(57)【要約】  向上した安定性、高度の免疫原性、及び減少した反応源性を有する免疫原性組成物、並びにその調製プロセス。ジフテリアトキソイド抗原（Ｄ）、破傷風トキソイド（Ｔ）抗原、Ｂ型肝炎表面抗原（ＨＢｓＡｇ）、不活性Ｂ型全細胞百日咳（ｗＰ）抗原、インフルエンザＢ型菌（Ｈｉｂ）の担体タンパク質共役莢膜サッカライド、不活性ポリオウイルス（ＩＰＶ）抗原、及び追加で１種以上の抗原を含む免疫原性組成物、並びにその調製方法。向上した免疫原性、減少した反応源性、及び向上した安定性を示す、完全液体混合ワクチン。ホルムアルデヒド不活性化の向上した方法であって、リン酸アルミニウム補助剤上に個別に吸着された、ジフテリアトキソイド抗原（Ｄ）、破傷風トキソイド（Ｔ）抗原、及びＢ型肝炎（ＨｅｐＢ）表面抗原の、向上した吸着特性と、防腐剤として、最小の総アルミニウム含有量（Ａｌ３＋）及び最適化濃度の２−フェノキシエタノール（２−ＰＥ）である、方法。【特許請求の範囲】
【請求項１】
免疫原性組成物であって、
（ｉ）ジフテリアトキソイド（Ｄ）；
（ｉｉ）破傷風トキソイド（Ｔ）；
（ｉｉｉ）不活性全細胞百日咳抗原（ｗＰ）；
（ｉｖ）Ｂ型肝炎ウイルス表面抗原（ＨＢｓＡｇ）；
（ｖ）インフルエンザＢ型菌（Ｈｉｂ）の担体タンパク質共役莢膜サッカライド；
（ｖｉ）不活性ポリオウイルス抗原（ＩＰＶ）；
（ｖｉｉ）補助剤；
（ｖｉｉｉ）防腐剤；及び
（ｉｘ）希釈媒体又は緩衝剤
を含み、２〜８℃及び室温にて、向上した免疫原性、減少した反応源性、及び向上した安定性を示す完全液体混合ワクチンである、組成物。
【請求項２】
インフルエンザ菌（ａ、ｃ、ｄ、ｅ、ｆ抗原型及び無莢膜化菌株）、肝炎（Ａ型、Ｃ型、Ｄ型、Ｅ型、Ｆ型及びＧ型菌株）、ロタウイルス、ナイセリア髄膜炎Ａ型抗原（複数可）、ナイセリア髄膜炎Ｃ型抗原（複数可）、ナイセリア髄膜炎Ｗ−１３５抗原（複数可）、ナイセリア髄膜炎Ｙ抗原（複数可）、ナイセリア髄膜炎Ｘ抗原（複数可）、肺炎球菌抗原（複数可）、ナイセリア髄膜炎Ｂ抗原（複数可）、黄色ブドウ球菌抗原（複数可）、炭疽、ＢＣＧ、ヒト乳頭腫ウイルス、サルモネラ菌チフス抗原（複数可）、無細胞百日咳抗原、変性アデニル酸シクラーゼ、マラリア抗原（ＲＴＳ，Ｓ）、麻疹、流行性耳下腺炎、風疹、フラビウイルス抗原、デング熱、ジカ熱、エボラ、チクングンヤ熱、日本脳炎、及び下痢抗原からなる群から選択される１種以上の抗原を更に含む、請求項１に記載の免疫原性組成物。
【請求項３】
前記無細胞百日咳抗原が、変性アデニル酸シクラーゼ、百日咳トキソイド（ＰＴ）、繊維状赤血球凝集素（ＦＨＡ）、パータクチン（Ｐ６９若しくはＰＲＮ）又は線毛タンパク質（ＦＩＭ１、２及び３）から選択される１種以上の抗原を含む、請求項２に記載の免疫原性組成物。
【請求項４】
水酸化アルミニウム（Ａｌ（ＯＨ）３）若しくはリン酸アルミニウム（ＡｌＰＯ４）などのアルミニウム塩（Ａｌ３＋）、ミョウバン、リン酸カルシウム、ＭＰＬＡ、３Ｄ−ＭＰＬ、ＱＳ２１、ＣｐＧ含有オリゴデオキシヌクレオチド補助剤、リポソーム、又は水中油型エマルションからなる群から選択される１種以上の補助剤を含む、請求項１に記載の免疫原性組成物。
【請求項５】
補助剤としてリン酸アルミニウム（ＡｌＰＯ４）を含む、請求項４に記載の免疫原性組成物。
【請求項６】
０．５ｍｌあたり０．１ｍｇ〜０．５ｍｌあたり０．６ｍｇの量で総アルミニウム含有量（Ａｌ３＋）を含む、請求項１〜５のいずれか一項に記載の免疫原性組成物。
【請求項７】
前記不活性全細胞百日咳抗原（ｗＰ）が、百日咳菌株１３４、５０９、２５５２５及び６２２９である、請求項１に記載の免疫原性組成物。
【請求項８】
前記ＩＰＶ抗原が、マホニー１型、ＭＥＦ２型、若しくはソーケット３型からなる群から選択されるソーク株、又は１型、２型、若しくは３型からなる群から選択されるセービン株である、請求項１に記載の免疫原性組成物。
【請求項９】
前記ＩＰＶ抗原が、０．５ｍｌあたり０．１ｍｇ〜０．５ｍｌあたり１．２５ｍｇのＡｌ３＋濃度及び少なくとも７０％の吸着率を有するアルミニウム塩上に吸着される、請求項８に記載の免疫原性組成物。
【請求項１０】
前記ＩＰＶ抗原が、０．５ｍｌあたり０．１ｍｇ〜０．５ｍｌあたり０．６ｍｇのＡｌ３＋濃度及び少なくとも９０％の吸着率を有するアルミニウム塩上に吸着される、請求項９に記載の免疫原性組成物。
【請求項１１】
前記Ｄ抗原が、少なくとも５０％の吸着率を有するアルミニウム塩上に吸着される、請求項１に記載の免疫原性組成物。
【請求項１２】
前記Ｔ抗原が、少なくとも４０％の吸着率を有するアルミニウム塩上に吸着される、請求項１に記載の免疫原性組成物。
【請求項１３】
前記ＨＢｓＡｇ抗原が、少なくとも７０％の吸着率を有するアルミニウム塩上に吸着される、請求項１に記載の免疫原性組成物。
【請求項１４】
前記Ｈｉｂ抗原が、シアニル化共役化学作用又は還元アミノ化化学作用を使用した、Ｈｉｂポリリボシルリビトールリン酸（ＰＲＰ）の担体タンパク質共役多糖類であり、前記シアニル化試薬が、臭化シアン、１−シアノ−４−ジメチルアミノピリジニウムテトラフルオロボレート（ＣＤＡＰ）、１−シアノ−４−ピロリジノピリジニウムテトラフルオロボレート（ＣＰＰＴ）、１−シアノイミダゾール、即ち（１−Ｃｌ）、１−シアノベンゾトリアゾール（１−ＣＢＴ）又は２−シアノピリダジン−３（２Ｈ）オン（２−ＣＰＯ）から選択され、また担体タンパク質が、ＣＲＭ１９７、ジフテリアトキソイド、ナイセリア髄膜炎外膜複合体、破傷風トキソイドのフラグメントＣ、百日咳トキソイド、インフルエンザ菌のタンパク質Ｄ、大腸菌ＬＴ、大腸菌ＳＴ、及び緑膿菌からの細菌外毒素Ａ、外膜複合体ｃ（ＯＭＰＣ）、ポリン、トランスフェリン結合タンパク質、プノイモリジン、肺炎球菌表面タンパク質Ａ（ＰｓｐＡ）、肺炎球菌表面アドヘシンＡ（ＰｓａＡ）、肺炎球菌ＰｈｔＤ、肺炎球菌表面タンパク質ＢＶＨ−３及びＢＶＨ−１１、炭疽菌の感染防御抗原（ＰＡ）並びに炭疽菌の解毒浮腫因子（ＥＦ）及び致死因子（ＬＦ）、卵白アルブミン、キーホールリンペットヘモシアニン（ＫＬＨ）、ヒト血清アルブミン、ウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）、及びツベルクリンの精製タンパク質誘導体（ＰＰＤ）、合成ペプチド、熱ショックタンパク質、百日咳タンパク質、サイトカイン、リンホカイン、ホルモン、成長因子、Ｎ１９などの種々の病原体由来抗原からの複数のヒトＣＤ４＋Ｔ細胞エピトープを含む人工タンパク質、鉄取込みタンパク質、Ｃ．ディフィシル由来のトキシンＡ又はＢ、及び連鎖を伴う若しくは伴わないＳ．アガラクチアタンパク質を含む群から選択される、請求項１に記載の免疫原性組成物。
【請求項１５】
前記Ｈｉｂが、いずれの補助剤上にも実質的に吸着されない、請求項１に記載の免疫原性組成物。
【請求項１６】
２−フェノキシエタノール、塩化ベンゼトニウム（フェメロール）、フェノール、チオメルサール、ホルムアルデヒド、メチル及びプロピルパラベン、若しくはベンジルアルコール、又はこれらの組み合わせからなる群から選択される防腐剤を含む、請求項１に記載の免疫原性組成物。
【請求項１７】
防腐剤として２−フェノキシエタノールを含む、請求項１６に記載の免疫原性組成物。
【請求項１８】
防腐剤を含まない、請求項１に記載の免疫原性組成物。
【請求項１９】
塩化ナトリウム、リン酸緩衝生理食塩水からなる群から選択される緩衝剤を含む、請求項１に記載の免疫原性組成物。
【請求項２０】
希釈媒体又は緩衝剤として塩化ナトリウムを含む、請求項１９に記載の免疫原性組成物。
【請求項２１】
製薬上許容できる輸送体、賦形剤、結合剤、担体、等張剤、乳化剤、又は湿潤剤を更に含む、請求項１に記載の免疫原性組成物。
【請求項２２】
糖及びポリオール、界面活性剤、ポリマー、塩、アミノ酸、ｐＨ変性剤からなる群から選択される、製薬上許容できる賦形剤を含む、請求項２０に記載の免疫原性組成物。
【請求項２３】
０．５ｍｌあたり約１０Ｌｆ〜０．５ｍｌあたり２５Ｌｆの量のＤ抗原、０．５ｍｌあたり約２Ｌｆ〜０．５ｍｌあたり１０Ｌｆの量のＴ抗原、０．５ｍｌあたり約１２ＩＯＵ〜０．５ｍｌあたり１６ＩＯＵの量のｗＰ抗原、０．５ｍｌあたり約７μｇ〜０．５ｍｌあたり１５μｇの量のＨＢｓＡｇ、０．５ｍｌあたり約７μｇ〜０．５ｍｌあたり１３μｇの量のＨｉｂ抗原、それぞれ０．５ｍｌあたり約１〜５０ＤＵの量のソーク１型、約１〜２０ＤＵの量のソーク２型、又は約１〜５０ＤＵの量のソーク３型のＩＰＶ抗原、０．５ｍｌあたり約０．１ｍｇ〜０．５ｍｌあたり２．５ｍｇの量のリン酸アルミニウム、０．５ｍｌあたり約１ｍｇ〜０．５ｍｌあたり６ｍｇの量の２−フェノキシエタノール、約０．５％〜１．５％の量の塩化ナトリウムを含む、請求項１〜２２のいずれか一項に記載の免疫原性組成物。
【請求項２４】
０．５ｍｌあたり約１０Ｌｆ〜０．５ｍｌあたり２５Ｌｆの量のＤ抗原、０．５ｍｌあたり約２Ｌｆ〜０．５ｍｌあたり１０Ｌｆの量のＴ抗原、０．５ｍｌあたり約１２ＩＯＵ〜０．５ｍｌあたり１６ＩＯＵの量のｗＰ抗原、０．５ｍｌあたり約７μｇ〜０．５ｍｌあたり１５μｇの量のＨＢｓＡｇ、０．５ｍｌあたり約７μｇ〜０．５ｍｌあたり１３μｇの量のＨｉｂ抗原、それぞれ０．５ｍｌあたり約１〜５０ＤＵの量のセービン１型、約１〜２０ＤＵの量のセービン２型、又は約１〜５０ＤＵの量のセービン３型のＩＰＶ抗原、０．５ｍｌあたり約０．１ｍｇ〜０．５ｍｌあたり２．５ｍｇの量のリン酸アルミニウム、０．５ｍｌあたり約１ｍｇ〜０．５ｍｌあたり６ｍｇの量の２−フェノキシエタノール、約０．５％〜１．５％の量の塩化ナトリウムを含む、請求項１〜２３のいずれか一項に記載の免疫原性組成物。
【請求項２５】
０．５ｍｌあたり約１０Ｌｆの量のＤ抗原、０．５ｍｌあたり約２Ｌｆの量のＴ抗原、０．５ｍｌあたり約１２ＩＯＵの量のｗＰ抗原、０．５ｍｌあたり約８μｇの量のＨＢｓＡｇ、０．５ｍｌあたり約８μｇの量のＨｉｂ抗原、それぞれ０．５ｍｌあたり約４０ＤＵの量のソーク１型、約８ＤＵの量のソーク２型、又は約３２ＤＵの量のソーク３型のＩＰＶ抗原、０．５ｍｌあたり約１．２５ｍｇの量のリン酸アルミニウム、０．５ｍｌあたり約２．５ｍｇの量の２−フェノキシエタノール、約１．５％の量の塩化ナトリウムを含む、請求項１〜２４のいずれか一項に記載の免疫原性組成物。
【請求項２６】
０．５ｍｌあたり約２０Ｌｆの量のＤ抗原、０．５ｍｌあたり約４Ｌｆの量のＴ抗原、０．５ｍｌあたり約１４ＩＯＵの量のｗＰ抗原、０．５ｍｌあたり約１５μｇの量のＨＢｓＡｇ、０．５ｍｌあたり約１０μｇの量のＨｉｂ抗原、それぞれ０．５ｍｌあたり約４０ＤＵの量のソーク１型、約８ＤＵの量のソーク２型、又は約３２ＤＵの量のソーク３型のＩＰＶ抗原、０．５ｍｌあたり約１．２５ｍｇの量のリン酸アルミニウム、０．５ｍｌあたり約２．５ｍｇの量の２−フェノキシエタノール、約１．５％の量の塩化ナトリウムを含む、請求項１〜２５のいずれか一項に記載の免疫原性組成物。
【請求項２７】
０．５ｍｌあたり約２５Ｌｆの量のＤ抗原、０．５ｍｌあたり約１０Ｌｆの量のＴ抗原、０．５ｍｌあたり約１６ＩＯＵの量のｗＰ抗原、０．５ｍｌあたり約１５μｇの量のＨＢｓＡｇ、０．５ｍｌあたり約１３μｇの量のＨｉｂ抗原、それぞれ０．５ｍｌあたり約４０ＤＵの量のソーク１型、約８ＤＵの量のソーク２型、又は約３２ＤＵの量のソーク３型のＩＰＶ抗原、０．５ｍｌあたり約１．２５ｍｇの量のリン酸アルミニウム、０．５ｍｌあたり約２．５ｍｇの量の２−フェノキシエタノール、約１．５％の量の塩化ナトリウムを含む、請求項１〜２６のいずれか一項に記載の免疫原性組成物。
【請求項２８】
向上した免疫原性、減少した反応源性、及び向上した安定性を示し、
（ｉ）ジフテリアトキソイド（Ｄ）；
（ｉｉ）破傷風トキソイド（Ｔ）；
（ｉｉｉ）不活性全細胞百日咳抗原（ｗＰ）；
（ｉｖ）Ｂ型肝炎ウイルス表面抗原（ＨＢｓＡｇ）；
（ｖ）インフルエンザＢ型菌（Ｈｉｂ）の担体タンパク質共役莢膜サッカライド；及び
（ｖｉ）不活性ポリオウイルス抗原（ＩＰＶ）
を含む、完全液体混合ワクチン組成物の製造プロセスであって、
以下の工程、
ａ）．ブレンド容器／コンテナへの通常生理食塩水の添加
ｂ）．ジフテリアトキソイドを含む成分Ｉの添加
ｃ）．破傷風トキソイドを含む成分ＩＩの添加
ｄ）．不活性全細胞百日咳抗原の添加
ｅ）．Ｂ型肝炎表面抗原を含む成分ＩＩＩの添加
ｆ）．Ｈｉｂ抗原の添加
ｇ）．ＩＰＶ抗原の添加
ｈ）．２−フェノキシエタノールの添加
ｉ）．水酸化ナトリウム／炭酸ナトリウムによる、ｐＨ６〜７．０への調節
ｊ）．通常生理食塩水の添加による容積の補充
を含む、製造プロセス。
【請求項２９】
前記成分Ｉの前記調製が、以下の工程、
ａ）．コンテナ／容器内での、リン酸アルミニウムの転移
ｂ）．ジフテリアトキソイドの添加
ｃ）．酢酸／水酸化ナトリウムによる、４．５〜５．５へのｐＨ調整
ｄ）．安定化
ｅ）．水酸化ナトリウム／炭酸ナトリウムによる、５．５〜６．５へのｐＨ調整
ｆ）．安定化
を含む、請求項２８に記載のプロセス。
【請求項３０】
前記成分ＩＩの前記調製が、以下の工程、
ａ）．コンテナ／容器内での、リン酸アルミニウムの転移
ｂ）．破傷風トキソイドの添加
ｃ）．酢酸／水酸化ナトリウムによる、４．５〜５．５へのｐＨ調整
ｄ）．安定化
ｅ）．水酸化ナトリウム／炭酸ナトリウムによる、５．５〜６．５へのｐＨ調整
ｆ）．安定化
を含む、請求項２８に記載のプロセス。
【請求項３１】
前記成分ＩＩＩの前記調製が、以下の工程、
ａ）．コンテナ／容器内での、リン酸アルミニウムの転移
ｂ）．Ｂ型肝炎表面抗原の添加
ｃ）．酢酸／水酸化ナトリウムによる、４．５〜５．５へのｐＨ調整
ｄ）．安定化
ｅ）．水酸化ナトリウム／炭酸ナトリウムによる、５．８〜６．８へのｐＨ調整
ｆ）．安定化
を含む、請求項２８に記載のプロセス。
【請求項３２】
前記不活性全細胞百日咳抗原の前記調製が、以下の工程、
ａ）．百日咳菌株１３４のホルムアルデヒドの存在下で、１０〜１５分間、５６℃にて不活性化させること
ｂ）．百日咳菌株５０９のホルムアルデヒドの存在下で、１０〜１５分間、５６℃にて不活性化させること
ｃ）．百日咳菌株２５５２５及び６２２９のホルムアルデヒドの存在下で、１０〜１５分間、５６℃にて不活性化させること
ｃ）．百日咳菌株６２２９のホルムアルデヒドの存在下で、１０〜１５分間、５６℃にて不活性化させること
ｄ）．不活性百日咳菌株１３４、５０９、２５５２５、及び６２２９を、１：１：０．２５：０．２５の比率にて、その後に混合すること
ｅ）．所望により、アルミニウム系補助剤上に吸着させること
を含み、チメロサールを欠き、かつ不活性全細胞百日咳抗原が塊状ではなく均質な状態に留まり、それによって、減少された反応源性をもたらし、かつより長い持続時間に対するより良好な洗剤能を所与する、請求項２８に記載のプロセス。
【請求項３３】
前記Ｈｉｂ抗原の前記調製が、以下の工程、
ａ）．インフルエンザｂ型菌の発酵
ｂ）．０．１％のホルムアルデヒドの存在下で、２時間、３７℃にて不活性化させること
ｃ）．Ｈｉｂポリリボシルリビトールリン酸（ＰＲＰ）多糖類の精製
ｄ）．アジピン酸二水和物（ＡＤＨ）連鎖の存在下で、臭化シアンシアニル化結合化学作用を使用して、工程ｃの精製生成物を破傷風トキソイド（ＴＴ）へと結合させること
ｅ）．工程ｄの共役体の精製
ｆ）．好ましくは０．２２μｍのフィルタを介して、精製済み共役体を濾過すること
を含み、遊離ＰＲＰのパーセンテージが、総精製済みＨｉｂバルク共役体中で５％以下である、請求項２８に記載のプロセス。
【請求項３４】
添付の実施例に関して本明細書にて記載されたような、実質的に向上した免疫原性、減少した反応源性、及び向上した安定性を示す、完全液体混合ワクチン組成物。
【請求項３５】
添付の実施例に関して本明細書にて記載されたような、実質的に向上した免疫原性、減少した反応源性、及び向上した安定性を示す、完全液体混合ワクチン組成物の製造プロセス。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本開示は、バイオテクノロジーの分野に関し、より詳細には、抗原／免疫原の群を含む混合ワクチン組成物、並びにその調製方法に関する。本開示は、更に、混合ワクチンの生成分野における向上した方法論に関する。
【背景技術】
【０００２】
多数の疾病に対する免疫原性を提供することが可能な混合ワクチンは、所与される皮下注射数を減少させ、複数の筋肉注射と関係した合併症を減少させ、投与及び生産コストを減少させ、在庫コストを低減し、ワクチン接種の遅延及び機会取り逃しを減少させ、また多数の個別のワクチン接種を減少させることにより患者からの応諾を向上させる故に、単価ワクチン以上に常に有用である。更に、完全に液体である混合ワクチンの調製は、再構成が必要であるようなものに勝る、異なる利点を有している。平均調製時間は、完全液体ワクチンに関して、非完全液体ワクチンと比較してほぼ半分である、と見出されている。同様の研究では、ほぼ全ての健康管理職員（９７．６％）が、彼らの日常実務において、完全液体ワクチンを使用することが好ましくあり得る、と述べた（参照：Ｓｏｕｂｅｙｒａｎｄ  Ｂら；Ａｓｓｅｓｓｍｅｎｔ  ｏｆ  ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎ  ｔｉｍｅ  ｗｉｔｈ  ｆｕｌｌｙ−ｌｉｑｕｉｄ  ｖｅｒｓｕｓ  ｎｏｎ−ｆｕｌｌｙ  ｌｉｑｕｉｄ  ｐａｅｄｉａｔｒｉｃ  ｈｅｘａｖａｌｅｎｔ  ｖａｃｃｉｎｅｓ，Ａ  ｔｉｍｅ  ａｎｄ  ｍｏｔｉｏｎ  ｓｔｕｄｙ；Ｖａｃｃｉｎｅ  ２０１５；３３：３９７６−８２）。
【０００３】
現在周知で利用可能な混合ワクチンは、一回の皮下注射にて、多数の疾病に関して感染しやすい人間母集団における、所望の水準の安全性、有効性及び免疫原性を達成するための、適切な免疫原性形態における適切な抗原の適切な配合物を、含有していな場合がある。ほんの少数の追加の抗原により作成することができる多数の異なるワクチンの組み合わせが、想到される。１〜４種のその他の抗原組成物（例えば、ＨＩＢ（凍結乾燥又は液体）、ＨＢＶ、ＩＰＶ、ＨＡＶ）を、ＤＴｗＰ又はＤＴａＰのどちらかへと添加することにより、生成可能な４４種の異なるワクチンの組み合わせが可能である。異なる製造業者からの個々の構成成分が思到される場合、その数は数千へと増大し得る。あらゆる個々の新規混合ワクチンは（供給元に従った構成成分における差を考慮に入れ）、個別に開発されて、安全性、安定性、適合性、及び有効性を実証しなければならず、これら全てのワクチンの開発は、商船的な課題となる。
【０００４】
混合ワクチンの抗原：
ジフテリア及び破傷風抗原
ジフテリア及び破傷風は、それぞれ、コリネバクテリウム・ジフテリアエ及びクロストリジウム・テタニにより引き起こされる、急性感染症である。両方の事例においても、臨床的疾病に関する原因であるこれらの細菌の、強力な細菌外毒素である。これらの毒素を含有するこれらの細菌に対する防護が可能な、化学的に改質されたワクチンは、従って、もはや毒素ではないが、依然として抗原性である。ジフテリア及び破傷風毒素は、ウシ抽出物を含有する媒体において、コリネバクテリウム・ジフテリアエ及びクロストリジウム・テタニの成長により、生成される。トキソイド［ジフテリアトキソイド（Ｄ）及び破傷風トキソイド（Ｔ）］を作製するために、熱、ＵＶ、ホルマリン／ホルムアルデヒド、グルタルアルデヒド、アセチルエチレンイミン、等を含む、次の処理剤を使用して、毒素を不活性化させる。ウシ海綿状脳症（ＢＳＥ）、伝播性海綿様脳症（ＴＳＥ）、クロイツフェルトヤコブ病（ＣＪＤ及び変異型ＣＪＤ病）に関しての懸念が、ワクチンを介して伝搬される、ウシ抽出物を含有する増殖培地にて使用される動物性構成要素から生じ得る。（参照：生物学的及び薬学的生成物に関する、伝搬性海綿様脳症におけるＷＨＯガイドライン；２００３＆ＥＭＥＡ／ＣＰＭＰ／ＢＷＰ／８１９／０１；２００１年４月２４日）。
【０００５】
百日咳抗原
１９４０年代における化学的及び加熱不活性化百日咳菌微生物で構成される全細胞ワクチンの導入は、百日咳菌により引き起こされる百日咳の発生率における、劇的な減少に関して責任を負っていた。
【０００６】
全細胞ＤＴＰワクチンは、一般的に幾つかの局所的有害事象（例えば、注射箇所における紅斑、腫脹、及び痛み）、発熱、及びその他の軽い全身性事象（例えば、眠気、焦燥感、及び拒食症）に関連する  （参照：Ｃｏｄｙ  ＣＬ，Ｂａｒａｆｆ  ＬＪ，Ｃｈｅｒｒｙ  ＪＤ，Ｍａｒｃｙ  ＳＭ，Ｍａｎｃｌａｒｃｋ  ＣＲ；Ｔｈｅ  Ｎａｔｕｒｅ  ａｎｄ  ｒａｔｅ  ｏｆ  ａｄｖｅｒｓｅ  ｒｅａｃｔｉｏｎｓ  ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ  ｗｉｔｈ  ＤＴＰ  ａｎｄ  ＤＴ  ｉｍｍｕｎｉｚａｔｉｏｎ  ｉｎ  ｉｎｆａｎｔｓ  ａｎｄ  ｃｈｉｌｄｒｅｎ，Ｐａｅｄｉａｔｒｉｃｓ  １９８１；６８：６５０−６０）及び（参照：Ｌｏｎｇ  ＳＳ，ＤｅＦｏｒｅｓｔ  Ａ，Ｐｅｎｎｒｉｄｇｅ  Ｐｅｄｉａｔｒｉｃ  Ａｓｓｏｃｉａｔｅｓら，Ｌｏｎｇｉｔｕｄｉｎａｌ  ｓｔｕｄｙ  ｏｆ  ａｄｖｅｒｓｅ  ｒｅａｃｔｉｏｎｓ  ｆｏｌｌｏｗｉｎｇ  Ｄｉｐｈｔｈｅｒｉａ−ｔｅｔａｎｕｓ−ｐｅｒｔｕｓｓｉｓ  ｖａｃｃｉｎｅ  ｉｎ  ｉｎｆａｎｃｙ，Ｐａｅｄｉａｔｒｉｃｓ  １９９０；８５：２９４−３０２）。より重篤な事象（例えば、痙攣｛発熱の有無を伴う｝及び筋緊張低下・反応性低下発作）は、全細胞ＤＴＰワクチンを受けた小児の間で、より低頻度（投与済みの１７５０件の投与薬量に対して１件の事例の比率）にて発生する  （参照：Ｃｏｄｙ  ＣＬ、Ｂａｒａｆｆ  ＬＪ、Ｃｈｅｒｒｙ  ＪＤ、Ｍａｒｃｙ  ＳＭ、Ｍａｎｃｌａｒｃｋ  ＣＲ；Ｔｈｅ  Ｎａｔｕｒｅ  ａｎｄ  ｒａｔｅ  ｏｆ  ａｄｖｅｒｓｅ  ｒｅａｃｔｉｏｎｓ  ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ  ｗｉｔｈ  ＤＴＰ  ａｎｄ  ＤＴ  ｉｍｍｕｎｉｚａｔｉｏｎ  ｉｎ  ｉｎｆａｎｔｓ  ａｎｄ  ｃｈｉｌｄｒｅｎ，Ｐａｅｄｉａｔｒｉｃｓ  １９８１；６８：６５０−６０）。急性脳症は、より稀であるにもかかわらず発生する（投与済みの百万件の投薬量に対して０〜１０．５件の事例の比率）。全細胞百日咳ワクチンが、場合によっては稀に、永久性能損傷を引き起こすことを、専門家達は同意している。（参照：Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ  ｏｆ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ；ＤＰＴ  ｖａｃｃｉｎｅ  ａｎｄ  ｃｈｒｏｎｉｃ  ｎｅｒｖｏｕｓ  ｓｙｓｔｅｍ  ｄｙｓｆｕｎｃｔｉｏｎ，ａ  ｎｅｗ  ａｎａｌｙｓｉｓ；Ｗａｓｈｉｎｇｔｏｎ  Ｄ．Ｃ．，Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ａｃａｄｅｍｙ  Ｐｒｅｓｓ，１９９４年）。
【０００７】
幾つかの報告では、ワクチン許容の減退及び結果としての新たな流行性をもたらした、全細胞百日咳ワクチン接種、反応源性、及び深刻な副作用間の関係を引用している（Ｍｉｌｌｅｒ，Ｄ．Ｌ．，Ｒｏｓｓ，Ｅ．Ｍ．，Ａｌｄｅｒｓｌａｄｅ，Ｒ．，Ｂｅｌｌｍａｎ，Ｍ．Ｈ．，ａｎｄ  Ｂｒａｗｓｏｎ，Ｎ．Ｓ．Ｂ．（１９８１年）．Ｐｅｒｔｕｓｓｉｓ  ｉｍｍｕｎｉｚａｔｉｏｎ  ａｎｄ  ｓｅｒｉｏｕｓ  ａｃｕｔｅ  ｎｅｕｒｏｌｏｇｉｃａｌ  ｉｌｌｎｅｓｓ  ｉｎ  ｃｈｉｌｄｒｅｎ：Ｂｒｉｔ  Ｍｅｄ．Ｊ．２８２：１５９５−１５９９）。
【０００８】
副作用に関連する全細胞百日咳ワクチン（ｗＰ）は、それらの世界的な継続使用に関しての障害であり、また従って、ｗＰ系混合ワクチンは、工業化された世界において、徐々に無細胞百日咳系混合ワクチンに置き換えられていった。より近年には、確定された構成成分の百日咳ワクチンが開発されてきた。全ての液体六価無細胞百日咳系ワクチン（ＤＴａＰ  ＩＰＶ  ＰＲＰ−Ｔ−ＨＢｓＡｇ）が、以前に報告されてきた（ＥＰ１０２８７５０）。
【０００９】
Ｉｎｆａｎｒｉｘ（登録商標）Ｈｅｘａ（ＧＳＫ）は、現在、世界的規模で市場にて販売されている唯一の、サークＩＰＶを含有する六価の小児混合ワクチンである。本製品（ＤＴａＰ３−ＩＰＶ−ＨＢＶ／Ｈｉｂ）は、個別のバイアル瓶内の、使用前にワクチンの残りと共に復元される凍結乾燥Ｈｉｂ抗原ＰＲＰ−Ｔ共役体と共同包装された、五価の製品のプレフィルド注射器として、販売されている。
【００１０】
第２の六価ワクチン、Ｈｅｘｙｏｎ（登録商標）（Ｈｅｘａｃｉｍａ（登録商標）及びＨｅｘａｘｉｍ（登録商標））とも称される）は、Ｓａｎｏｆｉ  Ｐａｓｔｅｕｒからの全液体の六価であるが、同様に、ａＰも伴う。本ワクチンは、欧州及び世界的な民間市場を標的としている、と見込まれている。同様にａＰを伴う、Ｍｅｒｃｋ及びＳａｎｏｆｉ  Ｐａｓｔｅｕｒにより共同開発されている別の六価ワクチンは、現在、臨床研究の第三段階である。
【００１１】
七価の混合ワクチンは、ＤＴ、無細胞百日咳菌、セービンＩＰＶ（１型：４０ＤＵ、２型：８ＤＵ、３型３２ＤＵ）、単一株不活性ロタウイルス（Ｇ９株、即ち１１６Ｅ株）、共役インフルエンザｂ型菌、ＴＴ共役ＰＲＰ、及び組換型Ｂ型肝炎ワクチンから構成され、Ｂｈａｒａｔ  Ｂｉｏｔｅｃｈ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌにより開発されている。
【００１２】
しかし、特に発展途上国の設定において、無細胞百日咳（ａＰ）ワクチンの長期有効性に関する懸念が発生してきている。最近の報告は、百日咳に対する免疫は青年期に衰退し、また六ヶ月以下の年齢の乳児において、彼らが完全にワクチン接種を受ける前に、症例が増大することの原因であることを、示唆している。乳児期にａＰにより免疫性を与えられた８〜１２歳において、ワクチンの有効性は２４パーセントと推定された。オーストラリアにおける観測的研究はまた、乳児期にａＰワクチンを所与された青年の間で、ｗＰワクチンを所与された青年よりも更に高い症例率（相対リスク３．３、信頼区間２．４〜４．５の９５パーセント）を示した。
【００１３】
コストの観点から、ａＰ抗原は、製造差及び特許権使用料コスト故に、歴史的にｗＰ抗原のコストを１０〜３０倍で超えてきており、また従って、発展途上国に対しての経済的負担を構成してきた。結果として、ｗＰ系六価ワクチンのコストは、低資源国の公共部門において使用するために、より良好に適合し得る。
【００１４】
従って、発展途上国のためにの六価ワクチンにおける全細胞百日咳ワクチン（ｗＰ）は、特に発展途上国の設定において、ａＰワクチンのコストと長期有効性に関する発生している懸念の両方故に、重要になってきている。最良の全細胞百日咳（ｗＰ）ワクチンと比較して、ａＰワクチンは、集団予防接種プログラムにおいてさほど効果的ではない（Ｖｉｃｋｅｒｓら、２００６年；Ｃｈｅｒｒｙ、２０１２年）。
【００１５】
免疫を獲得した人口における激増の最近の研究は、ａＰワクチンの防護持続期間が短すぎ（Ｋｌｅｉｎら、２０１２年；Ｍｉｓｅｇａｄｅｓら、２０１２年）、より年齢の高い小児及び青年における免疫の低下をもたらし、またこの年齢群における対応する症例の増加をもたらす（Ｓｋｏｗｒｏｎｓｋｉら、２００２年；Ｋｌｅｉｎら、２０１２年）ことを示してきた。これは、ｗＰワクチンとは対照的であり、１０代の年代に対して良好な保護を提供する（Ｋｌｅｉｎら、２０１２年）。これらの欠点の結果として、１９９０年代にａＰワクチンへと切換えた国において、小児が初回抗原刺激を受けたワクチンが、後の免疫追加ワクチンに対する彼らの免疫反応を決定し得る故に、現在、百日咳に対する防護がより良好ではないだけでなく、追加免疫に対しての反応性がより少なくあり得る世代の子供たちが存在する（Ｐｏｄｄａら、１９９５年；Ｍａｓｃａｒｔら、２００７年；Ｓｈｅｒｉｄａｎら、２０１２年；Ｌｉｋｏ，Ｒｏｂｉｓｉｏｎ及びＣｉｅｓｌａｋ、２０１３年；Ｓｍｉｔｓら、２０１３年）。
【００１６】
ｗＰの反応源性に貢献する最も重要な因子の１つは、細菌外膜からの内毒素である、リポオリゴ糖（ＬＯＳ）の存在である。
【００１７】
多くの製造業者により実施される、ｗＰ毒素の不活性化のための全細胞百日咳ワクチン（ｗＰ）のバルクプロセスは、熱処理／ホルマリンを使用する。幾つかの報告では、ｗＰの不活性化に関するチメロサールの使用を引用している。しかし、チメロサールの使用は、ＩＰＶの抗原性の損失を引き起こす（Ｖａｃｃｉｎｅ  １９９４年  Ｖｏｌｕｍｅ１２  Ｎｏ．９  ８５１−８５６）。不活性ポリオウイルスワクチンの洗剤能におけるチメロサールの有毒作用は、また従って、ＩＰＶを含有する混合ワクチンの場合、チメロサール含有ｗＰから分離されたバイアル瓶内に存在させて、時間の経過とともに、又は百日咳バルク源の不活性化の変化とともに、その潜在能を保持することが必要な場合がある。若干の抗原、即ち、活性ＰＴも同様に免疫反応調整剤として機能し、また異なるワクチン間の種々の抗原に対する免疫反応における有意差が、観察されてきた（ＷＨＯ，１９９３年）。
【００１８】
ＬＯＳの化学的抽出は、生体外試験又は生体内試験での使用に応じて、内毒素含有量の著しい減少（２０％）、及び毒性に対する内毒素における著しい低下（最大９７％）をもたらした。ＬＯＳ抽出は、生成物の完全性に影響を与えることはなく、より重要なことに、ＤＴＰの潜在能及び／又は安定性に低い影響を与えなかった。更に、実際には、抗体におけるいずれかの差及びＴ細胞応答が観察された。（参照：Ｗａｌｄｅｌｙ  Ｏｌｉｖｅｉｒａ  Ｄｉａｓら；Ａｎ  ｉｍｐｒｏｖｅｄ  ｗｈｏｌｅ  ｃｅｌｌ  ｐｅｒｔｕｓｓｉｓ  ｖａｃｃｉｎｅ  ｗｉｔｈ  ｒｅｄｕｃｅｄ  ｃｏｎｔｅｎｔ  ｏｆ  ｅｎｄｏｔｏｘｉｎ；Ｈｕｍａｎ  Ｖａｃｃｉｎｅｓ  ＆  ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ  ９：２，３３９−３４８；２０１２年２月）。
【００１９】
Ｂ型肝炎抗原
種々の肝炎ウイルス株が存在している。Ｂ型肝炎は、人間の肝臓に感染して、肝炎と称する炎症を引き起こす、Ｂ型肝炎ウイルス（ＨｅｐＢ）により引き起こされる疾病である。疾病に対するワクチンは、ウイルス性包膜タンパク質の１つである、Ｂ型肝炎表面抗原（ＨＢｓＡｇ）を含有する。集団予防接種に使用されてきたワクチンは現在入手可能であり、例えば、Ｍｅｒｃｋによる製品Ｒｅｃｏｍｂｉｖａｘ  ＨＢ（登録商標）及びＣｏｍｖａｘ（登録商標）、並びにＧｌａｘｏ  ＳｍｉｔｈＫｌｉｎｅ  ＢｉｏｌｏｇｉｃａｌｓによるＥｎｇｅｒｉｘ−Ｂ（登録商標）及びＰｅｄｉａｒｉｘ（登録商標）である。Ｂ型肝炎成分を有する混合ワクチンは、ＨｅｐＢ単一抗原ワクチンと比較して、より高い完成度及び応諾結果の両方を伴った。（参照：Ｋｕｒｏｓｋｙら；Ｅｆｆｅｃｔ  ｏｆ  Ｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎ  Ｖａｃｃｉｎｅｓ  ｏｎ  Ｈｅｐａｔｉｔｉｓ  Ｂ  Ｖａｃｃｉｎｅ  Ｃｏｍｐｌｉａｎｃｅ  ｉｎ  Ｃｈｉｌｄｒｅｎ  ｉｎ  ｔｈｅ  Ｕｎｉｔｅｄ  Ｓｔａｔｅｓ；Ｔｈｅ  Ｐｅｄｉａｔｒｉｃ  Ｉｎｆｅｃｔｉｏｕｓ  Ｄｉｓｅａｓｅ  Ｊｏｕｒｎａｌ，３６（７）：ｅ１８９−ｅ１９６  ２０１７年７月）。幾つかの参照では、その他の抗原と組み合わされた、リン酸アルミニウム上へのＢ型肝炎表面抗原の吸着を引用している。Ｂ型肝炎成分は、実質的にチオメルサールを含むべきではない（ｍｅｔｈｏｄ  ｏｆ  ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎ  ｏｆ  ＨＢｓＡｇ  ｗｉｔｈｏｕｔ  ｔｈｉｏｍｅｒｓａｌが、以前にＥＰ１３０７４７３にて公開されている）。Ｂ型肝炎成分の低免疫原性故に、Ｈｅｘａｖａｃ（登録商標）の混合ワクチンが市場から引き上げられた。従って、適切な又は高度の免疫原性を伴うＢ型肝炎抗原を含む混合ワクチン組成物が、必要とされている。
【００２０】
インフルエンザ菌（Ｈｉｂ）抗原
インフルエンザ菌は、上気道区系の一環であるグラム陰性球杆菌である。インフルエンザｂ型菌（Ｈｉｂ  ｂ）は、若年小児における髄膜炎侵襲血行性の感染症の主要な症例であり、また人生最初の２年間における主要な症例である。インフルエンザ菌に対する予防接種は、多糖類ワクチン［ポリリボースリビトールリン酸（ＰＲＰ）］を用いて、１９８７年にカナダで始まった。Ｈｉｂのポリリボースリビトールリン酸（ＰＲＰ）カプセルは、微生物に関する主要な毒性要因である。ＰＲＰに対する抗体は、血清殺菌活性に対する主要な貢献者であり、また抗体の増大レベルは、侵襲性の疾病リスクの減少に関連している。ＰＲＰは、Ｔ細胞独立抗原であり、また従って、ａ）月齢１８か月未満の乳児及び小児おける不十分な抗体応答の誘発、ｂ）変異性、かつＴ細胞依存抗原に見られるよりも定量的により小さい抗体応答、ｃ）より高い免疫グロブリンＭ（ＩｇＭ）比率の生成物、並びにｃ）追加免疫応答を生じさせることができない、により特徴付けられる。
【００２１】
初期ワクチンは、乳児において効果が無いと検証されたＰＲＰ成分にのみに基づいた。ＰＲＰ共役ワクチンに対する更なる試みが指導されたが、ＰＲＰは、髄膜炎菌、ジフテリアトキソイド、破傷風トキソイド、及びＣＲＭ１９７の外膜タンパク質などの担体タンパク質と称されるタンパク質に共役される。混合ワクチンにおけるＨｉｂ共役成分の包含は、減少されたＨｉｂ免疫原性と関連付けられてきた。なお、Ｈｉｂ共役体は水性媒体中で不安定であり、かつこの形態での持続的保管では生残が不可能である。従って、インフルエンザｂ型菌（Ｈｉｂ）のＰＲＰ多糖類は、乾燥固体として頻繁に配合され、これは、その他の抗原の液体配合物と共に送達される時に復元される。例えば、Ｉｎｆｎｒｉｘ（登録商標）ｈｅｘａ（ＰＣＴ国際公開特許第９９／４８５２５号）である。
【００２２】
ポリオ抗原
異なる種類のワクチンが入手可能である。
●１９６１年の、Ｄｒ．Ａｌｂｅｒｔ  Ｓａｂｉｎによる、弱毒化（弱められた）経口ポリオ生ワクチン（ＯＰＶ）。サービン株を含むＯＰＶは、経口にて所与される。
●１９５５年の、Ｄｒ．Ｊｏｎａｓ  Ｓａｌｋによる、不活性（死滅）ポリオワクチン（ＩＰＶ）。サーク株を含むＩＰＶは、注射剤として所与される。
●近年、ホルマリンにより、サービン株ポリオウイルスを不活性化させることにより調製された、サービン不活性ポリオウイルスは、注射器に関して開発されてきており、また同様に、商業製品として入手可能とされている。
【００２３】
弱毒化（ＯＰＶ）生ポリオワクチン及不活性（ＩＰＶ）ポリオワクチンの両方は、世界的にポリオ疾病を制御するのに効果的であった。ポリオワクチンは、サーク株又はサービン株を含んでよい。
【００２４】
１９９５年に、Ｄｒ．Ｊｏｎａｓ  Ｓａｌｋは、野生型ポリオウイルスの不活性化において成功し、従って、注射器タイプの配合を可能にし、またサーク株と命名され、これは、小児麻痺疾病に対するワクチンにて使用されてきたマホニー１型、ＭＥＦ２型、及びソーケット３型を含む。サービン株は、サービン１型及びサービン２型株を含む。
【００２５】
ポリオワクチンの許容可能な標準投与量は、現在、不活性ポリオウイルス１型（マホニー）の４０Ｄ抗原単位、不活性ポリオウイルス２型（ＭＥＦ−Ｉ）の８Ｄ抗原単位、及び不活性ポリオウイルス３型（ソーケット）の３２Ｄ抗原単位、例えば、Ｉｎｆａｎｒｉｘ−ｈｅｘａ（ＰＣＴ国際公開特許第９９／４８５２５号）を含む。
【００２６】
ＩＰＶは、現在、ＤＴ−ＩＰＶ（ジフテリア及び破傷風トキソイドを伴う）、及び六価−ＩＰＶワクチン（追加で、百日咳、Ｂ型肝炎、及びインフルエンザｂ型菌）、例えば、Ｉｎｆａｎｒｉｘ−ｈｅｘａ（ＰＣＴ国際公開特許第９９／４８５２５号）を含む、非免疫助成単独形配合として、又は種々の組み合わせにて、入手可能である。
【００２７】
しかし、ＯＰＶと比較した場合、ＩＰＶに関する全体生産コストは著しく高い。これは、主に、次の要件故である。（ｉ）投与量あたりより多くのウイルス、（ｉｉ）追加のダウンストリーム処理（即ち、濃縮、精製、及び不活性化）、並びに関連するＱＣ試験、（ｉｉｉ）抗原の損失又はダウンストリームにおける不十分な回復率、並びにｉｖ）汚染現在まで、ＩＰＶ技術革新並びに低所得及び中所得国における実施に関して、財政的問題が主要な欠点であった。
【００２８】
ポリオウイルスの根絶に続くＩＰＶに対する将来的な世界規模の需要は、年あたり、現在のレベルである８，０００万投与量から１億５，０００万投与量へと増大し得た。従って、ＩＰＶの「大量」供給へのアプローチが必要とされると見込まれている。
【００２９】
低投与量のＩＰＶ抗原を使用して感染症に対する保護を提供する、減少された投与量の有効ワクチン配合物は、従来のワクチンの供給量が世界規模の必要性を満たすのに不十分な状況、又は従来のワクチンの製造コスト故に、発展途上国において許容可能な価格にてワクチンを販売することを妨害する状況において、好適である。同様に、市場で流通している既存の配合物と比較して、ＩＰＶ低投与量への曝露はより安全であり得る。従って、より許容可能な価格が可能であるＩＰＶを作成する、種々の戦略を評価する必要性がある。従って、投与量を減少させたＩＰＶを含む混合ワクチンは、更に廉価で投与が容易であるように作成され得る。
【００３０】
パンデミックインフルエンザワクチンの場合、補助剤の使用が投与量の減少、入手可能性の増大、及びワクチンのコスト減少を可能する。従って、ＩＰＶ補助ワクチン配合物がコストを削減させ得、また同様に、入手可能なＩＰＶ投与量の数を世界規模で増大させることが、推測されてきた。
【００３１】
なお、アルミニウム塩は安全であると考えられてきており、ＩＰＶを含有する混合ワクチンに既に使用されており、開発に関する障害が最も低く、かつ製造するのに安価である。しかし、アルミニウム補助剤は、著しい投与量の低減を可能にするかに関しては、知られていない。
【００３２】
他の抗原
混合ワクチンに含ませることができたその他の抗原は、インフルエンザ菌（ａ、ｃ、ｄ、ｅ、ｆ抗原型、及び無莢膜化菌株）、肝炎（Ａ型、Ｃ型、Ｄ型、Ｅ型、Ｆ型、及びＧ型株）、髄膜炎Ａ型、Ｂ型、又はＣ型、インフルエンザ肺炎球菌、連鎖球菌、炭疽、デング熱、マラリア、流行性耳下腺炎、風疹、ＢＣＧ、日本脳炎、ロタウイルス、天然痘、黄熱病、腸チフス、帯状疱疹、水痘ウイルス、及びその他である。
【００３３】
混合ワクチンに使用される抗原の範囲及び種類は、乳児、幼児、小児、青年、及び大人などに使用される目標の母集団年齢による。百日咳菌、クロストリジウム・テタニ、コリネバクテリウム・ジフテリアエ、及び所望により、不活性ポリオウイルス（ＩＰＶ）、並びに／又はＢ型肝炎ウイルス、並びに／又はインフルエンザＢ型菌感染症からの感染症を防ぎ得る、最も初期に知られている混合ワクチンが、周知である（例えば、ＰＣＴ国際公開特許第９３／２４１４８号、同第９７／００６９７号、同第２０００／０３０６７８号、同第２００８／０２８９５６号、米国特許出願公開第６０１３２６４号及びＰＣＴ国際公開特許第２００５０８９７９４号を参照のこと）。
【００３４】
一方で、頻回ワクチン注射は、微生物による汚染を防ぐための防腐剤を使用しなければならない。ＵＮにより準先進国へと輸出される混合ワクチン生成物等に関して、防腐剤を含有する頻回ワクチンが好ましく、ワクチンが使用される国の環境、配給方法、費用、等が考慮される。ワクチン生成物に使用される防腐剤の例は、チメロサール、２−ＰＥ、フェノール、ホルムアルデヒドを含有することができ、また防腐剤の従来の投与量が当技術分野において周知である。
【００３５】
本発明者らは、混合ワクチン組成物における免疫原性、反応源性、安定性、並びに抗原の適切な形態のメンテナンスが、個々の抗原の調製プロセス、抗原追加の順序、特定の抗原に関する特定の量での特定の補助剤の使用、補助剤上への抗原の個々の吸着又は組み合わされた吸着、補助剤上への抗原吸着の程度、総ミョウバン含有量、使用される防腐剤の濃度及び種類、攪拌、温度及びｐＨを含む種々のパラメータの使用を含む、組成物が配合された方法に依存することを、見出した。
【発明の概要】
【００３６】
向上した免疫原性及び減少された反応源性を示す液体安定混合ワクチン組成物、並びにその製造プロセスが、開示されている。本開示は、
ａ）半合成培地を使用して生成され、かつその後に解毒された、高精製ジフテリアトキソイド（Ｄ）及び破傷風トキソイド（Ｔ）。
ｂ）熱及び化学的不活性化の組み合わせ、減少された反応源性及び増大した潜在能をもたらす特定の比率での、特定の百日咳菌株を使用して調製された、不活性全細胞Ｂ型百日咳（ｗＰ）成分。
ｃ）担体タンパク質（ＣＰ）共役インフルエンザＢ型菌（Ｈｉｂ）莢膜多糖類抗原（ＰＲＰ）。
ｄ）ホルムアルデヒド不活性化の向上した方法を利用することにより調製され、かつ水酸化アルミニウム上に更に吸着される、標準的な投与量又は減少されたサーク若しくはサービン（不活性ポリオウイルス）ＩＰＶ投与量。
ｅ）Ｂ型肝炎（ＨｅｐＢ）表面抗原がリン酸アルミニウム補助剤上に個別に吸着され、Ｄ及びＴ抗原がリン酸アルミニウム補助剤上に個別に吸着され、それにより、高度の免疫原性をもたらすような、抗原（複数可）の最適な吸着プロファイル。
ｆ）減少された反応源性を確実にするための、最小ミョウバン含有量。
ｇ）防腐剤として２−フェノキシエタノール（２−ＰＥ）の最適濃度、を含む、混合ワクチン品組成物に関する。
【００３７】
目的
本明細書の少なくとも一実施形態が満たす本開示のいくつかの目的を、以下に示す。
【００３８】
本開示の目的は、先行技術の１つ以上の問題を改善すること、又は少なくとも有用な代替案を提供することである。
【００３９】
本開示の別の目的は、１つ以上の疾病状態の予防及び治療に好適であり、かつ前記免疫原性成分のそれぞれについての抗体保有率に関する基準を満たす、液体の、安定した、減少された反応源性、並びにより高い免疫原性の混合ワクチン組成物／配合物を提供することである。
【００４０】
本開示の依然として別の目的は、混合ワクチンのこのような組成物／配合物の製造方法を提供することである。
【００４１】
本開示のその他の目的及び利点は、本開示の範囲を制限することを意図するものではない、以下の発明の詳細な説明からより明らかとなるであろう。
【発明を実施するための形態】
【００４２】
本開示の第一の実施形態によれば、混合ワクチン組成物は、ジフテリアトキソイド（Ｄ）、破傷風トキソイド（Ｔ）、全細胞Ｂ型百日咳（ｗＰ）抗原、インフルエンザＢ型菌（Ｈｉｂ）共役体、Ｂ型肝炎（ＨｅｐＢ）、不活性ポリオウイルス（ＩＰＶ）抗原から選択されるがこれらに限定されない抗原／免疫原の群からなり、また追加的に、アルミニウム系補助剤及び防腐剤からなる。
【００４３】
本開示の第二の実施形態によれば、混合ワクチン組成物は、それぞれ、インフルエンザ菌（ａ、ｃ、ｄ、ｅ、ｆ抗原型、及び無莢膜化菌株）、肝炎（Ａ型、Ｃ型、Ｄ型、Ｅ型、Ｆ型、及びＧ型株）、髄膜炎Ａ型、Ｂ型、Ｃ型、Ｙ型、Ｗ−１３５型、又はＸ型、インフルエンザ菌、黄色ブドウ球菌、サルモネラチフス菌抗原（複数可）、無細胞百日咳抗原、変性アデニル酸シクラーゼ、マラリア抗原（ＲＴＳ，Ｓ）、肺炎球菌、連鎖球菌、炭疽、デング熱、マラリア、麻疹、流行性耳下腺炎、風疹、ＢＣＧ、ヒトパピローマ・ウイルス、日本脳炎、デング熱、ジカ熱、エボラ、チクングンヤ熱、ロタウイルス、天然痘、黄熱病、フラビウイルス、帯状疱疹、水痘ウイルス抗原からなる群から選択されるがこれらに限定されない、１種以上の抗原から更になることができる。
【００４４】
本開示の第三の実施形態によれば、混合ワクチン組成物に使用されるＩＰＶ株は、１型、２型、及び３型からなる群から選択される不活性サービン株、又はマホニー１型、ＭＥＦ２型、及びソーケット３型からなる群から選択される不活性サーク株からなる。
【００４５】
第三の実施形態の一態様では、ポリオウイルスは以下の方法により成長し得る。
●ＣＣＬ８１−ＶＥＲＯ（サルの腎臓）細胞株を、ポリオウイルス、即ち、サービン株及びサーク株の成長のための宿主細胞として使用する。
●ポリオウイルスの所望の株による宿主細胞の感染及び７２時間の培養後、ウイルスと細胞残骸を含有する培地を貯蔵して、単一の容器に収集した。
●１００ＫＤａのカセットによる接線方向の流量濾過を濾液に施し、リン酸緩衝剤を使用して透析濾過し、かつ陰イオン交換クロマトグラフィーを使用して精製した。
●患者に投与するのに先立って、適切な不活性化法を使用して、ウイルスを不活性化させなければならない。
【００４６】
しかし、本発明者らは、驚くべきことに、ホルムアルデヒド不活性化後のＤ抗原の高い割合での損失が、ポリオウイルス粒子の望ましくない凝集を予想外に引き起こす、リン酸緩衝剤の存在故であり得ることを、見出した。
【００４７】
従って、本開示の重要な態様は、以下の工程を含むホルマリン不活性化の向上したプロセスからなる。
ａ）リン酸緩衝剤から、７〜７．５の間のｐＨを有する（３０〜５０ｍＭ）の範囲のトリス緩衝剤へと、精製したポリオウイルスプールに緩衝剤交換を施した。
ｂ）上記の混合物Ｍ−１９９へと、グリシン（５ｇｍ／ｌ）を含有する媒体を添加した。
ｃ）０．０２５％のホルムアルデヒドを添加して、その後に混合した。
ｄ）電磁攪拌器におけるウイルスバルクの持続的な撹拌により、混合物を、その後に３７℃にて５〜１３日間培養した。
ｅ）７日目に、培養後の混合物に中間体ＴＦＦ系（１００ＫＤａ、０．１ｍ２）を施し、また不活性化後に最終の濾過を施した。
ｆ）その後、濾過したバルクを２〜８℃にて貯蔵した。
ｇ）Ｄ−Ａｇユニット測定に関して、Ｄ−ＡｇＥＬＩＳＡを実施する。
【００４８】
本開示の第４の実施形態によれば、混合ワクチン組成物に使用されるＩＰＶ株は、１型、２型、及び３型からなる群から選択される投与量低減不活性サービン株、又はマホニー１型、ＭＥＦ２型、及びソーケット３型からなる群から選択される不活性サーク株からなる。
【００４９】
本開示の第５の実施形態によれば、ＩＰＶ（サービン株及びサーク株）は、（例えば、存在する場合、その他の成分と混合される前において）いかなる補助剤上にも吸着されない。
【００５０】
本開示の第６の実施形態によれば、ＩＰＶ（サービン株及びサーク株）成分（複数可）は、（例えば、存在する場合、その他の成分と混合される前後において）水酸化アルミニウム（Ａｌ（ＯＨ）３）若しくはリン酸アルミニウム（ＡｌＰＯ４）などのアルミニウム塩（Ａｌ３＋）、ミョウバン、リン酸カルシウム、ＭＰＬＡ、３Ｄ−ＭＰＬ、ＱＳ２１、ＣｐＧ含有オリゴデオキシヌクレオチド補助剤、リポソーム、若しくは水中油型エマルション、又はこれらの組み合わせからなる群から選択される補助剤上に、吸着され得る。吸着される場合、１種以上のＩＰＶ成分が、別個に又は混合物として一緒に水酸化ミョウバン上に吸着され得る。
【００５１】
ＩＰＶ（サービン株及びサーク株）成分（複数可）は、次の手順によりアルミニウム塩上に吸着されてよい。
●加圧滅菌されたＡｌ（ＯＨ）３の所望の容積を取得して、５０ｍｌの容器内に０．１〜０．８ｍｇ／投与量の最終ミョウバン（Ａｌ＋＋＋）濃度を得る。
●調節したＤ−Ａｇ単位と共にＩＰＶバルクを添加して、希釈剤（１０ｘＭ−１９９＋０．５％グリシン）を伴う容積を構成する。
●最終配合ｐＨを調節して、６〜６．８のｐＨを伴う最終配合物を得る。
【００５２】
第６の実施形態の態様の１つでは、ホルマリン不活性ＩＰＶの吸着は、０．１ｍｇ／投与量、０．２ｍｇ／投与量、０．３ｍｇ／投与量、０．４ｍｇ／投与量、０．５ｍｇ／投与量、０．６ｍｇ／投与量、０．７ｍｇ／投与量、及び０．８ｍｇ／投与量、好ましくは、抗原型あたり０．１ｍｇ／投与量〜１．２５ｍｇ／投与量から選択される濃度を有するミョウバン（Ａｌ３＋）上で、６．２、６．３、６．４、６．５、６．６、６．７及び６．８、好ましくは６．５から選択されるｐＨにて、行うことができる。
【００５３】
第６の実施形態の依然として別の態様の１つでは、トリスの存在下におけるホルマリン不活性化後のＤ抗原の回復率は、５０％、６０％、７０％、又は８０％の一方であり得、また水酸化アルミニウム吸着後の吸着率は、７０％〜８０％、８０％〜９０％、又は９０％〜９９％、又は９５％〜９９％であり得る。
【００５４】
本開示の第７の実施形態によれば、ジフテリア毒素（細菌外毒素）及び破傷風毒素（細菌外毒素）は、それぞれ、コリネバクテリウム・ジフテリア及びクロストリジウム・テタニから得られ、またその後に、好適な不活性化法を使用して解毒された。こうして得られたジフテリアトキソイド（Ｄ）及び破傷風トキソイド（Ｔ）を、ゲル濾過クロマトグラフィーを使用して、更に精製した。こうして得られた精製済みＤＴを、混合ワクチンの配合のために更に使用した。
【００５５】
第７の実施形態の態様の１つでは、ジフテリア毒素は、以下の組み合わせのいずれかにおいて、最適な濃度にて、以下の成分からなる半合成培地内で、コリネバクテリウム・ジフテリアエにより生成される。
【００５６】
組み合わせ１：
カゼイン加水分解産物、マルトース一水和物、氷酢酸、乳酸ナトリウム、硫酸マグネシウム、βアラニン、ピメリン酸、ニコチン酸、硫酸銅、硫酸亜鉛、塩化第一マンガン、Ｌ−シスチン、塩化カルシウム、二水和物、二水素オルトリン酸カリウム、Ｄｉ燐酸カリウム、硫酸第一鉄、及びＷＦＩ。
【００５７】
組み合わせ２：
カゼイン加水分解産物、マルトース一水和物、氷酢酸、乳酸ナトリウム、硫酸マグネシウム、βアラニン、ピメリン酸、ニコチン酸、塩化第一マンガン、Ｌ−シスチン、塩化カルシウム、二水和物、二水素オルトリン酸カリウム、Ｄｉ燐酸カリウム、硫酸第一鉄、及びＷＦＩ。
【００５８】
組み合わせ３：
カゼイン加水分解産物、マルトース一水和物、氷酢酸、乳酸ナトリウム、βアラニン、ピメリン酸、ニコチン酸、硫酸銅、硫酸亜鉛、塩化第一マンガン、Ｌ−シスチン、塩化カルシウム、二水和物、二水素オルトリン酸カリウム、Ｄｉ燐酸カリウム、及びＷＦＩ。
【００５９】
組み合わせ４：
酵母菌抽出物、マルトース一水和物、氷酢酸、乳酸ナトリウム硫酸マグネシウム、βアラニン、ピメリン酸、ニコチン酸、硫酸銅、硫酸亜鉛、塩化第一マンガン、Ｌ−シスチン、塩化カルシウム、二水和物、二水素オルトリン酸カリウム、Ｄｉ燐酸カリウム、硫酸第一鉄、及びＷＦＩ。
【００６０】
第７の実施形態の第２の態様によれば、破傷風毒素は、以下の組み合わせのいずれかにおいて、最適な濃度にて、以下の成分からなる半合成培地内で、クロストリジウム・テタニにより生成される。
【００６１】
組み合わせ１：
カゼイン消化物、塩化カルシウム、Ｄ燐酸カリウム、無水デキストロース、塩化ナトリウム、硫酸マグネシウム、リボフラビン、塩酸チアミン、塩酸ピリドキシン、パントテン酸カルシウム、ニコチン酸、Ｌ−シスチン、塩化第二鉄、ビタミンＢ１２溶液、ビオチン、コンク、ＨＣＩ、ＮａＯＨ、無水エタノール、及びＷＦＩ。
【００６２】
組み合わせ２：
カゼイン消化物、塩化カルシウム、βアラニン、Ｄ燐酸カリウム、無水デキストロース、塩化ナトリウム、硫酸マグネシウム、硫酸第一鉄、リボフラビン、塩酸チアミン、塩酸ピリドキシン、パントテン酸カルシウム、ニコチン酸、Ｌ−シスチン、塩化第二鉄、ビタミンＢ１２溶液、ビオチン、コンク、ＨＣＩ、ＮａＯＨ、無水エタノール、及びＷＦＩ。
【００６３】
組み合わせ３：
カゼイン消化物、塩化カルシウム、Ｄ燐酸カリウム、無水デキストロース、塩化ナトリウム、硫酸亜鉛、リボフラビン、塩酸チアミン、塩酸ピリドキシン、パントテン酸カルシウム、ニコチン酸、Ｌ−シスチン、塩化第二鉄、ビタミンＢ１２溶液、ビオチン、コンク、ＨＣＩ、ＮａＯＨ、無水エタノール、及びＷＦＩ。
【００６４】
組み合わせ４：
カゼイン加水分解産物物、塩化カルシウム、Ｄ燐酸カリウム、無水デキストロース、塩化ナトリウム、硫酸マグネシウム、塩化第一マンガン、リボフラビン、塩酸チアミン、塩酸ピリドキシン、パントテン酸カルシウム、ニコチン酸、Ｌ−シスチン、塩化第二鉄、ビタミンＢ１２溶液、ビオチン、コンク、ＨＣＩ、ＮａＯＨ、無水エタノール、及びＷＦＩ。
【００６５】
第７の実施形態の依然として別の態様では、ジフテリア毒素及び破傷風毒素は、加熱、ＵＶ、ホルマリン／ホルムアルデヒド、アセチルエチレンイミン等を含む以下の不活性化法のうちの１つ又は組み合わせを使用して、解毒される。
【００６６】
本開示の第８の実施形態によれば、混合ワクチン組成物に使用される肝炎（ＨｅＰ）抗原は、Ｂ型肝炎株（ＨＢｓＡｇ）の表面由来のＨｅＰ抗原からなる。
【００６７】
第８の実施形態の一態様では、ＨＢｓＡｇは、以下の方法のうちの１つにより作製することができる。
●ＨＢＶ感染の間に大量のＨＢｓＡｇが肝臓で合成されて、血流内へと放出される際に、慢性Ｂ型肝炎キャリアの血漿から、粒子形態にて抗原を精製することによる。
●組み換えＤＮＡ法により、タンパク質を発現させる。
【００６８】
本開示の第９の実施形態によれば、ジフテリアトキソイド（Ｄ）、破傷風トキソイド（Ｔ）、及びＢ型肝炎表面抗原（ＨＢｓＡｇ）は、水酸化アルミニウム（Ａｌ（ＯＨ）３）若しくはリン酸アルミニウム（ＡｌＰＯ４）などのアルミニウム塩（Ａｌ３＋）、ミョウバン、リン酸カルシウム、ＭＰＬＡ、３Ｄ−ＭＰＬ、ＱＳ２１、ＣｐＧ含有オリゴデオキシヌクレオチド補助剤、リポソーム、若しくは水中油型エマルション、又はこれらの組み合わせからなる群から選択される補助剤上に、個別に吸着される。
【００６９】
依然として好ましくは、ジフテリアトキソイド（Ｄ）、破傷風トキソイド（Ｔ）、及びＢ型肝炎表面抗原（ＨＢｓＡｇ）は、リン酸アルミニウム上に個別に吸着される。第９の実施形態の一態様では、ジフテリアトキソイド（Ｄ）抗原は、少なくとも５０％の吸着率を有するリン酸アルミニウム上に吸着された。第９の実施形態の別の態様では、破傷風トキソイド（Ｔ）抗原は、少なくとも４０％の吸着率を有するリン酸アルミニウム上に吸着された。
【００７０】
第９の実施形態の依然として別の一態様では、Ｂ型肝炎表面抗原（ＨＢｓＡｇ）は、少なくとも７０％の吸着率を有するリン酸アルミニウム上に吸着された。
【００７１】
本開示の第１０の実施形態によれば、本開示の混合ワクチンに使用されるＨｉｂ抗原は、Ｈｉｂ  ｂ株７６０７０５の莢膜多糖類由来である。
【００７２】
第１０の実施形態の一態様によれば、Ｈｉｂ  ｂ  ＰＲＰ抗原は、ＣＲＭ１９７、ジフテリアトキソイド、ナイセリア髄膜炎外膜複合体、破傷風トキソイドのフラグメントＣ、百日咳トキソイド、インフルエンザ菌のタンパク質Ｄ、大腸菌ＬＴ、大腸菌ＳＴ、及び緑膿菌からの細菌外毒素Ａ、外膜複合体ｃ（ＯＭＰＣ）、ポリン、トランスフェリン結合タンパク質、プノイモリジン、肺炎球菌表面タンパク質Ａ（ＰｓｐＡ）、肺炎球菌表面アドヘシンＡ（ＰｓａＡ）、肺炎球菌ＰｈｔＤ、肺炎球菌表面タンパク質ＢＶＨ−３及びＢＶＨ−１１、炭疽菌の感染防御抗原（ＰＡ）並びに炭疽菌の解毒浮腫因子（ＥＦ）及び致死因子（ＬＦ）、卵白アルブミン、キーホールリンペットヘモシアニン（ＫＬＨ）、ヒト血清アルブミン、ウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）、及びツベルクリンの精製タンパク質誘導体（ＰＰＤ）、合成ペプチド、熱ショックタンパク質、百日咳タンパク質、サイトカイン、リンホカイン、ホルモン、成長因子、Ｎ１９などの種々の病原体由来抗原からの複数のヒトＣＤ４＋Ｔ細胞エピトープを含む人工タンパク質、鉄取込みタンパク質、Ｃ．ディフィシル由来のトキシンＡ又はＢ、及びＳ．アガラクチアタンパク質、からなるが、これらに限定されない担体タンパク質の群から選択される担体タンパク質に、共役される。
【００７３】
依然として好ましくは、Ｈｉｂ  ｂ  ＰＲＰ抗原は、ＣＮＢｒ化学作用、還元アミノ化化学作用、シアニル化化学作用、又は既に開示されているＫｎｉｓｋｅｒｎら、Ｅｌｌｉｓらの「Ｃｏｎｊｕｇａｔｉｏｎ：ｄｅｓｉｇｎ  ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，ａｎｄ  ａｎａｌｙｓｉｓ」、「Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ  ａｎｄ  ｃｌｉｎｉｃａｌ  ｕｓｅｓ  ｏｆ  Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ  ｂ  ｃｏｎｊｕｇａｔｅ  ｖａｃｃｉｎｅｓ」（ニューヨーク州：マーセル・デッカー社（Ｍａｒｃｅｌ  Ｄｅｋｋｅｒ），１９９４年：３７−６９）の任意のその他の化学作用により、破傷風トキソイド（ＴＴ）に共役される。
【００７４】
第１０の実施形態の第２の態様によれば、担体タンパク質は、本開示の組成物中に遊離形態及び共役形態の両方にて存在し、非共役形態は、好ましくは、全体として、組成物中の担体タンパク質の総量の２０％以下、またより好ましくは、５重量％未満で存在する。
【００７５】
第１０の実施形態の第３の態様によれば、Ｈｉｂ抗原は、いかなる補助剤上にも実質的に吸着されない。
【００７６】
第１０の実施形態の第４の態様によれば、Ｈｉｂ抗原は、いかなる補助剤上への故意又は意図的な吸着をも施され得ない。
【００７７】
本開示の第１１の実施形態によれば、本開示の混合ワクチン組成物に使用される全細胞百日咳（ｗＰ）抗原の調製物は、好ましくは、特定の比率で混合され、かつその後に、チメロサールを欠き、従って減少された反応源性及び増大した潜在能をもたらす向上した不活性化法を利用することにより不活性化され、またアルミニウム系補助剤上に吸着され得る、又は吸着され得ない、百日咳菌株１３４、５０９、２５５２５、及び６２２９から作製される。
【００７８】
第１１の実施形態の一態様によれば、本開示の混合ワクチン組成物に使用される全細胞百日咳（ｗＰ）抗原の調製物は、好ましくは、１：１：０．２５：０．２５の比率で混合された百日咳菌株１３４、５０９、２５５２５、及び６２２９から作製される。
【００７９】
第１１の実施形態の第２の態様によれば、本開示の混合ワクチン組成物に使用される全細胞百日咳（ｗＰ）抗原の調製物は、加熱、ＵＶ、ホルマリン／ホルムアルデヒド、アセチルエチレンイミン等を含む１種以上の以下の不活性化処置を使用して、不活性化された。
【００８０】
依然として好ましくは、混合ワクチン組成物に使用される全細胞百日咳（ｗＰ）抗原の調製物は、加熱と化学処理との組み合わせを使用して不活性化された。依然として好ましくは、ホルムアルデヒドの存在下で、５６±２℃にて、１０〜１５分間での加熱不活性化では、ｗＰバルクは非塊状に留まり、また容易に均質化され、それにより、減少された反応源性をもたらして、長期持続時間のためのより良好なｗＰ潜在能を所与する。
【００８１】
第１１の実施形態の第３の態様によれば、混合ワクチン組成物に使用される全細胞百日咳（ｗＰ）抗原の調製物は、（例えば、存在する場合、その他の成分との混合の前後において）水酸化アルミニウム、リン酸アルミニウム、又はこれらの組み合わせなどのアルミニウム系補助剤上に吸着され得る、又は吸着され得ない。吸着された場合、１種以上のｗＰ株（即ち、１３４、５０９、２５５２５、及び６２２９）は、別個に又は混合物として一緒に吸着され得る。
【００８２】
本開示の第１２の実施形態によれば、ジフテリアトキソイド（Ｄ）は１〜４０Ｌｆの範囲の量であり、破傷風トキソイド（Ｔ）は４〜２５Ｌｆの範囲の量であり、ｗＰは０．５ｍｌあたり４〜３０ＩＯＵの範囲の量であり、インフルエンザＢ型菌ＰＲＰ−ＴＴ共役体は、０．５ｍｌあたり１〜２０μｇのＰＲＰ含有量の範囲の量であり、ＨＢｓＡｇ抗原は、０．５ｍｌあたり１〜２０μｇの範囲の量であり、１型、２型、及び３型を含むサービンＩＰＶは、１型では１〜５０ＤＵ／０．５ｍｌの量にて含有され、２型では１〜２０ＤＵ／０．５ｍｌの量にて含有され、また３型では１〜５０ＤＵ／０．５ｍｌの量にて含有され、かつ追加的に、最終の混合ワクチン組成物／配合物中にアルミニウム系補助剤及び防腐剤を含む。
【００８３】
依然として好ましくは、ジフテリアトキソイド（Ｄ）は、最終の混合ワクチン組成物中で約２５Ｌｆの量である。
【００８４】
依然として好ましくは、ジフテリアトキソイド（Ｄ）は、最終の混合ワクチン組成物中で約２０Ｌｆの量である。
【００８５】
依然として好ましくは、ジフテリアトキソイド（Ｄ）は、最終の混合ワクチン組成物中で約１０Ｌｆの量である。
【００８６】
依然として好ましくは、破傷風トキソイド（Ｔ）は、最終の混合ワクチン組成物中で約１０Ｌｆの量である。
【００８７】
依然として好ましくは、破傷風トキソイド（Ｔ）は、最終の混合ワクチン組成物中で約４Ｌｆの量である。
【００８８】
依然として好ましくは、破傷風トキソイド（Ｔ）は、最終の混合ワクチン組成物中で約２Ｌｆの量である。
【００８９】
依然として好ましくは、ｗＰは、最終の混合ワクチン組成物中で０．５ｍｌあたり約１６ＩＯＵの量である。
【００９０】
依然として好ましくは、ｗＰは、最終の混合ワクチン組成物中で０．５ｍｌあたり約１４ＩＯＵの量である。
【００９１】
依然として好ましくは、ｗＰは、最終の混合ワクチン組成物中で０．５ｍｌあたり約１２ＩＯＵの量である。
【００９２】
依然として好ましくは、インフルエンザＢ型菌ＰＲＰ−ＴＴ共役体は、０．５ｍｌあたり約１３μｇのＰＲＰ含有量の量である。
【００９３】
依然として好ましくは、インフルエンザＢ型菌ＰＲＰ−ＴＴ共役体は、０．５ｍｌあたり約１０μｇのＰＲＰ含有量の量である。
【００９４】
依然として好ましくは、インフルエンザＢ型菌ＰＲＰ−ＴＴ共役体は、０．５ｍｌあたり約８μｇのＰＲＰ含有量の量である。
【００９５】
依然として好ましくは、ＨＢｓＡｇ抗原は、最終の混合ワクチン組成物中で０．５ｍｌあたり約１５μｇの量である。
【００９６】
依然として好ましくは、ＨＢｓＡｇ抗原は、最終の混合ワクチン組成物中で０．５ｍｌあたり約１０μｇの量である。
【００９７】
依然として好ましくは、ＨＢｓＡｇ抗原は、最終の混合ワクチン組成物中で０．５ｍｌあたり約８μｇの量である。
【００９８】
依然として好ましくは、１型、２型、及び３型株を含むサービン不活性ポリオワクチン（ｓＩＰＶ）は、最終の混合ワクチン組成物中で、それぞれ、０．５ｍｌあたり約４０ＤＵ、８ＤＵ、及び３２ＤＵの量にて存在する。
【００９９】
本開示の第１３の実施形態によれば、ジフテリアトキソイド（Ｄ）は１〜４０Ｌｆの範囲の量であり、破傷風トキソイド（Ｔ）は４〜２５Ｌｆの範囲の量であり、ｗＰは０．５ｍｌあたり４〜３０ＩＯＵの範囲の量であり、インフルエンザＢ型菌ＰＲＰ−ＴＴ共役体は、０．５ｍｌあたり１〜２０μｇのＰＲＰ含有量の範囲の量であり、ＨＢｓＡｇ抗原は、０．５ｍｌあたり１〜２０μｇの範囲の量であり、マホニー１型、ＭＥＦ２型、及びソーケット３型株を含むサーク不活性ポリオウイルス（ＩＰＶ）は、マホニー１型では１〜５０ＤＵ／０．５ｍｌの量にて含有され、ＭＥＦ２型では１〜２０ＤＵ／０．５ｍｌの量にて含有され、またソーケット３型では１〜５０ＤＵ／０．５ｍｌの量にて含有され、かつ追加的に、最終の混合ワクチン組成物／配合物中にアルミニウム系補助剤及び防腐剤を含む。
【０１００】
依然として好ましくは、ジフテリアトキソイド（Ｄ）は、最終の混合ワクチン組成物中で約２５Ｌｆの量である。
【０１０１】
依然として好ましくは、ジフテリアトキソイド（Ｄ）は、最終の混合ワクチン組成物中で約２０Ｌｆの量である。
【０１０２】
依然として好ましくは、ジフテリアトキソイド（Ｄ）は、最終の混合ワクチン組成物中で約１０Ｌｆの量である。
【０１０３】
依然として好ましくは、破傷風トキソイド（Ｔ）は、最終の混合ワクチン組成物中で約１０Ｌｆの量である。
【０１０４】
依然として好ましくは、破傷風トキソイド（Ｔ）は、最終の混合ワクチン組成物中で約４Ｌｆの量である。
【０１０５】
依然として好ましくは、破傷風トキソイド（Ｔ）は、最終の混合ワクチン組成物中で約２Ｌｆの量である。
【０１０６】
依然として好ましくは、ｗＰは、最終の混合ワクチン組成物中で０．５ｍｌあたり約１６ＩＯＵの量である。
【０１０７】
依然として好ましくは、ｗＰは、最終の混合ワクチン組成物中で０．５ｍｌあたり約１４ＩＯＵの量である。
【０１０８】
依然として好ましくは、ｗＰは、最終の混合ワクチン組成物中で０．５ｍｌあたり約１２ＩＯＵの量である。
【０１０９】
依然として好ましくは、インフルエンザＢ型菌ＰＲＰ−ＴＴ共役体は、０．５ｍｌあたり約１３μｇのＰＲＰ含有量の量である。
【０１１０】
依然として好ましくは、インフルエンザＢ型菌ＰＲＰ−ＴＴ共役体は、０．５ｍｌあたり約１０μｇのＰＲＰ含有量の量である。
【０１１１】
依然として好ましくは、インフルエンザＢ型菌ＰＲＰ−ＴＴ共役体は、０．５ｍｌあたり約８μｇのＰＲＰ含有量の量である。
【０１１２】
依然として好ましくは、ＨＢｓＡｇ抗原は、最終の混合ワクチン組成物中で０．５ｍｌあたり約１５μｇの量である。
【０１１３】
依然として好ましくは、ＨＢｓＡｇ抗原は、最終の混合ワクチン組成物中で０．５ｍｌあたり約１０μｇの量である。
【０１１４】
依然として好ましくは、ＨＢｓＡｇ抗原は、最終の混合ワクチン組成物中で０．５ｍｌあたり約８μｇの量である。
【０１１５】
依然として好ましくは、マホニー１型、ＭＥＦ２型、及びソーケット３型株を含むサーク不活性ポリオワクチン（ｓＩＰＶ）は、最終の混合ワクチン組成物中で、それぞれ、０．５ｍｌあたり約４０ＤＵ、８ＤＵ、及び３２ＤＵの量にて存在する。
【０１１６】
本開示の第１４の実施形態によれば、ジフテリアトキソイドは１〜４０Ｌｆの範囲の量であり、破傷風トキソイドは４〜２５Ｌｆの範囲の量であり、ｗＰは０．５ｍｌあたり４〜３０ＩＯＵの範囲の量であり、インフルエンザＢ型菌ＰＲＰ−ＴＴ共役体は、０．５ｍｌあたり１〜２０μｇのＰＲＰ含有量の範囲の量であり、ＨｅＰ抗原は、０．５ｍｌあたり１〜２０μｇの範囲の量であり、１型、２型、及び３型を含む、混合ワクチン組成物に使用される投与量低減サービン不活性ポリオワクチン（ｓＩＰＶ）は、１型では２．５〜１０ＤＵ／０．５ｍｌの量にて含有され、２型では５〜２０ＤＵ／０．５ｍｌの量にて含有され、また３型では１〜２０ＤＵ／０．５ｍｌの量にて含有され、かつ追加的に、最終の混合ワクチン組成物／配合物中にアルミニウム系補助剤及び防腐剤を含む。
【０１１７】
依然として好ましくは、ジフテリアトキソイド（Ｄ）は、最終の混合ワクチン組成物中で約２５Ｌｆの量である。
【０１１８】
依然として好ましくは、ジフテリアトキソイド（Ｄ）は、最終の混合ワクチン組成物中で約２０Ｌｆの量である。
【０１１９】
依然として好ましくは、ジフテリアトキソイド（Ｄ）は、最終の混合ワクチン組成物中で約１０Ｌｆの量である。
【０１２０】
依然として好ましくは、破傷風トキソイド（Ｔ）は、最終の混合ワクチン組成物中で約１０Ｌｆの量である。
【０１２１】
依然として好ましくは、破傷風トキソイド（Ｔ）は、最終の混合ワクチン組成物中で約４Ｌｆの量である。
【０１２２】
依然として好ましくは、破傷風トキソイド（Ｔ）は、最終の混合ワクチン組成物中で約２Ｌｆの量である。
【０１２３】
依然として好ましくは、ｗＰは、最終の混合ワクチン組成物中で０．５ｍｌあたり約１６ＩＯＵの量である。
【０１２４】
依然として好ましくは、ｗＰは、最終の混合ワクチン組成物中で０．５ｍｌあたり約１４ＩＯＵの量である。
【０１２５】
依然として好ましくは、ｗＰは、最終の混合ワクチン組成物中で０．５ｍｌあたり約１２ＩＯＵの量である。
【０１２６】
依然として好ましくは、インフルエンザＢ型菌ＰＲＰ−ＴＴ共役体は、０．５ｍｌあたり約１３μｇのＰＲＰ含有量の量である。
【０１２７】
依然として好ましくは、インフルエンザＢ型菌ＰＲＰ−ＴＴ共役体は、０．５ｍｌあたり約１０μｇのＰＲＰ含有量の量である。
【０１２８】
依然として好ましくは、インフルエンザＢ型菌ＰＲＰ−ＴＴ共役体は、０．５ｍｌあたり約８μｇのＰＲＰ含有量の量である。
【０１２９】
依然として好ましくは、ＨＢｓＡｇ抗原は、最終の混合ワクチン組成物中で０．５ｍｌあたり約１５μｇの量である。
【０１３０】
依然として好ましくは、ＨＢｓＡｇ抗原は、最終の混合ワクチン組成物中で０．５ｍｌあたり約１０μｇの量である。
【０１３１】
依然として好ましくは、ＨＢｓＡｇ抗原は、最終の混合ワクチン組成物中で０．５ｍｌあたり約８μｇの量である。
【０１３２】
依然として好ましくは、１型、２型、及び３型株を含む投与量低減サービン不活性ポリオワクチン（ｓＩＰＶ）は、最終の混合ワクチン組成物中で、それぞれ、０．５ｍｌあたり約５ＤＵ、１６ＤＵ、及び１０ＤＵの量にて存在する。
【０１３３】
本開示の第１５の実施形態によれば、ジフテリアトキソイドは１〜４０Ｌｆの範囲の量であり、破傷風トキソイドは４〜２５Ｌｆの範囲の量であり、ｗＰは０．５ｍｌあたり４〜３０ＩＯＵの範囲の量であり、インフルエンザＢ型菌ＰＲＰ−ＴＴ共役体は、０．５ｍｌあたり１〜２０μｇのＰＲＰ含有量の範囲の量であり、ＨｅＰ抗原は、０．５ｍｌあたり１〜２０μｇの範囲の量であり、マホニー１型、ＭＥＦ２型、及びソーケット３型株を含む投与量低減サーク不活性ポリオワクチンは、マホニー１型では５〜１５ＤＵ／０．５ｍｌの量にて含有され、ＭＥＦ２型では１〜１８ＤＵ／０．５ｍｌの量にて含有され、またソーケット３型では５〜１５ＤＵ／０．５ｍｌの量にて含有され、かつ追加的に、最終の混合ワクチン組成物／配合物中にアルミニウム系補助剤及び防腐剤を含む。
【０１３４】
依然として好ましくは、ジフテリアトキソイド（Ｄ）は、最終の混合ワクチン組成物中で約２５Ｌｆの量である。
【０１３５】
依然として好ましくは、ジフテリアトキソイド（Ｄ）は、最終の混合ワクチン組成物中で約２０Ｌｆの量である。
【０１３６】
依然として好ましくは、ジフテリアトキソイド（Ｄ）は、最終の混合ワクチン組成物中で約１０Ｌｆの量である。
【０１３７】
依然として好ましくは、破傷風トキソイド（Ｔ）は、最終の混合ワクチン組成物中で約１０Ｌｆの量である。
【０１３８】
依然として好ましくは、破傷風トキソイド（Ｔ）は、最終の混合ワクチン組成物中で約４Ｌｆの量である。
【０１３９】
依然として好ましくは、破傷風トキソイド（Ｔ）は、最終の混合ワクチン組成物中で約２Ｌｆの量である。
【０１４０】
依然として好ましくは、ｗＰは、最終の混合ワクチン組成物中で０．５ｍｌあたり約１６ＩＯＵの量である。
【０１４１】
依然として好ましくは、ｗＰは、最終の混合ワクチン組成物中で０．５ｍｌあたり約１４ＩＯＵの量である。
【０１４２】
依然として好ましくは、ｗＰは、最終の混合ワクチン組成物中で０．５ｍｌあたり約１２ＩＯＵの量である。
【０１４３】
依然として好ましくは、インフルエンザＢ型菌ＰＲＰ−ＴＴ共役体は、０．５ｍｌあたり約１３μｇのＰＲＰ含有量の量である。
【０１４４】
依然として好ましくは、インフルエンザＢ型菌ＰＲＰ−ＴＴ共役体は、０．５ｍｌあたり約１０μｇのＰＲＰ含有量の量である。
【０１４５】
依然として好ましくは、インフルエンザＢ型菌ＰＲＰ−ＴＴ共役体は、０．５ｍｌあたり約８μｇのＰＲＰ含有量の量である。
【０１４６】
依然として好ましくは、ＨＢｓＡｇ抗原は、最終の混合ワクチン組成物中で０．５ｍｌあたり約１５μｇの量である。
【０１４７】
依然として好ましくは、ＨＢｓＡｇ抗原は、最終の混合ワクチン組成物中で０．５ｍｌあたり約１０μｇの量である。
【０１４８】
依然として好ましくは、ＨＢｓＡｇ抗原は、最終の混合ワクチン組成物中で０．５ｍｌあたり約８μｇの量である。
【０１４９】
依然として好ましくは、マホニー１型、ＭＥＦ２型、及びソーケット３型株を含む投与量低減サーク不活性ポリオワクチンは、最終の混合ワクチン組成物中で、それぞれ、０．５ｍｌあたり約１０ＤＵ、２ＤＵ、及び１０ＤＵの量にて存在する。
【０１５０】
本開示の第１６の実施形態によれば、最終の混合ワクチン組成物の１種以上の抗原は、いかなる補助剤上にも実質的に吸着されない場合がある。
【０１５１】
本開示の第１７の実施形態によれば、組成物は、水酸化アルミニウム（Ａｌ（ＯＨ）３）若しくはリン酸アルミニウム（ＡｌＰＯ４）などのアルミニウム塩（Ａｌ３＋）、ミョウバン、リン酸カルシウム、ＭＰＬＡ、３Ｄ−ＭＰＬ、ＱＳ２１、ＣｐＧ含有オリゴデオキシヌクレオチド補助剤、リポソーム、又は水中油型エマルションからなる群から選択される、１種以上の補助剤を含む。
【０１５２】
依然として好ましくは、組成物は、補助剤としてリン酸アルミニウム（ＡｌＰＯ４）を含む。
【０１５３】
第１７の実施形態の一態様では、最終配合物の抗原は、その場でのリン酸アルミニウムゲル、又は既製のリン酸アルミニウムゲル、又はこれらの組み合わせ上に吸着され得る。
【０１５４】
第１７の実施形態の好ましい一態様では、本開示の組成物は、２．５ｍｇ／０．５ｍｌ以下の補助剤、及び具体的には、１．５ｍｇ／０．５ｍｌ〜０．１ｍｇ／０．５ｍｌの量の補助剤を含み得る。
【０１５５】
依然として第１７の実施形態の別の好ましい一態様では、最終の混合ワクチン組成物／配合物中のアルミニウム含有量（Ａｌ＋３）は、０．５ｍｌあたり１．２５ｍｇ超ではない場合があり、好ましくは０．５ｍｌあたり１ｍｇ、また最も好ましくは０．５ｍｌあたり０．１ｍｇ〜０．５ｍｌあたり０．６３ｍｇの量であり得る。
【０１５６】
本開示の第１８の実施形態によれば、混合ワクチン組成物／配合物は、２−フェノキシエタノール、塩化ベンゼトニウム（フェメロール）、フェノール、チオメルサール、ホルムアルデヒド、メチル及びプロピルパラベン、若しくはベンジルアルコール、又はこれらの組み合わせからなる群から選択される防腐剤を含んでよい。依然として好ましくは、混合ワクチン組成物／配合物は、防腐剤として２−フェノキシエタノール（２−ＰＯＥ）を含んでよい。
【０１５７】
本発明の別の一態様によれば、本発明の混合ワクチン中の２−フェノキシエタノールの量は、好ましくは３．５ｍｇ／０．５ｍｌ超ではない場合があり、より好ましくは３．０ｍｇ／０．５ｍｌ、また最も好ましくは２．５ｍｇ／０．５ｍｌである。
【０１５８】
本開示の第１９の実施形態によれば、本開示の混合ワクチン組成物／配合物は、糖及びポリオール、界面活性剤、ポリマー、塩、アミノ酸、ｐＨ変性剤（ワクチン組成物のｐＨを調節する）等からなる群から選択される、製薬上許容できる賦形剤を含んでよい。使用される糖及びポリオールの例としては、スクロース、トレハロース、ラクトース、マルトース、ガラクトース、マンニトール、ソルビトール、グリセロール等を挙げてよい。界面活性剤の例としては、ポリソルベート２０、ポリソルベート８０等などの非イオン性界面活性剤を挙げてよい。ポリマーの例としては、デキストラン、カルボキシメチルセルロース、ヒアルロン酸、シクロデキストリン等を挙げてよい。塩の例としては、ＮａＣｌ、ＭｇＣ１２、ＫＣｌ、ＣａＣ１２等を挙げてよい。アミノ酸の例としては、アルギニン、グリシン、ヒスチジン等を挙げてよい。ｐＨ変性剤の例としては、水酸化ナトリウム、塩酸等を挙げてよい。
【０１５９】
本開示の第２０の実施形態によれば、当該混合ワクチンは、凍結乾燥配合物又は液体配合物であり得、好ましくは液体配合物である。
【０１６０】
本開示の第２１の実施形態によれば、当該混合ワクチンは、摂氏２〜８℃にて１２〜３６ヶ月、摂氏２５℃にて２〜６ヶ月、摂氏３７℃にて１週間〜４週間安定し得、ｐＨ６．０〜ｐＨ７．０の範囲、より好ましくはｐＨ６．２〜ｐＨ６．８の範囲、また最も好ましくはｐＨ６．３〜ｐＨ６．７の範囲の最終ｐＨを有する。
【０１６１】
本開示の第２２の実施形態によれば、向上した免疫原性及び減少された反応源性を伴う安定した多価ワクチンは、ワクチンが以下に開示されたプロセス、ｉ）個々の抗原の作製プロセス、ｉｉ）抗原の添加の順序、ｉｉｉ）特定の抗原に関する、特定の量での特定の補助剤の使用、ｉｖ）補助剤上への抗原の個々の吸着又は組み合わされた吸着、ｖ）補助剤上への抗原の吸着の程度、ｖｉ）最小ミョウバン濃度の使用、ｖｉｉ）最適な濃度及び防腐剤種類の使用、並びにｖｉｉｉ）攪拌、温度、及びｐＨを含む種々のパラメータの使用を考慮に入れて、これらにより製造される場合に得ることができる、ということを申請者は見出した。
【０１６２】
ＳＩＩＰＬ混合ワクチンにて使用される株の生物源：
ジフテリアトキソイド：
コリネバクテリウム・ジフテリアエＰＷ８  ＣＮ２０００株を、Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｃｏｎｔｒｏｌ  Ａｕｔｈｒｉｔｙ  Ｃｅｎｔｒａｌ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ（Ｃ．Ｒ．Ｉ）（Ｋａｓａｕｌｉ，Ｈｉｍａｃｈａｌ  Ｐｒａｄｅｓｈ，インド）により、凍結乾燥形態にて、１９７３年にＷｅｌｌｃｏｍｅ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ（ロンドン、英国）から入手した。株を受領して、Ｃ．Ｒ．Ｉ．Ｋａｓａｕｌｉにおいて、Ｍａｓｔｅｒ  Ｓｅｅｄ  Ｌｏｔ−Ｃ．ジフテリアエＣＮ２０００Ａ１下で更に冷凍乾燥させた。
【０１６３】
破傷風トキソイド：
クロストリジウム・テタニ株ハーバード株Ｎｏ．４９２０５を、Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｃｏｎｔｒｏｌ  Ａｕｔｈｒｉｔｙ  Ｃ．Ｒ．Ｉ．Ｋａｓａｕｌｉにより、凍結乾燥形態にて、Ｒｉｊｋｓ  Ｉｎｓｔｉｔｕｅ  Ｖｏｏｒ  ｄｅ  Ｖｏｌｋｓｇｅｚｏｎｄｈｅｉｄ（オランダ）から入手した。
【０１６４】
百日咳：
ＳＩＩＰＬでの百日咳ワクチンバルクの製造は、４種の百日咳菌株、即ち、１３４、５０９、６２２９、及び２５５２５株の使用を伴う。１３４株及び５０９株のＭａｓｔｅｒ  Ｓｅｅｄは、元々、Ｒｉｊｋｓ  Ｉｎｓｔｉｔｕｅ（オランダ）からのものであり、Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｃｏｎｔｒｏｌ  Ａｕｔｈｒｉｔｙ，Ｃｅｎｔｒａｌ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ（Ｋａｓａｕｌｉ，Ｈｉｍａｃｈａｌ  Ｐｒａｄｅｓｈ，インド）を介して入手したものである。６２２９株及び２５５２５株のＭａｓｔｅｒ  Ｓｅｅｄは、元々、Ｌｉｓｔｅｒ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ（イングランド）からのものである。
【０１６５】
Ｂ型肝炎：
Ｒｈｅｉｎ  Ｂｉｏｔｅｃｈ（ドイツ）は、ＨＢｓＡｇ表面抗原遺伝子を含有する組換型ハンゼヌラ・ポリモルファ株を作製した。Ｒｈｅｉｎ  Ｂｉｏｔｅｃｈはまた、Ｍａｓｔｅｒ  Ｃｅｌｌ  Ｂａｎｋ（ＭＣＢハンゼヌラ・ポリモルファＫ３／８−１株ＡＤＷ，１２／９４）を作成し、また本バンクにおいて全ての特性試験を実施した。
【０１６６】
インフルエンザＢ型菌：
細胞基質発生に関する微生物源は、インフルエンザｂ型菌７６０７０５株である。株は、元々、１９７６年１１月に、２歳２ヶ月の男児（１９７４年８月１４日生まれ）から隔離された。株の３つの継代は、Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｍｅｄｉｃａｌ  Ｃｅｎｔｒｅ（ＡＭＣ），Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  ｏｆ  Ａｍｓｔｅｒｄａｍにおいて、−７０℃にて貯蔵される前に発生した。本株は、ＳＩＩＰＬとＮｅｔｈｅｒｌａｎｄｓ  Ｖａｃｃｉｎｅｓ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ（ＮＶＩ，オランダ）との間の共同研究の一部として、ＳＩＩＰＬへと移された。
【０１６７】
ＩＰＶ：
株及びポリオウイルス源を、以下に所与する。
ポリオウイルス１型：
株：マホニー型
供給元：Ｄｒ．Ｊ．Ｓａｌｋ（Ｐｉｔｍａｎ  ＆  Ｍｏｏｒｅ  ｃｏｍｐａｎｙ）
ポリオウイルス２型：
株：ＭＥＦ１型
供給元：Ｓｔａｔｅｎｓ  Ｓｅｒｕｍ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ（コペンハーゲン）
ポリオウイルス３型：
株：ソーケット型
供給元：Ｓｔａｔｅｎｓ  Ｓｅｒｕｍ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ（コペンハーゲン）
【０１６８】
本明細書全体を通して、用語「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅ）」、又は「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅｓ）」若しくは「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」などの変形形態は、述べられた要素、整数若しくは工程、又は要素、整数若しくは工程の群の包含を意味するが、いずれのその他の要素、整数若しくは工程、又は要素、整数若しくは工程の群の除外をも意味するものではない、と理解されよう。
【０１６９】
表現「少なくとも（ａｔ  ｌｅａｓｔ）」又は「少なくとも１つ（ａｔ  ｌｅａｓｔ  ｏｎｅ）」の使用は、１つ以上の所望の目的又は結果を達成するために本発明の実施形態において使用され得る際に、１つ以上の要素又は成分又は量の使用を示唆するものである。本発明の特定の実施形態が記載されている一方で、これらの実施形態は、例示目的のみにより提示されており、また本発明の範囲を制限することを意図するものではない。本発明の範囲内の、本発明の配合に対する変形形態又は変更は、本明細書の開示の考察の際に、当業者に対して発生し得るものである。このような変形形態又は変更は、本発明の精神において適切である。
【０１７０】
種々の物理的パラメータ、寸法、及び量に関して所与される数値は、おおよその値のみであり、また物理的パラメータ、寸法、及び量に対して指定された数値よりも高い値は、本明細書中で特に異議を唱えない限り、本発明の範囲内に収まるものと見なされる。
【０１７１】
考慮すべき強調が、本明細書における好ましい実施形態の特定の特徴においてなされてきたが、本開示の原理を逸脱することなく、好ましい実施形態において多くの追加の特徴が追加され得、かつ多くの変更がなされ得ることを、理解されよう。本開示の好ましい実施形態におけるこれらの及びその他の変更は、本明細書の開示から当業者には明白であり、それにより、前述の記述事項が、単に本開示の例示として解釈され、かつ限定されるものではないことが、明確に理解されよう。
【０１７２】
利点
上記で本明細書に記載された本開示は、Ｄ、Ｔ、ｗＰ、ＨＢｓＡｇ、Ｈｉｂ  ＰＲＰ−ＴＴ共役体、及びＩＰＶを含む混合ワクチン組成物の実現、並びにそれらの製造方法を含むがこれらに限定されない、幾つかの技術的進歩及び利点を有する。その他の混合ワクチン組成物と比較した場合、本開示は、以下の利点を提供する。
１．完全な液体混合ワクチン
２．向上した免疫原性
３．減少された反応源性
４．１２ヶ月にわたって試験した、２〜８℃及び室温における向上した安定性
５．伝播性海綿様脳症（ＴＳＥ）又はウシ海綿状脳症（ＢＳＥ）を含まない、半合成培地を使用して生成された、高度に精製されたジフテリアトキソイド（Ｄ）及び破傷風トキソイド（Ｔ）。
６．全細胞Ｂ型百日咳（ｗＰ）抗原は、１：１：０．２５：０．２５の比率にて、百日咳菌株１３４、５０９、２５５２５、及び６２２９を含み、それにより、Ｂ型百日咳に対する潜在能及び免疫原性を向上させる。加熱とホルムアルデヒド不活性化とを組み合わせて使用した、全細胞Ｂ型百日咳（ｗＰ）成分の不活性化の向上した方法。
７．本プロセスはチメロサールを欠き、かつ不活性全細胞百日咳抗原が塊状ではなく均質な状態に留まり、それにより、減少された反応源性をもたらし、かつより長い持続時間に対するより良好な洗剤能を所与する。
８．総インフルエンザｂ型菌ＰＲＰ−ＴＴ共役体バルクにおける、低遊離ＰＲＰ（７％未満）。
９．リン酸アルミニウム補助剤上に個別に吸着され、それにより、潜在能及び免疫原性を向上させる、ジフテリアトキソイド抗原（Ｄ）、破傷風トキソイド（Ｔ）抗原、及びＢ型肝炎（ＨｅＰＢ）表面抗原の向上した吸着プロファイル。
１０．総ミョウバン含有量（Ａｌ＝＋３）が最小であり、それにより、減少された反応源性を確実にする。
１１．防腐剤として２−フェノキシエタノール（２−ＰＥ）の最適濃度。
【実施例】
【０１７３】
本発明の好ましい実施形態を実証するために、以下の実施例が含まれる。代表する技術に従った実施例に開示されている組成物及び技術は、本発明者により発見され、本発明の実施に際して良好に機能し、また従って、その実施に関して好ましい様式を構成すると考えることができると、当業者により理解されなければならない。しかし、当業者は、本開示の見地から、開示されている特定の実施形態において多くの変更を行うことができ、かつ依然として、本発明の精神及び範囲から逸脱することなしに、同様の又は類似した結果を得ることができる、と理解しなければならない。
【０１７４】
実施例１：
【０１７５】
【表１】
2020527571.tif 000002
【０１７６】
【表２】
2020527571.tif 000003
【０１７７】
実施例２：
本実施例は、種々の混合ワクチン組成物における概要を所与する。
【０１７８】
【表３】
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【０１７９】
【表４】
2020527571.tif 000005
【０１８０】
【表５】
2020527571.tif 000006
【０１８１】
【表６】
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【０１８２】
【表７】
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【０１８３】
【表８】
2020527571.tif 000009
【０１８４】
【表９】
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【０１８５】
ワクチンは、製造プロセス中に使用される、微量のグルタルアルデヒド、ホルムアルデヒド、ネオマイシン、ストレプトマイシン、及びポリミキシンＢを含有し得る。
【０１８６】
実施例３：
インフルエンザｂ型菌共役体バルクの製造プロセス
インフルエンザｂ型菌共役体バルクの製造プロセスの工程の広範な視点が、要約的に以下に説明する、プロセスの５３の工程の手助けと共に、提示される。
【０１８７】
工程１：種菌ステージＩフラスコ振盪（Ｓ１）：
作業用シードロットバイアル瓶を使用して、０．２２μｍの濾過済み種培地を含有するフラスコ振盪段階の接種材料を、播種する。２５ｍｌの作業容積を伴う使い捨てのＰＥＴＧ１２５ｍｌのフラスコを、使用する。本段階は、制御された撹拌（２００±５０ｒｐｍ）及び温度（３６±２℃）にて、培養振盪器中にて実施される。適切な細菌の成長が達成された後（ＯＤ５９０≧１．０）、培養物を、工程２に記載されている次の接種材料段階（Ｓ２段階）へと移動させる。処理中制御としてグラム染色を実施して、培養物の純度を確実にする（グラム陰性短桿菌）。
【０１８８】
工程２：種菌ステージＩＩフラスコ振盪（Ｓ２）：
Ｓ２接種材料段階は、８００ｍＬの作業容積を伴うＬフェルンバッハフラスコ（Ｓ２Ａ及びＳ２Ｂ）からなる。ＯＤ５９０が許容基準内になるまで、ＯＤ５９０測定に関してＳ２フラスコを使用し、またＳ３段階の接種材料に関してＳ２Ｂフラスコを使用する。両方のフラスコは、フィルタ滅菌済み培地と共にバッチ付けされるが、これは、Ｓ１接種材料段階と同一である。Ｓ１段階のフラスコは、段階ＩＩの両方の振盪フラスコを播種するために使用される。本段階は、制御された撹拌（２００±５０ｒｐｍ）及び温度（３６±２℃）にて、培養振盪器中にて実施される。適切な細菌の成長が達成された後（ＯＤ５９０≧１．０）、培養物を、工程３に記載されている次の接種材料段階（Ｓ３段階）へと移動させる。処理中制御としてグラム染色を実施して、培養物の純度を確実にする（グラム陰性短桿菌）。
【０１８９】
工程３：種菌ステージＩＩＩ発酵槽：
Ｓ３接種材料段階は、３５Ｌの作業容積を伴う１２０Ｌの発酵槽からなる。発酵槽は、前回の接種材料段階と同一である培地と共に、バッチ付けされる。Ｓ２段階のフラスコは、接種材料発酵槽を播種するために使用される。温度（３６±２℃）、ＤＯ（設定値１０％）、攪拌（３００〜６００ｒｐｍ）、エアレーション（１〜５ＬＰＭ）、及び背圧（０．２バール）にて、接種材料発酵槽中で実施される。適切な細菌の成長が達成された後（ＯＤ５９０≧１．０）、培養物を、工程４に記載されている次の生成段階（Ｓ４段階）へと移動させる。処理中制御としてグラム染色を実施して、培養物の純度を確実にする（グラム陰性短桿菌）。
【０１９０】
工程４：１２００Ｌ規模の生成物発酵：
１２００Ｌの接種材料発酵槽は、８００Ｌの作業容積を有する。これは、基底の培地と共にバッチ付けされて、その場で蒸気滅菌される。その後、０．２２μｍのフィルタを通過した後に、種々の培地追加物が追加される。工程３から得られたＳ３段階の培養物と共に、発酵槽を播種する。制御された溶存酸素（設定値−２０％）、温度（３６±２℃）、ｐＨ（７．１〜７．４）、撹拌（４０〜４００ｒｐｍ）、エアレーショ（５０〜３００ＬＰＭ）、及び背圧（０．２バール）下で、発酵が実施される。発酵過程の間に、２つの別個の養分スパイクを追加する。ＯＤ５９０（ＯＤ５９０≧３．５）を測定することにより成長を監視し、また固定相に達した後に発酵が完了したと見なす。成長中及び固定相では、多糖類生成物が分泌され、かつ培養液体培地中に蓄積される。処理中制御としてグラム染色を実施して、培養物の純度を確実にする（グラム陰性短桿菌）。
【０１９１】
工程５：ホルマリン処理：
化学薬剤（ホルマリン）を使用することにより、本工程においてバイオバーデン還元を達成する。０．１％のホルマリンを添加して、ＮＬＴのために、発酵した液体培地を２時間、３７℃にて培養する。ホルマリン処理後、容器を速やかに＜１５℃まで冷却する。ホルマリンの添加を確認して、バイオバーデン還元を達成する。これは、培養期間後に、培養プレートにより確認する。工程６に記載するように、収集のためにバイオバーデン還元液体培地を準備する。
【０１９２】
工程６：持続的遠心分離機による収集：
主要収取工程として、持続的遠心分離機を用いる。本工程は、粗製液体培地を含有する多糖体を不活性バイオマスから分離するために実施される。ＯＤ５９０還元により測定した際に、＞９０％のバイオマス除去の目的で、持続的遠心分離機が使用される。遠心分離機はおよそ１５０００ｇにて、また２００〜５００Ｌ／ｈの液体流量にて操作される。遠心分離された上澄みは、工程７にて記載されているように、更に処理される。
【０１９３】
工程７：５０ＬＰ深層濾過：
遠心分離された上澄みを５０ＬＰ深層フィルタに通し、細胞残骸などの粗大な物質を除去する。本工程は、生成物が濾液を通過することを可能にし、また工程８にて記載されているように、追加の深層フィルタとインラインである。
【０１９４】
工程８：９０ＬＰ深層濾過：
５０ＬＰの深層フィルタからの濾液は、更に９０ＬＰの深層フィルタ（０．２２μｍの公称評点）を更に通過して、前回の深層フィルタにより保持されなかったあらゆる不溶性物質を、更に除去する。本工程は、濾液が本質的に細胞残骸を有せず、また０．２２μｍのフィルタを確実に通過することを保証する。後続の濾過工程は、工程９に記載されている。
【０１９５】
工程９及び１０：０．２２μｍ濾過：
９０ＬＰの深層フィルタからの濾液は、０．２２μｍのフィルタを更に通過し、また濾液は保持タンク内に収集される。
【０１９６】
工程１１及び１２：１００ｋＤ濃縮及び膜分離精製法：
本工程は、培地成分及び低分子量の不純物を除去するために実施される。更に、作業容積を減少させるために、濃縮が実施される。Ｈｉｂ多糖類（ＰＲＰ）の分子量が≧５００ｋＤである際に、１００ｋＤの分子量のカットオフが選択される。液体培地をおよそ１０倍に濃縮し、その後に、ＮＬＴ５容積について、０．０１Ｍ  ＰＢＳ緩衝剤（ｐＨ７．２）を使用して透析濾過する。濃縮水における得られた生成物は、「粗製ＰＲＰ」と称され、また工程１３に記載されているように、更に処理される。濃縮された液体培地は、０．２２μｍのフィルタを介して転送ポートを通ってＤＳＰ領域へと移動し、細菌がＤＳＰ領域へと持ち越されないことを確実にする。
【０１９７】
工程１３：ＣＴＡＢ析出：
ＣＴＡＢ（臭化セチルトリメチルアンモニウム）はカチオン性洗剤であり、これは、多糖類の析出のために使用される。ＣＴＡＢは、親水性領域並びに疎水性部分、及び沈殿タンパク質、核酸、及び多糖類からなる。工程１２から得られた粗製ＰＲＰは、１％のＣＴＡＢ濃度にて析出され、かつ＞２時間の間培養される。ＣＴＡＢペレット収集は、工程１４に記載されている。
【０１９８】
工程１４、１５、及び１６：ＣＴＡＢペレット濃縮、収集、及び貯蔵：
ＳＥＺ−３では、持続的遠心分離機を使用して、１５０００ｒｐｍにて、ＦＦ、ＣＴＡＢペレットが遠心分離される。ＣＴＡＢペレットを収集し、重量を量り、アリコートし、かつ更なる処理のために≦２０℃にて貯蔵する。これは、第１の処理間保持工程である。
【０１９９】
工程１７及び１８：ＣＴＡＢペーストの解凍及び溶解：
冷凍ＣＴＡＢペーストを、室温へと解凍する。解凍したペレットを、５．８５％のＮａＣｌ溶液中に溶解させる。撹拌タンク中で溶解を実施して、水相中で多糖類生成物を可溶化する。タンクは若干の未溶解物質を含有し、これは、沈殿したタンパク質及び核酸故である。工程１９に記載されているように、懸濁液を更に処理する。
【０２００】
工程１９：遠心分離：
工程１８にて得られた物質を、２〜８℃にて、５０００〜６５００ｒｐｍで２０〜３０分間遠心分離し、未溶解物質を除去する。遠心分離された上澄みを収集し、工程２０に記載されているように、更に処理する。
【０２０１】
工程２０：７２％エタノール析出：
７２％のエタノールを使用して、ＰＲＰを析出する。９６％のエタノールを使用して、工程１９で得られた上澄みに対して最終濃度が７２％のエタノールを生成する。本析出は、２〜８℃にて一晩実施される。工程２１に記載されているように、得られた沈殿物を収集する。
【０２０２】
工程２１及び２２：遠心分離及びペレット溶解：
２〜８℃にて、５０００〜６５００ｒｐｍで２０〜３０分間、遠心分離により、７２％のエタノール沈殿物を収集する。目視による透明度が得られるまで、得られたペレットをＷ．Ｆ．Ｉ．中で溶解させる。可溶化されたペレットの後続の処理は、工程２３に記載されている。
【０２０３】
工程２３：ＤＯＣ及び３２％エタノール析出：
工程２２から得られた物質へと、２２．６％の酢酸ナトリウム及び１％のデオキシコール酸ナトリウムを添加する。９６％のエタノールを使用して、３２％のエタノールの最終濃度を生成する。ＤＯＣと３２％のアルコールの両方が、タンパク質不純物の析出を推し進める一方で、多糖類を液相にすることを可能にする。本析出は、２〜８℃にて一晩（ＮＬＴ８時間）実施される。
【０２０４】
工程２４：遠心分離：
工程２３にて得られた物質を、２〜８℃にて、５０００〜６５００ｒｐｍで２０〜３０分間遠心分離し、沈殿物を除去する。遠心分離された上澄みを収集し、工程２５に記載されているように、更に処理する。
【０２０５】
工程２５：深層濾過及び炭素濾過：
工程２４にてえられた上澄み溶液は、可溶性のＰＲＰを含有し、深層濾過を施され、続いて炭素濾過を施されて核酸及び色素を除去する。核酸の除去は、２６０ｎｍ（Ａ２６０）にて断続的な吸収度を測定することにより、監視される。目標のＡ２６０に達した後、０．２２μｍのフィルタに通して溶液を濾過し、また工程２６に記載されているように、この濾過済み溶液を更に処理した。
【０２０６】
工程２６：６４％エタノール析出：
工程２５にて得られた濾過済み物質を、６４％のエタノールの最終濃度にて、９６％のエタノールで更に析出する。本析出は、２〜８℃にて一晩実施される。得られた沈殿を遠心分離により収集し、工程２７に記載されているように、更に処理する。
【０２０７】
工程２７：ペレット収集及び溶解：
上澄みをデカントして、ペレットを収集するために廃棄する。ペレットは、室温にてＷ．Ｆ．Ｉ．中に溶解される。
【０２０８】
工程２８：３００ｋＤ濃縮及び膜分離精製法：
３００ｋＤ  ＮＭＷＣＯ膜を使用して、溶解済みペレット溶液を遠心分離する。これは、Ｗ．Ｆ．Ｉを使用して、（ＮＬＴ）８Ｘ以上、更に透析濾過される。工程２９に記載されているように、得られた濃縮水を更に処理する。
【０２０９】
工程２９及び３０：０．２２μｍ濾過及び精製済みＰＲＰの貯蔵：
バイオバーデンを最小化する浄化工程として、３００ｋＤ  ＵＦ濃縮水を０．２２μｍのフィルタに通過させる。得られた精製済みＰＲＰをアリコートして、工程３１に記載されているように、更なる使用まで≦２０℃にて貯蔵する。精製済みＰＲＰのサンプルを、Ｑ．Ｃ分析のために発送する。
【０２１０】
工程３１：解凍及び貯蔵：
共役バッチサイズに基づいて、工程３０から得られた天然多糖類の適切な量を解凍する。プールされた物質をＰＲＰ含有量に関して検定するが、これは、工程３２に記載されているように、更なる処理のために必要である。
【０２１１】
工程３２：１００ｋＤ濃縮：
プールされた精製済み多糖類は、更なる処理のために最小濃度（８〜１２ｍｇ／ｍＬ）となることが必要である。プールされた多糖類の濃度が目標を下回る場合、１００ｋＤ  ＵＦ  ＮＭＷＣＯ膜を使用することにより、プールされた多糖類溶液を濃縮する。濃縮後にサンプルを絞り、後続の工程（工程３３）のために最小濃度を達成することを確実にする。
【０２１２】
工程３３：アルカリ性脱重合：
工程３２から得られた濃縮済みの多糖類（７４ｇ／１１０ｇ相当）を、炭酸水素塩緩衝液を使用して、弱アルカリ性状況下で解重合する。目標の多糖類サイズを達成した後、工程３４に記載されているように、解重合済みの多糖類を活性化させる。
【０２１３】
工程３４：多糖類の活性化：
工程３３にて得られた解重合済みの多糖類を、臭化シアンを使用して活性化させる。窒素環境下で、活性化を行う。臭化シアンは高毒性化学薬品であり、また本化学薬品を取り扱う間には適切な注意が取られる。
【０２１４】
工程３５：リンカー吸着：
新鮮な調製済みアジピン酸ジヒドラジド（ＡＤＨ）溶液を、６〜１０分間のうちに、工程３４から得られた反応混合物へと添加する。ＮＬＴに関して、１６時間、２〜１０℃にて、反応を実施する。ＡＤＨリンカーの役割は、共役反応に必要とされる、多糖類におけるアミン基を提供することである。
【０２１５】
工程３６：濃縮及び膜分離精製法：
工程３５から得られた反応混合物を濃縮し、かつ１０ｋＤ  ＮＭＷＣＯ  ＵＦ膜を使用して、リン酸緩衝食塩水（ＰＢＳ）を伴う容積により、容積を透析濾過し、遊離ＡＤＨを除去する。ＡＤＨの除去をＨＰＬＣにて監視し、かつ遊離ＡＤＨレベルが５％未満に達するまで透析濾過を継続する。得られた濃縮水を、ＮＬＴ  ５Ｘ  ＭＥＳ−ＮａＣｌ緩衝剤を用いて更に透析濾過する。これは、ＮＬＴ２０ｍｇ／ｍＬの濃度を達成するために、更に濃縮される。濃縮済みの処理済みＰＲＰを、工程３７に記載されているように、更なる使用まで、２〜８℃にて保持する。
【０２１６】
工程３７及び３８：０．２２μｍ濾過及び処理済みＰＲＰの貯蔵：
工程３６からの濃縮水を０．２２μｍのフィルタに通すが、これは浄化工程として役立つ。これはまた、処理の間にバイオバーデンレベルを制御することを確実にし、グレードＣ領域において実施される。濾過済みの活性化多糖類を収集し、サンプル抽出し、アリコートして、更なる処理まで２〜８℃にて貯蔵する。ＰＲＰ分子サイズ（ｋＤ）、ＰＲＰ含有量、及びＰＲＰ活性化の程度を含む分析のために、処理済みの多糖類プールからサンプルを絞り出す。処理済みＰＲＰ更なる処理は、工程４０に記載されている。
【０２１７】
工程３９：ＴＴ１０ｋＤ濃縮及び膜分離精製法：
共役反応は、２つの成分、即ち、処理済みの多糖類及び担体タンパク質（ＴＴ）を必要とする。担体タンパク質を濃縮し、また１０ｋＤ  ＵＦ  ＮＭＷＣＯ膜を使用して、ＭＥＳ−ＮａＣｌ緩衝剤により、透析濾過する。本透析濾過済みの担体タンパク質を、次に、同一の膜を使用して、ＮＬＴ２０ｍｇ／ｍＬへと更に濃縮する。
【０２１８】
工程４０：共役体：
共役反応は、２つの成分、即ち、処理済みの多糖類及び担体タンパク質（ＴＴ）を必要とする。活性化多糖類成分は、工程３８から得られる。担体タンパク質は、工程３９から得られる。ＰＲＰの比率にて、適切な量にて２種の成分を混合する。撹拌下、ＥＤＣの存在下にてＴＴ＝１：１（ｗ／ｗ）である。ＨＰＬＣにおいて共役反応を監視し、また≧８５％の（共役体への遊離タンパク質変換に基づいた）タンパク質変換まで、監視を継続する。
【０２１９】
工程４１：急冷：
共役反応が、変換に関するその許容基準まで処理された後に（工程４０）、冷却により反応を停止させる。リン酸ＥＤＴＡ緩衝剤を使用して、共役反応物を冷却する。工程４２に記載されているように、その後に共役反応物を処理する。
【０２２０】
工程４２：３０ＳＰ及び０．２２ミクロン濾過：
３０ＳＰフィルタを介して、工程４１から得られた共役体を濾過し、続いて０．２２μｍの濾過を行う。これは、あらゆる大きな凝集塊の除去を確実にする。工程４３に記載されているように、濾過済みの共役体を処理する。
【０２２１】
工程４３：３００ｋＤ限外濾過及び膜分離精製法：
３００ｋＤ  ＵＦ  ＮＭＷＣＯ膜を使用して、０．０５％の食塩水を用いて、工程４２から得られた共役反応混合物を透析濾過する。透析濾過を実施して、共役試薬及び未反応ＴＴを除去する。工程４４に記載されているように、得られた濃縮水を更に処理する。
【０２２２】
工程４４及び４５：０．２２μｍ濾過及び粗製共役体の貯蔵：
工程４３からの濃縮水を０．２２μｍのフィルタに通すが、これは浄化工程として役立つ。これはまた、処理の間にバイオバーデンレベルを制御することを確実にし、グレードＣ領域において実施される。濾過済みの粗製共役体を収集し、サンプル抽出して、更なる処理まで２〜８℃にて貯蔵する。粗製共役体の更なる処理は、工程４６に記載されている。
【０２２３】
工程４６：粗製共役体希釈法：
必要な場合に、Ｗ．Ｆ．Ｉを用いて、４±１ｍｇ／ｍＬの目標濃度まで工程４５からの粗製共役体を希釈し、また工程４７に記載されている析出工程により、更に処理する。
【０２２４】
工程４７：硫酸アンモニウム析出法：
希釈済みの共役反応混合物を更に処理して、硫酸アンモニウム（５０重量体積％の原液）を使用することにより、遊離ＰＲＰを除去する。撹拌下で、１５℃未満にて、析出工程を実施する。析出工程は沈澱物における共役を推し進め、また上澄みにおける遊離ＰＲＰを残す。硫酸アンモニウムの添加後、ＮＬＴ１２時間の間、撹拌することなく、１５℃未満にて、得られた懸濁液を貯蔵する。
【０２２５】
工程４８：ペレット収集及び溶解：
工程４７から得られた懸濁液を、〜７０００ｇにて、２〜８℃で、４０±１０分間、遠心分離する。デカンテーションにより上澄みを廃棄して、得られたペレットをトリス食塩水中に溶解させる。
【０２２６】
工程４９：３００ｋＤ膜分離精製法：
３０ＳＰ深層フィルタを介して工程４８から得られた溶液を濾過し、また３００ｋＤ  ＮＭＷＣＯ膜を使用して、２０ｍＭのトリス食塩水を用いて、透析濾過する。
【０２２７】
工程５０：ＧＰＣクロマトグラフィー精製：
サイズ排除クロマトグラフィーのための、Ｔｏｙｏｐｅａｒｌ  ＨＷ−６５Ｆヒドロキシル化メタクリルポリマービーズゲルを含有するおよそ７０Ｌ  ＧＰＣカラムに、工程４９から得られた溶液を装填する。処理済みの共役体（硫酸アンモニウム後）におけるＧＰＣクロマトグラフィーの使用により、得られた物質中の遊離ＰＲＰレベルが減少する。２０ｍＭのトリス０．９％ＮａＣｌによりカラムを溶出して、Ａ２８０に基づいて留分を収集する。遊離ＰＲＰに対する適切な基準に基づく適切な留分、比率、及び分離サイズがプールされ、また工程５１に記載されているように、プールを更に処理する。
【０２２８】
工程５１：３００ｋＤ膜分離精製法：
３００ｋＤ  ＵＦ  ＮＭＷＣＯ膜を使用して、２０ｍＭのトリスを用いて、工程５０から得られたプール済み共役体溶出液を透析濾過する。本濃縮水の容積は、その内部のＰＲＰ含有量がおよそ１ｍｇ／ｍＬとなるように、目標が定められる。
【０２２９】
工程５２及び５３：０．２２μｍ濾過：
グレードＡの環境下で、０．２２μｍのフィルタを介して、工程５１から得られたバルク共役体を濾過し、無菌状態を確実にする。０．２２μｍのフィルタを完全に試験する。濾過されたバルク共役体からのサンプルを、完全な分析のためにＱ．Ｃ．に発送する。濾過済みの共役体を「無菌Ｈｉｂバルク共役体」としてラベル付けし、かつ２〜８℃にて貯蔵する。バルク共役体は２〜８℃にて最大３か月まで貯蔵され得、またその後に使用されない場合、最大１年の総持続時間、−７０℃にて貯蔵され得る。
【０２３０】
得られたＨｉｂ  ＰＲＰ−ＴＴ共役体抗原の品質特性は、以下の通りである。
ＰＲＰ含有量（μｇ／０．５ｍｌ）：８．１
比率（ＰＲＰ：ＴＴ）            ：０．５
遊離ＰＲＰ（％）                ：４．８％
ＰＭＷ（ｋＤ）                  ：９８３
Ａｖｇ  ＭＷ（ｋＤ）            ：７５２
【０２３１】
実施例４：
全細胞百日咳（ｗＰ）抗原の不活性化法：
不活性化法の最適化は、ホルムアルデヒドの存在下において５６℃で１０分間、ホルムアルデヒドの存在下において５６℃で１５分間、ヒミンの存在下において５６℃で１０分間、ヒミンの存在下において５６℃で１５分間の不活性化、及び５６℃にて３０分間の加熱のみを含む、種々の実験を実施した後になされる。潜在能における著しい差は、これらの方法では観察されていない。これらの方法の範囲外では、前述のその他の方法と比較して、本方法を使用して生成された百日咳細胞塊がより均質である故に、ホルムアルデヒドの存在下において５６℃で１０分間が選択される。
【０２３２】
以下の工程を含む、不活性ｗＰ抗原の製造プロセス：
ａ）．百日咳菌株１３４のホルムアルデヒドの存在下で、１０〜１５分間、５６℃にて不活性化させること
ｂ）．百日咳菌株５０９のホルムアルデヒドの存在下で、１０〜１５分間、５６℃にて不活性化させること
ｃ）．百日咳菌株２５５２５及び６２２９のホルムアルデヒドの存在下で、１０〜１５分間、５６℃にて不活性化させること
ｃ）．百日咳菌株６２２９のホルムアルデヒドの存在下で、１０〜１５分間、５６℃にて不活性化させること
ｄ）．不活性百日咳菌株１３４、５０９、２５５２５、及び６２２９を、１：１：０．２５：０．２５の比率にて、その後に混合すること
ｅ）．所望により、アルミニウム系補助剤上に吸着させること
【０２３３】
本プロセスはチメロサールを欠き、かつ不活性全細胞百日咳抗原が塊状ではなく均質な状態に留まり、それにより、減少された反応源性をもたらし、かつより長い持続時間に対するより良好な洗剤能を所与する。
【０２３４】
実施例５：
不活性ポリオウイルス（ＩＰＶ）の製造プロセス：
ポリオウイルスは、以下の方法により成長し得る。
●ＣＣＬ８１−ＶＥＲＯ（サルの腎臓）細胞株を、ポリオウイルス、即ち、サービン株及びサーク株の成長のための宿主細胞として使用する。
●ポリオウイルスの所望の株による宿主細胞の感染及び７２時間の培養後、ウイルスと細胞残骸を含有する培地を貯蔵して、単一の容器に収集した。
●１００ＫＤａのカセットによる接線方向の流量濾過を濾液に施し、リン酸緩衝剤を使用して透析濾過し、かつ陰イオン交換クロマトグラフィーを使用して精製した。
●患者に投与するのに先立って、適切な不活性化法を使用して、ウイルスを不活性化させなければならない。
【０２３５】
以下の工程を含むホルマリン不活性化：
ａ）リン酸緩衝剤から、７〜７．５の間のｐＨを有する（３０〜５０ｍＭ）の範囲のトリス緩衝剤へと、精製したポリオウイルスプールに緩衝剤交換を施した。
ｂ）上記の混合物Ｍ−１９９へと、グリシン（５ｇｍ／ｌ）を含有する媒体を添加した。
ｃ）０．０２５％のホルムアルデヒドを添加して、その後に混合した。
ｄ）電磁攪拌器におけるウイルスバルクの持続的な撹拌により、混合物を、その後に３７℃にて５〜１３日間培養した。
ｅ）７日目に、培養後の混合物に中間体ＴＦＦ系（１００ＫＤａ、０．１ｍ２）を施し、また不活性化後に最終の濾過を施した。
ｆ）その後、濾過したバルクを２〜８℃にて貯蔵した。
ｇ）Ｄ−Ａｇユニット測定に関して、Ｄ−ＡｇＥＬＩＳＡを実施する。
【０２３６】
実施例６：
本実施例は、Ｄ、Ｔ、ｗＰ、ＨＢｓＡｇ、Ｈｉｂ、ＰＲＰ−ＴＴ共役体、及びＩＰＶを含む混合ワクチン組成物の、製造プロセスの概要を所与する。
【０２３７】
１．成分Ｉの配合手順：
ａ）．コンテナ／容器内での、リン酸アルミニウムの転移
ｂ）．ジフテリアトキソイドの添加
ｃ）．酢酸／水酸化ナトリウムによる、４．５〜５．５へのｐＨ調整
ｄ）．安定化のための待機
ｅ）．水酸化ナトリウム／炭酸ナトリウムによる、５．５〜６．５へのｐＨ調整
ｆ）．安定化のための待機
２．成分ＩＩの配合手順：
ａ）．コンテナ／容器内での、リン酸アルミニウムの転移
ｂ）．破傷風トキソイドの添加
ｃ）．酢酸／水酸化ナトリウムによる、４．５〜５．５へのｐＨ調整
ｄ）．安定化のための待機
ｅ）．水酸化ナトリウム／炭酸ナトリウムによる、５．５〜６．５へのｐＨ調整
ｆ）．安定化のための待機
３．成分ＩＩＩの配合手順：
ａ）．コンテナ／容器内での、リン酸アルミニウムの転移
ｂ）．Ｂ型肝炎表面抗原の添加
ｃ）．酢酸／水酸化ナトリウムによる、４．５〜５．５へのｐＨ調整
ｄ）．安定化のための待機
ｅ）．水酸化ナトリウム／炭酸ナトリウムによる、５．５〜６．５へのｐＨ調整
ｆ）．安定化のための待機
４．成分Ｉと成分ＩＩとの混合、及びＲＴによる撹拌。
５．不活性ｗＰ抗原を、上記混合物に添加し、続いてＲＴにて撹拌した。
６．ＲＴにて、成分ＩＩＩを、工程５で得られた混合物に添加した。
７．Ｈｉｂ  ＰＲＰ共役体を、６〜１６℃にて、工程６で得られた混合物に添加した。
８．ＩＰＶ抗原を、６〜１６℃にて、工程６で得られた混合物に添加した。
９．２−フェノキシエタノールを、６〜１６℃にて、工程７で得られた混合物に添加した。
１０．ｐＨを確認し、必要な場合には、水酸化ナトリウム／炭酸ナトリウムを用いて、ｐＨを６．０〜７．０に調節する。
１１．ＮａＣｌを、工程１０で得られた混合物に添加し、続いて、３時間撹拌した。
【０２３８】
実施例７：
六価ワクチン毒性の研究：
スケジュール「Ｙ」及びワクチンの非臨床評価に基づくＷＨＯのガイドラインを遵守した研究計画に従って、また優良実験室規範のＯＥＣＤ基準に従って、ＤＴｗＰ−ＨｅｐＢ−ＩＰＶ−Ｈｉｂワクチンを用いて、以下の毒性研究を実施した。
【０２３９】
１．皮下経路による、ＳＤラット（Ｓｐｒａｇｕｅ  Ｄａｗｌｅｙ  Ｒａｔｓ）における単一投与毒性試験
処置の開始時点で年齢５〜６週間の、合計２０匹のオス及び２０匹のメスのラットを、無作為に４つのグループに分けた。各グループは、５匹のオス及び５匹のメスのラットからなる。偽薬、補助剤、ＤＴｗＰ−ＨｅｐＢ−ＩＰＶ−Ｈｉｂの単一ワクチンの使用を準備して、副皮膚経路を介して多数回使用ワクチンを投与した。投与後１４日間、ラットを観察した。
【０２４０】
２．筋肉内経路による、ＳＤラット（Ｓｐｒａｇｕｅ  Ｄａｗｌｅｙ  Ｒａｔｓ）における頻回投与毒性試験
合計１００匹のオス及び１００匹のメスのラットを、主要グループと回復グループへと無作為に割り当てた。偽薬制御剤、補助剤制御剤、ＤＴｗＰ−ＨｅｐＢ−ＩＰＶ−Ｈｉｂの単一ワクチンの使用を準備して、１日目、２９日目、５７日目、及び８５日目に、深筋肉注射により多数回使用ワクチンをゆっくりと注射した。回復グループにおける動物を処置せず、２８日間観察した。
【０２４１】
３．皮下経路による、ニュージーランド白ウサギにおける単一投与毒性試験
合計１６匹のオス及び１６匹のメスのウサギを、４つのグループへと無作為に分けた。偽薬、補助剤、ＤＴｗＰ−ＨｅｐＢ−ＩＰＶ−Ｈｉｂの単一ワクチンの使用を準備して、副皮膚経路を介して、それぞれのグループの各動物に多数回使用ワクチンを投与した。ウサギに単一皮下投与量を投与して、１５日間観察した。
【０２４２】
４．筋肉内経路による、ニュージーランド白ウサギにおける頻回投与毒性試験
合計４０匹のオス及び４０匹のメスのウサギを、主要グループと回復グループへと無作為に割り当てた。偽薬制御剤、補助剤制御剤の使用を準備して、異なる投与量の単一及び多数回使用ＤＴｗＰ−ＨｅｐＢ−ＩＰＶ−Ｈｉｂワクチンを、１日目、２９日目、５７日目、及び８５日目に、深筋肉注射によりゆっくりと注射した。回復グループにおける動物にはいかなる処置もせず、２８日間観察した。結果に基づいて、用いられる試験条件下にて、単一の人投与量（０．５ｍＬ）が副皮膚経路又は筋肉内経路により投与された場合に、単一及び多数回使用の六価ワクチン［ジフテリア、破傷風、百日咳（全細胞）、Ｂ型肝炎、ポリオ（不活性）、及びインフルエンザｂ型菌共役体ワクチン（吸着）］が、ＳＤラット（Ｓｐｒａｇｕｅ−Ｄａｗｌｅｙ  ｒａｔｓ）及びニュージーランドシロウサギにおいて、いかなる全身性副作用をも発生させなかったことが、結論付けられた。ワクチン処置グループにて観察された局部注射部位の炎症反応及び免疫応答の発見が予測され、また一般に、アルミニウム補助ワクチン投与による毒性研究において観察される。従って、最も多い投与量０．５ｍＬ／動物（１ヒト投与量）における試験項目「ＤＴｗＰ−ＨｅｐＢ−ＩＰＶ−Ｈｉｂワクチン」が、用いられる試験条件及び投与量下で「非観察副作用レベル（ＮＯＡＥＬ）」として考慮される。
【０２４３】
実施例８：
【０２４４】
【表１０】
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【国際調査報告】
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