(57)【要約】本発明は、凍結乾燥ポリペプチドの再構成時間を低減するために有用な方法及び製剤に関する。【選択図】図１
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
凍結乾燥抗体組成物の再構成時間の低減方法であって、（ａ）少なくとも約３６０：１の糖：抗体のモル比で前記抗体及び糖を含む液体組成物を調製することと、（ｂ）ｔｅｒｔ−ブチルアルコール（ＴＢＡ）を前記液体組成物に添加して液体抗体／ＴＢＡ混合物を形成することであって、前記液体抗体／ＴＢＡ混合物中の前記ＴＢＡの量が、約５体積％〜６体積％である、形成することと、（ｃ）前記液体抗体／ＴＢＡ混合物を冷凍することと、（ｄ）前記液体抗体／ＴＢＡ混合物を凍結乾燥して凍結乾燥抗体組成物を形成することと、（ｅ）前記凍結乾燥抗体組成物を希釈液で再構成することであって、ＴＢＡの存在下で凍結乾燥された前記抗体を再構成するための時間が、ＴＢＡの不在下で凍結乾燥された同量の同じ抗体を再構成するための時間よりも少ない、再構成することと、を含む、前記方法。
【請求項２】
前記液体抗体／ＴＢＡ混合物中の前記ＴＢＡの量が、約５体積％である、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
糖：抗体の前記モル比が、約３６０：１〜約５００：１である、請求項１に記載の方法。
【請求項４】
ＴＢＡが、前記液体抗体／ＴＢＡ混合物を冷凍する直前に、前記抗体を含む前記液体組成物に添加される、請求項１に記載の方法。
【請求項５】
前記抗体が、完全長抗体である、請求項１に記載の方法。
【請求項６】
前記抗体を含む前記液体組成物中の前記抗体の濃度が、約１０ｍｇ／ｍＬ〜約２５０ｍｇ／ｍＬ、約２５ｍｇ／ｍＬ〜約２５０ｍｇ／ｍＬ、約５０ｍｇ／ｍＬ〜約２５０ｍｇ／ｍＬ、約１００ｍｇ／ｍＬ〜約２５０ｍｇ／ｍＬ、約１５０ｍｇ／ｍｍＬ〜約２５０ｍｇ／ｍＬ、約２５ｍｇ／ｍＬ〜約１００ｍｇ／ｍＬ、約５０ｍｇ／ｍＬ〜約１００ｍｇ／ｍＬ、約２５ｍｇ／ｍＬ〜約１２５ｍｇ／ｍＬ、または約５０ｍｇ／ｍＬ〜約１２５ｍｇ／ｍＬである、請求項１に記載の方法。
【請求項７】
前記抗体を含む前記液体組成物中の前記抗体の量が、約１５０ｍｇ〜１１グラムである、請求項１に記載の方法。
【請求項８】
前記糖が、スクロースまたはトレハロースである、請求項１に記載の方法。
【請求項９】
前記液体抗体／ＴＢＡ混合物が、ガラスバイアル中で凍結乾燥される、請求項１に記載の方法。
【請求項１０】
前記ガラスバイアルが、６ｃｃバイアル、１０ｃｃバイアル、１５ｃｃバイアル、２０ｃｃバイアル、２５ｃｃバイアル、５０ｃｃバイアル、または１００ｃｃバイアルである、請求項９に記載の方法。
【請求項１１】
前記ガラスバイアルが、２．５ｍＬ、２５ｍＬ、５０ｍＬ、または１００ｍＬの充填量を有する、請求項９に記載の方法。
【請求項１２】
ＴＢＡの存在下で凍結乾燥された前記凍結乾燥抗体組成物を再構成するための時間が、ＴＢＡの不在下で凍結乾燥された同量の同じ抗体組成物を再構成するための時間と比較して、約４０〜９５％低減される、請求項１に記載の方法。
【請求項１３】
ＴＢＡの存在下で凍結乾燥された前記凍結乾燥抗体組成物を再構成するための時間が、ＴＢＡの不在下で凍結乾燥された同量の同じ抗体組成物を再構成するための時間と比較して、約５０％、約６０％、約７０％、約８０％、約９０％、または約９５％低減される、請求項１に記載の方法。
【請求項１４】
ＴＢＡの存在下で凍結乾燥された前記凍結乾燥抗体組成物を再構成するための時間が、ＴＢＡの不在下で凍結乾燥された同量の同じ抗体組成物を再構成するための時間と比較して、約５０〜６０％、約６０〜７０％、約７０〜８０％、約８０〜９０％、または約９０〜９５％低減される、請求項１に記載の方法。
【請求項１５】
前記凍結乾燥抗体組成物の再構成は、前記凍結乾燥抗体組成物が真空下にある条件下で行われる、請求項１に記載の方法。
【請求項１６】
前記真空が、１００Ｔｏｒｒ未満、５０Ｔｏｒｒ未満、または１００ｍＴｏｒｒ〜５０Ｔｏｒｒである、請求項１５に記載の方法。
【請求項１７】
前記真空が、１００ｍＴｏｒｒである、請求項１５に記載の方法。
【請求項１８】
前記凍結乾燥抗体組成物の再構成が、攪拌器を使用して行われる、請求項１に記載の方法。
【請求項１９】
前記製剤が、前記抗体、糖、希釈液、及びＴＢＡを含み、前記液体製剤中の前記ＴＢＡの量が、約５体積％〜６体積％であり、前記液体製剤中の前記糖の量が、少なくとも約３６０：１の糖：抗体のモル比であり、ＴＢＡの存在下で凍結乾燥された前記抗体を再構成するための時間が、ＴＢＡの不在下で凍結乾燥された同量の同じ抗体を再構成するための時間よりも少ない、凍結乾燥に好適な液体抗体製剤。
【請求項２０】
前記液体組成物中の前記ＴＢＡの量が、約５体積％である、請求項１９に記載の液体抗体製剤。
【請求項２１】
前記凍結乾燥抗体組成物が、少なくとも約３６０：１の糖：抗体のモル比で前記抗体及び糖を含む液体組成物を調製することと、ｔｅｒｔ−ブチルアルコール（ＴＢＡ）を前記液体組成物に添加して液体抗体／ＴＢＡ混合物を形成することであって、前記液体製剤中の前記ＴＢＡの量が、約５体積％〜６体積％である、形成することと、前記液体抗体／ＴＢＡ混合物を冷凍することと、前記液体抗体／ＴＢＡ混合物を凍結乾燥して凍結乾燥抗体組成物を形成することであって、希釈液での前記凍結乾燥抗体組成物の再構成時に、ＴＢＡの存在下で凍結乾燥された前記抗体を再構成するための時間が、ＴＢＡの不在下で凍結乾燥された同量の同じ抗体を再構成するための時間よりも少ない、凍結乾燥することと、を含む、凍結乾燥抗体組成物。
【請求項２２】
前記液体組成物中の前記ＴＢＡの量が、約５体積％である、請求項２１に記載の凍結乾燥抗体製剤。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願の相互参照
本出願は、２０１６年１２月２２日出願の米国仮出願第６２／４３８，２３２号（参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）の利益を主張する。
【０００２】
本発明は、凍結乾燥ポリペプチドの再構成時間を低減するために有用な方法及び製剤に関する。
【背景技術】
【０００３】
薬学的または他の用途のための生体分子は、多くの場合、凍結乾燥され、このプロセスにおいて、それが冷凍され、真空下に置かれた後に液体組成物から水が除去される。一般に、凍結乾燥は、水の除去によって（多くの生物学的化学分解が加水分解性であるため）及びその系の全体移動度を減少させることによって（側鎖及び分子の動的移動が化学的かつ物理的分解事象の発生に必須であるため）、ポリペプチド組成物の安定性を改善する。凍結乾燥ポリペプチドは、多くの場合、それらが凍結乾燥され、保管されたものと全く同じ容器またはバイアル中で、使用前に後次に再構成される。特に凍結乾燥された医薬ポリペプチド組成物（例えば、抗体組成物）の再構成の文脈において、短い再構成時間が好ましい。
【０００４】
高濃度及び高用量（例えば、グラム量）の凍結乾燥された医薬品は、長い凍結乾燥サイクル及び多くの場合、長い再構成時間を含む、固有の処理及び取り扱いの課題を提起する。（例えば、Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｒｅｖｉｅｗ，１３（２０１０），ｐｐ．３１−３２  ３４−３８を参照。）生体分子の再構成時間を制御する１つのアプローチは、タンパク質濃度を減少させることにより、充填量を増加させることである。しかしながら、このアプローチは、充填量を増加させることが１用量当たり複数のバイアルの使用を必要とする、高用量製剤には不適切であり得る。かかる場合、代替の凍結乾燥製剤及び方法が必要とされる。
【０００５】
凍結乾燥製剤中のｔｅｒｔ−ブチルアルコール（ＴＢＡ）の存在は、少量または低用量（例えば、ミリグラム量）の生体分子の再構成時間を改善することが示された（例えば、米国特許出願公開第ＵＳ２０１４／００４４７１７号、Ｎａｉｌ  ｅｔ  ａｌ．，（２００２）Ｊ  Ｐｈａｒｍａ  Ｓｃｉ．Ｖｏｌ．９１、Ｄｅｇｏｂｅｒｔ  ｅｔ  ａｌ．，（２０１６）Ｄｒｙｉｎｇ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ、Ｙｏｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，（２００９）Ｉｎｔ  Ｊ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃｓ，３７１：７１−８１、Ｔｅａｇａｒｄｅｎ  ａｎｄ  Ｂａｋｅｒ（２００２）Ｅｕｒ  Ｊ  Ｐｈａｒｍａ  Ｓｃｉ  １５：１１５−１３３、Ｖｅｓｓｏｔ  ａｎｄ  Ａｎｄｒｉｅｕ（２０１２）Ｄｒｙｉｎｇ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ（２０１２）  ３０：３７７−３８５を参照）。
【０００６】
しかしながら、生体分子の凍結乾燥製剤中の共溶媒系中のＴＢＡの使用、ならびに再構成時間及びポリペプチド安定性に対するその効果は、大量のタンパク質（例えば、グラム量）を含有する、または高タンパク質濃度を有するポリペプチド製剤において十分に特徴付けられていなかった。
【０００７】
したがって、低減されたまたは速い再構成時間を提供するとともに、生体分子の完全性及び安定性を維持する、大きい量及び濃度（すなわち、高濃度、高用量）のポリペプチド組成物（抗体組成物を含む）の凍結乾燥された生体分子の方法及び製剤が必要である。本発明は、凍結乾燥ポリペプチドの再構成時間を低減するための方法及び製剤を提供することによって、この必要性を満たし、該方法及び製剤は、特に高濃度及び／または高用量製剤の凍結乾燥された抗体組成物について、凍結乾燥ポリペプチドの完全性及び安定性を維持する。
【発明の概要】
【０００８】
本発明は、凍結乾燥ポリペプチド、例えば、凍結乾燥された抗体組成物の再構成時間を低減するために有用な方法及び製剤を提供する。
【０００９】
一実施形態では、本発明は、凍結乾燥ポリペプチド組成物の再構成時間の低減方法を提供し、該方法は、ポリペプチドを含む液体組成物を調製することと、ｔｅｒｔ−ブチルアルコール（ＴＢＡ）を液体組成物に添加して液体ポリペプチド／ＴＢＡ混合物を形成することと、液体ポリペプチド／ＴＢＡ混合物を冷凍することと、液体ポリペプチド／ＴＢＡ混合物を凍結乾燥して凍結乾燥ポリペプチド組成物を形成することと、凍結乾燥ポリペプチド組成物を希釈液で再構成することと、を含み、ＴＢＡの存在下で凍結乾燥されたポリペプチドを再構成するための時間は、ＴＢＡの不在下で凍結乾燥された同量の同じポリペプチドを再構成するための時間よりも少ない。いくつかの実施形態では、液体ポリペプチド／ＴＢＡ混合物を形成するために液体ポリペプチド組成物に添加されるＴＢＡの量は、約０．５体積％〜約２０体積％である。他の実施形態では、液体ポリペプチド／ＴＢＡ混合物を形成するために液体ポリペプチド組成物に添加されるＴＢＡの量は、０．５体積％、１体積％、２．５体積％、５体積％、７．５体積％、１０体積％、１２．５体積％、１５体積％、１７．５体積％、及び２０体積％からなる群から選択される。さらに他の実施形態では、液体ポリペプチド／ＴＢＡ混合物を形成するために液体ポリペプチド組成物に添加されるＴＢＡの量は、約１体積％〜約２０体積％、約１体積％〜約１０体積％、約１体積％〜約５体積％、約５体積％〜約２０体積％、または約５体積％〜約１０体積％である。一実施形態では、ＴＢＡは、液体ポリペプチド／ＴＢＡ混合物を冷凍する直前に、ポリペプチドを含む液体組成物に添加される。ある特定の実施形態では、ポリペプチドは、抗体である。いくつかの実施形態では、ポリペプチドは、抗体であり、方法は、ＴＢＡを液体組成物に添加する前に、少なくとも約３６０：１の糖：抗体のモル比で抗体及び糖を含む液体組成物を調製することを含む。
【００１０】
一実施形態では、本発明は、凍結乾燥抗体組成物の再構成時間の低減方法を提供し、該方法は、抗体を含む液体組成物を調製することと、ｔｅｒｔ−ブチルアルコール（ＴＢＡ）を液体組成物に添加して液体抗体／ＴＢＡ混合物を形成することと、液体抗体／ＴＢＡ混合物を冷凍することと、液体抗体／ＴＢＡ混合物を凍結乾燥して凍結乾燥抗体組成物を形成することと、凍結乾燥抗体組成物を希釈液で再構成することと、を含み、ＴＢＡの存在下で凍結乾燥された抗体を再構成するための時間は、ＴＢＡの不在下で凍結乾燥された同量の同じ抗体を再構成するための時間よりも少ない。いくつかの実施形態では、液体ポリペプチド／ＴＢＡ混合物を形成するために液体ポリペプチド組成物に添加されるＴＢＡの量は、約０．５体積％〜約２０体積％である。他の実施形態では、液体ポリペプチド／ＴＢＡ混合物を形成するために液体ポリペプチド組成物に添加されるＴＢＡの量は、０．５体積％、１体積％、２．５体積％、５体積％、７．５体積％、１０体積％、１２．５体積％、１５体積％、１７．５体積％、及び２０体積％からなる群から選択される。さらに他の実施形態では、液体ポリペプチド／ＴＢＡ混合物を形成するために液体ポリペプチド組成物に添加されるＴＢＡの量は、約１体積％〜約２０体積％、約１体積％〜約１０体積％、約１体積％〜約５体積％、約５体積％〜約２０体積％、または約５体積％〜約１０体積％である。いくつかの実施形態では、方法は、ＴＢＡを液体組成物に添加する前に、少なくとも約３６０：１の糖：抗体のモル比で抗体及び糖を含む液体組成物を調製することを含む。一実施形態では、ＴＢＡは、液体ポリペプチド／ＴＢＡ混合物を冷凍する直前に、ポリペプチドを含む液体組成物に添加される。一実施形態では、抗体は、モノクローナル抗体である。一実施形態では、抗体は、ヒトモノクローナル抗体である。一実施形態では、抗体は、ヒト化モノクローナル抗体である。一実施形態では、抗体は、キメラ抗体である。一実施形態では、抗体は、抗体断片である。一実施形態では、抗体は、二重特異性抗体である。一実施形態では、抗体は、抗体−薬物コンジュゲート（例えば、免疫コンジュゲート）である。
【００１１】
一実施形態では、本発明は、凍結乾燥ポリペプチド組成物の再構成時間の低減方法を提供し、該方法は、ポリペプチドを含む液体組成物を調製することと（ポリペプチドを含む液体組成物中のポリペプチドの濃度は、約１０ｍｇ／ｍＬ〜約１５０ｍｇ／ｍＬである）、ｔｅｒｔ−ブチルアルコール（ＴＢＡ）を液体組成物に添加して液体ポリペプチド／ＴＢＡ混合物を形成することと、液体ポリペプチド／ＴＢＡ混合物を冷凍することと、液体ポリペプチド／ＴＢＡ混合物を凍結乾燥して凍結乾燥ポリペプチド組成物を形成することと、凍結乾燥ポリペプチド組成物を希釈液で再構成することと、を含み、ＴＢＡの存在下で凍結乾燥されたポリペプチドを再構成するための時間は、ＴＢＡの不在下で凍結乾燥された同量の同じポリペプチドを再構成するための時間よりも少ない。いくつかの実施形態では、ポリペプチドを含む液体組成物中のポリペプチドの濃度は、約１０ｍｇ／ｍＬ〜約２５０ｍｇ／ｍＬ、約２５ｍｇ／ｍＬ〜約２５０ｍｇ／ｍＬ、約５０ｍｇ／ｍＬ〜約２５０ｍｇ／ｍＬ、約１００ｍｇ／ｍＬ〜約２５０ｍｇ／ｍＬ、約１５０ｍｇ／ｍｍＬ〜約２５０ｍｇ／ｍＬ、約２５ｍｇ／ｍＬ〜約１００ｍｇ／ｍＬ、約５０ｍｇ／ｍＬ〜約１００ｍｇ／ｍＬ、約２５ｍｇ／ｍＬ〜約１２５ｍｇ／ｍＬ、または約５０ｍｇ／ｍＬ〜約１２５ｍｇ／ｍＬである。いくつかの実施形態では、ポリペプチドを含む液体組成物中のポリペプチドの濃度は、約２５ｍｇ／ｍＬ、約４０ｍｇ／ｍＬ、約５０ｍｇ／ｍＬ、約６０ｍｇ／ｍＬ、約７０ｍｇ／ｍＬ、約１００ｍｇ／ｍＬ、約１２５ｍｇ／ｍＬ、約１５０ｍｇ／ｍＬ、約２００ｍｇ／ｍＬ、または約２５０ｍｇ／ｍＬである。ある特定の実施形態では、ポリペプチドは、抗体である。いくつかの実施形態では、液体ポリペプチド／ＴＢＡ混合物を形成するために液体ポリペプチド組成物に添加されるＴＢＡの量は、約０．５体積％〜約２０体積％である。いくつかの実施形態では、ポリペプチドは、抗体であり、方法は、ＴＢＡを液体組成物に添加する前に、少なくとも約３６０：１の糖：抗体のモル比で抗体及び糖を含む液体組成物を調製することを含む。
【００１２】
一実施形態では、本発明は、凍結乾燥ポリペプチド組成物の再構成時間の低減方法を提供し、該方法は、ポリペプチドを含む液体組成物を調製することと（ポリペプチドを含む液体組成物中のポリペプチドの量は、約１５０ｍｇ〜約１１グラムである）、ｔｅｒｔ−ブチルアルコール（ＴＢＡ）を液体組成物に添加して液体ポリペプチド／ＴＢＡ混合物を形成することと、液体ポリペプチド／ＴＢＡ混合物を冷凍することと、液体ポリペプチド／ＴＢＡ混合物を凍結乾燥して凍結乾燥ポリペプチド組成物を形成することと、凍結乾燥ポリペプチド組成物を希釈液で再構成することと、を含み、ＴＢＡの存在下で凍結乾燥されたポリペプチドを再構成するための時間は、ＴＢＡの不在下で凍結乾燥された同量の同じポリペプチドを再構成するための時間よりも少ない。いくつかの実施形態では、ポリペプチドを含む液体組成物中のポリペプチドの量は、約１５０ｍｇ、約２５０ｍｇ、約５００ｍｇ、約７５０ｍｇ、約１グラム、約２グラム、約３グラム、約４グラム、約５グラム、約６グラム、約７グラム、約８グラム、約９グラム、約１０グラム、または約１１グラムである。いくつかの実施形態では、ポリペプチドを含む液体組成物中のポリペプチドの量は、約１５０ｍｇ〜１１グラムである。いくつかの実施形態では、ポリペプチドを含む液体組成物中のポリペプチドの量は、約１５０ｍｇ〜約１グラム、約５００ｍｇ〜約１グラム、約５００ｍｇ〜約５グラム、約１グラム〜約５グラム、約１グラム〜約１０グラム、または約５グラム〜約１０グラムである。いくつかの実施形態では、ポリペプチドを含む液体組成物中のポリペプチドの量は、１１グラム超である。ある特定の実施形態では、ポリペプチドは、抗体である。いくつかの実施形態では、液体ポリペプチド／ＴＢＡ混合物を形成するために液体ポリペプチド組成物に添加されるＴＢＡの量は、約０．５体積％〜約２０体積％である。いくつかの実施形態では、ポリペプチドは、抗体であり、方法は、ＴＢＡを液体組成物に添加する前に、少なくとも約３６０：１の糖：抗体のモル比で抗体及び糖を含む液体組成物を調製することを含む。
【００１３】
一実施形態では、本発明は、凍結乾燥ポリペプチド組成物の再構成時間の低減方法を提供し、該方法は、ポリペプチドを含む液体組成物を調製することと、ｔｅｒｔ−ブチルアルコール（ＴＢＡ）を液体組成物に添加して液体ポリペプチド／ＴＢＡ混合物を形成することと、液体ポリペプチド／ＴＢＡ混合物を冷凍することと、液体ポリペプチド／ＴＢＡ混合物を凍結乾燥して凍結乾燥ポリペプチド組成物を形成することと、凍結乾燥ポリペプチド組成物を希釈液で再構成することと、を含み、ＴＢＡの存在下で凍結乾燥されたポリペプチドを再構成するための時間は、ＴＢＡの不在下で凍結乾燥された同量の同じポリペプチドを再構成するための時間よりも短く、ＴＢＡの存在下で凍結乾燥された凍結乾燥ポリペプチド組成物を再構成するための時間は、ＴＢＡの不在下で凍結乾燥された同量の同じポリペプチド組成物を再構成するための時間と比較して、約４０％〜約９５％低減される。いくつかの実施形態では、ＴＢＡの存在下で凍結乾燥された凍結乾燥ポリペプチド組成物を再構成するための時間は、ＴＢＡの不在下で凍結乾燥された同量の同じポリペプチド組成物を再構成するための時間と比較して、約５０％、約６０％、約７０％、約８０％、約９０％、約９５％、約５０％〜約６０％、約６０％〜約７０％、約７０％〜約８０％、約８０％〜約９０％、または約９０％〜約９５％低減する。いくつかの実施形態では、ポリペプチドは、抗体であり、方法は、ＴＢＡを液体組成物に添加する前に、少なくとも約３６０：１の糖：抗体のモル比で抗体及び糖を含む液体組成物を調製することを含む。
【００１４】
本発明のいくつかの実施形態では、液体ポリペプチド／ＴＢＡ混合物は、バイアル、シリンジ（二室式シリンジを含む）、またはカートリッジ中で凍結乾燥される。いくつかの実施形態では、液体ポリペプチド／ＴＢＡ混合物は、ガラスバイアル中で凍結乾燥される。いくつかの実施形態では、バイアルは、６ｃｃバイアル、１０ｃｃバイアル、１５ｃｃバイアル、２０ｃｃバイアル、５０ｃｃバイアル、または１００ｃｃバイアルである。いくつかの実施形態では、ガラスバイアルは、６ｃｃバイアル、１０ｃｃバイアル、１５ｃｃバイアル、２０ｃｃバイアル、５０ｃｃバイアル、または１００ｃｃバイアルである。いくつかの実施形態では、バイアルは、０．１ｍＬ、０．３ｍＬ、０．５ｍＬ、１ｍＬ、２ｍＬ、２．５ｍＬ、５ｍＬ、１０ｍＬ、２０ｍＬ、２５ｍＬ、５０ｍＬ、または１００ｍＬの容量または充填量を有する。いくつかの実施形態では、ガラスバイアルは、０．１ｍＬ、０．３ｍＬ、０．５ｍＬ、１ｍＬ、２ｍＬ、２．５ｍＬ、５ｍＬ、１０ｍＬ、２０ｍＬ、２５ｍＬ、５０ｍＬ、または１００ｍＬの容量または充填量を有する。
【００１５】
いくつかの実施形態では、凍結乾燥ポリペプチド組成物の再構成は、凍結乾燥ポリペプチド組成物の再構成が真空下で行われる条件下で行われる。いくつかの実施形態では、本発明は、凍結乾燥ポリペプチド組成物の再構成時間の低減方法を提供し、該方法は、ポリペプチドを含む液体組成物を調製することと、ｔｅｒｔ−ブチルアルコール（ＴＢＡ）を液体組成物に添加して液体ポリペプチド／ＴＢＡ混合物を形成することと、液体ポリペプチド／ＴＢＡ混合物を冷凍することと、液体ポリペプチド／ＴＢＡ混合物を凍結乾燥して凍結乾燥ポリペプチド組成物を形成することと、凍結乾燥ポリペプチド組成物を希釈液で再構成することと、を含み、凍結乾燥ポリペプチド組成物の再構成は、凍結乾燥ポリペプチド組成物の再構成が真空下にある条件下で行われ、さらにＴＢＡの存在下で凍結乾燥されたポリペプチドの再構成は、ＴＢＡの不在下で凍結乾燥された同量の同じポリペプチドを再構成するための時間よりも少ない。いくつかの実施形態では、真空は、深真空である。いくつかの実施形態では、真空は、部分真空である。ある特定の実施形態では、真空は、１００Ｔｏｒｒ未満である。ある特定の実施形態では、真空は、５０Ｔｏｒｒ未満である。ある特定の実施形態では、真空は、１００ｍＴｏｒｒ〜５０Ｔｏｒｒである。一実施形態では、真空は、１００ｍＴｏｒｒである。いくつかの実施形態では、ポリペプチドは、抗体であり、方法は、ＴＢＡを液体組成物に添加する前に、少なくとも約３６０：１の糖：抗体のモル比で抗体及び糖を含む液体組成物を調製することを含む。
【００１６】
いくつかの実施形態では、凍結乾燥ポリペプチド組成物の再構成は、機械撹拌器などの撹拌器を使用して行われる。一実施形態では、本発明は、凍結乾燥ポリペプチド組成物の再構成時間の低減方法を提供し、該方法は、ポリペプチドを含む液体組成物を調製することと、ｔｅｒｔ−ブチルアルコール（ＴＢＡ）を液体組成物に添加して液体ポリペプチド／ＴＢＡ混合物を形成することと、液体ポリペプチド／ＴＢＡ混合物を冷凍することと、液体ポリペプチド／ＴＢＡ混合物を凍結乾燥して凍結乾燥ポリペプチド組成物を形成することと、凍結乾燥ポリペプチド組成物を、撹拌器を使用することにより希釈液で再構成することと、を含み、ＴＢＡの存在下で凍結乾燥されたポリペプチドを再構成するための時間は、ＴＢＡの不在下で凍結乾燥された同量の同じポリペプチドを再構成するための時間よりも少ない。いくつかの実施形態では、バイアルまたは容器は、撹拌器上に置かれる。いくつかの実施形態では、ポリペプチドは、抗体であり、方法は、ＴＢＡを液体組成物に添加する前に、少なくとも約３６０：１の糖：抗体のモル比で抗体及び糖を含む液体組成物を調製することを含む。
【００１７】
いくつかの実施形態では、凍結乾燥ポリペプチド組成物の再構成は、凍結乾燥ポリペプチド組成物が真空下にある条件下で撹拌器を使用して行われる。一実施形態では、本発明は、凍結乾燥ポリペプチド組成物の再構成時間の低減方法を提供し、該方法は、ポリペプチドを含む液体組成物を調製することと、ｔｅｒｔ−ブチルアルコール（ＴＢＡ）を液体組成物に添加して液体ポリペプチド／ＴＢＡ混合物を形成することと、液体ポリペプチド／ＴＢＡ混合物を冷凍することと、液体ポリペプチド／ＴＢＡ混合物を凍結乾燥して凍結乾燥ポリペプチド組成物を形成することと、凍結乾燥ポリペプチド組成物を、撹拌器を使用することにより希釈液で再構成することと、を含み、凍結乾燥ポリペプチド組成物の再構成は、凍結乾燥ポリペプチド組成物が真空下にある条件下で行われ、さらにＴＢＡの存在下で凍結乾燥されたポリペプチドの再構成は、ＴＢＡの不在下で凍結乾燥された同量の同じポリペプチドを再構成するための時間よりも少ない。いくつかの実施形態では、真空は、深真空である。いくつかの実施形態では、真空は、部分真空である。ある特定の実施形態では、真空は、１００Ｔｏｒｒ未満である。ある特定の実施形態では、真空は、５０Ｔｏｒｒ未満である。ある特定の実施形態では、真空は、１００ｍＴｏｒｒ〜５０Ｔｏｒｒである。一実施形態では、真空は、１００ｍＴｏｒｒである。いくつかの実施形態では、ポリペプチドは、抗体であり、方法は、ＴＢＡを液体組成物に添加する前に、少なくとも約３６０：１の糖：抗体のモル比で抗体及び糖を含む液体組成物を調製することを含む。
【００１８】
本発明は、凍結乾燥に好適な液体ポリペプチド製剤を提供する。いくつかの実施形態では、本発明は、凍結乾燥に好適な液体ポリペプチド製剤を提供し、該製剤は、ポリペプチド、希釈液、及びＴＢＡを含み、ＴＢＡの存在下で凍結乾燥されたポリペプチドを再構成するための時間は、ＴＢＡの不在下で凍結乾燥された同量の同じポリペプチドを再構成するための時間よりも少ない。いくつかの実施形態では、液体製剤中のＴＢＡの量は、約０．５体積％〜２０体積％である。いくつかの実施形態では、液体製剤中のＴＢＡの量は、０．５体積％、１体積％、２．５体積％、５体積％、７．５体積％、１０体積％、１２．５体積％、１５体積％、１７．５体積％、及び２０体積％からなる群から選択される。他の実施形態では、液体ポリペプチド／ＴＢＡ混合物を形成するために液体ポリペプチド組成物に添加されるＴＢＡの量は、約１体積％〜約２０体積％、約１体積％〜約１０体積％、約１体積％〜約５体積％、約５体積％〜約２０体積％、または約５体積％〜約１０体積％である。一実施形態では、ＴＢＡは、液体ポリペプチド／ＴＢＡ混合物を冷凍する直前に、ポリペプチドを含む液体組成物に添加される。ある特定の実施形態では、ポリペプチドは、抗体である。いくつかの実施形態では、ポリペプチドは、抗体であり、製剤は、少なくとも約３６０：１の糖：抗体のモル比で糖をさらに含む。
【００１９】
本発明は、凍結乾燥ポリペプチド組成物を提供し、凍結乾燥ポリペプチド組成物は、ポリペプチドを含む液体組成物を調製すること、ｔｅｒｔ−ブチルアルコール（ＴＢＡ）を液体組成物に添加して液体ポリペプチド／ＴＢＡ混合物を形成すること、液体ポリペプチド／ＴＢＡ混合物を冷凍すること、液体ポリペプチド／ＴＢＡ混合物を凍結乾燥して凍結乾燥ポリペプチド組成物を形成することによって産生され、凍結乾燥ポリペプチド組成物の、希釈液での再構成時に、ＴＢＡの存在下で凍結乾燥されたポリペプチドを再構成するための時間は、ＴＢＡの不在下で凍結乾燥された同量の同じポリペプチドを再構成するための時間よりも少ない。いくつかの実施形態では、液体製剤中のＴＢＡの量は、約０．５体積％〜約２０体積％である。いくつかの実施形態では、液体製剤中のＴＢＡの量は、０．５体積％、１体積％、２．５体積％、５体積％、７．５体積％、１０体積％、１２．５体積％、１５体積％、１７．５体積％、及び２０体積％からなる群から選択される。他の実施形態では、液体ポリペプチド／ＴＢＡ混合物を形成するために液体ポリペプチド組成物に添加されるＴＢＡの量は、約１体積％〜約２０体積％、約１体積％〜約１０体積％、約１体積％〜約５体積％、約５体積％〜約２０体積％、または約５体積％〜約１０体積％である。一実施形態では、ＴＢＡは、液体ポリペプチド／ＴＢＡ混合物を冷凍する直前に、ポリペプチドを含む液体組成物に添加される。ある特定の実施形態では、ポリペプチドは、抗体である。ある特定の実施形態では、ＴＢＡの、ポリペプチド製剤への添加は、ポリペプチドの完全性または安定性に対する影響がない。いくつかの実施形態では、ポリペプチドは、抗体であり、凍結乾燥ポリペプチド組成物は、ＴＢＡを液体組成物に添加する前に、少なくとも約３６０：１の糖：抗体のモル比で抗体及び糖を含む液体組成物を調製することによって産生される。
【００２０】
一実施形態では、本発明は、凍結乾燥抗体組成物の再構成時間の低減方法を提供し、該方法は、少なくとも約３６０：１の糖：抗体のモル比で抗体及び糖を含む液体組成物を調製することと、ｔｅｒｔ−ブチルアルコール（ＴＢＡ）を液体組成物に添加して液体抗体／ＴＢＡ混合物を形成することと（液体抗体／ＴＢＡ混合物中のＴＢＡの量は、約５体積％〜２０体積％である）、液体抗体／ＴＢＡ混合物を冷凍することと、液体抗体／ＴＢＡ混合物を凍結乾燥して凍結乾燥抗体組成物を形成することと、凍結乾燥抗体組成物を希釈液で再構成することと、を含み、ＴＢＡの存在下で凍結乾燥された抗体を再構成するための時間は、ＴＢＡの不在下で凍結乾燥された同量の同じ抗体を再構成するための時間よりも少ない。いくつかの実施形態では、液体抗体／ＴＢＡ混合物を形成するために液体抗体組成物に添加されるＴＢＡの量は、５体積％、７．５体積％、１０体積％、１２．５体積％、１５体積％、１７．５体積％、及び２０体積％からなる群から選択される。いくつかの実施形態では、液体抗体／ＴＢＡ混合物を形成するために液体抗体組成物に添加されるＴＢＡの量は、約５体積％〜６体積％である。さらに他の実施形態では、液体抗体／ＴＢＡ混合物を形成するために液体抗体組成物に添加されるＴＢＡの量は、約５体積％〜約１０体積％である。一実施形態では、ＴＢＡは、液体抗体／ＴＢＡ混合物を冷凍する直前に、抗体を含む液体組成物に添加される。ある特定の実施形態では、抗体は、完全長抗体である。一実施形態では、抗体は、モノクローナル抗体である。一実施形態では、抗体は、ヒトモノクローナル抗体である。一実施形態では、抗体は、ヒト化モノクローナル抗体である。一実施形態では、抗体は、キメラ抗体である。一実施形態では、抗体は、抗体断片である。一実施形態では、抗体は、抗原結合断片、例えばＦｖ、Ｆａｂ、Ｆａｂ′、Ｆａｂ′−ＳＨ、Ｆ（ａｂ′）２；ダイアボディ；直鎖状抗体、一本鎖抗体分子（例えば、ｓｃＦｖ）；及び抗体断片から形成された多重特異性抗体である。一実施形態では、抗体は、二重特異性抗体である。一実施形態では、抗体は、抗体−薬物コンジュゲート（例えば、免疫コンジュゲート）である。いくつかの実施形態では、糖は、スクロースまたはトレハロースである。ある特定の実施形態では、ＴＢＡの、液体組成物への添加は、抗体の完全性または安定性に対する影響がない。
【００２１】
一実施形態では、本発明は、凍結乾燥抗体組成物の再構成時間の低減方法を提供し、該方法は、少なくとも約３６０：１の糖：抗体のモル比で抗体及び糖を含む液体組成物を調製することと（抗体を含む液体組成物中の抗体の濃度は、約１０ｍｇ／ｍＬ〜約２５０ｍｇ／ｍＬである）、ｔｅｒｔ−ブチルアルコール（ＴＢＡ）を液体組成物に添加して液体抗体／ＴＢＡ混合物を形成することと（液体抗体／ＴＢＡ混合物中のＴＢＡの量は、約５体積％〜２０体積％である）、液体抗体／ＴＢＡ混合物を冷凍することと、液体抗体／ＴＢＡ混合物を凍結乾燥して凍結乾燥抗体組成物を形成することと、凍結乾燥抗体組成物を希釈液で再構成することと、を含み、ＴＢＡの存在下で凍結乾燥された抗体を再構成するための時間は、ＴＢＡの不在下で凍結乾燥された同量の同じ抗体を再構成するための時間よりも少ない。いくつかの実施形態では、液体抗体／ＴＢＡ混合物を形成するために液体抗体組成物に添加されるＴＢＡの量は、約５体積％〜６体積％である。いくつかの実施形態では、抗体を含む液体組成物中の抗体の濃度は、約２５ｍｇ／ｍＬ〜約２５０ｍｇ／ｍＬ、約５０ｍｇ／ｍＬ〜約２５０ｍｇ／ｍＬ、約１００ｍｇ／ｍＬ〜約２５０ｍｇ／ｍＬ、約１５０ｍｇ／ｍｍＬ〜約２５０ｍｇ／ｍＬ、約２５ｍｇ／ｍＬ〜約１００ｍｇ／ｍＬ、約５０ｍｇ／ｍＬ〜約１００ｍｇ／ｍＬ、約２５ｍｇ／ｍＬ〜約１２５ｍｇ／ｍＬ、または約５０ｍｇ／ｍＬ〜約１２５ｍｇ／ｍＬである。いくつかの実施形態では、抗体を含む液体組成物中の抗体の濃度は、約２５ｍｇ／ｍＬ、約４０ｍｇ／ｍＬ、約５０ｍｇ／ｍＬ、約６０ｍｇ／ｍＬ、約７０ｍｇ／ｍＬ、約１００ｍｇ／ｍＬ、約１２５ｍｇ／ｍＬ、約１５０ｍｇ／ｍＬ、約２００ｍｇ／ｍＬ、または約２５０ｍｇ／ｍＬである。いくつかの実施形態では、糖は、スクロースまたはトレハロースである。ある特定の実施形態では、ＴＢＡの、液体組成物への添加は、抗体の完全性または安定性に対する影響がない。
【００２２】
一実施形態では、本発明は、凍結乾燥抗体組成物の再構成時間の低減方法を提供し、該方法は、少なくとも約３６０：１の糖：抗体のモル比で抗体及び糖を含む液体組成物を調製することと（抗体を含む液体組成物中の抗体の量は、約１５０ｍｇ〜約１１グラムである）、ｔｅｒｔ−ブチルアルコール（ＴＢＡ）を液体組成物に添加して液体抗体／ＴＢＡ混合物を形成することと（液体抗体／ＴＢＡ混合物中のＴＢＡの量は、約５体積％〜２０体積％である）、液体抗体／ＴＢＡ混合物を冷凍することと、液体抗体／ＴＢＡ混合物を凍結乾燥して凍結乾燥抗体組成物を形成することと、凍結乾燥抗体組成物を希釈液で再構成することと、を含み、ＴＢＡの存在下で凍結乾燥された抗体を再構成するための時間は、ＴＢＡの不在下で凍結乾燥された同量の同じ抗体を再構成するための時間よりも少ない。いくつかの実施形態では、液体抗体／ＴＢＡ混合物を形成するために液体抗体組成物に添加されるＴＢＡの量は、約５体積％〜６体積％である。いくつかの実施形態では、抗体を含む液体組成物中の抗体の量は、約１５０ｍｇ、約２５０ｍｇ、約５００ｍｇ、約７５０ｍｇ、約１グラム、約２グラム、約３グラム、約４グラム、約５グラム、約６グラム、約７グラム、約８グラム、約９グラム、約１０グラム、または約１１グラムである。いくつかの実施形態では、抗体を含む液体組成物中の抗体の量は、約１５０ｍｇ〜約１グラム、約５００ｍｇ〜約１グラム、約５００ｍｇ〜約５グラム、約１グラム〜約５グラム、約１グラム〜約１０グラム、または約５グラム〜約１０グラムである。いくつかの実施形態では、抗体を含む液体組成物中の抗体の量は、１１グラム超である。いくつかの実施形態では、糖は、スクロースまたはトレハロースである。ある特定の実施形態では、ＴＢＡの、液体組成物への添加は、抗体の完全性または安定性に対する影響がない。
【００２３】
一実施形態では、本発明は、凍結乾燥抗体組成物の再構成時間の低減方法を提供し、該方法は、少なくとも約３６０：１の糖：抗体のモル比で抗体及び糖を含む液体組成物を調製することと、ｔｅｒｔ−ブチルアルコール（ＴＢＡ）を液体組成物に添加して液体抗体／ＴＢＡ混合物を形成することと（液体抗体／ＴＢＡ混合物中のＴＢＡの量は、約５体積％〜２０体積％である）、液体抗体／ＴＢＡ混合物を冷凍することと、液体抗体／ＴＢＡ混合物を凍結乾燥して凍結乾燥抗体組成物を形成することと、凍結乾燥抗体組成物を希釈液で再構成することと、を含み、ＴＢＡの存在下で凍結乾燥された抗体を再構成するための時間は、ＴＢＡの不在下で凍結乾燥された同量の同じ抗体を再構成するための時間よりも短く、ＴＢＡの存在下で凍結乾燥された凍結乾燥抗体組成物を再構成するための時間は、ＴＢＡの不在下で凍結乾燥された同量の同じ抗体組成物を再構成するための時間と比較して、約４０％〜約９５％低減される。いくつかの実施形態では、液体抗体／ＴＢＡ混合物を形成するために液体抗体組成物に添加されるＴＢＡの量は、約５体積％〜６体積％である。いくつかの実施形態では、ＴＢＡの存在下で凍結乾燥された凍結乾燥抗体組成物を再構成するための時間は、ＴＢＡの不在下で凍結乾燥された同量の同じポリペプチド組成物を再構成するための時間と比較して、約４０％、約５０％、約６０％、約７０％、約８０％、約９０％、約９５％、約５０％〜約６０％、約６０％〜約７０％、約７０％〜約８０％、約８０％〜約９０％、または約９０％〜約９５％低減する。いくつかの実施形態では、糖は、スクロースまたはトレハロースである。ある特定の実施形態では、ＴＢＡの、液体組成物への添加は、抗体の完全性または安定性に対する影響がない。
【００２４】
本発明のいくつかの実施形態では、液体抗体／ＴＢＡ混合物は、バイアル、シリンジ（二室式シリンジを含む）、またはカートリッジ中で凍結乾燥される。いくつかの実施形態では、液体抗体／ＴＢＡ混合物は、ガラスバイアル中で凍結乾燥される。いくつかの実施形態では、バイアルは、６ｃｃバイアル、１０ｃｃバイアル、１５ｃｃバイアル、２０ｃｃバイアル、５０ｃｃバイアル、または１００ｃｃバイアルである。いくつかの実施形態では、バイアルは、０．１ｍＬ、０．３ｍＬ、０．５ｍＬ、１ｍＬ、２ｍＬ、２．５ｍＬ、５ｍＬ、１０ｍＬ、２０ｍＬ、２５ｍＬ、５０ｍＬ、または１００ｍＬの容量または充填量を有する。
【００２５】
いくつかの実施形態では、凍結乾燥抗体組成物の再構成は、凍結乾燥抗体組成物の再構成が真空下で行われる条件下で行われる。いくつかの実施形態では、本発明は、凍結乾燥抗体組成物の再構成時間の低減方法を提供し、該方法は、少なくとも約３６０：１の糖：抗体のモル比で抗体及び糖を含む液体組成物を調製することと、ｔｅｒｔ−ブチルアルコール（ＴＢＡ）を液体組成物に添加して液体抗体／ＴＢＡ混合物を形成することと（液体抗体／ＴＢＡ混合物中のＴＢＡの量は、約５体積％〜２０体積％である）、液体抗体／ＴＢＡ混合物を冷凍することと、液体抗体／ＴＢＡ混合物を凍結乾燥して凍結乾燥抗体組成物を形成することと、凍結乾燥抗体組成物を希釈液で再構成することと、を含み、凍結乾燥抗体組成物の再構成は、凍結乾燥抗体組成物が真空下にある条件下で行われ、さらにＴＢＡの存在下で凍結乾燥された抗体を再構成するための時間は、ＴＢＡの不在下で凍結乾燥された同量の同じ抗体を再構成するための時間よりも少ない。いくつかの実施形態では、液体抗体／ＴＢＡ混合物を形成するために液体抗体組成物に添加されるＴＢＡの量は、約５体積％〜６体積％である。いくつかの実施形態では、真空は、深真空である。いくつかの実施形態では、真空は、部分真空である。ある特定の実施形態では、真空は、１００Ｔｏｒｒ未満である。ある特定の実施形態では、真空は、５０Ｔｏｒｒ未満である。ある特定の実施形態では、真空は、１００ｍＴｏｒｒ〜５０Ｔｏｒｒである。一実施形態では、真空は、１００ｍＴｏｒｒである。
【００２６】
いくつかの実施形態では、凍結乾燥抗体組成物の再構成は、機械撹拌器などの撹拌器を使用して行われる。一実施形態では、本発明は、凍結乾燥抗体組成物の再構成時間の低減方法を提供し、該方法は、少なくとも約３６０：１の糖：抗体のモル比で抗体及び糖を含む液体組成物を調製することと、ｔｅｒｔ−ブチルアルコール（ＴＢＡ）を液体組成物に添加して液体抗体／ＴＢＡ混合物を形成することと（液体抗体／ＴＢＡ混合物中のＴＢＡの量は、約５体積％〜２０体積％である）、液体抗体／ＴＢＡ混合物を冷凍することと、液体抗体／ＴＢＡ混合物を凍結乾燥して凍結乾燥抗体組成物を形成することと、凍結乾燥抗体組成物を、撹拌器を使用することにより希釈液で再構成することと、を含み、ＴＢＡの存在下で凍結乾燥された抗体を再構成するための時間は、ＴＢＡの不在下で凍結乾燥された同量の同じ抗体を再構成するための時間よりも少ない。いくつかの実施形態では、バイアルまたは容器は、撹拌器上に置かれる。いくつかの実施形態では、液体抗体／ＴＢＡ混合物を形成するために液体抗体組成物に添加されるＴＢＡの量は、約５体積％〜６体積％である。
【００２７】
いくつかの実施形態では、凍結乾燥抗体組成物の再構成は、凍結乾燥抗体組成物が真空下にある条件下で撹拌器を使用して行われる。一実施形態では、本発明は、凍結乾燥抗体組成物の再構成時間の低減方法を提供し、該方法は、少なくとも約３６０：１の糖：抗体のモル比で抗体及び糖を含む液体組成物を調製することと、ｔｅｒｔ−ブチルアルコール（ＴＢＡ）を液体組成物に添加して液体抗体／ＴＢＡ混合物を形成することと（液体抗体／ＴＢＡ混合物中のＴＢＡの量は、約５体積％〜２０体積％である）、液体抗体／ＴＢＡ混合物を冷凍することと、液体抗体／ＴＢＡ混合物を凍結乾燥して凍結乾燥抗体組成物を形成することと、凍結乾燥抗体組成物を、撹拌器を使用することにより希釈液で再構成することと、を含み、凍結乾燥抗体組成物の再構成は、凍結乾燥抗体組成物が真空下にある条件下で行われ、さらにＴＢＡの存在下で凍結乾燥された抗体を再構成するための時間は、ＴＢＡの不在下で凍結乾燥された同量の同じ抗体を再構成するための時間よりも少ない。いくつかの実施形態では、真空は、深真空である。いくつかの実施形態では、真空は、部分真空である。ある特定の実施形態では、真空は、１００Ｔｏｒｒ未満である。ある特定の実施形態では、真空は、５０Ｔｏｒｒ未満である。ある特定の実施形態では、真空は、１００ｍＴｏｒｒ〜５０Ｔｏｒｒである。一実施形態では、真空は、１００ｍＴｏｒｒである。いくつかの実施形態では、液体抗体／ＴＢＡ混合物を形成するために液体抗体組成物に添加されるＴＢＡの量は、約５体積％〜６体積％である。
【００２８】
本開示の方法のステップは、一個人または実体によって行われ得るか、またはステップは、複数の人々によってもしくは複数の実体によって行われ得る。ステップは、一個人または一実体の指示で、複数の人々または複数の実体によって行われてもよい。例えば、一個人または実態は、ポリペプチド及び糖を含む液体組成物を調製することができ、異なる個人または実態は、液体ポリペプチド／ＴＢＡ混合物を冷凍する前に、ＴＢＡを液体組成物に添加して、液体ポリペプチド／ＴＢＡ混合物を形成することができる。別の実施例では、一個人または実態は、液体ポリペプチド／ＴＢＡ混合物を凍結乾燥して、凍結乾燥ポリペプチド組成物を形成することができ、異なる個人または実態は、凍結乾燥ポリペプチド組成物を希釈液で再構成することができる。
【００２９】
したがって、一態様において、本発明は、凍結乾燥ポリペプチドまたは抗体組成物の再構成時間の低減方法を提供し、該方法は、ｔｅｒｔ−ブチルアルコール（ＴＢＡ）を、少なくとも約３６０：１のモル比でポリペプチドまたは抗体及び糖を含む液体組成物に添加して、液体ポリペプチドまたは抗体／ＴＢＡ混合物を形成することと（液体ポリペプチドまたは抗体／ＴＢＡ混合物中のＴＢＡの量は、約５体積％〜２０体積％である）、液体ポリペプチドまたは抗体／ＴＢＡ混合物を冷凍することと、液体ポリペプチドまたは抗体／ＴＢＡ混合物を凍結乾燥して凍結乾燥ポリペプチドまたは抗体組成物を形成することと、凍結乾燥ポリペプチドまたは抗体組成物を希釈液で再構成することと、を含み、ＴＢＡの存在下で凍結乾燥されたポリペプチドまたは抗体を再構成するための時間は、ＴＢＡの不在下で凍結乾燥された同量の同じポリペプチドまたは抗体を再構成するための時間よりも少ない。いくつかの実施形態では、液体ポリペプチドまたは抗体／ＴＢＡ混合物中のＴＢＡの量は、約５体積％〜６体積％である。
【００３０】
別の態様において、本発明は、凍結乾燥ポリペプチドまたは抗体組成物の再構成時間の低減方法を提供し、該方法は、ｔｅｒｔ−ブチルアルコール（ＴＢＡ）を、少なくとも約３６０：１のモル比でポリペプチドまたは抗体及び糖を含む液体組成物に添加して、液体ポリペプチドまたは抗体／ＴＢＡ混合物を形成することと（液体ポリペプチドまたは抗体／ＴＢＡ混合物中のＴＢＡの量は、約５体積％〜２０体積％である）、液体ポリペプチドまたは抗体／ＴＢＡ混合物を冷凍することと、液体ポリペプチドまたは抗体／ＴＢＡ混合物を凍結乾燥して凍結乾燥ポリペプチドまたは抗体組成物を形成することと、を含み、凍結乾燥ポリペプチドまたは抗体組成物は、その後、希釈液で再構成され、ＴＢＡの存在下で凍結乾燥されたポリペプチドまたは抗体を再構成するための時間は、ＴＢＡの不在下で凍結乾燥された同量の同じポリペプチドまたは抗体を再構成するための時間よりも少ない。いくつかの実施形態では、液体ポリペプチドまたは抗体／ＴＢＡ混合物中のＴＢＡの量は、約５体積％〜６体積％である。
【００３１】
本発明は、凍結乾燥に好適な液体抗体製剤を提供する。いくつかの実施形態では、本発明は、凍結乾燥に好適な液体抗体製剤を提供し、該製剤は、抗体、糖、希釈液、及びＴＢＡを含み、液体製剤中のＴＢＡの量は、約５体積％〜２０体積％であり、液体製剤中の糖の量は、少なくとも約３６０：１の糖：抗体のモル比であり、ＴＢＡの存在下で凍結乾燥された抗体を再構成するための時間は、ＴＢＡの不在下で凍結乾燥された同量の同じ抗体を再構成するための時間よりも少ない。いくつかの実施形態では、液体製剤中のＴＢＡの量は、５体積％、７．５体積％、１０体積％、１２．５体積％、１５体積％、１７．５体積％、及び２０体積％からなる群から選択される。他の実施形態では、液体抗体／ＴＢＡ混合物を形成するために液体抗体組成物に添加されるＴＢＡの量は、約５体積％〜約１０体積％である。いくつかの実施形態では、液体製剤中のＴＢＡの量は、約５体積％〜６体積％である。一実施形態では、ＴＢＡは、液体抗体／ＴＢＡ混合物を冷凍する直前に、抗体を含む液体組成物に添加される。いくつかの実施形態では、糖は、スクロースまたはトレハロースである。ある特定の実施形態では、液体抗体製剤中のＴＢＡの存在は、抗体の完全性または安定性に対する影響がない。
【００３２】
本発明は、凍結乾燥抗体組成物を提供し、該凍結乾燥抗体組成物は、少なくとも約３６０：１の糖：抗体のモル比で抗体及び糖を含む液体組成物を調製すること、ｔｅｒｔ−ブチルアルコール（ＴＢＡ）を液体組成物に添加して液体抗体／ＴＢＡ混合物を形成すること（液体抗体／ＴＢＡ混合物中のＴＢＡの量は、約５体積％〜２０体積％である）、液体抗体／ＴＢＡ混合物を冷凍すること、液体抗体／ＴＢＡ混合物を凍結乾燥して凍結乾燥抗体組成物を形成するによって産生され、希釈液による凍結乾燥抗体組成物の再構成時に、ＴＢＡの存在下で凍結乾燥された抗体を再構成するための時間は、ＴＢＡの不在下で凍結乾燥された同量の同じ抗体を再構成するための時間よりも少ない。いくつかの実施形態では、液体製剤中のＴＢＡの量は、５体積％、７．５体積％、１０体積％、１２．５体積％、１５体積％、１７．５体積％、及び２０体積％からなる群から選択される。他の実施形態では、液体抗体／ＴＢＡ混合物を形成するために液体抗体組成物に添加されるＴＢＡの量は、約５体積％〜約１０体積％である。いくつかの実施形態では、液体抗体／ＴＢＡ混合物を形成するために液体抗体組成物に添加されるＴＢＡの量は、約５体積％〜約６体積％である。一実施形態では、ＴＢＡは、液体抗体／ＴＢＡ混合物を冷凍する直前に、抗体を含む液体組成物に添加される。いくつかの実施形態では、糖は、スクロースまたはトレハロースである。ある特定の実施形態では、ＴＢＡの、液体組成物への添加は、液体組成物中または凍結乾燥抗体組成物中の抗体の完全性または安定性に対する影響がない。
【図面の簡単な説明】
【００３３】
【図１】０％、０．５％、１％、５％、及び２０％（ｖ／ｖ）のｔｅｒｔ−ブチルアルコールを含有する凍結乾燥抗体製剤の再構成時間を示すデータを記載する。
【図２】６ｃｃバイアル中に凍結乾燥された０％、５％、及び１０％（ｖ／ｖ）ｔｅｒｔ−ブチルアルコールを含有する２．５ｍＬの凍結乾燥抗体製剤の再構成時間を示すデータを記載する。
【図３】５０ｃｃバイアル中に凍結乾燥された０％、１％、５％、１０％、及び２０％（ｖ／ｖ）ｔｅｒｔ−ブチルアルコールを含有する２５ｍＬの凍結乾燥抗体製剤の再構成時間を示すデータを記載する。
【図４】１００ｃｃバイアル中に凍結乾燥された０％、５％、及び１０％（ｖ／ｖ）ｔｅｒｔ−ブチルアルコールを含有する６０ｍＬの凍結乾燥抗体製剤の再構成時間に対する真空の効果を示すデータを記載する。
【図５】１００ｃｃバイアル中に凍結乾燥された０％、５％、及び１０％（ｖ／ｖ）ｔｅｒｔ−ブチルアルコールを含有する１００ｍＬの凍結乾燥抗体製剤の再構成時間に対する撹拌器の効果を示すデータを記載する。
【図６】１００ｃｃバイアル中に凍結乾燥された０％、５％、及び１０％（ｖ／ｖ）ｔｅｒｔ−ブチルアルコールを含有する１００ｍＬの凍結乾燥抗体製剤の再構成時間に対する真空及び撹拌器の効果を示すデータを記載する。
【図７】１００ｃｃバイアル中に０％または５％（ｖ／ｖ）ｔｅｒｔ−ブチルアルコールを含有する１００ｍＬの凍結乾燥抗体製剤の再構成時間に対する真空、撹拌器、ならびに真空及び撹拌器の効果を示すデータを記載する。
【図８Ａ】サイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）によって測定して、２〜８℃または３０℃のいずれかで、０％、１％、５％、１０％、及び２０％（ｖ／ｖ）のｔｅｒｔ−ブチルアルコールを含有する抗体製剤の７日安定性分析を示すデータを記載する。
【図８Ｂ】サイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）によって測定して、２〜８℃または３０℃のいずれかで、０％、１％、５％、１０％、及び２０％（ｖ／ｖ）のｔｅｒｔ−ブチルアルコールを含有する抗体製剤の７日安定性分析を示すデータを記載する。
【図９】ＩＥＣによって測定して、２〜８℃または３０℃のいずれかで、０％、１％、５％、１０％、及び２０％（ｖ／ｖ）のｔｅｒｔ−ブチルアルコールを含有する抗体製剤の７日安定性分析を示すデータを記載する。
【図１０Ａ】０％、５％、または１０％（ｖ／ｖ）ｔｅｒｔ−ブチルアルコールを含有する凍結乾燥前の液体抗体混合物から生成された凍結乾燥抗体製剤の、５０℃での４ヶ月安定性分析を示すデータを記載する。モノマーパーセンテージを、ＳＥＣによって測定した。図１０Ａは、ｍＡｂ１の結果を示し、図１０Ｂは、ｍＡｂ２の結果を示す。
【図１０Ｂ】０％、５％、または１０％（ｖ／ｖ）ｔｅｒｔ−ブチルアルコールを含有する凍結乾燥前の液体抗体混合物から生成された凍結乾燥抗体製剤の、５０℃での４ヶ月安定性分析を示すデータを記載する。モノマーパーセンテージを、ＳＥＣによって測定した。図１０Ａは、ｍＡｂ１の結果を示し、図１０Ｂは、ｍＡｂ２の結果を示す。
【発明を実施するための形態】
【００３４】
本発明は、特に、ポリペプチド製剤、凍結乾燥製剤、凍結乾燥製剤の作製方法、ならびに凍結乾燥ポリペプチドの再構成時間を低減するのに有用な方法及び製剤を提供する。
【００３５】
定義
本明細書の「抗体」という用語は、最も広義に使用され、それらが所望の抗原結合活性を呈する限り、モノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、多重特異性抗体（例えば、二重特異性抗体）、及び抗体断片を含むがこれらに限定されない、様々な抗体構造を包含する。
【００３６】
「抗体断片」とは、無傷の抗体が結合する抗原に結合する、無傷の抗体の一部分を含む無傷の抗体以外の分子を指す。抗体断片の例には、Ｆｖ、Ｆａｂ、Ｆａｂ′、Ｆａｂ′−ＳＨ、Ｆ（ａｂ′）２；二重特異性抗体；直鎖状抗体；一本鎖抗体分子（例えば、ｓｃＦｖ）；及び抗体断片から形成される多重特異性抗体が含まれるが、これらに限定されない。
【００３７】
「キメラ」抗体という用語は、重鎖及び／または軽鎖の一部分が、特定の源または種に由来する一方で、重鎖及び／または軽鎖の残りの部分が異なる源または種に由来する抗体を指す。
【００３８】
抗体の「クラス」は、その重鎖が所有する定常ドメインまたは定常領域の種類を指す。５つの主要なクラスの抗体、つまり、ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ、及びＩｇＭが存在し、これらのうちのいくつかは、サブクラス（アイソタイプ）、例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１、及びＩｇＡ２にさらに分類され得る。免疫グロブリンの異なるクラスに対応する重鎖定常ドメインはそれぞれ、α、δ、ε、γ、及びμと呼ばれる。
【００３９】
「完全長抗体」、「無傷抗体」、及び「全抗体」という用語は、本明細書で、天然抗体構造と実質的に同様の構造を有するか、または本明細書に定義されるＦｃ領域を含有する重鎖を有する抗体を指すように同義に使用される。
【００４０】
「ヒト抗体」は、ヒトもしくはヒト細胞により産生された抗体、またはヒト抗体レパートリーもしくは他のヒト抗体コード配列を利用する非ヒト源に由来する抗体のアミノ酸配列に対応するアミノ酸配列を保有するものである。ヒト抗体のこの定義は、非ヒト抗原結合残基を含むヒト化抗体を具体的に排除する。
【００４１】
「ヒト化」抗体は、非ヒトＨＶＲからのアミノ酸残基及びヒトＦＲからのアミノ酸残基を含むキメラ抗体を指す。ある特定の実施形態では、ヒト化抗体は、少なくとも１つ、及び典型的には２つの可変ドメインの実質的に全てを含み、そのＨＶＲ（例えば、ＣＤＲ）の全てまたは実質的に全てが非ヒト抗体のものに対応し、ＦＲの全てまたは実質的に全てがヒト抗体のものに対応する。ヒト化抗体は、任意で、ヒト抗体に由来する抗体定常領域の少なくとも一部分を含み得る。抗体、例えば、非ヒト抗体の「ヒト化型」は、ヒト化を受けた抗体を指す。
【００４２】
「免疫コンジュゲート」は、細胞傷害性剤を含むが、これに限定されない１つ以上の異種分子（複数可）にコンジュゲートされる抗体である。
【００４３】
「抗体−薬物コンジュゲート」は、細胞傷害性剤を含むが、これに限定されない１つ以上の異種分子（複数可）にコンジュゲートされる抗体である。
【００４４】
「個体」または「対象」は、哺乳動物である。哺乳動物には、家畜（例えば、ウシ、ヒツジ、ネコ、イヌ、及びウマ）、霊長類（例えば、ヒト、及びサルなどの非ヒト霊長類）、ウサギ、ならびに齧歯類（例えば、マウス及びラット）が含まれるが、これらに限定されない。ある特定の実施形態では、個体または対象は、ヒトである。
【００４５】
「単離された」抗体とは、その天然環境の構成成分から分離された抗体である。いくつかの実施形態では、抗体は、例えば、電気泳動（例えば、ＳＤＳ−ＰＡＧＥ、等電点電気泳動法（ＩＥＦ）、キャピラリー電気泳動法）またはクロマトグラフ（例えば、イオン交換もしくは逆相ＨＰＬＣ）によって決定される、９５％または９９％を超える純度に精製される。抗体の純度を評定するための方法の概説については、例えば、Ｆｌａｔｍａｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒ．Ｂ  ８４８：７９−８７（２００７）を参照されたい。
【００４６】
本明細書で使用される場合、「モノクローナル抗体」という用語は、実質的に同種の抗体の集団から得られた抗体を指し、すなわち、その集団を構成する個々の抗体は、同一であり、及び／または同じエピトープに結合するが、例えば、自然発生突然変異を含有するか、またはモノクローナル抗体調製物の産生中に生じる、起こり得る変異型抗体は例外であり、かかる変異型は一般的に少量で存在する。異なる決定基（エピトープ）に対して指向された異なる抗体を典型的に含むポリクローナル抗体調製物とは対照的に、モノクローナル抗体調製物の各モノクローナル抗体は、抗原上の単一の決定基に対して指向される。したがって、「モノクローナル」という修飾語は、実質的に同種の抗体集団から得られるという抗体の特徴を示し、任意の特定の方法による抗体の産生を必要とするものと解釈されるべきではない。例えば、本発明に従って使用されるモノクローナル抗体は、ハイブリドーマ法、組み換えＤＮＡ法、ファージディスプレイ法、及びヒト免疫グロブリン遺伝子座の全てまたは一部を含有するトランスジェニック動物を利用する方法を含むがこれらに限定されない、様々な技法により作製され得、モノクローナル抗体を作製するためのかかる方法及び他の例示的な方法が、本明細書に記載される。
【００４７】
「ネイキッド抗体」は、異種部分（例えば、細胞傷害性部分）または放射標識にコンジュゲートされていない抗体を指す。ネイキッド抗体は、薬学的製剤中に存在し得る。
【００４８】
「天然抗体」は、様々な構造を有する天然に存在する免疫グロブリン分子を指す。例えば、天然ＩｇＧ抗体は、ジスルフィド結合されている２つの同一の軽鎖及び２つの同一の重鎖から構成される、約１５０，０００ダルトンのヘテロ四量体糖タンパク質である。Ｎ末端からＣ末端まで、各重鎖は、可変重ドメインまたは重鎖可変ドメインとも呼ばれる可変領域（ＶＨ）を有し、その後に３つの定常ドメイン（ＣＨ１、ＣＨ２、ＣＨ３）が続く。同様に、Ｎ末端からＣ末端まで、各軽鎖は、可変軽ドメインまたは軽鎖可変ドメインとも呼ばれる可変領域（ＶＬ）を有し、その後に定常軽（ＣＬ）ドメインが続く。抗体の軽鎖は、その定常ドメインのアミノ酸配列に基づいて、カッパ（κ）及びラムダ（λ）と呼ばれる２つの種類のうちの１つに割り当てられ得る。
【００４９】
「薬学的製剤」という用語は、調製物中に含有される活性成分の生物活性が有効になるような形態であり、かつ製剤が投与される対象にとって許容できないほど有毒である追加の構成成分を全く含有しない調製物を指す。
【００５０】
「薬学的に許容される担体」は、対象にとって無毒である、活性成分以外の薬学的製剤中の成分を指す。薬学的に許容される担体には、緩衝液、賦形剤、安定剤、凍結保護物質（例えば、スクロース、トレハロース）、または保存剤が含まれるが、これらに限定されない。薬学的に許容される担体または希釈液は、注入用の滅菌水を含む。
【００５１】
本明細書で使用される場合、「再構成時間」及びその文法上の変形は、凍結乾燥された分子が溶解され、及び／または液体形態で懸濁されるのに必要な時間の量を指す。例えば、再構成時間には、ポリペプチドの乾燥（すなわち、凍結乾燥）ペレットまたはケークが、凍結乾燥に続いて水または緩衝液中で懸濁されるのに必要な時間が含まれるが、これに限定されない。「低減」または「低減する」または「低減された」再構成時間及びその文法上の変形は、第２の製剤及び／または条件下で凍結乾燥され、同じ液体中に懸濁された同量の同じポリペプチドと比較して、第１の製剤及び／または条件下で凍結乾燥されたポリペプチドの量が液体中に懸濁するために、より少ない時間が必要とされることを意味する。
【００５２】
本明細書で使用される場合、「ケーク」または「凍結乾燥されたケーク」または「ｌｙｏケーク」という用語は、フリーズドライ（すなわち、凍結乾燥）ポリペプチド組成物または製剤を指す。
【００５３】
本明細書で使用される場合、「治療」（及び「治療する」または「治療すること」などのその文法上の変形）とは、治療されている個体の自然経過を変更することを目的とした臨床介入を指し、予防のために、または臨床病理過程中に行われ得る。治療の望ましい効果には、疾患の発生または再発の予防、症状の緩和、疾患の任意の直接的または間接的病理学的帰結の縮小、疾患進行速度の減少、病状の回復または寛解、及び緩解または予後の改善が含まれるが、これらに限定されない。いくつかの実施形態では、本発明の抗体を使用して、疾患の発達を遅延させるか、または疾患の進行を減速させる。
【００５４】
薬学的製剤
本明細書に記載される抗体の薬学的製剤は、所望の程度の純度を有するかかる抗体を、１つ以上の任意の薬学的に許容される担体と混合することによって（Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ′ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ  １６ｔｈ  ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｏｓｏｌ，Ａ．Ｅｄ．（１９８０））、凍結乾燥製剤または水溶液の形態で調製される。薬学的に許容される担体は一般に、レシピエントに対し、用いられる投薬量及び濃度で無毒であり、緩衝液（リン酸、クエン酸、及び他の有機酸など）、アスコルビン酸及びメチオニンを含む酸化防止剤、保存剤（オクタデシルジメチルベンジル塩化アンモニウム、塩化ヘキサメトニウム、塩化ベンザルコニウム、塩化ベンゼトニウム、フェノール、ブチル、もしくはベンジルアルコール、アルキルパラベン（メチルもしくはプロピルパラベンなど）、カテコール、レゾルシノール、シクロヘキサノール、３−ペンタノール、及びｍ−クレゾールなど）、低分子量（約１０残基未満）ポリペプチド、タンパク質（血清アルブミン、ゼラチン、もしくは免疫グロブリンなど）、親水性ポリマー（ポリビニルピロリドンなど）、アミノ酸（グリシン、グルタミン、アスパラギン、ヒスチジン、アルギニン、もしくはリジンなど）、単糖類、二糖類、及び他の炭水化物（グルコース、マンノース、もしくはデキストリンを含む）、キレート剤（ＥＤＴＡなど）、糖類（スクロース、マンニトール、トレハロース、もしくはソルビトールなど）、塩形成対イオン（ナトリウムなど）、金属錯体（例えば、Ｚｎ−タンパク質錯体）、及び／または非イオン性界面活性剤（ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）など）を含むが、これらに限定されない。本明細書における例示的な薬学的に許容される担体は、可溶性の中性活性ヒアルロニダーゼ糖タンパク質（ｓＨＡＳＥＧＰ）、例えば、ｒＨｕＰＨ２０（ＨＹＬＥＮＥＸ（登録商標）、Ｂａｘｔｅｒ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ，Ｉｎｃ．）などのヒト可溶性ＰＨ−２０ヒアルロニダーゼ糖タンパク質などの介在性薬物分散剤をさらに含む。ｒＨｕＰＨ２０を含む、ある特定の例示的なｓＨＡＳＥＧＰ及び使用方法は、米国特許公開第２００５／０２６０１８６号及び同第２００６／０１０４９６８号に記載されている。一態様では、ｓＨＡＳＥＧＰは、コンドロイチナーゼなどの１つ以上の追加のグリコサミノグリカナーゼと組み合わせられる。
【００５５】
例示的な凍結乾燥抗体製剤は、米国特許第６，２６７，９５８号に記載されている。水性抗体製剤には、米国特許第６，１７１，５８６号及び同第ＷＯ２００６／０４４９０８号に記載されるものが含まれ、後者の製剤は、ヒスチジン−酢酸緩衝液を含む。ある特定の実施形態では、本発明の抗体製剤は、液体抗体組成物及びＴＢＡを含み、ＴＢＡは、凍結乾燥前に液体抗体組成物に添加される。いくつかの態様では、本発明の抗体製剤は、０．５体積％、１体積％、２．５体積％、５体積％、７．５体積％、１０体積％、１２．５体積％、１５体積％、１７．５体積％、及び２０体積％からなる群から選択される液体抗体組成物中のＴＢＡの量を含む。他の実施形態では、液体抗体組成物中のＴＢＡの量は、約１体積％〜約２０体積％、約１体積％〜約１０体積％、約１体積％〜約５体積％、約５体積％〜約２０体積％、または約５体積％〜約１０体積％である。
【００５６】
いくつかの実施形態では、本開示の抗体組成物及び製剤は、少なくとも約３６０：１の糖：抗体のモル比で抗体及び糖を含む。いくつかの実施形態では、糖：抗体のモル比は、少なくとも約３６０：１、少なくとも約３８０：１、少なくとも約４００：１、少なくとも約４２０：１、少なくとも約４４０：１、少なくとも約４６０：１、少なくとも約４８０：１、または少なくとも約５００：１であり、これらの数の間のあらゆる値を含む。いくつかの実施形態では、比は、約３６０：１〜約５００：１である。糖は、凍結乾燥中のタンパク質の安定性を改善するための、スクロースもしくはトレハロース、または当該技術分野において知られている任意の他の糖であり得る。本明細書で使用される場合、抗体対トレハロースの重量比を計算するための製剤中のトレハロースの重量は、トレハロース無水物の量（ＭＷ３４２．３０）に基づいている。他の形態のトレハロース（例えば、トレハロース二水和物）が使用される場合、製剤中のトレハロースの重量は、同じモル濃度を有するトレハロース二水和物の重量から変換されるべきである。糖：抗体のモル比を計算するとき、１５０ｋＤａの分子量が、抗体に想定され得る。
【００５７】
本明細書における製剤はまた、治療される特定の適応症に必要な２つ以上の活性成分、好ましくは互いに悪影響を及ぼさない相補的活性を有するものを含有してもよい。かかる活性成分は、意図される目的に有効な量で組み合わせて好適に存在する。
【００５８】
徐放性調製物が調製され得る。徐放性調製物の好適な例としては、抗体を含有する固体疎水性ポリマーの半透性マトリックスが含まれ、これらのマトリックスは、成形物品、例えば、フィルムまたはマイクロカプセルの形態である。
【００５９】
インビボ投与に使用される製剤は一般に、滅菌される。滅菌性は、例えば、滅菌ろ過膜を通したろ過によって容易に達成され得る。
【００６０】
本発明は、特に、ポリペプチド製剤、凍結乾燥製剤、及び凍結乾燥ポリペプチド組成物の再構成時間の低減方法を提供する。凍結乾燥方法及び技法は、当該技術分野において周知である。一般に、凍結乾燥のプロセスは、以下の通りである。溶解された物質（例えば、生体分子、ポリペプチド）を、その最終パッケージまたは保存容器（例えば、バイアル、シリンジ、またはカートリッジ）中で、低温（例えば、−６０℃）で冷凍する。凍結乾燥またはフリーズドライは、それが冷凍され、真空下で置かれた後に、産生物から水が除去されるプロセスであり、氷が液相を通過することなく固体から蒸気に直接変化するのを可能にする。プロセスは、３つの別個及び相互依存のプロセス、つまり冷凍、一次乾燥（昇華）、及び二次乾燥（脱着）を伴う。結果は、ドライ乾燥凍結ケーク（すなわち、ドライｌｙｏケーク）であり、その密度、孔径、総孔体積、及び表面積を含むこの構造は、産生（例えば、希釈液、温度、真空強度、乾燥条件、冷凍条件等）によって制御される。適切な保管により、凍結乾燥生体分子及びポリペプチドは、典型的に、２年または３年にわたって安定したままである。
【００６１】
凍結乾燥容器としては、例えば、バイアル、シリンジ、またはカートリッジが挙げられる。様々なサイズの多くの凍結乾燥容器は、市販されており、これらの多くはガラスで作製されている。凍結乾燥において使用するためのバイアルサイズには、６ｃｃバイアル、１０ｃｃバイアル、１５ｃｃバイアル、２０ｃｃバイアル、５０ｃｃバイアル、１００ｃｃバイアル等が含まれるが、これらに限定されない。０．１ｍＬ、０．３ｍＬ、０．５ｍＬ、１ｍＬ、２ｍＬ、２．５ｍＬ、５ｍＬ、１０ｍＬ、２０ｍＬ、２５ｍＬ、５０ｍＬ、１００ｍＬ等の容量または充填量を有するバイアルを含む、様々な容量（または充填量）の凍結乾燥バイアルもまた入手可能である。
【００６２】
本発明は、凍結乾燥ポリペプチド組成物の再構成時間の低減方法を提供し、該方法は、（ａ）ポリペプチドを含む液体組成物を調製することと、（ｂ）ｔｅｒｔ−ブチルアルコール（ＴＢＡ）を液体組成物に添加して液体ポリペプチド／ＴＢＡ混合物を形成することと、（ｃ）液体ポリペプチド／ＴＢＡ混合物を冷凍することと、（ｄ）液体ポリペプチド／ＴＢＡ混合物を凍結乾燥して凍結乾燥ポリペプチド組成物（すなわち、凍結乾燥ポリペプチドケーク）を形成することと、（ｅ）凍結乾燥ポリペプチド組成物を希釈液で再構成することと、を含み、ＴＢＡの存在下で凍結乾燥されたポリペプチドを再構成するための時間は、ＴＢＡの不在下で凍結乾燥された同量の同じポリペプチドを再構成するための時間よりも少ない。
【００６３】
本発明は、凍結乾燥ポリペプチド組成物の再構成時間を低減するための方法及び製剤を提供し、ＴＢＡは、凍結乾燥前にポリペプチドを含む液体組成物に添加される。ある特定の実施形態では、ポリペプチドを含む液体組成物に添加されるＴＢＡの量は、約０．５体積％〜約２０体積％、約１体積％〜約２０体積％、約１体積％〜約１０体積％、約１体積％〜約５体積％、約５体積％〜約２０体積％、約５体積％〜約１０体積％、または約１０体積％〜約２０体積％である。
【００６４】
他の実施形態では、ポリペプチドを含む液体組成物に添加されるＴＢＡの量は、約０．５体積％、１体積％、２．５体積％、５体積％、７．５体積％、１０体積％、１２．５体積％、１５体積％、１７．５体積％、または２０体積％である。一実施形態では、ポリペプチドを含む液体組成物に添加されるＴＢＡの量は、約５体積％〜６体積％である。一実施形態では、ポリペプチドを含む液体組成物に添加されるＴＢＡの量は、約５体積％である。一実施形態では、ポリペプチドを含む液体組成物に添加されるＴＢＡの量は、４．５体積％、４．６体積％、４．７体積％、４．８体積％、４．９体積％、５体積％、５．１体積％、５．２体積％、５．３体積％、５．４体積％、５．５体積％、５．６体積％、５．７体積％、５．８体積％、５．９体積％、６体積％、６．１体積％、または６．２体積％である。一実施形態では、ポリペプチドを含む液体組成物に添加されるＴＢＡの量は、約１０体積％である。一実施形態では、ポリペプチドを含む液体組成物に添加されるＴＢＡの量は、約２０体積％である。
【００６５】
本発明の方法及び製剤は、ポリペプチドの様々な濃度の再構成時間を低減することにおいて有効であり、特に高濃度ポリペプチド組成物の再構成時間を低減することにおいて有用かつ有効である。例えば、本発明は、凍結乾燥前にポリペプチドを含む液体組成物にＴＢＡを添加することによって、凍結乾燥ポリペプチド組成物の再構成時間を低減することにおいて有効な方法及び製剤を提供し、ポリペプチドを含む液体組成物は、高ポリペプチド濃度を有する。ある特定の実施形態では、ポリペプチドを含む液体組成物中のポリペプチドの濃度は、約１０ｍｇ／ｍＬ〜２５０ｍｇ／ｍＬである。ある特定の実施形態では、ポリペプチドを含む液体組成物中のポリペプチドの濃度は、約２５ｍｇ／ｍＬ〜約２５０ｍｇ／ｍＬ、約５０ｍｇ／ｍＬ〜約２５０ｍｇ／ｍＬ、約１００ｍｇ／ｍＬ〜約２５０ｍｇ／ｍＬ、約１５０ｍｇ／ｍｍＬ〜約２５０ｍｇ／ｍＬ、約２５ｍｇ／ｍＬ〜約１００ｍｇ／ｍＬ、約５０ｍｇ／ｍＬ〜約１００ｍｇ／ｍＬ、約２５ｍｇ／ｍＬ〜約１２５ｍｇ／ｍＬ、または約５０ｍｇ／ｍＬ〜約１２５ｍｇ／ｍＬである。いくつかの実施形態では、ポリペプチドを含む液体組成物中のポリペプチドの濃度は、約２５ｍｇ／ｍＬ、約４０ｍｇ／ｍＬ、約５０ｍｇ／ｍＬ、約６０ｍｇ／ｍＬ、約７０ｍｇ／ｍＬ、約１００ｍｇ／ｍＬ、約１２５ｍｇ／ｍＬ、約１５０ｍｇ／ｍＬ、約２００ｍｇ／ｍＬ、または約２５０ｍｇ／ｍＬである。
【００６６】
本発明の方法及び製剤は、様々な量（ａｍｏｕｎｔｓ）及び量（ｑｕａｎｔｉｔｉｅｓ）のポリペプチドの再構成時間を低減することにおいて有効である。例えば、本発明は、凍結乾燥前にポリペプチドを含む液体組成物にＴＢＡを添加することによって、凍結乾燥ポリペプチド組成物の再構成時間を低減することにおいて有効な方法及び製剤を提供し、ポリペプチドを含む液体組成物は、大量（ｑｕａｎｔｉｔｙまたはａｍｏｕｎｔ）のポリペプチドを有する。ある特定の実施形態では、ポリペプチドを含む液体組成物中のポリペプチドの量は、約１５０ｍｇ〜約１１グラムである。ある特定の実施形態では、ポリペプチドを含む（及び凍結乾燥後の）液体組成物中のポリペプチドの量は、約１５０ｍｇ、約２５０ｍｇ、約５００ｍｇ、約７５０ｍｇ、約１グラム、約２グラム、約３グラム、約４グラム、約５グラム、約６グラム、約７グラム、約８グラム、約９グラム、約１０グラム、または約１１グラムである。いくつかの実施形態では、ポリペプチドを含む液体組成物中のポリペプチドの量は、１１グラム超である。
【００６７】
凍結乾燥容器の渦流または揺動は、凍結乾燥ポリペプチドの再構成時間をさらに改善し得る。本発明のいくつかの実施形態では、凍結乾燥ポリペプチドの再構成は、凍結乾燥容器中の凍結乾燥ポリペプチドに希釈液を添加し、凍結乾燥ポリペプチドが希釈液中に溶解または懸濁されるまで容器を渦流させることによって行われる。本発明の他の実施形態では、凍結乾燥ポリペプチドの再構成は、凍結乾燥容器中の凍結乾燥ポリペプチドに希釈液を添加し、容器を撹拌器（例えば、機械撹拌器）上に置き、凍結乾燥ポリペプチドが希釈液中に溶解または懸濁されるまで凍結乾燥容器を揺動させることによって行われる。
【００６８】
真空下でのポリペプチドの再構成はまた、凍結乾燥ポリペプチドの再構成時間を改善し得る。本発明のいくつかの実施形態では、凍結乾燥ポリペプチドを含む凍結乾燥容器は、再構成中に真空下で維持される。一実施形態では、凍結乾燥ポリペプチドを含む凍結乾燥容器は、再構成中に完全真空下にある。ある特定の実施形態では、凍結乾燥ポリペプチドを含む凍結乾燥容器は、再構成中に１００Ｔｏｒｒ未満である。ある特定の実施形態では、凍結乾燥ポリペプチドを含む凍結乾燥容器は、再構成中に５０Ｔｏｒｒ未満である。ある特定の実施形態では、凍結乾燥ポリペプチドを含む凍結乾燥容器は、１００ｍＴｏｒｒ〜５０Ｔｏｒｒである。一実施形態では、凍結乾燥ポリペプチドを含む凍結乾燥容器は、１００ｍＴｏｒｒである。
【００６９】
本発明は、本発明の方法によって産生される凍結乾燥ポリペプチド組成物を提供する。いくつかの実施形態では、本発明は、凍結乾燥ポリペプチド組成物を提供し、該凍結乾燥ポリペプチド組成物は、ポリペプチドを含む液体組成物を調製すること、ｔｅｒｔ−ブチルアルコール（ＴＢＡ）を液体組成物に添加して液体ポリペプチド／ＴＢＡ混合物を形成すること、液体ポリペプチド／ＴＢＡ混合物を冷凍すること、液体ポリペプチド／ＴＢＡ混合物を凍結乾燥して凍結乾燥ポリペプチド組成物を形成することによって産生され、凍結乾燥ポリペプチド組成物の、希釈液での再構成時に、ＴＢＡの存在下で凍結乾燥されたポリペプチドを再構成するための時間は、ＴＢＡの不在下で凍結乾燥された同量の同じポリペプチドを再構成するための時間よりも少ない。ある特定の実施形態では、凍結乾燥ポリペプチド組成物は、ポリペプチドを含む凍結乾燥ケークである。
【００７０】
本発明は、本発明の方法によって産生される液体ポリペプチド組成物を提供する。いくつかの実施形態では、本発明は、液体ポリペプチド組成物を提供し、該液体ポリペプチド組成物は、ポリペプチドを含む液体組成物を調製すること、及びｔｅｒｔ−ブチルアルコール（ＴＢＡ）を液体組成物に添加して液体ポリペプチド／ＴＢＡ混合物を形成することによって産生され、液体ポリペプチド組成物を形成するための液体ポリペプチド／ＴＢＡ混合物、及びその後の凍結乾燥ポリペプチド組成物の、希釈液での再構成時に、ＴＢＡの存在下で凍結乾燥されたポリペプチドを再構成するための時間は、ＴＢＡの不在下で凍結乾燥された同量の同じポリペプチドを再構成するための時間よりも少ない。
【００７１】
本開示のいくつかの実施形態では、少なくとも約３６０：１の糖：抗体のモル比で抗体及び糖を含む液体組成物へのＴＢＡの添加は（液体抗体／ＴＢＡ混合物中のＴＢＡの量は、約５体積％〜２０体積％である）、液体抗体／ＴＢＡ混合物中、凍結乾燥抗体組成物中、または凍結乾燥に好適な液体抗体製剤中の抗体の完全性または安定性に対する影響がない。かかる実施形態では、抗体は、液体組成物中または凍結乾燥組成物中での保管時に、その物理的安定性及び／または化学的安定性及び／または生物学的活性を本質的に保持する。好ましくは、本明細書に提供される組成物及び製剤中の抗体は、保管時に、その物理的及び化学的安定性、ならびにその生物学的活性を本質的に保持する。保管期間は、一般に、製剤の意図される貯蔵寿命に基づいて選択される。タンパク質安定性を測定するための種々の分析技法が当該技術分野で利用可能であり、例えば、Ｐｅｐｔｉｄｅ  ａｎｄ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ，２４７−３０１，Ｖｉｎｃｅｎｔ  Ｌｅｅ  Ｅｄ．，Ｍａｒｃｅｌ  Ｄｅｋｋｅｒ，Ｉｎｃ．，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，Ｎ．Ｙ．，Ｐｕｂｓ．（１９９１）及びＪｏｎｅｓ，Ａ．Ａｄｖ．Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ  Ｒｅｖ．１０：２９−９０（１９９３）に概説されている。安定性は、選択された温度で選択された期間にわたって測定され得る。
【００７２】
ある特定の実施形態では、凍結乾燥に好適な液体抗体製剤は、約４０℃で少なくとも約１、２、３、４、５、６、７、１４、２１、２８日、またはそれ以上にわたって安定である。ある特定の実施形態では、液体抗体製剤は、約４０℃で少なくとも約１、２、３、４、５、６、７、８週間、またはそれ以上にわたって安定である。ある特定の実施形態では、液体抗体製剤は、約２５℃で少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４ヶ月、またはそれ以上にわたって安定である。ある特定の実施形態では、液体抗体製剤は、約５℃で少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４ヶ月、またはそれ以上にわたって安定である。ある特定の実施形態では、液体抗体製剤は、約−２０℃以下で少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８ヶ月、またはそれ以上にわたって安定である。さらに、液体抗体製剤は、好ましくは液体抗体製剤の冷凍（例えば、−２０℃、−４０℃、または−７０℃まで）及び解凍後、例えば１、２、３、４、または５サイクルの冷凍及び解凍後に安定である。
【００７３】
ある特定の実施形態では、凍結乾燥抗体組成物は、約２５℃で少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８週間、もしくはそれ以上、または少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４ヶ月、もしくはそれ以上にわたって安定である。ある特定の実施形態では、凍結乾燥抗体組成物は、約５℃で少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４ヶ月、またはそれ以上にわたって安定である。ある特定の実施形態では、凍結乾燥抗体組成物は、約−２０℃以下で少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０年、またはそれ以上にわたって安定である。
【００７４】
安定性は、様々な異なる方法で、例えば、凝集体形成の評価によって（例えば、サイズ排除クロマトグラフィーを使用して、濁度を測定することによって、及び／または目視検査によって）、カチオン交換クロマトグラフィーまたはキャピラリーゾーン電気泳動を使用して電荷不均一性を評定することによって、アミノ末端またはカルボキシ末端配列分析によって、質量分光分析によって、還元されたインタクトな抗体を比較するＳＤＳ−ＰＡＧＥ分析によって、ペプチドマッピング（例えば、トリプシンまたはＬＹＳ−Ｃ）分析によって、抗体の生物学的活性または抗原結合機能を評価することによって、質的及び／または量的に評価され得る。不安定性は、凝集、脱アミド化（例えば、Ａｓｎ脱アミド化）、酸化（例えば、Ｍｅｔ酸化）、異性化（例えば、Ａｓｐ異性化）、クリッピング／加水分解／断片化（例えば、ヒンジ領域断片化）、スクシンイミド形成、不対システイン（複数可）、Ｎ末端伸長、Ｃ末端処理、グリコシル化差異等のうちのいずれか１つ以上を伴い得る。
【００７５】
抗体は、それが、色及び／または透明度の目視検査時に、または当該技術分野において既知の方法、例えば、ＵＶ光散乱もしくはサイズ排除クロマトグラフィーなどによって測定されたときに、凝集、沈殿、及び／または変性の兆候をほとんどまたは全く示さない場合、組成物または薬学的製剤中で「その物理的安定性を保持する」。
【００７６】
抗体は、所与の時点での化学的安定性が、抗体が以下に定義されるその生物学的活性を依然として保持しているとみなされるようなものである場合、組成物または薬学的製剤中で「その化学的安定性を保持する」。化学的安定性は、抗体の化学的に改変された形態を検出及び定量することによって評定され得る。化学的改変は、例えば、サイズ排除クロマトグラフィー、ＳＤＳ−ＰＡＧＥ、及び／またはマトリックス補助レーザー脱着イオン化／飛行時間型質量分析（ＭＡＬＤＩ／ＴＯＦ  ＭＳ）を使用して評価され得るサイズ修正（例えば、クリッピング）を含み得る。他のタイプの化学的改変としては、例えば、イオン交換クロマトグラフィーまたはｉｃＩＥＦによって評価され得る電荷改変（例えば、脱アミド化の結果として起こる）が挙げられる。
【００７７】
抗体は、所与の時点での抗体の生物学的活性が、例えば、抗原結合アッセイで決定されたときに、組成物または薬学的製剤が調製された時点で呈される生物学的活性の約１０％以内である場合（アッセイのエラー内）、組成物または薬学的製剤中で「その生物学的活性を保持する」。抗体の他の「生物学的活性」アッセイは、本明細書で以下に詳述される。
【００７８】
本明細書で使用される場合、モノクローナル抗体の「生物学的活性」とは、抗原に結合する抗体の能力を指す。これは、抗原に結合し、インビトロまたはインビボで測定され得る測定可能な生物学的応答をもたらす抗体をさらに含み得る。かかる活性は、アンタゴニスト活性またはアゴニスト活性であり得る。
【００７９】
抗体
本発明に従って製剤化され得る抗体を産生するための例示的な技法が本明細書に提供される。一実施形態では、抗体が結合する抗原は、生物学的に重要なタンパク質であり、疾患または障害に罹患している哺乳動物への抗体の投与により、その哺乳動物に治療的利益がもたらされ得る。しかしながら、非ポリペプチド抗原（腫瘍関連糖脂質抗原など、米国特許第５，０９１，１７８号を参照されたい）を対象とする抗体もまた企図される。
【００８０】
抗原がポリペプチドである場合、それは、膜貫通分子（例えば、受容体）または成長因子等のリガンドであり得る。例示的な抗原としては、分子、例えば、レニン；ヒト成長ホルモン及びウシ成長ホルモンを含む成長ホルモン；成長ホルモン放出因子；副甲状腺ホルモン；甲状腺刺激ホルモン；リポタンパク質；α−１−抗トリプシン；インスリンＡ鎖；インスリンＢ鎖；プロインスリン；卵胞刺激ホルモン；カルシトニン；黄体形成ホルモン；グルカゴン；抗凝固因子、例えば、タンパク質Ｃ；心房性ナトリウム利尿因子；肺界面活性剤；プラスミノーゲン活性化因子、例えば、ウロキナーゼまたはヒト尿もしくは組織型プラスミノーゲン活性化因子（ｔ−ＰＡ）；ボンベシン；トロンビン；造血成長因子；腫瘍壊死因子−α及び−β；エンケファリナーゼ；ＲＡＮＴＥＳ（活性化時に調節され、Ｔ細胞が正常に発現及び分泌している）；ヒトマクロファージ炎症性タンパク質（ＭＩＰ−１−α）；血清アルブミン、例えば、ヒト血清アルブミン；ミュラー管抑制物質；リラキシンＡ鎖；リラキシンＢ鎖；プロリラキシン；マウスゴナドトロピン関連ペプチド；微生物タンパク質、例えば、β−ラクタマーゼ；ＤＮａｓｅ；ＩｇＥ；細胞傷害性Ｔリンパ球関連抗原（ＣＴＬＡ）、例えば、ＣＴＬＡ−４；インヒビン；アクチビン；ホルモンまたは成長因子受容体；タンパク質ＡまたはＤ；リウマチ因子；神経栄養因子、例えば、骨由来神経栄養因子（ＢＤＮＦ）、ニューロトロフィン−３、ニューロトロフィン−４、ニューロトロフィン−５、もしくはニューロトロフィン−６（ＮＴ−３、ＮＴ−４、ＮＴ−５、もしくはＮＴ−６）、または神経成長因子、例えば、ＮＧＦ−β；血小板由来成長因子（ＰＤＧＦ）；線維芽細胞成長因子、例えば、ａＦＧＦ及びｂＦＧＦ；上皮成長因子（ＥＧＦ）；形質転換成長因子（ＴＧＦ）、例えば、ＴＧＦ−β１、ＴＧＦ−β２、ＴＧＦ−β３、ＴＧＦ−β４、またはＴＧＦ−β５を含むＴＧＦ−α及びＴＧＦ−β；インスリン様成長因子Ｉ及びＩＩ（ＩＧＦ−Ｉ及びＩＧＦ−ＩＩ）；ｄｅｓ（１−３）−ＩＧＦ−Ｉ（脳ＩＧＦ−Ｉ）、インスリン様成長因子結合タンパク質；ＣＤタンパク質、例えば、ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ８、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２２、及びＣＤ４０；エリスロポエチン；骨誘導因子；免疫毒素；骨形成タンパク質（ＢＭＰ）；インターフェロン、例えば、インターフェロン−α、インターフェロン−β、及びインターフェロン−γ；コロニー刺激因子（ＣＳＦ）、例えば、Ｍ−ＣＳＦ、ＧＭ−ＣＳＦ、及びＧ−ＣＳＦ；インターロイキン（ＩＬ）、例えば、ＩＬ−１、ＩＬ−２、ＩＬ−３、ＩＬ−４、ＩＬ−５、ＩＬ−６、ＩＬ−７、ＩＬ−８、ＩＬ−９、及びＩＬ−１０；スーパーオキシドジスムターゼ；Ｔ細胞受容体；表面膜タンパク質；崩壊促進因子；ウイルス抗原、例えば、ＡＩＤＳエンベロープの一部分など；輸送タンパク質；ホーミング受容体；アドレシン；調節タンパク質；インテグリン、例えば、ＣＤ１  ｌａ、ＣＤ１  ｌｂ、ＣＤ１  ｌｃ、ＣＤ１８、ＩＣＡＭ、ＶＬＡ−４、及びＶＣＡＭ；腫瘍関連抗原、例えば、ＨＥＲ２、ＨＥＲ３、またはＨＥＲ４受容体；ならびに上述のポリペプチドのうちのいずれかの断片が挙げられる。
【００８１】
本発明によって包含される抗体の例示的な分子標的としては、ＣＤタンパク質、例えば、ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ８、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＣＤ３４、及びＣＤ４０；ＥｒｂＢ受容体ファミリーのメンバー、例えばＥＧＦ受容体、ＨＥＲ２、ＨＥＲ３、またはＨＥＲ４受容体；Ｂ細胞表面抗原、例えばＣＤ２０またはＢＲ３；腫瘍壊死受容体スーパーファミリーのメンバー（ＤＲ５を含む）；前立腺幹細胞抗原（ＰＳＣＡ）；細胞癒着分子、例えば、ＬＦＡ−１、Ｍａｃｌ、ｐｌ５０．９５、ＶＬＡ−４、ＩＣＡＭ−１、ＶＣＡＭ、α４／β７インテグリン、及びαｖ／β３インテグリン（そのαまたはβサブユニットのいずれかを含む）（例えば、抗ＣＤ１  ｌａ、抗ＣＤ１８、または抗ＣＤ１  ｌｂ抗体）；成長因子、例えばＶＥＧＦならびにその受容体；組織因子（ＴＦ）；腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）、例えば、ＴＮＦ−αまたはＴＮＦ−β、αインターフェロン（α−ＩＦＮ）；インターロイキン、例えば、ＩＬ−８；ＩｇＥ；血液群抗原；ｆｌｋ２／ｆｌｔ３受容体；肥満（ＯＢ）受容体；ｍｐｌ受容体；ＣＴＬＡ−４；タンパク質Ｃ等が挙げられる。
【００８２】
他の分子に任意でコンジュゲートされる可溶性抗原またはその断片は、抗体を生成するための免疫原として使用され得る。受容体などの膜貫通分子の場合、これらの断片（例えば、受容体の細胞外ドメイン）が免疫原として使用され得る。あるいは、膜貫通分子を発現する細胞が免疫原として使用され得る。かかる細胞は、天然源（例えば、癌細胞株）に由来し得るか、または膜貫通分子を発現するように組み換え技法によって形質転換された細胞であり得る。抗体の調製に有用な他の抗原及びその形態は、当業者には明らかであろう。
【００８３】
本発明に従って製剤化され得る例示的な抗体としては、以下、抗ＨＥＲ２抗体を含む抗ＥｒｂＢ抗体（例えば、トラスツズマブ（ＨＥＲＣＥＰＴＩＮ（登録商標））またはペルツズマブ）；Ｂ細胞表面マーカーに結合する抗体、例えば、ＣＤ２０（例えば、リツキシマブ及びヒト化２Ｈ７／オクレリズマブ）、ＣＤ２２、ＣＤ４０、またはＢＲ３；ＩｇＥに結合する抗体（Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈから市販されているオマリズマブ（ＸＯＬＡＩＲ（登録商標））、Ｅ２６、ＨＡＥ１、そのＦｃ領域の２６５位にアミノ酸置換を有するＩｇＥ抗体（ＵＳ２００４／０１９１２４４  Ａ１）、Ｈｕ−９０１、ＷＯ２００４／０７００１１にあるようなＩｇＥ抗体、またはＩｇＥ上の小さい細胞外セグメントに結合する抗体、Ｍｌ′（例えば、４７Ｈ４ｖ５、米国特許第８，０７１，０９７号を参照）、またＰｒｅｓｔａ  ｅｔ  ａｌ，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５１：２６２３−２６３２（１９９３）を参照；国際公開第ＷＯ９５／１９１８１号；１９９８年２月３日発行の米国特許第５，７１４，３３８号；１９９２年２月２５日発行の米国特許第５，０９１，３１３号、１９９３年３月４日公開のＷＯ９３／０４１７３；１９９９年１月１４日公開のＷＯ９９／０１５５６；及び米国特許第５，７１４，３３８号；血管内皮成長因子（ＶＥＧＦ）（例えば、ベバシズマブ）またはＶＥＧＦ受容体に結合する抗体；抗ＩＬ−８抗体（Ｓｔ  Ｊｏｈｎ  ｅｔ  ａｌ，Ｃｈｅｓｔ，１０３：９３２（１９９３）及び国際公開ＷＯ  ９５／２３８６５）；抗ＰＳＣＡ抗体（ＷＯ０ｌ／４０３０９）；抗ＣＤ４０抗体（Ｓ２Ｃ６及びそのヒト化変異形）（ＷＯ００／７５３４８）；エファリズマブ（ＲＡＰＴＩＶＡ（登録商標））を含む抗ＣＤ１  ｌａ抗体（米国特許第５，６２２，７００号、ＷＯ９８／２３７６１、Ｓｔｅｐｐｅ  ｅｔ  ａｌ，Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔ  Ｉｎｔｌ．４：３−７（１９９１）、及びＨｏｕｒｍａｎｔ  ｅｔ  ａｌ，Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ  ５８：３７７−３８０（１９９４））；抗ＣＤ１８抗体（１９９７年４月２２日発行の米国特許第５，６２２，７００号、または１９９７年７月３１日公開のＷＯ９７／２６９１２にあるような）；抗Ａｐｏ−２受容体抗体（１９９８年１１月１９日公開のＷＯ９８／５１７９３）；ｃＡ２（ＲＥＭＩＣＡＤＥ（登録商標））及びアダリムマブ（ＨＵＭＩＲＡ（登録商標））、ＣＤＰ５７１、及びＭＡＫ−１９５（Ａｆｅｌｉｍｏｍａｂ）を含む、抗ＴＮＦ−α抗体（１９９７年９月３０日発行の米国特許第５，６７２，３４７号、Ｌｏｒｅｎｚ  ｅｔ  ａｌ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５６（４）：１６４６−１６５３（１９９６）、及びＤｈａｉｎａｕｔ  ｅｔ  ａｌ．Ｃｒｉｔ．Ｃａｒｅ  Ｍｅｄ．２３（９）：１４６１−１４６９（１９９５）を参照）；抗組織因子（ＴＦ）（１９９４年１１月９日に付与された欧州特許第０４２０９３７Ｂ１号）；抗ヒトα４β７インテグリン（１９９８年２月１９日公開のＷＯ９８／０６２４８）；抗ＥＧＦＲ抗体（１９９６年１２月１９日公開のＷＯ９６／４０２１０号にあるようなキメラ化またはヒト化２２５抗体を含む）；抗ＣＤ３抗体、例えば、ＯＫＴ３（１９８５年５月７日発行の米国特許第４，５１５，８９３号）；抗ＣＤ２５���たは抗ｔａｃ抗体、例えば、ＣＨＩ−６２１（ＳＩＭＵＬＥＣＴ（登録商標））及び（ＺＥＮＡＰＡＸ（登録商標））（１９９７年１２月２日発行の米国特許第５，６９３，７６２号を参照）；抗ＣＤ４抗体、例えば、ｃＭ−７４１２抗体（Ｃｈｏｙ  ｅｔ  ａｌ．Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ  Ｒｈｅｕｍ  ３９（ｌ）：５２−５６（１９９６））；抗ＣＤ５２抗体、例えば、アレムツズマブ（ＣＡＭＰＡＴＨ−１Ｈ（登録商標））（Ｒｉｅｃｈｍａｎｎ  ｅｔ  ａｌ．Ｎａｔｕｒｅ  ３３２：３２３−３３７（１９８８）；抗Ｆｃ受容体抗体、例えば、Ｇｒａｚｉａｎｏ  ｅｔ  ａｌ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５５（１０）：４９９６−５００２（１９９５）にあるようなＦｃｙＲＩに対して指向されたＭ２２抗体；抗がん胎児性抗原（ＣＥＡ）抗体、例えば、ｈＭＮ−１４（Ｓｈａｒｋｅｙ  ｅｔ  ａｌ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．５５（２３Ｓｕｐｐｌ）：５９３５ｓ−５９４５ｓ（１９９５）；ｈｕＢｒＥ−３、ｈｕ−Ｍｃ３、及びＣＨＬ６を含む乳房内皮細胞に対して指向された抗体（Ｃｅｒｉａｎｉ  ｅｔ  ａｌ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．５５（２３）：５８５２ｓ−５８５６ｓ（１９９５）；及びＲｉｃｈｍａｎ  ｅｔ  ａｌ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．５５（２３  Ｓｕｐｐ）：５９１６ｓ−５９２０ｓ（１９９５））；Ｃ２４２などの結腸癌細胞に結合する抗体（Ｌｉｔｔｏｎ  ｅｔ  ａｌ．ＥｕｒＪ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２６（１）：１−９（１９９６））；抗ＣＤ３８抗体、例えば、ＡＴ１３／５（Ｅｌｌｉｓ  ｅｔ  ａｌ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５５（２）：９２５−９３７（１９９５））；抗ＣＤ３３抗体、例えば、Ｈｕ  Ｍ１９５（Ｊｕｒｃｉｃ  ｅｔ  ａｌ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ  ５５（２３  Ｓｕｐｐｌ）：５９０８ｓ−５９１０ｓ（１９９５）、及びＣＭＡ−６７６またはＣＤＰ７７１；抗ＣＤ２２抗体、例えば、ＬＬ２またはＬｙｍｐｈｏＣｉｄｅ（Ｊｕｗｅｉｄ  ｅｔ  ａｌ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ  ５５（２３  Ｓｕｐｐｌ）：５８９９ｓ−５９０７ｓ（１９９５）；抗ＥｐＣＡＭ抗体、例えば、１７−１Ａ（ＰＡＮＯＲＥＸ（登録商標））；抗ＧｐＩＩｂ／ＩＩＩａ抗体、例えば、アブシキシマブまたはｃ７Ｅ３  Ｆａｂ（ＲＥＯＰＲＯ（登録商標））；抗ＲＳＶ抗体、例えば、ＭＥＤＩ−４９３（ＳＹＮＡＧＩＳ（登録商標））；抗ＣＭＶ抗体、例えば、ＰＲＯＴＯＶＩＲ（登録商標））；抗ＨＩＶ抗体、例えば、ＰＲ０５４２；抗肝炎抗体、例えば、抗Ｈｅｐ  Ｂ抗体  ＯＳＴＡＶＩＲ（登録商標）；抗ＣＡ  １２５抗体ＯｖａＲｅｘ；抗イディオタイプＧＤ３エピトープ抗体ＢＥＣ２；抗ａｖＰ３抗体ＶＩＴＡＸＩＮ（登録商標）；抗ヒト腎細胞癌抗体、例えば、ｃｈ−Ｇ２５０；ＩＮＧ−１；抗ヒト１７−１Ａ抗体（３６２２Ｗ９４）；抗ヒト結腸直腸腫瘍抗体（Ａ３３）；ＧＤ３ガングリオシドに対して指向された抗ヒト黒色腫抗体Ｒ２４；抗ヒト扁平細胞癌（ＳＦ−２５）；及び抗ヒト白血球抗原（ＨＬＡ）抗体、例えば、Ｓｍａｒｔ  ＩＤ１０及び抗ＨＬＡ  ＤＲ抗体Ｏｎｃｏｌｙｍ（Ｌｙｍ−１）；抗ＣＣＲ５（ＰＲＯ  １４０）；ＡＢＴ−３２５；ＡＢＴ−３０８；ＡＢＴ−１４７；抗β７（エトロリズマブ）；抗ＨＥＲ３／ＥＧＦＲ  ＤＡＦ（ＤＬｌ  Ｉｆ）；抗インターロイキン６受容体（ＩＬ６Ｒ）、例えば、トシリズマブ（ＡＣＴＥＭＲＡ（登録商標））；抗ＦｌｕＡ（ＷＯ２０１４／０７８２６８を参照）、ならびに抗Ａβ（ＷＯ２００３／０７０７６０及びＷＯ２００８／０１１３４８を参照）等が挙げられるが、これらに限定されない。
【実施例】
【００８４】
以下は、本発明の方法及び組成物の例である。上述の概要を考慮すると、様々な他の実施形態が実施され得ることを理解する。
【００８５】
実施例１．０〜２０％のＴＢＡを有する２．５ｍＬ及び２５ｍＬのｍＡｂケークの再構成
精製されたモノクローナル抗体（ｍＡｂ）溶液（ｍＡｂ１及びｍＡｂ２）を、１６８ｍＭのスクロース、２０ｍＭのＨｉｓ−ＨＣｌ、０．０３％のＰＳ２０を含有する緩衝液中で７０ｍｇ／ｍＬまで希釈した。ＴＢＡを、２５℃のその融点より上に温めた後、ｍＡｂ試料を以下のように添加した。最大５％の最終ＴＢＡ濃度の場合、ＴＢＡを７０ｍｇ／ｍＬのｍＡｂ溶液に直接添加した。１０％または２０％（体積／体積）の最終ＴＢＡ濃度を有する試料の場合、より高い初期濃度のｍＡｂ１（９０ｍｇ／ｍＬ）及びｍＡｂ２（１００ｍｇ／ｍＬ）を使用し、適量のＴＢＡの添加に続いて、１６８ｍＭのスクロース及び０．０３％  ＰＳ２０を含有する２０ｍＭのＨｉｓ緩衝液を使用して７０ｍｇ／ｍＬのタンパク質まで希釈して、最終ｍＡｂ溶液中１０％のＴＢＡまたは２０％のＴＢＡ（ｖ／ｖ）濃度を得た。
【００８６】
次いで、ｍＡｂ／ＴＢＡ混合物を添加して、Ｓｃｈｏｔｔ管バイアル（２．５ｍＬ充填の場合６ｃｃバイアル、２５ｍＬ充填の場合５０ｃｃバイアル）を洗浄し、脱発熱化した。Ｄａｉｋｙｏ  Ｄ７７７−１  ２０ｍｍ  ｌｙｏストッパーでバイアルを塞いだ。次いで、バイアルを実験室フリーズドライヤーに装填した（Ｌｙｏｓｔａｒ  ＩＩ，ＦＴＳ  Ｓｙｓｔｅｍｓ，Ｓｔｏｎｅ  Ｒｉｄｇｅ，ＮＹまたはＬｙｏｓｔａｒ  ＩＩＩ，ＳＰ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ，Ｓｔｏｎｅ  Ｒｉｄｇｅ，ＮＹ）。
【００８７】
凍結乾燥を以下のように行った。非制御核形成を使用する実験の場合、バイアルを５℃で１時間平衡させた。次いで、シェルフ温度を−０．３℃／分で−３５℃まで低減し、この温度で６時間保持した。
【００８８】
制御核形成を使用する実験の場合、バイアルを−１０℃で２時間平衡させた。チャンバを窒素で５分間にわたって２８．５ｐｓｉｇまで加圧し、次いで約２秒間にわたって減圧した。次いで、シェルフ温度を−０．３℃／分で−３５℃まで低減し、この温度で６時間保持した。乾燥挙動における任意の可能性のある凍結乾燥器間の変動性を避けるために、所与の実験における全てのバイアル試料を、乾燥用の１つの凍結乾燥器中で統合した。一次乾燥を、ピラニ真空管がキャパシタンスマノメーターで集束されるまで、−１０℃のシェルフ温度及び１００ｍＴｏｒｒのチャンバ圧で行った。二次乾燥を（乾燥ケーク中の水分を０．５〜２％の許容レベルまで減少させる）、２０℃のシェルフ温度及び１００ｍＴｏｒｒのチャンバ圧で１２時間行った。凍結乾燥に続いて、バイアルを５℃で保管した。
【００８９】
凍結乾燥されたモノクローナル抗体組成物を、凍結乾燥前に、タンパク質濃度と同一のｍＡｂタンパク質濃度を有する溶液を産生するのに十分な量の注入用滅菌水（希釈液）で再構成した。２．２ｍＬの注入用滅菌水を、元々２．５ｍＬ充填を含有していた各６ｃｃバイアルに添加し、２２ｍＬの注入用滅菌水を、もともと２５ｍＬ充填を含有していた各５０ｃｃバイアルに添加した。再構成前に、バイアル及び注入用滅菌水（再構成希釈液）を室温で平衡させた。
【００９０】
６ｃｃバイアル中のｍＡｂ１の再構成を、２．２ｍＬの注入用滅菌水を添加することによって行い、５秒間にわたって渦流させた後、抗体溶液が完全に再構成される（すなわち、完全溶解）まで、６０ｒｐｍで軌道撹拌器上に置いた。６ｃｃバイアル中のｍＡｂ２の再構成を、２．２ｍＬの注入用滅菌水を添加することによって行い、５秒間にわたって渦流させた後、抗体溶液が完全に再構成されるまで、１０分毎に５秒間にわたってバイアルを手動で渦流させた。５０ｃｃバイアル中のｍＡｂ１の再構成を、２２ｍＬの注入用滅菌水を添加することによって行い、５秒間にわたって渦流させた後、抗体溶液が完全に再構成されるまで、１０分毎に５秒間にわたってバイアルを手動で渦流させた。
【００９１】
手動再構成のための試料を含有するバイアルを、希釈液の添加直後に５秒間にわたって渦流させた後、残りの固体が目視によって溶解されたと確認されるまで、およそ１０分毎に渦流させた。時折、撹拌を停止して、残りの固体を視覚的に評定した。
【００９２】
図１は、６ｃｃバイアル（２．５ｍＬ充填）からの凍結乾燥ｍＡｂ１の再構成時間（分）に対する異なる濃度のＴＢＡの効果を示す。図１に示されるように、凍結乾燥前の抗体溶液への０．５％、１％、５％、または２０％  ＴＢＡの添加は、ｍＡｂ１の再構成時間の低減をもたらした。特に、５％  ＴＢＡの添加は、凍結乾燥抗体の再構成時間を２０分超から５分未満に低減し、非ＴＢＡで処置した対照と比較して、再構成時間のおよそ８０％の低減であった。
【００９３】
以下の表１は、試験した各ＴＢＡ濃度について、３つの別個の６ｃｃバイアルの上記実験と関連した特定の再構成時間を示す。
表１
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【００９４】
図２は、６ｃｃバイアル（２．５ｍＬ充填）からの凍結乾燥ｍＡｂ２の再構成時間（分）に対する異なる濃度のＴＢＡの効果を示す。図２に示されるように、凍結乾燥前の抗体溶液への５％または１０％  ＴＢＡの添加は、ｍＡｂ２の再構成時間の低減をもたらした。特に、５％  ＴＢＡの添加は、凍結乾燥抗体の再構成時間を２０分超からおよそ７．５分に低減した。
【００９５】
図３は、５０ｃｃバイアル（２５ｍＬ充填）からの凍結乾燥ｍＡｂ１の再構成時間（分）に対する異なる濃度のＴＢＡの効果を示す。図３に示されるように、凍結乾燥前の抗体溶液への１％、５％、１０％、または２０％  ＴＢＡの添加は、ｍＡｂ１の再構成時間の低減をもたらした。特に、５％  ＴＢＡの添加は、凍結乾燥抗体の再構成時間を、およそ７０分からおよそ２７分に低減した。
【００９６】
まとめると、これらの結果は、凍結乾燥前の抗体溶液へのＴＢＡの添加は、再構成時間の低減をもたらすことを示した。追加として、これらの結果は、５％  ＴＢＡが、１％  ＴＢＡ、１０％  ＴＢＡ、または２０％  ＴＢＡで得られるものと比較して、再構成時間の最大低減を提供することを示した。
【００９７】
実施例２．ＴＢＡ及び真空での再構成
ＴＢＡとの組み合わせで、部分真空下に対する完全真空下での凍結乾燥ｍＡｂ１の再構成時間に対する効果を、以下のように調べた。この研究の場合、７０ｍｇ／ｍＬで６０ｍＬの充填量のｍＡｂ１を含有する、１００ｃｃバイアルを使用した。ＴＢＡをｍＡｂ１溶液に添加して、最終濃度を５％  ＴＢＡまたは１０％  ＴＢＡのいずれかにした。凍結乾燥に続いて、バイアルを１００ｍＴｏｒｒ（真空）または２００Ｔｏｒｒ（部分真空対照）のいずれかに埋め戻した。
【００９８】
１００ｃｃバイアル中の凍結乾燥ｍＡｂ１を、注入用滅菌水の添加によって元の６０ｍＬの充填量に再構成し、５秒間にわたって渦流させた後、抗体溶液が完全に再構成される（すなわち、完全溶解）まで、バイアルを１０分毎に５秒間にわたって渦流させた。
【００９９】
図４は、２つの異なる真空条件下（１００ｍＴｏｒｒまたは２００Ｔｏｒｒのいずれか）、１００ｃｃバイアル中の凍結乾燥ｍＡｂ１の再構成時間に対する異なる濃度のＴＢＡ（５％及び１０％  ＴＢＡ）の効果を示す。図４に示されるように、凍結乾燥前の、抗体溶液への５％  ＴＢＡまたは１０％  ＴＢＡのいずれかの添加は、６０ｍＬの充填量を有する１００ｃｃバイアル中のｍＡｂ１の再構成時間の低減をもたらし、それぞれ２．５ｍＬの充填量または２５ｍＬの充填量のいずれかを含有する６ｃｃまたは５０ｃｃバイアルのいずれかで得られた結果と一致していた。特に、２００Ｔｏｒｒ条件下、５％  ＴＢＡまたは１０％  ＴＢＡの添加は、ＴＢＡなしで１１０分超から５％  ＴＢＡでおよそ６０分、及び１０％  ＴＢＡでおよそ８０分まで再構成時間を低減した。
【０１００】
１００ｍＴｏｒｒ条件下で再構成を行ったとき、再構成時間が大幅に低減した。特に、１００ｍＴｏｒｒ条件下、５％  ＴＢＡまたは１０％  ＴＢＡの添加は、ＴＢＡなしでおよそ４０分から５％  ＴＢＡでおよそ２０分、及び１０％  ＴＢＡでおよそ４０分まで再構成時間を低減した。
【０１０１】
まとめると、これらの結果は、ＴＢＡと真空との組み合わせが、ＴＢＡまたは真空を単独で使用することと比較して、再構成時間の大幅な低減を示した。
【０１０２】
実施例３．様々な撹拌器条件下でのＴＢＡによる再構成
ＴＢＡとの組み合わせで撹拌器の助けを借りて、または助けなしに再構成を行ったときの、凍結乾燥ｍＡｂ１の再構成時間に対する効果を、以下のように調べた。この研究の場合、７０ｍｇ／ｍＬで６０ｍＬの充填量のｍＡｂ１を含有する、１００ｃｃバイアルを使用した。ＴＢＡをｍＡｂ１溶液に添加して、最終濃度を５％  ＴＢＡまたは１０％  ＴＢＡのいずれかにした。
【０１０３】
１００ｃｃバイアル中の凍結乾燥ｍＡｂ１を、注入用滅菌水の添加によって元の６０ｍＬの充填量に再構成した。手動再構成のための試料を含有するバイアルを、希釈液の添加直後に５秒間にわたって渦流させた後、残りの固体が目視によって溶解されたと確認されるまで、およそ１０分毎に渦流させた。撹拌器による再構成のための試料を含有するバイアルを、希釈液の添加に続いて、Ｎｏｖａｒｔｉｓ／Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ  ５００ｒｐｍ  Ｘｏｌａｉｒ  Ｓｈａｋｅｒ（Ｓｏｕｔｈ  Ｓａｎ  Ｆｒａｎｃｉｓｃｏ，ＣＡ）で撹拌した。時折、撹拌を停止して、残りの固体を視覚的に評定した。
【０１０４】
図５は、撹拌器の使用とともに、または使用なしに再構成されたときの、１００ｃｃバイアル中の凍結乾燥ｍＡｂ１の再構成時間に対する異なる濃度のＴＢＡ（５％及び１０％  ＴＢＡ）の効果を示す。図５に示されるように、凍結乾燥前の抗体溶液への５％  ＴＢＡまたは１０％  ＴＢＡのいずれかの添加は、６０ｍＬの充填量を有する１００ｃｃバイアル中のｍＡｂ１の再構成時間の低減をもたらした。特に、対照（撹拌器なし）条件下、凍結乾燥前のＴＢＡの添加は、ＴＢＡなしで１１０分超から５％  ＴＢＡでおよそ６０分、及び１０％  ＴＢＡでおよそ８０分まで再構成時間を低減した。
【０１０５】
撹拌器を５００ｒｐｍで使用して再構成を行ったとき、再構成時間が大幅に低減した。特に、撹拌器を用いて再構成を行ったとき、ＴＢＡの添加は、ＴＢＡなしでおよそ１８分から５％  ＴＢＡまたは１０％  ＴＢＡのいずれかでおよそ１０分まで再構成時間を低減した。
【０１０６】
まとめると、これらの結果は、ＴＢＡと撹拌器との組み合わせが、ＴＢＡを単独で使用することと比較して、再構成時間の大幅な低減を示したことを示した。
【０１０７】
実施例４．ＴＢＡ、真空、及び撹拌器での再構成
ＴＢＡとの組み合わせで撹拌器の助けを借りて、真空下（１００ｍＴｏｒｒ）で再構成を行ったときの、凍結乾燥ｍＡｂ１の再構成時間に対する効果を、以下のように調べた。この研究の場合、７０ｍｇ／ｍＬで６０ｍＬの充填量のｍＡｂ１を含有する、１００ｃｃバイアルを使用した。ＴＢＡをｍＡｂ１溶液に添加して、最終濃度を５％  ＴＢＡまたは１０％  ＴＢＡのいずれかにした。真空及び撹拌器条件は、実施例３で上に記載した通りであった。
【０１０８】
図６は、撹拌器の使用とともに、１００ｍＴｏｒｒ下で再構成されたときの、１００ｃｃバイアル中の凍結乾燥ｍＡｂ１の再構成時間に対する異なる濃度のＴＢＡ（５％及び１０％  ＴＢＡ）の効果を示す。図６に示されるように、再構成は、ＴＢＡなし、真空なし、及び撹拌器なしで６０ｍＬの充填を含有する１００ｃｃバイアルの場合、再構成にはおよそ１１０分を要した（１０分毎に５秒間渦流させる）。しかしながら、真空、ＴＢＡ、及び撹拌器の添加は、再構成時間を１０分未満まで劇的に低減し、これら３つのパラメータの組み合わせは、再構成時間を９５％超低減した。
【０１０９】
５％  ＴＢＡ、真空、及び撹拌器の組み合わせを使用して、４．２ｇｍのタンパク質の再構成時間は、平均１１５分から５分に低減し、急速再構成時間を有する高用量生体分子製剤の調製を可能にした。
【０１１０】
図７は、１００ｃｃバイアル中に０％または５％（ｖ／ｖ）ｔｅｒｔ−ブチルアルコールを含有する１００ｍＬの凍結乾燥抗体製剤の再構成時間に対する真空、撹拌器、ならびに真空及び撹拌器の効果を示す。
【０１１１】
実施例５．液体安定性研究
液体中のｍＡｂ１安定性に対するＴＢＡの効果を調べるための安定性研究を行った。サイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）によって、及びイオン交換クロマトグラフィー（ＩＥＣ）によって、ｍＡｂ１安定性を測定した。ｍＡｂ１（７０ｍｇ／ｍＬ）を、０％  ＴＢＡ、１％  ＴＢＡ、５％  ＴＢＡ、１０％  ＴＢＡ、または２０％  ＴＢＡを含有する５０ｃｃバイアル（２５ｍＬ充填）に添加した。次いで、バイアルを２〜８℃または３０℃で７日間維持し、その間、ＳＥＣ及びＩＥＣ分析によって、各条件について０日目、３日目、及び７日目に抗体の安定性を決定した。
【０１１２】
Ｔｏｓｏｈ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ  ＴＳＫゲル７．８ｍｍ  ＩＤ×３０ｃｍ  Ｌカラム（Ｓｏｕｔｈ  Ｓａｎ  Ｆｒａｎｃｉｓｃｏ，ＣＡ）を有するＡｇｉｌｅｎｔ  １１００または１２００  ＨＰＬＣ（Ｓａｎｔａ  Ｃｌａｒａ，ＣＡ）を使用して、ＳＥＣ分析を行った。Ｄｉｏｎｅｘ  ＰｒｏＰａｃ  ＷＣＸ−１０  ＢｉｏＬＣ（商標）４×２５０ｍｍ分析カラム（Ｓｕｎｎｙｖａｌｅ，ＣＡ）を有するＡｇｉｌｅｎｔ  １２００  ＨＰＬＣを使用して、ＩＥＣ分析を行った。
【０１１３】
図８Ａ及び８Ｂに示されるように、ＳＥＣ分析は７日の経過にわたって高いパーセンテージのモノマーピークの維持を示したため、ｍＡｂ１は、２〜８℃または３０℃のいずれかで７日の経過にわたる様々な濃度のＴＢＡの添加時に、良好な安定性を維持した。図８Ｂは、図８Ａに示されるグラフの拡大バージョンを示す（すなわち、図８Ｂは、３０℃での２０％  ＴＢＡと関連したデータを含まない図８Ａのデータを示す）。
【０１１４】
図９に示されるように、ＩＥＣ分析は７日の経過にわたって全ての例で対照に相当する主要ピークの維持を示したため、ｍＡｂ１は、２〜８℃または３０℃のいずれかで７日の経過にわたる様々な濃度のＴＢＡの添加時に、良好な安定性を維持した。
【０１１５】
まとめると、これらの結果は、２０％（例えば、１％、５％、１０％  ＴＢＡ）より下のＴＢＡ濃度で、抗体の安定性は、少なくとも７日間維持されるが、２０％  ＴＢＡ条件でいくらかの安定性の喪失が観察された。
【０１１６】
実施例６．水分分析
凍結乾燥に続く乾燥ｍＡｂの水分レベルに対する、凍結乾燥前のｍＡｂ１またはｍＡｂ２へのＴＢＡ添加の効果を調べた。ｍＡｂ１及びｍＡｂ２（いずれも７０ｍｇ／ｍＬ）を、上記のように６ｃｃバイアルに添加した。ＴＢＡをｍＡｂ溶液に添加して、最終濃度を０％、５％、または１０％  ＴＢＡにした。次いで、試料を上に記載したように凍結乾燥した。凍結乾燥に続いて、凍結乾燥試料（すなわち、固体試料）の含水量を、Ｍｅｔｔｌｅｒ  Ｔｏｌｅｄｏ  ＤＬ３１容積測定カール・フィッシャー滴定装置（Ｃｏｌｕｍｂｕｓ，ＯＨ）を使用して決定した。
【０１１７】
以下の表２に示されるように、ＴＢＡの添加は、凍結乾燥抗体調製の水分レベルに影響を及ぼさない。
表２
2020503316.tif 000004
【０１１８】
非制御核形成（ＵＣＮ）及び制御核形成（ＣＮ）の下で、様々な濃度のＴＢＡ（０％、５％、１０％）を有するｍＡｂ１（５０ｃｃバイアル中４０ｍｇ／ｍＬ）について含水量をさらに調べた。以下の表３に示されるように、ＴＢＡの添加は、標準冷凍技法（非制御核形成）を使用して凍結乾燥された抗体調製物の水分レベルに影響を及ぼさない。ＴＢＡの添加は、制御核形成を使用して凍結乾燥された抗体調製物の含水量を減少させる。
表３
2020503316.tif 000005
【０１１９】
表１及び表２の両方に示されるモノクローナル抗体調製へのＴＢＡの添加は、ＴＢＡの添加が、ＵＣＮケーク中の水分レベルにそれほど影響がなく、ＣＮケーク中の水分レベルを減少させることを示す。
【０１２０】
実施例７．特定の表面積を決定するためのＢＥＴ分析
凍結乾燥抗体ケーク構造の特定の表面積に対する様々な濃度のＴＢＡの効果を調べた。ｍＡｂ１及びｍＡｂ２を６ｃｃバイアルに７０ｍｇ／ｍＬで０％、５％、または１０％  ＴＢＡとともに添加し、上記のように凍結乾燥した。特定の表面積の測定は、Ｑｕａｎｔａｃｈｒｏｍｅ  Ｑｕａｄｒａｓｏｒｂ  Ｅｖｏ自動化表面積及び孔径分析器（Ｂｏｙｎｔｏｎ  Ｂｅａｃｈ，ＦＬ）を用いて行った。相対湿度＜３％で、グローブボックス内で試料を粉砕し、タールバルブに装填した。およそ１００ｍｇの試料サイズを使用した。強真空で少なくとも３時間にわたって４０℃で残留水分の脱着を行った。次いで、Ｋｒｙｐｔｏｎを吸着物として使用し、０．０５〜０．２４の相対圧力Ｐ／Ｐｏで、マルチポイントＢｒｕｎａｕｅｒ−Ｅｍｍｅｔｔ−Ｔｅｌｌｅｒ（ＢＥＴ）分析を行った。
【０１２１】
以下の表４は、ｍ２／グラムとして提示される、特定の表面積（ＳＳＡ）決定の結果を示す。以下の表４に示されるように、凍結乾燥前の抗体調製物へのＴＢＡの添加は、凍結乾燥ケークの表面積の増加をもたらした。
表４
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【０１２２】
非制御核形成（ＵＣＮ）及び制御核形成（ＣＮ）を用いて、様々な濃度のＴＢＡ（０％、５％、１０％）を有するｍＡｂ１（５０ｃｃバイアル中の４０ｍｇ／ｍＬ）のＢＥＴ分析を使用して、表面積をさらに調べた。非制御核形成（ＵＣＮ）及び制御核形成（ＣＮ）を有するｍＡｂ１ケークの孔径を、以下の表５に示す。
表５
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【０１２３】
ＢＥＴ分析は、ＴＢＡの添加が、恐らく凍結乾燥中に昇華するにつれて垂直孔を形成するＴＢＡに起因して、孔径及び凍結乾燥ケーク構造の差をもたらしたことを示唆した。（Ｎａｉｌ，ＳＬ  ｅｔ  ａｌ．Ｆｒｅｅｚｅ−Ｄｒｙｉｎｇ  ｏｆ  ｔｅｒｔ−Ｂｕｔａｎｏｌ／Ｗａｔｅｒ  Ｃｏｓｏｌｖｅｎｔ  Ｓｙｓｔｅｍｓ：Ａ  Ｃａｓｅ  Ｒｅｐｏｒｔ  ｏｎ  Ｆｏｒｍａｔｉｏｎ  ｏｆ  ａ  Ｆｒｉａｂｌｅ  Ｆｒｅｅｚｅ−Ｄｒｉｅｄ  Ｐｏｗｄｅｒ  ｏｆ  Ｔｏｂｒａｍｙｃｉｎ  Ｓｕｌｆａｔｅ．Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ．Ｖｏｌ．９１，Ｎｏ．４．Ａｐｒｉｌ  ２００２．Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｐｈａｒｍａｃｉｓｔｓ  Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎを参照。）
【０１２４】
実施例８．凍結乾燥抗体の安定性研究
後次に凍結乾燥された抗体組成物中の抗体の安定性に対する凍結乾燥前の液体抗体／ＴＢＡ混合物中のＴＢＡの効果を調べる安定性研究を行った。サイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）によって安定性を測定した。
【０１２５】
６ｃｃバイアルを、７０ｍｇ／ｍＬ抗体（ｍＡｂ１またはｍＡｂ２）、１６８ｍＭのスクロース、２０ｍＭのヒスチジンＨＣｌ（ｐＨ５．８）、０．０２８％のポリソルベート２０、及び０、５、または１０％（ｖ／ｖ）ＴＢＡを含有する２．５ｍＬの製剤で充填した。保存的凍結乾燥サイクルでバイアルを凍結乾燥し、５０℃で４ヶ月超にわたってインキュベートした。試料を月１回採取し、サイズ排除クロマトグラフィーによるバッチ分析まで−２０℃に置いた。図１０Ａは、各月１回の時点で凍結乾燥されたｍＡｂ１組成物中で維持されたモノマーのパーセンテージを示す。図１０Ｂは、凍結乾燥ｍＡｂ２組成物の結果を示す。
【０１２６】
結果は、５０℃での凍結乾燥ｍＡｂの加速した分解は、５％  ＴＢＡが凍結乾燥前の液体抗体／ＴＢＡ混合物中に存在するとき、依然として凍結乾燥ｍＡｂの典型的かつ許容される範囲内である。上記のように、このレベルのＴＢＡもまた、凍結乾燥ｍＡｂの再構成時間を最小化することを示した。したがって、５％  ＴＢＡを凍結乾燥前の液体抗体製剤に添加することは、大きな（例えば、５０または１００ｃｃ）バイアルを必要とする高用量の凍結乾燥ｍＡｂ産生物に利点を提供し得、再構成時間は、より少量のバイアルと比較して著しく長くなり得る。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
2020503316.tif 000013
【図７】
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【図８Ａ】
2020503316.tif 000015
【図８Ｂ】
2020503316.tif 000016
【図９】
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【図１０Ａ】
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【図１０Ｂ】
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【国際調査報告】
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