(57)【要約】【課題】核酸を高濃度で含む製剤に関する。【解決手段】複数の非経口経路で投与することができる、低粘度で高濃度の核酸組成物は、市場に現在流通している核酸製品よりも、投与の頻度を減らし得る。特に、皮下、筋肉内、及び、腹腔内投与のための低粘度デフィブロタイド製剤は、患者にとって利便性が高く、及び／または、院外で投与する。本発明の製剤は、例えば、末梢動脈障害の処置、急性腎不全の処置、急性心筋虚血の処置、及び、類洞閉塞症候群、または、ＶＯＤの処置及び予防など、数多くの病態の処置のために使用し得る。【選択図】図１Ａ
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
少なくとも８０ｍｇ／ｍＬの濃度の核酸を含む、低粘度医薬製剤。
【請求項２】
前記核酸が、多分散ランダム配列を含む、請求項１に記載の低粘度医薬製剤。
【請求項３】
前記核酸が、その大部分が、一本鎖ポリデオキシリボヌクレオチドとして存在する、請求項２に記載の低粘度医薬製剤。
【請求項４】
前記一本鎖ポリデオキシリボヌクレオチドが、以下の式：
Ｐ１−５、（ｄＡｐ）１２−２４、（ｄＧｐ）１０−２０、（ｄＴｐ）１３−２６、（ｄＣｐ）１０−２０、
式中：Ｐ＝リンラジカル
ｄＡｐ＝デオキシアデニルモノマー
ｄＧｐ＝デオキシグアニルモノマー
ｄＴｐ＝デオキシチミジルモノマー
ｄＣｐ＝デオキシシチジルモノマー
に対応するランダム配列である、請求項３に記載の低粘度医薬製剤。
【請求項５】
前記核酸濃度が、約８５ｍｇ／ｍＬ〜約４００ｍｇ／ｍＬである、請求項１に記載の低粘度医薬製剤。
【請求項６】
前記製剤の粘度が、約７０ｃＰ未満である、請求項１に記載の低粘度医薬製剤。
【請求項７】
前記製剤の粘度が、約５ｃＰ〜６５ｃＰである、請求項６に記載の低粘度医薬製剤。
【請求項８】
前記製剤の粘度が、約１０ｃＰ〜約６５ｃＰである、請求項７に記載の低粘度医薬製剤。
【請求項９】
粘度を、室温で測定する、請求項６〜８のいずれかに記載の低粘度医薬製剤。
【請求項１０】
粘度を、約１５℃〜約３５℃で測定する、請求項６〜８のいずれかに記載の低粘度医薬製剤。
【請求項１１】
粘度を、約２１℃〜約２３℃で測定する、請求項６〜８のいずれかに記載の低粘度医薬製剤。
【請求項１２】
グリシルグリシンをさらに含む、請求項１に記載の低粘度医薬製剤。
【請求項１３】
前記グリシルグリシンの濃度が、約５ｍＭ〜約１００ｍＭである、請求項１２に記載の低粘度医薬製剤。
【請求項１４】
前記グリシルグリシンの濃度が、約５ｍＭ〜６０ｍＭである、請求項１３に記載の低粘度医薬製剤。
【請求項１５】
前記グリシルグリシンの濃度が、約１０ｍＭ〜約４０ｍＭである、請求項１４に記載の低粘度医薬製剤。
【請求項１６】
前記製剤が、約２４０ｍＯｓｍ／ｋｇ〜約６００ｍＯｓｍ／ｋｇのオスモル濃度を有する、請求項１に記載の低粘度医薬製剤。
【請求項１７】
前記製剤が、約３００ｍＯｓｍ／ｋｇ〜約５５０ｍＯｓｍ／ｋｇのオスモル濃度を有する、請求項１に記載の低粘度医薬製剤。
【請求項１８】
前記核酸が、リボ核酸またはデオキシリボ核酸のポリヌクレオチドまたはオリゴヌクレオチドを含む、請求項１に記載の低粘度医薬製剤。
【請求項１９】
前記核酸の分子量が、約５，０００〜約５０，０００ダルトンである、請求項１８に記載の低粘度医薬製剤。
【請求項２０】
前記核酸の分子量が、約１３，０００〜約３０，０００ダルトンである、請求項１８に記載の低粘度医薬製剤。
【請求項２１】
前記核酸の分子量が、約１６，０００〜約２０，０００ダルトンである、請求項１８に記載の低粘度医薬製剤。
【請求項２２】
クエン酸ナトリウム、コハク酸ナトリウム、ヒスチジン、ＴＲＩＳ緩衝剤、ＨＥＰＥＳ緩衝剤、塩化ナトリウム、アルギニン、リドカイン、及び／または、ポリソルベート−８０から選択する緩衝剤または賦形剤をさらに含む、請求項１に記載の低粘度医薬製剤。
【請求項２３】
前記製剤が、緩衝剤または賦形剤を含んでおり、前記核酸が、アルカリ金属塩の形態である、請求項１に記載の低粘度医薬製剤。
【請求項２４】
前記緩衝剤または賦形剤が、ナトリウム塩を含む、請求項２３に記載の低粘度医薬製剤。
【請求項２５】
前記緩衝剤または賦形剤が、クエン酸ナトリウム、コハク酸ナトリウム、または、塩化ナトリウムである、請求項２２〜２４のいずれかに記載の低粘度医薬製剤。
【請求項２６】
前記緩衝剤または賦形剤が、約８０ｍＭ未満のナトリウム塩の濃度のクエン酸ナトリウム、コハク酸ナトリウム、または、塩化ナトリウムである、請求項２２〜２５のいずれかに記載の低粘度医薬製剤。
【請求項２７】
前記緩衝剤または賦形剤が、２０〜３４ｍＭの濃度のクエン酸ナトリウムである、請求項２６に記載の低粘度医薬製剤。
【請求項２８】
７０％を超える一本鎖多分散ポリデオキシリボヌクレオチドを含む組成物を、８５ｍｇ／ｍＬ〜約４００ｍｇ／ｍＬで含む低粘度医薬製剤であって、それぞれのポリデオキシリボヌクレオチドが、４５〜６５個の塩基を含み、及び、１３ｋＤａ〜２０ｋＤａの平均分子量と、約５ｍＭ〜約１００ｍＭの濃度のグリシルグリシンとを有する、前記低粘度医薬製剤。
【請求項２９】
７０％を超える一本鎖多分散ポリデオキシリボヌクレオチドの核酸を含む核酸組成物を、１５０ｍｇ／ｍＬ〜約２５０ｍｇ／ｍＬで含む低粘度医薬製剤であって、それぞれのポリデオキシリボヌクレオチドが、４５〜６５個の塩基を含み、及び、１３ｋＤａ〜２０ｋＤａの平均分子量と、約５ｍＭ〜約６０ｍＭの濃度のグリシルグリシンとを有し、前記製剤が、１５℃〜２５℃で測定した約５〜約７０ｃＰの粘度と、約３００ｍＯｓｍ／ｋｇ〜５５０ｍＯｓｍ／ｋｇのオスモル濃度とを有しており、及び、前記製剤が、患者への非経口投与のために製剤したものである、前記低粘度医薬製剤。
【請求項３０】
１００ｍｇ／ｍＬ〜約４００ｍｇ／ｍＬのデフィブロタイド、及び、約５ｍＭ〜約６０ｍＭの濃度のグリシルグリシンを含む低粘度医薬製剤であって、前記製剤は、１５℃〜２５℃で測定した約５〜約６０ｃＰの粘度と、約２４０ｍＯｓｍ／ｋｇ〜７００ｍＯｓｍ／ｋｇのオスモル濃度とを有しており、及び、前記製剤が、患者への非経口投与のために製剤したものである、前記低粘度医薬製剤。
【請求項３１】
粘度が、経時的に低下する、先行請求項のいずれかに記載の低粘度医薬製剤。
【請求項３２】
粘度が、貯蔵している間に低下する、請求項３１に記載の低粘度医薬製剤。
【請求項３３】
粘度が、剪断、攪拌、及び／または、圧力が強くなると低下する、先行請求項のいずれかに記載の低粘度医薬製剤。
【請求項３４】
前記剪断が、投与している間に強くなる、請求項３３に記載の低粘度医薬製剤。
【請求項３５】
前記剪断が、針または機器を介して投与している間に強くなる、請求項３４に記載の低粘度医薬製剤。
【請求項３６】
前記製剤を、皮下投与、筋肉内投与、または、腹腔内投与のために製剤する、先行請求項のいずれかに記載の低粘度医薬製剤。
【請求項３７】
前記製剤が、静脈内投与を介して送達した製剤と比較して、全身性半減期の延長を示す、請求項３７に記載の低粘度医薬製剤。
【請求項３８】
前記皮下送達する製剤が、静脈内投与を介して送達した製剤と比較して、血漿濃度の最高最低間比率が小さい、請求項３７に記載の低粘度医薬製剤。
【請求項３９】
前記皮下送達する製剤が、静脈内投与を介して送達した製剤と比較して、改善された効力、及び／または、改善された安全性プロファイルを示す、請求項３７に記載の低粘度医薬製剤。
【請求項４０】
等張性、または、チキソトロピー性である、先行請求項のいずれかに記載の低粘度医薬製剤。
【請求項４１】
患者が自己投与し得る、先行請求項のいずれかに記載の低粘度医薬製剤。
【請求項４２】
先行請求項のいずれかに記載の低粘度製剤の皮下投与用機器。
【請求項４３】
請求項１〜４２のいずれかに記載の低粘度製剤を投与する、ことを含む疾患を処置する方法であって、前記疾患を、血栓症、類洞閉塞症候群または肝血管閉塞性疾患（ＶＯＤ）、移植片対宿主病（ＧｖＨＤ）、移植関連血栓性微小血管症（ＴＡ−ＴＭＡ）、または、特発性肺炎症候群を含む造血幹細胞移植（ＨＳＣＴ）関連合併症、血栓性血小板減少性紫斑病（ＴＴＰ）及び溶血性尿毒症症候群（ＨＵＳ）を含むその他のＴＭＡ、急性心筋虚血、虚血性脳卒中、固形臓器移植における虚血再灌流障害、急性呼吸窮迫症候群（ＡＲＤＳ）、鎌状赤血球血管閉塞性危機（ＶＯＣ）、鎌状赤血球関連急性胸部症候群、播種性血管内凝固症候群（ＤＩＣ）、敗血症、腎不全、その他の冠動脈または末梢動脈疾患、血液悪性腫瘍、または、固形腫瘍から選択する、前記方法。
【請求項４４】
患者の生活の質を改善する投薬計画、すなわち、投与量の減少を必要とする、及び／または、投与の頻度を減らすことを許容する前記投与計画で、前記低粘度製剤を投与する、請求項４３に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
１．関連出願への相互参照
本出願は、２０１７年８月３日に出願した米国仮出願第６２／５４０，６５７号の優先権の利益を主張するものであって、本明細書の一部を構成するものとして、同出願の全内容を参照により援用する。
【背景技術】
【０００２】
２．発明の背景
核酸塩であるデフィブロタイドは、ランダム配列の複雑な混合物であり、その大部分は、動物の粘膜のＤＮＡに由来する一本鎖ポリデオキシリボヌクレオチドである。このものは、血管内皮細胞、特に、小血管での内皮細胞に対して保護効果があり、また、抗血栓性、抗炎症性、及び、抗虚血性の特性を有する。
【０００３】
デフィブロタイドのナトリウム塩は、Ｄｅｆｉｔｅｌｉｏ（登録商標）（Ｇｅｎｔｉｕｍ  Ｓ．ｒ．Ｌ．，Ｖｉｌｌａ  Ｇｕａｒｄｉａ，Ｉｔａｌｙ）として市販されており、そして、現在のところ、造血幹細胞移植（ＨＳＣＴ）した後に腎臓または肺の機能不全を示す成人患者、及び、小児患者での肝静脈閉塞性疾患（ＶＯＤ）、別名、類洞閉塞症候グループ（ＳＯＳ）の処置について承認を受けている。６時間ごとに、２時間の静脈内注入で、少なくとも２１日間、患者に投与する。注入レジメンの頻度と量の多さが故に、デフィブロタイドを投与するための第２のＩＶラインを患者に設けて、デフィブロタイドと、ＩＶでの投与が必要なその他の薬剤との混合を避ける必要がある。処置レジメンは、デフィブロタイドが治療効果を示し得るさらなる疾患徴候への外来投与には適さない。それ故に、さらに簡便な方法でデフィブロタイドを患者に投与して、外来診療での投与を可能にし、互換性のある投与機器を介して患者が自宅で自己投与することを可能にし、または、院内での投薬時間を短縮し、そして、液量を減らすことは有益である。したがって、医薬として有効な用量を自宅で投与するための新規で、かつ、患者に対して利便性に富んだ投与計画を実現する新規のデフィブロタイドの製剤が待望されている。
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【０００４】
３．発明の概要
本発明は、広範囲の核酸、及び、それらの塩、デフィブロタイドなど、ならびに、生理学的に関連するレベルで粘度とオスモル濃度を維持しながら、これらの分子の高濃度製剤を作製する能力を含む。これらの高濃度製剤は、例えば、皮下に投与でき、そして、院外での患者による投与を可能にするなど、患者に対して数多くの利点をもたらす。自己投与、それに、ＩＶ以外の経路での投与の利点は、患者とその家族、及び、病院が実感している。これらの患者の処置、及び、モニターに病院が必要とする時間と人手が大幅に削減できるので、病院と患者の双方の経済的負担も軽減する。本明細書で提供する製剤は、特に、デフィブロタイドに関連する。しかしながら、本発明は、広範囲のヌクレオチド産物、例えば、ＤＮＡやＲＮＡワクチンなどの一本鎖及び二本鎖ＤＮＡまたはＲＮＡ産物に対して適用するものである、ことを理解されたい。
【０００５】
本明細書では、治療投与用の核酸組成物を提供しており、同組成物は、複数の非経口経路で投与し得るものであり、そして、市場に現在流通している同様の核酸製品よりも、投与頻度を少なくし、及び／または、投与期間を短くしたことで、患者の生活の質を改善し得る。より具体的には、例えば、皮下、筋肉内、及び／または、腹腔内経路など、静脈以外の経路でも投与することができる、低粘度、高濃度の核酸製剤を提供する。ある特定の実施形態では、高濃度核酸製剤を、自己投与、及び／または、外来患者に対して投与する。特定の実施形態では、当該核酸は、デフィブロタイドである。本発明の製剤は、例えば、類洞閉塞症候群または肝血管閉塞性疾患（ＶＯＤ）、移植片対宿主病（ＧｖＨＤ）、移植関連血栓性微小血管障害（ＴＡ−ＴＭＡ）または特発性肺炎症候群などの造血幹細胞移植（ＨＳＣＴ）関連合併症を含む数多くの病態の処置、及び／または、予防に使用し得る。その他の病態として、例えば、血栓性血小板減少性紫斑病（ＴＴＰ）及び溶血性尿毒症症候群（ＨＵＳ）を含むその他のＴＭＡ、急性心筋虚血、虚血性脳卒中、固形臓器移植における虚血再灌流障害、急性呼吸窮迫症候群（ＡＲＤＳ）、鎌状赤血球血管閉塞性危機（ＶＯＣ）、鎌状赤血球関連急性胸部症候群、播種性血管内凝固症候群（ＤＩＣ）、敗血症、腎不全、その他の冠動脈または末梢動脈疾患、血液悪性腫瘍、または、固形腫瘍がある。
【０００６】
一部の態様では、本開示は、少なくとも８０ｍｇ／ｍＬの濃度の核酸を含む、低粘度医薬製剤を提供する。一部の実施形態では、当該核酸濃度は、約８５ｍｇ／ｍＬ〜約４００ｍｇ／ｍＬである。一部の実施形態では、当該製剤の粘度は：ａ）約７０ｃＰ未満、ｂ）約５ｃＰ〜６５ｃＰ、または、ｃ）約１０ｃＰ〜約６５ｃＰである。一部の実施形態では、当該粘度を：ａ）室温で、ｂ）約１５℃〜約３５℃で、または、ｃ）約２１℃〜約２３℃で測定する。
【０００７】
一部の実施形態では、当該低粘度医薬製剤は、グリシルグリシンをさらに含む。一部の実施形態では、当該グリシルグリシン濃度は、ａ）約５ｍＭ〜約１００ｍＭ、ｂ）約５ｍＭ〜６０ｍＭ、または、ｃ）約１０ｍＭ〜約４０ｍＭである。
【０００８】
一部の実施形態では、当該低粘度医薬製剤は、ａ）約２４０ｍＯｓｍ／ｋｇ〜約６００ｍＯｓｍ／ｋｇ、または、ｂ）約３００ｍＯｓｍ／ｋｇ〜約５５０ｍＯｓｍ／ｋｇのオスモル濃度を有する。
【０００９】
一部の実施形態では、当該低粘度医薬製剤での核酸は、リボ核酸またはデオキシリボ核酸のポリヌクレオチドまたはオリゴヌクレオチドを含む。一部の実施形態では、当該核酸の分子量は、ａ）約５，０００〜約５０，０００ダルトン、ｂ）約１３，０００〜約３０，０００ダルトン、または、ｃ）約１６，０００〜約２０，０００ダルトンである。
【００１０】
一部の実施形態では、当該核酸は、多分散ランダム配列を含む。一部の実施形態では、当該核酸は、その大部分が、一本鎖ポリデオキシリボヌクレオチドとして存在する。
【００１１】
一部の実施形態では、当該低粘度医薬製剤は、以下の式：
Ｐ１−５、（ｄＡｐ）１２−２４、（ｄＧｐ）１０−２０、（ｄＴｐ）１３−２６、（ｄＣｐ）１０−２０
式中、Ｐ＝リンラジカル
ｄＡｐ＝デオキシアデニルモノマー
ｄＧｐ＝デオキシグアニルモノマー
ｄＴｐ＝デオキシチミジルモノマー
ｄＣｐ＝デオキシシチジルモノマー
に対応するランダム配列である、一本鎖ポリデオキシリボヌクレオチドを含む。
【００１２】
一部の実施形態では、当該低粘度医薬製剤は、クエン酸ナトリウム、コハク酸ナトリウム、ヒスチジン、ＴＲＩＳ緩衝剤、ＨＥＰＥＳ緩衝剤、塩化ナトリウム、アルギニン、リドカイン、及び／または、ポリソルベート−８０から選択する緩衝剤または賦形剤を含む。一部の実施形態では、当該低粘度製剤は、当該核酸が、アルカリ金属塩の形態である緩衝剤または賦形剤を含む。一部の実施形態では、当該緩衝剤または賦形剤は、ナトリウム塩を含む。一部の実施形態では、当該緩衝剤または賦形剤は、クエン酸ナトリウム、コハク酸ナトリウム、または、塩化ナトリウムである。一部の実施形態では、当該緩衝剤または賦形剤は、ナトリウム塩の濃度が約８０ｍＭ未満であるクエン酸ナトリウム、コハク酸ナトリウム、または、塩化ナトリウムである。
【００１３】
一部の実施形態では、当該緩衝剤または賦形剤は、濃度が２０〜３４ｍＭであるクエン酸ナトリウムである。
【００１４】
一部の態様では、本開示は、７０％を超える一本鎖多分散ポリデオキシリボヌクレオチドを含む組成物を、８５ｍｇ／ｍＬ〜約４００ｍｇ／ｍＬで含む低粘度医薬製剤であって、それぞれの当該ポリデオキシリボヌクレオチドが、４５〜６５個の塩基を含み、及び、１３ｋＤａ〜２０ｋＤａの平均分子量と、約５ｍＭ〜約１００ｍＭの濃度のグリシルグリシンとを有する、当該低粘度医薬製剤を提供する。
【００１５】
一部の態様では、本開示は、７０％を超える一本鎖多分散ポリデオキシリボヌクレオチドの核酸を含む核酸組成物を、１５０ｍｇ／ｍＬ〜約２５０ｍｇ／ｍＬで含む低粘度医薬製剤であって、それぞれの当該ポリデオキシリボヌクレオチドが、４５〜６５個の塩基を含み、及び、１３ｋＤａ〜２０ｋＤａの平均分子量と、約５ｍＭ〜約６０ｍＭの濃度のグリシルグリシンとを有し、当該製剤が、１５℃〜２５℃で測定した約５〜約７０ｃＰの粘度と、約３００ｍＯｓｍ／ｋｇ〜５５０ｍＯｓｍ／ｋｇのオスモル濃度とを有しており、及び、当該製剤が、患者への非経口投与のために製剤したものである、当該低粘度医薬製剤を提供する。
【００１６】
一部の態様では、本開示は、１００ｍｇ／ｍＬ〜約４００ｍｇ／ｍＬのデフィブロタイド、及び、約５ｍＭ〜約６０ｍＭの濃度のグリシルグリシンを含む低粘度医薬製剤であって、当該製剤は、１５℃〜２５℃で測定した約５〜約６０ｃＰの粘度と、約２４０ｍＯｓｍ／ｋｇ〜７００ｍＯｓｍ／ｋｇのオスモル濃度とを有しており、及び、当該製剤が、患者への非経口投与のために製剤したものである、当該低粘度医薬製剤を提供する。
【００１７】
一部の実施形態では、当該低粘度医薬製剤の粘度は、経時的に低下する。一部の実施形態では、当該粘度は、貯蔵している間に低下する。一部の実施形態では、剪断、攪拌、及び／または、圧力が強くなると、当該粘度は低下する。一部の実施形態では、医薬製剤を投与している間に剪断が強くなる。一部の実施形態では、針または機器を介して医薬製剤を投与している間に剪断が強くなる。
【００１８】
一部の実施形態では、当該低粘度医薬製剤を、皮下、筋肉内、または、腹腔内投与のために製剤する。一部の実施形態では、当該製剤は、静脈内投与で送達する製剤と比較して、全身性半減期の延長を示す。一部の実施形態では、当該皮下送達する製剤が、静脈内投与を介して送達した製剤と比較して、血漿濃度の最高最低間比率が小さい。一部の実施形態では、当該皮下送達製剤は、静脈内投与を介して送達した製剤と比較して、有効性の改善、及び／または、改善された安全性プロファイルを示す。
【００１９】
一部の実施形態では、当該低粘度医薬製剤は、等張性、または、チキソトロピー性である。
【００２０】
一部の実施形態では、患者は、低粘度医薬製剤を自己投与し得る。
【００２１】
一部の態様では、本開示は、少なくとも８０ｍｇ／ｍＬの濃度の核酸を含む低粘度製剤を皮下投与するための機器を提供する。一部の態様では、本開示は、請求項１〜３３のいずれかに記載の低粘度製剤を投与する、ことを含む疾患を処置する方法であって、当該疾患を、血栓症、類洞閉塞症候群または肝血管閉塞性疾患（ＶＯＤ）、移植片対宿主病（ＧｖＨＤ）、移植関連血栓性微小血管症（ＴＡ−ＴＭＡ）、または、特発性肺炎症候群を含む造血幹細胞移植（ＨＳＣＴ）関連合併症、血栓性血小板減少性紫斑病（ＴＴＰ）及び溶血性尿毒症症候群（ＨＵＳ）を含むその他のＴＭＡ、急性心筋虚血、虚血性脳卒中、固形臓器移植における虚血再灌流障害、急性呼吸窮迫症候群（ＡＲＤＳ）、鎌状赤血球血管閉塞性危機（ＶＯＣ）、鎌状赤血球関連急性胸部症候群、播種性血管内凝固症候群（ＤＩＣ）、敗血症、腎不全、その他の冠動脈または末梢動脈疾患、血液悪性腫瘍、または、固形腫瘍から選択する、当該方法を提供する。
【００２２】
一部の実施形態では、患者の生活の質を改善する投薬計画、すなわち、投与量の減少を必要とする、及び／または、投与の頻度を減らすことを許容する当該投与計画で、当該低粘度製剤を投与する。
【００２３】
したがって、ある実施形態では、核酸を含んだ、患者に対する治療的投与のための低粘度製剤を提供しており、当該核酸は、少なくとも８０ｍｇ／ｍＬの濃度で存在する。一部の実施形態では、当該核酸は、８５〜４００ｍｇ／ｍＬの濃度で存在する。一部の実施形態では、当該核酸は、少なくとも８５、９０、９５、または、１００ｍｇ／ｍＬの濃度で存在する。当該核酸は、１００〜４００ｍｇ／ｍＬ、または、１００〜３００ｍｇ／ｍＬの濃度で存在させることができる。一部の実施形態では、当該核酸は、４５〜６５個の塩基、及び／または、１３〜２０ｋＤａの平均分子量を有する。ある特定の実施形態では、当該核酸は、その大部分が、一本鎖である。したがって、好ましくは、当該核酸は、少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、または、９５％が一本鎖である。一部の実施形態では、当該核酸の塩基の最大で５％、１０％、１５％、２０％、２５％、または、最大で３０％が対を形成している。その他の実施形態では、当該核酸は、最大で５％、１０％、１５％、２０％、２５％、または、最大で３０％が二本鎖である。
【００２４】
一部の実施形態では、当該核酸は、アルカリ金属塩として存在する。ある特定の実施形態では、当該アルカリ金属塩は、ナトリウム塩である。特定の実施形態では、当該核酸は、その大部分が、一本鎖ポリデオキシリボヌクレオチドである。一部の好ましい実施形態では、当該核酸は、その大部分が、一本鎖ポリデオキシリボ核酸ナトリウム塩である。特定の実施形態では、当該核酸は、デフィブロタイドである。
【００２５】
患者の利便性を向上させる上で、低粘度、等張性、及び／または、チキソトロピー性の治療製剤として患者に対して注射投与することが重要である。デフィブロタイドの事例では、濃度が大きくなると、濃度のわずかな変化が、粘度を大きく変動させることとなり、そして、この変動は、温度の影響をさらに受ける。本発明は、良好な忍容性を示す注射可能な生物製剤の基準を依然として満たしながら、濃度を高めることを可能にする。
【００２６】
したがって、ある実施形態では、上記した製剤は、７０センチポアズ（ｃＰ）未満の粘度を有する。ある実施形態では、当該粘度は、５〜６５ｃＰ、または、１０〜６０ｃＰである。好ましくは、当該粘度を、１５℃〜３５℃などの室温条件下で測定する。より好ましくは、当該粘度を、１８℃〜２５℃で測定する。さらにより好ましくは、当該粘度を、２１℃〜２３℃で測定する。
【００２７】
別の実施形態では、上記した製剤は、２４０〜７００ｍＯｓｍ／ｋｇのオスモル濃度を有する。その他の実施形態では、上記した製剤は、３００〜５００ｍＯｓｍ／ｋｇのオスモル濃度を有する。特定の実施形態では、上記した製剤は、６．８〜８．５、または、７〜８のｐＨを有する。
【００２８】
ある特定の緩衝剤または賦形剤を使用して、安定性、粘度、及び／または、オスモル濃度を制御し得る。ある実施形態では、上記した製剤は、１つ以上の緩衝剤または賦形剤を含む。ある特定の実施形態では、当該賦形剤を、クエン酸ナトリウム、コハク酸塩、塩化ナトリウム、アルギニン、リジン、リドカイン、または、ポリソルベート−８０（「ＰＳ−８０」）からなるグループから選択する。一部の実施形態では、当該緩衝剤を、グリシルグリシン、ヒスチジン、トリス（ヒドロキシメチル）アミノメタン（「ＴＲＩＳ」）、クエン酸ナトリウム、または、４−（２−ヒドロキシエチル）−１−ピペラズメタンスルホン酸（「ＨＥＰＥＳ」）緩衝剤からなるグループから選択する。ある好ましい実施形態では、当該緩衝剤は、例えば、Ｌ−カルノシン、または、グリシルグリシンなどのジペプチドである。グリシルグリシンを、それ単独で、及び、その他の賦形剤と組み合わせて使用すると、特定の濃度の核酸についての粘度、及び／または、オスモル濃度を最小化して、製剤の溶液特性を改善する。グリシルグリシン含有製剤は、忍容性を改善し、そして、注射時の不快感を最小限に抑えることが公知である生理学的に関連する条件に最適化した溶液特性を示す。したがって、ある実施形態では、核酸、及び、グリシルグリシンを含む、患者への治療的投与のための低粘度製剤を提供しており、当該核酸は、少なくとも８０ｍｇ／ｍＬの濃度で存在する。一部の好ましい実施形態では、当該核酸は、デフィブロタイドである。デフィブロタイドは、液体製剤では、非ニュートン剪断減粘とチキソトロピー性の挙動とを示し、そして、この挙動は、高濃度の液体製剤で顕著に出現する。したがって、ある特定の実施形態では、少なくとも８０ｍｇ／ｍＬのデフィブロタイド溶液、及び、グリシルグリシンを含む、患者への治療的投与のための低粘度製剤を提供する。一部の実施形態では、グリシルグリシンは、５〜１００ｍＭの量で存在する。より好ましくは、グリシルグリシンは、５〜６０ｍＭ、または、１０〜４０ｍＭの量で存在する。
【００２９】
別の実施形態では、７０％を超える一本鎖多分散ポリデオキシリボヌクレオチドを含む核酸を、１００ｍｇ／ｍＬ〜３００ｍｇ／ｍＬで含む、患者への治療的投与のための低粘度製剤であって、多分散ポリデオキシリボヌクレオチドが、４５〜６５個の塩基、及び、１３ｋＤａ〜２０ｋＤａの平均分子量、及び、約１０ｍＭ〜約６０ｍＭの量のグリシルグリシンを含む賦形剤を有する、当該低粘度製剤を提供する。さらに別の実施形態では、７０％を超える一本鎖多分散ポリデオキシリボヌクレオチドを含む核酸を、１５０ｍｇ／ｍＬ〜２５０ｍｇ／ｍＬで含む、患者への治療的投与のための低粘度製剤であって、多分散ポリデオキシリボヌクレオチドが、４５〜６５個の塩基の平均長、及び、１３ｋＤａ〜２０ｋＤａの平均分子量、及び、約１０ｍＭ〜約１００ｍＭの量のグリシルグリシンを含む賦形剤を有し、及び、当該製剤が、５〜７０ｃＰの粘度、及び／または、２４０ｍＯｓｍ／ｋｇ〜５５０ｍＯｓｍ／ｋｇのオスモル濃度を有しており、及び、当該製剤が、患者への非経口投与に適している、当該低粘度製剤を提供する。一部の好ましい実施形態では、当該核酸は、デフィブロタイドである。
【００３０】
ある実施形態では、７０％を超える一本鎖多分散ポリデオキシリボヌクレオチドを含むデフィブロタイドを、１００ｍｇ／ｍＬ〜３００ｍｇ／ｍＬで含む、患者への治療的投与のための低粘度製剤であって、多分散ポリデオキシリボヌクレオチドが、４５〜６５個の塩基の平均長、及び、１３ｋＤａ〜２０ｋＤａの平均分子量、及び、約１０ｍＭ〜約１００ｍＭの量のグリシルグリシンを含む賦形剤を有し、当該製剤が、５〜７０ｃＰの粘度、２４０ｍＯｓｍ／ｋｇ〜５００ｍＯｓｍ／ｋｇのオスモル濃度を有しており、及び、患者への非経口投与に適している、当該低粘度製剤を提供する。
【００３１】
ある実施形態では、本発明の低粘度製剤を非経口投与する方法を提供する。一部の実施形態では、当該製剤は、皮下投与に適している。ある特定の実施形態では、当該製剤は、自己投与を含む皮下送達のための機器を含む。好ましい実施形態では、５〜５０ｍＬの水性液で、５分〜３時間にわたって、デフィブロタイドの用量を皮下送達する方法を提供する。
【００３２】
その他の態様では、本明細書では、本明細書に開示した製剤の製造方法を提供する。さらなる態様では、本発明の製剤を包装する方法を提供する。ある特定の態様では、皮下投与をすることができる装置で、本発明の製剤を包装する方法を提供する。
【００３３】
ある実施形態では、上記した製剤は、患者の自己投与のために使用することができる。ある特定の実施形態では、上記した製剤は、院外投与のために使用することができる。
【００３４】
一部の実施形態では、当該病態または疾患は、造血幹細胞移植の後の腎臓または肺の機能障害を伴う肝ＶＯＤである。
【００３５】
４．図面の簡単な説明
【図面の簡単な説明】
【００３６】
【図１Ａ】図１Ａは、３種類の製剤緩衝剤：クエン酸ナトリウム（菱形）、グリシルグリシン（正方形）、または、クエン酸ナトリウムとグリシルグリシンとの混合物（三角形）を使用して、様々な製剤の粘度を、デフィブロタイドの濃度に応じて示すグラフである。
【図１Ｂ】図１Ｂは、クエン酸ナトリウム（青色の菱形）、ＧｌｙＧｌｙ（赤色の四角形）、または、ＧｌｙＧｌｙとクエン酸ナトリウム（緑色の三角形）を含む製剤の温度に応じた粘度を示すグラフである。
【図１Ｃ】図１Ｃは、２０ｍＭ  ＧｌｙＧｌｙ（青色の丸）、２０ｍＭ  ＧｌｙＧｌｙと３４ｍＭクエン酸ナトリウム（橙色の四角）、２０ｍＭ  ＧｌｙＧｌｙと１００ｍＭコハク酸ナトリウム（青色の三角形）、及び、２０ｍＭ  ＧｌｙＧｌｙと２０ｍＭ塩化ナトリウム（赤色の菱形）を含む製剤の経時的な粘度低下を示すグラフである。
【図１Ｄ】図１Ｄは、クエン酸ナトリウム（菱形）、または、グリシルグリシン（四角形）のいずれかを使用して、デフィブロタイド濃度に応じて、様々な製剤のオスモル濃度を示すグラフである。
【図２Ａ】図２Ａは、様々な緩衝剤または賦形剤の存在下における、２００ｍｇ／ｍＬデフィブロタイド製剤の粘度を示すグラフである。
【図２Ｂ】図２Ｂは、様々な緩衝剤または賦形剤の存在下における、２００ｍｇ／ｍＬデフィブロタイド製剤のオスモル濃度を示すグラフである。
【図３Ａ】図３Ａは、ナトリウム塩に応じて、オスモル濃度の増大を示すグラフである。
【図３Ｂ】図３Ｂは、グリシルグリシン緩衝剤、及び、クエン酸ナトリウム溶液（０、２０、３４、８０、または、１００ｍＭクエン酸ナトリウムを含む）の存在下における、１８０ｍｇ／ｍＬデフィブロタイド製剤の経時的な粘度を示すグラフである。
【図４】図４は、グリシルグリシン緩衝剤を含む２００ｍｇ／ｍＬのデフィブロタイド製剤の粘度に関する経時的な温度の影響を示すグラフである。
【図５Ａ】図５Ａは、クエン酸緩衝剤を含む２００ｍｇ／ｍＬのデフィブロタイド製剤のオスモル濃度に関する温度の経時的影響を示すグラフである。
【図５Ｂ】図５Ｂは、グリシルグリシン緩衝剤を含む２００ｍｇ／ｍＬのデフィブロタイド製剤のオスモル濃度に関する経時的な温度の影響を示すグラフである。
【図６】図６は、皮下投与した本発明の３つの異なる２００ｍｇ／ｍＬデフィブロタイド製剤の薬物動態を、動物モデルを使用して、市販のＤｅｆｉｔｅｌｉｏ（登録商標）の皮下及び静脈内投与と比較して示すグラフである。
【図７】図７は、デフィブロタイドの薬物動態プロファイルのシミュレーションを示すグラフであり、７０％のバイオアベイラビリティと仮定して、６．２５ｍｇ／ｋｇの２時間注入を毎日４回、次いで、１８ｍｇ／ｋｇの皮下投与を毎日２回行った。
【発明を実施するための形態】
【００３７】
５．発明の詳細な説明
デフィブロタイド（ＣＡＳ番号  ８３７１２−６０−１）は、天然由来の材料に由来する物質である。動物粘膜から抽出して得られるものは、比較的分子量の小さなポリデオキシリボヌクレオチドのナトリウム塩である。デフィブロタイドには様々なサイズ範囲のものがあり、そして、平均分子量（ＭＷ）が、１３〜２０ｋＤａであることが公知である。デフィブロタイドは、本明細書の一部を構成するものとして、各々の全内容を参照により援用する米国特許第４，９８５，５５２号、及び、米国特許第５，２２３，６０９号に従って得ることができ、及び／または、前出の米国特許第４，９８３，５５２号、及び、米国特許第５，２２３，６０９号に記載されている物理的／化学的特性を示す。デフィブロタイドの治療作用を模倣するホスホジエステルオリゴヌクレオチドとして提示される合成デフィブロタイドが、本明細書の一部を構成するものとして、全内容を参照により援用するＵＳ２０１１００９２５７６に記載されている。
【００３８】
デフィブロタイドには、抗血栓薬としての使用（米国特許第３，８２９，５６７号）、末梢動脈障害の処置、急性腎不全の処置（米国特許第４，６９４，１３４号）、及び、急性心筋虚血の処置（米国特許第４，６９３，９９５号）など、数多くの治療的用途がある。最近では、デフィブロタイドは、類洞閉塞症候群／静脈閉塞性疾患の処置と予防のために使用されている（ＥＵ臨床試験ＥｕｄｒａＣＴ：２００４−０００５９２−３３、米国臨床試験２００５−０１（ＣｌｉｎｉｃａｌＴｒｉａｌｓ．ｇｏｖ識別子：ＮＣＴ００３５８５０１）。ＶＯＤの徴候と症状が緩和されるまで、患者らに対して、６．２５ｍｇ／ｋｇ用量を、６時間ごとに、２時間の静脈内注入で与えて処置する。前述したように、デフィブロタイドは、現在のところ、注射用の単一バイアルとして、Ｄｅｆｉｔｅｌｉｏ（登録商標）という名称で市販されている（Ｇｅｎｔｉｕｍ  Ｓ．ｒ．Ｌ．，Ｖｉｌｌａ  Ｇｕａｒｄｉａ，Ｉｔａｌｙから市販されている、ｄａｉｌｙｍｅｄ．ｎｌｍ．ｎｉｈ．ｇｏｖ／ｄａｉｌｙｍｅｄ／ｓｅａｒｃｈ．ｃｆｍ？ｌａｂｅｌｔｙｐｅ＝ａｌｌ＆ｑｕｅｒｙ＝ｄｅｆｉｂｒｏｔｉｄｅで入手可能な添付文書を参照されたい）。Ｄｅｆｉｔｅｌｉｏ（登録商標）は、５％デキストロース注射液（ＵＳＰ）、または、０．９％塩化ナトリウム注射液（ＵＳＰ）で希釈して、静脈内輸液として調製する。静脈内製剤は、室温で貯蔵する場合は、４時間以内、冷蔵貯蔵する場合は、２４時間以内に使用する。４回の静脈内注入で、合計で、８時間投与する。
【００３９】
静脈内（ＩＶ）、皮下（ＳＣ）、筋肉内（ＩＭ）、または、経口（ＰＯ）の投与経路で投与するための新規デフィブロタイド製剤、及び／または、剤形の開発は、処置を受けている患者の生活の質を改善し得る。例えば、１日４回の頻度を、１日１回または２回にまで減らし、そして、注入の期間を短くすると、処置を受けている患者の生活の質を改善し得る。デフィブロタイドのＳＣ投与経路は、臨床投与の時間を大幅に短縮し、必要な限り、当該製剤の外来投与を可能にする。大用量ＳＣ送達機器を含む組み合わせ製品は、利便性を高め、医療専門家（ＨＣＰ）、介護者による投与の迅速化、または、患者による自己投与でさえも図ることができる。経口投与経路は、用量の調製と投与の容易さ、痛みの軽減に関連し得るものであり、また、患者に好評なことが多い。上記した製剤、薬物送達、及び、剤形開発研究の例は、デフィブロタイドを用いた処置を受けている間の生活の質と、患者が利用する上での改善に焦点を当てている。
【００４０】
一部の実施形態では、投与の経路は、本開示の製剤の有効性、及び／または、寿命に影響を与える。一部の実施形態では、皮下、筋肉内、及び／または、腹腔内投与は、静脈内投与する同じ製剤と比較して、全身半減期の延長に関連している。一部の実施形態では、製剤の皮下投与は、静脈内に投与される同じ製剤と比較して、血漿濃度の最高最低間比率を低くする。一部の実施形態では、皮下投与は、静脈内投与する同じ製剤と比較して、改善した有効性を提供し、及び／または、製剤の安全性プロファイルを改善する。
【００４１】
５．１  定義
以下の定義は、本発明の理解を深めるためのものである。
【００４２】
本明細書で使用する用語「核酸」は、「核酸、及び、それらの塩」を含み、そして、鎖内でともに結合したヌクレオチド単位から構成されるポリマーまたは大きな生体分子を含む、ヌクレオチドから構成される分子のことを指し、このものは、リボース、及び／または、デオキシリボースモノマーからなるものを含むポリヌクレオチド及びオリゴヌクレオチドを含み、それらは、サイズ、及び／または、配列を均一にすることができ、または、多分散とすることができ、それらは、異なる長さの混合物を含むあらゆる長さとすることができるが、一部の実施形態は、一般的に、１０〜４００塩基、２０〜２００塩基、または、４５〜６０塩基長であり、一部の実施形態では、平均ＭＷは、５〜５０キロダルトン（「ｋＤａ」）、１３〜３０ｋＤａ、または、１３〜２０ｋＤａ、または、１６〜２０ｋＤａであり、それらを、一本鎖または二本鎖とすることができるが、一部の実施形態は、本出願のその他の箇所で説明した制限の範囲内の大部分の一本鎖ポリデオキシリボヌクレオチド塩である。これには、動物の腸粘膜ゲノムＤＮＡの制御を受けた解重合から得たＤＮＡ配列も含み、ある実施形態は、デフィブロタイドを含む。
【００４３】
本明細書で使用する用語「デフィブロタイド」とは、デフィブロタイドの天然及び合成の双方の供給源、例えば、米国特許出願番号第２０１１００９２５７６号に記載された合成ホスホジエステルオリゴヌクレオチドなどのことを指す。デフィブロタイドという用語は、動物、及び／または、植物組織から抽出して得られるが、合成的にも生成し得るポリデオキシリボヌクレオチドのことを指し、当該ポリデオキシリボヌクレオチドは、通常は、アルカリ金属塩、一般的には、ナトリウム塩の形態で使用しており、そして、一般的には、１３〜３０ｋＤａの分子量を有する（ＣＡＳ登録番号：８３７１２−６０−１）。好ましくは、デフィブロタイドは、本明細書の一部を構成するものとして、各々の全内容を参照により援用する米国特許第４，９８５，５５２号、及び、米国特許第５，２２３，６０９号に従って得ることができ、及び／または、前出の米国特許第４，９８５，５５２号、及び、米国特許第５，２２３，６０９号に記載されている物理的／化学的特性を示す。より詳細には、デフィブロタイドとは、ランダム配列の式：Ｐ１−５、（ｄＡＰ）１２−２４、（ｄＧＰ）１０−２０、（ｄＰｐ）１３−２６、（ｄＣＰ）１０−２０、式中：Ｐ＝リンラジカル、ｄＡｐ＝デオキシアデニルモノマー、ｄＧｐ＝デオキシグアニルモノマー、ｄＴｐ＝デオキシチミジンモノマー、ｄＣｐ＝デオキシシチジンモノマー、及び／または、以下の化学的／物理的特性を示す：電気泳動＝均一な陽極移動度、及び／または、吸光係数、２６０±１ｎｍでのＥ１ｃｍ１％  ｎｍ＝２２０±１０、及び／または、Ｅ２３０／Ｅ２６０＝０．４５±０．０４、及び／または、モル吸光係数（リンに関する）ε（Ρ）＝７．７５０±５００、及び／または、旋回能［α］Ｄ２０°＝５３°±６、及び／または、天然ＤＮＡの％、及び／または、ｈ＝１５±５として示す可逆的濃色性、を有するポリデオキシリボヌクレオチドの混合物である。
【００４４】
本明細書で使用する用語「ポリデオキシリボヌクレオチド」とは、その構成モノマーが、デオキシリボヌクレオチドであるポリマーのことを指す。
【００４５】
本明細書で使用する用語「オリゴデオキシリボヌクレオチド」とは、デオキシリボースモノマーからなるあらゆるオリゴヌクレオチドのことを指す。
【００４６】
本明細書で使用する用語「平均ＭＷ」とは、当該ポリマーの平均（ｍｅａｎ）または平均（ａｖｅｒａｇｅ）分子量のことを指す。
【００４７】
本明細書で使用する用語「グリシルグリシン」または「Ｇｌｙ−Ｇｌｙ」または「ＧｌｙＧｌｙ」または「グリグリ」とは、２つのグリシン分子からなる単純ペプチドのことを指す（グリシンは、単純な非必須アミノ酸である）、当該ジペプチドは、さらに複雑なペプチドを合成するために使用する。両性電解質であるグリシルグリシンは、ジグリシン、ジグリココール、グリシンジペプチド、Ｎ−グリシルグリシンとも称する。本明細書の一部を構成するものとして、全内容を参照により援用するＣＮ特許出願１０１７５９７６７に記載の方法などの方法で、それを作り出すことができる。
【００４８】
本明細書で使用する用語「賦形剤」とは、デフィブロタイドを用いて製剤し得るものであり、かつ、そのバイオアベイラビリティを高める、粘度及び／またはオスモル濃度を下げる、組成物の溶解性を高める、または、長期安定性を改善するなど、最終投与形態のデフィブロタイドを改善する目的で含み得る、あらゆる物質のことを指す。活性物質の取り扱いを補助する上で、製造プロセスにおいて賦形剤が有用なものとすることができる。適切な賦形剤の選択は、投与経路、及び、剤形、ならびに、有効成分、及び、その他の要因にもよる。したがって、デフィブロタイドは、それを製造または投与をしている間の性能、ならびに、インビトロ及びインビボでのその性能を調整することを可能にする、当該技術分野で公知のあらゆる賦形剤（複数可）と組み合わせ得る。これらの賦形剤の多くは、デフィブロタイド製剤の薬物動態プロファイルを調整するために利用し得る。
【００４９】
本明細書で使用する用語「緩衝剤（ｂｕｆｆｅｒ）」または「緩衝剤（ｂｕｆｆｅｒｉｎｇ  ａｇｅｎｔ）」とは、少量の酸または塩基の添加に起因する水素イオン濃度の変化に抵抗する溶液のことを指す。このものには、例えば、別の酸性または塩基性化合物を添加した後に、選択したｐＨ値の近傍で溶液のｐＨを維持するために使用する弱酸または弱塩基を含む。そのような緩衝剤（ｂｕｆｆｅｒ）または緩衝剤（ｂｕｆｆｅｒｉｎｇ  ａｇｅｎｔ）の機能とは、酸または塩基が溶液に加えられても、溶液のｐＨの変化を妨げることである。
【００５０】
本明細書で使用する用語「ｐＨ調整剤」とは、溶液のｐＨを選択したｐＨ値に変更するために使用する酸または塩基のことを指す。そのような作用物質の機能は、酸性または塩基性化合物の添加に続いて、溶液のｐＨを所望の値に変えることである。
【００５１】
本明細書で使用する用語「製剤」とは、例えば、本明細書で開示した医薬組成物または製剤の安定で、かつ、医薬として許容可能な製剤を含む、治療用途の組成物のことを指す。
【００５２】
本明細書で使用する用語「低粘度製剤」とは、約７０センチポアズ（ｃＰ）未満の粘度を有する製剤のことを指す。通常であれば、地理的地域、及び／または、測定を行う場所の気象条件に応じて、粘度を、周囲温度／室温（例えば、１５℃〜３５℃、１８℃〜２５℃、または、２１℃〜２３℃）で測定する。
【００５３】
本明細書で使用する用語「水性製剤」とは、水をベースとした製剤、特に、水溶液である製剤のことを指す。
【００５４】
本明細書で使用する用語「高濃度製剤」または「高濃度液体製剤」または「ＨＣＬＦ」とは、核酸の濃度が、約８０ｍｇ／ｍＬ以上、または、約８５ｍｇ／ｍＬ以上である製剤のことを指す。
【００５５】
本明細書で使用する用語「高濃度デフィブロタイド製剤」とは、デフィブロタイド濃度が、約８０ｍｇ／ｍＬ以上である製剤のことを指す。
【００５６】
本明細書で使用する用語「薬物動態」または「ＰＫ」とは、血漿濃度時間プロファイル、それに、最大濃度（Ｃｍａｘ）、曲線下面積（ＡＵＣ）、及び、当該薬剤が最大濃度になるまでの時間（Ｔｍａｘ）などの動態パラメーターなど、体内の個々の作用物質のインビボでの活動のことを指す。
【００５７】
本発明の組成物に関連して使用する句「医薬として許容可能な」または「許容可能な」とは、生理学的に許容可能であり、かつ、一般的に、動物、及び／または、ヒトに投与しても望ましくない反応を招かない組成物の分子実体、及び、その他の成分のことを指す。好ましくは、本明細書で使用する用語「医薬として許容可能な」とは、連邦政府または州政府の規制当局の承認を受けていること、または、哺乳類、及び、より具体的には、ヒトでの使用において、米国薬局方、または、その他の一般的に認識されている薬局方に掲載されていること、を意味する。
【００５８】
本明細書で使用する用語「生理学的に関連する」とは、動物対象、特に、ヒト対象に投与する医薬、治療剤、または、その他の剤形での使用に適した測定値、レベル、または、量のことを指す。
【００５９】
本明細書で使用する用語「非経口」とは、非経口のあらゆる投与手段のことを指す。静脈内（ｉ．ｖ．、または、ＩＶ）注入、ＩＶボーラス注射、皮下（ｓ．ｃ．、または、ＳＣ）、及び、筋肉内（ｉ．ｍ．、または、ＩＭ）注射を含む。
【００６０】
本明細書で使用する用語「投与する」または「投与」は、意図する作用部位に化合物を直接的、及び、間接的に送達するためのすべての手段を含むことを意図する。
【００６１】
本明細書で使用する用語「動物」とは、哺乳動物、特に、ヒトを含むあらゆる動物のことを意味する。
【００６２】
本明細書で使用する用語「患者」とは、哺乳動物、特に、ヒトのことを指す。開示した実施形態の方法で処置を受ける患者は、ヒト対象と、獣医学的目的のための動物対象（例えば、イヌ、ネコ、サル、チンパンジー、及び／または、など）との双方を含む。これらの患者は、男性でも女性でもよく、そして、例えば、新生児、乳児、少年、青年、成人、または、老人など、あらゆる適切な年齢とし得る。
【００６３】
本明細書で使用する用語「処置する（ｔｒｅａｔ）」、「処置する（ｔｒｅａｔｉｎｇ）」または「処置（ｔｒｅａｔｍｅｎｔ）」などは、疾患、及び／または、それに付随する症状を、緩和または抑制する方法のことを指す。例えば、本発明の意味の範囲内で、用語「処置する（ｔｒｅａｔ）」とは、発症（すなわち、疾患の臨床症状発現前の期間）を停止、遅延させ、及び／または、疾患を進行または悪化させるリスクを減らすことも意味する。
【００６４】
用語「ａ」及び「ａｎ」は、活性剤、緩衝剤、オスモライトなどの組成物の成分を変更するために使用する場合は、量の制限を示すものではなく、少なくとも１つの言及事項の存在を示す。用語「または」または「及び／または」は、２つの単語または表現を、一緒に、または、個別に捉えることを示すための機能語として使用する。用語「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」、「有する（ｈａｖｉｎｇ）」、「含む（ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ）」、及び「含む（ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ）」とは、制限を伴わない用語として解釈すべきである（すなわち、「があるが、これに限定されない」ことを意味する）。同じ要素または特徴に関するすべての範囲の終点は、包含的であり、そして、独立して組み合わせることができる。
【００６５】
本明細書を通して、用語「約（ａｂｏｕｔ）」、及び／または、「約（ａｐｐｒｏｘｉｍａｔｅｌｙ）」とは、数値、及び／または、範囲との組み合わせで使用し得る。用語「約」は、列挙した数値に近似する数値のことを意味する、ものと理解する。例えば、「約１２００［単位］」とは、１２００の±１０％以内、±１０％、±９％、±８％、±７％、±７％、±５％、±４％、±３％、±２％、±１％、±１％未満、または、その範囲内でのその他の数値、または、数値範囲内のことを意味し得る。さらに、「約［数値］未満」または「約［数値］を超える」の句は、本明細書で使用する用語「約」の定義を考慮して、理解すべきである。用語「約（ａｂｏｕｔ）」及び「約（ａｐｐｒｏｘｉｍａｔｅｌｙ）」は、互換可能に使用し得る。
【００６６】
本明細書全体を通して、ある特定の量に関して数値範囲を示している。これらの範囲は、その範囲内でのすべての部分範囲を含む、ことを理解されたい。したがって、範囲「５０〜８０」は、その範囲内でのすべての可能な範囲を含む（例えば、５１〜７９、５２〜７８、５３〜７７、５４〜７６、５５〜７５、７０〜７０など）。さらに、所定の範囲内のすべての数値は、そこに含まれる範囲の終点となり得る（例えば、範囲５０〜８０は、５５〜８０、５０〜７５などの終点を有する範囲を含む）。
【００６７】
５．２  核酸を含む医薬品製剤
本発明のある実施形態は、患者に対して利便性のある薬物送達のための核酸、及び、それらの塩の低粘度高濃度液体製剤（ＨＣＬＦ）の開発である。特に、皮下に投与し得る核酸組成物、及び／または、現在市場に流通している核酸製品よりも低頻度での投与を必要とし得る核酸組成物を研究している。ある特定の実施形態では、高濃度の核酸製剤を、外来患者をベースとして自己投与させる。本発明の一部の製剤は、皮下、及び／または、筋肉内投与において特に好ましいチキソトロピー性と剪断減粘挙動とを有する。本明細書で提供する製剤は、現在利用可能な市販の核酸製剤と比較して、改善された忍容性、処置の間の患者の利便性、及び、外来投薬の機会を提供する。一部の実施形態では、本明細書で提供する高濃度核酸製剤の粘度は、経時的に低下する。ある特定の実施形態では、本明細書で提供する高濃度核酸製剤の粘度、及び／または、流動性は、剪断ひずみが高まると減少する。そのような特性は、注射器／機器のシリンダーから針の狭小なオリフィスに製剤を通過させると、製剤が受ける歪みまたは剪断応力を高めてしまう注射器または事前装填皮下機器などの注射可能機器及び送達機器にとって好ましい、ことを理解すべきである。ある特定の実施形態では、当該核酸は、デフィブロタイドである。本発明の製剤、特に、デフィブロタイドを含む製剤は、例えば、末梢動脈障害の処置、急性腎不全の処置、急性心筋虚血の処置、移植片対宿主病（ＧｖＨＤ）の処置及び予防、移植関連血栓性微小血管障害（ＴＡ−ＴＭＡ）の処置と予防、例えば、固形臓器移植（例えば、腎臓ＩＲＩ）などの虚血再灌流障害の処置、サイトカイン放出症候群（ＣＲＳ）、または、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）−Ｔ細胞関連脳症症候群（ＣＲＥＳ）の処置と予防、及び、類洞閉塞症候群すなわちＶＯＤの処置、及び、予防などの数多くの病態の処置に使用し得る。一部の実施形態では、本発明の製剤、特に、デフィブロタイドを含む製剤は、化学療法、幹細胞除去、及び／または、造血幹細胞移植（ＨＳＣＴ）を受けた、受けている、または、受けようとしている患者に対して投与し得る。デフィブロタイドのその他の用途、その製造方法、及び、試験方法は、本明細書の一部を構成するものとして、それぞれの全内容を参照により援用する、以下の特許、特許出願、及び、論文に記載されている：米国特許第３，７７０，７２０号、第３，８２９，５６７号、第３，８９９，４８１号、第４，６９３，１３４号、第４，６９３，９９５号、４，９３８，８７３号、第４，９８５，５５２号、第５，０８１，１０９号、第５，１１６，６１７号、第５，２２３，６０９号、第５，６４６，１２７号、第５，６４６，２６８号、第５，９７７，０８３号、第６，０４６，１７２号、第６，６９９，９８５号、第６，７６７，５５４号、第７，３３８，７７７号、第８，５５１，９６７号、第８，７７１，６６３号，米国特許公開第２００８０１９４５０６号、第２００９０１３１３６２号、第２０１１００９２５７６号、第２０１３０２３１４７０号、第２０１４０００５２５６号，米国特許出願第１４／０１９，６７４号、第１４／３２３，９１８号、第１４／４０８，２７２号、第６２／６５６，４８６号、第６２／６５７，１６１号、第６２／６６４，６５７号、及び、国際出願ＷＯ２０１３／１９０５８２、及び、ＰＣＴ／ＥＰ２０１５／０７７３５５。本明細書の一部を構成するものとして参照により援用する、Ｐａｌｍｅｒ  ａｎｄ  Ｂｏａ，Ｄｅｆｉｂｒｏｔｉｄｅ．Ａ  Ｒｅｖｉｅｗ  ｏｆ  ｉｔｓ  ｐｈａｒｍａｃｏｄｙｎａｍｉｃ  ａｎｄ  ｐｈａｒｍａｃｏｋｉｎｅｔｉｃ  ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ，ａｎｄ  ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ  ｕｓｅ  ｉｎ  ｖａｓｃｕｌａｒ  ｄｉｓｏｒｄｅｒｓ，Ｄｒｕｇｓ，１９９３，Ｆｅｂ；４５（２）：２５９−９４も参照されたい。全体を通して引用しているその他の参考文献も、本明細書の一部を構成するものとして、それらの全内容を参照により援用する。
【００６８】
ある特定の実施形態では、本明細書に記載した方法で評価されるデフィブロタイドは、本明細書の一部を構成するものとして、双方の全内容を参照により援用する、米国特許第４，９８５，５５２号、及び、第５，２２３，６０９号に記載したようなプロセスで製造する。本発明の好ましいある実施形態では、デフィブロタイドは、以下のランダム配列の式：
Ｐ１−５、（ｄＡｐ）１２−２４、（ｄＧｐ）１０−２０、（ｄＴｐ）１３−２６、（ｄＣｐ）１０−２０
式中、Ｐ＝リンラジカル
ｄＡｐ＝デオキシアデニルモノマー
ｄＧｐ＝デオキシグアニルモノマー
ｄＴｐ＝デオキシチミジルモノマー
ｄＣｐ＝デオキシシチジルモノマー、
に対応するポリデオキシリボヌクレオチドである。
【００６９】
本明細書で使用するデフィブロタイドは、以下の化学物理特性の１つ以上、または、すべてを有し得る：電気泳動＝均一な陽極移動度、吸光係数、２６０±１ｎｍでのＥ１ｃｍ１％＝２２０±１０、吸光比率、Ｅ２３０／Ｅ２６０＝０．４５±０．０４、モル吸光係数（リンに関する）ε（Ρ）＝７．７５０±５００、旋回能［α］Ｄ２０°＝５３°±６、天然ＤＮＡの％、ｈ＝１５±５として示す可逆的濃色性、及び、０．９５±０．５のプリン：ピリミジン比。
【００７０】
本発明のある実施形態は、本明細書の一部を構成するものとして、全内容を参照により援用するＲｅｍｉｎｇｔｏｎ，Ｔｈｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｙ（Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ  ｔｈｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｙ）Ｔｗｅｎｔｙ−Ｓｅｃｏｎｄ  Ｅｄｉｔｉｏｎ，２０１３  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｐｒｅｓｓに記載されているような様々な緩衝剤または賦形剤を有する核酸製剤を含む。特に、第１８３７頁から始まる賦形剤に関する研究論文を参照されたい。好ましくは、当該核酸は、デフィブロタイドである。一部の実施形態では、デフィブロタイド以外の核酸を使用する。
【００７１】
一部の実施形態では、本発明は、ジペプチド緩衝剤（例えば、Ｌ−カルノシン、または、グリシルグリシン）を含む。本発明の好ましいある実施形態は、グリシンのジペプチドであるグリシルグリシンを含む。このものは、Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈなどの発売元が市販をしており、生物系の賦形剤として有用である。本発明の特定の実施形態では、グリシルグリシンは、約１ｍＭ〜約５０ｍＭの濃度で存在する。一部の実施形態では、グリシルグリシンは、約５ｍＭ〜約１００ｍＭ、約１０〜約６０ｍＭ、または、約１０〜約４０ｍＭの濃度で存在する。一部の実施形態では、当該グリシルグリシンは、約１ｍＭ、約５ｍＭ、約１０ｍＭ、約１５ｍＭ、約２０ｍＭ、約２５ｍＭ、約３０ｍＭ、約３５ｍＭ、約４０ｍＭ、約４５ｍＭ、または、約５０ｍＭの濃度で存在する。
【００７２】
その他の緩衝剤または賦形剤を、本製剤に存在させることができる。一部の実施形態では、当該低粘度医薬製剤は、クエン酸ナトリウム、コハク酸ナトリウム、ヒスチジン、ＴＲＩＳ緩衝剤、ＨＥＰＥＳ緩衝剤、塩化ナトリウム、アルギニン、リドカイン、及び／または、ポリソルベート−８０から選択する緩衝剤または賦形剤を含む。一部の実施形態では、当該低粘度製剤は、当該核酸が、アルカリ金属塩の形態である緩衝剤または賦形剤を含む。一部の実施形態では、当該緩衝剤または賦形剤は、ナトリウム塩を含む。一部の実施形態では、当該緩衝剤または賦形剤は、クエン酸ナトリウム、コハク酸ナトリウム、または、塩化ナトリウムである。
【００７３】
一部の実施形態では、当該緩衝剤または賦形剤は、約８０ｍＭ未満のナトリウム塩の濃度のクエン酸ナトリウム、コハク酸ナトリウム、または、塩化ナトリウムである。一部の実施形態では、当該製剤は、約１〜８０ｍＭのナトリウム塩を含む。一部の実施形態では、当該製剤は、約１ｍＭ、約５ｍＭ、約１０ｍＭ、約１５ｍＭ、約２０ｍＭ、約２５ｍＭ、約３０ｍＭ、約３５ｍＭ、約４０ｍＭ、約４５ｍＭ、または、約５０ｍＭのナトリウム塩を含む。
【００７４】
一部の実施形態では、当該製剤は、クエン酸ナトリウムを含む。一部の実施形態では、当該クエン酸ナトリウムは、約５〜約５０ｍＭ、約５〜約６０ｍＭ、約１０〜約６０ｍＭ、または、約１０〜約４０ｍＭの濃度で存在する。一部の実施形態では、当該クエン酸ナトリウムの濃度は、約１ｍＭ、約５ｍＭ、約１０ｍＭ、約１５ｍＭ、約２０ｍＭ、約２５ｍＭ、約３０ｍＭ、約３５ｍＭ、約４０ｍＭ、約４５ｍＭ、約５０ｍＭ、約５５ｍＭ、または、約６０ｍＭである。
【００７５】
貯蔵剤、塩類、または、ｐＨ調整剤などのその他の賦形剤を、本製剤に対して加えることができる。
【００７６】
本発明の一部の実施形態では、当該低粘度製剤の粘度は、約１〜約７０ｃＰである。一部の実施形態では、当該低粘度製剤の粘度は、約５ｃＰ〜約６５ｃＰ、または、約１０ｃＰ〜約６５ｃＰである。一部の実施形態では、当該低粘度製剤の粘度は、約５ｃＰ、約１０ｃＰ、約１５ｃＰ、約２０ｃＰ、約２５ｃＰ、約３０ｃＰ、約３５ｃＰ、約４０ｃＰ、約４５ｃＰ、約５０ｃＰ、約５５ｃＰ、約６０ｃＰ、約６５ｃＰ、または、約７０ｃＰである。
【００７７】
本発明の一部の実施形態では、当該低粘度製剤の粘度は、経時的に低下する。一部の実施形態では、製剤を貯蔵している間に、粘度が低下する。一部の実施形態では、本明細書で提供する当該低粘度核酸製剤の粘度は、核酸の平均分子量の減少とともに低下する。一部の実施形態では、本明細書で提供する当該低粘度核酸製剤の粘度は、所定の濃度の当該核酸での核酸の平均分子量の減少とともに低下する。一部の実施形態では、本明細書で提供する低粘度核酸製剤の粘度は、１５℃〜３５℃などの室温条件下で粘度を測定すると、所定の濃度の当該核酸での核酸の平均分子量の減少とともに低下する。一部の実施形態では、剪断、攪拌、及び／または、圧力が強くなると、粘度が低下する。一部の実施形態では、当該低粘度製剤を投与している間（例えば、針の内部を通過させているとき）に、当該粘度は低下する。一部の実施形態では、当該低粘度製剤の粘度の決定値は、測定の際の温度に応じて変化する。一部の実施形態では、本明細書で提供する高濃度核酸製剤の粘度は、当該核酸の平均分子量の減少とともに低下する。一部の実施形態では、本明細書で提供する高濃度核酸製剤の粘度は、当該核酸の平均分子量の増加とともに大きくなる。好ましい実施形態では、当該粘度を、１５℃〜３５℃などの室温条件下で測定する。より好ましくは、当該粘度を、１８℃〜２５℃で測定する。さらにより好ましくは、当該粘度を、２１℃〜２３℃で測定する。
【００７８】
一部の実施形態では、本開示の低粘度製剤は、約２００ｍＯｓｍ／ｋｇ〜約１０００ｍＯｓｍ／ｋｇのオスモル濃度を有する。一部の実施形態では、本開示の低粘度製剤は、約２４０ｍＯｓｍ／ｋｇ〜約６００ｍＯｓｍ／ｋｇ、または、約３００ｍＯｓｍ／ｋｇ〜約５５０ｍＯｓｍ／ｋｇのオスモル濃度を有する。一部の実施形態では、本開示の低粘度製剤は、約２００ｍＯｓｍ／ｋｇ、約２４０ｍＯｓｍ／ｋｇ、約２５０ｍＯｓｍ／ｋｇ、約３００ｍＯｓｍ／ｋｇ、約３５０ｍＯｓｍ／ｋｇ、約４００ｍＯｓｍ／ｋｇ、約４５０ｍＯｓｍ／ｋｇ、約５００ｍＯｓｍ／ｋｇ、約６００ｍＯｓｍ／ｋｇ、約６５０ｍＯｓｍ／ｋｇ、約７００ｍＯｓｍ／ｋｇ、約７５０ｍＯｓｍ／ｋｇ、約８００ｍＯｓｍ／ｋｇ、約８５０ｍＯｓｍ／ｋｇ、約９００ｍＯｓｍ／ｋｇ、または、約９５０ｍＯｓｍ／ｋｇのオスモル濃度を有する。
【００７９】
一部の実施形態では、本開示は、本開示の製剤を送達する方法を提供する。ある特定の実施形態では、本発明の製剤を、皮下送達する。一部の実施形態では、本発明の製剤は、患者が使用できる機器で皮下投与する。一部の実施形態では、当該低粘度製剤は、デフィブロタイド製剤である。一部の実施形態では、当該製剤は、高濃度液体製剤（ＨＣＬＦ）である。
【００８０】
皮下投与用の機器は、例えば、事前に定めた成人または小児の用量で事前に満たし得るものであり、または、体重をベースとした特定の用量を個々の患者に対して投与するために使用し得る。一部の実施形態では、当該患者が、用量を決定し、そして、投与する。ある特定の実施形態では、本発明の製剤を、例えば、ＦＲＥＥＤＯＭ６０（登録商標）ポンプ、または、同様のもの（ＲＭＳ（商標）Ｍｅｄｉｃａｌ  Ｐｒｏｄｕｃｔｓ）などの市販の機器を用いて皮下投与する。一部の特定の実施形態では、本発明の製剤を、約２時間未満、約１時間未満、または、約３０分未満で皮下投与する。一部の特定の実施形態では、本発明の製剤を、約５分〜約１時間、約１０分〜約１時間、または、約１５分〜約４５分かけて皮下送達する。
【００８１】
製剤の投与量は、当業者に自明な様々な要因で決定し得る。一部の実施形態では、当該用量は、患者のベースライン体重に基づいている。一部の実施形態では、製剤を、約１〜約１００ｍｇ／体重キログラム／日で投与する。例えば、当該製剤を、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９、または、１００ｍｇ／体重キログラム／日の量で投与する。一部の実施形態では、製剤を、約２５ｍｇ／体重キログラム／日の量で投与する。一部の実施形態では、患者の体重をベースとした用量は、３５ｋｇを超える患者については、１０ｍｇ単位で四捨五入する。一部の実施形態では、患者の体重をベースとした用量は、３５ｋｇ未満の患者については、５ｍｇ単位で四捨五入する。一部の実施形態では、当該製剤は、デフィブロタイド製剤である。
【００８２】
当該製剤を、１日１回、または、１日に複数回で投与し得る。一部の実施形態では、当該製剤を、１日１回投与する。一部の実施形態では、当該製剤を、１日に複数回投与する。例えば、当該製剤を、１日に、２、３、４、５、６、７、８、９、または、１０回投与し得る。一部の実施形態では、当該製剤を、１日４回投与する。一部の実施形態では、当該製剤を、６時間ごとに、１日４回投与する。
【００８３】
一部の実施形態では、投与の用量、及び、頻度を、投与経路に応じて変える。一部の実施形態では、本開示の低粘度製剤を皮下投与すると、低頻度の投与、及び／または、低用量が可能になる。一部の実施形態では、本開示の低粘度製剤を皮下投与すると、投与量を減らすことができる。
【００８４】
当業者であれば、患者ごとに処置期間が違うことは自明である。例えば、一部の実施形態では、処置期間は、肝ＶＯＤの徴候と症状をモニターして決定する。例えば、第１の処置期間の後も肝ＶＯＤの徴候と症状が依然として認められるのであれば、デフィブロタイド処置を、ＶＯＤが解消するまで続ける。一部の実施形態では、２１日後に、肝臓ＶＯＤの徴候と症状が依然として認められるのであれば、最大で６０日まで、ＶＯＤが解消するまでデフィブロタイド処置を継続する。したがって、ある特定の実施形態では、当該処置期間は、２１日〜６０日間続き得る。例えば、当該処置期間は、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、または、６０日間続く。一部の実施形態では、当該処置期間は、２１日間続く。
【００８５】
一部の実施形態では、本開示の製剤の投与は、未処置患者または製剤投与前の同じ患者と比較して、ＶＯＤ、及び／または、ＶＯＤ症状の発症を、処置または改善する。一部の実施形態では、ＶＯＤ、及び／または、ＶＯＤ症状は、１日目〜１０年目の患者において、処置または改善する。一部の実施形態では、当該製剤の投与は、約１日目、約２日目、約３日目、約４日目、約５日目、約６日目、約１週目、約２週目、約３週目、約４週目、約５週目、約６週目、約７週目、約８週目、約９週目、約１０週目、約２０週目、約３０週目、約４０週目、約５０週目、約６０週目、約７０週目、約８０週目、約９０週目、約１００週目、約１年目、約２年目、または、約３年目に、未処置患者またはデフィブロタイドを投与する前の同じ患者と比較して、ＶＯＤ、及び／または、ＶＯＤ症状の発症を、処置または改善する。一部の実施形態では、当該製剤の投与は、約１日間、約１週間、約１ヶ月間、約２ヶ月間、約３ヶ月間、約４ヶ月間、約５ヶ月間、約６ヶ月間、約１年間、約２年間、約５年間、または、約１０年間、または、それ以上にわたって、未処置患者または製剤を投与する前の同じ患者と比較して、ＶＯＤ、及び／または、ＶＯＤ症状の発症を、処置または改善する。
【００８６】
一部の実施形態では、本開示の製剤の投与は、未処置患者または製剤投与前の同じ患者と比較して、ＶＯＤ、及び／または、ＶＯＤ症状の約１％、約５％、約１０％、約２０％、約３０％、約４０％、約５０％、約６０％、約７０％、約８０％、約９０％、または、約１００％を処置または改善する。一部の実施形態では、当該製剤の投与は、未処置患者または製剤投与前の同じ患者と比較して、約１日目、約２日目、約３日目、約４日目、約５日目、約６日目、約１週目、約２週目、約３週目、約４週目、約５週目、約６週目、約７週目、約８週目、約９週目、約１０週目、約２０週目、約３０週目、約４０週目、約５０週目、約６０週目、約７０週目、約８０週目、約９０週目、約１００週目、約１年目、約２年目、または、約３年目に、ＶＯＤ、及び／または、ＶＯＤ症状の発症の約１％、約５％、約１０％、約２０％、約３０％、約４０％、約５０％、約６０％、約７０％、約８０％、約９０％、または約１００％を処置または改善する。一部の実施形態では、当該製剤の投与は、未処置患者または製剤投与前の同じ患者と比較して、約１日間、約２日間、約３日間、約４日間、約５日間、約６日間、約１週間、約２週間、約３週間、約４週間、約１ヶ月間、約２ヶ月間、約３ヶ月間、約４ヶ月間、約５ヶ月間、約６ヶ月間、約１年間、約２年間、約５年間、または、約１０年間、または、それ以上にわたって、ＶＯＤ、及び／または、ＶＯＤ症状の発症の約１％、約５％、約１０％、約２０％、約３０％、約４０％、約５０％、約６０％、約７０％、約８０％、約９０％、または、約１００％を処置または改善する。
【００８７】
以下の実施例は、本発明の好ましい実施形態を実証するために含む。以下の実施例に開示した技術が、本発明の実施において十分に機能することが本発明者により発見されている技術を示し、したがって、本発明の実施のための好ましいモードを構成するものと見なし得ることを、当業者であれば理解する。しかしながら、本開示に照らして、開示した特定の実施形態において数多くの変更を行うことができ、そして、本発明の趣旨及び範囲から逸脱せずに、同様の、または、類似の結果をなおも得ることができることを、当業者であれば理解する。
【実施例】
【００８８】
６．実施例
６．１  実施例１−制限溶液特性の同定
核酸の高濃度液体製剤（ＨＣＬＦ）を開発するためには、製剤を制限し得る溶液の重要な物理化学的特性を特定することが肝要である。このことを調査するため、２つの異なる製剤を使用して、約３００ｍｇ／ｍＬのデフィブロタイド濃度を最大値とする範囲で数多くの溶液を調製し、そして、それぞれの溶液特性を、デフィブロタイド濃度に応じて特徴付けした。外観、溶解度、粘度、オスモル濃度、溶液内のポリマー構造（遠紫外線、及び、近紫外線円偏光二色性）、熱特性（示差走査熱量測定）、及び、分子量／凝集（ＤＬＳ、ＦＴＩＲ、及び、ＳＥＣ−ＭＡＬＳ）は、様々なデフィブロタイド溶液について分析した特性の一部であった。
【００８９】
試料調製： 遠心濃縮を行うことで、または、デフィブロタイドＡＰＩを、８０、１５０、２００、２５０、及び、３００ｍｇ／ｍＬで溶解することで、３４ｍＭクエン酸ナトリウム、ｐＨ７．３、または、３４ｍＭグリシルグリシン（「Ｇｌｙ−Ｇｌｙ」）、ｐＨ７．５において、デフィブロタイドを製剤した。産物濃度を、一般的には、紫外可視分光法で測定した。デフィブロタイドの試料を、３５μｌの試料を使用して、それぞれの製剤緩衝剤で、目標濃度の０．１ｍｇ／ｍＬにまで、重量測定法で三連で希釈した。Ａ２６０及びＡ３２０を、０．２ｃｍのキュベット光路長を使用して測定した。Ａ２６０値を、３２０ｎｍでの光散乱に関して補正を行い、そして、濃度を、２２．２ｍＬ＊ｍｇ−１ｃｍ−１の吸光係数を使用して決定した。希釈係数を決定する際に、１．０８ｇ／ｍＬの試料密度、及び、１．０ｇ／ｍＬの希釈密度を使用して、試料の質量を補正した。各溶液の物理化学的特性を、次の方法で、濃度に応じて分析した。
【００９０】
視覚的外観と濁度：コアモジュール３（「ＣＭ３」）ロボットで、デジタルカラーマッチングを行った。デフィブロタイド試料の色も、欧州薬局方（ＥＰ）カラーマッチング分析を使用して評価を行っており、同分析では、７つのＥＰ色標準ＢＹ１〜ＢＹ７を使用しており、ＢＹ１が最も濃い色の標準となっている。当該分析は、背景が白色であるライトボックス下で行った（Ｅｉｓａｉ  Ｍａｃｈｉｎｅｒｙ  Ｏｂｓｅｒｖａｔｉｏｎ  Ｌａｍｐ  Ｍｏｄｅｌ  ＭＩＨ−ＤＸ，Ｆｉｓｈｅｒ  ｌｉｇｈｔ  Ｍｅｔｅｒ  Ｍｏｄｅｌ  ０６−６６２−６３）。当該Ｇｌｙ−Ｇｌｙ製剤、及び、クエン酸塩製剤に関する色の評価では、有意差は無く、すべてが、透明でやや黄色の溶液、または、茶色−黄色の溶液であり、標準よりも着色の強度が顕著であった。加えて、目視可能な粒子は検出されなかった（８０μｍ以上の粒径を評価した）。濁度も、７つの濁度標準を用いて測定した。ＥＰの色標準と比較したところ、すべての製剤の色は、初期時点、ならびに、２５±２℃／６０±５％ＲＨで１ヶ月貯蔵した後ではＢＹ４であり、すべての製剤が、最長で少なくとも３ヶ月間、２５±２℃／６０±５％ＲＨで、安定であった。
【００９１】
溶解度：溶液でのデフィブロタイドの溶解度を、分析用のＣＭ３ロボットを使用して、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）沈殿で評価した。研究全体を通して、大量のＰＥＧの存在下でも、ごく少量の沈殿が観察されたので、当該産物の溶液溶解性の高さが認められた。
【００９２】
溶液粘度：デフィブロタイド試料の溶液粘度を、約８０、１５０、２００、２５０、３００ｍｇ／ｍＬの濃度で分析した。一般的に、Ｂｒｏｏｋｆｉｅｌｄ  ＤＶ−ＩＩＩ  Ｕｌｔｒａ  Ｐｒｏｇｒａｍｍａｂｌｅ  Ｒｈｅｏｍｅｔｅｒを使用して、粘度を測定した。当該試料を、約５５０μＬを使用して、２２℃で、そのまま分析した。Ｄｅｆｉｔｅｌｉｏ（登録商標）の粘度は、３．９ｃＰであり、剪断速度に関係しなかった。これらの結果は、Ｄｅｆｉｔｅｌｉｏ（登録商標）が、ニュートン流体挙動を示すことを示唆した。クエン酸塩、及び、Ｇｌｙ−Ｇｌｙ緩衝剤で、３００ｍｇ／ｍＬで製剤した本発明のデフィブロタイド製剤は、当該粘度が、剪断速度、及び、生成物濃度に依存していることを実証した。製剤したデフィブロタイドの粘度は、産物濃度に応じて指数関数的に増加する、と考えられた。産物濃度に応じた３４ｍＭ  Ｇｌｙ−Ｇｌｙ、ｐＨ７．５のデフィブロタイドの粘度は、３４ｍＭクエン酸ナトリウム、及び、ｐＨ７．３でのデフィブロタイドと比較して有意に低く、このことは、Ｇｌｙ−Ｇｌｙが、本発明のＨＣＬＦのデフィブロタイドの溶液特性を改善する能力を実証している。
【００９３】
オスモル濃度：オスモル濃度を、少なくとも２つの異なる方法で測定し、そして、その結果を、すべての図面に記載している（例えば、図１Ｄを参照されたい）。一般的に、ある測定では、Ｖａｐｒｏ  Ｖａｐｏｒ  Ｐｒｅｓｓｕｒｅ  Ｏｓｍｏｍｅｔｅｒを使用した。３４ｍＭ  Ｇｌｙ−Ｇｌｙ、ｐＨ７．５のデフィブロタイドのオスモル濃度は、３４ｍＭクエン酸ナトリウム、及び、ｐＨ７．３のデフィブロタイドと比較して低く、このことは、Ｇｌｙ−Ｇｌｙが、本発明のＨＣＬＦのデフィブロタイドの溶液特性を改善する能力を実証している。
【００９４】
遠紫外線、及び、近紫外線円偏光二色性：溶液でのデフィブロタイド製剤の二次、及び、三次構造を、産物濃度に応じて、円偏光二色性で評価を行い、そして、Ｊａｓｃｏ  Ｊ−８１０  Ｓｐｅｃｔｒｏｐｏｌａｒｉｍｅｔｅｒで分析した。
【００９５】
遊離核塩基分析：試料を、移動相（５０ｍＭ  ＣＨ３ＣＯＯＮＨ４、ｐＨ５．０）で、１．６ｍｇ／ｍＬで定量的に調製し、そして、２５４ｎｍの検出波長を使用して、ＲＰ−ＨＰＬＣで分析した。Ｓｙｎｅｒｇｉ  Ｆｕｓｉｏｎ  ４μｍ−ＲＰ  ８０Åカラムを使用して、流速１ｍＬ／分で、核酸塩基を分離した。Ｄｅｆｉｔｅｌｉｏ（登録商標）を参照物質として使用し、移動相で、１．６ｍｇ／ｍＬで調製した。
【００９６】
フーリエ変換赤外分光法：標準的な手法を使用してＦＴＩＲ分析を実施して、デフィブロタイドのＨＣＬＦの構造を評価した。当該ＦＴＩＲ分析は、３００ｍｇ／ｍＬの２種類のデフィブロタイド製剤（クエン酸塩、及び、Ｇｌｙ−Ｇｌｙ）が、Ｄｅｆｉｔｅｌｉｏ（登録商標）と比較して、同様のプロファイルを示すことを実証した。
【００９７】
示差走査熱量測定：標準的な手法を使用する示差走査熱量測定によって、デフィブロタイドの溶液での熱特性を測定した。それらの結果は、濃度、及び／または、Ｇｌｙ−Ｇｌｙなどの緩衝剤マトリックスが、デフィブロタイドの熱特性に影響を与えることができる、ことを示唆している。
【００９８】
サイズ分布：分子量平均に寄与する構造の分子量を明らかにするために、産物濃度に応じて、それぞれの製剤について測定を行った。多分散指数（Ｍｗ／Ｍｎ）を使用して、製剤の不均一性を測定し、そして、それらの結果に基づいて、当該試料が多分散であると結論付けた。これらの結果は、クエン酸塩、及び、Ｇｌｙ−Ｇｌｙに対して３００ｍｇ／ｍＬで製剤したデフィブロタイドが、Ｄｅｆｉｔｅｌｉｏ（登録商標）に匹敵している、ことを示した。
【００９９】
全体として、上記した方法を使用したこれらの結果は、溶液のオスモル濃度と粘度が、産物の十分に許容可能な濃度をどのくらいまで高く達成できるかを制限する上で重大な役割を果たす重要な製剤特性であることを示している。Ｇｌｙ−Ｇｌｙを含む製剤でのこれらの特性は、溶液の熱特性（ΔＨ、Ｔｍ）とも相関する、顕著な溶液特性の改善を示した。
【０１００】
図１Ａのグラフは、クエン酸ナトリウム、Ｇｌｙ−Ｇｌｙ、または、この２つの混合物の存在下で、デフィブロタイド濃度を高めて作成した製剤の粘度を示す。それらの結果は、デフィブロタイド製剤の粘度が、その濃度に強く依存していることを示しており、そして、２００ｍｇ／ｍＬ溶液は、８０ｍｇ／ｍＬ溶液と比較して約１０倍も高い粘度を有している。
【０１０１】
図１Ｂのグラフは、クエン酸ナトリウム、Ｇｌｙ−Ｇｌｙ、または、この２つの混合物のいずれかを含む、３つの異なる製剤の温度に応じて粘度を示す。
【０１０２】
図１Ｃのグラフは、これらの選択した製剤の経時的な粘度の低下を示す：２０ｍＭ  ＧｌｙＧｌｙ（青色の円、橙色の正方形と重なっている）、２０ｍＭ  ＧｌｙＧｌｙ、及び、３４ｍＭクエン酸ナトリウム（橙色の正方形）、２０ｍＭ  ＧｌｙＧｌｙ、及び、１００ｍＭコハク酸ナトリウム（青色の三角形）、２０ｍＭ  ＧｌｙＧｌｙ、及び、２０ｍＭ  塩化ナトリウム（赤色の菱形）。ＧｌｙＧｌｙ含有製剤は、ある特定の時点で最低の粘度を示す。
【０１０３】
図１Ｄのグラフは、Ｇｌｙ−Ｇｌｙ、または、クエン酸ナトリウム緩衝剤の存在下で高まるデフィブロタイド濃度を使用して作成した製剤のオスモル濃度を示す。
【０１０４】
６．２  実施例２−製剤特性に関する緩衝剤の効果
６．２．１  実施例２．１−粘度とオスモル濃度に関する緩衝剤と賦形剤の効果
デフィブロタイド濃度を高めると、粘度とオスモル濃度の双方が大きくなることが、実施例１で実証された。非経口投与用の医薬品は、低粘度、及び／または、等張であることが重要である。デフィブロタイド製剤の粘度、及び／または、オスモル濃度を低下し得る緩衝剤または賦形剤を同定するために、２００ｍｇ／ｍＬデフィブロタイド製剤を使用して、様々な緩衝剤及び賦形剤（ＧＲＡＳ賦形剤を含む）のワイドパネルスクリーニングを実施した。
【０１０５】
以下の表１に示すように、２００ｍｇ／ｍＬを標的として試験製剤を調製した。
【表１−１】
2020530004.tif 000003
【表１−２】
2020530004.tif 000004
【表２−１】
2020530004.tif 000005
【表２−２】
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【表２−３】
2020530004.tif 000007
【表２−４】
2020530004.tif 000008
【０１０６】
表１及び２、ならびに、図１Ｂ、１Ｃ、及び、２Ａのグラフに示したように、Ｇｌｙ−Ｇｌｙを含むＨＣＬＦ製剤は、その他の製剤と比較したところ、そして、異なるｐＨ、産物濃度、及び、温度条件下で試験して（図２Ａを参照されたい）、クエン酸緩衝剤と比較したところ、全体的に粘度が著しく小さかった。特に、ＴＲＩＳ及びヒスチジン緩衝剤は、２００ｍｇ／ｍＬのデフィブロタイドで、さらに低い粘度（４０ｃＰ未満）を示した。Ｇｌｙ−Ｇｌｙでのほぼ全部の製剤で、所定の産物濃度、及び、周囲温度条件で、クエン酸緩衝剤と比較して、粘度が最大で５０％小さかった。周囲温度は、地域によって変化し得るので、粘度を、約１５℃〜３０℃で測定することが好ましい、しかしながら、気象条件次第で、わずかでも高低変化し得る。例えば、１８０ｍｇ／ｍＬのデフィブロタイド（平均分子量１４ｋＤＡ）を含み、そして、２０ｍＭ  Ｇｌｙ−Ｇｌｙ、及び、３４ｍＭクエン酸ナトリウムｐＨ７．０を含む、ある好ましい製剤を、２５℃で測定すると、粘度が１２ｃＰであった。同じ条件下で、平均分子量１７ｋＤａのデフィブロタイドを使用した場合、その他の製剤での粘度は、２７ｃｐであった。スクリーニングした賦形剤の内、リドカインだけが、粘度をさらに低下させる可能性を示した、しかしながら、オスモル濃度は、９００ｍＯｓｍ／ｋｇを超えて高くなったため（図２Ｂを参照されたい）、さらなる調査には実用的とは考えられなかった。全体的に最も小さな粘度を示すＧｌｙ−ｇｌｙ緩衝剤を、２００ｍｇ／ｍＬ  ＨＣＬＦデフィブロタイド製剤に適した緩衝剤として同定した。
【０１０７】
６．２．２  実施例２．２−貯蔵している間の緩衝能力と安定性に対する異なるナトリウムイオン源の効果
Ｇｌｙ−Ｇｌｙ緩衝剤系を含む高濃度デフィブロタイド（「ＤＦ」）製剤の様々な緩衝剤溶液の緩衝能力を比較するために、３つの異なるナトリウムイオン源を利用する１６種類の緩衝剤を使用して、ＤＦ製剤の安定性、不純物プロファイル、及び、溶液特性を評価した。これらの製剤の概要を、表３に示す。
【表３】
2020530004.tif 000009
【０１０８】
外観、色、及び、透明度の結果に基づいて、Ｇｌｙ−Ｇｌｙ緩衝剤で製剤したデフィブロタイドは、最長で少なくとも３ヶ月間、２５±２℃／６０±５％ＲＨで貯蔵した後でも、安定であった。
【０１０９】
ＵＶ及びｐＨ分析は、２５±２℃／６０±５％ＲＨで、最長で３ヶ月にわたって貯蔵した場合、すべての製剤で、デフィブロタイド濃度が一定である、ことを示した。
【０１１０】
すべての製剤の粘度は、時間に応じて低下した（例えば、図３Ｂを参照されたい）。初期時点での粘度は、１８０ｍｇ／ｍＬのすべての製剤で、２３．８ｃＰ〜３４．４ｃＰの範囲内であり、そして、２５±２℃／６０±５％ＲＨで３ヶ月にわたって貯蔵した後では、最大で約５２％低下した。図３Ｂに記載した製剤Ｆ１〜Ｆ５を、上記の表３に記載している。
【０１１１】
ナトリウム塩濃度と相関する貯蔵時間に応じて、小さなオスモル濃度の増加傾向が認められた。塩濃度が増加しても、オスモル濃度の増加の変化は大きくなった（図３Ａを参照されたい）。総ナトリウム塩が８０ｍＭ未満の製剤は、経時的なオスモル濃度の変化が最も小さく、５００ｍＯｓｍ／ｋｇ未満であった。
【０１１２】
ＦＮＢアッセイを示す安定性は、１ヶ月の貯蔵の後に総不純物と遊離核酸塩基がわずかに増加したことを実証した。全体として、製剤Ｆ２及びＦ３での遊離核酸塩基の量は、最も少なかった。
【０１１３】
サイズ排除クロマトグラフ（ＳＥＣ）−多角度光散乱（ＭＡＬＳ）分析を実施して、デフィブロタイドのサイズ分布と分子量を、産物濃度に応じて決定した。ＤＦ製剤とＡＰＩ参照物質を、ガラス製スクリューキャップチューブ（１０ｍＬ）のＳＥＣ移動相で、４ｍｇ／ｍＬに希釈した。溶液を、攪拌せずに、室温で、１時間維持した。次いで、試料溶液を、約１００℃（沸騰水）にまで加熱し、そして、この温度で、１５分間維持した。最後に、当該試料溶液を、水と氷を使用して、５分間冷却した。室温で安定化させた後（約１５分）、これらの試料を、０．２０μｍ  ＳＦＣＡシリンジフィルターでろ過した。当該試料溶液を、調製して１時間以内に、ＳＥＣ−ＭＡＬＳで分析した。参照物質を、移動相にて、４ｍｇ／ｍＬのデフィブロタイドＡＰＩから調製した。当該分析は、すべての製剤が、類似のサイズと多分散性を有することを示した。
【０１１４】
これらの組み合わせた結果に基づいて、２０ｍＭ  Ｇｌｙ−Ｇｌｙ、及び、８０ｍＭ未満のナトリウム塩（及び、好ましくは、２０〜３４ｍＭクエン酸ナトリウム）での１８０ｍｇ／ｍＬデフィブロタイドが、ＨＣＬＦ製剤の好ましい緩衝剤の組み合わせである。
【０１１５】
６．３  実施例３−経時的、及び、温度に応じた粘度変化
医薬品にあっては、適切な有効期間を確保するために、経時的品質を維持することが重要である。したがって、Ｇｌｙ−Ｇｌｙ緩衝剤を使用して、２００ｍｇ／ｍＬデフィブロタイド製剤の粘度を、時間と温度の双方に応じて測定した。
【０１１６】
上記したようにして、試料を調製した。
【０１１７】
図４のグラフは、２０ｍＭ  Ｇｌｙ−Ｇｌｙ緩衝剤を使用して、２００ｍｇ／ｍＬのデフィブロタイド製剤の粘度が経時的に低下し、そして、温度の上昇とともに低下することも示している（２５℃、４０℃、及び、６０℃で測定した）。温度と時間に応じた粘度の低下は、薬物送達、及び、特に、ＨＣＬＦなどの高濃度産物などの産物の製造に適している。経時的な粘度の低下、チキソトロピー挙動は、特に有利であり、改善された利便性を患者にもたらし、また、これらの製剤に改善された忍容性をもたらす。デフィブロタイドは、温度安定性産物であるので、高温での粘度の低下により、患者に対する利便性を改善するさらなる機会を提供する。例えば、患者が投与前に製剤を温めると、粘度が下がって、特に、皮下、及び／または、筋肉内投与のための継続的投与を容易にする。
【０１１８】
６．４  実施例４−強制分解を使用した経時的なオスモル濃度
医薬品は、長期間にわたって、様々な条件下で、低いオスモル濃度を維持することも重要である。したがって、Ｇｌｙ−Ｇｌｙ、及び、クエン酸緩衝剤を使用して、２００ｍｇ／ｍＬデフィブロタイド製剤のオスモル濃度を、強制分解試験を使用して、時間と温度の双方に応じて測定した。
【０１１９】
上記したようにして試料を調製した。当該製剤のオスモル濃度を、２５℃、４０℃、及び、６０℃で測定した。
【０１２０】
図５Ａのグラフは、クエン酸ナトリウム緩衝剤を使用して、２００ｍｇ／ｍＬデフィブロタイド製剤のオスモル濃度を示している。
【０１２１】
図５Ｂのグラフは、Ｇｌｙ−Ｇｌｙ緩衝剤を使用して、２００ｍｇ／ｍＬデフィブロタイド製剤のオスモル濃度を示している。これらのグラフから分かるように、当該Ｇｌｙ−Ｇｌｙ製剤のオスモル濃度は、クエン酸緩衝剤を含む製剤と比較して低下している。重要なことに、当該Ｇｌｙ−Ｇｌｙ製剤のオスモル濃度は、各時点、及び、全温度で一貫して低いままである（約４００ｍＯｓｍ／ｋｇ未満）。
【０１２２】
６．５  実施例５−物理的安定性、及び、強制分解下の産物プロファイル
本発明のＨＣＬＦの物理的安定性、及び、産物プロファイルを、強制分解研究を使用して評価した。Ｇｌｙ−Ｇｌｙ、及び／または、クエン酸ナトリウムにて、ｐＨ３〜ｐＨ１０で製剤した１８０ｍｇ／ｍＬ〜２２０ｍｇ／ｍＬの濃度範囲内のデフィブロタイドを、２５±２℃／６０±５％相対湿度（「ＲＨ」）、４０±２℃／７５±５％ＲＨ、及び、６０℃で、最長で３ヶ月間にわたって貯蔵した後に評価をした。試験した製剤を、以下の表４に示す。
【表４】
2020530004.tif 000010
【０１２３】
強制分解安定性試験での外観、色、透明度、ｐＨ、及び、粒子数の結果に基づいて、２０ｍＭ  ＧｌｙＧｌｙ、ｐＨ  ７〜８にて、２００ｍｇ／ｍＬ（ＦＤ３）で製剤したデフィブロタイドが、２５±２℃／６０±５％ＲＨで貯蔵し、そして、最長で３ヶ月にわたるストレス条件を終えた後で、最も安定した製剤であった。
【０１２４】
６．６  実施例６−様々な投与経路を使用する核酸製剤の薬物動態
６．６．１  実施例６．１−デフィブロタイドの静脈内（ＩＶ）注入、ＩＶボーラス注射、皮下（ＳＣ）注射、及び、筋肉内（ＩＭ）注射
オスのゲッチンゲン豚に対して、単回の２時間静脈内（ＩＶ）注入、ＩＶボーラス注射、皮下（ＳＣ）注射、筋肉内（ＩＭ）注射、または、経口（ＰＯ）強制経口投与を介して、様々なデフィブロタイド製剤の薬物動態（ＰＫ）の比較を行った。加えて、静脈内注入と比較して、様々な血管外投与経路のバイオアベイラビリティを決定した。
【０１２５】
オスのゲッチンゲン豚またはミニブタは、ＳＣ送達を探索するための業界標準であり、デフィブロタイドＳＣ製剤、及び、送達オプションを探索するための許容可能なモデルである。それぞれの動物は、表５の処置グループに記載したデフィブロタイドの単回投与を受けた。ゲッチンゲン豚、ｎ＝３匹のオス／グループを、以下の処置グループに割り当てた。
【表５】
2020530004.tif 000011
【０１２６】
血液試料を採取し、そして、血漿に処理した。Ｑｕａｎｔ−ｉＴ  ＯｌｉＧｒｅｅｎ  ｓｓＤＮＡアッセイキット（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）を使用して、ブタの血漿試料でのデフィブロタイドの濃度を定量した。簡潔に説明すると、当該アッセイの方法論は、９６ウェルプレートでの試料の（二連で）分割、ＯｌｉＧｒｅｅｎ試薬の添加、攪拌しながらのインキュベーション（５分間、光から保護する）、及び、直接蛍光測定（４８５励起、５１５ｎｍカットオフ、及び、５２５ｎｍの放射）を含む。アッセイ範囲は、２．５〜６０μｇ／ｍＬ（高範囲）、及び、０．０５〜２．５μｇ／ｍＬ（低範囲）であった。当該アッセイの定量下限（ＬＬＯＱ）は、０．０５μｇ／ｍＬであった。
【０１２７】
個々の動物のデフィブロタイドの血漿濃度と時間のデータを、ＰＫ分析のためにＷｉｎＮｏｎｌｉｎ  Ｐｈｏｅｎｉｘバージョン６．３ソフトウェア（Ｐｈａｒｓｉｇｈｔ，Ｃａｒｙ，ＮＣ）にダウンロードした。非コンパートメントＩＶ注入、ＩＶボーラス、または、血管外注射モデルを適宜使用して、各動物の単回投与ＰＫパラメーターを決定した。ＰＫパラメーターの推定には、名目用量と試料回収時間（表５を参照されたい）を使用した。バックグラウンド値（範囲＝０．１１５〜０．９０３μｇ／ｍＬ）は、すべての動物で、投与前の時点で認められた。したがって、１μｇ／ｍＬ未満の濃度値を、＜ＬＬＯＱとして扱い、そして、分析では使用しなかった。可能な限り、以下のパラメーターを推定した：
Ｔｍａｘ      観察された最大濃度までの時間
Ｃｍａｘ      観察された最大濃度
ＡＵＣ０−ｔ  線型台形公式で推定した、時間＝０から測定可能な最終濃度の
時点までの濃度−時間曲線下の面積
ＭＲＴ０−ｔ  時間＝０から測定可能な最終濃度の時点までの平均滞留時間
Ｃｍａｘ／Ｄ  用量レベルで除算して得た、観察された最大濃度
ＡＵＣ０−ｔ／Ｄ  用量レベルで除算して線型台形公式で推定した、時間＝０
から測定可能な最終濃度の時点までの濃度−時間曲線下の面積
ＣＬ          用量をＡＵＣ０−ｔで除算して得た、ＩＶグループについて
計算したもの。
【０１２８】
パーセンテージとして表した生物学的に利用可能な画分（Ｆ）を、ＩＶ注入用量グループに対する各動物グループに関して、ＡＵＣ０−ｔ／Ｄ値に基づいて、次のようにして算出した：
（個々の動物のＳＣ、ＩＭ、または、ＰＯ  ＡＵＣ０−ｔ／Ｄ）／（グループ平均ＩＶ注入ＡＵＣ０−ｔ／Ｄ）×１００％
【０１２９】
デフィブロタイド血漿分析：オスのゲッチンゲン豚に対するＩＶ、ＳＣ、ＩＭ、または、ＰＯ投与後のデフィブロタイド血漿濃度を、以下にまとめた：２５ｍｇ／ｋｇの単回ＩＶ注入投与、または、２．５ｍｇ／ｋｇデフィブロタイドの単回ＩＶボーラス投与では、投与して８時間後までの平均血漿濃度は、１μｇ／ｍＬを超えていた。２５ｍｇ／ｋｇデフィブロタイドのＳＣまたはＩＭ投与では、投与して２４時間後（最後に測定した時点）までの平均血漿濃度は、１μｇ／ｍＬを超えていた。１００ｍｇ／ｋｇでＰＯ投与した後に、１匹の動物でのある時点（動物１４Ｍに投与して４時間後）、及び、１匹の動物での３つの時点（動物１３Ｍに投与して、５、６、及び、１２時間後）では、デフィブロタイド血漿濃度は、１μｇ／ｍＬを超えていたが、３番目の動物（１５Ｍ）では、すべての時点で１μｇ／ｍＬ未満であった。
【０１３０】
薬物動態分析：個々の動物と概要を説明したＰＫパラメーターも測定して、以下に示した：２５ｍｇ／ｋｇデフィブロタイドを、２時間、ＩＶ注入した後では、平均Ｃｍａｘ／Ｄは、１．５２（μｇ／ｍＬ）／（ｍｇ／ｋｇ）であり、そして、平均ＡＵＣ０−ｔ／Ｄ値は、３．５６（時間＊μｇ／ｍＬ）／（ｍｇ／ｋｇ）であった。２．５ｍｇ／ｋｇデフィブロタイドでＩＶボーラス投与した後では、平均Ｃｍａｘ／Ｄは、１４．４（μｇ／ｍＬ）／（ｍｇ／ｋｇ）であり、そして、平均ＡＵＣ０−ｔ／Ｄ値は、８．３０（時間＊μｇ／ｍＬ）／（ｍｇ／ｋｇ）であった。
【０１３１】
２５ｍｇ／ｋｇデフィブロタイドをＳＣ投与した後のＴｍａｘは、投与して０．２５〜８時間の範囲であったが、血漿ＰＫプロファイルに複数のピークが認められた。平均ＳＣバイオアベイラビリティ（％Ｆ）は、８１．３％であった。２５ｍｇ／ｋｇデフィブロタイドをＩＭ投与した後のＴｍａｘは、投与して０．２５〜０．５０時間の範囲であった。平均ＩＭバイオアベイラビリティは、１０８％であった。対照的に、１００ｍｇ／ｋｇのデフィブロタイドを経口投与した後は、測定可能な濃度はほとんど認められなかった。ＰＯ投与した後の平均バイオアベイラビリティは、７．２％未満であった。
【０１３２】
これらの結果は、ＩＶ投与と比較して、ＳＣ及びＩＭ投与した後でのデフィブロタイドへの曝露が延長されたことを示している。平均ＭＲＴ最終値は、ＩＶ注入グループ、及び、ＩＶボーラス投与グループのそれぞれでの１．３０、及び、２．１６時間と比較して、ＳＣ、及び、ＩＭ投与グループで、それぞれ、９．２６、及び、７．３６時間であった。
【０１３３】
６．６．２  実施例６．２−ＨＣＬＦデフィブロタイド製剤の皮下投与
皮下投与したデフィブロタイドの高濃度液体製剤の薬物動態をさらに調査するために、２００ｍｇ／ｍＬの３つの異なるＨＣＬＦ製剤を、Ｄｅｆｉｔｅｌｉｏの単回の２時間の静脈内（ＩＶ）注入、または、ＳＣ注射と比較した。加えて、ＳＣ投与経路を介したバイオアベイラビリティを、ＩＶ注入と比較して決定した。
【０１３４】
２００ｍｇ／ｍＬのＨＣＬＦ製剤を、上記したようにして、クエン酸ナトリウム、Ｇｌｙ−Ｇｌｙ、または、これらの緩衝剤の組み合わせを使用して調製した。以下の表６に示す用量を使用して、Ｄｅｆｉｔｅｌｉｏを、４ｍｇ／ｍＬ  ＩＶ、または、８０ｍｇ／ｍＬ  ＳＣで投与した。オスのゲッチンゲン豚（ｎ＝３匹のオス／グループ）に、表６に記載した試験品を単回投与した。実施例６．１の分析方法を使用して、デフィブロタイドを分析した。当該ＰＫパラメーターは、実施例６．１と同様にして決定した。
【表６】
2020530004.tif 000012
【０１３５】
パーセント（％Ｆ）として表すバイオアベイラビリティを、上記したようにして算出を行い、そして、それらの結果を、以下の表７に示す。
【表７】
2020530004.tif 000013
【０１３６】
デフィブロタイドの血漿濃度、及び、血漿濃度−時間データを、上記したように決定し、そして、図６に示した。図６に記載の個々のミニブタでのＰＫプロファイルは、４つのＳＣ処置すべて（Ｄｅｆｉｔｅｌｉｏ、及び、３つのＨＣＬＦ）の複数の吸収ピークを示している。デフィブロタイドは、オリゴヌクレオチドの混合物であるため、これらの複数のピークは、デフィブロタイドの個々の成分の吸収速度の変動に起因したものであり得る。まとめると、これらの結果は、デフィブロタイドのバイオアベイラビリティが、高濃度液体製剤を含むすべての製剤において、ＳＣ投与で好ましいことを示している。
【０１３７】
加えて、４つのＳＣグループの平均滞留時間（ＭＲＴ）は、９．２８〜１０．９時間の範囲であった、一方で、ＩＶグループのＭＲＴは、わずか２．４１時間であった（表７）、したがって、ＳＣ投与は、ＩＶ注入の約４倍半ものデフィブロタイドの持続放出をもたらした。このことは、低粘度のデフィブロタイドのＳＣ投与において、ＨＣＬＦが、ＩＶ投与と比較して、デフィブロタイドの血漿曝露を延長したという点で、実施例６．１で示されたものと一致する。
【０１３８】
特定の理論に束縛されることを望むものではないが、ＳＣ経路による循環時間の延長は、吸収の持続放出パターンを付与するデフィブロタイドＨＣＬＦの性質に起因している可能性が高い。ＨＣＬＦをＳＣ投与してデフィブロタイドの循環が拡大することは、投与頻度の少ない代替レジメンを調査し、そして、患者の生活の質を改善する機会を提供し得る。
【０１３９】
６．６．３  実施例６．３−ＩＶ、及び、ＳＣ投与の薬物動態プロファイルの比較
ＳＣ  ＨＣＬＦ投与のＰＫ比較を実証するために、ＳＣ及びＩＶ注入後のＰＫプロファイルのシミュレーションを、コンパートメントモデリング技術を使用して実施した。ＩＶ注入、または、ＳＣ投与ＰＫプロファイルを、それぞれ、シミュレーションするために、１次吸収プロセスの有無に関係なく、単純な１−コンパートメントモデルを使用した。このモデリング演習では、ＩＶ注入投与した後の平均ＰＫパラメーターを、Ｄｅｆｉｔｅｌｉｏ（登録商標）の添付文書から得た。ＰＫ研究では、通常、薬物のクリアランスと分布量とを、生物学的利用可能性について報告をする、これらは、それぞれ、ＣＬ／ＦとＶ／Ｆである。ここで使用したＰＫシミュレーションでは、ＳＣ  ＨＣＬＦを投与した後に、平均ＣＬ／Ｆ、及び、Ｖ／Ｆを、７０％の生物学的利用可能性を想定して、ＩＶパラメーターから計算した。吸収速度定数は、０．２２ｈ−１と推定され、これは、ミニブタで認められたものと同様である。ＩＶ注入の用量とレジメンは、１日４回、２時間のＩＶ注入で、６．２５ｍｇ／ｋｇ／注入（２５ｍｇ／ｋｇ／日の１日の合計投与量）であった。ＳＣ投与の１日用量とレジメンは、１日２回、１８ｍｇ／ｋｇ／ＳＣ投与（３６ｍｇ／ｋｇ／日の１日の合計投与量）であった。このシミュレーションは、体重７０ｋｇの方を対象に実施した。シミュレーションの間、ＳＣ投与した後のＡＵＣの合計は、ＩＶ注入と同じになるように維持した。
【０１４０】
図７に示したように、経時的血漿濃度プロファイルは、それぞれのＩＶ注入を行った後の急速なクリアランスとは対照的に、ＳＣ投与後のデフィブロタイドの緩慢で一定した放出を実証している。重要なことに、ＳＣ投与した後のデフィブロタイドの最小血漿濃度は、ＩＶ注入のそれよりもはるかに高く、一方で、ＳＣ投与のＣｍａｘは、ＩＶ注入のＣｍａｘと同様であった。
【０１４１】
ＳＣ投与の薬物動態は、その薬理活性にとって重要であり得るデフィブロタイドの連続的な血漿曝露を可能にするプロファイルを表す。ＳＣ投与した後のピーク対血漿濃度比は、約７００であるＩＶ注入のそれと比較して、約８である。
【０１４２】
まとめると、これらの結果は、デフィブロタイドの皮下投与が、ＩＶ注入のＰＫとはかけ離れた新規薬物動態プロファイル、すなわち、現在利用可能なデフィブロタイド製剤が必要としているものを提供する、ことを実証している。デフィブロタイドの緩慢で安定した放出は、そのリスク対利益プロファイルにとって重要であり得るものであり、そして、独自の皮下薬物動態は、より良好な有効性と、改善された安全性プロファイルとをもたらし得る新規の用量、及び／または、投与計画の開発を可能にする。
【図１Ａ】
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【図１Ｂ】
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【図１Ｃ】
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【図１Ｄ】
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【図２Ａ】
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【図２Ｂ】
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【図３Ａ】
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【図３Ｂ】
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【図４】
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【図５Ａ】
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【図５Ｂ】
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【図６】
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【図７】
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【国際調査報告】
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