(57)【要約】  カンナビジオール酸エステル、それを含む組成物ならびに様々な疾患、病態および症状の治療へのその使用。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
一般式（Ｉ）：
【化１】
2020524679.tif 000014
を有し、式中、
Ｒ１が、−Ｃ（＝Ｏ）ＯＲ３、−ＯＣ（＝Ｏ）Ｒ４から選択され；
Ｒ２が、直鎖または分岐鎖Ｃ１〜Ｃ１５アルキル、直鎖または分岐鎖Ｃ２〜Ｃ１５アルケニルおよび直鎖または分岐鎖Ｃ２〜Ｃ１５アルキニルから選択され；それぞれ独立に任意選択で、ヒドロキシ、ハロゲン、アミンおよびアミドまたはその任意の組合せから選択される少なくとも１つの置換基によって置換されており；
Ｒ３およびＲ４がそれぞれ独立に、直鎖または分岐鎖Ｃ１〜Ｃ１５アルキル、直鎖または分岐鎖Ｃ２〜Ｃ１５アルケニル、直鎖または分岐鎖Ｃ２〜Ｃ１５アルキニル、ハロゲン、アミンおよびアミドから選択される、
化合物。
【請求項２】
一般式（ＩＩ）：
【化２】
2020524679.tif 000015
を有し、式中、
Ｒ２が、直鎖または分岐鎖Ｃ１〜Ｃ１５アルキル、直鎖または分岐鎖Ｃ２〜Ｃ１５アルケニルおよび直鎖または分岐鎖Ｃ２〜Ｃ１５アルキニルから選択され；それぞれ独立に任意選択で、ヒドロキシ、ハロゲン、アミンおよびアミドまたはその任意の組合せから選択される少なくとも１つの置換基によって置換されており；
Ｒ３が、直鎖または分岐鎖Ｃ１〜Ｃ１５アルキル、直鎖または分岐鎖Ｃ２〜Ｃ１５アルケニル、直鎖または分岐鎖Ｃ２〜Ｃ１５アルキニル、ハロゲン、アミンおよびアミドから選択される、
化合物。
【請求項３】
Ｒ２が直鎖または分岐鎖Ｃ１〜Ｃ１５アルキルである、請求項１または２に記載の化合物。
【請求項４】
Ｒ２が直鎖または分岐鎖Ｃ２〜Ｃ１５アルケニルである、請求項１または２に記載の化合物。
【請求項５】
Ｒ２が直鎖または分岐鎖Ｃ２〜Ｃ１５アルキニルである、請求項１または２に記載の化合物。
【請求項６】
Ｒ３が直鎖または分岐鎖Ｃ１〜Ｃ１５アルキルである、請求項１または２に記載の化合物。
【請求項７】
Ｒ３が直鎖または分岐鎖Ｃ２〜Ｃ１５アルケニルである、請求項１または２に記載の化合物。
【請求項８】
Ｒ３が直鎖または分岐鎖Ｃ２〜Ｃ１５アルキニルである、請求項１または２に記載の化合物。
【請求項９】
Ｒ３が、ハロゲン、アミンおよびアミドから選択される、請求項１または２に記載の化合物。
【請求項１０】
請求項１〜９のいずれか１項に記載の化合物を少なくとも１つ含む、組成物。
【請求項１１】
５−ＨＴ１Ａ受容体に関連する病態、疾患または症状の治療に使用する、請求項１〜９のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項１２】
嘔気、嘔吐、痙攣およびその任意の組合せから選択される病態、疾患または症状の治療に使用する、請求項１〜９のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項１３】
うつ病に関連する病態、疾患または症状の治療に使用する、請求項１〜９のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項１４】
不安、ストレス、うつ病、統合失調症、パニック、離脱症候群、自己免疫疾患、炎症、梗塞サイズの縮小、脳卒中の血流増大、肥満、メタボリック症候群、網膜症、嘔気、心筋、肝臓、腎臓虚血性／再灌流傷害、神経損傷、ハンチントン病、アルツハイマー病、脳梗塞、肝性脳症、外傷性脳損傷、脳虚血、脊髄損傷、記憶救済効果、癌、血管新生、癲癇、痙攣、神経因性疼痛、気道閉塞、強迫行動、認知障害、性衝動および性機能の低下、睡眠障害、オピオイドによる呼吸抑制、依存症ならびにその任意の組合せから選択される病態、疾患または症状の治療に使用する、請求項１〜９のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項１５】
腎機能異常に関連する少なくとも１つの疾患、病態、症状または障害の治療に使用する、請求項１〜９のいずれか１項に記載の化合物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
カンナビジオール酸（ＣＢＤＡ）はアサ（Ｃａｎｎａｂｉｓ  ｓａｔｉｖａ）の主要成分の１つである。カンナビジオール酸は１９５５年に最初に単離され（ＫｒｅｊｃｉおよびＳａｎｔａｖｙ，１９５５）、１９６５年にそのメチルエステルの物理的特性の解析によって構造が明らかにされた（ＭｅｃｈｏｕｌａｍおよびＧａｏｎｉ，１９６５）。そののち、カンナビジオールからのカンナビジオール酸合成が報告された（ＭｅｃｈｏｕｌａｍおよびＢｅｎ−Ｚｖｉ，１９６９）。
【化１】
2020524679.tif 000002
【０００２】
カンナビジオール酸（ＣＢＤＡ）は植物体内にある間に徐々に脱炭酸されてカンナビジオールになり（Ｍｅｃｈｏｕｌａｍ，１９７３）、この過程は熱によって促進される。カンナビジオールはこれまでに多数の刊行物の主題となり、現在ではその生物学的／治療的特性がある程度明らかにされている（Ｍｅｃｈｏｕｌａｍら，２００２；ＺｈｏｒｎｉｔｓｋｙおよびＰｏｔｖｉｎ，２０１２；ＣａｓｃｉｏおよびＰｅｒｔｗｅｅ，２０１４）が、カンナビジオール酸の薬理学に関するわれわれの知見はそれよりはるかに少ない。
【０００３】
このフィトカンナビノイドに関してこれまでに公開されている数少ない情報から、同物質が多岐にわたる作用および効果を有し得ることが示唆される。その結果、フィトカンナビノイドが乳癌細胞移動を阻害し（Ｔａｋｅｄａら，２０１７）、シクロオキシゲナーゼ−２（ＣＯＸ−２）のダウンレギュレーションを引き起こす（Ｔａｋｅｄａら，２０１４）ことが示されている。最近得られた証拠から、ＣＢＤＡが（１μｇ・ｋｇ−１ｉ．ｐ．の低用量で）、５−ＨＴ１Ａ受容体活性化の増強により（Ｂｏｌｏｇｎｉｎｉら，２０１３；Ｒｏｃｋら，２０１３；２０１５ｂ）、明らかにスンクス（Ｓｕｎｃｕｓ  ｍｕｒｉｎｕｓ）の嘔吐およびラットの条件付けゲーピングの急性嘔気誘発性挙動をともに抑制することが可能である（ＧｒｉｌｌおよびＮｏｒｇｒｅｎ，１９７８）ことによって示されるように、強力な５−ＨＴ１Ａ受容体介在型抗嘔気効果を引き起こし得ることが示唆される。ＣＢＤＡは、急性嘔気を軽減するほか、化学療法患者が嘔気を催す治療を受けた診療所に戻ったときにみられる効果である予期（条件付け）嘔気を軽減する可能性も秘めている（Ｒｏｃｋら，２０１４；２０１５ａ；２０１６）。このような患者に予期嘔気が発症したとき、それに効果を示す選択的治療法は現時点で存在しない。したがって、Ｒｏｃｋら（２０１４；２０１５ａ；２０１６）が、ＣＢＤＡが５−ＨＴ１Ａ依存性の作用機序によって状況誘発性条件付けゲーピング（予期嘔気のモデル）も軽減することを明らかにしたことは注目に値する。最後に、ＣＢＤＡがＣＢＤと同様に、高ストレス条件下で０．１μｇ・ｋｇ−１、ｉ．ｐ．の低用量で抗不安様効果を生じさせることも示されている（Ｒｏｃｋら，２０１７）。
【０００４】
しかし、ＣＢＤＡは、特に熱に曝されたときに極めて不安定になる。このため、より安定性の高いＣＢＤＡの類似体を発見する必要性が高まっていた。驚くべきことに、本願の発明者らにより、ＣＢＤＡのエステル誘導体が、求められている安定性だけでなく、ＣＢＤＡと同等かそれ以上の効果的な生物学的プロファイルを示すことが発見された。
【発明の概要】
【０００５】
したがって、本発明は、一般式（Ｉ）：
【化２】
2020524679.tif 000003
を有する化合物を提供する。
【０００６】
式中、Ｒ１は−Ｃ（＝Ｏ）ＯＲ３、−ＯＣ（＝Ｏ）Ｒ４から選択され；Ｒ２は、直鎖または分岐鎖Ｃ１〜Ｃ１５アルキル、直鎖または分岐鎖Ｃ２〜Ｃ１５アルケニルおよび直鎖または分岐鎖Ｃ２〜Ｃ１５アルキニルから選択され；それぞれ独立に任意選択で、ヒドロキシ（−ＯＨ）、ハロゲン、アミンおよびアミドまたはその任意の組合せから選択される少なくとも１つの置換基によって置換されており；Ｒ３およびＲ４はそれぞれ独立に、直鎖または分岐鎖Ｃ１〜Ｃ１５アルキル、直鎖または分岐鎖Ｃ２〜Ｃ１５アルケニル、直鎖または分岐鎖Ｃ２〜Ｃ１５アルキニル（前記アルキル、アルケニルまたはアルキニルはそれぞれ任意選択で、ヒドロキシ（−ＯＨ）、ハロゲン、アミンおよびアミドまたはその任意の組合せから選択される少なくとも１つの置換基によって置換されている）、ハロゲン、アミンおよびアミドから選択される。
【０００７】
本発明はさらに、一般式（ＩＩ）：
【化３】
2020524679.tif 000004
を有する化合物を提供する。
【０００８】
式中、Ｒ２は、直鎖または分岐鎖Ｃ１〜Ｃ１５アルキル、直鎖または分岐鎖Ｃ２〜Ｃ１５アルケニルおよび直鎖または分岐鎖Ｃ２〜Ｃ１５アルキニルから選択され；それぞれ独立に任意選択で、ヒドロキシ、ハロゲン、アミンおよびアミドまたはその任意の組合せから選択される少なくとも１つの置換基によって置換されており；Ｒ３は、直鎖または分岐鎖Ｃ１〜Ｃ１５アルキル、直鎖または分岐鎖Ｃ２〜Ｃ１５アルケニル、直鎖または分岐鎖Ｃ２〜Ｃ１５アルキニル（前記アルキル、アルケニルまたはアルキニルはそれぞれ任意選択で、ヒドロキシ（−ＯＨ）、ハロゲン、アミンおよびアミドまたはその任意の組合せから選択される少なくとも１つの置換基によって置換されている）、ハロゲン、アミンおよびアミドから選択される。
【０００９】
いくつかの実施形態では、Ｒ２は直鎖または分岐鎖Ｃ１〜Ｃ１５アルキルである。他の実施形態では、Ｒ２は直鎖または分岐鎖Ｃ２〜Ｃ１５アルケニルである。さらなる実施形態では、Ｒ２は直鎖または分岐鎖Ｃ２〜Ｃ１５アルキニルである。
【００１０】
いくつかの実施形態では、Ｒ３は直鎖または分岐鎖Ｃ１〜Ｃ１５アルキルである。他の実施形態では、Ｒ３は直鎖または分岐鎖Ｃ２〜Ｃ１５アルケニルである。さらなる実施形態では、Ｒ３は直鎖または分岐鎖Ｃ２〜Ｃ１５アルキニルである。さらなる実施形態では、Ｒ３は、ハロゲン、アミンおよびアミドから選択される。いくつかの実施形態では、アルキル、アルケニルまたはアルキニルであるＲ３は任意選択で、ヒドロキシ（−ＯＨ）、ハロゲン、アミンおよびアミドまたはその任意の組合せから選択される少なくとも１つの置換基によって置換されている。
【００１１】
いくつかの実施形態では、本発明の化合物はＨＵ−５８０：
【化４】
2020524679.tif 000005
である。
【００１２】
本発明はさらに、一般式（ＩＩＩ）：
【化５】
2020524679.tif 000006
を有する化合物を提供する。
【００１３】
式中、Ｒ２は、直鎖または分岐鎖Ｃ１〜Ｃ１５アルキル、直鎖または分岐鎖Ｃ２〜Ｃ１５アルケニルおよび直鎖または分岐鎖Ｃ２〜Ｃ１５アルキニルから選択され；それぞれ独立に任意選択で、ヒドロキシ、ハロゲン、アミンおよびアミドまたはその任意の組合せから選択される少なくとも１つの置換基によって置換されており；Ｒ４は、直鎖または分岐鎖Ｃ１〜Ｃ１５アルキル、直鎖または分岐鎖Ｃ２〜Ｃ１５アルケニル、直鎖または分岐鎖Ｃ２〜Ｃ１５アルキニル（前記アルキル、アルケニルまたはアルキニルはそれぞれ任意選択で、ヒドロキシ（−ＯＨ）、ハロゲン、アミンおよびアミドまたはその任意の組合せから選択される少なくとも１つの置換基によって置換されている）、ハロゲン、アミンおよびアミドから選択される。
【００１４】
「ハロゲン」という用語は、Ｆ、Ｃｌ、ＢｒまたはＩを意味する。
【００１５】
本明細書で使用される「アミン」という用語は−ＮＲＲ’Ｒ’’ラジカルを指し、式中、Ｒ、Ｒ’およびＲ’’はそれぞれ、Ｈ、直鎖または分岐鎖Ｃ１〜Ｃ１５アルキル、直鎖または分岐鎖Ｃ２〜Ｃ１５アルケニルおよび直鎖または分岐鎖Ｃ２〜Ｃ１５アルキニルから選択される。
【００１６】
本明細書で使用される「アミド」という用語は−Ｃ（＝Ｏ）ＮＲＲ’Ｒ’’またはＮＲＣ（＝Ｏ）Ｒ’ラジカルを指し、式中、Ｒ、Ｒ’およびＲ’’はそれぞれ、Ｈ、直鎖または分岐鎖Ｃ１〜Ｃ１５アルキル、直鎖または分岐鎖Ｃ２〜Ｃ１５アルケニルおよび直鎖または分岐鎖Ｃ２〜Ｃ１５アルキニルから選択される。
【００１７】
本明細書で使用される「Ｃ１〜Ｃ１５アルキル」という用語は、炭素原子を１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、１０個、１１個、１２個、１３個、１４個または１５個有し、いずれの炭素原子もシグマ結合を介して結合した飽和分岐鎖または直鎖炭化水素基を表す。
【００１８】
本明細書で使用される「Ｃ２〜Ｃ１５アルケニル」という用語は、炭素原子を２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、１０個、１１個、１２個、１３個、１４個または１５個有し、前記炭素原子を結合している結合のうち少なくとも１つのものが二重結合であり、それ以外の結合がいずれも任意の他のタイプのもの（単結合および／または二重結合）である、分岐鎖または直鎖炭化水素基を表す。
【００１９】
本明細書で使用される「Ｃ２〜Ｃ１５アルキニル」という用語は、炭素原子を２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、１０個、１１個、１２個、１３個、１４個または１５個有し、前記炭素原子を結合している結合のうち少なくとも１つのものが三重結合であり、それ以外の結合がいずれも任意の他のタイプのもの（単結合および／または二重結合および／または三重結合）である、分岐鎖または直鎖炭化水素基を表す。
【００２０】
本明細書で使用される「任意選択の置換基」という用語は、対応する置換基が存在しても存在しなくてもよいことを意味する。したがって、本発明の化合物は、この任意選択の置換を有するものと定義されるラジカルの任意の位置に任意選択の置換基を１個、２個、３個またはそれ以上有し得る。
【００２１】
本明細書に提供される化合物は１つまたは複数のキラル中心を含み得ることを理解するべきである。このようなキラル中心はそれぞれ、（Ｒ）立体配置または（Ｓ）立体配置のいずれかであり得る。本発明の化合物がキラル中心を２つ以上含む場合、そのキラル中心はそれぞれ独立に、（Ｒ）立体配置または（Ｓ）立体配置であり得る。したがって、本明細書に提供される化合物は、鏡像異性的に純粋なものであっても、立体異性体混合物またはジアステレオマー混合物であってもよい。
【００２２】
本発明はさらに、本明細書で上記または下記に定義される一般式（Ｉ）および（ＩＩ）の化合物を少なくとも１つ含む、組成物を提供する。
【００２３】
さらなる態様では、本発明は、５−ＨＴ１Ａ受容体に関連する病態、疾患または症状の治療に使用する、本明細書で上記または下記に定義される一般式（Ｉ）および（ＩＩ）の化合物を提供する。
【００２４】
さらなる態様では、本発明は、嘔気，嘔吐，痙攣およびその任意の組合せから選択される病態、疾患または症状の治療に使用する、本明細書で上記または下記に定義される一般式（Ｉ）および（ＩＩ）の化合物を提供する。
【００２５】
さらなる態様では、本発明は、うつ病に関連する病態、疾患または症状の治療に使用する、本明細書で上または下に定義される一般式（Ｉ）および（ＩＩ）の化合物を提供する。
【００２６】
さらなる態様では、本発明は、不安、ストレス、うつ病、統合失調症、パニック、離脱症候群、自己免疫疾患、炎症、梗塞サイズの縮小、脳卒中の血流増大、肥満、メタボリック症候群、網膜症、嘔気、心筋、肝臓、腎臓の虚血性／再灌流傷害、神経損傷、ハンチントン病、アルツハイマー病、脳梗塞、肝性脳症、外傷性脳損傷、脳虚血、脊髄損傷、記憶救済効果、癌、血管新生、癲癇、痙攣、神経因性疼痛、気道閉塞、強迫行動、認知障害、性衝動および性機能の低下、睡眠障害、オピオイドによる呼吸抑制、依存症ならびにその任意の組合せから選択される病態、疾患または症状の治療に使用する、本明細書で上記または下記に定義される一般式（Ｉ）および（ＩＩ）の化合物を提供する。
【００２７】
別の態様では、本発明は、カンナビジオール酸（ＣＢＤＡ）によって改善することを特徴とする疾患を治療する方法であって、このような治療を必要とする対象に本明細書で上記または下記に定義される一般式（Ｉ）および（ＩＩ）の化合物を治療有効量投与することを含む、方法に関する。
【００２８】
疾患、病態および症状の非限定的な例として、不安およびストレス、うつ病、統合失調症、パニックおよび不安、大麻依存症およびタバコ依存症の離脱症状、モルヒネおよびコカインによる報酬促進効果、任意のタイプの自己免疫疾患（特定の非限定的な例として１型糖尿病、ＧＶＨＤ）、炎症（クローン病、大腸炎、膵炎、関節リウマチ）、梗塞サイズの縮小および脳卒中の血流増大、肥満（摂食量を減らすこと、または食欲を低下させることによって治療される）、メタボリック症候群、糖尿病による網膜症、嘔気、心筋、肝臓、腎臓の虚血性／再灌流傷害、神経損傷（神経の疾患または傷害によるもの）、パーキンソン病、ハンチントン病、アルツハイマー病、脳梗塞、肝性脳症、外傷性脳損傷、脳虚血、脊髄損傷、記憶救済効果、癌および癌化学療法に対する抵抗性、癌細胞移動（転移）、血管新生、癲癇および痙攣、慢性炎症性および神経因性疼痛、気道閉塞、強迫行動ならびにその任意の組合せがある。
【００２９】
いくつかの実施形態では、疾患、病態および症状は、嘔気（予期嘔気および急性嘔気の両方）、嘔吐、不安および任意のタイプの情動障害、例えばうつ病（大うつ病、軽症うつ病および双極性疾患を含む）などから選択される。
【００３０】
本発明は、５ＨＴ１Ａ受容体の活性化によって臨床的に有益な効果が明らかになる疾患を治療する方法であって、このような治療を必要とする対象に少なくとも１つの一般式（Ｉ）または（ＩＩ）の化合物を有効量投与することを含む、方法に関する。
【００３１】
このような疾患および病態の非限定的な例として、高血圧症、不安、嘔吐および嘔気、疼痛、統合失調症、パーキンソン病、認知障害、性衝動および性機能の低下、肥満（効果が摂食量の抑制である）、睡眠障害（特に、短いレム持続時間）、オピオイドによる呼吸抑制、依存症ならびにその任意の組合せがある。
【００３２】
特に、５ＨＴ１Ａ活性化によって臨床的転帰の改善がみられる疾患として、嘔気（予期嘔気および急性嘔気の両方）および嘔吐（制吐および抗嘔気）、不安および任意のタイプの情動障害、主としてうつ病（大うつ病、軽症うつ病および双極性疾患を含む）ならびにその任意の組合せがある。
【００３３】
したがって、本明細書で「５ＨＴ１Ａ受容体に関連する病態、症状または疾患」と言う場合、高血圧症、不安、嘔吐および嘔気、疼痛、統合失調症、パーキンソン病、認知障害、性衝動および性機能の低下、肥満（効果が摂食量の抑制である）、睡眠障害（特に、短いレム持続時間）、オピオイドによる呼吸抑制、依存症、嘔気（予期嘔気および急性嘔気の両方）および嘔吐（制吐および抗嘔気）、不安および任意のタイプの情動障害、主としてうつ病（大うつ病、軽症うつ病および双極性疾患を含む）ならびにその任意の組合せがこれに含まれることを理解するべきである。
【００３４】
別の態様では、本発明は、嘔気（予期嘔気および急性嘔気の両方）、不安および任意のタイプの情動障害、主としてうつ病（大うつ病、軽症うつ病および双極性疾患を含む）から選択される疾患を治療する方法であって、このような治療を必要とする対象に有効量のＣＢＤＡ−ＭＥを投与することを含む、方法に関する。
【００３５】
また別の態様では、本発明は、腎機能異常に関連する少なくとも１つの疾患、病態、症状または障害の治療に使用する、本明細書で上記および下記に開示される化合物を提供する。本発明はさらに、必要とする患者の腎機能異常に関連する少なくとも１つの疾患、病態、症状または障害を治療する方法であって、前記患者に少なくとも１つの本発明の化合物を投与することを含む、方法を提供する。
【００３６】
本願において「腎機能異常」と言う場合、それには腎機能の（定性的または定量的に）任意のタイプの低下または不全が含まれることを理解するべきであり、それは急性または慢性のものであり得る。このような腎機能異常は、傷害、疾患、遺伝的素因などを含めた任意の理由によって引き起こされるものであり得る。急性腎機能異常の原因としては、特に限定されないが、低血圧、尿路閉塞、投薬、筋肉分解、溶血性尿毒症症候群およびその任意の組合せが挙げられる。慢性腎機能異常のほかの原因としては、特に限定されないが、糖尿病、高血圧、ネフローゼ症候群、多発性嚢胞腎およびその任意の組合せが挙げられる。
【００３７】
いくつかの実施形態では、このような腎機能異常に関連する疾患、病態、症状および障害としては、特に限定されないが、糖尿病性腎症、慢性および急性腎傷害、慢性および急性腎疾患、慢性腎臓不全の急性増悪、肥満関連腎損傷およびその任意の組合せが挙げられる。
【００３８】
腎機能異常に関連する病態および症状としては、特に限定されないが、血中尿素高値、嘔吐、下痢、嘔気、体重減少、夜間排尿、排尿の頻度および量の変化、尿中血液、排尿時の圧迫または排尿困難、血中リン酸塩の蓄積、そう痒、骨損傷、骨折部の偽関節、筋痙攣、血中カリウムの蓄積、心リズム異常、筋肉麻痺、腎臓が余分な体液を除去する機能の低下、肢、足首、足、顔面または手の腫脹、息切れ、多発性嚢胞腎、液体の詰まった大型の腎嚢胞、背中または体側の疼痛、エリスロポエチン産生量の低下、赤血球産生量の低下、貧血、泡状の尿または泡の多い尿、手、足、腹部または顔面の腫脹、食欲低下、血中および尿中タンパク質の過剰、高用量ペニシリン投与時の発作ならびにその任意の組合せが挙げられる。
【００３９】
本発明は、薬学的に許容される補助剤および任意選択で他の治療剤と混合した本発明の化合物を含む、医薬組成物にも関する。補助剤は、組成物の他の成分と適合性があり、その被投与者に対して有害でないという意味で「許容される」ものでなければならない。
【００４０】
医薬組成物としては、経口投与、経直腸投与、経鼻投与、局所投与（経皮投与、頬側投与および舌下投与を含む）、経膣投与または非経口投与（皮下投与、筋肉内投与、静脈内投与および真皮内投与を含む）投与あるいは埋植物による投与に適した医薬組成物が挙げられる。組成物は、薬学分野で周知の任意の方法によって調製され得る。
【００４１】
このような方法は、本発明に使用する化合物またはその組合せを任意の補助剤と組み合わせる段階を含む。補助成分（１つまたは複数）とも呼ばれる補助剤（１つまたは複数）としては、当該技術分野で慣例的なもの、例えば担体、充填剤、結合剤、希釈剤、崩壊剤、滑沢剤、着色剤、香味剤、抗酸化剤および湿潤剤などが挙げられる。
【００４２】
経口投与に適した医薬組成物は、丸剤、錠剤、糖衣錠剤もしくはカプセル剤などの個別の投与単位として、または粉末もしくは顆粒などとして、または溶液もしくは懸濁液として提供し得る。有効成分をボーラスまたはペーストとして提供してもよい。組成物をさらに、経直腸投与に合わせて坐剤または浣腸剤に加工することができる。
【００４３】
本発明はさらに、本明細書で上に記載した医薬組成物と、本明細書で上に記載した用途のための組成物の使用に関する指示書を含めた包装材料とを組み合わせて含む。
【００４４】
非経口投与には、適切な組成物としては、水性および非水性の無菌注射が挙げられる。組成物は、単位用量または複数用量容器、例えば密閉したバイアルおよびアンプルに入れて提供してよく、使用前に無菌液体担体、例えば水の添加のみを必要とする凍結乾燥条件で保管してよい。経皮投与には、例えば、ゲル剤、貼付剤またはスプレー剤が考えられる。例えば経鼻吸入による経肺投与に適した組成物または製剤としては、定量加圧式のエアロゾル、噴霧器または吸入器によって発生させ得る微細な粒子またはミストが挙げられる。
【００４５】
組成物の投与に関する正確な用量およびレジメンは、得るべき治療効果または栄養効果に必然的に左右され、具体的な処方、投与経路ならびに組成物を投与するべき個々の対象の年齢および状態によって異なり得る。
【００４６】
本発明はさらに、５−ＨＴ１Ａ受容体に関連する病態、疾患または症状を治療する方法を提供し、前記方法は、必要とする患者に本明細書または上に開示される少なくとも１つの化合物（式（Ｉ）、（ＩＩ）の化合物など）を投与することを含む。
【００４７】
本発明はさらに、嘔気、嘔吐、痙攣およびその任意の組合せから選択される病態、疾患または症状を治療する方法を提供し、前記方法は、必要とする患者に本明細書または上に開示される少なくとも１つの化合物（式（Ｉ）、（ＩＩ）の化合物など）を投与することを含む。
【００４８】
本発明はさらに、うつ病に関連する病態、疾患または症状を治療する方法を提供し、前記方法は、必要とする患者に本明細書または上に開示される少なくとも１つの化合物（式（Ｉ）、（ＩＩ）の化合物など）を投与することを含む。
【００４９】
本発明はさらに、不安、ストレス、うつ病、統合失調症、パニック、離脱症候群、自己免疫疾患、炎症、梗塞サイズの縮小、脳卒中の血流増大、肥満、メタボリック症候群、網膜症、嘔気、心筋、肝臓、腎臓虚血性／再灌流傷害、神経損傷、ハンチントン病、アルツハイマー病、脳梗塞、肝性脳症、外傷性脳損傷、脳虚血、脊髄損傷、記憶救済効果、癌、血管新生、癲癇、痙攣、神経因性疼痛、気道閉塞、強迫行動、認知障害、性衝動および性機能の低下、睡眠障害、オピオイドによる呼吸抑制、依存症ならびにその任意の組合せから選択される病態、疾患または症状を治療する方法を提供し、前記方法は、必要とする患者に本明細書または上に開示される少なくとも１つの化合物（式（Ｉ）、（ＩＩ）の化合物など）を投与することを含む。
【００５０】
本発明はさらに、腎機能異常に関連する少なくとも１つの疾患、病態、症状または障害を治療する方法を提供し、前記方法は、必要とする患者に本明細書または上に開示される少なくとも１つの化合物（式（Ｉ）、（ＩＩ）の化合物など）を投与することを含む。
【００５１】
本明細書で使用される「疾患、障害、病態または症状を治療すること」という用語は、疾患、障害またはその症状の進行を遅らせる、または逆転させることを指す。疾患または障害を治療することには、疾患の症状を治療することおよび／または症状を軽減することが含まれる。
【００５２】
本発明と見なされる主題については、本明細書の最後の部分に具体的に挙げ、明確に特許請求する。ただし、本発明は、その機構および実施方法の両方ならびにその目的、特徴および利点に関して、以下の詳細な説明を参照し、添付図面とともに読むことによって最大限理解されよう。
【図面の簡単な説明】
【００５３】
【図１】図１Ａ−図１Ｅ。８−ＯＨ−ＤＰＡＴによる［３５Ｓ］−ＧＴＰγＳとヒト５−ＨＴ１Ａ受容体が安定にトランスフェクトされたＣＨＯ細胞から得た膜との結合の刺激に対するＣＢＤＡ（０．０１ｎＭ、０．１ｎＭ、１．０ｎＭ、１０ｎＭまたは１００ｎＭ）の効果を示す図である。記号は平均値±ＳＥＭ（ｎ＝６）を表す。ＣＢＤＡの存在下またはその溶媒（ＶＥＨ）であるＤＭＳＯ単独の存在下で求めた８−ＯＨ−ＤＰＡＴの平均Ｅｍａｘ値および平均ＥＣ５０値をその値の９５％信頼限界とともに表１に挙げる。
【図２】図２Ａ−図２Ｆ。８−ＯＨ−ＤＰＡＴによる［３５Ｓ］−ＧＴＰγＳとヒト５−ＨＴ１Ａ受容体が安定にトランスフェクトされたＣＨＯ細胞から得た膜との結合の刺激に対するＨＵ−５８０（０．００１ｎＭ、０．０１ｎＭ、０．１ｎＭ、１．０ｎＭ、１０ｎＭまたは１００ｎＭ）の効果を示す図である。記号は平均値±ＳＥＭ（ｎ＝６）を表す。ＨＵ−５８０の存在下またはその溶媒（ＶＥＨ）であるＤＭＳＯ単独の存在下で求めた８−ＯＨ−ＤＰＡＴの平均Ｅｍａｘ値および平均ＥＣ５０値をその値の９５％信頼限界とともに表２に挙げる。
【図３】様々な用量のＣＢＤＡ（１グループ当たりｎ＝８）もしくはＨＵ−５８０（１グループ当たりｎ＝８）または溶媒単独（ＶＥＨ；ｎ＝８）で前処置したラットにＬｉＣｌと組み合わせたサッカリン溶液によって誘発された条件付けゲーピングの平均回数を示す図である。追加のグループには、０．１ｍｇ・ｋｇ−１ＨＵ−５８０（ｎ＝６）またはＶＥＨ（ｎ＝８）の１５分前にＷＡＹ１００６３５（０．１ｍｇ・ｋｇ−１）による前処置を実施した。結果は平均±ＳＥＭで示されており、＊Ｐ＜０．０５は、ＣＢＤＡまたはＨＵ−５８０に対する反応の平均のうちＶＥＨに対する反応の平均と有意な差がみられたものを示している。
【図４Ａ】予期嘔気試験の４５分前にｉ．ｐ．投与したＣＢＤＡもしくはＨＵ−５８０（０．０１μｇ・ｋｇ−１、０．１μｇ・ｋｇ−１）または溶媒（ＶＥＨ）（１グループ当たりｎ＝６）の効果を示す図である。追加のグループには、０．１ｍｇ・ｋｇ−１ＨＵ−５８０（ｎ＝８）またはＶＥＨ（ｎ＝８）の１５分前にＷＡＹ１００６３５（０．１ｍｇ・ｋｇ−１）による前処置を実施した。予期嘔気試験試行中に条件付けゲーピング反応の平均回数を測定した。各バーは平均±ＳＥＭを表す。＊Ｐ＜０．０５はＶＥＨで処置した対照動物との有意差を示す。
【図４Ｂ】予期嘔気試験の後に実施した活動試験で平均移動距離（ｃｍ）を測定したことを示す図である。各バーは平均±ＳＥＭを表す。
【図５】無足ショック（Ｎｏ−ＦＳ）またはＦＳに曝露してから２４時間後にラットが明箱に滞在した時間の平均値を示す図である。５分間の明暗箱エマージェンス試験（ｌｉｇｈｔ−ｄａｒｋ  ｂｏｘ  ｅｍｅｒｇｅｎｃｅ  ｔｅｓｔ）の４５分前、全ラットに溶媒（ＶＥＨ；ｎ＝９または１２）、０．０１μｇ・ｋｇ−１ＣＢＤＡ（ｎ＝８）または０．０１μｇ・ｋｇ−１ＨＵ−５８０（ｎ＝８）をｉ．ｐ．注射した。追加のグループには、ＶＥＨ（ｎ＝７または８）または０．０１μｇ・ｋｇ−１ＨＵ−５８０（ｎ＝８）の１５分前に０．１ｍｇ・ｋｇ−１ＷＡＹ１００６３５を注射した。各バーは平均±ＳＥＭを表す。＊Ｐ＜０．０５は、ＦＳストレス群とＮｏ  ＦＳストレス群との間の有意差を示す。
【発明を実施するための形態】
【００５４】
図示を簡潔かつ明確にするため、図面に示される要素が必ずしも縮尺通りに描かれているわけではないことが理解されよう。例えば、明確にするため、一部の要素の寸法が他の要素よりも誇張されていることがある。さらに、適切であると考える場合、対応する要素または類似した要素を示すため、参照番号が複数の図面で繰り返されることがある。
【００５５】
（本発明の詳細な説明）
以下の詳細な説明では、本発明が十全に理解されるよう具体的詳細を多数記載する。ただし、当業者には、本発明がこれらの具体的詳細を用いなくても実施され得ることが理解されよう。他の例では、本発明が不明瞭にならないように周知の方法、手順および構成要素が詳細に記載されている。
【００５６】
合成
カンナビジオール酸（ＣＢＤＡ）の合成：
カンナビジオール（ＣＢＤ、３１４ｍｇ、１ｍｍｏｌ）と、マグネシウムメチルカルボナートのジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）２モル溶液（ＭＭＣ／２Ｍ、１．５ｍｌ、３ｍｍｏｌ）との混合物を１３０℃で３時間加熱する。次いで、反応物を０℃に冷却し、１０％塩酸で酸性化し、エーテルで抽出した。有機層を生理食塩水で洗浄し、乾燥剤の硫酸マグネシウム（ＭｇＳＯ４）で乾燥させた後、蒸発させる。次いで、粗化合物をカラムクロマトグラフィー（２０％エーテル−石油エーテル）により清浄化する。
【００５７】
カンナビジオール酸メチルエステル（ＨＵ−５８０）の合成：
カンナビジオール酸（ＣＢＤＡ）（１７５ｍｇ，０．４８８ｍｍｏｌ）をジクロロメタン（ＣＨ２Ｃｌ２）２．５ｍｌに溶かした溶液に、メタノール（ＣＨ３ＯＨ、０．４８８ｍｍｏｌ）０．０２ｍｌおよび４−ピロリジノピリジン（０．０４８ｍｍｏｌ）７．２ｍｇを加える。反応物を室温で５分間攪拌した後、カップリング剤のＮ，Ｎ’−ジシクロヘキシルカルボジイミド（ＤＣＣ）（１２１ｍｇ、０．５８５ｍｍｏｌ）を加え、一晩攪拌する。次いで、溶媒を蒸発させ、粗混合物を５％塩酸で酸性化し、ジクロロメタン（ＣＨ２Ｃｌ２）で抽出した。有機層を飽和炭酸水素ナトリウム（ＮａＨＣＯ３）水溶液で洗浄し、乾燥剤の硫酸マグネシウム（ＭｇＳＯ４）で乾燥させた後、蒸発させる。次いで、粗化合物をカラムクロマトグラフィー（２％エーテル−石油エーテル）により清浄化する。
【００５８】
Ｂｒｕｋｅｒ  ＡＭＸ  ３００ＭＨｚ装置に重水素化ＤＭＳＯを用いて１Ｈ−ＮＭＲスペクトルを取得した。シリカゲル６０Ｆ２５４プレート（Ｍｅｒｃｋ社）で薄層クロマトグラフィー（ＴＬＣ）を実施した。シリカゲル６０Å（Ｍｅｒｃｋ社）でカラムクロマトグラフィーを実施した。ＵＶランプを２５４ｎｍで用いて化合物の位置を確認した。ＥＩ検出器および３０ｍメチルシリコーンカラムを備えたＨＰ  ＧＣＭＳ機器（Ｍｏｄｅｌ  ＧＣＤ  ＰＬＵＳ）でＧＣＭＳ分析を実施した。
【００５９】
１Ｈ  ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，（（ＣＤ３）２ＳＯ））δ６．１８（１Ｈ，ｓ，Ａｒ），５．０７（１Ｈ，ｓ），４．４４（１Ｈ，ｓ），４．４１（１Ｈ，ｓ），３．８２（３Ｈ，ｓ），３．３５（１Ｈ，ｍ），２．６６（１Ｈ，ｍ），２．４９（２Ｈ，ｔ），２．０９（１Ｈ，ｂ），１．９５（３Ｈ，ｓ），１．７１−１．０５（１２，ｍｓ），０．８６（３Ｈ，ｔ）。ＧＣ  ＭＳ＝３１４ｍ／ｚ。
【００６０】
生物学的方法
ｉｎ  ｖｉｔｒｏの手順
ＣＨＯ細胞。ヒト５−ＨＴ１Ａ受容体をコードするｃＤＮＡが安定にトランスフェクトされたＣＨＯ細胞（Ｋｅｉｔｈ  Ｐａｒｋｅｒ博士から贈与されたもの）を、Ｆｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ  ＵＫ社が供給するＧｉｂｃｏ（商標）Ｈａｍ’ｓ  Ｆ−１２  Ｎｕｔｒｉｅｎｔ  Ｍｉｘに、同じくＦｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ  ＵＫ社が供給する２ｍＭ  Ｌ−グルタミン、１０％ＦＢＳおよび０．６％ペニシリン−ストレプトマイシンならびにＳｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ  ＵＫ社が供給するＧ４１８［（２Ｒ，３Ｓ，４Ｒ，５Ｒ，６Ｓ）−５−アミノ−６−｛［（１Ｒ，２Ｓ，３Ｓ，４Ｒ，６Ｓ）−４，６−ジアミノ−３−｛［（２Ｒ，３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ）−３，５−ジヒドロキシ−５−メチル−４−（メチルアミノ）オキサン−２−イル］オキシ｝２−ヒドロキシ−シクロヘキシル］オキシ｝−２−［（１Ｒ）−１−ヒドロキシエチル］オキサン−３，４−ジオール；６００ｍｇ・ｍＬ−１］の二硫酸塩をともに添加したもので３７℃、５％ＣＯ２にて維持した。
【００６１】
［３５Ｓ］−ＧＴＰγＳ結合アッセイ。ヒト５−ＨＴ１ＡＣＨＯ細胞膜（１ウェル当たりタンパク質５０μｇ）、ＧＴＰγＳ結合緩衝剤（５０ｍＭトリス−ＨＣｌ；５０ｍＭトリス−塩基；５ｍＭ  ＭｇＣｌ２；１ｍＭ  ＥＤＴＡ；１００ｍＭ  ＮａＣｌ；１ｍＭ  ＤＴＴおよび０．１％ＢＳＡ）、０．１ｎＭ［３５Ｓ］−ＧＴＰγＳおよび３０μＭ  ＧＤＰを用い、最終体積５００μＬで各アッセイを実施した（Ｃａｓｃｉｏら，２０１０）。ウェルに［３５Ｓ］−ＧＴＰγＳを加えることにより結合を開始させた。３０μＭ  ＧＴＰγＳの存在下で非特異的結合を測定した。アッセイを３０℃で６０分間実施した（Ｃａｓｃｉｏら，２０１０）。Ｃａｓｃｉｏら（２０１０）によって既に記載されているトリス結合緩衝液を用いた急速真空ろ過法により反応を停止させ、液体シンチレーションスペクトロメトリーにより放射活性を定量化した。いずれの［３５Ｓ］−ＧＴＰγＳ結合アッセイにも０．１ｎＭ［３５Ｓ］−ＧＴＰγＳを使用し、３０ｍＭ  ＧＤＰおよび１ウェル当たり５μｇのタンパク質濃度。ＣＢＤＡ、ＨＵ−５８０、８−ＯＨ−ＤＰＡＴおよびＷＡＹ１００６３５をＤＭＳＯに溶かした１０ｍＭストック溶液として−２０℃で保管した。
【００６２】
ｉｎ  ｖｉｖｏの手順
動物。動物の処置はカナダ動物管理協会に従うものであり、プロトコルはグェルフ大学内の動物管理委員会による承認を受けたものである。動物試験についてはＡＲＲＩＶＥガイドラインに従って報告されている（Ｋｉｌｋｅｎｎｙら，２０１０；ＭｃＧｒａｔｈおよびＬｉｌｌｅｙ，２０１５）。Ｃｈａｒｌｅｓ  Ｒｉｖｅｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ（サンコンスタン、ケベック州）から入手した未処置雄Ｓｐｒａｇｕｅ−Ｄａｗｌｅｙラット計２００匹を全ｉｎ  ｖｉｖｏ試験に用いた。Ｈａｒｌａｎ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ社（ミシサガ、オンタリオ州）のｂｅｄ−ｏ−ｃｏｂ床敷、茶色の紙タオルおよびＡｎｄｅｒｓｏｎｓ社（モーミー、オハイオ州）のＣｒｉｎｋｌ’Ｎｅｓｔ（商標）を入れた乳白色のプラスチック製ホームケージ（４８×２６×２０ｃｍ）でラットを個別に飼育する（急性嘔気試験）か、ペアで飼育した［予期嘔気試験および明暗エマージェンス試験（ｌｉｇｈｔ−ｄａｒｋ  ｅｍｅｒｇｅｎｃｅ  ｓｔｕｄｙ）］。さらに、ホームケージ内では、ラットに長さ１４ｃｍ、直径１２ｃｍの白色の柔らかい紙容器を与えた。いずれのラットも周囲温度２１℃、１２時間／１２時間の明暗スケジュール（０７：００時に消灯）とし、飼料（Ｈｉｇｈｌａｎｄ  Ｒａｔ  Ｃｈｏｗ［８６４０］）および水を自由摂取させて維持した。急性嘔気および予期嘔気に関する試験では、条件付け当日のラットの体重は２６３〜３２９ｇの範囲であった。明暗エマージェンス試験（ｌｉｇｈｔ−ｄａｒｋ  ｅｍｅｒｇｅｎｃｅ  ｓｔｕｄｙ）では、試験当日のラットの体重は３２０〜３８７ｇの範囲であった。
【００６３】
装置。急性嘔気（ｉｎ  ｖｉｖｏ実験１）に関する試験では、ラットを味覚反応（ＧｒｉｌｌおよびＮｏｒｇｒｅｎ，１９７８）チャンバに入れ、チャンバのカニューレを注入ポンプ（Ｍｏｄｅｌ  ＫＤＳ１００、ＫＤ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ社、ホリストン、マサチューセッツ州、米国）に取り付けて液体を送達した。味覚反応チャンバは、透明ガラス張りのテーブルの上に乗った透明なＰｌｅｘｉｇｌａｓ製のもの（２２．５×２６×２０ｃｍ）とした。チャンバの下にある４５°の角度の鏡によりラットの腹側面を見やすくして、口腔顔面反応を観察した。条件付けチャンバは、暗室の２５Ｗの光源の隣に置いた。Ｆｉｒｅ  Ｗｉｒｅでコンピュータと接続したビデオカメラ（Ｓｏｎｙ  ＤＣＲ−ＨＣ４８、Ｈｅｎｒｙ’ｓ  Ｃａｍｅｒａｓ社、ウォータールー、オンタリオ州、カナダ）の焦点を鏡に合わせ、２分間の味覚反応試験中の各ラットの口腔顔面反応を記録するのに用いた。のちに、「Ｔｈｅ  Ｏｂｓｅｒｖｅｒ」（Ｎｏｌｄｕｓ  Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ社、リーズバーグ、バージニア州、米国）ソフトウェアを用いてビデオテープをスコア化した。
【００６４】
ｉｎ  ｖｉｖｏ実験２では、不透明な蓋があり、透明ガラス張りのテーブルの上に乗った不透明な黒色のＰｌｅｘｉｇｌａｓｓ製の特殊な条件付けチャンバ（２２．５×２６×２０ｃｍ）を用いて、状況誘発性条件付けゲーピング（予期嘔気のモデル）を測定した。チャンバの下にある４５°の角度の鏡によりラットの腹側面を見やすくして、口腔顔面反応を観察した。条件付けチャンバは、暗室の２５Ｗの光源の隣に置いた。Ｆｉｒｅ  Ｗｉｒｅでコンピュータと接続したビデオカメラの焦点を鏡に合わせて、５分間の試験試行中の各ラットの口腔顔面反応を記録した。のちに「Ｔｈｅ  Ｏｂｓｅｒｖｅｒ」ソフトウェアを用いてビデオテープをスコア化した。活動を評価するため、白色のＰｌｅｘｉｇｌａｓ製の活動チャンバ（６０×２５×２５ｃｍ）を用い、状況チャンバを使用する異なる部屋にある赤色光によって照らして、ＡＮチャンバとは異なる状況を生じさせた。各ラットの活動をビデオカメラにより撮影し、Ｅｔｈｏｖｉｓｉｏｎソフトウェアプログラム（Ｎｏｌｄｕｓ社、オランダ）を用いてコンピュータに送信して移動距離（ｃｍ）を測定した。
【００６５】
ｉｎ  ｖｉｖｏ実験３では、２つの区画、すなわち、不透明な黒色のプラスチックでできた小さい（幅２５ｃｍ×長さ２０．５ｃｍ×高さ２０．５ｃｍ）閉じた暗箱と、その扉（幅８ｃｍ×高さ１０ｃｍ）に続く大きく（長さ３９．５ｃｍ×幅２５ｃｍ）開けた光で照らす箱とに分けられた乳白色のプラスチック製の長方形の箱からなる明暗エマージェンス（ｌｉｇｈｔ−ｄａｒｋ  ｅｍｅｒｇｅｎｃｅ）装置を用いて、抗不安様反応を評価した。光によって照らされるオープンな箱を、その箱の中央部の１１５ｃｍ上方に位置する１つのランプ（６０Ｗ電球を備え、光チャンバ内では１８０ｌｕｘである）により照らした。明暗箱の上にビデオカメラを取り付け、５分間の試験で明箱の中に滞在する時間に関して、Ｅｔｈｏｖｉｓｉｏｎソフトウェア（Ｎｏｌｄｕｓ  Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ社、リーズバーグ、バージニア州、米国）によりビデオテープを解析した。足ショック（ＦＳ）セッションでは、ラットを防音ＭＥＤ  Ａｓｓｏｃｉａｔｅｓ恐怖条件付けチャンバ（セント・オールバンズ、バーモント州、米国）に入れた。６分間のＦＳセッションは、１分間隔で与える０．８ｍＡの足ショック６回からなるものとした。Ｂｌｕｅｔｔら（２０１４）によって記載されている通りに、０．５秒間の各ショックの前に３０秒間の聴覚トーン（９０Ｄｂ、５０００Ｈｚ）を流した。
【００６６】
ｉｎ  ｖｉｖｏの手順
ｉｎ  ｖｉｖｏ実験１：ＣＢＤＡおよびＨＵ−５８０の急性嘔気に対する用量依存性効果ならびにＨＵ−５８０の効果の５−ＨＴ１Ａ受容体介在。
Ｌｉｍｅｂｅｅｒら（２０１０）によって記載されている手順に従い、全ラットに口腔内カニューレを外科手術により留置した。外科手術当日、ラットにイソフルラン（導入にはＯ２中４〜５％、維持にはＯ２中１．５％）で麻酔する３０分前に抗生物質（Ｄｅｒａｐｉｎ：００ｍｇ・ｋｇ−１ｓ．ｃ．；Ｐｆｉｚｅｒ  Ａｎｉｍａｌ  Ｈｅａｌｔｈ、Ｐｆｉｚｅｒ  Ｃａｎａｄａ社、キルクラン、ケベック州、カナダ）を注射した。いずれの外科手術の前にも、後肢の引っ込め反射の消失によって示され、カナダ動物管理評議会によって定められている外科的な平坦な麻酔を導入し、必要に応じて調整した。麻酔が十分に導入された後、頸部背側の肩甲骨の高さで２ｃｍ２の皮膚区画を剃毛した。石鹸（Ｂａｃｔｉｓｔａｔ；Ｅｃｏｌａｂ社、セントポール、ミネソタ州、米国）で洗浄し、７０％イソプロピルアルコール、次いで７％Ｂｅｔａｄｉｎｅ溶液（Ｐｕｒｄｕｅ  Ｐｒｏｄｕｃｔｓ社、スタンフォード、コネチカット州、米国）で拭くことにより皮膚を調製した。次いで、各ラットに抗炎症／鎮痛薬のカルプロフェン（Ｒｉｍａｄｙｌ；Ｐｆｉｚｅｒ  Ｃａｎａｄａ社、キルクラン、ケベック州、カナダ）の５ｍｇ・ｋｇ−１注射（ｉ．ｐ．）を実施した。頸部の剃毛領域に１５ゲージ薄肉ステンレス鋼針を耳周辺の皮下に向けて挿入し、口腔内の第一大臼歯の裏側まで刺した。次いで、その針の中に長さ１０ｃｍ、内径０．８６ｍｍ、外径１．２７ｍｍのＩｎｔｒａ  Ｍｅｄｉｃ  ＰＥ９０チューブ（Ｃｌａｙ  Ａｄａｍｓ  Ｂｒａｎｄ；Ｂｅｃｔｏｎ  Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ  ａｎｄ  Ｃｏ．，Ｓｐａｒｋｓ社、メリーランド州、米国）を挿入した後、針を抜いた。穿孔部位にＢｅｔａｄｉｎｅ（１０％）を塗布し、カニューレを安定させる目的でチューブの露出端に弾力性のあるディスク（２ｃｍ２）を３枚被せて頸の後ろの皮膚まで引き寄せた。ヒートフランジを取り付けた口腔内開口部の裏側に固定したポリプロピレンメッシュ（２９７ミクロン；Ｓｍａｌｌ  Ｐａｒｔｓ社、ミラマー、フロリダ州、米国）製の６ｍｍのディスクによってカニューレを口腔内にしっかり固定した。次いで、ラットをホームケージに戻し、３日間にわたって毎日監視した。外科手術後の３日間、ラットの体重を測定し、カニューレに消毒洗口液を流して洗浄した。このとき、ラットの活動、発声、脱水、強直および眼球周辺のポルフィリン染色の有無も監視した。外科手術後第１日に、ラットにＲｉｍａｄｙｌの鎮痛／抗炎症注射（５ｍｇ・ｋｇ−１ｉ．ｐ．）も実施した。
【００６７】
外科手術後の監視の後、ラットに順応試行を実施し、この試行では、ラットを味覚反応チャンバに入れ、各ラットのカニューレを注入ポンプに取り付けた。順応の過程では、ラットの口腔内カニューレに水を１ｍＬ・分−１の速度で２分間注入した。順応試行の翌日、ラットに条件付け試行を実施し、この試行では、溶媒（ＶＥＨ）（ｎ＝８）、ＣＢＤＡ（０．０１μｇ・ｋｇ−１、０．１μｇ・ｋｇ−１、１μｇ・ｋｇ−１；１グループ当たりｎ＝８）またはＨＵ−５８０（０．０１μｇ・ｋｇ−１、０．１μｇ・ｋｇ−１、１μｇ・ｋｇ−１；１グループ当たりｎ＝８）の前処置注射を実施した。前処置注射の４５分後、ラットを個別にチャンバに入れ、０．１％サッカリン溶液を１ｍＬ・分−１の速度で２分間、ｐ．ｏ．で注入した。サッカリン注入後直ちに２０ｍＬ・ｋｇ−１の０．１５Ｍ  ＬｉＣｌを全ラットに注射し、ホームケージに戻した。７２時間後、薬物を使用せずにラットを試験した。ラットに再び０．１％サッカリン溶液を１ｍＬ・分−１の速度で２分間、ｐ．ｏ．で注入し、その間、チャンバの下にある４５°の角度の鏡から口腔顔面反応をビデオで記録した。次いで、ラットをホームケージに戻した。作用機序を明らかにするため、さらに２グループを追加した。このラットには、溶媒（ｎ＝８）または０．１μｇ・ｋｇ−１ＨＵ−５８０（ｎ＝６）を注射する１５分前にＷＡＹ１００６３５（０．１ｍｇ・ｋｇ−１）を注射した。のちに、実験条件を知らされていない観察者が「Ｔｈｅ  Ｏｂｓｅｒｖｅｒ」を用いてビデオテープのゲーピング行動（口および顎を大きく開け、下顎切歯が露出される行動）をスコア化した。
【００６８】
ｉｎ  ｖｉｖｏ実験２：ＣＢＤＡおよびＨＵ−５８０の予期嘔気に対する効果ならびにＨＵ−５８０の効果の５−ＨＴ１Ａ受容体介在。
予期嘔気を軽減する効力をＨＵ−５８０とＣＢＤＡとで比較するため、状況誘発性条件付けゲーピングパラダイムを用いた（例えば、Ｌｉｍｅｂｅｅｒら，２０１０；Ｒｏｃｋら，２０１４）。ラットに４回の条件付け試行を実施し、この試行では、特殊な状況と１２７ｍｇ・ｋｇ−１ＬｉＣｌとを組み合わせた。各試行では、ラットにＬｉＣｌを注射し、次いで、直ちに条件付けチャンバに３０分間入れた。この手順を条件付け試行の間に４８時間の間隔を設けて４回繰り返した。試験試行では、ラットを５つの治療群（１グループ当たりｎ＝６）、すなわち、ＶＥＨ、０．１μｇ・ｋｇ−１ＣＢＤＡ、０．１μｇ・ｋｇ−１ＨＵ−５８０、０．０１μｇ・ｋｇ−１ＣＢＤＡ、０．０１μｇ・ｋｇ−１ＨＵ−５８０のうちの１つに無作為に割り付けた。前処置注射を実施してから４５分後、ラットに生理食塩水を注射し（２０ｍＬ・ｋｇ−１ｉ．ｐ．）、個別に条件付け（状況）チャンバに５分間入れ、口腔顔面反応をビデオで記録した。ＨＵ−５８０の作用機序を検討するため、追加の２グループのラットに０．１ｍｇ・ｋｇ−１ＷＡＹ−ＶＥＨ（ｎ＝８）、０．１ｍｇ・ｋｇ−１ＷＡＹ−０．１μｇ・ｋｇ−１ＨＵ−５８０（ｎ＝８）を投与した。ＨＵ−３０８またはＶＥＨの１５分前にＶＥＨまたはＷＡＹ１００６３５を投与した。実験条件を知らされていない観察者が「Ｔｈｅ  Ｏｂｓｅｒｖｅｒ」を用いて試験試行のビデオテープのゲーピング行動（口および顎を大きく開け、下顎切歯が露出される行動）をスコア化した。試験試行後直ちに、ラットを活動チャンバ（白色のＰｌｅｘｉｇｌａｓ、６０×２５×２５ｃｍ、赤色光を照射）に１５分間入れ、自発運動をビデオカメラにより撮影し、ＥｔｈｏＶｉｓｉｏｎソフトウェア（Ｎｏｌｄｕｓ社、オランダ）を用いてコンピュータに送信して移動距離（ｃｍ）を測定した。
【００６９】
ｉｎ  ｖｉｖｏ実験３：ＣＢＤＡおよびＨＵ−５８０の不安様反応に対する効果ならびにＨＵ−５８０の効果の５−ＨＴ１Ａ受容体介在。
足ショックストレスまたは無足ショック（Ｎｏ  ＦＳ）ストレスの後に、明暗箱エマージェンス試験（ｌｉｇｈｔ−ｄａｒｋ  ｂｏｘ  ｅｍｅｒｇｅｎｃｅ  ｔｅｓｔ）を用いてＣＢＤＡおよびＨＵ−５８０の不安様反応に対する効果を評価した。Ｂｌｕｅｔｔら（２０１４）は、この試験では足ショックストレスの２４時間後に不安様反応が大幅に増強されることを明らかにしている。Ｒｏｃｋら（２０１７）も、ＣＢＤＡが（０．１μｇ・ｋｇ−１ｉ．ｐ．の低用量で）５−ＨＴ１Ａ依存性の作用機序によって足ショックストレス後の不安様反応の増強を抑制することを明らかにしている。このため、さらに低い用量（０．０１μｇ・ｋｇ−１、ｉ．ｐ）のＣＢＤＡとＨＵ−５０８について相対効果を比較した。ＨＵ−５８０がこのような低用量で抗不安作用を示すことがわかったため、次に、５ＨＴ１Ａ受容体アンタゴニストのＷＡＹ１００６３５によってＨＵ−５８０による不安様反応の抑制を逆転させることができるかどうかを評価した。
【００７０】
実験操作前の１３日間、全ラットを施設に馴化させ、１３日間のうちの８日間、体重測定およびハンドリングを実施した。この馴化の後、ラットに単回のＦＳストレスセッションまたはＮｏ  ＦＳストレスセッションを実施し、２４時間後に明暗エマージェンス試験（ｌｉｇｈｔ−ｄａｒｋ  ｅｍｅｒｇｅｎｃｅ  ｔｅｓｔ）（Ｂｌｕｅｔｔら，２０１４）を実施した。ＦＳ群では、ラットを防音ＭＥＤ  Ａｓｓｏｃｉａｔｅｓ恐怖条件付けチャンバ（セント・オールバンズ、バーモント州、米国）に入れた。６分間のＦＳセッションは、１分間隔で与える０．８ｍＡのＦＳ６回からなるものとした。Ｂｌｕｅｔｔら（２０１４）によって記載されている通りに、０．５秒間の各ショックの前に３０秒間の聴覚トーン（９０Ｄｂ、５０００Ｈｚ）を流した。Ｎｏ  ＦＳストレス群は、このセッションの間、ホームケージに入れておいた。
【００７１】
２４時間後、ラットに明暗エマージェンス試験（ｌｉｇｈｔ−ｄａｒｋ  ｅｍｅｒｇｅｎｃｅ  ｔｅｓｔ）を実施した。ＦＳ群およびＮｏ  ＦＳ群のラットをＶＥＨ、０．０１μｇ・ｋｇ−１ＣＢＤＡまたは０．０１μｇ・ｋｇ−１ＨＵ−５８０で前処置した。４５分後、ラットを明暗箱の暗チャンバに入れ、５分間の試験でその運動を追跡した。ＨＵ−５８０の効果が５−ＨＴ１Ａ受容体介在性である可能性を検討するため、追加のグループに、ＶＥＨまたは０．０１μｇ・ｋｇ−１ＨＵ−５８０の１５分前にＷＡＹ１００６３５を注射した。明箱に滞在した秒数を測定した。グループは以下の通りとした：Ｎｏ  ＦＳ−ＶＥＨ（ｎ＝９）、ＦＳ−ＶＥＨ（ｎ＝１２）、Ｎｏ  ＦＳ−０．０１μｇ・ｋｇ−１ＣＢＤＡ（ｎ＝８）、ＦＳ−０．０１μｇ・ｋｇ−１ＣＢＤＡ（ｎ＝８）、Ｎｏ  ＦＳ−０．０１  ＨＵ−５８０（ｎ＝８）、ＦＳ−０．０１  ＨＵ−５８０（ｎ＝８）、Ｎｏ  ＦＳ−０．１μｇ・ｋｇ−１ＷＡＹ−ＶＥＨ（ｎ＝８）、ＦＳ−０．１μｇ・ｋｇ−１ＷＡＹ−ＶＥＨ（ｎ＝７）、Ｎｏ  ＦＳ−０．１μｇ・ｋｇ−１ＷＡＹ−０．０１μｇ・ｋｇ−１ＨＵ５８０（ｎ＝８）、ＦＳ−０．１μｇ・ｋｇ−１ＷＡＹ−０．０１μｇ・ｋｇ−１ＨＵ−５８０（ｎ＝８）。
【００７２】
ｉｎ  ｖｉｔｒｏデータおよびｉｎ  ｖｉｖｏデータの解析
アゴニスト刺激値（アゴニストの存在下で得た値）から基底結合値（アゴニストの不在下で得た値）を減じることによって正味のアゴニスト刺激［３５Ｓ］−ＧＴＰγＳ結合値を算出した（Ｃａｓｃｉｏら，２０１０）。値を平均値で表し、ばらつきをＳＥＭまたは９５％信頼限界として表す。Ｓ字状濃度反応曲線の方程式を用いた非線形回帰分析（ＧｒａｐｈＰａｄ  Ｐｒｉｓｍ）により平均ＥＣ５０値および平均最大効果値（Ｅｍａｘ）ならびにこれらの値のＳＥＭまたは９５％信頼限界を算出した。Ｐ値＜０．０５を有意であるとした。データおよび統計解析は、薬理学の実験計画および解析に関する推奨事項（Ｃｕｒｔｉｓら，２０１５）に従うものである。
【００７３】
急性嘔気実験（ｉｎ  ｖｉｖｏ実験１）で得たデータの解析では、２分間の試験でのゲーピングの平均回数に関して一因子ＡＮＯＶＡを実施し、それに続く対比較を最小有意差（ＬＳＤ）事後検定で評価した。予期嘔気（ＡＮ）実験（ｉｎ  ｖｉｖｏ実験２）で得たデータの解析では、５分間のＡＮ試験でのゲーピングの平均回数および活動試験での総移動距離に関して一因子ＡＮＯＶＡを実施し、それに続く対比較をＬＳＤ事後検定で評価した。不安様反応実験（ｉｎ  ｖｉｖｏ実験３）で得たデータの解析では、明暗エマージェンス試験（ｌｉｇｈｔ−ｄａｒｋ  ｅｍｅｒｇｅｎｃｅ  ｔｅｓｔ）中に明箱に滞在した時間数をＦＳストレス／Ｎｏ  ＦＳストレスならびに各前処置およびμｇ・ｋｇ−１ｉ．ｐ．投与条件（ＶＥＨ、０．０１μｇ・ｋｇ−１ＣＢＤＡ、０．０１μｇ・ｋｇ−１ＨＵ−５８０、ＷＡＹ−ＶＥＨまたはＷＡＹ−ＨＵ−５８０）の因子を用いた２×５因子間ＡＮＯＶＡに加えた。それに続く独立ｔ検定を実施して相互作用を検討した。有意レベルをＰ＜０．０５に設定した。
【００７４】
ｉｎ  ｖｉｔｒｏで使用した薬物および材料。８−ＯＨ−ＤＰＡＴおよびＷＡＹ１００６３５はＢｉｏ−Ｔｅｃｈｎｅ社（アビンドン、イギリス）によって供給されたものである。［３５Ｓ］−ＧＴＰγＳ（１２５０  Ｃｉ  ｍｍｏｌ−１）はＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ  Ｌｉｆｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ社（ボストン、マサチューセッツ州、米国）から、ＧＴＰγＳ、ＧＤＰおよびＤＭＳＯはＳｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ  ＵＫ社から購入したものである。ＣＢＤＡおよびそのメチルエステル（ＨＵ−５８０）はＲａｐｈａｅｌ  Ｍｅｃｈｏｕｌａｍにより提供されたものである。
【００７５】
ｉｎ  ｖｉｖｏで使用した薬物。塩化リチウム（ＬｉＣｌ；Ｓｉｇｍａ  Ａｌｄｒｉｃｈ社）を滅菌水を含む０．１５Ｍ溶液として調製し、体積２０ｍＬ・ｋｇ−１（用量１２７．２ｍｇ・ｋｇ−１）でｉ．ｐ．投与した。ＣＢＤＡおよびそのメチルエステル（ＨＵ−５８０）は、Ｒａｐｈａｅｌ  Ｍｅｃｈｏｕｌａｍにより提供されたものであり、これをガラス製の目盛付きチューブ内でエタノール１ｍＬに溶かし、その溶液にＴｗｅｅｎ８０（Ｓｉｇｍａ社）１ｍＬを加え、窒素流でエタノールを蒸発させた後、生理食塩水９ｍＬを加えた（最終的なＴｗｅｅｎ８０：生理食塩水比＝１：９）。ＣＢＤＡまたはＨＵ−５８０のうちのいずれかを０．０１μｇ・ｍＬ−１、０．１μｇ・ｍＬ−１または１．０μｇ・ｍＬ−１の濃度で含有するストック溶液をそれぞれ用いて、ラットにＣＢＤＡまたはＨＵ−５８０を体積１ｍＬ・ｋｇ−１、用量０．０１μｇ・ｋｇ−１、０．１μｇ・ｋｇ−１または１．０μｇ・ｋｇ−１でｉ．ｐ．投与した。ＷＡＹ１００６３５（Ｓｉｇｍａ社、セントルイス、ミズーリ州、米国）を０．１ｍｇ・ｍＬ−１の濃度で生理食塩水に溶かし、用量０．１ｍｇ・ｋｇ−１（１ｍＬ・ｋｇ−１）でラットにｉ．ｐ．投与した。
【００７６】
結果
ＣＢＤＡおよびＨＵ−５８０は５−ＨＴ１Ａ受容体アゴニストがｉｎ  ｖｉｔｒｏでの［３５Ｓ］ＧＴＰγＳとヒト５−ＨＴ１Ａ受容体との結合を刺激する能力を増強する
ラット脳幹膜を用いた［３５Ｓ］ＧＴＰγＳ結合実験で既に明らかにされている（Ｂｏｌｏｇｎｉｎｉら，２０１３）通り、ＣＢＤＡは、選択的５−ＨＴ１Ａ受容体アゴニストの８−ＯＨ−ＤＰＡＴによって引き起こされる、［３５Ｓ］−ＧＴＰγＳと、ヒト５−ＨＴ１Ａ受容体が安定にトランスフェクトされたＣＨＯ細胞から得た膜との結合の刺激を増強した（図１Ａ〜１Ｅおよび表１）。マイクロモル未満の範囲のＣＢＤＡ濃度では、０．１ｎＭ、１．０ｎＭおよび１０ｎＭで８−ＯＨ−ＤＰＡＴの平均Ｅｍａｘの有意な増大がみられたが、０．０１ｎＭおよび１００ｎＭではみられなかった。これらの平均Ｅｍａｘの増大のうち、８−ＯＨ−ＤＰＡＴの平均ＥＣ５０の有意な変化を伴うものはなかった（Ｐ＞０．０５；表１）。ＣＢＤＡのメチルエステルであるＨＵ−５８０は、８−ＯＨ−ＤＰＡＴが引き起こす［３５Ｓ］−ＧＴＰγＳとヒト５−ＨＴ１Ａ受容体発現ＣＨＯ細胞膜との結合の刺激を増強する効力がＣＢＤＡよりはるかに高かった（図２Ａ〜２Ｆおよび表２）。このように、ＨＵ−５８０では、（ＣＢＤＡと同じく）０．１ｎＭ、１．０ｎＭおよび１０ｎＭばかりでなく（ＣＢＤＡとは異なり）０．０１ｎＭでも８−ＯＨ−ＤＰＡＴの平均Ｅｍａｘの有意な増大がみられた。ＨＵ−５８０は、（ＣＢＤＡと同じく）１００ｎＭでも０．００１ｎＭでも８−ＯＨ−ＤＰＡＴの平均Ｅｍａｘを増大させることはなく、検討したいずれの濃度でも８−ＯＨ−ＤＰＡＴの平均ＥＣ５０に有意な影響を及ぼすことはなかった（表２）。ＨＵ−５８０そのものを０．０１ｎＭ、０．１ｎＭ、１ｎＭ、１０ｎＭまたは１００ｎＭの濃度で投与した場合、これらのいずれの濃度でも［３５Ｓ］−ＧＴＰγＳとヒト５−ＨＴ１Ａ受容体トランスフェクトＣＨＯ細胞から得た膜との結合に対して検出可能な効果がみられなかったことからわかるように、５−ＨＴ１Ａ受容体のアゴニストとしても逆アゴニストとしても振る舞うことはなかった（ｎ＝６；データ不掲載）。
【００７７】
【表１】
2020524679.tif 000007
【００７８】
アスタリスクはそれぞれ、特定濃度のＣＢＤＡの存在下で求めた８−ＯＨ−ＤＰＡＴの平均Ｅｍａｘ値と、同じ実験でＣＢＤＡの代わりに溶媒（ＤＭＳＯ）の存在下で求めた上の行に示される８−ＯＨ−ＤＰＡＴの平均Ｅｍａｘ値との間の有意差（＊Ｐ＜０．０５）を表す。有意差は、重なりのない９５％信頼限界によって示されている。
【００７９】
【表２】
2020524679.tif 000008
【００８０】
アスタリスクはそれぞれ、特定濃度のＨＵ−５８０の存在下で求めた８−ＯＨ−ＤＰＡＴの平均Ｅｍａｘ値と、同じ実験でＨＵ−５８０の代わりに溶媒（ＤＭＳＯ）の存在下で求めた上の行に示される８−ＯＨ−ＤＰＡＴの平均Ｅｍａｘ値との間の有意差（＊Ｐ＜０．０５）を表す。有意差は、重なりのない９５％信頼限界によって示されている。
【００８１】
ｉｎ  ｖｉｖｏ実験１：ＣＢＤＡおよびＨＵ−５８０の急性嘔気に対する用量依存性効果ならびにＨＵ−５８０の効果の５−ＨＴ１Ａ受容体介在
ＨＵ−５８０はラットゲーピングモデルによる評価で、０．１μｇ・ｋｇ−１の用量では急性嘔気の軽減にＣＢＤＡよりも高い効果を示したが、０．０１μｇ・ｋｇ−１および１μｇ・ｋｇ−１ではそうではなかった。ＨＵ−５８０の急性嘔気に対する抑制効果（０．１μｇ・ｋｇ−１）はＷＡＹ１００６３５によって遮断された。一因子ＡＮＯＶＡでは有意なグループ効果Ｆ（８，６１）＝３．９；Ｐ＜０．０５が明らかになった。図３に、様々な前処置群にみられたゲーピングの平均回数を示す。のちのＬＳＤ事後比較検定では、両化合物とも用量１μｇ・ｋｇ−１で溶媒よりもＬｉＣｌ誘発性ゲーピング反応が減少する（Ｐ＜０．０５）ことが明らかになり、本発明者らのこれまでの知見（Ｌｉｍｅｂｅｅｒら，２０１０；ＲｏｃｋおよびＰａｒｋｅｒ，２０１３）が再現された。しかし、ＨＵ−５８０は、０．１−μｇ・ｋｇ−１の低用量、すなわち、ＣＢＤＡによる嘔気様行動の減少の閾値下でも、ＬｉＣｌ誘発性条件付けゲーピング行動が溶媒よりも減少した（Ｐ＜０．０５）。ＨＵ−５８０（０．１μｇ・ｋｇ−１）で前処置したラットもＷＡＹ−０．１μｇ・ｋｇ−１ＨＵ−５８０群よりゲーピングが有意に少なく（Ｐ＜０．０５）、５−ＨＴ１Ａ受容体介在性が示された。
【００８２】
ｉｎ  ｖｉｖｏ実験２：ＣＢＤＡおよびＨＵ−５８０の予期嘔気に対する効果ならびにＨＵ−５８０の効果の５−ＨＴ１Ａ受容体介在
ＨＵ−５８０は、状況誘発性条件付けゲーピングモデルによる評価で、０．０１μｇ・ｋｇ−１の極めて低い用量では予期嘔気の軽減にＣＢＤＡよりも高い効果を示したが、０．１μｇ・ｋｇ−１ではそうではなかった。ＨＵ−５８０（０．１μｇ・ｋｇ−１）の抑制効果は、ＷＡＹ１００６３５で前処置することにより遮断された。一因子ＡＮＯＶＡでは有意なグループ効果Ｆ（６，３９）＝８．７；Ｐ＜０．０５が明らかになった。図４Ａに、みられたゲーピングの平均回数を示す。のちのＬＳＤ事後比較では、ＣＢＤＡおよびＨＵ−５８０ともに用量０．１μｇ・ｋｇ−１ではＶＥＨ対照よりも条件付けゲーピングが少ない（Ｐ値＜０．０５）が、用量０．０１μｇ・ｋｇ−１ではグループ間に差がみられ、ＨＵ−５８０群のゲーピングがＶＥＨ対照（Ｐ＜０．０５）および０．０１ＣＢＤＡ群（Ｐ＝０．０５）よりも有意に少ないことが明らかになった。ＨＵ−５８０（０．１μｇ・ｋｇ−１）で前処置したラットもＷＡＹ−０．１μｇ・ｋｇ−１ＨＵ−５８０群よりゲーピングが有意に少なく（Ｐ＜０．０５）、５−ＨＴ１Ａ受容体介在性が示された。自発運動試験の一因子ＡＮＯＶＡ（図４Ｂ）では、移動距離に対する有意な効果はみられず、Ｆ（６，３９）＝０．９、Ｐ＞０．０５であった。
【００８３】
ｉｎ  ｖｉｖｏ実験３：ＣＢＤＡおよびＨＵ−５８０の抗不安効果
図５に、明暗試験の２４時間前にＦＳまたはＮｏ  ＦＳを実施した様々な前処置群それぞれについて、ラットが明箱に滞在した平均秒数を示す。図からわかるように、ＦＳストレスにより、明箱に滞在する時間が減少するという不安様反応が大幅に増強された。０．０１μｇ・ｋｇ−１の低用量では、ＨＵ−５８０により、明箱に滞在する時間が減少するという不安様反応に対するＦＳの効果が逆転したが、ＣＢＤＡではそうではなかった。明箱に滞在した秒数に関する２×５  ＡＮＯＶＡでは、ＦＳストレスによる有意な主作用、Ｆ（１，８４）＝２５．６；Ｐ＜０．０５およびＦＳストレスと前処置の相互作用、Ｆ（４，８４）＝３．２；Ｐ＜０．０５が明らかになった。この相互作用を解析するため、続く独立ｔ検定では、ＶＥＨ（Ｐ＜０．０５）、０．０１μｇ・ｋｇ−１ＣＢＤＡ（Ｐ＜０．０５）、ＷＡＹ−ＶＥＨ（Ｐ＜０．０５）またはＷＡＹ−０．０１μｇ・ｋｇ−１ＨＵ−５８０（Ｐ＝０．０５）で前処置したラットはＮｏ  ＦＳストレス後よりもＦＳストレス後の方が明箱に滞在する時間が少ないが、０．０１μｇ・ｋｇ−１ＨＵ−５８０で前処置したラットにはこの不安様反応がみられないことがわかった。さらに、続く明箱に滞在した時間に関する一因子ＡＮＯＶＡにより、ＦＳ群間にはＮｏ  ＦＳ群とは異なり、前処置による有意な効果、Ｆ（４，３８）＝４．６；Ｐ＜０．０５が明らかになった。ＦＳ群間では、続くボンフェローニ検定により、０．０１μｇ・ｋｇ−１ＨＵ−５８０群のみがＶＥＨ群よりも明箱に滞在する時間が有意に長い（Ｐ＜０．０５）ことがわかった。
【００８４】
考察
得られた結果から、ＣＢＤＡが、ｉｎ  ｖｉｔｒｏで５−ＨＴ１Ａ受容体の直接アゴニストである８−ＯＨ−ＤＰＡＴによって５−ＨＴ１Ａ受容体活性化の明らかな増強をもたらすこと、およびラットにｉｎ  ｖｉｖｏで急性嘔気および予期嘔気の両方の５−ＨＴ１Ａ受容体介在性の軽減をもたらすことの両方に有意な効力を示すことが確認された。
【００８５】
新たなｉｎ  ｖｉｔｒｏのデータから、第一に、ＣＢＤＡがラット脳幹５−ＨＴ１Ａ受容体の活性化（Ｂｏｌｏｇｎｉｎｉら，２０１３）だけでなくヒト５−ＨＴ１Ａ受容体の活性化も増強し得ること、第二に、ＣＢＤＡがラット脳幹５−ＨＴ１Ａ受容体およびヒト５−ＨＴ１Ａ受容体の両方に対し、マイクロモル未満の範囲で、釣鐘型の濃度反応曲線を示すこのような増強を引き起こすことがわかる。本明細書に記載されるｉｎ  ｖｉｔｒｏのデータから、ＣＢＤＡとそのメチルエステルであるＨＵ−５８０の薬理効果の間に重要な類似性があることもわかる。より具体的には、これらのデータから、ＨＵ−５８０が、［３５Ｓ］−ＧＴＰγＳ結合アッセイで８−ＯＨ−ＤＰＡＴによるヒト５−ＨＴ１Ａ受容体活性化の明らかな増強をもたらすＣＢＤＡの能力を共有していることを示す、説得力のある証拠が得られた。重要なのは、ＨＵ−５８０が、このような増強をＣＢＤＡよりも高い効力で、かつはるかに広範囲にわたる釣鐘型の濃度反応曲線でもたらすことである。このように、０．０１〜１０ｎＭの濃度のＨＵ−５８０によって、（表２）、また０．１〜１０ｎＭの濃度のＣＢＤＡによって（表１）、有意な増強が引き起こされた。一方、１ｎＭ、１０ｎＭおよび１００ｎＭの濃度では、ＨＵ−５８０がもたらす８−ＯＨ−ＤＰＡＴによる５−ＨＴ１Ａ受容体活性化の増強はＣＢＤＡよりもわずかに小さく、０．０１ｎＭおよび０．１ｎＭの濃度では、ＨＵ−５８０がもたらすこの活性化の増強はＣＢＤＡよりもわずかに大きいものであった（表１および２）。
【００８６】
［３５Ｓ］−ＧＴＰγＳと５−ＨＴ１Ａ受容体との結合の刺激に関する８−ＯＨ−ＤＰＡＴのＥｍａｘ値を有意に増大させたＣＢＤＡおよびＨＵ−５８０の濃度のうち、８−ＯＨ−ＤＰＡＴのＥＣ５０に有意な変化をもたらしたものはなかったことは注目に値する。（表１および２）。この観察結果は、ＣＢＤＡおよびＨＵ−５８０が８−ＯＨ−ＤＰＡＴによるこの受容体の活性化の正のアロステリックモジュレーターとして作用していたことを示すものであり、いくつかの正のアロステリックモジュレーターが実際、特定の受容体に対するアゴニストのＥｍａｘ値は増大させるが効力は増大させないことを示す証拠がある（Ｃｈｒｉｓｔｏｐｏｕｌｏｓら，２０１４）。ＣＢＤＡおよびＨＵ−５８０が、正のアロステリックモジュレーターとして５−ＨＴ１Ａ受容体上のアロステリック部位を標的とする可能性がある。本明細書で得られたＣＢＤＡおよびＨＵ−５８０に関するポジティブなｉｎ  ｖｉｔｒｏデータはいずれも、ヒト５−ＨＴ１Ａ受容体をトランスフェクトしたＣＨＯ細胞を用いて実施した実験から得られたものであることも注目に値する。
【００８７】
ｉｎ  ｖｉｖｏのデータから、ＨＵ−５８０とＣＢＤＡの薬理効果の間の類似性がわかる。したがって、これらのデータは、ＣＢＤＡがラットの急性嘔気および予期嘔気を軽減する能力がＨＵ−５８０まで及ぶことを示すものである。重要なのは、同じく本発明者らのｉｎ  ｖｉｔｒｏ実験で明らかになったように、ＨＵ−５８０がＣＢＤＡよりもはるかに高い効力を示すことである。より具体的には、０．１μｇ・ｋｇ−１ｉ．ｐ．の低用量のＨＵ−５８０でも急性嘔気誘発性条件付けゲーピングの効果的な抑制が引き起こされたが、このような抑制をもたらすＣＢＤＡの最小有効量は１μｇ・ｋｇ−１ｉ．ｐ．であった（図３）。実際、０．０１μｇ・ｋｇ−１ｉ．ｐ．の低用量では、ＨＵ−５８０は状況誘発性条件付けゲーピングを抑制したが、ＣＢＤＡは抑制しないことがわかった。ＨＵ−５８０によるＬｉＣｌ誘発性ゲーピングおよび状況誘発性条件付けゲーピングの抑制が、５−ＨＴ１Ａ受容体の選択的アンタゴニストであるＷＡＹ１００６３５によって完全に妨げられ得ることも明らかになった。最後に、最近、ＣＢＤＡが明暗箱エマージェンス試験（ｌｉｇｈｔ−ｄａｒｋ  ｂｏｘ  ｅｍｅｒｇｅｎｃｅ  ｔｅｓｔ）で、０．１μｇ・ｋｇ−１、１μｇ・ｋｇ−１および１００μｇ・ｋｇ−１ｉ．ｐ．の用量でＦＳによる不安様行動の増強を抑えることが明らかにされている（Ｒｏｃｋら，２０１７）が、本明細書では、ＣＢＤＡが明暗エマージェンス試験（ｌｉｇｈｔ−ｄａｒｋ  ｅｍｅｒｇｅｎｃｅ  ｔｅｓｔ）で、さらに低い０．０１μｇ・ｋｇ−１ｉ．ｐ．という用量では、ＦＳによる不安様行動の増強を抑えるＨＵ−５８０の能力を共有しないことが明らかになったことから、ＨＵ−５８０がストレスによる不安の軽減にＣＢＤＡよりもはるかに高い効力を示し得ることが示唆される。さらに、ＨＵ−５８０が不安様行動の増強を抑える能力を有することが、５−ＨＴ１Ａ受容体介在性のものであることもわかった。以上の結果は、ＨＵ−５８０がＣＢＤＡよりも安定であり、かつＣＢＤＡよりも効力が高い（急性嘔気および予期嘔気）ことを示すものである。
【００８８】
理想的には、医薬として使用する薬物は、保管時に妥当な期間にわたって安定性を示すものであるべきである。したがって、保管中のＣＢＤＡが、４℃であっても相当量分解されることから、この計画の主要な目的は、本稿に記載されているアッセイでＣＢＤＡに劣らない効力が得られるが、この温度で保管しても妥当な長さの期間にわたってはるかに高い安定性を示す化合物を開発することであった。したがって、本発明者らが、ＨＵ−５８０が実際、４℃で２１日間保管した場合にＣＢＤＡより安定であることを明らかにしたことは注目に値する。さらに、ＨＵ−５８０がｉｎ  ｖｉｔｒｏでもｉｎ  ｖｉｖｏでもＣＢＤＡより効力が高いことを示すこの発見は、本発明者らの実験でＨＵ−５８０が示した薬理効果が、そのＣＢＤＡへの分解にも代謝にも依存しなかったとする仮説を裏付けるものである。
【００８９】
結論として、この証拠は、ＨＵ−５８０が、ラットの急性嘔気および予期嘔気ならびにストレスによる不安の両方の兆候の抑制にＣＢＤＡよりも高い効力を示し、５−ＨＴ１Ａ受容体に依存する形でこれらの効果をもたらすことを示すものである。
【００９０】
ここまで、本発明の特定の特徴について本明細書に説明および記載してきたが、当業者には多数の修正、置換、変更および均等物が思いつくであろう。したがって、添付の「特許請求の範囲」は、本発明の真の趣旨の範囲内に含まれるこのような修正および変更をすべて包含することを意図するものであることが理解されるべきである。
【００９１】
（参考文献）
【表３】
2020524679.tif 000009
2020524679.tif 000010
2020524679.tif 000011
2020524679.tif 000012
2020524679.tif 000013
【図１Ａ】
2020524679.tif 000016
【図１Ｂ】
2020524679.tif 000017
【図１Ｃ】
2020524679.tif 000018
【図１Ｄ】
2020524679.tif 000019
【図１Ｅ】
2020524679.tif 000020
【図２Ａ】
2020524679.tif 000021
【図２Ｂ】
2020524679.tif 000022
【図２Ｃ】
2020524679.tif 000023
【図２Ｄ】
2020524679.tif 000024
【図２Ｅ】
2020524679.tif 000025
【図２Ｆ】
2020524679.tif 000026
【図３】
2020524679.tif 000027
【図４Ａ】
2020524679.tif 000028
【図４Ｂ】
2020524679.tif 000029
【図５】
2020524679.tif 000030
【国際調査報告】
2020524679.tif 000031
2020524679.tif 000032
2020524679.tif 000033