(57)【要約】  本発明は、概して、ｓｉＲＮＡの薬力学的活性を調節する薬剤に関する。さらに、本発明は、概して、疾患の処置又は予防に使用するための医薬組成物の効果及び安全性の評価に使用するための方法及びシステムに関する。
2020531450.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
８又は９つの修飾ヌクレオチドを含む調整性ＲＥＶＥＲＳＩＲ化合物であって、前記修飾ヌクレオチドの少なくとも３つは、高親和性モノマーであり、及び前記高親和性モノマーの１つは、ｓｉＲＮＡの標的鎖の５’−末端から６番目のヌクレオチドと塩基対合する、調整性ＲＥＶＥＲＳＩＲ化合物。
【請求項２】
前記高親和性モノマーは、ＬＮＡである、請求項１に記載の調整性ＲＥＶＥＲＳＩＲ化合物。
【請求項３】
３又は４つのＬＮＡヌクレオチドを含む、請求項２に記載の調整性ＲＥＶＥＲＳＩＲ化合物。
【請求項４】
アンチセンス鎖に対して少なくとも９０％相補的である一本鎖オリゴヌクレオチドである、請求項１に記載の調整性ＲＥＶＥＲＳＩＲ化合物。
【請求項５】
アンチセンス鎖と完全に相補的である、請求項１に記載の調整性ＲＥＶＥＲＳＩＲ化合物。
【請求項６】
少なくとも１つの修飾ヌクレオチド間結合を含む、請求項１に記載の調整性ＲＥＶＥＲＳＩＲ化合物。
【請求項７】
ヌクレオチド間結合は、ホスホロチオエートである、請求項６に記載の調整性ＲＥＶＥＲＳＩＲ化合物。
【請求項８】
３又は４つ以下のホスホロチオエート修飾を含む、請求項７に記載の調整性ＲＥＶＥＲＳＩＲ化合物。
【請求項９】
リガンドと共役される、請求項に１記載の調整性ＲＥＶＥＲＳＩＲ化合物。
【請求項１０】
前記リガンドは、
【化１】
2020531450.tif 000120
である、請求項９に記載の調整性ＲＥＶＥＲＳＩＲ化合物。
【請求項１１】
前記リガンドは、前記化合物の３’−末端に共役される、請求項９に記載の調整性ＲＥＶＥＲＳＩＲ化合物。
【請求項１２】
前記修飾オリゴヌクレオチドは、リガンドと共役され、及び前記リガンドは、前記調整性ＲＥＶＥＲＳＩＲ化合物中のデオキシ糖を有するヌクレオチドに共役される、請求項１に記載の調整性ＲＥＶＥＲＳＩＲ化合物。
【請求項１３】
前記デオキシ糖は、２’−デオキシリボースである、請求項１２に記載の調整性ＲＥＶＥＲＳＩＲ化合物。
【請求項１４】
前記ｓｉＲＮＡは、ｍＲＮＡ、プレｍＲＮＡ、マイクロＲＮＡ、プレマイクロＲＮＡにターゲティングされる、請求項１に記載の調整性ＲＥＶＥＲＳＩＲ化合物。
【請求項１５】
前記ｓｉＲＮＡは、リガンドと共役される、請求項１に記載の調整性ＲＥＶＥＲＳＩＲ化合物。
【請求項１６】
請求項１に記載の調整性ＲＥＶＥＲＳＩＲ化合物を含むキット。
【請求項１７】
ｓｉＲＮＡと、請求項１に記載の調整性ＲＥＶＥＲＳＩＲ化合物とを含むキット。
【請求項１８】
疾患の処置又は予防に使用するための医薬組成物の効果及び安全性を評価する方法又はシステムであって、前記方法は、
（１）第１の処置期間にわたって前記医薬組成物で全ての対象を処置するステップ、
（２）前記全ての対象について、ｍＲＮＡレベル及び／又は生理学的アウトカム尺度を導き出すステップ、
（３）前記処置された対象の応答メンバーを非応答メンバーから分離するステップ、
（４）前記応答者のメンバーをランダム化し、且つ少なくとも２つのさらなる亜群に階層化するステップ、
（５）第２の処置期間にわたり、（４）における１つの亜群のメンバーを前記医薬組成物で引き続き処置し、且つ他方の亜群のメンバーを請求項１に記載のＲＥＶＥＲＳＩＲ化合物で処置するステップ、
（６）前記亜群について、ｍＲＮＡレベル及び／又は生理学的アウトカム尺度を導き出すステップ、
（７）（６）におけるアウトカムを（２）におけるアウトカムと比較するステップ、
（８）（７）における前記比較を使用して、前記医薬組成物の効果及び安全性尺度を導き出すステップ
を含む、方法又はシステム。
【請求項１９】
疾患の処置又は予防に使用するための医薬組成物の効果及び安全性を評価する方法又はシステムであって、前記システムは、
（１）対象群を少なくとも２つの亜群に階層化するステップ、
（２）第１の処置期間にわたって１つの亜群のメンバーを前記医薬組成物で処置し、且つ第２の亜群のメンバーを盲検プラセボで処置するステップ、
（３）前記亜群について、ｍＲＮＡレベル、及び／又はバイオマーカ、及び／又は生理学的アウトカム尺度を導き出すステップ、
（４）第２の処置期間にわたり、前記処置された亜群のメンバーを請求項１に記載の調整性ＲＥＶＥＲＳＩＲで処置し、且つ前記他方の盲検プラセボ亜群のメンバーを前記医薬組成物で処置するステップ、
（５）前記亜群について、ｍＲＮＡレベル及び／又は生理学的アウトカム尺度を導き出すステップ、
（６）（５）におけるアウトカムを（３）におけるアウトカムと比較するステップ、
（７）（６）における前記比較を使用して、前記医薬組成物の効果及び安全性尺度を導き出すステップ
を含む、方法又はシステム。
【請求項２０】
前記疾患は、標的遺伝子の異常な発現によって引き起こされる、請求項１８又は１９に記載の方法又はシステム。
【請求項２１】
前記医薬組成物は、オリゴヌクレオチドである、請求項２０に記載の方法又はシステム。
【請求項２２】
前記オリゴヌクレオチドは、アンチセンス又はｓｉＲＮＡである、請求項２１に記載の方法又はシステム。
【請求項２３】
前記オリゴヌクレオチドは、持続性の薬力学を提供した、請求項２１に記載の方法又はシステム。
【請求項２４】
請求項１に記載の調整性ＲＥＶＥＲＳＩＲ化合物は、前記処置されたメンバーのランダム化治療中止を均一化し且つ可能にするために使用される、請求項１８に記載の方法又はシステム。
【請求項２５】
請求項１に記載の調整性ＲＥＶＥＲＳＩＲ化合物の投与は、前記医薬組成物のプラセボ投与と一緒に盲検化される、請求項１８に記載の方法又はシステム。
【請求項２６】
請求項１に記載の調整性ＲＥＶＥＲＳＩＲ化合物は、前記処置された亜群のウォッシュアウトを誘導する、請求項１８又は１９に記載の方法又はシステム。
【請求項２７】
請求項１に記載の調整性ＲＥＶＥＲＳＩＲ化合物は、ＲＮＡｉ酸度のベースラインをリセットする、請求項１８に記載の方法又はシステム。
【請求項２８】
前記ｓｉＲＮＡは、前記調整性ＲＥＶＥＲＳＩＲ処置の少なくとも１、２、３又は４週間後に再投与され得る、請求項１９に記載の方法又はシステム。
【請求項２９】
前記標的遺伝子は、ＴＴＲ、ＡＧＴ、ＡＬＡＳ−１、ＧＯ１、ＡＴ３、第ＸＩ因子、第ＸＩＩ因子、ＣＣ３、ＣＣ５、ＡＡＴ、Ｅｇ５、ＰＣＳＫ９、ＴＰＸ２、アポＢ、ＳＡＡ、ＲＳＶ、ＰＤＧＦβ遺伝子、Ｅｒｂ−Ｂ遺伝子、Ｓｒｃ遺伝子、ＣＲＫ遺伝子、ＧＲＢ２遺伝子、ＲＡＳ遺伝子、ＭＥＫＫ遺伝子、ＪＮＫ遺伝子、ＲＡＦ遺伝子、Ｅｒｋ１／２遺伝子、ＰＣＮＡ（ｐ２１）遺伝子、ＭＹＢ遺伝子、ＪＵＮ遺伝子、ＦＯＳ遺伝子、ＢＣＬ−２遺伝子、サイクリンＤ遺伝子、ＶＥＧＦ遺伝子、ＥＧＦＲ遺伝子、サイクリンＡ遺伝子、サイクリンＥ遺伝子、ＷＮＴ−Ｉ遺伝子、β−カテニン遺伝子、ｃ−ＭＥＴ遺伝子、ＰＫＣ遺伝子、ＮＦＫＢ遺伝子、ＳＴＡＴ３遺伝子、サバイビン遺伝子、Ｈｅｒ２／Ｎｅｕ遺伝子、トポイソメラーゼＩ遺伝子、トポイソメラーゼＩＩα遺伝子、ｐ７３遺伝子中の突然変異、ｐ２１（ＷＡＦ１／ＣＩＰ１）遺伝子中の突然変異、ｐ２７（ＫＩＰ１）遺伝子中の突然変異、ＰＰＭ１Ｄ遺伝子中の突然変異、ＲＡＳ遺伝子中の突然変異、カベオリンＩ遺伝子中の突然変異、ＭＩＢ  Ｉ遺伝子中の突然変異、ＭＴＡＩ遺伝子中の突然変異、Ｍ６８遺伝子中の突然変異、腫瘍抑制遺伝子中の突然変異及びｐ５３腫瘍抑制遺伝子中の突然変異からなる群から選択される、請求項２０に記載の方法又はシステム。
【請求項３０】
前記第１の処置期間は、オープンラベル試験又は単純盲検試験の完了までである、請求項１８に記載の方法又はシステム。
【請求項３１】
前記第２の処置期間は、約１週間〜１ヵ月、２ヵ月、３ヵ月、４ヵ月、５ヵ月又は６ヵ月である、請求項１８に記載の方法又はシステム。
【請求項３２】
前記第２の処置期間は、臨床試験の完了までである、請求項１８に記載の方法又はシステム。
【請求項３３】
前記医薬剤を検証するための臨床試験又は臨床試験を実施するためのシステムを構成する、請求項１８〜３２のいずれか一項に記載の方法又はシステム。
【請求項３４】
前記医薬剤を用いる処置計画をその効果について評価するためのものである、請求項１８〜３３のいずれか一項に記載の方法又はシステム。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願の相互参照
本願は、３５  Ｕ．Ｓ．Ｃ．§１１９（ｅ）に基づき、２０１７年８月１７日に出願された米国仮特許出願第６２／５４６，７７９号明細書の利益を主張するものであり、その内容は、全体として参照により本明細書に組み込まれる。
【０００２】
本発明は、概して、ｓｉＲＮＡ（例えば、共役又は非共役ｓｉＲＮＡ）をｉｎ  ｖｉｖｏでターゲティングするオリゴマー化合物（オリゴマー）であって、それにより、ＲＮＡｉ薬効薬理と、従ってｉｎ  ｖｉｖｏでのｓｉＲＮＡベースの治療薬の治療活性及び／又は副作用との個別化された制御の方法を提供する、オリゴマー化合物（オリゴマー）に関する。本発明は、概して、疾患の処置又は予防に使用するための医薬組成物の効果及び安全性の評価に使用するための方法及びシステムにも関する。
【背景技術】
【０００３】
近年、いくつかの臨床試験からの安全性及び効力データから、ＲＮＡ干渉（ＲＮＡｉ）の治療可能性についてのエビデンスが続々ともたらされている。内在性ＲＮＡｉ経路を使用する低分子干渉ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）分子は、ｍＲＮＡを強力且つ特異的に抑制し、それにより疾患の原因となるタンパク質又は疾患経路に関与するタンパク質の形成を防ぐ。肝細胞へのＲＮＡｉ治療薬の標的化送達は、化学修飾ｓｉＲＮＡを三価Ｎ−アセチルガラクトサミン（ＧａｌＮＡｃ）リガンドに共役させることによって達成され、これは、アシアロ糖タンパク質受容体（ＡＳＧＰＲ）媒介性組織特異的取込みを促進する。増強された安定化化学を備えるＧａｌＮＡｃ−ｓｉＲＮＡコンジュゲートの開発により、効力及び持続に実質的な向上がもたらされた。前臨床動物モデル及びヒトにおいて、ＧａｌＮＡｃ−ｓｉＲＮＡコンジュゲートは、単回皮下投与後、数ヵ月にわたって強力なサイレンシングが持続され、顕著な作用の持続期間を実証した。その長期にわたる作用の持続と共に、ＲＮＡｉ治療薬は、サイレンシング活性の急速な逆転を可能にする技術から利益を受けることができるため、ＲＮＡｉ薬理学に対して個別対応の制御、すなわち個別化精密医療に要望される性質を提供する。
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【０００４】
本発明者らは、驚くことに、同じｓｉＲＮＡ化合物の再投与後、ｓｉＲＮＡ化合物のＲＮＡｉ活性を有効に回復させるために、調整性ＲＥＶＥＲＳＩＲ剤の適切なレベルの調節が必要であることを見出した。ＲＥＶＥＲＳＩＲ作用の調整可能な持続は、同じｓｉＲＮＡの再投与後、ＲＮＡｉ薬理薬効の有効な回復を可能にする設計パラメータの最適化によって達成され、これによりｓｉＲＮＡ治療薬の治療有効性をｉｎ  ｖｉｖｏで調節する上で解離速度及び結合速度制御を提供する。調整性ＲＥＶＥＲＳＩＲ剤の調整可能な持続性は、ヒトにおけるｓｉＲＮＡ治療薬を用いた臨床試験の設計に際してｓｉＲＮＡ効果の制御まで延長され得る。
【０００５】
いくつかの実施形態では、本発明は、８〜１０個の連結ヌクレオチド（例えば、８、９又は１０個）から構成される修飾オリゴヌクレオチドを含み、且つｓｉＲＮＡ化合物（例えば、共役又は非共役ｓｉＲＮＡ）の少なくとも１つの鎖と実質的に相補的な核酸塩基配列を有する調整性ＲＥＶＥＲＳＩＲ化合物を提供する。一部の実施形態では、調整性ＲＥＶＥＲＳＩＲ化合物は、８〜１０個（例えば、８、９又は１０個）の連結ヌクレオチドから構成される修飾オリゴヌクレオチドを含み、且つｓｉＲＮＡ化合物のアンチセンス鎖と実質的に相補的な核酸塩基配列を有する。一部の実施形態では、調整性ＲＥＶＥＲＳＩＲ化合物は、８〜１０個（例えば、８、９又は１０個）の連結ヌクレオチドから構成される修飾オリゴヌクレオチドを含み、且つｓｉＲＮＡ化合物のセンス鎖と実質的に相補的な核酸塩基配列を有する。
【０００６】
いくつかのそのような実施形態では、修飾オリゴヌクレオチドは、一本鎖オリゴヌクレオチドであり、且つ／又はｓｉＲＮＡの少なくとも１つの鎖と少なくとも９０％相補的である。一部の実施形態では、修飾オリゴヌクレオチドは、一本鎖オリゴヌクレオチドであり、且つ／又はｓｉＲＮＡのアンチセンス鎖と少なくとも９０％相補的である。一部の実施形態では、修飾オリゴヌクレオチドは、一本鎖オリゴヌクレオチドであり、且つ／又はｓｉＲＮＡのセンス鎖と少なくとも９０％相補的である。
【０００７】
いくつかの実施形態では、調整性ＲＥＶＥＲＳＩＲ化合物は、共役又は非共役ｓｉＲＮＡの少なくとも１つの鎖と完全に相補的である。一部の実施形態では、調整性ＲＥＶＥＲＳＩＲ化合物は、ｓｉＲＮＡのアンチセンス鎖と完全に相補的である。一部の実施形態では、調整性ＲＥＶＥＲＳＩＲ化合物は、ｓｉＲＮＡのセンス鎖と完全に相補的である。
【０００８】
いくつかの実施形態では、調整性ＲＥＶＥＲＳＩＲ化合物は、少なくとも１つの修飾ヌクレオチド間又は糖間結合を含む。いくつかのこうした実施形態では、少なくとも１つ（例えば、１、２、３、４、５、６つ及び全て含む）のヌクレオチド間結合は、ホスホロチオエートヌクレオチド間結合である。
【０００９】
いくつかの実施形態では、調整性ＲＥＶＥＲＳＩＲ化合物は、修飾糖を含む少なくとも１つのヌクレオチドを含む。特定の実施形態では、修飾糖は、２’−Ｏ−メチル又は２’−Ｏ−メトキシエチルを含む二環式糖又は糖である。
【００１０】
いくつかの実施形態では、調整性ＲＥＶＥＲＳＩＲ化合物は、１つ又は複数（例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９又は１０個を含む）のロックド核酸（ＬＮＡ）モノマーを含む。
【００１１】
一部の実施形態では、調整性ＲＥＶＥＲＳＩＲ化合物中の各ヌクレオチドは、２’修飾ヌクレオチドであり、及び調整性ＲＥＶＥＲＳＩＲ化合物は、少なくとも１つ（例えば、１、２又は３つ）のＧ−クランプ核酸塩基を含む。
【００１２】
いくつかの実施形態では、本発明の調整性ＲＥＶＥＲＳＩＲ化合物は、修飾核酸塩基を含む少なくとも１つのヌクレオチドをさらに含む。いくつかのこうした実施形態では、修飾核酸塩基は、５−メチルシトシン、５−メチルウラシル又は２，６−ジアミノプリンである。
【００１３】
いくつかの実施形態では、調整性ＲＥＶＥＲＳＩＲ化合物は、少なくとも１つの修飾を含む。いくつかのこうした実施形態では、調整性ＲＥＶＥＲＳＩＲ化合物は、１つ又は複数のヌクレオチド修飾及び／又は１つ又は複数の結合修飾を含む。いくつかの実施形態では、調整性ＲＥＶＥＲＳＩＲ化合物は、糖修飾、結合修飾、核酸塩基修飾、コンジュゲート（例えば、リガンド）及びこれらの任意の組合せから選択される１つ又は複数の修飾を含む。
【００１４】
いくつかの実施形態では、本発明は、８又は９つの修飾ヌクレオチドを含む調整性ＲＥＶＥＲＳＩＲ化合物を提供する。
【００１５】
いくつかの実施形態では、本発明は、８又は９つの修飾ヌクレオチドと、分子を３’−ＧａｌＮＡｃリガンドに連結する調整性ＲＥＶＥＲＳＩＲ化合物の３’−末端のＤＮＡヌクレオチドリンカーとから構成される調整性ＲＥＶＥＲＳＩＲ化合物を提供する。
【００１６】
いくつかの実施形態では、少なくとも３つ（３又は４つ）のＬＮＡヌクレオチドとＬＮＡヌクレオチドの１つとを含む調整性ＲＥＶＥＲＳＩＲ化合物は、ｓｉＲＮＡの標的鎖の５’−末端から６番目のヌクレオチドと塩基対合する。
【００１７】
いくつかの実施形態では、本発明の調整性ＲＥＶＥＲＳＩＲは、３又は４つ以下のホスホロチオエート（ＰＳ）骨格修飾をさらに含む。
【００１８】
いくつかの実施形態では、調整性ＲＥＶＥＲＳＩＲ化合物は、ＲＩＳＣ経路を調節する。一部の実施形態では、調整性ＲＥＶＥＲＳＩＲ化合物は、ＲＩＳＣ経路を阻害する。
【００１９】
いくつかの実施形態では、本発明は、調整性ＲＥＶＥＲＳＩＲ化合物又はその薬学的に許容される塩と、薬学的に許容される担体又は希釈剤とを含む組成物を提供する。
【００２０】
いくつかの実施形態では、ｓｉＲＮＡの活性は、本発明のオリゴマー調整性ＲＥＶＥＲＳＩＲ化合物によって中和される。いくつかの実施形態では、オリゴマー調整性ＲＥＶＥＲＳＩＲ化合物の投与時間後のある時点において、ｓｉＲＮＡの活性を低減するオリゴマー調整性ＲＥＶＥＲＳＩＲ化合物の作用は、同じｓｉＲＮＡの投与によって中和される。
【００２１】
いくつかの実施形態では、調整性ＲＥＶＥＲＳＩＲ化合物の作用は、ｓｉＲＮＡ薬剤の治療作用の薬剤投与及び休薬制御を可能にし、この場合、ｓｉＲＮＡの一連の薬剤投与及び休薬作用は、治療用ｓｉＲＮＡの投与後及び／又は投与前の調整性ＲＥＶＥＲＳＩＲ化合物の逐次的投与によって達成することができる。
【００２２】
いくつかの実施形態では、本発明は、細胞における共役又は非共役ｓｉＲＮＡのＲＮＡｉ活性を阻害する方法を提供する。この方法は、概して、細胞を本発明の調整性ＲＥＶＥＲＳＩＲ化合物と接触させることにより、細胞におけるＲＮＡｉ活性を阻害するステップを含む。いくつかのこうした実施形態において、細胞は、ｉｎ  ｖｉｖｏにおけるものである。一部の実施形態では、細胞は、ｉｎ  ｖｉｔｒｏである。一部の実施形態では、細胞は、ｅｘ  ｖｉｖｏである。一部の実施形態では、細胞は対象内にある。このさらに別の一部の実施形態では、細胞は動物由来である。いくつかの実施形態では、動物はヒトである。
【００２３】
いくつかの実施形態では、本発明は、細胞を共役又は非共役ｓｉＲＮＡと接触させるステップ；ＲＮＡｉ活性を検出するステップ；及び細胞を調整性ＲＥＶＥＲＳＩＲ化合物と接触させるステップを含む方法を提供する。いくつかの実施形態では、ＲＮＡｉ活性を検出する方法は、存在する標的ｍＲＮＡの量、存在する標的タンパク質の量及び／又は標的タンパク質の活性を測定するステップを含む。いくつかの実施形態では、こうした方法は、細胞を調整性ＲＥＶＥＲＳＩＲ化合物と接触させた後、ＲＮＡｉ活性を測定することにより、調整性ＲＥＶＥＲＳＩＲ活性を検出するステップを含む。いくつかのこうした実施形態では、細胞は、ｉｎ  ｖｉｖｏである。一部の実施形態では、細胞は、動物におけるものである。いくつかの実施形態では、動物はヒトである。
【００２４】
いくつかの実施形態では、本発明は、ｓｉＲＮＡ治療薬の副作用を改善する方法を提供し、これは、細胞を共役又は非共役ｓｉＲＮＡと接触させるステップ；副作用を検出するステップ；細胞を調整性ＲＥＶＥＲＳＩＲ化合物と接触させるステップを含み、これによりｓｉＲＮＡ、内在性、外性マイクロＲＮＡ又はそれらの組合せの副作用を改善する。
【００２５】
いくつかの実施形態では、本発明は、患者を処置する方法を提供し、これは、共役又は非共役ｓｉＲＮＡを患者に投与するステップ；ｓｉＲＮＡ活性について患者をモニターするステップ；及びｓｉＲＮＡ活性が所望より高くなる場合、調整性ＲＥＶＥＲＳＩＲ化合物を投与するステップを含む。いくつかのこうした実施形態では、ｓｉＲＮＡ活性をモニターするステップは、存在する標的ｍＲＮＡの量を測定するステップ、存在する標的タンパク質の量を測定するステップ及び／又は標的タンパク質の活性を測定するステップを含む。いくつかの実施形態では、こうした方法は、調整性ＲＥＶＥＲＳＩＲ化合物の投与後、ｓｉＲＮＡ活性を測定することにより、調整性ＲＥＶＥＲＳＩＲ活性を検出するステップを含む。いくつかの実施形態では、患者は哺乳動物である。いくつかの実施形態では、患者はヒトである。
【００２６】
いくつかの実施形態では、本発明は、患者を処置する方法を提供し、これは、共役又は非共役ｓｉＲＮＡを患者に投与するステップ；１つ又は複数の副作用について患者をモニターするステップ；及び１つ又は複数の副作用が望ましくないレベルに達する場合、調整性ＲＥＶＥＲＳＩＲ化合物を投与するステップを含む。いくつかの実施形態では、患者は哺乳動物である。いくつかの実施形態では、患者はヒトである。
【００２７】
いくつかの実施形態では、調整性ＲＥＶＥＲＳＩＲ化合物の構造及び特性は、調整性ＲＥＶＥＲＳＩＲ化合物がｉｎ  ｖｉｖｏでｓｉＲＮＡ活性の最大阻害又は逆転を達成するように設計される。例えば、ｓｉＲＮＡ活性の最大阻害又は逆転は、ｍＲＮＡレベルが少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９９％、最大１００％及び５％〜１００％の任意の整数まで減少したときに起こる。
【００２８】
いくつかの実施形態では、調整性ＲＥＶＥＲＳＩＲ化合物の構造及び特性は、調整性ＲＥＶＥＲＳＩＲ化合物がｉｎ  ｖｉｖｏでｓｉＲＮＡ活性の阻害又は逆転の持続制御を達成するように設計される。いくつかの実施形態では、持続は、調整性ＲＥＶＥＲＳＩＲを用いて制御され、低ホスホロチオエートヌクレオチ間結合及びオリゴヌクレオチド間結合内のＬＮＡ修飾の戦略的配置を備えた調整性ＲＥＶＥＲＳＩＲ化合物を設計する必要がある。
【００２９】
いくつかの実施形態では、調整性ＲＥＶＥＲＳＩＲ化合物は、５、４又は３つ以下のホスホロチオエートを含み、且つ少なくとも３つ（３又は４つ）のＬＮＡヌクレオチドを含み、及びＬＮＡヌクレオチドの１つは、ｓｉＲＮＡの標的鎖の５’−末端から６番目のヌクレオチドと塩基対合する。
【００３０】
いくつかの実施形態では、調整性ＲＥＶＥＲＳＩＲ化合物の構造及び特性は、調整性ＲＥＶＥＲＳＩＲ化合物がｉｎ  ｖｉｖｏでｓｉＲＮＡの有効な再投与及びＲＮＡｉの回復を可能にするように設計される。
【００３１】
本発明は、概して、疾患、例えば標的遺伝子の異常な発現によって引き起こされる疾患の処置又は予防に使用するための医薬組成物の効果及び安全性を実証する方法にも関する。特に、本発明は、ｓｉＲＮＡなどの医薬組成物が持続性の薬力学（ＰＤ）を有し、且つオープンラベル単群臨床試験において長期安全性及び効力が望ましいが、実現可能ではない状況において、効果及び安全性を実証するための改善された方法に関する。本発明は、患者の動員が難しく、且つプラセボ又は低活性治療薬を受ける対象がわずかであり、そのため治療効果及び安全性の検出が妨げられ得る状況、例えば希少疾病の状況にも関する。
【００３２】
従って、本発明は、疾患の処置又は予防に使用するための医薬組成物の効果及び安全性を評価する様々な方法及びシステムを提供し、ランダム化治療中止方法は、
（１）第１の処置期間にわたって医薬組成物で全ての対象を処置するステップ、
（２）全ての対象について、ｍＲＮＡレベル及び／又は生理学的アウトカム尺度を導き出すステップ、
（３）処置された対象の応答メンバーを非応答メンバーから分離するステップ、
（４）応答者のメンバーをランダム化し、且つ少なくとも２つのさらなる亜群に階層化するステップ、
（５）第２の処置期間にわたり、（４）における１つの亜群のメンバーを医薬組成物で引き続き処置し、且つ他方の亜群のメンバーを請求項１に記載のＲＥＶＥＲＳＩＲ化合物で処置するステップ、
（６）これらの亜群について、ｍＲＮＡレベル及び／又は生理学的アウトカム尺度を導き出すステップ、
（７）（６）におけるアウトカムを（２）におけるアウトカムと比較するステップ、及び
（８）（７）における比較を使用して、医薬組成物の効果及び安全性尺度を導き出すステップ
を含む。
【００３３】
いくつかの実施形態では、本発明は、疾患の処置又は予防に使用するための医薬組成物の効果及び安全性を評価する様々な方法及びシステムを提供し、クロスオーバー方法は、
（１）対象群を少なくとも２つの亜群に階層化するステップ、
（２）第１の処置期間にわたり、１つの亜群のメンバーを医薬組成物で処置し、且つ第２の亜群のメンバーを盲検プラセボで処置するステップ、
（３）これらの亜群について、ｍＲＮＡレベル、及び／又はバイオマーカ、及び／又は生理学的アウトカム尺度を導き出すステップ、
（４）第２の処置期間にわたり、処置された亜群のメンバーを調整性ＲＥＶＥＲＳＩＲ化合物で処置し、且つ他方の盲検プラセボ亜群のメンバーを医薬組成物で処置するステップ、
（５）これらの亜群について、ｍＲＮＡレベル及び／又は生理学的アウトカム尺度を導き出すステップ、
（６）（５）におけるアウトカムを（３）におけるアウトカムと比較するステップ、及び
（７）（６）における比較を使用して、医薬組成物の効果及び安全性尺度を導き出すステップ
を含む。
【図面の簡単な説明】
【００３４】
【図１】トランスチレチン指向性（ＴＴＲ）ｓｉＲＮＡをターゲティングすると共に、ガイド（アンチセンス）ｓｉＲＮＡ鎖のｇ６位（ｓｉＲＮＡの標的鎖の５’−末端から６番目のヌクレオチド）との異なる塩基対合に基づいてＲＮＡｉ活性逆転の様々な能力を有する例示的な１５−ｍｅｒ  ＲＥＶＥＲＳＩＲ化合物のｉｎ  ｖｉｖｏ活性を示す。
【図２】ＴＴＲ  ｓｉＲＮＡをターゲティングすると共に、ガイドｓｉＲＮＡ鎖のｇ６位との塩基対合に基づいてＲＮＡｉ活性逆転の様々な能力を有する例示的な９−ｍｅｒ  調整性ＲＥＶＥＲＳＩＲ化合物のｉｎ  ｖｉｖｏ活性を示す。
【図３】ＴＴＲ  ｓｉＲＮＡをターゲティングすると共に、異なる含量のロックド核酸（ＬＮＡ）ヌクレオチド及びホスホロチオエート（ＰＳ）骨格修飾を有する例示的な９−ｍｅｒ  調整性ＲＥＶＥＲＳＩＲ化合物のｉｎ  ｖｉｖｏ活性を示す。
【図４】ＴＴＲ  ｓｉＲＮＡ剤の複数回再攻撃に対して長期持続性のＲＮＡｉ活性逆転を有する例示的なＲＥＶＥＲＳＩＲ化合物のｉｎ  ｖｉｖｏ活性を示す。
【図５】ＴＴＲ  ｓｉＲＮＡ剤の単回再攻撃に対して長期持続性のＲＮＡｉ活性逆転を有する例示的なＲＥＶＥＲＳＩＲ化合物の様々な用量でのｉｎ  ｖｉｖｏ活性を示す。
【図６】ＴＴＲ  ｓｉＲＮＡ剤の単回再攻撃に対して長期持続性のＲＮＡｉ活性逆転を有する例示的なＲＥＶＥＲＳＩＲ化合物のｉｎ  ｖｉｖｏ活性を示す。
【図７】ＴＴＲ  ｓｉＲＮＡ剤の単回再攻撃に対して調整可能な持続性のＲＮＡｉ活性逆転を有する例示的な調整性ＲＥＶＥＲＳＩＲ化合物のｉｎ  ｖｉｖｏ活性を示す。
【図８】ＴＴＲ  ｓｉＲＮＡ剤の単回再攻撃に対して調整可能な持続性のＲＮＡｉ活性逆転を有する例示的な調整性ＲＥＶＥＲＳＩＲ化合物のｉｎ  ｖｉｖｏ活性並びに後のＲＮＡｉ活性の完全な回復を示す。
【図９】第１／２ａ相にわたる調整性ＲＥＶＥＲＳＩＲクロスオーバー臨床試験を示す。
【図１０】第２／３相にわたる調整性ＲＥＶＥＲＳＩＲランダム化治療中止臨床試験を示す。
【図１１】調整性ＲＥＶＥＲＳＩＲランダム化治療中止臨床試験設計で予測される例示的なデータを示す。
【図１２】ｍｉＲ−１２２調整性ＲＥＶＥＲＳＩＲ化合物を用いた雄ラットにおけるｉｎ  ｖｉｖｏ試験からのｍｉＲ−１２２標的ｍＲＮＡ肝臓ｑＰＣＲデータを示す。
【図１３−１５】ｍｉＲ−１２２調整性ＲＥＶＥＲＳＩＲ化合物を用いた雄ラットにおけるｉｎ  ｖｉｖｏ試験からのｍｉＲ−１２２バイオマーカ時間経過を示す。
【図１６】ｍｉＲ−１２２調整性ＲＥＶＥＲＳＩＲ化合物を用いた雄ラットにおけるｉｎ  ｖｉｖｏ試験からの食塩水群と比較したｍｉＲ−１２２バイオマーカの倍率変化を示す。
【図１７】ｍｉＲ−１２２調整性ＲＥＶＥＲＳＩＲ化合物を用いた雄ラットにおけるｉｎ  ｖｉｖｏ試験からのＬＦＴ評価を示す。
【図１８−１９】ｍｉＲ−１２２調整性ＲＥＶＥＲＳＩＲ化合物を用いた雄ラットにおけるｉｎ  ｖｉｖｏ試験からの組織病理学データを示す。
【発明を実施するための形態】
【００３５】
以上の概要及び以下の詳細な説明のいずれも、例示及び説明を意図するものであり、特許請求の範囲に記載する通り、本発明を限定するものではないことが理解されるべきである。本明細書において、単数形の使用は、特に別の記載がない限り、複数形を含む。本明細書で使用されるとき、「又は」の使用は、別に記載のない限り、「及び／又は」を意味する。さらに、用語「含んでいる」並びに「含む」及び「含まれる」などの他の形態の使用も限定的ではない。また、「要素」又は「成分」などの用語は、特に別の記載がない限り、１単位を含む要素及び成分と、２サブユニット以上を含む要素及び成分との両方を包含する。
【００３６】
本明細書で使用されるセクションの見出しは、構成を目的とするに過ぎず、記載される主題を限定するものとして解釈すべきではない。本願に引用される全ての文献又は文献の一部、例えば、限定はしないが、特許、特許出願、論文、書籍及び専門書は、あらゆる目的のために全体として参照により本明細書に組み込まれるものとする。
【００３７】
いくつかの実施形態では、本発明は、８又は９つの修飾ヌクレオチドを含む調整性ＲＥＶＥＲＳＩＲ化合物を提供し、ここで、修飾ヌクレオチドの少なくとも３つは、高親和性モノマーであり、及び高親和性モノマーの１つは、ｓｉＲＮＡの標的鎖の５’−末端から６番目のヌクレオチドと塩基対合する。
【００３８】
いくつかの実施形態では、高親和性モノマーは、ＬＮＡである。
【００３９】
いくつかの実施形態では、３又は４つのＬＮＡヌクレオチドを含む調整性ＲＥＶＥＲＳＩＲ化合物である。
【００４０】
いくつかの実施形態では、調整性ＲＥＶＥＲＳＩＲ化合物は、アンチセンス鎖に対して少なくとも９０％の相補性を有する一本鎖オリゴヌクレオチドである。
【００４１】
いくつかの実施形態では、調整性ＲＥＶＥＲＳＩＲ化合物は、アンチセンス鎖と完全に相補的である。
【００４２】
いくつかの実施形態では、調整性ＲＥＶＥＲＳＩＲ化合物は、少なくとも１つの修飾ヌクレオチド間結合を含む。
【００４３】
いくつかの実施形態では、調整性ＲＥＶＥＲＳＩＲ化合物は、ホスホロチオエートであるヌクレオチド間結合を含む。
【００４４】
いくつかの実施形態では、調整性ＲＥＶＥＲＳＩＲ化合物は、３又は４つ以下のホスホロチオエート修飾を含む。
【００４５】
いくつかの実施形態では、調整性ＲＥＶＥＲＳＩＲ化合物は、リガンドと共役される。
【００４６】
いくつかの実施形態では、調整性ＲＥＶＥＲＳＩＲ化合物は、
【化１】
2020531450.tif 000003
であるリガンドを含む。
【００４７】
いくつかの実施形態では、調整性ＲＥＶＥＲＳＩＲ化合物は、化合物の３’−末端に共役されているリガンドを含む。
【００４８】
いくつかの実施形態では、調整性ＲＥＶＥＲＳＩＲ化合物は、２’−デオキシリボースであるデオキシ糖を含む。
【００４９】
いくつかの実施形態では、本発明は、８又は９つの修飾ヌクレオチドを含む調整性ＲＥＶＥＲＳＩＲ化合物を含むキットを提供し、ここで、修飾ヌクレオチドの少なくとも３つは、高親和性モノマーであり、及び高親和性モノマーの１つは、ｓｉＲＮＡの標的鎖の５’−末端から６番目のヌクレオチドと塩基対合する。
【００５０】
いくつかの実施形態では、本発明は、ｓｉＲＮＡと、８又は９つの修飾ヌクレオチドを含む調整性ＲＥＶＥＲＳＩＲ化合物とを含むキットを提供し、ここで、修飾ヌクレオチドの少なくとも３つは、高親和性モノマーであり、及び高親和性モノマーの１つは、ｓｉＲＮＡの標的鎖の５’−末端から６番目のヌクレオチドと塩基対合する。
【００５１】
いくつかの実施形態では、本発明は、疾患の処置又は予防に使用するための医薬組成物の効果及び安全性を評価する方法又はシステムを提供し、本方法は、
（１）第１の処置期間にわたって医薬組成物で全ての対象を処置するステップ、
（２）全ての対象について、ｍＲＮＡレベル及び／又は生理学的アウトカム尺度を導き出すステップ、
（３）処置された対象の応答メンバーを非応答メンバーから分離するステップ、
（４）応答者のメンバーをランダム化し、且つ少なくとも２つのさらなる亜群に階層化するステップ、
（５）第２の処置期間にわたり、（４）における１つの亜群のメンバーを医薬組成物で引き続き処置し、且つ他方の亜群のメンバーを請求項１に記載のＲＥＶＥＲＳＩＲ化合物で処置するステップ、
（６）これらの亜群について、ｍＲＮＡレベル及び／又は生理学的アウトカム尺度を導き出すステップ、
（７）（６）におけるアウトカムを（２）におけるアウトカムと比較するステップ、及び
（８）（７）における比較を使用して、医薬組成物の効果及び安全性尺度を導き出すステップ
を含む。
【００５２】
いくつかの実施形態では、本発明は、疾患の処置又は予防に使用するための医薬組成物の効果及び安全性を評価する方法又はシステムを提供し、本方法は、
（１）第１の処置期間にわたって医薬組成物で全ての対象を処置するステップ、
（２）全ての対象について、ｍＲＮＡレベル及び／又は生理学的アウトカム尺度を導き出すステップ、
（３）処置された対象の応答メンバーを非応答メンバーから分離するステップ、
（４）応答者のメンバーをランダム化し、且つ少なくとも２つのさらなる亜群に階層化するステップ、
（５）第２の処置期間にわたり、（４）における１つの亜群のメンバーを医薬組成物で引き続き処置し、且つ他方の亜群のメンバーを請求項１に記載のＲＥＶＥＲＳＩＲ化合物で処置するステップ、
（６）これらの亜群について、ｍＲＮＡレベル及び／又は生理学的アウトカム尺度を導き出すステップ、
（７）（６）におけるアウトカムを（２）におけるアウトカムと比較するステップ、及び
（８）（７）における比較を使用して、医薬組成物の効果及び安全性尺度を導き出すステップ
を含み、この場合、対象を４つの亜群に分け、クロスオーバー臨床試験におけるウィリアムズ（Ｗｉｌｌｉａｍｓ）デザイン及びランダム化（Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｓｔａｔｉｓｔｉｃａｌ  Ｓｏｆｔｗａｒｅ，Ｖ２９，Ｆｅｂｒｕａｒｙ  ２００９）に従う。
【００５３】
一例では、試験中の処置の回数は、４回であり、下記の一連の処置を実施する。
【００５４】
【表１】
2020531450.tif 000004
【００５５】
ここで、薬剤１Ａは、１回目用量の医薬組成物を含み、薬剤２Ｂは、２回目用量の医薬組成物を含み、ＡｃｔＣｔｒｌは、初期用量の医薬組成物、実対照薬又は他の標準治療薬（すなわちその疾患について入手可能な他の治療薬）を含み、プラセボは、ＲＥＶＥＲＳＩＲ治療薬を含む群を含む。
【００５６】
いくつかの実施形態では、本発明は、疾患の処置又は予防に使用するための医薬組成物の効果及び安全性を評価する方法又はシステムを提供し、ここで、疾患は、標的遺伝子の異常な発現によって引き起こされる。
【００５７】
いくつかの実施形態では、本発明は、疾患の処置又は予防に使用するための医薬組成物の効果及び安全性を評価する方法又はシステムを提供し、ここで、医薬組成物は、オリゴヌクレオチドを含む。
【００５８】
いくつかの実施形態では、本発明は、疾患の処置又は予防に使用するための医薬組成物の効果及び安全性を評価する方法又はシステムを提供し、ここで、オリゴヌクレオチドは、アンチセンス又はｓｉＲＮＡである。
【００５９】
いくつかの実施形態では、本発明は、疾患の処置又は予防に使用するための医薬組成物の効果及び安全性を評価する方法又はシステムを提供し、ここで、オリゴヌクレオチドは、持続可能な薬力学を提供した。
【００６０】
いくつかの実施形態では、本発明は、疾患の処置又は予防に使用するための医薬組成物の効果及び安全性を評価する方法又はシステムを提供し、ここで、調整性ＲＥＶＥＲＳＩＲ化合物は、処置されたメンバーのランダム化治療中止を均一化し且つ可能にするために使用される。
【００６１】
いくつかの実施形態では、本発明の調整性ＲＥＶＥＲＳＩＲ化合物は、処置された亜群のウォッシュアウトを誘導する。
【００６２】
いくつかの実施形態では、本発明の調整性ＲＥＶＥＲＳＩＲ化合物は、ＲＮＡｉ酸度のベースラインをリセットする。
【００６３】
いくつかの実施形態では、ｓｉＲＮＡは、調整性ＲＥＶＥＲＳＩＲ処置の少なくとも１、２、３又は４週間後に再投与され得る。
【００６４】
いくつかの実施形態では、標的遺伝子は、ＴＴＲ、ＡＧＴ、ＡＬＡＳ−１、第ＸＩ因子、第ＸＩＩ因子、ＣＣ５、ＣＣ３、ＧＯ１、ＡＴ３、ＡＡＴ、Ｅｇ５、ＰＣＳＫ９、ＴＰＸ２、アポＢ、ＳＡＡ、ＲＳＶ、ＰＤＧＦβ遺伝子、Ｅｒｂ−Ｂ遺伝子、Ｓｒｃ遺伝子、ＣＲＫ遺伝子、ＧＲＢ２遺伝子、ＲＡＳ遺伝子、ＭＥＫＫ遺伝子、ＪＮＫ遺伝子、ＲＡＦ遺伝子、Ｅｒｋ１／２遺伝子、ＰＣＮＡ（ｐ２１）遺伝子、ＭＹＢ遺伝子、ＪＵＮ遺伝子、ＦＯＳ遺伝子、ＢＣＬ−２遺伝子、サイクリンＤ遺伝子、ＶＥＧＦ遺伝子、ＥＧＦＲ遺伝子、サイクリンＡ遺伝子、サイクリンＥ遺伝子、ＷＮＴ−Ｉ遺伝子、β−カテニン遺伝子、ｃ−ＭＥＴ遺伝子、ＰＫＣ遺伝子、ＮＦＫＢ遺伝子、ＳＴＡＴ３遺伝子、サバイビン遺伝子、Ｈｅｒ２／Ｎｅｕ遺伝子、トポイソメラーゼＩ遺伝子、トポイソメラーゼＩＩα遺伝子、ｐ７３遺伝子中の突然変異、ｐ２１（ＷＡＦ１／ＣＩＰ１）遺伝子中の突然変異、ｐ２７（ＫＩＰ１）遺伝子中の突然変異、ＰＰＭ１Ｄ遺伝子中の突然変異、ＲＡＳ遺伝子中の突然変異、カベオリンＩ遺伝子中の突然変異、ＭＩＢ  Ｉ遺伝子中の突然変異、ＭＴＡＩ遺伝子中の突然変異、Ｍ６８遺伝子中の突然変異、腫瘍抑制遺伝子中の突然変異及びｐ５３腫瘍抑制遺伝子中の突然変異からなる群から選択される。
【００６５】
いくつかの実施形態では、第２の期間は、オープンラベル試験の完了までである。
【００６６】
いくつかの実施形態では、第１の期間は、約１ヵ月、２ヵ月又は３ヵ月である。
【００６７】
いくつかの実施形態では、第３の期間は、臨床試験の完了までである。
【００６８】
いくつかの実施形態では、方法又はシステムは、医薬剤を検証するための臨床試験又は臨床試験を実施するためのシステムを構成する。いくつかの実施形態では、方法又はシステムは、医薬剤を用いる処置計画をその効果について評価するためのものである。
【００６９】
定義
具体的な定義が記載されていない限り、本明細書に記載の分析化学、合成有機化学、並びに医学及び薬化学に関連して使用される名称、並びにそれらの手順及び技術は、当技術分野でよく知られ、且つ一般に使用されているものである。化学合成及び化学分析のために標準的技術を使用することができる。いくつかのこうした技術及び手順は、例えば、“Ｃａｒｂｏｈｙｄｒａｔｅ  Ｍｏｄｉｆｉｃａｔｉｏｎｓ  ｉｎ  Ａｎｔｉｓｅｎｓｅ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ”Ｅｄｉｔｅｄ  ｂｙ  Ｓａｎｇｖｉ  ａｎｄ  Ｃｏｏｋ，Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｓｏｃｉｅｔｙ，Ｗａｓｈｉｎｇｔｏｎ  Ｄ．Ｃ．，１９９４；“Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，”Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏ．，Ｅａｓｔｏｎ，Ｐａ．，１８ｔｈ  ｅｄｉｔｉｏｎ，１９９０；及び“Ａｎｔｉｓｅｎｓｅ  Ｄｒｕｇ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ，Ｓｔｒａｔｅｇｉｅｓ，ａｎｄ  Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ”Ｅｄｉｔｅｄ  ｂｙ  Ｓｔａｎｌｅｙ  Ｔ．Ｃｒｏｏｋｅ，ＣＲＣ  Ｐｒｅｓｓ，Ｂｏｃａ  Ｒａｔｏｎ，Ｆｌａ．；並びにＳａｍｂｒｏｏｋ  ｅｔ  ａｌ．，“Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ，Ａ  ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，”２ｎｄ  Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ，１９８９に見出すことができ、これらは、あらゆる目的のために参照により本明細書に組み込まれる。認められる限り、本開示で言及される全ての特許、出願、公開出願並びに他の刊行物及び他のデータは、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。
【００７０】
別に指示されていない限り、下記の用語は、下記の意味を有する。
【００７１】
本明細書で使用されるとき、用語「調整性ＲＥＶＥＲＳＩＲ」とは、約８、９、１０、１１、１２、１３、１４又は１５日後、約５０％、６０％、７０％、８０％、９０％又は完全回復のタンパク質回復レベルでｓｉＲＮＡの活性を中和するオリゴマーＲＥＶＥＲＳＩＲ化合物を意味する。一実施形態では、調整性ＲＥＶＥＲＳＩＲ化合物は、約８、９、１０、１１、１２、１３、１４又は１５日後、タンパク質の完全な回復レベルでｓｉＲＮＡの活性を中和する。一実施形態では、調整性ＲＥＶＥＲＳＩＲ化合物は、約９、１０、１１又は１２日後、約７０％のタンパク質回復レベルでｓｉＲＮＡの活性を中和する。
【００７２】
いくつかの実施形態では、オリゴマー調整性ＲＥＶＥＲＳＩＲ化合物の投与時間後のある時点において、ｓｉＲＮＡの活性を低減するオリゴマー調整性ＲＥＶＥＲＳＩＲ化合物の作用は、約１５〜４５日、好ましくは約３７〜４２日後に同じｓｉＲＮＡの投与によって中和される。
【００７３】
本明細書で使用されるとき、用語「ヌクレオシド」は、核酸塩基及び糖を含むグリコシルアミンを意味する。ヌクレオシドとして、限定はしないが、天然に存在するヌクレオシド、無塩基ヌクレオシド、修飾ヌクレオシド並びに模擬塩基及び／又は糖基を有するヌクレオシドが挙げられる。
【００７４】
本明細書で使用されるとき、用語「ヌクレオチド」は、核酸塩基と、リン酸基が共有結合した糖とを含むグリコソミン（ｇｌｙｃｏｓｏｍｉｎｅ）を指す。ヌクレオチドは、様々な置換基のいずれかで修飾され得る。
【００７５】
本明細書で使用されるとき、用語「核酸塩基」は、ヌクレオシド又はヌクレオチドの塩基部分を指す。核酸塩基は、別の核酸の塩基に水素結合することができる任意の原子又は原子団を含み得る。
【００７６】
本明細書で使用されるとき、用語「ヘテロ環塩基部分」は、ヘテロ環を含む核酸塩基を指す。
【００７７】
本明細書で使用されるとき、用語「オリゴマー化合物」は、２つ以上のサブ構造を含み、核酸分子の１領域とハイブリダイズすることができるポリマー構造を指す。いくつかの実施形態では、オリゴマー化合物は、オリゴヌクレオチドである。いくつかの実施形態では、オリゴマー化合物は、オリゴヌクレオチドである。いくつかの実施形態では、オリゴマー化合物は、アンチセンス化合物である。いくつかの実施形態では、オリゴマー化合物は、調整性ＲＥＶＥＲＳＩＲ化合物である。いくつかの実施形態では、オリゴマー化合物は、コンジュゲート基を含む。
【００７８】
本明細書で使用されるとき、「オリゴヌクレオシド」は、ヌクレオシド間結合が、リン原子を含有しないオリゴヌクレオチドを指す。
【００７９】
本明細書で使用されるとき、用語「オリゴヌクレオチド」は、複数の連結ヌクレオチドを含むオリゴマー化合物を指す。いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドの１つ又は複数のヌクレオチドは、修飾されている。いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドは、リボ核酸（ＲＮＡ）又はデオキシリボ核酸（ＤＮＡ）を含む。いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドは、天然及び／若しくは非天然核酸塩基、糖及び共有結合ヌクレオチド間結合から構成され、さらに非核酸コンジュゲートを含み得る。
【００８０】
本明細書で使用されるとき、用語「ヌクレオシド間結合」は、隣接するヌクレオシド同士の非リン共有結合を指す。
【００８１】
本明細書で使用されるとき、用語「ヌクレオチド間結合」は、隣接するヌクレオチド同士の共有リン結合を指す。
【００８２】
本明細書で使用されるとき、用語「天然に存在するヌクレオチド間結合」は、３’−５’リン酸ジエステル結合を指す。
【００８３】
本明細書で使用されるとき、用語「ｓｉＲＮＡ活性を検出する」又は「ｓｉＲＮＡ活性を測定する」は、ｓｉＲＮＡ活性を検出又は測定するための試験が、特定のサンプルについて実施され、対照サンプルの試験と比較されることを意味する。このような検出及び／又は測定は、ゼロの値を含み得る。従って、ｓｉＲＮＡ活性の検出のための試験の結果、ｓｉＲＮＡ活性がないこと（ゼロのｓｉＲＮＡ活性）が判明する場合でも、「ｓｉＲＮＡ活性を検出するステップ」はやはり実施されている。
【００８４】
本明細書で使用されるとき、用語「対照サンプル」は、リポータオリゴマー化合物と接触させていないサンプルを指す。
【００８５】
本明細書で使用されるとき、用語「モチーフ」は、オリゴマー化合物中の非修飾及び修飾ヌクレオチドのパターンを指す。
【００８６】
本明細書で使用されるとき、用語「調整性ＲＥＶＥＲＳＩＲ化合物」は、共役又は非共役ｓｉＲＮＡの少なくとも一方の鎖と相補的で、それとハイブリダイズすることができるオリゴマー化合物を指す。限定はしないが、調整性ＲＥＶＥＲＳＩＲ化合物は、意図しない標的ＰＤ作用をブロックするだけではなく、共役又は非共役ｓｉＲＮＡで起こり得るあらゆる潜在的オフターゲット活性もブロックすることができる。
【００８７】
本明細書で使用されるとき、用語「調整性ＲＥＶＥＲＳＩＲ活性」は、調整性ＲＥＶＥＲＳＩＲ化合物とｓｉＲＮＡの鎖の１つとのハイブリダイゼーションに起因すると考えられる任意のｓｉＲＮＡ活性の強度又は持続時間のいずれかの低減を指す。
【００８８】
本明細書で使用されるとき、用語「混合骨格オリゴマー化合物」は、オリゴマー化合物の少なくとも１つのヌクレオチド間結合が、オリゴマー化合物の少なくとも１つの他のヌクレオチド間結合と異なるオリゴマー化合物を指す。
【００８９】
本明細書で使用されるとき、用語「標的タンパク質」は、調節が望まれるタンパク質を指す。
【００９０】
本明細書で使用されるとき、用語「標的遺伝子」は、標的タンパク質をコードする遺伝子を指す。
【００９１】
本明細書で使用されるとき、用語「標的核酸」は、発現又は活性が、共役若しくは非共役ｓｉＲＮＡ化合物により調節され得る、任意の核酸分子を指す。標的核酸として、限定はしないが、標的タンパク質をコードするＤＮＡから転写されるＲＮＡ（限定はしないが、ｐｒｅ−ｍＲＮＡ及びｍＲＮＡ又はその部分）並びにそのようなＲＮＡから得られるｃＤＮＡ及びｍｉＲＮＡが挙げられる。例えば、標的核酸は、その発現が特定の障害若しくは病態又は感染因子由来の核酸分子と関連する細胞遺伝子（又は遺伝子から転写されるｍＲＮＡ）であり得る。
【００９２】
本明細書で使用されるとき、用語「標的ｓｉＲＮＡ」は、調整性ＲＥＶＥＲＳＩＲ化合物によってターゲティングされるｓｉＲＮＡ化合物を指す。
【００９３】
本明細書で使用されるとき、用語「ターゲティングする」又は「ターゲティングされる」は、特定の標的核酸分子又は標的核酸分子内のヌクレオチドの特定の領域に対するｓｉＲＮＡのアンチセンス鎖の会合を指す。
【００９４】
本明細書で使用されるとき、用語「核酸塩基相補性」は、別の核酸塩基と塩基対合することができる核酸塩基を指す。例えば、ＤＮＡでは、アデニン（Ａ）は、チミン（Ｔ）と相補的である。例えば、ＲＮＡでは、アデニン（Ａ）は、ウラシル（Ｕ）と相補的である。いくつかの実施形態では、相補的核酸塩基は、その標的核酸の核酸塩基と塩基対合することができるアンチセンス化合物の核酸塩基を指す。例えば、アンチセンス化合物の特定の位置の核酸塩基が、標的核酸の特定の位置の核酸塩基と、水素結合することができれば、オリゴヌクレオチドと標的核酸同士の水素結合の位置は、その核酸塩基対で相補的であるとみなされる。
【００９５】
本明細書で使用されるとき、用語「非相補的核酸塩基」は、互いに水素結合を形成しないか、又はそうでなければハイブリダイゼーションを支持しない核酸塩基の対を指す。
【００９６】
本明細書で使用されるとき、用語「相補的」は、別のオリゴマー化合物又は核酸と核酸塩基相補性によってハイブリダイズするオリゴマー化合物の能力を指す。いくつかの実施形態では、オリゴマー化合物とその標的は、各分子内で十分な数の対応する位置が、互いに結合することができる核酸塩基によって占められて、アンチセンス化合物と標的との安定した会合を可能にするとき、互いに相補的である。当業者であれば、会合を維持するオリゴマー化合物の能力を排除することなく、ミスマッチの含有が可能であることは認識される。従って、ミスマッチである（すなわち標的の対応ヌクレオチドに対して相補的な核酸塩基ではない）最大約２０％のヌクレオチドを含み得るオリゴマー化合物（例えば、調整性ＲＥＶＥＲＳＩＲ化合物、ｓｉＲＮＡなど）が本明細書に記載される。好ましくは、調整性ＲＥＶＥＲＳＩＲ化合物及びｓｉＲＮＡなどのオリゴマー化合物は、約１５％以下、より好ましくは約１０％以下、最も好ましくは５％以下のミスマッチを含有するか、又はミスマッチを一切含有しない。残りのヌクレオチドは、相補的核酸塩基であるか、そうでなければ、ハイブリダイゼーションを破壊しない（例えば、ユニバーサル塩基）。当業者であれば、本発明で提供される化合物は、標的核酸に対して少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％又は１００％相補的であることは認識されるであろう。
【００９７】
本明細書で使用されるとき、「ハイブリダイゼーション」は、相補的オリゴマー化合物（例えば、ｓｉＲＮＡのアンチセンス鎖とその標的核酸又は標的ｓｉＲＮＡに対する調整性ＲＥＶＥＲＳＩＲ）の対合を意味する。特定の機構に限定されないが、対合の最も一般的機構は、相補的ヌクレオチド又はヌクレオチド塩基（核酸塩基）同士の水素結合を含み、これは、ワトソン−クリック（Ｗａｔｓｏｎ−Ｃｒｉｃｋ）型、フーグスティーン（Ｈｏｏｇｓｔｅｅｎ）型若しくは逆フーグスティーン（Ｈｏｏｇｓｔｅｅｎ）型水素結合であり得る。例えば、天然の塩基アデニンは、水素結合の形成を介して対合する天然の核酸塩基チミジン及びウラシルと相補的な核酸塩基である。天然の塩基グアニンは、天然の塩基シトシン及び５−メチルシトシンと相補的な核酸塩基である。ハイブリダイゼーションは、様々な状況下で起こり得る。
【００９８】
本明細書で使用されるとき、用語「特異的にハイブリダイズする」は、あるオリゴマー化合物が、１つの核酸部位に、他の核酸部位とハイブリダイズするよりも高い親和性でハイブリダイズする能力を指す。いくつかの実施形態では、ｓｉＲＮＡのアンチセンスは、２つ以上の標的部位に特異的にハイブリダイズする。
【００９９】
本明細書で使用されるとき、「設計する」又は「設計される」は、選択された核酸分子と特異的にハイブリダイズするオリゴマー化合物を設計するプロセスを指す。
【０１００】
本明細書で使用されるとき、用語「調節」は、調節前の機能又は活性のレベルと比較した、機能又は活性の摂動を指す。例えば、調節は、遺伝子発現の変化、すなわち増大（刺激若しくは誘導）又は低減（阻害若しくは抑制）のいずれかを含む。別の例として、発現の調節は、ｐｒｅ−ｍＲＮＡプロセシングのスプライス部位選択の摂動を含み得る。
【０１０１】
本明細書で使用されるとき、用語「発現」は、遺伝子のコードされた情報が、細胞内に存在し、且つ作動する構造へと変換されるあらゆる機能及びステップを指す。こうした構造として、限定はしないが、転写及び翻訳の産物が挙げられる。
【０１０２】
本明細書で使用されるとき、「変異体」は、ＤＮＡの同じゲノム領域から生成され得る別のＲＮＡ転写物を指す。変異体として、限定はしないが、「ｐｒｅ−ｍＲＮＡ変異体」があり、これは、同じゲノムＤＮＡから生成される転写物であり、同じゲノムＤＮＡから生成される他の転写物とは、その開始位置又は終止位置のいずれかが異なり、イントロン及びエキソン配列の両方を含む。さらに変異体には、限定はしないが、別のスプライス部位又は別の開始及び終止コドンを有するものもある。
【０１０３】
本明細書で使用されるとき、「高親和性修飾モノマー」は、天然に存在するモノマーと比較して、少なくとも１つの修飾核酸塩基、ヌクレオチド間結合又は糖部分を有し、この修飾が、その標的核酸に対する高親和性修飾モノマーを含むアンチセンス化合物の親和性を高めるようなモノマーを指す。高親和性修飾として、限定はしないが、２’−修飾糖を含むモノマー（例えば、ヌクレオシド及びヌクレオチド）がある。
【０１０４】
本明細書で使用されるとき、用語「２’−修飾」又は「２’−置換」は、Ｈ又はＯＨ以外の２’位に置換基を含む糖を意味する。２’−修飾モノマーとして、限定はしないが、２’−置換基、例えばアリル、アミノ、アジド、チオ、Ｏ−アリル、Ｏ−Ｃ１〜Ｃ１０アルキル、−ＯＣＦ３、Ｏ−（ＣＨ２）２−Ｏ−ＣＨ３、２’−Ｏ（ＣＨ２）２ＳＣＨ３、Ｏ−（ＣＨ２）２−Ｏ−Ｎ（Ｒｍ）（Ｒｎ）又はＯ−ＣＨ２−Ｃ（＝Ｏ）−Ｎ（Ｒｍ）（Ｒｎ）を有するＢＮＡ及びモノマー（例えば、ヌクレオシド及びヌクレオチド）が挙げられ、ここで、各Ｒｍ及びＲｎは、独立に、Ｈ又は置換若しくは非置換Ｃ１〜Ｃ１０アルキルである。いくつかの実施形態では、オリゴマー化合物は、式２’−Ｏ（ＣＨ２）ｎＨ（ここで、ｎは、１〜６である）がない２’修飾モノマーを含む。いくつかの実施形態では、オリゴマー化合物は、式２’−ＯＣＨ３がない２’修飾モノマーを含む。いくつかの実施形態では、オリゴマー化合物は、上記式又は別の実施形態では、２’−Ｏ（ＣＨ２）２ＯＣＨ３がない２’修飾モノマーを含む。
【０１０５】
本明細書で使用されるとき、「ロックド核酸」又は「ＬＮＡ」又は「ロックドヌクレオシド」又は「ロックドヌクレオチド」は、ヌクレオシドのフラノース部分が、フラノース環上の２つの炭素原子をつなげる架橋を含み、それにより二環式系を形成するヌクレオシド又はヌクレオチドを指す。ロックド核酸は、二環式核酸（ＢＮＡ）とも呼ばれる。
【０１０６】
本明細書で使用されるとき、別に指示されない限り、用語「メチレンオキシＬＮＡ」は、単独で、β−Ｄ−メチレンオキシＬＮＡを指す。
【０１０７】
本明細書で使用されるとき、用語「ＭＯＥ」は、２’−Ｏ−メトキシエチル置換基を指す。
【０１０８】
本明細書で使用されるとき、用語「ギャップマー」は、中央領域（「ギャップ」）と、中央領域のいずれかの側の領域（「ウィング」）を含むキメラオリゴマー化合物を指し、ここで、ギャップは、各ウィングと異なる少なくとも１つの修飾を含む。このような修飾としては、核酸塩基、モノマー結合及び糖修飾並びに修飾の非存在（非修飾）がある。従って、いくつかの実施形態では、ウィングの各々におけるヌクレオチド結合は、ギャップ内のヌクレオチド結合と異なる。いくつかの実施形態では、各ウィングは、高親和性修飾を有するヌクレオチドを含み、ギャップは、その修飾を含まないヌクレオチドを含む。いくつかの実施形態では、ギャップ内のヌクレオチド及びウィング内のヌクレオチドは、全て高親和性修飾を含むが、ギャップ内の高親和性修飾は、ウィング内の高親和性修飾と異なる。いくつかの実施形態では、ウィング内の修飾は、互いに同じである。いくつかの実施形態では、ウィング内の修飾は、互いに異なる。いくつかの実施形態では、ギャップ内のヌクレオチドは、非修飾であり、ウィング内のヌクレオチドは、修飾されている。いくつかの実施形態では、各ウィング内の修飾は、同じである。いくつかの実施形態では、一方のウィング内の修飾は、他方のウィング内の修飾と異なる。いくつかの実施形態では、オリゴマー化合物は、ギャップ内に２’−デオキシヌクレオチドを有し、且つウィング内に高親和性修飾を含むヌクレオチドを有するギャップマーである。
【０１０９】
本明細書で使用されるとき、用語「プロドラッグ」は、内在性酵素又は他の化学薬品及び／若しくは条件の作用により、身体又はその細胞内で活性形態（すなわち薬剤）へと変換される不活性形態で調製される治療薬を指す。
【０１１０】
本明細書で使用されるとき、用語「薬学的に許容される塩」は、活性化合物の所望の生物活性を保持し、望ましくない毒物学的作用を付与しない活性化合物の塩を指す。
【０１１１】
本明細書で使用されるとき、用語「キャップ構造」又は「末端キャップ部分」は、アンチセンス化合物のいずれかの末端に組み込まれた化学修飾を指す。
【０１１２】
本明細書で使用されるとき、用語「予防」は、数時間から数日、好ましくは数週間から数ヵ月にわたって、状態若しくは疾患の発症又は発生を遅延させるか又は未然に防ぐことを指す。
【０１１３】
本明細書で使用されるとき、用語「改善」は、状態若しくは疾患の少なくとも１つの活性又は１つの重症度の指標の軽減を指す。指標の重症度は、当業者には周知の主観的又は客観的測度により決定することができる。
【０１１４】
本明細書で使用されるとき、用語「処置」は、疾患若しくは状態の変化又は改善をもたらすために、本発明の組成物を投与することを指す。予防、改善及び／又は処置は、疾患若しくは状態の経過を変化させるために、定期的間隔で又は状態若しくは疾患の発症前に複数回用量の投与を必要とし得る。さらに、状態若しくは疾患の予防、改善及び処置のためにそれぞれ１個体に単剤を順次又は同時に用い得る。
【０１１５】
本明細書で使用されるとき、用語「医薬剤」は、対象に投与されるとき、治療利益をもたらす物質を指す。いくつかの実施形態では、医薬剤は、活性医薬剤である。いくつかの実施形態では、医薬剤は、プロドラッグである。
【０１１６】
本明細書で使用されるとき、用語「治療有効量」は、動物に治療利益をもたらす医薬剤の量を指す。
【０１１７】
本明細書で使用されるとき、用語「投与する」は、動物に医薬剤を提供することを意味し、限定はしないが、医療専門家による投与及び自己投与を含む。
【０１１８】
本明細書で使用されるとき、用語「共投与する」は、２種以上の医薬剤を動物に提供することを意味する。いくつかの実施形態では、こうした２種以上の医薬剤は、一緒に投与する。いくつかの実施形態では、こうした２種以上の医薬剤は、個別に投与する。いくつかの実施形態では、こうした２種以上の医薬剤は、同時に投与する。いくつかの実施形態では、こうした２種以上の医薬剤は、異なる時点で投与する。いくつかの実施形態では、こうした２種以上の医薬剤は、同じ投与経路により投与する。いくつかの実施形態では、こうした２種以上の医薬剤は、異なる投与経路により投与する。いくつかの実施形態では、こうした２種以上の医薬剤は、同じ医薬製剤に含有されている。いくつかの実施形態では、こうした２種以上の医薬剤は、個別の医薬製剤の形態をしている。
【０１１９】
本明細書で使用されるとき、用語「医薬組成物」は、個体に投与するのに好適な物質の混合物を指す。例えば、医薬組成物は、アンチセンスオリゴヌクレオチド及び滅菌水溶液を含み得る。いくつかの実施形態では、医薬組成物は、医薬剤と希釈剤及び／又は担体を含む。
【０１２０】
本明細書で使用されるとき、用語「ｉｎ  ｖｉｔｒｏ」は、生物（例えば、動物又は植物）内ではなく、人工的環境、例えば試験管又は反応容器内、細胞培養で起こる事象を指す。本明細書で使用されるとき、用語「ｅｘ  ｖｉｖｏ」は、生きた生物から取り出され、生物外部（例えば、試験管内）で培養される細胞を指す。本明細書で使用されるとき、用語「ｉｎ  ｖｉｖｏ」は、生物（例えば、動物、植物及び／又は微生物）内で起こる事象を指す。
【０１２１】
本明細書で使用されるとき、用語「対象」又は「患者」は、例えば、実験、診断及び／又は治療を目的として、本明細書に開示の組成物を投与することができる、任意の生物を指す。典型的な対象として、動物（例えば、マウス、ラット、ウサギ、非ヒト霊長類及びヒトなどの哺乳動物）並びに／又は植物が挙げられる。通常、動物は、霊長類、げっ歯類、家畜又は競技用動物などの脊椎動物である。霊長類としては、チンパンジー、カニクイザル、クモザル及びマカク、例えばアカゲザル（Ｒｈｅｓｕｓ）が挙げられる。げっ歯類としては、マウス、ラット、ウッドチャック、フェレット、ウサギ及びハムスターが挙げられる。家畜及び競技用動物としては、ウシ、ウマ、ブタ、シカ、バイソン、スイギュウ、ネコ科種、例えば家ネコ、イヌ科種、例えばイヌ、キツネ、オオカミ、鳥類種、例えばニワトリ、エミュー、ダチョウ並びに魚類、例えばマス、ナマズ及びサケが挙げられる。患者又は対象は、上に挙げた任意のサブセット、例えば前述の全てを含むが、ヒト、霊長類又はげっ歯類などの１つ又は複数の群若しくは種を除外する。本明細書に記載する態様のいくつかの実施形態では、対象は、哺乳動物、例えば霊長類、例えばヒトである。「対象」又は「患者」という用語は、本明細書では置き換え可能に使用される。対象は、男性（雄）又は女性（雌）のいずれでもあり得る。
【０１２２】
好ましくは、対象は、哺乳動物である。哺乳動物は、ヒト、非ヒト霊長類、マウス、ラット、イヌ、ネコ、ウマ又はウシであり得るが、これらの例に限定されるわけではない。ヒト以外の哺乳動物は、ヒトの疾患及び障害の動物モデルとなる対象として有利に使用することができる。さらに、本明細書に記載する化合物、組成物及び方法は、家畜及び／又はペットに用いることもできる。
【０１２３】
一実施形態では、対象は、ヒトである。別の実施形態では、対象は、疾患モデルとしての実験動物又は代用動物である。この用語は、特定の年齢又は性別を意味するわけではない。従って、男性（雄）又は女性（雌）にかかわらず、成体及び新生の対象並びに胎児が包含されることが意図される。対象の例として、ヒト、イヌ、ネコ、ウシ、ヤギ及びマウスが挙げられる。対象という用語は、さらにトランスジェニック種を含むことも意図される。一部の実施形態では、対象は、欧州系であり得る。一部の実施形態では、対象は、アフリカ系アメリカ人であり得る。一部の実施形態では、対象は、アジア系であり得る。
【０１２４】
ヒト身体に対して実施される方法の特許付与を禁止する管轄区域では、ヒト対象への組成物の「投与」の意味は、ヒト対象が、いずれかの方法（例えば、経口、吸入、局所適用、注射、挿入など）により自己投与する、規制物質を処方することに限定されることになる。特許を受けることができる主題を定義する法律又は規制に適う最も広範且つ合理的な解釈が意図される。ヒト身体に対して実施される方法の特許付与を禁止しない管轄区域では、組成物の「投与」は、ヒト身体に対して実施される方法と、前述した活動との両方を包含する。
【０１２５】
本明細書で使用されるとき、用語「非経口投与」は、注射又は注入による投与を指す。非経口投与として、限定はしないが、皮下投与、静脈内投与又は筋肉内投与が挙げられる。
【０１２６】
本明細書で使用されるとき、用語「皮下投与」は、皮膚の直下への投与を指す。「皮下投与」は、静脈への投与を意味する。
【０１２７】
本明細書で使用されるとき、用語「用量」は、１回の投与で供給される医薬剤の指定量を指す。いくつかの実施形態では、１用量は、２回以上のボーラス、錠剤又は注射で投与し得る。例えば、皮下投与が望まれるいくつかの実施形態では、所望の用量は、１回の注射によって容易に供給できない量を必要とする。こうした実施形態では、２回以上の注射を用いて、所望の用量を達成し得る。いくつかの実施形態では、１用量は、個体の注射部位反応を最小限にするために、２回以上の注射で投与し得る。
【０１２８】
本明細書で使用されるとき、用語「単位投与剤形」は、医薬剤が提供される形態を指す。いくつかの実施形態では、単位投与剤形は、凍結乾燥したアンチセンスオリゴヌクレオチドを含むバイアルである。いくつかの実施形態では、単位投与剤形は、再構成されたアンチセンスオリゴヌクレオチドを含むバイアルである。
【０１２９】
本明細書で使用されるとき、用語「活性医薬成分」は、所望の効果を付与する医薬組成物中の物質を指す。
【０１３０】
本明細書で使用されるとき、用語「副作用」は、所望の効果以外の処置に起因すると考えられる生理反答を指す。いくつかの実施形態では、副作用として、限定はしないが、注射部位反応、肝機能試験異常、腎機能異常、肝毒性、中枢神経系異常及び筋障害が挙げられる。例えば、血清中のアミノトランスフェラーゼレベル上昇は、肝毒性又は肝機能異常を示し得る。例えば、ビリルビンの増加は、肝毒性又は肝機能異常を示し得る。
【０１３１】
本明細書で使用されるとき、用語「アルキル」は、ここで使用される通り、最大２４個の炭素原子を含む飽和直鎖又は分岐状炭化水素ラジカルを指す。アルキル基の例として、限定はしないが、メチル、エチル、プロピル、ブチル、イソプロピル、ｎ−ヘキシル、オクチル、デシル、ドデシルなどが挙げられる。アルキル基は、一般に、１〜約２４個の炭素原子、より典型的には１〜約１２個の炭素原子（Ｃ１〜Ｃ１２アルキル）を含み、１〜約６つの炭素原子がより好ましい。本明細書で使用される用語「低級アルキル」は、１〜約６つの炭素原子を含む。本明細書で使用されるアルキル基は、任意選択で、１つ又は複数の別の置換基を含み得る。
【０１３２】
本明細書で使用されるとき、用語「アルケニル」は、ここで使用される通り、最大２４個の炭素原子を含み、且つ少なくとも１つの炭素−炭素二重結合を有する直鎖又は分岐状炭化水素ラジカルを指す。アルケニル基の例として、限定はしないが、エテニル、プロペニル、ブテニル、１−メチル−２−ブテン−１−イル、１，３−ブタジエンなどのジエンなどが挙げられる。アルケニル基は、一般に、２〜約２４個の炭素原子、より典型的には２〜約１２個の炭素原子を含み、２〜約６つの炭素原子がより好ましい。本明細書で使用されるアルケニル基は、任意選択で、１つ又は複数の別の置換基を含み得る。
【０１３３】
本明細書で使用されるとき、用語「アルキニル」は、ここで使用される通り、最大２４個の炭素原子を含み、且つ少なくとも１つの炭素−炭素三重結合を有する直鎖又は分岐状炭化水素ラジカルを指す。アルキニル基の例として、限定はしないが、エチニル、１−プロピニル、１−ブチニルなどが挙げられる。アルキニル基は、一般に、２〜約２４個の炭素原子、より典型的には２〜約１２個の炭素原子を含み、２〜約６つの炭素原子がより好ましい。本明細書で使用されるアルキニル基は、任意選択で、１つ又は複数の別の置換基を含み得る。
【０１３４】
本明細書で使用されるとき、用語「アミノアルキル」は、ここで使用される通り、アミノ置換アルキルラジカルを指す。この用語は、任意の位置にアミノ置換基を有するＣ１〜Ｃ１２アルキル基を含むことを意味し、ここで、アルキル基は、アミノアルキル基を親分子に会合させる。アミノアルキル基のアルキル及び／又はアミノ部分は、置換基でさらに置換することができる。
【０１３５】
本明細書で使用されるとき、用語「脂肪族」は、ここで使用される通り、最大２４個の炭素原子を含み、いずれか２つの炭素間の飽和が単結合、二重結合若しくは三重結合である、直鎖又は分岐状炭化水素ラジカルを指す。脂肪族基は、好ましくは、１〜約２４個の炭素原子、より典型的には１〜約１２個の炭素原子を含み、１〜約６つの炭素原子がより好ましい。脂肪族基の直鎖又は分岐鎖は、窒素、酸素、硫黄及びリンを含む１つ又は複数のヘテロ原子で分断され得る。ヘテロ原子で分断されたこのような脂肪族基として、限定はしないが、ポリアルコキシ、例えばポリアルキレングリコール、ポリアミン及びポリイミンが挙げられる。本明細書で使用される脂肪族基は、任意選択で、別の置換基を含み得る。
【０１３６】
本明細書で使用されるとき、用語「脂環式」又は「アリシクリル」は、環が脂肪族の環系を指す。この環系は、少なくとも１つが脂肪族である１つ又は複数の環を含み得る。好ましい脂環式化合物は、環内に約５〜約９つの炭素原子を有する環を含む。本明細書で使用される脂環式は、任意選択で、別の置換基を含み得る。本明細書で使用されるとき、用語「アルコキシ」は、ここで使用される通り、アルキル基と酸素原子との間に形成されるラジカルを指し、ここで、酸素原子は、アルコキシ基を親分子に結合させるために用いられる。アルコキシ基の例として、限定はしないが、メトキシ、エトキシ、プロポキシ、イソプロポキシ、ｎ−ブトキシ、ｓｅｃ−ブトキシ、ｔｅｒｔ−ブトキシ、ｎ−ペントキシ、ネオペントキシ、ｎ−ヘキソキシなどが挙げられる。本明細書で使用されるアルコキシ基は、任意選択で、別の置換基を含み得る。本明細書で使用されるとき、用語「ハロ」及び「ハロゲン」は、ここで使用される通り、フッ素、臭素及びヨウ素から選択される原子を指す。
【０１３７】
本明細書で使用されるとき、用語「アリール」及び「芳香族」は、ここで使用される通り、１つ又は複数の芳香環を有する、単環若しくは多環式炭素環系ラジカルを指す。アリール基の例として、限定はしないが、フェニル、ナフチル、テトラヒドロナフチル、インダニル、イデニルなどが挙げられる。好ましいアリール環系は、１つ又は複数の環内に約５〜約２０個の炭素原子を有する。本明細書で使用されるアリール基は、任意選択で、別の置換基を含み得る。
【０１３８】
本明細書で使用されるとき、用語「アラルキル」及び「アリールアルキル」は、ここで使用される通り、アルキル基とアリール基との間に形成されるラジカルを指し、ここで、アルキル基は、アラルキル基を親分子に結合させるために用いられる。例として、限定はしないが、ベンジル、フェネチルなどが挙げられる。本明細書で使用されるアラルキル基は、任意選択で、ラジカル基を形成するアルキル、アリール又はその両方の基に結合した別の置換基を含み得る。
【０１３９】
本明細書で使用されるとき、用語「複素環式ラジカル」は、ここで使用される通り、少なくとも１つのヘテロ原子を含み、不飽和、一部飽和若しくは完全飽和であり、従って、ヘテロアリール基を含む、ラジカル単環式若しくは多環式環系を指す。複素環式は、融合環系を含むことも意味し、ここで、融合環の１つ又は複数は、少なくとも１つのヘテロ原子を含み、他の環は、１つ若しくは複数のヘテロ原子を含有し得るか、又は任意選択でヘテロ原子を含まない。複素環式基は、典型的に、硫黄、窒素又は酸素から選択される少なくとも１つの原子を含む。複素環式基の例として、［１，３］ジオキソラン、ピロリジニル、ピラゾリニル、ピラゾリジニル、イミダゾリニル、イミダゾリジニル、ピペリジニル、ピペラジニル、オキサゾリジニル、イソキサゾリジニル、モルホリニル、チアゾリジニル、イソチアゾリジニル、キノキサリニル、ピリダジノニル、テトラヒドロフリルなどが挙げられる。本明細書で使用される複素環式基は、任意選択で、別の置換基を含み得る。本明細書で使用されるとき、用語「ヘテロアリール」及び「ヘテロ芳香族」は、ここで使用される通り、環の少なくとも１つが芳香族であり、１つ又は複数のヘテロ原子を含む、単環式若しくは多環式芳香環、環系又は融合環系を含むラジカルを指す。ヘテロアリールは、融合環系を含むことも意味し、これには、１つ又は複数の融合環がヘテロ原子を含まない系も含まれる。ヘテロアリール基は、典型的に、硫黄、窒素又は酸素から選択される１つの環原子を含む。ヘテロアリール基の例として、限定はしないが、ピリジニル、ピラジニル、ピリミジニル、ピロリル、ピラゾリル、イミダゾリル、チアゾリル、オキサゾリル、イソオキサゾリル、チアジアゾリル、オキサジアゾリル、チオフェニル、フラニル、キノリニル、イソキノリニル、ベンズイミダゾリル、ベンゾオキサゾリル、キノキサリニルなどが挙げられる。ヘテロアリールラジカルは、直接又は脂肪族基若しくはヘテロ原子などの連結部分を介して親分子に結合することができる。本明細書で使用されるヘテロアリール基は、任意選択で、別の置換基を含み得る。
【０１４０】
本明細書で使用されるとき、用語「ヘテロアリールアルキル」は、ここで使用されるように、ヘテロアリールアルキル基を親分子に結合することができるアルキルラジカルを有する、既に定義した通りのヘテロアリール基を指す。例として、限定はしないが、ピリジニルメチル、ピリミジニルエチル、ナフチリジニルプロピルなどが挙げられる。本明細書で使用されるヘテロアリールアルキル基は、任意選択で、ヘテロアリール又はアルキル部分の一方又は両方に別の置換基を含み得る。
【０１４１】
本明細書で使用されるとき、用語「単環又は多環式構造」は、本発明で使用される通り、単環又は融合若しくは連結された環を有する多環式である、全ての環系を包含し、脂肪族、脂環式、アリール、ヘテロアリール、アラルキル、アリールアルキル、複素環式、ヘテロアリール、ヘテロ芳香族、ヘテロアリールアルキルから選択される単環又は混合環系を含むものとする。このような単環及び多環式構造は、均質であるか、又は完全飽和、部分的飽和若しくは完全不飽和などの様々な飽和度を有する環を含むことができる。各環は、Ｃ、Ｎ、Ｏ及びＳから選択される環原子を含み、それにより複素環並びに混合モチーフに存在し得る唯一のＣ環原子のみを含む環、例えば１つの環が炭素原子のみを含み、融合環が２つの窒素原子を有するベンズイミダゾールを形成することができる。単環又は多環式構造は、例えば、環の１つに結合した２つの＝Ｏ基を有するフタルイミドなどの置換基でさらに置換することができる。別の態様では、単環又は多環式構造は、環原子を介して直接、置換基又は二官能価連結分子を介して親分子に結合することができる。
【０１４２】
本明細書で使用されるとき、用語「アシル」は、ここで使用される通り、有機酸からのヒドロキシル基の除去により形成されるラジカルを指し、これは、一般式−Ｃ（Ｏ）−Ｘを有し、ここで、Ｘは、典型的には脂肪族、脂環式又は芳香族である。例として、脂肪族カルボニル、芳香族カルボニル、脂肪族スルホニル、芳香族スルフィニル、脂肪族スルフィニル、芳香族リン酸エステル、脂肪族リン酸エステルなどが挙げられる。本明細書で使用されるアシル基は、任意選択で別の置換基を含み得る。
【０１４３】
本明細書で使用されるとき、用語「ヒドロカルビル」は、Ｃ、Ｏ及びＨを含む基を含む。任意の飽和度を有する直鎖、分岐状及び環状基が含まれる。こうしたヒドロカルビル基は、Ｎ、Ｏ及びＳから選択される１つ又は複数のヘテロ原子を含み得、また１つ又は複数の置換基で一又は多置換され得る。
【０１４４】
本明細書で使用されるとき、用語「置換基（ｓｕｂｓｔｉｔｕｅｎｔ）」及び「置換基（ｓｕｂｓｔｉｔｕｅｎｔ  ｇｒｏｕｐ）は、ここで使用される通り、所望の特性を増強するか又は所望の効果を付与するために、他の基若しくは親化合物に一般的に付加される基を含む。置換基は、保護若しくは非保護のいずれでもあり得、親化合物内の１つの利用可能な部位又は多数の利用可能な部位に付加することができる。置換基も他の置換基でさらに置換され得、直接又はアルキル若しくはヒドロカルビル基などの結合基を介して親化合物に結合され得る。このような基として、限定はしないが、ハロゲン、ヒドロキシル、アルキル、アルケニル、アルキニル、アシル（−Ｃ（Ｏ）Ｒａａ）、カルボキシル（−Ｃ（Ｏ）Ｏ−Ｒａａ）、脂肪族基、脂環式基、アルコキシ、置換オキソ（−Ｏ−Ｒａａ）、アリール、アラルキル、複素環式、ヘテロアリール、ヘテロアリールアルキル、アミノ（−ＮＲｂｂＲｃｃ）、イミノ（＝ＮＲｂｂ）、アミド（−Ｃ（Ｏ）Ｎ−ＲｂｂＲｃｃ又は−Ｎ（Ｒｂｂ）Ｃ（Ｏ）Ｒａａ）、アジド（−Ｎ３）、ニトロ（−ＮＯ２）、シアノ（−ＣＮ）、カルバミド（−ＯＣ（Ｏ）ＮＲｂｂＲｃｃ又は−Ｎ（Ｒｂｂ）Ｃ（Ｏ）ＯＲａａ）、ウレイド（−Ｎ（Ｒｂｂ）Ｃ（Ｏ）ＮＲｂｂＲｃｃ）、チオウレイド（−Ｎ（Ｒｂｂ）Ｃ（Ｓ）ＮＲｂｂＲｃｃ）、グアニジニル（−Ｎ（Ｒｂｂ）Ｃ（＝ＮＲｂｂ）ＮＲｂｂＲｃｃ）、アミジニル（−Ｃ（＝ＮＲｂｂ）−ＮＲｂｂＲｃｃ又は−Ｎ（Ｒｂｂ）Ｃ（ＮＲｂｂ）Ｒａａ）、チオール（−ＳＲｂｂ）、スルフィニル（−Ｓ（Ｏ）Ｒｂｂ）、スルホニル（−Ｓ（Ｏ）２Ｒｂｂ）、スルホンアミジル（−Ｓ（Ｏ）２ＮＲｂｂＲｃｃ又は−Ｎ（Ｒｂｂ）Ｓ（Ｏ）２Ｒｂｂ）及びコンジュゲート基が挙げられる。各Ｒａａ、Ｒｂｂ及びＲｃｃは、独立に、Ｈ、任意選択で連結された化学官能基又は別の置換基であり、好ましいリストは、限定はしないが、Ｈ、アルキル、アルケニル、アルキニル、脂肪族、アルコキシ、アシル、アリール、アラルキル、ヘテロアリール、脂環式、複素環式及びヘテロアリールアルキルを含む。
【０１４５】
本明細書に開示する調整性ＲＥＶＥＲＳＩＲ化合物は、ｓｉＲＮＡの活性を低減する上で特に有効である。例えば、本明細書に開示する調整性ＲＥＶＥＲＳＩＲ化合物は、ｓｉＲＮＡの活性を少なくとも約５０％、若しくは少なくとも約６０％、若しくは少なくとも約７０％、若しくは少なくとも約８０％、若しくは少なくとも約９０％、若しくは少なくとも約９５％、若しくは少なくとも約９７％、若しくは少なくとも約９９％、若しくは最大１００％（すなわち基準サンプルと比較して存在しないレベル）低減することができるか、又は基準レベルと比較して、５０〜１００％の範囲のいずれかの低減をもたらすことができる。基準レベルは、調整性ＲＥＶＥＲＳＩＲ化合物の非存在下のｓｉＲＮＡ活性であり得る。
【０１４６】
一部の実施形態では、本明細書に記載する調整性ＲＥＶＥＲＳＩＲ化合物は、調整性ＲＥＶＥＲＳＩＲ化合物の投与又は使用から７日未満以内（例えば、６日、５日、４日、３日、２日又は１日以内）に、ｓｉＲＮＡの活性を少なくとも約７５％、例えば８０％、８５％、９０％、９５％以上低減することができ、ｓｉＲＮＡ活性のより完全な低減若しくは阻害を含む。
【０１４７】
一部の実施形態では、調整性ＲＥＶＥＲＳＩＲ化合物は、調整性ＲＥＶＥＲＳＩＲ化合物の投与又は使用から４日以内にｓｉＲＮＡの活性を完全に低減することができる。ｓｉＲＮＡの活性の完全な低減は、基準レベルに対して少なくとも８０％のｓｉＲＮＡの活性の低減を意味する。
【０１４８】
オリゴマー化合物
いくつかの実施形態では、ｓｉＲＮＡ及び／又は調整性ＲＥＶＥＲＳＩＲ化合物は、オリゴマー化合物である。いくつかの実施形態では、ＤＮＡ又はＲＮＡなどの天然に存在するオリゴマーと比較して、ｓｉＲＮＡ及び／又は調整性ＲＥＶＥＲＳＩＲ化合物などのオリゴマー化合物を化学修飾することが望ましい。いくつかのこうした修飾は、オリゴマー化合物の活性を改変する。いくつかのこうした化学修飾は、例えば、標的核酸に対するｓｉＲＮＡの親和性又は標的ｓｉＲＮＡに対する調整性ＲＥＶＥＲＳＩＲの親和性を増大し、１つ又は複数のヌクレアーゼに対するその耐性を増大し、且つ／又はオリゴマー化合物の薬物動態若しくは組織分布を改変することにより、活性を改変することができる。いくつかの事例では、標的に対するオリゴマー化合物の親和性を増大する化学の使用は、より短いオリゴマー化合物使用を可能にし得る。
【０１４９】
モノマー
いくつかの実施形態では、オリゴマー化合物は、１つ又は複数の修飾モノマーを含む。いくつかのこうした実施形態では、オリゴマー化合物は、１つ又は複数の高親和性モノマーを含む。いくつかの実施形態では、このような高親和性モノマーは、２’−修飾糖を含むモノマー（例えば、ヌクレオシド及びヌクレオチド）から選択され、このようなものとして、限定はしないが、ＢＮＡ及び２’−置換基を有するモノマー（例えば、ヌクレオシド及びヌクレオチド）、例えばアリル、アミノ、アジド、チオ、Ｏ−アリル、Ｏ−Ｃ１〜Ｃ１０アルキル、−ＯＣＦ３−、Ｏ−（ＣＨ２）２−Ｏ−ＣＨ３、２’−Ｏ（ＣＨ２）２ＳＣＨ３、Ｏ−（ＣＨ２）２−Ｏ−Ｎ（Ｒｍ）（Ｒｎ）又はＯ−ＣＨ２−Ｃ（＝Ｏ）−Ｎ（Ｒｍ）（Ｒｎ）が挙げられ、ここで、各Ｒｍ及びＲｎは、独立に、Ｈ又は置換若しくは非置換Ｃ１〜Ｃ１０アルキルである。
【０１５０】
いくつかの実施形態では、限定はしないが、本発明の調整性ＲＥＶＥＲＳＩＲ化合物及びｓｉＲＮＡなどのオリゴマー化合物は、１つ又は複数の高親和性モノマーを含む。
【０１５１】
いくつかの実施形態では、限定はしないが、本発明の調整性ＲＥＶＥＲＳＩＲ化合物及びｓｉＲＮＡなどのオリゴマー化合物は、１つ又は複数のβ−Ｄ−メチレンオキシ（４’−ＣＨ２−Ｏ−２’）ＬＮＡモノマーを含む。
【０１５２】
いくつかの実施形態では、限定はしないが、本発明の調整性ＲＥＶＥＲＳＩＲ化合物及びｓｉＲＮＡなどのオリゴマー化合物は、１つ又は複数のα−Ｄ−メチレンオキシ（４’−ＣＨ２−Ｏ−２’）ＬＮＡモノマーを含む。
【０１５３】
いくつかの実施形態では、限定はしないが、本発明の調整性ＲＥＶＥＲＳＩＲ化合物及びｓｉＲＮＡなどのオリゴマー化合物は、１つ又は複数の（Ｓ）−ｃＥｔモノマーを含む。
【０１５４】
いくつかの実施形態では、限定はしないが、本発明の調整性ＲＥＶＥＲＳＩＲ化合物及びｓｉＲＮＡなどのオリゴマー化合物は、１つ又は複数の高親和性モノマーを含み、但し、オリゴマー化合物は、２’−Ｏ（ＣＨ２）ｎＨ（ｎは１〜６である）を含むヌクレオチドを含まない。
【０１５５】
いくつかの実施形態では、限定はしないが、調整性ＲＥＶＥＲＳＩＲ化合物及びｓｉＲＮＡなどのオリゴマー化合物は、１つ又は複数の高親和性モノマーを含み、但し、オリゴマー化合物は、２’−ＯＣＨ３又は２’−Ｏ（ＣＨ２）２ＯＣＨ３を含むヌクレオチドを含まない。
【０１５６】
いくつかの実施形態では、限定はしないが、調整性ＲＥＶＥＲＳＩＲ化合物及びｓｉＲＮＡなどのオリゴマー化合物は、１つ又は複数（例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５又はそれを上回る）の高親和性モノマーを含み、但し、オリゴマー化合物は、α−Ｌ−メチレンオキシ（４’−ＣＨ２−Ｏ−２’）ＬＮＡを含まない。
【０１５７】
いくつかの実施形態では、限定はしないが、調整性ＲＥＶＥＲＳＩＲ化合物及びｓｉＲＮＡなどのオリゴマー化合物は、１つ又は複数の高親和性モノマーを含み、但し、オリゴマー化合物は、β−Ｄ−メチレンオキシ（４’−ＣＨ２−Ｏ−２’）ＬＮＡを含まない。
【０１５８】
いくつかの実施形態では、限定はしないが、調整性ＲＥＶＥＲＳＩＲ化合物及びｓｉＲＮＡなどのオリゴマー化合物は、１つ又は複数の高親和性モノマーを含み、但し、オリゴマー化合物は、α−Ｌ−メチレンオキシ（４’−ＣＨ２−Ｏ−２’）ＬＮＡ又はβ−Ｄ−メチレンオキシ（４’−ＣＨ２−Ｏ−２’）ＬＮＡを含まない。
【０１５９】
特定の核酸塩基
ヌクレオシドの天然に存在する塩基部分は、典型的に、複素環式塩基である。このような複素環式塩基の２つの最も一般的なクラスは、プリン及びピリミジンである。ペントフラノシル糖を含むヌクレオシドの場合、リン酸基を、糖の２’、３’又は５’ヒドロキシル部分に連結することができる。オリゴヌクレオチドを形成する際、これらのリン酸基は、隣接するヌクレオシドを互いに共有結合させて、直鎖ポリマー化合物を形成する。オリゴヌクレオチド内で、リン酸基は、一般にオリゴヌクレオチドのヌクレオシド間又はヌクレオチド間骨格を形成するものを指す。ＲＮＡ及びＤＮＡの天然に存在する結合又は骨格は、３’−５’リン酸ジエステル結合である。
【０１６０】
プリン核酸塩基アデニン（Ａ）及びグアニン（Ｇ）並びにピリミジン核酸塩基チミン（Ｔ）、シトシン（Ｃ）及びウラシル（Ｕ）などの「非修飾」又は「天然」核酸塩基以外にも、当業者には周知の多くの修飾核酸塩基又は核酸塩基模倣物が、本明細書に記載する化合物で使用可能である。非修飾又は天然核酸塩基は、改善された特性を有するオリゴヌクレオチドを提供するために、修飾又は置換することができる。例えば、ヌクレアーゼ耐性オリゴヌクレオチドは、これらの塩基又は合成及び天然核酸塩基（例えば、イノシン、キサンチン、ヒポキサンチン、ヌブラリン、イソグアニシン若しくはツベルシジン）並びに本明細書に記載のオリゴマー修飾のいずれか１つを用いて、調製することができる。代わりに、上記塩基及び「ユニバーサル塩基」のいずれかの置換若しくは修飾類似体を使用することができる。天然塩基を非天然及び／又はユニバーサル塩基により置換する場合、本明細書において、このヌクレオチドは、修飾核酸塩基及び／又は核酸塩基修飾を含むと言われる。修飾核酸塩基及び／又は核酸塩基修飾は、共役部分、例えば本明細書に記載のリガンドを含む天然、非天然及びユニバーサル塩基も含む。核酸塩基との共役のための好ましいコンジュゲート部分は、カチオン性アミノ基を含み、これらは、適切なアルキル、アルケニル又はアミド結合を有するリンカーを介して、核酸塩基と共役され得る。
【０１６１】
本明細書に記載するオリゴマー化合物は、核酸塩基（当技術分野では単純に「塩基」と呼ばれることが多い）修飾又は置換も含むことができる。本明細書で使用されるとき、「非修飾」又は「天然」核酸塩基は、プリン塩基アデニン（Ａ）及びグアニン（Ｇ）並びにピリミジン塩基チミン（Ｔ）、シトシン（Ｃ）及びウラシル（Ｕ）を含む。例示的な修飾核酸塩基として、限定はしないが、イノシン、キサンチン、ヒポキサンチン、ヌブラリン、イソグアニシン、ツベルシジン、２−（ハロ）アデニン、２（アルキル）アデニン、２−（プロピル）アデニン、２−（アミノ）アデニン、２−（アミノ）アデニン、２−（アミノアルキル）アデニン、２−（アミノプロピル）アデニン、２−（メチルチオ）−Ｎ６−（イソペンテニル）アデニン、６−（アルキル）アデニン、６−（メチル）アデニン、７−（デアザ）アデニン、８−（アルケニル）アデニン、８−（アルキル）アデニン、８−（アルキニル）アデニン、８−（アミノ）アデニン、８−（ハロ）アデニン、８−（ヒドロキシル）アデニン、８−（チオアルキル）アデニン、８−（チオール）アデニン、Ｎ６−（イソペンチル）アデニン、Ｎ６−（メチル）アデニン、Ｎ６，Ｎ６−（ジメチル）アデニン、２−（アルキル）グアニン、２−（プロピル）グアニン、６−（アルキル）グアニン、６−（メチル）グアニン、７−（アルキル）グアニン、７−（メチル）グアニン、７−（デアザ）グアニン、８−（アルキル）グアニン、８−（アルケニル）グアニン、８−（アルキニル）グアニン、８−（アミノ）グアニン、８−（ハロ）グアニン、８−（ヒドロキシル）グアニン、８−（チオアルキル）グアニン、８−（チオール）グアニン、Ｎ−（メチル）グアニン、２−（チオ）シトシン、３−（デアザ）−５−（アザ）シトシン、３−（アルキル）シトシン、３−（メチル）シトシン、５−（アルキル）シトシン、５−（アルキニル）シトシン、５−（ハロ）シトシン、５−（メチル）シトシン、５−（プロピニル）シトシン、５−（プロピニル）シトシン、５−（トリフルオロメチル）シトシン、６−（アゾ）シトシン、Ｎ４−（アセチル）シトシン、３−（３−アミノ−３−カルボキシプロピル）ウラシル、２−（チオ）ウラシル、５−（メチル）−２−（チオ）ウラシル、５−（メチルアミノメチル）−２−（チオ）ウラシル、４−（チオ）ウラシル、５−（メチル）−４−（チオ）ウラシル、５−（メチルアミノメチル）−４−（チオ）ウラシル、５−（メチル）−２，４−（ジチオ）ウラシル、５−（メチルアミノメチルエチル）−２，４−（ジチオ）ウラシル、５−（２−アミノプロピル）ウラシル、５−（アルキル）ウラシル、５−（アルキニル）ウラシル、５−（アリルアミノ）ウラシル、５−（アミノアリル）ウラシル、５−（アミノアルキル）ウラシル、５−（グアニジニウムアルキル）ウラシル、５−（１，３−ジアゾール−１−アルキル）ウラシル、５−（シアノアルキル）ウラシル、５−（ジアルキルアミノアルキル）ウラシル、５−（ジメチルアミノアルキル）ウラシル、５−（ハロ）ウラシル、５−（メトキシ）ウラシル、ウラシル−５−オキシ酢酸、５−（メトキシカルボニルメチル）−２−（チオ）ウラシル、５−（メトキシカルボニル−メチル）ウラシル、５−（プロピニル）ウラシル、５−（プロピニル）ウラシル、５−（トリフルオロメチル）ウラシル、６−（アゾ）ウラシル、ジヒドロウラシル、Ｎ３−（メチル）ウラシル、５−ウラシル（すなわちプソイドウラシル）、２−（チオ）プソイドウラシル、４−（チオ）プソイドウラシル、２，４−（ジチオ）プソイドウラシル、５−（アルキル）プソイドウラシル、５−（メチル）プソイドウラシル、５−（アルキル）−２−（チオ）プソイドウラシル、５−（メチル）−２−（チオ）プソイドウラシル、５−（アルキル）−４−（チオ）プソイドウラシル、５−（メチル）−４−（チオ）プソイドウラシル、５−（アルキル）−２，４−（ジチオ）プソイドウラシル、５−（メチル）−２，４−（ジチオ）プソイドウラシル、１−置換プソイドウラシル、１−置換２（チオ）−プソイドウラシル、１置換４−（チオ）−プソイドウラシル、１−置換２，４−（ジチオ）プソイドウラシル、１−（アミノカルボニルエチレニル）−プソイドウラシル、１−（アミノカルボニルエチレニル）−２（チオ）−プソイドウラシル、１−（アミノカルボニルエチレニル）−４−（チオ）−プソイドウラシル、１−（アミノカルボニルエチレニル）−２，４−（ジチオ）−プソイドウラシル、１−（アミノアルキルアミノカルボニルエチレニル）−プソイドウラシル、１−（アミノアルキルアミノカルボニルエチレニル）−２（チオ）−プソイドウラシル、１−（アミノアルキルアミノカルボニルエチレニル）−４−（チオ）−プソイドウラシル、１−（アミノアルキルアミノカルボニルエチレニル）−２，４−（ジチオ）−プソイドウラシル、１，３−（ジアザ）−２−（オキソ）−フェノキサジン−１−イル、１−（アザ）−２−（チオ）−３−（アザ）−フェノキサジン、１，３−（ジアザ）−２−（オキソ）−フェンチアジン−１−イル、１−（アザ）−２−（チオ）−３−（アザ）−フェンチアジン−１−イル、７−置換１，３−（ジアザ）−２−（オキソ）−フェノキサジン−１−イル、７−置換１−（アザ）−２−（チオ）−３−（アザ）−フェノキサジン−１−イル、７−置換１，３−（ジアザ）−２−（オキソ）−フェンチアジン−１−イル、７−置換１−（アザ）−２−（チオ）−３−（アザ）−フェンチアジン−１−イル、７−（アミノアルキルヒドロキシ）−１，３−（ジアザ）−２−（オキソ）−フェノキサジン−１−イル、７−（アミノアルキルヒドロキシ）−１−（アザ）−２−（チオ）−３−（アザ）−フェノキサジン−１−イル、７−（アミノアルキルヒドロキシ）−１，３−（ジアザ）−２−（オキソ）−フェンチアジン−１−イル、７−（アミノアルキルヒドロキシ）−１−（アザ）−２−（チオ）−３−（アザ）−フェンチアジン−１−イル、７−（グアニジニウムアルキルヒドロキシ）−１，３−（ジアザ）−２−（オキソ）−フェノキサジン−１−イル、７−（グアニジニウムアルキルヒドロキシ）−１−（アザ）−２−（チオ）−３−（アザ）−フェノキサジン−１−イル、７−（グアニジニウムアルキルヒドロキシ）−１，３−（ジアザ）−２−（オキソ）−フェンチアジン−１−イル、７−（グアニジニウムアルキルヒドロキシ）−１−（アザ）−２−（チオ）−３−（アザ）−フェンチアジン−１−イル、１，３，５−（トリアザ）−２，６−（ジオキサ）−ナフタレン、イノシン、キサンチン、ヒポキサンチン、ヌブラリン、ツベルシジン、イソグアニシン、イノシニル、２−アザ−イノシニル、７−デアザ−イノシニル、ニトロイミダゾリル、ニトロピラゾリル、ニトロベンズイミダゾリル、ニトロインダゾリル、アミノインドリル、ピロロピリミジニル、３−（メチル）イソカルボスチリリル、５−（メチル）イソカルボスチリリル、３−（メチル）−７−（プロピニル）イソカルボスチリリル、７−（アザ）インドリル、６−（メチル）−７−（アザ）インドリル、イミジゾピリジニル、９−（メチル）−イミジゾピリジニル、ピロロピリジニル、イソカルボスチリリル、７−（プロピニル）イソカルボスチリリル、プロピニル−７−（アザ）インドリル、２，４，５−（トリメチル）フェニル、４−（メチル）インドリル、４，６−（ジメチル）インドリル、フェニル、ナフタレニル、アントラセニル、フェナントラセニル、ピレニル、スチベニル、テトラセニル、ペンタセニル、ジフルオロトリル、４−（フルオロ）−６−（メチル）ベンズイミダゾール、４−（メチル）ベンズイミダゾール、６−（アゾ）チミン、２−ピリジノン、５−ニトロインドール、３−ニトロピロール、６−（アザ）ピリミジン、２−（アミノ）プリン、２，６−（ジアミノ）プリン、５−置換ピリミジン、Ｎ２−置換プリン、Ｎ６−置換プリン、Ｏ６−置換プリン、置換１，２，４−トリアゾール、ピロロ−ピリミジン−２−オン−３−イル、６−フェニル−ピロロ−ピリミジン−２−オン−３−イル、パラ−置換−６−フェニル−ピロロ−ピリミジン−２−オン−３−イル、オルト−置換−６−フェニル−ピロロ−ピリミジン−２−オン−３−イル、ビス−オルト−置換−６−フェニル−ピロロ−ピリミジン−２−オン−３−イル、パラ−（アミノアルキルヒドロキシ）−６−フェニル−ピロロ−ピリミジン−２−オン−３−イル、オルト−（アミノアルキルヒドロキシ）−６−フェニル−ピロロ−ピリミジン−２−オン−３−イル、ビス−オルト−（アミノアルキルヒドロキシ）−６−フェニル−ピロロ−ピリミジン−２−オン−３−イル、ピリドピリミジン−３−イル、２−オキソ−７−アミノ−ピリドピリミジン−３−イル、２−オキソ−ピリドピリミジン−３−イルなどの他の合成若しくは天然核酸塩基又はこれらの任意のＯ−アルキル化若しくはＮ−アルキル化誘導体が挙げられる。代わりに、上に挙げた塩基及び「ユニバーサル塩基」のいずれかの置換又は修飾類似体を使用することもできる。
【０１６２】
本明細書で使用されるとき、ユニバーサル核酸塩基は、融解挙動、細胞内酵素による認識又はオリゴヌクレオシド二重螺旋の活性に実質的に影響することなく、４つの天然に存在する核酸塩基の全てと塩基対合することができる。一部の例示的なユニバーサル核酸として、限定はしないが、２，４−ジフルオロトルエン、ニトロピロリル、ニトロインドリル、８−アザ−７−デアザアデニン、４−フルオロ−６−メチルベンズイミダズル、４−メチルベンズイミダズル、３−メチルイソカルボスチリリル、５−メチルイソカルボスチリリル、３−メチル−７−プロピニルイソカルボスチリリル、７−アザインドリル、６−メチル−７−アザインドリル、イミジゾピリジニル、９−メチル−イミジゾピリジニル、ピロロピリジニル、イソカルボスチリリル、７−プロピニルイソカルボスチリリル、プロピニル−７−アザインドリル、２，４，５−トリメチルフェニル、４−メチルインドリル、４，６−ジメチルインドリル、フェニル、ナフタレニル、アントラセニル、フェナトラセニル、ピレニル、スチルベニル、テトラセニル、ペンタセニル及びこれらの構造的誘導体（例えば、Ｌｏａｋｅｓ，２００１，Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ，２９，２４３７−２４４７を参照）が挙げられる。
【０１６３】
さらなる核酸塩基として、米国特許第３，６８７，８０８号明細書に開示されているもの；２００９年３月２６日に出願された国際出願ＰＣＴ／米国特許出願第０９／０３８４２５号明細書に開示されているもの；Ｃｏｎｃｉｓｅ  Ｅｎｃｙｃｌｏｐｅｄｉａ  Ｏｆ  Ｐｏｌｙｍｅｒ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  Ａｎｄ  Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ，ｐａｇｅｓ  ８５８−８５９，Ｋｒｏｓｃｈｗｉｔｚ，Ｊ．Ｉ．，ｅｄ．Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ＆Ｓｏｎｓ，１９９０に開示されているもの；Ｅｎｇｌｉｓｈ  ｅｔ  ａｌ．，Ａｎｇｅｗａｎｄｔｅ  Ｃｈｅｍｉｅ，Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  Ｅｄｉｔｉｏｎ，１９９１，３０，６１３により開示されているもの；Ｍｏｄｉｆｉｅｄ  Ｎｕｃｌｅｏｓｉｄｅｓ  ｉｎ  Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  ａｎｄ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，Ｈｅｒｄｅｗｉｊｉｎ，ｐ．Ｅｄ．Ｗｉｌｅｙ−ＶＣＨ，２００８に開示されているもの；並びにＳａｎｇｈｖｉ，Ｙ．Ｓ．，Ｃｈａｐｔｅｒ  １５，ｄｓＲＮＡ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  ａｎｄ  Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ，ｐａｇｅｓ  ２８９−３０２，Ｃｒｏｏｋｅ，Ｓ．Ｔ．ａｎｄ  Ｌｅｂｌｅｕ，Ｂ．，Ｅｄｓ．，ＣＲＣ  Ｐｒｅｓｓ，１９９３により開示されているものが挙げられる。これら文献全ての内容は、参照により本明細書に組み込まれる。
【０１６４】
いくつかの実施形態では、修飾核酸塩基は、例えば、７−デアザプリン、５−メチルシトシン又はＧ−クランプなどの親核酸塩基と構造がかなり類似する核酸塩基である。いくつかの実施形態では、核酸塩基模擬物は、例えば、三環式フェノキサジン核酸塩基模擬物などのように、より複雑な構造を含む。前述した修飾核酸塩基の調製方法は、当業者には周知である。
【０１６５】
一部の実施形態では、調整性ＲＥＶＥＲＳＩＲ化合物は、
【化２】
2020531450.tif 000005
（ｎは、０、１、２、３、４、５又は６である）
から選択される少なくとも１つ（例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９又は１０個）のＧクランプ核酸塩基を含む。
【０１６６】
特定の糖
本発明において提供されるオリゴマー化合物は、修飾糖部分を有する、ヌクレオシド又はヌクレオチドなどの１つ又は複数のモノマーを含み得る。例えば、ヌクレオシドのフラノシル糖環は、いくつかの方法で修飾することができ、こうした方法として、限定はしないが、置換基の付加、２つの非ジェミナル環原子の架橋によるロックド核酸又は二環式核酸の形成などがある。いくつかの実施形態では、オリゴマー化合物は、ＬＮＡである１つ又は複数のモノマーを含む。
【０１６７】
ロックド核酸の一部の実施形態では、フルナオシル（ｆｕｒｎａｏｓｙｌ）の２’位は、−［Ｃ（Ｒ１）（Ｒ２）］ｎ−、−［Ｃ（Ｒ１）（Ｒ２）］ｎ−Ｏ−、−［Ｃ（Ｒ１）（Ｒ２）］ｎ−Ｎ（Ｒ１）−、−［Ｃ（Ｒ１）（Ｒ２）］ｎ−Ｎ（Ｒ１）−Ｏ−、−［Ｃ（Ｒ１Ｒ２）］ｎ−Ｏ−Ｎ（Ｒ１）−、−Ｃ（Ｒ１）＝Ｃ（Ｒ２）−Ｏ−、−Ｃ（Ｒ１）＝Ｎ−、−Ｃ（Ｒ１）＝Ｎ−Ｏ−、−Ｃ（＝ＮＲ１）−、−Ｃ（＝ＮＲ１）−Ｏ−、−Ｃ（＝Ｏ）−、−Ｃ（＝Ｏ）Ｏ−、−Ｃ（＝Ｓ）−、−Ｃ（＝Ｓ）Ｏ−、−Ｃ（＝Ｓ）Ｓ−、−Ｏ−、−Ｓｉ（Ｒ１）２−、−Ｓ（＝Ｏ）Ｘ−及び−Ｎ（Ｒ１）−から独立に選択されるリンカーによって４’位に連結され、
式中、
ｘは、０、１又は２であり；
ｎは、１、２、３又は４であり；
各Ｒ１及びＲ２は、独立に、Ｈ、保護基、ヒドロキシル、Ｃ１〜Ｃ１２アルキル、置換されたＣ１〜Ｃ１２アルキル、Ｃ２〜Ｃ１２アルケニル、置換されたＣ２〜Ｃ１２アルケニル、Ｃ２〜Ｃ１２アルキニル、置換されたＣ２〜Ｃ１２アルキニル、Ｃ５〜Ｃ２０アリール、置換されたＣ５〜Ｃ２０アリール、複素環式ラジカル、置換された複素環式ラジカル、ヘテロアリール、置換されたヘテロアリール、Ｃ５〜Ｃ７脂環式ラジカル、置換されたＣ５〜Ｃ７脂環式ラジカル、ハロゲン、ＯＪ１、ＮＪ１Ｊ２、ＳＪ１、Ｎ３、ＣＯＯＪ１、アシル（Ｃ（＝Ｏ）−Ｈ）、置換されたアシル、ＣＮ、スルホニル（Ｓ（＝Ｏ）２−Ｊ１）又はスルホキシル（Ｓ（＝Ｏ）−Ｊ１）であり；及び
各Ｊ１及びＪ２は、独立に、Ｈ、Ｃ１〜Ｃ１２アルキル、置換されたＣ１〜Ｃ１２アルキル、Ｃ２〜Ｃ１２アルケニル、置換されたＣ２〜Ｃ１２アルケニル、Ｃ２〜Ｃ１２アルキニル、置換されたＣ２〜Ｃ１２アルキニル、Ｃ５〜Ｃ２０アリール、置換されたＣ５〜Ｃ２０アリール、アシル（Ｃ（＝Ｏ）−Ｈ）、置換されたアシル、複素環式ラジカル、置換された複素環式ラジカル、Ｃ１〜Ｃ１２アミノアルキル、置換されたＣ１〜Ｃ１２アミノアルキル又は保護基である。
【０１６８】
一実施形態では、ＬＮＡ化合物のリンカーの各々は、独立に、−［Ｃ（Ｒ１）（Ｒ２）］ｎ−、−［Ｃ（Ｒ１）（Ｒ２）］ｎ−Ｏ−、−Ｃ（Ｒ１Ｒ２）−Ｎ（Ｒ１）−Ｏ−又は−Ｃ（Ｒ１Ｒ２）−Ｏ−Ｎ（Ｒ１）−である。別の実施形態では、前記リンカーの各々は、独立に、４’−ＣＨ２−２’、４’−（ＣＨ２）２−２’、４’−（ＣＨ２）３−２’、４’−ＣＨ２−Ｏ−２’、４’−（ＣＨ２）２−Ｏ−２’、４’−ＣＨ２−Ｏ−Ｎ（Ｒ１）−２’及び４’−ＣＨ２−Ｎ（Ｒ１）−Ｏ−２’−であり、ここで、各Ｒ１は、独立に、Ｈ、保護基又はＣ１〜Ｃ１２アルキルである。
【０１６９】
いくつかのＬＮＡは、特許文献並びに科学文献で調製及び開示記載されている（Ｓｉｎｇｈ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｈｅｍ．Ｃｏｍｍｕｎ．，１９９８，４，４５５−４５６；Ｋｏｓｈｋｉｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ，１９９８，５４，３６０７−３６３０；Ｗａｈｌｅｓｔｅｄｔ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．，２０００，９７，５６３３−５６３８；Ｋｕｍａｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏｏｒｇ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．Ｌｅｔｔ．，１９９８，８，２２１９−２２２２；国際公開第９４／１４２２６号パンフレット；同第２００５／０２１５７０号パンフレット；Ｓｉｎｇｈ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．，１９９８，６３，１００３５−１００３９；ＬＮＡを開示する発行米国特許及び公開出願の例として、例えば米国特許第７，０５３，２０７号明細書；同第６，２６８，４９０号明細書；同第６，７７０，７４８号明細書；同第６，７９４，４９９号明細書；同第７，０３４，１３３号明細書；及び同第６，５２５，１９１号明細書；並びに米国特許出願公開第２００４−０１７１５７０号明細書；同第２００４−０２１９５６５号明細書；同第２００４−００１４９５９号明細書；同第２００３−０２０７８４１号明細書；同第２００４−０１４３１１４号明細書；及び同第２００３００８２８０７号明細書が挙げられる。
【０１７０】
さらに、リボシル糖環の２’−ヒドロキシル基が、糖環の４’炭素原子に連結され、これにより、メチレンオキシ（４’−ＣＨ２−Ｏ−２’）結合を形成して、二環式糖部分を形成するＬＮＡも記載されている（Ｅｌａｙａｄｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎｉｏｎ  Ｉｎｖｅｎｓ．Ｄｒｕｇｓ，２００１，２，５５８−５６１；Ｂｒａａｓｃｈ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｈｅｍ．Ｂｉｏｌ．，２００１，８  １−７；及びＯｒｕｍ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎｉｏｎ  Ｍｏｌ．Ｔｈｅｒ．，２００１，３，２３９−２４３に論述；また、米国特許第６，２６８，４９０号明細書及び同第６，６７０，４６１号明細書も参照のこと）。連結は、２’酸素原子と４’炭素原子とを架橋するメチレン（−ＣＨ２−）基であり得、その場合、この二環式部分には用語メチレンオキシ（４’−ＣＨ２−Ｏ−２’）ＬＮＡが用いられ；この位置にエチレン基がある場合、用語エチレンオキシ（４’−ＣＨ２ＣＨ２−Ｏ−２’）ＬＮＡが用いられる（Ｓｉｎｇｈ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｈｅｍ．Ｃｏｍｍｕｎ．，１９９８，４，４５５−４５６；Ｍｏｒｉｔａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏｏｒｇａｎｉｃ  Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，２００３，１１，２２１１−２２２６）。メチレンオキシ（４’−ＣＨ２−Ｏ−２’）ＬＮＡ及び他の二環式糖類似体は、相補的ＤＮＡ及びＲＮＡとの非常に高い二重螺旋熱安定性（Ｔｍ＝＋３〜＋１０℃）、３’−エキソヌクレアーゼ分解に対する安定性及び良好な溶解性を示す。ＢＮＡを含む強力且つ非毒性アンチセンスオリゴヌクレオチドが記載されている（Ｗａｈｌｅｓｔｅｄｔ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．，２０００，９７，５６３３−５６３８）。
【０１７１】
同じく取り上げられているメチレンオキシ（４’−ＣＨ２−Ｏ−２’）ＬＮＡの異性体は、α−Ｌ−メチレンオキシ（４’−ＣＨ２−Ｏ−２’）ＬＮＡであり、これは、３’−エキソヌクレアーゼに対する優れた安定性を有することが証明されている。α−Ｌ−メチレンオキシ（４’−ＣＨ２−Ｏ−２’）ＬＮＡは、アンチセンスギャップマー及びキメラに組み込まれて、これらは、強力なアンチセンス活性を示した（Ｆｒｉｅｄｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ，２００３，２１，６３６５−６３７２）。
【０１７２】
メチレンオキシ（４’−ＣＨ２−Ｏ−２’）ＬＮＡモノマーアデニン、シトシン、グアニン、５−メチル−シトシン、チミン及びウラシルの合成及び調製は、それらのオリゴマー化及び核酸認識特性と共に記載されている（Ｋｏｓｈｋｉｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ，１９９８，５４，３６０７−３６３０）。また、ＢＮＡ及びその調製も国際公開第９８／３９３５２号パンフレット及び同第９９／１４２２６号パンフレットに記載されている。
【０１７３】
さらに、メチレンオキシ（４’−ＣＨ２−Ｏ−２’）ＬＮＡの類似体、ホスホロチオエート−メチレンオキシ（４’−ＣＨ２−Ｏ−２’）ＬＮＡ及び２’−チオ−ＬＮＡも調製されている（Ｋｕｍａｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏｏｒｇ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．Ｌｅｔｔ．，１９９８，８，２２１９−２２２２）。また、核酸ポリメラーゼの基質としてオリゴデオキシヌクレオチド二重螺旋を含むロックドヌクレオシド類似体の調製も記載されている（Ｗｅｎｇｅｌらの国際公開第９９／１４２２６号パンフレット）。さらにまた、新規の配座固定された高親和性オリゴヌクレオチド類似体である、２’−アミノ−ＬＮＡの合成も当技術分野で記載されている（Ｓｉｎｇｈ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．，１９９８，６３，１００３５−１００３９）。さらには、２’−アミノ−及び２’−メチルアミノ−ＬＮＡが調製され、相補的ＲＮＡ及びＤＮＡ鎖とのそれらの二重螺旋の熱安定性が既に報告されている。
【０１７４】
修飾糖部分は、よく知られており、その標的に対するアンチセンス化合物の親和性を改変、典型的には増大し、且つ／又はヌクレアーゼ耐性を増大するために使用することができる。好ましい修飾糖の代表的なリストには、限定はしないが、メチレンオキシ（４’−ＣＨ２−Ｏ−２’）ＬＮＡ及びエチレンオキシ（４’−（ＣＨ２）２−Ｏ−２’架橋）ＥＮＡなどの二環式修飾糖；置換された糖、特に、２’−Ｆ、２’−ＯＣＨ３又は２’−Ｏ（ＣＨ２）２−ＯＣＨ３置換基を有する２’置換糖；並びに４’−チオ修飾糖が含まれる。また、糖は、中でも糖模擬基で置換することもできる。修飾糖の調製方法は、当業者には周知である。こうした修飾糖の調製を教示するいくつかの代表的な特許及び刊行物として、限定はしないが、米国特許第４，９８１，９５７号明細書；同第５，１１８，８００号明細書；同第５，３１９，０８０号明細書；同第５，３５９，０４４号明細書；同第５，３９３，８７８号明細書；同第５，４４６，１３７号明細書；同第５，４６６，７８６号明細書；同第５，５１４，７８５号明細書；同第５，５１９，１３４号明細書；同第５，５６７，８１１号明細書；同第５，５７６，４２７号明細書；同第５，５９１，７２２号明細書；同第５，５９７，９０９号明細書；同第５，６１０，３００号明細書；同第５，６２７，０５３号明細書；同第５，６３９，８７３号明細書；同第５，６４６，２６５号明細書；同第５，６５８，８７３号明細書；同第５，６７０，６３３号明細書；同第５，７９２，７４７号明細書；同第５，７００，９２０号明細書；同第６，５３１，５８４号明細書；及び同第６，６００，０３２号明細書；並びに国際公開第２００５／１２１３７１号パンフレットが挙げられる。
【０１７５】
「オキシ」−２’ヒドロキシル基修飾の例として、アルコキシ又はアリールオキシ（ＯＲ、例えばＲ＝Ｈ、アルキル、シクロアルキル、アリール、アラルキル、ヘテロアリール若しくは糖）；ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、Ｏ（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｎＣＨ２ＣＨ２ＯＲ、ｎ＝１〜５０；ヌクレオシドのフラノース部分が、フラノース環上の２つの炭素原子をつなぐ架橋を含み、それにより二環式環系を形成する「ロックド」核酸（ＬＮＡ）；Ｏ−ＡＭＩＮＥ又はＯ−（ＣＨ２）ｎＡＭＩＮＥ（ｎ＝１〜１０、ＡＭＩＮＥ＝ＮＨ２；アルキルアミノ、ジアルキルアミノ、ヘテロシクリル、アリールアミノ、ジアリールアミノ、ヘテロアリールアミノ、ジヘテロアリールアミノ、エチレンジアミン又はポリアミノ）；並びにＯ−ＣＨ２ＣＨ２（ＮＣＨ２ＣＨ２ＮＭｅ２）２が挙げられる。
【０１７６】
「デオキシ」修飾として、水素（すなわち突出一本鎖と特に関連するデオキシリボース糖）；ハロ（例えば、フルオロ）；アミノ（例えば、ＮＨ２；アルキルアミノ、ジアルキルアミノ、ヘテロシクリル、アリールアミノ、ジアリールアミノ、ヘテロアリールアミノ、ジヘテロアリールアミノ又はアミノ酸）；ＮＨ（ＣＨ２ＣＨ２ＮＨ）ｎＣＨ２ＣＨ２−ＡＭＩＮＥ（ＡＭＩＮＥ＝ＮＨ２；アルキルアミノ、ジアルキルアミノ、ヘテロシクリル、アリールアミノ、ジアリールアミノ、ヘテロアリールアミノ又はジアリールアミノ）；−ＮＨＣ（Ｏ）Ｒ（Ｒ＝アルキル、シクロアルキル、アリール、アラルキル、ヘテロアリール又は糖）；シアノ；メルカプト；アルキル−チオ−アルキル；チオアルコキシ；チオアルキル；アルキル；シクロアルキル；アリール；アルケニル及びアルキニルが挙げられ、これらは、任意選択で、例えばアミノ官能基で置換することができる。
【０１７７】
他の好適な２’−修飾、例えば修飾ＭＯＥが、米国特許出願公開第２０１３０１３０３７８号明細書（その内容は、参照により本明細書に組み込まれる）に記載されている。
【０１７８】
２’位の修飾は、アラビノース立体配置に存在し得る。用語「アラビノース立体配置」は、アラビノースにおける２’−ＯＨと同じ立体配置のリボースのＣ２’上の置換基の配置を指す。
【０１７９】
糖は、糖の同じ炭素に２つの異なる修飾、例えばｇｅｍ修飾を含むことができる。糖基は、リボースにおいて対応するものとは反対の立体化学配置を有する１つ又は複数の炭素を含有することもできる。従って、オリゴマー化合物は、糖として、例えばアラビノースを含有する１つ又は複数のモノマーを含み得る。モノマーは、糖の１位にα−結合、例えばα−ヌクレオチドを有し得る。モノマーは、４’位に反対の立体配置も有し得、例えばＣ５’とＨ４’又はこれらを置換する置換基同士が交換される。Ｃ５’及びＨ４’又はこれらを置換する置換基同士が交換されている場合、この糖は、４’で修飾されていると言う。
【０１８０】
さらに、オリゴマー化合物は、脱塩基糖、すなわちＣ−１’に核酸塩基が欠落しているか、又はＣ１’の核酸塩基の代わりに別の化学基を有する糖も含み得る。例えば、米国特許第５，９９８，２０３号明細書（その内容は、全体として参照により本明細書に組み込まれる）を参照されたい。これらの脱塩基糖は、１つ又は複数の構成糖原子に修飾も含み得る。オリゴマー化合物は、Ｌ異性体、例えばＬ−ヌクレオシドである１つ又は複数の糖を含有することもできる。さらに、糖基に対する修飾は、硫黄、任意選択で置換された窒素若しくはＣＨ２基による４’−Ｏの置換も含み得る。一部の実施形態では、Ｃ１’と核酸塩基との連結は、α立体配置である。
【０１８１】
糖修飾は、リボース炭素同士のＣ−Ｃ結合（例えば、Ｃ１’−Ｃ２’、Ｃ２’−Ｃ３’、Ｃ３’−Ｃ４’、Ｃ４’−Ｏ４’、Ｃ１’−Ｏ４’）が存在しない、且つ／又はリボース炭素又は酸素（例えば、Ｃ１’、Ｃ２’、Ｃ３’、Ｃ４’又はＯ４’）の少なくとも１つが、独立に若しくは組合せで、ヌクレオチドに存在しない、非環状ヌクレオチドも含み得る。一部の実施形態では、非環状ヌクレオチドは、
【化３】
2020531450.tif 000006
であり、ここで、Ｂは、修飾若しくは非修飾核酸塩基であり、Ｒ１及びＲ２は、独立に、Ｈ、ハロゲン、ＯＲ３若しくはアルキルであり；Ｒ３は、Ｈ、アルキル、シクロアルキル、アリール、アラルキル、ヘテロアリール若しくは糖である）。
【０１８２】
一部の実施形態では、糖修飾は、２’−Ｈ、２’−Ｏ−Ｍｅ（２’−Ｏ−メチル）、２’−Ｏ−ＭＯＥ（２−Ｏ−メトキシエチル）、２’−Ｆ、２’−Ｏ−［２−（メチルアミノ）−２−オキソエチル］（２’−Ｏ−ＮＭＡ）、２’−Ｓ−メチル、２’−Ｏ−ＣＨ２−（４’−Ｃ）（ＬＮＡ）、２’−Ｏ−ＣＨ２ＣＨ２−（４’−Ｃ）（ＥＮＡ）、２’−Ｏ−アミノプロピル（２’−Ｏ−ＡＰ）、２’−Ｏ−ジメチルアミノエチル（２’−Ｏ−ＤＭＡＯＥ）、２’−Ｏ−ジメチルアミノプロピル（２’−Ｏ−ＤＭＡＰ）、２’−Ｏ−ジメチルアミノエチルオキシエチル（２’−Ｏ−ＤＭＡＥＯＥ）及びアラビノース立体配置に２’−Ｏ−Ｍｅを有するｇｅｍ２’−ＯＭｅ／２’Ｆからなる群から選択される。
【０１８３】
特定のヌクレオチドが、その２’位を介して次のヌクレオチドと連結している場合、本明細書に記載の糖修飾は、その特定のヌクレオチド、例えばその２’位を介して次のヌクレオチドと連結しているヌクレオチドについて、糖の３’位に配置し得ることが理解されるべきである。３’位の修飾は、キシロース立体配置で存在し得る。用語「キシロース立体配置」は、キシロース糖の３’−ＯＨと同じ立体配置でのリボースのＣ３’上の置換基の配置を指す。
【０１８４】
Ｃ４’及び／又はＣ１’に結合した水素は、直鎖又は分岐状の、任意選択で置換されたアルキル、任意選択で置換されたアルケニル、任意選択で置換されたアルキニルにより置換することができ、アルキル、アルケニル及びアルキニルの骨格は、Ｏ、Ｓ、Ｓ（Ｏ）、ＳＯ２、Ｎ（Ｒ’）、Ｃ（Ｏ）、Ｎ（Ｒ’）Ｃ（Ｏ）Ｏ、ＯＣ（Ｏ）Ｎ（Ｒ’）、ＣＨ（Ｚ’）、リン含有結合、任意選択で置換されたアリール、任意選択で置換されたヘテロアリール、任意選択で置換された複素環式若しくは任意選択で置換されたシクロアルキルの１つ又は複数を含有することができ、ここで、Ｒ’は、水素、アシル又は任意選択で置換された脂肪族であり、Ｚ’は、ＯＲ１１、ＣＯＲ１１、ＣＯ２Ｒ１１、
【化４】
2020531450.tif 000007
、ＮＲ２１Ｒ３１、ＣＯＮＲ２１Ｒ３１、ＣＯＮ（Ｈ）ＮＲ２１Ｒ３１、ＯＮＲ２１Ｒ３１、ＣＯＮ（Ｈ）Ｎ＝ＣＲ４１Ｒ５１、Ｎ（Ｒ２１）Ｃ（＝ＮＲ３１）ＮＲ２１Ｒ３１、Ｎ（Ｒ２１）Ｃ（Ｏ）ＮＲ２１Ｒ３１、Ｎ（Ｒ２１）Ｃ（Ｓ）ＮＲ２１Ｒ３１、ＯＣ（Ｏ）ＮＲ２１Ｒ３１、ＳＣ（Ｏ）ＮＲ２１Ｒ３１、Ｎ（Ｒ２１）Ｃ（Ｓ）ＯＲ１１、Ｎ（Ｒ２１）Ｃ（Ｏ）ＯＲ１１、Ｎ（Ｒ２１）Ｃ（Ｏ）ＳＲ１１、Ｎ（Ｒ２１）Ｎ＝ＣＲ４１Ｒ５１、ＯＮ＝ＣＲ４１Ｒ５１、ＳＯ２Ｒ１１、ＳＯＲ１１、ＳＲ１１及び置換若しくは非置換複素環式からなる群から選択され；Ｒ２１及びＲ３１は、それぞれの存在について、独立に、水素、アシル、非置換若しくは置換脂肪族、アリール、ヘテロアリール、複素環式、ＯＲ１１、ＣＯＲ１１、ＣＯ２Ｒ１１又はＮＲ１１Ｒ１１’であるか；又はＲ２１及びＲ３１は、それらが結合する原子と一緒に、複素環を形成し；Ｒ４１及びＲ５１は、それぞれの存在について、独立に、水素、アシル、非置換若しくは置換脂肪族、アリール、ヘテロアリール、複素環式化合物、ＯＲ１１、ＣＯＲ１１若しくはＣＯ２Ｒ１１又はＮＲ１１Ｒ１１’であり；Ｒ１１及びＲ１１’は、独立に、水素、脂肪族、置換された脂肪族、アリール、ヘテロアリール又は複素環式である。一部の実施形態では、５’末端ヌクレオチドのＣ４’に結合した水素は、置換されている。
【０１８５】
一部の実施形態では、Ｃ４’及びＣ５’は、一緒に、任意選択で置換された複素環式を形成し、これは、少なくとも１つの−ＰＸ（Ｙ）−を含み、ここで、Ｘは、Ｈ、ＯＨ、ＯＭ、ＳＨ、任意選択で置換されたアルキル、任意選択で置換されたアルコキシ、任意選択で置換されたアルキルチオ、任意選択で置換されたアルキルアミノ又は任意選択で置換されたジアルキルアミノであり、ここで、Ｍは、それぞれの存在について、独立に、総電荷が＋１のアルキル金属又は遷移金属であり；Ｙは、Ｏ、Ｓ又はＮＲ’であり；ここで、Ｒ’は、水素、任意選択で置換された脂肪族である。この修飾は、オリゴヌクレオチドの５末端にあるのが好ましい。
【０１８６】
いくつかの実施形態では、ＬＮＡは、式：
【化５】
2020531450.tif 000008
を有する二環式ヌクレオチドを含み、
式中、
Ｂｘは、複素環式塩基部分であり；
Ｔ１は、Ｈ又はヒドロキシル保護基であり；
Ｔ２は、Ｈ、ヒドロキシル保護基又は反応性リン基であり；
Ｚは、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、Ｃ２〜Ｃ６アルケニル、Ｃ２〜Ｃ６アルキニル、置換Ｃ１〜Ｃ６アルキル、置換Ｃ２〜Ｃ６アルケニル、置換Ｃ２〜Ｃ６アルキニル、アシル、置換アシル又は置換アミドである。
【０１８７】
一実施形態では、置換された基の各々は、独立に、ハロゲン、オキソ、ヒドロキシル、ＯＪ１、ＮＪ１Ｊ２、ＳＪ１、Ｎ３、ＯＣ（＝Ｘ）Ｊ１、ＯＣ（＝Ｘ）ＮＪ１Ｊ２、ＮＪ３Ｃ（＝Ｘ）ＮＪ１Ｊ２及びＣＮ（各Ｊ１、Ｊ２及びＪ３は、独立に、Ｈ若しくはＣ１〜Ｃ６アルキルであり、Ｘは、Ｏ、Ｓ若しくはＮＪ１である）から独立に選択される、任意選択で保護された置換基で一又は多置換されている。
【０１８８】
いくつかのこうした実施形態では、置換された基の各々は、独立に、ハロゲン、オキソ、ヒドロキシル、ＯＪ１、ＮＪ１Ｊ２、ＳＪ１、Ｎ３、ＯＣ（＝Ｘ）Ｊ１及びＮＪ３Ｃ（＝Ｘ）ＮＪ１Ｊ２（各Ｊ１、Ｊ２及びＪ３は、独立に、Ｈ、Ｃ１〜Ｃ６アルキル若しくは置換されたＣ１〜Ｃ６アルキルであり、Ｘは、Ｏ若しくはＮＪ１である）から独立に選択される置換基で一又は多置換されている。
【０１８９】
いくつかの実施形態では、Ｚ基は、１つ又は複数のＸｘで置換されたＣ１〜Ｃ６アルキルであり、ここで、各Ｘｘは、独立に、ＯＪ１、ＮＪ１Ｊ２、ＳＪ１、Ｎ３、ＯＣ（＝Ｘ）Ｊ１、ＯＣ（＝Ｘ）ＮＪ１Ｊ２、ＮＪ３Ｃ（＝Ｘ）ＮＪ１Ｊ２又はＣＮ（各Ｊ１、Ｊ２及びＪ３は、独立に、Ｈ若しくはＣ１〜Ｃ６アルキルであり、Ｘは、Ｏ、Ｓ若しくはＮＪ１である）である。別の実施形態では、Ｚ基は、１つ又は複数のＸｘで置換されたＣ１〜Ｃ６アルキルであり、ここで、各Ｘｘは、独立に、ハロ（例えば、フルオロ）、ヒドロキシル、アルコキシ（例えば、ＣＨ３−）、置換アルコキシ又はアジドである。
【０１９０】
いくつかの実施形態では、Ｚ基は、−ＣＨ２Ｘｘであり、ここで、Ｘｘは、ＯＪ１、ＮＪ１Ｊ２、ＳＪ１、Ｎ３、ＯＣ（＝Ｘ）Ｊ１、ＯＣ（＝Ｘ）ＮＪ１Ｊ２、ＮＪ３Ｃ（＝Ｘ）ＮＪ１Ｊ２又はＣＮ（各Ｊ１、Ｊ２及びＪ３は、独立に、Ｈ若しくはＣ１〜Ｃ６アルキルであり、Ｘは、Ｏ、Ｓ若しくはＮＪ１である）から選択される。別の実施形態では、Ｚ基は、Ｘｘが、ハロ（例えば、フルオロ）、ヒドロキシル、アルコキシ（例えば、ＣＨ３−）又はアジドである、−ＣＨ２Ｘｘである。
【０１９１】
いくつかの実施形態では、Ｚ基は、（Ｒ）−配置：
【化６】
2020531450.tif 000009
である。
【０１９２】
いくつかの実施形態では、Ｚ基は、（Ｓ）−配置：
【化７】
2020531450.tif 000010
である。
【０１９３】
いくつかの実施形態では、各Ｔ１及びＴ２は、ヒドロキシル保護基である。ヒドロキシル保護基の好ましいリストは、ベンジル、ベンゾイル、２，６−ジクロロベンジル、ｔ−ブチルジメチルシリル、ｔ−ブチルジフェニルシリル、メシレート、トシレート、ジメトキシトリチル（ＤＭＴ）、９−フェニルキサンチン−９−イル（Ｐｉｘｙｌ）及び９−（ｐ−メトキシフェニル）キサンチン−９−イル（ＭＯＸ）を含む。いくつかの実施形態では、Ｔ１は、アセチル、ベンジル、ｔ−ブチルジメチルシリル、ｔ−ブチルジメチルシリル及びジメトキシトリチルから選択されるヒドロキシル保護基であり、より好ましいヒドロキシル保護基は、４，４’−ジメトキシトリチルであるＴ１である。
【０１９４】
いくつかの実施形態では、Ｔ２は、反応性リン基であり、好ましい反応性リン基として、ジイソプロピルシアノエトキシホスホロアミダイト及びＨ−リン酸塩が挙げられる。いくつかの実施形態では、Ｔ１は、４，４’−ジメトキシトリチルで、Ｔ２は、ジイソプロピルシアノエトキシホスホロアミダイトである。
【０１９５】
いくつかの実施形態では、オリゴマー化合物は、式：
【化８】
2020531450.tif 000011
又は式：
【化９】
2020531450.tif 000012
又は式：
【化１０】
2020531450.tif 000013
の少なくとも１つのモノマーを有し、
式中、
Ｂｘは、複素環式塩基部分であり；
Ｔ３は、Ｈ、ヒドロキシル保護基、連結したコンジュゲート基又はヌクレオシド、ヌクレオチド、オリゴヌクレオシド、オリゴヌクレオチド、モノマーサブユニット若しくはオリゴマー化合物に結合したヌクレオシド間結合基であり；
Ｔ４は、Ｈ、ヒドロキシル保護基、連結したコンジュゲート基又はヌクレオシド、ヌクレオチド、オリゴヌクレオシド、オリゴヌクレオチド、モノマーサブユニット若しくはオリゴマー化合物に結合したヌクレオシド間結合基であり；
ここで、Ｔ３及びＴ４の少なくとも１つは、ヌクレオシド、ヌクレオチド、オリゴヌクレオシド、オリゴヌクレオチド、モノマーサブユニット若しくはオリゴマー化合物に結合したヌクレオシド間結合基であり；
Ｚは、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、Ｃ２〜Ｃ６アルケニル、Ｃ２〜Ｃ６アルキニル、置換Ｃ１〜Ｃ６アルキル、置換Ｃ２〜Ｃ６アルケニル、置換Ｃ２〜Ｃ６アルキニル、アシル、置換アシル又は置換アミドである。
【０１９６】
一実施形態では、置換された基の各々は、独立に、ハロゲン、オキソ、ヒドロキシル、ＯＪ１、ＮＪ１Ｊ２、ＳＪ１、Ｎ３、ＯＣ（＝Ｘ）Ｊ１、ＯＣ（＝Ｘ）ＮＪ１Ｊ２、ＮＪ３Ｃ（＝Ｘ）ＮＪ１Ｊ２及びＣＮ（各Ｊ１、Ｊ２及びＪ３は、独立に、Ｈ若しくはＣ１〜Ｃ６アルキルであり、Ｘは、Ｏ、Ｓ若しくはＮＪ１である）から独立に選択される、任意選択で保護された置換基で、一又は多置換されている。
【０１９７】
一実施形態では、置換された基の各々は、独立に、ハロゲン、オキソ、ヒドロキシル、ＯＪ１、ＮＪ１Ｊ２、ＳＪ１、Ｎ３、ＯＣ（＝Ｘ）Ｊ１及びＮＪ３Ｃ（＝Ｘ）ＮＪ１Ｊ２（各Ｊ１、Ｊ２及びＪ３は、独立に、Ｈ若しくはＣ１〜Ｃ６アルキルであり、Ｘは、Ｏ若しくはＮＪ１である）から独立に選択される置換基で、一又は多置換されている。
【０１９８】
いくつかのこうした実施形態では、少なくとも１つのＺは、Ｃ１〜Ｃ６アルキル又は置換Ｃ１〜Ｃ６アルキルである。いくつかの実施形態では、各Ｚは、独立に、Ｃ１〜Ｃ６アルキル又は置換Ｃ１〜Ｃ６アルキルである。いくつかの実施形態では、少なくとも１つのＺは、Ｃ１〜Ｃ６アルキルである。いくつかの実施形態では、各Ｚは、独立に、Ｃ１〜Ｃ６アルキルである。いくつかの実施形態では、少なくとも１つのＺは、メチルである。いくつかの実施形態では、各Ｚは、メチルである。いくつかの実施形態では、少なくとも１つのＺは、エチルである。いくつかの実施形態では、各Ｚは、エチルである。いくつかの実施形態では、少なくとも１つのＺは、置換Ｃ１〜Ｃ６アルキルである。いくつかの実施形態では、各Ｚは、独立に、置換Ｃ１〜Ｃ６アルキルである。いくつかの実施形態では、少なくとも１つのＺは、置換メチルである。いくつかの実施形態では、各Ｚは、置換メチルである。いくつかの実施形態では、少なくとも１つのＺは、置換エチルである。いくつかの実施形態では、各Ｚは、置換エチルである。
【０１９９】
いくつかの実施形態では、少なくとも１つの置換基は、Ｃ１〜Ｃ６アルコキシである（例えば、少なくとも１つのＺは、１つ又は複数のＣ１〜Ｃ６アルコキシで置換されたＣ１〜Ｃ６アルキルである）。別の実施形態では、各置換基は、独立に、Ｃ１〜Ｃ６アルコキシである（例えば、各Ｚは、独立に、１つ又は複数のＣ１〜Ｃ６アルコキシで置換されたＣ１〜Ｃ６アルキルである）。
【０２００】
いくつかの実施形態では、少なくとも１つのＣ１〜Ｃ６アルコキシ置換基は、ＣＨ３Ｏ−である（例えば、少なくとも１つのＺは、ＣＨ３ＯＣＨ２−である）。別の実施形態では、各Ｃ１〜Ｃ６アルコキシ置換基は、ＣＨ３Ｏ−である（例えば、各Ｚは、ＣＨ３ＯＣＨ２−である）。
【０２０１】
いくつかの実施形態では、少なくとも１つの置換基は、ハロゲンである（例えば、少なくとも１つのＺは、１つ又は複数のハロゲンで置換されたＣ１〜Ｃ６アルキルである）。いくつかの実施形態では、各置換基は、独立に、ハロゲンである（例えば、各Ｚは、独立に、１つ又は複数のハロゲンで置換されたＣ１〜Ｃ６アルキルである）。いくつかの実施形態では、少なくとも１つの置換基は、フルオロである（例えば、少なくとも１つのＺは、ＣＨ２ＦＣＨ２−、ＣＨＦ２ＣＨ２−又はＣＦ３ＣＨ２−である）。いくつかの実施形態では、各ハロ置換基は、フルオロである（例えば、各Ｚは、ＣＨ２ＦＣＨ２−、ＣＨＦ２ＣＨ２−又はＣＦ３ＣＨ２−である）。
【０２０２】
いくつかの実施形態では、少なくとも１つの置換基は、ヒドロキシルである（例えば、少なくとも１つのＺは、１つ又は複数のヒドロキシルで置換されたＣ１〜Ｃ６アルキルである）。いくつかの実施形態では、各置換基は、独立に、ヒドロキシルである（例えば、各Ｚは、独立に、１つ又は複数のヒドロキシルで置換されたＣ１〜Ｃ６アルキルである）。いくつかの実施形態では、少なくとも１つのＺは、ＨＯＣＨ２−である。別の実施形態では、各Ｚは、ＨＯＣＨ２−である。
【０２０３】
いくつかの実施形態では、少なくとも１つのＺは、ＣＨ３−、ＣＨ３ＣＨ２−、ＣＨ２ＯＣＨ３−、ＣＨ２Ｆ−又はＨＯＣＨ２−である。いくつかの実施形態では、各Ｚは、ＣＨ３−、ＣＨ３ＣＨ２−、ＣＨ２ＯＣＨ３−、ＣＨ２Ｆ−又はＨＯＣＨ２−である。
【０２０４】
いくつかの実施形態では、少なくとも１つのＺ基は、１つ又は複数のＸｘで置換されたＣ１〜Ｃ６アルキルであり、ここで、各Ｘｘは、独立に、ＯＪ１、ＮＪ１Ｊ２、ＳＪ１、Ｎ３、ＯＣ（＝Ｘ）Ｊ１、ＯＣ（＝Ｘ）ＮＪ１Ｊ２、ＮＪ３Ｃ（＝Ｘ）ＮＪ１Ｊ２又はＣＮであり；各Ｊ１、Ｊ２及びＪ３は、独立に、Ｈ若しくはＣ１〜Ｃ６アルキルであり、Ｘは、Ｏ、Ｓ若しくはＮＪ１である。別の実施形態では、少なくとも１つのＺ基は、１つ又は複数のＸｘで置換されたＣ１〜Ｃ６アルキルであり、ここで、各Ｘｘは、独立に、ハロ（例えば、フルオロ）、ヒドロキシル、アルコキシ（例えば、ＣＨ３Ｏ−）又はアジドである。
【０２０５】
いくつかの実施形態では、各Ｚ基は、独立に、１つ又は複数のＸｘで置換されたＣ１〜Ｃ６アルキルであり、ここで、各Ｘｘは、独立に、ＯＪ１、ＮＪ１Ｊ２、ＳＪ１、Ｎ３、ＯＣ（＝Ｘ）Ｊ１、ＯＣ（＝Ｘ）ＮＪ１Ｊ２、ＮＪ３Ｃ（＝Ｘ）ＮＪ１Ｊ２又はＣＮであり；各Ｊ１、Ｊ２及びＪ３は、独立に、Ｈ若しくはＣ１〜Ｃ６アルキルであり、Ｘは、Ｏ、Ｓ若しくはＮＪ１である。別の実施形態では、各Ｚ基は、独立に、１つ又は複数のＸｘで置換されたＣ１〜Ｃ６アルキルであり、ここで、各Ｘｘは、独立に、ハロ（例えば、フルオロ）、ヒドロキシル、アルコキシ（例えば、ＣＨ３Ｏ−）又はアジドである。
【０２０６】
いくつかの実施形態では、少なくとも１つのＺ基は、−ＣＨ２Ｘｘであり、ここで、各Ｘｘは、ＯＪ１、ＮＪ１Ｊ２、ＳＪ１、Ｎ３、ＯＣ（＝Ｘ）Ｊ１、ＯＣ（＝Ｘ）ＮＪ１Ｊ２、ＮＪ３Ｃ（＝Ｘ）ＮＪ１Ｊ２又はＣＮであり；各Ｊ１、Ｊ２及びＪ３は、独立に、Ｈ若しくはＣ１〜Ｃ６アルキルであり、Ｘは、Ｏ、Ｓ若しくはＮＪ１である。いくつかの実施形態では、少なくとも１つのＺ基は、−ＣＨ２Ｘｘであり、ここで、各Ｘｘは、ハロ（例えば、フルオロ）、ヒドロキシル、アルコキシ（例えば、ＣＨ３Ｏ−）又はアジドである。
【０２０７】
いくつかの実施形態では、各Ｚ基は、独立に、−ＣＨ２Ｘｘであり、ここで、各Ｘｘは、独立に、ＯＪ１、ＮＪ１Ｊ２、ＳＪ１、Ｎ３、ＯＣ（＝Ｘ）Ｊ１、ＯＣ（＝Ｘ）ＮＪ１Ｊ２、ＮＪ３Ｃ（＝Ｘ）ＮＪ１Ｊ２又はＣＮであり；各Ｊ１、Ｊ２及びＪ３は、独立に、Ｈ若しくはＣ１〜Ｃ６アルキルであり、Ｘは、Ｏ、Ｓ若しくはＮＪ１である。別の実施形態では、各Ｚ基は、独立に、−ＣＨ２Ｘｘであり、ここで、各Ｘｘは、ハロ（例えば、フルオロ）、ヒドロキシル、アルコキシ（例えば、ＣＨ３Ｏ−）又はアジドである。
【０２０８】
いくつかの実施形態では、少なくとも１つのＺ基は、ＣＨ３−である。別の実施形態では、各Ｚ基は、ＣＨ３−である。
【０２０９】
いくつかの実施形態では、少なくとも１つのモノマーのＺ基は、式：
【化１１】
2020531450.tif 000014
又は式：
【化１２】
2020531450.tif 000015
又は式：
【化１３】
2020531450.tif 000016
により表される（Ｒ）−配置である。
【０２１０】
いくつかの実施形態では、上記式の各モノマーのＺ基は、（Ｒ）−配置である。
【０２１１】
いくつかの実施形態では、少なくとも１つのモノマーのＺ基は、式：
【化１４】
2020531450.tif 000017
又は式：
【化１５】
2020531450.tif 000018
又は式：
【化１６】
2020531450.tif 000019
により表される（Ｓ）−配置である。
【０２１２】
いくつかの実施形態では、上記式の各モノマーのＺ基は、（Ｓ）−配置である。
【０２１３】
いくつかの実施形態では、Ｔ３は、Ｈ又はヒドロキシル保護基である。いくつかの実施形態では、Ｔ４は、Ｈ又はヒドロキシル保護基である。別の実施形態では、Ｔ３は、ヌクレオシド、ヌクレオチド又はモノマーサブユニットに結合したヌクレオシド間結合基である。いくつかの実施形態では、Ｔ４は、ヌクレオシド、ヌクレオチド又はモノマーサブユニットに結合したヌクレオシド間結合基である。いくつかの実施形態では、Ｔ３は、オリゴヌクレオシド又はオリゴヌクレオチドに連結したヌクレオシド間結合基である。いくつかの実施形態では、Ｔ４は、オリゴヌクレオシド又はオリゴヌクレオチドに連結したヌクレオシド間結合基である。いくつかの実施形態では、Ｔ３は、オリゴマー化合物に連結したヌクレオシド間結合基である。いくつかの実施形態では、Ｔ４は、オリゴマー化合物に連結したヌクレオシド間結合基である。いくつかの実施形態では、Ｔ３及びＴ４の少なくとも１つは、リン酸ジエステル又はホスホロチオエートから選択されるヌクレオチド間結合基である。
【０２１４】
いくつかの実施形態では、オリゴマー化合物は、式：
【化１７】
2020531450.tif 000020
式：
【化１８】
2020531450.tif 000021
式：
【化１９】
2020531450.tif 000022
の少なくとも２つの連続したモノマーの少なくとも１つの領域を有する。
【０２１５】
いくつかのこうした実施形態では、ＬＮＡとして、限定はしないが、
【化２０】
2020531450.tif 000023
に示すように、（Ａ）α−Ｌ−メチレンオキシ（４’−ＣＨ２−Ｏ−２’）ＬＮＡ、（Ｂ）β−Ｄ−メチレンオキシ（４’−ＣＨ２−Ｏ−２’）ＬＮＡ、（Ｃ）エチレンオキシ（４’−（ＣＨ２）２−Ｏ−２’）ＬＮＡ、（Ｄ）アミノオキシ（４’−ＣＨ２−Ｏ−Ｎ（Ｒ）−２’）ＬＮＡ及び（Ｅ）オキシアミノ（４’−ＣＨ２−Ｎ（Ｒ）−Ｏ−２’）ＬＮＡが挙げられる。
【０２１６】
いくつかの実施形態では、オリゴマー化合物は、上の式の少なくとも２つの連続したモノマーの少なくとも２つの領域を含む。いくつかの実施形態では、オリゴマー化合物は、ギャップオリゴマー化合物を含む。いくつかの実施形態では、オリゴマー化合物は、約８〜約１４個の連続したβ−Ｄ−２’−デオキシリボフラノシルヌクレオシドの少なくとも１つの領域を含む。いくつかの実施形態では、オリゴマー化合物は、約９〜約１２個の連続したβ−Ｄ−２’−デオキシリボフラノシルヌクレオシドの少なくとも１つの領域を含む。
【０２１７】
いくつかの実施形態では、オリゴマー化合物は、式：
【化２１】
2020531450.tif 000024
（式中、Ｂｘは、複素環式塩基部分である）
の少なくとも１つ（例えば、例えば１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５又はそれを上回る）のＳ−ｃＥｔモノマーを含む。
【０２１８】
一部の実施形態では、オリゴマー化合物、例えば調整性ＲＥＶＥＲＳＩＲ化合物は、
【化２２】
2020531450.tif 000025
（式中、Ｂは、Ａ−００１〜Ａ−０２６であり、ｎは、０〜６（例えば、１、２、３、４、５又は６）である）
から選択される少なくとも１つ（例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５又はそれを上回る）のヌクレオチドを含む。
【０２１９】
いくつかの実施形態では、モノマーは、糖模倣物を含む。いくつかのこうした実施形態では、糖又は糖−ヌクレオシド間結合組合せの代わりに、模倣物を使用し、核酸塩基は、選択される標的とのハイブリダイゼーションのために維持する。糖模倣物の代表的な例として、限定はしないが、シクロヘキセニル又はモルホリノが挙げられる。糖−ヌクレオシド間結合組合せの模倣物の代表的な例として、限定はしないが、非荷電アキラル結合により連結されたペプチド核酸（ＰＮＡ）及びモルホリノ基が挙げられる。一部の事例では、核酸塩基の代わりに模倣物を用いる。代表的な核酸塩基模倣物は当技術分野でよく知られており、限定はしないが、三環式フェノキサジン類似体及びユニバーサル塩基（Ｂｅｒｇｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎｕｃ  Ａｃｉｄ  Ｒｅｓ．２０００，２８：２９１１−１４、参照により本明細書に組み込まれる）が挙げられる。糖、ヌクレオシド、ヌクレオチド及び核酸塩基模倣物の合成方法は、当業者には周知である。
【０２２０】
いくつかの実施形態では、調整性ＲＥＶＥＲＳＩＲ化合物は、ＬＮＡである少なくとも１つのモノマーと、少なくとも１つのＧクランプ核酸塩基を含む。例えば、調整性ＲＥＶＥＲＳＩＲ化合物は、ＬＮＡである１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５又はそれを上回るモノマーと、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５又はそれを上回るＧクランプ核酸塩基とを含む。
【０２２１】
一部の実施形態では、調整性ＲＥＶＥＲＳＩＲ化合物は、少なくとも１つ（例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５又はそれを上回る）のペプチド核酸モノマーを含む。いくつかの実施形態では、調整性ＲＥＶＥＲＳＩＲ化合物は、ＬＮＡである少なくとも１つのモノマーと、ＰＮＡである少なくとも１つのモノマーを含む。例えば、調整性ＲＥＶＥＲＳＩＲ化合物は、ＬＮＡである１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５又はそれを上回るモノマーと、ＰＮＡである１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５又はそれを上回るモノマーを含む。
【０２２２】
いくつかの実施形態では、調整性ＲＥＶＥＲＳＩＲ化合物は、少なくとも１つのＰＮＡと、少なくとも１つのＧクランプ核酸塩基を含む。例えば、調整性ＲＥＶＥＲＳＩＲ化合物は、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５又はそれを上回るＰＮＡと、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５又はそれを上回るＧクランプ核酸塩基を含む。
【０２２３】
いくつかの実施形態では、調整性ＲＥＶＥＲＳＩＲ化合物は、少なくとも１つのＬＮＡ、少なくとも１つのＰＮＡ及び少なくとも１つのＧクランプ核酸塩基を含む。例えば、調整性ＲＥＶＥＲＳＩＲ化合物は、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５又はそれを上回るＬＮＡモノマー；１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５又はそれを上回るＰＮＡ及び１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５又はそれを上回るＧクランプ核酸塩基を含む。
【０２２４】
モノマー連結
本明細書には、モノマー（限定はしないが、修飾及び非修飾ヌクレオシド及びヌクレオチド）を互いに連結し、それによってオリゴマー化合物を形成する結合基を記載する。こうした結合基は、糖間結合とも呼ばれる。２つの主要なクラスの結合基は、リン原子の存在又は非存在によって区別される。代表的なリン含有結合として、限定はしないが、リン酸ジエステル（Ｐ＝Ｏ）、ホスホロトリエステル、ホンスホン酸メチル、ホスホロアミデート及びホスホロチオエート（Ｐ＝Ｓ）が挙げられる。代表的なリン含有結合として、限定はしないが、メチレンメチルイミノ（−ＣＨ２−Ｎ（ＣＨ３）−Ｏ−ＣＨ２−）、チオジエステル（−Ｏ−Ｃ（Ｏ）−Ｓ−）、チオカルバメート（−Ｏ−Ｃ（Ｏ）（ＮＨ）−Ｓ−）；シロキサン（−Ｏ−Ｓｉ（Ｈ）２−Ｏ−）；並びにＮ，Ｎ’−ジメチルヒドラジン（−ＣＨ２−Ｎ（ＣＨ３）−Ｎ（ＣＨ３）−）が挙げられる。非リン結合基を有するオリゴマー化合物は、オリゴヌクレオシドと呼ばれる。天然のリン酸ジエステル結合と比較して、修飾された結合は、オリゴマー化合物のヌクレアーゼ耐性を改変、典型的には増大するために、使用することができる。いくつかの実施形態では、キラル原子を有する結合は、個別の鏡像体として、ラセミ混合物で調製することができる。代表的なキラル結合として、限定はしないが、リン酸アルキル及びホスホロチオエートが挙げられる。リン含有及び非リン含有結合の調製方法は、当業者には周知である。
【０２２５】
結合基中のリン酸基は、酸素の１つを異なる置換基で置換することにより修飾することができる。この修飾による結果の１つは、核酸分解に対するオリゴヌクレオチドの耐性増大であり得る。修飾リン酸基の例として、ホスホロチオエート、ホスホロセレネート、ボラノリン酸塩、ボラノリン酸エステル、リン酸水素、ホスホロアミデート、リン酸アルキル又はアリール及びリン酸トリエステルが挙げられる。一部の実施形態では、連結における非架橋リン酸酸素原子の１つは、Ｓ、Ｓｅ、ＢＲ３（Ｒは、水素、アルキル、アリールである）、Ｃ（すなわちアルキル基、アリール基など）、Ｈ、ＮＲ２（Ｒは、水素、任意選択で置換されたアルキル、アリールである）又はＯＲ（Ｒは、任意選択で置換されたアルキル若しくはアリールである）のいずれかにより置換することができる。非修飾リン酸基中のリン原子は、アキラルである。しかし、上記原子又は原子団の１つによる非架橋酸素原子の１つの置換は、リン原子をキラルにする。換言すれば、このように修飾されたリン酸基中のリン原子は、立体中心である。立体形成性リン原子は、「Ｒ」配置（本明細書では、Ｒｐ）又は「Ｓ」配置（本明細書では、Ｓｐ）のいずれかを有し得る。
【０２２６】
ホスホロチオエートは、硫黄により置換された両方の非架橋酸素原子を有する。ホスホロチオエート中のリン中心は、オリゴヌクレオチドジアステレオマーの形成を排除するアキラルである。従って、特定の理論に拘束されることは意図しないが、両方の非架橋酸素原子に対する修飾は、キラル中心、例えばホスホロチオエート形成を排除し、それらがジアステレオマー混合物を生成することができないことから、望ましい場合がある。従って、非架橋酸素原子は、独立に、Ｏ、Ｓ、Ｓｅ、Ｂ、Ｃ、Ｈ、Ｎ又はＯＲ（Ｒは、アルキル又はアリールである）のいずれかであり得る。
【０２２７】
リン酸リンカーは、窒素（架橋ホスホロアミデート）、硫黄（架橋ホスホロチオエート）及び炭素（架橋ホスホン酸メチレン）による、架橋酸素（すなわちリン酸塩をモノマーの糖に連結する酸素）の置換によっても修飾することもできる。この置換は、連結酸素のいずれか一方又は両方の連結酸素で実施することができる。架橋酸素が、ヌクレオシドの３’−酸素であるとき、炭素による置換が好ましい。架橋酸素が、ヌクレオシドの５’−酸素であるとき、窒素による置換が好ましい。
【０２２８】
リン酸塩に連結した酸素の少なくとも１つが置換されているか、又はリン酸基が非リン基によって置換されている修飾リン酸結合は、「非リン酸ジエステル糖間結合」又は「非リン酸ジエステルリンカー」とも呼ばれる。
【０２２９】
いくつかの実施形態では、リン酸基は、非リン含有コネクター、例えばデホスホリンカーにより置換することができる。デホスホリンカーは、本明細書において、非リン酸ジエステルリンカーとも呼ばれる。特定の理論に拘束されることを意図しないが、荷電リン酸ジエステル基は、核酸分解の反応中心であるため、中性構造模倣物によるその置換は、増強されたヌクレアーゼ安定性を付与すると考えられる。やはり、特定の理論に拘束されることは意図しないが、一部の実施形態では、荷電リン酸基を中性部分で置換する改変を導入することが望ましい場合もある。
【０２３０】
リン酸基を置換することができる部分の例として、限定はしないが、以下のものが挙げられる：アミド（例えば、アミド−３（３’−ＣＨ２−Ｃ（＝Ｏ）−Ｎ（Ｈ）−５’）及びアミド−（３’−ＣＨ２−Ｎ（Ｈ）−Ｃ（＝Ｏ）−５’））、ヒドロキシルアミノ、シロキサン（ジアルキルシロキサン）、カルボキサミド、炭酸塩、カルボキシメチル、カルバメート、カルボン酸エステル、チオエーテル、エチレンオキシドリンカー、硫化物、スルホン酸塩、スルホンアミド、スルホン酸エステル、チオホルムアセタール（３’−Ｓ−ＣＨ２−Ｏ−５’）、ホルムアセタール（３’−Ｏ−ＣＨ２−Ｏ−５’）、オキシム、メチレンイミノ、メチケンカルボニルアミノ、メチレンメチルイミノ（ＭＭＩ、３’−ＣＨ２−Ｎ（ＣＨ３）−Ｏ−５’）、メチレンヒドラゾ、メチレンジメチルヒドラゾ、メチレンオキシメチルイミノ、エーテル（Ｃ３’−Ｏ−Ｃ５’）、チオエーテル（Ｃ３’−Ｓ−Ｃ５’）、チオアセトアミド（Ｃ３’−Ｎ（Ｈ）−Ｃ（＝Ｏ）−ＣＨ２−Ｓ−５’、Ｃ３’−Ｏ−Ｐ（Ｏ）−Ｏ−ＳＳ−Ｃ５’、Ｃ３’−ＣＨ２−ＮＨ−ＮＨ−Ｃ５’、３’−ＮＨＰ（Ｏ）（ＯＣＨ３）−Ｏ−５’及び３’−ＮＨＰ（Ｏ）（ＯＣＨ３）−Ｏ−５’及び混合Ｎ、Ｏ、Ｓ及びＣＨ２構成部分を含むノニオン結合。例えば、Ｃａｒｂｏｈｙｄｒａｔｅ  Ｍｏｄｉｆｉｃａｔｉｏｎｓ  ｉｎ  Ａｎｔｉｓｅｎｓｅ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ；Ｙ．Ｓ．Ｓａｎｇｈｖｉ  ａｎｄ  Ｐ．Ｄ．Ｃｏｏｋ  Ｅｄｓ．ＡＣＳ  Ｓｙｍｐｏｓｉｕｍ  Ｓｅｒｉｅｓ  ５８０；Ｃｈａｐｔｅｒｓ  ３  ａｎｄ  ４，（ｐｐ．４０−６５）を参照されたい。好ましい実施形態として、メチレンメチルイミノ（ＭＭＩ）、メチレンカルボニルアミノ、アミド、カルバメート及びエチレンオキシドリンカーが挙げられる。
【０２３１】
当業者であれば、いくつかの事例において、非架橋酸素原子の置換が、隣接する２’−ＯＨによる糖間結合の切断増強をもたらし得るため、多くの事例で、非架橋酸素原子の修飾が、２’−ＯＨの修飾、例えば隣接する糖間結合、例えばアラビノース糖、２’−Ｏ−アルキル、２’−Ｆ、ＬＮＡ及びＥＮＡの切断に参加しない修飾を必要とし得ることを十分に認識している。
【０２３２】
好ましい非リン酸ジエステル糖間結合は、ホスホロチオエート、少なくとも１％、５％、１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％又はそれを上回る鏡像体過剰率のＳｐ異性体を含むホスホロチオエート、少なくとも１％、５％、１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％又はそれを上回る鏡像体過剰率のＲｐ異性体を含むホスホロチオエート、ホスホロジチオエート、ホスホトリエステル、アミノアルキルホスホトリオエステル、アルキル−ホスホネート（例えば、メチル−ホスホネート）、セレノホスフェート、ホスホロアミデート（例えば、Ｎ−アルキルホスホロアミデート）並びにボラノホスホネートを含む。
【０２３３】
一部の実施形態では、オリゴマー化合物、例えば調整性ＲＥＶＥＲＳＩＲ化合物又はｓｉＲＮＡは、少なくとも１つ（例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５又はそれを上回り且つ各数値を含めてそれを下回る）の修飾若しくは非リン酸ジエステル結合を含む。一実施形態では、オリゴマー化合物、例えば調整性ＲＥＶＥＲＳＩＲ化合物又はｓｉＲＮＡは、少なくとも１つ（例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５又はそれを上回り且つ各数値を含めてそれを下回る）のホスホロチオエート結合を含む。
【０２３４】
一部の実施形態では、逆転（ｒｅｖｅｒｓｅｒ）化合物中の全てのヌクレオチド間結合は、ホスホロチオエート（ＰＳ）ヌクレオチド間結合である。いくつかの実施形態では、調整性ＲＥＶＥＲＳＩＲ化合物は、少なくとも１つのホスホロチオエート（ＰＳ）ヌクレオチド間結合を含むが、前記調整性ＲＥＶＥＲＳＩＲ化合物中の全てのヌクレオチド間結合がホスホロチオエート結合であるわけではない。換言すれば、一部の実施形態では、１００％未満（例えば、９５％、９０％、８５％、８０％、７５％、７０％、６５％、６０％、５５％、５０％、４５％、４０％又はそれを下回る）のヌクレオチド間結合が、ホスホロチオエート結合である。
【０２３５】
一部の実施形態では、調整性ＲＥＶＥＲＳＩＲ化合物は、少なくとも１つのホスホロチオエートヌクレオチド間結合と、ホスホロチオエートではない少なくとも１つのヌクレオシド間又はインターヌクレオチド間結合を含む。例えば、調整性ＲＥＶＥＲＳＩＲ化合物は、少なくとも１つのホスホロチオエートヌクレオチド間結合と、少なくとも１つのリン酸ジエステルヌクレオチド間結合とを含む。一部の実施形態では、非ホスホロチオエートヌクレオチド間結合は、末端と、最後から２番目のヌクレオチドとの間にある。
【０２３６】
一部の実施形態では、調整性ＲＥＶＥＲＳＩＲ化合物の３’末端の核酸塩基と、残りの調整性ＲＥＶＥＲＳＩＲ化合物との間のヌクレオチド間結合は、リン酸ジエステル結合である。一部の実施形態では、逆転（ｒｅｖｅｒｓｅｒ）化合物中の全てのヌクレオチド間結合は、調整性ＲＥＶＥＲＳＩＲ化合物の３’末端のヌクレオシドと、残りの調整性ＲＥＶＥＲＳＩＲ化合物との間のヌクレオチド間結合を除いて、ホスホロチオエートである。
【０２３７】
リン酸リンカー及び糖が、ヌクレアーゼ耐性ヌクレオシド、ヌクレオチド又はヌクレオチドサロゲートにより置換されている、オリゴマー化合物を構築することもできる。特定の理論に拘束されることは意図しないが、繰り返し荷電された骨格は、ポリアニオンを認識するタンパク質（例えば、ヌクレアーゼ）に対する結合を弱めると考えられる。やはり、特定の理論に拘束されることは意図しないが、一部の実施形態では、塩基が中性サロゲート骨格により係留される改変を導入するのが望ましい場合もある。例として、モルホリノ、シクロブチル、ピロリジン、ペプチド核酸（ＰＮＡ）、アミノエチルグリシル（ａｅｇＰＮＡ）及び骨格伸張ピロリジンＰＮＡ（ｂｅｐＰＮＡ）ヌクレオシドサロゲートが挙げられる。好ましいサロゲートは、ＰＮＡサロゲートである。
【０２３８】
本明細書に記載するオリゴマー化合物は、１つ又は複数の非対称中心を含み、従って、鏡像体、ジアステレオマー及び他の立体配置を生成するが、これらは、絶対立体化学に関して、糖アノマーなどの場合、（Ｒ）若しくは（Ｓ）として又はアミノ酸などの場合（Ｄ）若しくは（Ｌ）として定義され得る。本明細書に記載するアンチセンス化合物には、このような、考えられるあらゆる異性体並びにそれらのラセミ形態及び任意選択で純粋形態が含まれる。
【０２３９】
末端修飾
オリゴマー化合物の末端を修飾することができる。このような修飾は、一方又は両方の末端で可能である。例えば、オリゴヌクレオチドの３’及び／又は５’末端を標識部分、例えば発蛍光団（例えば、ピレン、ＴＡＭＲＡ、フルオレセイン、Ｃｙ３若しくはＣｙ５色素）又は保護基（例えば、硫黄、ケイ素、ホウ素若しくはエステル系）などの他の機能性分子実体と共役させることができる。機能性分子実体は、リン酸基及び／又はリンカーを介して糖に結合することができる。リンカーの末端原子は、リン酸基の結合原子又は糖のＣ−３’若しくはＣ−５’Ｏ、Ｎ、Ｓ若しくはＣ基に連結するか、又はそれを置換することができる。代わりに、リンカーは、ヌクレオチドサロゲート（例えば、ＰＮＡ）の末端原子に連結するか、又はそれを置換することができる。
【０２４０】
リンカー／リン酸−機能分子実体−リンカー／リン酸アレイが、二本鎖オリゴマー化合物の２つの鎖間に配置されているとき、このアレイは、ヘアピンタイプのオリゴマー化合物中のヘアピンループを置換し得る。
【０２４１】
活性を調節する上で有用な末端修飾には、リン酸塩又はリン酸塩類似体によるオリゴマー化合物の５’末端の修飾がある。いくつかの実施形態では、オリゴマー化合物の５’末端は、リン酸化されているか、又はホスホリル類似体を含む。例示的な５’リン酸修飾として、ＲＩＳＣ媒介性遺伝子サイレンシングと適合性であるものが挙げられる。５’末端の修飾は、対象の免疫系を刺激又は阻害する上でも有用となり得る。一部の実施形態では、オリゴマー化合物の５’末端は、修飾
【化２３】
2020531450.tif 000026
を含み、ここで、Ｗ、Ｘ及びＹは、各々独立に、Ｏ、ＯＲ（Ｒは、水素、アルキル、アリールである）、Ｓ、Ｓｅ、ＢＲ３（Ｒは、水素、アルキル、アリールである）、ＢＨ３−、Ｃ（すなわちアルキル基、アリール基など）、Ｈ、ＮＲ２（Ｒは、水素、アルキル、アリールである）又はＯＲ（Ｒは、水素、アルキル又はアリールである）から選択され；Ａ及びＺは、それぞれの存在について各々独立に、非存在、Ｏ、Ｓ、ＣＨ２、ＮＲ（Ｒは、水素、アルキル、アリールである）又は任意選択で置換されたアルキレンであり、ここで、アルキレンの骨格は、内部及び／又は末端に、Ｏ、Ｓ、ＳＳ及びＮＲ（Ｒは、水素、アルキル、アリールである）を含むことができ；ｎは、０〜２である。一部の実施形態では、ｎは、１又は２である。Ａは、糖の５’炭素に連結した酸素を置換することが理解される。ｎが０であるとき、Ｗ及びＹは、それらが結合されるＰと一緒に、任意選択で置換された５〜８員複素環式化合物を形成することができ、ここで、Ｗ及びＹは、各々独立に、Ｏ、Ｓ、ＮＲ’又はアルキレンである。複素環式は、アリール又はヘテロアリールで置換されているのが好ましい。一部の実施形態では、５’末端ヌクレオチドのＣ５’上の一方又は両方の水素が、ハロゲン、例えばＦで置換されている。
【０２４２】
例示的な５’−修飾として、限定はしないが、５’−一リン酸塩（（ＨＯ）２（Ｏ）ｐ−Ｏ−５’）；５’−二リン酸塩（（ＨＯ）２（Ｏ）Ｐ−Ｏ−Ｐ（ＨＯ）（Ｏ）−Ｏ−５’）；５’−三リン酸塩（（ＨＯ）２（Ｏ）Ｐ−Ｏ−（ＨＯ）（Ｏ）Ｐ−Ｏ−Ｐ（ＨＯ）（Ｏ）−Ｏ−５’）；５’−モノチオリン酸塩（ホスホロチオエート；（ＨＯ）２（Ｓ）Ｐ−Ｏ−５’）；５’−モノジチオリン酸塩（ホスホロジチオエート；（ＨＯ）（ＨＳ）（Ｓ）Ｐ−Ｏ−５’）、５’−ホスホロチオレート（（ＨＯ）２（Ｏ）Ｐ−Ｓ−５’）；５’−α−チオ三リン酸塩；５’−β−チオ三リン酸塩；５’−γ−チオ三リン酸塩；５’−ホスホロアミデート（（ＨＯ）２（Ｏ）Ｐ−ＮＨ−５’、（ＨＯ）（ＮＨ２）（Ｏ）Ｐ−Ｏ−５’）が挙げられる。他の５’−修飾としては、５’−アルキルリン酸塩（Ｒ（ＯＨ）（Ｏ）Ｐ−Ｏ−５’、Ｒ＝アルキル、例えばメチル、エチル、イソプロピル、プロピルなど）、５’−アルキルエーテルホスホン酸塩（Ｒ（ＯＨ）（Ｏ）Ｐ−Ｏ−５’、Ｒ＝アルキルエーテル、例えばメトキシメチル（ＣＨ２ＯＭｅ）、エトキシメチルなど）が挙げられる。他の例示的な５’−修飾としては、Ｚが、任意選択で少なくとも１回置換されたアルキルであるもの、例えば（（ＨＯ）２（Ｘ）Ｐ−Ｏ［−（ＣＨ２）ａ−Ｏ−Ｐ（Ｘ）（ＯＨ）−Ｏ］ｂ−５’、（（ＨＯ）２（Ｘ）Ｐ−Ｏ［−（ＣＨ２）ａ−Ｐ（Ｘ）（ＯＨ）−Ｏ］ｂ−５’、（（ＨＯ）２（Ｘ）Ｐ−［−（ＣＨ２）ａ−Ｏ−Ｐ（Ｘ）（ＯＨ）−Ｏ］ｂ−５’；ジアルキル末端リン酸塩及びリン酸塩模倣物；ＨＯ［−（ＣＨ２）ａ−Ｏ−Ｐ（Ｘ）（ＯＨ）−Ｏ］ｂ−５’、Ｈ２Ｎ［−（ＣＨ２）ａ−Ｏ−Ｐ（Ｘ）（ＯＨ）−Ｏ］ｂ−５’、Ｈ［−（ＣＨ２）ａ−Ｏ−Ｐ（Ｘ）（ＯＨ）−Ｏ］ｂ−５’、Ｍｅ２Ｎ［−（ＣＨ２）ａ−Ｏ−Ｐ（Ｘ）（ＯＨ）−Ｏ］ｂ−５’、ＨＯ［−（ＣＨ２）ａ−Ｐ（Ｘ）（ＯＨ）−Ｏ］ｂ−５’、Ｈ２Ｎ［−（ＣＨ２）ａ−Ｐ（Ｘ）（ＯＨ）−Ｏ］ｂ−５’、Ｈ［−（ＣＨ２）ａ−Ｐ（Ｘ）（ＯＨ）−Ｏ］ｂ−５’、Ｍｅ２Ｎ［−（ＣＨ２）ａ−Ｐ（Ｘ）（ＯＨ）−Ｏ］ｂ−５’が挙げられ、ここで、ａ及びｂは、各々独立に、１〜１０である。他の実施形態は、ＢＨ３、ＢＨ３−及び／又はＳｅによる酸素及び／又は硫黄の置換を含む。
【０２４３】
末端修飾は、分布をモニターする上でも有用となり得、このような場合、付加するのに好ましい基には、発蛍光団、例えばフルオレセイン又はＡｌｅｘａ色素、例えばＡｌｅｘａ  ４８８がある。末端修飾は、取込みを増強するのにも有用となり得、このための有用な修飾としては、ターゲティングリガンドがある。さらに末端修飾は、別の部分にオリゴヌクレオチドを架橋する上でも有用となり得、このための有用な修飾として、マイトマイシンＣ、プソラレン及びそれらの誘導体が挙げられる。
【０２４４】
オリゴマー化合物
いくつかの実施形態では、例えば、リン酸ジエステル及びホスホロチオエートヌクレオチド間結合などの結合を形成する上で有用な反応性リン基を有するオリゴマー化合物がここに提供される。前駆体又はオリゴマー化合物の調製及び／又は精製方法は、本明細書に記載する組成物又は方法を限定するものではない。ＤＮＡ、ＲＮＡ、オリゴヌクレオチド、オリゴヌクレオシド及びアンチセンス化合物などのオリゴマー化合物の合成及び精製方法は、当業者には周知である。
【０２４５】
一般に、オリゴマー化合物は、結合基により互いに連結された複数のモノマーサブユニットを含む。オリゴマー化合物の非限定的例として、プライマー、プローブ、アンチセンス化合物、アンチセンスオリゴヌクレオチド、外部ガイド配列（ＥＧＳ）オリゴヌクレオチド、選択的スプライサー及びｓｉＲＮＡが挙げられる。このように、これらの化合物は、一本鎖、二本鎖、環状、分岐状又はヘアピンの形態で導入することができ、これらは、内部若しくは末端バルジ又はループなどの構造的要素を含むことができる。オリゴマー二本鎖化合物は、ハイブリダイズして二本鎖化合物を形成する２本鎖又はハイブリダイゼーション並びに完全若しくは部分的な二本鎖化合物の形成を可能にするのに十分な自己相補性を備えた一本鎖のいずれでもあり得る。
【０２４６】
いくつかの実施形態では、本発明は、キメラオリゴマー化合物を提供する。いくつかのこうした実施形態では、キメラオリゴマー化合物は、キメラオリゴヌクレオチドである。いくつかのこうした実施形態では、キメラオリゴヌクレオチドは、様々な修飾ヌクレオチドを含む。いくつかの実施形態では、キメラオリゴヌクレオチドは、混合型骨格アンチセンスオリゴヌクレオチドである。
【０２４７】
一般に、キメラオリゴマー化合物は、孤立した位置にあるか又は特定のモチーフを画定する領域に一緒に群を形成し得る修飾ヌクレオシドを有する。修飾及び／又は模倣群の任意の組合せが、本明細書に記載するキメラオリゴマー化合物を含み得る。
【０２４８】
いくつかの実施形態では、キメラオリゴマー化合物は、典型的に、ヌクレアーゼ分解に対する耐性増強、細胞取込みの増強及び／又は標的核酸に対する結合親和性増大を付与するように、修飾された少なくとも１つの領域を含む。いくつかの実施形態では、オリゴマー化合物の別の領域は、ＲＮＡ：ＤＮＡ又はＲＮＡ：ＲＮＡハイブリッドを切断することができる酵素の基質として役立ち得る。
【０２４９】
いくつかの実施形態では、キメラオリゴマー化合物は、ギャップマーである。いくつかの実施形態では、混合型骨格オリゴマー化合物は、一方又は両方のウィングに１タイプのヌクレオチド間結合を有し、ギャップ内には別のタイプのヌクレオシド間結合を有する。いくつかのこうした実施形態では、混合型骨格オリゴヌクレオチドは、ウィング内にリン酸ジエステル結合を、またギャップ内にホスホロチオエート結合を有する。ウィング内のヌクレオチド間結合が、ギャップ内のヌクレオチド間結合と異なるいくつかの実施形態では、そのウィングとギャップを架橋するヌクレオチド間結合は、ウィング内のヌクレオチド間結合と同じである。ウィング内のヌクレオチド間結合が、ギャップ内のヌクレオチド間結合と異なるいくつかの実施形態では、そのウィングとギャップを架橋するヌクレオチド間結合は、ギャップ内のヌクレオシド間結合と同じである。
【０２５０】
いくつかの実施形態では、本発明は、様々な長さ範囲のいずれかの長さのｓｉＲＮＡ及び調整性ＲＥＶＥＲＳＩＲ化合物を含む、オリゴマー化合物を提供する。いくつかの実施形態では、本発明は、Ｘ−Ｙ連結オリゴヌクレオチドから構成されるオリゴマー化合物を提供し、ここで、Ｘ及びＹは、各々独立に、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９及び５０から選択され；但し、Ｘ＜Ｙである。例えば、いくつかの実施形態では、本願は、８〜９、８〜１０、８〜１１、８〜１２、８〜１３、８〜１４、８〜１５、８〜１６、８〜１７、８〜１８、８〜１９、８〜２０、８〜２１、８〜２２、８〜２３、８〜２４、８〜２５、８〜２６、８〜２７、８〜２８、８〜２９、８〜３０、９〜１０、９〜１１、９〜１２、９〜１３、９〜１４、９〜１５、９〜１６、９〜１７、９〜１８、９〜１９、９〜２０、９〜２１、９〜２２、９〜２３、９〜２４、９〜２５、９〜２６、９〜２７、９〜２８、９〜２９、９〜３０、１０〜１１、１０〜１２、１０〜１３、１０〜１４、１０〜１５、１０〜１６、１０〜１７、１０〜１８、１０〜１９、１０〜２０、１０〜２１、１０〜２２、１０〜２３、１０〜２４、１０〜２５、１０〜２６、１０〜２７、１０〜２８、１０〜２９、１０〜３０、１１〜１２、１１〜１３、１１〜１４、１１〜１５、１１〜１６、１１〜１７、１１〜１８、１１〜１９、１１〜２０、１１〜２１、１１〜２２、１１〜２３、１１〜２４、１１〜２５、１１〜２６、１１〜２７、１１〜２８、１１〜２９、１１〜３０、１２〜１３、１２〜１４、１２〜１５、１２〜１６、１２〜１７、１２〜１８、１２〜１９、１２〜２０、１２〜２１、１２〜２２、１２〜２３、１２〜２４、１２〜２５、１２〜２６、１２〜２７、１２〜２８、１２〜２９、１２〜３０、１３〜１４、１３〜１５、１３〜１６、１３〜１７、１３〜１８、１３〜１９、１３〜２０、１３〜２１、１３〜２２、１３〜２３、１３〜２４、１３〜２５、１３〜２６、１３〜２７、１３〜２８、１３〜２９、１３〜３０、１４〜１５、１４〜１６、１４〜１７、１４〜１８、１４〜１９、１４〜２０、１４〜２１、１４〜２２、１４〜２３、１４〜２４、１４〜２５、１４〜２６、１４〜２７、１４〜２８、１４〜２９、１４〜３０、１５〜１６、１５〜１７、１５〜１８、１５〜１９、１５〜２０、１５〜２１、１５〜２２、１５〜２３、１５〜２４、１５〜２５、１５〜２６、１５〜２７、１５〜２８、１５〜２９、１５〜３０、１６〜１７、１６〜１８、１６〜１９、１６〜２５、１６〜２１、１６〜２２、１６〜２３、１６〜２４、１６〜２５、１６〜２６、１６〜２７、１６〜２８、１６〜２９、１６〜３０、１７〜１８、１７〜１９、１７〜２０、１７〜２１、１７〜２２、１７〜２３、１７〜２４、１７〜２５、１７〜２６、１７〜２７、１７〜２８、１７〜２９、１７〜３０、１８〜１９、１８〜２０、１８〜２１、１８〜２２、１８〜２３、１８〜２４、１８〜２５、１８〜２６、１８〜２７、１８〜２８、１８〜２９、１８〜３０、１９〜２０、１９〜２１、１９〜２２、１９〜２３、１９〜２４、１９〜２５、１９〜２６、１９〜２９、１９〜２８、１９〜２９、１９〜３０、２０〜２１、２０〜２２、２０〜２３、２０〜２４、２０〜２５、２０〜２６、２０〜２７、２０〜２８、２０〜２９、２０〜３０、２１〜２２、２１〜２３、２１〜２４、２１〜２５、２１〜２６、２１〜２７、２１〜２８、２１〜２９、２１〜３０、２２〜２３、２２〜２４、２２〜２５、２２〜２６、２２〜２７、２２〜２８、２２〜２９、２２〜３０、２３〜２４、２３〜２５、２３〜２６、２３〜２７、２３〜２８、２３〜２９、２３〜３０、２４〜２５、２４〜２６、２４〜２７、２４〜２８、２４〜２９、２４〜３０、２５〜２６、２５〜２７、２５〜２８、２５〜２９、２５〜３０、２６〜２７、２６〜２８、２６〜２９、２６〜３０、２７〜２８、２７〜２９、２７〜３０、２８〜２９、２８〜３０又は２９〜３０個の連結ヌクレオチドを含む、オリゴマー化合物を提供する。
【０２５１】
前述したように、調整性ＲＥＶＥＲＳＩＲ化合物は、任意の長さであり得る。例えば、一部の実施形態では、調整性ＲＥＶＥＲＳＩＲ化合物は、６〜３０ヌクレオチドから構成される修飾オリゴヌクレオチドである。例えば、調整性ＲＥＶＥＲＳＩＲ化合物は、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９又は３０個の連結核酸塩基から構成され得る。一部の実施形態では、調整性ＲＥＶＥＲＳＩＲ化合物は、６〜１７、７〜１６又は８〜１５個の連結核酸塩基から構成される。
【０２５２】
本発明者らは、中でも、１５以下のヌクレオチドから構成される調整性ＲＥＶＥＲＳＩＲ化合物、すなわち修飾オリゴヌクレオチドが、ｓｉＲＮＡ活性を逆転する上で特に有効であることを見出した。従って、一部の実施形態では、調整性ＲＥＶＥＲＳＩＲ化合物は、８〜１５（例えば、８、９、１０、１１、１２、１３、１４又は１５）の連結ヌクレオチドから構成される修飾オリゴヌクレオチドである。一部の実施形態では、調整性ＲＥＶＥＲＳＩＲ化合物は、６〜１２、７〜１１又は８〜１０個の連結核酸塩基から構成される修飾オリゴヌクレオチドである。一部の実施形態では、調整性ＲＥＶＥＲＳＩＲ化合物は、８〜９つの連結核酸塩基から構成される修飾オリゴヌクレオチドである。
【０２５３】
本明細書で述べるように、調整性ＲＥＶＥＲＳＩＲ化合物は、ｓｉＲＮＡの少なくとも１つの鎖と実質的に相補的な修飾オリゴヌクレオチドである。特定の理論に拘束されることは意図しないが、ｓｉＲＮＡのアンチセンス鎖のシード領域（すなわちアンチセンス鎖の５’末端の２〜８位）と実質的に相補的である調整性ＲＥＶＥＲＳＩＲ化合物は、ｓｉＲＮＡ活性を低減する上で特に有効である。従って、多くの実施形態では、調整性ＲＥＶＥＲＳＩＲ化合物は、ｓｉＲＮＡのアンチセンス鎖のヌクレオチド２〜８、２〜９、２〜１０、２〜１１、２〜１２、２〜１３、２〜１４、２〜１５又は２〜１６と実質的に相補的である。これに関連して、実質的に相補的とは、少なくとも９０％、好ましくは少なくとも９５％の相補性、より好ましくは完全な相補性を意味する。
【０２５４】
リガンド
いくつかの実施形態では、オリゴマー化合物は、１つ又は複数のコンジュゲート基の共有結合により修飾される。一般に、コンジュゲート基は、結合されたオリゴマー化合物の１つ又は複数の特性を修飾し、こうした特性として、例えば、限定はしないが、薬力学、薬物動態、結合、吸収、細胞分布、細胞取込み、電荷及びクリアランスが挙げられる。コンジュゲート基は、化学分野で常用的に使用されており、オリゴマー化合物などの親化合物に、直接又は任意選択の連結部分若しくは結合基を介して連結される。コンジュゲート基の好ましいリストは、限定はしないが、インターカレータ、リポータ分子、ポリアミン、ポリアミド、ポリエチレングリコール、チオエーテル、ポリエーテル、コレステロール、チオコレステロール、コール酸部分、葉酸塩、脂質、リン脂質、ビオチン、フェナジン、フェナントリジン、アントラキノン、アダマンタン、アクリジン、フルオレセイン、ローダミン、クーマリン及び染料を含む。
【０２５５】
本発明に適した好ましいコンジュゲート基としては、以下のものが挙げられる：コレステロール部分などの脂質部分（Ｌｅｔｓｉｎｇｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，１９８９，８６，６５５３）；コール酸（Ｍａｎｏｈａｒａｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏｏｒｇ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．Ｌｅｔｔ．，１９９４，４，１０５３）；チオエーテル、例えばヘキシル−Ｓ−トリチルチオール（Ｍａｎｏｈａｒａｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ａｎｎ．Ｎ．Ｙ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．，１９９２，６６０，３０６；Ｍａｎｏｈａｒａｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏｏｒｇ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．Ｌｅｔ．，１９９３，３，２７６５）；チオコレステロール（Ｏｂｅｒｈａｕｓｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎｕｃｌ．Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．，１９９２，２０，５３３）；脂肪族鎖、例えばドデカジオール又はウンデシル残基（Ｓａｉｓｏｎ−Ｂｅｈｍｏａｒａｓ  ｅｔ  ａｌ．，ＥＭＢＯ  Ｊ．，１９９１，１０，１１１；Ｋａｂａｎｏｖ  ｅｔ  ａｌ．，ＦＥＢＳ  Ｌｅｔｔ．，１９９０，２５９，３２７；Ｓｖｉｎａｒｃｈｕｋ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏｃｈｉｍｉｅ，１９９３，７５，４９）；リン脂質、例えばジ−ヘキサデシル−ラク−グリセロール又はトリエチルアンモニウム−１，２−ジ−Ｏ−ヘキサデシル−ラク−グリセロ−３−Ｈ−ホスホン酸塩（Ｍａｎｏｈａｒａｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ  Ｌｅｔｔ．，１９９５，３６，３６５１；Ｓｈｅａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎｕｃｌ．Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．，１９９０，１８，３７７７）；ポリアミン又はポリエチレングリコール鎖（Ｍａｎｏｈａｒａｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎｕｃｌｅｏｓｉｄｅｓ＆Ｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓ，１９９５，１４，９６９）；アダマンタン酢酸（Ｍａｎｏｈａｒａｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ  Ｌｅｔｔ．，１９９５，３６，３６５１）；パルミチル部分（Ｍｉｓｈｒａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏｃｈｉｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ａｃｔａ，１９９５，１２６４，２２９）；又はオクタデシルアミン若しくはヘキシルアミノ−カルボニル−オキシコレステロール部分（Ｃｒｏｏｋｅ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．Ｅｘｐ．Ｔｈｅｒ．，１９９６，２７７，９２３）。
【０２５６】
一般に、非常に多様な実体、例えばリガンドを本明細書に記載のオリゴマー化合物に結合させることができる。リガンドは、天然に存在する分子又は組換え若しくは合成分子を含み得る。例示的なリガンドとして、限定はしないが、以下のものが挙げられる：ポリリシン（ＰＬＬ）、ポリＬ−アスパラギン酸、ポリＬ−グルタミン酸、スチレン−無水マレイン酸コポリマー、ポリ（Ｌ−ラクチド−コ−グリコライド）コポリマー、ジビニルエーテル−無水マレイン酸コポリマー、Ｎ−（２−ヒドロキシプロピル）メタクリルアミドコポリマー（ＨＭＰＡ）、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ、例えばＰＥＧ−２Ｋ、ＰＥＧ−５Ｋ、ＰＥＧ−１０Ｋ、ＰＥＧ−１２Ｋ、ＰＥＧ−１５Ｋ、ＰＥＧ−２０Ｋ、ＰＥＧ−４０Ｋ）、ＭＰＥＧ、［ＭＰＥＧ］２、ポリビニルアルコール（ＰＶＡ）、ポリウレタン、ポリ（２−エチルアクリル酸）、Ｎ−イソプロピルアクリルアミドポリマー、ポリホスファジン、ポリエチレンイミン、カチオン基、スペルミン、スペルミジン、ポリアミン、プソイドペプチド−ポリアミン、ペプチド模倣ポリアミン、デントリマーポリアミン、アルギニン、アミジン、プロタミン、カチオン性脂質、カチオン性ポルフィリン、ポリアミンの第４級塩、チロトロピン、メラノトロピン、レクチン、糖タンパク質、サーファクタントタンパク質Ａ、ムチン、グリコシル化ポリアミノ酸、トランスフェリン、ビスホスホネート、ポリグルタミン酸塩、ポリアスパラギン酸塩、アプタマー、アシアロフェチュイン、ヒアルロナン、プロコラーゲン、イムノグロブリン（例えば、抗体）、インスリン、トランスフェリン、アルブミン、糖−アルブミンコンジュゲート、挿入剤（例えば、アクリジン）、架橋剤（例えば、プソラレン、マイトマイシンＣ）、ポルフィリン（例えば、ＴＰＰＣ４、テキサフィリン、サフィリン）、多環式芳香族炭化水素（例えば、フェナジン、ジヒドロフェナジン）、人工エンドヌクレアーゼ（例えば、ＥＤＴＡ）、親油性分子（例えば、ステロイド、胆汁酸、コレステロール、コール酸、アダマンタン酢酸、１−ピレン酪酸、ジヒドロテストステロン、１，３−ビス−Ｏ（ヘキサデシル）グリセロール、ゲラニルオキシヘキシル基、ヘキサデシルグリセロール、ボルネオール、メントール、１，３−プロパンジオール、ヘプタデシル基、パルミチン酸、ミリスチン酸、Ｏ３−（オレオイル）リトコール酸、Ｏ３−（オレオイル）コレン酸、ジメトキシトリチル若しくはフェノキサジン）、ペプチド（例えば、α螺旋ペプチド、両親媒性ペプチド、ＲＧＤペプチド、細胞透過ペプチド、エンドソーム溶解／融合ペプチド）、アルキル化剤、リン酸塩、アミノ、メルカプト、ポリアミノ、アルキル、置換アルキル、放射性標識マーカ、酵素、ハプテン（例えば、ビオチン）、輸送／吸収促進剤（例えば、ナプロキセン、アスピリン、ビタミンＥ、葉酸）、合成リボヌクレアーゼ（例えば、イミダゾール、ビスイミダゾール、ヒスタミン、イミダゾールクラスター、アクリジン−イミダゾールコンジュゲート、テトラアザマクロ環のＥｕ３＋複合体）、ジニトロフェニル、ＨＲＰ、ＡＰ、抗体、ホルモン及びホルモン受容体、レクチン、炭水化物、多価炭水化物、ビタミン（例えば、ビタミンＡ、ビタ���ンＥ、ビタミンＫ、ビタミンＢ、例えば葉酸、Ｂ１２、リボフラビン、ビオチン及びピリドキサール）、ビタミン補因子、リポ多糖、ｐ３８ＭＡＰキナーゼの活性化剤、ＮＦ−κＢの活性化剤、タキソン、ビンクリスチン、ビンブラスチン、サイトカラシン、ノコダゾール、ジャプラキノリド、ラトルンクリンＡ、ファロイジン、スウィンホリドＡ、インダノシン、ミオセルビン、腫瘍壊死因子α（ＴＮＦα）、インターロイキン−１β、γインターフェロン、天然若しくは組換え低密度リポタンパク質（ＬＤＬ）、天然若しくは組換え高密度リポタンパク質（ＨＤＬ）並びに細胞透過剤（例えば、螺旋状細胞透過剤）。
【０２５７】
ペプチド及びペプチド模倣リガンドとしては、天然又は修飾ペプチド、例えばＤ若しくはＬペプチド；α，β，若しくはγペプチド；Ｎ−メチルペプチド；アザペプチド；１つ又は複数のアミドを有するペプチド、すなわちペプチド、１つ又は複数の尿素、チオ尿素、カルバメート若しくはスルホニル尿素結合で置換された結合；又は環状ペプチドを有するものがある。ペプチド模倣物（本明細書では、オリゴペプチド模倣物とも呼ばれる）は、天然のペプチドに類似した明確な３次元構造にフォールディングすることができる分子である。ペプチド又はペプチド模倣リガンドは、約５〜５０アミノ酸長、例えば５、１０、１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５又は５０アミノ酸長であり得る。
【０２５８】
例示的な両親媒性ペプチドとして、限定はしないが、セクロピン、リコトキシン（ｌｙｃｏｔｏｘｉｎ）、パラダキシン（ｐａｒａｄａｘｉｎ）、ブホリン、ＣＰＦ、ボンビニン様ペプチド（ＢＬＰ）、カテリシジン、セラトトキシン（ｃｅｒａｔｏｔｏｘｉｎ）、Ｓ．クラバ（Ｓ．ｃｌａｖａ）ペプチド、メクラウナギ（ｈａｇｆｉｓｈ）腸抗菌ペプチド（ＨＦＩＡＰ）、マガイニン（ｍａｇａｉｎｉｎｅ）、ブレビニン−２、デルマセプチン、メリチン、プレウロシジン、Ｈ２Ａペプチド、アフリカツメガエル（Ｘｅｎｏｐｕｓ）ペプチド、エスクレンチニス−１（ｅｓｃｕｌｅｎｔｉｎｉｓ−１）及びカエリンが挙げられる。
【０２５９】
本明細書で使用されるとき、「エンドソーム性リガンド」は、エンドソーム特性を有する分子を指す。エンドソーム性リガンドは、本発明の組成物若しくはその成分の溶解及び／又は本発明の組成物若しくはその成分の、エンドソーム、リソソーム、小胞体（ＥＲ）、ゴルジ装置、微小管、ペロキシソーム又は細胞内の他の小胞体から細胞の細胞質への輸送を促進する。いくつかの例示的なエンドソーム性リガンドとして、限定はしないが、イミダゾール、ポリ若しくはオリゴイミダゾール、直鎖若しくは分岐状ポリエチレンイミン（ＰＥＩ）、直鎖及び分岐状ポリアミン、例えばスペルミン、カチオン性直鎖若しくは分岐状ポリアミン、ポリカルボキシレート、ポリカチオン、マスクオリゴ若しくはポリカチオン又はアニオン、アセタール、ポリアセタール、ケタール／ポリケタール、オルトエステル、マスク若しくは非マスクカチオン又はアニオン電荷を有する直鎖若しくは分岐状ポリマー、マスク若しくは非マスクカチオン又はアニオン電荷を有するデンドリマー、ポリアニオン性ペプチド、ペプチド模倣物、ｐＨ感受性ペプチド、天然及び合成融合性脂質、天然及び合成カチオン性脂質が挙げられる。
【０２６０】
例示的なエンドソーム性／融合性ペプチドとして、限定はしないが、以下のものが挙げられる：
ＡＡＬＥＡＬＡＥＡＬＥＡＬＡＥＡＬＥＡＬＡＥＡＡＡＡＧＧＣ（ＧＡＬＡ）（配列番号１）；ＡＡＬＡＥＡＬＡＥＡＬＡＥＡＬＡＥＡＬＡＥＡＬＡＡＡＡＧＧＣ（ＥＡＬＡ）（配列番号２）；ＡＬＥＡＬＡＥＡＬＥＡＬＡＥＡ（配列番号３）；ＧＬＦＥＡＩＥＧＦＩＥＮＧＷＥＧＭＩＷＤＹＧ（ＩＮＦ−７）（配列番号４）；ＧＬＦＧＡＩＡＧＦＩＥＮＧＷＥＧＭＩＤＧＷＹＧ（Ｉｎｆ  ＨＡ−２）（配列番号５）；ＧＬＦＥＡＩＥＧＦＩＥＮＧＷＥＧＭＩＤＧＷＹＧＣＧＬＦＥＡＩＥＧＦＩＥＮＧＷＥＧＭＩＤ  ＧＷＹＧＣ（ｄｉＩＮＦ−７）（配列番号６）；ＧＬＦＥＡＩＥＧＦＩＥＮＧＷＥＧＭＩＤＧＧＣＧＬＦＥＡＩＥＧＦＩＥＮＧＷＥＧＭＩＤＧＧＣ（ｄｉＩＮＦ−３）（配列番号７）；ＧＬＦＧＡＬＡＥＡＬＡＥＡＬＡＥＨＬＡＥＡＬＡＥＡＬＥＡＬＡＡＧＧＳＣ（ＧＬＦ）（配列番号８）；ＧＬＦＥＡＩＥＧＦＩＥＮＧＷＥＧＬＡＥＡＬＡＥＡＬＥＡＬＡＡＧＧＳＣ（ＧＡＬＡ−ＩＮＦ３）（配列番号９）；ＧＬＦ  ＥＡＩ  ＥＧＦＩ  ＥＮＧＷ  ＥＧｎＩ  ＤＧ  Ｋ  ＧＬＦ  ＥＡＩ  ＥＧＦＩ  ＥＮＧＷ  ＥＧｎＩ  ＤＧ（ＩＮＦ−５、ｎはノルロイシンである）（配列番号１０）；ＬＦＥＡＬＬＥＬＬＥＳＬＷＥＬＬＬＥＡ（ＪＴＳ−１）（配列番号１１）；ＧＬＦＫＡＬＬＫＬＬＫＳＬＷＫＬＬＬＫＡ（ｐｐＴＧ１）（配列番号１２）；ＧＬＦＲＡＬＬＲＬＬＲＳＬＷＲＬＬＬＲＡ（ｐｐＴＧ２０）（配列番号１３）；ＷＥＡＫＬＡＫＡＬＡＫＡＬＡＫＨＬＡＫＡＬＡＫＡＬＫＡＣＥＡ（ＫＡＬＡ）（配列番号１４）；ＧＬＦＦＥＡＩＡＥＦＩＥＧＧＷＥＧＬＩＥＧＣ（ＨＡ）（配列番号１５）；ＧＩＧＡＶＬＫＶＬＴＴＧＬＰＡＬＩＳＷＩＫＲＫＲＱＱ（Ｍｅｌｉｔｔｉｎ）（配列番号１６）；Ｈ５ＷＹＧ（配列番号１７）；及びＣＨＫ６ＨＣ（配列番号１８）。
【０２６１】
特定の理論に拘束されることは意図しないが、融合性脂質は、膜と融合し、その結果、膜を不安定化する。融合性脂質は、通常、小さい頭部基及び不飽和アシル鎖を有する。例示的な融合性脂質として、限定はしないが、１，２−ジレオイル−ｓｎ−３−ホスホエタノールアミン（ＤＯＰＥ）、ホスファチジルエタノールアミン（ＰＯＰＥ）、パルミトイルホスファチジルコリン（ＰＯＰＣ）、（６Ｚ、９Ｚ、２８Ｚ、３１Ｚ）−ヘプタトリアコンタ−６，９，２８，３１−テトラエン−１９−オール（Ｄｉ−Ｌｉｎ）、Ｎ−メチル（２，２−ジ（９Ｚ，１２Ｚ）−オクタデカ−９，１２−ジエニル）−１，３−ジオキソラン−４−イル）メタンアミン（ＤＬｉｎ−ｋ−ＤＭＡ）及びＮ−メチル−２−（２，２−ジ（（９Ｚ，１２Ｚ）−オクタデカ−９，１２−ジエニル）−１，３−ジオキソラン−４−イル）エタンアミン（本明細書では、ＸＴＣとも呼ばれる）が挙げられる。
【０２６２】
本発明に適したエンドソーム溶解活性を有する合成ポリマーは、米国特許出願公開第２００９／００４８４１０号明細書；同第２００９／００２３８９０号明細書；同第２００８／０２８７６３０号明細書；同第２００８／０２８７６２８号明細書；同第２００８／０２８１０４４号明細書；同第２００８／０２８１０４１号明細書；同第２００８／０２６９４５０号明細書；同第２００７／０１０５８０４号明細書；同第２００７００３６８６５号明細書；及び同第２００４／０１９８６８７号明細書に記載されており、これらの内容は、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。
【０２６３】
例示的な細胞透過性ペプチドとして、限定はしないが、以下のものが挙げられる：ＲＱＩＫＩＷＦＱＮＲＲＭＫＷＫＫ（ペネトラチン）（配列番号１９）；ＧＲＫＫＲＲＱＲＲＲＰＰＱＣ（Ｔａｔ断片４８〜６０）（配列番号２０）；ＧＡＬＦＬＧＷＬＧＡＡＧＳＴＭＧＡＷＳＱＰＫＫＫＲＫＶ（シグナル配列ベースのペプチド）（配列番号２１）；ＬＬＩＩＬＲＲＲＩＲＫＱＡＨＡＨＳＫ（ＰＶＥＣ）（配列番号２２）；ＧＷＴＬＮＳＡＧＹＬＬＫＩＮＬＫＡＬＡＡＬＡＫＫＩＬ（トランスポルタン）（配列番号２３）；ＫＬＡＬＫＬＡＬＫＡＬＫＡＡＬＫＬＡ（両親媒性モデルペプチド）（配列番号２４）；ＲＲＲＲＲＲＲＲＲ（Ａｒｇ９）（配列番号２５）；ＫＦＦＫＦＦＫＦＦＫ（細菌細胞透過性ペプチド）（配列番号２６）；ＬＬＧＤＦＦＲＫＳＫＥＫＩＧＫＥＦＫＲＩＶＱＲＩＫＤＦＬＲＮＬＶＰＲＴＥＳ（ＬＬ−３７）（配列番号２７）；ＳＷＬＳＫＴＡＫＫＬＥＮＳＡＫＫＲＩＳＥＧＩＡＩＡＩＱＧＧＰＲ（セクロピンＰ１）（配列番号２８）；ＡＣＹＣＲＩＰＡＣＩＡＧＥＲＲＹＧＴＣＩＹＱＧＲＬＷＡＦＣＣ（α−デフェンシン）（配列番号２９）；ＤＨＹＮＣＶＳＳＧＧＱＣＬＹＳＡＣＰＩＦＴＫＩＱＧＴＣＹＲＧＫＡＫＣＣＫ（β−デフェンシン）（配列番号３０）；ＲＲＲＰＲＰＰＹＬＰＲＰＲＰＰＰＦＦＰＰＲＬＰＰＲＩＰＰＧＦＰＰＲＦＰＰＲＦＰＧＫＲ−ＮＨ２（ＰＲ−３９）（配列番号３１）；ＩＬＰＷＫＷＰＷＷＰＷＲＲ−ＮＨ２（インドリシジン）（配列番３２）；ＡＡＶＡＬＬＰＡＶＬＬＡＬＬＡＰ（ＲＦＧＦ）（配列番号３３）；ＡＡＬＬＰＶＬＬＡＡＰ（ＲＦＧＦ類似体）（配列番号３４）；及びＲＫＣＲＩＶＶＩＲＶＣＲ（バクテネシン）（配列番号３５）。
【０２６４】
例示的なカチオン性基として、限定はしないが、例えば、Ｏ−ＡＭＩＮＥ（ＡＭＩＮＥ＝ＮＨ２；アルキルアミノ、ジアルキルアミノ、ヘテロシクリル、アリールアミノ、ジアリールアミノ、ヘテロアリールアミノ又はジヘテロアリールアミノ、エチレンジアミン、ポリアミノ）；アミノアルコキシ、例えばＯ（ＣＨ２）ｎＡＭＩＮＥ（例えば、ＡＭＩＮＥ＝ＮＨ２；アルキルアミノ、ジアルキルアミノ、ヘテロシクリル、アリールアミノ、ジアリールアミノ、ヘテロアリールアミノ又はジヘテロアリールアミノ、エチレンジアミン、ポリアミノ）；アミノ（例えば、ＮＨ２；アルキルアミノ、ジアルキルアミノ、ヘテロシクリル、アリールアミノ、ジアリールアミノ、ヘテロアリールアミノ、ジヘテロアリールアミノ又はアミノ酸）；並びにＮＨ（ＣＨ２ＣＨ２ＮＨ）ｎＣＨ２ＣＨ２−ＡＭＩＮＥ（ＡＭＩＮＥ＝ＮＨ２；アルキルアミノ、ジアルキルアミノ、ヘテロシクリル、アリールアミノ、ジアリールアミノ、ヘテロアリールアミノ又はジヘテロアリールアミノ）から得られる、プロトン化アミノ基が挙げられる。
【０２６５】
本明細書で使用されるとき、用語「ターゲティングリガンド」は、選択される標的、例えば細胞、細胞型、組織、臓器、身体の領域又はコンパートメント、例えば細胞、組織若しくは臓器コンパートメントに対し、増大した親和性を付与する任意の分子を指す。いくつかの例示的なターゲティングリガンドとして、限定はしないが、抗体、抗原、葉酸塩、受容体リガンド、炭水化物、アプタマー、インテグリン受容体リガンド、ケモカイン受容体リガンド、トランスフェリン、ビオチン、セロトニン受容体リガンド、ＰＳＭＡ、エンドテリン、ＧＣＰＩＩ、ソマトスタチン、ＬＤＬ及びＨＤＬリガンドが挙げられる。
【０２６６】
炭水化物ベースのターゲティングリガンドとして、限定はしないが、Ｄ−ガラクトース、多価ガラクトース、Ｎ−アセチル−Ｄ−ガラクトース（ＧａｌＮＡｃ）、多価ＧａｌＮＡｃ、例えばＧａｌＮＡｃ２及びＧａｌＮＡｃ３；Ｄ−マンノース、多価マンノース、多価ラクトース、Ｎ−アセチル−ガラクトサミン、Ｎ−アセチル−グルコサミン、多価フコース、グリコシル化ポリアミノ酸及びレクチンが挙げられる。多価という用語は、２つ以上の単糖単位が存在することを示す。このような単糖サブユニットは、グリコシド結合を介して互いに連結するか、又はスカフォールド分子に連結することができる。
【０２６７】
リガンドとして、本発明に適したいくつかの葉酸塩及び葉酸塩類似体が米国特許第２，８１６，１１０号明細書；同第５１４１０，１０４号明細書；同第５，５５２，５４５号明細書；同第６，３３５，４３４号明細書及び同第７，１２８，８９３号明細書に記載されており、これらの内容は、全体として参照により本明細書に組み込まれる。
【０２６８】
本明細書で使用されるとき、用語「ＰＫ調節リガンド」及び「ＰＫモジュレータ」は、本発明の組成物の薬剤動態を調節することができる分子を指す。いくつかの例示的なＰＫモジュレータとして、限定はしないが、親油性分子、胆汁酸、ステロール、リン脂質類似体、ペプチド、タンパク質結合剤、ビタミン、脂肪酸、フェノキサジン、アスピリン、ナプロキセン、イブプロフェン、スプロフェン、ケトプロフェン、（Ｓ）−（＋）−プラノプロフェン、カルプロフェン、ＰＥＧ、ビオチン及びトランスサイレチア−結合リガンド（例えば、テトライイドチロ酢酸、２，４，６−トリイドフェノール及びフルフェナム酸）が挙げられる。いくつかのホスホロチオエート糖間結合を含むオリゴマー化合物は、血清タンパク質と結合することも知られており、従って、短いオリゴマー化合物、例えば約５〜３０ヌクレオチド（例えば、５〜２５ヌクレオチド、好ましくは５〜２０ヌクレオチド、例えば５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９若しくは２０ヌクレオチド）を含み、骨格に複数のホスホロチオエート結合を含むオリゴヌクレオチドも、リガンド（例えば、ＰＫ調節リガンド）として本発明に適している。ＰＫ調節オリゴヌクレオチドは、少なくとも３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５又はそれを上回るホスホロチオエート及び／又はホスホロジチオエート結合を含む。一部の実施形態では、ＰＫ調節オリゴヌクレオチド中の全てのヌクレオチド間結合は、ホスホロチオエート及び／又はホスホロジチオエート結合である。さらに、血清成分に結合するアプタマー（例えば、血清タンパク質）も、ＰＫ調節リガンドとして、本発明に適している。血清成分（例えば、血清タンパク質）との結合は、Ｏｒａｖｃｏｖａ，ｅｔ  ａｌ．，Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ  Ｂ（１９９６），６７７：１−２７に記載されているものなどのアルブミン結合アッセイから予測することができる。
【０２６９】
２つ以上のリガンドが存在する場合、リガンドは、全て同じ特性を有し得、全てが異なる特性を有するか、又は一部のリガンドが同じ特性を有し、残りは異なる特性を有し得る。例えば、リガンドは、ターゲティング特性を有するか、エンドソーム溶解活性を有するか、又はＰＫ調節特性を有することができる。好ましい実施形態では、リガンドは、全て異なる特性を有する。
【０２７０】
一部の実施形態では、二本鎖オリゴマー化合物の一方の鎖のリガンドは、第２の鎖のリガンドに対して親和性を有する。一部の実施形態では、リガンドは、二本鎖オリゴマー化合物の両方の鎖に共有結合される。本明細書で使用される通り、リガンド、オリゴマー鎖より多くに連結されているとき、オリゴマー化合物の結合点は、リガンド自体の原子又はリガンド自体が結合されている担体分子の原子であり得る。
【０２７１】
リガンドは、様々な箇所、例えば３’−末端、５’−末端及び／又は内部位置で、オリゴマー化合物に結合することができる。２つ以上のリガンドが存在する場合、リガンドは、オリゴマー化合物の両側の末端にあり得る。好ましい実施形態では、リガンドは、介在テザー／リンカーを介してオリゴマー化合物に結合している。リガンド又は係留されたリガンドは、モノマーが成長鎖に組み込まれている場合、このモノマー上に存在し得る。一部の実施形態では、リガンドは、「前駆体」モノマーを成長鎖に組み込んだ後、カップリングによってこの「前駆体」モノマーに組み込むこともできる。例えば、アミノ末端テザー（すなわちリガンドが結合していない）モノマー、例えばモノマー−リンカー−ＮＨ２は、成長オリゴマー化合物鎖に組み込むことができる。次の操作で、すなわち鎖への前駆体モノマーの組み込み後、求電子基を有するリガンド、例えばペンタフルオロフェニルエステル又はアルデヒド基を有するリガンドを、リガンドの求電子基と前駆体モノマーの末端求電子基とのカップリングにより、前駆体モノマーのテザーに結合することができる。
【０２７２】
別の例では、クリックケミストリー反応に参加するのに好適な化学基を有するリガンド、例えばアジ化物又はアルキン末端テザー／リンカーを組み込むことができる。次の操作で、すなわち鎖への前駆体モノマーの組み込み後、相補的化学基を有するリガンド、例えばアルキン又はアジ化物を、アルキン及びアジ化物とのカップリングにより、前駆体モノマーに結合することができる。
【０２７３】
二本鎖オリゴマー化合物の場合、リガンドを一方又は両方の鎖に結合することができる。一部の実施形態では、ｓｉＲＮＡは、センス鎖に共役したリガンドを含む。別の実施形態では、ｓｉＲＮＡは、アンチセンス鎖に共役したリガンドを含む。
【０２７４】
一部の実施形態では、リガンドは、オリゴマー化合物の核酸塩基、糖部分又はヌクレオシド間結合に共役することができる。プリン核酸塩基又はその誘導体への共役は、環内及び環外原子などの任意の位置で実施し得る。一部の実施形態では、プリン核酸塩基の２−、６−、７−又は８位をコンジュゲート部分に結合する。ピリミジン核酸塩基又はその誘導体への共役も任意の位置で実施し得る。一部の実施形態では、ピリミジン核酸塩基の２−、５−及び６位をコンジュゲート部分で置換することができる。リガンドを核酸塩基に共役させる場合、好ましい位置は、ハイブリダイゼーションを妨害しない、すなわち塩基対合に必要な水素結合相互作用を妨害しない位置である。
【０２７５】
ヌクレオシドの糖部分への共役は、任意の炭素原子で実施し得る。コンジュゲート部分に結合することができる糖部分の例示的な炭素原子として、２’、３’及び５’炭素原子がある。また、１’位も、コンジュゲート部分、例えば脱塩基残基に結合することができる。ヌクレオシド間結合は、コンジュゲート部分を担持することもできる。リン含有結合（例えば、リン酸ジエステル、ホスホロチオエート、ホスホロジチオエート、ホスホロアミダイトなど）の場合、コンジュゲート部分を、リン原子に直接又はリン原子に結合したＯ、Ｎ若しくはＳ原子に結合することができる。アミン−又はアミド含有ヌクレオシド間結合（例えば、ＰＮＡ）の場合、コンジュゲート部分を、アミン若しくはアミドの窒素原子又は隣接する炭素原子に結合することができる。
【０２７６】
本発明者らは、中でも、リガンドと共役した調整性ＲＥＶＥＲＳＩＲ化合物が、ｓｉＲＮＡの活性を低減する上で特に有効であることを見出した。特定の理論に拘束されることは意図しないが、リガンドは、調整性ＲＥＶＥＲＳＩＲ化合物を所望の作用位置に送達することにより、調整性ＲＥＶＥＲＳＩＲ化合物の能力を増加若しくは増強することができる。従って、一部の実施形態では、調整性ＲＥＶＥＲＳＩＲ化合物をリガンドと共役させる。
【０２７７】
調整性ＲＥＶＥＲＳＩＲ化合物と共役したリガンドは、所望の作用位置への調整性ＲＥＶＥＲＳＩＲ化合物の送達には有用であるが、ｓｉＲＮＡ活性を低減する調整性ＲＥＶＥＲＳＩＲ化合物の能力にマイナスの影響を及ぼし得る。従って、一部の実施形態では、リガンドと調整性ＲＥＶＥＲＳＩＲ化合物との連結は、調整性ＲＥＶＥＲＳＩＲ化合物が所望の作用位置に到達した後、切断を受けるように設計することができる。これは、いくつかの方法で達成することができる。例えば、調整性ＲＥＶＥＲＳＩＲ化合物をリガンドに連結するリンカーは、切断可能なリンカーであり得る。
【０２７８】
本発明者らはさらに、リガンドと連結した調整性ＲＥＶＥＲＳＩＲ化合物中のヌクレオチドが、ｓｉＲＮＡの活性を低減する調整性ＲＥＶＥＲＳＩＲ化合物の能力に影響を及ぼし得ることも見出した。本発明者らは、デオキシ糖（例えば、２’−デオキシリボース）を含む、リガンド共役ヌクレオチドが、ｓｉＲＮＡ活性を低減する調整性ＲＥＶＥＲＳＩＲ化合物の能力を増強する上で特に有効であることを見出した。従って、一部の実施形態では、リガンドと共役したヌクレオチドは、デオキシ糖、例えば２’−デオキシ糖を含む。
【０２７９】
本明細書に開示する様々な態様の一部の実施形態では、リガンドは、調整性ＲＥＶＥＲＳＩＲ化合物の３’末端のヌクレオチドに結合させる。本発明者らは、中でも、リガンド共役ヌクレオチドと残りの調整性ＲＥＶＥＲＳＩＲ化合物とのヌクレオチド間結合も、ｓｉＲＮＡ活性を低減する調整性ＲＥＶＥＲＳＩＲ化合物の能力に影響を及ぼし得ることを見出した。特定の理論に拘束されることは意図しないが、容易に切断可能なヌクレオチド間結合は、ｓｉＲＮＡ活性を低減する調整性ＲＥＶＥＲＳＩＲ化合物の能力を増強する上で特に有効であることが判明している。従って、一部の実施形態では、リガンド共役ヌクレオチドを、切断可能なヌクレオチド間結合を介して、残りの調整性ＲＥＶＥＲＳＩＲ化合物に結合させる。一部の実施形態では、切断可能なヌクレオチド間結合は、リン酸ジエステルヌクレオチド間結合である。
【０２８０】
一部実施形態では、リガンド共役ヌクレオチドは、デオキシ糖を含み、これを、切断可能なヌクレオチド間結合を介して残りの調整性ＲＥＶＥＲＳＩＲ化合物に連結させる。これの、一部の別の実施形態では、この切断可能なヌクレオチド間結合は、リン酸ジエステルヌクレオチド間結合である。
【０２８１】
一部の実施形態では、リガンド共役ヌクレオチドは、デオキシ糖を含み、これを、リン酸ジエステル結合ではないヌクレオチド間結合を介して残りの調整性ＲＥＶＥＲＳＩＲ化合物に連結させる。
【０２８２】
一部の実施形態では、リガンドは、調整性ＲＥＶＥＲＳＩＲ化合物の３’末端のヌクレオチドに共役させる。
【０２８３】
一部の実施形態では、リガンドは、調整性ＲＥＶＥＲＳＩＲ化合物の５’末端に共役させる。一部の実施形態では、第１のリガンドを調整性ＲＥＶＥＲＳＩＲ化合物の５’末端に共役させ、第２のリガンドを第１のリガンドに共役させる。
【０２８４】
オリゴマー化合物のコンジュゲートを調製する多く方法がある。一般に、オリゴマー化合物の反応性基（例えば、ＯＨ、ＳＨ、アミン、カルボキシル、アルデヒドなど）をコンジュゲート部分の反応性基と接触させることにより、オリゴマー化合物をコンジュゲート部分に結合する。一部の実施形態では、一方の反応性基は求電子性で、他方は求核性である。
【０２８５】
例えば、求電子基は、カルボニル含有官能基であり得、求核基は、アミン又はチオールであり得る。結合基を用いるか又は用いない核酸及び関連オリゴマー化合物の共役方法は、例えばＭａｎｏｈａｒａｎ  ｉｎ  Ａｎｔｉｓｅｎｓｅ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  ａｎｄ  Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ，Ｃｒｏｏｋｅ  ａｎｄ  ＬｅＢｌｅｕ，ｅｄｓ．，ＣＲＣ  Ｐｒｅｓｓ，Ｂｏｃａ  Ｒａｔｏｎ，Ｆｌａ．，１９９３，Ｃｈａｐｔｅｒ  １７（これは、その全体が参照により本明細書に組み込まれる）などの文献に十分に記載されている。
【０２８６】
オリゴマー化合物、例えばオリゴヌクレオチドのコンジュゲートの調製を教示する代表的な米国特許として、限定はしないが、米国特許第４，８２８，９７９号明細書；同第４，９４８，８８２号明細書；同第５，２１８，１０５号明細書；同第５，５２５，４６５号明細書；同第５，５４１，３１３号明細書；同第５，５４５，７３０号明細書；同第５，５５２，５３８号明細書；同第５，５７８，７１７号明細書、同第５，５８０，７３１号明細書；同第５，５８０，７３１号明細書；同第５，５９１，５８４号明細書；同第５，１０９，１２４号明細書；同第５，１１８，８０２号明細書；同第５，１３８，０４５号明細書；同第５，４１４，０７７号明細書；同第５，４８６，６０３号明細書；同第５，５１２，４３９号明細書；同第５，５７８，７１８号明細書；同第５，６０８，０４６号明細書；同第４，５８７，０４４号明細書；同第４，６０５，７３５号明細書；同第４，６６７，０２５号明細書；同第４，７６２，７７９号明細書；同第４，７８９，７３７号明細書；同第４，８２４，９４１号明細書；同第４，８３５，２６３号明細書；同第４，８７６，３３５号明細書；同第４，９０４，５８２号明細書；同第４，９５８，０１３号明細書；同第５，０８２，８３０号明細書；同第５，１１２，９６３号明細書；同第５，２１４，１３６号明細書；同第５，０８２，８３０号明細書；同第５，１１２，９６３号明細書；同第５，１４９，７８２号明細書；同第５，２１４，１３６号明細書；同第５，２４５，０２２号明細書；同第５，２５４，４６９号明細書；同第５，２５８，５０６号明細書；同第５，２６２，５３６号明細書；同第５，２７２，２５０号明細書；同第５，２９２，８７３号明細書；同第５，３１７，０９８号明細書；同第５，３７１，２４１号明細書、同第５，３９１，７２３号明細書；同第５，４１６，２０３号明細書、同第５，４５１，４６３号明細書；同第５，５１０，４７５号明細書；同第５，５１２，６６７号明細書；同第５，５１４，７８５号明細書；同第５，５６５，５５２号明細書；同第５，５６７，８１０号明細書；同第５，５７４，１４２号明細書；同第５，５８５，４８１号明細書；同第５，５８７，３７１号明細書；同第５，５９５，７２６号明細書；同第５，５９７，６９６号明細書；同第５，５９９，９２３号明細書；同第５，５９９，９２８号明細書；同第５，６７２，６６２号明細書；同第５，６８８，９４１号明細書；同第５，７１４，１６６号明細書；同第６，１５３，７３７号明細書；同第６，１７２，２０８号明細書；同第６，３００，３１９号明細書；同第６，３３５，４３４号明細書；同第６，３３５，４３７号明細書；同第６，３９５，４３７号明細書；同第６，４４４，８０６号明細書；同第６，４８６，３０８号明細書；同第６，５２５，０３１号明細書；同第６，５２８，６３１号明細書；同第６，５５９，２７９号明細書が挙げられ、これらの内容は、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。
【０２８７】
いくつかの実施形態では、限定はしないが、調整性ＲＥＶＥＲＳＩＲ化合物及びｓｉＲＮＡなどの本明細書に記載するオリゴマー化合物は、
【化２４】
2020531450.tif 000027
に示す構造を有するリガンドを含み、
ここで、
ＬＧは、それぞれの存在について独立に、リガンド、例えば炭水化物、例えば単糖、二糖、三糖、四糖、多糖であり；
Ｚ’、Ｚ’’、Ｚ’’’及びＺ’’’’は、それぞれの存在について各々独立に、Ｏ又はＳである。
【０２８８】
いくつかの実施形態では、限定はしないが、調整性ＲＥＶＥＲＳＩＲ化合物及びｓｉＲＮＡなどの本明細書に記載するオリゴマー化合物は、式（ＩＩ）、（ＩＩＩ），（ＩＶ）又は（Ｖ）：
【化２５】
2020531450.tif 000028
に示す構造を有するリガンドを含み、
ここで、
ｑ２Ａ、ｑ２Ｂ、ｑ３Ａ、ｑ３Ｂ、ｑ４Ａ、ｑ４Ｂ、ｑ５Ａ、ｑ５Ｂ及びｑ５Ｃは、それぞれの存在について独立に、０〜２０であり、反復単位は、同じであるか又は異なり得；
Ｑ及びＱ’は、それぞれの存在について独立に、非存在、−（ｐ７−Ｑ７−Ｒ７）ｐ−Ｔ７−又は−Ｔ７−Ｑ７−Ｔ７’−Ｂ−Ｔ８’−Ｑ８−Ｔ８であり；
Ｐ２Ａ、Ｐ２Ｂ、Ｐ３Ａ、Ｐ３Ｂ、Ｐ４Ａ、Ｐ４Ｂ、Ｐ５Ａ、Ｐ５Ｂ、Ｐ５Ｃ、Ｐ７、Ｔ２Ａ、Ｔ２Ｂ、Ｔ３Ａ、Ｔ３Ｂ、Ｔ４Ａ、Ｔ４Ｂ、Ｔ４Ａ、Ｔ５Ｂ、Ｔ５Ｃ、Ｔ７、Ｔ７’、Ｔ８及びＴ８’は、それぞれの存在について各々独立に、ＣＯ、ＮＨ、Ｏ、Ｓ、ＯＣ（Ｏ）、ＮＨＣ（Ｏ）、ＣＨ２、ＣＨ２ＮＨ又はＣＨ２Ｏであり；
Ｂは、−ＣＨ２−Ｎ（ＢＬ）−ＣＨ２−であり；
ＢＬは、−ＴＢ−ＱＢ−ＴＢ’−Ｒｘであり；
Ｑ２Ａ、Ｑ２Ｂ、Ｑ３Ａ、Ｑ３Ｂ、Ｑ４Ａ、Ｑ４Ｂ、Ｑ５Ａ、Ｑ５Ｂ、Ｑ５Ｃ、Ｑ７、Ｑ８及びＱＢは、それぞれの存在について独立に、非存在、アルキレン、置換されたアルキレンであり、１つ又は複数のメチレンは、Ｏ、Ｓ、Ｓ（Ｏ）、ＳＯ２、Ｎ（ＲＮ）、Ｃ（Ｒ’）＝Ｃ（Ｒ’）、Ｃ≡Ｃ又はＣ（Ｏ）の１つ又は複数によって分断若しくは終結することができ；
ＴＢ及びＴＢ’は、それぞれの存在について各々独立に、非存在、ＣＯ、ＮＨ、Ｏ、Ｓ、ＯＣ（Ｏ）、ＯＣ（Ｏ）Ｏ、ＮＨＣ（Ｏ）、ＮＨＣ（Ｏ）、ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ、ＮＨＣ（Ｏ）Ｏ、ＣＨ２、ＣＨ２ＮＨ又はＣＨ２Ｏであり；
ＲＸは、親油性物質（例えば、コレステロール、コール酸、アダマンタン酢酸、１−ピレン酪酸、ジヒドロテストロン、１，３−ビス−Ｏ（ヘキサデシル）グリセロール、ゲラニルオキシヘキシル基、ヘキサデシルグリセロール、ボルネオール、メントール、１，３−プロパノールジオール、ヘプタデシル基、パルミチン酸、ミリスチン酸、Ｏ３−（オレオイル）リトコール酸、Ｏ３−（オレオイル）コレン酸、ジメトキシトリチル又はフェノキサジン）、ビタミン（例えば、葉酸塩、ビタミンＡ、ビタミンＥ、ビオチン、ピリドキサール）、ペプチド、炭水化物（例えば、単糖、二糖、三糖、四糖、オリゴ糖、多糖）、エンドソーム性成分、ステロイド（例えば、ウバオール、ヘシゲニン、ジオスゲニン）、テルペン（例えば、トリテルペン、例えばサルササポゲニン、フリーデリン、エピフリーデラノール誘導体化リトコール酸）又はカチオン性脂質であり；
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ２Ａ、Ｒ２Ｂ、Ｒ３Ａ、Ｒ３Ｂ、Ｒ４Ａ、Ｒ４Ｂ、Ｒ５Ａ、Ｒ５Ｂ、Ｒ５Ｃ、Ｒ７は、それぞれの存在について各々独立に、非存在、ＮＨ、Ｏ、Ｓ、ＣＨ２、Ｃ（Ｏ）Ｏ、Ｃ（Ｏ）ＮＨ、ＮＨＣＨ（Ｒａ）Ｃ（Ｏ）、−Ｃ（Ｏ）−ＣＨ（Ｒａ）−、ＮＨ−、ＣＯ、ＣＨ＝Ｎ−Ｏ、
【化２６】
2020531450.tif 000029
又はヘテロシクリルであり；
Ｌ１、Ｌ２Ａ、Ｌ２Ｂ、Ｌ３Ａ、Ｌ３Ｂ、Ｌ４Ａ、Ｌ４Ｂ、Ｌ５Ａ、Ｌ５Ｂ及びＬ５Ｃは、それぞれの存在について各々独立に、炭水化物、例えば単糖、二糖、三糖、四糖、オリゴ糖及び多糖であり；
Ｒ’及びＲ’’は、各々独立に、Ｈ、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、ＯＨ、ＳＨ又はＮ（ＲＮ）２であり；
ＲＮは、各々独立に、Ｈ、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ブチル又はベンジルであり；
Ｒａは、Ｈ又はアミノ酸側鎖であり；
Ｚ’、Ｚ’’、Ｚ’’’及びＺ’’’’は、それぞれの存在について各々独立に、Ｏ又はＳであり；
ｐは、それぞれの存在について各々独立に、０〜２０である。
【０２８９】
いくつかの実施形態では、限定はしないが、調整性ＲＥＶＥＲＳＩＲ化合物及びｓｉＲＮＡなどの本明細書に記載するオリゴマー化合物は、構造：
【化２７】
2020531450.tif 000030
のリガンドを含む。
【０２９０】
いくつかの実施形態では、限定はしないが、調整性ＲＥＶＥＲＳＩＲ化合物及びｓｉＲＮＡなどの本明細書に記載するオリゴマー化合物は、構造：
【化２８】
2020531450.tif 000031
のリガンドを含む。
【０２９１】
いくつかの実施形態では、限定はしないが、調整性ＲＥＶＥＲＳＩＲ化合物及びｓｉＲＮＡなどの本明細書に記載するオリゴマー化合物は、構造：
【化２９】
2020531450.tif 000032
のリガンドを含む。
【０２９２】
いくつかの実施形態では、限定はしないが、調整性ＲＥＶＥＲＳＩＲ化合物及びｓｉＲＮＡなどの本明細書に記載するオリゴマー化合物は、構造：
【化３０】
2020531450.tif 000033
のリガンドを含む。
【０２９３】
いくつかの実施形態では、限定はしないが、調整性ＲＥＶＥＲＳＩＲ化合物及びｓｉＲＮＡなどの本明細書に記載するオリゴマー化合物は、構造：
【化３１】
2020531450.tif 000034
のリガンドを含む。
【０２９４】
いくつかの実施形態では、限定はしないが、調整性ＲＥＶＥＲＳＩＲ化合物及びｓｉＲＮＡなどの本明細書に記載するオリゴマー化合物は、構造：
【化３２】
2020531450.tif 000035
のリガンドを含む。
【０２９５】
いくつかの実施形態では、限定はしないが、調整性ＲＥＶＥＲＳＩＲ化合物及びｓｉＲＮＡなどの本明細書に記載するオリゴマー化合物は、構造：
【化３３】
2020531450.tif 000036
のリガンドを含む。
【０２９６】
いくつかの実施形態では、限定はしないが、調整性ＲＥＶＥＲＳＩＲ化合物及びｓｉＲＮＡなどの本明細書に記載するオリゴマー化合物は、構造：
【化３４】
2020531450.tif 000037
のリガンドを含む。
【０２９７】
いくつかの実施形態では、限定はしないが、調整性ＲＥＶＥＲＳＩＲ化合物及びｓｉＲＮＡなどの本明細書に記載するオリゴマー化合物は、構造：
【化３５】
2020531450.tif 000038
のリガンドを含む。
【０２９８】
いくつかの実施形態では、限定はしないが、調整性ＲＥＶＥＲＳＩＲ化合物及びｓｉＲＮＡなどの本明細書に記載するオリゴマー化合物は、構造：
【化３６】
2020531450.tif 000039
のリガンドを含む。
【０２９９】
いくつかの実施形態では、限定はしないが、調整性ＲＥＶＥＲＳＩＲ化合物及びｓｉＲＮＡなどの本明細書に記載するオリゴマー化合物は、構造：
【化３７】
2020531450.tif 000040
のリガンドを含む。
【０３００】
いくつかの実施形態では、限定はしないが、調整性ＲＥＶＥＲＳＩＲ化合物及びｓｉＲＮＡなどの本明細書に記載するオリゴマー化合物は、構造：
【化３８】
2020531450.tif 000041
のモノマーを含む。
【０３０１】
いくつかの実施形態では、限定はしないが、調整性ＲＥＶＥＲＳＩＲ化合物及びｓｉＲＮＡなどの本明細書に記載するオリゴマー化合物は、構造：
【化３９】
2020531450.tif 000042
のリガンドを含む。
【０３０２】
いくつかの実施形態では、限定はしないが、調整性ＲＥＶＥＲＳＩＲ化合物及びｓｉＲＮＡなどの本明細書に記載するオリゴマー化合物は、構造：
【化４０】
2020531450.tif 000043
のモノマーを含む。
【０３０３】
いくつかの実施形態では、限定はしないが、調整性ＲＥＶＥＲＳＩＲ化合物及びｓｉＲＮＡなどの本明細書に記載するオリゴマー化合物は、構造：
【化４１】
2020531450.tif 000044
のモノマーを含む。
【０３０４】
いくつかの実施形態では、限定はしないが、調整性ＲＥＶＥＲＳＩＲ化合物及びｓｉＲＮＡなどの本明細書に記載するオリゴマー化合物は、構造：
【化４２】
2020531450.tif 000045
のモノマーを含む。
【０３０５】
いくつかの実施形態では、限定はしないが、調整性ＲＥＶＥＲＳＩＲ化合物及びｓｉＲＮＡなどの本明細書に記載するオリゴマー化合物は、構造：
【化４３】
2020531450.tif 000046
のモノマーを含む。
【０３０６】
いくつかの実施形態では、限定はしないが、調整性ＲＥＶＥＲＳＩＲ化合物及びｓｉＲＮＡなどの本明細書に記載するオリゴマー化合物は、構造：
【化４４】
2020531450.tif 000047
のモノマーを含む。
【０３０７】
いくつかの実施形態では、限定はしないが、調整性ＲＥＶＥＲＳＩＲ化合物及びｓｉＲＮＡなどの本明細書に記載するオリゴマー化合物は、構造：
【化４５】
2020531450.tif 000048
のモノマーを含む。
【０３０８】
いくつかの実施形態では、限定はしないが、調整性ＲＥＶＥＲＳＩＲ化合物及びｓｉＲＮＡなどの本明細書に記載するオリゴマー化合物は、構造：
【化４６】
2020531450.tif 000049
のリガンドを含む。
【０３０９】
いくつかの実施形態では、限定はしないが、調整性ＲＥＶＥＲＳＩＲ化合物及びｓｉＲＮＡなどの本明細書に記載するオリゴマー化合物は、構造：
【化４７】
2020531450.tif 000050
のリガンドを含む。
【０３１０】
いくつかの実施形態では、限定はしないが、調整性ＲＥＶＥＲＳＩＲ化合物及びｓｉＲＮＡなどの本明細書に記載するオリゴマー化合物は、構造：
【化４８】
2020531450.tif 000051
のリガンドを含む。
【０３１１】
いくつかの実施形態では、限定はしないが、調整性ＲＥＶＥＲＳＩＲ化合物及びｓｉＲＮＡなどの本明細書に記載するオリゴマー化合物は、構造：
【化４９】
2020531450.tif 000052
のリガンドを含む。
【０３１２】
いくつかの実施形態では、限定はしないが、調整性ＲＥＶＥＲＳＩＲ化合物及びｓｉＲＮＡなどの本明細書に記載するオリゴマー化合物は、構造：
【化５０】
2020531450.tif 000053
のリガンドを含む。
【０３１３】
いくつかの実施形態では、限定はしないが、調整性ＲＥＶＥＲＳＩＲ化合物及びｓｉＲＮＡなどの本明細書に記載するオリゴマー化合物は、構造：
【化５１】
2020531450.tif 000054
のリガンドを含む。
【０３１４】
いくつかの実施形態では、限定はしないが、調整性ＲＥＶＥＲＳＩＲ化合物及びｓｉＲＮＡなどの本明細書に記載するオリゴマー化合物は、構造：
【化５２】
2020531450.tif 000055
のリガンドを含む。
【０３１５】
いくつかの実施形態では、限定はしないが、調整性ＲＥＶＥＲＳＩＲ化合物及びｓｉＲＮＡなどの本明細書に記載するオリゴマー化合物は、構造：
【化５３】
2020531450.tif 000056
のリガンドを含む。
【０３１６】
いくつかの実施形態では、限定はしないが、調整性ＲＥＶＥＲＳＩＲ化合物及びｓｉＲＮＡなどの本明細書に記載するオリゴマー化合物は、構造：
【化５４】
2020531450.tif 000057
のリガンドを含む。
【０３１７】
いくつかの実施形態では、限定はしないが、調整性ＲＥＶＥＲＳＩＲ化合物及びｓｉＲＮＡなどの本明細書に記載するオリゴマー化合物は、構造：
【化５５】
2020531450.tif 000058
のモノマーを含む。
【０３１８】
いくつかの実施形態では、限定はしないが、調整性ＲＥＶＥＲＳＩＲ化合物及びｓｉＲＮＡなどの本明細書に記載するオリゴマー化合物は、構造：
【化５６】
2020531450.tif 000059
のモノマーを含む。
【０３１９】
いくつかの実施形態では、限定はしないが、調整性ＲＥＶＥＲＳＩＲ化合物及びｓｉＲＮＡなどの本明細書に記載するオリゴマー化合物は、構造：
【化５７】
2020531450.tif 000060
のモノマーを含む。
【０３２０】
いくつかの実施形態では、限定はしないが、調整性ＲＥＶＥＲＳＩＲ化合物及びｓｉＲＮＡなどの本明細書に記載するオリゴマー化合物は、構造：
【化５８】
2020531450.tif 000061
のモノマーを含む。
【０３２１】
いくつかの実施形態では、限定はしないが、調整性ＲＥＶＥＲＳＩＲ化合物及びｓｉＲＮＡなどの本明細書に記載するオリゴマー化合物は、構造：
【化５９】
2020531450.tif 000062
のモノマーを含む。
【０３２２】
いくつかの実施形態では、限定はしないが、調整性ＲＥＶＥＲＳＩＲ化合物及びｓｉＲＮＡなどの本明細書に記載するオリゴマー化合物は、構造：
【化６０】
2020531450.tif 000063
のモノマーを含む。
【０３２３】
一部の実施形態では、Ｌ２Ａ及びＬ２Ｂは、いずれも異なる。
【０３２４】
一部の実施形態では、Ｌ３Ａ及びＬ３Ｂは、いずれも同じである。
【０３２５】
一部の実施形態では、Ｌ３Ａ及びＬ３Ｂは、いずれも異なる。
【０３２６】
一部の実施形態では、Ｌ４Ａ及びＬ４Ｂは、いずれも同じである。
【０３２７】
一部の実施形態では、Ｌ４Ａ及びＬ４Ｂは、いずれも異なる。
【０３２８】
一部の好ましい実施形態では、Ｌ５Ａ、Ｌ５Ｂ及びＬ５Ｃは、全て同じである。
【０３２９】
一部の実施形態では、Ｌ５Ａ、Ｌ５Ｂ及びＬ５Ｃの２つは、同じである。
【０３３０】
一部の実施形態では、Ｌ５Ａ及びＬ５Ｂは、同じである。
【０３３１】
一部の実施形態では、Ｌ５Ａ及びＬ５Ｃは、同じである。
【０３３２】
一部の実施形態では、Ｌ５Ｂ及びＬ５Ｃは、同じである。
【０３３３】
いくつかの実施形態では、限定はしないが、調整性ＲＥＶＥＲＳＩＲ化合物及びｓｉＲＮＡなどの本明細書に記載するオリゴマー化合物は、構造：
【化６１】
2020531450.tif 000064
のモノマーを含む。
【０３３４】
いくつかの実施形態では、限定はしないが、調整性ＲＥＶＥＲＳＩＲ化合物及びｓｉＲＮＡなどの本明細書に記載するオリゴマー化合物は、構造：
【化６２】
2020531450.tif 000065
のモノマーを含む。
【０３３５】
いくつかの実施形態では、限定はしないが、調整性ＲＥＶＥＲＳＩＲ化合物及びｓｉＲＮＡなどの本明細書に記載するオリゴマー化合物は、構造：
【化６３】
2020531450.tif 000066
のモノマーを含む。
【０３３６】
いくつかの実施形態では、限定はしないが、調整性ＲＥＶＥＲＳＩＲ化合物及びｓｉＲＮＡなどの本明細書に記載するオリゴマー化合物は、構造：
【化６４】
2020531450.tif 000067
のモノマーを含み、ここで、Ｙは、Ｏ又はＳであり、ｎは、３〜６である。
【０３３７】
いくつかの実施形態では、限定はしないが、調整性ＲＥＶＥＲＳＩＲ化合物及びｓｉＲＮＡなどの本明細書に記載するオリゴマー化合物は、構造：
【化６５】
2020531450.tif 000068
のモノマーを含み、ここで、Ｙは、Ｏ又はＳであり、ｎは、３〜６である。
【０３３８】
いくつかの実施形態では、限定はしないが、調整性ＲＥＶＥＲＳＩＲ化合物及びｓｉＲＮＡなどの本明細書に記載するオリゴマー化合物は、構造：
【化６６】
2020531450.tif 000069
のモノマーを含む。
【０３３９】
いくつかの実施形態では、限定はしないが、調整性ＲＥＶＥＲＳＩＲ化合物及びｓｉＲＮＡなどの本明細書に記載するオリゴマー化合物は、構造：
【化６７】
2020531450.tif 000070
のモノマーを含み、ここで、Ｘは、Ｏ又はＳである。
【０３４０】
いくつかの実施形態では、限定はしないが、調整性ＲＥＶＥＲＳＩＲ化合物及びｓｉＲＮＡなどの本明細書に記載するオリゴマー化合物は、
【化６８】
2020531450.tif 000071
【化６９】
2020531450.tif 000072
からなる群から選択されるモノマーを含む。
【０３４１】
いくつかの実施形態では、限定はしないが、調整性ＲＥＶＥＲＳＩＲ化合物及びｓｉＲＮＡなどの本明細書に記載するオリゴマー化合物は、構造：
【化７０】
2020531450.tif 000073
のモノマーを含み、ここで、Ｒは、ＯＨ又はＮＨＣＯＯＨである。
【０３４２】
いくつかの実施形態では、限定はしないが、調整性ＲＥＶＥＲＳＩＲ化合物及びｓｉＲＮＡなどの本明細書に記載するオリゴマー化合物は、構造：
【化７１】
2020531450.tif 000074
のモノマーを含み、ここで、Ｒは、ＯＨ又はＮＨＣＯＯＨである。
【０３４３】
いくつかの実施形態では、限定はしないが、調整性ＲＥＶＥＲＳＩＲ化合物及びｓｉＲＮＡなどの本明細書に記載するオリゴマー化合物は、構造：
【化７２】
2020531450.tif 000075
のモノマーを含み、ここで、Ｒは、Ｏ又はＳである。
【０３４４】
いくつかの実施形態では、限定はしないが、調整性ＲＥＶＥＲＳＩＲ化合物及びｓｉＲＮＡなどの本明細書に記載するオリゴマー化合物は、構造：
【化７３】
2020531450.tif 000076
のモノマーを含み、ここで、Ｒは、ＯＨ又はＮＨＣＯＯＨである。
【０３４５】
いくつかの実施形態では、限定はしないが、調整性ＲＥＶＥＲＳＩＲ化合物及びｓｉＲＮＡなどの本明細書に記載するオリゴマー化合物は、構造：
【化７４】
2020531450.tif 000077
のモノマーを含む。
【０３４６】
いくつかの実施形態では、限定はしないが、調整性ＲＥＶＥＲＳＩＲ化合物及びｓｉＲＮＡなどの本明細書に記載するオリゴマー化合物は、構造：
【化７５】
2020531450.tif 000078
のモノマーを含み、ここで、Ｒは、ＯＨ又はＮＨＣＯＯＨである。
【０３４７】
いくつかの実施形態では、限定はしないが、調整性ＲＥＶＥＲＳＩＲ化合物及びｓｉＲＮＡなどの本明細書に記載するオリゴマー化合物は、構造：
【化７６】
2020531450.tif 000079
のモノマーを含み、ここで、Ｒは、ＯＨ又はＮＨＣＯＯＨである。
【０３４８】
いくつかの実施形態では、限定はしないが、調整性ＲＥＶＥＲＳＩＲ化合物及びｓｉＲＮＡなどの本明細書に記載するオリゴマー化合物は、構造：
【化７７】
2020531450.tif 000080
のモノマーを含み、ここで、Ｒは、ＯＨ又はＮＨＣＯＯＨである。
【０３４９】
いくつかの実施形態では、限定はしないが、調整性ＲＥＶＥＲＳＩＲ化合物及びｓｉＲＮＡなどの本明細書に記載するオリゴマー化合物は、構造：
【化７８】
2020531450.tif 000081
のモノマーを含み、ここで、Ｒは、ＯＨ又はＮＨＣＯＯＨである。
【０３５０】
いくつかの実施形態では、限定はしないが、調整性ＲＥＶＥＲＳＩＲ化合物及びｓｉＲＮＡなどの本明細書に記載するオリゴマー化合物は、構造：
【化７９】
2020531450.tif 000082
のモノマーを含む。
【０３５１】
前述したモノマーにおいて、Ｘ及びＹは、それぞれの存在について各々独立に、Ｈ、保護基、リン酸基、リン酸ジエステル基、活性化リン酸基、活性化亜リン酸基、ホスホロアミダイト、固定支持体、−Ｐ（Ｚ’）（Ｚ’’）Ｏ−ヌクレオチド、−Ｐ（Ｚ’）（Ｚ’’）Ｏ−ヌクレオチド、脂質、ＰＥＧ、ステロイド、ポリマー、ヌクレオチド、ヌクレオチド又はオリゴヌクレオチド；Ｚ’及びＺ’’は、それぞれの存在について各々独立に、Ｏ又はＳである。
【０３５２】
いくつかの実施形態では、調整性ＲＥＶＥＲＳＩＲ化合物は、構造：
【化８０】
2020531450.tif 000083
のリガンドと共役される。
【０３５３】
いくつかの実施形態では、共役ｓｉＲＮＡは、構造：
【化８１】
2020531450.tif 000084
のリガンドを有する。
【０３５４】
いくつかの実施形態では、調整性ＲＥＶＥＲＳＩＲ化合物は、構造：
【化８２】
2020531450.tif 000085
のリガンドと共役され、ここで、各ｎは、独立に、１〜２０である。
【０３５５】
一例では、調整性ＲＥＶＥＲＳＩＲ化合物は、構造：
【化８３】
2020531450.tif 000086
のリガンドと共役される。
【０３５６】
前述したリガンド及びモノマーの合成は、例えば、米国特許第８，１０６，０２２号明細書（その内容は、全体として参照により本明細書に組み込まれる）に記載されている。
【０３５７】
当技術分野で公知のものなどの結合基又は二官能価結合部分は、本発明で提供する化合物に適している。結合基は、例えば、オリゴマー化合物などの親化合物中の選択性部位に対する、化学官能基、コンジュゲート基、リポータ基及び他の基の結合に有用である。一般に、二官能価結合部分は、２つの官能基を有するヒドロカルボニル部分である。官能基の一方は、親分子又は目的の化合物に結合するように選択され、他方は、化学官能基又はコンジュゲート基などの選択された任意の基に、本質的に結合するように選択される。一部の実施形態では、リンカーは、エチレングリコール若しくはアミノ酸単位などの反復単位の鎖構造又はオリゴマーを含む。二官能価結合部分に常用的に用いられる官能基の例として、限定はしないが、求核基と反応させるための求電子基及び求電子基と反応させるための求核基が挙げられる。一部の実施形態では、二官能価結合部分は、アミノ、ヒドロキシル、カルボン酸、チオール、不飽和（例えば、二重又は三重結合）などを含む。二官能価結合部分のいくつかの非限定的な例として、８−アミノ−３，６−ジオキサオクタン酸（ＡＤＯ）、スクシニミジル４−（Ｎ−マレイミドメチル）シクロヘキサン−１−カルボキシレート（ＳＭＣＣ）及び６−アミノヘキサン酸（ＡＨＥＸ又はＡＨＡ）が挙げられる。他の結合基として、限定はしないが、置換Ｃ１〜Ｃ１０アルキル、置換若しくは非置換Ｃ２〜Ｃ１０アルケニル又は置換若しくは非置換Ｃ２〜Ｃ１０アルキニルが挙げられ、好ましい置換基の非限定的リストは、ヒドロキシル、アミノ、アルコキシ、カルボキシ、ベンジル、フェニル、ニトロ、チオール、チオアルコキシ、ハロゲン、アルキル、アリール、アルケニル及びアルキニルを含む。
【０３５８】
いくつかの実施形態では、リガンドは、リンカーを介してオリゴマー化合物と共役される。
【０３５９】
本明細書で使用されるとき、用語「リンカー」は、化合物の２つの部分をつなげる有機部分を意味する。リンカーは、典型的には、直接結合又は酸素若しくは硫黄などの原子、ＮＲ１、Ｃ（Ｏ）、Ｃ（Ｏ）ＮＨ、ＳＯ、ＳＯ２、ＳＯ２ＮＨなどの単位又は置換若しくは非置換アルキル、置換若しくは非置換アルケニル、置換若しくは非置換アルキニル、アリールアルキル、アリールアルケニル、アリールアルキニル、ヘテロアリールアルキル、ヘテロアリールアルケニル、ヘテロアリールアルキニル、ヘテロシクリルアルキル、ヘテロシクリルアルケニル、ヘテロシクリルアルキニル、アリール、へテロアリール、ヘテロシクリル、シクロアルキル、シクロアルケニル、アルキルアリールアルキル、アルキルアリールアルケニル、アルキルアリールアルキニル、アルケニルアリールアルキル、アルケニルアリールアルケニル、アルケニルアリールアルキニル、アルキニルアリールアルキル、アルキニルアリールアルケニル、アルキニルアリールアルキニル、アルキルヘテロアリールアルキル、アルキルヘテロアリールアルケニル、アルキルヘテロアリールアルキニル、アルケニルヘテロアリールアルキル、アルケニルヘテロアリールアルケニル、アルケニルヘテロアリールアルキニル、アルキニルヘテロアリールアルキル、アルキニルヘテロアリールアルケニル、アルキニルヘテロアリールアルキニル、アルキルヘテロシクリルアルキル、アルキルヘテロシクリルアルケニル、アルキルヘテロシクリルアルキニル、アルケニルヘテロシクリルアルキル、アルケニルヘテロシクリルアルケニル、アルケニルヘテロシクリルアルキニル、アルキニルヘテロシクリルアルキル、アルキニルヘテロシクリルアルケニル、アルキニルヘテロシクリルアルキニル、アルキルアリール、アルケニルアリール、アルキニルアリール、アルキルヘテロアリール、アルケニルヘテロアリール、アルキニルヘレロアリールなどの原子鎖を含み、ここで、１つ又は複数のメチレンは、Ｏ、Ｓ、Ｓ（Ｏ）、ＳＯ２、Ｎ（Ｒ１）２、Ｃ（Ｏ）、切断可能な結合部分、置換若しくは非置換アリール、置換若しくは非置換へテロアリール、置換若しくは非置換ヘテロ環式で分断又は終結され得、ここで、Ｒ１は、水素、アシル、脂肪族又は置換脂肪族である。
【０３６０】
一実施形態では、リンカーは、−［（Ｐ−Ｑ’’−Ｒ）ｑ−Ｘ−（Ｐ’−Ｑ’’’−Ｒ’）ｑ’］ｑ’’−Ｔ−であり、式中、Ｐ、Ｒ、Ｔ、Ｐ’、Ｒ’及びＴは、それぞれの存在について各々独立に、非存在、ＣＯ、ＮＨ、Ｏ、Ｓ、ＯＣ（Ｏ）、ＮＨＣ（Ｏ）、ＣＨ２、ＣＨ２ＮＨ、ＣＨ２Ｏ；ＮＨＣＨ（Ｒａ）Ｃ（Ｏ）、−Ｃ（Ｏ）−ＣＨ（Ｒａ）−ＮＨ−、ＣＨ＝Ｎ−Ｏ、
【化８４】
2020531450.tif 000087
又はヘテロシクリルであり；
Ｑ’’及びＱ’’’は、それぞれの存在について各々独立に、非存在、−（ＣＨ２）ｎ−、−Ｃ（Ｒ１）（Ｒ２）（ＣＨ２）ｎ−、−（ＣＨ２）ｎＣ（Ｒ１）（Ｒ２）−、−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｍＣＨ２ＣＨ２−又は−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｍＣＨ２ＣＨ２ＮＨ−であり、Ｘは、非存在であるか又は切断可能な結合基であり；
Ｒａは、Ｈ又はアミノ酸側鎖であり；
Ｒ１及びＲ２は、それぞれの存在について各々独立に、Ｈ、ＣＨ３、ＯＨ、ＳＨ又はＮ（ＲＮ）２であり；
ＲＮは、それぞれの存在について各々独立に、Ｈ、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ブチル又はベンジルであり；
ｑ、ｑ’及びｑ’’は、それぞれの存在について各々独立に、０〜２０であり、ここで、反復単位は、同じであるか又は異なり得；
ｎは、それぞれの存在について各々独立に、１〜２０であり；
ｍは、それぞれの存在について各々独立に、０〜５０である。
【０３６１】
一部の実施形態では、リンカーは、少なくとも１つの切断可能な結合基を含む。
【０３６２】
一部の実施形態では、リンカーは、分岐状リンカーである。分岐状リンカーの分岐点は、少なくとも三価であり得るが、四価、五価若しくは六価の原子又はそのような多価を示す基であり得る。ある実施形態では、分岐点は、−Ｎ、−Ｎ（Ｑ）−Ｃ、−Ｏ−Ｃ、−Ｓ−Ｃ、−ＳＳ−Ｃ、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｑ）−Ｃ、−ＯＣ（Ｏ）Ｎ（Ｑ）−Ｃ、−Ｎ（Ｑ）Ｃ（Ｏ）−Ｃ又は−Ｎ（Ｑ）Ｃ（Ｏ）Ｏ−Ｃであり；式中、Ｑは、それぞれの存在について各々独立に、Ｈ又は任意選択で置換されたアルキルである。一部の実施形態では、分岐点は、グリセロール又はグリセロール誘導体である。
【０３６３】
切断可能な結合基は、細胞外部では十分に安定しているが、標的細胞に進入すると、切断されて、リンカーが一緒に保持する２つの部分を放出するものである。好ましい実施形態では、切断可能な結合基は、対象の血液若しくは血清中又は第２の基準条件下（例えば、血液若しくは血清中に見出される条件を模倣又は表すために選択することができる）より、標的細胞内又は第１の基準条件下（例えば、細胞内の条件を模倣又は表すために選択することができる）で、少なくとも１０倍以上、好ましくは少なくとも１００倍以上速く切断される。
【０３６４】
切断可能な結合基は、切断作用剤、例えばｐＨ、酸化還元電位又は分解分子の存在に対して感受性である。一般に、切断作用剤は、血清又は血液中よりも細胞内部でより行き渡っているか、又はより高いレベル若しくは活性で見出される。そのような分解作用剤の例として、以下のものが挙げられる：特定の基質のために選択される酸化還元剤又は基質特異性のない酸化還元剤、例えば酸化若しくは還元酵素又は還元によって酸化還元的に切断可能な結合基を分解することができる、細胞に存在するメルカプタンなどの還元剤；エステラーゼ；アミダーゼ；エンドソーム又は酸性環境を作り出すことができる作用剤、例えば５以下のｐＨをもたらすもの；一般酸、ペプチダーゼ（基質特異的であり得る）及びプロテアーゼ並びにホスファターゼとして作用することにより、酸で切断可能な結合基を加水分解又は分解することができる酵素。
【０３６５】
リンカーは、特定の酵素により切断可能である切断可能な結合基を含むことができる。リンカーに組み込まれる切断可能な結合基のタイプは、ターゲティングしようとする細胞に応じて変わり得る。例えば、肝臓ターゲティングリガンドは、エステル基を含むリンカーを介してカチオン性脂質に連結することができる。肝細胞は、エステラーゼに富んでおり、従って、リンカーは、エステラーゼが豊富でない細胞型よりも肝細胞中で効率的に切断されるであろう。エステラーゼが豊富な他の細胞型としては、肺、腎皮質及び精巣の細胞がある。
【０３６６】
肝細胞及び滑膜細胞などのペプチダーゼが豊富な細胞型をターゲティングする場合、ペプチド結合を含有するリンカーを使用することができる。
【０３６７】
一部の実施形態では、切断可能な結合基は、血液若しくは血清（又は細胞外条件を模倣するように選択されたｉｎ  ｖｉｔｒｏ条件下）と比較して、細胞内（又は細胞内条件を模倣するように選択されたｉｎ  ｖｉｔｒｏ条件下）で少なくとも１．２５、１．５、１．７５、２、３、４、５、１０、２５、５０又は１００倍速く切断される。  一部の実施形態では、切断可能な結合基は、細胞内（又は細胞内条件を模倣するように選択されたｉｎ  ｖｉｔｒｏ条件下）と比較して、血液中（又は細胞外条件を模倣するように選択されたｉｎ  ｖｉｔｒｏ条件下）で、９０％、８０％、７０％、６０％、５０％、４０％、３０％、２０％、１０％、５％又は１％未満切断される。
【０３６８】
例示的な切断可能な結合基として、限定はしないが、以下のものが挙げられる：酸化還元的に切断可能な結合基（例えば、−Ｓ−Ｓ及び−Ｃ（Ｒ）２−Ｓ−Ｓ−、ここで、Ｒは、Ｈ又はＣ１〜Ｃ６アルキルであり、少なくとも１つのＲは、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、例えばＣＨ３若しくはＣＨ２ＣＨ３である）；ホスフェートベースの切断可能な結合基（例えば、−Ｏ−Ｐ（Ｏ）（ＯＲ）−Ｏ−、−Ｏ−Ｐ（Ｓ）（ＯＲ）−Ｏ−、−Ｏ−Ｐ（Ｓ）（ＳＲ）−Ｏ−、−Ｓ−Ｐ（Ｏ）（ＯＲ）−Ｏ−、−Ｏ−Ｐ（Ｏ）（ＯＲ）−Ｓ−、−Ｓ−Ｐ（Ｏ）（ＯＲ）−Ｓ−、−Ｏ−Ｐ（Ｓ）（ＯＲｋ）−Ｓ−、−Ｓ−Ｐ（Ｓ）（ＯＲ）−Ｏ−、−Ｏ−Ｐ（Ｏ）（Ｒ）−Ｏ−、−Ｏ−Ｐ（Ｓ）（Ｒ）−Ｏ−、−Ｓ−Ｐ（Ｏ）（Ｒ）−Ｏ−、−Ｓ−Ｐ（Ｓ）（Ｒ）−Ｏ−、−Ｓ−Ｐ（Ｏ）（Ｒ）−Ｓ−、−Ｏ−Ｐ（Ｓ）（Ｒ）−Ｓ−、−Ｏ−Ｐ（Ｏ）（ＯＨ）−Ｏ−、−Ｏ−Ｐ（Ｓ）（ＯＨ）−Ｏ−、−Ｏ−Ｐ（Ｓ）（ＳＨ）−Ｏ−、−Ｓ−Ｐ（Ｏ）（ＯＨ）−Ｏ−、−Ｏ−Ｐ（Ｏ）（ＯＨ）−Ｓ−、−Ｓ−Ｐ（Ｏ）（ＯＨ）−Ｓ−、−Ｏ−Ｐ（Ｓ）（ＯＨ）−Ｓ−、−Ｓ−Ｐ（Ｓ）（ＯＨ）−Ｏ−、−Ｏ−Ｐ（Ｏ）（Ｈ）−Ｏ−、−Ｏ−Ｐ（Ｓ）（Ｈ）−Ｏ−、−Ｓ−Ｐ（Ｏ）（Ｈ）−Ｏ−、−Ｓ−Ｐ（Ｓ）（Ｈ）−Ｏ−、−Ｓ−Ｐ（Ｏ）（Ｈ）−Ｓ−及び−Ｏ−Ｐ（Ｓ）（Ｈ）−Ｓ−、ここで、Ｒは、任意選択で置換された直鎖若しくは分岐状Ｃ１〜Ｃ１０アルキルである）；酸で切断可能な結合基（例えば、ヒドラゾン、エステル並びにアミノ酸のエステル、−Ｃ＝ＮＮ−及び−ＯＣ（Ｏ）−）；エステルベースの切断可能な結合基（例えば、−Ｃ（Ｏ）Ｏ−）；ペプチドベースの切断可能な結合基（例えば、細胞内のペプチダーゼ及びプロテアーゼなどの酵素により切断される結合基、例えば−ＮＨＣＨＲＡＣ（Ｏ）ＮＨＣＨＲＢＣ（Ｏ）−、ここで、ＲＡ及びＲＢは、２つの隣接アミノ酸から構成されるＲ基である）。ペプチドベースの切断可能な結合基は、２つ以上のアミノ酸を含む。一部の実施形態では、ペプチドベースの切断可能な結合基は、細胞に見出されるペプチダーゼ又はプロテアーゼの基質であるアミノ酸配列を含む。
【０３６９】
一部の実施形態では、酸で切断可能な結合基は、約６．５以下（例えば、約６．−、５．５、５．０又はそれを下回る）のｐＨを有する酸性環境中において又は一般酸として作用し得る酵素などの作用剤により切断される。
【０３７０】
一部の実施形態では、リンカーは、オリゴヌクレオチドリンカーであり、限定はしないが、（Ｎ）ｎ（Ｎは、独立に、修飾又は非修飾ヌクレオチドであり、ｎは、１〜２３である）を含む。一部の実施形態では、ｎは、１〜１０、例えば１、２、３、４、５、６、７、８、９又は１０である。一部の実施形態では、オリゴヌクレオチドリンカーは、ＧＮＲＡ、（Ｇ）４、（Ｕ）４及び（ｄＴ）４からなる群から選択され、ここで、Ｎは、修飾又は非修飾ヌクレオチドであり、Ｒは、修飾又は非修飾プリンヌクレオチドである。リンカー中の一部のヌクレオチドは、リンカー中の他のヌクレオチドとの塩基対合相互作用に関与し得る。当業者であれば、本明細書に記載する任意のオリゴヌクレオチド化学修飾又は変更をオリゴヌクレオチドリンカーに使用することができる。いくつかの実施形態では、リンカーは、ｄＡである。
【０３７１】
モチーフ
本発明はさらに、キメラオリゴマー化合物であるオリゴマー化合物も含む。本発明に関連して、「キメラ」オリゴマー化合物又は「キメラ」は、２つ以上の化学的に異なる領域を含むオリゴマー化合物であり、各領域は、少なくとも１つのモノマー単位、すなわちオリゴヌクレオチドの場合、修飾又は非修飾ヌクレオチドから構成される。キメラオリゴマー化合物は、特定のモチーフを有するものとして記載することができる。一部の実施形態では、モチーフとして、限定はしないが、交互モチーフ、ギャップモチーフ、ヘミマーモチーフ、均質に完全に修飾されたモチーフ及び位置修飾モチーフが挙げられる。本明細書で使用されるとき、「化学的に異なる領域」という語句は、オリゴマー化合物の他所には存在しない修飾を有するか又はオリゴマー化合物の他所に存在する修飾がない点で他の領域と異なるオリゴマー領域を指す。オリゴマー化合物は、２つ以上の化学的に異なる領域を含み得る。本明細書で使用されるとき、修飾を含まない領域も化学的に異なるとみなされる。
【０３７２】
化学的に異なる領域は、オリゴマー化合物内で反復することができる。従って、オリゴマー化合物内の化学的に異なる領域のパターンは、第１の化学的に異なる領域に、１つ又は複数の第２の化学的に異なる領域が続くように実現することができる。化学的に異なる領域のこうした配列は、１回又は複数回反復することができる。好ましくは、２回以上配列を反復する。二本鎖オリゴマー化合物の両方の鎖がこれらの配列を含むことができる。化学的に異なる領域の各々は、実際に、わずかに単一モノマー、例えばヌクレオチドを含むこともある。一部の実施形態では、化学的に異なる領域の各々は、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７又は１８個のモノマー、例えばヌクレオチドを含む。
【０３７３】
一部の実施形態では、交互ヌクレオチドは、同じ修飾を有し、例えば、鎖内の全ての奇数ヌクレオチドは、同じ修飾を有し、且つ／又は鎖内の全ての偶数ヌクレオチドは、第１の鎖と類似の修飾を有する。一部の実施形態では、オリゴマー化合物中の全ての奇数ヌクレオチドは、同じ修飾を有し、全ての偶数ヌクレオチドは、奇数ヌクレオチドには存在しない修飾を有し、その逆も同じである。
【０３７４】
二本鎖オリゴマー化合物の両方の鎖が交互修飾パターンを含む場合、一方の鎖のヌクレオチドは、類似修飾された第２の鎖のヌクレオチドに対して相補的位置であり得る。別の実施形態では、第２の鎖の類似修飾のパターンに対して、それぞれ第１の鎖の修飾のパターン間に位相シフトが存在する。このシフトは、第１の鎖及び第２の鎖の類似修飾ヌクレオチドが、互いに相補的位置ではないようにするのが好ましい。
【０３７５】
一部の実施形態では、第１の鎖は、交互ヌクレオチドが、２’−修飾、例えば２’−Ｏ−メチル修飾を含む、交互修飾パターンを有する。一部の実施形態では、第１の鎖が、交互２’−Ｏ−メチル修飾を含み、第２の鎖が、交互２’−フルオロ修飾を含む。他の実施形態では、二本鎖オリゴヌクレオチドの両方の鎖が、交互２’−Ｏ−メチル修飾を含む。
【０３７６】
二本鎖オリゴマー化合物の両方の鎖が交互２’−Ｏ−メチル修飾を含む場合、このような２’−修飾ヌクレオチドは、二重螺旋領域において相補的位置であり得る。代わりに、このような２’−修飾ヌクレオチドは、二重螺旋領域において相補的位置ではない。
【０３７７】
一部の実施形態では、オリゴヌクレオチドは、２つの化学的に異なる領域を含み、ここで、各領域は、１、２、３、４、５、６、７、８、９又は１０ヌクレオチド長である。
【０３７８】
別の実施形態では、オリゴマー化合物は、３つの化学的に異なる領域を含む。中央の領域は、約５〜１５（例えば、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４又は１５）ヌクレオチド長であり、各フランキング又はウィング領域は、独立に、１〜１０（例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９又は１０）ヌクレオチド長である。３つの領域の全てが異なる修飾を含み得るか、又はウィング領域が互いに類似の修飾を有し得る。一部の実施形態では、ウィング領域は、同じ長さ、例えば１、２、３、４、５、６、７、８、９又は１０ヌクレオチド長である。
【０３７９】
本明細書で使用されるとき、用語「交互モチーフ」は、モノマーサブユニットが、オリゴマー化合物のほぼ全配列にわたって交互に繰り返す２つの異なるタイプの糖基を有する、連結モノマーサブユニットから構成される連続配列を含むオリゴマー化合物を指す。交互モチーフを有するオリゴマー化合物は、式：５’−Ａ（−Ｌ−Ｂ−Ｌ−Ａ）ｎ（−Ｌ−Ｂ）ｎｎ−３’により表すことができ、式中、Ａ及びＢは、異なる糖基を有するモノマーサブユニットであり、各Ｌは、ヌクレオシド間結合基であり、ｎは、約４〜約１２であり、ｎｎは、０又は１である。これにより、長さが約９〜約２６モノマーサブユニットの交互オリゴマー化合物が可能になる。これより長い及び短いオリゴマー化合物も本発明に適していることから、この長さ範囲が限定的であるわけではない。一実施形態では、Ａ及びＢの一方は、本明細書に記載する通りの２’−修飾ヌクレオシドである。
【０３８０】
本明細書で使用されるとき、ある「タイプ」のヌクレオシド又はヌクレオチドに関して「修飾のタイプ」という用語は、ヌクレオシドの修飾を指し、修飾及び非修飾ヌクレオシドを含む。従って、別に指定されない限り、「第１のタイプの修飾を有するヌクレオシド」は、非修飾ヌクレオシドであり得る。
【０３８１】
本明細書で使用されるとき、「タイプ領域」は、オリゴマー化合物の１部分を指し、ここで、上記領域内のヌクレオシド及びヌクレオシド間結合は、同じタイプの修飾を含み；任意の隣接部分のヌクレオシド及び／又はヌクレオシド間結合は、少なくとも１つの異なるタイプの修飾を含む。本明細書で使用されるとき、用語「均質な完全修飾モチーフ」は、各々同じタイプの糖基を有する連結モノマーサブユニットの連続的配列を含むオリゴヌクレオチドを指す。一実施形態では、均質な完全修飾モチーフは、本発明のヌクレオシドの連続的配列を含む。一実施形態では、本明細書に記載するヌクレオシドの連続的配列の３’及び５’末端の一方又は両方は、１つ又は複数の非修飾ヌクレオシドなどの末端基を含む。
【０３８２】
本明細書で使用されるとき、用語「ヘミマーモチーフ」は、５’又は３’末端に位置する１タイプの糖基を有するモノマーサブユニットの短い連続的配列を有するオリゴマー化合物を指し、ここで、残りのモノマーサブユニットは、異なるタイプの糖基を有する。一般に、ヘミマーは、均質ではあるが、異なる糖基を有し、オリゴマー化合物の３’又は５’末端のいずれかに位置する短い領域（１、２、３、４若しくは約５つのモノマーサブユニット）をさらに含む、均質糖基のオリゴマー化合物である。一実施形態では、ヘミマーモチーフは、１タイプの約１０〜約２８個のモノマーサブユニットから構成される連続した配列と、一方の末端に位置する第２のタイプの１〜５又は２〜５つのモノマーサブユニットとを含む。一実施形態では、ヘミマーは、一方の末端に位置する本発明の１〜１２個の連続したヌクレオシドを有する、約８〜約２０個のβ−Ｄ−２’−デオキシリボヌクレオシドから構成される連続した配列である。一実施形態では、ヘミマーは、一方の末端に位置する本発明の１〜５つの連続したヌクレオシドを有する、約８〜約２０個のβ−Ｄ−２’−デオキシリボヌクレオシドから構成される連続的配列である。一実施形態では、ヘミマーは、一方の末端に位置する本発明の１〜３つの連続したヌクレオシドを有する、約１２〜約１８個のβ−Ｄ−２’−デオキシリボ−ヌクレオシドから構成される連続した配列である。一実施形態では、ヘミマーは、一方の末端に位置する本発明の１〜３つの連続したヌクレオシドを有する、約１０〜約１４個のβ−Ｄ−２’−デオキシリボヌクレオシドから構成される連続した配列である。
【０３８３】
本明細書で使用されるとき、用語「ブロックマーモチーフ」は、異なるタイプの糖基を有する連続したモノマーサブユニットの分断内部ブロック以外、各モノマーサブユニットの糖基が同じである、モノマーサブユニットの連続的配列を含むオリゴヌクレオチドを指す。ブロックマーは、ギャップマーと定義が幾分重複するが、典型的に、ブロックマーの場合、ブロック内のモノマーサブユニットのみが非天然糖基であり、ギャップマーでは、外部領域内のモノマーサブユニットのみが非天然糖基であり、ブロックマー又はギャップマー内の残りのモノマーサブユニットは、β−Ｄ−２’−デオキシリボヌクレオシド又はβ−Ｄ−リボヌクレオシドである。一実施形態では、モノマーサブユニットの全てが非天然糖基を含むブロックマーオリゴヌクレオチドが本明細書に提供される。
【０３８４】
本明細書で使用されるとき、用語「位置的に修飾されたモチーフ」は、別のタイプの糖基を有する１〜約５つの連続したモノマーサブユニットから構成される２つ以上の領域で分断された１タイプの糖基を有するモノマーサブユニットの連続的配列を含むことを意味する。１〜約５つの連続したモノマーサブユニットから構成される２つ以上の領域の各々は、独立に、糖基のタイプに関して均質に修飾されている。一実施形態では、２つ以上の領域の各々は、同じタイプの糖基を有する。一実施形態では、２つ以上の領域の各々は、異なるタイプの糖基を有する。一実施形態では、本発明の２〜約５つの連続したヌクレオシドから構成される２若しくは３つの領域をさらに含む８〜２０個のβ−Ｄ−２’−デオキシリボヌクレオシドから構成される配列を含む、位置的に修飾されたオリゴヌクレオチドが提供される。位置的に修飾されたオリゴヌクレオチドは、いずれかの位置モチーフによって特徴付けられる領域の置換のパターンが、これらの他のモチーフの１つについて本明細書に記載する定義と合致しないことから、ギャップモチーフ、ヘミマーモチーフ、ブロックマーモチーフ及び交互モチーフとは区別される。位置的に修飾されたオリゴマー化合物という用語は、多くの異なる特定の置換パターンを含む。
【０３８５】
本明細書で使用されるとき、用語「ギャップマー」又は「ギャップオリゴマー化合物」は、２つの外部領域若しくはウィングと１つの内部領域若しくはギャップを有するオリゴマー化合物を指す。３つの領域は、内部領域の糖基と異なる外部領域の糖基を有するモノマーサブユニットの連続的配列を形成し、ここで、特定の領域内の各モノマーサブユニットの糖基は同じである。外部領域の糖基が同じであるとき、ギャップマーは、対称ギャップマーであり、５’−外部領域に使用される糖基が、３’−外部領域で使用される糖基と異なるとき、ギャップマーは、非対称ギャップマーである。一実施形態では、外部領域は、小さく（各々独立に、１、２、３、４若しくは約５つのモノマーサブユニット）、モノマーサブユニットは、β−Ｄ−２’−デオキシリボヌクレオシドを含む内部領域を有する非天然糖基を含む。一実施形態では、外部領域は、各々独立に、１〜約５つのモノマーサブユニットを含み、内部領域は、６〜１８個の非修飾ヌクレオシドを含む。内部領域又はギャップは、一般に、β−Ｄ−２’−デオキシリボ−ヌクレオシドを含むが、非天然の糖基を含み得る。
【０３８６】
一実施形態では、ギャップオリゴマー化合物は、β−Ｄ−２’−デオキシリボヌクレオシドの内部領域を含み、その際、外部領域の一方が、本発明のヌクレオシドを含む。一実施形態では、ギャップオリゴヌクレオチドは、β−Ｄ−２’−デオキシリボヌクレオシドの内部領域を含み、その際、外部領域の両方が、本発明のヌクレオシドを含む。一実施形態では、ギャップオリゴヌクレオチドは、β−Ｄ−２’−デオキシリボヌクレオシドの内部領域を含み、その際、外部領域の両方が、本発明のヌクレオシドを含む。一実施形態では、全てのモノマーサブユニットが非天然糖基を含む、ギャップオリゴヌクレオチドが本明細書に提供される。一実施形態では、５’末端の１又は２つの本発明のヌクレオシドと、３’末端の２又は３つの本発明のヌクレオシドと、１０〜１６個のβ−Ｄ−２’−デオキシリボヌクレオシドから構成される内部領域とを含む、ギャップオリゴヌクレオチドが提供される。一実施形態では、５’末端の１つの本発明のヌクレオシドと、３’末端の２つの本発明のヌクレオシドと、１０〜１６個のβ−Ｄ−２’−デオキシリボヌクレオシドから構成される内部領域とを含む、ギャップオリゴヌクレオチドが提供される。一実施形態では、５’末端の２つの本発明のヌクレオシドと、３’末端の２つの本発明のヌクレオシドと、１０〜１４個のβ−Ｄ−２’−デオキシリボヌクレオシドから構成される内部領域とを含む、ギャップオリゴヌクレオチドが提供される。一実施形態では、長さ約１０〜約２１モノマーサブユニットのギャップオリゴヌクレオチドが提供される。一実施形態では、長さ約１２〜約１６モノマーサブユニットのギャップオリゴヌクレオチドが提供される。一実施形態では、長さ約１２〜約１４モノマーサブユニットのギャップオリゴヌクレオチドが提供される。
【０３８７】
いくつかの実施形態では、本発明のオリゴマー化合物の５’末端モノマーは、５’末端にリン含有部分を含む。いくつかの実施形態では、５’末端モノマーは、２’−修飾を含む。いくつかのこうした実施形態では、５’末端モノマーの２’−修飾は、カチオン性修飾である。いくつかの実施形態では、５’末端モノマーは、５’−修飾を含む。いくつかの実施形態では、５’末端モノマーは、２’−修飾と５’−修飾を含む。いくつかの実施形態では、５’末端モノマーは、５’−安定化ヌクレオシドを含む。いくつかの実施形態では、５’末端モノマーの修飾は、５’−リン酸塩を安定化する。いくつかの実施形態では、５’末端モノマーの修飾を含むオリゴマー化合物は、エキソヌクレアーゼに対して耐性である。いくつかの実施形態では、５’末端モノマーの修飾を含むオリゴマー化合物は、改善された調整性ＲＥＶＥＲＳＩＲ特性を有する。いくつかの実施形態では、５’末端モノマーの修飾を含むオリゴマー化合物は、ｓｉＲＮＡの鎖との改善された会合を有する。
【０３８８】
いくつかの実施形態では、５’末端モノマーは、改変された結合により、残りのオリゴマー化合物に結合される。いくつかのこうした実施形態では、５’末端モノマーは、ホスホロチオエート結合により、残りのオリゴマー化合物に結合される。
【０３８９】
いくつかの実施形態では、本発明のオリゴマー化合物は、１つ又は複数の交互修飾の領域を含む。いくつかの実施形態では、オリゴマー化合物は、１つ又は複数の交互ヌクレオシド修飾の領域を含む。いくつかの実施形態では、オリゴマー化合物は、１つ又は複数の交互結合修飾の領域を含む。いくつかの実施形態では、オリゴマー化合物は、１つ又は複数の交互ヌクレオシド及び結合修飾の領域を含む。
【０３９０】
いくつかの実施形態では、本発明のオリゴマー化合物は、１つ又は複数の交互２’−Ｆ修飾ヌクレオシド及び２’−ＯＭｅ修飾ヌクレオシドの領域を含む。いくつかのこうした実施形態では、交互２’−Ｆ修飾ヌクレオシド及び２’−ＯＭｅ修飾ヌクレオシドのこのような領域も、交互結合を含む。いくつかのこうした実施形態では、２’−Ｆ修飾ヌクレオシドの３’末端での結合は、ホスホロチオエート結合である。いくつかのこうした実施形態では、２’−ＯＭｅヌクレオシドの３’末端での結合は、リン酸ジエステル結合である。
【０３９１】
いくつかの実施形態では、このような交互領域は：
（２’−Ｆ）−（ＰＳ）−（２’−ＯＭｅ）−（ＰＯ）
である。
【０３９２】
いくつかの実施形態では、オリゴマー化合物は、２、３、４、５、６、７、８、９、１０又は１１個のこうした交互領域を含む。こうした領域は、連続的であり得るか、又は異なる修飾ヌクレオシド若しくは結合によって分断され得る。
【０３９３】
いくつかの実施形態では、交互モチーフ中の１つ又は複数の交互領域は、複数のあるタイプの単一ヌクレオシドを含む。例えば、本発明のオリゴマー化合物は、以下のヌクレオシドモチーフ：
ＡＢＡ；
ＡＢＢＡ；
ＡＡＢＡ；
ＡＡＢＢＡＡ；
ＡＢＢＡＢＢ；
ＡＡＢＡＡＢ；
ＡＢＢＡＢＡＡＢＢ；
ＡＢＡＢＡＡ；
ＡＡＢＡＢＡＢ；
ＡＢＡＢＡＡ；
ＡＢＢＡＡＢＢＡＢＡＢＡＡ；
ＢＡＢＢＡＡＢＢＡＢＡＢＡＡ；又は
ＡＢＡＢＢＡＡＢＢＡＢＡＢＡＡ
のいずれかの１つ又は複数の領域を含み得、ここで、Ａは、第１のタイプのヌクレオシドであり、Ｂは、第２のタイプのヌクレオシドである。いくつかの実施形態では、Ａ及びＢは、各々、２’−Ｆ、２’−ＯＭｅ、ＬＮＡ、ＤＮＡ及びＭＯＥから選択される。
【０３９４】
いくつかの実施形態では、Ａは、ＤＮＡである。いくつかの実施形態では、Ｂは、ＤＮＡである。一部の実施形態では、Ａは、４’−ＣＨ２Ｏ−２’−ＬＮＡである。いくつかの実施形態では、Ｂは、４’−ＣＨ２Ｏ−２’−ＬＮＡである。いくつかの実施形態では、Ａは、ＤＮＡで、Ｂは、４’−ＣＨ２Ｏ−２’−ＬＮＡである。いくつかの実施形態では、Ａは、４’−ＣＨ２Ｏ−２’−ＬＮＡで、Ｂは、ＤＮＡである。
【０３９５】
いくつかの実施形態では、Ａは、２’−ＯＭｅである。いくつかの実施形態では、Ｂは、２’−ＯＭｅである。いくつかの実施形態では、Ａは、２’−ＯＭｅで、Ｂは、４’−ＣＨ２Ｏ−２’−ＬＮＡである。いくつかの実施形態では、Ａは、４’−ＣＨ２Ｏ−２’−ＬＮＡで、Ｂは、２’−ＯＭｅである。いくつかの実施形態では、Ａは、２’−ＯＭｅで、Ｂは、ＤＮＡである。いくつかの実施形態では、Ａは、ＤＮＡで、Ｂは、２’−ＯＭｅである。
【０３９６】
いくつかの実施形態では、Ａは、（Ｓ）−ｃＥｔである。いくつかの実施形態では、Ｂは、（Ｓ）−ｃＥｔである。いくつかの実施形態では、Ａは、２’−ＯＭｅで、Ｂは、（Ｓ）−ｃＥｔである。いくつかの実施形態では、Ａは、（Ｓ）−ｃＥｔで、Ｂは、２’−ＯＭｅである。いくつかの実施形態では、Ａは、ＤＮＡで、Ｂは、（Ｓ）−ｃＥｔである。いくつかの実施形態では、Ａは、（Ｓ）−ｃＥｔで、Ｂは、ＤＮＡである。
【０３９７】
いくつかの実施形態では、Ａは、２’−Ｆである。いくつかの実施形態では、Ｂは、２’−Ｆである。いくつかの実施形態では、Ａは、２’−Ｆで、Ｂは、４’−ＣＨ２Ｏ−２’−ＬＮＡである。いくつかの実施形態では、Ａは、４’−ＣＨ２Ｏ−２’−ＬＮＡで、Ｂは、２’−Ｆである。いくつかの実施形態では、Ａは、２’−Ｆで、Ｂは、（Ｓ）−ｃＥｔである。いくつかの実施形態では、Ａは、（Ｓ）−ｃＥｔで、Ｂは、２’−Ｆである。いくつかの実施形態では、Ａは、２’−Ｆで、Ｂは、ＤＮＡである。いくつかの実施形態では、Ａは、ＤＮＡで、Ｂは、２’−Ｆである。いくつかの実施形態では、Ａは、２’−ＯＭｅで、Ｂは、２’−Ｆである。いくつかの実施形態では、Ａは、ＤＮＡで、Ｂは、２’−ＯＭｅである。いくつかの実施形態では、Ａは、２’−ＯＭｅで、Ｂは、ＤＮＡである。
【０３９８】
いくつかの実施形態では、このような交互モチーフを有するオリゴマー化合物は、リン酸塩安定化修飾を含む５’末端ヌクレオシドも含む。いくつかの実施形態では、上記の交互モチーフを有するオリゴマー化合物は、２’カチオン性修飾を含む５’末端ヌクレオシドも含む。いくつかの実施形態では、上記の交互モチーフを有するオリゴマー化合物は５’末端修飾も含む。
【０３９９】
２−２−３モチーフ
いくつかの実施形態では、本発明のオリゴマー化合物は、２−２−３モチーフを有する領域を含む。このような領域は、下記のモチーフ：
５’−  （Ｅ）ｗ−（Ａ）２−（Ｂ）Ｘ−（Ａ）２−（Ｃ）ｙ−（Ａ）３−（Ｄ）Ｚ
を含み、
ここで、Ａは、第１のタイプの修飾ヌクレオシドであり；
Ｂ、Ｃ、Ｄ及びＥは、Ａと異なる修飾がなされたヌクレオシドであるが、Ｂ、Ｃ、Ｄ及びＥは、互いに同じ又は異なる修飾を有し得；
ｗ及びｚは、０〜１５であり；
ｘ及びｙは、１〜１５である。
【０４００】
いくつかの実施形態では、Ａは、２’−ＯＭｅ修飾ヌクレオシドである。いくつかの実施形態では、Ｂ、Ｃ、Ｄ及びＥは、全て２’−Ｆ修飾ヌクレオシドである。いくつかの実施形態では、Ａは、２’−ＯＭｅ修飾ヌクレオシドで、Ｂ、Ｃ、Ｄ及びＥは、全て２’−Ｆ修飾ヌクレオシドである。
【０４０１】
いくつかの実施形態では、２−２−３モチーフの結合は、全て修飾結合である。いくつかの実施形態では、結合は、全てホスホロチオエート結合である。いくつかの実施形態では、第１のタイプの各修飾の３’末端の結合は、リン酸ジエステルである。
【０４０２】
いくつかの実施形態では、Ｚは、０である。こうした実施形態において、第１のタイプの３ヌクレオシドの領域は、オリゴヌクレオチドの３’末端にある。いくつかの実施形態では、このような領域は、オリゴマー化合物の３’末端にあり、第１のタイプの３ヌクレオシドの領域の３’末端に他の基は結合していない。いくつかの実施形態では、Ｚが０であるオリゴヌクレオチドを含むオリゴマー化合物は、３’末端ヌクレオシドに結合された末端基を含み得る。このような末端基は、別のヌクレオシドを含み得る。このような別のヌクレオシドは、典型的に、非ハイブリダイズヌクレオシドである。
【０４０３】
いくつかの実施形態では、Ｚは、１〜３である。いくつかの実施形態では、Ｚは、２である。いくつかの実施形態では、Ｚのヌクレオシドは、２’−ＭＯＥヌクレオシドである。いくつかの実施形態では、Ｚは、非ハイブリダイズヌクレオシドを表す。混乱を避けるために、このような非ハイブリダイズヌクレオシドが、Ｚ＝０の３’末端基としても記載され得ることに留意する。
【０４０４】
組合せモチーフ
前述したモチーフ及び修飾のいくつかを組み合わせ得ることが理解されるべきである。モチーフは、少数のヌクレオシドのみを含み得ることから、特定のオリゴマー化合物は、２つ以上のモチーフを含むことができる。非限定的な例として、いくつかの実施形態では、オリゴマー化合物は、ＬＮＡ、ホスホロチオエート結合、２’−ＯＭｅ、共役リガンドから選択される２つ以上のヌクレオチドモチーフを有し得る。
【０４０５】
本明細書に記載する様々なヌクレオシドモチーフのいずれかを有するオリゴマー化合物は、任意の結合モチーフを有すこともできる。例えば、オリゴマー化合物において、５’末端の最初の１、２、３、４又は５は、修飾された糖間結合であり、また３’末端の最初の４、５、６、７又は８糖間結合は、修飾された糖間結合であり得る。こうした修飾オリゴマー化合物の中央領域は、本明細書に記載する他のモチーフのいずれかに基づく糖間結合、例えば均質、交互、ヘミマー、ギャップマーなどを有し得る。一部の実施形態では、オリゴマー化合物は、５’末端の第１及び第２のモノマー間のホスホロチオエート結合、中央領域におけるホスホロチオエート／リン酸ジエステル交互結合並びに３’末端の６、７又は８ホスホロチオエート結合を含む。
【０４０６】
ヌクレオシドモチーフにより画定される領域の長さ及び結合モチーフの長さは、同じである必要はないことに留意すべきである。
【０４０７】
一部の実施形態では、一本鎖オリゴマー化合物又は二本鎖オリゴマー化合物の少なくとも１つの鎖は、以下のモチーフの少なくとも１つを含む：
（ａ）５’−ホスホロチオエート又は５’−ホスホロジチオエート；
（ｂ）５’末端のヌクレオチド１及び２のカチオン性修飾、ここで、カチオン性修飾は、ピリジミンのＣ５位及びプリンのＣ２、Ｃ６、Ｃ８、環外Ｎ２若しくは環外Ｎ６に位置する；
（ｃ）５’末端の最初の２つの末端ヌクレオチドにおける少なくとも１つのＧクランプヌクレオチド及びカチオン性修飾を有する他のヌクレオチド、ここで、カチオン性修飾は、ピリジミンのＣ５位又はプリンのＣ２、Ｃ６、Ｃ８、環外Ｎ２若しくは環外Ｎ６位に位置する；
（ｄ）核酸塩基修飾を含む少なくとも１つの２’−Ｆ修飾ヌクレオチド；
（ｅ）核酸塩基修飾を含む少なくとも１つのｇｅｍ−２’−Ｏ−メチル／２’−Ｆ修飾ヌクレオチド；好ましくは、メチル置換基は、上方配置、例えばアラビノース配置にある；
（ｆ）３’末端の５’−ＰｕＰｕ−３’ジヌクレオチド、ここで、いずれのヌクレオチドも、米国特許出願公開第２０１３０１３０３７８号明細書（その内容は、全体として参照により本明細書に組み込まれる）に記載のように、２’位に修飾ＭＯＥを含む；
（ｇ）５’末端の５’−ＰｕＰｕ−３’ジヌクレオチド、ここで、いずれのヌクレオチドも、米国特許出願公開第２０１３０１３０３７８号明細書に記載のように、２’位に修飾ＭＯＥを含む；
（ｈ）米国特許出願公開第２０１３０１３０３７８号明細書に記載のように、２’位に修飾ＭＯＥを含む、５’末端のヌクレオチド；
（ｉ）３’−Ｆ修飾を有する５’末端のヌクレオチド：
（ｊ）４’−置換基を含む５’末端ヌクレオチド；
（ｋ）Ｏ４’修飾を含む５’末端ヌクレオチド；
（ｌ）４’−置換基を含む３’末端ヌクレオチド；並びに
（ｍ）これらの組合せ。
【０４０８】
一部の実施形態では、二本鎖オリゴマー化合物の両方の鎖は、独立に、前述したモチーフの少なくとも１つを含む。一部の他の実施形態では、二本鎖オリゴマー化合物の両方の鎖は、前述したモチーフの少なくとも１つを含み、これらのモチーフは、同じであるか又は異なり得るか、又は同じであるか若しくは異なるもののいくつかの組合せであり得る。
【０４０９】
前述の例は、記載されるモチーフをどのように組み合わせて使用できるかを示すために提供されるものであり、特定の組合せ又は組合せの例示に用いた特定の修飾に本発明を限定することは意図しない。さらに、限定はしないが、上の表に示すものなどの特定の例は、より一般的な実施形態を包含することを意図する。例えば、上の表の列Ａは、交互に繰り返す２’−ＯＭｅ及び２’−Ｆヌクレオシドの領域を例示する。従って、この同じ開示は、交互に繰り返す別の２’−Ｆ修飾の領域も例示する。これは、交互に繰り返す２’−Ｏ−アルキル及び２’−ハロゲンヌクレオシドの領域も例示する。これは、交互に繰り返す異なる修飾ヌクレオシドの領域も例示する。本明細書全体の実施例の全てが、こうした包括的解釈を考慮する。
【０４１０】
上の表に例示したものなどのオリゴマー化合物の長さは、モチーフを破断することなく、記載の領域の１つ又は複数を伸長又は短縮することによって容易に操作し得ることに留意する。
【０４１１】
一部の実施形態では、オリゴマー化合物は、化学的に異なる２つ以上の領域を含み、２００９年３月２６日に出願された国際出願ＰＣＴ／米国特許出願第０９／０３８４３３号明細書（その内容は、全体として本明細書に組み込まれる）に記載の構造を有する。
【０４１２】
合成、精製及び分析
修飾及び非修飾ヌクレオシド及びヌクレオチドのオリゴマー化は、ＤＮＡ（Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｆｏｒ  Ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓ  ａｎｄ  Ａｎａｌｏｇｓ，Ｅｄ．Ａｇｒａｗａｌ（１９９３），Ｈｕｍａｎａ  Ｐｒｅｓｓ）及び／又はＲＮＡ（Ｓｃａｒｉｎｇｅ，Ｍｅｔｈｏｄｓ（２００１），２３，２０６−２１７．Ｇａｉｔ  ｅｔ  ａｌ．，Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ  ｏｆ  Ｃｈｅｍｉｃａｌｌｙ  ｓｙｎｔｈｅｓｉｚｅｄ  ＲＮＡ  ｉｎ  ＲＮＡ：Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎｓ，Ｅｄ．Ｓｍｉｔｈ（１９９８），１−３６．Ｇａｌｌｏ  ｅｔ  ａｌ．，Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ（２００１），５７，５７０７−５７１３）についての文献に記載の手順に従って、常用的に実施することができる。
【０４１３】
本発明で提供するオリゴマー化合物は、固相合成の公知の技術によって一般的且つ常用的に製造することができる。こうした合成の装置は、例えば、Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ（Ｆｏｓｔｅｒ  Ｃｉｔｙ，Ｃａｌｉｆ．）を含む複数の供給業者により販売されている。当技術分野で公知であるこうした合成のための任意の他の手段を追加的又は代替的に使用し得る。類似の技術を用いて、ホスホロチオエート及びアルキル化誘導体などのオリゴヌクレオチドを調製することは、よく知られている。本発明は、アンチセンス化合物合成の方法により限定されない。
【０４１４】
オリゴマー化合物の精製及び分析の方法は、当業者には周知である。分析方法としては、キャピラリー電気泳動（ＣＥ）及びエレクトロスプレー質量分析が挙げられる。こうした合成及び分析方法は、マルチウェルプレートで実施することができる。本発明の方法は、オリゴマー精製方法により限定されない。
【０４１５】
本発明のオリゴマー化合物は、液相若しくは固相有機合成を用いて又は当技術分野で公知の方法により酵素を用いて調製することができる。有機合成は、非天然又は修飾ヌクレオチドを含むオリゴマー鎖を容易に調製することができるという利点を提供する。当技術分野で公知のこうした合成のための任意の他の手段を追加的又は代替的に使用し得る。類似の技術を用いて、糖間結合のホスホロチオエート、ホスホロジチオエート及びアルキル化誘導体を含むものなど、他のオリゴマー化合物を調製することもよく知られている。本発明の二本鎖オリゴマー化合物は、２ステップ法を用いて調製することができる。最初に、二本鎖分子の個々の鎖を別々に調製する。次に、構成鎖をアニーリングする。
【０４１６】
合成の方法とは関係なく、オリゴマー化合物は、製剤化に適切な溶液（例えば、水及び／又は有機溶液）中で調製することができる。例えば、オリゴマー調製物を沈殿させてから、純粋再蒸留水中に再溶解させた後、凍結乾燥させることができる。次に、乾燥させたオリゴマー化合物を、意図する製剤化方法に適した溶液に再懸濁させることができる。
【０４１７】
特定の修飾オリゴマー化合物の合成に関する教示は、以下に見出すことができる：ポリアミン共役オリゴヌクレオチドに関する、米国特許第５，１３８，０４５号明細書及び同第５，２１８，１０５号明細書；キラルリン結合を有するオリゴヌクレオチドの調製のためのモノマーに関する、米国特許第５，２１２，２９５号明細書；修飾骨格を有するオリゴヌクレオチドに関する、米国特許第５，３７８，８２５号明細書及び同第５，５４１，３０７号明細書；骨格修飾オリゴヌクレオチド及び還元性カップリングによるその調製に関する、米国特許第５，３８６，０２３号明細書；３−デアザプリン環系に基づく修飾核酸塩基及びその合成方法に関する、米国特許第５，４５７，１９１号明細書；Ｎ−２置換プリンに基づく修飾核酸塩基に関する、米国特許第５，４５９，２５５号明細書；キラルリン結合を有するオリゴヌクレオチドを調製するための方法に関する、米国特許第５，５２１，３０２号明細書；ペプチド核酸に関する、米国特許第５，５３９，０８２号明細書；βラクタム骨格を有するオリゴヌクレオチドに関する、米国特許第５，５５４，７４６号明細書；オリゴヌクレオチドの合成のための方法及び材料に関する、米国特許第５，５７１，９０２号明細書；アルキルチオ基を有するヌクレオシド（このような基は、ヌクレオシドの様々な位置のいずれかに結合した他の部分に対するリンカーとして使用することができる）に関する、米国特許第５，５７８，７１８号明細書；高キラル純度のホスホロチオエート結合を有するオリゴヌクレオチドに関する、米国特許第５，５８７，３６１号明細書及び同第５，５９９，７９７号明細書；２’−Ｏ−アルキルグアノシン及び関連化合物（２，６−ジアミノプリン化合物など）の調製方法に関する、米国特許第５，５０６，３５１号明細書；Ｎ−２置換プリンを有するオリゴヌクレオチドに関する、米国特許第５，５８７，４６９号明細書；３−デアザプリンを有するオリゴヌクレオチドに関する、米国特許第５，５８７，４７０号明細書；いずれも、共役４’−デスメチルヌクレオシド類似体に関する、米国特許第５，２２３，１６８号明細書及び同第５，６０８，０４６号明細書；骨格修飾オリゴヌクレオチド類似体に関する、米国特許第５，６０２，２４０号明細書及び同第５，６１０，２８９号明細書；並びに中でも、２’−フルオロ−オリゴヌクレオチドの合成方法に関する、米国特許第６，２６２，２４１号明細書及び同第５，４５９，２５５号明細書。
【０４１８】
医薬組成物を製剤化するための組成物及び方法
オリゴマー化合物は、医薬組成物又は製剤の調製のために、薬学的に許容される活性及び／又は不活性物質と混合することができる。医薬組成物の製剤化のための組成物及び方法は、限定はしないが、投与経路、疾患の程度又は投与しようとする用量などのいくつかの基準に左右される。
【０４１９】
ｓｉＲＮＡ及び／又は調整性ＲＥＶＥＲＳＩＲ化合物などのオリゴマー化合物は、このようなオリゴマー化合物を好適な薬学的に許容される希釈剤若しくは担体と組み合わせることにより、医薬組成物として使用することができる。薬学的に許容される希釈剤としては、リン酸緩衝食塩水（ＰＢＳ）がある。ＰＢＳは、非経口で送達しようとする組成物に使用するのに好適な希釈剤である。従って、一実施形態では、アンチセンス化合物及び／又は解毒剤化合物並びに薬学的に許容される希釈剤を含む医薬組成物が、本明細書に記載する方法に使用される。いくつかの実施形態では、薬学的に許容される希釈剤は、ＰＢＳである。
【０４２０】
オリゴマー化合物を含む医薬組成物は、任意の薬学的に許容される塩、エステル又はこうしたエステルの塩を含む。いくつかの実施形態では、オリゴマー化合物を含む医薬組成物は、ヒトなどの動物に投与されると、生物学的に活性の代謝物又はその残基を（直接若しくは間接的に）付与することができる１つ又は複数のオリゴヌクレオチドを含む。従って、例えば、本開示は、アンチセンス化合物の薬学的に許容される塩、プロドラッグ、こうしたプロドラッグの薬学的に許容される塩並びに他の生物学的均等物にも関する。好適な薬学的に許容される塩として、限定はしないが、ナトリウム及びカリウム塩がある。
【０４２１】
プロドラッグは、活性オリゴマー化合物を形成するために、身体内で内在性ヌクレアーゼにより切断されるオリゴマー化合物の一方又は両方の末端に別のヌクレオシドの組み込みを含むことができる。
【０４２２】
本発明の医薬組成物は、局所又は全身処置のいずれが要望されるか、及び処置しようとする部位に応じて様々な方法で投与することができる。投与は、局所（例えば、経皮パッチにより）、肺、例えばネブライザーなどを用いて、粉末若しくはエアゾールの吸入又は通気により；気管内、鼻内、表皮及び経皮、経口若しくは非経口であり得る。非経口投与としては、静脈内、動脈内、皮下、腹腔内若しくは筋肉内注射又は注入；皮下、例えば埋込型デバイス；又は頭蓋内、例えば実質内、髄腔内若しくは脳室内投与が挙げられる。
【０４２３】
オリゴマー化合物は、肝臓（例えば、肝臓の肝細胞）などの特定の組織をターゲティングするように送達することができる。
【０４２４】
局所投与用の医薬組成物及び製剤としては、経皮パッチ、軟膏、ローション、クリーム、ゲル、点滴薬、坐薬、スプレー、液体及び粉末を挙げることができる。従来の医薬担体、水性、粉末又は油性基剤、増粘剤などが必要となるか、又は望ましい場合がある。また、コーティングされたコンドーム、手袋なども有用となり得る。好適な局所製剤として、本発明の主題であるｉＲＮＡが、脂質、リポソーム、脂肪酸、脂肪酸エステル、ステロイド、キレート剤及び界面活性剤などの局所送達剤と混合されているものが挙げられる。好適な脂質及びリポソームとして、中性（例えば、ジオレイオイルホスファチジルＤＯＰＥエタノールアミン、ジミリストイルホスファチジルコリンＤＭＰＣ、ジステロイルホスファチジルコリン）陰性（例えば、ジミリストイルホスファチジルグリセロールＤＭＰＧ）及びカチオン性（例えば、ジオレオイルテトラメチルアミノプロピルＤＯＴＡＰ及びジオレオイルホスファチジルエタノールアミンＤＯＴＭＡ）が挙げられる。本発明の主題であるｉＲＮＡは、リポソーム中に封入するか、又はそれと、特にカチオン性リポソームと複合体を形成し得る。代わりに、ｉＲＮＡを脂質、特にカチオン性脂質と複合体化し得る。好適な脂肪酸及びエステルとして、限定はしないが、アラキドン酸、オレイン酸、エイコサン酸、ラウリン酸、カプリル酸、カプリン酸、ミリスチン酸、パルミチン酸、ステアリン酸、リノール酸、リノレン酸、ジカプリン酸エステル、トリカプリン酸エステル、モノオレイン、ジラウリン、グレセリル１−モノカプリン酸エステル、１−ドデシルアザシクロヘプタン−２−オン、アシルカルニチン、アシルコリン又はＣ１〜２０アルキルエステル（例えば、イソプロピルミリスチン酸エステルＩＰＭ）、モノグリセリド、ジグリセリド又はこれらの薬学的に許容される塩が挙げられる。局所製剤は、米国特許第６，７４７，０１４号明細書に詳細に記載されており、これは、参照により本明細書に組み込まれる。
【０４２５】
研究され、薬剤の製剤化のために使用されているマイクロエマルション以外にも多くの組織化された界面活性構造がある。これらは、単層、ミセル、二層及び小胞を含む。リポソームなどの小胞は、薬剤送達の観点からそれらが提供するその特異性及び作用の持続性のために、大きい関心を集めている。本明細書で使用されるとき、用語「リポソーム」は、球状二層又は二層内に配置される両親媒性脂質から構成される小胞を意味する。
【０４２６】
リポソームは、親油性物質と水性の内部から形成される膜を有する単層又は多層小胞である。水性部分は、送達しようとする組成物を含有する。カチオン性リポソームは、細胞壁に融合することができるという利点を有する。非カチオン性リポソームは、細胞壁に効率的に融合することはできないが、ｉｎ  ｖｉｖｏでマクロファージにより取り込まれる。
【０４２７】
リポソームのさらなる利点は、以下の通りである：天然リン脂質から得られるリポソームは、生体適合性及び生分解性であること；リポソームは、多様な水及び脂溶性薬剤を取り込み得ること；リポソームは、その内部コンパートメント内に封入された薬剤を代謝及び分解から保護し得ること（Ｒｏｓｏｆｆ，ｉｎ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｄｏｓａｇｅ  Ｆｏｒｍｓ，Ｌｉｅｂｅｒｍａｎ，Ｒｉｅｇｅｒ  ａｎｄ  Ｂａｎｋｅｒ（Ｅｄｓ．），１９８８，Ｍａｒｃｅｌ  Ｄｅｋｋｅｒ，Ｉｎｃ．，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，Ｎ．Ｙ．，ｖｏｌｕｍｅ  １，ｐ．２４５）。リポソーム製剤の調製で重要な考慮事項は、脂質表面電荷、小胞サイズ及びリポソームの含水量である。
【０４２８】
リポソームは、作用部位への活性成分の輸送及び送達に有用である。リポソーム膜は、構造的に生物膜と類似していることから、リポソームを組織に適用すると、リポソームは、細胞膜と融合し始め、リポソームと細胞の融合が進行するにつれ、リポソームの内容物は、細胞中に移され、そこで活性剤が作用し得る。
【０４２９】
リポソーム製剤は、多くの薬剤の送達方法として広範囲にわたる研究の対象であった。局所投与の場合、リポソームは、他の製剤に対していくつかの利点を提供するというエビデンスが増えている。このような利点には、投与された薬剤の高度全身吸収に関連する副作用の低減、要望される標的部位での投与薬剤の蓄積増大並びに親水性及び疎水性両方の多様な薬剤を皮膚中に投与する能力が含まれる。
【０４３０】
複数の報告が、高分子量ＤＮＡを含む薬剤を皮膚中に送達するリポソームの能力について詳述している。鎮痛剤、抗体、ホルモン及び高分子量ＤＮＡを含む化合物が皮膚に送達されている。ほとんどの場合、適用によって上面表皮のターゲティングが達成された。
【０４３１】
リポソームは、２つの大きいクラスに分けられる。カチオン性リポソームは、陽荷電リポソームであり、陰荷電ＤＮＡ分子と相互作用して、安定した複合体を形成する。陽荷電ＤＮＡ／リポソーム複合体は、陰荷電細胞表面に結合し、エンドソーム内に内在化される。エンドソーム内は酸性ｐＨであるため、リポソームは破壊され、その内容物を細胞質中に放出する（Ｗａｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍｕｎ．，１９８７，１４７，９８０−９８５）。
【０４３２】
ｐＨ感受性又は陰荷電であるリポソームは、ＤＮＡと複合体化するのではなく、ＤＮＡを捕捉する。ＤＮＡと脂質は、いずれも同様に荷電していることから、複合体形成ではなく、反発が起こる。それでも、一部のＤＮＡは、これらのリポソームの水性内部に捕捉される。ｐＨ感受性リポソームは、チミジンキナーゼ遺伝子をコードするＤＮＡを培養中の細胞単層に送達するために用いられている。外性遺伝子の発現が標的細胞内で指令された（Ｚｈｏｕ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ  Ｒｅｌｅａｓｅ，１９９２，１９，２６９−２７４）。
【０４３３】
一主要タイプのリポソーム組成物は、天然由来のホスファチジルコリン以外のリン脂質を含む。中性リポソーム組成物は、例えば、ジミリストイルホスファチジルコリン（ＤＭＰＣ）又はジパルミトイルホスファチジルコリン（ＤＰＰＣ）から形成することができる。アニオン性リポソーム組成物は、一般に、ジミリストイルホスファチジルグリセロールから形成されるが、アニオン性融合性リポソームは、主に、ジオレオイルホスファチジルエタノールアミン（ＤＯＰＥ）から形成される。別のタイプのリポソーム組成物は、例えば、ダイズＰＣ及び卵ＰＣなどのホスファチジルコリン（ＰＣ）から形成される。別のタイプは、リン脂質及び／又はホスファチジルコリン及び／又はコレステロールの混合物から形成される。
【０４３４】
いくつかの研究では、皮膚へのリポソーム薬製剤の局所送達を評価している。インターフェロンを含有するリポソームをモルモットの皮膚に適用したところ、皮膚ヘルペスの軽減が達成されたのに対し、他の手段（例えば、溶液又はエマルションとして）によるインターフェロンの送達は有効ではなかった（Ｗｅｉｎｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｄｒｕｇ  Ｔａｒｇｅｔｉｎｇ，１９９２，２，４０５−４１０）。さらに、別の研究では、水性系を用いたインターフェロンの投与に対して、リポソーム製剤の一部として投与されるインターフェロンの効力を試験し、リポソーム製剤は、水性投与より優れているという結論が出された（ｄｕ  Ｐｌｅｓｓｉｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ａｎｔｉｖｉｒａｌ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ，１９９２，１８，２５９−２６５）。
【０４３５】
ノニオン性リポソーム系も、特にノニオン性界面活性剤及びコレステロールを含む系が、皮膚への薬剤送達における有用性を決定するために試験されている。Ｎｏｖａｓｏｍｅ（商標）Ｉ（ジラウリン酸グリセリル／コレステロール／ポリオキシエチレン−１０−ステアリルエーテル）及びＮｏｖａｓｏｍｅ（商標）ＩＩ（ジステアリン酸グリセリル／コレステロール／ポリオキシエチレン−１０−ステアリルエーテル）を含むノニオン性リポソーム製剤が、マウス皮膚の真皮にシクロスポリン−Ａを送達するために使用された。結果から、こうしたノニオン性リポソーム系が、皮膚の様々な層へのシクロスポリン−Ａの沈着を促進する上で有効であることがわかった（Ｈｕ  ｅｔ  ａｌ．Ｓ．Ｔ．Ｐ．Ｐｈａｒｍａ．Ｓｃｉ．，１９９４，４，６，４６６）。
【０４３６】
リポソームは、「立体安定化」リポソームも含み、この用語は、本明細書で使用されるとき、１種又は複数の特殊化脂質を含むリポソームを指し、これらの脂質は、リポソームに組み込まれると、このような特殊化脂質のないリポソームと比較して循環寿命の増加をもたらす。立体安定化リポソームの例として、リポソーム（Ａ）の小胞体形成脂質部分の一部が、モノシアロガングリオシドＧＭ１などの１種又は複数の糖脂質を含むもの、又は（Ｂ）が、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）部分などの１種又は複数の親水性ポリマーと誘導体化したものがある。特定の理論に拘束されることは意図しないが、当技術分野では、少なくともガングリオシド、スフィンゴミエリン又はＰＥＧ−誘導体化脂質を含有する、立体安定化リポソームについて、これらの立体安定化リポソームの循環寿命の増加は、細網内皮系（ＲＥＳ）の細胞への取り込み低減によるものと考えられている（Ａｌｌｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，ＦＥＢＳ  Ｌｅｔｔｅｒｓ，１９８７，２２３，４２；Ｗｕ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ，１９９３，５３，３７６５）。
【０４３７】
１種又は複数の糖脂質を含む様々なリポソームが当技術分野において公知である。Ｐａｐａｈａｄｊｏｐｏｕｌｏｓら（Ａｎｎ．Ｎ．Ｙ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．，１９８７，５０７，６４）は、リポソームの血中半減期を向上させるモノシアロガングリオシドＧＭ１、ガラクトセレブロシド硫酸及びホスファチジルイノシトールの能力を報告している。これらの知見は、Ｇａｂｉｚｏｎら（Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．，１９８８，８５，６９４９）により詳細に説明されている。米国特許第４，８３７，０２８号明細書及び国際公開第８８／０４９２４号パンフレット（いずれも、Ａｌｌｅｎらによる）は、（１）スフィンゴミエリン及び（２）ガングリオシドＧＭ１又はガラクトセレブロシド硫酸エステルを含むリポソームを開示する。米国特許第５，５４３，１５２号明細書（Ｗｅｂｂら）は、スフィンゴミエリンを含むリポソームを開示する。１，２−ｓｎ−ジミリストイルホスファチジルコリンを含むリポソームが、国際公開第９７／１３４９９号パンフレット（Ｌｉｍら）に開示されている。
【０４３８】
１種又は複数の親水性ポリマーで誘導体化された脂質を含む多くのリポソーム及びその調製方法が当技術分野で公知である。Ｓｕｎａｍｏｔｏら（Ｂｕｌｌ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．Ｊｐｎ．，１９８０，５３，２７７８）は、ＰＥＧ部分を含有するノニオン性洗剤、２Ｃ１２１５Ｇを含むリポソームを記載している。Ｉｌｌｕｍら（ＦＥＢＳ  Ｌｅｔｔ．，１９８４，１６７，７９）は、ポリマーグリコールによるポリスチレン粒子の親水性コーティングにより、血中半減期が有意に増加したことを記載している。ポリアルキレングリコール（例えば、ＰＥＧ）のカルボン酸基の結合により修飾された合成リン脂質が、Ｓｅａｒｓ（米国特許第４，４２６，３３０号明細書及び同第４，５３４，８９９号明細書）により記載されている。Ｋｌｉｂａｎｏｖら（ＦＥＢＳ  Ｌｅｔｔ．，１９９０，２６８，２３５）は、ＰＥＧで誘導体化されたホスファチジルエタノールアミン（ＰＥ）又はステアリン酸ＰＥＧを含むリポソームが、血中循環半減期の有意な増加を有することを立証する実験を記載している。Ｂｌｕｍｅら（Ｂｉｏｃｈｉｍｉｃａ  ｅｔ  Ｂｉｏｐｈｙｓｉｃａ  Ａｃｔａ，１９９０，１０２９，９１）は、こうした観察を、他のＰＥＧ−誘導体化リン脂質、例えばジステアロイルホスファチジルエタノールアミン（ＤＳＰＥ）とＰＥＧの組合せから形成されるＤＳＰＥ−ＰＥＧにまで拡大した。外側表面に共有結合したＰＥＧ部分を有するリポソームが、Ｆｉｓｈｅｒの欧州特許第０  ４４５  １３１Ｂ１号明細書及び国際公開第９０／０４３８４号パンフレットに記載されている。ＰＥＧで誘導体化されたＰＥを１〜２０モル％含有するリポソーム及びその使用方法が、Ｗｏｏｄｌｅら（米国特許第５，０１３，５５６号明細書及び同第５，３５６，６３３号明細書）並びにＭａｒｔｉｎら（米国特許第５，２１３，８０４号明細書及び欧州特許第０  ４９６  ８１３Ｂ１号明細書）に記載されている。いくつかの他の脂質−ポリマーコンジュゲートを含むリポソームが、国際公開第９１／０５５４５号パンフレット及び米国特許第５，２２５，２１２号明細書（いずれも、Ｍａｒｔｉｎら）及び国際公開第９４／２００７３号パンフレット（Ｚａｌｉｐｓｋｙら）に開示されている。ＰＥＧ修飾セラミド脂質を含むリポソームが、国際公開第９６／１０３９１号パンフレット（Ｃｈｏｉら）に記載されている。米国特許第５，５４０，９３５号明細書（Ｍｉｙａｚａｋｉら）及び米国特許第５，５５６，９４８号明細書（Ｔａｇａｗａら）は、その表面で機能性部分とさらに誘導体化することができるＰＥＧ含有リポソームを記載している。
【０４３９】
核酸を含むいくつかのリポソームが、当技術分野で知られている。Ｔｈｉｅｒｒｙらの国際公開第９６／４００６２号パンフレットは、高分子量核酸をリポソームに封入するための方法を開示している。Ｔａｇａｗａらの米国特許第５，２６４，２２１号明細書は、タンパク質結合リポソームを開示し、こうしたリポソームの内容物が、ｄｓＲＮＡを含み得ることを主張する。Ｒａｈｍａｎらの米国特許第５，６６５，７１０号明細書は、オリゴデオキシリボヌクレオチドをリポソームに封入する特定の方法を記載する。Ｌｏｖｅらの国際公開第９７／０４７８７号パンフレットは、ｒａｆ遺伝子にターゲティングされたｄｓＲＮＡを含むリポソームを開示する。
【０４４０】
トランスファーソームはまた、別のタイプのリポソームで、高度に変形可能な脂質凝集体であり、薬剤送達ビヒクルの魅力的な候補である。トランスファーソームは、脂肪滴と表現することができ、これは、高度に変形可能であるため、この脂肪滴より小さい孔を容易に透過することができる。トランスファーソームは、それらが使用される環境に適応することができ、例えば自己最適化し（皮膚の孔の形状に適応性）、自己修復し、往々にして断片化せずにその標的に到達すると共に、往々にして自己充填する。トランスファーソームを製造するために表面端活性剤、通常界面活性剤を標準的リポソーム組成物に添加することができる。トランスファーソームは、皮膚に血清アルブミンを送達するために使用されている。トランスファーソーム媒介による血清アルブミンの送達は、血清アルブミンを含有する溶液の皮下注射と同程度に有効であることが判明している。
【０４４１】
リポソーム組成物は、当技術分野で公知の様々な方法により調製することができる。例えば、以下の文献を参照されたい：米国特許第４，２３５，８７１号明細書；同第４，７３７，３２３号明細書；同第４，８９７，３５５号明細書及び同第５，１７１，６７８号明細書；国際公開第９６／１４０５７号明細書及び同第９６／３７１９４号パンフレット；Ｆｅｌｇｎｅｒ，Ｐ．Ｌ．ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．，ＵＳＡ（１９８７）８：７４１３−７４１７、Ｂａｎｇｈａｍ，ｅｔ  ａｌ．Ｍ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．（１９６５）２３：２３８、Ｏｌｓｏｎ，ｅｔ  ａｌ．Ｂｉｏｃｈｉｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ａｃｔａ（１９７９）５５７：９、Ｓｚｏｋａ，ｅｔ  ａｌ．Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．（１９７８）７５：４１９４、Ｍａｙｈｅｗ，ｅｔ  ａｌ．Ｂｉｏｃｈｉｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ａｃｔａ（１９８４）７７５：１６９、Ｋｉｍ，ｅｔ  ａｌ．Ｂｉｏｃｈｉｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ａｃｔａ（１９８３）７２８：３３９及びＦｕｋｕｎａｇａ，ｅｔ  ａｌ．Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ．（１９８４）１１５：７５７。
【０４４２】
界面活性剤は、エマルション（マイクロエマルションを含む）及びリポソームなどの製剤において広範な適用が見出される。天然及び合成両方の多種多様な界面活性剤の特性を分類及び等級化する最も一般的な方法は、親水性／親油性バランス（ＨＬＢ）の使用によるものである。親水基の性質（「頭部」としても知られる）は、製剤に使用される様々な界面活性剤を分類する最も有用な手段を提供する（Ｒｉｅｇｅｒ，ｉｎ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｄｏｓａｇｅ  Ｆｏｒｍｓ，Ｍａｒｃｅｌ  Ｄｅｋｋｅｒ，Ｉｎｃ．，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，Ｎ．Ｙ．，１９８８，ｐ．２８５）。
【０４４３】
界面活性剤分子がイオン化されていなければ、これは、ノニオン性界面活性剤として分類される。ノニオン性界面活性剤は、医薬品及び化粧品に広範な適用が見出され、広範囲のｐＨ値で使用可能である。一般に、それらのＨＬＢ値は、その構造に応じて２〜約１８の範囲である。ノニオン性界面活性剤は、エチレングリコールエステル、プロピレングリコールエステル、グリセリルエステル、ポリグリセリルエステル、ソルビタンエステル、スクロースエステル及びエトキシル化エステルなどのノニオン性エステルを含む。脂肪アルコールエトキシレート、プロポキシル化アルコール及びエトキシル化／プロポキシル化ブロックポリマーなどのノニオン性アルカノールアミド及びエーテルもこのクラスに含まれる。ポリオキシエチレン界面活性剤は、ノニオン性界面活性剤クラスの最も一般的なメンバーである。
【０４４４】
水に溶解若しくは分散させたとき、界面活性剤分子が陰電荷を帯びる場合、この界面活性剤は、アニオン性として分類される。アニオン性界面活性剤としては、石鹸などのカルボン酸塩、アシルラクチレート、アミノ酸のアシルアミド、硫酸アルキル及びエトキシル化硫酸アルキルなどの硫酸のエステル、アルキルベンゼンスルホン酸塩などのスルホン酸塩、イセチオン酸アシル、アシルタウリン（ａｃｙｌ  ｔａｕｒａｔｅ）及びスルホコハク酸塩及びリン酸塩が挙げられる。アニオン性界面活性剤クラスの最も重要なメンバーは、硫酸アルキル及び石鹸である。
【０４４５】
水に溶解若しくは分散させたとき、界面活性剤分子が陽電荷を帯びる場合、この界面活性剤は、カチオン性として分類される。カチオン性界面活性剤としては、第４級アンモニウム塩及びエトキシル化アミンが挙げられる。第４級アンモニウム塩は、このクラスの最も使用されているメンバーである。
【０４４６】
界面活性剤分子が、陽電荷又は陰電荷のいずれかを帯びる能力を有する場合、この界面活性剤は、両性として分類される。両性界面活性剤としては、アクリル酸誘導体、置換アルキルアミド、Ｎ−アルキルベタイン及びホスファチドが挙げられる。
【０４４７】
製薬品、製剤及びエマルションでの界面活性剤の使用について論じられている（Ｒｉｅｇｅｒ，ｉｎ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｄｏｓａｇｅ  Ｆｏｒｍｓ，Ｍａｒｃｅｌ  Ｄｅｋｋｅｒ，Ｉｎｃ．，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，Ｎ．Ｙ．，１９８８，ｐ．２８５）。
【０４４８】
脂質粒子
一部の実施形態では、調整性ＲＥＶＥＲＳＩＲを脂質製剤、例えばＬＮＰ又は他の核酸−脂質粒子中に完全に封入することができる。脂質製剤に封入された調整性ＲＥＶＥＲＳＩＲは、リガンドと共役させなくても又は共役させてもよい（すなわち共役された調整性ＲＥＶＥＲＳＩＲ）。
【０４４９】
本明細書で使用されるとき、用語「ＬＮＰ」は、安定した核酸−脂質粒子を指す。ＬＮＰは、カチオン性脂質、非カチオン性脂質及び粒子の凝集を防ぐ脂質（例えば、ＰＥＧ−脂質コンジュゲート）を含む。ＬＮＰは、静脈内（ｉ．ｖ．）注射後に長期の循環寿命を呈示し、離れた部位（例えば、投与部位から物理的に離れた部位）に蓄積することから、全身適用に極めて有用である。ＬＮＰは、「ｐＳＰＬＰ」を含み、これは、ＰＣＴ公開国際公開第００／０３６８３号パンフレットに記載されている通り、封入された縮合剤−核酸複合体を含む。本発明の粒子は、典型的には約５０ｎｍ〜約１５０ｎｍ、より典型的には約６０ｎｍ〜約１３０ｎｍ、より典型的には約７０ｎｍ〜約１１０ｎｍ、最も典型的には約７０ｎｍ〜約９０ｎｍの平均粒径を有し、実質的に無毒性である。さらに、核酸は、本発明の核酸−脂質粒子に存在する場合、水溶液中でヌクレアーゼによる分解に対して耐性である。核酸−脂質粒子及びそれらの調製方法は、例えば、米国特許第５，９７６，５６７号明細書；同第５，９８１，５０１号明細書；同第６，５３４，４８４号明細書；同第６，５８６，４１０号明細書；同第６，８１５，４３２号明細書；米国特許出願公開第２０１０／０３２４１２０号明細書及びＰＣＴ公開国際公開第９６／４０９６４号パンフレットに開示されている。
【０４５０】
一部の実施形態では、脂質及び薬剤比（質量／質量比）（例えば、脂質対調整性ＲＥＶＥＲＳＩＲ比）は、約１：１〜約５０：１、約１：１〜約２５：１、約３：１〜約１５：１、約４：１〜約１０：１、約５：１〜約９：１又は約６：１〜約９：１の範囲である。上に挙げた範囲の中間の範囲も本発明の一部であると考慮される。
【０４５１】
カチオン性脂質は、例えば、Ｎ，Ｎ−ジオレイル−Ｎ，Ｎ−ジメチルアンモニウム塩化物（ＤＯＤＡＣ）、Ｎ，Ｎ−ジステアリル−Ｎ，Ｎ−ジメチルアンモニウム臭化物（ＤＤＡＢ）、Ｎ−（Ｉ−（２，３−ジオレオイルオキシ）プロピル）−Ｎ，Ｎ，Ｎ−トリメチルアンモニウム塩化物（ＤＯＴＡＰ）、Ｎ−（Ｉ−（２，３−ジオレオイルオキシ）プロピル）−Ｎ，Ｎ，Ｎ−トリメチルアンモニウム塩化物（ＤＯＴＭＡ）、Ｎ，Ｎ−ジメチル−２，３−ジオレオイルオキシ）プロピルアミン（ＤＯＤＭＡ）、１，２−ジリノレイルオキシ−Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノプロパン（ＤＬｉｎＤＭＡ）、１，２−ジリノレニルオキシ−Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノプロパン（ＤＬｅｎＤＭＡ）、１，２−ジリノレイルカルバモイルオキシ−３−ジメチルアミノプロパン（ＤＬｉｎ−Ｃ−ＤＡＰ）、１，２−ジリノレイオキシ−３−（ジメチルアミノ）アセトキシプロパン（ＤＬｉｎ−ＤＡＣ）、１，２−ジリノレイオキシ−３−モルホリノプロパン（ＤＬｉｎ−ＭＡ）、１，２−ジリノレイル−３−ジメチルアミノプロパン（ＤＬｉｎＤＡＰ）、１，２−ジリノレイルチオ−３−ジメチルアミノプロパン（ＤＬｉｎ−Ｓ−ＤＭＡ）、１−リノレイル−２−リノレイルオキシ−３−ジメチルアミノプロパン（ＤＬｉｎ−２−ＤＭＡＰ）、１，２−ジリノレイルオキシ−３−トリメチルアミノプロパン塩化物塩（ＤＬｉｎ−ＴＭＡ．Ｃｌ）、１，２−ジリノレイル−３−トリメチルアミノプロパン塩化物塩（ＤＬｉｎ−ＴＡＰ．Ｃｌ）、１，２−ジリノレイルオキシ−３−（Ｎ−メチルピペラジノ）プロパン（ＤＬｉｎ−ＭＰＺ）又は３−（Ｎ，Ｎ−ジリノレイルアミノ）−１，２−プロパンジオール（ＤＬｉｎＡＰ）、３−（Ｎ，Ｎ−ジオレイルアミノ）−１，２−プロパンジオ（ＤＯＡＰ）、１，２−ジリノレニルオキソ−３−（２−Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノ）エトキシプロパン（ＤＬｉｎ−ＥＧ−ＤＭＡ）、１，２−ジリノレニルオキシ−Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノプロパン（ＤＬｉｎＤＭＡ）、２，２−ジリノレイル−４−ジメチルアミノメチル−［１，３］−ジオキソラン（ＤＬｉｎ−Ｋ−ＤＭＡ）又はそれらの類似体、（３ａＲ，５ｓ，６ａＳ）−Ｎ，Ｎ−ジメチル−２，２−ジ（（９Ｚ，１２Ｚ）−オクダデカ−９，１２−ジエニル）テトラヒドロ−３ａＨ−シクロペンタ［ｄ］［１，３］ジオキソ−５−アミン（ＡＬＮ１００）、（６Ｚ，９Ｚ，２８Ｚ，３１Ｚ）−ヘプタトリアコンタ−６，９，２８，３１−テトラエン−１９−イル４−（ジメチルアミノ）ブタン酸塩（ＭＣ３）、１，１’−（２−（４−（２−（（２−（ビス（２−ヒドロキシドデシル）アミノ）エチル）（２−ヒドロキシドデシル）アミノ）エチル）ピペラジン−１−イル）エチルアザネジル）ジドデカン−２−オール又はこれらの混合物であり得る。カチオン性脂質は、粒子中に存在する総脂質の約２０モル％〜約５０モル％又は約４０モル％を占めることができる。
【０４５２】
一部の実施形態では、化合物２，２−ジリノレイル−４−ジメチルアミノエチル−［１，３］−ジオキソランを用いて、脂質−調整性ＲＥＶＥＲＳＩＲナノ粒子を調製することができる。２，２−ジリノレイル−４−ジメチルアミノエチル−［１，３］−ジオキソランの合成は、国際公開第２０１０／０４８５３６号パンフレットとして公開された国際出願ＰＣＴ／米国特許出願公開第２００９／０６１８９７号明細書に記載されており、これは、参照により本明細書に組み込まれる。
【０４５３】
一部の実施形態では、脂質−調整性ＲＥＶＥＲＳＩＲ粒子は、４０％の２，２−ジリノレイル−４−ジメチルアミノエチル−［１，３］−ジオキソラン：１０％ＤＳＰＣ：４０％コレステロール：１０％ＰＥＧ−Ｃ−ＤＯＭＧ（モル％）を含み、６３．０±２０ｎｍの粒度及び０．０２７の調整性ＲＥＶＥＲＳＩＲ／脂質比を有する。
【０４５４】
イオン化／非カチオン性脂質は、アニオン性脂質又は中性脂質であり得、限定はしないが、ジステアロイルホスファチジルコリン（ＤＳＰＣ）、ジオレオイルホスファチジルコリン（ＤＯＰＣ）、ジパルミトイルホスファチジルコリン（ＤＰＰＣ）、ジオレオイルホスファチジルグリセロール（ＤＯＰＧ）、ジパルミトイルホスファチジルグリセロール（ＤＰＰＧ）、ジオレオイルホスファチジルエタノールアミン（ＤＯＰＥ）、パルミトイルオレイルホスファチジルコリン（ＰＯＰＣ）、パルミトイルオレイルホスファチジルエタノールアミン（ＰＯＰＥ）、ジオレオイル−ホスファチジルエタノールアミン４−（Ｎ−マレイミドメチル）−シクロヘキサン−１−カルボン酸塩（ＤＯＰＥ−ｍａｌ）、ジパルミトイルホスファチジルエタノールアミン（ＤＰＰＥ）、ジミリストイルホスホエタノールアミン（ＤＭＰＥ）、ジステアロイル−ホスファチジルエタノールアミン（ＤＳＰＥ）、１６−Ｏ−モノメチルＰＥ、１６−Ｏ−ジメチルＰＥ、１８−１−トランスＰＥ、１−ステアロイル−２−オレオイル−ホスファチジエタノールアミン（ＳＯＰＥ）、コレステロール又はこれらの混合物が挙げられる。非カチオン性脂質は、粒子中に存在する総脂質の約５モル％〜約９０モル％、約１０モル％又はコレステロールが含まれる場合には約５８モル％を占めることができる。
【０４５５】
粒子の凝集を阻害する共役脂質は、例えば、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）−脂質であり得、限定はしないが、ＰＥＧ−ジアシルグリセロール（ＤＡＧ）、ＰＥＧ−ジアルキルオキシプロピル（ＤＡＡ）、ＰＥＧ−リン脂質、ＰＥＧ−セラミド（Ｃｅｒ）又はこれらの混合物を含む。ＰＥＧ−ＤＡＡコンジュゲートは、例えば、ＰＥＧ−ジラウリルオキシプロピル（Ｃ１２）、ＰＥＧ−ジミリスチルオキシプロピル（Ｃ１４）、ＰＥＧ−ジパルミチルオキシプロピル（Ｃ１６）又はＰＥＧ−ジステアロイルオキシプロピル（Ｃ１８）であり得る。粒子の凝集を阻害する共役脂質は、粒子中に存在する総脂質の０モル％〜約２０モル％又は約２モル％を占めることができる。
【０４５６】
一部の実施形態では、核酸−脂質粒子は、例えば、粒子中に存在する総脂質の約１０モル％〜約６０モル％又は約４８モル％のコレステロールをさらに含む。
【０４５７】
他の例示的な脂質−調整性ＲＥＶＥＲＳＩＲ製剤を以下の表１に記載する。
【０４５８】
【表２】
2020531450.tif 000088
【０４５９】
【表３】
2020531450.tif 000089
【０４６０】
【表４】
2020531450.tif 000090
【０４６１】
表１内の略語は、下記のものを含む：ＤＳＰＣ：ジステアロイルホスファチジルコリン；ＤＰＰＣ：ジパルミトイルホスファチジルコリン；ＰＥＧ−ＤＭＧ：ＰＥＧ−ジジミリストイルグリセロール（Ｃ１４−ＰＥＧ又はＰＥＧ−Ｃ１４）（平均分子量２０００のＰＥＧ）；ＰＥＧ−ＤＳＧ：ＰＥＧ−ジスチリルグリセロール（Ｃ１８−ＰＥＧ又はＰＥＧ−Ｃ１８）（平均分子量２０００のＰＥＧ）；ＰＥＧ−ｃＤＭＡ：ＰＥＧ−カルバモイル−１，２−ジミリスチルオキシプロピルアミン（平均分子量２０００のＰＥＧ）。
【０４６２】
ＤＬｉｎＤＭＡ（１，２−ジリノレニルオキシ−Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノプロパン）含有の製剤は、２００９年４月１５日出願の国際公開第２００９／１２７０６０号パンフレットに記載されており、これは、参照により本明細書に組み込まれる。
【０４６３】
ＸＴＣ含有の製剤は、例えば、２００９年１月２９日出願の米国仮特許出願第６１／１４８，３６６号明細書；２００９年３月２日出願の米国仮特許出願第６１／１５６，８５１号明細書；２００９年６月１０日出願の米国仮特許出願；２００９年７月２４日出願の米国仮特許出願第６１／２２８，３７３号明細書；２００９年９月３日出願の米国仮特許出願第６１／２３９，６８６号明細書；並びに２０１０年１月２９日出願の国際出願番号ＰＣＴ／米国特許出願公開第２０１０／０２２６１４号明細書に記載されており、これらは、参照により本明細書に組み込まれる。
【０４６４】
ＭＣ３含有の製剤は、例えば、２０１０年６月１０日出願の米国特許出願公開第２０１０／０３２４１２０号明細書に記載されており、その全内容は、参照により本明細書に組み込まれる。
【０４６５】
生分解性脂質含有の製剤は、例えば、２０１１年６月３日出願のＰＣＴ公開国際公開第２０１１／１５３４９３号パンフレット及び２０１２年１２月７日出願のＰＣＴ公開国際公開第２０１３／０８６３５４号パンフレットに記載されており、その全内容は、参照により本明細書に組み込まれる。
【０４６６】
（１３Ｚ，１６Ｚ）−Ｎ，Ｎ−ジメチル−３−ノニルドコサ−１３，１６−ジエン−１−アミン含有の製剤は、例えば、２０１１年９月２０日出願の国際公開第２０１２／０４０１８４号パンフレットに記載されており、その全内容は、参照により本明細書に組み込まれる。
【０４６７】
本発明のオリゴマー化合物は、ミセルとして調製及び製剤化することができる。本明細書で使用されるとき、「ミセル」は、分子上の疎水性部分が全て、内部へ向かい、親水性部分が周囲の水層と接触したまま残るように、両親媒性分子が球状構造内に配置される特定のタイプの分子集合体である。環境が疎水性である場合、逆の配置が存在する。
【０４６８】
一部の実施形態では、製剤は、本発明のオリゴヌクレオチドと少なくとも１種の両親媒性担体から形成されるミセルを含み、ここで、ミセルは、好ましくは約１００ｎｍ未満の平均直径を有する。より好ましい実施形態は、約５０ｎｍ未満の平均直径を有するミセルを提供し、さらに好ましい実施形態は、約３０ｎｍ未満又はさらに約２０ｎｍ未満の平均直径を有するミセルを提供する。
【０４６９】
ミセル製剤は、オリゴヌクレオチド組成物の水溶液、アルカリ金属Ｃ８〜Ｃ２２アルキル硫酸塩及び両親媒性担体を混合することによって調製することができる。両親媒性担体は、アルカリ金属アルキル硫酸塩の添加と同時に又は添加後に添加することができる。ミセルは、より微小な粒度のミセルを提供するために、激しい混合以外の実質的にあらゆる種類の成分の混合によって形成される。
【０４７０】
本発明のオリゴマー化合物は、エマルションとして調製及び製剤化することができる。本明細書で使用されるとき、「エマルション」は、液滴の形態で別の液体に分散された１液体の不均質系である。
【０４７１】
エマルションは、多くの場合、互いに入念に混合し、分散させた２つの非混和性液相を含む二相系である。一般に、エマルションは、油中水型（ｗ／ｏ）又は水中油型（ｏ／ｗ）の種類のいずれかであり得る。水相が、バルク油相中で微細に分割され、微小液滴として分散された場合、得られる組成物は、油中水型（ｗ／ｏ）エマルションと呼ばれる。代わりに、油相がバルク水相中で微細に分割され、微小液滴として分散された場合、得られる組成物は、水中油型（ｏ／ｗ）エマルションと呼ばれる。エマルションは、分散相及び活性薬物に加えて追加の成分を含み得、この追加成分は、水相、油相中の溶液として又はそれ自体が別個の相として存在し得る。必要に応じてエマルション中に、乳化剤、安定剤、色素及び抗酸化剤などの製剤用賦形剤も存在し得る。医薬エマルションは、例えば、油中水中油型（ｏ／ｗ／ｏ）及び水中油中水型（ｗ／ｏ／ｗ）エマルションの場合など、３つ以上の相から構成される多重エマルションであり得る。このような複合製剤は、多くの場合、単純な２成分エマルションが提供しないいくつかの利点を提供する。ｏ／ｗエマルションの個々の油滴が、微小な水滴を取り囲む多重エマルションは、ｗ／ｏ／ｗエマルションを構成する。同様に、油性連続相中に安定化された水の小滴に取り囲まれた油滴の系は、ｏ／ｗ／ｏエマルションを構成する。
【０４７２】
エマルションは、熱力学的安定性がほとんど又は全くないことを特徴とする。多くの場合、エマルションの分散又は不連続相は、外側又は連続相中に良好に分散され、乳化剤を用いて又は製剤の粘度によってこの形態で維持される。エマルションの相のいずれかは、エマルションタイプの軟膏基剤及びクリームがそうであるように、半固体又は固体であり得る。エマルションを安定化する他の手段は、エマルションのいずれかの相に組み込まれ得る乳化剤の使用を含む。乳化剤は、大きく４つのカテゴリー：合成界面活性剤、天然に存在する乳化剤、吸収性基剤及び微細に分散した固体に分類され得る（Ｉｄｓｏｎ，ｉｎ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｄｏｓａｇｅ  Ｆｏｒｍｓ，Ｌｉｅｂｅｒｍａｎ，Ｒｉｅｇｅｒ  ａｎｄ  Ｂａｎｋｅｒ（Ｅｄｓ．），１９８８，Ｍａｒｃｅｌ  Ｄｅｋｋｅｒ，Ｉｎｃ．，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，Ｎ．Ｙ．，ｖｏｌｕｍｅ  １，ｐ．１９９）。
【０４７３】
表面活性剤としても知られる合成界面活性剤は、エマルションの製剤化に広範な適用性があり、文献でも概説されている（Ｒｉｅｇｅｒ，ｉｎ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｄｏｓａｇｅ  Ｆｏｒｍｓ，Ｌｉｅｂｅｒｍａｎ，Ｒｉｅｇｅｒ  ａｎｄ  Ｂａｎｋｅｒ（Ｅｄｓ．），１９８８，Ｍａｒｃｅｌ  Ｄｅｋｋｅｒ，Ｉｎｃ．，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，Ｎ．Ｙ．，ｖｏｌｕｍｅ  １，ｐ．２８５；Ｉｄｓｏｎ，ｉｎ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｄｏｓａｇｅ  Ｆｏｒｍｓ，Ｌｉｅｂｅｒｍａｎ，Ｒｉｅｇｅｒ  ａｎｄ  Ｂａｎｋｅｒ（Ｅｄｓ．），Ｍａｒｃｅｌ  Ｄｅｋｋｅｒ，Ｉｎｃ．，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，Ｎ．Ｙ．，１９８８，ｖｏｌｕｍｅ  １，ｐ．１９９）。界面活性剤は、典型的には両親媒性であり、親水性及び疎水性部分を含む。界面活性剤の親水性対疎水性の比は、親水性／親油性バランス（ＨＬＢ）と称されており、製剤の調製に際して界面活性剤を分類し、選択する上で価値のあるツールである。界面活性剤は、親水基：ノニオン性、アニオン性、カチオン性及び両性の性質に基づいて様々なクラスに分類することができる（Ｒｉｅｇｅｒ，ｉｎ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｄｏｓａｇｅ  Ｆｏｒｍｓ，Ｌｉｅｂｅｒｍａｎ，Ｒｉｅｇｅｒ  ａｎｄ  Ｂａｎｋｅｒ（Ｅｄｓ．），１９８８，Ｍａｒｃｅｌ  Ｄｅｋｋｅｒ，Ｉｎｃ．，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，Ｎ．Ｙ．，ｖｏｌｕｍｅ  １，ｐ．２８５）。
【０４７４】
エマルション製剤に用いられる天然に存在する乳化剤としては、ラノリン、蜜蝋、ホスファチド、レシチン及びアカシアが挙げられる。吸収性基剤は、無水ラノリン及び親水性ワセリンなどのように、水を吸収して、ｗ／ｏ型エマルションを形成するが、尚その半固体稠度を維持するような親水性特性を有する。また、微粉砕された固体も、特に界面活性剤と組み合わせて且つ粘性調製物中で優れた乳化剤として使用されている。こうしたものとして、重金属水酸化物などの極性無機固体、ベントナイト、アタパルガイト、ヘクトライト、カオリン、モンモリロナイト、コロイド状ケイ酸アルミニウム及びコロイド状ケイ酸アルミニウムマグネシウムなどの非膨潤性粘土、顔料並びに炭素などの非極性固体又はトリステアリン酸グリセリルが挙げられる。
【０４７５】
非常に多様な非乳化材料もエマルション製剤に含有され、エマルションの特性に寄与する。こうしたものとして、脂肪、油、蝋、脂肪酸、脂肪アルコール、脂肪酸エステル、湿潤剤、親水性コロイド、保存料及び抗酸化剤が挙げられる（Ｂｌｏｃｋ，ｉｎ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｄｏｓａｇｅ  Ｆｏｒｍｓ，Ｌｉｅｂｅｒｍａｎ，Ｒｉｅｇｅｒ  ａｎｄ  Ｂａｎｋｅｒ（Ｅｄｓ．），１９８８，Ｍａｒｃｅｌ  Ｄｅｋｋｅｒ，Ｉｎｃ．，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，Ｎ．Ｙ．，ｖｏｌｕｍｅ  １，ｐ．３３５；Ｉｄｓｏｎ，ｉｎ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｄｏｓａｇｅ  Ｆｏｒｍｓ，Ｌｉｅｂｅｒｍａｎ，Ｒｉｅｇｅｒ  ａｎｄ  Ｂａｎｋｅｒ（Ｅｄｓ．），１９８８，Ｍａｒｃｅｌ  Ｄｅｋｋｅｒ，Ｉｎｃ．，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，Ｎ．Ｙ．，ｖｏｌｕｍｅ  １，ｐ．１９９）。
【０４７６】
親水性コロイド又は親水コロイドとしては、多糖（例えば、アカシア、寒天、アルギン酸、カラギーナン、グアーガム、カラヤガム及びトラガカンス）、セルロース誘導体（例えば、カルボキシメチルセルロース及びカルボキシプロピルセルロース）並びに合成ポリマー（例えば、カルボマー、セルロースエーテル及びカルボキシビニルポリマー）などの天然ゴム及び合成ポリマーが挙げられる。これらは水中に分散するか、又は膨潤して、分散相小滴の周囲に強力な界面膜を形成することにより、且つ外部相の粘度を高めることにより、エマルションを安定化するコロイド溶液を形成する。
【０４７７】
エマルションは、多くの場合、細菌の増殖を容易に支持し得る炭水化物、タンパク質、ステロール及びホスファチドなどのいくつかの成分を往々にして含有することから、これらの製剤は、保存料を含むことが多い。エマルション製剤中に含まれる、常用の保存料としては、メチルパラベン、プロピルパラベン、第４級アンモニウム塩、塩化ベンザルコニウム、ｐ−ヒドロキシ安息香酸のエステル及びホウ酸が挙げられる。また、製剤の分解を防止するために、抗酸化剤もエマルション製剤に一般に添加される。使用される抗酸化剤は、トコフェロール、没食子酸アルキル、ブチル化ヒドロキシアニソール、ブチル化ヒドロキシトルエンなどの遊離ラジカルスカベンジャー又はアスコルビン酸及びメタ重亜硫酸ナトリウムなどの還元剤並びにクエン酸、酒石酸及びレシチンなどの抗酸化剤共力剤であり得る。
【０４７８】
一部の実施形態では、組成物は、マイクロエマルションとして製剤化される。本明細書で使用されるとき、「マイクロエマルション」は、単一の光学的に等方性で、且つ熱力学的に安定した溶液である、水、油及び両親媒質の系を指す。マイクロエマルションは、表面活性分子の界面膜により安定化された２種の非混和性液体の熱力学的に安定し、等方的に透明な分散体も含む。
【０４７９】
マイクロエマルションは、単一の光学的に等方性で、且つ熱力学的に安定した溶液である、水、油及び両親媒質の系として定義することができる（Ｒｏｓｏｆｆ，ｉｎ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｄｏｓａｇｅ  Ｆｏｒｍｓ，Ｌｉｅｂｅｒｍａｎ，Ｒｉｅｇｅｒ  ａｎｄ  Ｂａｎｋｅｒ（Ｅｄｓ．），１９８８，Ｍａｒｃｅｌ  Ｄｅｋｋｅｒ，Ｉｎｃ．，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，Ｎ．Ｙ．，ｖｏｌｕｍｅ  １，ｐ．２４５）。典型的には、マイクロエマルションは、最初に水性界面活性剤溶液中に油を分散させ、次に、十分な量の第４の成分（一般に、中間の鎖長アルコール）を添加して、透明な系を形成することによって調製される系である。従って、マイクロエマルションは、表面活性分子の界面膜により安定化されている２つの非混和性液体から構成される、熱力学的に安定し、等方的に透明な分散体として記載されている（Ｌｅｕｎｇ  ａｎｄ  Ｓｈａｈ，ｉｎ：Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ  Ｒｅｌｅａｓｅ  ｏｆ  Ｄｒｕｇｓ：Ｐｏｌｙｍｅｒｓ  ａｎｄ  Ａｇｇｒｅｇａｔｅ  Ｓｙｓｔｅｍｓ，Ｒｏｓｏｆｆ，Ｍ．，Ｅｄ．，１９８９，ＶＣＨ  Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，ｐａｇｅｓ  １８５−２１５）。マイクロエマルションは、一般に、油、水、界面活性剤、補助界面活性剤及び電解質を含む３〜５つの成分の組合せを用いて調製される。マイクロエマルションが、油中水型（ｗ／ｏ）又は水中油型（ｏ／ｗ）タイプのいずれであるかは、使用される油及び界面活性剤の特性並びに界面活性剤分子の極性頭部及び炭化水素尾部の構造及び幾何学的充填に左右される（Ｓｃｈｏｔｔ，ｉｎ  Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏ．，Ｅａｓｔｏｎ，Ｐａ．，１９８５，ｐ．２７１）。
【０４８０】
相図を使用する現象学的手法が広範に研究されており、当業者は、マイクロエマルションを製剤化する方法についての包括的知識を得ている（Ｒｏｓｏｆｆ，ｉｎ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｄｏｓａｇｅ  Ｆｏｒｍｓ，Ｌｉｅｂｅｒｍａｎ，Ｒｉｅｇｅｒ  ａｎｄ  Ｂａｎｋｅｒ（Ｅｄｓ．），１９８８，Ｍａｒｃｅｌ  Ｄｅｋｋｅｒ，Ｉｎｃ．，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，Ｎ．Ｙ．，ｖｏｌｕｍｅ  １，ｐ．２４５；Ｂｌｏｃｋ，ｉｎ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｄｏｓａｇｅ  Ｆｏｒｍｓ，Ｌｉｅｂｅｒｍａｎ，Ｒｉｅｇｅｒ  ａｎｄ  Ｂａｎｋｅｒ（Ｅｄｓ．），１９８８，Ｍａｒｃｅｌ  Ｄｅｋｋｅｒ，Ｉｎｃ．，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，Ｎ．Ｙ．，ｖｏｌｕｍｅ  １，ｐ．３３５）。従来のエマルションと比較して、マイクロエマルションは、自発的に形成される熱力学的に安定した液滴の製剤中に水不溶性薬剤を可溶化するという利点を提供する。
【０４８１】
マイクロエマルションの調製に使用される界面活性剤として、限定はしないが、単独又は補助界面活性剤との組合せで、イオン性界面活性剤、ノニオン性界面活性剤、Ｂｒｉｊ９６、ポリエチレンオレイルエーテル、ポリグリセロール脂肪酸エステル、モノラウリン酸テトラグリセロール（ＭＬ３１０）、モノオレイン酸テトラグリセロール（ＭＯ３１０）、モノオレイン酸ヘキサグリセロール（ＰＯ３１０）、ペンタオレイン酸ヘキサグリセロール（ＰＯ５００）、モノカプリン酸デカグリセロール（ＭＣＡ７５０）、モノオレイン酸デカグリセロール（ＭＯ７５０）、セキオレイン酸（ｓｅｑｕｉｏｌｅａｔｅ）デカグリセロール（ＳＯ７５０）、デカオレイン酸デカグリセロール（ＤＡＯ７５０）が挙げられる。通常、エタノール、１−プロパノール及び１−ブタノールなどの短鎖アルコールである補助界面活性剤は、界面活性剤薄膜中に浸透し、その結果、界面活性剤分子間に生成された空隙空間によって不規則な薄膜を形成することにより、界面流動性を増大させる役割を果たす。しかしながら、マイクロエマルションは、補助界面活性剤を使用することなく調製することができ、アルコールフリー自己乳化型マイクロエマルション系は、当技術分野において公知である。水性相は、典型的に、限定はしないが、水、薬剤の水溶液、グリセロール、ＰＥＧ３００、ＰＥＧ４００、ポリグリセロール、プロピレングリコール及びエチレングリコールの誘導体であり得る。油相は、限定はしないが、Ｃａｐｔｅｘ  ３００、Ｃａｐｔｅｘ  ３５５、Ｃａｐｍｕｌ  ＭＣＭ、脂肪酸エステル、中鎖（Ｃ８〜Ｃ１２）モノ、ジ及びトリ−グリセリド、ポリオキシエチル化グリセリル脂肪酸エステル、脂肪アルコール、ポリグリコール化グリセリド、飽和ポリグリコール化Ｃ８〜Ｃ１０グリセリド、植物油及びシリコーン油などの材料を含み得る。
【０４８２】
マイクロエマルションは、薬剤可溶化及び薬剤吸収向上の観点から特に興味深い。脂質ベースのマイクロエマルション（ｏ／ｗ及びｗ／ｏの両方）は、ペプチドを含む薬剤の経口バイオアベイラビリティを向上させるために提案されている（Ｃｏｎｓｔａｎｔｉｎｉｄｅｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ，１９９４，１１，１３８５−１３９０；Ｒｉｔｓｃｈｅｌ，Ｍｅｔｈ．Ｆｉｎｄ．Ｅｘｐ．Ｃｌｉｎ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．，１９９３，１３，２０５）。マイクロエマルションは、薬剤可溶化の改善、酵素加水分解からの薬剤の保護、界面活性剤誘導による膜流動性及び透過性の改変に起因する薬剤吸収の考えられる向上、調製の容易さ、固体剤形と比べた経口投与の容易さ、臨床的効力の改善及び毒性の低減という利点を提供する（Ｃｏｎｓｔａｎｔｉｎｉｄｅｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ，１９９４，１１，１３８５；Ｈｏ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｐｈａｒｍ．Ｓｃｉ．，１９９６，８５，１３８−１４３）。多くの場合、マイクロエマルションは、その成分が周囲温度で一緒にされると自発的に形成され得る。このことは、易熱性薬剤、ペプチド又はｄｓＲＮＡを製剤化する際に特に有利となり得る。マイクロエマルションは、美容及び医薬用途の両方において活性構成成分の経皮送達にも有効である。本発明のマイクロエマルション組成物及び製剤が、胃腸管からのｄｓＲＮＡ及び核酸の全身吸収の増大並びにｄｓＲＮＡ及び核酸の局部細胞取り込みの改善を促進することが期待される。
【０４８３】
さらに、本発明のマイクロエマルションは、製剤の特性を改善し、且つ本発明のｄｓＲＮＡ及び核酸の吸収を向上させるために、モノステアリン酸ソルビタン（Ｇｒｉｌｌ３）、ラブラソール（Ｌａｂｒａｓｏｌ）及び透過促進剤などの追加の成分及び添加剤を含有し得る。本発明のマイクロエマルションに使用される透過促進剤は、５つの大きいカテゴリー：界面活性剤、脂肪酸、胆汁酸塩、キレート化剤及び非キレート化非界面活性剤の１つに属するものとして分類することができる（Ｌｅｅ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｒｉｔｉｃａｌ  Ｒｅｖｉｅｗｓ  ｉｎ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ  Ｄｒｕｇ  Ｃａｒｒｉｅｒ  Ｓｙｓｔｅｍｓ，１９９１，ｐ．９２）。これらのクラスの各々は、上に論じている。
【０４８４】
皮膚科学、経口及び非経口経路によるエマルション製剤の適用並びにその製造方法は、文献、例えばＩｄｓｏｎ，ｉｎ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｄｏｓａｇｅ  Ｆｏｒｍｓ，Ｌｉｅｂｅｒｍａｎ，Ｒｉｅｇｅｒ  ａｎｄ  Ｂａｎｋｅｒ（Ｅｄｓ．），１９８８，Ｍａｒｃｅｌ  Ｄｅｋｋｅｒ，Ｉｎｃ．，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，Ｎ．Ｙ．，ｖｏｌｕｍｅ  １，ｐ．１９９；Ｒｏｓｏｆｆ，ｉｎ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｄｏｓａｇｅ  Ｆｏｒｍｓ，Ｌｉｅｂｅｒｍａｎ，Ｒｉｅｇｅｒ  ａｎｄ  Ｂａｎｋｅｒ（Ｅｄｓ．），１９８８，Ｍａｒｃｅｌ  Ｄｅｋｋｅｒ，Ｉｎｃ．，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，Ｎ．Ｙ．，ｖｏｌｕｍｅ  １，ｐ．２４５；及びＢｌｏｃｋ，ｉｎ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｄｏｓａｇｅ  Ｆｏｒｍｓ，Ｌｉｅｂｅｒｍａｎ，Ｒｉｅｇｅｒ  ａｎｄ  Ｂａｎｋｅｒ（Ｅｄｓ．），１９８８，Ｍａｒｃｅｌ  Ｄｅｋｋｅｒ，Ｉｎｃ．，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，Ｎ．Ｙ．，ｖｏｌｕｍｅ  １，ｐ．３３５に論述されており、これらの内容は、全体として参照により本明細書に組み込まれる。
【０４８５】
本発明のオリゴマー化合物は、脂質粒子、例えば（ａ）本発明のオリゴヌクレオチド（前記オリゴヌクレオチドは、親油性物質に共役されている）と、（ｂ）共役オリゴヌクレオチドが凝集、混合又は結合される、少なくとも１つの脂質成分、例えばエマルション、リポソーム、単離リポタンパク質、再構成リポタンパク質若しくはリン脂質とを含む製剤化脂質粒子（ＦＬｉＰ）として調製及び製剤化することができる。オリゴヌクレオチドと脂質成分の化学量論は、１：１であり得る。代わりに、この化学量論は、１：多、多：１又は多：多であり得、ここで、多は、２以上である。
【０４８６】
ＦＬｉＰは、トリアシルグリセロール、リン脂質、グリセロール並びに親油性リンカー分子を介してオリゴヌクレオチドと凝集、混合若しくは結合した１種又は数種の脂質結合タンパク質を含み得る。驚くべきことに、前述した脂質と組み合わせた前記１種又は数種の脂質結合タンパク質により、ＦＬｉＰは、肝臓、腸、腎臓、ステロイド産生臓器、心臓、肺及び／又は筋肉組織に対する親和性を示すことが判明している。従って、これらのＦＬｉＰは、これらの組織に対するオリゴヌクレオチドの担体として役立ち得る。例えば、脂質共役オリゴヌクレオチド、例えばコレステロール共役オリゴヌクレオチドは、ＨＤＬ及びＬＤＬリポタンパク質粒子に結合し、それぞれの受容体との結合時に細胞の取り込みを媒介し、それにより肝臓、腸、腎臓及びステロイド産生臓器へのオリゴヌクレオチド送達を指令する。Ｗｏｌｆｒｕｍ  ｅｔ  ａｌ．Ｎａｔｕｒｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈ．（２００７），２５：１１４５−１１５７を参照されたい。
【０４８７】
ＦＬｉＰは、１５〜２５％のトリアシルグリセロール、約０．５〜２％のリン脂質及び１〜３％のグリセロール並びに１種又は数種の脂質結合タンパク質を含む脂質粒子であり得る。ＦＬｉＰは、約１５〜２５％のトリアシルグリセロール、約１〜２％のリン脂質、約２〜３％のグリセロール及び１種又は数種の脂質結合タンパク質を含む脂質粒子であり得る。一部の実施形態では、脂質粒子は、約２０％のトリアシルグリセロール、約１．２％のリン脂質及び約２．２５％のグリセロール並びに１種又は数種の脂質結合タンパク質を含む。
【０４８８】
ＦＬｉＰに好適な別の脂質成分は、リポタンパク質、例えば単離リポタンパク質又はより好ましくは再構成リポタンパク質である。例示的なリポタンパク質として、カイロミクロン、ＶＬＤＬ（超低密度リポタンパク質）、ＩＤＬ（中間密度リポタンパク質）、ＬＤＬ（低密度リポタンパク質）及びＨＤＬ（高密度リポタンパク質）が挙げられる。再構成リポタンパク質を製造する方法は、当技術分野で公知であり、例えばＡ．Ｊｏｎｅｓ，Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ  Ｌｕｎｇ  Ｒｅｓ．６，２５５−２７０（１９８４）、米国特許第４，６４３，９８８号明細書及び同第５１２８３１８号明細書、国際公開第８７／０２０６２号パンフレット、カナダ国特許第２，１３８，９２５号明細書を参照されたい。再構成リポタンパク質、特にアポリポタンパク質Ａ−Ｉ、Ａ−ＩＩ、Ａ−ＩＶ、ａｐｏＣ及び  ａｐｏＥを製造する他の方法は、Ａ．Ｊｏｎａｓ，Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ  １２８，５５３−５８２（１９８６）及びＧ．Ｆｒａｎｃｅｓｃｈｉｎｉ  ｅｔ  ａｌ．Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，２６０（３０），１６３２１−２５（１９８５）に記載されている。
【０４８９】
ＦＬｉＰに好ましい１つの脂質成分は、Ｉｎｔｒａｌｉｐｉｄである。Ｉｎｔｒａｌｉｐｉｄ（登録商標）は、ヒトでの使用のための最初の安全な脂肪エマルションの商標である。Ｉｎｔｒａｌｉｐｉｄ（登録商標）２０％（２０％静脈内脂肪エマルション）は、２０％ダイズ油、１．２％卵黄リン脂質、２．２５％グリセリン及び注射用水から構成されている。さらに、ＦＬｉＰの脂質成分を製造するために、サフラワー油などの他の好適な油を使用できることも本発明に含まれる。
【０４９０】
ＦＬｉＰは、約２０〜５０ｎｍ又は約３０〜５０ｎｍ、例えば約３５〜４０ｎｍの範囲の粒度であり得る。一部の実施形態では、ＦＬｉＰは、少なくとも約１００ｎｍの粒度を有する。代わりに、ＦＬｉＰは、リポソーム又はエマルションベースのいずれを特徴とするかにかかわらず、約１００〜１５０ｎｍ、例えば約１１０ｎｍ、約１２０ｎｍ、約１３０ｎｍ又は約１４０ｎｍであり得る。また、複数のＦＬｉＰを凝集させ、一緒に送達することも可能であり、そのため、粒度は、１００ｎｍを超え得る。
【０４９１】
脂質粒子を製造する方法は、（ａ）化学的に修飾することができる１種又は複数の親油性物質（例えば、コレステロール）共役オリゴヌクレオチドと脂質成分を混合するステップ；及び（ｂ）この混合物を分別するステップを含む。一部の実施形態では、この方法は、３０〜５０ｎｍ、好ましくは約４０ｎｍの粒度を有する画分を選択する追加ステップを含む。
【０４９２】
本発明に適したいくつかの例示的な脂質粒子製剤は、２００９年３月２６日に出願された米国特許出願第１２／４１２，２０６号明細書に記載されており、その内容は、全体として参照により本明細書に組み込まれる。
【０４９３】
一部の実施形態では、オリゴマー化合物は、酵母細胞壁粒子（「ＹＣＷＰ」）に製剤化することができる。酵母細胞壁粒子は、抽出された酵母細胞壁外部及びコアを含み、コアは、ペイロード（例えば、オリゴヌクレオチド）を含む。粒子の外部は、酵母グルカン（例えば、βグルカン、β−１，３−グルカン、β−１，６−グルカン）、酵母マンナン又はこれらの組合せを含む。酵母細胞壁粒子は、典型的に、直径約１〜４μｍの球状粒子である。
【０４９４】
酵母細胞壁粒子の調製は、当技術分野で公知であり、例えば米国特許第４，９９２，５４０号明細書；同第５，０８２，９３６号明細書；同第５，０２８，７０３号明細書；同第５，０３２，４０１号明細書；同第５，３２２，８４１号明細書；同第５，４０１，７２７号明細書；同第５，５０４，０７９号明細書；同第５，６０７，６７７号明細書；同第５，７４１，４９５号明細書；同第５，８３０，４６３号明細書；同第５，９６８，８１１号明細書；同第６，４４４，４４８号明細書；及び同第６，４７６，００３号明細書、米国特許出願公開第２００３／０２１６３４６号明細書及び同第２００４／００１４７１５号明細書並びに国際公開第２００２／１２３４８号パンフレットに記載されており、これらの内容は、全体として参照により本明細書に組み込まれる。薬剤送達のための酵母細胞様粒子の適用は、例えば、米国特許第５，０３２，４０１号明細書；同第５，６０７，６７７号明細書；同第５，７４１，４９５号明細書；及び同第５，８３０，４６３号明細書並びに米国特許出願公開第２００５／０２８１７８１号明細書及び同第２００８／００４４４３８号明細書に記載されており、これらの内容は、全体として参照により本明細書に組み込まれる。米国特許出願公開第２００９／０２２６５２８号明細書（その内容は、参照により本明細書に組み込まれる）は、細胞へのオリゴヌクレオチドの送達のための、酵母細胞壁粒子を用いた核酸の製剤化を記載している。
【０４９５】
オリゴマー化合物の例示的な製剤化は、米国特許第４，８９７，３５５号明細書；同第４，３９４，４４８号明細書；同第４，２３５，８７１号明細書；同第４，２３１，８７７号明細書；同第４，２２４，１７９号明細書；同第４，７５３，７８８号明細書；同第４，６７３，５６７号明細書；同第４，２４７，４１１号明細書；同第４，８１４，２７０号明細書；同第５，５６７，４３４号明細書；同第５，５５２，１５７号明細書；同第５，５６５，２１３号明細書；同第５，７３８，８６８号明細書；同第５，７９５，５８７号明細書；同第５，９２２，８５９号明細書；同第６，０７７，６６３号明細書；同第７，９０６，４８４号明細書；及び同第８，６４２，０７６；ＰＣＴ公開国際公開第２００９／１３２１３１号明細書パンフレット並びに米国特許出願公開第２００６／０２４００９３号明細書、同第２００７／０１３５３７２号明細書、同第２０１１／０１１７１２５号明細書、同第２００９／０２９１１３１号明細書、同第２０１２／０３１６２２０号明細書、同第２００９／０１６３７０５号明細書及び同第２０１３／０１２９７８５号明細書に記載されており、これらの内容は、全体として参照により本明細書に組み込まれる。Ｂｅｈｒ（１９９４）Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ  Ｃｈｅｍ．５：３８２−３８９及びＬｅｗｉｓ  ｅｔ  ａｌ．（１９９６）ＰＮＡＳ  ９３：３１７６−３１８１）も本発明に適したオリゴヌクレオチドの製剤化を記載しており、その内容は、全体として参照により本明細書に組み込まれる。
【０４９６】
ｓｉＲＮＡ
本明細書で使用されるとき、用語「ｓｉＲＮＡ」は、ＲＮＡ転写物の標的切断を媒介する物質を指す。これらの物質は、ＲＮＡｉ誘導サイレンシング複合体（ＲＩＳＣ）として知られる細胞質多タンパク質複合体と結合する。ＲＮＡ干渉を誘導する上で有効な物質は、本明細書において、ｓｉＲＮＡ、ＲＮＡｉ剤又はｉＲＮＡ剤とも呼ばれる。本明細書で使用されるとき、ｓｉＲＮＡという用語は、マイクロＲＮＡ及びｐｒｅ−マイクロＲＮＡを含む。
【０４９７】
本明細書で使用されるとき、用語「ｓｉＲＮＡ」は、ＲＮＡ転写物の標的切断を媒介する物質を指す。これらの物質は、ＲＮＡｉ誘導サイレンシング複合体（ＲＩＳＣ）として知られる細胞質多タンパク質複合体と結合する。ＲＮＡ干渉を誘導する上で有効な物質は、本明細書において、ｓｉＲＮＡ、ｄｓＲＮＡ、ＲＮＡｉ剤又はｉＲＮＡ剤とも呼ばれる。
【０４９８】
本明細書で使用されるとき、用語「ｓｉＲＮＡ活性」及び「ＲＮＡｉ活性」は、ｓｉＲＮＡによる遺伝子サイレンシングを指す。
【０４９９】
本明細書で使用されるとき、ＲＮＡ干渉分子による「遺伝子サイレンシング」は、標的遺伝子について、ｍｉＲＮＡ又はＲＮＡ干渉分子が存在しない細胞に見出されるｍＲＮＡレベルの少なくとも約５％、少なくとも約１０％、少なくとも約２０％、少なくとも約３０％、少なくとも約４０％、少なくとも約５０％、少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、１００％までを含む少なくとも約９９％及びこれらの間のあらゆる整数％の、細胞中のｍＲＮＡレベルの減少を指す。１つの好ましい実施形態では、ｍＲＮＡレベルは、少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、１００％までを含む少なくとも約９９％及び５％〜１００％のあらゆる整数％の減少を示す。
【０５００】
本明細書で使用されるとき、用語「遺伝子発現を調節する」は、１種又は複数のタンパク質若しくはタンパク質サブユニットをコードする遺伝子の発現又はＲＮＡ分子若しくは均等なＲＮＡ分子のレベルを上方制御又は下方制御して、発現、レベル若しくは活性が、モジュレータの非存在下で観察されるものより高いか又は低くなるようにすることを意味する。例えば、用語「調節する」は、「阻害する」を意味し得るが、用語「調節する」の使用は、この定義に限定されない。
【０５０１】
本明細書で使用されるとき、遺伝子発現調節は、１種又は複数のタンパク質若しくはタンパク質サブユニットをコードする遺伝子の発現又はそれらをコードするＲＮＡ分子若しくは均等なＲＮＡ分子のレベルが、ｓｉＲＮＡ、例えばＲＮＡｉ剤の非存在下で観察されるものと少なくとも５％、１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、１００％、２倍、３倍、４倍、５倍以上異なる場合に起こる。％及び／又は倍率差は、例えば、対照又は非対照に対して、以下のように計算することができる。
【数１】
2020531450.tif 000091
【０５０２】
本明細書で使用されるとき、遺伝子発現に関して、「阻害する」、「下方制御する」又は「低減する」という用語は、１種又は複数のタンパク質若しくはタンパク質サブユニットをコードする遺伝子の発現、又はＲＮＡ分子若しくは均等なＲＮＡ分子のレベル、又は１種又は複数のタンパク質若しくはタンパク質サブユニットの活性が、モジュレータの非存在下で観察されるものより低く低減されることを意味する。１種又は複数のタンパク質若しくはタンパク質サブユニットをコードする遺伝子の発現、又はＲＮＡ分子若しくは均等なＲＮＡ分子のレベル、又は１種又は複数のタンパク質若しくはタンパク質サブユニットの活性が、対応する非調節対照に比べ、少なくとも１０％低く、好ましくは少なくとも１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、９８％、９９％又は最も好ましくは１００％（すなわち遺伝子発現がない）だけ低く低減される場合、遺伝子発現は、下方制御される。
【０５０３】
本明細書で使用されるとき、遺伝子発現に関して、「増加する」、「上方制御する」という用語は、１種又は複数のタンパク質若しくはタンパク質サブユニットをコードする遺伝子の発現、又はＲＮＡ分子若しくは均等なＲＮＡ分子のレベル、又は１種又は複数のタンパク質若しくはタンパク質サブユニットの活性が、モジュレータの非存在下で観察されるものより高く増加されることを意味する。１種又は複数のタンパク質若しくはタンパク質サブユニットをコードする遺伝子の発現、又はＲＮＡ分子若しくは均等なＲＮＡ分子のレベル、又は１種又は複数のタンパク質若しくはタンパク質サブユニットの活性が、対応する非調節対照に比べ、少なくとも１０％、好ましくは少なくとも１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、９８％、１００％、１．１倍、１．２５倍、１．５倍、１．７５倍、２倍、３倍、４倍、５倍、１０倍、５０倍、１００倍以上増加される場合、遺伝子発現は、上方制御される。
【０５０４】
本明細書で使用されるとき、用語「増加した」又は「増加する」は、概して、統計的に有意な量の増加を意味し；誤解を避けるために、「増加した」は、基準レベルと比較して少なくとも１０％の増加、例えば基準レベルと比較して少なくとも約２０％、若しくは少なくとも約３０％、若しくは少なくとも約４０％、若しくは少なくとも約５０％、若しくは少なくとも約６０％、若しくは少なくとも約７０％、若しくは少なくとも約８０％、若しくは少なくとも約９０％若しくは１００％以下の増加又は１０〜１００％のあらゆる増加、或いは基準レベルと比較して少なくとも約２倍、少なくとも約３倍、少なくとも約４倍、少なくとも約５倍若しくは少なくとも１０倍の増加又は２倍〜１０倍以上のあらゆる増加を意味する。
【０５０５】
本明細書で使用されるとき、用語「低減した」又は「低減する」は、概して、統計的に有意な量の減少を意味する。しかしながら、誤解を避けるために、「低減した」は、基準レベルと比較して少なくとも１０％の減少、例えば基準レベルと比較して少なくとも約２０％、若しくは少なくとも約３０％、若しくは少なくとも約４０％、若しくは少なくとも約５０％、若しくは少なくとも約６０％、若しくは少なくとも約７０％、若しくは少なくとも約８０％、若しくは少なくとも約９０％若しくは１００％（すなわち基準サンプルと比較してゼロレベル）以下の減少又は基準レベルと比較して１０〜１００％のあらゆる減少を意味する。
【０５０６】
当業者であれば、２０〜２３、特に２１塩基対の二重螺旋構造を含む二本鎖オリゴヌクレオチドが、ＲＮＡ干渉を誘導するのに特に有効であるとして認められていることは十分認識している（Ｅｌｂａｓｈｉｒ  ｅｔ  ａｌ．，ＥＭＢＯ  ２００１，２０：６８７７−６８８８）。しかしながら、他に、これより短い又は長い二本鎖オリゴヌクレオチドも有効となり得ることが見出されている。
【０５０７】
二本鎖オリゴヌクレオチドは、ハイブリダイズして、二重螺旋構造を形成するのに十分に相補的である２つのオリゴヌクレオチド鎖を含む。一般に、二重螺旋構造は、１５〜３０、より一般的には１８〜２５、さらに一般的には１９〜２４、最も一般的には１９〜２１塩基対の長さである。一部の実施形態では、長さが２５〜３０塩基対と、より長い二本鎖オリゴヌクレオチドが好ましい。一部の実施形態では、長さが１０〜１５塩基対と、より短い二本鎖オリゴヌクレオチドが好ましい。別の実施形態では、二本鎖オリゴヌクレオチドは、少なくとも２１ヌクレオチド長である。
【０５０８】
一部の実施形態では、二本鎖オリゴヌクレオチドは、センス鎖とアンチセンス鎖とを含み、ここで、アンチセンスＲＮＡ鎖は、標的配列の少なくとも一部と相補的である相補性の領域を有し、二重螺旋領域は、１４〜３０ヌクレオチド長である。同様に、標的配列に対する相補性の領域は、１４〜３０、より一般的には１８〜２５、さらに一般的には１９〜２４、最も一般的には１９〜２１ヌクレオチド長である。
【０５０９】
本明細書で使用されるとき、語句「アンチセンス鎖」は、目的とする標的配列に対して実質的に相補的又は１００％相補的であるオリゴマー化合物を指す。「アンチセンス鎖」という語句は、２つの個別の鎖から形成される両オリゴマー化合物のアンチセンス領域並びにヘアピン又はダンベル型構造を形成することができる単分子化合物を含む。用語「アンチセンス鎖」及び「ガイド鎖」は、本明細書では置き換え可能に使用される。
【０５１０】
語句「センス鎖」は、メッセンジャーＲＮＡ又はＤＮＡの配列などの標的配列と、全部又は一部が同じヌクレオシド配列を有するオリゴマー化合物を指す。「センス鎖」及び「パッセンジャー鎖」という用語は、本明細書では置き換え可能に使用される。
【０５１１】
「特異的にハイブリダイズ可能な」及び「相補的な」は、核酸が、伝統的なワトソン−クリック又は他の非伝統的タイプのいずれかにより、別の核酸配列と水素結合を形成し得ることを意味する。本発明の核酸分子に関連して、核酸分子とその相補的配列との結合自由エネルギーは、核酸の関連機能、例えばＲＮＡｉ活性を進行させるのに十分である。核酸分子の結合自由エネルギーの決定は、当技術分野においてよく知られている（例えば、Ｔｕｒｎｅｒ  ｅｔ  ａｌ，１９８７，ＣＳＨ  Ｓｙｍｐ．Ｑｕａｎｔ．Ｂｉｏｌ．ＬＩＩ  ｐｐ．１２３−１３３；Ｆｒｉｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，１９８６，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ８３：９３７３−９３７７；Ｔｕｒｎｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，１９８７，Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．１０９：３７８３−３７８５を参照）。相補性パーセントは、第２の核酸配列と、水素結合（例えば、ワトソン−クリック塩基対合）を形成することができる核酸分子中の連続した残基のパーセンテージ（例えば、１０のうちの５、６、７、８、９、１０は、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％及び１００％相補的である）を示す。「完全に相補的」又は１００％相補性とは、核酸配列の連続した残基の全てが、第２の核酸配列中の同数の連続した残基と水素結合することを意味する。完全ではない相補性は、２つの鎖の一部（全部ではない）のヌクレオチド単位が、互いに水素結合することができる状況を指す。「実質的な相補性」は、非相補的であるように選択されたポリヌクレオチド鎖の領域（例えば、突出部）を除いて、９０％以上の相補性を呈示するポリヌクレオチド鎖を指す。特異的結合には、特異的結合が要望される条件下、すなわちｉｎ  ｖｉｖｏアッセイ若しくは治療処置の場合、生理学的条件下において、又はｉｎ  ｖｉｔｒｏアッセイの場合、アッセイが実施される条件下で、非標的配列とオリゴマー化合物の非特異的結合を回避するのに十分な程度の相補性が必要である。非標的配列は、典型的に、少なくとも５ヌクレオチド異なる。
【０５１２】
用語「オフターゲット」及び語句「オフターゲット効果」は、所与の標的に対するｓｉＲＮＡが、別のｍＲＮＡ配列、ＤＮＡ配列又は細胞タンパク質若しくは他の部分と直接若しくは間接的のいずれかで相互作用することにより、意図しない作用を引き起こすあらゆる事例を指す。例えば、「オフターゲット効果」は、他の転写物と、ｓｉＲＮＡのセンス及び／又はアンチセンス鎖との間の部分的な相同性又は相補性により、他の転写物の同時分解が生じるとき起こりうる。
【０５１３】
一部の実施形態では、二本鎖オリゴマー化合物の二本鎖領域は、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９若しくは３０ヌクレオチチド対と等しいか、又は少なくともその長さである。
【０５１４】
一部の実施形態では、二本鎖オリゴマー化合物のアンチセンス鎖は、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９若しくは３０ヌクレオチチド対と等しいか、又は少なくともその長さである。
【０５１５】
一部の実施形態では、二本鎖オリゴマー化合物のセンス鎖は、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９若しくは３０ヌクレオチチド対と等しいか、又は少なくともその長さである。
【０５１６】
一部の実施形態では、１つの鎖は、二本鎖領域内に１〜５つの一本鎖ヌクレオチドの少なくとも１区間を有する。「二本鎖領域内の一本鎖ヌクレオチドの区間」とは、一本鎖区間の両端に少なくとも１つのヌクレオチド塩基対が存在することを意味する。一部の実施形態では、両方の鎖が、二本鎖領域内に１〜５（例えば、１、２、３、４又は５）つの一本鎖ヌクレオチドから構成される少なくとも１区間を有する。両方の鎖が、二本鎖領域内に１〜５（例えば、１、２、３、４又は５）つの一本鎖ヌクレオチドから構成される１区間を有する場合、このような一本鎖ヌクレオチドは、互いに反対（例えば、ミスマッチの区間）であり得るか、又は第２の鎖が第１の鎖の一本鎖オリゴヌクレオチドと反対の一本鎖ヌクレオチドを含まないようにこれらを配置することもでき、またその逆（例えば、一本鎖ループ）も可能である。一部の実施形態では、一本鎖ヌクレオチドは、いずれかの末端から８ヌクレオチド以内、例えば２つの鎖間の相補性の領域の５’又は３’末端のいずれかから、８、７、６、５、４、３若しくは２ヌクレオチドに存在する。
【０５１７】
一部の実施形態では、二本鎖オリゴヌクレオチドの各鎖は、ＰＣＴ公開国際公開第２００４０８０４０６号パンフレット（その内容は、全体として参照により本明細書に組み込まれる）に記載のものなどのＺＸＹ構造を有する。
【０５１８】
いくつかの実施形態では、二本鎖オリゴマー化合物の２つの鎖を互いに連結することができる。２つの鎖は、両端又は一端のみで、互いに連結することができる。一端で連結するとは、第１の鎖の５’末端を第２の鎖の３’末端に連結するか、又は第１の鎖の３’末端を第２の鎖の５’末端に連結することを意味する。２つの鎖を両端で互いに連結するとき、第１の鎖の５’末端を第２の鎖の３’末端に連結し、且つ第１の鎖の３’末端を第２の鎖の５’末端に連結する。２つの鎖は、オリゴヌクレオチドリンカーにより互いに連結することができ、こうしたリンカーとして、限定はしないが、（Ｎ）ｎ（Ｎは、独立に、修飾若しくは非修飾ヌクレオチドであり、ｎは、３〜２３である）がある。一部の実施形態では、ｎは、３〜１０、例えば３、４、５、６、７、８、９又は１０である。一部の実施形態では、オリゴヌクレオチドリンカーは、ＧＮＲＡ、（Ｇ）４、（Ｕ）４及び（ｄＴ）４からなる群から選択され、ここで、Ｎは、修飾又は非修飾ヌクレオチドであり、Ｒは、修飾又は非修飾プリンヌクレオチドである。リンカー中のヌクレオチドの一部は、リンカー中の他のヌクレオチドとの塩基対合相互作用に関与し得る。また、２つの鎖は、非ヌクレオシドリンカー、例えば本明細書に記載のリンカーにより互いに連結することもできる。当業者であれば、本明細書に記載する任意のオリゴヌクレオチド化学修飾又は改変をオリゴヌクレオチドリンカーに使用し得ることが理解されるであろう。
【０５１９】
ヘアピン及びダンベルタイプオリゴマー化合物は、少なくとも１４、１５、１５、１６、１７、１８、１９、２９、２１、２２、２３、２４又は２５ヌクレオチド対以上の二重螺旋領域を有し得る。二重螺旋領域は、２００、１００又は５０以下の長さであり得る。一部の実施形態では、二重螺旋領域の範囲は、１５〜３０、１７〜２３、１９〜２３及び１９〜２１ヌクレオチド対の長さである。
【０５２０】
ヘアピンオリゴマー化合物は、一部の実施形態では３’に、また一部の実施形態ではヘアピンのアンチセンス側に、一本鎖突出部又は末端非対合領域を有し得る。一部の実施形態では、突出部は、１〜４、より一般的には２〜３ヌクレオチド長であった。ＲＮＡ干渉を誘導することができるヘアピンオリゴマー化合物は、本明細書において「ｓｈＲＮＡ」とも呼ばれる。
【０５２１】
いくつかの実施形態では、２つのオリゴマー鎖は、特定の結合が要望される条件下、すなわちｉｎ  ｖｉｖｏアッセイ若しくは治療処置の場合、生理学的条件下において、且つｉｎ  ｖｉｔｒｏアッセイの場合、アッセイが実施される条件下において、非標的核酸配列とアンチセンス化合物の非特異的結合を回避するのに十分な程度の相補性がある場合に特異的にハイブリダイズする。
【０５２２】
本明細書で使用されるとき、「緊縮ハイブリダイゼーション条件」又は「緊縮条件」は、アンチセンス化合物がその標的配列とハイブリダイズするが、他の配列とは最小数にハイブリダイズする条件を指す。緊縮条件は、配列依存的であり、様々な状況で異なり、アンチセンス化合物が標的配列とハイブリダイズする「緊縮条件」は、アンチセンス化合物の性質及び組成並びにそれらが試験されるアッセイによって決定される。
【０５２３】
当技術分野では、ヌクレオチド親和性修飾の組み込みにより、非修飾活性化と比較して、より多くのミスマッチ数を達成し得ることが理解される。同様に、特定のオリゴヌクレオチド配列は、他のオリゴヌクレオチド配列よりミスマッチに対してより耐性であり得る。当業者は、オリゴヌクレオチド同士又はオリゴヌクレオチド及び標的核酸同士の適切な数のミスマッチを例えば融解温度（Ｔｍ）の決定により決定することができる。Ｔｍ又はΔＴｍは、当業者には周知である技術によって計算することができる。例えば、Ｆｒｅｉｅｒら（Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ，１９９７，２５，２２：４４２９−４４４３）に記載される技術により、当業者は、ヌクレオチド修飾を、それらがＲＮＡ：ＤＮＡ二重螺旋の融解温度を高める能力について評価することができる。
【０５２４】
標的発現の調節
いくつかの実施形態では、標的核酸は、ｍＲＮＡである。いくつかのこうした実施形態では、ｓｉＲＮＡは、その標的ｍＲＮＡ又はその発現を調節するように設計する。いくつかの実施形態では、標的核酸分子に対するアンチセンス化合物の設計は、多段階プロセスであり得る。典型的に、このプロセスは、標的タンパク質、調節しようとするその活性の同定で開始し、次に、その発現によって標的タンパク質が産生される核酸を同定する。いくつかの実施形態では、アンチセンス化合物の設計により、標的核酸分子とハイブリダイズするアンチセンス化合物を取得する。いくつかの実施形態では、アンチセンス化合物は、アンチセンスオリゴヌクレオチド又はアンチセンスオリゴヌクレオシドである。いくつかの実施形態では、アンチセンス化合物と標的核酸は、互いに相補的である。いくつかのこうした実施形態では、アンチセンス化合物は、標的核酸と完全に相補的である。いくつかの実施形態では、アンチセンス化合物は、１つのミスマッチを含む。いくつかの実施形態では、アンチセンス化合物は、２つのミスマッチを含む。いくつかの実施形態では、アンチセンス化合物は、３つ以上のミスマッチを含む。
【０５２５】
標的核酸の調節は、任意の数の核酸機能の改変によって達成することができる。いくつかの実施形態では、調節しようとするＲＮＡの機能としては、限定はしないが、転位機能（限定はしないが、タンパク質翻訳部位へのＲＮＡの転位、ＲＮＡ合成部位から遠位の細胞内の部位へのＲＮＡの転位など）並びにＲＮＡからのタンパク質の翻訳が挙げられる。調節することができるＲＮＡプロセシング機能として、限定はしないが、１つ又は複数のＲＮＡ種を取得するためのＲＮＡのスプライシング、ＲＮＡのキャッピング、ＲＮＡの３’成熟及び触媒活性又はＲＮＡに関与する若しくはＲＮＡにより促進され得る、ＲＮＡを含む複合体形成が挙げられる。発現の調節により、１つ又は複数の核酸種のレベル増加又は１つ又は複数の核酸種のレベル低下を起こすことができ、一時的又は正味定常状態レベルによるいずれも可能である。従って、一実施形態では、発現の調節は、標的ＲＮＡ又はタンパク質レベルの増加又は低下を意味し得る。別の実施形態では、発現の調節は、１つ又は複数のＲＮＡスプライス産物の増加若しくは減少又は２つ以上のスプライス産物の比の変化を意味し得る。
【０５２６】
いくつかの実施形態では、ｓｉＲＮＡは、共役ｓｉＲＮＡである。本明細書で使用されるとき、用語「共役ｓｉＲＮＡ」は、リガンドで共役されたＲＮＡｉ剤を指す。例えば、本明細書で記載するリガンドと共役したＲＮＡｉ剤である。
【０５２７】
一部の他の実施形態では、ｓｉＲＮＡは、非共役ｓｉＲＮＡである。本明細書で使用されるとき、用語「非共役ｓｉＲＮＡ」は、リガンド、例えば本明細書で記載するリガンドと共役していないＲＮＡｉ剤を指す。
【０５２８】
一態様では、本発明は、標的遺伝子の発現を阻害するための、二本鎖ＲＮＡ（ｄｓＲＮＡ）剤、すなわちｓｉＲＮＡに関する。ｄｓＲＮＡ剤は、センス鎖とアンチセンス鎖を含み、各々、１４〜４０ヌクレオチドを有する。ｄｓＲＮＡ剤は、式（Ｉ）：
【化８５】
2020531450.tif 000092
により表される。
【０５２９】
式（Ｉ）中、Ｂ１、Ｂ２、Ｂ３、Ｂ１’、Ｂ２’、Ｂ３’及びＢ４’は、各々独立に、２’−Ｏ−アルキル、２’−置換アルコキシ、２’−置換アルキル、２’−ハロ、ＥＮＡ及びＢＮＡ／ＬＮＡからなる群から選択される修飾を含むヌクレオチドである。一実施形態では、Ｂ１、Ｂ２、Ｂ３、Ｂ１’、Ｂ２’、Ｂ３’及びＢ４’は、各々、２’−ＯＭｅ修飾を含む。
【０５３０】
Ｃ１は、アンチセンス鎖のシード領域（すなわちアンチセンス鎖の５’末端の２〜８位）とは反対の部位に配置される熱不安定化ヌクレオチドである。例えば、Ｃ１は、アンチセンス鎖の５’末端の２〜８位のヌクレオチドと対合するセンス鎖の１つの位置にある。Ｃ１ヌクレオチドは、熱不安定化修飾を担持し、これは、脱塩基修飾；二重螺旋中の反対側ヌクレオチドとのミスマッチ；並びに２’−デオキシ修飾又は非環状ヌクレオチド、例えばアンロックド核酸（ＵＮＡ）若しくはグリセロール核酸（ＧＮＡ）などの糖修飾を含み得る。一実施形態では、Ｃ１は、ｉ）アンチセンス鎖の反対側ヌクレオチドとのミスマッチ；ｉｉ）
【化８６】
2020531450.tif 000093
からなる群から選択される脱塩基修飾；及びｉｉｉ）
【化８７】
2020531450.tif 000094
からなる群から選択される糖修飾からなる群から選択される熱不安定化修飾を有し、ここで、Ｂは、修飾又は非修飾核酸塩基であり、Ｒ１及びＲ２は、独立に、Ｈ、ハロゲン、ＯＲ３若しくはアルキルであり；Ｒ３は、Ｈ、アルキル、シクロアルキル、アリール、アラルキル、ヘテロアリール若しくは糖である。一実施形態では、Ｃ１における熱不安定化修飾は、Ｇ：Ｇ、Ｇ：Ａ、Ｇ：Ｕ、Ｇ：Ｔ、Ａ：Ａ、Ａ：Ｃ、Ｃ：Ｃ、Ｃ：Ｕ、Ｃ：Ｔ、Ｕ：Ｕ、Ｔ：Ｔ及びＵ：Ｔからなる群から選択されるミスマッチ；及び任意選択で、ミスマッチ対における少なくとも１つの核酸塩基は、２’−デオキシ核酸塩基である。一例では、Ｃ１における熱不安定化修飾は、ＧＮＡ又は
【化８８】
2020531450.tif 000095
である。
【０５３１】
Ｔ１、Ｔ１’、Ｔ２’及びＴ３’は、各々独立に、２’−ＯＭｅ修飾の立体的嵩高さ以下の立体的嵩高さをヌクレオチドに付与する修飾を含むヌクレオチドを示す。修飾は、ヌクレオチドのリボース糖の２’位にあるか、又は非リボースヌクレオチド、非環状ヌクレオチド又はヌクレオチドの骨格に対する修飾であり得、この修飾は、リボース糖の２’位と類似又は均等であり、且つ２’−ＯＭｅ修飾の立体的嵩高さ以下の立体的嵩高さをヌクレオチドに付与する。例えば、Ｔ１、Ｔ１’、Ｔ２’及びＴ３’は、各々独立に、ＤＮＡ、ＲＮＡ、ＬＮＡ、２’−Ｆ及び２’−Ｆ−５’−メチルから選択される。一実施形態では、Ｔ１はＤＮＡである。一実施形態では、Ｔ１’は、ＤＮＡ、ＲＮＡ又はＬＮＡである。一実施形態では、Ｔ２’は、ＤＮＡ又はＲＮＡである。一実施形態では、Ｔ３’は、ＤＮＡ又はＲＮＡである。
【０５３２】
ｎ１、ｎ３及びｑ１は、独立に、４〜１５ヌクレオチド長である。
【０５３３】
ｎ５、ｑ３及びｑ７は、独立に、１〜６ヌクレオチド長である。
【０５３４】
ｎ４、ｑ２及びｑ６は、独立に、１〜３ヌクレオチド長である。
【０５３５】
ｑ５は、独立に、０〜１０ヌクレオチド長である。
【０５３６】
ｎ２及びｑ４は、独立に、０〜３ヌクレオチド長である。
【０５３７】
代わりに、ｎ４は、０〜３ヌクレオチド長である。
【０５３８】
一実施形態では、ｎ４は、０であり得る。一例では、ｎ４は、０で、ｑ２及びｑ６は、１である。別の例では、ｎ４は、０で、ｑ２及びｑ６は、１であり、ここで、センス鎖の１〜５位内に２つのホスホロチオエートヌクレオチド間結合修飾（センス鎖の５’末端から数えて）を有し、アンチセンス鎖の１及び２位に２つのホスホロチオエートヌクレオチド間結合修飾を、また１８〜２３位内に２つのホスホロチオエートヌクレオチド間結合修飾（アンチセンス鎖の５’末端から数えて）を有する。
【０５３９】
一実施形態では、ｎ４、ｑ２及びｑ６は、各々、１である。
【０５４０】
一実施形態では、ｎ２、ｎ４、ｑ２、ｑ４及びｑ６は、各々、１である。
【０５４１】
一実施形態では、センス鎖が、１９〜２２ヌクレオチド長であり、且つｎ４が１であるとき、Ｃ１は、センス鎖の５’末端の１４〜１７位にある。
【０５４２】
一実施形態では、Ｔ３’は、アンチセンス鎖の５’末端から２位で開始する。一例では、Ｔ３’は、アンチセンス鎖の５’末端から２位にあり、ｑ６は、１に等しい。
【０５４３】
一実施形態では、Ｔ１’は、アンチセンス鎖の５’末端から１４位で開始する。一例では、Ｔ１’は、アンチセンス鎖の５’末端から１４位にあり、ｑ２は、１に等しい。
【０５４４】
一実施形態では、Ｔ１’及びＴ３’は、長さ１１ヌクレオチドだけ隔てられている（すなわちＴ１’及びＴ３’ヌクレオチドを計数しない。
【０５４５】
一実施形態では、Ｔ１’は、アンチセンス鎖の５’末端から１４位にある。一例では、Ｔ１’は、アンチセンス鎖の５’末端から１４位にあり、ｑ２は、１に等しく、非リボース、非環状若しくは骨格における１つ又は複数の２’位の修飾は、２’−ＯＭｅリボース修飾より小さい立体的嵩高さを付与する。
【０５４６】
一実施形態では、Ｔ３’は、アンチセンス鎖の５’末端から２位にある。一例では、Ｔ３’は、アンチセンス鎖の５’末端から２位にあり、ｑ６は、１に等しく、非リボース、非環状若しくは骨格におけ１つ又は複数のる２’位の修飾は、２’−ＯＭｅリボース修飾より小さい立体的嵩高さを付与する。
【０５４７】
一実施形態では、Ｔ１は、センス鎖の切断部位にある。一例では、センス鎖が、１９〜２２ヌクレオチド長であり、且つｎ２が１であるとき、Ｔ１は、センス鎖の５’末端から１１位にある。
【０５４８】
一実施形態では、Ｔ２’は、アンチセンス鎖の５’末端から６位で開始する。一例では、Ｔ２’は、アンチセンス鎖の５’末端から６〜１０位にあり、ｑ４は、１である。
【０５４９】
一実施形態では、Ｂ１は、２’−ＯＭｅ又は２’−Ｆであり、ｎ１は、８であり、Ｔ１は、２’Ｆであり、ｎ２は、３であり、Ｂ２は、２’−ＯＭｅであり、ｎ３は、７であり、ｎ４は、０であり、Ｂ３は、２’−ＯＭｅであり、ｎ５は、３であり、Ｂ１’は、２’ＯＭｅ又は２’−Ｆであり、ｑ１は、９であり、Ｔ１’は、２’−Ｆであり、ｑ２は、１であり、Ｂ２’は、２’−ＯＭｅ又は２’−Ｆであり、ｑ３は、４であり、Ｔ２’は、２’−Ｆであり、ｑ４は、２であり、Ｂ３’は、２’−ＯＭｅ又は２’−Ｆであり、ｑ５は、５であり、Ｔ３’は、２’−Ｆであり、ｑ６は、１であり、Ｂ４’は、２’−ＯＭｅであり、ｑ７は、１である。
【０５５０】
一実施形態では、Ｂ１は、２’−ＯＭｅ又は２’−Ｆであり、ｎ１は、８であり、Ｔ１は、２’Ｆであり、ｎ２は、３であり、Ｂ２は、２’−ＯＭｅであり、ｎ３は、７であり、ｎ４は、０であり、Ｂ３は、２’−ＯＭｅであり、ｎ５は、３であり、Ｂ１’は、２’−ＯＭｅ又は２’−Ｆであり、ｑ１は、９であり、Ｔ１’は、２’−Ｆであり、ｑ２は、１であり、Ｂ２’は、２’−ＯＭｅ又は２’−Ｆであり、ｑ３は、４であり、Ｔ２’は、２’−Ｆであり、ｑ４は、２であり、Ｂ３’は、２’−ＯＭｅ又は２’−Ｆであり、ｑ５は、５であり、Ｔ３’は、２’−Ｆであり、ｑ６は、１であり、Ｂ４’は、２’−ＯＭｅであり、ｑ７は、１であり；センス鎖の１〜５位内に２つのホスホロチオエートヌクレオチド間結合修飾（センス鎖の５’末端から数えて）を有し、アンチセンス鎖の１及び２位に２つのホスホロチオエートヌクレオチド間結合修飾を、また１８〜２３位内に２つのホスホロチオエートヌクレオチド間結合修飾（アンチセンス鎖の５’末端から数えて）を有する。
【０５５１】
一実施形態では、Ｂ１は、２’−ＯＭｅ又は２’−Ｆであり、ｎ１は、８であり、Ｔ１は、２’Ｆであり、ｎ２は、３であり、Ｂ２は、２’−ＯＭｅであり、ｎ３は、７であり、ｎ４は、０であり、Ｂ３は、２’−ＯＭｅであり、ｎ５は、３であり、Ｂ１’は、２’−ＯＭｅ又は２’−Ｆであり、ｑ１は、９であり、Ｔ１’は、２’−Ｆであり、ｑ２は、１であり、Ｂ２’は、２’−ＯＭｅ又は２’−Ｆであり、ｑ３は、４であり、ｑ４は、０であり、Ｂ３’は、２’−ＯＭｅ又は２’−Ｆであり、ｑ５は、７であり、Ｔ３’は、２’−Ｆであり、ｑ６は、１であり、Ｂ４’は、２’−ＯＭｅであり、ｑ７は、１である。
【０５５２】
一実施形態では、Ｂ１は、２’−ＯＭｅ又は２’−Ｆであり、ｎ１は、８であり、Ｔ１は、２’Ｆであり、ｎ２は、３であり、Ｂ２は、２’−ＯＭｅであり、ｎ３は、７であり、ｎ４は、０であり、Ｂ３は、２’−ＯＭｅであり、ｎ５は、３であり、Ｂ１’は、２’−ＯＭｅ又は２’−Ｆであり、ｑ１は、９であり、Ｔ１’は、２’−Ｆであり、ｑ２は、１であり、Ｂ２’は、２’−ＯＭｅ又は２’−Ｆであり、ｑ３は、４であり、ｑ４は、０であり、Ｂ３’は、２’−ＯＭｅ又は２’−Ｆであり、ｑ５は、７であり、Ｔ３’は、２’−Ｆであり、ｑ６は、１であり、Ｂ４’は、２’−ＯＭｅであり、ｑ７は、１であり；センス鎖の１〜５位内に２つのホスホロチオエートヌクレオチド間結合修飾（５’末端から数えて）を有し、アンチセンス鎖の１及び２位に２つのホスホロチオエートヌクレオチド間結合修飾を、また１８〜２３位内に２つのホスホロチオエートヌクレオチド間結合修飾（５’末端から数えて）を有する。
【０５５３】
一実施形態では、Ｂ１は、２’−ＯＭｅ又は２’−Ｆであり、ｎ１は、８であり、Ｔ１は、２’Ｆであり、ｎ２は、３であり、Ｂ２は、２’−ＯＭｅであり、ｎ３は、７であり、ｎ４は、０であり、Ｂ３は、２’−ＯＭｅであり、ｎ５は、３であり、Ｂ１’は、２’−ＯＭｅ又は２’−Ｆであり、ｑ１は、９であり、Ｔ１’は、２’−Ｆであり、ｑ２は、１であり、Ｂ２’は、２’−ＯＭｅ又は２’−Ｆであり、ｑ３は、４であり、Ｔ２’は、２’−Ｆであり、ｑ４は、２であり、Ｂ３’は、２’−ＯＭｅ又は２’−Ｆであり、ｑ５は、５であり、Ｔ３’は、２’−Ｆであり、ｑ６は、１であり、Ｂ４’は、２’−Ｆであり、ｑ７は、１である。
【０５５４】
一実施形態では、Ｂ１は、２’−ＯＭｅ又は２’−Ｆであり、ｎ１は、８であり、Ｔ１は、２’Ｆであり、ｎ２は、３であり、Ｂ２は、２’−ＯＭｅであり、ｎ３は、７であり、ｎ４は、０であり、Ｂ３は、２’−ＯＭｅであり、ｎ５は、３であり、Ｂ１’は、２’−ＯＭｅ又は２’−Ｆであり、ｑ１は、９であり、Ｔ１’は、２’−Ｆであり、ｑ２は、１であり、Ｂ２’は、２’−ＯＭｅ又は２’−Ｆであり、ｑ３は、４であり、Ｔ２’は、２’−Ｆであり、ｑ４は、２であり、Ｂ３’は、２’−ＯＭｅ又は２’−Ｆであり、ｑ５は、５であり、Ｔ３’は、２’−Ｆであり、ｑ６は、１であり、Ｂ４’は、２’−Ｆであり、ｑ７は、１であり；ここで、センス鎖の１〜５位内に２つのホスホロチオエートヌクレオチド間結合修飾（センス鎖の５’末端から数えて）を有し、アンチセンス鎖の１及び２位に２つのホスホロチオエートヌクレオチド間結合修飾を、また１８〜２３位内に２つのホスホロチオエートヌクレオチド間結合修飾（アンチセンス鎖の５’末端から数えて）を有する。
【０５５５】
一実施形態では、Ｂ１は、２’−ＯＭｅ又は２’−Ｆであり、ｎ１は、８であり、Ｔ１は、２’Ｆであり、ｎ２は、３であり、Ｂ２は、２’−ＯＭｅであり、ｎ３は、７であり、ｎ４は、０であり、Ｂ３は、２’−ＯＭｅであり、ｎ５は、３であり、Ｂ１’は、２’−ＯＭｅ又は２’−Ｆであり、ｑ１は、９であり、Ｔ１’は、２’−Ｆであり、ｑ２は、１であり、Ｂ２’は、２’−ＯＭｅ又は２’−Ｆであり、ｑ３は、４であり、ｑ４は、０であり、Ｂ３’は、２’−ＯＭｅ又は２’−Ｆであり、ｑ５は、７であり、Ｔ３’は、２’−Ｆであり、ｑ６は、１であり、Ｂ４’は、２’−Ｆであり、ｑ７は、１である。
【０５５６】
一実施形態では、Ｂ１は、２’−ＯＭｅ又は２’−Ｆであり、ｎ１は、８であり、Ｔ１は、２’Ｆであり、ｎ２は、３であり、Ｂ２は、２’−ＯＭｅであり、ｎ３は、７であり、ｎ４は、０であり、Ｂ３は、２’−ＯＭｅであり、ｎ５は、３であり、Ｂ１’は、２’−ＯＭｅ又は２’−Ｆであり、ｑ１は、９であり、Ｔ１’は、２’−Ｆであり、ｑ２は、１であり、Ｂ２’は、２’−ＯＭｅ又は２’−Ｆであり、ｑ３は、４であり、ｑ４は、０であり、Ｂ３’は、２’−ＯＭｅ又は２’−Ｆであり、ｑ５は、７であり、Ｔ３’は、２’−Ｆであり、ｑ６は、１であり、Ｂ４’は、２’−Ｆであり、ｑ７は、１であり；ここで、センス鎖の１〜５位内に２つのホスホロチオエートヌクレオチド間結合修飾（センス鎖の５’末端から数えて）を有し、また、アンチセンス鎖の１及び２位に２つのホスホロチオエートヌクレオチド間結合修飾と、１８〜２３位内に２つのホスホロチオエートヌクレオチド間結合修飾（アンチセンス鎖の５’末端から数えて）を有する。
【０５５７】
一実施形態では、本発明のｄｓＲＮＡ剤の１００％、９５％、９０％、８５％、８０％、７５％、７０％、６５％、６０％、５５％、５０％、４５％、４０％、３５％又は３０％が、修飾されている。
【０５５８】
一実施形態では、ｄｓＲＮＡ剤のセンス及びアンチセンス鎖の各々は、独立に、非環状ヌクレオチド、ＬＮＡ、ＨＮＡ、ＣｅＮＡ、２’−メトキシエチル、２’−Ｏ−メチル、２’−Ｏ−アリル、２’−Ｃ−アリル、２’−デオキシ、２’−フルオロ、２’−Ｏ−Ｎ−メチルアセトアミド（２’−Ｏ−ＮＭＡ）、２’−Ｏ−ジメチルアミノエトキシエチル（２’−Ｏ−ＤＭＡＥＯＥ）、２’−Ｏ−アミノプロピル（２’−Ｏ−ＡＰ）又は２’−アラ−Ｆで修飾されている。
【０５５９】
一実施形態では、ｄｓＲＮＡ剤のセンス及びアンチセンス鎖の各々は、少なくとも２つの異なる修飾を含有する。
【０５６０】
一実施形態では、式（Ｉ）のｄｓＲＮＡ剤は、１〜１０ヌクレオチド長の３’及び／又は５’突出部をさらに含む。一例では、式（Ｉ）のｄｓＲＮＡ剤は、アンチセンス鎖の３’末端に３’突出部を含み、アンチセンス鎖の５’末端に平滑末端を含む。別の例では、ｄｓＲＮＡ剤は、センス鎖の５’末端に５’末端突出部を有する。
【０５６１】
一実施形態では、本発明のｄｓＲＮＡ剤は、２’−Ｆ修飾を一切含まない。
【０５６２】
一実施形態では、ｄｓＲＮＡ剤のセンス鎖及び／又はアンチセンス鎖は、ホスホロチオエート又はメチルホスホネートヌクレオチド間結合の１つ又は複数のブロックを含む。一例では、センス鎖は、２つのホスホロチオエート又はメチルホスホネートヌクレオチド間結合の１つのブロックを含む。一例では、アンチセンス鎖は、２つのホスホロチオエート又はメチルホスホネートヌクレオチド間結合の２つのブロックを含む。例えば、ホスホロチオエート又はメチルホスホネートヌクレオチド間結合の２つのブロックは、１６〜１８リン酸ヌクレオチド間結合により隔てられている。
【０５６３】
一実施形態では、ｄｓＲＮＡ剤のセンス及びアンチセンス鎖の各々は、１５〜３０ヌクレオチドを有する。一例では、センス鎖は、１９〜２２ヌクレオチドを有し、アンチセンス鎖は、１９〜２５ヌクレオチドを有する。別の例では、センス鎖は、２１ヌクレオチドを有し、アンチセンス鎖は、２３ヌクレオチドを有する。
【０５６４】
一実施形態では、二重螺旋におけるアンチセンス鎖の５’末端の１位のヌクレオチドは、Ａ、ｄＡ、ｄＵ及びｄＴからなる群から選択される。一実施形態では、アンチセンス鎖の５’末端から１番目、２番目及び３番目の塩基対の少なくとも１つは、ＡＵ塩基対である。
【０５６５】
一実施形態では、本発明のｄｓＲＮＡ剤のアンチセンス鎖は、標的ＲＮＡと１００％相補的であり、これとハイブリダイズして、ＲＮＡ干渉によりその発現を阻害する。別の実施形態では、本発明のｄｓＲＮＡ剤のアンチセンス鎖は、標的ＲＮＡと少なくとも９５％、少なくとも９０％、少なくとも８５％、少なくとも８０％、少なくとも７５％、少なくとも７０％、少なくとも６５％、少なくとも６０％、少なくとも５５％又は少なくとも５０％相補的である。
【０５６６】
一態様では、本発明は、標的遺伝子の発現を阻害することができるｄｓＲＮＡ剤に関する。ｄｓＲＮＡ剤は、センス鎖及びアンチセンス鎖を含み、各鎖は、１４〜４０ヌクレオチドを有する。センス鎖は、少なくとも１つの熱不安定化ヌクレオチドを含有し、ここで、少なくとも１つの前記熱不安定化ヌクレオチドは、アンチセンス鎖のシード領域とは反対の部位（すなわちアンチセンス鎖の５’末端の２〜８位）又はその付近に存在する。例えば、センス鎖が、２１ヌクレオチド長のとき、熱不安定化ヌクレオチドは、センス鎖の５’末端の１４〜１７位に存在する。アンチセンス鎖は、立体的要求性のある２’−ＯＭｅ修飾より小さい、少なくとも２つの修飾核酸を含有する。好ましくは、立体的要求性のある２’−ＯＭｅ修飾より小さい、２つの修飾核酸は、長さ１１ヌクレオチドだけ隔てられている。例えば、２つの修飾核酸は、アンチセンス鎖の５’末端の２及び１４位にある。
【０５６７】
一実施形態では、ｄｓＲＮＡ剤のセンス鎖配列は、式（Ｉｓ）：
【化８９】
2020531450.tif 000096
により表され、
式中、
Ｂ１、Ｂ２及びＢ３は、各々独立に、２’−Ｏアルキル、２’−置換アルコキシ、２’−置換アルキル、２’−ハロ、ＥＮＡ及びＢＮＡ／ＬＮＡからなる群から選択される修飾を含むヌクレオチドを示し；
Ｃ１は、アンチセンス鎖のシード領域（すなわちアンチセンス鎖の５’末端の２〜８位）とは反対の部位に位置する熱不安定化ヌクレオチド（例えば、ＵＮＡ又はＧＮＡ、ミスマッチ、脱塩基若しくはＤＮＡなどの非環状ヌクレオチド）であり；
Ｔ１は、非リボース、非環状又は骨格の２’位又は均等な位置に化学修飾を含むヌクレオチドを示し、この修飾は、２’−ＯＭｅ修飾より小さい立体的嵩高さをヌクレオチドに付与し；例えば、Ｔ１は、ＤＮＡ、ＲＮＡ、ＬＮＡ、２’−Ｆ及び２’−Ｆ−５’−メチルからなる群から選択され；
ｎ１又はｎ３は、独立に、４〜１５ヌクレオチド長であり；
ｎ５は、１〜６ヌクレオチド長であり；
ｎ４は、１〜３ヌクレオチド長であり；
ｎ２は、０〜３ヌクレオチド長である。
【０５６８】
一実施形態では、ｄｓＲＮＡ剤の１９、２０、２１又は２２ヌクレオチド長のセンス鎖配列は、式（Ｉｓ）：
【化９０】
2020531450.tif 000097
により表され、
式中、
Ｂ１、Ｂ２及びＢ３は、各々独立に、２’−Ｏアルキル、２’−置換アルコキシ、２’−置換アルキル、２’−ハロ、ＥＮＡ及びＢＮＡ／ＬＮＡからなる群から選択される修飾を含むヌクレオチドを示し；
Ｃ１は、アンチセンス鎖のシード領域（すなわちアンチセンス鎖の５’末端の２〜８位）とは反対の部位に位置する熱不安定化ヌクレオチド（例えば、ＵＮＡ又はＧＮＡ、ミスマッチ、脱塩基若しくはＤＮＡなどの非環状ヌクレオチド）であり；
Ｔ１は、ＤＮＡ、ＲＮＡ、ＬＮＡ、２’−Ｆ及び２’−Ｆ−５’−メチルからなる群から選択される化学修飾を含むヌクレオチドを示し；
ｎ１又はｎ３は、独立に、４〜１５ヌクレオチド長であり；
ｎ５は、１〜６ヌクレオチド長であり；
ｎ４は、１〜３ヌクレオチド長であり；
ｎ２は、０〜３ヌクレオチド長である。
【０５６９】
一実施形態では、式（Ｉｓ）のｄｓＲＮＡ剤は、１〜１０ヌクレオチド長の３’及び／又は５’突出部をさらに含む。一例では、式（Ｉｓ）のｄｓＲＮＡ剤は、５’突出部を含む。
【０５７０】
一実施形態では、Ｃ１は、センス鎖の５’末端から１４、１５、１６又は１７位に１つの熱不安定化ヌクレオチドを含む。例えば、Ｃ１は、非環状ヌクレオチド（例えば、ＵＮＡ若しくはＧＮＡ）、ミスマッチ、脱塩基又はＤＮＡである。１つの具体的な例では、Ｃ１は、ＧＮＡである。
【０５７１】
一実施形態では、Ｔ１は、センス鎖の５’末端から１１位にＤＮＡ、ＲＮＡ、ＬＮＡ、２’−Ｆ又は２’−Ｆ−５’−メチルを含む。
【０５７２】
一実施形態では、本発明のｄｓＲＮＡ剤は、センス鎖（Ｉｓ）を含み、ここで、Ｃ１は、非環状ヌクレオチド（例えば、ＵＮＡ若しくはＧＮＡ）、ミスマッチ、脱塩基又はＤＮＡであり；Ｔ１は、センス鎖の５’末端から１１位にＤＮＡ、ＲＮＡ、ＬＮＡ、２’−Ｆ又は２’−Ｆ−５’−メチルを含む。
【０５７３】
一実施形態では、ｄｓＲＮＡ剤のアンチセンス鎖は、式（Ｉａ）：
【化９１】
2020531450.tif 000098
により表され、
式中、
Ｂ１’、Ｂ２’、Ｂ３’及びＢ４’は、各々独立に、２’−Ｏアルキル、２’−置換アルコキシ、２’−置換アルキル、２’−ハロ、ＥＮＡ及びＢＮＡ／ＬＮＡからなる群から選択される修飾を含むヌクレオチドを示し；
Ｔ１’、Ｔ２’及びＴ３’は、各々独立に、非リボース、非環状又は骨格の２’位又は均等な位置に化学修飾を含むヌクレオチドを示し、この修飾は、２’−ＯＭｅ修飾より低い立体的嵩高さをヌクレオチドに付与し；例えば、Ｔ１’、Ｔ２’及びＴ３’は、各々独立に、ＤＮＡ、ＲＮＡ、ＬＮＡ、２’−Ｆ及び２’−Ｆ−５’−メチルからなる群から選択され；
ｑ１は、独立に、４〜１５ヌクレオチド長であり；
ｑ３又はｑ７は、独立に、１〜６ヌクレオチド長であり；
ｑ２又はｑ６は、独立に、１〜３ヌクレオチド長であり；
ｑ４は、独立に、０〜３ヌクレオチド長であり；
ｑ５は、独立に、０〜１０ヌクレオチド長である。
【０５７４】
一実施形態では、ｄｓＲＮＡ剤の１９、２０、２１、２２、２３、２４又は２５ヌクレオチド長のアンチセンス鎖配列は、式（Ｉａ）：
【化９２】
2020531450.tif 000099
により表され、
式中、
Ｂ１’、Ｂ２’、Ｂ３’，及びＢ４’は、各々独立に、２’−Ｏアルキル、２’−置換アルコキシ、２’−置換アルキル、２’−ハロ、ＥＮＡ及びＢＮＡ／ＬＮＡからなる群から選択される修飾を含むヌクレオチドを示し；
Ｔ１’、Ｔ２’及びＴ３’は、各々独立に、ＤＮＡ、ＲＮＡ、ＬＮＡ、２’−Ｆ及び２’−Ｆ−５’−メチルからなる群から選択される化学修飾を含むヌクレオチドを示し；
ｑ１は、独立に、４〜１５ヌクレオチド長であり；
ｑ３又はｑ７は、独立に、１〜６ヌクレオチド長であり；
ｑ２又はｑ６は、独立に、１〜３ヌクレオチド長であり；
ｑ４は、独立に、０〜３ヌクレオチド長であり；
ｑ５は、独立に、０〜１０ヌクレオチド長である。
【０５７５】
一実施形態では、式（Ｉａ）のｄｓＲＮＡ剤は、１〜１０ヌクレオチド長の３’及び／又は５’突出部をさらに含む。一例では、式（Ｉａ）のｄｓＲＮＡ剤は、３’突出部を有する。
【０５７６】
一実施形態では、本発明は、標的遺伝子の発現を阻害するための二本鎖ＲＮＡ（ｄｓＲＮＡ）剤に関する。ｄｓＲＮＡ剤は、各鎖が１４〜４０ヌクレオチドを有する、センス鎖及びアンチセンス鎖：
【化９３】
2020531450.tif 000100
を含み、
式中、
Ｂ１、Ｂ２、Ｂ３、Ｂ１’、Ｂ２’、Ｂ３’及びＢ４’は、各々独立に、２’−Ｏアルキル、２’−置換アルコキシ、２’−置換アルキル、２’−ハロ、ＥＮＡ及びＢＮＡ／ＬＮＡからなる群から選択される修飾を含むヌクレオチドを示し；
Ｃ１は、非環状ヌクレオチド（例えば、ＵＮＡ又はＧＮＡ）であり；
Ｔ１、Ｔ１’、Ｔ２’及びＴ３’は、各々独立に、ＤＮＡ、ＲＮＡ、ＬＮＡ、２’−Ｆ及び２’−Ｆ−５’−メチルからなる群から選択される化学修飾を含むヌクレオチドを示し；
ｎ１、ｎ３又はｑ１は、独立に、４〜１５ヌクレオチド長であり；
ｎ５、ｑ３又はｑ７は、独立に、１〜６ヌクレオチド長であり；
ｎ４、ｑ２又はｑ６は、独立に、１〜３ヌクレオチド長であり；
ｎ２又はｑ４は、独立に、０〜３ヌクレオチド長であり；
ｑ５は、独立に、０〜１０ヌクレオチド長であり；
ここで、ｄｓＲＮＡ剤は、アンチセンス及び／又はセンス鎖の１〜１０ヌクレオチド長の３’及び／又は５’突出部を有する。
【０５７７】
一実施形態では、本発明は、標的遺伝子の発現を阻害するための二本鎖ＲＮＡ（ｄｓＲＮＡ）剤に関する。ｄｓＲＮＡ剤は、各鎖が１４〜４０ヌクレオチドを有する、センス及びアンチセンス鎖：
【化９４】
2020531450.tif 000101
を含み、
式中、
Ｂ１、Ｂ２、Ｂ３、Ｂ１’、Ｂ２’、Ｂ３’，及びＢ４’は、各々独立に、２’−Ｏアルキル、２’−置換アルコキシ、２’−置換アルキル、２’−ハロ、ＥＮＡ及びＢＮＡ／ＬＮＡからなる群から選択される修飾を含むヌクレオチドを示し；
Ｃ１は、非環状ヌクレオチド（例えば、ＵＮＡ又はＧＮＡ）であり；
Ｔ１、Ｔ１’、Ｔ２’及びＴ３’は、各々独立に、ＤＮＡ、ＲＮＡ、ＬＮＡ、２’−Ｆ及び２’−Ｆ−５’−メチルからなる群から選択される化学修飾を含むヌクレオチドを示し；
ｎ１、ｎ３又はｑ１は、独立に、４〜１５ヌクレオチド長であり；
ｎ５、ｑ３又はｑ７は、独立に、１〜６ヌクレオチド長であり；
ｎ４、ｑ２又はｑ６は、独立に、１〜３ヌクレオチド長であり；
ｎ２又はｑ４は、独立に、０〜３ヌクレオチド長であり；
ｑ５は、独立に、０〜１０ヌクレオチド長であり；
ここで、ｄｓＲＮＡ剤は、アンチセンス鎖の３’末端に２ヌクレオチド長の３’突出部を含む。
【０５７８】
一実施形態では、本発明は、標的遺伝子の発現を阻害するための二本鎖ＲＮＡ（ｄｓＲＮＡ）剤に関する。ｄｓＲＮＡ剤は、各鎖が１５〜３０ヌクレオチドを有する、センス鎖及びアンチセンス鎖：
【化９５】
2020531450.tif 000102
を含み、
式中、
Ｂ１、Ｂ２、Ｂ３、Ｂ１’、Ｂ２’、Ｂ３’及びＢ４’は、各々独立に、２’−ＯＭｅ修飾を含むヌクレオチドを示し；
Ｃ１は、非環状ヌクレオチドＧＮＡであり；
Ｔ１、Ｔ１’、Ｔ２’及びＴ３’は、各々独立に、ＤＮＡ又はＲＮＡであり；
ｎ１、ｎ３又はｑ１は、独立に、４〜１５ヌクレオチド長であり；
ｎ５、ｑ３又はｑ７は、独立に、１〜６ヌクレオチド長であり；
ｎ４、ｑ２又はｑ６は、独立に、１〜３ヌクレオチド長であり；
ｎ２又はｑ４は、独立に、０〜３ヌクレオチド長であり；
ｑ５は、独立に、０〜１０ヌクレオチド長であり；
ここで、ｄｓＲＮＡ剤は、アンチセンス鎖の３’末端に１〜６ヌクレオチド長の３’突出部を有する。
【０５７９】
一実施形態では、本発明は、標的遺伝子の発現を阻害するための二本鎖ＲＮＡ（ｄｓＲＮＡ）剤に関する。ｄｓＲＮＡ剤は、各鎖が１９〜２３ヌクレオチドを有する、センス鎖及びアンチセンス鎖：
【化９６】
2020531450.tif 000103
を含み、
式中、
Ｂ１、Ｂ２、Ｂ３、Ｂ１’、Ｂ２’、Ｂ３’及びＢ４’は、各々独立に、２’−ＯＭｅ修飾を含むヌクレオチドを示し；
Ｃ１は、非環状ヌクレオチドＧＮＡであり；
Ｔ１、Ｔ１’、Ｔ２’及びＴ３’は、各々独立に、ＤＮＡ又はＲＮＡであり；
ｎ１、ｎ３、ｑ１又はｑ３は、独立に、４〜１５ヌクレオチド長であり；
ｎ５、ｑ３又はｑ７は、独立に、１〜６ヌクレオチド長であり；
ｎ４、ｑ２又はｑ６は、独立に、１〜３ヌクレオチド長であり；
ｎ２、ｑ４又はｑ５は、独立に、０〜３ヌクレオチド長であり；
ｑ５は、独立に、０〜１０ヌクレオチド長であり；
ここで、ｄｓＲＮＡ剤は、アンチセンス鎖の３’末端に２ヌクレオチド長の３’突出部を有する。
【０５８０】
一実施形態では、本発明は、標的遺伝子の発現を阻害するための二本鎖ＲＮＡ（ｄｓＲＮＡ）剤に関する。ｄｓＲＮＡ剤は、各鎖が１４〜４０ヌクレオチドを有する、センス鎖及びアンチセンス鎖：
【化９７】
2020531450.tif 000104
を含み、
式中、
Ｂ１、Ｂ２、Ｂ３、Ｂ１’、Ｂ２’、Ｂ３’及びＢ４’は、各々独立に、２’−Ｏアルキル、２’−置換アルコキシ、２’−置換アルキル、２’−ハロ、ＥＮＡ及びＢＮＡ／ＬＮＡからなる群から選択される修飾を含むヌクレオチドを示し；
Ｃ１は、非環状ヌクレオチド（例えば、ＵＮＡ又はＧＮＡ）であり；
Ｔ１、Ｔ１’、Ｔ２’及びＴ３’は、各々独立に、ＤＮＡ、ＲＮＡ、ＬＮＡ、２’−Ｆ及び２’−Ｆ−５’−メチルからなる群から選択される化学修飾を含むヌクレオチドを示し；
ｎ１、ｎ３又はｑ１は、独立に、４〜１５ヌクレオチド長であり；
ｎ５、ｑ３又はｑ７は、独立に、１〜６ヌクレオチド長であり；
ｎ４、ｑ２又はｑ６は、独立に、１〜３ヌクレオチド長であり；
ｎ２又はｑ４は、独立に、０〜３ヌクレオチド長であり；
ｑ５は、独立に、０〜１０ヌクレオチド長であり；
ここで、ｄｓＲＮＡ剤は、センス鎖の５’末端に１〜１０ヌクレオチド長の５’突出部を有する。
【０５８１】
一実施形態では、本発明は、標的遺伝子の発現を阻害するための二本鎖ＲＮＡ（ｄｓＲＮＡ）剤に関する。ｄｓＲＮＡ剤は、各鎖が１４〜４０ヌクレオチドを有する、センス鎖及びアンチセンス鎖：
【化９８】
2020531450.tif 000105
を含み、
式中、
Ｂ１、Ｂ２、Ｂ３、Ｂ１’、Ｂ２’、Ｂ３’及びＢ４’は、各々独立に、２’−Ｏアルキル、２’−置換アルコキシ、２’−置換アルキル、２’−ハロ、ＥＮＡ及びＢＮＡ／ＬＮＡからなる群から選択される修飾を含むヌクレオチドを示し；
Ｃ１は、非環状ヌクレオチド（例えば、ＵＮＡ又はＧＮＡ）であり；
Ｔ１、Ｔ１’、Ｔ２’及びＴ３’は、各々独立に、ＤＮＡ、ＲＮＡ、ＬＮＡ、２’−Ｆ及び２’−Ｆ−５’−メチルからなる群から選択される化学修飾を含むヌクレオチドを示し；
ｎ１、ｎ３又はｑ１は、独立に、４〜１５ヌクレオチド長であり；
ｎ５、ｑ３又はｑ７は、独立に、１〜６ヌクレオチド長であり；
ｎ４、ｑ２又はｑ６は、独立に、１〜３ヌクレオチド長であり；
ｎ２又はｑ４は、独立に、０〜３ヌクレオチド長であり；
ｑ５は、独立に、０〜１０ヌクレオチド長であり；
ここで、ｄｓＲＮＡ剤は、センス鎖の５’末端に１〜６ヌクレオチド長の５’突出部を有する。
【０５８２】
一実施形態では、本発明は、標的遺伝子の発現を阻害するための二本鎖ＲＮＡ（ｄｓＲＮＡ）剤に関する。ｄｓＲＮＡ剤は、各鎖が１４〜４０ヌクレオチドを有する、センス鎖及びアンチセンス鎖：
【化９９】
2020531450.tif 000106
を含み、
式中、
Ｂ１、Ｂ２、Ｂ３、Ｂ１’、Ｂ２’、Ｂ３’及びＢ４’は、各々独立に、２’−Ｏアルキル、２’−置換アルコキシ、２’−置換アルキル、２’−ハロ、ＥＮＡ及びＢＮＡ／ＬＮＡからなる群から選択される修飾を含むヌクレオチドを示し；
Ｃ１は、非環状ヌクレオチド（例えば、ＵＮＡ又はＧＮＡ）であり；
Ｔ１、Ｔ１’、Ｔ２’及びＴ３’は、各々独立に、ＤＮＡ、ＲＮＡ、ＬＮＡ、２’−Ｆ及び２’−Ｆ−５’−メチルからなる群から選択される化学修飾を含むヌクレオチドを示し；
ｎ１、ｎ３又はｑ１は、独立に、４〜１５ヌクレオチド長であり；
ｎ５、ｑ３又はｑ７は、独立に、１〜６ヌクレオチド長であり；
ｎ４、ｑ２又はｑ６は、独立に、１〜３ヌクレオチド長であり；
ｎ２又はｑ４は、独立に、０〜３ヌクレオチド長であり；
ｑ５は、独立に、０〜１０ヌクレオチド長であり；
ここで、ｄｓＲＮＡ剤は、センス鎖の５’末端に１〜１０ヌクレオチド長の５’突出部を有し、アンチセンス鎖の５’末端に１〜１０ヌクレオチドの３’突出部を有する。
【０５８３】
熱不安定化修飾
アンチセンス鎖のシード領域（すなわちアンチセンス鎖の５’末端の２〜８位）とは反対の部位で、センス鎖に熱不安定化ヌクレオチドを導入することにより、ｄｓＲＮＡ二重螺旋が解離又は融解する傾向を高める（二重螺旋会合の自由エネルギーを低減する）ことにより、ｄｓＲＮＡ剤をＲＮＡ干渉について最適化することができる。この修飾は、二重螺旋が、アンチセンス鎖のシード領域内で解離又は融解する傾向を高めることができる。
【０５８４】
熱不安定化修飾は、脱塩基修飾；反対側の鎖における反対側ヌクレオチドとのミスマッチ；並びに２’−デオキシ修飾又は非環状ヌクレオチド、例えばアンロックド核酸（ＵＮＡ）若しくはグリセロール核酸（ＧＮＡ）などの糖修飾を含み得る。
【０５８５】
例示される脱塩基修飾は、以下の通りである。
【化１００】
2020531450.tif 000107
【０５８６】
例示される糖修飾は、以下の通りである。
【化１０１】
2020531450.tif 000108
【０５８７】
用語「非環状ヌクレオチド」は、非環状リボース糖を有する任意のヌクレオチドを指し、例えば、その際、リボース炭素同士の結合（例えば、Ｃ１’−Ｃ２’、Ｃ２’−Ｃ３’、Ｃ３’−Ｃ４’、Ｃ４’−Ｏ４’若しくはＣ１’−Ｏ４’）のいずれかが存在しない、且つ／又はリボース炭素若しくは酸素（例えば、Ｃ１’、Ｃ２’、Ｃ３’、Ｃ４’又はＯ４’）の少なくとも１つが、独立に又は組合せで、ヌクレオチドから欠失している。一部の実施形態では、非環状ヌクレオチドは、
【化１０２】
2020531450.tif 000109
であり、ここで、Ｂは、修飾又は非修飾核酸塩基であり、Ｒ１及びＲ２は、独立に、Ｈ、ハロゲン、ＯＲ３又はアルキルであり；Ｒ３は、Ｈ、アルキル、シクロアルキル、アリール、アラルキル、ヘテロアリール又は糖である）。用語「ＵＮＡ」は、アンロックド非環状核酸を指し、糖の結合のいずれかが除去されて、アンロックド「糖」残基を形成する。一例では、ＵＮＡは、Ｃ１’−Ｃ４’（すなわちＣ１’及びＣ４’炭素同士の共有結合炭素−酸素−炭素結合）が除去されたモノマーも包含する。別の例では、糖のＣ２’−Ｃ３’結合（すなわちＣ２’及びＣ３’炭素同士の共有結合炭素−炭素結合）が除去されている（Ｍｉｋｈａｉｌｏｖ  ｅｔ．ａｌ．，Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ  Ｌｅｔｔｅｒｓ，２６（１７）：２０５９（１９８５）；及びＦｌｕｉｔｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｏｌ．Ｂｉｏｓｙｓｔ．，１０：１０３９（２００９）を参照されたい；これらは、全体として参照により本明細書に組み込まれる）。非環状誘導体は、ワトソン−クリック対合に影響を及ぼすことなく、より大きい骨格柔軟性を付与する。非環状ヌクレオチドは、２’−５’又は３’−５’結合を介して連結することができる。
【０５８８】
用語「ＧＮＡ」は、ＤＮＡ又はＲＮＡに類似しているが、リン酸ジエステル結合：
【化１０３】
2020531450.tif 000110
により連結される反復グリセロール単位から構成される点で、「骨格」の組成が異なるポリマーであるグリコール核酸を指す。
【０５８９】
熱不安定化修飾は、ｄｓＲＮＡ二重螺旋内の熱不安定化ヌクレオチドと、反対側の鎖の反対側ヌクレオチドとのミスマッチ（すなわち非相補的塩基対）であり得る。例示的なミスマッチ塩基対は、Ｇ：Ｇ、Ｇ：Ａ、Ｇ：Ｕ、Ｇ：Ｔ、Ａ：Ａ、Ａ：Ｃ、Ｃ：Ｃ、Ｃ：Ｕ、Ｃ：Ｔ、Ｕ：Ｕ、Ｔ：Ｔ、Ｕ：Ｔ又はこれらの組合せを含む。当技術分野で知られる他のミスマッチ塩基対合も本発明に適している。ミスマッチは、天然に存在するヌクレオチド又は修飾ヌクレオチドのいずれのヌクレオチド間でも起こり得る。すなわち、ミスマッチ塩基対合は、ヌクレオチドのリボース糖に対する修飾とは関係なく、それぞれのヌクレオチドからの核酸塩基同士で起こり得る。いくつかの実施形態では、ｄｓＲＮＡ剤は、ミスマッチ対合に少なくとも１つの核酸塩基を含有し、それは、２’−デオキシ核酸塩基であり；例えば、２’−デオキシ核酸塩基は、センス鎖に存在する。
【０５９０】
脱塩基ヌクレオチド、非環状ヌクレオチド修飾（ＵＮＡ及びＧＮＡなど）並びにミスマッチ修飾のさらなる例は、国際公開第２０１１／１３３８７６号パンフレット（これは、全体として参照により本明細書に組み込まれる）に記載されている。
【０５９１】
熱不安定化修飾は、反対側塩基との水素結合を形成する能力が低減又は無効化されたユニバーサル塩基、さらにはリン酸修飾も含み得る。
【０５９２】
反対側の鎖における塩基との水素結合を形成する能力が障害又は完全に無効化された核酸塩基修飾が、国際公開第２０１０／００１１８９５号パンフレット（全体として参照により本明細書に組み込まれる）に記載されているように、ｄｓＲＮＡ二重螺旋の中央領域の不安定化について評価されている。例示的な核酸塩基修飾は、
【化１０４】
2020531450.tif 000111
である。
【０５９３】
天然のリン酸ジエステル結合と比較して、ｄｓＲＮＡ二重螺旋の熱安定性を低下させることがわかっている例示的なリン酸修飾は、
【化１０５】
2020531450.tif 000112
である。
【０５９４】
一実施形態では、本発明のｄｓＲＮＡ剤は、２’−５’結合（２’−Ｈ、２’−ＯＨ及び２’−ＯＭｅとの、且つＰ＝Ｏ又はＰ＝Ｓとの）を含む。例えば、２’−５’結合修飾を用いて、ヌクレアーゼ耐性を促進するか若しくはセンス鎖とアンチセンス鎖の結合を阻害することができるか、又は上記修飾をセンス鎖の５’末端に用いて、ＲＩＳＣによるセンス鎖活性化を回避することができる。
【０５９５】
別の実施形態では、本発明のｄｓＲＮＡ剤は、Ｌ糖（例えば、２’−Ｈ、２’−ＯＨ及び２’−ＯＭｅを含むＬリボース、Ｌ−アラビノース）を含む。例えば、これらのＬ糖修飾を用いて、ヌクレアーゼ耐性を促進するか若しくはセンス鎖とアンチセンス鎖との結合を阻害することができるか、又は上記修飾をセンス鎖の５’末端に用いて、ＲＩＳＣによるセンス鎖活性化を回避することができる。
【０５９６】
一実施形態では、ｄｓＲＮＡ剤は、式（Ｉ）により表される少なくとも２つの二重螺旋を含む多量体であり、ここで、前記二重螺旋は、リンカーにより連結される。リンカーは、切断可能又は切断不可能のいずれでもあり得る。任意選択で、前記多量体は、リガンドをさらに含む。ｄｓＲＮＡ剤の各々は、同じ遺伝子又は２つの異なる遺伝子をターゲティングすることができ；又はｄｓＲＮＡ剤の各々は、２つの異なる部位で同じ遺伝子をターゲティングすることができる。
【０５９７】
一実施形態では、ｄｓＲＮＡ剤は、式（Ｉ）により表される３、４、５、６つ又はそれを上回る二重螺旋を含む多量体であり、ここで、前記二重螺旋は、リンカーにより連結される。リンカーは、切断可能又は切断不可能のいずれでもあり得る。任意選択で、前記多量体は、リガンドをさらに含む。ｄｓＲＮＡ剤の各々は、同じ遺伝子又は２つの異なる遺伝子をターゲティングすることができ；又はｄｓＲＮＡ剤の各々は、２つの異なる部位で同じ遺伝子をターゲティングすることができる。
【０５９８】
一実施形態では、式（Ｉ）により表される２つのｄｓＲＮＡ剤が、５’末端で互いに連結され、３’末端の一方又は両方が、任意選択でリガンドに共役される。ｄｓＲＮＡの各々は、同じ遺伝子又は２つの異なる遺伝子をターゲティングすることができ；又はｄｓＲＮＡの各々は、２つの異なる部位で同じ遺伝子をターゲティングすることができる。
【０５９９】
様々な刊行物が、多量体ｓｉＲＮＡについて記載しており、これらは、全て本発明のｄｓＲＮＡで使用することができる。こうした刊行物は、国際公開第２００７／０９１２６９号パンフレット、米国特許第７８５８７６９号明細書、国際公開第２０１０／１４１５１１号パンフレット、同第２００７／１１７６８６号パンフレット、同第２００９／０１４８８７号パンフレット及び同第２０１１／０３１５２０号パンフレットパンフレットが挙げられ、これらは、全体として参照により本明細書に組み込まれる。
【０６００】
ｄｓＲＮＡ剤に対する１つ又は複数の炭水化物部分の共役を含むｄｓＲＮＡ剤は、ｄｓＲＮＡ剤の１つ又は複数の特性を最適化することができる。多くの場合、炭水化物部分は、ｄｓＲＮＡ剤の修飾サブユニットに結合される。例えば、ｄｓＲＮＡ剤の１つ又は複数のリボヌクレオチドサブユニットのリボース糖は、炭水化物リガンドが結合される別の部分、例えば非炭水化物（好ましくは環状）担体で置換することができる。サブユニットのリボース糖がこのように置換されたリボヌクレオチドサブユニットは、本明細書において、リボース置換修飾サブユニット（ＲＲＭＳ）と呼ばれる。環状担体は、炭素環式環系である、すなわち全ての環原子が炭素原子であるか、又は複素環式環系、すなわち１つ又は複数の環原子が、ヘテロ原子、例えば窒素、酸素、硫黄であり得る。環状担体は、単環式環系であり得るか、又は２つ以上の環、例えば融合環を含み得る。環状担体は、完全飽和環系であり得るか、又は１つ又は複数の二重結合を含み得る。
【０６０１】
リガンドは、担体を介してポリヌクレオチドに結合することができる。担体は、（ｉ）少なくとも１つの「骨格結合点」、好ましくは２つの「骨格結合点」と、（ｉｉ）少なくとも１つの「係留結合点」を含む。本明細書で使用する「骨格結合点」は、官能基、例えばヒドロキシル基又は一般に骨格、例えばリボ核酸のリン酸若しくは修飾リン酸（例えば、硫黄含有）骨格への担体の組み込みに利用可能な、且つ好適な結合を指す。一部の実施形態における「係留結合点」（ＴＡＰ）は、環状担体の構成環原子、例えば炭素原子若しくはヘテロ原子（骨格結合点を付与する原子と異なる）を指し、これは、選択された部分を連結する。この部分は、例えば、炭水化物、例えば単糖、二糖、三糖、四糖、オリゴ糖及び多糖であり得る。任意選択で、選択された部分は、介在テザーにより環状担体に連結される。従って、環状担体は、往々にして官能基、例えばアミノ基を含むか、又は一般に別の化学実体、例えば構成環へのリガンドの組み込み若しくは係留に好適な結合を提供する。
【０６０２】
一実施形態では、本発明のｄｓＲＮＡ剤は、担体を介してリガンドに共役され、担体は、環状基又は非環状基であり得；好ましくは、環状基は、ピロリジニル、ピラゾリニル、ピラゾリジニル、イミダゾリニル、イミダゾリジニル、ピペリジニル、ピペラジニル、［１，３］ジオキソラン、オキサゾリジニル、イソキサゾリジニル、モルホリニル、チアゾリジニル、イソチアゾリジニル、キノキサリニル、ピリダジノニル、テトラヒドロフリル及びデカリンから選択され；好ましくは、非環状基は、セリノール骨格又はジエタノールアミン骨格から選択される。
【０６０３】
本発明の二本鎖ＲＮＡ（ｄｓＲＮＡ）剤は、任意選択で１つ又は複数のリガンドと共役され得る。リガンドは、３’末端、５’末端又は両端で、センス鎖、アンチセンス鎖又は両方の鎖に結合することができる。例えば、リガンドは、センス鎖、特に、センス鎖の３’末端に共役させることができる。
【０６０４】
一実施形態では、本発明のｄｓＲＮＡ剤は、５’リン酸化されているか、又は５’プライム末端にホスホリル類似体を含む。５’リン酸修飾は、ＲＩＳＣ媒介遺伝子サイレンシングと適合性のものを含む。好適な修飾としては、以下のものが挙げられる：５’−一リン酸（（ＨＯ）２（Ｏ）Ｐ−Ｏ−５’）；５’−二リン酸（（ＨＯ）２（Ｏ）Ｐ−Ｏ−Ｐ（ＨＯ）（Ｏ）−Ｏ−５’）；５’−三リン酸（（ＨＯ）２（Ｏ）Ｐ−Ｏ−（ＨＯ）（Ｏ）Ｐ−Ｏ−Ｐ（ＨＯ）（Ｏ）−Ｏ−５’）；５’−グアノシンキャップ（７−メチル化又は非メチル化）（７ｍ−Ｇ−Ｏ−５’−（ＨＯ）（Ｏ）Ｐ−Ｏ−（ＨＯ）（Ｏ）Ｐ−Ｏ−Ｐ（ＨＯ）（Ｏ）−Ｏ−５’）；５’−アデノシンキャップ（Ａｐｐｐ）及び任意の修飾若しくは非修飾ヌクレオチドキャップ構造（Ｎ−Ｏ−５’−（ＨＯ）（Ｏ）Ｐ−Ｏ−（ＨＯ）（Ｏ）Ｐ−Ｏ−Ｐ（ＨＯ）（Ｏ）−Ｏ−５’）；５’−モノチオリン酸（ホスホロチオエート；（ＨＯ）２（Ｓ）Ｐ−Ｏ−５’）；５’−モノジチオリン酸（ホスホロジチオエート；（ＨＯ）（ＨＳ）（Ｓ）Ｐ−Ｏ−５’）、５’−ホスホロチオレート（（ＨＯ）２（Ｏ）Ｐ−Ｓ−５’）；酸素／硫黄置換一リン酸、二リン酸及び三リン酸（例えば、５’−α−チオトリホスフェート、５’−γ−チオトリホスフェートなど）、５’−ホスホロアミデート（（ＨＯ）２（Ｏ）Ｐ−ＮＨ−５’、（ＨＯ）（ＮＨ２）（Ｏ）Ｐ−Ｏ−５’）、５’−アルキルホスホネート（Ｒ＝アルキル＝メチル、エチル、イソプロピル、プロピルなど、例えばＲＰ（ＯＨ）（Ｏ）−Ｏ−５’−、５’−アルキルホスホネート（すなわちビニル、置換ビニル）、（ＯＨ）２（Ｏ）Ｐ−５’−ＣＨ２−）、５’−アルキルエーテルホスホネート（Ｒ＝アルキルエーテル＝メトキシメチル（ＭｅＯＣＨ２−）、エトキシメチルなど、例えばＲＰ（ＯＨ）（Ｏ）−Ｏ−５’−）の任意の組合せ。一例では、修飾は、ｄｓＲＮＡ剤のアンチセンス鎖に配置することができる。
【０６０５】
調整性ＲＥＶＥＲＳＩＲ化合物
いくつかの事例では、ｓｉＲＮＡ活性を阻害することが望ましい。例えば、ｓｉＲＮＡ標的がｍＲＮＡであるいくつかの実施形態では、ｓｉＲＮＡ活性を阻害し、それにより標的タンパク質の発現を回復することが望ましい場合もある。例えば、特定のｓｉＲＮＡは、治療に使用されている。いくつかのこうした使用では、ｓｉＲＮＡは、長時間作用する。いくつかの事例では、こうした長時間作用ｓｉＲＮＡは、その便宜性のために、望ましい。こうした事例では、しかし、ｓｉＲＮＡの活性を逆転する手段を有することも望ましい場合がある。例えば、ある患者は、処置に十分に応答しないか、又は過剰用量を受ける可能性がある。こうした事例では、逆転（ｒｅｖｅｒｓｅｒ）化合物を投与して、ｓｉＲＮＡのＲＮＡｉ活性を少なくとも一部低減することができる。いくつかの実施形態では、ｓｉＲＮＡの長時間持続効果のために、自然のクリアランスによりその効果が徐々に弱まるのを待つのは好ましくない選択肢である。
【０６０６】
例として、本発明を限定することなしに、いくつかのｓｉＲＮＡが、血液凝固因子（例えば、第ＩＩ因子（プロトロンビン）、第ＶＩＩ因子、第ＩＸ因子など）を阻害するのに有用である。こうしたｓｉＲＮＡは、抗凝固剤としての治療薬の可能性を有する。長い半減期は、このようなｓｉＲＮＡを特に魅力的にするが、患者が過剰用量を受ける、手術を受ける（その場合、抗凝固は望ましくない）又はそれ以外に、抗凝固剤作用の低減が求められる場合、抗凝固剤ｓｉＲＮＡに対する逆転化合物を投与することができる。このような調整性ＲＥＶＥＲＳＩＲ化合物は、ｓｉＲＮＡの自然のクリアランスを単に待つより迅速に凝固機能を回復するであろう。この例は、例示を目的として提供される。多くのｓｉＲＮＡが、膨大な数の標的、限定はしないが、膨大な数のメッセンジャーＲＮＡ（ｍＲＮＡ）標的及びｐｒｅ−ｍＲＮＡ標的並びに膨大な数の非コードＲＮＡ標的に対して設計されている。本発明に提供する調整性ＲＥＶＥＲＳＩＲ化合物は、ｓｉＲＮＡ化合物の標的又は機構とは関係なく、あらゆるｓｉＲＮＡに好適である。
【０６０７】
いくつかの実施形態では、本発明は、ｍＲＮＡにターゲティングされたｓｉＲＮＡに対する調整性ＲＥＶＥＲＳＩＲ化合物を提供する。いくつかのこうした実施形態では、標的ｍＲＮＡは、代謝に関与するタンパク質をコードする。いくつかのこうした実施形態では、標的ｍＲＮＡは、心臓機能に関与するタンパク質をコードする。いくつかの実施形態では、標的ｍＲＮＡは、血液凝固に関与するタンパク質をコードする。様々な標的タンパク質のいずれかをターゲティングする例示的なｓｉＲＮＡ化合物は、当技術分野において公知である。さらに、標的遺伝子に対するｓｉＲＮＡを調製する方法は当技術分野で公知であり、当業者であれば容易に使用可能である。
【０６０８】
限定なしに、ｓｉＲＮＡの標的遺伝子として、限定はしないが、不要な細胞増殖を促進する遺伝子、増殖因子遺伝子、増殖因子受容体遺伝子、遺伝子発現キナーゼ、アダプタータンパク質遺伝子、Ｇタンパク質スーパーファミリー分子をコードする遺伝子、転写因子をコードする遺伝子、血管新生を媒介する遺伝子、ウイルス遺伝子、ウイルス複製に必要な遺伝子、ウイルス機能を媒介する細胞遺伝子、細菌性病原体の遺伝子、アメーバ性病原体の遺伝子、寄生体病原体の遺伝子、真菌性病原体の遺伝子、不要な免疫応答を媒介する遺伝子、痛みのプロセシングを媒介する遺伝子、神経疾患を媒介する遺伝子、ヘテロ接合性の喪失を特徴とする細胞に見出されるａｌｌｅｎｅ遺伝子又は多型遺伝子の１つのａｌｌｅｇｅ遺伝子が挙げられる。
【０６０９】
ｓｉＲＮＡの特定の例示的な標的遺伝子として、限定はしないが、以下のものが挙げられる：ＡＴ３、ＡＧＴ、ＡＬＡＳ１、ＴＭＰＲ、ＨＡＯ１、ＡＧＴ、Ｃ５、ＣＣＲ−５、ＰＤＧＦβ遺伝子；Ｅｒｂ−Ｂ遺伝子、Ｓｒｃ遺伝子；ＣＲＫ遺伝子；ＧＲＢ２遺伝子；ＲＡＳ遺伝子；ＭＥＫＫ遺伝子；ＪＮＫ遺伝子；ＲＡＦ遺伝子；Ｅｒｋ１／２遺伝子；ＰＣＮＡ（ｐ２１）遺伝子；ＭＹＢ遺伝子；ｃ−ＭＹＣ遺伝子；ＪＵＮ遺伝子；ＦＯＳ遺伝子；ＢＣＬ−２遺伝子；サイクリンＤ遺伝子；ＶＥＧＦ遺伝子；ＥＧＦＲ遺伝子；サイクリンＡ遺伝子；サイクリンＥ遺伝子；ＷＮＴ−１遺伝子；β−カテニン遺伝子；ｃ−ＭＥＴ遺伝子；ＰＫＣ遺伝子；ＮＦＫＢ遺伝子；ＳＴＡＴ３遺伝子；サバイビン遺伝子；Ｈｅｒ２／Ｎｅｕ遺伝子；トポイソメラーゼＩ遺伝子；トポイソメラーゼＩＩα遺伝子；ｐ７３遺伝子；ｐ２１（ＷＡＦ１／ＣＩＰ１）遺伝子、ｐ２７（ＫＩＰ１）遺伝子；ＰＰＭ１Ｄ遺伝子；カベオリンＩ遺伝子；ＭＩＢ  Ｉ遺伝子；ＭＴＡＩ遺伝子；Ｍ６８遺伝子；腫瘍抑制遺伝子；ｐ５３遺伝子；ＤＮ−ｐ６３遺伝子；ｐＲｂ腫瘍抑制遺伝子；ＡＰＣ１腫瘍抑制遺伝子；ＢＲＣＡ１腫瘍抑制遺伝子；ＰＴＥＮ腫瘍抑制遺伝子；ＭＬＬ融合遺伝子、例えばＭＬＬ−ＡＦ９、ＢＣＲ／ＡＢＬ融合遺伝子；ＴＥＬ／ＡＭＬ１融合遺伝子；ＥＷＳ／ＦＬＩ１融合遺伝子；ＴＬＳ／ＦＵＳ１融合遺伝子；ＰＡＸ３／ＦＫＨＲ融合遺伝子；ＡＭＬ１／ＥＴＯ融合遺伝子；αｖ−インテグリン遺伝子；Ｆｌｔ−１受容体遺伝子；チューブリン遺伝子；ヒトパピローマウイルス（Ｈｕｍａｎ  Ｐａｐｉｌｌｏｍａ  Ｖｉｒｕｓ）遺伝子、ヒトパピローマウイルス（Ｈｕｍａｎ  Ｐａｐｉｌｌｏｍａ  Ｖｉｒｕｓ）複製に必要な遺伝子、ヒト免疫不全ウイルス（Ｈｕｍａｎ  Ｉｍｍｕｎｏｄｅｆｉｃｉｅｎｃｙ  Ｖｉｒｕｓ）遺伝子、ヒト免疫不全ウイルス（Ｈｕｍａｎ  Ｉｍｍｕｎｏｄｅｆｉｃｉｅｎｃｙ  Ｖｉｒｕｓ）複製に必要な遺伝子、Ａ型肝炎ウイルス（Ｈｅｐａｔｉｔｉｓ  Ａ  Ｖｉｒｕｓ）遺伝子、Ａ型肝炎ウイルス（Ｈｅｐａｔｉｔｉｓ  Ａ  Ｖｉｒｕｓ）複製に必要な遺伝子、Ｂ型肝炎ウイルス（Ｈｅｐａｔｉｔｉｓ  Ｂ  Ｖｉｒｕｓ）遺伝子、Ｂ型肝炎ウイルス（Ｈｅｐａｔｉｔｉｓ  Ｂ  Ｖｉｒｕｓ）複製に必要な遺伝子、Ｃ型肝炎ウイルス遺伝子（Ｈｅｐａｔｉｔｉｓ  Ｃ  Ｖｉｒｕｓ）、Ｃ型肝炎ウイルス（Ｈｅｐａｔｉｔｉｓ  Ｃ  Ｖｉｒｕｓ）複製に必要な遺伝子、Ｄ型肝炎ウイルス（Ｈｅｐａｔｉｔｉｓ  Ｄ  Ｖｉｒｕｓ）遺伝子、Ｄ型肝炎ウイルス（Ｈｅｐａｔｉｔｉｓ  Ｄ  Ｖｉｒｕｓ）複製に必要な遺伝子、Ｅ型肝炎ウイルス（Ｈｅｐａｔｉｔｉｓ  Ｅ  Ｖｉｒｕｓ）遺伝子、Ｅ型肝炎ウイルス（Ｈｅｐａｔｉｔｉｓ  Ｅ  Ｖｉｒｕｓ）複製に必要な遺伝子、Ｆ型肝炎ウイルス（Ｈｅｐａｔｉｔｉｓ  Ｆ  Ｖｉｒｕｓ）遺伝子、Ｆ型肝炎ウイルス（Ｈｅｐａｔｉｔｉｓ  Ｆ  Ｖｉｒｕｓ）複製に必要な遺伝子、Ｇ型肝炎ウイルス（Ｈｅｐａｔｉｔｉｓ  Ｇ  Ｖｉｒｕｓ）遺伝子、Ｇ型肝炎ウイルス（Ｈｅｐａｔｉｔｉｓ  Ｇ  Ｖｉｒｕｓ）複製に必要な遺伝子、Ｈ型肝炎ウイルス（Ｈｅｐａｔｉｔｉｓ  Ｈ  Ｖｉｒｕｓ）遺伝子、Ｈ型肝炎ウイルス（Ｈｅｐａｔｉｔｉｓ  Ｈ  Ｖｉｒｕｓ）複製に必要な遺伝子、ＲＳウイルス（Ｒｅｓｐｉｒａｔｏｒｙ  Ｓｙｎｃｙｔｉａｌ  Ｖｉｒｕｓ）遺伝子、ＲＳウイルス（Ｒｅｓｐｉｒａｔｏｒｙ  Ｓｙｎｃｙｔｉａｌ  Ｖｉｒｕｓ）複製に必要な遺伝子、単純ヘルペスウイルス（Ｈｅｒｐｅｓ  Ｓｉｍｐｌｅｘ  Ｖｉｒｕｓ）遺伝子、単純ヘルペスウイルス（Ｈｅｒｐｅｓ  Ｓｉｍｐｌｅｘ  Ｖｉｒｕｓ）複製に必要な遺伝子、ヘルペスサイトメガロウイルス（ｈｅｒｐｅｓ  Ｃｙｔｏｍｅｇａｌｏｖｉｒｕｓ）遺伝子、ヘルペスサイトメガロウイルス（ｈｅｒｐｅｓ  Ｃｙｔｏｍｅｇａｌｏｖｉｒｕｓ）複製に必要な遺伝子、ヘルペスエプスタインバーウイルス（Ｅｐｓｔｅｉｎ  Ｂａｒｒ  Ｖｉｒｕｓ）遺伝子、ヘルペスエプスタインバーウイルス（Ｅｐｓｔｅｉｎ  Ｂａｒｒ  Ｖｉｒｕｓ）複製に必要な遺伝子、カポジ肉腫関連ヘルペスウイルス（Ｋａｐｏｓｉ’ｓ  Ｓａｒｃｏｍａ−ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ  Ｈｅｒｐｅｓ  Ｖｉｒｕｓ）遺伝子、カポジ肉腫関連ヘルペスウイルス（Ｋａｐｏｓｉ’ｓ  Ｓａｒｃｏｍａ−ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ  Ｈｅｒｐｅｓ  Ｖｉｒｕｓ）複製に必要な遺伝子、ＪＣウイルス（ＪＣ  Ｖｉｒｕｓ）遺伝子、ＪＣウイルス（ＪＣ  Ｖｉｒｕｓ）複製に必要なヒト遺伝子、ミクソウイルス遺伝子、ミクソウイルス遺伝子複製に必要な遺伝子、ライノウイルス遺伝子、ライノウイルス複製に必要な遺伝子、コロナウイルス遺伝子、コロナウイルス複製に必要な遺伝子、西ナイルウイルス（Ｗｅｓｔ  Ｎｉｌｅ  Ｖｉｒｕｓ）遺伝子、西ナイルウイルス（Ｗｅｓｔ  Ｎｉｌｅ  Ｖｉｒｕｓ）複製に必要な遺伝子、セントルイス脳炎（Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ  Ｅｎｃｅｐｈａｌｉｔｉｓ）遺伝子、セントルイス脳炎（Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ  Ｅｎｃｅｐｈａｌｉｔｉｓ）複製に必要な遺伝子、ダニ媒介性脳炎ウイルス（Ｔｉｃｋ−ｂｏｒｎｅ  ｅｎｃｅｐｈａｌｉｔｉｓ  ｖｉｒｕｓ）遺伝子、ダニ媒介性脳炎ウイルス（Ｔｉｃｋ−ｂｏｒｎｅ  ｅｎｃｅｐｈａｌｉｔｉｓ  ｖｉｒｕｓ）複製に必要な遺伝子、マリーバレー脳炎ウイルス（Ｍｕｒｒａｙ  Ｖａｌｌｅｙ  ｅｎｃｅｐｈａｌｉｔｉｓ  ｖｉｒｕｓ）遺伝子、マリーバレー脳炎ウイルス（Ｍｕｒｒａｙ  Ｖａｌｌｅｙ  ｅｎｃｅｐｈａｌｉｔｉｓ  ｖｉｒｕｓ）複製に必要な遺伝子、デング熱ウイルス遺伝子、デング熱ウイルス遺伝子複製に必要な遺伝子、シミアンウイルス（Ｓｉｍｉａｎ  Ｖｉｒｕｓ）４０遺伝子、シミアンウイルス（Ｓｉｍｉａｎ  Ｖｉｒｕｓ）４０複製に必要な遺伝子、ヒトＴ細胞リンパ球向性ウイルス（Ｈｕｍａｎ  Ｔ  Ｃｅｌｌ  Ｌｙｍｐｈｏｔｒｏｐｉｃ  Ｖｉｒｕｓ）遺伝子、ヒトＴ細胞リンパ球向性ウイルス（Ｈｕｍａｎ  Ｔ  Ｃｅｌｌ  Ｌｙｍｐｈｏｔｒｏｐｉｃ  Ｖｉｒｕｓ）複製に必要な遺伝子、モロニー−マウス白血病ウイルス（Ｍｏｌｏｎｅｙ−Ｍｕｒｉｎｅ  Ｌｅｕｋｅｍｉａ  Ｖｉｒｕｓ）遺伝子、モロニー−マウス白血病ウイルス（Ｍｏｌｏｎｅｙ−Ｍｕｒｉｎｅ  Ｌｅｕｋｅｍｉａ  Ｖｉｒｕｓ）複製に必要な遺伝子、脳心筋炎ウイルス遺伝子、脳心筋炎ウイルス複製に必要な遺伝子、はしかウイルス遺伝子、はしかウイルス複製に必要な遺伝子、水痘帯状疱疹ウイルス（Ｖｅｒｉｃｅｌｌａ  ｚｏｓｔｅｒ  ｖｉｒｕｓ）遺伝子、水痘帯状疱疹ウイルス（Ｖｅｒｉｃｅｌｌａ  ｚｏｓｔｅｒ  ｖｉｒｕｓ）複製に必要な遺��子、アデノウイルス遺伝子、アデノウイルス複製に必要な遺伝子、黄熱病ウイルス遺伝子、黄熱病ウイルス複製に必要な遺伝子、ポリオウイルス遺伝子、ポリオウイルス複製に必要な遺伝子、ポックスウイルス遺伝子、ポックスウイルス複製に必要な遺伝子、プラスモジウム（ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍ）遺伝子、プラスモジウム（ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍ）遺伝子複製に必要な遺伝子、ミコバクテリア・ウルセランス（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｕｌｃｅｒａｎｓ）遺伝子、ミコバクテリア・ウルセランス（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｕｌｃｅｒａｎｓ）複製に必要な遺伝子、結核菌（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ）遺伝子、結核菌（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ）遺伝子に必要な遺伝子、癩菌（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｌｅｐｒａｅ）遺伝子、癩菌（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｌｅｐｒａｅ）複製に必要な遺伝子、黄色ブドウ球菌（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ａｕｒｅｕｓ）遺伝子、黄色ブドウ球菌（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ａｕｒｅｕｓ）複製に必要な遺伝子、肺炎連鎖球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）遺伝子、肺炎連鎖球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）複製に必要な遺伝子、化膿連鎖球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｐｙｏｇｅｎｅｓ）遺伝子、化膿連鎖球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｐｙｏｇｅｎｅｓ）複製に必要な遺伝子、クラミジア・ニューモニエ（Ｃｈｌａｍｙｄｉａ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）遺伝子、クラミジア・ニューモニエ（Ｃｈｌａｍｙｄｉａ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）複製に必要な遺伝子、肺炎ミコプラズマ（Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）遺伝子、肺炎ミコプラズマ（Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）複製に必要な遺伝子、インテグリン遺伝子、セレクチン遺伝子、補体系遺伝子、ケモカイン遺伝子、ケモカイン受容体遺伝子、ＧＣＳＦ遺伝子、Ｇｒｏ１遺伝子、Ｇｒｏ２遺伝子、Ｇｒｏ３遺伝子、ＰＦ４遺伝子、ＭＩＧ遺伝子、前血小板塩基性タンパク質遺伝子、ＭＩＰ−１Ｉ遺伝子、ＭＩＰ−１Ｊ遺伝子、ＲＡＮＴＥＳ遺伝子、ＭＣＰ−１遺伝子、ＭＣＰ−２遺伝子、ＭＣＰ−３遺伝子、ＣＭＢＫＲ１遺伝子、ＣＭＢＫＲ２遺伝子、ＣＭＢＫＲ３遺伝子、ＣＭＢＫＲ５ｖ、ＡＩＦ−１遺伝子、Ｉ−３０９遺伝子、イオンチャネルの構成要素の遺伝子、神経伝達物質受容体の遺伝子、神経伝達物質リガンドの遺伝子、アミロイドファミリー遺伝子、プレセニリン遺伝子、ＨＤ遺伝子、ＤＲＰＬＡ遺伝子、ＳＣＡ１遺伝子、ＳＣＡ２遺伝子、ＭＪＤ１遺伝子、ＣＡＣＮＬ１Ａ４遺伝子、ＳＣＡ７遺伝子、ＳＣＡ８遺伝子、ヘテロ接合性喪失（ＬＯＨ）細胞に見出される対立遺伝子、多型遺伝子の１つの対立遺伝子並びにこれらの組合せ。
【０６１０】
ヘテロ接合性喪失（ＬＯＨ）は、ＬＯＨの領域に、配列、例えば遺伝子のヘミ接合を引き起こし得る。これにより、正常細胞と疾患状態の細胞、例えば癌細胞との間に有意な遺伝的差異が生じ得るが、これは、正常細胞と疾患状態の細胞、例えば癌細胞との間の有用な差異を提供する。この差異は、遺伝子又は他の配列が、二倍体細胞においてヘテロ接合性であるが、ＬＯＨを有する細胞ではヘミ接合性であるために、起こり得る。ＬＯＨの領域は、多くの場合、喪失によって不要な増殖を促進する遺伝子、例えば腫瘍抑制遺伝子並びに例えば他の遺伝子、一部の事例では正常な機能、例えば成長に不可欠な遺伝子を含む他の配列を含む。本発明の方法は、部分的に、本発明の組成物による必須遺伝子の１つの対立遺伝子の特異的な調節を利用するものである。
【０６１１】
いくつかの実施形態では、本発明は、マイクロＲＮＡを調節するｓｉＲＮＡに対する調整性ＲＥＶＥＲＳＩＲ化合物を提供する。
【０６１２】
調整性ＲＥＶＥＲＳＩＲ化合物は、オリゴマー化合物である。従って、いくつかの実施形態では、調整性ＲＥＶＥＲＳＩＲ化合物は、例えば、限定はしないが、オリゴマー化合物についての本明細書の論述に記載する修飾及びモチーフのいずれかを含む。
【０６１３】
いくつかの実施形態では、モチーフは、ｓｉＲＮＡ及び調整性ＲＥＶＥＲＳＩＲ化合物の両方を考慮して設計される。いくつかの実施形態では、調整性ＲＥＶＥＲＳＩＲ化合物は、４つ以上の連続したＤＮＡ様モノマーを含み得る。いくつかの実施形態では、得られるＲＮＡ／ＤＮＡ二重螺旋は、ＲＮａｓｅ  Ｈを活性化することができ、それによりＲＮＡ様アンチセンス化合物の切断が起こる。いくつかの実施形態では、調整性ＲＥＶＥＲＳＩＲ活性は、酵素活性に依存しない。いくつかのこうした実施形態では、酵素の適合性とは関係なく設計された化合物は、他の特性を改善するための修飾を含み得る。例えば、特定のモチーフは、標的核酸に対する高い親和性を有するが、その標的の酵素による切断を誘発することはできないオリゴマー化合物をもたらす。このようなモチーフは、ｓｉＲＮＡの切断を必要としない実施形態の調整性ＲＥＶＥＲＳＩＲ化合物に有用となり得る。
【０６１４】
いくつかの実施形態では、ｓｉＲＮＡの一方の鎖、例えば調整性ＲＥＶＥＲＳＩＲ化合物と相補的な鎖と、対応する調整性ＲＥＶＥＲＳＩＲ化合物は、同じ長さである。一部の実施形態では、ｓｉＲＮＡの一方の鎖、例えば調整性ＲＥＶＥＲＳＩＲ化合物と相補的な鎖と、対応する調整性ＲＥＶＥＲＳＩＲ化合物は、異なる長さである。一部の実施形態では、調整性ＲＥＶＥＲＳＩＲ化合物は、ｓｉＲＮＡからの対応する相補鎖より短い。一部の実施形態では、調整性ＲＥＶＥＲＳＩＲ化合物は、ｓｉＲＮＡからの対応する相補鎖より、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０ヌクレオチドだけ又はそれよりも短い。
【０６１５】
いくつかの実施形態では、ｓｉＲＮＡのアンチセンス鎖と、対応する調整性ＲＥＶＥＲＳＩＲ化合物は、同じ長さである。一部の実施形態では、ｓｉＲＮＡのアンチセンス鎖と、対応する調整性ＲＥＶＥＲＳＩＲ化合物は、異なる長さである。一部の実施形態では、調整性ＲＥＶＥＲＳＩＲ化合物は、ｓｉＲＮＡからの対応する相補的アンチセンス鎖より短い。一部の実施形態では、調整性ＲＥＶＥＲＳＩＲ化合物は、ｓｉＲＮＡからの対応する相補的アンチセンス鎖より、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０ヌクレオチドだけ又はそれよりも短い。
【０６１６】
いくつかの実施形態では、ｓｉＲＮＡのセンス鎖と、対応する調整性ＲＥＶＥＲＳＩＲ化合物は、同じ長さである。一部の実施形態では、ｓｉＲＮＡのセンス鎖と、対応する調整性ＲＥＶＥＲＳＩＲ化合物は、異なる長さである。一部の実施形態では、調整性ＲＥＶＥＲＳＩＲ化合物は、ｓｉＲＮＡからの対応する相補的センス鎖より短い。一部の実施形態では、調整性ＲＥＶＥＲＳＩＲ化合物は、ｓｉＲＮＡからの対応する相補的センス鎖より、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０ヌクレオチドだけ又はそれよりも短い。
【０６１７】
いくつかの実施形態では、ｓｉＲＮＡと調整性ＲＥＶＥＲＳＩＲ化合物は、患者に投与される。いくつかのこうした実施形態では、ｓｉＲＮＡを含む医薬組成物と、調整性ＲＥＶＥＲＳＩＲ化合物を含む医薬組成物は、同じ製剤を含む。いくつかの実施形態では、ｓｉＲＮＡを含む医薬組成物と、調整性ＲＥＶＥＲＳＩＲ化合物を含む医薬組成物は、異なる製剤を含む。いくつかの実施形態では、ｓｉＲＮＡと調整性ＲＥＶＥＲＳＩＲ化合物は、同じ経路により投与される。いくつかの実施形態では、ｓｉＲＮＡと調整性ＲＥＶＥＲＳＩＲ化合物は、異なる経路により投与される。例えば、いくつかの実施形態では、ｓｉＲＮＡは、経口投与され、調整性ＲＥＶＥＲＳＩＲ化合物は、注射により投与される。いくつかの実施形態では、ｓｉＲＮＡ及び調整性ＲＥＶＥＲＳＩＲ化合物の用量は同じである。いくつかの実施形態では、ｓｉＲＮＡ及び調整性ＲＥＶＥＲＳＩＲ化合物の用量は異なる。
【０６１８】
いくつかの実施形態では、ｓｉＲＮＡ及び調整性ＲＥＶＥＲＳＩＲ化合物の毒性プロフィールは、類似している。いくつかの実施形態では、このような毒性プロフィールは、異なっている。例えば、いくつかの実施形態では、ｓｉＲＮＡは、長期投与のために意図することができ、調整性ＲＥＶＥＲＳＩＲ化合物は、必要に応じて短時間の使用のためにのみ意図される。こうした実施形態では、調整性ＲＥＶＥＲＳＩＲ化合物の有毒な副作用に対する耐容性は、向上し得る。従って、ｓｉＲＮＡでの使用に過度に毒性となり得る修飾及びモチーフは、調整性ＲＥＶＥＲＳＩＲ化合物において許容可能となり得る。例えば、いくつかの実施形態では、１つ又は複数のＬＮＡヌクレオシドを含むオリゴマー化合物は、標的核酸に対する高い親和性を有することが明らかにされているが、いくつかの実施形態では、比較的低濃度で毒性を生じることがわかっている。長期投与が意図される特定のｓｉＲＮＡの場合、ＬＮＡを含む特定のこうした化合物は、好適ではないことがある。しかし、調整性ＲＥＶＥＲＳＩＲ化合物が長期投与のために意図されず、むしろ、ｓｉＲＮＡ活性が問題となる短時間の投与のために意図される実施形態では、解毒剤化合物におけるこうしたＬＮＡ修飾は許容される。ＬＮＡの親和性増大は、調整性ＲＥＶＥＲＳＩＲ効果を改善することができ、調整性ＲＥＶＥＲＳＩＲ化合物は、短時間のみ投与されるため、また、恐らく患者が苦しんでいる場合、ＬＮＡの毒性増加は、正当化され得る。他の高親和性であるが、恐らく毒性の修飾も知られている。
【０６１９】
いくつかの実施形態では、ｓｉＲＮＡの活性は、非オリゴマー調整性ＲＥＶＥＲＳＩＲにより中和される。例えば、いくつかの実施形態では、標的核酸が、タンパク質をコードする標的ｍＲＮＡであるとき、ｓｉＲＮＡの活性を低減すると共に、標的タンパク質の量を増加することが望ましい（例えば、標的タンパク質量が低くなり過ぎるか、又は状況が変化して、標的タンパク質量を回復する必要が生じる）。こうした実施形態では、標的タンパク質そのものを単純に投与することができる。このような投与は、標的タンパク質を低減するｓｉＲＮＡ活性を直ちに逆転することになる。しかし、本発明のオリゴマー調整性ＲＥＶＥＲＳＩＲ化合物を投与することが望ましい場合もある。例えば、標的タンパク質は、動物において短い半減期を有し得る。従って、回復されたタンパク質濃度を維持するために、ｓｉＲＮＡが除去され、正常なタンパク質発現が回復されるまで、標的タンパク質の投与を繰り返す必要がある。いくつかのこうした実施形態では、調整性ＲＥＶＥＲＳＩＲ化合物を投与して、ｓｉＲＮＡ活性の持続時間を短縮することがやはり望ましい。いくつかの実施形態では、オリゴマー調整性ＲＥＶＥＲＳＩＲ化合物は、非オリゴマー調整性ＲＥＶＥＲＳＩＲと一緒に共投与する。いくつかのこうした実施形態では、非オリゴマー調整性ＲＥＶＥＲＳＩＲは、標的タンパク質である。いくつかの実施形態では、非オリゴマー調整性ＲＥＶＥＲＳＩＲ化合物は、標的タンパク質と類似の生理学的効果を有するか又は標的タンパク質の発現を刺激するタンパク質である。
【０６２０】
いくつかの実施形態では、ｓｉＲＮＡの活性は、本発明のオリゴマー調整性ＲＥＶＥＲＳＩＲ化合物によって中和される。いくつかの実施形態では、オリゴマー調整性ＲＥＶＥＲＳＩＲ化合物の投与時間後のある時点において、ｓｉＲＮＡの活性を低減するオリゴマー調整性ＲＥＶＥＲＳＩＲ化合物の作用は、同じｓｉＲＮＡの投与によって中和される。
【０６２１】
いくつかの実施形態では、調整性ＲＥＶＥＲＳＩＲ化合物の作用は、ｓｉＲＮＡ薬剤の治療作用の薬剤投与及び休薬制御を可能にし、この場合、ｓｉＲＮＡの一連の薬剤投与及び休薬作用は、治療用ｓｉＲＮＡの投与後及び／又は投与前の調整性ＲＥＶＥＲＳＩＲ化合物の逐次的投与によって達成することができる。
【０６２２】
研究ツール
いくつかの事例では、ｓｉＲＮＡは、研究ツールとして使用されている。例えば、特定の遺伝子産物の機能を調べている研究者らは、細胞又は動物に存在するその遺伝子産物の量を低減するｓｉＲＮＡを設計し、細胞又は動物における表現型変化を観察することができる。いくつかの実施形態では、本発明は、ＲＮＡｉを介して細胞又は動物における遺伝子産物の量を低減した後、そのＲＮＡｉ活性を低減し、それにより阻害した遺伝子産物を回復する方法を提供する。いくつかの実施形態では、試験者らは、タンパク質又は非翻訳核酸を特性決定するために、こうした技術を使用することができる。いくつかの実施形態では、試験者らは、ｓｉＲＮＡ及び調整性ＲＥＶＥＲＳＩＲ化合物投与の間隔を変えることができる。いくつかの実施形態では、遺伝子産物及び／又はいくつかの細胞機能の動力学及び／又はターンオーバを調べるために、こうした実験を使用する。
【０６２３】
本明細書に記載するように、本発明は、対象にｓｉＲＮＡを投与した後、調整性ＲＥＶＥＲＳＩＲ化合物又はそれを含む組成物を投与するステップを含む。限定なしに、ｓｉＲＮＡ及び調整性ＲＥＶＥＲＳＩＲ化合物は、共役又は非共役のいずれでもあり得る。さらに、ｓｉＲＮＡ及び調整性ＲＥＶＥＲＳＩＲ化合物は、独立に、脂質製剤、例えばＬＮＰ又は他の核酸−脂質粒子に封入することができる。さらに、ｓｉＲＮＡ及び調整性ＲＥＶＥＲＳＩＲ化合物は、独立に、任意の適切な投与経路又は方法によって投与することができる。例えば、ｓｉＲＮＡ及び調整性ＲＥＶＥＲＳＩＲ化合物は、独立に、静脈内投与（ＩＶ）又は皮下投与（ＳＣ）によって投与することができる。
【０６２４】
従って、一部の実施形態では、本発明は、非共役ｓｉＲＮＡを対象に投与した後、共役された調整性ＲＥＶＥＲＳＩＲ化合物を投与するステップを含む方法を提供し、ここで、調整性ＲＥＶＥＲＳＩＲ化合物は、脂質製剤、例えばＬＮＰ又は他の核酸−脂質粒子に封入されており、調整性ＲＥＶＥＲＳＩＲ化合物は、静脈内投与によって投与される。
【０６２５】
一部の他の実施形態では、本発明は、非共役ｓｉＲＮＡを対象に投与した後、共役された調整性ＲＥＶＥＲＳＩＲ化合物を投与するステップを含む方法を提供し、ここで、調整性ＲＥＶＥＲＳＩＲ化合物は、脂質製剤に封入されており、調整性ＲＥＶＥＲＳＩＲ化合物は、皮下投与によって投与される。
【０６２６】
また一部の実施形態では、本発明は、共役ｓｉＲＮＡを対象に投与した後、共役された調整性ＲＥＶＥＲＳＩＲ化合物を投与するステップを含む方法を提供し、ここで、調整性ＲＥＶＥＲＳＩＲ化合物は、脂質製剤に封入されており、調整性ＲＥＶＥＲＳＩＲ化合物は、静脈内投与によって投与される。
【０６２７】
さらに一部の実施形態では、本発明は、共役ｓｉＲＮＡを対象に投与した後、共役された調整性ＲＥＶＥＲＳＩＲ化合物を投与するステップを含む方法を提供し、ここで、調整性ＲＥＶＥＲＳＩＲ化合物は、脂質製剤に封入されており、調整性ＲＥＶＥＲＳＩＲ化合物は、皮下投与によって投与される。
【０６２８】
前述の実施形態では、共役された調整性ＲＥＶＥＲＳＩＲ化合物を記載するが、共役されていない調整性ＲＥＶＥＲＳＩＲ化合物を用いることもできる。従って、一部の実施形態では、本発明は、非共役ｓｉＲＮＡを対象に投与するステップ、その後、非共役の調整性ＲＥＶＥＲＳＩＲ化合物を投与するステップを含む方法を提供し、ここで、調整性ＲＥＶＥＲＳＩＲ化合物は、脂質製剤に封入されており、調整性ＲＥＶＥＲＳＩＲ化合物は、静脈内投与によって投与される。一部の他の実施形態では、本発明は、非共役ｓｉＲＮＡを対象に投与するステップ、その後、非共役の調整性ＲＥＶＥＲＳＩＲ化合物を投与するステップを含む方法を提供し、ここで、調整性ＲＥＶＥＲＳＩＲ化合物は、脂質製剤に封入されており、調整性ＲＥＶＥＲＳＩＲ化合物は、皮下投与によって投与される。また一部の実施形態では、本発明は、共役ｓｉＲＮＡを対象に投与するステップ、その後、非共役の調整性ＲＥＶＥＲＳＩＲ化合物を投与するステップを含む方法を提供し、ここで、調整性ＲＥＶＥＲＳＩＲ化合物は、脂質製剤に封入されており、調整性ＲＥＶＥＲＳＩＲ化合物は、静脈内投与によって投与される。さらに一部の実施形態では、本発明は、共役ｓｉＲＮＡを対象に投与するステップ、その後、非共役の調整性ＲＥＶＥＲＳＩＲ化合物を投与するステップを含む方法を提供し、ここで、調整性ＲＥＶＥＲＳＩＲ化合物は、脂質製剤に封入されており、調整性ＲＥＶＥＲＳＩＲ化合物は、皮下投与によって投与される。
【０６２９】
キット
いくつかの実施形態では、本発明は、１種又は複数のｓｉＲＮＡ及び１種又は複数の対応する調整性ＲＥＶＥＲＳＩＲ化合物を含むキットを提供する。いくつかの実施形態では、こうしたキットは、治療用途のために意図される。いくつかの実施形態では、こうしたキットは、研究用途のために意図される。
【０６３０】
本明細書に記載する特定の化合物、組成物及び方法をいくつかの実施形態に従って詳細に説明してきたが、以下の実施例は、本明細書に記載する化合物を説明するために用いるに過ぎず、本発明を限定することを意図するものではない。本願で引用される参照文献、ＧｅｎＢａｎｋアクセッション番号などは各々、全体として参照により本明細書に組み込まれる。
【０６３１】
配列表及び実施例に記載するヌクレオチド配列は、糖部分、モノマー結合又は核酸塩基に対するいずれの修飾からも独立している。従って、配列番号により定義されるオリゴマー化合物は、独立に、糖部分、ヌクレオシド間若しくはヌクレオチド間結合又は核酸塩基に対する１つ又は複数の修飾を含み得る。
【０６３２】
本明細書に開示する様々な態様の例示的な実施形態は、以下の番号付けされたパラグラフの１つ又は複数により記述することができる：
１．８又は９つの修飾ヌクレオチドを含む調整性ＲＥＶＥＲＳＩＲ化合物であって、修飾ヌクレオチドの少なくとも３つは、高親和性モノマーであり、及び高親和性モノマーの１つは、ｓｉＲＮＡの標的鎖の５’−末端から６番目のヌクレオチドと塩基対合する、調整性ＲＥＶＥＲＳＩＲ化合物。
２．高親和性モノマーは、ＬＮＡである、パラグラフ１の調整性ＲＥＶＥＲＳＩＲ化合物。
３．３又は４つのＬＮＡヌクレオチドを含む、パラグラフ２の調整性ＲＥＶＥＲＳＩＲ化合物。
４．アンチセンス鎖に対して少なくとも９０％相補的である一本鎖オリゴヌクレオチドである、パラグラフ１〜３のいずれか１つの調整性ＲＥＶＥＲＳＩＲ化合物。
５．アンチセンス鎖と完全に相補的である、パラグラフ１〜４のいずれか１つの調整性ＲＥＶＥＲＳＩＲ化合物。
６．少なくとも１つの修飾ヌクレオチド間結合を含む、パラグラフ１〜５のいずれか１つの調整性ＲＥＶＥＲＳＩＲ化合物。
７．ヌクレオチド間結合は、ホスホロチオエートである、パラグラフ６の調整性ＲＥＶＥＲＳＩＲ化合物。
８．３又は４つ以下のホスホロチオエート修飾を含む、パラグラフ７の調整性ＲＥＶＥＲＳＩＲ化合物。
９．リガンドと共役される、パラグラフ１〜８のいずれか１つの調整性ＲＥＶＥＲＳＩＲ化合物。
１０．リガンドは、
【化１０６】
2020531450.tif 000113
である、パラグラフ９の調整性ＲＥＶＥＲＳＩＲ化合物。
１１．リガンドは、化合物の３’−末端に共役される、パラグラフ９の調整性ＲＥＶＥＲＳＩＲ化合物。
１２．修飾オリゴヌクレオチドは、リガンドと共役され、及びリガンドは、調整性ＲＥＶＥＲＳＩＲ化合物中のデオキシ糖を有するヌクレオチドに共役される、パラグラフ１〜１１のいずれか１つの調整性ＲＥＶＥＲＳＩＲ化合物。
１３．前記デオキシ糖は、２’−デオキシリボースである、パラグラフ１２の調整性ＲＥＶＥＲＳＩＲ化合物。
１４．ｓｉＲＮＡは、ｍＲＮＡ、プレｍＲＮＡ、マイクロＲＮＡ、プレマイクロＲＮＡにターゲティングされる、パラグラフ１〜１３のいずれか１つの調整性ＲＥＶＥＲＳＩＲ化合物。
１５．ｓｉＲＮＡは、リガンドと共役される、パラグラフ１〜１４のいずれか１つの調整性ＲＥＶＥＲＳＩＲ化合物。
１６．パラグラフ１〜１５のいずれか１つの調整性ＲＥＶＥＲＳＩＲ化合物を含むキット。
１７．ｓｉＲＮＡと、パラグラフ１〜１５のいずれか１つの調整性ＲＥＶＥＲＳＩＲ化合物とを含むキット。
１８．疾患の処置又は予防に使用するための医薬組成物の効果及び安全性を評価する方法又はシステムであって、本方法は、
（１）第１の処置期間にわたって医薬組成物で全ての対象を処置するステップ、
（２）全ての対象について、ｍＲＮＡレベル及び／又は生理学的アウトカム尺度を導き出すステップ、
（３）処置された対象の応答メンバーを非応答メンバーから分離するステップ、
（４）応答者のメンバーをランダム化し、且つ少なくとも２つのさらなる亜群に階層化するステップ、
（５）第２の処置期間にわたり、（４）における１つの亜群のメンバーを医薬組成物で引き続き処置し、且つ他方の亜群のメンバーをパラグラフ１〜１５のいずれか１つに記載のＲＥＶＥＲＳＩＲ化合物で処置するステップ、
（６）これらの亜群について、ｍＲＮＡレベル及び／又は生理学的アウトカム尺度を導き出すステップ、
（７）（６）におけるアウトカムを（２）におけるアウトカムと比較するステップ、
（８）（７）における比較を使用して、医薬組成物の効果及び安全性尺度を導き出すステップ
を含む、方法又はシステム。
１９．疾患の処置又は予防に使用するための医薬組成物の効果及び安全性を評価する方法又はシステムであって、本システムは、
（１）対象群を少なくとも２つの亜群に階層化するステップ、
（２）第１の処置期間にわたり、１つの亜群のメンバーを医薬組成物で処置し、且つ第２の亜群のメンバーを盲検プラセボで処置するステップ、
（３）これらの亜群について、ｍＲＮＡレベル、及び／又はバイオマーカ、及び／又は生理学的アウトカム尺度を導き出すステップ、
（４）第２の処置期間にわたり、処置された亜群のメンバーをパラグラフ１〜１５のいずれか１つに記載の調整性ＲＥＶＥＲＳＩＲ化合物で処置し、且つ他方の盲検プラセボ亜群のメンバーを医薬組成物で処置するステップ、
（５）これらの亜群について、ｍＲＮＡレベル及び／又は生理学的アウトカム尺度を導き出すステップ、
（６）（５）におけるアウトカムを（３）におけるアウトカムと比較するステップ、
（７）（６）における比較を使用して、医薬組成物の効果及び安全性尺度を導き出すステップ
を含む、方法又はシステム。
２０．疾患は、標的遺伝子の異常な発現によって引き起こされる、パラグラフ１８又はパラグラフ１９に記載の方法又はシステム。
２１．医薬組成物は、オリゴヌクレオチドである、パラグラフ２０に記載の方法又はシステム。
２２．オリゴヌクレオチドは、アンチセンス又はｓｉＲＮＡである、パラグラフ２１に記載の方法又はシステム。
２３．オリゴヌクレオチドは、持続性の薬力学を提供した、パラグラフ２１に記載の方法又はシステム。
２４．パラグラフ１〜１５のいずれか１つに記載の調整性ＲＥＶＥＲＳＩＲ化合物は、処置されたメンバーのランダム化治療中止を均一化し且つ可能にするために使用される、パラグラフ１８に記載の方法又はシステム。
２５．請求項１に記載の調整性ＲＥＶＥＲＳＩＲ化合物の投与は、医薬組成物のプラセボ投与と一緒に盲検化される、パラグラフ１８に記載の方法又はシステム。
２６．パラグラフ１〜１５のいずれか１つに記載の調整性ＲＥＶＥＲＳＩＲ化合物は、処置された亜群のウォッシュアウトを誘導する、パラグラフ１８又はパラグラフ１９に記載の方法又はシステム。
２７．パラグラフ１〜１５のいずれか１つに記載の調整性ＲＥＶＥＲＳＩＲ化合物は、ＲＮＡｉ酸度のベースラインをリセットする、パラグラフ１８に記載の方法又はシステム。
２８．ｓｉＲＮＡは、調整性ＲＥＶＥＲＳＩＲ処置の少なくとも１、２、３又は４週間後に再投与され得る、パラグラフ１９に記載の方法又はシステム。
２９．標的遺伝子は、ＴＴＲ、ＡＧＴ、ＡＬＡＳ−１、ＧＯ１、ＡＴ３、第ＸＩ因子、第ＸＩＩ因子、ＣＣ３、ＣＣ５、ＡＡＴ、Ｅｇ５、ＰＣＳＫ９、ＴＰＸ２、アポＢ、ＳＡＡ、ＲＳＶ、ＰＤＧＦβ遺伝子、Ｅｒｂ−Ｂ遺伝子、Ｓｒｃ遺伝子、ＣＲＫ遺伝子、ＧＲＢ２遺伝子、ＲＡＳ遺伝子、ＭＥＫＫ遺伝子、ＪＮＫ遺伝子、ＲＡＦ遺伝子、Ｅｒｋ１／２遺伝子、ＰＣＮＡ（ｐ２１）遺伝子、ＭＹＢ遺伝子、ＪＵＮ遺伝子、ＦＯＳ遺伝子、ＢＣＬ−２遺伝子、サイクリンＤ遺伝子、ＶＥＧＦ遺伝子、ＥＧＦＲ遺伝子、サイクリンＡ遺伝子、サイクリンＥ遺伝子、ＷＮＴ−Ｉ遺伝子、β−カテニン遺伝子、ｃ−ＭＥＴ遺伝子、ＰＫＣ遺伝子、ＮＦＫＢ遺伝子、ＳＴＡＴ３遺伝子、サバイビン遺伝子、Ｈｅｒ２／Ｎｅｕ遺伝子、トポイソメラーゼＩ遺伝子、トポイソメラーゼＩＩα遺伝子、ｐ７３遺伝子中の突然変異、ｐ２１（ＷＡＦ１／ＣＩＰ１）遺伝子中の突然変異、ｐ２７（ＫＩＰ１）遺伝子中の突然変異、ＰＰＭ１Ｄ遺伝子中の突然変異、ＲＡＳ遺伝子中の突然変異、カベオリンＩ遺伝子中の突然変異、ＭＩＢ  Ｉ遺伝子中の突然変異、ＭＴＡＩ遺伝子中の突然変異、Ｍ６８遺伝子中の突然変異、腫瘍抑制遺伝子中の突然変異及びｐ５３腫瘍抑制遺伝子中の突然変異からなる群から選択される、パラグラフ２０に記載の方法又はシステム。
３０．第１の処置期間は、オープンラベル試験又は単純盲検試験の完了までである、パラグラフ１８に記載の方法又はシステム。
３１．第２の処置期間は、約１週間〜１ヵ月、２ヵ月、３ヵ月、４ヵ月、５ヵ月又は６ヵ月である、パラグラフ１８に記載の方法又はシステム。
３２．第２の処置期間は、臨床試験の完了までである、パラグラフ１８に記載の方法又はシステム。
３３．医薬剤を検証するための臨床試験又は臨床試験を実施するためのシステムを構成する、先行する番号のパラグラフのいずれか１つに記載の方法又はシステム。
３４．医薬剤を用いる処置計画をその効果について評価するためのものである、先行パラグラフのいずれか１つに記載の方法又はシステム。
【実施例】
【０６３３】
実施例１：オリゴヌクレオチド合成
オリゴヌクレオチドは、全てカスタムＧａｌＮＡｃ支持体を用い、１μモルスケールのＭｅｒＭａｄｅ１９２合成装置で調製した。１１ＬＮＡホスホロアミダイトは、Ｅｘｉｑｏｎから購入した。ホスホロアミダイトの全ては、カップリング時間を４００秒まで延長した以外、２−シアノエチルホスホロアミダイト及びＥＴＴアクチベータについての標準プロトコルを用い、１００％アセトニトリル中１００ｍＭの濃度、９：１アセトニトリル：ＤＭＦ（２’−ＯＭｅ−Ｃ、２’−ＯＭｅ−Ｕ）又は１：１ＤＣＭ：アセトニトリル（ＬＮＡ−５−Ｍｅ−Ｃ）で使用した。９：１アセトニトリル：水中の５０ｍＭヨウ素又は９：１ピリジン：アセトニトリル中の１００ｍＭ  １，２，４−ジチアゾール−５−チオン（ＤＤＴＴ）の溶液をそれぞれ用いて、リン酸塩への亜リン酸塩酸化又はホスホロチオエートへの硫化を達成した。トリチルオフ合成後、カラムを１５０μＬの４０％水性メチルアミンと一緒に室温で３０分間インキュベートしてから、真空により溶液を９６ウェルプレート中に排出させた。水性メチルアミンの新鮮な部分を用いるインキュベーション及び排出を繰り返した後、粗オリゴヌクレオチド溶液を含有するプレートを密封し、６０℃でさらに３０分間振盪させることにより、全ての保護基を完全に除去した。１．２ｍＬの９：１アセトニトリル：ＥｔＯＨを各ウェルに添加することにより、粗オリゴヌクレオチドの沈殿を達成した後、−２０℃で一晩インキュベーションを実施した。次に、４℃において４５分間プレートを３０００ＲＰＭで遠心分離し、各ウェルから上清を除去した後、ペレットを９５０μＬの２０ｍＭ水性ＮａＯＡｃ中に再懸濁させた。沈殿しなかった（約１０ヌクレオチドに満たない）調整性ＲＥＶＥＲＳＩＲ化合物について、真空下で濃縮した後、１．０ｍＬの２０ｍＭ水性ＮａＯＡｃ中に再溶解させた。水を用いたＧＥ  Ｈｉ−Ｔｒａｐ脱塩カラム（Ｓｅｐｈａｄｅｘ  Ｇ２５  Ｓｕｐｅｒｆｉｎｅ）で各未精製溶液を最終的に脱塩して、最終オリゴヌクレオチド生成物を溶出した。ＥＳＩ−ＭＳ及びＩＥＸ  ＨＰＬＣにより全オリゴヌクレオチドの同一性及び純度をそれぞれ確認した。
【０６３４】
実施例２：野生型マウスでのｉｎ  ｖｉｖｏ  ＴＴＲ遺伝子サイレンシング実験
全ての手順は、該当する場合、地方、州及び連邦条例に適合し、且つ（ｉ）動物実験委員会（Ｉｎｓｔｉｔｕｔｉｏｎａｌ  Ａｎｉｍａｌ  Ｃａｒｅ  ａｎｄ  Ｕｓｅ  Ｃｏｍｍｉｔｔｅｅ）；（ｉｉ）ＡＡＡＬＡＣ（国際実験動物ケア評価認証協会（Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ  ｆｏｒ  Ａｓｓｅｓｓｍｅｎｔ  ａｎｄ  Ａｃｃｒｅｄｉｔａｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ａｎｉｍａｌ  Ｃａｒｅ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ））−認定番号：００１３４５により承認されたプロトコルを用いて、有資格研究員により実施された。Ｃｈａｒｌｅｓ  Ｒｉｖｅｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓから取得した６〜８週齢のＣ５７ＢＬ／６雌マウス（１群当たりｎ＝３）に体重１グラム当たり１０μＬの量のＧａｌＮＡｃコンジュゲート（ｓｉＲＮＡ  ＡＤ−５７７２７又は調整性ＲＥＶＥＲＳＩＲ）を皮下投与した。対照群にリン酸干渉食塩水（ＰＢＳ）を投与した。血清サンプルを採取し、後述する特定の標的タンパク質のｓｉＲＮＡ活性について分析した。全血から単離した血清から血清ＴＴＲタンパク質をＥＬＩＳＡにより定量した。ＥＬＩＳＡは、血清サンプルの３０２５倍希釈後、製造者プロトコル（ＡＬＰＣＯ，４１−ＰＡＬＭＳ−Ｅ０１）に従って実施した。データをプレブリードＴＴＲレベルに対して正規化した。群平均値は、±ＳＤと共に示す。全てのサンプルを２回反復でアッセイし、各データポイントは、各コホート内の全マウス（ｎ＝３）の平均値である。
【０６３５】
実施例３：標的ｓｉＲＮＡのガイド（アンチセンス）鎖中のｇ６位のヌクレオチドと、調整性ＲＥＶＥＲＳＩＲ化合物中の相補性ヌクレオチドとの塩基対は、調整性ＲＥＶＥＲＳＩＲ効力に影響を及ぼす。
ＴＴＲ−ｓｉＲＮＡ−ＧａｌＮＡｃコンジュゲート（ＡＤ−５７７２７）を第０日の野生型マウスに３ｍｇ／ｋｇの用量で皮下（ＳＣ）投与した後、第７日に０．１ｍｇ／ｋｇの用量で調整性ＲＥＶＥＲＳＩＲ化合物を皮下（ＳＣ）投与した。調整性ＲＥＶＥＲＳＩＲの投与後、第９、１１及び１４日に血清用血液サンプルを採取し、ＴＴＲタンパク質レベルを分析し、これは、図１にプロットする。これらの結果は、標的ｓｉＲＮＡのガイド（アンチセンス）鎖のヌクレオチドｇ６反対側の調整性ＲＥＶＥＲＳＩＲヌクレオチドへのＬＮＡ修飾の導入が調整性ＲＥＶＥＲＳＩＲ剤の高い効力を損なうことを示した。計５つのＬＮＡ修飾ヌクレオチドを有する、ｇ６−ＬＮＡ−対合の調整性ＲＥＶＥＲＳＩＲ剤は、第１１日に血清中のＴＴＲの完全な逆転を示した。別の５ＬＮＡ調整性ＲＥＶＥＲＳＩＲ（Ａ−１４６１３１．１）において、標的ヌクレオチドｇ６と塩基対合したヌクレオチドからＬＮＡ修飾を除去した場合、同じ調整性ＲＥＶＥＲＳＩＲ用量を用いると、調整性ＲＥＶＥＲＳＩＲなしのＰＢＳ対照群と比較して、４０％までのＴＴＲレベルの逆転のみが達成された。
【０６３６】
実施例４：調整性ＲＥＶＥＲＳＩＲ剤の修飾ヌクレオチドにおけるＬＮＡ修飾の正しい配置は、極めて強力な調整性ＲＥＶＥＲＳＩＲ化合物を維持しながら、調整性ＲＥＶＥＲＳＩＲ中のＬＮＡの数の低減を可能にする。
ＴＴＲ−ｓｉＲＮＡ−ＧａｌＮＡｃコンジュゲート（ＡＤ−５７７２７）を第０日の野生型マウスに３ｍｇ／ｋｇの用量で皮下（ＳＣ）投与した後、第７日に０．０３ｍｇ／ｋｇの用量で異なる調整性ＲＥＶＥＲＳＩＲ分子を皮下（ＳＣ）投与した。調整性ＲＥＶＥＲＳＩＲの投与後、第９、１１及び１４日に血清用血液サンプルを採取し、ＴＴＲタンパク質レベルを分析し、これは、図２にプロットする。これらの結果は、わずか２つのＬＮＡを有する調整性ＲＥＶＥＲＳＩＲ（Ａ−１６０８９２．３）であっても、ｇ６と対合した調整性ＲＥＶＥＲＳＩＲ位置へのＬＮＡ修飾の導入がマウス血清中のＴＴＲレベルの有意な逆転（４０％）をもたらすことを示した。比較すると、同じ配列及び同じ２ＬＮＡ含量であるが、非ｇ６対合ヌクレオチドに位置する調整性ＲＥＶＥＲＳＩＲ（Ａ−１４６０９６．１）は、同じ調整性ＲＥＶＥＲＳＩＲ用量を用いたとき、調整性ＲＥＶＥＲＳＩＲなしのＰＢＳ対照群に比べ、ＴＴＲレベルの逆転をほとんど示さなかった（図２）。加えて、標的とのＬＮＡ塩基対としてｇ６の反対側に調整性ＲＥＶＥＲＳＩＲ位置を維持すると、３ＬＮＡ（Ａ−１６０８９５．３）又は５ＬＮＡ（Ａ−１４６０９９．１）のいずれかを有する同等に強力な調整性ＲＥＶＥＲＳＩＲ剤が得られたが、この場合、いずれの調整性ＲＥＶＥＲＳＩＲ化合物も、調整性ＲＥＶＥＲＳＩＲなしのＰＢＳ対照群に比べ、第１１日までに血清中のＴＴＲレベルの完全な逆転を示した（図２）。
【０６３７】
実施例５：調整性ＲＥＶＥＲＳＩＲ中において、より少数のＬＮＡを有するｇ６対合ＬＮＡ調整性ＲＥＶＥＲＳＩＲ剤は、マウスにおいて高い標的逆転能力を維持する。
ＴＴＲ−ｓｉＲＮＡ−ＧａｌＮＡｃコンジュゲート（ＡＤ−５７７２７）を第０日の野生型マウスに３ｍｇ／ｋｇの用量で皮下（ＳＣ）投与した後、第７日に０．０３ｍｇ／ｋｇの用量で異なる調整性ＲＥＶＥＲＳＩＲ分子を皮下（ＳＣ）投与した。調整性ＲＥＶＥＲＳＩＲの投与後、第９、１１及び１４日に血清用血液サンプルを採取し、ＴＴＲタンパク質レベルを分析し、これは、図３にプロットする。これらの結果は、標的とのＬＮＡ塩基対としてｇ６の反対側に調整性ＲＥＶＥＲＳＩＲ位置を維持すると、３ＬＮＡ（Ａ−１６０８９５．３）、４ＬＮＡ（Ａ−１６０８９６．３）又は５ＬＮＡ（Ａ−５７１１７１．４）のいずれかを有する強力な調整性ＲＥＶＥＲＳＩＲ剤が得られることを明らかにし、この場合、３つの調整性ＲＥＶＥＲＳＩＲ化合物は、全て調整性ＲＥＶＥＲＳＩＲなしのＰＢＳ対照群に比べて第１１日までに血清中のＴＴＲレベルの高い逆転（＞６０％）を示した（図３）。
【０６３８】
実施例６：５ＬＮＡを有するＲＥＶＥＲＳＩＲ剤は、ｓｉＲＮＡ−ＧａｌＮＡｃコンジュゲートによる複数回の再攻撃後もマウスにおいて標的逆転作用の高度の持続性を示す。
ＴＴＲ−ｓｉＲＮＡ−ＧａｌＮＡｃコンジュゲート（ＡＤ−５７７２７）を第０日の野生型マウスに３ｍｇ／ｋｇの用量で皮下（ＳＣ）投与した後、第７日に０．３ｍｇ／ｋｇの用量で、５ＬＮＡ、８ＰＳ  ９−ｍｅｒＲＥＶＥＲＳＩＲ分子（Ａ−１４６０９９．１）を皮下（ＳＣ）投与した。ＲＥＶＥＲＳＩＲの投与後、第９、１１、１４、２８及び４２日に血清用血液サンプルを採取した。ＴＴＲタンパク質レベルを分析し、これは、図４にプロットする。これは、第１１日までのＲＥＶＥＲＳＩＲ群のベースラインＴＴＲレベルへの完全な回復と、第４２日までのＲＥＶＥＲＳＩＲなしのＰＢＳ群の完全な回復とを示している。第４２日までにＴＴＲ−ｓｉＲＮＡ−ＧａｌＮＡｃコンジュゲート（ＡＤ−５７７２７）を３ｍｇ／ｋｇのＳＣ用量で再攻撃し、第４９、５６及び８５日に血清用血液サンプルを採取した。第４２日の再攻撃後、ＲＥＶＥＲＳＩＲ群は、血清中のＴＴＲのベースラインレベルから有意な変化を示さなかったが、ＲＥＶＥＲＳＩＲなしのＰＢＳ群は、第４９日までにＴＴＲレベルの完全なノックダウンを示した。３ｍｇ／ｋｇのＡＤ−５７７２７での２回目の再攻撃を第８５日に試み、血清用血液サンプルを第９２、９８及び１２７日に採取した。第８５日のＡＤ−５７７２７投与後、ＲＥＶＥＲＳＩＲ群のＴＴＲレベルは、第９２日までにベースライン（１００％）から７０％まで低下したが、第９８日までに急速にベースラインまで回復したのに対し、ＰＢＳ群は、第１２７日までにＴＴＲノックダウン及び回復の完全なサイクルを示した（図４）。最後に、３回目の再攻撃を３ｍｇ／ｋｇのＡＤ−５７７２７で第１２７日に試み、血清用血液サンプルを第１３４及び１４１日に採取した。第１２７日のＡＤ−５７７２７投与後、ＲＥＶＥＲＳＩＲ群のＴＴＲレベルは、第１３４日にベースライン（１００％）から４０％までさらに低下したが、ＲＥＶＥＲＳＩＲなしのＰＢＳ対照群に比べて、第１４１日までにベースラインまで急速に回復した（図４）。この実験は、ＲＥＶＥＲＳＩＲ化合物中のＬＮＡの高含量（５ＬＮＡ）及び高ＰＳ含量（８ＰＳ）が、高い逆転能力と共に、最大１２０日まで、マウス血清中の安定したベースラインＴＴＲレベルを伴う極めて高い活性の持続（０．３ｍｇ／ｋｇのＲＥＶＥＲＳＩＲ用量で）をもたらし、これは、より高い３ｍｇ／ｋｇ用量でのｓｉＲＮＡ剤の複数回の再投与後であっても、ｓｉＲＮＡ剤で有効に再投与及び再攻撃することはできない（図４）。
【０６３９】
実施例７：５ＬＮＡを有するＲＥＶＥＲＳＩＲ剤は、より低用量のＲＥＶＥＲＳＩＲでもマウス中の標的逆転作用の高い持続性を示し、これは、ＲＥＶＥＲＳＩＲの調製可能な持続性がＲＥＶＥＲＳＩＲ用量のみを調整するだけでは制御できないことを実証するものである。
ＴＴＲ−ｓｉＲＮＡ−ＧａｌＮＡｃコンジュゲート（ＡＤ−５７７２７）を第０日の野生型マウスに３ｍｇ／ｋｇの用量で皮下（ＳＣ）投与した後、第７日に０．０３及び０．０１ｍｇ／ｋｇの２つの用量で５ＬＮＡ、８ＰＳ  ９−ｍｅｒＲＥＶＥＲＳＩＲ分子（Ａ−１４６０９９．１）を皮下（ＳＣ）投与した。ＲＥＶＥＲＳＩＲの投与後、第９、１１、１４、２８及び３２日に血清用血液サンプルを採取した。ＴＴＲタンパク質レベルを分析し、これは、図５にプロットする。これは、第１１日までに０．０３ｍｇ／ｋｇで投与されたＲＥＶＥＲＳＩＲ群のベースラインＴＴＲレベルへの完全な回復（１００％）と、０．０１ｍｇ／ｋｇで投与されたＲＥＶＥＲＳＩＲ群のＴＴＲレベルの不完全な部分的（４０％）回復とを示している。第３２日までにＴＴＲ−ｓｉＲＮＡ−ＧａｌＮＡｃコンジュゲート（ＡＤ−５７７２７）を３ｍｇ／ｋｇの単回ＳＣ用量で再攻撃し、第３９、４６及び７５日に血清用血液サンプルを採取した。第３２日の再攻撃後、ＲＥＶＥＲＳＩＲ群は、血清中ＴＴＲのベースラインレベルからの低下（４０〜２０％）を示したが、ＲＥＶＥＲＳＩＲなしのＰＢＳ対照群に比べて、第４６日までに急速にベースラインまで回復した（図５）。この実験は、０．０３ｍｇ／ｋｇの用量で投与されたＲＥＶＥＲＳＩＲ中の高含量ＬＮＡ（５ＬＮＡ）及び高ＰＳ含量（８ＰＳ）が、高い逆転能力と共に、活性の高い持続性をもたらし、これは、ｓｉＲＮＡ剤で部分的に再攻撃されたが、ＰＢＳ対照群よりも有意に速く回復を示した（図５）。加えて、０．０１ｍｇ／ｋｇで投与された同じＲＥＶＥＲＳＩＲ化合物についての再攻撃プロフィールも、より高速の標的レベルの回復を含む同様の回復プロフィールを示したが、０．０３ｍｇ／ｋｇのＲＥＶＥＲＳＩＲ用量群（第１１日までに１００％）と比較して、第１１日（４０％）及び１４日（６０％）で有意に低い逆転能力を示した。この実験から、用量単独では、高ＬＮＡ及び高ＰＳ含量非調整性ＲＥＶＥＲＳＩＲ化合物の調整可能な持続性及び有効な再攻撃を制御できないことが判明した。
【０６４０】
実施例８：５ＬＮＡを有する低用量ＲＥＶＥＲＳＩＲ剤は、ＲＥＶＥＲＳＩＲ中のＰＳ骨格の数を減らしても、標的タンパク質レベルの部分的逆転と共に、マウスにおける標的逆転作用の高い持続性を呈示し、これは、ＲＥＶＥＲＳＩＲ用量及びＰＳ含量を調整するだけではＲＥＶＥＲＳＩＲの調整可能な持続性を制御できないことを実証している。
ＴＴＲ−ｓｉＲＮＡ−ＧａｌＮＡｃコンジュゲート（ＡＤ−５７７２７）を第０日の野生型マウスに３ｍｇ／ｋｇの用量で皮下（ＳＣ）投与した後、第７日に５ＬＮＡ、８ＰＳ  ９−ｍｅｒＲＥＶＥＲＳＩＲ分子（Ａ−１４６０９９．１）及び５ＬＮＡ、４ＰＳ  ９−ｍｅｒＲＥＶＥＲＳＩＲ分子（Ａ−１５０３７０．１）をいずれもより低用量の０．０１ｍｇ／ｋｇで皮下（ＳＣ）投与した。ＲＥＶＥＲＳＩＲの投与後、第９、１１、１４、２８及び３２日に血清用血液サンプルを採取した。ＴＴＲタンパク質レベルを分析し、これは、図６にプロットする。これは、いずれの化合物についても、第１１日までに、ＲＥＶＥＲＳＩＲなしのＰＢＳ対照群と比較して、ＲＥＶＥＲＳＩＲ群のＴＴＲレベルの不完全な部分的回復（４０％）を示している。第３２日にＴＴＲ−ｓｉＲＮＡ−ＧａｌＮＡｃコンジュゲート（ＡＤ−５７７２７）を３ｍｇ／ｋｇの単回ＳＣ用量で再攻撃し、第３９、４６及び７５日に血清用血液サンプルを採取した。第３２日の再攻撃後、２つのＲＥＶＥＲＳＩＲ群は、血清中のＴＴＲのベースラインレベルからの低下（２０％まで）を示したが、ＲＥＶＥＲＳＩＲなしのＰＢＳ対照群（５０％前後のままであった）に比べて、第５２日までに急速にベースラインまで回復した（図６）。この実験は、０．０１ｍｇ／ｋｇの低用量で投与された非調整性ＲＥＶＥＲＳＩＲ中の高含量のＬＮＡ（５ＬＮＡ）及び高ＰＳ含量（８ＰＳ、Ａ−１４６０９９．１）が、部分的な逆転能力と共に、活性の高い持続性をもたらし、これは、ｓｉＲＮＡ剤で部分的に再攻撃されたが、ＰＢＳ対照群よりも有意に高速で回復を示した（図６）。加えて、ＰＳ修飾の含量が８ＰＳから４ＰＳに低下した場合（Ａ−１５０３７０．１）も、逆転開始及び持続性及び再攻撃の同様のプロフィールが観察された。この実験から、ＰＳ含量を半分に減じた（８ＰＳから４ＰＳに）場合でも、用量単独では、高ＬＮＡの非調整性ＲＥＶＥＲＳＩＲ化合物の調整可能な持続性及び有効な再攻撃を制御できないことが判明した。
【０６４１】
実施例９：調整性ＲＥＶＥＲＳＩＲ設計による制御の例。調整性ＲＥＶＥＲＳＩＲ剤における正しいＬＮＡ配置を有するＬＮＡの減少は、標的タンパク質レベルの強力な逆転と共に、マウスにおける標的逆転作用の調整可能な持続性を示す。
ＴＴＲ−ｓｉＲＮＡ−ＧａｌＮＡｃコンジュゲート（ＡＤ−５７７２７）を第０日の野生型マウスに３ｍｇ／ｋｇの用量で皮下（ＳＣ）投与した後、第７日に２ＬＮＡ、４ＰＳ  ９−ｍｅｒ調整性ＲＥＶＥＲＳＩＲ分子（Ａ−１６０８９１．１）、５ＬＮＡ、４ＰＳ  ９−ｍｅｒ調整性ＲＥＶＥＲＳＩＲ分子（Ａ−１５０３７０．１）及び４ＬＮＡ、３ＰＳ、９−ｍｅｒ調整性ＲＥＶＥＲＳＩＲ分子（Ａ−１６０８９６．１）の３つ全てを有効な調整性ＲＥＶＥＲＳＩＲ用量の０．０３ｍｇ／ｋｇで皮下（ＳＣ）投与した。調整性ＲＥＶＥＲＳＩＲの投与後、第９、１１、１４、２８及び３７日に血清用血液サンプルを採取した。ＴＴＲタンパク質レベルを分析し、これは、図７にプロットする。これは、ＲＥＶＥＲＳＩＲなしのＰＢＳ対照群と比較して、５ＬＮＡ及び２ＬＮＡのいずれについても第１１日までに調整性ＲＥＶＥＲＳＩＲ群のＴＴＲレベルの不完全な部分的回復（５０％）を、且つ４ＬＮＡについてより高いレベルの回復（７０％）を示している。３つの群は、第１４日にさらに差が広がり、この時点で、４−ＬＮＡ化合物は、最も強力な逆転能力を示した。第３７日にＴＴＲ−ｓｉＲＮＡ−ＧａｌＮＡｃコンジュゲート（ＡＤ−５７７２７）を３ｍｇ／ｋｇの単回ＳＣ用量で再攻撃し、第４４及び５１日に血清用血液サンプルを採取した（図７）。第３７日の再攻撃後、５−ＬＮＡ調整性ＲＥＶＥＲＳＩＲ群は、ＰＢＳ対照群に比べて、血清中のＴＴＲのレベルの低下（４０％まで）を示したが、第５１日までに急速にほぼベースラインまで回復した。興味深いことに、２−ＬＮＡ及び４−ＬＮＡ高度調整性ＲＥＶＥＲＳＩＲ剤は、いずれも調整性ＲＥＶＥＲＳＩＲなしのＰＢＳ対照群と同じ再攻撃プロフィールを示し（図７）、第４４及び５１日のＴＴＲレベルは、同一であった。この実験から、ＬＮＡの減少により、マウスにおける調整性ＲＥＶＥＲＳＩＲ化合物の調整可能な持続性及び有効な再攻撃を制御し得ることが判明した。
【０６４２】
実施例１０：ｓｉＲＮＡ活性に対する最適な調整性制御を有する調整性ＲＥＶＥＲＳＩＲ設計の例。正しいＬＮＡ配置を有する３ＬＮＡ修飾は、マウスにおける標的逆転の調整可能な持続性を備えた最適な調整性ＲＥＶＥＲＳＩＲ剤を提供する。
ＴＴＲ−ｓｉＲＮＡ−ＧａｌＮＡｃコンジュゲート（ＡＤ−５７７２７）を第０日の野生型マウスに３ｍｇ／ｋｇの用量で投与した後、第７日に３ＬＮＡ、３ＰＳ  ９−ｍｅｒ調整性ＲＥＶＥＲＳＩＲ分子（Ａ−１６０８９５．１）を０．０３ｍｇ／ｋｇの有効な調整性ＲＥＶＥＲＳＩＲ用量でＳＣ投与した。調整性ＲＥＶＥＲＳＩＲの投与後、第９、１１、１４、２８及び３７日に血清用血液サンプルを採取した。ＴＴＲタンパク質レベルを分析し、これは、図８にプロットする。これは、第１１日までにＲＥＶＥＲＳＩＲなしのＰＢＳ対照群と比べて、調整性ＲＥＶＥＲＳＩＲ群のＴＴＲレベルの完全な回復を示している。第３７日にＴＴＲ−ｓｉＲＮＡ−ＧａｌＮＡｃコンジュゲート（ＡＤ−５７７２７）を３ｍｇ／ｋｇの単回ＳＣ用量で再攻撃し、第４４、５１、５８及び７２日に血清用血液サンプルを採取した（図８）。第３７日の再攻撃後、調整性ＲＥＶＥＲＳＩＲ群は、ＲＥＶＥＲＳＩＲなしのＰＢＳ対照群と同じ再攻撃及び回復プロフィールを示し（図８）、全ての日でＴＴＲレベルが同じであった。
【０６４３】
実施例１１：第１／２ａ相ＡＧＴ臨床設計：患者内比較を用いることにより抵抗性ＨＴＮ  ＰｏＣの信頼性を高める（調整性ＲＥＶＥＲＳＩＲクロスオーバー）。
集団は、ＪＮＣ８指針により定義される通りの抵抗性高血圧を含む。第１／２ａ相臨床設計では、約２４人の患者を使用する（Ｎ約２４）。シーケンス１：ＡＬＮ−ＡＧＴ；調整性ＲＥＶＥＲＳＩＲウォッシュアウト；プラセボ。シーケンス２：プラセボ；調整性ＲＥＶＥＲＳＩＲウォッシュアウト；ＡＬＮ−ＡＧＴ。プライマリーエンドポイントは、ＳＢＰ、ＡＢＰＭの変化であり；主要セカンダリーエンドポイントは、ＤＢＰ、ＡＢＰＭの変化；ＳＢＰ及び臨床上の変化；並びにＤＢＰ及び臨床上の変化である。調整性ＲＥＶＥＲＳＩＲにＢＰ効果がないことを証明するために不可欠のＨＴＮ単回漸増試験（ＳＡＤ）コホートで立証される調整性ＲＥＶＥＲＳＩＲ  ｐｂｏ比較である（図９）。
【０６４４】
実施例１２：第２／３相：持続可能な効果及び安全性：第２相として１年効果／安全性を開始することによる促進（調整性ＲＥＶＥＲＳＩＲランダム化治療中止）。
集団は、ＪＮＣ８指針により定義される通りのステージ１又は２高血圧（ＨＴＮ）の患者を含む。第２／３相臨床試験設計には、約千人の患者を使用する（Ｎ約１０００）。期間１  −  １ヵ月：ランダム化二重盲検プラセボ対照（ＤＢ  ＰＣ）。期間２  −  １年：オープンラベル単群；ＢＰが目標でなければ、チアジド利尿薬の添加。期間３：二重盲検プラセボ対照ＤＤランダム化治療中止（ＤＢ  ＰＣ  ＤＤ）。プライマリーエンドポイントは、安全性及び有害事象を観察することである。主要セカンダリーエンドポイントは、ＳＢＰ応答者、ＤＢＰ応答者、ＳＢＰ及び臨床上の変化；並びにＤＢＰ及び臨床上の変化である（図１０）。得ることができるデータの例を図１１に示す。
【０６４５】
収縮期高血圧は、上昇した収縮期血圧（ＳＢＰ）として定義される。拡張期血圧（ＤＢＰ）が正常（＜９０）であり、収縮期血圧が高い（＞１４０）場合、「孤立性収縮期高血圧」と呼ばれ；ＨＴＮは、高血圧であり；ＢＰは、血圧であり；ＨＣＴＺ（ヒドロクロロチアジド）は、身体が過剰な塩を吸収する（水分貯留を引き起こし得る）のを防ぐことを促進するチアジド利尿薬（利尿剤）であり；ＥＯＰ２は、臨床試験の第２相の終了である。
【０６４６】
実施例１３：調整性ＲＥＶＥＲＳＩＲ剤は、ラットにおいてｍｉＲ−１２２抑制解除を示す。
ｍｉＲ−１２２調整性ＲＥＶＥＲＳＩＲ化合物を第１日の野生型雄ラットに皮下（ＳＣ）投与した。試験を第１７日に終了し、肝臓を採取し、ｍｉＲ−１２２標的ｍＲＮＡ（ＡｌｄｏＡ及びＡｌｐｌ）のｍＲＮＡ肝臓レベルをｑＰＣＲにより測定した（図１２）。９−ｍｅｒ  ｍｉＲ−１２２調整性ＲＥＶＥＲＳＩＲ（Ａ−１５６３８２）は、１５−ｍｅｒ（Ａ−１５６３７８）より強力であった。肝臓におけるｍｉＲ−１２２標的ｍＲＮＡの最大抑制解除は、第１７日に１ｍｇ／ｋｇの９−ｍｅｒ  Ａ−１５６３８２で観察された。
【０６４７】
実施例１４：調整性ＲＥＶＥＲＳＩＲ剤は、ラットにおいてｍｉＲ−１２２バイオマーカに対するｍｉＲ−１２２抑制解除の影響を示す。
ｍｉＲ−１２２調整性ＲＥＶＥＲＳＩＲ化合物を第１日の野生型雄ラットに皮下（ＳＣ）投与し、血清を第４、８、１２日（時点毎に１６０ｕＬの血清）並びに剖検時に採取し、ｍｉＲ−１２２バイオマーカの時間経過を測定した（図１３〜１５）。９−ｍｅｒ  ｍｉＲ−１２２調整性ＲＥＶＥＲＳＩＲ（Ａ−１５６３８２）は、１５−ｍｅｒ（Ａ−１５６３７８）より強力であった。両方のｍｉＲ−１２２調整性ＲＥＶＥＲＳＩＲ化合物で活性依存性変化が観察された（Ａ−１５６３８２及びＡ−１５６３７８）が、陰性対照（スクランブル配列）ｍｉＲ−１２２調整性ＲＥＶＥＲＳＩＲ（Ａ−１５７１７２）では観察されなかった。全ＣＨＯＬバイオマーカに対する類似の応答（図１３）がＨＤＬバイオマーカについて観察され（図１４）、ここで、９−ｍｅｒ  ｍｉＲ−１２２調整性ＲＥＶＥＲＳＩＲ  Ａ−１５６３８２で用量依存的減少である。１５−ｍｅｒ  Ａ−１５６３７８の場合のみ、小幅な変化が観察されたが、陰性対照の調整性ＲＥＶＥＲＳＩＲ  Ａ−１５７１７２の場合、ＨＤＬに対する作用は用量依存性ではなかった（図１４）。１０ｍｇ／ｋｇのいずれのｍｉｒ１２２化合物でも、第１２日の非絶食ラットのみにわずかな調整性ＲＥＶＥＲＳＩＲ誘導のＴＲＩＧ減少が検出された（図１５）。食塩水対照群に対するＡＬＰ及びＣＨＯＬの倍率変化を決定し（図１６）、９−ｍｅｒ  ｍｉＲ−１２２調整性ＲＥＶＥＲＳＩＲ（Ａ−１５６３８２）が１５−ｍｅｒ（Ａ−１５６３７８）より強力であることを確認した。
【０６４８】
実施例１５：ラットにおけるｍｉＲ−１２２に対するｍｉＲ−１２２抑制解除において、調整性ＲＥＶＥＲＳＩＲ剤に肝細胞毒性の組織学的エビデンスはなく、血清化学に関して正常な肝臓パラメータが観察された。
ｍｉＲ−１２２調整性ＲＥＶＥＲＳＩＲ化合物を第１日の野生型雄ラットに皮下（ＳＣ）投与し、試験を第１７日に終了し、肝臓試験機能（ＬＦＴ）評価（図１７）及び組織学評価（図１８〜１９）のために、肝臓を採取した。
【０６４９】
表
表１は、例示的な脂質−調整性ＲＥＶＥＲＳＩＲ製剤を示す。
【０６５０】
表２は、使用されるＴＴＲ  ｓｉＲＮＡ−ＧａｌＮＡｃコンジュゲート剤（ＡＤ−５７７２７）の配列を示す。
【０６５１】
表３は、使用される調整性ＲＥＶＥＲＳＩＲ剤の配列を示す。黒い丸は、２’−Ｏ−メチルヌクレオチドであり、灰色の丸は、ＬＮＡヌクレオチドであり、破線の付いた灰色の丸Ａは、２’−デオキシアデノシンである。バーは、ＰＳ結合である。
【０６５２】
表４は、使用されるｍｉＲ−１２２調整性ＲＥＶＥＲＳＩＲ剤の配列を示す。黒い丸は、２’−Ｏ−メチルヌクレオチドであり、灰色の丸は、ＬＮＡヌクレオチドであり、破線の付いた灰色の丸Ａは、２’−デオキシアデノシンである。バーは、ＰＳ結合である。
【０６５３】
表５は、ラットにおけるｍｉＲ−１２２調整性ＲＥＶＥＲＳＩＲ剤のｉｎ  ｖｉｖｏ試験設計を示す。エンドポイントは、次の通りである。第４、８、１２日（各時点で１６０ｕＬ）及び剖検時に血清採取。暫定ｍｉＲ−１２２バイオマーカ：↑ＡＬＰ、↓ＣＨＯＬ、↓ＴＲＩＧ、↓ＬＤＬ、↓ＨＤＬ。肝臓損傷バイオマーカ：ＡＬＴ、ＧＬＤＨ、ＡＳＴ、ＴＢＩＬ。Ｔｅｒｍｉｎａｌ  Ｆｕｌｌ血清ｃｈｅｍパネル＋ＴＢＡ、ＨＤＬ、ＬＤＬ。剖検時の肝臓採取及び組織病理学：ｍｉＲ−１２２標的ｍＲＮＡ（ＡＬＰ、ＡｌｄｏＡ）についてのｑＰＣＲ。ｍｉＲ−１２２についてのノーザンブロット。
【０６５４】
便宜のために、配列、例えば、表２に記載する配列を表すのに使用される略語を収集し、表６に記載する。
【０６５５】
【表５】
2020531450.tif 000114
【０６５６】
表２の配列番号は、次の通りである：Ａ−１１７７９９．１（配列番号３６）及びＡ−１１７８００．１（配列番号３７）。
【０６５７】
【表６】
2020531450.tif 000115
【０６５８】
表３の配列番号及び配列は、次の通りである：
Ａ−１４６０９９．２（配列番号３８）、ｕｓｇｓ（ｍ５Ｃｌｎｓ）（Ｔｌｎｓ）（ｍ５Ｃｌｎｓ）（Ｔｌｎｓ）ａｓ（Ｔｌｎｓ）ａｄＡＬ９６；
Ａ−１５７１７１．４（配列番号３９）、ｕｓｇｓ（ｍ５Ｃｌｎ）ｕｓ（ｍ５Ｃｌｎ）（Ｔｌｎ）ａｓ（Ｔｌｎｓ）（Ａｌｎ）ｄＡＬ９６；
Ａ−１５０３７０．４（配列番号４０）、ｕｓｇｓ（ｍ５Ｃｌｎ）（Ｔｌｎ）（ｍ５Ｃｌｎ）（Ｔｌｎ）ａｓ（Ｔｌｎｓ）ａｄＡＬ９６；
Ａ−１６０８８８．３（配列番号４１）、ｕｓｇｓｃｓｕｓ（ｍ５Ｃｌｎ）ｕｓａｓｕｓａｄＡＬ９６；
Ａ−１６０８８９．３（配列番号４２）、ｕｓｇｓｃｕ（ｍ５Ｃｌｎ）ｕａｓｕｓａｄＡＬ９６；
Ａ−１６０８９０．３（配列番号４３）、ｕｓｇｓｃｓｕｓ（ｍ５Ｃｌｎ）ｕｓａｓｕｓ（Ａｌｎ）ｄＡＬ９６；
Ａ−１６０８９１．３（配列番号４４）、ｕｓｇｓｃｕ（ｍ５Ｃｌｎ）ｕａｓｕｓ（Ａｌｎ）ｄＡＬ９６；
Ａ−１６０８９２．３（配列番号４５）、ｕｓｇｓｃｓｕ（ｍ５Ｃｌｎ）ｕａｓｕｓ（Ａｌｎ）ｄＡＬ９６；
Ａ−１４６０９３．３（配列番号４６）、ｕｓｇｓｕｓｕｓｃｓｕｓ（Ｔｌｎｓ）ｇｓ（ｍ５Ｃｌｎｓ）（Ｔｌｎｓ）（ｍ５Ｃｌｎｓ）（Ｔｌｎｓ）ａｓ（Ｔｌｎｓ）ａｄＡＬ９６；
Ａ−１６０８９５．３（配列番号４７）、ｕｓｇｓｃｕ（ｍ５Ｃｌｎ）ｕ（Ａｌｎ）ｕｓ（Ａｌｎ）ｄＡＬ９６；及び
Ａ−１６０８９６．３（配列番号４８）、ｕｓｇｓ（ｍ５Ｃｌｎ）ｕ（ｍ５Ｃｌｎ）ｕ（Ａｌｎ）ｕｓ（Ａｌｎ）ｄＡＬ９６。ここで、Ｌ９６は、Ｎ−［トリス（ＧａｌＮＡｃ−アルキル）−アミドデカノイル）］−４−ヒドロキシプロリノールＨｙｐ−（ＧａｌＮＡｃ−アルキル）３’であり；ｓは、ホスホロチオエートであり；Ｎｌｎは、ＬＮＡであり、小文字は、２’−ＯＭｅであり；（ｍ５Ｃｌｎ）は、２’−Ｏ、４’−Ｃ−メチレン５−メチルシチジン−３’−リン酸であり；ＤＮは、２’−デオキシである。
【０６５９】
【表７】
2020531450.tif 000116
【０６６０】
表３の配列番号及び配列は、次の通りである：
Ａ−１５６３８２（配列番号４９）、（Ｔｌｎｓ）ｃｓａｓｃｓ（Ａｌｎ）（ｍ５Ｃｌｎ）ｕｓ（ｍ５Ｃｌｎｓ）（ｍ５Ｃｌｎ）ｄＡＬ９６；
Ａ−１５６３７８（配列番号５０）、ｃｓｃｓａｓｕｓｕｓｇｓ（Ｔｌｎ）ｃｓａｓｃｓ（Ａｌｎ）（ｍ５Ｃｌｎ）ｕｓ（ｍ５Ｃｌｎｓ）（ｍ５Ｃｌｎ）ｄＡＬ９６；及び
Ａ−１５７１７２（配列番号５１）、ｕｓｃｓ（Ｔｌｎ）ａｓ（Ｔｌｎ）（Ａｌｎ）ｃｓ（Ｇｌｎｓ）（Ｔｌｎ）ｄＡＬ９６。ここで、Ｌ９６は、Ｎ−［トリス（ＧａｌＮＡｃ−アルキル）−アミドデカノイル）］−４−ヒドロキシプロリノールＨｙｐ−（ＧａｌＮＡｃ−アルキル）３’であり；ｓは、ホスホロチオエートであり；Ｎｌｎは、ＬＮＡであり、小文字は、２’−ＯＭｅであり；（ｍ５Ｃｌｎ）は、２’−Ｏ、４’−Ｃ−メチレン５−メチルシチジン−３’−リン酸であり；ＤＮは、２’−デオキシである。
【０６６１】
【表８】
2020531450.tif 000117
【０６６２】
【表９】
2020531450.tif 000118
【０６６３】
【表１０】
2020531450.tif 000119
【０６６４】
本明細書及び実施例に明示される全ての特許及び他の刊行物は、あらゆる目的のために参照により明示的に本明細書に組み込まれる。これらの刊行物は、本願の出願日より前に開示のために提供されたに過ぎない。これに関するいかなることも、本発明者らが、先行発明のために又は別の何らかの理由で、こうした開示に先行する資格がないという承認として解釈すべきではない。日付に関する記載又はこれらの文献の内容に関する表示は、全て本出願人が入手可能な情報に基づくものであり、これらの文献の日付又は内容の正確さに関する何らの承認をなすものではない。
【０６６５】
本明細書において好ましい実施形態を示し、詳細に説明してきたが、当業者には、様々な改変形態、追加形態、代替形態などが本発明の趣旨を逸脱することなくなされ得、従って、これらは、以下の特許請求の範囲に定義する通り、本発明の範囲内であるとみなされることは明らかであろう。さらに、当業者であれば、既述していない範囲まで本明細書で説明及び例示した様々な実施形態のいずれか１つをさらに改変して、本明細書に開示する他の実施形態のいずれかに示される特徴を組み込み得ることが理解されるであろう。
【図１】
2020531450.tif 000121
【図２】
2020531450.tif 000122
【図３】
2020531450.tif 000123
【図４】
2020531450.tif 000124
【図５】
2020531450.tif 000125
【図６】
2020531450.tif 000126
【図７】
2020531450.tif 000127
【図８】
2020531450.tif 000128
【図９】
2020531450.tif 000129
【図１０】
2020531450.tif 000130
【図１１】
2020531450.tif 000131
【図１２】
2020531450.tif 000132
【図１３】
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【図１４】
2020531450.tif 000134
【図１５】
2020531450.tif 000135
【図１６】
2020531450.tif 000136
【図１７】
2020531450.tif 000137
【図１８】
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【図１９】
2020531450.tif 000139
【配列表】
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【国際調査報告】
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