(57)【要約】  式（Ｉ）の構造を有する、ＢＭＩ−１／ＭＣＬ−１を阻害するための化合物であって、様々な基が記載の通りである化合物。ガンを治療するための医薬組成物は、効果的な量の式（Ｉ）の化合物を含む。    【化１】2020518563.tif 000027
2020518563.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
下記の式（Ｉ）の構造を有する、ＢＭＩ−１および／またはＭＣＬ−１を阻害するための化合物：
【化１】
2020518563.tif 000026
式中、
ＸおよびＹはそれぞれが独立して、ＣＨ２、ＣＨ、Ｏ、Ｓ、ＮおよびＮＨからなる群から選択される；
Ａｒ１およびＡｒ２はそれぞれが独立して、アリールおよびヘテロアリールからなる群から選択され、ただし、前記アリールまたはヘテロアリールはそれぞれが、ＲａおよびＲｂから選択される１つまたは複数の置換基により随意的に置換される；
Ｌは、（Ｃ１〜６）アルキル、（Ｃ２〜６）アルケン、ＣＯＮＲａ、ＮＲａＣＯ、Ｓ（Ｏ）ｎＮＲａ、ＮＲａＳ（Ｏ）ｎ、ＲａＮＣＯＮＲａ、ＲａＮＳ（Ｏ）ｎＮＲａ、ＲａＮＣ（Ｓ）ＮＲａ、Ｃ（Ｓ）ＮＲａ、ＮＲａ、ピペラジン、ＯおよびＳからなる群から選択される１つである；
ＲａおよびＲｂはそれぞれが独立して、水素、ハロゲン、（Ｃ１〜６）アルキル、（Ｃ１〜６）アルコキシル、Ｏ−（Ｃ１〜６）アルキル、Ｓ−（Ｃ１〜６）アルキル、アリール、ヘテロアリール、Ｎ（Ｒｃ）（Ｒｄ）、ＣＯＲｃ、ＣＯＮ（Ｒｃ）（Ｒｄ）、ＮＲｃ−ＣＯ−Ｎ（Ｒｃ）（Ｒｄ）、Ｏ−ＣＯ−Ｎ（Ｒｃ）（Ｒｄ）、ＮＲｃ−Ｓ（Ｏ）ｎ−Ｎ（Ｒｃ）（Ｒｄ）からなる群から選択され、あるいは
ＲａおよびＲｂは、それらが結合する炭素原子、窒素原子またはイオウ原子と一緒になって、シクロアルキルおよびヘテロシクロアルキルからなる群から選択される環を形成することができる；
ＲｃおよびＲｄはそれぞれが独立して、水素、ハロゲン、（Ｃ１〜６）アルキル、（Ｃ１〜６）アルコキシル、（Ｃ６〜１９）アリール、ヘテロアリール、（Ｃ３〜１２）シクロアルキルからなる群から選択され、あるいは、ＲｃおよびＲｄは、それらが結合する炭素原子、窒素原子またはイオウ原子と一緒になって、５員〜７員の環を形成することができる；かつ
ｎは、０、１または２である。
【請求項２】
ＸがＮＨであり、かつ、ＹがＣＨである、または、ＸがＣＨであり、かつ、ＹがＮＨである、
請求項１に記載の化合物。
【請求項３】
Ａｒ１がフェニルまたはピリジルである、
請求項１〜２のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項４】
ＸがＮＨであり、かつ、ＹがＣＨである、
請求項３に記載の化合物。
【請求項５】
Ａｒ１がフェニルである、
請求項４に記載の化合物。
【請求項６】
化合物１〜７３から選択される１つである、
請求項１に記載の化合物。
【請求項７】
化合物４１〜４８から選択される１つである、
請求項１に記載の化合物。
【請求項８】
化合物４４である、
請求項１に記載の化合物。
【請求項９】
ガンを処置するための医薬組成物であって、
請求項１〜８のいずれか一項に記載の化合物を含む
医薬組成物。
【請求項１０】
前記ガンが肺ガンである、
請求項９に記載の医薬組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、ガン細胞の幹細胞性を阻害することができる治療剤、およびガンの処置における当該治療剤の使用に関する。
【背景技術】
【０００２】
ほとんどの腫瘍が腫瘍細胞の不均一な集団が含有する。腫瘍の大部分が、増殖性の分化したガン細胞から構成される。しかしながら、一部のガン細胞は幹細胞の特性（すなわち、幹細胞性）を有する。これらの幹細胞様のガン細胞（これらは「ガン幹細胞」またはＣＳＣと呼ばれる）は、新しいガン細胞を生じさせる可能性があり、また、悪性腫瘍の持続を引き起こす可能性がある。
【０００３】
近年、ＢＭＩ−１（Ｂリンパ腫Ｍｏ−ＭＬＶ挿入領域１ホモログ）がガン細胞の幹細胞性に関与することが見出された。ＢＭＩ−１は、細胞周期阻害剤遺伝子であるＰ１６およびＰ１９を調節することができる。ＢＭＩ−１がいくつかのタイプのガンにおいて、例えば、血液学的ガンおよび脳ガンなどにおいて上昇する。腫瘍細胞におけるＢＭＩ−１発現レベルの低下はアポトーシスおよび／または細胞老化を引き起こすことができ、細胞傷害性薬剤に対する感受性を増大させる。
【０００４】
加えて、ＢＭＩ１が、ＤＮＡ損傷部位に迅速に動員されることが見出されている。ＢＭＩ１の喪失は、相同的組換えによるＤＮＡ二本鎖切断の放射線感受性で、損なわれた修復を引き起こす。
【０００５】
Ｂｍｉ１が、効率的な自己再生細胞分裂のために必須である。Ｂｍｉ−１がガン幹細胞集団の維持において役割を果たしている。Ｋｒｅｓｏ他（Ｎａｔ．Ｍｅｄ．２０、２９〜３６（２０１４））は、ＢＭＩ１を標的とすることによって、ヒト結腸ガン幹細胞がマウス異種移植において排除され得ることを明らかにした。Ｋｒｅｓｏ他はさらに、小分子のＢＭＩ−１阻害剤が腫瘍の成長および転移を全身毒性の非存在下で阻止することを示した。このことは、自己再生を標的とすること（すなわち、ガンの幹細胞性を阻害すること）が、ガンを処置するための新しい戦略として実行可能であることを例示している。
【０００６】
米国特許出願公開第２０１５／０３１５１８２号明細書、同第２０１６／０２１４９７８号明細書、同第２０１６／０２８０６８５号明細書および同第２０１６／０２９７７９８号明細書（ＰＴＣ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ，Ｉｎｃ．（Ｓｏｕｔｈ  Ｐｌａｉｎｆｉｅｌｄ、ＮＪ））には、ＢＭＩ−１のいくつかの阻害剤と、ＢＭＩ−１によって媒介されるガンを処置するための方法とが開示される。
【０００７】
別の分子、すなわち、骨髄細胞白血病配列１（ＭＣＬ１）もまた、化学療法に対する耐性を、ガン幹細胞（ＣＳＣ）を拡大することによって付与することが見出されている。ＭＣＬ−１は、Ｂｃｌ−２ファミリーに属するものであり、多数の細胞タイプの発達における重要な抗アポトーシスタンパク質である。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００８】
先行技術の様々なＢＭＩ−１阻害剤が知られているにもかかわらず、ガン細胞の幹細胞性を抑制するためのＢＭＩ−１／ＭＣＬ−１のより効果的な阻害剤が求められている。
【課題を解決するための手段】
【０００９】
本発明の様々な実施形態が、ＢＭＩ−１および／またはＭＣＬ−１を阻害することができ、かつ、様々なガンを処置するために使用することができる化合物に関する。
【００１０】
本発明の１つの態様が、ＢＭＩ−１および／またはＭＣＬ−１の阻害剤は腫瘍およびガン幹細胞関連疾患の処置において有用であるので、式（Ｉ）によって記載される構造を有する化合物またはその医薬的に許容される塩に関する。
【化１】
2020518563.tif 000003
式中、
ＸおよびＹはそれぞれが独立して、ＣＨ２、ＣＨ、Ｏ、Ｓ、ＮおよびＮＨからなる群から選択される；
Ａｒ１およびＡｒ２はそれぞれが独立して、アリールおよびヘテロアリールからなる群から選択され、ただし、前記アリールまたはヘテロアリールはそれぞれが、ＲａおよびＲｂから選択される１つまたは複数の置換基により随意的に置換される；
Ｌは、（Ｃ１〜６）アルキル、（Ｃ２〜６）アルケン、ＣＯＮＲａ、ＮＲａＣＯ、Ｓ（Ｏ）ｎＮＲａ、ＮＲａＳ（Ｏ）ｎ、ＲａＮＣＯＮＲａ、ＲａＮＳ（Ｏ）ｎＮＲａ、ＲａＮＣ（Ｓ）ＮＲａ、Ｃ（Ｓ）ＮＲａ、ＮＲａ、ピペラジン、ＯおよびＳからなる群から選択される１つである；
ＲａおよびＲｂはそれぞれが独立して、水素、ハロゲン、（Ｃ１〜６）アルキル、（Ｃ１〜６）アルコキシル、Ｏ−（Ｃ１〜６）アルキル、Ｓ−（Ｃ１〜６）アルキル、アリール、ヘテロアリール、Ｎ（Ｒｃ）（Ｒｄ）、ＣＯＲｃ、ＣＯＮ（Ｒｃ）（Ｒｄ）、ＮＲｃ−ＣＯ−Ｎ（Ｒｃ）（Ｒｄ）、Ｏ−ＣＯ−Ｎ（Ｒｃ）（Ｒｄ）、ＮＲｃ−Ｓ（Ｏ）ｎ−Ｎ（Ｒｃ）（Ｒｄ）からなる群から選択され、あるいは
ＲａおよびＲｂは、それらが結合する炭素原子、窒素原子またはイオウ原子と一緒になって、シクロアルキルおよびヘテロシクロアルキルからなる群から選択される環を形成することができる；
ＲｃおよびＲｄはそれぞれが独立して、水素、ハロゲン、（Ｃ１〜６）アルキル、（Ｃ１〜６）アルコキシル、（Ｃ６〜１９）アリール、ヘテロアリール、（Ｃ３〜１２）シクロアルキルからなる群から選択され、あるいは、ＲｃおよびＲｄは、それらが結合する炭素原子、窒素原子またはイオウ原子と一緒になって、５員〜７員の環を形成することができる；かつ
ｎは、０、１または２である。
【００１１】
本発明のいくつかの実施形態によれば、本発明の化合物は、上記の式Ｉを有する構造において、ＸがＮＨであり、かつ、ＹがＣＨである構造、または、ＸがＣＨであり、かつ、ＹがＮＨである構造を含む。上記実施形態のいずれにおいても、Ａｒ１はフェニルまたはピリジルである場合がある。特定の実施形態において、ＸはＮＨであり、かつ、ＹはＣＨである。上記実施形態のいずれにおいても、Ａｒ１はフェニルである場合がある。
【００１２】
本発明の１つの局面が、ガンの成長、再発、転移、または治療剤に対する耐性を処置するための医薬組成物に関する。本発明の１つの実施形態による医薬組成物は、式（Ｉ）によって示される構造を有する上記化合物のいずれか１つの効果的な量を含む。
【００１３】
本発明の実施形態によれば、ＢＭＩ−１および／またはＭＣＬ−１の過剰発現に伴うガンはどれも、本発明の化合物を用いて防止することができ、または処置することができる。本発明のいくつかの実施形態によれば、ガンは肺ガンである場合がある。
【００１４】
本発明の他の局面が下記の説明および実施例により明らかになるであろう。
【図面の簡単な説明】
【００１５】
【図１Ａ】図１ＡはリスリドによるＢＭＩ−１およびＭＣＬ−１の発現の阻害を示す。ＢＭＩ１が、種々の濃度のリスリドによる処理の後のＨ１９７５におけるウエスタンブロットによって検出された。
【００１６】
【図１Ｂ】図１ＢはリスリドによるＨ１９７５細胞スフェロイド形成の阻害を示す。Ｈ１９７５細胞を、種々の濃度のリスリドによる処理の後、血清非含有マトリゲルにおけるスフェロイド形成活性について分析した。
【００１７】
【図２Ａ】図２Ａは本発明の化合物（リスリド誘導体）によるＢＭＩ−１およびＭＣＬ−１の発現の阻害を示す。リスリド誘導体の抗ＢＭＩ１／ＭＣＬ１効力を、Ｈ１９７５細胞における処理（１０μＭ、６時間）の後、ウエスタンブロットによってインビトロで試験した。１００を超えるリスリドの誘導体を合成し、試験し、結果の一部のみを例示した。
【００１８】
【図２Ｂ】図２Ｂは、化合物４４がＢＭＩ−１およびＭＣＬ−１の発現を用量依存的様式で阻害することを示す。誘導体＃４４の抗ＢＭＩ１／ＭＣＬ１効力を、種々の濃度によるＨ１９７５細胞における６時間の処理の後、ウエスタンブロットによって試験した。
【００１９】
【図３】図３はマウス同所性腫瘍モデルにおける様々な試験化合物によるガン成長の阻害を示す。マウスは、Ｈ１９７５−ｌｕｃ細胞が同所性移植され（１０６細胞／マウス）、３週間にわたる薬物処置を受けることが開始された。腫瘍成長の後、非侵襲的な生物発光画像化を行い、腫瘍成長を定量化した。リスリドおよび化合物＃４３〜４５を、尾静脈を介したＩＶ注射により投与した（１ｍｐｋ、５回／７日）。タルセバ（ゲフィチニブ）を経口投与した（２０ｍｐｋ、５回／７日）。Ｎ＝５〜７、それぞれの群について。
【００２０】
【図４Ａ】図４Ａは、同所性マウス腫瘍モデルを使用する試験スキームを示す。マウスにＨ１９７５−ｌｕｃ細胞を同所性移植した（１０６細胞／マウス）。０日目（腫瘍移植後２日として定義される）に、マウスは４週間にわたる薬物処置（５回／週）が施され、腫瘍形成の後、非侵襲的画像化を１４日目および２８日目に行った。
【００２１】
【図４Ｂ】図４Ｂは、１４および２８日目での非侵襲的画像化によって明らかにされるような、図４Ａにおいて記載される実験でのそれぞれの群における数匹のマウスの画像化結果を示す。
【００２２】
【図４Ｃ】図４Ｃは１４および２８日目でのそれぞれの群における腫瘍非存在マウスの割合を示す。
【００２３】
【図４Ｄ】図４Ｄは１４および２８日目でのそれぞれの群におけるマウスの生物発光強度の定量化を示す。Ｎ＝１０、Ｃｔｒｌおよび＃４４（１ｍｐｋ）について；ｎ＝８、他の群について。
【００２４】
【図４Ｅ】図４Ｅは２８日目でのそれぞれの群における腫瘍抑制率を示す。
【００２５】
【図４Ｆ】図４Ｆはそれぞれの群におけるマウス体重を示し、これらから、マウス体重における有意な差がすべての群において認められなかったことが示される。
【００２６】
【図５Ａ】図５Ａは、同所性マウス腫瘍モデルを使用する試験スキームを示す。マウスにＨ１９７５−ｌｕｃ細胞を同所性移植した（１０６細胞／マウス）。０日目（腫瘍移植後３週間として定義される）に、マウスは画像化され、３週間にわたる薬物処置（５回／週）を受けることを開始した。腫瘍成長の後、非侵襲的画像化を毎週行った。
【００２７】
【図５Ｂ】図５Ｂは、０、７、１４および２１日目での非侵襲的画像化によって明らかにされるような、図５Ａにおいて記載される実験でのそれぞれの群における数匹のマウスの画像化結果を示す。
【００２８】
【図５Ｃ】図５Ｃはそれぞれの群におけるマウスの相対的成長速度を示す。成長速度を平均化し、表した。Ｎ＝７、Ｃｔｒｌおよび＃４４（１ｍｐｋ）について；ｎ＝８、他の群について。
【００２９】
【図５Ｄ】図５Ｄは２１日目でのそれぞれの群における腫瘍抑制率を示す。
【００３０】
【図５Ｅ】図５Ｅはそれぞれの群におけるマウス体重を示し、これらから、マウス体重における有意な差がすべての群においてなかったことが示される。
【発明を実施するための形態】
【００３１】
定義
用語「アルキル」は、二重結合または三重結合を有しておらず、かつ、直鎖型および／または分岐型であってもよい炭素鎖を意味する。「アルキル」はＣ１〜Ｃ３アルキル、Ｃ１〜Ｃ６アルキルおよびＣ１〜Ｃ１２アルキルなどのように基における炭素の数によってさらに定義される場合がある。例えば、Ｃ１〜Ｃ６アルキルは、１個、２個、３個、４個、５個または６個の炭素を有するアルキル基として定義される。この記載において、炭素の数が「Ｃ１〜Ｃ６」または「Ｃ１〜６」として表される場合がある。アルキル基の例は、メチル、エチル、プロピル、イソプロピルおよびブチルなどが含まれる。同様に、用語「Ｃ０〜Ｃ４アルキル」には、４個、３個、２個、１個または０個の炭素原子を含有するアルキルが含まれる。炭素を有しないアルキル基は、水素、またはアルキルが架橋成分であるときには直接の結合である。
【００３２】
用語「アルキル」は、「アルキレニル」、すなわち、２つの残基を連結する二価のアルキルを含むように広く使用される。二価「アルキル」の例には、−ＣＨ２−、−ＣＨ２−ＣＨ２−などが含まれる。
【００３３】
用語「アルケン」または用語「アルケニル」は、少なくとも１つのＣ−Ｃ二重結合を有する直鎖型および／または分岐型の構造を意味する。「アルケン」はＣ２〜Ｃ６アルケンおよびＣ２〜Ｃ１２アルケンなどのように炭素の数によってさらに定義される場合がある。例えば、Ｃ２〜Ｃ６アルケンには、エチレン、プロピレンおよびブチレンなどが含まれる。同様に、「アルケニル」は、２つの残基を連結する二価の「アルケニル」を含むように広く使用される場合がある。例えば、Ｃ２〜Ｃ６アルケニルには、エチレニル、プロピレニルおよびブチレニルなどが含まれる。
【００３４】
用語「アルキニル」は、少なくとも１つのＣ−Ｃ三重結合を有する直鎖型および／または分岐型の構造を意味する。「アルキニル」基はＣ２〜Ｃ６アルキニルおよびＣ２〜Ｃ１２アルキニルなどのように炭素の数によってさらに定義される場合がある。例えば、Ｃ２〜Ｃ６アルキニルは、２個、３個、４個、５個または６個の炭素を直鎖型および／または分岐型の配置で有する基として定義される。同様に、Ｃ２〜Ｃ６アルキニルには、２−ヘキシニルまたは２−ペンチニルなどが含まれる。
【００３５】
本明細書中で使用される場合、用語「アルコキシ」には、酸素原子に連接する上記で定義されるようなアルキル基が含まれる。用語「アルコキシ」にはまた、アルキルエーテル基が含まれ、この場合、用語「アルキル」は上記で定義される通りであり、「エーテル」は、酸素原子が間に存在する２つのアルキル基を意味する。アルコキシ基の例には、メトキシ、エトキシ、ｎ−プロポキシおよびｎ−ブトキシが含まれる。
【００３６】
用語「アリール」は、別途具体的に述べられる場合を除き、それぞれの環が７員までの安定な単環式または縮合型の炭素環であって、少なくとも１つの環が芳香族である炭素環をどのようなものであっても意味する。「アリール」基は（Ｃ６〜１２）アリールおよび（Ｃ６〜１９）アリールなどのように炭素の数によって定義される場合がある。そのようなアリール基の例には、フェニル、ナフチルおよびトリルが含まれる。
【００３７】
用語「アリールオキシ」は、酸素原子を介して連接する上記で定義されるようなアリール基を意味する。
【００３８】
用語「シクロアルキル」は、ヘテロ原子を含有しない炭素環を意味し、単環式、二環式および三環式の飽和炭素環、同様にまた縮合環系を含む。そのような縮合環系は、ベンゾ縮合した炭素環のような縮合環系を形成するために、ベンゼン環のような部分的または完全に不飽和である１つの環を含むことができる。シクロアルキルには、スピロ縮合した環系のような縮合環系が含まれる。「シクロアルキル」基は（Ｃ３〜６）シクロアルキル、（Ｃ３〜１２）シクロアルキルおよび（Ｃ３〜１９）シクロアルキルなどのように炭素の数によって定義される場合がある。シクロアルキルの例には、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロヘキシル、アダマンタニル、インダニル、インデニルおよびフルオレニルが含まれる。
【００３９】
同様に、「シクロアルケニル」は、ヘテロ原子を含有せず、かつ、少なくとも１つの非芳香族性のＣ−Ｃ二重骨を含有する炭素環を意味する。シクロアルケニルには、単環式、二環式および三環式の部分的に飽和した炭素環、同様にまた、ベンゾ縮合したシクロアルケンが含まれる場合がある。「シクロアルケニル」基は（Ｃ３〜６）シクロアルケニル、（Ｃ３〜１２）シクロアルケニルおよび（Ｃ３〜１９）シクロアルケニルなどのように炭素の数によって定義される場合がある。シクロアルケニルの例には、シクロへキセニルおよびインデニルが含まれる。
【００４０】
用語「シクロアルキルオキシ」には、オキシ連接原子に連接する上記で定義されるようなシクロアルキル基が含まれる。
【００４１】
用語「ヘテロ」には、別途具体的に記載される場合を除き、１つまたは複数のＯ原子、Ｓ原子および／またはＮ原子が含まれる。例えば、「ヘテロシクロアルキル」（またはヘテロシクリル）および「ヘテロアリール」には、１つまたは複数のＯ原子、Ｓ原子および／またはＮ原子を環に含有する環系が含まれる。
【００４２】
用語「ヘテロシクロアルキル」は、１つまたは複数の環炭素がＯ、Ｓおよび／またはＮなどのヘテロ原子により置換される上記で定義されるようなシクロアルキルを意味する。ヘテロシクロアルキルの例には、アゼチジニル、ピロリジニル、ピペリジニル、ピペラジニル、モルホリニルおよびテトラヒドロフラニルが含まれる。本明細書中で使用される場合、「ヘテロシクロアルキル」には、隣接原子または非隣接原子を介してつながる２つ以上のヘテロシクロアルキル基を有する架橋ヘテロシクロアルキルが含まれる。
【００４３】
用語「ヘテロアリール」は、本明細書中で使用される場合、少なくとも１つの芳香族環と、Ｎ、Ｏおよび／またはＳから選択される１〜４個のヘテロ原子とを含有する単環式または多環式の環系を意味し、ただし、窒素およびイオウのヘテロ原子は必要に応じて酸化されていてもよく、窒素ヘテロ原子は必要に応じて四級化されていてもよい。ヘテロアリールの例には、芳香族環を含有する安定な５〜７員の単環式または安定な９〜１０員の縮合二環式の複素環式環系が含まれる場合がある。ヘテロアリール基は、基に含まれる炭素の数によって定義される場合がある。例えば、（Ｃ３〜１９）ヘテロアリールは、ヘテロ原子に加えて、３〜１９個の炭素を有するヘテロアリール基を示す。多環式環系のいくつかの環は、飽和、部分的飽和または不飽和である場合がある。ヘテロアリール基には、複素環式環が芳香族環（例えば、ベンゼン環など）に縮合する二環式または多環式の基がどのようなものであっても含まれる。複素環式環は、安定な構造の創出をもたらすヘテロ原子または炭素原子においてどれにおいてであっても結合し得る。そのようなヘテロアリール基の例には、ピリジン、ピリミジン、ピラジン、チオフェン、オキサゾール、チアゾール、トリアゾール、オキサジアゾール、ピロール、１，２，４−オキサジアゾールおよび１，３，４−チアジアゾールが含まれる。
【００４４】
用語「ヘテロアリールオキシ」は、オキシ連接原子を介して連接部位に連接する上記で定義されるようなヘテロアリール基を記載する。
【００４５】
上記のシクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アリールおよびヘテロアリールなどの環系はさらに、アルキル、アルケニルまたはアルキニルなどの非環式成分に連接してもよい。これらの場合において、環式部分と、非環式部分とは、それぞれの部分における炭素の数によって別々に表される場合がある。例えば、（Ｃ３〜１９）ヘテロアリール（Ｃ１〜６）アルキルにより、１個〜６個の炭素を有するアルキル基に結合する、３個〜１９個の炭素原子を有するヘテロアリール環が規定される。（Ｃ３〜１９）ヘテロアリール（Ｃ１〜６）アルキルの例には、例えば、フリルメチル、チエニルエチル、ピラゾリルメチルおよびキノキサリニルメチルが含まれる。
【００４６】
用語「カルバモイル」には、−ＮＨＣ（Ｏ）Ｏ（Ｃ１〜４）アルキルおよび−ＯＣ（Ｏ）ＮＨ（Ｃ１〜４）アルキルが含まれる場合がある。
【００４７】
用語「随意的に置換された（される）」は、置換された（される）および非置換の両方を含む。例えば、随意的に置換されたアリールはペンタフルオロフェニル基またはフェニル環を表し得る。さらに、置換は分子内の副部分においてどこでも、またはすべてでなされることが可能である。例えば、置換（された）アリール（Ｃ１〜６）アルキルは、アリール基での１つもしくは複数の置換および／またはアルキル基での１つもしくは複数の置換を含む場合がある。
【００４８】
ヘテロアリールまたはヘテロシクロアルキルの「オキシド」という用語は、例えば、窒素原子のＮ−オキシドまたはイオウ原子のＳ−オキシドを含む。基が「存在しない」とき、それは「直接の結合」である。
【００４９】
１つまたは複数の二重結合を有する本明細書中に記載される化合物は、シス／トランスの異性体、同様にまた、他の立体配座異性体を生じさせる場合がある。本発明は、すべてのそのような可能な異性体、同様にまた、それらの混合物を含む。
【００５０】
結合記号（ダッシュまたはダブルダッシュ）によって別途示されている場合を除き、示された基に対する連接点は、最も右側に記載された基に存在するものとする。すなわち、例えば、フェニルアルキル基は、アルキルを介して主構造に連接する。
【００５１】
本明細書中に記載される化合物は１つまたは複数の不斉中心を含有することができ、したがって、ジアステレオマーおよび光学異性体を生じさせる場合がある。本発明は、すべてのそのような可能なジアステレオマー、同様にまた、それらのラセミ混合物、エナンチオマー、すべての可能な幾何異性体、およびそれらの医薬的に許容され得る塩を含む。上記の式Ｉは、明確な立体化学を特定の位置において伴うことなく示される。本発明は式Ｉのすべての立体異性体およびその医薬的に許容され得る塩を含む。さらに、立体異性体の混合物、同様にまた、単離された特定の立体異性体もまた含まれる。そのような化合物を調製するために使用される合成手順の過程の期間中において、あるいは当業者に知られているラセミ化手順またはエピマー化手順を使用する際において、そのような手順の生成物は立体異性体の混合物である可能性がある。
【００５２】
本発明の化合物は、様々な医薬的に許容され得る塩形態物において有用である。用語「医薬的に許容され得る塩」は、製薬化学者には明らかであろうそのような塩形態物、例えば、実質的に非毒性であり、かつ、所望の薬物動態学的特性、美味性、吸収、分布、代謝または排出をもたらす塩形態物を示す。好都合には、医薬組成物が、医薬的に許容され得るキャリアとの組合せで有効成分から調製される場合がある。
【００５３】
医薬的に許容され得る塩が、医薬的に許容され得る非毒性の塩基または酸から調製される場合がある。本発明の化合物が酸性であるときには、その対応する塩を、無機塩基および有機塩基を含めて医薬的に許容され得る非毒性の塩基から都合よく調製することができる。そのような無機塩基に由来する塩には、アルミニウム塩、アンモニウム塩、カルシウム塩、銅塩、第二鉄塩、第一鉄塩、リチウム塩、マグネシウム塩、マンガン塩、カリウム塩、ナトリウム塩および亜鉛塩などが含まれる。医薬的に許容され得る有機の非毒性塩基に由来する塩には、第一級アミン、第二級アミンおよび第三級アミン、同様にまた、環状アミンおよび天然に存在する置換アミンおよび合成された置換アミンなどの置換アミンの塩が含まれる。塩が形成され得る他の医薬的に許容され得る有機の非毒性塩基には、例えば、アルギニン、ベタイン、カフェイン、コリン、Ｎ，Ｎ’−ジベンジルエチレンジアミン、ジエチルアミン、２−ジエチルアミノエタノール、２−ジメチルアミノエタノール、エタノールアミン、エチレンジアミン、Ｎ−エチルモルホリン、Ｎ−エチルピペリジン、グルカミン、グルコサミン、ヒスチジン、ヒドラバミン、イソプロピルアミン、リシン、メチルグルカミン、モルホリン、ピペラジン、ピペリジン、ポリアミン樹脂、プロカイン、プリン類、テオブロミン、トリエチルアミン、トリメチルアミン、トリプロピルアミンおよびトロメタンミンなどが含まれる。
【００５４】
本発明の化合物が塩基性であるときには、その対応する塩を、無機酸および有機酸を含めて医薬的に許容され得る非毒性の酸から都合よく調製することができる。そのような酸には、例えば、酢酸、ベンゼンスルホン酸、安息香酸、ショウノウスルホン酸、クエン酸、エタンスルホン酸、フマル酸、グルコン酸、グルタミン酸、臭化水素酸、塩酸、イセチオン酸、乳酸、マレイン酸、リンゴ酸、マンデル酸、メタンスルホン酸、粘液液、硝酸、パモ酸、パントテン酸、リン酸、コハク酸、硫酸、酒石酸およびｐ−トルエンスルホン酸などが含まれる。
【００５５】
医薬的に許容され得る塩の例には、アミンなどの塩基性残基の無機酸塩または有機酸塩；カルボン酸などの酸性残基のアルカリ塩または有機塩；およびその他が含まれる。医薬的に許容され得る塩には、例えば、非毒性の無機酸または有機酸から形成される親化合物の従来型非毒性塩または第四級アンモニウム塩が含まれる。
【００５６】
詳細な説明
本発明の様々な実施形態が、ＢＭＩ−１および／またはＭＣＬ−１を阻害することができる化合物で、ガン細胞の幹細胞性を促進させるように機能する化合物に関する。本発明の化合物は、様々なガンを処置するために、同様にまた、ガンの再発および転移を処置するために使用することができる。
【００５７】
ＢＭＩ−１および／またはＭＣＬ−１の阻害剤の探索において、本発明の発明者らは予想外であったが、リセルグ酸の類似体、すなわち、リスリドがＢＭＩ−１の効果的な阻害剤であることを見出した。リスリドの構造は以下に示される通りである：
【化２】
2020518563.tif 000004
【００５８】
予備的試験により、リスリドがＢＭＩ−１の発現を用量依存的様式で阻害したこと（図１Ａ）、Ｈ１９７５細胞のスフェロイド形成を用量依存的様式で阻害したこと（図１Ｂ）が確認された。リスリドは、ＬＳＤ（リセルグ酸類似体）の構造に類似する構造を有するドパミンアゴニスト（抗パーキンソン剤として使用される）である。リセルグ酸類似体は、４つの環が縮合したコア構造を有しており、この構造がその血液脳関門（ＢＢＢ）横断能に寄与しているかもしれない。しかしながら、ＢＭＩ−１／ＭＣＬ−１の阻害のために、本発明の化合物は、ＢＢＢを横断することを必要としない。実際、ＢＢＢ横断能は不利となる場合がある。
【００５９】
したがって、発明者らは、このリード化合物を、その血液脳関門（ＢＢＢ）浸透能を低下させるために、また、その水溶性を改善するために、４つの環が縮合したそのコア構造を壊すことによって改善することにした。具体的には、リスリドの４環コアの閉じた環を、その平面性を低下させるために開環し、いくつかの高極性基を、その親油性疎水性を低下させるために導入した。１００を超えるリスリドの誘導体を合成し、インビトロによって抗ＢＭＩ−１／ＭＣＬ−１効力について試験した（図２Ａを参照のこと）。本発明の化合物は一般には、インドール構造または他の類似する縮合した２つの環に基づく構造（例えば、ベンゾチオフェン）を有する。本発明のこれらの２環型化合物は式Ｉとして一般化され得る：
【化３】
2020518563.tif 000005
【００６０】
本発明の化合物はＢＢＢ横断能を有しないことが予想される。したがって、本発明の化合物は、ＣＮＳに対する影響を有する可能性がより低く、ガンの処置における使用のための良好なＢＭＩ−１／ＭＣＬ−１阻害活性を有することが予想される。式Ｉの一般構造を有する本発明の化合物は下記のスキーム１に従って合成され得る：
【化４】
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【００６１】
スキームＩに例示されるように、関与する反応は従来的である。最初に、芳香族臭化物（Ａ）が、パラジウム触媒（例えば、ＰｄＣｌ２（ｄｐｐｆ）、すなわち、（１，１’−ビス（ジフェニルホスフィノ）フェロセン）−パラジウム（ＩＩ）ジクロリド、これは、例えば、Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈから市販されている）の触媒作用の存在下、鈴木反応として知られる反応でアリールボロン酸化合物（Ｂ）とカップリングされる。このカップリングにより、生成物（Ｃ）が生成し、そのアミノ基をさらに、アミドを形成するためにアシルクロリド（Ｄ）により修飾することができ、これにより、式Ｉの化合物がもたらされる。これらの反応は従来的であり、市販の試薬を伴うため、当業者は、これらの反応を、過度な実験を伴うことなく行うことができるであろう。
【００６２】
式Ｉの化合物の代表的な例が下記において表１に示される：
【表１】
2020518563.tif 000007
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【実施例】
【００６３】
上記で記されるように、本発明の化合物の合成は従来の有機反応を伴い、市販の試薬が使用される。当業者は、これらの化合物を、過度な実験を伴うことなく合成することができるだろう。下記の実施例は、本発明のある特定の実施形態を例示するために示される。これらの実施例は例示のみのためであり、本発明の範囲を限定するものとして解釈してはならない。
【００６４】
別途示されている場合を除き、１Ｈ  ＮＭＲデータは５００ＭＨｚで得られ、本発明の化合物は、効力が、１０μＭ未満のＩＣ５０値を有するとして下記のアッセイで明らかにされた。本明細書中で使用される略語は、別途明記される場合を除き、下記の通りである：
Ｂｕ：ブチル；Ｂｎ：ベンジル；ＢＯＣ：ｔ−ブチルオキシカルボニル；
ＢＯＰ：ベンゾトリアゾール−１−イルオキシトリ／ジメチルアミノ−ホスホニウムヘキサフルオロホスファート；
ＤＣＣ：ジシクロヘキシルカルボジイミド；ＤＭＦ：Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド；
ＤＭＡＰ：４−ジメチルアミノピリジン；
ＥＤＣ：１−（３−ジメチルアミノプロピル）３−エチルカルボジイミド塩酸塩；
ＥｔＯＡ：ｃ酢酸エチル；Ｅｑ．：当量；ＨＯＢｔ：ヒドロキシベンズトリアゾール；
ＬＡＨ：水素化アルミニウムリチウム；ＭｅＯＨ：メタノール；
ＭＨｚ：メガヘルツ；ＭＳ（ＥＳ）：質量分光光度計−エレクトロンスプレー；
ＮＭＰ：Ｎ−メチルピロリジノン；Ｐｈ：フェニル；
Ｐｒ：プロピル；ＴＥＡ：トリエチルアミン；ＴＨＦ：テトラヒドロフラン；
ＴＬＣ：薄層クロマトグラフィー；およびＴｅｔｒａｋｉｓ：テトラキス（トリフェニルホスフィン）パラジウム。
【実施例１】
【００６５】
Ｎ−（３−（１Ｈ−インドール−７−イル）フェニル）−４−エチルベンズアミド（４４）
【化５】
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ＤＭＦ（１６ｍｌ）における７−ブロモ−１Ｈ−インドール（Ａ、１．０ｇ、５．１０ｍｍｏｌ）、３−アミノベンゼンボロン酸一水和物（Ｂ、９４８．５ｍｇ、６．１２ｍｍｏｌ）およびＫ２ＣＯ３（２．８２ｇ、２０．４０ｍｍｏｌ）を脱気し、その後、Ｎ２によりフラッシュした。その後、ＰｄＣｌ２（ｄｐｐｆ）（４１６．６ｍｇ、０．５１０ｍｍｏｌ）を溶液に徐々に加えた。反応混合物を１００℃に加熱し、５．０時間撹拌した。反応をＴＬＣによってモニターし、反応混合物をセライトでろ過した。溶液を酢酸エチルにより２回抽出し、有機層をブラインにより洗浄し、ＭｇＳＯ４（ｓ）で乾燥し、減圧下で濃縮した。残渣をシリカゲルでのカラムクロマトグラフィーによって精製して、３−（１Ｈ−インドール−７−イル）ベンゼンアミン（Ｃ、９６４．７ｍｇ）を９１％の収率で得た。ＬＣ／ＭＳ  ｍ／ｚ  ２０８．９６。１Ｈ  ＮＭＲ（５００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ６）δ７．３７〜７．３６（ｍ、２Ｈ）、７．１５〜７．１０（ｍ、２Ｈ）、７．０１（ｄ、Ｊ＝７．２Ｈｚ、１Ｈ）、６．９０（ｓ、１Ｈ）、６．８０（ｄ、Ｊ＝７．６Ｈｚ、１Ｈ）、６．５８〜６．５６（ｍ、２Ｈ）、および５．１２（ｓ、２Ｈ）。
【００６６】
３−（１Ｈ−インドール−７−イル）ベンゼンアミン（Ｃ、１３７．０ｍｇ、０．６５８ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（２．０ｍｌ）における溶液に、Ｋ２ＣＯ３（１３６．４ｍｇ、０．９８７ｍｍｏｌ）および４−エチルベンゾイルクロリド（０．１４５ｍｌ、０．９８７ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を５５℃で４．０時間撹拌し、その後、水により反応停止させた。溶液を減圧下で濃縮し、酢酸エチルにより抽出した。有機層をブラインにより洗浄し、ＭｇＳＯ４（ｓ）で乾燥し、減圧下で濃縮して、Ｎ−（３−（１Ｈ−インドール−７−イル）フェニル）−４−エチルベンズアミド（４４、１２２．２ｍｇ）を５５％の収率で黄色固体として得た。ＬＣ／ＭＳ  ｍ／ｚ  ３４１．６０。１Ｈ  ＮＭＲ（５００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ６）δ１０．９５（ｓ、１Ｈ）、１０．２６（ｓ、１Ｈ）、８．０６（ｓ、１Ｈ）、７．９３〜７．９２（ｄ、Ｊ＝７．６Ｈｚ、３Ｈ）、７．５７〜７．５６（ｄ、Ｊ＝７．０Ｈｚ、１Ｈ）、７．５１〜７．４８（ｔ、Ｊ＝７．７Ｈｚ、１Ｈ）、７．３９〜７．３６（ｍ、３Ｈ）、７．３（ｓ、１Ｈ）、７．１３〜７．１１（ｍ、２Ｈ）、６．５４〜６．５３（ｍ、１Ｈ）、２．７２〜２．６７（ｍ、２Ｈ）、および１．２３〜１．１９（ｍ、３Ｈ）。
【実施例２】
【００６７】
表１に列挙される化合物１〜７３の合成
上記の表１に列挙される化合物１〜７３を、実施例１で記載される様式と類似する様式で合成した。それらの計算質量および実測ＥＳＩ−ＭＳデータが表２に示される。
【表２】
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【００６８】
本発明の化合物がＢＭＩ−１／ＭＣｌ−１の発現を阻害し得るかを、細胞培養を用いてアッセイした。ＢＭＩ−１およびＭＣＬ−１が肺ガン細胞株Ｈ１９７５などの多くのガンにおいて過剰発現する。したがって、ＢＭＩ−１／ＭＣＬ−１を過剰発現するガン細胞は、ＢＭＩ−１／ＭＣＬ−１の阻害をアッセイするための都合のよいプラットフォームを提供する。
【００６９】
下記の実施例において、アッセイではＨ１９７５（ＡＴＣＣ  ＣＲＬ−５９０８）が使用され、これは、Ｔ７９０ＭのＥＧＦＲ変異を有するヒト肺腺ガン細胞株であり、ゲフィチニブなどの第１世代のチロシンキナーゼ阻害剤に対して耐性がある。Ｈ１９７５細胞を、１０％のウシ胎児血清および１％のペニシリン／ストレプトマイシンが補充されるＲＰＭＩ−１６４０培地において、５％のＣＯ２を用いて３７℃での加湿インキュベーターで培養した。
【００７０】
実施例１：本発明の化合物によるＢＭＩ−１タンパク質発現の低下
ＢＭＩ−１／ＭＣＬ−１発現の阻害を試験するために、本発明の試験化合物をそれぞれ、１０μＭの最終濃度に達するように培養培地で希釈し、上記細胞を、これらの化合物を含有する培地と６時間インキュベーションした。
【００７１】
薬物処置後、細胞をＰＢＳにより２回洗浄し、掻き取り、プロテアーゼ阻害剤を含有するＲＩＰＡ緩衝液（２０ｍＭ  Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ  ｐＨ７．５、１５０ｍＭ  ＮａＣｌ、１ｍＭ  Ｎａ２ＥＤＴＡ、１ｍＭ  ＥＧＴＡ、１％ＮＰ−４０、１％デオキシコール酸ナトリウム、２．５ｍＭピロリン酸ナトリウム、１ｍＭ  ｂ−グリセロリン酸、１ｍＭ  Ｎａ３ＶＯ４、１μｇ／ｍｌロイペプチン）に再懸濁した。細胞溶解物を５〜１０分間にわたって超音波処理し、４℃で２０分間、１４０００ｒｐｍで遠心分離した。上清を回収し、タンパク質濃度について求め、さらなる使用まで−８０℃で貯蔵した。
【００７２】
ＢＭＩ−１／ＭＣＬ−１の発現レベルがウエスタンブロット分析により評価され得る。ウエスタンブロット分析のために、すべてのサンプルを等しいタンパク質量（５０μｇ）に希釈し、６ｘサンプル緩衝液（３７５ｍＭ  Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ、９％ＳＤＳ、５０％グリセロール、０．０３％ブロモフェノールブルー）を加えることによって変性させ、９５℃で５分間加熱した。その後、変性タンパク質サンプルを、タンパク質を分離するために１０％Ｔｒｉｓ−グリシンＳＤＳポリアクリルアミドゲルに負荷した。泳動条件のための電源を、濃縮用ゲルでの泳動のためには８０Ｖで、分離用ゲルについては１００Ｖでそれぞれ設定した。タンパク質を分離した後、タンパク質バンドを、１０％の１ｘ転写ストック緩衝液（２５０ｍＭ  Ｔｒｉｓ塩基、１．９２Ｍグリシン）＋２０％のメタノールおよび７０％の蒸留脱イオン水を含有する転写緩衝液混合物においてポリアクリルアミドゲルからニトロセルロースメンブランに転写した。転写条件のための電源を３００ｍＡで設定し、転写を氷上で２．５時間行った。変性タンパク質を含有するニトロセルロースメンブランを室温で１時間、５％のスキムミルクを含有する溶液によりブロッキング処理した。
【００７３】
ブロッキング処理後、メンブランを、０．１％のＴｗｅｅｎ−２０を含有するＴＢＳ（ＴＢＳＴ）により５分間洗浄した。すべてのメンブランを一次抗体（ＢＭＩ−１抗体、Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ  ０５−６３７、１：１０００）と４℃で一晩インキュベーションした。ＴＢＳＴによる洗浄（５分、３回）の後、メンブランを二次抗体（ＨＲＰコンジュゲート化抗マウスＩｇＧ、Ｊａｃｋｓｏｎ  ＩｍｍｕｎｏＲｅｓｅｒｃｈ  ＬＡＢＯＲＡＴＯＲＩＥＳ  ＩＮＣ．、１：５０００）と室温で１時間インキュベーションした。ＴＢＳＴによる洗浄（５分、５回）の後、メンブランを化学発光試薬と１分間インキュベーションし、生物発光画像化システム（Ｂｉｏｓｐｅｃｔｒｕｍ−ＡＣ  ｗ／Ｂｉｏ  Ｃｈｅｍｉ  Ｃａｍｅｒａ、ＵＶＰ）により画像化した。
【００７４】
加えて、メンブランはまた、ＭＣＬ−１およびチューブリンに対する抗体によるプローブ探索が行われた。チューブリンは、ゲル上の異なるレーンにおける相対的な負荷量を評価するための内部コントロールとして機能する。骨髄細胞白血病１（ＭＣＬ１）は、多くのガンにおいて過剰発現する生存促進性タンパク質である。
【００７５】
図２Ａに示されるように、本発明の化合物（特に化合物４３、化合物４４および化合物４５）による処理が行われたとき、ＢＭＩ−１およびＭＣＬ−１のタンパク質発現が著しく低下した。これらの結果は、本発明の化合物が実際にＢＭＩ−１およびＭＣＬ−１の強力な阻害剤であることを示している。したがって、これらの化合物は、ガン幹細胞の幹細胞性の抑制において有用であるにちがいない。それに応じて、これらの化合物は、ＢＭＩ−１および／またはＭＣＬ−１の過剰発現に伴うことが見出されているガンの処置において有用であるにちがいない。
【００７６】
図２Ｂは、ＢＭＩ−１およびＭＣＬ−１の発現の本発明の化合物による阻害が用量依存的様式で生じたことを示す。一例として化合物＃４４（ＢＩ−４４）を使用する場合、この化合物はＢＭＩ−１およびＭＣＬ−１の発現をサブμＭ濃度で効果的に阻害した。
【００７７】
実施例２．本発明の化合物のイン・ビボ（ｉｎ  ｖｉｖｏ）抗腫瘍活性
強力な抗ＢＭＩ−１／ＭＣＬ−１効果を示す誘導体（例えば、化合物＃４３〜４５（ＢＩ−４３〜ＢＩ−４５）など）をさらなるイン・ビボ抗腫瘍試験のために選択した。イン・ビボでのマウス腫瘍モデルを下記のように確立した。
１．ＳＣＩＤマウス（７０匹のマウス、約６−６週齢）を、肺ガン細胞がそれらの胸腔に移植される前に１週間にわたって隔離した。
２．ガン細胞をマウスの胸腔に移植する前に、マウスをガス麻酔により麻酔した。マウスを２０ｃｍ×１０ｃｍ×１０ｃｍの透明なアクリルボックスに入れ、アクリルボックスを柔軟なチューブにより麻酔器および酸素タンクに接続した。その後、適量の麻酔剤（イソフルラン）を麻酔器に導入した。バルブが開けられている。酸素濃度を３２〜３６％で制御し、流速が０．５〜１Ｌ／分であり、その結果、麻酔剤の濃度が３〜４％の範囲内であるようにした。
３．マウスは約６０〜９０秒後に完全に麻酔された。その後、胸腔内手技を、２９Ｇの０．５ｍＬインスリンシリンジを用いて行うことができるであろう。Ｈ１９７５−Ｌｕｃ、これは、ルシフェラーゼ発現ベクターにより安定的に形質導入されたＨ１９７５細胞である。０．１ｍＬ量の細胞懸濁液（Ｈ１９７５−Ｌｕｃ）を抜き取り、前肢と横隔膜との間での右側の位置においてマウスの胸腔に注入した。手技を３０秒以内に終了した。
４．手技後、マウスをケージに戻した。マウスは約３０〜６０秒で覚醒するであろう。
５．ガン細胞の胸腔内移植の１週間後、発光試薬（Ｄ−ルシフェリン）をマウスの腹腔に注入した。非侵襲的イン・ビボ画像化システム（ＩＶＩＳ）を使用して、バイオルミネセンスを分析した。
【００７８】
腫瘍がマウスにおいて確立された後、試験化合物を示された用量で投与し、腫瘍サイズを、バイオルミネセンスを使用してモニターした。腫瘍サイズの結果（バイオルミネセンス強度によって測定された場合の結果）を図３に示した。
【００７９】
この実験では、チロシンキナーゼ阻害剤であり、かつ、いくつかのガン細胞（例えば、非小細胞肺ガン、膵臓ガンなど）の成長を阻害することが知られているＴＡＲＣＥＶＡ（登録商標）（エルロチニブ）を陽性処置コントロールとして使用した（２０ｍｇ／Ｋｇ、すなわち、２０ｍｐｋ）。リスリドおよびＢＩ４３〜４５が１ｍｐｋでそれぞれ使用される。図３に示されるように、試験化合物の中で、ＢＩ−４４が最も顕著な抗腫瘍成長効果を示した。
【００８０】
実施例３：マウスでの同所性ガンモデルにおける本発明の化合物の抗腫瘍活性
化合物４４（ＢＩ−４４）が最も強力な抗ＢＭＩ−１活性および抗ＭＣＬ−１活性を示したので、その効力を２つの同所性異種移植動物研究においてさらに調べた。マウスでのガンモデルを上記のように作製した。同所性Ｈ１９７５−Ｌｕｃモデルは以前の研究として記載された。ＢＩ−４４を、図で示される用量を用いて、尾静脈を介するＩＶ注射によって投与した（５回／７日）。ゲフィチニブおよびアファチニブを２０ｍｐｋ（ｍｇ／Ｋｇ）の用量で経口投与した（５回／７日）。
【００８１】
第１の動物モデルにおいて、マウスにＨ１９７５−ｌｕｃ細胞を同所性移植した（１０６細胞／マウス）。０日目（腫瘍移植後２日として定義される）に、マウスは４週間にわたる薬物処置（５回／週）を受けることを開始し、腫瘍形成の後、非侵襲的画像化を１４および２８日目に行った。
【００８２】
ＢＩ−４４を、図４Ａに示される投与スキームに従って同所性肺腫瘍移植後２日から開始して投与し、腫瘍形成を１４および２８日目に非侵襲的生物発光画像化により評価した。
【００８３】
Ｈ１９７５はＥＧＦＲでのＴ７９０Ｍ変異を含有するため、ゲフィチニブ（ＥＧＦＲのＴ７９０Ｍを標的としない第１世代のＴＫＩ）およびアファチニブ（ＥＧＦＲのＴ７９０Ｍを標的とすることができる第２世代のＴＫＩ）の薬物を陰性コントロールおよび陽性コントロールとしてそれぞれ使用した。
【００８４】
それぞれの群（それぞれのＣｔｒｌおよびＢＩ−４４（１ｍｐｋ）についてはＮ＝１０、それぞれの他の群についてはｎ＝８）におけるマウスの生物発光強度の定量化を示す図４Ｂにおいて示されるように、結果から、１ｋｇの体重あたり３ｍｇ（３ｍｐｋ）の用量を用いてＢＩ−４４により処置される群は６２．５％（５／８）および３７．５％（３／８）の腫瘍非存在率を１４および２８日目にそれぞれ有し、これらは、アファチニブを用いて処置される群の結果に匹敵することが示された（図４Ｃ）。
【００８５】
画像の定量化により、コントロールと比較した場合、マウスの肺における有意に低下した生物発光強度がＢＩ−４４（３ｍｐｋ）処置群およびアファチニブ処置群の両方において示され（図４Ｄ）、腫瘍抑制率が８０％前後であった（図４Ｅ）。処置群におけるマウスのすべてがマウス体重を実験期間中に変化させなかった（図４Ｆ）。
【００８６】
第２のモデルにおいて、ＢＩ−４４を、すべてのマウスが肺における規定のルシフェラーゼシグナルを含有した腫瘍移植後３週から開始して投与した（図５Ａ）。その後、腫瘍成長を３週間にわたって追った（図５Ａ）。マウスにＨ１９７５−ｌｕｃ細胞を同所性移植した（１０６細胞／マウス）。０日目（腫瘍移植後３週間として定義される）に、マウスは画像化され、３週間にわたる薬物処置（５回／週）を受けることを開始した。腫瘍成長の後、非侵襲的画像化を毎週行った。
【００８７】
結果は、それぞれの群における数匹のマウスの画像化結果に基づいて、ＢＩ−４４が腫瘍成長を用量依存的様式で有意に阻害したことを示した（図５Ｂおよび図５Ｃ）。２１日目での３および９ｍｐｋの抑制率が９０％前後であった。それぞれの群におけるマウスの相対的成長速度を平均化し、図５Ｄに表した（それぞれのＣｔｒｌおよびＢＩ−４４（１ｍｐｋ）についてはＮ＝７、それぞれの他の群についてはｎ＝８）。処置群におけるマウスのすべてがマウス体重を実験期間中に変化させなかった（図５Ｅ）。
【００８８】
要約すると、これらの研究からの結果は、本発明の化合物は、おそらくはＢＭＩ−１／ＭＣＬ−１機能を阻害することによって、イン・ビボでの腫瘍成長を阻害することができることを示す。これらの結果は、ＢＭＩ−１／ＭＣＬ−１の発現を阻害し得る本発明の化合物は実際に腫瘍成長を阻害することができることを裏づけている。ＢＭＩ−１／ＭＣＬ−１の過剰発現が、ガンの再発、転移および耐性に伴うため、本発明の化合物はまた、ガン細胞の再発、転移または耐性を防止するためにも使用することができる。
【００８９】
例示の明確化のために、上記の実施例では、ＢＩ−４４および肺ガンが、本発明の様々な実施形態を明らかにするために使用される。しかしながら、本発明の他の化合物が、ＢＭＩ−１および／またはＭＣＬ−１の発現を阻害することが示されている。これらの化合物もまた、ＢＭＩ−１および／またはＭＣＬ−１の過剰発現に伴う肺ガンおよび他のガンを含めて様々なガンを防止するために、または処置するために使用することができる。
【００９０】
本発明の様々な実施形態の利点には、下記の１つまたは複数が含まれ得る。本発明の化合物は新規の化学的実体であり、それにもかかわらず、ＢＭＩ−１／ＭＣＬ−１阻害活性を有する。本発明の化合物は、既知のＢＭＩ−１阻害剤（Ｎａｔｕｒｅ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ、２０：２９〜３６、２０１４）とは異なる化学構造を有する。
【００９１】
本発明の化合物はＢＭＩ−１／ＭＣＬ−１を阻害することができ、ガンを処置するために使用することができる。予備的研究において、本発明の化合物は、アファチニブ（非小細胞肺腺ガンを処置するためのＦＤＡ承認薬）の特性よりも優れた特性を有する。現在、非小細胞腺ガンの処置は、ＥＧＦＲを標的とするチロシンキナーゼ阻害剤（例えば、アファチニブ）に基づいている。本発明の化合物は、異なる標的、すなわち、ＢＭＩ−１を阻害する。したがって、本発明の化合物は、非小細胞腺ガンを処置するために単独で、または他の治療薬との組合せで使用され得る。肺ガンを処置することに加えて、本発明の化合物はまた、現時点では何ら効果的な処置がない扁平上皮ガンを処置するために使用することができる。
【００９２】
本発明の様々な実施形態が限られた数の実施例により例示されているが、当業者は、これらの実施例が例示のみのためであること、そして、他の改変および変化が、本発明の範囲から逸脱することなく可能であることを理解するであろう。したがって、保護の範囲は、添付された請求項によって限定されるだけでなければならない。
【図１Ａ】
2020518563.tif 000028
【図１Ｂ】
2020518563.tif 000029
【図２Ａ】
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【図２Ｂ】
2020518563.tif 000031
【図３】
2020518563.tif 000032
【図４Ａ】
2020518563.tif 000033
【図４Ｂ】
2020518563.tif 000034
【図４Ｃ】
2020518563.tif 000035
【図４Ｄ】
2020518563.tif 000036
【図４Ｅ】
2020518563.tif 000037
【図４Ｆ】
2020518563.tif 000038
【図５Ａ】
2020518563.tif 000039
【図５Ｂ】
2020518563.tif 000040
【図５Ｃ】
2020518563.tif 000041
【図５Ｄ】
2020518563.tif 000042
【図５Ｅ】
2020518563.tif 000043
【国際調査報告】
2020518563.tif 000044
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