(57)【要約】本発明は、ＪＡＫ阻害剤として有用である、式１の化合物または薬学的に許容されるその塩を提供する。2020518581.tif 000038本発明は、化合物の結晶形態、その化合物を含む医薬組成物、その化合物を使用してＪＡＫ阻害剤に適している疾患を処置する方法、ならびに化合物を調製するために有用なプロセスおよび中間体も提供する。本発明は、化合物の結晶形態、形態１および形態２も提供する。本発明は、化合物１またはその薬学的に許容され得る塩、および薬学的に許容され得るキャリアを含む薬学的組成物も提供する。
2020518581.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
式：
【化１９】
2020518581.tif 000030
の化合物または薬学的に許容されるその塩。
【請求項２】
式：
【化２０】
2020518581.tif 000031
の化合物。
【請求項３】
式：
【化２１】
2020518581.tif 000032
の化合物の結晶形態であって、１０．６１±０．２０、１１．８４±０．２０、１４．９４±０．２０、１８．２６±０．２０および１９．０６±０．２０の２θ値における回折ピークを含む粉末Ｘ線回折パターンを特徴とする、結晶形態。
【請求項４】
前記粉末Ｘ線回折パターンが、１３．３２±０．２０、１７．６９±０．２０および２１．１０±０．２０の２θ値における追加の回折ピークを有することをさらに特徴とする、請求項３に記載の結晶形態。
【請求項５】
前記粉末Ｘ線回折パターンが、１０．８５±０．２０、１６．１４±０．２０、１６．３５±０．２０、１８．４３±０．２０、１９．２０±０．２０、１９．４９±０．２０、２０．７２±０．２０、２１．９４±０．２０、２２．６４±０．２０、２３．６４±０．２０、２５．１９±０．２０および２８．０８±０．２０から選択される２θ値における２つまたはそれよりも多い追加の回折ピークを有することをさらに特徴とする、請求項４に記載の結晶形態。
【請求項６】
ピーク位置が図１に示されているパターンのピーク位置と実質的に一致する粉末Ｘ線回折パターンを特徴とする、請求項３に記載の結晶形態。
【請求項７】
２６８℃から２７７℃の間の温度で吸熱熱流の最大値を示す、１分当たり１０℃の加熱速度で記録した示差走査熱量測定トレースを特徴とする、請求項３に記載の結晶形態。
【請求項８】
２７２．６±２℃にピークを持つ吸熱熱流の最大値を示す、１分当たり１０℃の加熱速度で記録した示差走査熱量測定トレースを特徴とする、請求項３に記載の結晶形態。
【請求項９】
図２に示されているものと実質的に一致する示差走査熱量測定トレースを特徴とする、請求項３に記載の結晶形態。
【請求項１０】
式：
【化２２】
2020518581.tif 000033
の化合物の結晶形態であって、８．１６±０．２０、８．９７±０．２０、１５．２９±０．２０、１６．７０±０．２０、１８．００±０．２０および２０．１８±０．２０の２θ値における回折ピークを含む粉末Ｘ線回折パターンを特徴とする、結晶形態。
【請求項１１】
前記粉末Ｘ線回折パターンが、７．６９±０．２０、１０．６６±０．２０、１１．４６±０．２０、１１．９１±０．２０、１５．８０±０．２０、１７．０２±０．２０、１８．８３±０．２０、２２．３９±０．２０、２２．９８±０．２０、２４．８９±０．２０および２６．５４±０．２０から選択される２θ値における２つまたはそれよりも多い追加の回折ピークを有することをさらに特徴とする、請求項１０に記載の結晶形態。
【請求項１２】
ピーク位置が図６に示されているパターンのピーク位置と実質的に一致する粉末Ｘ線回折パターンを特徴とする、請求項１０に記載の結晶形態。
【請求項１３】
２１５℃から２２９℃の間の温度で吸熱熱流の最大値を示す、１分当たり１０℃の加熱速度で記録された示差走査熱量測定トレースを特徴とする、請求項１０に記載の結晶形態。
【請求項１４】
２２１．７±３℃のピークを持つ吸熱熱流の最大値を示す、１分当たり１０℃の加熱速度で記録された示差走査熱量測定トレースを特徴とする、請求項１０に記載の結晶形態。
【請求項１５】
図７に示されているものと実質的に一致する示差走査熱量測定トレースを特徴とする、請求項１０に記載の結晶形態。
【請求項１６】
請求項１もしくは２に記載の化合物または請求項３から１５のいずれか一項に記載の結晶形態と、薬学的に許容される担体とを含む、医薬組成物。
【請求項１７】
目への塗布に好適である、請求項１６に記載の医薬組成物。
【請求項１８】
硝子体内注射に好適である、請求項１７に記載の医薬組成物。
【請求項１９】
懸濁剤である、請求項１８に記載の医薬組成物。
【請求項２０】
式１の化合物
【化２３】
2020518581.tif 000034
または薬学的に許容されるその塩を調製するための方法であって、
（ａ）式６の化合物：
【化２４】
2020518581.tif 000035
を、式７の化合物：
【化２５】
2020518581.tif 000036
［式中、ＲＡは、水素または２，５−ジオキソピロリジニルである］
と反応させるステップと、
（ｂ）必要に応じて薬学的に許容される塩を調製するステップと
を含み、
式１の化合物または薬学的に許容されるその塩を提供する、方法。
【請求項２１】
式６の化合物：
【化２６】
2020518581.tif 000037
またはその塩。
【請求項２２】
請求項３に記載の結晶形態を調製する方法であって、
（ａ）１−（２−（６−（２−エチル−５−フルオロ−４−ヒドロキシフェニル）−４−フルオロ−１Ｈ−インダゾール−３−イル）−１，４，６，７−テトラヒドロ−５Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］ピリジン−５−イル）−２−モルホリノエタン−１−オンの均質混合物を、極性非プロトン性溶媒中、または極性水混和性溶媒中、または極性非プロトン性溶媒および極性水混和性溶媒の混合物中において、４５から７５℃の間の温度で形成するステップと、
（ｂ）前記均質混合物を、水混和性溶媒および水の混合物に、６０から９０℃の間の温度で添加して、第２の混合物を得るステップと、
（ｃ）水を前記第２の混合物に、６０から９０℃の間の温度でゆっくりと添加して、スラリーを形成するステップと、
（ｄ）前記スラリーから前記結晶形態を単離するステップと
を含む、方法。
【請求項２３】
ステップ（ａ）の前記極性非プロトン性溶媒が、ＤＭＳＯ、ＤＭＦ、ＮＭＰ、ＤＭＡｃおよびニトロメタンからなる群から選択され、ステップ（ａ）の前記極性水混和性溶媒が、アセトニトリル、アセトン、メタノール、エタノールおよびＴＨＦからなる群から選択され、ステップ（ｂ）の前記水混和性溶媒が、アセトニトリル、アセトン、メタノール、エタノール、ｎ−プロパノール、イソプロパノール、ｎ−ブタノール、ＴＨＦ、ＤＭＳＯ、ＤＭＦ、ＮＭＰ、ＤＭＡｃおよびニトロメタンからなる群から選択される、請求項２２に記載の方法。
【請求項２４】
哺乳動物における眼疾患の処置において使用するための、請求項１もしくは２に記載の化合物または請求項３から１５のいずれか一項に記載の結晶形態。
【請求項２５】
前記眼疾患が、ブドウ膜炎、糖尿病性網膜症、糖尿病性黄斑浮腫、ドライアイ疾患、加齢黄斑変性、網膜静脈閉塞またはアトピー性角結膜炎である、請求項２４に記載の化合物または結晶形態。
【請求項２６】
前記眼疾患が、糖尿病性黄斑浮腫またはブドウ膜炎である、請求項２５に記載の化合物または結晶形態。
【請求項２７】
哺乳動物における眼疾患の処置のための医薬の製造における、請求項１もしくは２に記載の化合物または請求項３から１５のいずれか一項に記載の結晶形態の使用。
【請求項２８】
前記眼疾患が、ブドウ膜炎、糖尿病性網膜症、糖尿病性黄斑浮腫、ドライアイ疾患、加齢黄斑変性、網膜静脈閉塞またはアトピー性角結膜炎である、請求項２７に記載の使用。
【請求項２９】
哺乳動物における眼疾患を処置する方法であって、請求項１もしくは２に記載の化合物または請求項３から１５のいずれか一項に記載の結晶形態と、薬学的に許容される担体とを含む医薬組成物を、前記哺乳動物の目に投与するステップを含む、方法。
【請求項３０】
前記眼疾患が、ブドウ膜炎、糖尿病性網膜症、糖尿病性黄斑浮腫、ドライアイ疾患、加齢黄斑変性、網膜静脈閉塞またはアトピー性角結膜炎である、請求項２９に記載の方法。
【請求項３１】
前記眼疾患が、ブドウ膜炎または糖尿病性黄斑浮腫である、請求項３０に記載の方法。
【請求項３２】
哺乳動物における皮膚の炎症性疾患の処置において使用するための、請求項１もしくは２に記載の化合物または請求項３から１５のいずれか一項に記載の結晶形態。
【請求項３３】
前記皮膚の前記炎症性疾患が、アトピー性皮膚炎である、請求項３２に記載の化合物または結晶形態。
【請求項３４】
哺乳動物における皮膚の炎症性疾患の処置において使用するための医薬の製造における、請求項１もしくは２に記載の化合物または請求項３から１５のいずれか一項に記載の結晶形態の使用。
【請求項３５】
前記皮膚の前記炎症性疾患が、アトピー性皮膚炎である、請求項３４に記載の使用。
【請求項３６】
哺乳動物における皮膚の炎症性疾患を処置する方法であって、請求項１もしくは２に記載の化合物または請求項３から１５のいずれか一項に記載の結晶形態と、薬学的に許容される担体とを含む医薬組成物を、前記哺乳動物の前記皮膚に塗布するステップを含む、方法。
【請求項３７】
前記皮膚の前記炎症性疾患が、アトピー性皮膚炎である、請求項３６に記載の方法。
【請求項３８】
哺乳動物における呼吸器疾患の処置において使用するための、請求項１もしくは２に記載の化合物または請求項３から１５のいずれか一項に記載の結晶形態。
【請求項３９】
前記呼吸器疾患が、喘息、慢性閉塞性肺疾患、嚢胞性線維症、肺臓炎、特発性肺線維症、急性肺傷害、急性呼吸窮迫症候群、気管支炎、肺気腫、肺移植拒絶反応、原発性移植片機能不全、器質化肺炎、急性肺移植拒絶反応、リンパ球性細気管支炎、慢性肺同種移植片機能不全、拘束性慢性肺同種移植片機能不全、好中球性同種移植片機能不全または閉塞性細気管支炎である、請求項３８に記載の化合物または結晶形態。
【請求項４０】
前記呼吸器疾患が、喘息、慢性肺同種移植片機能不全または慢性閉塞性肺疾患である、請求項３９に記載の化合物または結晶形態。
【請求項４１】
哺乳動物における呼吸器疾患の処置のための医薬の製造における、請求項１もしくは２に記載の化合物または請求項３から１５のいずれか一項に記載の結晶形態の使用。
【請求項４２】
前記呼吸器疾患が、喘息、慢性閉塞性肺疾患、嚢胞性線維症、肺臓炎、特発性肺線維症、急性肺傷害、急性呼吸窮迫症候群、気管支炎、肺気腫、肺移植拒絶反応、原発性移植片機能不全、器質化肺炎、急性肺移植拒絶反応、リンパ球性細気管支炎、慢性肺同種移植片機能不全、拘束性慢性肺同種移植片機能不全、好中球性同種移植片機能不全または閉塞性細気管支炎である、請求項４１に記載の使用。
【請求項４３】
哺乳動物における呼吸器疾患を処置する方法であって、前記哺乳動物に、請求項１もしくは２に記載の化合物または請求項３から１５のいずれか一項に記載の結晶形態と、薬学的に許容される担体とを含む、医薬組成物を投与するステップを含む、方法。
【請求項４４】
前記呼吸器疾患が、喘息、慢性閉塞性肺疾患、嚢胞性線維症、肺臓炎、特発性肺線維症、急性肺傷害、急性呼吸窮迫症候群、気管支炎、肺気腫、肺移植拒絶反応、原発性移植片機能不全、器質化肺炎、急性肺移植拒絶反応、リンパ球性細気管支炎、慢性肺同種移植片機能不全、拘束性慢性肺同種移植片機能不全、好中球性同種移植片機能不全または閉塞性細気管支炎である、請求項４３に記載の方法。
【請求項４５】
前記呼吸器疾患が、喘息、慢性肺同種移植片機能不全または慢性閉塞性肺疾患である、請求項４４に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、複数の疾患、特に眼、皮膚および呼吸器疾患の処置に有用な、ＪＡＫキナーゼ阻害剤化合物を対象にする。本発明は、化合物の結晶形態、そのような化合物を含む医薬組成物、そのような化合物を使用してＪＡＫ阻害剤による処置に適している疾患を処置する方法、ならびに化合物を調製するために有用なプロセスおよび中間体も対象にする。
【背景技術】
【０００２】
サイトカインは、ケモカイン、インターフェロン、インターロイキン、リンフォカインおよび腫瘍壊死因子を含む細胞間シグナル伝達分子である。サイトカインは、通常の細胞増殖および免疫調節のために重大であるだけでなく、免疫媒介性疾患を推進し、悪性細胞の増殖にも寄与する。多くのサイトカインのレベル上昇は、多数の疾患または状態、特に炎症を特徴とする疾患の病理学に関係するとされてきた。疾患に関係する多くのサイトカインが、チロシンキナーゼのヤヌスファミリー（ＪＡＫ）に依存するシグナル伝達経路を介して作用し、これは、転写因子のシグナル伝達兼転写活性化因子（ＳＴＡＴ）ファミリーを介してシグナル伝達する。
【０００３】
ＪＡＫファミリーは、４つのメンバー、ＪＡＫ１、ＪＡＫ２、ＪＡＫ３およびチロシンキナーゼ２（ＴＹＫ２）を含む。サイトカインのＪＡＫ依存性サイトカイン受容体との結合は、ＪＡＫキナーゼ上のチロシン残基のリン酸化をもたらす受容体二量体化を誘発し、ＪＡＫ活性化を達成する。リン酸化ＪＡＫは、今度は、種々のＳＴＡＴタンパク質と結合してリン酸化し、これが、二量体化し、細胞核に内在化し、遺伝子転写を直接的に変調し、数ある効果の中でも、炎症性疾患に関連する下流効果につながる。ＪＡＫは通常、ホモ二量体またはヘテロ二量体として対になってサイトカイン受容体と会合する。特異的なサイトカインは、特異的なＪＡＫ対合に関連する。ＪＡＫファミリーの４つのメンバーのそれぞれは、炎症に関連するサイトカインのうちの少なくとも１つのシグナル伝達に関係する。
【０００４】
炎症は、ブドウ膜炎、糖尿病性網膜症、糖尿病性黄斑浮腫、ドライアイ疾患、加齢黄斑変性、網膜静脈閉塞およびアトピー性角結膜炎を含む多くの眼疾患において、顕著な役割を果たす。ブドウ膜炎は、複数の眼内炎症状態を網羅し、多くの場合、公知の感染トリガーなしに生じる自己免疫である。該状態は、米国において、約２００万人の患者に影響を及ぼしていると推定される。一部の患者において、ブドウ膜炎に関連する慢性炎症は、組織破壊につながり、米国において失明の５番目の主な原因である。ＪＡＫ−ＳＴＡＴ経路を介してシグナル伝達する、ブドウ膜炎患者の目において上昇したサイトカインは、ＩＬ−２、ＩＬ−４、ＩＬ−５、ＩＬ−６、ＩＬ−１０、ＩＬ−２３およびＩＦＮ−γを含む（ＨｏｒａｉおよびＣａｓｐｉ、Ｊ  Ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎ  Ｃｙｔｏｋｉｎｅ  Ｒｅｓ、２０１１年、３１巻、７３３〜７４４頁；Ｏｏｉら、Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ  ａｎｄ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ、２００６年、４巻、２９４〜３０９頁）。ブドウ膜炎のための既存の療法は、多くの場合、準最適であり、多くの患者はコントロール不良である。ステロイドは、多くの場合、有効であるが、白内障および眼圧の増大／緑内障に関連する。
【０００５】
糖尿病性網膜症（ＤＲ）は、網膜における血管への損傷によって引き起こされる。これは、糖尿病患者の間で、視力喪失の最も一般的な原因である。血管新生および炎症経路は、該疾患において、重要な役割を果たす。多くの場合、ＤＲは、糖尿病性黄斑浮腫（ＤＭＥ）に進行することになり、これは、糖尿病患者における視力喪失の最も頻繁な原因である。該状態は、米国単独で約１５０万人の患者に影響を及ぼしていると推定され、そのうち約２０％が両目に影響を及ぼす疾患を有する。ＩＬ−６等のＪＡＫ−ＳＴＡＴ経路を介してシグナル伝達するサイトカイン、ならびにその産生がＪＡＫ−ＳＴＡＴ経路シグナル伝達によって部分的に推進されるＩＰ−１０およびＭＣＰ−１（代替としてＣＣＬ２と称される）等の他のサイトカインは、ＤＲ／ＤＭＥに関連する炎症において役割を果たすと考えられる（Ａｂｃｏｕｗｅｒ、Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ｃｅｌｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌ、２０１３年、付録１、１〜１２頁；Ｓｏｈｎら、Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｏｐｔｈａｌｍｏｌｏｇｙ、２０１１年、１５２巻、６８６〜６９４頁；ＯｗｅｎおよびＨａｒｔｎｅｔｔ、Ｃｕｒｒ  Ｄｉａｂ  Ｒｅｐ、２０１３年、１３巻、４７６〜４８０頁；Ｃｈｅｕｎｇら、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｖｉｓｉｏｎ、２０１２年、１８巻、８３０〜８３７頁；Ｄｏｎｇら、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｖｉｓｉｏｎ、２０１３年、１９巻、１７３４〜１７４６頁；Ｆｕｎａｔｓｕら、Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌｏｇｙ、２００９年、１１６巻、７３〜７９頁）。ＤＭＥのための既存の療法は、準最適であり、硝子体内抗ＶＥＧＦ処置は、一部の患者においてのみ有効であり、ステロイドは、白内障および眼圧の増大に関連する。
【０００６】
ドライアイ疾患（ＤＥＤ）は、米国においておよそ５００万人の患者に影響を及ぼしている多因子障害である。眼表面の炎症は、この疾患の発症および伝播において重要な役割を果たすと考えられる。ＩＬ−１、ＩＬ−２、ＩＬ−４、ＩＬ−５、ＩＬ−６およびＩＦＮ−γ等のサイトカインのレベル上昇は、ＤＥＤ患者の眼液において留意されてきており（Ｓｔｅｖｅｎｓｏｎら、Ａｒｃｈ  Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌ、２０１２年、１３０巻、９０〜１００頁）、レベルは、多くの場合、疾患重症度と相関している。加齢黄斑変性およびアトピー性角結膜炎も、ＪＡＫ依存性サイトカインに関連すると考えられている。
【０００７】
網膜静脈閉塞（ＲＶＯ）は、高度に蔓延している視力に障害を起こす疾患である。網膜血流の閉塞は、網膜血管系の損傷、出血および組織虚血につながり得る。ＲＶＯの原因は多因子であるが、血管および炎症性メディエーターの両方が重要であることが示されている（Ｄｅｏｂｈａｋｔａら、Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎ、２０１３年、論文ＩＤ４３８４１２）。ＩＬ−６およびＩＬ−１３等のＪＡＫ−ＳＴＡＴ経路を介してシグナル伝達するサイトカイン、ならびにその産生がＪＡＫ−ＳＴＡＴ経路シグナル伝達によって部分的に推進されるＭＣＰ−１等の他のサイトカインは、ＲＶＯ患者の眼組織においてレベル上昇して検出されている（Ｓｈｃｈｕｋｏら、Ｉｎｄｉａｎ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌｏｇｙ、２０１５年、６３巻（１２号）、９０５〜９１１頁）。ＲＶＯの多くの患者が光凝固によって処置されるが、これは、本質的に破壊的な療法である。抗ＶＥＧＦ剤も使用されるが、それらは一部の患者においてのみ有効である。目における炎症のレベルを低減させるステロイド薬（トリアムシノロンアセトニドおよびデキサメタゾンインプラント）は、ある特定の形態のＲＶＯを持つ患者に有益な結果を提供することも示されているが、それらは白内障および眼圧の増大／緑内障を引き起こすことも示されている。
【０００８】
アトピー性皮膚炎（ＡＤ）は、アメリカ合衆国単独において推定１４００万人の人々に影響を及ぼしている、一般的な慢性炎症性皮膚疾患である。ＡＤは、先進国において小児の１０〜２０％および成人の１〜３％に影響を及ぼしていると推定され（Ｂａｏら、ＪＡＫ−ＳＴＡＴ、２０１３年、２巻、ｅ２４１３７頁）、有病率は増大しつつある。ＪＡＫ−ＳＴＡＴ経路に依拠する炎症促進性サイトカイン、特に、ＩＬ−４、ＩＬ−５、ＩＬ−１０、ＩＬ−１３およびＩＦＮγの上昇は、ＡＤに関連するとされてきた（Ｂａｏら、Ｌｅｕｎｇら、Ｔｈｅ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｉｏｎ、２００４年、１１３巻、６５１〜６５７頁）。加えて、ＪＡＫ対合を介してシグナル伝達する別のサイトカインであるＩＬ−３１の上方調節は、ＡＤの慢性状態に関連する掻痒において役割を有することが示されている（Ｓｕｎｋｏｌｙら、Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ａｌｌｅｒｇｙ  ａｎｄ  Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ、２００６年、１１７巻、４１１〜４１７頁）。
【０００９】
喘息は、予防も治癒もない、気道の慢性疾患である。該疾患は、炎症、線維症、過敏応答性および気道のリモデリングを特徴とし、これらはすべて、気流制限に寄与する。世界中で推定３億人が喘息に罹患しており、喘息を持つ人々の数は、２０２５年までに１億人超増加するであろうと推定される。ほとんどの患者は、ロイコトリエン修飾因子および／または長時間作用型ベータアゴニストと組み合わせられてよい吸入コルチコステロイドの使用により、喘息症状の制御を実現することができるが、疾患が従来の療法によって制御されない重症喘息を持つ患者のサブセットが残る。ＪＡＫ−ＳＴＡＴ経路を介してシグナル伝達する、喘息の炎症に関係するサイトカインは、ＩＬ−２、ＩＬ−３、ＩＬ−４、ＩＬ−５、ＩＬ−６、ＩＬ−９、ＩＬ−１１、ＩＬ−１３、ＩＬ−２３、ＩＬ−３１、ＩＬ−２７、胸腺間質性リンパ球新生因子（ＴＳＬＰ）、インターフェロン−γ（ＩＦＮγ）および顆粒球マクロファージコロニー刺激因子（ＧＭ−ＣＳＦ）を含む。気道の炎症は、喘息に加えて、他の呼吸器疾患の特徴である。慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、嚢胞性線維症（ＣＦ）、肺臓炎、間質性肺疾患（特発性肺線維症を含む）、急性肺傷害、急性呼吸窮迫症候群、気管支炎、肺気腫、閉塞性細気管支炎およびサルコイドーシスも、病態生理学がＪＡＫシグナル伝達サイトカインに関連していると考えられる呼吸器官疾患である。
炎症性疾患において上昇したサイトカインの数および各サイトカインが特定のＪＡＫ対合に関連することを考慮すると、ＪＡＫファミリーのすべてのメンバーに対してｐａｎ活性を持つ化学阻害剤は、眼、皮膚および呼吸器疾患の処置について広範な有用性を有し得る。強力なｐａｎ−ＪＡＫ阻害剤が依然として必要である。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【００１０】
【非特許文献１】ＨｏｒａｉおよびＣａｓｐｉ、Ｊ  Ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎ  Ｃｙｔｏｋｉｎｅ  Ｒｅｓ、２０１１年、３１巻、７３３〜７４４頁
【非特許文献２】Ｏｏｉら、Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ  ａｎｄ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ、２００６年、４巻、２９４〜３０９頁
【非特許文献３】Ａｂｃｏｕｗｅｒ、Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ｃｅｌｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌ、２０１３年、付録１、１〜１２頁
【非特許文献４】Ｓｏｈｎら、Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｏｐｔｈａｌｍｏｌｏｇｙ、２０１１年、１５２巻、６８６〜６９４頁
【非特許文献５】ＯｗｅｎおよびＨａｒｔｎｅｔｔ、Ｃｕｒｒ  Ｄｉａｂ  Ｒｅｐ、２０１３年、１３巻、４７６〜４８０頁
【非特許文献６】Ｃｈｅｕｎｇら、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｖｉｓｉｏｎ、２０１２年、１８巻、８３０〜８３７頁
【非特許文献７】Ｄｏｎｇら、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｖｉｓｉｏｎ、２０１３年、１９巻、１７３４〜１７４６頁
【非特許文献８】Ｆｕｎａｔｓｕら、Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌｏｇｙ、２００９年、１１６巻、７３〜７９頁
【非特許文献９】Ｓｔｅｖｅｎｓｏｎら、Ａｒｃｈ  Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌ、２０１２年、１３０巻、９０〜１００頁
【非特許文献１０】Ｄｅｏｂｈａｋｔａら、Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎ、２０１３年、論文ＩＤ４３８４１２
【非特許文献１１】Ｓｈｃｈｕｋｏら、Ｉｎｄｉａｎ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌｏｇｙ、２０１５年、６３巻（１２号）、９０５〜９１１頁
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【００１１】
一態様では、本発明は、炎症性疾患の処置に有用なＪＡＫ阻害剤化合物を提供する。
【００１２】
特に、一態様では、本発明は、式
【化１】
2020518581.tif 000003
の１−（２−（６−（２−エチル−５−フルオロ−４−ヒドロキシフェニル）−４−フルオロ−１Ｈ−インダゾール−３−イル）−１，４，６，７−テトラヒドロ−５Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］ピリジン−５−イル）−２−モルホリノエタン−１−オン、以後、化合物１、または薬学的に許容されるその塩を提供する。
【００１３】
本発明は、化合物の結晶形態、形態１および形態２も提供する。
【００１４】
本発明は、化合物１またはその薬学的に許容され得る塩、および薬学的に許容され得るキャリアを含む薬学的組成物も提供する。
【００１５】
一態様では、本発明は、哺乳動物の眼疾患を処置する方法であって、この方法が、本発明の化合物１または薬学的組成物をその哺乳動物に投与する工程を含む、方法を提供する。一態様では、眼疾患は、ブドウ膜炎、糖尿病性網膜症、糖尿病性黄斑浮腫、ドライアイ疾患、加齢黄斑変性、網膜静脈閉塞およびアトピー性角結膜炎である。特に、眼疾患は、糖尿病性黄斑浮腫またはブドウ膜炎である。
【００１６】
さらに別の方法の態様では、本発明は、皮膚の炎症性疾患、特にアトピー性皮膚炎を処置する方法であって、本発明の化合物１または医薬組成物を、哺乳動物の皮膚に塗布するステップを含む、方法を提供する。
【００１７】
さらなる態様では、本発明は、哺乳動物における呼吸器疾患を処置する方法であって、本発明の化合物１または薬学的に許容されるその塩または医薬組成物を、哺乳動物に投与するステップを含む、方法を提供する。
【００１８】
別個の明確な態様において、本発明は、化合物１を調製するために有用な、本明細書において記述されている合成プロセスおよび中間体も提供する。
【００１９】
本発明は、医学療法において使用するための本明細書において記述されている通りの化合物１、および哺乳動物における眼疾患、皮膚疾患または呼吸器疾患を処置するための製剤または医薬の製造における本発明の化合物の使用も提供する。
【図面の簡単な説明】
【００２０】
本発明の種々の態様を、付随する図面を参照して例証する。
【００２１】
【図１】図１は、化合物１の結晶形態２（以後、形態２）の粉末Ｘ線回折（ＰＸＲＤ）パターンを示す。
【００２２】
【図２】図２は、結晶形態２の示差走査熱量測定（ＤＳＣ）サーモグラムを示す。
【００２３】
【図３】図３は、結晶形態２の熱重量分析（ＴＧＡ）プロットを示す。
【図４】図４は、約２５℃の温度で観察された結晶形態２の動的水分吸着（ＤＭＳ）等温線を示す。
【００２４】
【図５】図５は、形態２の偏光顕微鏡画像を示す。
【００２５】
【図６】図６は、化合物１の結晶形態１（以後、形態１）の粉末Ｘ線回折（ＰＸＲＤ）パターンを示す。
【００２６】
【図７】図７は、結晶形態１の示差走査熱量測定（ＤＳＣ）サーモグラムを示す。
【００２７】
【図８】図８は、結晶形態１の熱重量分析（ＴＧＡ）プロットを示す。
【図９】図９は、約２５℃の温度で観察された結晶形態１の動的水分吸着（ＤＭＳ）等温線を示す。
【００２８】
【図１０】図１０は、形態１の偏光顕微鏡法画像を示す。
【発明を実施するための形態】
【００２９】
化学構造は、本明細書において、ＣｈｅｍＤｒａｗソフトウェア（ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ，Ｉｎｃ．、Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ、ＭＡ）において実装される通り、ＩＵＰＡＣ既約に従って命名される。
さらに、本発明の化合物の構造におけるテトラヒドロイミダゾピリジン部分のイミダゾ部は、互変異性形態で存在する。化合物は、
【化２】
2020518581.tif 000004
として同等に表され得る。
【００３０】
ＩＵＰＡＣ既約によれば、これらの表現は、テトラヒドロイミダゾピリジン部の原子の異なる番号付けを生み出す。したがって、この構造は、１−（２−（６−（２−エチル−５−フルオロ−４−ヒドロキシフェニル）−４−フルオロ−１Ｈ−インダゾール−３−イル）−３，４，６，７−テトラヒドロ−５Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］ピリジン−５−イル）−２−モルホリノエタン−１−オンと指定される。これは、１−（２−（６−（２−エチル−５−フルオロ−４−ヒドロキシフェニル）−４−フルオロ−１Ｈ−インダゾール−３−イル）−１，４，６，７−テトラヒドロ−５Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］ピリジン−５−イル）−２−モルホリノエタン−１−オンとも指定され得る。構造が特定の形態で示されている、または命名されているが、本発明は、それらの互変異性体も含むことが理解されるであろう。
【００３１】
本発明の化合物は、いくつかの塩基性基を含有し、したがって、化合物は、遊離塩基として、またはモノプロトン化塩形態、ジプロトン化塩形態もしくはそれらの混合物等の種々の塩形態で存在することができる。すべてのそのような形態は、別段の指示がない限り、本発明の範囲内に含まれる。
【００３２】
本発明は、式１の同位体標識化合物、すなわち、原子が、同じ原子番号を有するが自然界において優勢である原子質量とは異なる原子質量を有する原子で置きかえられているまたは富化されている、式１の化合物も含む。式１の化合物に組み込まれ得る同位体の例は、２Ｈ、３Ｈ、１１Ｃ、１３Ｃ、１４Ｃ、１３Ｎ、１５Ｎ、１５Ｏ、１７Ｏ、１８Ｏおよび１８Ｆを含むがこれらに限定されない。特に興味深いのは、三重水素または炭素−１４が富化されている式１の化合物であり、これらの化合物は、例えば、組織分布研究において使用され得る。同じく特に興味深いのは、とりわけ代謝部位において重水素が富化されている式１の化合物であり、これらの化合物は、より優れた代謝安定性を有することが期待される。加えて、特に興味深いのは、１１Ｃ、１８Ｆ、１５Ｏおよび１３Ｎ等の陽電子放出同位体が富化されている式１の化合物であり、これらの化合物は、例えば、陽電子放射断層撮影（ＰＥＴ）研究において使用され得る。
【００３３】
定義
その種々の態様および実施形態を含む本発明について記述する場合、下記である。
用語「治療有効量」は、処置を必要とする患者に投与された場合に処置を達成するために十分な量を意味する。
【００３４】
用語「処置すること」または「処置」は、患者（特にヒト）において処置されている医学的状態、疾患または障害（例えば、呼吸器疾患）を、予防すること、寛解させることまたは抑制すること；あるいは医学的状態、疾患または障害の症状を緩和することを意味する。
【００３５】
用語「薬学的に許容される塩」は、患者またはヒト等の哺乳動物への投与に許容される塩（例えば、所与の投薬レジームのための許容される哺乳類の安全性を有する塩）を意味する。代表的な薬学的に許容される塩は、酢酸、アスコルビン酸、ベンゼンスルホン酸、安息香酸、カンファースルホン酸、クエン酸、エタンスルホン酸、エジシル酸、フマル酸、ゲンチシン酸、グルコン酸、グルクロン酸（ｇｌｕｃｏｒｏｎｉｃ）、グルタミン酸、馬尿酸、臭化水素酸、塩酸、イセチオン酸、乳酸、ラクトビオン酸、マレイン酸、リンゴ酸、マンデル酸、メタンスルホン酸、粘液酸、ナフタレンスルホン酸、ナフタレン−１，５−ジスルホン酸、ナフタレン−２，６−ジスルホン酸、ニコチン酸、硝酸、オロチン酸、パモ酸、パントテン酸、リン酸、コハク酸、硫酸、酒石酸、ｐ−トルエンスルホン酸およびキシナホ酸等の塩を含む。
【００３６】
用語「その塩」は、酸の水素が金属カチオンまたは有機カチオン等のカチオンによって置きかえられた場合に形成される化合物を意味する。例えば、カチオンは、式１の化合物のプロトン化形態、すなわち、１つまたは複数のアミノ基が酸によってプロトン化された形態であることができる。典型的には、塩は、薬学的に許容される塩であるが、これは、患者への投与が意図されていない中間化合物の塩には必要とされない。
【００３７】
用語「アミノ保護基」は、アミノ窒素における望ましくない反応を防止するために好適な保護基を意味する。代表的なアミノ保護基は、ホルミル；アシル基、例えば、アセチルおよびトリ−フルオロアセチル等のアルカノイル基；ｔｅｒｔブトキシカルボニル（Ｂｏｃ）等のアルコキシカルボニル基；ベンジルオキシカルボニル（Ｃｂｚ）および９−フルオレニルメトキシカルボニル（Ｆｍｏｃ）等のアリールメトキシカルボニル基；ベンジル（Ｂｎ）、トリチル（Ｔｒ）および１，１−ジ−（４’−メトキシフェニル）メチル等のアリールメチル基；トリメチルシリル（ＴＭＳ）、ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル（ＴＢＤＭＳ）、［２−（トリメチルシリル）エトキシ］メチル（ＳＥＭ）等のシリル基等を含むがこれらに限定されない。
【００３８】
用語「ヒドロキシ保護基」は、ヒドロキシ基における望ましくない反応を防止するために好適な保護基を意味する。代表的なヒドロキシ保護基は、メチル、エチルおよびｔｅｒｔ−ブチル等のアルキル基；アシル基、例えば、アセチル等のアルカノイル基；ベンジル（Ｂｎ）、ｐ−メトキシベンジル（ＰＭＢ）、９−フルオレニルメチル（Ｆｍ）およびジフェニルメチル（ベンズヒドリル、ＤＰＭ）等のアリールメチル基；トリメチルシリル（ＴＭＳ）およびｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル（ＴＢＳ）等のシリル基等を含むがこれらに限定されない。
【００３９】
多数の保護基ならびにそれらの導入および除去は、Ｔ．  Ｗ．  ＧｒｅｅｎｅおよびＰ．Ｇ．Ｍ．  Ｗｕｔｓ、Ｐｒｏｔｅｃｔｉｎｇ  Ｇｒｏｕｐｓ  ｉｎ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ、第３版、Ｗｉｌｅｙ、Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋにおいて記述されている。
【００４０】
一般的合成手順
化合物１およびその中間体は、下記の一般的方法および手順に従い、市販されているまたは慣用的に調製される出発材料および試薬を使用して調製することができる。加えて、酸性または塩基性の原子または官能基を有する化合物は、別段の指示がない限り、塩として使用されてよいか、または生成されてよい（一部の事例において、特定の反応における塩の使用は、反応を行う前に、慣用的手順を使用して、塩の、非塩形態、例えば遊離塩基への変換を必要とすることになる）。
【００４１】
本発明の特定の実施形態が下記の手順において示され得るまたは記述され得るが、当業者ならば、そのような手順を使用して、または当業者に公知である他の方法、試薬および出発材料を使用することによって、本発明の他の実施形態または態様も調製できることを認識するであろう。特に、化合物１は、反応物質を異なる順序で合わせて最終生成物を生成するまでの途中で異なる中間体を提供する、様々なプロセスルートによって調製されてよいことが分かるであろう。
【００４２】
１−（２−（６−（２−エチル−５−フルオロ−４−ヒドロキシフェニル）−４−フルオロ−１Ｈ−インダゾール−３−イル）−１，４，６，７−テトラヒドロ−５Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］ピリジン−５−イル）−２−モルホリノエタン−１−オン（化合物１）の調製を、添付の実施例において詳細に記述する。主要ステップをスキーム１にまとめる。
【化３】
2020518581.tif 000005
式中、試薬７は、２，５−ジオキソピロリジン−１−イル２−モルホリノアセテートである、すなわち、変数ＲＡは、実施例１に記述される通り、活性化剤２，５−ジオキソピロリジニルを表す。代替として、モルホリン−４−イル酢酸、すなわち、ＲＡは、水素を表し、実施例４に記述される通り、典型的なアミド結合形成条件下で、試薬７として使用される。
【００４３】
中間体３は、以下の調製１および３において記述されている通りに調製されてよい。主要な保護された中間体５の調製の代替方法は、スキーム２において例証される。
【化４】
2020518581.tif 000006
【００４４】
ブロモインダゾールアルデヒド８を、ベンジル保護されたイミン化合物２と反応させて、中間体９を提供してよい。反応は、典型的には、亜硫酸水素ナトリウムの存在下、約１３０℃から約１４０℃の間の温度で、約１から約６時間の間にわたってまたは反応が実質的に完了するまで、行われる。化合物９を、水素化ホウ素ナトリウム等の還元剤を使用して還元して、化合物１０を提供し、これを、典型的な鈴木・宮浦カップリング条件下、保護されたフェニルトリフルオロボレート１１と組み合わせて、中間体５を提供する。反応は、典型的には、パラジウム触媒の存在下、昇温で行われる。スキーム２においてトリフルオロホウ酸カリウム塩として示される鈴木パートナー１１は、対応するボロネート（以下の調製１における中間体１〜５）を二フッ化水素カリウムと反応させて、中間体１１を提供することによって調製することができる。代替として、ボロネート中間体を、トリフルオロボレート１１の代わりに使用することができる。
【００４５】
したがって、方法態様では、本発明は、式１の化合物またはその薬学的に許容される塩を調製する方法であって、スキーム１において例証される通り、式６の化合物を式７の化合物と反応させて、式１の化合物またはその薬学的に許容される塩を提供するステップを含む、方法を提供する。
【００４６】
追加の方法態様では、本発明は、式１の化合物を調製する際に有用な、式５の化合物および式６の化合物を提供する。
【００４７】
結晶形態
別の態様では、本発明は、１−（２−（６−（２−エチル−５−フルオロ−４−ヒドロキシフェニル）−４−フルオロ−１Ｈ−インダゾール−３−イル）−１，４，６，７−テトラヒドロ−５Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］ピリジン−５−イル）−２−モルホリノエタン−１−オン（１）を結晶形態で提供する。
【００４８】
形態１
本発明の結晶形態１は、化合物１の結晶性遊離形態である。一態様では、形態１は、数あるピークの中でも、８．１６±０．２０、８．９７±０．２０、１５．２９±０．２０、１６．７０±０．２０、１８．００±０．２０および２０．１８±０．２０の２θ値における有意な回折ピークを有する粉末Ｘ線回折（ＰＸＲＤ）パターンを特徴とする。形態１は、７．６９±０．２０、１０．６６±０．２０、１１．４６±０．２０、１１．９１±０．２０、１５．８０±０．２０、１７．０２±０．２０、１８．８３±０．２０、２２．３９±０．２０、２２．９８±０．２０、２４．８９±０．２０および２６．５４±０．２０から選択される２θ値における３つまたはそれよりも多いおよび４つまたはそれよりも多い追加の回折ピークを含む２つまたはそれよりも多い追加の回折ピークを有するＰＸＲＤパターンをさらに特徴としてよい。別の態様では、形態１は、８．１６±０．２０、８．９７±０．２０、１５．２９±０．２０、１６．７０±０．２０、１８．００±０．２０および２０．１８±０．２０から選択される２θ値における３、４、５または６つの回折ピークを有するＰＸＲＤパターンを特徴とする。
【００４９】
粉末Ｘ線回折の分野で周知であるように、ＰＸＲＤパラーンのピーク位置は、相対的ピーク高さよりも、比較的、実験の詳細（例えば、サンプル調製および装置のジオメトリの詳細）に感受性でない。したがって、１つの態様において、結晶形態１は、ピーク位置が、図６に示されるものと実質的に一致する粉末Ｘ線回折パターンを特徴とする。
【００５０】
別の態様では、上記結晶形態１は、高温に曝露されたときの挙動によって特徴付けられる。図７において実証される通り、１分当たり１０℃の加熱速度で記録された示差走査熱量測定（ＤＳＣ）トレース（ｔｒａｃｅ）は、約２１０℃から約２３４℃の範囲内、または約２１５℃から約２２９℃の間の範囲内、または約２２０℃から約２２４℃の間の範囲内の、溶融遷移として同定される吸熱熱流のピークを呈する。結晶形態１は、約２２１．７℃にピークを持つ吸熱熱流の最大値を示す、１分当たり１０℃の加熱速度で記録された示差走査熱量測定トレースを特徴とする。図８の熱重量分析（ＴＧＡ）トレースは、約２９３℃の分解開始未満の温度で顕著な重量損失がないことを示す。
【００５１】
本発明の形態１結晶性遊離形態について、代表的な動的水分吸着（ＤＭＳ）トレースを図９に示す。結晶形態１は、吸収および脱着の２サイクル間の小さなヒステリシスを実証した。形態１は、図９に示されている通り、５％から７０％相対湿度の湿度範囲における約０．９９％の重量増加および５％から９０％相対湿度の湿度範囲における約１．３２％の重量増加を室温で実証した。形態１は、わずかに吸湿性であるとみなされる。
【００５２】
結晶形態１は、上昇した温度および湿度への曝露時に安定であることが示されている。４０℃および７５％相対湿度の加速条件で３６週間後、化学的純度における統計的に有意な変化は観察されなかった。
【００５３】
形態１は、化合物１をエタノールに加熱しながら溶解し、続いて、アセトニトリルを添加することによって調製されてよく、ここで、アセトニトリルのエタノールに対する比は、約１：１、または約１：３〜３：１である。次いで、得られた混合物を加温し、続いて、約２０℃から約２５℃の間の温度で、約４時間から約３０時間の間にわたって、または約１６時間にわたって撹拌する。次いで、固体を濾過し、乾燥させて、形態１を提供する。
【００５４】
形態１は、化合物１をエタノールと混合し、混合物を、約５０から約８０℃の間の温度で、約２から３０分間、または約１０分間にわたって撹拌し、続いて、約５０から約８０℃の間の温度でアセトニトリルをゆっくりと添加することによって調製されてもよく、ここで、アセトニトリルのエタノールに対する体積比は、約３：１〜１：１、または約１．５：１である。形態１の種晶を添加し、反応混合物を、約２０℃から約２５℃の間の温度で、約４時間から約３０時間の間にわたって、または約１８時間にわたって撹拌してよい。次いで、固体を濾過し、乾燥させて、形態１を提供する。
【００５５】
形態２
本発明の結晶形態２は、化合物１の結晶性遊離形態である。一態様では、形態２は、数あるピークの中でも、１０．６１±０．２０、１１．８４±０．２０、１４．９４±０．２０、１８．２６±０．２０および１９．０６±０．２０の２θ値における有意な回折ピークを有する粉末Ｘ線回折（ＰＸＲＤ）パターンを特徴とする。形態２は、１３．３２±０．２０、１７．６９±０．２０および２１．１０±０．２０の２θ値における追加の回折ピークを有するＰＸＲＤパターンをさらに特徴としてよい。形態２は、１０．８５±０．２０、１６．１４±０．２０、１６．３５±０．２０、１８．４３±０．２０、１９．２０±０．２０、１９．４９±０．２０、２０．７２±０．２０、２１．９４±０．２０、２２．６４±０．２０、２３．６４±０．２０、２５．１９±０．２０および２８．０８±０．２０から選択される２θ値における３つまたはそれよりも多いおよび４つまたはそれよりも多い追加の回折ピークを含む２つまたはそれよりも多い追加の回折ピークを有するＰＸＲＤパターンをさらに特徴としてよい。
【００５６】
別の態様では、形態２は、１０．６１±０．２０、１１．８４±０．２０、１３．３２±０．２０、１４．９４±０．２０、１７．６９±０．２０、１８．２６±０．２０、１９．０６±０．２０および２１．１０±０．２０から選択される２θ値における３、４、５または６つの回折ピークを有するＰＸＲＤパターンを特徴とする。
【００５７】
粉末Ｘ線回折の分野において周知であるように、ＰＸＲＤパターンのピーク位置は、相対的なピークの高さよりも、試料調製および機器の形状の詳細等の実験詳細に対して比較的感度が低い。故に、一態様では、結晶形態２は、ピーク位置が図１に示されているものと実質的に一致する粉末Ｘ線回折パターンを特徴とする。
【００５８】
結晶形態２の構造は、単結晶Ｘ線回折分析によってさらに特徴付けられた。結晶は、斜方晶系およびＰｂｃａ空間群に属する。単位格子寸法は、ａ＝９．７２４５（１１）Å、ｂ＝１６．８１９７（１４）Å、ｃ＝３２．６０４（４）Å、α＝９０°、β＝９０°、γ＝９０°、体積＝５３３２．８（１０）Å３である。算出された密度は、１．３０２ｇ／ｃｍ３である。結晶は、単位格子当たり８個の分子を含有する。構造は、結晶が水も他の溶媒分子も含有せず、分子構造が本明細書において描写されている通りの実施例１の化合物の構造と一致することを確認するものである。導出された原子位置から予測される粉末Ｘ線回折ピークは、観察された結果と良好に一致する。
【００５９】
別の態様では、結晶形態２は、高温に曝露された場合のその挙動を特徴とする。図２において実証される通り、１分当たり１０℃の加熱速度で記録された示差走査熱量測定（ＤＳＣ）トレースは、約２６８℃から約２７７℃の範囲内、または約２７０℃から約２７５℃の間の範囲内、または約２７１℃から約２７４℃の間の範囲内の、溶融遷移として同定される吸熱熱流のピークを呈する。結晶形態２は、約２７２．６±２℃のピークを持つ吸熱熱流の最大値を示す、１分当たり１０℃の加熱速度で記録された示差走査熱量測定トレースを特徴とする。
【００６０】
図３の熱重量分析（ＴＧＡ）トレースは、約２６９℃の分解開始未満の温度では有意な重量損失がないことを示す。
【００６１】
本発明の形態２結晶性遊離形態について、代表的な動的水分吸着（ＤＭＳ）トレースを図４に示す。結晶形態２は、吸収および脱着の２サイクル間のヒステリシスを示さず、吸湿性の並外れて小さい傾向を実証した。形態２は、図４に示されている通り、５％から９０％相対湿度の湿度範囲における約０．１８％の重量増加および５％から７０％相対湿度の湿度範囲における約０．１２％の重量増加を室温で実証した。形態２は、非吸湿性であるとみなされる。
【００６２】
形態２は、実施例１の化合物１を、ＤＭＳＯに（例えば、１から３ｍＬ、または約２ｍＬのＤＭＳＯについて、１ｇの化合物１の比で）、約４５から７５℃の間の温度でまたは約６０℃で溶解し、続いて、メタノールを添加することによって調製することができ、ここで、メタノールのＤＭＳＯに対する体積比は、約１：４〜約１：１、または約１：２である。次いで、均質混合物を、メタノールおよび水の予混合溶液に、約６０から約９０℃の間または約７５℃の温度で滴下添加し（ここで、メタノールのＤＭＳＯに対する比は、１．５〜３：１である）、ここで、メタノールの水に対する予混合溶液の体積比は、約０．５：１〜約１：２、または約１：０．９である。次いで、混合物を、約６０から約９０℃の間または約７５℃の温度で、約３０分間から約２時間または約１時間にわたって撹拌させる。次いで、水を、約６０から約９０℃の間または約７５℃の温度でゆっくりと添加することができ、ここで、水のメタノールに対する体積比は、２から４の間である。次いで、得られたスラリーを室温（典型的には、約２０から約２５℃の温度）まで、典型的には約２から約１２時間または約６時間かけてゆっくりと冷却する。次いで、スラリーを室温で保持し、次いで、濾過し、約５０から約９０％または約７０％水の、水およびメタノールの混合物で洗浄して、形態２を提供する。
【００６３】
一態様では、本発明は、結晶形態２を調製する方法であって、
（ａ）１−（２−（６−（２−エチル−５−フルオロ−４−ヒドロキシフェニル）−４−フルオロ−１Ｈ−インダゾール−３−イル）−１，４，６，７−テトラヒドロ−５Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］ピリジン−５−イル）−２−モルホリノエタン−１−オンの均質混合物を、極性非プロトン性溶媒中、または極性水混和性溶媒中、または極性非プロトン性溶媒および極性水混和性溶媒の混合物中において、４５から７５℃の間の温度で形成するステップと、
（ｂ）均質混合物を、水混和性溶媒および水の混合物に、６０から９０℃の間の温度で添加して、第２の混合物を得るステップと、
（ｃ）水を第２の混合物に、６０から９０℃の間の温度でゆっくりと添加して、スラリーを形成するステップと、
（ｄ）スラリーから結晶形態を単離するステップと
を含む、方法を提供する。
【００６４】
一部の態様では、ステップ（ａ）の極性非プロトン性溶媒は、ＤＭＳＯ、ＤＭＦ、ＮＭＰ、ＤＭＡｃおよびニトロメタンからなる群から選択され、ステップ（ａ）の極性水混和性溶媒は、アセトニトリル、アセトン、メタノール、エタノールおよびＴＨＦからなる群から選択され、ステップ（ｂ）の水混和性溶媒は、アセトニトリル、アセトン、メタノール、エタノール、ｎ−プロパノール、イソプロパノール、ｎ−ブタノール、ＴＨＦ、ＤＭＳＯ、ＤＭＦ、ＮＭＰ、ＤＭＡｃおよびニトロメタンからなる群から選択される。一部の態様では、ステップ（ａ）の極性非プロトン性溶媒は、ＤＭＳＯであり、ステップ（ａ）の極性水混和性溶媒は、メタノールであり、ステップ（ｂ）の水混和性溶媒は、メタノールである。
【００６５】
一部の態様では、ステップ（ｃ）において取得されたスラリーを、ステップ（ｄ）の前に、約２０から２５℃の間の温度まで冷却する。
【００６６】
代替として、形態２は、実施例１において取得された化合物１を、極性水混和性溶媒および水の混合物中、６０から９０℃の間の温度で撹拌することによって形成され得る。一部の態様では、溶媒の水に対する比は、約１：１、または２：１〜０．５：１である。一部の態様では、極性水混和性溶媒は、アセトニトリル、アセトン、メタノール、エタノール、ｎ−プロパノール、イソプロパノール、ｎ−ブタノール、ＴＨＦ、ＤＭＳＯ、ＤＭＦ、ＮＭＰ、ＤＭＡｃおよびニトロメタンからなる群から選択される。
【００６７】
医薬組成物
化合物１および薬学的に許容されるその塩は、典型的には、医薬組成物または製剤の形態で使用される。そのような医薬組成物は、有利にも、経口、吸入、光注入、局所（経皮を含む）、経直腸、鼻腔および非経口投与モードを含むがこれらに限定されない、任意の許容される投与ルートによって患者に投与されてよい。
【００６８】
したがって、その組成物態様の１つでは、本発明は、薬学的に許容される担体または賦形剤と化合物１とを含む医薬組成物を対象にし、ここで、上記で定義した通り、「化合物１」は、化合物１またはその薬学的に許容される塩を意味する。必要に応じて、そのような医薬組成物は、所望ならば、他の治療剤および／または製剤化剤を含有してよい。組成物およびその使用について論じる場合、化合物１は、本明細書において、「活性剤」とも称され得る。
【００６９】
一部の態様では、本開示は、化合物１もしくは薬学的に許容されるその塩、または形態１もしくは形態２と、薬学的に許容される担体とを含む、医薬組成物を提供する。一部の態様では、医薬組成物は、目への塗布に好適である。一部の態様では、組成物は、目の中への注射に好適である。一部の態様では、組成物は、硝子体内注射に好適である。一部の態様では、組成物は、懸濁物である。一部の態様では、組成物は、結晶性懸濁物である。一部の態様では、組成物は、形態１または形態２の懸濁物である。
【００７０】
本発明の医薬組成物は、典型的には、治療有効量の化合物１を含有する。しかしながら、当業者ならば、医薬組成物が、治療有効量を超える、すなわちバルク組成物、または治療有効量未満、すなわち治療有効量を実現するように複数回投与のために設計された個々の単位用量を含有してよいことを認識するであろう。
【００７１】
典型的には、そのような医薬組成物は、例えば、約０．０５から約３０重量％まで、および約０．１％から約１０重量％までの活性剤を含む、約０．０１から約９５重量％までの活性剤を含有することになる。
【００７２】
任意の従来の担体または賦形剤を、本発明の医薬組成物において使用してよい。特定の担体もしくは賦形剤、または担体もしくは賦形剤の組合せの選択は、特定の患者を処置するために使用されている投与モード、または医学的状態もしくは病状の種類によって決まることになる。これに関して、特定の投与モードに好適な医薬組成物の調製は、十分に医薬品分野の当業者の範囲内である。加えて、本発明の医薬組成物において使用される担体または賦形剤は、市販されている。さらなる例証として、従来の製剤化技術は、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：  Ｔｈｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｙ、第２０版、Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ  Ｗｉｌｌｉａｍｓ  ＆  Ｗｈｉｔｅ、Ｂａｌｔｉｍｏｒｅ、Ｍａｒｙｌａｎｄ（２０００年）；およびＨ．Ｃ．  Ａｎｓｅｌら、Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｄｏｓａｇｅ  Ｆｏｒｍｓ  ａｎｄ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ  Ｓｙｓｔｅｍｓ、第７版、Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ  Ｗｉｌｌｉａｍｓ  ＆  Ｗｈｉｔｅ、Ｂａｌｔｉｍｏｒｅ、Ｍａｒｙｌａｎｄ（１９９９年）において記述されている。
【００７３】
薬学的に許容される担体としての働きをすることができる材料の代表的な例は、下記を含むがこれらに限定されない：ラクトース、グルコースおよびスクロース等の糖；コーンスターチおよびジャガイモデンプン等のデンプン；微結晶性セルロース等のセルロース、ならびにカルボキシメチルセルロースナトリウム、エチルセルロースおよび酢酸セルロース等のその誘導体；粉末トラガカント；麦芽；ゼラチン；タルク；ココアバターおよび坐剤ワックス等の賦形剤；ラッカセイ油、綿実油、サフラワー油、ゴマ油、オリーブ油、コーン油および大豆油等の油；プロピレングリコール等のグリコール；グリセリン、ソルビトール、マンニトールおよびポリエチレングリコール等のポリオール；オレイン酸エチルおよびラウリン酸エチル等のエステル；寒天；水酸化マグネシウムおよび水酸化アルミニウム等の緩衝剤；アルギン酸；パイロジェンフリー水；等張生理食塩水；リンゲル液；エチルアルコール；リン酸緩衝溶液；ならびに医薬組成物において用いられる他の非毒性の適合性物質。
【００７４】
医薬組成物は、典型的には、活性剤を、薬学的に許容される担体および１つまたは複数の必要に応じた原料と、徹底的かつ密接に、混合するまたは混和することによって調製される。次いで、得られた均一に混和された混合物を、従来の手順および設備を使用して、錠剤、カプセル剤、丸剤等に成形するまたは充填することができる。
【００７５】
本発明の医薬組成物は、好ましくは、単位剤形で包装される。用語「単位剤形」は、患者に投薬するために好適な、すなわち、各単位が、単独でまたは１つもしくは複数の追加の単位と組み合わせてのいずれかで、所望の治療効果を生成するように算出された所定分量の活性剤を含有する、物理的に不連続な単位を指す。例えば、そのような単位剤形は、カプセル剤、錠剤、丸剤等、または眼内もしくは非経口投与に好適な単位包装であってよい。
【００７６】
一実施形態では、本発明の医薬組成物は、経口投与に好適である。経口投与に好適な医薬組成物は、カプセル剤、錠剤、丸剤、キャンディー剤、カシェ剤、糖衣錠剤、散剤、顆粒剤の形態；あるいは水性または非水性液体中の液剤または懸濁剤として；あるいは水中油型または油中水型液体乳剤として；あるいはエリキシル剤またはシロップ剤として等であってよく、それぞれが、所定量の化合物１を活性原料として含有する。
【００７７】
固体剤形で（すなわち、カプセル剤、錠剤、丸剤等として）の経口投与が意図されている場合、本発明の医薬組成物は、典型的には、活性剤および１つまたは複数の薬学的に許容される担体を含むことになる。必要に応じて、そのような固体剤形は、デンプン、微結晶性セルロース、ラクトース、第二リン酸カルシウム、スクロース、グルコース、マンニトールおよび／またはケイ酸等の充填剤または増量剤；カルボキシメチルセルロース、アルギン酸塩、ゼラチン、ポリビニルピロリドン、スクロースおよび／またはアカシア等の結合剤；グリセロール等の保湿剤；クロスカルメロースナトリウム（ｃｒｏｓｓｃａｒｍｅｌｌｏｓｅ  ｓｏｄｉｕｍ）、寒天、炭酸カルシウム、バレイショもしくはタピオカデンプン、アルギン酸、ある特定のシリケートおよび／または炭酸ナトリウム等の崩壊剤；パラフィン等の溶液遅延剤；第四級アンモニウム化合物等の吸収加速剤；セチルアルコールおよび／またはグリセロールモノステアレート等の湿潤剤；カオリンおよび／またはベントナイト粘土等の吸収剤；タルク、ステアリン酸カルシウム、ステアリン酸マグネシウム、固体ポリエチレングリコール、ラウリル硫酸ナトリウムおよび／またはそれらの混合物等の滑沢剤；着色剤；ならびに緩衝剤を含んでよい。
【００７８】
放出剤、湿潤剤、コーティング剤、甘味、香味および着香剤、保存剤ならびに酸化防止剤も、本発明の医薬組成物中に存在することができる。薬学的に許容される酸化防止剤の例は、アスコルビン酸、システイン塩酸塩、重硫酸ナトリウム、メタ重亜硫酸ナトリウム（ｓｏｄｉｕｍ  ｍｅｔａｂｉｓｕｌｆａｔｅ）、亜硫酸ナトリウム等の水溶性酸化防止剤；パルミチン酸アスコルビル、ブチル化ヒドロキシアニソール、ブチル化ヒドロキシトルエン、レシチン、没食子酸プロピル、アルファ−トコフェロール等の油溶性酸化防止剤；および、クエン酸、エチレンジアミン四酢酸、ソルビトール、酒石酸、リン酸等の金属キレート剤を含む。錠剤、カプセル剤、丸剤等のためのコーティング剤は、酢酸フタル酸セルロース、フタル酸酢酸ポリビニル、フタル酸ヒドロキシプロピルメチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、メタクリル酸、メタクリル酸エステルコポリマー、トリメリト酸酢酸セルロース、カルボキシメチルエチルセルロース、酢酸コハク酸ヒドロキシプロピルメチルセルロース等、腸溶コーティングに使用されるものを含む。
【００７９】
本発明の医薬組成物は、例として、可変割合のヒドロキシプロピルメチルセルロース；あるいは他のポリマーマトリックス、リポソームおよび／またはマイクロスフェアを使用して、活性剤の緩徐または制御放出を提供するように製剤化されてもよい。加えて、本発明の医薬組成物は、乳白剤を必要に応じて含有してよく、活性原料のみを、または優先的に、胃腸管のある特定の一部で、必要に応じて、遅延様式で放出するように製剤化されてよい。使用され得る包埋組成物の例は、ポリマー性物質およびワックスを含む。活性剤は、適切ならば、上述した賦形剤の１つまたは複数を加えた、マイクロカプセル形態であることもできる。
【００８０】
経口投与に好適な液体剤形は、例証として、薬学的に許容される乳剤、マイクロ乳剤、液剤、懸濁剤、シロップ剤およびエリキシル剤を含む。液体剤形は、典型的には、活性剤および不活性希釈剤、例えば、水または他の溶媒、可溶化剤および乳化剤、例えば、エチルアルコール、イソプロピルアルコール、炭酸エチル、酢酸エチル、ベンジルアルコール、安息香酸ベンジル、プロピレングリコール、１，３−ブチレングリコール、油（とりわけ、綿実、ラッカセイ、コーン、胚芽、オリーブ、ヒマシおよびゴマ油）、オレイン酸、グリセロール、テトラヒドロフリルアルコール、ポリエチレングリコールおよびソルビタンの脂肪酸エステル等、ならびにそれらの混合物を含む。代替として、ある特定の液体製剤は、例えばスプレー乾燥によって粉末に変換することができ、これを使用して、従来の手順によって固体剤形を調製する。
【００８１】
懸濁剤は、活性原料に加えて、例えば、エトキシ化イソステアリルアルコール、ポリオキシエチレンソルビトールおよびソルビタンエステル、微結晶性セルロース、アルミニウムメタ水酸化物、ベントナイト、寒天およびトラガカント、ならびにそれらの混合物等の懸濁化剤を含有してよい。
【００８２】
化合物１は、非経口的に（例えば、静脈内、皮下、筋肉内または腹腔内注射によって）投与することもできる。非経口投与では、活性剤は、典型的には、例として、滅菌水溶液、生理食塩水、プロピレングリコール、ポリエチレングリコール等の低分子量アルコール、植物油、ゼラチン、オレイン酸エチル等の脂肪酸エステル等を含む、非経口投与に好適なビヒクルと混ぜられる。非経口製剤は、１つまたは複数の酸化防止剤、可溶化剤、安定剤、保存剤、湿潤剤、乳化剤、緩衝剤または分散剤を含有してもよい。これらの製剤は、滅菌注射用媒質、滅菌剤、濾過、照射または熱の使用によって、無菌にされてよい。
【００８３】
化合物１は、眼内注射のための滅菌水性懸濁剤または液剤として製剤化されてもよい。そのような水性製剤に組み込まれてよい有用な賦形剤は、ポリソルベート８０、セルロースポリマー、例えば、カルボキシメチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、メチルセルロース、塩化カリウム、塩化カルシウム、塩化ナトリウム、塩化マグネシウム、酢酸ナトリウム、クエン酸ナトリウム、ヒスチジン、α−α−トレハロース二水和物、スクロース、ポリソルベート２０、ヒドロキシプロピル−β−シクロデキストリン、塩化ベンザルコニウム、アンバーライトＩＲＰ−６９、ポリオキシエチレングリコールエーテル（ラウリル、ステアリルおよびオレイル）、エチレンジアミン四酢酸ナトリウム塩、タウロコール酸ナトリウム、サポニンおよびクレモフォールＥＬ、ポリカルボフィル−システイン、キサンタンガム、ゲランガム、ヒアルロン酸、リポソームならびにリン酸ナトリウムを含む。浸透性増強剤、界面活性剤、胆汁酸、２−ヒドロキシプロピル−β−シクロデキストリン等のシクロデキストリンおよびキレート剤が製剤に含まれてよい。活性剤と複合体を形成する能力を有する、親水性の外面および親油性の内面を持つ円筒状オリゴヌクレオチドも、製剤に含まれてよい。ベンジルアルコールは、保存剤としての働きをすることができ、等張性を調整するために塩化ナトリウムが含まれてよい。加えて、ｐＨ調整のために、塩酸および／または水酸化ナトリウムを溶液に添加してよい。眼内注射のための水性製剤は、保存剤フリーとして調製されてよい。
【００８４】
眼製剤は、目への活性原料の持続放出を可能にし得る。眼製剤は、乳剤（水中油型または油中水型）、懸濁剤または軟膏剤として製剤化されてよい。懸濁物製剤は、化合物１または薬学的に許容されるその塩を、結晶形態、例えば形態１もしくは形態２として、または非晶質状態で、含有してよい。
【００８５】
化合物１は、点眼剤投薬に好適であるようにまたは硝子体内インプラントとして製剤化されてもよい。インプラントは、一定の治療レベルの薬物を送達することを可能にし得る。レザバーインプラントは、典型的には、ケイ素、エチレン酢酸ビニル（ＥＶＡ）またはポリビニルアルコール（ＰＶＡ）等の非反応性物質によって囲まれたペレット化された薬物コアで作製されており、これらのインプラントは、非生分解性であり、連続量の薬物を数カ月から１年間にわたって送達することができる。マトリックスインプラントを使用してもよい。これらは、典型的には、充填用量、続いて、漸減用量の薬物を、１日から６カ月の期間中、送達するために使用される。これらは、最も一般的には、コポリマーポリ乳酸（ＰＬＡ）および／またはポリ乳酸グリコール酸（ＰＬＧＡ）から作製され、水および二酸化炭素に分解する。イオントフォレーシスを使用してもよい。これは、小電流が印加されて組織へのイオン化された薬物透過を増強する、非侵襲的技術である。
【００８６】
細胞ベースの送達システムであるカプセル化細胞技術（ＥＣＴ）を使用して、治療剤を目に送達してもよい。典型的には、遺伝子修飾細胞は、半透膜の中空管内に包装され、これは、免疫細胞の侵入を防止し、栄養素および治療用分子が膜を越えて自由に拡散することを可能にする。ポリマー切片の両端を密閉し、チタンループを固定端に置き、これを、毛様体扁平部にインプラントし、強膜に固定する。
【００８７】
化合物１は、眼底への送達を可能にする任意の形態で製剤化されてよい。送達モードの例は文献において公知である（Ｋｕｎｏら、Ｐｏｌｙｍｅｒｓ、２０１１年、３巻、１９３〜２２１頁、ｄｅｌ  Ａｍｏら、Ｄｒｕｇ  Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ  Ｔｏｄａｙ、２００８年、１３巻、１３５〜１４３頁、Ｓｈｏｒｔ、Ｔｏｘｉｃｏｌｏｇｉｃ  Ｐａｔｈｏｌｏｇｙ、２００８年、３６巻、４９〜６２頁）。そのような送達モードは、脈絡膜上腔を介して脈絡膜および網膜への送達を可能にする脈絡膜上送達、テノン嚢下送達、眼球周囲送達、コンタクトレンズ、涙点プラグならびに強膜プラグを含むがこれらに限定されない。化合物１は、眼球周囲、強膜上、球後、球周囲または結膜下注射によって送達されてもよい。
【００８８】
化合物１は、乳剤、ポリマー性マイクロもしくはナノスフェア、リポソーム、マイクロもしくはナノ粒子、マイクロスフェア、ミセルまたはデンドリマーとして送達されてよい。ポリ乳酸（ｐｏｌｙａｃｔｉｄｅ）およびＰＬＧＡ等の生分解性および生体適合性ポリマーを使用することができる。化合物１は、カプセル化されていてよい。
【００８９】
加えて、化合物１は、皮膚への局所投与のために、軟膏剤またはクリーム剤として製剤化されてよい。軟膏製剤は、典型的には透明な油性または脂肪性材料の基剤を有する半固体調製物である。軟膏製剤において使用するために好適な油性材料は、ペトロラタム（石油ゼリー）、ミツロウ、ココアバター、シアバターおよびセチルアルコールを含む。軟膏剤は、所望ならば、皮膚軟化剤および透過増強剤を必要に応じて付加的に含んでよい。
【００９０】
クリーム製剤は、典型的には精製水を含む、油相および水性相を含む乳剤として調製されてよい。クリーム製剤の成分は、ペトロラタム（ｐｅｔｒｏｌａｔｒｕｍ）、鉱油、植物および動物油ならびにトリグリセリド等の油基剤；ラノリンアルコール、ステアリン酸およびセトステアリルアルコール等のクリーム基剤；ポリビニルアルコール等のゲル基剤；プロピレングリコールおよびポリエチレングリコール等の溶媒；ポリソルベート、ステアレート、例えばステアリン酸グリセリル、ヒドロキシステアリン酸オクチル、ポリオキシステアレート、ＰＥＧステアリルエーテル、パルミチン酸イソプロピルおよびソルビタンモノステアレート等の乳化剤；多糖および亜硫酸ナトリウム等の安定剤；中鎖トリグリセリド、ミリスチン酸イソプロピルおよびジメチコン等の皮膚軟化剤（すなわち、保湿剤）；セチルアルコールおよびステアリルアルコール等の硬化剤；メチルパラベン、プロピルパラベン、フェノキシエタノール、ソルビン酸、ジアゾリジニル尿素およびブチル化ヒドロキシアニソール等の抗菌剤；Ｎ−メチルピロリドン、プロピレングリコール、ポリエチレングリコールモノラウレート等の透過増強剤；ならびにエデト酸二ナトリウム等のキレート剤を含んでよい。
【００９１】
代替として、本発明の医薬組成物は、吸入による投与のために製剤化される。吸入による投与に好適な医薬組成物は、典型的には、エアゾールまたは散剤の形態となる。そのような組成物は、概して、定量吸入器、乾燥粉末吸入器、ネブライザーまたは同様の送達デバイス等の周知の送達デバイスを使用して投与される。
【００９２】
加圧容器を使用する吸入によって投与される場合、本発明の医薬組成物は、典型的には、活性原料と、ジクロロジフルオロメタン、トリクロロフルオロメタン、ジクロロテトラフルオロエタン、二酸化炭素または他の好適なガス等の好適な噴射剤とを含むことになる。加えて、医薬組成物は、化合物１と、粉末吸入器において使用するために好適な散剤を含む、カプセルまたはカートリッジ（例えば、ゼラチン製）の形態であってよい。好適な散剤基剤は、例として、ラクトースまたはデンプンを含む。
【００９３】
下記の非限定的な例は、本発明の代表的な医薬組成物を例証する。
【００９４】
錠剤経口固体剤形
化合物１または薬学的に許容されるその塩を、微結晶性セルロース、ポリビニルピロリドンおよびクロスカルメロースナトリウムと、４：５：１：１の比で乾式混和し、錠剤に圧縮して、錠剤１個当たり例えば５ｍｇ、２０ｍｇまたは４０ｍｇの活性剤の単位投薬量を提供する。
【００９５】
カプセル剤経口固体剤形
化合物１または薬学的に許容されるその塩を、微結晶性セルロース、ポリビニルピロリドンおよびクロスカルメロースナトリウムと、４：５：１：１の比で、湿式造粒によって組み合わせ、ゼラチンまたはヒドロキシプロピルメチルセルロースカプセルに充填して、１個のカプセル剤当たり例えば５ｍｇ、２０ｍｇまたは４０ｍｇの活性剤の単位投薬量を提供する。
【００９６】
液体製剤
化合物１（０．１％）、水（９８．９％）およびアスコルビン酸（１．０％）を含む液体製剤は、本発明の化合物を、水およびアスコルビン酸の混合物に添加することによって形成される。
【００９７】
腸溶コーティング経口剤形
化合物１を、ポリビニルピロリドンを含有する水溶液に溶解し、微結晶性セルロースまたは糖ビーズ上に、１：５ｗ／ｗ  活性剤：ビーズの比でスプレーコーティングし、次いで、アクリルコポリマーを含むおよそ５％重量増加の腸溶コーティングを塗布する。腸溶コーティングビーズをゼラチンまたはヒドロキシプロピルメチルセルロースカプセルに充填して、１個のカプセル剤当たり例えば３０ｍｇの活性剤の単位投薬量を提供する。
【００９８】
腸溶コーティング経口剤形
Ｅｕｄｒａｇｉｔ−Ｌ（登録商標）およびＥｕｄｒａｇｉｔ−Ｓ（登録商標）の組合せまたは酢酸コハク酸ヒドロキシプロピルメチルセルロースを含む腸溶コーティングを、上述した錠剤経口剤形またはカプセル剤経口剤形に塗布する。
【００９９】
眼内注射のための水性製剤
各１ｍＬの滅菌水性懸濁剤は、５ｍｇから５０ｍｇまでの化合物１、等張性のための塩化ナトリウム、保存剤としての０．９９％（ｗ／ｖ）ベンジルアルコール、０．７５％カルボキシメチルセルロースナトリウムおよび０．０４％ポリソルベートを含む。ｐＨを５から７．５に調整するために、水酸化ナトリウムまたは塩酸が含まれてよい。
【０１００】
眼内注射のための水性製剤
滅菌保存剤フリー水性懸濁剤は、１０ｍＭリン酸ナトリウム、４０ｍＭ塩化ナトリウム、０．０３％ポリソルベート２０および５％スクロース中に、５ｍｇ／ｍＬから５０ｍｇ／ｍＬまでの化合物１を含む。
【０１０１】
局所投与のための軟膏製剤
化合物１を、ペトロラタム、Ｃ８〜Ｃ１０トリグリセリド、ヒドロキシステアリン酸オクチルおよびＮ−メチルピロリドンと、ある比で組み合わせて、０．０５重量％から５重量％の活性剤を含有する組成物を提供する。
【０１０２】
局所投与のための軟膏製剤
化合物１を、白色ペトロラタム、プロピレングリコール、モノ−およびジ−グリセリド、パラフィン、ブチル化ヒドロキシトルエンならびにエデト酸カルシウム二ナトリウムと、ある比で組み合わせて、０．０５重量％から５重量％の活性剤を含有する組成物を提供する。
【０１０３】
局所投与のための軟膏製剤
化合物１を、鉱油、パラフィン、炭酸プロピレン、白色ペトロラタムおよび白色ワックスと組み合わせて、０．０５重量％から５重量％の活性剤を含有する組成物を提供する。
【０１０４】
局所投与のためのクリーム製剤
鉱油を、化合物１、プロピレングリコール、パルミチン酸イソプロピル、ポリソルベート６０、セチルアルコール、ソルビタンモノステアレート、ポリオキシル４０ステアレート、ソルビン酸、メチルパラベンおよびプロピルパラベンと組み合わせて、油相を形成し、これを、精製水と、せん断混和によって組み合わせて、０．０５重量％から５重量％の活性剤を含有する組成物を提供する。
【０１０５】
局所投与のためのクリーム製剤
化合物１、ベンジルアルコール、セチルアルコール、クエン酸無水物、モノおよびジ−グリセリド、オレイルアルコール、プロピレングリコール、セトステアリル硫酸ナトリウム、水酸化ナトリウム、ステアリルアルコール、トリグリセリドおよび水を含むクリーム製剤は、０．０５重量％から５重量％の活性剤を含有する。
【０１０６】
局所投与のためのクリーム製剤
化合物１、セトステアリルアルコール、ミリスチン酸イソプロピル、プロピレングリコール、セトマクロゴール１０００、ジメチコン３６０、クエン酸、クエン酸ナトリウムおよび精製水を、保存剤としてのイミド尿素、メチルパラベンおよびプロピルパラベンとともに含むクリーム製剤は、０．０５重量％から５重量％の活性剤を含有する。
【０１０７】
乾燥粉末組成物
微粉化した化合物１（１ｇ）を、粉砕ラクトース（２５ｇ）と混和する。次いで、この混和された混合物を、剥離可能なブリスターパックの個々のブリスターに、用量当たり約０．１ｍｇから約４ｍｇの間の化合物１を提供するために十分な量で充填する。乾燥粉末吸入器を使用して、ブリスターの内容物を投与する。
【０１０８】
定量吸入器組成物
レシチン（０．２ｇ）を脱塩水（２００ｍＬ）に溶解することによって調製された溶液に、微粉化した化合物１（１０ｇ）を分散させる。得られた懸濁物をスプレードライし、次いで、微粉化して、約１．５μｍ未満の平均直径を有する粒子を含む微粉化された組成物を形成する。次いで、微粉化された組成物を、定量吸入器によって投与された場合に用量当たり約０．１ｍｇから約４ｍｇの化合物１を提供するために十分な量で、加圧した１，１，１，２−テトラフルオロエタンを含有する定量吸入器カートリッジに充填する。
【０１０９】
ネブライザー組成物
化合物１（２５ｍｇ）を、１．５〜２．５当量の塩酸を含有する溶液に溶解し、続いて、ｐＨを３．５から５．５に調整するための水酸化ナトリウムおよび３重量％のグリセロールを添加する。すべての成分が溶解するまで、溶液をよく撹拌する。用量当たり約０．１ｍｇから約４ｍｇの化合物１を提供するネブライザーデバイスを使用して、溶液を投与する。
【０１１０】
有用性
化合物１は、ＪＡＫファミリーの酵素：ＪＡＫ１、ＪＡＫ２、ＪＡＫ３およびＴＹＫ２の強力阻害剤であることが示されている。
【０１１１】
眼疾患
多くの眼疾患は、ＪＡＫ−ＳＴＡＴ経路に依拠する炎症促進性サイトカインの上昇に関連することが示されている。化合物１は４つすべてのＪＡＫ酵素で強力な阻害を呈することから、ＪＡＫを介してシグナル伝達する多数のサイトカイン（ＩＬ−６、ＩＬ−２およびＩＦＮ−γ等）のシグナル伝達および病原性作用を強力に阻害すること、ならびに、その産生がＪＡＫ−ＳＴＡＴ経路シグナル伝達によって推進される他のサイトカイン（ＭＣＰ−１およびＩＰ−１０等）の増大を防止することが期待される。
【０１１２】
特に、化合物１は、サイトカイン上昇の下流効果の阻害を登録するアッセイを含むアッセイ３から６において記述されている細胞アッセイにおけるＩＬ−６、ＩＬ−２およびＩＦＮγシグナル伝達の阻害について、６．４またはそれよりも大きいｐＩＣ５０値（４００ｎＭまたはそれ未満のＩＣ５０値）を呈した。
【０１１３】
アッセイ７の薬物動態研究は、単回硝子体内注射後のウサギの目における持続的曝露および硝子体組織において観察されたものよりも少なくとも３桁低い血漿中濃度を実証した。
【０１１４】
さらに、化合物１の硝子体内投薬は、ラット網膜／脈絡膜組織におけるＩＬ−６誘発性ｐＳＴＡＴ３の有意な阻害ならびにウサギ硝子体および網膜／脈絡膜組織におけるＩＦＮ−γ誘発性ＩＰ−１０の有意かつ持続的な阻害を実証している。化合物１の硝子体内投薬は、ウサギにおけるＩＦＮ−γ誘発性ｐＳＴＡＴ１の有意かつ持続的な阻害を実証している。
【０１１５】
有意な全身レベルの非存在下での持続的な眼内ＪＡＫ阻害は、全身的に推進される有害作用なしに、目において強力な局所抗炎症活性をもたらすであろうことが期待される。故に、化合物１は、ブドウ膜炎、糖尿病性網膜症、糖尿病性黄斑浮腫、ドライアイ疾患、加齢黄斑変性、網膜静脈閉塞およびアトピー性角結膜炎を含むがこれらに限定されない若干数の眼疾患において有益であることが期待される。
【０１１６】
特に、ブドウ膜炎（ＨｏｒａｉおよびＣａｓｐｉ、Ｊ  Ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎ  Ｃｙｔｏｋｉｎｅ  Ｒｅｓ、２０１１年、３１巻、７３３〜７４４頁）、糖尿病性網膜症（Ａｂｃｏｕｗｅｒ、Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ｃｅｌｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌ、２０１３年、付録１、１〜１２頁）、糖尿病性黄斑浮腫（Ｓｏｈｎら、Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｏｐｔｈａｌｍｏｌｏｇｙ、２０１１年、１５２巻、６８６〜６９４頁）、ドライアイ疾患（Ｓｔｅｖｅｎｓｏｎら、Ａｒｃｈ  Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌ、２０１２年、１３０巻、９０〜１００頁）、網膜静脈閉塞（Ｓｈｃｈｕｋｏら、Ｉｎｄｉａｎ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌｏｇｙ、２０１５年、６３（１２）、９０５〜９１１頁）および加齢黄斑変性（Ｋｎｉｃｋｅｌｂｅｉｎら、Ｉｎｔ  Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌ  Ｃｌｉｎ、２０１５年、５５巻（３号）、６３〜７８頁）は、ＪＡＫ−ＳＴＡＴ経路を介してシグナル伝達するある特定の炎症促進性サイトカインの上昇を特徴とする。したがって、化合物１は、関連する眼炎症を緩和し疾患進行を逆転させる、またはこれらの疾患における症状軽減を提供することができる場合がある。
【０１１７】
一態様では、したがって、本発明は、哺乳動物における眼疾患を処置する方法であって、１−（２−（６−（２−エチル−５−フルオロ−４−ヒドロキシフェニル）−４−フルオロ−１Ｈ−インダゾール−３−イル）−１，４，６，７−テトラヒドロ−５Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］ピリジン−５−イル）−２−モルホリノエタン−１−オンまたは薬学的に許容されるその塩と、医薬担体とを含む医薬組成物を、哺乳動物の目に投与するステップを含む、方法を提供する。一態様では、眼疾患は、ブドウ膜炎、糖尿病性網膜症、糖尿病性黄斑浮腫、ドライアイ疾患、加齢黄斑変性、網膜静脈閉塞またはアトピー性角結膜炎である。一態様では、方法は、化合物１を硝子体内注射によって投与するステップを含む。
【０１１８】
炎症性皮膚疾患
例えば、アトピー性皮膚炎は、ＪＡＫ−ＳＴＡＴ経路に依拠する炎症促進性サイトカイン、特に、ＩＬ−４、ＩＬ−５、ＩＬ−１０、ＩＬ−１３およびＩＦＮγの上昇に関連するとされてきた。上記で引用した細胞アッセイにおけるサイトカイン阻害に加えて、化合物１は、アッセイ２で記述される通り、ＩＬ−１３の阻害について１３ｎＭのＩＣ５０値を呈した。さらに、化合物１のモデルのクリームおよび軟膏製剤は、検出可能な血漿曝露なしに、マウスにおいては少なくとも２日間およびミニブタにおいては少なくとも７日間にわたって、持続的な皮膚レベルを実証している。
【０１１９】
顕著な全身レベルの非存在下での持続的な皮膚レベルの化合物１は、全身的な有害作用を推進せずに、皮膚において強力な局所的抗炎症活性および鎮痒活性をもたらすと期待される。したがって、化合物１は、円形脱毛症、白斑、皮膚Ｔ細胞リンパ腫、結節性痒疹、扁平苔癬、原発性限局性皮膚アミロイド症、水疱性類天疱瘡、移植片対宿主病の皮膚徴候、類天疱瘡、円板状ループス、環状肉芽腫、慢性単純性苔癬、外陰部／陰嚢／肛門そう痒症、硬化性苔癬、ヘルペス後神経痛そう痒、扁平毛孔性苔癬および脱毛性毛嚢炎（ｆｏｌｉｃｕｌｉｔｉｓ  ｄｅｃａｌｖａｎｓ）を含むがこれらに限定されない、多数の皮膚炎症またはそう痒状態において有益と期待される。特に、円形脱毛症（Ｘｉｎｇら、Ｎａｔ  Ｍｅｄ．、２０１４年、Ｓｅｐ；２０（９）：１０４３〜９頁）、白斑（Ｃｒａｉｇｌｏｗら、ＪＡＭＡ  Ｄｅｒｍａｔｏｌ．  ２０１５年、Ｏｃｔ；１５１（１０）：１１１０〜２頁）、皮膚Ｔ細胞リンパ腫（Ｎｅｔｃｈｉｐｏｒｏｕｋら、Ｃｅｌｌ  Ｃｙｃｌｅ．  ２０１４年；１３（２１）：３３３１〜５頁）結節性痒疹（Ｓｏｎｋｏｌｙら、Ｊ  Ａｌｌｅｒｇｙ  Ｃｌｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．、２００６年、Ｆｅｂ；１１７（２）：４１１〜７頁）、扁平苔癬（Ｗｅｌｚ−Ｋｕｂｉａｋら、Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  Ｒｅｓ．、２０１５年；２０１５：８５４７４７）、原発性限局性皮膚アミロイド症（Ｔａｎａｋａら、Ｂｒ  Ｊ  Ｄｅｒｍａｔｏｌ．、２００９年  Ｄｅｃ；１６１（６）：１２１７〜２４頁）、水疱性類天疱瘡（Ｆｅｌｉｃｉａｎｉら、Ｉｎｔ  Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｐａｔｈｏｌ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．、１９９９年  Ｍａｙ−Ａｕｇ；１２（２）：５５〜６１頁）および移植片対宿主病の皮膚徴候（Ｏｋｉｙａｍａら、Ｊ  Ｉｎｖｅｓｔ  Ｄｅｒｍａｔｏｌ．、２０１４年  Ａｐｒ；１３４（４）：９９２〜１０００頁）は、ＪＡＫ活性化を介してシグナル伝達するある特定のサイトカインの上昇を特徴とする。したがって、化合物１は、これらのサイトカインによって推進された関連する皮膚炎症またはそう痒症を緩和することができる場合がある。特に、化合物１は、アトピー性皮膚炎および他の炎症性皮膚疾患の処置に有用となることが期待され得る。
【０１２０】
一態様では、したがって、本発明は、哺乳動物（例えば、ヒト）における炎症性皮膚疾患を処置する方法であって、１−（２−（６−（２−エチル−５−フルオロ−４−ヒドロキシフェニル）−４−フルオロ−１Ｈ−インダゾール−３−イル）−１，４，６，７−テトラヒドロ−５Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］ピリジン−５−イル）−２−モルホリノエタン−１−オンまたはその薬学的に許容される塩と、医薬担体とを含む医薬組成物を、哺乳動物の皮膚に塗布するステップを含む、方法を提供する。一態様では、炎症性皮膚疾患は、アトピー性皮膚炎である。
【０１２１】
化合物１は、炎症性皮膚疾患を処置するために、ムピロシンおよびフシジン酸等のグラム陽性抗生物質と組み合わせて使用してもよい。一態様では、したがって、本発明は、哺乳動物における炎症性皮膚疾患を処置する方法であって、化合物１およびグラム陽性抗生物質を、哺乳動物の皮膚に塗布するステップを含む、方法を提供する。別の態様では、本発明は、１−（２−（６−（２−エチル−５−フルオロ−４−ヒドロキシフェニル）−４−フルオロ−１Ｈ−インダゾール−３−イル）−１，４，６，７−テトラヒドロ−５Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］ピリジン−５−イル）−２−モルホリノエタン−１−オンまたは薬学的に許容されるその塩と、グラム陽性抗生物質と、薬学的に許容される担体とを含む、医薬組成物を提供する。
【０１２２】
呼吸器疾患
ＪＡＫ−ＳＴＡＴ経路を介してシグナル伝達するサイトカイン、特に、ＩＬ−２、ＩＬ−３、ＩＬ−４、ＩＬ−５、ＩＬ−６、ＩＬ−９、ＩＬ−１１、ＩＬ−１３、ＩＬ−２３、ＩＬ−３１、ＩＬ−２７、胸腺間質性リンパ球新生因子（ＴＳＬＰ）、インターフェロン−γ（ＩＦＮγ）および顆粒球マクロファージコロニー刺激因子（ＧＭ−ＣＳＦ）は、喘息の炎症および他の炎症性呼吸器疾患にも関係するとされてきた。上述した通り、化合物１は、ＪＡＫ１、ＪＡＫ２、ＪＡＫ３およびＴＹＫ２酵素の強力阻害剤であることが示され、細胞アッセイにおいて炎症促進性サイトカインの強力な阻害も実証している。
【０１２３】
ＪＡＫ阻害剤の抗炎症活性は、喘息の前臨床モデルにおいて確実に実証されている（Ｍａｌａｖｉｙａら、Ｉｎｔ  Ｉｍｍｕｎｏｐｈａｒｍａｃｏｌ、２０１０年、１０巻、８２９〜８３６頁；Ｍａｔｓｕｎａｇａら、Ｂｉｏｃｈｅｍ  ａｎｄ  Ｂｉｏｐｈｙｓ  Ｒｅｓ  Ｃｏｍｍｕｎ、２０１１年、４０４巻、２６１〜２６７頁；Ｋｕｄｌａｃｚら、Ｅｕｒ  Ｊ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌ、２００８年、５８２巻、１５４〜１６１頁）。したがって、化合物１は、炎症性呼吸器障害、特に、喘息の処置に有用であることが期待される。肺の炎症および線維症は、喘息に加えて、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、嚢胞性線維症（ＣＦ）、肺臓炎、間質性肺疾患（特発性肺線維症を含む）、急性肺傷害、急性呼吸窮迫症候群、気管支炎、肺気腫および閉塞性細気管支炎等の他の呼吸器疾患の特徴である。したがって、化合物１は、慢性閉塞性肺疾患、嚢胞性線維症、肺臓炎、間質性肺疾患（特発性肺線維症を含む）、急性肺傷害、急性呼吸窮迫症候群、気管支炎、肺気腫、閉塞性細気管支炎およびサルコイドーシスの処置にも有用であることが期待される。
【０１２４】
一態様では、したがって、本発明は、哺乳動物（例えば、ヒト）における呼吸器疾患を処置する方法であって、哺乳動物に、１−（２−（６−（２−エチル−５−フルオロ−４−ヒドロキシフェニル）−４−フルオロ−１Ｈ−インダゾール−３−イル）−１，４，６，７−テトラヒドロ−５Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］ピリジン−５−イル）−２−モルホリノエタン−１−オンまたは薬学的に許容されるその塩を投与するステップを含む、方法を提供する。
【０１２５】
１つの態様において、呼吸器疾患は、喘息、慢性閉塞性肺疾患、嚢胞性線維症、肺臓炎、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、嚢胞性線維症（ＣＦ）、肺臓炎、間質性肺疾患（特発性肺線維症を含む）、急性肺傷害、急性呼吸促迫症候群、気管支炎、気腫、閉塞性細気管支炎またはサルコイドーシスである。別の態様において、呼吸器疾患は、喘息または慢性閉塞性肺疾患である。
【０１２６】
さらなる態様では、呼吸器疾患は、肺感染症、蠕虫感染症、肺動脈性高血圧症、サルコイドーシス、リンパ脈管筋腫症、気管支拡張症または浸潤性肺疾患である。さらに別の態様では、呼吸器疾患は、薬物誘発性肺臓炎、真菌誘発性肺臓炎、アレルギー性気管支肺アスペルギルス症、過敏性肺臓炎、好酸球性多発血管炎性肉芽腫症、特発性急性好酸球性肺炎、特発性慢性好酸球性肺炎、好酸球増加症候群、レフレル症候群、閉塞性細気管支炎器質化肺炎または免疫チェックポイント阻害剤誘発性肺臓炎である。
【０１２７】
本発明は、哺乳動物における喘息を処置する方法であって、哺乳動物に、１−（２−（６−（２−エチル−５−フルオロ−４−ヒドロキシフェニル）−４−フルオロ−１Ｈ−インダゾール−３−イル）−１，４，６，７−テトラヒドロ−５Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］ピリジン−５−イル）−２−モルホリノエタン−１−オンまたは薬学的に許容されるその塩と、薬学的に許容される担体とを含む、医薬組成物を投与するステップを含む、方法をさらに提供する。
【０１２８】
化合物１または薬学的に許容されるその塩は、好酸球性肺疾患を処置するためにも有用であり得る。好酸球性気道炎症は、好酸球性肺疾患と総称される疾患の特徴的特色である（Ｃｏｔｔｉｎら、Ｃｌｉｎ．  Ｃｈｅｓｔ．  Ｍｅｄ．、２０１６年、３７巻（３号）、５３５〜５６頁）。好酸球性疾患は、ＩＬ−４、ＩＬ−１３およびＩＬ−５シグナル伝達に関連するとされてきた。好酸球性肺疾患は、感染症（とりわけ蠕虫感染症）、薬物誘発性肺臓炎（例えば、抗生物質、フェニトインまたはｌ−トリプトファン等の治療薬によって誘発されるもの）、真菌誘発性肺臓炎（例えば、アレルギー性気管支肺アスペルギルス症）、過敏性肺臓炎および好酸球性多発血管炎性肉芽腫症（以前はチャーグ・ストラウス症候群として公知であった）を含む。未知の病因の好酸球性肺疾患は、特発性急性好酸球性肺炎（ｐｎｅｕｍｏｎｉ）、特発性慢性好酸球性肺炎、好酸球増加症候群およびレフレル症候群を含む。
【０１２９】
化合物１または薬学的に許容されるその塩は、ＰＡＨを処置するためにも有用であり得る。ＩＬ−６遺伝子における多型は、ＩＬ−６レベル上昇および肺動脈性高血圧症（ＰＡＨ）を発症するリスクの増大に関連するとされてきた（Ｆａｎｇら、Ｊ  Ａｍ  Ｓｏｃ  Ｈｙｐｅｒｔｅｎｓ．、２０１７年、１１巻（３号）、１７１〜１７７頁）。ＰＡＨにおけるＩＬ−６の役割を裏付けるように、ＩＬ−６受容体鎖ｇｐ１３０の阻害は、ＰＡＨのラットモデルにおいて疾患を寛解させた（Ｈｕａｎｇら、Ｃａｎ  Ｊ  Ｃａｒｄｉｏｌ．、２０１６年、３２巻（１１号）、１３５６．ｅ１〜１３５６．ｅ１０）。
【０１３０】
化合物１または薬学的に許容されるその塩は、サルコイドーシスおよびリンパ脈管筋腫症等の非アレルギー性肺疾患を処置するためにも有用であり得る。ＩＦＮγ、ＩＬ−１２およびＩＬ−６等のサイトカインは、サルコイドーシスおよびリンパ脈管筋腫症等の広範な非アレルギー性肺疾患に関係するとされてきた（Ｅｌ−Ｈａｓｈｅｍｉｔｅら、Ａｍ．  Ｊ．  Ｒｅｓｐｉｒ．  Ｃｅｌｌ  Ｍｏｌ．  Ｂｉｏｌ．、２００５年、３３巻、２２７〜２３０頁およびＥｌ−Ｈａｓｈｅｍｉｔｅら、Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．、２００４年、６４巻、３４３６〜３４４３頁）。
【０１３１】
化合物１または薬学的に許容されるその塩は、慢性好中球性炎症に関連する疾患である気管支拡張症および浸潤性肺疾患を処置するためにも有用であり得る。ある特定のサイトカインは、好中球性炎症に関連する（例えば、ＩＬ−６、ＩＦＮγ）。
【０１３２】
病理学的Ｔ細胞活性化は、複数の呼吸器疾患の病因において重大である。自己反応性Ｔ細胞は、閉塞性細気管支炎器質化肺炎（ＣＯＳとも称される）において役割を果たす。ＣＯＳと同様に、肺移植拒絶反応の病因は、移植ドナー肺によるレシピエントＴ細胞の異常なＴ細胞活性化と連関している。肺移植拒絶反応は、初期に原発性移植片機能不全（ＰＧＤ）、器質化肺炎（ＯＰ）、急性拒絶反応（ＡＲ）もしくはリンパ球性細気管支炎（ＬＢ）として出現し得るか、または肺移植数年後に慢性肺同種移植片機能不全（ＣＬＡＤ）として出現し得る。ＣＬＡＤは、以前は閉塞性細気管支炎（ＢＯ）として公知であったが、現在は、ＢＯ、拘束性ＣＬＡＤ（ｒＣＬＡＤまたはＲＡＳ）および好中球性同種移植片機能不全を含めた、異なる病理学的徴候を有し得る症候群とみなされている。慢性肺同種移植片機能不全（ＣＬＡＤ）は、移植肺に機能性を漸進的に失わせることから、肺移植レシピエントの長期管理における主要課題である（Ｇａｕｔｈｉｅｒら、Ｃｕｒｒ  Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔ  Ｒｅｐ．、２０１６年、３巻（３号）、１８５〜１９１頁）。ＣＬＡＤは、処置に対して応答性が乏しく、したがって、この状態を予防するまたは処置することができる有効な化合物が依然として必要である。ＩＦＮγおよびＩＬ−５等のいくつかのＪＡＫ依存性サイトカインは、ＣＬＡＤおよび肺移植拒絶反応において上方調節される（Ｂｅｒａｓｔｅｇｕｉら、Ｃｌｉｎ  Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔ．、２０１７年、３１巻、ｅ１２８９８）。その上、ＪＡＫ依存性ＩＦＮシグナル伝達の下流にあるＣＸＣＬ９およびＣＸＣＬ１０等のＣＸＣＲ３ケモカインの高い肺レベルは、肺移植患者におけるより悪い転帰と連関している（Ｓｈｉｎｏら、ＰＬＯＳ  Ｏｎｅ、２０１７年、１２巻（７号）、ｅ０１８０２８１）。ＪＡＫ阻害は、腎移植拒絶反応において有効であることが示されている（Ｖｉｃｅｎｔｉら、Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ、２０１２年、１２巻、２４４６〜５６頁）。したがって、化合物１は、肺移植拒絶反応およびＣＬＡＤを処置するまたは予防する際に有効である潜在性を有し得る。肺移植拒絶反応の基礎として記述されているのと同様のＴ細胞活性化事象も、造血幹細胞移植後に出現することができる肺移植片対宿主病（ＧＶＨＤ）の主な推進力とみなされる。ＣＬＡＤと同様に、肺ＧＶＨＤは、極めて乏しい転帰を持つ慢性進行状態であり、処置は現在のところ承認されていない。サルベージ療法として全身性ＪＡＫ阻害剤ルキソリチニブを受けた、ステロイド不応性急性または慢性ＧＶＨＤを持つ９５人の患者の遡及的な多施設調査研究は、肺ＧＶＨＤを持つ人々を含む大多数の患者におけるルキソリチニブに対する完全または部分的な応答を実証した（Ｚｅｉｓｅｒら、Ｌｅｕｋｅｍｉａ、２０１５年、２９巻、１０号、２０６２〜６８頁）。より最近では、別のＴ細胞媒介性肺疾患である免疫チェックポイント阻害剤誘発性肺臓炎が、免疫チェックポイント阻害剤の使用増大とともに現れた。これらのＴ細胞刺激剤で処置されたがん患者において、致死的肺臓炎が発症し得る。化合物１または薬学的に許容されるその塩は、これらのあまり便宜の図られていない重篤��呼吸器疾患のための新規処置を提示する潜在性を有する。
【０１３３】
消化器疾患
ＪＡＫ阻害剤として、化合物１または薬学的に許容されるその塩は、様々な他の疾患にも有用であり得る。化合物１または薬学的に許容されるその塩は、炎症性腸疾患、潰瘍性大腸炎（直腸Ｓ状結腸炎、全結腸炎、潰瘍性直腸炎および左側大腸炎）、クローン病、膠原線維性大腸炎、リンパ球性大腸炎、ベーチェット病、セリアック病、免疫チェックポイント阻害剤誘発性大腸炎、回腸炎、好酸球性食道炎、移植片対宿主病関連大腸炎および感染性大腸炎を含むがこれらに限定されない様々な胃腸炎症の兆候に有用であり得る。潰瘍性大腸炎（Ｒｅｉｍｕｎｄら、Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ、１９９６年、１６巻、１４４〜１５０頁）、クローン病（Ｗｏｙｗｏｄｔら、Ｅｕｒ  Ｊ  Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌｏｇｙ  Ｈｅｐａｔｏｌｏｇｙ、１９９９年、１１巻、２６７〜２７６頁）、膠原線維性大腸炎（Ｋｕｍａｗａｔら、Ｍｏｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ、２０１３年、５５巻、３５５〜３６４頁）、リンパ球性大腸炎（Ｋｕｍａｗａｔら、２０１３年）、好酸球性食道炎（Ｗｅｉｎｂｒａｎｄ−Ｇｏｉｃｈｂｅｒｇら、Ｉｍｍｕｎｏｌ  Ｒｅｓ、２０１３年、５６巻、２４９〜２６０頁）、移植片対宿主病関連大腸炎（Ｃｏｇｈｉｌｌら、Ｂｌｏｏｄ、２００１年、１１７巻、３２６８〜３２７６頁）、感染性大腸炎（Ｓｔａｌｌｍａｃｈら、Ｉｎｔ  Ｊ  Ｃｏｌｏｒｅｃｔａｌ  Ｄｉｓ、２００４年、１９巻、３０８〜３１５頁）、ベーチェット病（Ｚｈｏｕら、Ａｕｔｏｉｍｍｕｎ  Ｒｅｖ、２０１２年、１１巻、６９９〜７０４頁）、セリアック病（ｄｅ  Ｎｉｔｔｏら、Ｗｏｒｌｄ  Ｊ  Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌ、２００９年、１５巻、４６０９〜４６１４頁）、免疫チェックポイント阻害剤誘発性大腸炎（例えば、ＣＴＬＡ−４阻害剤誘発性大腸炎；（Ｙａｎｏら、Ｊ  Ｔｒａｎｓｌａｔｉｏｎ  Ｍｅｄ、２０１４年、１２巻、１９１頁）、ＰＤ−１−またはＰＤ−Ｌ１阻害剤誘発性大腸炎）および回腸炎（Ｙａｍａｍｏｔｏら、Ｄｉｇ  Ｌｉｖｅｒ  Ｄｉｓ、２００８年、４０巻、２５３〜２５９頁）は、ある特定の炎症促進性サイトカインレベルの上昇を特徴とする。多くの炎症促進性サイトカインは、ＪＡＫ活性化を介してシグナル伝達するため、化合物１または薬学的に許容されるその塩は、炎症を緩和し、症状軽減を提供することができる場合がある。特に、化合物１または薬学的に許容されるその塩は、潰瘍性大腸炎の鎮静の誘導および維持のため、ならびに、クローン病、免疫チェックポイント阻害剤誘発性大腸炎、および移植片対宿主病における胃腸への有害作用の処置のために、有用であり得る。一態様では、したがって、本発明は、哺乳動物（例えば、ヒト）における胃腸の炎症性疾患を処置する方法であって、哺乳動物に、化合物１もしくはその薬学的に許容される塩、または薬学的に許容される担体と化合物１もしくはその薬学的に許容される塩とを含む医薬組成物を投与するステップを含む、方法を提供する。
【０１３４】
他の疾患
化合物１またはその薬学的に許容される塩は、他の炎症性疾患、自己免疫疾患またはがん等の他の疾患を処置するためにも有用であり得る。
【０１３５】
化合物１またはその薬学的に許容される塩は、関節炎、関節リウマチ、若年性関節リウマチ、移植拒絶反応、眼球乾燥症、乾癬性関節炎、糖尿病、インスリン依存性糖尿病、運動ニューロン病、骨髄異形成症候群、疼痛、サルコペニア、悪液質、敗血性ショック、全身性エリテマトーデス、白血病、慢性リンパ球性白血病、慢性骨髄性白血病、急性リンパ芽球性白血病、急性骨髄性白血病、強直性脊椎炎、骨髄線維症、Ｂ細胞リンパ腫、肝細胞癌、ホジキン病、乳がん、多発性骨髄腫、黒色腫、非ホジキンリンパ腫、非小細胞肺がん、卵巣明細胞癌、卵巣腫瘍、膵臓腫瘍、真性赤血球増加症、シェーグレン症候群、軟部組織肉腫、肉腫、脾腫、Ｔ細胞リンパ腫およびサラセミアメジャーのうちの１つまたは複数を処置するために有用であり得る。
【０１３６】
組合せ療法
本開示の化合物または薬学的に許容されるその塩は、疾患を処置するために同じ機序によってまたは異なる機序によって作用する１つまたは複数の作用物質と組み合わせて使用してよい。異なる作用物質を、順次にまたは同時に、別個の組成物でまたは同じ組成物で投与してよい。組合せ療法のための作用物質の有用なクラスは、抗血管新生薬、ステロイド、抗炎症、血漿カリクレイン阻害剤、胎盤増殖因子リガンド阻害剤、ＶＥＧＦ−Ａリガンド阻害剤、アンジオポエチンリガンド−２阻害剤、タンパク質チロシンホスファターゼベータ阻害剤、Ｔｅｋチロシンキナーゼ受容体刺激剤、カルシニューリン阻害剤、ＶＥＧＦリガンド阻害剤、ｍＴＯＲ複合体１阻害剤、ｍＴＯＲ阻害剤、ＩＬ−１７アンタゴニスト、カルモジュリン変調剤、ＦＧＦ受容体アンタゴニスト、ＰＤＧＦ受容体アンタゴニスト、ＶＥＧＦ受容体アンタゴニスト、ＴＮＦアルファリガンド阻害剤、ＴＮＦ結合剤、プロテオグリカン４刺激剤、ＶＥＧＦ−Ｃリガンド阻害剤、ＶＥＧＦ−Ｄリガンド阻害剤、ＣＤ１２６アンタゴニスト、補体カスケード阻害剤、グルココルチコイドアゴニスト、補体Ｃ５因子阻害剤、カンナビノイド受容体アンタゴニスト、スフィンゴシン−１−リン酸受容体−１変調剤、スフィンゴシン−１−リン酸受容体−３変調剤、スフィンゴシン−１−リン酸受容体−４変調剤、スフィンゴシン−１−リン酸受容体−５変調剤、アセトアルデヒドデヒドロゲナーゼ阻害剤、Ｆｌｔ３チロシンキナーゼ阻害剤、Ｋｉｔチロシンキナーゼ阻害剤、タンパク質キナーゼＣ阻害剤、副腎皮質刺激ホルモンリガンド、ストロマ細胞由来因子１リガンド阻害剤、免疫グロブリンＧ１アゴニスト；インターロイキン−１ベータリガンド阻害剤、ムチン刺激剤；核内因子カッパＢ変調剤、細胞毒性Ｔリンパ球タンパク質−４刺激剤、Ｔ細胞表面糖タンパク質ＣＤ２８阻害剤、リポタンパク質リパーゼ刺激剤；ＰＰＡＲアルファアゴニスト、アデノシンＡ３受容体アゴニスト、アンジオテンシンＩＩ受容体アンタゴニスト、ＶＥＧＦ受容体アンタゴニスト、インターフェロンベータリガンド、ＳＭＡＤ−２変調剤；ＴＧＦベータ１リガンド阻害剤、ソマトスタチン受容体アゴニスト、ＩＬ−２受容体アルファサブユニット阻害剤、ＶＥＧＦ−Ｂリガンド阻害剤、チモシンベータ４リガンド、アンジオテンシンＩＩ  ＡＴ−１受容体アンタゴニスト、ＣＣＲ２ケモカインアンタゴニスト、膜銅アミンオキシダーゼ阻害剤、ＣＤ１１ａアンタゴニスト、ＩＣＡＭ−１阻害剤、インスリン様増殖因子１アンタゴニスト、カリクレイン阻害剤、フコシルトランスフェラーゼ６刺激剤、ＧＤＰフコースシンターゼ（ｓｙｎｔｈｅｔａｓｅ）変調剤、ＧＨＲ遺伝子阻害剤、ＩＧＦ１遺伝子阻害剤、ＶＥＧＦ−１受容体アンタゴニスト、アルブミンアゴニスト、ＩＬ−２アンタゴニスト、ＣＳＦ−１アンタゴニスト；ＰＤＧＦ受容体アンタゴニスト、ＶＥＧＦ−２受容体アンタゴニスト、ｍＴＯＲ阻害剤、ＰＰＡＲアルファアゴニスト、Ｒｈｏ  ＧＴＰアーゼ阻害剤、Ｒｈｏ関連タンパク質キナーゼ阻害剤、補体Ｃ３阻害剤、ＥＧＲ−１転写因子阻害剤、核因子赤血球系２関連因子変調剤、核内因子カッパＢ阻害剤、インテグリンアルファ−Ｖ／ベータ−３アンタゴニスト、エ��スロポエチン受容体アゴニスト、グルカゴン様ペプチド１アゴニスト、ＴＮＦＲＳＦ１Ａ遺伝子刺激剤、アンジオポエチンリガンド−２阻害剤、アルファ−２抗プラスミン阻害剤、コラーゲンアンタゴニスト、フィブロネクチン阻害剤、ラミニンアンタゴニスト、プラスミン刺激剤、神経増殖因子リガンド、ＦＧＦ１受容体アンタゴニスト、ＦＧＦ３受容体アンタゴニスト、ｉｔｋチロシンキナーゼ阻害剤、Ｌｃｋチロシンキナーゼ阻害剤、Ｌｔｋチロシンキナーゼ受容体阻害剤、ＰＤＧＦ受容体アルファアンタゴニスト、ＰＤＧＦ受容体ベータアンタゴニスト、タンパク質チロシンキナーゼ阻害剤、ＶＥＧＦ−３受容体アンタゴニスト、膜銅アミンオキシダーゼ阻害剤、ソマトスタチン２受容体アゴニスト、ソマトスタチン４受容体アゴニスト、ソマトスタチン５受容体アゴニスト、タンパク質キナーゼＣアルファ阻害剤、タンパク質キナーゼＣベータ阻害剤、タンパク質キナーゼＣデルタ阻害剤タンパク質キナーゼＣイプシロン阻害剤タンパク質キナーゼＣエータ阻害剤、タンパク質キナーゼＣシータ阻害剤、アンキリン変調剤、ムチン刺激剤、Ｐ２Ｙ２プリン受容体アゴニスト、ギャップジャンクションアルファ−１タンパク質阻害剤、ＣＣＲ３ケモカインアンタゴニスト；エオタキシンリガンド阻害剤、アミロライド感受性ナトリウムチャネル阻害剤、ＰＤＧＦ受容体アンタゴニスト、タンパク質チロシンキナーゼ阻害剤、網膜色素上皮タンパク質阻害剤、マトリックスメタロプロテアーゼ阻害剤、ＰＤＧＦ受容体アンタゴニスト、ＰＤＧＦ受容体ベータアンタゴニスト、ＰＤＧＦ−Ｂリガンド阻害剤、成長ホルモン受容体アンタゴニスト、細胞接着分子阻害剤、インテグリン変調剤、ＣＸＣＲ４ケモカインアンタゴニスト、コイルドコイルドメイン含有タンパク質阻害剤、Ｈｓｐ９０変調剤、Ｒｈｏ関連タンパク質キナーゼ阻害剤、ＶＥＧＦ遺伝子阻害剤、エンドグリン阻害剤、ＣＣＲ３ケモカインアンタゴニスト、ｍａｘｉ  Ｋカリウムチャネル変調剤、ｍａｘｉ  Ｋカリウムチャネル刺激剤、ＰＧＦ２アルファアゴニスト、プロスタノイド受容体アゴニスト、電位依存性クロライドチャネル２変調剤、補体Ｃ５ａ受容体アンタゴニスト、イノシン一リン酸デヒドロゲナーゼ阻害剤、インターロイキン１８リガンド阻害剤、ＴＲＰカチオンチャネルＭ８刺激剤、ＣＮＴＦ受容体アゴニスト、ＴＲＰＶ１遺伝子阻害剤、デオキシリボヌクレアーゼＩ刺激剤、ＩＲＳ１遺伝子阻害剤、Ｒｈｏ関連タンパク質キナーゼ阻害剤、ポリＡＤＰリボースポリメラーゼ１阻害剤、ポリＡＤＰリボースポリメラーゼ２阻害剤、ポリＡＤＰリボースポリメラーゼ３阻害剤、バニロイドＶＲ１アゴニスト、ＮＦＡＴ５遺伝子刺激剤、ムチン刺激剤、Ｓｙｋチロシンキナーゼ阻害剤、アルファ２アドレナリン受容体アゴニスト、シクロオキシゲナーゼ阻害剤、アミロイドタンパク質沈着阻害剤、グリコーゲンシンターゼキナーゼ−３阻害剤、ＰＡＲＰ刺激剤、タウ沈着阻害剤、ＤＤＩＴ４遺伝子阻害剤、ヘモグロビン合成変調剤、インターロイキン−１ベータリガンド阻害剤、ＴＮＦアンタゴニスト、ＫＣＮＱ電位依存性カリウムチャネル刺激剤、ＮＭＤＡ受容体アンタゴニスト、シクロオキシゲナーゼ１阻害剤、シクロオキシゲナーゼ阻害剤、���−ＨＴ１ａ受容体アゴニスト、カルシウムチャネル阻害剤、ＦＧＦ−２リガンド変調剤、ホスホイノシタイド３−キナーゼ阻害剤、ＣＤ４４アンタゴニスト、ヒアルロニダーゼ変調剤、ヒアルロン酸アゴニスト、ＩＬ−１アンタゴニスト、Ｉ型ＩＬ−１受容体アンタゴニスト、補体因子Ｐ阻害剤、チューブリンアンタゴニスト、ベータアミロイドアンタゴニスト、ＩＬ２遺伝子刺激剤、Ｉ−カッパＢキナーゼベータ阻害剤、核内因子カッパＢ変調剤、プラスミノーゲンアクチベーター阻害剤１阻害剤、ＦＧＦ−２リガンド、プロテアーゼ変調剤およびコルチコトロピン変調剤を含むがこれらに限定されない。
【０１３７】
本発明のＪＡＫ阻害剤化合物と組み合わせて使用され得る具体的な作用物質は、ラナデルマブ、アフリベルセプト、ＲＧ−７７１６、ＡＫＢ−９７７８、シクロスポリン、ベバシズマブ、エベロリムス、セクキヌマブ、フルオシノロンアセトニド、ＲＰ−１０１、乳酸スクアラミン、組換えヒトルブリシン、ＯＰＴ−３０２、サリルマブ、デキサメタゾン、エクリズマブ、フィンゴリモド、アダリムマブ、レプロキサラップ、ミドスタウリン、コルチコトロピン、オラプテストペゴル（ｏｌａｐｔｅｓｅｄ  ｐｅｇｏｌ）、カナキヌマブ、レコフラボン（ｒｅｃｏｆｌａｖｏｎｅ）、アバタセプト、フェノフィブレート、ピクリデノソン、ＯｐＲｅｇｅｎ、カンデサルタン、ゴリムマブ、ペガプタニブ、インターフェロン−ベータ、ジシテルチド、酢酸オクトレオチド、アネコルタブ、バシリキシマブ、脈絡膜上トリアムシノロンアセトニド、ＲＧＮ−２５９、ジフルプレドナート、ＨＬ−０３６、アバシンカプタドペゴルナトリウム、イルベサルタン、プロパゲルマニウム、トリアムシノロンアセトニド、アジスロマイシン、ＢＩ−１４６７３３５、リフィテグラスト、エタボン酸ロテプレドノール、テプロツムマブ、ＫＶＤ−００１、ＴＺ−１０１、アテシドルセン、Ｎｏｖ−０３、ベバシズマブ、ＡＶＡ−１０１、ＲＵ−１０１、ボクロスポリン、ボロラニブ（ｖｏｒｏｌａｎｉｂ）、シロリムス、コリンフェノフィブレート、ＶＸ−２１０、ＡＰＬ−２、ＣＰＣ−５５１、エラミプレチド、ＳＦ−０１６６、シビネチド、エラミプレチド、リラグルチド、ＥＹＳ−６０６、ネスバクマブ、アフリベルセプト、オクリプラスミン、フィルゴチニブ、セネゲルミン、アディポセル、ブロルシズマブ、ラニビズマブ、アフリベルセプト、パデリポルフィン光線力学的療法、パゾパニブ、ＡＳＰ−８２３２、ベルドレオチド、ソトラスタウリン、アビシパルペゴル（ａｂｉｃｉｐａｒ  ｐｅｇｏｌ）、ジカフォソルテトラナトリウム、ＨＣＢ−１０１９、コンベルセプト、ベルチリムマブ、ＳＨＰ−６５９、ＴＨＲ−３１７、ＡＬＫ−００１、ＰＡＮ−９０８０６、インターフェロンアルファ−２ｂ、フルオシノロン、スニチニブマレート、エミクススタト、ｈＩ−ｃｏｎ１、ＴＢ−４０３、ミノサイクリン、ＭＡ０９−ｈＲＰＥ細胞、ペグプララニブナトリウム、ペグビソマント、ルミネート（ｌｕｍｉｎａｔｅ）、ブリキサフォル、Ｈ−１１２９、カロツキシマブ、ＡＸＰ−１２７５、ラニビズマブ、イソプロピルウノプロストン、テシドルマブ、腸溶コーティングミコフェノール酸ナトリウム、タデキニグアルファ、トリアムシノロンアセトニド、シクロスポリン、ＳＴ−２６６、ＡＶＸ−０１２、ＮＴ−５０１−ＥＣＴ、チバニシラン、ベルテポルフィン、ドルナーゼアルファ、アガニルセン、リパスジル、ルカパリブリン酸塩、ズカプサイシン、テトラチオモリブデート、ジクロフェナク、ＬＨＡ−５１０、ＡＧＮ−１９５２６３、タクロリムス、レバミピド、Ｒ−３４８、ブリモニジン酒石酸塩、ビゾミチン、Ｔ−８９、ＬＭＥ−６３６、ＢＩ−１０２６７０６、リメキソロン、トブラマイシン、ＴＯＰ−１６３０、タラポルフィン、ブロムフェナクナトリウム、トリアムシノロンアセトニド、ダブネチド、エタボン酸ロ��プレドノール、ＸＥＤ−６０、ＥＧ−ミロチン（Ｍｉｒｏｔｉｎ）、ＡＰＤ−２０９、アデノビル、ＰＦ−０４５２３６５５、ヒドロキシカルバミド、ナバメペント、レチナミン、ＣＮＴＯ−２４７６、ラニビズマブ、フルピルチン、Ｂ２７ＰＤ、Ｓ−６４６２４０、ＧＬＹ−２３０、ヒドララジン、ネパフェナク、ＤｅｘＮＰ、トレハロース、ヒアルロン酸、デキサメタゾン−Ｃａ持続放出デポー剤、ナルゾタン、ヒアルロニダーゼ、ヒアルロン酸ナトリウム、イスナキンラ、ソマトスタチン、ＣＬＧ−５６１、ＯＣ−１０Ｘ、ＵＣＡ−００２、組換えヒト上皮増殖因子、ペミロラスト、ＶＭ−１００、ＭＢ−１１３１６、モノナトリウムアルファルミノール、ラニビズマブ、ＩＭＤ−１０４１、ＬＭＧ−３２４、ＨＥ−１０、シンヒアルロン酸ナトリウム、ＢＤＭ−Ｅ、間葉系前駆細胞、ジスルフィラム、ＣＴＣ−９６、ＰＧ−１０１、ベイフシュー（Ｂｅｉｆｕｓｈｕ）、キモトリプシンを含むがこれらに限定されない。
【０１３８】
本明細書において、化合物１またはその薬学的に許容される塩と、１つまたは複数の他の治療剤とを含む、医薬組成物も提供される。治療剤は、上記で指定した作用物質のクラスからおよび上述した具体的な作用物質のリストから、選択されてよい。一部の実施形態では、医薬組成物は、眼送達に好適である。一部の実施形態では、医薬組成物は、液体または懸濁物組成物である。
【０１３９】
さらに、方法態様では、本発明は、哺乳動物における疾患または障害を処置する方法であって、哺乳動物に、化合物１またはその薬学的に許容される塩および１つまたは複数の他の治療剤を投与するステップを含む、方法を提供する。
【０１４０】
併用療法において使用される場合、作用物質は、単一医薬組成物で製剤化されてもよく、あるいは、作用物質は、同時にまたは別個の時間に、同じまたは異なる投与経路によって投与される別個の組成物で提供されてもよい。そのような組成物は、別個に包装することができ、またはキットとして一緒に包装されてもよい。キット内の２つまたはそれよりも多くの治療剤は、同じ投与経路によってまたは異なる投与経路によって投与されてよい。
【実施例】
【０１４１】
下記の合成および生物学的実施例は、本発明を例証するために提供されるものであり、本発明の範囲をいかようにも限定するものとして解釈されるべきではない。以下の実施例において、下記の略語は、別段の指示がない限り、下記の意味を有する。以下で定義されていない略語は、それらの一般に認められている意味を有する。
ＡＣＮ＝アセトニトリル
ＤＣＣ＝ジシクロヘキシルカルボジイミド
ＤＩＰＥＡ＝Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン
ＤＭＡｃ＝ジメチルアセトアミド
ＤＭＦ＝Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド
ＤＭＳＯ＝ジメチルスルホキシド
ＥｔＯＡｃ＝酢酸エチル
ＨＡＴＵ＝Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチル−Ｏ−（７−アザベンゾトリアゾール−１−イル）ウロニウムヘキサフルオロホスフェート
ＬＤＡ＝リチウムジイソプロピルアミド
ｍｉｎ＝分
ＭＴＢＥ＝メチルｔｅｒｔ−ブチルエーテル
ＮＢＳ＝Ｎ−ブロモスクシンイミド
ＮＭＰ＝Ｎ−メチル−２−ピロリドン
ＲＴ＝室温
ＴＨＦ＝テトラヒドロフラン
ビス（ピナコラート）ジボロン＝４，４，５，５，４’，４’，５’，５’−オクタメチル−［２，２’］ビ［［１，３，２］ジオキサボロラニル］
Ｐｄ（ｄｐｐｆ）Ｃｌ２−ＣＨ２Ｃｌ２＝ジクロロメタンとのジクロロ（１，１’−ビス（ジフェニルホスフィノ）−フェロセン）−ジパラジウム（ＩＩ）複合体
【０１４２】
試薬および溶媒は、商業供給業者（Ａｌｄｒｉｃｈ、Ｆｌｕｋａ、Ｓｉｇｍａ等）から購入し、さらに精製することなく使用した。反応混合物の進行を、薄層クロマトグラフィー（ＴＬＣ）、分析用高速液体クロマトグラフィー（分析用ＨＰＬＣ）および質量分析によってモニターした。反応混合物を、各反応において具体的に記述されている通りに後処理し、一般には、反応混合物を、抽出、ならびに、温度および溶媒依存性結晶化、および沈殿等の他の精製方法によって精製した。加えて、反応混合物を、カラムクロマトグラフィーによってまたは分取ＨＰＬＣによって、典型的には、Ｃ１８またはＢＤＳカラムパッキングおよび従来の溶離液を使用して、慣用的に精製した。典型的な分取ＨＰＬＣ条件を以下に記述する。
【０１４３】
反応生成物の特徴付けは、質量分析および１Ｈ−ＮＭＲ分光分析によって慣用的に行った。ＮＭＲ分析のために、試料を重水素化溶媒（ＣＤ３ＯＤ、ＣＤＣｌ３またはｄ６−ＤＭＳＯ等）に溶解し、標準的な観察条件下、Ｖａｒｉａｎジェミニ２０００機器（４００ＭＨｚ）で１Ｈ−ＮＭＲスペクトルを獲得した。化合物の質量分析同定は、自動精製システムと接続された、Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ（Ｆｏｓｔｅｒ  Ｃｉｔｙ、ＣＡ）モデルＡＰＩ１５０ＥＸ機器またはＷａｔｅｒｓ（Ｍｉｌｆｏｒｄ、ＭＡ）３１００機器を用いるエレクトロスプレーイオン化法（ＥＳＭＳ）によって実施した。
分取ＨＰＬＣ条件
カラム：Ｃ１８、５μｍ。２１．２×１５０ｍｍまたはＣ１８、５μｍ  ２１×２５０またはＣ１４、５μｍ  ２１×１５０ｍｍ
カラム温度：室温
流量：２０．０ｍＬ／分
移動相：Ａ＝水＋０．０５％ＴＦＡ
Ｂ＝ＡＣＮ＋０．０５％ＴＦＡ、
注入体積：（１００〜１５００μＬ）
検出器波長：２１４ｎｍ
【０１４４】
粗化合物を、１：１  水：酢酸に、約５０ｍｇ／ｍＬで溶解した。２．１×５０ｍｍ  Ｃ１８カラムを使用して４分間の分析スケールテスト実行を、続いて、分析スケールテスト実行のＢ保持％に基づく勾配で１００μＬの注射を使用して１５または２０分間の分取スケール実行を行った。正確な勾配は、試料依存性であった。最良の分離のために、不純物が連なっている試料を２１×２５０ｍｍ  Ｃ１８カラムおよび／または２１×１５０ｍｍ  Ｃ１４カラムで確認した。所望生成物を含有する画分を、質量分光分析によって同定した。
【０１４５】
調製１：２−（４−（ベンジルオキシ）−２−エチル−５−フルオロフェニル）−４，４，５，５−テトラメチル−１，３，２−ジオキサボロラン（１−５）
【化５】
2020518581.tif 000007
（ａ）２−（ベンジルオキシ）−４−ブロモ−１−フルオロベンゼン（１−２）
２つの反応を並行して行い、後処理のために組み合わせた。ＡＣＮ（５Ｌ）中の、５−ブロモ−２−フルオロフェノール（１−１）（８５０ｇ、４．５ｍｏｌ）、臭化ベンジル（８３７ｇ、４．９ｍｏｌ）および炭酸カリウム（９２３ｇ、６．７ｍｏｌ）の混合物を、２０℃で１２時間にわたって撹拌した。反応物を組み合わせ、濃縮し、水（８Ｌ）で希釈し、ＥｔＯＡｃ（３×３Ｌ）で抽出した。有機層を分離し、ブライン（３Ｌ）で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させ、濃縮した。粗生成物をシリカゲルパッド（３：１  石油エーテル：ＥｔＯＡｃで溶離）を介して精製して、表題中間体（１．８３ｋｇ、７３％収率）を白色固体として得た。１Ｈ  ＮＭＲ  （４００  ＭＨｚ，  ＣＤＣｌ３）  δ７．３８−７．４６  （ｍ，  ５Ｈ），  ７．１５  （ｄｄ，  Ｊ  ＝  ７．６，  ２．０  Ｈｚ，  １Ｈ），  ６．９８−７．１５  （ｍ，  １Ｈ），  ５．１２  （ｓ，  ２Ｈ）．
【０１４６】
（ｂ）２−（ベンジルオキシ）−４−エチル−１−フルオロベンゼン（１−３）
６つの反応を並行して行い、後処理のために組み合わせた。ＴＨＦ（１００ｍＬ）中の前のステップの生成物（２００ｇ、７１１ｍｍｏｌ）の溶液に、炭酸カリウム（１９７ｇ、１．４ｍｏｌ）を添加した。反応混合物を窒素で３回パージし、続いて、Ｐｄ（ｄｐｐｆ）Ｃｌ２−ＣＨ２Ｃｌ２（１１．６ｇ、１４．２ｍｍｏｌ）を添加した。反応混合物を０℃に冷却し、ジエチル亜鉛（１Ｍ、１．０７Ｌ）を滴下添加し、反応混合物を７０℃で１時間にわたって撹拌した。反応物を組み合わせ、２０℃に冷却し、水（７Ｌ）にゆっくりと注ぎ入れた。混合物に、４Ｍ  ＨＣｌ水溶液をｐＨ６になるまで添加した。有機層を分離し、水性相をＥｔＯＡｃ（３×２Ｌ）で抽出した。組み合わせた有機層をブライン（５Ｌ）で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させ、濃縮し、シリカゲルパッド（５０：１  石油エーテル：ＥｔＯＡｃで溶離）を介して精製して、表題中間体（９００ｇ、９２％収率）を薄黄色油として得た。１Ｈ  ＮＭＲ  （４００  ＭＨｚ，  ＣＤＣｌ３）  δ７．２９−７．４３  （ｍ，  ５Ｈ），  ６．９４−６．９７  （ｍ，  １Ｈ），  ６．８２  （ｄ，  Ｊ  ＝  ８．０  Ｈｚ，  １Ｈ），  ６．７０  （ｍ，  １Ｈ），  ５．０９  （ｓ，  ２Ｈ），  ２．５２−２．５８  （ｍ，  ２Ｈ），  １．１７  （ｔ，  Ｊ  ＝  ７．６  Ｈｚ，  ３Ｈ）．
【０１４７】
（ｃ）１−（ベンジルオキシ）−４−ブロモ−５−エチル−２−フルオロベンゼン（１−４）
４つの反応を並行して行い、組み合わせた。ＡＣＮ（１Ｌ）中の２−（ベンジルオキシ）−４−エチル−１−フルオロベンゼン（１−３）（２９３ｇ、１．３ｍｏｌ）の溶液に、ＮＢＳ（２４９ｇ、１．４ｍｏｌ）を２０℃で小分けにして添加した。反応混合物を２０℃で２時間にわたって撹拌した。反応混合物を組み合わせ、濃縮した。残留物を水（５Ｌ）で希釈し、ＥｔＯＡｃ（２×５Ｌ）で抽出した。有機相をブライン（４Ｌ）で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、真空で濃縮した。粗生成物をシリカゲルクロマトグラフィー（石油エーテル：ＥｔＯＡｃ  １００：１〜１０：１で溶離）によって精製して、表題中間体（１．４ｋｇ、８９％収率）を薄黄色油として得た。１Ｈ  ＮＭＲ  （４００  ＭＨｚ，  ＣＤＣｌ３）  δ７．２９−７．３８  （ｍ，  ５Ｈ），  ７．２  （ｄ，  Ｊ  ＝  １０．４  Ｈｚ，  １Ｈ），  ６．８  （ｄ，  Ｊ  ＝  ８．８  Ｈｚ，  １Ｈ），  ５．０６  （ｓ，  ２Ｈ），  ２．６  （ｑ，  Ｊ  ＝  ７．６  Ｈｚ，  ２  Ｈ），  １．１  （ｔ，  Ｊ  ＝  ７．６  Ｈｚ，  ３Ｈ）．
【０１４８】
（ｄ）２−（４−（ベンジルオキシ）−２−エチル−５−フルオロフェニル）−４，４，５，５−テトラメチル−１，３，２−ジオキサボロラン（１−５）
７つの反応を並行して行い、後処理のために組み合わせた。ジオキサン（２Ｌ）中の前のステップの生成物（２００ｇ、６４７ｍｍｏｌ）の溶液に、酢酸カリウム（１９０ｇ、１．９ｍｏｌ）、ビス（ピナコラート）ジボロン（１８１ｇ、７１２ｍｍｏｌ）およびＰｄ（ｄｐｐｆ）Ｃｌ２−ＣＨ２Ｃｌ２（１０．６ｇ、１２．９ｍｍｏｌ）を、窒素下、２０℃で添加した。混合物を１２０℃で２時間にわたって撹拌した。反応混合物を組み合わせ、濃縮し、水（５Ｌ）で希釈し、ＥｔＯＡｃ（３×４Ｌ）で抽出した。組み合わせた有機相を無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、真空で濃縮した。粗生成物をシリカゲルクロマトグラフィー（石油エーテル：ＥｔＯＡｃ  １：０〜５：１で溶離）によって精製して、表題化合物（１．３５ｋｇ、８４％収率）を白色固体として得た。１Ｈ  ＮＭＲ  （４００  ＭＨｚ，  ＣＤＣｌ３）  δ７．３３−７．５１  （ｍ，  ６Ｈ），  ６．８２  （ｄ，  Ｊ  ＝  ７．６  Ｈｚ，  １Ｈ），  ５．１７  （ｓ，  ２Ｈ），  ２．８５  （ｑ，  Ｊ  ＝  ７．６  Ｈｚ，  ２Ｈ），  １．３３  （ｓ，  １２Ｈ），  １．１５  （ｔ，  Ｊ  ＝  ７．６  Ｈｚ，  ３Ｈ）．
【０１４９】
調製２：１−ベンジル−４−イミノ−１，４−ジヒドロピリジン−３−アミン（２）
【化６】
2020518581.tif 000008
ＡＣＮ（３Ｌ）中のピリジン−３，４−ジアミン（４００ｇ、３．６７ｍｏｌ）の溶液に、臭化ベンジル（５９６ｇ、３．４９ｍｏｌ）を０℃で小分けにして添加し、反応混合物を３０分間にわたって、次いで２０℃で１２時間にわたって撹拌し、濾過した。濾過ケーキをＡＣＮ（５００ｍＬ）で洗浄し、乾燥させて、表題化合物のＨＢｒ塩（６００ｇ、２．１４ｍｏｌ、５８％収率）を白色粉末として得た。１Ｈ  ＮＭＲ  （４００  ＭＨｚ，  ＭｅＯＤ）  δ７．８３  （ｄ，  Ｊ  ＝  ５．６  Ｈｚ，  １Ｈ），  ７．６４  （ｓ，  １Ｈ），  ７．３２−７．４０  （ｍ，  ５Ｈ），  ６．７６  （ｄ，  Ｊ  ＝  ６．８  Ｈｚ，  １Ｈ），  ５．２８  （ｓ，  ２Ｈ）．
【０１５０】
調製３：６−（４−（ベンジルオキシ）−２−エチル−５−フルオロフェニル）−４−フルオロ−１Ｈ−インダゾール−３−カルバルデヒド（３）
【化７】
2020518581.tif 000009
（ａ）１−（４−ブロモ−２，６−ジフルオロフェニル）−２，２−ジエトキシエタン−１−オン（３−１）
９つの反応を並行して行い、後処理のために組み合わせた。ＴＨＦ（７００ｍＬ）中の１−ブロモ−３，５−ジフルオロベンゼン（１００ｇ、５１８ｍｍｏｌ）の溶液を脱気し、窒素で３回パージした。次いで、２Ｍ  ＬＤＡ（３１１ｍＬ）を−７０℃で添加し、反応混合物を、窒素下、−７０℃で０．５時間にわたって撹拌した。ＴＨＦ（２００ｍＬ）中のエチル２，２−ジエトキシアセテート（９６ｇ、５４４ｍｍｏｌ）の溶液を、窒素下、−７０℃で滴下添加し、反応混合物を１時間にわたって撹拌した。反応物を組み合わせ、氷飽和塩化アンモニウム（１０Ｌ）に小分けにして注ぎ入れ、ＥｔＯＡｃ（３×３Ｌ）で抽出した。有機層を分離し、ブライン（５Ｌ）で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させ、濃縮し、シリカゲルクロマトグラフィー（石油エーテル  ＥｔＯＡｃ  １：０〜１００：１で溶離）によって精製して、表題化合物（１．２６ｋｇ、８４％収率）を黄色油として得た。１Ｈ  ＮＭＲ  （４００  ＭＨｚ，  ＣＤＣｌ３）  δ  ７．１２  （ｄ，  Ｊ  ＝  ７．２  Ｈｚ，  ２Ｈ），  ５．１５  （ｓ，  １Ｈ），  ３．６１−３．７  （ｍ，  ４Ｈ），  １．２  （ｔ，  Ｊ  ＝  ７．２  Ｈｚ，  ６Ｈ）．
【０１５１】
（ｂ）１−（４’−（ベンジルオキシ）−２’−エチル−３，５，５’−トリフルオロ−［１，１’−ビフェニル］−４−イル）−２，２−ジエトキシエタン−１−オン（３−２）
５つの反応を並行して行い、後処理のために組み合わせた。エタノール（１５０ｍＬ）およびトルエン（１．５Ｌ）中の１−（４−ブロモ−２，６−ジフルオロフェニル）−２，２−ジエトキシエタン−１−オン（３−１）（１８９ｇ、５８６ｍｍｏｌ）の混合物に、水（１５０ｍＬ）、炭酸ナトリウム（８４．８ｇ、８００ｍｍｏｌ）および２−（４−（ベンジルオキシ）−２−エチル−５−フルオロフェニル）−４，４，５，５−テトラメチル−１，３，２−ジオキサボロラン（１−５）（１９０ｇ、５３３ｍｍｏｌ）を２０℃で添加した。懸濁物を真空下で脱気し、窒素で数回パージした。Ｐｄ（ｄｐｐｆ）Ｃｌ２−ＣＨ２Ｃｌ２（１３ｇ、１６ｍｍｏｌ）を添加し、反応混合物を窒素で数回パージし、１２０℃で２時間にわたって撹拌した。反応物を組み合わせ、２０℃に冷却し、水（５Ｌ）に注ぎ入れ、ＥｔＯＡｃ（３×４Ｌ）で抽出した。組み合わせた有機層をブライン（５Ｌ）で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、濃縮し、シリカゲルクロマトグラフィー（石油エーテル：ＥｔＯＡｃ  １００：１〜５：１で溶離）によって精製して、表題中間体（８８０ｇ、７０％収率）を黄色油として得た。１Ｈ  ＮＭＲ  （４００  ＭＨｚ，  ＣＤＣｌ３）  δ  ７．３６−７．４８  （ｍ，  ５Ｈ），  ６．９４−６．９６  （ｍ，  ２Ｈ），  ６．８６−６．９２  （ｍ，  ２Ｈ），  ５．２９  （ｓ，  １Ｈ），  ５．１９  （ｓ，  ２Ｈ），  ３．６７−３．７７  （ｍ，  ４Ｈ），  ２．５２  （ｑ，  Ｊ  ＝  ７．６  Ｈｚ，  ２Ｈ），  １．２５  （ｔ，  Ｊ  ＝  ６．８  Ｈｚ，  ６Ｈ），  １．０７  （ｔ，  Ｊ  ＝  ７．２  Ｈｚ，  ３Ｈ）．
【０１５２】
（ｃ）６−（４−（ベンジルオキシ）−２−エチル−５−フルオロフェニル）−３−（ジエトキシメチル）−４−フルオロ−１Ｈ−インダゾール（３−３）
４つの反応を並行して行い、後処理のために組み合わせた。ＴＨＦ（２Ｌ）中の前のステップの生成物（２２０ｇ、４６６ｍｍｏｌ）の溶液に、ヒドラジン一水和物（４７．６ｇ、９３１ｍｍｏｌ）を２０℃で添加した。反応混合物を１００℃で１２時間にわたって撹拌した。４つの反応物を組み合わせ、２０℃に冷却し、濃縮した。残留物をＥｔＯＡｃ（５Ｌ）に溶解し、０．１Ｍ  ＨＣｌ（２×１．５Ｌ）で洗浄した。組み合わせた有機層をブライン（１．５Ｌ）で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、濃縮して、表題中間体（９００ｇ、粗製物）を黄色ガム状物として得て、これを、次のステップにおいて直接使用した。１Ｈ  ＮＭＲ  （４００  ＭＨｚ，  ＣＤＣｌ３）  δ  ７．３６−７．４８  （ｍ，  ５Ｈ），  ６．９４−６．９６  （ｍ，  ２Ｈ），  ６．８６−６．９２  （ｍ，  ２Ｈ），  ５．２９  （ｓ，  １Ｈ），  ５．１９  （ｓ，  ２Ｈ），  ３．６７−３．７７  （ｍ，  ４Ｈ），  ２．５２  （ｑ，  Ｊ  ＝  ７．６  Ｈｚ，  ２Ｈ），  １．２５  （ｔ，  Ｊ  ＝  ６．８  Ｈｚ，  ６Ｈ），  １．０７  （ｔ，  Ｊ  ＝  ７．２  Ｈｚ，  ３Ｈ）．
【０１５３】
（ｄ）６−（４−（ベンジルオキシ）−２−エチル−５−フルオロフェニル）−４−フルオロ−１Ｈ−インダゾール−３−カルバルデヒド（３）
３つの反応を並行して行い、後処理のために組み合わせた。アセトン（１．５Ｌ）中の前のステップの生成物（３００ｇ、６４３ｍｍｏｌ）の溶液に、４Ｍ  ＨＣｌ（１６ｍＬ）を２０℃で滴下添加し、反応混合物を２０℃で０．１７時間にわたって撹拌した。反応物を組み合わせ、濃縮し、ＭＴＢＥ（１Ｌ）で希釈し、濾過した。濾過ケーキをＭＴＢＥ（２×３００ｍＬ）で洗浄し、減圧下で乾燥させて、表題中間体（７０５ｇ、粗製物）を黄色固体として得て、これを、次のステップにおいて直接使用した。（ｍ／ｚ）：［Ｍ＋Ｈ］＋Ｃ２３Ｈ１８Ｆ２Ｎ２Ｏ２の計算値３９３．１３、実測値３９３．１。１Ｈ  ＮＭＲ  （４００  ＭＨｚ，  ＤＭＳＯ−ｄ６）  δ  １４．５１  （ｓ，  １Ｈ），  １０．１７  （ｄ，  Ｊ  ＝  ３．６  Ｈｚ，  １Ｈ），  ７．５０  （ｄ，  Ｊ  ＝  ７．２  Ｈｚ，  ２Ｈ），  ７．４０−７．４２  （ｍ，  ４Ｈ），  ７．２４  （ｄ，  Ｊ＝８．４  Ｈｚ，  １Ｈ），  ７．１５  （ｄ，  Ｊ  ＝  １２．４  Ｈｚ，  １Ｈ），  ７．０６  （ｄ，  Ｊ  ＝  ８．４  Ｈｚ，  １Ｈ），  ５．２５  （ｓ，  ２Ｈ），  ２．５２−２．５３  （ｍ，  ２Ｈ），  １．０３  （ｔ，  Ｊ  ＝  ７．６  Ｈｚ，  ３Ｈ）．
【０１５４】
調製４：５−ベンジル−２−（６−（４−（ベンジルオキシ）−２−エチル−５−フルオロフェニル）−４−フルオロ−１Ｈ−インダゾール−３−イル）−５Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］ピリジン（４）
【化８】
2020518581.tif 000010
４つの反応を並行して行い、後処理のために組み合わせた。ＤＭＦ（１．１Ｌ）中の６−（４−（ベンジルオキシ）−２−エチル−５−フルオロフェニル）−４−フルオロ−１Ｈ−インダゾール−３−カルバルデヒド（３）、調製３の生成物（１７２ｇ、４４０ｍｍｏｌ）の溶液に、亜硫酸水素ナトリウム（６８．６ｇ、６５９ｍｍｏｌ）および１−ベンジル−４−イミノ−１，４−ジヒドロピリジン−３−アミン（２）（１３６ｇ、４８４ｍｍｏｌ）を２０℃で添加し、反応混合物を１５０℃で２時間にわたって撹拌した。４つの反応物を組み合わせ、反応混合物を減圧下で濃縮した。残留物を水（１０Ｌ）に注ぎ入れ、濾過した。濾過ケーキを減圧下で乾燥させて、表題中間体（９９０ｇ、粗製物）を黄色固体として得て、これを、精製することなく直接使用した。（ｍ／ｚ）：［Ｍ＋Ｈ］＋Ｃ３５Ｈ２７Ｆ２Ｎ５Ｏの計算値５７２．２、実測値５７２．３。
【０１５５】
調製５：５−ベンジル−２−（６−（４−（ベンジルオキシ）−２−エチル−５−フルオロフェニル）−４−フルオロ−１Ｈ−インダゾール−３−イル）−４，５，６，７−テトラヒドロ−１Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］ピリジン（５）
【化９】
2020518581.tif 000011
３つの反応を並行して行い、後処理のために組み合わせた。メタノール（１．５Ｌ）およびＴＨＦ（１Ｌ）中の５−ベンジル−２−（６−（４−（ベンジルオキシ）−２−エチル−５−フルオロフェニル）−４−フルオロ−１Ｈ−インダゾール−３−イル）−５Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］ピリジン（４）、調製４の生成物（３３０ｇ、５７７ｍｍｏｌ）の混合物に、水素化ホウ素ナトリウム（２６７ｇ、６．９ｍｏｌ）を小分けにして２０℃で添加し、反応混合物を２０℃で２４時間にわたって撹拌した。３つの反応物を組み合わせ、反応混合物を水（１０Ｌ）に添加し、１０分間にわたって撹拌し、濾過した。濾液をＥｔＯＡｃ（２×５Ｌ）で抽出し、組み合わせた有機相を無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、真空下で濃縮した。粗生成物をＥｔＯＡｃ（２Ｌ）で希釈し、３０分間にわたって撹拌し、濾過した。濾過ケーキをＭＴＢＥ（３×２００ｍＬ）で洗浄して、表題中間体（２７５ｇ、２８％収率）を薄黄色固体として得た。（ｍ／ｚ）：［Ｍ＋Ｈ］＋Ｃ３５Ｈ３１Ｆ２Ｎ５Ｏの計算値５７６．２５、実測値５７６．３。１Ｈ  ＮＭＲ  （４００  ＭＨｚ，  ＤＭＳＯ−ｄ６）  δ７．５０−７．５２  （ｍ，  ２Ｈ），  ７．３５−７．４３  （ｍ，  ７Ｈ），  ７．２３−７．２５  （ｍ，  ３Ｈ），  ７．１５  （ｄ，  Ｊ  ＝  １２．０  Ｈｚ，  １Ｈ），  ６．８１  （ｄ，  Ｊ  ＝  １２．０  Ｈｚ，  １Ｈ），  ５．２５  （ｓ，  ２Ｈ），  ３．７２  （ｓ，  ２Ｈ），  ３．４３  （ｂｒ．  ｓ，  ２Ｈ），  ２．７８  （ｂｒ．  ｓ，  ２Ｈ），  ２．６６  （ｂｒ．  ｓ，  ２Ｈ），  ２．５５  （ｑ，  ２Ｈ），  １．０４  （ｔ，  Ｊ＝７．６Ｈｚ，  ３Ｈ）．
【０１５６】
調製６：５−エチル−２−フルオロ−４−（４−フルオロ−３−（４，５，６，７−テトラヒドロ−１Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］ピリジン−２−イル）−１Ｈ−インダゾール−６−イル）フェノール（６）
【化１０】
2020518581.tif 000012
５つの反応を並行して行い、後処理のために組み合わせた。ＴＨＦ（５００ｍＬ）およびメタノール（５００ｍＬ）中の５−ベンジル−２−（６−（４−（ベンジルオキシ）−２−エチル−５−フルオロフェニル）−４−フルオロ−１Ｈ−インダゾール−３−イル）−４，５，６，７−テトラヒドロ−１Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］ピリジン（５）、調製５の生成物（５５ｇ、９５．５ｍｍｏｌ）の混合物に、パラジウム炭素（１５ｇ、９．６ｍｍｏｌ）および１２Ｍ  ＨＣｌ水溶液（１０ｍＬ）を添加した。懸濁物を真空下で脱気し、水素で数回パージし、水素（５０ｐｓｉ）下、５０℃で１２時間にわたって撹拌した。反応物を組み合わせ、反応混合物を濾過した。濾液を真空下で濃縮して、表題中間体のＨＣｌ塩（１５０ｇ、粗製物）をオフホワイトの固体として提供した。（ｍ／ｚ）：［Ｍ＋Ｈ］＋Ｃ２１Ｈ１９Ｆ２Ｎ５Ｏの計算値３９６．１６、実測値３９６．２。１Ｈ  ＮＭＲ  （４００ＭＨｚ，  ＭｅＯＤ）  δ７．４３  （ｓ，  １Ｈ），  ７．０７  （ｄ，  Ｊ  ＝  １１．６  Ｈｚ，  １Ｈ），  ６．９７  （ｄ，  Ｊ  ＝  １１．６  Ｈｚ，  １Ｈ），  ６．９１  （ｄ，  Ｊ＝  ８．８  Ｈｚ，  １Ｈ），  ４．５７  （ｓ，  ２Ｈ），  ３．７４  （ｓ，  ２Ｈ），  ３．２４  （ｓ，  ２Ｈ），  ２．５５  （ｑ，  Ｊ  ＝  ７．６  Ｈｚ，  ２Ｈ），  １．０８  （ｔ，  Ｊ  ＝  ７．６  Ｈｚ，  ３Ｈ）．
【０１５７】
調製７：２，５−ジオキソピロリジン−１−イル２−モルホリノアセテート（７’）
【化１１】
2020518581.tif 000013
（ａ）ｔｅｒｔ−ブチル２−モルホリノアセテート（７−１）
ＴＨＦ（３Ｌ）中のモルホリン（１６０ｇ、１．８４ｍｏｌ）および炭酸カリウム（３８１ｇ、２．７６ｍｏｌ）の混合物に、２−ブロモ酢酸ｔｅｒｔ−ブチル（３４１ｇ、１．７５ｍｏｌ）を０℃でゆっくりと添加した。反応混合物を３０分間にわたって、次いで、２０℃で１２時間にわたって撹拌し、濃縮した。水（１．５Ｌ）を添加し、反応混合物をＥｔＯＡｃ（３×１Ｌ）で抽出した。有機層を分離し、ブライン（５００ｍＬ）で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させ、濃縮して、表題中間体（３００ｇ、８１％収率）を黄色油として得た。１Ｈ  ＮＭＲ  （４００  ＭＨｚ，  ＣＤＣｌ３）  δ３．７４  （ｔ，Ｊ＝４．８  Ｈｚ，  ４Ｈ），  ３．１０  （ｓ，  ２Ｈ），  ２．５７  （ｔ，  Ｊ  ＝  ４．８  Ｈｚ，  ４Ｈ），  １．４６  （ｓ，  ９Ｈ）．
【０１５８】
（ｂ）２−モルホリノ酢酸（７”）
ジオキサン中３Ｍ  ＨＣｌ（２．０Ｌ）中の前のステップの生成物（７−１）（３００ｇ、１．４９ｍｏｌ）の混合物を、２０℃で１２時間にわたって撹拌し、濃縮して、表題化合物のＨＣｌ塩（２７０ｇ、９９％収率）を淡色固体として得て、これを、次のステップにおいて直接使用した。１Ｈ  ＮＭＲ  （４００  ＭＨｚ，  ＭｅＯＤ）  δ４．１３  （ｓ，  ２Ｈ），  ３．９３  （ｂｒ．  ｓ，  ４Ｈ），  ３．６４  （ｂｒ．  ｓ，  ４Ｈ）．
【０１５９】
（ｃ）２，５−ジオキソピロリジン−１−イル２−モルホリノアセテート（７’）
ＤＣＭ（２Ｌ）中の、前のステップの生成物（１５０ｇ、８２６ｍｍｏｌ）、１−ヒドロキシピロリジン−２，５−ジオン（９５ｇ、８２６ｍｍｏｌ）、ＤＣＣ（２５６ｇ、１．２４ｍｏｌ）およびＤＩＰＥＡ（１６０ｇ、１．２４ｍｏｌ）の混合物を、１５℃で１２時間にわたって撹拌し、濾過した。濾液を濃縮し、ＥｔＯＡｃ（８００ｍＬ）で洗浄した。固体を濾過によって収集し、濃縮して、表題化合物（１５０ｇ、７５％収率）を白色固体として得た。１Ｈ  ＮＭＲ  （４００  ＭＨｚ，  ＤＭＳＯ−ｄ６）  δ３．６８  （ｓ，  ２Ｈ），  ３．５８  （ｔ，  Ｊ＝４．８  Ｈｚ，  ４Ｈ），  ２．８２  （ｓ，  ４Ｈ），  ２．５７  （ｔ，  Ｊ  ＝  ５．２  Ｈｚ，  ４Ｈ）．
【０１６０】
（実施例１）
１−（２−（６−（２−エチル−５−フルオロ−４−ヒドロキシフェニル）−４−フルオロ−１Ｈ−インダゾール−３−イル）−１，４，６，７−テトラヒドロ−５Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］ピリジン−５−イル）−２−モルホリノエタン−１−オン（１）
【化１２】
2020518581.tif 000014
ＤＭＦ（６００ｍＬ）中の、５−エチル−２−フルオロ−４−（４−フルオロ−３−（４，５，６，７−テトラヒドロ−１Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］ピリジン−２−イル）−１Ｈ−インダゾール−６−イル）フェノール（６）２ＨＣｌ（１００ｇ、２１４ｍｍｏｌ）、２，５−ジオキソピロリジン−１−イル２−モルホリノアセテート（７’）（６７．２ｇ、２７８ｍｍｏｌ）およびＤＩＰＥＡ（６９ｇ、５３４ｍｍｏｌ）の混合物を、１５℃で１２時間にわたって撹拌し、濾過した。溶液を逆相クロマトグラフィー（Ａｇｅｌａ  ＦＬＥＸＡＴＭ  ＦＳ−１Ｌ機器；２ｋｇ  Ａｇｅｌａ  Ｃ１８  ＤＡＣカラム；２００ｇの試料をＤＭＦ（９００ｍＬ）に溶解；流速３００ｍＬ／分；溶媒Ａ水、溶媒Ｂ  ＡＣＮ；勾配（％Ｂ、時間（分）：０／１５、０〜４０／４５、４０／５０）によって精製して、表題化合物（５０．０ｇ、４４．８％収率）を薄黄色固体として生じさせた。（ｍ／ｚ）：［Ｍ＋Ｈ］＋Ｃ２７Ｈ２８Ｆ２Ｎ６Ｏ３の計算値５２３．２２、実測値５２３．０。１Ｈ  ＮＭＲ  （４００ＭＨｚ，  ＭｅＯＤ）  δ７．２２  （ｓ，  １Ｈ），  ６．８０−６．９６  （ｍ，  ３Ｈ），  ４．６８−４．７８  （ｍ，  ２Ｈ），  ３．９６  （ｓ，  ２Ｈ），  ３．６５−３．９５  （ｍ，  ４Ｈ），  ３．３５−３．３８  （ｍ，  ２Ｈ），  ２．７７−２．９２  （ｍ，  ２Ｈ），  ２．５２−２．５６  （ｍ，  ６Ｈ），  １．０６  （ｔ，  Ｊ  ＝  ７．６  Ｈｚ，  ３Ｈ）．
【０１６１】
（実施例２）
結晶性１−（２−（６−（２−エチル−５−フルオロ−４−ヒドロキシフェニル）−４−フルオロ−１Ｈ−インダゾール−３−イル）−１，４，６，７−テトラヒドロ−５Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］ピリジン−５−イル）−２−モルホリノエタン−１−オン（１）形態１
２５０ｍＬのフラスコに、１−（２−（６−（２−エチル−５−フルオロ−４−ヒドロキシフェニル）−４−フルオロ−１Ｈ−インダゾール−３−イル）−１，４，６，７−テトラヒドロ−５Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］ピリジン−５−イル）−２−モルホリノエタン−１−オン（１）、実施例１の生成物（５ｇ）およびエタノール（５０ｍＬ）を添加し、反応混合物を５０〜８０℃で１０分間にわたって撹拌し、次いで、ＡＣＮ（７５ｍＬ）を５０〜８０℃でゆっくりと添加し、続いて、実施例３からの種晶を添加した。反応混合物を２０〜２５℃で１８時間にわたって撹拌した。得られた固体を濾過によって収集し、真空下、５０℃で１８時間にわたって乾燥させて、表題化合物形態１（３．６ｇ、７２％収率）を提供した。
【０１６２】
（実施例３）
結晶性１−（２−（６−（２−エチル−５−フルオロ−４−ヒドロキシフェニル）−４−フルオロ−１Ｈ−インダゾール−３−イル）−１，４，６，７−テトラヒドロ−５Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］ピリジン−５−イル）−２−モルホリノエタン−１−オン（１）形態１
化合物１、実施例１の生成物（１ｇ）をエタノール（１０ｍＬ）に添加し、加熱して溶解させた。アセトニトリル（１０ｍＬ）を添加し、反応混合物を撹拌し、加温し、次いで、室温で１６時間にわたって撹拌し、濾過し、真空下、５０℃で１８時間にわたって乾燥させて、表題化合物形態１（０．２３ｇ）を提供した。
【０１６３】
（実施例４）
１−（２−（６−（２−エチル−５−フルオロ−４−ヒドロキシフェニル）−４−フルオロ−１Ｈ−インダゾール−３−イル）−１，４，６，７−テトラヒドロ−５Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］ピリジン−５−イル）−２−モルホリノエタン−１−オン（１）
【化１３】
2020518581.tif 000015
Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（０．２９８ｍＬ、１．７０７ｍｍｏｌ）を、ＤＭＦ（０．５ｍＬ）中の、５−エチル−２−フルオロ−４−（４−フルオロ−３−（４，５，６，７−テトラヒドロ−１Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］ピリジン−２−イル）−１Ｈ−インダゾール−６−イル）フェノール（１３５ｍｇ、０．３４１ｍｍｏｌ）（６）、ＨＡＴＵ（１５６ｍｇ、０．４１０ｍｍｏｌ）および２−モルホリノ酢酸（７”）（５４．５ｍｇ、０．３７６ｍｍｏｌ）の溶液に添加し、反応混合物を室温で２４時間にわたって撹拌した。水酸化リチウム（４９．１ｍｇ、２．０４９ｍｍｏｌ）を添加し、反応混合物を６５℃で１時間にわたって撹拌し、真空で濃縮して、透明黄色液体を産出した。粗液を、分取ＨＰＬＣを介して精製して、表題化合物のＴＦＡ塩（１４２ｍｇ、０．２２３ｍｍｏｌ、６５．３％収率）をベージュ色固体として産出した。
【０１６４】
（実施例５）
結晶性１−（２−（６−（２−エチル−５−フルオロ−４−ヒドロキシフェニル）−４−フルオロ−１Ｈ−インダゾール−３−イル）−１，４，６，７−テトラヒドロ−５Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］ピリジン−５−イル）−２−モルホリノエタン−１−オン（１）形態２
実施例１の化合物１（２．５ｇ）をＤＭＳＯ（５ｍＬ）に６０℃で溶解した。均質溶液が取得されたら、ＭｅＯＨ（２．５ｍＬ）を溶液に添加した。均質混合物を、ＭｅＯＨ（１２．７５ｍＬ）およびＨ２Ｏ（１１．２５ｍＬ）の予混合溶液に、７５℃で３０分間かけて滴下添加した。混合物が完全に添加されたら、組み合わせた混合物を７５℃で１時間にわたって撹拌させ、その間に結晶性スラリーが形成された。Ｈ２Ｏ（３６ｍＬ）を７５℃で２時間かけて滴下添加した。Ｈ２Ｏチャージが完了した後、スラリーを７５℃で１時間にわたって撹拌し、次いで、２０℃に６時間かけてゆっくりと冷却した。スラリーを２０℃でさらに１０時間にわたって保持した後、濾過し、７０％Ｈ２Ｏ／ＭｅＯＨ（１０ｍＬ）で洗浄し、真空下、５０℃で１８時間にわたって乾燥させて、表題化合物形態２（２．１３ｇ）を提供した。
【０１６５】
本発明の固体形態の特性
実施例２および５の１−（２−（６−（２−エチル−５−フルオロ−４−ヒドロキシフェニル）−４−フルオロ−１Ｈ−インダゾール−３−イル）−１，４，６，７−テトラヒドロ−５Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］ピリジン−５−イル）−２−モルホリノエタン−１−オン（１）の２つの無水形態、形態１および形態２の試料を、それぞれ、粉末Ｘ線回折（ＰＸＲＤ）、示差走査熱量測定（ＤＳＣ）、熱重量分析（ＴＧＡ）、動的水分吸着（ＤＭＳ）および偏光顕微鏡法画像によって分析した。形態２は単結晶Ｘ線回折分析によっても分析した。
【０１６６】
実施例６：粉末Ｘ線回折
図１および６の粉末Ｘ線回折パターンは、４５ｋＶの出力電圧および４０ｍＡの電流でＣｕ−Ｋα線（λ＝１．５４０５１Å）を使用するＢｒｕｋｅｒ  Ｄ８−ＡｄｖａｎｃｅＸ線回折計を用いて得た。この装置を、サンプルにおいて強度が最大となるように入射スリット、発散スリットおよび散乱スリットを設定したＢｒａｇｇ−Ｂｒｅｎｔａｎｏジオメトリで作動させた。計測のために、少量の粉末（５〜２５ｍｇ）をサンプルホルダー上に静かに押し込んで、滑らかな表面を形成させ、Ｘ線曝露に供した。サンプルを、２°から３５°（単位：２θ）まで０．０２°の刻み幅および１工程あたり０．３０°秒の走査速度での２θ−２θモードで走査した。データ取得を、Ｂｒｕｋｅｒ  ＤｉｆｆｒａｃＳｕｉｔｅ計測ソフトウェアによって制御し、Ｊａｄｅソフトウェア（バージョン７．５．１）によって解析した。上記装置は、コランダム標準を用いて±０．０２°２シータ角以内に較正した。観察されたＰＸＲＤ２シータピーク位置およびｄ間隔を、結晶形態１および結晶形態２についてそれぞれ、表１および２に示す。
【表１】
2020518581.tif 000016
【表２】
2020518581.tif 000017
【０１６７】
実施例７：熱分析
示差走査熱量測定（ＤＳＣ）を、Ｔｈｅｒｍａｌ  Ａｎａｌｙｓｔコントローラを備えたＴＡ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ  Ｍｏｄｅｌ  Ｑ−１００モジュールを用いて行った。データを収集し、ＴＡ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ  Ｔｈｅｒｍａｌ  Ａｎａｌｙｓｉｓソフトウェアを用いて解析した。各結晶形態のサンプルを、ふた付きのアルミニウムパンに正確に秤量した。５℃での５分間の等温平衡期間の後、サンプルを１０℃／分の線形加熱勾配で０℃から３００℃に加熱した。
【０１６８】
本発明の形態１結晶性遊離形態の代表的なＤＳＣサーモグラムを、図７に示す。１分当たり１０℃の加熱速度で記録された示差走査熱量測定（ＤＳＣ）トレースは、約２１０℃から約２３４℃の範囲内、または約２１５℃から約２２９℃の間の範囲内、または約２２０℃から約２２４℃の間の範囲内の、溶融遷移として同定される吸熱熱流のピークを呈する。結晶形態は、約２２１．７℃または２２１．７±３℃のピークを持つ吸熱熱流の最大値を示す、１分当たり１０℃の加熱速度で記録された示差走査熱量測定トレースを特徴とする。
【０１６９】
本発明の形態２結晶性遊離形態の代表的なＤＳＣサーモグラムを、図２に示す。１分当たり１０℃の加熱速度で記録された示差走査熱量測定（ＤＳＣ）トレースは、約２６８℃から約２７７℃の範囲内、または約２７０℃から約２７５℃の間の範囲内、または約２７１℃から約２７４℃の間の範囲内の、溶融遷移として同定される吸熱熱流のピークを呈する。結晶形態は、約２７２．６℃または２７２．６±２℃のピークを持つ吸熱熱流の最大値を示す、１分当たり１０℃の加熱速度で記録された示差走査熱量測定トレースを特徴とする。
【０１７０】
熱重量分析（ＴＧＡ）の計測は、高分解能を備えるＴＡ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ  Ｍｏｄｅｌ  Ｑ−５０モジュールを用いて行った。データを、ＴＡ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ  Ｔｈｅｒｍａｌ  Ａｎａｌｙｓｔコントローラを用いて収集し、ＴＡ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ  Ｕｎｉｖｅｒｓａｌ  Ａｎａｌｙｓｉｓソフトウェアを用いて解析した。秤量したサンプルを白金パン上に置き、周囲温度から３００〜３５０℃まで１０℃の加熱速度で走査した。使用中、天秤および炉チャンバーに窒素流をパージした。
【０１７１】
本発明の形態１結晶性遊離形態の代表的なＴＧＡトレースを、図８に示す。図８の熱重量分析（ＴＧＡ）トレースは、約２９３℃の分解開始未満の温度では顕著な重量損失がないことを示す。
【０１７２】
本発明の形態２結晶性遊離形態の代表的なＴＧＡトレースを、図３に示す。図３の熱重量分析（ＴＧＡ）トレースは、約２６９℃の分解開始未満の温度では顕著な重量損失がないことを示す。
【０１７３】
実施例８：動的水分吸着の評価
動的水分吸着（ＤＭＳ）の計測を、ＶＴＩ大気微量天秤ＳＧＡ−１００システム（ＶＴＩ  Ｃｏｒｐ．，Ｈｉａｌｅａｈ，ＦＬ  ３３０１６）を使用して行った。秤量したサンプルを使用し、解析の開始時の湿度は、可能な限り最低の値（０％ＲＨに近い値）であった。ＤＭＳ解析は、１２０分間にわたる最初の乾燥工程（０％ＲＨ）の後、５％ＲＨ〜９０％ＲＨの湿度範囲にわたる５％ＲＨ／工程という走査速度での吸着および脱着の２サイクルからなった。ＤＭＳの実行は、２５℃の等温で行われた。
【０１７４】
本発明の形態１結晶性遊離形態についての代表的なＤＭＳトレースを、図９に示す。
【０１７５】
結晶形態１は、吸収および脱着の２サイクル間の小さなヒステリシスを実証した。形態１は、図９に示されている通り、５％から７０％相対湿度の湿度範囲における約０．９９％の重量増加および５％から９０％相対湿度の湿度範囲における約１．３２％の重量増加を室温で実証した。形態１は、わずかに吸湿性であるとみなされる。
【０１７６】
本発明の形態２結晶性遊離形態についての代表的なＤＭＳトレースを、図４に示す。結晶形態２は、吸収および脱着の２サイクル間のヒステリシスを示さず、吸湿性の並外れて小さい傾向を実証した。形態２は、図４に示されている通り、５％から７０％相対湿度の湿度範囲における約０．１２％の重量増加および５％から９０％相対湿度の湿度範囲における約０．１８％の重量増加を室温で実証した。形態２は、非吸湿性であるとみなされる。
【０１７７】
（実施例９）
形態２の単結晶Ｘ線回折
データは、Ｏｘｆｏｒｄ  Ｃｒｙｏｓｙｓｔｅｍｓコブラ冷却デバイスを備えた、Ｒｉｇａｋｕ  Ｏｘｆｏｒｄ  Ｄｉｆｆｒａｃｔｉｏｎ  Ｓｕｐｅｒｎｏｖａ  Ｄｕａｌ  Ｓｏｕｒｃｅ、Ｃｕ  ａｔ  Ｚｅｒｏ、アトラスＣＣＤ回折計で収集した。データは、Ｃｕ  Ｋα放射線を使用して収集した。Ｂｒｕｋｅｒ  ＡＸＳ  ＳＨＥＬＸＴＬ結晶学ソフトウェアスイートを使用して、構造を解明し、精密化した。全詳細はＣＩＦにおいて見ることができる。別段の記載がない限り、炭素と結合している水素原子を、幾何学的に置き、ライディング等方性変位パラメーターを用いて精密化させた。ヘテロ原子と結合している水素原子を、差分フーリエマップに位置付け、等方性変位パラメーターを用いて自由に精密化させた。
【表３】
2020518581.tif 000018
【０１７８】
（実施例１０）
形態１の固体状態安定性評価
本発明の形態１結晶性遊離形態の試料を、２つの配置ａ）開いたガラスバイアルおよびｂ）乾燥剤を含有するＨＤＰＥボトルの内側に置いた閉じたガラスバイアル下、２５℃および６０％相対湿度（ＲＨ）ならびに４０℃および７５％ＲＨで貯蔵した。ＨＤＰＥボトルをインダクションシーリングした。特定の間隔で、代表的な試料の内容物を除去し、化学的純度についてＨＰＬＣによって分析した（ＨＰＬＣ純度（％ａ／ａ）として以下に示す）。
【表４】
2020518581.tif 000019
【０１７９】
（実施例１１）
形態１および形態２の偏光顕微鏡法（ＰＬＭ）画像
形態１および形態２の試料を、交差偏光フィルター付きの光学顕微鏡（Ｏｌｙｍｐｕｓ  ＢＸ５１）下で検査した。画像を、ＰａｘＩｔ撮像ソフトウェア（バージョン６．４）によって制御したＰａｘＣａｍカメラで収集した。試料を、液浸媒質として軽油を用いるスライドガラス上で調製した。粒子のサイズに応じて、４倍、１０倍または２０倍対物レンズを拡大のために使用した。
調製８：ｔｅｒｔ−ブチル２−ヨード−１−（（２−（トリメチルシリル）エトキシ）メチル）−１，４，６，７−テトラヒドロ−５Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］ピリジン−５−カルボキシレート（Ｃ−５）
【化１４】
2020518581.tif 000020
【０１８０】
０．０１Ｍ  ＨＣｌ（５００ｍＬ）中の化合物Ｃ−２２（２５ｇ、１３５．８６ｍｍｏｌ）の溶液に、ジメトキシメタン（２１．６４ｍＬ、２４４．５４ｍｍｏｌ）を添加した。得られた溶液を１００℃で１８時間にわたって撹拌した。溶媒を真空下で除去し、残留物をジエチルエーテルおよびエタノールで２回トリチュレートし、濾過し、乾燥させて、化合物Ｃ−２１（２５．２ｇ、９４．６％収率）を提供した。
【０１８１】
メタノール（２５０ｍＬ）中の化合物Ｃ−２１（２５．０ｇ、１２７．５５ｍｍｏｌ）の溶液に、ＤＩＰＥＡ（５７．２３ｍＬ、３１８．８７ｍｍｏｌ）を添加し、続いて、（Ｂｏｃ）２Ｏ（６８．２３ｍＬ、３１８．８７ｍｏｌ）を添加し、反応物を室温で１８時間にわたって撹拌した。得られた反応物を水（１５０ｍＬ）で希釈し、酢酸エチル（３×２００ｍＬ）を使用して抽出した。組み合わせた有機層を無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、デカントし、減圧下で濃縮して、粗生成物Ｃ−２０を取得し、これを、さらに精製することなく次のステップに持ち越した。
【０１８２】
メタノール（５００ｍＬ）中のこの粗化合物Ｃ−２０（４０．０ｇ、１２３．８ｍｍｏｌ）の溶液に、１Ｍ  ＮａＯＨ溶液（２００ｍＬ）を添加し、得られた溶液を室温で１８時間にわたって撹拌した。溶媒を真空下で留去し、得られた粗製物を水（２００ｍＬ）で希釈し、酢酸エチル（３×３００ｍＬ）を使用して抽出した。組み合わせた有機層を無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、減圧下で濃縮して、粗生成物を取得して、これを、カラムクロマトグラフィー（１００〜２００シリカゲル）を介して精製し、５〜１０％ＭｅＯＨ：ＤＣＭで溶離して、所望生成物Ｃ−１９（２０ｇ、７２．４％収率）を得た。
【０１８３】
ＴＨＦ（４００ｍＬ）中の化合物Ｃ−１９（２０ｇ、８９．６８ｍｍｏｌ）の溶液に、ＮＩＳ（３０．２６ｇ、１３４．５２ｍｍｏｌ）を室温で添加し、得られた溶液を同じ温度で２時間にわたって撹拌した。反応混合物を水（２００ｍＬ）で希釈し、酢酸エチル（２×３００ｍＬ）中で抽出し、有機層を、１０％チオ硫酸ナトリウム水溶液（３×１００ｍＬ）、続いて、ブラインで洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、減圧下で濃縮して、粗生成物Ｃ−１８を取得して、これを、さらに精製することなく次のステップにおいて使用した。
【０１８４】
ＴＨＦ（１５０ｍＬ）中の化合物Ｃ−１８（１５．０ｇ、４２．９７ｍｍｏｌ）の撹拌溶液に、ＮａＨ（１．８ｇ  ４５．１１ｍｍｏｌ）を０℃で小分けにして添加し、反応混合物を室温で１時間にわたって撹拌した。次いで、ＳＥＭクロリド（８．１８ｍＬ、４５．１１ｍｍｏｌ）を０℃で滴下添加した。反応物を室温で６時間にわたって撹拌した。反応の進行をＴＬＣによってモニターし、反応物を０℃の氷水（２００ｍＬ）でクエンチし、酢酸エチル（２×２００ｍＬ）で抽出した。組み合わせた有機層をブラインで洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させた。有機層を濾過し、減圧下で濃縮して、粗生成物を取得して、これを、カラムクロマトグラフィー（１００〜２００）シリカ（１０〜１５％  ＥｔＯＡｃ：ヘキサンで溶離）によって精製して、所望生成物Ｃ−５を粘性液体（１１ｇ、５５％）として得た。
【０１８５】
調製９：２−（２−エチル−５−フルオロ−４−メトキシフェニル）−４，４，５，５−テトラメチル−１，３，２−ジオキサボロラン（Ｃ−１２）
【化１５】
2020518581.tif 000021
−４０℃に冷却した無水ＴＨＦ（１０００ｍＬ）中の化合物Ｃ−１７（３４７．６ｇ、９７３．１４ｍｍｏｌ）の撹拌懸濁物に、ｎ−ブチルリチウム（ヘキサン中２．５Ｍ、３６２．６ｍＬ、９０５．０２ｍｍｏｌ）を５０分間かけて添加し、その時点で、リンイリドの特徴的な黄色は持続していた。反応混合物を−１０℃に加温し、１時間にわたって撹拌し、次いで、混合物を−３０℃に冷却し、無水ＴＨＦ（２００ｍＬ）中の化合物Ｒ−１（５０ｇ、３２４．３８ｍｍｏｌ）の溶液を３０分間かけて添加した。結果として生じた混合物を周囲温度に加温し、終夜撹拌した。反応の進行をＴＬＣによってモニターした。完了したら、反応物を水（５００ｍＬ）の漸進的添加によってクエンチし、ジエチルエーテル（３×５００ｍＬ）で抽出した。組み合わせた有機層を、水（２×５００ｍＬ）、ブライン（２５０ｍＬ）で洗浄し、（無水Ｎａ２ＳＯ４）で乾燥させ、減圧下で濃縮して、粗化合物を得た。取得された粗生成物Ｃ−１６を、精製することなく次のステップにおいて使用した。
【０１８６】
エタノール（１０００ｍＬ）中の粗製物Ｃ−１６（１１０ｇ、７２３．３９ｍｍｏｌ）の溶液に、１０％Ｐｄ／Ｃ（５０ｇ）を添加した。水素ガスのバルーンを取り付け、反応物を排気し、水素で３回再充填した。反応物を、水素雰囲気下、室温で終夜撹拌した。室温で終夜撹拌した後、反応は完了した。これをセライトのパッドに通して濾過し、真空で濃縮して、粗化合物を提供して、これを、カラムクロマトグラフィー（１００〜２００）シリカゲルを介して精製し、３〜５％酢酸エチル／ヘキサンを使用して溶離して、所望生成物Ｃ−１５を無色液体（２ステップにわたって２４ｇ、４８％）として取得した。
【０１８７】
ＭｅＣＮ（２００ｍＬ）中の化合物Ｃ−１５（２４．０ｇ、１５５．８４ｍｍｏｌ）の溶液に、ＭｅＣＮ（１００ｍＬ）中のＮＢＳ（２８．０ｇ、１５７．４０ｍｍｏｌ）の溶液を添加した。得られた溶液を室温で１８時間にわたって撹拌した。溶媒を真空で除去し、残留物をジエチルエーテル（１００ｍＬ）で希釈した。沈殿物が観察され、これを、濾過によって除去し、濾液を亜硫酸ナトリウム水溶液（２００ｍＬ）およびブライン（１００ｍＬ）で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、真空で濃縮して、所望生成物Ｃ−１４を黄色油（３５．０ｇ、９７％収率）として得た。
【０１８８】
ジオキサン（４００ｍＬ）中の化合物Ｃ−１４（２０ｇ、８５．８３６ｍｍｏｌ）の溶液に、化合物Ｒ−２（３２．６９ｇ、１２８．７５５ｍｍｏｌ）およびＫＯＡｃ（２５．２７ｇ、２５７．５０８ｍｍｏｌ）を添加した。反応混合物を窒素で１５分間にわたって脱気し、次いで、パラジウム触媒（３．５ｇ、４．２９ｍｍｏｌ）を添加した。反応混合物を撹拌し、１１０℃で３時間にわたって加熱した。反応物をセライトのパッドに通して濾過し、酢酸エチルで洗浄した。濾液を酢酸エチル（２００ｍＬ）で希釈し、水（２×２００ｍＬ）およびブライン（１００ｍＬ）で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させ、真空下で濃縮した。取得された粗生成物を、カラムクロマトグラフィー（１００〜２００シリカゲル）を介して精製し、３〜５％ＥｔＯＡｃ：ヘキサンで溶離して、所望生成物Ｃ−１２（２０ｇ、８３％収率）を得た。
【０１８９】
調製１０：３−（ジメチル−スタンニル）−６−（２−エチル−５−フルオロ−４−メトキシフェニル）−１−（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル）−１Ｈ−インダゾール（Ｃ−６）
【化１６】
2020518581.tif 000022
化合物Ｃ−１３（２５ｇ、１２６．８４ｍｍｏｌ）、３，４−ジヒドロ−２Ｈ−ピラン（１３４．５ｍＬ、１４７１．５ｍＬ）およびｐ−ＴＳＡ（５．５７ｇ、２９．１８ｍｍｏｌ）の混合物を、ＴＨＦ（７００ｍＬ）に溶かし、６０℃で終夜加熱した。反応混合物を氷水に注ぎ入れ、水性相を酢酸エチルで抽出した。有機層を硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過した。濾液を減圧下で蒸発させ、残留物をシリカゲル（２３０〜４００）カラム（ヘキサン中１〜２％酢酸エチルで溶離）上で精製して、所望化合物Ｃ−１１（２３．５ｇ、６７％収率）を得た。
【０１９０】
ＤＭＦ：Ｈ２Ｏ（３９６：９９ｍＬ）中の、化合物Ｃ−１１（１３．３ｇ、４７．５ｍｍｏｌ）、化合物Ｃ−１２（１５．９６ｇ、５７．０ｍｍｏｌ）およびＫ３ＰＯ４（３０．２１ｇ、１４２．５ｍｍｏｌ）の溶液を、窒素で１５分間にわたって脱気し、次いで、パラジウム触媒（１．６ｇ、２．３７ｍｍｏｌ）を添加し、反応混合物を窒素で５分間にわたってパージした。得られた反応混合物を、連続的に撹拌しながら、１００℃で１２時間にわたって加熱した。反応混合物をセライトのパッドに通して濾過し、酢酸エチルで洗浄した。濾液を酢酸エチル（２００ｍＬ）で希釈し、ＥｔＯＡｃ（２×１００ｍＬ）で抽出し、冷水（１００ｍＬ）およびブライン（５０ｍＬ）で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させ、真空下で濃縮して、粗生成物を得て、これを、フラッシュクロマトグラフィー（１００〜２００シリカゲル）を介して精製し、１０％ＥｔＯＡｃ：ヘキサンで溶離して、Ｃ−１０（１４ｇ、９１．４％収率）を得た。
【０１９１】
メタノール（６００ｍＬ）中の化合物Ｃ−１０（５２ｇ、１４６．８９ｍｍｏｌ）の溶液に、濃ＨＣｌ（５０ｍＬ）を添加し、得られた溶液を６０℃で終夜加熱した。反応混合物を室温に冷却し、真空下で濃縮した。残留物をＥｔＯＡｃ（２００ｍＬ）で希釈し、飽和ＮａＨＣＯ３水溶液（２×１５０ｍＬ）で洗浄した。有機層をＮａ２ＳＯ４で乾燥させ、濃縮して、所望生成物Ｃ−９（３５ｇ、８８．９％収率）を得た。
【０１９２】
ＤＭＦ（１００ｍＬ）中の化合物Ｃ−９（１７．５ｇ、６４．８１ｍｍｏｌ）の溶液に、ＫＯＨ（１４．５ｇ、２５９．５４ｍｍｏｌ）を添加し、混合物を１５分間にわたって撹拌した。ＤＭＦ（５０ｍＬ）中のヨウ素（３２．７ｇ、１２９．６２ｍｍｏｌ）の溶液を０℃でゆっくりと添加し、反応混合物を室温で３０分間にわたって撹拌した。反応の進行をＴＬＣによってモニターし、次いで、反応混合物を水（２００ｍＬ）で希釈し、酢酸エチル（２×２００ｍＬ）で抽出した。有機層を飽和メタ重亜硫酸ナトリウム水溶液（２×１５０ｍＬ）および水（３×１００ｍＬ）で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、真空下で濃縮して、粗生成物Ｃ−８（２１ｇ）を得た。
【０１９３】
ＤＣＭ（２３０ｍＬ）中のＣ−８（２１．０ｇ、５３．０２ｍｍｏｌ）の溶液に、ｐ−ＴｓＯＨ（１．８ｇ、１０．６０ｍｍｏｌ）を添加し、混合物を０℃に冷却した。化合物Ｒ−３（７．０４ｍＬ、７９．５４ｍｍｏｌ）を上記の溶液に滴下添加し、反応混合物を室温で終夜撹拌した。ＴＬＣモニタリングは、反応の完了を示した。反応混合物をＤＣＭ（２×１５０ｍＬ）で希釈し、飽和ＮａＨＣＯ３水溶液（２００ｍＬ）およびブライン（２００ｍＬ）で洗浄した。有機層を無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、真空で濃縮して、粗生成物を得て、これを、フラッシュクロマトグラフィーによって精製して、Ｃ−７を得た。
【０１９４】
トルエン（２００ｍＬ）中のＣ−７（１０．０ｇ、２０．８３ｍｍｏｌ）の溶液を、窒素で２０分間にわたって脱気し、続いて、Ｒ−４（４．８９ｍＬ、２２．９１ｍｍｏｌ）およびＰｄ（ＰＰｈ３）４（１．２ｇ、１．０４ｍｍｏｌ）を添加した。反応混合物を窒素でさらに５分間にわたってパージし、次いで、１００℃で撹拌した。２時間後、ＴＬＣは、反応の完了を示す。反応混合物を室温に冷却し、セライトパッドに通して濾過し、残留物を酢酸エチルで洗浄した。濃縮した濾液をカラムクロマトグラフィー（中性アルミナ）によって精製し、２〜５％ＥｔＯＡｃ：ヘキサンで溶離して、生成物Ｃ−６（６．４ｇ、５７．６％収率）を得た。
【０１９５】
調製１１：２−（６−（２−エチル−５−フルオロ−４−メトキシフェニル）−１Ｈ−インダゾール−３−イル）−４，５，６，７−テトラヒドロ−１Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］ピリジン（Ｃ−３）
【化１７】
2020518581.tif 000023
トルエン（１００ｍＬ）中の化合物Ｃ−６（６．４ｇ、１２．３７ｍｍｏｌ）の溶液に、化合物Ｃ−５（５．９ｇ、１２．３７ｍｍｏｌ）を添加した。反応混合物を窒素で２０分間にわたって脱気し、続いて、ヨウ化銅（Ｉ）（４７０ｍｇ、２．４７ｍｍｏｌ）およびＰｄ（ＰＰｈ３）４（７１４ｍｇ、１．２３７ｍｍｏｌ）を添加し、次いで、１００℃で１２時間にわたって撹拌した。反応の進行をＴＬＣによってモニターした。反応物を室温に冷却し、セライトパッドに通して濾過し、残留物を酢酸エチルで洗浄した。有機層を水で希釈し、分離し、有機部分をブラインで洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過した。濾液を減圧下で濃縮して、粗生成物を得て、これを、カラムクロマトグラフィー（１００〜２００メッシュサイズシリカ）によって精製し、２０％ＥｔＯＡｃ：ヘキサンで溶離して、Ｃ−４（４ｇ、４５．９％）を得た。
【０１９６】
ジオキサン（３０ｍＬ）中の化合物Ｃ−４（４．０ｇ、５．６ｍｍｏｌ）の溶液に、濃ＨＣｌ（３０ｍＬ）を添加した。反応混合物を７０℃で１６時間にわたって撹拌した。反応の進行をＬＣＭＳによってモニターした。反応物を室温に冷却し、真空で濃縮し、ジエチルエーテルでトリチュレートし、分取ＨＰＬＣを介して精製して、所望化合物Ｃ−３（０．６５ｇ、２９．５％）を得た。
【０１９７】
（実施例１２）
１−（２−（６−（２−エチル−５−フルオロ−４−ヒドロキシフェニル）−１Ｈ−インダゾール−３−イル）−１，４，６，７−テトラヒドロ−５Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］ピリジン−５−イル）−２−モルホリノエタン−１−オン（Ｃ−１）
【化１８】
2020518581.tif 000024
室温のＤＣＭ（０．５ｍｌ）中のＣ−３（１８０ｍｇ、０．４６０ｍｍｏｌ）の混合物に、三臭化ホウ素、ＤＣＭ（１００ｍｌ）中１ｍ（２．２９９ｍｌ、２．２９９ｍｍｏｌ）を添加した。得られた混合物を３０分間にわたって撹拌した後、それを濃縮した。得られた残留物をＭｅＯＨ（３×３．０ｍＬ）と共蒸発させ、ＡｃＯＨ：Ｈ２Ｏの１：１混合物（３．０ｍＬ）に再溶解し、濾過し、逆相分取ＨＰＬＣによって精製した。所望の画分を組み合わせ、フリーズドライして、Ｃ−２（（５−エチル−２−フルオロ−４−（３−（４，５，６，７−テトラヒドロ−１Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］ピリジン−２−イル）−１Ｈ−インダゾール−６−イル）フェノール）をＴＦＡ塩として得た。
【０１９８】
室温のＤＭＦ（０．５ｍｌ）中の、Ｃ−２、ＴＦＡ（１５ｍｇ、０．０３１ｍｍｏｌ）および７”（２当量、０．０６１ｍｍｏｌ）の混合物に、ＨＡＴＵ（２５．５ｍｇ、０．０６７ｍｍｏｌ）およびＤＩＥＡ（０．０４３ｍｌ、０．２４４ｍｍｏｌ）を添加した。得られた混合物を室温で終夜撹拌した。反応物をＭｅＯＨ（０．５０００ｍｌ）および水（０．５００ｍｌ）で希釈した。ＬｉＯＨ（２．１９３ｍｇ、０．０９２ｍｍｏｌ）を添加した。得られた混合物を６５℃で１時間にわたって加熱した。次いで、反応物を濃縮し、得られた残留物を、ＤＣＭ（０．５００ｍｌ）およびＴＦＡ（０．５００ｍｌ）の混合物により室温で３０分間にわたって処理し、濃縮し、ＡｃＯＨ：Ｈ２Ｏの１：１混合物（１．５ｍＬ）に再溶解し、濾過し、逆相分取ＨＰＬＣによって精製して、化合物Ｃ−１をＴＦＡ塩として得た。（ｍ／ｚ）：［Ｍ＋Ｈ］＋Ｃ２７Ｈ２９ＦＮ６Ｏ３の計算値５０４．２３、実測値５０５．２。
【０１９９】
生物学的アッセイ
化合物１を、下記の生物学的アッセイのうちの１つまたは複数において特徴付けた。
【０２００】
アッセイ１：生化学的ＪＡＫキナーゼアッセイ
４つのランサスクリーンＪＡＫ生化学的アッセイ（ＪＡＫ１、２、３およびＴｙｋ２）のパネルを、共通のキナーゼ反応緩衝液（５０ｍＭ  ＨＥＰＥＳ、ｐＨ７．５、０．０１％Ｂｒｉｊ−３５、１０ｍＭ  ＭｇＣｌ２および１ｍＭ  ＥＧＴＡ）中で行った。組換えＧＳＴタグ付きＪＡＫ酵素およびＧＦＰタグ付きＳＴＡＴ１ペプチド基質を、Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓから入手した。
【０２０１】
連続希釈化合物を、４つのＪＡＫ酵素のそれぞれおよび基質とともに、白色３８４ウェルマイクロプレート（Ｃｏｒｎｉｎｇ）中、周囲温度で１時間にわたってプレインキュベートした。その後、ＡＴＰを、１％ＤＭＳＯを含む１０μＬの総体積で添加して、キナーゼ反応を開始した。ＪＡＫ１、２、３およびＴｙｋ２についての最終酵素濃度は、それぞれ、４．２ｎＭ、０．１ｎＭ、１ｎＭおよび０．２５ｎＭであり、使用した対応するＫｍ
ＡＴＰ濃度は、２５μＭ、３μＭ、１．６μＭおよび１０μＭであるのに対し、基質濃度は、４つすべてのアッセイについて２００ｎＭである。キナーゼ反応を周囲温度で１時間にわたって進めさせた後、ＴＲ−ＦＲＥＴ希釈緩衝液（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）中のＥＤＴＡ（１０ｍＭ最終濃度）およびＴｂ抗ｐＳＴＡＴ１（ｐＴｙｒ７０１）抗体（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ、２ｎＭ最終濃度）の１０μＬの調製物を添加した。プレートを周囲温度で１時間にわたってインキュベートさせた後、エンビジョンリーダー（Ｐｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ）で読み取った。放出比シグナル（５２０ｎｍ／４９５ｎｍ）を記録し、ＤＭＳＯおよびバックグラウンド対照に基づくパーセント阻害値を算出するために利用した。
【０２０２】
用量応答分析のために、パーセント阻害データを化合物濃度に対してプロットし、ＩＣ５０値を４パラメーターロバスト当てはめモデルからプリズムソフトウェア（ＧｒａｐｈＰａｄ  Ｓｏｆｔｗａｒｅ）を用いて決定した。結果をｐＩＣ５０（ＩＣ５０の負の対数）として表現し、その後、チェン−プルソフ式を使用して、ｐＫｉ（解離定数Ｋｉの負の対数）に変換した。
【０２０３】
化合物１は、下記の酵素効力を呈した。
【表５】
2020518581.tif 000025
【０２０４】
アッセイ２：細胞ＪＡＫ効力アッセイ：ＩＬ−１３の阻害
アルファスクリーンＪＡＫＩ細胞効力アッセイを、ＢＥＡＳ−２Ｂヒト肺上皮細胞（ＡＴＣＣ）におけるインターロイキン−１３（ＩＬ−１３、Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ）誘発性ＳＴＡＴ６リン酸化を測定することによって行った。抗ＳＴＡＴ６抗体（Ｃｅｌｌ  Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）を、アルファスクリーンアクセプタービーズ（Ｐｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ）とコンジュゲートさせたのに対し、抗ｐＳＴＡＴ６（ｐＴｙｒ６４１）抗体（Ｃｅｌｌ  Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）を、ＥＺ−リンクスルホ−ＮＨＳ−ビオチン（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）を使用してビオチン化した。
【０２０５】
ＢＥＡＳ−２Ｂ細胞を、１０％ＦＢＳ（Ｈｙｃｌｏｎｅ）、１００Ｕ／ｍＬペニシリン、１００μｇ／ｍＬストレプトマイシン（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）および２ｍＭグルタマックス（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）を補充した５０％ＤＭＥＭ／５０％Ｆ−１２培地（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）中、５％ＣＯ２加湿インキュベーター内、３７℃で増殖させた。アッセイの１日目、細胞を、２５μＬの培地を加えた白色ポリ−Ｄ−リシンコーティング３８４ウェルプレート（Ｃｏｒｎｉｎｇ）中に７，５００細胞／ウェル密度で播種し、インキュベーター内で終夜接着させた。アッセイの２日目、培地を除去し、用量応答の試験化合物を含有する１２μＬのアッセイ緩衝液（ハンクス平衡塩類溶液／ＨＢＳＳ、２５ｍＭ  ＨＥＰＥＳおよび１ｍｇ／ｍＬウシ血清アルブミン／ＢＳＡ）で置きかえた。化合物をＤＭＳＯ中で連続希釈し、次いで、培地中でさらに１０００倍希釈して、最終ＤＭＳＯ濃度を０．１％にした。細胞を、試験化合物とともに３７℃で１時間にわたってインキュベートし、続いて、１２μｌの予め温めておいたＩＬ−１３（アッセイ緩衝液中８０ｎｇ／ｍＬ）を刺激のために添加した。３７℃で３０分間にわたってインキュベートした後、アッセイ緩衝液（化合物およびＩＬ−１３を含有）を除去し、１０μＬの細胞溶解緩衝液（２５ｍＭ  ＨＥＰＥＳ、０．１％ＳＤＳ、１％ＮＰ−４０、５ｍＭ  ＭｇＣｌ２、１．３ｍＭ  ＥＤＴＡ、１ｍＭ  ＥＧＴＡ、ならびにＲｏｃｈｅ  Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ製のコンプリートウルトラミニプロテアーゼ阻害剤およびＰｈｏｓＳＴＯＰを補充）。プレートを周囲温度で３０分間にわたって振とうした後、検出試薬を添加した。ビオチン抗ｐＳＴＡＴ６および抗ＳＴＡＴ６コンジュゲートアクセプタービーズの混合物を最初に添加し、周囲温度で２時間にわたってインキュベートし、続いて、ストレプトアビジンコンジュゲートドナービーズ（Ｐｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ）を添加した。最低でも２時間のインキュベーション後、アッセイプレートをエンビジョンプレートリーダーで読み取った。アルファスクリーン発光シグナルを記録し、ＤＭＳＯおよびバックグラウンド対照に基づくパーセント阻害値を算出するために利用した。
【０２０６】
用量応答分析のために、パーセント阻害データを化合物濃度に対してプロットし、ＩＣ５０値を４パラメーターロバスト当てはめモデルからプリズムソフトウェアを用いて決定した。結果を、ＩＣ５０値の負の対数であるｐＩＣ５０として表現してもよい。化合物１は、このアッセイにおいて７．９のｐＩＣ５０値を呈した。
【０２０７】
アッセイ３：細胞ＪＡＫ効力アッセイ：ヒトＰＢＭＣにおけるＩＬ−２／抗ＣＤ３刺激ＩＦＮγの阻害
インターロイキン−２（ＩＬ−２）／抗ＣＤ３刺激インターフェロンガンマ（ＩＦＮγ）の阻害についての試験化合物の効力を、ヒト全血（Ｓｔａｎｆｏｒｄ  Ｂｌｏｏｄ  Ｃｅｎｔｅｒ）から単離したヒト末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）において測定した。ＩＬ−２はＪＡＫを介してシグナル伝達することから、このアッセイは、ＪＡＫ細胞効力の尺度を提供する。
【０２０８】
（１）ヒト末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）を、健康なドナーのヒト全血から、フィコール勾配を使用して単離した。細胞を、３７℃、５％ＣＯ２加湿インキュベーター内、１０％熱失活ウシ胎仔血清（ＦＢＳ、Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）、２ｍＭグルタマックス（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）、２５ｍＭ  ＨＥＰＥＳ（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）および１×ペニシリン／ストレプトマイシン（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）を補充したＲＰＭＩ（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）中で培養した。細胞を、培地（５０μＬ）中に２００，０００細胞／ウェルで播種し、１時間にわたって培養した。化合物をＤＭＳＯ中で連続希釈し、次いで、培地中でさらに５００倍希釈した（２×最終アッセイ濃度に）。試験化合物希釈物（１００μＬ／ウェル）を細胞に添加し、３７℃、５％ＣＯ２で１時間にわたってインキュベートし、続いて、予め温めておいたアッセイ培地（５０μＬ）中のＩＬ−２（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ；最終濃度１００ｎｇ／ｍＬ）および抗ＣＤ３（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ；最終濃度１μｇ／ｍＬ）を２４時間にわたって添加した。
【０２０９】
（２）サイトカイン刺激後、細胞を５００ｇで５分間にわたって遠心分離し、上清を除去し、−８０℃で冷凍した。ＩＬ−２／抗ＣＤ３に応答した試験化合物の阻害効力を決定するために、ＥＬＩＳＡ（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ）を介して上清ＩＦＮγ濃度を測定した。ＩＣ５０値を、ＩＦＮγの濃度対化合物濃度の阻害曲線の分析から決定した。データは、ｐＩＣ５０（ＩＣ５０の負の１０進対数）値として表現される。化合物１は、このアッセイにおいて約６．７のｐＩＣ５０値を呈した。
【０２１０】
アッセイ４：細胞ＪＡＫ効力アッセイ：ＣＤ４＋Ｔ細胞におけるＩＬ−２刺激ｐＳＴＡＴ５の阻害
インターロイキン−２（ＩＬ−２）／抗ＣＤ３刺激ＳＴＡＴ５リン酸化の阻害についての試験化合物の効力を、ヒト全血（Ｓｔａｎｆｏｒｄ  Ｂｌｏｏｄ  Ｃｅｎｔｅｒ）から単離したヒト末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）中のＣＤ４陽性（ＣＤ４＋）Ｔ細胞において、フローサイトメトリーを使用して測定した。ＩＬ−２はＪＡＫを介してシグナル伝達することから、このアッセイは、ＪＡＫ細胞効力の尺度を提供する。
【０２１１】
ＣＤ４＋Ｔ細胞を、フィコエリトロビリン（ＰＥ）コンジュゲート抗ＣＤ４抗体（クローンＲＰＡ−Ｔ４、ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）を使用して同定し、一方、アレクサフルオル６４７コンジュゲート抗ｐＳＴＡＴ５抗体（ｐＹ６９４、クローン４７、ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）を使用して、ＳＴＡＴ５リン酸化を検出した。
【０２１２】
（１）ＩＬ−２／抗ＣＤ３によるサイトカイン刺激を２４時間の代わりに３０分間にわたって実施したことを除いて、アッセイ３段落（１）のプロトコールに準拠した。
【０２１３】
（２）サイトカイン刺激後、細胞を、予め温めておいた固定溶液（２００μＬ；ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）により、３７℃、５％ＣＯ２で１０分間にわたって固定し、ＤＰＢＳ緩衝液（１ｍＬ、Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）で２回洗浄し、氷冷パーム緩衝液ＩＩＩ（１０００μＬ、ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）に４℃で３０分間にわたって再懸濁した。細胞を、ＤＰＢＳ中２％ＦＢＳ（ＦＡＣＳ緩衝液）で２回洗浄し、次いで、抗ＣＤ４  ＰＥ（１：５０希釈）および抗ＣＤ３アレクサフルオル６４７（１：５希釈）を含有するＦＡＣＳ緩衝液（１００μＬ）に、暗所にて室温で６０分間にわたって再懸濁した。インキュベーション後、細胞をＦＡＣＳ緩衝液中で２回洗浄した後、ＬＳＲＩＩフローサイトメーター（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）を使用して分析した。ＩＬ−２／抗ＣＤ３に応答した試験化合物の阻害効力を決定するために、ｐＳＴＡＴ５のメジアン蛍光強度（ＭＦＩ）をＣＤ４＋Ｔ細胞において測定した。ＩＣ５０値を、ＭＦＩ対化合物濃度の阻害曲線の分析から決定した。データは、ｐＩＣ５０（ＩＣ５０の負の１０進対数）値として表現される。化合物１は、このアッセイにおいて約７．７のｐＩＣ５０値を呈した。
【０２１４】
アッセイ５：細胞ＪＡＫ効力アッセイ：ヒトＰＢＭＣにおけるＩＬ−６刺激ＣＣＬ２（ＭＣＰ−１）の阻害
インターロイキン−６（ＩＬ−６）刺激ＣＣＬ２（ＭＣＰ−１）産生の阻害についての試験化合物の効力を、ヒト全血（Ｓｔａｎｆｏｒｄ  Ｂｌｏｏｄ  Ｃｅｎｔｅｒ）から単離されたヒト末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）において測定した。ＩＬ−６はＪＡＫを介してシグナル伝達することから、このアッセイは、ＪＡＫ細胞効力の遠位測定を提供する。
【０２１５】
（１）アッセイ３段落（１）のプロトコールに準拠して、試験化合物とともにインキュベーションした。本アッセイでは、試験化合物をウェルに添加し、インキュベートした後、予め温めておいたアッセイ培地（５０μＬ）中のＩＬ−６（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ；最終濃度１０ｎｇ／ｍｌ）を添加した。
【０２１６】
（２）４８時間にわたるサイトカイン刺激後、細胞を５００ｇで５分間にわたって遠心分離し、上清を除去し、−８０℃で冷凍した。ＩＬ−６に応答した試験化合物の阻害効力を決定するために、ＥＬＩＳＡ（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ）を介して上清ＣＣＬ２（ＭＣＰ−１）濃度を測定した。ＩＣ５０値は、ＣＣＬ２／ＭＣＰ−１の濃度対化合物濃度の阻害曲線の分析から決定した。データは、ｐＩＣ５０（負の１０進対数ＩＣ５０）値として表現される。化合物１は、このアッセイにおいて約６．４のｐＩＣ５０値を呈した。
【０２１７】
アッセイ６：細胞ＪＡＫ効力アッセイ：ＩＦＮγ誘発性ｐＳＴＡＴ１の阻害
インターフェロンガンマ（ＩＦＮγ）刺激ＳＴＡＴ１リン酸化の阻害についての試験化合物の効力を、ヒト全血（Ｓｔａｎｆｏｒｄ  Ｂｌｏｏｄ  Ｃｅｎｔｅｒ）由来のＣＤ１４陽性（ＣＤ１４＋）単球において、フローサイトメトリーを使用して測定した。ＩＦＮγはＪＡＫを介してシグナル伝達することから、このアッセイは、ＪＡＫ細胞効力の測定を提供する。
【０２１８】
単球は、フルオレセインイソチオシアネート（ＦＩＴＣ）コンジュゲート抗ＣＤ１４抗体（クローンＲＭ０５２、Ｂｅｃｋｍａｎ  Ｃｏｕｌｔｅｒ）を使用して同定し、アレクサフルオル６４７コンジュゲート抗ｐＳＴＡＴ１抗体（ｐＹ７０１、クローン４ａ、ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）を使用して、ＳＴＡＴ１リン酸化を検出した。
【０２１９】
ヒト末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）を、健康なドナーのヒト全血から、フィコール勾配を使用して単離した。細胞を、３７℃、５％ＣＯ２加湿インキュベーター内、１０％ウシ胎仔血清（ＦＢＳ、Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）、２ｍＭグルタマックス（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）、２５ｍＭ  ＨＥＰＥＳ（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）および１×ペニシリン／ストレプトマイシン（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）を補充したＲＰＭＩ（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）中で培養した。細胞を、培地（２００μＬ）中に２５０，０００細胞／ウェルで播種し、１時間にわたって培養し、次いで、種々の濃度の試験化合物を含有するアッセイ培地（５０μＬ）（０．１％ウシ血清アルブミン（Ｓｉｇｍａ）、２ｍＭグルタマックス、２５ｍＭ  ＨＥＰＥＳおよび１×ペニシリンストレプトマイシンを補充したＲＰＭＩ）に再懸濁した。化合物をＤＭＳＯ中で連続希釈し、次いで、培地中でもう１０００倍希釈して、最終ＤＭＳＯ濃度を０．１％にした。試験化合物希釈物を、細胞とともに、３７℃、５％ＣＯ２で１時間にわたってインキュベートし、続いて、培地（５０μＬ）中の予め温めておいたＩＦＮγ（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ）を、０．６ｎｇ／ｍＬの最終濃度で３０分間にわたって添加した。サイトカイン刺激後、細胞を、予め温めておいた固定溶液（１００μＬ）（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）により、３７℃、５％ＣＯ２で１０分間にわたって固定し、ＦＡＣＳ緩衝液（１ｍＬ）（ＰＢＳ中１％ＢＳＡ）で２回洗浄し、１：１０  抗ＣＤ１４  ＦＩＴＣ：ＦＡＣＳ緩衝液（１００μＬ）に再懸濁し、４℃で１５分間にわたってインキュベートした。細胞を１回洗浄し、次いで、氷冷パーム緩衝液ＩＩＩ（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）（１００μＬ）に４℃で３０分間にわたって再懸濁した。細胞をＦＡＣＳ緩衝液で２回洗浄し、次いで、１：１０  抗ｐＳＴＡＴ１アレクサフルオル６４７：ＦＡＣＳ緩衝液（１００μＬ）に、室温、暗所で３０分間にわたって再懸濁し、ＦＡＣＳ緩衝液中で２回洗浄し、ＬＳＲＩＩフローサイトメーター（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）を使用して分析した。
【０２２０】
試験化合物の阻害効力を決定するために、ｐＳＴＡＴ１のメジアン蛍光強度（ＭＦＩ）をＣＤ１４＋単球において測定した。ＩＣ５０値は、ＭＦＩ対化合物濃度の阻害曲線の分析から決定した。データは、ｐＩＣ５０（負の１０進対数ＩＣ５０）値として表現される。化合物１は、このアッセイにおいて約７．１のｐＩＣ５０値を呈した。
【０２２１】
アッセイ７：ウサギの目における眼内薬物動態
このアッセイの目的は、ウサギの眼組織における試験化合物の薬物動態を決定することであった。
【０２２２】
溶液製剤
実施例２において調製した１−（２−（６−（２−エチル−５−フルオロ−４−ヒドロキシフェニル）−４−フルオロ−１Ｈ−インダゾール−３−イル）−１，４，６，７−テトラヒドロ−５Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］ピリジン−５−イル）−２−モルホリノエタン−１−オン（１）を、２％２−ヒドロキシプロピル−β−シクロデキストリンに溶解して、１ｍｇ／ｍＬの標的濃度に到達した。試験化合物の溶液の両側性硝子体内注射（５０μＬ／目）を、ニュージーランド白色ウサギ（５０μｇ／目）に投与した。試験化合物濃度を、眼組織：硝子体、房水、網膜／脈絡膜および虹彩毛様体において、注射後所定の時点（３０分、４時間、１日、３日、７日、１４日）で測定した。２匹のウサギ（４つの目）に各時点で投薬した。硝子体組織において、化合物１は、およそ９時間の半減期および最終的におよそ２日間の終末相半減期を持つ初期の濃度の減少を特徴とする、濃度の二相減少を呈した。化合物は、網膜および脈絡膜領域にも迅速に分配することが分かり、硝子体組織と同様の薬物動態プロファイルを示す。
【０２２３】
懸濁物製剤
懸濁物製剤は、実施例２の化合物１（形態１）を、生理食塩水中の０．５％ヒドロキシプロピルメチルセルロース（ＨＰＭＣ  Ｅ５）＋０．０２％Ｔｗｅｅｎ８０と組み合わせて、０．２５ｍｇ／目、１ｍｇ／目および４ｍｇ／目用量についてそれぞれ５ｍｇ／ｍＬ、２０ｍｇ／ｍＬおよび８０ｍｇ／ｍＬの標的濃度に到達することによって調製した。試験化合物の懸濁物の両側性硝子体内注射（５０μＬ／目）を、ニュージーランド白色ウサギに投与した。試験化合物濃度は、眼組織において、溶液製剤アッセイと同様に、注射後３０分、４時間、２４時間、７２時間、７日、１４日、２８日、５６日および８４日で測定した。４ｍｇ／目用量群については、注射後１６８日における追加の時点でも収集した。すべての用量群が、目における測定可能な薬物濃度を、この研究において試験した最後の時点まで実証した。１２週（８４日）では、すべての用量について強固な持続的曝露が観察された。持続的曝露は、４ｍｇ／目用量群について、２４週（８４日）で観察された。化合物は、硝子体組織において、３０分から２４週まで、およそ５から１０μｇ／ｍＬ／日の薬物クリアランス速度で、薬物濃度の線形減少を示した。クリアランス速度は、ビヒクルへの化合物１の溶解性および溶液製剤における眼の薬物動態学的挙動と一致している。すべての用量群が、目における測定可能な薬物濃度を、この研究において試験した最後の時点まで実証した。したがって、薬物曝露は、この研究において観察されたものよりも長いことが妥当と思われる。血漿における薬物濃度を測定し、３つすべての濃度で、硝子体組織における濃度よりも少なくとも３桁低いことが分かった。
【０２２４】
懸濁物製剤は、実施例５の化合物１（形態２）を、生理食塩水中の０．５％ヒドロキシプロピルメチルセルロース（ＨＰＭＣ  Ｅ５）＋０．０２％Ｔｗｅｅｎ８０と組み合わせて、０．０２ｍｇ／目、０．０５ｍｇ／目、０．１ｍｇ／目および１ｍｇ／目用量についてそれぞれ０．４ｍｇ／ｍＬ、１ｍｇ／ｍＬ、２ｍｇ／ｍＬおよび２０ｍｇ／ｍＬの標的濃度に到達することによって調製した。試験化合物の懸濁物の両側性硝子体内注射（５０μＬ／目）を、ダッチベルテッドウサギに投与した。試験化合物濃度は、硝子体液、眼房水、虹彩毛様体、網膜、網膜色素上皮／脈絡膜細胞および血漿において、注射後３０分、７日、１４日、２８日、４２日および５６日で測定した。化合物は、硝子体組織において、３０分から試験した最後の時点まで、薬物濃度の非常に緩やかな減少を示した（０．０２ｍｇ／目用量については２８日、０．０５ｍｇ／目および１ｍｇ／目用量については４２日、ならびに０．１ｍｇ／目用量については５６日）。すべての用量群が、目における測定可能な薬物濃度を、この研究において試験した最後の時点まで実証した。したがって、薬物曝露は、この研究において観察されたものよりも長いことが妥当と思われる。血漿における薬物濃度を測定し、３つすべての濃度で、硝子体組織における濃度よりも少なくとも３桁低いことが分かった。３桁は、対数スケール（すなわち、非対数スケールで１０００）に対応する。
【０２２５】
アッセイ８：薬力学的アッセイ：ラットにおけるＩＬ６誘発性ｐＳＴＡＴ３の阻害
ＩＬ−６誘発性ｐＳＴＡＴ３を阻害する試験化合物の単回硝子体内投与の能力を、ラット網膜／脈絡膜ホモジネートにおいて測定した。
【０２２６】
懸濁物製剤は、実施例２の化合物１を、精製水中の０．５％ヒドロキシプロピルメチルセルロース（ＨＰＭＣ  Ｅ５  ＬＶ）、０．０２％Ｔｗｅｅｎ８０および９ｍｇ／ｍＬ塩化ナトリウムと組み合わせて、１０ｍｇ／ｍＬの標的濃度に到達することによって調製した。
【０２２７】
雌ルイスラットに、懸濁物製剤を硝子体内（ＩＶＴ）投薬（目当たり５μＬ）した。３日後、ＩＬ−６（Ｐｅｐｒｏｔｅｃｈ；０．１ｍｇ／ｍＬ；目当たり５μＬ）またはビヒクルを硝子体内投与して、ｐＳＴＡＴ３を誘発した。ＩＬ−６の２回目のＩＶＴ注射の１時間後に、眼組織を解離した。網膜／脈絡膜組織をホモジネートし、ＥＬＩＳＡ（Ｃｅｌｌ  Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ）を使用してｐＳＴＡＴ３レベルを測定した。ＩＬ−６誘発性ｐＳＴＡＴ３のパーセント阻害を、ビヒクル／ビヒクルおよびビヒクル／ＩＬ−６群と比較して算出した。１００％よりも大きい阻害は、ｐＳＴＡＴ３レベルの、ビヒクル／ビヒクル群において観察されるもの未満への低減を反映している。
【０２２８】
ＩＬ−６負荷の前に３日間の前処置を行った場合、懸濁物製剤によって投与された５０μｇ用量の化合物１は、網膜／脈絡膜組織において、ＩＬ−６誘発性ｐＳＴＡＴ３を１１６％阻害した。
【０２２９】
アッセイ９：薬力学的アッセイ：ウサギの目におけるＩＦＮγ誘発性ＩＰ−１０の阻害
インターフェロン−ガンマ（ＩＦＮγ）誘発性ＩＰ−１０タンパク質レベルを阻害する試験化合物の単回硝子体内投与の能力を、ウサギの硝子体および網膜／脈絡膜組織において測定した。
【０２３０】
懸濁物製剤を、実施例２の化合物１（形態１）を、精製水中の０．５％ヒドロキシプロピルメチルセルロース（ＨＰＭＣ  Ｅ５）、０．０２％Ｔｗｅｅｎ８０および９ｍｇ／ｍＬ塩化ナトリウムと組み合わせることによって調製して、２０ｍｇ／ｍＬの標的濃度に到達させた。
【０２３１】
雄ニュージーランド白色ウサギ（Ｌｉｖｅｏｎ  Ｂｉｏｌａｂｓ、Ｉｎｄｉａ）を研究に使用した。動物を、到着後、研究施設（Ｊｕｂｉｌａｎｔ  Ｂｉｏｓｙｓ  Ｌｔｄ．、Ｉｎｄｉａ）で順化させた。各ウサギに、目当たり５０μＬの総用量体積で合計２回の硝子体内（ＩＶＴ）注射を与えた。１回目のＩＶＴ注射（目当たり４５μＬ）では、０．９ｍｇの試験化合物またはビヒクルを送達した。１週間後、２回目のＩＶＴ注射（目当たり５μＬ）では、ＩＰ−１０の誘導のためにＩＦＮγ（１μｇ／目；ストック溶液１ｍｇ／ｍＬ；Ｋｉｎｇｆｉｓｈｅｒ  Ｂｉｏｔｅｃｈ）またはビヒクルを送達した。注射当日、ウサギを、ケタミン（３５ｍｇ／ｋｇ）およびキシラジン（５ｍｇ／ｋｇ）の筋肉内注射で麻酔した。深く麻酔がかかったら、各目を滅菌生理食塩水ですすぎ、３１ゲージ針付きの０．５ｍＬのインスリンシリンジ（５０単位＝０．５ｍＬ）を使用し、ブラウンスタイン固定キャリパー（２  ３／４”）で直筋から３．５ｍｍかつ角膜輪部から４ｍｍの位置をマークすることによって、両目の上鼻側にＩＶＴ注射を実施した。
【０２３２】
ＩＦＮγの２回目のＩＶＴ注射の２４時間後に組織を採取した。硝子体液（ＶＨ）および網膜／脈絡膜組織（Ｒ／Ｃ）を採取し、ホモジネートし、ウサギＣＸＣＬ１０（ＩＰ−１０）ＥＬＩＳＡキット（Ｋｉｎｇｆｉｓｈｅｒ  Ｂｉｏｔｅｃｈ）を使用して、ＩＰ−１０タンパク質レベルを測定した。ＩＦＮγ誘発性ＩＰ−１０のパーセント阻害を、ビヒクル／ビヒクルおよびビヒクル／ＩＦＮγ群と比較して算出した。
【０２３３】
ＩＦＮγ負荷の前に１週間の前処置を行った場合、化合物１の懸濁物製剤は、硝子体液および網膜／脈絡膜組織において、ＩＦＮγ誘発性ＩＰ−１０をそれぞれ８１％および８０％阻害した。ＩＦＮγ負荷の前に１カ月の前処置を行った場合でも同様の効能が観察された。
【０２３４】
アッセイ１０：マウスおよびミニブタの皮膚における皮膚薬物動態
このアッセイの目的は、無傷のマウスまたはミニブタの皮膚への２４時間曝露後の、試験化合物の表皮、真皮および血漿薬物動態を決定することであった。
【０２３５】
１−（２−（６−（２−エチル−５−フルオロ−４−ヒドロキシフェニル）−４−フルオロ−１Ｈ−インダゾール−３−イル）−１，４，６，７−テトラヒドロ−５Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］ピリジン−５−イル）−２−モルホリノエタン−１−オン（１）は、表６においてそれぞれ製剤Ａまたは製剤Ｂとして記述されている通り、クリーム剤または軟膏剤中０．５％（ｗ／ｗ）に製剤化した。
【０２３６】
投薬の２４時間前に、２５ｇの雄Ｂａｌｂ／ｃマウスの背部の毛を剃って、少なくとも６ｃｍ２の領域（体表面の約１０％）を露出させ、別個の実験において、１０ｋｇのゲッティンゲンミニブタの背部の毛を剃って、少なくとも４５０ｃｍ２の領域（体表面の約１０％）を露出させた。イソフルラン麻酔後、時間ゼロで、試験化合物をマウスまたはミニブタの背部に２５μＬ／ｃｍ２の用量で塗布した。皮膚を粘着性カバーで覆って、ケージまたは寝具への化合物の損失を防止した。
【０２３７】
２４時間曝露後、背部を石鹸および水で穏やかに洗浄して、吸収されなかった薬物を除去し、パッドで乾燥させた（ｐａｔｔｅｄ  ｄｒｙ）。この洗浄の直後に、マウスから心臓穿刺によっておよびミニブタから静脈穿刺を介して、採血した。次いで、粘着テープ剥離によって外皮（角質層）を除去した。表皮が露出したら、０．５ｃｍのパンチ生検を取り出した。表皮および真皮を迅速に分離し、秤量し、スナップ凍結させた。マウスにおいては投薬４８時間後、ならびにミニブタにおいては投薬４８時間、９４時間および１６８時間（７日）後に、同様の試料を取得した。
【０２３８】
表皮および真皮試料を、１：１０（ｗ／ｖ）水中、Ｃｏｖａｒｉｓ超音波ホモジナイザーを使用してホモジネートした。試料を３体積のアセトニトリル中で抽出し、ＬＣ−ＭＳ分析を介して標準曲線に対して定量化した。以下の表７に示されている血漿、表皮および真皮についての薬物動態パラメーターＡＵＣ０−ｔから明らかなように、表皮および真皮層において有意な化合物曝露が呈されたのに対し、血漿曝露は、マウスにおいて製剤Ａ中で無視できる程度であり、マウスにおいて製剤Ｂ中でおよびミニブタにおいて両方の製剤中で定量下限未満であった。
【表６】
2020518581.tif 000026
【表７】
2020518581.tif 000027
【０２３９】
アッセイ１１：マウスにおける肺および血漿薬物動態
化合物１の血漿および肺濃度ならびにそれらの比を、下記の様式で決定した。Ｃｈａｒｌｅｓ  Ｒｉｖｅｒ  ＬａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓからのＢＡＬＢ／ｃマウスをアッセイにおいて使用した。実施例２の化合物１形態１を、通常の生理食塩水（水中０．９％塩化ナトリウム）中の０．０１％Ｔｗｅｅｎ８０中、０．１ｍｇ／ｍＬの濃度で懸濁剤として製剤化した。５０μＬの懸濁物製剤を、経口吸引によってマウスの気管に導入した。種々の時点（０．０８３、１、４、２４、４８、７２および９６時間）。投薬後、心臓穿刺を介して血液試料を取り出し、無傷の肺をマウスから切除した。血液サンプルを４℃にておよそ１２，０００ｒｐｍで４分間遠心することにより（Ｅｐｐｅｎｄｏｒｆ  ｃｅｎｔｒｉｆｕｇｅ，５８０４Ｒ）、血漿を収集した。肺をパッドで乾燥し、計量し、１：３の希釈度で滅菌水中にてホモジナイズした。化合物１の血漿中濃度および肺内濃度を、試験マトリクスにおける検量線を構築する分析標準に対するＬＣ−ＭＳ解析によって決定した。肺における良好な曝露は、３６０μｇ  ｈｒ／ｇの肺ＡＵＣ（０〜９６時間）で見られた。肺対血漿比を、μｇ  ｈｒ／ｇを単位とする肺ＡＵＣとμｇ  ｈｒ／ｍＬを単位とする血漿ＡＵＣとの比として決定した（ＡＵＣは、慣例的に、試験化合物濃度対時間の曲線下面積として定義される）。肺対血漿のＡＵＣ比は、１７８０であり、血漿における非常に低い曝露を示していた。
【０２４０】
アッセイ１２：薬力学的アッセイ：ウサギの目におけるＩＦＮγ誘発性ｐＳＴＡＴ１の阻害
インターフェロン−ガンマ（ＩＦＮγ）誘発性ＳＴＡＴ１タンパク質のリン酸化（ｐＳＴＡＴ１）を阻害する試験化合物の単回硝子体内投与の能力を、ウサギの網膜／脈絡膜組織において測定した。
【０２４１】
懸濁物製剤を、実施例２の化合物１（形態１）を、精製水中の０．５％ヒドロキシプロピルメチルセルロース（ＨＰＭＣ  Ｅ５）、０．０２％Ｔｗｅｅｎ８０および９ｍｇ／ｍＬ塩化ナトリウムと組み合わせることによって調製して、２０ｍｇ／ｍＬの標的濃度に到達させた。
【０２４２】
雄ニュージーランド白色ウサギ（Ｌｉｖｅｏｎ  Ｂｉｏｌａｂｓ、Ｉｎｄｉａ）を研究に使用した。動物を、到着後、研究施設（Ｊｕｂｉｌａｎｔ  Ｂｉｏｓｙｓ  Ｌｔｄ．、Ｉｎｄｉａ）で順化させた。各ウサギに、目当たり５０μＬの総用量体積で合計２回の硝子体内（ＩＶＴ）注射を与えた。１回目のＩＶＴ注射（目当たり４５μＬ）では、０．９ｍｇの試験化合物またはビヒクルを送達した。１週間後、２回目のＩＶＴ注射（目当たり５μＬ）では、ＩＰ−１０の誘導のためにＩＦＮγ（１μｇ／目；ストック溶液１ｍｇ／ｍＬ；Ｋｉｎｇｆｉｓｈｅｒ  Ｂｉｏｔｅｃｈ）またはビヒクルを送達した。注射当日、ウサギを、ケタミン（３５ｍｇ／ｋｇ）およびキシラジン（５ｍｇ／ｋｇ）の筋肉内注射で麻酔した。深く麻酔がかかったら、各目を滅菌生理食塩水ですすぎ、３１ゲージ針付きの０．５ｍＬのインスリンシリンジ（５０単位＝０．５ｍＬ）を使用し、ブラウンスタイン固定キャリパー（２  ３／４”）で直筋から３．５ｍｍかつ角膜輪部から４ｍｍの位置をマークすることによって、両目の上鼻側にＩＶＴ注射を実施した。
【０２４３】
ＩＦＮγの２回目のＩＶＴ注射の２時間後、組織を採取した。網膜／脈絡膜組織（Ｒ／Ｃ）を採取し、ホモジネートし、ＰｒｏｔｅｉｎＳｉｍｐｌｅ  ＷＥＳ機器での定量的ウエスタンブロットによってｐＳＴＡＴ１レベルを測定した。ＩＦＮγ誘発性ｐＳＴＡＴ１のパーセント阻害を、ビヒクル／ビヒクルおよびビヒクル／ＩＦＮγ群と比較して算出した。
【０２４４】
ＩＦＮγ負荷の前に１週間の前処置では、化合物１の懸濁物製剤は、ＩＦＮγ誘発性ｐＳＴＡＴ１を８５％阻害した。ＩＦＮγ負荷の前の単回用量の懸濁物製剤での３カ月の前処置の後では、化合物１の懸濁物製剤は、ＩＦＮγ誘発性ｐＳＴＡＴ１を７６％阻害した。
【０２４５】
懸濁物製剤は、実施例５の化合物１（形態２）を、通常の生理食塩水中の０．５％ヒドロキシプロピルメチルセルロース（ＨＰＭＣ  Ｅ５）＋０．０２％Ｔｗｅｅｎ８０と組み合わせることによって調製して、１１．１、３．３および１．１ｍｇ／ｍＬの標的濃度に到達させた。
【０２４６】
雄ニュージーランド白色ウサギ（Ｌｉｖｅｏｎ  Ｂｉｏｌａｂｓ、Ｉｎｄｉａ）を研究に使用した。動物を、到着後、研究施設（Ｊｕｂｉｌａｎｔ  Ｂｉｏｓｙｓ  Ｌｔｄ．、Ｉｎｄｉａ）で順化させた。各ウサギに、目当たり５０μＬの総用量体積で合計２回の硝子体内（ＩＶＴ）注射を与えた。１回目のＩＶＴ注射（目当たり４５μＬ）では、５００μｇ、１５０μｇまたは５０μｇの試験化合物またはビヒクルを送達した。２週間後、２回目のＩＶＴ注射（目当たり５μＬ）では、ＩＰ−１０の誘導のためにＩＦＮγ（１μｇ／目；ストック溶液１ｍｇ／ｍＬ；Ｋｉｎｇｆｉｓｈｅｒ  Ｂｉｏｔｅｃｈ）またはビヒクルを送達した。注射当日、ウサギを、ケタミン（３５ｍｇ／ｋｇ）およびキシラジン（５ｍｇ／ｋｇ）の筋肉内注射で麻酔した。深く麻酔がかかったら、各目を滅菌生理食塩水ですすぎ、３１ゲージ針付きの０．５ｍＬのインスリンシリンジ（５０単位＝０．５ｍＬ）を使用し、ブラウンスタイン固定キャリパー（２  ３／４”）で直筋から３．５ｍｍかつ角膜輪部から４ｍｍの位置をマークすることによって、両目の上鼻側にＩＶＴ注射を実施した。
【０２４７】
ＩＦＮγの２回目のＩＶＴ注射の２時間後、組織を採取した。網膜／脈絡膜組織（Ｒ／Ｃ）を採取し、ホモジネートし、ＰｒｏｔｅｉｎＳｉｍｐｌｅ  ＷＥＳ機器での定量的ウエスタンブロットによってｐＳＴＡＴ１レベルを測定した。ＩＦＮγ誘発性ｐＳＴＡＴ１のパーセント阻害を、ビヒクル／ビヒクルおよびビヒクル／ＩＦＮγ群と比較して算出した。
【０２４８】
ＩＦＮγ負荷の前に２週間の前処置を行った場合、化合物１の懸濁物製剤は、ＩＦＮγ誘発性ｐＳＴＡＴ１を、５００μｇ用量については７９％、１５０μｇ用量については５８％、および５０μｇ用量については６１％阻害した。
【０２４９】
アッセイ１３：キノームスクリーニングおよびジニ係数
化合物１およびＣ−１を、他のキナーゼに対してスクリーニングして、それらの選択性プロファイルを評価した。
【０２５０】
キナーゼタグ付きＴ７ファージ株を、ＢＬ２１株由来のＥ．ｃｏｌｉ宿主中の２４ウェルブロックにおいて並行して増殖させた。Ｅ．ｃｏｌｉを対数期まで増殖させ、冷凍ストックからのＴ７ファージを感染させ（感染多重度＝０．４）、溶解するまで（９０〜１５０分）、３２℃で振とうしながらインキュベートした。溶解物を遠心分離（６，０００×ｇ）し、濾過（０．２μｍ）して、細胞残屑を除去した。残りのキナーゼをＨＥＫ−２９３細胞において産生させ、その後、ｑＰＣＲ検出のためにＤＮＡでタグ付けした。
【０２５１】
ストレプトアビジンコーティング磁気ビーズを、ビオチン化小分子リガンドにより、室温で３０分間にわたって処理して、キナーゼアッセイのための親和性樹脂を発生させた。リガンド化ビーズを過剰なビオチンでブロックし、ブロッキング緩衝液（シーブロック（Ｐｉｅｒｃｅ）、１％ＢＳＡ、０．０５％Ｔｗｅｅｎ２０、１ｍＭ  ＤＴＴ）で洗浄して、未結合のリガンドを除去し、非特異的ファージ結合を低減させた。１×結合緩衝液（２０％シーブロック、０．１７×ＰＢＳ、０．０５％Ｔｗｅｅｎ２０、６ｍＭ  ＤＴＴ）中で、キナーゼ、リガンド化親和性ビーズおよび試験化合物を組み合わせることにより、結合反応を組み立てた。試験化合物を１００％ＤＭＳＯ中４０×ストックとして調製し、アッセイに直接希釈した。すべての反応は、ポリプロピレン３８４ウェルプレート中、０．０４ｍｌの最終体積で実施した。アッセイプレートを、室温で１時間にわたって振とうしながらインキュベートし、親和性ビーズを洗浄緩衝液（１×ＰＢＳ、０．０５％Ｔｗｅｅｎ２０）で洗浄した。次いで、ビーズを溶離緩衝液（１×ＰＢＳ、０．０５％Ｔｗｅｅｎ２０、０．５μＭ非ビオチン化親和性リガンド）に再懸濁し、室温で３０分間にわたって振とうしながらインキュベートした。溶出液におけるキナーゼ濃度を、ｑＰＣＲによって測定した。
【０２５２】
化合物を１μＭでスクリーニングし、表８および９における一次スクリーニング結合相互作用についての結果を「％阻害」（＝１００−（（試験化合物シグナル−陽性対照シグナル）／（（陰性対照シグナル）−（陽性対照シグナル））×１００）として報告し、ここで、陰性対照はＤＭＳＯであり、陽性対照は対照化合物である。
【表８】
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【表９】
2020518581.tif 000029
【０２５３】
化合物１は、化合物Ｃ−１よりも、ＣＤＫ７およびＣＤＫ９について、有意に低い結合阻害を呈することが分かった。化合物１は、いくつかの他のキナーゼについても、より低い結合阻害を有していた。
【０２５４】
化合物１およびＣ−１の両方を、３５の異なるキナーゼに対してスクリーニングした。両方の化合物について、ジニ係数を決定した。化合物１は０．６２のジニ係数を有し、化合物Ｃ−１は０．４６のジニ係数を有していた。ジニ係数を使用して、キナーゼのパネルに対する化合物の選択性を表現する（Ｇｒａｃｚｙｋ、Ｊ．  Ｍｅｄ．  Ｃｈｅｍ．、２００７年、５０巻、５７７３〜５７７９頁）。より高い数字は、より選択的な化合物に対応する。
【０２５５】
化合物１と化合物Ｃ−１との間の唯一の構造差は、コアにおけるフルオロ基の存在である。この構造差は、化合物のキノーム選択性に重要な影響を有することが示された。
【０２５６】
アッセイ１４：細胞毒性アッセイ
セルタイターグロールミネッセンス細胞生存／細胞毒性アッセイを、正常な増殖条件下、ＢＥＡＳ−２Ｂヒト肺上皮細胞（ＡＴＣＣ）において行った。
【０２５７】
細胞を、１０％ＦＢＳ（Ｈｙｃｌｏｎｅ）、１００Ｕ／ｍＬペニシリン、１００μｇ／ｍＬストレプトマイシン（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）および２ｍＭグルタマックス（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）を補充した５０％ＤＭＥＭ／５０％Ｆ−１２培地（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）中、５％ＣＯ２加湿インキュベーター内、３７℃で増殖させた。アッセイの１日目、細胞を、２５μＬの培地を加えた白色３８４ウェル組織培養プレート（Ｃｏｒｎｉｎｇ）中に５００細胞／ウェル密度で播種し、インキュベーター内で終夜接着させた。アッセイの２日目、用量応答の試験化合物を含有する５μＬの培地を添加し、３７℃で４８時間にわたってインキュベートした。３０μＬのセルタイターグロー検出溶液（Ｐｒｏｍｅｇａ）をその後添加し、オービタルシェーカー上で５分間にわたって混合し、さらに１０分間にわたってインキュベートした後、エンビジョンリーダーで読み取った。発光シグナルを記録し、パーセントＤＭＳＯ対照値を算出した。
【０２５８】
用量応答分析のために、パーセントＤＭＳＯ対照データを化合物濃度に対してプロットし、各データ点を線で結ぶことによって用量応答曲線を導出した。各曲線が１５％阻害閾値と交差する濃度を、ＣＣ１５として定義する。
【０２５９】
このアッセイにおいてより高いＣＣ１５価を呈する試験化合物は、細胞毒性を引き起こす可能性が低いことが期待される。
【０２６０】
化合物１は３．１６μＭのＣＣ１５を呈したのに対し、化合物Ｃ−１は６３０ｎＭのＣＣ１５を呈した。したがって、化合物１は、このアッセイに基づき、化合物Ｃ−１よりも細胞毒性を引き起こす可能性が有意に低い。
【０２６１】
化合物１と化合物Ｃ−１との間の唯一の構造差は、コアにおけるフルオロ基の存在である。この構造差は、化合物の細胞毒性に重要な影響を有することが示された。
【０２６２】
本発明について、その具体的な態様または実施形態を参照して記述してきたが、本発明の真の趣旨および範囲から逸脱することなく、種々の変更が為され得るまたは同等物で代用され得ることが、当業者には理解されるであろう。加えて、適用される特許法および規制によって許可される程度まで、本明細書において引用されているすべての刊行物、特許および特許出願は、各文書が参照により本明細書に個々に組み込まれたのと同程度まで、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【国際調査報告】
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