(57)【要約】本明細書において提供されるのは、骨環境内および骨環境周辺で所望の期間にわたり薬物の固定された非拮抗性のモル比を生じさせるための新規な方法である。この方法は、薬物ペイロードを骨表面から放出させ得る、骨を標的とした治療剤を、第２の治療剤に加えて含む医薬組成物を投与することによって、骨疾患および骨に関連する疾患を処置することを可能にする。このような方法は、がんによって誘発される骨疾患、骨髄炎および骨感染、骨痛および炎症性骨疾患、代謝性疾患、ならびにその他のものなどの、骨疾患および骨に関連する疾患の処置において有用である。
2020503365.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
薬物ペイロードを骨表面から放出させ得る、骨を標的とした治療剤を、第２の治療剤と組み合わせて含む医薬組成物を、骨に関連する疾患を有する対象に投与することを含む、骨環境内および骨環境周辺で所望の期間にわたり薬物の固定された非拮抗性のモル比を生じさせる方法。
【請求項２】
骨環境における軟部組織の疾患を処置するための薬物の臨床的に既知の比が使用される、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記骨を標的とした治療剤がゲムシタビン−イバンドロネートのコンジュゲートであり、前記第２の治療剤がドセタキセルである、前記骨に関連する疾患が骨肉腫である請求項１に記載の方法。
【請求項４】
前記骨を標的とした治療剤が、（０．０２〜１４ｍｇ／ｋｇ）の範囲の用量で投与される、図２に示すようなゲムシタビン−イバンドロネートの特異的なコンジュゲートであり、前記第２の治療剤が、１．５マイクログラム／ｋｇ〜１５ミリグラム／ｋｇの範囲の用量で投与されるドセタキセルである、前記骨に関連する疾患が骨肉腫である請求項１に記載の方法。
【請求項５】
前記骨に関連する疾患が、がんによって誘発される骨疾患または原発性の骨がんである、請求項１に記載の方法。
【請求項６】
前記骨に関連する疾患が骨髄炎である、請求項１に記載の方法。
【請求項７】
前記骨に関連する疾患が、骨髄内のウイルス複製である、請求項１に記載の方法。
【請求項８】
前記骨に関連する疾患が骨痛である、請求項１に記載の方法。
【請求項９】
骨疾患が、関節リウマチまたは骨内もしくは骨周辺における炎症である、請求項１に記載の方法。
【請求項１０】
骨疾患が代謝性疾患である、請求項１に記載の方法。
【請求項１１】
薬物ペイロードを骨表面から放出させ得る、骨を標的とした治療剤を、第２の治療剤と組み合わせて含む医薬組成物を、骨に関連する疾患を有する対象に投与することを含む、骨環境内および骨環境周辺で所望の期間にわたり第２の薬物に対する第１の薬物の固定された非拮抗性のモル比を生じさせる方法であって、前記モル比が、細胞に基づく研究もしくは動物に基づく研究に由来する、または２つの治療剤の既知の付加的もしくは相乗的活性に由来する方法。
【請求項１２】
前記第２の治療剤が、前記骨を標的とした治療剤の投与まで最大４８時間で投与される、請求項１または請求項１１に記載の方法。
【請求項１３】
前記第２の治療剤が、前記骨を標的とした治療剤の４８時間後までに投与される、請求項１または請求項１１に記載の方法。
【請求項１４】
前記第２の治療剤が、前記骨を標的とした治療剤の投与の間に投与される、請求項１または請求項１１に記載の方法。
【請求項１５】
前記骨を標的とした治療剤をその標準投薬量で投与しながら、前記第２の治療剤を、１／１００からその標準投薬量までの量で投与する、請求項１または請求項１１に記載の方法。
【請求項１６】
前記骨を標的とした治療剤を１／１００から標準投薬量までの量で投与しながら、前記第２の治療剤をその標準投薬量で投与する、請求項１または請求項１１に記載の方法。
【請求項１７】
前記骨を標的とした治療剤を１／１００からその標準投薬量までの量で投与しながら、前記第２の治療剤を１／１００からその標準投薬量までの量で投与する、請求項１または請求項１１に記載の方法。
【請求項１８】
前記骨を標的とした治療剤がＭＢＣ−１１であり、前記第２の治療剤がドセタキセルである、請求項１に記載の方法。
【請求項１９】
前記骨を標的とした治療剤がＭＢＣ−１１であり、前記第２の治療剤がＸｏｆｉｇｏである、請求項１に記載の方法。
【請求項２０】
ＭＢＣ−１１が５／ｍｇ／ｋｇ／日またはそれ未満で、２時間の注入を介して、最大５日の連続する日数にわたり投与され、Ｘｏｆｉｇｏが標準治療の投薬レジメンまたはそれ未満で投与される、請求項１９に記載の方法。
【請求項２１】
前記骨を標的とした治療剤が、ゲムシタビンとイバンドロネートとのコンジュゲートであり、前記第２の治療剤がドセタキセルである、請求項２に記載の方法。
【請求項２２】
前記骨を標的とした治療剤が、ゲムシタビンとイバンドロネートとのコンジュゲートであり、前記第２の治療剤がＸｏｆｉｇｏである、請求項２に記載の方法。
【請求項２３】
ゲムシタビンとイバンドロネートとのコンジュゲートが、５／ｍｇ／ｋｇ／日またはそれ未満で、２時間の注入を介して、最大５日の連続する日数にわたり投与され、Ｘｏｆｉｇｏがその標準治療の投薬レジメンまたはそれ未満で投与される、請求項１９に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
医学、薬理学、および生化学の分野に関連し得る、骨環境内および骨環境周辺で所望の期間にわたり薬物の固定された非拮抗性のモル比を生じさせるための組成物および方法が提供される。本発明は、骨の微小環境内での薬物の非拮抗性のモル比を可能にするために他の薬物と組み合わせて使用される、最も高い骨ミネラル表面から最も低い血管系内までの薬物の濃度勾配を生じさせる、骨を標的とした治療法の使用に関する。これは、軟部組織において有効であることが既知である比率での薬物の組合せで骨および周囲の骨環境を処置する手段を提供するが、本発明の前には、骨環境内で十分な時間にわたり必要な比率を達成することは不可能であったであろう。
【背景技術】
【０００２】
背景
薬物の組合せは、がんおよび感染性疾患を含む多くの疾患のための一般的な治療法である。用量組合せ中の各薬物の量は、典型的には経験的に決定され、１つの薬物の最大耐用量を使用し、次いで第２の薬物の用量を毒性によって制限されるまで増大させることによって、その量に達することが最も多い。両方の薬物量が調整され得るが、アウトカムは、主に忍容性に基づく。このアプローチでは、最適な薬物モル比を見出すこともできず、また、これらの比率が患者の標的組織において維持されるべき期間を達成することもできず、そして、過剰な毒性を促進する。本発明は、薬物のモル比を達成し、これらの比を他の方法では不可能な長期間にわたって骨内および骨周辺で維持するための、新規なアプローチを提供する。
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【０００３】
本発明は、上記で論じられた課題の１つまたは複数を解決することを目的とする。
【図面の簡単な説明】
【０００４】
【図１Ａ】図１では、グラフの背景は、骨の微小環境の尺度を表している。骨ミネラルは、骨芽細胞（１０ミクロン／サイド）の列が一列に並んでおり、その後に、骨ミネラルから外側に向かって続いているほぼ同じサイズの骨髄細胞が続いている：転移性のがん細胞は緑色で表されており、平均距離（約４０ミクロン）でモデリングされている。これらの細胞は、報告によると骨ミネラルから発見され、骨ミネラルから血管までの距離の中央値は９０ミクロンであり、尺度化のために、内部の赤血球と共に赤色で表されている。４つのグラフは、４つの投薬シナリオでの結果的な薬物勾配を説明する：左上部−静脈内（ＩＶ）シタラビン（ａｒａＣ）が、血液がんの有効な処置のために、血液中で５〜１０ｕＭの濃度を達成するために投薬される。血管から骨への一次指数関数的な勾配がモデリングされ（青色の曲線）、これは、介在する細胞が有効濃度のａｒａＣに曝露されていないことを実証し、これは、骨ミネラルの近くにあるがん細胞に適切に投薬することが不可能であることを含み、抗がん剤が骨転移の成長を止めることが不可能であるという所見の説明を助ける。右上部−ａｒａＣの骨を標的としたコンジュゲートを投与した後に達成されたａｒａＣの勾配は、ａｒａＣの放出および結果として得られる濃度勾配がモデリングされる骨ミネラル上へのそのコンジュゲートの蓄積を可能にした（青色の曲線）。このシナリオでは、骨に局在化したがん細胞を、活性量のａｒａＣに曝露する。左下部−ａｒａＣの勾配（青色の曲線）および第２のＩＶ薬物の勾配（赤色の曲線）が示され、骨ミネラルと血管との間で可能なそれらのモル比が示されている。１：２（０．５）を超える非拮抗性のモル比が必要であるケースでは、有効性は達成され得ない。右下部−骨を標的とした薬物コンジュゲートを放出した後のａｒａＣの勾配（青色の曲線）および第２のＩＶ薬物の勾配（赤色の曲線）が示され、骨ミネラルと血管との間で可能なそれらのモル比が示されている。１：２（０．５）を超える非拮抗性のモル比が必要であるケースでは、１：１〜４：１（１〜４倍）の有効な比が達成され得ることを見ることができる。
【図１Ｂ】同上。
【図１Ｃ】同上。
【図１Ｄ】同上。
【０００５】
【図２】図２では、骨標的化薬物コンジュゲートの例が提供される。ＭＢＣ−１１を、最近完了した第Ｉ相臨床試験で、ＣＩＢＤ患者において試験した。多発性骨髄腫、ならびに前立腺がんおよび乳がんによって誘発される骨疾患のモデルにおける心強い前臨床の結果を基に、骨の病変を誘発している何らかの原発性がんを有する患者を最初の臨床試験に含めた。全部で１５人の患者の全体で、２０６の骨病変がイメージングされ（１８Ｆ−ＦＤＧ−ＰＥＴ／ＣＴ）、１１１の病変が、グルコースアビディティーが有意に低下している（＞２５％）ことが観察された。したがって、骨病変の５３．８％は、ＭＢＣ−１１療法の後に活性が有意に低下した。このことは、ＭＢＣ−１１についてのヒトでの概念実証を提供し、Ｘｏｆｉｇｏを投与されている乳がん患者について報告されている有効性に匹敵する。ＭＢＣ  Ｐｈａｒｍａの第２世代の骨を標的としたコンジュゲートであるＧＥＭ−ＩＢを、ｉｎ  ｖｉｖｏで、前立腺がんによって誘発された骨疾患のモデルにおいて試験した。この研究は生存エンドポイントについては設計されていなかったが、生存が向上する傾向が見られた。さらに、転移は、処置後に有意に低下した。この研究において、ＧＥＭ−ＩＢは、驚くべきことに、ＧＥＭ−エチドロネート（ＧＥＭ−ＥＴ）、ＭＢＣ−１１、およびシタラビン−ＩＢと比較して、より活性である。ＧＥＭ−ＩＢを６ｍｇ／ｋｇ／日で連続する５日間にわたり投薬することは、この投薬レジメンのＭＴＤである。さらに、月曜日、水曜日、および金曜日に３週間にわたり、その１日用量の２倍を投薬することは、良く忍容された。骨への蓄積は、ＭＴＤを上回る毒性をもたらし得る。次の投薬の前に、骨からＧＥＭが放出されるために十分な時間を提供すると、毒性が低下する。以下の実施例は、ＧＥＭ−ＩＢについての前臨床の概念実証を提供する。
【０００６】
【図３】図３は、骨肉腫のマウスモデルにおける腫瘍減少および生存の利益に関する、ドセタキセルと組み合わせたＧＥＭ−ＩＢの利益を説明する。ＤＴＸと組み合わせたＧＥＭ−ＩＢは、より高い有効性を示す。腫瘍容積は楕円であると推定された。容積を０日目の容積から差し引いて、「正常な」脚容積を推定した。８日目の後、ＡＮＯＶＡによって、モック群とＧＥＭ−ＩＢ＋ＤＴＸ群との間の統計的有意性が明らかになる。各処置群において８頭のマウスを平均した。誤差のバーはＳＥＭを表す。
【０００７】
【図４】図４は、骨肉腫のマウスモデルにおける腫瘍減少および生存の利益に関する、ドセタキセルと組み合わせたＧＥＭ−ＩＢの利益を説明する。ＤＴＸと組み合わせたＧＥＭ−ＩＢは、安楽死までの時間を増大させる。腫瘍を有する脚の最大直径が正常な脚の直径よりも１０ｍｍ大きくなった場合、マウスを安楽死させた。モックおよびＧＥＭ＋ＩＢのマウスは処置の開始後２４日目から、ＧＥＭ−ＩＢのマウスは２８日目から、ＧＥＭ＋ＤＴＸのマウスおよびＧＥＭ−ＩＢ＋ＤＴＸのマウスは３０日目から、屠殺を開始した。体重減少が理由で安楽死させたマウスは、このチャートでは死亡とは示されておらず、安楽死させた日のチェックマークとして示してある。ＡＮＯＶＡは、ｐ＝０．００１２での統計的有意性を示し、多重比較は、ＧＥＭ−ＩＢ＋ＤＴＸ群とモック群およびＧＥＭ＋ＤＴＸ群との間の有意性を示す。
【０００８】
【図５】図５は、ゲムシタビン−イバンドロネートコンジュゲートおよびＸｏｆｉｇｏでの組合せ処置後のがん細胞の活性を予測する。
【発明を実施するための形態】
【０００９】
発明の要旨
一態様では、本明細書において提供されるのは、対象における骨疾患または骨に関連する疾患を処置するための方法であり、前記方法は、非拮抗性のモル比の骨を標的とした薬物および第２の薬物を含む医薬組成物を前記対象に投与することを含む。前記方法は、骨を標的とした薬物が、第２の薬物の存在下で、骨の区画において非拮抗性の比を確立し、有効性をもたらすために十分な時間にわたり維持する能力に依存する。開示される方法はまた、治療利益を維持し、同時に毒性を低下させながら、有意に低い用量強度で薬物を投与することを容易にする。
【００１０】
図１は、（ｉ）標準的な方法、すなわち、両薬物が全身に投与される方法（右側）、および（ｉｉ）本発明、すなわち、１つの薬物がその骨デポ剤から放出され、他方で、第２の薬物が全身に投与される方法（左側）による、骨の微小環境への投薬の比較を説明する。示される勾配は、単一の時点での薬物濃度の空間的分布を表すものの、利益を観察するために十分な時間にわたり効果的な比（骨の区画での）を維持する能力は調整され得、最適に確立され得ることは理解されなくてはならない。投与される、骨を標的とした薬物の量は、骨上のデポ剤中の薬物を増大または減少させるように調整され得る。骨からの薬物放出の動態は、骨を標的とした作用物質において使用されるコンジュゲーション化学に基づいて調整され得る。そして、第２の全身に投与される作用物質は、骨環境における定常状態レベルの確立を可能にする時間にわたる注入として投与され得る。コンジュゲーション化学の、骨標的化薬物からの薬物放出の動態に影響する能力に関して、骨標的化作用物質に薬物を繋げる結合の化学的安定性（例えば、図２を参照されたい）は、加水分解および薬物放出の速度を規定し得ることが理解される。例えば、ホスホジエステル結合の加水分解は、ホスホネート結合よりも桁違いに迅速である。結合の化学的安定性に加えて、薬物および骨標的化作用物質の立体的かさ高さは、薬物放出動態に影響する化学的および／または酵素的加水分解速度の両方に影響し得る。
【００１１】
図１は、中核となる発明である、骨と血管系との間の空間において薬物比を生じさせる方法を説明する。下部のパネルにおいて示される典型的な比によって、これらの比が、両薬物が血液から骨に拡散した場合には達成され得ないことが明らかとなる。血管系から入る薬物の量および速度の制御を、骨表面からの薬物の放出の量および速度の制御と組み合わせることによって、骨の区画において有効であることが既知の薬物比を確立することが可能になる。
【００１２】
一態様では、本明細書において提供されるのは、本発明によって骨の区画において既知の薬物比で再現される、ｉｎ  ｖｉｔｒｏもしくはｉｎ  ｖｉｖｏで実験的に、または臨床的に決定されるが、骨内および骨周辺で効果的であることは公知ではない、公知のまたは公開された非拮抗性の薬物比を使用する（骨環境内および骨環境周辺で所望の期間にわたり薬物の固定された非拮抗性のモル比を生じさせる）方法である。例えば、ダウノルビシンと組み合わせたシタラビンは、急性骨髄性白血病を処置するために４０年超にわたり使用されており、依然として、この疾患のための治療法のバックボーンである。処置のプロトコールは、両治療法の循環濃度をマイクロモル範囲にするように設計されている。しかし、いずれの治療法も骨を標的としておらず、したがって、患者への毒性を伴わずに必要な濃度を達成することができないため、組合せは、骨がんの処置において効果的ではない。
【００１３】
本明細書において開示されるのは、骨の区画で所望の薬物比を提供する用量の、第２の治療法と組み合わせた骨標的化コンジュゲートを使用する方法である。シタラビンをビスホスホネート（bisphonphonate）担体にコンジュゲートすることによって、例えば、シタラビンは骨の区画に送達され、罹患した組織での治療的に関連する用量を達成する。ダウノルビシンの用量は、薬物の区画において所望の濃度を達成するように調整され得る。多くの治療法のための様々な投薬レジメンが臨床的に試験されており、骨標的化技術と共に使用される場合に骨の区画での治療的に関連する用量を達成するように変換され得る標準的な処置プロトコールとして、薬物比の範囲を提供する。当業者には、現在臨床的に使用されている広範な組合せ化学療法を、本発明を使用して骨疾患を処置するために変換することができる。
【００１４】
一態様では、本明細書において提供されるのは、ｉｎ  ｖｉｔｒｏでの設定での薬物の組合せの決定のためのＣｈｏｕ−Ｔａｌａｌａｙの方法を使用して当業者によって容易に決定され得る非拮抗性の薬物比を使用する方法である。
【００１５】
一態様では、本明細書において提供されるのは、がんによって誘発される骨疾患を有する前記対象を、非拮抗性の比の、骨を標的としたシタラビンおよびラジウム（２２３）塩化物（Ｘｏｆｉｇｏ（商標））で処置する方法である。投与される骨を標的としたシタラビンの量は、最大耐用量（ＭＴＤ）の０．１〜１倍以内であり、投与されるラジウム（２２３）塩化物の量は、その臨床的に定められた標準用量の０．１〜１倍以内である。一実施形態では、Ｘｏｆｉｇｏは、骨を標的としたシタラビンを投与するまで最大４８時間で投与される。別の実施形態では、両作用物質は、同時投与される。別の実施形態では、ラジウムは、骨を標的としたシタラビンの投与が完了した４８時間後までに投与される。
【００１６】
一実施形態では、本方法は、がんによって誘発される骨疾患を有する前記対象を、非拮抗性の比の、骨を標的としたゲムシタビンおよびラジウム（２２３）塩化物（Ｘｏｆｉｇｏ）で処置する。投与される骨を標的としたゲムシタビンの量は、最大耐用量（ＭＴＤ）の０．１〜１倍以内であり、投与されるラジウム（２２３）塩化物の量は、その臨床的に定められた標準用量の０．１〜１倍以内である。一実施形態では、ラジウムは、骨を標的としたゲムシタビンを投与するまで最大４８時間で投与される。別の実施形態では、両作用物質は、同時投与される。別の実施形態では、Ｘｏｆｉｇｏは、骨を標的としたゲムシタビンの投与が完了した４８時間後までに投与される。
【００１７】
一実施形態では、本方法は、がんによって誘発される骨疾患を有する前記対象を、非拮抗性の比の、骨を標的としたゲムシタビンおよびドセタキセルで処置する。投与される骨を標的としたゲムシタビンの量は、ＭＴＤの０．１〜１倍以内であり、投与されるドセタキセルの量は、その臨床的に定められた標準用量の０．１〜１倍以内である。一実施形態では、ドセタキセルは、骨を標的としたゲムシタビンを投与するまで最大４８時間でに投与される。別の実施形態では、両作用物質は、同時投与される。別の実施形態では、ドセタキセルは、骨を標的としたゲムシタビンの投与が完了した４８時間後までに投与される。
【００１８】
一実施形態では、本方法は、がんによって誘発される骨疾患を有する前記対象を、非拮抗性の比の、骨を標的としたシタラビンおよびドセタキセルで処置する。投与される骨を標的としたシタラビンの量は、最大耐用量（ＭＴＤ）の０．１〜１倍以内であり、投与されるドセタキセルの量は、その臨床的に定められた標準用量の０．１〜１倍以内である。一実施形態では、ドセタキセルは、骨を標的としたシタラビンを投与するまで４８時間以内に投与される。別の実施形態では、両作用物質は、同時投与される。別の実施形態では、ドセタキセルは、骨を標的としたシタラビンの投与が完了した４８時間後までに投与される。
【００１９】
一態様では、本明細書において提供されるのは、骨髄炎を有する前記対象を、非拮抗性の比の、骨を標的とした抗生物質および第２のフリーの抗生物質で処置する方法である。
【００２０】
一態様では、本明細書において提供されるのは、骨髄区画におけるあるウイルス負荷を伴うウイルス感染を有する前記対象を、非拮抗性の比の、骨を標的とした抗ウイルス剤および第２のフリーの抗ウイルス剤で処置する方法である。
【００２１】
一態様では、本明細書において提供されるのは、骨痛を有する前記対象を、非拮抗性の比の、骨を標的とした鎮痛剤または麻酔薬および第２のフリーの鎮痛剤または麻酔薬で処置する方法である。
【００２２】
一態様では、本明細書において提供されるのは、関節リウマチまたは骨の炎症状態を有する前記対象を、非拮抗性の比の、骨を標的とした抗炎症剤および第２のフリーの抗炎症剤で処置する方法である。
【００２３】
一態様では、本明細書において提供されるのは、以下の薬物のいずれかと組み合わせた、特許第６，２１４，８１２号、および特許第６，７５０，３４０号、および特許第６，８９６，８７１号、および特許第７，５９８，２４６号の特許請求の範囲に記載されている、骨を標的としたコンジュゲートを含む組成物である。
【００２４】
細胞傷害性剤として使用され得る化合物のクラスには、以下のものが含まれる：アルキル化剤（限定はしないが、ナイトロジェンマスタード、エチレンイミン誘導体、アルキルスルホネート、ニトロソウレア、およびトリアゼンを含む）：ウラシルマスタード、クロルメチン、シクロホスファミド（Ｃｙｔｏｘａｎ（登録商標））、イホスファミド、メルファラン、クロラムブシル、ピポブロマン、トリエチレン−メラミン、トリエチレンチオホスホルアミド（triethylenethiophosphoramine）、ブスルファン、カルムスチン、ロムスチン、ストレプトゾシン、ダカルバジン、およびテモゾロミド；代謝拮抗物質（限定はしないが、葉酸アンタゴニスト、ピリミジン類似体、プリン類似体、およびアデノシンデアミナーゼ阻害剤を含む）：メトトレキサート、５−フルオロウラシル、フロクスウリジン、シタラビン、６−メルカプトプリン、６−チオグアニン、フルダラビンホスフェート、ペントスタチン、およびゲムシタビン；天然生成物およびその誘導体（例えば、ビンカアルカロイド、抗腫瘍抗生物質、酵素、リンホカイン、およびエピポドフィロトキシン）：ビンブラスチン、ビンクリスチン、ビンデシン、ブレオマイシン、ダクチノマイシン、ダウノルビシン、ドキソルビシン、エピルビシン、イダルビシン、ａｒａ−ｃ、パクリタキセル（パクリタキセルは、Ｔａｘｏｌ（登録商標）として市販されている）、ミトラマイシン、デオキシコホルマイシン、マイトマイシン−ｃ、１−アスパラギナーゼ、インターフェロン（好ましくは、ＩＦＮ−α）、エトポシド、およびテニポシド。
【００２５】
他の増殖性の細胞傷害性剤は、ナベルビン（navelbene）、ＣＰＴ−１１、アナストロゾール（anastrazole）、レトロゾール（letrazole）、カペシタビン、レロキサフィン、シクロホスファミド、イホスファミド（ifosamide）、およびドロロキシフェン（droloxafine）である。
【００２６】
微小管作用剤は、細胞の有糸分裂に干渉し、その細胞傷害活性について当技術分野において周知である。本発明において有用な微小管作用剤には、限定はしないが、アロコルヒチン（ＮＳＣ  ４０６０４２）、ハリコンドリンＢ（ＮＳＣ  ６０９３９５）、コルヒチン（ＮＳＣ  ７５７）、コルヒチン誘導体（例えば、ＮＳＣ  ３３４１０）、ドラスタチン１０（ＮＳＣ  ３７６１２８）、メイタンシン（ＮＳＣ  １５３８５８）、リゾキシン（ＮＳＣ  ３３２５９８）、パクリタキセル（Ｔａｘｏｌ（登録商標）、ＮＳＣ  １２５９７３）、Ｔａｘｏｌ（登録商標）誘導体（例えば、誘導体（例えば、ＮＳＣ  ６０８８３２）、チオコルヒチン（ＮＳＣ  ３６１７９２）、トリチルシステイン（ＮＳＣ  ８３２６５）、ビンブラスチンスルフェート（ＮＳＣ  ４９８４２）、ビンクリスチンスルフェート（ＮＳＣ  ６７５７４）、限定はしないがエポチロンＡ、エポチロンＢ、およびディスコデルモリド（Service、（１９９６年）Science、２７４巻：２００９頁を参照されたい）を含む天然および合成のエポチロン、エストラムスチン、ノコダゾール、ＭＡＰ４などが含まれる。このような作用物質の例は、Bulinski（１９９７年）J.  Cell  Sci.１１０巻：３０５５〜３０６４頁；Panda（１９９７年）Proc.  Natl.  Acad.  Sci.  USA、９４巻：１０５６０〜１０５６４頁；Muhlradt（１９９７年）Cancer  Res.  ５７巻：３３４４〜３３４６頁；Nicolaou（１９９７年）Nature、３８７巻：２６８〜２７２頁；Vasquez（１９９７年）Mol.  Biol.  Cell.  ８巻：９７３〜９８５頁；およびPanda（１９９６年）J.  Biol.  Chem、２７１巻：２９８０７〜２９８１２頁においても記載されている。
【００２７】
同様に適切なものは、エピポドフィロトキシン（epidophyllotoxin）などの細胞傷害性剤；抗悪性腫瘍酵素；トポイソメラーゼ阻害剤；プロカルバジン；ミトキサントロン；シスプラチンおよびカルボプラチンなどの白金配位錯体；生物学的応答修飾因子；成長阻害剤；抗ホルモン治療剤；ロイコボリン；テガフール；ならびに造血増殖因子である。
【００２８】
使用され得る細胞増殖抑制剤には、限定はしないが、ホルモンおよびステロイド（合成類似体を含む）：１７−アルファ−エチニルエストラジオール、ジエチルスチルベストロール、テストステロン、プレドニゾン、フルオキシメステロン、プロピオン酸ドロモスタノロン、テストラクトン、酢酸メゲストロール、メチルプレドニゾロン、メチル−テストステロン、プレドニゾロン、トリアムシノロン、クロロトリアニセン（hlorotrianisene）、ヒドロキシプロゲステロン、アミノグルテチミド、エストラムスチン、メドロキシプロゲステロン酢酸エステル、ロイプロリド、フルタミド、トレミフェン、ゾラデックスが含まれる。
【００２９】
他の細胞増殖抑制剤は、マトリクスメタロプロテイナーゼ阻害剤などの抗血管新生剤、および抗ＶＥＧＦ抗体などの他のＶＥＧＦ阻害剤であり、また、ＺＤ６４７４およびＳＵ６６６８などの低分子も含まれる。Ｇｅｎｅｔｅｃｈの抗Ｈｅｒ２抗体もまた利用することができる。適切なＥＧＦＲ阻害剤は、ＥＫＢ−５６９（不可逆的阻害剤）である。同様に含まれるものは、ＥＧＦＲに対して免疫特異的なＩｍｃｌｏｎｅ抗体Ｃ２２５、およびｓｒｃ阻害剤である。
【００３０】
細胞増殖抑制剤として使用するために同様に適切なものは、アンドロゲン依存性の癌腫を非増殖性にするＣａｓｏｄｅｘ（登録商標）（ビカルタミド、Ａｓｔｒａ  Ｚｅｎｅｃａ）である。細胞増殖抑制剤のさらに別の例は、エストロゲン依存性の乳がんの増殖または成長を阻害する抗エストロゲンであるタモキシフェン（登録商標）である。細胞増殖性シグナルの伝達の阻害剤は、細胞増殖抑制剤である。代表的な例には、上皮増殖因子阻害剤、Ｈｅｒ−２阻害剤、ＭＥＫ−１キナーゼ阻害剤、ＭＡＰＫキナーゼ阻害剤、ＰＩ３キナーゼ阻害剤、Ｓｒｃキナーゼ阻害剤、およびＰＤＧＦ阻害剤が含まれる。
【００３１】
本明細書において同様に検討されるものは、ラジウム２２３を含む放射線治療化合物とのコンジュゲートである。
【００３２】
詳細な説明
ｉｎ  ｖｉｔｒｏにおいて、２つの薬物は１つのモル比では相乗効果を示し得るが、他の比ではこれらの薬物は付加的であるかまたは拮抗的でさえあることが実証されている（Mayer,  L.  D.ら、Mol.  Cancer  Ther.（２００６年）５巻：１８５４〜６３頁；Chou,  T-C.ら、Adv.  Enzyme  Reg.（１９８４年）２２巻：２７〜５５頁）。細胞培養物において決定されたこのような最適な条件を動物用に変換することは、動物／哺乳動物系の複雑性が増していることに起因して困難である。例えば、薬物の薬物動態学的活性および薬力学的活性は、単独で使用される場合、または組合せで存在する場合で、著しく異なり得る。このことは、２つの薬物の相乗的なモル比を標的組織において維持しようとする際、また、その比を、治療利益を達成するために必要な時間にわたり維持しようとする際に、困難をもたらす。薬物が、がんの処置に使用される薬物に一般的な、迅速なクリアランスを有するケースでは、２つの薬物の非拮抗性のモル比を充実性腫瘍において達成することは困難であり、また、治療利益をもたらすために十分な時間にわたり固定されたモル比を維持することはさらに困難であり、したがって、薬物の１つ（または複数）を長期注入（例えば２４時間）として投与して、腫瘍に対する定常状態の曝露を維持し、次いで第２の薬物を投与して、２つの薬物の効果的なモル比を腫瘍内で達成することが、一般的な手法である。このアプローチの、結果として生じる毒性は、管理されなければならず、この懸念によって、本発明の別の利益、すなわち、薬物を骨の上で濃縮させ、薬物の組合せを骨の区画および局所領域に局在化させることによって、全身的な曝露を低下させるという利益が際立つ。
【００３３】
がんによって誘発される骨疾患は本発明の用途であり、そのため、原発性の骨がんである骨肉腫（ＯＳ）は、極めて関連する例として提供される。ＯＳは、最も一般的な原発性の悪性骨腫瘍であり、主に青年期の人および若年成人の疾患であり、長骨の骨幹端で生じることが多い。これは非常に稀な疾患であり、米国では年に数百のケースしか発生しておらず、世界中で年に２万の新たなケースがあると推定されている。多剤ネオアジュバント化学療法が、ＯＳにおいて、外科手術の前に腫瘍壊死のパーセント（％ＴＮ）を高めるために使用されている。強力な組織学的応答（＞９０％ＴＮ）が、より長い生存期間と関連している。ｉｎ  ｓｉｔｕでの高い％ＴＮは、生存の増大に関連すると理論化されおり、それは、高い％ＴＮが、標準的な抗がんレジメンに対する微小転移の応答の間接的な尺度である可能性が高いためである。このことに加えて、ｉｎ  ｓｉｔｕでの腫瘍壊死はまた、腫瘍に対する宿主細胞の免疫応答に好ましい免疫調節効果を有するとも理論化されている。小児において、この処置によって、全体的な生存率は約８０％となるが、無イベント生存率は低い。実際、ＯＳを有すると診断された小児の２０％は５年を生きられず、最大５０％が１０年を生きられない。ほとんどの場合が、この疾患に関連して有意な罹患率を有するであろう。骨肉腫は転移性が高い疾患であり、患者の最大８０％が、初診の時点で臨床的または準臨床的な微小転移を有すると推定されている。転移を有する患者は予後が不良であり、長期生存率は２５％未満である。明らかに、この疾患、ならびに他のがんによって誘発される骨疾患および骨の病気を有する患者のアウトカムを向上させる新規な治療法が必要である。本明細書において提供されるのは、他の手段では不可能な、多くのこれらの課題に対処するための手段としての、薬物のモル比を達成し、この比を骨内および骨周辺で、より長い期間にわたり維持するための、新規なアプローチである。
【００３４】
薬物を骨に対して標的化するための能力は、骨から循環に向かう薬物勾配を生じさせる手段を提供する（図１に示すように）。骨標的化薬物は、骨の区画内または骨の区画周辺の任意の構成成分に対する親和性を有する任意の生物学的に活性な化合物であり得、これには、限定はしないが、骨ミネラル、コラーゲンなどの骨マトリクスの構成要素、コンドロイチンスルフェート、および骨髄を構成し骨を囲む細胞が含まれる。骨標的化作用物質の例には、限定はしないが、ビスホスホネート、ビスホスホネート−薬物コンジュゲート（ＭＢＣ−１１、ゲムシタビン−イバンドロネートコンジュゲートなど、図２を参照されたい）、骨に関連する細胞を標的とする抗体および抗体−薬物コンジュゲート（デノスマブ抗体およびオステオプロテゲリン（ＯＰＧ）抗体など）、ポリマー性アミノ酸薬物コンジュゲート（アスパラギンおよびグルタミン酸を含有する）、ならびにテトラサイクリン誘導体が含まれる。骨標的化薬物コンジュゲートは、放出速度が既知であるかまたは測定可能である、表面または骨に局在した標的から薬物ペイロードを放出する能力を有し、骨の区画内で特別かつ一時的な薬物勾配を提供し得る。第２の薬物が、確立した、骨に局在する薬物勾配の存在下で投与される場合、骨の区画内での固有の固定された非拮抗性の薬物比が可能である。
【００３５】
したがって、骨の区画内で薬物勾配を生じさせ得る、骨を標的とした薬物、および循環から骨表面に向かう勾配を生じさせ得る第２の薬物は、骨環境内および骨環境周辺で所望の期間にわたり薬物の固定された非拮抗性のモル比を生じさせる方法の重要な構成成分である。この方法は、薬物ペイロードを骨表面から放出させ得る、骨を標的とした治療剤を、静脈内経路、経口経路、腹腔内経路、または他の投与経路などのあらゆる他の手段によって投与される第２の治療剤に加えて含む医薬組成物を投与することを要する。
【００３６】
本方法の驚くべき態様によって、軟部組織の疾患の処置のための薬物の臨床的に既知の比を有する臨床的に使用される組合せ療法の利益を、骨の区画における骨に関連する疾患の処置に移行させることが可能になる。
【００３７】
例えば、ゲムシタビンおよびドセタキセルの組合せは、今や、薬学的に有効な量のドセタキセルと組み合わせた、薬学的に有効な量のゲムシタビン−イバンドロネートのコンジュゲートを、それを必要とする患者に投与することを含む、骨肉腫の処置において使用することができる。
【００３８】
上記のような、骨環境内および骨環境周辺で所望の期間にわたり薬物の固定された非拮抗性のモル比を生じさせる方法は、以下のものに適用することができる：
・  病気が、がんによって誘発される骨疾患もしくは原発性の骨がんである場合の、骨に関連する疾患、
・  骨髄炎などの骨に関連する疾患、
・  骨髄内のウイルス複製などの、骨に関連する疾患、
・  骨痛、
・  関節リウマチまたは骨内もしくは骨周辺における炎症、あるいは
・  骨に影響する代謝性疾患。
【００３９】
これまでに臨床的に使用されていない薬物の組合せによる骨環境の処置が、細胞に基づく研究もしくは動物に基づく研究における説得力のあるデータに起因して、または説得力のある付加的もしくは相乗的効果（例えば、放射線増感）を有する組合せにおける薬物のメカニズムに起因して望ましい場合に、本方法が適用され得る。
【００４０】
骨からの薬物放出の動態によって、第２の治療剤が骨を標的とした治療剤の投与の前、例えば、骨を標的とした治療剤の投与まで最大４８時間で投与される方法によって使用される、一部の骨標的化作用物質が指導される。この様式では、骨を標的としていない薬物の所望のモル濃度は、その後の骨を標的とした薬物および結果的な骨からの放出が治療利益を最適化するように、骨の区画において確立されるか、または、ある特定の時間尺度でのクリアランスを提供するために確立され得る。
【００４１】
他の態様では、第２の治療剤は、骨を標的とした治療剤の後に、例えば、骨を標的とした治療剤の４８時間後までに投与され得る。
【００４２】
また、さらに他の実施形態では、または薬物の他の組合せでは、第２の治療剤は、骨を標的とした治療剤の投与の間に投与される。
【００４３】
がんによって誘発される骨疾患の処置における、単一の作用物質としてのＭＢＣ−１１の利益は、動物モデルにおいておよび臨床的に確立されている。骨を標的とした治療剤がＭＢＣ−１１であり、第２の治療剤がドセタキセルである場合、さらなる臨床的な利益が達成される。
【００４４】
さらに、シタラビンが放射線治療薬を放射線増感させるようにＭＢＣ−１１がシタラビンを骨に放出する潜在能力は、骨を標的とした治療剤がＭＢＣ−１１であり、第２の治療剤がＸｏｆｉｇｏである場合に、患者に利益となる。
【００４５】
ＭＢＣ−１１の現在臨床的に確立されているＭＴＤは、ＭＢＣ−１１が５／ｍｇ／ｋｇ／日またはそれ未満で、２時間の注入を介して、最大５日の連続する日数にわたり投与され、Ｘｏｆｉｇｏが標準治療の投薬レジメンまたはそれ未満で投与される方法が使用されるべきであることを示す。
【００４６】
ゲムシタビン（Gemcitibine）は、シタラビンより強力であることが多く、増感に加えてそれ自体の活性を自己強化し得る、ドセタキセルの強力な増感剤であることが公知である。したがって、本明細書において、骨を標的とした治療剤がゲムシタビンとイバンドロネートとのコンジュゲートであり、第２の治療剤がドセタキセルである方法が有用であることが検討される。
【００４７】
ゲムシタビンは、シタラビンより強力であることが多く、放射線増感に加えてそれ自体の活性を自己強化し得る、強力な放射線増感剤であることが公知である。したがって、骨を標的とした治療剤がゲムシタビンとイバンドロネートとのコンジュゲートであり、第２の治療剤がＸｏｆｉｇｏである方法が臨床的に有利である。
【００４８】
ゲムシタビンとイバンドロネートとのコンジュゲートのＭＴＤは、ＭＢＣ−１のＭＴＤよりも低い。したがって、ゲムシタビンとイバンドロネートとのコンジュゲートは、５／ｍｇ／ｋｇ／日またはそれ未満で、２時間の注入を介して、最大５日の連続する日数にわたり投与され得、Ｘｏｆｉｇｏは、その標準治療の投薬レジメンまたはそれ未満で投与され得る。
【００４９】
以下の実験結果および仮想例は、説明を目的として提供され、本発明の範囲を限定するためのものではない。
【実施例】
【００５０】
以下の実施例は、説明を目的で提供されるものにすぎず、本発明の範囲を限定するものではない。
（実施例１）
【００５１】
以下の研究の目標は、ゲムシタビン−イバンドロネート（ＧＥＭ−ＩＢ）コンジュゲートの有効性を評価することであった。ＧＥＭ−ＩＢを、単独で、およびドセタキセル（ＤＴＸ）と組み合わせての両方で試験し、等モル量の個々の遊離化合物（ＧＥＭ、ＤＴＸ、およびＩＢ）と比較した。目的は、まず、ＧＥＭおよびＤＴＸの用量の範囲を試験して、マウス骨肉腫（ＯＳ）モデルと共に試験するための最適な条件を決定することであった。コンジュゲートまたは遊離化合物のいずれかで処置したマウスにおける腫瘍組織量および骨形態を、その後分析した。
【００５２】
ＧＥＭおよびＧＥＭ／ＤＴＸ組合せの投薬範囲：組み合わせたＧＥＭおよびＤＴＸは、相乗的活性を有することが分かった。このことは、ヒトＯＳ細胞系である１４３Ｂ−ｌｕｃ（１４３Ｂ細胞を、マウスモデル系で使用するためにルシフェラーゼ（ｌｕｃ）を発現するようにトランスフェクトした）との培養において判定された。これらの細胞を培養において処置する際、薬物の組合せは、個々の薬剤よりも低いＩＣ５０値を示した。ＤＴＸのＩＣ５０＝７２ｎＭ、ＧＥＭのＩＣ５０＝９ｎＭ。１ｎＭのＧＥＭの存在下で、ＤＴＸのＩＣ５０は、０．１２ｎＭまで６００分の１に低下した。Ｂｌｉｓｓ分析は、２つの薬物が、１０ｐＭ〜１ｍＭの範囲のＤＴＸ用量と０．５または１ｎＭのＧＥＭとで相乗的であることを示唆した。このことによって、骨の微小環境に対して標的化するための広範囲の薬物比が提供された。
【００５３】
１４３Ｂ−ｌｕｃ細胞を次いで、脛骨内注射を介してヌードマウスに移植し、ＯＳについての同所性のモデルを生成した。腫瘍の存在および成長を、ｉｎ  ｖｉｖｏイメージング（Ｘｅｎｏｇｅｎ）で確認した。マウス（Ｎ＝８／処置群）を次いで、６０ｍｇ／ｋｇのＧＥＭで週に２回、そして１５ｍｇ／ｋｇのＤＴＸで週に１回、単独でまたは組み合わせて（１５ｍｇ／ｋｇのＤＴＸと２０、４０、または６０ｍｇ／ｋｇのＧＥＭ）処置し、体重減少および腫瘍成長についてモニタリングした。全ての処置群におけるマウスは、最高の組合せ用量を除いて、いかなる体重減少も示さず、このことは、処置および薬物の組合せの忍容性を示す。腫瘍サイズを、腫瘍を有する脚の最大直径を測定することによってモニタリングした（発光は、このモデルでは腫瘍サイズと相関せず、腫瘍の形成が開始された時期について動物群を正規化するためだけに使用した）。３つの組合せの群はさらに低い腫瘍成長を示し、最高の組合せ処置は、最も低い腫瘍成長を示した。特に、６０ｍｇ／ｋｇのＧＥＭ単独の群は、２０ｍｇ／ｋｇのＧＥＭと１５ｍｇ／ｋｇのＤＴＸとの群と類似の腫瘍成長を示し、このことは、ＤＴＸを加えることによって、かなり低い用量のＧＥＭが腫瘍サイズの類似の低下を示すことが可能になることを示唆する。
【００５４】
ＧＥＭ−ＩＢの有効性（図２に示す）：第２世代のコンジュゲートであるＧＥＭ−ＩＢは、ＧＥＭを骨に対して標的化させ、こうして単独でおよびＤＴＸとの組合せで、ＯＳに対するその有効性を増大させると仮定される。さらに、ビスホスホネート自体が抗腫瘍効果を有し、ＧＥＭおよびＤＴＸの抗腫瘍効果に対する作用の別のメカニズムにさらに寄与することが実証されている。ＧＥＭ−ＩＢを次いで、単独でおよびＤＴＸと組み合わせて、ＯＳマウスモデルにおいて使用した。
【００５５】
ＩＢおよびＧＥＭ−ＩＢに対する忍容性を、マウスモデル系において試験した。ＩＢ処置を１２ｍｇ／ｋｇで週に２回行うことによって、最小限度の体重減少のみが生じ、ＧＥＭ−ＩＢ処置を１４ｍｇ／ｋｇで週に２回行うと、類似の結果が示された。より長い研究期間の全体にわたるマウスの健康を確実にするために、用量を、６ｍｇ／ｋｇのＩＢ、および等モル用量のＧＥＭ−ＩＢ（１４ｍｇ／ｋｇ）、およびＧＥＭ（６ｍｇ／ｋｇ）と１５ｍｇ／ｋｇのＤＴＸとに減らした。マウスに、脛骨内注射を介して１４３Ｂ−ｌｕｃ細胞を移植し、処置を移植の４日後に開始した。ｉｎ  ｖｉｖｏで、ＭｉｃｒｏＣＴを、処置を開始した２２日後に行い、ＧＥＭ−ＩＢおよび／またはＩＢの骨を保持する効果を確認し、ＩＢ単独またはＧＥＭ−ＩＢを投与されたマウスにおいて骨容積密度および骨梁数が高いことが観察された。
【００５６】
ＤＴＸまたはＩＢと組み合わせた、コンジュゲートしていないＧＥＭは、腫瘍成長のわずかな低下のみを示した。これはおそらく、上記の最も有効な組合せと比較して、ＧＥＭが１０分の１に減少したためである。１４ｍｇ／ｋｇのコンジュゲートＧＥＭ−ＩＢは、遊離した作用物質と比較して類似のわずかな低下を示した。腫瘍成長の最も大きな低下は、ＤＴＸと組み合わせたＧＥＭ−ＩＢによって示された（図３）。したがって、イバンドロネート（ＩＢ）とＧＥＭとのコンジュゲート（図２のゲムシタビンとイバンドロネート、ＧＥＭ−ＩＢ）は、単一の作用物質として有効であり、マウスＯＳモデル系において、ＤＴＸと組み合わせて付加的な利益を実証した。ＧＥＭ−ＩＢを遊離ＧＥＭのモル用量の１／１０で投与しながら、同等の有効性が一定のＤＴＸで実証される。この革新的な治療法は、本明細書において提供される組成物、組合せ、および方法でＯＳ患者に提供され得る。
【００５７】
これは、最大腫瘍直径のみの測定（データは示していない）および腫瘍容積の推定（図３）の両方によって証明される。特に、骨を標的とした組合せは、ＧＥＭ部分のモル当量がコンジュゲートでは１０分の１に低下するにもかかわらず、遊離した作用物質で見られる有効性に匹敵した。
【００５８】
大きな腫瘍サイズに起因する安楽死までのマウスの生存についてのカプラン・マイヤー分析はさらに、ＧＥＭ−ＩＢおよびＤＴＸの組合せで生存が向上したことを実証する（図４）。ＤＴＸと組み合わせたＧＥＭ−ＩＢコンジュゲートによって示される腫瘍成長の大きな低下は、標的化された化学療法剤によって有効性が増大したこと、およびＤＴＸとの相乗作用を実証する。
結論
【００５９】
これらの結果は、ｉｎ  ｖｉｔｒｏで観察されるＧＥＭとＤＴＸとの相乗効果と一致する、ＤＴＸと組み合わせた標的化されたＧＥＭ−ＩＢ処置の、有望なｉｎ  ｖｉｖｏでの抗腫瘍効果および骨保持効果を示した。ＯＳマウスモデルは、同所性の位置に腫瘍を有し、ｉｎ  ｖｉｖｏイメージングで腫瘍を確認する能力を有する、薬物試験系を提供する。
【００６０】
単独のまたはＧＥＭ−ＩＢコンジュゲート中のＩＢでのマウスの処置は、より高いレベルの、考えられる腎毒性を示したが、より低い用量で忍容性が良好であった。マウスを次いで、ＧＥＭ−ＩＢ、ＧＥＭ−ＩＢとＤＴＸ、またはＧＥＭ、ＤＴＸ、もしくはＩＢの個々の作用物質で処置した。ＧＥＭ−ＩＢ＋ＤＴＸで処置されたマウスは、腫瘍成長において最も大きな低下を示した。このことは、腫瘍の測定および必要な安楽死の前の生存時間の増大の両方によって実証された。マウスにおける有効性の研究は、ドセタキセルを１５ｍｇ／ｋｇで投与した場合に、図２に示すイバンドロネート（ibandornate）へのゲムシタビンの特異的なコンジュゲートを＞１００倍（０．１〜１４ｍｇ／ｋｇ）の範囲の用量で投与した場合に、腫瘍成長の低下を実証した。細胞に基づく研究は、この組合せが、ゲムシタビンが０．５〜１ｎＭで存在する場合に、１万倍（０．０１〜１０００マイクロモル）の範囲のドセタキセルで骨肉腫がん細胞死滅活性を提供したことを実証した。これらの研究を総合すると、骨標的化の不存在下で可能な有効性よりも優れた、骨の区画における薬物の有効な比を生成する、本発明の能力を示す。本発明者らのデータは、ＧＥＭ−ＩＢを１００倍の範囲を超えて投薬することによって、ドセタキセルの存在下での利益が提供されることを示唆する。骨肉腫細胞に基づくデータは、ドセタキセルの用量範囲が１万という非常に広い範囲を網羅し得ることを示唆する。したがって、骨肉腫を有する哺乳動物を処置するために、細胞に基づくデータおよびマウスのデータを一般化すると、ある範囲の間の（０．０２〜１４ｍｇ／ｋｇ）ＧＥＭ−ＩＢと、１．５マイクログラム／ｋｇ〜１５ミリグラム／ｋｇの間で投薬されるドセタキセルとを投薬することが必要とされる。
（実施例２）
【００６１】
骨肉腫（ＯＳ）の異種移植片マウスモデルにおける、Ｇｅｍ−Ｉｂａｎｄ（ゲムシタビン−イバンドロネートコンジュゲート）と組み合わせたＸｏｆｉｇｏの非拮抗性の有効性のｉｎ  ｖｉｖｏでの実証の仮想例。この実施例は、細胞を放射線増感するゲムシタビンの能力の報告に基づいて予測される。図５を参照されたい。
【００６２】
同所的にＫＲＩＢ細胞を注射されたマウスは、同所注射後４週間以内に、溶解性／芽球性のＯＳ病変および肉眼的な肺転移のＸ線写真による証拠を示す（Berlin,  O.ら、Cancer  Research（１９９３年）５３巻、４８９０〜４８９５頁）。ＫＲＩＢ細胞は安定的にトランスフェクトされており、ルシフェラーゼの構成的発現を可能にしている。１０ｕＬ中に２×１０４の細胞が、６〜８週齢のオス無胸腺マウスの脛骨の髄腔内に注射される。以下の処置を接種の７日後に開始し、５週間にわたり継続した：
・  ２０ｍｇ／ｋｇのゲムシタビンを週に２回。
・  ＳＯＣＸｏｆｉｇｏを月に１回。
・  Ｇｅｍ−Ｉｂａｎｄを２０ｍｇ／ｋｇのゲムシタビンのモル当量で週に２回。
・  Ｘｏｆｉｇｏを月に１回に加えて、２０ｍｇ／ｋｇのゲムシタビンを週に２回。
・  Ｘｏｆｉｇｏを月に１回に加えて、Ｇｅｍ−Ｉｂａｎｄを２０ｍｇ／ｋｇのゲムシタビンのモル当量で週に２回。
・  モック処置。
【図１Ａ】
2020503365.tif 000003
【図１Ｂ】
2020503365.tif 000004
【図１Ｃ】
2020503365.tif 000005
【図１Ｄ】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
2020503365.tif 000009
【図５】
2020503365.tif 000010
【国際調査報告】
2020503365.tif 000011
2020503365.tif 000012