したがって、ヨーロッパでは、バイオシミラーは、規則（ＥＣ）Ｎｏ７２６／２００４の第６条及び指令２００１／８３／ＥＣの第１０（４）条の下で認可され得るか、認可が承認され得るか、又は認可申請の対象であり得る。ヨーロッパでは、すでに認可されている元の生物学的医薬品は、「参照医薬品」と呼ばれることがある。バイオシミラーと見なされる製品の要件のいくつかは、類似生物学的医薬品におけるＣＨＭＰガイドラインに概説されている。さらに、モノクローナル抗体バイオシミラーに関するガイドラインを含む製品固有のガイドラインは、ＥＭＡによって製品ごとに提供され、そのウェブサイトに公開されている。本明細書に記載のバイオシミラーは、品質特性、生物学的活性、作用機序、安全性プロファイル及び／又は有効性として参照医薬品と類似し得る。さらに、バイオシミラーは、参照医薬品と同じ状態を処置するために使用されるか、又は使用を意図され得る。したがって、本明細書に記載のバイオシミラーは、参照医薬品と類似した又は非常に類似した品質特性を有すると見なし得る。代替的又は追加的に、本明細書に記載のバイオシミラーは、参照医薬品と類似した又は非常に類似した生物学的活性を有すると見なし得る。代替的又は追加的に、本明細書に記載のバイオシミラーは、参照医薬品と類似した又は非常に類似した安全性プロファイルを有すると見なし得る。代替的又は追加的に、本明細書に記載のバイオシミラーは、参照医薬品と類似した又は非常に類似した有効性を有すると見なし得る。本明細書に記載されるように、ヨーロッパにおけるバイオシミラーは、ＥＭＡによって認可されている参照医薬品と比較される。しかしながら、いくつかの場合、バイオシミラーは、特定の研究において欧州経済地域外で認可されている生物学的医薬品（ＥＥＡ非認可の「コンパレータ」）と比較され得る。そのような試験には、例えば、特定の臨床試験及びインビボ非臨床試験が含まれる。本明細書で使用される場合、「バイオシミラー」という用語は、非ＥＥＡ認可コンパレータと比較された又は比較され得る生物学的医薬品にも関する。特定のバイオシミラーは、抗体、抗体断片（例えば、抗原結合部分）及び融合タンパク質などのタンパク質である。タンパク質バイオシミラーは、ポリペプチドの機能に有意に影響を及ぼさない、アミノ酸構造にわずかな改変（例えば、アミノ酸の欠失、付加及び／又は置換を含む）を有するアミノ酸配列を有し得る。バイオシミラーは、その参照医薬品のアミノ酸配列に対して９７％以上、例えば９７％、９８％、９９％又は１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み得る。バイオシミラーは、相違が医薬品の安全性及び／又は有効性において変化をもたらさないことを条件として、参照医薬品の翻訳後改変と異なる１つ以上の翻訳後改変、例えば、限定されるものではないが、グリコシル化、酸化、脱アミド化及び／又は切断を含み得る。バイオシミラーは、参照医薬品と同一又は異なるグリコシル化パターンを有し得る。排他的ではないが、特に相違が参照医薬品に関する安全性の懸念に対処するか又は対処することを意図している場合、バイオシミラーは、異なるグリコシル化パターンを有し得る。さらに、バイオシミラーは、医薬品の安全性及び有効性が損なわれない場合、例えばその強度、医薬形態、製剤、賦形剤及び／又は提示において参照医薬品から逸脱し得る。バイオシミラーは、例えば、参照医薬品と比較した場合の薬物動態（ＰＫ）及び／又は薬力学（ＰＤ）プロファイルにおける相違を含み得るが、依然として承認されるか又は承認に適していると見なされるために参照医薬品と十分に類似していると認められる。特定の状況において、バイオシミラーは、参照医薬品と比較して異なる結合特性を示し、ここで、異なる結合特性は、ＥＭＡなどの規制当局により、類似の生物学的製品としての認可に対する障壁ではないと見なされる。「バイオシミラー」という用語は、他の国及び地域の規制機関によっても同義的に使用される。
【０１５９】
[00181]  「有効量」又は「治療有効量」という用語は、疾患処置を含むが、これに限定されない意図された用途を達成するのに十分である、本明細書に記載の化合物又は化合物の組み合わせの量を指す。治療有効量は、意図される用途（インビトロ又はインビボ）又は処置されている対象及び疾患状態（例えば、対象の体重、年齢及び性別）、疾患状態の重症度又は投与方法によって変動し得る。この用語は、標的細胞において特定の応答（例えば、血小板接着及び／又は細胞遊走の減少）を誘発する用量にも適用される。特定の用量は、選択された特定の化合物、従うべき投与レジメン、化合物が他の化合物と組み合わせて投与されるかどうか、投与のタイミング、それが投与される組織及び化合物が運ばれる物理的送達システムによって変動する。
【０１６０】
[00182]  「治療効果」は、その用語が本明細書で使用される場合、治療上の利益及び／又は予防上の利益を包含する。予防効果は、疾患若しくは状態の出現を遅らせるか若しくは排除すること、疾患若しくは状態の症状の発症を遅らせるか若しくは排除すること、疾患若しくは状態の進行を遅らせるか、停止させるか若しくは逆行させること、又はそれらの任意の組み合わせを含む。
【０１６１】
[00183]  「ＱＤ」、「ｑｄ」又は「ｑ．ｄ．」という用語は、１日に１回、１日１回又は毎日１回を意味する。「ＢＩＤ」、「ｂｉｄ」又は「ｂ．ｉ．ｄ．」という用語は、１日に２回、１日２回又は毎日２回を意味する。「ＴＩＤ」、「ｔｉｄ」又は「ｔ．ｉ．ｄ．」という用語は、１日に３回、１日３回又は毎日３回を意味する。「ＱＩＤ」、「ｑｉｄ」又は「ｑ．ｉ．ｄ．」という用語は、１日に４回、１日４回又は毎日４回を意味する。
【０１６２】
[00184]  疑義を回避するために、本明細書では、本発明の特定の態様、実施形態又は実施例と併せて記載された特定の特徴（例えば、整数、特性、値、使用、疾患、式、化合物又は基）は、不適合でない限り、本明細書に記載の任意の他の態様、実施形態又は実施例にも適用可能であると理解されるべきであることを意図する。したがって、そのような特徴は、必要に応じて、本明細書で定義された定義、特許請求の範囲又は実施形態のいずれかと共に使用することができる。本明細書に開示されている全ての特徴（添付の請求項、要約及び図面を含む）及び／又はそのように開示されている任意の方法若しくはプロセスの全てのステップは、少なくともいくつかの特徴及び／又はステップが相互に排他的である組み合わせを除いて、任意の組み合わせで組み合わせ得る。本発明は、開示された実施形態のいかなる詳細にも限定されるものではない。本発明は、本明細書に開示されている特徴（添付の請求項、要約及び図面を含む）の任意の新規なもの若しくは新規な組み合わせ又はそのように開示された任意の方法若しくはプロセスのステップの任意の新規なもの若しくは任意の新規な組み合わせに及ぶ。
【０１６３】
[00185]  「約」及び「およそ」という用語は、統計的に有意義な値の範囲内を意味する。そのような範囲は、所与の値又は範囲の一桁以内、好ましくは５０％以内、より好ましくは２０％以内、さらに好ましくは１０％以内、さらにより好ましくは５％以内であり得る。「約」又は「およそ」という用語によって包含される許容される変動は、研究下の特定のシステムに依存し、当業者によって容易に理解され得る。さらに、本明細書で使用される場合、「約」及び「およそ」という用語は、寸法、サイズ、処方、パラメータ、形状並びに他の量及び特性が正確でなく、且つ正確である必要がないが、公差、換算係数、四捨五入、測定誤差など、及び当業者に知られている他の要因を反映して、必要に応じて、近似及び／又はより大きい若しくはより小さいことができることを意味する。一般的に、寸法、サイズ、処方、パラメータ、形状又は他の量若しくは特徴は、そうであると明示的に述べられているかどうかにかかわらず、「約」又は「およそ」である。非常に異なるサイズ、形状及び寸法の実施形態は、記載された機構を採用し得ることに留意されたい。
【０１６４】
[00186]  元の形式及び修正された形式において、添付の特許請求の範囲で使用される場合、「含む」、「から本質的になる」及び「からなる」という移行的な用語は、記載されていない特許請求の範囲のさらなる要素又はステップが存在する場合、特許請求の範囲の対象から除外されるものに関し、特許請求の範囲の対象を定義する。「含む」という用語は、包含的であるか又はオープンエンドであることが意図されており、いかなる追加の列挙されていない要素、方法、ステップ又は材料も排除するものではない。「からなる」という用語は、特許請求の範囲に明記されたもの及び材料の場合には明記された材料に関連する通常の不純物以外のいかなる要素、ステップ又は材料も排除する。「から本質的になる」という用語は、特許請求の範囲を、特定の要素、ステップ又は材料並びに特許請求される本発明の基本的及び新規な特徴に実質的に影響を及ぼさないものに限定する。本発明を具体化する本明細書に記載された全ての組成物、方法及びキットは、代替性の実施形態において、「含む」、「から本質的になる」及び「からなる」という移行的な用語のいずれかにより、より具体的に定義することができる。
【０１６５】
カリウムチャネルアゴニスト
[00187]  一実施形態では、カリウムチャネルアゴニストは、ＩＫチャネルアゴニスト、アクチベーター又はオープナー及びＫＣａ３．１チャネルアゴニスト、アクチベーター又はオープナーとしても知られるＫＣａ３．１アゴニスト、アクチベーター又はオープナーである。ＫＣａ３．１は、ｈＩＫＣａ、ｈＫＣａ４、ｈＳＫ４、中間コンダクタンスカルシウム活性化カリウムチャネル及び小コンダクタンスカルシウム活性化カリウムチャネル４としても知られている。
【０１６６】
[00188]  一実施形態では、ＫＣａ３．１アゴニストは、ベンゾチアゾール誘導体又はその薬学的に許容される塩、共結晶、溶媒和物若しくはプロドラッグである。一実施形態では、ＫＣａ３．１アゴニストは、ベンゾイミダゾール誘導体又はその薬学的に許容される塩、共結晶、溶媒和物若しくはプロドラッグである。適切なベンゾチアゾール及びベンズイミダゾール誘導体は、Sankaranarayanan,et al, Mol.Pharmacol.2009, 75, 281-95に記載され、その開示は、参照により本明細書に組み込まれる。
【０１６７】
[00189]  一実施形態では、ＫＣａ３．１アゴニストは、式（１）：
【化１６】
2020503351.tif 000020
（式中、
Ｒａは、ハロ、シアノ、ヒドロキシ、チオール、（Ｃ１〜６）アルキル、−ＮＨ２及び−ＮＲ１Ｒ２からなる群から選択され；
Ｒ１及びＲ２は、独立して、Ｈ又は（Ｃ１〜６）アルキルであり；
Ｘは、Ｓ、Ｏ及びＮＨからなる群から選択され；
Ｒｂ及びＲｃは、水素、（Ｃ１〜６）アルキル、（Ｃ１〜６）アルコキシル、ハロ、ニトロ、アリール、ヘテロアリール、（Ｃ１〜６）アルキル及び（Ｃ３〜７）シクロアルキルからなる群から独立して選択されるか、又はＲｂ及びＲｃは、それらが結合されている炭素原子と共に、アリール、ナフチル、アントリル、ヘテロアリール、シクロアルキル及びヘテロシクロアルキル環からなる群から選択される環を形成し；及び
Ｒｄ及びＲｅは、水素、（Ｃ１〜６）アルキル、（Ｃ１〜６）アルコキシル、ハロ、ニトロ、アリール、ヘテロアリール、（Ｃ１〜６）アルキル及び（Ｃ３〜７）シクロアルキルからなる群から独立して選択されるか、又はＲｄ及びＲｅは、それらが結合されている炭素原子と共に、アリール、ナフチル、アントリル、ヘテロアリール、シクロアルキル及びヘテロシクロアルキル環からなる群から選択される環を形成し；
ただし、ＲｂとＲｃとが環を形成する場合、ＲｄとＲｅとは、環を形成せず、及びＲｄとＲｅとが環を形成する場合、ＲｂとＲｃとは、環を形成しない）
による化合物又はその薬学的に許容される塩、共結晶、溶媒和物若しくはプロドラッグである。
【０１６８】
[00190]  一実施形態では、ＫＣａ３．１アゴニストは、式（１）による化合物又はその薬学的に許容される塩、共結晶、溶媒和物若しくはプロドラッグであり、
Ｒａは、チオール及び−ＮＨ２から選択され；
Ｒｂ及びＲｃは、水素、（Ｃ１〜３）アルキル、（Ｃ１〜３）アルコキシル、ハロ、ニトロ、非置換アリール、（Ｃ１〜３）アルキルからなる群から独立して選択され、及び又はＲｂ及びＲｃは、それらが共に結合している炭素原子と共に、アリール、ヘテロアリール、シクロアルキル及びヘテロシクロアルキル環からなる群から選択される５又は６員環を形成し；及び
Ｒｄ及びＲｅは、水素、（Ｃ１〜３）アルキル、（Ｃ１〜３）アルコキシル、ハロ、ニトロ、非置換アリール、（Ｃ１〜３）アルキルからなる群から独立して選択され、及び又はＲｄ及びＲｅは、それらが共に結合している炭素原子と共に、アリール、ヘテロアリール、シクロアルキル及びヘテロシクロアルキル環からなる群から選択される５又は６員環を形成し、
ただし、ＲｂとＲｃとが環を形成する場合、ＲｄとＲｅとは、環を形成せず、及びＲｄとＲｅとが環を形成する場合、ＲｂとＲｃとは、環を形成しない。
【０１６９】
[00191]  一実施形態では、ＫＣａ３．１アゴニストは、ナフト［１，２−ｄ］チアゾール−２−イルアミン（式（２））：
【化１７】
2020503351.tif 000021
としても知られるＳＫＡ−３１又はその薬学的に許容される塩、共結晶、溶媒和物若しくはプロドラッグである。ＳＫＡ−３１は、Tocris Bioscience,Avonmouth, Bristol, UK及びSigma-Aldrich Co., St. Louis, MO, USAを含む複数の供給元から市販されている（ChemicalAbstracts Service（ＣＡＳ）番号４０１７２−６５−４）。ＳＫＡ−３１の特性及び合成は、Sankaranarayanan, et al, Mol.Pharmacol.2009,75, 281-95に記載され、その開示は、参照により本明細書に組み込まれる。
【０１７０】
[00192]  一実施形態では、ＫＣａ３．１アゴニストは、アントラ［２，１−ｄ］チアゾール−２−イルアミン（式（３））：
【化１８】
2020503351.tif 000022
としても知られるＳＫＡ−２０又はその薬学的に許容される塩、共結晶、溶媒和物若しくはプロドラッグである。ＳＫＡ−２０の特性及び合成は、Sankaranarayanan,et al, Mol.Pharmacol.2009, 75, 281-95に記載され、その開示は、参照により本明細書に組み込まれる。
【０１７１】
[00193]  一実施形態では、ＫＣａ３．１アゴニストは、６，７−ジクロロ−１Ｈ−インドール−２，３−ジオン３−オキシム（式（４））：
【化１９】
2020503351.tif 000023
としても知られるＮＳ３０９又はその薬学的に許容される塩、共結晶、溶媒和物若しくはプロドラッグである。ＮＳ３０９は、Tocris Bioscienceを含む複数の供給元から市販されている（ＣＡＳ番号１８７１１−１６−５）。ＮＳ３０９の特性及び合成は、米国特許第６，９６９，７２９号及びStrobaek,et al., Biochim.Biophys.Acta 2004, 1665, 1-5に記載され、その開示は、参照により本明細書に組み込まれる。
【０１７２】
[00194]  一実施形態では、ＫＣａ３．１アゴニストは、式（５）：
【化２０】
2020503351.tif 000024
（式中、
Ｒ１は、水素；アルキル基；シクロアルキル基；アシル基；フェニル基又はベンジル基（このフェニル及びベンジル基は、非置換であるか、又はハロゲン、−ＮＯ２、−ＣＮ、−ＣＦ３、アルキル、シクロアルキル、ヒドロキシ及びアルコキシから選択される置換基で１回以上置換されている）；式−ＣＨ２ＣＮの基；式−ＣＨ２ＣＯ２Ｒ’の基（式中、Ｒ’は、水素又はアルキルを表す）；式−ＣＨ２ＣＯＮＲＩＶＲＶの基（式中、ＲＩＶ及びＲＶは、独立して、水素、アルキル、フェニル又はベンジル（このフェニル及びベンジル基は、非置換であるか、又はハロゲン及び／又はアルキルで１回以上置換されている）を表すか、又はＲＩＶ及びＲＶは、それらが結合されているＮ原子と共に、複素環式４〜７員単環式基（この複素環式基は、非置換であるか、又はハロゲン、アルキル、シクロアルキル、アルキルオキシ、シクロアルキルオキシ、フェニル又はベンジルからなる群から選択される置換基で１回以上置換されている）を形成する）；又は式−ＣＨ２Ｃ（＝ＮＯＨ）ＮＨ２の基を表し、
Ｒ２は、水素；アルキル基；シクロアルキル基；式−ＣＨ２ＣＯ２Ｒ’の基（式中、Ｒ’は、水素又はアルキル基を表す）；フェニル基又はベンジル基（このフェニル及びベンジル基は、非置換であるか、又はハロゲン、−ＮＯ２、−ＣＮ、−ＣＦ３、アルキル、シクロアルキル、ヒドロキシ及びアルコキシから選択される置換基で１回以上置換されている）を表し、
Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５及びＲ６は、互いに独立して、水素；ハロゲン；−ＮＯ２；−ＣＮ；−ＣＦ３；アルキル基；アルコキシ基；フェニル基又はベンジル基（このフェニル及びベンジル基は、非置換であるか、又はハロゲン、−ＮＯ２、−ＣＮ、−ＣＦ３、アルキル、シクロアルキル、ヒドロキシ及びアルコキシから選択される置換基で１回以上置換されている）；又は式−ＳＯ２ＮＲ’’Ｒ’’’の基（式中、Ｒ’’及びＲ’’’は、互いに独立して、水素又はアルキル基を表す）を表し、又は
Ｒ５及びＲ６は、上記で定義した通りであり、Ｒ３及びＲ４は、さらなる４〜７員の縮合環（この縮合環は、芳香族、飽和又は部分飽和であり得、この縮合環は、非置換であるか、又はハロゲン、−ＮＯ２、−ＣＮ、−ＣＦ３及び式−ＳＯ２ＮＲ’’Ｒ’’’の基（式中、Ｒ’’及びＲ’’’は互いに独立して水素又はアルキル基を表す）からなる群から選択される置換基で１回以上置換されている）を共に形成する）
による化合物又はその薬学的に許容される塩、共結晶、溶媒和物若しくはプロドラッグである。式（５）による化合物の性質及び合成は、米国特許第６，９６９，７２９号に記載され、その開示は、参照により本明細書に組み込まれる。
【０１７３】
[00195]  一実施形態では、ＫＣａ３．１アゴニストは、１−エチル−１，３−ジヒドロ−２Ｈ−ベンズイミダゾール−２−オン及び１−エチル−２−ベンズイミダゾリノン（式（６））：
【化２１】
2020503351.tif 000025
としても知られる１−ＥＢＩＯ又はその薬学的に許容される塩、共結晶、溶媒和物若しくはプロドラッグである。１−ＥＢＩＯは、Tocris Bioscience及びSigma-Aldrichを含む複数の供給元から市販されている（ＣＡＳ番号１００４５−４５−１）。１−ＥＢＩＯの特性及び合成は、Adeagbo,Eur.J. Pharmacol.1999, 379, 151-59及びDevor, et al., Am.J. Physiol.1996, 271, L775-L784に記載され、その開示は、参照により本明細書に組み込まれる。
【０１７４】
[00196]  一実施形態では、ＫＣａ３．１アゴニストは、５，６−ジクロロ−１−エチル−１，３−ジヒドロ−２Ｈ−ベンズイミダゾール−２−オン及びＤＣ−ＥＢＩＯ（式（７））：
【化２２】
2020503351.tif 000026
としても知られるＤＣＥＢＩＯ又はその薬学的に許容される塩、共結晶、溶媒和物若しくはプロドラッグである。ＤＣＥＢＩＯは、Tocris Bioscience及びSigma-Aldrichを含む複数の供給元から市販されている（ＣＡＳ番号６０５６３−３６−２）。ＤＣＥＢＩＯの特性及び合成は、Singh,et al, J. Pharmacol.Exp.Ther.2001, 296, 600-611に記載され、その開示は、参照により本明細書に組み込まれる。
【０１７５】
[00197]  一実施形態では、ＫＣａ３．１アゴニストは、２−アミノ−６−トリフルオロメトキシベンゾチアゾール又は６−（トリフルオロメトキシ）ベンゾ［ｄ］チアゾール−２−アミン（式（８））：
【化２３】
2020503351.tif 000027
としても知られるリルゾール又はその薬学的に許容される塩、共結晶、溶媒和物若しくはプロドラッグである。リルゾールは、RILUTEK及びTEGLUTIKの商品名で複数の供給元から市販されており、Sigma-AldrichCo., St. Louis, MO, USAから入手することもできる（ＣＡＳ番号１７４４−２２−５）。リルゾールの特性及び合成は、米国特許第４，３７０，３３８号及びGrunnet,et al., Neuropharmacology 2001, 40, 879-887に記載され、その開示は、参照により本明細書に組み込まれる。
【０１７６】
[00198]  一実施形態では、ＫＣａ３．１アゴニストは、式（９ａ）による化合物又は式（９ｂ）による化合物：
【化２４】
2020503351.tif 000028
（式中、Ｒは、ハロ、シアノ、ヒドロキシ、（Ｃ１〜６）アルキル、（Ｃ３〜７）シクロアルキル、（Ｃ１〜６）アルコキシ、（Ｃ３〜７）シクロアルキル、（Ｃ３〜７）シクロアルコキシ、ハロ（Ｃ１〜６）アルキル及び−ＮＲ１Ｒ２から選択され；及び
Ｒ１及びＲ２は、独立して、水素、（Ｃ１〜６）アルキル及び（Ｃ３〜７）シクロアルキルから選択されるか、又はＲ１及びＲ２は、それらが共に結合している窒素原子と共に、４〜７員複素環を形成する）
又はその薬学的に許容される塩、共結晶、溶媒和物若しくはプロドラッグである。式（９ａ）及び（９ｂ）による化合物の特性及び合成は、国際公開２０１５／１６４８１６Ａ２号に記載され、その開示は、参照により本明細書に組み込まれる。
【０１７７】
[00199]  一実施形態では、ＫＣａ３．１アゴニストは、５−メチルナフト［１，２−ｄ］オキサゾール−２−アミン（式（１０ａ））又は５−メチルナフト［２，１−ｄ］オキサゾール−２−アミン（式（１０ｂ）、ＳＫＡ−１２１としても知られる）：
【化２５】
2020503351.tif 000029
又はその薬学的に許容される塩、共結晶、溶媒和物若しくはプロドラッグである。式（１０ａ）及び式（１０ｂ）（ＳＫＡ−１２１）による化合物の特性及び合成は、国際公開２０１５／１６４８１６Ａ２号及びColeman,et al., Mol.Pharmacol.2014, 86, 342-57に記載され、その開示は、参照により本明細書に組み込まれる。
【０１７８】
[00200]  一実施形態では、ＫＣａ３．１アゴニストは、ＳＫＡ−１２（式（１１））としても知られる６−（トリフルオロメトキシ）−１Ｈ−ベンゾ［ｄ］イミダゾール−２−アミン：
【化２６】
2020503351.tif 000030
又はその薬学的に許容される塩、共結晶、溶媒和物若しくはプロドラッグである。ＳＫＡ−１２の特性及び合成は、Sankaranarayanan, etal, Mol.Pharmacol.2009, 75, 281-95に記載され、その開示は、参照により本明細書に組み込まれる。
【０１７９】
[00201]  一実施形態では、ＫＣａ３．１アゴニストは、ＳＫＡ−５（式（１２））としても知られる６−メトキシベンゾ［ｄ］チアゾール−２−チオール：
【化２７】
2020503351.tif 000031
又はその薬学的に許容される塩、共結晶、溶媒和物若しくはプロドラッグである。ＳＫＡ−５の特性及び合成は、Sankaranarayanan, et al,Mol.Pharmacol.2009, 75, 281-95に記載され、その開示は、参照により本明細書に組み込まれる。
【０１８０】
[00202]  一実施形態では、ＫＣａ３．１アゴニストは、ＳＫＡ−６（式（１３））としても知られる６−ニトロベンゾ［ｄ］チアゾール−２−チオール：
【化２８】
2020503351.tif 000032
又はその薬学的に許容される塩、共結晶、溶媒和物若しくはプロドラッグである。ＳＫＡ−６の特性及び合成は、Sankaranarayanan, et al,Mol.Pharmacol.2009, 75, 281-95に記載され、その開示は、参照により本明細書に組み込まれる。
【０１８１】
[00203]  一実施形態では、ＫＣａ３．１アゴニストは、ＳＫＡ−４６（式（１４））としても知られる６−（トリフルオロメトキシ）−１Ｈ−ベンゾ［ｄ］イミダゾール−２−チオール：
【化２９】
2020503351.tif 000033
又はその薬学的に許容される塩、共結晶、溶媒和物若しくはプロドラッグである。ＳＫＡ−４６の特性及び合成は、Sankaranarayanan, etal, Mol.Pharmacol.2009, 75, 281-95に記載され、その開示は、参照により本明細書に組み込まれる。
【０１８２】
[00204]  一実施形態では、ＫＣａ３．１アゴニストは、ＳＫＡ−４７（式（１５））としても知られる６−（ジフルオロメトキシ）−１Ｈ−ベンゾ［ｄ］イミダゾール−２−チオール：
【化３０】
2020503351.tif 000034
又はその薬学的に許容される塩、共結晶、溶媒和物若しくはプロドラッグである。ＳＫＡ−４７の特性及び合成は、Sankaranarayanan, etal, Mol.Pharmacol.2009, 75, 281-95に記載され、その開示は、参照により本明細書に組み込まれる。
【０１８３】
[00205]  一実施形態では、ＫＣａ３．１アゴニストは、ＳＫＡ−４１（式（１７））としても知られる４−（４−（トリフルオロメトキシ）フェニル）チアゾール−２−アミン：
【化３１】
2020503351.tif 000035
又はその薬学的に許容される塩、共結晶、溶媒和物若しくはプロドラッグである。ＳＫＡ−４１の特性及び合成は、Sankaranarayanan, etal, Mol.Pharmacol.2009, 75, 281-95に記載され、その開示は、参照により本明細書に組み込まれる。
【０１８４】
[00206]  一実施形態では、ＫＣａ３．１アゴニストは、ＳＫＡ−１（式（１８））としても知られるベンゾ［ｄ］チアゾール−２−アミン：
【化３２】
2020503351.tif 000036
又はその薬学的に許容される塩、共結晶、溶媒和物若しくはプロドラッグである。ＳＫＡ−１の特性及び合成は、Sankaranarayanan, et al,Mol.Pharmacol.2009, 75, 281-95に記載され、その開示は、参照により本明細書に組み込まれる。
【０１８５】
[00207]  一実施形態では、ＫＣａ３．１アゴニストは、ＳＫＡ−３６（式（１９））としても知られるベンゾ［ｄ］チアゾール−２−アミン：
【化３３】
2020503351.tif 000037
又はその薬学的に許容される塩、共結晶、溶媒和物若しくはプロドラッグである。ＳＫＡ−３６の特性及び合成は、Sankaranarayanan, etal, Mol.Pharmacol.2009, 75, 281-95に記載され、その開示は、参照により本明細書に組み込まれる。
【０１８６】
[00208]  一実施形態では、ＫＣａ３．１アゴニストは、ＳＫＡ−４（式（２０））としても知られる６−ニトロベンゾ［ｄ］チアゾール−２−アミン：
【化３４】
2020503351.tif 000038
又はその薬学的に許容される塩、共結晶、溶媒和物若しくはプロドラッグである。ＳＫＡ−４の特性及び合成は、Sankaranarayanan, et al,Mol.Pharmacol.2009, 75, 281-95に記載され、その開示は、参照により本明細書に組み込まれる。
【０１８７】
[00209]  一実施形態では、ＫＣａ３．１アゴニストは、ＳＫＡ−１６（式（２１））としても知られる６−（メチルスルホニル）ベンゾ［ｄ］チアゾール−２−アミン：
【化３５】
2020503351.tif 000039
又はその薬学的に許容される塩、共結晶、溶媒和物若しくはプロドラッグである。ＳＫＡ−１６の特性及び合成は、Sankaranarayanan, etal, Mol.Pharmacol.2009, 75, 281-95に記載され、その開示は、参照により本明細書に組み込まれる。
【０１８８】
[00210]  一実施形態では、ＫＣａ３．１アゴニストは、ＳＫＡ−２４（式（２２））としても知られる１−（２−アミノベンゾ［ｄ］チアゾール−６−イル）エタン−１−オン：
【化３６】
2020503351.tif 000040
又はその薬学的に許容される塩、共結晶、溶媒和物若しくはプロドラッグである。ＳＫＡ−２４の特性及び合成は、Sankaranarayanan, etal, Mol.Pharmacol.2009, 75, 281-95に記載され、その開示は、参照により本明細書に組み込まれる。
【０１８９】
[00211]  一実施形態では、ＫＣａ３．１アゴニストは、ＳＫＡ−２（式（２３））としても知られる６−メトキシベンゾ［ｄ］チアゾール−２−アミン：
【化３７】
2020503351.tif 000041
又はその薬学的に許容される塩、共結晶、溶媒和物若しくはプロドラッグである。ＳＫＡ−２の特性及び合成は、Sankaranarayanan, et al,Mol.Pharmacol.2009, 75, 281-95に記載され、その開示は、参照により本明細書に組み込まれる。
【０１９０】
[00212]  一実施形態では、ＫＣａ３．１アゴニストは、ＳＫＡ−１７（式（２４））としても知られる６−メトキシベンゾ［ｄ］チアゾール−２−アミン：
【化３８】
2020503351.tif 000042
又はその薬学的に許容される塩、共結晶、溶媒和物若しくはプロドラッグである。ＳＫＡ−１７の特性及び合成は、Sankaranarayanan, etal, Mol.Pharmacol.2009, 75, 281-95に記載され、その開示は、参照により本明細書に組み込まれる。
【０１９１】
[00213]  一実施形態では、ＫＣａ３．１アゴニストは、ＳＫＡ−１３（式（２５））としても知られる５−クロロ−６−メトキシベンゾ［ｄ］チアゾール−２−アミン：
【化３９】
2020503351.tif 000043
又はその薬学的に許容される塩、共結晶、溶媒和物若しくはプロドラッグである。ＳＫＡ−１３の特性及び合成は、Sankaranarayanan, etal, Mol.Pharmacol.2009, 75, 281-95に記載され、その開示は、参照により本明細書に組み込まれる。
【０１９２】
[00214]  一実施形態では、ＫＣａ３．１アゴニストは、ＳＫＡ−７（式（２６））としても知られる６−ベンジルベンゾ［ｄ］チアゾール−２−アミン：
【化４０】
2020503351.tif 000044
又はその薬学的に許容される塩、共結晶、溶媒和物若しくはプロドラッグである。ＳＫＡ−７の特性及び合成は、Sankaranarayanan, et al,Mol.Pharmacol.2009, 75, 281-95に記載され、その開示は、参照により本明細書に組み込まれる。
【０１９３】
[00215]  一実施形態では、ＫＣａ３．１アゴニストは、ＳＫＡ−３２（式（２７））としても知られる６−フェノキシベンゾ［ｄ］チアゾール−２−アミン：
【化４１】
2020503351.tif 000045
又はその薬学的に許容される塩、共結晶、溶媒和物若しくはプロドラッグである。ＳＫＡ−３２の特性及び合成は、Sankaranarayanan, etal, Mol.Pharmacol.2009, 75, 281-95に記載され、その開示は、参照により本明細書に組み込まれる。
【０１９４】
[00216]  一実施形態では、ＫＣａ３．１アゴニストは、ＳＫＡ−２２（式（２８））としても知られる（２−アミノベンゾ［ｄ］チアゾール−６−イル）（フェニル）メタノン：
【化４２】
2020503351.tif 000046
又はその薬学的に許容される塩、共結晶、溶媒和物若しくはプロドラッグである。ＳＫＡ−２２の特性及び合成は、Sankaranarayanan, etal, Mol.Pharmacol.2009, 75, 281-95に記載され、その開示は、参照により本明細書に組み込まれる。
【０１９５】
[00217]  一実施形態では、ＫＣａ３．１アゴニストは、ＳＫＡ−４８（式（２９））としても知られる（２−アミノベンゾ［ｄ］チアゾール−６−イル）（フェニル）メタノン：
【化４３】
2020503351.tif 000047
又はその薬学的に許容される塩、共結晶、溶媒和物若しくはプロドラッグである。ＳＫＡ−４８の特性及び合成は、Sankaranarayanan, etal, Mol.Pharmacol.2009, 75, 281-95に記載され、その開示は、参照により本明細書に組み込まれる。
【０１９６】
[00218]  一実施形態では、ＫＣａ３．１アゴニストは、ＳＫＡ−１８（式（２９））としても知られる６−フルオロベンゾ［ｄ］チアゾール−２−アミン：
【化４４】
2020503351.tif 000048
又はその薬学的に許容される塩、共結晶、溶媒和物若しくはプロドラッグである。ＳＫＡ−１８の特性及び合成は、Sankaranarayanan, etal, Mol.Pharmacol.2009, 75, 281-95に記載され、その開示は、参照により本明細書に組み込まれる。
【０１９７】
[00219]  一実施形態では、ＫＣａ３．１アゴニストは、ＳＫＡ−４２（式（３０））としても知られる５，６−ジフルオロベンゾ［ｄ］チアゾール−２−アミン：
【化４５】
2020503351.tif 000049
又はその薬学的に許容される塩、共結晶、溶媒和物若しくはプロドラッグである。ＳＫＡ−４２の特性及び合成は、Sankaranarayanan, etal, Mol.Pharmacol.2009, 75, 281-95に記載され、その開示は、参照により本明細書に組み込まれる。
【０１９８】
[00220]  一実施形態では、ＫＣａ３．１アゴニストは、ＳＫＡ−３（式（３１））としても知られる６−クロロベンゾ［ｄ］チアゾール−２−アミン：
【化４６】
2020503351.tif 000050
又はその薬学的に許容される塩、共結晶、溶媒和物若しくはプロドラッグである。ＳＫＡ−３の特性及び合成は、Sankaranarayanan, et al,Mol.Pharmacol.2009, 75, 281-95に記載され、その開示は、参照により本明細書に組み込まれる。
【０１９９】
[00221]  一実施形態では、ＫＣａ３．１アゴニストは、ＳＫＡ−８（式（３２））としても知られる５−（トリフルオロメトキシ）ベンゾ［ｄ］チアゾール−２−アミン：
【化４７】
2020503351.tif 000051
又はその薬学的に許容される塩、共結晶、溶媒和物若しくはプロドラッグである。ＳＫＡ−８の特性及び合成は、Sankaranarayanan, et al,Mol.Pharmacol.2009, 75, 281-95に記載され、その開示は、参照により本明細書に組み込まれる。
【０２００】
[00222]  一実施形態では、ＫＣａ３．１アゴニストは、ＳＫＡ−３５（式（３３））としても知られる４−（トリフルオロメトキシ）ベンゾ［ｄ］チアゾール−２−アミン：
【化４８】
2020503351.tif 000052
又はその薬学的に許容される塩、共結晶、溶媒和物若しくはプロドラッグである。ＳＫＡ−３５の特性及び合成は、Sankaranarayanan, etal, Mol.Pharmacol.2009, 75, 281-95に記載され、その開示は、参照により本明細書に組み込まれる。
【０２０１】
[00223]  一実施形態では、ＫＣａ３．１アゴニストは、ＳＫＡ−５１（式（３４））としても知られる６−（トリフルオロメチル）ベンゾ［ｄ］チアゾール−２−アミン：
【化４９】
2020503351.tif 000053
又はその薬学的に許容される塩、共結晶、溶媒和物若しくはプロドラッグである。ＳＫＡ−５１の特性及び合成は、Sankaranarayanan, etal, Mol.Pharmacol.2009, 75, 281-95に記載され、その開示は、参照により本明細書に組み込まれる。
【０２０２】
[00224]  一実施形態では、ＫＣａ３．１アゴニストは、ＳＫＡ−３４（式（３５））としても知られる５−（トリフルオロメチル）ベンゾ［ｄ］チアゾール−２−アミン：
【化５０】
2020503351.tif 000054
又はその薬学的に許容される塩、共結晶、溶媒和物若しくはプロドラッグである。ＳＫＡ−３４の特性及び合成は、Sankaranarayanan, etal, Mol.Pharmacol.2009, 75, 281-95に記載され、その開示は、参照により本明細書に組み込まれる。
【０２０３】
[00225]  一実施形態では、ＫＣａ３．１アゴニストは、ＳＫＡ−１９（式（３６））としても知られる６−（（トリフルオロメチル）チオ）ベンゾ［ｄ］チアゾール−２−アミン：
【化５１】
2020503351.tif 000055
又はその薬学的に許容される塩、共結晶、溶媒和物若しくはプロドラッグである。ＳＫＡ−１９の特性及び合成は、Sankaranarayanan, etal, Mol.Pharmacol.2009, 75, 281-95に記載され、その開示は、参照により本明細書に組み込まれる。
【０２０４】
[00226]  一実施形態では、ＫＣａ３．１アゴニストは、ＳＫＡ−１１（式（３７））としても知られる６−（クロロジフルオロメトキシ）ベンゾ［ｄ］チアゾール−２−アミン：
【化５２】
2020503351.tif 000056
又はその薬学的に許容される塩、共結晶、溶媒和物若しくはプロドラッグである。ＳＫＡ−１１の特性及び合成は、Sankaranarayanan, etal, Mol.Pharmacol.2009, 75, 281-95に記載され、その開示は、参照により本明細書に組み込まれる。
【０２０５】
[00227]  一実施形態では、ＫＣａ３．１アゴニストは、ＳＫＡ−５３（式（３８））としても知られる［２，４’ビベンゾ［ｄ］チアゾール］−２’−アミン：
【化５３】
2020503351.tif 000057
又はその薬学的に許容される塩、共結晶、溶媒和物若しくはプロドラッグである。ＳＫＡ−５３の特性及び合成は、Sankaranarayanan, etal, Mol.Pharmacol.2009, 75, 281-95に記載され、その開示は、参照により本明細書に組み込まれる。
【０２０６】
[00228]  一実施形態では、ＫＣａ３．１アゴニストは、ＳＫＡ−２９（式（３９））としても知られる６，７−ジヒドロ−５Ｈ−インデノ［５，６−ｄ］チアゾール−２−アミン：
【化５４】
2020503351.tif 000058
又はその薬学的に許容される塩、共結晶、溶媒和物若しくはプロドラッグである。ＳＫＡ−２９の特性及び合成は、Sankaranarayanan, etal, Mol.Pharmacol.2009, 75, 281-95に記載され、その開示は、参照により本明細書に組み込まれる。
【０２０７】
[00229]  一実施形態では、ＫＣａ３．１アゴニストは、ＳＫＡ−４４（式（４０））としても知られる６，７，８，９−テトラヒドロナフト［２，１−ｄ］チアゾール−２−アミン：
【化５５】
2020503351.tif 000059
又はその薬学的に許容される塩、共結晶、溶媒和物若しくはプロドラッグである。ＳＫＡ−４４の特性及び合成は、Sankaranarayanan, etal, Mol.Pharmacol.2009, 75, 281-95に記載され、その開示は、参照により本明細書に組み込まれる。
【０２０８】
[00230]  一実施形態では、ＫＣａ３．１アゴニストは、ＳＫＡ−４９（式（４１））としても知られる６，７，８，９−テトラヒドロナフト［１，２−ｄ］チアゾール−２−アミン：
【化５６】
2020503351.tif 000060
又はその薬学的に許容される塩、共結晶、溶媒和物若しくはプロドラッグである。ＳＫＡ−４９の特性及び合成は、Sankaranarayanan, etal, Mol.Pharmacol.2009, 75, 281-95に記載され、その開示は、参照により本明細書に組み込まれる。
【０２０９】
[00231]  一実施形態では、ＫＣａ３．１アゴニストは、ＳＫＡ−４５（式（４２））としても知られるナフト［２，１−ｄ］チアゾール−２−アミン：
【化５７】
2020503351.tif 000061
又はその薬学的に許容される塩、共結晶、溶媒和物若しくはプロドラッグである。ＳＫＡ−４５の特性及び合成は、Sankaranarayanan, etal, Mol.Pharmacol.2009, 75, 281-95に記載され、その開示は、参照により本明細書に組み込まれる。
【０２１０】
[00232]  一実施形態では、ＫＣａ３．１アゴニストは、ＳＫＡ−２１（式（４３））としても知られる２−アミノ−６ａ，１０ａ−ジヒドロアントラ［２，１−ｄ］チアゾール−６，１１−ジオン：
【化５８】
2020503351.tif 000062
又はその薬学的に許容される塩、共結晶、溶媒和物若しくはプロドラッグである。ＳＫＡ−２１の特性及び合成は、Sankaranarayanan, etal, Mol.Pharmacol.2009, 75, 281-95に記載され、その開示は、参照により本明細書に組み込まれる。
【０２１１】
[00233]  一実施形態では、ＫＣａ３．１アゴニストは、ＳＫＡ−２６（式（４４））としても知られる２−アミノ−７Ｈ−クロメノ［６，５−ｄ］チアゾール−７−オン：
【化５９】
2020503351.tif 000063
又はその薬学的に許容される塩、共結晶、溶媒和物若しくはプロドラッグである。ＳＫＡ−２６の特性及び合成は、Sankaranarayanan, etal, Mol.Pharmacol.2009, 75, 281-95に記載され、その開示は、参照により本明細書に組み込まれる。
【０２１２】
[00234]  一実施形態では、ＫＣａ３．１アゴニストは、ＳＫＡ−５０（式（４５））としても知られるベンゾ［１，２−ｄ：４，５−ｄ’］ビス（チアゾール）−２，６−ジアミン：
【化６０】
2020503351.tif 000064
又はその薬学的に許容される塩、共結晶、溶媒和物若しくはプロドラッグである。ＳＫＡ−５０の特性及び合成は、Sankaranarayanan, etal, Mol.Pharmacol.2009, 75, 281-95に記載され、その開示は、参照により本明細書に組み込まれる。
【０２１３】
[00235]  一実施形態では、ＫＣａ３．１アゴニストは、ＳＫＡ−２５（式（４６））としても知られるベンゾ［１，２−ｄ：４，３−ｄ’］ビス（チアゾール）−２−アミン：
【化６１】
2020503351.tif 000065
又はその薬学的に許容される塩、共結晶、溶媒和物若しくはプロドラッグである。ＳＫＡ−２５の特性及び合成は、Sankaranarayanan, etal, Mol.Pharmacol.2009, 75, 281-95に記載され、その開示は、参照により本明細書に組み込まれる。
【０２１４】
[00236]  一実施形態では、ＫＣａ３．１アゴニストは、ＳＫＡ−５６（式（４７））としても知られるチアゾロ［４，５−ｃ］キノリン−２−アミン：
【化６２】
2020503351.tif 000066
又はその薬学的に許容される塩、共結晶、溶媒和物若しくはプロドラッグである。ＳＫＡ−５６の特性及び合成は、Sankaranarayanan, etal, Mol.Pharmacol.2009, 75, 281-95に記載され、その開示は、参照により本明細書に組み込まれる。
【０２１５】
[00237]  一実施形態では、ＫＣａ３．１アゴニストは、ＳＫＡ−３０（式（４８））としても知られる６，７−ジヒドロ−［１，４］ジオキシノ［２’，３’：４，５］ベンゾ［１，２−ｄ］チアゾール−２−アミン：
【化６３】
2020503351.tif 000067
又はその薬学的に許容される塩、共結晶、溶媒和物若しくはプロドラッグである。ＳＫＡ−３０の特性及び合成は、Sankaranarayanan, etal, Mol.Pharmacol.2009, 75, 281-95に記載され、その開示は、参照により本明細書に組み込まれる。
【０２１６】
[00238]  一実施形態では、ＫＣａ３．１アゴニストは、前述のベンゾチアゾール化合物のいずれか１つから選択されるベンゾチアゾール誘導体又はその薬学的に許容される塩、共結晶、溶媒和物若しくはプロドラッグである。一実施形態では、ＫＣａ３．１アゴニストは、前述のベンゾイミダゾール化合物のいずれか１つから選択されるベンゾイミダゾール誘導体又はその薬学的に許容される塩、共結晶、溶媒和物若しくはプロドラッグである。
【０２１７】
[00239]  一実施形態では、ＫＣａ３．１アゴニストは、
５−エチルナフト［１，２−ｄ］オキサゾール−２−アミン；
５−プロピルナフト［１，２−ｄ］オキサゾール−２−アミン；
５−シクロプロピルナフト［１，２−ｄ］オキサゾール−２−アミン；
５−（ｔｅｒｔ−ブチル）ナフト［１，２−ｄ］オキサゾール−２−アミン；
５−フルオロナフト［１，２−ｄ］オキサゾール−２−アミン；
５−クロロナフト［１，２−ｄ］オキサゾール−２−アミン；
５−ブロモナフト［１，２−ｄ］オキサゾール−２−アミン；
５−ヨードナフト［１，２−ｄ］オキサゾール−２−アミン；
２−アミノナフト［１，２−ｄ］オキサゾール−５−カルボニトリル；
ナフト［１，２−ｄ］オキサゾール−２，５−ジアミン；
Ｎ５−メチルナフト［１，２−ｄ］オキサゾール−２，５−ジアミン；
Ｎ５，Ｎ５−ジメチルナフト［１，２−ｄ］オキサゾール−２，５−ジアミン；
Ｎ５−エチルナフト［１，２−ｄ］オキサゾール−２，５−ジアミン；
５−（ピロリジン−１−イル）ナフト［１，２−ｄ］オキサゾール−２−アミン；
５−メトキシナフト［１，２−ｄ］オキサゾール−２−アミン；
５−トリフルオロメチルナフト［１，２−ｄ］オキサゾール−２−アミン；及び
その薬学的に許容される塩、共結晶、溶媒和物又はプロドラッグ
からなる群から選択される。これらの化合物の特性及び合成は、国際公開２０１５／１６４８１６Ａ２号に記載され、その開示は、参照により本明細書に組み込まれる。
【０２１８】
[00240]  一実施形態では、ＫＣａ３．１アゴニストは、
５−エチルナフト［２，１−ｄ］オキサゾール−２−アミン；
５−プロピルナフト［２，１−ｄ］オキサゾール−２−アミン；
５−シクロプロピルナフト［２，１−ｄ］オキサゾール−２−アミン；
５−（ｔｅｒｔ−ブチル）ナフト［２，１−ｄ］オキサゾール−２−アミン；
５−フルオロナフト［２，１−ｄ］オキサゾール−２−アミン；
５−クロロナフト［２，１−ｄ］オキサゾール−２−アミン；
５−ブロモナフト［２，１−ｄ］オキサゾール−２−アミン；
５−ヨードナフト［２，１−ｄ］オキサゾール−２−アミン；
２−アミノナフト［２，１−ｄ］オキサゾール−５−カルボニトリル；
ナフト［２，１−ｄ］オキサゾール−２，５−ジアミン；
Ｎ５−メチルナフト［２，１−ｄ］オキサゾール−２，５−ジアミン；
Ｎ５，Ｎ５−ジメチルナフト［２，１−ｄ］オキサゾール−２，５−ジアミン；
Ｎ５−エチルナフト［２，１−ｄ］オキサゾール−２，５−ジアミン；
５−（ピロリジン−１−イル）ナフト［２，１−ｄ］オキサゾール−２−アミン；
５−メトキシナフト［２，１−ｄ］オキサゾール−２−アミン；
５−トリフルオロメチルナフト［２，１−ｄ］オキサゾール−２−アミン；及び
その薬学的に許容される塩、共結晶、溶媒和物又はプロドラッグ
からなる群から選択される。これらの化合物の特性及び合成は、国際公開２０１５／１６４８１６Ａ２号に記載され、その開示は、参照により本明細書に組み込まれる。
【０２１９】
[00241]  一実施形態では、ＫＣａ３．１アゴニストは、
２，３，３−トリメチル−３Ｈ−ベンゾ［ｇ］インドール（ＳＫＡ−９２及びＣＡＳ番号７４４７０−８５−２としても知られる）；
２−メチルナフト［２，３−ｄ］オキサゾール（ＳＫＡ−１０４及びＣＡＳ番号２０６８６−６６−２としても知られる）；
２−メチルナフト［１，２−ｄ］オキサゾール（ＳＫＡ−１０３及びＣＡＳ番号８５−１５−４としても知られる）；
ナフト［１，２−ｄ］オキサゾール−２−アミン（ＳＫＡ−１０２及びＣＡＳ番号８５８４３２−４５−８としても知られる）；
２−メチルナフト［１，２−ｄ］チアゾール（ＳＫＡ−７４及びＣＡＳ番号２６８２−４５−３としても知られる）；
２−アミノ−４−（１−ナフチル）チアゾール（ＳＫＡ−７５、ＣＡＳ番号５６５０３−９６−９としても知られる）；
２−アミノ−４−（２−ナフチル）チアゾール（ＳＫＡ−７６、ＣＡＳ番号２１３３１−４３−１としても知られる）；及び
その薬学的に許容される塩、共結晶、溶媒和物又はプロドラッグ
からなる群から選択される。これらの化合物の特性及び合成は、国際公開２０１５／１６４８１６Ａ２号に記載され、その開示は、参照により本明細書に組み込まれる。
【０２２０】
[00242]  一実施形態では、ＫＣａ３．１アゴニストは、５−メチルナフト［１，２−ｄ］チアゾール−２−アミン（ＳＫＡ−１１１としても知られる）及びその薬学的に許容される塩、共結晶、溶媒和物若しくはプロドラッグである。ＳＫＡ−１１１の化合物の特性及び合成は、国際公開２０１５／１６４８１６Ａ２及びColeman,et al., Mol.Pharmacol.2014, 86, 342-57に記載され、その開示は、参照により本明細書に組み込まれる。
【０２２１】
腫瘍浸潤リンパ球を増殖させる方法
[00243]  一実施形態では、本発明は、ＴＩＬを増殖させる方法であって、少なくとも１つのＴＩＬを含むＴＩＬの集団を本明細書に記載のカリウムチャネルアゴニストと接触させることを含む方法を提供する。一実施形態では、本発明は、ＴＩＬを増殖させる方法であって、細胞培養培地中でＴＩＬの集団を１つ以上のカリウムチャネルアゴニストと接触させるステップを含む方法を提供する。
【０２２２】
[00244]  一実施形態では、本発明は、腫瘍から腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）の集団を調製するためのプロセスであって、
（ａ）断片化した腫瘍を第１の細胞培養培地と接触させるステップ；
（ｂ）第１の細胞培養培地中でＴＩＬの第１の集団の初期増殖（プレＲＥＰ）を行ってＴＩＬの第２の集団を得るステップであって、ＴＩＬの第２の集団の数は、ＴＩＬの第１の集団よりも少なくとも５倍多く、第１の細胞培養培地は、ＩＬ−２を含む、ステップ；
（ｂ）第２の細胞培養培地中でＴＩＬの第２の集団の急速増殖（ＲＥＰ）を行ってＴＩＬの第３の集団を得るステップであって、ＴＩＬの第３の集団の数は、急速増殖の開始から７日後にＴＩＬの第２の集団よりも少なくとも５０倍多く、第２の細胞培養培地は、ＩＬ−２、ＯＫＴ−３（抗ＣＤ３抗体）、照射同種異系末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）を含み、急速増殖は、１４日以下の期間にわたって行われる、ステップ；
（ｃ）ＴＩＬの第３の集団を回収するステップ
を含み、第１の細胞培養培地若しくは第２の細胞培養培地のいずれか又は第１の細胞培養培地及び第２の細胞培養培地の両方は、カリウムチャネルアゴニストをさらに含む、プロセスを提供する。
【０２２３】
[00245]  一実施形態では、カリウムチャネルアゴニストは、プレＲＥＰステップ及びＲＥＰステップにおいて異なり得る。
【０２２４】
[00246]  一実施形態では、カリウムチャネルアゴニストは、ＫＣａ３．１（ＩＫチャネル）アゴニストである。
【０２２５】
[00247]  一実施形態では、本発明は、プレ急速増殖（プレＲＥＰ）プロセス及び急速増殖プロセス（ＲＥＰ）を含む、ＴＩＬの集団を増殖させるためのプロセスであって、増殖に使用される細胞培養培地は、１００ＩＵ／ｍＬ〜１０，０００ＩＵ／ｍＬ、２００ＩＵ／ｍＬ〜５，０００ＩＵ／ｍＬ、３００ＩＵ／ｍＬ〜４，８００ＩＵ／ｍＬ、４００ＩＵ／ｍＬ〜４，６００ＩＵ／ｍＬ、５００ＩＵ／ｍＬ〜４，４００ＩＵ／ｍＬ、６００ＩＵ／ｍＬ〜４，２００ＩＵ／ｍＬ、７００ＩＵ／ｍＬ〜４，０００ＩＵ／ｍＬ、８００ＩＵ／ｍＬ〜３，８００ＩＵ／ｍＬ、９００ＩＵ／ｍＬ〜３，６００ＩＵ／ｍＬ、１，０００ＩＵ／ｍＬ〜３，４００ＩＵ／ｍＬ、１，１００ＩＵ／ｍＬ〜３，２００ＩＵ／ｍＬ、１，２００ＩＵ／ｍＬ〜３，０００ＩＵ／ｍＬ、１，３００ＩＵ／ｍＬ〜２，８００ＩＵ／ｍＬ、１，４００ＩＵ／ｍＬ〜２，６００ＩＵ／ｍＬ、１，５００ＩＵ／ｍＬ〜２，４００ＩＵ／ｍＬ、１，６００ＩＵ／ｍＬ〜２，２００ＩＵ／ｍＬ、１，７００ＩＵ／ｍＬ〜２，０００ＩＵ／ｍＬ、５，５００ＩＵ／ｍＬ〜９，５００ＩＵ／ｍＬ、６，０００ＩＵ／ｍＬ〜９，０００ＩＵ／ｍＬ、６５００ＩＵ／ｍＬ〜８，５００ＩＵ／ｍＬ、７，０００ＩＵ／ｍＬ〜８，０００ＩＵ／ｍＬ及び７，５００ＩＵ／ｍＬ〜８，０００ＩＵ／ｍＬからなる群から選択される濃度のＩＬ−２を含む、プロセスを提供する。
【０２２６】
[00248]  一実施形態では、本発明は、プレ急速増殖（プレＲＥＰ）プロセス及び急速増殖プロセス（ＲＥＰ）を含む、ＴＩＬの集団を増殖させるためのプロセスであって、増殖に使用される細胞培養培地は、約１００ＩＵ／ｍＬ、約２００ＩＵ／ｍＬ、約３００ＩＵ／ｍＬ、約４００ＩＵ／ｍＬ、約１００ＩＵ／ｍＬ、約１００ＩＵ／ｍＬ、約１００ＩＵ／ｍＬ、約１００ＩＵ／ｍＬ、約１００ＩＵ／ｍＬ、約５００ＩＵ／ｍＬ、約６００ＩＵ／ｍＬ、約７００ＩＵ／ｍＬ、約８００ＩＵ／ｍＬ、約９００ＩＵ／ｍＬ、約１，０００ＩＵ／ｍＬ、約１，１００ＩＵ／ｍＬ、約１，２００ＩＵ／ｍＬ、約１，３００ＩＵ／ｍＬ、約１，４００ＩＵ／ｍＬ、約１，５００ＩＵ／ｍＬ、約１，６００ＩＵ／ｍＬ、約１，７００ＩＵ／ｍＬ、約１，８００ＩＵ／ｍＬ、約１，９００ＩＵ／ｍＬ、約２，０００ＩＵ／ｍＬ、約２，１００ＩＵ／ｍＬ、約２，２００ＩＵ／ｍＬ、約２，３００ＩＵ／ｍＬ、約２，４００ＩＵ／ｍＬ、約２，５００ＩＵ／ｍＬ、約２，６００ＩＵ／ｍＬ、約２，７００ＩＵ／ｍＬ、約２，８００ＩＵ／ｍＬ、約２，９００ＩＵ／ｍＬ、約３，０００ＩＵ／ｍＬ、約３，１００ＩＵ／ｍＬ、約３，２００ＩＵ／ｍＬ、約３，３００ＩＵ／ｍＬ、約３，４００ＩＵ／ｍＬ、約３，５００ＩＵ／ｍＬ、約３，６００ＩＵ／ｍＬ、約３，７００ＩＵ／ｍＬ、約３，８００ＩＵ／ｍＬ、約３，９００ＩＵ／ｍＬ、約４，０００ＩＵ／ｍＬ、約４，１００ＩＵ／ｍＬ、約４，２００ＩＵ／ｍＬ、約４，３００ＩＵ／ｍＬ、約４，４００ＩＵ／ｍＬ、約４，５００ＩＵ／ｍＬ、約４，６００ＩＵ／ｍＬ、約４，７００ＩＵ／ｍＬ、約４，８００ＩＵ／ｍＬ、約４，９００ＩＵ／ｍＬ、約５，０００ＩＵ／ｍＬ、約５，１００ＩＵ／ｍＬ、約５，２００ＩＵ／ｍＬ、約５，３００ＩＵ／ｍＬ、約５，４００ＩＵ／ｍＬ、約５，５００ＩＵ／ｍＬ、約５，６００ＩＵ／ｍＬ、約５，７００ＩＵ／ｍＬ、約５，８００ＩＵ／ｍＬ、約５，９００ＩＵ／ｍＬ、約６，０００ＩＵ／ｍＬ、約６，５００ＩＵ／ｍＬ、約７，０００ＩＵ／ｍＬ、約７，５００ＩＵ／ｍＬ、約８，０００ＩＵ／ｍＬ、約８，５００ＩＵ／ｍＬ、約９，０００ＩＵ／ｍＬ、約９，５００ＩＵ／ｍＬ及び約１０，０００ＩＵ／ｍＬからなる群から選択される濃度のＩＬ−２を含む、プロセスを提供する。
【０２２７】
[00249]  一実施形態では、本発明は、プレ急速増殖（プレＲＥＰ）プロセスを含む、ＴＩＬの集団を増殖させるためのプロセスを提供する。一実施形態では、本発明は、ＴＩＬの集団を増殖させるプレＲＥＰプロセスであって、細胞培養培地中でＴＩＬの集団を１つ以上のカリウムチャネルアゴニストと接触させるステップを含み、細胞培養培地は、初期濃度１０００ＩＵ／ｍＬ〜６０００ＩＵ／ｍＬのＩＬ−２をさらに含む、プレＲＥＰプロセスを提供する。
【０２２８】
[00250]  一実施形態では、本発明は、ＴＩＬの集団を増殖させるためのプレＲＥＰプロセスであって、細胞培養培地中でＴＩＬの集団を１つ以上のカリウムチャネルアゴニストと接触させるステップを含み、細胞培養培地は、初期濃度約６０００ＩＵ／ｍＬのＩＬ−２をさらに含む、プロセスを提供する。
【０２２９】
[00251]  一実施形態では、本発明は、ＴＩＬの集団を増殖させるためのプレＲＥＰプロセスであって、細胞培養培地中でＴＩＬの集団を１つ以上のカリウムチャネルアゴニストと接触させるステップを含み、細胞培養培地は、初期濃度１０００ＩＵ／ｍＬ〜６０００ＩＵ／ｍＬのＩＬ−２をさらに含み、１つ以上のカリウムチャネルアゴニストは、ＫＣａ３．１（ＩＫチャネル）アゴニストを含む、プロセスを提供する。
【０２３０】
[00252]  一実施形態では、本発明は、ＴＩＬの集団を増殖させるためのプレＲＥＰプロセスであって、細胞培養培地中でＴＩＬの集団を１つ以上のカリウムチャネルアゴニストと接触させるステップを含み、細胞培養培地は、初期濃度１０００ＩＵ／ｍＬ〜６０００ＩＵ／ｍＬのＩＬ−２をさらに含み、１つ以上のカリウムチャネルアゴニストは、１ピコモル（ｐＭ）〜１０００ｐＭ、１ｐＭ〜５００ｐＭ、５０ｐＭ〜４５０ｐＭ、１００ｐＭ〜４００ｐＭ、１５０ｐＭ〜３５０ｐＭ、２００ｐＭ〜３００ｐＭ、５５０ｐＭ〜９５０ｐＭ、６００ｐＭ〜９００ｐＭ、６５０ｐＭ〜８５０ｐＭ、７００ｐＭ〜８００ｐＭ、１ナノモル（ｎＭ）〜１０００ｎＭ、１ｎＭ〜５００ｎＭ、５０ｎＭ〜４５０ｎＭ、１００ｎＭ〜４００ｎＭ、１５０ｎＭ〜３５０ｎＭ、２００ｎＭ〜３００ｎＭ、５５０ｎＭ〜９５０ｎＭ、６００ｎＭ〜９００ｎＭ、６５０ｎＭ〜８５０ｎＭ、７００ｎＭ〜８００ｎＭ、１００ｎＭ〜５００ｎＭ、２００ｎＭ〜５００ｎＭ、３００ｎＭ〜５００ｎＭ、４００ｎＭ〜５００ｎＭ、５００ｎＭ〜６００ｎＭ、６００ｎＭ〜７００ｎＭ、７００ｎＭ〜８００ｎＭ、２５０ｎＭ〜５００ｎＭ、１０ｎＭ〜２００ｎＭ、５０ｎＭ〜２００ｎＭ、１マイクロモル（μＭ）〜１０００μＭ、１μＭ〜５００μＭ、５０μＭ〜４５０μＭ、１００μＭ〜４００μＭ、１５０μＭ〜３５０μＭ、２００μＭ〜３００μＭ、５５０μＭ〜９５０μＭ、６００μＭ〜９００μＭ、６５０μＭ〜８５０μＭ、７００μＭ〜８００μＭ、１００μＭ〜５００μＭ、２００μＭ〜５００μＭ、３００μＭ〜５００μＭ、４００μＭ〜５００μＭ、５００μＭ〜６００μＭ、６００μＭ〜７００μＭ、７００μＭ〜８００μＭ、２５０μＭ〜５００μＭ、１０μＭ〜２００μＭ、５０μＭ〜２００μＭ、１ミリモル（ｍＭ）〜１０００ｍＭ、１ｍＭ〜５００ｍＭ、５０ｍＭ〜４５０ｍＭ、１００ｍＭ〜４００ｍＭ、１５０ｍＭ〜３５０ｍＭ、２００ｍＭ〜３００ｍＭ、５５０ｍＭ〜９５０ｍＭ、６００ｍＭ〜９００ｍＭ、６５０ｍＭ〜８５０ｍＭ、７００ｍＭ〜８００ｍＭ、１００ｍＭ〜５００ｍＭ、２００ｍＭ〜５００ｍＭ、３００ｍＭ〜５００ｍＭ、４００ｍＭ〜５００ｍＭ、５００ｍＭ〜６００ｍＭ、６００ｍＭ〜７００ｍＭ、７００ｍＭ〜８００ｍＭ、２５０ｍＭ〜５００ｍＭ、１０ｍＭ〜２００ｍＭ及び５０ｍＭ〜２００ｍＭからなる群から選択される濃度のＫＣａ３．１（ＩＫチャネル）アゴニストを含む、プロセスを提供する。
【０２３１】
[00253]  一実施形態では、本発明は、ＴＩＬの集団を増殖させるためのプレＲＥＰプロセスであって、細胞培養培地中でＴＩＬの集団を１つ以上のカリウムチャネルアゴニストと接触させるステップを含み、細胞培養培地は、初期濃度１０００ＩＵ／ｍＬ〜６０００ＩＵ／ｍＬのＩＬ−２をさらに含み、１つ以上のカリウムチャネルアゴニストは、１ナノモル（ｎＭ）〜１００ｎＭ、１００ｎＭ〜２００ｎＭ、２００ｎＭ〜３００ｎＭ、３００ｎＭ〜４００ｎＭ、４００ｎＭ〜５００ｎＭ、５００ｎＭ〜６００ｎＭ、６００ｎＭ〜７００ｎＭ、７００ｎＭ〜８００ｎＭ、８００ｎＭ〜９００ｎＭ、９００ｎＭ〜１マイクロモル（μＭ）、１μＭ〜２μＭ、２μＭ〜５μＭ、５μＭ〜１０μＭ及び１０μＭ〜１００μＭからなる群から選択される濃度のＫＣａ３．１（ＩＫチャネル）アゴニストを含み得る、プロセスを提供する。
【０２３２】
[00254]  一実施形態では、本発明は、ＴＩＬの集団を増殖させるためのプレＲＥＰプロセスであって、細胞培養培地中でＴＩＬの集団を１つ以上のカリウムチャネルアゴニストと接触させるステップを含み、細胞培養培地は、初期濃度１０００ＩＵ／ｍＬ〜６０００ＩＵ／ｍＬのＩＬ−２をさらに含み、１つ以上のカリウムチャネルアゴニストは、約１ｐＭ、約５０ｐＭ、約１００ｐＭ、約１５０ｐＭ、約２００ｐＭ、約２５０ｐＭ、約３００ｐＭ、約３５０ｐＭ、約４００ｐＭ、約４５０ｐＭ、約５００ｐＭ、約５５０ｐＭ、約６００ｐＭ、約６５０ｐＭ、約７００ｐＭ、約７５０ｐＭ、約８００ｐＭ、約８５０ｐＭ、約９００ｐＭ、約９５０ｐＭ、約１ｎＭ、約２５ｎＭ、約５０ｎＭ、約７５ｎＭ、約１００ｎＭ、約１２５ｎＭ、約１５０ｎＭ、約１７５ｎＭ、約２００ｎＭ、約２２５ｎＭ、約２５０ｎＭ、約２７５ｎＭ、約３００ｎＭ、約３２５ｎＭ、約３５０ｎＭ、約３７５ｎＭ、約４００ｎＭ、約４２５ｎＭ、約４５０ｎＭ、約４７５ｎＭ、約５００ｎＭ、約５２５ｎＭ、約５５０ｎＭ、約５７５ｎＭ、約６００ｎＭ、約６２５ｎＭ、約６５０ｎＭ、約６７５ｎＭ、約７００ｎＭ、約７５０ｎＭ、約８００ｎＭ、約８５０ｎＭ、約９００ｎＭ、約９５０ｎＭ、約１μＭ、約２μＭ、約５μＭ、約１０μＭ、約２０μＭ、約３０μＭ、約４０μＭ、約５０μＭ、約６０μＭ、約７０μＭ、約８０μＭ、約９０μＭ、約１００μＭ、約１２５μＭ、約１５０μＭ、約１７５μＭ、約２００μＭ、約２２５μＭ、約２５０μＭ、約２７５μＭ、約３００μＭ、約３２５μＭ、約３５０μＭ、約３７５μＭ、約４００μＭ、約４２５μＭ、約４５０μＭ、約５００μＭ、約５５０μＭ、約６００μＭ、約６５０μＭ、約７００μＭ、約７５０μＭ、約８００μＭ、約８５０μＭ、約９００μＭ、約９５０μＭ、約１ミリモル（ｍＭ）、約２ｍＭ、約５ｍＭ、約１０ｍＭ、約２５ｍＭ、約３０ｍＭ、約３５ｍＭ、約４０ｍＭ、約４５ｍＭ、約５０ｍＭ、約５５ｍＭ、約６０ｍＭ、約６５ｍＭ、約７０ｍＭ、約７５ｍＭ、約８０ｍＭ、約８５ｍＭ、約９０ｍＭ、約９５ｍＭ及び約１００ｍＭからなる群から選択される濃度のＫＣａ３．１（ＩＫチャネル）アゴニストを含む、プロセスを提供する。
【０２３３】
[00255]  一実施形態では、本発明は、ＴＩＬの集団を増殖させるためのプレＲＥＰプロセスであって、細胞培養培地中でＴＩＬの集団を１つ以上のカリウムチャネルアゴニストと接触させるステップを含み、細胞培養培地は、初期濃度１０００ＩＵ／ｍＬ〜６０００ＩＵ／ｍＬのＩＬ−２をさらに含み、１つ以上のカリウムチャネルアゴニストは、１ｐＭ超、５０ｐＭ超、１００ｐＭ超、１５０ｐＭ超、２００ｐＭ超、２５０ｐＭ超、３００ｐＭ超、３５０ｐＭ超、４００ｐＭ超、４５０ｐＭ超、５００ｐＭ超、５５０ｐＭ超、６００ｐＭ超、６５０ｐＭ超、７００ｐＭ超、７５０ｐＭ超、８００ｐＭ超、８５０ｐＭ超、９００ｐＭ超、９５０ｐＭ超、１ｎＭ超、２５ｎＭ超、５０ｎＭ超、７５ｎＭ超、１００ｎＭ超、１２５ｎＭ超、１５０ｎＭ超、１７５ｎＭ超、２００ｎＭ超、２２５ｎＭ超、２５０ｎＭ超、２７５ｎＭ超、３００ｎＭ超、３２５ｎＭ超、３５０ｎＭ超、３７５ｎＭ超、４００ｎＭ超、４２５ｎＭ超、４５０ｎＭ超、４７５ｎＭ超、５００ｎＭ超、５２５ｎＭ超、５５０ｎＭ超、５７５ｎＭ超、６００ｎＭ超、６２５ｎＭ超、６５０ｎＭ超、６７５ｎＭ超、７００ｎＭ超、７５０ｎＭ超、８００ｎＭ超、８５０ｎＭ超、９００ｎＭ超、９５０ｎＭ超、１μＭ超、２μＭ超、５μＭ超、１０μＭ超、２０μＭ超、３０μＭ超、４０μＭ超、５０μＭ超、６０μＭ超、７０μＭ超、８０μＭ超、９０μＭ超、１００μＭ超、１２５μＭ超、１５０μＭ超、１７５μＭ超、２００μＭ超、２２５μＭ超、２５０μＭ超、２７５μＭ超、３００μＭ超、３２５μＭ超、３５０μＭ超、３７５μＭ超、４００μＭ超、４２５μＭ超、４５０μＭ超、５００μＭ超、５５０μＭ超、６００μＭ超、６５０μＭ超、７００μＭ超、７５０μＭ超、８００μＭ超、８５０μＭ超、９００μＭ超、９５０μＭ超、１ミリモル（ｍＭ）超、２ｍＭ超、５ｍＭ超、１０ｍＭ超、２５ｍＭ超、３０ｍＭ超、３５ｍＭ超、４０ｍＭ超、４５ｍＭ超、５０ｍＭ超、５５ｍＭ超、６０ｍＭ超、６５ｍＭ超、７０ｍＭ超、７５ｍＭ超、８０ｍＭ超、８５ｍＭ超、９０ｍＭ超、９５ｍＭ超及び１００ｍＭ超からなる群から選択される濃度のＫＣａ３．１（ＩＫチャネル）アゴニストを含む、プロセスを提供する。
【０２３４】
[00256]  一実施形態では、本発明は、ＴＩＬの集団を増殖させるためのプレＲＥＰプロセスであって、細胞培養培地中でＴＩＬの集団を１つ以上のカリウムチャネルアゴニストと接触させるステップを含み、細胞培養培地は、初期濃度１０００ＩＵ／ｍＬ〜６０００ＩＵ／ｍＬのＩＬ−２をさらに含み、１つ以上のカリウムチャネルアゴニストは、１ｐＭ未満、５０ｐＭ未満、１００ｐＭ未満、１５０ｐＭ未満、２００ｐＭ未満、２５０ｐＭ未満、３００ｐＭ未満、３５０ｐＭ未満、４００ｐＭ未満、４５０ｐＭ未満、５００ｐＭ未満、５５０ｐＭ未満、６００ｐＭ未満、６５０ｐＭ未満、７００ｐＭ未満、７５０ｐＭ未満、８００ｐＭ未満、８５０ｐＭ未満、９００ｐＭ未満、９５０ｐＭ未満、１ｎＭ未満、２５ｎＭ未満、５０ｎＭ未満、７５ｎＭ未満、１００ｎＭ未満、１２５ｎＭ未満、１５０ｎＭ未満、１７５ｎＭ未満、２００ｎＭ未満、２２５ｎＭ未満、２５０ｎＭ未満、２７５ｎＭ未満、３００ｎＭ未満、３２５ｎＭ未満、３５０ｎＭ未満、３７５ｎＭ未満、４００ｎＭ未満、４２５ｎＭ未満、４５０ｎＭ未満、４７５ｎＭ未満、５００ｎＭ未満、５２５ｎＭ未満、５５０ｎＭ未満、５７５ｎＭ未満、６００ｎＭ未満、６２５ｎＭ未満、６５０ｎＭ未満、６７５ｎＭ未満、７００ｎＭ未満、７５０ｎＭ未満、８００ｎＭ未満、８５０ｎＭ未満、９００ｎＭ未満、９５０ｎＭ未満、１μＭ未満、２μＭ未満、５μＭ未満、１０μＭ未満、２０μＭ未満、３０μＭ未満、４０μＭ未満、５０μＭ未満、６０μＭ未満、７０μＭ未満、８０μＭ未満、９０μＭ未満、１００μＭ未満、１２５μＭ未満、１５０μＭ未満、１７５μＭ未満、２００μＭ未満、２２５μＭ未満、２５０μＭ未満、２７５μＭ未満、３００μＭ未満、３２５μＭ未満、３５０μＭ未満、３７５μＭ未満、４００μＭ未満、４２５μＭ未満、４５０μＭ未満、５００μＭ未満、５５０μＭ未満、６００μＭ未満、６５０μＭ未満、７００μＭ未満、７５０μＭ未満、８００μＭ未満、８５０μＭ未満、９００μＭ未満、９５０μＭ未満、１ミリモル（ｍＭ）未満、２ｍＭ未満、５ｍＭ未満、１０ｍＭ未満、２５ｍＭ未満、３０ｍＭ未満、３５ｍＭ未満、４０ｍＭ未満、４５ｍＭ未満、５０ｍＭ未満、５５ｍＭ未満、６０ｍＭ未満、６５ｍＭ未満、７０ｍＭ未満、７５ｍＭ未満、８０ｍＭ未満、８５ｍＭ未満、９０ｍＭ未満、９５ｍＭ未満及び１００ｍＭ未満からなる群から選択される濃度のＫＣａ３．１（ＩＫチャネル）アゴニストを含む、プロセスを提供する。
【０２３５】
[00257]  一実施形態では、本発明は、ＴＩＬの集団を増殖させるためのプレＲＥＰプロセスであって、細胞培養培地中でＴＩＬの集団を１つ以上のカリウムチャネルアゴニストと接触させるステップを含み、細胞培養培地は、初期濃度１０００ＩＵ／ｍＬ〜６０００ＩＵ／ｍＬのＩＬ−２をさらに含み、１つ以上のカリウムチャネルアゴニストは、ＫＣａ３．１（ＩＫチャネル）アゴニストを含み、ＣＤ８＋ＣＤ２８＋、ＣＤ８＋ＣＤ２７＋、ＣＤ８＋ＣＤ２７＋ＣＤ２８＋、ＣＣＲ７＋及びそれらの組み合わせからなる群から選択される表現型を有するＴ細胞を含むＴＩＬの集団は、カリウムチャネルアゴニストなしで得られたＴＩＬの参照集団に対して増加しており、ＴＩＬの第２の集団における表現型は、ＴＩＬの参照集団に対して少なくとも１％、少なくとも２％、少なくとも３％、少なくとも４％、少なくとも５％、少なくとも１０％、少なくとも１５％、少なくとも２０％、少なくとも２５％、少なくとも３０％、少なくとも３５％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも１００％、少なくとも１２５％、少なくとも１５０％、少なくとも２００％、少なくとも２５０％、少なくとも３００％、少なくとも４００％又は少なくとも５００％増加している、プロセスを提供する。
【０２３６】
[00258]  一実施形態では、本発明は、ＴＩＬの集団を増殖させるプレＲＥＰプロセスであって、細胞培養培地中でＴＩＬの集団を１つ以上のカリウムチャネルアゴニストと接触させるステップを含み、細胞培養培地は、初期濃度１０００ＩＵ／ｍＬ〜６０００ＩＵ／ｍＬのＩＬ−２をさらに含み、１つ以上のカリウムチャネルアゴニストは、ＫＣａ３．１（ＩＫチャネル）アゴニストを含み、ＴＩＬの集団は、１日間、２日間、３日間、４日間、５日間、６日間、７日間、８日間、９日間、１０日間、１１日間、１２日間、１３日間、１４日間、１５日間、１６日間、１７日間、１８日間、１９日間、２０日間、２１日間、２５日間、３０日間、３５日間及び４０日間からなる群から選択される期間にわたって増殖される、プロセスを提供する。
【０２３７】
[00259]  一実施形態では、本発明は、ＴＩＬの集団を増殖させるプレＲＥＰプロセスであって、細胞培養培地中でＴＩＬの集団を１つ以上のカリウムチャネルアゴニストと接触させるステップを含み、細胞培養培地は、初期濃度１０００ＩＵ／ｍＬ〜６０００ＩＵ／ｍＬのＩＬ−２をさらに含み、１つ以上のカリウムチャネルアゴニストは、ＫＣａ３．１（ＩＫチャネル）アゴニストを含み、ＴＩＬの集団は、１日未満、２日未満、３日未満、４日未満、５日未満、６日未満、７日未満、８日未満、９日未満、１０日未満、１１日未満、１２日未満、１３日未満、１４日未満、１５日未満、１６日未満、１７日未満、１８日未満、１９日未満、２０日未満、２１日未満、２５日未満、３０日未満、３５日未満及び４０日未満からなる群から選択される期間にわたって増殖される、プロセスを提供する。
【０２３８】
[00260]  一実施形態では、本発明は、ＴＩＬの集団を増殖させる方法であって、細胞培養培地中でＴＩＬの集団を１つ以上のカリウムチャネルアゴニストと接触させるステップを含み、細胞培養培地は、初期濃度１０００ＩＵ／ｍＬ〜６０００ＩＵ／ｍＬのＩＬ−２及び初期濃度約３０ｎｇ／ｍＬのＯＫＴ−３抗体をさらに含む、方法を提供する。
【０２３９】
[00261]  一実施形態では、本発明は、ＴＩＬの集団を増殖させるためのＲＥＰプロセスであって、細胞培養培地中でＴＩＬの集団を１つ以上のカリウムチャネルアゴニストと接触させるステップを含み、細胞培養培地は、初期濃度約６０００ＩＵ／ｍＬのＩＬ−２及び初期濃度約３０ｎｇ／ｍＬのＯＫＴ−３抗体をさらに含む、プロセスを提供する。
【０２４０】
[00262]  一実施形態では、本発明は、ＴＩＬの集団を増殖させるためのＲＥＰプロセスであって、細胞培養培地中でＴＩＬの集団を１つ以上のカリウムチャネルアゴニストと接触させるステップを含み、細胞培養培地は、初期濃度約６０００ＩＵ／ｍＬのＩＬ−２及び初期濃度約３０ｎｇ／ｍＬのＯＫＴ−３抗体をさらに含み、１つ以上のカリウムチャネルアゴニストは、ＫＣａ３．１（ＩＫチャネル）アゴニストを含む、プロセスを提供する。
【０２４１】
[00263]  一実施形態では、本発明は、ＴＩＬの集団を増殖させるためのＲＥＰプロセスであって、細胞培養培地中でＴＩＬの集団を１つ以上のカリウムチャネルアゴニストと接触させるステップを含み、細胞培養培地は、初期濃度１０００ＩＵ／ｍＬ〜６０００ＩＵ／ｍＬのＩＬ−２及び初期濃度約３０ｎｇ／ｍＬのＯＫＴ−３抗体をさらに含み、１つ以上のカリウムチャネルアゴニストは、１ピコモル（ｐＭ）〜１０００ｐＭ、１ｐＭ〜５００ｐＭ、５０ｐＭ〜４５０ｐＭ、１００ｐＭ〜４００ｐＭ、１５０ｐＭ〜３５０ｐＭ、２００ｐＭ〜３００ｐＭ、５５０ｐＭ〜９５０ｐＭ、６００ｐＭ〜９００ｐＭ、６５０ｐＭ〜８５０ｐＭ、７００ｐＭ〜８００ｐＭ、１ナノモル（ｎＭ）〜１０００ｎＭ、１ｎＭ〜５００ｎＭ、５０ｎＭ〜４５０ｎＭ、１００ｎＭ〜４００ｎＭ、１５０ｎＭ〜３５０ｎＭ、２００ｎＭ〜３００ｎＭ、５５０ｎＭ〜９５０ｎＭ、６００ｎＭ〜９００ｎＭ、６５０ｎＭ〜８５０ｎＭ、７００ｎＭ〜８００ｎＭ、１００ｎＭ〜５００ｎＭ、２００ｎＭ〜５００ｎＭ、３００ｎＭ〜５００ｎＭ、４００ｎＭ〜５００ｎＭ、５００ｎＭ〜６００ｎＭ、６００ｎＭ〜７００ｎＭ、７００ｎＭ〜８００ｎＭ、２５０ｎＭ〜５００ｎＭ、１０ｎＭ〜２００ｎＭ、５０ｎＭ〜２００ｎＭ、１マイクロモル（μＭ）〜１０００μＭ、１μＭ〜５００μＭ、５０μＭ〜４５０μＭ、１００μＭ〜４００μＭ、１５０μＭ〜３５０μＭ、２００μＭ〜３００μＭ、５５０μＭ〜９５０μＭ、６００μＭ〜９００μＭ、６５０μＭ〜８５０μＭ、７００μＭ〜８００μＭ、１００μＭ〜５００μＭ、２００μＭ〜５００μＭ、３００μＭ〜５００μＭ、４００μＭ〜５００μＭ、５００μＭ〜６００μＭ、６００μＭ〜７００μＭ、７００μＭ〜８００μＭ、２５０μＭ〜５００μＭ、１０μＭ〜２００μＭ、５０μＭ〜２００μＭ、１ミリモル（ｍＭ）〜１０００ｍＭ、１ｍＭ〜５００ｍＭ、５０ｍＭ〜４５０ｍＭ、１００ｍＭ〜４００ｍＭ、１５０ｍＭ〜３５０ｍＭ、２００ｍＭ〜３００ｍＭ、５５０ｍＭ〜９５０ｍＭ、６００ｍＭ〜９００ｍＭ、６５０ｍＭ〜８５０ｍＭ、７００ｍＭ〜８００ｍＭ、１００ｍＭ〜５００ｍＭ、２００ｍＭ〜５００ｍＭ、３００ｍＭ〜５００ｍＭ、４００ｍＭ〜５００ｍＭ、５００ｍＭ〜６００ｍＭ、６００ｍＭ〜７００ｍＭ、７００ｍＭ〜８００ｍＭ、２５０ｍＭ〜５００ｍＭ、１０ｍＭ〜２００ｍＭ及び５０ｍＭ〜２００ｍＭからなる群から選択される濃度のＫＣａ３．１（ＩＫチャネル）アゴニストを含む、プロセスを提供する。
【０２４２】
[00264]  一実施形態では、本発明は、ＴＩＬの集団を増殖させるためのＲＥＰプロセスであって、細胞培養培地中でＴＩＬの集団を１つ以上のカリウムチャネルアゴニストと接触させるステップを含み、細胞培養培地は、初期濃度１０００ＩＵ／ｍＬ〜６０００ＩＵ／ｍＬのＩＬ−２及び初期濃度約３０ｎｇ／ｍＬのＯＫＴ−３抗体をさらに含み、１つ以上のカリウムチャネルアゴニストは、１ナノモル（ｎＭ）〜１００ｎＭ、１００ｎＭ〜２００ｎＭ、２００ｎＭ〜３００ｎＭ、３００ｎＭ〜４００ｎＭ、４００ｎＭ〜５００ｎＭ、５００ｎＭ〜６００ｎＭ、６００ｎＭ〜７００ｎＭ、７００ｎＭ〜８００ｎＭ、８００ｎＭ〜９００ｎＭ、９００ｎＭ〜１マイクロモル（μＭ）、１μＭ〜２μＭ、２μＭ〜５μＭ、５μＭ〜１０μＭ、１０μＭ〜１００μＭ、１００μＭ〜２００μＭ、２００μＭ〜３００μＭ、３００μＭ〜４００μＭ、４００μＭ〜５００μＭ、５００μＭ〜６００μＭ、６００μＭ〜７００μＭ、７００μＭ〜８００μＭ、８００μＭ〜９００μＭ、９００μＭ〜１ｍＭ、１ｍＭ〜１０ｍＭ、１０ｍＭ〜１００ｍＭ、１００ｍＭ〜２００ｍＭ、２００ｍＭ〜３００ｍＭ、３００ｍＭ〜４００ｍＭ及び４００ｍＭ〜５００ｍＭからなる群から選択される濃度のＫＣａ３．１（ＩＫチャネル）アゴニストを含む、プロセスを提供する。
【０２４３】
[00265]  一実施形態では、本発明は、ＴＩＬの集団を増殖させるためのＲＥＰプロセスであって、細胞培養培地中でＴＩＬの集団を１つ以上のカリウムチャネルアゴニストと接触させるステップを含み、細胞培養培地は、初期濃度１０００ＩＵ／ｍＬ〜６０００ＩＵ／ｍＬのＩＬ−２及び初期濃度約３０ｎｇ／ｍＬのＯＫＴ−３抗体をさらに含み、１つ以上のカリウムチャネルアゴニストは、約１ｐＭ、約５０ｐＭ、約１００ｐＭ、約１５０ｐＭ、約２００ｐＭ、約２５０ｐＭ、約３００ｐＭ、約３５０ｐＭ、約４００ｐＭ、約４５０ｐＭ、約５００ｐＭ、約５５０ｐＭ、約６００ｐＭ、約６５０ｐＭ、約７００ｐＭ、約７５０ｐＭ、約８００ｐＭ、約８５０ｐＭ、約９００ｐＭ、約９５０ｐＭ、約１ｎＭ、約２５ｎＭ、約５０ｎＭ、約７５ｎＭ、約１００ｎＭ、約１２５ｎＭ、約１５０ｎＭ、約１７５ｎＭ、約２００ｎＭ、約２２５ｎＭ、約２５０ｎＭ、約２７５ｎＭ、約３００ｎＭ、約３２５ｎＭ、約３５０ｎＭ、約３７５ｎＭ、約４００ｎＭ、約４２５ｎＭ、約４５０ｎＭ、約４７５ｎＭ、約５００ｎＭ、約５２５ｎＭ、約５５０ｎＭ、約５７５ｎＭ、約６００ｎＭ、約６２５ｎＭ、約６５０ｎＭ、約６７５ｎＭ、約７００ｎＭ、約７５０ｎＭ、約８００ｎＭ、約８５０ｎＭ、約９００ｎＭ、約９５０ｎＭ、約１μＭ、約２μＭ、約５μＭ、約１０μＭ、約２０μＭ、約３０μＭ、約４０μＭ、約５０μＭ、約６０μＭ、約７０μＭ、約８０μＭ、約９０μＭ、約１００μＭ、約１２５μＭ、約１５０μＭ、約１７５μＭ、約２００μＭ、約２２５μＭ、約２５０μＭ、約２７５μＭ、約３００μＭ、約３２５μＭ、約３５０μＭ、約３７５μＭ、約４００μＭ、約４２５μＭ、約４５０μＭ、約５００μＭ、約５５０μＭ、約６００μＭ、約６５０μＭ、約７００μＭ、約７５０μＭ、約８００μＭ、約８５０μＭ、約９００μＭ、約９５０μＭ、約１ミリモル（ｍＭ）、約２ｍＭ、約５ｍＭ、約１０ｍＭ、約２５ｍＭ、約３０ｍＭ、約３５ｍＭ、約４０ｍＭ、約４５ｍＭ、約５０ｍＭ、約５５ｍＭ、約６０ｍＭ、約６５ｍＭ、約７０ｍＭ、約７５ｍＭ、約８０ｍＭ、約８５ｍＭ、約９０ｍＭ、約９５ｍＭ、約１００ｍＭ、約１２５ｍＭ、約１５０ｍＭ、約１７５ｍＭ、約２００ｍＭ、約３００ｍＭ、約４００ｍＭ及び約５００ｍＭからなる群から選択される濃度のＫＣａ３．１（ＩＫチャネル）アゴニストを含む、プロセスを提供する。
【０２４４】
[00266]  一実施形態では、本発明は、ＴＩＬの集団を増殖させるためのＲＥＰプロセスであって、細胞培養培地中でＴＩＬの集団を１つ以上のカリウムチャネルアゴニストと接触させるステップを含み、細胞培養培地は、初期濃度１０００ＩＵ／ｍＬ〜６０００ＩＵ／ｍＬのＩＬ−２及び初期濃度約３０ｎｇ／ｍＬのＯＫＴ−３抗体をさらに含み、１つ以上のカリウムチャネルアゴニストは、１ｐＭ超、５０ｐＭ超、１００ｐＭ超、１５０ｐＭ超、２００ｐＭ超、２５０ｐＭ超、３００ｐＭ超、３５０ｐＭ超、４００ｐＭ超、４５０ｐＭ超、５００ｐＭ超、５５０ｐＭ超、６００ｐＭ超、６５０ｐＭ超、７００ｐＭ超、７５０ｐＭ超、８００ｐＭ超、８５０ｐＭ超、９００ｐＭ超、９５０ｐＭ超、１ｎＭ超、２５ｎＭ超、５０ｎＭ超、７５ｎＭ超、１００ｎＭ超、１２５ｎＭ超、１５０ｎＭ超、１７５ｎＭ超、２００ｎＭ超、２２５ｎＭ超、２５０ｎＭ超、２７５ｎＭ超、３００ｎＭ超、３２５ｎＭ超、３５０ｎＭ超、３７５ｎＭ超、４００ｎＭ超、４２５ｎＭ超、４５０ｎＭ超、４７５ｎＭ超、５００ｎＭ超、５２５ｎＭ超、５５０ｎＭ超、５７５ｎＭ超、６００ｎＭ超、６２５ｎＭ超、６５０ｎＭ超、６７５ｎＭ超、７００ｎＭ超、７５０ｎＭ超、８００ｎＭ超、８５０ｎＭ超、９００ｎＭ超、９５０ｎＭ超、１μＭ超、２μＭ超、５μＭ超、１０μＭ超、２０μＭ超、３０μＭ超、４０μＭ超、５０μＭ超、６０μＭ超、７０μＭ超、８０μＭ超、９０μＭ超、１００μＭ超、１２５μＭ超、１５０μＭ超、１７５μＭ超、２００μＭ超、２２５μＭ超、２５０μＭ超、２７５μＭ超、３００μＭ超、３２５μＭ超、３５０μＭ超、３７５μＭ超、４００μＭ超、４２５μＭ超、４５０μＭ超、５００μＭ超、５５０μＭ超、６００μＭ超、６５０μＭ超、７００μＭ超、７５０μＭ超、８００μＭ超、８５０μＭ超、９００μＭ超、９５０μＭ超、１ミリモル（ｍＭ）超、２ｍＭ超、５ｍＭ超、１０ｍＭ超、２５ｍＭ超、３０ｍＭ超、３５ｍＭ超、４０ｍＭ超、４５ｍＭ超、５０ｍＭ超、５５ｍＭ超、６０ｍＭ超、６５ｍＭ超、７０ｍＭ超、７５ｍＭ超、８０ｍＭ超、８５ｍＭ超、９０ｍＭ超、９５ｍＭ超、１００ｍＭ超、１２５ｍＭ超、１５０ｍＭ超、１７５ｍＭ超、２００ｍＭ超、３００ｍＭ超、４００ｍＭ超及び５００ｍＭ超からなる群から選択される濃度のＫＣａ３．１（ＩＫチャネル）アゴニストを含む、プロセスを提供する。
【０２４５】
[00267]  一実施形態では、本発明は、ＴＩＬの集団を増殖させるためのＲＥＰプロセスであって、細胞培養培地中でＴＩＬの集団を１つ以上のカリウムチャネルアゴニストと接触させるステップを含み、細胞培養培地は、初期濃度１０００ＩＵ／ｍＬ〜６０００ＩＵ／ｍＬのＩＬ−２及び初期濃度約３０ｎｇ／ｍＬのＯＫＴ−３抗体をさらに含み、１つ以上のカリウムチャネルアゴニストは、１ｐＭ未満、５０ｐＭ未満、１００ｐＭ未満、１５０ｐＭ未満、２００ｐＭ未満、２５０ｐＭ未満、３００ｐＭ未満、３５０ｐＭ未満、４００ｐＭ未満、４５０ｐＭ未満、５００ｐＭ未満、５５０ｐＭ未満、６００ｐＭ未満、６５０ｐＭ未満、７００ｐＭ未満、７５０ｐＭ未満、８００ｐＭ未満、８５０ｐＭ未満、９００ｐＭ未満、９５０ｐＭ未満、１ｎＭ未満、２５ｎＭ未満、５０ｎＭ未満、７５ｎＭ未満、１００ｎＭ未満、１２５ｎＭ未満、１５０ｎＭ未満、１７５ｎＭ未満、２００ｎＭ未満、２２５ｎＭ未満、２５０ｎＭ未満、２７５ｎＭ未満、３００ｎＭ未満、３２５ｎＭ未満、３５０ｎＭ未満、３７５ｎＭ未満、４００ｎＭ未満、４２５ｎＭ未満、４５０ｎＭ未満、４７５ｎＭ未満、５００ｎＭ未満、５２５ｎＭ未満、５５０ｎＭ未満、５７５ｎＭ未満、６００ｎＭ未満、６２５ｎＭ未満、６５０ｎＭ未満、６７５ｎＭ未満、７００ｎＭ未満、７５０ｎＭ未満、８００ｎＭ未満、８５０ｎＭ未満、９００ｎＭ未満、９５０ｎＭ未満、１μＭ未満、２μＭ未満、５μＭ未満、１０μＭ未満、２０μＭ未満、３０μＭ未満、４０μＭ未満、５０μＭ未満、６０μＭ未満、７０μＭ未満、８０μＭ未満、９０μＭ未満、１００μＭ未満、１２５μＭ未満、１５０μＭ未満、１７５μＭ未満、２００μＭ未満、２２５μＭ未満、２５０μＭ未満、２７５μＭ未満、３００μＭ未満、３２５μＭ未満、３５０μＭ未満、３７５μＭ未満、４００μＭ未満、４２５μＭ未満、４５０μＭ未満、５００μＭ未満、５５０μＭ未満、６００μＭ未満、６５０μＭ未満、７００μＭ未満、７５０μＭ未満、８００μＭ未満、８５０μＭ未満、９００μＭ未満、９５０μＭ未満、１ミリモル（ｍＭ）未満、２ｍＭ未満、５ｍＭ未満、１０ｍＭ未満、２５ｍＭ未満、３０ｍＭ未満、３５ｍＭ未満、４０ｍＭ未満、４５ｍＭ未満、５０ｍＭ未満、５５ｍＭ未満、６０ｍＭ未満、６５ｍＭ未満、７０ｍＭ未満、７５ｍＭ未満、８０ｍＭ未満、８５ｍＭ未満、９０ｍＭ未満、９５ｍＭ未満、１００ｍＭ未満、１２５ｍＭ未満、１５０ｍＭ未満、１７５ｍＭ未満、２００ｍＭ未満、３００ｍＭ未満、４００ｍＭ未満及び５００ｍＭ未満からなる群から選択される濃度のＫＣａ３．１（ＩＫチャネル）アゴニストを含む、プロセスを提供する。
【０２４６】
[00268]  一実施形態では、本発明は、腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）の集団を増殖させるＲＥＰプロセスであって、細胞培養培地中でＴＩＬの集団を１つ以上のカリウムチャネルアゴニストと接触させるステップを含み、ＴＩＬの集団は、細胞培養培地中で７日間にわたって少なくとも５０倍に増殖される、プロセスを提供する。
【０２４７】
[00269]  一実施形態では、本発明は、腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）の集団を増殖させるＲＥＰプロセスであって、細胞培養培地中でＴＩＬの集団を１つ以上のカリウムチャネルアゴニストと接触させるステップを含み、ＴＩＬの集団は、細胞培養培地中で７日間にわたって少なくとも５０倍に増殖され、増殖は、ガス透過性容器を使用して行われる、プロセスを提供する。
【０２４８】
[00270]  一実施形態では、本発明は、腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）の集団を増殖させるＲＥＰプロセスであって、細胞培養培地中でＴＩＬの集団を１つ以上のカリウムチャネルアゴニストと接触させるステップを含み、ＴＩＬの集団は、細胞培養培地中で７日間にわたって少なくとも５０倍に増殖され、増殖は、ガス透過性容器を使用して行われ、ガス透過性容器は、ガス透過性バッグ又はガス透過性フラスコである、プロセスを提供する。
【０２４９】
[00271]  一実施形態では、本発明は、ＴＩＬの集団を増殖させるＲＥＰプロセスであって、細胞培養培地中でＴＩＬの集団を１つ以上のカリウムチャネルアゴニストと接触させるステップを含み、細胞培養培地は、初期濃度１０００ＩＵ／ｍＬ〜６０００ＩＵ／ｍＬのＩＬ−２及び初期濃度約３０ｎｇ／ｍＬのＯＫＴ−３抗体をさらに含み、１つ以上のカリウムチャネルアゴニストは、ＫＣａ３．１（ＩＫチャネル）アゴニストを含み、ＴＩＬの集団は、１日間、２日間、３日間、４日間、５日間、６日間、７日間、８日間、９日間、１０日間、１１日間、１２日間、１３日間、１４日間、１５日間、１６日間、１７日間、１８日間、１９日間、２０日間、２１日間、２５日間、３０日間、３５日間及び４０日間からなる群から選択される期間にわたって急速に増殖される、プロセスを提供する。
【０２５０】
[00272]  一実施形態では、本発明は、ＴＩＬの集団を増殖させるＲＥＰプロセスであって、細胞培養培地中でＴＩＬの集団を１つ以上のカリウムチャネルアゴニストと接触させるステップを含み、細胞培養培地は、初期濃度１０００ＩＵ／ｍＬ〜６０００ＩＵ／ｍＬのＩＬ−２及び初期濃度約３０ｎｇ／ｍＬのＯＫＴ−３抗体をさらに含み、１つ以上のカリウムチャネルアゴニストは、ＫＣａ３．１（ＩＫチャネル）アゴニストを含み、ＴＩＬの集団は、１日未満、２日未満、３日未満、４日未満、５日未満、６日未満、７日未満、８日未満、９日未満、１０日未満、１１日未満、１２日未満、１３日未満、１４日未満、１５日未満、１６日未満、１７日未満、１８日未満、１９日未満、２０日未満、２１日未満、２５日未満、３０日未満、３５日未満及び４０日未満からなる群から選択される期間にわたって急速に増殖される、プロセスを提供する。
【０２５１】
[00273]  一実施形態では、ＲＥＰは、任意の適切な方法によって本開示のカリウムチャネルアゴニストを使用してガス透過性容器中で行うことができる。例えば、ＴＩＬは、インターロイキン−２（ＩＬ−２）又はインターロイキン−１５（ＩＬ−１５）の存在下での非特異的Ｔ細胞受容体刺激を用いて急速に増殖され得る。非特異的Ｔ細胞受容体刺激は、例えば、約３０ｎｇ／ｍＬのＯＫＴ−３、モノクローナル抗ＣＤ３抗体（Ortho-McNeil,Raritan, NJ又はMiltenyi Biotech, Auburn, CAから市販）を含み得る。ＴＩＬは、任意選択により３００ＩＵ／ｍＬのＩＬ−２又はＩＬ−１５などのＴ細胞成長因子の存在下において、任意選択によりヒト白血球抗原Ａ２（ＨＬＡ−Ａ２）結合ペプチド、例えば０．３μＭ  ＭＡＲＴ−１：２６−３５（２７Ｌ）又はｇｐｌ  ００：２０９−２１７（２１０Ｍ）などのベクターから発現させることができる、癌のエピトープなどのその抗原部分を含む１つ以上の抗原を用いてインビトロでＴＩＬをさらに刺激することによって急速増殖させることができる。他の適切な抗原としては、例えば、ＮＹ−ＥＳＯ−１、ＴＲＰ−１、ＴＲＰ−２、チロシナーゼ癌抗原、ＭＡＧＥ−Ａ３、ＳＳＸ−２及びＶＥＧＦＲ２又はそれらの抗原部分が挙げられ得る。ＴＩＬは、ＩＴＬＡ−Ａ２発現抗原提示細胞上にパルスされた癌の同じ抗原で再刺激することによっても急速増殖され得る。代替的に、ＴＩＬは、例えば、照射自己リンパ球又は照射ＩＴＬＡ−Ａ２＋同種異系リンパ球及びＩＬ−２でさらに再刺激することができる。
【０２５２】
[00274]  一実施形態では、ＴＩＬを増殖させるための方法は、約５０００ｍＬ〜約２５０００ｍＬの細胞培養培地、約５０００ｍＬ〜約１００００ｍＬの細胞培養培地又は約５８００ｍＬ〜約８７００ｍＬの細胞培養培地を使用することを含み得る。一実施形態では、ＴＩＬを増殖させるための方法は、約１０００ｍＬ〜約２０００ｍＬの細胞培地、約２０００ｍＬ〜約３０００ｍＬの細胞培養培地、約３０００ｍＬ〜約４０００ｍＬの細胞培養培地、約４０００ｍＬ〜約５０００ｍＬの細胞培養培地、約５０００ｍＬ〜約６０００ｍＬの細胞培養培地、約６０００ｍＬ〜約７０００ｍＬの細胞培養培地、約７０００ｍＬ〜約８０００ｍＬの細胞培養培地、約８０００ｍＬ〜約９０００ｍＬの細胞培養培地、約９０００ｍＬ〜約１００００ｍＬの細胞培養培地、約１００００ｍＬ〜約１５０００ｍＬの細胞培養培地、約１５０００ｍＬ〜約２００００ｍＬの細胞培養培地又は約２００００ｍＬ〜約２５０００ｍＬの細胞培養培地を使用することを含み得る。一実施形態では、ＴＩＬの数を増やすために１種類以下の細胞培養培地を使用する。任意の適切な細胞培養培地、例えばＡＩＭ−Ｖ細胞培地（Ｌ−グルタミン、５０μＭ硫酸ストレプトマイシン及び１０μＭ硫酸ゲンタマイシン）細胞培地（Invitrogen,Carlsbad CA）が使用され得る。これに関して、本発明の方法は、ＴＩＬの数を増やすために必要とされる培地の量及び培地の種類の数を有利に減少させる。一実施形態では、ＴＩＬの数を増やすことは、３日又は４日に１回以下の頻度で細胞にフィードすることを含み得る。ガス透過性容器内の細胞数を増やすことは、細胞を増殖させるのに必要なフィード頻度を減らすことによって細胞数を増やすのに必要な手順を単純化する。
【０２５３】
[00275]  一実施形態では、急速増殖は、ガス透過性容器を使用して行われる。そのような実施形態は、細胞集団が約５×１０５細胞／ｃｍ２から１０×１０６〜３０×１０６細胞／ｃｍ２に増殖することを可能にする。一実施形態では、この増殖は、フィードなしで発生する。一実施形態では、この増殖は、培地がガス透過性フラスコ内で約１０ｃｍの高さにある限り、フィードなしで発生する。一実施形態では、これは、フィードなしであるが、１つ以上のサイトカインの添加を伴う。一実施形態では、サイトカインを培地と混合する必要なく、サイトカインをボーラスとして添加することができる。そのような容器、装置及び方法は、当技術分野において公知であり、ＴＩＬの増殖に使用されており、米国特許出願公開第２０１４／０３７７７３９Ａ１号、国際公開第２０１４／２１００３６Ａ１号、米国特許出願公開第２０１３／０１１５６１７Ａ１号、国際公開第２０１３／１８８４２７Ａ１号、米国特許出願公開第２０１１／０１３６２２８Ａ１号、米国特許第８，８０９，０５０号、国際公開第２０１１／０７２０８８Ａ２号、米国特許出願公開第２０１６／０２０８２１６Ａ１号、米国特許出願公開第２０１２／０２４４１３３Ａ１号、国際公開第２０１２／１２９２０１Ａ１号、米国特許出願公開第２０１３／０１０２０７５Ａ１号、米国特許第８，９５６，８６０号、国際公開第２０１３／１７３８３５Ａ１号及び米国特許出願公開第２０１５／０１７５９６６Ａ１号に記載されているものを含み、その開示は、参照により本明細書に組み込まれる。そのようなプロセスは、Jin,et al., J. Immunotherapy 2012, 35, 283-292にも記載され、その開示は、参照により本明細書に組み込まれる。
【０２５４】
[00276]  一実施形態では、ガス透過性容器は、G-Rex 10フラスコ（Wilson Wolf ManufacturingCorporation, New Brighton, MN, USA）である。一実施形態では、ガス透過性容器は、１０ｃｍ２のガス透過性培養表面を含む。一実施形態では、ガス透過性容器は、４０ｍＬの細胞培養培地容量を含む。一実施形態では、ガス透過性容器は、２回の培地交換後、１億〜３億のＴＩＬを提供する。
【０２５５】
[00277]  一実施形態では、ガス透過性容器は、G-Rex 100フラスコ（Wilson Wolf ManufacturingCorporation, New Brighton, MN, USA）である。一実施形態では、ガス透過性容器は、１００ｃｍ２のガス透過性培養表面を含む。一実施形態では、ガス透過性容器は、４５０ｍＬの細胞培養培地容量を含む。一実施形態では、ガス透過性容器は、２回の培地交換後、１０億〜３０億のＴＩＬを提供する。
【０２５６】
[00278]  一実施形態では、ガス透過性容器は、G-Rex 100Mフラスコ（Wilson Wolf ManufacturingCorporation, New Brighton, MN, USA）である。一実施形態では、ガス透過性容器は、１００ｃｍ２のガス透過性培養表面を含む。一実施形態では、ガス透過性容器は、１０００ｍＬの細胞培養培地容量を含む。一実施形態では、ガス透過性容器は、培地交換なしで１０億〜３０億のＴＩＬを提供する。
【０２５７】
[00279]  一実施形態では、ガス透過性容器は、G-Rex 100Lフラスコ（Wilson Wolf ManufacturingCorporation, New Brighton, MN, USA）である。一実施形態では、ガス透過性容器は、１００ｃｍ２のガス透過性培養表面を含む。一実施形態では、ガス透過性容器は、２０００ｍＬの細胞培養培地容量を含む。一実施形態では、ガス透過性容器は、培地交換なしで１０億〜３０億のＴＩＬを提供する。
【０２５８】
[00280]  一実施形態では、ガス透過性容器は、G-Rex 24ウェルプレート（Wilson Wolf ManufacturingCorporation, New Brighton, MN, USA）である。一実施形態では、ガス透過性容器は、ウェルを有するプレートを含み、各ウェルは、２ｃｍ２のガス透過性培養表面を含む。一実施形態では、ガス透過性容器は、ウェルを有するプレートを含み、各ウェルは、８ｍＬの細胞培養培地容量を含む。一実施形態では、ガス透過性容器は、２回の培地交換後、１ウェルあたり２０００万〜６０００万個の細胞を提供する。
【０２５９】
[00281]  一実施形態では、ガス透過性容器は、G-Rex 6ウェルプレート（Wilson Wolf ManufacturingCorporation, New Brighton, MN, USA）である。一実施形態では、ガス透過性容器は、ウェルを有するプレートを含み、各ウェルは、１０ｃｍ２のガス透過性培養表面を含む。一実施形態では、ガス透過性容器は、ウェルを有するプレートを含み、各ウェルは、４０ｍＬの細胞培養培地容量を含む。一実施形態では、ガス透過性容器は、２回の培地交換後、１ウェルあたり１億〜３億個の細胞を提供する。
【０２６０】
[00282]  一実施形態では、第１及び／又は第２のガス透過性容器内の細胞培地は、濾過されていない。濾過されていない細胞培地の使用は、細胞数を増殖させるために必要な手順を単純化し得る。一実施形態では、第１及び／又は第２のガス透過性容器内の細胞培地は、ベータ−メルカプトエタノール（ＢＭＥ）を欠いている。
【０２６１】
[00283]  一実施形態では、本方法の期間は、哺乳動物から腫瘍組織サンプルを取得すること；細胞培地を中に含有する第１のガス透過性容器中で腫瘍組織サンプルを培養すること；腫瘍組織サンプルからＴＩＬを取得すること；カリウムチャネルアゴニストを使用して、細胞培地をその中に含有する第２のガス透過性容器中のＴＩＬの数を約１４〜約４２日の期間、例えば約２８日間にわたって増やすことを含む。
【０２６２】
[00284]  一実施形態では、急速増殖におけるＴＩＬ対カリウムチャネルアゴニスト（細胞対モル）の比は、約１：０．０００００００１、約１：０．００００００１、約１：０．０００００１、約１：０．００００１、約１：０．０００１、約１：０．００１、約１：０．０１、約１：０．０１、約１：０．１又は約１：１である。一実施形態では、急速増殖におけるＴＩＬ対カリウムチャネルアゴニストのモル数の比は、１：０．０００００００１〜１：０．０００１である。一実施形態では、急速増殖におけるＴＩＬ対カリウムチャネルアゴニストの比は、１：０．０００００００１〜１：０．０００００１である。
【０２６３】
[00285]  一実施形態では、ＴＩＬ対カリウムチャネルアゴニストの比（ＴＩＬ：カリウムチャネルアゴニスト、細胞対分子）は、約１：１〜約１：１０、約１：１０〜約１：１００、約１：１００〜約１：１０００、約１：１０００〜約１：１０４、約１：１０４〜約１：１０５、約１：１０５〜約１：１０６、約１：１０６〜約１：１０７、約１：１０７〜約１：１０８及び約１：１０８〜約１：１０９からなる群から選択される。
【０２６４】
[00286]  一実施形態では、細胞培養培地は、ＩＬ−２を含む。好ましい一実施形態では、細胞培養培地は、約３０００ＩＵ／ｍＬのＩＬ−２を含む。一実施形態では、細胞培養培地は、約１０００ＩＵ／ｍＬ、約１５００ＩＵ／ｍＬ、約２０００ＩＵ／ｍＬ、約２５００ＩＵ／ｍＬ、約３０００ＩＵ／ｍＬ、約３５００ＩＵ／ｍＬ、約４０００ＩＵ／ｍＬ、約４５００ＩＵ／ｍＬ、約５０００ＩＵ／ｍＬ、約５５００ＩＵ／ｍＬ、約６０００ＩＵ／ｍＬ、約６５００ＩＵ／ｍＬ、約７０００ＩＵ／ｍＬ、約７５００ＩＵ／ｍＬ又は約８０００ＩＵ／ｍＬのＩＬ−２を含む。一実施形態では、細胞培養培地は、１０００〜２０００ＩＵ／ｍＬ、２０００〜３０００ＩＵ／ｍＬ、３０００〜４０００ＩＵ／ｍＬ、４０００〜５０００ＩＵ／ｍＬ、５０００〜６０００ＩＵ／ｍＬ、６０００〜７０００ＩＵ／ｍＬ、７０００〜８０００ＩＵ／ｍＬ又は８０００ＩＵ／ｍＬのＩＬ−２を含む。
【０２６５】
[00287]  一実施形態では、細胞培養培地は、ＯＫＴ−３抗体を含む。好ましい一実施形態では、細胞培養培地は、約３０ｎｇ／ｍＬのＯＫＴ−３抗体を含む。一実施形態では、細胞培養培地は、約０．１ｎｇ／ｍＬ、約０．５ｎｇ／ｍＬ、約１ｎｇ／ｍＬ、約２．５ｎｇ／ｍＬ、約５ｎｇ／ｍＬ、約７．５ｎｇ／ｍＬ、約１０ｎｇ／ｍＬ、約１５ｎｇ／ｍＬ、約２０ｎｇ／ｍＬ、約２５ｎｇ／ｍＬ、約３０ｎｇ／ｍＬ、約３５ｎｇ／ｍＬ、約４０ｎｇ／ｍＬ、約５０ｎｇ／ｍＬ、約６０ｎｇ／ｍＬ、約７０ｎｇ／ｍＬ、約８０ｎｇ／ｍＬ、約９０ｎｇ／ｍＬ、約１００ｎｇ／ｍＬ、約２００ｎｇ／ｍＬ、約５００ｎｇ／ｍＬ及び約１μｇ／ｍＬのＯＫＴ−３抗体を含む。一実施形態では、細胞培養培地は、０．１ｎｇ／ｍＬ〜１ｎｇ／ｍＬ、１ｎｇ／ｍＬ〜５ｎｇ／ｍＬ、５ｎｇ／ｍＬ〜１０ｎｇ／ｍＬ、１０ｎｇ／ｍＬ〜２０ｎｇ／ｍＬ、２０ｎｇ／ｍＬ〜３０ｎｇ／ｍＬ、３０ｎｇ／ｍＬ〜４０ｎｇ／ｍＬ、４０ｎｇ／ｍＬ〜５０ｎｇ／ｍＬ及び５０ｎｇ／ｍＬ〜１００ｎｇ／ｍＬのＯＫＴ−３抗体を含む。
【０２６６】
[00288]  一実施形態では、ＴＩＬは、ガス透過性容器内で増殖される。米国特許出願公開米国特許出願公開第２００５／０１０６７１７Ａ１号に記載されているものを含む当技術分野で公知の方法、組成物及び装置を使用して、ＰＢＭＣを使用してＴＩＬを増殖させるために、ガス透過性容器が使用されており、その開示は、参照により本明細書に組み込まれる。一実施形態では、ＴＩＬは、ガス透過性バッグ内で増殖される。一実施形態では、ＴＩＬは、XuriCell Expansion System W25（GE Healthcare）など、ガス透過性バッグ内でＴＩＬを増殖させる細胞増殖システムを使用して増殖される。一実施形態では、ＴＩＬは、XuriCell Expansion System W5（GE Healthcare）としても知られるWAVE Bioreactor Systemなど、ガス透過性バッグ内でＴＩＬを増殖させる細胞増殖システムを使用して増殖される。一実施形態では、細胞増殖システムは、約１００ｍＬ、約２００ｍＬ、約３００ｍＬ、約４００ｍＬ、約５００ｍＬ、約６００ｍＬ、約７００ｍＬ、約８００ｍＬ、約９００ｍＬ、約１Ｌ、約２Ｌ、約３Ｌ、約４Ｌ、約５Ｌ、約６Ｌ、約７Ｌ、約８Ｌ、約９Ｌ、約１０Ｌ、約１１Ｌ、約１２Ｌ、約１３Ｌ、約１４Ｌ、約１５Ｌ、約１６Ｌ、約１７Ｌ、約１８Ｌ、約１９Ｌ、約２０Ｌ、約２５Ｌ及び約３０Ｌからなる群から選択される容積を有するガス透過性細胞バッグを含む。一実施形態では、細胞増殖システムは、５０〜１５０ｍＬ、１５０〜２５０ｍＬ、２５０〜３５０ｍＬ、３５０〜４５０ｍＬ、４５０〜５５０ｍＬ、５５０〜６５０ｍＬ、６５０〜７５０ｍＬ、７５０〜８５０ｍＬ、８５０〜９５０ｍＬ及び９５０〜１０５０ｍＬからなる群から選択される範囲の容積を有するガス透過性細胞バッグを含む。一実施形態では、細胞増殖システムは、１Ｌ〜２Ｌ、２Ｌ〜３Ｌ、３Ｌ〜４Ｌ、４Ｌ〜５Ｌ、５Ｌ〜６Ｌ、６Ｌ〜７Ｌ、７Ｌ〜８Ｌ、８Ｌ〜９Ｌ、９Ｌ〜１０Ｌ、１０Ｌ〜１１Ｌ、１１Ｌ〜１２Ｌ、１２Ｌ〜１３Ｌ、１３Ｌ〜１４Ｌ、１４Ｌ〜１５Ｌ、１５Ｌ〜１６Ｌ、１６Ｌ〜１７Ｌ、１７Ｌ〜１８Ｌ、１８Ｌ〜１９Ｌ及び１９Ｌ〜２０Ｌからなる群から選択される範囲の容積を有するガス透過性細胞バッグを含む。一実施形態では、細胞増殖システムは、０．５Ｌ〜５Ｌ、５Ｌ〜１０Ｌ、１０Ｌ〜１５Ｌ、１５Ｌ〜２０Ｌ、２０Ｌ〜２５Ｌ及び２５Ｌ〜３０Ｌからなる群から選択される範囲の容積を有するガス透過性細胞バッグを含む。一実施形態では、細胞増殖システムは、約３０分、約１時間、約２時間、約３時間、約４時間、約５時間、約６時間、約７時間、約８時間、約９時間、約１０時間、約１１時間、約１２時間、約２４時間、約２日、約３日、約４日、約５日、約６日、約７日、約８日、約９日、約１０日、約１１日、約１２日、約１３日、約１４日、約１５日、約１６日、約１７日、約１８日、約１９日、約２０日、約２１日、約２２日、約２３日、約２４日、約２５日、約２６日、約２７日及び約２８日の揺動時間を用いる。一実施形態では、細胞増殖システムは、３０分〜１時間、１時間〜１２時間、１２時間〜１日、１日〜７日、７日〜１４日、１４日〜２１日及び２１日〜２８日の揺動時間を用いる。一実施形態では、細胞増殖システムは、約２揺動／分、約５揺動／分、約１０揺動／分、約２０揺動／分、約３０揺動／分及び約４０揺動／分の揺動速度を用いる。一実施形態では、細胞増殖システムは、２揺動／分〜５揺動／分、５揺動／分〜１０揺動／分、１０揺動／分〜２０揺動／分、２０揺動／分〜３０揺動／分及び３０揺動／分〜４０揺動／分の揺動速度を用いる。一実施形態では、細胞増殖システムは、約２°、約３°、約４°、約５°、約６°、約７°、約８°、約９°、約１０°、約１１°及び約１２°の揺動角を用いる。一実施形態では、細胞増殖システムは、２°〜３°、３°〜４°、４°〜５°、５°〜６°、６°〜７°、７°〜８°、８°〜９°、９°〜１０°、１０°〜１１°及び１１°〜１２°の揺動角を用いる。
【０２６７】
[00289]  一実施形態では、カリウムチャネルアゴニストを使用してＴＩＬを増殖させる方法は、ＴＩＬが優れた腫瘍反応性について選択されるステップをさらに含む。当技術分野で公知の任意の選択方法が使用され得る。例えば、その開示が参照により本明細書に組み込まれる米国特許出願公開第２０１６／００１００５８Ａ１号に記載されている方法は、優れた腫瘍反応性に関するＴＩＬの選択に使用され得る。
【０２６８】
[00290]  一実施形態では、本発明は、本開示のカリウムチャネルアゴニストのいずれかを使用してＴＩＬの集団を増殖させる方法を提供し、この方法は、Jin,et al., J. Immunotherapy 2012, 35, 283-292に記載されているようなステップを含み、その開示は、参照により本明細書に組み込まれる。例えば、腫瘍又はその一部を酵素培地に入れ、およそ１分間機械的に分離させ得る。次いで、混合物を５％ＣＯ２中３７℃で３０分間インキュベートし、次いでおよそ１分間再び機械的に破砕し得る。５％ＣＯ２中、３７℃で３０分間インキュベートした後、腫瘍又はその一部を３回目におよそ１分間機械的に破砕し得る。３回目の機械的破砕後、大きい組織片が存在する場合、５％ＣＯ２中、３７℃でさらに３０分のインキュベーションを伴って又は伴わず、１回又は２回のさらなる機械的分離をサンプルに適用し得る。最終インキュベーションの終わりに、細胞懸濁液が多数の赤血球又は死細胞を含有する場合、これらの細胞を除去するためにFicollを用いた密度勾配分離を行うことができる。ＴＩＬ培養は、２４ウェルプレート（Costar２４ウェル細胞培養クラスター、平底；CorningIncorporated, Corning, NY）で開始され、各ウェルに、ＩＬ−２（６０００ＩＵ／ｍＬ；Chiron Corp., Emeryville, CA）を含む２ｍＬの完全培地（ＣＭ）中、１×１０６個の腫瘍消化細胞又はおよそ１〜８ｍｍ３のサイズの１つの腫瘍断片が播種され得る。ＣＭは、１０％ヒトＡＢ血清、２５ｍＭ  Ｈｅｐｅｓ及び１０ｍｇ／ｍＬゲンタマイシンを添加した、GlutaMAXを含むRoswellPark Memorial Institute（ＲＰＭＩ）１６４０緩衝液を含む。培養は、４０ｍＬ容量及び１０ｃｍ２のガス透過性シリコン底を有するガス透過性フラスコ（G-Rex10；Wilson Wolf Manufacturing, New Brighton内で開始され得、各フラスコに、ＩＬ−２を含む１０〜４０ｍＬのＣＭ中、１０〜４０×１０６個の生存可能な腫瘍消化細胞又は５〜３０個の腫瘍断片が充填され得る。G-Rex10及び２４ウェルプレートは、５％ＣＯ２中３７℃において加湿インキュベーター内でインキュベートされ得、培養開始の５日後、培地の半分は、除去され、新鮮なＣＭ及びＩＬ−２と交換され得、５日目の後、培地の半分は、２〜３日ごとに交換され得る。本開示のカリウムチャネルアゴニストを使用して、本明細書の他の箇所に記載されるように、T-175フラスコ及びガス透過性バッグ又はガス透過性G-Rexフラスコを使用して、ＴＩＬの急速増殖プロトコル（ＲＥＰ）が行われ得る。Ｔ−１７５フラスコ中のＲＥＰでは、１×１０６個のＴＩＬが各フラスコ中の１５０ｍＬの培地に懸濁され得る。ＴＩＬは、３０００ＩＵ／ｍＬのＩＬ−２及び３０ｎｇ／ｍＬの抗ＣＤ３抗体（ＯＫＴ−３）を添加した、ＣＭ及びＡＩＭ−Ｖ培地の１：１混合物（５０／５０培地）中において、本明細書に記載の比率で本開示のカリウムチャネルアゴニストと共に培養され得る。T-175フラスコは、５％ＣＯ２中３７℃でインキュベートされ得る。培地の半分は、５日目に、３０００ＩＵ／ｍＬのＩＬ−２を含む５０／５０培地を用いて交換され得る。７日目に、２つのＴ−１７５フラスコからの細胞を３Ｌバッグ中で混合し、５％ヒトＡＢ血清を含む３００ｍＬのＡＩＭ−Ｖ及び３０００ＩＵ／ｍＬのＩＬ−２を３００ｍＬのＴＩＬ懸濁液に添加し得る。各バッグ中の細胞数を��日又は隔日で数えることができ、新鮮な培地を添加して細胞数を０．５〜２．０×１０６細胞／ｍＬに保ち得る。１００ｃｍ２のガス透過性シリコン底を有する５００ｍＬ容量のフラスコ（例えば、本明細書の他の箇所に記載されるように、G-Rex100, Wilson Wolf Manufacturing）中のＲＥＰでは、５×１０６又は１０×１０６個のＴＩＬは、３０００ＩＵ／ｍＬのＩＬ−２及び３０ｎｇ／ｍＬの抗ＣＤ３抗体（ＯＫＴ−３）を添加した、４００ｍＬの５０／５０培地中において、本明細書に記載の比率（例えば、１：１００）でカリウムチャネルアゴニストと共に培養され得る。G-Rex100フラスコは、５％ＣＯ２中３７℃でインキュベートされ得る。５日目に、２５０ｍＬの上清を取り出して遠心分離ボトルに入れ、１５００ｒｐｍ（４９１ｇ）で１０分間遠心分離し得る。得られたＴＩＬペレットを、３０００ＩＵ／ｍＬのＩＬ−２を含む１５０ｍＬの新鮮な５０／５０培地に再懸濁し、G-Rex100フラスコに戻し添加し得る。ＴＩＬをG-Rex 100フラスコ中で連続的に増殖させる場合、７日目に各G-Rex 100中のＴＩＬは各フラスコに存在する３００ｍＬの培地に懸濁され、細胞懸濁液は、３つのG-Rex100フラスコに接種するために使用され得る、３つの１００ｍＬアリコートに分割され得る。次いで、５％ヒトＡＢ血清を含む約１５０ｍＬのＡＩＭ−Ｖ及び１ｍＬあたり３０００ＵＩのＩＬ−２を各フラスコに添加し得る。次いで、G-Rex100フラスコを５％ＣＯ２中３７℃でインキュベートし、４日後、３０００ＩＵ／ｍＬのＩＬ−２を有する１５０ｍＬのＡＩＭ−Ｖを各G-Rex 100フラスコに加え得る。この後、培養１４日目に細胞を回収することによってＲＥＰが完了され得る。
【０２６９】
[00291]  一実施形態では、癌を増殖又は処置する方法は、ＴＩＬが患者の腫瘍サンプルから得られるステップを含む。患者の腫瘍サンプルは、当技術分野において公知の方法を使用して得られ得る。例えば、ＴＩＬは、酵素的腫瘍消化物及び鋭的切開による腫瘍断片（サイズ約１〜約８ｍｍ）から培養され得る。そのような腫瘍消化物は、酵素培地（例えば、RoswellPark Memorial Institute（ＲＰＭＩ）1640緩衝液、２ｍＭグルタメート、１０ｍｃｇ／ｍＬゲンタマイシン、３０Ｕｎｉｔ／ｍＬのＤＮａｓｅ及び１．０ｍｇ／ｍＬのコラゲナーゼ）中でのインキュベーション、続いて機械的分離（例えば、組織分離剤を使用）によって産生され得る。腫瘍を酵素培地に入れ、腫瘍をおよそ１分間機械的に分離させ、続いて５％ＣＯ２中３７℃で３０分間インキュベートし、続いて前述の条件下において、小さい組織片のみが存在するまで機械的分離及びインキュベーションのサイクルを反復することにより、腫瘍消化物が生成され得る。このプロセスの終わりに、細胞懸濁液が多数の赤血球又は死細胞を含有する場合、これらの細胞を除去するためにFICOLL分岐親水性多糖を用いた密度勾配分離を行うことができる。米国特許出願公開第２０１２／０２４４１３３Ａ１号に記載されているものなど、当技術分野で公知の代替的方法を使用し得、その開示は、参照により本明細書に組み込まれる。前述の任意の方法は、ＴＩＬを増殖させる方法又は癌を処置する方法のために本明細書に記載の任意の実施形態において使用され得る。
【０２７０】
[00292]  一実施形態では、前述のように、T-175フラスコ及びガス透過性バッグを使用して（Tran, et al, J.Immunother.2008, 31, 742-51；Dudley, et al, J. Immunother.2003, 26, 332-42）、又はガス透過性培養器具（G-Rexフラスコ、WilsonWolf Manufacturing Corporation, New Brighton, MN, USAから市販）を使用してＴＩＬの急速増殖プロセスが実施され得る。Ｔ−１７５フラスコ中のＴＩＬ急速増殖では、１５０ｍＬの培地中に懸濁した１×１０６個のＴＩＬが各Ｔ−１７５フラスコに添加され得る。ＴＩＬは、ＴＩＬ１対カリウムチャネルアゴニスト分子１００の比率で本開示のカリウムチャネルアゴニストと共に培養され得、細胞は、３０００ＩＵ（国際単位）／ｍＬのＩＬ−２及び３０ｎｇ／ｍＬの抗ＣＤ３抗体（例えば、ＯＫＴ−３）を添加した、ＣＭ及びＡＩＭ−Ｖ培地の１：１混合物中で培養され得る。T-175フラスコは、５％ＣＯ２中３７℃でインキュベートされ得る。培地の半分は、５日目に、１ｍＬあたり３０００ＩＵのＩＬ−２を含む５０／５０培地を用いて交換され得る。７日目に、２つのＴ−１７５フラスコからの細胞を３Ｌバッグ中で混合し、５％ヒトＡＢ血清を含む３００ｍＬのＡＩＭ−Ｖ及び１ｍＬあたり３０００ＩＵのＩＬ−２を３００ｍＬのＴＩＬ懸濁液に添加した。各バッグ中の細胞数を毎日又は隔日で数え、新鮮な培地を添加して細胞数を０．５〜２．０×１０６細胞／ｍＬに保った。
【０２７１】
[00293]  一実施形態では、１００ｃｍ２のガス透過性シリコン底を有する５００ｍＬ容量のガス透過性フラスコ（G-Rex100、Wilson Wolf Manufacturing Corporation, New Brighton, MN, USAから市販）中のＴＩＬ急速増殖では、５×１０６又は１０×１０６個のＴＩＬは、５％人ＡＢ血清、３０００ＩＵ／ｍＬのＩＬ−２及び３０ｎｇ／ｍＬの抗ＣＤ３（ＯＫＴ−３）を添加した、４００ｍＬの５０／５０培地中において、カリウムチャネルアゴニストと共に培養され得る。G-Rex100フラスコは、５％ＣＯ２中３７℃でインキュベートされ得る。５日目に、２５０ｍＬの上清を取り出して遠心分離ボトルに入れ、１５００ｒｐｍ（毎分回転数；４９１×ｇ）で１０分間遠心分離し得る。ＴＩＬペレットを、５％ヒトＡＢ血清、１ｍＬあたり３０００ＩＵのＩＬ−２を含む１５０ｍＬの新鮮培地で再懸濁し、元のG-Rex100フラスコに戻し添加し得る。ＴＩＬをG-Rex 100フラスコ中で連続的に増殖させる場合、７日目に、各G-Rex 100フラスコ中のＴＩＬは、各フラスコに存在する３００ｍＬの培地に懸濁され得、細胞懸濁液は、３つのG-Rex100フラスコに接種するために使用され得る、３つの１００ｍＬアリコートに分割され得る。次いで、５％ヒトＡＢ血清を含む１５０ｍＬのＡＩＭ−Ｖ及び１ｍＬあたり３０００ＵＩのＩＬ−２を各フラスコに添加し得る。G-Rex100フラスコを５％ＣＯ２中３７℃でインキュベートし、４日後、１ｍＬあたり３０００ＩＵのＩＬ−２を有する１５０ｍＬのＡＩＭ−Ｖを各G-Rex 100フラスコに加え得る。細胞は、培養１４日目に回収され得る。
【０２７２】
[00294]  一実施形態では、ＴＩＬは、以下のように調製され得る。２ｍｍ３の腫瘍断片を、２ｍＭグルタミン（Mediatech,Inc.Manassas, VA）、１００Ｕ／ｍＬペニシリン（Invitrogen Life Technologies）、１００μｇ／ｍＬストレプトマイシン（InvitrogenLife Technologies）、５％熱不活性化ヒトＡＢ血清（Valley Biomedical, Inc.Winchester, VA）及び６００ＩＵ／ｍＬ  ｒｈＩＬ−２（Chiron,Emeryville, CA）を添加したＡＩＭ−Ｖ培地（Invitrogen Life Technologies, Carlsbad, CA）を含む完全培地（ＣＭ）中で培養する。固形腫瘍の酵素的消化のために、腫瘍標本をさいの目に切りRPMI-1640へ入れ、洗浄し、１５〜２２℃で５分間、８００ｒｐｍで遠心分離し、酵素的消化緩衝液（RPMI-1640中０．２ｍｇ／ｍＬコラゲナーゼ及び３０Ｕｎｉｔ／ｍｌのＤＮａｓｅ）に再懸濁し、続いて室温で一晩回転させる。断片から作製されたＴＩＬをＣＭ中で３〜４週間増殖させ、新鮮に増殖させるか、又は１０％ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）を含む熱不活性化ＨＡＢ血清中で凍結保存し、研究時まで−１８０℃で保存し得る。腹水採取から得られた腫瘍関連リンパ球（ＴＡＬ）をＣＭ中２４ウェルプレートの３×１０６細胞／ウェルで播種した。低倍率倒立顕微鏡を使用して、ＴＩＬの増殖を隔日で検査した。
【０２７３】
[00295]  一実施形態では、本発明のカリウムチャネルアゴニストは、Ｔ細胞を増殖させるために使用され得る。ＴＩＬの増殖について記載された本発明の任意の前述の実施形態は、Ｔ細胞の増殖にも適用され得る。一実施形態では、本発明のカリウムチャネルアゴニストは、ＣＤ８  Ｔ細胞を増殖させるために使用され得る。一実施形態では、本発明のカリウムチャネルアゴニストは、ＣＤ４＋Ｔ細胞を増殖させるために使用され得る。一実施形態では、本発明のカリウムチャネルアゴニストは、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ−Ｔ）で形質導入されたＴ細胞を増殖させるために使用され得る。一実施形態では、本発明のカリウムチャネルアゴニストは、改変Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）を含むＴ細胞を増殖させるために使用され得る。ＣＡＲ−Ｔ細胞は、当技術分野において、例えばその開示が参照により本明細書に組み込まれる米国特許第７，０７０，９９５号；同第７，４４６，１９０号；同第８，３９９，６４５号；同第８，９１６，３８１号；及び同第９，３２８，１５６号で説明されているように、ＣＤ１９を含む任意の適切な抗原に対して標的化され得る。改変ＴＣＲ細胞は、当技術分野において、例えばその開示が参照により本明細書に組み込まれる米国特許第８，３６７，８０４号及び同第７，５６９，６６４号で説明されているように、ＮＹ−ＥＳＯ−１、ＴＲＰ−１、ＴＲＰ−２、チロシナーゼ癌抗原、ＭＡＧＥ−Ａ３、ＳＳＸ−２及びＶＥＧＦＲ２又はそれらの抗原部分を含む任意の適切な抗原に対して標的化され得る。
【０２７４】
任意選択によるＴＩＬの凍結保存
[0001]  いくつかの実施形態では、バルクＴＩＬ集団又は増殖ＴＩＬ集団のいずれかを任意選択により凍結保存することができる。いくつかの実施形態では、凍結保存は、治療的ＴＩＬ集団で行われる。いくつかの実施形態では、凍結保存は、増殖後に回収されたＴＩＬで行われる。いくつかの実施形態では、ＴＩＬは、輸液バッグ内で凍結保存される。いくつかの実施形態では、ＴＩＬは、輸液バッグに入れる前に凍結保存される。いくつかの実施形態では、ＴＩＬは、凍結保存されており、注入バッグに入っていない。いくつかの実施形態では、凍結保存は、凍結保存媒体を使用して行われる。いくつかの実施形態では、凍結保存媒体は、ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）を含有する。これは、一般的に、ＴＩＬ集団を凍結溶液、例えば８５％補体不活性化ＡＢ血清及び１５％ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）に入れることによって達成される。溶液中の細胞を超低温バイアルに入れ、任意選択により凍結保存のために気体窒素冷凍庫に移動させて、−８０℃で２４時間保存する。Sadeghi,et al, Acta Oncologica 2013, 52, 978-986を参照されたい。
【０２７５】
[0002]  適切な場合、細胞を冷凍庫から取り出し、溶液のおよそ４／５が解凍されるまで３７℃の水浴中で解凍する。細胞は、一般的に、完全培地に再懸濁され、任意選択により１回以上洗浄される。いくつかの実施形態では、当技術分野で知られているように、解凍したＴＩＬを計数し、生存率について評価することができる。
【０２７６】
[0003]  好ましい態様において、ＴＩＬの集団は、ＣＳ１０凍結保存培地（CryoStor 10、BioLifeSolutions）を使用して凍結保存される。好ましい実施形態では、ＴＩＬの集団は、ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）を含有する凍結保存培地を使用して凍結保存される。好ましい実施形態では、ＴＩＬの集団は、１：１（ｖｏｌ：ｖｏｌ）比のＣＳ１０及び細胞培養培地を使用して凍結保存される。好ましい実施形態では、ＴＩＬの集団は、さらなるＩＬ−２をさらに含む、約１：１（ｖｏｌ：ｖｏｌ）比のＣＳ１０及び細胞培養培地を使用して凍結保存される。
【０２７７】
[0004]  本明細書に記載されるように、凍結保存は、ＴＩＬ増殖プロセスを通して多数の時点で行うことができる。いくつかの実施形態では、第１の増殖後のバルクＴＩＬ集団又は１回以上の第２の増殖後のＴＩＬの増殖集団を凍結保存することができる。凍結保存は、一般的に、ＴＩＬ集団を凍結溶液、例えば８５％補体不活性化ＡＢ血清及び１５％ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）に入れることによって達成することができる。溶液中の細胞を超低温バイアルに入れ、任意選択により凍結保存のために気体窒素冷凍庫に移動させて、−８０℃で２４時間保存する。Sadeghi,et al, Acta Oncologica 2013, 52, 978-986を参照されたい。
【０２７８】
[0005]  適切な場合、細胞を冷凍庫から取り出し、溶液のおよそ４／５が解凍されるまで３７℃の水浴中で解凍する。細胞は、一般的に、完全培地に再懸濁され、任意選択により１回以上洗浄される。いくつかの実施形態では、当技術分野で知られているように、解凍したＴＩＬを計数し、生存率について評価することができる。
【０２７９】
[0006]  いくつかの場合、本明細書に記載のプロトコルを使用して、ＴＩＬ集団を直ちに凍結保存することができる。
【０２８０】
ＴＩＬの医薬組成物、投与量及び投与レジメン
[00296]  一実施形態では、本開示の方法を使用して増殖させたＴＩＬは、医薬組成物として患者に投与される。一実施形態では、医薬組成物は、滅菌緩衝液中のＴＩＬの懸濁液である。本開示の方法を使用して増殖されたＴＩＬは、当技術分野において公知の任意の適切な経路によって投与され得る。好ましくは、ＴＩＬは、単一の動脈内又は静脈内注入として投与され、これは、好ましくは、およそ３０〜６０分続く。他の適切な投与経路には、腹腔内投与、髄腔内投与及びリンパ管内投与が含まれる。
【０２８１】
[00297]  任意の適切な用量のＴＩＬを投与することができる。特に癌が黒色腫である場合、好ましくは、平均が約７．８×１０１０ＴＩＬである約２．３×１０１０〜約１３．７×１０１０ＴＩＬが投与される。一実施形態では、約１．２×１０１０〜約４．３×１０１０のＴＩＬが投与される。
【０２８２】
[00298]  いくつかの実施形態では、本発明の医薬組成物中に提供されるＴＩＬの数は、約１×１０６、２×１０６、３×１０６、４×１０６、５×１０６、６×１０６、７×１０６、８×１０６、９×１０６、１×１０７、２×１０７、３×１０７、４×１０７、５×１０７、６×１０７、７×１０７、８×１０７、９×１０７、１×１０８、２×１０８、３×１０８、４×１０８、５×１０８、６×１０８、７×１０８、８×１０８、９×１０８、１×１０９、２×１０９、３×１０９、４×１０９、５×１０９、６×１０９、７×１０９、８×１０９、９×１０９、１×１０１０、２×１０１０、３×１０１０、４×１０１０、５×１０１０、６×１０１０、７×１０１０、８×１０１０、９×１０１０、１×１０１１、２×１０１１、３×１０１１、４×１０１１、５×１０１１、６×１０１１、７×１０１１、８×１０１１、９×１０１１、１×１０１２、２×１０１２、３×１０１２、４×１０１２、５×１０１２、６×１０１２、７×１０１２、８×１０１２、９×１０１２、１×１０１３、２×１０１３、３×１０１３、４×１０１３、５×１０１３、６×１０１３、７×１０１３、８×１０１３及び９×１０１３個である。一実施形態では、本発明の医薬組成物中に提供されるＴＩＬの数は、１×１０６〜５×１０６、５×１０６〜１×１０７、１×１０７〜５×１０７、５×１０７〜１×１０８、１×１０８〜５×１０８、５×１０８〜１×１０９、１×１０９〜５×１０９、５×１０９〜１×１０１０、１×１０１０〜５×１０１０、５×１０１０〜１×１０１１、５×１０１１〜１×１０１２、１×１０１２〜５×１０１２及び５×１０１２〜１×１０１３の範囲内である。
【０２８３】
[00299]  いくつかの実施形態では、本発明の医薬組成物中に提供されるＴＩＬの濃度は、例えば、医薬組成物の１００％、９０％、８０％、７０％、６０％、５０％、４０％、３０％、２０％、１９％、１８％、１７％、１６％、１５％、１４％、１３％、１２％、１１％、１０％、９％、８％、７％、６％、５％、４％、３％、２％、１％、０．５％、０．４％、０．３％、０．２％、０．１％、０．０９％、０．０８％、０．０７％、０．０６％、０．０５％、０．０４％、０．０３％、０．０２％、０．０１％、０．００９％、０．００８％、０．００７％、０．００６％、０．００５％、０．００４％、０．００３％、０．００２％、０．００１％、０．０００９％、０．０００８％、０．０００７％、０．０００６％、０．０００５％、０．０００４％、０．０００３％、０．０００２％又は０．０００１％ｗ／ｗ、ｗ／ｖ又はｖ／ｖより低い。
【０２８４】
[00300]  いくつかの実施形態では、本発明の医薬組成物中に提供されるＴＩＬの濃度は、医薬組成物の９０％、８０％、７０％、６０％、５０％、４０％、３０％、２０％、１９．７５％、１９．５０％、１９．２５％、１９％、１８．７５％、１８．５０％、１８．２５％、１８％、１７．７５％、１７．５０％、１７．２５％、１７％、１６．７５％、１６．５０％、１６．２５％、１６％、１５．７５％、１５．５０％、１５．２５％、１５％、１４．７５％、１４．５０％、１４．２５％、１４％、１３．７５％、１３．５０％、１３．２５％、１３％、１２．７５％、１２．５０％、１２．２５％、１２％、１１．７５％、１１．５０％、１１．２５％、１１％、１０．７５％、１０．５０％、１０．２５％、１０％、９．７５％、９．５０％、９．２５％、９％、８．７５％、８．５０％、８．２５％、８％、７．７５％、７．５０％、７．２５％、７％、６．７５％、６．５０％、６．２５％、６％、５．７５％、５．５０％、５．２５％、５％、４．７５％、４．５０％、４．２５％、４％、３．７５％、３．５０％、３．２５％、３％、２．７５％、２．５０％、２．２５％、２％、１．７５％、１．５０％、１２５％、１％、０．５％、０．４％、０．３％、０．２％、０．１％、０．０９％、０．０８％、０．０７％、０．０６％、０．０５％、０．０４％、０．０３％、０．０２％、０．０１％、０．００９％、０．００８％、０．００７％、０．００６％、０．００５％、０．００４％、０．００３％、０．００２％、０．００１％、０．０００９％、０．０００８％、０．０００７％、０．０００６％、０．０００５％、０．０００４％、０．０００３％、０．０００２％又は０．０００１％ｗ／ｗ、ｗ／ｖ又はｖ／ｖより高い。
【０２８５】
[00301]  いくつかの実施形態では、本発明の医薬組成物中に提供されるＴＩＬの濃度は、医薬組成物の約０．０００１％〜約５０％、約０．００１％〜約４０％、約０．０１％〜約３０％、約０．０２％〜約２９％、約０．０３％〜約２８％、約０．０４％〜約２７％、約０．０５％〜約２６％、約０．０６％〜約２５％、約０．０７％〜約２４％、約０．０８％〜約２３％、約０．０９％〜約２２％、約０．１％〜約２１％、約０．２％〜約２０％、約０．３％〜約１９％、約０．４％〜約１８％、約０．５％〜約１７％、約０．６％〜約１６％、約０．７％〜約１５％、約０．８％〜約１４％、約０．９％〜約１２％又は約１％〜約１０％ｗ／ｗ、ｗ／ｖ又はｖ／ｖの範囲内である。
【０２８６】
[00302]  いくつかの実施形態では、本発明の医薬組成物中に提供されるＴＩＬの濃度は、医薬組成物の約０．００１％〜約１０％、約０．０１％〜約５％、約０．０２％〜約４．５％、約０．０３％〜約４％、約０．０４％〜約３．５％、約０．０５％〜約３％、約０．０６％〜約２．５％、約０．０７％〜約２％、約０．０８％〜約１．５％、約０．０９％〜約１％、約０．１％〜約０．９％ｗ／ｗ、ｗ／ｖ又はｖ／ｖの範囲内である。
【０２８７】
[00303]  いくつかの実施形態では、本発明の医薬組成物中に提供されるＴＩＬの量は、１０ｇ、９．５ｇ、９．０ｇ、８．５ｇ、８．０ｇ、７．５ｇ、７．０ｇ、６．５ｇ、６．０ｇ、５．５ｇ、５．０ｇ、４．５ｇ、４．０ｇ、３．５ｇ、３．０ｇ、２．５ｇ、２．０ｇ、１．５ｇ、１．０ｇ、０．９５ｇ、０．９ｇ、０．８５ｇ、０．８ｇ、０．７５ｇ、０．７ｇ、０．６５ｇ、０．６ｇ、０．５５ｇ、０．５ｇ、０．４５ｇ、０．４ｇ、０．３５ｇ、０．３ｇ、０．２５ｇ、０．２ｇ、０．１５ｇ、０．１ｇ、０．０９ｇ、０．０８ｇ、０．０７ｇ、０．０６ｇ、０．０５ｇ、０．０４ｇ、０．０３ｇ、０．０２ｇ、０．０１ｇ、０．００９ｇ、０．００８ｇ、０．００７ｇ、０．００６ｇ、０．００５ｇ、０．００４ｇ、０．００３ｇ、０．００２ｇ、０．００１ｇ、０．０００９ｇ、０．０００８ｇ、０．０００７ｇ、０．０００６ｇ、０．０００５ｇ、０．０００４ｇ、０．０００３ｇ、０．０００２ｇ又は０．０００１ｇ以下である。
【０２８８】
[00304]  いくつかの実施形態では、本発明の医薬組成物中に提供されるＴＩＬの量は、０．０００１ｇ、０．０００２ｇ、０．０００３ｇ、０．０００４ｇ、０．０００５ｇ、０．０００６ｇ、０．０００７ｇ、０．０００８ｇ、０．０００９ｇ、０．００１ｇ、０．００１５ｇ、０．００２ｇ、０．００２５ｇ、０．００３ｇ、０．００３５ｇ、０．００４ｇ、０．００４５ｇ、０．００５ｇ、０．００５５ｇ、０．００６ｇ、０．００６５ｇ、０．００７ｇ、０．００７５ｇ、０．００８ｇ、０．００８５ｇ、０．００９ｇ、０．００９５ｇ、０．０１ｇ、０．０１５ｇ、０．０２ｇ、０．０２５ｇ、０．０３ｇ、０．０３５ｇ、０．０４ｇ、０．０４５ｇ、０．０５ｇ、０．０５５ｇ、０．０６ｇ、０．０６５ｇ、０．０７ｇ、０．０７５ｇ、０．０８ｇ、０．０８５ｇ、０．０９ｇ、０．０９５ｇ、０．１ｇ、０．１５ｇ、０．２ｇ、０．２５ｇ、０．３ｇ、０．３５ｇ、０．４ｇ、０．４５ｇ、０．５ｇ、０．５５ｇ、０．６ｇ、０．６５ｇ、０．７ｇ、０．７５ｇ、０．８ｇ、０．８５ｇ、０．９ｇ、０．９５ｇ、１ｇ、１．５ｇ、２ｇ、２．５、３ｇ、３．５、４ｇ、４．５ｇ、５ｇ、５．５ｇ、６ｇ、６．５ｇ、７ｇ、７．５ｇ、８ｇ、８．５ｇ、９ｇ、９．５ｇ又は１０ｇ超である。
【０２８９】
[00305]  本発明の医薬組成物において提供されるＴＩＬは、広い投与量範囲にわたって有効である。正確な投与量は、投与経路、化合物が投与される形態、処置されるべき対象の性別及び年齢、処置されるべき対象の体重並びに担当医の選好及び経験に依存するであろう。臨床的に確立されたＴＩＬの投与量も適切な場合に使用され得る。ＴＩＬの投与量など、本明細書の方法を使用して投与される医薬組成物の量は、処置されるヒト又は哺乳動物、疾患又は状態の重症度、投与速度、活性医薬成分の性質及び処方医の裁量に依存するであろう。
【０２９０】
[00306]  いくつかの実施形態では、ＴＩＬは、単回投与で投与され得る。そのような投与は、注射、例えば静脈内注射によるものであり得る。いくつかの実施形態では、ＴＩＬは、複数回投与で投与され得る。投与は、１年に１回、２回、３回、４回、５回、６回又は６回を超え得る。投与は、月に１回、２週間に１回、週に１回又は隔日に１回であり得る。ＴＩＬの投与は、必要な限り継続し得る。
【０２９１】
[00307]  いくつかの実施形態では、ＴＩＬの有効投与量は、約１×１０６、２×１０６、３×１０６、４×１０６、５×１０６、６×１０６、７×１０６、８×１０６、９×１０６、１×１０７、２×１０７、３×１０７、４×１０７、５×１０７、６×１０７、７×１０７、８×１０７、９×１０７、１×１０８、２×１０８、３×１０８、４×１０８、５×１０８、６×１０８、７×１０８、８×１０８、９×１０８、１×１０９、２×１０９、３×１０９、４×１０９、５×１０９、６×１０９、７×１０９、８×１０９、９×１０９、１×１０１０、２×１０１０、３×１０１０、４×１０１０、５×１０１０、６×１０１０、７×１０１０、８×１０１０、９×１０１０、１×１０１１、２×１０１１、３×１０１１、４×１０１１、５×１０１１、６×１０１１、７×１０１１、８×１０１１、９×１０１１、１×１０１２、２×１０１２、３×１０１２、４×１０１２、５×１０１２、６×１０１２、７×１０１２、８×１０１２、９×１０１２、１×１０１３、２×１０１３、３×１０１３、４×１０１３、５×１０１３、６×１０１３、７×１０１３、８×１０１３及び９×１０１３である。いくつかの実施形態では、ＴＩＬの有効投与量は、１×１０６〜５×１０６、５×１０６〜１×１０７、１×１０７〜５×１０７、５×１０７〜１×１０８、１×１０８〜５×１０８、５×１０８〜１×１０９、１×１０９〜５×１０９、５×１０９〜１×１０１０、１×１０１０〜５×１０１０、５×１０１０〜１×１０１１、５×１０１１〜１×１０１２、１×１０１２〜５×１０１２及び５×１０１２〜１×１０１３の範囲内である。
【０２９２】
[00308]  いくつかの実施形態では、ＴＩＬの有効投与量は、約０．０１ｍｇ／ｋｇ〜約４．３ｍｇ／ｋｇ、約０．１５ｍｇ／ｋｇ〜約３．６ｍｇ／ｋｇ、約０．３ｍｇ／ｋｇ〜約３．２ｍｇ／ｋｇ、約０．３５ｍｇ／ｋｇ〜約２．８５ｍｇ／ｋｇ、約０．１５ｍｇ／ｋｇ〜約２．８５ｍｇ／ｋｇ、約０．３ｍｇ〜約２．１５ｍｇ／ｋｇ、約０．４５ｍｇ／ｋｇ〜約１．７ｍｇ／ｋｇ、約０．１５ｍｇ／ｋｇ〜約１．３ｍｇ／ｋｇ、約０．３ｍｇ／ｋｇ〜約１．１５ｍｇ／ｋｇ、約０．４５ｍｇ／ｋｇ〜約１ｍｇ／ｋｇ、約０．５５ｍｇ／ｋｇ〜約０．８５ｍｇ／ｋｇ、約０．６５ｍｇ／ｋｇ〜約０．８ｍｇ／ｋｇ、約０．７ｍｇ／ｋｇ〜約０．７５ｍｇ／ｋｇ、約０．７ｍｇ／ｋｇ〜約２．１５ｍｇ／ｋｇ、約０．８５ｍｇ／ｋｇ〜約２ｍｇ／ｋｇ、約１ｍｇ／ｋｇ〜約１．８５ｍｇ／ｋｇ、約１．１５ｍｇ／ｋｇ〜約１．７ｍｇ／ｋｇ、約１．３ｍｇ／ｋｇｍｇ〜約１．６ｍｇ／ｋｇ、約１．３５ｍｇ／ｋｇ〜約１．５ｍｇ／ｋｇ、約２．１５ｍｇ／ｋｇ〜約３．６ｍｇ／ｋｇ、約２．３ｍｇ／ｋｇ〜約３．４ｍｇ／ｋｇ、約２．４ｍｇ／ｋｇ〜約３．３ｍｇ／ｋｇ、約２．６ｍｇ／ｋｇ〜約３．１５ｍｇ／ｋｇ、約２．７ｍｇ／ｋｇ〜約３ｍｇ／ｋｇ、約２．８ｍｇ／ｋｇ〜約３ｍｇ／ｋｇ又は約２．８５ｍｇ／ｋｇ〜約２．９５ｍｇ／ｋｇの範囲内である。
【０２９３】
[00309]  いくつかの実施形態では、ＴＩＬの有効投与量は、約１ｍｇ〜約５００ｍｇ、約１０ｍｇ〜約３００ｍｇ、約２０ｍｇ〜約２５０ｍｇ、約２５ｍｇ〜約２００ｍｇ、約１ｍｇ〜約５０ｍｇ、約５ｍｇ〜約４５ｍｇ、約１０ｍｇ〜約４０ｍｇ、約１５ｍｇ〜約３５ｍｇ、約２０ｍｇ〜約３０ｍｇ、約２３ｍｇ〜約２８ｍｇ、約５０ｍｇ〜約１５０ｍｇ、約６０ｍｇ〜約１４０ｍｇ、約７０ｍｇ〜約１３０ｍｇ、約８０ｍｇ〜約１２０ｍｇ、約９０ｍｇ〜約１１０ｍｇ又は約９５ｍｇ〜約１０５ｍｇ、約９８ｍｇ〜約１０２ｍｇ、約１５０ｍｇ〜約２５０ｍｇ、約１６０ｍｇ〜約２４０ｍｇ、約１７０ｍｇ〜約２３０ｍｇ、約１８０ｍｇ〜約２２０ｍｇ、約１９０ｍｇ〜約２１０ｍｇ、約１９５ｍｇ〜約２０５ｍｇ又は約１９８〜約２０７ｍｇの範囲内である。
【０２９４】
[00310]  有効量のＴＩＬは、鼻腔内及び経皮経路、動脈内注射、静脈内、腹腔内、非経口、筋肉内、皮下、局所、移植若しくは腫瘍への直接注射又は吸入を含む、同様の有用性を有する薬剤の許容される投与様式のいずれかにより、単回投与又は複数回投与のいずれかで投与され得る。
【０２９５】
カリウムチャネルアゴニストの医薬組成物、投与量及び投与レジメン
[00311]  いくつかの実施形態では、本発明は、本発明のＴＩＬを使用した処置と組み合わせて、本明細書に記載の疾患及び状態の処置に使用するための、ＫＣａ３．１アゴニストを含む、カリウムチャネルアゴニストを含む医薬組成物を提供する。好ましい実施形態では、本発明は、癌の処置に使用するための、下記のものを含む医薬組成物を提供する。
【０２９６】
[00312]  いくつかの実施形態では、カリウムチャネルアゴニスト製剤は、トリス塩酸塩、塩化ナトリウム、マンニトール、ペンテン酸、ポリソルベート８０、水酸化ナトリウム及び塩酸から選択される１つ以上の賦形剤を含む。
【０２９７】
[00313]  いくつかの実施形態では、カリウムチャネルアゴニストを含む医薬組成物は、経口摂取に適した液体医薬組成物であり得る。
【０２９８】
[00314]  経口投与に適した本発明の医薬組成物は、それぞれ粉末又は顆粒、水性液体又は非水性液体中の溶液又は懸濁液、水中油型エマルジョン、油中水型液体エマルジョン、再構成用粉末、経口消費用粉末、ボトル（ボトル内の粉末又は液体を含む）、経口溶解フィルム、ロゼンジ、ペースト、チューブ、ガム及びパックとして有効成分の所定量を含有するカプセル、サシェ、錠剤、液体又はエアロゾルスプレーなどの個別の剤形として提供することができる。そのような剤形は、任意の薬学的方法によって調製することができるが、全ての方法は、活性成分を１つ以上の必要な成分を構成する担体と会合させるステップを含む。一般的に、組成物は、活性成分を液体担体若しくは微粉化した固体担体又はその両方と均一且つ緊密に混合し、次いで必要に応じて生成物を所望の体裁に成形することにより調製される。例えば、錠剤は、任意選択により１つ以上の補助成分と共に圧縮又は成形することにより調製することができる。圧縮錠剤は、粉末又は顆粒などの自由流動形態の活性成分を適切な機械で圧縮し、任意選択により結合剤、滑沢剤、不活性希釈剤及び／又は界面活性剤又は分散剤などの賦形剤と混合して、調製することができる。成形錠剤は、不活性液体希釈剤で湿らせた粉末化合物の混合物を適切な機械で成形することによって作製することができる。
【０２９９】
[00315]  医薬組成物及び剤形における使用に適した結合剤としては、これらに限定されるものではないが、コーンスターチ、ポテトスターチ又は他のデンプン、ゼラチン、アカシアなどの天然及び合成ゴム、アルギン酸ナトリウム、アルギン酸、他のアルギン酸塩、粉末トラガカント、グアーガム、セルロース及びその誘導体（例えば、エチルセルロース、酢酸セルロース、カルボキシメチルセルロースカルシウム、カルボキシメチルセルロースナトリウム）、ポリビニルピロリドン、メチルセルロース、アルファ化デンプン、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、微結晶セルロース及びそれらの混合物が挙げられる。
【０３００】
[00316]  本明細書に開示される医薬組成物及び剤形における使用に適した充填剤の例としては、これらに限定されるものではないが、タルク、炭酸カルシウム（例えば、顆粒又は粉末）、微結晶セルロース、粉末セルロース、デキストレート、カオリン、マンニトール、ケイ酸、ソルビトール、デンプン、アルファ化デンプン及びそれらの混合物が挙げられる。
【０３０１】
[00317]  崩壊剤を本発明の組成物に使用して、水性環境に曝されたときに崩壊する錠剤を提供し得る。崩壊剤が多すぎると、ボトル内で崩壊する錠剤が産生され得る。少なすぎると、崩壊が起こるのに不十分である可能性があり、したがって剤形からの活性成分の放出の速度及び程度が変化する。したがって、本明細書に開示されている化合物の剤形を形成するために、活性成分の放出を有害に変えるのに少なすぎず多すぎない十分量の崩壊剤を使用し得る。使用される崩壊剤の量は、製剤の種類及び投与態様に基づいて変化し得、当業者に容易に認識され得る。約０．５〜約１５重量％の崩壊剤又は約１〜約５重量％の崩壊剤が医薬組成物に使用され得る。本発明の医薬組成物及び剤形を形成するために使用することができる崩壊剤としては、これらに限定されるものではないが、寒天、アルギン酸、炭酸カルシウム、微結晶セルロース、クロスカルメロースナトリウム、クロスポビドン、ポラクリリンカリウム、デンプングリコール酸ナトリウム、ジャガイモ又はタピオカデンプン、他のデンプン、アルファ化デンプン、他のデンプン、粘土、他のアルギン、他のセルロース、ガム又はそれらの混合物が挙げられる。
【０３０２】
[00318]  本発明の医薬組成物及び剤形を形成するために使用することができる滑沢剤としては、これらに限定されるものではないが、ステアリン酸カルシウム、ステアリン酸マグネシウム、フマル酸ステアリルナトリウム、鉱油、軽質鉱油、グリセリン、ソルビトール、マンニトール、ポリエチレングリコール、他のグリコール、ステアリン酸、ラウリル硫酸ナトリウム、タルク、硬化植物油（例えば、ピーナッツ油、綿実油、ヒマワリ油、ゴマ油、オリーブ油、コーン油及び大豆油）、ステアリン酸亜鉛、オレイン酸エチル、ラウリン酸エチル、寒天又はそれらの混合物が挙げられる。さらなる滑沢剤としては、例えば、サイロイドシリカゲル、合成シリカの凝固エアロゾル、ケイ化微結晶セルロース又はそれらの混合物が挙げられる。滑沢剤は、任意選択により、医薬組成物の約０．５％未満又は約１％未満（重量で）の量で添加することができる。
【０３０３】
[00319]  水性懸濁液及び／又はエリキシル剤が経口投与に望ましい場合、活性医薬成分を水、エタノール、プロピレングリコール、グリセリン及びそれらの種々の組み合わせなどの希釈剤と共に様々な甘味剤又は香味剤、色素又は染料及び所望の場合、乳化剤及び／又は懸濁剤と組み合わせ得る。
【０３０４】
[00320]  錠剤は、コーティングされていなくてもよく、又は胃腸管内での崩壊及び吸収を遅らせ、それによって長期間にわたって持続作用をもたらすように公知の技術によってコーティングされ得る。例えば、グリセリルモノステアレート又はグリセリルジステアレートのなどの徐放化物質を使用することができる。経口使用のための製剤は、活性成分が不活性固体希釈剤、例えば炭酸カルシウム、リン酸カルシウム若しくはカオリンと混合されている硬ゼラチンカプセルとして、又は活性成分が水若しくは油性媒体、例えばピーナッツ油、流動パラフィン又はオリーブ油と混合されている軟ゼラチンカプセルとしても提供することができる。
【０３０５】
[00321]  本発明の医薬組成物及び剤形を形成するために使用することができる界面活性剤としては、これらに限定されるものではないが、親水性界面活性剤、親油性界面活性剤及びそれらの混合物が挙げられる。すなわち、親水性界面活性剤の混合物を使用し得るか、親油性界面活性剤の混合物を使用し得るか、又は少なくとも１つの親水性界面活性剤と少なくとも１つの親油性界面活性剤との混合物を使用し得る。
【０３０６】
[00322]  一実施形態では、ＫＣａ３．１アゴニストを含むカリウムチャネルアゴニストは、約０．２５ｍｇ、約０．５ｍｇ、約１ｍｇ、約２ｍｇ、約２．５ｍｇ、約５ｍｇ、約７．５ｍｇ、約８ｍｇ、約１０ｍｇ、約２０ｍｇ、約２５ｍｇ、約５０ｍｇ、約７５ｍｇ、１００ｍｇ、約２００ｍｇ、約３００ｍｇ、約４００ｍｇ、約５００ｍｇ、約６００ｍｇ、約７００ｍｇ、約８００ｍｇ、約９００ｍｇ、約１０００ｍｇ、約１１００ｍｇ、約１２００ｍｇ、約１３００ｍｇ、約１４００ｍｇ、約１５００ｍｇ、約１６００ｍｇ、約１７００ｍｇ、約１８００ｍｇ、約１９００ｍｇ及び約２０００ｍｇからなる群から選択される用量で経口的に又は注入によって対象に投与される。一実施形態では、ＫＣａ３．１アゴニストを含むカリウムチャネルアゴニストは、毎週投与される。一実施形態では、ＫＣａ３．１アゴニストを含むカリウムチャネルアゴニストは、２週間ごとに投与される。一実施形態では、ＫＣａ３．１アゴニストを含むカリウムチャネルアゴニストは、３週間ごとに投与される。一実施形態では、カリウムチャネルアゴニストは、毎月投与される。一実施形態では、ＫＣａ３．１アゴニストを含むカリウムチャネルアゴニストは、より低い初期用量で投与され、これは、その後の毎月投与される間隔で投与されるときに増加する。
【０３０７】
[00323]  ＫＣａ３．１アゴニストを含む、投与されるカリウムチャネルアゴニストの量は、処置されるヒト又は哺乳動物、疾患又は状態の重症度、投与速度、化合物の性質及び処方医の裁量に依存するであろう。しかしながら、それぞれの有効投与量は、単回投与又は分割投与で約１〜約３５ｍｇ／ｋｇ／日などの１日あたり体重１ｋｇあたり約０．００１〜約１００ｍｇの範囲内である。７０ｋｇのヒトの場合、これは、約０．０５〜約２．５ｇ／日などの約０．０５〜７ｇ／日に達する。いくつかの場合、上記範囲の下限を下回る投与量レベルが十分量を超える可能性があり、他の場合、有害な副作用を引き起こすことなく、さらにより多くの用量を使用し得る（例えば、終日にわたる投与のために、そのようなより多くの用量をいくつかの小さい用量に分割することによって）。カリウムチャネルアゴニストの投与量は、ｍｇ／ｋｇ体重の単位又はｍｇ／ｍ２体表面積の単位で提供され得る。
【０３０８】
[00324]  いくつかの実施形態では、ＫＣａ３．１アゴニストを含むカリウムチャネルアゴニストは、１、２、３、４、５、６、７、１４、２８日、２ヶ月、３ヶ月、６ヶ月、１２ヶ月又は２４ヶ月超にわたって投与される。いくつかの場合、必要な限り連続投与が達成され維持される。
【０３０９】
[00325]  いくつかの実施形態では、本明細書に開示される、ＫＣａ３．１アゴニストを含むカリウムチャネルアゴニストの有効投与量は、約１ｍｇ〜約５００ｍｇ、約１０ｍｇ〜約３００ｍｇ、約２０ｍｇ〜約２５０ｍｇ、約２５ｍｇ〜約２００ｍｇ、約１０ｍｇ〜約２００ｍｇ、約２０ｍｇ〜約１５０ｍｇ、約３０ｍｇ〜約１２０ｍｇ、約１０ｍｇ〜約９０ｍｇ、約２０ｍｇ〜約８０ｍｇ、約３０ｍｇ〜約７０ｍｇ、約４０ｍｇ〜約６０ｍｇ、約４５ｍｇ〜約５５ｍｇ、約４８ｍｇ〜約５２ｍｇ、約５０ｍｇ〜約１５０ｍｇ、約６０ｍｇ〜約１４０ｍｇ、約７０ｍｇ〜約１３０ｍｇ、約８０ｍｇ〜約１２０ｍｇ、約９０ｍｇ〜約１１０ｍｇ、約９５ｍｇ〜約１０５ｍｇ、約１５０ｍｇ〜約２５０ｍｇ、約１６０ｍｇ〜約２４０ｍｇ、約１７０ｍｇ〜約２３０ｍｇ、約１８０ｍｇ〜約２２０ｍｇ、約１９０ｍｇ〜約２１０ｍｇ、約１９５ｍｇ〜約２０５ｍｇ又は約１９８〜約２０２ｍｇの範囲内である。いくつかの実施形態では、本明細書に開示されるカリウムチャネルアゴニストの有効投与量は、約２５ｍｇ、約５０ｍｇ、約７５ｍｇ、約１００ｍｇ、約１２５ｍｇ、約１５０ｍｇ、約１７５ｍｇ、約２００ｍｇ、約２２５ｍｇ又は約２５０ｍｇである。
【０３１０】
[00326]  いくつかの実施形態では、本明細書に開示される、ＫＣａ３．１アゴニストを含むカリウムチャネルアゴニストの有効投与量は、約０．０１ｍｇ／ｋｇ〜約４．３ｍｇ／ｋｇ、約０．１５ｍｇ／ｋｇ〜約３．６ｍｇ／ｋｇ、約０．３ｍｇ／ｋｇ〜約３．２ｍｇ／ｋｇ、約０．３５ｍｇ／ｋｇ〜約２．８５ｍｇ／ｋｇ、約０．１５ｍｇ／ｋｇ〜約２．８５ｍｇ／ｋｇ、約０．３ｍｇ〜約２．１５ｍｇ／ｋｇ、約０．４５ｍｇ／ｋｇ〜約１．７ｍｇ／ｋｇ、約０．１５ｍｇ／ｋｇ〜約１．３ｍｇ／ｋｇ、約０．３ｍｇ／ｋｇ〜約１．１５ｍｇ／ｋｇ、約０．４５ｍｇ／ｋｇ〜約１ｍｇ／ｋｇ、約０．５５ｍｇ／ｋｇ〜約０．８５ｍｇ／ｋｇ、約０．６５ｍｇ／ｋｇ〜約０．８ｍｇ／ｋｇ、約０．７ｍｇ／ｋｇ〜約０．７５ｍｇ／ｋｇ、約０．７ｍｇ／ｋｇ〜約２．１５ｍｇ／ｋｇ、約０．８５ｍｇ／ｋｇ〜約２ｍｇ／ｋｇ、約１ｍｇ／ｋｇ〜約１．８５ｍｇ／ｋｇ、約１．１５ｍｇ／ｋｇ〜約１．７ｍｇ／ｋｇ、約１．３ｍｇ／ｋｇｍｇ〜約１．６ｍｇ／ｋｇ、約１．３５ｍｇ／ｋｇ〜約１．５ｍｇ／ｋｇ、約２．１５ｍｇ／ｋｇ〜約３．６ｍｇ／ｋｇ、約２．３ｍｇ／ｋｇ〜約３．４ｍｇ／ｋｇ、約２．４ｍｇ／ｋｇ〜約３．３ｍｇ／ｋｇ、約２．６ｍｇ／ｋｇ〜約３．１５ｍｇ／ｋｇ、約２．７ｍｇ／ｋｇ〜約３ｍｇ／ｋｇ、約２．８ｍｇ／ｋｇ〜約３ｍｇ／ｋｇ又は約２．８５ｍｇ／ｋｇ〜約２．９５ｍｇ／ｋｇの範囲内である。いくつかの実施形態では、本明細書に開示されるカリウムチャネルアゴニストの有効投与量は、約０．３５ｍｇ／ｋｇ、約０．７ｍｇ／ｋｇ、約１ｍｇ／ｋｇ、約１．４ｍｇ／ｋｇ、約１．８ｍｇ／ｋｇ、約２．１ｍｇ／ｋｇ、約２．５ｍｇ／ｋｇ、約２．８５ｍｇ／ｋｇ、約３．２ｍｇ／ｋｇ又は約３．６ｍｇ／ｋｇである。
【０３１１】
[00327]  いくつかの実施形態では、本明細書に開示される、ＫＣａ３．１アゴニストを含むカリウムチャネルアゴニストの有効投与量は、約１ｍｇ〜約５００ｍｇ、約１０ｍｇ〜約３００ｍｇ、約２０ｍｇ〜約２５０ｍｇ、約２５ｍｇ〜約２００ｍｇ、約１ｍｇ〜約５０ｍｇ、約５ｍｇ〜約４５ｍｇ、約１０ｍｇ〜約４０ｍｇ、約１５ｍｇ〜約３５ｍｇ、約２０ｍｇ〜約３０ｍｇ、約２３ｍｇ〜約２８ｍｇ、約５０ｍｇ〜約１５０ｍｇ、約６０ｍｇ〜約１４０ｍｇ、約７０ｍｇ〜約１３０ｍｇ、約８０ｍｇ〜約１２０ｍｇ、約９０ｍｇ〜約１１０ｍｇ又は約９５ｍｇ〜約１０５ｍｇ、約９８ｍｇ〜約１０２ｍｇ、約１５０ｍｇ〜約２５０ｍｇ、約１６０ｍｇ〜約２４０ｍｇ、約１７０ｍｇ〜約２３０ｍｇ、約１８０ｍｇ〜約２２０ｍｇ、約１９０ｍｇ〜約２１０ｍｇ、約１９５ｍｇ〜約２０５ｍｇ又は約１９８〜約２０７ｍｇの範囲内である。いくつかの実施形態では、本明細書に開示されるカリウムチャネルアゴニストの有効投与量は、約２５ｍｇ、約５０ｍｇ、約７５ｍｇ、約１００ｍｇ、約１２５ｍｇ、約１５０ｍｇ、約１７５ｍｇ、約２００ｍｇ、約２２５ｍｇ又は約２５０ｍｇである。
【０３１２】
[00328]  いくつかの実施形態では、本明細書に開示される、ＫＣａ３．１アゴニストを含むカリウムチャネルアゴニストの有効投与量は、約０．０１ｍｇ／ｋｇ〜約４．３ｍｇ／ｋｇ、約０．１５ｍｇ／ｋｇ〜約３．６ｍｇ／ｋｇ、約０．３ｍｇ／ｋｇ〜約３．２ｍｇ／ｋｇ、約０．３５ｍｇ／ｋｇ〜約２．８５ｍｇ／ｋｇ、約０．０１ｍｇ／ｋｇ〜約０．７ｍｇ／ｋｇ、約０．０７ｍｇ／ｋｇ〜約０．６５ｍｇ／ｋｇ、約０．１５ｍｇ／ｋｇ〜約０．６ｍｇ／ｋｇ、約０．２ｍｇ／ｋｇ〜約０．５ｍｇ／ｋｇ、約０．３ｍｇ／ｋｇ〜約０．４５ｍｇ／ｋｇ、約０．３ｍｇ／ｋｇ〜約０．４ｍｇ／ｋｇ、約０．７ｍｇ／ｋｇ〜約２．１５ｍｇ／ｋｇ、約０．８５ｍｇ／ｋｇ〜約２ｍｇ／ｋｇ、約１ｍｇ／ｋｇ〜約１．８５ｍｇ／ｋｇ、約１．１５ｍｇ／ｋｇ〜約１．７ｍｇ／ｋｇ、約１．３ｍｇ／ｋｇ〜約１．６ｍｇ／ｋｇ、約１．３５ｍｇ／ｋｇ〜約１．５ｍｇ／ｋｇ、約１．４ｍｇ／ｋｇ〜約１．４５ｍｇ／ｋｇ、約２．１５ｍｇ／ｋｇ〜約３．６ｍｇ／ｋｇ、約２．３ｍｇ／ｋｇ〜約３．４ｍｇ／ｋｇ、約２．４ｍｇ／ｋｇ〜約３．３ｍｇ／ｋｇ、約２．６ｍｇ／ｋｇ〜約３．１５ｍｇ／ｋｇ、約２．７ｍｇ／ｋｇ〜約３ｍｇ／ｋｇ、約２．８ｍｇ／ｋｇ〜約３ｍｇ／ｋｇ又は約２．８５ｍｇ／ｋｇ〜約２．９５ｍｇ／ｋｇの範囲内である。いくつかの実施形態では、本明細書に開示されるカリウムチャネルアゴニストは、約０．４ｍｇ／ｋｇ、約０．７ｍｇ／ｋｇ、約１ｍｇ／ｋｇ、約１．４ｍｇ／ｋｇ、約１．８ｍｇ／ｋｇ、約２．１ｍｇ／ｋｇ、約２．５ｍｇ／ｋｇ、約２．８５ｍｇ／ｋｇ、約３．２ｍｇ／ｋｇ又は約３．６ｍｇ／ｋｇである。
【０３１３】
[00329]  いくつかの実施形態では、ＫＣａ３．１アゴニストを含むカリウムチャネルアゴニストは、１ｍｇ、２ｍｇ、５ｍｇ、１０ｍｇ、２０ｍｇ、３０ｍｇ、４０ｍｇ、５０ｍｇ、６０ｍｇ、７０ｍｇ、８０ｍｇ、９０ｍｇ、１００ｍｇ、１５０ｍｇ又は２００ｍｇＢＩＤを含む、１〜１０００ｍｇＢＩＤの投与量で投与される。
【０３１４】
[00330]  いくつかの実施形態では、本発明の医薬組成物中に提供される、ＫＣａ３．１アゴニストを含むカリウムチャネルアゴニスト及びその組み合わせの濃度は、独立して、例えば医薬組成物の１００％、９０％、８０％、７０％、６０％、５０％、４０％、３０％、２０％、１９％、１８％、１７％、１６％、１５％、１４％、１３％、１２％、１１％、１０％、９％、８％、７％、６％、５％、４％、３％、２％、１％、０．５％、０．４％、０．３％、０．２％、０．１％、０．０９％、０．０８％、０．０７％、０．０６％、０．０５％、０．０４％、０．０３％、０．０２％、０．０１％、０．００９％、０．００８％、０．００７％、０．００６％、０．００５％、０．００４％、０．００３％、０．００２％、０．００１％、０．０００９％、０．０００８％、０．０００７％、０．０００６％、０．０００５％、０．０００４％、０．０００３％、０．０００２％又は０．０００１％ｗ／ｗ、ｗ／ｖ又はｖ／ｖより低い。
【０３１５】
[00331]  いくつかの実施形態では、本発明の医薬組成物中に提供される、ＫＣａ３．１アゴニストを含むカリウムチャネルアゴニスト及びその組み合わせの濃度は、独立して、医薬組成物の９０％、８０％、７０％、６０％、５０％、４０％、３０％、２０％、１９．７５％、１９．５０％、１９．２５％、１９％、１８．７５％、１８．５０％、１８．２５％、１８％、１７．７５％、１７．５０％、１７．２５％、１７％、１６．７５％、１６．５０％、１６．２５％、１６％、１５．７５％、１５．５０％、１５．２５％、１５％、１４．７５％、１４．５０％、１４．２５％、１４％、１３．７５％、１３．５０％、１３．２５％、１３％、１２．７５％、１２．５０％、１２．２５％、１２％、１１．７５％、１１．５０％、１１．２５％、１１％、１０．７５％、１０．５０％、１０．２５％、１０％、９．７５％、９．５０％、９．２５％、９％、８．７５％、８．５０％、８．２５％、８％、７．７５％、７．５０％、７．２５％、７％、６．７５％、６．５０％、６．２５％、６％、５．７５％、５．５０％、５．２５％、５％、４．７５％、４．５０％、４．２５％、４％、３．７５％、３．５０％、３．２５％、３％、２．７５％、２．５０％、２．２５％、２％、１．７５％、１．５０％、１２５％、１％、０．５％、０．４％、０．３％、０．２％、０．１％、０．０９％、０．０８％、０．０７％、０．０６％、０．０５％、０．０４％、０．０３％、０．０２％、０．０１％、０．００９％、０．００８％、０．００７％、０．００６％、０．００５％、０．００４％、０．００３％、０．００２％、０．００１％、０．０００９％、０．０００８％、０．０００７％、０．０００６％、０．０００５％、０．０００４％、０．０００３％、０．０００２％又は０．０００１％ｗ／ｗ、ｗ／ｖ又はｖ／ｖより高い。
【０３１６】
[00332]  いくつかの実施形態では、医薬組成物中における、ＫＣａ３．１アゴニストを含むカリウムチャネルアゴニストの濃度は、独立して、医薬組成物の約０．０００１％〜約５０％、約０．００１％〜約４０％、約０．０１％〜約３０％、約０．０２％〜約２９％、約０．０３％〜約２８％、約０．０４％〜約２７％、約０．０５％〜約２６％、約０．０６％〜約２５％、約０．０７％〜約２４％、約０．０８％〜約２３％、約０．０９％〜約２２％、約０．１％〜約２１％、約０．２％〜約２０％、約０．３％〜約１９％、約０．４％〜約１８％、約０．５％〜約１７％、約０．６％〜約１６％、約０．７％〜約１５％、約０．８％〜約１４％、約０．９％〜約１２％又は約１％〜約１０％ｗ／ｗ、ｗ／ｖ又はｖ／ｖの範囲内である。
【０３１７】
[00333]  いくつかの実施形態では、医薬組成物中における、ＫＣａ３．１アゴニストを含むカリウムチャネルアゴニストの濃度は、独立して、医薬組成物の約０．００１％〜約１０％、約０．０１％〜約５％、約０．０２％〜約４．５％、約０．０３％〜約４％、約０．０４％〜約３．５％、約０．０５％〜約３％、約０．０６％〜約２．５％、約０．０７％〜約２％、約０．０８％〜約１．５％、約０．０９％〜約１％、約０．１％〜約０．９％ｗ／ｗ、ｗ／ｖ又はｖ／ｖの範囲内である。
【０３１８】
[00334]  いくつかの実施形態では、医薬組成物中における、ＫＣａ３．１アゴニストを含むカリウムチャネルアゴニストの量は、独立して、１０ｇ、９．５ｇ、９．０ｇ、８．５ｇ、８．０ｇ、７．５ｇ、７．０ｇ、６．５ｇ、６．０ｇ、５．５ｇ、５．０ｇ、４．５ｇ、４．０ｇ、３．５ｇ、３．０ｇ、２．５ｇ、２．０ｇ、１．５ｇ、１．０ｇ、０．９５ｇ、０．９ｇ、０．８５ｇ、０．８ｇ、０．７５ｇ、０．７ｇ、０．６５ｇ、０．６ｇ、０．５５ｇ、０．５ｇ、０．４５ｇ、０．４ｇ、０．３５ｇ、０．３ｇ、０．２５ｇ、０．２ｇ、０．１５ｇ、０．１ｇ、０．０９ｇ、０．０８ｇ、０．０７ｇ、０．０６ｇ、０．０５ｇ、０．０４ｇ、０．０３ｇ、０．０２ｇ、０．０１ｇ、０．００９ｇ、０．００８ｇ、０．００７ｇ、０．００６ｇ、０．００５ｇ、０．００４ｇ、０．００３ｇ、０．００２ｇ、０．００１ｇ、０．０００９ｇ、０．０００８ｇ、０．０００７ｇ、０．０００６ｇ、０．０００５ｇ、０．０００４ｇ、０．０００３ｇ、０．０００２ｇ又は０．０００１ｇ以下である。
【０３１９】
[00335]  いくつかの実施形態では、医薬組成物中における、ＫＣａ３．１アゴニストを含むカリウムチャネルアゴニストの量は、独立して、０．０００１ｇ、０．０００２ｇ、０．０００３ｇ、０．０００４ｇ、０．０００５ｇ、０．０００６ｇ、０．０００７ｇ、０．０００８ｇ、０．０００９ｇ、０．００１ｇ、０．００１５ｇ、０．００２ｇ、０．００２５ｇ、０．００３ｇ、０．００３５ｇ、０．００４ｇ、０．００４５ｇ、０．００５ｇ、０．００５５ｇ、０．００６ｇ、０．００６５ｇ、０．００７ｇ、０．００７５ｇ、０．００８ｇ、０．００８５ｇ、０．００９ｇ、０．００９５ｇ、０．０１ｇ、０．０１５ｇ、０．０２ｇ、０．０２５ｇ、０．０３ｇ、０．０３５ｇ、０．０４ｇ、０．０４５ｇ、０．０５ｇ、０．０５５ｇ、０．０６ｇ、０．０６５ｇ、０．０７ｇ、０．０７５ｇ、０．０８ｇ、０．０８５ｇ、０．０９ｇ、０．０９５ｇ、０．１ｇ、０．１５ｇ、０．２ｇ、０．２５ｇ、０．３ｇ、０．３５ｇ、０．４ｇ、０．４５ｇ、０．５ｇ、０．５５ｇ、０．６ｇ、０．６５ｇ、０．７ｇ、０．７５ｇ、０．８ｇ、０．８５ｇ、０．９ｇ、０．９５ｇ、１ｇ、１．５ｇ、２ｇ、２．５、３ｇ、３．５、４ｇ、４．５ｇ、５ｇ、５．５ｇ、６ｇ、６．５ｇ、７ｇ、７．５ｇ、８ｇ、８．５ｇ、９ｇ、９．５ｇ又は１０ｇ超である。
【０３２０】
[00336]  いくつかの実施形態では、本発明は、本発明のＴＩＬを使用した処置と組み合わせて、本明細書に記載の疾患及び状態の処置に使用するための、ＫＣａ３．１アゴニストを含む、カリウムチャネルアゴニストを含む医薬組成物を提供し、ここで、カリウムチャネルアゴニストは、ＴＩＬでの処置後に５０ｍｇの投与量で１日２回投与され、医薬組成物は、無水二塩基性リン酸カルシウム、コロイド状二酸化ケイ素、クロスカルメロースナトリウム、ヒプロメロース、ステアリン酸マグネシウム、微結晶セルロース、ポリエチレングリコール、二酸化チタン又はそれらの組み合わせをさらに含む。いくつかの前述の実施形態では、カリウムチャネルアゴニスト又はＫＣａ３．１アゴニストは、リルゾールである。
【０３２１】
ＴＩＬとカリウムチャネルアゴニストとの組み合わせの医薬組成物
[00337]  好ましい実施形態では、本発明は、ＴＩＬと少なくとも１つのカリウムチャネルアゴニストとの組み合わせを含む注射用医薬組成物及びその組み合わせ並びに腫瘍内注射又は静脈内注入を含む注射に適した医薬賦形剤を提供する。組成物中の薬剤の成分及び量は、本明細書に記載の通りである。
【０３２２】
[00338]  いくつかの実施形態では、ＴＩＬとカリウムチャネルアゴニストとの組み合わせは、単回投与で投与される。そのような投与は、カリウムチャネルアゴニストを導入するために、注射、例えば静脈内注射によるものであり得る。
【０３２３】
[00339]  いくつかの実施形態では、ＴＩＬとカリウムチャネルアゴニストとの組み合わせは、複数回投与で投与される。好ましい実施形態では、ＴＩＬとカリウムチャネルアゴニストとの組み合わせは、複数回投与で投与される。カリウムチャネルアゴニストの投与は、１日に１回、２回、３回、４回、５回、６回又は６回を超え得る。ＴＩＬ及びカリウムチャネルアゴニストの投与は、月に１回、２週間に１回、週に１回又は隔日に１回であり得る。
【０３２４】
[00340]  注射による投与のために本発明の組成物が組み込まれ得る形態には、ゴマ油、コーン油、綿実油又はピーナッツ油並びにエリキシル剤、マンニトール、デキストロース又は滅菌水溶液及び同様の医薬ビヒクルを含む、水性若しくは油性懸濁液又はエマルジョンが含まれる。
【０３２５】
[00341]  生理食塩水中の水溶液も従来から注射に使用されている。エタノール、グリセロール、プロピレングリコール及び液体ポリエチレングリコール（及びそれらの適切な混合物）、シクロデキストリン誘導体及び植物油も使用され得る。適切な流動性は、例えば、分散する場合に必要な粒子サイズを維持するための、レシチンなどのコーティングの使用及び界面活性剤の使用によって維持することができる。微生物の作用の防止は、様々な抗菌剤及び抗真菌剤、例えばパラベン、クロロブタノール、フェノール、ソルビン酸及びチメロサールによってもたらされ得る。
【０３２６】
[00342]  滅菌注射用溶液は、必要に応じて、上に列挙したような様々な他の成分と共に適切な媒体中に必要量のカリウムチャネルアゴニスト及びＴＩＬの組み合わせを組み込み、続いて濾過滅菌することによって調製される。一般的に、分散液は、基本的な分散媒体と、上に列挙したものからの必要な他の成分とを含有する滅菌ビヒクル中に様々な滅菌活性成分を組み込むことによって調製される。滅菌注射用溶液を調製するための滅菌粉末の場合、特定の望ましい調製方法は、活性成分に加えて任意のさらなる所望の成分の粉末を先に滅菌濾過したその溶液から得る、真空乾燥及び凍結乾燥法である。
【０３２７】
他の医薬組成物
[00343]  医薬組成物は、本明細書に記載の組成物と、舌下、口腔、直腸、骨内、眼内、鼻腔内、硬膜外又は脊髄内投与に適した１つ以上の薬学的に許容される賦形剤とからも調製され得る。そのような医薬組成物の調製は、当技術分野で周知である。例えば、Anderson,et al, eds., Handbook of Clinical Drug Data, Tenth Edition, McGraw-Hill, 2002；及びPrattand Taylor, eds., Principles of Drug Action, Third Edition, Churchill Livingston,N.Y., 1990を参照されたく、このそれぞれは、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。
【０３２８】
[00344]  ＴＩＬとカリウムチャネルアゴニストとの組み合わせの投与は、作用部位への化合物の送達を可能にする任意の方法によって達成され得る。これらの方法は、経口経路、十二指腸内経路、非経口注射（静脈内、動脈内、皮下、筋肉内、血管内、腹腔内又は注入を含む）、局所（例えば、経皮適用）、直腸投与、カテーテル又はステントによる局所送達又は吸入によるものを含む。化合物の組み合わせは、脂肪内又は髄腔内投与することもできる。
【０３２９】
[00345]  本発明は、キットも提供する。キットには、単独での又は適切なパッケージ中で組み合わせた直ちに投与できるＴＩＬの組み合わせ及びカリウムチャネルアゴニスト並びに使用説明書、臨床研究の議論及び副作用のリストを含み得る文書が含まれる。そのようなキットは、科学文献、添付文書、臨床試験結果及び／又はこれらの要約なども含み得、これは、組成物の活性及び／又は利点を示すか若しくは設定し、及び／又は用量、投与、副作用、薬物相互作用若しくは医療提供者にとって有用な他の情報を記載する。そのような情報は、様々な研究、例えばインビボモデルを含む実験動物を用いた研究及びヒトの臨床試験に基づく研究の結果に基づき得る。キットは、別の活性医薬成分をさらに含み得る。選択された実施形態では、カリウムチャネルアゴニスト及びＴＩＬ並びに別の活性医薬成分は、キット内の別々の容器に別々の組成物として提供される。選択された実施形態では、カリウムチャネルアゴニスト及びＴＩＬからなる群から選択される分子は、キットの容器内に単一組成物として提供される。使用のための適切なパッケージ及びさらなる物品（例えば、液体製剤用の計量カップ、空気への曝露を最小限に抑えるためのホイル包装など）は、当技術分野において公知であり、キットに含まれ得る。本明細書に記載のキットは、医師、看護師、薬剤師、処方医などを含む医療提供者に提供、販売及び／又は販売促進することができる。キットはまた、選択された実施形態では、消費者に直接販売され得る。
【０３３０】
[00346]  上記のキットは、本明細書に記載の疾患及び状態の処置に使用するのが好ましい。好ましい実施形態では、キットは、癌の処置に使用するためのものである。好ましい実施形態では、キットは、固形腫瘍癌の処置に使用するためのものである。好ましい実施形態では、本発明のキットは、本明細書に記載の癌のいずれかを含む癌の処置に使用するためのものである。
【０３３１】
癌を処置する方法
[00347]  上記のＴＩＬ（及びその集団）とカリウムチャネルアゴニストとの組成物及び組み合わせは、過剰増殖性障害を処置するための方法において使用することができる。好ましい一実施形態では、それらは、癌の処置に使用するためのものである。好ましい実施形態では、本発明は、癌が血液悪性腫瘍又は固形腫瘍である、癌の処置方法を提供する。好ましい一実施形態では、本発明は、癌を処置する方法であって、癌は、黒色腫、卵巣癌、子宮頸癌、肺癌、膀胱癌、乳癌、頭頸部癌、腎細胞癌、急性骨髄性白血病、結腸直腸癌及び肉腫からなる群から選択される、方法を提供する。好ましい一実施形態では、本発明は、癌を処置する方法であって、癌は、非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）又はトリプルネガティブ乳癌、二重抵抗性黒色腫及びブドウ膜（眼内）黒色腫からなる群から選択される、方法を提供する。好ましい一実施形態では、本発明は、癌をＴＩＬとカリウムチャネルアゴニストとの組み合わせにより処置する方法であって、癌は、黒色腫、卵巣癌、子宮頸癌、肺癌、膀胱癌、乳癌、頭頸部癌、腎細胞癌、急性骨髄性白血病、結腸直腸癌及び肉腫からなる群から選択される、方法を提供する。好ましい一実施形態では、本発明は、癌をＴＩＬとカリウムチャネルアゴニストとの組み合わせにより処置する方法であって、癌は、非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）、エストロゲン受容体陽性（ＥＲ＋）乳癌、プロゲステロン受容体陽性（ＰＲ＋）乳癌、ヒト上皮増殖因子受容体２（ＨＥＲ２＋）乳癌、トリプルポジティブ乳癌（ＥＲ＋／ＰＲ＋／ＨＥＲ２＋）、トリプルネガティブ乳癌（ＥＲ−／ＰＲ−／ＨＥＲ２−）、二重抵抗性黒色腫及びブドウ膜（眼内）黒色腫からなる群から選択される、方法を提供する。
【０３３２】
[00348]  いくつかの実施形態では、本発明は、腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）の集団を用いて癌を処置する方法であって、
（ａ）患者から腫瘍を切除するステップであって、腫瘍は、ＴＩＬの第１の集団を含む、ステップ；
（ｂ）腫瘍を断片化して腫瘍断片を得るステップ；
（ｃ）腫瘍断片を第１の細胞培養培地と接触させるステップ；
（ｄ）第１の細胞培養培地中でＴＩＬの第１の集団の初期増殖を行ってＴＩＬの第２の集団を得るステップであって、ＴＩＬの第２の集団の数は、ＴＩＬの第１の集団よりも少なくとも５倍多く、第１の細胞培養培地は、ＩＬ−２を含む、ステップ；
（ｅ）第２の細胞培養培地中でＴＩＬの第２の集団の急速増殖を行ってＴＩＬの第３の集団を得るステップであって、ＴＩＬの第３の集団の数は、急速増殖の開始から７日後にＴＩＬの第２の集団よりも少なくとも５０倍多く、第２の細胞培養培地は、ＩＬ−２、ＯＫＴ−３（抗ＣＤ３抗体）及び照射同種異系末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）を含み、急速増殖は、１４日以下の期間にわたって行われる、ステップ；
（ｆ）ＴＩＬの第３の集団を回収するステップ；及び
（ｇ）ＴＩＬの第３の集団の治療有効部分を、癌を有する患者に投与するステップ
を含み、第１の細胞培養培地若しくは第２の細胞培養培地のいずれか又は第１の細胞培養培地及び第２の細胞培養培地の両方は、カリウムチャネルアゴニストをさらに含み、
癌は、黒色腫、卵巣癌、子宮頸癌、肺癌、膀胱癌、乳癌、頭頸部癌、腎細胞癌、急性骨髄性白血病、結腸直腸癌及び肉腫からなる群から選択される、方法を提供する。
【０３３３】
[00349]  いくつかの実施形態では、本発明は、腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）の集団を用いて癌を処置する方法であって、
（ａ）患者から腫瘍を切除するステップであって、腫瘍は、ＴＩＬの第１の集団を含む、ステップ；
（ｂ）腫瘍を断片化して腫瘍断片を得るステップ；
（ｃ）腫瘍断片を第１の細胞培養培地と接触させるステップ；
（ｄ）第１の細胞培養培地中でＴＩＬの第１の集団の初期増殖を行ってＴＩＬの第２の集団を得るステップであって、ＴＩＬの第２の集団の数は、ＴＩＬの第１の集団よりも少なくとも５倍多く、第１の細胞培養培地は、ＩＬ−２を含む、ステップ；
（ｅ）第２の細胞培養培地中でＴＩＬの第２の集団の急速増殖を行ってＴＩＬの第３の集団を得るステップであって、ＴＩＬの第３の集団の数は、急速増殖の開始から７日後にＴＩＬの第２の集団よりも少なくとも５０倍多く、第２の細胞培養培地は、ＩＬ−２、ＯＫＴ−３（抗ＣＤ３抗体）及び照射同種異系末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）を含み、急速増殖は、１４日以下の期間にわたって行われる、ステップ；
（ｆ）ＴＩＬの第３の集団を回収するステップ；及び
（ｇ）ＴＩＬの第３の集団の治療有効部分を、癌を有する患者に投与するステップ
を含み、第１の細胞培養培地若しくは第２の細胞培養培地のいずれか又は第１の細胞培養培地及び第２の細胞培養培地の両方は、カリウムチャネルアゴニストをさらに含み、
癌は、非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）、エストロゲン受容体陽性（ＥＲ＋）乳癌、プロゲステロン受容体陽性（ＰＲ＋）乳癌、ヒト上皮増殖因子受容体２（ＨＥＲ２＋）乳癌、トリプルポジティブ乳癌（ＥＲ＋／ＰＲ＋／ＨＥＲ２＋）、トリプルネガティブ乳癌（ＥＲ−／ＰＲ−／ＨＥＲ２−）、二重抵抗性黒色腫及びブドウ膜（眼内）黒色腫からなる群から選択される、方法を提供する。
【０３３４】
[00350]  示された疾患又は障害の処置、予防及び／又は管理における本明細書に記載の方法、化合物及び化合物の組み合わせの有効性は、当技術分野において公知の様々な動物モデルを使用して試験することができる。膵臓癌の処置の有効性を判断するためのモデルは、Herreros-Villanueva,et al., World J. Gastroenterol.2012, 18, 1286-1294に記載されている。乳癌の処置の有効性を判断するためのモデルは、例えば、Fantozzi,Breast Cancer Res.2006, 8, 212に記載されている。卵巣癌の処置の有効性を判断するためのモデルは、例えば、Mullany, et al,Endocrinology 2012, 153, 1585-92；及びFong, et al, J. Ovarian Res.2009, 2, 12に記載されている。黒色腫の処置の有効性を判断するためのモデルは、例えば、Damsky,et al, Pigment Cell & Melanoma Res.2010, 23, 853-859に記載されている。肺癌の処置の有効性を判断するためのモデルは、例えば、Meuwissen,et al, Genes & Development, 2005, 19, 643-664に記載されている。肺癌の処置の有効性を判断するためのモデルは、例えば、Kim,Clin.Exp.Otorhinolaryngol.2009, 2, 55-60；及びSano, Head Neck Oncol.2009, 1, 32に記載されている。ＣＴ２６モデルを含む、結腸直腸癌の処置の有効性を判断するためのモデルは、Castle,et al, BMC Genomics, 2013, 15, 190；Endo, et al, Cancer Gene Therapy, 2002, 9, 142-148；Roth,et al, Adv.Immunol.1994, 57, 281-351；Fearon, et al, Cancer Res.1988, 48, 2975-2980.に記載されている。
【０３３５】
化学療法による骨髄非破壊的リンパ球枯渇
[00351]  一実施形態では、本発明は、ＴＩＬの集団を用いて癌を処置する方法を提供し、ここで、患者は、本開示のＴＩＬの注入及びカリウムチャネルアゴニストによる処置前に骨髄非破壊的化学療法で前処置される。一実施形態では、骨髄非破壊的化学療法は、１つ以上の化学療法剤である。一実施形態では、骨髄非破壊的化学療法は、２日間（ＴＩＬ注入の２７日前及び２６日前）のシクロホスファミド６０ｍｇ／ｋｇ／日及び５日間（ＴＩＬ注入の２７〜２３日前）のフルダラビン２５ｍｇ／ｍ２／日である。一実施形態では、本開示による骨髄非破壊的化学療法及びＴＩＬ注入（０日目）後、患者は、生理学的許容量まで８時間ごとに７２０，０００ＩＵ／ｋｇでＩＬ−２の静脈内注入を受ける。
【０３３６】
[00352]  実験的知見は、腫瘍特異的Ｔリンパ球の養子移入前のリンパ球枯渇が、調節性Ｔ細胞及び免疫系の競合要素（「サイトカインシンク」）を排除することによって処置効果を高めるのに重要な役割を果たすことを示している。したがって、本発明のいくつかの実施形態は、本発明のＴＩＬを導入する前に患者においてリンパ球枯渇ステップ（「免疫抑制調整」とも称される）を利用する。
【０３３７】
[00353]  一般的に、リンパ球枯渇は、フルダラビン又はシクロホスファミド（活性型はマホスファミドと称される）及びその組み合わせの投与を使用して達成される。そのような方法は、Gassner,et al, Cancer Immunol.Immunother.2011, 60, 75-85、Muranski, et al, Nat.Clin.Pract.Oncol,2006, 3, 668-681、Dudley, et al, J. Clin.Oncol.2008, 26, 5233-5239及びDudley, et al,J. Clin.Oncol.2005, 23, 2346-2357に記載されており、これらの全ては、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。
【０３３８】
[00354]  いくつかの実施形態では、フルダラビンは、０．５μｇ／ｍＬ〜１０μｇ／ｍＬフルダラビンの濃度で投与される。いくつかの実施形態では、フルダラビンは、１μｇ／ｍＬフルダラビンの濃度で投与される。いくつかの実施形態では、フルダラビン処置は、１日、２日、３日、４日、５日、６日又は７日以上にわたって実施される。いくつかの実施形態では、フルダラビンは、１０ｍｇ／ｋｇ／日、１５ｍｇ／ｋｇ／日、２０ｍｇ／ｋｇ／日、２５ｍｇ／ｋｇ／日、３０ｍｇ／ｋｇ／日、３５ｍｇ／ｋｇ／日、４０ｍｇ／ｋｇ／日又は４５ｍｇ／ｋｇ／日の投与量で投与される。いくつかの実施形態では、フルダラビン処置は、３５ｍｇ／ｋｇ／日で２〜７日間実施される。いくつかの実施形態では、フルダラビン処置は、３５ｍｇ／ｋｇ／日で４〜５日間実施される。いくつかの実施形態では、フルダラビン処置は、２５ｍｇ／ｋｇ／日で４〜５日間実施される。
【０３３９】
[00355]  いくつかの実施形態では、シクロホスファミドの活性型であるマホスファミドは、シクロホスファミドの投与により０．５μｇ／ｍＬ〜１０μｇ／ｍＬの濃度で得られる。いくつかの実施形態では、シクロホスファミドの活性型であるマホスファミドは、シクロホスファミドの投与により１μｇ／ｍＬの濃度で得られる。いくつかの実施形態では、シクロホスファミド処置は、１日、２日、３日、４日、５日、６日又は７日以上にわたって実施される。いくつかの実施形態では、シクロホスファミドは、１００ｍｇ／ｍ２／日、１５０ｍｇ／ｍ２／日、１７５ｍｇ／ｍ２／日、２００ｍｇ／ｍ２／日、２２５ｍｇ／ｍ２／日、２５０ｍｇ／ｍ２／日、２７５ｍｇ／ｍ２／日又は３００ｍｇ／ｍ２／日の投与量で投与される。いくつかの実施形態では、シクロホスファミドは、静脈内（すなわちｉ．ｖ．）投与される。いくつかの実施形態では、シクロホスファミド処置は、３５ｍｇ／ｋｇ／日で２〜７日間実施される。いくつかの実施形態では、シクロホスファミド処置は、２５０ｍｇ／ｍ２／日、ｉ．ｖ．で、４〜５日間実施される。いくつかの実施形態では、シクロホスファミド処置は、２５０ｍｇ／ｍ２／日、ｉ．ｖ．で、４日間実施される。
【０３４０】
[00356]  いくつかの実施形態では、リンパ球枯渇は、フルダラビン及びシクロホスファミドを共に患者に投与することによって行われる。いくつかの実施形態では、４日間にわたり、フルダラビンは、２５ｍｇ／ｍ２／日、ｉ．ｖ．で投与され、シクロホスファミドは、２５０ｍｇ／ｍ２／日、ｉ．ｖ．で投与される。
【０３４１】
[00357]  一実施形態では、リンパ球枯渇は、６０ｍｇ／ｍ２／日の用量で２日間にわたってシクロホスファミドを投与し、続いて２５ｍｇ／ｍ２／日の用量で５日間にわたってフルダラビンを投与することにより行われる。
【実施例】
【０３４２】
実施例
[00358]  本明細書に包含される実施形態は、以下の実施例を参照して説明される。これらの実施例は、説明のみを目的として提供され、本明細書に包含される本開示は、決してこれらの実施例に限定されると解釈されるべきではなく、むしろ本明細書に提供される教示の結果として明らかになるあらゆる変形形態を包含すると解釈されるべきである。
【０３４３】
実施例１  −  ＫＣａ３．１の発現
[00359]  ＫＣａ３．１は、健常ドナーＰＢＭＣにおける全てのＴ細胞サブセットによって広く発現される。Ｔ細胞サブセットは、ＣＤ４５ＲＡ及びＣＣＲ７、すなわちナイーブ、セントラルメモリー（ＴＣＭ）、エフェクターメモリー（ＴＥＦ）及びエフェクターメモリーＲＡ＋（ＴＥＭＲＡ）細胞を用いて定義され、図１に示される細胞選別戦略は、Becton,Dickinson & Co.(BD) FACS CANTO IIフローサイトメトリーシステムを使用して行われた。健常ドナーＰＢＭＣを抗ＣＤ３、抗ＣＤ４、抗ＣＤ８、抗ＫＣａ３．１、抗ＣＤ４５ＲＡ及び抗ＣＣＲ７で染色し、フローサイトメトリーによって分析した（ｎ＝６）。ＫＣａ３．１発現のパーセンテージは、各Ｔ細胞サブセット、すなわちＣＤ３＋ＣＤ４＋（図２Ａ及び図３Ａ）及びＣＤ３＋ＣＤ８＋サブセット（図２Ｂ及び図３Ｂ）において実証されている。スチューデントの片側Ｔ検定を使用すると、各Ｔ細胞サブセットのＫＣａ３．１発現に統計的な差は見られない（ｐ値＜０．０５は、統計的に有意と見なされる）。
【０３４４】
[00360]  ＫＣａ３．１の動的発現を研究するために、２つの健常ドナーＰＢＭＣ株及び黒色腫腫瘍からの３つのＴＩＬ株を、ＫＣａ３．１アゴニストＳＫＡ−３１（式（２））を有する抗ＣＤ３及び抗ＣＤ２８で活性化した。０日目（ベースライン）のＰＢＭＣ及びＴＩＬをＫＣａ３．１発現の対照として使用した。健常ドナーＰＢＭＣ及び３つのＴＩＬ株（Ｍ００４、Ｍ１０１１及びＭ１０２３）を解凍し、ＩＬ−２（６０００ＩＵ／ｍＬ）（CellGenixInc., Portsmouth, NH, USA）を含む、RPMI 1640（Thermo Fisher Scientific, Waltham, MA, USA）、１ｍＭのGlutamax（ThermoFisher Scientific）、１ｍＭのピルビン酸（Thermo Fisher Scientific）、５０μＭの２−メルカプトエタノール（ThermoFisher Scientific）及び1X Pen-Strep（Thermo Fisher Scientific）及び１０％ヒトＡＢ血清（Gemini Bio-Products,West Sacramento, CA, USA）を含有するＴＩＬ培地（ＴＩＬ  ＣＭ）中で培養した。翌日、ＰＢＭＣを、５０ｎＭのＳＫＡ−３１（Sigma-AldrichCo., St. Louis, MO, USA）を含むか又は含まない抗ＣＤ３（Clone CLB-T3/4.E、Cell Sciences）（１μｇ／ｍＬ）及び抗ＣＤ２８（Clone28.2、BioLegend, San Diego, CA, USA）（５００ｎｇ／ｍＬ）で活性化した。５０ｎＭのＳＫＡ−３１を含むか又は含まない抗ＣＤ３（CloneCLB-T3/4.E、1XE mAB、Cell Sciences）（１００ｎｇ／ｍＬ）及び抗ＣＤ２８（５００ｎｇ／ｍＬ）でＴＩＬを刺激した。活性化後１、３、７日目に細胞を回収し、抗ＣＤ３（クローンSP34-2、BDBiosciences）、抗ＣＤ８（クローンRPA-T8、BioLegend）、抗ＫＣａ３．１（ポリクローナル、Alomone Lab）及びAmCyan（ThermoFisher Scientific）で染色し、BD FACS CANTO IIシステムを使用したフローサイトメトリーにより分析した。
【０３４５】
[00361]  結果を図４に示す。抗ＣＤ３（ＯＫＴ３）によるＴ細胞活性化時、ＫＣａ３．１発現が１日目に最初に観察された。最も高い発現は、３日目に見られた。発現は、７日目に徐々に低下した。ヒトＰＢＭＣ及びＴＩＬにおいて、ＫＣａ３．１発現は、比較的低く、抗ＣＤ３及び抗ＣＤ２８による刺激後２４時間以内に上方制御が観察された。結果は、ＫＣａ３．１アゴニストＳＫＡ−３１の添加がＫＣａ３．１発現を変化させなかったことを示す。この結果は、ＫＣａ３．１アゴニストの有無にかかわらず、ＫＣａ３．１チャネル発現がＲＥＰの７日目までダウンレギュレーションを開始することが見出されたという驚くべき結果も示しており、したがって、ＫＣａ３．１アゴニストの使用は、ＴＩＬのＲＥＰ（又はプレＲＥＰ）中、０日目とおよそ７日目〜１１日目（又はダウンレギュレーションによって決定される適切な期間）との間で効果的に採用され得る。
【０３４６】
[00362]  Ｔ細胞活性化後のＫＣａ３．１発現の上方制御をさらに研究した。健常ドナーＰＢＭＣを抗ＣＤ３（１０００ｎｇ／ｍＬ）及び抗ＣＤ２８（５００ｎｇ／ｍＬ）で活性化した（ｎ＝６）。擬似カラープロットは、ＴＣＲ活性化後０日目及び３日目のＣＤ３＋ＣＤ４＋サブセット（図５、上）及びＣＤ３＋ＣＤ８＋サブセット（図５、下）中のＫＣａ３．１のパーセンテージを示す。３日の時間経過内のＫＣａ３．１の動的発現は、ＣＤ３＋ＣＤ４＋（図６、上）及びＣＤ３＋ＣＤ８＋サブセット（図６、下）で実証されている。
【０３４７】
[00363]  プレＲＥＰ  ＴＩＬ（すなわちＩＬ−２中での培養後）におけるＫＣａ３．１の発現の増加も観察された。ＫＣａ３．１発現を健常ドナーＰＢＭＣ（ｎ＝６）及びプレＲＥＰ  ＴＩＬ（ｎ＝８）においてフローサイトメトリーによって評価した。疑似カラープロット及びドットプロットは、健常ドナーＰＢＭＣのＣＤ３＋ＣＤ４＋及びＣＤ３＋ＣＤ８＋サブセット及びＴＩＬ（図７及び図８）において示されたＫＣａ３．１発現のパーセンテージを表す（ｐ値は、スチューデントの片側Ｔ検定を使用して、正常ＰＢＭＣとプレＲＥＰ−ＴＩＬとの間の差を表し、ここで、０．０５未満のｐ値は、統計的に有意であると見なされる）。
【０３４８】
実施例２  −  カリウムチャネルアゴニストはＲＥＰ中のＴＩＬ増殖を促進する
[00364]  ＫＣａ３．１アゴニストＳＫＡ−３１（式（２））を用いて又は用いずに、ＲＥＰプロトコルを使用して１４日間メラノーマＴＩＬ株を増殖させた。G-REX２４ウェルプレート（WilsonWolf Manufacturing）中において、ＴＩＬとフィーダー細胞の比が１：１００の照射ＰＢＭＣフィーダー細胞を使用して、抗ＣＤ３  ＯＫＴ−３抗体（MiltenyiBiotech）（３０ｎｇ／ｍＬ）で１０個のＴＩＬ株（Ｍ００４、Ｍ１０１１、Ｍ１０１７、Ｍ１０２０、Ｍ１０２１、Ｍ１０２５、Ｍ１０３０、Ｍ１０３４、Ｍ１０３６及びＭ１０４５）をＲＥＰにより増殖させた。５０ｍＭのＳＫＡ−３１を含むか又は含まない８ｍＬのＴＩＬ  ＲＥＰ培地（１：１の比率のＴＩＬ  ＣＭ及びＡｉｍ  Ｖ培地（ThermoFisher Scientific））中において、０日目にG-REX２４ウェルあたりおよそ１×１０６ＴＩＬを使用した。２日目に培養物にＩＬ−２（６０００ＩＵ／ｍＬ）を添加した。培地の半分は、５日目に、５０ｍＭのＳＫＡ−３１を含むか又は含まない新鮮なＡＩＭＶ培地と交換した。ＲＥＰ培養物に対し、それぞれ９日目及び１２日目にＩＬ−２（３０００ＩＵ／ｍＬ）を添加した。１４日目にＴＩＬを計数し、増殖倍率について計算した。
【０３４９】
[00365]  結果を図９に示す。観察された増殖倍率は、ＫＣａ３．１アゴニストの添加を伴う場合、ＫＣａ３．１アゴニストなしで行われた対照と比較して有意に高い。驚くべきことに、ＲＥＰで増殖されたＴＩＬは、ＳＫＡ−３１の存在下で１．４２倍の増殖を示した（ｐ＝０．００２）。
【０３５０】
実施例３  −  カリウムチャネルアゴニストで処置したＴＩＬは、分化度の低い表現型を示す
[00366]  実施例２と同様に、ＫＣａ３．１アゴニストＳＫＡ−３１（式（２））を用いて又は用いずに、ＲＥＰプロトコルを使用して、１４日間、１０個の黒色腫ＴＩＬ株を増殖させた。各ＲＥＰの終わりにＴＩＬを回収し、抗ＣＤ３（クローンＳＰ３４−２、BDBiosciences）、抗ＣＤ２８（クローンＣＤ２８．２、BD biosciences）及び抗ＣＤ２７（Ｍ−Ｔ２７１、BD Biosciences）抗体を使用して表現型を決定した。
【０３５１】
[00367]  結果は、図１０、図１１及び図１２に提示され、ＫＣａ３．１アゴニストＳＫＡ−３１で処置された黒色腫ＴＩＬがより大きいＣＤ８＋ＣＤ２８＋（ｐ＝０．０４）、ＣＤ８＋ＣＤ２７＋（ｐ＝０．０４）及びＣＤ８＋ＣＤ２７＋ＣＤ２８＋Ｔ細胞サブセット（ｐ＝０．００２）の増殖を呈することを示す。全体として、結果は、ＫＣａ３．１アゴニストで処置したＴＩＬが、ＣＤ８＋ＣＤ２７＋、ＣＤ８＋ＣＤ２８＋及びＣＤ８＋ＣＤ２７＋ＣＤ２８＋Ｔ細胞の、より大きいサブセットを有する驚くほど分化度の低い表現型を呈することを示す。
【０３５２】
実施例４  −  カリウムチャネルアゴニストはプレＲＥＰ  ＴＩＬにおいてＣＣＲ７＋及びＣＤ２５＋発現を促進する
[00368]  ３つの腫瘍（腎臓、エストロゲン受容体陽性（ＥＲ＋）乳房及び黒色腫）をＩＬ−２単独又はＳＫＡ−３１を含むＩＬ−２のいずれかと共に増殖させて、プレＲＥＰ段階におけるＫＣａ３．１アゴニストの性能を評価した。切除した腫瘍サンプルを３〜５ｍｍ２の断片に切断した。４〜８個の腫瘍断片を、１００ｎＭのＳＫＡ−３１を伴って又は伴わず、ＩＬ−２（６０００ＩＵ／ｍＬ）と共にＴＩＬ  ＣＭ（前述）を含有するGREX-10フラスコに入れた。回収まで５日ごとに培養物にＩＬ−２を添加した。３週間後、ＴＩＬを収集し、計数し、抗ＣＤ８（クローンRPA-T8、BioLegend）、抗ＣＤ４（OKT-4、BioLegend）、抗ＣＣＲ７（BioLegendG043H7）又はAmCyan（Thermo Fisher Scientific）で染色し、BD FACS CANTO IIシステムを使用したフローサイトメトリーにより分析した。３つの腫瘍断片におけるＣＣＲ７発現の結果を、図１４で提示される腫瘍の１つについての代表的なフローサイトメトリーの結果と共に図１３に示す。
【０３５３】
[00369]  ＣＣＲ７は、メモリーＴ細胞と関連しており、ＴＩＬ増殖を促進し、Ｔ細胞分化を減弱させる。Campbell, et al., J. Immunol.2001, 166, 877-84；Gattinoni, et al., Nature Med.2011, 17,1290-97；Zhou, et al., J. Immunol.2005, 175, 7046-52。図６及び図７の結果は、ＫＣａ３．１アゴニストがＴＩＬ中でのＣＣＲ７の発現を驚くほど増強することを示しており、これは、ＫＣａ３．１アゴニストを使用して増殖されたＴＩＬのより良好な臨床性能を提供し得る。
【０３５４】
[00370]  ＳＫＡ−３１がＣＤ２５及びＣＣＲ７の発現を増強するというさらなる証拠も得られた。プレＲＥＰ  ＴＩＬをＩＬ−２（６０００ＵＩ／ｍＬ）単独又はＳＫＡ−３１と共に増殖させ、２１日後に分析した（ｎ＝１４；腫瘍タイプ：乳癌（８）、黒色腫（３）、腎臓（２）、卵巣（１））。ＣＣＲ７＋発現は、ＣＤ４＋（図１５、上）及びＣＤ８＋サブセット（図１５、下）においてフローサイトメトリーによって評価した。代表的なフローサイトメトリー実験を図１６に示す。ＣＤ２５＋発現は、ＣＤ４＋（図１７、上）及びＣＤ８＋サブセット（図１７、下）においてフローサイトメトリーによって評価した（ｎ＝１６、乳癌（８）、黒色腫（３）、腎臓（３）、卵巣（２））。代表的なフローサイトメトリー実験を図１８に示す。両方の場合において、ｐ値は、スチューデントの片側Ｔ検定を使用して、無処置とＳＫＡ−３１との間の差を表し、０．０５未満のｐ値は、統計的に有意であると見なされる。
【０３５５】
実施例５  −  カリウムチャネルアゴニストは、ＣＤ３＋ＣＤ８＋プレＲＥＰ  ＴＩＬの増殖を促進する
[00371]  卵巣癌及び乳癌（トリプルポジティブ、ＥＲ＋／ＰＲ＋／ＨＥＲ２＋）腫瘍からの腫瘍断片を、濃度５０ｎＭのＩＬ−２単独又はＳＫＡ−３１（式（２））を含むＩＬ−２のいずれかと共にプレＲＥＰ段階で増殖させた。切除した腫瘍サンプルを３〜５ｍｍ２の断片に切断した。４〜８個の腫瘍断片を、ＩＬ−２（６０００ＩＵ／ｍＬ）と共にＴＩＬ  ＣＭ（前述）を含有するGREX-10フラスコに入れた。回収まで５日ごとに培養物にＩＬ−２を添加した。３週間後、ＴＩＬを収集し、計数し、抗ＣＤ８抗体（クローンRPA-T8、BioLegend）、抗ＣＤ４抗体（OKT-4、BioLegend）、抗ＣＤ３抗体（クローンSP34-2,BD Biosciences）及びAmCyan（Thermo Fisher Scientific）で染色し、BD FACS CANTO IIシステムを使用したフローサイトメトリーにより分析した。
【０３５６】
[00372]  結果は、図１９に提示され、ＣＤ３＋ＣＤ８＋ＴＩＬについて卵巣腫瘍断片から得られたＴＩＬのＫＣａ３．１アゴニストの存在下での絶対細胞数の増加を示す。図２０において、乳房腫瘍断片の結果は、ＣＤ３＋ＣＤ４＋ＴＩＬ及びＣＤ３＋ＣＤ８＋ＴＩＬの両方について絶対細胞数の増加を示す。驚くべきことに、ＫＣａ３．１アゴニストは、治療上有用なプレＲＥＰ  ＴＩＬの増殖及び絶対細胞数を増強することが見出された。プレＲＥＰ  ＴＩＬ中のＣＤ３＋ＣＤ８＋Ｔ細胞の割合が高いことは、ＲＥＰ後に優れた最終ＴＩＬ生成物をもたらし、これは、ＴＩＬ処置患者における臨床反応と強く関連することが示されている。
【０３５７】
実施例６  −  インターフェロン−γ分泌及び腫瘍殺傷に対するＫＣａ３．１アゴニストの効果
[00373]  ＫＣａ３．１アゴニストが腫瘍殺傷に悪影響を及ぼさずにＴＩＬからのＩＦＮ−γ分泌を増強及び維持することを実証するために実験を行った。図２１は、酵素結合免疫吸着測定法（ＥＬＩＳＡ）によって測定されたＩＦＮ−γ放出の結果を示す。ＳＫＡ−３１を伴って及び伴わずに調製したＴＩＬを３：１のＴＩＬ：黒色腫細胞比（すなわち３：１のエフェクター：標的又はＥ：Ｔ比）で２４時間、黒色腫腫瘍細胞と共培養した。８０μｇ／ｍＬの抗体クローンＷ６／３２（BioLegend）を使用してＴＣＲ  ＭＨＣ−Ｉの遮断を行った。結果を図２１に示す。ＩＦＮ−γ放出における統計的に有意な増加が１つのＴＩＬ細胞株について観察され、第２のＴＩＬ細胞株からのＩＦＮ−γ放出に対する悪影響は、観察されなかった。ＭＨＣ−Ｉ遮断の結果は、殺傷がＴ細胞溶解性殺傷によって引き起こされたものであり、サイトカイン、ＮＫ細胞又は他の機構によって引き起こされたものでないことを実証している。図２２は、アポトーシス黒色腫細胞についてのカスパーゼ−３マーカーによる、異なるＥ：Ｔ比でのＭ１０３２株についての細胞殺傷の結果を示す。図２３は、アポトーシス黒色腫細胞についてのカスパーゼ−３マーカーによる、異なるＥ：Ｔ比でのＭ１０４１株についての細胞殺傷の結果を示す。両方の場合において、ＫＣａ３．１アゴニストＳＫＡ−３１の使用から腫瘍殺傷に対する悪影響は、観察されない。
【０３５８】
実施例７  −  ＴＩＬを増殖させ、増殖されたＴＩＬを用いて癌を処置する方法
[00374]  ＫＣａ３．１チャネルを標的とすることは、養子Ｔ細胞療法の臨床応用のための分化度の低いＴＩＬを増殖させて維持するための新しい戦略である。ＫＣａ３．１は、ナイーブ、セントラルメモリー（ＴＣＭ）、エフェクターメモリー（ＴＥＦ）及びエフェクターメモリーＣＤ４５ＲＡ＋（ＴＥＭＲＡ）細胞を含む全てのＴ細胞サブセットによって発現される。Ｔ細胞活性化後２４時間以内にＫＣａ３．１の有意な上方制御が見られる。ＴＩＬは、末梢血中の正常Ｔ細胞（ＰＢＭＣ）と比較して有意に高いレベルのＫＣａ３．１を有し、これは、ＴＩＬが活性化Ｔリンパ球であることを示唆する。例示的なＫＣａ３．１アゴニスト（ＳＫＡ−３１）によるＫＣａ３．１チャネルの活性化は、ＴＩＬ増殖を促進し、ＳＫＡ−３１は、ＴＩＬ増殖中にＣＤ２７＋及びＣＤ２８＋発現を維持することを促進する。増加したＣＤ２５発現及びＣＣＲ７発現は、ＩＬ−２及びＳＫＡ−３１と共に増殖させたプレＲＥＰ  ＴＩＬにおいて見出される。Ｋ＋チャネルの活性化は、ＴＩＬの増殖を促進し、分化度の低い表現型を維持し、長期の生着を促進するための新しい戦略である。
【０３５９】
[00375]  ＴＩＬは、当技術分野において公知の方法及び本明細書に記載の任意の方法を用いて増殖させることができる。例えば、ＴＩＬを増殖させるための例示的な方法が図２４に示される。本明細書に記載されているように、カリウムチャネルアゴニストを図２４の方法に加え得る。カリウムチャネルアゴニストは、例えば、ＳＫＡ−３１又はＳＫＡ−２０などの本明細書に記載のＫＣａ３．１チャネルアゴニストであり得、本明細書中に記載されるようにＴＩＬ増殖を促進するのに十分な濃度でプレＲＥＰ又はＲＥＰ段階中又は両方の段階中に添加され得る。ＴＩＬの増殖は、本明細書に記載の患者においてカリウムチャネルアゴニストと組み合わせて癌を処置する任意の方法とさらに組み合わせ得る。本明細書に記載のＫＣａ３．１チャネルアゴニストなどのカリウムチャネルアゴニストを使用してＴＩＬを増殖させるための、及び増殖させたＴＩＬで癌患者を処置するための例示的な方法を図２５に示す。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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【図１４】
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【図１５】
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【図１６】
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【図１７】
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【図１８】
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【図１９】
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【図２０】
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【図２１】
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【図２２】
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【図２３】
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【図２４】
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【図２５】
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【配列表】
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【国際調査報告】
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