(57)【要約】  本開示は、ヒトＣＤ３８と結合する抗体において見出される抗体配列を提供する。特に、本開示は、抗ヒトＣＤ３８抗体の配列を提供する。薬学的な製造化および開発に適合する特徴を示す、かかる配列を含む抗体およびその抗原結合部分は、医学的方法および組成物、特にがんの治療に有用である完全ヒト抗体（例えば、完全ヒトモノクローナル抗体または抗原結合断片）として提供できる。【選択図】図８
2020531003.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
可変重鎖の相補性決定領域３としてのａＣＤ３８−ａ−３２３−ＨＣＤＲ３アミノ酸配列を含む、抗体またはその抗原結合断片。
【請求項２】
ａ）可変重鎖の相補性決定領域１としてのａＣＤ３８−ａ−３２３−ＨＣＤＲ１アミノ酸配列と、
ｂ）可変重鎖の相補性決定領域２としてのａＣＤ３８−ａ−３２３−ＨＣＤＲ２アミノ酸配列と、をさらに含む、請求項１に記載の抗体またはその抗原結合断片。
【請求項３】
ａ）可変軽鎖の相補性決定領域１としてのａＣＤ３８−ａ−３２３−ＬＣＤＲ１アミノ酸配列と、
ｂ）可変軽鎖の相補性決定領域２としてのａＣＤ３８−ａ−３２３−ＬＣＤＲ２アミノ酸配列と、
ｃ）可変軽鎖の相補性決定領域３としてのａＣＤ３８−ａ−３２３−ＬＣＤＲ３アミノ酸配列と、をさらに含む、請求項１または請求項２に記載の抗体またはその抗原結合断片。
【請求項４】
前記抗体またはその抗原結合断片が、ａＣＤ３８−ａ−３２３−ＨＣＤＲ１２３アミノ酸配列を含む可変重鎖を含む、請求項１〜３のいずれか一項に記載の抗体またはその抗原結合断片。
【請求項５】
前記抗体またはその抗原結合断片が、ａＣＤ３８−ａ−３２３−ＬＣＤＲ１２３アミノ酸配列を含む可変軽鎖をさらに含む、請求項１〜４のいずれか一項に記載の抗体またはその抗原結合断片。
【請求項６】
前記抗体またはその抗原結合断片が、
ａ）配列番号１の配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号２の配列を含むＨＣＤＲ２、配列番号３の配列を含むＨＣＤＲ３、配列番号５の配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号６の配列を含むＬＣＤＲ２、および配列番号７の配列を含むＬＣＤＲ３を含む、抗体またはその抗原結合断片、
ｂ）配列番号４の配列を含む重鎖可変領域、および配列番号８の配列を含む軽鎖可変領域を含む、抗体またはその抗原結合断片、
ｃ）配列番号１０の配列を含む重鎖可変領域、および配列番号１１の配列を含む軽鎖可変領域を含む、抗体またはその抗原結合断片、ならびに
ｄ）配列番号１２の配列を含む重鎖可変領域、および配列番号１３の配列を含む軽鎖可変領域を含む、抗体またはその抗原結合断片からなる群から選択される、請求項１〜５のいずれか一項に記載の抗体またはその抗原結合断片。
【請求項７】
前記抗体またはその抗原結合断片が、ａ−フコシル化されている、請求項１〜６のいずれかに記載の抗体またはその抗原結合断片。
【請求項８】
ヒトＣＤ３８のエピトープと特異的に結合する抗体または抗原結合断片であって、前記エピトープが、配列番号９の少なくともアミノ酸残基１２０、１２１、および１４１を含む、抗体または抗原結合断片。
【請求項９】
前記エピトープが、配列番号９のアミノ酸残基２４１をさらに含む、請求項８に記載の抗体または抗原結合断片。
【請求項１０】
請求項１〜７のいずれか一項に記載の抗体または抗原結合断片によって結合されるヒトＣＤ３８のエピトープと特異的に結合する、抗体またはその抗原結合断片。
【請求項１１】
ヒトＣＤ３８との結合について、請求項１〜７のいずれか一項に記載の抗体または抗原結合断片と競合する、抗体またはその抗原結合断片。
【請求項１２】
請求項１〜９のいずれか一項に記載の抗体またはその抗原結合断片の親和性成熟バリアント。
【請求項１３】
前記抗体またはその抗原結合断片が、モノクローナル抗体、ドメイン抗体、一本鎖抗体、Ｆａｂ断片、Ｆ（ａｂ’）２断片、一本鎖可変断片（ｓｃＦｖ）、ｓｃＦｖ−Ｆｃ断片、一本鎖抗体（ｓｃＡｂ）、アプタマー、またはナノボディである、請求項１〜１２のいずれか一項に記載の抗体またはその抗原結合断片。
【請求項１４】
前記抗体またはその抗原結合断片が、ウサギ、マウス、キメラ、ヒト化、または完全ヒト抗原結合抗体である、請求項１〜１３のいずれか一項に記載の抗体またはその抗原結合断片。
【請求項１５】
前記抗体が、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、およびＩｇＧ４アイソタイプ抗体からなる群から選択される、請求項１〜１４のいずれか一項に記載の抗体またはその抗原結合断片。
【請求項１６】
前記抗体またはその抗原結合断片が、二重特異性抗体、多重特異性抗体、または治療剤または診断剤をさらに含む免疫複合体に含まれる、請求項１〜１５のいずれか一項に記載の抗体またはその抗原結合断片。
【請求項１７】
前記抗体またはその抗原結合断片が、ヒトＣＤ３８の細胞外ドメインと結合する、請求項１〜１６のいずれか一項に記載の抗体またはその抗原結合断片。
【請求項１８】
前記抗体またはその抗原結合断片が、それらの表面上でヒトＣＤ３８を発現する細胞と結合する、ＣＤ３８調節抗体剤である、請求項１〜１７のいずれか一項に記載の抗体またはその抗原結合断片。
【請求項１９】
請求項１〜１８のいずれか一項に記載の抗体またはその抗原結合断片をコードする、核酸分子。
【請求項２０】
請求項１９に記載の核酸分子を含む、核酸ベクター。
【請求項２１】
請求項２０に記載の核酸ベクターを含む、宿主細胞。
【請求項２２】
請求項２１に記載の宿主細胞を培養することにより、請求項１〜１９のいずれか一項に記載の抗体またはその抗原結合断片を産生する、方法。
【請求項２３】
請求項１〜１９のいずれか一項に記載の抗体またはその抗原結合断片を含む、組成物。
【請求項２４】
薬学的に許容される担体または賦形剤をさらに含む、請求項２３に記載の組成物。
【請求項２５】
前記組成物が、がんの治療において使用するためのものである、請求項２４に記載の薬学的組成物。
【請求項２６】
がんを治療するための医薬品の製造における、請求項１〜１８のいずれか一項に記載の抗体もしくはその抗原結合断片、または請求項２３に記載の組成物の使用。
【請求項２７】
対象においてがんを治療する方法であって、請求項２４に記載の組成物の有効量を前記対象に投与することを含む、方法。
【請求項２８】
前記対象に第２の薬剤を同時、または任意の順序で連続的に投与することをさらに含む、請求項２７に記載の方法。
【請求項２９】
前記対象が、固形腫瘍を有する、請求項２７または２８に記載の方法。
【請求項３０】
前記対象が、血液がんを有する、請求項２８または２９に記載の方法。
【請求項３１】
抗ＣＤ３８抗体を調製する方法であって、請求項１〜１８のいずれか一項に記載の抗体を提供することと、前記抗体を親和性成熟させることとを含み、産生された前記抗ＣＤ３８抗体が、親抗体よりもＣＤ３８に対して高い親和性を有する、方法。
【請求項３２】
薬学的組成物を調製する方法であって、請求項３１に記載の方法に従って調製された抗体を提供することと、少なくとも１つ以上の薬学的に許容される賦形剤と前記抗体を共製剤化することとを含む、方法。
【請求項３３】
容器内に請求項２３に記載の組成物を含む、キット。
【発明の詳細な説明】
【背景技術】
【０００１】
ＣＤ３８は、特にニコチンアミドアデニンジヌクレオチドから環状アデノシン二リン酸リボース（ｃＡＤＰＲ）を生成する重要なＡＤＰリボシルシクラーゼとして、酵素活性を有するＩＩ型膜受容体糖タンパク質である。異なる細胞外刺激は、ｃＡＤＰＲ産生を誘発できる。ｃＡＤＰＲは、細胞増殖、分化、接着、およびシグナル伝達などの多くの細胞機能に関与する細胞内カルシウムストックの動員にとって重要である。ＣＤ３８は当初、白血球活性化マーカーとして同定されていたが、受容体および細胞外酵素としての二重の役割を果たし、細胞シグナル伝達および細胞恒常性活性を寄与する。ＣＤ３８は、慢性リンパ球性白血病、骨髄腫、および卵巣がんなどの悪性腫瘍を含む、様々なヒト疾患に関連している（Ｑｕａｒｏｎａ  Ｖ，ｅｔ  ａｌ．，２０１３；Ｗｅｉ  Ｗ，ｅｔ  ａｌ．，２０１４）。
【０００２】
ＣＤ３８は、ＴおよびＢリンパ球、ならびにＮＫ細胞などのエフェクター細胞だけでなく、制御性ＴおよびＢ細胞などの免疫抑制細胞、骨髄由来抑制細胞（ＭＤＳＣ）、または腫瘍関連マクロファージをさらに含む、免疫学的応答に関与する多くの細胞種（要するに免疫細胞として称される）の表面上に見出される（Ｃｈｅｖｒｉｅｒ  Ｓ  ｅｔ  ａｌ．２０１７）。例えば、肺がん患者において、抗ＰＤ−１治療は、ＣＤ３８を高レベルで発現するＰＤ−１発現Ｔ細胞の増殖を誘導した（Ｋａｍｐｈｏｒｓｔ  ＡＯ  ｅｔ  ａｌ．，２０１７）。免疫細胞の生物学的活性、特に生理学的および病理学的状態における免疫応答の調節のためのｃＡＤＰＲおよびＣＤ３８を介したＣａ２＋シグナル伝達の重要性は、文献内に記載されている（Ｍｏｒａｎｄｉ  Ｆ  ｅｔ  ａｌ．，２０１５；Ｒａｈ  ＳＹ  ｅｔ  ａｌ．，２０１５）。
【０００３】
ＣＤ３８は、疾患の全ての段階での多発性骨髄腫患者、および予後不良を伴うＣＬＬ患者におけるがん細胞によって高度に発現される。主にＣＤ３８アンタゴニストまたは阻害剤として作用する化合物を生成することにより、様々なＣＤ３８標的化療法が開発されている（ｄｅ  Ｗｅｅｒｓ  Ｍ  ｅｔ  ａｌ．，２０１１；  ｖａｎ  ｄｅ  Ｄｏｎｋ  ＮＷ  ｅｔ  ａｌ．，２０１６；  Ｈｏｒｅｎｓｔｅｉｎ  ＡＬ  ｅｔ  ａｌ．，２０１７）。ＣＤ３８アゴニストとして作用する抗ＣＤ３８モノクローナル抗体（ＩＢ４と称されたものなど）は、カルシウムイオンの動員、ＣＤ３８の分断、ＮＫ細胞媒介性細胞傷害、サイトカイン分泌（特にインターロイキン６およびインターフェロンガンマ）、およびヒトＴリンパ球の増殖、他の活性を誘発することを特徴としており、免疫毒素を生成するように修飾されている（Ｍａｌａｖａｓｉ  Ｆ  ｅｔ  ａｌ．，２００８；Ｈａｒａ−Ｙｏｋｏｙａｍａ  Ｍ  ｅｔ  ａｌ．，２００８；Ｆｒａｓｃａ  Ｌ  ｅｔ  ａｌ，２００６；Ｋａｒａｋａｓｈｅｖａ  Ｔ  ｅｔ  ａｌ．，２０１５）。免疫細胞に対するかかる正の効果は、Ｃａ２＋動員の誘導、ＣＤ３８酵素活性の阻害、および／または細胞内シグナル伝達経路の活性化に関連し得る。
【０００４】
モノクローナル抗体は、ＣＤ３８発現腫瘍細胞の標的化された直接的な殺傷のために開発され、臨床において有望な結果を示している。しかしながら、かかる抗ＣＤ３８抗体の活性は、がん細胞の表面上にＣＤ３８が高度に発現している腫瘍に制限され得る。固形腫瘍において、ＣＤ３８の発現は、一般に腫瘍細胞上で低いか、または存在せず、エフェクターおよび抑制の両方の腫瘍浸潤性免疫細胞と関連し得る。したがって、標的化された細胞の殺傷または活性化を伴うＣＤ３８特異的アゴニスト、または調節特性などの異なる成分の組み合わせに起因する活性、薬学的開発との互換性を示す抗ＣＤ３８抗体が依然として必要とされており、そしてそれは、がんの治療、特に固形がんの治療に活用でき得る。
【発明の概要】
【０００５】
いくつかの実施形態において、本発明は、新規ＣＤ３８調節抗体剤を提供する。いくつかの実施形態において、提供されるＣＤ３８調節抗体剤は、ＣＤ３８、特にヒトＣＤ３８、多くの実施形態においてヒトＣＤ３８細胞外ドメインの部位と特異的に結合する抗体または抗原結合断片である。
【０００６】
いくつかの実施形態において、提供される抗体または抗原結合断片は、１つ以上のＣＤ３８の特徴を調節する。すなわち、いくつかの実施形態において、ＣＤ３８のレベルおよび／または活性、および／またはその１つ以上の下流の効果は、提供される抗体が存在する場合と存在しない場合とで検出可能なほどに変更される。代替的または追加的に、いくつかの実施形態において、提供される抗体が存在する場合のＣＤ３８のレベルおよび／または活性、および／またはその１つ以上の下流の効果は、参照ＣＤ３８調節抗体剤（例えば、既知の望ましい属性、例えばＣＤ３８の１つ以上の特徴を刺激する既知の能力を有するＩＢ−４などの参照抗ＣＤ３８抗体）を使用した場合に、同等の条件下で観察されるものと同等以上である。
【０００７】
多くの実施形態において、提供されるＣＤ３８調節抗体剤（例えば、抗ＣＤ３８抗体またはその抗原結合断片）が存在する場合、１つ以上のＣＤ３８の特徴が増強される。例えば、いくつかの実施形態において、提供されるＣＤ３８調節抗体剤（例えば、抗ＣＤ３８抗体またはその抗原結合断片）の存在は、免疫細胞の活性化および／または増殖の増加と相関する。したがって、提供されるＣＤ３８調節抗体剤は、本明細書では多くの場合に「アゴニスト」を指す。しかしながら、当業者は、本開示の教示が、提供される抗体またはその抗原結合断片の特定の作用メカニズムによって制限されないことを理解するであろう。提供される抗体の関連する構造的および／または機能的特徴は、本明細書に記載されており、それ自体を表す。
【０００８】
いくつかの実施形態において、提供されるＣＤ３８調節抗体剤（例えば、ＣＤ３８抗体または抗原結合断片）は、例えば、特定の免疫エフェクター細胞（例えば、ＮＫ細胞および／またはＴ細胞）に対する効果によって特徴付けられ得る。代替的または追加的に、いくつかの実施形態において、提供されるＣＤ３８調節抗体剤（例えば、ＣＤ３８抗体または抗原結合断片）は、例えば、免疫抑制細胞に対する効果によって特徴付けられ得る。例えば、いくつかの実施形態において、ＣＤ３８調節抗体剤は、ＮＫ細胞およびＴ細胞などの免疫エフェクター細胞に対する活性化特性、ならびに／または免疫抑制細胞などのＣＤ３８高発現細胞に対する細胞傷害特性を示す。代替的または追加的に、いくつかの実施形態において、提供されるＣＤ３８調節抗体剤は、ヒトＣＤ３８細胞外ドメインにおける特定のエピトープとの結合に関連する、ならびに／またはそれらを特に薬学的用途および／もしくは製造に適したものにする１つ以上の特徴を特徴付ける。
【０００９】
提供されるＣＤ３８調節抗体剤（例えば、提供される抗体またはその抗原結合断片（またはそのバリアント））、それらを含む組成物、および／またはそれらの使用を含む提供される技術は、医学的に有用である。いくつかの実施形態において、かかる提供される技術は、がん治療および／または予防において有用である。
【００１０】
いくつかの実施形態において、提供されるＣＤ３８調節抗体剤は、ａＣＤ３８−ａ−３２３の配列を有する抗体によって例示され、より一般的には、抗体または薬剤は、例えば、可変重鎖の相補性決定領域３としてのａＣＤ３８−ａ−３２３−ＨＣＤＲ３アミノ酸配列（配列番号３）を含む、１つ以上の抗原結合断片もしくはその一部であるか、またはそれらを含み、および／または、いくつかの実施形態において、ａＣＤ３８−ａ−３２３  ＨＣＤＲ１（配列番号１）およびＨＣＤＲ２（配列番号２）配列の一方または両方を含み、および／またはヒトＣＤ３８細胞外ドメインの結合についてａＣＤ３８−ａ−３２３と競合する。いくつかの実施形態において、提供される抗体またはその抗原結合断片は、１０−８Ｍの範囲またはそれ以下（１０−９ｍの範囲）内のＫｄでヒトＣＤ３８と結合し、好ましくは、抗体またはその抗原結合断片は、１０−８Ｍ〜１０−１１Ｍの範囲内のＫｄでヒトＣＤ３８と結合する。いくつかの実施形態におけるＫｄは、１０−８〜１０−１１である。抗体またはその抗原結合断片の結合親和性を評価するためのＫｄは、Ｂｉａｃｏｒｅ分析またはＦｏｒｔｅ  Ｂｉｏ  Ｏｃｔｅｔ  Ｓｙｓｔｅｍを使用した分析などの表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）を含む、標準的な方法論によって取得できる。
【００１１】
いくつかの実施形態において、提供されるＣＤ３８調節抗体剤（例えば、提供される抗体またはその抗原結合断片）は、ａＣＤ３８−ａ−３２３により結合されるヒトＣＤ３８上のエピトープと結合する。いくつかの実施形態において、かかる提供されるＣＤ３８調節抗体剤は、ヒトＣＤ３８細胞外ドメインと結合し得る。いくつかの実施形態において、提供されるＣＤ３８調節抗体剤は、ＣＤ３８のエピトープと結合し得る（例えば、本明細書に記載されるか、または当該分野で知られている別の方法の１つ以上のアッセイを使用して評価される場合）。いくつかの実施形態において、提供される抗体またはその抗原結合断片は、１０−８Ｍの範囲のＫｄ値でヒトおよびカニクイザルＣＤ３８（例えば、ヒトおよびカニクイザルＣＤ３８上の細胞外エピトープと）と結合し得、その抗原結合断片は、１０−８〜１０−１１ＭのＫｄでヒトＣＤ３８と結合する。
【００１２】
いくつかの実施形態において、提供される抗体またはその抗原結合断片は、変異ヒトＣＤ３８（非変異ヒトＣＤ３８（配列番号９）と比較して）と結合し、変異ヒトＣＤ３８において、２７４位のセリン残基は、フェニルアラニンで置換されている。
【００１３】
いくつかの実施形態において、提供される抗体またはその抗原結合断片は、変異ヒトＣＤ３８（非変異ヒトＣＤ３８（配列番号９）と比較して）と結合し、変異ヒトＣＤ３８において、２０２位のアスパラギン酸残基は、グリシン残基で置換されている。
【００１４】
いくつかの実施形態において、提供される抗体またはその抗原結合断片は、変異ヒトＣＤ３８（非変異ヒトＣＤ３８（配列番号９）と比較して）と結合し、変異ヒトＣＤ３８において、２７４位のセリン残基は、フェニルアラニンで置換されており、かつ２０２位のアスパラギン酸残基は、グリシン残基で置換されている。
【００１５】
とりわけ、本開示は、本明細書に記載される特に有用なＣＤ３８調節抗体剤（例えば、抗ＣＤ３８抗体またはその抗原結合断片）を同定および／または特徴付けるために利用できる手順（図１）を提供する（例えば、ヒトＣＤ３８（例えば、その細胞外エピトープ）との特異的結合などの特定の構造的および／または機能的特徴により特徴付けられる抗ＣＤ３８抗体もしくはその抗原結合断片、本明細書に記載される１つ以上のＣＤＲ配列要素の包括（（特に、任意でＨＣＤＲ１および／またはＨＣＤＲ２要素と組み合わせたＨＣＤＲ３配列要素の包含）、本明細書に記載される細胞活性化活性、本明細書に記載される細胞傷害活性（例えば、それらの表面上に比較的高レベルのＣＤ３８を有する免疫調節細胞に関して）、およびそれらの組み合わせ）。いくつかの実施形態において、本明細書に記載される特に有用な抗ＣＤ３８抗体は、複数のかかる特徴によって特徴付けられる。いくつかの実施形態において、本明細書に記載される１つ以上の抗体は、ＣＤ３８調節抗体剤として特徴付けられ得る。
【００１６】
したがって、本明細書で例示されるように、ａＣＤ３８−ａ−３２３配列（特にａＣＤ３８−ａ−３２３−ＨＣＤＲ３（配列番号３）および／またはａＣＤ３８−ａ−３２３−ＬＣＤＲ３（配列番号７））を含む特定の抗体および／または抗原結合断片は、かかる所望される構造的および／または機能的特徴によって特徴付けられ；かかる抗体および／またはその抗原結合断片は、本明細書ではＣＤ３８調節抗体剤を指し得る。さらに、本開示によれば、ａＣＤ３８−ａ−３２３と競合する抗体およびその抗原結合断片は、特に有用な抗体であり得、かかる抗体および／またはその抗原結合断片は、本明細書ではＣＤ３８調節抗体剤をさらに指し得る。
【００１７】
本明細書に記載される抗体（および／またはその抗原結合断片）は、医学的（例えば、治療および／または予防、例えばがんの治療において）、および／またはヒトＣＤ３８細胞外ドメイン内のエピトープの標的化を必要とするか、または関与する方法に関して使用するために特に有用であり得る。提供される抗体またはその抗原結合断片は、最も適切なアイソタイプ、特にＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、およびＩｇＧ４アイソタイプ抗体、より具体的にはヒトＩｇＧ１からなる群からのヒトアイソタイプを提示するように調製され得る。
【００１８】
一態様において、本発明は、ａＣＤ３８−ａ−３２３−ＨＣＤＲ３アミノ酸配列（配列番号３）およびそれを含むポリペプチド、例えば、可変重鎖の相補性決定領域３としてのａＣＤ３８−ａ−３２３−ＨＣＤＲ３アミノ酸配列（配列番号３）を含む抗体または抗原結合断片などを提供する。いくつかの実施形態において、かかる抗体または抗原結合断片は、
ａ）可変重鎖の相補性決定領域１としてのａＣＤ３８−ａ−３２３−ＨＣＤＲ１アミノ酸配列（配列番号１）、および／または
ｂ）可変重鎖の相補性決定領域２としてのａＣＤ３８−ａ−３２３−ＨＣＤＲ２アミノ酸配列（配列番号２）のようなさらなるａＣＤ３８−ａ−３２３アミノ酸配列要素を含むことによってさらに特徴付けられ得る。
【００１９】
いくつかの実施形態において、提供される抗体またはその抗原結合断片は、上記で定義される可変重鎖の相補性決定領域（すなわち、ａＣＤ３８−ａ−３２３アミノ酸配列要素）をさらに正確な順序で含み得、特にその結合および機能特性を正確に発揮するために、ａＣＤ３８−ａ−３２３−ＨＣＤＲ１２３アミノ酸配列（配列番号４）に含まれるものなど、抗体フレーム配列によって特異的に分離される。例えば、いくつかの実施形態において、提供される抗体またはその抗原結合断片は、ａＣＤ３８−ａ−３２３−ＨＣＤＲ１２３アミノ酸配列（配列番号４またはそのＨＣＤＲ１（配列番号１）、ＨＣＤＲ２（配列番号２）、およびＨＣＤＲ３（配列番号３）配列）、ならびに任意で、
ａ）可変軽鎖の相補性決定領域１としてのａＣＤ３８−ａ−３２３−ＬＣＤＲ１アミノ酸配列（配列番号５）、
ｂ）可変軽鎖の相補性決定領域２としてのａＣＤ３８−ａ−３２３−ＬＣＤＲ２アミノ酸配列（配列番号６）、および
ｃ）可変軽鎖の相補性決定領域３としてのａＣＤ３８−ａ−３２３−ＬＣＤＲ３アミノ酸配列（配列番号７）を含むことができる。
【００２０】
したがって、いくつかの実施形態において、本発明は、ａＣＤ３８−ａ−３２３−ＨＣＤＲ１２３アミノ酸配列（配列番号４）を含む可変重鎖を含む、単離された抗体またはその抗原結合断片を提供する。好ましくは、かかる単離された抗体またはその抗原結合断片は、実施例に記載されるように、ａＣＤ３８−ａ−３２３−ＬＣＤＲ１２３アミノ酸配列（配列番号８）を含む可変軽鎖をさらに含む。
【００２１】
いくつかの実施形態において、本発明は、以下の配列を含む可変重鎖：
2020531003.tif 000003
および／または以下の配列を含む可変軽鎖配列：を含む単離された抗体またはその抗原結合断片を提供する
2020531003.tif 000004
【００２２】
いくつかの実施形態において、ａＣＤ３８−ａ−３２３の可変重鎖配列は、以下の配列を含み：
2020531003.tif 000005
および、ａＣＤ３８−ａ−３２３の可変軽鎖配列は、以下の配列を含む：
2020531003.tif 000006
【００２３】
本発明は、ＨＣＤＲ３としてのａＣＤ３８−ａ−３２３−ＨＣＤＲ３の配列（配列番号３）、およびＬＣＤＲ３としてのａＣＤ３８−ａ−３２３−ＬＣＤＲ３の配列（配列番号７）を含む、抗体またはその抗原結合断片をさらに提供する。
【００２４】
本発明は、ＣＤＲ配列またはａＣＤ３８−ａ−３２３の重鎖または軽鎖可変配列などの参照配列に対して特定の％同一性を有するバリアント抗体およびその抗原結合断片をさらに提供する。かかる抗体およびその抗原結合断片は、本明細書ではＣＤ３８調節抗体剤をさらに指し得る。
【００２５】
例えば、いくつかの実施形態において、抗ＣＤ３８抗体またはその抗原結合断片は、配列番号４と少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む可変重鎖配列を含む。いくつかの実施形態において、抗ＣＤ３８抗体またはその抗原結合断片は、配列番号４と少なくとも９５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む可変重鎖配列を含む。いくつかの実施形態において、抗ＣＤ３８抗体またはその抗原結合断片は、配列番号４と少なくとも９８％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む可変重鎖配列を含む。いくつかの実施形態において、抗ＣＤ３８抗体またはその抗原結合断片は、配列番号４のアミノ酸配列を含む可変重鎖配列を含む。
【００２６】
いくつかの実施形態において、抗ＣＤ３８抗体またはその抗原結合断片は、配列番号８と少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む可変軽鎖配列を含む。いくつかの実施形態において、抗ＣＤ３８抗体またはその抗原結合断片は、配列番号８と少なくとも９５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む可変軽鎖配列を含む。いくつかの実施形態において、抗ＣＤ３８抗体またはその抗原結合断片は、配列番号８と少なくとも９８％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む可変軽鎖配列を含む。いくつかの実施形態において、抗ＣＤ３８抗体またはその抗原結合断片は、配列番号８のアミノ酸配列を含む可変軽鎖配列を含む。
【００２７】
いくつかの態様において、抗ＣＤ３８抗体またはその抗原結合断片は、配列番号４と少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む可変重鎖配列と、配列番号８と少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む可変軽鎖配列と、を含む。いくつかの態様において、抗ＣＤ３８抗体またはその抗原結合断片は、配列番号４と少なくとも９５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む可変重鎖配列と、配列番号８と少なくとも９５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む可変軽鎖配列と、を含む。いくつかの態様において、抗ＣＤ３８抗体またはその抗原結合断片は、配列番号４と少なくとも９８％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む可変重鎖配列と、配列番号８と少なくとも９８％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む可変軽鎖配列と、を含む。いくつかの実施形態において、抗ＣＤ３８抗体またはその抗原結合断片は、配列番号４のアミノ酸配列を含む可変重鎖配列と、配列番号８のアミノ酸配列を含む可変軽鎖配列と、を含む。
【００２８】
いくつかの実施形態において、抗ＣＤ３８抗体またはその抗原結合断片は、配列番号１０と少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む可変重鎖配列を含む。いくつかの実施形態において、抗ＣＤ３８抗体またはその抗原結合断片は、配列番号１０と少なくとも９５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む可変重鎖配列を含む。いくつかの実施形態において、抗ＣＤ３８抗体またはその抗原結合断片は、配列番号１０と少なくとも９８％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む可変重鎖配列を含む。いくつかの実施形態において、抗ＣＤ３８抗体またはその抗原結合断片は、配列番号１０のアミノ酸配列を含む可変重鎖配列を含む。
【００２９】
いくつかの実施形態において、抗ＣＤ３８抗体またはその抗原結合断片は、配列番１１と少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む可変軽鎖配列を含む。いくつかの実施形態において、抗ＣＤ３８抗体またはその抗原結合断片は、配列番１１と少なくとも９５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む可変軽鎖配列を含む。いくつかの実施形態において、抗ＣＤ３８抗体またはその抗原結合断片は、配列番１１と少なくとも９８％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む可変軽鎖配列を含む。いくつかの実施形態において、抗ＣＤ３８抗体またはその抗原結合断片は、配列番号１１のアミノ酸配列を含む可変軽鎖配列を含む。
【００３０】
いくつかの態様において、抗ＣＤ３８抗体またはその抗原結合断片は、配列番号１０と少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む可変重鎖配列と、配列番号１１と少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む可変軽鎖配列と、を含む。いくつかの態様において、抗ＣＤ３８抗体またはその抗原結合断片は、配列番号１０と少なくとも９５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む可変重鎖配列と、配列番号１１と少なくとも９５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む可変軽鎖配列と、を含む。いくつかの態様において、抗ＣＤ３８抗体またはその抗原結合断片は、配列番号１０と少なくとも９８％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む可変重鎖配列と、配列番号１１と少なくとも９８％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む可変軽鎖配列と、を含む。いくつかの実施形態において、抗ＣＤ３８抗体またはその抗原結合断片は、配列番号１０のアミノ酸配列を含む可変重鎖配列と、配列番号１１のアミノ酸配列を含む可変軽鎖配列と、を含む。
【００３１】
いくつかの実施形態において、抗ＣＤ３８抗体またはその抗原結合断片は、配列番号１２と少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む可変重鎖配列を含む。いくつかの実施形態において、抗ＣＤ３８抗体またはその抗原結合断片は、配列番号１２と少なくとも９５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む可変重鎖配列を含む。いくつかの実施形態において、抗ＣＤ３８抗体またはその抗原結合断片は、配列番号１２と少なくとも９８％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む可変重鎖配列を含む。いくつかの実施形態において、抗ＣＤ３８抗体またはその抗原結合断片は、配列番号１２のアミノ酸配列を含む可変重鎖配列を含む。
【００３２】
いくつかの実施形態において、抗ＣＤ３８抗体またはその抗原結合断片は、配列番１３と少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む可変軽鎖配列を含む。いくつかの実施形態において、抗ＣＤ３８抗体またはその抗原結合断片は、配列番１３と少なくとも９５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む可変軽鎖配列を含む。いくつかの実施形態において、抗ＣＤ３８抗体またはその抗原結合断片は、配列番１３と少なくとも９８％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む可変軽鎖配列を含む。いくつかの実施形態において、抗ＣＤ３８抗体またはその抗原結合断片は、配列番号１３のアミノ酸配列を含む可変軽鎖配列を含む。
【００３３】
いくつかの態様において、抗ＣＤ３８抗体またはその抗原結合断片は、配列番号１２と少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む可変重鎖配列と、配列番号１３と少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む可変軽鎖配列と、を含む。いくつかの態様において、抗ＣＤ３８抗体またはその抗原結合断片は、配列番号１２と少なくとも９５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む可変重鎖配列と、配列番号１３と少なくとも９５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む可変軽鎖配列と、を含む。いくつかの態様において、抗ＣＤ３８抗体またはその抗原結合断片は、配列番号１２と少なくとも９８％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む可変重鎖配列と、配列番号１３と少なくとも９８％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む可変軽鎖配列と、を含む。いくつかの実施形態において、抗ＣＤ３８抗体またはその抗原結合断片は、配列番号１２のアミノ酸配列を含む可変重鎖配列と、配列番号１３のアミノ酸配列を含む可変軽鎖配列と、を含む。
【００３４】
かかるバリアント抗体およびその抗原結合断片は、ａＣＤ３８−ａ−３２３について本明細書に開示される重および軽鎖可変配列を有する抗体およびその抗原結合断片について記載されるものと同等（または実質的に同等）の機能的および薬理学的特性を保持または示すことができる。
【００３５】
さらに、ａＣＤ３８−ａ−３２３アミノ酸配列は、上記で定義されたａＣＤ３８−ａ−３２３アミノ酸配列要素に関する置換数によって定義される抗体配列も指す。例えば、かかる配列は、ａＣＤ３８−ａ−３２３−ＨＣＤＲ３（配列番号３）内に最大１、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０個のアミノ酸置換を含む配列を可変重鎖の相補性決定領域３（ＨＣＤＲ３）として含み得る。さらなる実施形態において、ａＣＤ３８−ａ−３２３アミノ酸配列は、ａＣＤ３８−ａ−３２３−ＨＣＤＲ１、ａＣＤ３８−ａ−３２３−ＨＣＤＲ２、およびａＣＤ３８−ａ−３２３−ＨＣＤＲ３内に最大１、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０個のアミノ酸置換を含む配列を可変重鎖の相補性決定領域１、２および３（ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３）として、より好ましくは、ａＣＤ３８−ａ−３２３−ＨＣＤＲ１２３（配列番号４）内、または配列番号１０、または配列番号１２内に最大１、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０個のアミノ酸置換を含む配列を含む抗体配列をさらに指す。いくつかの態様において、ａＣＤ３８−ａ−３２３アミノ酸配列は、可変重鎖配列のフレームワーク領域内に最大１、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０個のアミノ酸置換を含む配列を可変重鎖配列として含む抗体配列をさらに指す。かかるａＣＤ３８−ａ−３２３アミノ酸配列要素およびかかる置換を提示する抗体は、ａＣＤ３８−ａ−３２３、および一般的なＣＤ３８調節抗体剤の結合および／または機能特性を依然として提示することができる。
【００３６】
かかるａＣＤ３８−ａ−３２３アミノ酸配列は、ａＣＤ３８−ａ−３２３−ＬＣＤＲ３（配列番号７）内に最大１、２、３、または４個のアミノ酸置換を含む配列を可変軽鎖の相補性決定領域３（ＬＣＤＲ３）としてさらに含み得る。さらなる実施形態において、ａＣＤ３８−ａ−３２３アミノ酸配列は、ａＣＤ３８−ａ−３２３−ＬＣＤＲ１、ａＣＤ３８−ａ−３２３−ＬＣＤＲ２、およびａＣＤ３８−ａ−３２３−ＬＣＤＲ３内に最大１、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０個のアミノ酸置換を含む配列を可変軽鎖の相補性決定領域１、２および３（ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、およびＬＣＤＲ３）として、より好ましくは、ａＣＤ３８−ａ−３２３−ＬＣＤＲ１２３（配列番号８）内、または配列番号１１、または配列番号１３内に最大１、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０個のアミノ酸置換を含む配列を含む抗体配列をさらに指す。いくつかの態様において、ａＣＤ３８−ａ−３２３アミノ酸配列は、可変軽鎖配列のフレームワーク領域内に最大１、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０個のアミノ酸置換を含む配列を可変軽鎖配列として含む抗体配列をさらに指す。かかるａＣＤ３８−ａ−３２３アミノ酸配列要素およびかかる置換を提示する抗体は、ａＣＤ３８−ａ−３２３、および一般的なＣＤ３８調節抗体剤の結合および／または機能特性を依然として提示することができる。
【００３７】
したがって、一実施形態において、本発明は、
ａ．ａＣＤ３８−ａ−３２３の可変重鎖領域配列（またはその親和性成熟バリアントなどのそのバリアント）、もしくはａＣＤ３８−ａ−３２３の可変重鎖領域配列（またはその親和性成熟バリアントなどのそのバリアント）と比較して最大５個のアミノ酸置換を有する可変重鎖領域配列、および／または
ｂ．ａＣＤ３８−ａ−３２３の可変軽鎖領域配列（またはその親和性成熟バリアントなどのそのバリアント）、もしくはａＣＤ３８−ａ−３２３の可変軽鎖領域配列（またはその親和性成熟バリアントなどのそのバリアント）と比較して最大５個のアミノ酸置換を有する可変軽鎖領域配列を含む抗ＣＤ３８抗体剤（すなわち、本明細書に記載される抗体またはその抗原結合断片、およびそのバリアント）を提供する。
アミノ酸置換が込みこまれ得るａＣＤ３８−ａ−３２３重鎖には、配列番号４、１０、および１２が含まれる。アミノ酸置換が込みこまれ得るａＣＤ３８−ａ−３２３軽鎖には、配列番号８、１１、および１３が含まれる。
【００３８】
アミノ酸置換は、抗体の機能特性に悪影響を及ぼさないか、または実質的に悪影響を及ぼさないことが好ましい。したがって、置換は、それらの保存的アミノ酸置換として考慮され得る。好ましくは、アミノ酸置換が発生する場合に、重および／または軽鎖可変領域の全長が変化しないように、それらは１：１の比率で発生する。
【００３９】
本発明は、抗体またはその抗原結合断片をさらに提供し、抗体の軽または重鎖内の任意のメチオニンは、例えばメチオニンの酸化を低減するために改変され得る。例えば、メチオニン残基は、例えば、ロイシンまたはフェニルアラニンなどの異なるアミノ酸で置き換えて改変され得る。
【００４０】
したがって、いくつかの実施形態において、本明細書で提供される抗体またはその断片は、当技術分野で標準的であるように変異させることができる。このように修飾されているかかる抗体は、最終配列に到達する前に、さらなる修飾（例えば、親和性成熟）を受ける必要があり得る。
【００４１】
本発明の一実施形態において、本明細書に開示される抗体のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３配列（例えば、ａＣＤ３８−ａ−３２３のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３配列）を有するバリアント抗体、または本明細書に開示される任意の抗体の可変重および可変軽鎖（例えば、ａＣＤ３８−ａ−３２３の可変重および可変軽鎖）が提供されるが、ただし、ＣＤＲ内の少なくとも１つのアミノ酸が変更されているという点で、特定の配列とは異なる。開示されるバリアントは、ａＣＤ３８−ａ−３２３について記載されるように使用および製剤化され得る。
【００４２】
本発明は、親和性成熟抗体、例えば、本明細書に開示される抗体のうちのいずれかに由来する親和性成熟バリアントをさらに提供する。一実施形態において、親和性成熟抗体は、任意のメチオニン残基を除去または変異させるように改変された親和性成熟抗体である。開示される親和性成熟バリアントは、ａＣＤ３８−ａ−３２３について記載されるように使用および製剤化され得る。
【００４３】
いくつかの実施形態において、本発明は、本明細書に記載される抗体（例えば、ａＣＤ３８−ａ−３２３、またはその抗原結合断片もしくはバリアント）を提供することと、抗体を親和性成熟させることとを含む、抗ＣＤ３８抗体を調製する方法を提供し、産生された抗体は、親抗体よりも高い親和性でＣＤ３８と結合する。好ましくは、産生された抗体は、例えばＫｄによって測定されるように、親抗体がＣＤ３８と結合するよりも少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、より好ましくは少なくとも５０％高い親和性でＣＤ３８と結合する。親和性を測定するための方法は、当技術分野で知られており、以下の実施例において記載される。かかる方法によって産生された親和性成熟抗体は、他の抗ＣＤ３８抗体剤について本明細書に記載されるように製剤化および使用されることができる。
【００４４】
親和性成熟は、当業者に知られている任意の好適な方法に従って実行され得る。例えば、試験管内抗体表示システムは、高親和性を伴う特定の抗体の生成に広く使用されている。これらのシステムにおいて、表現型（すなわち、抗体断片）が遺伝子型（すなわち、抗体遺伝子）と対になっており、抗体の配列を直接的に決定することが可能である。抗体レパートリの表示を達成して、その後のバインダの選択を可能にし、選択の厳密性を高めることにより、より高い親和性のバリアントのより高い選択を可能にするいくつかのシステムが開発されている。抗体断片は、酵母、リボソーム、ファージディスプレイ粒子において、またはＤＮＡとの直接的な連結により発現されることができる。
【００４５】
現在の抗体親和性成熟の方法は、２つの変異誘発カテゴリに属する：確率的および非確率的。エラーを起こしやすいポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）、ミューテータ細菌種、および飽和変異誘発は、確率的変異誘発法の典型的な例である。非確率的手法では、多くの場合アラニンスキャニングまたは部位特異的変異誘発を使用して、特定のバリアントの限られた収集物を生成する。さらに、シャッフルされた親抗体のバリアントを取得するためのシャッフル化アプローチも、抗体の親和性をさらに向上させるために使用できる。
【００４６】
したがって、本発明の一実施形態において、親和性成熟の方法は、確率的変異誘発（例えば、エラーを起こしやすいポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）、ミューテータ細菌種、または飽和変異誘発）、非確率的変異誘発（例えば、アラニンスキャニングまたは部位特異的変異誘発）、シャッフル化（例えば、ＤＮＡシャッフル、鎖シャッフル、ＣＤＲシャッフル）、および、ＣＲＩＳＰＲ−Ｃａｓ９システムの使用からなる群から選択され、変更を導入する。
【００４７】
親和性成熟の方法は、例えば、Ｒａｊｐａｌ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ＵＳＡ，２００５，１０２（２４）：８４６６−７１、Ｓｔｅｉｎｗａｎｄ  ｅｔ  ａｌ．，ＭＡｂｓ，２０１４，６（１）：２０４−１８、およびＨａｎｄｂｏｏｋ  ｏｆ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ，Ｗｉｌｅｙ，２０１４，  Ｃｈａｐｔｅｒ  ６，Ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ａｆｆｉｎｉｔｙ  （ｐａｇｅｓ  １１５−１４０）において記載される。
【００４８】
いくつかの実施形態において、上記に記載の方法に従って調製された抗体を提供することと（すなわち、親和性成熟により抗体を産生するため）、少なくとも１つ以上の薬学的に許容される賦形剤と抗体を共製剤化することとを含む、薬学的組成物を調製する方法が提供される。薬学的組成物の調製に使用される抗体は、ａＣＤ３８−ａ−３２３の親和性成熟バリアントであり得る。かかる方法により産生された薬学的組成物は、他の抗ＣＤ３８抗体剤について本明細書に記載されるように本発明の治療の方法に使用されることができる。
【００４９】
本明細書に記載の提供される抗体および／またはその抗原結合断片（例えば、ａＣＤ３８−ａ−３２３−ＨＣＤＲ３もしくはａＣＤ３８−ａ−３２３−ＨＣＤＲ１２３などの１つ以上のａＣＤ３８−ａ−３２３アミノ酸配列要素を含み得る、ならびに／または、ヒトＣＤ３８、および例えば、カニクイザルＣＤ３８のような非ヒト霊長類ＣＤ３８などとの結合について、ａＣＤ３８−ａ−３２３と競合し得る、ＣＤ３８調節抗体剤）は、様々な形式のいずれかで提供され得る。例えば、いくつかの実施形態において、好適な形式は、モノクローナル抗体、ドメイン抗体、一本鎖抗体、Ｆａｂ断片、Ｆ（ａｂ’）２断片、一本鎖可変断片（ｓｃＦｖ）、ｓｃＦｖ−Ｆｃ断片、一本鎖抗体（ｓｃＡｂ）、アプタマー、もしくはナノボディであり得るか、またはそれを含み得る。いくつかの実施形態において、抗体またはその抗原結合断片（および特にモノクローナル抗体）は、ウサギ、マウス、キメラ、ヒト化、もしくは完全ヒト抗体またはその抗原結合断片であり得る。いくつかの実施形態において、提供される抗体またはその抗原結合断片は、所与の用途に最も好適であり得るとして、ＩｇＧ、ＩｇＡ、ＩｇＥ、またはＩｇＭアイソタイプ（好ましくはヒトのもの）であり得る。いくつかの態様において、提供される抗体またはその抗原結合断片は、ＩｇＧアイソタイプであり、より具体的にはＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、またはＩｇＧ４アイソタイプ（好ましくはヒトＩｇＧ１）である。いくつかの実施形態において、提供される抗体またはその抗原結合断片（例えば、多重特異性結合剤の一部として提供される）は、例えば、ａＣＤ３８−ａ−３２３アミノ酸配列などのＣＤ３８調節抗体剤にさらなる結合および／または機能的部分を関連付けることが望ましい場合、単離された抗体または抗原結合は、二重特異性抗体、多重特異性抗体、または当技術分野で利用可能であり得る他の多重特異性形式に含まれ得る。
【００５０】
いくつかの実施形態において、提供されるＣＤ３８調節抗体剤は、ＣＤ３８結合実体（例えば、抗ＣＤ３８抗体またはその抗原結合断片）、および治療剤または診断剤などの複合化ペイロードを含む。多くのかかる実施形態において、薬剤は、「免疫複合体」として考慮される、および／または示される。抗体薬物などの特定の免疫複合体の生成に使用できる技術および化合物の例は、文献（Ｂｅｃｋ  Ａ  ｅｔ  ａｌ．，２０１７）に開示されており、いくつかの既知の抗ＣＤ３８抗体（ＷＯ２０１６／１６６３０４）に好適であるとして記載される。
【００５１】
いくつかの実施形態において、本発明は、提供される抗体またはその抗原結合断片を特定するａＣＤ３８−ａ−３２３アミノ酸配列を提供する。いくつかの実施形態において、かかる配列は、ヒトＣＤ３８の細胞外ドメインにおけるエピトープ、ならびに、任意で、カニクイザルおよび／またはマウスＣＤ３８の対応するエピトープ、単離されたタンパク質として、またはＣＤ３８を発現する細胞の表面上（免疫細胞、または例えば、Ｒａｊｉ細胞などの細胞株）のいずれかと結合する提供される抗体またはその抗原結合断片を特定する。
【００５２】
本発明は、本発明のＣＤ３８調節抗体剤により結合されるのと同じ（または類似の）エピトープと結合するＣＤ３８調節抗体剤をさらに提供する。例えば、一実施形態において、ａＣＤ３８−ａ−３２３（またはそのバリアント）と同じ（または類似の）エピトープと結合する抗体が提供される。
【００５３】
いくつかの実施形態において、本発明は、ヒトＣＤ３８のエピトープと特異的に結合する抗ＣＤ３８抗体または抗原結合断片を提供し、エピトープは、配列番号９の少なくともアミノ酸１２０、１２１、および１４１を含む。いくつかの実施形態において、抗ＣＤ３８抗体または抗原結合断片は、配列番号９のアミノ酸２４１とさらに結合する。
【００５４】
いくつかの実施形態において、本発明は、ａＣＤ３８−ａ−３２３アミノ酸配列を含む抗体またはその抗原結合断片をスクリーニングおよび／もしくは特徴付ける手順、ならびに／または単離されたタンパク質として、およびヒトＣＤ３８を発現する細胞の表面上にヒトＣＤ３８細胞外ドメインとの結合を可能にする１つ以上のａＣＤ３８−ａ−３２３アミノ酸配列要素（例えば、ａＣＤ３８−ａ−３２３−ＨＣＤＲ３アミノ酸配列を含む、および／またはａＣＤ３８−ａ−３２３と競合する）を含み、同じエピトープ、特に実施例で特定されたエピトープに対して競合する、抗体またはその抗原結合断片と同等の結合特徴を示すものを提供する。いくつかの実施形態において、ａＣＤ３８−ａ−３２３（またはそのバリアント）は、配列番号９のアミノ酸残基１２０、１２１、および１４１を含むエピトープと結合し得、任意で配列番号９のアミノ酸残基２４１と結合し得る。
【００５５】
さらに、本発明は、１つ以上のａＣＤ３８−ａ−３２３アミノ酸配列要素を含む抗体またはその抗原結合断片と同等の機能的特徴を示す抗体またはその抗原結合断片をスクリーニングするための手順をさらに提供し、かかる特徴は、細胞活性化および細胞傷害活性であり、ＣＤ３８調節抗体剤として作用する。これらの範囲で、候補抗体は、実施例（図１を参照）に記載されるアッセイ、またはかかる特徴の存在を確立するための当技術分野で即知である他のアッセイで試験することができるが、試験管内／生体外アッセイ、細胞系アッセイ、および／または動物モデルで評価される場合の、それらの全てが可能である。
【００５６】
いくつかの実施形態において、本発明は、ａＣＤ３８−ａ−３２３アミノ酸配列などのＣＤ３８調節抗体剤を含む単離された抗体またはその抗原結合断片をコードする核酸分子を提供する。いくつかの実施形態において、かかる提供される核酸分子は、コドン最適化された核酸配列を含み得、および／または、例えば、細菌、酵母、昆虫、魚類、ネズミ科、サル、またはヒト細胞などの宿主細胞における発現のための好適な核酸ベクター内の発現カセットに含まれ得る。
【００５７】
いくつかの実施形態において、本発明は、例えば、本明細書に記載されるＣＤ３８調節抗体剤（例えば、ａＣＤ３８−ａ−３２３アミノ酸配列を含む）の１つ以上の特性を有する提供されるＣＤ３８調節抗体剤（例えば、抗体またはその抗原結合断片）を発現する異種性核酸分子（例えば、ＤＮＡベクター）を含む宿主細胞を提供する。いくつかの実施形態において、本開示は、例えば本明細書に記載されるＣＤ３８調節抗体剤（例えば、ａＣＤ３８−ａ−３２３アミノ酸配列を含む）の１つ以上の特性を有するＣＤ３８調節抗体剤（例えば、抗体またはその抗原結合断片）を調製する方法を提供する。いくつかの実施形態において、かかる方法は、核酸を含む宿主細胞（例えば、ベクターを介して宿主細胞を含むおよび／または宿主細胞に送達され得る異種性核酸）を培養することを含み得る。いくつかの実施形態において、かかる宿主細胞（および／または異種性核酸配列）は、ＣＤ３８調節抗体剤（例えば、抗体またはその抗原結合断片）が宿主細胞から分泌され（例えば、細胞培養上清から単離できるように）、および／または細胞表面上に露出される（例えば、かかるａＣＤ３８−ａ−３２３のアミノ酸配列および配列要素が、かかる細胞の状況下で、または一緒に、意図的に使用される場合、モノクローナル抗体の特異性をＴ細胞にグラフトする人工Ｔ細胞受容体として）ように配置および構築される。
【００５８】
いくつかの実施形態において、抗体またはその抗原結合断片（またはそのバリアント）は、ａフコシル化され得る。抗体のグリコシル化は、抗体（例えば、モノクローナル抗体、組換え抗体、および／または他の方法で操作または単離された抗体）およびＦｃ融合タンパク質の活性、薬物動態、および薬力学に影響を与える可能性があり、特定の技術を利用して、所望されるグリコシル化プロファイルを有する抗体を取得でき得ることは周知である（Ｌｉｕ  Ｌ，２０１５）。本発明に従って使用するための抗体（例えば、本明細書に記載される抗ＣＤ３８抗体、例えばＣＤ３８調節抗体剤であり得るか、またはそれとして記載される抗体を含む）の細胞傷害を支持するエフェクター機能は、抗体のフコシル化レベルを低下させる方法を使用して増強することができる。かかる特性を示す特定のａＣＤ３８−ａ−３２３配列要素を含む抗体は、例えば、細胞株を遺伝子工学的に操作する技術を使用してａＣＤ３８−ａ−３２３配列を発現させることにより生産でき、それらは、フコシル化の能力が欠如または低下した抗体を産生でき得、それらのいくつかは、Ｐｏｔｅｌｌｉｇｅｎｔ（Ｌｏｎｚａ）ＧｌｙＭＡＸＸ（ＰｒｏＢｉｏｇｅｎ）などの市販品であるか、または例えば、容積オスモル濃度の制御および／もしくは酵素阻害剤の使用など、製造プロセスの操作によるものであり、例えば、ＥＰ２４８０６７１に記載される方法もさらに参照されたい。
【００５９】
いくつかの実施形態において、本発明は、本明細書に記載される所望される特性を有する提供される抗体またはその抗原結合断片を含む組成物（例えば、薬学的組成物）を提供する（例えば、本明細書においてＣＤ３８調節抗体剤と呼ばれる抗体に関して記載されているように、具体的には、例えば、ａＣＤ３８−ａ−３２３抗体またはその抗原結合断片、およびそのバリアントを含む）。いくつかの実施形態において、かかる提供される組成物は、治療、診断、または予防用途などの医学的用途において意図されるおよび／または使用される。いくつかの実施形態において、かかる提供される組成物は、薬学的に許容される担体または賦形剤をさらに含むことができ、および／またはがんの治療に使用でき得る。いくつかの実施形態において、薬学的組成物は、当技術分野で知られているような１つ以上の担体、賦形剤、塩、緩衝剤などと共に製剤化され得る。当業者は、特定の方法および／または投与の部位、例えば非経口、（例えば、皮下、筋肉内、または静脈内注射）、粘膜、腫瘍内、腫瘍周囲、経口、または局所的投与に特に所望されるおよび／または有用であり得るものを含む、様々な製剤技術を認識し、容易に利用することができるであろう。多くの実施形態において、本明細書に記載されるＣＤ３８調節抗体剤例えば、抗ＣＤ３８抗体またはその抗原結合部分）を含む提供される薬学的組成物は、非経口（例えば、注射および／または注入による）送達用に製剤化される。いくつかの実施形態において、かかる提供される薬学的組成物は、例えば、事前装填されたシリンジまたはバイアル形式で提供され得る。いくつかの実施形態において、かかる提供される薬学的組成物は、例えば、乾燥（例えば、凍結乾燥）形態で提供および／または利用され得、代替的に、いくつかの実施形態において、かかる提供される薬学的組成物は、液体形態（例えば、溶液、懸濁液、分散液、乳剤など）、ゲル形態などで提供および／または利用され得る。
【００６０】
いくつかの実施形態において、本発明は、本明細書に記載される（例えば、ａＣＤ３８−ａ−３２３アミノ酸配列要素を含む）ＣＤ３８調節抗体剤（例えば、抗ＣＤ３８抗体またはその抗原結合断片）、および／またはそれらを含む組成物の、Ｂ細胞悪性腫瘍、リンパ腫、（ホジキンリンパ腫、非ホジキンリンパ腫、慢性リンパ球性、白血病、急性リンパ芽球性白血病、骨髄腫）、骨髄増殖性障害、固形腫瘍（乳がん、扁平上皮がん、結腸がん、頭頸部がん、肺がん、泌尿生殖器がん、直腸がん、胃がん、肉腫、黒色腫、食道がん、肝がん、精巣がん、子宮頸がん、肥満細胞腫、血管腫、眼がん、喉頭がん、口腔がん、中皮腫、皮膚がん、直腸がん、喉がん、膀胱がん、乳がん、子宮がん、前立腺がん、肺がん、膵臓がん、腎がん、胃がん、小細胞肺がん、卵巣がんなど）などのがんの治療および／または治療用薬剤の製造における使用を提供する。がんは、ＣＤ２０、ＨＥＲ２、ＰＤ−１、ＰＤ−Ｌ１、ＳＬＡＭ７Ｆ、ＣＤ４７、ＣＤ１３７、ＣＤ１３４、ＴＩＭ３、ＣＤ２５、ＧＩＴＲ、ＥＧＦＲなどの特定の腫瘍関連マーカーおよび抗原の存在、または高いマイクロサテライト不安定性（ＭＳＩ−Ｈ）もしくはミスマッチ修復欠損（ｄＭＭＲ）として示されるバイオマーカーを有すると特定されているがんに基づいて定義することもできる。さらに、かかる状態は、前がん性、原発性がん、くすぶり型骨髄腫、意義不明の単クローン性ガンマグロブリン血症、子宮頸部上皮内腫瘍、ＭＡＬＴ腫／ＧＡＬＴ種、および様々なリンパ増殖性疾患などの上記のがんの非侵襲的状態を定義する場合にも考慮され得る。好ましくは、いくつかの実施形態において、治療される対象は、固形腫瘍を有する。一実施形態において、対象は、血液学的がんを有する。いくつかの実施形態において、対象は、ＣＤ３８陽性腫瘍を有する。
【００６１】
したがって、いくつかの実施形態において、本発明は、本明細書に記載の提供されるＣＤ３８調節抗体剤（例えば、抗ＣＤ３８抗体またはその抗原結合断片）を含む組成物の有効量を対象に投与することを含む、対象においてがんを治療する方法を提供する（例えば、ａＣＤ３８−ａ−３２３アミノ酸配列を含む）。いくつかの実施形態において、提供される方法は、少なくとも１つの追加の薬剤または療法を任意の順序で同時にまたは連続的に対象に投与することをさらに含み得る（すなわち、対象が併用療法を受けるように）。いくつかの実施形態において、かかる少なくとも１つの追加の薬剤または療法は、抗がん剤（例えば、化学療法剤）、放射線療法（体の外部に放射線を適用するか、または放射性複合化合物を投与することにより）、抗腫瘍抗原もしくはマーカー抗体（抗原またはマーカーは、例えばＣＤ４、ＣＤ２５、ＣＡ１２５、ＰＳＭＡ、ｃ−ＭＥＴ、ＶＥＧＦ、ＣＤ１３７、ＶＥＧＦＲ２、ＣＤ２０、ＨＥＲ２、ＨＥＲ３、ＳＬＡＭＦ７、ＣＤ３２６、ＣＡＩＸ、ＣＤ４０、ＣＤ４７、またはＥＧＦ受容体である）、チェックポイント阻害剤、または免疫調節抗体（例えば、ＰＤ−１、ＰＤ−Ｌ１、ＴＩＭ３、ＣＤ２５、ＧＩＴＲ、ＣＤ１３４、ＣＤ１３４Ｌ、ＣＤ１３７Ｌ、ＣＤ８０、ＣＤ８６、Ｂ７−Ｈ３、Ｂ７−Ｈ４、Ｂ７ＲＰ１、ＬＡＧ３、ＩＣＯＳ、ＴＩＭ３、ＧＡＬ９、ＣＤ２８、ＡＰ２Ｍ１、ＳＨＰ−２、ＯＸ−４０などを標的とする抗体）、ワクチン、アジュバント、使用標準プロトコル、がん細胞を標的とするか、もしくはがん細胞に対する免疫応答を刺激する１つ以上の他の化合物、またはそれらの任意の組み合わせであり得る。一定の特定の実施形態において、かかる少なくとも１つの追加の薬剤または療法が抗体であるか、または抗体を含む場合に、かかる抗体によって標的化される形式および／または抗原は、文献に列挙され、おそらく特定のがんに適合するものから選択され得る（Ｓｌｉｗｋｏｗｓｋｉ  Ｍ  ＆  Ｍｅｌｌｍａｎ  Ｉ，２０１３；Ｒｅｄｍａｎ  ＪＭ  ｅｔ  ａｌ．，２０１５；Ｋｉｊａｎｋａ  Ｍ  ｅｔ  ａｌ．，２０１５）。
【００６２】
さらに、本発明は、本明細書に記載の（例えば、ａＣＤ３８−ａ−３２３アミノ酸配列を含む）提供されるＣＤ３８調節抗体剤（例えば、抗ＣＤ３８抗体またはその抗原結合断片）、またはかかる単離された抗体もしくは抗原結合断片の投与、保存、または他の使用が可能な関連する組成物を含む様々なキットまたは製造品を提供する。いくつかの実施形態において、提供されるキットは、容器、シリンジ、バイアル、またはかかる組成物を含む他の容器を、任意で１つ以上の製造品、希釈剤、試薬、固相、および／またはキットの正しい使用のための説明書と一緒に含む。
【００６３】
いくつかの実施形態において、医学的用途などの特定の用途、特にがんの治療のための、本明細書に記載される（例えば、ａＣＤ３８−ａ−３２３アミノ酸配列を含む）特定のＣＤ３８調節抗体剤（例えば、抗ＣＤ３８抗体またはその抗原結合断片）の同定、特徴付け、および／または検証は、本明細書に記載される１つ以上のアッセイまたはシステムを使用することにより実行できる。いくつかの実施形態において、かかる同定、特徴付け、および／または検証は、例えば異なる実験設定および／または選択パネル（例えば、がん由来細胞株）を使用した、１つ以上の細胞系アッセイにおける活性の分析を伴い得る。いくつかの実施形態において、特に、本明細書に記載される特定の所望されるＣＤ３８調節抗体剤に関連する提案される免疫学的メカニズムを考慮すると、所望される同定、特徴付け、および／または検証は、がんが誘発されるか、またはがん細胞が異種移植片、または同系／同種のがん由来細胞として移植される動物モデルにおいて生成される関連データの収集を伴う。代替的または追加的に、いくつかの実施形態において、ＰＢＭＣ（すなわち、ヒト化ＰＢＭＣマウスモデル）またはＣＤ３４＋造血幹細胞（すなわち、ＣＤ３４＋ヒト化マウス）などのヒト細胞の移植を伴う動物モデルを利用して、モデルシステム内のヒト免疫細胞に対するＣＤ３８調節抗体剤の活性を評価でき得る。
【００６４】
いくつかの実施形態において、本明細書に記載されるＣＤ３８調節抗体剤（例えば、抗ＣＤ３８抗体またはその抗原結合断片）の関連配列（例えば、ａＣＤ３８−ａ−３２３アミノ酸配列を含むか、または別の方法では本明細書にＣＤ３８調節抗体剤として記載される薬剤の構造的および／または機能的特徴を含む）は、薬学的および／または技術的理由のために、さらに好適または所望される抗体フレームの状況下にクローニングおよび／または発現させることができる。例えば、かかる配列（おそらくコドン最適化ＶＨおよびＶＬコード配列として）は、ヒトＩｇＧ１定常領域（ｈＩｇＧ１）と一緒にクローン化され、好適な抗体発現ベクターおよび細胞株（例えば、ＣＨＯ−ＳのようなＣＨＯ由来の細胞株など）を使用して発現される。いくつかの特定の実施形態において、ヒトＩｇＧ１形式の抗体における提供された抗体配列の発現および分泌は、トランスフェクション後の細胞溶解物の還元された状態において、および抗体の精製（親和性クロマトグラフィ、ゲル濾過、および／または他の好適な技術による）に後で使用される上清の非還元化状態において分析できる。提供される抗ＣＤ３８抗体配列の結合および／または他の機能特性は、ヒトＩｇＧ１形式（例えば、ＣＤ３８調節抗体剤−ｈＩｇＧ１）で、例えば、以下の実施例に記載される１つ以上のアッセイを使用して分析できる。例えば、かかるｈＩｇＧ１形式で提供される抗体は、例えばフローサイトメトリーを使用して、ヒトおよびカニクイザルのＰＢＭＣとの結合について評価することができる。代替的または追加的に、特定の免疫細胞集団との結合は、例えばＮＫ細胞のＣＤ３、ＣＤ４５、ＣＤ５６、およびＣＤ１５９（ＮＫＧ２Ａ）、ＣＤ１４（単球）、ＣＤ１９（Ｂ細胞用）、ならびに／またはＣＤ４／ＣＤ８（Ｔ細胞）のような特定の免疫細胞集団の１つ以上の特定のマーカーを利用し得るフローサイトメトリーを使用して評価できる。
【００６５】
さらに、ヒト原発性腫瘍細胞および／またはヒトの健康なドナーおよび／または患者から単離された免疫細胞に対する本明細書に記載される（例えば、ａＣＤ３８−ａ−３２３アミノ酸配列を含むか、またはＣＤ３８調節抗体剤−ｈＩｇＧ１などのＣＤ３８調節抗体剤として本明細書に記載される薬剤の構造的および／または機能的特徴を含む）１つ以上のＣＤ３８調節抗体剤（例えば、抗ＣＤ３８抗体またはその抗原結合断片）の効果を評価できる。個々の免疫細胞集団に対する潜在的な影響をより詳細に調査するために、かかるＣＤ３８調節抗体剤を使用して、ＰＢＭＣ、ならびに／または、腫瘍から単離された細胞、および／もしくは精製されたヒトＣＤ８およびＣＤ４Ｔ細胞、Ｔｒｅｇ細胞、ＭＤＳＣ細胞、樹状細胞、マクロファージおよび単球、好中球、ＮＫ細胞、およびその他の細胞種を治療できる。潜在的な読み出しには、サイトカイン放出、腫瘍細胞殺傷、細胞増殖、まらびに／または活性化、アポトーシス、抗原特異的および／もしくは同種系応答、またはそれらの任意の組み合わせが含まれる。代替的または追加的に、マウスまたは非ヒト霊長類を治療することができ、フローサイトメトリーを使用して、または動物から様々な器官および／または細胞を単離した後、細胞の状態を追跡できる。
【００６６】
代替的または追加的に、本明細書に記載される（例えば、ａＣＤ３８−ａ−３２３アミノ酸配列を含むか、またはＣＤ３８調節抗体剤−ｈＩｇＧ１などのＣＤ３８調節抗体剤として本明細書に記載される薬剤の構造的および／または機能的特徴を含む）ＣＤ３８調節抗体剤（例えば、抗ＣＤ３８抗体またはその抗原結合断片）の１つ以上の特性は、ＣＤ３８発現細胞（例えば、ＮＫ細胞またはＴ細胞）に対するかかるＣＤ３８調節抗体剤の効果を研究することにより、単独または組み合わせて評価でき得る；ＣＤ３８酵素活性、ＣＤ３８誘導Ｃａ２＋レベルおよびタンパク質リン酸化、ＣＤ３８脱落および／もしくは内在化、ＣＤ３８誘導細胞内経路の活性化（例えば、ＮＦκＢ経路）、ならびに／またはＣＤ３１および他の受容体タンパク質との相互作用（例えば、ＣＤ１６、ＴＣＲ、ＢＣＲなど）。ＣＤ３８の下流の活性への後のプロセスの関与が、これらのプロセスの特定の阻害剤を使用してさらに評価できる。これらの細胞効果は、ａＣＤ３８調節抗体剤−ｈＩｇＧ１抗体をカニクイザルに投与した場合、生体内で追跡できる。
【００６７】
本発明のいくつかの実施形態において、抗体（およびそのバリアント）は、有利な活性プロファイルを有し得る。例えば、一実施形態において、抗体またはその抗原結合断片（およびそのバリアント）は、
ＣＤ３８＋標的細胞に対して抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）活性を示し、
補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）を示し、かつ／または
免疫エフェクター細胞の活性化を誘導し得る。
【００６８】
好ましくは、ａＣＤ３８−ａ−３２３またはその抗原結合断片（またはそのバリアント）は、同じまたは実質的に同じ条件下でのダラツムマブと比較して、ＣＤ３８＋標的細胞に対して低減されたＣＤＣ活性を示す。
【００６９】
抗ＣＤ３８抗体またはその抗原結合断片の抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）活性は、例えば、標的細胞としてＣＤ３８＋Ｄａｕｄｉ細胞、およびエフェクター細胞としてヒトＰＢＭＣ細胞を使用して、実施例に記載されるアッセイを使用して試験管内で決定され得、エフェクター細胞に対する標的細胞の比率は、約５０対１〜約２５対１である。
【００７０】
ＣＤ３８＋標的細胞に対する補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）活性は、実施例に記載されるアッセイを使用して、例えば１０％補体の存在下でＣＤ３８＋Ｄａｕｄｉおよび／またはＲａｊｉ細胞を使用して、試験管内で決定できる。ＣＤＣ活性は、ヒト補体の存在下で最大１０μｇ／ｍｌの濃度まで増加する抗体で標的細胞を処理することにより決定できる。いくつかの実施形態において、ＣＤＣ活性は、１０％の補体の存在下でのＣＤ３８＋細胞、すなわち、ＣＤ３８＋Ｄａｕｄｉ細胞の細胞溶解の最大割合を測定することにより決定され得る。所定の抗体の最大溶解は、実験ごとに異なり得る。したがって、ＣＤＣ活性を測定するための他の指標を考慮することは有益であり、例えば、ＥＣ５０値、ならびに／または参照抗体（ダラツムマブなど）と比較した最大％溶解および／もしくはＥＣ５０の倍数差などが含まれる。したがって、ダラツムマブと比較した低いＣＤＣ活性の決定は、最大％溶解、ＥＣ５０、および／またはいずれかの値のダラツムマブと比較した倍数変化に関連し得る。
【００７１】
本発明の好ましい一実施形態において、ＣＤ３８調節抗体剤は、
ａ）ダラツムマブよりも少なくとも０．５倍高い（またはより好ましくは少なくとも１倍高い）ＥＣ５０、および／または
ｂ）ダラツムマブによって示されるものの半分以下である１０％補体の存在下でＲａｊｉおよび／またはＤａｕｄｉ細胞で測定された最大％溶解を伴って、ＣＤＣを示し得る。
【００７２】
当然であるが、ダラツムマブのＣＤＣは、比較のために同じまたは実質的に同じ条件で決定される。ＣＤＣ活性は、最大約１０μｇ／ｍｌの抗体濃度を使用して決定できる。当業者が理解するように、細胞の最大溶解を決定する場合、１０μｇ／ｍＬの濃度が必ずしも必要とは限らず、必要であれば１０μｇ／ｍＬを使用してもよいが、より低い抗体濃度で最大細胞溶解が起こり得る。
【００７３】
いくつかの実施形態において、ダラツムマブと比較したＣＤＣ活性の低下は、同じまたは実質的に同じ条件下で、ダラツムマブよりも抗体またはその抗体結合断片のＥＣ５０が少なくとも約０．５倍大きい（すなわち、少なくとも約１．５倍大きい）、または好ましくは、少なくとも約１倍大きい（すなわち、少なくとも約２倍大きい）ことである。例えば、抗体またはその抗体結合断片のＥＣ５０は、１０％補体の存在下でのＤａｕｄｉ細胞および／またはＲａｊｉに対するダラツムマブよりも少なくとも約０．５倍、または好ましくは約１倍大きい。
【００７４】
いくつかの実施形態において、ダラツムマブと比較したＣＤＣ活性の低下は、最大％溶解が、同じまたは実質的に同じ条件下でダラツムマブによって示されるものの半分以下である。例えば、最大％溶解は、１０％の補体の存在下でＲａｊｉおよび／またはＤａｕｄｉ細胞で測定されるように、ダラツムマブによって示されるものの半分以下であり得る。
【００７５】
いくつかの実施形態において、抗体またはその断片（またはそのバリアント）は、ＣＤＣによりＣＤ３８＋発現Ｄａｕｄｉ細胞の６０％未満の溶解を引き起こす。いくつかの実施形態において、抗体またはその断片は、ＣＤＣによりＣＤ３８＋発現細胞の約５０％未満、約４０％未満、約３０％未満、または約２０％未満の溶解を引き起こす。いくつかの実施形態において、抗体またはその断片は、ＣＤＣによりＣＤ３８＋発現細胞の約６０％未満の溶解であるが、約１０％を超える溶解を引き起こす。溶解パーセンテージは、１０％の補体が存在し、抗体の濃度が最大１０μｇ／ｍＬまで増加するＤａｕｄｉ細胞において測定できる。
【００７６】
いくつかの実施形態において、抗体またはその抗原結合断片（またはそのバリアント）は、ＣＤ３８＋Ｄａｕｄｉおよび／またはＲａｊｉ細胞に対して少なくとも約０．０５μｇ／ｍＬのＥＣ５０でＣＤＣを誘導する（および任意で、ＣＤＣにより、かかるＣＤ３８＋発現細胞の６０％未満の溶解を引き起こす）。いくつかの実施形態において、抗体またはその断片は、ＣＤ３８＋Ｄａｕｄｉおよび／またはＲａｊｉ細胞に対して少なくとも約０．０５μｇ／ｍＬ、少なくとも約０．１０μｇ／ｍＬ、または少なくとも約０．１５μｇ／ｍＬのＥＣ５０でＣＤＣを誘導する（任意で、最大約１０μｇ／ｍｌまでの抗体濃度でのＣＤＣにより、かかるＣＤ３８＋発現細胞の６０％未満の溶解を引き起こす）。
【００７７】
いくつかの実施形態において、抗ＣＤ３８抗体またはその抗原結合断片（またはそのバリアント）は、同じまたは実質的に同じ条件下で、ダラツムマブと比較して、より多くの量のＴ細胞活性化を誘導し得る。いくつかの態様において、Ｔ細胞活性化は、ｌｕｃ＿レポーターＪｕｒｋａｔ細胞におけるＮＦＡＴシグナル伝達を測定することにより決定され得る。いくつかの態様において、ｌｕｃ＿レポーターＪｕｒｋａｔ細胞において測定される、抗ＣＤ３８抗体またはその抗原結合断片によって誘導されるＮＦＡＴシグナル伝達は、同じまたは実質的に同じ条件下で測定されるダラツムマブよりも少なくとも約１０％高い。いくつかの実施形態において、ＮＦＡＴシグナル伝達は、同じまたは実質的に同じ条件下で測定されるダラツムマブのＮＦＡＴシグナル伝達よりも少なくとも約１５％、少なくとも約２０％、または少なくとも約３０％高い。
【００７８】
Ｊｕｒｋａｔ細胞でのＮＦＡＴ  ｌｕｃ＿レポーターアッセイにおいて、ＮＦＡＴシグナル伝達は、相対発光ユニット（ＲＬＵ）の可溶性ＣＤ３モノクローナル抗体の存在下で測定され得る。ＣＤ３モノクローナル抗体は、１μｇ／ｍｌの濃度であり得、Ｊｕｒｋａｔ細胞は、約５μｇ／ｍｌ〜約４０μｇ／ｍｌ（例えば、１０μｇ／ｍｌ）の濃度の抗ＣＤ３８抗体で刺激され得る。かかるアッセイを使用すると、ＣＤ３のみの刺激のＲＬＵがベースラインとして使用される場合、ＮＦＡＴシグナル伝達は、同じまたは実質的に同じ条件下で測定されるダラツムマブのＮＦＡＴシグナル伝達よりも少なくとも約１０％高い可能性がある。
【００７９】
Ｔ細胞の活性化は、Ｔ細胞増殖の増加、および／またはサイトカイン分泌の増加によってさらに特徴付けられ、サイトカインは、ＩＬ−２、ＴＮＦ−α、ＩＦＮ−γ、ＩＬ−１０、およびＧＭ−ＣＳＦからなる群から選択され得る。
【００８０】
Ｔ細胞増殖は、実施例で提供されるように、例えば、１０μｇ／ｍｌの抗体濃度で７２時間の培養後、０．１μｇ／ｍｌまたは０．５μｇ／ｍｌの抗ＣＤ３抗体の存在下で決定されるように測定され得る。いくつかの実施形態において、抗ＣＤ３８抗体またはその抗原結合断片は、未処置細胞と比較して、ＣＤ４＋および／またはＣＤ８＋細胞のＴ細胞増殖を、少なくとも２０％増加させる。いくつかの実施形態において、Ｔ細胞増殖は、未処理細胞と比較して、少なくとも約２５％、少なくとも約３０％、少なくとも約３５％、または少なくとも約４０％増加する。
【００８１】
好ましくは、抗ＣＤ３８抗体またはその抗原結合断片（またはそのバリアント）は、同じまたは実質的に同じ条件で（例えば、同じ抗体濃度で７２時間インキュベート）、ヒトＩｇＧ１で処理した細胞と比較して、ＣＤ４＋および／またはＣＤ８＋細胞におけるＴ細胞増殖を、少なくとも約０．５倍（すなわち、少なくとも１．５倍）、または少なくとも１倍（すなわち、少なくとも２倍）、または少なくとも２倍（すなわち、少なくとも３倍）、または少なくとも３倍（すなわち、少なくとも４倍）増加させる。
【００８２】
いくつかの実施形態において、抗ＣＤ３８抗体またはその抗原結合断片（またはそのバリアント）は、同じまたは実質的に同じ条件下で、ダラツムマブにより誘導されるよりも多い量のＣＤ４＋ならびに／またはＣＤ８＋細胞におけるＩＬ−２、ＴＮＦ−α、ＩＦＮ−γ、ＩＬ−１０および／もしくはＧＭ−ＣＳＦからなる群から選択されるサイトカインの分泌を誘導する。いくつかの実施形態において、抗ＣＤ３８抗体またはその抗原結合断片は、ダラツムマブと比較してＧＭ−ＣＳＦの分泌を増加させる。サイトカイン分泌は、実施例で提供されるように、例えば、１０μｇ／ｍｌの抗体濃度で７２時間の培養後に決定されるように測定され得る。
【００８３】
いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３８抗体またはその抗原結合断片（またはそのバリアント）は、ＮＫ細胞の活性化を誘導し得る。ＮＫ細胞の活性化は、ＮＫ細胞増殖の増加によって特徴付けられる。ＮＫ細胞の活性化は、代替的または追加的に、細胞内ＩＦＮｇ産生の増加を示すことにより、および／または脱顆粒マーカーＣＤ１０７ａの発現を増加させることで決定され得る。
【００８４】
いくつかのの実施形態において、抗ＣＤ３８抗体またはその抗原結合断片（またはそのバリアント）は、シクラーゼおよび／またはＮＡＤａｓｅ活性に影響を及ぼし得る。ＣＤ３８  ＮＡＤａｓｅ活性に対する効果は、例えば、Ｊｕｒｋａｔ細胞において、Ｅ−ＮＡＤ＋の５’−ｅＡＭＰへの変換を測定することにより、実施例のアッセイのように測定することができる。ＣＤ３８シクラーゼ活性に対する効果は、例えば、Ｊｕｒｋａｔ細胞において、ＮＧＤ＋のｃＧＤＰＲへの変換を測定することにより、実施例のアッセイのように測定することができる。
【００８５】
いくつかの実施形態において、抗ＣＤ３８抗体またはその抗原結合断片（またはそのバリアント）は、ＣＤ３８  ＮＡＤａｓｅ活性に対する阻害効果を有する。ＣＤ３８  ＮＡＤａｓｅ活性に対する阻害効果は、例えば、Ｊｕｒｋａｔ細胞において、Ｅ−ＮＡＤ＋の５’−ｅＡＭＰへの変換を測定することにより、実施例のアッセイのように測定することができる。いくつかの実施形態において、ＣＤ３８  ＮＡＤａｓｅ活性に対する阻害効果は、Ｊｕｒｋａｔ細胞において、Ｅ−ＮＡＤ＋の５’ｅＡＭＰへの変換により測定される、ＩｇＧ非結合対照抗体の存在下でのＣＤ３８  ＮＡＤａｓｅ活性と比較して、少なくとも１０％低い。いくつかの実施形態において、阻害効果は、ＩｇＧ非結合制御活性の存在下でのＣＤ３８  ＮＡＤａｓｅ活性と比較して、少なくとも約１５％、少なくとも約２０％、または少なくとも約２５％低くなり得る。
【００８６】
いくつかの実施形態において、抗ＣＤ３８抗体またはその抗原結合断片（またはそのバリアント）は、Ｊｕｒｋａｔ細胞において、Ｅ−ＮＡＤ＋の５’ｅＡＭＰへの変換により測定される、ＣＤ３８  ＮＡＤａｓｅ活性を、ＩｇＧ非結合対照抗体の存在下でのＣＤ３８  ＮＡＤａｓｅ活性の約２５％以上で低下させる。好ましくは、抗体は、ＣＤ３８  ＮＡＤａｓｅ活性を、ＩｇＧ非結合対照抗体の存在下でのＣＤ３８  ＮＡＤａｓｅ活性の約３０％以上、約４０％以上、または約５０％以上で低下させる。好ましくは、抗体は、ＣＤ３８  ＮＡＤａｓｅ活性を、ＩｇＧ非結合対照抗体の存在下でのＣＤ３８  ＮＡＤａｓｅ活性の２５％〜９５％、約３０％〜９０％、または約４０％〜９０％で低下させる。これは、抗ＣＤ３８抗体またはその抗原結合断片の存在下で、ＣＤ３８  ＮＡＤａｓｅ活性がＪｕｒｋａｔ細胞において依然として存在することを意味するが、しかしながら、ＩｇＧ非結合対照抗体の存在下と比較した量は減少された。
【００８７】
いくつかの実施形態において、抗ＣＤ３８抗体またはその抗原結合断片（またはそのバリアント）は、ＣＤ３８シクラーゼ活性に対して刺激効果を有する。ＣＤ３８シクラーゼ活性に対する刺激効果は、例えば、Ｊｕｒｋａｔ細胞において、ＮＧＤ＋のｃＧＤＰＲへの変換を測定することにより、実施例のアッセイのように測定することができる。いくつかの実施形態において、ＣＤ３８シクラーゼ活性に対する刺激効果は、Ｊｕｒｋａｔ細胞において、ＮＧＤ＋のｃＧＤＰＲへの変換により測定される、ＩｇＧ非結合対照抗体の存在下でのＣＤ３８シクラーゼ活性と比較して、少なくとも１０％高くなり得る。いくつかの実施形態において、刺激効果は、ＩｇＧ非結合制御活性の存在下でのＣＤ３８シクラーゼと比較して、少なくとも約１５％、少なくとも約２０％、少なくとも約２５％高く、少なくとも約５０％高く、最後に約１００％高く、少なくとも約２００％高く、少なくとも約３００％高く、少なくとも約４００％高くなり得る。いくつかの実施形態において、抗ＣＤ３８抗体またはその抗原結合断片は、ダラツムマブと比較してＣＤ３８シクラーゼに対してより大きな刺激効果を有する。
【００８８】
いくつかの実施形態において、抗ＣＤ３８抗体またはその抗原結合断片は、ＣＤ３８シクラーゼ活性に対する刺激効果およびＣＤ３８  ＮＡＤａｓｅ活性に対する阻害効果を有する。
【００８９】
ダラツムマブは、Ｊｕｒｋａｔ細胞においてシクラーゼ活性を阻害し、かつＮＡＤａｓｅ活性を刺激することが示されている。対照的に、本発明の抗体は、同じまたは実質的に同じ条件で、ＣＤ３８シクラーゼに対する刺激効果、およびＣＤ３８  ＮＡＤａｓｅの阻害効果を有し得る。
【００９０】
そのようなものとして、抗ＣＤ３８抗体またはその抗原結合断片（またはそのバリアント）は、ＣＤ３８＋標的細胞に対して抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）活性を示し、同じまたは実質的に同じ条件下で、ダラツムマブと比較してＣＤ３８＋標的細胞に対するＣＤＣ活性の低下を示し（例えば、本明細書に記載されるように測定される最大％溶解は、ダラツムマブの半分未満であり得る）、免疫エフェクター細胞の活性化を誘導し、Ｔ細胞増殖を誘導し、ＧＭ−ＣＳＦを含むサイトカイン分泌の増加を誘導し、ＣＤ３８  ＮＡＤａｓｅ活性に対する阻害効果を示し、ＣＤ３８シクラーゼ活性に対する刺激効果を示す。
【００９１】
本発明は、抗体ａＣＤ３８−ａ−３２３のバリアントまたは誘導体をさらに含む。バリアントまたは誘導体抗体またはその抗原結合断片は、それらが由来する抗体と同じ機能的プロファイル（すなわち、薬理学的特性）を共有し得る。同様に、本発明は、ＣＤ３８との結合についてａＣＤ３８−ａ−３２３（またはそのバリアント）と競合する抗体または抗原結合断片を含む。かかる競合抗体は、ａＣＤ３８−ａ−３２３と同じ機能的プロファイル（すなわち、薬理学的特性）を有し得る。
【００９２】
提供されるＣＤ３８調節抗体剤とヒトＣＤ３８との間の分子相互作用についてさらに洞察を得るために、ＣＤ３８調節抗体剤およびヒトＣＤ３８タンパク質の結晶構造が決定され得る（例えば、ａＣＤ３８−ａ−３２３−ｈＩｇＧ１抗体の特定の例を与えるため）。提供されるＣＤ３８調節抗体剤（具体的には、例えばａＣＤ３８−ａ−３２３−ｈＩｇＧ１抗体を含む）の溶解性および／または安定性は、溶解性研究、加速ストレス研究、凍結融解研究、および正式な安定性研究を介して評価できる。抗体の凝集に続いて、目視検査、サイズ排除クロマトグラフィ、動的光散乱、ＯＤ２８０／３２０吸光度を測定できる。
【図面の簡単な説明】
【００９３】
【図１】本発明による１つ以上の特性を有するアゴニスト性抗ＣＤ３８抗体、特に重要なＣＤ３８調節抗体剤の特徴として本明細書に記載されるものとしてのａＣＤ３８−ａ−３２３を同定するためのスクリーニング手順を要約するフローチャート：薬学的に関連する標的化細胞の殺傷（例えば、ＡＤＣＣ、ＡＤＣＰ、およびＣＤＣアッセイで測定）、免疫細胞への影響（（Ｔｒｅｇ、ＣＤ８およびＣＤ４  Ｔ細胞、ＮＫ細胞、樹状細胞、ＭＤＳＣ、マクロファージ、および／または単球など、細胞生存率および／または増殖、サイトカイン分泌、および／または活性化マーカーなどの特性を測定するため）、ＣＤ３８酵素活性またはＣＤ３８を介したシグナル伝達への影響、ＣＤ３８を発現している（またはしていない）がん細胞への影響、他の薬物との組み合わせ（例えば、腫瘍抗原を標的とする抗体または他の抗がん剤）、および／または抗体配列および形式、凝集しやすい配列、グリコシル化部位の存在、または可変ドメインにおける遊離システインおよび／または影響に関連する安定性の問題を特定するため（例えば、ＦａｂとしてのヒトＩｇＧ１フレーム内、ナノボディ、二重／多重特異性抗体、または非抗体足場内）。
【図２】ａＣＤ３８−ａ−３２３タンパク質配列に関連するタンパク質配列重（ａＣＤ３８−ａ−３２３−ＨＣＤＲ１（配列番号１）、ａＣＤ３８−ａ−３２３−ＨＣＤＲ２（配列番号２）、およびａＣＤ３８−ａ−３２３−ＨＣＤＲ３（配列番号３））、および軽（ａＣＤ３８−ａ−３２３−ＬＣＤＲ１（配列番号５）ａＣＤ３８−ａ−３２３−ＬＣＤＲ２（配列番号６）、およびａＣＤ３８−ａ−３２３−ＬＣＤＲ３（配列番号７））鎖の各ＣＤＲを、スクリーニング手順によって最初に特定した重および軽鎖抗体のフレーム配列内に、下線で個別に示した（ａＣＤ３８−ａ−３２３−ＨＣＤＲ１２３（配列番号４）およびａＣＤ３８−ａ−３２３−ＬＣＤＲ１２３（配列番号８））。
【図３】カニクイザル（Ａ）またはヒト由来（Ｂ）のいずれかの細胞を、抗体濃度を増加させて使用し、分析をＣＤ８陽性またはＣＤ４陽性細胞に制限し、ヒトＩｇＧ１アイソタイプ対照と比較する、ＰＢＭＣにおいて発現されるＣＤ３８とのａＣＤ３８−ａ−３２３の結合の特徴付け。
【図４】任意のさらなる腫瘍標的化抗体の投与から独立した細胞系モデルにおける、ダラツムマブ（ＤＡＲＡ）または陰性対照抗体（抗ヒトＣＤ３またはヒトＩｇＧ１アイソタイプ）と比較した、ａＣＤ３８−ａ−３２３の機能的特徴付け。（Ａ）ａＣＤ３８−ａ−３２３は、各グラフに示されるように、ＴＣＲを介したＣＤ４およびＣＤ８  Ｔ細胞増殖の割合を増加させた。（ａＣＤ３８−ａ−３２３は１０−５−２．５μｇ／ｍｌで、ｈＩｇＧ１およびＤＡＲＡは１０μｇ／ｍｌで試験した；基準活性化を提供する抗ＣＤ３濃度は０．１μｇ／ｍｌである）。（Ｂ）ａＣＤ３８−ａ−３２３は、ＴＣＲ活性化ＣＤ４／ＣＤ８  Ｔ細胞によるＧＭ−ＣＳＦの分泌を増加させる（試験された３ドナーのうち３ドナーで同様のパターン）、（ａＣＤ３８−ａ−３２３は１０−５−２．５μｇ／ｍｌで、ｈＩｇＧ１およびＤＡＲＡは１０μｇ／ｍｌで試験し、抗ＣＤ３濃度は０．１μｇ／ｍｌで試験した）。
【図５】細胞傷害に関して、ＤＡＲＡと比較したａＣＤ３８−ａ−３２３の機能的特徴付け。（Ａ）ａＣＤ３８−ａ−３２３およびＤＡＲＡの両方が、抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）によって、ＣＤ３８発現Ｄａｕｄｉ細胞の殺傷を誘導する。さらに、ａＣＤ３８−ａ−３２３およびダラツムマブ（ＤＡＲＡ）の両方が、補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ、Ｂ）を誘導し、ＤＡＲＡは、ＣＤＣによる細胞溶解を４０％のみ誘導するａＣＤ３８−ａ−３２３よりも高い程度であり、ＤＡＲＡは＞９０％の細胞溶解を誘導する（ＣＤＣは、文献に記載されているようにＤＡＲＡにとって特に重要である）。
【図６】酵素活性に関して、ダラツムマブ（ＤＡＲＡ）および対照抗体（ヒトＩｇＧ１アイソタイプ）と比較したａＣＤ３８−ａ−３２３の機能的特徴付け。ａＣＤ３８−３２３および対照抗体による、Ｄａｕｄｉ細胞におけるＣＤ３８シクラーゼまたはＮＡＤａｓｅ（ヒドロラーゼ）活性の阻害または活性化を試験した。（Ａ）ａＣＤ３８−ａ−３２３はヒトＩｇＧ１抗体と比較してシクラーゼ活性を増加させるが、ＤＡＲＡはシクラーゼ活性を低下させる（Ｎ＝２実験）。（Ｂ）ａＣＤ３８−ａ−３２３はＮＡＤａｓｅ活性を低下させるが、ＤＡＲＡは低下させない（Ｎ＝２実験）。
【図７】酵素活性に関して、ダラツムマブおよびヒトＩｇＧ１アイソタイプと比較したａＣＤ３８−ａ−３２３の機能的特徴付け。ａＣＤ３８−ａ−３２３および対照抗体による、Ｊｕｒｋａｔ細胞におけるＣＤ３８シクラーゼまたはＮＡＤａｓｅ（ヒドロラーゼ）活性の阻害または活性化を試験した。（Ａ）ａＣＤ３８−ａ−３２３は、ヒトＩｇＧ１抗体と比較してシクラーゼ活性を誘導するが、ＤＡＲＡはシクラーゼ活性を低下させる。（Ｂ）ａＣＤ３８−ａ−３２３はＮＡＤａｓｅ活性を低下させるが、ＤＡＲＡは低下させない。図７は、３つの独立した実験（ｎ＝３）の平均としてのデータを示す。
【図８】ダラツムマブと比較した、示された日数にわたるＲａｍｏｓ細胞の皮下投与に基づく生体内固形腫瘍がんモデルにおける動物の生存に関するａＣＤ３８−ａ−３２３（１０ｍｇ／ｋｇで投与された）の特徴付け。腫瘍成長の治療の影響を評価した。
【図９】ダラツムマブと比較した、示された日数にわたるＲａｍｏｓ細胞の静脈内投与に基づく生体内固形腫瘍がんモデルにおける動物の生存に関するａＣＤ３８−ａ−３２３（１０ｍｇ／ｋｇで投与された）の特徴付け。マウスの生存に対する治療の影響を評価した。
【図１０】ダラツムマブと比較した、示された日数にわたるＲａｊｉ細胞の静脈内投与に基づく生体内固形腫瘍がんモデルにおける動物の生存に関するａＣＤ３８−ａ−３２３（１０ｍｇ／ｋｇで投与された）の特徴付け。マウスの生存に対する治療の影響を評価した。
【図１１】Ｏｃｔｅｔ  Ｒｅｄ  ９６装置のバイオレイヤー干渉法によって測定した、ダラツムマブ（図１１Ｂ）と比較したｈｉｓタグ付き組換えヒトＣＤ３８との抗ＣＤ３８抗体ａＣＤ３８−ａ−３２３（図１１Ａ）の結合を示す。４．２ｎＭのｒｈＣＤ３８−ｈｉｓ、続いて様々な濃度の抗体（図に示すように）をＮｉ−ＮＴＡバイオセンサに負荷し、次にそれらをＫｉｎｅｔｉｃｓ  Ｂｕｆｆｅｒで分離した。
【図１２】Ｂｉａｃｏｒｅ  ２０００での、ｈｉｓタグ付けされたｒｈＣＤ３８に対する精製ａＣＤ３８−ａ−３２３抗体（ＩｇＧ１）のＳＰＲ系分析。
【図１３】Ｊｕｒｋａｔ細胞でのＮＦＡＴシグナル伝達ｌｕｃレポーターアッセイにおける、ダラツムマブ（ＤＡＲＡ）または陰性対照抗体（ヒトＩｇＧ１アイソタイプ）と比較したａＣＤ３８−ｂ−３４８の機能的特徴付け。
【発明を実施するための形態】
【００９４】
以下に、本明細書で使用される用語、技術的手法、および実施形態の特定の定義を提供し、それらの多くまたは大部分が、当業者の共通の理解を裏付けるものである。
【００９５】
投与：本明細書で使用される「投与」という用語は、対象への組成物の投与を指す。動物対象（例えば、ヒト）への投与は、任意の好適な経路によるものであり得る。例えば、いくつかの実施形態において、投与は、気管支（気管支滴下による投与を含む）、頬側、経腸、動脈内、皮内、胃内、髄内、筋肉内、鼻腔内、腹腔内、くも膜下腔内、静脈内、脳室内、特定の臓器または組織内（例えば、肝内、腫瘍内、腫瘍周囲など）、粘膜、鼻、口部、直腸、皮下、舌下、局所、気管（気管内滴下を含む）、経皮、膣、および硝子体であり得る。投与は、断続的な投薬を伴い得る。代替的に、投与は、少なくとも選択された期間の連続的投薬（例えば、灌流）を伴い得る。当該技術分野で知られているように、抗体療法は一般に、例えば静脈内、皮下、または腫瘍内注入により非経口的に投与される（例えば、特に腫瘍内の高用量が所望される場合）。
【００９６】
薬剤：本明細書で使用される「薬剤」という用語は、例えば、ポリペプチド、核酸、糖類、小分子、金属、またはそれらの組み合わせを含む任意の化学クラスの化合物または実体を指し得る。本発明に従って利用され得る薬剤の特定の実施形態には、小分子、薬物、ホルモン、抗体、抗体断片、アプタマー、核酸（例えば、ｓｉＲＮＡ、ｓｈＲＮＡ、アンチセンスオリゴヌクレオチド、リボザイム）、ペプチド、ペプチド模倣物などが含まれる。薬剤は、ポリマーであっても、ポリマーを含んでもよい。
【００９７】
抗体：本明細書で使用される「抗体」という用語は、ＣＤ３８、特にヒトＣＤ３８、およびヒトＣＤ３８細胞外などの特定の標的抗原との特異的結合を付与するのに十分な標準的な免疫グロブリン配列要素を含むポリペプチドを指す。当技術分野で知られているように、自然に産生される無傷の抗体は、相互に関連する２つの同一の重鎖ポリペプチド（各約５０ｋＤ）および２つの同一の軽鎖ポリペプチド（各約２５ｋＤ）で構成される、およそ１５０ｋＤの四量体であり、一般に「Ｙ字型」構造と称されるものである。各重鎖は、少なくとも４つのドメイン（各々約１１０アミノ酸の長さ）、アミノ末端可変（ＶＨ）ドメイン（Ｙ構造の先端に位置する）、それに続く３つの定常ドメイン、ＣＨ１、ＣＨ２、およびカルボキシ末端ＣＨ３（Ｙ’のステムの基部に位置する）で構成される。「スイッチ」として知られる短い領域は、重鎖可変および定常領域を接続する。「ヒンジ」は、ＣＨ２およびＣＨ３ドメインを抗体の残りの部分と接続する。このヒンジ領域の２つのジスルフィド結合は、２つの重鎖ポリペプチドを無傷の抗体において互いに接続する。各軽鎖は、２つのドメイン、アミノ末端可変（ＶＬ）ドメイン、それに続くカルボキシ末端定常（ＣＬ）ドメインで構成され、別の「スイッチ」によって互いに分離されている。無傷の抗体四量体は、重および軽鎖が単一ジスルフィド結合によって互いに結合している２つの重鎖−軽鎖二量体で構成されており、他の２つのジスルフィド結合が重鎖のヒンジ領域を互いに接続するため、二量体が互いに接続され、四量体が形成される。天然に産生された抗体は、典型的にはＣＨ２ドメインがグリコシル化されており、各ドメインは、圧縮逆平行ベータバレル内に互いに密集した２つのベータシート（例えば、３本、４本、または５本鎖シート）から形成された「免疫グロブリンフォールド」を特徴とする構造を有する。各可変ドメインには、「補体決定領域」として知られる３つの超可変ループ（ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３；当技術分野で理解されているように、例えばＫａｂａｔナンバリングスキームに従って決定される）、および４つのやや不変の「フレームワーク」領域（ＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３、ＦＲ４）が含まれる。天然の抗体が折り畳まれると、ＦＲ領域は、ドメインの構造的フレームワークを提供するベータシートを形成し、重および軽鎖の両方のＣＤＲループ領域が三次元空間に集められ、Ｙ構造の先端に位置する単一の超可変抗原結合部位を作製する。天然の抗体のＦｃ領域は補体系の要素に結合し、さらに、例えば細胞傷害を媒介するエフェクター細胞を含むエフェクター細胞上の受容体にも結合する。当技術分野で知られているように、Ｆｃ受容体に対するＦｃ領域の親和性および／または他の結合属性は、抗体の開発可能性を改善できるグリコシル化または他の修飾により調節することができる（Ｊａｒａｓｃｈ  Ａ  ｅｔ  ａｌ．，２０１５）。
【００９８】
いくつかの実施形態において、本発明に従って産生および／または利用される抗体には、かかるグリコシル化が改変または操作されたＦｃドメインを含むグリコシル化Ｆｃドメインが含まれる。本発明の目的のために、特定の実施形態において、天然の抗体に見られる十分な免疫グロブリンドメイン配列を含むポリペプチドまたはポリペプチドの複合体は、かかるポリペプチドが天然に産生されるかどうかにかかわらず、「抗体」と呼ばれ、および／または使用され得（例えば、抗原に反応する生物によって生成される）、または組換え工学、化学合成、または他の人工システムまたは方法論によって生成される。いくつかの実施形態において、抗体はポリクローナル抗体またはオリゴクローナル抗体であり、抗体のパネルとして生成され、各々が単一の抗体配列に関連付けられ、抗原内の多少の異なるエピトープと結合する（異なる参照抗ＣＤ３８抗体に関連するヒトＣＤ３８細胞外ドメイン内の異なるエピトープなど）。
【００９９】
文献（Ｋｅａｒｎｓ  ＪＤ  ｅｔ  ａｌ．，２０１５）に記載されているように、ポリクローナルまたはオリゴクローナル抗体は、医療用途の単一調整で提供できる。いくつかの実施形態において、抗体は、モノクローナルである。いくつかの実施形態において、抗体は、マウス、ウサギ、霊長類、またはヒトの抗体に特質のある定常領域配列を有する。いくつかの実施形態において、抗体配列要素は、当技術分野で知られているように、ヒト化、霊長類化、キメラなどである。さらに、本明細書で使用される「抗体」という用語は、適切な実施形態において（特に明記しない限り、文脈から明らかでない限り）、例えば以下に定義される抗原結合断片として、代替提示で抗体の構造的および機能的特徴を利用するために、当技術分野で既知または開発された構築物または形式のいずれをも参照できる。例えば、本発明に従って利用される抗体は、無傷のＩｇＧ、ＩｇＥおよびＩｇＭ、二重または多重特異性抗体（例えば、Ｚｙｂｏｄｉｅｓ（登録商標）など）、単鎖可変ドメイン（ｓｃＦｖ）、ポリペプチド−Ｆｃ融合、Ｆａｂ、カメロイド抗体、重鎖サメ抗体（ＩｇＮＡＲ）、マスクされた抗体（例えば、Ｐｒｏｂｏｄｉｅｓ（登録商標））、または細胞表面での発現および露出を可能にするポリペプチドとの融合タンパク質（モノクローナル抗体の特異性をＴ細胞に移植するために使用される人工Ｔ細胞受容体を取得するための構築物内のｓｃＦｖとして）から選択されるがこれらに限定されない形式である。いくつかの実施形態において、抗体は、自然に産生された場合に有するであろう共有結合修飾（例えば、グリカンの付着）を欠く場合がある。代替的に、抗体は、共有結合修飾（例えば、グリカン、ペイロード［例えば、検出可能部分、治療部分、触媒部分など］、または他のペンダント基［例えば、ポリエチレングリコールなど］の付着）を含み得る。
【０１００】
抗原：本明細書で使用される「抗原」という用語は、免疫応答を誘発する、ならびに／またはＴ細胞受容体（例えば、ＭＨＣ分子によって提示される場合）、および／もしくはＢ細胞受容体と結合する因子を指す。液性応答を誘発する抗原は、抗原特異的抗体の産生を伴うか、またはＣＤ３８細胞外ドメインに対する実施例に示されるように、抗体ライブラリをスクリーニングし、さらに特徴付けされる候補抗体配列を同定するために使用できる。
【０１０１】
抗原結合断片：本明細書で使用される「抗原結合断片」という用語は、抗原結合断片および抗体によって標的化される抗原と特異的に結合する能力を付与するのに十分な本明細書に記載される抗体の１つ以上の部分を含むか、または成る薬剤を包含する。例えば、いくつかの実施形態において、この用語は、特異的結合を付与するのに十分な免疫グロブリン構造要素を含むポリペプチド、またはポリペプチド複合体のいずれをも包含する。例示的な抗原結合フラグメントには、小モジュラー免疫医薬品（「ＳＭＩＰｓ（商標）」）、一本鎖抗体、カメロイド抗体、単一ドメイン抗体（例えば、サメ単一ドメイン抗体）、一本鎖またはタンデム型二重特異性抗体（ＴａｎｄＡｂ（登録商標））、ＶＨＨ、Ａｎｔｉｃａｌｉｎｓ（登録商標）、Ｎａｎｏｂｏｄｉｅｓ（登録商標）、低分子、ＢｉＴＥ（登録商標）、アンキリンリピートタンパク質またはＤＡＲＰＩＮｓ（登録商標）、Ａｖｉｍｅｒｓ（登録商標）、ＤＡＲＴ、ＴＣＲ様抗体、Ａｄｎｅｃｔｉｎｓ（登録商標）、Ａｆｆｉｌｉｎｓ（登録商標）、Ｔｒａｎｓ−ｂｏｄｉｅｓ（登録商標）、Ａｆｆｉｂｏｄｉｅｓ（登録商標）、ＴｒｉｍｅｒＸ（登録商標）、マイクロタンパク質、Ｃｅｎｔｙｒｉｎｓ（登録商標）、ＣｏＶＸボディ、ＢｉＣｙｃｌｉｃペプチド、Ｋｕｎｉｔｚドメイン由来抗体構築物、または所望される生物学的活性を示す限りの他の抗体断片が含まれるが、これに限定されない。いくつかの実施形態において、この用語は、例えば文献（Ｖａｚｑｕｅｚ−Ｌｏｍｂａｒｄｉ  Ｒ  ｅｔ  ａｌ．，２０１５）で概説されているように、ステープル化ペプチド、抗体様結合ペプチド模倣体、抗体様結合足場タンパク質、モノボディ、および／または他の非抗体タンパク質足場などの他のタンパク質構造を包含する。いくつかの実施形態において、抗原結合断片は、アミノ酸配列が相補性決定領域（ＣＤＲ）として当業者によって認識される１つ以上の構造要素を含むポリペプチドであるか、またはそれを含む。いくつかの実施形態における抗原結合断片は、そのアミノ酸配列が、本明細書に記載される抗ＣＤ３８抗体に見られるもの（例えば、ａＣＤ３８−ａ−３２３アミノ酸配列要素）と実質的に同一の少なくとも１つの参照ＣＤＲ（例えば、少なくとも１つの重鎖ＣＤＲおよび／または少なくとも１つの軽鎖ＣＤＲ）、特にＨＣＤＲ３（例えば、ａＣＤ３８−ａ−３２３−ＨＣＤＲ３配列）などの少なくとも１つの重鎖ＣＤＲを含むポリペプチドであるか、またはそれを含む。いくつかの実施形態における抗原結合断片は、そのアミノ酸配列が、配列が同一であるか、または参照ＣＤＲが由来する抗体（例えば、ａＣＤ３８−ａ−３２３）の標的との結合を維持しながら、かかる参照ＣＤＲと比較して少数（例えば、１、２、３、または４）のアミノ酸改変（例えば、置換、追加、または欠失、多くの場合は、置換）を含むかのいずれかである、少なくとも１つのＣＤＲ（例えば、少なくとも１つの重鎖ＣＤＲおよび／または少なくとも１つの軽鎖ＣＤＲ）を含むポリペプチドであるか、またはそれを含む。いくつかの実施形態において、抗原結合断片は、参照抗体（例えば、ａＣＤ３８−ａ−３２３）の重鎖もしくは軽鎖からの３つ全てのＣＤＲ（またはいくつかの実施形態では、それと実質的に同一の配列）を含むポリペプチドまたはその複合体であるか、またはそれを含み；いくつかの実施形態において、抗原結合断片は、参照抗体（例えば、ａＣＤ３８−ａ−３２３）からの６つ全てのＣＤＲ（または、一部の実施形態では、それと実質的に同一の配列）を含むポリペプチドもしくはその複合体であるか、またはそれを含む。いくつかの実施形態において、抗原結合断片は、参照抗体（例えば、ａＣＤ３８−ａ−３２３）の重および／もしくは軽鎖可変ドメイン（または、いくつかの実施形態では、それと実質的に同一の配列）を含むポリペプチドまたはその複合体であるか、またはそれを含む。いくつかの実施形態において、「抗原結合断片」という用語は、例えば、ＲＮＡアプタマーおよびＤＮＡアプタマーなどの核酸アプタマーのような、非ペプチドおよび非タンパク質構造を包含する。アプタマーは、ポリペプチドなどの特定の標的と結合するオリゴヌクレオチド（例えば、ＤＮＡ、ＲＮＡ、またはその類似体または誘導体）である。アプタマーは、低分子、タンパク質、核酸、さらには細胞および組織などの様々な分子標的と特異的に結合する短い合成一本鎖オリゴヌクレオチドである。これらの小さな核酸分子は、タンパク質または他の細胞標的と特異的に結合可能な二次および三次構造を形成でき、本質的に抗体の化学的同等物である。アプタマーは非常に特異性があり、サイズが比較的小さく、非免疫原性である。アプタマーは一般に、ＳＥＬＥＸ（指数関数的エンリッチメントによるリガンドの系統的進化）として知られるバイオパニング法から選択される（例えば、Ｅｌｌｉｎｇｔｏｎ  ｅｔ  ａｌ．Ｎａｔｕｒｅ．１９９０；  ３４６（６２８７）：８１８−８２２；Ｔｕｅｒｋ  ｅｔ  ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ．１９９０；２４９（４９６８）：５０５−５１０；Ｎｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｕｒｒ  Ｍｅｄ  Ｃｈｅ  ２０１１；  １８（２７）：４２０６−１４を参照されたい）。任意の所与の標的に対してアプタマーを生成する方法は、当技術分野で周知である。アフィマーを含むペプチドアプタマーも含まれる。アフィマーは、特定の標的タンパク質に対して高親和性結合表面を提供するペプチドループを提示するように操作された、小さく、非常に安定したタンパク質である。シスタチンのシステインプロテアーゼ阻害物質ファミリーに由来する、１２〜１４ｋＤａの低分子量のタンパク質である。アフィマータンパク質は足場で構成されており、シスタチンタンパク質の折り畳みに基づいた安定したタンパク質である。それらは、ランダム化して抗体と同様の高い親和性および特異性で異なる標的タンパク質と結合できる、２つのペプチドループならびにＮ末端配列を表示する。タンパク質足場上でのペプチドの安定化は、ペプチドが取り得る可能性のある立体構造を制限し、したがって、遊離ペプチドのライブラリと比較して、結合親和性および特異性が向上する。
【０１０２】
配列同一性の割合（％）：２つの配列間の「配列同一性」の割合（％）は、当技術分野で即知の方法を使用して決定できる。ペプチド、ポリペプチド、または抗体配列に関する配列同一性は、配列を整列させてギャップを導入した後、特定のペプチドまたはポリペプチド配列のアミノ酸残基と同一である候補配列のアミノ酸残基の割合として定義でき、必要に応じて、配列同一性の最大割合を達成し、配列同一性の一部として保存的置換を考慮しない。アミノ酸配列同一性の割合を決定する目的のためのアラインメントは、例えば、ＢＬＡＳＴ、ギャップ付ＢＬＡＳＴを含むＢＬＡＳＴ−２、およびＢＬＡＳＴｐ（タンパク質用）（Ａｌｔｓｃｈｕｌ  ＳＦ  ｅｔ  ａｌ（１９９７））、またはＦＡＳＴＡなどの公的に利用可能なコンピュータソフトウェアを使用して、デフォルトのパラメータを使用して当該技術分野の範囲内である様々な手段で達成することができる。
【０１０３】
生物学的試料。本明細書で使用される「生物学的試料」または「試料」という用語は、概して本明細書に記載される目的の生物源（例えば、組織、または生物体、または培養細胞）から取得されるか、または由来する試料を指す。目的の源は、動物またはヒトなどの生物体であり得る。生体試料は、生体組織または体液を含み得る。
【０１０４】
がん：「がん」、「悪性腫瘍」、「新生物」、「腫瘍」、「腫」、および「がん種」という用語は、本明細書では互換的に使用され、相対的に異常であり、制御されない、および／または自律的な成長を示す細胞を指し、そのため、細胞増殖の制御が著しく失われることによって特徴付けされる異常な成長表現型を示す。概して、本出願における検出または治療の対象となる細胞には、前がん性（例えば、良性）、悪性、前転移性、転移性、および非転移性細胞が含まれる。本開示の教示は、あらゆる全てのがんに関連し得る。いくつかの非限定的な例を挙げると、いくつかの実施形態において、本開示の教示は、例えば、白血病、リンパ腫（ホジキンおよび非ホジキン）、骨髄腫、および骨髄増殖性障害を含む造血性がん；肉腫、黒色腫、腺腫、固形組織のがん腫、口部、喉、喉頭、および肺の扁平上皮がん、肝臓がん、前立腺などの泌尿生殖器がん、子宮頸がん、膀胱がん、子宮がん、子宮内膜がん、腎細胞がん、骨がん、膵臓がん、皮膚がん、皮膚性または眼内黒色腫、内分泌系のがん、甲状腺のがん、副甲状腺のがん、頭頸部がん、乳がん、胃腸がん、神経系がん、乳頭腫などの良性病変などの１つ以上のがんに適用される。本発明の抗体は、ＣＤ３８＋発現腫瘍の治療において使用できる。
【０１０５】
ＣＤ３８調節抗体剤：「ＣＤ３８調節抗体剤」という用語は、本明細書に記載される特定の特性を示すＣＤ３８調節抗体剤（例えば、抗ＣＤ３８抗体）を指すために本明細書で使用される。多くの実施形態において、本明細書に記載の所望されるＣＤ３８調節抗体剤は、免疫エフェクター細胞を刺激し、および／または免疫細胞機能を改変し、免疫抑制細胞または腫瘍細胞など（例えば、各々の場合に、それらの表面上にＣＤ３８を発現する）のＣＤ３８発現細胞（例えば、高レベルのＣＤ３８を発現する）に対して細胞傷害性または食作用を誘発することを特徴とする。いくつかの実施形態において、ＣＤ３８調節抗体剤は、免疫細胞（例えば、免疫細胞、特にＣＤ３８を発現する免疫細胞と接触した場合）および腫瘍細胞に関してａＣＤ３８−ａ−３２３の活性と合理的に同等な活性（例えば、レベルおよび／または種類）によって特徴付けされる。いくつかの実施形態において、関連する活性は、ＡＤＣＰ、ＡＤＣＣ、ＣＤＣの欠如、直接的殺傷、特定のＣＤ３８発現細胞（例えば、高発現細胞）の枯渇、エフェクター免疫細胞活性化、Ｔ細胞、Ｂ細胞、またはＮＫ細胞の増殖の促進、免疫細胞活性の調節（例えば、抑制性マクロファージの炎症性マクロファージへの再分極）、Ｔ細胞レパートリの傾斜など、およびそれらの組み合わせであるか、またはそれらを含む。いくつかの実施形態において、ＣＤ３８調節抗体剤は、その存在またはレベルがＣＤ３８のレベルおよび／または活性、および／またはＣＤ３８活性に特徴的な１つ以上の特徴または結果と相関する実体または部分である。いくつかの実施形態において、増加したレベルおよび／または活性は、実体（複数可）または部分（複数可）の非存在下で他の同等な条件下で観察されるものと比較して評価または決定される。代替的または追加的に、いくつかの実施形態において、増加したレベルおよび／または活性は、参照ＣＤ３８調節抗体剤（例えば、好適な参照抗ＣＤ３８抗体、多くの実施形態においてはＩＢ４などのＣＤ３８アゴニスト抗体）が存在する場合に、同等な条件下で観察されるものと同等またはそれ以上である。多くの実施形態において、本開示に従って使用するためのＣＤ３８調節抗体剤は、ＣＤ３８、典型的にはその細胞外ドメインと直接的もしくは間接的に結合する、実体または部分であるか、またはそれを含む。いくつかの実施形態において、ＣＤ３８調節抗体剤は、本明細書に例示される抗ＣＤ３８抗体、その抗原結合断片（例えば、１つ以上のＣＤＲ、全ての重鎖ＣＤＲ、全ての軽鎖ＣＤＲ、全てのＣＤＲ、重鎖可変領域、軽鎖可変領域、または重および軽鎖可変領域の両方を含む）、その親和性成熟バリアント（またはその抗原結合断片）、または前述のうちのいずれかの任意の代替形式（例えば、キメラ、ヒト化、多重特異性、代替アイソタイプなど）とＣＤ３８との結合を含むか、または競合する。代替的または追加的に、いくつかの実施形態において、本明細書に記載されるＣＤ３８調節抗体剤は、スクリーニング、製造、（前）臨床治験、および／またはヒトＣＤ３８内の関連エピトープを同定するため）、および／または製剤、投与のため、および／または本明細書に開示されるような特定の状況下における有効性（例えば、がん治療のため）に有利な特徴であり得る１つ以上の特徴により特徴付けられ得る。
【０１０６】
併用療法：本明細書で使用される「併用療法」という用語は、対象が２つ以上の治療レジメン（例えば、２つ以上の治療剤）に同時に曝露される状態を指す。いくつかの実施形態において、２つ以上の薬剤は、同時に投与され得る。代替的に、かかる薬剤は、連続的に投与され得；別の方法としては、かかる薬剤は、重複した投薬レジメンで投与される。
【０１０７】
同等：本明細書で使用される「同等」という用語は、２つ以上の媒介物、実体、状況、効果、条件のセットなどを指し、それらは互いに同一ではない可能性あるが、それらの間の比較を可能にするのに十分に類似している（例えば、レベルおよび／または活性による）ため、観察される差異または類似性に基づいて結論を合理的に引き出すことができ得る。かかる同等な条件のセット、効果、状況、個体、または集団は、複数の実質的に同一な特徴、および１つまたは少数の多様な特徴によって特徴付けられる。当業者は、状況下において、同等とみなされる２つ以上のかかる媒介物、実体、状況、条件のセット、効果、または集団などについて、任意の所与の状況においてどの程度の同一性が必要であるかを理解するであろう。
【０１０８】
含む：１つ以上の指定された要素またはステップを「含む」として本明細書で記載される構成または方法は、無制限であり、つまり、指定された要素またはステップは必須であるが、構成または方法の範囲内で他の要素またはステップが追加され得る。さらに、１つ以上の指定された要素またはステップを「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」（または「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅｓ）」）として、同じ指定された要素またはステップの、より限定された構成または方法を「本質的に〜からなる（ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇ  ｅｓｓｅｎｔｉａｌｌｙ  ｏｆ）」（または「本質的に〜からなる（ｃｏｎｓｉｓｔｓ  ｅｓｓｅｎｔｉａｌｌｙ  ｏｆ）」）として記載される構成または方法のいずれをもが、対応するものを記載していることがさらに理解され、つまり、構成または方法には、指定された必須の要素またはステップが含まれ、構成または方法の基本的および新規の特性（複数可）に実質的に影響しない追加の要素またはステップも含み得る。
【０１０９】
ダラツムマブ：本明細書で使用される「ダラツムマブ」という用語は、ＷＯ２００６／０９９８７５に公開されるＶＨおよびＶＬ配列を有し、かつヒトＩｇＧ１モノクローナル抗体である抗体を含む。例えば、以下に提供されるそれぞれの配列を含む可変重鎖および軽鎖配列を有する：
重鎖：
2020531003.tif 000007
軽鎖
2020531003.tif 000008
【０１１０】
剤形：本明細書で使用される「剤形」という用語は、対象への投与のための活性剤（例えば、治療剤または診断剤）の物理的に別個な単位を指す。各単位は、所定量の活性剤を含む。いくつかの実施形態において、かかる量は、関連する集団に投与された場合に、所望されるまたは有益な結果と相関することが決定されている投薬レジメンに従った投与に好適な単位投薬量（またはその全画分）である（すなわち、治療投薬レジメン）。当業者は、特定の対象に投与される治療用組成物または薬剤の総量が、１人以上の担当医によって決定され、複数の剤形の投与を伴い得ることを理解する。
【０１１１】
投薬レジメン：本明細書で使用される「投薬レジメン」という用語は、典型的には一定期間で区切られて、対象に個々に投与されるセットの単位用量（典型的には１つ以上）を指す。いくつかの実施形態において、所与の治療剤は、推奨される投薬レジメンを有し、１回以上の用量を伴い得る。いくつかの実施形態において、投薬レジメンは、各々が同じ長さの時間間隔によって互いに区切られている複数の用量を含む。代替的に、投薬レジメンは、複数の用量、および個々の用量を区別する少なくとも２つの異なる期間を含む。いくつかの実施形態において、投薬レジメン内の全ての用量は、同じ単位用量の量である。代替的に、投薬レジメン内の異なる用量は、異なる量である。いくつかの実施形態において、投薬レジメンは、第１の用量の量での第１の用量と、それに続く第１の用量の量とは異なる第２の用量の量での１回以上の追加用量と、を含む。投薬レジメンは、第１の用量の量での第１の用量と、それに続く第１の用量の量と同じ第２の用量の量での１回以上の追加用量と、を含み得る。いくつかの実施形態において、投薬レジメンは、関連する集団にわたって投与された場合の所望されるまたは有益な結果と相関している（すなわち、治療的投薬レジメンである）。
【０１１２】
エピトープ：本明細書で使用される「エピトープ」という用語は、抗体または抗原結合断片によって結合される抗原の一部を指す。いくつかの実施形態において、抗原がポリペプチドである場合、エピトープは、抗原内で共有結合的に隣接していないが、抗原が関連する立体構造である場合に三次元空間で互いに近接している抗原の部分から構成されるという点で立体構造的である。例えば、ＣＤ３８について、立体構造エピトープは、ＣＤ３８細胞外ドメインにおいて隣接していないアミノ酸残基で構成されるエピトープであり；線状エピトープは、ＣＤ３８細胞外ドメインにおいて隣接するアミノ酸残基で構成されるエピトープである。いくつかの実施形態において、本発明に従って利用されるエピトープは、本明細書で提供されるＣＤ３８調節抗体剤（例えば、ａＣＤ３８−ａ−３２３）によって結合されるものへの参照により提供される。ａＣＤ３８−ａ−３２３に対するエピトープの正確な配列および／または特にアミノ酸残基を決定する手段は、抗原配列からのペプチドとの競合、異なる種からのＣＤ３８配列との結合、トランケート、および／または変異誘発（例えば、アラニンスキャニングまたは他の部位特異的変異誘発）、ファージディスプレイ系スクリーニング、または（共）結晶学技術を含む、文献および実施例において即知である。
【０１１３】
患者：本明細書で使用される「患者」または「対象」という用語は、例えば実験、診断、予防、美容、および／または治療目的で、提供される組成物が投与されるか、または投与され得る生物体を指す。典型的には、患者には動物（例えば、マウス、ラット、ウサギ、非ヒト霊長類、および／またはヒトなどの哺乳動物）が含まれる。いくつかの実施形態において、患者はヒトである。いくつかの実施形態において、患者は、１つ以上の障害または状態に罹患しているか、または罹患しやすい。患者は、障害もしくは状態の１つ以上の症状を示すか、または１つ以上の障害もしくは状態（がん、または１つ以上の腫瘍の存在など）と診断されている可能性がある。いくつかの実施形態において、患者は、かかる疾患、障害、または状態を診断および／または処置するための特定の治療を受けているか、または受けたことがある。
【０１１４】
薬学的に許容される：本明細書で使用される場合、本明細書で開示される組成物を製剤化するために使用される担体、希釈剤、または賦形剤に適用される用語「薬学的に許容される」は、担体、希釈剤、または賦形剤が組成物の他の成分と適合し、そのレシピエントに有害であってはならないことを意味する。
【０１１５】
薬学的組成物：本明細書で使用される「薬学的組成物」という用語は、活性剤が、１つ以上の薬学的に許容される担体と一緒に製剤化される組成物を指す。いくつかの実施形態において、活性剤は、関連する集団に投与されたときに所定の治療効果を達成する統計的に有意な確率を示す治療的レジメンでの投与に好適な単位用量で存在する。薬学的組成物は、例えば、水薬（水性もしくは非水性の溶液または懸濁液）、錠剤、例えば、口腔、舌下、および全身吸収を対象とするもの、ボーラス、粉末、顆粒、舌に適用するためのペーストなどの経口投与；例えば、無菌溶液、または懸濁液、または徐放性製剤として皮下、筋肉内、静脈内、腫瘍内、または硬膜外注入による非経口投与；例えば、皮膚、肺、または口腔に適用されるクリーム、軟膏、または放出制御パッチまたはスプレーとしての局所適用；膣内、直腸内、舌下、眼、経皮、鼻、肺、および他の粘膜表面へ適合されるものを含む、固体または液体の形態で投与するために製剤化され得る。
【０１１６】
固形腫瘍：本明細書で使用される「固形腫瘍」という用語は、通常、嚢胞または液体領域を含まない組織の異常な塊を指す。固形腫瘍は、良性または悪性であり得る。様々な種類の固形腫瘍は、それらを形成する細胞の種類に応じて命名される。固形腫瘍の例は、肉腫（海綿骨、軟骨、脂肪、筋肉、血管、造血、または線維性結合組織などの組織における間葉系の起源の形質転換細胞から生じるがんを含む）、がん腫（上皮細胞から生じる腫瘍を含む）、黒色腫、リンパ腫、中皮腫、神経芽細胞腫、網膜芽細胞腫などである。固形腫瘍が関与するがんには、脳がん、肺がん、胃がん、十二指腸がん、食道がん、乳がん、結腸および直腸がん、腎がん、膀胱がん、腎臓がん、膵臓がん、前立腺がん、卵巣がん、黒色腫、口部がん、肉腫、眼がん、甲状腺がん、尿道がん、膣がん、頸部がん、リンパ腫などが含まれるが、これらに限定されない。
【０１１７】
治療有効量：本明細書で使用される「治療有効量」という用語は、治療投薬レジメンに従って疾患および／または状態に罹患しているか、または罹患しやすい集団に投与した場合に、かかる疾患および／または状態を治療するのに十分な量（例えば、薬剤または薬学的組成物の）を意味する。治療有効量は、疾患、障害、および／または状態の１つ以上の症状の発生率および／または重症度を低下させ、安定させるおよび／または発症を遅らせる量である。当業者は、「治療有効量」が、実際に特定の対象で成功した治療を達成することを必要としないことを理解するであろう。
【０１１８】
治療：本明細書で使用される「治療（ｔｒｅａｔｍｅｎｔ）」（「治療（ｔｒｅａｔ）」または「治療する（ｔｒｅａｔｉｎｇ）」）という用語は、１つ以上の症状の部分的または完全な緩和、改善、回復、阻害、発症の遅延、重症度の軽減、および／または発生率の低下をもたらす物質（例えば、ａＣＤ３８−ａ−３２３、または他の任意の薬剤によって例示される、提供されるＣＤ３８調節抗体剤）の任意の投与を指す。いくつかの実施形態において、治療は、ａＣＤ３８−ａ−３２３などのＣＤ３８調節抗体剤（例えば、静脈内、腫瘍内、または腫瘍周囲注入に使用するための、薬学的に許容される担体、賦形剤および／またはアジュバントを任意に含む注入可能な水性組成物として）の直接的投与、または対象から細胞を取得（例えば、血液、組織、または腫瘍から、マーカーの発現の存在または非存在に基づく選択の有無にかかわらず）し、該細胞を生体外でａＣＤ３８−ａ−３２３などのＣＤ３８調節抗体剤と接触させ、かかる細胞を対象（マーカーの発現の存在または非存在に基づく選択の有無にかかわらず）に投与することを含むレジメンを使用した投与を伴い得る。
【０１１９】
投薬および投与。本発明に従って使用するための本明細書に記載されるＣＤ３８調節抗体剤（例えば、ａＣＤ３８−ａ−３２３−ＨＣＤＲ３アミノ酸配列を含む抗ＣＤ３８またはその抗原結合断片）を含む薬学的組成物は、当業者に既知および／または利用可能な様々な技法および／または技術のうちのいずれかを使用して保存および／または送達のために調整され得る。いくつかの実施形態において、提供されるＣＤ３８調節抗体剤は、米国食品医薬品局（ＦＤＡ）および／または欧州医薬品庁（ＥＭＥＡ）などの規制当局によって承認された投薬レジメンに従って、例えば関連する適応症のために投与される。いくつかの実施形態において、提供されるＣＤ３８調節抗体剤は、１つ以上の他の薬剤または療法と組み合わせて投与され、米国食品医薬品局（ＦＤＡ）および／または欧州医薬品庁（ＥＭＥＡ）などの規制当局によって承認された投薬レジメンに従って、例えば関連する適応症のために投与され得る。しかしながら、いくつかの実施形態において、提供されるＣＤ３８調節抗体剤の使用により、ＣＤ３８調節抗体剤療法と組み合わせて使用される承認された薬剤または療法の投薬量を減らすことができ得る（例えば、１回以上の服用での活性物質の量の減少、服用回数の減少、および／または服用頻度の減少）。いくつかの実施形態において、投薬および／または投与は、さらに投与される他の薬物、患者の状態、および／またはＣＤ３８調節抗体剤の形式（例えば、免疫複合体、ナノボディ、または二重特異性抗体として修飾）に適合され得る。
【０１２０】
さらに、いくつかの実施形態において、特定の細胞種、特定の腫瘍もしくはその種類、または特定の患者集団のいずれであっても、ＣＤ３８のタイミングおよび／または閾値発現レベルに基づいて、投薬レジメンを調整し、特に連続的な投薬レジメンを設計することが望ましい場合がある（例えば、遺伝マーカーを運ぶ）。いくつかのそのような実施形態において、治療投薬レジメンは、治療の前および／または最中に１つ以上の誘導マーカーまたは他の基準の発現を評価する検出方法に照らして組み合わされ得るか、または調整され得る。
【０１２１】
いくつかの実施形態において、本発明による投薬および投与は、任意のまたは様々な形態における１つ以上の生理学的に許容される担体、賦形剤、または安定剤と組み合わせた所望される純度を有する活性剤を利用する。これらには、例えば、液体溶液（例えば、注射および注入可能な溶液）、分散液または懸濁液、錠剤、丸薬、粉末、リポソーム、および坐薬などの液体、半固体、ならびに固体剤形が含まれる。好ましい形態は、意図される投与様式および／または治療用途に依存し、典型的には、抗体を用いたヒト対象の治療に使用されるものと同様の組成物などの注射液または注入液の形態である。
【０１２２】
いくつかの実施形態において、成分は、インプラント、経皮パッチ、およびマイクロカプセル化送達システムを含む制御放出製剤などの、迅速な放出および／または分解から薬剤（複数可）を保護する担体と共に調製できる。ポリ無水物、ポリグリコール酸、ポリオルトエステル、およびポリ乳酸などの生分解性の生体適合性ポリマーが使用され得る。概して、各活性剤は、良好な医療行為と一貫しており、関連する薬剤（複数可）（例えば、抗体などの薬剤）に対して好適な薬学的組成物および投薬レジメンを使用して、治療有効量で処方、服用、および投与される。活性剤を含む薬学的組成物は、経口、粘膜、吸入、局所、頬、鼻、直腸、または非経口を含むがこれらに限定されない、当技術分野で知られている任意の好適な方法によって投与できる（例えば、静脈内、注入、腫瘍内、結節内、皮下、腹腔内、筋肉内、皮内、経皮、または対象の組織の物理的破壊、およびかかる破壊による薬学的組成物の投与を伴う他の種類の投与）。
【０１２３】
いくつかの実施形態において、特定の活性剤に対する投薬レジメンは、例えば、対象の１つ以上の目的の組織または体液における、特定の所望される薬物動態プロファイルまたは他の曝露パターンを達成するための断続的または連続的（例えば、灌流または徐放システムによって）な投与を伴い得る。いくつかの実施形態において、組み合わせて投与される異なる薬剤は、異なる送達経路を介しておよび／または異なるスケジュールに従って投与され得る。代替的に、または追加的に、いくつかの実施形態において、第１の活性剤の１回以上の用量は、１つ以上の他の活性薬剤と実質的に同時に、およびいくつかの実施形態では、共通の経路を介して、および／または単一組成物の一部として投与される。
【０１２４】
所定の治療レジメンの経路および／または投薬スケジュールを最適化する際に考慮すべき要因には、例えば、治療中の特定のがん（例えば、種類、ステージ、位置など）、対照の臨床状態（例えば、年齢、全体的な健康、体重など）、薬剤の送達部位、薬剤の性質（例えば、抗体または他のタンパク質系化合物）、薬剤の投与の様式および／または経路、併用療法の有無、ならびに医師に即知である他の要因が含まれ得る。
【０１２５】
当業者は、例えば、特定の送達経路が用量に影響を与える可能性があること、および／または必要な用量が送達経路に影響を与える可能性があることを理解するであろう。例えば、特定の部位または場所（例えば、組織または器官内）内における特に高濃度の薬剤が目的である場合、集中送達（例えば、腫瘍内送達）が望ましいおよび／または有用であり得る。いくつかの実施形態において、特定の薬学的組成物および／または利用される投薬レジメンの１つ以上の特徴は、例えば、所望される治療効果または応答（例えば、本明細書に記載されるＣＤ３８調節抗体剤の機能的特徴に関連する治療的または生物学的反応）を最適化するために、経時的（例えば、任意の個々の服用での活性物質の量の増減、服用間の時間間隔の増減など）に修正され得る。概して、本発明による活性剤の投薬の種類、量、および頻度は、関連する薬剤が哺乳動物、好ましくはヒトに投与される場合に適用される安全性および有効性の要件によって管理される。概して、かかる投薬の特徴は、治療なしで観察されるものと比較して、特定の、典型的には検出可能な治療応答を提供するように選択される。本発明の状況下おいて、例示的な所望される治療応答は、腫瘍成長、腫瘍サイズ、転移、腫瘍に関連する１つ以上の症状および副反応の阻害および／または減少、ならびにがん細胞のアポトーシスの増加、治療に関連する１つ以上の細胞マーカーもしくは循環マーカーの減少または増加などを伴い得るが、これらに限定されない。かかる基準は、文献に開示される様々な免疫学的、細胞学的、およびその他の方法のいずれをもによって容易に評価できる。例えば、ＣＤ３８調節抗体剤の治療有効量は、単独でまたはさらなる薬剤と組み合わせて、実施例に記載されるようにがん細胞の殺傷を促進するのに十分であるとして決定され得る。
【０１２６】
活性剤またはかかる薬剤を含む組成物としてのＣＤ３８調節抗体剤の治療的有効量は、例えば、治療される疾患または状態、疾患のステージ、治療される哺乳動物の年齢、および健康、および身体的状態、疾患の重症度、投与される特定の化合物などの１つ以上の要因を考慮することを含む、当技術分野で利用可能な技術を使用して容易に決定できる。
【０１２７】
いくつかの実施形態において、治療有効量は、体重の少なくとも約０．０１μｇ／ｋｇ、体重の少なくとも約０．０５μｇ／ｋｇ体重；体重の少なくとも約０．１μｇ／ｋｇ、体重の少なくとも約１μｇ／ｋｇ、体重の少なくとも約５μｇ／ｋｇ、体重の少なくとも約１０μｇ／ｋｇ、またはそれ以上（例えば、体重の１００μｇ／ｋｇ）であり得る活性剤の有効用量（および／または単位用量）である。いくつかの実施形態において、かかるガイドラインは、活性剤の分子量について調整され得ることが、当業者によって理解されるであろう。投薬量は、投与経路、治療サイクル、またはその結果に従った用量漸増プロトコルに応じて変化してもよく、増加した用量でａＣＤ３８−ａ−３２３−ＨＣＤＲ３アミノ酸配列を含む単離抗体またはその抗原結合断片の投与に関連して、最大耐量および用量制限毒性（もしあれば）を決定するために使用できる。
【０１２８】
治療用組成物は、典型的には、製造および保管の条件下で無菌および安定でなければならない。組成物は、溶液、マイクロエマルジョン、分散液、リポソーム、または高薬物濃度に好適な他の秩序構造として製剤化できる。無菌の注入可能な溶液は、好適な溶媒に必要量の抗体を、上記に列挙した成分の１つまたは組み合わせと共に組み込み、続いて濾過滅菌することにより調製できる。概して、分散液は、活性化合物を、基本的な分散媒および上記に列挙したものからの他の必要とされる成分を含む無菌ビヒクルに組み込むことにより調製される。無菌の注入可能な溶液の調製が粉末の場合において、好ましい調製方法は、真空乾燥および凍結乾燥であり、事前に滅菌された濾過溶液から活性成分、さらに任意の追加の所望される成分の粉末が得られる。溶液の適切な流動性は、例えば、コーティングを使用することにより、分散の場合に必要な粒子サイズを維持することにより、および界面活性剤を使用することにより維持することができる。注入可能な組成物の長期の吸収は、吸収を遅延させる薬剤、例えば、モノステアリン酸塩およびゼラチンを組成物に含めることによりもたらすことができる。
【０１２９】
各薬剤の製剤は、無菌濾過膜を通した濾過により達成でき、その後、ボーラス投与または連続的投与に好適な形態で包装または販売できるように、無菌であることが望ましい。注入可能製剤は、アンプルまたは防腐剤を含む複数回用量容器などの単位剤形で調製、包装、または販売され得る。非経口投与用の製剤には、本明細書で論じられる懸濁液、溶液、油性または水性ビヒクル中のエマルジョン、ペースト、および植込式持続放出または生分解性製剤が含まれるが、これらに限定されない。無菌の注入可能な製剤は、水、または１，３ブタンジオールなどの非毒性の非経口的に許容される希釈剤、または溶媒を使用して調整され得る。有用な他の非経口的に投与可能な製剤には、微結晶形態、リポソーム調製物、または生分解性ポリマー系の成分として有効成分を含むものが含まれる。持続放出または埋め込みのための組成物は、エマルジョン、イオン交換樹脂、難溶性ポリマーもしくは塩などの薬学的に許容されるポリマーまたは疎水性成分を含み得る。
【０１３０】
本発明に従って使用するための各薬学的組成物は、利用される用量および濃度で対象に対して無毒である薬学的に許容される分散剤、湿潤剤、懸濁剤、等張剤、コーティング剤、抗菌剤および抗真菌剤、担体、賦形剤、塩、または安定剤を含み得る。かかる追加の薬学的に許容される化合物の非網羅的なリストには、ホスフェート、シトラート、および他の有機酸などの緩衝液；アスコルビン酸、およびメチオニンを含む抗酸化剤；薬理学的に許容されるアニオンを含む塩（酢酸塩、安息香酸塩、重炭酸塩、重硫酸塩、イソチオン酸塩、乳酸塩、ラクトビオン酸塩、ラウリン酸塩、リンゴ酸塩、マレイン酸塩、サリチル酸塩、ステアリン酸塩、亜酢酸塩、コハク酸塩、タンニン酸塩、酒石酸塩、テオクル酸塩、トシル酸塩、トリエチオジド、およびバレレート塩など）；保存料（塩化オクタデシルジメチルベンジルアンモニウム、塩化ヘキサメトニウム；塩化ベンザルコニウム、塩化ベンゼトニウム、塩化ナトリウム；フェノール、ブチルまたはベンジルアルコール；メチルまたはプロピルパラベンなどのアルキルパラベン；カテコール、レゾルシノール；シクロヘキサノール；３−ペンタノール；およびｍ−クレゾールなど）；低分子量（約１０残基未満）ポリペプチド；血清アルブミンなどのタンパク質；ポリビニルピロリドンなどの親水性ポリマー；グリシン、グルタミン、アスパラギン、ヒスチジン、アルギニン、またはリジンなどのアミノ酸；単糖類、二糖類、およびグルコース、マンノース、またはデキストリンを含む他の炭水化物；ＥＤＴＡなどのキレート剤；スクロース、マンニトール、トレハロース、またはソルビトールなどの糖；ナトリウムなどの塩形成性対イオン；金属錯体（例えば、Ｚｎ−タンパク質錯体）；ならびに／またはＴＷＥＥＮ（商標）、ＰＬＵＲＯＮＩＣＳ（商標）、もしくはポリエチレングリコール（ＰＥＧ）などの非イオン性界面活性剤が含まれる。
【０１３１】
いくつかの実施形態において、２つ以上の活性剤が本発明に従って利用される場合、かかる薬剤は同時にまたは連続的に投与され得る。いくつかの実施形態において、１つの薬剤の投与は、別の薬剤の投与と関連して特にタイミングがとられている。いくつかの実施形態において、組み合わせて投与される薬剤の所望される相対的な投薬レジメンは、例えば、生体外、生体内および／または試験管内モデルを使用して、評価または経験的に決定され得；いくつかの実施形態では、かかる評価または経験的な決定は、特定の患者または患者集団において生体内で行われる（例えば、相関がなされるように）。
【０１３２】
いくつかの実施形態において、本発明の実施において利用される１つ以上の活性剤は、少なくとも２サイクルを含む断続的な投薬レジメンに従って投与される。２つ以上の薬剤が組み合わせて投与され、各々がかかる断続的、サイクル、レジメンによって投与される場合、異なる薬剤の個々の用量は互いに組み合わされ得る。いくつかの実施形態において、本明細書に記載されるＣＤ３８調節抗体剤の用量後の一定期間で、第２の薬剤の１回以上の用量が投与される。いくつかの実施形態において、第２の薬剤の各用量は、本明細書に記載されるＣＤ３８調節抗体剤の用量後の一定期間で投与される。いくつかの実施形態において、本明細書に記載されるＣＤ３８調節抗体剤は、同じ経路によるその後の投与だけでなく、皮下（または筋肉内）投与および腫瘍内投与などの交互投与経路によるレジメンで投与することもでき、患者の応答に応じて、１、２、４、またはそれ以上の週にわたる治療の１回以上のサイクル内で、同じレジメン（または投与間隔を延長することにより）でかかるサイクルを繰り返す。さらに、いくつかの実施形態において、従う的確なレジメン（例えば、服用回数、服用間隔（例えば、相互または他の療法を施すなどの別のイベントと関連して）、服用量などは、１つ以上の他のサイクルと比較して１つ以上のサイクルについて異なり得る。
【０１３３】
本明細書に記載される投与経路、用量、および／またはレジメンのうちのいずれをも使用することにより、本明細書に記載されるＣＤ３８調節抗体剤は、例えば、生検、血液試料、および／または他の臨床基準を使用して患者において測定される１つ以上の基準を考慮して、同定、特徴付け、および／または検証できる。いくつかの実施形態において、腫瘍サイズおよび／または転移の直接的評価の代替として、または追加して、本明細書に記載されるＣＤ３８調節抗体剤の治療効果は、１つ以上の異なる一般的な基準が評価される方法で決定できる：がん細胞での直接的細胞傷害（がん細胞のアポトーシスおよびネクローシス）、腫瘍浸潤、免疫細胞の増加（ＣＤ４陽性および／またはＣＤ８陽性の腫瘍浸潤Ｔ細胞など）、血液中を循環する免疫細胞の増加（リンパ球、ＮＫ細胞、単球、樹状細胞、マクロファージ、Ｂ細胞などの総集団または特定の亜集団）、および／または応答患者または非応答患者のいずれかでのみ、治療前と治療後のいくつかの異なる発現を表す（ＲＮＡシーケンス、マスフローサイトメトリー、および／または他のマスシーケンスアプローチによって決定される）。代替的または追加的に、いくつかの実施形態において、かかる同定、特徴付け、および／または検証は、１つ以上の特定のタンパク質もしくはタンパク質セットのｍＲＮＡおよび／またはタンパク質発現をスクリーニングすることによる分子レベルでのフォローアップを伴い得る。いくつかの実施形態において、１つ以上のかかる技術は、本明細書に記載されるＣＤ３８調節抗体剤に対する応答を評価するための同定または関連情報の取得を可能にし得、例えば、それは組織分布ならびに／または腫瘍内（または近く）および／もしくは血中を循環している特定の細胞集団のマーカーに関連し得る。
【０１３４】
かかるアプローチおよび免疫生物学的データにより、１つ以上の有効性および／もしくは安全性のパラメータまたは特性だけでない、決定が可能であり得るが、いくつかの実施形態において、特定の用量、経路、または投薬レジメンを選択するための理論的根拠を提供でき、例えば、所定の適応症に対する１つ以上の臨床治験において、単独で、および／または他の薬物、標準ケアプロトコル、またはさらなる治療的有益性を提供できる免疫療法と組み合わせて利用でき得る。したがって、本発明の一連のさらなる実施形態において、本明細書に記載されるＣＤ３８調節抗体剤は、患者の細胞もしくは組織（腫瘍、血液試料、血液画分など）中の１つ以上の遺伝子についてのＲＮＡおよび／またはタンパク質レベル、かかる製剤を用いた治療後もしくは治療前での発現の複合された存在（および／または非存在）を決定した後、疾患（がんなど）に罹患する患者を治療する方法または疾患（がんなど）を予防する方法で使用される。したがって、かかる方法は、治療有効量の所望されるＣＤ３８調節抗体剤に関連する１つ以上のバイオマーカー、またはより複雑な遺伝子発現シグネチャ（または細胞集団分布）、対象が本明細書に記載されるＣＤ３８調節抗体剤を用いた治療後に、抗腫瘍もしくは抗感染症応答を有し得ることを予測する治療関連バイオマーカー（複数可）、または対象がＣＤ３８調節抗体剤を用いた治療後に、化合物を用いた治療に応答し得ることを予測する治療関連バイオマーカー（複数可）を定義することを可能にし得る。
【０１３５】
代替的または追加的に、いくつかの実施形態において、本明細書に開示される特定のＣＤ３８調節抗体剤の投薬および投与は、ヒトがんおよび／または他のヒト組織におけるＣＤ３８発現を考慮して、例えば、様々ながん、組織、および／もしくは患者における間質ならびに／または免疫サブセットのＣＤ３８分布に関するデータを収集することによって事前に確立および／または後に評価されることができる。かかるデータは、様々な免疫および非免疫亜集団におけるＣＤ３８発現の関係を同定するために、一般的ながんの種類および／もしくは組織（中枢神経系、食道、胃、肝臓、結腸、直腸、肺、膀胱、心臓、腎臓、甲状腺、膵臓、子宮、皮膚、乳房、卵巣、前立腺、および精巣）にわたって一般的な技術（フローサイトメトリー、マスサイトメトリー、免疫組織化学、またはｍＲＮＡ発現ライブラリなど）を使用することで生成でき、ならびに／またはそれは、細胞浸潤測定および／もしくはがん細胞もしくは免疫細胞のサブセットに関連するがん関連マーカー（Ｆｏｘｐ３、およびＰＤ−１／ＰＤ−Ｌ１など）と関係する。ＣＤ３８発現は、腫瘍組織において免疫サブセット（ＮＫ細胞およびその他のエフェクターまたは調節免疫細胞など）に限定（または非限定）でき、かつＣＤ３８発現と免疫チェックポイント阻害剤との相関を、陽性である場合に決定でき、したがって、かかる免疫チェックポイント阻害剤を標的とする化合物と組み合わせたＣＤ３８調節抗体剤の好適な使用を提案する。
【０１３６】
製造品およびキット；本発明のいくつかの実施形態において、本明細書に記載されるＣＤ３８調節抗体剤は、別個の製造品で提供される。本発明のいくつかの実施形態において、ＣＤ３８調節抗体剤を含む製品は、ラベルを備えた容器内または容器と共に提供される。好適な容器には、例えば、ボトル、バイアル、シリンジ、および試験管が含まれ得る。いくつかの実施形態において、容器は、ガラスまたはプラスチックなどの任意のものか、または様々な材料から形成されてもよい。いくつかの実施形態において、容器は、特定の疾患、障害、または状態、またはそのステージもしくは種類を治療するのに有効な組成物を保持する。いくつかの実施形態において、容器は無菌のアクセスポートを有してもよい（例えば、容器は点滴溶液バッグまたは皮下注入針によって貫通可能なストッパーを有するバイアルであってもよい）。例えば、いくつかの実施形態において、本明細書に記載されるＣＤ３８調節抗体剤を含む組成物は、ゴム栓およびアルミニウムシールを備えた透明なガラスバイアルに封入される。容器上のラベルまたは関連付けられているラベルは、選択の状態を治療するために組成物が使用されていることを示す。
【０１３７】
いくつかの実施形態において、製造品は、リン酸緩衝生理食塩水、リンゲル液、およびデキストロース溶液などの薬学的に許容される緩衝液を含む別個の容器をさらに含んでもよく、および／または他の緩衝液、希釈剤、フィルター、針、シリンジ、および使用説明書付きの添付文書を含む、商業的およびユーザーの観点から所望される他の材料をさらに含んでもよい。例えば、いくつかの実施形態において、製造品は、合計２ｍｇ、５ｍｇ、１０ｍｇ、２０ｍｇ、５０ｍｇ、またはそれ以上を含む無菌水溶液として、静脈内製剤で各薬剤または薬剤を提供することが可能であり得、０．１ｍｇ／ｍｌ、１ｍｇ／ｍｌ、１０ｍｇ／ｍｌの最終濃度、またはそれ以上の濃度で、好適な希釈剤および緩衝液を使用して製剤化される。
【０１３８】
いくつかの実施形態において、キットの一部内に凍結乾燥の形態で提供することができる本明細書に記載されるＣＤ３８調節抗体剤は、キットまたは他の種類の投薬単位を提供されるか、または提供されない任意の適切な水溶液で、適合性のある薬学的担体を使用して再構成される。ＣＤ３８調節抗体剤の１つ以上の単位剤形は、パックまたはディスペンサデバイス内に提供され得る。かかるパックまたはデバイスは、例えば、ブリスターパックなどの金属またはプラスチックホイルを含み得る。かかる部品キットを正しく使用するために、これは、緩衝液、希釈剤、充填剤、針、シリンジ、およびがんの治療における使用に関する指示を記載した添付文書をさらに含み得る。
【０１３９】
いくつかの実施形態において、製品または本明細書に記載されるキットに関連する指示は、正しい使用法について知らせるために使用され得、かつ／または製品および／もしくはキット内の薬剤、製剤、および他の材料の可能な効果を監視するための、ラベル、小冊子、出版物、記録物、図表、または任意の他の手段の形態であり得る。指示は、製品と一緒に提供され得、かつ／またはキット内に提供され得る。
【実施例】
【０１４０】
実施例１：試験管内においてＣＤ３８と結合する抗体の生成
材料および方法
ＣＤ３８抗原の調製。ヒト、カニクイザル（Ｃｙｎｏ）、およびマウスＣＤ３８タンパク質の組換えヒスチジンタグ付き細胞外ドメインを、Ｓｉｎｏ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｃ．から購入した。タンパク質試薬のビオチン化を、ＥＺ−Ｌｉｎｋ  Ｓｕｌｆｏ−ＮＨＳ−Ｂｉｏｔｉｎｙｌａｔｉｏｎ  Ｋｉｔ（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、カタログ番号２１４２５）を使用して行った。ＣＤ３８抗原を約１ｍｇ／ｍＬに濃縮し、緩衝液をＰＢＳに交換した後、１：７．５モル比でビオチン化試薬（ＥＺ−Ｌｉｎｋ  Ｓｕｌｆｏ−ＮＨＳ−Ｂｉｏｔｉｎｙｌａｔｉｏｎ  Ｋｉｔ、Ｔｈｅｒｍｏ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、カタログ番号２１４２５）を添加した。混合物を４℃で一晩保持した後、別の緩衝液に交換して、溶液中の遊離ビオチンを除去した。ビオチン化を、標識タンパク質のストレプトアビジンセンサ結合により確認した。
【０１４１】
抗ＣＤ３８抗体の単離のためのライブラリ照合および選択方法論：各々が約１０９の多様性の８つのナイーブヒト合成酵母ライブラリを、以前に説明されたように、モノクローナル抗体を発現する酵母細胞株のハイスループットスクリーニングおよび選択のために設計し、生成し、増殖させた（Ｘｕ  Ｙ  ｅｔ  ａｌ，２０１３、ＷＯ２００９／０３６３７９、ＷＯ２０１０／１０５２５６、ＷＯ２０１２０／０９５６８）。８つの並列選択を、単量体ヒトＣＤ３８系の選択のための８つのナイーブライブラリを使用して行った。
【０１４２】
第１の２回の選択ラウンドのために、Ｍｉｌｔｅｎｙｉ  ＭＡＣｓシステムを利用する電磁ビーズ選別技法を、本質的に記載されるように行った（Ｓｉｅｇｅｌ  ｅｔ  ａｌ．，２００４）。簡潔には、酵母細胞（約１０１０細胞／ライブラリ）を、０．１％ＢＳＡを含むＦＡＣＳ洗浄緩衝液ＰＢＳ中で、３ｍＬの１００ｎＭビオチン化単量体ヒトＣＤ３８抗原と室温で１５分間インキュベートした。５０ｍＬの氷冷洗浄緩衝液で１回洗浄した後、細胞ペレットを４０ｍＬの洗浄緩衝液中に再懸濁させ、５００μＬのＳｔｒｅｐｔａｖｉｄｉｎ  ＭｉｃｒｏＢｅａｄｓ（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ  Ｂｉｏｔｅｃ，Ｇｅｒｍａｎｙ、カタログ番号１３０−０４８−１０１）を酵母細胞に添加し、４℃で１５分間インキュベートした。次に、酵母細胞をペレット化し、５ｍＬの洗浄緩衝液中に再懸濁させ、ＭＡＣＳ  ＬＳカラム（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ  Ｂｉｏｔｅｃ，Ｇｅｒｍａｎｙ、カタログ番号１３０−０４２−４０１）に装填した。５ｍＬを装填した後、カラムを３ｍＬのＦＡＣＳ洗浄緩衝液で３回洗浄した。カラムを磁場から除去し、酵母細胞を５ｍＬの成長培地で溶出し、その後、一晩成長させた。
【０１４３】
２回のＭＡＣＳラウンド後、５回の選別ラウンドを、フローサイトメトリー（ＦＡＣＳ）を使用して行った。第１のＦＡＣＳ選択ラウンドについて、およそ４×１０７の酵母細胞をペレット化し、洗浄緩衝液で３回洗浄し、各々１００ｎＭのビオチン化単量体ヒト、マウス、およびカニクイザルＣＤ３８抗原と室温で１０分間インキュベートした。その後、酵母細胞を２回洗浄し、ヤギ抗ヒトＦ（ａｂ’）２カッパ−ＦＩＴＣ（１：１００で希釈）（Ｓｏｕｔｈｅｒｎ  Ｂｉｏｔｅｃｈ，ＵＳＡ、カタログ番号２０６２−０２）で、かつ二次試薬としてストレプトアビジンＡｌｅｘａ  Ｆｌｕｏｒ  ６３３（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，ＵＳＡ、カタログ番号Ｓ２１３７５）（１：５００で希釈）またはエクストラアビジン（Ｅｘｔｒａｖｉｄｉｎ）−フィコエリトリン（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ，ＵＳＡ、カタログ番号Ｅ４０１１）（１：５０で希釈）のいずれかで、４℃で１５分間染色した。氷冷洗浄緩衝液で２回洗浄した後、細胞ペレットを０．４ｍＬの洗浄緩衝液中に再懸濁させ、濾過器で蓋をした選別管に移した。選別を、ＦＡＣＳ  ＡＲＩＡ選別機（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）を使用して行い、選別ゲートを決定して、ＣＤ３８結合のみを選択した。第１のＦＡＣＳラウンド由来のマウス選択集団およびカニクイザル選択集団を合わせて２つのプールにした。その後、これらのプールをヒトＣＤ３８結合について選別して、試薬多重特異性結合剤を低減するための第２のＦＡＣＳラウンドにおける交差反応性結合剤を特定した（Ｘｕ  Ｙ  ｅｔ  ａｌ．，２０１３）。第４のＦＡＣＳラウンドは、１００ｎＭのビオチン化単量体ＣＤ３８を抗原として使用した正の選択から主になった。選択されたクローンの試料をプレーティングし、配列決定した。
【０１４４】
ナイーブ選択で同定されたクローンの親和性成熟：第４のＦＡＣＳ選別選択ラウンド出力由来の重鎖を使用して、４つのさらなる選択ラウンドに使用した軽鎖多様化ライブラリを調製した。第１の選択ラウンドは、抗原として１００ｎＭのビオチン化単量体ヒトＣＤ３８または抗原として２００ｎＭのビオチン化単量体マウスＣＤ３８のいずれかと複合したＭｉｌｔｅｎｙｉ  ＭＡＣｓビーズを含んだ。ＭＡＣｓビーズ選択後、３回のＦＡＣＳ選別ラウンドを行った。第１のＦＡＣＳラウンドは、１００ｎＭもしくは１０ｎＭのヒトＣＤ３８または２００ｎＭのマウスＣＤ３８のいずれかを含んだ。上述の第２のＦＡＣＳラウンドと並行して、競合選択を、７５〜１００ｎＭの競合ＩｇＧを用いて行った。選択ラウンド後、１または１０ｎＭのヒトＣＤ３８で第３の正の選別を行った後に、プレーティングした。各ＦＡＣＳ選択ラウンド由来の個々のコロニーをＩｇＧ配列決定のために選択した。
【０１４５】
ＩｇＧおよびＦａｂの生産および精製：酵母クローンを飽和状態まで増殖させた後、３０℃で４８時間振盪しながら誘導した。誘導後、酵母細胞をペレット化し、上清を精製のために収集した。ＩｇＧを、タンパク質Ａカラムを使用して精製し、酢酸（ｐＨ２．０）で溶出した。Ｆａｂ断片をパパイン消化によって生成し、ＣａｐｔｕｒｅＳｅｌｅｃｔ  ＩｇＧ−ＣＨ１親和性マトリックス（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ、カタログ番号１９４３２００２５０）で精製した。
【０１４６】
抗ＣＤ３８抗体の親和性測定：ＣＤ３８抗体の親和性を、Ｆｏｒｔｅ  ＢｉｏによりそれらのＫＤを測定することによって決定した。Ｆｏｒｔｅ  Ｂｉｏ親和性測定を、記載されるようにＩｇＧをオンラインでＡＨＱセンサに装填することによって行った（Ｅｓｔｅｐ  Ｐ  ｅｔ  ａｌ．，２０１３）。簡潔には、センサをアッセイ緩衝液中で３０分間、オフラインで平衡化し、その後、ベースライン確立のためにオンラインで６０秒間監視した。結合力測定のために、ＩｇＧを装填したセンサを、２００ｎＭのヒト、カニクイザル、またはマウスＣＤ３８に３分間曝露し、その後、それらをオフ速度測定のために３分間にわたってアッセイ緩衝液に移した。一価結合測定結果を、ビオチン化ＣＤ３８単量体をＳＡセンサに装填し、その後、２００ｎＭの抗体に曝露することによって得た。反応速度データを、Ｆｏｒｔｅ  Ｂｉｏから提供されたデータ分析ソフトウェアの１：１結合モデルを使用してフィッティングした。参照アゴニスト抗ＣＤ３８抗体についてこのアッセイで確立されたＫｄ値は、以下の通りである：ＩＢ４について、ヒトＣＤ３８の場合では０．９×１０−８Ｍ、ＩＢ４についてカニクイザルＣＤ３８とは結合しない。
【０１４７】
抗ＣＤ３８抗体の結合力測定：Ｎｉ−ＮＴＡセンサをアッセイ緩衝液中で３０分間、オフラインで平衡化し、その後、ベースライン確立のためにオンラインで６０秒間監視した。それらに４．２ｎＭの抗原（ＨＩＳタグ付き組換えヒトＣＤ３８）を５０分間装填し、その後、それらを洗浄のために０．５分間にわたってアッセイ緩衝液に移し、ベースライン決定のために再度アッセイ緩衝液中に１分間置いた。その後、抗体を異なる濃度（図１１に記載される）で５０分間結合させた。その後、それらをオフ速度測定のために３０分にわたってアッセイ緩衝液に移した。反応速度データを、ＦｏｒｔｅＢｉｏから提供されたデータ分析ソフトウェアにおける１：１結合モデルを使用してフィッティングした。
【０１４８】
代替的に、抗ヒトＣＤ３８抗体の親和性を、２５℃の周囲実験温度でＣＭ−５センサチップを使用したＢｉａｃｏｒｅ  ２０００におけるＳＰＲによってそれらのＫＤを測定することによって決定した。抗ヒト抗体を最初に分析緩衝液（ｐＨ７．４、１０ｍＭ  ＨＥＰＥＳ、１５０ｍＭ  ＮａＣｌ、３ｍＭ  ＥＤＴＡ、０．０５％  Ｔｗｅｅｎ  ２０）中で全てのフローセルにわたって固定化して、１０分かけて１２，０００〜１４，０００のＲＵにした。リガンド（抗体試験物質）を、７３ＲＵの捕捉レベルで準連続的に装填した。その後、分析物（Ｈｉｓタグ付き組換えヒトＣＤ３８）を、４００ｎＭから始まり最低濃度０．７８ｎＭの２倍希釈した分析緩衝液中で６分間結合させた。解離を分析緩衝液中で１０分間行った。試料濃度間の再生ステップを３Ｍ  ＭｇＣｌ２中で０．５分間にわたって３回行った。このプロセスを通して２５μＬ／分の流量を維持した。反応速度データを、基準を差し引いたＢｉａｃｏｒｅから提供された分析ソフトウェアにおけるグローバルフィッティングを使用してフィッティングした。
【０１４９】
エピトープビニング：抗体のエピトープビニングを、標準のサンドイッチビニングアッセイを使用してＦｏｒｔｅ  Ｂｉｏ  Ｏｃｔｅｔ  Ｒｅｄ３８４システム（Ｐａｌｌ  Ｆｏｒｔｅ  Ｂｉｏ  Ｃｏｒｐ．，ＵＳＡ）で行うことができる。抗ヒトＣＤ３８抗体をＡＨＱセンサに装填し、センサ上の非占有Ｆｃ結合部位を非関連ヒトＩｇＧ１抗体で遮断することができる。センサを１００ｎＭの標的抗原に、その後、第２の抗ＣＤ３８抗体、参照モノクローナルアゴニストマウス抗ヒトＣＤ３８抗体（ＩＢ４）に曝露することができる。データを、Ｆｏｒｔｅ  Ｂｉｏ  Ｄａｔａ  Ａｎａｌｙｓｉｓ  Ｓｏｆｔｗａｒｅ  ７．０を使用して処理することができる。抗原会合後の第２の抗体によるさらなる結合が非占有エピトープを示す一方で、結合なしはエピトープ遮断を示す。
【０１５０】
抗ＣＤ３８抗体のＣＤ３８発現細胞との結合：候補のヒットを、精製したカニクイザルＴ細胞との結合を分析することにより評価した。この目的のために、カニクイザル汎Ｔ細胞を、２０μｇ／ｍｌのａＣＤ３８−ａ−３２３またはアイソタイプ対照で染色し、その後氷上で３０分間片対数連続希釈（７点）した。未結合の一次抗体を洗浄により除去し、その後氷上で二次抗体（５μｇ／ｍｌ）で３０分間染色した。全ての試料を、適切なＣＤ３、ＣＤ４、およびＣＤ８交差反応性抗体を用いて三連染色した。試料をフローサイトメトリーで測定した。データ分析のために、試料取得中にＦＳＣ対ＳＳＣパラメータを使用して生細胞をゲート化した。染色した細胞の平均蛍光強度（ＭＦＩ）を、濃度の対数に対するＭＦＩをグラフ化したＸＹチャート上にプロットし、データを、ＥＣ５０が算出される非線形回帰曲線に当てはめた。代替的に、結合をヒトＰＢＭＣで評価した。この目的のために、３人のヒトドナーの全血からＰＢＭＣを調製し、最終濃度１μＭ、２００ｎＭ、４０ｎＭ、８ｎＭ、１．６ｎＭ、３２０ｐＭ、６４ｐＭ、１３ｐＭ、および２．５ｐＭでのａＣＤ３８−ａ−３２３またはアイソタイプ対照と共に３０分間インキュベートした。次いで、細胞を洗浄し、ＡＦ４８８二次抗体で標識した。次いで、細胞を追加の表面染色化抗体：抗ＣＤ３  ＰＥ−Ｃｙ７、抗ＣＤ４  ＡＰＣ、および抗ＣＤ８  ＢＶ４５１と共にインキュベートした。試料の取得を、ＢＤ  ＦＡＣＳＤｉｖａソフトウェア（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）で実行される８色（３レーザー）ＢＤ  ＦＡＣＳＣａｎｔｏ  ＩＩサイトメーターを使用して実行した。分析後の処理を、ＦＣＳ  Ｅｘｐｒｅｓｓ（ｖ３．０）ソフトウェア（ＤｅＮｏｖｏソフトウェア）を使用して実施した。異なる細胞集団の相対比率（％）および中央値蛍光強度（ＭＦＩ）データを、小数点以下２桁までで報告した。
【０１５１】
哺乳動物細胞において発現したヒトＩｇＧ１としてのａＣＤ３８−ａ−３２３の再クローニング、生産、および特性評価：抗体のコドン最適化ＶＨおよびＶＬコード配列の合成をＧｅｎｅｗｉｚによって行った。可変領域のｃＤＮＡを、ヒトＩｇＧ１重鎖およびカッパ軽鎖定常領域（それぞれ、Ｐ０１８５７およびＰ０１８３４）を含む抗体発現ベクター（Ｉｃｏｓａｇｅｎ，ＥＳＴ）にクローン化した。全長重鎖および軽鎖ｃＤＮＡを、最終ベクターにおける配列決定によって示し、その後、ＣＨＯに基づく細胞（ＣＨＯＥＢＮＡＬＴ８５）を使用する安定したエピソーム発現系であるＱＭＣＦ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ（Ｉｃｏｓａｇｅｎ）を使用してそれらを発現させるために再クローン化し、組換えタンパク質、抗体、ＣＨＯＥＢＮＡＬＴ８５細胞の産生に適切なベクターを、抗体産生のために１μｇの発現プラスミドでトランスフェクトした。トランスフェクションの４８時間後、７００μｇ／ｍｌのＧ４１８を添加して、プラスミド含有細胞集団を選択した。産生のために、温度を３０℃に変化させ、培養物をさらに供給した。産生の終わりに、培養上清を遠心分離（１０００ｇ、３０分、および１５℃）によって精製し、ＰＭＳＦを添加し、上清を精製まで処理または凍結した。ｈＩｇＧ１抗体を、ＭａｂＳｅｌｅｃｔ  ＳｕＲｅ親和性クロマトグラフィ、続いてＰＢＳまたはＰＢＳ  １００ｎＭ  Ｌ−ＡｒｇのいずれかでのＳｕｐｅｒｄｅｘ  ２００ゲル濾過により精製した。ＣＨＯＥＢＮＡＬＴ８５細胞で産生されたヒトＩｇＧ１抗体を、組換えウサギＣＤ３８（６５００３−Ｔ０８Ｈ−２０；Ｓｉｎｏ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ）および組換えラットＣＤ３８：（８０２２９−Ｒ０８Ｈ−２０；Ｓｉｎｏ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ）を使用して、組換えヒトＣＤ３８に対する親和性、マウス、ラット、ウサギ、およびカニクイザルＣＤ３８に対する交差反応性、ならびに選択されたＣＤ３８結合抗体に対するエピトープビニングついて特徴付けた。
【０１５２】
抗ヒトＣＤ３８抗体競合アッセイ：抗体競合は、標準の順次結合アッセイを使用してＦｏｒｔｅ  Ｂｉｏ  Ｏｃｔｅｔ  Ｒｅｄ９６システム（Ｐａｌｌ  Ｆｏｒｔｅ  Ｂｉｏ  Ｃｏｒｐ．，ＵＳＡ）で実行できる。０．６２５ｕｇ／ｍＬの組換えヒトＣＤ３８Ｈｉｓタグを３００秒間にわたってＮｉ−ＮＴＡバイオセンサに装填した。１５秒間洗浄し、ベースラインステップを動態緩衝液で６０秒間行った後、センサを６６．６ｎＭの第１の抗体（ダラツムマブ）に６００秒間、続いて、第２の抗ＣＤ３８抗体（ダラツムマブ（対照）またはａＣＤ３８−ａ−３２３）に（同様に６６．６ｎＭで６００秒間）曝露した。データを、Ｆｏｒｔｅ  Ｂｉｏ  Ｄａｔａ  Ａｎａｌｙｓｉｓ  Ｓｏｆｔｗａｒｅ  ９．０を使用して処理した。第２の抗体によるさらなる結合が非占有エピトープ（エピトープにおいて競合なし）を示す一方で、結合なしはエピトープ遮断（エピトープにおいて競合あり）を示す。
【０１５３】
結果
組換えヒトＣＤ３８細胞外タンパク質配列（ｒｈＣＤ３８）と結合するモノクローナル抗体（ｍＡｂ）を、材料および方法に記載の酵母に基づく抗体提示ライブラリを使用して単離した。これらの抗体を配列決定し、特有のクローンを酵母細胞で産生した（Ｂａｒｎａｒｄ  ＧＣ  ｅｔ  ａｌ．，２０１０）。特有の抗体配列を発現する各酵母クローンの細胞培養上清をｒｈＣＤ３８結合についてスクリーニングした。
【０１５４】
選択した抗体のＫＤ値（親和性および結合力測定結果）および交差ビニング分析を表１Ａに提供する：
【表１Ａ】
2020531003.tif 000009
【０１５５】
ＯｃｔｅｔおよびＢｉａｃｏｒｅによって測定され、かつダラツムマブと比較した抗ＣＤ３８抗体の組換え一価ヒトＣＤ３８との結合を、図１１に示す。組換え一価ヒトＣＤ３８に対する抗ＣＤ３８抗体（ＩｇＧ１）の結合親和性も、Ｂｉａｃｏｒｅによって測定した（より信頼性の高いデータが得られると考えられる）。結果を表１Ａおよび図１２に示す。
【０１５６】
アラニンスキャニングによるエピトープマッピング確認の結果を表１Ｂに示す。
【表１Ｂ】
2020531003.tif 000010
【０１５７】
ｒｈＣＤ３８との結合、配列特有性、および発現レベルに基づいて、ｍＡｂのパネルを特定した。これらの抗体を組換えカニクイザルおよびマウスＣＤ３８細胞外ドメインタンパク質配列との結合についてさらに特徴付けた。クローンを、１０−８Ｍ〜１０−１０Ｍからなる一価のｒｈＣＤ３８および／または組換えカニクイザルＣＤ３８細胞外タンパク質配列に対するＩｇＧ結合値を表すものとして特徴付けた。抗体クローンを、陰性対照としてＣＨＯ−Ｓ細胞を使用して、フローサイトメトリーによってリンパ芽球様Ｒａｊｉ細胞などのＣＤ３８を強力に発現するヒト細胞との結合レベルで評価した。さらに、ヒトＰＢＭＣ（図３Ｂ）との結合を確認したが、カニクイザル汎Ｔ細胞（図３Ａ）との結合は確認されなかった。
【０１５８】
最後に、凝集および非特異的相互作用を起こす傾向がある抗体配列を排除するために、抗体を、多重特異性試薬（ＰＳＲ）アッセイおよび親和性捕捉自己相互作用ナノ粒子分光法（ＡＣ−ＳＩＮＳ）（初期段階の抗体開発のためのハイスループットスクリーニングを可能にするアプローチ）でスクリーニングした（Ｌｉｕ  Ｙ  ｅｔ  ａｌ．，２０１４）。選択した抗体のいずれも後者のアッセイで陽性とスコア化されず、したがって、パネルから排除しなかった。
【０１５９】
上述のように配列決定および特徴付けられた選択したヒットのうち、クローンａＣＤ３８−ａ−３２３が、新規の相補性決定領域（ＣＤＲ、図２）を提示し、かつ１０−８Ｍ〜１０１１の範囲のＫｄ値でヒトＣＤ３８細胞外タンパク質配列と結合する抗体である。アラニンスキャニングは、ａＣＤ３８−ａ−３２３がヒトＣＤ３８（配列番号９）のアミノ酸残基１２０、１２１、１４１、および２４１と結合すること、または少なくともこれらの残基が抗体結合に必要であることを示した。
【０１６０】
したがって、ａＣＤ３８−ａ−３２３配列（図２）は、ＣＤ３８と特異的に結合する抗体を特定し、その用語が本明細書で使用されるようにＣＤ３８調節抗体剤を定義する機能的特徴に関連したそれらのアゴニスト活性を、細胞系のアッセイまたは動物モデルによって機能的に評価することができる。
【０１６１】
実施例２：ＣＤ３８調節抗体剤を検証するための細胞系のモデル
材料および方法
試験管内Ｔ細胞活性化アッセイ：予め凍結させた初代ヒト汎Ｔ細胞（Ｓｔｅｍｃｅｌｌ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）をｅＦｌｕｏｒ４５０蛍光色素（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）で標識し、抗ＣＤ３抗体（０．１μｇ／ｍＬのコーティング濃度、クローンＯＫＴ３、ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）を事前にコーティングし、かつ抗ＣＤ３８調節抗体を、１０％ＦＢＳ（Ｓｉｇｍａ）、２ｍＭのＬグルタミン（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）、および１０，０００Ｕ／ｍＬのＰｅｎ−Ｓｔｒｅｐ（Ｓｉｇｍａ）を含有するＲＰＭＩ１６４０（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）中１０、５、および２．５μｇ／ｍＬの濃度でコーティングした９６ウェルプレート内で７２時間インキュベートした。Ｔ細胞増殖の読み出しをフローサイトメーターで取得し、生存率色素（Ｚｏｍｂｉｅ  ＮＩＲ，ＢｉｏＬｅｇｅｎｄ）で標識した死細胞を排除し、蛍光色素標識抗体（ＣＤ８−ＦＩＴＣクローンＨＩＴ８ａ  ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ、ＣＤ２５−ＰＥクローンＭ−Ａ２５１  Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ、ＣＤ４−ＢＶ５１０クローンＲＰＡ−Ｔ４  ＢｉｏＬｅｇｅｎｄ、ＣＤ３８−ＰＥ−Ｃｙ７クローンＨＢ＿７、ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ、ＣＤ１３７−ＡＰＣクローン４Ｂ４−１  ＢｉｏＬｅｇｅｎｄ）での染色によって表面マーカーを区別した。上清におけるサイトカイン分析を、製造元の指示に従ってＭｅｓｏ  Ｓｃａｌｅ  Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ  ＭＳＤプラットホームを使用して行い、ＧＭ−ＣＳＦの発現を決定した（Ｍｕｌｔｉｐｌｅｘアッセイキット、Ｍｅｓｏ  Ｓｃａｌｅ  Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ、図中のアスタリスクは適合曲線範囲を超える値を示す）。
【０１６２】
ＮＦＡＴシグナル伝達アッセイによる試験管内Ｔ細胞活性化：ルシフェラーゼレポーター系（ＢＰＳ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）を用いて安定的にトランスフェクトされたＪｕｒｋａｔ細胞を、ＣＤ３８（または対照ＩｇＧ）に対して異なる濃度のｍＡｂ（０．２、１、５、１０、２０、４０ｕｇ／ｍｌ）を伴うＰＢＳ（ＧＩＢＣＯ）で４℃で２０分間インキュベートし、続いて、細胞のペレット化、ＰＢＳ上清の除去、および４０ｕｇ／ｍｌ  Ｆ（Ａｂ’）２断片架橋Ａｂ（Ｊａｃｋｓｏｎ  ＩｍｍｕｎｏＲｅｓｅａｒｃｈ）を添加した低温増殖培地（ＲＰＭＩ（ＡＴＣＣ）＋１０％ＦＢＳ（ＳＩＧＭＡ））で、１ｕｇ／ｍｌ可溶性ＣＤ３  ｍＡｂの存在下で細胞を再懸濁した。架橋抗体を添加してから１０分後に、細胞を３７℃のインキュベーションに移した。３７℃インキュベーションが開始されてから６〜２４時間後に、細胞を溶解し、製造元の指示（ＢＰＳ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅワンステップルシフェラーゼアッセイキット）に従って、特定のルシフェラーゼ基質の加水分解からの発光放出の平均値によってルシフェラーゼ活性を測定した。ＮＦＡＴシグナル伝達を、相対発光単位（ＲＬＵ）として測定した。
【０１６３】
試験管内ＮＫ細胞活性化アッセイ。本明細書に記載される抗ＣＤ３８抗体は、試験管内ＮＫ細胞活性化アッセイを使用して特徴付けることができ、例えば、ヒトＰＢＭＣをＣｅｌｌ  Ｔｒａｃｅ  ｖｉｏｌｅｔ  ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ  ｄｙｅ（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）で標識し、ＭＤＡ−ＭＢ−２３１細胞の存在下で、１００：１の比率で（培養培地ＩＭＤＭ、Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ、１０％ヒト血清熱不活性化、Ｓｉｇｍａ、１０，０００Ｕ／ｍＬ  Ｐｅｎ−Ｓｔｒｅｐ、Ｓｉｇｍａ）５日間培養した。抗ＣＤ３８抗体を添加するか、または対照細胞を未処理のままにした。蛍光色素の希釈によって定量化した増殖の読み出しをＦＡＣＳ分析によって行った。細胞を蛍光色素複合化抗体で標識し、ＮＫ細胞を、死細胞（Ｚｏｍｂｉｅ  ＮＩＲ色素、Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ）を除外し、ＣＤ４５＋造血細胞（ＣＤ４５−ＰＥ−Ｃｙ７、Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ）上でゲーティングし、さらにＣＤ３陰性ＣＤ５６陽性細胞（ＣＤ５６−ＢＶ７１１クローンＨＩ３０  Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ、ＣＤ３−ＢＶ５１０クローンＯＫＴ３  Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ）上でゲーティングすることによってゲーティングした。
【０１６４】
試験管内ＡＤＣＰアッセイ：本明細書に記載される抗ＣＤ３８抗体は、試験管内ＡＤＣＰアッセイを使用して特徴付けることができ、例えば、抗体依存性細胞食作用（ＡＤＣＰ）は、試験管内で分化したＴｒｅｇを標的細胞として、単球由来マクロファージをエフェクター細胞として使用して実行できる。異なるエフェクターと標的との比率を評価した。標的細胞を１×１０４細胞／ウェルで添加し、エフェクター細胞を（１×１０４、２．５×１０４、５×１０４、または１×１０５細胞／ウェル）で添加した。抗ヒトＣＤ３８抗体を３つの濃度（１μｇ／ｍＬ、１０μｇ／ｍＬ、および５０μｇ／ｍＬ）で評価した。以下のプロトコルを使用してアッセイを行った：ＰＢＭＣをＦｉｃｏｌｌ勾配遠心分離によって白血球錐体から単離した。ＣＤ１４＋細胞を、ＣＤ１４  Ｍｉｃｒｏｂｅａｄｓ（ＣＤＫ００６、Ｍｉｌｔｅｎｙｉ  Ｂｉｏｔｅｃ）を使用して単離した。単球を、１０％ＦＢＳ（Ｓｉｇｍａ）、２ｍＭ  Ｌ−グルタミン（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）、および１０，０００Ｕ／ｍＬ  Ｐｅｎ−Ｓｔｒｅｐ（Ｓｉｇｍａ）を含有するＲＰＭＩ１６４０（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）中５０ｎｇ／ｍＬのＭ−ＣＳＦの存在下で７日間培養し、４日後にＭ−ＣＳＦを含有する新鮮培地を添加した。制御性Ｔ細胞（Ｔｒｅｇ）を、ヒトＴｒｅｇ細胞分化キット（１３０−０５０−２０１、Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ）を使用して単離した。これらの細胞を３７℃、５％ＣＯ２の加湿インキュベータ内で５日間インキュベートした。７日目に、マクロファージおよびｅＦｌｕｏｒ４５０標識（ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）Ｔｒｅｇを上述の比率で、ＣＤ３８または対照抗体の存在下で一晩共培養した。Ｔｒｅｇ食作用を、Ｔｒｅｇ標識（ｅＦｌｕｏｒ４５０色素）に対して陽性のＣＤ１４＋細胞（ＣＤ１４−ＰＥ−Ｃｙ７クローンＭｆＰ９で染色、ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）上でのフローサイトメトリーゲーティングによって決定した。
【０１６５】
試験管内ＡＤＣＰレポーターアッセイ：Ｐｒｏｍｅｇａ  Ｂｉｏａｓｓａｙ  ｃｏｒｅ  ｋｉｔ  Ｇ９９０１を使用できる。標的ウェルの５０００Ｒａｊｉ細胞／ウェルを、９６ウェル白色ポリスチレンプレート（Ｃｏｓｔａｒカタログ番号３９１７）を使用して２５ｕＬ／ウェルの培地中にプレーティングした。試験抗体を別個のプレート内で連続希釈（１：３）した。２５ｕＬの連続希釈した抗体を細胞に添加した。エフェクター細胞の５００００細胞／ウェルをプレートに添加した（２５ｕＬ／ウェル）。プレートを３７℃で一晩２０時間インキュベートした。翌日、プレートをインキュベータから取り出し、室温で２０分間保持した。６０ｕｌのＢｉｏ−Ｇｌｏルシフェラーゼアッセイ基質を各ウェルに添加し、３０分間インキュベートした。発光を、ＧｌｏＭａｘ  Ｍｕｌｔｉ  Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ  Ｓｙｓｔｅｍを使用して読み取った。細胞培養培地：ＲＰＭＩ＋４％低ＩｇＧ血清。
【０１６６】
試験管内ＡＤＣＣアッセイ：抗ヒトＣＤ３８抗体の特徴付けのために、Ｄａｕｄｉ（ＣＤ３８陽性）ヒト細胞株を標的細胞として使用し、かつヒトＰＢＭＣをエフェクター細胞源として使用して、抗体依存性細胞傷害アッセイ（ＡＤＣＣアッセイ）を行った。エフェクターと標的との比率を、１０μｇ／ｍＬの最高濃度、続いて、三連での対数希釈系列（７点）で、３７℃、５％ＣＯ２で４時間評価した試験物質（抗ＣＤ３８一次抗体または対照としてのリツキシマブ）を用いて５０：１または２５：１で評価した。ＰＢＭＣをＩＬ−２で刺激し、ＩＬ−２が共培養アッセイ中に存在した。試験管内培養前に、標的細胞株を１μＭのカルセインＡＭで標識し、２．５ｍＭのプロベネシドとインキュベートした。溶解細胞が装填したカルセインを上清中に放出し、これにより蛍光測定が可能になる。カルセインＡＭ放出をＥｘｃｅｌおよびＧｒａｐｈＰａｄソフトウェア分析によって分析して、１％サポニン処置値を使用して最大溶解を決定する正規化によって用量反応曲線を生成した。標的細胞溶解パーセンテージを、濃度の対数に対する正規化カルセインＡＭ放出パーセンテージをグラフ化したＸＹチャート上にプロットし、データを、ＥＣ５０が算出される非線形回帰曲線に当てはめた。
【０１６７】
試験管内ＣＤＣアッセイ：本明細書に記載される抗ＣＤ３８抗体は、試験管内ＮＫ  ＣＤＣアッセイを使用して特徴付けることができ、例えば、ＣＤ３８発現ヒト細胞株（Ｄａｕｄｉ）に対するＣＤＣ活性を、細胞を、１０μｇ／ｍＬの最高濃度、続いて、三連での対数希釈系列（７点）（正常ヒト血清補体の最終濃度１０％）で、試験物質（抗ＣＤ３８一次抗体または対照としてのリツキシマブ）で処理することによって試験した。試料を３７℃、５％ＣＯ２で３時間培養した。フローサイトメトリー分析前に、培養条件に従って、細胞を洗浄し、ヨウ化プロピジウム（ＰＩ）を含む１倍ＰＢＳ中に５μｇ／ｍＬの最終濃度で再懸濁した。全ての細胞を試料取得中にフローサイトメトリーによって試験した。ＰＩ陽性細胞のパーセンテージを、濃度の対数に対するＰＩパーセンテージをグラフ化したＸＹチャート上にプロットし、データを、ＥＣ５０が算出される非線形回帰曲線に当てはめた。
【０１６８】
直接細胞死アッセイ。本明細書に記載される抗ＣＤ３８抗体は、直接的細胞死アッセイを使用して特徴付ることができ、例えば、ＣＤ３８発現ヒト細胞株（Ｄａｕｄｉ）に対する直接的プロアポトーシス活性を、細胞を、１０μｇ／ｍＬの最高濃度、続いて、三連での対数希釈系列（７点）で、試験物質（抗ＣＤ３８一次抗体）または対照としてのリツキシマブで処理することによって試験した。Ｆｃγ受容体媒介性架橋活性による細胞死を、細胞を、１０μｇ／ｍＬの最高濃度、続いて、三連での対数連続希釈（７点）で、対照として試験物質（抗ＣＤ３８一次抗体またはリツキシマブ）で処理し、その後、５μｇ／ｍＬのウサギ抗ヒトＦｃγ  Ｆ（ａｂ’）２（二次抗体）で処理することによって試験した。試料を３７℃、５％ＣＯ２で２４時間培養した。培養条件に従って、細胞を洗浄し、Ａｎｎｅｘｉｎ  Ｖ結合緩衝液および７−ＡＡＤ中に再懸濁させて、細胞死をフローサイトメトリー分析によって試験した。全ての細胞を試料取得中にフローサイトメトリーによって試験した。後期アポトーシス細胞パーセンテージを、濃度の対数に対するＡｎｎｅｘｉｎ  Ｖ陽性細胞および７−ＡＡＤ陽性細胞パーセンテージをグラフ化したＸＹチャート上にプロットし、データを、ＥＣ５０が算出される非線形回帰曲線に当てはめた。
【０１６９】
細胞表面（シクラーゼ活性およびＮＡＤａｓｅ／ヒドロラーゼ活性）上でのＣＤ３８の酵素活性：Ｄａｕｄｉ細胞およびＪｕｒｋａｔ細胞の細胞表面上でのＣＤ３８のシクラーゼ活性およびＮＡＤａｓｅ活性の両方を、ＮＧＤ＋（Ｓｉｇｍａ）およびＥ−ＮＡＤ＋（Ｓｉｇｍａ）のそれらのそれぞれの蛍光生成物：ｃＧＤＰＲ（ＮＤＧ＋からの環状生成物）および５’−ｅＡＭＰ（Ｅ−ＮＡＤ＋の加水分解生成物）へのＣＤ３８依存性変換を監視することによって測定した。１５万個のＤａｕｄｉ細胞を７５μＬのＰＢＳ（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｆｉｓｈｅｒ）中１０μｇ／ｍＬの抗体と氷上で２０分間インキュベートし、２０分後、７５μＬの酵素反応緩衝液（または対照緩衝液）を添加し、Ｄａｕｄｉ細胞を３７℃で４５分間インキュベートし、Ｊｕｒｋａｔ細胞を３７℃で６０分間インキュベートした。酵素反応緩衝液には、２０ｍＭ  ＵｌｔｒａＰｕｒｅ  Ｔｒｉｓ−ＨＣＩ緩衝液（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｆｉｓｈｅｒ）、ｐＨ  ７．５のＰＢＳ（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｆｉｓｈｅｒ）、および２００μＭのＮＧＤ＋またはＥ−ＮＡＤ＋のいずれかが含まれる。３７℃でインキュベートした後、細胞を、５５０×ｇの遠心分離手段によってペレット化し、１００μＬの上清を、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｄｅｖｉｃｅ  ＳｐｅｃｔｒａＭａｘ  ＭｉｎｉＭａｘ  ３００プレートリーダー（励起波長３００および発光波長４１０）での蛍光測定のために利用した。
【０１７０】
統計。Ｐｒｉｓｍソフトウェア（ＧｒａｐｈＰａｄ）を使用して曲線当てはめを行い、ＥＣ５０値および最大活性を決定した。
【０１７１】
結果
ＡＤＣＣおよびＣＤＣアッセイからのＥＣ５０値および溶解パーセンテージの結果を、同じ実験のダラツムマブの結果と比較して、表２、３、および４に示す：
【表２】
2020531003.tif 000011
【表３】
2020531003.tif 000012
【０１７２】
実施例１において特徴付けされている他の抗体としてのａＣＤ３８−ａ−３２３候補抗体を、免疫細胞に関してさらに評価した。第１の一連の実験では、ａＣＤ３８−ａ−３２３は、ヒトＴ細胞との用量依存的結合を示す（図３Ｂ）。Ｔ細胞を使用して試験する場合、例えば、かかる細胞の培養のためのプレートをコーティングするためにａＣＤ３８−ａ−３２３を使用する場合、ａＣＤ３８−ａ−３２３がヒトＴ細胞活性化を増加させる一方で、参照抗ＣＤ３８抗体（ＤＡＲＡ）ははるかに弱いアゴニスト活性を提示する（図４Ａ）。ａＣＤ３８−ａ−３２３のこの強力なヒトＴ細胞活性化活性は、ＮＦＡＴシグナル伝達アッセイで測定した場合にさらに支持される（図１３）。ａＣＤ３８−ａ−３２３のアゴニスト活性は、ＤＡＲＡと比較して、ａＣＤ３８−ａ−３２３によって誘発されたヒトＴ細胞によるより強力な炎症性サイトカイン分泌によってさらに強まる（図４Ｂ）。ａＣＤ３８−ａ−３２３およびＤＡＲＡは、ＡＤＣＣアッセイにおいて同等の活性を示す（図５Ａ）。ＤＡＲＡと比較してａＣＤ３８−３２３によって引き起こされるより低いＣＤＣ効果（図５Ｂ）は、注入部位反応の減少により増強された安全性を有する抗ＣＤ３８抗体を提供するであろう。試験管内での殺傷活性に加えて、ａＣＤ３８−ａ−３２３はＣＤ３８のシクラーゼ活性を強く増加させるが（図６Ａおよび図７Ａ）、ＤＡＲＡはＤａｕｄｉ細胞アッセイおよびＪｕｒｋａｔ細胞アッセイの両方で後期活性を阻害する。ａＣＤ３８−ａ−３２３は、ＣＤ３８のＮＡＤａｓｅ（ＮＡＤ＋ヒドロラーゼ）活性を低下させるが、ＤＡＲＡは低下しない（図６Ｂ）。Ｊｕｒｋａｔ細胞アッセイにおいて、ａＣＤ３８−ａ−３２３はＣＤ３８のＮＡＤａｓｅ（ＮＡＤ＋ヒドロラーゼ）活性を低下させるが、ＤＡＲＡは活性を増強させる（図７Ｂ）。
【０１７３】
結論として、ａＣＤ３８−ａ−３２３を、異なる実験設定において免疫細胞に対してＣＤ３８調節抗体剤の活性を提示する例示の抗ＣＤ３８抗体と特徴付けた。
【０１７４】
実施例３：動物モデルにおけるＣＤ３８調節抗体剤の検証
材料および方法
リンパ腫細胞系モデル
本明細書に記載される抗ＣＤ３８抗体は、動物モデルを使用して特徴付けでき、例えば、ＲａｍｏｓおよびＲａｊｉ腫瘍細胞を、１０％ウシ胎仔血清を補充した２ｍＭのＬ−グルタミン＋１ｍＭのピルビン酸Ｎａ＋４．５ｇ／Ｌのグルコース＋１０ｍＭのＨｅｐｅｓを含有するＲＰＭＩ１６４０中で培養した。健常雌ｃｂ１７  ＳＣＩＤマウスをＣｈａｒｌｅｓ  Ｒｉｖｅｒから入手した。腫瘍を、２００μＬのＲＰＭＩ１６４０中５ｘ１０６個のＲａｍｏｓ細胞、または１ｘ１０６個のＲａｊｉ細胞の動物の尾静脈への静脈内注射によって誘導した。細胞注射をγ線源（１．４４Ｇｙ／マウス、６０Ｃｏ、ＢｉｏＭｅｐ，Ｂｒｅｔｅｎｉｅｒｅｓ，Ｆｒａｎｃｅ）での全身照射の２４〜７２時間後に行った。マウスを体重によってランダムに処理群分けした（１群当たり８匹のマウス）。全てのモデルにおいて、第１群の動物には、ビヒクルを５ｍＬ／ｋｇで週２回３週間連続して（ＴＷ×３）静脈内注射した。第２群の動物には、ＤＡＲＡを１０ｍｇ／ｋｇ／注入で週２回３週間連続して（ＴＷ×３）静脈内注入した。第３群の動物には、ａＣＤ３８−ａ−３２３を１０ｍｇ／ｋｇ／注入で週２回３週間連続して（ＴＷ×３）静脈内注入した。マウスを最大８週後までに屠殺した。
【０１７５】
固形腫瘍モデル
雌ＣＢ．１７  ＳＣＩＤマウスの側腹部に、０％マトリゲル中１×１０７個のＲａｍｏｓ腫瘍細胞を皮下注入した（ｎ＝１０／群）。腫瘍が１００〜１３０ｍｍ３のサイズに達したときに処理を開始し、週２回３週間処理した。マウスを、ダラツムマブおよびビヒクル対照と比較して、抗体ａＣＤ３８−ａ−３２３で静脈内に１０ｍｇ／ｋｇで処置した。腫瘍体積が２０００ｍｍ２に達したか、または６０日が経過したときに、マウスを屠殺した。
【０１７６】
結果
ａＣＤ３８−ａ−３２３の治療的特性を、ヒトがんの動物モデルで、具体的には、ヒト腫瘍細胞の殺傷に関するＣＤ３８調節抗体剤の特性をより適切に評価することができる免疫不全マウスを使用して試験することができる。
【０１７７】
これらの特性を、動物生存率の観点のみならず、同時免疫学的効果と共に、文献（Ｍｏｒｔｏｎ  ＪＪ  ｅｔ  ａｌ．２０１６、Ｈｏｌｚａｐｆｅｌ  ＢＭ  ｅｔ  ａｌ．，２０１５）に記載されるように、固形腫瘍が皮下で増殖するヒトがん株またはヒト初代がん細胞のいずれかの注入に基づくヒト腫瘍（具体的には、固体がん）の他の生体内モデルにおいてさらに調査することができる。
【０１７８】
ａＣＤ３８−ａ−３２３は、ダラツムマブと比較して、皮下注入したＲａｍｏｓ細胞に対する同等の抗腫瘍活性を示した（図８）。ａＣＤ３８−ａ−３２３は、ダラツムマブと比較して、静脈内注入したＲａｍｏｓおよびＲａｊｉ細胞に対する同等の抗腫瘍活性をさらに示した（図９および図１０）。
【０１７９】
特性を、腫瘍細胞および免疫細胞が単離された患者から直接的に単離され、かつ抗ＣＤ３８抗体に対するそれらの応答（細胞活性化、増殖、サイトカイン産生、および／または細胞死によって測定される）について試験管内で試験された腫瘍試料の使用に基づいて生体外モデルにおいてさらに調査することができる。選択された組織または生体物質におけるアブスコパル効果または遺伝子発現の変化などのさらなる特徴を、恐らく、ａＣＤ３８−ａ−３２３を、異なる用量で、かつ／または他の抗がん剤（キナーゼもしくは他の酵素阻害剤、抗体、放射線／化学療法、アジュバント、またはワクチンなど）と組み合わせて投与することによって評価することができる。
【０１８０】
実施例４：変異ＣＤ３８との抗体結合
材料および方法：ヒトＣＤ３８の２つの変異体バージョンを構築した。第１のバージョンでは、２０２位でＤをＧに変異させ（Ｄ２０２Ｇ）、第２のバージョンでは、２７４位でＳをＦに変異させた（Ｓ２７４Ｆ）。
【０１８１】
変異したＣＤ３８タンパク質の各々とのａＣＤ３８−ａ−３２３の結合を評価し、ダラツムマブと比較した。
【０１８２】
結果
【表４】
2020531003.tif 000013
【０１８３】
結果は、ａＣＤ３８−ａ−３２３の結合が、ヒトＣＤ３８への変異Ｄ２０２Ｇまたは変異Ｓ２７４Ｆの導入による影響を受けないことが示された。これを、抗体結合が変異Ｓ２７４Ｆの導入により影響を受けたが、ヒトＣＤ３８への変異Ｄ２０２Ｇの導入によって影響を受けなかったダラツムマブと比較する。これらの結果は、ダラツムマブとは異なるエピトープとのａＣＤ３８−ａ−３２３の結合を支持する。
【０１８４】
本出願に含まれる配列の要約が以下に提供される
【表５】
2020531003.tif 000014
【０１８５】
等価物および範囲
当業者であれば、本発明が、実施例または本明細書に含まれるある特定の実施形態の他の記述ではなく、添付の特許請求の範囲によって定義されることを理解するであろう。
【０１８６】
同様に、「ａ」、「ａｎ」、および「ｔｈｅ」という単数形は、文脈が別途明確に示さない限り、複数の指示対象を含む。
【０１８７】
別途上記で定義されない限り、本明細書で使用される全ての技術用語および科学用語は、本発明が属する当業者によって一般に理解される意味と同じ意味を有する。本明細書に記載されるものと同様または同等の任意の方法および材料も、本発明の実施または試験で使用され得る。一般に、本明細書に記載される細胞および組織培養、分子生物学、免疫学、遺伝学、ならびにタンパク質および核酸化学に関連して使用される命名法、およびそれらの技法は、当技術分野で周知であり、一般に使用されているものであるか、製造元の仕様書に従うものである。
【０１８８】
本明細書で言及される全ての刊行物は、それらの刊行物が引用されることに関連して方法および／または材料を開示および説明するために参照により本明細書に組み込まれる。
参考文献
Ａｕｓｉｅｌｌｏ  ＣＭ  ｅｔ  ａｌ．，２０００．Ｔｉｓｓｕｅ  Ａｎｔｉｇｅｎｓ．５６：５３９−４７．
Ｂａｒｎａｒｄ  ＧＣ  ｅｔ  ａｌ．，２０１０．Ｊ  Ｉｎｄ  Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．３７：９６１−７１．
Ｂｅｃｋ  Ａ  ｅｔ  ａｌ．，２０１７．Ｎａｔ  Ｒｅｖ  Ｄｒｕｇ  Ｄｉｓｃｏｖ．１６：３１５−３３７．
Ｃｈｅｖｒｉｅｒ  Ｓ  ｅｔ  ａｌ．２０１７．Ｃｅｌｌ．１６９：７３６−７４９．
ｄｅ  Ｗｅｅｒｓ  Ｍ  ｅｔ  ａｌ．，２０１１．Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．１８６：１８４０−８．
Ｅｓｔｅｐ  Ｐ  ｅｔ  ａｌ．，２０１３  ＭＡｂｓ．５：２７０−８．
Ｆｅｒｒｅｒｏ  Ｅ  ｅｔ  ａｌ．，２００４．ＢＭＣ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．５：２１．
Ｆｒａｓｃａ  Ｌ  ｅｔ  ａｌ，２００６．Ｂｌｏｏｄ  １０７：２３９２−２３９９．
Ｈａｒａ−Ｙｏｋｏｙａｍａ  Ｍ  ｅｔ  ａｌ．，２００８．Ｉｎｔ  Ｉｍｍｕｎｏｐｈａｒｍａｃｏｌ．８：５９−７０．
Ｈｏｌｚａｐｆｅｌ  ＢＭ  ｅｔ  ａｌ．，２０１５．Ｓｔｅｍ  Ｃｅｌｌｓ．３３：１６９６−７０４．
Ｈｏｒｅｎｓｔｅｉｎ  ＡＬ  ｅｔ  ａｌ．，２０１７．Ｈｕｍ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ．２５：７５−８５．
Ｊａｒａｓｃｈ  Ａ  ｅｔ  ａｌ．，２０１５．Ｊ  Ｐｈａｒｍ  Ｓｃｉ．１０４：１８８５−１８９８．
Ｋａｍｐｈｏｒｓｔ  ＡＯ  ｅｔ  ａｌ．，  ２０１７．Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  Ｕ  Ｓ  Ａ．  １１４：４９９３−４９９８．
Ｋａｒａｋａｓｈｅｖａ  Ｔ  ｅｔ  ａｌ．，２０１５．Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ  ７５：４０７４−８５．
Ｋｅａｒｎｓ  ＪＤ  ｅｔ  ａｌ．，２０１５．Ｍｏｌ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｔｈｅｒ．１４：１６２５−３６．
Ｋｉｊａｎｋａ  Ｍ  ｅｔ  ａｌ．，２０１５．Ｎａｎｏｍｅｄｉｃｉｎｅ．１０：１６１−１７４．
Ｌａｎｇｅｄｉｊｋ  ＪＰ  ｅｔ  ａｌ．，２０１１．Ａｎａｌｙｔｉｃａｌ  Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ．４１７：１４９−１５５．
Ｌｉｕ  Ｌ，２０１５．Ｊ  Ｐｈａｒｍ  Ｓｃｉ．１０４：１８６６−８４．
Ｌｉｕ  Ｙ  ｅｔ  ａｌ．，２０１４．ＭＡｂｓ．６：４８３−９２．
Ｍａｌａｖａｓｉ  Ｆ  ｅｔ  ａｌ．，２００８．Ｐｈｙｓｉｏｌ  Ｒｅｖ．８８：８４１−８６．
Ｍｏｒａｎｄｉ  Ｆ  ｅｔ  ａｌ．，２０１５．Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．１９５：９６５−７２．
Ｍｏｒｔｏｎ  ＪＪ  ｅｔ  ａｌ．２０１６．Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．７６：６１５３−６１５８．
Ｑｕａｒｏｎａ  Ｖ  ｅｔ  ａｌ．，２０１３．Ｃｙｔｏｍｅｔｒｙ  Ｂ  Ｃｌｉｎ  Ｃｙｔｏｍ．８４：２０７−１７．
Ｒａｈ  ＳＹ  ｅｔ  ａｌ．，２０１５．Ｓｃｉ  Ｒｅｐ．５：９４８２．
Ｒｅｄｍａｎ  ＪＭ  ｅｔ  ａｌ．，２０１５．Ｍｏｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．６７：２８−４５．
Ｓｉｅｇｅｌ  ＲＷ  ｅｔ  ａｌ．，２００４．Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  Ｍｅｔｈｏｄｓ．２８６：１４１−５３．
Ｓｌｉｗｋｏｗｓｋｉ  Ｍ  ＆  Ｍｅｌｌｍａｎ  Ｉ，２０１３．Ｓｃｉｅｎｃｅ．３４１：１１９２−８．
Ｓｙｄｏｗ  Ｊ  ｅｔ  ａｌ．２０１４．ＰＬｏＳ  Ｏｎｅ．９：ｅ１００７３６．
Ｔｉｍｍｅｒｍａｎｎ  Ｐ  ｅｔ  ａｌ．，２００７，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｒｅｃｏｇｎｉｔ．，２０，２８３−９９．
ｖａｎ  ｄｅ  Ｄｏｎｋ  ＮＷ  ｅｔ  ａｌ．，２０１６．Ｉｍｍｕｎｏｌ  Ｒｅｖ．２７０：９５−１１２．
Ｖａｚｑｕｅｚ−Ｌｏｍｂａｒｄｉ  Ｒ  ｅｔ  ａｌ．，２０１５．Ｄｒｕｇ  Ｄｉｓｃｏｖ  Ｔｏｄａｙ．２０：１２７１−８３．
Ｘｕ  Ｙ  ｅｔ  ａｌ．，２０１３．Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｅｎｇ  Ｄｅｓ  Ｓｅｌ．２６：６６３−７０
Ｗｅｉ  Ｗ  ｅｔ  ａｌ．，２０１４．Ｗｏｒｌｄ  Ｊ  ＢｉｏｌＣｈｅｍ．５：５８−６７．
Ｒａｊｐａｌ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ＵＳＡ，２００５，１０２（２４）：８４６６−７１．
Ｓｔｅｉｎｗａｎｄ  ｅｔ  ａｌ．，ＭＡｂｓ，２０１４，６（１）：２０４−１８．
Ｅｌｌｉｎｇｔｏｎ  ｅｔ  ａｌ．Ｎａｔｕｒｅ．１９９０；３４６（６２８７）：８１８−８２２．
Ｔｕｅｒｋ  ｅｔ  ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ．１９９０；２４９（４９６８）：５０５−５１０．
Ｎｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｕｒｒ  Ｍｅｄ  Ｃｈｅ  ２０１１；１８（２７）：４２０６−１４．
【図１】
2020531003.tif 000015
【図２】
2020531003.tif 000016
【図３Ａ】
2020531003.tif 000017
【図３Ｂ】
2020531003.tif 000018
【図４】
2020531003.tif 000019
【図５】
2020531003.tif 000020
【図６】
2020531003.tif 000021
【図７】
2020531003.tif 000022
【図８】
2020531003.tif 000023
【図９】
2020531003.tif 000024
【図１０】
2020531003.tif 000025
【図１１】
2020531003.tif 000026
【図１２】
2020531003.tif 000027
【図１３】
2020531003.tif 000028
【配列表】
2020531003000001.app
【国際調査報告】
2020531003.tif 000029
2020531003.tif 000030
2020531003.tif 000031
2020531003.tif 000032
2020531003.tif 000033
2020531003.tif 000034
2020531003.tif 000035