(57)【要約】本開示は、ＮＯｘガスを含む組成物を器官（複数可）に直接連続して投与することにより、単数または複数の器官の生存率を改善する方法を提供する。移植を目的とする器官の生存率を改善する方法であって、器官灌流システムまたは換気を介して、器官にＮＯｘガスを含む組成物を直接連続して投与することを含む方法である。組成物が少なくとも１時間、ただし１２時間を超えずに投与される。器官がドナーから採取された後に組成物が投与される。器官が脳死ドナーの体内にある間に組成物が投与される。【選択図】図１
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
移植を目的とする器官の生存率を改善する方法であって、器官灌流システムまたは換気を介して、前記器官に２０ｐｐｍ以下のＮＯｘガスを含む組成物を直接連続して投与することを含む、前記方法。
【請求項２】
前記組成物が少なくとも１時間、ただし１２時間を超えずに投与される、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記器官がドナーから採取された後に前記組成物が投与される、請求項１または請求項２に記載の方法。
【請求項４】
前記器官が脳死ドナーの体内にある間に前記組成物が投与される、請求項１または請求項２に記載の方法。
【請求項５】
前記器官が、肺、心臓、肝臓、腎臓、膵臓、腸、胸腺、及び角膜からなる群から選択される、請求項１〜３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６】
ＮＯｘの量が約１０ｐｐｍ〜約１５ｐｐｍである、請求項１〜５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項７】
ＮＯｘの量が約５ｐｐｍ〜約１０ｐｐｍである、請求項１〜５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項８】
ＮＯｘの量が約１ｐｐｍ〜約５ｐｐｍである、請求項１〜５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項９】
前記組成物が器官灌流液であり、任意で１つ以上の追加の化合物（複数可）をさらに含む、請求項１〜８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１０】
前記灌流液が無細胞灌流液である、請求項９に記載の方法。
【請求項１１】
前記方法が、約２０ｐｐｍ〜約４０ｐｐｍのＮＯｘガス（「負荷用量」）を含む組成物を２０ｐｐｍ以下のＮＯｘガスを含む前記組成物を連続して投与する直前の最長約１時間（「負荷期間」）前記器官に投与することをさらに含む、請求項１〜１０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１２】
前記負荷用量組成物が灌流液である、請求項１１に記載の方法。
【請求項１３】
前記灌流液が無細胞灌流液である、請求項１２に記載の方法。
【請求項１４】
ＮＯｘガスの総投与時間が１２時間を超えない、請求項１〜１３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１５】
ミトコンドリア機能が顕著に維持される、請求項１〜１４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１６】
ミトコンドリア活性酸素種（ｍｔＲＯＳ）が、非処置対照と比較して前記器官内で減少する、請求項１〜１５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１７】
虚血再灌流により損傷した器官の生存率を改善する方法であって、器官灌流システムを介して前記器官に２０ｐｐｍ以下のＮＯｘガスを含む組成物を直接連続して投与することを含む、前記方法。
【請求項１８】
前記組成物が少なくとも１時間、ただし１２時間を超えずに投与される、請求項１７に記載の方法。
【請求項１９】
前記器官は移植が目的とされ、前記器官がドナーから採取された後に前記組成物が投与される、請求項１７または請求項１８に記載の方法。
【請求項２０】
前記器官は移植が目的とされ、前記器官が脳死ドナーの体内にある間に前記組成物が投与される、請求項１７または請求項１８に記載の方法。
【請求項２１】
前記器官が、肺、心臓、肝臓、腎臓、膵臓、腸、胸腺、及び角膜からなる群から選択される、請求項１７〜２０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２２】
ＮＯｘの量が約１０ｐｐｍ〜約１５ｐｐｍである、請求項１７〜２１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２３】
ＮＯｘの量が約５ｐｐｍ〜約１０ｐｐｍである、請求項１７〜２１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２４】
ＮＯｘの量が約１ｐｐｍ〜約５ｐｐｍである、請求項１７〜２１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２５】
前記組成物が器官灌流液であり、任意で１つ以上の追加の化合物（複数可）をさらに含む、請求項１７〜２３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２６】
前記灌流液が無細胞灌流液である、請求項２５に記載の方法。
【請求項２７】
前記方法が、約２０ｐｐｍ〜約４０ｐｐｍのＮＯｘガス（「負荷用量」）を含む組成物を２０ｐｐｍ以下のＮＯｘガスを含む前記組成物を連続して投与する直前の最長約１時間（「負荷期間」）前記器官に投与することをさらに含む、請求項１７〜２６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２８】
前記負荷用量組成物が灌流液である、請求項２７に記載の方法。
【請求項２９】
前記灌流液が無細胞灌流液である、請求項２８に記載の方法。
【請求項３０】
ＮＯｘガスの総投与時間が１２時間を超えない、請求項１７〜２９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３１】
ミトコンドリア機能が顕著に維持される、請求項１７〜３０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３２】
ミトコンドリア活性酸素種（ｍｔＲＯＳ）が、非処置対照と比較して前記器官内で減少する、請求項１７〜３１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３３】
移植方法であって、
（ａ）器官灌流システムを介して、２０ｐｐｍ以下のＮＯｘガスを含む組成物を、移植を目的とした器官に連続して直接投与すること、及び
（ｂ）前記器官をレシピエントに移植すること
を含む、前記方法。
【請求項３４】
前記組成物が少なくとも１時間、ただし１２時間を超えずに投与される、請求項３３に記載の方法。
【請求項３５】
前記器官がドナーから採取された後に前記組成物が投与される、請求項３３または請求項３４に記載の方法。
【請求項３６】
前記器官が脳死ドナーの体内にある間に前記組成物が投与される、請求項３３または請求項３４に記載の方法。
【請求項３７】
前記器官が、肺、心臓、肝臓、腎臓、膵臓、腸、胸腺、及び角膜からなる群から選択される、請求項３３〜３６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３８】
ＮＯｘの量が約１０ｐｐｍ〜約１５ｐｐｍである、請求項３３〜３７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３９】
ＮＯｘの量が約５ｐｐｍ〜約１０ｐｐｍである、請求項３３〜３７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４０】
ＮＯｘの量が約１ｐｐｍ〜約５ｐｐｍである、請求項３３〜３７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４１】
前記組成物が器官灌流液であり、任意で１つ以上の追加の化合物（複数可）をさらに含む、請求項３３〜４０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４２】
前記灌流液が無細胞灌流液である、請求項４１に記載の方法。
【請求項４３】
前記方法が、ステップ（ａ）の直前の最長約１時間（「負荷期間」）、約２０ｐｐｍ〜約４０ｐｐｍのＮＯｘガス（「負荷用量」）を含む組成物を前記器官に投与することをさらに含む、請求項３３〜４２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４４】
前記負荷用量組成物が灌流液である、請求項４３に記載の方法。
【請求項４５】
前記灌流液が無細胞灌流液である、請求項４４に記載の方法。
【請求項４６】
ＮＯｘガスの総投与時間が１２時間を超えない、請求項３３〜４５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４７】
ミトコンドリア機能が顕著に維持される、請求項３３〜４６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４８】
ミトコンドリア活性酸素種（ｍｔＲＯＳ）が、非処置対照と比較して前記器官内で減少する、請求項３３〜４７のいずれか一項に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願の相互参照
本願は、２０１７年８月２５日に出願された米国仮出願第６２／５５０，４６３号の優先権を主張するものであり、その開示はその全体が参照により本明細書に組み込まれる。
【０００２】
本開示は、ＮＯｘガスを含む組成物を器官（複数可）に直接連続して投与することにより、単数または複数の器官の生存率を改善する方法を提供する。
【背景技術】
【０００３】
適切な血流を奪われた細胞、組織、器官、及び生物は、酸化ストレスによる虚血性障害を受け、最終的に死亡する。虚血性障害を軽減する従来の方法は、罹患した組織を酸素で灌流することを含むが、この処置は重大な組織の損傷を引き起こすことがあり、脳卒中または心停止中の脳損傷などの重篤な及び／または永続的な傷害を引き起こす可能性がある。
【０００４】
組織及び器官を代謝低下状態に誘導することにより、虚血及び再灌流障害を低減する試みがなされてきた。例えば、移植（ｔｒａｎｓｐｌａｎｔまたはｇｒａｆｔ）のために生体組織が保存される状況では、代謝活動を減らすための１つの一般的な方法は、生理食塩水などの生理的な流体に組織または器官を浸し、寒冷な環境に置くことによるものである。しかし、そのような方法には長期間は頼れず、器官の移植と四肢の再付着の成功は、依然として、器官または四肢が無傷の生物と接触していない時間に対して反比例する関連である。
【０００５】
したがって、当技術分野では、虚血及び／または再灌流障害の前に器官の生存率を改善させる必要性が依然存在している。
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【０００６】
一態様では、本開示は、移植を目的とする器官の生存率を改善する方法であって、器官灌流システムまたは換気を介して、器官にＮＯｘガスを含む組成物を直接連続して投与することを含む方法を包含する。
【０００７】
別の態様では、本開示は、虚血再灌流により損傷した器官の生存率を改善する方法であって、器官灌流システムまたは換気を介して器官に約２０ｐｐｍ以下のＮＯｘガスを含む組成物を直接連続して投与することを含む方法を包含する。様々な実施形態において、治療を必要とする器官は、外傷、外科手術、呼吸停止、または心停止により損傷を受けた器官である。特定の実施形態では、治療を必要とする器官は、移植を目的とした器官である。例示的な実施形態では、治療を必要とする器官は、ドナーから摘出された、移植を目的とする器官である。
【０００８】
別の態様において、本開示は、虚血再灌流により損傷した器官の生存率を改善する方法であって、（ａ）約２０ｐｐｍ〜約４０ｐｐｍのＮＯｘガス（「負荷用量」）を含む組成物を最長約１時間（「負荷期間」）器官に投与すること、次いで（ｂ）器官灌流システムまたは換気を介して、約２０ｐｐｍ以下のＮＯｘガスを含む組成物を器官に直接連続して投与することを含む方法を包含する。様々な実施形態において、治療を必要とする器官は、外傷、外科手術、呼吸停止、または心停止により損傷を受けた器官である。特定の実施形態では、治療を必要とする器官は、移植を目的とした器官である。例示的な実施形態では、治療を必要とする器官は、ドナーから摘出された、移植を目的とした器官である。
【０００９】
別の態様において、本開示は、移植を目的とする器官の生存率を改善する方法であって、器官灌流システムまたは換気を介して、器官に２０ｐｐｍ以下のＮＯｘガスを含む組成物を直接連続して投与することを含む方法を包含する。いくつかの実施形態では、器官は脳死のドナーに存在する。他の実施形態において、器官は、ＮＯｘガスを含む組成物の投与前にドナーから摘出されている。例示的な実施形態では、器官は肺、腎臓、または心臓である。
【００１０】
別の態様において、本開示は、移植を目的とする器官の生存率を改善する方法であって、（ａ）約２０ｐｐｍ〜約４０ｐｐｍのＮＯｘガス（「負荷用量」）を含む組成物を最長約１時間（「負荷期間」）器官に投与すること、次いで（ｂ）器官灌流システムまたは換気を介して、２０ｐｐｍ以下のＮＯｘガスを含む組成物を器官に直接連続して投与することを含む方法を包含する。いくつかの実施形態では、器官は脳死のドナーに存在する。他の実施形態において、器官は、ＮＯｘガスを含む組成物の投与前にドナーから摘出されている。例示的な実施形態では、器官は肺、腎臓、または心臓である。
【００１１】
別の態様において、本開示は、それを必要とする器官の虚血再灌流障害を治療する方法であって、器官灌流システムまたは換気を介して器官に直接２０ｐｐｍ以下のＮＯｘガスを含む組成物を連続して投与することを含む方法を包含する。様々な実施形態において、治療を必要とする器官は、外傷、外科手術、呼吸停止、または心停止により損傷を受けた器官である。特定の実施形態では、治療を必要とする器官は、移植を目的とした器官である。例示的な実施形態では、治療を必要とする器官は、ドナーから摘出された、移植を目的とした器官である。
【００１２】
別の態様では、本開示は、それを必要とする器官の虚血再灌流障害を治療する方法であって、（ａ）約２０ｐｐｍ〜約４０ｐｐｍのＮＯｘガス（「負荷用量」）を含む組成物を最長約１時間（「負荷期間」）器官に投与すること、次いで（ｂ）器官灌流システムまたは換気を介して、２０ｐｐｍ以下のＮＯｘガスを含む組成物を器官に直接連続して投与することを含む方法を包含する。様々な実施形態において、治療を必要とする器官は、外傷、外科手術、呼吸停止、または心停止により損傷を受けた器官である。特定の実施形態では、治療を必要とする器官は、移植を目的とした器官である。例示的な実施形態では、治療を必要とする器官は、ドナーから摘出された、移植を目的とした器官である。
【００１３】
別の態様において、本開示は、移植のための方法であって、（ａ）２０ｐｐｍ以下のＮＯｘガスを含む組成物を、移植を目的とした器官に直接最長１２時間連続して投与すること、及び（ｂ）器官をレシピエントに移植することを含む方法を提供する。いくつかの実施形態では、器官は脳死のドナーに存在する。他の実施形態において、器官は、ＮＯｘガスを含む組成物の投与前にドナーから摘出されている。例示的な実施形態では、器官は肺、腎臓、または心臓である。
【００１４】
別の態様において、本開示は、移植のための方法であって、（ａ）約２０ｐｐｍ〜約４０ｐｐｍのＮＯｘガス（「負荷用量」）を含む組成物を最長約１時間（「負荷期間」）器官に投与すること、次いで（ｂ）２０ｐｐｍ以下のＮＯｘガスを含む組成物を、移植を目的とした器官に直接最長１２時間連続して投与すること、次に（ｃ）器官をレシピエントに移植することを含む方法を提供する。いくつかの実施形態では、器官は脳死のドナーに存在する。他の実施形態において、器官は、ＮＯｘガスを含む組成物の投与前にドナーから摘出されている。例示的な実施形態では、器官は肺、腎臓、または心臓である。
【００１５】
本開示の他の態様及び反復は、より徹底的に以下に説明されている。
【００１６】
アプリケーションファイルは、カラーで実行された少なくとも１つの写真を含む。カラー写真を含むこの特許出願公開の複製は、要求及び必要な料金の支払いに応じて、省庁によって提供される。
【図面の簡単な説明】
【００１７】
【図１】ＥＶＬＰ回路の実施形態の図解である。
【図２】ＥＶＬＰ回路の実施形態の図解である。
【発明を実施するための形態】
【００１８】
本開示は、ＮＯｘガスを含む組成物を器官（複数可）に直接連続して投与することにより、単数または複数の器官の生存率を改善する方法を提供する。本開示は、移植を目的とする器官、ならびに他の原因による虚血再灌流障害のある器官の生存率を改善する方法を包含する。また、本開示により、移植器官の能力を改善する方法及び移植のための方法が提供される。本明細書で使用される場合、「ＮＯｘガス」という用語は、気体窒素酸化物を示す。好ましい実施形態では、ＮＯｘガスはガス状の一酸化窒素（ｇＮＯ）である。組成物のさらなる成分の非限定的な例には、不活性希釈ガス（例えば、ヘリウム、ネオンなど）、ヒトアルブミン、カプリル酸ナトリウム、Ｎ−アセチル−ＤＬ−トリプトファン、及び酸素ガス（Ｏ２）が含まれ得る。ＮＯｘガスを含む組成物を器官に直接連続して投与するとは、投与期間中、中断することなく器官がＮＯｘガスと直接接触することを意味する。本開示は、器官の種類によって制限されない。適切な器官の非限定的な例には、肝臓、腎臓、膵臓、心臓、肺、腸、胸腺、角膜、血管新生複合同種移植片（例えば、顔、手など）、またはそれらの任意の組み合わせが含まれる。器官の生存率は、ＮＯｘガスを含む組成物を器官に直接連続して投与しない方法により得られた器官と比較して改善されよう。本明細書で使用される場合、「生存率」という用語は、意図された目的に対する器官の適合性を示す。器官の生存率の測定値は、器官の種類によって異なり得、当技術分野で知られているものである。
【００１９】
本開示全体に適用されるいくつかの定義をこれより提示する。本明細書で使用される場合、「約」は、明示的に示されているかどうかにかかわらず、整数、分数、百分率などを含む数値を示す。「約」という用語は、全般に、列挙された値の±０．５〜１％、±１〜５％または±５〜１０％などの数値の範囲を指し、引用された値と同等、例えば、同じ機能または結果を有するとみなされる。
【００２０】
「含む」という用語は、「含むが、必ずしも限定されない」ことを意味する。これは、特に、前述の組み合わせ、群、シリーズなどにおけるオープンエンドの包含またはメンバーシップを示す。本明細書で使用される場合、「ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ（含む）」及び「ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ（含む）」という用語は、包括的及び／またはオープンエンドであり、追加の、列挙されていない要素または方法プロセスを除外しない。「から本質的になる」という用語は、「ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ（含む）」よりも限定的であるが、「からなる」ほど制限を加えるものではない。具体的には、「から本質的になる」という用語は、特定の材料またはステップ、及び特許請求された発明の本質的な特性に実質的に影響しないものにメンバーシップを制限する。
【００２１】
本明細書で使用する場合、「虚血再灌流障害」という用語は、虚血、再灌流、またはその両方により生じる損傷を示す。
【００２２】
本明細書で使用される場合、「治療する」、「治療すること」、または「治療」という用語は、治療的処置と、予防または予防措置との両方を指し、目的は、望ましくない生理学的変化または疾患／障害を予防または減速（軽減）することである。有益または望ましい臨床結果としては、限定されないが、症状の緩和、疾患の範囲の縮減、疾患の安定した（すなわち、悪化していない）状態、疾患の進行の遅延または減速、疾患の状態の寛解または緩和、及び寛解（部分的寛解または完全寛解）が、検出可能であっても検出不可能であっても、挙げられる。また、「治療」は、治療を受けていない場合に予想される生存期間と比較して、生存期間を延長することを意味する場合がある。治療を必要とする者としては、すでに疾患もしくは障害に罹患している者、ならびに疾患もしくは障害を有する傾向にある者、または疾患もしくは障害を予防すべき状態にある者が挙げられる。
【００２３】
（ａ）ＮＯｘガスを含む組成物
本開示によれば、ＮＯｘガスを含む組成物は、器官に連続して直接投与される。本開示の組成物は、気体または液体であり得る。本開示の組成物が液体である場合、ＮＯｘガスは液体に可溶化される。別の言い方をすると、「組成物が液体であるＮＯｘガスを含む組成物」は、可溶化ＮＯｘガスを含む液体である。同様に、「組成物が液体である２０ｐｐｍのＮＯｘガスを含む組成物」は、２０ｐｐｍの一酸化窒素を含む液体であり、２０ｐｐｍの一酸化窒素は液体に可溶化されるＮＯｘガスの量である。さらに、組成物が液体である実施形態では、器官に直接投与されるＮＯｘガスの量は、液体に可溶化されたＮＯｘガスの量である。ＮＯｘガスは、当技術分野で知られている任意の方法によって生成及び提供することができる。
【００２４】
一部の実施形態では、組成物は気体である。ＮＯｘガスに加えて、組成物は、不活性希釈ガス（複数可、例えば、ヘリウム、ネオンなど）、窒素、酸素、及び水を含むがこれらに限定されない、１つ以上の追加の成分をさらに含んでもよい。例示的な実施形態では、ＮＯｘガスはｇＮＯである。組成物が気体である場合、組成物は、人工呼吸器または当技術分野で知られている他のいずれかの方法を介して器官に直接投与することができる。
【００２５】
他の実施形態では、組成物は灌流液である。「灌流液」という用語は、組織または器官の保存、灌流、または再灌流に使用されるいずれかの流体を示す。灌流液は、無菌であり、等張性であることが頻繁にある。可溶化ＮＯｘガスに加えて、灌流液は、カプリル酸ナトリウム、Ｎ−アセチル−ＤＬ−トリプトファン、及びヒトアルブミンを含むがこれらに限定されない１つまたは複数の追加の成分をさらに含んでもよい。灌流液の組成物はまた、器官の間で異なる場合がある。好ましい実施形態では、灌流液は無細胞灌流液である。そのような溶液には、セルシオ溶液、クレブス・ヘンセライト溶液、通常の生理食塩水、ウィスコンシン大学溶液、セントトーマスＩＩ溶液、コリンズ溶液、スタンフォード溶液、パーフィデックス（登録商標）［Ｃｅｌｓｉｏｒ  ｓｏｌｕｔｉｏｎ，  Ｋｒｅｂｓ−Ｈｅｎｓｅｌｅｉｔ  ｓｏｌｕｔｉｏｎ，  ｎｏｒｍａｌ  ｓａｌｉｎｅ  ｓｏｌｕｔｉｏｎ，  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  ｏｆ  Ｗｉｓｃｏｎｓｉｎ  ｓｏｌｕｔｉｏｎ，  Ｓｔ．  Ｔｈｏｍａｓ  ＩＩ  ｓｏｌｕｔｉｏｎ，  Ｃｏｌｌｉｎｓ  ｓｏｌｕｔｉｏｎ，  Ｓｔａｎｆｏｒｄ  ｓｏｌｕｔｉｏｎ，  Ｐｅｒｆｉｄｅｘ］、Ｓｔｅｅｎ  Ｓｏｌｕｔｉｏｎ（商標）またはそれらの組み合わせが含まれ得るが、これらに限定されない。例示的な実施形態では、組成物は無細胞灌流液であり、ＮＯｘガスはｇＮＯである。さらなる実施形態では、無細胞灌流液は、Ｓｔｅｅｎ  Ｓｏｌｕｔｉｏｎ（商標）であり、任意選択でカプリル酸ナトリウム、Ｎ−アセチル−ＤＬ−トリプトファン、及びヒトアルブミンを含む。灌流液を器官に直接投与するのに適した方法は当技術分野で知られており、器官灌流システムを含むがこれに限定されない。本開示は、いずれの特定の器官灌流システムにも限定されない。一般的に言えば、器官灌流システムは、灌流液の移動と制御のためのポンプ、システムの温度を制御する手段、カニューレ、及び生理学的パラメータを測定する手段を備えてもよい。器官灌流システムの非限定的な例は、参照により本明細書に組み込まれる米国特許第９，６２９，３５８号に開示されている。また、器官灌流システムの非限定的な例は、図１及び図２に開示されている。
【００２６】
器官の生存率を改善するために、治療有効量のＮＯｘガスが器官に直接投与される。投与される組成物の１つまたは複数のタイプに応じて、器官へのＮＯｘガスの直接投与は、器官灌流システム、人工呼吸器、またはそれらの任意の組み合わせを介して生じ得る。器官灌流システムと人工呼吸器を組み合わせて使用する実施形態では、器官灌流システムと人工呼吸器を同時に使用して、ＮＯｘガスを含む組成物を器官に直接投与してもよい。あるいは、または加えて、器官灌流システムと人工呼吸器を連続して使用して、ＮＯｘガスを含む組成物を器官に直接、例えば２つの投与方法の間で様々に量を重複させて（例えば、重複無し、重複が数秒、数分、または数時間）投与することができる。例えば、最初に人工呼吸器で、次に灌流システムで、またはその逆で投与を行うことができる。
【００２７】
「ＮＯｘガスの治療有効量」とは、器官に直接投与された場合に、本明細書で定義される器官の生存率を改善するのに十分なＮＯｘガスの量を示す。「治療有効量」を構成するＮＯｘの量は、様々な要因に応じて異なるが、当業者によって決定され得る。以下でさらに詳述するように、虚血再灌流障害のある器官の治療のための治療有効量のＮＯｘガスは２０ｐｐｍ以下である。この治療有効量のＮＯｘガスは、単独で、または負荷用量のＮＯｘガスの投与後に使用することができる。ＮＯｘガスの負荷用量は、虚血性器官の血管拡張を増加させるために使用でき、ドナーから除去された後に最初に本開示の組成物が器官と接触するとき、特に適切であり得る。しかし、負荷用量で提供されるＮＯｘガスの量は、通常、長時間（例えば１時間を超える期間）虚血再灌流障害を安全に治療するために使用できるＮＯｘガスの量を超える。
【００２８】
１つ以上の実施形態において、ＮＯｘガスは初期の濃度で投与され、所望の効果（例えば、器官の生存率の増加）を得るために必要に応じて任意に増加される。例えば、初期の一酸化窒素濃度は、約０．０５ｐｐｍ〜約５０ｐｐｍまたは約１ｐｐｍ〜約５０ｐｐｍであり、所望の効果が得られるか一酸化窒素の閾値が満たされるまで、任意に漸増し得る。例示的な一酸化窒素の投与は、約１ｐｐｍの初期の濃度で開始し、その後、所望のＮＯｘ効果が得られるまで約０．１ｐｐｍ〜約５ｐｐｍの増分で増加させることができるが、ＮＯｘ濃度が５０ｐｐｍを超えないこと及び／またはメトヘモグロビンのレベルが約５％に満たない、またはそれを超えないことを確実にする。あるいは、例示的な一酸化窒素の投与は、５ｐｐｍという初期の濃度で開始し、その後、所望のＮＯｘ効果が得られるまで０．１ｐｐｍ〜５ｐｐｍの増分で増加させることができるが、ＮＯｘ濃度が５０ｐｐｍを超えないこと及び／またはメトヘモグロビンのレベルが約５％に満たない、またはそれを超えないことを確実にする。別の例示的な実施形態では、一酸化窒素の投与は、１０ｐｐｍという初期の濃度で開始し、その後、所望のＮＯｘ効果が得られるまで０．１ｐｐｍ〜５ｐｐｍの増分で増加させることができるが、ＮＯｘ濃度が５０ｐｐｍを超えないこと及び／またはメトヘモグロビンのレベルが約５％に満たない、またはそれを超えないことを確実にする。さらに別の例示的な実施形態では、一酸化窒素の投与は、１５ｐｐｍという初期の濃度で開始し、その後、所望のＮＯｘ効果が得られるまで０．１ｐｐｍ〜５ｐｐｍの増分で増加させることができるが、ＮＯｘ濃度が５０ｐｐｍを超えないこと及び／またはメトヘモグロビンのレベルが約５％に満たない、またはそれを超えないことを確実にする。さらに別の例示的な実施形態では、一酸化窒素の投与は、２０ｐｐｍという初期の濃度で開始し、その後、所望のＮＯｘ効果が得られるまで０．１ｐｐｍ〜５ｐｐｍの増分で増加させることができるが、ＮＯｘ濃度が５０ｐｐｍを超えないこと及び／またはメトヘモグロビンのレベルが約５％に満たない、またはそれを超えないことを確実にする。上記の実施形態のそれぞれにおいて、投与は、５分、１０分、１５分、３０分または６０分間であり得る。あるいは、投与は１時間、２時間、３時間、４時間、５時間、６時間、７時間、８時間、９時間、１０時間、１１時間、または１２時間であってもよい。
【００２９】
１つ以上の実施形態において、ＮＯｘガスは初期の濃度で投与され、所望の効果（例えば、器官の生存率の増加）を得るために必要に応じて任意に増加される。例えば、初期の一酸化窒素濃度は、約０．０５ｐｐｍ〜約３５ｐｐｍまたは約１ｐｐｍ〜約３５ｐｐｍであり、所望の効果が得られるか一酸化窒素の閾値が満たされるまで、任意に漸増し得る。例示的な一酸化窒素の投与は、約１ｐｐｍの初期の濃度で開始し、その後、所望のＮＯｘ効果が得られるまで約０．１ｐｐｍ〜約５ｐｐｍの増分で増加させることができるが、ＮＯｘ濃度が３５ｐｐｍを超えないこと及び／またはメトヘモグロビンのレベルが約５％に満たない、またはそれを超えないことを確実にする。あるいは、例示的な一酸化窒素の投与は、５ｐｐｍという初期の濃度で開始し、その後、所望のＮＯｘ効果が得られるまで０．１ｐｐｍ〜５ｐｐｍの増分で増加させることができるが、ＮＯｘ濃度が３５ｐｐｍを超えないこと、及び／またはメトヘモグロビンのレベルが約５％に満たない、またはそれを超えないことを確実にする。別の例示的な実施形態では、一酸化窒素の投与は、１０ｐｐｍという初期の濃度で開始し、その後、所望のＮＯｘ効果が得られるまで０．１ｐｐｍ〜５ｐｐｍの増分で増加させることができるが、ＮＯｘ濃度が３５ｐｐｍを超えないこと及び／またはメトヘモグロビンのレベルが約５％に満たない、またはそれを超えないことを確実にする。さらに別の例示的な実施形態では、一酸化窒素の投与は、１５ｐｐｍという初期の濃度で開始し、その後、所望のＮＯｘ効果が得られるまで０．１ｐｐｍ〜５ｐｐｍの増分で増加させることができるが、ＮＯｘ濃度が３５ｐｐｍを超えないこと及び／またはメトヘモグロビンのレベルが約５％に満たない、またはそれを超えないことを確実にする。さらに別の例示的な実施形態では、一酸化窒素の投与は、２０ｐｐｍという初期の濃度で開始し、その後、所望のＮＯｘ効果が得られるまで０．１ｐｐｍ〜５ｐｐｍの増分で増加させることができるが、ＮＯｘ濃度が３５ｐｐｍを超えないこと及び／またはメトヘモグロビンのレベルが約５％に満たない、またはそれを超えないことを確実にする。上記の実施形態のそれぞれにおいて、投与は、５分、１０分、１５分、３０分または６０分間であり得る。あるいは、投与は１時間、２時間、３時間、４時間、５時間、６時間、７時間、８時間、９時間、１０時間、１１時間、または１２時間であってもよい。
【００３０】
１つ以上の実施形態において、ＮＯｘガスは初期の濃度で投与され、所望の効果（例えば、器官の生存率の増加）を得るために必要に応じて任意に増加される。例えば、初期の一酸化窒素濃度は、約０．０５ｐｐｍ〜約２０ｐｐｍまたは約１ｐｐｍ〜約２０ｐｐｍであり、所望の効果が得られるか一酸化窒素の閾値が満たされるまで、任意に漸増し得る。例示的な一酸化窒素の投与は、約１ｐｐｍの初期の濃度で開始し、その後、所望のＮＯｘ効果が得られるまで約０．１ｐｐｍ〜約５ｐｐｍの増分で増加させることができるが、ＮＯｘ濃度が２０ｐｐｍを超えないこと及び／またはメトヘモグロビンのレベルが約５％に満たない、またはそれを超えないことを確実にする。あるいは、例示的な一酸化窒素の投与は、５ｐｐｍという初期の濃度で開始し、その後、所望のＮＯｘ効果が得られるまで０．１ｐｐｍ〜５ｐｐｍの増分で増加させることができるが、ＮＯｘ濃度が２０ｐｐｍを超えないこと、及び／またはメトヘモグロビンのレベルが約５％に満たない、またはそれを超えないことを確実にする。別の例示的な実施形態では、一酸化窒素の投与は、１０ｐｐｍという初期の濃度で開始し、その後、所望のＮＯｘ効果が得られるまで０．１ｐｐｍ〜５ｐｐｍの増分で増加させることができるが、ＮＯｘ濃度が３５ｐｐｍを超えないこと及び／またはメトヘモグロビンのレベルが約５％に満たない、またはそれを超えないことを確実にする。さらに別の例示的な実施形態では、一酸化窒素の投与は、１５ｐｐｍという初期の濃度で開始し、その後、所望のＮＯｘ効果が得られるまで０．１ｐｐｍ〜５ｐｐｍの増分で増加させることができるが、ＮＯｘ濃度が２０ｐｐｍを超えないこと及び／またはメトヘモグロビンのレベルが約５％に満たない、またはそれを超えないことを確実にする。さらに別の例示的な実施形態では、一酸化窒素の投与は、２０ｐｐｍという初期の濃度で開始し、その後、所望のＮＯｘ効果が得られるまで０．１ｐｐｍ〜５ｐｐｍの増分で増加させることができるが、ＮＯｘ濃度が２０ｐｐｍを超えないこと及び／またはメトヘモグロビンのレベルが約５％に満たない、またはそれを超えないことを確実にする。上記の実施形態のそれぞれにおいて、投与は、５分、１０分、１５分、３０分または６０分間であり得る。あるいは、投与は１時間、２時間、３時間、４時間、５時間、６時間、７時間、８時間、９時間、１０時間、１１時間、または１２時間であってもよい。
【００３１】
１つ以上の実施形態において、ＮＯｘガスは初期の濃度で初期の時間投与され、次いで所望の効果（例えば、器官の生存率の増加）を得るために第２の時間にわたり、さらに低い第２の濃度で投与される。例えば、ＮＯｘガスは、約２０ｐｐｍ〜約４０ｐｐｍという初期の濃度で最長約１時間投与され、その後、器官の生存率を改善するために２０ｐｐｍ以下に減少させてもよい。例示的な一酸化窒素の投与は、約２０ｐｐｍ〜約４０ｐｐｍの初期の濃度で開始し、その後、２０ｐｐｍ以下の一酸化窒素濃度になるまで初期の時間にわたり増分を減少させることができる。減少率は一定でも、一定でなくてもよい。一酸化窒素濃度は、例えば一酸化窒素マーカーの監視に基づいて、必要に応じてさらに調整することができる。あるいは、例示的な一酸化窒素の投与は、約２０ｐｐｍ〜約４０ｐｐｍの初期の濃度で開始し、初期の時間にわたり一定性を保持し、その後、２０ｐｐｍ以下の一酸化窒素濃度まで減少させることができる。一酸化窒素濃度は、例えば一酸化窒素マーカーの監視に基づいて、必要に応じてさらに調整することができる。上記の実施形態のそれぞれにおいて、一酸化窒素投与の合計時間（初期の濃度の時間と濃度低下時間の合計）は１時間、２時間、３時間、４時間、５時間、６時間、７時間、８時間、９時間、１０時間、１１時間、または１２時間であってもよい。
【００３２】
上記の実施形態のそれぞれにおいて、初期の一酸化窒素濃度、一酸化窒素の増分の増加または減少、一酸化窒素または一酸化窒素マーカーの最大一酸化窒素濃度及び／または閾値は、用途により、及び／または治療されている特定の器官に基づいて、異なり得る。増分は、一酸化窒素の供給の調整全体で異なる場合がある。監視により、一酸化窒素または一酸化窒素マーカーが一酸化窒素の閾値を満たすか超えていることが示された場合、一酸化窒素はまた徐々に減少させることができる。
【００３３】
上記の実施形態のそれぞれにおいて、ＮＯｘ濃度は、最後のＮＯｘ濃度に対して特定の割合だけ増分的に調整することもできる。このような増分パーセンテージは、ＮＯｘ濃度における５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、１００％、１１０％、１２５％、１５０％、１７５％及び２００％の変化を含み得る。
【００３４】
ＮＯｘ濃度の調整の代わりに、またはそれに加えて、ＮＯｘガスの流量を調整するなど、器官に直接供給されるＮＯｘガスの量を調整するための任意の手段によって、ＮＯｘガスの投与を調整することができる。
【００３５】
さらなる実施形態では、一酸化窒素の投与は、一酸化窒素または一酸化窒素マーカーの監視に基づいて調整される。本明細書で使用される場合、「一酸化窒素マーカー」とは、流体の一酸化窒素濃度の直接的または間接的な指標を示す。例えば、一酸化窒素マーカーには、とりわけ、メトヘモグロビン及びＮＯｘ（すなわち、ＮＯ、亜硝酸イオン（ＮＯ２−）、硝酸イオン（ＮＯ３−）など）が含まれる。そのような調整は、手作業またはＮＯｘ供給デバイスによって自動的に実施されてもよい。また、ＮＯ供給デバイスは、監視に基づいてアラームを発することもできる。監視デバイスがＮＯ供給デバイスとは別の構成要素である場合、監視デバイスは、任意の適切な有線接続または無線接続を介して、監視情報をＮＯ供給デバイスに送信できる。例えば、流体の一酸化窒素または一酸化窒素マーカーが特定の閾値を下回る場合、流体の一酸化窒素または一酸化窒素マーカーが閾値を満たすまでＮＯの供給が増加し得る。同様に、流体の一酸化窒素または一酸化窒素マーカーが特定の閾値を超える場合、投与されるＮＯの量を減少させ得る。一酸化窒素または一酸化窒素マーカーは、連続的または断続的に、例えば定期的な間隔で、監視することができる。
【００３６】
１つ以上の実施形態において、そのような監視は、メトヘモグロビン及び／またはＮＯを監視することを含むことができる。これらの一酸化窒素マーカーは、パルスオキシメトリーや光学的な測定などの手法や、ＮＯまたはＮＯマーカーを直接的または間接的に測定または相関させる他のいずれかの手段によって、直接測定できる。例えば、別の測定手法では、プローブを灌流液に入れて流体のＮＯｘレベルを測定し、灌流液のリアルタイム分析を提供することができる。
【００３７】
１つ以上の実施形態において、一酸化窒素または一酸化窒素マーカーの測定値を一酸化窒素の閾値と比較することにより、一酸化窒素または一酸化窒素マーカーを監視する。一酸化窒素の閾値は、メトヘモグロビン血症が発生しないことを保証する安全上の制限であってよい。例えば、一酸化窒素の閾値は、赤血球に対するメトヘモグロビンの割合などのメトヘモグロビンレベルであり得る。例示的な実施形態では、一酸化窒素の閾値は、約１％〜約１５％のメトヘモグロビン、または約３％〜約１０％のメトヘモグロビンの範囲にある。したがって、メトヘモグロビンレベルが≦３％、≦４％、≦５％、≦６％、≦７％、≦８％、≦９％、≦１０％、≦１１％、または≦１２％などの許容できる範囲を満たすか超える場合、一酸化窒素の投与を調整することができる。
【００３８】
灌流液のＮＯ２のレベルも監視され得る。流体の再循環により、流体にＮＯ２が蓄積する場合がある。ＮＯ２濃度が上昇し特定の閾値を超えた場合、ＮＯ供給デバイスはＮＯの投与を調整し、及び／またはアラームを発することができる。また、ＮＯ２は、還元剤、スクラバー、塩基、またはその他の適切な手段を使用して除去することもできる。
【００３９】
（ｂ）虚血再灌流障害
「虚血再灌流障害」という用語は、虚血、再灌流、またはその両方のために生じる損傷を示す。虚血は、器官への不十分な血液供給を指し、組織または器官の領域への血液供給が遮断されると、虚血障害が発生する。器官または組織への血流を回復する行為は再灌流と呼ばれ、虚血後に組織または器官への血流を回復する結果として再灌流障害が発生する。虚血は、生物が受けた傷害または疾患の結果である可能性がある。虚血または低酸素症を誘発する可能性のある特定の疾患の例には、外傷または外科手術、呼吸器または心停止、腫瘍、心疾患、及び神経疾患が含まれるが、これらに限定されない。虚血性または低酸素状態を引き起こす可能性のある特定の傷害の例には、火傷、切傷、切断、銃創、または外科的外傷などの外傷が含まれるが、これらに限定されない。さらに、傷害は、脳卒中や心臓発作などの体内の損傷も含むことができ、それは循環が急激に低下する。その他の傷害には、寒さや放射線への暴露などの非侵襲的なストレスによる循環の低下、または心臓の手術中、または輸送用のドナー器官の摘出前の器官ドナーの処置、及びレシピエントへの移植などの循環の計画的な低下が含まれる。
【００４０】
本開示の一態様は、それを必要とする器官の虚血再灌流障害を治療する方法を包含する。この方法は、２０ｐｐｍ以下のＮＯｘガスを含む組成物を器官に直接連続して投与することを含む。いくつかの実施形態では、組成物は１ｐｐｍ〜２０ｐｐｍの一酸化窒素を含む。他の実施形態において、組成物は、約１ｐｐｍ〜約１０ｐｐｍの一酸化窒素、約５ｐｐｍ〜約１５ｐｐｍの一酸化窒素、または約１０ｐｐｍ〜２０ｐｐｍを含む。他の実施形態では、組成物は、約１ｐｐｍ、約２ｐｐｍ、約３ｐｐｍ、約４ｐｐｍ、約５ｐｐｍ、約６ｐｐｍ、約７ｐｐｍ、約８ｐｐｍ、約９ｐｐｍ、約１０ｐｐｍ、約１１ｐｐｍ、約１２ｐｐｍ、約１３ｐｐｍ、約１４ｐｐｍ、約１５ｐｐｍ、約１６ｐｐｍ、約１７ｐｐｍ、約１８ｐｐｍ、約１９ｐｐｍ、または約２０ｐｐｍの一酸化窒素を含む。ＮＯｘガスを含む適切な組成物はセクション（ａ）に記載されている。好ましい実施形態では、組成物は灌流液であり、さらにより好ましくは無細胞灌流液である。さらなる実施形態では、無細胞灌流液は、Ｓｔｅｅｎ  Ｓｏｌｕｔｉｏｎ（商標）であり、任意選択でカプリル酸ナトリウム、Ｎ−アセチル−ＤＬ−トリプトファン、及びヒトアルブミンを含む。様々な実施形態において、治療を必要とする器官は、外的傷害、外科手術、呼吸停止、または心停止により損傷を受けた器官である。特定の実施形態では、治療を必要とする器官は、移植を目的とした器官である。例示的な実施形態では、治療を必要とする器官は、ドナーから摘出された、移植を目的とした器官である。
【００４１】
投与は、５分、１０分、１５分、３０分または６０分間であり得る。あるいは、投与は１時間、２時間、３時間、４時間、５時間、６時間、７時間、８時間、９時間、１０時間、１１時間、１２時間またはそれより長くてもよい。器官が移植の目的とされている実施形態では、ＮＯｘガスの投与は、合計で１２時間を超えないことが好ましい。特定の実施形態では、投与は虚血と同時に始まる。他の実施形態において、投与は、虚血が始まった後しばらくしてから始まるが、優先的には虚血の開始に可能な限り近い時間に開始する。例えば、投与は、虚血の開始の約５分、１０分、１５分、２０分、２５分、または３０分後に始まってよい。また、投与は再灌流中に開始することも、別法として再灌流が始まった後に継続することもできる。場合によっては、再灌流が始まってから１時間、２時間、３時間、４時間、５時間、６時間、７時間、８時間、９時間、１０時間、１１時間、１２時間または１２時間より長く、投与を続けることができる。
【００４２】
虚血再灌流障害の効果的な治療は、細胞の機能の測定（例えば、代謝能力、ＡＴＰ含有量など）、細胞の損傷の測定（例えば、組織学的評価、タンパク質の酸化、形態変化など）、炎症の測定、及び／または器官の機能の測定を含むがそれらに限定されない、当技術分野で公知のいずれかの方法により評価できる。
【００４３】
さらなる実施形態では、それを必要とする器官の虚血再灌流障害を治療する方法は、約２０ｐｐｍ〜約４０ｐｐｍのＮＯｘガス（「負荷用量」）を含む組成物が、２０ｐｐｍ以下のＮＯｘガスを含む組成物を投与する直前の最長約１時間（「負荷期間」）投与される、追加のステップを含むことができる。例えば、負荷用量は、約１０分、約１５分、約２０分、約３０分、または約１０分〜約３０分の間投与されてもよい。別の例において、負荷用量は、約３０分、約３５分、約４０分、約４０分、約４５分、約５０分、約５５分、約６０分、または３０分〜６０分の間投与されてもよい。一酸化窒素濃度を除いて、２つの組成は同じであってもよい。あるいは、２つの組成は異なっていてもよい。負荷用量における一酸化窒素の濃度は、一酸化窒素濃度が２０ｐｐｍ以下になるまで、負荷期間にわたって徐々に減少させることができる。減少率は一定でも、一定でなくてもよい。あるいは、負荷用量における一酸化窒素の濃度は、負荷期間にわたって一定に保持され、その後、２０ｐｐｍ以下の一酸化窒素濃度まで減少してもよい。好ましい実施形態では、２つの組成物は同じであり、組成物は灌流液、好ましくは無細胞灌流液である。例示的な実施形態では、器官は心臓、肺、または腎臓であり、器官は移植を目的としたものである。
【００４４】
本開示の別の態様は、虚血再灌流により障害を受けた器官の生存率を改善する方法を包含する。この方法は、２０ｐｐｍ以下のＮＯｘガスを含む組成物を器官に直接連続して投与することを含む。いくつかの実施形態では、組成物は１ｐｐｍ〜２０ｐｐｍの一酸化窒素を含む。他の実施形態において、組成物は、約１ｐｐｍ〜約１０ｐｐｍの一酸化窒素、約５ｐｐｍ〜約１５ｐｐｍの一酸化窒素、または約１０ｐｐｍ〜２０ｐｐｍを含む。他の実施形態では、組成物は、約１ｐｐｍ、約２ｐｐｍ、約３ｐｐｍ、約４ｐｐｍ、約５ｐｐｍ、約６ｐｐｍ、約７ｐｐｍ、約８ｐｐｍ、約９ｐｐｍ、約１０ｐｐｍ、約１１ｐｐｍ、約１２ｐｐｍ、約１３ｐｐｍ、約１４ｐｐｍ、約１５ｐｐｍ、約１６ｐｐｍ、約１７ｐｐｍ、約１８ｐｐｍ、約１９ｐｐｍ、または約２０ｐｐｍの一酸化窒素を含む。ＮＯｘガスを含む適切な組成物はセクション（ａ）に記載されている。好ましい実施形態では、組成物は灌流液であり、さらにより好ましくは無細胞灌流液である。さらなる実施形態では、無細胞灌流液は、Ｓｔｅｅｎ  Ｓｏｌｕｔｉｏｎ（商標）であり、任意選択でカプリル酸ナトリウム、Ｎ−アセチル−ＤＬ−トリプトファン、及びヒトアルブミンを含む。虚血及び／または再灌流により損傷を受けた器官の生存率を改善することは、ミトコンドリア機能の維持または酸化的損傷の減少を含み得る。また、器官の生存率を評価するための当技術分野で公知の他の手段を使用してもよく、それは細胞の機能の測定（例えば、代謝能力、ＡＴＰ含有量など）、細胞の損傷の測定（例えば、組織学的評価、形態変化など）、炎症の測定、及び／または器官の機能の測定を含むがそれらに限定されない。
【００４５】
一実施形態では、本開示は、虚血再灌流障害を有する器官のミトコンドリア機能を維持する方法を包含する。本明細書で使用される場合、ミトコンドリア機能は、ミトコンドリアの結合状態の指標である呼吸制御比（ＲＣＲ）によって測定され得る。一般的に言えば、ＲＣＲは、ＡＤＰが定常状態濃度（状態４）にリン酸化された後の酸化速度に対する、過剰な基質とアデノシン二リン酸の存在下での酸化速度（状態３）の比率を表す。いくつかの実施形態では、２０ｐｐｍ以下のＮＯｘガスを含む組成物を器官に直接投与することにより、虚血再灌流障害のある器官においてミトコンドリア機能が顕著に維持される。本明細書で使用する場合、「顕著に維持された」とは、本明細書に記載のＮＯｘガスで治療された器官と、虚血再灌流を経ていない対照器官との間のミトコンドリア機能の５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、または９５％未満の差を示す。別の言い方をすれば、顕著に維持されているとは、同様の虚血再灌流障害を経たが直接連続的にＮＯｘガスを投与されていない同様の器官と比較して、ミトコンドリア機能が改善したことを示し得る。ＮＯｘガスを含む適切な組成物はセクション（ａ）に記載されている。好ましい実施形態では、組成物は灌流液、さらにより好ましくは無細胞灌流液であり、器官は心臓、肺、または腎臓である。さらなる実施形態では、無細胞灌流液は、Ｓｔｅｅｎ  Ｓｏｌｕｔｉｏｎ（商標）であり、任意選択でカプリル酸ナトリウム、Ｎ−アセチル−ＤＬ−トリプトファン、及びヒトアルブミンを含む。
【００４６】
他の実施形態では、本開示は、虚血再灌流障害を有する器官への酸化的損傷を減少させる方法を包含する。一般的に言えば、この方法は、２０ｐｐｍ以下のＮＯｘガスを含む組成物を器官に直接連続して投与することを含む。本明細書で使用される場合、「酸化的損傷の減少」または「酸化的損傷の低減」は、同様の条件下で治療される器官と比較して測定され得るが、それは直接及び連続的にＮＯｘガスを投与されない。例えば、酸化的損傷は、同様の条件下で治療された器官と比較して、５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、または９５％減少し得るが、それは直接及び連続的にＮＯｘガスを投与されるわけではない。特定の実施形態では、ミトコンドリアの活性酸素種（ｍｔＲＯＳ）は、非治療対照と比較して、直接連続ＮＯｘが投与された虚血再灌流障害の器官の内部で減少する。ＮＯｘガスを含む適切な組成物はセクション（ａ）に記載されている。好ましい実施形態では、組成物は灌流液、さらにより好ましくは無細胞灌流液であり、器官は心臓、肺、または腎臓である。さらなる実施形態では、無細胞灌流液は、Ｓｔｅｅｎ  Ｓｏｌｕｔｉｏｎ（商標）であり、任意選択でカプリル酸ナトリウム、Ｎ−アセチル−ＤＬ−トリプトファン、及びヒトアルブミンを含む。
【００４７】
いくつかの実施形態では、本開示は、虚血再灌流障害を有する器官のスーパーオキシドジスムターゼ２（ＳＯＤ２またはマンガン依存性スーパーオキシドジスムターゼ（ＭｎＳＯＤ））の活性を増加させる方法を包含する。この方法は、２０ｐｐｍ以下のＮＯｘガスを含む組成物を器官に直接連続して投与することを含み、ＭｎＳＯＤの活性は、本開示の組成物と接触していない対照器官と比較して、器官で増加する。例えば、ＭｎＳＯＤの活性は、同様の条件下で治療された器官と比較して、５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、または９５％増加し得るが、それは直接及び連続的にＮＯｘガスを投与されるわけではない。ＭｎＳＯＤの活性を測定する方法は、当技術分野で公知である。ＮＯｘガスを含む適切な組成物はセクション（ａ）に記載されている。好ましい実施形態では、組成物は灌流液、さらにより好ましくは無細胞灌流液であり、器官は心臓、肺、または腎臓である。さらなる実施形態では、無細胞灌流液は、Ｓｔｅｅｎ  Ｓｏｌｕｔｉｏｎ（商標）であり、任意選択でカプリル酸ナトリウム、Ｎ−アセチル−ＤＬ−トリプトファン、及びヒトアルブミンを含む。
【００４８】
他の実施形態では、本開示は、虚血再灌流障害を有する器官におけるニトロチロシンの形成を阻害する方法を包含する。この方法は、２０ｐｐｍ以下のＮＯｘガスを含む組成物を器官に直接連続して投与することを含み、本発明の組成物と接触していない対照器官と比較して、器官におけるニトロチロシン付加物の形成が阻害される。例えば、ニトロチロシンの形成は、同様の条件下で治療された器官と比較して、５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、または９５％阻害され得るが、それは直接及び連続的にＮＯｘガスを投与されるわけではない。ニトロチロシン付加物の形成を測定する方法は、当技術分野で公知である。ＮＯｘガスを含む適切な組成物はセクション（ａ）に記載されている。好ましい実施形態では、組成物は灌流液、さらにより好ましくは無細胞灌流液であり、器官は心臓、肺、または腎臓である。さらなる実施形態では、無細胞灌流液は、Ｓｔｅｅｎ  Ｓｏｌｕｔｉｏｎ（商標）であり、任意選択でカプリル酸ナトリウム、Ｎ−アセチル−ＤＬ−トリプトファン、及びヒトアルブミンを含む。
【００４９】
特定の実施形態では、本開示は、虚血再灌流障害を有する器官におけるミトコンドリア複合体Ｉ活性、複合体ＩＩ活性、複合体ＩＩＩ活性、複合体ＩＶ活性、またはそれらの組み合わせの不活性化を防止する方法を包含する。この方法は、２０ｐｐｍ以下のＮＯｘガスを含む組成物を器官に直接連続して投与することを含み、２０ｐｐｍ以下のＮＯｘガスを投与することは、対照器官と比較して、ミトコンドリア複合体Ｉ、複合体ＩＩ、複合体ＩＩＩ、複合体ＩＶ、またはそれらの組み合わせの活性の不活化を防止する。一実施形態では、２０ｐｐｍ以下のＮＯｘガスを含む組成物を器官に直接連続して投与することにより、ミトコンドリア複合体Ｉ活性の不活化が防止される。別の実施形態では、２０ｐｐｍ以下のＮＯｘガスを含む組成物を器官に直接連続して投与することにより、ミトコンドリア複合体ＩＩ活性の不活化が防止される。さらに別の実施形態では、２０ｐｐｍ以下のＮＯｘガスを含む組成物を器官に直接連続して投与することにより、ミトコンドリア複合体ＩＩＩ活性の不活化が防止される。別の実施形態では、２０ｐｐｍ以下のＮＯｘガスを含む組成物を器官に直接連続して投与することにより、ミトコンドリア複合体ＩＶ活性の不活性化が防止される。好ましい実施形態では、２０ｐｐｍ以下のＮＯｘガスを含む組成物を器官に直接連続して投与することにより、ミトコンドリア複合体Ｉ及びミトコンドリア複合体ＩＩ活性の不活性化が防止される。別の好ましい実施形態では、２０ｐｐｍ以下のＮＯｘガスを含む組成物を器官に直接連続して投与することにより、ミトコンドリア複合体ＩＩ及びミトコンドリア複合体ＩＩＩ活性の不活性化が防止される。例えば、上記の実施形態のそれぞれにおける活性の不活性化は、同様の条件下で治療された器官と比較して、５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、または９５％阻害され得るが、それは直接及び連続的にＮＯｘガスを投与されるわけではない。ミトコンドリア複合体Ｉ活性、複合体ＩＩ活性、複合体ＩＩＩ活性、または複合体ＩＶ活性を測定する方法は、当技術分野で公知である。ＮＯｘガスを含む適切な組成物はセクション（ａ）に記載されている。好ましい実施形態では、組成物は灌流液、さらにより好ましくは無細胞灌流液であり、器官は心臓、肺、または腎臓である。さらなる実施形態では、無細胞灌流液は、Ｓｔｅｅｎ  Ｓｏｌｕｔｉｏｎ（商標）であり、任意選択でカプリル酸ナトリウム、Ｎ−アセチル−ＤＬ−トリプトファン、及びヒトアルブミンを含む。
【００５０】
上記の実施形態のそれぞれにおいて、２０ｐｐｍ以下のＮＯｘガスを含む組成物の投与は、器官の生存率を改善するのに必要な時間であり得る。例えば、いくつかの実施形態では、投与は、５分、１０分、１５分、３０分または６０分間であり得る。他の実施形態では、投与は１時間、２時間、３時間、４時間、５時間、６時間、７時間、８時間、９時間、１０時間、１１時間、１２時間またはそれより長くてもよい。器官が移植の目的とされている実施形態では、ＮＯｘガスの投与は、合計で１２時間を超えないことが好ましい。特定の実施形態では、投与は虚血と同時に始まる。他の実施形態において、投与は、虚血が始まった後しばらくしてから始まるが、優先的には虚血の開始に可能な限り近い時間に開始する。いくつかの実施形態において、投与は、虚血の開始の約５分、１０分、１５分、２０分、２５分、または３０分後に始まる。また、投与は再灌流中に開始することも、別法として再灌流が始まった後に継続することもできる。場合によっては、再灌流が始まってから１時間、２時間、３時間、４時間、５時間、６時間、７時間、８時間、９時間、１０時間、１１時間、１２時間または１２時間より長く、投与を続けることができる。
【００５１】
さらなる実施形態では、上記の方法は、約２０ｐｐｍ〜約４０ｐｐｍのＮＯｘガス（「負荷用量」）を含む組成物が、２０ｐｐｍ以下のＮＯｘガスを含む組成物を投与する直前の最長約１時間投与される、追加のステップを含むことができる。例えば、負荷用量は、約１０分、約１５分、約２０分、約３０分、または約１０分〜約３０分の間投与されてもよい。別の例において、負荷用量は、約３０分、約３５分、約４０分、約４０分、約４５分、約５０分、約５５分、約６０分、または３０分〜６０分の間投与されてもよい。一酸化窒素濃度を除いて、２つの組成は同じであってもよい。あるいは、２つの組成は異なっていてもよい。負荷用量における一酸化窒素の濃度は、一酸化窒素濃度が２０ｐｐｍ以下になるまで、約１時間までの期間にわたって徐々に減少させることができる。減少率は一定でも、一定でなくてもよい。あるいは、負荷用量における一酸化窒素の濃度は、約１時間までの期間にわたって一定に保持され、その後、２０ｐｐｍ以下の一酸化窒素濃度まで減少してもよい。好ましい実施形態では、２つの組成物は同じであり、組成物は灌流液、好ましくは無細胞灌流液である。さらなる実施形態では、無細胞灌流液は、Ｓｔｅｅｎ  Ｓｏｌｕｔｉｏｎ（商標）であり、任意選択でカプリル酸ナトリウム、Ｎ−アセチル−ＤＬ−トリプトファン、及びヒトアルブミンを含む。例示的な実施形態では、器官は心臓、肺、または腎臓である。
【００５２】
（ｃ）移植を目的とした器官の生存率を改善する方法
虚血再灌流障害を有する器官は、移植を目的とした器官を包含する。したがって、本開示は、移植を目的とした器官の生存率を改善する方法を包含する。そのような方法は、ＮＯｘガスを含む組成物を、器官灌流システムまたは換気を介して器官に直接最長１２時間にわたって連続して投与することを含む。別の言い方をすれば、器官の調達時からレシピエントへ移植するときまで、器官がＮＯｘガスと直接接触し、中断することはない。本明細書で使用する場合、調達とは、器官のドナーの特定と器官の摘出の両方を指し、いずれかの用語と互換的に使用することができる。いくつかの実施形態において、組成物は、器官がドナーから採取された後に投与される。他の実施形態では、組成物は、器官がドナーの体内にある間に投与される。これらの実施形態では、ドナーは、脳死のドナーまたは心停止ドナーであり得る。いくつかの例では、投与は、５分、１０分、１５分、３０分または６０分間であり得る。他の例では、投与は１時間、２時間、３時間、４時間、５時間、６時間、７時間、８時間、９時間、１０時間、１１時間、１２時間またはそれより長くてもよい。ＮＯｘガスを含む適切な組成物はセクション（ａ）に記載されている。好ましい実施形態では、組成物は灌流液であり、さらにより好ましくは無細胞灌流液である。さらなる実施形態では、無細胞灌流液は、Ｓｔｅｅｎ  Ｓｏｌｕｔｉｏｎ（商標）であり、任意選択でカプリル酸ナトリウム、Ｎ−アセチル−ＤＬ−トリプトファン、及びヒトアルブミンを含む。理論に拘束されることを望まないが、本開示の方法は、先行して移植の基準を満たさなかった器官の生存率を改善することにより、移植に利用可能な器官の数を増加させることができ、そのためより多くのドナー（例えば、脳死近縁のドナー、心停止ドナーなど）から得るより多くの器官を使用できると考えられる。移植を目的とした器官の生存率の改善には、一部には、ミトコンドリア機能の維持または器官の酸化的損傷の減少が含まれ得る。また、器官の生存率を評価するための当技術分野で公知の他の手段を使用してもよく、それは細胞の機能の測定（例えば、代謝能力、ＡＴＰ含有量など）、細胞の損傷の測定（例えば、組織学的評価、形態変化など）、炎症の測定、及び／または器官の機能の測定を含むがそれらに限定されない。例示的な実施形態では、器官は心臓、肺、または腎臓である。
【００５３】
一実施形態では、本開示は、移植を目的とする器官のミトコンドリア機能を維持する方法を包含する。本明細書で使用される場合、ミトコンドリア機能は、ミトコンドリアの結合状態の指標である呼吸制御比（ＲＣＲ）によって測定され得る。一般的に言えば、ＲＣＲは、ＡＤＰが定常状態濃度（状態４）にリン酸化された後の酸化速度に対する、過剰な基質とアデノシン二リン酸の存在下での酸化速度（状態３）の比率を表す。いくつかの実施形態では、２０ｐｐｍ以下のＮＯｘガスを含む組成物を器官に直接投与することにより、移植を目的とした器官においてミトコンドリア機能が顕著に維持される。本明細書で使用する場合、「顕著に維持された」とは、本明細書に記載のＮＯｘガスで治療された器官と、ＮＯｘガスで治療されていない対照器官との間のミトコンドリア機能の５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、または９５％未満の差を示す。別の言い方をすれば、顕著に維持されているとは、同様の虚血再灌流障害を経たが直接連続的にＮＯｘガスを投与されていない、移植を目的とした同様の器官と比較して、ミトコンドリア機能が改善したことを示し得る。ＮＯｘガスを含む適切な組成物はセクション（ａ）に記載されている。好ましい実施形態では、組成物は灌流液、さらにより好ましくは無細胞灌流液であり、器官は心臓、肺、または腎臓である。さらなる実施形態では、無細胞灌流液は、Ｓｔｅｅｎ  Ｓｏｌｕｔｉｏｎ（商標）であり、任意選択でカプリル酸ナトリウム、Ｎ−アセチル−ＤＬ−トリプトファン、及びヒトアルブミンを含む。
【００５４】
特定の実施形態では、本開示は、移植を目的としたした器官への酸化的損傷を減少させる方法を包含する。例えば、ミトコンドリア活性酸素種（ｍｔＲＯＳ）は、移植を目的とした器官内で減少し得る。そのような方法は、２０ｐｐｍ以下のＮＯｘガスを含む組成物を器官に直接連続して投与することを含む。直接連続して投与することは、器官がドナーから摘出される前、輸送／保管中、レシピエントへ移植している間、レシピエントへの移植後、またはそれらの任意の組み合わせで起こり得る。好ましい実施形態では、器官の摘出時からレシピエントへ移植するときまで、器官がＮＯｘガスと直接接触し、中断することはない。本明細書で使用される場合、「酸化的損傷の減少」または「酸化的損傷の低減」は、同様の条件下で治療される器官と比較して測定され得るが、それは直接及び連続的にＮＯｘガスを投与されない。例えば、酸化的損傷は、同様の条件下で治療された器官と比較して、５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、または９５％減少し得るが、それは直接及び連続的にＮＯｘガスを投与されるわけではない。特定の実施形態では、ミトコンドリアの活性酸素種（ｍｔＲＯＳ）は、非治療対照と比較して、直接連続してＮＯｘが投与された虚血再灌流障害の器官の内部で減少する。ＮＯｘガスを含む適切な組成物はセクション（ａ）に記載されている。好ましい実施形態では、組成物は灌流液、さらにより好ましくは無細胞灌流液であり、器官は心臓、肺、または腎臓である。さらなる実施形態では、無細胞灌流液は、Ｓｔｅｅｎ  Ｓｏｌｕｔｉｏｎ（商標）であり、任意選択でカプリル酸ナトリウム、Ｎ−アセチル−ＤＬ−トリプトファン、及びヒトアルブミンを含む。
【００５５】
いくつかの実施形態では、本開示は、移植を目的とした器官のスーパーオキシドジスムターゼ２（ＳＯＤ２またはマンガン依存性スーパーオキシドジスムターゼ（ＭｎＳＯＤ））の活性を増加させる方法を包含する。この方法は、２０ｐｐｍ以下のＮＯｘガスを含む組成物を器官に直接連続して投与することを含み、ＭｎＳＯＤの活性は、本開示の組成物と接触していない対照器官と比較して、器官で増加する。例えば、ＭｎＳＯＤの活性は、同様の条件下で治療された器官と比較して、５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、または９５％増加し得るが、それは直接及び連続的にＮＯｘガスを投与されるわけではない。直接連続して投与することは、器官がドナーから摘出される前、輸送／保管中、レシピエントへ移植している間、レシピエントへの移植後、またはそれらの任意の組み合わせで起こり得る。好ましい実施形態では、器官の摘出時からレシピエントへ移植するときまで、器官がＮＯｘガスと直接接触し、中断することはない。ＭｎＳＯＤの活性を測定する方法は、当技術分野で公知である。ＮＯｘガスを含む適切な組成物はセクション（ａ）に記載されている。好ましい実施形態では、組成物は灌流液、さらにより好ましくは無細胞灌流液であり、器官は心臓、肺、または腎臓である。さらなる実施形態では、無細胞灌流液は、Ｓｔｅｅｎ  Ｓｏｌｕｔｉｏｎ（商標）であり、任意選択でカプリル酸ナトリウム、Ｎ−アセチル−ＤＬ−トリプトファン、及びヒトアルブミンを含む。
【００５６】
他の実施形態では、本開示は、移植を目的とする器官におけるニトロチロシンの形成を阻害する方法を包含する。この方法は、２０ｐｐｍ以下のＮＯｘガスを含む組成物を器官に直接連続して投与することを含み、本開示の組成物と接触していない対照器官と比較して、器官におけるニトロチロシン付加物の形成が阻害される。例えば、ニトロチロシンの形成は、同様の条件下で治療された器官と比較して、５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、または９５％阻害され得るが、それは直接及び連続的にＮＯｘガスを投与されるわけではない。直接連続して投与することは、器官がドナーから摘出される前、輸送／保管中、レシピエントへ移植している間、レシピエントへの移植後、またはそれらの任意の組み合わせで起こり得る。好ましい実施形態では、器官の摘出時からレシピエントへ移植するときまで、器官がＮＯｘガスと直接接触し、中断することはない。ニトロチロシン付加物の形成を測定する方法は、当技術分野で公知である。ＮＯｘガスを含む適切な組成物はセクション（ａ）に記載されている。好ましい実施形態では、組成物は灌流液、さらにより好ましくは無細胞灌流液であり、器官は心臓、肺、または腎臓である。さらなる実施形態では、無細胞灌流液は、Ｓｔｅｅｎ  Ｓｏｌｕｔｉｏｎ（商標）であり、任意選択でカプリル酸ナトリウム、Ｎ−アセチル−ＤＬ−トリプトファン、及びヒトアルブミンを含む。
【００５７】
特定の実施形態では、本開示は、移植を目的とした器官におけるミトコンドリア複合体Ｉ活性、複合体ＩＩ活性、複合体ＩＩＩ活性、複合体ＩＶ活性、またはそれらの組み合わせの不活性化を防止する方法を包含する。この方法は、２０ｐｐｍ以下のＮＯｘガスを含む組成物を器官に直接連続して投与することを含み、２０ｐｐｍ以下のＮＯｘガスを投与することは、対照器官と比較して、ミトコンドリア複合体Ｉ、複合体ＩＩ、複合体ＩＩＩ、複合体ＩＶ、またはそれらの組み合わせの活性の不活化を防止する。一実施形態では、２０ｐｐｍ以下のＮＯｘガスを含む組成物を器官に直接連続して投与することにより、ミトコンドリア複合体Ｉ活性の不活化が防止される。別の実施形態では、２０ｐｐｍ以下のＮＯｘガスを含む組成物を器官に直接連続して投与することにより、ミトコンドリア複合体ＩＩ活性の不活性化が防止される。さらに別の実施形態では、２０ｐｐｍ以下のＮＯｘガスを含む組成物を器官に直接連続して投与することにより、ミトコンドリア複合体ＩＩＩ活性の不活化が防止される。別の実施形態では、２０ｐｐｍ以下のＮＯｘガスを含む組成物を器官に直接連続して投与することにより、ミトコンドリア複合体ＩＶ活性の不活性化が防止される。好ましい実施形態では、２０ｐｐｍ以下のＮＯｘガスを含む組成物を器官に直接連続して投与することにより、ミトコンドリア複合体Ｉ及びミトコンドリア複合体ＩＩ活性の不活性化が防止される。別の好ましい実施形態では、２０ｐｐｍ以下のＮＯｘガスを含む組成物を器官に直接連続して投与することにより、ミトコンドリア複合体ＩＩ及びミトコンドリア複合体ＩＩＩ活性の不活性化が防止される。例えば、上記の実施形態のそれぞれにおける活性の不活性化は、同様の条件下で治療された器官と比較して、５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、または９５％阻害され得るが、それは直接及び連続的にＮＯｘガスを投与されるわけではない。直接連続して投与することは、器官がドナーから摘出される前、輸送／保管中、レシピエントへ移植している間、レシピエントへの移植後、またはそれらの任意の組み合わせで起こり得る。好ましい実施形態では、器官の摘出時からレシピエントへ移植するときまで、器官がＮＯｘガスと直接接触し、中断することはない。ミトコンドリア複合体Ｉ活性、複合体ＩＩ活性、複合体ＩＩＩ活性、または複合体ＩＶ活性を測定する方法は、当技術分野で公知である。ＮＯｘガスを含む適切な組成物はセクション（ａ）に記載されている。好ましい実施形態では、組成物は灌流液、さらにより好ましくは無細胞灌流液であり、器官は心臓、肺、または腎臓である。さらなる実施形態では、無細胞灌流液は、Ｓｔｅｅｎ  Ｓｏｌｕｔｉｏｎ（商標）であり、任意選択でカプリル酸ナトリウム、Ｎ−アセチル−ＤＬ−トリプトファン、及びヒトアルブミンを含む。
【００５８】
上記の各方法において、器官灌流システムを介した器官へのＮＯｘガスを含む組成物の直接投与は、器官灌流システム、人工呼吸器、またはそれらの任意の組み合わせを介して、１時間、２時間、３時間、４時間、５時間、６時間、７時間、８時間、９時間、１０時間、１１時間、または１２時間にわたり生じ得る。器官灌流システムと人工呼吸器を組み合わせて使用する実施形態では、器官灌流システムと人工呼吸器を同時に使用して、ＮＯｘガスを含む組成物を器官に直接投与してもよい。あるいは、または加えて、器官灌流システムと人工呼吸器を連続して使用して、ＮＯｘガスを含む組成物を器官に直接、例えば２つの投与方法の間で様々に量を重複させて（例えば、重複無し、重複が数秒、数分、または数時間）投与することができる。例えば、最初に人工呼吸器で、次に灌流システムで、またはその逆で投与を行うことができる。
【００５９】
さらなる実施形態では、上記の方法は、約２０ｐｐｍ〜約４０ｐｐｍのＮＯｘガス（「負荷用量」）を含む組成物が、２０ｐｐｍ以下のＮＯｘガスを含む組成物を投与する直前の最長約１時間投与され、ＮＯｘガスの投与は、合計で１２時間を超えない、追加のステップを含むことができる。例えば、負荷用量は、約１０分、約１５分、約２０分、約３０分、または約１０分〜約３０分の間投与することができ、その場合２０ｐｐｍ以下のＮＯｘガスを含む組成物は、約１１．８時間以下投与される。別の例では、負荷用量は、約３０分、約３５分、約４０分、約４０分、約４５分、約５０分、約５５分、約６０分、または３０分〜６０分の間投与されてもよく、その場合２０ｐｐｍ以下のＮＯｘガスを含む組成物は、１１．５時間以下投与される。一酸化窒素濃度を除いて、２つの組成は同じであってもよい。あるいは、２つの組成は異なっていてもよい。負荷用量における一酸化窒素の濃度は、一酸化窒素濃度が２０ｐｐｍ以下になるまで、約１時間までの期間にわたって徐々に減少させることができる。減少率は一定でも、一定でなくてもよい。あるいは、負荷用量における一酸化窒素の濃度は、約１時間までの期間にわたって一定に保持され、その後、２０ｐｐｍ以下の一酸化窒素濃度まで減少してもよい。好ましい実施形態では、２つの組成物は同じであり、組成物は灌流液、好ましくは無細胞灌流液である。さらなる実施形態では、無細胞灌流液は、Ｓｔｅｅｎ  Ｓｏｌｕｔｉｏｎ（商標）であり、任意選択でカプリル酸ナトリウム、Ｎ−アセチル−ＤＬ−トリプトファン、及びヒトアルブミンを含む。例示的な実施形態では、器官は心臓、肺、または腎臓である。
【００６０】
（ｄ）移植を目的とした器官の移植後の能力を改善する方法
本開示の別の態様は、移植を目的とする器官の移植後の能力を改善する方法を包含する。この方法は、２０ｐｐｍ以下のＮＯｘガスを含む組成物を、器官灌流システムを介して器官に直接最長１２時間連続して投与することを含む。いくつかの例では、投与は、５分、１０分、１５分、３０分または６０分間であり得る。他の例では、投与は１時間、２時間、３時間、４時間、５時間、６時間、７時間、８時間、９時間、１０時間、１１時間、または１２時間であってもよい。ＮＯｘガスを含む適切な組成物はセクション（ａ）に記載されている。好ましい実施形態では、組成物は灌流液であり、さらにより好ましくは無細胞灌流液である。移植を目的とした器官の移植後の能力の改善は、ミトコンドリア機能の維持または酸化的損傷の減少を含み得る。また、器官の生存率を評価するための当技術分野で公知の他の手段を使用してもよく、それは細胞の機能の測定（例えば、代謝能力、ＡＴＰ含有量など）、細胞の損傷の測定（例えば、組織学的評価、形態変化など）、炎症の測定、及び／または器官の機能の測定を含むがそれらに限定されない。例示的な実施形態では、器官は心臓、肺、または腎臓である。
【００６１】
一実施形態では、本開示は、移植後の器官においてミトコンドリア機能を維持する方法を包含する。本明細書で使用される場合、ミトコンドリア機能は、ミトコンドリアの結合状態の指標である呼吸制御比（ＲＣＲ）によって測定され得る。一般的に言えば、ＲＣＲは、ＡＤＰが定常状態濃度（状態４）にリン酸化された後の酸化速度に対する、過剰な基質とアデノシン二リン酸の存在下での酸化速度（状態３）の比率を表す。いくつかの実施形態では、２０ｐｐｍ以下のＮＯｘガスを含む組成物を器官に直接投与することにより、移植後の器官においてミトコンドリア機能が顕著に維持される。本明細書で使用する場合、「顕著に維持された」とは、本明細書に記載のＮＯｘガスで治療された器官と、ＮＯｘガスで直接連続的に治療されていない対照器官との間のミトコンドリア機能の５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、または９５％未満の差を示す。別の言い方をすれば、顕著に維持されているとは、同様の虚血再灌流障害を経たが直接連続的にＮＯｘガスを投与されていない同様の器官と比較して、ミトコンドリア機能が改善したことを示し得る。ＮＯｘガスを含む適切な組成物はセクション（ａ）に記載されている。好ましい実施形態では、組成物は灌流液、さらにより好ましくは無細胞灌流液であり、器官は心臓、肺、または腎臓である。さらなる実施形態では、無細胞灌流液は、Ｓｔｅｅｎ  Ｓｏｌｕｔｉｏｎ（商標）であり、任意選択でカプリル酸ナトリウム、Ｎ−アセチル−ＤＬ−トリプトファン、及びヒトアルブミンを含む。
【００６２】
他の実施形態では、本開示は、移植後の器官の酸化的損傷を減少させる方法を包含する。一般的に言えば、この方法は、２０ｐｐｍ以下のＮＯｘガスを含む組成物を器官に直接連続して投与することを含む。本明細書で使用される場合、「酸化的損傷の減少」または「酸化的損傷の低減」は、同様の条件下で治療される器官と比較して測定され得るが、それは直接及び連続的にＮＯｘガスを投与されない。例えば、酸化的損傷は、同様の条件下で治療された器官と比較して、５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、または９５％減少し得るが、それは直接及び連続的にＮＯｘガスを投与されるわけではない。特定の実施形態では、ミトコンドリアの活性酸素種（ｍｔＲＯＳ）は、非治療対照と比較して、直接連続ＮＯｘが投与された移植後の器官内で減少する。ＮＯｘガスを含む適切な組成物はセクション（ａ）に記載されている。好ましい実施形態では、組成物は灌流液、さらにより好ましくは無細胞灌流液であり、器官は心臓、肺、または腎臓である。さらなる実施形態では、無細胞灌流液は、Ｓｔｅｅｎ  Ｓｏｌｕｔｉｏｎ（商標）であり、任意選択でカプリル酸ナトリウム、Ｎ−アセチル−ＤＬ−トリプトファン、及びヒトアルブミンを含む。
【００６３】
さらなる実施形態では、上記の方法は、約２０ｐｐｍ〜約４０ｐｐｍのＮＯｘガス（「負荷用量」）を含む組成物が、２０ｐｐｍ以下のＮＯｘガスを含む組成物を投与する直前の最長約１時間投与され、ＮＯｘガスの投与は、合計で１２時間を超えない、追加のステップを含むことができる。例えば、負荷用量は、約１０分、約１５分、約２０分、約３０分、または約１０分〜約３０分の間投与することができ、その場合２０ｐｐｍ以下のＮＯｘガスを含む組成物は、約１１．８時間以下投与される。別の例では、負荷用量は、約３０分、約３５分、約４０分、約４０分、約４５分、約５０分、約５５分、約６０分、または３０分〜６０分の間投与されてもよく、その場合２０ｐｐｍ以下のＮＯｘガスを含む組成物は、１１．５時間以下投与される。一酸化窒素濃度を除いて、２つの組成は同じであってもよい。あるいは、２つの組成は異なっていてもよい。負荷用量における一酸化窒素の濃度は、一酸化窒素濃度が２０ｐｐｍ以下になるまで、約１時間までの期間にわたって徐々に減少させることができる。減少率は一定でも、一定でなくてもよい。あるいは、負荷用量における一酸化窒素の濃度は、約１時間までの期間にわたって一定に保持され、その後、２０ｐｐｍ以下の一酸化窒素濃度まで減少してもよい。好ましい実施形態では、２つの組成物は同じであり、組成物は灌流液、好ましくは無細胞灌流液である。例示的な実施形態では、器官は心臓、肺、または腎臓である。さらなる実施形態では、無細胞灌流液は、Ｓｔｅｅｎ  Ｓｏｌｕｔｉｏｎ（商標）であり、任意選択でカプリル酸ナトリウム、Ｎ−アセチル−ＤＬ−トリプトファン、及びヒトアルブミンを含む。
【００６４】
（ｅ）移植方法
別の態様において、本開示は、移植方法を提供する。この方法は、（ａ）２０ｐｐｍ以下のＮＯｘガスを含む組成物を、移植を目的とした器官に直接最長１２時間連続して投与すること、及び（ｂ）器官をレシピエントに移植することを含む。投与は、５分、１０分、１５分、３０分または６０分間であり得る。あるいは、投与は１時間、２時間、３時間、４時間、５時間、６時間、７時間、８時間、９時間、１０時間、１１時間、または１２時間であってもよい。いくつかの実施形態では、組成物は１ｐｐｍ〜２０ｐｐｍの一酸化窒素を含む。他の実施形態において、組成物は、約１〜約１０ｐｐｍの一酸化窒素、約５ｐｐｍ〜約１５ｐｐｍの一酸化窒素、または約１０ｐｐｍ〜２０ｐｐｍを含む。他の実施形態では、組成物は、約１ｐｐｍ、約２ｐｐｍ、約３ｐｐｍ、約４ｐｐｍ、約５ｐｐｍ、約６ｐｐｍ、約７ｐｐｍ、約８ｐｐｍ、約９ｐｐｍ、約１０ｐｐｍ、約１１ｐｐｍ、約１２ｐｐｍ、約１３ｐｐｍ、約１４ｐｐｍ、約１５ｐｐｍ、約１６ｐｐｍ、約１７ｐｐｍ、約１８ｐｐｍ、約１９ｐｐｍ、または約２０ｐｐｍの一酸化窒素を含む。ＮＯｘガスを含む適切な組成物はセクション（ａ）に記載されている。好ましい実施形態では、組成物は灌流液であり、さらにより好ましくは無細胞灌流液である。さらなる実施形態では、無細胞灌流液は、Ｓｔｅｅｎ  Ｓｏｌｕｔｉｏｎ（商標）であり、任意選択でカプリル酸ナトリウム、Ｎ−アセチル−ＤＬ−トリプトファン、及びヒトアルブミンを含む。例示的な実施形態では、器官は心臓、肺、または腎臓である。
【００６５】
特定の実施形態において、移植を目的とする器官は、上記のステップ（ａ）の前にドナーから摘出されている。これらの実施形態において、投与は、虚血が始まった後しばらくしてから始まるが、優先的には虚血の開始に可能な限り近い時間に開始する。例えば、投与は、虚血の開始の約５分、１０分、１５分、２０分、２５分、または３０分後に始まってよい。投与のタイミングは、再灌流の開始に対応していても、していなくてもよい。
【００６６】
さらなる実施形態では、この方法は、約２０ｐｐｍ〜約４０ｐｐｍのＮＯｘガス（「負荷用量」）を含む組成物が、２０ｐｐｍ以下のＮＯｘガスを含む組成物を投与する直前の最長約１時間（「負荷期間」）投与される、追加のステップを含むことができる。例えば、負荷用量は、約１０分、約１５分、約２０分、約３０分、または約１０分〜約３０分の間投与されてもよい。別の例において、負荷用量は、約３０分、約３５分、約４０分、約４０分、約４５分、約５０分、約５５分、約６０分、または３０分〜６０分の間投与されてもよい。一酸化窒素濃度を除いて、２つの組成は同じであってもよい。あるいは、２つの組成は異なっていてもよい。負荷用量における一酸化窒素の濃度は、一酸化窒素濃度が２０ｐｐｍ以下になるまで、負荷期間にわたって徐々に減少させることができる。減少率は一定でも、一定でなくてもよい。あるいは、負荷用量における一酸化窒素の濃度は、負荷期間にわたって一定に保持され、その後、２０ｐｐｍ以下の一酸化窒素濃度まで減少してもよい。好ましい実施形態では、２つの組成物は同じであり、組成物は灌流液、好ましくは無細胞灌流液である。さらなる実施形態では、無細胞灌流液は、Ｓｔｅｅｎ  Ｓｏｌｕｔｉｏｎ（商標）であり、任意選択でカプリル酸ナトリウム、Ｎ−アセチル−ＤＬ−トリプトファン、及びヒトアルブミンを含む。例示的な実施形態では、器官は心臓、肺、または腎臓である。
【００６７】
実施例
以下の例は、本発明の様々な反復を示す。
【００６８】
実施例１：肺移植プロトコル
本試験は、修正版標準肺ドナー選択基準に従って、合計２０の肺（ｇＮＯ及び灌流液の８つの肺、灌流液のみの８つの肺、及びｇＮＯ換気及び灌流液の４つの肺）を含む。３群試験には、灌流液に加えられたｇＮＯ、灌流液のみ、及びｇＮＯ換気と灌流液が含まれる（パイロット研究）。無細胞灌流液（Ｓｔｅｅｎ  ｓｏｌｕｔｉｏｎ）を伴うＸＶｉｖｏ灌流デバイスシステムを使用する。肺の最長低温虚血時間は８〜１０時間である。Ｅｘ−Ｖｉｖｏの肺灌流の期間は最長１２時間である。肺の健康状態は、評価システム、バイオマーカーの評価、及び組織病理学的評価によって評価される。
【００６９】
評価システム
評価システムは、３変数の複合尺度を使用した０〜１０の格付け（総合スコア）を含む。３変数は、１）４つのカテゴリを使用して０〜４として重み付けされたデルタＰａＯ２：０＝＜３５０ｍｍＨｇ；１＝≧３５０〜＜４００Ｈｇ；２＝≧４００〜＜４５０ｍｍＨｇ；３＝≧４５０〜＜５００ｍｍＨｇ；４＝≧５００ｍｍＨｇ、２）０〜４（ベースラインからの変化）として重み付けされた肺の静的コンプライアンス：０＝コンプライアンスの改善または悪化なし；１＝１〜３％の改善；２＝４〜７％の改善；３＝８〜１１％の改善、及び４＝１２〜１５％のコンプライアンスの改善、及び３）０〜２として重み付けされた肺血管抵抗（ＰＶＲ）：０＝ＰＶＲの変化またはＰＶＲの増加なし、１＝ＰＶＲの１〜７％の減少；２＝ＰＶＲの８〜１５％の減少である。
【００７０】
バイオマーカーの評価
損傷評価分子タンパク質（ＤＡＭＰ）、高移動度グループボックス−１（ＨＭＧＢ１）、Ｓ１００Ａ８（ＭＲＰ８、カルグラニュリンＡ）、Ｓ１００Ａ９（ＭＲＰ１４、カルグラニュリンＢ）、及び血清アミロイドＡ（ＳＡＡ）が、評価されるバイオマーカーである。対象のサイトカインは、ＴＮＦα−１、ＩＬ１−β、ＩＬ−６、ＮＬＲＰ３、ＩＬ−１０、及びドナー細胞フリーＤＮＡである。
【００７１】
組織病理学的評価
評価される組織病理学的パラメータは、間質性及び肺胞内浮腫、硝子膜の形成、及び血管の完全性／損傷の証拠（ＣＤ３１染色）である。
【００７２】
ドナー肺の調達
ドナーから器官を回収した後の現在の臨床上での実践は、レシピエントに移植されるまで低温で静的に保存するためのものである。回収中、肺は、局所の冷却及び肺の換気と組み合わせて、低カリウムデキストラン保存溶液を使用した、低温の肺の洗い流しを経る。その後、肺は静的に膨張した状態にて４℃で輸送される。低体温は、虚血に直面して、細胞の生存率を維持した状態で代謝活性が低下し、細胞死のプロセスを本質的に減速する（３７℃で代謝率の５％）。そのため、低温保存は、先行技術の肺の保存の主力である。しかし、器官の代謝機能の大幅な低下が存在し、そのため、意義ある肺の評価と回復ができずにいる。
【００７３】
この試験のドナー肺の調達技術は、以下の通りである。気管支鏡検査と胸骨正中切開を行う。心膜と複数の腔部を開く。両方の肺を補充し、１００％ＦｉＯ２チャレンジでＰＯ２を評価する。全身にヘパリン処置をする。主要肺大動脈（ＰＡ）に巾着縫合を施す。巾着を通してＰＡにカニューレを挿入する。カニューレを脱気し、脱気したＰｅｒｆａｄｅｘチューブに接続する（Ｐｅｒｆａｄｅｘバッグは重力（非加圧）によって排出されるのみであるべきで、バッグは肺より１メートル以上高くならないようにすべきである）。５００ｍｃｇのＡｌｐｒｏｓｔｉｄｉｌを主要ＰＡに直接投与する。上大静脈（ＳＶＣ）、開孔した左心房及び右心房、及びクロスクランプの大動脈を結紮する。
【００７４】
４リットルの順行性のＰｅｒｆａｄｅｘを供給する。右心房と左心房の両方で、排水を迅速かつ急速に確実に排出する。両方の肺に局所的に氷を置く（ただし、１サイクルに使用する肺は１つのみ）。４〜６ｍｌ／ｋｇ／分という１回換気量と１分あたり１０回という呼吸数で、室内の空気ＦｉＯ２での換気を維持する。注入が完了したら、心臓を切除する。心臓を移植している場合は、ＰＡ分岐部でＰＡを切開する。ＰＡの分岐は分割しない。心臓を移植していない場合は、肺動脈弁のすぐ近傍のＲＶＯＴでＰＡを切開する。左心房用カフが依然無傷であることを確認する。低温Ｐｅｒｆａｄｅｘ（合計２リットル）を、逆行の肺静脈に注入する。横隔膜のレベルで心膜を両側から切開し、横切るようにして心膜を横隔膜から完全に分離する。両側の下肺靭帯を切開する。後縦膜頭側から気管分岐部まで、後側心膜を解剖する。輪状軟骨のレベルまで気管頭側を解剖する。気管内チューブを喉頭のレベルまで引き込む。５０％ＦｉＯ２において、肺を総肺容量の５０％に膨張させる。輪状軟骨の上方で気管を２つのステープル負荷で分割する。横隔膜に向かって、後縦隔（食道）尾部から後部気管を解剖する。大動脈弓から左側ＰＡを解剖し、動脈管索を分割する。肺を摘出し、氷冷したＰｅｒｆａｄｅｘ溶液にて保存する。心臓が移植用に調達されている場合は、ドナーの下行大動脈を１０ｃｍ切除し、肺と同じ低温Ｐｅｒｆａｄｅｘ溶液バッグに入れる。これは後に肺動脈の再建に使用される。
【００７５】
Ｅｘ−Ｖｉｖｏ肺灌流（ＥＶＬＰ）
ＥＶＬＰの主な原理は、ドナー器官の温度、水分及び無菌性を維持する密閉容器内で体外の肺を灌流及び換気することからなる。ＥＶＬＰ回路は、肺動脈（ＰＡ）に入る前に膜ガス交換器と白血球除去フィルターを通過しながら灌流液を循環させる遠心ポンプからなる。このシステムは、心臓手術の体外回路（ＥＣＣ）に使用されるものと極めて類似している。Ａｃｅｌｌｕｌａｒ  Ｓｔｅｅｎの溶液は、ＥＶＬＰのプロセスの灌流液として使用される。
【００７６】
簡潔に言えば、ＥＶＬＰのプロセスは以下の通りである。肺は、換気中に肺を安定した位置に固定し、暖かく湿った環境を提供するために、特別な被覆されたプラスチック製チャンバーに配置される。灌流液（遠心ポンプで推進させる）は、肺動脈（ＰＡ）に配置されたカニューレから肺に入る。肺から戻る流れは、重力により、肺静脈（ＰＶ）を介し受動的であり、灌流液は、ポンプと膜型人工肺を介して再循環させる前にリザーバーに収集される。ガス人工肺は、酸素（６％）、二酸化炭素（８％）、及び窒素（８６％）の特別なガス混合物を備えたタンクに接続されている。人工呼吸器により肺への気道が得られ、また気管胸部チューブに接続される。
【００７７】
肺移植片（器官採取中に冷却され、静的な低温保存を経る）は、４５分間にわたって徐々に再加温される。肺灌流は、低流量（０．１０〜０．１５ｌ／分）で開始され、その後、再加温と並行して、（７０ｍｌ／ｋｇ／分での）推定心拍出量の４０〜５０％の肺動脈での供給に対して徐々に増加する。虚血再灌流障害（ＩＲＩ）が完全性を損なわせ、肺胞毛細血管膜の透過性を高め、肺水腫の形成につながる可能性があるため、器官調達後のＩＲＩによって毛細血管肺胞バリアが弱体化したらＰＡの圧力を低く保つ必要がある（＜１５〜２０ｍｍＨｇ）。
【００７８】
再加温段階中、移植片へのＯ２供給は膜型人工肺により供給され、次いでＰＡにおける通常の測定に近いｐＣＯ２及びｐＨを供給する。ＥＶＬＰのプロセスを通じてＰＡ及び左心房（ＬＡ）の圧力を継続的に測定するカテーテルをｉｎ  ｓｉｔｕに配置する。灌流液の温度が摂氏３２度（通常、灌流開始後約３０分）に達すると、肺の機械的換気が開始される。
【００７９】
以下は、ＥＶＬＰのプロセスの１９ステップの進行である。これは、包括的なプロトコルではなく、クイック参照ガイドである。
【００８０】
ステップ１．肺のＸＰＳへの輸送。ＵＮＯＳの標準に準拠させる。
【００８１】
ステップ２．肺のカニューレ挿入。ＬＡカニューレ（緑）を適切な心房の開口部に合わせてトリミングし、連続ポリプロピレン縫合で縫合する。ＰＡカニューレ（黄）は、ＰＡの腔部を開いて、ＸＶＩＶＯカニューレを挿入する。肺動脈の再建が必要な場合は、ドナーの下行大動脈のセグメントを肺動脈に縫合し、その後上記のようにカニューレを挿入する。臍テープまたはシルクタイを使用して、カニューレをグローブの所定の位置に固定し、圧力ラインの下のカニューレにタイを返す。挿管では、収縮を防ぐために気管をクランプする。ＥＴチューブを気管に挿入し、臍テープまたはシルクタイで固定する。
【００８２】
ステップ３．バックテーブルの洗い流し。１リットルの低温Ｐｅｒｆａｄｅｘを逆流洗浄し、カニューレ挿入周辺の漏れを確認する。ＥＴチューブは、クランプしたままにする。
【００８３】
ステップ４．システムの設定。ＰＧＭでＸＰＳの灌流回路を設定する。プラスチックを取り外すことでドームを開き、次いで第１の青レイヤーラッピングをバックテーブルにて開く。青テーブルの上のＸＰＳの上部バーに透明なＵ型ドレープを置き、青テーブルを覆うＸＰＳのｗクリップを固定する。Ｕ型ドレープの「Ｕ」の開口部を右側にし、チューブが通れるようにする。Ｘｖｉｖｏ機の青テーブル上でドームの第２の青レイヤーを無菌状態で開く。赤い３／８インチの排水ラインをドームの背面に取り付け、４分の１のラインをポールの外側周囲に、また赤いローラーポンプの中に通す。排水バッグから手を離して、オレンジと赤のラインをバッグに取り付ける。リザーバーの上部から二方コックまで戻りラインを追加する。赤いラインにあるリザーバーに対する二方コックを閉じて、排水バッグに対して開く。トランスデューサーをセットし、滅菌生理食塩水で洗い流し、ヒーター／クーラーに対する青いチューブを追加し、次いでＱｕａｄｒｏｘの背面に静脈ガスラインを追加する。十分な量のＯ２とトリガスが確実にあるように確認する。
【００８４】
ステップ５．システムのパージ。リザーバーに１５００ｍｌのＳＴＥＥＮを追加し、薬物（ヘパリン１０，０００ユニット、メチルプレドニゾロン５００ｍｇ、セフタジジン１ｇｍ）を追加し、最初にＣａｒｄｉｏｈｅｌｐとヒーター・クーラー（２３に設定）をオンにし、次にＵＰＳ、タッチスクリーン、及び人工呼吸器が続く。Ｑｕａｄｒｏｘの背面にある黄色のキャップ、リザーバーのいずれかの透明なキャップ、及び白血球フィルターの青いキャップを取り外して、灌流回路をパージする。Ｃａｒｄｉｏｈｅｌｐを１０００ＲＰＭに増加して回路の漏れを確認し、１分後Ｃａｒｄｉｏｈｅｌｐを３０００ＲＰＭに増加する。数分後、Ｃａｒｄｉｏｈｅｌｐを５０００ＲＰＭに増加して１分間作動させて、すべての空気がラインから確実に出ていることを確認し、ＲＰＭを２５０未満に減らす。
【００８５】
ステップ６．データ設定のロギング。タッチスクリーンのセットアップページで必要な情報を入力し、アラーム（６．８）までの許容レベルにＰＨを変更する。サービスページで、緑色のＰＧＭ較正ボタンを押し、ＰＧＭのパッケージにある較正番号に基づいてＰＨとＰＯ２を入力する。メイン画面でタイマーを設定する（１と２はカウントアップし、＃３はカウントダウンする（＃３は１０分に設定））。人工呼吸器について設定を押し、モード（Ｓ）ＣＭＶ＋で確認を押す。スプレッドシートのパラメータを入力し、確認を押す。また、フローシートのパラメータごとにアラームを設定する。ＸＰＳの背面のＩ／Ｏパネルで、肺の回路の右側に吸気ポート及び左側に呼気ポート（青色の先端）を配置する。白は透明、青は青で、フローセンサチューブを接続する。静脈ガス混合ラインを接続する。高圧Ｏ２ラインを接続する。加湿フィルターは、フローセンサとＥＴ−Ｔの間の回路の肺側の端部に配置される。術前点検を行い、システムを押し、テスト・較正を押す。各較正テストを１回に１つ選択する。気密度・以下のステップを押し、フローセンサ・以下のステップを押し、Ｏ２セルはテストの必要がない。
【００８６】
ステップ７．逆行性の洗い流し。滅菌チューブクランプを使用すると、灌流回路内の流れの方向が変わり、流れがＬＡで進み、ＰＡを出る。７５０ＲＰＭから始めて、ＰＡカニューレを充填するのに十分な流量になるまでＲＰＭをゆっくりと増加させ、ＳＴＥＥＮ  ｓｏｌｕｔｉｏｎから血液を除いて約２５０ｃｃになるまで、肺を洗い出しする。リサイクルポンプを使用して、このＳＴＥＥＮ  ｓｏｌｕｔｉｏｎをダンプバッグに向ける。血液が除かれたら、ＬＡ側にカニューレと回路を取り付けて、肺がＳＴＥＥＮ  ｓｏｌｕｔｉｏｎで充填されていることを確認する。ＬＡカニューレを通り、ＰＡカニューレを充填するのに十分なＳＴＥＥＮがあるべきであり、その後、リザーバーに入るためにリサイクルポンプの方向をリセットする。ＰＡカニューレの上部に滅菌クランプを再配置し、回路に取り付ける。ブリッジをクランプする（唯一のクランプであるべきである）。
【００８７】
ステップ８．較正。灌流フローセンサと圧力センサを較正する。（フローセンサは、肺が逆行のために回路に配置される前に行うことができる）。圧力センサは、逆行して肺が回路上になった直後に行うべきである（流体の高さの上部−カニューレが肺と圧力二方コックに会う場所で、圧力センサラインからシリンジを引いてすべて同じ高さにするべきであり、ＳＴＥＥＮを充填して、確実に二方コックを動かして生理食塩水から遮断する）。
【００８８】
ステップ９．順行。タイマー１（灌流タイマー）を開始し、最初の１時間の設定についてはＥＶＬＰワークアップシートに従う。
【００８９】
ステップ１０．最初の１時間の設定。１０分ごとに、Ｃａｒｄｉｏｈｅｌｐとヒーター・クーラーが、それぞれ最大値に達するまで変更される。温度が３２℃に達するまで、換気を開始できない。３２℃では気管支が処理される場合がある。トリガス掃引は、人工呼吸器の起動と同時に開始する必要がある。
【００９０】
ステップ１１．肺の補充。Ｏ２チャレンジと混同しないようにするために、肺の補充は人工呼吸器の呼気キーを１５秒間手で保持する。呼気を保持するには、吸気の後にこのキーを押すべきである。
【００９１】
ステップ１２．Ｏ２チャレンジ。Ｏ２チャレンジでは、人工呼吸器の設定のみを変更し、ＥＶＬＰワークアップシートの補充設定に従う。（ＶｔにＩＢＷ×１０の乗算をし、ＦｉＯ２を１００％に増やす、ＢＰＭは最大１０）
【００９２】
ステップ１３．ガス抜き。Ｏ２チャレンジの最後の瞬間に、動脈及び静脈灌流液のサンプルをトランスデューサーから採取するべきである。メイン画面の灰色のＰＨボタンを押して、ガスの値をロックする。（ラボから結果が返ってきたら、ＬＡとＰＡ両方でＰＨに対してピンポイントの較正を行う。）適切な情報を記録し、次いで人工呼吸器で通常の設定にリセットする（この時点でアラームと設定を高くしておく）。
【００９３】
ステップ１４．Ｘ線。Ｏ２チャレンジが完了した後、未来のＸ線のためにベースライン比較を行うために、Ｘ線を実行する必要がある。
【００９４】
ステップ１５．ＳＴＥＥＮの希釈。補充、チャレンジ、ガス吸引、及びＸ線が完了した後（またはＸ線の間）、ＳＴＥＥＮの希釈が必要になる。＋／−ポンプ制御ウィンドウをタッチスクリーンで開く。［除去］ボタンをタッチして、除去ボタンがロックされるまで指を下にスライドさせる（クランプ方式が使用されている場合は、代わりにクランプを除去する）。リザーバーのレベル低下を注視する。十分なＳＴＥＥＮを除去したら、「除去」ボタンをタッチしてシャットオフする（クランプ方式を使用している場合は、クランプと換える）。新鮮なＳＴＥＥＮを３本または４本追加する。また、別の用量の薬物を追加することができる。
【００９５】
ステップ１６．次の３〜５時間の間、肺を維持及び評価する。各々の時間の５０分のマークで、ステップ１２及び１３（ピンポイントの較正を引く）を繰り返す。
【００９６】
ステップ１７．移植のために肺を摘出する約１時間前にステップ１４を繰り返す。最初のＸ線と２番目のＸ線を比較することは、肺が移植可能かどうかを判断する一助となる。
【００９７】
ステップ１８．６時間の灌流後にステップ１５を繰り返す。
【００９８】
ステップ１９．急速冷却。肺の移植が受け入れられたら、ヒーター／クーラーを１５℃に設定し、３２℃で肺が５０％膨張したときにＥＴチューブをクランプし、肺を灌流回路から外し、２リットルの低温Ｐｅｒｆａｄｅｘで洗い流し、Ｐｅｒｆａｄｅｘとともに滅菌バッグに入れる。（標準的なドナー調達プロトコルと同様）。
【００９９】
ステップ２０．ＸＰＳを清浄化し、保管する。ＸＰＳの表面を消毒剤で拭き取り、トグルスイッチを上にして保管し、充電のためにコンセントに差し込む。ガスの吸引は、１０分ごとのチャレンジの最後に行うべきである。
【０１００】
参考として、図１及び図２を参照されたい。潜在可能性のあるシステムの概略図を示している。
【０１０１】
実施例２  吸入された一酸化窒素は、心停止試験の盲検無作為化コントロール仔ブタ仮死モデルにおいて脳ミトコンドリア機能を改善する。
【０１０２】
緒言
小児の心停止（ＣＡ）後の神経学的損傷は、依然一般的である。吸入された一酸化窒素（ｉＮＯ）は、脳ミトコンドリア機能障害を緩和する可能性がある。これは、ＣＡによって誘発される二次的な脳損傷の重要な収束点である。仮死及び心停止後、ＣＰＲ及び４時間の自発循環復帰後（ＲＯＳＣ）の間に２０ｐｐｍのｉＮＯで治療をされた動物は、プラセボと比較した呼吸制御比（ＲＣＲ）の上昇とミトコンドリア活性酸素種（ｍｔＲＯＳ）の低下とによって定義されるように、脳血流（ＣＢＦ）を改善し、ミトコンドリア機能を改善すると仮定した。
【０１０３】
方法
４週齢のブタを７分間窒息させ、その後心室細動にした。ガイドラインＣＰＲが、胸部の直径の１／３以上の圧迫深度（ＣＤ）で実施され、標準的なエピネフリンが、ＲＯＳＣ後のプロトコル化されたケアで、１０分間またはＲＯＳＣまで継続された。盲検方式で、対象を無作為化した（２０ｐｐｍのｉＮＯで開始して１分でＣＰＲ期間に入る、ｎ＝１０、またはプラセボ、ｎ＝１０）。シャム（ｎ＝４）はＣＡまたはＣＰＲを受けずにいた。侵襲的な臨床的機器及び非侵襲的な光学機器を使用して、ベースライン及び連続ＣＢＦ測定を行った。皮質及び海馬組織は、ミトコンドリア機能を評価するために高解像度呼吸測定法により分析した。該当する場合、Ｔ検定とＡＮＯＶＡが使用された。対象内相関を統制するために一般化推定方程式を使用して、縦断的な血行動態変数を比較した。
【０１０４】
結果
プラセボ群の７／１０及びｉＮＯ群のｉＮＯ  １０／１０（ｐ＝０．２１）が生存した。ＣＰＲ中及びＲＯＳＣ後の間は、治療群間で侵襲的または非侵襲的ＣＢＦに有意差はなかった。皮質及び海馬のＲＣＲは有意に高く（ｐ＝０．０４、０．００７）、ｍｔＲＯＳ産生はｉＮＯ治療動物で有意に低かった（ｐ＜０．００１、ｐ＝０．０３）。ｉＮＯ群とプラセボ群の間で全身または肺の血行動態に差はなかったが、ＣＰＲ間のｉＮＯ動物の平均肺動脈圧は低くなる傾向があった（２８．１±９．８ｖ。４２．６±６．０、ｐ＝０．１４）。ｉＮＯは、脳のミトコンドリア機能（ＲＣＲの増加）を保持し、小児ＣＡのブタモデルでｍｔＲＯＳの生産を制限する。虚血再灌流障害及び心停止におけるｉＮＯのこの潜在可能性のある神経保護効果を評価するには、さらなる研究が必要である。
【図１】
2020531529.tif 000003
【図２】
2020531529.tif 000004
【国際調査報告】
2020531529.tif 000005
2020531529.tif 000006