(57)【要約】本発明は、タンパク質性ヘテロ二量体、タンパク質性ヘテロ二量体を含む医薬組成物、医薬品及び／又はキット、タンパク質性ヘテロ二量体の製造方法、並びにその用途を提供する。
2020527939.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
第１のメンバー及び前記第１のメンバーとは異なる第２のメンバーを含むタンパク質性ヘテロ二量体であって、
前記第１のメンバーは軽鎖、及び第１のＦｃ領域を含む重鎖を含み、前記軽鎖が前記重鎖に複合されて腫瘍抗原への結合特異性を示す標的部分が形成され、
前記第２のメンバーは、第２のＦｃ領域と融合される免疫調節物質を含むポリペプチドを含み、
前記第１のＦｃ領域と前記第２のＦｃ領域との複合により、前記第１のメンバーは前記第２のメンバーと会合して前記ヘテロ二量体を形成し、
前記第１のＦｃ領域は第１の修飾を含む、且つ／又は、前記第２のＦｃ領域は第２の修飾を含み、ただし、前記第１の修飾及び／又は前記第２の修飾は、ノブ修飾及びホール修飾を含むノブアンドホール修飾よりも前記第１のメンバーと前記第２のメンバーとのヘテロ二量体化を効果的に促進する、タンパク質性ヘテロ二量体。
【請求項２】
前記第２のメンバーに含まれた前記ポリペプチドは融合タンパク質であり、前記免疫調節物質のＣ末端が前記第２のＦｃ領域のＮ末端と融合されて前記融合タンパク質が形成され、任意選択的に、リンカーを介して融合される、請求項１に記載のタンパク質性ヘテロ二量体。
【請求項３】
前記腫瘍抗原はＥＧＦＲ、ＥＧＦＲ変異体、ＨＥＲ２／ｎｅｕ、ＧＰＣ３、ＦＡＰ、Ｍｕｃ１、ＭＵＣ５ＡＣ及びメソセリンから選択される、上記請求項のいずれか１項に記載のタンパク質性ヘテロ二量体。
【請求項４】
前記免疫調節物質はインターフェロン、インターロイキン、ケモカイン、リンホカイン及び腫瘍壊死因子から選択されたサイトカインである、上記請求項のいずれか１項に記載のタンパク質性ヘテロ二量体。
【請求項５】
前記免疫調節物質はインターフェロンα、インターフェロンλ及びインターフェロンβから選択されたインターフェロンである、上記請求項のいずれか１項に記載のタンパク質性ヘテロ二量体。
【請求項６】
前記免疫調節物質はインターロイキンであり、前記インターロイキンはインターロイキン１０、インターロイキン２及び／又はスーパーインターロイキン２を含む、上記請求項のいずれか１項に記載のタンパク質性ヘテロ二量体。
【請求項７】
前記第１のＦｃ領域及び前記第２のＦｃ領域は免疫グロブリンのＦｃ領域に由来し、前記免疫グロブリンはヒトＩｇＧ１である、上記請求項のいずれか１項に記載のタンパク質性ヘテロ二量体。
【請求項８】
前記第２のメンバーに含まれた前記ポリペプチドは２種以上の免疫調節物質を含み、前記２種以上の免疫調節物質はインフレームで互いに融合され且つ前記第２のＦｃ領域と融合され、ただし前記２種以上の免疫調節物質は前記第２のＦｃ領域のＮ末端に配置される、上記請求項のいずれか１項に記載のタンパク質性ヘテロ二量体。
【請求項９】
前記第１の修飾は位置Ｔ３６６におけるアミノ酸置換、並びにＹ３４９、Ｆ４０５、Ｋ４０９、Ｄ３９９、Ｋ３６０、Ｑ３４７、Ｋ３９２及びＳ３５４からなる群から選択された１つ以上の位置におけるアミノ酸置換を含み、ただし前記アミノ酸の位置は、ＫＡＢＡＴ番号のＥＵインデックスに基づいて決定される、上記請求項のいずれか１項に記載のタンパク質性ヘテロ二量体。
【請求項１０】
前記第１の修飾に含まれたアミノ酸置換はＹ３４９Ｃ、Ｙ３４９Ｄ、Ｄ３９９Ｓ、Ｆ４０５Ｋ、Ｋ３６０Ｅ、Ｋ４０９Ａ、Ｋ４０９Ｅ、Ｑ３４７Ｅ、Ｑ３４７Ｒ、Ｓ３５４Ｄ、Ｋ３９２Ｄ及びＴ３６６Ｗからなる群からから選択される、請求項９に記載のタンパク質性ヘテロ二量体。
【請求項１１】
前記第１の修飾は、
１）Ｙ３４９及びＴ３６６；
２）Ｙ３４９、Ｔ３６６及びＦ４０５；
３）Ｙ３４９、Ｔ３６６及びＫ４０９；
４）Ｙ３４９、Ｔ３６６、Ｆ４０５、Ｋ３６０及びＱ３４７；
５）Ｙ３４９、Ｔ３６６、Ｆ４０５及びＱ３４７；
６）Ｙ３４９、Ｔ３６６、Ｋ４０９、Ｋ３６０及びＱ３４７；
７）Ｙ３４９、Ｔ３６６、Ｋ４０９及びＱ３４７；
８）Ｔ３６６、Ｋ４０９及びＫ３９２；
９）Ｔ３６６及びＫ４０９；
１０）Ｔ３６６、Ｋ４０９、Ｙ３４９及びＳ３５４；
１１）Ｔ３６６及びＦ４０５；
１２）Ｔ３６６、Ｆ４０５及びＤ３９９；並びに、
１３）Ｔ３６６、Ｆ４０５、Ｙ３４９及びＳ３５４から選択されたいずれかの群に示す位置におけるアミノ酸置換を含む、請求項９又は請求項１０に記載のタンパク質性ヘテロ二量体。
【請求項１２】
前記第１の修飾は、
１）Ｙ３４９Ｃ及びＴ３６６Ｗ；
２）Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｗ及びＦ４０５Ｋ；
３）Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｗ及びＫ４０９Ｅ；
４）Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｗ及びＫ４０９Ａ；
５）Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、Ｆ４０５Ｋ、Ｋ３６０Ｅ及びＱ３４７Ｅ；
６）Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、Ｆ４０５Ｋ及びＱ３４７Ｒ；
７）Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、Ｋ４０９Ａ、Ｋ３６０Ｅ及びＱ３４７Ｅ；
８）Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、Ｋ４０９Ａ及びＱ３４７Ｒ；
９）Ｔ３６６Ｗ、Ｋ４０９Ａ及びＫ３９２Ｄ；
１０）Ｔ３６６Ｗ及びＫ４０９Ａ；
１１）Ｔ３６６Ｗ、Ｋ４０９Ａ及びＹ３４９Ｄ；
１２）Ｔ３６６Ｗ、Ｋ４０９Ａ、Ｙ３４９Ｄ及びＳ３５４Ｄ；
１３）Ｔ３６６Ｗ及びＦ４０５Ｋ；
１４）Ｔ３６６Ｗ、Ｆ４０５Ｋ及びＤ３９９Ｓ；
１５）Ｔ３６６Ｗ、Ｆ４０５Ｋ及びＹ３４９Ｄ；並びに、
１６）Ｔ３６６Ｗ、Ｆ４０５Ｋ、Ｙ３４９Ｄ及びＳ３５４Ｄから選択されたいずれかの群に示すアミノ酸置換を含む、請求項９〜請求項１１のいずれか１項に記載のタンパク質性ヘテロ二量体。
【請求項１３】
前記第２の修飾は、位置Ｔ３６６、Ｌ３６８及びＹ４０７におけるアミノ酸置換、並びにＤ３５６、Ｄ３９９、Ｅ３５７、Ｆ４０５、Ｋ３６０、Ｋ３９２、Ｋ４０９及びＱ３４７からなる群から選択された１つ以上の位置におけるアミノ酸置換を含み、ただし前記アミノ酸の位置は、ＫＡＢＡＴ番号のＥＵインデックスに基づいて決定される、請求項９〜請求項１２のいずれか１項に記載のタンパク質性ヘテロ二量体。
【請求項１４】
前記第２の修飾に含まれた前記アミノ酸置換は、Ｄ３５６Ｃ、Ｄ３９９Ｓ、Ｅ３５７Ａ、Ｆ４０５Ｋ、Ｋ３６０Ｅ、Ｋ３９２Ｄ、Ｋ４０９Ａ、Ｌ３６８Ａ、Ｌ３６８Ｇ、Ｑ３４７Ｅ、Ｑ３４７Ｒ、Ｔ３６６Ｓ、Ｙ４０７Ａ及びＹ４０７Ｖからなる群から選択される、請求項１３に記載のタンパク質性ヘテロ二量体。
【請求項１５】
前記第２の修飾は、
１）Ｄ３５６、Ｔ３６６、Ｌ３６８、Ｙ４０７及びＦ４０５；
２）Ｄ３５６、Ｔ３６６、Ｌ３６８及びＹ４０７；
３）Ｄ３５６、Ｔ３６６、Ｌ３６８、Ｙ４０７及びＱ３４７；
４）Ｄ３５６、Ｔ３６６、Ｌ３６８、Ｙ４０７、Ｋ３６０及びＱ３４７；
５）Ｄ３５６、Ｔ３６６、Ｌ３６８、Ｙ４０７、Ｆ４０５及びＱ３４７；
６）Ｄ３５６、Ｔ３６６、Ｌ３６８、Ｙ４０７、Ｆ４０５、Ｋ３６０及びＱ３４７；
７）Ｔ３６６、Ｌ３６８、Ｙ４０７、Ｄ３９９及びＦ４０５；
８）Ｔ３６６、Ｌ３６８、Ｙ４０７及びＦ４０５；
９）Ｔ３６６、Ｌ３６８、Ｙ４０７、Ｆ４０５及びＥ３５７；
１０）Ｔ３６６、Ｌ３６８、Ｙ４０７及びＫ４０９；
１１）Ｔ３６６、Ｌ３６８、Ｙ４０７、Ｋ４０９及びＫ３９２；並びに、
１２）Ｔ３６６、Ｌ３６８、Ｙ４０７、Ｋ４０９及びＥ３５７から選択されたいずれかの群に示す位置におけるアミノ酸置換を含む、請求項１３又は請求項１４に記載のタンパク質性ヘテロ二量体。
【請求項１６】
前記第２の修飾は、
１）Ｄ３５６Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、Ｙ４０７Ｖ及びＦ４０５Ｋ；
２）Ｄ３５６Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ及びＹ４０７Ｖ；
３）Ｄ３５６Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、Ｙ４０７Ｖ及びＱ３４７Ｒ；
４）Ｄ３５６Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、Ｋ３６０Ｅ及びＱ３４７Ｅ；
５）Ｄ３５６Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、Ｆ４０５Ｋ及びＱ３４７Ｒ；
６）Ｄ３５６Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、Ｆ４０５Ｋ、Ｋ３６０Ｅ及びＱ３４７Ｅ；
７）Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、Ｄ３９９Ｓ及びＦ４０５Ｋ；
８）Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ｇ、Ｙ４０７Ａ及びＦ４０５Ｋ；
９）Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、Ｆ４０５Ｋ及びＥ３５７Ａ；
１０）Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、Ｙ４０７Ｖ及びＫ４０９Ａ；
１１）Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、Ｋ４０９Ａ及びＫ３９２Ｄ；
１２）Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ｇ、Ｙ４０７Ａ及びＫ４０９Ａ；
１３）Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、Ｋ４０９Ａ及びＥ３５７Ａから選択されたいずれかの群に示すアミノ酸置換を含む、請求項１３〜請求項１５のいずれか１項に記載のタンパク質性ヘテロ二量体。
【請求項１７】
前記第１のＦｃ領域は前記第１の修飾を含み、前記第２のＦｃ領域は前記第２の修飾を含み、前記第１の修飾及び前記第２の修飾は、
１）第１の修飾：Ｙ３４９及びＴ３６６；第２の修飾：Ｄ３５６、Ｔ３６６、Ｌ３６８、Ｙ４０７及びＦ４０５；
２）第１の修飾：Ｙ３４９、Ｔ３６６及びＦ４０５；第２の修飾：Ｄ３５６、Ｔ３６６、Ｌ３６８及びＹ４０７；
３）第１の修飾：Ｙ３４９、Ｔ３６６及びＫ４０９；第２の修飾：Ｄ３５６、Ｔ３６６、Ｌ３６８、Ｙ４０７及びＦ４０５；
４）第１の修飾：Ｙ３４９、Ｔ３６６、Ｆ４０５、Ｋ３６０及びＱ３４７；第２の修飾：Ｄ３５６、Ｔ３６６、Ｌ３６８、Ｙ４０７及びＱ３４７；
５）第１の修飾：Ｙ３４９、Ｔ３６６、Ｆ４０５及びＱ３４７；第２の修飾：Ｄ３５６、Ｔ３６６、Ｌ３６８、Ｙ４０７、Ｋ３６０及びＱ３４７；
６）第１の修飾：Ｙ３４９、Ｔ３６６、Ｋ４０９、Ｋ３６０及びＱ３４７；第２の修飾：Ｄ３５６、Ｔ３６６、Ｌ３６８、Ｙ４０７、Ｆ４０５及びＱ３４７；
７）第１の修飾：Ｙ３４９、Ｔ３６６、Ｋ４０９及びＱ３４７；第２の修飾：Ｄ３５６、Ｔ３６６、Ｌ３６８、Ｙ４０７、Ｆ４０５、Ｋ３６０及びＱ３４７；
８）第１の修飾：Ｔ３６６、Ｋ４０９及びＫ３９２；第２の修飾：Ｔ３６６、Ｌ３６８、Ｙ４０７、Ｄ３９９及びＦ４０５；
９）第１の修飾：Ｔ３６６及びＫ４０９；第２の修飾：Ｔ３６６、Ｌ３６８、Ｙ４０７及びＦ４０５；
１０）第１の修飾：Ｔ３６６、Ｋ４０９及びＹ３４９；第２の修飾：Ｔ３６６、Ｌ３６８、Ｙ４０７、Ｆ４０５及びＥ３５７；
１１）第１の修飾：Ｔ３６６、Ｋ４０９、Ｙ３４９及びＳ３５４；第２の修飾：Ｔ３６６、Ｌ３６８、Ｙ４０７、Ｆ４０５及びＥ３５７；
１２）第１の修飾：Ｔ３６６及びＦ４０５；第２の修飾：Ｔ３６６、Ｌ３６８、Ｙ４０７及びＫ４０９；
１３）第１の修飾：Ｔ３６６、Ｆ４０５及びＤ３９９；第２の修飾：Ｔ３６６、Ｌ３６８、Ｙ４０７、Ｋ４０９及びＫ３９２；
１４）第１の修飾：Ｔ３６６、Ｆ４０５及びＹ３４９；第２の修飾：Ｔ３６６、Ｌ３６８、Ｙ４０７、Ｋ４０９及びＥ３５７；
１５）第１の修飾：Ｔ３６６、Ｆ４０５、Ｙ３４９及びＳ３５４；第２の修飾：Ｔ３６６、Ｌ３６８、Ｙ４０７、Ｋ４０９及びＥ３５７から選択されたいずれかの群に示す位置におけるアミノ酸置換を含み、
ただし前記アミノ酸の位置は、ＫＡＢＡＴ番号のＥＵインデックスに基づいて決定される、上記請求項のいずれか１項に記載のタンパク質性ヘテロ二量体。
【請求項１８】
前記第１のＦｃ領域は前記第１の修飾を含み、前記第２のＦｃ領域は前記第２の修飾を含み、前記第１の修飾及び前記第２の修飾は、
１）第１の修飾：Ｙ３４９Ｃ及びＴ３６６Ｗ；第２の修飾：Ｄ３５６Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、Ｙ４０７Ｖ及びＦ４０５Ｋ；
２）第１の修飾：Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｗ及びＦ４０５Ｋ；第２の修飾：Ｄ３５６Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ及びＹ４０７Ｖ；
３）第１の修飾：Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｗ及びＫ４０９Ｅ；第２の修飾：Ｄ３５６Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、Ｙ４０７Ｖ及びＦ４０５Ｋ；
４）第１の修飾：Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｗ及びＫ４０９Ａ；第２の修飾：Ｄ３５６Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、Ｙ４０７Ｖ及びＦ４０５Ｋ；
５）第１の修飾：Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、Ｆ４０５Ｋ、Ｋ３６０Ｅ及びＱ３４７Ｅ；第２の修飾：Ｄ３５６Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、Ｙ４０７Ｖ及びＱ３４７Ｒ；
６）第１の修飾：Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、Ｆ４０５Ｋ及びＱ３４７Ｒ；第２の修飾：Ｄ３５６Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、Ｋ３６０Ｅ及びＱ３４７Ｅ；
７）第１の修飾：Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、Ｋ４０９Ａ、Ｋ３６０Ｅ及びＱ３４７Ｅ；第２の修飾：Ｄ３５６Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、Ｆ４０５Ｋ及びＱ３４７Ｒ；
８）第１の修飾：Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、Ｋ４０９Ａ及びＱ３４７Ｒ；第２の修飾：Ｄ３５６Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、Ｆ４０５Ｋ、Ｋ３６０Ｅ及びＱ３４７Ｅ；
９）第１の修飾：Ｔ３６６Ｗ、Ｋ４０９Ａ及びＫ３９２Ｄ；第２の修飾：Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、Ｄ３９９Ｓ及びＦ４０５Ｋ；
１０）第１の修飾：Ｔ３６６Ｗ及びＫ４０９Ａ；第２の修飾：Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ｇ、Ｙ４０７Ａ及びＦ４０５Ｋ；
１１）第１の修飾：Ｔ３６６Ｗ、Ｋ４０９Ａ及びＹ３４９Ｄ；第２の修飾：Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、Ｆ４０５Ｋ及びＥ３５７Ａ；
１２）第１の修飾：Ｔ３６６Ｗ、Ｋ４０９Ａ、Ｙ３４９Ｄ及びＳ３５４Ｄ；第２の修飾：Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、Ｆ４０５Ｋ及びＥ３５７Ａ；
１３）第１の修飾：Ｔ３６６Ｗ及びＦ４０５Ｋ；第２の修飾：Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、Ｙ４０７Ｖ及びＫ４０９Ａ；
１４）第１の修飾：Ｔ３６６Ｗ、Ｆ４０５Ｋ及びＤ３９９Ｓ；第２の修飾：Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、Ｋ４０９Ａ及びＫ３９２Ｄ；
１５）第１の修飾：Ｔ３６６Ｗ及びＦ４０５Ｋ；第２の修飾：Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ｇ、Ｙ４０７Ａ及びＫ４０９Ａ；
１６）第１の修飾：Ｔ３６６Ｗ、Ｆ４０５Ｋ及びＹ３４９Ｄ；第２の修飾：Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、Ｋ４０９Ａ及びＥ３５７Ａ；
１７）第１の修飾：Ｔ３６６Ｗ、Ｆ４０５Ｋ、Ｙ３４９Ｄ及びＳ３５４Ｄ；第２の修飾：Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、Ｋ４０９Ａ及びＥ３５７Ａから選択されたいずれかの群に示すアミノ酸置換を含み、
ただし前記アミノ酸の位置は、ＫＡＢＡＴ番号のＥＵインデックスに基づいて決定される、上記請求項のいずれか１項に記載のタンパク質性ヘテロ二量体。
【請求項１９】
前記第１のＦｃ領域は前記第１の修飾を含み、前記第２のＦｃ領域は前記第２の修飾を含み、前記第１の修飾はアミノ酸置換Ｔ３６６Ｗ及びＫ４０９Ａを含み、前記第２の修飾はアミノ酸置換Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ｇ、Ｙ４０７Ａ及びＦ４０５Ｋを含み、ただし前記アミノ酸の位置は、ＫＡＢＡＴ番号のＥＵインデックスに基づいて決定される、上記請求項のいずれか１項に記載のタンパク質性ヘテロ二量体。
【請求項２０】
前記標的部分はＥＧＦＲと特異的に結合し、前記第１のメンバーの前記軽鎖はＣＤＲ１〜３を含み、ＣＤＲ１のアミノ酸配列は配列番号１０１に記載のとおり、ＣＤＲ２のアミノ酸配列は配列番号１０２に記載のとおり、ＣＤＲ３のアミノ酸配列は配列番号１０３に記載のとおりである、前記第１のメンバーの前記重鎖はＣＤＲ１〜３を含み、ＣＤＲ１のアミノ酸配列は配列番号１０５に記載のとおり、ＣＤＲ２のアミノ酸配列は配列番号１０６に記載のとおり、ＣＤＲ３のアミノ酸配列は配列番号１０７に記載のとおりである、上記請求項のいずれか１項に記載のタンパク質性ヘテロ二量体。
【請求項２１】
前記標的部分はＥＧＦＲ変異体と特異的に結合し、前記第１のメンバーの前記軽鎖はＣＤＲ１〜３を含み、ＣＤＲ１のアミノ酸配列は配列番号１０９に記載のとおり、ＣＤＲ２のアミノ酸配列は配列番号１１０に記載のとおり、ＣＤＲ３のアミノ酸配列は配列番号１１１に記載のとおりである、前記第１のメンバーの前記重鎖はＣＤＲ１〜３を含み、ＣＤＲ１のアミノ酸配列は配列番号１１３に記載のとおり、ＣＤＲ２のアミノ酸配列は配列番号１１４に記載のとおり、ＣＤＲ３のアミノ酸配列は配列番号１１５に記載のとおりである、請求項１〜請求項１９のいずれか１項に記載のタンパク質性ヘテロ二量体。
【請求項２２】
前記標的部分はＨＥＲ２／ｎｅｕと特異的に結合し、前記第１のメンバーの前記軽鎖はＣＤＲ１〜３を含み、ＣＤＲ１のアミノ酸配列は配列番号１１７及び１２５から選択され、ＣＤＲ２のアミノ酸配列は配列番号１１８及び１２６から選択され、ＣＤＲ３のアミノ酸配列は配列番号１１９及び１２７から選択される、前記第１のメンバーの前記重鎖はＣＤＲ１〜３を含み、ＣＤＲ１のアミノ酸配列は配列番号１２１及び１２９から選択され、ＣＤＲ２のアミノ酸配列は配列番号１２２及び１３０から選択され、ＣＤＲ３のアミノ酸配列は配列番号１２３及び１３１から選択される、請求項１〜請求項１９のいずれか１項に記載のタンパク質性ヘテロ二量体。
【請求項２３】
前記標的部分はＧＰＣ３と特異的に結合し、前記第１のメンバーの前記軽鎖はＣＤＲ１〜３を含み、ＣＤＲ１のアミノ酸配列は配列番号１３３に記載のとおり、ＣＤＲ２のアミノ酸配列は配列番号１３４に記載のとおり、ＣＤＲ３のアミノ酸配列は配列番号１３５に記載のとおりである、前記第１のメンバーの前記重鎖はＣＤＲ１〜３を含み、ＣＤＲ１のアミノ酸配列は配列番号１３７に記載のとおり、ＣＤＲ２のアミノ酸配列は配列番号１３８に記載のとおり、ＣＤＲ３のアミノ酸配列は配列番号１３９に記載のとおりである、請求項１〜請求項１９のいずれか１項に記載のタンパク質性ヘテロ二量体。
【請求項２４】
前記標的部分はＦＡＰと特異的に結合し、前記第１のメンバーの前記軽鎖はＣＤＲ１〜３を含み、ＣＤＲ１のアミノ酸配列は配列番号１４１に記載のとおり、ＣＤＲ２のアミノ酸配列は配列番号１４２に記載のとおり、ＣＤＲ３のアミノ酸配列は配列番号１４３に記載のとおりである、前記第１のメンバーの前記重鎖はＣＤＲ１〜３を含み、ＣＤＲ１のアミノ酸配列は配列番号１４５に記載のとおり、ＣＤＲ２のアミノ酸配列は配列番号１４６に記載のとおり、ＣＤＲ３のアミノ酸配列は配列番号１４７に記載のとおりである、請求項１〜請求項１９のいずれか１項に記載のタンパク質性ヘテロ二量体。
【請求項２５】
前記標的部分はＭｕｃ１と特異的に結合し、前記第１のメンバーの前記軽鎖はＣＤＲ１〜３を含み、ＣＤＲ１のアミノ酸配列は配列番号１４９に記載のとおり、ＣＤＲ２のアミノ酸配列は配列番号１５０に記載のとおり、ＣＤＲ３のアミノ酸配列は配列番号１５１に記載のとおりである、前記第１のメンバーの前記重鎖はＣＤＲ１〜３を含み、ＣＤＲ１のアミノ酸配列は配列番号１５３に記載のとおり、ＣＤＲ２のアミノ酸配列は配列番号１５４に記載のとおり、ＣＤＲ３のアミノ酸配列は配列番号１５５に記載のとおりである、請求項１〜請求項１９のいずれか１項に記載のタンパク質性ヘテロ二量体。
【請求項２６】
前記標的部分はメソセリンと特異的に結合し、前記第１のメンバーの前記軽鎖はＣＤＲ１〜３を含み、ＣＤＲ１のアミノ酸配列は配列番号１６５に記載のとおり、ＣＤＲ２のアミノ酸配列は配列番号１６６に記載のとおり、ＣＤＲ３のアミノ酸配列は配列番号１６７に記載のとおりである、前記第１のメンバーの前記重鎖はＣＤＲ１〜３を含み、ＣＤＲ１のアミノ酸配列は配列番号１６９に記載のとおり、ＣＤＲ２のアミノ酸配列は配列番号１７０に記載のとおり、ＣＤＲ３のアミノ酸配列は配列番号１７１に記載のとおりである、請求項１〜請求項１９のいずれか１項に記載のタンパク質性ヘテロ二量体。
【請求項２７】
前記標的部分はＭＵＣ５ＡＣと特異的に結合し、前記第１のメンバーの前記軽鎖はＣＤＲ１〜３を含み、ＣＤＲ１のアミノ酸配列は配列番号１５７に記載のとおり、ＣＤＲ２のアミノ酸配列は配列番号１５８に記載のとおり、ＣＤＲ３のアミノ酸配列は配列番号１５９に記載のとおりである、前記第１のメンバーの前記重鎖はＣＤＲ１〜３を含み、ＣＤＲ１のアミノ酸配列は配列番号１６１に記載のとおり、ＣＤＲ２のアミノ酸配列は配列番号１６２に記載のとおり、ＣＤＲ３のアミノ酸配列は配列番号１６３に記載のとおりである、請求項１〜請求項１９のいずれか１項に記載のタンパク質性ヘテロ二量体。
【請求項２８】
前記第１のメンバーの前記重鎖で、前記第１のＦｃ領域のアミノ酸配列は、配列番号１、４、５、６、７、９、１１、１３、１５、１７、１９、２１、２２、２４、２６、２７及び２９から選択される、上記請求項のいずれか１項に記載のタンパク質性ヘテロ二量体。
【請求項２９】
前記第２のメンバーに含まれた前記免疫調節物質のアミノ酸配列は、配列番号１７３〜１８０から選択される、上記請求項のいずれか１項に記載のタンパク質性ヘテロ二量体。
【請求項３０】
前記第２のメンバーに含まれた前記第２のＦｃ領域のアミノ酸配列は、配列番号２、３、８、１０、１２、１４、１６、１８、２０、２３、２５及び２８から選択される、上記請求項のいずれか１項に記載のタンパク質性ヘテロ二量体。
【請求項３１】
前記第２のメンバーに含まれた前記ポリペプチドのアミノ酸配列は、配列番号７７、８０、８２、８４、８６、８９、９１及び９７から選択される、上記請求項のいずれか１項に記載のタンパク質性ヘテロ二量体。
【請求項３２】
前記第１のメンバーに含まれた前記軽鎖のアミノ酸配列は、配列番号３７、４５、４９、５３、５７、６１、６５、６９及び７３から選択され、前記第１のメンバーに含まれた前記重鎖のアミノ酸配列は、配列番号３９、４７、５１、５５、５９、６３、６７、７１及び７５から選択され、前記第２のメンバーに含まれた前記ポリペプチドのアミノ酸配列は、配列番号７７、８０、８２、８４、８６、８９、９１及び９７から選択される、上記請求項のいずれか１項に記載のタンパク質性ヘテロ二量体。
【請求項３３】
上記請求項のいずれか１項に記載のタンパク質性ヘテロ二量体をコードする単離されたポリヌクレオチド。
【請求項３４】
請求項３３に記載の単離されたポリヌクレオチドを含むベクター。
【請求項３５】
請求項３３に記載の単離されたポリヌクレオチド又は請求項３４に記載のベクターを含む、単離された宿主細胞。
【請求項３６】
１）請求項１〜請求項３２のいずれか１項に記載のタンパク質性ヘテロ二量体と、
２）前記タンパク質性ヘテロ二量体の前記第１のメンバーの２つにより形成された第１のホモ二量体と、
３）前記タンパク質性ヘテロ二量体の前記第２のメンバーの２つにより形成された第２のホモ二量体とを含み、
ただし、前記タンパク質性ヘテロ二量体の前記タンパク質混合物におけるパーセンテージは、少なくとも５０％である、タンパク質混合物。
【請求項３７】
請求項１〜請求項３２のいずれか１項に記載のタンパク質性ヘテロ二量体、又は請求項３６に記載のタンパク質混合物を含み、任意選択的に薬学的に許容される賦形剤を含む、医薬組成物。
【請求項３８】
腫瘍又は腫瘍細胞の成長阻害のための医薬品及び／又はキットの製造における請求項１〜請求項３２のいずれか１項に記載のタンパク質性ヘテロ二量体又は請求項３６に記載のタンパク質混合物の用途。
【請求項３９】
（ｉ）前記タンパク質性ヘテロ二量体の発現に影響を与える条件下で請求項３５に記載の宿主細胞を培養することと、ｉｉ）発現された前記タンパク質性ヘテロ二量体、又は前記タンパク質性ヘテロ二量体を含む前記タンパク質混合物を得ることとを含む、請求項１〜請求項３２のいずれか１項に記載のタンパク質性ヘテロ二量体又は請求項３６に記載のタンパク質混合物の製造方法。
【発明の詳細な説明】
【背景技術】
【０００１】
腫瘍抗原に対する免疫応答（参照文献：Ｄｉｓｉｓら．（１９９７）  Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｏｎｃｏｌ．１５：  ３３６３−３３６７）を検出できるが、悪性細胞が誘発する疾患は一般に、拒絶反応につながる免疫応答を引き起こすことができない。関連研究により、サイトカイン及び共刺激分子などの免疫調節性分子を細胞内に導入することにより腫瘍細胞の免疫原性を増強できることが証明されていた。しかしながら、残留の癌細胞を根絶するには、直接遺伝子導入ができない広範囲に散在する微小転移性腫瘍沈着物の標的化が必要な場合がある。また、導入された免疫調節性分子の発現及び安定性は常に満足のいくものではない。免疫系の細胞によって生成されたサイトカインなどの免疫調節物質は、適応免疫応答の細胞を直接的又は間接的に活性化させ、保護的な抗腫瘍免疫の誘発において重要な役割を果たすことができる。自然免疫系はＩＦＮ−α、ＴＮＦ−α及びインターロイキンなどの炎症誘発性サイトカインの放出を引き起こす細菌産物又は「危険」シグナルによりトリガーされる。
【０００２】
複数の研究により、免疫調節物質は動物モデルの中でも癌患者の中でも、抗腫瘍効果を果たすのに有用であることが示されていた。しかしながら、免疫調節物質の用途に関係する半減期の短さと全身毒性により、それらの使用が大いに制限されていた。中国特許出願第２００８８０１１７２２５．８号において、腫瘍関連抗原を標的とする抗体のＣ末端に付着されるインターフェロンを含むキメラ構築物が紹介されている。しかしながら、そのようなキメラ構築物によって発現された融合タンパク質はインビボで一般に、極めて不安定であり、その発現量は一般に、産業的な規模の生産には不十分である。
【０００３】
近年、二重特異性抗体などのヘテロ二量体タンパク質が開発され、２つの異なる標的の共結合は可能になる。従来、二重特異性抗体はそれぞれ単一のモノクローナル抗体（ｍＡｂ）を産生する２つの細胞株を融合することによって生成された。しかしながら、かかるプロセスにおいては、二重特異性抗体（又はヘテロ二量体タンパク質）は量が少ないだけでなく、所望の産物を単離するために徹底的な精製が必要である。
【０００４】
９０年代に、２つの単一特異性開始タンパク質のＣＨ３領域に非対称修飾を導入することで二重特異性抗体の収量を向上させた「ノブアンドホール（ｋｎｏｂ−ａｎｄ−ｈｏｌｅ）」モデルはＣａｒｔｅｒらによって開発された（参照文献：Ｒｉｄｇｗａｙ，Ｐｒｅｓｔａら，１９９６；Ｃａｒｔｅｒら，２００１）。しかしながら、「ノブアンドホール」修飾が行われたとしても、タンパク質ホモ二量体の生成を効果的に制御又は解消することができず、ヘテロ二量体タンパク質の収量をさらに向上させるのは困難である。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
従って、産業的な規模で比較的高い収量で生産することができ、インビボにおいて比較的長い半減期を有し、様々な新生物、異なる種類の癌及び／又は腫瘍など、細胞及び／又は組織の過剰増殖に関連する障害又は疾患を治療するのに有用な免疫調節物質の標的化発現が必要である。また、複雑な精製プロセスの回避及び／又は望ましくない不純物に関連するリスクの低減のために、そのような産物の収量は十分に高い。
【課題を解決するための手段】
【０００６】
本発明は、上述した課題を解決するためになされるものであり、関連する有益な効果をも提供する。本発明は腫瘍成長の阻害に有用なタンパク質性ヘテロ二量体、及び当該タンパク質性ヘテロ二量体を含む組成物、医薬品及び／又はキットを含む。また、本発明は前記タンパク質性ヘテロ二量体を含み、（望ましくないタンパク質ホモ二量体など）望ましくない不純物を（もし存在する場合）非常に少ない量で含むタンパク質混合物を提供する。さらに、本発明はタンパク質性ヘテロ二量体又はタンパク質混合物の製造方法、並びに癌の治療を含むがこれに限定されない、腫瘍成長の阻害におけるタンパク質性ヘテロ二量体及び／又はタンパク質混合物の医薬的用途を含む。
【０００７】
いくつかの態様において、本発明に係るタンパク質性ヘテロ二量体は有意な抗腫瘍活性を有する。いくつかの態様において、本発明に係るタンパク質性ヘテロ二量体は高い発現量を有する。いくつかの態様において、本発明に係るタンパク質性ヘテロ二量体はインビボで長い半減期を有する。いくつかの態様において、本発明に係るタンパク質性ヘテロ二量体は大規模な産業化された生産に特に好適である。いくつかの態様において、本発明に係る前記タンパク質性ヘテロ二量体を含むタンパク質混合物は望ましくない不純物を非常に少なく含む又は実質的に含まない。
【０００８】
一つの態様において、本発明はタンパク質性ヘテロ二量体を提供する。当該タンパク質性ヘテロ二量体は第１のメンバー及び第１のメンバーとは異なる第２のメンバーを含んでもよく、第１のメンバーは軽鎖、及び第１のＦｃ領域を含む重鎖を含み、当該軽鎖が重鎖と複合されて腫瘍抗原への結合特異性を示す標的部分が形成される、第２のメンバーは第２のＦｃ領域と融合される免疫調節物質を含むポリペプチドを含んでもよい、第１のＦｃ領域と第２のＦｃ領域との複合により、第１のメンバーは第２のメンバーと会合してヘテロ二量体を形成できる、第１のＦｃ領域は第１の修飾を含む且つ／又は第２のＦｃ領域は第２の修飾を含んでもよく、ただしノブ修飾及びホール修飾を含むノブアンドホール修飾と比べ、第１の修飾及び／又は第２の修飾は第１のメンバーと第２のメンバーとのヘテロ二量体化をより効果的に促進できる。ノブ修飾及びホール修飾を含むノブアンドホール修飾において、第１のＦｃ領域はノブ修飾を含み、第２のＦｃ領域はホール修飾を含んでもよい。あるいは、第１のＦｃ領域はホール修飾を含み、第２のＦｃ領域はノブ修飾を含んでもよい。
【０００９】
いくつかの実施形態において、第１の修飾はノブ修飾又はホール修飾とは異なるものである、且つ／又は、第２の修飾はノブ修飾又はホール修飾とは異なるものである。
【００１０】
いくつかの実施形態において、哺乳動物細胞で発現される場合、タンパク質性ヘテロ二量体の収量は参照タンパク質の収量より少なくとも１０％高く、参照タンパク質は、ｉ）第１のＦｃ領域でノブ修飾を含むこと、ｉｉ）第２のＦｃ領域でホール修飾を含むこと、ｉｉｉ）本発明に係るタンパク質性ヘテロ二量体の前記第１の修飾及び前記第２の修飾を同時に含まないことにおいて、参照タンパク質と相違する。哺乳動物細胞はＨＥＫ２９３細胞、ＣＨＯ細胞、ＣＯＳ−１細胞及びＮＳ０細胞からなる群からから選択されてもよい。
【００１１】
いくつかの実施形態において、第１のＦｃ領域は第１の修飾を含み、第２のＦｃ領域は第２の修飾を含み、第１の修飾及び第２の修飾はいずれもノブ修飾又はホール修飾とは異なるものである。
【００１２】
いくつかの実施形態において、第２のメンバーに含まれたポリペプチドは融合タンパク質であり、免疫調節物質のＣ末端が第２のＦｃ領域のＮ末端と直接的又は間接的に融合されて融合タンパク質が形成される。
【００１３】
いくつかの実施形態において、腫瘍抗原はＥＧＦＲ、ＥＧＦＲ変異体、ＨＥＲ２／ｎｅｕ、ＧＰＣ３、ＦＡＰ、Ｍｕｃ１、ＭＵＣ５ＡＣ及びメソセリンからなる群から選択される。
【００１４】
いくつかの実施形態において、標的部分の軽鎖は、腫瘍抗原に特異的に指向された抗体の軽鎖の対応するＣＤＲｓに含まれたアミノ酸配列と少なくとも６０％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％同一のアミノ酸配列を含むＣＤＲｓを含む。
【００１５】
いくつかの実施形態において、標的部分の軽鎖は、腫瘍抗原に特異的に指向された抗体の軽鎖の対応する可変領域に含まれたアミノ酸配列と少なくとも６０％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％同一のアミノ酸配列を含む可変領域を含む。
【００１６】
いくつかの実施形態において、標的部分の軽鎖は、腫瘍抗原に特異的に指向された抗体の軽鎖の対応するアミノ酸配列に含まれたアミノ酸配列と少なくとも６０％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％同一のアミノ酸配列を含む。
【００１７】
いくつかの実施形態において、標的部分の重鎖は、腫瘍抗原に特異的に指向された抗体の重鎖の対応するＣＤＲｓに含まれたアミノ酸配列と少なくとも６０％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％と同一のアミノ酸配列を含むＣＤＲｓを含む。
【００１８】
いくつかの実施形態において、標的部分の重鎖は、腫瘍抗原に特異的に指向された抗体の重鎖の対応する可変領域に含まれたアミノ酸配列と少なくとも６０％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％と同一のアミノ酸配列を含む可変領域を含む。
【００１９】
いくつかの実施形態において、標的部分の重鎖は、腫瘍抗原に特異的に指向された抗体の重鎖の対応するアミノ酸配列に含まれたアミノ酸配列と少なくとも６０％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％同一のアミノ酸配列を含む。
【００２０】
いくつかの実施形態において、標的部分の軽鎖は、腫瘍抗原に特異的に指向された抗体の軽鎖の対応するＣＤＲｓに含まれたアミノ酸配列と少なくとも６０％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％同一のアミノ酸配列を含むＣＤＲｓを含む、標的部分の重鎖は、腫瘍抗原に特異的に指向された抗体の重鎖の対応するＣＤＲｓに含まれたアミノ酸配列と少なくとも６０％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％と同一のアミノ酸配列を含むＣＤＲｓを含む。
【００２１】
いくつかの実施形態において、標的部分の軽鎖は、腫瘍抗原に特異的に指向された抗体の軽鎖の対応する可変領域に含まれたアミノ酸配列と少なくとも６０％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％同一のアミノ酸配列を含む可変領域を含む、標的部分の重鎖は、腫瘍抗原に特異的に指向された抗体の重鎖の対応する可変領域に含まれたアミノ酸配列と少なくとも６０％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％と同一のアミノ酸配列を含む可変領域を含む。
【００２２】
いくつかの実施形態において、標的部分の軽鎖は、腫瘍抗原に特異的に指向された抗体の軽鎖の対応するアミノ酸配列に含まれたアミノ酸配列と少なくとも６０％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％同一のアミノ酸配列を含む、標的部分の重鎖は、腫瘍抗原に特異的に指向された抗体の重鎖の対応するアミノ酸配列に含まれたアミノ酸配列と少なくとも６０％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％同一のアミノ酸配列を含む。
【００２３】
いくつかの実施形態において、腫瘍抗原に特異的に指向された抗体は、抗ＥＧＦＲ、抗ＥＧＦＲ変異体、抗ＨＥＲ２／ｎｅｕ、抗ＧＰＣ３、抗ＦＡＰ、抗Ｍｕｃ１、抗ＭＵＣ５ＡＣ及び抗メソセリンからなる群から選択される。
【００２４】
いくつかの実施形態において、免疫調節物質は免疫応答を増強させる。いくつかの実施形態において、免疫調節物質は免疫応答を低下させる。
【００２５】
いくつかの実施形態において、免疫調節物質はサイトカインである。例えば、免疫調節物質はインターフェロン、インターロイキン、ケモカイン、リンホカイン及び腫瘍壊死因子からなる群から選択されたサイトカインであってもよい。
【００２６】
いくつかの実施形態において、免疫調節物質は、インターフェロンα、インターフェロンλ及びインターフェロンβからなる群から選択されたインターフェロンである。
【００２７】
いくつかの実施形態において、免疫調節物質はインターロイキンであり、当該インターロイキンはインターロイキン１０、インターロイキン２及び／又はスーパーインターロイキン２を含む。
【００２８】
いくつかの実施形態において、第１のＦｃ領域及び第２のＦｃ領域は免疫グロブリンのＦｃ領域に由来する。
【００２９】
例えば、免疫グロブリンはＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３及びＩｇＧ４からなる群から選択されもてよい。
【００３０】
いくつかの実施形態において、第１のＦｃ領域及び第２のＦｃ領域は免疫グロブリンのＦｃ領域に由来し、当該免疫グロブリンはヒトＩｇＧ１である。
【００３１】
いくつかの実施形態において、第２のＦｃ領域は免疫調節物質とインフレームで融合される。
【００３２】
いくつかの実施形態において、第２のＦｃ領域はリンカーを介して免疫調節物質とインフレームで融合される。
【００３３】
いくつかの実施形態において、第２のメンバーに含まれたポリペプチドは２種以上の免疫調節物質を含み、当該２種以上の免疫調節物質はインフレームで互いに融合され且つ第２のＦｃ領域と融合され、ただし、当該２種以上の免疫調節物質は第２のＦｃ領域に対向するＮ末端に配置される。例えば、当該２種以上の免疫調節物質は同一であってもよい。
【００３４】
いくつかの実施形態において、第１の修飾は位置Ｔ３６６におけるアミノ酸置換、並びにＹ３４９、Ｆ４０５、Ｋ４０９、Ｄ３９９、Ｋ３６０、Ｑ３４７、Ｋ３９２及びＳ３５４からなる群から選択された１つ以上の位置におけるアミノ酸置換を含み、ただしアミノ酸の位置は、ＫＡＢＡＴ番号のＥＵインデックスに基づいて決定される。
【００３５】
いくつかの実施形態において、第１の修飾は、Ｙ３４９Ｃ、Ｙ３４９Ｄ、Ｄ３９９Ｓ、Ｆ４０５Ｋ、Ｋ３６０Ｅ、Ｋ４０９Ａ、Ｋ４０９Ｅ、Ｑ３４７Ｅ、Ｑ３４７Ｒ、Ｓ３５４Ｄ、Ｋ３９２Ｄ及びＴ３６６Ｗからなる群から選択されたアミノ酸置換を含む。
【００３６】
いくつかの実施形態において、第１の修飾は、２〜５個のアミノ酸置換を含む。
【００３７】
いくつかの実施形態において、第１の修飾は、１）Ｙ３４９及びＴ３６６；２）Ｙ３４９、Ｔ３６６及びＦ４０５；３）Ｙ３４９、Ｔ３６６及びＫ４０９；４）Ｙ３４９、Ｔ３６６、Ｆ４０５、Ｋ３６０及びＱ３４７；５）Ｙ３４９、Ｔ３６６、Ｆ４０５及びＱ３４７；６）Ｙ３４９、Ｔ３６６、Ｋ４０９、Ｋ３６０及びＱ３４７；７）Ｙ３４９、Ｔ３６６、Ｋ４０９及びＱ３４７；８）Ｔ３６６、Ｋ４０９及びＫ３９２；９）Ｔ３６６及びＫ４０９；１０）Ｔ３６６、Ｋ４０９、Ｙ３４９及びＳ３５４；１１）Ｔ３６６及びＦ４０５；１２）Ｔ３６６、Ｆ４０５及びＤ３９９；１３）Ｔ３６６、Ｆ４０５、Ｙ３４９及びＳ３５４から選択されたいずれかの群に示す位置におけるアミノ酸置換を含む。
【００３８】
いくつかの実施形態において、第１の修飾は、１）Ｙ３４９Ｃ及びＴ３６６Ｗ；２）Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｗ及びＦ４０５Ｋ；３）Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｗ及びＫ４０９Ｅ；４）Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｗ及びＫ４０９Ａ；５）Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、Ｆ４０５Ｋ、Ｋ３６０Ｅ及びＱ３４７Ｅ；６）Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、Ｆ４０５Ｋ及びＱ３４７Ｒ；７）Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、Ｋ４０９Ａ、Ｋ３６０Ｅ及びＱ３４７Ｅ；８）Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、Ｋ４０９Ａ及びＱ３４７Ｒ；９）Ｔ３６６Ｗ、Ｋ４０９Ａ及びＫ３９２Ｄ；１０）Ｔ３６６Ｗ及びＫ４０９Ａ；１１）Ｔ３６６Ｗ、Ｋ４０９Ａ及びＹ３４９Ｄ；１２）Ｔ３６６Ｗ、Ｋ４０９Ａ、Ｙ３４９Ｄ及びＳ３５４Ｄ；１３）Ｔ３６６Ｗ及びＦ４０５Ｋ；１４）Ｔ３６６Ｗ、Ｆ４０５Ｋ及びＤ３９９Ｓ；１５）Ｔ３６６Ｗ、Ｆ４０５Ｋ及びＹ３４９Ｄ；並びに１６）Ｔ３６６Ｗ、Ｆ４０５Ｋ、Ｙ３４９Ｄ及びＳ３５４Ｄから選択されたいずれかの群に示すアミノ酸置換を含む。
【００３９】
いくつかの実施形態において、第２の修飾は、位置Ｔ３６６、Ｌ３６８及びＹ４０７におけるアミノ酸置換、並びにＤ３５６、Ｄ３９９、Ｅ３５７、Ｆ４０５、Ｋ３６０、Ｋ３９２、Ｋ４０９及びＱ３４７からなる群から選択された１つ以上の位置におけるアミノ酸置換を含み、ただしアミノ酸の位置は、ＫＡＢＡＴ番号のＥＵインデックスに基づいて決定される。
【００４０】
いくつかの実施形態において、第２の修飾に含まれたアミノ酸置換は、Ｄ３５６Ｃ、Ｄ３９９Ｓ、Ｅ３５７Ａ、Ｆ４０５Ｋ、Ｋ３６０Ｅ、Ｋ３９２Ｄ、Ｋ４０９Ａ、Ｌ３６８Ａ、Ｌ３６８Ｇ、Ｑ３４７Ｅ、Ｑ３４７Ｒ、Ｔ３６６Ｓ、Ｙ４０７Ａ及びＹ４０７Ｖからなる群から選択される。
【００４１】
いくつかの実施形態において、第２の修飾は、４〜６個の位置におけるアミノ酸置換を含む。
【００４２】
いくつかの実施形態において、第２の修飾は、１）Ｄ３５６、Ｔ３６６、Ｌ３６８、Ｙ４０７及びＦ４０５；２）Ｄ３５６、Ｔ３６６、Ｌ３６８及びＹ４０７；３）Ｄ３５６、Ｔ３６６、Ｌ３６８、Ｙ４０７及びＱ３４７；４）Ｄ３５６、Ｔ３６６、Ｌ３６８、Ｙ４０７、Ｋ３６０及びＱ３４７；５）Ｄ３５６、Ｔ３６６、Ｌ３６８、Ｙ４０７、Ｆ４０５及びＱ３４７；６）Ｄ３５６、Ｔ３６６、Ｌ３６８、Ｙ４０７、Ｆ４０５、Ｋ３６０及びＱ３４７；７）Ｔ３６６、Ｌ３６８、Ｙ４０７、Ｄ３９９及びＦ４０５；８）Ｔ３６６、Ｌ３６８、Ｙ４０７及びＦ４０５；９）Ｔ３６６、Ｌ３６８、Ｙ４０７、Ｆ４０５及びＥ３５７；１０）Ｔ３６６、Ｌ３６８、Ｙ４０７及びＫ４０９；１１）Ｔ３６６、Ｌ３６８、Ｙ４０７、Ｋ４０９及びＫ３９２；１２）Ｔ３６６、Ｌ３６８、Ｙ４０７、Ｋ４０９及びＥ３５７から選択されたいずれかの群に示す位置におけるアミノ酸置換を含む。
【００４３】
いくつかの実施形態において、第２の修飾は、１）Ｄ３５６Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、Ｙ４０７Ｖ及びＦ４０５Ｋ；２）Ｄ３５６Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ及びＹ４０７Ｖ；３）Ｄ３５６Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、Ｙ４０７Ｖ及びＱ３４７Ｒ；４）Ｄ３５６Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、Ｋ３６０Ｅ及びＱ３４７Ｅ；５）Ｄ３５６Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、Ｆ４０５Ｋ及びＱ３４７Ｒ；６）Ｄ３５６Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、Ｆ４０５Ｋ、Ｋ３６０Ｅ及びＱ３４７Ｅ；７）Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、Ｄ３９９Ｓ及びＦ４０５Ｋ；８）Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ｇ、Ｙ４０７Ａ及びＦ４０５Ｋ；９）Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、Ｆ４０５Ｋ及びＥ３５７Ａ；１０）Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、Ｙ４０７Ｖ及びＫ４０９Ａ；１１）Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、Ｋ４０９Ａ及びＫ３９２Ｄ；１２）Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ｇ、Ｙ４０７Ａ及びＫ４０９Ａ；１３）Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、Ｋ４０９Ａ及びＥ３５７Ａから選択されたいずれかの群に示すアミノ酸置換を含む。
【００４４】
いくつかの実施形態において、第１のＦｃ領域は第１の修飾を含み、第２のＦｃ領域は第２の修飾を含む。第１の修飾は位置Ｔ３６６におけるアミノ酸置換、並びにＹ３４９、Ｆ４０５、Ｋ４０９、Ｄ３９９、Ｋ３６０、Ｑ３４７、Ｋ３９２及びＳ３５４からなる群から選択された１つ以上の位置におけるアミノ酸置換を含み、ただしアミノ酸の位置は、ＫＡＢＡＴ番号のＥＵインデックスに基づいて決定される。第２の修飾は、位置Ｔ３６６、Ｌ３６８及びＹ４０７におけるアミノ酸置換、並びにＤ３５６、Ｄ３９９、Ｅ３５７、Ｆ４０５、Ｋ３６０、Ｋ３９２、Ｋ４０９及びＱ３４７からなる群から選択された１つ以上の位置におけるアミノ酸置換を含み、ただしアミノ酸の位置は、ＫＡＢＡＴ番号のＥＵインデックスに基づいて決定される。第１の修飾及び第２の修飾は、本願に定義される通りであってもよい。
【００４５】
いくつかの実施形態において、第１のＦｃ領域は第１の修飾を含み、第２のＦｃ領域は第２の修飾を含み、第１の修飾及び第２の修飾は、１）第１の修飾：Ｙ３４９及びＴ３６６；第２の修飾：Ｄ３５６、Ｔ３６６、Ｌ３６８、Ｙ４０７及びＦ４０５；２）第１の修飾：Ｙ３４９、Ｔ３６６及びＦ４０５；第２の修飾：Ｄ３５６、Ｔ３６６、Ｌ３６８及びＹ４０７；３）第１の修飾：Ｙ３４９、Ｔ３６６及びＫ４０９；第２の修飾：Ｄ３５６、Ｔ３６６、Ｌ３６８、Ｙ４０７及びＦ４０５；４）第１の修飾：Ｙ３４９、Ｔ３６６、Ｆ４０５、Ｋ３６０及びＱ３４７；第２の修飾：Ｄ３５６、Ｔ３６６、Ｌ３６８、Ｙ４０７及びＱ３４７；５）第１の修飾：Ｙ３４９、Ｔ３６６、Ｆ４０５及びＱ３４７；第２の修飾：Ｄ３５６、Ｔ３６６、Ｌ３６８、Ｙ４０７、Ｋ３６０及びＱ３４７；６）第１の修飾：Ｙ３４９、Ｔ３６６、Ｋ４０９、Ｋ３６０及びＱ３４７；第２の修飾：Ｄ３５６、Ｔ３６６、Ｌ３６８、Ｙ４０７、Ｆ４０５及びＱ３４７；７）第１の修飾：Ｙ３４９、Ｔ３６６、Ｋ４０９及びＱ３４７；第２の修飾：Ｄ３５６、Ｔ３６６、Ｌ３６８、Ｙ４０７、Ｆ４０５、Ｋ３６０及びＱ３４７；８）第１の修飾：Ｔ３６６、Ｋ４０９及びＫ３９２；第２の修飾：Ｔ３６６、Ｌ３６８、Ｙ４０７、Ｄ３９９及びＦ４０５；９）第１の修飾：Ｔ３６６及びＫ４０９；第２の修飾：Ｔ３６６、Ｌ３６８、Ｙ４０７及びＦ４０５；１０）第１の修飾：Ｔ３６６、Ｋ４０９及びＹ３４９；第２の修飾：Ｔ３６６、Ｌ３６８、Ｙ４０７、Ｆ４０５及びＥ３５７；１１）第１の修飾：Ｔ３６６、Ｋ４０９、Ｙ３４９及びＳ３５４；第２の修飾：Ｔ３６６、Ｌ３６８、Ｙ４０７、Ｆ４０５及びＥ３５７；１２）第１の修飾：Ｔ３６６及びＦ４０５；第２の修飾：Ｔ３６６、Ｌ３６８、Ｙ４０７及びＫ４０９；１３）第１の修飾：Ｔ３６６、Ｆ４０５及びＤ３９９；第２の修飾：Ｔ３６６、Ｌ３６８、Ｙ４０７、Ｋ４０９及びＫ３９２；１４）第１の修飾：Ｔ３６６、Ｆ４０５及びＹ３４９；第２の修飾：Ｔ３６６、Ｌ３６８、Ｙ４０７、Ｋ４０９及びＥ３５７；１５）第１の修飾：Ｔ３６６、Ｆ４０５、Ｙ３４９及びＳ３５４；第２の修飾：Ｔ３６６、Ｌ３６８、Ｙ４０７、Ｋ４０９及びＥ３５７から選択されたいずれかの群に示す位置におけるアミノ酸置換を含み、ただしアミノ酸の位置は、ＫＡＢＡＴ番号のＥＵインデックスに基づいて決定される。
【００４６】
いくつかの実施形態において、第１のＦｃ領域は第１の修飾を含み、第２のＦｃ領域は第２の修飾を含み、第１の修飾及び第２の修飾は、１）第１の修飾：Ｙ３４９Ｃ及びＴ３６６Ｗ；第２の修飾：Ｄ３５６Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、Ｙ４０７Ｖ及びＦ４０５Ｋ；２）第１の修飾：Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｗ及びＦ４０５Ｋ；第２の修飾：Ｄ３５６Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ及びＹ４０７Ｖ；３）第１の修飾：Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｗ及びＫ４０９Ｅ；第２の修飾：Ｄ３５６Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、Ｙ４０７Ｖ及びＦ４０５Ｋ；４）第１の修飾：Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｗ及びＫ４０９Ａ；第２の修飾：Ｄ３５６Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、Ｙ４０７Ｖ及びＦ４０５Ｋ；５）第１の修飾：Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、Ｆ４０５Ｋ、Ｋ３６０Ｅ及びＱ３４７Ｅ；第２の修飾：Ｄ３５６Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、Ｙ４０７Ｖ及びＱ３４７Ｒ；６）第１の修飾：Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、Ｆ４０５Ｋ及びＱ３４７Ｒ；第２の修飾：Ｄ３５６Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、Ｋ３６０Ｅ及びＱ３４７Ｅ；７）第１の修飾：Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、Ｋ４０９Ａ、Ｋ３６０Ｅ及びＱ３４７Ｅ；第２の修飾：Ｄ３５６Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、Ｆ４０５Ｋ及びＱ３４７Ｒ；８）第１の修飾：Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、Ｋ４０９Ａ及びＱ３４７Ｒ；第２の修飾：Ｄ３５６Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、Ｆ４０５Ｋ、Ｋ３６０Ｅ及びＱ３４７Ｅ；９）第１の修飾：Ｔ３６６Ｗ、Ｋ４０９Ａ及びＫ３９２Ｄ；第２の修飾：Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、Ｄ３９９Ｓ及びＦ４０５Ｋ；１０）第１の修飾：Ｔ３６６Ｗ及びＫ４０９Ａ；第２の修飾：Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ｇ、Ｙ４０７Ａ及びＦ４０５Ｋ；１１）第１の修飾：Ｔ３６６Ｗ、Ｋ４０９Ａ及びＹ３４９Ｄ；第２の修飾：Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、Ｆ４０５Ｋ及びＥ３５７Ａ；１２）第１の修飾：Ｔ３６６Ｗ、Ｋ４０９Ａ、Ｙ３４９Ｄ及びＳ３５４Ｄ；第２の修飾：Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、Ｆ４０５Ｋ及びＥ３５７Ａ；１３）第１の修飾：Ｔ３６６Ｗ及びＦ４０５Ｋ；第２の修飾：Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、Ｙ４０７Ｖ及びＫ４０９Ａ；１４）第１の修飾：Ｔ３６６Ｗ、Ｆ４０５Ｋ及びＤ３９９Ｓ；第２の修飾：Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、Ｋ４０９Ａ及びＫ３９２Ｄ；１５）第１の修飾：Ｔ３６６Ｗ及びＦ４０５Ｋ；第２の修飾：Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ｇ、Ｙ４０７Ａ及びＫ４０９Ａ；１６）第１の修飾：Ｔ３６６Ｗ、Ｆ４０５Ｋ及びＹ３４９Ｄ；第２の修飾：Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、Ｋ４０９Ａ及びＥ３５７Ａ；１７）第１の修飾：Ｔ３６６Ｗ、Ｆ４０５Ｋ、Ｙ３４９Ｄ及びＳ３５４Ｄ；第２の修飾：Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、Ｋ４０９Ａ及びＥ３５７Ａから選択されたいずれかの群に示すアミノ酸置換を含み、ただしアミノ酸の位置は、ＫＡＢＡＴ番号のＥＵインデックスに基づいて決定される。
【００４７】
いくつかの実施形態において、第１のＦｃ領域は第１の修飾を含み、第２のＦｃ領域は第２の修飾を含み、第１の修飾はアミノ酸置換Ｔ３６６Ｗ及びＫ４０９Ａを含み、第２の修飾はアミノ酸置換Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ｇ、Ｙ４０７Ａ及びＦ４０５Ｋを含み、ただしアミノ酸の位置は、ＫＡＢＡＴ番号のＥＵインデックスに基づいて決定される。
【００４８】
いくつかの実施形態において、標的部分はＥＧＦＲと特異的に結合し、第１のメンバーの軽鎖はＣＤＲ１〜３を含み、ＣＤＲ１のアミノ酸配列は配列番号１０１に記載のとおり、ＣＤＲ２のアミノ酸配列は配列番号１０２に記載のとおり、ＣＤＲ３のアミノ酸配列は配列番号１０３に記載のとおりである。
【００４９】
いくつかの実施形態において、標的部分はＥＧＦＲと特異的に結合し、第１のメンバーの軽鎖は軽鎖可変領域を含み、軽鎖可変領域のアミノ酸配列は配列番号１０４に記載のとおりである。
【００５０】
いくつかの実施形態において、標的部分はＥＧＦＲと特異的に結合し、第１のメンバーの軽鎖のアミノ酸配列は配列番号３７に記載のとおりである。
【００５１】
いくつかの実施形態において、標的部分はＥＧＦＲと特異的に結合し、第１のメンバーの重鎖はＣＤＲ１〜３を含み、ＣＤＲ１のアミノ酸配列は配列番号１０５に記載のとおり、ＣＤＲ２のアミノ酸配列は配列番号１０６に記載のとおり、ＣＤＲ３のアミノ酸配列は配列番号１０７に記載のとおりである。
【００５２】
いくつかの実施形態において、標的部分はＥＧＦＲと特異的に結合し、第１のメンバーの重鎖は重鎖可変領域を含み、当該重鎖可変領域のアミノ酸配列は配列番号１０８に記載のとおりである。
【００５３】
いくつかの実施形態において、標的部分はＥＧＦＲと特異的に結合し、第１のメンバーの重鎖のアミノ酸配列は配列番号３９に記載のとおりである。
【００５４】
いくつかの実施形態において、標的部分はＥＧＦＲ変異体と特異的に結合し、第１のメンバーの軽鎖はＣＤＲ１〜３を含み、ＣＤＲ１のアミノ酸配列は配列番号１０９に記載のとおり、ＣＤＲ２のアミノ酸配列は配列番号１１０に記載のとおり、ＣＤＲ３のアミノ酸配列は配列番号１１１に記載のとおりである。
【００５５】
いくつかの実施形態において、標的部分はＥＧＦＲ変異体と特異的に結合し、第１のメンバーの軽鎖は軽鎖可変領域を含み、軽鎖可変領域のアミノ酸配列は配列番号１１２に記載のとおりである。
【００５６】
いくつかの実施形態において、標的部分はＥＧＦＲ変異体と特異的に結合し、第１のメンバーの軽鎖のアミノ酸配列は配列番号５３に記載のとおりである。
【００５７】
いくつかの実施形態において、標的部分はＥＧＦＲ変異体と特異的に結合し、第１のメンバーの重鎖はＣＤＲ１〜３を含み、ＣＤＲ１のアミノ酸配列は配列番号１１３に記載のとおり、ＣＤＲ２のアミノ酸配列は配列番号１１４に記載のとおり、ＣＤＲ３のアミノ酸配列は配列番号１１５に記載のとおりである。
【００５８】
いくつかの実施形態において、標的部分はＥＧＦＲ変異体と特異的に結合し、第１のメンバーの重鎖は重鎖可変領域を含み、当該重鎖可変領域のアミノ酸配列は配列番号１１６に記載のとおりである。
【００５９】
いくつかの実施形態において、標的部分はＥＧＦＲ変異体と特異的に結合し、第１のメンバーの重鎖のアミノ酸配列は配列番号５５に記載のとおりである。
【００６０】
いくつかの実施形態において、標的部分はＨＥＲ２／ｎｅｕと特異的に結合し、第１のメンバーの軽鎖はＣＤＲ１〜３を含み、ＣＤＲ１のアミノ酸配列は配列番号１１７及び配列番号１２５から選択され、ＣＤＲ２のアミノ酸配列は配列番号１１８及び配列番号１２６から選択され、ＣＤＲ３のアミノ酸配列は配列番号１１９及び配列番号１２７から選択される。
【００６１】
いくつかの実施形態において、標的部分はＨＥＲ２／ｎｅｕと特異的に結合し、第１のメンバーの軽鎖は軽鎖可変領域を含み、当該軽鎖可変領域のアミノ酸配列は配列番号１２０及び配列番号１２８から選択される。
【００６２】
いくつかの実施形態において、標的部分はＨＥＲ２／ｎｅｕと特異的に結合し、第１のメンバーの軽鎖のアミノ酸配列は配列番号４５及び配列番号４９から選択される。
【００６３】
いくつかの実施形態において、標的部分はＨＥＲ２／ｎｅｕと特異的に結合し、第１のメンバーの重鎖はＣＤＲ１〜３を含み、ＣＤＲ１のアミノ酸配列は配列番号１２１及び配列番号１２９から選択され、ＣＤＲ２のアミノ酸配列は配列番号１２２及び配列番号１３０から選択され、ＣＤＲ３のアミノ酸配列は配列番号１２３及び配列番号１３１から選択される。
【００６４】
いくつかの実施形態において、標的部分はＨＥＲ２／ｎｅｕと特異的に結合し、第１のメンバーの重鎖は重鎖可変領域を含み、当該重鎖可変領域のアミノ酸配列は配列番号１２４及び配列番号１３２から選択される。
【００６５】
いくつかの実施形態において、標的部分はＨＥＲ２／ｎｅｕと特異的に結合し、第１のメンバーの重鎖のアミノ酸配列は配列番号４７及び配列番号５１から選択される。
【００６６】
いくつかの実施形態において、標的部分はＧＰＣ３と特異的に結合し、第１のメンバーの抗体軽鎖はＣＤＲ１〜３を含み、ＣＤＲ１のアミノ酸配列は配列番号１３３に記載のとおり、ＣＤＲ２のアミノ酸配列は配列番号１３４に記載のとおり、ＣＤＲ３のアミノ酸配列は配列番号１３５に記載のとおりである。
【００６７】
いくつかの実施形態において、標的部分はＧＰＣ３と特異的に結合し、第１のメンバーの軽鎖は軽鎖可変領域を含み、軽鎖可変領域のアミノ酸配列は配列番号１３６に記載のとおりである。
【００６８】
いくつかの実施形態において、標的部分はＧＰＣ３と特異的に結合し、第１のメンバーの軽鎖のアミノ酸配列は配列番号５７に記載のとおりである。
【００６９】
いくつかの実施形態において、標的部分はＧＰＣ３と特異的に結合し、第１のメンバーの重鎖はＣＤＲ１〜３を含み、ＣＤＲ１のアミノ酸配列は配列番号１３７に記載のとおり、ＣＤＲ２のアミノ酸配列は配列番号１３８に記載のとおり、ＣＤＲ３のアミノ酸配列は配列番号１３９に記載のとおりである。
【００７０】
いくつかの実施形態において、標的部分はＧＰＣ３と特異的に結合し、第１のメンバーの抗体重鎖は重鎖可変領域を含み、当該重鎖可変領域のアミノ酸配列は配列番号１４０に記載のとおりである。
【００７１】
いくつかの実施形態において、標的部分はＧＰＣ３と特異的に結合し、第１のメンバーの重鎖のアミノ酸配列は配列番号５９に記載のとおりである。
【００７２】
いくつかの実施形態において、標的部分はＦＡＰと特異的に結合し、第１のメンバーの軽鎖はＣＤＲ１〜３を含み、ＣＤＲ１のアミノ酸配列は配列番号１４１に記載のとおり、ＣＤＲ２のアミノ酸配列は配列番号１４２に記載のとおり、ＣＤＲ３のアミノ酸配列は配列番号１４３に記載のとおりである。
【００７３】
いくつかの実施形態において、標的部分はＦＡＰと特異的に結合し、第１のメンバーの軽鎖は軽鎖可変領域を含み、軽鎖可変領域のアミノ酸配列は配列番号１４４に記載のとおりである。
【００７４】
いくつかの実施形態において、標的部分はＦＡＰと特異的に結合し、第１のメンバーの軽鎖のアミノ酸配列は配列番号６１に記載のとおりである。
【００７５】
いくつかの実施形態において、標的部分はＦＡＰと特異的に結合し、第１のメンバーの重鎖はＣＤＲ１〜３を含み、ＣＤＲ１のアミノ酸配列は配列番号１４５に記載のとおり、ＣＤＲ２のアミノ酸配列は配列番号１４６に記載のとおり、ＣＤＲ３のアミノ酸配列は配列番号１４７に記載のとおりである。
【００７６】
いくつかの実施形態において、標的部分はＦＡＰと特異的に結合し、第１のメンバーの重鎖は重鎖可変領域を含み、当該重鎖可変領域のアミノ酸配列は配列番号１４８に記載のとおりである。
【００７７】
いくつかの実施形態において、標的部分はＦＡＰと特異的に結合し、第１のメンバーの重鎖のアミノ酸配列は配列番号６３に記載のとおりである。
【００７８】
いくつかの実施形態において、標的部分はＭｕｃ１と特異的に結合し、第１のメンバーの軽鎖はＣＤＲ１〜３を含み、ＣＤＲ１のアミノ酸配列は配列番号１４９に記載のとおり、ＣＤＲ２のアミノ酸配列は配列番号１５０に記載のとおり、ＣＤＲ３のアミノ酸配列は配列番号１５１に記載のとおりである。
【００７９】
いくつかの実施形態において、標的部分はＭｕｃ１と特異的に結合し、第１のメンバーの軽鎖は軽鎖可変領域を含み、軽鎖可変領域のアミノ酸配列は配列番号１５２に記載のとおりである。
【００８０】
いくつかの実施形態において、標的部分はＭｕｃ１と特異的に結合し、第１のメンバーの軽鎖のアミノ酸配列は配列番号６５に記載のとおりである。
【００８１】
いくつかの実施形態において、標的部分はＭｕｃ１と特異的に結合し、第１のメンバーの重鎖はＣＤＲ１〜３を含み、ＣＤＲ１のアミノ酸配列は配列番号１５３に記載のとおり、ＣＤＲ２のアミノ酸配列は配列番号１５４に記載のとおり、ＣＤＲ３のアミノ酸配列は配列番号１５５に記載のとおりである。
【００８２】
いくつかの実施形態において、標的部分はＭｕｃ１と特異的に結合し、第１のメンバーの重鎖は重鎖可変領域を含み、当該重鎖可変領域のアミノ酸配列は配列番号１５６に記載のとおりである。
【００８３】
いくつかの実施形態において、標的部分はＭｕｃ１と特異的に結合し、第１のメンバーの重鎖のアミノ酸配列は配列番号６７に記載のとおりである。
【００８４】
いくつかの実施形態において、標的部分はメソセリンと特異的に結合し、第１のメンバーの軽鎖はＣＤＲ１〜３を含み、ＣＤＲ１のアミノ酸配列は配列番号１６５に記載のとおり、ＣＤＲ２のアミノ酸配列は配列番号１６６に記載のとおり、ＣＤＲ３のアミノ酸配列は配列番号１６７に記載のとおりである。
【００８５】
いくつかの実施形態において、標的部分はメソセリンと特異的に結合し、第１のメンバーの軽鎖は軽鎖可変領域を含み、軽鎖可変領域のアミノ酸配列は配列番号１６８に記載のとおりである。
【００８６】
いくつかの実施形態において、標的部分はメソセリンと特異的に結合し、第１のメンバーの軽鎖のアミノ酸配列は配列番号７３に記載のとおりである。
【００８７】
いくつかの実施形態において、標的部分はメソセリンと特異的に結合し、第１のメンバーの重鎖はＣＤＲ１〜３を含み、ＣＤＲ１のアミノ酸配列は配列番号１６９に記載のとおり、ＣＤＲ２のアミノ酸配列は配列番号１７０に記載のとおり、ＣＤＲ３のアミノ酸配列は配列番号１７１に記載のとおりである。
【００８８】
いくつかの実施形態において、標的部分はメソセリンと特異的に結合し、第１のメンバーの重鎖は重鎖可変領域を含み、当該重鎖可変領域のアミノ酸配列は配列番号１７２に記載のとおりである。
【００８９】
いくつかの実施形態において、標的部分はメソセリンと特異的に結合し、第１のメンバーの重鎖のアミノ酸配列は配列番号７５に記載のとおりである。
【００９０】
いくつかの実施形態において、標的部分はＭＵＣ５ＡＣと特異的に結合し、第１のメンバーの軽鎖はＣＤＲ１〜３を含み、ＣＤＲ１のアミノ酸配列は配列番号１５７に記載のとおり、ＣＤＲ２のアミノ酸配列は配列番号１５８に記載のとおり、ＣＤＲ３のアミノ酸配列は配列番号１５９に記載のとおりである。
【００９１】
いくつかの実施形態において、標的部分はＭＵＣ５ＡＣと特異的に結合し、第１のメンバーの軽鎖は軽鎖可変領域を含み、軽鎖可変領域のアミノ酸配列は配列番号１６０に記載のとおりである。
【００９２】
いくつかの実施形態において、標的部分はＭＵＣ５ＡＣと特異的に結合し、第１のメンバーの軽鎖のアミノ酸配列は配列番号６９に記載のとおりである。
【００９３】
いくつかの実施形態において、標的部分はＭＵＣ５ＡＣと特異的に結合し、第１のメンバーの重鎖はＣＤＲ１〜３を含み、ＣＤＲ１のアミノ酸配列は配列番号１６１に記載のとおり、ＣＤＲ２のアミノ酸配列は配列番号１６２に記載のとおり、ＣＤＲ３のアミノ酸配列は配列番号１６３に記載のとおりである。
【００９４】
いくつかの実施形態において、標的部分はＭＵＣ５ＡＣと特異的に結合し、第１のメンバーの重鎖は重鎖可変領域を含み、当該重鎖可変領域のアミノ酸配列は配列番号１６４に記載のとおりである。
【００９５】
いくつかの実施形態において、標的部分はＭＵＣ５ＡＣと特異的に結合し、第１のメンバーの重鎖のアミノ酸配列は配列番号７１に記載のとおりである。
【００９６】
いくつかの実施形態において、第１のメンバーの重鎖で、第１のＦｃ領域のアミノ酸配列は配列番号１、４、５、６、７、９、１１、１３、１５、１７、１９、２１、２２、２４、２６、２７及び２９から選択される。
【００９７】
いくつかの実施形態において、第２のメンバーに含まれた免疫調節物質のアミノ酸配列は配列番号１７３〜１８０から選択される。
【００９８】
いくつかの実施形態において、第２のメンバーに含まれた第２のＦｃ領域のアミノ酸配列は配列番号２、３、８、１０、１２、１４、１６、１８、２０、２３、２５及び２８から選択される。
【００９９】
いくつかの実施形態において、第２のメンバーに含まれたポリペプチドのアミノ酸配列は配列番号７７、８０、８２、８４、８６、８９、９１及び９７から選択される。
【０１００】
いくつかの実施形態において、第１のメンバーに含まれた軽鎖のアミノ酸配列は配列番号３７、４５、４９、５３、５７、６１、６５、６９及び７３から選択され、第１のメンバーに含まれた重鎖のアミノ酸配列は配列番号３９、４７、５１、５５、５９、６３、６７、７１及び７５から選択され、第２のメンバーに含まれたポリペプチドのアミノ酸配列は配列番号７７、８０、８２、８４、８６、８９、９１及び９７から選択される。
【０１０１】
いくつかの実施形態において、ノブアンドホール修飾はノブ修飾及びホール修飾を含み、ただしノブ修飾はアミノ酸置換Ｙ３４９Ｃ及びＴ３６６Ｗを含み、ホール修飾はアミノ酸置換Ｄ３５６Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ及びＹ４０７Ｖを含み、ただしアミノ酸の位置は、ＫＡＢＡＴ番号のＥＵインデックスに基づいて決定される。場合によっては、ノブ修飾は第１のＦｃ領域に含まれ、ホール修飾は第２のＦｃ領域に含まれる。場合によっては、ノブ修飾は第２のＦｃ領域に含まれ、ホール修飾は第１のＦｃ領域に含まれる。
【０１０２】
別の態様において、本発明は単離されたポリヌクレオチドを提供し、当該単離されたポリヌクレオチドは本発明に係るタンパク質性ヘテロ二量体をコードする。いくつかの実施形態において、単離されたポリヌクレオチドは本発明に係るタンパク質性ヘテロ二量体のサブユニット（例えば、メンバー）又は断片をコードする。
【０１０３】
別の態様において、本発明はベクターを提供し、当該ベクターは本発明に係る単離されたポリヌクレオチドを含む。
【０１０４】
別の態様において、本発明は単離された宿主細胞を提供し、当該宿主細胞は本発明に係る単離されたポリヌクレオチド又はベクターを含む。
【０１０５】
別の態様において、本発明はタンパク質混合物を提供し、当該タンパク質混合物は、１）本発明に係るタンパク質性ヘテロ二量体と、２）当該タンパク質性ヘテロ二量体の第１のメンバーのうちの２つにより形成された第１のホモ二量体と、３）タンパク質性ヘテロ二量体の第２のメンバーのうちの２つにより形成された第２のホモ二量体とを含み、ただし、タンパク質性ヘテロ二量体のタンパク質混合物におけるパーセンテージは少なくとも５０％である。いくつかの実施形態において、第２のホモ二量体のパーセンテージは第１のホモ二量体のパーセンテージより小さい。いくつかの実施形態において、第２のホモ二量体のパーセンテージは最大１０％である。いくつかの実施形態において、タンパク質混合物は第２のホモ二量体を実質的に含まない。例えば、タンパク質混合物はそれを発現する細胞から直接得られてもよい。例えば、タンパク質混合物におけるタンパク質性ヘテロ二量体は発現後に精製されない。例えば、タンパク質の発現後に、混合物から望ましくないタンパク質二量体又は多量体（例えば、タンパク質ホモ二量体）が除去されない。
【０１０６】
別の態様において、本発明は医薬組成物を提供し、当該医薬組成物は本発明に係るタンパク質性ヘテロ二量体、又は本発明に係るタンパク質混合物を含み、任意選択的に薬学的に許容される賦形剤を含む。
【０１０７】
いくつかの実施形態において、医薬組成物は経口投与、静脈内投与、筋肉内投与、腫瘍部位でのインサイチュ投与、吸入、直腸投与、膣内投与、経皮投与又は皮下貯蔵所による投与用のものとして製造される。
【０１０８】
別の態様において、本発明は、腫瘍又は腫瘍細胞の成長阻害のための医薬品及び／又はキットの製造における本発明に係るタンパク質性ヘテロ二量体又はタンパク質混合物の用途を提供する。
【０１０９】
別の態様において、本発明は、腫瘍又は腫瘍細胞の成長の阻害方法を提供し、当該方法は、腫瘍又は腫瘍細胞を有効量の本発明に係るタンパク質性ヘテロ二量体又は本発明に係るタンパク質混合物と接触させることを含む。いくつかの実施形態において、当該接触はインビトロ又はインビボで行われる。
【０１１０】
例えば、本発明は、適用対象における腫瘍／癌の治療方法を提供し、当該方法は有効量の本発明に係るタンパク質性ヘテロ二量体又は本発明に係るタンパク質混合物を適用対象に投与することを含む。
【０１１１】
別の態様において、本発明は、タンパク質性ヘテロ二量体、又はタンパク質性ヘテロ二量体を含むタンパク質混合物の製造方法を提供し、当該方法は、（ｉ）タンパク質性ヘテロ二量体の発現に影響を与える条件下で本発明に係る宿主細胞を培養することと、（ｉｉ）発現されたタンパク質性ヘテロ二量体、又は発現されたタンパク質性ヘテロ二量体を含むタンパク質混合物を得ることとを含む。
【０１１２】
本発明の他の態様及び有益な効果は、本発明の例示的実施形態が示される以下の詳細な説明により当業者に明確なものになる。なお、本発明は他の及び異なる実施形態を有してもよく、そのいくつかの詳細は本発明から逸脱することなく様々な点において変更できる。従って、図面及び明細書は、本質的に限定するためのものではなく例示的なものと見なされるべきである。
【援用による参照資料の組み込み】
【０１１３】
本明細書で言及される全ての刊行物、特許及び特許出願は、個々の刊行物、特許又は特許出願が援用により具体的で且つ個別に組み込まれる場合と同じ程度に、援用により本明細書に組み込まれる。
【図面の簡単な説明】
【０１１４】
本発明の新規な特徴は、添付の特許請求の範囲に詳細に記載される。例示的な実施形態が記述される以下の詳細な説明を参照することにより、本発明の特徴及び有益な効果に対するよりよい理解を得ることができる。実施形態において、本発明の原理が適用され、以下の各図が参照される。
【図１Ａ】図１Ａは、本発明に係るタンパク質性ヘテロ二量体の例を示す。
【図１Ｂ】図１Ｂは、本発明に係るタンパク質性ヘテロ二量体の例を示す。
【図２Ａ】図２Ａは、ＳＤＳ−ＰＡＧＥ分析による、本発明に係るタンパク質性ヘテロ二量体の形成の結果を示す。
【図２Ｂ】図２Ｂは、ＳＤＳ−ＰＡＧＥ分析による、本発明に係るタンパク質性ヘテロ二量体の形成の結果を示す。
【図２Ｃ】図２Ｃは、ＳＤＳ−ＰＡＧＥ分析による、本発明に係るタンパク質性ヘテロ二量体の形成の結果を示す。
【図２Ｄ】図２Ｄは、ＳＤＳ−ＰＡＧＥ分析による、本発明に係るタンパク質性ヘテロ二量体の形成の結果を示す。
【図２Ｅ】図２Ｅは、ＳＤＳ−ＰＡＧＥ分析による、本発明に係るタンパク質性ヘテロ二量体の形成の結果を示す。
【図２Ｆ】図２Ｆは、ＳＤＳ−ＰＡＧＥ分析による、本発明に係るタンパク質性ヘテロ二量体の形成の結果を示す。
【図２Ｇ】図２Ｇは、ＳＤＳ−ＰＡＧＥ分析による、本発明に係るタンパク質性ヘテロ二量体の形成の結果を示す。
【図３】図３は、異なるタンパク質性ヘテロ二量体の形成の比較結果を示す。
【図４】図４は、異なるＦｃ領域と融合された免疫調節物質のタンパク質発現の結果比較を示す。
【図５】図５は、本発明に係るタンパク質性ヘテロ二量体の特異的な標的結合親和性を示す。
【図６】図６は、本発明に係るタンパク質性ヘテロ二量体の標的結合親和性を示す。
【図７】図７は、本発明に係るタンパク質性ヘテロ二量体の特異的な標的結合親和性を示す。
【図８Ａ】図８Ａは、本発明に係るタンパク質性ヘテロ二量体の特異的な標的結合親和性を示す。
【図８Ｂ】図８Ｂは、本発明に係るタンパク質性ヘテロ二量体の特異的な標的結合親和性を示す。
【図９】図９は、本発明に係るタンパク質性ヘテロ二量体の特異的な標的結合親和性を示す。
【図１０】図１０は、本発明に係るタンパク質性ヘテロ二量体の特異的な標的結合親和性を示す。
【図１１】図１１は、本発明に係るタンパク質性ヘテロ二量体における免疫調節物質の存在を示す。
【図１２】図１２は、本発明に係るタンパク質性ヘテロ二量体における免疫調節物質の存在を示す。
【図１３Ａ】図１３Ａは、本発明に係るタンパク質性ヘテロ二量体の抗ウイルス活性を示す。
【図１３Ｂ】図１３Ｂは、本発明に係るタンパク質性ヘテロ二量体の抗ウイルス活性を示す。
【図１３Ｃ】図１３Ｃは、本発明に係るタンパク質性ヘテロ二量体の抗ウイルス活性を示す。
【図１４Ａ】図１４Ａは、本発明に係るタンパク質性ヘテロ二量体のインターロイキン活性を示す。
【図１４Ｂ】図１４Ｂは、本発明に係るタンパク質性ヘテロ二量体のインターロイキン活性を示す。
【図１５Ａ】図１５Ａは、本発明に係るタンパク質性ヘテロ二量体のインビボ抗腫瘍活性を示す。
【図１５Ｂ】図１５Ｂは、本発明に係るタンパク質性ヘテロ二量体のインビボ抗腫瘍活性を示す。
【図１６Ａ】図１６Ａは、本発明に係るタンパク質性ヘテロ二量体のインビボ抗腫瘍活性を示す。
【図１６Ｂ】図１６Ｂは、本発明に係るタンパク質性ヘテロ二量体のインビボ抗腫瘍活性を示す。
【図１６Ｃ】図１６Ｃは、本発明に係るタンパク質性ヘテロ二量体のインビボ抗腫瘍活性を示す。
【図１７】図１７は、本発明に係るタンパク質性ヘテロ二量体のインビボ抗腫瘍活性を示す。
【図１８Ａ】図１８Ａは、本発明に係るタンパク質性ヘテロ二量体のインビボ抗腫瘍活性を示す。
【図１８Ｂ】図１８Ｂは、本発明に係るタンパク質性ヘテロ二量体のインビボ抗腫瘍活性を示す。
【図１９】図１９は、本発明に係るタンパク質性ヘテロ二量体のインビボ標的化活性を示す。
【図２０】図２０は、本発明に係るタンパク質性ヘテロ二量体のＡＤＣＣ活性を示す。
【図２１】図２１は、本発明に係るタンパク質性ヘテロ二量体の特異的な標的結合親和性を示す。
【図２２】図２２は、本発明に係るタンパク質性ヘテロ二量体の特異的な標的結合親和性を示す。
【図２３】図２３は、本発明に係るタンパク質性ヘテロ二量体の特異的な標的結合親和性を示す。
【図２４】図２４は、本発明に係るタンパク質性ヘテロ二量体のインビボ抗腫瘍活性を示す。
【図２５】図２５は、本発明に係るタンパク質性ヘテロ二量体のインビボ抗腫瘍活性を示す。
【発明を実施するための形態】
【０１１５】
本発明の実施形態を説明するにあたり、下記実施形態は例示的なものとして提供され、本発明の実施に際し、本明細書に記載の本発明の実施形態の様々な代替的な方式を採用できることが理解されるべきである。当業者は本開示から逸脱することなく、多数の変形、変更及び置換に想到し得る。
【０１１６】
特に定義される場合を除き、本明細書で使用される技術用語及び科学用語は、当業者が通常理解されるものと同一の意味を有する。本明細書に記載の方法及び材料に類似する又は同等なものは、本発明の実施又はテストのために利用できるが、以下適切な方法又は材料が説明される。矛盾が生じた場合、本明細書及びこの中に記載の定義に準拠する。また、材料、方法及び実施例は例示的なものであり、制限を加えるためのものではない。当業者は本開示から逸脱することなく、多数の変形、変更及び置換に想到し得る。
【０１１７】
文脈の中で特に説明がなされる場合を除き、本明細書で使用される単数形「１つ、１種」及び「当該」は一般に、複数の言及も含む。
【０１１８】
本明細書で使用される用語「タンパク質性」とは一般に、ポリペプチド又はタンパク質に関連する、類似するもの、又はポリペプチドもしくはタンパク質そのものに由来する材料又は分子を指す。例えば、本発明に係るタンパク質性ヘテロ二量体はヘテロ二量体タンパク質、２つ以上のポリペプチドを含むヘテロ二量体であってもよい。
【０１１９】
本明細書で使用される用語「ヘテロ二量体」とは一般に、２つの異なるメンバーからなる分子（例えば、タンパク質性分子）を指す。ヘテロ二量体の２つのメンバーは構造的に、機能的に、活性的に及び／又は組成的に相違してもよい。例えば、２つの異なるメンバーはこれらのポリペプチドを形成するアミノ酸残基の順番、数量又は種類において相違するポリペプチドを含んでもよい。ヘテロ二量体の２つの異なるメンバーのそれぞれは１つ、２つの又はそれ以上のユニット、ポリペプチド鎖又は部分を独立して含んでもよい。
【０１２０】
本明細書で使用される用語「標的部分」とは一般に、標的分子、細胞、粒子、組織もしくは凝集体と特異的に、選択的に又は優先的に結合する分子、複合体又は凝集体を指す。例えば、標的部分は抗体、抗原結合抗体断片、二重特異性抗体又は抗体に基づく他の分子もしくは化合物であってもよい。標的部分の他の例として、アプタマー、アビマー、受容体結合リガンド、核酸、ビオチン−アビジン結合対、結合ペプチド又はタンパク質等を含むが、これらに限定されない。用語「標的部分」及び「結合部分」は本明細書で入れ替えて使用できる。
【０１２１】
本明細書で使用される用語「腫瘍抗原」とは一般に、宿主の中で免疫応答をトリガーする能力を有する、腫瘍細胞の中で又は腫瘍細胞によって生成された抗原性物質を指す。例えば、腫瘍抗原は、腫瘍細胞の一部を構成し腫瘍特異的細胞傷害性Ｔリンパ球を誘導できるタンパク質、ポリペプチド、ペプチド又はその断片であってもよい。腫瘍抗原ペプチドは腫瘍抗原が腫瘍細胞の中で分解された結果として生成され、且つ、ＨＬＡ分子との結合により細胞表面で発現されたら腫瘍特異的細胞傷害性Ｔリンパ球を誘導又は活性化できるペプチドであってもよい。いくつかの実施形態において、用語「腫瘍抗原」とは、癌細胞において排他的に又は優先的に又は示差的に発現される、且つ／又は、癌細胞に関連として発見されることにより、癌に優先的又は特異的な標的を提供する生体分子（例えば、タンパク質、炭水化物、糖タンパク質等）を指してもよい。例えば、優先的に発現されることは、生物体中の他の細胞に対して優先的に発現される、生物体内の特定領域（例えば、特定の器官又は組織）内で優先的に発現されることであってもよい。
【０１２２】
用語「腫瘍抗原エピトープ」及び「腫瘍抗原決定基」は、本明細書で入れ替えて使用でき、一般に腫瘍特異的細胞傷害性Ｔリンパ球を誘導する腫瘍抗原に存在するアミノ酸配列の部位を指す。
【０１２３】
用語「免疫調節物質」及び「免疫調節剤」は本明細書で入れ替えて使用でき、一般に免疫系の機能に影響を与える物質を指す。免疫調節物質は免疫応答を増強又は減少させることができる。例えば、免疫調節物質は細菌、ケモカイン、インターロイキン、リン酸グアノシン−グアニン（ＣｐＧ）オリゴデオキシヌクレオチド及びグルカンに由来するサイトカイン、顆粒球コロニー刺激因子（Ｇ−ＣＳＦ）、インターフェロン、イミキモド、細胞膜画分の組み換え、合成及び／又は天然の製剤を含むがこれらに限定されない免疫療法用活性化薬であってもよい。場合によっては、免疫調節物質はサイトカインである。場合によっては、免疫調節物質は抗体又はその抗原結合断片のいずれでもない。場合によっては、免疫調節物質は免疫グロブリン分子又はその断片（例えば、抗原結合断片）のいずれでもない。
【０１２４】
いくつかの実施形態において、免疫調節物質はインターフェロン、インターロイキン、ケモカイン、リンホカイン及び腫瘍壊死因子からなる群から選択される。例えば、免疫調節物質はインターフェロンα、インターフェロンλ、インターフェロンβ、インターロイキン１０、インターロイキン２及びスーパーインターロイキン２からなる群から選択されてもよい。
【０１２５】
本明細書において、タンパク質性ヘテロ二量体を含む文脈の中で使用される用語「発現量」は一般に、発現時、例えば、宿主細胞によって発現される機能的形態で生成されたタンパク質性ヘテロ二量体の量を指す。
【０１２６】
本明細書で使用される用語「二量体化配列」とは一般に、二量体を形成できる又は二量体化を行っているアミノ酸配列を指す。いくつかの実施形態において、二量体は２つの異なるメンバーによって形成されたヘテロ二量体である。場合によっては、ヘテロ二量体の２つの異なるメンバーは異なる二量体化配列を含んでもよい。
【０１２７】
本明細書で使用される用語「ヘテロ二量体化」とは一般に、２つの異なるメンバー（例えば、２つの異なるポリペプチド）の間にヘテロ二量体を形成するプロセスを指す。例えば、複合、会合又は凝集により、前記２つの異なるメンバーの間に共有結合を形成する又は形成しない。
【０１２８】
本明細書で使用される用語「共有結合」とは一般に、電子の共有により原子同士間に形成された化学結合を指す。例えば、共有結合は極性又は無極性である。いくつかの実施形態において、共有結合はジスルフィド結合である。
【０１２９】
本明細書で使用される用語「非共有結合ペアワイズ親和性」とは一般に、非共有結合性相互作用により、例えば、イオン対、水素結合、双極子−双極子相互作用、電荷移動相互作用、π−π相互作用、陽イオン−π電子相互作用、ファンデルワールス相互作用及び分散相互作用、疎水性（親油性）相互作用、複合体形成（例えば、遷移金属陽イオンによる複合体形成）又はこれらの相互作用の組み合わせにより互いに結合できる二量体化配列又はヘテロ二量体化配列を指す。
【０１３０】
本明細書で使用される用語「リンカー」とは一般に、２つのポリペプチド配列を連結又はリンクする、例えば、２つのポリペプチドドメインをリンクする合成アミノ酸配列を指す。リンカーはペプチド結合によって２つのアミノ酸配列を連結できる。いくつかの実施形態において、本発明に係るリンカーは線形配列において生物学的に活性な部分を第２の部分に連結させる。
【０１３１】
用語「ポリペプチド」、「ペプチド」及び「タンパク質」は、本明細書で入れ替えて使用でき、任意の長さのアミノ酸のポリマーを指す。当該ポリマーは直鎖状又は分岐状であり、修飾されたアミノ酸を含んでもよく、非アミノ酸によって中断されてもよい。当該用語は、ジスルフィド結合形成、グリコシル化、脂質化、アセチル化、リン酸化又は標識成分との結合など他の操作によって修飾されたアミノ酸ポリマーをも含む。当該用語は１つ以上のアミノ酸残基が対応する天然的に存在するアミノ酸の人工的化学類似体であるアミノ酸ポリマー、天然的に存在するアミノ酸ポリマーにも適用される。当該用語はポリペプチドを構成するアミノ酸を連結する典型的なペプチド結合における変異体をさらに含む。例えば、「ペプチド」、「ポリペプチド」及び「タンパク質」はα炭素がペプチド結合を介してリンクされたアミノ酸の鎖であってもよい。従って、鎖の一方の末端（アミノ末端）における末端アミノ酸は遊離アミノ基を有し、鎖の他方の末端（カルボキシ末端）における末端アミノ酸は遊離カルボキシル基を有してもよい。本明細書で使用される用語「アミノ末端」（Ｎ末端と略記される）とは一般に、ペプチドのアミノ末端のアミノ酸における遊離α−アミノ基又はペプチド内の任意の他の位置におけるアミノ酸のα−アミノ基（ペプチド結合に関与する場合はイミノ基）を指す。同様に、用語「カルボキシ末端」とは一般に、ペプチドのカルボキシ末端における遊離カルボキシル基又はペプチド内の任意の他の位置におけるアミノ酸のカルボキシル基を指す。ペプチドはアミド結合ではないエーテルによって連結されたアミノ酸など、ペプチド等価体を含むがこれに限定されない、任意のポリアミノ酸を実質的に含んでもよい。
【０１３２】
本明細書で使用される用語「アミノ酸」とは一般に、Ｄ又はＬ光学異性体、又はこれらの両方、アミノ酸類似体及びペプチド等価体を含むがこれに限定されない、天然及び／又は非天然的に存在するもしくは合成されたアミノ酸を指す。標準的な１文字或３文字の略号はアミノ酸を指定するために用いられる。
【０１３３】
本明細書で使用される用語「天然的なＬ−アミノ酸」とは一般に、グリシン（Ｇ）、プロリン（Ｐ）、アラニン（Ａ）、バリン（Ｖ）、ロイシン（Ｌ）、イソロイシン（Ｉ）、メチオニン（Ｍ）、システイン（Ｃ）、フェニルアラニン（Ｆ）、チロシン（Ｙ）、トリプトファン（Ｗ）、ヒスチジン（Ｈ）、リジン（Ｋ）、アルギニン（Ｒ）、グルタミン（Ｑ）、アスパラギン（Ｎ）、グルタミン酸（Ｅ）、アスパラギン酸（Ｄ）、セリン（Ｓ）又はトレオニン（Ｔ）のＬ光学異性体を指す。
【０１３４】
本明細書で使用される用語「非天然的に存在する」とは一般に、野生型又は天然的に存在する配列（例えば、適用対象で発見された配列）に対応しない、相補的でない又は高度の相同性を有しないポリペプチド又はポリヌクレオチド配列を指す。例えば、適切に整列された場合、天然的な配列と比較して、非天然的に存在するポリペプチド又は断片は９９％、９８％、９５％、９０％、８０％、７０％、６０％、５０％より少ない又はさらに少ないアミノ酸配列同一性を共有してもよい。あるいは、適切に整列された場合、天然的な配列と比較して、非天然的に存在するポリペプチド又は断片は９９％、９８％、９５％、９０％、８０％、７０％、６０％、５０％より高い又はさらに高いアミノ酸配列同一性を共有してもよい。
【０１３５】
本明細書で使用される用語「親水性」及び「疎水性」とは一般に、物質の水との親和性を指す。親水性物質は水に対して強い親和性を有し、水に溶解する、混合する又は水に濡れる傾向にある、疎水性物質は実質的に水との親和性がなく、水を弾くか水を吸収しない傾向にあり、且つ、水に溶解しない、水と混合しない又は水に濡れない傾向にある。アミノ酸はその疎水性に基づいて特徴づけられる。これに関して多くの尺度が開発されている。その一例として、Ｈｏｐｐ，ＴＰ，  Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ＵＳＡ  （１９８１）  ７８：３８２４に記載のＬｅｖｉｔｔ，  Ｍら，  Ｊ  Ｍｏｌ  Ｂｉｏｌ（１９７６）１０４：５９によって開発された尺度が挙げられる。「親水性アミノ酸」の例として、アルギニン、リジン、トレオニン、アラニン、アスパラギン及びグルタミンが挙げられる。特に注意したいのは、親水性アミノ酸のアスパラギン酸、グルタミン酸、セリン及びグリシンである。「疎水アミノ酸」の例として、トリプトファン、チロシン、フェニルアラニン、メチオニン、ロイシン、イソロイシン及びバリンが挙げられる。
【０１３６】
タンパク質性分子（例えば、ポリペプチド又はタンパク質）を含む文脈の中で使用される場合、用語「断片」とは一般に、治療的及び／又は生物学的活性の一部を維持する又は維持しない天然の生物学的に活性なタンパク質の短縮形式を指す。
【０１３７】
タンパク質性分子（例えば、ポリペプチド又はタンパク質）を含む文脈の中で使用される場合、用語「変異体」とは一般に、生物学的に活性なタンパク質の治療的及び／又は生物学的活性の少なくとも一部を維持できる天然の生物学的に活性なタンパク質と配列相同性を有するタンパク質性分子を指す。例えば、参照用の生物学的に活性なタンパク質と比較して、変異体タンパク質は少なくとも６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％のアミノ酸配列同一性を共有してもよい。いくつかの実施形態において、「変異体」は意図的に修飾されたタンパク質、例えば、部位特異的突然変異誘発、コーディング遺伝子の合成、挿入又は突然変異により偶発的に修飾されたタンパク質を含む。
【０１３８】
用語「結合された」、「リンクされた」、「融合された」及び「融合」は本明細書で入れ替えて使用でき、一般に、例えば、化学的結合又は組換えを含む方式により２つ以上の化学元素、配列又は成分を連結することを指す。例えば、プロモーター又はエンハンサーが配列の転写に影響を与える場合、コーディング配列と操作可能にリンクされる。一般に、「操作可能にリンクされる」とは、リンクされたＤＮＡ配列がリーディングフェースで又はインフレームにおいて連続することを指す。「インフレーム融合」とは、オリジナルのＯＲＦの正しいリーディングフレームが維持される方式により、２つ以上のオープンリーディングフレーム（ＯＲＦｓ）を連結して連続する比較的長いＯＲＦを形成することを指す。従って、得られた「融合ポリペプチド」は、オリジナルのＯＲＦｓによってコードされるポリペプチドに対応する２つ以上の断片（当該断片は自然界で一般にこのように連結されていない）を含む単一のタンパク質である。「融合部位」とは、２つ以上の断片が連結された配列を指す。場合によっては、融合部位は連結された２つ以上の断片における配列と同一の配列であってもよい。場合によっては、融合部位は連結された２つ以上の断片の配列のいずれとも同一ではないギャップ断片をさらに含んでもよい。
【０１３９】
ポリペプチドを含む文脈の中で、「線形配列」又は「配列」はポリペプチドにおけるアミノ酸のアミノ基からカルボキシ末端へ、互いに隣接する残基がポリペプチドの一次構造において連続する方向上の順番である。「部分配列」は、ポリペプチドの一部を形成し、１つ又は２つの方向に追加の残基を含む線形配列である。
【０１４０】
用語「ポリヌクレオチド」、「核酸」、「ヌクレオチド」及び「オリゴヌクレオチド」は本明細書で入れ替えて使用でき、一般に、任意の長さのヌクレオチドのポリマー形態、即ちデオキシリボヌクレオチド又はリボヌクレオチド、又はその類似体を指す。ポリヌクレオチドは任意の三次元構造を有してもよく、任意の既知又は未知の機能を実行できる。ポリヌクレオチドの非限定的な例として、遺伝子又は遺伝子断片のコーディング又は非コーディング領域、連鎖解析によって定義された遺伝子座、エクソン、イントロン、伝令ＲＮＡ（ｍＲＮＡ）、転移ＲＮＡ、リボソームＲＮＡ、リボザイム、ｃＤＮＡ、組換えポリヌクレオチド、分岐ポリヌクレオチド、プラスミド、ベクター、任意の配列の単離されたＤＮＡ、任意の配列の単離されたＲＮＡ、核酸プローブ及びプライマーが挙げられる。ポリヌクレオチドはチル化ヌクレオチド及びヌクレオチド類似体など、修飾されたヌクレオチドを含んでもよい。修飾が存在する場合、ポリマーの組立て前又は組立て後に、ヌクレオチド構造に対して修飾を行うことができる。ヌクレオチドの配列は非ヌクレオチドの成分によって中断されてもよい。ポリヌクレオチドは重合後に、標識成分との結合など、さらに修飾されてもよい。
【０１４１】
用語「遺伝子」及び「遺伝子断片」は本明細書で入れ替えて使用でき、一般に、転写及び翻訳後に特定のタンパク質をコードできる少なくとも１つのオープンリーディングフレームを含むポリヌクレオチドを指す。ポリヌクレオチドがコーディング領域全体又はその断片をカバーする少なくとも１つのオープンリーディングフレームを含んでさえいれば、遺伝子又は遺伝子断片は、ゲノム又はｃＤＮＡであってもよい。「融合遺伝子」は互いにリンクされた少なくとも２つの異種ポリヌクレオチドからなる遺伝子である。
【０１４２】
本明細書で使用される用語「抗体」とは一般に、実質的に免疫グロブリン遺伝子又は免疫グロブリン遺伝子の断片によってコードされた１つ以上のポリペプチドを含むタンパク質を指す。免疫グロブリン遺伝子はκ、λ、α、γ、δ、ε及びμ定常領域遺伝子、及び無数の免疫グロブリン可変領域遺伝子を含む。本明細書で使用される用語「軽鎖」はκかλのいずれかに分類される。重鎖は、γ、μ、α、δ又はεのいずれかに分類され、これによって免疫グロブリンの種類として、ＩｇＧ、ＩｇＭ、ＩｇＡ、ＩｇＤ及びＩｇＥがそれぞれ定義される。本発明で使用される抗体は四量体を含む構造ユニットを有してもよい。四量体のそれぞれは２対の同一のポリペプチド鎖からなってもよく、それぞれが１つの「軽」鎖（約２５ＫＤ）及び１つの「重」鎖（約５０〜７０ＫＤ）を有する。それぞれの鎖のＮ末端には約１００〜１１０又はそれ以上の、主に抗原を認識するためのアミノ酸の可変領域が定義されてもよい。本明細書で使用される用語「軽鎖可変領域」（ＶＬ）及び「重鎖可変領域」（ＶＨ）とは一般に、それぞれ軽鎖及び重鎖のこれらの領域を指す。抗体は完全な免疫グロブリンの形式で存在してもよければ、様々なペプチダーゼの消化により生成された又は新規に発現された多くの十分に特徴付けられた断片の形式で存在してもよい。従って、例えば、ペプシンはヒンジ領域におけるジスルフィド結合の下方の抗体を消化してＦ（ａｂ）’２（ジスルフィド結合によってＶＨ−ＣＨ１に連結された１つの軽鎖であるＦａｂの二量体）を生成できる。Ｆ（ａｂ）’２を穏やかな条件で還元して、ヒンジ領域におけるジスルフィド結合を破壊することにより、（Ｆａｂ’）２二量体をＦａｂ’単量体に変換できる。Ｆａｂ’単量体は実質的にヒンジ領域の一部を有するＦａｂである（他の抗体断片に関する詳細な説明として、Ｆｕｎｄａｍｅｎｔａｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，  Ｗ．  Ｅ．  Ｐａｕｌ，  ｅｄ．，  Ｒａｖｅｎ  Ｐｒｅｓｓ，  Ｎ．Ｙ．  （１９９３）を参照できる）。完全な抗体の消化に基づいて様々な抗体断片を定義しているが、当業者が理解できるように、化学的方法又は組換えＤＮＡ方法を利用してこのようなＦａｂ’断片を新規合成できる。従って、本明細書で使用される用語「抗体」は、Ｆａｂ’２、ＩｇＧ、ＩｇＭ、ＩｇＡ、ＩｇＥ、ｓｃＦｖ、ｄＡｂ、ナノボディ、ユニボディ及びダイアボディを含むがこれらに限定されない、全抗体の修飾又は組換えＤＮＡ方法を利用して新規合成された抗体断片も含む。いくつかの実施形態において、抗体は、可変重鎖及び可変軽鎖が（直接的に又はペプチドリンカーを介して）互いに連結されて連続するポリペプチドが形成された一本鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）抗体など、Ｆａｂ’２、ＩｇＧ、ＩｇＭ、ＩｇＡ、ＩｇＥ及び一本鎖抗体を含むが、これらに限定されない。
【０１４３】
本明細書で使用される用語「抗原結合部位」又は「結合部分」とは一般に、抗原の結合に関与する抗体の部分を指す。抗原結合部位は重「Ｈ」鎖及び／又は軽「Ｌ」鎖のＮ末端可変「Ｖ」領域のアミノ酸残基によって形成されてもよい。重鎖及び軽鎖のＶ領域における３つの高度に分散する伸展（ｓｔｒｅｔｃｈ）は「超可変領域」と称され、「フレームワーク領域」又は「ＦＲｓ」と呼ばれるより保存的なフランキング伸展の間に配置される。従って、本明細書で使用される用語「ＦＲ」とは一般に、免疫グロブリンで超可変領域の間及びその付近に天然的に発見されたアミノ酸配列を指す。抗体分子において、軽鎖の３つの超可変領域及び重鎖の３つの超可変領域が三次元空間において互いに対向して配置されて、抗原が結合する「表面」を形成する。当該表面は標的抗原の認識及び結合を媒介できる。重鎖及び軽鎖のそれぞれの３つの超可変領域は「相補性決定領域」又は「ＣＤＲｓ」と称され、例えば、Ｋａｂａｔら．  Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  ｉｎｔｅｒｅｓｔ，  ４ｔｈ  ｅｄ．  Ｕ．Ｓ．  Ｄｅｐｔ．  Ｈｅａｌｔｈ  ａｎｄ  Ｈｕｍａｎ  Ｓｅｒｖｉｃｅｓ，  Ｐｕｂｌｉｃ  Ｈｅａｌｔｈ  Ｓｅｒｖｉｃｅｓ，  Ｂｅｔｈｅｓｄａ，  Ｍｄ．  （１９８７）によって特徴づけられる。
【０１４４】
いくつかの実施形態において、本明細書で使用される抗体及びその断片は二重特異性であってもよい。二重特異性抗体又はその断片は様々な配置を有してもよい。例えば、二重特異性抗体は単一の抗体（又は抗体断片）に類似するが、２つの異なる抗原結合部位（可変領域）を有するものであってもよい。様々な実施形態において、二重特異性抗体は化学的技術（参照文献：Ｋｒａｎｚら  （１９８１）  Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔｌ．  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ，  ＵＳＡ，  ７８：  ５８０７）、又は「ポリオーマ」技術（例えば、米国特許第４４７４８９３号）、又は組換えＤＮＡ技術により生成されてもよい。いくつかの実施形態において、本明細書で使用される二重特異性抗体は、少なくとも１つが腫瘍抗原である少なくとも２つの異なるエピトープに対する結合特異性を有してもよい。いくつかの実施形態において、抗体及びその断片はヘテロ抗体である。ヘテロ抗体は、それぞれが異なる特異性を有する、２つ以上の抗体又は互いにリンクされた抗体結合断片（例えば、Ｆａｂ）である。
【０１４５】
本明細書で使用される用語「相同性」、「相同の」又は「配列同一性」とは一般に、２つ以上のポリヌクレオチド配列同士間又は２つ以上のポリペプチド配列同士間における配列類似性又は互換性を指す。プログラム（例えば、Ｅｍｂｏｓｓ  Ｎｅｅｄｌｅ又はＢｅｓｔＦｉｔ）を用いて２つの異なるアミノ酸配列の間における配列同一性、類似性又は相同性を決定する際、デフォルト設定を使用するか、同一性、類似性又は相同性スコアを最適化するために適切なスコア行列（例えば、ｂｌｏｓｕｍ４５又はｂｌｏｓｕｍ８０）を選択してもよい。いくつかの実施形態において、相同のポリヌクレオチドはストリンジェントな条件下でハイブリダイゼーションし、それらの配列と比較して少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、さらには１００％の配列同一性を有するポリヌクレオチドである。比較可能な長さの配列が最適に整列された場合、相同のポリペプチドは少なくとも８０％、又は少なくとも９０％、又は少なくとも９５％、又は少なくとも９７％、又は少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の配列同一性を有する。
【０１４６】
ポリヌクレオチド配列を含む文脈の中で使用される用語「同一性パーセンテージ」及び「％同一性」とは一般に、標準化されたアルゴリズムにより整列された少なくとも２つのポリヌクレオチド配列間における残基がマッチングするパーセンテージを指す。このようなアルゴリズムは標準化された再現可能な方式により比較される配列にギャップを挿入して、２つの配列間の整列を最適化することにより、２つの配列に対するより意味のある比較を実現できる。同一性パーセンテージは定義されたポリヌクレオチド配列全体の長さにおいて測定されるか、又はより短い長さにおいて測定されてもよい、例えば、定義されたサイズがより大きなポリヌクレオチド配列から得られた断片の長さにおいて測定される。なお、本明細書の表、図又は配列表に示される配列においてサポートされる任意の断片長はいずれもパーセンテージ同一性が測定される長さの説明に利用できることは理解できる。
【０１４７】
本明細書で定義されたポリペプチド配列を含む文脈の中で使用される用語「パーセンテージ（％）配列同一性」と一般には、検索配列における第２の参照ポリペプチド配列又はタンパク質のアミノ酸残基と同一のアミノ酸残基のパーセンテージを指す、必要であれば、最大パーセンテージの配列同一性を得るために、配列の整列及びギャップの導入を行い、保存的な置換を配列同一性の一部として考慮しない。アミノ酸の配列同一性パーセンテージを決定するための整列は、当該分野の周知技術としての様々な方式により実現できる、例えば、ＢＬＡＳＴ、ＢＬＡＳＴ−２、ＡＬＩＧＮ、ＮＥＥＤＬＥ又はＭｅｇａｌｉｇｎ（ＤＮＡＳＴＡＲ）ソフトウェアなどの利用可能な公開コンピューターソフトウェアを使用する。当業者は、比較される配列の全長において最大の整列を実現するために必要な任意のアルゴリズムを含む、整列を測定するための適切なパラメータを決定できる。パーセンテージ同一性は定義されたポリペプチド配列全体の長さにおいて測定されるか、より短い長さにおいて、例えば、定義されたサイズがより大きなポリペプチド配列から得られた断片の長さにおいて測定される。なお、本明細書の表、図又は配列表に示される配列においてサポートされる任意の断片長はいずれもパーセンテージ同一性が測定される長さの説明に利用できることは理解できる。
【０１４８】
本明細書で使用される用語「宿主細胞」とは一般に、本発明に係るプラスミド又はベクターの受容体になる又は本発明に係るプラスミド又はベクターの受容体である、個々の細胞、細胞株又は細胞培地を含み、本発明に係るポリヌクレオチドを構成するか、本発明に係るタンパク質性ヘテロ二量体（例えば、ヘテロ二量体タンパク質）を発現する。宿主細胞は単一の宿主細胞の子孫を含んでもよい。自然的、偶発的又は意図的な突然変異により、子孫は（形態的に又は全ＤＮＡ相補体のゲノムにおいて）必ずしもオリジナルの親細胞と完全に同一であるとは限られない。宿主細胞はインビトロで本発明に係るベクターでトランスフェクトされた細胞を含んでもよい。宿主細胞は細菌細胞（例えば、大腸菌）、酵母細胞又は他の真核細胞であってもよい、例えば、ＣＯＳ細胞、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞、ＨｅＬａ細胞、ＨＥＫ２９３細胞、ＣＯＳ−１細胞、ＮＳ０細胞又は骨髄腫細胞である。いくつかの実施形態において、宿主細胞は哺乳動物細胞である。いくつかの実施形態において、哺乳動物細胞はＨＥＫ２９３細胞である。
【０１４９】
本明細書で使用される用語「ベクター」とは一般に、挿入された核酸分子を宿主細胞内及び／又は宿主細胞の間に転送する適切な宿主の中で自己複製できる核酸分子を指す。当該用語は主にＤＮＡ又はＲＮＡを細胞に挿入するために機能するベクター、主にＤＮＡ又はＲＮＡを複製するために機能するベクターの複製、及びＤＮＡ又はＲＮＡの転写及び／又は翻訳のために機能する発現ベクター含む。さらに、上述した１種以上の機能を提供するベクターを含む。「発現ベクター」とは、適切な宿主細胞に導入されると、転写されてポリペプチドとして翻訳されるポリヌクレオチドである。「発現系」とは一般に、所望の発現産物を生成するように機能する発現ベクターを含む適切な宿主細を指す。
【０１５０】
用語「有効量」又は「治療有効量」とは、疾患の治療などを含むがこれに限定されない所望の用途を達成するための組成物（例えば、本明細書に記載のタンパク質性ヘテロ二量体）の量を指す。治療有効量は所望の用途（例えば、インビトロ又はインビボ）又は適用対象及び治療される疾患の状態（例えば、適用対象の体重及び年齢、疾患状態の重症度、投与方式など）に応じて変化する場合があり、当業者はこれを容易に決定できる。当該用語は標的細胞の中で特定応答の誘導、例えば、標的遺伝子誘導、増殖及び／又はアポトーシスのために使われる用量にも適用される。具体的な用量は、選択された特定の化合物、遵守すべき投与計画、他の化合物と組み合わせて投与されるか否か、投与のタイミング、投与される組織及び投与に用いられる物理的送達システムに応じて変化する場合がある。
【０１５１】
用語「治療」又は「緩和」又は「改善」は本明細書で入れ替えて使用でき、治療的利益及び／又は予防的利益を含むがこれらに限定されない、有益な又は所望の結果を得るための方法を指す。本明細書で使用される治療的利益とは一般に、治療される潜在的な障害の重症度を根絶又は低減することを指す。同様に、潜在的な障害に関連する１種以上の生理的症状の重症度を解消、低減する又はその発生率を低減することにより治療的利益を得るため、適用対象に潜在的な障害が解消されないが、改善が確認される。予防的利益を得るために、特定の疾患に罹患するリスクのある適用対象に組成物を投与するか、当該疾患の診断がなされないとしても、疾患の１種以上の生理的症状を報告する適用対象に投与してもよい。
【０１５２】
本明細書で使用される用語「治療効果」とは一般に、上述した治療的利益及び／又は予防的利益を含む。予防効果は疾患もしくは障害の出現の遅延もしくは解消、疾患もしくは障害の症状の発生の遅延もしくは解消、疾患もしくは症状の進行の遅延、停止もしくは逆転、又はこれらの任意の組み合わせを含む。
【０１５３】
本明細書で使用される用語「同時投与」、「〜と共に投与」及び文法的に同等な表現は一般に、動物に２種以上の薬剤を投与することにより、当該薬剤及び／又はその代謝物は適用対象の中に同時に存在することを含む。同時投与は別々の組成物として同時投与する、別々の組成物として異なる時点で投与する、又は両方の薬剤が同時に存在する組成物として投与することを含む。
【０１５４】
用語「アンタゴニスト」及び「阻害剤」は本明細書で入れ替えて使用でき、一般に、標的タンパク質の活性又は発現を阻害することにより標的タンパク質の生物学的機能を阻害する能力を有する化合物を指す。従って、用語「アンタゴニスト」及び「阻害剤」は標的タンパク質の生物学的役割を含む文脈の中で定義される。本明細書において好ましいアンタゴニストは標的と特異的に相互作用する（例えば、結合する）が、標的タンパク質をメンバーとするシグナル伝達経路の他のメンバーと相互作用することにより標的タンパク質の生物学的活性を阻害する化合物も、当該定義に明確に含まれる。アンタゴニストによって阻害される生物学的活性は好ましくは腫瘍の発生、成長又は拡散に関連する。
【０１５５】
本明細書で使用される用語「アゴニスト」とは一般に、標的タンパク質の活性又はその発現を阻害又は増強させることにより標的タンパク質の生物学的機能を開始又は増強させる能力を有する化合物を指す。従って、用語「アゴニスト」は標的ポリペプチドの生物学的役割が言及される文脈の中で定義される。本明細書において、好ましくはアゴニストが標的と特異的に相互作用（例えば、結合する）が、標的ポリペプチドをメンバーとするシグナル伝達経路の他のメンバーと相互作用することにより標的ポリペプチドの生物学的活性を開始又は増強させる化合物も、当該定義にも含まれる。
【０１５６】
本明細書で使用される用語「薬剤」又は「生物学的活性化薬」とは一般に、生物学的、薬学的もしくは化学的化合物又は他の物質を指す。非限定的な例として、単純又は複雑な有機もしくは無機分子、ペプチド、タンパク質、オリゴヌクレオチド、抗体、抗体誘導体、抗体断片、ビタミン誘導体、炭水化物、毒素又は化学療法化合物が挙げられる。様々な化合物、例えば、小分子及びオリゴマー（例えば、オリゴペプチド及びオリゴヌクレオチド）、又は様々なコア構造に基づく合成有機化合物を合成できる。また、様々な天然資源は、例えば植物又は動物抽出物など、スクリーニング用の化合物を提供するために利用できる。
【０１５７】
本明細書で使用される用語「抗癌剤」、「抗腫瘍剤」又は「化学療法剤」とは一般に、腫瘍性症状を治療するのに有用な任意の薬剤を指す。抗癌剤の一種は化学療法剤を含む。
【０１５８】
本明細書で使用される用語「化学療法」とは一般に、静脈内投与、経口投与、筋肉内投与、腹腔内投与、膀胱内投与、皮下投与、経皮投与、口腔内投与、又は吸入又は坐剤形式を含む、様々な方法を用いて癌患者に１種以上の化学療法薬及び／又は他の薬剤を投与することを指す。
【０１５９】
本明細書で使用される用語「細胞増殖」とは一般に、分裂の結果として、細胞数量が変化する現象を指す。例えば、細胞増殖により細胞数量が増加する。当該用語は、細胞形態が増殖シグナルに一致して変化する（例えば、サイズの増加）細胞成長をも含む。
【０１６０】
本明細書で使用される用語「インビボ」とは一般に、適用対象の体内で起こる事象を指す。
【０１６１】
本明細書で使用される用語「インビトロ」とは一般に、適用対象の体外で起こる事象を指す。例えば、インビトロアッセイは適用対象の体外で実施される任意のアッセイを指す。インビトロアッセイは死細胞又は生細胞を用いて行われた細胞ベースのアッセイを含む。インビトロアッセイは完全細胞を使用しない無細胞アッセイをも含む。
【０１６２】
本明細書で使用される用語「インターフェロン」（ＩＦＮ）とは一般に、宿主細胞がウイルス、細菌、寄生虫又は腫瘍細胞などの病原体の存在に応答して生成及び放出したシグナル伝達タンパク質を指す。インターフェロンには３つの主要なタイプ、即ちタイプＩ、タイプＩＩ及びタイプＩＩＩがある、このうち、インターフェロンのタイプＩはＩＦＮ−α及びＩＦＮ−βを含んでもよく、ＩＦＮ−αはＩＦＮ−αのサブタイプ、例えば、ＩＦＮ−α２、ＩＦＮ−α４などをさらに含んでもよい。インターフェロンのタイプＩはウイルスの複製を阻害でき、抗寄生虫活性、細胞増殖阻害活性、免疫細胞の細胞傷害刺激活性を有し、免疫調節に関与し抗腫瘍効果を示す。インターフェロンのタイプＩＩ及びタイプＩＩＩはＩＦＮ−γ、ＩＦＮ−λ１（ＩＬ−２９）、ＩＦＮ−λ２（ＩＬ−２８ａ）及びＩＦＮ−λ３（ＩＬ−２８ｂ）を含んでもよい。本明細書で使用される用語「インターフェロン」は全長インターフェロン又はその断片（例えば、短縮形式）又はその変異体を含んでもよく、それは対応する野生型インターフェロンの生物学的活性を実質的に維持している（例えば、対応する野生型インターフェロンの生物学的活性の少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、さらには少なくとも１００％を有する）。本明細書で使用されるインターフェロンは任意の哺乳動物に由来してもよい。いくつかの実施形態において、インターフェロンはヒト、ウマ、ウシ、ネズミ、ブタ、ウサギ、ネコ、イヌ、ラット、ヤギ、ヒツジ及び非ヒト霊長類からなる群から選択される。
【０１６３】
本明細書で使用される用語「インターロイキン」とは一般に、Ｔリンパ球及び／又はＢリンパ球、及び／又は造血細胞の発生及び分化を促進できる分泌タンパク質又はシグナル伝達分子を指す。インターロイキンはペルパーＣＤ４  Ｔリンパ球、又は単球、マクロファージ、内皮細胞によって合成されてもよい。本明細書において使用されるインターロイキン（ＩＬ）はＩＬ−１、ＩＬ−２、ＩＬ−３、ＩＬ−４、ＩＬ−５、ＩＬ−６、ＩＬ−７、ＩＬ−８、ＩＬ−９、ＩＬ−１０、ＩＬ−１１、ＩＬ−１２、ＩＬ−１３、ＩＬ−１４、ＩＬ−１５、ＩＬ−１６、ＩＬ−１７、ＩＬ−１８、ＩＬ−１９、ＩＬ−２０、ＩＬ−２１、ＩＬ−２２、ＩＬ−２３、ＩＬ−２４、ＩＬ−２５、ＩＬ−２６、ＩＬ−２７、ＩＬ−２８、ＩＬ−２９、ＩＬ−３０、ＩＬ−３１、ＩＬ−３２、ＩＬ−３３、ＩＬ−３４、ＩＬ−３５及び／又はＩＬ−３６を含んでもよい。本明細書で使用される用語「インターロイキン」は全長インターロイキン、又は対応する野生型インターロイキンの生物学的活性（例えば、対応する野生型インターロイキン生物学的活性の少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％又はさらには少なくとも１００％の生物学的活性を有する）を実質的に維持している断片（例えば、短縮形式）又はその変異体を含んでもよい。本明細書において使用されるインターロイキンは任意の哺乳動物に由来してもよい。いくつかの実施形態において、インターロイキンはヒト、ウマ、ウシ、ネズミ、ブタ、ウサギ、ネコ、イヌ、ラット、ヤギ、ヒツジ及び非ヒト霊長類からなる群から選択される。いくつかの実施形態において、インターロイキンは、例えば、その受容体に対する親和性が増加又は低減された突然変異の形態であってもよい。いくつかの実施形態において、インターロイキンはＩＬ−２を修飾することでＩＬ−２Ｒβに対する結合親和性を増加させたスーパーＩＬ−２である（ｓＩＬ２とも称される。Ｎａｔｕｒｅ  ４８４，  ５２９−５３３，  ２０１２．４．２６を参照）。ｓＩＬ−２における突然変異は主に、サイトカインのコアにおいて発生する。分子動力学的シミュレーションにより、進化した突然変異はＩＬ−２を安定化させ、ＩＬ−２Ｒβ結合部位におけるリックスの柔軟性を、ＣＤ２５にバインドする場合のように最適化された受容体の結合配置に低減させていることが示された。ＩＬ−２と比較して、ｓＩＬ−２は細胞傷害性Ｔ細胞の効果的な拡張を誘導して、インビボにおける抗腫瘍応答の向上につながり、制御性Ｔ細胞の拡張が比例して低減され、肺水腫が緩和される。
【０１６４】
本明細書で使用される用語「抗ＨＥＲ２／ｎｅｕ抗体」とは一般に、ＨＥＲ２／ｎｅｕ受容体と特異的又は優先的に結合する抗体を指す。例えば、抗ＨＥＲ２／ｎｅｕ抗体又は抗ＨＥＲ２抗体はトラスツズマブ、ペルツズマブ又はその抗原結合断片である。
【０１６５】
本明細書で使用される用語「抗ＥＧＦＲ抗体」とは一般に、ＥＧＦＲと特異的又は優先的に結合する抗体を指す。場合によっては、抗ＥＧＦＲ抗体は、ＥＧＦＲの変異形式（例えば、ＥＧＦＲに最も一般的な細胞外ドメイン変異であるＥＧＦＲ変異体ＩＩＩ（ＥＧＦＲｖＩＩＩともいう）と結合する。このような突然変異は、リガンド非依存性構成的活性を有する短縮された細胞外ドメインによって特徴付けられるＥＧＦＲ遺伝子のエクソン２−７の欠失につながる。例えば、抗ＥＧＦＲ抗体はセツキシマブ、Ｍａｂ８０６又はその抗原結合断片である。
【０１６６】
本明細書で使用される用語「適用対象」とは一般に、ネコ、イヌ、ウマ、ブタ、ウシ、ヒツジ、ヒツジ、ウサギ、マウス、ラット又はサルを含むがこれらに限定されない、ヒト又は非ヒト動物を指す。
【０１６７】
本明細書で使用される用語「抗ＥＧＦＲファミリー抗体」とは一般に、上皮成長因子受容体ファミリーのメンバーと特異的に結合する抗体を指す。例えば、それはＥｒｂＢ−１（上皮成長因子受容体（ＥＧＦＲ）ともいう）、ＥｒｂＢ−２（ヒトの場合ＨＥＲ２と、げっ歯類の場合ｎｅｕともいう）、ＥｒｂＢ−３（ＨＥＲ３ともいう）及び／又はＥｒｂＢ−４（ＨＥＲ４ともいう）と結合する抗体であってもよい。抗ＥＧＦＲファミリー抗体は、Ｃ６．５、Ｃ６ｍＬ３−９、Ｃ６  ＭＨ３−Ｂ１、Ｃ６−Ｂ１Ｄ２、Ｆ５、ＨＥＲ３．Ａ５、ＨＥＲ３．Ｆ４、ＨＥＲ３．Ｈ１、ＨＥＲ３．Ｈ３、ＨＥＲ３．Ｅ１２、ＨＥＲ３．Ｂ１２、ＥＧＦＲ．Ｅ１２、ＥＧＦＲ．Ｃ１０、ＥＧＦＲ．Ｂ１１、ＥＧＦＲ．Ｅ８、ＨＥＲ４．Ｂ４、ＨＥＲ４．Ｇ４、ＨＥＲ４．Ｆ４、ＨＥＲ４．Ａ８、ＨＥＲ４．Ｂ６、ＨＥＲ４．Ｄ４、ＨＥＲ４．Ｄ７、ＨＥＲ４．Ｄ１１、ＨＥＲ４．Ｄ１２、ＨＥＲ４．Ｅ３、ＨＥＲ４．Ｅ７、ＨＥＲ４．Ｆ８及びＨＥＲ４．Ｃ７など抗体の１種以上を含むが、これらに限定されない。美国特許公開第ＵＳ２００６／００９９２０５Ａ１号及びＵＳ２００４／００７１６９６Ａ１号を参照でき、当該文献は援用により本明細書に組み込まれる。
【０１６８】
本明細書で使用される用語「一本鎖Ｆｖ」（「ｓＦｖ」又は「ｓｃＦｖ」）ポリペプチドとは一般に、直接連結された又はペプチドがコードするリンカーを介して連結されたＶＨ及びＶＬをコードする配列を含む核酸によって発現されてもよい、共有結合されたＶＨ（重鎖可変領域）：ＶＬ（軽鎖可変領域）ヘテロ二量体を指す（参照文献：Ｈｕｓｔｏｎら．  Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔ．  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．  ＵＳＡ，  ８５：  ５８７９−５８８３  （１９８８））。
【０１６９】
癌細胞に関連する文脈の中で使用される用語「成長及び／又は増殖の阻害」とは一般に、癌細胞の成長速度及び／又は増殖速度の低減を指す。例えば、癌細胞の死亡（例えば、アポトーシスによる）を含む。いくつかの実施形態において、当該用語は固形腫瘍の成長及び／又は増殖を阻害する、且つ／又は、腫瘍サイズの減少又は解消を誘導することを含む。
【０１７０】
本明細書で使用される用語「癌細胞表面マーカー」又は「癌細胞関連マーカー」とは一般に、癌細胞において排他的に又は優先的に又は示差的に発現される、且つ／又は、癌細胞に関連するものとして発見されることにより癌に優先的又は特異的な標的を提供する生体分子、例えばタンパク質、炭水化物、糖タンパク質などを指す。いくつかの実施形態において、優先的に発現されることは任意の生物体内の他の細胞に対して優先的に発現されること、又は生物体の特定領域（例えば、特定の器官又は組織）内で優先的に発現されることであってもよい。
【０１７１】
本明細書で使用される用語「メンバー」とは一般に、タンパク質性ヘテロ二量体の１つの成分としてのポリペプチド、サブユニット又は部分を指す。
【０１７２】
本明細書で使用される用語「Ｆｃ領域」とは一般に、免疫グロブリン重鎖定常領域のカルボキシ末端部分又はその類似体又はＦｃ受容体と結合できる部分を指す。周知のように、１つの免疫グロブリン重鎖定常領域は４つ又は５つのドメインを含む。ドメインは、ＣＨ１−ヒンジ−ＣＨ２−ＣＨ３（−ＣＨ４）のように順次命名される。ＣＨ４はヒンジ領域を有しないＩｇＭに存在する。本発明に有用な免疫グロブリン重鎖定常領域は免疫グロブリンヒンジ領域を含み、且つ、ＣＨ３ドメインを含んでもよい。例えば、免疫グロブリン重鎖定常領域は免疫グロブリンヒンジ領域、ＣＨ２ドメイン及びＣＨ３ドメインを含んでもよい。いくつかの実施形態において、本発明に係るＦｃ領域はヒンジ−ＣＨ２−ＣＨ３ドメインからなる。
【０１７３】
本明細書で使用される用語「〜と複合される」とは一般に、１つのメンバー／サブユニットが分子（例えば、抗体）の別のメンバー／サブユニットと会合する（例えば、結合する）ことを含む。例えば、軽鎖は重鎖と複合して標的部分を形成できる。
【０１７４】
本明細書で使用される用語「結合特異性」とは一般に、所定の標的と特異的に結合する（例えば、免疫応答を伴う）能力を指す（ただし非標的とは結合しない又は実質的に結合しない）。本発明において標的部分は単一特異性であり、且つ、標的と特異的に結合する１つ以上の結合部位を含む、又は多重特異性（例えば、二重特異性又は三重特異性）であり、且つ、同じ又は異なる標的と特異的に結合する２つ以上の結合部位を含む。
【０１７５】
本明細書で使用される用語「〜と会合する」又は「〜と会合される」とは一般に、１つのエンティティが別のエンティティと物理的に会合又は接触することを指す。例えば、タンパク質性ヘテロ二量体の第１のメンバーは共有結合又は非共有結合により第２のメンバーと「会合」されてもよい。いくつかの実施形態において、タンパク質性ヘテロ二量体の第１のメンバーは界面によって第２のメンバーと会合し、当該界面は第１のメンバー及び第２のメンバーにそれぞれ由来するアミノ酸残基（即ち界面残基）により形成される。
【０１７６】
本明細書で使用される用語「修飾」とは一般に、ポリペプチド骨格（例えば、アミノ酸配列）に対する任意の操作又はポリペプチドの翻訳後修飾（例えば、グリコシル化）を指す。例えば、修飾は対応する野生型ポリペプチドの配列に対していうものである。修飾とは１つ以上（例えば、１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、１０個又はそれ以上）のアミノ酸の置換、追加及び／又は欠失であってもよい。
【０１７７】
本明細書で使用される用語「ノブアンドホール修飾」とは一般に、ポリペプチドの界面に修飾を導入してバルジを形成し（ノブ修飾）、別のポリペプチドの対応する位置に修飾を導入して空洞を形成し（ホール修飾）、バルジのサイズは空洞のサイズと同じ又は近いことを指す。例えば、ノブアンドホール修飾によりヘテロ二量体が形成されるとともに、ホモ二量体の形成が阻害される。参照文献として、米国特許第５７３１１６８号、第７６９５９３６号、Ｒｉｄｇｗａｙら，  Ｐｒｏｔ  Ｅｎｇ  ９，  ６１７−６２１（１９９６）、及びＣａｒｔｅｒ，  Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  Ｍｅｔｈ  ２４８，７−１５（２００１）が挙げられる。従って、本明細書で使用される用語「ノブ修飾」とは一般に、より小さいサイズの側鎖を有するアミノ酸（例えば、チロシン又はトリプトファン）をより大きいサイズの側鎖を有するアミノ酸（例えば、アラニン又はトレオニン）に置き換えることでバルジを形成した、ポリペプチド界面における修飾を指す。本明細書で使用される用語「ホール修飾」とは一般に、より大きいサイズの側鎖を有するアミノ酸（例えば、アラニン又はトレオニン）をより小さいサイズの側鎖を有するアミノ酸（例えば、チロシン又はトリプトファン）に置き換えることで空洞を形成した、別のポリペプチドの対応する位置における修飾を指す。ノブ修飾及びホール修飾はポリペプチドをコードする核酸の改変、例えば、部位特異的突然変異誘発、又はペプチド合成により行われてもよい。特定の実施形態において、ノブ修飾はＦｃ領域の２つのサブユニットの一方にアミノ酸置換Ｙ３４９Ｃ及びＴ３６６Ｗを含み、ホール修飾はＦｃ領域の２つのサブユニットの他方にアミノ酸置換Ｄ３５６Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ及びＹ４０７Ｖを含む。
【０１７８】
本明細書で使用される用語「ＨＥＫ２９３細胞」とは一般に、形質転換されたヒト胚腎臓（ＨＥＫ）細胞に由来するクローン単離を指す。ＨＥＫ２９３株は、単層培養においてより優れた密着性を示し、プラークアッセイ及び他の足場依存性の用途に利用しやすい２９３細胞株の一種の変異体を指す。これらは２９３  ＳＦＭ  ＩＩなどの無血清培地における浮遊培養に適用される。
【０１７９】
本明細書で使用される用語「ＣＨＯ細胞」とは一般に、非分泌的な不死化線維芽細胞であるチャイニーズハムスター卵巣細胞を指す。ＣＨＯ細胞はＣＨＯ内因性タンパク質をほぼ分泌しないため、標的タンパク質の単離及び精製に好適である。
【０１８０】
本明細書で使用される用語「ＣＯＳ−１細胞」とは一般に、サル腎臓組織に由来する線維芽細胞様細胞株を指す。ＣＯＳ細胞は、大きなＴ抗原を生成できるがゲノムの複製には欠陥が存在する特定形態のＳＶ４０ウイルスでＣＶ−１細胞を不死化させることにより得られる。よく使用されるＣＯＳ細胞株の１つの形態はＣＯＳ−１である。
【０１８１】
本明細書で使用される用語「ＮＳ０細胞」とは一般に、非分泌型マウス骨髓種に由来するモデル細胞株を指す。当該細胞株はＮＳＩ／１のサブラインより生成されたコレステロール依存性細胞株である。
【０１８２】
本明細書で使用される用語「融合タンパク質」とは一般に、直接的又は間接的に（例えば、リンカーを介して）異種ポリペプチドのアミノ酸配列と融合されたポリペプチドのアミノ酸配列を含む、あるいはこれによって構成されたポリペプチド（即ち、その前のポリペプチド又はそのドメインとは無関係のポリペプチド）を指す。
【０１８３】
本明細書で使用される用語「Ｃ末端」とは一般に、ポリペプチドのカルボキシ末端を指す。
【０１８４】
本明細書で使用される用語「Ｎ末端」とは一般に、ポリペプチドのアミノ末端を指す。
【０１８５】
本明細書で使用される用語「ＥＧＦＲ」とは一般に、上皮成長因子受容体を指す。例えば、Ｃａｒｐｅｎｔｅｒら．  Ａｎｎ．  Ｒｅｖ．  Ｂｉｏｃｈｅｍ．  ５６：８８１−９１４（１９８７）が参照されたように、その天然的に存在する変異体の形態を含む。
【０１８６】
本明細書で使用される用語「ＥＧＦＲ変異体」とは一般に、ＥＧＦＲの突然変異形態（例えば、ＥＧＦＲに最も一般的な細胞外ドメイン突然変異である、ＥＧＦＲ変異体ＩＩＩ（ＥＧＦＲｖＩＩＩともいう）を指す。当該突然変異により、リガンド非依存性構成的活性を有する短縮された細胞外ドメインによって特徴付けられる、ＥＧＦＲ遺伝子のエクソン２−７の欠失が生じる。
【０１８７】
本明細書で使用される用語「ＨＥＲ２／ｎｅｕ」とは一般に、ヒトＨＥＲ２タンパク質を指す。例えば、Ｓｅｍｂａら，  ＰＮＡＳ（ＵＳＡ）  ８２：  ６４９７−６５０１（１９８５）及びＹａｍａｍｏｔｏら．  Ｎａｔｕｒｅ  ３１９：  ２３０−２３４（１９８６）に記載のとおりである（ＧｅｎＢａｎｋ登録番号Ｘ０３３６３）。
【０１８８】
本明細書で使用される用語「ＧＰＣ３」とは一般に、遺伝子ｇｌｙｐｉｃａｎ３（ＮＣＢＩデータベース遺伝子ＩＤ：２７１９）がコードする肝癌早期マーカータンパク質を指す。ＧＰＣ３は肝細胞癌において高発現され、早期肝細胞癌患者の組織の中で検出される。
【０１８９】
本明細書で使用される用語「抗ＧＰＣ３抗体」とは一般に、ＧＰＣ３と特異的又は優先的に結合する抗体を指す。例えば、抗ＧＰＣ３抗体はコドリツズマブ又はその抗原結合断片である。
【０１９０】
本明細書で使用される用語「ＦＡＰ」とは一般に、線維芽細胞活性化タンパク質（ＦＡＰ）を指す。ＦＡＰは腫瘍マトリックス線維芽細胞に存在し、細胞表面で役割を果たす。ＦＡＰはセリンプロテアーゼファミリーのタイプＩＩの１つのメンバーで、ジペプチジルペプチダーゼ活性及びコラゲナーゼ活性を有する膜セリンペプチダーゼである。
【０１９１】
本明細書で使用される用語「抗ＦＡＰ抗体」とは一般に、ＦＡＰと特異的に又は優先的に結合する抗体を指す。例えば、抗ＦＡＰ抗体は抗体２８Ｈ１又はその抗原結合断片である。
【０１９２】
本明細書で使用される用語「Ｍｕｃ１」とは一般に、ｍｕｃ１遺伝子によってコードされた糖タンパク質を指す。Ｍｕｃ１は主に乳腺、膵臓、卵巣などの上皮組織及び器官に存在する。癌上皮細胞の表面に高発現されるため、免疫応答の標的として利用できる。
【０１９３】
本明細書で使用される用語「抗Ｍｕｃ１抗体」とは一般に、Ｍｕｃ１と特異的に又は優先的に結合する抗体を指す。例えば、抗Ｍｕｃ１抗体は抗体５Ｅ５、抗体５Ｅ５のヒト化された形態又はその抗原結合断片である。
【０１９４】
本明細書で使用される用語「ＭＵＣ５ＡＣ」とは一般に、ムチンＭＵＣ５ＡＣを指す。ＭＵＣ５ＡＣは結腸直腸癌、胃印環細胞癌、結腸癌、直腸癌及び膵臓癌で高発現される。
【０１９５】
本明細書で使用される用語「抗ＭＵＣ５ＡＣ抗体」とは一般に、ＭＵＣ５ＡＣと特異的に又は優先的に結合する抗体を指す。例えば、抗ＭＵＣ５ＡＣ抗体は抗体エンシツキシマブ又はその抗原結合断片である。
【０１９６】
本明細書で使用される用語「メソセリン」とは一般に、分子量が４０ＫＤの細胞表面糖タンパク質を指す。メソセリンは初期膵臓腫瘍など、様々な腫瘍組織において高発現され、正常な胸膜、心膜及び腹膜中皮細胞においても発現される。
【０１９７】
本明細書で使用される用語「抗メソセリン抗体」とは一般に、メソセリンと特異的に又は優先的に結合する抗体を指す。例えば、抗メソセリン抗体は抗体アマツキシマブ、抗体アマツキシマブのヒト化された形態又はその抗原結合断片である。
【０１９８】
本明細書で使用される用語「ケモカイン」とは一般に、白血球を感染部位に引き付けられる一部の小分子量（主に８〜１０ＫＤ）のタンパク質を指す。例えば、ケモカインタンパク質の共同な構造特徴には、小分子量及び三次構造を確保する保存的位置における４つのシステイン残基を含む。なお、一部のケモカインは炎症反応の促進に関与し、もう一部のケモカインは修復又は発達などの正常なプロセスにおける細胞遊走制御に関与する。
【０１９９】
本明細書で使用される用語「リンホカイン」とは一般に、活性化されたリンパ球によって生成された、対応する標的細胞に作用して標的細胞の特性的又は機能的な変化を引き起こすホルモン様ポリペプチドを指す。リンパ球はリンホカインによって隣接又は遠隔の標的細胞に作用して免疫調節及び免疫効果を実現する。一般的なリンホカインには、単球−マクロファージ遊走阻止因子（ＭＩＦ）、白血病阻止因子（ＬＩＦ）、ナチュラルキラー細胞の細胞毒素（ＮＫＣＦ）及びリンホトキシン（ＬＢ）を含むが、これらに限定されない。
【０２００】
本明細書で使用される用語「腫瘍壊死因子」とは一般に、活性化されたマクロファージ、ＮＫ細胞及びＴリンパ球によって生成された腫瘍壊死因子を指す。このうち、マクロファージによって生成されたＴＮＦはＴＮＦ−αと、リンホトキシン（ｌｙｍｐｈｏｔｏｘｉｎ、略称ＬＴ）によって生成されたＴリンパ球はＴＮＦ−βと称される。
【０２０１】
本明細書で使用される用語「免疫グロブリン」とは一般に、実質的に免疫グロブリン遺伝子によってコードされた１種以上のポリペプチドからなるタンパク質を指す。既知の免疫グロブリン遺伝子はκ、λ、α、γ（ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４）、δ、ε、μ定常領域遺伝子、及び無数の免疫グロブリン可変領域遺伝子を含む。免疫グロブリンの一つの形態は抗体の基本構造ユニットを構成する。当該形態はそれぞれ１本の軽鎖及び１本の重鎖を有する２対の同一の免疫グロブリン鎖からなる四量体である。各対において、軽鎖可変領域及び重鎖可変領域は共同で作用して抗原と結合する機能を果たし、定常領域は抗体エフェクターの機能を果たす。抗体以外に、免疫グロブリンは、例えば、Ｆｖ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’及び（Ｆａｂ’）２など他の様々な形態で存在してもよい。
【０２０２】
本明細書で使用される用語「インフレーム融合」とは一般に、オリジナルのＯＲＦｓの正しいリーディングフレームを維持する方式による、２つ以上のオープンリーディングフレーム（ＯＲＦｓ）の連結による連続したより長いＯＲＦの形成を指す。
【０２０３】
本明細書で使用される用語「リンカー」とは一般に、例えば、２つのポリペプチドドメインをリンクするなど、２つのポリペプチド配列をリンク又は連結した合成アミノ酸配列を指す。リンカーはペプチド結合を介して２つのアミノ酸配列を連結できる。いくつかの実施形態において、本発明に係るリンカーは線形配列において免疫調節物質を第２のＦｃ領域に連結する。
【０２０４】
本明細書で使用される用語「Ｎ末端に配置される」とは一般に、別の分子（例えば、別のポリペプチド）のＮ末端の位置に配置されることを指す。例えば、本発明によれば、２種以上の免疫調節物質は第２のＦｃ領域のＮ末端に配置されてもよい。
【０２０５】
本明細書で使用される用語「アミノ酸置換」とは一般に、ポリペプチドの特定位置における１つのアミノ酸が別のアミノ酸によって置き換えられることを指す。
【０２０６】
本明細書で使用される用語「ＫＡＢＡＴ番号のＥＵインデックス」とは一般に、Ｋａｂａｔら．  （１９７１）  Ａｎｎ．  ＮＹ  Ａｃａｄ，  Ｓｃｉ．  １９０：３８２−３９１及びＫａｂａｔ，  Ｅ．  Ａ．，ら  （１９９１）  Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，  Ｆｉｆｔｈ  Ｅｄｉｔｉｏｎ，  Ｕ．Ｓ．  Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ  ａｎｄ  Ｈｕｍａｎ  Ｓｅｒｖｉｃｅｓ，  ＮＩＨ  Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ  Ｎｏ．  ９１−３２４２に対応するＥＵ番号のインデックスを指す。
【０２０７】
本明細書で使用される用語「単離されたポリヌクレオチド」とは一般に、自然環境から単離された又は人工合成された任意の長さのヌクレオチドのポリマー形態である、デオキシリボヌクレオチド又はリボヌクレオチド又はその類似体を指す。
【０２０８】
本明細書で使用される用語「タンパク質混合物」とは一般に、２種以上のタンパク質の混合物を指す。
【０２０９】
本明細書で使用される用語「ホモ二量体」とは一般に、２つの同一の単量体（例えば、２つの同一のメンバー又はサブユニット）によって形成された分子を指す。２つの単量体は共有結合及び／又は非共有結合性相互作用によって互いに凝集、複合又は会合することができる。例えば、タンパク質ホモ二量体の２つの単量体は前記２つの単量体のそれぞれの界面アミノ酸残基間の相互作用により互いに会合できる。
【０２１０】
本明細書で使用される用語「実質的に含まない」とは一般に、組成物（例えば、混合物）がある物質を非常に少なく含む又はほぼ含まないことを指す。例えば、前記物質は１０％未満、９％未満、８％未満、７％未満、６％未満、５％未満、４％未満、３％未満、２％未満、１％未満、０．５％未満、０．１％未満又は０．０１％未満のパーセンテージで存在する。
【０２１１】
本明細書で使用される用語「薬学的に許容される賦形剤」とは一般に、医薬品の投与に適合するあらゆる溶媒、分散媒体、コーティング、等張剤及び吸収遅延剤などを指す。
【０２１２】
タンパク質性ヘテロ二量体、タンパク質混合物、単離されたポリヌクレオチド、ベクター及び宿主細胞
一つの態様において、本発明はタンパク質性ヘテロ二量体を提供する。当該タンパク質性ヘテロ二量は第１のメンバー及び第１のメンバーとは異なる第２のメンバーを含んでもよい。第１のメンバーは軽鎖、及び第１のＦｃ領域を含む重鎖を含み、軽鎖が重鎖と複合されて腫瘍抗原への結合特異性を示す標的部分が形成される。第２のメンバーは第２のＦｃ領域と融合される免疫調節物質を含むポリペプチドを含んでもよい。第１のＦｃ領域と第２のＦｃ領域との複合により第１のメンバーは第２のメンバーと会合して、ヘテロ二量体を形成できる。
【０２１３】
場合によっては、本発明に係るタンパク質性ヘテロ二量体はタンパク質複合体であってもよい。当該複合体は、少なくとも３つのポリペプチド鎖、例えば、第１のポリペプチド鎖、第２のポリペプチド鎖及び第３のポリペプチド鎖を含んでもよい。いくつかの実施形態において、複合体は３つのポリペプチド鎖からなる又は実質的に３つのポリペプチド鎖からなる。例えば、第１のポリペプチド鎖は腫瘍抗原に特異的な抗体の重鎖を含み、第２のポリペプチド鎖は腫瘍抗原に特異的な抗体の軽鎖を含んでもよい。重鎖は第１のＦｃ領域を含んでもよい。重鎖（即ち、第１のポリペプチド鎖の重鎖）及び軽鎖（即ち、第２のポリペプチド鎖の軽鎖）は複合してタンパク質性ヘテロ二量体の第１のメンバーを形成できる。第３のポリペプチド鎖は（例えば、Ｎ末端からＣ末端へと）１つ以上のリンカーを介して第２のＦｃ領域と融合された１つ以上の免疫調節物質を含んでもよい。第３のポリペプチド鎖はタンパク質性ヘテロ二量体の第２のメンバーであってもよい。第１のＦｃ領域と第２のＦｃ領域との複合により第１のメンバーは第２のメンバーと会合して、ヘテロ二量体を形成できる。
【０２１４】
例えば、本発明に係るタンパク質性ヘテロ二量体はタンパク質複合体であってもよい。当該複合体は、（１）腫瘍抗原に特異的な抗体の重鎖及び軽鎖、（２）Ｎ末端からＣ末端へと、任意選択的に１つ以上のリンカーを介して抗体Ｆｃ領域と融合された１つ以上の免疫調節物質を含む融合タンパク質を含む。
【０２１５】
第１のＦｃ領域は第１の修飾を含む、且つ／又は、第２のＦｃ領域は第２の修飾を含んでもよい、ただし第１の修飾及び／又は第２の修飾はノブ修飾及びホール修飾を含むノブアンドホール修飾よりも第１のメンバーと第２のメンバーとのヘテロ二量体化を効果的に促進できる。例えば、第１の修飾は第１のＦｃ領域のＣＨ３ドメインにあり、第２の修飾は第２のＦｃ領域のＣＨ３ドメインにあってもよい。例えば、第１の修飾及び／又は第２の修飾はそれぞれ対応する野生型Ｆｃ領域の配列に対していうものである。
【０２１６】
いくつかの実施形態において、第１のＦｃ領域は第１の修飾を含み、第２のＦｃ領域は一切の修飾を含まず、前記第１の修飾はノブ修飾及びホール修飾を含むノブアンドホール修飾よりも第１のメンバーと第２のメンバーとのヘテロ二量体化を効果的に促進できる。
【０２１７】
いくつかの実施形態において、第２のＦｃ領域は第２の修飾を含み、第１のＦｃ領域は一切の修飾を含まず、前記第２の修飾はノブ修飾及びホール修飾を含むノブアンドホール修飾よりも第１のメンバーと第２のメンバーとのヘテロ二量体化を効果的に促進できる。
【０２１８】
いくつかの実施形態において、第１のＦｃ領域は第１の修飾を含み、第２のＦｃ領域は第２の修飾を含み、ただし、前記第１の修飾及び前記第２の修飾はノブ修飾及びホール修飾を含むノブアンドホール修飾よりも第１のメンバーと第２のメンバーとのヘテロ二量体化を効果的に促進できる。
【０２１９】
いくつかの実施形態において、第１の修飾はノブ修飾又はホール修飾とは異なる、且つ／又は、第２の修飾はノブ修飾又はホール修飾とは異なるものである。例えば、第１の修飾はノブ修飾又はホール修飾と異なり、第２の修飾はホール修飾と同一であってもよい。場合によっては、第１の修飾はノブ修飾と同一のものであり、第２の修飾はノブ修飾又はホール修飾とは異なるものである。いくつかの実施形態において、第１のＦｃ領域は第１の修飾を含み、第２のＦｃ領域は第２の修飾を含み、第１の修飾又は第２の修飾はいずれもノブ修飾又はホール修飾と同一ではない。
【０２２０】
いくつかの実施形態において、第１の修飾は、位置Ｔ３６６におけるアミノ酸置換、並びにＹ３４９、Ｆ４０５、Ｋ４０９、Ｄ３９９、Ｋ３６０、Ｑ３４７、Ｋ３９２及びＳ３５４からなる群から選択された１つ以上の位置におけるアミノ酸置換を含み、ただしアミノ酸の位置は、ＫＡＢＡＴ番号のＥＵインデックスに基づいて決定される。
【０２２１】
いくつかの実施形態において、第１の修飾は、Ｙ３４９Ｃ、Ｙ３４９Ｄ、Ｄ３９９Ｓ、Ｆ４０５Ｋ、Ｋ３６０Ｅ、Ｋ４０９Ａ、Ｋ４０９Ｅ、Ｑ３４７Ｅ、Ｑ３４７Ｒ、Ｓ３５４Ｄ、Ｋ３９２Ｄ及びＴ３６６Ｗからなる群から選択されたアミノ酸置換を含み、ただしアミノ酸の位置は、ＫＡＢＡＴ番号のＥＵインデックスに基づいて決定される。
【０２２２】
いくつかの実施形態において、第１の修飾は、２〜５個のアミノ酸置換を含む。
【０２２３】
いくつかの実施形態において、第１の修飾は、１）Ｙ３４９及びＴ３６６；２）Ｙ３４９、Ｔ３６６及びＦ４０５；３）Ｙ３４９、Ｔ３６６及びＫ４０９；４）Ｙ３４９、Ｔ３６６、Ｆ４０５、Ｋ３６０及びＱ３４７；５）Ｙ３４９、Ｔ３６６、Ｆ４０５及びＱ３４７；６）Ｙ３４９、Ｔ３６６、Ｋ４０９、Ｋ３６０及びＱ３４７；７）Ｙ３４９、Ｔ３６６、Ｋ４０９及びＱ３４７；８）Ｔ３６６、Ｋ４０９及びＫ３９２；９）Ｔ３６６及びＫ４０９；１０）Ｔ３６６、Ｋ４０９、Ｙ３４９及びＳ３５４；１１）Ｔ３６６及びＦ４０５；１２）Ｔ３６６、Ｆ４０５及びＤ３９９；１３）Ｔ３６６、Ｆ４０５、Ｙ３４９及びＳ３５４から選択されたいずれかの群に示す位置におけるアミノ酸置換を含み、ただしアミノ酸の位置は、ＫＡＢＡＴ番号のＥＵインデックスに基づいて決定される。
【０２２４】
いくつかの実施形態において、第１の修飾は、１）Ｙ３４９Ｃ及びＴ３６６Ｗ；２）Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｗ及びＦ４０５Ｋ；３）Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｗ及びＫ４０９Ｅ；４）Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｗ及びＫ４０９Ａ；５）Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、Ｆ４０５Ｋ、Ｋ３６０Ｅ及びＱ３４７Ｅ；６）Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、Ｆ４０５Ｋ及びＱ３４７Ｒ；７）Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、Ｋ４０９Ａ、Ｋ３６０Ｅ及びＱ３４７Ｅ；８）Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、Ｋ４０９Ａ及びＱ３４７Ｒ；９）Ｔ３６６Ｗ、Ｋ４０９Ａ及びＫ３９２Ｄ；１０）Ｔ３６６Ｗ及びＫ４０９Ａ；１１）Ｔ３６６Ｗ、Ｋ４０９Ａ及びＹ３４９Ｄ；１２）Ｔ３６６Ｗ、Ｋ４０９Ａ、Ｙ３４９Ｄ及びＳ３５４Ｄ；１３）Ｔ３６６Ｗ及びＦ４０５Ｋ；１４）Ｔ３６６Ｗ、Ｆ４０５Ｋ及びＤ３９９Ｓ；１５）Ｔ３６６Ｗ、Ｆ４０５Ｋ及びＹ３４９Ｄ；１６）Ｔ３６６Ｗ、Ｆ４０５Ｋ、Ｙ３４９Ｄ及びＳ３５４Ｄから選択されたいずれかの群に示すアミノ酸置換を含み、ただしアミノ酸の位置は、ＫＡＢＡＴ番号のＥＵインデックスに基づいて決定される。
【０２２５】
いくつかの実施形態において、第２の修飾は、位置Ｔ３６６、Ｌ３６８及びＹ４０７におけるアミノ酸置換、並びに位置Ｄ３５６、Ｄ３９９、Ｅ３５７、Ｆ４０５、Ｋ３６０、Ｋ３９２、Ｋ４０９及びＱ３４７からなる群から選択された１つ以上の位置におけるアミノ酸置換を含み、ただしアミノ酸の位置は、ＫＡＢＡＴ番号のＥＵインデックスに基づいて決定される。
【０２２６】
いくつかの実施形態において、第２の修飾に含まれたアミノ酸置換は、Ｄ３５６Ｃ、Ｄ３９９Ｓ、Ｅ３５７Ａ、Ｆ４０５Ｋ、Ｋ３６０Ｅ、Ｋ３９２Ｄ、Ｋ４０９Ａ、Ｌ３６８Ａ、Ｌ３６８Ｇ、Ｑ３４７Ｅ、Ｑ３４７Ｒ、Ｔ３６６Ｓ、Ｙ４０７Ａ及びＹ４０７Ｖからなる群から選択され、ただしアミノ酸の位置は、ＫＡＢＡＴ番号のＥＵインデックスに基づいて決定される。
【０２２７】
いくつかの実施形態において、第２の修飾は、４〜６個の位置におけるアミノ酸置換を含む。
【０２２８】
いくつかの実施形態において、第２の修飾は、１）Ｄ３５６、Ｔ３６６、Ｌ３６８、Ｙ４０７及びＦ４０５；２）Ｄ３５６、Ｔ３６６、Ｌ３６８及びＹ４０７；３）Ｄ３５６、Ｔ３６６、Ｌ３６８、Ｙ４０７及びＱ３４７；４）Ｄ３５６、Ｔ３６６、Ｌ３６８、Ｙ４０７、Ｋ３６０及びＱ３４７；５）Ｄ３５６、Ｔ３６６、Ｌ３６８、Ｙ４０７、Ｆ４０５及びＱ３４７；６）Ｄ３５６、Ｔ３６６、Ｌ３６８、Ｙ４０７、Ｆ４０５、Ｋ３６０及びＱ３４７；７）Ｔ３６６、Ｌ３６８、Ｙ４０７、Ｄ３９９及びＦ４０５；８）Ｔ３６６、Ｌ３６８、Ｙ４０７及びＦ４０５；９）Ｔ３６６、Ｌ３６８、Ｙ４０７、Ｆ４０５及びＥ３５７；１０）Ｔ３６６、Ｌ３６８、Ｙ４０７及びＫ４０９；１１）Ｔ３６６、Ｌ３６８、Ｙ４０７、Ｋ４０９及びＫ３９２；１２）Ｔ３６６、Ｌ３６８、Ｙ４０７、Ｋ４０９及びＥ３５７から選択されたいずれかの群に示す位置におけるアミノ酸置換を含み、ただしアミノ酸の位置はＫＡＢＡＴ番号のＥＵインデックスに基づいて決定される。
【０２２９】
いくつかの実施形態において、第２の修飾は、１）Ｄ３５６Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、Ｙ４０７Ｖ及びＦ４０５Ｋ；２）Ｄ３５６Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ及びＹ４０７Ｖ；３）Ｄ３５６Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、Ｙ４０７Ｖ及びＱ３４７Ｒ；４）Ｄ３５６Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、Ｋ３６０Ｅ及びＱ３４７Ｅ；５）Ｄ３５６Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、Ｆ４０５Ｋ及びＱ３４７Ｒ；６）Ｄ３５６Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、Ｆ４０５Ｋ、Ｋ３６０Ｅ及びＱ３４７Ｅ；７）Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、Ｄ３９９Ｓ及びＦ４０５Ｋ；８）Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ｇ、Ｙ４０７Ａ及びＦ４０５Ｋ；９）Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、Ｆ４０５Ｋ及びＥ３５７Ａ；１０）Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、Ｙ４０７Ｖ及びＫ４０９Ａ；１１）Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、Ｋ４０９Ａ及びＫ３９２Ｄ；１２）Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ｇ、Ｙ４０７Ａ及びＫ４０９Ａ；１３）Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、Ｋ４０９Ａ及びＥ３５７Ａから選択されたいずれかの群に示すアミノ酸置換を含み、ただしアミノ酸の位置はＫＡＢＡＴ番号のＥＵインデックスに基づいて決定される。
【０２３０】
いくつかの実施形態において、第１のＦｃ領域は第１の修飾を含み、第２のＦｃ領域は第２の修飾を含み、第１の修飾及び第２の修飾は、第１の修飾：Ｙ３４９及びＴ３６６；第２の修飾：Ｄ３５６、Ｔ３６６、Ｌ３６８、Ｙ４０７及びＦ４０５；２）第１の修飾：Ｙ３４９、Ｔ３６６及びＦ４０５；第２の修飾：Ｄ３５６、Ｔ３６６、Ｌ３６８及びＹ４０７；３）第１の修飾：Ｙ３４９、Ｔ３６６及びＫ４０９；第２の修飾：Ｄ３５６、Ｔ３６６、Ｌ３６８、Ｙ４０７及びＦ４０５；４）第１の修飾：Ｙ３４９、Ｔ３６６、Ｆ４０５、Ｋ３６０及びＱ３４７；第２の修飾：Ｄ３５６、Ｔ３６６、Ｌ３６８、Ｙ４０７及びＱ３４７；５）第１の修飾：Ｙ３４９、Ｔ３６６、Ｆ４０５及びＱ３４７；第２の修飾：Ｄ３５６、Ｔ３６６、Ｌ３６８、Ｙ４０７、Ｋ３６０及びＱ３４７；６）第１の修飾：Ｙ３４９、Ｔ３６６、Ｋ４０９、Ｋ３６０及びＱ３４７；第２の修飾：Ｄ３５６、Ｔ３６６、Ｌ３６８、Ｙ４０７、Ｆ４０５及びＱ３４７；７）第１の修飾：Ｙ３４９、Ｔ３６６、Ｋ４０９及びＱ３４７；第２の修飾：Ｄ３５６、Ｔ３６６、Ｌ３６８、Ｙ４０７、Ｆ４０５、Ｋ３６０及びＱ３４７；８）第１の修飾：Ｔ３６６、Ｋ４０９及びＫ３９２；第２の修飾：Ｔ３６６、Ｌ３６８、Ｙ４０７、Ｄ３９９及びＦ４０５；９）第１の修飾：Ｔ３６６及びＫ４０９；第２の修飾：Ｔ３６６、Ｌ３６８、Ｙ４０７及びＦ４０５；１０）第１の修飾：Ｔ３６６、Ｋ４０９及びＹ３４９；第２の修飾：Ｔ３６６、Ｌ３６８、Ｙ４０７、Ｆ４０５及びＥ３５７；１１）第１の修飾：Ｔ３６６、Ｋ４０９、Ｙ３４９及びＳ３５４；第２の修飾：Ｔ３６６、Ｌ３６８、Ｙ４０７、Ｆ４０５及びＥ３５７；１２）第１の修飾：Ｔ３６６及びＦ４０５；第２の修飾：Ｔ３６６、Ｌ３６８、Ｙ４０７及びＫ４０９；１３）第１の修飾：Ｔ３６６、Ｆ４０５及びＤ３９９；第２の修飾：Ｔ３６６、Ｌ３６８、Ｙ４０７、Ｋ４０９及びＫ３９２；１４）第１の修飾：Ｔ３６６、Ｆ４０５及びＹ３４９；第２の修飾：Ｔ３６６、Ｌ３６８、Ｙ４０７、Ｋ４０９及びＥ３５７；１５）第１の修飾：Ｔ３６６、Ｆ４０５、Ｙ３４９及びＳ３５４；第２の修飾：Ｔ３６６、Ｌ３６８、Ｙ４０７、Ｋ４０９及びＥ３５７から選択されたいずれかの群に示す位置におけるアミノ酸置換を含み、ただしアミノ酸の位置は、ＫＡＢＡＴ番号のＥＵインデックスに基づいて決定される。
【０２３１】
いくつかの実施形態において、第１のＦｃ領域は第１の修飾を含み、第２のＦｃ領域は第２の修飾を含み、第１の修飾及び第２の修飾は、１）第１の修飾：Ｙ３４９Ｃ及びＴ３６６Ｗ；第２の修飾：Ｄ３５６Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、Ｙ４０７Ｖ及びＦ４０５Ｋ；２）第１の修飾：Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｗ及びＦ４０５Ｋ；第２の修飾：Ｄ３５６Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ及びＹ４０７Ｖ；３）第１の修飾：Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｗ及びＫ４０９Ｅ；第２の修飾：Ｄ３５６Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、Ｙ４０７Ｖ及びＦ４０５Ｋ；４）第１の修飾：Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｗ及びＫ４０９Ａ；第２の修飾：Ｄ３５６Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、Ｙ４０７Ｖ及びＦ４０５Ｋ；５）第１の修飾：Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、Ｆ４０５Ｋ、Ｋ３６０Ｅ及びＱ３４７Ｅ；第２の修飾：Ｄ３５６Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、Ｙ４０７Ｖ及びＱ３４７Ｒ；６）第１の修飾：Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、Ｆ４０５Ｋ及びＱ３４７Ｒ；第２の修飾：Ｄ３５６Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、Ｋ３６０Ｅ及びＱ３４７Ｅ；７）第１の修飾：Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、Ｋ４０９Ａ、Ｋ３６０Ｅ及びＱ３４７Ｅ；第２の修飾：Ｄ３５６Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、Ｆ４０５Ｋ及びＱ３４７Ｒ；８）第１の修飾：Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、Ｋ４０９Ａ及びＱ３４７Ｒ；第２の修飾：Ｄ３５６Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、Ｆ４０５Ｋ、Ｋ３６０Ｅ及びＱ３４７Ｅ；９）第１の修飾：Ｔ３６６Ｗ、Ｋ４０９Ａ及びＫ３９２Ｄ；第２の修飾：Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、Ｄ３９９Ｓ及びＦ４０５Ｋ；１０）第１の修飾：Ｔ３６６Ｗ及びＫ４０９Ａ；第２の修飾：Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ｇ、Ｙ４０７Ａ及びＦ４０５Ｋ；１１）第１の修飾：Ｔ３６６Ｗ、Ｋ４０９Ａ及びＹ３４９Ｄ；第２の修飾：Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、Ｆ４０５Ｋ及びＥ３５７Ａ；１２）第１の修飾：Ｔ３６６Ｗ、Ｋ４０９Ａ、Ｙ３４９Ｄ及びＳ３５４Ｄ；第２の修飾：Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、Ｆ４０５Ｋ及びＥ３５７Ａ；１３）第１の修飾：Ｔ３６６Ｗ及びＦ４０５Ｋ；第２の修飾：Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、Ｙ４０７Ｖ及びＫ４０９Ａ；１４）第１の修飾：Ｔ３６６Ｗ、Ｆ４０５Ｋ及びＤ３９９Ｓ；第２の修飾：Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、Ｋ４０９Ａ及びＫ３９２Ｄ；１５）第１の修飾：Ｔ３６６Ｗ及びＦ４０５Ｋ；第２の修飾：Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ｇ、Ｙ４０７Ａ及びＫ４０９Ａ；１６）第１の修飾：Ｔ３６６Ｗ、Ｆ４０５Ｋ及びＹ３４９Ｄ；第２の修飾：Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、Ｋ４０９Ａ及びＥ３５７Ａ；１７）第１の修飾：Ｔ３６６Ｗ、Ｆ４０５Ｋ、Ｙ３４９Ｄ及びＳ３５４Ｄ；第２の修飾：Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、Ｋ４０９Ａ及びＥ３５７Ａから選択されたいずれかの群に示すアミノ酸置換を含み、ただしアミノ酸の位置は、ＫＡＢＡＴ番号のＥＵインデックスに基づいて決定される。
【０２３２】
いくつかの実施形態において、第１のＦｃ領域は第１の修飾を含み、第２のＦｃ領域は第２の修飾を含み、第１の修飾はアミノ酸置換Ｔ３６６Ｗ及びＫ４０９Ａを含み、第２の修飾はアミノ酸置換Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ｇ、Ｙ４０７Ａ及びＦ４０５Ｋを含み、ただしアミノ酸の位置は、ＫＡＢＡＴ番号のＥＵインデックスに基づいて決定される。
【０２３３】
いくつかの実施形態において、ノブアンドホール修飾はノブ修飾及びホール修飾を含み、ノブ修飾はアミノ酸置換Ｙ３４９Ｃ及びＴ３６６Ｗを含み、ホール修飾はアミノ酸置換Ｄ３５６Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ及びＹ４０７Ｖを含み、ただしアミノ酸の位置は、ＫＡＢＡＴ番号のＥＵインデックスに基づいて決定される。
【０２３４】
いくつかの実施形態において、哺乳動物細胞で発現される場合、本発明に係るタンパク質性ヘテロ二量体の収量は参照タンパク質より少なくとも１０％（例えば、少なくとも１５％、少なくとも２０％、少なくとも２５％、少なくとも３０％、少なくとも３５％、少なくとも４０％、少なくとも４５％、少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％又はそれ以上）高い。参照タンパク質は、ｉ）第１のＦｃ領域にノブ修飾を含むこと、ｉｉ）第２のＦｃ領域にホール修飾を含むこと、ｉｉｉ）第１の修飾及び第２の修飾を同時に含まないことにおいて、タンパク質性ヘテロ二量体と相違する。哺乳動物細胞はＨＥＫ２９３細胞、ＣＨＯ細胞、ＣＯＳ−１細胞及びＮＳ０細胞からなる群からから選択されてもよい。いくつかの実施形態において、ノブ修飾はアミノ酸置換Ｙ３４９Ｃ及びＴ３６６Ｗを含み、ホール修飾はアミノ酸置換Ｄ３５６Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ及びＹ４０７Ｖを含み、ただしアミノ酸の位置は、ＫＡＢＡＴ番号のＥＵインデックスに基づいて決定される。
【０２３５】
いくつかの実施形態において、第２のメンバーに含まれたポリペプチドは融合タンパク質であり、免疫調節物質のＣ末端が第２のＦｃ領域のＮ末端と直接的又は間接的に融合されて融合タンパク質が形成される。いくつかの実施形態において、免疫調節物質のＣ末端は第２のＦｃ領域のＮ末端と間接的と融合される。例えば、第２のＦｃ領域はリンカーを介して免疫調節物質とインフレームで融合される。リンカーは例えば、ペプチド結合を介して２つのポリペプチド配列を連結又はリンクする合成アミノ酸配列である。いくつかの実施形態において、リンカーは１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、１０個、１１個、１２個、１３個、１４個、１５個、１６個、１７個、１８個、１９個、２０個、２１個、２２個、２３個、２４個、２５個、又はそれ以上のアミノ酸を含むペプチドである。例えば、リンカーは、１〜１０個のアミノ酸（例えば、１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、１０個、又は以上のアミノ酸）、１〜１５個のアミノ酸（例えば、１〜１１個、１２個、１３個、１４個、１５個のアミノ酸）、１〜２０個のアミノ酸、１〜３０個又はそれ以上のアミノ酸を含む。いくつかの実施形態において、リンカーは配列番号７９又は８８に記載のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態において、リンカーはタンパク質加水分解に対し耐性を有する、又はタンパク質加水分解に対し実質的に耐性を有する。
【０２３６】
いくつかの実施形態において、腫瘍抗原はＥＧＦＲ、ＥＧＦＲ変異体、ＨＥＲ２／ｎｅｕ、ＧＰＣ３、ＦＡＰ、Ｍｕｃ１、ＭＵＣ５ＡＣ及びメソセリンからなる群から選択される。
【０２３７】
標的部分の軽鎖は、腫瘍抗原に特異的に指向された抗体の軽鎖の対応するＣＤＲｓに含まれたアミノ酸配列と少なくとも６０％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％同一のアミノ酸配列を含むＣＤＲｓを含んでもよい。いくつかの実施形態において、標的部分の軽鎖は、腫瘍抗原に特異的に指向された抗体の軽鎖の対応する可変領域に含まれたアミノ酸配列と少なくとも６０％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％同一のアミノ酸配列を含む可変領域を含む。いくつかの実施形態において、標的部分の軽鎖は、腫瘍抗原に特異的に指向された抗体の軽鎖の対応するアミノ酸配列に含まれた配列と少なくとも６０％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％同一のアミノ酸配列を含む。
【０２３８】
標的部分の重鎖は、腫瘍抗原に特異的に指向された抗体の重鎖の対応するＣＤＲｓに含まれたアミノ酸配列少なくとも６０％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％同一のアミノ酸配列を含むＣＤＲｓを含んでもよい。いくつかの実施形態において、標的部分の重鎖は、腫瘍抗原に特異的に指向された抗体の重鎖の対応する可変領域に含まれたアミノ酸配列と少なくとも６０％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％同一のアミノ酸配列を含む可変領域を含んでもよい。いくつかの実施形態において、標的部分の重鎖は、腫瘍抗原に特異的に指向された抗体の重鎖の対応するアミノ酸配列に含まれた配列と少なくとも６０％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％同一のアミノ酸配列を含む。
【０２３９】
いくつかの実施形態において、標的部分の軽鎖は、腫瘍抗原に特異的に指向された抗体の軽鎖の対応するＣＤＲｓに含まれたアミノ酸配列と少なくとも６０％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％同一のアミノ酸配列を含むＣＤＲｓを含み、標的部分の重鎖は、腫瘍抗原に特異的に指向された抗体の重鎖の対応するＣＤＲｓに含まれたアミノ酸配列と少なくとも６０％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％と同一のアミノ酸配列を含むＣＤＲｓを含む。
【０２４０】
いくつかの実施形態において、標的部分の軽鎖は、腫瘍抗原に特異的に指向された抗体の軽鎖の対応する可変領域に含まれたアミノ酸配列と少なくとも６０％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％同一のアミノ酸配列を含む可変領域を含む、標的部分の重鎖は、腫瘍抗原に特異的に指向された抗体の重鎖の対応する可変領域に含まれたアミノ酸配列と少なくとも６０％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％と同一のアミノ酸配列を含む可変領域を含む。
【０２４１】
いくつかの実施形態において、標的部分の軽鎖は、腫瘍抗原に特異的に指向された抗体の軽鎖の対応するアミノ酸配列に含まれたアミノ酸配列と少なくとも６０％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％同一のアミノ酸配列を含むアミノ酸配列を含み、標的部分の重鎖は、腫瘍抗原に特異的に指向された抗体の重鎖の対応するアミノ酸配列に含まれたアミノ酸配列と少なくとも６０％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％同一のアミノ酸配列を含むアミノ酸配列を含む。
【０２４２】
腫瘍抗原に特異的に指向された抗体は、抗ＥＧＦＲ、抗ＥＧＦＲ変異体、抗ＨＥＲ２／ｎｅｕ、抗ＧＰＣ３、抗ＦＡＰ、抗Ｍｕｃ１、抗ＭＵＣ５ＡＣ及び抗メソセリンからなる群から選択されてもよい。いくつかの実施形態において、抗ＥＧＦＲ抗体はセツキシマブである。いくつかの実施形態において、抗ＥＧＦＲ変異体抗体は抗ＥＧＦＲ変異体ＩＩＩ抗体で、例えば、Ｍａｂ８０６である。いくつかの実施形態において、抗ＨＥＲ２／ｎｅｕ抗体は、トラスツズマブ又はペルツズマブである。いくつかの実施形態において、抗ＧＰＣ３抗体は抗体コドリツズマブである。いくつかの実施形態において、抗ＦＡＰ抗体は抗体２８Ｈ１である。いくつかの実施形態において、抗Ｍｕｃ１抗体は抗体５Ｅ５、又は抗体５Ｅ５のヒト化された形態である。いくつかの実施形態において、抗ＭＵＣ５ＡＣ抗体は抗体エンシツキシマブである。いくつかの実施形態において、抗メソセリン抗体は抗体アマツキシマブ、又は抗体アマツキシマブのヒト化された形態である。
【０２４３】
いくつかの実施形態において、標的部分はＥＧＦＲと特異的に結合し、第１のメンバーの軽鎖はＣＤＲ１〜３を含み、ＣＤＲ１のアミノ酸配列は配列番号１０１に記載のとおり、ＣＤＲ２のアミノ酸配列は配列番号１０２に記載のとおり、ＣＤＲ３のアミノ酸配列は配列番号１０３に記載のとおりである。
【０２４４】
いくつかの実施形態において、標的部分はＥＧＦＲと特異的に結合し、第１のメンバーの軽鎖は軽鎖可変領域を含み、軽鎖可変領域のアミノ酸配列は配列番号１０４に記載のとおりである。
【０２４５】
いくつかの実施形態において、標的部分はＥＧＦＲと特異的に結合し、第１のメンバーの軽鎖のアミノ酸配列は配列番号３７に記載のとおりである。
【０２４６】
いくつかの実施形態において、標的部分はＥＧＦＲと特異的に結合し、第１のメンバーの重鎖はＣＤＲ１〜３を含み、ＣＤＲ１のアミノ酸配列は配列番号１０５に記載のとおり、ＣＤＲ２のアミノ酸配列は配列番号１０６に記載のとおり、ＣＤＲ３のアミノ酸配列は配列番号１０７に記載のとおりである。
【０２４７】
いくつかの実施形態において、標的部分はＥＧＦＲと特異的に結合し、第１のメンバーの重鎖は重鎖可変領域を含み、重鎖可変領域のアミノ酸配列は配列番号１０８に記載のとおりである。
【０２４８】
いくつかの実施形態において、標的部分はＥＧＦＲと特異的に結合し、第１のメンバーの重鎖のアミノ酸配列は配列番号３９に記載のとおりである。
【０２４９】
いくつかの実施形態において、標的部分はＥＧＦＲと特異的に結合し、第１のメンバーの軽鎖は軽鎖ＣＤＲ１〜３を含み、軽鎖ＣＤＲ１のアミノ酸配列は配列番号１０１に記載のとおり、軽鎖ＣＤＲ２のアミノ酸配列は配列番号１０２に記載のとおり、軽鎖ＣＤＲ３のアミノ酸配列は配列番号１０３に記載のとおりである、第１のメンバーの重鎖は重鎖ＣＤＲ１〜３を含み、重鎖ＣＤＲ１のアミノ酸配列は配列番号１０５に記載のとおり、重鎖ＣＤＲ２のアミノ酸配列は配列番号１０６に記載のとおり、重鎖ＣＤＲ３のアミノ酸配列は配列番号１０７に記載のとおりである。
【０２５０】
いくつかの実施形態において、標的部分はＥＧＦＲと特異的に結合し、第１のメンバーの軽鎖は軽鎖可変領域を含み、軽鎖可変領域のアミノ酸配列は配列番号１０４に記載のとおりである、第１のメンバーの重鎖は重鎖可変領域を含み、重鎖可変領域のアミノ酸配列は配列番号１０８に記載のとおりである。
【０２５１】
いくつかの実施形態において、標的部分はＥＧＦＲと特異的に結合し、第１のメンバーの軽鎖のアミノ酸配列は配列番号３７に記載のとおりである、第１のメンバーの重鎖のアミノ酸配列は配列番号３９に記載のとおりである。
【０２５２】
いくつかの実施形態において、標的部分はＥＧＦＲ変異体と特異的に結合し、第１のメンバーの軽鎖はＣＤＲ１〜３を含み、ＣＤＲ１のアミノ酸配列は配列番号１０９に記載のとおり、ＣＤＲ２のアミノ酸配列は配列番号１１０に記載のとおり、ＣＤＲ３のアミノ酸配列は配列番号１１１に記載のとおりである。
【０２５３】
いくつかの実施形態において、標的部分はＥＧＦＲ変異体と特異的に結合し、第１のメンバーの軽鎖は軽鎖可変領域を含み、軽鎖可変領域のアミノ酸配列は配列番号１１２に記載のとおりである。
【０２５４】
いくつかの実施形態において、標的部分はＥＧＦＲ変異体と特異的に結合し、第１のメンバーの軽鎖のアミノ酸配列は配列番号５３に記載のとおりである。
【０２５５】
いくつかの実施形態において、標的部分はＥＧＦＲ変異体と特異的に結合し、第１のメンバーの重鎖はＣＤＲ１〜３を含み、ＣＤＲ１のアミノ酸配列は配列番号１１３に記載のとおり、ＣＤＲ２のアミノ酸配列は配列番号１１４に記載のとおり、ＣＤＲ３のアミノ酸配列は配列番号１１５に記載のとおりである。
【０２５６】
いくつかの実施形態において、標的部分はＥＧＦＲ変異体と特異的に結合し、第１のメンバーの重鎖は重鎖可変領域を含み、重鎖可変領域のアミノ酸配列は配列番号１１６に記載のとおりである。
【０２５７】
いくつかの実施形態において、標的部分はＥＧＦＲ変異体と特異的に結合し、第１のメンバーの重鎖のアミノ酸配列は配列番号５５に記載のとおりである。
【０２５８】
いくつかの実施形態において、標的部分はＥＧＦＲ変異体と特異的に結合し、第１のメンバーの軽鎖は軽鎖ＣＤＲ１〜３を含み、軽鎖ＣＤＲ１のアミノ酸配列は配列番号１０９に記載のとおり、軽鎖ＣＤＲ２のアミノ酸配列は配列番号１１０に記載のとおり、軽鎖ＣＤＲ３のアミノ酸配列は配列番号１１１に記載のとおりである、第１のメンバーの重鎖は重鎖ＣＤＲ１〜３を含み、重鎖ＣＤＲ１のアミノ酸配列は配列番号１１３に記載のとおり、重鎖ＣＤＲ２のアミノ酸配列は配列番号１１４に記載のとおり、重鎖ＣＤＲ３のアミノ酸配列は配列番号１１５に記載のとおりである。
【０２５９】
いくつかの実施形態において、標的部分はＥＧＦＲ変異体と特異的に結合し、第１のメンバーの軽鎖は軽鎖可変領域を含み、軽鎖可変領域のアミノ酸配列は配列番号１１２に記載のとおりである、第１のメンバーの重鎖は重鎖可変領域を含み、重鎖可変領域のアミノ酸配列は配列番号１１６に記載のとおりである。
【０２６０】
いくつかの実施形態において、標的部分はＥＧＦＲ変異体と特異的に結合し、第１のメンバーの軽鎖のアミノ酸配列は配列番号５３に記載のとおりである、第１のメンバーの重鎖のアミノ酸配列は配列番号５５に記載のとおりである。
【０２６１】
いくつかの実施形態において、標的部分はＨＥＲ２／ｎｅｕと特異的に結合し、第１のメンバーの軽鎖はＣＤＲ１〜３を含み、ＣＤＲ１のアミノ酸配列は配列番号１１７及び１２５から選択され、ＣＤＲ２のアミノ酸配列は配列番号１１８及び１２６から選択され、ＣＤＲ３のアミノ酸配列は配列番号１１９及び１２７から選択される。
【０２６２】
いくつかの実施形態において、標的部分はＨＥＲ２／ｎｅｕと特異的に結合し、第１のメンバーの軽鎖は軽鎖可変領域を含み、軽鎖可変領域のアミノ酸配列は配列番号１２０及び１２８から選択される。
【０２６３】
いくつかの実施形態において、標的部分はＨＥＲ２／ｎｅｕと特異的に結合し、第１のメンバーの軽鎖のアミノ酸配列は配列番号４５及び４９から選択される。
【０２６４】
いくつかの実施形態において、標的部分はＨＥＲ２／ｎｅｕと特異的に結合し、第１のメンバーの重鎖はＣＤＲ１〜３を含み、ＣＤＲ１のアミノ酸配列は配列番号１２１及び１２９から選択され、ＣＤＲ２のアミノ酸配列は配列番号１２２及び１３０から選択され、ＣＤＲ３のアミノ酸配列は配列番号１２３及び１３１から選択される。
【０２６５】
いくつかの実施形態において、標的部分はＨＥＲ２／ｎｅｕと特異的に結合し、第１のメンバーの抗体重鎖は重鎖可変領域を含み、重鎖可変領域のアミノ酸配列は配列番号１２４及び１３２から選択される。
【０２６６】
いくつかの実施形態において、標的部分はＨＥＲ２／ｎｅｕと特異的に結合し、第１のメンバーの重鎖のアミノ酸配列は配列番号４７及び５１から選択される。
【０２６７】
いくつかの実施形態において、標的部分はＨＥＲ２／ｎｅｕと特異的に結合し、第１のメンバーの軽鎖は軽鎖ＣＤＲ１〜３を含み、軽鎖ＣＤＲ１のアミノ酸配列は配列番号１１７及び１２５から選択され、軽鎖ＣＤＲ２のアミノ酸配列は配列番号１１８及び１２６から選択され、軽鎖ＣＤＲ３のアミノ酸配列は配列番号１１９及び１２７から選択される、第１のメンバーの重鎖は重鎖ＣＤＲ１〜３を含み、重鎖ＣＤＲ１のアミノ酸配列は配列番号１２１及び１２９から選択され、重鎖ＣＤＲ２のアミノ酸配列は配列番号１２２及び１３０から選択され、重鎖ＣＤＲ３のアミノ酸配列は配列番号１２３及び１３１から選択される。
【０２６８】
いくつかの実施形態において、標的部分はＨＥＲ２／ｎｅｕと特異的に結合し、第１のメンバーの軽鎖は軽鎖可変領域を含み、軽鎖可変領域のアミノ酸配列は配列番号１２０及び１２８から選択される、第１のメンバーの重鎖は重鎖可変領域を含み、重鎖可変領域のアミノ酸配列は配列番号１２４及び１３２から選択される。
【０２６９】
いくつかの実施形態において、標的部分はＨＥＲ２／ｎｅｕと特異的に結合し、第１のメンバーの軽鎖のアミノ酸配列は配列番号４５及び４９から選択される、第１のメンバーの重鎖のアミノ酸配列は配列番号４７及び５１から選択される。
【０２７０】
いくつかの実施形態において、標的部分はＧＰＣ３と特異的に結合し、第１のメンバーの軽鎖はＣＤＲ１〜３を含み、ＣＤＲ１のアミノ酸配列は配列番号１３３に記載のとおり、ＣＤＲ２のアミノ酸配列は配列番号１３４に記載のとおり、ＣＤＲ３のアミノ酸配列は配列番号１３５に記載のとおりである。
【０２７１】
いくつかの実施形態において、標的部分はＧＰＣ３と特異的に結合し、第１のメンバーの軽鎖は軽鎖可変領域を含み、軽鎖可変領域のアミノ酸配列は配列番号１３６に記載のとおりである。
【０２７２】
いくつかの実施形態において、標的部分はＧＰＣ３と特異的に結合し、第１のメンバーの軽鎖のアミノ酸配列は配列番号５７に記載のとおりである。
【０２７３】
いくつかの実施形態において、標的部分はＧＰＣ３と特異的に結合し、第１のメンバーの重鎖はＣＤＲ１〜３を含み、ＣＤＲ１のアミノ酸配列は配列番号１３７に記載のとおり、ＣＤＲ２のアミノ酸配列は配列番号１３８に記載のとおり、ＣＤＲ３のアミノ酸配列は配列番号１３９に記載のとおりである。
【０２７４】
いくつかの実施形態において、標的部分はＧＰＣ３と特異的に結合し、第１のメンバーの重鎖は重鎖可変領域を含み、重鎖可変領域のアミノ酸配列は配列番号１４０に記載のとおりである。
【０２７５】
いくつかの実施形態において、標的部分はＧＰＣ３と特異的に結合し、第１のメンバーの重鎖のアミノ酸配列は配列番号５９に記載のとおりである。
【０２７６】
いくつかの実施形態において、標的部分はＧＰＣ３と特異的に結合し、第１のメンバーの軽鎖は軽鎖ＣＤＲ１〜３を含み、軽鎖ＣＤＲ１のアミノ酸配列は配列番号１３３に記載のとおり、軽鎖ＣＤＲ２のアミノ酸配列は配列番号１３４に記載のとおり、軽鎖ＣＤＲ３のアミノ酸配列は配列番号１３５に記載のとおりである、第１のメンバーの重鎖は重鎖ＣＤＲ１〜３を含み、重鎖ＣＤＲ１のアミノ酸配列は配列番号１３７に記載のとおり、重鎖ＣＤＲ２のアミノ酸配列は配列番号１３８に記載のとおり、重鎖ＣＤＲ３のアミノ酸配列は配列番号１３９に記載のとおりである。
【０２７７】
いくつかの実施形態において、標的部分はＧＰＣ３と特異的に結合し、第１のメンバーの軽鎖は軽鎖可変領域を含み、軽鎖可変領域のアミノ酸配列は配列番号１３６に記載のとおりである、第１のメンバーの重鎖は重鎖可変領域を含み、重鎖可変領域のアミノ酸配列は配列番号１４０に記載のとおりである。
【０２７８】
いくつかの実施形態において、標的部分はＧＰＣ３と特異的に結合し、第１のメンバーの軽鎖のアミノ酸配列は配列番号５７に記載のとおりである、第１のメンバーの重鎖のアミノ酸配列は配列番号５９に記載のとおりである。
【０２７９】
いくつかの実施形態において、標的部分はＦＡＰと特異的に結合し、第１のメンバーの軽鎖はＣＤＲ１〜３を含み、ＣＤＲ１のアミノ酸配列は配列番号１４１に記載のとおり、ＣＤＲ２のアミノ酸配列は配列番号１４２に記載のとおり、ＣＤＲ３のアミノ酸配列は配列番号１４３に記載のとおりである。
【０２８０】
いくつかの実施形態において、標的部分はＦＡＰと特異的に結合し、第１のメンバーの軽鎖は軽鎖可変領域を含み、軽鎖可変領域のアミノ酸配列は配列番号１４４に記載のとおりである。
【０２８１】
いくつかの実施形態において、標的部分はＦＡＰと特異的に結合し、第１のメンバーの軽鎖のアミノ酸配列は配列番号６１に記載のとおりである。
【０２８２】
いくつかの実施形態において、標的部分はＦＡＰと特異的に結合し、第１のメンバーの重鎖はＣＤＲ１〜３を含み、ＣＤＲ１のアミノ酸配列は配列番号１４５に記載のとおり、ＣＤＲ２のアミノ酸配列は配列番号１４６に記載のとおり、ＣＤＲ３のアミノ酸配列は配列番号１４７に記載のとおりである。
【０２８３】
いくつかの実施形態において、標的部分はＦＡＰと特異的に結合し、第１のメンバーの重鎖は重鎖可変領域を含み、重鎖可変領域のアミノ酸配列は配列番号１４８に記載のとおりである。
【０２８４】
いくつかの実施形態において、標的部分はＦＡＰと特異的に結合し、第１のメンバーの重鎖のアミノ酸配列は配列番号６３に記載のとおりである。
【０２８５】
いくつかの実施形態において、標的部分はＦＡＰと特異的に結合し、第１のメンバーの軽鎖は軽鎖ＣＤＲ１〜３を含み、軽鎖ＣＤＲ１のアミノ酸配列は配列番号１４１に記載のとおり、軽鎖ＣＤＲ２のアミノ酸配列は配列番号１４２に記載のとおり、軽鎖ＣＤＲ３のアミノ酸配列は配列番号１４３に記載のとおりである、第１のメンバーの重鎖は重鎖ＣＤＲ１〜３を含み、重鎖ＣＤＲ１のアミノ酸配列は配列番号１４５に記載のとおり、重鎖ＣＤＲ２のアミノ酸配列は配列番号１４６に記載のとおり、重鎖ＣＤＲ３のアミノ酸配列は配列番号１４７に記載のとおりである。
【０２８６】
いくつかの実施形態において、標的部分はＦＡＰと特異的に結合し、第１のメンバーの軽鎖は軽鎖可変領域を含み、軽鎖可変領域のアミノ酸配列は配列番号１４８に記載のとおりである、第１のメンバーの鎖は重鎖可変領域を含み、重鎖可変領域のアミノ酸配列は配列番号１５２に記載のとおりである。
【０２８７】
いくつかの実施形態において、標的部分はＦＡＰと特異的に結合し、第１のメンバーの軽鎖のアミノ酸配列は配列番号６１に記載のとおりである、第１のメンバーの重鎖のアミノ酸配列は配列番号６３に記載のとおりである。
【０２８８】
いくつかの実施形態において、標的部分はＭｕｃ１と特異的に結合し、第１のメンバーの抗体軽鎖はＣＤＲ１〜３を含み、ＣＤＲ１のアミノ酸配列は配列番号１４９に記載のとおり、ＣＤＲ２のアミノ酸配列は配列番号１５０に記載のとおり、ＣＤＲ３のアミノ酸配列は配列番号１５１に記載のとおりである。
【０２８９】
いくつかの実施形態において、標的部分はＭｕｃ１と特異的に結合し、第１のメンバーの抗体軽鎖は軽鎖可変領域を含み、軽鎖可変領域のアミノ酸配列は配列番号１５２に記載のとおりである。
【０２９０】
いくつかの実施形態において、標的部分はＭｕｃ１と特異的に結合し、第１のメンバーの軽鎖のアミノ酸配列は配列番号６５に記載のとおりである。
【０２９１】
いくつかの実施形態において、標的部分はＭｕｃ１と特異的に結合し、第１のメンバーの重鎖はＣＤＲ１〜３を含み、ＣＤＲ１のアミノ酸配列は配列番号１５３に記載のとおり、ＣＤＲ２のアミノ酸配列は配列番号１５４に記載のとおり、ＣＤＲ３のアミノ酸配列は配列番号１５５に記載のとおりである。
【０２９２】
いくつかの実施形態において、標的部分はＭｕｃ１と特異的に結合し、第１のメンバーの重鎖は重鎖可変領域を含み、重鎖可変領域のアミノ酸配列は配列番号１５６に記載のとおりである。
【０２９３】
いくつかの実施形態において、標的部分はＭｕｃ１と特異的に結合し、第１のメンバーの重鎖のアミノ酸配列は配列番号６７に記載のとおりである。
【０２９４】
いくつかの実施形態において、標的部分はＭｕｃ１と特異的に結合し、第１のメンバーの軽鎖は軽鎖ＣＤＲ１〜３を含み、軽鎖ＣＤＲ１のアミノ酸配列は配列番号１４９に記載のとおり、軽鎖ＣＤＲ２のアミノ酸配列は配列番号１５０に記載のとおり、軽鎖ＣＤＲ３のアミノ酸配列は配列番号１５１に記載のとおりである、第１のメンバーの重鎖は重鎖ＣＤＲ１〜３を含み、重鎖ＣＤＲ１のアミノ酸配列は配列番号１５３に記載のとおり、重鎖ＣＤＲ２のアミノ酸配列は配列番号１５４に記載のとおり、重鎖ＣＤＲ３のアミノ酸配列は配列番号１５５に記載のとおりである。
【０２９５】
いくつかの実施形態において、標的部分はＭｕｃ１と特異的に結合し、第１のメンバーの軽鎖は軽鎖可変領域を含み、軽鎖可変領域のアミノ酸配列は配列番号１５２に記載のとおりである、第１のメンバーの重鎖は重鎖可変領域を含み、重鎖可変領域のアミノ酸配列は配列番号１５６に記載のとおりである。
【０２９６】
いくつかの実施形態において、標的部分はＭｕｃ１と特異的に結合し、第１のメンバーの軽鎖のアミノ酸配列は配列番号６５に記載のとおりである、第１のメンバーの重鎖のアミノ酸配列は配列番号６７に記載のとおりである。
【０２９７】
いくつかの実施形態において、標的部分はメソセリンと特異的に結合し、第１のメンバーの軽鎖はＣＤＲ１〜３を含み、ＣＤＲ１のアミノ酸配列は配列番号１６５に記載のとおり、ＣＤＲ２のアミノ酸配列は配列番号１６６に記載のとおり、ＣＤＲ３のアミノ酸配列は配列番号１６７に記載のとおりである。
【０２９８】
いくつかの実施形態において、標的部分はメソセリンと特異的に結合し、第１のメンバーの軽鎖は軽鎖可変領域を含み、軽鎖可変領域のアミノ酸配列は配列番号１６８に記載のとおりである。
【０２９９】
いくつかの実施形態において、標的部分はメソセリンと特異的に結合し、第１のメンバーの軽鎖のアミノ酸配列は配列番号７３に記載のとおりである。
【０３００】
いくつかの実施形態において、標的部分はメソセリンと特異的に結合し、第１のメンバーの重鎖はＣＤＲ１〜３を含み、ＣＤＲ１のアミノ酸配列は配列番号１６９に記載のとおり、ＣＤＲ２のアミノ酸配列は配列番号１７０に記載のとおり、ＣＤＲ３のアミノ酸配列は配列番号１７１に記載のとおりである。
【０３０１】
いくつかの実施形態において、標的部分はメソセリンと特異的に結合し、第１のメンバーの重鎖は重鎖可変領域を含み、重鎖可変領域のアミノ酸配列は配列番号１７２に記載のとおりである。
【０３０２】
いくつかの実施形態において、標的部分はメソセリンと特異的に結合し、第１のメンバーの重鎖のアミノ酸配列は配列番号７５に記載のとおりである。
【０３０３】
いくつかの実施形態において、標的部分はメソセリンと特異的に結合し、第１のメンバーの軽鎖は軽鎖ＣＤＲ１〜３を含み、軽鎖ＣＤＲ１のアミノ酸配列は配列番号１６５に記載のとおり、軽鎖ＣＤＲ２のアミノ酸配列は配列番号１６６に記載のとおり、軽鎖ＣＤＲ３のアミノ酸配列は配列番号１６７に記載のとおりである、第１のメンバーの重鎖は重鎖ＣＤＲ１〜３を含み、重鎖ＣＤＲ１のアミノ酸配列は配列番号１６９に記載のとおり、重鎖ＣＤＲ２のアミノ酸配列は配列番号１７０に記載のとおり、重鎖ＣＤＲ３のアミノ酸配列は配列番号１７１に記載のとおりである。
【０３０４】
いくつかの実施形態において、標的部分はメソセリンと特異的に結合し、第１のメンバーの軽鎖は軽鎖可変領域を含み、軽鎖可変領域のアミノ酸配列は配列番号１６８に記載のとおりである、第１のメンバーの重鎖は重鎖可変領域を含み、重鎖可変領域のアミノ酸配列は配列番号１７２に記載のとおりである。
【０３０５】
いくつかの実施形態において、標的部分はメソセリンと特異的に結合し、第１のメンバーの軽鎖のアミノ酸配列は配列番号７３に記載のとおりである、第１のメンバーの重鎖のアミノ酸配列は配列番号７５に記載のとおりである。
【０３０６】
いくつかの実施形態において、標的部分はＭＵＣ５ＡＣと特異的に結合し、第１のメンバーの軽鎖はＣＤＲ１〜３を含み、ＣＤＲ１のアミノ酸配列は配列番号１５７に記載のとおり、ＣＤＲ２のアミノ酸配列は配列番号１５８に記載のとおり、ＣＤＲ３のアミノ酸配列は配列番号１５９に記載のとおりである。
【０３０７】
いくつかの実施形態において、標的部分はＭＵＣ５ＡＣと特異的に結合し、第１のメンバーの軽鎖は軽鎖可変領域を含み、軽鎖可変領域のアミノ酸配列は配列番号１６０に記載のとおりである。
【０３０８】
いくつかの実施形態において、標的部分はＭＵＣ５ＡＣと特異的に結合し、第１のメンバーの軽鎖のアミノ酸配列は配列番号６９に記載のとおりである。
【０３０９】
いくつかの実施形態において、標的部分はＭＵＣ５ＡＣと特異的に結合し、第１のメンバーの重鎖はＣＤＲ１〜３を含み、ＣＤＲ１のアミノ酸配列は配列番号１６１に記載のとおり、ＣＤＲ２のアミノ酸配列は配列番号１６２に記載のとおり、ＣＤＲ３のアミノ酸配列は配列番号１６３に記載のとおりである。
【０３１０】
いくつかの実施形態において、標的部分はＭＵＣ５ＡＣと特異的に結合し、第１のメンバーの重鎖は重鎖可変領域を含み、重鎖可変領域のアミノ酸配列は配列番号１６４に記載のとおりである。
【０３１１】
いくつかの実施形態において、標的部分はＭＵＣ５ＡＣと特異的に結合し、第１のメンバーの重鎖のアミノ酸配列は配列番号７１に記載のとおりである。
【０３１２】
いくつかの実施形態において、標的部分はＭＵＣ５ＡＣと特異的に結合し、第１のメンバーの軽鎖は軽鎖ＣＤＲ１〜３を含み、軽鎖ＣＤＲ１のアミノ酸配列は配列番号１５７に記載のとおり、軽鎖ＣＤＲ２のアミノ酸配列は配列番号１５８に記載のとおり、軽鎖ＣＤＲ３のアミノ酸配列は配列番号１５９に記載のとおりである、第１のメンバーの重鎖は重鎖ＣＤＲ１〜３を含み、重鎖ＣＤＲ１のアミノ酸配列は配列番号１６１に記載のとおり、重鎖ＣＤＲ２のアミノ酸配列は配列番号１６２に記載のとおり、重鎖ＣＤＲ３のアミノ酸配列は配列番号１６３に記載のとおりである。
【０３１３】
いくつかの実施形態において、標的部分はＭＵＣ５ＡＣと特異的に結合し、第１のメンバーの軽鎖は軽鎖可変領域を含み、軽鎖可変領域のアミノ酸配列は配列番号１６０に記載のとおりである、第１のメンバーの重鎖は重鎖可変領域を含み、重鎖可変領域のアミノ酸配列は配列番号１６４に記載のとおりである。
【０３１４】
いくつかの実施形態において、標的部分はＭＵＣ５ＡＣと特異的に結合し、第１のメンバーの軽鎖のアミノ酸配列は配列番号６９に記載のとおりである、第１のメンバーの重鎖のアミノ酸配列は配列番号７１に記載のとおりである。
【０３１５】
いくつかの実施形態において、免疫調節物質は免疫応答を増強させる。免疫応答を増強できる免疫調節物質の例は、ＩＬ−２、ＩＦＮα、ＩＦＮβ、ＩＦＮγ、ＩＦＮλ、腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）α、ＩＬ−１２及びＩＬ−１０を含むが、これらに限定されない。
【０３１６】
いくつかの実施形態において、免疫調節物質は免疫応答を低下させる。免疫応答を低下できる免疫調節物質の非限定的な例として、ＩＬ−１０及びトランスフォーミング増殖因子（ＴＧＦ）−βが挙げられる。
【０３１７】
いくつかの実施形態において、免疫調節物質はサイトカインである。例えば、免疫調節物質はインターフェロン、インターロイキン、ケモカイン、リンホカイン及び腫瘍壊死因子からなる群から選択されたサイトカインであってもよい。
【０３１８】
いくつかの実施形態において、免疫調節物質は、インターフェロンα、インターフェロンλ及びインターフェロンβからなる群から選択されたインターフェロンである。
【０３１９】
いくつかの実施形態において、免疫調節物質はインターロイキンであり、インターロイキンはインターロイキン１０、インターロイキン２及び／又はスーパーインターロイキン２を含む。
【０３２０】
いくつかの実施形態において、第１のＦｃ領域及び第２のＦｃ領域は免疫グロブリンのＦｃ領域に由来する。例えば、免疫グロブリンはＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３及びＩｇＧ４から選択される。いくつかの実施形態において、第１のＦｃ領域及び第２のＦｃ領域は免疫グロブリンのＦｃ領域に由来し、当該免疫グロブリンはヒトＩｇＧ１である。
【０３２１】
いくつかの実施形態において、第１の修飾及び／又は第２の修飾はヒトＩｇＧ１のＦｃ領域の野生型アミノ酸配列に対していうものである。
【０３２２】
いくつかの実施形態において、第２のＦｃ領域は免疫調節物質とインフレームで融合される。
【０３２３】
いくつかの実施形態において、第２のメンバーに含まれたポリペプチドは２種以上の免疫調節物質を含み、当該２種以上の免疫調節物質はインフレームで互いに融合され且つ第２のＦｃ領域と融合され、ただし当該２種以上の免疫調節物質は第２のＦｃ領域のＮ末端に配置される。いくつかの実施形態において、当該２種以上の免疫調節物質はリンカーを介してインフレームで互いに融合される、且つ／又は第２のＦｃ領域と融合されてもよい。リンカーは例えば、ペプチド結合を介して２つのポリペプチド配列を連結又はリンクする合成アミノ酸配列である。いくつかの実施形態において、リンカーは例えば、１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、１０個、１１個、１２個、１３個、１４個、１５個、１６個、１７個、１８個、１９個、２０個、２１個、２２個、２３個、２４個、２５個又はそれ以上のアミノ酸を含む。当該２種以上の免疫調節物質は同一のタイプであるか、異なるタイプのものである。例えば、当該２種以上の免疫調節物質は同一のものである。いくつかの実施形態において、当該２種以上の免疫調節物質はインターロイキン１０である。
【０３２４】
いくつかの実施形態において、第１のメンバーの重鎖で、第１のＦｃ領域のアミノ酸配列は配列番号１、４、５、６、７、９、１１、１３、１５、１７、１９、２１、２２、２４、２６、２７及び２９から選択される。
【０３２５】
いくつかの実施形態において、第２のメンバーに含まれた免疫調節物質のアミノ酸配列は配列番号１７３〜１８０から選択される。
【０３２６】
いくつかの実施形態において、第２のメンバーに含まれた第２のＦｃ領域のアミノ酸配列は配列番号２、３、８、１０、１２、１４、１６、１８、２０、２３、２５及び２８から選択される。
【０３２７】
いくつかの実施形態において、第２のメンバーに含まれたポリペプチドのアミノ酸配列は配列番号７７、８０、８２、８４、８６、８９、９１及び９７から選択される。
【０３２８】
いくつかの実施形態において、第１のメンバーに含まれた軽鎖のアミノ酸配列は配列番号３７、４５、４９、５３、５７、６１、６５、６９及び７３から選択され、第１のメンバーに含まれた重鎖のアミノ酸配列は配列番号３９、４７、５１、５５、５９、６３、６７、７１及び７５から選択され、第２のメンバーに含まれたポリペプチドのアミノ酸配列は配列番号７７、８０、８２、８４、８６、８９、９１及び９７から選択される。
【０３２９】
別の態様において、本発明はタンパク質混合物を提供し、当該タンパク質混合物は、１）本発明に係るタンパク質性ヘテロ二量体と、２）タンパク質性ヘテロ二量体の第１のメンバーの２つにより形成された第１のホモ二量体と、３）タンパク質性ヘテロ二量体の第２のメンバーの２つにより形成された第２のホモ二量体とを含む。タンパク質混合物におけるタンパク質性ヘテロ二量体のパーセンテージは少なくとも５０％（例えば、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも７６％、少なくとも７７％、少なくとも７８％、少なくとも７９％、少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、少なくとも８４％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％又はそれ以上）であってもよい。
【０３３０】
いくつかの実施形態において、タンパク質混合物で、第２のホモ二量体のパーセンテージは第１のホモ二量体のパーセンテージより小さい。例えば、第１のホモ二量体のパーセンテージは第２のホモ二量体のパーセンテージより少なくとも１．１倍、少なくとも１．２倍、少なくとも１．３倍、少なくとも１．４倍、少なくとも１．５倍、少なくとも１．６倍、少なくとも１．７倍、少なくとも１．８倍、少なくとも１．９倍、少なくとも２．０倍、少なくとも２．１倍、少なくとも２．２倍、少なくとも２．３倍、少なくとも２．４倍、少なくとも２．５倍、少なくとも２．６倍、少なくとも２．７倍、少なくとも２．８倍少なくとも２．９倍、少なくとも３．０倍、少なくとも３．１倍、少なくとも３．２倍、少なくとも３．５倍、少なくとも４．０倍、少なくとも４．５倍、少なくとも５．０倍、少なくとも５．５倍、少なくとも６．０倍、少なくとも７．０倍、少なくとも８．０倍又はそれ以上である。
【０３３１】
いくつかの実施形態において、第２のホモ二量体のタンパク質混合物におけるパーセンテージは、最大１０％（例えば、最大０．０％、最大０．０１％、最大０．１％、最大０．５％、最大１％、最大１．５％、最大２％、最大３％、最大４％、最大５％、最大６％、最大７％、最大８％、最大９％）である。いくつかの実施形態において、タンパク質混合物は第２のホモ二量体を実質的に含まない。
【０３３２】
別の態様において、本発明は、本発明に係るタンパク質性ヘテロ二量体をコードする単離されたポリヌクレオチドを提供する。いくつかの実施形態において、単離されたポリヌクレオチドは本発明に係るタンパク質性ヘテロ二量体のサブユニット（例えば、メンバー）又は断片をコードする。
【０３３３】
当該ポリヌクレオチドは本分野で周知された組換え技術を利用して合成できる。例えば、自動化ＤＮＡ合成装置を用いて当該ポリヌクレオチドを合成する。
【０３３４】
標準的な組換えＤＮＡ技術及び分子クローニング技術は、Ｓａｍｂｒｏｏｋ，  Ｊ．，  Ｆｒｉｔｓｃｈ，  Ｅ．  Ｆ．とＭａｎｉａｔｉｓ  Ｔ．  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ：  Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ；  Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ：  Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ，  （１９８９）  （Ｍａｎｉａｔｉｓ）、Ｔ．  Ｊ．  Ｓｉｌｈａｖｙ，  Ｍ．  Ｌ．  Ｂｅｎｎａｎ，  Ｌ．  Ｗ．  Ｅｎｑｕｉｓｔ，  Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔｓ  ｗｉｔｈ  Ｇｅｎｅ  Ｆｕｓｉｏｎｓ，  Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ，  Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ，  Ｎ．Ｙ．  （１９８４）、Ａｕｓｕｂｅｌ，  Ｆ．  Ｍ．ら，  Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，  Ｇｒｅｅｎｅ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ａｓｓｏｃ．とＷｉｌｅｙ−Ｉｎｔｅｒｓｃｉｅｎｃｅ（１９８７）に記載のものを含む。簡単に言えば、対象核酸は、細胞から直接抽出された、又はＰＣＲ及びＲＴ−ＰＣＲを含むがこれらに限定されない様々な増幅プロセスを利用して組換え生成されたゲノムＤＮＡ断片、ｃＤＮＡｓ及びＲＮＡｓによって調製できる。
【０３３５】
核酸の直接的化学合成は一般に３’−遮断された及び５’−遮断されたヌクレオチド単量体を成長中のヌクレオチドポリマー鎖の末端５’−ヒドロキシルに基に順次加えることを含み、ただし加えるたびには成長中の鎖の末端５’ヒドロキシル基による、リン酸トリエステル、ホスホルアミダイトなどのリン誘導体をはじめとする加えられた単量体の３’位置における求核攻撃により影響される。Ｍａｔｔｅｕｃｉら，  Ｔｅｔ．  Ｌｅｔｔ．  ５２１：７１９（１９８０）、Ｃａｒｕｔｈｅｒｓらによる米国特許第４５００７０７号、Ｓｏｕｔｈｅｒｎらによる米国特許第５４３６３２７号及び第５７００６３７号を参照できる。
【０３３６】
別の態様において、本発明は、本発明に係る単離されたポリヌクレオチドを含むベクターを提供する。
【０３３７】
当該ベクターは任意の直鎖状核酸、プラスミド、ファージミド、コスミド、ＲＮＡベクター、ウイルスベクターなどであってもよい。ウイルスベクターの非限定的な例は、レトロウイルス、アデノウイルス及びアデノ随伴ウイルスを含む。いくつかの実施形態において、ベクターはファージディスプレイベクターなどの発現ベクターである。
【０３３８】
発現ベクターは特定のタイプの宿主細胞に適用されるが、他の宿主細胞に適用されない場合がある。例えば、発現ベクターを宿主生物体に導入し、ベクターに含まれた任意の遺伝子／ポリヌクレオチドの生存率及び発現を監視する。
【０３３９】
発現ベクターは、発現後に、発現ベクターを担持する他の宿主細胞を選択又は同定するのに有用な、１つの以上の表現型形質を付与する１つ以上の選択マーカー遺伝子をさらに含んでもよい。真核細胞に適する選択マーカーの非限定的な例は、ジヒドロ葉酸レダクターゼ及びネオマイシン耐性を含む。
【０３４０】
様々な公開技術を利用して対象ベクターを宿主細胞に安定的又は一過性導入することができる。例えば、一つの方法は、発現ベクターがカルシウム沈殿物によって導入される塩化カルシウム処理を含む。他の塩、例えばリン酸カルシウムも、同様の手順に従って使用できる。また、エレクトロポレーション（即ち、核酸に対する細胞の透過性を高めるための電流印加）も利用できる。形質転換法の他の例は、マイクロインジェクション、ＤＥＡＥデキストラン媒介形質転換及び酢酸リチウム存在下の熱ショックを含む。脂質複合体、リポソーム及びデンドリマーも、宿主細胞をトランスフェクトするために使用できる。
【０３４１】
宿主細胞への異種配列導入後、様々な方法を利用して、対象ベクターが導入された宿主細胞を同定できる。一つの例示的な選択方法は、個々の細胞を継代培養して個々のコロニーを形成し、次に、所望のタンパク質産物の発現について試験することを含む。別の方法として、発現ベクター内に含まれた選択マーカー遺伝子の発現によって付与された表現型形質に基づいて異種配列を含む宿主細胞を選択することを含む。
【０３４２】
例えば、本発明に係る様々な異種配列の宿主細胞への導入は、ＰＣＲ、サザンブロット又はノーザンブロットハイブリダイゼーションなどの方法により確認できる。例えば、得られた宿主細胞から核酸を調製し、目的配列に特異的なプライマーを使用するＰＣＲにより目的配列を増幅することができる。増幅産物をアガロースゲル電気泳動、ポリアクリルアミドゲル電気泳動又はキャピラリー電気泳動にかけて、エチジウムブロマイド、ＳＹＢＲグリーン溶液などで染色するか、ＵＶ検出でＤＮＡを検出する。あるいは、目的配列に特異的な核酸プローブをハイブリダイゼーション反応に使用する。目的遺伝子配列の発現は、ＰＣＲと組み合わせた逆転写、ノーザンブロットハイブリダイゼーションによる対応するｍＲＮＡの検出、又はコードされた遺伝子産物と反応する抗体を使用するイムノアッセイにより確認できる。例示的なイムノアッセイは、ＥＬＩＳＡ、放射免疫アッセイ、及びサンドイッチイムノアッセイを含むが、これらに限定されない。
【０３４３】
また、本発明に係る様々な異種配列の宿主細胞への導入は、異種配列がコードする酵素（例えば、酵素マーカー）の酵素活性により確認できる。本分野で周知された様々な方法により酵素を検出できる。一般に、研究対象の酵素反応の産物形成又は基質の変換により確認できる。当該反応は、インビトロ又はインビボで行われる。
【０３４４】
別の態様において、本発明は単離された宿主細胞を提供し、当該宿主細胞は本発明に係る単離されたポリヌクレオチド又はベクターを含む、且つ／又は、タンパク質性ヘテロ二量体、及び／又はタンパク質性ヘテロ二量体をコードする単離されたポリヌクレオチド、及び／又は本発明に係るタンパク質混合物を発現できる。
【０３４５】
いくつかの実施形態において、当該細胞は、本発明に係るヘテロ二量体タンパク質、本発明に係る単離されたポリヌクレオチドがコードするヘテロ二量体タンパク質及び／又はタンパク質混合物を発現する。当該細胞は、真核細胞又は原核細胞であってもよい。適切な細胞を、本発明に係るポリヌクレオチド又はベクターを用いて形質転換又はトランスフェクトすることでヘテロ二量体タンパク質及び／又はタンパク質混合物の発現及び／又は分泌に利用できる。例えば、当該細胞は、大腸菌細胞、他の細菌宿主細胞、酵母細胞又は様々な高等真核細胞（例えば、不死化ハイブリドーマ細胞、ＮＳ０骨髄腫細胞、ＨＥＫ２９３細胞、チャイニーズハムスター卵巣細胞、ＨｅＬａ細胞、ＣＯＳ細胞など）であってもよい。いくつかの実施形態において、タンパク質性ヘテロ二量体（例えば、ヘテロ二量体タンパク質）をコードするポリヌクレオチドは特定の宿主細胞における発現に好適な発現制御配列に操作可能に連結される。
【０３４６】
医薬組成物
別の態様において、本発明は医薬組成物を提供し、当該医薬組成物は本発明に係るタンパク質性ヘテロ二量体又は本発明に係るタンパク質混合物を含む。当該医薬組成物は薬学的に許容される賦形剤をさらに含んでもよい。
【０３４７】
薬学的に許容される賦形剤の例は、不活性な固体希釈剤及び充填剤、希釈剤、滅菌水溶液及び様々な有機溶媒、透過促進剤、可溶化剤及び補助剤を含むが、これらに限定されない。
【０３４８】
いくつかの実施形態において、当該医薬組成物は経口投与、静脈内投与、筋肉内投与、腫瘍部位でのインサイチュ投与、吸入、直腸投与、膣内投与、経皮投与又は皮下貯蔵所投与用として処方される。
【０３４９】
当該医薬組成物は腫瘍の成長阻害のために使用できる。例えば、当該医薬組成物は疾患の発展又は進行を阻害又は遅延し、腫瘍のサイズを縮小（さらには腫瘍を実質的に解消）し、疾患状態を緩和及び／又は安定化させることができる。
【０３５０】
以下、非限定的で例示的な医薬組成物及びその製造方法を説明する。
【０３５１】
当該医薬組成物は例えば、錠剤、カプセル、ピル、粉末、徐放性製剤、溶液、懸濁液など経口投与用に好適な形態、非経口注射用の滅菌溶液、懸濁液又はエマルジョン、局所投与用の軟膏又はクリーム、又は直腸投与用坐剤であってもよい。医薬組成物は、正確な用量の単回投与に好適な単位剤形であってもよい。当該医薬組成物は、本発明に係るタンパク質性ヘテロ二量体（例えば、ヘテロ二量体タンパク質）又はタンパク質混合物を活性成分としてさらに含み、従来の医薬品ベクター又は賦形剤を含んでもよい。さらに、他の医薬品、ベクター、補助剤などをさらに含んでもよい。
【０３５２】
例示的な非経口投与形態は、滅菌水溶液、例えば、水性プロピレングリコール又はデキストロース溶液における活性なタンパク質性ヘテロ二量体（例えば、ヘテロ二量体タンパク質）の溶液又は懸濁液を含むがこれらに限定されない。必要に応じて、これらの剤形は、ヒスチジン及び／又はリン酸塩などの塩で適宜緩衝されてもよい。
【０３５３】
いくつかの実施形態において、本発明は注射用医薬組成物を提供し、当該医薬組成物は本発明に係るタンパク質性ヘテロ二量体（例えば、ヘテロ二量体タンパク質）又はタンパク質混合物及び注射に好適な医薬品賦形剤を含む。組成物における薬剤の成分及び量は本明細書に記載のとおりである。
【０３５４】
本発明に係る医薬組成物を加えて注射投与される形態は、ゴマ油、トウモロコシ油、綿実油又はピーナッツオイル、及びエリキシル剤、マンニトール、デキストロース、又は滅菌水溶液及び類似する医薬用媒介が使用される水性、油性懸濁液又はエマルジョンであってもよい。
【０３５５】
また、生理食塩水中の水溶液も注射に利用できる。エタノール、グリセロール、プロピレングリコール、液体ポリエチレングリコールなど（及びそれらの適切な混合物）、シクロデキストリン誘導体、及び植物油も使用できる。適切な流動性は、例えば、分散の場合に必要な粒子サイズを維持するためのレシチンなどのコーティングの使用、及び界面活性剤の使用により維持できる。微生物の作用を防止するために、様々な抗菌剤及び抗真菌剤、例えば、パラベン、クロロブタノール、フェノール、ソルビン酸、チメロサールなどを用いることができる。
【０３５６】
滅菌注射溶液は、適切な量の本発明に係るタンパク質性ヘテロ二量体（例えば、ヘテロ二量体タンパク質）又は本発明に係るタンパク質混合物を上述した様々な他の成分と共に適切な溶媒に加え、必要に応じて、濾過と殺菌を行うことにより製造できる。分散液は一般に、必要又は希望に応じて、基本的な分散媒及び上述した他の成分を含む滅菌されたベクターに様々な滅菌された活性成分を加えることにより調製できる。滅菌注射溶液の調製用の滅菌粉末の場合、望ましい製造方法として、予め滅菌・濾過された溶液から活性成分及び任意の他の所望の成分の粉末を生成する真空乾燥及び凍結乾燥技術が挙げられる。
【０３５７】
いくつかの実施形態において、本発明は経口投与用の医薬組成物を提供し、当該医薬組成物は本発明に係るタンパク質性ヘテロ二量体（例えば、ヘテロ二量体タンパク質）又はタンパク質混合物、及び経口投与に好適な医薬品賦形剤を含む。
【０３５８】
いくつかの実施形態において、本発明は経口投与用の固体医薬組成物を提供し、当該医薬組成物は、（ｉ）一定の量の本発明に係るタンパク質性ヘテロ二量体（例えば、ヘテロ二量体タンパク質）又はタンパク質混合物を含む、任意選択的に、（ｉｉ）一定の量の第２の薬剤を含む、（ｉｉｉ）経口投与に好適な医薬品賦形剤を含む。いくつかの実施形態において、当該組成物は、（ｉｖ）一定の量の第３の薬剤をさらに含む。いくつかの実施形態において、タンパク質性ヘテロ二量体又はタンパク質混合物、第２の薬剤及び任意選択的な第３の薬剤の量は単独で又は組み合わせた場合、適用対象の症状を治療するのに有効な量である。
【０３５９】
いくつかの実施形態において、当該医薬組成物は経口投与に好適な液体医薬組成物であってもよい。経口投与に好適な本発明に係る医薬組成物は、粉末、顆粒、溶液、水性もしくは非水性液体中の懸濁液、水中油型エマルジョン又は油中水型液体エマルジョンとしてそれぞれ所定量の活性成分を含むカプセル、カシェ剤、錠剤、液体又はエアロゾルスプレーなど別個の剤形であってもよい。かかる剤形は、任意の薬学的な方法により製造できるが、全ての方法は一般に、活性成分を１つ以上の別の成分を構成するベクターと組み合わせるステップを含む。一般に、組成物は活性成分を液体担体又は微粉化された固体担体又は両方と均一かつ緊密に混合し、次に必要に応じて、製品を所望の形態に形成させることにより製造される。
【０３６０】
水がいくつかのポリペプチドの分解を促進するため、本発明は活性成分（例えば、本発明に係るタンパク質性ヘテロ二量体又はヘテロ二量体タンパク質）を含む無水医薬組成物及び剤形も含む。例えば、製剤の保存寿命又は経時的な安定性などの特性を決定するために長期保存をシミュレートする手段として、製薬業界では水が追加される（例えば、５％）。無水の性質を維持するために、無水の医薬組成物として製造し保存することができる。従って、無水組成物は水への暴露を防ぐ従来の材料を使用して包装して、適切な処方キットに含めることができる。適切な包装の例は、気密箔、プラスチックなど、単位用量容器、ブリスターパック及びストリップパックを含むがこれらに限定されない。
【０３６１】
本発明に係るタンパク質性ヘテロ二量体（例えば、ヘテロ二量体タンパク質又は複合体）、又はタンパク質混合物は従来の医薬品混合技術に従って、医薬用担体と緊密に混合して組み合わせることができる。投与に望ましい製剤の形態に応じて、担体は様々な形態をとることができる。経口剤形用の組成物を製造する際、経口液体製剤（例えば、懸濁液、溶液、エリキシルなど）又はエアロゾルの場合、任意の通常の医薬用媒体、例えば、水、エチレングリコール、油、アルコール、香味剤、防腐剤、着色剤などを担体として使用できる。経口固体製剤の場合、例えば、デンプン、糖、微結晶セルロース、希釈剤、造粒剤、潤滑剤、結合剤、崩壊剤などを担体として使用できるが、いくつかの実施形態において、ラクトースを使用しない。例えば、適切な担体は粉末、カプセル及び錠剤、及び固体経口製剤を含む。必要に応じて、標準的な水性又は非水性技術により錠剤をコーティングしてもよい。
【０３６２】
経口投与用として水性懸濁液及び／又はエリキシルが望ましい場合、前記活性成分は様々な甘味剤又は香味剤、着色物質又は染料、必要に応じて、乳化剤及び／又は懸濁剤と水、エタノール、プロピレングリコール、グリセリン及びそれらの様々な組み合わせなどである希釈剤と組み合わされてもよい。
【０３６３】
錠剤はコーティングされないか、又は胃腸管での崩解及び吸收を遅らせて、より長期間にわたる持続的な効果を提供するために、公知の技術を利用してコーティングされてもよい。
【０３６４】
本発明の医薬組成物及び剤形を形成するために使用可能な界面活性剤は親水性界面活性剤、親油性界面活性剤及びそれらの混合物を含むがこれらに限定されない。親水性界面活性剤の混合物を使用し、親油性界面活性剤の混合物を使用し、又は少なくとも１種の親水性界面活性剤及び少なくとも１種の親油性界面活性剤の混合物を使用してもよい。
【０３６５】
いくつかの実施形態において、当該組成物は、本発明に係るタンパク質性ヘテロ二量体又はタンパク質混合物の良好な可溶化性及び／又は溶解を確保し、本発明に係るタンパク質性ヘテロ二量体又はタンパク質混合物の沈殿を最大限に低減するために、可溶化剤を含んでもよい。非経口投与用の組成物、例えば、注射用組成物の場合、特に重要である。可溶化剤は、親水性医薬品及び／又は他の成分、例えば界面活性剤の溶解性を高めるか、組成物を安定的又は均一な溶液もしくは分散液として維持するために加えることができる。
【０３６６】
当該組成物は１種以上の薬学的に許容される添加剤及び賦形剤をさらに含んでもよい。かかる添加剤及び賦形剤は粘着防止剤、消泡剤、緩衝剤、ポリマー、抗酸化剤、防腐剤、キレート剤、粘度調整剤、等張化剤、香味剤、着色剤、着臭剤、乳白剤、懸濁剤、結合剤、充填剤、可塑剤、潤滑剤及びそれらの混合物を含むが、これらに限定されない。
【０３６７】
また、処理の便宜上、安定性の向上、又は他の理由により当該組成物に酸又は塩基を加えてもよい。
【０３６８】
本発明に係る医薬組成物は治療有効量の活性化薬（例えば、本発明に係るタンパク質性ヘテロ二量体又はタンパク質混合物）を含んでもよい。治療有効量とは、（少なくとも部分的に）ある症状又は障害に罹患する又はそれらが進行するリスクを有する適用対象の症状又は障害（例えば、癌）及び／又はその任意の合併症を予防及び／又治癒できる本発明に係る医薬組成物の量を指す。含有された活性化薬の具体的な量／濃度は、投与方法及び患者のニーズに応じて変更されてもよい、例えば、患者の体積、粘度、及び／又は体重などに基づき決定されてもよい。例えば、適切な用量は約０．１ｍｇ又は１ｍｇ／ｋｇ／日〜約５０ｍｇ／ｋｇ／日としてもよい、場合によっては、用量をさらに高く設定してもよい。いくつかの実施形態において、適用された用量は約３ｍｇ／ｋｇ／日〜約３．５ｍｇ／ｋｇ／日、３．５ｍｇ／ｋｇ／日〜約７．２ｍｇ／ｋｇ／日、約７．２ｍｇ／ｋｇ／日〜約１１．０ｍｇ／ｋｇ／日、約１１．０ｍｇ／ｋｇ／日〜約１５．０ｍｇ／ｋｇ／日としてもよい。いくつかの実施形態において、適用される用量は約１０ｍｇ／ｋｇ／日〜約５０ｍｇ／ｋｇ／日、例えば、１日当たり約２０ｍｇ〜約５０ｍｇとして２回投与される。なお、当業者（例えば、医師又は薬剤師）は特定の患者、製剤及び／又は疾患の状態に基づいてこれらの具体的な用量を適宜調整してもよい。
【０３６９】
本発明に係るタンパク質性ヘテロ二量体又は医薬組成物は１種以上の追加の治療的に活性な成分をさらに含んでもよい。かかる追加の治療的に活性な成分は、組成物に別々に存在するか、又は本発明に係るタンパク質性ヘテロ二量体に付着、結合又は会合されてもよい。
【０３７０】
医療用途及び治療方法
別の態様において、本発明は腫瘍もしくは腫瘍細胞の成長阻害のための医薬品及び／又はキットの製造における、本発明に係るタタンパク質性ヘテロ二量体又はンパク質混合物の用途を提供する。いくつかの実施形態において、医薬品及び／又はキットは標的細胞（例えば、癌細胞）の成長又は分化を特異的且つ／又は優先的に阻害する、又は標的細胞（例えば、癌細胞）を死滅させるために使用される。
【０３７１】
別の態様において、本発明は腫瘍又は腫瘍細胞の成長の阻害方法を提供する。当該方法は、腫瘍又は腫瘍細胞を有効量の本発明に係るタンパク質性ヘテロ二量体又は本発明に係るタンパク質混合物と接触させることを含む。いくつかの実施形態において、前記接触はインビトロで起こる。いくつかの実施形態において、前記接触はインビボで起こる。
【０３７２】
いくつかの実施形態において、前記接触は本発明に係るタンパク質性ヘテロ二量体（例えば、ヘテロ二量体タンパク質）、タンパク質混合物、医薬組成物又は医薬品を適用対象（例えば、哺乳動物）に全身的に又は局所的に投与することを含む。いくつかの実施形態において、前記接触は本発明に係るタンパク質性ヘテロ二量体（例えば、ヘテロ二量体タンパク質）、タンパク質混合物、医薬組成物又は医薬品を腫瘍部位に直接投与することを含む。いくつかの実施形態において、前記投与は経口投与、静脈内投与、筋肉内投与、腫瘍部位でのインサイチュ投与、吸入、直腸投与、膣内投与、経皮投与又は皮下貯蔵所による投与により行われる。
【０３７３】
いくつかの実施形態において、腫瘍（例えば、癌）もしくは腫瘍細胞（例えば、癌細胞）であるか、又は固形腫瘍に由来する。例えば、癌は、Ｂ細胞リンパ腫、肺癌、気管支癌、結腸直腸癌、前立腺癌、乳癌、膵臓癌、胃癌、卵巣癌、膀胱癌、脳又は中枢神経系癌、末梢神経系癌、食道癌、子宮頸癌、黒色腫、子宮癌又は子宮内膜癌、口腔癌又は咽頭癌、肝臓癌、腎臓癌、胆道癌、小腸癌又は虫垂癌、唾液腺癌、甲状腺癌、副腎癌、骨肉腫、軟骨肉腫、脂肪肉腫、精巣癌、及び悪性線維性組織球腫からなる群から選択されてもよい。
【０３７４】
いくつかの実施形態において、癌又は癌細胞は適用対象の体内に位置する、例えば、ヒト又は非ヒト動物（例えば、哺乳動物）における癌又は癌細胞である。
【０３７５】
いくつかの実施形態において、哺乳動物はヒトである。いくつかの実施形態において、哺乳動物はマウス、ラット、ネコ、イヌ、ウサギ、ブタ、ヒツジ、ウマ、ウシ、ヤギ、アレチネズミ、ハムスター、モルモット、サル又は他の哺乳類である。かかる哺乳動物の多くは、固形腫瘍及び／又は他の癌を含む、当該技術分野で既知の特定の疾患又は障害の臨床前モデルなどの適用対象であってもよい（例えば、Ｔａｌｍａｄｇｅら，  ２００７  Ａｍ．  Ｊ．  Ｐａｔｈｏｌ．  １７０：７９３；Ｋｅｒｂｅｌ，Ｃａｎｃ．  Ｂｉｏｌ．  Ｔｈｅｒａｐ．  ２（４  Ｓｕｐｐｌ  １）：Ｓ１３４；Ｍａｎら，  ２００７  Ｃａｎｃ．  Ｍｅｔ．  Ｒｅｖ．  ２６：７３７；Ｃｅｓｐｅｄｅｓら，  ２００６  Ｃｌｉｎ．  ＴｒａｎｓＬ  Ｏｎｃｏｌ．  ８：３１８）。
【０３７６】
タンパク質性ヘテロ二量体又はタンパク質混合物の製造方法
本発明は、別の態様において、タンパク質性ヘテロ二量体、又はタンパク質性ヘテロ二量体を含むタンパク質混合物の製造方法を提供し、当該方法は、（ｉ）タンパク質性ヘテロ二量体の発現に影響を与える条件下で本発明に係る宿主細胞を培養することと、（ｉｉ）発現されたタンパク質性ヘテロ二量体、又は発現されたタンパク質性ヘテロ二量体を含むタンパク質混合物（例えば、本発明に係るタンパク質混合物）を得ることとを含む。
【０３７７】
いくつかの実施形態において、タンパク質性ヘテロ二量体の製造方法は以下のステップを含む。
（１）ヘテロ二量体の第１のメンバーを提供し、ただし、第１のメンバーは軽鎖、及び第１のＦｃ領域を含む重鎖を含み、軽鎖が重鎖と複合されて腫瘍抗原への結合特異性を示す標的部分が形成される。
（２）前記ヘテロ二量体の、第１のメンバーとは異なる第２のメンバーを提供し、ただし、第２のメンバーは第２のＦｃ領域と融合された免疫調節物質を含むポリペプチドを含む、第１のＦｃ領域と第２のＦｃ領域との複合により、第１のメンバーは第２のメンバーと会合してヘテロ二量体を形成する、第１のＦｃ領域は第１の修飾を含む、且つ／又は、第２のＦｃ領域は第２の修飾を含み、ただし、第１の修飾及び／又は第２の修飾はノブ修飾及びホール修飾を含むノブアンドホールよりも第１のメンバーと第２のメンバーとのヘテロ二量体化を効果的に促進できる。
（３）タンパク質性ヘテロ二量体を得る。
【０３７８】
いくつかの実施形態において、当該方法は、タンパク質性ヘテロ二量体又はタンパク質混合物を単離及び／又は精製するステップをさらに含む。
【０３７９】
いくつかの実施形態において、当該方法は、本発明に係るヘテロ二量体、その１つ以上のメンバー又はその断片をコード／発現するポリヌクレオチド／ベクターを用いて宿主細胞をトランスフェクト／形質転換するステップをさらに含む。
【０３８０】
いくつかの実施形態において、本発明に係るタンパク質性ヘテロ二量体又はタンパク質混合物は、タンパク質の発現に好適な条件において細胞でベクターを発現することにより製造される。いくつかの実施形態において、本発明に係るタンパク質性ヘテロ二量体又はタンパク質混合物は単一の細胞クローンにおいて製造される。
【０３８１】
タンパク質の発現に好適な条件における変更可能な要素は、例えば、インキュベーション時間、温度及び媒質などを含み、当業者は細胞のタイプによってこれらを容易に決定できる。
【０３８２】
いくつかの実施形態において、本発明に係るタンパク質性ヘテロ二量体又はタンパク質混合物を製造するプロセスで、宿主細胞は培地において、及び発酵タンクなど、培地の成長のために利用可能な任意の装置において成長する。細胞は単層成長するか、又は表面に付着される。あるいは、宿主細胞は懸濁状態において成長する。細胞は無血清の培地において成長できる。かかる培地は市販されている培地、例えば、８ｍＭＬ−グルタミンが補充されたＯｐｔｉ−ＣＨＯ（インビトロジェン社提供、カタログ番号１２６８１）、１０％ウシ胎仔血清が補充されたＲＰＭＩ  １６４０培地、１０．５ｎｇ／ｍｌのｍＩＬ−３及びＬ−グルタミン、５％ＦＣＳ培地であってもよいが、これらに限定されない。
【０３８３】
本発明は、以下の実施形態を含む。
１．第１のメンバー及び前記第１のメンバーとは異なる第２のメンバーを含み、ただし、前記第１のメンバーは軽鎖、及び第１のＦｃ領域を含む重鎖を含み、前記軽鎖が前記重鎖と複合されて腫瘍抗原への結合特異性を示す標的部分が形成される、前記第２のメンバーは第２のＦｃ領域と融合される免疫調節物質を含むポリペプチドを含む、前記第１のＦｃ領域と前記第２のＦｃ領域との複合により、前記第１のメンバーは前記第２のメンバーと会合して前記ヘテロ二量体を形成する、前記第１のＦｃ領域は第１の修飾を含む、且つ／又は、前記第２のＦｃ領域は第２の修飾を含み、ただし、前記第１の修飾及び／又は前記第２の修飾はノブ修飾及びホール修飾を含むノブアンドホール修飾よりも前記第１のメンバーと前記第２のメンバーとのヘテロ二量体化を効果的に促進できる、タンパク質性ヘテロ二量体。
【０３８４】
２．前記第１の修飾は前記ノブ修飾又は前記ホール修飾とは異なるものである、且つ／又は、前記第２の修飾は前記ノブ修飾又は前記ホール修飾とは異なるものである、実施形態１に記載のタンパク質性ヘテロ二量体。
【０３８５】
３．哺乳動物細胞で発現される場合、当該タンパク質性ヘテロ二量体の収量は参照タンパク質の収量より少なくとも１０％高く、当該参照タンパク質は、ｉ）前記第１のＦｃ領域にノブ修飾を含むこと、ｉｉ）前記第２のＦｃ領域にホール修飾を含むこと、ｉｉｉ）前記第１の修飾及び前記第２の修飾を同時に含まないことにおいて、当該タンパク質性ヘテロ二量体と相違する、上記実施形態のいずれか１項に記載のタンパク質性ヘテロ二量体。
【０３８６】
４．前記哺乳動物細胞はＨＥＫ２９３細胞、ＣＨＯ細胞、ＣＯＳ−１細胞及びＮＳ０細胞からなる群から選択される、実施形態３に記載のタンパク質性ヘテロ二量体。
【０３８７】
５．前記第１のＦｃ領域は第１の修飾を含み、前記第２のＦｃ領域は第２の修飾を含み、第１の修飾及び第２の修飾はいずれもノブ修飾又はホール修飾とは異なるものである、上記実施形態のいずれか１項に記載のタンパク質性ヘテロ二量体。
【０３８８】
６．第２のメンバーに含まれたポリペプチドは融合タンパク質であり、免疫調節物質のＣ末端が第２のＦｃ領域のＮ末端と直接的又は間接的に融合されて融合タンパク質が形成される、上記実施形態のいずれか１項に記載のタンパク質性ヘテロ二量体。
【０３８９】
７．腫瘍抗原はＥＧＦＲ、ＥＧＦＲ変異体、ＨＥＲ２／ｎｅｕ、ＧＰＣ３、ＦＡＰ、Ｍｕｃ１、ＭＵＣ５ＡＣ及びメソセリンからなる群から選択される、上記実施形態のいずれか１項に記載のタンパク質性ヘテロ二量体。
【０３９０】
８．標的部分の軽鎖は、腫瘍抗原に特異的に指向された抗体の軽鎖の対応するＣＤＲｓに含まれたアミノ酸配列と少なくとも６０％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％同一のアミノ酸配列を含むＣＤＲｓを含む、上記実施形態のいずれか１項に記載のタンパク質性ヘテロ二量体。
【０３９１】
９．標的部分の軽鎖は、腫瘍抗原に特異的に指向された抗体の軽鎖の対応する可変領域に含まれたアミノ酸配列と少なくとも６０％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％同一のアミノ酸配列を含む可変領域を含む、上記実施形態のいずれか１項に記載のタンパク質性ヘテロ二量体。
【０３９２】
１０．標的部分の軽鎖は、腫瘍抗原に特異的に指向された抗体の軽鎖の対応するアミノ酸配列に含まれたアミノ酸配列と少なくとも６０％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％同一のアミノ酸配列を含む、上記実施形態のいずれか１項に記載のタンパク質性ヘテロ二量体。
【０３９３】
１１．標的部分の重鎖は、腫瘍抗原に特異的に指向された抗体の重鎖の対応するＣＤＲｓに含まれたアミノ酸配列と少なくとも６０％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％と同一のアミノ酸配列を含むＣＤＲｓを含む、上記実施形態のいずれか１項に記載のタンパク質性ヘテロ二量体。
【０３９４】
１２．標的部分の重鎖は、腫瘍抗原に特異的に指向された抗体の重鎖の対応する可変領域に含まれたアミノ酸配列と少なくとも６０％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％と同一のアミノ酸配列を含む可変領域を含む、上記実施形態のいずれか１項に記載のタンパク質性ヘテロ二量体。
【０３９５】
１３．標的部分の重鎖は、腫瘍抗原に特異的に指向された抗体の重鎖の対応するアミノ酸配列に含まれたアミノ酸配列と少なくとも６０％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％同一のアミノ酸配列を含む、上記実施形態のいずれか１項に記載のタンパク質性ヘテロ二量体。
【０３９６】
１４．標的部分の軽鎖は、腫瘍抗原に特異的に指向された抗体の軽鎖の対応するＣＤＲｓに含まれたアミノ酸少なくとも６０％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％同一のアミノ酸配列を含むＣＤＲｓを含み、標的部分の重鎖は、腫瘍抗原に特異的に指向された抗体の重鎖の対応するＣＤＲｓに含まれたアミノ酸配列と少なくとも６０％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％と同一のアミノ酸配列を含むＣＤＲｓを含む、上記実施形態のいずれか１項に記載のタンパク質性ヘテロ二量体。
【０３９７】
１５．標的部分の軽鎖は、腫瘍抗原に特異的に指向された抗体の軽鎖の対応する可変領域に含まれたアミノ酸配列と少なくとも６０％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％同一のアミノ酸配列を含む可変領域を含む、標的部分の重鎖は、腫瘍抗原に特異的に指向された抗体の重鎖の対応する可変領域に含まれたアミノ酸配列と少なくとも６０％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％と同一のアミノ酸配列を含む可変領域を含む、上記実施形態のいずれか１項に記載のタンパク質性ヘテロ二量体。
【０３９８】
１６．標的部分の軽鎖は、腫瘍抗原に特異的に指向された抗体の軽鎖の対応するアミノ酸配列に含まれたアミノ酸配列少なくとも６０％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％同一のアミノ酸配列を含む、標的部分の重鎖は、腫瘍抗原に特異的に指向された抗体の重鎖の対応するアミノ酸配列に含まれたアミノ酸配列と少なくとも６０％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％同一のアミノ酸配列を含む、上記実施形態のいずれか１項に記載のタンパク質性ヘテロ二量体。
【０３９９】
１７．腫瘍抗原に特異的に指向された抗体は、抗ＥＧＦＲ、抗ＥＧＦＲ変異体、抗ＨＥＲ２／ｎｅｕ、抗ＧＰＣ３、抗ＦＡＰ、抗Ｍｕｃ１、抗ＭＵＣ５ＡＣ及び抗メソセリンからなる群から選択される、実施形態８〜１６のいずれか１項に記載のタンパク質性ヘテロ二量体。
【０４００】
１８．免疫調節物質は免疫応答を増強させる、上記実施形態のいずれか１項に記載のタンパク質性ヘテロ二量体。
【０４０１】
１９．免疫調節物質は免疫応答を低下させる、実施形態１〜１７のいずれか１項に記載のタンパク質性ヘテロ二量体。
【０４０２】
２０．免疫調節物質はサイトカインである、上記実施形態のいずれか１項に記載のタンパク質性ヘテロ二量体。
【０４０３】
２１．免疫調節物質は、インターフェロン、インターロイキン、ケモカイン、リンホカイン及び腫瘍壊死因子からなる群から選択されたサイトカインである、実施形態２０に記載のタンパク質性ヘテロ二量体。
【０４０４】
２２．免疫調節物質は、インターフェロンα、インターフェロンλ及びインターフェロンβからなる群から選択されたインターフェロンである、実施形態２１に記載のタンパク質性ヘテロ二量体。
【０４０５】
２３．免疫調節物質はインターロイキンであり、当該インターロイキンはインターロイキン１０、インターロイキン２及び／又はスーパーインターロイキン２を含む、実施形態２１に記載のタンパク質性ヘテロ二量体。
【０４０６】
２４．第１のＦｃ領域及び第２のＦｃ領域は免疫グロブリンのＦｃ領域に由来し、前記免疫グロブリンはＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３及びＩｇＧ４からなる群から選択される、上記実施形態のいずれか１項に記載のタンパク質性ヘテロ二量体。
【０４０７】
２５．第１のＦｃ領域及び第２のＦｃ領域は免疫グロブリンのＦｃ領域に由来し、免疫グロブリンはヒトＩｇＧ１である、実施形態２４に記載のタンパク質性ヘテロ二量体。
【０４０８】
２６．第２のＦｃ領域は免疫調節物質とインフレームで融合される、上記実施形態のいずれか１項に記載のタンパク質性ヘテロ二量体。
【０４０９】
２７．第２のＦｃ領域はリンカーを介して免疫調節物質とインフレームで融合される、上記実施形態のいずれか１項に記載のタンパク質性ヘテロ二量体。
【０４１０】
２８．第２のメンバーに含まれたポリペプチドは２種以上の免疫調節物質を含み、前記２種以上の免疫調節物質はインフレームで互いに融合され且つ第２のＦｃ領域と融合され、ただし前記２種以上の免疫調節物質は第２のＦｃ領域のＮ末端に配置される、上記実施形態のいずれか１項に記載のタンパク質性ヘテロ二量体。
【０４１１】
２９．前記２種以上の免疫調節物質は同一のものである、実施形態２８に記載のタンパク質性ヘテロ二量体。
【０４１２】
３０．第１の修飾は位置Ｔ３６６におけるアミノ酸置換、並びにＹ３４９、Ｆ４０５、Ｋ４０９、Ｄ３９９、Ｋ３６０、Ｑ３４７、Ｋ３９２及びＳ３５４からなる群から選択された１つ以上の位置におけるアミノ酸置換を含み、ただしアミノ酸の位置は、ＫＡＢＡＴ番号のＥＵインデックスに基づいて決定される、上記実施形態のいずれか１項に記載のタンパク質性ヘテロ二量体。
【０４１３】
３１．第１の修飾は、Ｙ３４９Ｃ、Ｙ３４９Ｄ、Ｄ３９９Ｓ、Ｆ４０５Ｋ、Ｋ３６０Ｅ、Ｋ４０９Ａ、Ｋ４０９Ｅ、Ｑ３４７Ｅ、Ｑ３４７Ｒ、Ｓ３５４Ｄ、Ｋ３９２Ｄ及びＴ３６６Ｗからなる群から選択されたアミノ酸置換を含む、実施形態３０に記載のタンパク質性ヘテロ二量体。
【０４１４】
３２．第１の修飾は２〜５個のアミノ酸置換を含む、実施形態３０又は３１に記載のタンパク質性ヘテロ二量体。
【０４１５】
３３．第１の修飾は、１）Ｙ３４９及びＴ３６６；２）Ｙ３４９、Ｔ３６６及びＦ４０５；３）Ｙ３４９、Ｔ３６６及びＫ４０９；４）Ｙ３４９、Ｔ３６６、Ｆ４０５、Ｋ３６０及びＱ３４７；５）Ｙ３４９、Ｔ３６６、Ｆ４０５及びＱ３４７；６）Ｙ３４９、Ｔ３６６、Ｋ４０９、Ｋ３６０及びＱ３４７；７）Ｙ３４９、Ｔ３６６、Ｋ４０９及びＱ３４７；８）Ｔ３６６、Ｋ４０９及びＫ３９２；９）Ｔ３６６及びＫ４０９；１０）Ｔ３６６、Ｋ４０９、Ｙ３４９及びＳ３５４；１１）Ｔ３６６及びＦ４０５；１２）Ｔ３６６、Ｆ４０５及びＤ３９９；１３）Ｔ３６６、Ｆ４０５、Ｙ３４９及びＳ３５４から選択されたいずれかの群に示す位置におけるアミノ酸置換を含む、実施形態３０〜３２のいずれか１項に記載のタンパク質性ヘテロ二量体。
【０４１６】
３４．第１の修飾は、１）Ｙ３４９Ｃ及びＴ３６６Ｗ；２）Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｗ及びＦ４０５Ｋ；３）Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｗ及びＫ４０９Ｅ；４）Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｗ及びＫ４０９Ａ；５）Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、Ｆ４０５Ｋ、Ｋ３６０Ｅ及びＱ３４７Ｅ；６）Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、Ｆ４０５Ｋ及びＱ３４７Ｒ；７）Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、Ｋ４０９Ａ、Ｋ３６０Ｅ及びＱ３４７Ｅ；８）Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、Ｋ４０９Ａ及びＱ３４７Ｒ；９）Ｔ３６６Ｗ、Ｋ４０９Ａ及びＫ３９２Ｄ；１０）Ｔ３６６Ｗ及びＫ４０９Ａ；１１）Ｔ３６６Ｗ、Ｋ４０９Ａ及びＹ３４９Ｄ；１２）Ｔ３６６Ｗ、Ｋ４０９Ａ、Ｙ３４９Ｄ及びＳ３５４Ｄ；１３）Ｔ３６６Ｗ及びＦ４０５Ｋ；１４）Ｔ３６６Ｗ、Ｆ４０５Ｋ及びＤ３９９Ｓ；１５）Ｔ３６６Ｗ、Ｆ４０５Ｋ及びＹ３４９Ｄ；及び１６）Ｔ３６６Ｗ、Ｆ４０５Ｋ、Ｙ３４９Ｄ及びＳ３５４Ｄから選択されたいずれかの群に示すアミノ酸置換を含む、実施形態３０〜３３のいずれか１項に記載のタンパク質性ヘテロ二量体。
【０４１７】
３５．第２の修飾は、位置Ｔ３６６、Ｌ３６８及びＹ４０７におけるアミノ酸置換、並びにＤ３５６、Ｄ３９９、Ｅ３５７、Ｆ４０５、Ｋ３６０、Ｋ３９２、Ｋ４０９及びＱ３４７からなる群から選択された１つ以上の位置におけるアミノ酸置換を含み、ただしアミノ酸の位置は、ＫＡＢＡＴ番号のＥＵインデックスに基づいて決定される、実施形態３０〜３４のいずれか１項に記載のタンパク質性ヘテロ二量体。
【０４１８】
３６．第２の修飾に含まれたアミノ酸置換は、Ｄ３５６Ｃ、Ｄ３９９Ｓ、Ｅ３５７Ａ、Ｆ４０５Ｋ、Ｋ３６０Ｅ、Ｋ３９２Ｄ、Ｋ４０９Ａ、Ｌ３６８Ａ、Ｌ３６８Ｇ、Ｑ３４７Ｅ、Ｑ３４７Ｒ、Ｔ３６６Ｓ、Ｙ４０７Ａ及びＹ４０７Ｖからなる群から選択される、実施形態３５に記載のタンパク質性ヘテロ二量体。
【０４１９】
３７．第２の修飾は４〜６個のアミノ酸置換を含む、実施形態３５又は３６に記載のタンパク質性ヘテロ二量体。
【０４２０】
３８．第２の修飾は、１）Ｄ３５６、Ｔ３６６、Ｌ３６８、Ｙ４０７及びＦ４０５；２）Ｄ３５６、Ｔ３６６、Ｌ３６８及びＹ４０７；３）Ｄ３５６、Ｔ３６６、Ｌ３６８、Ｙ４０７及びＱ３４７；４）Ｄ３５６、Ｔ３６６、Ｌ３６８、Ｙ４０７、Ｋ３６０及びＱ３４７；５）Ｄ３５６、Ｔ３６６、Ｌ３６８、Ｙ４０７、Ｆ４０５及びＱ３４７；６）Ｄ３５６、Ｔ３６６、Ｌ３６８、Ｙ４０７、Ｆ４０５、Ｋ３６０及びＱ３４７；７）Ｔ３６６、Ｌ３６８、Ｙ４０７、Ｄ３９９及びＦ４０５；８）Ｔ３６６、Ｌ３６８、Ｙ４０７及びＦ４０５；９）Ｔ３６６、Ｌ３６８、Ｙ４０７、Ｆ４０５及びＥ３５７；１０）Ｔ３６６、Ｌ３６８、Ｙ４０７及びＫ４０９；１１）Ｔ３６６、Ｌ３６８、Ｙ４０７、Ｋ４０９及びＫ３９２；１２）Ｔ３６６、Ｌ３６８、Ｙ４０７、Ｋ４０９及びＥ３５７から選択されたいずれかの群に示す位置におけるアミノ酸置換を含む、実施形態３５〜３７のいずれか１項に記載のタンパク質性ヘテロ二量体。
【０４２１】
３９．第２の修飾は、１）Ｄ３５６Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、Ｙ４０７Ｖ及びＦ４０５Ｋ；２）Ｄ３５６Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ及びＹ４０７Ｖ；３）Ｄ３５６Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、Ｙ４０７Ｖ及びＱ３４７Ｒ；４）Ｄ３５６Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、３６０Ｅ及びＱ３４７Ｅ；５）Ｄ３５６Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、Ｆ４０５Ｋ及びＱ３４７Ｒ；６）Ｄ３５６Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、Ｆ４０５Ｋ、Ｋ３６０Ｅ及びＱ３４７Ｅ；７）Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、Ｄ３９９Ｓ及びＦ４０５Ｋ；８）Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ｇ、Ｙ４０７Ａ及びＦ４０５Ｋ；９）Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、Ｆ４０５Ｋ及びＥ３５７Ａ；１０）Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、Ｙ４０７Ｖ及びＫ４０９Ａ；１１）Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、Ｋ４０９Ａ及びＫ３９２Ｄ；１２）Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ｇ、Ｙ４０７Ａ及びＫ４０９Ａ；１３）Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、Ｋ４０９Ａ及びＥ３５７Ａから選択されたいずれかの群に示すアミノ酸置換を含む、実施形態３５〜３８のいずれか１項に記載のタンパク質性ヘテロ二量体。
【０４２２】
４０．第１のＦｃ領域は第１の修飾を含み、第２のＦｃ領域は第２の修飾を含み、第１の修飾及び第２の修飾は、１）第１の修飾：Ｙ３４９及びＴ３６６；第２の修飾：Ｄ３５６、Ｔ３６６、Ｌ３６８、Ｙ４０７及びＦ４０５；２）第１の修飾：Ｙ３４９、Ｔ３６６及びＦ４０５；第２の修飾：Ｄ３５６、Ｔ３６６、Ｌ３６８及びＹ４０７；３）第１の修飾：Ｙ３４９、Ｔ３６６及びＫ４０９；第２の修飾：Ｄ３５６、Ｔ３６６、Ｌ３６８、Ｙ４０７及びＦ４０５；４）第１の修飾：Ｙ３４９、Ｔ３６６、Ｆ４０５、Ｋ３６０及びＱ３４７；第２の修飾：Ｄ３５６、Ｔ３６６、Ｌ３６８、Ｙ４０７及びＱ３４７；５）第１の修飾：Ｙ３４９、Ｔ３６６、Ｆ４０５及びＱ３４７；第２の修飾：Ｄ３５６、Ｔ３６６、Ｌ３６８、Ｙ４０７、Ｋ３６０及びＱ３４７；６）第１の修飾：Ｙ３４９、Ｔ３６６、Ｋ４０９、Ｋ３６０及びＱ３４７；第２の修飾：Ｄ３５６、Ｔ３６６、Ｌ３６８、Ｙ４０７、Ｆ４０５及びＱ３４７；７）第１の修飾：Ｙ３４９、Ｔ３６６、Ｋ４０９及びＱ３４７；第２の修飾：Ｄ３５６、Ｔ３６６、Ｌ３６８、Ｙ４０７、Ｆ４０５、Ｋ３６０及びＱ３４７；８）第１の修飾：Ｔ３６６、Ｋ４０９及びＫ３９２；第２の修飾：Ｔ３６６、Ｌ３６８、Ｙ４０７、Ｄ３９９及びＦ４０５；９）第１の修飾：Ｔ３６６及びＫ４０９；第２の修飾：Ｔ３６６、Ｌ３６８、Ｙ４０７及びＦ４０５；１０）第１の修飾：Ｔ３６６、Ｋ４０９及びＹ３４９；第２の修飾：Ｔ３６６、Ｌ３６８、Ｙ４０７、Ｆ４０５及びＥ３５７；１１）第１の修飾：Ｔ３６６、Ｋ４０９、Ｙ３４９及びＳ３５４；第２の修飾：Ｔ３６６、Ｌ３６８、Ｙ４０７、Ｆ４０５及びＥ３５７；１２）第１の修飾：Ｔ３６６及びＦ４０５；第２の修飾：Ｔ３６６、Ｌ３６８、Ｙ４０７及びＫ４０９；１３）第１の修飾：Ｔ３６６、Ｆ４０５及びＤ３９９；第２の修飾：Ｔ３６６、Ｌ３６８、Ｙ４０７、Ｋ４０９及びＫ３９２；１４）第１の修飾：Ｔ３６６、Ｆ４０５及びＹ３４９；第２の修飾：Ｔ３６６、Ｌ３６８、Ｙ４０７、Ｋ４０９及びＥ３５７；１５）第１の修飾：Ｔ３６６、Ｆ４０５、Ｙ３４９及びＳ３５４；第２の修飾：Ｔ３６６、Ｌ３６８、Ｙ４０７、Ｋ４０９及びＥ３５７から選択されたいずれかの群に示す位置におけるアミノ酸置換を含み、ただしアミノ酸の位置は、ＫＡＢＡＴ番号のＥＵインデックスに基づいて決定される、上記実施形態のいずれか１項に記載のタンパク質性ヘテロ二量体。
【０４２３】
４１．第１のＦｃ領域は第１の修飾を含み、第２のＦｃ領域は第２の修飾を含み、第１の修飾及び第２の修飾は、１）第１の修飾：Ｙ３４９Ｃ及びＴ３６６Ｗ；第２の修飾：Ｄ３５６Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、Ｙ４０７Ｖ及びＦ４０５Ｋ；２）第１の修飾：Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｗ及びＦ４０５Ｋ；第２の修飾：Ｄ３５６Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ及びＹ４０７Ｖ；３）第１の修飾：Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｗ及びＫ４０９Ｅ；第２の修飾：Ｄ３５６Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、Ｙ４０７Ｖ及びＦ４０５Ｋ；４）第１の修飾：Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｗ及びＫ４０９Ａ；第２の修飾：Ｄ３５６Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、Ｙ４０７Ｖ及びＦ４０５Ｋ；５）第１の修飾：Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、Ｆ４０５Ｋ、Ｋ３６０Ｅ及びＱ３４７Ｅ；第２の修飾：Ｄ３５６Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、Ｙ４０７Ｖ及びＱ３４７Ｒ；６）第１の修飾：Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、Ｆ４０５Ｋ及びＱ３４７Ｒ；第２の修飾：Ｄ３５６Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、Ｋ３６０Ｅ及びＱ３４７Ｅ；７）第１の修飾：Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、Ｋ４０９Ａ、Ｋ３６０Ｅ及びＱ３４７Ｅ；第２の修飾：Ｄ３５６Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、Ｆ４０５Ｋ及びＱ３４７Ｒ；８）第１の修飾：Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、Ｋ４０９Ａ及びＱ３４７Ｒ；第２の修飾：Ｄ３５６Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、Ｆ４０５Ｋ、Ｋ３６０Ｅ及びＱ３４７Ｅ；９）第１の修飾：Ｔ３６６Ｗ、Ｋ４０９Ａ及びＫ３９２Ｄ；第２の修飾：Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、Ｄ３９９Ｓ及びＦ４０５Ｋ；１０）第１の修飾：Ｔ３６６Ｗ及びＫ４０９Ａ；第２の修飾：Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ｇ、Ｙ４０７Ａ及びＦ４０５Ｋ；１１）第１の修飾：Ｔ３６６Ｗ、Ｋ４０９Ａ及びＹ３４９Ｄ；第２の修飾：Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、Ｆ４０５Ｋ及びＥ３５７Ａ；１２）第１の修飾：Ｔ３６６Ｗ、Ｋ４０９Ａ、Ｙ３４９Ｄ及びＳ３５４Ｄ；第２の修飾：Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、Ｆ４０５Ｋ及びＥ３５７Ａ；１３）第１の修飾：Ｔ３６６Ｗ及びＦ４０５Ｋ；第２の修飾：Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、Ｙ４０７Ｖ及びＫ４０９Ａ；１４）第１の修飾：Ｔ３６６Ｗ、Ｆ４０５Ｋ及びＤ３９９Ｓ；第２の修飾：Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、Ｋ４０９Ａ及びＫ３９２Ｄ；１５）第１の修飾：Ｔ３６６Ｗ及びＦ４０５Ｋ；第２の修飾：Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ｇ、Ｙ４０７Ａ及びＫ４０９Ａ；１６）第１の修飾：Ｔ３６６Ｗ、Ｆ４０５Ｋ及びＹ３４９Ｄ；第２の修飾：Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、Ｋ４０９Ａ及びＥ３５７Ａ；１７）第１の修飾：Ｔ３６６Ｗ、Ｆ４０５Ｋ、Ｙ３４９Ｄ及びＳ３５４Ｄ；第２の修飾：Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、Ｋ４０９Ａ及びＥ３５７Ａから選択されたいずれかの群に示すアミノ酸置換を含み、ただしアミノ酸の位置は、ＫＡＢＡＴ番号のＥＵインデックスに基づいて決定される、上記実施形態のいずれか１項に記載のタンパク質性ヘテロ二量体。
【０４２４】
４２．第１のＦｃ領域は第１の修飾を含み、第２のＦｃ領域は第２の修飾を含み、第１の修飾はアミノ酸置換Ｔ３６６Ｗ及びＫ４０９Ａを含み、第２の修飾はアミノ酸置換Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ｇ、Ｙ４０７Ａ及びＦ４０５Ｋを含み、ただしアミノ酸の位置は、ＫＡＢＡＴ番号のＥＵインデックスに基づいて決定される、実施形態４１に記載のタンパク質性ヘテロ二量体。
【０４２５】
４３．標的部分はＥＧＦＲと特異的に結合し、第１のメンバーの軽鎖はＣＤＲ１〜３を含み、ＣＤＲ１のアミノ酸配列は配列番号１０１から選択され、ＣＤＲ２のアミノ酸配列は配列番号１０２から選択され、ＣＤＲ３のアミノ酸配列は配列番号１０３から選択される、上記実施形態のいずれか１項に記載のタンパク質性ヘテロ二量体。
【０４２６】
４４．標的部分はＥＧＦＲと特異的に結合し、第１のメンバーの軽鎖は軽鎖可変領域を含み、軽鎖可変領域のアミノ酸配列は配列番号１０４から選択される、上記実施形態のいずれか１項に記載のタンパク質性ヘテロ二量体。
【０４２７】
４５．標的部分はＥＧＦＲと特異的に結合し、第１のメンバーの軽鎖のアミノ酸配列は配列番号３７から選択される、上記実施形態のいずれか１項に記載のタンパク質性ヘテロ二量体。
【０４２８】
４６．標的部分はＥＧＦＲと特異的に結合し、第１のメンバーの重鎖はＣＤＲ１〜３を含み、ＣＤＲ１のアミノ酸配列は配列番号１０５から選択され、ＣＤＲ２のアミノ酸配列は配列番号１０６から選択され、ＣＤＲ３のアミノ酸配列は配列番号１０７から選択される、実施形態４３〜４５のいずれか１項に記載のタンパク質性ヘテロ二量体。
【０４２９】
４７．標的部分はＥＧＦＲと特異的に結合し、第１のメンバーの重鎖は重鎖可変領域を含み、重鎖可変領域のアミノ酸配列は配列番号１０８から選択される、実施形態４３〜４５のいずれか１項に記載のタンパク質性ヘテロ二量体。
【０４３０】
４８．標的部分はＥＧＦＲと特異的に結合し、第１のメンバーの重鎖のアミノ酸配列は配列番号３９から選択される、実施形態４３〜４５のいずれか１項に記載のタンパク質性ヘテロ二量体。
【０４３１】
４９．標的部分はＥＧＦＲ変異体と特異的に結合し、第１のメンバーの軽鎖はＣＤＲ１〜３を含み、ＣＤＲ１のアミノ酸配列は配列番号１０９から選択され、ＣＤＲ２のアミノ酸配列は配列番号１１０から選択され、ＣＤＲ３のアミノ酸配列は配列番号１１１から選択される、実施形態１〜４２のいずれか１項に記載のタンパク質性ヘテロ二量体。
【０４３２】
５０．標的部分はＥＧＦＲ変異体と特異的に結合し、第１のメンバーの軽鎖は軽鎖可変領域を含み、軽鎖可変領域のアミノ酸配列は配列番号１１２から選択される、実施形態１〜４２のいずれか１項に記載のタンパク質性ヘテロ二量体。
【０４３３】
５１．標的部分はＥＧＦＲ変異体と特異的に結合し、第１のメンバーの軽鎖のアミノ酸配列は配列番号５３から選択される、実施形態１〜４２のいずれか１項に記載のタンパク質性ヘテロ二量体。
【０４３４】
５２．標的部分はＥＧＦＲ変異体と特異的に結合し、第１のメンバーの重鎖はＣＤＲ１〜３を含み、ＣＤＲ１のアミノ酸配列は配列番号１１３から選択され、ＣＤＲ２のアミノ酸配列は配列番号１１４から選択され、ＣＤＲ３のアミノ酸配列は配列番号１１５から選択される、実施形態４９〜５１のいずれか１項に記載のタンパク質性ヘテロ二量体。
【０４３５】
５３．標的部分はＥＧＦＲ変異体と特異的に結合し、第１のメンバーの重鎖は重鎖可変領域を含み、重鎖可変領域のアミノ酸配列は配列番号１１６から選択される、実施形態４９〜５１のいずれか１項に記載のタンパク質性ヘテロ二量体。
【０４３６】
５４．標的部分はＥＧＦＲ変異体と特異的に結合し、第１のメンバーの重鎖のアミノ酸配列は配列番号５５から選択される、実施形態４９〜５１のいずれか１項に記載のタンパク質性ヘテロ二量体。
【０４３７】
５５．標的部分はＨＥＲ２／ｎｅｕと特異的に結合し、第１のメンバーの軽鎖はＣＤＲ１〜３を含み、ＣＤＲ１のアミノ酸配列は配列番号１１７及び１２５から選択され、ＣＤＲ２のアミノ酸配列は配列番号１１８及び１２６から選択され、ＣＤＲ３のアミノ酸配列は配列番号１１９及び１２７から選択される、実施形態１〜４２のいずれか１項に記載のタンパク質性ヘテロ二量体。
【０４３８】
５６．標的部分はＨＥＲ２／ｎｅｕと特異的に結合し、第１のメンバーの軽鎖は軽鎖可変領域を含み、軽鎖可変領域のアミノ酸配列は配列番号１２０及び１２８から選択される、実施形態１〜４２のいずれか１項に記載のタンパク質性ヘテロ二量体。
【０４３９】
５７．標的部分はＨＥＲ２／ｎｅｕと特異的に結合し、第１のメンバーの軽鎖のアミノ酸配列は配列番号４５及び４９から選択される、実施形態１〜４２のいずれか１項に記載のタンパク質性ヘテロ二量体。
【０４４０】
５８．標的部分はＨＥＲ２／ｎｅｕと特異的に結合し、第１のメンバーの重鎖はＣＤＲ１〜３を含み、ＣＤＲ１のアミノ酸配列は配列番号１２１及び１２９から選択され、ＣＤＲ２のアミノ酸配列は配列番号１２２及び１３０から選択され、ＣＤＲ３のアミノ酸配列は配列番号１２３及び１３１から選択される、実施形態５５〜５７のいずれか１項に記載のタンパク質性ヘテロ二量体。
【０４４１】
５９．標的部分はＨＥＲ２／ｎｅｕと特異的に結合し、第１のメンバーの抗体重鎖は重鎖可変領域を含み、重鎖可変領域のアミノ酸配列は配列番号１２４及び１３２から選択される、実施形態５５〜５７のいずれか１項に記載のタンパク質性ヘテロ二量体。
【０４４２】
６０．標的部分はＨＥＲ２／ｎｅｕと特異的に結合し、第１のメンバーの重鎖のアミノ酸配列は配列番号４７及び５１から選択される、実施形態５５〜５７のいずれか１項に記載のタンパク質性ヘテロ二量体。
【０４４３】
６１．標的部分はＧＰＣ３と特異的に結合し、第１のメンバーの抗体軽鎖はＣＤＲ１〜３を含み、ＣＤＲ１のアミノ酸配列は配列番号１３３から選択され、ＣＤＲ２のアミノ酸配列は配列番号１３４から選択され、ＣＤＲ３のアミノ酸配列は配列番号１３５から選択される、実施形態１〜４２のいずれか１項に記載のタンパク質性ヘテロ二量体。
【０４４４】
６２．標的部分はＧＰＣ３と特異的に結合し、第１のメンバーの抗体軽鎖は軽鎖可変領域を含み、軽鎖可変領域のアミノ酸配列は配列番号１３６から選択される、実施形態１〜４２のいずれか１項に記載のタンパク質性ヘテロ二量体。
【０４４５】
６３．標的部分はＧＰＣ３と特異的に結合し、第１のメンバーの軽鎖のアミノ酸配列は配列番号５７から選択される、実施形態１〜４２のいずれか１項に記載のタンパク質性ヘテロ二量体。
【０４４６】
６４．標的部分はＧＰＣ３と特異的に結合し、第１のメンバーの抗体重鎖はＣＤＲ１〜３を含み、ＣＤＲ１のアミノ酸配列は配列番号１３７から選択され、ＣＤＲ２のアミノ酸配列は配列番号１３８から選択され、ＣＤＲ３のアミノ酸配列は配列番号１３９から選択される、実施形態６１〜６３のいずれか１項に記載のタンパク質性ヘテロ二量体。
【０４４７】
６５．標的部分はＧＰＣ３と特異的に結合し、第１のメンバーの抗体重鎖は重鎖可変領域を含み、重鎖可変領域のアミノ酸配列は配列番号１４０から選択される、実施形態６１〜６３のいずれか１項に記載のタンパク質性ヘテロ二量体。
【０４４８】
６６．標的部分はＧＰＣ３と特異的に結合し、第１のメンバーの重鎖のアミノ酸配列は配列番号５９から選択される、実施形態６１〜６３のいずれか１項に記載のタンパク質性ヘテロ二量体。
【０４４９】
６７．標的部分はＦＡＰと特異的に結合し、第１のメンバーの抗体軽鎖はＣＤＲ１〜３を含み、ＣＤＲ１のアミノ酸配列は配列番号１４１から選択され、ＣＤＲ２のアミノ酸配列は配列番号１４２から選択され、ＣＤＲ３のアミノ酸配列は配列番号１４３から選択される、実施形態１〜４２のいずれか１項に記載のタンパク質性ヘテロ二量体。
【０４５０】
６８．標的部分はＦＡＰと特異的に結合し、第１のメンバーの抗体軽鎖は軽鎖可変領域を含み、軽鎖可変領域のアミノ酸配列は配列番号１４４から選択される、実施形態１〜４２のいずれか１項に記載のタンパク質性ヘテロ二量体。
【０４５１】
６９．標的部分はＦＡＰと特異的に結合し、第１のメンバーの軽鎖のアミノ酸配列は配列番号６１から選択される、実施形態１〜４２のいずれか１項に記載のタンパク質性ヘテロ二量体。
【０４５２】
７０．標的部分はＦＡＰと特異的に結合し、第１のメンバーの抗体重鎖はＣＤＲ１〜３を含み、ＣＤＲ１のアミノ酸配列は配列番号１４５から選択され、ＣＤＲ２のアミノ酸配列は配列番号１４６から選択され、ＣＤＲ３のアミノ酸配列は配列番号１４７から選択される、実施形態６７〜６９のいずれか１項に記載のタンパク質性ヘテロ二量体。
【０４５３】
７１．標的部分はＦＡＰと特異的に結合し、第１のメンバーの抗体重鎖は重鎖可変領域を含み、重鎖可変領域のアミノ酸配列は配列番号１４８から選択される、実施形態６７〜６９のいずれか１項に記載のタンパク質性ヘテロ二量体。
【０４５４】
７２．標的部分はＦＡＰと特異的に結合し、第１のメンバーの重鎖のアミノ酸配列は配列番号６３から選択される、実施形態６７〜６９のいずれか１項に記載のタンパク質性ヘテロ二量体。
【０４５５】
７３．標的部分はＭｕｃ１と特異的に結合し、第１のメンバーの抗体軽鎖はＣＤＲ１〜３を含み、ＣＤＲ１のアミノ酸配列は配列番号１４９から選択され、ＣＤＲ２のアミノ酸配列は配列番号１５０から選択され、ＣＤＲ３のアミノ酸配列は配列番号１５１から選択される、実施形態１〜４２のいずれか１項に記載のタンパク質性ヘテロ二量体。
【０４５６】
７４．標的部分はＭｕｃｌと特異的に結合し、第１のメンバーの抗体軽鎖は軽鎖可変領域を含み、軽鎖可変領域のアミノ酸配列は配列番号１５２から選択される、実施形態１〜４２のいずれか１項に記載のタンパク質性ヘテロ二量体。
【０４５７】
７５．標的部分はＭｕｃｌと特異的に結合し、第１のメンバーの軽鎖のアミノ酸配列は配列番号６５から選択される、実施形態１〜４２のいずれか１項に記載のタンパク質性ヘテロ二量体。
【０４５８】
７６．標的部分はＭｕｃ１と特異的に結合し、第１のメンバーの抗体重鎖はＣＤＲ１〜３を含み、ＣＤＲ１のアミノ酸配列は配列番号１５３から選択され、ＣＤＲ２のアミノ酸配列は配列番号１５４から選択され、ＣＤＲ３のアミノ酸配列は配列番号１５５から選択される、実施形態７３〜７５のいずれか１項に記載のタンパク質性ヘテロ二量体。
【０４５９】
７７．標的部分はＭｕｃ１と特異的に結合し、第１のメンバーの抗体重鎖は重鎖可変領域を含み、重鎖可変領域のアミノ酸配列は配列番号１５６から選択される、実施形態７３〜７５のいずれか１項に記載のタンパク質性ヘテロ二量体。
【０４６０】
７８．標的部分はＭｕｃ１と特異的に結合し、第１のメンバーの重鎖のアミノ酸配列は配列番号６７から選択される、実施形態７３〜７５のいずれか１項に記載のタンパク質性ヘテロ二量体。
【０４６１】
７９．標的部分はメソセリンと特異的に結合し、第１のメンバーの抗体軽鎖はＣＤＲ１〜３を含み、ＣＤＲ１のアミノ酸配列は配列番号１６５から選択され、ＣＤＲ２のアミノ酸配列は配列番号１６６から選択され、ＣＤＲ３のアミノ酸配列は配列番号１６７から選択される、実施形態１〜４２のいずれか１項に記載のタンパク質性ヘテロ二量体。
【０４６２】
８０．標的部分はメソセリンと特異的に結合し、第１のメンバーの抗体軽鎖は軽鎖可変領域を含み、軽鎖可変領域のアミノ酸配列は配列番号１６８から選択される、実施形態１〜４２のいずれか１項に記載のタンパク質性ヘテロ二量体。
【０４６３】
８１．標的部分はメソセリンと特異的に結合し、第１のメンバーの軽鎖のアミノ酸配列は配列番号７３から選択される、実施形態１〜４２のいずれか１項に記載のタンパク質性ヘテロ二量体。
【０４６４】
８２．標的部分はメソセリンと特異的に結合し、第１のメンバーの抗体重鎖はＣＤＲ１〜３を含み、ＤＲ１のアミノ酸配列は配列番号１６９から選択され、ＣＤＲ２のアミノ酸配列は配列番号１７０から選択され、ＣＤＲ３のアミノ酸配列は配列番号１７１から選択される、実施形態７９〜８１のいずれか１項に記載のタンパク質性ヘテロ二量体。
【０４６５】
８３．標的部分はメソセリンと特異的に結合し、第１のメンバーの抗体重鎖は重鎖可変領域を含み、重鎖可変領域のアミノ酸配列は配列番号１７２から選択される、実施形態７９〜８１のいずれか１項に記載のタンパク質性ヘテロ二量体。
【０４６６】
８４．標的部分はメソセリンと特異的に結合し、第１のメンバーの重鎖のアミノ酸配列は配列番号７５から選択される、実施形態７９〜８１のいずれか１項に記載のタンパク質性ヘテロ二量体。
【０４６７】
８５．標的部分はＭＵＣ５ＡＣと特異的に結合し、第１のメンバーの抗体軽鎖はＣＤＲ１〜３を含み、ＣＤＲ１のアミノ酸配列は配列番号１５７から選択され、ＣＤＲ２のアミノ酸配列は配列番号１５８から選択され、ＣＤＲ３のアミノ酸配列は配列番号１５９から選択される、実施形態１〜４２のいずれか１項に記載のタンパク質性ヘテロ二量体。
【０４６８】
８６．標的部分はＭＵＣ５ＡＣと特異的に結合し、第１のメンバーの抗体軽鎖は軽鎖可変領域を含み、軽鎖可変領域のアミノ酸配列は配列番号１６０から選択される、実施形態１〜４２のいずれか１項に記載のタンパク質性ヘテロ二量体。
【０４６９】
８７．標的部分はＭＵＣ５ＡＣと特異的に結合し、第１のメンバーの軽鎖のアミノ酸配列は配列番号６９から選択される、実施形態１〜４２のいずれか１項に記載のタンパク質性ヘテロ二量体。
【０４７０】
８８．標的部分はＭＵＣ５ＡＣと特異的に結合し、第１のメンバーの抗体重鎖はＣＤＲ１〜３を含み、ＣＤＲ１のアミノ酸配列は配列番号１６１から選択され、ＣＤＲ２のアミノ酸配列は配列番号１６２から選択され、ＣＤＲ３のアミノ酸配列は配列番号１６３から選択される、実施形態８５〜８７のいずれか１項に記載のタンパク質性ヘテロ二量体。
【０４７１】
８９．標的部分はＭＵＣ５ＡＣと特異的に結合し、第１のメンバーの抗体重鎖は重鎖可変領域を含み、重鎖可変領域のアミノ酸配列は配列番号１６４から選択される、実施形態８５〜８７のいずれか１項に記載のタンパク質性ヘテロ二量体。
【０４７２】
９０．標的部分はＭＵＣ５ＡＣと特異的に結合し、第１のメンバーの重鎖のアミノ酸配列は配列番号７１から選択される、実施形態８５〜８７のいずれか１項に記載のタンパク質性ヘテロ二量体。
【０４７３】
９１．第１のメンバーの重鎖で、第１のＦｃ領域のアミノ酸配列は配列番号１、４、５、６、７。９、１１、１３、１５、１７、１９、２１、２２、２４、２６、２７及び２９から選択される、上記実施形態のいずれか１項に記載のタンパク質性ヘテロ二量体。
【０４７４】
９２．第２のメンバーに含まれた免疫調節物質のアミノ酸配列は配列番号１７３〜１８０から選択される、上記実施形態のいずれか１項に記載のタンパク質性ヘテロ二量体。
【０４７５】
９３．第２のメンバーに含まれた第２のＦｃ領域のアミノ酸配列は配列番号２、３、８、１０、１２、１４、１６、１８、２０、２３、２５及び２８から選択される、上記実施形態のいずれか１項に記載のタンパク質性ヘテロ二量体。
【０４７６】
９４．第２のメンバーに含まれたポリペプチドのアミノ酸配列は配列番号７７、８０、８２、８４、８６、８９、９１及び９７から選択される、上記実施形態のいずれか１項に記載のタンパク質性ヘテロ二量体。
【０４７７】
９５．第１のメンバーに含まれた軽鎖のアミノ酸配列は配列番号３７、４５、４９、５３、５７、６１、６５、６９及び７３であり、第１のメンバーに含まれた重鎖のアミノ酸配列は配列番号３９、４７、５１、５５、５９、６３、６７、７１及び７５であり、第２のメンバーに含まれたポリペプチドのアミノ酸配列は配列番号７７、８０、８２、８４、８６、８９、９１及び９７である、上記実施形態のいずれか１項に記載のタンパク質性ヘテロ二量体。
【０４７８】
９６．前記ノブアンドホール修飾はノブ修飾及びホール修飾を含み、ただしノブ修飾はアミノ酸置換Ｙ３４９Ｃ及びＴ３６６Ｗを含み、ホール修飾はアミノ酸置換Ｄ３５６Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ及びＹ４０７Ｖを含み、ただしアミノ酸の位置は、ＫＡＢＡＴ番号のＥＵインデックスに基づいて決定される、上記実施形態のいずれか１項に記載のタンパク質性ヘテロ二量体。
【０４７９】
９７．上記実施形態のいずれか１項に記載のタンパク質性ヘテロ二量体をコードする、単離されたポリヌクレオチド。
【０４８０】
９８．実施形態９７に記載の単離されたポリヌクレオチドを含むベクター。
【０４８１】
９９．実施形態９７に記載の単離されたポリヌクレオチド又は実施形態９８に記載のベクターを含む単離された宿主細胞。
【０４８２】
１００．１）実施形態１〜９６のいずれか１項に記載のタンパク質性ヘテロ二量体と、２）前記タンパク質性ヘテロ二量体の前記第１のメンバー２つにより形成された第１のホモ二量体と、３）前記タンパク質性ヘテロ二量体の前記第２のメンバーの２つにより形成された第２のホモ二量体とを含み、ただし前記タンパク質性ヘテロ二量体の前記タンパク質混合物におけるパーセンテージは少なくとも５０％である、タンパク質混合物。
【０４８３】
１０１．第２のホモ二量体のパーセンテージは第１のホモ二量体のパーセンテージより小さい、実施形態１００に記載のタンパク質混合物。
【０４８４】
１０２．第２のホモ二量体のパーセンテージは最大１０％である、実施形態１００又は１０１に記載のタンパク質混合物。
【０４８５】
１０３．前記第２のホモ二量体を実質的に含まない、実施形態１０２に記載のタンパク質混合物。
【０４８６】
１０４．実施形態１〜９６のいずれか１項に記載のタンパク質性ヘテロ二量体と、実施形態１００〜１０３のいずれか１項に記載のタンパク質混合物又は薬学的に許容される賦形剤とを含む医薬組成物。
【０４８７】
１０５．経口投与、静脈内投与、肌肉内投与、腫瘍部位でのインサイチュ投与、吸入、直腸投与、膣内投与、経皮投与又は皮下貯蔵所による投与用のものとして製造される実施形態１０４に記載の医薬組成物。
【０４８８】
１０６．腫瘍又は腫瘍細胞の成長阻害のための医薬品及び／又はキットの製造における実施形態１〜９６のいずれか１項に記載のタンパク質性ヘテロ二量体又は実施形態１００〜１０３のいずれか１項に記載のタンパク質混合物の用途。
【０４８９】
１０７．前記腫瘍又は腫瘍細胞を有効量の、実施形態１〜９６のいずれか１項に記載のタンパク質性ヘテロ二量体又は実施形態１００〜１０３のいずれか１項に記載のタンパク質混合物と接触させることを含む、腫瘍又は腫瘍細胞の成長の阻害方法。
【０４９０】
１０８．前記接触はインビトロ又はインビボで起こる、実施形態１０７に記載の方法。
【０４９１】
１０９．（ｉ）タンパク質性ヘテロ二量体の発現に影響を与える条件下で実施形態９９に記載の宿主細胞を培養することと、（ｉｉ）発現されたタンパク質性ヘテロ二量体、又は前記タンパク質性ヘテロ二量体を含むタンパク質混合物を得ることとを含む、タンパク質性ヘテロ二量体、又はタンパク質性ヘテロ二量体を含むタンパク質混合物の製造方法。
【０４９２】
本明細書において、本発明の好ましい実施形態を示して説明しているが、当業者が理解できるように、これらの実施形態は例として提供される。当業者は本発明から逸脱することなく、多数の変形、変更及び置換に想到することができる。なお、本発明を実施する際、本明細書に記載の本発明の実施形態の様々な代替的な形態を採用できることは理解できる。本発明は以下記載の特許請求の範囲により限定され、これらの請求項に含まれた方法、構造及びそれらの等同物がカバーされることを意図される。
【実施例】
【０４９３】
以下提供される実施例及び調製方法は、本発明に係るタンパク質性ヘテロ二量体、その使用及び製造方法を例示的にさらに説明するものである。なお、本発明の範囲は、何らの形で下記実施例及び調製方法により制限されるものではない。
【０４９４】
実施例１：ポリペプチドの修飾及び調製
１．１  Ｆｃ領域におけるアミノ酸修飾の決定
ヒトＩｇＧ１のＣＨ３−ＣＨ３ドメイン界面アミノ酸残基を決定した。野生型ヒトＩｇＧ１は第１の重鎖（鎖Ａ）及び第２の重鎖（鎖Ｂ）を含み、鎖Ａ及び鎖Ｂのそれぞれの界面アミノ酸は次の表１に記載のとおりである。アミノ酸の位置はＫＡＢＡＴ番号のＥＵインデックスに基づいて決定された。
【０４９５】
【表１】
2020527939.tif 000003
【０４９６】
次に、界面残基に対しアミノ酸修飾（例えば、アミノ酸置換）を行って、次に示す修飾群（表２に記載のとおり。参照ＫＨとはノブアンドホール修飾を指す）を得た。本発明において、鎖Ａは、Ｆｃ９又は第１のＦｃ領域ともいい、鎖ＢはＦｃ６又は第２のＦｃ領域ともいう。
【０４９７】
【表２】
2020527939.tif 000004
【０４９８】
次に、ＳｃＦｖ−Ｆｃ／Ｆｃシステム用いて表２に示す修飾群を含むヘテロ二量体タンパク質の形成を検出した。以下、具体的に説明する。
【０４９９】
まず、データベースＵｎｉｐｒｏｔ（Ｐ０１８５７）からヒト免疫グロブリンγ１（ＩｇＧ１）定常領域アミノ酸配列を取得して、野生型ヒトＩｇＧ１−Ｆｃ領域アミノ酸配列（配列番号３０）を得た。ＲＴ−ＰＣＲによりヒトＰＢＭＣ全ＲＮＡ（配列番号３１で、Ｆｃ遺伝子断片と呼ばれる）から野生型ヒトＩｇＧ１−Ｆｃをコードするポリヌクレオチド断片を得た。オーバーラップＰＣＲによりマウスκＩＩＩシグナルペプチド（配列番号３２）をコードするポリヌクレオチド断片をＦｃ遺伝子の５’末端に加えた後、ベクターｐｃＤＮＡ４（インビトロジェン社提供、カタログ番号Ｖ８６２２０）にサブクローニングすることにより、哺乳類細胞におけるヒトＩｇＧ１−Ｆｃの発現のための組換え発現ベクターを得た。
【０５００】
場合によっては、ラクダ単一ドメイン抗体の可変領域（ＶｈＨ）をコードするポリペプチドをＦｃ遺伝子断片のＮ末端と融合させることにより融合タンパク質ＶｈＨ−Ｆｃ（配列番号３４に記載）をコードする融合遺伝子断片（配列番号３３に記載）を得た。次に、ベクターｐｃＤＮＡ４（インビトロジェン社提供、カタログ番号Ｖ８６２２０）にサブクローニングすることにより、哺乳類細胞における融合タンパク質ＶｈＨ−Ｆｃの発現のための組換え発現ベクターを得た。
【０５０１】
ＳｃＦｖ−Ｆｃ融合タンパク質をコードする核酸分子（配列番号３５）を合成し、ＳｃＦｖとは、抗Ｈｅｒ２一本鎖抗体を指し、ＳｃＦｖ−Ｆｃ融合タンパク質のアミノ酸配列は配列番号３６に記載のとおりである。次に、ＳｃＦｖ−Ｆｃ遺伝子断片をベクターｐｃＤＮＡ４（インビトロジェン社提供、カタログ番号Ｖ８６２２０）にサブクローニングすることにより、哺乳類細胞におけるＳｃＦｖ−Ｆｃ融合タンパク質の発現のための組換え発現ベクターを得た。
【０５０２】
次に、オーバーラップＰＣＲにより表２に示すアミノ酸修飾をＳｃＦｖ−Ｆｃ（群ＫＨと群１〜１７）、ＶｈＨ−Ｆｃ（群９〜１２、１４、１５と１７）、及びＦｃ遺伝子断片（群ＫＨと群１〜８）にそれぞれ導入し、ここで、鎖ＡとはＳｃＦｖ−ＦｃにおけるＦｃ領域を、鎖Ｂとは独立したＦｃ領域又はＶｈＨ−ＦｃにおけるＦｃ領域を指す。アミノ酸修飾を有する遺伝子断片をベクターｐｃＤＮＡ４（インビトロジェン社提供、カタログ番号Ｖ８６２２０）にそれぞれサブクローニングすることにより、哺乳類細胞における修飾されたＳｃＦｖ−Ｆｃ融合タンパク質、修飾されたＦｃタンパク質及び修飾されたＶｈＨ−Ｆｃ融合タンパク質の発現のための組換え発現ベクターを得た。
【０５０３】
次に、構築されたＰＥＩ含有の発現ベクターを用いて、浮遊培養されたＨＥＫ２９３細胞（ＡＴＣＣ＝アメリカンタイプカルチャーコレクション提供、ＣＲＬ−１５７３（登録商標））をトランスフェクトした。各群において、鎖Ａを発現する発現ベクター（ＳｃＦｖ−Ｆｃ融合タンパク質）及び鎖Ｂを発現する発現ベクター（Ｆｃタンパク質又はＶｈＨ−Ｆｃ融合タンパク質）を１：１の割合で共トランスフェクトした。５〜６日培養後、一過性発現産物の上清を回収し、プロテインＡアフィニティークロマトグラフィーを利用して対応するタンパク質性ヘテロ二量体を含む発現産物を予備精製した。予備精製された発現産物のそれぞれは、いずれもそれぞれ異なるパーセンテージで存在するホモ二量体タンパク質ＳｃＦｖ−Ｆｃ／ＳｃＦｖ−Ｆｃ、ホモ二量体タンパク質Ｆｃ／Ｆｃ（又はホモ二量体タンパク質ＶｈＨ−Ｆｃ／ＶｈＨ−Ｆｃ）及びヘテロ二量体タンパク質ＳｃＦｖ−Ｆｃ／Ｆｃ（又はヘテロ二量体タンパク質ＳｃＦｖ−Ｆｃ／ＶｈＨ−Ｆｃ）を含む。これらのタンパク質（即ちホモ二量体及びヘテロ二量体）は分子量が異なるため、非還元ＳＤＳ−ＰＡＧＥゲルに反映された対応するバンド強度によりそれらの対応するパーセンテージを決定することができる。強度を定量化し、結果を次の表３〜表６にまとめた。
【０５０４】
【表３】
2020527939.tif 000005
【０５０５】
【表４】
2020527939.tif 000006
【０５０６】
【表５】
2020527939.tif 000007
【０５０７】
【表６】
2020527939.tif 000008
【０５０８】
表３〜表６から分かるように、全ての修飾群は参照用修飾ノブアンドホールよりもヘテロ二量体の形成を効果的に促進していた。以下の実施例において、例示の目的で、群１０における修飾（鎖Ａにおける修飾：Ｔ３６６Ｗ＋Ｋ４０９Ａ；鎖Ｂにおける修飾：Ｔ３６６Ｓ＋Ｌ３６８Ｇ＋Ｙ４０７Ａ＋Ｆ４０５Ｋ）を用いて本発明に係るタンパク質性ヘテロ二量体又はタンパク質混合物を生成させた。
【０５０９】
１．２  抗ＥＧＦＲ（セツキシマブ）の調製
セツキシマブ（エルビタックス（Ｅｒｂｉｔｕｘ）又はＥｒｂともいい、上皮成長因子受容体（ＥＧＦＲ）に対する抗体である）の重鎖及び軽鎖の全長アミノ酸配列を取得し、オンラインツールＤＮＡｗｏｒｋｓ（ｈｅｌｉｘｗｅｂ．ｎｉｈ．ｇｏｖ／ｄｎａｗｏｒｋｓ／）を利用してこれらのアミノ酸配列をコードする対応するＤＮＡ配列を取得した。次に、セツキシマブ軽鎖（Ｅｒｂ−ＬＣ）をコードする核酸分子合成した。Ｅｒｂ−ＬＣのアミノ酸配列は配列番号３７に記載のとおり、それをコードする対応するポリヌクレオチド配列は配列番号３８に記載のとおりである。次に、点突然変異（Ｔ３６６Ｗ及びＫ４０９Ａ）をセツキシマブ重鎖遺伝子のＦｃ領域をコードするポリヌクレオチド配列に導入し、修飾されたセツキシマブ重鎖をコードする核酸分子（本明細書でｅｒｂ−Ｆｃ９という）を合成し、それをコードする対応するポリペプチドをＥｒｂ−Ｆｃ９と命名した。Ｅｒｂ−Ｆｃ９のアミノ酸配列は配列番号３９に記載のとおり、それをコードするポリヌクレオチド配列は配列番号４０に記載のとおりである。
【０５１０】
別の実験において、点突然変異（Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ｇ、Ｙ４０７Ａ及びＦ４０５Ｋ）をセツキシマブ重鎖遺伝子のＦｃ領域をコードするポリヌクレオチド配列に導入し、修飾されたセツキシマブ重鎖をコードする核酸分子（本明細書でｅｒｂ−Ｆｃ６という）を合成し、それをコードする対応するポリペプチドをＥｒｂ−Ｆｃ６と命名した。Ｅｒｂ−Ｆｃ６のアミノ酸配列は配列番号４１に記載のとおり、それをコードするポリヌクレオチド配列は配列番号４２に記載のとおりである。
【０５１１】
別の実験において、参照タンパク質を調製するために、点突然変異（Ｙ３４９Ｃ及びＴ３６６Ｗ）をセツキシマブ重鎖遺伝子のＦｃ領域をコードするポリヌクレオチド配列に導入し、修飾されたセツキシマブ重鎖をコードする核酸分子（本明細書でＥｒｂ−ノブという）を合成し、それをコードする対応するポリペプチドをＥｒｂ−ノブと命名した。Ｅｒｂ−ノブのアミノ酸配列は配列番号４３に記載のとおり、それをコードするポリヌクレオチド配列は配列番号４４に記載のとおりである。
【０５１２】
１．３  抗ＨＥＲ２（トラスツズマブ）の調製
米国特許第ＵＳ７８７９３２５Ｂ２号（援用により本明細書に組み込まれる）の記載に基づき、トラスツズマブの重鎖及び軽鎖の全長アミノ酸配列を得た。次に、オンラインツールＤＮＡｗｏｒｋｓ（ｈｅｌｉｘｗｅｂ．ｎｉｈ．ｇｏｖ／ｄｎａｗｏｒｋｓ／）を利用してこれらのアミノ酸配列をコードする対応するＤＮＡ配列を取得した。次に、トラスツズマブの軽鎖（Ｔ−ＬＣ）をコードする核酸分子を合成した。Ｔ−ＬＣのアミノ酸配列は配列番号４５に記載のとおり、それをコードする対応するポリヌクレオチド配列は配列番号４６に記載のとおりである。次に、点突然変異（Ｔ３６６Ｗ及びＫ４０９Ａ）をトラスツズマブ重鎖遺伝子のＦｃ領域をコードするポリヌクレオチド配列に導入し、修飾されたトラスツズマブ重鎖をコードする核酸分子（本明細書でｔ−Ｆｃ９という）を合成し、それをコードする対応するポリペプチドをＴ−Ｆｃ９と命名した。Ｔ−Ｆｃ９のアミノ酸配列は配列番号４７に記載のとおり、それをコードするポリヌクレオチド配列は配列番号４８に記載のとおりである。
【０５１３】
１．４  抗ＨＥＲ２（ペルツズマブ）の調製
米国特許第ＵＳ７８７９３２５Ｂ２号（援用により本明細書に組み込まれる）の記載に基づき、ペルツズマブの重鎖及び軽鎖の全長アミノ酸配列を得た。次に、オンラインツールＤＮＡｗｏｒｋｓ（ｈｅｌｉｘｗｅｂ．ｎｉｈ．ｇｏｖ／ｄｎａｗｏｒｋｓ／）を利用してこれらのアミノ酸配列をコードする対応するＤＮＡ配列を取得した。次に、ペルツズマブの軽鎖（Ｐ−ＬＣ）をコードする核酸分子を合成した。Ｐ−ＬＣのアミノ酸配列は配列番号４９に記載のとおり、それをコードする対応するポリヌクレオチド配列は配列番号５０に記載のとおりである。次に、点突然変異（Ｔ３６６Ｗ及びＫ４０９Ａ）をペルツズマブ重鎖遺伝子のＦｃ領域をコードするポリヌクレオチド配列に導入し、修飾されたペルツズマブ重鎖をコードする核酸分子（本明細書でｐ−Ｆｃ９という）を合成し、それをコードする対応するポリペプチドをＰ−Ｆｃ９と命名した。Ｐ−Ｆｃ９のアミノ酸配列は配列番号５１に記載のとおり、それをコードするポリヌクレオチド配列は配列番号５２に記載のとおりである。
【０５１４】
１．５  抗ＥＧＦＲ変異体（Ｍａｂ８０６）の調製
米国特許第ＵＳ７５８９１８０Ｂ２（援用により本明細書に組み込まれる）の記載に基づき、Ｍａｂ８０６の重鎖及び軽鎖の全長アミノ酸配列を得た。次に、オンラインツールＤＮＡｗｏｒｋｓ（ｈｅｌｉｘｗｅｂ．ｎｉｈ．ｇｏｖ／ｄｎａｗｏｒｋｓ／）を利用してこれらのアミノ酸配列をコードする対応するＤＮＡ配列を取得した。次に、Ｍａｂ８０６の軽鎖（Ｍａｂ８０６−ＬＣ）をコードする核酸分子を合成した。Ｍａｂ８０６−ＬＣのアミノ酸配列は配列番号５３に記載のとおり、それをコードする対応するポリヌクレオチド配列は配列番号５４に記載のとおりである。次に、点突然変異（Ｔ３６６Ｗ及びＫ４０９Ａ）をＭａｂ８０６重鎖遺伝子のＦｃ領域をコードするポリヌクレオチド配列に導入し、修飾されたＭａｂ８０６重鎖をコードする核酸分子（本明細書でｍａｂ８０６−Ｆｃ９という）を合成し、それをコードする対応するポリペプチドをＭａｂ８０６−Ｆｃ９と命名した。Ｍａｂ８０６−Ｆｃ９のアミノ酸配列は配列番号５５に記載のとおり、それをコードするポリヌクレオチド配列は配列番号５６に記載のとおりである。
【０５１５】
１．６  抗ＧＰＣ３（コドリツズマブ）の調製
米国特許第ＵＳ７９１９０８６Ｂ２（援用により本明細書に組み込まれる）の記載に基づき、コドリツズマブの重鎖及び軽鎖の全長アミノ酸配列を得た。次に、オンラインツールＤＮＡｗｏｒｋｓ（ｈｅｌｉｘｗｅｂ．ｎｉｈ．ｇｏｖ／ｄｎａｗｏｒｋｓ／）を利用してこれらのアミノ酸配列をコードする対応するＤＮＡ配列を取得した。次に、コドリツズマブの軽鎖（Ｃ−ｍａｂ−ＬＣ）をコードする核酸分子を合成した。Ｃ−ｍａｂ−ＬＣのアミノ酸配列は配列番号５７に記載のとおり、それをコードする対応するポリヌクレオチド配列は配列番号５８に記載のとおりである。次に、点突然変異（Ｔ３６６Ｗ及びＫ４０９Ａ）をコドリツズマブ重鎖遺伝子のＦｃ領域をコードするポリヌクレオチド配列に導入し、修飾されたコドリツズマブ重鎖をコードする核酸分子（本明細書でＣ−ｍａｂ−Ｆｃ９という）を合成し、それをコードする対応するポリペプチドをＣ−ｍａｂ−Ｆｃ９と命名した。Ｃ−ｍａｂ−Ｆｃ９のアミノ酸配列は配列番号５９に記載のとおり、それをコードするポリヌクレオチド配列は配列番号６０に記載のとおりである。
【０５１６】
１．７  抗ＦＡＰ（２８Ｈ１）の調製
米国特許第ＵＳ２０１２０１２８５９１Ａ１（援用により本明細書に組み込まれる）の記載に基づき、２８Ｈ１の重鎖及び軽鎖の全長アミノ酸配列を得た。次に、オンラインツールＤＮＡｗｏｒｋｓ（ｈｅｌｉｘｗｅｂ．ｎｉｈ．ｇｏｖ／ｄｎａｗｏｒｋｓ／）を利用してこれらのアミノ酸配列をコードする対応するＤＮＡ配列を取得した。次に、２８Ｈ１の軽鎖（２８Ｈ１−ＬＣ）をコードする核酸分子を合成した。２８Ｈ１−ＬＣのアミノ酸配列は配列番号６１に記載のとおり、それをコードする対応するポリヌクレオチド配列は配列番号６２に記載のとおりである。次に、点突然変異（Ｔ３６６Ｗ及びＫ４０９Ａ）を２８Ｈ１重鎖遺伝子のＦｃ領域をコードするポリヌクレオチド配列に導入し、修飾された２８Ｈ１重鎖をコードする核酸分子（本明細書で２８Ｈ１−Ｆｃ９という）を合成し、それをコードする対応するポリペプチドを２８Ｈ１−Ｆｃ９と命名した。２８Ｈ１−Ｆｃ９のアミノ酸配列は配列番号６３に記載のとおり、それをコードするポリヌクレオチド配列は配列番号６４に記載のとおりである。
【０５１７】
１．８  抗−Ｍｕｃ１（５Ｅ５）の調製
米国特許第ＵＳ８４４０７９８Ｂ２（援用により本明細書に組み込まれる）の記載に基づき、５Ｅ５の重鎖及び軽鎖の全長アミノ酸配列を得た。次に、オンラインツールＤＮＡｗｏｒｋｓ（ｈｅｌｉｘｗｅｂ．ｎｉｈ．ｇｏｖ／ｄｎａｗｏｒｋｓ／）を利用してこれらのアミノ酸配列をコードする対応するＤＮＡ配列を取得した。次に、５Ｅ５の軽鎖（５Ｅ５−ＬＣ）をコードする核酸分子を合成した。５Ｅ５−ＬＣのアミノ酸配列は配列番号６５に記載のとおり、それをコードする対応するポリヌクレオチド配列は配列番号６６に記載のとおりである。次に、点突然変異（Ｔ３６６Ｗ及びＫ４０９Ａ）を５Ｅ５重鎖遺伝子のＦｃ領域をコードするポリヌクレオチド配列に導入し、修飾された５Ｅ５重鎖をコードする核酸分子（本明細書で５Ｅ５−Ｆｃ９という）を合成し、それをコードする対応するポリペプチドを５Ｅ５−Ｆｃ９と命名した。５Ｅ５−Ｆｃ９のアミノ酸配列は配列番号６７に記載のとおり、それをコードするポリヌクレオチド配列は配列番号６８に記載のとおりである。
【０５１８】
１．９  抗ＭＵＣ５ＡＣ（エンシツキシマブ）の調製
国際特許第ＷＯ２００６１１３５４６Ａ２号（援用により本明細書に組み込まれる）の記載に基づき、エンシツキシマブの重鎖及び軽鎖の全長アミノ酸配列を得た。次に、オンラインツールＤＮＡｗｏｒｋｓ（ｈｅｌｉｘｗｅｂ．ｎｉｈ．ｇｏｖ／ｄｎａｗｏｒｋｓ／）を利用してこれらのアミノ酸配列をコードする対応するＤＮＡ配列を取得した。次に、エンシツキシマブの軽鎖（Ｅ−ｍａｂ−ＬＣ）をコードする核酸分子を合成した。Ｅ−ｍａｂ−ＬＣのアミノ酸配列は配列番号６９に記載のとおり、それをコードする対応するポリヌクレオチド配列は配列番号７０に記載のとおりである。次に、点突然変異（Ｔ３６６Ｗ及びＫ４０９Ａ）をエンシツキシマブ重鎖遺伝子のＦｃ領域をコードするポリヌクレオチド配列に導入し、修飾されたエンシツキシマブ重鎖をコードする核酸分子（本明細書でＥ−ｍａｂ−Ｆｃ９という）を合成し、それをコードする対応するポリペプチドをＥ−ｍａｂ−ＦＣ９と命名した。Ｅ−ｍａｂ−Ｆｃ９のアミノ酸配列は配列番号７１に記載のとおり、それをコードするポリヌクレオチド配列は配列番号７２に記載のとおりである。
【０５１９】
１．１０  抗メソセリン（アマツキシマブ）の調製
ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｉｍｇｔ．ｏｒｇ／ｍＡｂ−ＤＢ／ｉｎｄｅｘよりアマツキシマブの重鎖及び軽鎖の全長アミノ酸配列を得た。次に、オンラインツールＤＮＡｗｏｒｋｓ（ｈｅｌｉｘｗｅｂ．ｎｉｈ．ｇｏｖ／ｄｎａｗｏｒｋｓ／）を利用してこれらのアミノ酸配列をコードする対応するＤＮＡ配列を取得した。次に、アマツキシマブの軽鎖（Ａ−ｍａｂ−ＬＣ）をコードする核酸分子を合成した。Ａ−ｍａｂ−ＬＣのアミノ酸配列は配列番号７３に記載のとおり、それをコードする対応するポリヌクレオチド配列は配列番号７４に記載のとおりである。次に、点突然変異（Ｔ３６６Ｗ及びＫ４０９Ａ）をアマツキシマブ重鎖遺伝子のＦｃ領域をコードするポリヌクレオチド配列に導入し、修飾された×××重鎖をコードする核酸分子（本明細書でＡ−ｍａｂ−Ｆｃ９という）を合成し、それをコードする対応するポリペプチドをＡ−ｍａｂ−ＦＣ９と命名した。Ａ−ｍａｂ−Ｆｃ９のアミノ酸配列は配列番号７５に記載のとおり、それをコードするポリヌクレオチド配列は配列番号７６に記載のとおりである。
【０５２０】
１．１１  ｍｕＩＦＮａ４−Ｆｃ６の調製
まず、米国国立生物工学情報センター（ＮＣＢＩ）よりマウスインターフェロンα４（ＩＦＮａ４）（ＮＭ＿０１０５０４．２）の配列情報を得て、それをコードする全長ポリヌクレオチド配列を得た。次に、ヒト免疫グロブリンγ１（ＩｇＧ１）定常領域（Ｐ０１８５７）のアミノ酸配列に基づき、タンパク質データベースＵｎｉｐｒｏｔよりヒトＩｇＧ１−Ｆｃのアミノ酸配列（即ちＰ０１８５７の残基１０４〜残基３３０）を得た。次に、点突然変異（Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ｇ、Ｙ４０７Ａ及びＦ４０５Ｋ）をＩｇＧ１−Ｆｃ断片に導入して、このように得たポリペプチドをＦｃ６と命名した。次に、リンカー配列「ＧＳＧＧＧ」（配列番号７９）をＦｃ６のＮ末端に加えて、リンカー−Ｆｃ６を得た。次に、オンラインツールＤＮＡｗｏｒｋｓ（ｈｅｌｉｘｗｅｂ．ｎｉｈ．ｇｏｖ／ｄｎａｗｏｒｋｓ／）を利用してそれをコードする対応するＤＮＡ配列を設計した。マウスＩＦＮａ４をコードするポリヌクレオチド配列をリンカー−Ｆｃ６をコードするポリヌクレオチド配列の５’末端に加えて、融合タンパク質ｍｕＩＦＮａ４−Ｆｃ６をコードするポリヌクレオチド配列を合成した。ｍｕＩＦＮａ４−Ｆｃ６のアミノ酸配列は配列番号７７に記載のとおり、それをコードするポリヌクレオチド配列は配列番号７８に記載のとおりである。
【０５２１】
１．１２  ｈｕＩＦＮａ２−Ｆｃ６の調製
まず、米国国立生物工学情報センター（ＮＣＢＩ）よりヒトインターフェロンα２（ＩＦＮａ２）（ＮＭ＿０００６０５．３）の配列情報を得て、それをコードする全長ポリヌクレオチド配列を得た。次に、ヒト免疫グロブリンγ１（ＩｇＧ１）定常領域（Ｐ０１８５７）のアミノ酸配列に基づき、タンパク質データベースＵｎｉｐｒｏｔよりヒトＩｇＧ１−Ｆｃのアミノ酸配列（即ちＰ０１８５７の残基１０４〜残基３３０）を得た。次に、点突然変異（Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ｇ、Ｙ４０７Ａ及びＦ４０５Ｋ）をＩｇＧ１−Ｆｃ断片に導入して、このように得たポリペプチドをＦｃ６と命名した。次に、リンカー配列「ＧＳＧＧＧ」（配列番号７９）をＦｃ６のＮ末端に加えて、リンカー−Ｆｃ６を得た。次に、オンラインツールＤＮＡｗｏｒｋｓ（ｈｅｌｉｘｗｅｂ．ｎｉｈ．ｇｏｖ／ｄｎａｗｏｒｋｓ／）を利用してそれをコードする対応するＤＮＡ配列を設計した。ヒトＩＦＮａ２をコードするポリヌクレオチド配列をリンカー−Ｆｃ６をコードするポリヌクレオチド配列の５’末端に加えて、融合タンパク質ｈｕＩＦＮａ２−Ｆｃ６をコードするポリヌクレオチド配列を合成した。ｈｕＩＦＮａ２−Ｆｃ６のアミノ酸配列は配列番号８０に記載のとおり、それをコードするポリヌクレオチド配列は配列番号８１に記載のとおりである。
【０５２２】
１．１３  ｍｕＩＦＮｂ−Ｆｃ６の調製
まず、米国国立生物工学情報センター（ＮＣＢＩ）よりマウスインターフェロンβ（ＩＦＮβ）（ＮＭ＿００５０１８．２）の配列情報を得て、それをコードする全長ポリヌクレオチド配列を得た。次に、ヒト免疫グロブリンγ１（ＩｇＧ１）定常領域（Ｐ０１８５７）のアミノ酸配列に基づき、タンパク質データベースＵｎｉｐｒｏｔよりヒトＩｇＧ１−Ｆｃのアミノ酸配列（即ちＰ０１８５７の残基１０４〜残基３３０）を得た。次に、点突然変異（Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ｇ、Ｙ４０７Ａ及びＦ４０５Ｋ）をＩｇＧ１−Ｆｃ断片に導入して、このように得たポリペプチドをＦｃ６と命名した。次に、リンカー配列「ＧＳＧＧＧ」（配列番号７９）をＦｃ６のＮ末端に加えて、リンカー−Ｆｃ６を得た。次に、オンラインツールＤＮＡｗｏｒｋｓ（ｈｅｌｉｘｗｅｂ．ｎｉｈ．ｇｏｖ／ｄｎａｗｏｒｋｓ／）を利用してそれをコードする対応するＤＮＡ配列を設計した。マウスＩＦＮβをコードするポリヌクレオチド配列をリンカー−Ｆｃ６をコードするポリヌクレオチド配列の５’末端に加えて、融合タンパク質ｍｕＩＦＮｂ−Ｆｃ６をコードするポリヌクレオチド配列を合成した。ｍｕＩＦＮｂ−Ｆｃ６のアミノ酸配列は配列番号８２に記載のとおり、それをコードするポリヌクレオチド配列は配列番号８３に記載のとおりである。
【０５２３】
１．１４  ｈｕＩＦＮｂ−Ｆｃ６の調製
まず、米国国立生物工学情報センター（ＮＣＢＩ）よりヒトインターフェロンβ（ＩＦＮβ）（ＥＦ０６４７２５．１）の配列情報を得て、それをコードする全長ポリヌクレオチド配列を得た。次に、ヒト免疫グロブリンγ１（ＩｇＧ１）定常領域（Ｐ０１８５７）のアミノ酸配列に基づき、タンパク質データベースＵｎｉｐｒｏｔよりヒトＩｇＧ１−Ｆｃのアミノ酸配列（即ちＰ０１８５７の残基１０４〜残基３３０）を得た。次に、点突然変異（Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ｇ、Ｙ４０７Ａ及びＦ４０５Ｋ）をＩｇＧ１−Ｆｃ断片に導入して、このように得たポリペプチドをＦｃ６と命名した。次に、リンカー配列「ＧＳＧＧＧ」（配列番号７９）をＦｃ６のＮ末端に加えて、リンカー−Ｆｃ６を得た。次に、オンラインツールＤＮＡｗｏｒｋｓ（ｈｅｌｉｘｗｅｂ．ｎｉｈ．ｇｏｖ／ｄｎａｗｏｒｋｓ／）を利用してそれをコードする対応するＤＮＡ配列を設計した。ヒトＩＦＮβをコードするポリヌクレオチド配列をリンカー−Ｆｃ６をコードするポリヌクレオチド配列の５’末端に加えて、融合タンパク質ｈｕＩＦＮｂ−Ｆｃ６をコードするポリヌクレオチド配列を合成した。ｈｕＩＦＮｂ−Ｆｃ６のアミノ酸配列は配列番号８４に記載のとおり、それをコードするポリヌクレオチド配列は配列番号８５に記載のとおりである。
【０５２４】
１．１５  ｈｕＩＦＮＬ−Ｆｃ６の調製
まず、米国国立生物工学情報センター（ＮＣＢＩ）よりヒトインターフェロンλ（ＩＦＮＬ）（ＢＣ１１７４８２．１）の配列情報を得て、それをコードする全長ポリヌクレオチド配列を得た。次に、ヒト免疫グロブリンγ１（ＩｇＧ１）定常領域（Ｐ０１８５７）のアミノ酸配列に基づき、タンパク質データベースＵｎｉｐｒｏｔよりヒトＩｇＧ１−Ｆｃのアミノ酸配列（即ちＰ０１８５７の残基１０４〜残基３３０）を得た。次に、点突然変異（Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ｇ、Ｙ４０７Ａ及びＦ４０５Ｋ）をＩｇＧ１−Ｆｃ断片に導入して、このように得たポリペプチドをＦｃ６と命名した。次に、リンカー配列「ＧＳＧＧＧ」（配列番号７９）をＦｃ６のＮ末端に加えて、リンカー−Ｆｃ６を得た。次に、オンラインツールＤＮＡｗｏｒｋｓ（ｈｅｌｉｘｗｅｂ．ｎｉｈ．ｇｏｖ／ｄｎａｗｏｒｋｓ／）を利用してそれをコードする対応するＤＮＡ配列を設計した。ヒトＩＦＮＬをコードするポリヌクレオチド配列をリンカー−Ｆｃ６をコードするポリヌクレオチド配列の５’末端に加えて、融合タンパク質ｈｕＩＦＮＬ−Ｆｃ６をコードするポリヌクレオチド配列を合成した。ｈｕＩＦＮＬ−Ｆｃ６のアミノ酸配列は配列番号８６に記載のとおり、それをコードするポリヌクレオチド配列は配列番号８７に記載のとおりである。
【０５２５】
１．１６  ｈｕＩＬ１０−Ｆｃ６の調製
まず、米国国立生物工学情報センター（ＮＣＢＩ）よりヒトインターロイキン１０（ｈｕＩＬ１０）（Ｐ２２３０１）の配列情報を得て、それをコードする全長ポリヌクレオチド配列を得た。次に、ヒト免疫グロブリンγ１（ＩｇＧ１）定常領域（Ｐ０１８５７）のアミノ酸配列に基づき、タンパク質データベースＵｎｉｐｒｏｔよりヒトＩｇＧ１−Ｆｃのアミノ酸配列（即ちＰ０１８５７の残基１０４〜残基３３０）を得た。次に、点突然変異（Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ｇ、Ｙ４０７Ａ及びＦ４０５Ｋ）をＩｇＧ１−Ｆｃ断片に導入して、このように得たポリペプチドをＦｃ６と命名した。次に、リンカー配列「（ＧＧＧＧＳ）３」（配列番号８８）をＦｃ６のＮ末端に加えて、リンカー−Ｆｃ６を得た。次に、オンラインツールＤＮＡｗｏｒｋｓ（ｈｅｌｉｘｗｅｂ．ｎｉｈ．ｇｏｖ／ｄｎａｗｏｒｋｓ／）を利用してそれをコードする対応するＤＮＡ配列を設計した。ｈｕＩＬ１０をコードするポリヌクレオチド配列をリンカー−Ｆｃ６をコードするポリヌクレオチド配列の５’末端に加えて、融合タンパク質ｈｕＩＬ１０−Ｆｃ６をコードするポリヌクレオチド配列を合成した。ｈｕＩＬ１０−Ｆｃ６のアミノ酸配列は配列番号８９に記載のとおり、それをコードするポリヌクレオチド配列は配列番号９０に記載のとおりである。
【０５２６】
１．１７  （ｈｕＩＬ１０）２−Ｆｃ６の調製
まず、米国国立生物工学情報センター（ＮＣＢＩ）よりヒトインターロイキン１０（ｈｕＩＬ１０）（Ｐ２２３０１）の配列情報を得て、それをコードする全長ポリヌクレオチド配列を得た。次に、ヒト免疫グロブリンγ１（ＩｇＧ１）定常領域（Ｐ０１８５７）のアミノ酸配列に基づき、タンパク質データベースＵｎｉｐｒｏｔよりヒトＩｇＧ１−Ｆｃのアミノ酸配列（即ちＰ０１８５７の残基１０４〜残基３３０）を得た。次に、点突然変異（Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ｇ、Ｙ４０７Ａ及びＦ４０５Ｋ）をＩｇＧ１−Ｆｃ断片に導入して、このように得たポリペプチドをＦｃ６と命名した。次に、リンカー配列「（ＧＧＧＧＳ）３」（配列番号８８）をＦｃ６のＮ末端に加えて、リンカー−Ｆｃ６を得た。次に、オンラインツールＤＮＡｗｏｒｋｓ（ｈｅｌｉｘｗｅｂ．ｎｉｈ．ｇｏｖ／ｄｎａｗｏｒｋｓ／）を利用してそれをコードする対応するＤＮＡ配列を設計した。次に、ｈｕＩＬ１０の２つのコピーの間にリンカー配列「（ＧＧＧＧＳ）３」（配列番号８８）を加えて、（ｈｕＩＬ１０）２を得た。次に、（ｈｕＩＬ１０）２をコードするポリヌクレオチド配列をリンカー−Ｆｃ６をコードするポリヌクレオチド配列の５’末端に加えて、融合タンパク質（ｈｕＩＬ１０）２−Ｆｃ６をコードするポリヌクレオチド配列を合成した。（ｈｕＩＬ１０）２−Ｆｃ６のアミノ酸配列は配列番号９１に記載のとおり、それをコードするポリヌクレオチド配列は配列番号９２に記載のとおりである。
【０５２７】
１．１８  （ｈｕＩＬ１０）２−Ｆｃ９の調製
まず、米国国立生物工学情報センター（ＮＣＢＩ）よりヒトインターロイキン１０（ｈｕＩＬ１０）（Ｐ２２３０１）の配列情報を得て、それをコードする全長ポリヌクレオチド配列を得た。次に、ヒト免疫グロブリンγ１（ＩｇＧ１）定常領域（Ｐ０１８５７）のアミノ酸配列に基づき、タンパク質データベースＵｎｉｐｒｏｔよりヒトＩｇＧ１−Ｆｃのアミノ酸配列（即ちＰ０１８５７の残基１０４〜残基３３０）を得た。次に、点突然変異（Ｔ３６６Ｗ及びＫ４０９Ａ）をＩｇＧ１−Ｆｃ断片に導入して、このように得たポリペプチドをＦｃ９と命名した。次に、リンカー配列「（ＧＧＧＧＳ）３」（配列番号８８）をＦｃ９のＮ末端に加えて、リンカー−Ｆｃ９を得た。次に、オンラインツールＤＮＡｗｏｒｋｓ（ｈｅｌｉｘｗｅｂ．ｎｉｈ．ｇｏｖ／ｄｎａｗｏｒｋｓ／）を利用してそれをコードする対応するＤＮＡ配列を設計した。次に、ｈｕＩＬ１０の２つのコピーの間にリンカー配列「（ＧＧＧＧＳ）３」（配列番号８８）を加えて、（ｈｕＩＬ１０）２を得た。次に、（ｈｕＩＬ１０）２をコードするポリヌクレオチド配列をリンカー−Ｆｃ９をコードするポリヌクレオチド配列の５’末端に加えて、融合タンパク質（ｈｕＩＬ１０）２−Ｆｃ９をコードするポリヌクレオチド配列を合成した。（ｈｕＩＬ１０）２−Ｆｃ９のアミノ酸配列は配列番号９３に記載のとおり、それをコードするポリヌクレオチド配列は配列番号９４に記載のとおりである。
【０５２８】
１．１９  （ｈｕＩＬ１０）２−Ｆｃ−ホールの調製
まず、米国国立生物工学情報センター（ＮＣＢＩ）よりヒトインターロイキン１０（ｈｕＩＬ１０）（Ｐ２２３０１）の配列情報を得て、それをコードする全長ポリヌクレオチド配列を得た。次に、ヒト免疫グロブリンγ１（ＩｇＧ１）定常領域（Ｐ０１８５７）のアミノ酸配列に基づき、タンパク質データベースＵｎｉｐｒｏｔよりヒトＩｇＧ１−Ｆｃのアミノ酸配列（即ちＰ０１８５７の残基１０４〜残基３３０）を得た。次に、点突然変異（Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ｇ、Ｙ４０７Ａ及びＦ４０５Ｋ）をＩｇＧ１−Ｆｃ断片に導入して、このように得たポリペプチドをＦｃ−ホールと命名した。次に、リンカー配列「（ＧＧＧＧＳ）３」（配列番号８８）をＦｃ−ホールのＮ末端に加えて、リンカー−Ｆｃ−ホールを得た。次に、オンラインツールＤＮＡｗｏｒｋｓ（ｈｅｌｉｘｗｅｂ．ｎｉｈ．ｇｏｖ／ｄｎａｗｏｒｋｓ／）を利用してそれをコードする対応するＤＮＡ配列を設計した。次に、ｈｕＩＬ１０の２つのコピーの間にリンカー配列「（ＧＧＧＧＳ）３」（配列番号８８）を加えて、（ｈｕＩＬ１０）２を得た。次に、（ｈｕＩＬ１０）２をコードするポリヌクレオチド配列をリンカー−Ｆｃ−ホールをコードするポリヌクレオチド配列の５’末端に加えて、融合タンパク質（ｈｕＩＬ１０）２−Ｆｃ−ホールをコードするポリヌクレオチド配列を合成した。（ｈｕＩＬ１０）２−Ｆｃ−ホールのアミノ酸配列は配列番号９５に記載のとおり、それをコードするポリヌクレオチド配列は配列番号９６に記載のとおりである。
【０５２９】
１．２０  ｈｕｓＩＬ２−Ｆｃ６の調製
まず、Ｎａｔｕｒｅ  ４８４，  ５２９−５３３（２０１２年４月２６日）（援用により本明細書に組み込まれる）の記載に基づき、ヒトスーパーインターロイキン２（ｈｕｓＩＬ２）の配列情報を得て、それをコードする全長ポリヌクレオチド配列を得た。次に、ヒト免疫グロブリンγ１（ＩｇＧ１）定常領域（Ｐ０１８５７）のアミノ酸配列に基づき、タンパク質データベースＵｎｉｐｒｏｔよりヒトＩｇＧ１−Ｆｃのアミノ酸配列（即ちＰ０１８５７の残基１０４〜残基３３０）を得た。次に、点突然変異（Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ｇ、Ｙ４０７Ａ及びＦ４０５Ｋ）をＩｇＧ１−Ｆｃ断片に導入して、このように得たポリペプチドをＦｃ６と命名した。次に、リンカー配列「ＧＧＧＧＳ」（配列番号７９）をＦｃ６のＮ末端に加えて、リンカー−Ｆｃ６を得た。次に、オンラインツールＤＮＡｗｏｒｋｓ（ｈｅｌｉｘｗｅｂ．ｎｉｈ．ｇｏｖ／ｄｎａｗｏｒｋｓ／）を利用してそれをコードする対応するＤＮＡ配列を設計した。ｈｕｓＩＬ２をコードするポリヌクレオチド配列をリンカー−Ｆｃ６をコードするポリヌクレオチド配列の５’末端に加えて、融合タンパク質ｈｕｓＩＬ２−Ｆｃ６をコードするポリヌクレオチド配列を合成した。ｈｕｓＩＬ２−Ｆｃ６のアミノ酸配列は配列番号９７に記載のとおり、それをコードするポリヌクレオチド配列は配列番号９８に記載のとおりである。
【０５３０】
１．２１  ｈｕｓＩＬ２−ホールの調製
まず、Ｎａｔｕｒｅ  ４８４，  ５２９−５３３（２０１２年４月２６日）（援用により本明細書に組み込まれる）の記載に基づき、ヒトスーパーインターロイキン２（ｈｕｓＩＬ２）の配列情報を得て、それをコードする全長ポリヌクレオチド配列を得た。次に、ヒト免疫グロブリンγ１（ＩｇＧ１）定常領域（Ｐ０１８５７）のアミノ酸配列に基づき、タンパク質データベースＵｎｉｐｒｏｔよりヒトＩｇＧ１−Ｆｃのアミノ酸配列（即ちＰ０１８５７の残基１０４〜残基３３０）を得た。次に、点突然変異（Ｄ３５６Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ及びＹ４０７Ｖ）をＩｇＧ１−Ｆｃ断片に導入して、このように得たポリペプチドをＦｃ−ホールと命名した。次に、リンカー配列「ＧＧＧＧＳ」（配列番号７９）をＦｃ−ホールのＮ末端に加えて、リンカー−Ｆｃ−ホールを得た。次に、オンラインツールＤＮＡｗｏｒｋｓ（ｈｅｌｉｘｗｅｂ．ｎｉｈ．ｇｏｖ／ｄｎａｗｏｒｋｓ／）を利用してそれをコードする対応するＤＮＡ配列を設計した。ｈｕｓＩＬ２をコードするポリヌクレオチド配列をリンカー−Ｆｃ−ホールをコードするポリヌクレオチド配列の５’末端に加えて、融合タンパク質ｈｕｓＩＬ２−Ｆｃ−ホールをコードするポリヌクレオチド配列を合成した。ｈｕｓＩＬ２−Ｆｃ−ホールのアミノ酸配列は配列番号９９に記載のとおり、それをコードするポリヌクレオチド配列は配列番号１００に記載のとおりである。
【０５３１】
実施例２：組換えプラスミドの構築
ＨｉｎｄＩＩＩ及びＥｃｏＲＩ（タカラバイオ社提供）を使用して、実施例１で得た核酸分子（それぞれＥｒｂ−Ｆｃ９、Ｅｒｂ−Ｆｃ６、Ｅｒｂ−ノブ、Ｔ−Ｆｃ９、Ｐ−Ｆｃ９、Ｍａｂ８０６−Ｆｃ９、Ｃ−ｍａｂ−Ｆｃ９、２８Ｈ１−Ｆｃ９、５Ｅ５−Ｆｃ９、Ｅ−ｍａｂ−Ｆｃ９、Ａ−ｍａｂ−Ｆｃ９、Ｔ−ＬＣ（トラスツズマブ軽鎖）、Ｐ−ＬＣ（ペルツズマブ軽鎖）、Ｅｒｂ−ＬＣ（セツキシマブ軽鎖）、Ｍａｂ８０６−ＬＣ（Ｍａｂ８０６軽鎖）、Ｃ−ｍａｂ−ＬＣ（コドリツズマブ軽鎖））、２８Ｈ１−ＬＣ（２８Ｈ１軽鎖）、５Ｅ５−ＬＣ（５Ｅ５軽鎖）、Ｅ−ｍａｂ−ＬＣ（エンシツキシマブ軽鎖）、Ａ−ｍａｂ−ＬＣ（アマツキシマブ軽鎖）、ｍｕＩＦＮａ４−Ｆｃ６、ｈｕＩＦＮａ２−Ｆｃ６、ｍｕＩＦＮｂ−Ｆｃ６、ｈｕＩＦＮｂ−Ｆｃ６、ｈｕＩＦＮＬ−Ｆｃ６、ｈｕＩＬ１０−Ｆｃ６、（ｈｕＩＬ１０）２−Ｆｃ６、（ｈｕＩＬ１０）２−Ｆｃ９、（ｈｕＩＬ１０）２−Ｆｃ−ホール、ｈｕｓＩＬ２−Ｆｃ６及びｈｕｓＩＬ２−ホールをコードする）を消化した後、それぞれベクターｐｃＤＮＡ４／ｍｙｃ−ＨｉｓＡ（インビトロジェン社提供、Ｖ８６３−２０）にサブクローニングした。配列決定によりプラスミドを検証し、正しく構築された組換えプラスミドをそれぞれ、ｐｃＤＮＡ４−Ｅｒｂ−Ｆｃ９、ｐｃＤＮＡ４−Ｅｒｂ−Ｆｃ６、ｐｃＤＮＡ４−Ｅｒｂ−ノブ、ｐｃＤＮＡ４−Ｔ−Ｆｃ９、ｐｃＤＮＡ４−Ｐ−Ｆｃ９、ｐｃＤＮＡ４−Ｍａｂ８０６−Ｆｃ９、ｐｃＤＮＡ４−Ｃ−ｍａｂ−Ｆｃ９、ｐｃＤＮＡ４−２８Ｈ１−Ｆｃ９、ｐｃＤＮＡ４−５Ｅ５−Ｆｃ９、ｐｃＤＮＡ４−Ｅ−ｍａｂ−Ｆｃ９、ｐｃＤＮＡ４−Ａ−ｍａｂ−Ｆｃ９、ｐｃＤＮＡ４−Ｔ−ＬＣ、ｐｃＤＮＡ４−Ｐ−ＬＣ、ｐｃＤＮＡ４−Ｅｒｂ−ＬＣ、ｐｃＤＮＡ４−Ｍａｂ８０６−ＬＣ、ｐｃＤＮＡ４−Ｃ−ｍａｂ−ＬＣ、ｐｃＤＮＡ４−２８Ｈ１−ＬＣ、ｐｃＤＮＡ４−５Ｅ５−ＬＣ、ｐｃＤＮＡ４−Ｅ−ｍａｂ−ＬＣ、ｐｃＤＮＡ４−Ａ−ｍａｂ−ＬＣ、ｐｃＤＮＡ４−ｍｕＩＦＮａ４−Ｆｃ６、ｐｃＤＮＡ４−ｈｕＩＦＮａ２−Ｆｃ６、ｐｃＤＮＡ４−ｍｕＩＦＮｂ−Ｆｃ６、ｐｃＤＮＡ４−ｈｕＩＦＮｂ−Ｆｃ６、ｐｃＤＮＡ４−ｈｕＩＦＮＬ−Ｆｃ６、ｐｃＤＮＡ４−ｈｕＩＬ１０−Ｆｃ６、ｐｃＤＮＡ４−（ｈｕＩＬ１０）２−Ｆｃ６、ｐｃＤＮＡ４−（ｈｕＩＬ１０）２−Ｆｃ９、ｐｃＤＮＡ４−（ｈｕＩＬ１０）２−Ｆｃ−ホール、ｐｃＤＮＡ４−ｈｕｓＩＬ２−Ｆｃ６及びｐｃＤＮＡ４−ｈｕｓＩＬ２−ホールと命名した。
【０５３２】
実施例３：タンパク質性ヘテロ二量体の発現及び精製
トランスフェクト実施２日前、１２×６００ｍＬ懸濁液で適応させた一過性トランスフェクション用ＨＥＫ２９３細胞（ＡＴＣＣ提供、ＣＲＬ−１５７３（登録商標））を調製し、０．８×１０６細胞／ｍｌの密度で細胞を接種した。２日後、細胞懸濁液を３等分して遠心分離して、６００ｍＬのＦｒｅｅｓｔｙｌｅ２９３培地に再懸濁させた。
【０５３３】
実施例２で得た組換え発現ベクターを以下に示す群に分けた。
群１：ｐｃＤＮＡ４−Ｅｒｂ−ノブ（２００μｇ）＋ｐｃＤＮＡ４−Ｅｒｂ−ＬＣ（２００μｇ）＋ｐｃＤＮＡ４−（ｈｕＩＬ１０）２−Ｆｃ−ｈｏｌｅ（２００μｇ）
群２：ｐｃＤＮＡ４−Ｅｒｂ−Ｆｃ６（２００μｇ）＋ｐｃＤＮＡ４−Ｅｒｂ−ＬＣ（２００μｇ）＋ｐｃＤＮＡ４−（ｈｕＩＬ１０）２−Ｆｃ９（２００μｇ）
群３：ｐｃＤＮＡ４−Ｅｒｂ−Ｆｃ９（２００μｇ）＋ｐｃＤＮＡ４−Ｅｒｂ−ＬＣ（２００μｇ）＋ｐｃＤＮＡ４−（ｈｕＩＬ１０）２−Ｆｃ６（２００μｇ）
群４：ｐｃＤＮＡ４−Ｅｒｂ−Ｆｃ９（２００μｇ）＋ｐｃＤＮＡ４−Ｅｒｂ−ＬＣ（２００μｇ）＋ｐｃＤＮＡ４−ｍｕＩＦＮａ４−Ｆｃ６（２００μｇ）
群５：ｐｃＤＮＡ４−Ｅｒｂ−Ｆｃ９（２００μｇ）＋ｐｃＤＮＡ４−Ｅｒｂ−ＬＣ（２００μｇ）＋ｐｃＤＮＡ４−ｈｕＩＦＮａ２−Ｆｃ６（２００μｇ）
群６：ｐｃＤＮＡ４−Ｅｒｂ−Ｆｃ９（２００μｇ）＋ｐｃＤＮＡ４−Ｅｒｂ−ＬＣ（２００μｇ）＋ｐｃＤＮＡ４−ｍｕＩＦＮｂ−Ｆｃ６（２００μｇ）
群７：ｐｃＤＮＡ４−Ｅｒｂ−Ｆｃ９（２００μｇ）＋ｐｃＤＮＡ４−Ｅｒｂ−ＬＣ（２００μｇ）＋ｐｃＤＮＡ４−ｈｕＩＦＮｂ−Ｆｃ６（２００μｇ）
群８：ｐｃＤＮＡ４−Ｅｒｂ−Ｆｃ９（２００μｇ）＋ｐｃＤＮＡ４−Ｅｒｂ−ＬＣ（２００μｇ）＋ｐｃＤＮＡ４−ｈｕＩＦＮＬ−Ｆｃ６（２００μｇ）
群９：ｐｃＤＮＡ４−Ｅｒｂ−Ｆｃ９（２００μｇ）＋ｐｃＤＮＡ４−Ｅｒｂ−ＬＣ（２００μｇ）＋ｐｃＤＮＡ４−ｈｕＩＬ１０−Ｆｃ６（２００μｇ）
群１０：ｐｃＤＮＡ４−Ｅｒｂ−ノブ（２００μｇ）＋ｐｃＤＮＡ４−Ｅｒｂ−ＬＣ（２００μｇ）＋ｐｃＤＮＡ４−ｈｕｓＩＬ２−ｈｏｌｅ（２００μｇ）
群１１：ｐｃＤＮＡ４−Ｅｒｂ−Ｆｃ９（２００μｇ）＋ｐｃＤＮＡ４−Ｅｒｂ−ＬＣ（２００μｇ）＋ｐｃＤＮＡ４−ｈｕｓＩＬ２−Ｆｃ６（２００μｇ）
群１２：ｐｃＤＮＡ４−Ｍａｂ８０６−Ｆｃ９（２００μｇ）＋ｐｃＤＮＡ４−Ｍａｂ８０６−ＬＣ（２００μｇ）＋ｐｃＤＮＡ４−ｍｕＩＦＮａ４−Ｆｃ６（２００μｇ）
群１３：ｐｃＤＮＡ４−Ｍａｂ８０６−Ｆｃ９（２００μｇ）＋ｐｃＤＮＡ４−Ｍａｂ８０６−ＬＣ（２００μｇ）＋ｐｃＤＮＡ４−ｈｕＩＦＮａ２−Ｆｃ６（２００μｇ）
群１４：ｐｃＤＮＡ４−Ｍａｂ８０６−Ｆｃ９（２００μｇ）＋ｐｃＤＮＡ４−Ｍａｂ８０６−ＬＣ（２００μｇ）＋ｐｃＤＮＡ４−ｍｕＩＦＮｂ−Ｆｃ６（２００μｇ）
群１５：ｐｃＤＮＡ４−Ｍａｂ８０６−Ｆｃ９（２００μｇ）＋ｐｃＤＮＡ４−Ｍａｂ８０６−ＬＣ（２００μｇ）＋ｐｃＤＮＡ４−ｈｕＩＦＮｂ−Ｆｃ６（２００μｇ）
群１６：ｐｃＤＮＡ４−Ｍａｂ８０６−Ｆｃ９（２００μｇ）＋ｐｃＤＮＡ４−Ｍａｂ８０６−ＬＣ（２００μｇ）＋ｐｃＤＮＡ４−ｈｕＩＦＮＬ−Ｆｃ６（２００μｇ）
群１７：ｐｃＤＮＡ４−Ｍａｂ８０６−Ｆｃ９（２００μｇ）＋ｐｃＤＮＡ４−Ｍａｂ８０６−ＬＣ（２００μｇ）＋ｐｃＤＮＡ４−ｈｕＩＬ１０−Ｆｃ６（２００μｇ）
群１８：ｐｃＤＮＡ４−Ｍａｂ８０６−Ｆｃ９（２００μｇ）＋ｐｃＤＮＡ４−Ｍａｂ８０６−ＬＣ（２００μｇ）＋ｐｃＤＮＡ４−（ｈｕＩＬ１０）２−Ｆｃ６（２００μｇ）
群１９：ｐｃＤＮＡ４−Ｍａｂ８０６−Ｆｃ９（２００μｇ）＋ｐｃＤＮＡ４−Ｍａｂ８０６−ＬＣ（２００μｇ）＋ｐｃＤＮＡ４−ｈｕｓＩＬ２−Ｆｃ６（２００μｇ）
群２０：ｐｃＤＮＡ４−Ｔ−Ｆｃ９（２００μｇ）＋ｐｃＤＮＡ４−Ｔ−ＬＣ（２００μｇ）＋ｐｃＤＮＡ４−ｍｕＩＦＮａ４−Ｆｃ６（２００μｇ）
群２１：ｐｃＤＮＡ４−Ｔ−Ｆｃ９（２００μｇ）＋ｐｃＤＮＡ４−Ｔ−ＬＣ（２００μｇ）＋ｐｃＤＮＡ４−ｈｕＩＦＮａ２−Ｆｃ６（２００μｇ）
群２２：ｐｃＤＮＡ４−Ｔ−Ｆｃ９（２００μｇ）＋ｐｃＤＮＡ４−Ｔ−ＬＣ（２００μｇ）＋ｐｃＤＮＡ４−ｍｕＩＦＮｂ−Ｆｃ６（２００μｇ）
群２３：ｐｃＤＮＡ４−Ｔ−Ｆｃ９（２００μｇ）＋ｐｃＤＮＡ４−Ｔ−ＬＣ（２００μｇ）＋ｐｃＤＮＡ４−ｈｕＩＦＮｂ−Ｆｃ６（２００μｇ）
群２４：ｐｃＤＮＡ４−Ｔ−Ｆｃ９（２００μｇ）＋ｐｃＤＮＡ４−Ｔ−ＬＣ（２００μｇ）＋ｐｃＤＮＡ４−ｈｕＩＦＮＬ−Ｆｃ６（２００μｇ）
群２５：ｐｃＤＮＡ４−Ｔ−Ｆｃ９（２００μｇ）＋ｐｃＤＮＡ４−Ｔ−ＬＣ（２００μｇ）＋ｐｃＤＮＡ４−ｈｕＩＬ１０−Ｆｃ６（２００μｇ）
群２６：ｐｃＤＮＡ４−Ｔ−Ｆｃ９（２００μｇ）＋ｐｃＤＮＡ４−Ｔ−ＬＣ（２００μｇ）＋ｐｃＤＮＡ４−（ｈｕＩＬ１０）２−Ｆｃ６（２００μｇ）
群２７：ｐｃＤＮＡ４−Ｔ−Ｆｃ９（２００μｇ）＋ｐｃＤＮＡ４−Ｔ−ＬＣ（２００μｇ）＋ｐｃＤＮＡ４−ｈｕｓＩＬ２−Ｆｃ６（２００μｇ）
群２８：ｐｃＤＮＡ４−Ｐ−Ｆｃ９（２００μｇ）＋ｐｃＤＮＡ４−Ｐ−ＬＣ（２００μｇ）＋ｐｃＤＮＡ４−ｍｕＩＦＮａ４−Ｆｃ６（２００μｇ）
群２９：ｐｃＤＮＡ４−Ｐ−Ｆｃ９（２００μｇ）＋ｐｃＤＮＡ４−Ｐ−ＬＣ（２００μｇ）＋ｐｃＤＮＡ４−ｈｕＩＦＮａ２−Ｆｃ６（２００μｇ）
群３０：ｐｃＤＮＡ４−Ｐ−Ｆｃ９（２００μｇ）＋ｐｃＤＮＡ４−Ｐ−ＬＣ（２００μｇ）＋ｐｃＤＮＡ４−ｍｕＩＦＮｂ−Ｆｃ６（２００μｇ）
群３１：ｐｃＤＮＡ４−Ｐ−Ｆｃ９（２００μｇ）＋ｐｃＤＮＡ４−Ｐ−ＬＣ（２００μｇ）＋ｐｃＤＮＡ４−ｈｕＩＦＮｂ−Ｆｃ６（２００μｇ）
群３２：ｐｃＤＮＡ４−Ｐ−Ｆｃ９（２００μｇ）＋ｐｃＤＮＡ４−Ｐ−ＬＣ（２００μｇ）＋ｐｃＤＮＡ４−ｈｕＩＦＮＬ−Ｆｃ６（２００μｇ）
群３３：ｐｃＤＮＡ４−Ｐ−Ｆｃ９（２００μｇ）＋ｐｃＤＮＡ４−Ｐ−ＬＣ（２００μｇ）＋ｐｃＤＮＡ４−ｈｕＩＬ１０−Ｆｃ６（２００μｇ）
群３４：ｐｃＤＮＡ４−Ｐ−Ｆｃ９（２００μｇ）＋ｐｃＤＮＡ４−Ｐ−ＬＣ（２００μｇ）＋ｐｃＤＮＡ４−（ｈｕＩＬ１０）２−Ｆｃ６（２００μｇ）
群３５：ｐｃＤＮＡ４−Ｐ−Ｆｃ９（２００μｇ）＋ｐｃＤＮＡ４−Ｐ−ＬＣ（２００μｇ）＋ｐｃＤＮＡ４−ｈｕｓＩＬ２−Ｆｃ６（２００μｇ）
群３６：ｐｃＤＮＡ４−Ｃ−ｍａｂ−Ｆｃ９（２００μｇ）＋ｐｃＤＮＡ４−Ｃ−ｍａｂ−ＬＣ（２００μｇ）＋ｐｃＤＮＡ４−ｍｕＩＦＮａ４−Ｆｃ６（２００μｇ）
群３７：ｐｃＤＮＡ４−Ｃ−ｍａｂ−Ｆｃ９（２００μｇ）＋ｐｃＤＮＡ４−Ｃ−ｍａｂ−ＬＣ（２００μｇ）＋ｐｃＤＮＡ４−ｈｕＩＦＮａ２−Ｆｃ６（２００μｇ）
群３８：ｐｃＤＮＡ４−Ｃ−ｍａｂ−Ｆｃ９（２００μｇ）＋ｐｃＤＮＡ４−Ｃ−ｍａｂ−ＬＣ（２００μｇ）＋ｐｃＤＮＡ４−ｍｕＩＦＮｂ−Ｆｃ６（２００μｇ）
群３９：ｐｃＤＮＡ４−Ｃ−ｍａｂ−Ｆｃ９（２００μｇ）＋ｐｃＤＮＡ４−Ｃ−ｍａｂ−ＬＣ（２００μｇ）＋ｐｃＤＮＡ４−ｈｕＩＦＮｂ−Ｆｃ６（２００μｇ）
群４０：ｐｃＤＮＡ４−Ｃ−ｍａｂ−Ｆｃ９（２００μｇ）＋ｐｃＤＮＡ４−Ｃ−ｍａｂ−ＬＣ（２００μｇ）＋ｐｃＤＮＡ４−ｈｕＩＦＮＬ−Ｆｃ６（２００μｇ）
群４１：ｐｃＤＮＡ４−Ｃ−ｍａｂ−Ｆｃ９（２００μｇ）＋ｐｃＤＮＡ４−Ｃ−ｍａｂ−ＬＣ（２００μｇ）＋ｐｃＤＮＡ４−ｈｕＩＬ１０−Ｆｃ６（２００μｇ）
群４２：ｐｃＤＮＡ４−Ｃ−ｍａｂ−Ｆｃ９（２００μｇ）＋ｐｃＤＮＡ４−Ｃ−ｍａｂ−ＬＣ（２００μｇ）＋ｐｃＤＮＡ４−（ｈｕＩＬ１０）２−Ｆｃ６（２００μｇ）
群４３：ｐｃＤＮＡ４−Ｃ−ｍａｂ−Ｆｃ９（２００μｇ）＋ｐｃＤＮＡ４−Ｃ−ｍａｂ−ＬＣ（２００μｇ）＋ｐｃＤＮＡ４−ｈｕｓＩＬ２−Ｆｃ６（２００μｇ）
群４４：ｐｃＤＮＡ４−２８Ｈ１−Ｆｃ９（２００μｇ）＋ｐｃＤＮＡ４−２８Ｈ１−ＬＣ（２００μｇ）＋ｐｃＤＮＡ４−ｍｕＩＦＮａ４−Ｆｃ６（２００μｇ）
群４５：ｐｃＤＮＡ４−２８Ｈ１−Ｆｃ９（２００μｇ）＋ｐｃＤＮＡ４−２８Ｈ１−ＬＣ（２００μｇ）＋ｐｃＤＮＡ４−ｈｕＩＦＮａ２−Ｆｃ６（２００μｇ）
群４６：ｐｃＤＮＡ４−２８Ｈ１−Ｆｃ９（２００μｇ）＋ｐｃＤＮＡ４−２８Ｈ１−ＬＣ（２００μｇ）＋ｐｃＤＮＡ４−ｍｕＩＦＮｂ−Ｆｃ６（２００μｇ）
群４７：ｐｃＤＮＡ４−２８Ｈ１−Ｆｃ９（２００μｇ）＋ｐｃＤＮＡ４−２８Ｈ１−ＬＣ（２００μｇ）＋ｐｃＤＮＡ４−ｈｕＩＦＮｂ−Ｆｃ６（２００μｇ）
群４８：ｐｃＤＮＡ４−２８Ｈ１−Ｆｃ９（２００μｇ）＋ｐｃＤＮＡ４−２８Ｈ１−ＬＣ（２００μｇ）＋ｐｃＤＮＡ４−ｈｕＩＦＮＬ−Ｆｃ６（２００μｇ）
群４９：ｐｃＤＮＡ４−２８Ｈ１−Ｆｃ９（２００μｇ）＋ｐｃＤＮＡ４−２８Ｈ１−ＬＣ（２００μｇ）＋ｐｃＤＮＡ４−ｈｕＩＬ１０−Ｆｃ６（２００μｇ）
群５０：ｐｃＤＮＡ４−２８Ｈ１−Ｆｃ９（２００μｇ）＋ｐｃＤＮＡ４−２８Ｈ１−ＬＣ（２００μｇ）＋ｐｃＤＮＡ４−（ｈｕＩＬ１０）２−Ｆｃ６（２００μｇ）
群５１：ｐｃＤＮＡ４−２８Ｈ１−Ｆｃ９（２００μｇ）＋ｐｃＤＮＡ４−２８Ｈ１−ＬＣ（２００μｇ）＋ｐｃＤＮＡ４−ｈｕｓＩＬ２−Ｆｃ６（２００μｇ）
群５２：ｐｃＤＮＡ４−５Ｅ５−Ｆｃ９（２００μｇ）＋ｐｃＤＮＡ４−５Ｅ５−ＬＣ（２００μｇ）＋ｐｃＤＮＡ４−ｍｕＩＦＮａ４−Ｆｃ６（２００μｇ）
群５３：ｐｃＤＮＡ４−５Ｅ５−Ｆｃ９（２００μｇ）＋ｐｃＤＮＡ４−５Ｅ５−ＬＣ（２００μｇ）＋ｐｃＤＮＡ４−ｈｕＩＦＮａ２−Ｆｃ６（２００μｇ）
群５４：ｐｃＤＮＡ４−５Ｅ５−Ｆｃ９（２００μｇ）＋ｐｃＤＮＡ４−５Ｅ５−ＬＣ（２００μｇ）＋ｐｃＤＮＡ４−ｍｕＩＦＮｂ−Ｆｃ６（２００μｇ）
群５５：ｐｃＤＮＡ４−５Ｅ５−Ｆｃ９（２００μｇ）＋ｐｃＤＮＡ４−５Ｅ５−ＬＣ（２００μｇ）＋ｐｃＤＮＡ４−ｈｕＩＦＮｂ−Ｆｃ６（２００μｇ）
群５６：ｐｃＤＮＡ４−５Ｅ５−Ｆｃ９（２００μｇ）＋ｐｃＤＮＡ４−５Ｅ５−ＬＣ（２００μｇ）＋ｐｃＤＮＡ４−ｈｕＩＦＮＬ−Ｆｃ６（２００μｇ）
群５７：ｐｃＤＮＡ４−５Ｅ５−Ｆｃ９（２００μｇ）＋ｐｃＤＮＡ４−５Ｅ５−ＬＣ（２００μｇ）＋ｐｃＤＮＡ４−ｈｕＩＬ１０−Ｆｃ６（２００μｇ）
群５８：ｐｃＤＮＡ４−５Ｅ５−Ｆｃ９（２００μｇ）＋ｐｃＤＮＡ４−５Ｅ５−ＬＣ（２００μｇ）＋ｐｃＤＮＡ４−（ｈｕＩＬ１０）２−Ｆｃ６（２００μｇ）
群５９：ｐｃＤＮＡ４−５Ｅ５−Ｆｃ９（２００μｇ）＋ｐｃＤＮＡ４−５Ｅ５−ＬＣ（２００μｇ）＋ｐｃＤＮＡ４−ｈｕｓＩＬ２−Ｆｃ６（２００μｇ）
群６０：ｐｃＤＮＡ４−Ｅ−ｍａｂ−Ｆｃ９（２００μｇ）＋ｐｃＤＮＡ４−Ｅ−ｍａｂ−ＬＣ（２００μｇ）＋ｐｃＤＮＡ４−ｍｕＩＦＮａ４−Ｆｃ６（２００μｇ）
群６１：ｐｃＤＮＡ４−Ｅ−ｍａｂ−Ｆｃ９（２００μｇ）＋ｐｃＤＮＡ４−Ｅ−ｍａｂ−ＬＣ（２００μｇ）＋ｐｃＤＮＡ４−ｈｕＩＦＮａ２−Ｆｃ６（２００μｇ）
群６２：ｐｃＤＮＡ４−Ｅ−ｍａｂ−Ｆｃ９（２００μｇ）＋ｐｃＤＮＡ４−Ｅ−ｍａｂ−ＬＣ（２００μｇ）＋ｐｃＤＮＡ４−ｍｕＩＦＮｂ−Ｆｃ６（２００μｇ）
群６３：ｐｃＤＮＡ４−Ｅ−ｍａｂ−Ｆｃ９（２００μｇ）＋ｐｃＤＮＡ４−Ｅ−ｍａｂ−ＬＣ（２００μｇ）＋ｐｃＤＮＡ４−ｈｕＩＦＮｂ−Ｆｃ６（２００μｇ）
群６４：ｐｃＤＮＡ４−Ｅ−ｍａｂ−Ｆｃ９（２００μｇ）＋ｐｃＤＮＡ４−Ｅ−ｍａｂ−ＬＣ（２００μｇ）＋ｐｃＤＮＡ４−ｈｕＩＦＮＬ−Ｆｃ６（２００μｇ）
群６５：ｐｃＤＮＡ４−Ｅ−ｍａｂ−Ｆｃ９（２００μｇ）＋ｐｃＤＮＡ４−Ｅ−ｍａｂ−ＬＣ（２００μｇ）＋ｐｃＤＮＡ４−ｈｕＩＬ１０−Ｆｃ６（２００μｇ）
群６６：ｐｃＤＮＡ４−Ｅ−ｍａｂ−Ｆｃ９（２００μｇ）＋ｐｃＤＮＡ４−Ｅ−ｍａｂ−ＬＣ（２００μｇ）＋ｐｃＤＮＡ４−（ｈｕＩＬ１０）２−Ｆｃ６（２００μｇ）
群６７：ｐｃＤＮＡ４−Ｅ−ｍａｂ−Ｆｃ９（２００μｇ）＋ｐｃＤＮＡ４−Ｅ−ｍａｂ−ＬＣ（２００μｇ）＋ｐｃＤＮＡ４−ｈｕｓＩＬ２−Ｆｃ６（２００μｇ）
群６８：ｐｃＤＮＡ４−Ａ−ｍａｂ−Ｆｃ９（２００μｇ）＋ｐｃＤＮＡ４−Ａ−ｍａｂ−ＬＣ（２００μｇ）＋ｐｃＤＮＡ４−ｍｕＩＦＮａ４−Ｆｃ６（２００μｇ）
群６９：ｐｃＤＮＡ４−Ａ−ｍａｂ−Ｆｃ９（２００μｇ）＋ｐｃＤＮＡ４−Ａ−ｍａｂ−ＬＣ（２００μｇ）＋ｐｃＤＮＡ４−ｈｕＩＦＮａ２−Ｆｃ６（２００μｇ）
群７０：ｐｃＤＮＡ４−Ａ−ｍａｂ−Ｆｃ９（２００μｇ）＋ｐｃＤＮＡ４−Ａ−ｍａｂ−ＬＣ（２００μｇ）＋ｐｃＤＮＡ４−ｍｕＩＦＮｂ−Ｆｃ６（２００μｇ）
群７１：ｐｃＤＮＡ４−Ａ−ｍａｂ−Ｆｃ９（２００μｇ）＋ｐｃＤＮＡ４−Ａ−ｍａｂ−ＬＣ（２００μｇ）＋ｐｃＤＮＡ４−ｈｕＩＦＮｂ−Ｆｃ６（２００μｇ）
群７２：ｐｃＤＮＡ４−Ａ−ｍａｂ−Ｆｃ９（２００μｇ）＋ｐｃＤＮＡ４−Ａ−ｍａｂ−ＬＣ（２００μｇ）＋ｐｃＤＮＡ４−ｈｕＩＦＮＬ−Ｆｃ６（２００μｇ）
群７３：ｐｃＤＮＡ４−Ａ−ｍａｂ−Ｆｃ９（２００μｇ）＋ｐｃＤＮＡ４−Ａ−ｍａｂ−ＬＣ（２００μｇ）＋ｐｃＤＮＡ４−ｈｕＩＬ１０−Ｆｃ６（２００μｇ）
群７４：ｐｃＤＮＡ４−Ａ−ｍａｂ−Ｆｃ９（２００μｇ）＋ｐｃＤＮＡ４−Ａ−ｍａｂ−ＬＣ（２００μｇ）＋ｐｃＤＮＡ４−（ｈｕＩＬ１０）２−Ｆｃ６（２００μｇ）
群７５：ｐｃＤＮＡ４−Ａ−ｍａｂ−Ｆｃ９（２００μｇ）＋ｐｃＤＮＡ４−Ａ−ｍａｂ−ＬＣ（２００μｇ）＋ｐｃＤＮＡ４−ｈｕｓＩＬ２−Ｆｃ６（２００μｇ）
【０５３４】
各群のプラスミド混合物を６ｍＬのＦｒｅｅｓｔｙｌｅ２９３培地で希釈して、ＰＥＩ（ポリエチレンイミン）溶液を加えてトランスフェクトを行った。各群のプラスミド／ＰＥＩ混合物をそれぞれ細胞懸濁液６００ｍＬに加えて、３７℃、１０％ＣＯ２、９０ｒｐｍにおいて培養し、培地に５０μｇ／Ｌ  ＩＧＦ−１（インスリン様成長因子Ｉ）を補充した。４時間後に、培養物にＥＸ２９３培地６００ｍＬ、２ｍＭのグルタミン及び５０μｇ／ＬのＩＧＦ−１を補充して、１３５ｒｐｍにおいて培養した。２４時間後に、３．８ｍＭのＶＰＡを加えた。５〜６日後に、５×１２００ｍＬの細胞上清を回収し、プロテインＡアフィニティークロマトグラフィーにより粗タンパク質性ヘテロ二量体試料を精製した。ＳＤＳ−ＰＡＧＥにより得た試料を検出して、目的バンドが明確に確認された。当該実施例を図２に示す。
【０５３５】
図２Ａは、Ｔｍａｂ−（ｈｕＩＬ１０）２−６−９のＳＤＳ−ＰＡＧＥ分析結果を示す。レーン２にはタンパク質マーカー（ＭＷマーカー２６６１９）が、レーン１には還元されたＴｍａｂ−（ｈｕＩＬ１０）２−６−９ヘテロ二量体タンパク質が、レーン３には非還元Ｔｍａｂ−（ｈｕＩＬ１０）２−６−９ヘテロ二量体タンパク質が装填された。Ｔ−ＬＣの分子量は約２５ＫＤ、Ｔ−Ｆｃ９の分子量は約５０ＫＤ、（ｈｕＩＬ１０）２−Ｆｃ６の分子量は約６５ＫＤ、Ｔｍａｂ−（ｈｕＩＬ１０）２−６−９ヘテロ二量体タンパク質の分子量は約１４０ＫＤである。
【０５３６】
図２Ｂは、Ｍａｂ８０６−（ｈｕＩＬ１０）２−６−９のＳＤＳ−ＰＡＧＥ分析結果を示す。レーン２にはタンパク質マーカー（ＭＷマーカー２６６１９）が、レーン１には還元されたＭａｂ８０６−（ｈｕＩＬ１０）２−６−９ヘテロ二量体タンパク質が、レーン３には非還元Ｍａｂ８０６−（ｈｕＩＬ１０）２−６−９ヘテロ二量体タンパク質が装填された。Ｍａｂ８０６−ＬＣの分子量は約２５ＫＤ、Ｍａｂ８０６−Ｆｃ９の分子量は約５０ＫＤ、（ｈｕＩＬ１０）２−Ｆｃ６の分子量は約６５ＫＤ、Ｍａｂ８０６−（ｈｕＩＬ１０）２−６−９ヘテロ二量体タンパク質の分子量は約１４０ＫＤである。
【０５３７】
図２Ｃは、Ｅｒｂ−ｍｕＩＦＮａ４−６−９のＳＤＳ−ＰＡＧＥ分析結果を示す。レーン２にはタンパク質マーカー（ＭＷマーカー２６６１９）が、レーン１には還元されたＥｒｂ−ｍｕＩＦＮａ４−６−９ヘテロ二量体タンパク質が、レーン３には非還元Ｅｒｂ−ｍｕＩＦＮａ４−６−９ヘテロ二量体タンパク質が装填された。Ｅｒｂ−ＬＣの分子量は約２５ＫＤ、Ｅｒｂ−Ｆｃ９の分子量は約５０ＫＤ、ｍｕＩＦＮａ４−Ｆｃ６の分子量は約４５ＫＤ、Ｅｒｂ−ｍｕＩＦＮａ４−６−９ヘテロ二量体タンパク質の分子量は約１２０ＫＤである。
【０５３８】
図２Ｄは、Ｅｒｂ−ｈｕｓＩＬ２−６−９のＳＤＳ−ＰＡＧＥ分析結果を示す。レーン２にはタンパク質マーカー（ＭＷマーカー２６６１９）が、レーン１には還元されたＥｒｂ−ｈｕｓＩＬ２−６−９ヘテロ二量体タンパク質が、レーン３には非還元Ｅｒｂ−ｈｕｓＩＬ２−６−９ヘテロ二量体タンパク質が装填された。Ｅｒｂ−ＬＣの分子量は約２５ＫＤ、Ｅｒｂ−Ｆｃ９の分子量は約５０ＫＤ、ｈｕｓＩＬ２−Ｆｃ６の分子量は約４１ＫＤ、Ｅｒｂ−ｈｕｓＩＬ２−６−９ヘテロ二量体タンパク質の分子量は約１２０ＫＤである。
【０５３９】
図２ＥはＥｒｂ−（ｈｕＩＬ１０）２−６−９のＳＤＳ−ＰＡＧＥ分析結果を示す。レーン２にはタンパク質マーカー（ＭＷマーカー２６６１９）が、レーン１には還元されたＥｒｂ−（ｈｕＩＬ１０）２−６−９ヘテロ二量体タンパク質が、レーン３には非還元Ｅｒｂ−（ｈｕＩＬ１０）２−６−９ヘテロ二量体タンパク質が装填された。Ｅｒｂ−ＬＣの分子量は約２５ＫＤ、Ｅｒｂ−Ｆｃ９の分子量は約５０ＫＤ、（ｈｕＩＬ１０）２−Ｆｃ６の分子量は約６５ＫＤ、Ｅｒｂ−（ｈｕＩＬ１０）２−６−９ヘテロ二量体タンパク質の分子量は約１４０ＫＤである。
【０５４０】
図２ＦはＴｍａｂ−ｈｕｓＩＬ２−６−９のＳＤＳ−ＰＡＧＥ分析結果を示す。レーン２にはタンパク質マーカー（ＭＷマーカー２６６１９）が、レーン１には還元されたＴｍａｂ−ｈｕｓＩＬ２−６−９ヘテロ二量体タンパク質が、レーン３には非還元Ｔｍａｂ−ｈｕｓＩＬ２−６−９ヘテロ二量体タンパク質が装填された。Ｔ−ＬＣの分子量は約２５ＫＤ、Ｔ−Ｆｃ９の分子量は約５０ＫＤ、ｈｕｓＩＬ２−Ｆｃ６の分子量は約４１ＫＤ、Ｔｍａｂ−ｈｕｓＩＬ２−６−９ヘテロ二量体タンパク質の分子量は約１１６ＫＤである。
【０５４１】
図２ＧはＥｒｂ−ｈｕＩＦＮａ２−６−９のＳＤＳ−ＰＡＧＥ分析結果を示す。レーン２にはタンパク質マーカー（ＭＷマーカー２６６１９）が、レーン１には還元されたＥｒｂ−ｈｕＩＦＮａ２−６−９ヘテロ二量体タンパク質が、レーン３には非還元Ｅｒｂ−ｈｕＩＦＮａ２−６−９ヘテロ二量体タンパク質が装填された。Ｅｒｂ−ＬＣの分子量は約２５ＫＤ、Ｅｒｂ−Ｆｃ９の分子量は約５０ＫＤ、ｈｕＩＦＮａ２−Ｆｃ６の分子量は約４５ＫＤ、Ｅｒｂ−ｈｕＩＦＮａ２−６−９ヘテロ二量体タンパク質の分子量は約１２０ＫＤである。
【０５４２】
同様のように、本発明に係る他のタンパク質性ヘテロ二量体の発現及び精製の結果も、ＳＤＳ−ＰＡＧＥにより検証・確認された。
【０５４３】
このように得たタンパク質性ヘテロ二量体を、（群１〜群７５それぞれ）Ｅｒｂ−（ｈｕＩＬ１０）２−ＫＨ、Ｅｒｂ−（ｈｕＩＬ１０）２−６−９、Ｅｒｂ−（ｈｕＩＬ１０）２−９−６、Ｅｒｂ−ｍｕＩＦＮａ４−６−９、Ｅｒｂ−ｈｕＩＦＮａ２−６−９、Ｅｒｂ−ｍｕＩＦＮｂ−６−９、Ｅｒｂ−ｈｕＩＦＮｂ−６−９、Ｅｒｂ−ｈｕＩＦＮＬ−６−９、Ｅｒｂ−ｈｕＩＬ１０−６−９、Ｅｒｂ−ｈｕｓＩＬ２−６−９、Ｅｒｂ−ｈｕｓＩＬ２−ＫＨ、Ｍａｂ８０６−ｍｕＩＦＮａ４−６−９、Ｍａｂ８０６−ｈｕＩＦＮａ２−６−９、Ｍａｂ８０６−ｍｕＩＦＮｂ−６−９、Ｍａｂ８０６−ｈｕＩＦＮｂ−６−９、Ｍａｂ８０６−ｈｕＩＦＮＬ−６−９、Ｍａｂ８０６−ｈｕＩＬ１０−６−９、Ｍａｂ８０６−ｈｕｓＩＬ２−６−９、Ｍａｂ８０６−（ｈｕＩＬ１０）２−６−９、Ｔｍａｂ−ｍｕＩＦＮａ４−６−９、Ｔｍａｂ−ｈｕＩＦＮａ２−６−９、Ｔｍａｂ−ｍｕＩＦＮｂ−６−９、Ｔｍａｂ−ｈｕＩＦＮｂ−６−９、Ｔｍａｂ−ｈｕＩＦＮＬ−６−９、Ｔｍａｂ−ｈｕＩＬ１０−６−９、Ｔｍａｂ−ｈｕｓＩＬ２−６−９、Ｔｍａｂ−（ｈｕＩＬ１０）２−６−９、Ｐｍａｂ−ｍｕＩＦＮａ４−６−９、Ｐｍａｂ−ｈｕＩＦＮａ２−６−９、Ｐｍａｂ−ｍｕＩＦＮｂ−６−９、Ｐｍａｂ−ｈｕＩＦＮｂ−６−９、Ｐｍａｂ−ｈｕＩＦＮＬ−６−９、Ｐｍａｂ−ｈｕＩＬ１０−６−９、Ｐｍａｂ−ｈｕｓＩＬ２−６−９、Ｐｍａｂ−（ｈｕＩＬ１０）２−６−９、Ｃ−ｍａｂ−ｍｕＩＦＮａ４−６−９、Ｃ−ｍａｂ−ｈｕＩＦＮａ２−６−９、Ｃ−ｍａｂ−ｍｕＩＦＮｂ−６−９、Ｃ−ｍａｂ−ｈｕＩＦＮｂ−６−９、Ｃ−ｍａｂ−ｈｕＩＦＮＬ−６−９、Ｃ−ｍａｂ−ｈｕＩＬ１０−６−９、Ｃ−ｍａｂ−ｈｕｓＩＬ２−６−９、Ｃ−ｍａｂ−（ｈｕＩＬ１０）２−６−９、２８Ｈ１−ｍｕＩＦＮａ４−６−９、２８Ｈ１−ｈｕＩＦＮａ２−６−９、２８Ｈ１−ｍｕＩＦＮｂ−６−９、２８Ｈ１−ｈｕＩＦＮｂ−６−９、２８Ｈ１−ｈｕＩＦＮＬ−６−９、２８Ｈ１−ｈｕＩＬ１０−６−９、２８Ｈ１−ｈｕｓＩＬ２−６−９、２８Ｈ１−（ｈｕＩＬ１０）２−６−９、５Ｅ５−ｍｕＩＦＮａ４−６−９、５Ｅ５−ｈｕＩＦＮａ２−６−９、５Ｅ５−ｍｕＩＦＮｂ−６−９、５Ｅ５−ｈｕＩＦＮｂ−６−９、５Ｅ５−ｈｕＩＦＮＬ−６−９、５Ｅ５−ｈｕＩＬ１０−６−９、５Ｅ５−ｈｕｓＩＬ２−６−９、５Ｅ５−（ｈｕＩＬ１０）２−６−９、Ｅ−ｍａｂ−ｍｕＩＦＮａ４−６−９、Ｅ−ｍａｂ−ｈｕＩＦＮａ２−６−９、Ｅ−ｍａｂ−ｍｕＩＦＮｂ−６−９、Ｅ−ｍａｂ−ｈｕＩＦＮｂ−６−９、Ｅ−ｍａｂ−ｈｕＩＦＮＬ−６−９、Ｅ−ｍａｂ−ｈｕＩＬ１０−６−９、Ｅ−ｍａｂ−ｈｕｓＩＬ２−６−９、Ｅ−ｍａｂ−（ｈｕＩＬ１０）２−６−９、Ａ−ｍａｂ−ｍｕＩＦＮａ４−６−９、Ａ−ｍａｂ−ｈｕＩＦＮａ２−６−９、Ａ−ｍａｂ−ｍｕＩＦＮｂ−６−９、Ａ−ｍａｂ−ｈｕＩＦＮｂ−６−９、Ａ−ｍａｂ−ｈｕＩＦＮＬ−６−９、Ａ−ｍａｂ−ｈｕＩＬ１０−６−９、Ａ−ｍａｂ−ｈｕｓＩＬ２−６−９及びＡ−ｍａｂ−（ｈｕＩＬ１０）２−６−９と命名した。
【０５４４】
実施例４：タンパク質性ヘテロ二量体の形成
４．１  ヘテロ二量体Ｅｒｂ−（ｈｕＩＬ１０）２−６−９と参照タンパク質Ｅｒｂ−（ｈｕＩＬ１０）２−ＫＨとのヘテロ二量体形成の比較
【０５４５】
トランスフェクト実施２日前、２×１００ｍＬ懸濁液で適応させた一過性トランスフェクション用のＨＥＫ２９３細胞（ＡＴＣＣ提供、ＣＲＬ−１５７３（登録商標））を調製し、０．８×１０６細胞／ｍＬの密度で細胞を接種した。２日後、細胞懸濁液を遠心分離して、１００ｍＬのＦｒｅｅｓｔｙｌｅ２９３培地に再懸濁させた。発現プラスミドを「Ｅｒｂ−（ｈｕＩＬ１０）２−６−９群」及び「Ｅｒｂ−（ｈｕＩＬ１０）２−ＫＨ群」と分け、Ｅｒｂ−（ｈｕＩＬ１０）２−６−９群は、ｐｃＤＮＡ４−Ｅｒｂ−Ｆｃ９（３３μｇ）＋ｐｃＤＮＡ４−Ｅｒｂ−ＬＣ（３３μｇ）＋ｐｃＤＮＡ４−（ｈｕＩＬ１０）２−Ｆｃ６（３３μｇ）を含み、Ｅｒｂ−（ｈｕＩＬ１０）２−ＫＨ群は、ｐｃＤＮＡ４−Ｅｒｂ−ノブ（３３μｇ）＋ｐｃＤＮＡ４−Ｅｒｂ−ＬＣ（３３μｇ）＋ｐｃＤＮＡ４−（ｈｕＩＬ１０）２−Ｆｃ−ホール（３３μｇ）を含む。各群のプラスミド混合物を１ｍＬのＦｒｅｅｓｔｙｌｅ２９３培地で希釈して、ＰＥＩ（ポリエチレンイミン）溶液を加えてトランスフェクトを行った。各群プラスミド／ＰＥＩ混合物をそれぞれ細胞懸濁液１００ｍＬに加えて、３７℃、１０％ＣＯ２、９０ｒｐｍにおいて培養し、培地に５０μｇ／ＬのＩＧＦ−１を補充した。４時間後に、培養物に１００ｍＬのＥＸ２９３培地、２ｍＭのグルタミン及び５０μｇ／ＬのＩＧＦ−１を補充して、１３５ｒｐｍにおいて培養した。２４時間後に、３．８ｍＭのＶＰＡを加えた。５〜６日後に、一過性発現による培養上清を回収し、プロテインＡアフィニティークロマトグラフィーを利用して対応するタンパク質性ヘテロ二量体を含む発現産物を予備精製した。Ｅｒｂ−（ｈｕＩＬ１０）２−６−９群に由来する予備精製された発現産物はそれぞれ異なるパーセンテージで存在するホモ二量体タンパク質Ｅｒｂ−Ｆｃ９／Ｅｒｂ−Ｆｃ９、ホモ二量体タンパク質（ｈｕＩＬ１０）２−Ｆｃ６／（ｈｕＩＬ１０）２−Ｆｃ６及びヘテロ二量体タンパク質Ｅｒｂ−Ｆｃ９／（ｈｕＩＬ１０）２−Ｆｃ６を含む。Ｅｒｂ−（ｈｕＩＬ１０）２−ＫＨ群に由来する予備精製された発現産物はそれぞれ異なるパーセンテージで存在するホモ二量体タンパク質Ｅｒｂ−ノブ／Ｅｒｂ−ノブ、ホモ二量体タンパク質（ｈｕＩＬ１０）２−ホール／（ｈｕＩＬ１０）２−ホール及びヘテロ二量体タンパク質Ｅｒｂ−ノブ／（ｈｕＩＬ１０）２−ホールを含む。これらのタンパク質（即ちホモ二量体及びヘテロ二量体）は分子量が異なるため、図３に示すように、非還元ＳＤＳ−ＰＡＧＥゲルに反映された対応するバンド強度によりその対応するパーセンテージを決定することができる。レーン１には抗体対照（エルビタックス）が、レーン２にはＥｒｂ−（ｈｕＩＬ１０）２−ＫＨ群の発現産物が、レーン３にはＥｒｂ−（ｈｕＩＬ１０）２−６−９群の発現産物が装填された。レーン４及びレーン６は空白とし、レーン５には標準タンパク質マーカーが装填された。相対的バンド強度を定量化し、結果を次の表７にまとめた。エルビタックス対照の強度は９０．９％である。
【０５４６】
【表７】
2020527939.tif 000009
【０５４７】
従って、ノブアンドホール修飾を含む対応するタンパク質性ヘテロ二量体と比較して、本発明に係るタンパク質性ヘテロ二量体に含まれた修飾は、ヘテロ二量体の形成をより効果的に促進させる。
【０５４８】
４．２  ヘテロ二量体Ｅｒｂ−ｈｕｓＩＬ２−６−９と参照タンパク質Ｅｒｂ−ｈｕｓＩＬ２−ＫＨとのヘテロ二量体形成の比較
【０５４９】
トランスフェクト実施２日前、２×１００ｍＬの懸濁液で適応させた一過性トランスフェクション用ＨＥＫ２９３細胞（ＡＴＣＣ提供、ＣＲＬ−１５７３（登録商標））を調製し、０．８×１０６細胞／ｍＬの密度で細胞を接種した。２日後、細胞懸濁液を遠心分離して、１００ｍＬのＦｒｅｅｓｔｙｌｅ２９３培地に再懸濁させた。発現プラスミドを「Ｅｒｂ−ｈｕｓＩＬ２−６−９群」及び「Ｅｒｂ−ｈｕｓＩＬ２−ＫＨ群」と分け、Ｅｒｂ−ｈｕｓＩＬ２−６−９群は、ｐｃＤＮＡ４−Ｅｒｂ−Ｆｃ９（３３μｇ）＋ｐｃＤＮＡ４−Ｅｒｂ−ＬＣ（３３μｇ）＋ｐｃＤＮＡ４−ｈｕｓＩＬ２−Ｆｃ６（３３μｇ）を含み、Ｅｒｂ−ｈｕｓＩＬ２−ＫＨ群は、ｐｃＤＮＡ４−Ｅｒｂ−ノブ（３３μｇ）＋ｐｃＤＮＡ４−Ｅｒｂ−ＬＣ（３３μｇ）＋ｐｃＤＮＡ４−ｈｕｓＩＬ２−Ｆｃ−ホール（３３μｇ）を含む。各群のプラスミド混合物を１ｍＬのＦｒｅｅｓｔｙｌｅ２９３培地で希釈して、ＰＥＩ（ポリエチレンイミン）溶液を加えてトランスフェクトを行った。各群プラスミド／ＰＥＩ混合物をそれぞれ１００ｍＬの細胞懸濁液に加えて、３７℃、１０％ＣＯ２、９０ｒｐｍにおいて培養し、培地に５０μｇ／ＬのＩＧＦ−１を補充した。４時間後に、培養物にＥＸ２９３培地１００ｍＬ、２ｍＭのグルタミン及び５０μｇ／ＬのＩＧＦ−１を補充して、１３５ｒｐｍにおいて培養した。２４時間後に、３．８ｍＭのＶＰＡを加えた。５〜６日後に、一過性発現による培養上清を回収し、プロテインＡアフィニティークロマトグラフィーを利用して対応するタンパク質性ヘテロ二量体を含む発現産物を予備精製した。Ｅｒｂ−ｈｕｓＩＬ２−６−９群に由来する予備精製された発現産物はそれぞれ異なるパーセンテージで存在するホモ二量体タンパク質Ｅｒｂ−Ｆｃ９／Ｅｒｂ−Ｆｃ９、ホモ二量体タンパク質ｈｕｓＩＬ２−Ｆｃ６／ｈｕｓＩＬ２−Ｆｃ６及びヘテロ二量体タンパク質Ｅｒｂ−Ｆｃ９／ｈｕｓＩＬ２−Ｆｃ６を含む。Ｅｒｂ−ｈｕｓＩＬ２−ＫＨ群に由来する予備精製された発現産物は異なるパーセンテージで存在するホモ二量体タンパク質Ｅｒｂ−ノブ／Ｅｒｂ−ノブ、ホモ二量体タンパク質ｈｕｓＩＬ２−ホール／ｈｕｓＩＬ２−ホール及びヘテロ二量体タンパク質Ｅｒｂ−ノブ／ｈｕｓＩＬ２−ホールを含む。これらのタンパク質（即ちホモ二量体及びヘテロ二量体）は分子量が異なるため、図３に示すように、非還元ＳＤＳ−ＰＡＧＥゲルに反映された対応するバンド強度によりその対応するパーセンテージを決定することができる。レーン７には抗体対照（エルビタックス）が、レーン８にはＥｒｂ−ｈｕｓＩＬ２−ＫＨ群の発現産物が、レーン９にはＥｒｂ−ｈｕｓＩＬ２−６−９群の発現産物が装填された。レーン４及びレーン６は空白とし、レーン５には標準タンパク質マーカーが装填された。相対的バンド強度を定量化し、結果を次の表８にまとめた。エルビタックス対照の強度は９０．３％である。
【０５５０】
【表８】
2020527939.tif 000010
【０５５１】
従って、ノブアンドホール修飾を含む対応するタンパク質性ヘテロ二量体と比較して、本発明に係るタンパク質性ヘテロ二量体に含まれた修飾は、ヘテロ二量体の形成をより効果的に促進させる。
【０５５２】
実施例５：異なる修飾を有する発現産物の比較
実施例４から分かるように、ノブアンドホール修飾を含む対応するタンパク質性ヘテロ二量体と比較して、本発明に係るタンパク質性ヘテロ二量体に含まれた修飾は、ヘテロ二量体の形成をより効果的に促進させる。
【０５５３】
第１の修飾及び第２の修飾の作用をさらに検出するために、実施例３に記載のとおり、次に示す群の発現産物を比較した。
群２：ｐｃＤＮＡ４−Ｅｒｂ−Ｆｃ６＋ｐｃＤＮＡ４−Ｅｒｂ−ＬＣ＋ｐｃＤＮＡ４−（ｈｕＩＬ１０）２−Ｆｃ９、及び
群３：ｐｃＤＮＡ４−Ｅｒｂ−Ｆｃ９＋ｐｃＤＮＡ４−Ｅｒｂ−ＬＣ＋ｐｃＤＮＡ４−（ｈｕＩＬ１０）２−Ｆｃ６。
【０５５４】
簡単に説明すると、トランスフェクト実施２日前、２×１００ｍＬの懸濁液で適応させた一過性トランスフェクション用ＨＥＫ２９３細胞（ＡＴＣＣ提供、ＣＲＬ−１５７３（登録商標））を調製し、０．８×１０６細胞／ｍＬの密度で細胞を接種した。２日後、細胞懸濁液を遠心分離して、１００ｍＬのＦｒｅｅｓｔｙｌｅ２９３培地に再懸濁させた。発現プラスミドを「Ｅｒｂ−（ｈｕＩＬ１０）２−６−９群」及び「Ｅｒｂ−（ｈｕＩＬ１０）２−９−６群」と分け、Ｅｒｂ−（ｈｕＩＬ１０）２−６−９群は、ｐｃＤＮＡ４−Ｅｒｂ−ＦＣ９（３３μｇ）＋ｐｃＤＮＡ４−ＥＲＢ−ＬＣ（３３μｇ）＋ｐｃＤＮＡ４−（ｈｕＩＬ１０）２−ＦＣ６（３３μｇ）を含み、Ｅｒｂ−（ｈｕＩＬ１０）２−９−６群は、ｐｃＤＮＡ４−Ｅｒｂ−Ｆｃ６（３３μｇ）＋ｐｃＤＮＡ４−Ｅｒｂ−ＬＣ（３３μｇ）＋ｐｃＤＮＡ４−（ｈｕＩＬ１０）２−Ｆｃ９（３３μｇ）を含む。各群のプラスミド混合物を１ｍＬのＦｒｅｅｓｔｙｌｅ２９３培地で希釈して、ＰＥＩ（ポリエチレンイミン）溶液を加えてトランスフェクトを行った。各群プラスミド／ＰＥＩ混合物をそれぞれ１００ｍＬの細胞懸濁液に加えて、３７℃、１０％ＣＯ２、９０ｒｐｍにおいて培養し、培地に５０μｇ／ＬのＩＧＦ−１を補充した。４時間後に、培養物にＥＸ２９３培地１００ｍＬ、２ｍＭのグルタミン及び５０μｇ／ＬのＩＧＦ−１を補充して、１３５ｒｐｍにおいて培養した。２４時間後に、３．８ｍＭのＶＰＡを加えた。５〜６日後に、一過性発現による培養上清を回収し、プロテインＡアフィニティークロマトグラフィーを利用して対応するタンパク質性ヘテロ二量体を含む発現産物を予備精製した。Ｅｒｂ−（ｈｕＩＬ１０）２−６−９群に由来する予備精製された発現産物は、それぞれ異なるパーセンテージで存在するホモ二量体タンパク質Ｅｒｂ−Ｆｃ９／Ｅｒｂ−Ｆｃ９（即ちＦｃ９ホモ二量体）、ホモ二量体タンパク質（ｈｕＩＬ１０）２−Ｆｃ６／（ｈｕＩＬ１０）２−Ｆｃ６（即ちＦｃ６ホモ二量体）及びヘテロ二量体タンパク質Ｅｒｂ−Ｆｃ９／（ｈｕＩＬ１０）２−Ｆｃ６を含む。Ｅｒｂ−（ｈｕＩＬ１０）２−９−６群に由来する予備精製された発現産物はそれぞれ異なるパーセンテージで存在するホモ二量体タンパク質Ｅｒｂ−Ｆｃ６／Ｅｒｂ−Ｆｃ６（即ちＦｃ６ホモ二量体）、ホモ二量体タンパク質（ｈｕＩＬ１０）２−Ｆｃ９／（ｈｕＩＬ１０）２−Ｆｃ９（即ちＦｃ９ホモ二量体）及びヘテロ二量体タンパク質Ｅｒｂ−Ｆｃ６／（ｈｕＩＬ１０）２−Ｆｃ９を含む。これらのタンパク質（即ちホモ二量体及びヘテロ二量体）は分子量が異なるため、図４に示すように、非還元ＳＤＳ−ＰＡＧＥゲルに反映された対応するバンド強度によりその対応するパーセンテージを決定することができる。レーン１には標準タンパク質マーカーが、レーン２にはＥｒｂ−（ｈｕＩＬ１０）２−６−９群の発現産物が、レーン３にはＥｒｂ−（ｈｕＩＬ１０）２−９−６群の発現産物が装填された。図４から分かるように、レーン２において、約８５ＫＤのバンドに示されるように（Ｅｒｂ−Ｆｃ９／Ｅｒｂ−Ｆｃ９ホモ二量体は非常に不安定で、分子量が約８５ＫＤの単量体に解離しやすい）、形成されたホモ二量体（即ちタンパク質���合物中の望ましくない不純物）の大半はＥｒｂ−Ｆｃ９／Ｅｒｂ−Ｆｃ９ホモ二量体（即ちＦｃ９ホモ二量体）である。興味深いことに、レーン３において、５０ＫＤ〜８５ＫＤの間のバンドに示されるように（（ｈｕＩＬ１０）２−Ｆｃ９／（ｈｕＩＬ１０）２−Ｆｃ９ホモ二量体は非常に不安定で、分子量が５０ＫＤ〜８５ＫＤの単量体に解離しやすい）、形成されたホモ二量体（即ちタンパク質混合物中の望ましくない不純物）の大半は（ｈｕＩＬ１０）２−Ｆｃ９／（ｈｕＩＬ１０）２−Ｆｃ９ホモ二量体（即ちＦｃ９ホモ二量体）である。従って、Ｅｒｂ−Ｆｃ９／Ｅｒｂ−Ｆｃ９ホモ二量体の形成はＥｒｂ部分ではなくＦｃ９部分によるという傾向にある。
【０５５５】
従って、Ｆｃ９領域を含むタンパク質性ヘテロ二量体のメンバーは、望ましくないホモ二量体不純物の形成につながる。そのため、本発明に係るタンパク質性ヘテロ二量体において、免疫調節物質（例えば、サイトカイン）をＦｃ９ドメイン（即ち第１のＦｃ領域）ではなくＦｃ６ドメイン（即ち第２のＦｃ領域）と融合させると有利である。
【０５５６】
実施例６：タンパク質性ヘテロ二量体と対応する標的との結合
【０５５７】
６．１  Ｅｒｂ−インターフェロンタンパク質性ヘテロ二量体とＥＧＦＲとの結合
ヒト扁平上皮癌Ａ４３１細胞株を使用して、Ｅｒｂ−インターフェロンタンパク質性ヘテロ二量体とＥＧＦＲとの結合を検出した。本発明に係るＥｒｂ−インターフェロンタンパク質性ヘテロ二量体（又は対照Ｅｒｂ抗体（エルビタックス、メルク社提供））及び抗ヒトＩｇＧ  Ｆｃ特異性ＰＥ（ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ：１２−４９９８−８２）二次抗体を連続希釈したものを細胞に順に加えて、フローサイトメトリー分析を行い、タンパク質濃度及びＰＥチャネルに由来する中程度の蛍光強度（ＭＦＩ）により用量−効果曲線を描画した。図５に示すように、タンパク質性ヘテロ二量体Ｅｒｂ−ｈｕＩＦＮａ２−６−９は対照抗体セツキシマブ（エルビタックス）と類似する方式で標的ＥＧＦＲと特異的に結合した。タンパク質性ヘテロ二量体は１つのＥＧＦＲ結合部分だけを含むため、そのＥＣ５０は２つのＥＧＦＲ結合部分を含む対照抗体セツキシマブのＥＣ５０より高い。
【０５５８】
また、バイオレイヤー干渉法（ＢＬＩ）により、対照抗体セツキシマブと比較して、Ｅｒｂ−ｈｕＩＦＮａ２−６−９のその標的ＥＧＦＲに対する結合親和性を検出した。Ｏｃｔｅｃｔ  Ｋ２を使用して実験を行った。プロテインＡバイオセンサ及びＥＧＦＲ−Ｈｉｓタンパク質を使用した。図６はＥｒｂ−ｈｕＩＦＮａ２−６−９及びセツキシマブそれぞれのＥＧＦＲ−Ｈｉｓに対する結合親和性を示す。結果により、Ｅｒｂ−ｈｕＩＦＮａ２−６−９のＥＧＦＲ−Ｈｉｓに対する結合親和性は対照抗体セツキシマブの結合親和性と有意差がないことが判明された。
【０５５９】
６．２  Ｅｒｂ−インターロイキンタンパク質性ヘテロ二量体とＥＧＦＲとの結合
ヒト扁平上皮癌Ａ４３１細胞株を使用して、Ｅｒｂ−インターロイキンタンパク質性ヘテロ二量体とＥＧＦＲとの結合を検出した。本発明に係るＥｒｂ−インターロイキンタンパク質性ヘテロ二量体（又は対照Ｅｒｂ抗体（エルビタックス、メルク社提供））及び抗ヒトＩｇＧ  Ｆｃ特異性ＰＥ（ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ：１２−４９９８−８２）二次抗体を連続希釈したものを細胞に加えて、フローサイトメトリー分析を行い、タンパク質濃度及びＰＥチャネルに由来する中程度の蛍光強度（ＭＦＩ）により用量−効果曲線を描画した。図５に示すように、タンパク質性ヘテロ二量体Ｅｒｂ−（ｈｕＩＬ１０）２−６−９は対照抗体セツキシマブ類似する方式で標的ＥＧＦＲと特異的に結合した。タンパク質性ヘテロ二量体は１つのＥＧＦＲ結合部分だけを含むため、そのＥＣ５０は２つのＥＧＦＲ結合部分を含む対照抗体セツキシマブのＥＣ５０より高い。
【０５６０】
また、バイオレイヤー干渉法（ＢＬＩ）により、対照抗体セツキシマブと比較して、Ｅｒｂ−（ｈｕＩＬ１０）２−６−９のその標的ＥＧＦＲに対する結合親和性を検出した。Ｏｃｔｅｃｔ  Ｋ２を使用して実験を行った。プロテインＡバイオセンサ及びＥＧＦＲ−Ｈｉｓタンパク質を使用した。Ｅｒｂ−（ｈｕＩＬ１０）２−６−９及びセツキシマブそれぞれのＥＧＦＲ−Ｈｉｓに対する結合親和性を図６に示す。結果により、Ｅｒｂ−（ｈｕＩＬ１０）２−６−９−９のＥＧＦＲ−Ｈｉｓに対する結合親和性は対照セツキシマブの結合親和性と有意差がないことが判明された。
【０５６１】
６．３  Ｍａｂ８０６−インターフェロン及びＭａｂ８０６−インターロイキンタンパク質性ヘテロ二量体とＥＧＦＲとの結合
ヒトＥＧＦＲｖＩＩＩを安定的に発現させるマウス大腸癌細胞株（即ちＭＣ３８細胞株）を使用してＭａｂ８０６−ｈｕＩＦＮａ２−６−９及びＭａｂ８０６−（ｈｕＩＬ１０）２−６−９とＥＧＦＲＶＩＩＩとの結合を検出した。Ｍａｂ８０６はＥＧＦＲｖＩＩＩ変異体と結合する抗体であるが、低親和性で野生型ＥＧＦＲとも結合する。フローサイトメトリーを行って、結果を図７に示す。図７により、Ｍａｂ８０６−ｈｕＩＦＮａ２−６−９及びＭａｂ８０６−（ｈｕＩＬ１０）２−６−９はＭＣ３８細胞に発現されたＥＧＦＲｖＩＩＩと結合したことが判明された。
【０５６２】
６．４  Ｔｍａｂ−インターロイキンタンパク質性ヘテロ二量体とＨｅｒ２との結合
同様のように、ヒトＨｅｒ２を安定的に発現させるマウス大腸癌細胞株（即ちＭＣ３８細胞株）及びヒトＨｅｒ２を安定的に発現させる黒色腫細胞株（即ちＢ１６細胞株）を使用して実験を行って、Ｔｍａｂ−（ｈｕＩＬ１０）２−６−９ヘテロ二量体とＨｅｒ２との結合を検出した。結果をそれぞれ図８の（Ａ）（ＭＣ３８細胞）及び（Ｂ）（Ｂ１６細胞）に示す。図８により、Ｔｍａｂ−（ｈｕＩＬ１０）２−６−９はＭＣ３８又はＢ１６細胞に発現されたＨｅｒ２と結合したことが判明された。Ｐｍａｂ−インターロイキンタンパク質性ヘテロ二量体（例えば、Ｐｍａｂ−（ｈｕＩＬ１０）２−６−９）において同様の結果を得た。
【０５６３】
６．５  Ｃ−ｍａｂ−インターフェロン及びＣ−ｍａｂ−インターロイキンタンパク質性ヘテロ二量体とＧＰＣ３との結合
ヒトＧＰＣ３を安定的に発現させるマウス大腸癌細胞株（ＭＣ３８細胞株）を使用して、Ｃ−ｍａｂ−ｈｕＩＦＮａ２−６−９及びＣ−ｍａｂ−（ｈｕＩＬ１０）２−６−９とＧＰＣ３との結合を検出した。フローサイトメトリーを行って、結果を図９に示す。図９により、Ｃ−ｍａｂ−ｈｕＩＦＮａ２−６−９及びＣ−ｍａｂ−（ｈｕＩＬ１０）２−６−９はＭＣ３８細胞に発現されたＧＰＣ３と結合したことが判明された。
【０５６４】
６．６  ２８Ｈ１インターフェロン及び２８Ｈ１インターロイキンタンパク質性ヘテロ二量体とＦＡＰとの結合
ヒトＦＡＰを発現するマウス大腸癌細胞株（ＭＣ３８細胞株）を使用して、２８Ｈ１−ｈｕＩＦＮａ２−６−９及び２８Ｈ１−（ｈｕＩＬ１０）２−６−９とＦＡＰとの結合を検出した。フローサイトメトリーを行って、結果を図１０に示す。図１０により、２８Ｈ１−ｈｕＩＦＮａ２−６−９及び２８Ｈ１−（ｈｕＩＬ１０）２−６−９はＭＣ３８細胞に発現されたＦＡＰと結合したことが判明された。
【０５６５】
６．７  ５Ｅ５−インターフェロン及び５Ｅ５−インターロイキンタンパク質性ヘテロ二量体とＭＵＣ１との結合
ヒトＭＵＣ１を発現するヒト乳癌細胞株（Ｔ−４７Ｄ細胞株）を使用して、５Ｅ５−ｈｕＩＦＮａ２−６−９及び５Ｅ５−（ｈｕＩＬ１０）２−６−９とＭＵＣ１との結合を検出した。フローサイトメトリーを行って、結果を図２１に示す。図２１により、５Ｅ５−ｈｕＩＦＮａ２−６−９及び５Ｅ５−（ｈｕＩＬ１０）２−６−９はＴ−４７Ｄ細胞に発現されたＭＵＣ１と結合したことが判明された。
【０５６６】
６．８  エンシツキシマブ−インターフェロン及びエンシツキシマブ−インターロイキンタンパク質性ヘテロ二量体とＭＵＣ５ＡＣとの結合
ヒトＭＵＣ５ＡＣを発現するヒト膵臓癌細胞株（ＣＦＰＡＣ−１細胞株）を使用して、Ｅ−ｍａｂ−ｈｕＩＦＮａ２−６−９及びＥ−ｍａｂ−（ｈｕＩＬ１０）２−６−９とＭＵＣ５ＡＣとの結合を検出した。フローサイトメトリーを行って、結果を図２２に示す。図２２により、Ｅ−ｍａｂ−ｈｕＩＦＮａ２−６−９及びＥ−ｍａｂ−（ｈｕＩＬ１０）２−６−９とＣＦＰＡＣ−１細胞に発現されたＭＵＣ５ＡＣとの結合は強くないことが判明された。Ｅ−ｍａｂは特定のタンパク質糖型と強く結合するという周知の事実より、その原因は、腫瘍組織においてインサイチュで発見された特定のタンパク質糖型の潜在的な発現不足によるものと考えられる。
【０５６７】
６．９  アマツキシマブ−インターフェロン及びアマツキシマブ−インターロイキンタンパク質性ヘテロ二量体とメソセリンとの結合
ヒトメソセリンを発現するヒト胃癌細胞株（ＮＣＩ−Ｎ８７細胞株）を使用して、Ａ−ｍａｂ−ｈｕＩＦＮａ２−６−９及びＡ−ｍａｂ−（ｈｕＩＬ１０）２−６−９とメソセリンとの結合を検出した。フローサイトメトリーを行って、結果を図２３に示す。図２３により、Ａ−ｍａｂ−ｈｕＩＦＮａ２−６−９及びＡ−ｍａｂ−（ｈｕＩＬ１０）２−６−９はＮＣＩ−Ｎ８７細胞に発現されたメソセリンと結合したことが判明された。
【０５６８】
実施例７：タンパク質性ヘテロ二量体における免疫調節物質の存在及びその生理活性
【０５６９】
７．１  本発明に係るタンパク質性ヘテロ二量体におけるインターフェロンの存在及びその生理活性
ＥＬＩＳＡによりヘテロ二量体Ｅｒｂ−ｈｕＩＦＮａ２−６−９におけるｈｕＩＦＮａ２の存在を確認し、結果を図１１に示す。簡単に説明すると、緩衝液（５０ｍＭのＮａ２ＣＯ３／ＮａＨＣＯ３、ｐＨ９．６）に溶解した２μｇ／ｍｌのＥＧＦＲ−ｈｕＦｃでＥＬＩＳＡプレートをコーティングさせて、４℃で一晩静置した。０．０５％（Ｖ／Ｖ）のポリソルベート−２０を含むＰＢＳＴ（ｐＨ７．４）でプレートを３回洗浄し、３％のＢＳＡを含むＰＢＳで１時間ブロッキングした後、連続希釈されたＥｒｂ−ｈｕＩＦＮａ２−６−９を加えて３７℃で２時間インキュベートした。次に、１μｇ／ｍｌの抗ｈｕＩＦＮα−ビオチンを加えて３７℃で１時間インキュベートした。続いて、１：１０００に希釈されたＳＡ−ＨＲＰを加え、３７℃で４０分間インキュベートした。ＴＭＢ（ＴＩＡＮＧＥＮ社提供、カタログ番号ＰＡ１０７−０１、ロット番号１６１４）基質を使用して結合を検出し、２ＭのＨ２ＳＯ４で停止させた。モレキュラーデバイス社のＳｐｅｃｔｒａＭａｘ  Ｐｌｕｓ−３８４型マイクロプレートリーダーで、４５０〜６５０ｎｍにおける吸光度を検出した。コンピュータープログラムＳｏｆｔＭａｘ  Ｐｒｏ５．４を用いて濃度を決定した。
【０５７０】
ＥＧＦＰ（強化緑色蛍光タンパク質）で標識した水疱性口内炎ウイルス（ＶＳＶ）を使用して、マウス線維芽細胞株Ｌ９２９又はヒト肝癌細胞株ＨｅｐＧ２を感染することにより、細胞の抗ウイルス増強能力におけるインターフェロンの活性を検出した。ｍｕＩＦＮａ４、ｍｕＩＦＮｂ及びｈｕＩＦＮａ２の活性をそれぞれ検出した。簡単に説明すると、連続希釈された、本発明に係るタンパク質性ヘテロ二量体の存在下で細胞を８時間培養して、ＶＳＶ−ＥＧＦＰで感染された適切な数量の細胞を加えた。２４時間後に、フローサイトメトリー分析により感染細胞のパーセンテージを決定し、タンパク質性ヘテロ二量体のウイルス感染に対する保護率を算出した。次に、保護率及びタンパク質性ヘテロ二量体濃度の用量−効果曲線よりＥＣ５０を得た。図１３より分かるように、ヘテロ二量体Ｅｒｂ−ｍｕＩＦＮａ４−６−９（Ａ）、Ｅｒｂ−ｍｕＩＦＮｂ−６−９（Ｂ）及びＥｒｂ−ｈｕＩＦＮａ２−６−９（Ｃ）は細胞をウイルス感染から保護していた。
【０５７１】
７．２  本発明に係るタンパク質性ヘテロ二量体におけるインターロイキンの存在及びその生理活性
ＥＬＩＳＡによりヘテロ二量体Ｅｒｂ−（ｈｕＩＬ１０）２−６−９におけるｈｕＩＬ１０の存在を確認し、結果を図１２に示す。簡単に説明すると、緩衝液（５０ｍＭのＮａ２ＣＯ３／ＮａＨＣＯ３、ｐＨ９．６）に溶解した５μｇ／ｍｌの抗ヒトＩＬ１０（バイオレジェンド社提供、ロット番号：Ｂ１７９９４８）でＥＬＩＳＡプレートをコーティングさせて、４℃で一晩静置した。０．０５％（Ｖ／Ｖ）のポリソルベート−２０を含むＰＢＳＴ（ｐＨ７．４）でプレートを３回洗浄し、３％のＢＳＡを含むＰＢＳで１時間ブロッキングした後、２０００ｎｇ／ｍｌより２倍連続希釈されたＥｒｂ−（ｈｕＩＬ１０）２−６−９を加えて３７℃で２時間インキュベートした。次に、２μｇ／ｍｌのＥＧＦＲ−Ｆｃ−ビオチンを加えて３７℃で１時間インキュベートした。次に、１：１０００に希釈されたＳＡ−ＨＲＰを加え、３７℃で４０分間インキュベートした。ＴＭＢ（ＴＩＡＮＧＥＮ社提供、カタログ番号ＰＡ１０７−０１、ロット番号１６１４）基質を使用して結合を検出し、２ＭのＨ２ＳＯ４で停止させた。モレキュラーデバイス社のＳｐｅｃｔｒａＭａｘ  Ｐｌｕｓ−３８４型マイクロプレートリーダーで、４５０〜６５０ｎｍにおける吸光度を検出した。コンピュータープログラムＳｏｆｔＭａｘ  Ｐｒｏ５．４を用いて濃度を決定した。
【０５７２】
インターロイキンはリポ多糖（ＬＰＳ）の刺激によるマクロファージのＴＮＦ−α放出を阻害できる（参照文献：Ｄａｖｉｄ  Ｆ．  ｅｔ  ａｌ．，  １９９１，Ｔｈｅ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ．  Ｖｏｌ．  １４７．３８１５−３８２２）。本発明に係るタンパク質性ヘテロ二量体におけるインターロイキンの当該活性をテストするために、ヒト末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）を９６ウェルプレートに接種し、３〜４時間後に懸濁された細胞を洗い流した。次に、種々の濃度の、本発明に係るＥｒｂ−（ｈｕＩＬ１０）２−６−９、Ｍａｂ８０６−（ｈｕＩＬ１０）２−６−９及びＴｍａｂ−（ｈｕＩＬ１０）２−６−９を加え、２時間後に２μｇ／ｍｌのＬＰＳを加えて２４時間刺激した。上清を回収し、ＥＬＩＳＡによりＴＮＦ−αの放出を検出した。ＴＮＦ−αキット（ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ，  ８８−７３４６）に添付の取扱い説明に従ってＥＬＩＳＡを行った。簡単に説明すると、コーティング緩衝液で捕捉抗体を希釈して、Ｃｏｓｔａｒ  ９０１８  ＥＬＩＳＡプレートをコーティングした。次に、標準品及び適切に希釈されたいくつかの試料を加えた。次に、検出抗体を使用して反応を検出し、ＴＭＢで現像させた。結果を図１４に示す。図１４Ａから分かるように、Ｅｒｂ−（ｈｕＩＬ１０）２−６−９は用量依存的方式でＴＮＦ−αの放出を阻害していた。図１４Ｂにより、本発明に係るＭａｂ８０６−（ｈｕＩＬ１０）２−６−９及びＴｍａｂ−（ｈｕＩＬ１０）２−６−９も、用量依存的方式でＴＮＦ−αの放出を効果的に阻害したことが判明された。
【０５７３】
実施例８：タンパク質性ヘテロ二量体の抗腫瘍活性
【０５７４】
８．１  本発明に係るＥｒｂ−インターフェロンヘテロ二量体の抗腫瘍活性
Ｃ５７  ＢＬ／６野生型マウスモデルを用いて、Ｅｒｂ−ｍｕＩＦＮａ４−６−９ヘテロ二量体のインビボ抗腫瘍活性をテストした。簡単に説明すると、８週齢の雌Ｃ５７  ＢＬ／６マウスに７×１０５のＢ１６−ＥＧＦＲ（図１５Ａ）又は１×１０６のＭＣ３８−ＥＧＦＲ（図１５Ｂ）細胞を皮下注射した。７日後、腫瘍体積を測定して約７０ｍｍ３であった。Ｅｒｂ−ｍｕＩＦＮａ４−６−９ヘテロ二量体又は対照抗体セツキシマブ（エルビタックス、メルク社提供）を腹腔内（ｉ．ｐ．）注射した。Ｅｒｂ−ｍｕＩＦＮａ４−６−９ヘテロ二量体をそれぞれ２ｍｇ／ｋｇ及び０．５ｍｇ／ｋｇで注射し、セツキシマブの用量は２ｍｇ／ｋｇとした。週に２回腫瘍のサイズを測定し、腫瘍体積を算出して腫瘍成長曲線を得た。結果を図１５に示す。Ｅｒｂ−ｍｕＩＦＮａ４−６−９ヘテロ二量体は各用量において、いずれもインビボで腫瘍体積を効果的に減少させたことが判明された。
【０５７５】
８．２  本発明に係るＥｒｂ−インターロイキンヘテロ二量体の抗腫瘍活性
実施例８．１と同様のように、Ｃ５７ＢＬ／６マウスモデルを用いて、Ｅｒｂ−（ｈｕＩＬ１０）２−６−９のインビボ抗腫瘍活性をテストした。簡単に説明すると、８週齢の雌Ｃ５７  ＢＬ／６マウスに７×１０５のＢ１６−ＥＧＦＲ細胞（図１６Ａ）又は１×１０６のＭＣ３８−ＥＧＦＲ細胞（図１６Ｂ）を皮下注射した。７日後、腫瘍体積を測定して約７０ｍｍ３であった。Ｅｒｂ−（ｈｕＩＬ１０）２−６−９ヘテロ二量体又は対照抗体セツキシマブ（エルビタックス、メルク社提供）を１回腹腔内（ｉ．ｐ．）注射した。それぞれ２種の異なる用量（それぞれ１ｍｇ／ｋｇ及び４ｍｇ／ｋｇ）でＥｒｂ−（ｈｕＩＬ１０）２−６−９ヘテロ二量体を注射し、セツキシマブの用量は４ｍｇ／ｋｇとした。週に２回腫瘍のサイズを測定し、腫瘍体積を算出して腫瘍成長曲線を得た。結果を図１６Ａ及び１６Ｂに示す。
【０５７６】
同様のように、Ｂａｌｂ／ｃマウスの右脇腹に５×１０５のＴｕｂｏ−ＥＧＦＲを皮下接種した。７日目、１０日目、１４日目に、２種の異なる用量（それぞれ１ｍｇ／ｋｇ及び４ｍｇ／ｋｇ）で、Ｅｒｂ−（ｈｕＩＬ１０）２−６−９ヘテロ二量体を３回腹腔内注射してマウスを処置した。図１６Ｃにより、Ｅｒｂ−（ｈｕＩＬ１０）２−６−９は用量依存的方式でインビボにおいて腫瘍体積を効果的に減少させたことが判明された。
【０５７７】
８．３  本発明に係る他のタンパク質性ヘテロ二量体の抗腫瘍活性
実施例８．１と同様のように、Ｃ５７ＢＬ／６マウスモデルを用いて、Ｅｒｂ−ｈｕｓＩＬ２−６−９のインビボ抗腫瘍活性をテストした。簡単に説明すると、８週齢の雌Ｃ５７  ＢＬ／６マウスに７×１０５のＢ１６−ＥＧＦＲを皮下注射した。７日後、腫瘍体積を測定して約７０ｍｍ３であった。３日ごとに、２ｍｇ／ｋｇでＥｒｂ−ｈｕｓＩＬ２−６−９ヘテロ二量体又はＰＢＳを、合計で５回腹腔内注射（ｉ．ｐ．）した。週に２回腫瘍のサイズを測定し、腫瘍体積を算出して腫瘍成長曲線を得た。結果を図１７に示す。Ｅｒｂ−ｈｕｓＩＬ２−６−９ヘテロ二量体はインビボで腫瘍体積を効果的に減少させことが判明された。
【０５７８】
また、Ｃ５７  ＢＬ／６マウスモデルを用いて、Ｔｍａｂ−（ｈｕＩＬ１０）２−６−９ヘテロ二量体のインビボ抗腫瘍活性をテストした。簡単に説明すると、８週齢の雌Ｃ５７  ＢＬ／６マウスに５×１０５のＢ１６−Ｈｅｒ２（図１８Ａ）又は５×１０５のＭＣ３８−Ｈｅｒ２細胞（図１８Ｂ）を皮下注射した。７日後、腫瘍の体積を測定して約７０ｍｍ３であった。７日目、１０日目及び１４日目に、異なる用量（それぞれ８ｍｇ／ｋｇ、４ｍｇ／ｋｇ、２ｍｇ／ｋｇ及び１ｍｇ／ｋｇ）でＴｍａｂ−（ｈｕＩＬ１０）２−６−９ヘテロ二量体タンパク質又はＰＢＳを腹腔内注射（ｉ．ｐ．）した。週に２回腫瘍のサイズを測定し、腫瘍体積を算出して腫瘍成長曲線を得た。結果を図１８Ａ及び１８Ｂに示す。Ｔｍａｂ−（ｈｕＩＬ１０）２−６−９ヘテロ二量体は各用量において、インビボで腫瘍体積を効果的に減少させたことが判明された。
【０５７９】
同様のように、ＭＣ３８−ＧＰＣ３、ＭＣ３８−ＦＡＰ、Ｂ１６−ＧＰＣ３及びＢ１６−ＦＡＰ同系腫瘍モデルにおいて、Ｃ−ｍａｂ−（ｈｕＩＬ１０）２−６−９、２８Ｈ１−（ｈｕＩＬ１０）２−６−９及び２８Ｈ１−ｈｕＩＦＮａ２−６−９ヘテロ二量体の抗腫瘍活性をテストして、有意な抗腫瘍効果を観察した。
【０５８０】
具体的には、膵臓癌モデル（インビトロ微小器官培養系）において、２８Ｈ１−ｈｕＩＦＮａ２−６−９の抗腫瘍活性をテストして、腫瘍成長への阻害を観察した。
【０５８１】
また、Ｂ１６−ＦＡＰ同系腫瘍モデルを用いて２８Ｈ１−（ｈｕＩＬ１０）２−６−９ヘテロ二量体のインビボ抗腫瘍活性を検出した。簡単に説明すると、８週齢の雌Ｃ５７  ＢＬ／６マウスに７×１０５のＢ１６−ＦＡＰ−５細胞を皮下注射した。７日後、腫瘍体積を測定して約７０〜１００ｍｍ３であった。７日目、１０日目及び１３日目に、２８Ｈ１−（ｈｕＩＬ１０）２−６−９ヘテロ二量体タンパク質、２８Ｈ１抗体対照又はＩｇＧ１アイソタイプ対照を４ｍｇ／ｋｇで腹腔内注射（ｉ．ｐ．）した。５日ごとに腫瘍サイズを測定し、腫瘍体積を算出して腫瘍成長曲線を得た。結果を図２４に示す。２８Ｈ１−（ｈｕＩＬ１０）２−６−９ヘテロ二量体はインビボで腫瘍体積を効果的に減少させ、しかもＩｇＧ１アイソタイプ対照及び２８Ｈ１抗体対照よりも効果的であることが判明された。
【０５８２】
また、対応するヒト化ＰＤＸマウスモデルにおいて、Ｅｒｂ−（ｈｕＩＬ１０）２−６−９、Ｅｒｂ−ｍｕＩＦＮａ４−６−９、Ｃ−ｍａｂ−（ｈｕＩＬ１０）２−６−９、２８Ｈ１−（ｈｕＩＬ１０）２−６−９、２８Ｈ１−ｈｕＩＦＮａ２−６−９及びＥ−ｍａｂ−（ｈｕＩＬ１０）２−６−９のインビボ抗腫瘍活性をテストして、インビボ抗腫瘍効果を観察した。
【０５８３】
具体的には、ＰＤＸマウスモデルを用いて、Ｅｒｂ−（ｈｕＩＬ１０）２−６−９ヘテロ二量体のインビボ抗腫瘍活性をテストした。簡単に説明すると、８週齢の雌Ｈｕ−ＣＤ３４  ＮＳＧマウスに膵臓癌Ａ１５６６８  Ｐ４  ＰＤＸ腫瘍細胞を移植した。腫瘍体積を測定して約１００ｍｍ３になると、０日目（１回目の投与日）、３日目、６日目、９日目、１２日目及び１５日目に、Ｅｒｂ−（ｈｕＩＬ１０）２−６−９ヘテロ二量体タンパク質（０．２ｍｐｋ）又はアイソタイプ対照（クラウンバイオ社提供、ロット番号２０１７０８１６、１ｍｐｋ）を腹腔内注射（ｉ．ｐ．）した。２日ごとに腫瘍サイズを測定し、腫瘍体積を算出して腫瘍成長曲線を得た。結果を図２５に示す。ＰＤＸマウスモデルにおいて、Ｅｒｂ−（ｈｕＩＬ１０）２−６−９ヘテロ二量体はインビボで腫瘍体積を効果的に減少させたことが判明された。
【０５８４】
実施例９：インビボにおけるタンパク質性ヘテロ二量体の標的化挙動
実施例８．１に示す手順と同様のように、Ｃ５７ＢＬ／６  Ｂ１６−ＥＧＦＲマウスモデルを用いて、Ｅｒｂ−（ｈｕＩＬ１０）２−６−９の体内分布を検出した。簡単に説明すると、８週齢の雌Ｃ５７  ＢＬ／６マウスに７×１０５のＢ１６−ＥＧＦＲ−ＳＩＹ細胞を皮下注射した。７日後、腫瘍体積を測定して約４５ｍｍ３であった。Ａｌｅｘａ  Ｆｌｕｏｒ  ７５０（ＡＦ７５０）で標識されたＥｒｂ−（ｈｕＩＬ１０）２−６−９ヘテロ二量体又は対照ヘテロ二量体Ｔｍａｂ−（ｈｕＩＬ１０）２−６−９を腹腔内注射（ｉ．ｐ．）した。注射後２４時間に、インビボにおいてＩＶＩＳスペクトルインビボイメージングシステム（パーキンエルマー社提供）を用いて、又は腫瘍除去後にインビトロにおいてＡＦ７５０免疫蛍光シグナルをスクリーニングした。図１９に示す結果により、ＥＧＦＲ陽性腫瘍において、Ｅｒｂ−（ｈｕＩＬ１０）２−６−９の濃度はＴｍａｂ−（ｈｕＩＬ１０）２−６−９の濃度をはるかに上回ることが判明された。従って、本発明に係るタンパク質性ヘテロ二量体はインビボで標的組織（例えば、腫瘍）に効果的に指向されることが可能である。
【０５８５】
実施例１０：タンパク質性ヘテロ二量体のＡＤＣＣ効果
また、本発明に係るタンパク質性ヘテロ二量体に対し、抗体依存性細胞により媒介された細胞傷害性（ＡＤＣＣ）をテストした。ＬＤＨの放出により本発明に係るタンパク質性ヘテロ二量体（例えば、Ｅｒｂ−ｈｕＩＦＮａ２−６−９及びＥｒｂ−（ｈｕＩＬ１０）２−６−９）のＡＤＣＣ効果をテストした。簡単に説明すると、Ｆｉｃｏｌｌ−Ｈｙｐａｑｕｅ密度勾配遠心分離により健常ドナーのヘパリン化末梢血試料からＰＢＭＣを得て、３７℃で１×１０Ｅ７の細胞／皿で３０ｎｇ／ｍｌのＩＬ−２及び１０％のＦＢＳを含む１６４０培地で２４時間培養した。９６ウェルプレートに、２．２５×１０５／ウェル及び１．５×１０４／ウェルの密度で、ＰＢＭＣ細胞及びＡ４３１細胞を接種し、１５ｎｇ／ｍｌのＩＬ−２及び２％のＦＢＳを含む１６４０培地を加えた。９ｎＭ（最終濃度は３ｎＭ）より、エルビタックス、Ｅｒｂ−ｈｕＩＦＮａ２−６−９及びＥｒｂ−（ｈｕＩＬ１０）２−６−９を５倍希釈して８種の異なる用量を得て、９６ウェルプレートに加えた。５時間後に、各ウェルにおいてＬＤＨを検出した。
【０５８６】
図２０から分かるように、タンパク質性ヘテロ二量体は対照エルビタックスと比べてわずか低いが、同等のＡＤＣＣ活性を示すため、Ｆｃ領域における修飾（即ち本発明に係るタンパク質性ヘテロ二量体の第１の修飾及び／又は第２の修飾）はＡＤＣＣ活性を破壊しないことが示唆される。
【図１】
2020527939.tif 000011
【図２−１】
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【図２−２】
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【図２−３】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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【図１４】
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【図１５】
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【図１６】
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【図１７】
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【図１８】
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【図１９】
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【図２０】
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【図２１】
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【図２２】
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【図２３】
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【図２４】
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【図２５】
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【配列表】
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【誤訳訂正書】
【提出日】令和2年6月1日(2020.6.1)
【誤訳訂正１】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０１５１
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０１５１】
本明細書で使用される用語「ベクター」とは、一般に、挿入された核酸分子を宿主細胞内及び／又は宿主細胞の間に転送する適切な宿主の中で自己複製できる核酸分子を指す。当該用語は、主にＤＮＡ又はＲＮＡを細胞に挿入するために機能するベクター、主にＤＮＡ又はＲＮＡを複製するために機能するベクターの複製、及びＤＮＡ又はＲＮＡの転写及び／又は翻訳のために機能する発現ベクターを包含する。さらに、上述した１種以上の機能を提供するベクターを包含する。「発現ベクター」とは、適切な宿主細胞に導入されることにより転写されて、ポリペプチドとして翻訳されるポリヌクレオチドである。「発現系」とは、一般に、所望の発現産物を生成するように機能する発現ベクターを含有する適切な宿主細胞を指す。
【誤訳訂正２】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０１６９
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０１６９】
本明細書で使用される用語「抗ＥＧＦＲファミリー抗体」とは、一般に、上皮成長因子受容体ファミリーの成員と特異的に結合する抗体を指す。例えば、ＥｒｂＢ−１（上皮成長因子受容体（ＥＧＦＲ）ともいう）、ＥｒｂＢ−２（ヒトの場合ＨＥＲ２と、げっ歯類の場合ｎｅｕともいう）、ＥｒｂＢ−３（ＨＥＲ３ともいう）、及び／又はＥｒｂＢ−４（ＨＥＲ４ともいう）と結合する抗体であってもよい。抗ＥＧＦＲファミリー抗体は、Ｃ６．５、Ｃ６ｍＬ３−９、Ｃ６  ＭＨ３−Ｂ１、Ｃ６−Ｂ１Ｄ２、Ｆ５、ＨＥＲ３．Ａ５、ＨＥＲ３．Ｆ４、ＨＥＲ３．Ｈ１、ＨＥＲ３．Ｈ３、ＨＥＲ３．Ｅ１２、ＨＥＲ３．Ｂ１２、ＥＧＦＲ．Ｅ１２、ＥＧＦＲ．Ｃ１０、ＥＧＦＲ．Ｂ１１、ＥＧＦＲ．Ｅ８、ＨＥＲ４．Ｂ４、ＨＥＲ４．Ｇ４、ＨＥＲ４．Ｆ４、ＨＥＲ４．Ａ８、ＨＥＲ４．Ｂ６、ＨＥＲ４．Ｄ４、ＨＥＲ４．Ｄ７、ＨＥＲ４．Ｄ１１、ＨＥＲ４．Ｄ１２、ＨＥＲ４．Ｅ３、ＨＥＲ４．Ｅ７、ＨＥＲ４．Ｆ８及びＨＥＲ４．Ｃ７等抗体の１種以上を包含するが、これらに限定されない。米国特許公開第ＵＳ２００６／００９９２０５Ａ１号及びＵＳ２００４／００７１６９６Ａ１号を参照でき、当該文献は、援用により本明細書に組み込まれる。
【手続補正書】
【提出日】令和2年6月1日(2020.6.1)
【手続補正１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【発明の詳細な説明】
【背景技術】
【０００１】
腫瘍抗原に対する免疫応答は、（非特許文献１）を検出できるが、疾患を引き起こす悪性細胞は、多くの場合、拒絶をもたらす免疫反応を誘発する免ことができない。研究により、サイトカイン及び共刺激分子等の免疫調節性分子を導入することにより腫瘍細胞の免疫原性を増強できることが証明されていた。しかしながら、残存癌細胞を根絶するには、直接遺伝子導入ができない広範囲に散在する微小転移性腫瘍進展病巣の標的化が必要な場合がある。また、導入された免疫調節分子の発現及び安定性は、十分と言ういうには程遠いものであることが多い。免疫系の細胞によって産生されるサイトカイン等の免疫調節物質は、適応免疫応答の細胞を直接的又は間接的に活性化させ、防御的な抗腫瘍免疫の誘発において重要な役割を果たすことができる。自然免疫は、ＩＦＮ−α、ＴＮＦ−α及びインターロイキン等の炎症誘発性サイトカインの放出を引き起こす細菌産物又は「危険」シグナルにより引き起こされる。
【０００２】
複数の研究により、免疫調節物質が動物モデル及び癌患者の両方において、抗腫瘍効果を果たすのに有用であり得ることが示されていた。しかしながら、免疫調節物質の適用に関係した半減期の短さと全身毒性により、それらの使用が大いに制限されている。特許文献１では、腫瘍関連抗原を標的とする抗体のＣ末端に付着インターフェロンを含有するキメラ構築物が記載されている。しかしながら、そのようなキメラ構築物によって発現される融合タンパク質は、インビボで、一般に、極めて不安定であり、その発現量は、一般に、工業的規模の生産にとって、十分に高くない。
【０００３】
近年、二重特異性抗体等のヘテロ二量体タンパク質が開発され、２つの異なる標的の共結合が可能になっている。従来、二重特異性抗体は、単一のモノクローナル抗体（ｍＡｂ）を産生する２つの細胞株を、それぞれ融合することによって生成された。しかしながら、かかるプロセスにおいては、二重特異性抗体（又はヘテロ二量体タンパク質は、量が少ないだけでなく、所望の産物を単離するために徹底的な精製が必要である。
【０００４】
９０年代に、２つの単一特異性開始タンパク質のＣＨ３領域に非対称修飾を導入することで二重特異性抗体の収量を向上させた「ノブアンドホール（ｋｎｏｂ−ａｎｄ−ｈｏｌｅ）」モデルは、Ｃａｒｔｅｒらによって開発された（非特許文献２）。しかしながら、「ノブアンドホール」修飾が行われたとしても、タンパク質ホモ二量体の生成を効果的に制御又は解消することができず、ヘテロ二量体タンパク質の収量をさらに向上させることは、困難である。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００５】
【特許文献１】中国特許出願第２００８８０１１７２２５．８号
【非特許文献】
【０００６】
【非特許文献１】Ｄｉｓｉｓ．（１９９７）Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｏｎｃｏｌ．１５：３３６３−３３６７
【非特許文献２】Ｒｉｄｇｗａｙ，Ｐｒｅｓｔａら，１９９６；Ｃａｒｔｅｒ，２００１
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
従って、産業的な規模で比較的高い収量で生産することができ、インビボにおいて比較的長い半減期を有し、様々な新生物、異なる種類の癌及び／又は腫瘍等、細胞及び／又は組織の過剰増殖に関連する障害又は疾患を治療するのに有用な免疫調節物質の標的化発現が必要である。また、複雑な精製プロセスの回避及び／又は望ましくない不純物に関連するリスクの低減のために、そのような産物の収量は、十分に高いことが求められる。
【課題を解決するための手段】
【０００８】
本開示は、上述した課題を解決するためになされるものであり、関連する有益な効果も提供する。本開示は、腫瘍成長の阻害に有用なタンパク質性ヘテロ二量体、及び当該タンパク質性ヘテロ二量体を含有する組成物、医薬品及び／又はキットを包含する。また、本開示は、前記タンパク質性ヘテロ二量体を包含し、（望ましくないタンパク質ホモ二量体等）望ましくない不純物を（もし存在する場合）非常に少ない量で含有するタンパク質混合物を提供する。さらに、本開示は、タンパク質性ヘテロ二量体又はタンパク質混合物の製造方法、並びに癌の治療を包含するがこれに限定されない、腫瘍成長の阻害におけるタンパク質性ヘテロ二量体及び／又はタンパク質混合物の医薬的用途を包含する。
【０００９】
いくつかの態様において、本開示に係るタンパク質性ヘテロ二量体は、有意な抗腫瘍活性を有する。いくつかの態様において、本開示に係るタンパク質性ヘテロ二量体は、高い発現量を有する。いくつかの態様において、本開示に係るタンパク質性ヘテロ二量体は、インビボで長い半減期を有する。いくつかの態様において、本開示に係るタンパク質性ヘテロ二量体は、大規模な産業化された生産に特に好適である。いくつかの態様において、本開示に係る前記タンパク質性ヘテロ二量体を含有するタンパク質混合物は、望ましくない不純物を非常に少なく含有するか、又は実質的に含有しない。
【００１０】
一つの態様において、本開示は、タンパク質性ヘテロ二量体を提供する。タンパク質性ヘテロ二量体は、第１の成員及び第１の成員とは異なる第２の成員を含有してもよく、第１の成員は、軽鎖及び第１のＦｃ領域を含有する重鎖を含有し、軽鎖が重鎖と複合されて腫瘍抗原への結合特異性を示す標的部分が形成され、第２の成員は、第２のＦｃ領域と融合される免疫調節物質を含有するポリペプチドを含有してよく、第１のＦｃ領域と第２のＦｃ領域との複合により、第１の成員は、第２の成員と会合してヘテロ二量体を形成し、第１のＦｃ領域は、第１の修飾を含有し、及び／又は第２のＦｃ領域は、第２の修飾を含有してもよく、第１の修飾及び／又は第２の修飾は、ノブ修飾及びホール修飾を含有するノブアンドホール修飾と比べ、第１の成員と第２の成員とのヘテロ二量体化をより効果的に促進できる。ノブ修飾及びホール修飾を含有するノブアンドホール修飾において、第１のＦｃ領域は、ノブ修飾を含有し、第２のＦｃ領域は、ホール修飾を含有してもよい。あるいは、第１のＦｃ領域は、ホール修飾を含有し、第２のＦｃ領域は、ノブ修飾を含有してもよい。
【００１１】
いくつかの実施形態において、前記第１の修飾は、ノブ修飾又はホール修飾とは異なるものである、且つ／又は、第２の修飾は、ノブ修飾又はホール修飾とは異なるものである。
【００１２】
いくつかの実施形態において、哺乳動物細胞で発現される場合、タンパク質性ヘテロ二量体の収量は、参照タンパク質の収量より、少なくとも１０％高く、参照タンパク質は、
ｉ）第１のＦｃ領域でノブ修飾を含有すること、
ｉｉ）第２のＦｃ領域でホール修飾を含有すること、及び
ｉｉｉ）本発明に係るタンパク質性ヘテロ二量体の第１の修飾及び第２の修飾を同時に含有しないこと
において、参照タンパク質と相違する。哺乳動物細胞は、ＨＥＫ２９３細胞、ＣＨＯ細胞、ＣＯＳ−１細胞、及びＮＳ０細胞からなる群からから選択されてもよい。
【００１３】
いくつかの実施形態において、第１のＦｃ領域は、第１の修飾を含有し、第２のＦｃ領域は、第２の修飾を含有し、第１の修飾及び第２の修飾は、いずれもノブ修飾又はホール修飾とは異なるものである。
【００１４】
いくつかの実施形態において、第２の成員に含有されるポリペプチドは、融合タンパク質であり、免疫調節物質のＣ末端が第２のＦｃ領域のＮ末端と直接的又は間接的に融合されて融合タンパク質が形成される。
【００１５】
いくつかの実施形態において、腫瘍抗原は、ＥＧＦＲ、ＥＧＦＲ変異体、ＨＥＲ２／ｎｅｕ、ＧＰＣ３、ＦＡＰ、Ｍｕｃ１、ＭＵＣ５ＡＣ、及びメソセリンからなる群から選択される。
【００１６】
いくつかの実施形態において、標的部分の軽鎖は、腫瘍抗原に特異的に指向された抗体の軽鎖の対応するＣＤＲに含有されるアミノ酸配列と、少なくとも６０％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一のアミノ酸配列を含有するＣＤＲを含有する。
【００１７】
いくつかの実施形態において、標的部分の軽鎖は、腫瘍抗原に特異的に指向された抗体の軽鎖の対応する可変領域に含有されるアミノ酸配列と、少なくとも６０％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一のアミノ酸配列を含有する可変領域を含有する。
【００１８】
いくつかの実施形態において、標的部分の軽鎖は、腫瘍抗原に特異的に指向された抗体の軽鎖の対応するアミノ酸配列に含有されるアミノ酸配列と、少なくとも６０％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％同一のアミノ酸配列を含有する。
【００１９】
いくつかの実施形態において、標的部分の重鎖は、腫瘍抗原に特異的に指向された抗体の重鎖の対応するＣＤＲに含有されるアミノ酸配列と、少なくとも６０％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一のアミノ酸配列を含有するＣＤＲを含有する。
【００２０】
いくつかの実施形態において、標的部分の重鎖は、腫瘍抗原に特異的に指向された抗体の重鎖の対応する可変領域に含有されるアミノ酸配列と、少なくとも６０％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一のアミノ酸配列を含有する可変領域を含有する。
【００２１】
いくつかの実施形態において、標的部分の重鎖は、腫瘍抗原に特異的に指向された抗体の重鎖の対応するアミノ酸配列に含有されるアミノ酸配列と、少なくとも６０％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一のアミノ酸配列を含有する。
【００２２】
いくつかの実施形態において、標的部分の軽鎖は、腫瘍抗原に特異的に指向された抗体の軽鎖の対応するＣＤＲに含有されるアミノ酸配列と、少なくとも６０％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一のアミノ酸配列を含有するＣＤＲを含有し、標的部分の重鎖は、腫瘍抗原に特異的に指向された抗体の重鎖の対応するＣＤＲに含有されるアミノ酸配列と、少なくとも６０％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一のアミノ酸配列を含有するＣＤＲを含有する。
【００２３】
いくつかの実施形態において、標的部分の軽鎖は、腫瘍抗原に特異的に指向された抗体の軽鎖の対応する可変領域に含有されるアミノ酸配列と、少なくとも６０％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一のアミノ酸配列を含有する可変領域を含有し、標的部分の重鎖は、腫瘍抗原に特異的に指向された抗体の重鎖の対応する可変領域に含有されるアミノ酸配列と、少なくとも６０％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一のアミノ酸配列を含有する可変領域を含有する。
【００２４】
いくつかの実施形態において、標的部分の軽鎖は、腫瘍抗原に特異的に指向された抗体の軽鎖の対応するアミノ酸配列に含有されるアミノ酸配列と、少なくとも６０％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一のアミノ酸配列を含有し、標的部分の重鎖は、腫瘍抗原に特異的に指向された抗体の重鎖の対応するアミノ酸配列に含有されるアミノ酸配列と、少なくとも６０％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一のアミノ酸配列を含有する。
【００２５】
いくつかの実施形態において、腫瘍抗原に特異的に指向された抗体は、抗ＥＧＦＲ、抗ＥＧＦＲ変異体、抗ＨＥＲ２／ｎｅｕ、抗ＧＰＣ３、抗ＦＡＰ、抗Ｍｕｃ１、抗ＭＵＣ５ＡＣ、及び抗メソセリンからなる群から選択される。
【００２６】
いくつかの実施形態において、免疫調節物質は、免疫応答を増強させる。いくつかの実施形態において、免疫調節物質は、免疫応答を低下させる。
【００２７】
いくつかの実施形態において、免疫調節物質は、サイトカインである。例えば、免疫調節物質は、インターフェロン、インターロイキン、ケモカイン、リンホカイン、及び腫瘍壊死因子からなる群から選択されたサイトカインであってもよい。
【００２８】
いくつかの実施形態において、免疫調節物質は、インターフェロンα、インターフェロンλ、及びインターフェロンβからなる群から選択されたインターフェロンである。
【００２９】
いくつかの実施形態において、免疫調節物質は、インターロイキンであり、当該インターロイキンは、インターロイキン１０、インターロイキン２、及び／又はスーパーインターロイキン２を含有する。
【００３０】
いくつかの実施形態において、第１のＦｃ領域及び第２のＦｃ領域は、免疫グロブリンのＦｃ領域に由来する。
【００３１】
例えば、免疫グロブリンは、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、及びＩｇＧ４からなる群から選択されもてよい。
【００３２】
いくつかの実施形態において、第１のＦｃ領域及び第２のＦｃ領域は、免疫グロブリンのＦｃ領域に由来し、当該免疫グロブリンは、ヒトＩｇＧ１である。
【００３３】
いくつかの実施形態において、第２のＦｃ領域は、免疫調節物質とインフレームで融合される。
【００３４】
いくつかの実施形態において、第２のＦｃ領域は、リンカーを介して免疫調節物質とインフレームで融合される。
【００３５】
いくつかの実施形態において、第２の成員に含有されるポリペプチドは、２種以上の免疫調節物質を含有し、２種以上の免疫調節物質は、インフレームで互いに融合され、且つ第２のＦｃ領域と融合され、ただし、２種以上の免疫調節物質は、第２のＦｃ領域に対向するＮ末端に配置される。例えば、２種以上の免疫調節物質は、同一であってもよい。
【００３６】
いくつかの実施形態において、第１の修飾は、位置Ｔ３６６におけるアミノ酸置換、並びにＹ３４９、Ｆ４０５、Ｋ４０９、Ｄ３９９、Ｋ３６０、Ｑ３４７、Ｋ３９２、及びＳ３５４からなる群から選択された１つ以上の位置におけるアミノ酸置換を含有し、アミノ酸の位置は、ＫＡＢＡＴ番号のＥＵインデックスに基づいて決定される。
【００３７】
いくつかの実施形態において、第１の修飾は、Ｙ３４９Ｃ、Ｙ３４９Ｄ、Ｄ３９９Ｓ、Ｆ４０５Ｋ、Ｋ３６０Ｅ、Ｋ４０９Ａ、Ｋ４０９Ｅ、Ｑ３４７Ｅ、Ｑ３４７Ｒ、Ｓ３５４Ｄ、Ｋ３９２Ｄ、及びＴ３６６Ｗからなる群から選択されたアミノ酸置換を含有する。
【００３８】
いくつかの実施形態において、第１の修飾は、２〜５個のアミノ酸置換を含有する。
【００３９】
いくつかの実施形態において、第１の修飾は、
１）Ｙ３４９及びＴ３６６；
２）Ｙ３４９、Ｔ３６６、及びＦ４０５；
３）Ｙ３４９、Ｔ３６６、及びＫ４０９；
４）Ｙ３４９、Ｔ３６６、Ｆ４０５、Ｋ３６０、及びＱ３４７；
５）Ｙ３４９、Ｔ３６６、Ｆ４０５、及びＱ３４７；
６）Ｙ３４９、Ｔ３６６、Ｋ４０９、Ｋ３６０、及びＱ３４７；
７）Ｙ３４９、Ｔ３６６、Ｋ４０９、及びＱ３４７；
８）Ｔ３６６、Ｋ４０９、及びＫ３９２；
９）Ｔ３６６及びＫ４０９；
１０）Ｔ３６６、Ｋ４０９、Ｙ３４９、及びＳ３５４；
１１）Ｔ３６６及びＦ４０５；
１２）Ｔ３６６、Ｆ４０５、及びＤ３９９；
１３）Ｔ３６６、Ｆ４０５、Ｙ３４９、及びＳ３５４
から選択された、いずれかの群に示す位置におけるアミノ酸置換を含有する。
【００４０】
いくつかの実施形態において、第１の修飾は、
１）Ｙ３４９Ｃ及びＴ３６６Ｗ；
２）Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、及びＦ４０５Ｋ；
３）Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、及びＫ４０９Ｅ；
４）Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、及びＫ４０９Ａ；
５）Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、Ｆ４０５Ｋ、Ｋ３６０Ｅ、及びＱ３４７Ｅ；
６）Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、Ｆ４０５Ｋ、及びＱ３４７Ｒ；
７）Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、Ｋ４０９Ａ、Ｋ３６０Ｅ、及びＱ３４７Ｅ；
８）Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、Ｋ４０９Ａ、及びＱ３４７Ｒ；
９）Ｔ３６６Ｗ、Ｋ４０９Ａ、及びＫ３９２Ｄ；
１０）Ｔ３６６Ｗ及びＫ４０９Ａ；
１１）Ｔ３６６Ｗ、Ｋ４０９Ａ及びＹ３４９Ｄ；
１２）Ｔ３６６Ｗ、Ｋ４０９Ａ、Ｙ３４９Ｄ、及びＳ３５４Ｄ；
１３）Ｔ３６６Ｗ及びＦ４０５Ｋ；
１４）Ｔ３６６Ｗ、Ｆ４０５Ｋ、及びＤ３９９Ｓ；
１５）Ｔ３６６Ｗ、Ｆ４０５Ｋ、及びＹ３４９Ｄ；並びに
１６）Ｔ３６６Ｗ、Ｆ４０５Ｋ、Ｙ３４９Ｄ、及びＳ３５４Ｄ
から選択された、いずれかの群に示すアミノ酸置換を含有する。
【００４１】
いくつかの実施形態において、第２の修飾は、位置Ｔ３６６、Ｌ３６８、及びＹ４０７におけるアミノ酸置換、並びにＤ３５６、Ｄ３９９、Ｅ３５７、Ｆ４０５、Ｋ３６０、Ｋ３９２、Ｋ４０９、及びＱ３４７からなる群から選択された１つ以上の位置におけるアミノ酸置換を含有し、アミノ酸の位置は、ＫＡＢＡＴ番号のＥＵインデックスに基づいて決定される。
【００４２】
いくつかの実施形態において、第２の修飾に含有されるアミノ酸置換は、Ｄ３５６Ｃ、Ｄ３９９Ｓ、Ｅ３５７Ａ、Ｆ４０５Ｋ、Ｋ３６０Ｅ、Ｋ３９２Ｄ、Ｋ４０９Ａ、Ｌ３６８Ａ、Ｌ３６８Ｇ、Ｑ３４７Ｅ、Ｑ３４７Ｒ、Ｔ３６６Ｓ、Ｙ４０７Ａ、及びＹ４０７Ｖからなる群から選択される。
【００４３】
いくつかの実施形態において、第２の修飾は、４〜６個の位置におけるアミノ酸置換を含有する。
【００４４】
いくつかの実施形態において、第２の修飾は、
１）Ｄ３５６、Ｔ３６６、Ｌ３６８、Ｙ４０７、及びＦ４０５；
２）Ｄ３５６、Ｔ３６６、Ｌ３６８、及びＹ４０７；
３）Ｄ３５６、Ｔ３６６、Ｌ３６８、Ｙ４０７、及びＱ３４７；
４）Ｄ３５６、Ｔ３６６、Ｌ３６８、Ｙ４０７、Ｋ３６０、及びＱ３４７；
５）Ｄ３５６、Ｔ３６６、Ｌ３６８、Ｙ４０７、Ｆ４０５、及びＱ３４７；
６）Ｄ３５６、Ｔ３６６、Ｌ３６８、Ｙ４０７、Ｆ４０５、Ｋ３６０、及びＱ３４７；
７）Ｔ３６６、Ｌ３６８、Ｙ４０７、Ｄ３９９、及びＦ４０５；
８）Ｔ３６６、Ｌ３６８、Ｙ４０７、及びＦ４０５；
９）Ｔ３６６、Ｌ３６８、Ｙ４０７、Ｆ４０５、及びＥ３５７；
１０）Ｔ３６６、Ｌ３６８、Ｙ４０７、及びＫ４０９；
１１）Ｔ３６６、Ｌ３６８、Ｙ４０７、Ｋ４０９、及びＫ３９２；
１２）Ｔ３６６、Ｌ３６８、Ｙ４０７、Ｋ４０９、及びＥ３５７
から選択された、いずれかの群に示す位置におけるアミノ酸置換を含有する。
【００４５】
いくつかの実施形態において、第２の修飾は、
１）Ｄ３５６Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、及びＦ４０５Ｋ；
２）Ｄ３５６Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、及びＹ４０７Ｖ；
３）Ｄ３５６Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、及びＱ３４７Ｒ；
４）Ｄ３５６Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、Ｋ３６０Ｅ、及びＱ３４７Ｅ；
５）Ｄ３５６Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、Ｆ４０５Ｋ、及びＱ３４７Ｒ；
６）Ｄ３５６Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、Ｆ４０５Ｋ、Ｋ３６０Ｅ、及びＱ３４７Ｅ；
７）Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、Ｄ３９９Ｓ、及びＦ４０５Ｋ；
８）Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ｇ、Ｙ４０７Ａ、及びＦ４０５Ｋ；
９）Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、Ｆ４０５Ｋ、及びＥ３５７Ａ；
１０）Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、及びＫ４０９Ａ；
１１）Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、Ｋ４０９Ａ、及びＫ３９２Ｄ；
１２）Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ｇ、Ｙ４０７Ａ、及びＫ４０９Ａ；
１３）Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、Ｋ４０９Ａ、及びＥ３５７Ａ
から選択された、いずれかの群に示すアミノ酸置換を含有する。
【００４６】
いくつかの実施形態において、第１のＦｃ領域は、第１の修飾を含有し、第２のＦｃ領域は、第２の修飾を含有する。第１の修飾は、位置Ｔ３６６におけるアミノ酸置換、並びにＹ３４９、Ｆ４０５、Ｋ４０９、Ｄ３９９、Ｋ３６０、Ｑ３４７、Ｋ３９２、及びＳ３５４からなる群から選択された１つ以上の位置におけるアミノ酸置換を含有し、アミノ酸の位置は、ＫＡＢＡＴ番号のＥＵインデックスに基づいて決定される。第２の修飾は、位置Ｔ３６６、Ｌ３６８、及びＹ４０７におけるアミノ酸置換、並びにＤ３５６、Ｄ３９９、Ｅ３５７、Ｆ４０５、Ｋ３６０、Ｋ３９２、Ｋ４０９、及びＱ３４７からなる群から選択された、１つ以上の位置におけるアミノ酸置換を含有し、アミノ酸の位置は、ＫＡＢＡＴ番号のＥＵインデックスに基づいて決定される。第１の修飾及び第２の修飾は、本願に定義される通りであってもよい。
【００４７】
いくつかの実施形態において、第１のＦｃ領域は、第１の修飾を含有し、第２のＦｃ領域は、第２の修飾を含有し、第１の修飾及び第２の修飾は、
１）第１の修飾：Ｙ３４９及びＴ３６６；並びに
第２の修飾：Ｄ３５６、Ｔ３６６、Ｌ３６８、Ｙ４０７、及びＦ４０５；
２）第１の修飾：Ｙ３４９、Ｔ３６６、及びＦ４０５；並びに
第２の修飾：Ｄ３５６、Ｔ３６６、Ｌ３６８、及びＹ４０７；
３）第１の修飾：Ｙ３４９、Ｔ３６６、及びＫ４０９；並びに
第２の修飾：Ｄ３５６、Ｔ３６６、Ｌ３６８、Ｙ４０７、及びＦ４０５；
４）第１の修飾：Ｙ３４９、Ｔ３６６、Ｆ４０５、Ｋ３６０、及びＱ３４７；並びに
第２の修飾：Ｄ３５６、Ｔ３６６、Ｌ３６８、Ｙ４０７、及びＱ３４７；
５）第１の修飾：Ｙ３４９、Ｔ３６６、Ｆ４０５、及びＱ３４７；並びに
第２の修飾：Ｄ３５６、Ｔ３６６、Ｌ３６８、Ｙ４０７、Ｋ３６０、及びＱ３４７；
６）第１の修飾：Ｙ３４９、Ｔ３６６、Ｋ４０９、Ｋ３６０、及びＱ３４７；並びに
第２の修飾：Ｄ３５６、Ｔ３６６、Ｌ３６８、Ｙ４０７、Ｆ４０５、及びＱ３４７；
７）第１の修飾：Ｙ３４９、Ｔ３６６、Ｋ４０９、及びＱ３４７；並びに
第２の修飾：Ｄ３５６、Ｔ３６６、Ｌ３６８、Ｙ４０７、Ｆ４０５、Ｋ３６０、及びＱ３４７；
８）第１の修飾：Ｔ３６６、Ｋ４０９、及びＫ３９２；並びに
第２の修飾：Ｔ３６６、Ｌ３６８、Ｙ４０７、Ｄ３９９、及びＦ４０５；
９）第１の修飾：Ｔ３６６及びＫ４０９；並びに
第２の修飾：Ｔ３６６、Ｌ３６８、Ｙ４０７、及びＦ４０５；
１０）第１の修飾：Ｔ３６６、Ｋ４０９、及びＹ３４９；並びに
第２の修飾：Ｔ３６６、Ｌ３６８、Ｙ４０７、Ｆ４０５、及びＥ３５７；
１１）第１の修飾：Ｔ３６６、Ｋ４０９、Ｙ３４９、及びＳ３５４；並びに
第２の修飾：Ｔ３６６、Ｌ３６８、Ｙ４０７、Ｆ４０５、及びＥ３５７；  
１２）第１の修飾：Ｔ３６６及びＦ４０５；並びに
第２の修飾：Ｔ３６６、Ｌ３６８、Ｙ４０７、及びＫ４０９；
１３）第１の修飾：Ｔ３６６、Ｆ４０５、及びＤ３９９；並びに
第２の修飾：Ｔ３６６、Ｌ３６８、Ｙ４０７、Ｋ４０９、及びＫ３９２；
１４）第１の修飾：Ｔ３６６、Ｆ４０５、及びＹ３４９；並びに
第２の修飾：Ｔ３６６、Ｌ３６８、Ｙ４０７、Ｋ４０９、及びＥ３５７；
１５）第１の修飾：Ｔ３６６、Ｆ４０５、Ｙ３４９、及びＳ３５４；並びに
第２の修飾：Ｔ３６６、Ｌ３６８、Ｙ４０７、Ｋ４０９、及びＥ３５７
から選択された、いずれかの群に示す位置におけるアミノ酸置換を含有し、アミノ酸の位置は、ＫＡＢＡＴ番号のＥＵインデックスに基づいて決定される。
【００４８】
いくつかの実施形態において、
第１のＦｃ領域は、第１の修飾を含有し、
第２のＦｃ領域は、第２の修飾を含有し、第１の修飾及び第２の修飾は、
１）第１の修飾：Ｙ３４９Ｃ及びＴ３６６Ｗ；並びに
第２の修飾：Ｄ３５６Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、及びＦ４０５Ｋ；
２）第１の修飾：Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、及びＦ４０５Ｋ；並びに
第２の修飾：Ｄ３５６Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、及びＹ４０７Ｖ；
３）第１の修飾：Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、及びＫ４０９Ｅ；並びに
第２の修飾：Ｄ３５６Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、及びＦ４０５Ｋ；
４）第１の修飾：Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、及びＫ４０９Ａ；並びに
第２の修飾：Ｄ３５６Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、及びＦ４０５Ｋ；
５）第１の修飾：Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、Ｆ４０５Ｋ、Ｋ３６０Ｅ、及びＱ３４７Ｅ；並びに
第２の修飾：Ｄ３５６Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、及びＱ３４７Ｒ；
６）第１の修飾：Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、Ｆ４０５Ｋ、及びＱ３４７Ｒ；並びに
第２の修飾：Ｄ３５６Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、Ｋ３６０Ｅ、及びＱ３４７Ｅ；
７）第１の修飾：Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、Ｋ４０９Ａ、Ｋ３６０Ｅ、及びＱ３４７Ｅ；並びに
第２の修飾：Ｄ３５６Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、Ｆ４０５Ｋ、及びＱ３４７Ｒ；
８）第１の修飾：Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、Ｋ４０９Ａ、及びＱ３４７Ｒ；並びに
第２の修飾：Ｄ３５６Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、Ｆ４０５Ｋ、Ｋ３６０Ｅ、及びＱ３４７Ｅ；
９）第１の修飾：Ｔ３６６Ｗ、Ｋ４０９Ａ、及びＫ３９２Ｄ；並びに
第２の修飾：Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、Ｄ３９９Ｓ、及びＦ４０５Ｋ；
１０）第１の修飾：Ｔ３６６Ｗ及びＫ４０９Ａ；並びに
第２の修飾：Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ｇ、Ｙ４０７Ａ、及びＦ４０５Ｋ；
１１）第１の修飾：Ｔ３６６Ｗ、Ｋ４０９Ａ、及びＹ３４９Ｄ；並びに
第２の修飾：Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、Ｆ４０５Ｋ、及びＥ３５７Ａ；
１２）第１の修飾：Ｔ３６６Ｗ、Ｋ４０９Ａ、Ｙ３４９Ｄ、及びＳ３５４Ｄ；並びに
第２の修飾：Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、Ｆ４０５Ｋ、及びＥ３５７Ａ；
１３）第１の修飾：Ｔ３６６Ｗ及びＦ４０５Ｋ；並びに
第２の修飾：Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、及びＫ４０９Ａ；
１４）第１の修飾：Ｔ３６６Ｗ、Ｆ４０５Ｋ、及びＤ３９９Ｓ；並びに
第２の修飾：Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、Ｋ４０９Ａ、及びＫ３９２Ｄ；
１５）第１の修飾：Ｔ３６６Ｗ及びＦ４０５Ｋ；並びに
第２の修飾：Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ｇ、Ｙ４０７Ａ、及びＫ４０９Ａ；
１６）第１の修飾：Ｔ３６６Ｗ、Ｆ４０５Ｋ、及びＹ３４９Ｄ；並びに
第２の修飾：Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、Ｋ４０９Ａ、及びＥ３５７Ａ；
１７）第１の修飾：Ｔ３６６Ｗ、Ｆ４０５Ｋ、Ｙ３４９Ｄ、及びＳ３５４Ｄ；並びに
第２の修飾：Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、Ｋ４０９Ａ、及びＥ３５７Ａ
から選択された、いずれかの群に示すアミノ酸置換を含有し、アミノ酸の位置は、ＫＡＢＡＴ番号のＥＵインデックスに基づいて決定される。
【００４９】
いくつかの実施形態において、
第１のＦｃ領域は、第１の修飾を含有し、第２のＦｃ領域は、第２の修飾を含有し、第１の修飾は、アミノ酸置換Ｔ３６６Ｗ、及びＫ４０９Ａを含有し、第２の修飾はアミノ酸置換Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ｇ、Ｙ４０７Ａ、及びＦ４０５Ｋを含有し、アミノ酸の位置は、ＫＡＢＡＴ番号のＥＵインデックスに基づいて決定される。
【００５０】
いくつかの実施形態において、標的部分は、ＥＧＦＲと特異的に結合し、第１の成員の軽鎖は、ＣＤＲ１〜３を含有し、ＣＤＲ１のアミノ酸配列は、配列番号１０１に記載のとおり、ＣＤＲ２のアミノ酸配列は、配列番号１０２に記載のとおり、そしてＣＤＲ３のアミノ酸配列は、配列番号１０３に記載のとおりである。
【００５１】
いくつかの実施形態において、標的部分は、ＥＧＦＲと特異的に結合し、第１の成員の軽鎖は、軽鎖可変領域を含有し、軽鎖可変領域のアミノ酸配列は、配列番号１０４に記載のとおりである。
【００５２】
いくつかの実施形態において、標的部分は、ＥＧＦＲと特異的に結合し、第１の成員の軽鎖のアミノ酸配列は、配列番号３７に記載のとおりである。
【００５３】
いくつかの実施形態において、標的部分は、ＥＧＦＲと特異的に結合し、第１の成員の重鎖は、ＣＤＲ１〜３を含有し、ＣＤＲ１のアミノ酸配列は、配列番号１０５に記載のとおり、ＣＤＲ２のアミノ酸配列は、配列番号１０６に記載のとおり、そしてＣＤＲ３のアミノ酸配列は、配列番号１０７に記載のとおりである。
【００５４】
いくつかの実施形態において、標的部分は、ＥＧＦＲと特異的に結合し、第１の成員の重鎖は、重鎖可変領域を含有し、重鎖可変領域のアミノ酸配列は、配列番号１０８に記載のとおりである。
【００５５】
いくつかの実施形態において、標的部分は、ＥＧＦＲと特異的に結合し、第１の成員の重鎖のアミノ酸配列は、配列番号３９に記載のとおりである。
【００５６】
いくつかの実施形態において、標的部分は、ＥＧＦＲ変異体と特異的に結合し、第１の成員の軽鎖は、ＣＤＲ１〜３を含有し、ＣＤＲ１のアミノ酸配列は、配列番号１０９に記載のとおり、ＣＤＲ２のアミノ酸配列は、配列番号１１０に記載のとおり、そしてＣＤＲ３のアミノ酸配列は、配列番号１１１に記載のとおりである。
【００５７】
いくつかの実施形態において、標的部分は、ＥＧＦＲ変異体と特異的に結合し、第１の成員の軽鎖は、軽鎖可変領域を含有し、軽鎖可変領域のアミノ酸配列は、配列番号１１２に記載のとおりである。
【００５８】
いくつかの実施形態において、標的部分は、ＥＧＦＲ変異体と特異的に結合し、第１の成員の軽鎖のアミノ酸配列は、配列番号５３に記載のとおりである。
【００５９】
いくつかの実施形態において、標的部分は、ＥＧＦＲ変異体と特異的に結合し、第１の成員の重鎖は、ＣＤＲ１〜３を含有し、ＣＤＲ１のアミノ酸配列は、配列番号１１３に記載のとおり、ＣＤＲ２のアミノ酸配列は、配列番号１１４に記載のとおり、ＣＤＲ３のアミノ酸配列は、配列番号１１５に記載のとおりである。
【００６０】
いくつかの実施形態において、標的部分は、ＥＧＦＲ変異体と特異的に結合し、第１の成員の重鎖は、重鎖可変領域を含有し、当該重鎖可変領域のアミノ酸配列は、配列番号１１６に記載のとおりである。
【００６１】
いくつかの実施形態において、標的部分は、ＥＧＦＲ変異体と特異的に結合し、第１の成員の重鎖のアミノ酸配列は、配列番号５５に記載のとおりである。
【００６２】
いくつかの実施形態において、標的部分は、ＨＥＲ２／ｎｅｕと特異的に結合し、第１の成員の軽鎖は、ＣＤＲ１〜３を含有し、ＣＤＲ１のアミノ酸配列は、配列番号１１７及び配列番号１２５から選択され、ＣＤＲ２のアミノ酸配列は、配列番号１１８及び配列番号１２６から選択され、そしてＣＤＲ３のアミノ酸配列は、配列番号１１９及び配列番号１２７から選択される。
【００６３】
いくつかの実施形態において、標的部分は、ＨＥＲ２／ｎｅｕと特異的に結合し、第１の成員の軽鎖は、軽鎖可変領域を含有し、当該軽鎖可変領域のアミノ酸配列は、配列番号１２０及び配列番号１２８から選択される。
【００６４】
いくつかの実施形態において、標的部分は、ＨＥＲ２／ｎｅｕと特異的に結合し、第１の成員の軽鎖のアミノ酸配列は、配列番号４５及び配列番号４９から選択される。
【００６５】
いくつかの実施形態において、標的部分は、ＨＥＲ２／ｎｅｕと特異的に結合し、第１の成員の重鎖は、ＣＤＲ１〜３を含有し、ＣＤＲ１のアミノ酸配列は、配列番号１２１及び配列番号１２９から選択され、ＣＤＲ２のアミノ酸配列は、配列番号１２２及び配列番号１３０から選択され、そしてＣＤＲ３のアミノ酸配列は、配列番号１２３及び配列番号１３１から選択される。
【００６６】
いくつかの実施形態において、標的部分は、ＨＥＲ２／ｎｅｕと特異的に結合し、第１の成員の重鎖は、重鎖可変領域を含有し、当該重鎖可変領域のアミノ酸配列は、配列番号１２４及び配列番号１３２から選択される。
【００６７】
いくつかの実施形態において、標的部分は、ＨＥＲ２／ｎｅｕと特異的に結合し、第１の成員の重鎖のアミノ酸配列は、配列番号４７及び配列番号５１から選択される。
【００６８】
いくつかの実施形態において、標的部分は、ＧＰＣ３と特異的に結合し、第１の成員の抗体軽鎖は、ＣＤＲ１〜３を含有し、ＣＤＲ１のアミノ酸配列は、配列番号１３３に記載のとおり、ＣＤＲ２のアミノ酸配列は、配列番号１３４に記載のとおり、そしてＣＤＲ３のアミノ酸配列は、配列番号１３５に記載のとおりである。
【００６９】
いくつかの実施形態において、標的部分は、ＧＰＣ３と特異的に結合し、第１の成員の軽鎖は、軽鎖可変領域を含有し、軽鎖可変領域のアミノ酸配列は、配列番号１３６に記載のとおりである。
【００７０】
いくつかの実施形態において、標的部分は、ＧＰＣ３と特異的に結合し、第１の成員の軽鎖のアミノ酸配列は、配列番号５７に記載のとおりである。
【００７１】
いくつかの実施形態において、標的部分は、ＧＰＣ３と特異的に結合し、第１の成員の重鎖は、ＣＤＲ１〜３を含有し、ＣＤＲ１のアミノ酸配列は、配列番号１３７に記載のとおり、ＣＤＲ２のアミノ酸配列は、配列番号１３８に記載のとおり、そしてＣＤＲ３のアミノ酸配列は、配列番号１３９に記載のとおりである。
【００７２】
いくつかの実施形態において、標的部分は、ＧＰＣ３と特異的に結合し、第１の成員の抗体重鎖は、重鎖可変領域を含有し、当該重鎖可変領域のアミノ酸配列は、配列番号１４０に記載のとおりである。
【００７３】
いくつかの実施形態において、標的部分は、ＧＰＣ３と特異的に結合し、第１の成員の重鎖のアミノ酸配列は、配列番号５９に記載のとおりである。
【００７４】
いくつかの実施形態において、標的部分は、ＦＡＰと特異的に結合し、第１の成員の軽鎖は、ＣＤＲ１〜３を含有し、ＣＤＲ１のアミノ酸配列は、配列番号１４１に記載のとおり、ＣＤＲ２のアミノ酸配列は、配列番号１４２に記載のとおり、そしてＣＤＲ３のアミノ酸配列は、配列番号１４３に記載のとおりである。
【００７５】
いくつかの実施形態において、標的部分は、ＦＡＰと特異的に結合し、第１の成員の軽鎖は、軽鎖可変領域を含有し、軽鎖可変領域のアミノ酸配列は、配列番号１４４に記載のとおりである。
【００７６】
いくつかの実施形態において、標的部分は、ＦＡＰと特異的に結合し、第１の成員の軽鎖のアミノ酸配列は、配列番号６１に記載のとおりである。
【００７７】
いくつかの実施形態において、標的部分は、ＦＡＰと特異的に結合し、第１の成員の重鎖は、ＣＤＲ１〜３を含有し、ＣＤＲ１のアミノ酸配列は、配列番号１４５に記載のとおり、ＣＤＲ２のアミノ酸配列は、配列番号１４６に記載のとおり、そしてＣＤＲ３のアミノ酸配列は、配列番号１４７に記載のとおりである。
【００７８】
いくつかの実施形態において、標的部分は、ＦＡＰと特異的に結合し、第１の成員の重鎖は、重鎖可変領域を含有し、当該重鎖可変領域のアミノ酸配列は、配列番号１４８に記載のとおりである。
【００７９】
いくつかの実施形態において、標的部分は、ＦＡＰと特異的に結合し、第１の成員の重鎖のアミノ酸配列は、配列番号６３に記載のとおりである。
【００８０】
いくつかの実施形態において、標的部分は、Ｍｕｃ１と特異的に結合し、第１の成員の軽鎖は、ＣＤＲ１〜３を含有し、ＣＤＲ１のアミノ酸配列は、配列番号１４９に記載のとおり、ＣＤＲ２のアミノ酸配列は、配列番号１５０に記載のとおり、そしてＣＤＲ３のアミノ酸配列は、配列番号１５１に記載のとおりである。
【００８１】
いくつかの実施形態において、標的部分は、Ｍｕｃ１と特異的に結合し、第１の成員の軽鎖は、軽鎖可変領域を含有し、軽鎖可変領域のアミノ酸配列は、配列番号１５２に記載のとおりである。
【００８２】
いくつかの実施形態において、標的部分は、Ｍｕｃ１と特異的に結合し、第１の成員の軽鎖のアミノ酸配列は、配列番号６５に記載のとおりである。
【００８３】
いくつかの実施形態において、標的部分は、Ｍｕｃ１と特異的に結合し、第１の成員の重鎖は、ＣＤＲ１〜３を含有し、ＣＤＲ１のアミノ酸配列は、配列番号１５３に記載のとおり、該ＣＤＲ２のアミノ酸配列は、配列番号１５４に記載のとおり、そしてＣＤＲ３のアミノ酸配列は、配列番号１５５に記載のとおりである。
【００８４】
いくつかの実施形態において、標的部分は、Ｍｕｃ１と特異的に結合し、第１の成員の重鎖は、重鎖可変領域を含有し、当該重鎖可変領域のアミノ酸配列は、配列番号１５６に記載のとおりである。
【００８５】
いくつかの実施形態において、標的部分は、Ｍｕｃ１と特異的に結合し、第１の成員の重鎖のアミノ酸配列は、配列番号６７に記載のとおりである。
【００８６】
いくつかの実施形態において、標的部分は、メソセリンと特異的に結合し、第１の成員の軽鎖は、ＣＤＲ１〜３を含有し、ＣＤＲ１のアミノ酸配列は、配列番号１６５に記載のとおり、ＣＤＲ２のアミノ酸配列は、配列番号１６６に記載のとおり、そしてＣＤＲ３のアミノ酸配列は、配列番号１６７に記載のとおりである。
【００８７】
いくつかの実施形態において、標的部分は、メソセリンと特異的に結合し、第１の成員の軽鎖は、軽鎖可変領域を含有し、軽鎖可変領域のアミノ酸配列は、配列番号１６８に記載のとおりである。
【００８８】
いくつかの実施形態において、標的部分は、メソセリンと特異的に結合し、第１の成員の軽鎖のアミノ酸配列は、配列番号７３に記載のとおりである。
【００８９】
いくつかの実施形態において、標的部分は、メソセリンと特異的に結合し、第１の成員の重鎖は、ＣＤＲ１〜３を含有し、ＣＤＲ１のアミノ酸配列は、配列番号１６９に記載のとおり、ＣＤＲ２のアミノ酸配列は、配列番号１７０に記載のとおり、そしてＣＤＲ３のアミノ酸配列は、配列番号１７１に記載のとおりである。
【００９０】
いくつかの実施形態において、標的部分は、メソセリンと特異的に結合し、第１の成員の重鎖は、重鎖可変領域を含有し、当該重鎖可変領域のアミノ酸配列は、配列番号１７２に記載のとおりである。
【００９１】
いくつかの実施形態において、標的部分は、メソセリンと特異的に結合し、第１の成員の重鎖のアミノ酸配列は、配列番号７５に記載のとおりである。
【００９２】
いくつかの実施形態において、標的部分は、ＭＵＣ５ＡＣと特異的に結合し、第１の成員の軽鎖は、ＣＤＲ１〜３を含有し、ＣＤＲ１のアミノ酸配列は、配列番号１５７に記載のとおり、ＣＤＲ２のアミノ酸配列は、配列番号１５８に記載のとおり、そしてＣＤＲ３のアミノ酸配列は、配列番号１５９に記載のとおりである。
【００９３】
いくつかの実施形態において、標的部分は、ＭＵＣ５ＡＣと特異的に結合し、第１の成員の軽鎖は、軽鎖可変領域を含有し、軽鎖可変領域のアミノ酸配列は、配列番号１６０に記載のとおりである。
【００９４】
いくつかの実施形態において、標的部分は、ＭＵＣ５ＡＣと特異的に結合し、第１の成員の軽鎖のアミノ酸配列は、配列番号６９に記載のとおりである。
【００９５】
いくつかの実施形態において、標的部分は、ＭＵＣ５ＡＣと特異的に結合し、第１の成員の重鎖は、ＣＤＲ１〜３を含有し、ＣＤＲ１のアミノ酸配列は、配列番号１６１に記載のとおり、ＣＤＲ２のアミノ酸配列は、配列番号１６２に記載のとおり、そしてＣＤＲ３のアミノ酸配列は、配列番号１６３に記載のとおりである。
【００９６】
いくつかの実施形態において、標的部分は、ＭＵＣ５ＡＣと特異的に結合し、第１の成員の重鎖は、重鎖可変領域を含有し、当該重鎖可変領域のアミノ酸配列は、配列番号１６４に記載のとおりである。
【００９７】
いくつかの実施形態において、標的部分は、ＭＵＣ５ＡＣと特異的に結合し、第１の成員の重鎖のアミノ酸配列は、配列番号７１に記載のとおりである。
【００９８】
いくつかの実施形態において、第１の成員の重鎖における第１のＦｃ領域のアミノ酸配列は、配列番号１、４、５、６、７、９、１１、１３、１５、１７、１９、２１、２２、２４、２６、２７、及び２９から選択される。
【００９９】
いくつかの実施形態において、第２の成員に含有される免疫調節物質のアミノ酸配列は、配列番号１７３〜１８０から選択される。
【０１００】
いくつかの実施形態において、第２の成員に含有される第２のＦｃ領域のアミノ酸配列は、配列番号２、３、８、１０、１２、１４、１６、１８、２０、２３、２５、及び２８から選択される。
【０１０１】
いくつかの実施形態において、第２の成員に含有されるポリペプチドのアミノ酸配列は、配列番号７７、８０、８２、８４、８６、８９、９１、及び９７から選択される。
【０１０２】
いくつかの実施形態において、第１の成員に含有される軽鎖のアミノ酸配列は、配列番号３７、４５、４９、５３、５７、６１、６５、６９、及び７３から選択され、第１の成員に含有される重鎖のアミノ酸配列は、配列番号３９、４７、５１、５５、５９、６３、６７、７１、及び７５から選択され、そして第２の成員に含有されるポリペプチドのアミノ酸配列は、配列番号７７、８０、８２、８４、８６、８９、９１、及び９７から選択される。
【０１０３】
いくつかの実施形態において、ノブアンドホール修飾は、ノブ修飾及びホール修飾を含有し、ノブ修飾は、アミノ酸置換Ｙ３４９Ｃ及びＴ３６６Ｗを含有し、ホール修飾は、アミノ酸置換Ｄ３５６Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、及びＹ４０７Ｖを含有し、アミノ酸の位置は、ＫＡＢＡＴ番号のＥＵインデックスに基づいて決定される。場合によっては、ノブ修飾は、第１のＦｃ領域に含有され、ホール修飾は、第２のＦｃ領域に含有される。場合によっては、ノブ修飾は、第２のＦｃ領域に含有され、そしてホール修飾は、第１のＦｃ領域に含有される。
【０１０４】
別の態様において、本開示は、単離されたポリヌクレオチドを提供し、当該単離されたポリヌクレオチドは、本開示に係るタンパク質性ヘテロ二量体をコードする。いくつかの実施形態において、単離されたポリヌクレオチドは、本開示に係るタンパク質性ヘテロ二量体のサブユニット（例えば、成員）又は断片をコードする。
【０１０５】
別の態様において、本開示は、ベクターを提供し、当該ベクターは、本開示に係る単離されたポリヌクレオチドを包含する。
【０１０６】
別の態様において、本開示は、単離された宿主細胞を提供し、当該宿主細胞は、本開示に係る単離されたポリヌクレオチド又はベクターを包含する。
【０１０７】
別の態様において、本開示は、タンパク質混合物を提供し、当該タンパク質混合物は、
１）本開示に係るタンパク質性ヘテロ二量体と、
２）当該タンパク質性ヘテロ二量体の第１の成員のうちの２個により形成された第１のホモ二量体と、
３）タンパク質性ヘテロ二量体の第２の成員のうちの２個により形成された第２のホモ二量体とを含有し、
タンパク質性ヘテロ二量体のタンパク質混合物におけるパーセンテージは、少なくとも５０％である。いくつかの実施形態において、第２のホモ二量体のパーセンテージは、第１のホモ二量体のパーセンテージより小さい。いくつかの実施形態において、第２のホモ二量体のパーセンテージは、最大１０％である。いくつかの実施形態において、タンパク質混合物は、第２のホモ二量体を実質的に含有しない。例えば、タンパク質混合物は、それを発現する細胞から直接得られてもよい。例えば、タンパク質混合物におけるタンパク質性ヘテロ二量体は、発現後に精製されない。例えば、タンパク質の発現後に、混合物から望ましくないタンパク質二量体又は多量体（例えば、タンパク質ホモ二量体）は、除去されない。
【０１０８】
別の態様において、本開示は、医薬組成物を提供し、当該医薬組成物は、本開示に係るタンパク質性ヘテロ二量体、又は本開示に係るタンパク質混合物を含有し、任意選択的に薬学的に許容される賦形剤を含有する。
【０１０９】
いくつかの実施形態において、医薬組成物は、経口投与、静脈内投与、筋肉内投与、腫瘍部位でのインサイチュ投与、吸入、直腸投与、膣内投与、経皮投与、又は皮下貯蔵所による投与用のものとして製造される。
【０１１０】
別の態様において、本開示は、腫瘍又は腫瘍細胞の成長阻害のための医薬品及び／又はキットの製造における本開示に係るタンパク質性ヘテロ二量体又はタンパク質混合物の用途を提供する。
【０１１１】
別の態様において、本開示は、腫瘍又は腫瘍細胞の成長の阻害方法を提供し、当該方法は、腫瘍又は腫瘍細胞を有効量の本開示に係るタンパク質性ヘテロ二量体又は本開示に係るタンパク質混合物と接触させることを含有する。いくつかの実施形態において、当該接触は、インビトロ又はインビボで行われる。
【０１１２】
例えば、本開示は、適用対象における腫瘍／癌の治療方法を提供し、当該方法は、有効量の本開示に係るタンパク質性ヘテロ二量体又は本開示に係るタンパク質混合物を適用対象に投与することを包含する。
【０１１３】
別の態様において、本開示は、タンパク質性ヘテロ二量体、又はタンパク質性ヘテロ二量体を含有するタンパク質混合物の製造方法を提供し、当該方法は、
（ｉ）タンパク質性ヘテロ二量体の発現に影響を与える条件下で本開示に係る宿主細胞を培養することと、
（ｉｉ）発現されたタンパク質性ヘテロ二量体又は発現されたタンパク質性ヘテロ二量体を含有するタンパク質混合物を得ること
とを包含する。
【０１１４】
本開示の他の態様及び有益な効果は、本開示の例示的実施形態が示される以下の詳細な説明により当業者に明確なものになる。なお、本開示は、他の及び異なる実施形態を有してもよく、そのいくつかの詳細は本開示から逸脱することなく様々な点において変更できる。従って、図面及び明細書は、本質的に限定するためのものではなく例示的なものと見なされるべきである。
【援用による参照資料の組み込み】
【０１１５】
本明細書で言及される全ての刊行物、特許及び特許出願は、個々の刊行物、特許、又は特許出願が援用により具体的で且つ個別に組み込まれる場合と同じ程度に、援用により本明細書に組み込まれる。
【図面の簡単な説明】
【０１１６】
本開示の新規な特徴は、添付の特許請求の範囲に詳細に記載される。例示的な実施形態が記述される以下の詳細な説明を参照することにより、本開示の特徴及び有益な効果に対するよりよい理解を得ることができる。実施形態において、本開示の原理が適用され、以下の各図が参照される。
【図１Ａ】図１Ａは、本発明に係るタンパク質性ヘテロ二量体の例を示す。
【図１Ｂ】図１Ｂは、本発明に係るタンパク質性ヘテロ二量体の例を示す。
【図２Ａ】図２Ａは、ＳＤＳ−ＰＡＧＥ分析による、本発明に係るタンパク質性ヘテロ二量体の形成の結果を示す。
【図２Ｂ】図２Ｂは、ＳＤＳ−ＰＡＧＥ分析による、本発明に係るタンパク質性ヘテロ二量体の形成の結果を示す。
【図２Ｃ】図２Ｃは、ＳＤＳ−ＰＡＧＥ分析による、本発明に係るタンパク質性ヘテロ二量体の形成の結果を示す。
【図２Ｄ】図２Ｄは、ＳＤＳ−ＰＡＧＥ分析による、本発明に係るタンパク質性ヘテロ二量体の形成の結果を示す。
【図２Ｅ】図２Ｅは、ＳＤＳ−ＰＡＧＥ分析による、本発明に係るタンパク質性ヘテロ二量体の形成の結果を示す。
【図２Ｆ】図２Ｆは、ＳＤＳ−ＰＡＧＥ分析による、本発明に係るタンパク質性ヘテロ二量体の形成の結果を示す。
【図２Ｇ】図２Ｇは、ＳＤＳ−ＰＡＧＥ分析による、本発明に係るタンパク質性ヘテロ二量体の形成の結果を示す。
【図３】図３は、異なるタンパク質性ヘテロ二量体の形成の比較結果を示す。
【図４】図４は、異なるＦｃ領域と融合された免疫調節物質のタンパク質発現の結果比較を示す。
【図５】図５は、本発明に係るタンパク質性ヘテロ二量体の特異的な標的結合親和性を示す。
【図６】図６は、本発明に係るタンパク質性ヘテロ二量体の標的結合親和性を示す。
【図７】図７は、本発明に係るタンパク質性ヘテロ二量体の特異的な標的結合親和性を示す。
【図８Ａ】図８Ａは、本発明に係るタンパク質性ヘテロ二量体の特異的な標的結合親和性を示す。
【図８Ｂ】図８Ｂは、本発明に係るタンパク質性ヘテロ二量体の特異的な標的結合親和性を示す。
【図９】図９は、本発明に係るタンパク質性ヘテロ二量体の特異的な標的結合親和性を示す。
【図１０】図１０は、本発明に係るタンパク質性ヘテロ二量体の特異的な標的結合親和性を示す。
【図１１】図１１は、本発明に係るタンパク質性ヘテロ二量体における免疫調節物質の存在を示す。
【図１２】図１２は、本発明に係るタンパク質性ヘテロ二量体における免疫調節物質の存在を示す。
【図１３Ａ】図１３Ａは、本発明に係るタンパク質性ヘテロ二量体の抗ウイルス活性を示す。
【図１３Ｂ】図１３Ｂは、本発明に係るタンパク質性ヘテロ二量体の抗ウイルス活性を示す。
【図１３Ｃ】図１３Ｃは、本発明に係るタンパク質性ヘテロ二量体の抗ウイルス活性を示す。
【図１４Ａ】図１４Ａは、本発明に係るタンパク質性ヘテロ二量体のインターロイキン活性を示す。
【図１４Ｂ】図１４Ｂは、本発明に係るタンパク質性ヘテロ二量体のインターロイキン活性を示す。
【図１５Ａ】図１５Ａは、本発明に係るタンパク質性ヘテロ二量体のインビボ抗腫瘍活性を示す。
【図１５Ｂ】図１５Ｂは、本発明に係るタンパク質性ヘテロ二量体のインビボ抗腫瘍活性を示す。
【図１６Ａ】図１６Ａは、本発明に係るタンパク質性ヘテロ二量体のインビボ抗腫瘍活性を示す。
【図１６Ｂ】図１６Ｂは、本発明に係るタンパク質性ヘテロ二量体のインビボ抗腫瘍活性を示す。
【図１６Ｃ】図１６Ｃは、本発明に係るタンパク質性ヘテロ二量体のインビボ抗腫瘍活性を示す。
【図１７】図１７は、本発明に係るタンパク質性ヘテロ二量体のインビボ抗腫瘍活性を示す。
【図１８Ａ】図１８Ａは、本発明に係るタンパク質性ヘテロ二量体のインビボ抗腫瘍活性を示す。
【図１８Ｂ】図１８Ｂは、本発明に係るタンパク質性ヘテロ二量体のインビボ抗腫瘍活性を示す。
【図１９】図１９は、本発明に係るタンパク質性ヘテロ二量体のインビボ標的化活性を示す。
【図２０】図２０は、本発明に係るタンパク質性ヘテロ二量体のＡＤＣＣ活性を示す。
【図２１】図２１は、本発明に係るタンパク質性ヘテロ二量体の特異的な標的結合親和性を示す。
【図２２】図２２は、本発明に係るタンパク質性ヘテロ二量体の特異的な標的結合親和性を示す。
【図２３】図２３は、本発明に係るタンパク質性ヘテロ二量体の特異的な標的結合親和性を示す。
【図２４】図２４は、本発明に係るタンパク質性ヘテロ二量体のインビボ抗腫瘍活性を示す。
【図２５】図２５は、本発明に係るタンパク質性ヘテロ二量体のインビボ抗腫瘍活性を示す。
【発明を実施するための形態】
【０１１７】
本開示の実施形態を説明するにあたり、下記実施形態は、例示的なものとして提供され、本開示の実施に際し、本明細書に記載の本開示の実施形態の様々な代替的な方式を採用できることが理解されるべきである。当業者は、本開示から逸脱することなく、多数の変形、変更、及び置換に想到し得る。
【０１１８】
特に定義される場合を除き、本明細書で使用される技術用語及び科学用語は、当業者が通常理解されるものと同一の意味を有する。本明細書に記載の方法及び材料に類似する又は同等なものは、本発明の実施又はテストのために利用できるが、以下適切な方法又は材料が説明される。矛盾が生じた場合、本明細書及びこの中に記載の定義に準拠する。また、材料、方法、及び実施例は、例示的なものであり、制限を加えるためのものではない。当業者は、本開示から逸脱することなく、多数の変形、変更、及び置換に想到し得る。
【０１１９】
文脈の中で特に説明がなされる場合を除き、本明細書で使用される単数形「１個、１種」及び「当該」は、一般に、複数の言及も包含する。
【０１２０】
本明細書で使用される用語「タンパク質性」とは、一般に、ポリペプチド又はタンパク質に関連する、類似するもの、又はポリペプチド若しくはタンパク質そのものに由来する材料又は分子を指す。例えば、本開示のタンパク質性ヘテロ二量体は、ヘテロ二量体タンパク質、又は２個以上のポリペプチドを含有するヘテロ二量体であってもよい。
【０１２１】
本明細書で使用される用語「ヘテロ二量体」とは、一般に、２個の異なる成員からなる分子（例えば、タンパク質性分子）を指す。ヘテロ二量体の２個の成員が構造的に、機能的に、活性的に及び／又は組成的に相違してもよい。例えば、２個の異なる成員がこれらのポリペプチドを形成するアミノ酸残基の順番、数量又は種類において相違するポリペプチドを含有してもよい。ヘテロ二量体の２個の異なる成員のそれぞれが１個、２個の又はそれ以上のユニット、ポリペプチド鎖又は部分を独立して含有してもよい。
【０１２２】
本明細書で使用される用語「標的部分」とは、一般に、標的分子、細胞、粒子、組織又は凝集体と、特異的、選択的、又は優先的に結合する分子、複合体又は凝集体を指す。例えば、標的部分は、抗体、抗原結合抗体断片、二重特異性抗体、又は抗体に基づく他の分子若しくは化合物であってもよい。標的部分の他の例として、アプタマー、アビマー、受容体結合リガンド、核酸、ビオチン−アビジン結合対、結合ペプチド、又はタンパク質等を包含するが、これらに限定されない。用語「標的部分」及び「結合部分」は、本明細書で区別無く使用できる。
【０１２３】
本明細書で使用される用語「腫瘍抗原」とは、一般に、宿主の中で免疫応答を引き起こす能力を有し得る、腫瘍細胞の中で又は腫瘍細胞によって産生される抗原性物質を指す。例えば、腫瘍抗原は、腫瘍細胞の一部を構成し、腫瘍特異的細胞傷害性Ｔリンパ球を誘導できるタンパク質、ポリペプチド、ペプチド、又はその断片であってもよい。腫瘍抗原ペプチドは、腫瘍抗原が腫瘍細胞の中で分解された結果として生成され、且つ、ＨＬＡ分子との結合により細胞表面で発現され、腫瘍特異的細胞傷害性Ｔリンパ球を誘導又は活性化できるペプチドであってもよい。いくつかの実施形態において、用語「腫瘍抗原」とは、癌細胞において排他的に又は優先的に又は示差的に発現される、及び／又は、癌細胞に関連するとして発見されることにより、癌に優先的又は特異的な標的を提供する生体分子（例えば、タンパク質、炭水化物、糖タンパク質等）を指してもよい。例えば、優先的に発現されることは、生物体中の他の細胞に対して優先的に発現される、生物体内の特定領域（例えば、特定の器官内又は組織内）で優先的に発現されることであってもよい。
【０１２４】
用語「腫瘍抗原エピトープ」及び「腫瘍抗原決定基」とは、本明細書で区別無く使用でき、一般に腫瘍特異的細胞傷害性Ｔリンパ球を誘導する腫瘍抗原に存在するアミノ酸配列の部位を指す。
【０１２５】
用語「免疫調節物質」及び「免疫調節剤」とは、本明細書で区別無く使用でき、一般に免疫系の機能に影響を与える物質を指す。免疫調節物質は、免疫応答を増強又は減少させることができる。例えば、免疫調節物質は、細菌、ケモカイン、インターロイキン、リン酸グアノシン−グアニン（ＣｐＧ）オリゴデオキシヌクレオチド及びグルカンに由来するサイトカイン、顆粒球コロニー刺激因子（Ｇ−ＣＳＦ）、インターフェロン、イミキモド、細胞膜画分の組み換え、合成及び／又は天然の製剤を包含するがこれらに限定されない免疫療法用活性化薬であってもよい。場合によって、免疫調節物質は、サイトカインである。場合によって、免疫調節物質は、抗体又はその抗原結合断片のいずれでもない。場合によって、免疫調節物質は、免疫グロブリン分子又はその断片（例えば、抗原結合断片）のいずれでもない。
【０１２６】
いくつかの実施形態において、免疫調節物質は、インターフェロン、インターロイキン、ケモカイン、リンホカイン及び腫瘍壊死因子からなる群から選択される。例えば、免疫調節物質は、インターフェロンα、インターフェロンλ、インターフェロンβ、インターロイキン１０、インターロイキン２、及びスーパーインターロイキン２からなる群から選択されてもよい。
【０１２７】
本明細書において、タンパク質性ヘテロ二量体をとの関連で使用される用語「発現量」とは、一般に、発現時、例えば、宿主細胞によって発現される機能的形態で生成されたタンパク質性ヘテロ二量体の量を指す。
【０１２８】
本明細書で使用される用語「二量体化配列」とは、一般に、二量体を形成する又は二量体化を受ける事ができるアミノ酸配列を指す。いくつかの実施形態において、二量体は、２個の異なる成員によって形成されたヘテロ二量体である。場合によって、ヘテロ二量体の２個の異なる成員は、異なる二量体化配列を含有してもよい。
【０１２９】
本明細書で使用される用語「ヘテロ二量体化」とは、一般に、２個の異なる成員（例えば、２つの異なるポリペプチド）の間に、例えば、前記２個の異なる成員の間に共有結合を形成する又は形成しない複合、会合、又は凝集により、ヘテロ二量体を形成するプロセスを指す。成員
【０１３０】
本明細書で使用される用語「共有結合」とは、一般に、電子の共有により原子同士間に形成された化学結合を指す。例えば、共有結合は、極性又は無極性である。いくつかの実施形態において、共有結合は、ジスルフィド結合である。
【０１３１】
本明細書で使用される用語「非共有結合対親和性」とは、一般に、非共有結合性相互作用により、例えば、イオン対、水素結合、双極子−双極子相互作用、電荷移動相互作用、π−π相互作用、陽イオン−π電子相互作用、ファンデルワールス相互作用及び分散相互作用、疎水性（親油性）相互作用、複合体形成（例えば、遷移金属陽イオンによる複合体形成）又はこれらの相互作用の組み合わせにより互いに結合できる二量体化配列又はヘテロ二量体化配列を指す。
【０１３２】
本明細書で使用される用語「リンカー」とは、一般に、２個のポリペプチド配列を連結又は接続する、例えば、２つのポリペプチドドメインを接続する合成アミノ酸配列を指す。リンカーは、ペプチド結合によって２つのアミノ酸配列を連結できる。いくつかの実施形態において、本開示に係るリンカーは、線形配列において生物学的に活性な部分を第２の部分に連結させる。
【０１３３】
用語「ポリペプチド」、「ペプチド」、及び「タンパク質」とは、本明細書で区別無く使用でき、任意の長さのアミノ酸のポリマーを指す。当該ポリマーは、直鎖状又は分岐状であり、修飾されたアミノ酸を含有してもよく、非アミノ酸によって中断されてもよい。当該用語は、ジスルフィド結合形成、グリコシル化、脂質化、アセチル化、リン酸化、又は標識成分との結合等他の操作によって修飾されたアミノ酸ポリマーをも包含する。当該用語は、１個以上のアミノ酸残基が対応する天然的に存在するアミノ酸の人工的化学類似体であるアミノ酸ポリマー、天然的に存在するアミノ酸ポリマーにも適用される。当該用語は、ポリペプチドを構成するアミノ酸を連結する典型的なペプチド結合における変異体をさらに包含する。例えば、「ペプチド」、「ポリペプチド」、及び「タンパク質」とは、α炭素がペプチド結合を介して接続されたアミノ酸の鎖であってもよい。従って、鎖の一方の末端（アミノ末端）における末端アミノ酸は、遊離アミノ基を有し、鎖の他方の末端（カルボキシ末端）における末端アミノ酸は、遊離カルボキシル基を有してもよい。本明細書で使用される用語「アミノ末端」（Ｎ末端と略記される）とは、一般に、ペプチドのアミノ末端のアミノ酸における遊離α−アミノ基又はペプチド内の任意の他の位置におけるアミノ酸のα−アミノ基（ペプチド結合に関与する場合はイミノ基）を指す。同様に、用語「カルボキシ末端」とは、一般に、ペプチドのカルボキシ末端における遊離カルボキシル基又はペプチド内の任意の他の位置におけるアミノ酸のカルボキシル基を指す。ペプチドは、アミド結合ではないエーテルによって連結されたアミノ酸等のペプチド等価体を包含するが、これに限定されないず、任意のポリアミノ酸を実質的に含有してもよい。
【０１３４】
本明細書で使用される用語「アミノ酸」とは、一般に、Ｄ又はＬ光学異性体、又はこれらの両方、アミノ酸類似体及びペプチド等価体を包含するが、これに限定されない、天然及び／又は非天然的に存在するもしくは合成されたアミノ酸を指す。標準的な１文字或３文字の略号がアミノ酸を指定するために用いられる。
【０１３５】
本明細書で使用される用語「天然Ｌ−アミノ酸」とは、一般に、グリシン（Ｇ）、プロリン（Ｐ）、アラニン（Ａ）、バリン（Ｖ）、ロイシン（Ｌ）、イソロイシン（Ｉ）、メチオニン（Ｍ）、システイン（Ｃ）、フェニルアラニン（Ｆ）、チロシン（Ｙ）、トリプトファン（Ｗ）、ヒスチジン（Ｈ）、リジン（Ｋ）、アルギニン（Ｒ）、グルタミン（Ｑ）、アスパラギン（Ｎ）、グルタミン酸（Ｅ）、アスパラギン酸（Ｄ）、セリン（Ｓ）、又はトレオニン（Ｔ）のＬ光学異性体を指す。
【０１３６】
本明細書で使用される用語「非自然発生」とは、一般に、野生型又は天然的に存在する配列（例えば、適用対象で発見された配列）に対応しない、相補的でない又は高度の相同性を有しないポリペプチド又はポリヌクレオチド配列を指す。例えば、適切に整列された場合、天然の配列と比較して、非自然発生ポリペプチド又は断片は、９９％、９８％、９５％、９０％、８０％、７０％、６０％、５０％未満の、又はさらに少ないアミノ酸配列同一性を共有してもよい。代替的に、適切に整列された場合、天然の配列と比較して、非自然発生ポリペプチド又は、断片は９９％、９８％、９５％、９０％、８０％、７０％、６０％、５０％、より高い、又はさらに高いアミノ酸配列同一性を共有してもよい。
【０１３７】
本明細書で使用される用語「親水性」及び「疎水性」とは、一般に、物質の水との親和性を指す。親水性物質は、水に対して強い親和性を有し、水に溶解する、混合する又は水に濡れる傾向にあり、一方で、疎水性物質は、実質的に水との親和性がなく、水を弾くか水を吸収しない傾向にあり、且つ、水に溶解しない、水と混合しない又は水に濡れない傾向にある。アミノ酸は、その疎水性に基づいて特徴づけられる。これに関して多くの尺度が開発されている。その一例として、Ｈｏｐｐ，ＴＰ，Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ＵＳＡ（１９８１）７８：３８２４に記載のＬｅｖｉｔｔ，Ｍら，Ｊ  Ｍｏｌ  Ｂｉｏｌ（１９７６）１０４：５９によって開発された尺度が挙げられる。「親水性アミノ酸」の例として、アルギニン、リジン、トレオニン、アラニン、アスパラギン及びグルタミンが挙げられる。特に注意したいのは、親水性アミノ酸のアスパラギン酸、グルタミン酸、セリン、及びグリシンである。「疎水アミノ酸」の例として、トリプトファン、チロシン、フェニルアラニン、メチオニン、ロイシン、イソロイシン、及びバリンが挙げられる。
【０１３８】
タンパク質性分子（例えば、ポリペプチド又はタンパク質）に関連して使用される場合、用語「断片」とは、一般に、治療的及び／又は生物学的活性の一部を維持する又は維持しない天然の生物学的に活性なタンパク質の短縮形式を指す。
【０１３９】
タンパク質性分子（例えば、ポリペプチド又はタンパク質）に関連して使用される場合、用語「変異体」とは、一般に、生物学的に活性なタンパク質の治療的及び／又は生物学的活性の、少なくとも一部を維持できる、天然の生物学的に活性なタンパク質と配列相同性を有するタンパク質性分子を指す。例えば、参照用の生物学的に活性なタンパク質と比較して、変異体タンパク質は、少なくとも６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％のアミノ酸配列同一性を共有してもよい。いくつかの実施形態において、「変異体」は、意図的に修飾されたタンパク質、例えば、部位特異的突然変異誘発、コーディング遺伝子の合成、挿入又は突然変異により偶発的に修飾されたタンパク質を包含する。
【０１４０】
用語「コンジュゲートした」、「連結した」、「融合した」、及び「融合」とは、本明細書で区別無く使用でき、一般に、例えば、化学的結合又は組換えを包含される方式により、２個以上の化学元素、配列、又は成分を連結することを指す。例えば、プロモーター又はエンハンサーが配列の転写に影響を与える場合、コーディング配列と操作可能に連結される。一般に、「操作可能にリンクされる」とは、連結されたＤＮＡ配列がリーディングフェースで、又はインフレームにおいて連続することを指す。「インフレーム融合」とは、元のＯＲＦの正しいリーディングフレームが維持される方式により、２個以上のオープンリーディングフレーム（ＯＲＦ）を連結して連続する比較的長いＯＲＦを形成することを指す。従って、得られた「融合ポリペプチド」は、元のＯＲＦによってコードされるポリペプチドに対応する２個以上の断片（当該断片は、天然で一般にこのように連結されていない）を含有する単一のタンパク質である。「融合部位」とは、２個以上の断片が連結された配列を指す。場合によっては、融合部位は、連結された２個以上の断片における配列と同一の配列であってもよい。場合によって、融合部位は、連結された２個以上の断片の配列のいずれとも同一ではないギャップ断片をさらに含有してもよい。
【０１４１】
ポリペプチドを含有する文脈の中で、「線形配列」又は「配列」は、ポリペプチドにおけるアミノ酸のアミノ基からカルボキシ末端へ、互いに隣接する残基がポリペプチドの一次構造において連続する方向上の順番である。「部分配列」は、ポリペプチドの一部を形成し、１個又は２個の方向に追加の残基を含有する線形配列である。
【０１４２】
用語「ポリヌクレオチド」、「核酸」、「ヌクレオチド」、及び「オリゴヌクレオチド」とは、本明細書で区別無く使用でき、一般に、任意の長さのヌクレオチドのポリマー形態、即ちデオキシリボヌクレオチド又はリボヌクレオチド、又はその類似体を指す。ポリヌクレオチドは、任意の三次元構造を有してもよく、任意の既知又は未知の機能を実行できる。以下は、ポリヌクレオチドの非限定的である：遺伝子又は遺伝子断片のコーディング又は非コーディング領域、連鎖解析によって定義された遺伝子座、エクソン、イントロン、伝令ＲＮＡ（ｍＲＮＡ）、転移ＲＮＡ、リボソームＲＮＡ、リボザイム、ｃＤＮＡ、組換えポリヌクレオチド、分岐ポリヌクレオチド、プラスミド、ベクター、任意の配列の単離されたＤＮＡ、任意の配列の単離されたＲＮＡ、核酸プローブ、及びプライマー。ポリヌクレオチドは、メチル化ヌクレオチド及びヌクレオチド類似体等、修飾されたヌクレオチドが包含されてもよい。修飾が存在する場合、重合体の会合前又は後に、ヌクレオチド構造に対して修飾を行うことができる。ヌクレオチドの配列は、非ヌクレオチドの成分によって中断されてもよい。ポリヌクレオチドは、重合後に、標識成分との結合等、さらに修飾されてもよい。
【０１４３】
用語「遺伝子」及び「遺伝子断片」とは、本明細書で区別無く使用でき、一般に、転写及び翻訳後に特定のタンパク質をコードできる、少なくとも１つのオープンリーディングフレームを含有するポリヌクレオチドを指す。ポリヌクレオチドがコーディング領域全体又はその断片をカバーする、少なくとも１つのオープンリーディングフレームを含有してさえいれば、遺伝子又は遺伝子断片は、ゲノム又はｃＤＮＡであってもよい。「融合遺伝子」は、互いに接続された、少なくとも２つの異種ポリヌクレオチドからなる遺伝子である。
【０１４４】
本明細書で使用される用語「抗体」とは、一般に、実質的に免疫グロブリン遺伝子又は免疫グロブリン遺伝子の断片によってコードされた１つ以上のポリペプチドを含有するタンパク質を指す。免疫グロブリン遺伝子は、κ、λ、α、γ、δ、ε、及びμ定常領域遺伝子、及び無数の免疫グロブリン可変領域遺伝子を含有する。本明細書で使用される用語「軽鎖」とは、κかλのいずれかに分類される。重鎖は、γ、μ、α、δ、又はεのいずれかに分類され、これによって免疫グロブリンの種類として、ＩｇＧ、ＩｇＭ、ＩｇＡ、ＩｇＤ、及びＩｇＥがそれぞれ定義される。本発明で使用される抗体は、四量体を含有する構造ユニットを有してもよい。四量体のそれぞれは、２対の同一のポリペプチド鎖からなってもよく、それぞれが１つの「軽」鎖（約２５ＫＤ）及び１つの「重」鎖（約５０〜７０ＫＤ）を有する。それぞれの鎖のＮ末端には、約１００〜１１０又はそれ以上の、主に抗原を認識するためのアミノ酸の可変領域が定義されてもよい。本明細書で使用される用語「軽鎖可変領域」（ＶＬ）及び「重鎖可変領域」（ＶＨ）とは、一般に、それぞれ軽鎖及び重鎖のこれらの領域を指す。抗体は、完全な免疫グロブリンの形式で存在してもよければ、様々なペプチダーゼの消化により生成された又は新規に発現された多くの十分に特徴付けられた断片の形式で存在してもよい。従って、例えば、ペプシンは、ヒンジ領域におけるジスルフィド結合の下方の抗体を消化してＦ（ａｂ）’２（ジスルフィド結合によってＶＨ−ＣＨ１に連結された１つの軽鎖であるＦａｂの二量体）を生成できる。Ｆ（ａｂ）’２を穏やかな条件で還元して、ヒンジ領域におけるジスルフィド結合を破壊することにより、（Ｆａｂ’）２二量体をＦａｂ’単量体に変換できる。Ｆａｂ’単量体は、実質的にヒンジ領域の一部を有するＦａｂである（他の抗体断片に関する詳細な説明として、Ｆｕｎｄａｍｅｎｔａｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，Ｗ．Ｅ．Ｐａｕｌ，ｅｄ．，Ｒａｖｅｎ  Ｐｒｅｓｓ，Ｎ．Ｙ．（１９９３）を参照できる）。完全な抗体の消化に基づいて様々な抗体断片を定義しているが、当業者が理解できるように、化学的方法又は組換えＤＮＡ方法を利用してこのようなＦａｂ’断片を新規合成できる。従って、本明細書で使用される用語「抗体」とは、Ｆａｂ’２、ＩｇＧ、ＩｇＭ、ＩｇＡ、ＩｇＥ、ｓｃＦｖ、ｄＡｂ、ナノボディ、ユニボディ、及びダイアボディを包含するがこれらに限定されない、全抗体の修飾又は組換えＤＮＡ方法を利用して新規合成された抗体断片も包含する。いくつかの実施形態において、抗体は、可変重鎖及び可変軽鎖が（直接的に又はペプチドリンカーを介して）互いに連結されて連続するポリペプチドが形成された一本鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）抗体等、Ｆａｂ’２、ＩｇＧ、ＩｇＭ、ＩｇＡ、ＩｇＥ、及び一本鎖抗体が包含されるが、これらに限定されない。
【０１４５】
本明細書で使用される用語「抗原結合部位」又は「結合部分」とは一般に、抗原の結合に関与する抗体の部分を指す。抗原結合部位は、重「Ｈ」鎖及び／又は軽「Ｌ」鎖のＮ末端可変「Ｖ」領域のアミノ酸残基によって形成されてもよい。重鎖及び軽鎖のＶ領域における３個の高い多様性を有するストレッチ（ｓｔｒｅｔｃｈ）は、「超可変領域」と称され、「フレームワーク領域」又は「ＦＲｓ」と呼ばれる、より保存的なストレッチ隣接の間に配置される。従って、本明細書で使用される用語「ＦＲ」とは、一般に、免疫グロブリンで超可変領域の間及びその付近に天然的に発見されたアミノ酸配列を指す。抗体分子において、軽鎖の３つの超可変領域及び重鎖の３つの超可変領域が三次元空間において互いに対向して配置されて、抗原が結合する「表面」を形成する。当該表面は、標的抗原の認識及び結合を媒介できる。重鎖及び軽鎖のそれぞれの３つの超可変領域は、「相補性決定領域」又は「ＣＤＲ」と称され、例えば、Ｋａｂａｔら．Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  ｉｎｔｅｒｅｓｔ，４ｔｈ  ｅｄ．Ｕ．Ｓ．Ｄｅｐｔ．Ｈｅａｌｔｈ  ａｎｄ  Ｈｕｍａｎ  Ｓｅｒｖｉｃｅｓ，Ｐｕｂｌｉｃ  Ｈｅａｌｔｈ  Ｓｅｒｖｉｃｅｓ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，Ｍｄ．（１９８７）によって特徴づけられる。
【０１４６】
いくつかの実施形態において、本明細書で使用される抗体及びその断片は、二重特異性であってもよい。二重特異性抗体又はその断片は、様々な配置を有してもよい。例えば、二重特異性抗体は、単一の抗体（又は抗体断片）に類似するが、２つの異なる抗原結合部位（可変領域）を有するものであってもよい。様々な実施形態において、二重特異性抗体は、化学的技術（参照文献：Ｋｒａｎｚら（１９８１）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ，ＵＳＡ，７８：５８０７）、又は「ポリオーマ」技術（例えば、米国特許第４４７４８９３号）、又は組換えＤＮＡ技術により生成されてもよい。いくつかの実施形態において、本明細書で使用される二重特異性抗体は、少なくとも１個が腫瘍抗原である、少なくとも２つの異なるエピトープに対する結合特異性を有してもよい。いくつかの実施形態において、抗体及びその断片は、ヘテロ抗体である。ヘテロ抗体は、それぞれが異なる特異性を有する、２個以上の抗体又は互いにリンクされた抗体結合断片（例えば、Ｆａｂ）である。
【０１４７】
本明細書で使用される用語「相同性」、「相同の」、又は「配列同一性」とは、一般に、２個以上のポリヌクレオチド配列同士間又は２個以上のポリペプチド配列同士間における配列類似性又は互換性を指す。プログラム（例えば、Ｅｍｂｏｓｓ  Ｎｅｅｄｌｅ又はＢｅｓｔＦｉｔ）を用いて２個の異なるアミノ酸配列の間における配列同一性、類似性、又は相同性を決定する際、デフォルト設定を使用するか、同一性、類似性又は相同性スコアを最適化するために適切なスコア行列（例えば、ｂｌｏｓｕｍ４５又はｂｌｏｓｕｍ８０）を選択してもよい。いくつかの実施形態において、相同のポリヌクレオチドは、ストリンジェントな条件下でハイブリダイゼーションし、それらの配列と比較して、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、さらには１００％の配列同一性を有するポリヌクレオチドである。比較可能な長さの配列が最適に整列された場合、相同のポリペプチドは、少なくとも８０％、又は、少なくとも９０％、又は、少なくとも９５％、又は、少なくとも９７％、又は、少なくとも９８％、又は、少なくとも９９％の配列同一性を有する。
【０１４８】
ポリヌクレオチド配列に関連して使用される用語「同一性パーセンテージ」、及び「％同一性」とは、一般に、標準化されたアルゴリズムにより整列された、少なくとも２個のポリヌクレオチド配列間における残基がマッチングするパーセンテージを指す。このようなアルゴリズムは、標準化された再現可能な方式により比較される配列にギャップを挿入して、２個の配列間の整列を最適化することにより、２個の配列に対するより意味のある比較を実現できる。同一性パーセンテージは、定義されたポリヌクレオチド配列全体の長さにおいて測定されるか、又はより短い長さにおいて測定されてもよく、例えば、定義されたサイズがより大きなポリヌクレオチド配列から得られた断片の長さにおいて測定される。なお、本明細書の表、図又は配列表に示される配列においてサポートされる任意の断片長は、いずれもパーセンテージ同一性が測定される長さの説明に利用できることが理解できる。
【０１４９】
本明細書で定義されたポリペプチド配列に関連して使用される用語「パーセンテージ（％）配列同一性」とは、一般に、検索配列における第２の参照ポリペプチド配列又はタンパク質のアミノ酸残基と同一のアミノ酸残基のパーセンテージを指し、必要であれば、最大パーセンテージの配列同一性を得るために、配列の整列及びギャップの導入を行い、保存的な置換を配列同一性の一部として考慮しない。アミノ酸の配列同一性パーセンテージを決定するための整列は、当該分野の周知技術としての様々な方式により実現でき、例えば、ＢＬＡＳＴ、ＢＬＡＳＴ−２、ＡＬＩＧＮ、ＮＥＥＤＬＥ、又はＭｅｇａｌｉｇｎ（ＤＮＡＳＴＡＲ）ソフトウェア等の利用可能な公開コンピューターソフトウェアを使用する。当業者は、比較される配列の全長において最大の整列を実現するために必要な任意のアルゴリズムを含有する、整列を測定するための適切なパラメータを決定できる。パーセンテージ同一性は、定義されたポリペプチド配列全体の長さにおいて測定されるか、より短い長さにおいて、例えば、定義されたサイズがより大きなポリペプチド配列から得られた断片の長さにおいて測定される。なお、本明細書の表、図又は配列表に示される配列においてサポートされる任意の断片長は、いずれもパーセンテージ同一性が測定される長さの説明に利用できることは理解できる。
【０１５０】
本明細書で使用される用語「宿主細胞」とは、一般に、本発明に係るプラスミド又はベクターの受容体になる又は本開示に係るプラスミド又はベクターの受容体である、個々の細胞、細胞株、又は細胞培地を包含し、本開示に係るポリヌクレオチドを構成するか、本開示に係るタンパク質性ヘテロ二量体（例えば、ヘテロ二量体タンパク質）を発現する。宿主細胞は、単一の宿主細胞の子孫を包含してもよい。自然的、偶発的又は意図的な突然変異により、子孫は、（形態的に又は全ＤＮＡ相補体のゲノムにおいて）必ずしも元の親細胞と完全に同一であるとは限られない。宿主細胞は、インビトロで本開示に係るベクターでトランスフェクトされた細胞を包含してもよい。宿主細胞は、細菌細胞（例えば、大腸菌）、酵母細胞又は他の真核細胞であってもよい、例えば、ＣＯＳ細胞、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞、ＨｅＬａ細胞、ＨＥＫ２９３細胞、ＣＯＳ−１細胞、ＮＳ０細胞、又は骨髄腫細胞である。いくつかの実施形態において、宿主細胞は、哺乳動物細胞である。いくつかの実施形態において、哺乳動物細胞は、ＨＥＫ２９３細胞である。
【０１５１】
本明細書で使用される用語「ベクター」とは、一般に、挿入された核酸分子を宿主細胞内及び／又は宿主細胞の間に転送する適切な宿主の中で自己複製できる核酸分子を指す。当該用語は、主にＤＮＡ又はＲＮＡを細胞に挿入するために機能するベクター、主にＤＮＡ又はＲＮＡを複製するために機能するベクターの複製、及びＤＮＡ又はＲＮＡの転写及び／又は翻訳のために機能する発現ベクターを包含する。さらに、上述した１種以上の機能を提供するベクターを包含する。「発現ベクター」とは、適切な宿主細胞に導入されることにより転写されて、ポリペプチドとして翻訳されるポリヌクレオチドである。「発現系」とは、一般に、所望の発現産物を生成するように機能する発現ベクターを含有する適切な宿主細を指す。
【０１５２】
用語「有効量」又は「治療有効量」とは、疾患の治療等を包含するがこれに限定されない所望の用途を達成するための組成物（例えば、本明細書に記載のタンパク質性ヘテロ二量体）の量を指す。治療有効量は、所望の用途（例えば、インビトロ又はインビボ）又は適用対象及び治療される疾患の状態（例えば、適用対象の体重及び年齢、疾患状態の重症度、投与方式等）に応じて変化する場合があり、当業者は、これを容易に決定できる。当該用語は、標的細胞の中で特定応答の誘導、例えば、標的遺伝子誘導、増殖及び／又はアポトーシスのために使われる用量にも適用される。具体的な用量は、選択された特定の化合物、遵守すべき投与計画、他の化合物と組み合わせて投与されるか否か、投与のタイミング、投与される組織及び投与に用いられる物理的送達システムに応じて変化する場合がある。
【０１５３】
用語「治療」又は「緩和」、又は「改善」とは、本明細書で区別無く使用でき、治療的利益及び／又は予防的利益を包含するが、これらに限定されない有益な又は所望の結果を得るための方法を指す。本明細書で使用される治療的利益とは、一般に、治療される潜在的な障害の重症度を根絶又は低減することを指す。同様に、治療的利益とは、被検体おいて改善が観察されるような基礎障害に関連する１種以上の生理的症状のの根絶、重症度の低減により実現できるが、被検体が依然として基礎障害に苦しむことがある。。予防的利益のために、特定の疾患を発症するリスクのある被検体、又はこの疾患の診断を下すことができない場合あっても、疾患の１種以上の生理的症状が報告されている適用対象に投与してもよい。
【０１５４】
本明細書で使用される用語「治療効果」とは、一般に、上述した治療的利益及び／又は予防的利益を包含する。予防効果は、疾患若しくは障害の出現の遅延若しくは解消、疾患若しくは障害の症状の発生の遅延若しくは解消、疾患若しくは症状の進行の遅延、停止若しくは逆転、又はこれらの任意の組み合わせを包含する。
【０１５５】
本明細書で使用される用語「同時投与」、「〜と共に投与」及び、文法的に同等な表現は、一般に、動物に２種以上の薬剤を投与することにより、当該薬剤及び／又はその代謝物は、適用対象の中に同時に存在することを包含する。同時投与は、別々の組成物として同時投与する、別々の組成物として異なる時点で投与する、又は両方の薬剤が同時に存在する組成物として投与することを包含する。
【０１５６】
用語「アンタゴニスト」及び「阻害剤」とは、本明細書で区別無く使用でき、一般に、標的タンパク質の活性又は発現を阻害することにより標的タンパク質の生物学的機能を阻害する能力を有する化合物を指す。従って、用語「アンタゴニスト」及び「阻害剤」は、標的タンパク質の生物学的役割を含有する文脈の中で定義される。本明細書において好ましいアンタゴニストは、標的と特異的に相互作用する（例えば、結合する）が、標的タンパク質を成員とするシグナル伝達経路の他の成員と相互作用することにより標的タンパク質の生物学的活性を阻害する化合物も、当該定義に明確に包含される。アンタゴニストによって阻害される生物学的活性は、好ましくは腫瘍の発生、成長又は拡散に関連する。
【０１５７】
本明細書で使用される用語「アゴニスト」とは、一般に、標的タンパク質の活性又はその発現を阻害又は増強させることにより標的タンパク質の生物学的機能を開始又は増強させる能力を有する化合物を指す。従って、用語「アゴニスト」とは、標的ポリペプチドの生物学的役割が言及される文脈の中で定義される。本明細書において、好ましくはアゴニストが標的と特異的に相互作用（例えば、結合する）が、標的ポリペプチドを成員とするシグナル伝達経路の他の成員と相互作用することにより標的ポリペプチドの生物学的活性を開始又は増強させる化合物も、当該定義にも包含される。
【０１５８】
本明細書で使用される用語「薬剤」又は「生物学的活性化薬」とは、一般に、生物学的、薬学的もしくは化学的化合物、又は他の物質を指す。非限定的な例として、単純若しくは複雑な有機若しくは無機分子、ペプチド、タンパク質、オリゴヌクレオチド、抗体、抗体誘導体、抗体断片、ビタミン誘導体、炭水化物、毒素、又は化学療法化合物が挙げられる。様々な化合物、例えば、小分子及びオリゴマー（例えば、オリゴペプチド及びオリゴヌクレオチド）、又は様々なコア構造に基づく合成有機化合物を合成できる。また、様々な天然資源は、例えば植物又は動物抽出物等、スクリーニング用の化合物を提供するために利用できる。
【０１５９】
本明細書で使用される用語「抗癌剤」、「抗腫瘍剤」、又は「化学療法剤」とは、一般に、腫瘍性症状を治療するのに有用な任意の薬剤を指す。抗癌剤の一種は、化学療法剤を包含する。
【０１６０】
本明細書で使用される用語「化学療法」とは、一般に、静脈内投与、経口投与、筋肉内投与、腹腔内投与、膀胱内投与、皮下投与、経皮投与、口腔内投与、又は吸入、又は坐剤形式を包含する、様々な方法を用いて癌患者に１種以上の化学療法薬及び／又は他の薬剤を投与することを指す。
【０１６１】
本明細書で使用される用語「細胞増殖」とは、一般に、分裂の結果として、細胞数量が変化する現象を指す。例えば、細胞増殖により細胞数量が増加する。当該用語は、細胞形態が増殖シグナルに一致して変化する（例えば、サイズの増加）細胞成長をも包含する。
【０１６２】
本明細書で使用される用語「インビボ」とは、一般に、適用対象の体内で起こる事象を指す。
【０１６３】
本明細書で使用される用語「インビトロ」とは、一般に、適用対象の体外で起こる事象を指す。例えば、インビトロアッセイは、適用対象の体外で実施される任意のアッセイを指す。インビトロアッセイは、死細胞又は生細胞を用いて行われた細胞ベースのアッセイを包含する。インビトロアッセイは、完全細胞を使用しない無細胞アッセイをも包含する。
【０１６４】
本明細書で使用される用語「インターフェロン」（ＩＦＮ）とは、一般に、宿主細胞がウイルス、細菌、寄生虫又は腫瘍細胞等の病原体の存在に応答して生成及び放出したシグナル伝達タンパク質を指す。インターフェロンには３つの主要なタイプ、即ちタイプＩ、タイプＩＩ及びタイプＩＩＩがあり、このうち、インターフェロンのタイプＩは、ＩＦＮ−α及びＩＦＮ−βを包含してもよく、ＩＦＮ−αは、ＩＦＮ−αのサブタイプ、例えば、ＩＦＮ−α２、ＩＦＮ−α４等をさらに包含してもよい。インターフェロンのタイプＩは、ウイルスの複製を阻害でき、抗寄生虫活性、細胞増殖阻害活性、免疫細胞の細胞傷害刺激活性を有し、免疫調節に関与し抗腫瘍効果を示す。インターフェロンのタイプＩＩ及びタイプＩＩＩは、ＩＦＮ−γ、ＩＦＮ−λ１（ＩＬ−２９）、ＩＦＮ−λ２（ＩＬ−２８ａ）及びＩＦＮ−λ３（ＩＬ−２８ｂ）を包含してもよい。本明細書で使用される用語「インターフェロン」は、全長インターフェロン又はその断片（例えば、短縮形式）又はその変異体を包含そしてもよく、これは、対応する野生型インターフェロンの生物学的活性を実質的に維持している（例えば、対応する野生型インターフェロンの生物学的活性の、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、さらには、少なくとも１００％を有する）。本明細書で使用されるインターフェロンは、任意の哺乳動物に由来してもよい。いくつかの実施形態において、インターフェロンは、ヒト、ウマ、ウシ、ネズミ、ブタ、ウサギ、ネコ、イヌ、ラット、ヤギ、ヒツジ、及び非ヒト霊長類からなる群から選択される。
【０１６５】
本明細書で使用される用語「インターロイキン」とは、一般に、Ｔリンパ球及び／又はＢリンパ球、及び／又は造血細胞の発生及び分化を促進できる分泌タンパク質又はシグナル伝達分子を指す。インターロイキンは、ペルパーＣＤ４  Ｔリンパ球、又は単球、マクロファージ、内皮細胞によって合成されてもよい。本明細書において使用されるインターロイキン（ＩＬ）は、ＩＬ−１、ＩＬ−２、ＩＬ−３、ＩＬ−４、ＩＬ−５、ＩＬ−６、ＩＬ−７、ＩＬ−８、ＩＬ−９、ＩＬ−１０、ＩＬ−１１、ＩＬ−１２、ＩＬ−１３、ＩＬ−１４、ＩＬ−１５、ＩＬ−１６、ＩＬ−１７、ＩＬ−１８、ＩＬ−１９、ＩＬ−２０、ＩＬ−２１、ＩＬ−２２、ＩＬ−２３、ＩＬ−２４、ＩＬ−２５、ＩＬ−２６、ＩＬ−２７、ＩＬ−２８、ＩＬ−２９、ＩＬ−３０、ＩＬ−３１、ＩＬ−３２、ＩＬ−３３、ＩＬ−３４、ＩＬ−３５及び／又はＩＬ−３６を包含してもよい。本明細書で使用される用語「インターロイキン」とは、全長インターロイキン、又は対応する野生型インターロイキンの生物学的活性（例えば、対応する野生型インターロイキン生物学的活性の、少なくとも、８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、又は更に、少なくとも１００％の生物学的活性を有する）を実質的に維持している断片（例えば、短縮形式）又はその変異体を包含してもよい。本明細書において使用されるインターロイキンは、任意の哺乳動物に由来してもよい。いくつかの実施形態において、インターロイキンは、ヒト、ウマ、ウシ、ネズミ、ブタ、ウサギ、ネコ、イヌ、ラット、ヤギ、ヒツジ、及び非ヒト霊長類からなる群から選択される。いくつかの実施形態において、インターロイキンは、例えば、その受容体に対する親和性が増加又は低減された突然変異の形態であってもよい。いくつかの実施形態において、インターロイキンは、ＩＬ−２を修飾することでＩＬ−２Ｒβに対する結合親和性を増加させたスーパーＩＬ−２である（ｓＩＬ２とも称される。Ｎａｔｕｒｅ  ４８４，５２９−５３３，２０１２．４．２６を参照）。ｓＩＬ−２における突然変異は、主に、サイトカインのコアにおいて発生する。分子動力学的シミュレーションにより、進化した突然変異は、ＩＬ−２を安定化させ、ＩＬ−２Ｒβ結合部位におけるリックスの柔軟性を、ＣＤ２５に結合した場合のように最適化された受容体の結合配置に低減させていることが示された。ＩＬ−２と比較して、ｓＩＬ−２は、細胞傷害性Ｔ細胞の効果的な拡張を誘導して、インビボにおける抗腫瘍応答の向上につながり、制御性Ｔ細胞の拡張が比例して低減され、肺水腫が緩和される。
【０１６６】
本明細書で使用される用語「抗ＨＥＲ２／ｎｅｕ抗体」とは、一般に、ＨＥＲ２／ｎｅｕ受容体と特異的又は優先的に結合する抗体を指す。例えば、抗ＨＥＲ２／ｎｅｕ抗体又は抗ＨＥＲ２抗体は、トラスツズマブ、ペルツズマブ又はその抗原結合断片である。
【０１６７】
本明細書で使用される用語「抗ＥＧＦＲ抗体」とは、一般に、ＥＧＦＲと特異的又は優先的に結合する抗体を指す。場合によって、抗ＥＧＦＲ抗体は、ＥＧＦＲの変異形式（例えば、ＥＧＦＲに最も一般的な細胞外ドメイン変異であるＥＧＦＲ変異体ＩＩＩ（ＥＧＦＲｖＩＩＩともいう）と結合する。このような突然変異は、リガンド非依存性構成的活性を有する短縮された細胞外ドメインによって特徴付けられるＥＧＦＲ遺伝子のエクソン２−７の欠失につながる。例えば、抗ＥＧＦＲ抗体は、セツキシマブ、Ｍａｂ８０６又はその抗原結合断片である。
【０１６８】
本明細書で使用される用語「適用対象」とは、一般に、ネコ、イヌ、ウマ、ブタ、ウシ、ヒツジ、ヒツジ、ウサギ、マウス、ラット、又はサルを包含するがこれらに限定されない、ヒト又は非ヒト動物を指す。
【０１６９】
本明細書で使用される用語「抗ＥＧＦＲファミリー抗体」とは、一般に、上皮成長因子受容体ファミリーの成員と特異的に結合する抗体を指す。例えば、ＥｒｂＢ−１（上皮成長因子受容体（ＥＧＦＲ）ともいう）、ＥｒｂＢ−２（ヒトの場合ＨＥＲ２と、げっ歯類の場合ｎｅｕともいう）、ＥｒｂＢ−３（ＨＥＲ３ともいう）、及び／又はＥｒｂＢ−４（ＨＥＲ４ともいう）と結合する抗体であってもよい。抗ＥＧＦＲファミリー抗体は、Ｃ６．５、Ｃ６ｍＬ３−９、Ｃ６  ＭＨ３−Ｂ１、Ｃ６−Ｂ１Ｄ２、Ｆ５、ＨＥＲ３．Ａ５、ＨＥＲ３．Ｆ４、ＨＥＲ３．Ｈ１、ＨＥＲ３．Ｈ３、ＨＥＲ３．Ｅ１２、ＨＥＲ３．Ｂ１２、ＥＧＦＲ．Ｅ１２、ＥＧＦＲ．Ｃ１０、ＥＧＦＲ．Ｂ１１、ＥＧＦＲ．Ｅ８、ＨＥＲ４．Ｂ４、ＨＥＲ４．Ｇ４、ＨＥＲ４．Ｆ４、ＨＥＲ４．Ａ８、ＨＥＲ４．Ｂ６、ＨＥＲ４．Ｄ４、ＨＥＲ４．Ｄ７、ＨＥＲ４．Ｄ１１、ＨＥＲ４．Ｄ１２、ＨＥＲ４．Ｅ３、ＨＥＲ４．Ｅ７、ＨＥＲ４．Ｆ８及びＨＥＲ４．Ｃ７等抗体の１種以上を包含するが、これらに限定されない。美国特許公開第ＵＳ２００６／００９９２０５Ａ１号及びＵＳ２００４／００７１６９６Ａ１号を参照でき、当該文献は、援用により本明細書に組み込まれる。
【０１７０】
本明細書で使用される用語「一本鎖Ｆｖ」（「ｓＦｖ」又は「ｓｃＦｖ」）ポリペプチドとは、一般に、直接連結された又はペプチドがコードするリンカーを介して連結されたＶＨ及びＶＬをコードする配列を含有する核酸によって発現されてもよい、共有結合されたＶＨ（重鎖可変領域）：ＶＬ（軽鎖可変領域）ヘテロ二量体を指す（参照文献：Ｈｕｓｔｏｎら．Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，８５：５８７９−５８８３（１９８８））。
【０１７１】
癌細胞に関連する文脈の中で使用される用語「成長及び／又は増殖の阻害」とは、一般に、癌細胞の成長速度及び／又は増殖速度の低減を指す。例えば、癌細胞の死亡（例えば、アポトーシスによる）を包含する。いくつかの実施形態において、当該用語は、固形腫瘍の成長及び／又は増殖を阻害する、且つ／又は、腫瘍サイズの減少又は解消を誘導することを包含する。
【０１７２】
本明細書で使用される用語「癌細胞表面マーカー」又は「癌細胞関連マーカー」とは、一般に、癌細胞において排他的に又は優先的に又は示差的に発現される、且つ／又は、癌細胞に関連するものとして発見されることにより癌に優先的又は特異的な標的を提供する生体分子、例えばタンパク質、炭水化物、糖タンパク質等を指す。いくつかの実施形態において、優先的に発現されることは、任意の生物体内の他の細胞に対して優先的に発現されること、又は生物体の特定領域（例えば、特定の器官内又は組織内）で優先的に発現されることであってもよい。
【０１７３】
本明細書で使用される用語「成員」とは、一般に、タンパク質性ヘテロ二量体の１個の成分としてのポリペプチド、サブユニット又は部分を指す。
【０１７４】
本明細書で使用される用語「Ｆｃ領域」とは、一般に、免疫グロブリン重鎖定常領域のカルボキシ末端部分又はその類似体又はＦｃ受容体と結合できる部分を指す。周知のように、１個の免疫グロブリン重鎖定常領域は、４個又は５個のドメインを含有する。ドメインは、ＣＨ１−ヒンジ−ＣＨ２−ＣＨ３（−ＣＨ４）のように順次命名される。ＣＨ４は、ヒンジ領域を有しないＩｇＭに存在する。本開示に有用な免疫グロブリン重鎖定常領域は、免疫グロブリンヒンジ領域を含有し、且つ、ＣＨ３ドメインを含有してもよい。例えば、免疫グロブリン重鎖定常領域は、免疫グロブリンヒンジ領域、ＣＨ２ドメイン、及びＣＨ３ドメインを含有してもよい。いくつかの実施形態において、本開示に係るＦｃ領域は、ヒンジ−ＣＨ２−ＣＨ３ドメインからなる。
【０１７５】
本明細書で使用される用語「と複合される」とは、一般に、１個の成員／サブユニットが分子（例えば、抗体）の別の成員／サブユニットと会合する（例えば、結合する）ことを包含する。例えば、軽鎖は、重鎖と複合して標的部分を形成できる。
【０１７６】
本明細書で使用される用語「結合特異性」とは、一般に、所定の標的と特異的に結合する（例えば、免疫応答を伴う）能力を指す（ただし非標的とは結合しない又は実質的に結合しない）。本開示において標的部分は、単一特異性であり、且つ、標的と特異的に結合する１個以上の結合部位を含有し、又は多重特異性（例えば、二重特異性又は三重特異性）であり、且つ、同じ又は異なる標的と特異的に結合する２つ以上の結合部位を含有する。
【０１７７】
本明細書で使用される用語「と会合する」又は「と会合される」とは、一般に、１個の実体が別の実体と物理的に会合又は接触することを指す。例えば、タンパク質性ヘテロ二量体の第１の成員は、共有結合又は非共有結合により第２の成員と「会合」されてもよい。いくつかの実施形態において、タンパク質性ヘテロ二量体の第１の成員は、界面によって第２の成員と会合し、当該界面は、第１の成員及び第２の成員にそれぞれ由来するアミノ酸残基（即ち界面残基）により形成される。
【０１７８】
本明細書で使用される用語「修飾」とは、一般に、ポリペプチド骨格（例えば、アミノ酸配列）に対する任意の操作又はポリペプチドの翻訳後修飾（例えば、グリコシル化）を指す。例えば、修飾は、対応する野生型ポリペプチドの配列に対していうものである。修飾とは、１個以上（例えば、１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、１０個、又はそれ以上）のアミノ酸の置換、追加及び／又は欠失であってもよい。
【０１７９】
本明細書で使用される用語「ノブアンドホール修飾」とは、一般に、ポリペプチドの界面に修飾を導入してバルジを形成し（ノブ修飾）、別のポリペプチドの対応する位置に修飾を導入して空洞を形成し（ホール修飾）、バルジのサイズは、空洞のサイズと同じ又は近いことを指す。例えば、ノブアンドホール修飾によりヘテロ二量体が形成されるとともに、ホモ二量体の形成が阻害される。参照文献として、米国特許第５７３１１６８号、第７６９５９３６号、Ｒｉｄｇｗａｙら，Ｐｒｏｔ  Ｅｎｇ９，６１７−６２１（１９９６）、及びＣａｒｔｅｒ，Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  Ｍｅｔｈ  ２４８，７−１５（２００１）が挙げられる。従って、本明細書で使用される用語「ノブ修飾」とは、一般に、より小さいサイズの側鎖を有するアミノ酸（例えば、チロシン又はトリプトファン）をより大きいサイズの側鎖を有するアミノ酸（例えば、アラニン又はトレオニン）に置き換えることでバルジを形成した、ポリペプチド界面における修飾を指す。本明細書で使用される用語「ホール修飾」とは、一般に、より大きいサイズの側鎖を有するアミノ酸（例えば、アラニン又はトレオニン）をより小さいサイズの側鎖を有するアミノ酸（例えば、チロシン又はトリプトファン）に置き換えることで空洞を形成した、別のポリペプチドの対応する位置における修飾を指す。ノブ修飾及びホール修飾は、ポリペプチドをコードする核酸の改変、例えば、部位特異的突然変異誘発、又はペプチド合成により行われてもよい。特定の実施形態において、ノブ修飾は、Ｆｃ領域の２つのサブユニットの一方にアミノ酸置換Ｙ３４９Ｃ及びＴ３６６Ｗを含有し、ホール修飾は、Ｆｃ領域の２つのサブユニットの他方にアミノ酸置換Ｄ３５６Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、及びＹ４０７Ｖを含有する。
【０１８０】
本明細書で使用される用語「ＨＥＫ２９３細胞」とは、一般に、形質転換されたヒト胚腎臓（ＨＥＫ）細胞に由来するクローン単離を指す。ＨＥＫ２９３株は、単層培養においてより優れた密着性を示し、プラークアッセイ及び他の足場依存性の用途に利用しやすい２９３細胞株の一種の変異体を指す。これらは、２９３  ＳＦＭ  ＩＩ等の無血清培地における浮遊培養に適用される。
【０１８１】
本明細書で使用される用語「ＣＨＯ細胞」とは、一般に、非分泌的な不死化線維芽細胞であるチャイニーズハムスター卵巣細胞を指す。ＣＨＯ細胞は、ＣＨＯ内因性タンパク質をほぼ分泌しないため、標的タンパク質の単離及び精製に好適である。
【０１８２】
本明細書で使用される用語「ＣＯＳ−１細胞」とは、一般に、サル腎臓組織に由来する線維芽細胞様細胞株を指す。ＣＯＳ細胞は、大きなＴ抗原を生成できるがゲノムの複製に欠陥が存在する特定形態のＳＶ４０ウイルスでＣＶ−１細胞を不死化させることにより得られる。よく使用されるＣＯＳ細胞株の１つの形態は、ＣＯＳ−１である。
【０１８３】
本明細書で使用される用語「ＮＳ０細胞」とは、一般に、非分泌型マウス骨髓種に由来するモデル細胞株を指す。当該細胞株は、ＮＳＩ／１のサブラインより生成されたコレステロール依存性細胞株である。
【０１８４】
本明細書で使用される用語「融合タンパク質」とは、一般に、直接的又は間接的に（例えば、リンカーを介して）異種ポリペプチドのアミノ酸配列と融合されたポリペプチドのアミノ酸配列を含有する、或いはこれによって構成されたポリペプチド（即ち、その前のポリペプチド又はそのドメインと無関係のポリペプチド）を指す。
【０１８５】
本明細書で使用される用語「Ｃ末端」とは、一般に、ポリペプチドのカルボキシ末端を指す。
【０１８６】
本明細書で使用される用語「Ｎ末端」とは、一般に、ポリペプチドのアミノ末端を指す。
【０１８７】
本明細書で使用される用語「ＥＧＦＲ」とは、一般に、上皮成長因子受容体を指す。例えば、Ｃａｒｐｅｎｔｅｒら．Ａｎｎ．Ｒｅｖ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．５６：８８１−９１４（１９８７）が参照されたように、その天然的に存在する変異体の形態を包含する。
【０１８８】
本明細書で使用される用語「ＥＧＦＲ変異体」とは、一般に、ＥＧＦＲの突然変異形態（例えば、ＥＧＦＲに最も一般的な細胞外ドメイン突然変異である、ＥＧＦＲ変異体ＩＩＩ（ＥＧＦＲｖＩＩＩともいう）を指す。当該突然変異により、リガンド非依存性構成的活性を有する短縮された細胞外ドメインによって特徴付けられる、ＥＧＦＲ遺伝子のエクソン２−７の欠失が生じる。
【０１８９】
本明細書で使用される用語「ＨＥＲ２／ｎｅｕ」とは、一般に、ヒトＨＥＲ２タンパク質を指す。例えば、Ｓｅｍｂａら，ＰＮＡＳ（ＵＳＡ）８２：６４９７−６５０１（１９８５）及びＹａｍａｍｏｔｏら．Ｎａｔｕｒｅ３１９：２３０−２３４（１９８６）に記載のとおりである（ＧｅｎＢａｎｋ登録番号Ｘ０３３６３）。
【０１９０】
本明細書で使用される用語「ＧＰＣ３」とは、一般に、遺伝子ｇｌｙｐｉｃａｎ３（ＮＣＢＩデータベース遺伝子ＩＤ：２７１９）がコードする肝癌早期マーカータンパク質を指す。ＧＰＣ３は、肝細胞癌において高発現され、早期肝細胞癌患者の組織の中で検出される。
【０１９１】
本明細書で使用される用語「抗ＧＰＣ３抗体」とは、一般に、ＧＰＣ３と特異的又は優先的に結合する抗体を指す。例えば、抗ＧＰＣ３抗体は、コドリツズマブ又はその抗原結合断片である。
【０１９２】
本明細書で使用される用語「ＦＡＰ」とは、一般に、線維芽細胞活性化タンパク質（ＦＡＰ）を指す。ＦＡＰは、腫瘍マトリックス線維芽細胞に存在し、細胞表面で役割を果たす。ＦＡＰは、セリンプロテアーゼファミリーのタイプＩＩの１つの成員で、ジペプチジルペプチダーゼ活性及びコラゲナーゼ活性を有する膜セリンペプチダーゼである。
【０１９３】
本明細書で使用される用語「抗ＦＡＰ抗体」とは、一般に、ＦＡＰと特異的に又は優先的に結合する抗体を指す。例えば、抗ＦＡＰ抗体は、抗体２８Ｈ１又はその抗原結合断片である。
【０１９４】
本明細書で使用される用語「Ｍｕｃ１」とは、一般に、ｍｕｃ１遺伝子によってコードされた糖タンパク質を指す。Ｍｕｃ１は、主に乳腺、膵臓、卵巣等の上皮組織及び器官に存在する。癌上皮細胞の表面に高発現されるため、免疫応答の標的として利用できる。
【０１９５】
本明細書で使用される用語「抗Ｍｕｃ１抗体」とは、一般に、Ｍｕｃ１と特異的に又は優先的に結合する抗体を指す。例えば、抗Ｍｕｃ１抗体は、抗体５Ｅ５、抗体５Ｅ５のヒト化された形態、又はその抗原結合断片である。
【０１９６】
本明細書で使用される用語「ＭＵＣ５ＡＣ」とは、一般に、ムチンＭＵＣ５ＡＣを指す。ＭＵＣ５ＡＣは、結腸直腸癌、胃印環細胞癌、結腸癌、直腸癌、及び膵臓癌で高発現される。
【０１９７】
本明細書で使用される用語「抗ＭＵＣ５ＡＣ抗体」とは、一般に、ＭＵＣ５ＡＣと特異的に又は優先的に結合する抗体を指す。例えば、抗ＭＵＣ５ＡＣ抗体は、抗体エンシツキシマブ又はその抗原結合断片である。
【０１９８】
本明細書で使用される用語「メソセリン」とは、一般に、分子量が４０ＫＤの細胞表面糖タンパク質を指す。メソセリンは、初期膵臓腫瘍等、様々な腫瘍組織において高発現され、正常な胸膜、心膜、及び腹膜中皮細胞においても発現される。
【０１９９】
本明細書で使用される用語「抗メソセリン抗体」とは、一般に、メソセリンと特異的に又は優先的に結合する抗体を指す。例えば、抗メソセリン抗体は、抗体アマツキシマブ、抗体アマツキシマブのヒト化された形態又はその抗原結合断片である。
【０２００】
本明細書で使用される用語「ケモカイン」とは、一般に、白血球を感染部位に引き付けられる一部の小分子量（主に８〜１０ＫＤ）のタンパク質を指す。例えば、ケモカインタンパク質の共同な構造特徴には、小分子量及び三次構造を確保する保存的位置における４個のシステイン残基を含有する。なお、一部のケモカインは、炎症反応の促進に関与し、もう一部のケモカインは、修復又は発達等の正常なプロセスにおける細胞遊走制御に関与する。
【０２０１】
本明細書で使用される用語「リンホカイン」とは、一般に、活性化されたリンパ球によって生成された、対応する標的細胞に作用して標的細胞の特性的又は機能的な変化を引き起こすホルモン様ポリペプチドを指す。リンパ球は、リンホカインによって隣接又は遠隔の標的細胞に作用して免疫調節及び免疫効果を実現する。一般的なリンホカインには、単球−マクロファージ遊走阻止因子（ＭＩＦ）、白血病阻止因子（ＬＩＦ）、ナチュラルキラー細胞の細胞毒素（ＮＫＣＦ）、及びリンホトキシン（ＬＢ）を包含するが、これらに限定されない。
【０２０２】
本明細書で使用される用語「腫瘍壊死因子」とは、一般に、活性化されたマクロファージ、ＮＫ細胞及びＴリンパ球によって生成された腫瘍壊死因子を指す。このうち、マクロファージによって生成されたＴＮＦは、ＴＮＦ−αと、リンホトキシン（ｌｙｍｐｈｏｔｏｘｉｎ、略称ＬＴ）によって生成されたＴリンパ球は、ＴＮＦ−βと称される。
【０２０３】
本明細書で使用される用語「免疫グロブリン」とは、一般に、実質的に免疫グロブリン遺伝子によってコードされた１種以上のポリペプチドからなるタンパク質を指す。既知の免疫グロブリン遺伝子は、κ、λ、α、γ（ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４）、δ、ε、μ定常領域遺伝子、及び無数の免疫グロブリン可変領域遺伝子を包含する。免疫グロブリンの一つの形態は、抗体の基本構造ユニットを構成する。当該形態は、それぞれ１本の軽鎖及び１本の重鎖を有する２対の同一の免疫グロブリン鎖からなる四量体である。各対において、軽鎖可変領域及び重鎖可変領域は、共同で作用して抗原と結合する機能を果たし、定常領域は、抗体エフェクターの機能を果たす。抗体以外に、免疫グロブリンは、例えば、Ｆｖ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’及び（Ｆａｂ’）２等他の様々な形態で存在してもよい。
【０２０４】
本明細書で使用される用語「インフレーム融合」とは、一般に、本来のＯＲＦｓの正しいリーディングフレームを維持する方式による、２個以上のオープンリーディングフレーム（ＯＲＦｓ）の連結による連続したより長いＯＲＦの形成を指す。
【０２０５】
本明細書で使用される用語「リンカー」とは、一般に、例えば、２個のポリペプチドドメインを接続する等、２個のポリペプチド配列を接続又は連結した合成アミノ酸配列を指す。リンカーは、ペプチド結合を介して２個のアミノ酸配列を連結できる。いくつかの実施形態において、本発明に係るリンカーは、線形配列において免疫調節物質を第２のＦｃ領域に連結する。
【０２０６】
本明細書で使用される用語「Ｎ末端に配置される」とは、一般に、別の分子（例えば、別のポリペプチド）のＮ末端の位置に配置されることを指す。例えば、本発明によれば、２種以上の免疫調節物質は、第２のＦｃ領域のＮ末端に配置されてもよい。
【０２０７】
本明細書で使用される用語「アミノ酸置換」とは、一般に、ポリペプチドの特定位置における１つのアミノ酸が別のアミノ酸によって置き換えられることを指す。
【０２０８】
本明細書で使用される用語「ＫＡＢＡＴ番号のＥＵインデックス」とは、一般に、Ｋａｂａｔら．（１９７１）Ａｎｎ．ＮＹ  Ａｃａｄ，Ｓｃｉ．１９０：３８２−３９１及びＫａｂａｔ，Ｅ．Ａ．，ら（１９９１）Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，Ｆｉｆｔｈ  Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｕ．Ｓ．Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ  ａｎｄ  Ｈｕｍａｎ  Ｓｅｒｖｉｃｅｓ，ＮＩＨ  Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ  Ｎｏ．９１−３２４２に対応するＥＵ番号のインデックスを指す。
【０２０９】
本明細書で使用される用語「単離されたポリヌクレオチド」とは、一般に、自然環境から単離された又は人工合成された任意の長さのヌクレオチドのポリマー形態である、デオキシリボヌクレオチド又はリボヌクレオチド又はその類似体を指す。
【０２１０】
本明細書で使用される用語「タンパク質混合物」とは、一般に、２種以上のタンパク質の混合物を指す。
【０２１１】
本明細書で使用される用語「ホモ二量体」とは、一般に、２個の同一の単量体（例えば、２個の同一の成員又はサブユニット）によって形成された分子を指す。２個の単量体は、共有結合及び／又は非共有結合性相互作用によって互いに凝集、複合又は会合することができる。例えば、タンパク質ホモ二量体の２つの単量体は、前記２個の単量体のそれぞれの界面アミノ酸残基間の相互作用により互いに会合できる。
【０２１２】
本明細書で使用される用語「実質的に含有しない」とは、一般に、組成物（例えば、混合物）がある物質を非常に少なく含有する又はほぼ含有しないことを指す。例えば、前記物質は、１０％未満、９％未満、８％未満、７％未満、６％未満、５％未満、４％未満、３％未満、２％未満、１％未満、０．５％未満、０．１％未満、又は０．０１％未満のパーセンテージで存在する。
【０２１３】
本明細書で使用される用語「薬学的に許容される賦形剤」とは、一般に、医薬品の投与に適合するあらゆる溶媒、分散媒体、コーティング、等張剤及び吸収遅延剤等を指す。
【０２１４】
タンパク質性ヘテロ二量体、タンパク質混合物、単離されたポリヌクレオチド、ベクター及び宿主細胞
一つの態様において、本開示は、タンパク質性ヘテロ二量体を提供する。当該タンパク質性ヘテロ二量体は、第１の成員及び第１の成員とは異なる第２の成員を含有してもよい。第１の成員は、軽鎖、及び第１のＦｃ領域を含有する重鎖を含有し、軽鎖が重鎖と複合されて腫瘍抗原への結合特異性を示す標的部分が形成される。第２の成員は、第２のＦｃ領域と融合される免疫調節物質を含有するポリペプチドを含有してもよい。第１のＦｃ領域と第２のＦｃ領域との複合により、第１の成員は、第２の成員と会合して、ヘテロ二量体を形成できる。
【０２１５】
場合によっては、本開示に係るタンパク質性ヘテロ二量体は、タンパク質複合体であってもよい。当該複合体は、少なくとも３個のポリペプチド鎖、例えば、第１のポリペプチド鎖、第２のポリペプチド鎖、及び第３のポリペプチド鎖を含有してもよい。いくつかの実施形態において、複合体は、３個のポリペプチド鎖からなる又は実質的に３個のポリペプチド鎖からなる。例えば、第１のポリペプチド鎖は、腫瘍抗原に特異的な抗体の重鎖を含有し、第２のポリペプチド鎖は、腫瘍抗原に特異的な抗体の軽鎖を含有してもよい。重鎖は、第１のＦｃ領域を含有してもよい。重鎖（即ち、第１のポリペプチド鎖の重鎖）及び軽鎖（即ち、第２のポリペプチド鎖の軽鎖）は、複合してタンパク質性ヘテロ二量体の第１の成員を形成できる。第３のポリペプチド鎖は、（例えば、Ｎ末端からＣ末端へと）１つ以上のリンカーを介して第２のＦｃ領域と融合された１つ以上の免疫調節物質を含有してもよい。第３のポリペプチド鎖は、タンパク質性ヘテロ二量体の第２の成員であってもよい。第１のＦｃ領域と第２のＦｃ領域との複合により、第１の成員は、第２の成員と会合して、ヘテロ二量体を形成できる。
【０２１６】
例えば、本開示に係るタンパク質性ヘテロ二量体は、タンパク質複合体であってもよい。当該複合体は、
（１）腫瘍抗原に特異的な抗体の重鎖及び軽鎖、及び
（２）Ｎ末端からＣ末端へと、任意選択的に１つ以上のリンカーを介して、抗体Ｆｃ領域と融合された１つ以上の免疫調節物質を含有する融合タンパク質
を含有する。
【０２１７】
第１のＦｃ領域は、第１の修飾を含有し、及び／又は、第２のＦｃ領域は、第２の修飾を含有してもよく、第１の修飾及び／又は第２の修飾は、ノブ修飾及びホール修飾を含有するノブアンドホール修飾よりも第１の成員と第２の成員とのヘテロ二量体化を効果的に促進できる。例えば、第１の修飾は、第１のＦｃ領域のＣＨ３ドメインにあり、第２の修飾は、第２のＦｃ領域のＣＨ３ドメインにあってもよい。例えば、第１の修飾及び／又は第２の修飾は、それらの対応する野生型Ｆｃ領域の配列とそれぞれ比較されるものである。
【０２１８】
いくつかの実施形態において、第１のＦｃ領域は、第１の修飾を含有し、第２のＦｃ領域は、一切の修飾を含有せず、前記第１の修飾は、ノブ修飾及びホール修飾を含有するノブアンドホール修飾よりも、第１の成員と第２の成員とのヘテロ二量体化を効果的に促進できる。
【０２１９】
いくつかの実施形態において、第２のＦｃ領域は、第２の修飾を含有し、第１のＦｃ領域は、一切の修飾を含有せず、前記第２の修飾は、ノブ修飾及びホール修飾を含有するノブアンドホール修飾よりも、第１の成員と第２の成員とのヘテロ二量体化を効果的に促進できる。
【０２２０】
いくつかの実施形態において、第１のＦｃ領域は、第１の修飾を含有し、第２のＦｃ領域は、第２の修飾を含有し、前記第１の修飾及び前記第２の修飾は、ノブ修飾及びホール修飾を含有するノブアンドホール修飾よりも、第１の成員と第２の成員とのヘテロ二量体化を効果的に促進できる。
【０２２１】
いくつかの実施形態において、第１の修飾は、ノブ修飾又はホール修飾とは異なる、及び／又は、第２の修飾は、ノブ修飾又はホール修飾とは異なるものである。例えば、第１の修飾は、ノブ修飾又はホール修飾と異なり、第２の修飾は、ホール修飾と同一であってもよい。場合によって、第１の修飾は、ノブ修飾と同一のものであり、第２の修飾は、ノブ修飾又はホール修飾とは異なるものである。いくつかの実施形態において、第１のＦｃ領域は、第１の修飾を含有し、第２のＦｃ領域は、当該第２の修飾を含有し、第１の修飾又は第２の修飾は、いずれもノブ修飾又はホール修飾と同一ではない。
【０２２２】
いくつかの実施形態において、第１の修飾は、位置Ｔ３６６におけるアミノ酸置換、並びにＹ３４９、Ｆ４０５、Ｋ４０９、Ｄ３９９、Ｋ３６０、Ｑ３４７、Ｋ３９２、及びＳ３５４からなる群から選択される１個以上の位置のアミノ酸置換を含有し、該アミノ酸の位置は、ＫＡＢＡＴ番号のＥＵインデックスに基づいて決定される。
【０２２３】
いくつかの実施形態において、第１の修飾は、Ｙ３４９Ｃ、Ｙ３４９Ｄ、Ｄ３９９Ｓ、Ｆ４０５Ｋ、Ｋ３６０Ｅ、Ｋ４０９Ａ、Ｋ４０９Ｅ、Ｑ３４７Ｅ、Ｑ３４７Ｒ、Ｓ３５４Ｄ、Ｋ３９２Ｄ、及びＴ３６６Ｗからなる群から選択されるアミノ酸置換を含有し、該アミノ酸の位置は、ＫＡＢＡＴ番号のＥＵインデックスに基づいて決定される。
【０２２４】
いくつかの実施形態において、前記第１の修飾は、２〜５個のアミノ酸置換を含有する。
【０２２５】
いくつかの実施形態において、前記第１の修飾は、
１）Ｙ３４９及びＴ３６６；
２）Ｙ３４９、Ｔ３６６、及びＦ４０５；
３）Ｙ３４９、Ｔ３６６、及びＫ４０９；
４）Ｙ３４９、Ｔ３６６、Ｆ４０５、Ｋ３６０、及びＱ３４７；
５）Ｙ３４９、Ｔ３６６、Ｆ４０５、及びＱ３４７；
６）Ｙ３４９、Ｔ３６６、Ｋ４０９、Ｋ３６０、及びＱ３４７；
７）Ｙ３４９、Ｔ３６６、Ｋ４０９、及びＱ３４７；
８）Ｔ３６６、Ｋ４０９、及びＫ３９２；
９）Ｔ３６６及びＫ４０９；
１０）Ｔ３６６、Ｋ４０９、Ｙ３４９、及びＳ３５４；
１１）Ｔ３６６及びＦ４０５；
１２）Ｔ３６６、Ｆ４０５、及びＤ３９９；
１３）Ｔ３６６、Ｆ４０５、Ｙ３４９、及びＳ３５４
から選択されるいずれかの群に示す位置におけるアミノ酸置換を含有し、該アミノ酸の位置は、ＫＡＢＡＴ番号のＥＵインデックスに基づいて決定される。
【０２２６】
いくつかの実施形態において、前記第１の修飾は、
１）Ｙ３４９Ｃ及びＴ３６６Ｗ；
２）Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、及びＦ４０５Ｋ；
３）Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、及びＫ４０９Ｅ；
４）Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、及びＫ４０９Ａ；
５）Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、Ｆ４０５Ｋ、Ｋ３６０Ｅ、及びＱ３４７Ｅ；
６）Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、Ｆ４０５Ｋ、及びＱ３４７Ｒ；
７）Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、Ｋ４０９Ａ、Ｋ３６０Ｅ、及びＱ３４７Ｅ；
８）Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、Ｋ４０９Ａ、及びＱ３４７Ｒ；
９）Ｔ３６６Ｗ、Ｋ４０９Ａ、及びＫ３９２Ｄ；
１０）Ｔ３６６Ｗ及びＫ４０９Ａ；
１１）Ｔ３６６Ｗ、Ｋ４０９Ａ、及びＹ３４９Ｄ；
１２）Ｔ３６６Ｗ、Ｋ４０９Ａ、Ｙ３４９Ｄ、及びＳ３５４Ｄ；
１３）Ｔ３６６Ｗ及びＦ４０５Ｋ；
１４）Ｔ３６６Ｗ、Ｆ４０５Ｋ、及びＤ３９９Ｓ；
１５）Ｔ３６６Ｗ、Ｆ４０５Ｋ、及びＹ３４９Ｄ；
１６）Ｔ３６６Ｗ、Ｆ４０５Ｋ、Ｙ３４９Ｄ、及びＳ３５４Ｄ
から選択されるいずれかの群に示すアミノ酸置換を含有し、該アミノ酸の位置は、ＫＡＢＡＴ番号のＥＵインデックスに基づいて決定される。
【０２２７】
いくつかの実施形態において、第２の修飾は、位置Ｔ３６６、Ｌ３６８、及びＹ４０７におけるアミノ酸置換、並びに位置Ｄ３５６、Ｄ３９９、Ｅ３５７、Ｆ４０５、Ｋ３６０、Ｋ３９２、Ｋ４０９、及びＱ３４７からなる群から選択される１つ以上の位置におけるアミノ酸置換を含有し、該アミノ酸の位置は、ＫＡＢＡＴ番号のＥＵインデックスに基づいて決定される。
【０２２８】
いくつかの実施形態において、第２の修飾に含有されるアミノ酸置換は、Ｄ３５６Ｃ、Ｄ３９９Ｓ、Ｅ３５７Ａ、Ｆ４０５Ｋ、Ｋ３６０Ｅ、Ｋ３９２Ｄ、Ｋ４０９Ａ、Ｌ３６８Ａ、Ｌ３６８Ｇ、Ｑ３４７Ｅ、Ｑ３４７Ｒ、Ｔ３６６Ｓ、Ｙ４０７Ａ、及びＹ４０７Ｖからなる群から選択され、該アミノ酸の位置は、ＫＡＢＡＴ番号のＥＵインデックスに基づいて決定される。
【０２２９】
いくつかの実施形態において、第２の修飾は、４〜６個の位置におけるアミノ酸置換を含有する。
【０２３０】
いくつかの実施形態において、第２の修飾は、
１）Ｄ３５６、Ｔ３６６、Ｌ３６８、Ｙ４０７、及びＦ４０５；
２）Ｄ３５６、Ｔ３６６、Ｌ３６８、及びＹ４０７；
３）Ｄ３５６、Ｔ３６６、Ｌ３６８、Ｙ４０７、及びＱ３４７；
４）Ｄ３５６、Ｔ３６６、Ｌ３６８、Ｙ４０７、Ｋ３６０、及びＱ３４７；
５）Ｄ３５６、Ｔ３６６、Ｌ３６８、Ｙ４０７、Ｆ４０５、及びＱ３４７；
６）Ｄ３５６、Ｔ３６６、Ｌ３６８、Ｙ４０７、Ｆ４０５、Ｋ３６０、及びＱ３４７；
７）Ｔ３６６、Ｌ３６８、Ｙ４０７、Ｄ３９９、及びＦ４０５；
８）Ｔ３６６、Ｌ３６８、Ｙ４０７、及びＦ４０５；
９）Ｔ３６６、Ｌ３６８、Ｙ４０７、Ｆ４０５、及びＥ３５７；
１０）Ｔ３６６、Ｌ３６８、Ｙ４０７、及びＫ４０９；
１１）Ｔ３６６、Ｌ３６８、Ｙ４０７、Ｋ４０９、及びＫ３９２；
１２）Ｔ３６６、Ｌ３６８、Ｙ４０７、Ｋ４０９、及びＥ３５７
から選択されるいずれかの群に示す位置におけるアミノ酸置換を含有し、該アミノ酸の位置は、ＫＡＢＡＴ番号のＥＵインデックスに基づいて決定される。
【０２３１】
いくつかの実施形態において、第２の修飾は、
１）Ｄ３５６Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、及びＦ４０５Ｋ；
２）Ｄ３５６Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、及びＹ４０７Ｖ；
３）Ｄ３５６Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、及びＱ３４７Ｒ；
４）Ｄ３５６Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、Ｋ３６０Ｅ、及びＱ３４７Ｅ；
５）Ｄ３５６Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、Ｆ４０５Ｋ、及びＱ３４７Ｒ；
６）Ｄ３５６Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、Ｆ４０５Ｋ、Ｋ３６０Ｅ、及びＱ３４７Ｅ；
７）Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、Ｄ３９９Ｓ、及びＦ４０５Ｋ；
８）Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ｇ、Ｙ４０７Ａ、及びＦ４０５Ｋ；
９）Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、Ｆ４０５Ｋ、及びＥ３５７Ａ；
１０）Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、及びＫ４０９Ａ；
１１）Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、Ｋ４０９Ａ、及びＫ３９２Ｄ；
１２）Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ｇ、Ｙ４０７Ａ、及びＫ４０９Ａ；
１３）Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、Ｋ４０９Ａ、及びＥ３５７Ａ
から選択されるいずれかの群に示すアミノ酸置換を含有し、該アミノ酸の位置は、ＫＡＢＡＴ番号のＥＵインデックスに基づいて決定される。
【０２３２】
いくつかの実施形態において、第１のＦｃ領域は、第１の修飾を含有し、第２のＦｃ領域は、第２の修飾を含有し、第１の修飾及び第２の修飾は、
１）第１の修飾：Ｙ３４９及びＴ３６６；並びに
第２の修飾：Ｄ３５６、Ｔ３６６、Ｌ３６８、Ｙ４０７、及びＦ４０５；
２）第１の修飾：Ｙ３４９、Ｔ３６６、及びＦ４０５；並びに
第２の修飾：Ｄ３５６、Ｔ３６６、Ｌ３６８、及びＹ４０７；
３）第１の修飾：Ｙ３４９、Ｔ３６６、及びＫ４０９；並びに
第２の修飾：Ｄ３５６、Ｔ３６６、Ｌ３６８、Ｙ４０７、及びＦ４０５；
４）第１の修飾：Ｙ３４９、Ｔ３６６、Ｆ４０５、Ｋ３６０、及びＱ３４７；並びに
第２の修飾：Ｄ３５６、Ｔ３６６、Ｌ３６８、Ｙ４０７、及びＱ３４７；
５）第１の修飾：Ｙ３４９、Ｔ３６６、Ｆ４０５、及びＱ３４７；並びに
第２の修飾：Ｄ３５６、Ｔ３６６、Ｌ３６８、Ｙ４０７、Ｋ３６０、及びＱ３４７；
６）第１の修飾：Ｙ３４９、Ｔ３６６、Ｋ４０９、Ｋ３６０、及びＱ３４７；並びに
第２の修飾：Ｄ３５６、Ｔ３６６、Ｌ３６８、Ｙ４０７、Ｆ４０５、及びＱ３４７；
７）第１の修飾：Ｙ３４９、Ｔ３６６、Ｋ４０９、及びＱ３４７；並びに
第２の修飾：Ｄ３５６、Ｔ３６６、Ｌ３６８、Ｙ４０７、Ｆ４０５、Ｋ３６０、及びＱ３４７；
８）第１の修飾：Ｔ３６６、Ｋ４０９、及びＫ３９２；並びに
第２の修飾：Ｔ３６６、Ｌ３６８、Ｙ４０７、Ｄ３９９、及びＦ４０５；
９）第１の修飾：Ｔ３６６及びＫ４０９；並びに
第２の修飾：Ｔ３６６、Ｌ３６８、Ｙ４０７及びＦ４０５；
１０）第１の修飾：Ｔ３６６、Ｋ４０９、及びＹ３４９；並びに
第２の修飾：Ｔ３６６、Ｌ３６８、Ｙ４０７、Ｆ４０５及びＥ３５７；
１１）第１の修飾：Ｔ３６６、Ｋ４０９、Ｙ３４９、及びＳ３５４；並びに
第２の修飾：Ｔ３６６、Ｌ３６８、Ｙ４０７、Ｆ４０５、及びＥ３５７；
１２）第１の修飾：Ｔ３６６及びＦ４０５；並びに
第２の修飾：Ｔ３６６、Ｌ３６８、Ｙ４０７、及びＫ４０９；
１３）第１の修飾：Ｔ３６６、Ｆ４０５、及びＤ３９９；並びに
第２の修飾：Ｔ３６６、Ｌ３６８、Ｙ４０７、Ｋ４０９、及びＫ３９２；
１４）第１の修飾：Ｔ３６６、Ｆ４０５、及びＹ３４９；並びに
第２の修飾：Ｔ３６６、Ｌ３６８、Ｙ４０７、Ｋ４０９、及びＥ３５７；
１５）第１の修飾：Ｔ３６６、Ｆ４０５、Ｙ３４９、及びＳ３５４；並びに
第２の修飾：Ｔ３６６、Ｌ３６８、Ｙ４０７、Ｋ４０９、及びＥ３５７
から選択されるいずれかの群に示す位置におけるアミノ酸置換を含有し、該アミノ酸の位置は、ＫＡＢＡＴ番号のＥＵインデックスに基づいて決定される。
【０２３３】
いくつかの実施形態において、
第１のＦｃ領域は、第１の修飾を含有し、
第２のＦｃ領域は、第２の修飾を含有し、
第１の修飾及び第２の修飾は、
１）第１の修飾：Ｙ３４９Ｃ及びＴ３６６Ｗ；並びに
第２の修飾：Ｄ３５６Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、及びＦ４０５Ｋ；
２）第１の修飾：Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、及びＦ４０５Ｋ；並びに
第２の修飾：Ｄ３５６Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、及びＹ４０７Ｖ；
３）第１の修飾：Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、及びＫ４０９Ｅ；並びに
第２の修飾：Ｄ３５６Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、及びＦ４０５Ｋ；
４）第１の修飾：Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、及びＫ４０９Ａ；並びに
第２の修飾：Ｄ３５６Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、及びＦ４０５Ｋ；
５）第１の修飾：Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、Ｆ４０５Ｋ、Ｋ３６０Ｅ、及びＱ３４７Ｅ；並びに
第２の修飾：Ｄ３５６Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、及びＱ３４７Ｒ；
６）第１の修飾：Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、Ｆ４０５Ｋ、及びＱ３４７Ｒ；並びに
第２の修飾：Ｄ３５６Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、Ｋ３６０Ｅ、及びＱ３４７Ｅ；
７）第１の修飾：Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、Ｋ４０９Ａ、Ｋ３６０Ｅ、及びＱ３４７Ｅ；並びに
第２の修飾：Ｄ３５６Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、Ｆ４０５Ｋ、及びＱ３４７Ｒ；
８）第１の修飾：Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、Ｋ４０９Ａ、及びＱ３４７Ｒ；並びに
第２の修飾：Ｄ３５６Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、Ｆ４０５Ｋ、Ｋ３６０Ｅ、及びＱ３４７Ｅ；
９）第１の修飾：Ｔ３６６Ｗ、Ｋ４０９Ａ、及びＫ３９２Ｄ；並びに
第２の修飾：Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、Ｄ３９９Ｓ、及びＦ４０５Ｋ；
１０）第１の修飾：Ｔ３６６Ｗ及びＫ４０９Ａ；並びに
第２の修飾：Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ｇ、Ｙ４０７Ａ、及びＦ４０５Ｋ；
１１）第１の修飾：Ｔ３６６Ｗ、Ｋ４０９Ａ、及びＹ３４９Ｄ；並びに
第２の修飾：Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、Ｆ４０５Ｋ及びＥ３５７Ａ；
１２）第１の修飾：Ｔ３６６Ｗ、Ｋ４０９Ａ、Ｙ３４９Ｄ、及びＳ３５４Ｄ；並びに
第２の修飾：Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、Ｆ４０５Ｋ、及びＥ３５７Ａ；
１３）第１の修飾：Ｔ３６６Ｗ及びＦ４０５Ｋ；並びに
第２の修飾：Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、及びＫ４０９Ａ；
１４）第１の修飾：Ｔ３６６Ｗ、Ｆ４０５Ｋ及びＤ３９９Ｓ；並びに
第２の修飾：Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、Ｋ４０９Ａ、及びＫ３９２Ｄ；
１５）第１の修飾：Ｔ３６６Ｗ及びＦ４０５Ｋ；並びに
第２の修飾：Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ｇ、Ｙ４０７Ａ、及びＫ４０９Ａ；
１６）第１の修飾：Ｔ３６６Ｗ、Ｆ４０５Ｋ及びＹ３４９Ｄ；並びに
第２の修飾：Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、Ｋ４０９Ａ、及びＥ３５７Ａ；
１７）第１の修飾：Ｔ３６６Ｗ、Ｆ４０５Ｋ、Ｙ３４９Ｄ、及びＳ３５４Ｄ；並びに
第２の修飾：Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、Ｋ４０９Ａ、及びＥ３５７Ａ
から選択されるいずれかの群に示すアミノ酸置換を含有し、該アミノ酸の位置は、ＫＡＢＡＴ番号のＥＵインデックスに基づいて決定される。
【０２３４】
いくつかの実施形態において、第１のＦｃ領域は、第１の修飾を含有し、第２のＦｃ領域は、第２の修飾を含有し、第１の修飾は、アミノ酸置換Ｔ３６６Ｗ及びＫ４０９Ａを含有し、第２の修飾は、アミノ酸置換Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ｇ、Ｙ４０７Ａ、及びＦ４０５Ｋを含有し、該アミノ酸の位置は、ＫＡＢＡＴ番号のＥＵインデックスに基づいて決定される。
【０２３５】
いくつかの実施形態において、ノブアンドホール修飾は、ノブ修飾及びホール修飾を含有し、ノブ修飾は、アミノ酸置換Ｙ３４９Ｃ及びＴ３６６Ｗを含有し、ホール修飾は、アミノ酸置換Ｄ３５６Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、及びＹ４０７Ｖを含有し、該アミノ酸の位置は、ＫＡＢＡＴ番号のＥＵインデックスに基づいて決定される。
【０２３６】
いくつかの実施形態において、哺乳動物細胞で発現される場合、本開示に係るタンパク質性ヘテロ二量体の収量は、参照タンパク質より、少なくとも１０％（例えば、少なくとも１５％、少なくとも２０％、少なくとも２５％、少なくとも３０％、少なくとも３５％、少なくとも４０％、少なくとも４５％、少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、又はそれ以上）高い。参照タンパク質は、
ｉ）第１のＦｃ領域にノブ修飾を含有すること、
ｉｉ）第２のＦｃ領域にホール修飾を含有すること、及び
ｉｉｉ）第１の修飾及び第２の修飾を同時に含有しないこと
において、タンパク質性ヘテロ二量体と相違する。哺乳動物細胞は、ＨＥＫ２９３細胞、ＣＨＯ細胞、ＣＯＳ−１細胞、及びＮＳ０細胞からなる群からから選択されてもよい。いくつかの実施形態において、ノブ修飾は、アミノ酸置換Ｙ３４９Ｃ及びＴ３６６Ｗを含有し、ホール修飾は、アミノ酸置換Ｄ３５６Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、及びＹ４０７Ｖを含有し、該アミノ酸の位置は、ＫＡＢＡＴ番号のＥＵインデックスに基づいて決定される。
【０２３７】
いくつかの実施形態において、第２の成員に含有されるポリペプチドは、融合タンパク質であり、免疫調節物質のＣ末端が第２のＦｃ領域のＮ末端と直接的又は間接的に融合されて融合タンパク質が形成される。いくつかの実施形態において、免疫調節物質のＣ末端は、第２のＦｃ領域のＮ末端と間接的と融合される。例えば、第２のＦｃ領域は、リンカーを介して免疫調節物質とインフレームで融合される。リンカーは、例えば、ペプチド結合を介して２つのポリペプチド配列を連結又はリンクする合成アミノ酸配列である。いくつかの実施形態において、リンカーは、１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、１０個、１１個、１２個、１３個、１４個、１５個、１６個、１７個、１８個、１９個、２０個、２１個、２２個、２３個、２４個、２５個、又はそれ以上のアミノ酸を含有するペプチドである。例えば、リンカーは、１〜１０個のアミノ酸（例えば、１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、１０個、又は以上のアミノ酸）、１〜１５個のアミノ酸（例えば、１〜１１個、１２個、１３個、１４個、１５個のアミノ酸）、１〜２０個のアミノ酸、１〜３０個又はそれ以上のアミノ酸を含有する。いくつかの実施形態において、リンカーは、配列番号７９又は８８に記載のアミノ酸配列を含有する。いくつかの実施形態において、リンカーは、タンパク質加水分解に対し耐性を有する又はタンパク質加水分解に対し実質的に耐性を有する。
【０２３８】
いくつかの実施形態において、腫瘍抗原は、ＥＧＦＲ、ＥＧＦＲ変異体、ＨＥＲ２／ｎｅｕ、ＧＰＣ３、ＦＡＰ、Ｍｕｃ１、ＭＵＣ５ＡＣ、及びメソセリンからなる群から選択される。
【０２３９】
標的部分の軽鎖は、腫瘍抗原に特異的に指向された抗体の軽鎖の対応するＣＤＲに含有されるアミノ酸配列と、少なくとも６０％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一のアミノ酸配列を含有するＣＤＲを含有してもよい。いくつかの実施形態において、標的部分の軽鎖は、腫瘍抗原に特異的に指向された抗体の軽鎖の対応する可変領域に含有されるアミノ酸配列と、少なくとも６０％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は、１００％同一のアミノ酸配列を含有する可変領域を含有する。いくつかの実施形態において、標的部分の軽鎖は、腫瘍抗原に特異的に指向された抗体の軽鎖の対応するアミノ酸配列に含有される配列と、少なくとも６０％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は、１００％同一のアミノ酸配列を含有する。
【０２４０】
標的部分の重鎖は、腫瘍抗原に特異的に指向された抗体の重鎖の対応するＣＤＲに含有されるアミノ酸配列と、少なくとも６０％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一のアミノ酸配列を含有するＣＤＲを含有してもよい。いくつかの実施形態において、標的部分の重鎖は、腫瘍抗原に特異的に指向された抗体の重鎖の対応する可変領域に含有されるアミノ酸配列と、少なくとも６０％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一のアミノ酸配列を含有する可変領域を含有してもよい。いくつかの実施形態において、標的部分の重鎖は、腫瘍抗原に特異的に指向された抗体の重鎖の対応するアミノ酸配列に含有される配列と、少なくとも６０％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一のアミノ酸配列を含有する。
【０２４１】
いくつかの実施形態において、標的部分の軽鎖は、腫瘍抗原に特異的に指向された抗体の軽鎖の対応するＣＤＲに含有されるアミノ酸配列と、少なくとも６０％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一のアミノ酸配列を含有するＣＤＲを含有し、標的部分の重鎖は、腫瘍抗原に特異的に指向された抗体の重鎖の対応するＣＤＲに含有されるアミノ酸配列と、少なくとも６０％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一のアミノ酸配列を含有するＣＤＲを含有する。
【０２４２】
いくつかの実施形態において、標的部分の軽鎖は、腫瘍抗原に特異的に指向された抗体の軽鎖の対応する可変領域に含有されるアミノ酸配列と、少なくとも６０％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一のアミノ酸配列を含有する可変領域を含有し、標的部分の重鎖は、腫瘍抗原に特異的に指向された抗体の重鎖の対応する可変領域に含有されるアミノ酸配列と、少なくとも６０％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％と同一のアミノ酸配列を含有する可変領域を含有する。
【０２４３】
いくつかの実施形態において、標的部分の軽鎖は、腫瘍抗原に特異的に指向された抗体の軽鎖の対応するアミノ酸配列に含有されるアミノ酸配列と、少なくとも６０％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一のアミノ酸配列を含有するアミノ酸配列を含有し、標的部分の重鎖は、腫瘍抗原に特異的に指向された抗体の重鎖の対応するアミノ酸配列に含有されるアミノ酸配列と、少なくとも６０％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一のアミノ酸配列を含有するアミノ酸配列を含有する。
【０２４４】
腫瘍抗原に特異的に指向された抗体は、抗ＥＧＦＲ、抗ＥＧＦＲ変異体、抗ＨＥＲ２／ｎｅｕ、抗ＧＰＣ３、抗ＦＡＰ、抗Ｍｕｃ１、抗ＭＵＣ５ＡＣ、及び抗メソセリンからなる群から選択されてもよい。いくつかの実施形態において、抗ＥＧＦＲ抗体は、セツキシマブである。いくつかの実施形態において、抗ＥＧＦＲ変異体抗体は、抗ＥＧＦＲ変異体ＩＩＩ抗体で、例えば、Ｍａｂ８０６である。いくつかの実施形態において、抗ＨＥＲ２／ｎｅｕ抗体は、トラスツズマブ又はペルツズマブである。いくつかの実施形態において、抗ＧＰＣ３抗体は、抗体コドリツズマブである。いくつかの実施形態において、抗ＦＡＰ抗体は、抗体２８Ｈ１である。いくつかの実施形態において、抗Ｍｕｃ１抗体は、抗体５Ｅ５又は抗体５Ｅ５のヒト化された形態である。いくつかの実施形態において、抗ＭＵＣ５ＡＣ抗体は、抗体エンシツキシマブである。いくつかの実施形態において、抗メソセリン抗体は、抗体アマツキシマブ又は抗体アマツキシマブのヒト化された形態である。
【０２４５】
いくつかの実施形態において、標的部分は、ＥＧＦＲと特異的に結合し、第１の成員の軽鎖は、軽鎖ＣＤＲ１〜３を含有し、軽鎖ＣＤＲ１のアミノ酸配列は、配列番号１０１に記載のとおり、軽鎖ＣＤＲ２のアミノ酸配列は、配列番号１０２に記載のとおり、そして軽鎖ＣＤＲ３のアミノ酸配列は、配列番号１０３に記載のとおりである。
【０２４６】
いくつかの実施形態において、標的部分は、ＥＧＦＲと特異的に結合し、第１の成員の軽鎖は、軽鎖可変領域を含有し、軽鎖可変領域のアミノ酸配列は、配列番号１０４に記載のとおりである。
【０２４７】
いくつかの実施形態において、標的部分は、ＥＧＦＲと特異的に結合し、第１の成員の軽鎖のアミノ酸配列は、配列番号３７に記載のとおりである。
【０２４８】
いくつかの実施形態において、標的部分は、ＥＧＦＲと特異的に結合し、第１の成員の重鎖は、重鎖ＣＤＲ１〜３を含有し、重鎖ＣＤＲ１のアミノ酸配列は、配列番号１０５に記載のとおり、重鎖ＣＤＲ２のアミノ酸配列は、配列番号１０６に記載のとおり、そして重鎖ＣＤＲ３のアミノ酸配列は、配列番号１０７に記載のとおりである。
【０２４９】
いくつかの実施形態において、標的部分は、ＥＧＦＲと特異的に結合し、第１の成員の重鎖は、重鎖可変領域を含有し、重鎖可変領域のアミノ酸配列は、配列番号１０８に記載のとおりである。
【０２５０】
いくつかの実施形態において、標的部分は、ＥＧＦＲと特異的に結合し、第１の成員の重鎖のアミノ酸配列は、配列番号３９に記載のとおりである。
【０２５１】
いくつかの実施形態において、標的部分は、ＥＧＦＲと特異的に結合し、第１の成員の軽鎖は、軽鎖ＣＤＲ１〜３を含有し、軽鎖ＣＤＲ１のアミノ酸配列は、配列番号１０１に記載のとおり、軽鎖ＣＤＲ２のアミノ酸配列は、配列番号１０２に記載のとおり、そして軽鎖ＣＤＲ３のアミノ酸配列は、配列番号１０３に記載のとおりであり、並びに第１の成員の重鎖は、重鎖ＣＤＲ１〜３を含有し、重鎖ＣＤＲ１のアミノ酸配列は、配列番号１０５に記載のとおり、重鎖ＣＤＲ２のアミノ酸配列は、配列番号１０６に記載のとおり、そして重鎖ＣＤＲ３のアミノ酸配列は、配列番号１０７に記載のとおりである。
【０２５２】
いくつかの実施形態において、標的部分は、ＥＧＦＲと特異的に結合し、第１の成員の軽鎖は、軽鎖可変領域を含有し、軽鎖可変領域のアミノ酸配列は、配列番号１０４に記載のとおりであり、そして第１の成員の重鎖は、重鎖可変領域を含有し、重鎖可変領域のアミノ酸配列は、配列番号１０８に記載のとおりである。
【０２５３】
いくつかの実施形態において、標的部分は、ＥＧＦＲと特異的に結合し、第１の成員の軽鎖のアミノ酸配列は、配列番号３７に記載のとおりであり、そして第１の成員の重鎖のアミノ酸配列は、配列番号３９に記載のとおりである。
【０２５４】
いくつかの実施形態において、標的部分は、ＥＧＦＲ変異体と特異的に結合し、第１の成員の軽鎖は、軽鎖ＣＤＲ１〜３を含有し、軽鎖ＣＤＲ１のアミノ酸配列は、配列番号１０９に記載のとおり、軽鎖ＣＤＲ２のアミノ酸配列は、配列番号１１０に記載のとおり、そして軽鎖ＣＤＲ３のアミノ酸配列は、配列番号１１１に記載のとおりである。
【０２５５】
いくつかの実施形態において、標的部分は、ＥＧＦＲ変異体と特異的に結合し、第１の成員の軽鎖は、軽鎖可変領域を含有し、軽鎖可変領域のアミノ酸配列は、配列番号１１２に記載のとおりである。
【０２５６】
いくつかの実施形態において、標的部分は、ＥＧＦＲ変異体と特異的に結合し、第１の成員の軽鎖のアミノ酸配列は、配列番号５３に記載のとおりである。
【０２５７】
いくつかの実施形態において、標的部分は、ＥＧＦＲ変異体と特異的に結合し、第１の成員の重鎖は、重鎖ＣＤＲ１〜３を含有し、重鎖ＣＤＲ１のアミノ酸配列は、配列番号１１３に記載のとおり、重鎖ＣＤＲ２のアミノ酸配列は、配列番号１１４に記載のとおり、そして重鎖ＣＤＲ３のアミノ酸配列は、配列番号１１５に記載のとおりである。
【０２５８】
いくつかの実施形態において、標的部分は、ＥＧＦＲ変異体と特異的に結合し、第１の成員の重鎖は、重鎖可変領域を含有し、重鎖可変領域のアミノ酸配列は、配列番号１１６に記載のとおりである。
【０２５９】
いくつかの実施形態において、標的部分は、ＥＧＦＲ変異体と特異的に結合し、第１の成員の重鎖のアミノ酸配列は、配列番号５５に記載のとおりである。
【０２６０】
いくつかの実施形態において、標的部分は、ＥＧＦＲ変異体と特異的に結合し、第１の成員の軽鎖は、軽鎖ＣＤＲ１〜３を含有し、軽鎖ＣＤＲ１のアミノ酸配列は、配列番号１０９に記載のとおり、軽鎖ＣＤＲ２のアミノ酸配列は、配列番号１１０に記載のとおり、そして軽鎖ＣＤＲ３のアミノ酸配列は、配列番号１１１に記載のとおりであり、並びに第１の成員の重鎖は、重鎖ＣＤＲ１〜３を含有し、重鎖ＣＤＲ１のアミノ酸配列は、配列番号１１３に記載のとおり、重鎖ＣＤＲ２のアミノ酸配列は、配列番号１１４に記載のとおり、そして重鎖ＣＤＲ３のアミノ酸配列は、配列番号１１５に記載のとおりである。
【０２６１】
いくつかの実施形態において、標的部分は、ＥＧＦＲ変異体と特異的に結合し、第１の成員の軽鎖は、軽鎖可変領域を含有し、軽鎖可変領域のアミノ酸配列は、配列番号１１２に記載のとおりであり、そして第１の成員の重鎖は、重鎖可変領域を含有し、重鎖可変領域のアミノ酸配列は、配列番号１１６に記載のとおりである。
【０２６２】
いくつかの実施形態において、標的部分は、ＥＧＦＲ変異体と特異的に結合し、第１の成員の軽鎖のアミノ酸配列は、配列番号５３に記載のとおりであり、そして第１の成員の重鎖のアミノ酸配列は、配列番号５５に記載のとおりである。
【０２６３】
いくつかの実施形態において、標的部分は、ＨＥＲ２／ｎｅｕと特異的に結合し、第１の成員の軽鎖は、軽鎖ＣＤＲ１〜３を含有し、軽鎖ＣＤＲ１のアミノ酸配列は、配列番号１１７及び１２５から選択され、軽鎖ＣＤＲ２のアミノ酸配列は、配列番号１１８及び１２６から選択され、そして軽鎖ＣＤＲ３のアミノ酸配列は、配列番号１１９及び１２７から選択される。
【０２６４】
いくつかの実施形態において、標的部分は、ＨＥＲ２／ｎｅｕと特異的に結合し、第１の成員の軽鎖は、軽鎖可変領域を含有し、軽鎖可変領域のアミノ酸配列は、配列番号１２０及び１２８から選択される。
【０２６５】
いくつかの実施形態において、標的部分は、ＨＥＲ２／ｎｅｕと特異的に結合し、第１の成員の軽鎖のアミノ酸配列は、配列番号４５及び４９から選択される。
【０２６６】
いくつかの実施形態において、標的部分は、ＨＥＲ２／ｎｅｕと特異的に結合し、第１の成員の重鎖は、重鎖ＣＤＲ１〜３を含有し、重鎖ＣＤＲ１のアミノ酸配列は、配列番号１２１及び１２９から選択され、重鎖ＣＤＲ２のアミノ酸配列は、配列番号１２２及び１３０から選択され、そして重鎖ＣＤＲ３のアミノ酸配列は、配列番号１２３及び１３１から選択される。
【０２６７】
いくつかの実施形態において、標的部分は、ＨＥＲ２／ｎｅｕと特異的に結合し、第１の成員の抗体重鎖は、重鎖可変領域を含有し、重鎖可変領域のアミノ酸配列は、配列番号１２４及び１３２から選択される。
【０２６８】
いくつかの実施形態において、標的部分は、ＨＥＲ２／ｎｅｕと特異的に結合し、第１の成員の重鎖のアミノ酸配列は、配列番号４７及び５１から選択される。
【０２６９】
いくつかの実施形態において、標的部分は、ＨＥＲ２／ｎｅｕと特異的に結合し、第１の成員の軽鎖は、軽鎖ＣＤＲ１〜３を含有し、軽鎖ＣＤＲ１のアミノ酸配列は、配列番号１１７及び１２５から選択され、軽鎖ＣＤＲ２のアミノ酸配列は、配列番号１１８及び１２６から選択され、そして軽鎖ＣＤＲ３のアミノ酸配列は、配列番号１１９及び１２７から選択され、並びに第１の成員の重鎖は、重鎖ＣＤＲ１〜３を含有し、重鎖ＣＤＲ１のアミノ酸配列は、配列番号１２１及び１２９から選択され、重鎖ＣＤＲ２のアミノ酸配列は、配列番号１２２及び１３０から選択され、そして重鎖ＣＤＲ３のアミノ酸配列は、配列番号１２３及び１３１から選択される。
【０２７０】
いくつかの実施形態において、標的部分は、ＨＥＲ２／ｎｅｕと特異的に結合し、第１の成員の軽鎖は、軽鎖可変領域を含有し、軽鎖可変領域のアミノ酸配列は、配列番号１２０及び１２８から選択され、そして第１の成員の重鎖は、重鎖可変領域を含有し、重鎖可変領域のアミノ酸配列は、配列番号１２４及び１３２から選択される。
【０２７１】
いくつかの実施形態において、標的部分は、ＨＥＲ２／ｎｅｕと特異的に結合し、第１の成員の軽鎖のアミノ酸配列は、配列番号４５及び４９から選択され、そして第１の成員の重鎖のアミノ酸配列は、配列番号４７及び５１から選択される。
【０２７２】
いくつかの実施形態において、標的部分は、ＧＰＣ３と特異的に結合し、第１の成員の軽鎖は、軽鎖ＣＤＲ１〜３を含有し、軽鎖ＣＤＲ１のアミノ酸配列は、配列番号１３３に記載のとおり、軽鎖ＣＤＲ２のアミノ酸配列は、配列番号１３４に記載のとおり、そして軽鎖ＣＤＲ３のアミノ酸配列は、配列番号１３５に記載のとおりである。
【０２７３】
いくつかの実施形態において、標的部分は、ＧＰＣ３と特異的に結合し、第１の成員の軽鎖は、軽鎖可変領域を含有し、軽鎖可変領域のアミノ酸配列は、配列番号１３６に記載のとおりである。
【０２７４】
いくつかの実施形態において、標的部分は、ＧＰＣ３と特異的に結合し、第１の成員の軽鎖のアミノ酸配列は、配列番号５７に記載のとおりである。
【０２７５】
いくつかの実施形態において、標的部分は、ＧＰＣ３と特異的に結合し、第１の成員の重鎖は、重鎖ＣＤＲ１〜３を含有し、重鎖ＣＤＲ１のアミノ酸配列は、配列番号１３７に記載のとおり、重鎖ＣＤＲ２のアミノ酸配列は、配列番号１３８に記載のとおり、そして重鎖ＣＤＲ３のアミノ酸配列は、配列番号１３９に記載のとおりである。
【０２７６】
いくつかの実施形態において、標的部分は、ＧＰＣ３と特異的に結合し、第１の成員の重鎖は、重鎖可変領域を含有し、重鎖可変領域のアミノ酸配列は、配列番号１４０に記載のとおりである。
【０２７７】
いくつかの実施形態において、標的部分は、ＧＰＣ３と特異的に結合し、第１の成員の重鎖のアミノ酸配列は、配列番号５９に記載のとおりである。
【０２７８】
いくつかの実施形態において、標的部分は、ＧＰＣ３と特異的に結合し、第１の成員の軽鎖は、軽鎖ＣＤＲ１〜３を含有し、軽鎖ＣＤＲ１のアミノ酸配列は、配列番号１３３に記載のとおり、軽鎖ＣＤＲ２のアミノ酸配列は、配列番号１３４に記載のとおり、そして軽鎖ＣＤＲ３のアミノ酸配列は、配列番号１３５に記載のとおりであり、並びに第１の成員の重鎖は、重鎖ＣＤＲ１〜３を含有し、重鎖ＣＤＲ１のアミノ酸配列は、配列番号１３７に記載のとおり、重鎖ＣＤＲ２のアミノ酸配列は、配列番号１３８に記載のとおり、そして重鎖ＣＤＲ３のアミノ酸配列は、配列番号１３９に記載のとおりである。
【０２７９】
いくつかの実施形態において、標的部分は、ＧＰＣ３と特異的に結合し、第１の成員の軽鎖は、軽鎖可変領域を含有し、軽鎖可変領域のアミノ酸配列は、配列番号１３６に記載のとおりであり、そして第１の成員の重鎖は、重鎖可変領域を含有し、重鎖可変領域のアミノ酸配列は、配列番号１４０に記載のとおりである。
【０２８０】
いくつかの実施形態において、標的部分は、ＧＰＣ３と特異的に結合し、第１の成員の軽鎖のアミノ酸配列は、配列番号５７に記載のとおりであり、そして第１の成員の重鎖のアミノ酸配列は、配列番号５９に記載のとおりである。
【０２８１】
いくつかの実施形態において、標的部分は、ＦＡＰと特異的に結合し、第１の成員の軽鎖は、軽鎖ＣＤＲ１〜３を含有し、軽鎖ＣＤＲ１のアミノ酸配列は、配列番号１４１に記載のとおり、軽鎖ＣＤＲ２のアミノ酸配列は、配列番号１４２に記載のとおり、そして軽鎖ＣＤＲ３のアミノ酸配列は、配列番号１４３に記載のとおりである。
【０２８２】
いくつかの実施形態において、標的部分は、ＦＡＰと特異的に結合し、第１の成員の軽鎖は、軽鎖可変領域を含有し、軽鎖可変領域のアミノ酸配列は、配列番号１４４に記載のとおりである。
【０２８３】
いくつかの実施形態において、標的部分は、ＦＡＰと特異的に結合し、第１の成員の軽鎖のアミノ酸配列は、配列番号６１に記載のとおりである。
【０２８４】
いくつかの実施形態において、標的部分は、ＦＡＰと特異的に結合し、第１の成員の重鎖は、重鎖ＣＤＲ１〜３を含有し、重鎖ＣＤＲ１のアミノ酸配列は、配列番号１４５に記載のとおり、重鎖ＣＤＲ２のアミノ酸配列は、配列番号１４６に記載のとおり、そして重鎖ＣＤＲ３のアミノ酸配列は、配列番号１４７に記載のとおりである。
【０２８５】
いくつかの実施形態において、標的部分は、ＦＡＰと特異的に結合し、第１の成員の重鎖は、重鎖可変領域を含有し、重鎖可変領域のアミノ酸配列は、配列番号１４８に記載のとおりである。
【０２８６】
いくつかの実施形態において、標的部分は、ＦＡＰと特異的に結合し、第１の成員の重鎖のアミノ酸配列は、配列番号６３に記載のとおりである。
【０２８７】
いくつかの実施形態において、標的部分は、ＦＡＰと特異的に結合し、第１の成員の軽鎖は、軽鎖ＣＤＲ１〜３を含有し、軽鎖ＣＤＲ１のアミノ酸配列は、配列番号１４１に記載のとおり、軽鎖ＣＤＲ２のアミノ酸配列は、配列番号１４２に記載のとおり、そして軽鎖ＣＤＲ３のアミノ酸配列は、配列番号１４３に記載のとおりであり、並びに第１の成員の重鎖は、重鎖ＣＤＲ１〜３を含有し、重鎖ＣＤＲ１のアミノ酸配列は、配列番号１４５に記載のとおり、重鎖ＣＤＲ２のアミノ酸配列は、配列番号１４６に記載のとおり、そして重鎖ＣＤＲ３のアミノ酸配列は、配列番号１４７に記載のとおりである。
【０２８８】
いくつかの実施形態において、標的部分は、ＦＡＰと特異的に結合し、第１の成員の軽鎖は、軽鎖可変領域を含有し、軽鎖可変領域のアミノ酸配列は、配列番号１４８に記載のとおりであり、そして第１の成員の重鎖は、重鎖可変領域を含有し、重鎖可変領域のアミノ酸配列は、配列番号１５２に記載のとおりである。
【０２８９】
いくつかの実施形態において、標的部分は、ＦＡＰと特異的に結合し、第１の成員の軽鎖のアミノ酸配列は、配列番号６１に記載のとおりであり、そして第１の成員の重鎖のアミノ酸配列は、配列番号６３に記載のとおりである。
【０２９０】
いくつかの実施形態において、標的部分は、Ｍｕｃ１と特異的に結合し、第１の成員の軽鎖は、軽鎖ＣＤＲ１〜３を含有し、軽鎖ＣＤＲ１のアミノ酸配列は、配列番号１４９に記載のとおり、軽鎖ＣＤＲ２のアミノ酸配列は、配列番号１５０に記載のとおり、そして軽鎖ＣＤＲ３のアミノ酸配列は、配列番号１５１に記載のとおりである。
【０２９１】
いくつかの実施形態において、標的部分は、Ｍｕｃ１と特異的に結合し、第１の成員の軽鎖は、軽鎖可変領域を含有し、軽鎖可変領域のアミノ酸配列は、配列番号１５２に記載のとおりである。
【０２９２】
いくつかの実施形態において、標的部分は、Ｍｕｃ１と特異的に結合し、第１の成員の軽鎖のアミノ酸配列は、配列番号６５に記載のとおりである。
【０２９３】
いくつかの実施形態において、標的部分は、Ｍｕｃ１と特異的に結合し、第１の成員の重鎖は、重鎖ＣＤＲ１〜３を含有し、重鎖ＣＤＲ１のアミノ酸配列は、配列番号１５３に記載のとおり、重鎖ＣＤＲ２のアミノ酸配列は、配列番号１５４に記載のとおり、そして重鎖ＣＤＲ３のアミノ酸配列は、配列番号１５５に記載のとおりである。
【０２９４】
いくつかの実施形態において、標的部分は、Ｍｕｃ１と特異的に結合し、第１の成員の重鎖は、重鎖可変領域を含有し、重鎖可変領域のアミノ酸配列は、配列番号１５６に記載のとおりである。
【０２９５】
いくつかの実施形態において、標的部分は、Ｍｕｃ１と特異的に結合し、第１の成員の重鎖のアミノ酸配列は、配列番号６７に記載のとおりである。
【０２９６】
いくつかの実施形態において、標的部分は、Ｍｕｃ１と特異的に結合し、第１の成員の軽鎖は、軽鎖ＣＤＲ１〜３を含有し、軽鎖ＣＤＲ１のアミノ酸配列は、配列番号１４９に記載のとおり、軽鎖ＣＤＲ２のアミノ酸配列は、配列番号１５０に記載のとおり、そして軽鎖ＣＤＲ３のアミノ酸配列は、配列番号１５１に記載のとおりであり、並びに第１の成員の重鎖は、重鎖ＣＤＲ１〜３を含有し、重鎖ＣＤＲ１のアミノ酸配列は、配列番号１５３に記載のとおり、重鎖ＣＤＲ２のアミノ酸配列は、配列番号１５４に記載のとおり、そして重鎖ＣＤＲ３のアミノ酸配列は、配列番号１５５に記載のとおりである。
【０２９７】
いくつかの実施形態において、標的部分は、Ｍｕｃ１と特異的に結合し、第１の成員の軽鎖は、軽鎖可変領域を含有し、軽鎖可変領域のアミノ酸配列は、配列番号１５２に記載のとおりであり、そして第１の成員の重鎖は、重鎖可変領域を含有し、重鎖可変領域のアミノ酸配列は、配列番号１５６に記載のとおりである。
【０２９８】
いくつかの実施形態において、標的部分は、Ｍｕｃ１と特異的に結合し、第１の成員の軽鎖のアミノ酸配列は、配列番号６５に記載のとおりであり、そして第１の成員の重鎖のアミノ酸配列は、配列番号６７に記載のとおりである。
【０２９９】
いくつかの実施形態において、標的部分は、メソセリンと特異的に結合し、第１の成員の軽鎖は、軽鎖ＣＤＲ１〜３を含有し、軽鎖ＣＤＲ１のアミノ酸配列は、配列番号１６５に記載のとおり、軽鎖ＣＤＲ２のアミノ酸配列は、配列番号１６６に記載のとおり、そして軽鎖ＣＤＲ３のアミノ酸配列は、配列番号１６７に記載のとおりである。
【０３００】
いくつかの実施形態において、標的部分は、メソセリンと特異的に結合し、第１の成員の軽鎖は、軽鎖可変領域を含有し、軽鎖可変領域のアミノ酸配列は、配列番号１６８に記載のとおりである。
【０３０１】
いくつかの実施形態において、標的部分は、メソセリンと特異的に結合し、第１の成員の軽鎖のアミノ酸配列は、配列番号７３に記載のとおりである。
【０３０２】
いくつかの実施形態において、標的部分は、メソセリンと特異的に結合し、第１の成員の重鎖は、重鎖ＣＤＲ１〜３を含有し、重鎖ＣＤＲ１のアミノ酸配列は、配列番号１６９に記載のとおり、重鎖ＣＤＲ２のアミノ酸配列は、配列番号１７０に記載のとおり、そして重鎖ＣＤＲ３のアミノ酸配列は、配列番号１７１に記載のとおりである。
【０３０３】
いくつかの実施形態において、標的部分は、メソセリンと特異的に結合し、第１の成員の重鎖は、重鎖可変領域を含有し、重鎖可変領域のアミノ酸配列は、配列番号１７２に記載のとおりである。
【０３０４】
いくつかの実施形態において、標的部分は、メソセリンと特異的に結合し、第１の成員の重鎖のアミノ酸配列は、配列番号７５に記載のとおりである。
【０３０５】
いくつかの実施形態において、標的部分は、メソセリンと特異的に結合し、第１の成員の軽鎖は、軽鎖ＣＤＲ１〜３を含有し、軽鎖ＣＤＲ１のアミノ酸配列は、配列番号１６５に記載のとおり、軽鎖ＣＤＲ２のアミノ酸配列は、配列番号１６６に記載のとおり、そして軽鎖ＣＤＲ３のアミノ酸配列は、配列番号１６７に記載のとおりであり、並びに第１の成員の重鎖は、重鎖ＣＤＲ１〜３を含有し、重鎖ＣＤＲ１のアミノ酸配列は、配列番号１６９に記載のとおり、重鎖ＣＤＲ２のアミノ酸配列は、配列番号１７０に記載のとおり、そして重鎖ＣＤＲ３のアミノ酸配列は、配列番号１７１に記載のとおりである。
【０３０６】
いくつかの実施形態において、標的部分は、メソセリンと特異的に結合し、第１の成員の軽鎖は、軽鎖可変領域を含有し、軽鎖可変領域のアミノ酸配列は、配列番号１６８に記載のとおりであり、そして第１の成員の重鎖は、重鎖可変領域を含有し、重鎖可変領域のアミノ酸配列は、配列番号１７２に記載のとおりである。
【０３０７】
いくつかの実施形態において、標的部分は、メソセリンと特異的に結合し、第１の成員の軽鎖のアミノ酸配列は、配列番号７３に記載のとおりであり、そして第１の成員の重鎖のアミノ酸配列は、配列番号７５に記載のとおりである。
【０３０８】
いくつかの実施形態において、標的部分は、ＭＵＣ５ＡＣと特異的に結合し、第１の成員の軽鎖は、軽鎖ＣＤＲ１〜３を含有し、軽鎖ＣＤＲ１のアミノ酸配列は、配列番号１５７に記載のとおり、軽鎖ＣＤＲ２のアミノ酸配列は、配列番号１５８に記載のとおり、そして軽鎖ＣＤＲ３のアミノ酸配列は、配列番号１５９に記載のとおりである。
【０３０９】
いくつかの実施形態において、標的部分は、ＭＵＣ５ＡＣと特異的に結合し、第１の成員の軽鎖は、軽鎖可変領域を含有し、軽鎖可変領域のアミノ酸配列は、配列番号１６０に記載のとおりである。
【０３１０】
いくつかの実施形態において、標的部分は、ＭＵＣ５ＡＣと特異的に結合し、第１の成員の軽鎖のアミノ酸配列は、配列番号６９に記載のとおりである。
【０３１１】
いくつかの実施形態において、標的部分は、ＭＵＣ５ＡＣと特異的に結合し、第１の成員の重鎖は、重鎖ＣＤＲ１〜３を含有し、重鎖ＣＤＲ１のアミノ酸配列は、配列番号１６１に記載のとおり、重鎖ＣＤＲ２のアミノ酸配列は、配列番号１６２に記載のとおり、そして重鎖ＣＤＲ３のアミノ酸配列は、配列番号１６３に記載のとおりである。
【０３１２】
いくつかの実施形態において、標的部分は、ＭＵＣ５ＡＣと特異的に結合し、第１の成員の重鎖は、重鎖可変領域を含有し、重鎖可変領域のアミノ酸配列は、配列番号１６４に記載のとおりである。
【０３１３】
いくつかの実施形態において、標的部分は、ＭＵＣ５ＡＣと特異的に結合し、第１の成員の重鎖のアミノ酸配列は、配列番号７１に記載のとおりである。
【０３１４】
いくつかの実施形態において、標的部分は、ＭＵＣ５ＡＣと特異的に結合し、第１の成員の軽鎖は、軽鎖ＣＤＲ１〜３を含有し、軽鎖ＣＤＲ１のアミノ酸配列は、配列番号１５７に記載のとおり、軽鎖ＣＤＲ２のアミノ酸配列は、配列番号１５８に記載のとおり、そして軽鎖ＣＤＲ３のアミノ酸配列は、配列番号１５９に記載のとおりであり、並びに第１の成員の重鎖は、重鎖ＣＤＲ１〜３を含有し、重鎖ＣＤＲ１のアミノ酸配列は、配列番号１６１に記載のとおり、重鎖ＣＤＲ２のアミノ酸配列は、配列番号１６２に記載のとおり、そして重鎖ＣＤＲ３のアミノ酸配列は、配列番号１６３に記載のとおりである。
【０３１５】
いくつかの実施形態において、標的部分は、ＭＵＣ５ＡＣと特異的に結合し、第１の成員の軽鎖は、軽鎖可変領域を含有し、軽鎖可変領域のアミノ酸配列は、配列番号１６０に記載のとおりであり、そして第１の成員の重鎖は、重鎖可変領域を含有し、重鎖可変領域のアミノ酸配列は、配列番号１６４に記載のとおりである。
【０３１６】
いくつかの実施形態において、標的部分は、ＭＵＣ５ＡＣと特異的に結合し、第１の成員の軽鎖のアミノ酸配列は、配列番号６９に記載のとおりであり、そして第１の成員の重鎖のアミノ酸配列は、配列番号７１に記載のとおりである。
【０３１７】
いくつかの実施形態において、免疫調節物質は、免疫応答を増強させる。免疫応答を増強できる免疫調節物質の例は、ＩＬ−２、ＩＦＮα、ＩＦＮβ、ＩＦＮγ、ＩＦＮλ、腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）α、ＩＬ−１２及びＩＬ−１０を含有するが、これらに限定されない。
【０３１８】
いくつかの実施形態において、免疫調節物質は、免疫応答を低下させる。免疫応答を低下できる免疫調節物質の非限定的な例として、ＩＬ−１０及びトランスフォーミング増殖因子（ＴＧＦ）−βが挙げられる。
【０３１９】
いくつかの実施形態において、免疫調節物質は、サイトカインである。例えば、免疫調節物質は、インターフェロン、インターロイキン、ケモカイン、リンホカイン及び腫瘍壊死因子からなる群から選択されたサイトカインであってもよい。
【０３２０】
いくつかの実施形態において、免疫調節物質は、インターフェロンα、インターフェロンλ、及インターフェロンβからなる群から選択されたインターフェロンである。
【０３２１】
いくつかの実施形態において、免疫調節物質は、インターロイキンであり、インターロイキンは、インターロイキン１０、インターロイキン２及び／又はスーパーインターロイキン２を含有する。
【０３２２】
いくつかの実施形態において、第１のＦｃ領域及び第２のＦｃ領域は、免疫グロブリンのＦｃ領域に由来する。例えば、免疫グロブリンは、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、及びＩｇＧ４から選択される。いくつかの実施形態において、第１のＦｃ領域及び第２のＦｃ領域は、免疫グロブリンのＦｃ領域に由来し、当該免疫グロブリンは、ヒトＩｇＧ１である。
【０３２３】
いくつかの実施形態において、第１の修飾及び／又は第２の修飾は、ヒトＩｇＧ１のＦｃ領域の野生型アミノ酸配列に対していうものである。
【０３２４】
いくつかの実施形態において、第２のＦｃ領域は、免疫調節物質とインフレームで融合される。
【０３２５】
いくつかの実施形態において、第２の成員に含有されるポリペプチドは、２種以上の免疫調節物質を含有し、当該２種以上の免疫調節物質は、インフレームで互いに融合され、且つ第２のＦｃ領域と融合され、当該２種以上の免疫調節物質は、第２のＦｃ領域のＮ末端に配置される。いくつかの実施形態において、当該２種以上の免疫調節物質は、リンカーを介してインフレームで互いに融合される、及び／又は第２のＦｃ領域と融合されてもよい。リンカーは、例えば、ペプチド結合を介して２個のポリペプチド配列を連結又は結合させる合成アミノ酸配列である。いくつかの実施形態において、リンカーは、例えば、１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、１０個、１１個、１２個、１３個、１４個、１５個、１６個、１７個、１８個、１９個、２０個、２１個、２２個、２３個、２４個、２５個、又はそれ以上のアミノ酸を含有する。当該２種以上の免疫調節物質は、同一のタイプであるか、異なるタイプのものである。例えば、当該２種以上の免疫調節物質は、同一のものである。いくつかの実施形態において、当該２種以上の免疫調節物質は、インターロイキン１０である。
【０３２６】
いくつかの実施形態において、第１の成員の重鎖で、第１のＦｃ領域のアミノ酸配列は、配列番号１、４、５、６、７、９、１１、１３、１５、１７、１９、２１、２２、２４、２６、２７、及び２９から選択される。
【０３２７】
いくつかの実施形態において、第２の成員に含有される免疫調節物質のアミノ酸配列は、配列番号１７３〜１８０から選択される。
【０３２８】
いくつかの実施形態において、第２の成員に含有される第２のＦｃ領域のアミノ酸配列は、配列番号２、３、８、１０、１２、１４、１６、１８、２０、２３、２５、及び２８から選択される。
【０３２９】
いくつかの実施形態において、第２の成員に含有されるポリペプチドのアミノ酸配列は、配列番号７７、８０、８２、８４、８６、８９、９１、及び９７から選択される。
【０３３０】
いくつかの実施形態において、第１の成員に含有される軽鎖のアミノ酸配列は、配列番号３７、４５、４９、５３、５７、６１、６５、６９、及び７３から選択され、第１の成員に含有される重鎖のアミノ酸配列は、配列番号３９、４７、５１、５５、５９、６３、６７、７１、及び７５から選択され、第２の成員に含有されるポリペプチドのアミノ酸配列は、配列番号７７、８０、８２、８４、８６、８９、９１、及び９７から選択される。
【０３３１】
別の態様において、本開示は、タンパク質混合物を提供し、当該タンパク質混合物は、
１）本開示に係るタンパク質性ヘテロ二量体と、
２）タンパク質性ヘテロ二量体の第１の成員の２つにより形成された第１のホモ二量体と、
３）タンパク質性ヘテロ二量体の第２の成員の２つにより形成された第２のホモ二量体
とを含有する。タンパク質混合物におけるタンパク質性ヘテロ二量体のパーセンテージは、少なくとも５０％（例えば、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも７６％、少なくとも７７％、少なくとも７８％、少なくとも７９％、少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、少なくとも８４％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、又はそれ以上）であってもよい。
【０３３２】
いくつかの実施形態において、タンパク質混合物で、第２のホモ二量体のパーセンテージは、第１のホモ二量体のパーセンテージより小さい。例えば、第１のホモ二量体のパーセンテージは、第２のホモ二量体のパーセンテージより、少なくとも１．１倍、少なくとも１．２倍、少なくとも１．３倍、少なくとも１．４倍、少なくとも１．５倍、少なくとも１．６倍、少なくとも１．７倍、少なくとも１．８倍、少なくとも１．９倍、少なくとも２．０倍、少なくとも２．１倍、少なくとも２．２倍、少なくとも２．３倍、少なくとも２．４倍、少なくとも２．５倍、少なくとも２．６倍、少なくとも２．７倍、少なくとも２．８倍少なくとも２．９倍、少なくとも３．０倍、少なくとも３．１倍、少なくとも３．２倍、少なくとも３．５倍、少なくとも４．０倍、少なくとも４．５倍、少なくとも５．０倍、少なくとも５．５倍、少なくとも６．０倍、少なくとも７．０倍、少なくとも８．０倍、又はそれ以上である。
【０３３３】
いくつかの実施形態において、第２のホモ二量体のタンパク質混合物におけるパーセンテージは、最大１０％（例えば、最大０．０％、最大０．０１％、最大０．１％、最大０．５％、最大１％、最大１．５％、最大２％、最大３％、最大４％、最大５％、最大６％、最大７％、最大８％、最大９％）である。いくつかの実施形態において、タンパク質混合物は、第２のホモ二量体を実質的に含有しない。
【０３３４】
別の態様において、本開示は、本開示に係るタンパク質性ヘテロ二量体をコードする単離されたポリヌクレオチドを提供する。いくつかの実施形態において、単離されたポリヌクレオチドは、本開示に係るタンパク質性ヘテロ二量体のサブユニット（例えば、成員）又は断片をコードする。
【０３３５】
当該ポリヌクレオチドは、本分野で周知された組換え技術を利用して合成できる。例えば、自動化ＤＮＡ合成装置を用いて当該ポリヌクレオチドを合成する。
【０３３６】
標準的な組換えＤＮＡ技術及び分子クローニング技術は、Ｓａｍｂｒｏｏｋ，Ｊ．，Ｆｒｉｔｓｃｈ，Ｅ．Ｆ．とＭａｎｉａｔｉｓ  Ｔ．Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ；  Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ：Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ，（１９８９）（Ｍａｎｉａｔｉｓ）、Ｔ．Ｊ．Ｓｉｌｈａｖｙ，Ｍ．Ｌ．Ｂｅｎｎａｎ，Ｌ．Ｗ．Ｅｎｑｕｉｓｔ，Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔｓ  ｗｉｔｈ  Ｇｅｎｅ  Ｆｕｓｉｏｎｓ，  Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ，  Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ，Ｎ．Ｙ．（１９８４）、Ａｕｓｕｂｅｌ，Ｆ．Ｍ．ら，Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｇｒｅｅｎｅ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ａｓｓｏｃ．とＷｉｌｅｙ−Ｉｎｔｅｒｓｃｉｅｎｃｅ（１９８７）に記載のものを包含する。簡単に言えば、対象核酸は、細胞から直接抽出された、又はＰＣＲ及びＲＴ−ＰＣＲを包含するがこれらに限定されない様々な増幅プロセスを利用して組換え生成されたゲノムＤＮＡ断片、ｃＤＮＡｓ、及びＲＮＡｓによって調製できる。
【０３３７】
核酸の直接的化学合成は、一般に３’ブロック及び５’ブロックヌクレオチド単量体の遂次付加を伴い、各々の付加は、付加される単量体の３’位の成長鎖の５’−ヒドロキシル基における求核攻撃（具体的には、ホスホトリエステル、ホスホラミダイト等のリン酸誘体である）により達成される。Ｍａｔｔｅｕｃｉら，Ｔｅｔ．Ｌｅｔｔ．５２１：７１９（１９８０）、Ｃａｒｕｔｈｅｒｓらによる米国特許第４５００７０７号、Ｓｏｕｔｈｅｒｎらによる米国特許第５４３６３２７号、及び第５７００６３７号を参照できる。
【０３３８】
別の態様において、本開示は、本開示に係る単離されたポリヌクレオチドを含有するむベクターを提供する。
【０３３９】
当該ベクターは、任意の直鎖状核酸、プラスミド、ファージミド、コスミド、ＲＮＡベクター、ウイルスベクター等であってもよい。ウイルスベクターの非限定的な例は、レトロウイルス、アデノウイルス、及びアデノ随伴ウイルスを包含する。いくつかの実施形態において、ベクターは、ファージディスプレイベクター等の発現ベクターである。
【０３４０】
発現ベクターは、特定のタイプの宿主細胞に適用されるが、他の宿主細胞に適用されない場合がある。例えば、発現ベクターを宿主生物体に導入し、ベクターに含有される任意の遺伝子／ポリヌクレオチドの生存率及び発現を監視する。
【０３４１】
発現ベクターは、発現後に、発現ベクターを担持する他の宿主細胞を選択又は同定するのに有用な、１つの以上の表現型形質を付与する１つ以上の選択マーカー遺伝子をさらに含有してもよい。真核細胞に適する選択マーカーの非限定的な例は、ジヒドロ葉酸レダクターゼ及びネオマイシン耐性を含有する。
【０３４２】
様々な公開技術を利用して対象ベクターを宿主細胞に安定的又は一過性導入することができる。例えば、一つの方法は、発現ベクターがカルシウム沈殿物によって導入される塩化カルシウム処理を包含する。他の塩、例えばリン酸カルシウムも、同様の手順に従って使用できる。また、エレクトロポレーション（即ち、核酸に対する細胞の透過性を高めるための電流印加）も利用できる。形質転換法の他の例は、マイクロインジェクション、ＤＥＡＥデキストラン媒介形質転換、及び酢酸リチウム存在下の熱ショックを包含する。脂質複合体、リポソーム、及びデンドリマーも、宿主細胞をトランスフェクトするために使用できる。
【０３４３】
宿主細胞への異種配列導入後、様々な方法を利用して、対象ベクターが導入された宿主細胞を同定できる。一つの例示的な選択方法は、個々の細胞を継代培養して個々のコロニーを形成し、次に、所望のタンパク質産物の発現について試験することを包含する。別の方法として、発現ベクター内に含有される選択マーカー遺伝子の発現によって付与された表現型形質に基づいて異種配列を含有する宿主細胞を選択することを包含する。
【０３４４】
例えば、本開示に係る様々な異種配列の宿主細胞への導入は、ＰＣＲ、サザンブロット又はノーザンブロットハイブリダイゼーション等の方法により確認できる。例えば、得られた宿主細胞から核酸を調製し、目的配列に特異的なプライマーを使用するＰＣＲにより目的配列を増幅することができる。増幅産物をアガロースゲル電気泳動、ポリアクリルアミドゲル電気泳動、又はキャピラリー電気泳動にかけて、エチジウムブロマイド、ＳＹＢＲグリーン溶液等で染色するか、ＵＶ検出でＤＮＡを検出する。代替的に、目的配列に特異的な核酸プローブをハイブリダイゼーション反応に使用する。目的遺伝子配列の発現は、ＰＣＲと組み合わせた逆転写、ノーザンブロットハイブリダイゼーションによる対応するｍＲＮＡの検出、又はコードされた遺伝子産物と反応する抗体を使用するイムノアッセイにより確認できる。例示的なイムノアッセイは、ＥＬＩＳＡ、放射免疫アッセイ、及びサンドイッチイムノアッセイを包含するが、これらに限定されない。
【０３４５】
また、本開示に係る様々な異種配列の宿主細胞への導入は、異種配列がコードする酵素（例えば、酵素マーカー）の酵素活性により確認できる。本分野で周知された様々な方法により酵素を検出できる。一般に、研究対象の酵素反応の産物形成又は基質の変換により確認できる。当該反応は、インビトロ又はインビボで行われる。
【０３４６】
別の態様において、本開示は、単離された宿主細胞を提供し、当該宿主細胞は、本開示に係る単離されたポリヌクレオチド又はベクターを含有する、及び／又は、タンパク質性ヘテロ二量体、及び／又はタンパク質性ヘテロ二量体をコードする単離されたポリヌクレオチド、及び／又は本開示に係るタンパク質混合物を発現できる。
【０３４７】
いくつかの実施形態において、当該細胞は、本開示に係るヘテロ二量体タンパク質、本開示に係る単離されたポリヌクレオチドがコードするヘテロ二量体タンパク質及び／又はタンパク質混合物を発現する。当該細胞は、真核細胞又は原核細胞であってもよい。適切な細胞を、本開示に係るポリヌクレオチド又はベクターを用いて形質転換又はトランスフェクトすることでヘテロ二量体タンパク質及び／又はタンパク質混合物の発現及び／又は分泌に利用できる。例えば、当該細胞は、大腸菌細胞、他の細菌宿主細胞、酵母細胞、又は様々な高等真核細胞（例えば、不死化ハイブリドーマ細胞、ＮＳ０骨髄腫細胞、ＨＥＫ２９３細胞、チャイニーズハムスター卵巣細胞、ＨｅＬａ細胞、ＣＯＳ細胞等）であってもよい。いくつかの実施形態において、タンパク質性ヘテロ二量体（例えば、ヘテロ二量体タンパク質）をコードするポリヌクレオチドは、特定の宿主細胞における発現に好適な発現制御配列に操作可能に連結される。
【０３４８】
医薬組成物
別の態様において、本開示は、医薬組成物を提供し、当該医薬組成物は、本開示に係るタンパク質性ヘテロ二量体又は本開示に係るタンパク質混合物を含有する。当該医薬組成物は、薬学的に許容される賦形剤をさらに含有してもよい。
【０３４９】
薬学的に許容される賦形剤の例は、不活性な固体希釈剤及び充填剤、希釈剤、滅菌水溶液及び様々な有機溶媒、透過促進剤、可溶化剤、及び補助剤を包含するが、これらに限定されない。
【０３５０】
いくつかの実施形態において、当該医薬組成物は、経口投与、静脈内投与、筋肉内投与、腫瘍部位でのインサイチュ投与、吸入、直腸投与、膣内投与、経皮投与、又は皮下貯蔵所投与用として処方される。
【０３５１】
当該医薬組成物は、腫瘍の成長阻害のために使用できる。例えば、当該医薬組成物は、疾患の発展又は進行を阻害又は遅延し、腫瘍のサイズを縮小（さらに腫瘍を実質的に解消）し、疾患状態を緩和及び／又は安定化させることができる。
【０３５２】
以下、非限定的で例示的な医薬組成物及びその製造方法を説明する。
【０３５３】
当該医薬組成物は、例えば、錠剤、カプセル、ピル、粉末、徐放性製剤、溶液、懸濁液等経口投与用に好適な形態、非経口注射用の滅菌溶液、懸濁液又はエマルジョン、局所投与用の軟膏又はクリーム、又は直腸投与用坐剤であってもよい。医薬組成物は、正確な用量の単回投与に好適な単位剤形であってもよい。当該医薬組成物は、本開示に係るタンパク質性ヘテロ二量体（例えば、ヘテロ二量体タンパク質）又はタンパク質混合物を活性成分としてさらに含有し、従来の医薬品ベクター又は賦形剤を含有してもよい。さらに、他の医薬品、ベクター、補助剤等をさらに含有してもよい。
【０３５４】
例示的な非経口投与形態は、滅菌水溶液、例えば、水性プロピレングリコール又はデキストロース溶液における活性なタンパク質性ヘテロ二量体（例えば、ヘテロ二量体タンパク質）の溶液又は懸濁液を包含するが、これらに限定されない。必要に応じて、これらの剤形は、ヒスチジン及び／又はリン酸塩等の塩で適宜緩衝されてもよい。
【０３５５】
いくつかの実施形態において、本開示は、注射用医薬組成物を提供し、当該医薬組成物は、本開示に係るタンパク質性ヘテロ二量体（例えば、ヘテロ二量体タンパク質）又はタンパク質混合物及び注射に好適な医薬品賦形剤を含有する。組成物における薬剤の成分及び量は、本明細書に記載のとおりである。
【０３５６】
本開示に係る医薬組成物を加えて注射投与される形態は、ゴマ油、トウモロコシ油、綿実油又はピーナッツオイル、及びエリキシル剤、マンニトール、デキストロース、又は滅菌水溶液及び類似する医薬用媒介が使用される水性、油性懸濁液又はエマルジョンであってもよい。
【０３５７】
また、生理食塩水中の水溶液も注射に利用できる。エタノール、グリセロール、プロピレングリコール、液体ポリエチレングリコール等（及びそれらの適切な混合物）、シクロデキストリン誘導体、及び植物油も使用できる。適切な流動性は、例えば、分散の場合に必要な粒子サイズを維持するためのレシチン等のコーティングの使用、及び界面活性剤の使用により維持できる。微生物の作用を防止するために、様々な抗菌剤及び抗真菌剤、例えば、パラベン、クロロブタノール、フェノール、ソルビン酸、チメロサール等を用いることができる。
【０３５８】
滅菌注射溶液は、適切な量の本開示に係るタンパク質性ヘテロ二量体（例えば、ヘテロ二量体タンパク質）又は本開示に係るタンパク質混合物を上述した様々な他の成分と共に適切な溶媒に加え、必要に応じて、濾過と殺菌を行うことにより製造できる。分散液は、一般に、必要又は希望に応じて、基本的な分散媒及び上述した他の成分を包含する滅菌されたベクターに様々な滅菌された活性成分を加えることにより調製できる。滅菌注射溶液の調製用の滅菌粉末の場合、望ましい製造方法として、予め滅菌・濾過された溶液から活性成分及び任意の他の所望の成分の粉末を生成する真空乾燥及び凍結乾燥技術が挙げられる。
【０３５９】
いくつかの実施形態において、本開示は、経口投与用の医薬組成物を提供し、当該医薬組成物は、本開示に係るタンパク質性ヘテロ二量体（例えば、ヘテロ二量体タンパク質）又はタンパク質混合物、及び経口投与に好適な医薬品賦形剤を包含する。
【０３６０】
いくつかの実施形態において、本開示は、経口投与用の固体医薬組成物を提供し、当該医薬組成物は、
（ｉ）一定の量の本開示に係るタンパク質性ヘテロ二量体（例えば、ヘテロ二量体タンパク質）又はタンパク質混合物を含有する、任意選択的に、
（ｉｉ）一定の量の第２の薬剤を含有する、
（ｉｉｉ）経口投与に好適な医薬品賦形剤を含有する。いくつかの実施形態において、当該組成物は、
（ｉｖ）一定の量の第３の薬剤を、さらに含有する。
いくつかの実施形態において、タンパク質性ヘテロ二量体又はタンパク質混合物、第２の薬剤及び任意選択的な第３の薬剤の量は、単独で又は組み合わせた場合、適用対象の症状を治療するのに有効な量である。
【０３６１】
いくつかの実施形態において、当該医薬組成物は、経口投与に好適な液体医薬組成物であってもよい。経口投与に好適な本開示に係る医薬組成物は、粉末、顆粒、溶液、水性若しくは非水性液体中の懸濁液、水中油型エマルジョン又は油中水型液体エマルジョンとしてそれぞれ所定量の活性成分を含有するカプセル、カシェ剤、錠剤、液体又はエアロゾルスプレー等別個の剤形であってもよい。かかる剤形は、任意の薬学的な方法により製造できるが、全ての方法は、一般に、活性成分を１個以上の別の成分を構成するベクターと組み合わせるステップを包含する。一般に、組成物は、活性成分を液体担体又は微粉化された固体担体又は両方と均一かつ緊密に混合し、次に必要に応じて、製品を所望の形態に形成させることにより製造される。
【０３６２】
水がいくつかのポリペプチドの分解を促進するため、本開示は、活性成分（例えば、本開示に係るタンパク質性ヘテロ二量体又はヘテロ二量体タンパク質）を含有する無水医薬組成物及び剤形も包含する。例えば、製剤の保存寿命又は経時的な安定性等の特性を決定するために長期保存をシミュレートする手段として、製薬業界において水が追加される（例えば、５％）。無水の性質を維持するために、無水の医薬組成物として製造し保存することができる。従って、無水組成物は、水への暴露を防ぐ従来の材料を使用して包装して、適切な処方キットに含有されることができる。適切な包装の例は、気密箔、プラスチック等、単位用量容器、ブリスターパック及びストリップパックを包含するが、これらに限定されない。
【０３６３】
本開示に係るタンパク質性ヘテロ二量体（例えば、ヘテロ二量体タンパク質又は複合体）、又はタンパク質混合物は、従来の医薬品混合技術に従って、医薬用担体と緊密に混合して組み合わせることができる。投与に望ましい製剤の形態に応じて、担体は、様々な形態をとることができる。経口剤形用の組成物を製造する際、経口液体製剤（例えば、懸濁液、溶液、エリキシル等）又はエアロゾルの場合、任意の通常の医薬用媒体、例えば、水、エチレングリコール、油、アルコール、香味剤、防腐剤、着色剤等を担体として使用できる。経口固体製剤の場合、例えば、デンプン、糖、微結晶セルロース、希釈剤、造粒剤、潤滑剤、結合剤、崩壊剤等を担体として使用できるが、いくつかの実施形態において、ラクトースを使用しない。例えば、適切な担体は、粉末、カプセル及び錠剤、及び固体経口製剤を包含する。必要に応じて、標準的な水性又は非水性技術により錠剤をコーティングしてもよい。
【０３６４】
経口投与用として水性懸濁液及び／又はエリキシルが望ましい場合、前記活性成分は、様々な甘味剤又は香味剤、着色物質又は染料、必要に応じて、乳化剤及び／又は懸濁剤と水、エタノール、プロピレングリコール、グリセリン及びそれらの様々な組み合わせ等である希釈剤と組み合わされてもよい。
【０３６５】
錠剤は、コーティングされないか、又は胃腸管での崩解及び吸收を遅らせて、より長期間にわたる持続的な効果を提供するために、公知の技術を利用してコーティングされてもよい。
【０３６６】
本開示の医薬組成物及び剤形を形成するために使用可能な界面活性剤は、親水性界面活性剤、親油性界面活性剤及びそれらの混合物を包含するが、これらに限定されない。親水性界面活性剤の混合物を使用し、親油性界面活性剤の混合物を使用し、又は、少なくとも１種の親水性界面活性剤、及び、少なくとも１種の親油性界面活性剤の混合物を使用してもよい。
【０３６７】
いくつかの実施形態において、当該組成物は、本開示に係るタンパク質性ヘテロ二量体又はタンパク質混合物の良好な可溶化性及び／又は溶解を確保し、本開示に係るタンパク質性ヘテロ二量体又はタンパク質混合物の沈殿を最大限に低減するために、可溶化剤を含有してもよい。非経口投与用の組成物、例えば、注射用組成物の場合、特に重要である。可溶化剤は、親水性医薬品及び／又は他の成分、例えば界面活性剤の溶解性を高めるか、組成物を安定的又は均一な溶液もしくは分散液として維持するために加えることができる。
【０３６８】
当該組成物は、１種以上の薬学的に許容される添加剤及び賦形剤をさらに含有してもよい。かかる添加剤及び賦形剤は、粘着防止剤、消泡剤、緩衝剤、ポリマー、抗酸化剤、防腐剤、キレート剤、粘度調整剤、等張化剤、香味剤、着色剤、着臭剤、乳白剤、懸濁剤、結合剤、充填剤、可塑剤、潤滑剤、及びそれらの混合物を包含するが、これらに限定されない。
【０３６９】
また、処理の便宜上、安定性の向上、又は他の理由により当該組成物に酸又は塩基を加えてもよい。
【０３７０】
本開示に係る医薬組成物は、治療有効量の活性化薬（例えば、本開示に係るタンパク質性ヘテロ二量体又はタンパク質混合物）を含有してもよい。治療有効量とは、（少なくとも部分的に）ある症状又は障害に罹患する又はそれらが進行するリスクを有する適用対象の症状又は障害（例えば、癌）及び／又はその任意の合併症を予防及び／又治癒できる医薬組成物の量を指す。含有された活性化薬の具体的な量／濃度は、投与方法及び患者のニーズに応じて変更されてもよい、例えば、患者の体積、粘度、及び／又は体重等に基づき決定されてもよい。例えば、適切な用量は、約０．１ｍｇ又は１ｍｇ／ｋｇ／日〜約５０ｍｇ／ｋｇ／日としてもよい、場合によっては、用量をさらに高く設定してもよい。いくつかの実施形態において、適用された用量は、約３ｍｇ／ｋｇ／日〜約３．５ｍｇ／ｋｇ／日、３．５ｍｇ／ｋｇ／日〜約７．２ｍｇ／ｋｇ／日、約７．２ｍｇ／ｋｇ／日〜約１１．０ｍｇ／ｋｇ／日、約１１．０ｍｇ／ｋｇ／日〜約１５．０ｍｇ／ｋｇ／日としてもよい。いくつかの実施形態において、適用される用量は、約１０ｍｇ／ｋｇ／日〜約５０ｍｇ／ｋｇ／日、例えば、１日当たり約２０ｍｇ〜約５０ｍｇとして２回投与される。なお、当業者（例えば、医師又は薬剤師）は、特定の患者、製剤及び／又は疾患の状態に基づいてこれらの具体的な用量を適宜調整してもよい。
【０３７１】
本開示に係るタンパク質性ヘテロ二量体又は医薬組成物は、１種以上の追加の治療的に活性な成分をさらに含有してもよい。かかる追加の治療的に活性な成分は、組成物に別々に存在するか、又は本開示に係るタンパク質性ヘテロ二量体に付着、結合又は会合されてもよい。
【０３７２】
医療用途及び治療方法
別の態様において、本開示は、腫瘍もしくは腫瘍細胞の成長阻害のための医薬品及び／又はキットの製造における、本開示に係るタタンパク質性ヘテロ二量体又はンパク質混合物の用途を提供する。いくつかの実施形態において、医薬品及び／又はキットは、標的細胞（例えば、癌細胞）の成長又は分化を特異的且つ／又は優先的に阻害する、又は標的細胞（例えば、癌細胞）を死滅させるために使用される。
【０３７３】
別の態様において、本開示は、腫瘍又は腫瘍細胞の成長の阻害方法を提供する。当該方法は、腫瘍又は腫瘍細胞を有効量の本開示に係るタンパク質性ヘテロ二量体又は本開示に係るタンパク質混合物と接触させることを包含する。いくつかの実施形態において、前記接触は、インビトロで起こる。いくつかの実施形態において、前記接触はインビボで起こる。
【０３７４】
いくつかの実施形態において、前記接触は、本開示に係るタンパク質性ヘテロ二量体（例えば、ヘテロ二量体タンパク質）、タンパク質混合物、医薬組成物又は医薬品を適用対象（例えば、哺乳動物）に全身的に又は局所的に投与することを包含する。いくつかの実施形態において、前記接触は、本開示に係るタンパク質性ヘテロ二量体（例えば、ヘテロ二量体タンパク質）、タンパク質混合物、医薬組成物又は医薬品を腫瘍部位に直接投与することを包含する。いくつかの実施形態において、前記投与は、経口投与、静脈内投与、筋肉内投与、腫瘍部位でのインサイチュ投与、吸入、直腸投与、膣内投与、経皮投与、又は皮下貯蔵所による投与により行われる。
【０３７５】
いくつかの実施形態において、腫瘍（例えば、癌）もしくは腫瘍細胞（例えば、癌細胞）であるか、又は固形腫瘍に由来する。例えば、癌は、Ｂ細胞リンパ腫、肺癌、気管支癌、結腸直腸癌、前立腺癌、乳癌、膵臓癌、胃癌、卵巣癌、膀胱癌、脳又は中枢神経系癌、末梢神経系癌、食道癌、子宮頸癌、黒色腫、子宮癌又は子宮内膜癌、口腔癌又は咽頭癌、肝臓癌、腎臓癌、胆道癌、小腸癌又は虫垂癌、唾液腺癌、甲状腺癌、副腎癌、骨肉腫、軟骨肉腫、脂肪肉腫、精巣癌、及び悪性線維性組織球腫からなる群から選択されてもよい。
【０３７６】
いくつかの実施形態において、癌又は癌細胞は、適用対象の体内に位置する、例えば、ヒト又は非ヒト動物（例えば、哺乳動物）における癌又は癌細胞である。
【０３７７】
いくつかの実施形態において、哺乳動物は、ヒトである。いくつかの実施形態において、哺乳動物は、マウス、ラット、ネコ、イヌ、ウサギ、ブタ、ヒツジ、ウマ、ウシ、ヤギ、アレチネズミ、ハムスター、モルモット、サル又は他の哺乳類である。かかる哺乳動物の多くは、固形腫瘍及び／又は他の癌を含有する、当該技術分野で既知の特定の疾患又は障害の臨床前モデル等の適用対象であってもよい（例えば、Ｔａｌｍａｄｇｅら，２００７  Ａｍ．Ｊ．Ｐａｔｈｏｌ．１７０：７９３；Ｋｅｒｂｅｌ，Ｃａｎｃ．Ｂｉｏｌ．Ｔｈｅｒａｐ．２（４  Ｓｕｐｐｌ  １）：Ｓ１３４；Ｍａｎら，２００７Ｃａｎｃ．Ｍｅｔ．Ｒｅｖ．２６：７３７；Ｃｅｓｐｅｄｅｓら，２００６Ｃｌｉｎ．  ＴｒａｎｓＬ  Ｏｎｃｏｌ．８：３１８）。
【０３７８】
タンパク質性ヘテロ二量体又はタンパク質混合物の製造方法
本開示は、別の態様において、タンパク質性ヘテロ二量体、又はタンパク質性ヘテロ二量体を含有するタンパク質混合物の製造方法を提供し、当該方法は、
（ｉ）タンパク質性ヘテロ二量体の発現に影響を与える条件下で本開示に係る宿主細胞を培養することと、
（ｉｉ）発現されたタンパク質性ヘテロ二量体、又は発現されたタンパク質性ヘテロ二量体を含有するタンパク質混合物（例えば、本開示に係るタンパク質混合物）を得ること
とを包含する。
【０３７９】
いくつかの実施形態において、タンパク質性ヘテロ二量体の製造方法は、以下のステップを包含する。
（１）ヘテロ二量体の第１の成員を提供し、当該第１の成員は、軽鎖、及び第１のＦｃ領域を含有する重鎖を含有し、軽鎖が重鎖と複合されて腫瘍抗原への結合特異性を示す標的部分が形成される、
（２）前記ヘテロ二量体の、第１の成員とは異なる第２の成員を提供し、当該第２の成員は、第２のＦｃ領域と融合された免疫調節物質を含有するポリペプチドを含有し、当該第１のＦｃ領域と当該第２のＦｃ領域との複合により、当該第１の成員は、当該第２の成員と会合してヘテロ二量体を形成し、当該第１のＦｃ領域は、第１の修飾を含有し、及び／又は、当該第２のＦｃ領域は、第２の修飾を含有し、当該第１の修飾及び／又は第２の修飾は、ノブ修飾及びホール修飾を含有するノブアンドホールよりも当該第１の成員と当該第２の成員とのヘテロ二量体化を効果的に促進できる、及び
（３）タンパク質性ヘテロ二量体を得る。
【０３８０】
いくつかの実施形態において、当該方法は、タンパク質性ヘテロ二量体又はタンパク質混合物を単離及び／又は精製するステップをさらに包含する。
【０３８１】
いくつかの実施形態において、当該方法は、本開示に係るヘテロ二量体、その１つ以上の成員又はその断片をコード／発現するポリヌクレオチド／ベクターを用いて宿主細胞をトランスフェクト／形質転換するステップをさらに包含する。
【０３８２】
いくつかの実施形態において、本開示に係るタンパク質性ヘテロ二量体又はタンパク質混合物は、タンパク質の発現に好適な条件において細胞でベクターを発現することにより製造される。いくつかの実施形態において、本開示に係るタンパク質性ヘテロ二量体又はタンパク質混合物は、単一の細胞クローンにおいて製造される。
【０３８３】
タンパク質の発現に好適な条件における変更可能な要素は、例えば、インキュベーション時間、温度及び媒質等を包含し、当業者は、細胞のタイプによってこれらを容易に決定できる。
【０３８４】
いくつかの実施形態において、本開示に係るタンパク質性ヘテロ二量体又はタンパク質混合物を製造するプロセスで、宿主細胞は、培地において、及び発酵タンク等、培地の成長のために利用可能な任意の装置において成長する。細胞は、単層成長するか、又は表面に付着される。あるいは、宿主細胞は、懸濁状態において成長する。細胞は、無血清の培地において成長できる。かかる培地は、市販されている培地、例えば、８ｍＭＬ−グルタミンが補充されたＯｐｔｉ−ＣＨＯ（インビトロジェン社提供、カタログ番号１２６８１）、１０％ウシ胎仔血清、１０．５ｎｇ／ｍｌのｍＩＬ−３、及びＬ−グルタミンが補充されたＲＰＭＩ  １６４０培地、又は５％ＦＣＳ培地であってもよいが、これらに限定されない。
【０３８５】
本開示は、以下の実施形態を包含する。
１．第１の成員及び第１の成員とは異なる第２の成員を含有するヘテロ二量体であって、第１の成員が軽鎖及び第１のＦｃ領域を含有する重鎖を含有し、軽鎖が重鎖と複合されて腫瘍抗原への結合特異性を示す標的部分が形成され、第２の成員が第２のＦｃ領域と融合される免疫調節物質を含有するポリペプチドを含有し、第１のＦｃ領域と第２のＦｃ領域との複合により、第１の成員が第２の成員と会合してヘテロ二量体を形成し、第１のＦｃ領域が第１の修飾を含有し、及び／又は、第２のＦｃ領域が第２の修飾を含有し、第１の修飾及び／又は前記第２の修飾がノブ修飾及びホール修飾を含有するノブアンドホール修飾よりも、第１の成員と第２の成員とのヘテロ二量体化を効果的に促進できる、タンパク質性ヘテロ二量体。
【０３８６】
２．前記第１の修飾が前記ノブ修飾又は前記ホール修飾とは異なるものである、及び／又は、前記第２の修飾が前記ノブ修飾又は前記ホール修飾とは異なるものである、実施形態１に記載のタンパク質性ヘテロ二量体。
【０３８７】
３．哺乳動物細胞で発現される場合、タンパク質性ヘテロ二量体の収量が参照タンパク質の収量より、少なくとも１０％高く、当該参照タンパク質が
ｉ）第１のＦｃ領域にノブ修飾を含有すること、
ｉｉ）第２のＦｃ領域にホール修飾を含有すること、
ｉｉｉ）第１の修飾及び第２の修飾を同時に含有しないこと
において、タンパク質性ヘテロ二量体と相違する、上記実施形態のいずれか１項に記載のタンパク質性ヘテロ二量体。
【０３８８】
４．前記哺乳動物細胞がＨＥＫ２９３細胞、ＣＨＯ細胞、ＣＯＳ−１細胞、及びＮＳ０細胞からなる群から選択される、実施形態３に記載のタンパク質性ヘテロ二量体。
【０３８９】
５．前記第１のＦｃ領域が第１の修飾を含有し、前記第２のＦｃ領域が第２の修飾を含有し、第１の修飾及び第２の修飾がいずれもノブ修飾又はホール修飾とは異なるものである、上記実施形態のいずれか１項に記載のタンパク質性ヘテロ二量体。
【０３９０】
６．第２の成員に含有されるポリペプチドが融合タンパク質であり、免疫調節物質のＣ末端が第２のＦｃ領域のＮ末端と直接的又は間接的に融合されて。融合タンパク質が形成される、上記実施形態のいずれか１項に記載のタンパク質性ヘテロ二量体。
【０３９１】
７．腫瘍抗原がＥＧＦＲ、ＥＧＦＲ変異体、ＨＥＲ２／ｎｅｕ、ＧＰＣ３、ＦＡＰ、Ｍｕｃ１、ＭＵＣ５ＡＣ、及びメソセリンからなる群から選択される、上記実施形態のいずれか１項に記載のタンパク質性ヘテロ二量体。
【０３９２】
８．標的部分の軽鎖が腫瘍抗原に特異的に指向された抗体の軽鎖の対応するＣＤＲに含有されるアミノ酸配列と、少なくとも６０％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一のアミノ酸配列を含有するＣＤＲを含有する、上記実施形態のいずれか１項に記載のタンパク質性ヘテロ二量体。
【０３９３】
９．標的部分の軽鎖が腫瘍抗原に特異的に指向された抗体の軽鎖の対応する可変領域に含有されるアミノ酸配列と、少なくとも６０％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一のアミノ酸配列を含有する可変領域を含有する、上記実施形態のいずれか１項に記載のタンパク質性ヘテロ二量体。
【０３９４】
１０．標的部分の軽鎖が腫瘍抗原に特異的に指向された抗体の軽鎖の対応するアミノ酸配列に含有されるアミノ酸配列と、少なくとも６０％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一のアミノ酸配列を含有する、上記実施形態のいずれか１項に記載のタンパク質性ヘテロ二量体。
【０３９５】
１１．標的部分の重鎖が腫瘍抗原に特異的に指向された抗体の重鎖の対応するＣＤＲに含有されるアミノ酸配列と、少なくとも６０％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一のアミノ酸配列を含有するＣＤＲを含有する、上記実施形態のいずれか１項に記載のタンパク質性ヘテロ二量体。
【０３９６】
１２．標的部分の重鎖が腫瘍抗原に特異的に指向された抗体の重鎖の対応する可変領域に含有されるアミノ酸配列と、少なくとも６０％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一のアミノ酸配列を含有する可変領域を含有する、上記実施形態のいずれか１項に記載のタンパク質性ヘテロ二量体。
【０３９７】
１３．標的部分の重鎖が腫瘍抗原に特異的に指向された抗体の重鎖の対応するアミノ酸配列に含有されるアミノ酸配列と、少なくとも６０％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一のアミノ酸配列を含有する、上記実施形態のいずれか１項に記載のタンパク質性ヘテロ二量体。
【０３９８】
１４．標的部分の軽鎖が腫瘍抗原に特異的に指向された抗体の軽鎖の対応するＣＤＲに含有されるアミノ酸と、少なくとも６０％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一のアミノ酸配列を含有するＣＤＲを含有し、標的部分の重鎖が腫瘍抗原に特異的に指向された抗体の重鎖の対応するＣＤＲに含有されるアミノ酸配列と、少なくとも、６０％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一のアミノ酸配列を含有するＣＤＲを含有する、上記実施形態のいずれか１項に記載のタンパク質性ヘテロ二量体。
【０３９９】
１５．標的部分の軽鎖が腫瘍抗原に特異的に指向された抗体の軽鎖の対応する可変領域に含有されるアミノ酸配列と、少なくとも６０％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％同一のアミノ酸配列を含有する可変領域を含有し、標的部分の重鎖が腫瘍抗原に特異的に指向された抗体の重鎖の対応する可変領域に含有されるアミノ酸配列と、少なくとも６０％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一のアミノ酸配列を含有する可変領域を含有する、上記実施形態のいずれか１項に記載のタンパク質性ヘテロ二量体。
【０４００】
１６．標的部分の軽鎖が腫瘍抗原に特異的に指向された抗体の軽鎖の対応するアミノ酸配列に含有されるアミノ酸配列と、少なくとも６０％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一のアミノ酸配列を含有し、標的部分の重鎖が腫瘍抗原に特異的に指向された抗体の重鎖の対応するアミノ酸配列に含有されるアミノ酸配列と、少なくとも６０％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一のアミノ酸配列を含有する、上記実施形態のいずれか１項に記載のタンパク質性ヘテロ二量体。
【０４０１】
１７．腫瘍抗原に特異的に指向された抗体が抗ＥＧＦＲ、抗ＥＧＦＲ変異体、抗ＨＥＲ２／ｎｅｕ、抗ＧＰＣ３、抗ＦＡＰ、抗Ｍｕｃ１、抗ＭＵＣ５ＡＣ、及び抗メソセリンからなる群から選択される、実施形態８〜１６のいずれか１項に記載のタンパク質性ヘテロ二量体。
【０４０２】
１８．免疫調節物質が免疫応答を増強させる、上記実施形態のいずれか１項に記載のタンパク質性ヘテロ二量体。
【０４０３】
１９．免疫調節物質が免疫応答を低下させる、実施形態１〜１７のいずれか１項に記載のタンパク質性ヘテロ二量体。
【０４０４】
２０．免疫調節物質がサイトカインである、上記実施形態のいずれか１項に記載のタンパク質性ヘテロ二量体。
【０４０５】
２１．免疫調節物質がインターフェロン、インターロイキン、ケモカイン、リンホカイン、及び腫瘍壊死因子からなる群から選択されたサイトカインである、実施形態２０に記載のタンパク質性ヘテロ二量体。
【０４０６】
２２．免疫調節物質がインターフェロンα、インターフェロンλ、及びインターフェロンβからなる群から選択されたインターフェロンである、実施形態２１に記載のタンパク質性ヘテロ二量体。
【０４０７】
２３．免疫調節物質がインターロイキンであり、当該インターロイキンがインターロイキン１０、インターロイキン２及び／又はスーパーインターロイキン２を含有する、実施形態２１に記載のタンパク質性ヘテロ二量体。
【０４０８】
２４．第１のＦｃ領域及び第２のＦｃ領域が免疫グロブリンのＦｃ領域に由来し、前記免疫グロブリンがＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、及びＩｇＧ４からなる群から選択される、上記実施形態のいずれか１項に記載のタンパク質性ヘテロ二量体。
【０４０９】
２５．第１のＦｃ領域及び第２のＦｃ領域が免疫グロブリンのＦｃ領域に由来し、免疫グロブリンがヒトＩｇＧ１である、実施形態２４に記載のタンパク質性ヘテロ二量体。
【０４１０】
２６．第２のＦｃ領域が免疫調節物質とインフレームで融合される、上記実施形態のいずれか１項に記載のタンパク質性ヘテロ二量体。
【０４１１】
２７．第２のＦｃ領域がリンカーを介して免疫調節物質とインフレームで融合される、上記実施形態のいずれか１項に記載のタンパク質性ヘテロ二量体。
【０４１２】
２８．第２の成員に含有された、ポリペプチドが２種以上の免疫調節物質を含有し、前記２種以上の免疫調節物質がインフレームで互いに融合され、且つ第２のＦｃ領域と融合され、前記２種以上の免疫調節物質が第２のＦｃ領域のＮ末端に配置される、上記実施形態のいずれか１項に記載のタンパク質性ヘテロ二量体。
【０４１３】
２９．前記２種以上の免疫調節物質が同一のものである、実施形態２８に記載のタンパク質性ヘテロ二量体。
【０４１４】
３０．第１の修飾が位置Ｔ３６６におけるアミノ酸置換、並びにＹ３４９、Ｆ４０５、Ｋ４０９、Ｄ３９９、Ｋ３６０、Ｑ３４７、Ｋ３９２、及びＳ３５４からなる群から選択された１つ以上の位置におけるアミノ酸置換を含有し、アミノ酸の位置がＫＡＢＡＴ番号のＥＵインデックスに基づいて決定される、上記実施形態のいずれか１項に記載のタンパク質性ヘテロ二量体。
【０４１５】
３１．第１の修飾がＹ３４９Ｃ、Ｙ３４９Ｄ、Ｄ３９９Ｓ、Ｆ４０５Ｋ、Ｋ３６０Ｅ、Ｋ４０９Ａ、Ｋ４０９Ｅ、Ｑ３４７Ｅ、Ｑ３４７Ｒ、Ｓ３５４Ｄ、Ｋ３９２Ｄ、及びＴ３６６Ｗからなる群から選択されたアミノ酸置換を含有し、実施形態３０に記載のタンパク質性ヘテロ二量体。
【０４１６】
３２．第１の修飾が２〜５個のアミノ酸置換を含有する、実施形態３０又は３１に記載のタンパク質性ヘテロ二量体。
【０４１７】
３３．第１の修飾が、
１）Ｙ３４９及びＴ３６６；
２）Ｙ３４９、Ｔ３６６、及びＦ４０５；
３）Ｙ３４９、Ｔ３６６、及びＫ４０９；
４）Ｙ３４９、Ｔ３６６、Ｆ４０５、Ｋ３６０、及びＱ３４７；
５）Ｙ３４９、Ｔ３６６、Ｆ４０５、及びＱ３４７；
６）Ｙ３４９、Ｔ３６６、Ｋ４０９、Ｋ３６０、及びＱ３４７；
７）Ｙ３４９、Ｔ３６６、Ｋ４０９、及びＱ３４７；
８）Ｔ３６６、Ｋ４０９、及びＫ３９２；
９）Ｔ３６６及びＫ４０９；
１０）Ｔ３６６、Ｋ４０９、Ｙ３４９、及びＳ３５４；
１１）Ｔ３６６及びＦ４０５；
１２）Ｔ３６６、Ｆ４０５、及びＤ３９９；並びに
１３）Ｔ３６６、Ｆ４０５、Ｙ３４９、及びＳ３５４
から選択されたいずれかの群に示す位置におけるアミノ酸置換を含有する、実施形態３０〜３２のいずれか１項に記載のタンパク質性ヘテロ二量体。
【０４１８】
３４．第１の修飾が、
１）Ｙ３４９Ｃ及びＴ３６６Ｗ；
２）Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、及びＦ４０５Ｋ；
３）Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、及びＫ４０９Ｅ；
４）Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、及びＫ４０９Ａ；
５）Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、Ｆ４０５Ｋ、Ｋ３６０Ｅ、及びＱ３４７Ｅ；
６）Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、Ｆ４０５Ｋ、及びＱ３４７Ｒ；
７）Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、Ｋ４０９Ａ、Ｋ３６０Ｅ、及びＱ３４７Ｅ；
８）Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、Ｋ４０９Ａ、及びＱ３４７Ｒ；
９）Ｔ３６６Ｗ、Ｋ４０９Ａ、及びＫ３９２Ｄ；
１０）Ｔ３６６Ｗ及びＫ４０９Ａ；
１１）Ｔ３６６Ｗ、Ｋ４０９Ａ、及びＹ３４９Ｄ；
１２）Ｔ３６６Ｗ、Ｋ４０９Ａ、Ｙ３４９Ｄ、及びＳ３５４Ｄ；
１３）Ｔ３６６Ｗ及びＦ４０５Ｋ；
１４）Ｔ３６６Ｗ、Ｆ４０５Ｋ、及びＤ３９９Ｓ；
１５）Ｔ３６６Ｗ、Ｆ４０５Ｋ、及びＹ３４９Ｄ；並びに
１６）Ｔ３６６Ｗ、Ｆ４０５Ｋ、Ｙ３４９Ｄ、及びＳ３５４Ｄ
から選択されたいずれかの群に示すアミノ酸置換を含有する、実施形態３０〜３３のいずれか１項に記載のタンパク質性ヘテロ二量体。
【０４１９】
３５．第２の修飾が、位置Ｔ３６６、Ｌ３６８、及びＹ４０７におけるアミノ酸置換、並びにＤ３５６、Ｄ３９９、Ｅ３５７、Ｆ４０５、Ｋ３６０、Ｋ３９２、Ｋ４０９、及びＱ３４７からなる群から選択された１つ以上の位置におけるアミノ酸置換を含有し、アミノ酸の位置が、ＫＡＢＡＴ番号のＥＵインデックスに基づいて決定される、実施形態３０〜３４のいずれか１項に記載のタンパク質性ヘテロ二量体。
【０４２０】
３６．第２の修飾が、Ｄ３５６Ｃ、Ｄ３９９Ｓ、Ｅ３５７Ａ、Ｆ４０５Ｋ、Ｋ３６０Ｅ、Ｋ３９２Ｄ、Ｋ４０９Ａ、Ｌ３６８Ａ、Ｌ３６８Ｇ、Ｑ３４７Ｅ、Ｑ３４７Ｒ、Ｔ３６６Ｓ、Ｙ４０７Ａ、及びＹ４０７Ｖからなる群から選択されるアミノ酸置換を含有する、実施形態３５に記載のタンパク質性ヘテロ二量体。
【０４２１】
３７．第２の修飾が４〜６個のアミノ酸置換を含有する、実施形態３５又は３６に記載のタンパク質性ヘテロ二量体。
【０４２２】
３８．第２の修飾が、
１）Ｄ３５６、Ｔ３６６、Ｌ３６８、Ｙ４０７、及びＦ４０５；
２）Ｄ３５６、Ｔ３６６、Ｌ３６８、及びＹ４０７；
３）Ｄ３５６、Ｔ３６６、Ｌ３６８、Ｙ４０７、及びＱ３４７；
４）Ｄ３５６、Ｔ３６６、Ｌ３６８、Ｙ４０７、Ｋ３６０、及びＱ３４７；
５）Ｄ３５６、Ｔ３６６、Ｌ３６８、Ｙ４０７、Ｆ４０５、及びＱ３４７；
６）Ｄ３５６、Ｔ３６６、Ｌ３６８、Ｙ４０７、Ｆ４０５、Ｋ３６０、及びＱ３４７；
７）Ｔ３６６、Ｌ３６８、Ｙ４０７、Ｄ３９９、及びＦ４０５；
８）Ｔ３６６、Ｌ３６８、Ｙ４０７、及びＦ４０５；
９）Ｔ３６６、Ｌ３６８、Ｙ４０７、Ｆ４０５、及びＥ３５７；
１０）Ｔ３６６、Ｌ３６８、Ｙ４０７、及びＫ４０９；
１１）Ｔ３６６、Ｌ３６８、Ｙ４０７、Ｋ４０９、及びＫ３９２；
１２）Ｔ３６６、Ｌ３６８、Ｙ４０７、Ｋ４０９、及びＥ３５７から選択されたいずれかの群に示す位置におけるアミノ酸置換を含有する、実施形態３５〜３７のいずれか１項に記載のタンパク質性ヘテロ二量体。
【０４２３】
３９．第２の修飾が、
１）Ｄ３５６Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、及びＦ４０５Ｋ；
２）Ｄ３５６Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、及びＹ４０７Ｖ；
３）Ｄ３５６Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、及びＱ３４７Ｒ；
４）Ｄ３５６Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、３６０Ｅ、及びＱ３４７Ｅ；
５）Ｄ３５６Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、Ｆ４０５Ｋ、及びＱ３４７Ｒ；
６）Ｄ３５６Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、Ｆ４０５Ｋ、Ｋ３６０Ｅ、及びＱ３４７Ｅ；
７）Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、Ｄ３９９Ｓ、及びＦ４０５Ｋ；
８）Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ｇ、Ｙ４０７Ａ及びＦ４０５Ｋ；
９）Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、Ｆ４０５Ｋ、及びＥ３５７Ａ；
１０）Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、及びＫ４０９Ａ；
１１）Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、Ｋ４０９Ａ、及びＫ３９２Ｄ；
１２）Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ｇ、Ｙ４０７Ａ、及びＫ４０９Ａ；
１３）Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、Ｋ４０９Ａ、及びＥ３５７Ａ
から選択されたいずれかの群に示すアミノ酸置換を含有する、実施形態３５〜３８のいずれか１項に記載のタンパク質性ヘテロ二量体。
【０４２４】
４０．第１のＦｃ領域が第１の修飾を含有し、
第２のＦｃ領域が第２の修飾を含有し、
第１の修飾及び第２の修飾が、
１）第１の修飾：Ｙ３４９及びＴ３６６；並びに
第２の修飾：Ｄ３５６、Ｔ３６６、Ｌ３６８、Ｙ４０７、及びＦ４０５；
２）第１の修飾：Ｙ３４９、Ｔ３６６、及びＦ４０５；並びに
第２の修飾：Ｄ３５６、Ｔ３６６、Ｌ３６８、及びＹ４０７；
３）第１の修飾：Ｙ３４９、Ｔ３６６、及びＫ４０９；並びに
第２の修飾：Ｄ３５６、Ｔ３６６、Ｌ３６８、Ｙ４０７、及びＦ４０５；
４）第１の修飾：Ｙ３４９、Ｔ３６６、Ｆ４０５、Ｋ３６０、及びＱ３４７；並びに
第２の修飾：Ｄ３５６、Ｔ３６６、Ｌ３６８、Ｙ４０７、及びＱ３４７；
５）第１の修飾：Ｙ３４９、Ｔ３６６、Ｆ４０５、及びＱ３４７；並びに
第２の修飾：Ｄ３５６、Ｔ３６６、Ｌ３６８、Ｙ４０７、Ｋ３６０、及びＱ３４７；
６）第１の修飾：Ｙ３４９、Ｔ３６６、Ｋ４０９、Ｋ３６０、及びＱ３４７；並びに
第２の修飾：Ｄ３５６、Ｔ３６６、Ｌ３６８、Ｙ４０７、Ｆ４０５、及びＱ３４７；
７）第１の修飾：Ｙ３４９、Ｔ３６６、Ｋ４０９、及びＱ３４７；並びに
第２の修飾：Ｄ３５６、Ｔ３６６、Ｌ３６８、Ｙ４０７、Ｆ４０５、Ｋ３６０、及びＱ３４７；
８）第１の修飾：Ｔ３６６、Ｋ４０９、及びＫ３９２；並びに
第２の修飾：Ｔ３６６、Ｌ３６８、Ｙ４０７、Ｄ３９９、及びＦ４０５；
９）第１の修飾：Ｔ３６６及びＫ４０９；並びに
第２の修飾：Ｔ３６６、Ｌ３６８、Ｙ４０７、及びＦ４０５；
１０）第１の修飾：Ｔ３６６、Ｋ４０９、及びＹ３４９；並びに
第２の修飾：Ｔ３６６、Ｌ３６８、Ｙ４０７、Ｆ４０５、及びＥ３５７；
１１）第１の修飾：Ｔ３６６、Ｋ４０９、Ｙ３４９、及びＳ３５４；並びに
第２の修飾：Ｔ３６６、Ｌ３６８、Ｙ４０７、Ｆ４０５、及びＥ３５７；
１２）第１の修飾：Ｔ３６６、及びＦ４０５；並びに
第２の修飾：Ｔ３６６、Ｌ３６８、Ｙ４０７、及びＫ４０９；
１３）第１の修飾：Ｔ３６６、Ｆ４０５、及びＤ３９９；並びに
第２の修飾：Ｔ３６６、Ｌ３６８、Ｙ４０７、Ｋ４０９、及びＫ３９２；
１４）第１の修飾：Ｔ３６６、Ｆ４０５、及びＹ３４９；並びに
第２の修飾：Ｔ３６６、Ｌ３６８、Ｙ４０７、Ｋ４０９、及びＥ３５７；
１５）第１の修飾：Ｔ３６６、Ｆ４０５、Ｙ３４９、及びＳ３５４；並びに
第２の修飾：Ｔ３６６、Ｌ３６８、Ｙ４０７、Ｋ４０９、及びＥ３５７
から選択されたいずれかの群に示す位置におけるアミノ酸置換を含有し、アミノ酸の位置が、ＫＡＢＡＴ番号のＥＵインデックスに基づいて決定される、上記実施形態のいずれか１項に記載のタンパク質性ヘテロ二量体。
【０４２５】
４１．第１のＦｃ領域が第１の修飾を含有し、
第２のＦｃ領域が第２の修飾を含有し、
第１の修飾及び第２の修飾が、
１）第１の修飾：Ｙ３４９Ｃ及びＴ３６６Ｗ；並びに
第２の修飾：Ｄ３５６Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、及びＦ４０５Ｋ；
２）第１の修飾：Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、及びＦ４０５Ｋ；並びに
第２の修飾：Ｄ３５６Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、及びＹ４０７Ｖ；
３）第１の修飾：Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｗ及びＫ４０９Ｅ；並びに
第２の修飾：Ｄ３５６Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、及びＦ４０５Ｋ；
４）第１の修飾：Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、及びＫ４０９Ａ；並びに
第２の修飾：Ｄ３５６Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、及びＦ４０５Ｋ；
５）第１の修飾：Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、Ｆ４０５Ｋ、Ｋ３６０Ｅ、及びＱ３４７Ｅ；並びに
第２の修飾：Ｄ３５６Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、及びＱ３４７Ｒ；
６）第１の修飾：Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、Ｆ４０５Ｋ、及びＱ３４７Ｒ；並びに
第２の修飾：Ｄ３５６Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、Ｋ３６０Ｅ、及びＱ３４７Ｅ；
７）第１の修飾：Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、Ｋ４０９Ａ、Ｋ３６０Ｅ、及びＱ３４７Ｅ；並びに
第２の修飾：Ｄ３５６Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、Ｆ４０５Ｋ、及びＱ３４７Ｒ；
８）第１の修飾：Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、Ｋ４０９Ａ、及びＱ３４７Ｒ；並びに
第２の修飾：Ｄ３５６Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、Ｆ４０５Ｋ、Ｋ３６０Ｅ、及びＱ３４７Ｅ；
９）第１の修飾：Ｔ３６６Ｗ、Ｋ４０９Ａ、及びＫ３９２Ｄ；並びに
第２の修飾：Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、Ｄ３９９Ｓ、及びＦ４０５Ｋ；
１０）第１の修飾：Ｔ３６６Ｗ及びＫ４０９Ａ；並びに
第２の修飾：Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ｇ、Ｙ４０７Ａ、及びＦ４０５Ｋ；
１１）第１の修飾：Ｔ３６６Ｗ、Ｋ４０９Ａ、及びＹ３４９Ｄ；並びに
第２の修飾：Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、Ｆ４０５Ｋ、及びＥ３５７Ａ；
１２）第１の修飾：Ｔ３６６Ｗ、Ｋ４０９Ａ、Ｙ３４９Ｄ、及びＳ３５４Ｄ；並びに
第２の修飾：Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、Ｆ４０５Ｋ、及びＥ３５７Ａ；
１３）第１の修飾：Ｔ３６６Ｗ及びＦ４０５Ｋ；
第２の修飾：Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、及びＫ４０９Ａ；
１４）第１の修飾：Ｔ３６６Ｗ、Ｆ４０５Ｋ、及びＤ３９９Ｓ；並びに
第２の修飾：Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、Ｋ４０９Ａ、及びＫ３９２Ｄ；
１５）第１の修飾：Ｔ３６６Ｗ、及びＦ４０５Ｋ；並びに
第２の修飾：Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ｇ、Ｙ４０７Ａ、及びＫ４０９Ａ；
１６）第１の修飾：Ｔ３６６Ｗ、Ｆ４０５Ｋ、及びＹ３４９Ｄ；並びに
第２の修飾：Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、Ｋ４０９Ａ、及びＥ３５７Ａ；
１７）第１の修飾：Ｔ３６６Ｗ、Ｆ４０５Ｋ、Ｙ３４９Ｄ、及びＳ３５４Ｄ；並びに
第２の修飾：Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、Ｋ４０９Ａ、及びＥ３５７Ａ
から選択されたいずれかの群に示すアミノ酸置換を含有し、アミノ酸の位置が、ＫＡＢＡＴ番号のＥＵインデックスに基づいて決定される、上記実施形態のいずれか１項に記載のタンパク質性ヘテロ二量体。
【０４２６】
４２．第１のＦｃ領域が第１の修飾を含有し、第２のＦｃ領域が第２の修飾を含有し、第１の修飾がアミノ酸置換Ｔ３６６Ｗ及びＫ４０９Ａを含有し、第２の修飾がアミノ酸置換Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ｇ、Ｙ４０７Ａ、及びＦ４０５Ｋを含有し、アミノ酸の位置が、ＫＡＢＡＴ番号のＥＵインデックスに基づいて決定される、実施形態４１に記載のタンパク質性ヘテロ二量体。
【０４２７】
４３．標的部分がＥＧＦＲと特異的に結合し、第１の成員の軽鎖がＣＤＲ１〜３を含有し、ＣＤＲ１のアミノ酸配列が配列番号１０１から選択され、ＣＤＲ２のアミノ酸配列が配列番号１０２から選択され、そしてＣＤＲ３のアミノ酸配列が配列番号１０３から選択される、上記実施形態のいずれか１項に記載のタンパク質性ヘテロ二量体。
【０４２８】
４４．標的部分がＥＧＦＲと特異的に結合し、第１の成員の軽鎖が軽鎖可変領域を含有し、軽鎖可変領域のアミノ酸配列が配列番号１０４から選択される、上記実施形態のいずれか１項に記載のタンパク質性ヘテロ二量体。
【０４２９】
４５．標的部分がＥＧＦＲと特異的に結合し、第１の成員の軽鎖のアミノ酸配列が配列番号３７から選択される、上記実施形態のいずれか１項に記載のタンパク質性ヘテロ二量体。
【０４３０】
４６．標的部分がＥＧＦＲと特異的に結合し、第１の成員の重鎖がＣＤＲ１〜３を含有し、ＣＤＲ１のアミノ酸配列が配列番号１０５から選択され、ＣＤＲ２のアミノ酸配列が配列番号１０６から選択され、そしてＣＤＲ３のアミノ酸配列が配列番号１０７から選択される、実施形態４３〜４５のいずれか１項に記載のタンパク質性ヘテロ二量体。
【０４３１】
４７．標的部分がＥＧＦＲと特異的に結合し、第１の成員の重鎖が重鎖可変領域を含有し、重鎖可変領域のアミノ酸配列が配列番号１０８から選択される、実施形態４３〜４５のいずれか１項に記載のタンパク質性ヘテロ二量体。
【０４３２】
４８．標的部分がＥＧＦＲと特異的に結合し、第１の成員の重鎖のアミノ酸配列が配列番号３９から選択される、実施形態４３〜４５のいずれか１項に記載のタンパク質性ヘテロ二量体。
【０４３３】
４９．標的部分がＥＧＦＲ変異体と特異的に結合し、第１の成員の軽鎖がＣＤＲ１〜３を含有し、ＣＤＲ１のアミノ酸配列が配列番号１０９から選択され、ＣＤＲ２のアミノ酸配列が配列番号１１０から選択され、そしてＣＤＲ３のアミノ酸配列が配列番号１１１から選択される、実施形態１〜４２のいずれか１項に記載のタンパク質性ヘテロ二量体。
【０４３４】
５０．標的部分がＥＧＦＲ変異体と特異的に結合し、第１の成員の軽鎖が軽鎖可変領域を含有し、軽鎖可変領域のアミノ酸配列が配列番号１１２から選択される、実施形態１〜４２のいずれか１項に記載のタンパク質性ヘテロ二量体。
【０４３５】
５１．標的部分がＥＧＦＲ変異体と特異的に結合し、第１の成員の軽鎖のアミノ酸配列が配列番号５３から選択される、実施形態１〜４２のいずれか１項に記載のタンパク質性ヘテロ二量体。
【０４３６】
５２．標的部分がＥＧＦＲ変異体と特異的に結合し、第１の成員の重鎖がＣＤＲ１〜３を含有し、ＣＤＲ１のアミノ酸配列が配列番号１１３から選択され、ＣＤＲ２のアミノ酸配列が配列番号１１４から選択され、そしてＣＤＲ３のアミノ酸配列が配列番号１１５から選択される、実施形態４９〜５１のいずれか１項に記載のタンパク質性ヘテロ二量体。
【０４３７】
５３．標的部分がＥＧＦＲ変異体と特異的に結合し、第１の成員の重鎖が重鎖可変領域を含有し、重鎖可変領域のアミノ酸配列が配列番号１１６から選択される、実施形態４９〜５１のいずれか１項に記載のタンパク質性ヘテロ二量体。
【０４３８】
５４．標的部分がＥＧＦＲ変異体と特異的に結合し、第１の成員の重鎖のアミノ酸配列が配列番号５５から選択される、実施形態４９〜５１のいずれか１項に記載のタンパク質性ヘテロ二量体。
【０４３９】
５５．標的部分がＨＥＲ２／ｎｅｕと特異的に結合し、第１の成員の軽鎖がＣＤＲ１〜３を含有し、ＣＤＲ１のアミノ酸配列が配列番号１１７及び１２５から選択され、ＣＤＲ２のアミノ酸配列が配列番号１１８及び１２６から選択され、そしてＣＤＲ３のアミノ酸配列が配列番号１１９及び１２７から選択される、実施形態１〜４２のいずれか１項に記載のタンパク質性ヘテロ二量体。
【０４４０】
５６．標的部分がＨＥＲ２／ｎｅｕと特異的に結合し、第１の成員の軽鎖が軽鎖可変領域を含有し、軽鎖可変領域のアミノ酸配列が配列番号１２０及び１２８から選択される、実施形態１〜４２のいずれか１項に記載のタンパク質性ヘテロ二量体。
【０４４１】
５７．標的部分がＨＥＲ２／ｎｅｕと特異的に結合し、第１の成員の軽鎖のアミノ酸配列が配列番号４５及び４９から選択される、実施形態１〜４２のいずれか１項に記載のタンパク質性ヘテロ二量体。
【０４４２】
５８．標的部分がＨＥＲ２／ｎｅｕと特異的に結合し、第１の成員の重鎖がＣＤＲ１〜３を含有し、ＣＤＲ１のアミノ酸配列が配列番号１２１及び１２９から選択され、ＣＤＲ２のアミノ酸配列が配列番号１２２及び１３０から選択され、そしてＣＤＲ３のアミノ酸配列が配列番号１２３及び１３１から選択される、実施形態５５〜５７のいずれか１項に記載のタンパク質性ヘテロ二量体。
【０４４３】
５９．標的部分がＨＥＲ２／ｎｅｕと特異的に結合し、第１の成員の重鎖が重鎖可変領域を含有し、重鎖可変領域のアミノ酸配列が配列番号１２４及び１３２から選択される、実施形態５５〜５７のいずれか１項に記載のタンパク質性ヘテロ二量体。
【０４４４】
６０．標的部分がＨＥＲ２／ｎｅｕと特異的に結合し、第１の成員の重鎖のアミノ酸配列が配列番号４７及び５１から選択される、実施形態５５〜５７のいずれか１項に記載のタンパク質性ヘテロ二量体。
【０４４５】
６１．標的部分がＧＰＣ３と特異的に結合し、第１の成員の軽鎖がＣＤＲ１〜３を含有し、ＣＤＲ１のアミノ酸配列が配列番号１３３から選択され、ＣＤＲ２のアミノ酸配列が配列番号１３４から選択され、そしてＣＤＲ３のアミノ酸配列が配列番号１３５から選択される、実施形態１〜４２のいずれか１項に記載のタンパク質性ヘテロ二量体。
【０４４６】
６２．標的部分がＧＰＣ３と特異的に結合し、第１の成員の軽鎖が軽鎖可変領域を含有し、軽鎖可変領域のアミノ酸配列が配列番号１３６から選択される、実施形態１〜４２のいずれか１項に記載のタンパク質性ヘテロ二量体。
【０４４７】
６３．標的部分がＧＰＣ３と特異的に結合し、第１の成員の軽鎖のアミノ酸配列が配列番号５７から選択される、実施形態１〜４２のいずれか１項に記載のタンパク質性ヘテロ二量体。
【０４４８】
６４．標的部分がＧＰＣ３と特異的に結合し、第１の成員の重鎖がＣＤＲ１〜３を含有し、ＣＤＲ１のアミノ酸配列が配列番号１３７から選択され、ＣＤＲ２のアミノ酸配列が配列番号１３８から選択され、そしてＣＤＲ３のアミノ酸配列が配列番号１３９から選択される、実施形態６１〜６３のいずれか１項に記載のタンパク質性ヘテロ二量体。
【０４４９】
６５．標的部分がＧＰＣ３と特異的に結合し、第１の成員の重鎖が重鎖可変領域を含有し、重鎖可変領域のアミノ酸配列が配列番号１４０から選択される、実施形態６１〜６３のいずれか１項に記載のタンパク質性ヘテロ二量体。
【０４５０】
６６．標的部分がＧＰＣ３と特異的に結合し、第１の成員の重鎖のアミノ酸配列が配列番号５９から選択される、実施形態６１〜６３のいずれか１項に記載のタンパク質性ヘテロ二量体。
【０４５１】
６７．標的部分がＦＡＰと特異的に結合し、第１の成員の軽鎖がＣＤＲ１〜３を含有し、ＣＤＲ１のアミノ酸配列が配列番号１４１から選択され、ＣＤＲ２のアミノ酸配列が配列番号１４２から選択され、そしてＣＤＲ３のアミノ酸配列が配列番号１４３から選択される、実施形態１〜４２のいずれか１項に記載のタンパク質性ヘテロ二量体。
【０４５２】
６８．標的部分がＦＡＰと特異的に結合し、第１の成員の軽鎖が軽鎖可変領域を含有し、軽鎖可変領域のアミノ酸配列が配列番号１４４から選択される、実施形態１〜４２のいずれか１項に記載のタンパク質性ヘテロ二量体。
【０４５３】
６９．標的部分がＦＡＰと特異的に結合し、第１の成員の軽鎖のアミノ酸配列が配列番号６１から選択される、実施形態１〜４２のいずれか１項に記載のタンパク質性ヘテロ二量体。
【０４５４】
７０．標的部分がＦＡＰと特異的に結合し、第１の成員の重鎖がＣＤＲ１〜３を含有し、ＣＤＲ１のアミノ酸配列が配列番号１４５から選択され、ＣＤＲ２のアミノ酸配列が配列番号１４６から選択され、そしてＣＤＲ３のアミノ酸配列が配列番号１４７から選択される、実施形態６７〜６９のいずれか１項に記載のタンパク質性ヘテロ二量体。
【０４５５】
７１．標的部分がＦＡＰと特異的に結合し、第１の成員の重鎖が重鎖可変領域を含有し、重鎖可変領域のアミノ酸配列が配列番号１４８から選択される、実施形態６７〜６９のいずれか１項に記載のタンパク質性ヘテロ二量体。
【０４５６】
７２．標的部分がＦＡＰと特異的に結合し、第１の成員の重鎖のアミノ酸配列が配列番号６３から選択される、実施形態６７〜６９のいずれか１項に記載のタンパク質性ヘテロ二量体。
【０４５７】
７３．標的部分がＭｕｃ１と特異的に結合し、第１の成員の軽鎖がＣＤＲ１〜３を含有し、ＣＤＲ１のアミノ酸配列が配列番号１４９から選択され、ＣＤＲ２のアミノ酸配列が配列番号１５０から選択され、そしてＣＤＲ３のアミノ酸配が配列番号１５１から選択される、実施形態１〜４２のいずれか１項に記載のタンパク質性ヘテロ二量体。
【０４５８】
７４．標的部分がＭｕｃｌと特異的に結合し、第１の成員の軽鎖が軽鎖可変領域を含有し、軽鎖可変領域のアミノ酸配列が配列番号１５２から選択される、実施形態１〜４２のいずれか１項に記載のタンパク質性ヘテロ二量体。
【０４５９】
７５．標的部分がＭｕｃｌと特異的に結合し、第１の成員の軽鎖のアミノ酸配列が配列番号６５から選択される、実施形態１〜４２のいずれか１項に記載のタンパク質性ヘテロ二量体。
【０４６０】
７６．標的部分がＭｕｃ１と特異的に結合し、第１のメンバーの重鎖がＣＤＲ１〜３を含有し、ＣＤＲ１のアミノ酸配列が配列番号１５３から選択され、ＣＤＲ２のアミノ酸配列が配列番号１５４から選択され、そしてＣＤＲ３のアミノ酸配列が配列番号１５５から選択される、実施形態７３〜７５のいずれか１項に記載のタンパク質性ヘテロ二量体。
【０４６１】
７７．標的部分がＭｕｃ１と特異的に結合し、第１の成員の重鎖が重鎖可変領域を含有し、重鎖可変領域のアミノ酸配列が配列番号１５６から選択される、実施形態７３〜７５のいずれか１項に記載のタンパク質性ヘテロ二量体。
【０４６２】
７８．標的部分がＭｕｃ１と特異的に結合し、第１の成員の重鎖のアミノ酸配列が配列番号６７から選択される、実施形態７３〜７５のいずれか１項に記載のタンパク質性ヘテロ二量体。
【０４６３】
７９．標的部分がメソセリンと特異的に結合し、第１の成員の軽鎖がＣＤＲ１〜３を含有し、ＣＤＲ１のアミノ酸配列が配列番号１６５から選択され、ＣＤＲ２のアミノ酸配列が配列番号１６６から選択され、そしてＣＤＲ３のアミノ酸配列が配列番号１６７から選択される、実施形態１〜４２のいずれか１項に記載のタンパク質性ヘテロ二量体。
【０４６４】
８０．標的部分がメソセリンと特異的に結合し、第１の成員の軽鎖が軽鎖可変領域を含有し、軽鎖可変領域のアミノ酸配列が配列番号１６８から選択される、実施形態１〜４２のいずれか１項に記載のタンパク質性ヘテロ二量体。
【０４６５】
８１．標的部分がメソセリンと特異的に結合し、第１の成員の軽鎖のアミノ酸配列が配列番号７３から選択される、実施形態１〜４２のいずれか１項に記載のタンパク質性ヘテロ二量体。
【０４６６】
８２．標的部分がメソセリンと特異的に結合し、第１の成員の重鎖がＣＤＲ１〜３を含有し、ＣＤＲ１のアミノ酸配列が配列番号１６９から選択され、ＣＤＲ２のアミノ酸配列が配列番号１７０から選択され、そしてＣＤＲ３のアミノ酸配列が配列番号１７１から選択される、実施形態７９〜８１のいずれか１項に記載のタンパク質性ヘテロ二量体。
【０４６７】
８３．標的部分がメソセリンと特異的に結合し、第１の成員の重鎖が重鎖可変領域を含有し、重鎖可変領域のアミノ酸配列が配列番号１７２から選択される、実施形態７９〜８１のいずれか１項に記載のタンパク質性ヘテロ二量体。
【０４６８】
８４．標的部分がメソセリンと特異的に結合し、第１の成員の重鎖のアミノ酸配列が配列番号７５から選択される、実施形態７９〜８１のいずれか１項に記載のタンパク質性ヘテロ二量体。
【０４６９】
８５．標的部分がＭＵＣ５ＡＣと特異的に結合し、第１の成員の軽鎖がＣＤＲ１〜３を含有し、ＣＤＲ１のアミノ酸配列が配列番号１５７から選択され、ＣＤＲ２のアミノ酸配列が配列番号１５８から選択され、そしてＣＤＲ３のアミノ酸配列が配列番号１５９から選択される、実施形態１〜４２のいずれか１項に記載のタンパク質性ヘテロ二量体。
【０４７０】
８６．標的部分がＭＵＣ５ＡＣと特異的に結合し、第１の成員の軽鎖が軽鎖可変領域を含有し、軽鎖可変領域のアミノ酸配列が配列番号１６０から選択される、実施形態１〜４２のいずれか１項に記載のタンパク質性ヘテロ二量体。
【０４７１】
８７．標的部分がＭＵＣ５ＡＣと特異的に結合し、第１の成員の軽鎖のアミノ酸配列が配列番号６９から選択される、実施形態１〜４２のいずれか１項に記載のタンパク質性ヘテロ二量体。
【０４７２】
８８．標的部分がＭＵＣ５ＡＣと特異的に結合し、第１の成員の重鎖がＣＤＲ１〜３を含有し、ＣＤＲ１のアミノ酸配列が配列番号１６１から選択され、ＣＤＲ２のアミノ酸配列が配列番号１６２から選択され、そしてＣＤＲ３のアミノ酸配列が配列番号１６３から選択される、実施形態８５〜８７のいずれか１項に記載のタンパク質性ヘテロ二量体。
【０４７３】
８９．標的部分がＭＵＣ５ＡＣと特異的に結合し、第１の成員の重鎖が重鎖可変領域を含有し、重鎖可変領域のアミノ酸配列が配列番号１６４から選択される、実施形態８５〜８７のいずれか１項に記載のタンパク質性ヘテロ二量体。
【０４７４】
９０．標的部分がＭＵＣ５ＡＣと特異的に結合し、第１の成員の重鎖のアミノ酸配列が配列番号７１から選択される、実施形態８５〜８７のいずれか１項に記載のタンパク質性ヘテロ二量体。
【０４７５】
９１．第１の成員の重鎖で、第１のＦｃ領域のアミノ酸配列が配列番号１、４、５、６、７、９、１１、１３、１５、１７、１９、２１、２２、２４、２６、２７、及び２９から選択される、上記実施形態のいずれか１項に記載のタンパク質性ヘテロ二量体。
【０４７６】
９２．第２の成員に含有される免疫調節物質のアミノ酸配列が配列番号１７３〜１８０から選択される、上記実施形態のいずれか１項に記載のタンパク質性ヘテロ二量体。
【０４７７】
９３．第２の成員に含有される第２のＦｃ領域のアミノ酸配列が配列番号２、３、８、１０、１２、１４、１６、１８、２０、２３、２５、及び２８から選択される、上記実施形態のいずれか１項に記載のタンパク質性ヘテロ二量体。
【０４７８】
９４．第２の成員に含有されるポリペプチドのアミノ酸配列が配列番号７７、８０、８２、８４、８６、８９、９１、及び９７から選択される、上記実施形態のいずれか１項に記載のタンパク質性ヘテロ二量体。
【０４７９】
９５．第１の成員に含有される軽鎖のアミノ酸配列が配列番号３７、４５、４９、５３、５７、６１、６５、６９及び７３であり、第１の成員に含有される重鎖のアミノ酸配列が配列番号３９、４７、５１、５５、５９、６３、６７、７１、及び７５であり、第２の成員に含有されるポリペプチドのアミノ酸配列が配列番号７７、８０、８２、８４、８６、８９、９１、及び９７である、上記実施形態のいずれか１項に記載のタンパク質性ヘテロ二量体。
【０４８０】
９６．前記ノブアンドホール修飾がノブ修飾及びホール修飾を含有し、ノブ修飾がアミノ酸置換Ｙ３４９Ｃ及びＴ３６６Ｗを含有し、ホール修飾がアミノ酸置換Ｄ３５６Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、及びＹ４０７Ｖを含有し、アミノ酸の位置が、ＫＡＢＡＴ番号のＥＵインデックスに基づいて決定される、上記実施形態のいずれか１項に記載のタンパク質性ヘテロ二量体。
【０４８１】
９７．上記実施形態のいずれか１項に記載のタンパク質性ヘテロ二量体をコードする、単離されたポリヌクレオチド。
【０４８２】
９８．実施形態９７に記載の単離されたポリヌクレオチドを含有するベクター。
【０４８３】
９９．実施形態９７に記載の単離されたポリヌクレオチド又は実施形態９８に記載のベクターを含有する単離された宿主細胞。
【０４８４】
１００．１）実施形態１〜９６のいずれか１項に記載のタンパク質性ヘテロ二量体と、２）前記タンパク質性ヘテロ二量体の前記第１の成員２つにより形成された第１のホモ二量体と、３）前記タンパク質性ヘテロ二量体の前記第２の成員の２つにより形成された第２のホモ二量体とを含有し、ただし前記タンパク質性ヘテロ二量体の前記タンパク質混合物におけるパーセンテージが、少なくとも５０％である、タンパク質混合物。
【０４８５】
１０１．第２のホモ二量体のパーセンテージが第１のホモ二量体のパーセンテージより小さい、実施形態１００に記載のタンパク質混合物。
【０４８６】
１０２．第２のホモ二量体のパーセンテージが最大１０％である、実施形態１００又は１０１に記載のタンパク質混合物。
【０４８７】
１０３．前記第２のホモ二量体を実質的に含有しない、実施形態１０２に記載のタンパク質混合物。
【０４８８】
１０４．実施形態１〜９６のいずれか１項に記載のタンパク質性ヘテロ二量体と、実施形態１００〜１０３のいずれか１項に記載のタンパク質混合物又は薬学的に許容される賦形剤とを含有する医薬組成物。
【０４８９】
１０５．経口投与、静脈内投与、肌肉内投与、腫瘍部位でのインサイチュ投与、吸入、直腸投与、膣内投与、経皮投与又は皮下貯蔵所による投与用のものとして製造される実施形態１０４に記載の医薬組成物。
【０４９０】
１０６．腫瘍又は腫瘍細胞の成長阻害のための医薬品及び／又はキットの製造における実施形態１〜９６のいずれか１項に記載のタンパク質性ヘテロ二量体又は実施形態１００〜１０３のいずれか１項に記載のタンパク質混合物の用途。
【０４９１】
１０７．前記腫瘍又は腫瘍細胞を有効量の実施形態１〜９６のいずれか１項に記載のタンパク質性ヘテロ二量体又は実施形態１００〜１０３のいずれか１項に記載のタンパク質混合物と接触させることを包含する、腫瘍又は腫瘍細胞の成長の阻害方法。
【０４９２】
１０８．前記接触がインビトロ又はインビボで起こる、実施形態１０７に記載の方法。
【０４９３】
１０９．（ｉ）タンパク質性ヘテロ二量体の発現に影響を与える条件下で実施形態９９に記載の宿主細胞を培養することと、（ｉｉ）発現されたタンパク質性ヘテロ二量体、又は前記タンパク質性ヘテロ二量体を含有するタンパク質混合物を得ることとを包含する、タンパク質性ヘテロ二量体、又はタンパク質性ヘテロ二量体を含有するタンパク質混合物の製造方法。
【０４９４】
本明細書において、本開示の好ましい実施形態を示して説明しているが、当業者が理解できるように、これらの実施形態は、例として提供される。当業者は、本開示から逸脱することなく、多数の変形、変更及び置換に想到することができる。なお、本開示を実施する際、本明細書に記載の本開示の実施形態の様々な代替的な形態を採用できることは理解できる。本開示は、以下記載の特許請求の範囲により限定され、これらの請求項に含有された方法、構造及びそれらの等同物がカバーされることを意図される。
【実施例】
【０４９５】
以下提供される実施例及び調製方法は、本開示に係るタンパク質性ヘテロ二量体、その使用及び製造方法を例示的にさらに説明するものである。なお、本開示の範囲は、何らの形で下記実施例及び調製方法により制限されるものではない。
【０４９６】
実施例１：ポリペプチドの修飾及び調製
１．１  Ｆｃ領域におけるアミノ酸修飾の決定
ヒトＩｇＧ１のＣＨ３−ＣＨ３ドメイン界面アミノ酸残基を決定した。野生型ヒトＩｇＧ１は、第１の重鎖（鎖Ａ）及び第２の重鎖（鎖Ｂ）を含有し、鎖Ａ及び鎖Ｂのそれぞれの界面アミノ酸は、次の表１に記載のとおりである。アミノ酸の位置は、ＫＡＢＡＴ番号のＥＵインデックスに基づいて決定された。
【０４９７】
【表１】
2020527939.tif 000038
【０４９８】
次に、界面残基に対しアミノ酸修飾（例えば、アミノ酸置換）を行って、次に示す修飾群（表２に記載のとおり。参照ＫＨとは、ノブアンドホール修飾を指す）を得た。本開示において、鎖Ａは、Ｆｃ９又は第１のＦｃ領域ともいい、鎖Ｂは、Ｆｃ６又は第２のＦｃ領域ともいう。
【０４９９】
【表２】
2020527939.tif 000039
【０５００】
次に、ＳｃＦｖ−Ｆｃ／Ｆｃシステム用いて表２に示す修飾群を含有するヘテロ二量体タンパク質の形成を検出した。以下、具体的に説明する。
【０５０１】
まず、データベースＵｎｉｐｒｏｔ（Ｐ０１８５７）からヒト免疫グロブリンγ１（ＩｇＧ１）定常領域アミノ酸配列を取得して、野生型ヒトＩｇＧ１−Ｆｃ領域アミノ酸配列（配列番号３０）を得た。ＲＴ−ＰＣＲによりヒトＰＢＭＣ全ＲＮＡ（配列番号３１で、Ｆｃ遺伝子断片と呼ばれる）から野生型ヒトＩｇＧ１−Ｆｃをコードするポリヌクレオチド断片を得た。オーバーラップＰＣＲによりマウスκＩＩＩシグナルペプチド（配列番号３２）をコードするポリヌクレオチド断片をＦｃ遺伝子の５’末端に加えた後、ベクターｐｃＤＮＡ４（インビトロジェン社提供、カタログ番号Ｖ８６２２０）にサブクローニングすることにより、哺乳類細胞におけるヒトＩｇＧ１−Ｆｃの発現のための組換え発現ベクターを得た。
【０５０２】
場合によっては、ラクダ単一ドメイン抗体の可変領域（ＶｈＨ）をコードするポリペプチドをＦｃ遺伝子断片のＮ末端と融合させることにより融合タンパク質ＶｈＨ−Ｆｃ（配列番号３４に記載）をコードする融合遺伝子断片（配列番号３３に記載）を得た。次に、ベクターｐｃＤＮＡ４（インビトロジェン社提供、カタログ番号Ｖ８６２２０）にサブクローニングすることにより、哺乳類細胞における融合タンパク質ＶｈＨ−Ｆｃの発現のための組換え発現ベクターを得た。
【０５０３】
ＳｃＦｖ−Ｆｃ融合タンパク質をコードする核酸分子（配列番号３５）を合成し、ＳｃＦｖとは、抗Ｈｅｒ２一本鎖抗体を指し、ＳｃＦｖ−Ｆｃ融合タンパク質のアミノ酸配列は、配列番号３６に記載のとおりである。次に、ＳｃＦｖ−Ｆｃ遺伝子断片をベクターｐｃＤＮＡ４（インビトロジェン社提供、カタログ番号Ｖ８６２２０）にサブクローニングすることにより、哺乳類細胞におけるＳｃＦｖ−Ｆｃ融合タンパク質の発現のための組換え発現ベクターを得た。
【０５０４】
次に、オーバーラップＰＣＲにより表２に示すアミノ酸修飾をＳｃＦｖ−Ｆｃ（群ＫＨと群１〜１７）、ＶｈＨ−Ｆｃ（群９〜１２、１４、１５と１７）、及びＦｃ遺伝子断片（群ＫＨと群１〜８）にそれぞれ導入し、ここで、鎖Ａとは、ＳｃＦｖ−ＦｃにおけるＦｃ領域を、鎖Ｂとは独立したＦｃ領域又はＶｈＨ−ＦｃにおけるＦｃ領域を指す。アミノ酸修飾を有する遺伝子断片をベクターｐｃＤＮＡ４（インビトロジェン社提供、カタログ番号Ｖ８６２２０）にそれぞれサブクローニングすることにより、哺乳類細胞における修飾されたＳｃＦｖ−Ｆｃ融合タンパク質、修飾されたＦｃタンパク質及び修飾されたＶｈＨ−Ｆｃ融合タンパク質の発現のための組換え発現ベクターを得た。
【０５０５】
次に、構築されたＰＥＩ含有の発現ベクターを用いて、浮遊培養されたＨＥＫ２９３細胞（ＡＴＣＣ＝アメリカンタイプカルチャーコレクション提供、ＣＲＬ−１５７３（登録商標））をトランスフェクトした。各群において、鎖Ａを発現する発現ベクター（ＳｃＦｖ−Ｆｃ融合タンパク質）及び鎖Ｂを発現する発現ベクター（Ｆｃタンパク質又はＶｈＨ−Ｆｃ融合タンパク質）を１：１の割合で共トランスフェクトした。５〜６日培養後、一過性発現産物の上清を回収し、プロテインＡアフィニティークロマトグラフィーを利用して対応するタンパク質性ヘテロ二量体を含有する発現産物を予備精製した。予備精製された発現産物のそれぞれは、いずれもそれぞれ異なるパーセンテージで存在するホモ二量体タンパク質ＳｃＦｖ−Ｆｃ／ＳｃＦｖ−Ｆｃ、ホモ二量体タンパク質Ｆｃ／Ｆｃ（又はホモ二量体タンパク質ＶｈＨ−Ｆｃ／ＶｈＨ−Ｆｃ）及びヘテロ二量体タンパク質ＳｃＦｖ−Ｆｃ／Ｆｃ（又はヘテロ二量体タンパク質ＳｃＦｖ−Ｆｃ／ＶｈＨ−Ｆｃ）を含有する。これらのタンパク質（即ちホモ二量体及びヘテロ二量体）は、分子量が異なるため、非還元ＳＤＳ−ＰＡＧＥゲルに反映された対応するバンド強度によりそれらの対応するパーセンテージを決定することができる。強度を定量化し、結果を次の表３〜表６にまとめた。
【０５０６】
【表３】
2020527939.tif 000040
【０５０７】
【表４】
2020527939.tif 000041
【０５０８】
【表５】
2020527939.tif 000042
【０５０９】
【表６】
2020527939.tif 000043
【０５１０】
表３〜表６から分かるように、全ての修飾群は、参照用修飾ノブアンドホールよりもヘテロ二量体の形成を効果的に促進していた。以下の実施例において、例示の目的で、群１０における修飾（鎖Ａにおける修飾：Ｔ３６６Ｗ＋Ｋ４０９Ａ；鎖Ｂにおける修飾：Ｔ３６６Ｓ＋Ｌ３６８Ｇ＋Ｙ４０７Ａ＋Ｆ４０５Ｋ）を用いて本開示に係るタンパク質性ヘテロ二量体又はタンパク質混合物を生成させた。
【０５１１】
１．２  抗ＥＧＦＲ（セツキシマブ）の調製
セツキシマブ（エルビタックス（Ｅｒｂｉｔｕｘ）又はＥｒｂともいい、上皮成長因子受容体（ＥＧＦＲ）に対する抗体である）の重鎖及び軽鎖の全長アミノ酸配列を取得し、オンラインツールＤＮＡｗｏｒｋｓ（ｈｅｌｉｘｗｅｂ．ｎｉｈ．ｇｏｖ／ｄｎａｗｏｒｋｓ／）を利用してこれらのアミノ酸配列をコードする対応するＤＮＡ配列を取得した。次に、セツキシマブ軽鎖（Ｅｒｂ−ＬＣ）をコードする核酸分子合成した。Ｅｒｂ−ＬＣのアミノ酸配列は、配列番号３７に記載のとおり、それをコードする対応するポリヌクレオチド配列は、配列番号３８に記載のとおりである。次に、点突然変異（Ｔ３６６Ｗ及びＫ４０９Ａ）をセツキシマブ重鎖遺伝子のＦｃ領域をコードするポリヌクレオチド配列に導入し、修飾されたセツキシマブ重鎖をコードする核酸分子（本明細書でｅｒｂ−Ｆｃ９という）を合成し、それをコードする対応するポリペプチドをＥｒｂ−Ｆｃ９と命名した。Ｅｒｂ−Ｆｃ９のアミノ酸配列は、配列番号３９に記載のとおり、それをコードするポリヌクレオチド配列は、配列番号４０に記載のとおりである。
【０５１２】
別の実験において、点突然変異（Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ｇ、Ｙ４０７Ａ及びＦ４０５Ｋ）をセツキシマブ重鎖遺伝子のＦｃ領域をコードするポリヌクレオチド配列に導入し、修飾されたセツキシマブ重鎖をコードする核酸分子（本明細書でｅｒｂ−Ｆｃ６という）を合成し、それをコードする対応するポリペプチドをＥｒｂ−Ｆｃ６と命名した。Ｅｒｂ−Ｆｃ６のアミノ酸配列は、配列番号４１に記載のとおり、それをコードするポリヌクレオチド配列は、配列番号４２に記載のとおりである。
【０５１３】
別の実験において、参照タンパク質を調製するために、点突然変異（Ｙ３４９Ｃ及びＴ３６６Ｗ）をセツキシマブ重鎖遺伝子のＦｃ領域をコードするポリヌクレオチド配列に導入し、修飾されたセツキシマブ重鎖をコードする核酸分子（本明細書でＥｒｂ−ノブという）を合成し、それをコードする対応するポリペプチドをＥｒｂ−ノブと命名した。Ｅｒｂ−ノブのアミノ酸配列は、配列番号４３に記載のとおり、それをコードするポリヌクレオチド配列は、配列番号４４に記載のとおりである。
【０５１４】
１．３  抗ＨＥＲ２（トラスツズマブ）の調製
米国特許第ＵＳ７８７９３２５Ｂ２号（援用により本明細書に組み込まれる）の記載に基づき、トラスツズマブの重鎖及び軽鎖の全長アミノ酸配列を得た。次に、オンラインツールＤＮＡｗｏｒｋｓ（ｈｅｌｉｘｗｅｂ．ｎｉｈ．ｇｏｖ／ｄｎａｗｏｒｋｓ／）を利用してこれらのアミノ酸配列をコードする対応するＤＮＡ配列を取得した。次に、トラスツズマブの軽鎖（Ｔ−ＬＣ）をコードする核酸分子を合成した。Ｔ−ＬＣのアミノ酸配列は、配列番号４５に記載のとおり、それをコードする対応するポリヌクレオチド配列は、配列番号４６に記載のとおりである。次に、点突然変異（Ｔ３６６Ｗ及びＫ４０９Ａ）をトラスツズマブ重鎖遺伝子のＦｃ領域をコードするポリヌクレオチド配列に導入し、修飾されたトラスツズマブ重鎖をコードする核酸分子（本明細書でｔ−Ｆｃ９という）を合成し、それをコードする対応するポリペプチドをＴ−Ｆｃ９と命名した。Ｔ−Ｆｃ９のアミノ酸配列は、配列番号４７に記載のとおり、それをコードするポリヌクレオチド配列は、配列番号４８に記載のとおりである。
【０５１５】
１．４  抗ＨＥＲ２（ペルツズマブ）の調製
米国特許第ＵＳ７８７９３２５Ｂ２号（援用により本明細書に組み込まれる）の記載に基づき、ペルツズマブの重鎖及び軽鎖の全長アミノ酸配列を得た。次に、オンラインツールＤＮＡｗｏｒｋｓ（ｈｅｌｉｘｗｅｂ．ｎｉｈ．ｇｏｖ／ｄｎａｗｏｒｋｓ／）を利用してこれらのアミノ酸配列をコードする対応するＤＮＡ配列を取得した。次に、ペルツズマブの軽鎖（Ｐ−ＬＣ）をコードする核酸分子を合成した。Ｐ−ＬＣのアミノ酸配列は、配列番号４９に記載のとおり、それをコードする対応するポリヌクレオチド配列は、配列番号５０に記載のとおりである。次に、点突然変異（Ｔ３６６Ｗ及びＫ４０９Ａ）をペルツズマブ重鎖遺伝子のＦｃ領域をコードするポリヌクレオチド配列に導入し、修飾されたペルツズマブ重鎖をコードする核酸分子（本明細書でｐ−Ｆｃ９という）を合成し、それをコードする対応するポリペプチドをＰ−Ｆｃ９と命名した。Ｐ−Ｆｃ９のアミノ酸配列は、配列番号５１に記載のとおり、それをコードするポリヌクレオチド配列は、配列番号５２に記載のとおりである。
【０５１６】
１．５  抗ＥＧＦＲ変異体（Ｍａｂ８０６）の調製
米国特許第ＵＳ７５８９１８０Ｂ２（援用により本明細書に組み込まれる）の記載に基づき、Ｍａｂ８０６の重鎖及び軽鎖の全長アミノ酸配列を得た。次に、オンラインツールＤＮＡｗｏｒｋｓ（ｈｅｌｉｘｗｅｂ．ｎｉｈ．ｇｏｖ／ｄｎａｗｏｒｋｓ／）を利用してこれらのアミノ酸配列をコードする対応するＤＮＡ配列を取得した。次に、Ｍａｂ８０６の軽鎖（Ｍａｂ８０６−ＬＣ）をコードする核酸分子を合成した。Ｍａｂ８０６−ＬＣのアミノ酸配列は、配列番号５３に記載のとおり、それをコードする対応するポリヌクレオチド配列は、配列番号５４に記載のとおりである。次に、点突然変異（Ｔ３６６Ｗ及びＫ４０９Ａ）をＭａｂ８０６重鎖遺伝子のＦｃ領域をコードするポリヌクレオチド配列に導入し、修飾されたＭａｂ８０６重鎖をコードする核酸分子（本明細書でｍａｂ８０６−Ｆｃ９という）を合成し、それをコードする対応するポリペプチドをＭａｂ８０６−Ｆｃ９と命名した。Ｍａｂ８０６−Ｆｃ９のアミノ酸配列は、配列番号５５に記載のとおり、それをコードするポリヌクレオチド配列は、配列番号５６に記載のとおりである。
【０５１７】
１．６  抗ＧＰＣ３（コドリツズマブ）の調製
米国特許第ＵＳ７９１９０８６Ｂ２（援用により本明細書に組み込まれる）の記載に基づき、コドリツズマブの重鎖及び軽鎖の全長アミノ酸配列を得た。次に、オンラインツールＤＮＡｗｏｒｋｓ（ｈｅｌｉｘｗｅｂ．ｎｉｈ．ｇｏｖ／ｄｎａｗｏｒｋｓ／）を利用してこれらのアミノ酸配列をコードする対応するＤＮＡ配列を取得した。次に、コドリツズマブの軽鎖（Ｃ−ｍａｂ−ＬＣ）をコードする核酸分子を合成した。Ｃ−ｍａｂ−ＬＣのアミノ酸配列は、配列番号５７に記載のとおり、それをコードする対応するポリヌクレオチド配列は、配列番号５８に記載のとおりである。次に、点突然変異（Ｔ３６６Ｗ及びＫ４０９Ａ）をコドリツズマブ重鎖遺伝子のＦｃ領域をコードするポリヌクレオチド配列に導入し、修飾されたコドリツズマブ重鎖をコードする核酸分子（本明細書でＣ−ｍａｂ−Ｆｃ９という）を合成し、それをコードする対応するポリペプチドをＣ−ｍａｂ−Ｆｃ９と命名した。Ｃ−ｍａｂ−Ｆｃ９のアミノ酸配列は、配列番号５９に記載のとおり、それをコードするポリヌクレオチド配列は、配列番号６０に記載のとおりである。
【０５１８】
１．７  抗ＦＡＰ（２８Ｈ１）の調製
米国特許第ＵＳ２０１２０１２８５９１Ａ１（援用により本明細書に組み込まれる）の記載に基づき、２８Ｈ１の重鎖及び軽鎖の全長アミノ酸配列を得た。次に、オンラインツールＤＮＡｗｏｒｋｓ（ｈｅｌｉｘｗｅｂ．ｎｉｈ．ｇｏｖ／ｄｎａｗｏｒｋｓ／）を利用してこれらのアミノ酸配列をコードする対応するＤＮＡ配列を取得した。次に、２８Ｈ１の軽鎖（２８Ｈ１−ＬＣ）をコードする核酸分子を合成した。２８Ｈ１−ＬＣのアミノ酸配列は、配列番号６１に記載のとおり、それをコードする対応するポリヌクレオチド配列は、配列番号６２に記載のとおりである。次に、点突然変異（Ｔ３６６Ｗ及びＫ４０９Ａ）を２８Ｈ１重鎖遺伝子のＦｃ領域をコードするポリヌクレオチド配列に導入し、修飾された２８Ｈ１重鎖をコードする核酸分子（本明細書で２８Ｈ１−Ｆｃ９という）を合成し、それをコードする対応するポリペプチドを２８Ｈ１−Ｆｃ９と命名した。２８Ｈ１−Ｆｃ９のアミノ酸配列は、配列番号６３に記載のとおり、それをコードするポリヌクレオチド配列は、配列番号６４に記載のとおりである。
【０５１９】
１．８  抗−Ｍｕｃ１（５Ｅ５）の調製
米国特許第ＵＳ８４４０７９８Ｂ２（援用により本明細書に組み込まれる）の記載に基づき、５Ｅ５の重鎖及び軽鎖の全長アミノ酸配列を得た。次に、オンラインツールＤＮＡｗｏｒｋｓ（ｈｅｌｉｘｗｅｂ．ｎｉｈ．ｇｏｖ／ｄｎａｗｏｒｋｓ／）を利用してこれらのアミノ酸配列をコードする対応するＤＮＡ配列を取得した。次に、５Ｅ５の軽鎖（５Ｅ５−ＬＣ）をコードする核酸分子を合成した。５Ｅ５−ＬＣのアミノ酸配列は、配列番号６５に記載のとおり、それをコードする対応するポリヌクレオチド配列は、配列番号６６に記載のとおりである。次に、点突然変異（Ｔ３６６Ｗ及びＫ４０９Ａ）を５Ｅ５重鎖遺伝子のＦｃ領域をコードするポリヌクレオチド配列に導入し、修飾された５Ｅ５重鎖をコードする核酸分子（本明細書で５Ｅ５−Ｆｃ９という）を合成し、それをコードする対応するポリペプチドを５Ｅ５−Ｆｃ９と命名した。５Ｅ５−Ｆｃ９のアミノ酸配列は、配列番号６７に記載のとおり、それをコードするポリヌクレオチド配列は、配列番号６８に記載のとおりである。
【０５２０】
１．９  抗ＭＵＣ５ＡＣ（エンシツキシマブ）の調製
国際特許第ＷＯ２００６１１３５４６Ａ２号（援用により本明細書に組み込まれる）の記載に基づき、エンシツキシマブの重鎖及び軽鎖の全長アミノ酸配列を得た。次に、オンラインツールＤＮＡｗｏｒｋｓ（ｈｅｌｉｘｗｅｂ．ｎｉｈ．ｇｏｖ／ｄｎａｗｏｒｋｓ／）を利用してこれらのアミノ酸配列をコードする対応するＤＮＡ配列を取得した。次に、エンシツキシマブの軽鎖（Ｅ−ｍａｂ−ＬＣ）をコードする核酸分子を合成した。Ｅ−ｍａｂ−ＬＣのアミノ酸配列は、配列番号６９に記載のとおり、それをコードする対応するポリヌクレオチド配列は、配列番号７０に記載のとおりである。次に、点突然変異（Ｔ３６６Ｗ及びＫ４０９Ａ）をエンシツキシマブ重鎖遺伝子のＦｃ領域をコードするポリヌクレオチド配列に導入し、修飾されたエンシツキシマブ重鎖をコードする核酸分子（本明細書でＥ−ｍａｂ−Ｆｃ９という）を合成し、それをコードする対応するポリペプチドをＥ−ｍａｂ−ＦＣ９と命名した。Ｅ−ｍａｂ−Ｆｃ９のアミノ酸配列は、配列番号７１に記載のとおり、それをコードするポリヌクレオチド配列は、配列番号７２に記載のとおりである。
【０５２１】
１．１０  抗メソセリン（アマツキシマブ）の調製
ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｉｍｇｔ．ｏｒｇ／ｍＡｂ−ＤＢ／ｉｎｄｅｘよりアマツキシマブの重鎖及び軽鎖の全長アミノ酸配列を得た。次に、オンラインツールＤＮＡｗｏｒｋｓ（ｈｅｌｉｘｗｅｂ．ｎｉｈ．ｇｏｖ／ｄｎａｗｏｒｋｓ／）を利用してこれらのアミノ酸配列をコードする対応するＤＮＡ配列を取得した。次に、アマツキシマブの軽鎖（Ａ−ｍａｂ−ＬＣ）をコードする核酸分子を合成した。Ａ−ｍａｂ−ＬＣのアミノ酸配列は、配列番号７３に記載のとおり、それをコードする対応するポリヌクレオチド配列は、配列番号７４に記載のとおりである。次に、点突然変異（Ｔ３６６Ｗ及びＫ４０９Ａ）をアマツキシマブ重鎖遺伝子のＦｃ領域をコードするポリヌクレオチド配列に導入し、修飾されたアマツキシマブ重鎖をコードする核酸分子（本明細書でＡ−ｍａｂ−Ｆｃ９という）を合成し、それをコードする対応するポリペプチドをＡ−ｍａｂ−ＦＣ９と命名した。Ａ−ｍａｂ−Ｆｃ９のアミノ酸配列は、配列番号７５に記載のとおり、それをコードするポリヌクレオチド配列は、配列番号７６に記載のとおりである。
【０５２２】
１．１１  ｍｕＩＦＮａ４−Ｆｃ６の調製
まず、米国国立生物工学情報センター（ＮＣＢＩ）よりマウスインターフェロンα４（ＩＦＮａ４）（ＮＭ＿０１０５０４．２）の配列情報を得て、それをコードする全長ポリヌクレオチド配列を得た。次に、ヒト免疫グロブリンγ１（ＩｇＧ１）定常領域（Ｐ０１８５７）のアミノ酸配列に基づき、タンパク質データベースＵｎｉｐｒｏｔよりヒトＩｇＧ１−Ｆｃのアミノ酸配列（即ちＰ０１８５７の残基１０４〜残基３３０）を得た。次に、点突然変異（Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ｇ、Ｙ４０７Ａ及びＦ４０５Ｋ）をＩｇＧ１−Ｆｃ断片に導入して、このように得たポリペプチドをＦｃ６と命名した。次に、リンカー配列「ＧＳＧＧＧ」（配列番号７９）をＦｃ６のＮ末端に加えて、リンカー−Ｆｃ６を得た。次に、オンラインツールＤＮＡｗｏｒｋｓ（ｈｅｌｉｘｗｅｂ．ｎｉｈ．ｇｏｖ／ｄｎａｗｏｒｋｓ／）を利用してそれをコードする対応するＤＮＡ配列を設計した。マウスＩＦＮａ４をコードするポリヌクレオチド配列をリ、ンカー−Ｆｃ６をコードするポリヌクレオチド配列の５’末端に加えて、融合タンパク質ｍｕＩＦＮａ４−Ｆｃ６をコードするポリヌクレオチド配列を合成した。ｍｕＩＦＮａ４−Ｆｃ６のアミノ酸配列は、配列番号７７に記載のとおり、それをコードするポリヌクレオチド配列は、配列番号７８に記載のとおりである。
【０５２３】
１．１２  ｈｕＩＦＮａ２−Ｆｃ６の調製
まず、米国国立生物工学情報センター（ＮＣＢＩ）よりヒトインターフェロンα２（ＩＦＮａ２）（ＮＭ＿０００６０５．３）の配列情報を得て、それをコードする全長ポリヌクレオチド配列を得た。次に、ヒト免疫グロブリンγ１（ＩｇＧ１）定常領域（Ｐ０１８５７）のアミノ酸配列に基づき、タンパク質データベースＵｎｉｐｒｏｔよりヒトＩｇＧ１−Ｆｃのアミノ酸配列（即ちＰ０１８５７の残基１０４〜残基３３０）を得た。次に、点突然変異（Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ｇ、Ｙ４０７Ａ及びＦ４０５Ｋ）をＩｇＧ１−Ｆｃ断片に導入して、このように得たポリペプチドをＦｃ６と命名した。次に、リンカー配列「ＧＳＧＧＧ」（配列番号７９）をＦｃ６のＮ末端に加えて、リンカー−Ｆｃ６を得た。次に、オンラインツールＤＮＡｗｏｒｋｓ（ｈｅｌｉｘｗｅｂ．ｎｉｈ．ｇｏｖ／ｄｎａｗｏｒｋｓ／）を利用してそれをコードする対応するＤＮＡ配列を設計した。ヒトＩＦＮａ２をコードするポリヌクレオチド配列をリンカー−Ｆｃ６をコードするポリヌクレオチド配列の５’末端に加えて、融合タンパク質ｈｕＩＦＮａ２−Ｆｃ６をコードするポリヌクレオチド配列を合成した。ｈｕＩＦＮａ２−Ｆｃ６のアミノ酸配列は、配列番号８０に記載のとおり、それをコードするポリヌクレオチド配列は、配列番号８１に記載のとおりである。
【０５２４】
１．１３  ｍｕＩＦＮｂ−Ｆｃ６の調製
まず、米国国立生物工学情報センター（ＮＣＢＩ）よりマウスインターフェロンβ（ＩＦＮβ）（ＮＭ＿００５０１８．２）の配列情報を得て、それをコードする全長ポリヌクレオチド配列を得た。次に、ヒト免疫グロブリンγ１（ＩｇＧ１）定常領域（Ｐ０１８５７）のアミノ酸配列に基づき、タンパク質データベースＵｎｉｐｒｏｔよりヒトＩｇＧ１−Ｆｃのアミノ酸配列（即ちＰ０１８５７の残基１０４〜残基３３０）を得た。次に、点突然変異（Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ｇ、Ｙ４０７Ａ及びＦ４０５Ｋ）をＩｇＧ１−Ｆｃ断片に導入して、このように得たポリペプチドをＦｃ６と命名した。次に、リンカー配列「ＧＳＧＧＧ」（配列番号７９）をＦｃ６のＮ末端に加えて、リンカー−Ｆｃ６を得た。次に、オンラインツールＤＮＡｗｏｒｋｓ（ｈｅｌｉｘｗｅｂ．ｎｉｈ．ｇｏｖ／ｄｎａｗｏｒｋｓ／）を利用してそれをコードする対応するＤＮＡ配列を設計した。マウスＩＦＮβをコードするポリヌクレオチド配列をリンカー−Ｆｃ６をコードするポリヌクレオチド配列の５’末端に加えて、融合タンパク質ｍｕＩＦＮｂ−Ｆｃ６をコードするポリヌクレオチド配列を合成した。ｍｕＩＦＮｂ−Ｆｃ６のアミノ酸配列は、配列番号８２に記載のとおり、それをコードするポリヌクレオチド配列は、配列番号８３に記載のとおりである。
【０５２５】
１．１４  ｈｕＩＦＮｂ−Ｆｃ６の調製
まず、米国国立生物工学情報センター（ＮＣＢＩ）よりヒトインターフェロンβ（ＩＦＮβ）（ＥＦ０６４７２５．１）の配列情報を得て、それをコードする全長ポリヌクレオチド配列を得た。次に、ヒト免疫グロブリンγ１（ＩｇＧ１）定常領域（Ｐ０１８５７）のアミノ酸配列に基づき、タンパク質データベースＵｎｉｐｒｏｔよりヒトＩｇＧ１−Ｆｃのアミノ酸配列（即ちＰ０１８５７の残基１０４〜残基３３０）を得た。次に、点突然変異（Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ｇ、Ｙ４０７Ａ及びＦ４０５Ｋ）をＩｇＧ１−Ｆｃ断片に導入して、このように得たポリペプチドをＦｃ６と命名した。次に、リンカー配列「ＧＳＧＧＧ」（配列番号７９）をＦｃ６のＮ末端に加えて、リンカー−Ｆｃ６を得た。次に、オンラインツールＤＮＡｗｏｒｋｓ（ｈｅｌｉｘｗｅｂ．ｎｉｈ．ｇｏｖ／ｄｎａｗｏｒｋｓ／）を利用してそれをコードする対応するＤＮＡ配列を設計した。ヒトＩＦＮβをコードするポリヌクレオチド配列をリンカー−Ｆｃ６をコードするポリヌクレオチド配列の５’末端に加えて、融合タンパク質ｈｕＩＦＮｂ−Ｆｃ６をコードするポリヌクレオチド配列を合成した。ｈｕＩＦＮｂ−Ｆｃ６のアミノ酸配列は、配列番号８４に記載のとおり、それをコードするポリヌクレオチド配列は、配列番号８５に記載のとおりである。
【０５２６】
１．１５  ｈｕＩＦＮＬ−Ｆｃ６の調製
まず、米国国立生物工学情報センター（ＮＣＢＩ）よりヒトインターフェロンλ（ＩＦＮＬ）（ＢＣ１１７４８２．１）の配列情報を得て、それをコードする全長ポリヌクレオチド配列を得た。次に、ヒト免疫グロブリンγ１（ＩｇＧ１）定常領域（Ｐ０１８５７）のアミノ酸配列に基づき、タンパク質データベースＵｎｉｐｒｏｔよりヒトＩｇＧ１−Ｆｃのアミノ酸配列（即ちＰ０１８５７の残基１０４〜残基３３０）を得た。次に、点突然変異（Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ｇ、Ｙ４０７Ａ及びＦ４０５Ｋ）をＩｇＧ１−Ｆｃ断片に導入して、このように得たポリペプチドをＦｃ６と命名した。次に、リンカー配列「ＧＳＧＧＧ」（配列番号７９）をＦｃ６のＮ末端に加えて、リンカー−Ｆｃ６を得た。次に、オンラインツールＤＮＡｗｏｒｋｓ（ｈｅｌｉｘｗｅｂ．ｎｉｈ．ｇｏｖ／ｄｎａｗｏｒｋｓ／）を利用し、てそれをコードする対応するＤＮＡ配列を設計した。ヒトＩＦＮＬをコードするポリヌクレオチド配列をリンカー−Ｆｃ６をコードするポリヌクレオチド配列の５’末端に加えて、融合タンパク質ｈｕＩＦＮＬ−Ｆｃ６をコードするポリヌクレオチド配列を合成した。ｈｕＩＦＮＬ−Ｆｃ６のアミノ酸配列は、配列番号８６に記載のとおり、それをコードするポリヌクレオチド配列は、配列番号８７に記載のとおりである。
【０５２７】
１．１６  ｈｕＩＬ１０−Ｆｃ６の調製
まず、米国国立生物工学情報センター（ＮＣＢＩ）よりヒトインターロイキン１０（ｈｕＩＬ１０）（Ｐ２２３０１）の配列情報を得て、それをコードする全長ポリヌクレオチド配列を得た。次に、ヒト免疫グロブリンγ１（ＩｇＧ１）定常領域（Ｐ０１８５７）のアミノ酸配列に基づき、タンパク質データベースＵｎｉｐｒｏｔよりヒトＩｇＧ１−Ｆｃのアミノ酸配列（即ちＰ０１８５７の残基１０４〜残基３３０）を得た。次に、点突然変異（Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ｇ、Ｙ４０７Ａ及びＦ４０５Ｋ）をＩｇＧ１−Ｆｃ断片に導入して、このように得たポリペプチドをＦｃ６と命名した。次に、リンカー配列「（ＧＧＧＧＳ）３」（配列番号８８）をＦｃ６のＮ末端に加えて、リンカー−Ｆｃ６を得た。次に、オンラインツールＤＮＡｗｏｒｋｓ（ｈｅｌｉｘｗｅｂ．ｎｉｈ．ｇｏｖ／ｄｎａｗｏｒｋｓ／）を利用してそれをコードする対応するＤＮＡ配列を設計した。ｈｕＩＬ１０をコードするポリヌクレオチド配列をリンカー−Ｆｃ６をコードするポリヌクレオチド配列の５’末端に加えて、融合タンパク質ｈｕＩＬ１０−Ｆｃ６をコードするポリヌクレオチド配列を合成した。ｈｕＩＬ１０−Ｆｃ６のアミノ酸配列は、配列番号８９に記載のとおり、それをコードするポリヌクレオチド配列は、配列番号９０に記載のとおりである。
【０５２８】
１．１７  （ｈｕＩＬ１０）２−Ｆｃ６の調製
まず、米国国立生物工学情報センター（ＮＣＢＩ）よりヒトインターロイキン１０（ｈｕＩＬ１０）（Ｐ２２３０１）の配列情報を得て、それをコードする全長ポリヌクレオチド配列を得た。次に、ヒト免疫グロブリンγ１（ＩｇＧ１）定常領域（Ｐ０１８５７）のアミノ酸配列に基づき、タンパク質データベースＵｎｉｐｒｏｔよりヒトＩｇＧ１−Ｆｃのアミノ酸配列（即ちＰ０１８５７の残基１０４〜残基３３０）を得た。次に、点突然変異（Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ｇ、Ｙ４０７Ａ及びＦ４０５Ｋ）をＩｇＧ１−Ｆｃ断片に導入して、このように得たポリペプチドをＦｃ６と命名した。次に、リンカー配列「（ＧＧＧＧＳ）３」（配列番号８８）をＦｃ６のＮ末端に加えて、リンカー−Ｆｃ６を得た。次に、オンラインツールＤＮＡｗｏｒｋｓ（ｈｅｌｉｘｗｅｂ．ｎｉｈ．ｇｏｖ／ｄｎａｗｏｒｋｓ／）を利用してそれをコードする対応するＤＮＡ配列を設計した。次に、ｈｕＩＬ１０の２つのコピーの間にリンカー配列「（ＧＧＧＧＳ）３」（配列番号８８）を加えて、（ｈｕＩＬ１０）２を得た。次に、（ｈｕＩＬ１０）２をコードするポリヌクレオチド配列をリンカー−Ｆｃ６をコードするポリヌクレオチド配列の５’末端に加えて、融合タンパク質（ｈｕＩＬ１０）２−Ｆｃ６をコードするポリヌクレオチド配列を合成した。（ｈｕＩＬ１０）２−Ｆｃ６のアミノ酸配列は、配列番号９１に記載のとおり、それをコードするポリヌクレオチド配列は、配列番号９２に記載のとおりである。
【０５２９】
１．１８  （ｈｕＩＬ１０）２−Ｆｃ９の調製
まず、米国国立生物工学情報センター（ＮＣＢＩ）よりヒトインターロイキン１０（ｈｕＩＬ１０）（Ｐ２２３０１）の配列情報を得て、それをコードする全長ポリヌクレオチド配列を得た。次に、ヒト免疫グロブリンγ１（ＩｇＧ１）定常領域（Ｐ０１８５７）のアミノ酸配列に基づき、タンパク質データベースＵｎｉｐｒｏｔよりヒトＩｇＧ１−Ｆｃのアミノ酸配列（即ちＰ０１８５７の残基１０４〜残基３３０）を得た。次に、点突然変異（Ｔ３６６Ｗ及びＫ４０９Ａ）をＩｇＧ１−Ｆｃ断片に導入して、このように得たポリペプチドをＦｃ９と命名した。次に、リンカー配列「（ＧＧＧＧＳ）３」（配列番号８８）をＦｃ９のＮ末端に加えて、リンカー−Ｆｃ９を得た。次に、オンラインツールＤＮＡｗｏｒｋｓ（ｈｅｌｉｘｗｅｂ．ｎｉｈ．ｇｏｖ／ｄｎａｗｏｒｋｓ／）を利用してそれをコードする対応するＤＮＡ配列を設計した。次に、ｈｕＩＬ１０の２つのコピーの間にリンカー配列「（ＧＧＧＧＳ）３」（配列番号８８）を加えて、（ｈｕＩＬ１０）２を得た。次に、（ｈｕＩＬ１０）２をコードするポリヌクレオチド配列をリンカー−Ｆｃ９をコードするポリヌクレオチド配列の５’末端に加えて、融合タンパク質（ｈｕＩＬ１０）２−Ｆｃ９をコードするポリヌクレオチド配列を合成した。（ｈｕＩＬ１０）２−Ｆｃ９のアミノ酸配列は、配列番号９３に記載のとおり、それをコードするポリヌクレオチド配列は、配列番号９４に記載のとおりである。
【０５３０】
１．１９  （ｈｕＩＬ１０）２−Ｆｃ−ホールの調製
まず、米国国立生物工学情報センター（ＮＣＢＩ）よりヒトインターロイキン１０（ｈｕＩＬ１０）（Ｐ２２３０１）の配列情報を得て、それをコードする全長ポリヌクレオチド配列を得た。次に、ヒト免疫グロブリンγ１（ＩｇＧ１）定常領域（Ｐ０１８５７）のアミノ酸配列に基づき、タンパク質データベースＵｎｉｐｒｏｔよりヒトＩｇＧ１−Ｆｃのアミノ酸配列（即ちＰ０１８５７の残基１０４〜残基３３０）を得た。次に、点突然変異（Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ｇ、Ｙ４０７Ａ及びＦ４０５Ｋ）をＩｇＧ１−Ｆｃ断片に導入して、このように得たポリペプチドをＦｃ−ホールと命名した。次に、リンカー配列「（ＧＧＧＧＳ）３」（配列番号８８）をＦｃ−ホールのＮ末端に加えて、リンカー−Ｆｃ−ホールを得た。次に、オンラインツールＤＮＡｗｏｒｋｓ（ｈｅｌｉｘｗｅｂ．ｎｉｈ．ｇｏｖ／ｄｎａｗｏｒｋｓ／）を利用してそれをコードする対応するＤＮＡ配列を設計した。次に、ｈｕＩＬ１０の２つのコピーの間にリンカー配列「（ＧＧＧＧＳ）３」（配列番号８８）を加えて、（ｈｕＩＬ１０）２を得た。次に、（ｈｕＩＬ１０）２をコードするポリヌクレオチド配列をリンカー−Ｆｃ−ホールをコードするポリヌクレオチド配列の５’末端に加えて、融合タンパク質（ｈｕＩＬ１０）２−Ｆｃ−ホールをコードするポリヌクレオチド配列を合成した。（ｈｕＩＬ１０）２−Ｆｃ−ホールのアミノ酸配列は、配列番号９５に記載のとおり、それをコードするポリヌクレオチド配列は、配列番号９６に記載のとおりである。
【０５３１】
１．２０  ｈｕｓＩＬ２−Ｆｃ６の調製
まず、Ｎａｔｕｒｅ  ４８４，  ５２９−５３３（２０１２年４月２６日）（援用により本明細書に組み込まれる）の記載に基づき、ヒトスーパーインターロイキン２（ｈｕｓＩＬ２）の配列情報を得て、それをコードする全長ポリヌクレオチド配列を得た。次に、ヒト免疫グロブリンγ１（ＩｇＧ１）定常領域（Ｐ０１８５７）のアミノ酸配列に基づき、タンパク質データベースＵｎｉｐｒｏｔよりヒトＩｇＧ１−Ｆｃのアミノ酸配列（即ちＰ０１８５７の残基１０４〜残基３３０）を得た。次に、点突然変異（Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ｇ、Ｙ４０７Ａ及びＦ４０５Ｋ）をＩｇＧ１−Ｆｃ断片に導入して、このように得たポリペプチドをＦｃ６と命名した。次に、リンカー配列「ＧＧＧＧＳ」（配列番号７９）をＦｃ６のＮ末端に加えて、リンカー−Ｆｃ６を得た。次に、オンラインツールＤＮＡｗｏｒｋｓ（ｈｅｌｉｘｗｅｂ．ｎｉｈ．ｇｏｖ／ｄｎａｗｏｒｋｓ／）を利用してそれをコードする対応するＤＮＡ配列を設計した。ｈｕｓＩＬ２をコードするポリヌクレオチド配列をリンカー−Ｆｃ６をコードするポリヌクレオチド配列の５’末端に加えて、融合タンパク質ｈｕｓＩＬ２−Ｆｃ６をコードするポリヌクレオチド配列を合成した。ｈｕｓＩＬ２−Ｆｃ６のアミノ酸配列は、配列番号９７に記載のとおり、それをコードするポリヌクレオチド配列は、配列番号９８に記載のとおりである。
【０５３２】
１．２１  ｈｕｓＩＬ２−ホールの調製
まず、Ｎａｔｕｒｅ  ４８４，  ５２９−５３３（２０１２年４月２６日）（援用により本明細書に組み込まれる）の記載に基づき、ヒトスーパーインターロイキン２（ｈｕｓＩＬ２）の配列情報を得て、それをコードする全長ポリヌクレオチド配列を得た。次に、ヒト免疫グロブリンγ１（ＩｇＧ１）定常領域（Ｐ０１８５７）のアミノ酸配列に基づき、タンパク質データベースＵｎｉｐｒｏｔよりヒトＩｇＧ１−Ｆｃのアミノ酸配列（即ちＰ０１８５７の残基１０４〜残基３３０）を得た。次に、点突然変異（Ｄ３５６Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ及びＹ４０７Ｖ）をＩｇＧ１−Ｆｃ断片に導入して、このように得たポリペプチドをＦｃ−ホールと命名した。次に、リンカー配列「ＧＧＧＧＳ」（配列番号７９）をＦｃ−ホールのＮ末端に加えて、リンカー−Ｆｃ−ホールを得た。次に、オンラインツールＤＮＡｗｏｒｋｓ（ｈｅｌｉｘｗｅｂ．ｎｉｈ．ｇｏｖ／ｄｎａｗｏｒｋｓ／）を利用してそれをコードする対応するＤＮＡ配列を設計した。ｈｕｓＩＬ２をコードするポリヌクレオチド配列をリンカー−Ｆｃ−ホールをコードするポリヌクレオチド配列の５’末端に加えて、融合タンパク質ｈｕｓＩＬ２−Ｆｃ−ホールをコードするポリヌクレオチド配列を合成した。ｈｕｓＩＬ２−Ｆｃ−ホールのアミノ酸配列は、配列番号９９に記載のとおり、それをコードするポリヌクレオチド配列は、配列番号１００に記載のとおりである。
【０５３３】
実施例２：組換えプラスミドの構築
ＨｉｎｄＩＩＩ及びＥｃｏＲＩ（タカラバイオ社提供）を使用して、実施例１で得た核酸分子（それぞれＥｒｂ−Ｆｃ９、Ｅｒｂ−Ｆｃ６、Ｅｒｂ−ノブ、Ｔ−Ｆｃ９、Ｐ−Ｆｃ９、Ｍａｂ８０６−Ｆｃ９、Ｃ−ｍａｂ−Ｆｃ９、２８Ｈ１−Ｆｃ９、５Ｅ５−Ｆｃ９、Ｅ−ｍａｂ−Ｆｃ９、Ａ−ｍａｂ−Ｆｃ９、Ｔ−ＬＣ（トラスツズマブ軽鎖）、Ｐ−ＬＣ（ペルツズマブ軽鎖）、Ｅｒｂ−ＬＣ（セツキシマブ軽鎖）、Ｍａｂ８０６−ＬＣ（Ｍａｂ８０６軽鎖）、Ｃ−ｍａｂ−ＬＣ（コドリツズマブ軽鎖））、２８Ｈ１−ＬＣ（２８Ｈ１軽鎖）、５Ｅ５−ＬＣ（５Ｅ５軽鎖）、Ｅ−ｍａｂ−ＬＣ（エンシツキシマブ軽鎖）、Ａ−ｍａｂ−ＬＣ（アマツキシマブ軽鎖）、ｍｕＩＦＮａ４−Ｆｃ６、ｈｕＩＦＮａ２−Ｆｃ６、ｍｕＩＦＮｂ−Ｆｃ６、ｈｕＩＦＮｂ−Ｆｃ６、ｈｕＩＦＮＬ−Ｆｃ６、ｈｕＩＬ１０−Ｆｃ６、（ｈｕＩＬ１０）２−Ｆｃ６、（ｈｕＩＬ１０）２−Ｆｃ９、（ｈｕＩＬ１０）２−Ｆｃ−ホール、ｈｕｓＩＬ２−Ｆｃ６及びｈｕｓＩＬ２−ホールをコードする）を消化した後、それぞれベクターｐｃＤＮＡ４／ｍｙｃ−ＨｉｓＡ（インビトロジェン社提供、Ｖ８６３−２０）にサブクローニングした。配列決定によりプラスミドを検証し、正しく構築された組換えプラスミドをそれぞれ、ｐｃＤＮＡ４−Ｅｒｂ−Ｆｃ９、ｐｃＤＮＡ４−Ｅｒｂ−Ｆｃ６、ｐｃＤＮＡ４−Ｅｒｂ−ノブ、ｐｃＤＮＡ４−Ｔ−Ｆｃ９、ｐｃＤＮＡ４−Ｐ−Ｆｃ９、ｐｃＤＮＡ４−Ｍａｂ８０６−Ｆｃ９、ｐｃＤＮＡ４−Ｃ−ｍａｂ−Ｆｃ９、ｐｃＤＮＡ４−２８Ｈ１−Ｆｃ９、ｐｃＤＮＡ４−５Ｅ５−Ｆｃ９、ｐｃＤＮＡ４−Ｅ−ｍａｂ−Ｆｃ９、ｐｃＤＮＡ４−Ａ−ｍａｂ−Ｆｃ９、ｐｃＤＮＡ４−Ｔ−ＬＣ、ｐｃＤＮＡ４−Ｐ−ＬＣ、ｐｃＤＮＡ４−Ｅｒｂ−ＬＣ、ｐｃＤＮＡ４−Ｍａｂ８０６−ＬＣ、ｐｃＤＮＡ４−Ｃ−ｍａｂ−ＬＣ、ｐｃＤＮＡ４−２８Ｈ１−ＬＣ、ｐｃＤＮＡ４−５Ｅ５−ＬＣ、ｐｃＤＮＡ４−Ｅ−ｍａｂ−ＬＣ、ｐｃＤＮＡ４−Ａ−ｍａｂ−ＬＣ、ｐｃＤＮＡ４−ｍｕＩＦＮａ４−Ｆｃ６、ｐｃＤＮＡ４−ｈｕＩＦＮａ２−Ｆｃ６、ｐｃＤＮＡ４−ｍｕＩＦＮｂ−Ｆｃ６、ｐｃＤＮＡ４−ｈｕＩＦＮｂ−Ｆｃ６、ｐｃＤＮＡ４−ｈｕＩＦＮＬ−Ｆｃ６、ｐｃＤＮＡ４−ｈｕＩＬ１０−Ｆｃ６、ｐｃＤＮＡ４−（ｈｕＩＬ１０）２−Ｆｃ６、ｐｃＤＮＡ４−（ｈｕＩＬ１０）２−Ｆｃ９、ｐｃＤＮＡ４−（ｈｕＩＬ１０）２−Ｆｃ−ホール、ｐｃＤＮＡ４−ｈｕｓＩＬ２−Ｆｃ６及びｐｃＤＮＡ４−ｈｕｓＩＬ２−ホールと命名した。
【０５３４】
実施例３：タンパク質性ヘテロ二量体の発現及び精製
トランスフェクト実施２日前、１２×６００ｍＬ懸濁液で適応させた一過性トランスフェクション用ＨＥＫ２９３細胞（ＡＴＣＣ提供、ＣＲＬ−１５７３（登録商標））を調製し、０．８×１０６細胞／ｍｌの密度で細胞を接種した。２日後、細胞懸濁液を３等分して遠心分離して、６００ｍＬのＦｒｅｅｓｔｙｌｅ２９３培地に再懸濁させた。
【０５３５】
実施例２で得た組換え発現ベクターを以下に示す群に分けた。
群１：ｐｃＤＮＡ４−Ｅｒｂ−ノブ（２００μｇ）＋ｐｃＤＮＡ４−Ｅｒｂ−ＬＣ（２００μｇ）＋ｐｃＤＮＡ４−（ｈｕＩＬ１０）２−Ｆｃ−ｈｏｌｅ（２００μｇ）
群２：ｐｃＤＮＡ４−Ｅｒｂ−Ｆｃ６（２００μｇ）＋ｐｃＤＮＡ４−Ｅｒｂ−ＬＣ（２００μｇ）＋ｐｃＤＮＡ４−（ｈｕＩＬ１０）２−Ｆｃ９（２００μｇ）
群３：ｐｃＤＮＡ４−Ｅｒｂ−Ｆｃ９（２００μｇ）＋ｐｃＤＮＡ４−Ｅｒｂ−ＬＣ（２００μｇ）＋ｐｃＤＮＡ４−（ｈｕＩＬ１０）２−Ｆｃ６（２００μｇ）
群４：ｐｃＤＮＡ４−Ｅｒｂ−Ｆｃ９（２００μｇ）＋ｐｃＤＮＡ４−Ｅｒｂ−ＬＣ（２００μｇ）＋ｐｃＤＮＡ４−ｍｕＩＦＮａ４−Ｆｃ６（２００μｇ）
群５：ｐｃＤＮＡ４−Ｅｒｂ−Ｆｃ９（２００μｇ）＋ｐｃＤＮＡ４−Ｅｒｂ−ＬＣ（２００μｇ）＋ｐｃＤＮＡ４−ｈｕＩＦＮａ２−Ｆｃ６（２００μｇ）
群６：ｐｃＤＮＡ４−Ｅｒｂ−Ｆｃ９（２００μｇ）＋ｐｃＤＮＡ４−Ｅｒｂ−ＬＣ（２００μｇ）＋ｐｃＤＮＡ４−ｍｕＩＦＮｂ−Ｆｃ６（２００μｇ）
群７：ｐｃＤＮＡ４−Ｅｒｂ−Ｆｃ９（２００μｇ）＋ｐｃＤＮＡ４−Ｅｒｂ−ＬＣ（２００μｇ）＋ｐｃＤＮＡ４−ｈｕＩＦＮｂ−Ｆｃ６（２００μｇ）
群８：ｐｃＤＮＡ４−Ｅｒｂ−Ｆｃ９（２００μｇ）＋ｐｃＤＮＡ４−Ｅｒｂ−ＬＣ（２００μｇ）＋ｐｃＤＮＡ４−ｈｕＩＦＮＬ−Ｆｃ６（２００μｇ）
群９：ｐｃＤＮＡ４−Ｅｒｂ−Ｆｃ９（２００μｇ）＋ｐｃＤＮＡ４−Ｅｒｂ−ＬＣ（２００μｇ）＋ｐｃＤＮＡ４−ｈｕＩＬ１０−Ｆｃ６（２００μｇ）
群１０：ｐｃＤＮＡ４−Ｅｒｂ−ノブ（２００μｇ）＋ｐｃＤＮＡ４−Ｅｒｂ−ＬＣ（２００μｇ）＋ｐｃＤＮＡ４−ｈｕｓＩＬ２−ｈｏｌｅ（２００μｇ）
群１１：ｐｃＤＮＡ４−Ｅｒｂ−Ｆｃ９（２００μｇ）＋ｐｃＤＮＡ４−Ｅｒｂ−ＬＣ（２００μｇ）＋ｐｃＤＮＡ４−ｈｕｓＩＬ２−Ｆｃ６（２００μｇ）
群１２：ｐｃＤＮＡ４−Ｍａｂ８０６−Ｆｃ９（２００μｇ）＋ｐｃＤＮＡ４−Ｍａｂ８０６−ＬＣ（２００μｇ）＋ｐｃＤＮＡ４−ｍｕＩＦＮａ４−Ｆｃ６（２００μｇ）
群１３：ｐｃＤＮＡ４−Ｍａｂ８０６−Ｆｃ９（２００μｇ）＋ｐｃＤＮＡ４−Ｍａｂ８０６−ＬＣ（２００μｇ）＋ｐｃＤＮＡ４−ｈｕＩＦＮａ２−Ｆｃ６（２００μｇ）
群１４：ｐｃＤＮＡ４−Ｍａｂ８０６−Ｆｃ９（２００μｇ）＋ｐｃＤＮＡ４−Ｍａｂ８０６−ＬＣ（２００μｇ）＋ｐｃＤＮＡ４−ｍｕＩＦＮｂ−Ｆｃ６（２００μｇ）
群１５：ｐｃＤＮＡ４−Ｍａｂ８０６−Ｆｃ９（２００μｇ）＋ｐｃＤＮＡ４−Ｍａｂ８０６−ＬＣ（２００μｇ）＋ｐｃＤＮＡ４−ｈｕＩＦＮｂ−Ｆｃ６（２００μｇ）
群１６：ｐｃＤＮＡ４−Ｍａｂ８０６−Ｆｃ９（２００μｇ）＋ｐｃＤＮＡ４−Ｍａｂ８０６−ＬＣ（２００μｇ）＋ｐｃＤＮＡ４−ｈｕＩＦＮＬ−Ｆｃ６（２００μｇ）
群１７：ｐｃＤＮＡ４−Ｍａｂ８０６−Ｆｃ９（２００μｇ）＋ｐｃＤＮＡ４−Ｍａｂ８０６−ＬＣ（２００μｇ）＋ｐｃＤＮＡ４−ｈｕＩＬ１０−Ｆｃ６（２００μｇ）
群１８：ｐｃＤＮＡ４−Ｍａｂ８０６−Ｆｃ９（２００μｇ）＋ｐｃＤＮＡ４−Ｍａｂ８０６−ＬＣ（２００μｇ）＋ｐｃＤＮＡ４−（ｈｕＩＬ１０）２−Ｆｃ６（２００μｇ）
群１９：ｐｃＤＮＡ４−Ｍａｂ８０６−Ｆｃ９（２００μｇ）＋ｐｃＤＮＡ４−Ｍａｂ８０６−ＬＣ（２００μｇ）＋ｐｃＤＮＡ４−ｈｕｓＩＬ２−Ｆｃ６（２００μｇ）
群２０：ｐｃＤＮＡ４−Ｔ−Ｆｃ９（２００μｇ）＋ｐｃＤＮＡ４−Ｔ−ＬＣ（２００μｇ）＋ｐｃＤＮＡ４−ｍｕＩＦＮａ４−Ｆｃ６（２００μｇ）
群２１：ｐｃＤＮＡ４−Ｔ−Ｆｃ９（２００μｇ）＋ｐｃＤＮＡ４−Ｔ−ＬＣ（２００μｇ）＋ｐｃＤＮＡ４−ｈｕＩＦＮａ２−Ｆｃ６（２００μｇ）
群２２：ｐｃＤＮＡ４−Ｔ−Ｆｃ９（２００μｇ）＋ｐｃＤＮＡ４−Ｔ−ＬＣ（２００μｇ）＋ｐｃＤＮＡ４−ｍｕＩＦＮｂ−Ｆｃ６（２００μｇ）
群２３：ｐｃＤＮＡ４−Ｔ−Ｆｃ９（２００μｇ）＋ｐｃＤＮＡ４−Ｔ−ＬＣ（２００μｇ）＋ｐｃＤＮＡ４−ｈｕＩＦＮｂ−Ｆｃ６（２００μｇ）
群２４：ｐｃＤＮＡ４−Ｔ−Ｆｃ９（２００μｇ）＋ｐｃＤＮＡ４−Ｔ−ＬＣ（２００μｇ）＋ｐｃＤＮＡ４−ｈｕＩＦＮＬ−Ｆｃ６（２００μｇ）
群２５：ｐｃＤＮＡ４−Ｔ−Ｆｃ９（２００μｇ）＋ｐｃＤＮＡ４−Ｔ−ＬＣ（２００μｇ）＋ｐｃＤＮＡ４−ｈｕＩＬ１０−Ｆｃ６（２００μｇ）
群２６：ｐｃＤＮＡ４−Ｔ−Ｆｃ９（２００μｇ）＋ｐｃＤＮＡ４−Ｔ−ＬＣ（２００μｇ）＋ｐｃＤＮＡ４−（ｈｕＩＬ１０）２−Ｆｃ６（２００μｇ）
群２７：ｐｃＤＮＡ４−Ｔ−Ｆｃ９（２００μｇ）＋ｐｃＤＮＡ４−Ｔ−ＬＣ（２００μｇ）＋ｐｃＤＮＡ４−ｈｕｓＩＬ２−Ｆｃ６（２００μｇ）
群２８：ｐｃＤＮＡ４−Ｐ−Ｆｃ９（２００μｇ）＋ｐｃＤＮＡ４−Ｐ−ＬＣ（２００μｇ）＋ｐｃＤＮＡ４−ｍｕＩＦＮａ４−Ｆｃ６（２００μｇ）
群２９：ｐｃＤＮＡ４−Ｐ−Ｆｃ９（２００μｇ）＋ｐｃＤＮＡ４−Ｐ−ＬＣ（２００μｇ）＋ｐｃＤＮＡ４−ｈｕＩＦＮａ２−Ｆｃ６（２００μｇ）
群３０：ｐｃＤＮＡ４−Ｐ−Ｆｃ９（２００μｇ）＋ｐｃＤＮＡ４−Ｐ−ＬＣ（２００μｇ）＋ｐｃＤＮＡ４−ｍｕＩＦＮｂ−Ｆｃ６（２００μｇ）
群３１：ｐｃＤＮＡ４−Ｐ−Ｆｃ９（２００μｇ）＋ｐｃＤＮＡ４−Ｐ−ＬＣ（２００μｇ）＋ｐｃＤＮＡ４−ｈｕＩＦＮｂ−Ｆｃ６（２００μｇ）
群３２：ｐｃＤＮＡ４−Ｐ−Ｆｃ９（２００μｇ）＋ｐｃＤＮＡ４−Ｐ−ＬＣ（２００μｇ）＋ｐｃＤＮＡ４−ｈｕＩＦＮＬ−Ｆｃ６（２００μｇ）
群３３：ｐｃＤＮＡ４−Ｐ−Ｆｃ９（２００μｇ）＋ｐｃＤＮＡ４−Ｐ−ＬＣ（２００μｇ）＋ｐｃＤＮＡ４−ｈｕＩＬ１０−Ｆｃ６（２００μｇ）
群３４：ｐｃＤＮＡ４−Ｐ−Ｆｃ９（２００μｇ）＋ｐｃＤＮＡ４−Ｐ−ＬＣ（２００μｇ）＋ｐｃＤＮＡ４−（ｈｕＩＬ１０）２−Ｆｃ６（２００μｇ）
群３５：ｐｃＤＮＡ４−Ｐ−Ｆｃ９（２００μｇ）＋ｐｃＤＮＡ４−Ｐ−ＬＣ（２００μｇ）＋ｐｃＤＮＡ４−ｈｕｓＩＬ２−Ｆｃ６（２００μｇ）
群３６：ｐｃＤＮＡ４−Ｃ−ｍａｂ−Ｆｃ９（２００μｇ）＋ｐｃＤＮＡ４−Ｃ−ｍａｂ−ＬＣ（２００μｇ）＋ｐｃＤＮＡ４−ｍｕＩＦＮａ４−Ｆｃ６（２００μｇ）
群３７：ｐｃＤＮＡ４−Ｃ−ｍａｂ−Ｆｃ９（２００μｇ）＋ｐｃＤＮＡ４−Ｃ−ｍａｂ−ＬＣ（２００μｇ）＋ｐｃＤＮＡ４−ｈｕＩＦＮａ２−Ｆｃ６（２００μｇ）
群３８：ｐｃＤＮＡ４−Ｃ−ｍａｂ−Ｆｃ９（２００μｇ）＋ｐｃＤＮＡ４−Ｃ−ｍａｂ−ＬＣ（２００μｇ）＋ｐｃＤＮＡ４−ｍｕＩＦＮｂ−Ｆｃ６（２００μｇ）
群３９：ｐｃＤＮＡ４−Ｃ−ｍａｂ−Ｆｃ９（２００μｇ）＋ｐｃＤＮＡ４−Ｃ−ｍａｂ−ＬＣ（２００μｇ）＋ｐｃＤＮＡ４−ｈｕＩＦＮｂ−Ｆｃ６（２００μｇ）
群４０：ｐｃＤＮＡ４−Ｃ−ｍａｂ−Ｆｃ９（２００μｇ）＋ｐｃＤＮＡ４−Ｃ−ｍａｂ−ＬＣ（２００μｇ）＋ｐｃＤＮＡ４−ｈｕＩＦＮＬ−Ｆｃ６（２００μｇ）
群４１：ｐｃＤＮＡ４−Ｃ−ｍａｂ−Ｆｃ９（２００μｇ）＋ｐｃＤＮＡ４−Ｃ−ｍａｂ−ＬＣ（２００μｇ）＋ｐｃＤＮＡ４−ｈｕＩＬ１０−Ｆｃ６（２００μｇ）
群４２：ｐｃＤＮＡ４−Ｃ−ｍａｂ−Ｆｃ９（２００μｇ）＋ｐｃＤＮＡ４−Ｃ−ｍａｂ−ＬＣ（２００μｇ）＋ｐｃＤＮＡ４−（ｈｕＩＬ１０）２−Ｆｃ６（２００μｇ）
群４３：ｐｃＤＮＡ４−Ｃ−ｍａｂ−Ｆｃ９（２００μｇ）＋ｐｃＤＮＡ４−Ｃ−ｍａｂ−ＬＣ（２００μｇ）＋ｐｃＤＮＡ４−ｈｕｓＩＬ２−Ｆｃ６（２００μｇ）
群４４：ｐｃＤＮＡ４−２８Ｈ１−Ｆｃ９（２００μｇ）＋ｐｃＤＮＡ４−２８Ｈ１−ＬＣ（２００μｇ）＋ｐｃＤＮＡ４−ｍｕＩＦＮａ４−Ｆｃ６（２００μｇ）
群４５：ｐｃＤＮＡ４−２８Ｈ１−Ｆｃ９（２００μｇ）＋ｐｃＤＮＡ４−２８Ｈ１−ＬＣ（２００μｇ）＋ｐｃＤＮＡ４−ｈｕＩＦＮａ２−Ｆｃ６（２００μｇ）
群４６：ｐｃＤＮＡ４−２８Ｈ１−Ｆｃ９（２００μｇ）＋ｐｃＤＮＡ４−２８Ｈ１−ＬＣ（２００μｇ）＋ｐｃＤＮＡ４−ｍｕＩＦＮｂ−Ｆｃ６（２００μｇ）
群４７：ｐｃＤＮＡ４−２８Ｈ１−Ｆｃ９（２００μｇ）＋ｐｃＤＮＡ４−２８Ｈ１−ＬＣ（２００μｇ）＋ｐｃＤＮＡ４−ｈｕＩＦＮｂ−Ｆｃ６（２００μｇ）
群４８：ｐｃＤＮＡ４−２８Ｈ１−Ｆｃ９（２００μｇ）＋ｐｃＤＮＡ４−２８Ｈ１−ＬＣ（２００μｇ）＋ｐｃＤＮＡ４−ｈｕＩＦＮＬ−Ｆｃ６（２００μｇ）
群４９：ｐｃＤＮＡ４−２８Ｈ１−Ｆｃ９（２００μｇ）＋ｐｃＤＮＡ４−２８Ｈ１−ＬＣ（２００μｇ）＋ｐｃＤＮＡ４−ｈｕＩＬ１０−Ｆｃ６（２００μｇ）
群５０：ｐｃＤＮＡ４−２８Ｈ１−Ｆｃ９（２００μｇ）＋ｐｃＤＮＡ４−２８Ｈ１−ＬＣ（２００μｇ）＋ｐｃＤＮＡ４−（ｈｕＩＬ１０）２−Ｆｃ６（２００μｇ）
群５１：ｐｃＤＮＡ４−２８Ｈ１−Ｆｃ９（２００μｇ）＋ｐｃＤＮＡ４−２８Ｈ１−ＬＣ（２００μｇ）＋ｐｃＤＮＡ４−ｈｕｓＩＬ２−Ｆｃ６（２００μｇ）
群５２：ｐｃＤＮＡ４−５Ｅ５−Ｆｃ９（２００μｇ）＋ｐｃＤＮＡ４−５Ｅ５−ＬＣ（２００μｇ）＋ｐｃＤＮＡ４−ｍｕＩＦＮａ４−Ｆｃ６（２００μｇ）
群５３：ｐｃＤＮＡ４−５Ｅ５−Ｆｃ９（２００μｇ）＋ｐｃＤＮＡ４−５Ｅ５−ＬＣ（２００μｇ）＋ｐｃＤＮＡ４−ｈｕＩＦＮａ２−Ｆｃ６（２００μｇ）
群５４：ｐｃＤＮＡ４−５Ｅ５−Ｆｃ９（２００μｇ）＋ｐｃＤＮＡ４−５Ｅ５−ＬＣ（２００μｇ）＋ｐｃＤＮＡ４−ｍｕＩＦＮｂ−Ｆｃ６（２００μｇ）
群５５：ｐｃＤＮＡ４−５Ｅ５−Ｆｃ９（２００μｇ）＋ｐｃＤＮＡ４−５Ｅ５−ＬＣ（２００μｇ）＋ｐｃＤＮＡ４−ｈｕＩＦＮｂ−Ｆｃ６（２００μｇ）
群５６：ｐｃＤＮＡ４−５Ｅ５−Ｆｃ９（２００μｇ）＋ｐｃＤＮＡ４−５Ｅ５−ＬＣ（２００μｇ）＋ｐｃＤＮＡ４−ｈｕＩＦＮＬ−Ｆｃ６（２００μｇ）
群５７：ｐｃＤＮＡ４−５Ｅ５−Ｆｃ９（２００μｇ）＋ｐｃＤＮＡ４−５Ｅ５−ＬＣ（２００μｇ）＋ｐｃＤＮＡ４−ｈｕＩＬ１０−Ｆｃ６（２００μｇ）
群５８：ｐｃＤＮＡ４−５Ｅ５−Ｆｃ９（２００μｇ）＋ｐｃＤＮＡ４−５Ｅ５−ＬＣ（２００μｇ）＋ｐｃＤＮＡ４−（ｈｕＩＬ１０）２−Ｆｃ６（２００μｇ）
群５９：ｐｃＤＮＡ４−５Ｅ５−Ｆｃ９（２００μｇ）＋ｐｃＤＮＡ４−５Ｅ５−ＬＣ（２００μｇ）＋ｐｃＤＮＡ４−ｈｕｓＩＬ２−Ｆｃ６（２００μｇ）
群６０：ｐｃＤＮＡ４−Ｅ−ｍａｂ−Ｆｃ９（２００μｇ）＋ｐｃＤＮＡ４−Ｅ−ｍａｂ−ＬＣ（２００μｇ）＋ｐｃＤＮＡ４−ｍｕＩＦＮａ４−Ｆｃ６（２００μｇ）
群６１：ｐｃＤＮＡ４−Ｅ−ｍａｂ−Ｆｃ９（２００μｇ）＋ｐｃＤＮＡ４−Ｅ−ｍａｂ−ＬＣ（２００μｇ）＋ｐｃＤＮＡ４−ｈｕＩＦＮａ２−Ｆｃ６（２００μｇ）
群６２：ｐｃＤＮＡ４−Ｅ−ｍａｂ−Ｆｃ９（２００μｇ）＋ｐｃＤＮＡ４−Ｅ−ｍａｂ−ＬＣ（２００μｇ）＋ｐｃＤＮＡ４−ｍｕＩＦＮｂ−Ｆｃ６（２００μｇ）
群６３：ｐｃＤＮＡ４−Ｅ−ｍａｂ−Ｆｃ９（２００μｇ）＋ｐｃＤＮＡ４−Ｅ−ｍａｂ−ＬＣ（２００μｇ）＋ｐｃＤＮＡ４−ｈｕＩＦＮｂ−Ｆｃ６（２００μｇ）
群６４：ｐｃＤＮＡ４−Ｅ−ｍａｂ−Ｆｃ９（２００μｇ）＋ｐｃＤＮＡ４−Ｅ−ｍａｂ−ＬＣ（２００μｇ）＋ｐｃＤＮＡ４−ｈｕＩＦＮＬ−Ｆｃ６（２００μｇ）
群６５：ｐｃＤＮＡ４−Ｅ−ｍａｂ−Ｆｃ９（２００μｇ）＋ｐｃＤＮＡ４−Ｅ−ｍａｂ−ＬＣ（２００μｇ）＋ｐｃＤＮＡ４−ｈｕＩＬ１０−Ｆｃ６（２００μｇ）
群６６：ｐｃＤＮＡ４−Ｅ−ｍａｂ−Ｆｃ９（２００μｇ）＋ｐｃＤＮＡ４−Ｅ−ｍａｂ−ＬＣ（２００μｇ）＋ｐｃＤＮＡ４−（ｈｕＩＬ１０）２−Ｆｃ６（２００μｇ）
群６７：ｐｃＤＮＡ４−Ｅ−ｍａｂ−Ｆｃ９（２００μｇ）＋ｐｃＤＮＡ４−Ｅ−ｍａｂ−ＬＣ（２００μｇ）＋ｐｃＤＮＡ４−ｈｕｓＩＬ２−Ｆｃ６（２００μｇ）
群６８：ｐｃＤＮＡ４−Ａ−ｍａｂ−Ｆｃ９（２００μｇ）＋ｐｃＤＮＡ４−Ａ−ｍａｂ−ＬＣ（２００μｇ）＋ｐｃＤＮＡ４−ｍｕＩＦＮａ４−Ｆｃ６（２００μｇ）
群６９：ｐｃＤＮＡ４−Ａ−ｍａｂ−Ｆｃ９（２００μｇ）＋ｐｃＤＮＡ４−Ａ−ｍａｂ−ＬＣ（２００μｇ）＋ｐｃＤＮＡ４−ｈｕＩＦＮａ２−Ｆｃ６（２００μｇ）
群７０：ｐｃＤＮＡ４−Ａ−ｍａｂ−Ｆｃ９（２００μｇ）＋ｐｃＤＮＡ４−Ａ−ｍａｂ−ＬＣ（２００μｇ）＋ｐｃＤＮＡ４−ｍｕＩＦＮｂ−Ｆｃ６（２００μｇ）
群７１：ｐｃＤＮＡ４−Ａ−ｍａｂ−Ｆｃ９（２００μｇ）＋ｐｃＤＮＡ４−Ａ−ｍａｂ−ＬＣ（２００μｇ）＋ｐｃＤＮＡ４−ｈｕＩＦＮｂ−Ｆｃ６（２００μｇ）
群７２：ｐｃＤＮＡ４−Ａ−ｍａｂ−Ｆｃ９（２００μｇ）＋ｐｃＤＮＡ４−Ａ−ｍａｂ−ＬＣ（２００μｇ）＋ｐｃＤＮＡ４−ｈｕＩＦＮＬ−Ｆｃ６（２００μｇ）
群７３：ｐｃＤＮＡ４−Ａ−ｍａｂ−Ｆｃ９（２００μｇ）＋ｐｃＤＮＡ４−Ａ−ｍａｂ−ＬＣ（２００μｇ）＋ｐｃＤＮＡ４−ｈｕＩＬ１０−Ｆｃ６（２００μｇ）
群７４：ｐｃＤＮＡ４−Ａ−ｍａｂ−Ｆｃ９（２００μｇ）＋ｐｃＤＮＡ４−Ａ−ｍａｂ−ＬＣ（２００μｇ）＋ｐｃＤＮＡ４−（ｈｕＩＬ１０）２−Ｆｃ６（２００μｇ）
群７５：ｐｃＤＮＡ４−Ａ−ｍａｂ−Ｆｃ９（２００μｇ）＋ｐｃＤＮＡ４−Ａ−ｍａｂ−ＬＣ（２００μｇ）＋ｐｃＤＮＡ４−ｈｕｓＩＬ２−Ｆｃ６（２００μｇ）
【０５３６】
各群のプラスミド混合物を６ｍＬのＦｒｅｅｓｔｙｌｅ２９３培地で希釈して、ＰＥＩ（ポリエチレンイミン）溶液を加えてトランスフェクトを行った。各群のプラスミド／ＰＥＩ混合物をそれぞれ細胞懸濁液６００ｍＬに加えて、３７℃、１０％ＣＯ２、９０ｒｐｍにおいて培養し、培地に５０μｇ／Ｌ  ＩＧＦ−１（インスリン様成長因子Ｉ）を補充した。４時間後に、培養物にＥＸ２９３培地６００ｍＬ、２ｍＭのグルタミン及び５０μｇ／ＬのＩＧＦ−１を補充して、１３５ｒｐｍにおいて培養した。２４時間後に、３．８ｍＭのＶＰＡを加えた。５〜６日後に、５×１２００ｍＬの細胞上清を回収し、プロテインＡアフィニティークロマトグラフィーにより粗タンパク質性ヘテロ二量体試料を精製した。ＳＤＳ−ＰＡＧＥにより得た試料を検出して、目的バンドが明確に確認された。当該実施例を図２に示す。
【０５３７】
図２Ａは、Ｔｍａｂ−（ｈｕＩＬ１０）２−６−９のＳＤＳ−ＰＡＧＥ分析結果を示す。レーン２には、タンパク質マーカー（ＭＷマーカー２６６１９）が、レーン１には、還元されたＴｍａｂ−（ｈｕＩＬ１０）２−６−９ヘテロ二量体タンパク質が、レーン３には、非還元Ｔｍａｂ−（ｈｕＩＬ１０）２−６−９ヘテロ二量体タンパク質が装填された。Ｔ−ＬＣの分子量は、約２５ＫＤ、Ｔ−Ｆｃ９の分子量は、約５０ＫＤ、（ｈｕＩＬ１０）２−Ｆｃ６の分子量は、約６５ＫＤ、Ｔｍａｂ−（ｈｕＩＬ１０）２−６−９ヘテロ二量体タンパク質の分子量は、約１４０ＫＤである。
【０５３８】
図２Ｂは、Ｍａｂ８０６−（ｈｕＩＬ１０）２−６−９のＳＤＳ−ＰＡＧＥ分析結果を示す。レーン２には、タンパク質マーカー（ＭＷマーカー２６６１９）が、レーン１には、還元されたＭａｂ８０６−（ｈｕＩＬ１０）２−６−９ヘテロ二量体タンパク質が、レーン３には、非還元Ｍａｂ８０６−（ｈｕＩＬ１０）２−６−９ヘテロ二量体タンパク質が装填された。Ｍａｂ８０６−ＬＣの分子量は、約２５ＫＤ、Ｍａｂ８０６−Ｆｃ９の分子量は、約５０ＫＤ、（ｈｕＩＬ１０）２−Ｆｃ６の分子量は、約６５ＫＤ、Ｍａｂ８０６−（ｈｕＩＬ１０）２−６−９ヘテロ二量体タンパク質の分子量は、約１４０ＫＤである。
【０５３９】
図２Ｃは、Ｅｒｂ−ｍｕＩＦＮａ４−６−９のＳＤＳ−ＰＡＧＥ分析結果を示す。レーン２には、タンパク質マーカー（ＭＷマーカー２６６１９）が、レーン１には、還元されたＥｒｂ−ｍｕＩＦＮａ４−６−９ヘテロ二量体タンパク質が、レーン３には、非還元Ｅｒｂ−ｍｕＩＦＮａ４−６−９ヘテロ二量体タンパク質が装填された。Ｅｒｂ−ＬＣの分子量は、約２５ＫＤ、Ｅｒｂ−Ｆｃ９の分子量は、約５０ＫＤ、ｍｕＩＦＮａ４−Ｆｃ６の分子量は、約４５ＫＤ、Ｅｒｂ−ｍｕＩＦＮａ４−６−９ヘテロ二量体タンパク質の分子量は、約１２０ＫＤである。
【０５４０】
図２Ｄは、Ｅｒｂ−ｈｕｓＩＬ２−６−９のＳＤＳ−ＰＡＧＥ分析結果を示す。レーン２には、タンパク質マーカー（ＭＷマーカー２６６１９）が、レーン１には、還元されたＥｒｂ−ｈｕｓＩＬ２−６−９ヘテロ二量体タンパク質が、レーン３には、非還元Ｅｒｂ−ｈｕｓＩＬ２−６−９ヘテロ二量体タンパク質が装填された。Ｅｒｂ−ＬＣの分子量は、約２５ＫＤ、Ｅｒｂ−Ｆｃ９の分子量は、約５０ＫＤ、ｈｕｓＩＬ２−Ｆｃ６の分子量は、約４１ＫＤ、Ｅｒｂ−ｈｕｓＩＬ２−６−９ヘテロ二量体タンパク質の分子量は、約１２０ＫＤである。
【０５４１】
図２Ｅは、Ｅｒｂ−（ｈｕＩＬ１０）２−６−９のＳＤＳ−ＰＡＧＥ分析結果を示す。レーン２には、タンパク質マーカー（ＭＷマーカー２６６１９）が、レーン１には、還元されたＥｒｂ−（ｈｕＩＬ１０）２−６−９ヘテロ二量体タンパク質が、レーン３には、非還元Ｅｒｂ−（ｈｕＩＬ１０）２−６−９ヘテロ二量体タンパク質が装填された。Ｅｒｂ−ＬＣの分子量は、約２５ＫＤ、Ｅｒｂ−Ｆｃ９の分子量は、約５０ＫＤ、（ｈｕＩＬ１０）２−Ｆｃ６の分子量は、約６５ＫＤ、Ｅｒｂ−（ｈｕＩＬ１０）２−６−９ヘテロ二量体タンパク質の分子量は、約１４０ＫＤである。
【０５４２】
図２Ｆは、Ｔｍａｂ−ｈｕｓＩＬ２−６−９のＳＤＳ−ＰＡＧＥ分析結果を示す。レーン２には、タンパク質マーカー（ＭＷマーカー２６６１９）が、レーン１には、還元されたＴｍａｂ−ｈｕｓＩＬ２−６−９ヘテロ二量体タンパク質が、レーン３には、非還元Ｔｍａｂ−ｈｕｓＩＬ２−６−９ヘテロ二量体タンパク質が装填された。Ｔ−ＬＣの分子量は、約２５ＫＤ、Ｔ−Ｆｃ９の分子量は、約５０ＫＤ、ｈｕｓＩＬ２−Ｆｃ６の分子量は、約４１ＫＤ、Ｔｍａｂ−ｈｕｓＩＬ２−６−９ヘテロ二量体タンパク質の分子量は、約１１６ＫＤである。
【０５４３】
図２Ｇは、Ｅｒｂ−ｈｕＩＦＮａ２−６−９のＳＤＳ−ＰＡＧＥ分析結果を示す。レーン２には、タンパク質マーカー（ＭＷマーカー２６６１９）が、レーン１には、還元されたＥｒｂ−ｈｕＩＦＮａ２−６−９ヘテロ二量体タンパク質が、レーン３には、非還元Ｅｒｂ−ｈｕＩＦＮａ２−６−９ヘテロ二量体タンパク質が装填された。Ｅｒｂ−ＬＣの分子量は、約２５ＫＤ、Ｅｒｂ−Ｆｃ９の分子量は、約５０ＫＤ、ｈｕＩＦＮａ２−Ｆｃ６の分子量は、約４５ＫＤ、Ｅｒｂ−ｈｕＩＦＮａ２−６−９ヘテロ二量体タンパク質の分子量は、約１２０ＫＤである。
【０５４４】
同様のように、本発明に係る他のタンパク質性ヘテロ二量体の発現及び精製の結果も、ＳＤＳ−ＰＡＧＥにより検証・確認された。
【０５４５】
このように得たタンパク質性ヘテロ二量体を、（群１〜群７５それぞれ）Ｅｒｂ−（ｈｕＩＬ１０）２−ＫＨ、Ｅｒｂ−（ｈｕＩＬ１０）２−６−９、Ｅｒｂ−（ｈｕＩＬ１０）２−９−６、Ｅｒｂ−ｍｕＩＦＮａ４−６−９、Ｅｒｂ−ｈｕＩＦＮａ２−６−９、Ｅｒｂ−ｍｕＩＦＮｂ−６−９、Ｅｒｂ−ｈｕＩＦＮｂ−６−９、Ｅｒｂ−ｈｕＩＦＮＬ−６−９、Ｅｒｂ−ｈｕＩＬ１０−６−９、Ｅｒｂ−ｈｕｓＩＬ２−６−９、Ｅｒｂ−ｈｕｓＩＬ２−ＫＨ、Ｍａｂ８０６−ｍｕＩＦＮａ４−６−９、Ｍａｂ８０６−ｈｕＩＦＮａ２−６−９、Ｍａｂ８０６−ｍｕＩＦＮｂ−６−９、Ｍａｂ８０６−ｈｕＩＦＮｂ−６−９、Ｍａｂ８０６−ｈｕＩＦＮＬ−６−９、Ｍａｂ８０６−ｈｕＩＬ１０−６−９、Ｍａｂ８０６−ｈｕｓＩＬ２−６−９、Ｍａｂ８０６−（ｈｕＩＬ１０）２−６−９、Ｔｍａｂ−ｍｕＩＦＮａ４−６−９、Ｔｍａｂ−ｈｕＩＦＮａ２−６−９、Ｔｍａｂ−ｍｕＩＦＮｂ−６−９、Ｔｍａｂ−ｈｕＩＦＮｂ−６−９、Ｔｍａｂ−ｈｕＩＦＮＬ−６−９、Ｔｍａｂ−ｈｕＩＬ１０−６−９、Ｔｍａｂ−ｈｕｓＩＬ２−６−９、Ｔｍａｂ−（ｈｕＩＬ１０）２−６−９、Ｐｍａｂ−ｍｕＩＦＮａ４−６−９、Ｐｍａｂ−ｈｕＩＦＮａ２−６−９、Ｐｍａｂ−ｍｕＩＦＮｂ−６−９、Ｐｍａｂ−ｈｕＩＦＮｂ−６−９、Ｐｍａｂ−ｈｕＩＦＮＬ−６−９、Ｐｍａｂ−ｈｕＩＬ１０−６−９、Ｐｍａｂ−ｈｕｓＩＬ２−６−９、Ｐｍａｂ−（ｈｕＩＬ１０）２−６−９、Ｃ−ｍａｂ−ｍｕＩＦＮａ４−６−９、Ｃ−ｍａｂ−ｈｕＩＦＮａ２−６−９、Ｃ−ｍａｂ−ｍｕＩＦＮｂ−６−９、Ｃ−ｍａｂ−ｈｕＩＦＮｂ−６−９、Ｃ−ｍａｂ−ｈｕＩＦＮＬ−６−９、Ｃ−ｍａｂ−ｈｕＩＬ１０−６−９、Ｃ−ｍａｂ−ｈｕｓＩＬ２−６−９、Ｃ−ｍａｂ−（ｈｕＩＬ１０）２−６−９、２８Ｈ１−ｍｕＩＦＮａ４−６−９、２８Ｈ１−ｈｕＩＦＮａ２−６−９、２８Ｈ１−ｍｕＩＦＮｂ−６−９、２８Ｈ１−ｈｕＩＦＮｂ−６−９、２８Ｈ１−ｈｕＩＦＮＬ−６−９、２８Ｈ１−ｈｕＩＬ１０−６−９、２８Ｈ１−ｈｕｓＩＬ２−６−９、２８Ｈ１−（ｈｕＩＬ１０）２−６−９、５Ｅ５−ｍｕＩＦＮａ４−６−９、５Ｅ５−ｈｕＩＦＮａ２−６−９、５Ｅ５−ｍｕＩＦＮｂ−６−９、５Ｅ５−ｈｕＩＦＮｂ−６−９、５Ｅ５−ｈｕＩＦＮＬ−６−９、５Ｅ５−ｈｕＩＬ１０−６−９、５Ｅ５−ｈｕｓＩＬ２−６−９、５Ｅ５−（ｈｕＩＬ１０）２−６−９、Ｅ−ｍａｂ−ｍｕＩＦＮａ４−６−９、Ｅ−ｍａｂ−ｈｕＩＦＮａ２−６−９、Ｅ−ｍａｂ−ｍｕＩＦＮｂ−６−９、Ｅ−ｍａｂ−ｈｕＩＦＮｂ−６−９、Ｅ−ｍａｂ−ｈｕＩＦＮＬ−６−９、Ｅ−ｍａｂ−ｈｕＩＬ１０−６−９、Ｅ−ｍａｂ−ｈｕｓＩＬ２−６−９、Ｅ−ｍａｂ−（ｈｕＩＬ１０）２−６−９、Ａ−ｍａｂ−ｍｕＩＦＮａ４−６−９、Ａ−ｍａｂ−ｈｕＩＦＮａ２−６−９、Ａ−ｍａｂ−ｍｕＩＦＮｂ−６−９、Ａ−ｍａｂ−ｈｕＩＦＮｂ−６−９、Ａ−ｍａｂ−ｈｕＩＦＮＬ−６−９、Ａ−ｍａｂ−ｈｕＩＬ１０−６−９、Ａ−ｍａｂ−ｈｕｓＩＬ２−６−９及びＡ−ｍａｂ−（ｈｕＩＬ１０）２−６−９と命名した。
【０５４６】
実施例４：タンパク質性ヘテロ二量体の形成
【０５４７】
４．１  ヘテロ二量体Ｅｒｂ−（ｈｕＩＬ１０）２−６−９と参照タンパク質Ｅｒｂ−（ｈｕＩＬ１０）２−ＫＨとのヘテロ二量体形成の比較
トランスフェクト実施２日前、２×１００ｍＬ懸濁液で適応させた一過性トランスフェクション用のＨＥＫ２９３細胞（ＡＴＣＣ提供、ＣＲＬ−１５７３（登録商標））を調製し、０．８×１０６細胞／ｍＬの密度で細胞を接種した。２日後、細胞懸濁液を遠心分離して、１００ｍＬのＦｒｅｅｓｔｙｌｅ２９３培地に再懸濁させた。発現プラスミドを「Ｅｒｂ−（ｈｕＩＬ１０）２−６−９群」及び「Ｅｒｂ−（ｈｕＩＬ１０）２−ＫＨ群」と分け、Ｅｒｂ−（ｈｕＩＬ１０）２−６−９群は、ｐｃＤＮＡ４−Ｅｒｂ−Ｆｃ９（３３μｇ）＋ｐｃＤＮＡ４−Ｅｒｂ−ＬＣ（３３μｇ）＋ｐｃＤＮＡ４−（ｈｕＩＬ１０）２−Ｆｃ６（３３μｇ）を含有し、Ｅｒｂ−（ｈｕＩＬ１０）２−ＫＨ群は、ｐｃＤＮＡ４−Ｅｒｂ−ノブ（３３μｇ）＋ｐｃＤＮＡ４−Ｅｒｂ−ＬＣ（３３μｇ）＋ｐｃＤＮＡ４−（ｈｕＩＬ１０）２−Ｆｃ−ホール（３３μｇ）を含有する。各群のプラスミド混合物を１ｍＬのＦｒｅｅｓｔｙｌｅ２９３培地で希釈して、ＰＥＩ（ポリエチレンイミン）溶液を加えてトランスフェクトを行った。各群プラスミド／ＰＥＩ混合物をそれぞれ細胞懸濁液１００ｍＬに加えて、３７℃、１０％ＣＯ２、９０ｒｐｍにおいて培養し、培地に５０μｇ／ＬのＩＧＦ−１を補充した。４時間後に、培養物に１００ｍＬのＥＸ２９３培地、２ｍＭのグルタミン及び５０μｇ／ＬのＩＧＦ−１を補充して、１３５ｒｐｍにおいて培養した。２４時間後に、３．８ｍＭのＶＰＡを加えた。５〜６日後に、一過性発現による培養上清を回収し、プロテインＡアフィニティークロマトグラフィーを利用して対応するタンパク質性ヘテロ二量体を含有する発現産物を予備精製した。Ｅｒｂ−（ｈｕＩＬ１０）２−６−９群に由来する予備精製された発現産物は、それぞれ異なるパーセンテージで存在するホモ二量体タンパク質Ｅｒｂ−Ｆｃ９／Ｅｒｂ−Ｆｃ９、ホモ二量体タンパク質（ｈｕＩＬ１０）２−Ｆｃ６／（ｈｕＩＬ１０）２−Ｆｃ６及びヘテロ二量体タンパク質Ｅｒｂ−Ｆｃ９／（ｈｕＩＬ１０）２−Ｆｃ６を含有する。Ｅｒｂ−（ｈｕＩＬ１０）２−ＫＨ群に由来する予備精製された発現産物は、それぞれ異なるパーセンテージで存在するホモ二量体タンパク質Ｅｒｂ−ノブ／Ｅｒｂ−ノブ、ホモ二量体タンパク質（ｈｕＩＬ１０）２−ホール／（ｈｕＩＬ１０）２−ホール及びヘテロ二量体タンパク質Ｅｒｂ−ノブ／（ｈｕＩＬ１０）２−ホールを含有する。これらのタンパク質（即ちホモ二量体及びヘテロ二量体）は、分子量が異なるため、図３に示すように、非還元ＳＤＳ−ＰＡＧＥゲルに反映された対応するバンド強度によりその対応するパーセンテージを決定することができる。レーン１には、抗体対照（エルビタックス）が、レーン２には、Ｅｒｂ−（ｈｕＩＬ１０）２−ＫＨ群の発現産物が、レーン３には、Ｅｒｂ−（ｈｕＩＬ１０）２−６−９群の発現産物が装填された。レーン４及びレーン６は、空白とし、レーン５には、標準タンパク質マーカーが装填された。相対的バンド強度を定量化し、結果を次の表７にまとめた。エルビタックス対照の強度は、９０．９％である。
【０５４８】
【表７】
2020527939.tif 000044
【０５４９】
従って、ノブアンドホール修飾を含有する対応するタンパク質性ヘテロ二量体と比較して、本開示に係るタンパク質性ヘテロ二量体に含有される修飾は、ヘテロ二量体の形成をより効果的に促進させる。
【０５５０】
４．２  ヘテロ二量体Ｅｒｂ−ｈｕｓＩＬ２−６−９と参照タンパク質Ｅｒｂ−ｈｕｓＩＬ２−ＫＨとのヘテロ二量体形成の比較
【０５５１】
トランスフェクト実施２日前、２×１００ｍＬの懸濁液で適応させた一過性トランスフェクション用ＨＥＫ２９３細胞（ＡＴＣＣ提供、ＣＲＬ−１５７３（登録商標））を調製し、０．８×１０６細胞／ｍＬの密度で細胞を接種した。２日後、細胞懸濁液を遠心分離して、１００ｍＬのＦｒｅｅｓｔｙｌｅ２９３培地に再懸濁させた。発現プラスミドを「Ｅｒｂ−ｈｕｓＩＬ２−６−９群」及び「Ｅｒｂ−ｈｕｓＩＬ２−ＫＨ群」と分け、Ｅｒｂ−ｈｕｓＩＬ２−６−９群は、ｐｃＤＮＡ４−Ｅｒｂ−Ｆｃ９（３３μｇ）＋ｐｃＤＮＡ４−Ｅｒｂ−ＬＣ（３３μｇ）＋ｐｃＤＮＡ４−ｈｕｓＩＬ２−Ｆｃ６（３３μｇ）を含有し、Ｅｒｂ−ｈｕｓＩＬ２−ＫＨ群は、ｐｃＤＮＡ４−Ｅｒｂ−ノブ（３３μｇ）＋ｐｃＤＮＡ４−Ｅｒｂ−ＬＣ（３３μｇ）＋ｐｃＤＮＡ４−ｈｕｓＩＬ２−Ｆｃ−ホール（３３μｇ）を含有する。各群のプラスミド混合物を１ｍＬのＦｒｅｅｓｔｙｌｅ２９３培地で希釈して、ＰＥＩ（ポリエチレンイミン）溶液を加えてトランスフェクトを行った。各群プラスミド／ＰＥＩ混合物をそれぞれ１００ｍＬの細胞懸濁液に加えて、３７℃、１０％ＣＯ２、９０ｒｐｍにおいて培養し、培地に５０μｇ／ＬのＩＧＦ−１を補充した。４時間後に、培養物にＥＸ２９３培地１００ｍＬ、２ｍＭのグルタミン及び５０μｇ／ＬのＩＧＦ−１を補充して、１３５ｒｐｍにおいて培養した。２４時間後に、３．８ｍＭのＶＰＡを加えた。５〜６日後に、一過性発現による培養上清を回収し、プロテインＡアフィニティークロマトグラフィーを利用して対応するタンパク質性ヘテロ二量体を含有する発現産物を予備精製した。Ｅｒｂ−ｈｕｓＩＬ２−６−９群に由来する予備精製された発現産物は、それぞれ異なるパーセンテージで存在するホモ二量体タンパク質Ｅｒｂ−Ｆｃ９／Ｅｒｂ−Ｆｃ９、ホモ二量体タンパク質ｈｕｓＩＬ２−Ｆｃ６／ｈｕｓＩＬ２−Ｆｃ６及びヘテロ二量体タンパク質Ｅｒｂ−Ｆｃ９／ｈｕｓＩＬ２−Ｆｃ６を含有する。Ｅｒｂ−ｈｕｓＩＬ２−ＫＨ群に由来する予備精製された発現産物は、異なるパーセンテージで存在するホモ二量体タンパク質Ｅｒｂ−ノブ／Ｅｒｂ−ノブ、ホモ二量体タンパク質ｈｕｓＩＬ２−ホール／ｈｕｓＩＬ２−ホール及びヘテロ二量体タンパク質Ｅｒｂ−ノブ／ｈｕｓＩＬ２−ホールを含有す。これらのタンパク質（即ちホモ二量体及びヘテロ二量体）は、分子量が異なるため、図３に示すように、非還元ＳＤＳ−ＰＡＧＥゲルに反映された対応するバンド強度によりその対応するパーセンテージを決定することができる。レーン７には、抗体対照（エルビタックス）が、レーン８には、Ｅｒｂ−ｈｕｓＩＬ２−ＫＨ群の発現産物が、レーン９には、Ｅｒｂ−ｈｕｓＩＬ２−６−９群の発現産物が装填された。レーン４及びレーン６は、空白とし、レーン５には、標準タンパク質マーカーが装填された。相対的バンド強度を定量化し、結果を次の表８にまとめた。エルビタックス対照の強度は、９０．３％である。
【０５５２】
【表８】
2020527939.tif 000045
【０５５３】
従って、ノブアンドホール修飾を含有する対応するタンパク質性ヘテロ二量体と比較して、本開示に係るタンパク質性ヘテロ二量体に含有された修飾は、ヘテロ二量体の形成をより効果的に促進させる。
【０５５４】
実施例５：異なる修飾を有する発現産物の比較
実施例４から分かるように、ノブアンドホール修飾を含有する対応するタンパク質性ヘテロ二量体と比較して、本開示に係るタンパク質性ヘテロ二量体に含有された修飾は、ヘテロ二量体の形成をより効果的に促進させる。
【０５５５】
第１の修飾及び第２の修飾の作用をさらに検出するために、実施例３に記載のとおり、次に示す群の発現産物を比較した。
群２：ｐｃＤＮＡ４−Ｅｒｂ−Ｆｃ６＋ｐｃＤＮＡ４−Ｅｒｂ−ＬＣ＋ｐｃＤＮＡ４−（ｈｕＩＬ１０）２−Ｆｃ９、及び
群３：ｐｃＤＮＡ４−Ｅｒｂ−Ｆｃ９＋ｐｃＤＮＡ４−Ｅｒｂ−ＬＣ＋ｐｃＤＮＡ４−（ｈｕＩＬ１０）２−Ｆｃ６。
【０５５６】
簡単に説明すると、トランスフェクト実施２日前、２×１００ｍＬの懸濁液で適応させた一過性トランスフェクション用ＨＥＫ２９３細胞（ＡＴＣＣ提供、ＣＲＬ−１５７３（登録商標））を調製し、０．８×１０６細胞／ｍＬの密度で細胞を接種した。２日後、細胞懸濁液を遠心分離して、１００ｍＬのＦｒｅｅｓｔｙｌｅ２９３培地に再懸濁させた。発現プラスミドを「Ｅｒｂ−（ｈｕＩＬ１０）２−６−９群」及び「Ｅｒｂ−（ｈｕＩＬ１０）２−９−６群」と分け、Ｅｒｂ−（ｈｕＩＬ１０）２−６−９群は、ｐｃＤＮＡ４−Ｅｒｂ−ＦＣ９（３３μｇ）＋ｐｃＤＮＡ４−ＥＲＢ−ＬＣ（３３μｇ）＋ｐｃＤＮＡ４−（ｈｕＩＬ１０）２−ＦＣ６（３３μｇ）を含有し、Ｅｒｂ−（ｈｕＩＬ１０）２−９−６群は、ｐｃＤＮＡ４−Ｅｒｂ−Ｆｃ６（３３μｇ）＋ｐｃＤＮＡ４−Ｅｒｂ−ＬＣ（３３μｇ）＋ｐｃＤＮＡ４−（ｈｕＩＬ１０）２−Ｆｃ９（３３μｇ）を含有する。各群のプラスミド混合物を１ｍＬのＦｒｅｅｓｔｙｌｅ２９３培地で希釈して、ＰＥＩ（ポリエチレンイミン）溶液を加えてトランスフェクトを行った。各群プラスミド／ＰＥＩ混合物をそれぞれ１００ｍＬの細胞懸濁液に加えて、３７℃、１０％ＣＯ２、９０ｒｐｍにおいて培養し、培地に５０μｇ／ＬのＩＧＦ−１を補充した。４時間後に、培養物にＥＸ２９３培地１００ｍＬ、２ｍＭのグルタミン及び５０μｇ／ＬのＩＧＦ−１を補充して、１３５ｒｐｍにおいて培養した。２４時間後に、３．８ｍＭのＶＰＡを加えた。５〜６日後に、一過性発現による培養上清を回収し、プロテインＡアフィニティークロマトグラフィーを利用して対応するタンパク質性ヘテロ二量体を含有する発現産物を予備精製した。Ｅｒｂ−（ｈｕＩＬ１０）２−６−９群に由来する予備精製された発現産物は、それぞれ異なるパーセンテージで存在するホモ二量体タンパク質Ｅｒｂ−Ｆｃ９／Ｅｒｂ−Ｆｃ９（即ちＦｃ９ホモ二量体）、ホモ二量体タンパク質（ｈｕＩＬ１０）２−Ｆｃ６／（ｈｕＩＬ１０）２−Ｆｃ６（即ちＦｃ６ホモ二量体）及びヘテロ二量体タンパク質Ｅｒｂ−Ｆｃ９／（ｈｕＩＬ１０）２−Ｆｃ６を含有する。Ｅｒｂ−（ｈｕＩＬ１０）２−９−６群に由来する予備精製された発現産物は、それぞれ異なるパーセンテージで存在するホモ二量体タンパク質Ｅｒｂ−Ｆｃ６／Ｅｒｂ−Ｆｃ６（即ちＦｃ６ホモ二量体）、ホモ二量体タンパク質（ｈｕＩＬ１０）２−Ｆｃ９／（ｈｕＩＬ１０）２−Ｆｃ９（即ちＦｃ９ホモ二量体）及びヘテロ二量体タンパク質Ｅｒｂ−Ｆｃ６／（ｈｕＩＬ１０）２−Ｆｃ９を含有する。これらのタンパク質（即ちホモ二量体及びヘテロ二量体）は、分子量が異なるため、図４に示すように、非還元ＳＤＳ−ＰＡＧＥゲルに反映された対応するバンド強度によりその対応するパーセンテージを決定することができる。レーン１には、標準タンパク質マーカーが、レーン２には、Ｅｒｂ−（ｈｕＩＬ１０）２−６−９群の発現産物が、レーン３には、Ｅｒｂ−（ｈｕＩＬ１０）２−９−６群の発現産物が装填された。図４から分かるように、レーン２において、約８５ＫＤのバンドに示されるように（Ｅｒｂ−Ｆｃ９／Ｅｒｂ−Ｆｃ９ホモ二量体は、非常に不安定で、分子量が約８５ＫＤの単量体に解離しやすい）、形成さ���たホモ二量体（即ちタンパク質混合物中の望ましくない不純物）の大半は、Ｅｒｂ−Ｆｃ９／Ｅｒｂ−Ｆｃ９ホモ二量体（即ちＦｃ９ホモ二量体）である。興味深いことに、レーン３において、５０ＫＤ〜８５ＫＤの間のバンドに示されるように（（ｈｕＩＬ１０）２−Ｆｃ９／（ｈｕＩＬ１０）２−Ｆｃ９ホモ二量体は、非常に不安定で、分子量が５０ＫＤ〜８５ＫＤの単量体に解離しやすい）、形成されたホモ二量体（即ちタンパク質混合物中の望ましくない不純物）の大半は、（ｈｕＩＬ１０）２−Ｆｃ９／（ｈｕＩＬ１０）２−Ｆｃ９ホモ二量体（即ちＦｃ９ホモ二量体）である。従って、Ｅｒｂ−Ｆｃ９／Ｅｒｂ−Ｆｃ９ホモ二量体の形成は、Ｅｒｂ部分ではなくＦｃ９部分によるという傾向にある。
【０５５７】
従って、Ｆｃ９領域を含有するタンパク質性ヘテロ二量体の成員は、望ましくないホモ二量体不純物の形成につながる。そのため、本開示に係るタンパク質性ヘテロ二量体において、免疫調節物質（例えば、サイトカイン）をＦｃ９ドメイン（即ち第１のＦｃ領域）ではなくＦｃ６ドメイン（即ち第２のＦｃ領域）と融合させると有利である。
【０５５８】
実施例６：タンパク質性ヘテロ二量体と対応する標的との結合
【０５５９】
６．１  Ｅｒｂ−インターフェロンタンパク質性ヘテロ二量体とＥＧＦＲとの結合
ヒト扁平上皮癌Ａ４３１細胞株を使用して、Ｅｒｂ−インターフェロンタンパク質性ヘテロ二量体とＥＧＦＲとの結合を検出した。本開示に係るＥｒｂ−インターフェロンタンパク質性ヘテロ二量体（又は対照Ｅｒｂ抗体（エルビタックス、メルク社提供））及び抗ヒトＩｇＧ  Ｆｃ特異性ＰＥ（ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ：１２−４９９８−８２）二次抗体を連続希釈したものを細胞に順に加えて、フローサイトメトリー分析を行い、タンパク質濃度及びＰＥチャネルに由来する中程度の蛍光強度（ＭＦＩ）により用量−効果曲線を描画した。図５に示すように、タンパク質性ヘテロ二量体Ｅｒｂ−ｈｕＩＦＮａ２−６−９は、対照抗体セツキシマブ（エルビタックス）と類似する方式で標的ＥＧＦＲと特異的に結合した。タンパク質性ヘテロ二量体は、１つのＥＧＦＲ結合部分だけを含有するため、そのＥＣ５０は、２つのＥＧＦＲ結合部分を含有する対照抗体セツキシマブのＥＣ５０より高い。
【０５６０】
また、バイオレイヤー干渉法（ＢＬＩ）により、対照抗体セツキシマブと比較して、Ｅｒｂ−ｈｕＩＦＮａ２−６−９のその標的ＥＧＦＲに対する結合親和性を検出した。Ｏｃｔｅｃｔ  Ｋ２を使用して実験を行った。プロテインＡバイオセンサ及びＥＧＦＲ−Ｈｉｓタンパク質を使用した。図６は、Ｅｒｂ−ｈｕＩＦＮａ２−６−９及びセツキシマブそれぞれのＥＧＦＲ−Ｈｉｓに対する結合親和性を示す。結果により、Ｅｒｂ−ｈｕＩＦＮａ２−６−９のＥＧＦＲ−Ｈｉｓに対する結合親和性は、対照抗体セツキシマブの結合親和性と有意差がないことが判明された。
【０５６１】
６．２  Ｅｒｂ−インターロイキンタンパク質性ヘテロ二量体とＥＧＦＲとの結合
ヒト扁平上皮癌Ａ４３１細胞株を使用して、Ｅｒｂ−インターロイキンタンパク質性ヘテロ二量体とＥＧＦＲとの結合を検出した。本開示に係るＥｒｂ−インターロイキンタンパク質性ヘテロ二量体（又は対照Ｅｒｂ抗体（エルビタックス、メルク社提供））及び抗ヒトＩｇＧ  Ｆｃ特異性ＰＥ（ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ：１２−４９９８−８２）二次抗体を連続希釈したものを細胞に加えて、フローサイトメトリー分析を行い、タンパク質濃度及びＰＥチャネルに由来する中程度の蛍光強度（ＭＦＩ）により用量−効果曲線を描画した。図５に示すように、タンパク質性ヘテロ二量体Ｅｒｂ−（ｈｕＩＬ１０）２−６−９は、対照抗体セツキシマブ類似する方式で標的ＥＧＦＲと特異的に結合した。タンパク質性ヘテロ二量体は、１つのＥＧＦＲ結合部分だけを含有するため、そのＥＣ５０は、２つのＥＧＦＲ結合部分を含有する対照抗体セツキシマブのＥＣ５０より高い。
【０５６２】
また、バイオレイヤー干渉法（ＢＬＩ）により、対照抗体セツキシマブと比較して、Ｅｒｂ−（ｈｕＩＬ１０）２−６−９のその標的ＥＧＦＲに対する結合親和性を検出した。Ｏｃｔｅｃｔ  Ｋ２を使用して実験を行った。プロテインＡバイオセンサ及びＥＧＦＲ−Ｈｉｓタンパク質を使用した。Ｅｒｂ−（ｈｕＩＬ１０）２−６−９及びセツキシマブそれぞれのＥＧＦＲ−Ｈｉｓに対する結合親和性を図６に示す。結果により、Ｅｒｂ−（ｈｕＩＬ１０）２−６−９−９のＥＧＦＲ−Ｈｉｓに対する結合親和性は、対照セツキシマブの結合親和性と有意差がないことが判明された。
【０５６３】
６．３  Ｍａｂ８０６−インターフェロン及びＭａｂ８０６−インターロイキンタンパク質性ヘテロ二量体とＥＧＦＲとの結合
ヒトＥＧＦＲｖＩＩＩを安定的に発現させるマウス大腸癌細胞株（即ちＭＣ３８細胞株）を使用してＭａｂ８０６−ｈｕＩＦＮａ２−６−９及びＭａｂ８０６−（ｈｕＩＬ１０）２−６−９とＥＧＦＲＶＩＩＩとの結合を検出した。Ｍａｂ８０６は、ＥＧＦＲｖＩＩＩ変異体と結合する抗体であるが、低親和性で野生型ＥＧＦＲとも結合する。フローサイトメトリーを行って、結果を図７に示す。図７により、Ｍａｂ８０６−ｈｕＩＦＮａ２−６−９及びＭａｂ８０６−（ｈｕＩＬ１０）２−６−９は、ＭＣ３８細胞に発現されたＥＧＦＲｖＩＩＩと結合したことが判明された。
【０５６４】
６．４  Ｔｍａｂ−インターロイキンタンパク質性ヘテロ二量体とＨｅｒ２との結合
同様のように、ヒトＨｅｒ２を安定的に発現させるマウス大腸癌細胞株（即ちＭＣ３８細胞株）及びヒトＨｅｒ２を安定的に発現させる黒色腫細胞株（即ちＢ１６細胞株）を使用して実験を行って、Ｔｍａｂ−（ｈｕＩＬ１０）２−６−９ヘテロ二量体とＨｅｒ２との結合を検出した。結果をそれぞれ図８の（Ａ）（ＭＣ３８細胞）及び（Ｂ）（Ｂ１６細胞）に示す。図８により、Ｔｍａｂ−（ｈｕＩＬ１０）２−６−９は、ＭＣ３８又はＢ１６細胞に発現されたＨｅｒ２と結合したことが判明された。Ｐｍａｂ−インターロイキンタンパク質性ヘテロ二量体（例えば、Ｐｍａｂ−（ｈｕＩＬ１０）２−６−９）において同様の結果を得た。
【０５６５】
６．５  Ｃ−ｍａｂ−インターフェロン及びＣ−ｍａｂ−インターロイキンタンパク質性ヘテロ二量体とＧＰＣ３との結合
ヒトＧＰＣ３を安定的に発現させるマウス大腸癌細胞株（ＭＣ３８細胞株）を使用して、Ｃ−ｍａｂ−ｈｕＩＦＮａ２−６−９及びＣ−ｍａｂ−（ｈｕＩＬ１０）２−６−９とＧＰＣ３との結合を検出した。フローサイトメトリーを行って、結果を図９に示す。図９により、Ｃ−ｍａｂ−ｈｕＩＦＮａ２−６−９及びＣ−ｍａｂ−（ｈｕＩＬ１０）２−６−９は、ＭＣ３８細胞に発現されたＧＰＣ３と結合したことが判明された。
【０５６６】
６．６  ２８Ｈ１インターフェロン及び２８Ｈ１インターロイキンタンパク質性ヘテロ二量体とＦＡＰとの結合
ヒトＦＡＰを発現するマウス大腸癌細胞株（ＭＣ３８細胞株）を使用して、２８Ｈ１−ｈｕＩＦＮａ２−６−９及び２８Ｈ１−（ｈｕＩＬ１０）２−６−９とＦＡＰとの結合を検出した。フローサイトメトリーを行って、結果を図１０に示す。図１０により、２８Ｈ１−ｈｕＩＦＮａ２−６−９及び２８Ｈ１−（ｈｕＩＬ１０）２−６−９は、ＭＣ３８細胞に発現されたＦＡＰと結合したことが判明された。
【０５６７】
６．７  ５Ｅ５−インターフェロン及び５Ｅ５−インターロイキンタンパク質性ヘテロ二量体とＭＵＣ１との結合
ヒトＭＵＣ１を発現するヒト乳癌細胞株（Ｔ−４７Ｄ細胞株）を使用して、５Ｅ５−ｈｕＩＦＮａ２−６−９及び５Ｅ５−（ｈｕＩＬ１０）２−６−９とＭＵＣ１との結合を検出した。フローサイトメトリーを行って、結果を図２１に示す。図２１により、５Ｅ５−ｈｕＩＦＮａ２−６−９及び５Ｅ５−（ｈｕＩＬ１０）２−６−９は、Ｔ−４７Ｄ細胞に発現されたＭＵＣ１と結合したことが判明された。
【０５６８】
６．８  エンシツキシマブ−インターフェロン及びエンシツキシマブ−インターロイキンタンパク質性ヘテロ二量体とＭＵＣ５ＡＣとの結合
ヒトＭＵＣ５ＡＣを発現するヒト膵臓癌細胞株（ＣＦＰＡＣ−１細胞株）を使用して、Ｅ−ｍａｂ−ｈｕＩＦＮａ２−６−９及びＥ−ｍａｂ−（ｈｕＩＬ１０）２−６−９とＭＵＣ５ＡＣとの結合を検出した。フローサイトメトリーを行って、結果を図２２に示す。図２２により、Ｅ−ｍａｂ−ｈｕＩＦＮａ２−６−９及びＥ−ｍａｂ−（ｈｕＩＬ１０）２−６−９とＣＦＰＡＣ−１細胞に発現されたＭＵＣ５ＡＣとの結合は、強くないことが判明された。Ｅ−ｍａｂは、特定のタンパク質糖型と強く結合するという周知の事実より、その原因は、腫瘍組織においてインサイチュで発見された特定のタンパク質糖型の潜在的な発現不足によるものと考えられる。
【０５６９】
６．９  アマツキシマブ−インターフェロン及びアマツキシマブ−インターロイキンタンパク質性ヘテロ二量体とメソセリンとの結合
ヒトメソセリンを発現するヒト胃癌細胞株（ＮＣＩ−Ｎ８７細胞株）を使用して、Ａ−ｍａｂ−ｈｕＩＦＮａ２−６−９及びＡ−ｍａｂ−（ｈｕＩＬ１０）２−６−９とメソセリンとの結合を検出した。フローサイトメトリーを行って、結果を図２３に示す。図２３により、Ａ−ｍａｂ−ｈｕＩＦＮａ２−６−９及びＡ−ｍａｂ−（ｈｕＩＬ１０）２−６−９は、ＮＣＩ−Ｎ８７細胞に発現されたメソセリンと結合したことが判明された。
【０５７０】
実施例７：タンパク質性ヘテロ二量体における免疫調節物質の存在及びその生理活性
【０５７１】
７．１  本開示に係るタンパク質性ヘテロ二量体におけるインターフェロンの存在及びその生理活性
ＥＬＩＳＡによりヘテロ二量体Ｅｒｂ−ｈｕＩＦＮａ２−６−９におけるｈｕＩＦＮａ２の存在を確認し、結果を図１１に示す。簡単に説明すると、緩衝液（５０ｍＭのＮａ２ＣＯ３／ＮａＨＣＯ３、ｐＨ９．６）に溶解した２μｇ／ｍｌのＥＧＦＲ−ｈｕＦｃでＥＬＩＳＡプレートをコーティングさせて、４℃で一晩静置した。０．０５％（Ｖ／Ｖ）のポリソルベート−２０を含有するＰＢＳＴ（ｐＨ７．４）でプレートを３回洗浄し、３％のＢＳＡを含有するＰＢＳで１時間ブロッキングした後、連続希釈されたＥｒｂ−ｈｕＩＦＮａ２−６−９を加えて３７℃で２時間インキュベートした。次に、１μｇ／ｍｌの抗ｈｕＩＦＮα−ビオチンを加えて３７℃で１時間インキュベートした。続いて、１：１０００に希釈されたＳＡ−ＨＲＰを加え、３７℃で４０分間インキュベートした。ＴＭＢ（ＴＩＡＮＧＥＮ社提供、カタログ番号ＰＡ１０７−０１、ロット番号１６１４）基質を使用して結合を検出し、２ＭのＨ２ＳＯ４で停止させた。モレキュラーデバイス社のＳｐｅｃｔｒａＭａｘ  Ｐｌｕｓ−３８４型マイクロプレートリーダーで、４５０〜６５０ｎｍにおける吸光度を検出した。コンピュータープログラムＳｏｆｔＭａｘ  Ｐｒｏ５．４を用いて濃度を決定した。
【０５７２】
ＥＧＦＰ（強化緑色蛍光タンパク質）で標識した水疱性口内炎ウイルス（ＶＳＶ）を使用して、マウス線維芽細胞株Ｌ９２９又はヒト肝癌細胞株ＨｅｐＧ２を感染することにより、細胞の抗ウイルス増強能力におけるインターフェロンの活性を検出した。ｍｕＩＦＮａ４、ｍｕＩＦＮｂ及びｈｕＩＦＮａ２の活性をそれぞれ検出した。簡単に説明すると、連続希釈された、本開示に係るタンパク質性ヘテロ二量体の存在下で細胞を８時間培養して、ＶＳＶ−ＥＧＦＰで感染された適切な数量の細胞を加えた。２４時間後に、フローサイトメトリー分析により感染細胞のパーセンテージを決定し、タンパク質性ヘテロ二量体のウイルス感染に対する保護率を算出した。次に、保護率及びタンパク質性ヘテロ二量体濃度の用量−効果曲線よりＥＣ５０を得た。図１３より分かるように、ヘテロ二量体Ｅｒｂ−ｍｕＩＦＮａ４−６−９（Ａ）、Ｅｒｂ−ｍｕＩＦＮｂ−６−９（Ｂ）及びＥｒｂ−ｈｕＩＦＮａ２−６−９（Ｃ）は、細胞をウイルス感染から保護していた。
【０５７３】
７．２  本開示に係るタンパク質性ヘテロ二量体におけるインターロイキンの存在及びその生理活性
ＥＬＩＳＡによりヘテロ二量体Ｅｒｂ−（ｈｕＩＬ１０）２−６−９におけるｈｕＩＬ１０の存在を確認し、結果を図１２に示す。簡単に説明すると、緩衝液（５０ｍＭのＮａ２ＣＯ３／ＮａＨＣＯ３、ｐＨ９．６）に溶解した５μｇ／ｍｌの抗ヒトＩＬ１０（バイオレジェンド社提供、ロット番号：Ｂ１７９９４８）でＥＬＩＳＡプレートをコーティングさせて、４℃で一晩静置した。０．０５％（Ｖ／Ｖ）のポリソルベート−２０を含有するＰＢＳＴ（ｐＨ７．４）でプレートを３回洗浄し、３％のＢＳＡを含有するＰＢＳで１時間ブロッキングした後、２０００ｎｇ／ｍｌより２倍連続希釈されたＥｒｂ−（ｈｕＩＬ１０）２−６−９を加えて３７℃で２時間インキュベートした。次に、２μｇ／ｍｌのＥＧＦＲ−Ｆｃ−ビオチンを加えて３７℃で１時間インキュベートした。次に、１：１０００に希釈されたＳＡ−ＨＲＰを加え、３７℃で４０分間インキュベートした。ＴＭＢ（ＴＩＡＮＧＥＮ社提供、カタログ番号ＰＡ１０７−０１、ロット番号１６１４）基質を使用して結合を検出し、２ＭのＨ２ＳＯ４で停止させた。モレキュラーデバイス社のＳｐｅｃｔｒａＭａｘ  Ｐｌｕｓ−３８４型マイクロプレートリーダーで、４５０〜６５０ｎｍにおける吸光度を検出した。コンピュータープログラムＳｏｆｔＭａｘ  Ｐｒｏ５．４を用いて濃度を決定した。
【０５７４】
インターロイキンは、リポ多糖（ＬＰＳ）の刺激によるマクロファージのＴＮＦ−α放出を阻害できる（参照文献：Ｄａｖｉｄ  Ｆ．  ｅｔ  ａｌ．，  １９９１，Ｔｈｅ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ．  Ｖｏｌ．  １４７．３８１５−３８２２）。本開示に係るタンパク質性ヘテロ二量体におけるインターロイキンの当該活性をテストするために、ヒト末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）を９６ウェルプレートに接種し、３〜４時間後に懸濁された細胞を洗い流した。次に、種々の濃度の、本開示に係るＥｒｂ−（ｈｕＩＬ１０）２−６−９、Ｍａｂ８０６−（ｈｕＩＬ１０）２−６−９及びＴｍａｂ−（ｈｕＩＬ１０）２−６−９を加え、２時間後に２μｇ／ｍｌのＬＰＳを加えて２４時間刺激した。上清を回収し、ＥＬＩＳＡによりＴＮＦ−αの放出を検出した。ＴＮＦ−αキット（ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ，  ８８−７３４６）に添付の取扱い説明に従ってＥＬＩＳＡを行った。簡単に説明すると、コーティング緩衝液で捕捉抗体を希釈して、Ｃｏｓｔａｒ  ９０１８  ＥＬＩＳＡプレートをコーティングした。次に、標準品及び適切に希釈されたいくつかの試料を加えた。次に、検出抗体を使用して反応を検出し、ＴＭＢで現像させた。結果を図１４に示す。図１４Ａから分かるように、Ｅｒｂ−（ｈｕＩＬ１０）２−６−９は、用量依存的方式でＴＮＦ−αの放出を阻害していた。図１４Ｂにより、本開示に係るＭａｂ８０６−（ｈｕＩＬ１０）２−６−９及びＴｍａｂ−（ｈｕＩＬ１０）２−６−９も、用量依存的方式でＴＮＦ−αの放出を効果的に阻害したことが判明された。
【０５７５】
実施例８：タンパク質性ヘテロ二量体の抗腫瘍活性
【０５７６】
８．１  本開示に係るＥｒｂ−インターフェロンヘテロ二量体の抗腫瘍活性
Ｃ５７  ＢＬ／６野生型マウスモデルを用いて、Ｅｒｂ−ｍｕＩＦＮａ４−６−９ヘテロ二量体のインビボ抗腫瘍活性をテストした。簡単に説明すると、８週齢の雌Ｃ５７  ＢＬ／６マウスに７×１０５のＢ１６−ＥＧＦＲ（図１５Ａ）又は１×１０６のＭＣ３８−ＥＧＦＲ（図１５Ｂ）細胞を皮下注射した。７日後、腫瘍体積を測定して約７０ｍｍ３であった。Ｅｒｂ−ｍｕＩＦＮａ４−６−９ヘテロ二量体又は対照抗体セツキシマブ（エルビタックス、メルク社提供）を腹腔内（ｉ．ｐ．）注射した。Ｅｒｂ−ｍｕＩＦＮａ４−６−９ヘテロ二量体をそれぞれ２ｍｇ／ｋｇ及び０．５ｍｇ／ｋｇで注射し、セツキシマブの用量は、２ｍｇ／ｋｇとした。週に２回腫瘍のサイズを測定し、腫瘍体積を算出して腫瘍成長曲線を得た。結果を図１５に示す。Ｅｒｂ−ｍｕＩＦＮａ４−６−９ヘテロ二量体は、各用量において、いずれもインビボで腫瘍体積を効果的に減少させたことが判明された。
【０５７７】
８．２  本開示に係るＥｒｂ−インターロイキンヘテロ二量体の抗腫瘍活性
実施例８．１と同様のように、Ｃ５７ＢＬ／６マウスモデルを用いて、Ｅｒｂ−（ｈｕＩＬ１０）２−６−９のインビボ抗腫瘍活性をテストした。簡単に説明すると、８週齢の雌Ｃ５７  ＢＬ／６マウスに７×１０５のＢ１６−ＥＧＦＲ細胞（図１６Ａ）又は１×１０６のＭＣ３８−ＥＧＦＲ細胞（図１６Ｂ）を皮下注射した。７日後、腫瘍体積を測定して約７０ｍｍ３であった。Ｅｒｂ−（ｈｕＩＬ１０）２−６−９ヘテロ二量体又は対照抗体セツキシマブ（エルビタックス、メルク社提供）を１回腹腔内（ｉ．ｐ．）注射した。それぞれ２種の異なる用量（それぞれ１ｍｇ／ｋｇ及び４ｍｇ／ｋｇ）でＥｒｂ−（ｈｕＩＬ１０）２−６−９ヘテロ二量体を注射し、セツキシマブの用量は、４ｍｇ／ｋｇとした。週に２回腫瘍のサイズを測定し、腫瘍体積を算出して腫瘍成長曲線を得た。結果を図１６Ａ及び１６Ｂに示す。
【０５７８】
同様のように、Ｂａｌｂ／ｃマウスの右脇腹に５×１０５のＴｕｂｏ−ＥＧＦＲを皮下接種した。７日目、１０日目、１４日目に、２種の異なる用量（それぞれ１ｍｇ／ｋｇ及び４ｍｇ／ｋｇ）で、Ｅｒｂ−（ｈｕＩＬ１０）２−６−９ヘテロ二量体を３回腹腔内注射してマウスを処置した。図１６Ｃにより、Ｅｒｂ−（ｈｕＩＬ１０）２−６−９は、用量依存的方式でインビボにおいて腫瘍体積を効果的に減少させたことが判明された。
【０５７９】
８．３  本開示に係る他のタンパク質性ヘテロ二量体の抗腫瘍活性
実施例８．１と同様のように、Ｃ５７ＢＬ／６マウスモデルを用いて、Ｅｒｂ−ｈｕｓＩＬ２−６−９のインビボ抗腫瘍活性をテストした。簡単に説明すると、８週齢の雌Ｃ５７  ＢＬ／６マウスに７×１０５のＢ１６−ＥＧＦＲを皮下注射した。７日後、腫瘍体積を測定して約７０ｍｍ３であった。３日ごとに、２ｍｇ／ｋｇでＥｒｂ−ｈｕｓＩＬ２−６−９ヘテロ二量体又はＰＢＳを、合計で５回腹腔内注射（ｉ．ｐ．）した。週に２回腫瘍のサイズを測定し、腫瘍体積を算出して腫瘍成長曲線を得た。結果を図１７に示す。Ｅｒｂ−ｈｕｓＩＬ２−６−９ヘテロ二量体は、インビボで腫瘍体積を効果的に減少させことが判明された。
【０５８０】
また、Ｃ５７  ＢＬ／６マウスモデルを用いて、Ｔｍａｂ−（ｈｕＩＬ１０）２−６−９ヘテロ二量体のインビボ抗腫瘍活性をテストした。簡単に説明すると、８週齢の雌Ｃ５７  ＢＬ／６マウスに５×１０５のＢ１６−Ｈｅｒ２（図１８Ａ）又は５×１０５のＭＣ３８−Ｈｅｒ２細胞（図１８Ｂ）を皮下注射した。７日後、腫瘍の体積を測定して約７０ｍｍ３であった。７日目、１０日目及び１４日目に、異なる用量（それぞれ８ｍｇ／ｋｇ、４ｍｇ／ｋｇ、２ｍｇ／ｋｇ及び１ｍｇ／ｋｇ）でＴｍａｂ−（ｈｕＩＬ１０）２−６−９ヘテロ二量体タンパク質又はＰＢＳを腹腔内注射（ｉ．ｐ．）した。週に２回腫瘍のサイズを測定し、腫瘍体積を算出して腫瘍成長曲線を得た。結果を図１８Ａ及び１８Ｂに示す。Ｔｍａｂ−（ｈｕＩＬ１０）２−６−９ヘテロ二量体は、各用量において、インビボで腫瘍体積を効果的に減少させたことが判明された。
【０５８１】
同様のように、ＭＣ３８−ＧＰＣ３、ＭＣ３８−ＦＡＰ、Ｂ１６−ＧＰＣ３及びＢ１６−ＦＡＰ同系腫瘍モデルにおいて、Ｃ−ｍａｂ−（ｈｕＩＬ１０）２−６−９、２８Ｈ１−（ｈｕＩＬ１０）２−６−９及び２８Ｈ１−ｈｕＩＦＮａ２−６−９ヘテロ二量体の抗腫瘍活性をテストして、有意な抗腫瘍効果を観察した。
【０５８２】
具体的には、膵臓癌モデル（インビトロ微小器官培養系）において、２８Ｈ１−ｈｕＩＦＮａ２−６−９の抗腫瘍活性をテストして、腫瘍成長への阻害を観察した。
【０５８３】
また、Ｂ１６−ＦＡＰ同系腫瘍モデルを用いて２８Ｈ１−（ｈｕＩＬ１０）２−６−９ヘテロ二量体のインビボ抗腫瘍活性を検出した。簡単に説明すると、８週齢の雌Ｃ５７  ＢＬ／６マウスに７×１０５のＢ１６−ＦＡＰ−５細胞を皮下注射した。７日後、腫瘍体積を測定して約７０〜１００ｍｍ３であった。７日目、１０日目及び１３日目に、２８Ｈ１−（ｈｕＩＬ１０）２−６−９ヘテロ二量体タンパク質、２８Ｈ１抗体対照又はＩｇＧ１アイソタイプ対照を４ｍｇ／ｋｇで腹腔内注射（ｉ．ｐ．）した。５日ごとに腫瘍サイズを測定し、腫瘍体積を算出して腫瘍成長曲線を得た。結果を図２４に示す。２８Ｈ１−（ｈｕＩＬ１０）２−６−９ヘテロ二量体は、インビボで腫瘍体積を効果的に減少させ、しかもＩｇＧ１アイソタイプ対照及び２８Ｈ１抗体対照よりも効果的であることが判明された。
【０５８４】
また、対応するヒト化ＰＤＸマウスモデルにおいて、Ｅｒｂ−（ｈｕＩＬ１０）２−６−９、Ｅｒｂ−ｍｕＩＦＮａ４−６−９、Ｃ−ｍａｂ−（ｈｕＩＬ１０）２−６−９、２８Ｈ１−（ｈｕＩＬ１０）２−６−９、２８Ｈ１−ｈｕＩＦＮａ２−６−９及びＥ−ｍａｂ−（ｈｕＩＬ１０）２−６−９のインビボ抗腫瘍活性をテストして、インビボ抗腫瘍効果を観察した。
【０５８５】
具体的には、ＰＤＸマウスモデルを用いて、Ｅｒｂ−（ｈｕＩＬ１０）２−６−９ヘテロ二量体のインビボ抗腫瘍活性をテストした。簡単に説明すると、８週齢の雌Ｈｕ−ＣＤ３４  ＮＳＧマウスに膵臓癌Ａ１５６６８  Ｐ４  ＰＤＸ腫瘍細胞を移植した。腫瘍体積を測定して約１００ｍｍ３になると、０日目（１回目の投与日）、３日目、６日目、９日目、１２日目及び１５日目に、Ｅｒｂ−（ｈｕＩＬ１０）２−６−９ヘテロ二量体タンパク質（０．２ｍｐｋ）又はアイソタイプ対照（クラウンバイオ社提供、ロット番号２０１７０８１６、１ｍｐｋ）を腹腔内注射（ｉ．ｐ．）した。２日ごとに腫瘍サイズを測定し、腫瘍体積を算出して腫瘍成長曲線を得た。結果を図２５に示す。ＰＤＸマウスモデルにおいて、Ｅｒｂ−（ｈｕＩＬ１０）２−６−９ヘテロ二量体は、インビボで腫瘍体積を効果的に減少させたことが判明された。
【０５８６】
実施例９：インビボにおけるタンパク質性ヘテロ二量体の標的化挙動
実施例８．１に示す手順と同様のように、Ｃ５７ＢＬ／６  Ｂ１６−ＥＧＦＲマウスモデルを用いて、Ｅｒｂ−（ｈｕＩＬ１０）２−６−９の体内分布を検出した。簡単に説明すると、８週齢の雌Ｃ５７  ＢＬ／６マウスに７×１０５のＢ１６−ＥＧＦＲ−ＳＩＹ細胞を皮下注射した。７日後、腫瘍体積を測定して約４５ｍｍ３であった。Ａｌｅｘａ  Ｆｌｕｏｒ  ７５０（ＡＦ７５０）で標識されたＥｒｂ−（ｈｕＩＬ１０）２−６−９ヘテロ二量体又は対照ヘテロ二量体Ｔｍａｂ−（ｈｕＩＬ１０）２−６−９を腹腔内注射（ｉ．ｐ．）した。注射後２４時間に、インビボにおいてＩＶＩＳスペクトルインビボイメージングシステム（パーキンエルマー社提供）を用いて、又は腫瘍除去後にインビトロにおいてＡＦ７５０免疫蛍光シグナルをスクリーニングした。図１９に示す結果により、ＥＧＦＲ陽性腫瘍において、Ｅｒｂ−（ｈｕＩＬ１０）２−６−９の濃度は、Ｔｍａｂ−（ｈｕＩＬ１０）２−６−９の濃度をはるかに上回ることが判明された。従って、本開示に係るタンパク質性ヘテロ二量体は、インビボで標的組織（例えば、腫瘍）に効果的に指向されることが可能である。
【０５８７】
実施例１０：タンパク質性ヘテロ二量体のＡＤＣＣ効果
また、本発明に係るタンパク質性ヘテロ二量体に対し、抗体依存性細胞により媒介された細胞傷害性（ＡＤＣＣ）をテストした。ＬＤＨの放出により本発明に係るタンパク質性ヘテロ二量体（例えば、Ｅｒｂ−ｈｕＩＦＮａ２−６−９及びＥｒｂ−（ｈｕＩＬ１０）２−６−９）のＡＤＣＣ効果をテストした。簡単に説明すると、Ｆｉｃｏｌｌ−Ｈｙｐａｑｕｅ密度勾配遠心分離により健常ドナーのヘパリン化末梢血試料からＰＢＭＣを得て、３７℃で１×１０Ｅ７の細胞／皿で３０ｎｇ／ｍｌのＩＬ−２及び１０％のＦＢＳを含有する１６４０培地で２４時間培養した。９６ウェルプレートに、２．２５×１０５／ウェル及び１．５×１０４／ウェルの密度で、ＰＢＭＣ細胞及びＡ４３１細胞を接種し、１５ｎｇ／ｍｌのＩＬ−２及び２％のＦＢＳを含有する１６４０培地を加えた。９ｎＭ（最終濃度は、３ｎＭ）より、エルビタックス、Ｅｒｂ−ｈｕＩＦＮａ２−６−９及びＥｒｂ−（ｈｕＩＬ１０）２−６−９を５倍希釈して８種の異なる用量を得て、９６ウェルプレートに加えた。５時間後に、各ウェルにおいてＬＤＨを検出した。
【０５８８】
図２０から分かるように、タンパク質性ヘテロ二量体は、対照エルビタックスと比べてわずか低いが、同等のＡＤＣＣ活性を示すため、Ｆｃ領域における修飾（即ち本発明に係るタンパク質性ヘテロ二量体の第１の修飾及び／又は第２の修飾）は、ＡＤＣＣ活性を破壊しないことが示唆される。
【手続補正２】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
第１の成員及び前記第１の成員とは異なる第２の成員を含有するタンパク質性ヘテロ二量体であって、
当該第１の成員が軽鎖、及び第１のＦｃ領域を含有する重鎖を含有し、当該軽鎖が当該重鎖に複合されて腫瘍抗原への結合特異性を示す標的部分が形成され、
当該第２の成員が第２のＦｃ領域と融合される免疫調節物質を含有するポリペプチドを含有し、
当該第１のＦｃ領域と当該第２のＦｃ領域との複合により、当該第１の成員が当該２の成員と会合して前記ヘテロ二量体を形成し、
当該第１のＦｃ領域が第１の修飾を含有し、及び／又は、当該第２のＦｃ領域が第２の修飾を含有し、
当該第１の修飾及び／又は当該第２の修飾がノブ修飾及びホール修飾を含有するノブアンドホール修飾よりも当該第１の成員と当該第２の成員とのヘテロ二量体化を効果的に促進し、
当該第２の成員に含有される当該ポリペプチドが融合タンパク質であり、当該免疫調節物質のＣ末端が当該第２のＦｃ領域のＮ末端と融合されて当該融合タンパク質が形成され、任意選択的に、リンカーを介して融合される、
タンパク質性ヘテロ二量体。
【請求項２】
前記第１のＦｃ領域及び前記第２のＦｃ領域が免疫グロブリンのＦｃ領域に由来し、前記免疫グロブリンがヒトＩｇＧ１である、請求項に記載のタンパク質性ヘテロ二量体。
【請求項３】
前記第２の成員に含有される前記ポリペプチドが２種以上の免疫調節物質を含有し、前記２種以上の免疫調節物質がインフレームで互いに融合され、且つ前記第２のＦｃ領域と融合され、前記２種以上の免疫調節物質が前記第２のＦｃ領域のＮ末端に配置される、請求項１又は２に記載のタンパク質性ヘテロ二量体。
【請求項４】
前記第１の修飾が、
１）Ｙ３４９及びＴ３６６；
２）Ｙ３４９、Ｔ３６６、及びＦ４０５；
３）Ｙ３４９、Ｔ３６６、及びＫ４０９；
４）Ｙ３４９、Ｔ３６６、Ｆ４０５、Ｋ３６０、及びＱ３４７；
５）Ｙ３４９、Ｔ３６６、Ｆ４０５、及びＱ３４７；
６）Ｙ３４９、Ｔ３６６、Ｋ４０９、Ｋ３６０、及びＱ３４７；
７）Ｙ３４９、Ｔ３６６、Ｋ４０９、及びＱ３４７；
８）Ｔ３６６、Ｋ４０９、及びＫ３９２；
９）Ｔ３６６及びＫ４０９；
１０）Ｔ３６６、Ｋ４０９、Ｙ３４９、及びＳ３５４；
１１）Ｔ３６６及びＦ４０５；
１２）Ｔ３６６、Ｆ４０５、及びＤ３９９；並びに、
１３）Ｔ３６６、Ｆ４０５、Ｙ３４９、及びＳ３５４
から選択されたいずれかの群に示す位置におけるアミノ酸置換を含有する、請求項１〜３のいずれか１項に記載のタンパク質性ヘテロ二量体。
【請求項５】
前記第１の修飾が、
１）Ｙ３４９Ｃ及びＴ３６６Ｗ；
２）Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、及びＦ４０５Ｋ；
３）Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、及びＫ４０９Ｅ；
４）Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、及びＫ４０９Ａ；
５）Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、Ｆ４０５Ｋ、Ｋ３６０Ｅ、及びＱ３４７Ｅ；
６）Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、Ｆ４０５Ｋ、及びＱ３４７Ｒ；
７）Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、Ｋ４０９Ａ、Ｋ３６０Ｅ、及びＱ３４７Ｅ；
８）Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、Ｋ４０９Ａ、及びＱ３４７Ｒ；
９）Ｔ３６６Ｗ、Ｋ４０９Ａ、及びＫ３９２Ｄ；
１０）Ｔ３６６Ｗ及びＫ４０９Ａ；
１１）Ｔ３６６Ｗ、Ｋ４０９Ａ、及びＹ３４９Ｄ；
１２）Ｔ３６６Ｗ、Ｋ４０９Ａ、Ｙ３４９Ｄ、及びＳ３５４Ｄ；
１３）Ｔ３６６Ｗ及びＦ４０５Ｋ；
１４）Ｔ３６６Ｗ、Ｆ４０５Ｋ、及びＤ３９９Ｓ；
１５）Ｔ３６６Ｗ、Ｆ４０５Ｋ、及びＹ３４９Ｄ；並びに、
１６）Ｔ３６６Ｗ、Ｆ４０５Ｋ、Ｙ３４９Ｄ、及びＳ３５４Ｄ
から選択されたいずれかの群に示すアミノ酸置換を含有する、請求項１〜４のいずれか１項に記載のタンパク質性ヘテロ二量体。
【請求項６】
前記第２の修飾が、
１）Ｄ３５６、Ｔ３６６、Ｌ３６８、Ｙ４０７、及びＦ４０５；
２）Ｄ３５６、Ｔ３６６、Ｌ３６８、及びＹ４０７；
３）Ｄ３５６、Ｔ３６６、Ｌ３６８、Ｙ４０７、及びＱ３４７；
４）Ｄ３５６、Ｔ３６６、Ｌ３６８、Ｙ４０７、Ｋ３６０、及びＱ３４７；
５）Ｄ３５６、Ｔ３６６、Ｌ３６８、Ｙ４０７、Ｆ４０５、及びＱ３４７；
６）Ｄ３５６、Ｔ３６６、Ｌ３６８、Ｙ４０７、Ｆ４０５、Ｋ３６０、及びＱ３４７；
７）Ｔ３６６、Ｌ３６８、Ｙ４０７、Ｄ３９９、及びＦ４０５；
８）Ｔ３６６、Ｌ３６８、Ｙ４０７、及びＦ４０５；
９）Ｔ３６６、Ｌ３６８、Ｙ４０７、Ｆ４０５、及びＥ３５７；
１０）Ｔ３６６、Ｌ３６８、Ｙ４０７、及びＫ４０９；
１１）Ｔ３６６、Ｌ３６８、Ｙ４０７、Ｋ４０９、及びＫ３９２；並びに、
１２）Ｔ３６６、Ｌ３６８、Ｙ４０７、Ｋ４０９、及びＥ３５７
から選択されたいずれかの群に示す位置におけるアミノ酸置換を含有する、請求項１〜５のいずれか１項に記載のタンパク質性ヘテロ二量体。
【請求項７】
前記第２の修飾が、
１）Ｄ３５６Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、及びＦ４０５Ｋ；
２）Ｄ３５６Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、及びＹ４０７Ｖ；
３）Ｄ３５６Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、及びＱ３４７Ｒ；
４）Ｄ３５６Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、Ｋ３６０Ｅ、及びＱ３４７Ｅ；
５）Ｄ３５６Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、Ｆ４０５Ｋ、及びＱ３４７Ｒ；
６）Ｄ３５６Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、Ｆ４０５Ｋ、Ｋ３６０Ｅ、及びＱ３４７Ｅ；
７）Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、Ｄ３９９Ｓ、及びＦ４０５Ｋ；
８）Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ｇ、Ｙ４０７Ａ、及びＦ４０５Ｋ；
９）Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、Ｆ４０５Ｋ、及びＥ３５７Ａ；
１０）Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、及びＫ４０９Ａ；
１１）Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、Ｋ４０９Ａ、及びＫ３９２Ｄ；
１２）Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ｇ、Ｙ４０７Ａ、及びＫ４０９Ａ；
１３）Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、Ｋ４０９Ａ、及びＥ３５７Ａ
から選択されたいずれかの群に示すアミノ酸置換を含有する、請求項１〜６のいずれか１項に記載のタンパク質性ヘテロ二量体。
【請求項８】
前記第１のＦｃ領域が前記第１の修飾を含有し、
前記第２のＦｃ領域が前記第２の修飾を含有し、
前記第１の修飾及び前記第２の修飾が、
１）第１の修飾：Ｙ３４９及びＴ３６６；並びに
第２の修飾：Ｄ３５６、Ｔ３６６、Ｌ３６８、Ｙ４０７、及びＦ４０５；
２）第１の修飾：Ｙ３４９、Ｔ３６６及びＦ４０５；並びに
第２の修飾：Ｄ３５６、Ｔ３６６、Ｌ３６８、及びＹ４０７；
３）第１の修飾：Ｙ３４９、Ｔ３６６、及びＫ４０９；並びに
第２の修飾：Ｄ３５６、Ｔ３６６、Ｌ３６８、Ｙ４０７、及びＦ４０５；
４）第１の修飾：Ｙ３４９、Ｔ３６６、Ｆ４０５、Ｋ３６０、及びＱ３４７；並びに
第２の修飾：Ｄ３５６、Ｔ３６６、Ｌ３６８、Ｙ４０７、及びＱ３４７；
５）第１の修飾：Ｙ３４９、Ｔ３６６、Ｆ４０５、及びＱ３４７；並びに
第２の修飾：Ｄ３５６、Ｔ３６６、Ｌ３６８、Ｙ４０７、Ｋ３６０、及びＱ３４７；
６）第１の修飾：Ｙ３４９、Ｔ３６６、Ｋ４０９、Ｋ３６０、及びＱ３４７；並びに
第２の修飾：Ｄ３５６、Ｔ３６６、Ｌ３６８、Ｙ４０７、Ｆ４０５、及びＱ３４７；
７）第１の修飾：Ｙ３４９、Ｔ３６６、Ｋ４０９、及びＱ３４７；並びに
第２の修飾：Ｄ３５６、Ｔ３６６、Ｌ３６８、Ｙ４０７、Ｆ４０５、Ｋ３６０、及びＱ３４７；
８）第１の修飾：Ｔ３６６、Ｋ４０９、及びＫ３９２；並びに
第２の修飾：Ｔ３６６、Ｌ３６８、Ｙ４０７、Ｄ３９９、及びＦ４０５；
９）第１の修飾：Ｔ３６６及びＫ４０９；並びに
第２の修飾：Ｔ３６６、Ｌ３６８、Ｙ４０７、及びＦ４０５；
１０）第１の修飾：Ｔ３６６、Ｋ４０９、及びＹ３４９；並びに第
２の修飾：Ｔ３６６、Ｌ３６８、Ｙ４０７、Ｆ４０５、及びＥ３５７；
１１）第１の修飾：Ｔ３６６、Ｋ４０９、Ｙ３４９、及びＳ３５４；並びに
第２の修飾：Ｔ３６６、Ｌ３６８、Ｙ４０７、Ｆ４０５、及びＥ３５７；
１２）第１の修飾：Ｔ３６６及びＦ４０５；並びに
第２の修飾：Ｔ３６６、Ｌ３６８、Ｙ４０７、及びＫ４０９；
１３）第１の修飾：Ｔ３６６、Ｆ４０５、及びＤ３９９；並びに
第２の修飾：Ｔ３６６、Ｌ３６８、Ｙ４０７、Ｋ４０９、及びＫ３９２；
１４）第１の修飾：Ｔ３６６、Ｆ４０５、及びＹ３４９；並びに
第２の修飾：Ｔ３６６、Ｌ３６８、Ｙ４０７、Ｋ４０９、及びＥ３５７；
１５）第１の修飾：Ｔ３６６、Ｆ４０５、Ｙ３４９、及びＳ３５４；並びに
第２の修飾：Ｔ３６６、Ｌ３６８、Ｙ４０７、Ｋ４０９、及びＥ３５７
から選択されたいずれかの群に示す位置におけるアミノ酸置換を含有し、
前記アミノ酸の位置がＫＡＢＡＴ番号のＥＵインデックスに基づいて決定される、請求項１〜７のいずれか１項に記載のタンパク質性ヘテロ二量体。
【請求項９】
前記第１のＦｃ領域が前記第１の修飾を含有し、
前記第２のＦｃ領域が前記第２の修飾を含有し、
前記第１の修飾及び前記第２の修飾が、
１）第１の修飾：Ｙ３４９Ｃ及びＴ３６６Ｗ；並びに
第２の修飾：Ｄ３５６Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、及びＦ４０５Ｋ；
２）第１の修飾：Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、及びＦ４０５Ｋ；並びに
第２の修飾：Ｄ３５６Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、及びＹ４０７Ｖ；
３）第１の修飾：Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、及びＫ４０９Ｅ；並びに
第２の修飾：Ｄ３５６Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、及びＦ４０５Ｋ；  
４）第１の修飾：Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、及びＫ４０９Ａ；並びに
第２の修飾：Ｄ３５６Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、及びＦ４０５Ｋ；
５）第１の修飾：Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、Ｆ４０５Ｋ、Ｋ３６０Ｅ、及びＱ３４７Ｅ；並びに
第２の修飾：Ｄ３５６Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、及びＱ３４７Ｒ；
６）第１の修飾：Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、Ｆ４０５Ｋ、及びＱ３４７Ｒ；並びに
第２の修飾：Ｄ３５６Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、Ｋ３６０Ｅ、及びＱ３４７Ｅ；
７）第１の修飾：Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、Ｋ４０９Ａ、Ｋ３６０Ｅ、及びＱ３４７Ｅ；並びに
第２の修飾：Ｄ３５６Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、Ｆ４０５Ｋ、及びＱ３４７Ｒ；
８）第１の修飾：Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、Ｋ４０９Ａ、及びＱ３４７Ｒ；並びに
第２の修飾：Ｄ３５６Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、Ｆ４０５Ｋ、Ｋ３６０Ｅ、及びＱ３４７Ｅ；
９）第１の修飾：Ｔ３６６Ｗ、Ｋ４０９Ａ、及びＫ３９２Ｄ；並びに
第２の修飾：Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、Ｄ３９９Ｓ、及びＦ４０５Ｋ；
１０）第１の修飾：Ｔ３６６Ｗ及びＫ４０９Ａ；並びに
第２の修飾：Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ｇ、Ｙ４０７Ａ、及びＦ４０５Ｋ；
１１）第１の修飾：Ｔ３６６Ｗ、Ｋ４０９Ａ、及びＹ３４９Ｄ；並びに
第２の修飾：Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、Ｆ４０５Ｋ、及びＥ３５７Ａ；
１２）第１の修飾：Ｔ３６６Ｗ、Ｋ４０９Ａ、Ｙ３４９Ｄ、及びＳ３５４Ｄ；並びに
第２の修飾：Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、Ｆ４０５Ｋ、及びＥ３５７Ａ；
１３）第１の修飾：Ｔ３６６Ｗ及びＦ４０５Ｋ；並びに
第２の修飾：Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、及びＫ４０９Ａ；
１４）第１の修飾：Ｔ３６６Ｗ、Ｆ４０５Ｋ、及びＤ３９９Ｓ；並びに
第２の修飾：Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、Ｋ４０９Ａ、及びＫ３９２Ｄ；
１５）第１の修飾：Ｔ３６６Ｗ及びＦ４０５Ｋ；並びに
第２の修飾：Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ｇ、Ｙ４０７Ａ、及びＫ４０９Ａ；
１６）第１の修飾：Ｔ３６６Ｗ、Ｆ４０５Ｋ、及びＹ３４９Ｄ；並びに
第２の修飾：Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、Ｋ４０９Ａ、及びＥ３５７Ａ；
１７）第１の修飾：Ｔ３６６Ｗ、Ｆ４０５Ｋ、Ｙ３４９Ｄ、及びＳ３５４Ｄ；並びに
第２の修飾：Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、Ｋ４０９Ａ、及びＥ３５７Ａから選択されたいずれかの群に示すアミノ酸置換を含有し、前記アミノ酸の位置がＫＡＢＡＴ番号のＥＵインデックスに基づいて決定される、請求項１〜８のいずれか１項に記載のタンパク質性ヘテロ二量体。
成員成員成員成員成員成員成員成員
【請求項１０】
前記第１の成員の前記重鎖で、前記第１のＦｃ領域のアミノ酸配列が配列番号１、４、５、６、７、９、１１、１３、１５、１７、１９、２１、２２、２４、２６、２７、及び２９から選択される、請求項１〜９のいずれか１項に記載のタンパク質性ヘテロ二量体。
【請求項１１】
前記第２の成員に含有される前記免疫調節物質のアミノ酸配列が配列番号１７３〜１８０から選択される、請求項１〜１０のいずれか１項に記載のタンパク質性ヘテロ二量体。
【請求項１２】
前記第２の成員に含有される前記第２のＦｃ領域のアミノ酸配列が配列番号２、３、８、１０、１２、１４、１６、１８、２０、２３、２５、及び２８から選択される、請求項１〜１１のいずれか１項に記載のタンパク質性ヘテロ二量体。
【請求項１３】
前記第２の成員に含有される前記ポリペプチドのアミノ酸配列が配列番号７７、８０、８２、８４、８６、８９、９１、及び９７から選択される、請求項１〜１２のいずれか１項に記載のタンパク質性ヘテロ二量体。
【請求項１４】
前記第１の成員に含有される前記軽鎖のアミノ酸配列が配列番号３７、４５、４９、５３、５７、６１、６５、６９、及び７３から選択され、前記第１の成員に含有される前記重鎖のアミノ酸配列が配列番号３９、４７、５１、５５、５９、６３、６７、７１、及び７５から選択され、そして前記第２の成員に含有される前記ポリペプチドのアミノ酸配列が配列番号７７、８０、８２、８４、８６、８９、９１及び９７から選択される、請求項１〜１３のいずれか１項に記載のタンパク質性ヘテロ二量体。
【請求項１５】
請求項１〜１４のいずれか１項に記載のタンパク質性ヘテロ二量体をコードする単離されたポリヌクレオチド。
【請求項１６】
請求項１５に記載の単離されたポリヌクレオチドを含有するベクター。
【請求項１７】
請求項１５に記載の単離されたポリヌクレオチド又は請求項１６に記載のベクターを含有する、単離された宿主細胞。
【請求項１８】
１）請求項１〜１４のいずれか１項に記載のタンパク質性ヘテロ二量体と、
２）前記タンパク質性ヘテロ二量体の前記第１の成員の２つにより形成された第１のホモ二量体と、
３）前記タンパク質性ヘテロ二量体の前記第２の成員の２つにより形成された第２のホモ二量体とを含有し、
前記タンパク質性ヘテロ二量体の前記タンパク質混合物におけるパーセンテージが、少なくとも５０％である、タンパク質混合物。
【請求項１９】
請求項１〜１４のいずれか１項に記載のタンパク質性ヘテロ二量体、又は請求項１８に記載のタンパク質混合物を含有し、任意選択的に薬学的に許容される賦形剤を含有する、医薬組成物。
【請求項２０】
腫瘍又は腫瘍細胞の成長阻害のために使用される請求項１〜１４のいずれか１項に記載のタンパク質性ヘテロ二量体又は請求項１８に記載のタンパク質混合物。
【国際調査報告】
2020527939.tif 000046
2020527939.tif 000047
2020527939.tif 000048
2020527939.tif 000049