(57)【要約】  本発明の抗酸化用栄養補助食品組成物は、ブドウ種子抽出物および緑茶抽出物を含み、該組成物中の該ブドウ種子抽出物の含量が、該ブドウ種子抽出物と該緑茶抽出物の総重量の４０〜６０重量％であること、および該組成物中の該緑茶抽出物の含量が、該ブドウ種子抽出物と該緑茶抽出物の総重量の６０〜４０重量％であることを特徴とする。本発明の組成物は、マツ樹皮抽出物およびザクロ抽出物から選択される少なくとも１種の物質をさらに含むことが好ましい。特に好ましい組成物は、該組成物中のブドウ種子抽出物、緑茶抽出物、マツ樹皮抽出物およびザクロ抽出物の総重量に対して、ブドウ種子抽出物３７〜４２重量％、緑茶抽出物３２〜３７重量％、マツ樹皮抽出物７〜１５重量％およびザクロ抽出物７〜１５重量％を含む。本発明の組成物は、哺乳動物および鳥類のウイルス性感染症の治療において使用され、特にヒト、ウマおよびラクダの、特に呼吸器感染症の治療において使用される。さらに、本発明の組成物を哺乳動物または鳥類に投与することを含む、哺乳動物または鳥類の呼吸器感染症の治療方法を開示する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
ブドウ種子抽出物および緑茶抽出物を含む抗酸化用栄養補助食品組成物であって、
該組成物中の該ブドウ種子抽出物の含量が、該ブドウ種子抽出物と該緑茶抽出物の総重量の４０〜６０重量％であること、および
該組成物中の該緑茶抽出物の含量が、該ブドウ種子抽出物と該緑茶抽出物の総重量の６０〜４０重量％であることを特徴とする組成物。
【請求項２】
マツ樹皮抽出物およびザクロ抽出物から選択される少なくとも１種の物質をさらに含む、請求項１に記載の組成物。
【請求項３】
前記組成物中のブドウ種子抽出物、緑茶抽出物、マツ樹皮抽出物およびザクロ抽出物の総重量に対して、ブドウ種子抽出物の含量が３０〜４５重量％であり、緑茶抽出物の含量が３０〜４５重量％であり、マツ樹皮抽出物の含量が５〜２０重量％であり、ザクロ抽出物の含量が５〜２０重量％である、請求項２に記載の組成物。
【請求項４】
前記組成物中のブドウ種子抽出物、緑茶抽出物、マツ樹皮抽出物およびザクロ抽出物の総重量に対して、ブドウ種子抽出物の含量が３５〜４５重量％であり、緑茶抽出物の含量が３０〜４０重量％であり、マツ樹皮抽出物の含量が５〜１５重量％であり、ザクロ抽出物の含量が５〜１５重量％である、請求項３に記載の組成物。
【請求項５】
前記組成物中のブドウ種子抽出物、緑茶抽出物、マツ樹皮抽出物およびザクロ抽出物の総重量に対して、ブドウ種子抽出物の含量が３７〜４２重量％であり、緑茶抽出物の含量が３２〜３７重量％であり、マツ樹皮抽出物の含量が７〜１５重量％であり、ザクロ抽出物の含量が７〜１５重量％である、請求項４に記載の組成物。
【請求項６】
充填剤をさらに含む、請求項１〜５のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項７】
前記充填剤が、米粉、ビタミンＣ、エキナシア、エルダーベリー抽出物およびエルダーフラワー抽出物から選択される１種以上の物質である、請求項６に記載の組成物。
【請求項８】
呼吸器感染症の治療において使用するための、請求項１〜７のいずれか１項に記載の組成物の使用。
【請求項９】
前記呼吸器感染症が、風邪またはインフルエンザである、請求項８に記載の使用。
【請求項１０】
哺乳動物または鳥類の呼吸器感染症を治療する方法であって、請求項１〜７のいずれか１項に記載の組成物を哺乳動物または鳥類に投与することを含む方法。
【請求項１１】
前記哺乳動物が、ヒト、ウマ、ラクダ、イヌおよびネコから選択され、前記鳥類がニワトリである、請求項１０に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、抗酸化用栄養補助食品組成物に関する。より具体的には、本発明は、ブドウ種子抽出物および緑茶抽出物を含む組成物に関する。本発明の組成物は、哺乳動物の風邪やインフルエンザなどの呼吸器感染症の治療において使用される。本発明は、ブドウ種子抽出物および緑茶抽出物を含む抗酸化用栄養補助食品組成物であって、該組成物中の該ブドウ種子抽出物の含量が、該ブドウ種子抽出物と該緑茶抽出物の総重量の４０〜６０重量％であること、および該組成物中の該緑茶抽出物の含量が、該ブドウ種子抽出物と該緑茶抽出物の総重量の６０〜４０重量％であることを特徴とする組成物を提供する。
【背景技術】
【０００２】
ブドウ種子抽出物および緑茶抽出物は、栄養補助食品として知られている。ブドウ種子抽出物は、ブドウ種子から工業的に生産され、抗酸化物質を極めて豊富に含み、通常９５％以上のプロアントシアニジンを含むオリゴメリックプロアントシアニジン複合体であり、様々な治療的特性を有している可能性が示唆されている。ブドウ種子抽出物は、市販品として容易に入手でき、通常、赤褐色の微粉末の形態で提供されている。ブドウ種子抽出物は、ヨーロッパブドウ（Vitis vinifera L.）の種子から水とエタノールで抽出したものが市販されている。ブドウ種子抽出物は、高コレステロール、アテローム性動脈硬化症、黄斑変性、血行不良、神経損傷などの疾患の治療に有益である可能性が示唆されている。また、緑茶抽出物も容易に入手可能な材料であり、黄褐色の微粉末として提供されている。緑茶抽出物は、チャノキ（Camellia sinensis）の葉からアルコール溶液で抽出したものが市販されている。緑茶抽出物は、中国伝統医学において、頭痛から抑うつまで様々な病態の治療に何世紀にもわたって使用されている。緑茶抽出物は、フラバノール、フラバンジオール、フラボノイドなどのポリフェノール類を高濃度で含むことが知られている。緑茶抽出物は、通常９５％以上のポリフェノール類を含む。緑茶に含まれるポリフェノール類としては、主に、カテキン、ガロカテキン、エピカテキン、エピガロカテキン、没食子酸エピカテキンおよび没食子酸エピガロカテキン（ＥＧＣＧとしても知られている）からなる６種のカテキン化合物が挙げられる。
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【０００３】
ブドウ種子抽出物および緑茶抽出物の抗酸化作用は知られているが、本発明者らは、これら２種の物質を前述の量で組み合わせた場合、得られた混合物の抗酸化活性は、ブドウ種子抽出物単独での活性と緑茶抽出物単独での活性を合わせたものよりも大きくなることを見出した。したがって、本発明者らは、特定の割合で混合物中に含まれるブドウ種子抽出物および緑茶抽出物が相互作用して相乗効果を発揮し、それによって、該混合物の抗酸化活性が達成されると見られることを発見した。
【０００４】
さらに、本発明者らは、前述の相乗効果に加えて、前記組成物にマツ樹皮抽出物およびザクロ抽出物の少なくとも一方がさらに含まれている場合、さらなる相乗効果が得られることを見出した。マツ樹皮抽出物は、黄褐色の微粉末として容易に市販品を入手可能である。マツ樹皮抽出物は、９５％以上のオリゴメリックプロアントシアニジン（ＯＰＣ）を含むことが知られている。ザクロ抽出物は、薄灰色または褐色の微粉末として市販品を入手可能であり、エラグ酸を４０〜９０％含むことが知られている。ザクロ抽出物は、ザクロの種子から得られる。本発明の組成物は、マツ樹皮抽出物とザクロ抽出物の両方を含むことが好ましい。
【０００５】
したがって、本発明の好ましい一実施形態によれば、本発明の組成物は、該組成物中のブドウ種子抽出物、緑茶抽出物、マツ樹皮抽出物およびザクロ抽出物の総重量に対して、ブドウ種子抽出物３０〜４５重量％、緑茶抽出物３０〜４５重量％、マツ樹皮抽出物５〜２０重量％およびザクロ抽出物５〜２０重量％を含む。また、本発明の組成物は、該組成物中のブドウ種子抽出物、緑茶抽出物、マツ樹皮抽出物およびザクロ抽出物の総重量に対して、ブドウ種子抽出物３５〜４５重量％、緑茶抽出物３０〜４０重量％、マツ樹皮抽出物５〜１５重量％およびザクロ抽出物５〜１５重量％を含むことがより好ましい。さらに、本発明の組成物は、該組成物中のブドウ種子抽出物、緑茶抽出物、マツ樹皮抽出物およびザクロ抽出物の総重量に対して、ブドウ種子抽出物３７〜４２重量％、緑茶抽出物３２〜３７重量％、マツ樹皮抽出物７〜１５重量％およびザクロ抽出物７〜１５重量％を含むことが最も好ましい。
【０００６】
本発明の組成物は、別の原料をさらに含んでいてもよく、たとえば１種以上の充填剤を含んでいてもよい。該充填剤としては、米粉、ビタミンＣ、エキナシア、エルダーベリー抽出物、エルダーフラワー抽出物、ならびにRibes属およびRubus属のベリー類（クロフサスグリ（Ribus nigrum）、ブラックベリー（Rubus fruticosus）、ラズベリー（Ribus idaeus）、アカフサスグリ（Ribus rubrum）など）の抽出物が挙げられる。
【０００７】
本発明の組成物は、特に、哺乳動物（ヒトなど）および鳥類のウイルス性感染症の治療、特に、風邪やインフルエンザなどの呼吸器感染症の治療において使用される。また、本発明の組成物を摂取したヒトにおいて帯状疱疹が急速に回復したという事例報告を受けていることから、本発明の組成物は、ヒトにおける帯状疱疹の治療に効果的であると考えられる。さらに、本発明の組成物は、ラクダ痘に感染したラクダの治療において使用することができると考えられる。ラクダ痘は、天然痘の病原体である痘瘡ウイルスと密接に関連するラクダ痘ウイルスによって引き起こされるウイルス性皮膚疾患である。
【０００８】
さらに、本発明は、哺乳動物または鳥類のウイルス性感染症（特に呼吸器感染症）を治療する方法であって、本発明による前記組成物を哺乳動物または鳥類に投与することを含む方法を提供する。本発明の方法は、ヒトの治療に有用である。しかし、本発明の方法は、非ヒト哺乳動物および鳥類の治療に使用することもできる。非ヒト哺乳動物としては、ウマ、ラクダ、イヌおよびネコが挙げられる。鳥類としては、ニワトリおよびその他の家禽が挙げられる。
【発明の効果】
【０００９】
本発明は、特に、最初から抗生物質の使用に頼ることなく、感染症を治療することができるという利点がある。感染症がウイルス性であると見られる場合、たとえそうであると確認できなくても、本発明の組成物を該感染症の罹患者に摂取させてもよく、投与してもよい。２４時間後に、罹患者自身が改善していないと感じたり、かつ／または血液試料を使用して作製した発光曲線において改善が認められなかった場合は、抗生物質の投与を考慮に入れてもよい。感染症が細菌性の場合、発光曲線は特徴的な形状を示すことから、感染症が本発明の組成物に反応性を示さない場合、抗生物質の使用を決定することができる。さらに、抗生物質が使用されたにも関わらず、発光曲線において、使用した抗生物質に対する反応が認められない場合、別の抗生物質を使用して患者を治療することを推奨することができる。したがって、本発明によって、不必要な抗生物質の使用を回避することができる。
【図面の簡単な説明】
【００１０】
【図１】様々な代表的な発光曲線の形状を示す。
【図２】個人Ｉから採取した試料を使用して作製した発光曲線と、正常健常者に関連する標準曲線を示す。
【図３】試験期間にわたって個人Ｉから採取した血液試料を使用して作製したすべての発光曲線を重ねたグラフを示す。
【図４】図３に示した発光曲線の最大反応を示す棒グラフである。
【図５】試験期間にわたって個人IIから採取した血液試料を使用して作製したすべての発光曲線を重ねたグラフを示す。
【図６】図５に示した発光曲線の最大反応を示す棒グラフである。
【図７】個人IIIから採取した血液試料を使用して作製したすべての発光曲線を重ねたグラフを示す。
【図８】図７に示した発光曲線の最大発光反応を示す棒グラフである。
【図９】個人IVから採取した血液試料を使用して作製したすべての発光曲線を重ねたグラフを示す。
【図１０】図９に示した発光曲線の最大発光反応を示す棒グラフである。
【図１１】Ａ〜Ｂ）個人Ｖから採取した血液試料を使用して作製した発光曲線と、基準としての正常基準曲線の形状Ａを示す。Ｃ）正常基準の最大発光反応と、図１１Ａおよび図１１Ｂに示した曲線の最大発光反応を示す棒グラフである。
【図１２】個人VIから採取した血液試料から作製した発光曲線と、正常健常者に関連する基準曲線を示す。
【図１３】個人VIIから採取した血液試料を使用して作製した発光曲線と、正常健常者に関連する基準曲線を示す。
【図１４】個人VIIIから採取した血液試料を使用して作製した発光曲線と、正常健常者に関連する基準曲線を示す。
【図１５】図１４に示した発光曲線の最大発光反応を示す棒グラフである。
【図１６】ABELmeterの使用手順を示す。
【図１７】スポーツ選手から採取した血液試料を使用して作製した発光曲線と、正常健常者に関連する基準曲線を示す。
【発明を実施するための形態】
【００１１】
ヒトに対する１回投与量は、通常、４００〜５００ｍｇである。通常、カプセルまたは錠剤の形態で経口投与する。しかし、本発明の組成物は、水性懸濁剤として投与することもできる。ウマに投与する場合の用量は、通常、ヒトに対する用量の約５倍である。同様の用量をラクダの治療に使用してもよい。しかしながら、ラクダは偽反芻動物であるため、液体形態の本発明の組成物がラクダの胃に到達しないようにすることが重要である。ラクダを治療する場合、注射器を使用して本発明の組成物を口腔内に送達し、その際に、本発明の組成物を口腔後部の粘膜上に注意深く送達し、血液中に直接吸収されるようにすることが好ましい。イヌ、ネコおよびその他の小型哺乳動物の治療では、食餌の上に振りかけたり、食餌中に混ぜたりするか、あるいはウマやラクダに使用されるような液体形態で送達することができる。１回投与量は動物の体重に応じて変更する必要があることは言うまでもない。ニワトリおよびその他の鳥類では、食餌および／または飲料水に混ぜて本発明の組成物を送達することができる。
【００１２】
本発明者らは、症状が現れる前であっても、ヒト体内の感染因子の存在を検出することができることを過去に見出しており、これは、酸化剤と反応して光を発する発光試薬を、ヒト体内から得られた白血球と接触させ、該白血球と該発光試薬の混合物に活性化剤を加え、発光を連続的にモニターおよび／または測定することによって実施することができる。この方法によって、本発明の組成物の投与後における体内での該組成物の効果をモニターすることができる。
【００１３】
したがって、本発明の組成物の効果のモニタリングは、
ａ）酸化剤と反応して光を発する発光試薬を、個体から提供された血液試料中の白血球または該血液試料から得られた白血球と接触させること；
ｂ）前記白血球と前記発光試薬の混合物に活性化剤を加えること；
ｃ）前記活性化剤の添加前から該活性化剤の添加後までの所定時間にわたって、前記発光試薬から生じた光を連続的にモニターおよび／または測定すること；ならびに
ｄ）感染因子の存在を判断するために発光を評価すること
を含む方法によって行うことができる。
【００１４】
前記方法は、試験を受ける個体から採取された血液試料中に含まれる白血球または該血液試料から得られた白血球に対して実施される。また、この試験は、（任意で希釈した）全血または白血球含有単離物（単離した白血球細胞など）を使用して実施することもできる。言うまでもなく、全血から白血球を単離する方法はよく知られている。この方法による試験は、少量の試料で実施することができ、たとえば、個体を針で突いた小さな穴から得られた試料などでも実施できる。
【００１５】
前記方法によれば、酸化剤と反応して光を発する発光試薬を、血液試料（通常は希釈したもの）または全血から単離した白血球試料と接触させる。このような発光試薬は、当技術分野で一般によく知られており、例として、ルシゲニン、ルミノール（３−アミノフタルヒドラジド、５−アミノ−２，３−ジヒドロ−１，４−フタラジンジオン）、イソルミノール（４−アミノフタルヒドラジド）、ＭＣＬＡ（５−（メトキシフェニル）−２−メチル−３，７−ジヒドロイミダゾール［１，２−ａ］ピラジン−３（７Ｈ）−オン塩酸塩）および海洋性二枚貝Pholas dactylusに由来する発光タンパク質であるPHOLASIN（商標）（PHOLASINはKnight Scientific Limitedの登録商標である）が挙げられる。PHOLASINは、スーパーオキシドアニオンやその他の活性酸素含有化学種（ＲＯＳ）などのフリーラジカルに対して超感受性を示し、ペルオキシダーゼなどの酵素との反応性を有することから、前記方法において使用することが好ましい。さらに、Pholas dactylusに由来する発光タンパク質の合成等価体を使用することもできる。
【００１６】
白血球と発光試薬の混合物に活性化剤を加えて、白血球のＮＡＤＰＨオキシダーゼ系を刺激する。この刺激により生成されたフリーラジカルおよび／または活性酸素種によって発光試薬が励起され、発光試薬から光が発生する。使用してもよい活性化剤としては、受容体刺激剤であるＮ−ホルミル−メチオニル−ロイシル−フェニルアラニン（ｆＭＬＰ）、およびホルボールエステルであるホルボール−１２−ミリスタート−１３−アセタート（ＰＭＡ）が挙げられる。ＰＭＡは、細胞内に入り、プロテインキナーゼＣを直接活性化する。添加されたｆＭＬＰとＰＭＡは協働して、モニターされる細胞表面上のＮＡＤＰＨオキシダーゼを活性化させるとともに、二次顆粒が見られる白血球の細胞膜上のＮＡＤＰＨオキシダーゼを活性化させることができる。ＰＭＡは、細胞全体のＮＡＤＰＨオキシダーゼを活性化するが、その速度はｆＭＬＰよりも遅い。さらにＰＭＡは脱顆粒も促進する。また、血小板活性化因子（ＰＡＦ）は、ｆＭＬＰとＰＭＡの組み合わせを使用した場合と同様の作用を発揮することから、血小板活性化因子（ＰＡＦ）を使用することもできる。血小板活性化因子（ＰＡＦ）は、ｆＭＬＰ受容体に結合し細胞に入る。また、抗Ｆｃ受容体抗体やリポ多糖類（ＬＰＳ）などのその他のメディエーターを、ｆＭＬＰもしくはＰＡＦに対する細胞の反応が誘導される濃度、またはフリーラジカルの産生が実際に刺激されて酵素含有顆粒の放出が誘導される濃度で使用してもよい。
【００１７】
前記方法によれば、発光試薬と白血球の混合物への活性化剤の添加前から該活性化剤の添加後までの所定時間にわたって、発光試薬から生じた光をモニターおよび／または測定する。発光は、通常、ルミノメーターを使用してモニターおよび／または測定する。発光試薬としてPHOLASINを使用した場合は、白血球の活性化前に、静止発光として知られる弱い光が発せられるが、活性化剤を添加すると、発光量が増加して、白血球の刺激の程度により決まる発光量が得られ、観察時間中の発光量が、活性化剤が添加されてからの経過時間に応じて変動する。したがって、発光がモニターおよび／または測定される所定時間にわたって、白血球と発光試薬の混合物に活性化剤を添加した効果、すなわち白血球の反応量が観察される。所定時間は活性化剤の種類に応じて選択され、すなわち、活性化剤が細胞表面の受容体に結合することにより白血球を活性化するのか（ｆＭＬＰなどで見られる）、細胞膜の内側から白血球を活性化するのか（すなわちＰＭＡ）、またはこれらの組み合わせによって白血球を活性化するのか（血小板活性化因子などで見られる）によって選択される。試験溶液中の白血球の濃度および／または発光試薬の濃度に応じて、アッセイの実施時間および使用するルミノメーターの種類が決まる。マイクロプレート用ルミノメーターでアッセイを行う場合、チューブ用ルミノメーターでアッセイを行う場合よりも、通常、１つの試料のアッセイの完了に要する時間は長くなる。測定時間は通常３０分未満であり、２０分未満であることが好ましく、１５分未満であることがより好ましい。さらに、前記方法を標準化して、活性化剤を添加してから通常５分間実施されるような、より迅速なアッセイを構築することも可能である。
【００１８】
発光試薬による発光は、所定時間内の時間の経過に従って記録することが好ましい。研究過程において本発明者らは、時間に対して発光強度をプロットした発光曲線を作製したところ、驚くべきことに、予想外にも、感染因子による感染を受けた個体では、正常で体調が良好な健常者から採取した白血球を使用して作製したコントロール発光曲線とは異なる特徴的な発光曲線が得られることを見出した。たとえば、白血球と発光試薬の混合物に活性化剤を添加した後に記録された発光強度のピークおよび／または発光曲線の全体的な形状を、コントロール発光曲線と比較することによって、試験を受けた個体の健康および身体状態における１つ以上の問題点が示されることがあることが見出された。正常で体調が良好な健常者から採取した血液試料から得た白血球を使用して作製されたコントロール発光曲線の形状は、活性化剤の添加後、即座に発光が急速に増加してピークに達し、その後、時間の経過とともに発光がピーク値から次第に有意に減少して、数分以内に徐々に低値に戻るという特徴を有する。さらに、本発明者らは、３８５人の平均反応曲線±１標準偏差（ＳＤ）から、前述の「正常」な曲線形状を有する基準曲線を作製することに成功した。この基準曲線の高さおよび平均曲線下面積によって、非常に良好な健康状態を示す発光反応の範囲が定義される。
【００１９】
感染因子に感染した個体から採取された血液試料から得た白血球を使用して作製された曲線は、コントロール曲線すなわち基準曲線と比較して、血液試料の採取時に該個体が感染症の症状を経験しているかどうかに関係なく、コントロールよりも発光ピークが高値となることを特徴とする過剰反応を示す。受容体刺激剤ｆＭＬＰによる刺激後に、基準範囲の上限よりも有意に高いピークが急速に発生した場合、白血球が反応を示している感染因子は通常ウイルスである。感染症が進行すると、全体的な曲線の形状は、感染症の初期段階で得られた曲線よりも少し丸みを帯びるようになる。しかしながら、ウイルスに白血球が曝露した結果として得られる丸みを帯びたこの曲線形状は、さらに時間が経過してからピークが見られる曲線下面積が有意に大きい極めて丸みを帯びた曲線と混同すべきではない。さらに時間が経過してからピークが見られるさらに丸みを帯びたこの曲線は、この形状の曲線を有する個体が抗生物質による治療に反応性を示し、治療の経過とともに健康状態が非常に良くなり、血液検査において発光のピークが減少したことから、細菌によるものであると間接的に確認されている。したがって、症状が現れる前に発光曲線の高さが正常基準範囲の上限よりも高くなる場合、個体の健康状態が悪い可能性があること、および血液試料を採取した時点からある一定期間内（たとえば１日以内または２日以内）に感染症の症状が現れる可能性があることを該個体に知らせることができ、有用である。
【００２０】
細菌性感染症に罹患した個体から採取した試料の発光反応曲線では、反応が極めて増強する傾向があり、特徴的な形状を示す。したがって、前述の試験手順を行うことによって、ウイルス性感染症と細菌性感染症を識別することが可能となる。このように、前述の試験手順によって、抗生物質を処方してもよい細菌性感染症に罹患した個体と、抗生物質の処方が不要な、ウイルス性感染症に罹患した個体とを特定することができる。
【００２１】
識別可能な特徴を有する発光曲線のライブラリーを作製することができ、試験を受ける個体から採取した血液試料から得た白血球を使用して作製した発光曲線と比較するための基準として使用してもよい。このような識別可能な特徴を有する標準曲線に対して比較を行うことによって、試験を受けた個体から得た発光反応が正常であるのか、あるいは異常であるのかを判断することが可能になるだけではなく、コントロールと比較して発光反応が正常でなかった場合、異常が示された理由として考えられるものを特定することが可能となる。この方法によって得られた結果により異常反応が示された個体は、問題を特定するためのより詳細な医療検査を受けるべきであるとして選択されてもよい。
【００２２】
前記方法の好ましい一態様によれば、試験を受ける個体から作製された発光曲線は、識別可能な特徴を有する１つ以上の標準曲線と比較され、識別可能な特徴を有する１つ以上の標準曲線の特徴と個体の発光曲線の特徴との間の類似点または相違点に基づいて前記特定を行う。識別可能な特徴を有する１つ以上の標準曲線の特徴と個体の発光曲線の特徴は、曲線の形状、曲線の強度およびその組み合わせから選択されることが好ましい。通常、試験を受ける個体から作製された発光曲線の比較対照としての、識別可能な特徴を有する１つ以上の標準曲線は、感染症に罹患していることが臨床的に確認された個体の血液試料から得た白血球を使用して作製された曲線から選択される。
【００２３】
前記方法は、個体の体内において、細菌性感染因子またはウイルス性感染因子などの感染因子の存在を検出するのに有用である。特に、前記方法は、個体において、ライノウイルスまたはインフルエンザウイルスなどの、上気道感染症を起こす感染因子の存在を検出するのに有用である。
【００２４】
本発明に従って得られた発光曲線の形状は、活性化剤による活性化に応答した白血球によるフリーラジカルおよび／またはその他の活性物質の産生に依存する。これらの応答は、血液中の白血球の生理学的状態に依存するため、血液試料が採取された患者の生理学的状態または医学的状態と関連する。このように、曲線の形状の主観的な観察は、診断を下すのに非常に有益であるが、曲線を定量する方法を使用すれば、血液中の白血球の異常をより客観的に判断することができ、したがって、より客観的な診断を下すことができる。
【００２５】
発光曲線は、ルミノメーターの反応をプロットしたものであり、相対発光量（ＲＬＵ）で示され、３つの部分からなる。第１の部分は、活性化剤で白血球を刺激する前の発光を記録するものであり、必要であれば別個に分析してもよい。発光曲線の大部分は、上昇と、これに続く下降から構成されている。発光曲線のこの部分全体を１つの単位として分析することができ、または発光曲線のこの部分を、上昇部および下降部に分割し、この２つの部分を別々に分析することもできる。
【００２６】
適切なソフトウェアを使用して、ａｘ３＋ｂｘ２＋ｃｘ＋ｄの一般式で示される三次式を導くことができ、この式は、発光曲線の大部分に密接に近似する。様々な曲線から算出されたａ、ｂ、ｃおよびｄの各値を比較することによって、曲線を定量することが可能であり、したがって、様々な患者から採取した血液試料を使用して得た複数の反応をより客観的に比較することが可能となる。
【００２７】
前記方法は、活性化された白血球の存在下において、発光試薬からの発光をモニターおよび／または測定することができる従来の装置を使用して実施することができる。前記方法は、非常に持ち運びが簡単であり、コンパクトで、簡便に使用できる携帯型ルミノメーターにおいて実施するのに適している。このような装置は、分析対象の白血球試料と発光試薬の混合物を収容するための手段；該混合物に活性化剤を導入するための手段；前記活性化剤の導入前から該活性化剤の導入後までの時間にわたって、前記発光試薬からの発光をモニターおよび／または測定するための手段；前記発光試薬からの発光量を表示するためのディスプレイ；ならびに片手で該装置をつかむための持ち手を備えている。
【００２８】
前述したように、本発明の組成物は、対象において、風邪などの呼吸器感染症の発症を阻止するか、または対象が既に呼吸器感染症に罹患しているのであれば回復を促進すると見られる天然産物を開示された相対的割合で含む。スポーツ選手およびスポーツを嗜む人々では、集中訓練を行ったり、競技または試合に頻繁に参加したりすることによる影響の１つとして極度の筋肉炎症を起こすことがあり、しばしば疲労を伴う。このような状態では、呼吸器感染症やその他の感染症を併発することが多い。筋肉炎症は、訓練を行った通常の結果であり、筋繊維の損傷を伴い、これにより、循環系に炎症メディエーターが放出されるとともに、活性酸素窒素種（ＲＯ（Ｎ）Ｓ）が発生する。循環白血球は、これらの炎症メディエーター（サイトカイン）を検出し、これらに応答して、循環系を去る準備を開始し、炎症部位である筋肉に浸潤する。白血球は筋肉において炎症反応を開始し、フリーラジカルおよびその他の活性酸素種を放出して、化学物質による情報伝達および酵素を損ない、炎症部位にさらに白血球を動員する。本発明者らは、本発明の組成物を投与することによって、ウイルスを原因とする呼吸器感染症からの対象の回復を促進できるだけでなく、疲労および炎症の様々な状態ならびに感染症を起こすその他の原因によって引き起こされる呼吸バースト活性の抑制を対象において促進できることを見出した。以下の実施例において、本明細書で述べた試験手順を使用して本発明の組成物の効果を示す。
【実施例】
【００２９】
解説
１．発光曲線
図１Ａ、図１Ｂおよび図１Ｃは、様々な代表的な発光曲線の形状を示す（基準Ａ〜基準Ｌとして示す）。これらの曲線の形状は、実際の測定に基づく曲線から得たものであり、高さの最大値が常に１００％になるように正規化されている。実験または臨床から得られた結果は、曲線の形状と発光反応の強度に基づいて最終的に分類する。図１Ａ〜１Ｃに示した発光曲線の形状を記号Ａ〜Ｌで示し、これらの各発光曲線の形状に関する簡単な説明を以下の表に示す。
【表１】
2020522276.tif 000002
【００３０】
２．抗酸化能スコア：ＥＣ５０値およびＡＢＥＬ−ＲＡＣ ｍｇスコア
各濃度の試験物質および試料非含有コントロールからそれぞれ別個の光反応曲線を作製する。結果は、ＥＣ５０値およびＡＢＥＬ−ＲＡＣスコアとして示す。ＥＣ５０（有効濃度（ｍｇ））は、（Pholasinとフリーラジカルまたはその他の活性酸素種とを使用して発生させた）光を５０％減少させる物質の濃度（ｇ／Ｌまたはｍｇ／ｍＬで標準化）である。この発光の減少が、試験物質の抗酸化能に相当する。
【００３１】
発光を５０％減少させるのに必要な物質の量が多ければ多いほど、抗酸化能は低くなる。発光を５０％減少させるのに必要な物質の量をＥＣ５０（５０％有効濃度）と呼ぶ。非常に高い抗酸化作用を有する物質は、非常に低いＥＣ５０値を有する。このことの理解をより容易にするため、ＥＣ５０値を、試験物質に作用させた各フリーラジカルすなわち酸化剤に対する相対的な抗酸化能を示す正のスコア（ＡＢＥＬ−ＲＡＣ ｍｇスコア）に変換した。たとえば、ペルオキシナイトライトをＲＯＳとして使用して作用させた場合、ＡＢＥＬ−ＲＡＣ ｍｇペルオキシナイトライトとして結果を示す。スーパーオキシドを作用させた場合、ＡＢＥＬ−ＲＡＣ ｍｇスーパーオキシドとして結果を示す。ＡＢＥＬ−ＲＡＣ ｍｇスコアは、ＥＣ５０値の逆数に１００を掛けた値である（１／ＥＣ５０×１００）。ＡＢＥＬ−ＲＡＣ ｍｇスコアが高ければ高いほど、試料の抗酸化能は高くなる。
【００３２】
図４では、発光タンパク質であるPholasinの存在下において、特定のフリーラジカルすなわち酸化剤を作用させて、試験試料の抗酸化能を評価する。発光を５０％減少させる濃度は、一定範囲の濃度での結果を使用して求め、指数回帰曲線を使用して分析する。テンプレートを使用して、発光を５０％減少させる濃度を得る。発光を５０％減少させる濃度とは、試料の有効濃度（ＥＣ５０）である。ＥＣ５０は、式：１／ＥＣ５０（ｍｇ）×１００を使用してＡＢＥＬ−ＲＡＣ（商標）スコアに変換する。ＡＢＥＬ−ＲＡＣスコアは、様々なＲＯＳを作用させたあらゆる実験において、１ｍｇあたり、１回投与量あたり、製剤中のパーセンテージまたは単位コストあたりで示すことができる。
【００３３】
試験物質に対して各ＲＯＳを作用させて求めたＡＢＥＬ−ＲＡＣスコアは、乾燥物１ｍｇあたりまたは液体１μＬあたりで示される。いくつかの物質は、いくつかのフリーラジカルに対してその他のフリーラジカルよりも良好な抗酸化作用を示す。
【００３４】
それぞれ異なる種類のフリーラジカルまたは非フリーラジカルを使用してＲＯＳを作用させる６種の抗酸化アッセイにより実験を行う。具体的には、これら６種の抗酸化アッセイは、
・高濃度スーパーオキシドアッセイ
・ハロゲン化酸化剤（＝次亜塩素酸）アッセイ
・ペルオキシナイトライトアッセイ
・ヒドロキシルラジカルアッセイ
・酵素により生成したスーパーオキシドを使用したアッセイ
・ペルオキシルラジカルアッセイ
・一重項酸素アッセイ
である。
【００３５】
各原料１ｍｇあたりのスコアを直接公式に当てはめて、最終製品における総ＡＢＥＬ−ＲＡＣスコアの理論値を求めることができる。次に、得られたスコアの理論値を、最終製品の実際のスコアと比較する。ＡＢＥＬ−ＲＡＣスコアの理論値に対する実際のスコアの比率を求めることによって、正の相乗効果または負の相乗効果を定量することができる。
【表２】
2020522276.tif 000003
【００３６】
新規な抗酸化用栄養補助食品に含まれる様々な原料のＡＢＥＬ−ＲＡＣ ｍｇスコアを、いずれもペルオキシナイトライトをＲＯＳとして作用させて算出した。
【００３７】
実施例１
以下の製剤を調製した。
【表３】
2020522276.tif 000004
【００３８】
各成分および最終製剤をそれぞれ抗酸化アッセイに供して、抗酸化活性を測定した。使用したアッセイはＡＢＥＬ−ペルオキシナイトライト抗酸化アッセイ（Knight Scientific Limited）であった。
【００３９】
このアッセイには以下の工程が含まれる。
１．分析対象の試料中の固形物を粉砕し、粉砕した試料を５０ｍｇ／ｍＬの濃度で水に溶解または懸濁する。
２．Pholasin（発光剤）の存在下において、マイクロプレートの各ウェルに各試料を入れて、マイクロプレート用ルミノメーター上でアッセイを行い、各ウェルにおける発光を（０．２秒間）測定し、測定を複数回繰り返す。各回の発光測定間のサイクル時間は、ペルオキシナイトライトアッセイでは３８秒で標準化する。
３．アッセイは、ペルオキシナイトライトを生成する試薬をマイクロプレートウェルに注入したゼロ時間から開始する。このアッセイにおいて、ペルオキシナイトライトアニオンは持続的に生成される。スーパーオキシドおよび硝酸が、ＳＩＮ−１（３−モルホリノシドノンイミン塩酸塩）から同時に遊離し、これらが互いに反応してペルオキシナイトライトアニオン（ＯＮＣＯ−）を生成し、試料物質に作用する。
４．各試験試料および試料非添加コントロールから別々の光反応曲線を作製する。
５．様々な濃度の試料を使用して別々にアッセイを行う。様々な濃度でアッセイを行うことにより、発光を５０％減少させることができる物質の濃度、すなわち、試料の有効濃度（ＥＣ５０）を求める。
６．求めたＥＣ５０値から、相対的抗酸化能（ＲＡＣ）を算出してもよい。ＲＡＣスコアは、ＥＣ５０値の逆数に１００を掛けた値である。
【００４０】
前述したように、ブドウ種子抽出物、緑茶抽出物、米粉および製剤全体をそれぞれ別々に分析した。ペルオキシナイトライト（ＰＯＸ）アッセイにより求めたＡＢＥＬ−ＲＡＣスコアを以下に示す。前記製剤中の各原料のＰＯＸ ＲＡＣスコアを使用して、各スコアに基づいた製剤への寄与の予測値を求め、以下の表に示した。この予測されたスコアを、製剤全体から得られた実際のスコアと比較した。相乗効果（実際のスコアを予測スコアで除した値）を算出した。
【００４１】
【表４】
2020522276.tif 000005
【００４２】
前記の表に示したように、製剤中の各原料の活性の合計に基づくと、実際の製剤の抗酸化活性は、予測された活性よりも大きいことが分かった。算出された相乗効果は１．５１であった。
【００４３】
実施例２
ブドウ種子抽出物１６５ｍｇ、緑茶抽出物１２５ｍｇおよび米粉１９２．５ｍｇを含む、実施例１のものとは異なる製剤を調製した。実施例１と同様にして、この製剤および各原料を分析した。下記の表に結果を示す。
【００４４】
【表５】
2020522276.tif 000006
【００４５】
前記の表に示したように、製剤中の各原料の活性の合計に基づくと、実際の製剤の抗酸化活性は、予測された活性よりも大きいことが分かった。算出された相乗効果は０．６６であり、実施例１の製剤で認められた相乗効果よりも低かった。
【００４６】
実施例３
ブドウ種子抽出物１５０ｍｇ、緑茶抽出物１３２ｍｇ、マツ樹皮抽出物５０ｍｇおよびザクロ抽出物５０ｍｇを含む製剤を調製した。実施例１と同様にして、この製剤および各原料を分析した。下記の表に結果を示す。
【００４７】
【表６】
2020522276.tif 000007
【００４８】
前記の表に示したように、製剤中の各原料の活性の合計に基づくと、実際の製剤の抗酸化活性は、予測された活性よりも大きいことが分かった。算出された相乗効果は１．３３であった。
【００４９】
実施例４
試験を実施するため、２０１６年９月２３日から週１回、個人Ｉから新鮮血試料を採取した。２０１６年９月２３日に、個人Ｉから体調が良いという報告を受けた。２０１６年９月２９日に、該個人から、呼吸器感染症のための体調が悪いという報告を受けた。２０１６年１０月１３日に、実施例３に記載の製剤の１回量を個人Ｉに投与した。
【００５０】
血液試料を採取したのと同じ日に、本明細書に記載の方法に従って血液試料を試験した。
【００５１】
ＥＤＴＡを含む試験管に各血液試料を採取した。血液希釈緩衝液２ｍｌを空の試験管に加え、これにＥＤＴＡ血液２０μｌを加えて試験用希釈全血試料を調製した。試験管に蓋をし、穏やかに３回転倒混和して、試験管内の内容物を混合した。
【００５２】
PHOLASIN用Reconstitution and Assay Buffer（Knight Scientific Limited）２２２μＬ、ルミネッセンスエンハンサーである再構築したADJUVANT-K（「ADJUVANT-K」はKnight Scientific Limitedの商標である）５０μＬ、PHOLASIN １２５μＬおよび希釈した全血５０μＬをポリスチレン製の透明なキュベットに加えた。再構築したADJUVANT-Kルミネッセンスエンハンサーは、Reconstitution and Assay Buffer ５ｍＬでADJUVANT-Kを再構築することによってあらかじめ調製した。キュベットに蓋をし、キュベットを３回転倒混和することにより内容物を混合した。すべての試薬と血液を含むキュベットをインキュベーターに入れて、３７℃で６分間インキュベートした。（インキュベーション時間は、少なくとも５分間でなければならないが、６分間を超えてもよく、２つ以上の試料を同時にインキュベートすることもできる。）
【００５３】
６分後に、キュベットの蓋を外し、黒色のチューブエクステンダーを取り付け、試験管用超高感度ルミノメーターABELmeterに挿入した。次に、ｆＭＬＰ ５０μｌをインジェクションピペットに装填し、ABELmeterに挿入した。
【００５４】
図１６の左上パネルに、（組み立てる前の）ABELmeterを示す。上中央のパネルに、黒色のチューブエクステンダーを取り付けたキュベットと、インジェクションピペットを示す。右上のパネルに、すべての試薬を含むキュベットをチューブエクステンダーに差し込んでいる様子を示す。左下のパネルに、ABELmeterにセットしたキュベットを示す。下中央のパネルに、ｆＭＬＰをあらかじめ充填したインジェクションキュベットをABELmeterにセットしている様子を示す。右下のパネルに、すべてのセットが完了し、アッセイを開始する準備ができていることを示す。
【００５５】
アッセイを開始し、キュベット中の試料からの発光を、０．５秒間隔で１分間持続的に記録した。１分後にｆＭＬＰ ５０μｌをキュベットに分注し、さらに５分間、発光を持続的に記録した。
【００５６】
発光プロファイルを、ｆＭＬＰ活性化剤を添加する１分前からｆＭＬＰ活性化剤を添加した５分後までの時間にわたって発生した光を示す発光曲線として記録した。
【００５７】
２０１６年１１月１７日に採取した試料から得た発光曲線を図２に示す。曲線Ａは、個人Ｉから採取した試料を使用して得た発光曲線であり、曲線Ｂは、正常健常者に関連する標準曲線である。影をつけた部分は、標準曲線Ｂの周囲の許容範囲を示す。
【００５８】
図３は、試験期間にわたって個人Ｉから採取した血液試料を使用して作製したすべての発光曲線を重ねたグラフを示す。各曲線は、Ｃ：２０１６年９月２３日に採取した試料、Ｄ：２０１６年９月２９日に採取した試料、Ｅ：２０１６年１０月６日に採取した試料、Ｆ：２０１６年１０月１３日に採取した試料、Ｇ：２０１６年１０月２０日に採取した試料、Ｈ：２０１６年１０月２７日に採取した試料、Ｊ：２０１６年１１月３日に採取した試料、Ｋ：２０１６年１１月１０日に採取した試料、およびＬ：２０１６年１１月１７日に採取した試料を示す。これらの曲線のうち、白血球と発光試薬の混合物に活性化剤を添加した後に曲線Ｆが過剰な反応を示したことが分かる。曲線Ｆでは、ｆＭＬＰ活性化剤の添加後に発光が極めて急激に増加し、基準曲線（ｒｅｆ）よりも傾斜が急であった。また、曲線Ｆにおける発光のピークは、基準曲線のピークよりも大幅に高くなっている。本発明の組成物を投与すると（２０１６年１０月１３日）、その後に得た血液試料から作製した曲線では発光のピークが低下し、発光曲線の形状が基準曲線の形状に近づいている。
【００５９】
前記発光曲線における最大反応を示した棒グラフを図４に示す。ＤおよびＥでは、本発明の組成物の１回量を投与する前の２０１６年１０月１３日まで反応の増強が進行したことから、ＤおよびＥにおける反応の増強は、個人Ｉが感染症を有することを示している。
【００６０】
実施例５
個人IIから最初の血液試料が提供され、実施例４に記載した前記手順に従ってこの試料を試験した。この最初の血液試料は、正常健常者に関連する標準曲線と比較して高いシグナルを示した。同じ日に１日を通して複数の血液試料をさらに採取し、これらの血液試料から得られたシグナルをモニターした。最初の試料を試験した２時間後に、実施例１に記載した組成物をカプセルの形態で前記個人に投与した。前記個人から定期的に血液試料をさらに採取し、実施例４に記載の手順に従って試験した。
【００６１】
図５は、試験期間にわたって個人IIから採取した血液試料を使用して作製したすべての発光曲線を重ねたグラフを示す。図５は以下の曲線を示す。曲線Ａは、正常健常者に関連する基準曲線である。曲線Ｂは、モニタリング期間の開始時に提供された最初の血液試料を使用して作製した発光曲線である（２０１７年６月２０日；時間１０：５０）。曲線Ｃは、１時間後に提供された血液試料を使用して作製した発光曲線である（２０１７年６月２０日１１：５０）。曲線Ｄは、最初の試料を採取した２時間後に提供された別の血液試料を使用して作製した曲線である（２０１７年６月２０日１２：５０）。曲線Ｅは、前記個人が、処方された製剤を摂取した８０分後に提供された別の血液試料を使用して作製した曲線である（２０１７年６月２０日１４：１０）。曲線Ｆは、前記個人が、処方された製剤を摂取した１４０分後に提供された血液試料を使用して作製した曲線である（２０１７年６月２０日１５：１０）。曲線Ｇは、前記個人が、処方された製剤を摂取した２０３分後に提供された血液試料を使用して作製した曲線である（２０１７年６月２０日１６：１３）。曲線Ｈは、さらに６０分後に提供された血液試料を使用して作製した曲線である（２０１７年６月２０日１７：１３）。前記発光曲線における最大反応を示した棒グラフを図６に示す。
【００６２】
図５および図６に示したように、製剤の投与後、初期では反応の増加が観察されたが（曲線Ｅ）、その後、シグナルは急速に低下し（曲線Ｆ、曲線Ｇ、曲線Ｈ）、白血球の反応が抑制された。後期のシグナルにより示された白血球反応の抑制は、本発明の製剤の抗酸化活性を白血球が吸収したことによるものであると説明することができる。後期の曲線Ｆ〜Ｈでは、曲線の形状が徐々に改善し、基準曲線Ａの形状に近づいた。
【００６３】
実施例６
試験を実施するため、２０１６年９月２３日から数日間隔で個人IIIから新鮮血試料を採取した。２０１６年９月２３日に、前記個人から体調が良いという報告を受けた。２０１６年９月２９日に、該個人から、風邪のための体調が悪いという報告を受けた。その日に、実施例３に記載の組成物の１回量を前記個人に投与した。血液試料を採取し、実施例４に記載の試験手順に従って試験した。再び症状がはっきりと確認されたため、２０１６年１０月１３日に採取した試料から得た結果に従って、その日に、前記組成物の１回量を前記個人にさらに投与した。
【００６４】
図７は、前記個人から採取した血液試料を使用して作製したすべての発光曲線を重ねたグラフを示す。各曲線は、Ｍ：２０１６年９月２３日に採取した試料、Ｎ：２０１６年９月２９日に採取した試料、Ｏ：２０１６年１０月３日に採取した試料、Ｐ：２０１６年１０月６日に採取した試料、Ｑ：２０１６年１０月１３日に採取した試料、Ｒ：２０１６年１０月２７日に採取した試料およびＳ：２０１６年１１月３日に採取した試料を示す。
【００６５】
曲線Ｎは、白血球と発光試薬の混合物にｆＭＬＰ活性化剤を添加した後、基準曲線（ｒｅｆ）と比べて反応の増強が認められ、発光が極めて急激に増加している。したがって、曲線Ｎで示される反応は、感染症の存在を示している。２０１６年９月２９日に本発明の組成物を投与した後に採取した次の２つの血液試料では、発光反応曲線は抑制されていた。しかしながら、その後、感染症の進行が再び確認されたため（曲線Ｑ参照）、２０１６年１０月１３日に本発明の組成物の１回量をさらに投与した。最後に得た血液試料から得た曲線Ｓおよび曲線Ｔでは、光反応が、基準曲線と比較して正常な状態に戻っていることが分かる。
【００６６】
図８は、曲線Ｍ〜Ｔの最大発光反応を示す棒グラフである。曲線Ｎおよび曲線Ｑに見られる反応の増強は、試験した個人における試料の採取時の感染症の程度を示している。
【００６７】
実施例７
試験を実施するため、２０１６年９月２３日から数日間隔で個人IVから新鮮血試料を採取した。その日に、前記個人から、風邪またはインフルエンザのような症状があるという報告を受けたため、その日のうちに、実施例３に記載の組成物の１回量を前記個人に投与した。血液試料を採取し、実施例４に記載の試験手順に従って試験した。２０１６年９月２３日に採取した試料から得られた結果では、基準と比較して光反応がわずかに増加していた。２０１６年１０月３日、すなわち前記個人に本発明の組成物を投与した１０日後に血液試料を採取して試験したところ、２０１６年９月２３日よりも光反応が低下したが、その日のうちに前記個人から、未だ体調が優れないという報告を受けた。さらに、２０１６年１０月６日に採取した血液試料を使用して試験を行ったところ、非常に高い光反応シグナルが示された。この試料から得られた光反応曲線は、非常に高いピークと丸い形状を示し、これは細菌性感染症に特徴的なものであった。その日のうちに前記個人に抗生物質を投与し、細菌性感染症の治療を実施した。７日後に、前記個人から体調が良くなったとの報告を受けた。２０１６年１０月１３日に血液試料を採取して試験を行ったところ、光反応が大幅に低下して基準に近くなった。
【００６８】
図９は、個人IVから採取した血液試料を使用して作製したすべての発光曲線を重ねたグラフを示す。各曲線は、Ｕ：２０１６年９月２３日に採取した試料、Ｖ：２０１６年１０月３日に採取した試料、Ｗ：２０１６年１０月６日に採取した試料およびＸ：２０１６年１０月１３日に採取した試料を示す。曲線Ｕは、基準曲線（ｒｅｆ）と比較して反応が増強していることを示す。曲線Ｖは、曲線Ｕおよび基準曲線と比較して反応が抑制されていることを示す。曲線Ｗは、曲線Ｖから３日後に作製したものであり、反応が大幅に増強していることを示す。この曲線の非常に高いピークと丸い形状は、細菌性感染症の存在を示している。細菌性感染症の治療を施した１週間後に血液試料を採取し、試験を実施し、曲線Ｘを得て基準曲線と比較したところ、正常よりも反応がわずかに高いことが示されたが、正常値に近づいていた。曲線Ｕ〜Ｘの最大発光反応を棒グラフに示す（図１０）。
【００６９】
この実施例では、前記試験手順によって、血液試料から得られる光反応に基づき、ウイルス性感染症と細菌性感染症を識別することができることが示されている。この試験手順を利用することによって、細菌性感染症の存在を示す光反応が得られるまで、疾患に罹患した人への抗生物質の投与を待つことが可能となるため、ウイルス性感染症の徴候のみを示す人に対する抗生物質の投与を回避することができる。
【００７０】
実施例８
男性の個人Ｖは、少し体調がすぐれず、ストレスを感じていることを訴えていた。その時の血液試料を前記個人から採取し、実施例４に記載の手順に従ってこの試料を試験した。この血液試料を使用して得た発光曲線を図１１Ａ（１）に示す。さらに、基準としての正常基準曲線の形状Ａを図１１Ａ（１）に示す。図１１Ａ（１）から分かるように、前記血液試料を試験することにより得られた発光曲線の形状は、基準曲線の形状Ｆおよび形状Ｇ（図１Ｂ）と似ていることから、感染症を発症している可能性が示唆される。１時間後に、前記個人から別の血液試料を採取し、前記手順に従って試験した。１時間後に採取したこの試料を使用して得た発光曲線を図１１Ａ（２）に示す。図から分かるように、反応は正常範囲の上限を超えていた。次に、実施例３に記載の４種の原料からなる栄養補助食品組成物を含むカプセル１個を前記個人に摂取させた。さらに１時間経過後、前記個人から別の血液試料を採取し、前記手順に従って試験した。この血液試料から得た発光曲線を図１１Ｂ（３）に示す。この図では、図１１Ａ（２）よりもさらに高い反応が示されている。図１１Ｂ（３）に示した試験を行った１時間後（すなわち栄養補助食品組成物を摂取した２時間後）に別の血液試料を採取し、この血液試料を前記手順に従って試験した。得られた発光曲線を図１１Ｂ（４）に示す。この図からは、反応シグナルが、図１１Ｂ（３）で示されたものよりも低下していることが分かる。さらに１時間経過後（すなわち前記個人が栄養補助食品組成物を摂取した３時間後）、別の血液試料を採取して試験した。得られた発光曲線の形状（図１１Ｂ（５））は、（図１１Ｂ（４）と比較して）反応がさらに低下し、正常範囲内（正常基準曲線の形状Ａ参照）であったことを示している。曲線の形状は、前記個人が栄養補助食品組成物を摂取する前に作製した図１１Ａ（１）および１１Ａ（２）に示された曲線の形状よりも丸みを帯びており、ピークがはっきりと右にシフトしていた。
【００７１】
図１１Ｃは、正常基準の最大発光反応と、図１１Ａ（１）および（２）ならびに図１１Ｂ（３）、（４）および（５）に示した曲線の最大発光反応を示す棒グラフである。試験を受けた個人が栄養補助食品組成物を摂取した時点も示す。
【００７２】
実施例９
個人VIから提供された血液試料から発光曲線（図１２Ａ；２）を作製したところ、正常健常者に関連する基準曲線（図１２Ａ；１）と比較して異常な反応が示された。第１の試料を採取してから１時間後に第２の試料を採取し、発光曲線を作製したところ（図１２Ｂ；３）、なお異常な形状を示していた。次に、マツ樹皮抽出物５０ｍｇとザクロ抽出物１００ｍｇを含む製剤をカプセルの形態で前記個人に投与した。これら２種の成分を含む製剤を投与した１時間後に、前記個人から血液試料を採取した。この血液試料から発光曲線を作製したところ（図１２Ｃ；４）、細胞の反応が低下したことが示されたが、曲線の形状はほとんど変化していなかった。実施例３に記載の４種の成分を含む製剤をカプセルの形態で前記個人に投与し、この投与の１時間後に別の血液試料を採取した。この血液試料から発光曲線を作製したところ（図１２Ｄ；５）、形状が基準曲線に近づいていた。前記４種の成分を含む製剤を投与した２時間１５分後に採取した血液試料を使用して作製した発光曲線から、曲線の形状が徐々に変化して、基準曲線にさらに近づいたこと（図１２Ｅ；６）、およびシグナルが低下して正常範囲内となったことが確認された。
【００７３】
実施例１０
個人VIIは、ストレスを感じ、疲れていることを訴えていた。前記個人から提供された血液試料を使用して発光曲線を作製したところ（図１３Ａ；１参照）、基準曲線の形状Ｆと似た形状が示され（解説の節の「１．発光曲線」および図１Ｂを参照されたい）、シグナルが低いことから、ストレスおよび疲労（抑うつ反応）が示唆された。実施例３に記載の製剤をカプセルの形態で前記個人に投与し、この投与の１時間後に該個人から別の血液試料を採取し、図１３Ｂに示す発光曲線２を得た。曲線２は、（図１３Ａ；１と比較して）曲線が顕著に右にシフトし、反応が正常範囲の上限を超えていることを示している。さらに３時間経過後、別の血液試料を採取し、この血液試料から発光曲線を作製したところ（図１３Ｃ；３）、正常範囲内のシグナルが示された。曲線３では、ｆＭＬＰの注入が遅延したため曲線がわずかに移動したが、曲線全体は右に有意にシフトしている。
【００７４】
実施例１１
２０１６年１０月６日に個人VIIIから体調が優れないという報告を受けた。その日に前記個人から血液試料を採取し、実施例４に記載の手順に従って試験した。この試料を使用して作製した発光曲線（図１４；曲線Ｂ）は、正常健常者に関連する基準曲線（図１４；曲線Ａ）と比較して反応が増加していた。提示された症状を考慮に入れて、２０１６年１０月６日に前記個人に抗生物質を投与した。１週間後（２０１６年１０月１３日）に採取した血液試料を試験して、この試料から発光曲線を作製したところ（図１４；曲線Ｃ）、さらに増強した反応が示された。２０１６年１０月２０日および２０１６年１０月２７日に採取した血液試料を使用して発光曲線をそれぞれ作製したところ（図１４；ＤおよびＥ）、反応が徐々に低下しており、２０１６年１０月２７日には前記個人から体調が良いとの報告を受けた。しかし、２０１６年１１月３日には前記個人から再び体調が優れないとの報告を受けた。その日に採取した血液試料を使用して発光曲線を作製したところ（図１４；曲線Ｆ）、強い反応が示され、基準曲線Ａと比較して異常な曲線形状であった。２０１６年１１月３日に実施例３に記載の製剤をカプセルの形態で前記個人に投与し、２０１６年１１月１０日、１７日および２４日に週１回、再度製剤を投与した。これらの日に採取した血液試料を使用して曲線を作製したところ（曲線Ｇ、曲線Ｈおよび曲線Ｉ）、反応が徐々に低下したことが示された。１週間後（２０１６年１２月１日）、前記個人から気分が良いという報告を受け、その日に採取した血液試料を使用して光反応曲線を作製したところ（図１４；曲線Ｊ）、反応がさらに低下したことが示された。２０１６年１２月８日にも、前記個人から気分が良いことを報告されていたが、その日に得られた血液試料から発光曲線を作製したところ（図１４；曲線Ｋ）、基準曲線Ａに形状が近づいていたものの、反応が増強しており、正常範囲をわずかに超えていた。反応が増強した理由として、血液試料の採取前に前記個人が運動を行った可能性、および体調が良かったという事実があったものの、別の感染症に感染しており、その症状が出ていなかった可能性が考えられる。しかしながら、後者の可能性は、試験後に前記個人から報告されなかった。
【００７５】
図１５は、図１４に示した曲線Ａ〜Ｋの最大発光反応を示す棒グラフである。
【００７６】
実施例１２
障害競走馬（ナショナルハントレースに出場するウマ）を主に訓練する厩舎で試験を行った。１００頭を超えるウマが常時飼育されていたため、よく似た症状のウイルス性呼吸器感染症がほぼ同じ期間にわたって持続していた年齢と性別が一致した複数のペアを、厩舎副長の手により非常に容易に見出すことができた。発症した症状のうちのいくつかは重篤な漏出（鼻水）を示し、咳および恐らくは発熱を伴うことが多く見受けられた。この試験では、肺の奥深くまで進行した高度の症状を呈し、二次細菌感染症を発症したウマは除外した。この試験に選択したウマはいずれも呼吸器感染症を有していたため、競馬に出場するための訓練は一時中断されていた。５対のウマを試験に選択した。
【００７７】
各対のウマにおいて、一方を治療対象のウマとして無作為に選択し、もう一方を非治療コントロールとした。治療対象の各ウマには、実施例３に記載の製剤の初回量を投与した。この１回量は、５０ｍＬネジ蓋付ポリプロピレン製遠心管中で水３０ｍＬに製剤２ｇを混合することによって調製した。遠心管を穏やかに少なくとも５回転倒混和することによって、激しく振盪することなく、製剤粉末を穏やかに溶解／分散させた。遠心管中の全量を５０ｍＬの投薬用シリンジに充填し、ウマの咽頭の後方から下方に送達することにより胃へと直接注入した。治療対象のウマには、試験開始時の最初の２日間は１日３回投薬し、その後４日間は１日２回投薬した。
【００７８】
結果：
治療対象のウマはいずれも前記治療に反応性を示した。症状がそれほど重くないウマでは、対になった非治療コントロールと比べて２４時間以内に良好な改善が示された。重度の症状を有するウマでは、改善が見られ始めるまでに４８時間を要した。コントロールウマにおける感染症の症状は、治療対象のウマと比べていずれも悪化した。１つの事例では、治療対象のウマは３６時間以内にトレーナーを背中に乗せて走ることが可能となったが、非治療コントロールは、厩舎の隅で非常に元気がなさそうに見えた。治療対象のウマはいずれも５日以内に人を乗せて走れるほどに十分な回復を見せた。非治療コントロールのうち３頭は、最終的に３週間後に回復したが、２頭の非処置コントロールは、二次細菌感染症が示唆される症状を発症したため、厩舎の獣医により治療を行った。
【００７９】
実施例１３
非常に多数のレース用ラクダを診察してきた経験のある熟練の獣医の手によって、各回５頭の罹患ラクダに対して２度の機会にわたり実施例３に記載の製剤を使用した。ラクダへの投与に使用した方法は、ウマに対する投与と同様とし、製剤２．０〜２．２ｇを水３０ｍｌと混合し、５０ｍｌの投薬用シリンジに充填した。ラクダの口腔粘膜に向けて投薬用シリンジから液状製剤を吐出して、血流中に直接吸収させた。ラクダは偽反芻動物であるため、第一胃に向けて製剤を直接投与すると、血液中への吸収が恐らくは何日も遅延すると考えられる。さらに、ラクダ同士で治療を比較することは不可能であると考えられた。ここで使用した口腔内フラッシュ法と呼ばれる手順は、ラクダに薬物を送達する際に通常使用される方法である。１度目の投与後、特に風邪様症状およびインフルエンザ様症状を有していたラクダから良い反応が得られたとの報告を獣医から得た。この獣医の報告によると、治療を行ったラクダは１週間未満で回復したが、治療を行わなかったラクダでは、回復までに１０〜１５日を要した。
【００８０】
２度目の投与では、前記獣医の手によって前述と同様に、前記罹患ラクダに投与した前記製剤の１回量２．２ｇを１日３回投与することにより治療を開始した。２４時間以内にラクダの咳が止まり、それから数日以内に鼻水も完全に止まったという報告を獣医から得た。ラクダは完全に回復し、次の週にはレースに出場できるほどまでに体調が良くなったことが認められた。
【００８１】
実施例１４
２０１６年９月２３日にスポーツ選手から、頻繁に疲労を感じ、呼吸器感染症の症状があるという報告を受けた。その日のうちに採取した血液試料を使用して発光曲線を作製した（図１７、曲線Ｂ）。２０１６年９月２３日の試験後、カプセル形態の実施例３に記載の製剤を前記スポーツ選手に摂取させた。前記スポーツ選手の自覚、および２０１６年１０月３日に提供された血液試料を使用して作製した発光曲線Ｃから、感染症の改善が示された。２０１６年１０月６日に、前記スポーツ選手から疲労を感じるという訴えを得た。その日のうちに提供された血液試料を使用して発光曲線Ｄを作製したところ、非常に高いシグナルとピークまでの時間の延長を示した曲線の形状より強い感染症が示唆され、恐らくは細菌性感染症であることが示された。適切な抗生物質で治療したところ、その後の試験結果（曲線Ｅ、曲線Ｆ、曲線Ｇおよび曲線Ｈ）から前記スポーツ選手の症状が改善したことが示された。
【図１Ａ（ａ）】
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【図１Ａ（ｂ）】
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【図１Ｂ（ａ）】
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【図１Ｂ（ｂ）】
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【図１Ｃ（ａ）】
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【図１Ｃ（ｂ）】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１Ａ（ａ）】
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【図１１Ａ（ｂ）】
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【図１１Ｂ（ａ）】
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【図１１Ｂ（ｂ）】
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【図１１Ｃ】
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【図１２Ａ】
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【図１２Ｂ−１２Ｃ】
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【図１２Ｄ−１２Ｅ】
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【図１３Ａ−１３Ｂ】
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【図１３Ｃ】
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【図１４】
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【図１５】
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【図１６】
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【図１７】
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【手続補正書】
【提出日】平成30年11月27日(2018.11.27)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ブドウ種子抽出物、緑茶抽出物、マツ樹皮抽出物およびザクロ抽出物を含む抗酸化用栄養補助食品組成物であって、
該組成物中のブドウ種子抽出物、緑茶抽出物、マツ樹皮抽出物およびザクロ抽出物の総重量に対して、ブドウ種子抽出物の含量が３０〜４５重量％であり、緑茶抽出物の含量が３０〜４５重量％であり、マツ樹皮抽出物の含量が５〜２０重量％であり、ザクロ抽出物の含量が５〜２０重量％であることを特徴とする組成物。
【請求項２】
前記組成物中のブドウ種子抽出物、緑茶抽出物、マツ樹皮抽出物およびザクロ抽出物の総重量に対して、ブドウ種子抽出物の含量が３５〜４５重量％であり、緑茶抽出物の含量が３０〜４０重量％であり、マツ樹皮抽出物の含量が５〜１５重量％であり、ザクロ抽出物の含量が５〜１５重量％である、請求項１に記載の組成物。
【請求項３】
前記組成物中のブドウ種子抽出物、緑茶抽出物、マツ樹皮抽出物およびザクロ抽出物の総重量に対して、ブドウ種子抽出物の含量が３７〜４２重量％であり、緑茶抽出物の含量が３２〜３７重量％であり、マツ樹皮抽出物の含量が７〜１５重量％であり、ザクロ抽出物の含量が７〜１５重量％である、請求項２に記載の組成物。
【請求項４】
充填剤をさらに含む、請求項１〜３のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項５】
前記充填剤が、米粉、ビタミンＣ、エキナシア、エルダーベリー抽出物およびエルダーフラワー抽出物から選択される１種以上の物質である、請求項４に記載の組成物。
【請求項６】
哺乳動物または鳥類のウイルス性感染症の治療において使用するための、請求項１〜５のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項７】
前記ウイルス性感染症が、風邪およびインフルエンザから選択される呼吸器感染症である、請求項６に記載の組成物。
【請求項８】
哺乳動物または鳥類の呼吸器感染症を治療する方法であって、請求項１〜５のいずれか１項に記載の組成物を哺乳動物または鳥類に投与することを含む方法。
【請求項９】
前記哺乳動物が、ヒト、ウマ、ラクダ、イヌおよびネコから選択され、前記鳥類がニワトリである、請求項８に記載の方法。
【請求項１０】
前記ブドウ種子抽出物、前記緑茶抽出物、前記マツ樹皮抽出物および前記ザクロ抽出物が、該ブドウ種子抽出物、該緑茶抽出物、該マツ樹皮抽出物および該ザクロ抽出物のそれぞれに対して１／ＥＣ５０×１００で算出された各数値の合計よりも、前記組成物に対して１／ＥＣ５０×１００で算出された数値の方が大きくなる量で前記組成物に含まれる、請求項１に記載の抗酸化用組成物。
【国際調査報告】
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