(57)【要約】  本発明の第１の態様は、１種以上の安定剤の存在下で非溶媒中に活性種の溶液を沈殿させ、沈殿物懸濁液と油を混合し、その後溶剤を除去することにより、油中の活性種の安定化粒子を含む液体組成物を製造する方法を提供する。本発明のさらなる態様は、該方法によって製造された液体組成物およびそのような液体組成物の使用方法に関する。
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
油中の少なくとも１種の活性種の安定化微粒子を含む液体組成物の製造方法であって、前記活性種がヌクレオシド類似体およびヌクレオチド類似体から選択され、
第１の溶液を形成するために前記少なくとも１種の活性種を第１の溶媒に溶解する工程、
第２の溶液を形成するために１種以上の安定剤を第２の溶媒に溶解する工程であって、前記第１および第２の溶媒は混和性であり、前記少なくとも１種の活性種は前記第２の溶媒に不溶性である溶解する工程、
前記混合溶媒に懸濁された前記少なくとも１種の活性種の安定化粒子の懸濁液を形成するために前記第１および第２の溶液を組み合わせる工程、
液体混合物を形成するために前記粒子懸濁液に油を追加する工程であって、前記安定化粒子は前記油に不溶である追加工程、および
前記液体組成物を形成するために前記液体混合物から前記第１および第２の溶媒を除去する工程
を含む方法。
【請求項２】
前記第１の溶媒がプロトン性溶媒を含み、前記第２の溶媒が非プロトン性溶媒を含む、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記第１の溶媒がメタノールを含み、前記第２の溶媒がジクロロメタンを含む、請求項２に記載の方法。
【請求項４】
前記第１の溶液中の前記少なくとも１種の活性種の総濃度が約１０〜１００ｍｇ／ｍＬ、好ましくは少なくとも約３０ｍｇ／ｍＬ、さらに好ましくは少なくとも約５０ｍｇ／ｍＬ、さらに好ましくは少なくとも約７０ｍｇ／ｍＬ、最も好ましくは少なくとも約８０ｍｇ／ｍＬである、請求項１〜３のいずれかに記載の方法。
【請求項５】
前記第２の溶液中の前記安定剤の濃度が約１〜３０ｍｇ／ｍＬ、好ましくは少なくとも約５ｍｇ／ｍＬ、さらに好ましくは少なくとも約１０ｍｇ／ｍＬ、さらに好ましくは少なくとも約１５ｍｇ／ｍＬ、最も好ましくは少なくとも約２０ｍｇ／ｍＬである、請求項１〜４のいずれかに記載の方法。
【請求項６】
混合時の前記第１および第２の溶液の前記体積比が約２：１から１：１０の間、好ましくは約１：１から１：６の間、最も好ましくは約１：４である、請求項１〜５のいずれかに記載の方法。
【請求項７】
前記第１および第２の溶液が、前記組み合わせる工程の間に攪拌される、請求項１〜６のいずれかに記載の方法。
【請求項８】
前記第１および第２の溶媒が凍結乾燥により除去される、請求項１〜７のいずれかに記載の方法。
【請求項９】
前記ヌクレオシド類似体が、アデノシン類似体およびグアノシン類似体から選択される、請求項１〜８のいずれかに記載の方法。
【請求項１０】
前記ヌクレオチド類似体が、アデノシン一リン酸類似体およびグアノシン一リン酸類似体から選択される、請求項１〜８のいずれかに記載の方法。
【請求項１１】
前記アデノシン一リン酸類似体がテノホビルプロドラッグから選択される、請求項１０に記載の方法。
【請求項１２】
前記テノホビルプロドラッグが、テノホビルジソプロキシル、テノホビルアラフェナミド、それらの塩またはそれらの組み合わせから選択される、請求項１１に記載の方法。
【請求項１３】
前記テノホビルジソプロキシル塩がテノホビルジソプロキシルフマル酸塩である、請求項１２に記載の方法。
【請求項１４】
前記テノホビルアラフェナミド塩がテノホビルアラフェナミドフムレートである、請求項１２に記載の方法。
【請求項１５】
前記１種以上の安定剤が界面活性剤である、請求項１〜１４のいずれかに記載の方法。
【請求項１６】
前記１種以上の界面活性剤がアニオン性界面活性剤である、請求項１５に記載の方法。
【請求項１７】
前記アニオン性界面活性剤がスルホン酸塩、好ましくはスルホサクシネート塩である、請求項１６に記載の方法。
【請求項１８】
前記スルホサクシネート塩が、ジオクチルナトリウムスルホサクシネート、ジオクチルカリウムスルホサクシネート、ジオクチルカルシウムスルホサクシネートまたはそれらの組み合わせから選択される、請求項１７に記載の方法。
【請求項１９】
さらなる安定剤が、ポリオキシエチレン（２）ステアリルエーテル（Ｂｒｉｊ（商標）Ｓ２）、プロピレングリコールモノカプリレート（タイプＩＩ）（Ｃａｐｒｙｏｌ（商標）９０）、プロピレングリコールモノカプリレート（タイプＩ）（Ｃａｐｒｙｏｌ（商標）ＰＧＭＣ）、プロピレングリコールジカプリロカプレート（Ｌａｂｒａｆａｃ（商標）ＰＧ）、アプリコット核油ＰＥＧ−６エステル（Ｌａｂｒａｆｉｌ（商標）Ｍ  １９４４  ＣＳ）、トウモロコシ油ＰＥＧ−６エステル（Ｌａｂｒａｆｉｌ（商標）Ｍ  ２１２５  ＣＳ）、カプリロカプロイルポリオキシル−８グリセリド（Ｌａｂｒａｓｏｌ（商標））、プロピレングリコールモノラウレート（タイプＩＩ）（Ｌａｕｒｏｇｌｙｃｏｌ（商標）９０）、プロピレングリコールモノラウレート（タイプＩ）（Ｌａｕｒｏｇｌｙｃｏｌ（商標）ＦＣＣ）、グリセリルモノリノレート（Ｍａｉｓｉｎｅ（商標）３５−１）、プロピレングリコールモノパルミトステアレート（Ｍｏｎｏｓｔｅｏｌ（商標））、グリセロールモノ−オレイン酸塩（Ｐｅｃｏｌ（商標））、ポリグリセリル−３ジイソステアレート（Ｐｌｕｒｏｌ（商標）ジイソステラック）、ポリグリセリル−６ジオレエート（Ｐｌｕｒｏｌ（商標）Ｏｌｉｑｕｅ）、ソルビタンオレイン酸塩（Ｓｐａｎ（商標）８０）、ポリオキシエチレンソルビタンモノパルミテート（Ｔｗｅｅｎ（商標）４０）、ポリエチレングリコールソルビタンモノオレエート（Ｔｗｅｅｎ（商標）８０）およびその組み合わせから選択される、請求項１５〜１８のいずれかに記載の方法。
【請求項２０】
前記油が、天然油、鉱油、合成油、シリコーン油、およびそれらの混合物から選択される、請求項１〜１９のいずれかに記載の方法。
【請求項２１】
前記天然油が、落花生油、大豆油、ゴマ油、ベニバナ油、植物油、アボカド油、米ぬか油、ホホバ油、ババス油、ヤシ油、ココナッツ油、ヒマシ油、綿実油、オリーブ油、亜麻仁油、菜種油およびそれらの混合物から選択される、請求項２０に記載の方法。
【請求項２２】
前記油が生体適合性である、請求項１〜２１のいずれかに記載の方法。
【請求項２３】
前記１種以上の安定剤が、ＡＯＴおよび任意選択でさらなる安定剤を含む、請求項１〜２２のいずれかに記載の方法。
【請求項２４】
前記さらなる安定剤が、プロピレングリコールモノラウレート（Ｉ型）（Ｌａｕｒｏｇｌｙｃｏｌ  （商標）  ＦＣＣ）またはモノリノール酸グリセリル（Ｍａｉｓｉｎｅ  （商標）  ３５−１）である、請求項２３に記載の方法。
【請求項２５】
前記さらなる安定剤がプロピレングリコールモノラウレート（タイプＩ）（Ｌａｕｒｏｇｌｙｃｏｌ  （商標）  ＦＣＣ）である、請求項２４に記載の方法。
【請求項２６】
前記油が、落花生油、ゴマ油、ココナッツ油および大豆油から選択される、請求項２３〜２５のいずれかに記載の方法。
【請求項２７】
前記油がゴマ油である、請求項２６に記載の方法。
【請求項２８】
請求項１〜２７のいずれか一項に記載の方法により得られた油中の少なくとも１種の活性種の安定化された微粒子を含む液体組成物。
【請求項２９】
油中の少なくとも１種の活性種の安定化された微粒子を含む液体組成物であって、前記活性種はヌクレオシド類似体およびヌクレオチド類似体から選択される、液体組成物。
【請求項３０】
前記ヌクレオシド類似体がアデノシン類似体またはグアノシン類似体から選択される、請求項２９に記載の液体組成物。
【請求項３１】
前記ヌクレオチド類似体が、アデノシン一リン酸類似体またはグアノシン一リン酸類似体から選択される、請求項２９に記載の液体組成物。
【請求項３２】
前記アデノシン一リン酸類似体がテノホビルプロドラッグから選択される、請求項３１に記載の液体組成物。
【請求項３３】
前記テノホビルプロドラッグが、テノホビルジソプロキシル、テノホビルアラフェナミド、それらの塩またはそれらの組み合わせから選択される、請求項３２に記載の液体組成物。
【請求項３４】
前記テノホビルジソプロキシル塩がテノホビルジソプロキシルフマル酸塩である、請求項３３に記載の液体組成物。
【請求項３５】
テノホビルアラフェナミド塩がテノホビルアラフェナミドフムレートである、請求項３３に記載の液体組成物。
【請求項３６】
前記油が、天然油、鉱油、合成油、シリコーン油、およびそれらの混合物から選択される、請求項２９〜３５に記載の液体組成物。
【請求項３７】
前記天然油が、落花生油、大豆油、ゴマ油、ベニバナ油、植物油、アボカド油、米ぬか油、ホホバ油、ババス油、ヤシ油、ココナッツ油、ヒマシ油、綿実油、オリーブ油、亜麻仁油、菜種油およびそれらの混合物から選択される、３６に記載の液体組成物。
【請求項３８】
前記油が生体適合性である、請求項３６または請求項３７に記載の液体組成物。
【請求項３９】
前記ナノ粒子が、質量で約５〜９５％の活性種、好ましくは約３０〜９０％の活性種、最も好ましくは約６０〜８５％の活性種を含む、請求項２８〜３８のいずれかに記載の液体組成物。
【請求項４０】
前記液体組成物が、少なくとも１ｍｇ／ｍＬ、好ましくは少なくとも１０ｍｇ／ｍＬ、より好ましくは少なくとも４０ｍｇ／ｍＬ、最も好ましくは少なくとも６０ｍｇ／ｍＬの粒子濃度を有する、請求項３８〜３９のいずれかに記載の液体組成物。
【請求項４１】
前記油が、落花生油、ゴマ油、ココナッツ油および大豆油から選択される、請求項２８〜４０のいずれかに記載の液体組成物。
【請求項４２】
前記油がゴマ油である、請求項４１に記載の液体組成物。
【請求項４３】
請求項２８〜４２のいずれか一項に記載の液体組成物、および任意に１種以上の追加の（薬学的に許容される）賦形剤を含む液体剤形の医薬組成物または獣医用組成物。
【請求項４４】
前記医薬組成物または獣医用組成物が追加の薬理学的に活性な化合物をさらに含む、請求項４３に記載の医薬組成物または獣医用組成物。
【請求項４５】
前記医薬組成物または獣医用組成物が筋肉内注射可能および／または皮下注射可能な形態である、請求項４３または請求項４４に記載の医薬組成物または獣医用組成物。
【請求項４６】
前記医薬組成物または獣医用組成物が前記注射部位でデポーを形成する、請求項４３〜４５のいずれかに記載の医薬組成物または獣医用組成物。
【請求項４７】
注射可能物が、予め充填された注射器の形態で提供される、請求項４３〜４６のいずれかに記載の注射可能な医薬組成物または獣医用組成物。
【請求項４８】
前記医薬組成物または獣医用組成物が経口投与に適した形態である、請求項４３または請求項４４に記載の医薬組成物または獣医用組成物。
【請求項４９】
前記医薬組成物または獣医用組成物が充填カプセルの形態である、請求項４８に記載の医薬組成物または獣医用組成物。
【請求項５０】
前記医薬組成物または獣医用組成物がゲルカプセルの形態である、請求項４９に記載の医薬組成物または獣医用組成物。
【請求項５１】
前記医薬組成物または獣医用組成物がシロップの形態である、請求項４８に記載の医薬組成物または獣医用組成物。
【請求項５２】
薬剤として使用するための、請求項２８〜４２のいずれか一項に記載の液体組成物、または請求項４３〜５１のいずれか一項に記載の医薬組成物または獣医用組成物。
【請求項５３】
ウイルス感染の治療および／または予防に使用するための、請求項２８〜４２のいずれか一項に記載の液体組成物、または請求項４３〜５１のいずれか一項に記載の医薬組成物または獣医用組成物。
【請求項５４】
前記ウイルス感染がＨＩＶによって引き起こされる、請求項５３に記載の液体組成物、または医薬組成物もしくは獣医用組成物。
【請求項５５】
請求項２８〜４２のいずれか一項に記載の液体組成物、または請求項４３〜５１のいずれか一項に記載の医薬組成物または獣医用組成物を治療有効量、ウイルス感染に苦しんでいるかウイルス感染のリスクがある患者に投与することを含む、感染を治療および／または予防する方法。
【請求項５６】
前記ウイルス感染がＨＩＶによって引き起こされる、請求項５５に記載の感染を治療および／または予防する方法。
【請求項５７】
投与後、活性種の治療有効濃度が少なくとも２４時間、好ましくは少なくとも３６時間、好ましくは少なくとも４８時間、好ましくは７２時間、最も好ましくは９６時間維持される、請求項５５または５６に記載の感染症を治療および／または予防する方法。
【請求項５８】
癌の治療に使用するための、請求項２８〜４２のいずれか一項に記載の液体組成物、または請求項４３〜５１のいずれか一項に記載の医薬組成物または獣医用組成物。
【請求項５９】
請求項２８〜４２のいずれか一項に記載の液体組成物、または請求項４３〜５１のいずれか一項に記載の医薬組成物または獣医用組成物を治療有効量、癌に罹患している患者に投与することを含む、癌の治療方法。
【請求項６０】
投与後、前記活性種の治療有効濃度が少なくとも２４時間、好ましくは少なくとも３６時間、好ましくは少なくとも４８時間、より好ましくは７２時間、最も好ましくは９６時間維持される、請求項５９に記載の癌の治療方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、油中の活性種の安定化粒子を含む液体組成物の製造方法、当該の方法により製造された液体組成物、およびそのような液体組成物の使用方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
薬理学的に活性な化合物の徐放が所望される場合が多数ある。例えば、慢性状態または予防薬として服用されるような多くの薬は、治療有効濃度を維持するために定期的なスケジュールで服用する必要があり、患者のコンプライアンスが低いと薬効が低下する。そのような薬物が、患者側の行動を必要とせずに治療有効濃度を維持するような方法で投与できれば、患者のコンプライアンスの低さの問題は改善される。
【０００３】
１つの解決策は、製剤が徐々に薬物を放出し、所定の期間にわたって有効な濃度を維持するように薬物を製剤化することである。特定の例は、薬剤をゆっくりと放出するポリマーシースに薬剤を入れることである。このアプローチは、避妊インプラントで一般的に使用されている。例えば、米国特許第４，９５７，１１９号明細書のようにである。
【０００４】
ただし、このアプローチには欠点がないわけではない。避妊用インプラントを例にとると、医学的に訓練された専門家がポリマーシースの挿入と取り外しを要求されるが、これは不快な手順で、適格な患者集団の間での方法の取り込みを低減する。
【０００５】
さらに、高脂肪の食事と一緒に投与すると、多くの薬物の薬物動態特性が強まる。これにより、例えば、薬物の経口バイオアベイラビリティが改善される。薬物の経口バイオアベイラビリティの改善は、所望の治療効果を依然として有する経口投与量の減少をもたらし得、経口投与量のこの減少は、有害な副作用および長期毒性への対応する減少をもたらし得る。
【０００６】
さらに、患者がこの強化された経口バイオアベイラビリティを得るために投薬計画と食事をタイミングと内容の両方の点で調整する必要があるため、患者のコンプライアンスはまた経口投薬計画の問題である。油を薬物とともに提供できれば、患者にそれ以上の不便を与えることなく、バイオアベイラビリティを高めることができる。
【０００７】
脂溶性の薬物は、脂質に溶解でき、経口バイオアベイラビリティを高める。水溶性（すなわち、脂溶性ではない）薬物は脂質に溶解することができないため、経口バイオアベイラビリティに対するこの強化の恩恵を受けることはできない。１つの可能な解決策は、水溶性薬物の固体薬物ナノ粒子（ＳＤＮ）を作成し、脂質相にそれらを分散させることである。ただし、水溶性薬物のＳＤＮは効率的な方法で製造することが難しく、このアプローチを効果的に追求することを妨げる。
【０００８】
担体液は、ａ）水相、ｂ）揮発性で水相と混和しない第２液相、ｃ）周囲温度でエマルジョンと液体の連続相に可溶な担体材料、およびｄ）エマルジョンの分散相に可溶なドーパント材料からエマルジョンを調製すること、およびその後、連続相と担体材料が両方とも固体になる（すなわち、凍結する）までエマルジョンを冷却し、続いて冷却された蒸気のエマルジョンから水と揮発性の第２相を除去し、解凍してドーパント材料が分散した液体生成物（周囲温度にて）を取得することを含む方法を利用することにより調製できることが、以前に発見された（国際公開第２００６／０７９４１０号にて記載および特許請求されている）。
【０００９】
この着想は、エマルジョンを利用しなかった代替方法（国際公開第２０１３／０３０５３５号に記載され、特許請求されている）を採用するためにその後開発された。別の方法は、ａ）溶媒または混和性溶媒の混合物、ｂ）溶媒（ａ）に可溶な液体担体、およびｃ）溶媒（ａ）にまた可溶なドーパント材料を含む単相溶液を調製すること；溶媒（ａ）と液体担体（ｂ）が凍結するように単相溶液を冷却すること；蒸気状の固化した溶媒を除去すること；およびドーパント材料が分散した液体生成物（周囲温度にて）を得るために解凍することを含む。
【００１０】
上記プロセスから得られた液体生成物は、ドーパント材料が容易に分散可能な形態で不溶性または難溶性のいずれかである溶媒を含む系に、ドーパント材料を供給するのに適している。その結果、系内のドーパント材料の濃度は、ドーパント材料が急速に分散されるため、短時間（数秒から数分程度）で急速に上昇する。しかし、そのような液体生成物を調製する方法のために、材料の特定の組み合わせは、上記の方法論に不適切であることが判明する場合がある（例えば、溶解特性の点で）。加えて、そのような方法は、ドーパント材料の溶解性の低い溶媒へのドーパント材料の迅速な放出に適した組成物を生成する。
【００１１】
薬物は、薬理学的に活性な化合物（活性種）である。Ｊｏｒｄｈｅｉｍ，  Ｌ．  Ｐ．；  Ｄｕｒａｎｔｅｌ，  Ｄ．；  Ｚｏｕｌｉｍ，  Ｆ．；  ａｎｄ  Ｄｕｍｏｎｔｅｔ，  Ｃ．  ｉｎ  Ｎａｔ．Ｒｅｖ．  Ｄｒｕｇ  Ｄｉｓｃｏｖ．２０１３，  １２，  ４４７により論じられているように、活性種にはヌクレオシドとヌクレオチドの類似体が含まれており、これらは様々な薬理学的用途にとって興味深いものである。例えば、ヌクレオチド類似体逆転写酵素阻害剤（ＮｔＲＴＩ）およびヌクレオシド類似体逆転写酵素阻害剤（ＮＲＴＩ）は、ウイルス感染の治療に使用される貴重な薬剤である。それらは、逆転写酵素の阻害によりウイルスＲＮＡからの二本鎖ウイルスＤＮＡの合成をブロックするように作用する。ヌクレオシドとヌクレオチドの類似体はまた、癌に対する活性が調査され、また癌の治療法として調査されている。それらは癌細胞の増殖と複製を阻害するように作用する。例えば、シタラビン（シチジンの類似体）は、白血病とリンパ腫の治療に使用される。ヌクレオシドとヌクレオチドの類似体は、耐性、経口バイオアベイラビリティの低下、および長期毒性の問題に頻繁に遭遇する。
【００１２】
ＮｔＲＴＩの例には、ヌクレオチド類似体、特にアデノシン一リン酸の類似体であるテノホビルプロドラッグが含まれる。ＮｔＲＴＩは、慢性ウイルス感染症、最も一般的にはＨＩＶの治療、およびリスクの高い個人の予防に使用される。このクラスの薬では珍しく、テノホビルプロドラッグはかなりの水溶性を備えている。通常、このクラスの薬物の場合、テノホビルプロドラッグは、有効性を維持するために高度に計画された投薬計画を必要とする。投薬計画が維持されない場合、疾患は患者の体内でさらに進行し、伝播の可能性が高まり得る。
【化１】
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【００１３】
本発明の目的は、液体組成物を製造する方法を提供することであり、該組成物は、油中の少なくとも１種の活性種の安定化粒子を含み、ならびにそのような液体組成物自体の提供であり、それにおいて少なくとも１種の活性種がその適用とともに徐々に放出され、そのすべてが先行技術で遭遇した問題または困難のいくつかを未然に防ぐまたは最小限に軽減する。さらなる目的は、活性種の経口バイオアベイラビリティが高められた、少なくとも１種の活性種の安定化粒子を含む液体組成物を提供することである。
【発明の概要】
【００１４】
第１の態様
【００１５】
本発明の第１の態様は、油中の少なくとも１種の活性種の安定化微粒子を含む液体組成物の製造方法であって、活性種がヌクレオシド類似体およびヌクレオチド類似体から選択され、
１）第１の溶液を形成するために少なくとも１種の活性種を第１の溶媒に溶解する工程、
２）第２の溶液を形成するために１種以上の安定剤を第２の溶媒に溶解する工程であって、第１および第２の溶媒は混和性であり、少なくとも１種の活性種は第２の溶媒に不溶性である溶解する工程、
３）混合溶媒に懸濁された少なくとも１種の活性種の安定化粒子の懸濁液を形成するために第１および第２の溶液を組み合わせる工程、
４）液体混合物を形成するために粒子懸濁液に油を追加する工程であって、少なくとも１種の活性種が油に不溶である追加する工程、および
５）液体組成物を形成するために粒子混濁液から第１および第２の溶媒を除去する工程
を含む方法。
【００１６】
本発明の第１の態様は、液体組成物の製造に関する方法である。液体組成物は、油で構成され、その中に油に不溶である少なくとも１種の活性種の安定化された微粒子が懸濁している。
【００１７】
いずれもの疑念を避けるために、少なくとも１種の活性種は、１種以上のヌクレオシド類似体、１種以上のヌクレオチド類似体、またはヌクレオシド類似体およびヌクレオチド類似体のそれぞれの１種以上であり得る。
【００１８】
プロドラッグとは、その薬理効果を示す前に生体内変化（代謝など）を受ける薬物または化合物を意味する。プロドラッグは、多くの場合、親薬物と比較して改善された吸着、分布、代謝および排泄特性、ならびに改善された生物学的利用能を示す。
【００１９】
いずれもの疑念を避けるために、本明細書全体を通して問題の物質の物としての状態を意味する「液体」および同様の用語は、（凝固温度より高い温度であるが、４０℃あるいはそれ以下の温度で）流動しやすさと、比較的高い非圧縮性；問題の物質は形状の変化には抵抗しないが、体積の変化には抵抗するという性質を示す。したがって、ゲル、ワックスおよび他のそのような「半固体」材料は、本発明の目的のための「液体」である物質として（上記の定義により）考慮されるべきである。
【００２０】
「油に不溶」とは、活性種が通常油に溶けないことを意味する。つまり、液体に導入された活性種の固体（１ｍｇ／ｍＬの量）がそのまま溶解せずに（つまり固体）残ることを意味する。
【００２１】
安定化とは、液体に懸濁されている間に粒子が凝集する傾向が改善または完全に緩和されたことを意味する。結果として、安定化微粒子は凝集せず、独立した特性と運動性を維持する。
【００２２】
理論に拘束されることを望まないが、第１および第２の溶液を混合すると、得られた溶媒混合物中にドーパント材料が沈殿すると考えられる。しかし、安定剤は、固体微粒子の集合または凝集を防止するように作用し、そのサイズを制限し、活性種の微粒子の微細な懸濁液をもたらす。
【００２３】
図３に示すように、活性種の懸濁液は安定であり、テノホビルプロドラッグであるテノホビルジソプロキシルフマル酸塩の微細な懸濁液の超音波処理は、流体力学的直径やサイズ分布に影響を与えないことを示している。
【００２４】
本発明の第１の態様の方法において、第１および第２の溶媒は、アルカン、低級（Ｃ１〜Ｃ１０）アルコール、有機酸、アミド、ニトリル、環状炭化水素、ハロゲン化アルカン、エステル、アルデヒドおよびケトン、エーテル、揮発性環状シリコーンおよび水から選択されてもよい。より好ましくは、第１の溶媒系は少なくとも１種のプロトン性溶媒を含み、第２の溶媒系は少なくとも１種の非プロトン性または非極性溶媒を含む。溶剤は以下から選択できる。
・アルカン、例えばヘプタン、ｎ−ヘキサン、イソオクタン、デカン、ドデカン；
・メタノール、エタノール、プロパノール、イソプロパノール、ブタノール、イソブタノール、第三級ブタノール、１−ペンタノールなどの低級（Ｃ１−１０）アルコール；
・ギ酸、酢酸などの有機酸；
・ホルムアミド、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミドなどのアミド；
・アセトニトリルなどのニトリル；
・トルエン、キシレン、シクロヘキサンなどの環状炭化水素；
・ジクロロメタン、ジクロロエタン、トリクロロメタン（クロロホルム）、フルオロトリクロロメタン、タトラクロロエタンなどのハロゲン化アルカン；
・酢酸エチルなどのエステル；
・アセトン、２−ブタノン、２−ヘキサノンなどのアルデヒドおよびケトン；
・ジエチルエーテルなどのエーテル；
・４〜６個のケイ素原子を含むシクロメチコーンなどの揮発性環状シリコーン、例えばＤｏｗ  Ｃｏｒｉｎｇ  Ｉｎｃ．から入手可能なＤｏｗ  Ｃｏｒｉｎｇ  ２４５  ＦｌｕｉｄおよびＤｏｗ  Ｃｏｒｉｎｇ  ３４５  Ｆｌｕｉｄ、および
・水。
【００２５】
第１の溶媒が低級アルコールを含み、第２の溶媒が塩素化溶媒を含むことがより好ましい。第１の溶媒がメタノールを含み、第２の溶媒がジクロロメタンを含むことが最も好ましい。
【００２６】
メタノールは極性のプロトン性溶媒であり、多くの活性種に適した溶媒である。ジクロロメタンは非プロトン性溶媒であり、多くの安定剤に適した溶媒である。極性は異なるが、メタノールとジクロロメタンは任意の比率で完全に混和する。さらに、メタノールとジクロロメタンの混合物は油に適した溶媒である。
【００２７】
第１および第２の溶媒は、さらなる適切な溶媒を含んでもよい。方法で使用される活性種、安定剤または油の溶解度に有害な影響を与えないという条件で、追加の溶媒を第１および第２の溶媒とともに使用してもよい。第１または第２の溶媒に添加され得る溶媒は、この方法で規定された要件を満たすものである。つまり、追加の溶媒を使用する場合、第１の溶媒は活性種の溶媒のままでなければならず；第２の溶媒は安定剤の溶媒のままでなければならず；活性種は、第１の溶媒と第２溶媒の混合から生じる混合溶媒に不溶性のままでなければならず；また、油は、第１の溶媒と第２の溶媒の混合により生じる混合溶媒に可溶でなければならない。
【００２８】
第１および第２の溶媒の各々に対する溶媒の混合物は、二成分混合物に限定されず、３つ以上の成分を含むことができる。溶媒混合物全体に混和性であり、ドーパント材料を可溶化せず、油が溶媒混合物に不溶性にならない限り、追加の溶媒が存在してもよい。追加の溶媒は、上記の適切な溶媒から選択できる。
【００２９】
第１の溶液中の少なくとも１種の活性種の総濃度が約１０〜１００ｍｇ／ｍＬ、好ましくは少なくとも約３０ｍｇ／ｍＬ、さらに好ましくは少なくとも約５０ｍｇ／ｍＬ、さらに好ましくは少なくとも約７０ｍｇ／ｍＬ、最も好ましくは少なくとも約８０ｍｇ／ｍＬであることが好ましい。さらに、第２の溶液中の安定剤の濃度が約１〜３０ｍｇ／ｍＬ、好ましくは少なくとも約５ｍｇ／ｍＬ、さらに好ましくは少なくとも約１０ｍｇ／ｍＬ、さらに好ましくは少なくとも約１５ｍｇ／ｍＬ、最も好ましくは少なくとも約２０ｍｇ／ｍＬであることが好ましい。
【００３０】
あるいは、約３０〜１００ｍｇ／ｍＬの範囲内に維持される、第１の溶液中の少なくとも１種の活性種の総濃度は、約５０〜１００ｍｇ／ｍＬ、より好ましくは、約７０〜１００ｍｇ／ｍＬ、最も好ましくは約８０〜１００ｍｇ／ｍＬであることが好ましいことがある。さらなる代替として、約１〜３０ｍｇ／ｍＬの範囲内に維持される第２の溶液中の安定剤の濃度は、約５〜３０ｍｇ／ｍＬの間、より好ましくは約１０〜３０ｍｇ／ｍＬ、さらに好ましくは約１５〜３０ｍｇ／ｍＬ、最も好ましくは約２０〜３０ｍｇ／ｍＬの間であることが好ましい場合がある。
【００３１】
第１の溶液と第２の溶液の活性種と安定剤の濃度を変えることにより、生じる懸濁液の第１の溶液と第２の溶液の相対量または粒子の総濃度を変更する必要なく、活性種の装填が異なる粒子の作成が可能になる。これは、第１の溶媒と第２の溶媒の比率を変更すると、得られる混合溶媒中の活性種および／または油の溶解度が変化する可能性があるため重要である。
【００３２】
第１および第２の溶液の体積比は、上記の溶解基準を満たす任意の体積比にすることができる（すなわち、活性種の沈殿粒子は、第１および第２の溶媒の混合から生じる混合溶媒に不溶性でなければならない；また油は第１および第２の溶媒の混合から生じる混合溶媒に可溶でなければならない）。混合時の第１および第２の溶液の体積比は、約２：１から１：１０の間、より好ましくは約１：１から１：６の間、最も好ましくは約１：４であることが好ましい。
【００３３】
第１の溶液と第２の溶液の体積比は、得られる混合溶媒での活性種の沈殿を確保するように選択される。また、混合溶媒は油を可溶化できる必要がある。したがって、混合溶媒には、活性種の固体微粒子と液体または溶解状態の油が含まれている。
【００３４】
組み合わせる工程中に、第１および第２の溶液を攪拌することが好ましい。この攪拌は、手動での単純な振とう、プレートシェーカーまたは他の自動シェーカーでの振とう、チューブローラーでの回転、マグネチックスターラーでの攪拌、メカニカルスターラーでの攪拌、ボルテックスまたは超音波処理であり得る。
【００３５】
第１の溶液と第２の溶液を組み合わせながらの攪拌に使用する方法は、油を懸濁液に混合するのにも適している。
【００３６】
多くの一般的な実験室の方法は、溶媒を除去するために使用するのに適している。好ましい方法は、凍結乾燥（すなわち、凍結して乾燥すること）である。この方法では、冷却媒体を使用して油分を含む懸濁液を急速に凍結し、溶媒を減圧下で昇華させて除去する。好ましくは、冷却媒体は液体窒素（沸点：−１９６℃）である。その他の可能な冷却媒体は以下を含む。
・液体空気、（沸点：−１９６℃）；
・液体アンモニア、（沸点：−３３℃）；
・アルゴンなどの液化希ガス（沸点：−１８６℃）；
・トリクロロエチレンなどの液化ハロゲン化炭化水素；
・フロン（商標）などのクロロフルオロカーボン、および
・ヘキサン、ジメチルブテン、イソヘプタン、クメンなどの炭化水素。
【００３７】
冷却媒体は、（液体ガスの場合のように）凍結プロセス中にその沸点にあるか、外部の冷却手段によって冷却され得る。あるいは、冷却媒体は、固体二酸化炭素を含む有機溶媒であってもよい。あるいは、油含有懸濁液の冷却は、フリーザーまたはフリーズドライヤーなど、その凝固点より低い温度に保持された環境に油含有懸濁液を配置することにより達成されてもよい。
【００３８】
好ましくは、減圧は高真空（例えば、＜１００μＢａｒ）である。凍結乾燥の条件は、当業者によく知られている。適用する真空とかかる時間は、存在する溶媒または溶媒の混合物のすべてが昇華によって効果的に除去されるようにする必要がある。凍結乾燥工程は、最大約７２時間、時には約４８時間、好ましくは１２時間未満実行されてもよい。
【００３９】
凍結乾燥を使用して、バルクの液体組成物から溶媒を除去し、その後、好ましい容器または容器に分割してもよい。あるいは、凍結乾燥を使用して、好ましい容器、例えば無菌シリンジ内の液体組成物から、直接溶媒を除去してもよい。凍結乾燥は、滅菌液体組成物を生成するように実行されることが好ましい。
【００４０】
本発明の方法から得られる液体組成物は、好ましくは実質的に溶媒を含まない。本発明の文脈において、「実質的に溶媒を含まない」という用語は、組成物および薬物調製物の溶媒を含まない量が１５％未満、好ましくは１０％未満、より好ましくは５％未満、最も好ましくは２％未満であることを意味する。代替的または追加的に、組成物の溶媒含有量は、ＩＣＨ調和ガイドラインなどの、業界で受け入れられている医薬品の規制ガイドラインの許容範囲内である。誤解を避けるために、本明細書全体では、特に指定のない限り、すべてのパーセントは重量パーセントである。
【００４１】
ヌクレオチドとヌクレオシドの類似体は化合物のクラスであり、その多くは薬理学的に活性であり、その構造はＲＮＡとＤＮＡの成分であるヌクレオチドとヌクレオシドに基づいている。ヌクレオシドは、核酸塩基とリボース糖から成る。ＤＮＡは４つの核酸塩基、アデニン、グアニン、チミンおよびシトシンを使用する。ヌクレオベースは、構造に応じてプリン（アデニンとグアニン）またはピリミジン（シトシン、チミン、ウラシル）として定義できる。ＲＮＡは、チミンの代わりに追加の核酸塩基であるウラシルを使用する。
【００４２】
５つの天然に存在するヌクレオシドは、アデノシン、グアノシン、５−メチルウリジン、ウリジン、およびシチジンである。ヌクレオチドは、糖にリン酸基が付加されたヌクレオシド（すなわち、ヌクレオシド一リン酸）からなる。５つの天然ヌクレオチドは、アデニン一リン酸、グアノシン一リン酸、５−メチルウリジン一リン酸、ウリジン一リン酸、およびシチジン一リン酸である。ヌクレオシドとヌクレオチドは生体分子であるため、それらの類似体は製薬用途に非常に興味深いものである。ヌクレオシドの適切な類似体は、任意のヌクレオシドの類似体であり得る。ヌクレオシドは環状でも非環状でもよい。ヌクレオチドの適切な類似体は、任意のヌクレオチドの類似体であり得る。ヌクレオチドは環状または非環状であってもよい。参考のため、１０種類の天然のヌクレオシドとヌクレオチドの構造を以下に示す。
【化２】
2020512371.tif 000004
【００４３】
いずれもの疑念を避けるために、類似体とは、化学的類似体とも呼ばれる構造的類似体を意味する。類似体の構造は、同名の化合物に似ているが、特定の点で異なる。言い換えれば、ヌクレオシド類似体およびヌクレオチド類似体は、それぞれヌクレオシドおよびヌクレオチドと構造的に類似しているが、異なる。ヌクレオシド類似体の核酸塩基と糖に修飾がなされる。ヌクレオチド類似体はさらに、リン酸基への修飾を特徴としている。一般的な修飾には次のものが含まれるが、これらに限定されない：核酸塩基のハロゲン化とＮ結合；糖のハロゲン化、メチル化、飽和、ヒドロキシル化、脱ヒドロキシル化および開環；および、リン酸塩におけるエステルとＰ−Ｎ結合の形成。
【００４４】
ヌクレオチドおよびヌクレオシドの類似体のよく知られたクラスは、ヌクレオチド類似体逆転写酵素阻害剤（ＮｔＲＴＩ）およびヌクレオシド類似体逆転写酵素阻害剤（ＮＲＴＩ）である。逆転写酵素に対する活性を持つヌクレオチドの類似体はＮｔＲＴＩである。逆転写酵素に対する活性を持つヌクレオシドの類似体はＮＴＲＩである。ＮＲＴＩとＮｔＲＴＩは、逆転写酵素を阻害する働きをする、ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）やＢ型肝炎などのレトロウイルスに対して効果的な抗ウイルス薬である。ＮＲＴＩは、アデノシン、グアノシン、５−メチルウリジン、ウリジンおよびシチジンの類似体であり得る。ＮｔＲＴＩは、アデニン一リン酸、グアノシン一リン酸、５−メチルウリジン一リン酸、ウリジン一リン酸およびシチジン一リン酸の類似体であり得る。
【００４５】
好ましくは、ヌクレオシド類似体は、アデノシン類似体およびグアノシン類似体から選択される。
【００４６】
好ましくは、ヌクレオチド類似体は、アデノシン一リン酸類似体およびグアノシン類似体から選択される。任意に、アデノシン類似体は、アデフォビルプロドラッグまたはテノホビルプロドラッグの１種または複数種から選択されてもよい。
【００４７】
テノホビルプロドラッグは、テノホビルジソプロキシル、テノホビルアラフェナミド、それらの塩またはそれらの組み合わせから選択され得る。
【００４８】
テノホビルプロドラッグは、薬理学的に許容される塩の形であってもよい。塩の形成、または対イオンの置換は、テノホビルプロドラッグの薬物動態学的および薬力学的特性に影響を与える可能性がある。テノホビルプロドラッグ塩は、酢酸塩、シュウ酸塩、フマル酸塩、クエン酸塩、コハク酸塩、酒石酸塩、サリチル酸塩、安息香酸塩、グリコール酸塩、メタンスルホン酸塩、エタンスルホン酸塩、ベンゼンスルホン酸塩、ｐ−トルエンスルホン酸塩、乳酸塩、マレイン酸塩、マロン酸塩、リンゴ酸塩、イセチオネート、ラクトビオン酸塩、マンデル酸塩、ｐ−クマレート、フェルレート、シナペート、カフェエート、クロロゲン酸塩、カフタレート、クタレート、ｐ−ヒドロキシ安息香酸塩、バニレート、シリン酸塩、４−（４−フェノキシベンゾイル）安息香酸塩、ゲンチジン酸塩、プロトカテク酸塩、没食子酸塩、リポ酸塩、アスパラギン酸塩、オロテートなどの有機塩の形態であってもよい。あるいは、テノホビルプロドラッグ塩は、塩酸塩、臭化水素酸塩、硫化物、リン酸塩、硝酸塩、スルファミン酸塩などの無機塩であってもよい。
【００４９】
好ましいテノホビルジソプロキシル塩は、テノホビルジソプロキシルフマレート（ＴＤＦ）である。
【化３】
2020512371.tif 000005
【００５０】
好ましいテノホビルアラフェナミド塩は、テノフォボルアラフェナミドフメレート（ＴＡＦ）である。
【化４】
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【００５１】
相互に適切な溶媒、安定剤および油を有し、それにより複数の活性種を含む活性種の微粒子を形成する場合、複数の活性種を組み合わせて使用できることを理解されたい。あるいは、これは、活性種の様々な微粒子をもたらし、各種類の微粒子は単一の活性種を含む。相互に適切とは、選択された溶媒、安定剤および油が、検討中のすべての活性種の調製のための本出願の方法での使用に適していることを意味する。例えば：
・相互に適切な溶媒とは、第１の溶媒がすべての活性種を溶解し、第２の溶媒がすべての安定剤を溶解し、活性種が混合溶媒に不溶性であり、油が混合溶媒に溶解することを意味する；
・相互に適切な安定剤とは、安定剤が組み合わさって、活性種の凝集を防ぐことを意味する；および
・相互に適切な油とは、どの活性種の微粒子も油に溶解しないことを意味する。
【００５２】
有利には、１種以上の安定剤は界面活性剤である。
【００５３】
１種以上の界面活性剤は、アニオン性界面活性剤のクラスから選択されることが好ましい。好ましいアニオン界面活性剤には、スルホン酸塩、より好ましくはスルホサクシネート塩が含まれる。
【００５４】
好ましいアニオン性界面活性剤は、ジオクチルスルホスクシネートナトリウム塩、ジオクチルスルホスクシネートカリウム塩、ジオクチルスルホスクシネートカルシウム塩およびそれらの組み合わせから選択され得る。
【００５５】
ジオクチルスルホスクシネートナトリウム塩（別名ドキュセートナトリウムまたはＡＯＴ）は、特に適切なアニオン性界面活性剤である。
【００５６】
理論に拘束されることを望まないが、アニオン性界面活性剤はテノホビルプロドラッグと塩を形成するか、テノホビルプロドラッグ塩の対イオンを置換すると考えられ、得られる複合体は混合溶媒に不溶性である。これらの錯体は、溶液から沈殿し始め、微粒子を形成し、残りの安定剤によって安定化される。
【００５７】
追加の安定剤は、アニオン性界面活性剤、非イオン界面活性剤、カチオン性界面活性剤、双性イオン界面活性剤、およびそれらの混合物から選択され得る。
【００５８】
界面活性剤が選択され得るクラス、およびそのいくつかの例には以下が含まれる：
・アルキルエーテル硫酸塩などのアニオン性界面活性剤；アルキルエーテルカルボキシレート；アルキルベンゼンスルホン酸塩；アルキルエーテルリン酸塩；スルホサクシネートジアルキル；サルコシネート；スルホン酸アルキル；石鹸；アルキル硫酸塩；カルボン酸アルキル；リン酸アルキル；パラフィンスルホン酸塩；二級ｎ−アルカンスルホン酸塩；アルファオレフィンスルホン酸塩；イセチオネートスルホン酸塩；アルギン酸塩；
・脂肪族アミン塩などのカチオン性界面活性剤；脂肪ジアミン塩；第四級アンモニウム化合物；ホスホニウム界面活性剤；スルホニウム界面活性剤；スルホンキソニウム界面活性剤；
・両性イオン界面活性剤、例えばアミノ酸のＮ−アルキル誘導体（グリシン、ベタイン、アミノプロピオン酸など）；イミダゾリン界面活性剤；アミンオキシド；アミドベタイン、および
・エトキシル化トリグリセリドなどの非イオン性界面活性剤；脂肪アルコールエトキシレート；アルキルフェノールエトキシレート；脂肪酸エトキシレート；脂肪族アミドエトキシレート；脂肪族アミンエトキシレート；ソルビタンアルカノエート；エチル化ソルビタンアルカノエート；アルキルエトキシレート；Ｐｌｕｒｏｎｉｃｓ（商標）；アルキルポリグルコシド；ステアロールエトキシレート；アルキルポリグリコシド；ショ糖脂肪酸エステル；プロピレングリコールモノラウレート（Ｌａｕｒｏｇｌｙｃｏｌ（商標）ＦＣＣ）；モノリノール酸グリセリル（Ｍａｉｓｉｎｅ（商標）３５−１）；コーン油ＰＥＧ−６エステル（Ｌａｂｒａｆｉｌ（商標）Ｍ２１２５ＣＳ）およびアプリコットカーネル油ＰＥＧ−６エステル（Ｌａｂｒａｆｉｌ（商標）Ｍ１９４４ＣＳ）。
【００５９】
さらなる安定剤は、ポリオキシエチレン（２）ステアリルエーテル（Ｂｒｉｊ（商標）Ｓ２）、プロピレングリコールモノカプリレート（タイプＩＩ）（Ｃａｐｒｙｏｌ（商標）９０）、プロピレングリコールモノカプリレート（タイプＩ）（Ｃａｐｒｙｏｌ（商標）ＰＧＭＣ）、プロピレングリコールジカプリロカプレート（Ｌａｂｒａｆａｃ（商標））  ＰＧ）、アプリコットカーネル油ＰＥＧ−６エステル（Ｌａｂｒａｆｉｌ（商標）Ｍ  １９４４  ＣＳ）、コーン油ＰＥＧ−６エステル（Ｌａｂｒａｆｉｌ（商標）Ｍ  ２１２５  ＣＳ）、カプリロカプロイルポリオキシル−８グリセリド（Ｌａｂｒａｓｏｌ（商標））、プロピレングリコールモノラウレート（タイプＩＩ）（Ｌａｕｒｏｇｌｙｃｏｌ（商標）９０）、モノラウリン酸プロピレングリコール（タイプＩ）（Ｌａｕｒｏｇｌｙｃｏｌ（商標）ＦＣＣ）、モノリノール酸グリセリル（Ｍａｉｓｉｎｅ（商標）３５−１）、モノパルミトステアリン酸プロピレングリコール（Ｍｏｎｏｓｔｅｏｌ（商標））、モノオレイン酸グリセロール（Ｐｅｃｏｌ（商標））、ポリグリセリル−３ジイソステアレート（Ｐｌｕｒｏｌ（商標）Ｄｉｉｓｏｓｔｅｒａｑｕｅ）、ポリグリセリル−６ジオレエート（Ｐｌｕｒｏｌ（商標）Ｏｌｉｑｕｅ）、ソルビタンオレイン酸塩（Ｓｐａｎ（商標）８０）、ポリオキシエチレンソルビタンモノパルミテート（Ｔｗｅｅｎ（商標）４０）、ポリエチレングリコールソルビタンモノオレエート（Ｔｗｅｅｎ（商標）８０）およびそれらの組み合わせから選択され得る。
【００６０】
安定剤、および使用する場合は追加の安定剤の選択は、油からの少なくとも１種の活性種の微粒子の放出速度に影響を与える可能性があることを理解されたい。さらに、混合溶媒および／または油中の微粒子のサイズおよび／または安定性に影響を与え得る。
【００６１】
安定剤の組み合わせおよび混合物も本発明の方法で使用できることを理解されたい。
【００６２】
微粒子懸濁液に添加される油は、天然油、鉱油、合成油、シリコーン油、およびそれらの混合物から選択されてもよい。適切な油は、溶媒の沸点よりも高い沸点を有し得る。適切な油は活性種を可溶化しない場合がある。油は、経口投与に適しているだけでなく、あるいは、非経口投与に適している場合もある。
【００６３】
好ましくは、油は天然油である。任意に、天然油は、落花生油、大豆油、ゴマ油、ベニバナ油、植物油、アボカド油、米ぬか油、ホホバ油、ババス油、ヤシ油、ココナッツ油、ヒマシ油、綿実油、オリーブ油、亜麻仁油、菜種油、アカシア油およびそれらの混合物から選択される。
【００６４】
油は生体適合性であることが好ましい。これは、液体組成物を生物学的環境で、例えば薬剤での使用として使用できるようにするためである。
【００６５】
油の選択は、少なくとも１種の活性種の粒子が不溶性である（つまり、油に分散しても固体のまま）ようにする必要がある。油の選択はまた、油からの微粒子の放出速度にも影響を与える可能性がある。油は、微粒子のデポーを形成できると考えられる。任意で、このデポーは筋肉内に配置できる。さらに任意で、このデポーは皮下に配置することができる。
【００６６】
油は、本明細書の別の場所で定義されている液体であるべきである。得られる混合物が液体のままであるという条件で、周囲条件下で通常固体である追加の材料を油と混合できることも考えられる。油と追加される固体材料の性質が、それらを混合できる比率を決定するので、油に追加され得る追加の固体材料の量は、ケースバイケースで当業者によって判断される。追加の材料が油に溶解し、均質な溶液を形成することが好ましい（ドーパント材料の微粒子は耐える）。
【００６７】
追加の材料は、液体組成物の安定剤または粘度調整剤として作用するために使用できる油溶性ポリマーであってもよい。
【００６８】
追加の材料は生体適合性であることが好ましい。これにより、液体組成物を生物学的環境で、例えば薬剤での使用で使用できるようになるためである。
【００６９】
油は、例えば次のような油溶性物質をさらに含んでもよい。
・ビタミンＡのエステル（例えば、パルミチン酸レチノールまたは酢酸）；ビタミンＥのエステル（例えば、酢酸トコフェロールまたはトコフェロールリノラート）、ビタミンＢ２、ビタミンＤ６、ビタミンＦなどのビタミン；
・ビサボロール（レボメノールとしても知られる）、グリセリン酸、グリセリン酸ステアリルなどの抗炎症剤；
・ラノリンおよびその誘導体；および
・皮膚軟化剤、例えばペルヒドロスクアレン、ペルフルオロポリエーテル。
【００７０】
本発明の第１の態様の方法のための１種以上の安定剤は、ＡＯＴおよび場合によりさらなる安定剤を含んでもよい。さらなる安定剤は、プロピレングリコールモノラウレート（タイプＩ）（Ｌａｕｒｏｇｌｙｃｏｌ（商標）ＦＣＣ）またはモノリノール酸グリセリル（Ｍａｉｓｉｎｅ（商標）３５−１）であってもよい。さらなる安定剤は、プロピレングリコールモノラウレート（タイプＩ）（Ｌａｕｒｏｇｌｙｃｏｌ（商標）ＦＣＣ）であってもよい。油は、落花生油、ゴマ油、ココナッツ油および大豆油から選択されてもよい。油はゴマ油でもよい。活性種はＴＤＦであってもよい。
【００７１】
混合溶媒に懸濁された少なくとも１種の活性種の安定化された微粒子の懸濁液の固形分は、質量で、約５〜９５％の活性種、好ましくは約３０〜９０％の活性種、最も好ましくは約６０〜８５％の活性種を含み得る。安定化微粒子の質量の残りは、安定剤を含む。複数の安定剤を使用する場合、質量の残りは各安定剤間で均等に分割できる。あるいは、より多くの量の安定剤を使用してもよい。安定化微粒子は、約８０％の活性種、１０％の第１の安定剤、および１０％の第２の安定剤を含んでもよい。一実施形態では、活性種はＴＤＦであり、第１の安定剤はＡＯＴであり、第２の安定剤はプロピレングリコールモノラウレート（タイプＩ）（Ｌａｕｒｏｇｌｙｃｏｌ（商標）  ＦＣＣ）またはグリセリルモノリノレート（Ｍａｉｓｉｎｅ（商標）  ３５−１）であり、任意に安定化粒子は８０％  ＴＤＦ、１０％ＡＯＴ、および１０％の第２の安定剤である。別の実施形態において、活性種はＴＤＦであり、第１の安定剤はＡＯＴであり、第２の安定剤はプロピレングリコールモノラウレート（タイプＩ）（Ｌａｕｒｏｇｌｙｃｏｌ（商標）  ＦＣＣ）であり、任意に安定化粒子は８０％ＴＤＦ、１０％ＡＯＴおよび１０％プロピレングリコールモノラウレート（タイプＩ）（Ｌａｕｒｏｇｌｙｃｏｌ（商標）ＦＣＣ）を含む。
【００７２】
安定化微粒子の懸濁液を油と混合して、混合溶媒の除去後に活性種の所定の装填を達成してもよい。装填は、少なくとも１ｍｇ／ｍＬ、好ましくは少なくとも１０ｍｇ／ｍＬ、より好ましくは少なくとも４０ｍｇ／ｍＬ、最も好ましくは少なくとも６０ｍｇ／ｍＬであり得る。あるいは、装填は、約１〜５０ｍｇ／ｍＬ、約５〜２５ｍｇ／ｍＬ、約１０〜２０ｍｇ／ｍＬまたは約１５ｍｇ／ｍＬであってもよい。一実施形態では、活性種はＴＤＦである。
第２の態様
【００７３】
本発明の第２の態様は、油中の少なくとも１種の活性種の安定化微粒子を含む液体組成物を提供し、活性種はヌクレオシド類似体およびヌクレオチド類似体から選択される。
【００７４】
本発明の第２の態様はまた、本発明の第１の態様の方法を使用して生成された油中の少なくとも１種の活性種の安定化微粒子を含む液体組成物を企図する。
【００７５】
前記液体組成物において、ヌクレオシド類似体は、アデノシン類似体およびグアノシン類似体から選択され得る。任意に、ヌクレオチド類似体は、アデノシンリン酸類似体およびグアノシンリン酸類似体から選択される。
【００７６】
好ましくは、アデノシンリン酸類似体は、アデフォビルプロドラッグまたはテノホビルプロドラッグのうちの１種または複数種から選択することができる。
【００７７】
テノホビルプロドラッグは、テノホビルジソプロキシル、テノホビルアラフェナミド、それらの塩またはそれらの組み合わせから選択され得る。好ましいテノホビルジソプロキシル塩は、テノホビルジソプロキシルフマレート（ＴＤＦ）である。好ましいテノホビルアラフェナミド塩は、テノフォボルアラフェナミドフメレート（ＴＡＦ）である。
【００７８】
油は、１種以上のテノホビルプロドラッグを可溶化しないという条件で、天然油、鉱油、合成油、シリコーン油およびそれらの混合物から選択されてもよい。
【００７９】
適切な天然油は、落花生油、大豆油、ゴマ油、ベニバナ油、植物油、アボカド油、米ぬか油、ホホバ油、ババス油、パーム油、ココナッツ油、ヒマシ油、綿実油、オリーブから選択することができる油、亜麻仁油、菜種油、アカシア油およびそれらの混合物から選択することができる。油が生体適合性であることがさらに好ましい。
【００８０】
少なくとも１種の活性種の微粒子のｚ平均直径は、当業者に知られている適切な手段により判定される。好ましい方法は、動的光散乱（ＤＬＳ）であり、油の添加前に混合溶媒システム内の微粒子に対して実行される。少なくとも１種の活性種の微粒子の粒子サイズ測定の特に好ましい方法は、Ｚｅｔａｓｉｚｅｒ  Ｎａｎｏ  Ｓという機器（Ｍａｌｖｅｒｎ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ  ＵＫ製）を使用するＤＬＳである。具体的には、Ｍａｌｖｅｒｎ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ  Ｎａｎｏ  Ｓは、赤色（６３３ｎｍ）４ｍＷヘリウムネオンレーザーを使用して、混合溶媒システムに微粒子の懸濁液を含む標準の光学品質ＵＶキュベットを照射する。本願で引用されているｚ平均直径は、機器メーカーが提供する標準プロトコルを使用して、その装置で取得したものである。
【００８１】
微粒子は、質量で約５〜９５％の活性種、好ましくは約３０〜９０％の活性種、最も好ましくは約６０〜８５％の活性種を含むことができる。少なくとも１種の活性種の粒子の残りは、安定剤で構成される。
【００８２】
上記で説明したように、活性種の微粒子の組成（すなわち、活性種である微粒子の重量％）は、第１および第２の溶液の相対濃度を変えることにより変更し、混合される第１および第２の溶液のそれぞれの体積と、少なくとも１種の活性種の粒子の総濃度は、バッチ間で一貫しているようにすることが好ましい。言い換えると、活性種の装填が異なる微粒子を製造するために、各溶液の合計体積と、活性種と安定剤の合計質量とを一定に保ちながら、第１および第２の溶液の濃度を変化させる。
【００８３】
好ましくは、液体組成物中の少なくとも１種の活性種の粒子の濃度は、少なくとも１ｍｇ／ｍＬ、好ましくは少なくとも１０ｍｇ／ｍＬ、より好ましくは少なくとも４０ｍｇ／ｍＬ、最も好ましくは少なくとも６０ｍｇ／ｍＬである。
【００８４】
液体組成物は、少なくとも１ｍｇ／ｍＬ、好ましくは少なくとも１０ｍｇ／ｍＬ、より好ましくは少なくとも４０ｍｇ／ｍＬ、最も好ましくは少なくとも６０ｍｇ／ｍＬの活性種の装填を有し得る。あるいは、装填は、約１〜５０ｍｇ／ｍＬ、約５〜２５ｍｇ／ｍＬ、約１０〜２０ｍｇ／ｍＬまたは約１５ｍｇ／ｍＬであってもよい。実施形態では、活性種はＴＤＦである。
【００８５】
あるいは、液体組成物中の少なくとも１種の活性種の粒子の濃度は、約１ｍｇ／ｍＬ〜約１００ｍｇ／ｍＬ、好ましくは約１０ｍｇ／ｍＬ〜約８０ｍｇ／ｍＬ、最も好ましくは約２０ｍｇ／ｍＬ〜約６０ｍｇ／ｍＬである。
【００８６】
液体組成物中の少なくとも１種の活性種の粒子の濃度は、凍結乾燥プロセスの前に加えられる油の体積を単に変えることにより微調整することができる。少なくとも１種の活性種の高濃度の微粒子は、濃い懸濁液をもたらすが、それでも注射器を使用して針を通過させることができる。したがって、微粒子が高濃度でも、液体組成物は、注射可能なものに適した材料の特性を有する。生体適合性油が選択された場合、液体組成物も生体適合性であるため、筋肉内注射などの生物学的用途に適している。
【００８７】
液体組成物中の少なくとも１種の活性種の微粒子が低濃度であると、より高感度のインビトロのアッセイでの用途を見出す可能性がある。
【００８８】
任意の粘度の液体組成物（すなわち、注射器を使用して針を通過するには濃すぎるため注射可能なものとしての使用に適さないものを含む）は、経口投与に適している可能性がある。経口投与は、液体シロップとしてであってもよい。あるいは、液体組成物はカプセルに詰めることができる。任意に、カプセルはゲルカプセルであり得る。
【００８９】
任意で、異なる活性種を含む複数の液体組成物が相互に適切な油を使用する場合、液体組成物を混合することができ、それにより様々な微粒子を含む液体組成物が得られ、各微粒子は単一の活性種または活性種の組み合わせを含む。
【００９０】
本発明の第２の態様による液体組成物を含む油は、落花生油、ゴマ油、ココナッツ油および大豆油から選択することができる。油はゴマ油でもよい。複数の安定剤を使用する場合、質量の残りは各安定剤間で均等に分割できる。あるいは、より多くの量の安定剤を使用してもよい。安定化微粒子は、約８０％の活性種、１０％の第１の安定剤、および１０％の第２の安定剤を含んでもよい。
【００９１】
実施形態では、活性種はＴＤＦであり、油は落花生油、ゴマ油、ココナッツ油および大豆油から選択され、ゴマ油が好ましい。任意で、液体組成物中の活性種の装填は、少なくとも１ｍｇ／ｍＬ、好ましくは少なくとも１０ｍｇ／ｍＬ、より好ましくは少なくとも４０ｍｇ／ｍＬ、最も好ましくは少なくとも６０ｍｇ／ｍＬである。あるいは、活性種の装填は、約１〜５０ｍｇ／ｍＬ、約５〜２５ｍｇ／ｍＬ、約１０〜２０ｍｇ／ｍＬまたは約１５ｍｇ／ｍＬであってもよい。
第３の態様
【００９２】
本発明の第３の態様は、本発明の第２の態様による液体組成物を含む液体剤形の医薬組成物または獣医用組成物を提供する。医薬組成物または獣医用組成物は、任意で、１種または複数種の追加の（薬学的に許容される）賦形剤を含む。
【００９３】
可能な賦形剤には、当業者に公知の任意のものが含まれ、充填剤、希釈剤、香味料、着色料、防腐剤、甘味料およびビヒクルのクラスから引き出されてもよい。
【００９４】
本発明の異なる医薬組成物または獣医用組成物は、当技術分野で周知の従来の医薬賦形剤を使用して、従来の手順によって得ることができることが理解されよう。
【００９５】
医薬組成物または獣医用組成物は、追加の薬理学的に活性な化合物をさらに含んでもよい。医薬組成物または獣医用組成物は、さらなる薬理学的に活性な化合物を含む組み合わせた生成物であってもよい。
【００９６】
さらなる薬理学的に活性な化合物には、さらなるヌクレオシド類似体およびヌクレオチド類似体が含まれ、これらは、油中に懸濁した活性種の微粒子への製剤化に適する場合もあれば適さない場合もある。
【００９７】
そのようなさらなる薬理学的に活性な化合物は、油に溶解するか、油相に懸濁した追加の微粒子として存在し得る。追加の微粒子は、本発明の方法または任意の他の適切な方法、例えば、噴霧乾燥またはエマルジョン経路により作製され得る。好ましくは、さらなる薬理学的に活性な化合物は、活性種と相乗効果を有する。
【００９８】
特に好ましい医薬組成物または獣医用組成物は、例えば筋肉内または皮下注射による非経口投与に適したものである。より好ましくは、そのような注射は、注射部位で活性種のデポーを形成し、注射部位の周囲の領域に活性種を徐々に放出する。活性種の漸進的な放出は、所定の期間にわたってもよい。好ましくは、活性種の放出は、注射部位の周囲の領域で活性種の設定濃度範囲を維持する。任意で、注射部位は筋肉内または皮下部位であり、注射部位を囲む領域は生物組織である。維持される設定濃度の範囲は、治療有効濃度範囲であってもよい。注射部位を囲む領域は、問題の生物学的システムの全体、または生物全体にまで及ぶと考えられてもよい。
【００９９】
医薬組成物または獣医用組成物は、適切な無菌容器で提供されてもよい。好ましくは、容器は密封されたバイアルである。より好ましくは、容器は予め充填された注射器である。
【０１００】
あるいは、医薬組成物または獣医用組成物は、経口投与に適した形態である。医薬組成物または獣医用組成物の経口投与に適した形態は、充填カプセルまたはシロップであり得る。経口投与される医薬組成物または獣医用組成物の好ましい形態は、ゲルカプセルであり得る。経口投与される医薬組成物または獣医用組成物の代替形態は、シロップであり得る。
【０１０１】
経口摂取された活性種のバイオアベイラビリティは、脂肪の同時消費（例えば、腸内でのテノホビルジソプロキシルフメレートの摂取）によってしばしば向上する。油中に分散した微粒子として活性種を処方すると、その経口バイオアベイラビリティが向上する。この強化は、患者側の任意のさらなる行動（すなわち、脂肪を伴う組成物の食事を与えること）を必要とせず、それにより、患者のコンプライアンスの問題を改善する。この改善された経口バイオアベイラビリティはまた、より低次の投薬計画をもたらし、それにより有害な副作用を減らし、長期毒性を下げ得る。
第４の態様
【０１０２】
本発明の第４の態様は、薬剤として使用するための、本発明の第２の態様による液体組成物、または本発明の第４の態様による医薬組成物または獣医用組成物を提供する。
第５の態様
【０１０３】
本発明の第５の態様は、ウイルス感染の治療および／または予防に使用するための、本発明の第２の態様による液体組成物、または本発明の第４の態様による医薬組成物または獣医用組成物に関する。
【０１０４】
「予防する」または「予防」への言及は予防的治療に関連し、状態、障害または病状に苛まれているが、状態、障害、または病状の臨床的または無症状の症状をまだ経験または示していないまたはその素因を有する可能性のあるヒトにおいて現れる状態、障害または病状の臨床症状の出現を予防または遅延させることを含むことを理解されたい。
【０１０５】
状態、障害、または病状の「治療」または「治療する」への言及には、（１）状態、障害、または病状の阻害、すなわち、疾患またはその再発の進行の抑制、低減または遅延（維持療法の場合）またはその少なくとも１つの臨床的または無症状の症状、または（２）疾患の緩和または減弱、すなわち状態、障害、または病状の退縮、またはその臨床的または無症状の症状の少なくとも１つを惹起することが含まれることが理解されるであろう。
【０１０６】
任意に、ウイルス感染は、ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）によって引き起こされる場合がある。
第６の態様
【０１０７】
本発明の第６の態様は、本発明の第２の態様による液体組成物、または本発明の第４の態様による医薬組成物または獣医用組成物を治療有効量、ウイルス感染に苛まれているかウイルス感染のリスクがある患者に投与することを含む、感染を治療および／または予防する方法である。
【０１０８】
「治療有効量」とは、疾患を治療するために哺乳動物に投与されたときに、そのような疾患の治療を行うのに十分な化合物の量を意味する。「治療有効量」は、化合物、疾患およびその重症度、ならびに治療される患者の年齢、体重などに応じて異なる。
【０１０９】
好ましくは、ウイルス感染はＨＩＶによって引き起こされる。
【０１１０】
治療有効量の液体組成物または医薬組成物または獣医学用組成物の投与は、油に懸濁した少なくとも１種の活性種の粒子のデポーの形成をもたらし得る。活性種は、デポーから徐々に放出され得る。
【０１１１】
治療有効量の液体組成物または医薬組成物または獣医用組成物の投与により、少なくとも２４時間、好ましくは少なくとも３６時間、好ましくは少なくとも４８時間、より好ましくは少なくとも７２時間、最も好ましくは９６時間維持される治療有効濃度の活性種が生じることが好ましい。あるいは、活性種の治療有効濃度は、約１２時間〜約９６時間、好ましくは約２４時間〜約９６時間、より好ましくは約４８時間〜約９６時間、最も好ましくは約７２時間〜約９６時間維持される。
【０１１２】
言い換えれば、活性種の薬物動態プロファイルは、上記の液体組成物に組み込むことにより大幅に向上する。図１は、動物モデルにおけるＴＤＦなどの活性種の予測的な薬物動態プロファイルを示している。上のプロットでは、活性種の血漿濃度は最初は急速に上昇するが、その後徐々に降下し、長期間にわたって治療有効濃度を維持する。下のプロットでは、活性種の濃度は最初は上昇するが、油からの活性種の放出速度が、代謝および排泄により血漿から活性種を除去する速度に近づくにつれて、すぐに定常状態に近づく。このようにして、治療有効濃度であり得る設定濃度を長期間にわたって維持することができる。
【０１１３】
活性種の薬物動態は、これらのシナリオの間に収まる可能性があり、時間の経過とともに変化する可能性さえあることが理解されよう。製剤、デポー放出速度、代謝およびクリアランスなど、多くの要因が、活性種の放出が優勢なレジームを決定する。さらに、これらの要因は相互に排他的なこともあるが、それらの間にはある程度の相互作用があることもある。
【０１１４】
活性種の微粒子の放出速度の速さは、活性種の微粒子の初期濃度とサイズ、安定剤の種類と量、油の種類、油に含まれるいずれかの追加材料の種類と量を変えることで制御できると考えられている。例えば、活性種の微粒子は、より粘性の高い油を介してよりゆっくりと拡散し、それにより活性種の放出速度が遅くなる。
【０１１５】
少なくとも１種の活性種の漸進的放出により、治療有効量の液体組成物または医薬組成物または獣医用組成物の投与がより少ない頻度で行われ、それにより患者のコンプライアンスおよび方法の有効性が改善される。
【０１１６】
あるいは、治療有効量の液体組成物または医薬組成物または獣医用組成物の投与は、活性種の標準的な製剤の投与と比較して活性種の経口バイオアベイラビリティの改善をもたらし得る。この経口バイオアベイラビリティの改善により、投与量が減少し、それにより有害な副作用と長期的な毒性が改善される可能性がある。
第７の態様
【０１１７】
本発明の第７の態様は、癌の治療に使用するための、本発明の第２の態様による液体組成物、または本発明の第４の態様による医薬組成物または獣医用組成物に関する。
第８の態様
【０１１８】
本発明の第８の態様は、本発明の第２の態様による液体組成物、または本発明の第４の態様による医薬組成物または獣医用組成物を治療有効量、癌に苛まれている患者に投与することを含む、感染を治療および／または予防する方法である。
【０１１９】
治療有効量の液体組成物または医薬組成物または獣医学用組成物の投与は、油に懸濁した少なくとも１種の活性種の粒子のデポーの形成をもたらし得る。活性種は、デポーから徐々に放出され得る。
【０１２０】
治療有効量の液体組成物または医薬組成物または獣医用組成物の投与により、少なくとも２４時間、好ましくは少なくとも３６時間、好ましくは少なくとも４８時間、より好ましくは少なくとも７２時間、最も好ましくは９６時間維持される治療有効濃度の活性種が生じることが好ましい。あるいは、活性種の治療有効濃度は、約１２時間〜約９６時間、好ましくは約２４時間〜約９６時間、より好ましくは約４８時間〜約９６時間、最も好ましくは約７２時間〜約９６時間維持される。
【０１２１】
少なくとも１種の活性種の漸進的放出により、治療有効量の液体組成物または医薬組成物または獣医用組成物の投与がより少ない頻度で行われ、それにより患者のコンプライアンスおよび方法の有効性が改善される。
【０１２２】
あるいは、治療有効量の液体組成物または医薬組成物または獣医用組成物の投与は、活性種の標準的な製剤の投与と比較して活性種の経口バイオアベイラビリティの改善をもたらし得る。この経口バイオアベイラビリティの改善により、投与量が減少し、それにより有害な副作用と長期的な毒性が改善される可能性がある。
【図面の簡単な説明】
【０１２３】
【図１】動物モデルのデポーからの活性種の徐放の効果を示す、投影された薬物動態プロファイルを示している。上のプロットは、活性種の濃度がピークに達してから徐々に落ち着く場合を示しているが、下のプロットは、活性種の濃度が投与時からレベルを維持する場合を示している。
【図２】ＤＬＳ測定により判定された、ジクロロメタン中の６０、７０および８０重量％のＴＤＦの装填を伴う、実施例２のＴＤＦ微粒子のｚ平均流体力学的直径の分布のグラフである。
【図３】実施例２のＴＤＦ微粒子のｚ平均流体力学的直径の分布のグラフであり、超音波処理の前後に６０重量％のＴＤＦが装填されている。
【図４ａ】単回経口投与後の様々な油中のＴＤＦの安定化粒子を含むいくつかの液体組成物について測定された薬物動態プロファイルを示している。
【図４ｂ】単回経口投与後の様々な油中のＴＤＦの安定化粒子を含むいくつかの液体組成物について測定された薬物動態プロファイルを示している。また、各グラフには、比較のために製剤化されていない対照の測定された薬物動態プロファイルも示されている。
【図５】４２時間にわたる複数回の経口投与後のゴマ油中のＴＤＦの安定化粒子を含む液体組成物について測定された定常状態の薬物動態プロファイルを示す。また、グラフには、比較のために製剤化されていない対照の測定された定常状態の薬物動態プロファイルも示されている。
【実施例】
【０１２４】
粒径の測定
【０１２５】
ドーパント材料の粒子の流体力学的直径および多分散性指数は、ドーパント材料の沈殿後ではあるが油の添加前に測定された。分析は、以下のパラメーターを使用して、ＤＬＳ、特にＺｅｔａｓｉｚｅｒ  Ｎａｎｏ  Ｓ（Ｍａｌｖｅｒｎ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ、Ｍａｌｖｅｒｎ、ＵＫ）を使用して実行した。
・粒子タイプは、屈折率１．３３０、吸収０．０１０のナノ粒子に設定
・分散剤は、０．４１３０の粘度と１．４２４の屈折率を持つジクロロメタン
・サンプル温度は２５℃
・光路長１０ｍｍの石英キュベットを使用
・測定角度は１７２°
・サンプルごとに３回測定
・測定ごとの実行回数は自動的に選択。
凍結乾燥
【０１２６】
溶媒を凍結乾燥により除去した。乾燥する混合物を液体窒素を使用して急速に凍結し、ＶｉｒＴｉｓ  Ｂｅｎｃｈｔｏｐ  Ｋ凍結乾燥機に接続した。コンデンサーを−１００℃に設定し、圧力を≦２０μｂａｒに維持し、サンプルを４８時間乾燥した。
【０１２７】
実施例は、テノホビルジソプロキシルフマル酸塩（ＴＤＦ）を含む液体組成物の形成に関する。
実施例１-溶媒と安定剤の選択
【０１２８】
ＴＤＦはテノホビルの水溶性プロドラッグであり、メタノールに可溶であることが知られており、本発明の目的のためには、この溶媒に最大８０ｍｇ／ｍＬまで可溶であることが見出された。したがって、最初の溶媒にはメタノールを使用した。ＴＤＦは、２番目の溶媒として使用されたジクロロメタンには溶解しない。
【０１２９】
次に、ジクロロメタン、ジクロロメタンとメタノールの混合物、および様々な潜在的な油への溶解性について、範囲内の安定剤を検証した。検証した安定剤のうち、５つが適切であることがわかり、分子量とＨＬＢ値とともに以下の表１に列挙されている。
【０１３０】
【表１】
2020512371.tif 000007
【０１３１】
以下の表２に示すように、単独またはバイナリ（質量で５０：５０）の組み合わせで使用した場合に、これらの安定剤がＴＤＦ微粒子の凝集を防止する能力を調査した。
【０１３２】
【表２】
2020512371.tif 000008
実施例２-ＴＤＦ微粒子の合成
【０１３３】
上記の結果に従って成分を選択した。ＳＣ４を安定剤として使用し、第１の溶媒はメタノールで、第２の溶媒はジクロロメタンであった。
【０１３４】
ＴＤＦ微粒子を合成する手順は以下の通りであった。
【０１３５】
特定の濃度のＴＤＦおよびＳＣ４のストック溶液（以下の表３を参照）は、それぞれメタノールおよびジクロロメタンで目標濃度を作成するために必要なＴＤＦおよび安定剤の質量を攪拌することによって作成された。攪拌は、室温で磁気攪拌棒と磁気ホットプレートを使用して達成された。
【０１３６】
【表３】
2020512371.tif 000009
【０１３７】
８００μＬの安定剤含有ジクロロメタン溶液をピペットで４ｍＬ容量のガラスバイアルに入れた。２００μＬのＴＤＦ含有メタノール溶液を同じバイアルにすばやくピペットで注入し、次いで密封して軽く振とうした。白い濁った懸濁液が瞬時に形成された。ＴＤＦ微粒子の形成に有効であることがわかったため、溶液の４：１の比率が一定に保たれた。微粒子のＴＤＦ装填は、混合前にメタノールとジクロロメタン溶液の濃度を変えることにより変更させた。このアプローチでは、ジクロロメタンとメタノールの４：１の比率が維持されている限り、追加される体積を増やすだけで、異なる体積のＴＤＦ微粒子懸濁液を生成でき、液体組成物の油に分散したＴＤＦ粒子の濃度の微細な制御を可能にすることに留意されたい。
【０１３８】
ＴＤＦナノ粒子の流体力学的直径と多分散性指数を判定し（以下の表４および図２を参照）、ＴＤＦ粒子の直径はＴＤＦの装填とともに増加することがわかった。理論に束縛されることを望まないが、これは、ＴＤＦ添加量の多いサンプルが安定剤の量を減らし、沈殿時の粒子の成長を防ぐ安定剤の能力を低下させたことに起因すると仮定された。
【０１３９】
【表４】
2020512371.tif 000010
【０１４０】
ＴＤＦ微粒子を超音波処理にかけ、それらの流体力学的直径および多分散性指数を再測定して、ＴＤＦ微粒子の安定性を判定した。超音波処理はＴＤＦ微粒子のサイズに影響を与えなかった（図３を参照）。ＴＤＦ微粒子は４：１のジクロロメタン：メタノール溶媒系で安定していることを示している。
実施例３-ＴＤＦ微粒子を含む液体組成物の合成
【０１４１】
生体適合性のある天然油を選択して、液体組成物を形成した。これらの油は、ＴＤＦ微粒子が不溶性であり、油が混合溶媒系に溶解する可能性があるため選択された。使用した油は、落花生油、大豆油、ゴマ油、ベニバナ油であった。
【０１４２】
ＴＤＦ微粒子を含む液体組成物を合成する手順は以下の通りであった。
【０１４３】
油をピペットで懸濁液に加え、ボルテックスで混合して、混合溶媒系と均一な溶液を形成した。次いで、この混合物を上記の凍結乾燥により乾燥させた。このプロセスによってメタノールとジクロロメタンの溶媒が除去され、ＴＤＦ微粒子が油に懸濁したままになった。油相は最初は凍結していたが、室温で約５分間放置すると液体の形態に戻った。
【０１４４】
凍結乾燥前に懸濁液と油の体積を変えることにより、油中のＴＤＦ微粒子の濃度を簡単に変更できた。これらのＴＤＦ微粒子で最大６０ｍｇ／ｍＬの高濃度が達成され、濃い懸濁液が形成されたが、高粘度にもかかわらず２５Ｇニードルを依然通過でき、液体組成物が少なくとも注射用組成物の物理的要件を満たしていることが実証された。
【０１４５】
【表５】
2020512371.tif 000011
【０１４６】
大量の液体組成物は、ＴＤＦ懸濁液と油のより多くを単純に使用することで合成され、さらにより多くの油で希釈することにより、より低い濃度が容易に生成された（上記の表５を参照）。これらの低濃度は、インビトロのアッセイなどのより高感度の適用に役立つ場合がある。
実施例４-ＴＤＦ微粒子を含む液体組成物の範囲
【０１４７】
実施例２および３で概説した方法を使用して、上記で概説した安定剤および油の全範囲を含むＴＤＦ微粒子の一連の配合物を作製した。これらすべてが成功したという事実は、本発明の方法の柔軟性を強調している。上記の５種類の安定剤、４種類の油、４種類のＴＤＦの装填を使用して、８０種類の製剤を成功裏に合成した（以下の表６を参照）。
【０１４８】
【表６】
2020512371.tif 000012
【０１４９】
実施例５-追加の安定剤
【０１５０】
実施例２に記載の手順に従って、以下の安定剤の組み合わせを使用して、ＴＤＦ微粒子を形成した（以下の表７を参照）。
【０１５１】
【表７】
2020512371.tif 000013
【０１５２】
安定剤はすべて、ＡＯＴと組み合わせて使用すると効果的であることがわかった。
実施例６-単回投与によるインビボ経口バイオアベイラビリティ
【０１５３】
成体オスＷｉｓｔａｒラット（約３００ｇ）を９つの群に分けた（１群あたり３ラット、８つのＴＤＦ微粒子分散液、アカシア媒体中の１０重量％ＴＤＦの経口コントロール）。馴化後（７日間）、ラットに単回用量のＴＤＦ微粒子分散液または未処方のＴＤＦコントロールを経口強制飼養（１５ｍｇ／Ｋｇ  ＴＤＦ、１ｍＬ／ｋｇ）で投与した。食餌と水は、手順全体を通して自由に得られた。２４時間かけて尾静脈から投与後、血液サンプル（２５０μｌ）を収集した。
【０１５４】
この実施例で使用される製剤は、８０ｗｔ％ＴＤＦ、１０ｗｔ％ＡＯＴおよび１０ｗｔ％のＬａｕｒｏｇｌｙｃｏｌ  ＦＣＣまたはＭａｉｓｉｎｅ  ３５−１の懸濁液を、ミリリットルあたり２０ｍｇ総固形物の濃度で含んでいた。次に、各懸濁液１ｍＬを１．０６７ｍＬの油と混合し、その後凍結乾燥して、油中の粒子濃度が、１５ｍｇ／ｍＬのＴＤＦに相当する１８．７５ｍｇ／ｍＬになるようにした。
【０１５５】
サンプリングの前に各ラットの体重を測定し、実験全体の健康状態の推定値としてモニターした。終了時点で、ＣＯ２の上昇勾配に続いて頸部脱臼を使用してラットを屠殺した。
【０１５６】
血漿中のＴＤＦの検証済みアッセイを使用して、ＴＳＱ  Ｅｎｄｕｒａ（Ｔｈｅｒｍｏｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）でバイオ分析を実施した。ＴＤＦの検量線は、１．９から５００ｎｇ／ｍｌの範囲の連続希釈により、ラットの血漿で作成された。抽出は、固相抽出を使用して実行された。標準曲線の３つの独立した調製によって直線性を評価した。標準の最大許容偏差は、偏差が２０％以下に設定されているＬＬＯＱを除き、規定値の１５％に設定された。
【０１５７】
アッセイ間およびアッセイ内の精度および正確さは、３つの濃度（標準曲線１０，２００および４００ｎｇ／ｍＬの範囲）の調製により評価され、各調製は３回繰り返された。平均値からの許容可能な偏差は、記載された濃度の１５％以内として定義された（偏差が２０％未満の低濃度を除く）。
【０１５８】
次に、ＴＤＦの血漿濃度をＰｒｉｓｍ（ｖ７．０ａ）を使用してプロットした。薬物動態パラメーター（Ｃｍａｘ、Ｔｍａｘ、およびＡＵＣ）は、ＰＫｓｏｌｖｅｒプラグインを使用して計算され、表８（括弧内に示される各測定の標準偏差）および図４ａおよび４ｂ（エラーバーとして示される各測定の標準偏差）に表示される。
【０１５９】
【表８】
2020512371.tif 000014
【０１６０】
結果からわかるように、８つのＴＤＦ微粒子分散液の単回投与スクリーニングのインビボデータは、２４時間にわたってコントロールで観察されたものと同様の血漿の露出を示した。
実施例７-複数回投与によるインビボ経口バイオアベイラビリティ
【０１６１】
単一のリード候補が選択され、定常状態のＰＫを確立するために複数回の用量研究に進んだ。馴化後（７日間）、ラットは４２時間にわたって６時間ごとに１回（１５ｍｇ／ｋｇ、１ｍＬ／ｋｇ）投与された。２４時間かけて尾静脈から最終投与後、血液サンプル（２５０μｌ）を収集した。
【０１６２】
実施例６のように、各ラットの健康状態をモニタした。屠殺、データ収集、およびデータ分析の方法も例６に一致させた。結果は、表９（括弧内に示されている各測定の標準偏差）および図５（エラーバーとして示されている各測定の標準偏差）に示されている。
【０１６３】
【表９】
2020512371.tif 000015
【０１６４】
定常状態では、１１７ゴマのＰＫは有意に高い血漿暴露を示した（Ｃｍａｘ  ２．４倍の増加（Ｐ＝０．００４）、Ｃｍｉｎ  ４．１倍の増加（Ｐ＝０．０２４）、ＡＵＣ２．４倍の増加（Ｐ＝０．０２６））。これらのデータは、油中の少なくとも１種の活性種の安定化された微粒子を含む液体組成物の使用による用量減少および長時間作用型治療効果の可能性を強調している。特に、それらは、油中のＴＤＦの安定化された微粒子を含む液体組成物の使用による用量減少および長時間作用性治療効果の可能性を強調している。
【図１】
2020512371.tif 000016
【図２】
2020512371.tif 000017
【図３】
2020512371.tif 000018
【図４ａ】
2020512371.tif 000019
【図４ｂ】
2020512371.tif 000020
【図５】
2020512371.tif 000021
【国際調査報告】
2020512371.tif 000022
2020512371.tif 000023
2020512371.tif 000024
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