(57)【要約】  本明細書において、軽度又は中等度〜重度の外傷性脳損傷（ＴＢＩ）のような、頭部への損傷を負った、又は負った可能性があるヒト対象の診断及び査定の一助となる方法であって、早期バイオマーカーであるユビキチンカルボキシ末端ヒドロラーゼＬ１（ＵＣＨ−Ｌ１）を使用する方法が開示される。本明細書においてまた、頭部への損傷を負った、又は負った可能性があるヒト対象が、ＵＣＨ−Ｌ１のレベルに基づく、頭部コンピュータ断層撮影（ＣＴ）スキャンから利益を得るか否かを決定し、それにより、ＣＴスキャンを受けるのかどうかを決定する一助となる方法も開示される。これらの方法は、ヒト対象から、対象が、頭部への損傷を負ってから、又は負った可能性があるときから２４時間後以内の時点において採取された、１つ以上の試料中の、ＵＣＨ−Ｌ１のレベル及びレベルの変化を検出するステップを伴う。【特許請求の範囲】
【請求項１】
ヒト対象を、頭部損傷について査定する方法であって、
ａ）推測される頭部損傷後２４時間以内に、前記対象から採取された試料に対するアッセイを実施して、ユビキチンカルボキシ末端ヒドロラーゼＬ１（ＵＣＨ−Ｌ１）の、前記試料中レベルを測定するステップ；及び
ｂ）前記対象が、軽度又は中等度〜重度の外傷性脳損傷（ＴＢＩ）を負っているのかどうかを決定するステップであって、
（ｉ）ＵＣＨ−Ｌ１の、前記試料中レベルが、ＵＣＨ−Ｌ１の基準レベルより高い場合、前記対象が、中等度〜重度のＴＢＩを負っており、ＵＣＨ−Ｌ１の、前記試料中レベルが、ＵＣＨ−Ｌ１の基準レベルより低い場合、前記対象が、軽度ＴＢＩを負っている；
（ｉｉ）ＵＣＨ−Ｌ１の、第１の時点において採取された試料中レベルから、ＵＣＨ−Ｌ１の、第２の時点において採取された試料中レベルへの、統計学的に有意な上昇若しくは低下が見られる場合、前記対象が、中等度〜重度のＴＢＩを負っており、ＵＣＨ−Ｌ１の、第１の時点において採取された試料中レベルから、ＵＣＨ−Ｌ１の、第２の時点において採取された試料中レベルへの、統計学的に有意な上昇若しくは低下が見られない場合、前記対象が、軽度ＴＢＩを負っている；
（ｉｉｉ）ＵＣＨ−Ｌ１のレベルが、前記第１の試料から前記第２の試料へ、少なくとも絶対量の低下若しくは上昇をする場合、前記対象が、中等度〜重度のＴＢＩを負っており、ＵＣＨ−Ｌ１のレベルの、前記第１の試料から前記第２の試料への、少なくとも絶対量の低下若しくは上昇が見られない場合、前記対象が、軽度ＴＢＩを負っている；又は
（ｉｖ）ＵＣＨ−Ｌ１のレベルが、前記第１の試料から前記第２の試料へ、少なくとも第１の絶対量の低下若しくは上昇をする場合、前記対象が、中等度〜重度のＴＢＩを負っており、ＵＣＨ−Ｌ１のレベルが、前記第１の試料から前記第２の試料へ、少なくとも第２の絶対量の低下若しくは上昇をする場合、前記対象が、軽度ＴＢＩを負っている
ステップ
を含む方法。
【請求項２】
前記第１の時点が、前記推測される頭部損傷の約０〜約１２時間後であり、前記統計学的に有意な上昇又は低下が、
（ａ）前記第２の時点から前記第１の時点へ、約１倍を超える若しくは約１分の１未満；
（ｂ）前記第２の時点から前記第１の時点へ、約０．７３倍を超える若しくは約０．７３分の１未満；又は
（ｃ）前記第２の時点から前記第１の時点へ、約０．７３倍を超える若しくは約０．７３分の１未満
からなる群から選択され、ＵＣＨ−Ｌ１の前記基準レベルが、約３５０ｐｇ／ｍＬ〜約５５０ｐｇ／ｍＬの間である、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記対象が、前記アッセイが実施される前に、又は実施された後において、ＧＣＳ（Ｇｌａｓｇｏｗ  Ｃｏｍａ  Ｓｃａｌｅ）スコアを受けている、請求項１〜２のいずれかに記載の方法。
【請求項４】
前記対象が、前記ＧＣＳ（Ｇｌａｓｇｏｗ  Ｃｏｍａ  Ｓｃａｌｅ）スコアに基づき、中等度〜重度のＴＢＩを有すると推測される、請求項３に記載の方法。
【請求項５】
前記基準レベルが、中等度〜重度のＴＢＩを有する対象と相関する、請求項１〜４のいずれかに記載の方法。
【請求項６】
前記基準レベルが、３〜１２のＧＣＳ（Ｇｌａｓｇｏｗ  Ｃｏｍａ  Ｓｃａｌｅ）スコアと相関する、請求項５に記載の方法。
【請求項７】
前記対象が、前記ＧＣＳ（Ｇｌａｓｇｏｗ  Ｃｏｍａ  Ｓｃａｌｅ）スコアに基づき、軽度ＴＢＩを有すると推測される、請求項３に記載の方法。
【請求項８】
前記基準レベルが、軽度ＴＢＩを有する対象と相関する、請求項１〜３のいずれかに記載の方法。
【請求項９】
前記基準レベルが、１３〜１５のＧＣＳ（Ｇｌａｓｇｏｗ  Ｃｏｍａ  Ｓｃａｌｅ）スコアと相関する、請求項８に記載の方法。
【請求項１０】
前記基準レベルが、（ａ）少なくとも約８５％〜約１００％の間の感度及び少なくとも約３０％〜約１００％の間の特異度を有するアッセイにより決定される；（ｂ）少なくとも約９９％の感度及び少なくとも約７５％の特異度を有するアッセイにより決定される；（ｃ）少なくとも約５０ｐｇ／ｍＬ〜約１２０００ｐｇ／ｍＬの間である；又は（ｄ）少なくとも約６５ｐｇ／ｍＬ〜約９０１９ｐｇ／ｍＬの間である、請求項１〜９のいずれかに記載の方法。
【請求項１１】
前記試料が、（ａ）前記推測される頭部損傷後、約０〜約６時間以内に採取され、前記基準レベルが、約１００％の感度及び少なくとも約３３％の特異度を有するアッセイにより決定される；（ｂ）前記推測される頭部損傷後、約０〜約６時間以内に採取され、前記基準レベルが、約１００％の感度及び約１００％の特異度を有するアッセイにより決定される；（ｃ）前記推測される頭部損傷後、約６時間〜約１２時間の間に採取され、前記基準レベルが、約１００％の感度及び少なくとも約３０％の特異度を有するアッセイにより決定される；（ｄ）前記推測される頭部損傷後、約６時間〜約１２時間の間に採取され、前記基準レベルが、約１００％の感度及び少なくとも約６３％の特異度を有するアッセイにより決定される；又は（ｅ）前記推測される頭部損傷後、約６時間〜約１２時間の間に採取され、少なくとも約９０％の感度及び少なくとも約９６％の特異度を有するアッセイにより決定される、請求項１〜１０のいずれかに記載の方法。
【請求項１２】
前記試料が、（ａ）前記推測される頭部損傷後０〜約６時間以内に採取され、前記基準レベルが、約３１１ｐｇ／ｍＬである；（ｂ）前記推測される頭部損傷後０〜６時間以内に採取され、前記基準レベルが、約９０１９ｐｇ／ｍＬである；（ｃ）前記推測される頭部損傷後、約６時間〜約１２時間の間に採取され、前記基準レベルが、約９８ｐｇ／ｍＬである；（ｄ）前記推測される頭部損傷後、約６時間〜約１２時間の間に採取され、前記基準レベルが、約２０９ｐｇ／ｍＬである；又は（ｅ）前記推測される頭部損傷後、約６時間〜約１２時間の間に採取され、前記基準レベルが、約５６９ｐｇ／ｍＬである、請求項１〜１１のいずれかに記載の方法。
【請求項１３】
前記絶対量が、中等度〜重度のＴＢＩを有する対象と相関する、請求項１に記載の方法。
【請求項１４】
前記絶対量が、３〜１２のＧＣＳ（Ｇｌａｓｇｏｗ  Ｃｏｍａ  Ｓｃａｌｅ）スコアと相関する、請求項１３に記載の方法。
【請求項１５】
前記絶対量が、軽度ＴＢＩを有する対象と相関する、請求項１に記載の方法。
【請求項１６】
前記絶対量が、１３〜１５のＧＣＳ（Ｇｌａｓｇｏｗ  Ｃｏｍａ  Ｓｃａｌｅ）スコアと相関する、請求項１５に記載の方法。
【請求項１７】
前記絶対量が、少なくとも約７０％〜約１００％の間の感度及び少なくとも約３０％〜約１００％の間の特異度を有するアッセイにより決定される、請求項１及び１３〜１６のいずれかに記載の方法。
【請求項１８】
前記試料が、（ａ）前記推測される頭部損傷後、約０〜約６時間以内に採取され、前記絶対量が、約１００％の感度及び約１００％の特異度を有するアッセイにより決定される；（ｂ）前記推測される頭部損傷後、約６〜約１２時間以内に採取され、前記絶対量が、少なくとも約７０％の感度及び少なくとも約９２％の特異度を有するアッセイにより決定される；（ｃ）前記推測される頭部損傷後、約０〜約１０時間以内に採取され、前記絶対量が、約１００％の感度及び少なくとも約３６％の特異度を有するアッセイにより決定される；（ｄ）前記推測される頭部損傷後、約０〜約１１時間以内に採取され、前記絶対量が、約１００％の感度及び少なくとも約３２％の特異度を有するアッセイにより決定される；又は（ｅ）前記推測される頭部損傷後、約０〜約１２時間以内に採取され、前記絶対量が、少なくとも約７５％の感度及び少なくとも約７６％の特異度を有するアッセイにより決定される、請求項１７に記載の方法。
【請求項１９】
前記試料が、（ａ）前記推測される頭部損傷後、約０〜約６時間以内に採取され、前記絶対量が、約２５２８ｐｇ／ｍＬである；（ｂ）前記推測される頭部損傷後、約６〜約１２時間以内に採取され、前記絶対量が、約１２９ｐｇ／ｍＬである；（ｃ）前記推測される頭部損傷後、約６〜約１２時間以内に採取され、前記絶対量が、約２５ｐｇ／ｍＬである；（ｄ）前記推測される頭部損傷後０〜１１時間以内に採取され、前記絶対量が、約２５ｐｇ／ｍＬである；又は（ｅ）前記推測される頭部損傷後、約０〜約１２時間以内に採取され、前記絶対量が、約１２９ｐｇ／ｍＬである、請求項１７又は１８に記載の方法。
【請求項２０】
ヒト対象における外傷性脳損傷（ＴＢＩ）の程度を査定する方法であって、
ａ）アッセイを実施して、推測される頭部損傷から２４時間以内に前記対象から採取された第１の試料、及び前記第１の試料が採取された約３〜約６時間後に前記対象から採取された第２の試料である、前記対象から得られた少なくとも２つの試料中の、ユビキチンカルボキシ末端ヒドロラーゼＬ１（ＵＣＨ−Ｌ１）を定量するステップ；並びに
ｂ）ＵＣＨ−Ｌ１のレベルが、前記第１の試料から前記第２の試料へ、低下するのか、上昇するのか、又は同じレベルを維持するのかに基づき、前記対象におけるＴＢＩの程度を決定するステップであって、前記対象が、軽度又は中等度〜重度の外傷性脳損傷を負っているのかどうかを決定することを含む、外傷性脳損傷の程度を決定するステップ
を含む方法。
【請求項２１】
前記第１の試料が、前記推測される頭部損傷後、約０〜約６時間以内に採取される、請求項２０に記載の方法。
【請求項２２】
ＵＣＨ−Ｌ１のレベルが、前記第１の試料から前記第２の試料へ、少なくとも約２０ｐｇ／ｍＬ〜少なくとも約６１００ｐｇ／ｍＬの間で上昇又は低下する場合に、前記対象が、中等度〜重度のＴＢＩを有することが決定される、請求項２０又は２１に記載の方法。
【請求項２３】
前記第１の試料が、（ａ）前記推測される頭部損傷後、約０〜約６時間以内に採取され、ＵＣＨ−Ｌ１のレベルが、少なくとも約２５２８ｐｇ／ｍＬ上昇若しくは低下する；（ｂ）前記推測される頭部損傷後、約６〜約１２時間以内に採取され、ＵＣＨ−Ｌ１のレベルが、少なくとも約１２９ｐｇ／ｍＬ上昇若しくは低下する；（ｃ）前記推測される頭部損傷後、約０〜約１０時間以内に採取され、ＵＣＨ−Ｌ１のレベルが、少なくとも約２５ｐｇ／ｍＬ上昇若しくは低下する；（ｄ）前記推測される頭部損傷後、約０〜約１１時間以内に採取され、ＵＣＨ−Ｌ１のレベルが、少なくとも約２５ｐｇ／ｍＬ上昇若しくは低下する；又は（ｅ）前記推測される頭部損傷後、約０〜約１２時間以内に採取され、ＵＣＨ−Ｌ１のレベルが、少なくとも約１２９ｐｇ／ｍＬ上昇若しくは低下する、請求項２０又は２１に記載の方法。
【請求項２４】
中等度〜重度のＴＢＩを有すると評価されたヒト対象を、ＴＢＩのための処置により処置するステップ及び、任意選択的に、前記処置を受けた後の前記ヒト対象をモニタリングするステップをさらに含む、請求項１〜２３のいずれかに記載の方法。
【請求項２５】
軽度ＴＢＩを有すると評価されたヒト対象をモニタリングするステップをさらに含む、請求項１〜２３のいずれかに記載の方法。
【請求項２６】
ヒト対象に対して、頭部コンピュータ断層撮影（ＣＴ）スキャンを実施するのかどうかを査定する方法であって、
ａ）アッセイを実施して、推測される頭部損傷後約２４時間以内に前記対象から採取された第１の試料、及び前記第１の試料が採取された約３〜約６時間後に前記対象から採取された第２の試料である、前記対象から得られた少なくとも２つの試料中の、ユビキチンカルボキシ末端ヒドロラーゼＬ１（ＵＣＨ−Ｌ１）を定量するステップ；並びに
ｂ）ＵＣＨ−Ｌ１のレベルが、前記第１の試料から前記第２の試料へ、低下するのか、上昇するのか、又は同じレベルを維持するのかに基づき、前記対象に対して、ＣＴスキャンを実施するのかどうかを決定するステップであって、
（ｉ）ＵＣＨ−Ｌ１の前記第１の試料中前記レベルが、ＵＣＨ−Ｌ１の基準レベルより高い場合に、前記ＣＴスキャンが実施され、ＵＣＨ−Ｌ１の前記第１の試料中前記レベルが、ＵＣＨ−Ｌ１の基準レベルより低い場合に、前記ＣＴスキャンが実施されない；
（ｉｉ）ＵＣＨ−Ｌ１の前記第１の試料中レベルから、ＵＣＨ−Ｌ１の前記第２の試料中レベルへ、統計学的に有意な上昇若しくは低下が見られる場合に、前記ＣＴスキャンが実施され、ＵＣＨ−Ｌ１の前記第１の試料中レベルから、ＵＣＨ−Ｌ１の前記第２の試料中レベルへ、統計学的に有意な上昇若しくは低下が見られない場合に、前記ＣＴスキャンが実施されない；又は
（ｉｉｉ）ＵＣＨ−Ｌ１のレベルが、前記第１の試料から前記第２の試料へ、少なくとも絶対量で低下若しくは上昇する場合に、前記ＣＴスキャンが実施され、ＵＣＨ−Ｌ１のレベルの、前記第１の試料から前記第２の試料へ、少なくとも絶対量の低下若しくは上昇が見られない場合に、前記ＣＴスキャンが実施されない、ステップ
を含む方法。
【請求項２７】
前記第１の時点が、前記推測される頭部損傷の約０〜約１２時間後であり、前記第１の時点から前記第２の時点へ、前記統計学的に有意な上昇若しくは低下が、約２倍未満若しくは約２分の１を超える；
前記第１の時点が、前記推測される頭部損傷の約０〜約１２時間後であり、前記第１の時点から前記第２の時点へ、前記統計学的に有意な上昇若しくは低下が、約１．８１倍未満若しくは約１．８１分の１を超える；
前記第１の時点が、前記推測される頭部損傷の約０〜約１２時間後であり、前記第２の時点から前記第１の時点へ、前記統計学的に有意な上昇が、約０．５０倍を超える；
前記第１の時点が、前記推測される頭部損傷の約０〜約１２時間後であり、前記第２の時点から前記第１の時点へ、前記統計学的に有意な上昇が、約０．５５倍を超える；又は
前記第１の時点が、前記推測される頭部損傷の約０〜約１２時間後であり、ＵＣＨ−Ｌ１の前記基準レベルが、約５５０ｐｇ／ｍＬであり、前記第２の時点から前記第１の時点へ、前記統計学的に有意な上昇が、約０．５５倍を超える、
請求項２６に記載の方法。
【請求項２８】
前記対象が、前記アッセイが実施される前に、又は実施された後において、ＣＴスキャンを受けている、請求項２６又は２７に記載の方法。
【請求項２９】
前記対象が、前記ＣＴスキャンに基づき、外傷性脳損傷を有すると推測される、請求項２８に記載の方法。
【請求項３０】
前記基準レベルが、陽性の頭部ＣＴスキャンと相関する、請求項２６〜２９のいずれかに記載の方法。
【請求項３１】
前記基準レベルが、（ａ）少なくとも約８０％〜約１００％の間の感度及び少なくとも約３０％〜約１００％の間の特異度を有するアッセイにより決定される；（ｂ）少なくとも約５０ｐｇ／ｍＬ〜約１０００ｐｇ／ｍＬの間である；又は（ｃ）少なくとも約８６ｐｇ／ｍＬ〜約７００ｐｇ／ｍＬの間である、請求項２６〜３０のいずれかに記載の方法。
【請求項３２】
前記試料が、（ａ）前記推測される頭部損傷後、約０〜約６時間以内に採取され、前記基準レベルが、約１００％の感度及び少なくとも約３７．５％の特異度を有するアッセイにより決定される；（ｂ）前記推測される頭部損傷後、約０〜約６時間以内に採取され、前記基準レベルが、約１００％の感度及び少なくとも約７５％の特異度を有するアッセイにより決定される；（ｃ）前記推測される頭部損傷後、約６時間〜約１２時間の間に採取され、少なくとも約９６％の感度及び少なくとも約３０％の特異度を有するアッセイにより決定される；（ｄ）前記推測される頭部損傷後、約６時間〜約１２時間の間に採取され、少なくとも約８６％の感度及び少なくとも約３５％の特異度を有するアッセイにより決定される；又は（ｅ）前記推測される頭部損傷後、約０時間〜約１２時間の間に採取され、前記基準レベルが、約１００％の感度及び少なくとも約３２％の特異度を有するアッセイにより決定される、請求項２６〜３１のいずれかに記載の方法。
【請求項３３】
前記試料が、（ａ）前記推測される頭部損傷後、約０〜約６時間以内に採取され、前記基準レベルが、約３７０ｐｇ／ｍＬである；（ｂ）前記推測される頭部損傷後、約０〜約６時間以内に採取され、前記基準レベルが、約５０９ｐｇ／ｍＬである；（ｃ）前記推測される頭部損傷後、約６時間〜約１２時間の間に採取され、前記基準レベルが、約９６ｐｇ／ｍＬである；（ｄ）前記推測される頭部損傷後、約６時間〜約１２時間の間に採取され、前記基準レベルが、約８６ｐｇ／ｍＬである；又は（ｅ）前記推測される頭部損傷後、約６時間〜約１２時間の間に採取され、前記基準レベルが、約５５０ｐｇ／ｍＬである、請求項２６〜３２のいずれかに記載の方法。
【請求項３４】
前記絶対量が、陽性の頭部ＣＴスキャンと相関する、請求項２６又は２７に記載の方法。
【請求項３５】
前記絶対量が、少なくとも約８０％〜約１００％の間の感度及び少なくとも約３０％〜約１００％の間の特異度を有するアッセイにより決定される、請求項２６又は２７に記載の方法。
【請求項３６】
前記試料が、（ａ）前記推測される頭部損傷後、約０〜約１０時間以内に採取され、前記絶対量が、少なくとも約８５％の感度及び少なくとも約４１％の特異度を有するアッセイにより決定される；又は（ｂ）前記推測される頭部損傷後、約０〜約１０時間以内に採取され、前記絶対量が、少なくとも約９０％の感度及び少なくとも約３５％の特異度を有するアッセイにより決定される、請求項３５に記載の方法。
【請求項３７】
前記試料が、（ａ）前記推測される頭部損傷後、約０〜約１０時間以内に採取され、前記絶対量が、約２５ｐｇ／ｍＬである；又は（ｂ）前記推測される頭部損傷後、約０〜約１０時間以内に採取され、前記絶対量が、約２３ｐｇ／ｍＬである、請求項３６に記載の方法。
【請求項３８】
前記第２の試料が、前記推測される頭部損傷後、約５時間〜約１６時間又は約３時間〜約６時間の間に、前記対象から採取される、請求項１〜３７のいずれかに記載の方法。
【請求項３９】
前記第２の試料が、前記推測される頭部損傷の約３時間、約４時間、約５時間、約６時間、約７時間、約８時間、約９時間、約１０時間、約１１時間又は約１２時間後に、前記対象から採取される、請求項１〜３７のいずれかに記載の方法。
【請求項４０】
前記試料に対するアッセイを実施して、ＵＣＨ−Ｌ１ではない、１つ以上の、他のバイオマーカーのレベルを測定又は検出するステップをさらに含む、請求項１〜３９のいずれかに記載の方法。
【請求項４１】
前記アッセイが、
（ａ）１つ以上の他のバイオマーカーの、前記第１の試料中レベル及び前記第２の試料中レベルを測定又は検出するステップ、
（ｂ）前記１つ以上の他のバイオマーカーの前記レベルの、前記第１の試料から、前記第２の試料への低下又は上昇を決定するステップ、及び
（ｃ）前記１つ以上の他のバイオマーカーの、前記第１の試料中レベルから、前記１つ以上の他のバイオマーカーの、前記第２の試料中レベルへの、統計学的に有意な低下又は上昇が見られる場合に、前記対象を、軽度ＴＢＩを有すると評価するステップ
を含む、請求項４０に記載の方法。
【請求項４２】
前記１つ以上の他のバイオマーカーが、Ｓ１００β、ニューロン特異的エノラーゼ（ＮＳＥ）、グリア細胞線維性酸性タンパク質（ＧＦＡＰ）、アポリポタンパク質１、タウ、Ｃ反応性タンパク質（ＣＲＰ）、遊離脳由来神経栄養因子（ＢＤＮＦ）、ｐ−タウ、総ＢＤＮＦ、トロポニンＩ（ＴｎＩ）及びこれらの組合せからなる群から選択される、請求項４０又は４１に記載の方法。
【請求項４３】
前記１つ以上の他のバイオマーカーが、Ｓ１００β、ＢＤＮＦ又はＣＲＰである、請求項４２に記載の方法。
【請求項４４】
軽度ＴＢＩを有すると評価された対象を、軽度ＴＢＩのための処置により処置するステップ、及び、任意選択的に、前記処置を受けた後の前記ヒト対象をモニタリングするステップをさらに含む、請求項１〜４３のいずれかに記載の方法。
【請求項４５】
軽度ＴＢＩを有すると評価されたヒト対象をモニタリングするステップをさらに含む、請求項１〜４４のいずれかに記載の方法。
【請求項４６】
ＵＣＨ−Ｌ１のレベルを測定するステップが、イムノアッセイを実施することを含む、請求項１〜４５のいずれかに記載の方法。
【請求項４７】
ＵＣＨ−Ｌ１のレベルを測定するステップが、
（ａ）前記試料を、同時に、又は任意の順序において逐次的に、
（１）ＵＣＨ−Ｌ１上又はＵＣＨ−Ｌ１断片上のエピトープに結合して捕捉抗体−ＵＣＨ−Ｌ１抗原複合体を形成する捕捉抗体、及び
（２）検出可能な標識を含み、前記捕捉抗体が結合していないＵＣＨ−Ｌ１上のエピトープに結合してＵＣＨ−Ｌ１抗原−検出抗体複合体を形成する検出抗体
と接触させることにより、捕捉抗体−ＵＣＨ−Ｌ１抗原−検出抗体複合体が形成されること、並びに
（ｂ）ＵＣＨ−Ｌ１の前記試料中量又は前記試料中濃度を、前記捕捉抗体−ＵＣＨ−Ｌ１抗原−検出抗体複合体内の前記検出可能な標識により発生させたシグナルに基づき測定すること
を含む、請求項１〜４６のいずれかに記載の方法。
【請求項４８】
前記試料が、全血試料、血清試料、脳脊髄液試料及び血漿試料からなる群から選択される、請求項１〜４７のいずれかに記載の方法。
【請求項４９】
前記対象が、物理的振盪、閉鎖性頭部外傷若しくは開放性頭部外傷を結果としてもたらす外部の機械的力若しくは他の力、１回以上の転倒、爆発又は爆破による鈍的衝撃により引き起こされた頭部損傷、又は他の種類の鈍的外傷を負った後に、前記試料が得られる、請求項１〜４８のいずれかに記載の方法。
【請求項５０】
前記対象が、化学物質、毒素又は化学物質と毒素との組合せを摂取した、又はこれらへと曝露された後において、前記試料が得られる、請求項１〜４９のいずれかに記載の方法。
【請求項５１】
前記化学物質又は毒素が、火、カビ、アスベスト、害虫駆除剤、殺虫剤、有機溶剤、塗料、糊、ガス、有機金属、乱用薬物又はこれらの１つ以上の組合せである、請求項５０に記載の方法。
【請求項５２】
前記試料が、自己免疫疾患、代謝性障害、脳腫瘍、低酸素症、ウイルス、髄膜炎、水頭症又はこれらの組合せを患う対象から得られる、請求項１〜４９のいずれかに記載の方法。
【請求項５３】
任意のヒト対象に対して、前記ヒト対象の臨床状態、前記ヒト対象の検査値、軽度又は中等度〜重度のＴＢＩを患う前記ヒト対象の分類、前記ヒト対象による低レベル又は高レベルのＵＣＨ−Ｌ１の呈示、及び前記ヒト対象が頭部損傷を負った可能性がある場合の任意の事象のタイミングからなる群から選択される因子に関わらず、実行されうる、請求項１〜４９のいずれかに記載の方法。
【請求項５４】
前記試料が、生物学的試料である、請求項１〜５３のいずれかに記載の方法。
【請求項５５】
前記試料が、全血試料、血清試料又は血漿試料である、請求項１〜５４のいずれかに記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願情報
本出願は、それらの内容が、参照によりそれらの全体において全ての目的のために本明細書に組み込まれた、２０１７年３月２３日に出願された、米国特許仮出願第６２／４７５，６６２号、２０１８年３月２３日に出願された、米国特許出願第１５／９３４，５４１号に対する優先権を主張する。
技術分野
本発明は、対象が、頭部への損傷を負ってから、又は負った可能性があるときから２４時間後以内の時点において、ヒト対象から採取された、１つ以上の試料（例えば、１つ以上の生物学的試料など）中の、早期バイオマーカーであるユビキチンカルボキシ末端ヒドロラーゼＬ１（ＵＣＨ−Ｌ１）のレベルの変化を検出することにより、軽度又は中等度〜重度の外傷性脳損傷（ＴＢＩ）のような頭部への損傷を負った、又は負った可能性があるヒト対象の診断及び査定の一助となる方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
米国だけにおいても、毎年５００万例を超える軽度の外傷性脳損傷（ＴＢＩ）が生じている。現在のところ、患者評価の一助とするのに利用可能である、簡単かつ客観的で、正確な測定法は存在しない。実際、ＴＢＩの査定及び診断の多くは、主観的データに基づく。残念ながら、頭部ＣＴ及びＧＣＳ（Ｇｌａｓｇｏｗ  Ｃｏｍａ  Ｓｃｏｒｅ）のような客観的測定法は、軽度ＴＢＩの査定において、十分に総合的又は高感度とはいえない。さらに、頭部ＣＴは、大半の時間にわたり軽度ＴＢＩについて何も明らかにせず、高価であり、患者を不要な放射線に曝露する。加えて、陰性の頭部ＣＴは、患者が、脳振盪を有さないことが明確になったこと意味するわけではなく、手術のような、ある特定の介入が確かではないことを指し示しうる。医師及び患者は、この状態を正確に査定して、適切なトリアージ及び回復を促進するのに、客観的で、信頼できる情報を必要とする。今日、急性ケア状況において、患者の査定及び管理の一助となる、ＵＣＨ−Ｌ１の使用に利用可能なデータは限定的である。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００３】
軽度ＴＢＩ（又は脳振盪）は、客観的に検出することがはるかに困難であり、世界中の救急治療室において、毎日難題を提示している。軽度ＴＢＩは、通例、出血及び脳に対する従来のコンピュータ断層撮影スキャンにおける異常のような、肉眼的病態を引き起こさないが、数日間〜数週間かけて、自発的に消失する、急速発症型の神経機能不全を引き起こす。軽度ＴＢＩ患者のうちの約１５％は、遷延性の認知機能不全を患う。救急治療室及び診療所、スポーツ領域及び軍事活動（例えば、戦闘）の現場における軽度ＴＢＩの犠牲者にとって、満たされていない必要性が存在する。
【課題を解決するための手段】
【０００４】
（発明の要旨）
一態様において、本開示は、頭部への損傷（又は頭部損傷）を負った、又は負った可能性があるヒト対象の診断及び査定の一助となる方法を対象とする。方法は、ａ）推測される頭部への損傷後２４時間以内に、対象から採取された試料に対するアッセイを実施して、ユビキチンカルボキシ末端ヒドロラーゼＬ１（ＵＣＨ−Ｌ１）の、生物学的試料中レベルを測定又は検出するステップ；及びｂ）対象が、軽度又は中等度〜重度の外傷性脳損傷（ＴＢＩ）を負っているのかどうかを決定するステップであって、（ｉ）ＵＣＨ−Ｌ１の、生物学的試料中レベルが、ＵＣＨ−Ｌ１の基準レベルより高い場合、対象が、中等度又は重度の外傷性脳損傷を有すると決定され、ＵＣＨ−Ｌ１の、生物学的試料中レベルが、ＵＣＨ−Ｌ１の基準レベルより低い場合、対象が、軽度外傷性脳損傷を有すると決定される；（ｉｉ）ＵＣＨ−Ｌ１の、第１の時点において採取された生物学的試料中レベルから、ＵＣＨ−Ｌ１の、第２の時点において採取された生物学的試料中レベルへの、統計学的に有意な上昇若しくは低下が見られる場合、対象が、中等度又は重度の外傷性脳損傷を有すると決定され、ＵＣＨ−Ｌ１の、第１の時点において採取された生物学的試料中レベルから、ＵＣＨ−Ｌ１の、第２の時点において採取された生物学的試料中レベルへの、統計学的に有意な上昇若しくは低下が見られない場合、対象が、軽度外傷性脳損傷を有すると決定される；（ｉｉｉ）ＵＣＨ−Ｌ１のレベルが、第１の生物学的試料から第２の生物学的試料へ、少なくとも絶対量の低下若しくは上昇をする場合、対象が、中等度又は重度の外傷性脳損傷を有すると決定される、若しくは、ＵＣＨ−Ｌ１のレベルの、第１の生物学的試料から、第２の生物学的試料への、少なくとも絶対量の低下若しくは上昇が見られない場合、対象が、軽度外傷性脳損傷を有すると決定される；（ｉｖ）ＵＣＨ−Ｌ１のレベルが、第１の生物学的試料から第２の生物学的試料へ、少なくとも第１の絶対量の低下若しくは上昇をする場合、対象が、中等度又は重度の外傷性脳損傷を有すると決定される、若しくは、ＵＣＨ−Ｌ１のレベルが、第１の生物学的試料から第２の生物学的試料へ、少なくとも第２の絶対量の低下若しくは上昇をする場合、対象が、軽度外傷性脳損傷を有すると決定される；又は（ｖ）ＵＣＨ−Ｌ１の生物学的試料中レベルがＵＣＨ−Ｌ１の基準レベルより高いか、又はＵＣＨ−Ｌ１の第１の時点において採取された生物学的試料中レベルから、ＵＣＨ−Ｌ１の第２の時点において採取された生物学的試料中レベルへ、量Ｘの有意な上昇若しくは低下が見られる場合、対象が、中等度又は重度の外傷性脳損傷を有すると決定され、ＵＣＨ−Ｌ１の生物学的試料中レベルがＵＣＨ−Ｌ１の基準レベルより低いか、又はＵＣＨ−Ｌ１の第１の時点において採取された生物学的試料中レベルから、ＵＣＨ−Ｌ１の第２の時点において採取された生物学的試料中レベルへ、量Ｘを超える、有意な上昇若しくは低下が見られない場合、対象が、軽度外傷性脳損傷を有すると決定されるステップを含む。
【０００５】
別の態様において、本開示は、推測される頭部への損傷（又は頭部損傷）を負った、又は負った可能性があるヒト対象における外傷性脳損傷の程度を決定する一助となる方法を対象とする。方法は、ａ）推測される損傷から２４時間以内に対象から採取された第１の生物学的試料、及び第１の生物学的試料が採取された約３〜約６時間後に対象から採取された第２の生物学的試料である、対象から得られた少なくとも２つの生物学的試料に対するアッセイを実施するステップ；ｂ）少なくとも２つの生物学的試料中に、ユビキチンカルボキシ末端ヒドロラーゼＬ１（ＵＣＨ−Ｌ１）からなる外傷性脳損傷の早期バイオマーカーを検出するステップであって、ＵＣＨ−Ｌ１の存在の開始が、推測される損傷後約０〜約６時間以内に現れるステップ；ｃ）第１の生物学的試料及び第２の生物学的試料の各々におけるＵＣＨ−Ｌ１のレベルを決定し、ＵＣＨ−Ｌ１のレベルが、第１の生物学的試料から第２の試料へ、低下又は上昇するのかどうかを決定するステップ；並びにｄ）ＵＣＨ−Ｌ１のレベルが、第１の生物学的試料から第２の生物学的試料へ、低下するのか、上昇するのか、又は同じレベルを維持するのかに基づき、対象における外傷性脳損傷の程度を決定するステップを含む。
【０００６】
なお、さらに別の態様において、本開示は、推測される頭部への損傷（又は頭部損傷）を負った、又は負った可能性があるヒト対象に対して、頭部コンピュータ断層撮影（ＣＴ）スキャンを実施するのかどうかの決定の一助となる方法を対象とする。方法は、ａ）推測される損傷から２４時間以内に対象から採取された第１の生物学的試料、及び第１の生物学的試料が採取された約３〜約６時間後に対象から採取された第２の生物学的試料である、対象から得られた少なくとも２つの生物学的試料に対するアッセイを実施するステップ；ｂ）少なくとも２つの生物学的試料中に、ユビキチンカルボキシ末端ヒドロラーゼＬ１（ＵＣＨ−Ｌ１）からなる外傷性脳損傷の早期バイオマーカーを検出するステップであって、ＵＣＨ−Ｌ１の存在の開始が、推測される損傷後、約０〜約６時間以内に現れるステップ；ｃ）第１の生物学的試料及び第２の生物学的試料の各々におけるＵＣＨ−Ｌ１のレベルを決定し、ＵＣＨ−Ｌ１のレベルが、第１の生物学的試料から第２の生物学的試料へ、低下又は上昇するのかどうかを決定するステップ；並びにｄ）ＵＣＨ−Ｌ１のレベルが、第１の生物学的試料から第２の生物学的試料へ、低下するのか、上昇するのか、又は同じレベルを維持するのかに基づき、対象に対して、ＣＴスキャンを実施するのかどうかを決定するステップを含む。
【０００７】
さらに別の態様において、本開示は、頭部損傷を負った、又は負った可能性があるヒト対象の診断及び査定の一助となる方法に関する。例えば、方法は、
ａ）推測される頭部損傷後２４時間以内に、対象から採取された試料に対するアッセイを実施して、ユビキチンカルボキシ末端ヒドロラーゼＬ１（ＵＣＨ−Ｌ１）の、試料中レベルを測定又は検出するステップ；及び
ｂ）対象が、軽度又は中等度〜重度の外傷性脳損傷（ＴＢＩ）を負っているのかどうかを決定するステップであって、
（ｉ）ＵＣＨ−Ｌ１の試料中レベルがＵＣＨ−Ｌ１の基準レベルより高い場合、対象が中等度〜重度の外傷性脳損傷を有すると決定され、ＵＣＨ−Ｌ１の試料中レベルがＵＣＨ−Ｌ１の基準レベルより低い場合、対象が軽度外傷性脳損傷を有すると決定される；
（ｉｉ）ＵＣＨ−Ｌ１の第１の時点において採取された試料中レベルからＵＣＨ−Ｌ１の第２の時点において採取された試料中レベルへ、統計学的に有意な上昇若しくは低下が見られる場合、対象が中等度〜重度の外傷性脳損傷を有すると決定され、ＵＣＨ−Ｌ１の第１の時点において採取された試料中レベルからＵＣＨ−Ｌ１の第２の時点において採取された試料中レベルへ、統計学的に有意な上昇若しくは低下が見られない場合、対象が軽度外傷性脳損傷を有すると決定される；
（ｉｉｉ）ＵＣＨ−Ｌ１のレベルが、第１の試料から第２の試料へ、少なくとも絶対量の低下若しくは上昇する場合、対象が中等度〜重度の外傷性脳損傷を有すると決定される、若しくは、ＵＣＨ−Ｌ１のレベルの、第１の試料から第２の試料へ、少なくとも絶対量の低下若しくは上昇が見られない場合、対象が軽度外傷性脳損傷を有すると決定される；
（ｉｖ）ＵＣＨ−Ｌ１のレベルが、第１の試料から第２の試料へ、少なくとも第１の絶対量の低下若しくは上昇をする場合、対象が中等度〜重度の外傷性脳損傷を有すると決定される、若しくは、ＵＣＨ−Ｌ１のレベルが、第１の試料から第２の試料へ、少なくとも第２の絶対量の低下若しくは上昇する場合、対象が軽度外傷性脳損傷を有すると決定される；又は
（ｖ）ＵＣＨ−Ｌ１の試料中レベルがＵＣＨ−Ｌ１の基準レベルより高いか、又はＵＣＨ−Ｌ１の第１の時点において採取された試料中レベルからＵＣＨ−Ｌ１の第２の時点において採取された試料中レベルへ、量Ｘの有意な上昇若しくは低下が見られる場合、対象が中等度〜重度の外傷性脳損傷を有すると決定され、ＵＣＨ−Ｌ１の試料中レベルがＵＣＨ−Ｌ１の基準レベルより低いか、又はＵＣＨ−Ｌ１の第１の時点において採取された試料中レベルからＵＣＨ−Ｌ１の第２の時点において採取された試料中レベルへ、量Ｘを超える、有意な上昇若しくは低下が見られない場合、対象が、軽度外傷性脳損傷を有すると決定される
ステップ
を含みうる。
【０００８】
さらに別の態様において、本開示は、ヒト対象を、頭部損傷（外傷性脳損傷のような）について査定する方法に関する。例えば、方法は、
ａ）推測される頭部損傷後２４時間以内に、対象から採取された試料（生物学的試料のような）に対するアッセイを実施して、ユビキチンカルボキシ末端ヒドロラーゼＬ１（ＵＣＨ−Ｌ１）の、試料中レベルを測定するステップ；及び
ｂ）対象が、軽度又は中等度〜重度の外傷性脳損傷（ＴＢＩ）を負っているのかどうかを決定するステップであって、
（ｉ）ＵＣＨ−Ｌ１の試料中レベルがＵＣＨ−Ｌ１の基準レベルより高い場合、対象が中等度〜重度のＴＢＩを負っており、ＵＣＨ−Ｌ１の試料中レベルがＵＣＨ−Ｌ１の基準レベルより低い場合、対象が軽度ＴＢＩを負っている；
（ｉｉ）ＵＣＨ−Ｌ１の第１の時点において採取された試料中レベルからＵＣＨ−Ｌ１の第２の時点において採取された試料中レベルへ、統計学的に有意な上昇若しくは低下が見られる場合、対象が中等度〜重度のＴＢＩを負っており、ＵＣＨ−Ｌ１の第１の時点において採取された試料中レベルからＵＣＨ−Ｌ１の、第２の時点において採取された試料中レベルへ、統計学的に有意な上昇若しくは低下が見られない場合、対象が軽度ＴＢＩを負っている；
（ｉｉｉ）ＵＣＨ−Ｌ１のレベルが、第１の試料から第２の試料へ、少なくとも絶対量の低下若しくは上昇をする場合、対象が中等度〜重度のＴＢＩを負っており、ＵＣＨ−Ｌ１のレベルの第１の試料から第２の試料へ、少なくとも絶対量の低下若しくは上昇が見られない場合、対象が軽度ＴＢＩを負っている；又は
（ｉｖ）ＵＣＨ−Ｌ１のレベルが、第１の試料から第２の試料へ、少なくとも第１の絶対量の低下若しくは上昇をする場合、対象が、中等度〜重度のＴＢＩを負っており、ＵＣＨ−Ｌ１のレベルが、第１の試料から第２の試料へ、少なくとも第２の絶対量の低下若しくは上昇をする場合、対象が軽度ＴＢＩを負っている
ステップ
を含みうる。
【０００９】
ヒト対象を頭部損傷について査定する、上記において記載された方法のうちのいずれかにおいて、第１の時点は、推測される頭部損傷の約０〜約１２時間後であることが可能であり、統計学的に有意な上昇又は低下は、（ａ）第２の時点から第１の時点へ、約１倍を超える、若しくは約１分の１未満；（ｂ）第２の時点から第１の時点へ、約０．７３倍を超える、若しくは約０．７３分の１未満；又は（ｃ）第２の時点から第１の時点へ、約０．７３倍を超える、若しくは約０．７３分の１未満からなる群から選択される場合があり、ＵＣＨ−Ｌ１の基準レベルは、約３５０ｐｇ／ｍＬ〜約５５０ｐｇ／ｍＬの間である。一部の実施形態において、有意な上昇又は低下は、第２の時点から第１の時点へ、約１倍を超える、又は約１分の１未満である。一部の実施形態において、有意な上昇又は低下は、第２の時点から第１の時点へ、約０．７３倍を超える、若しくは約０．７３分の１未満である。一部の実施形態において、有意な上昇又は低下は、第２の時点から第１の時点へ、約０．７３倍を超える、若しくは約０．７３分の１未満であり、ＵＣＨ−Ｌ１の基準レベルは、約３５０ｐｇ／ｍＬ〜約５５０ｐｇ／ｍＬの間である。
【００１０】
ヒト対象を頭部損傷について査定するための、上記において記載された方法のうちのいずれかにおいて、対象は、アッセイが実施される前に又は実施された後において、ＧＣＳ（Ｇｌａｓｇｏｗ  Ｃｏｍａ  Ｓｃａｌｅ）スコアを受けている場合がある。例えば、対象は、ＧＣＳ（Ｇｌａｓｇｏｗ  Ｃｏｍａ  Ｓｃａｌｅ）スコアに基づき、中等度〜重度のＴＢＩを有すると推測されうる。代替的に、対象は、ＧＣＳ（Ｇｌａｓｇｏｗ  Ｃｏｍａ  Ｓｃａｌｅ）スコアに基づき、軽度ＴＢＩを有すると推測されうる。代替的に、対象は、アッセイが実施される前に、ＧＣＳ（Ｇｌａｓｇｏｗ  Ｃｏｍａ  Ｓｃａｌｅ）スコアを受けていない場合がある。加えて、対象は、アッセイが実施される前に、頭部ＣＴを受けている場合がある。代替的にまた、対象は、アッセイが実施される前に、頭部ＣＴを受けていない場合がある。なお、さらに、対象は、アッセイが実施される前に、ＧＣＳ（Ｇｌａｓｇｏｗ  Ｃｏｍａ  Ｓｃａｌｅ）又は頭部ＣＴを受けていない場合がある。なお、さらに、対象は、アッセイが実施される前に、ＧＣＳ（Ｇｌａｓｇｏｗ  Ｃｏｍａ  Ｓｃａｌｅ）を受けているが、頭部ＣＴを受けていない場合がある。なお、さらに、対象は、アッセイが実施される前に、頭部ＣＴを受けているが、ＧＣＳ（Ｇｌａｓｇｏｗ  Ｃｏｍａ  Ｓｃａｌｅ）を受けていない場合がある。なお、さらに、対象は、アッセイが実施される前に、頭部ＣＴ及びＧＣＳ（Ｇｌａｓｇｏｗ  Ｃｏｍａ  Ｓｃａｌｅ）を受けている場合がある。
【００１１】
ヒト対象を、頭部損傷について査定するための、上記において記載された方法のうちのいずれかにおいて、基準レベルは、中等度〜重度のＴＢＩを有する対象と（軽度ＴＢＩを有する対象と比較した場合）相関しうる。代替的に、基準レベルは、軽度ＴＢＩを有する対象と（ＴＢＩを有さない対象と比較した場合）相関しうる。なお、さらに、基準レベルは、対象が、中等度〜重度のＴＢＩを有する（軽度ＴＢＩを有する対象と比較した場合）ことを指し示しうる。なお、さらに、基準レベルは、対象が、軽度ＴＢＩを有する（ＴＢＩを有さない対象と比較した場合）ことを指し示しうる。なお、さらに、基準レベルは、１３〜１５のＧＣＳ（Ｇｌａｓｇｏｗ  Ｃｏｍａ  Ｓｃａｌｅ）スコアと相関しうる。本発明の方法における使用のために、どの基準レベルを選択すべきなのかは、当業者に明らかである。
【００１２】
ヒト対象を、頭部損傷について査定するための、上記において記載された方法のうちのいずれかにおいて、基準レベルは、（ａ）少なくとも約８５％〜約１００％の間の感度及び少なくとも約３０％〜約１００％の間の特異度を有するアッセイにより決定されうる；（ｂ）少なくとも約９９％の感度及び少なくとも約７５％の特異度を有するアッセイにより決定されうる；（ｃ）少なくとも約５０ｐｇ／ｍＬ〜約１２０００ｐｇ／ｍＬの間でありうる；又は（ｄ）少なくとも約６５ｐｇ／ｍＬ〜約９０１９ｐｇ／ｍＬの間でありうる。一部の実施形態において、基準レベルは、少なくとも約８５％〜約１００％の間の感度及び少なくとも約３０％〜約１００％の間の特異度を有するアッセイにより決定されうる。一部の実施形態において、基準レベルは、少なくとも約９９％の感度及び少なくとも約７５％の特異度を有するアッセイにより決定されうる。一部の実施形態において、基準レベルは、少なくとも約５０ｐｇ／ｍＬ〜約１２０００ｐｇ／ｍＬの間；又は（ｄ）少なくとも約６５ｐｇ／ｍＬ〜約９０１９ｐｇ／ｍＬの間でありうる。
【００１３】
ヒト対象を、頭部損傷について査定するための、上記において記載された方法のうちのいずれかにおいて、試料は、（ａ）推測される頭部損傷後、約０〜約６時間以内に採取される場合があり、基準レベルは、約１００％の感度及び少なくとも約３３％の特異度を有するアッセイにより決定される；（ｂ）推測される頭部損傷後、約０〜約６時間以内に採取される場合があり、基準レベルは、約１００％の感度及び約１００％の特異度を有するアッセイにより決定される；（ｃ）推測される頭部損傷後、約６時間〜約１２時間の間に採取される場合があり、基準レベルは、約１００％の感度及び少なくとも約３０％の特異度を有するアッセイにより決定される；（ｄ）推測される頭部損傷後、約６時間〜約１２時間の間に採取される場合があり、基準レベルは、約１００％の感度及び少なくとも約６３％の特異度を有するアッセイにより決定される；又は（ｅ）推測される頭部損傷後、約６時間〜約１２時間の間に採取される場合があり、少なくとも約９０％の感度及び少なくとも約９６％の特異度を有するアッセイにより決定される。一部の実施形態において、試料は、推測される頭部損傷後、約０〜約６時間以内に採取される場合があり、基準レベルは、約１００％の感度及び少なくとも約３３％の特異度を有するアッセイにより決定される。一部の実施形態において、試料は、推測される頭部損傷後、約０〜約６時間以内に採取される場合があり、基準レベルは、約１００％の感度及び約１００％の特異度を有するアッセイにより決定される。一部の実施形態において、試料は、推測される頭部損傷後、約６時間〜約１２時間の間に採取される場合があり、基準レベルは、約１００％の感度及び少なくとも約３０％の特異度を有するアッセイにより決定される。一部の実施形態において、試料は、推測される頭部損傷後、約６時間〜約１２時間の間に採取される場合があり、基準レベルは、約１００％の感度及び少なくとも約６３％の特異度を有するアッセイにより決定される。一部の実施形態において、試料は、推測される頭部損傷後、約６時間〜約１２時間の間に採取される場合があり、基準レベルは、少なくとも約９０％の感度及び少なくとも約９６％の特異度を有するアッセイにより決定される。
【００１４】
代替的に、試料は、（ａ）推測される頭部損傷後０〜約６時間以内に採取される場合があり、基準レベルは、約３１１ｐｇ／ｍＬである；（ｂ）推測される頭部損傷後０〜６時間以内に採取される場合があり、基準レベルは、約９０１９ｐｇ／ｍＬである；（ｃ）推測される頭部損傷後、約６時間〜約１２時間の間に採取される場合があり、基準レベルは、約９８ｐｇ／ｍＬである；（ｄ）推測される頭部損傷後、約６時間〜約１２時間の間に採取される場合があり、基準レベルは、約２０９ｐｇ／ｍＬである；又は（ｅ）推測される頭部損傷後、約６時間〜約１２時間の間に採取される場合があり、基準レベルは、約５６９ｐｇ／ｍＬである。一部の実施形態において、試料は、推測される頭部損傷後０〜約６時間以内に採取される場合があり、基準レベルは、約３１１ｐｇ／ｍＬである。一部の実施形態において、試料は、推測される頭部損傷後０〜６時間以内に採取される場合があり、基準レベルは、約９０１９ｐｇ／ｍＬである。一部の実施形態において、試料は、推測される頭部損傷後、約６時間〜約１２時間の間に採取される場合があり、基準レベルは、約９８ｐｇ／ｍＬである。一部の実施形態において、試料は、推測される頭部損傷後、約６時間〜約１２時間の間に採取される場合があり、基準レベルは、約２０９ｐｇ／ｍＬである。一部の実施形態において、試料は、推測される頭部損傷後、約６時間〜約１２時間の間に採取される場合があり、基準レベルは、約５６９ｐｇ／ｍＬである。
【００１５】
ヒト対象を、頭部損傷について査定するための、上記において記載された方法のうちのいずれかにおいて、基準レベルは、中等度〜重度のＴＢＩを有する対象と（軽度ＴＢＩを有する対象と比較した場合）相関しうる。代替的に、基準レベルは、軽度ＴＢＩを有する対象と（ＴＢＩを有さない対象と比較した場合）相関しうる。なお、さらに、基準レベルは、対象が、中等度〜重度のＴＢＩを有する（軽度ＴＢＩを有する対象と比較した場合）ことを指し示しうる。なお、さらに、基準レベルは、対象が、軽度ＴＢＩを有する（ＴＢＩを有さない対象と比較した場合）ことを指し示しうる。なおまださらに、基準レベルは、１３〜１５のＧＣＳ（Ｇｌａｓｇｏｗ  Ｃｏｍａ  Ｓｃａｌｅ）スコアと相関しうる。本発明の方法における使用のために、どの基準レベルを選択すべきなのかは、当業者に明らかである。
【００１６】
ヒト対象を、頭部損傷について査定するための、上記において記載された方法のうちのいずれかにおいて、絶対量は、少なくとも約７０％〜約１００％の間の感度及び少なくとも約３０％〜約１００％の間の特異度を有するアッセイにより決定されうる。
【００１７】
ヒト対象を、頭部損傷について査定するための、上記において記載された方法のうちのいずれかにおいて、試料は、（ａ）推測される頭部損傷後、約０〜約６時間以内に採取される場合があり、絶対量は、約１００％の感度及び約１００％の特異度を有するアッセイにより決定される；（ｂ）推測される頭部損傷後、約６〜約１２時間以内に採取される場合があり、絶対量は、少なくとも約７０％の感度及び少なくとも約９２％の特異度を有するアッセイにより決定される；（ｃ）推測される頭部損傷後、約０〜約１０時間以内に採取される場合があり、絶対量は、約１００％の感度及び少なくとも約３６％の特異度を有するアッセイにより決定される；（ｄ）推測される頭部損傷後、約０〜約１１時間以内に採取される場合があり、絶対量は、約１００％の感度及び少なくとも約３２％の特異度を有するアッセイにより決定される；又は（ｅ）推測される頭部損傷後、約０〜約１２時間以内に採取される場合があり、絶対量は、少なくとも約７５％の感度及び少なくとも約７６％の特異度を有するアッセイにより決定される。
【００１８】
なお、さらに、ヒト対象を、頭部損傷について査定するための、上記において記載された方法のうちのいずれかにおいて、試料は、（ａ）推測される頭部損傷後、約０〜約６時間以内に採取される場合があり、絶対量は、約２５２８ｐｇ／ｍＬである；（ｂ）推測される頭部損傷後、約６〜約１２時間以内に採取される場合があり、絶対量は、約１２９ｐｇ／ｍＬである；（ｃ）推測される頭部損傷後、約６〜約１２時間以内に採取される場合があり、絶対量は、約２５ｐｇ／ｍＬである；（ｄ）推測される頭部損傷後０〜１１時間以内に採取される場合があり、絶対量は、約２５ｐｇ／ｍＬである；又は（ｅ）推測される頭部損傷後、約０〜約１２時間以内に採取される場合があり、絶対量は、約１２９ｐｇ／ｍＬである。
【００１９】
ヒト対象を、頭部損傷について査定するための、上記において同定された方法において、試料（又は生物学的試料）は、全血試料、血清試料又は血漿試料でありうる。具体的に、試料（又は生物学的試料）は、全血試料でありうる。代替的に、試料（又は生物学的試料）は、血清試料でありうる。代替的に、試料（又は生物学的試料）は、血漿試料でありうる。
【００２０】
ヒト対象を、頭部損傷について査定するための、上記において記載された方法において、ＵＣＨ−Ｌ１は、イムノアッセイを使用して測定又は検出されうる。一態様において、上記において記載された方法において、試料（又は生物学的試料）は、全血試料であることが可能であり、ＵＣＨ−Ｌ１は、イムノアッセイを使用して測定又は検出されうる。さらに上記において記載された方法における、別の態様において、試料（又は生物学的試料）は、血清試料であることが可能であり、ＵＣＨ−Ｌ１は、イムノアッセイを使用して測定又は検出されうる。さらに上記において記載された方法における、別の態様において、試料（又は生物学的試料）は、血漿試料であることが可能であり、ＵＣＨ−Ｌ１は、イムノアッセイを使用して測定又は検出されうる。
【００２１】
ヒト対象を、頭部損傷について査定するための、上記において記載された方法は、軽度又は中等度〜重度のＴＢＩを有すると評価されたヒト対象を、ＴＢＩのための処置により処置するステップをさらに含みうる。したがって、ＴＢＩのために処置される患者はまた、任意選択的に、任意の処置コース中及びこの後においてモニタリングもされる。代替的に、前記方法は、軽度ＴＢＩ又は中等度ＴＢＩを有すると評価された対象（まだ今のところ処置を受けていない可能性がある対象のような対象）をモニタリングするステップをさらに含みうる。
【００２２】
さらに別の態様において、本開示は、頭部損傷を負った、又は負った可能性があるヒト対象における外傷性脳損傷の程度を決定する一助となる方法に関する。例えば、方法は、
ａ）推測される頭部損傷から２４時間以内に対象から採取された第１の試料、及び第１の試料が採取された約３〜約６時間後に対象から採取された第２の試料である、対象から得られた少なくとも２つの試料に対するアッセイを実施するステップ；
ｂ）少なくとも２つの試料中に、ユビキチンカルボキシ末端ヒドロラーゼＬ１（ＵＣＨ−Ｌ１）からなる外傷性脳損傷の早期バイオマーカーを検出するステップ；
ｃ）第１の試料及び第２の試料の各々におけるＵＣＨ−Ｌ１のレベルを決定し、ＵＣＨ−Ｌ１のレベルが、第１の試料から第２の試料へ、低下又は上昇するのかどうかを決定するステップ；及び
ｄ）ＵＣＨ−Ｌ１のレベルが、第１の試料から第２の試料へ、低下するのか、上昇するのか、又は同じレベルを維持するのかに基づき、対象における外傷性脳損傷の程度を決定するステップであって、対象が、軽度又は中等度〜重度の外傷性脳損傷を負っているのかどうかを決定することを含む、外傷性脳損傷の程度を決定するステップ
を含みうる。
【００２３】
ヒト対象における外傷性脳損傷の程度を決定する一助となるための、上記の方法において、ＵＣＨ−Ｌ１の存在の開始（ステップｂにおける存在の開始のような）は、推測される頭部損傷後、約０〜約６時間以内に現れる。
【００２４】
さらに別の態様において、本開示は、ヒト対象における外傷性脳損傷（ＴＢＩ）の程度を査定する方法に関する。例えば、方法は、
ａ）アッセイを実施して、推測される頭部損傷から２４時間以内に、対象から採取された第１の試料、及び第１の試料が採取された、約３〜約６時間後に、対象から採取された第２の試料である、対象から得られた、少なくとも２つの試料中の、ユビキチンカルボキシ末端ヒドロラーゼＬ１（ＵＣＨ−Ｌ１）を定量するステップ；並びに
ｂ）ＵＣＨ−Ｌ１のレベルが、第１の試料から第２の試料へ、低下するのか、上昇するのか、又は同じレベルを維持するのかに基づき、対象におけるＴＢＩの程度を決定するステップであって、対象が、軽度又は中等度〜重度の外傷性脳損傷を負っているのかどうかを決定することを含む、外傷性脳損傷の程度を決定するステップ
を含みうる。
【００２５】
ＴＢＩの程度を決定又は査定するための、上記において記載された方法において、第１の試料は、推測される頭部損傷後、約０〜約６時間以内に採取されうる。
【００２６】
ＴＢＩの程度を決定又は査定するための、上記において記載された方法において、対象は、ＵＣＨ−Ｌ１のレベルが、第１の試料から第２の試料へ、少なくとも約２０ｐｇ／ｍＬ〜少なくとも約６１００ｐｇ／ｍＬの間で上昇又は低下する場合に、中等度〜重度のＴＢＩを有することが決定されうる。
【００２７】
ＴＢＩの程度を決定又は査定するための、上記において記載された方法において、第１の試料は、（ａ）推測される頭部損傷後、約０〜約６時間以内に採取される場合があり、ＵＣＨ−Ｌ１のレベルは、少なくとも約２５２８ｐｇ／ｍＬ上昇若しくは低下する；（ｂ）推測される頭部損傷後、約６〜約１２時間以内に採取される場合があり、ＵＣＨ−Ｌ１のレベルは、少なくとも約１２９ｐｇ／ｍＬ上昇若しくは低下する；（ｃ）推測される頭部損傷後、約０〜約１０時間以内に採取される場合があり、ＵＣＨ−Ｌ１のレベルは、少なくとも約２５ｐｇ／ｍＬ上昇若しくは低下する；（ｄ）推測される頭部損傷後、約０〜約１１時間以内に採取される場合があり、ＵＣＨ−Ｌ１のレベルは、少なくとも約２５ｐｇ／ｍＬ上昇若しくは低下する；又は（ｅ）推測される頭部損傷後、約０〜約１２時間以内に採取される場合があり、ＵＣＨ−Ｌ１のレベルは、少なくとも約１２９ｐｇ／ｍＬ上昇若しくは低下する。
【００２８】
ＴＢＩの程度を決定又は査定するための、上記において同定された方法において、試料（又は生物学的試料）は、全血試料、血清試料又は血漿試料でありうる。具体的に、試料（又は生物学的試料）は、全血試料でありうる。代替的に、試料（又は生物学的試料）は、血清試料でありうる。代替的に、試料（又は生物学的試料）は、血漿試料でありうる。
【００２９】
ＴＢＩの程度を決定又は査定するための、上記において記載された方法において、ＵＣＨ−Ｌ１は、イムノアッセイを使用して測定又は検出されうる。上記において記載された方法における、別の態様において、試料（又は生物学的試料）は、全血試料であることが可能であり、ＵＣＨ−Ｌ１は、イムノアッセイを使用して測定又は検出されうる。上記において記載された方法における、別の態様において、試料（又は生物学的試料）は、血清試料であることが可能であり、ＵＣＨ−Ｌ１は、イムノアッセイを使用して測定又は検出されうる。上記において記載された方法における、別の態様において、試料（又は生物学的試料）は、血漿試料であることが可能であり、ＵＣＨ−Ｌ１は、イムノアッセイを使用して測定又は検出されうる。
【００３０】
ＴＢＩの程度を決定又は査定するための、上記において記載された方法は、軽度又は中等度〜重度のＴＢＩを有すると評価されたヒト対象を、ＴＢＩのための処置により処置するステップをさらに含みうる。したがって、ＴＢＩのために処置される患者はまた、任意選択的に、本明細書において記載された通りに、任意の処置コース中及びこの後においてモニタリングもされる。代替的に、前記方法は、軽度ＴＢＩ又は中等度ＴＢＩを有すると評価された対象（まだ今のところ処置を受けていない可能性がある対象のような対象）をモニタリングするステップをさらに含みうる。
【００３１】
さらに別の態様において、本開示は、頭部損傷を負った、又は負った可能性があるヒト対象に対して、頭部コンピュータ断層撮影（ＣＴ）スキャンを実施するのかどうかの決定の一助となる方法に関する。例えば、方法は、推測される頭部損傷から２４時間以内に、対象から採取された第１の試料、及び第１の試料が採取された、約３〜約６時間後に、対象から採取された第２の試料である、対象から得られた、少なくとも２つの試料中の、ユビキチンカルボキシ末端ヒドロラーゼＬ１（ＵＣＨ−Ｌ１）を検出又は測定するアッセイを実施するステップ；
ａ）第１の試料及び第２の試料の各々におけるＵＣＨ−Ｌ１のレベルを決定し、ＵＣＨ−Ｌ１のレベルが、第１の試料から第２の試料へ、低下又は上昇するのかどうかを決定するステップ；及び
ｂ）ＵＣＨ−Ｌ１のレベルが、第１の試料から第２の試料へ、低下するのか、上昇するのか、同じレベルを維持するのかに基づき、対象に対して、ＣＴスキャンを実施するのかどうかを決定するステップであって、
（ｉ）ＵＣＨ−Ｌ１の、第１の試料中レベルが、ＵＣＨ−Ｌ１の基準レベルより高い場合に、ＣＴスキャンが実施され、ＵＣＨ−Ｌ１の、第１の試料中レベルが、ＵＣＨ−Ｌ１の基準レベルより低い場合に、ＣＴスキャンが実施されない；
（ｉｉ）ＵＣＨ−Ｌ１の、第１の試料中レベルから、ＵＣＨ−Ｌ１の、第２の試料中レベルへの、統計学的に有意な上昇若しくは低下が見られる場合に、ＣＴスキャンが実施され、ＵＣＨ−Ｌ１の、第１の試料中レベルから、ＵＣＨ−Ｌ１の、第２の試料中レベルへの、統計学的に有意な上昇若しくは低下が見られない場合に、ＣＴスキャンが実施されない；又は
（ｉｉｉ）ＵＣＨ−Ｌ１のレベルが、第１の試料から第２の試料へ、少なくとも絶対量の低下若しくは上昇する場合に、ＣＴスキャンが実施され、ＵＣＨ−Ｌ１のレベルの、第１の試料から、第２の試料への、少なくとも絶対量の低下若しくは上昇が見られない場合に、ＣＴスキャンが実施されない
ステップ
を含みうる。
【００３２】
さらに別の態様において、本開示は、ヒト対象に対して、頭部コンピュータ断層撮影（ＣＴ）スキャンを実施するのかどうかを査定する方法に関する。例えば、方法は、
ａ）アッセイを実施して、推測される頭部損傷後、約２４時間以内に、対象から採取された第１の試料、及び第１の試料が採取された、約３〜約６時間後に、対象から採取された第２の試料である、対象から得られた、少なくとも２つの試料中の、ユビキチンカルボキシ末端ヒドロラーゼＬ１（ＵＣＨ−Ｌ１）を定量するステップ；並びに
ｂ）ＵＣＨ−Ｌ１のレベルが、第１の試料から第２の試料へ、低下するのか、上昇するのか、又は同じレベルを維持するのかに基づき、対象に対して、ＣＴスキャンを実施するのかどうかを決定するステップであって、
（ｉ）ＵＣＨ−Ｌ１の第１の試料中レベルがＵＣＨ−Ｌ１の基準レベルより高い場合に、ＣＴスキャンが実施され、ＵＣＨ−Ｌ１の第１の試料中レベルがＵＣＨ−Ｌ１の基準レベルより低い場合に、ＣＴスキャンが実施されない；
（ｉｉ）ＵＣＨ−Ｌ１の第１の試料中レベルからＵＣＨ−Ｌ１の第２の試料中レベルへ、統計学的に有意な上昇若しくは低下が見られる場合に、ＣＴスキャンが実施され、ＵＣＨ−Ｌ１の第１の試料中レベルからＵＣＨ−Ｌ１の第２の試料中レベルへ、統計学的に有意な上昇若しくは低下が見られない場合に、ＣＴスキャンが実施されない；又は
（ｉｉｉ）ＵＣＨ−Ｌ１のレベルが、第１の試料から第２の試料へ、少なくとも絶対量の低下若しくは上昇をする場合に、ＣＴスキャンが実施され、ＵＣＨ−Ｌ１のレベルの第１の試料から第２の試料へ、少なくとも絶対量の低下若しくは上昇が見られない場合に、ＣＴスキャンが実施されない
ステップ
を含みうる。
【００３３】
頭部ＣＴを実施するのかどうかを決定又は査定するための、上記において記載された方法において、第１の時点は、推測される頭部損傷の約０〜約１２時間後であることが可能であり、統計学的に有意な上昇若しくは低下は、第１の時点から第２の時点へ、約２倍未満若しくは約２分の１を超える；第１の時点は、推測される頭部損傷の約０〜約１２時間後であることが可能であり、統計学的に有意な上昇若しくは低下は、第１の時点から第２の時点へ、約１．８１倍未満若しくは約１．８１分の１を超える；第１の時点は、推測される頭部損傷の約０〜約１２時間後であることが可能であり、統計学的に有意な上昇は、第２の時点から第１の時点へ、約０．５０倍を超える；第１の時点は、推測される頭部損傷の約０〜約１２時間後であることが可能であり、統計学的に有意な上昇は、第２の時点から第１の時点へ、約０．５５倍を超える；又は第１の時点は、推測される頭部損傷の約０〜約１２時間後であることが可能であり、ＵＣＨ−Ｌ１の基準レベルは、約５５０ｐｇ／ｍＬであり、統計学的に有意な上昇は、第２の時点から第１の時点へ、約０．５５倍を超える。
【００３４】
頭部ＣＴを実施するのかどうかを決定又は査定するための、上記において記載された方法において、対象は、既に実施されたＣＴスキャンに基づき、外傷性脳損傷を有することが推測されうる。例えば、対象の医学的状態（患者が意識不明である場合のような）に応じて、ＣＴスキャンは、対象が、救急治療室、外傷センター又は他の施設に到着した直後に対象がＴＢＩを有するのかどうかを評価及び／若しくは査定するために、行われうる。このようなＣＴスキャンは、対象が、軽度ＴＢＩ又は中等度若しくは重度のＴＢＩを有するのかどうかを確認及び決定するように、アッセイが実施される前に実施されうる。アッセイが実施された後に、医師による（又は他の医療従事者による）ＴＢＩの管理（例えば、手術による介入及び／又は薬理学的介入が要求されうるのかどうかを決定するためのような）の一部としてのアッセイの結果に基づき、１回以上の、後続のＣＴスキャンが実施されうる。
【００３５】
頭部ＣＴを実施するのかどうかを決定又は査定するための、上記において記載された方法において、基準レベルは、陽性の頭部ＣＴスキャンと相関しうる。
【００３６】
頭部ＣＴを実施するのかどうかを決定又は査定するための、上記において記載された方法において、基準レベルは、（ａ）少なくとも約８０％〜約１００％の間の感度及び少なくとも約３０％〜約１００％の間の特異度を有するアッセイにより決定されうる；（ｂ）少なくとも約５０ｐｇ／ｍＬ〜約１０００ｐｇ／ｍＬの間でありうる；又は（ｃ）少なくとも約８６ｐｇ／ｍＬ〜約７００ｐｇ／ｍＬの間でありうる。
【００３７】
頭部ＣＴを実施するのかどうかを決定又は査定するための、上記において記載された方法において、試料は、（ａ）推測される頭部損傷後、約０〜約６時間以内に採取される場合があり、基準レベルは、約１００％の感度及び少なくとも約３７．５％の特異度を有するアッセイにより決定される；（ｂ）推測される頭部損傷後、約０〜約６時間以内に採取される場合があり、基準レベルは、約１００％の感度及び少なくとも約７５％の特異度を有するアッセイにより決定される；（ｃ）推測される頭部損傷後、約６時間〜約１２時間の間に採取される場合があり、少なくとも約９６％の感度及び少なくとも約３０％の特異度を有するアッセイにより決定される；（ｄ）推測される頭部損傷後、約６時間〜約１２時間の間に採取される場合があり、少なくとも約８６％の感度及び少なくとも約３５％の特異度を有するアッセイにより決定される；又は（ｅ）推測される頭部損傷後、約０時間〜約１２時間の間に採取される場合があり、基準レベルは、約１００％の感度及び少なくとも約３２％の特異度を有するアッセイにより決定される。
【００３８】
頭部ＣＴを実施するのかどうかを決定又は査定するための、上記において記載された方法において、試料は、（ａ）推測される頭部損傷後、約０〜約６時間以内に採取される場合があり、基準レベルは、約３７０ｐｇ／ｍＬである；（ｂ）推測される頭部損傷後、約０〜約６時間以内に採取される場合があり、基準レベルは、約５０９ｐｇ／ｍＬである；（ｃ）推測される頭部損傷後、約６時間〜約１２時間の間に採取される場合があり、基準レベルは、約９６ｐｇ／ｍＬである；（ｄ）推測される頭部損傷後、約６時間〜約１２時間の間に採取される場合があり、基準レベルは、約８６ｐｇ／ｍＬである；又は（ｅ）推測される頭部損傷後、約６時間〜約１２時間の間に採取される場合があり、基準レベルは、約５５０ｐｇ／ｍＬである。
【００３９】
頭部ＣＴを実施するのかどうかを決定又は査定するための、上記において記載された方法において、絶対量は、陽性の頭部ＣＴスキャンと相関する。
【００４０】
頭部ＣＴを実施するのかどうかを決定又は査定するための、上記において記載された方法において、絶対量は、少なくとも約８０％〜約１００％の間の感度及び少なくとも約３０％〜約１００％の間の特異度を有するアッセイにより決定されうる。
【００４１】
頭部ＣＴを実施するのかどうかを決定又は査定するための、上記において記載された方法において、試料は、（ａ）推測される頭部損傷後、約０〜約１０時間以内に採取される場合があり、絶対量は、少なくとも約８５％の感度及び少なくとも約４１％の特異度を有するアッセイにより決定される；又は（ｂ）推測される頭部損傷後、約０〜約１０時間以内に採取される場合があり、絶対量は、少なくとも約９０％の感度及び少なくとも約３５％の特異度を有するアッセイにより決定される。
【００４２】
頭部ＣＴを実施するのかどうかを決定又は査定するための、上記において記載された方法において、試料は、（ａ）推測される頭部損傷後、約０〜約１０時間以内に採取される場合があり、絶対量は、約２５ｐｇ／ｍＬである；又は（ｂ）推測される頭部損傷後、約０〜約１０時間以内に採取される場合があり、絶対量は、約２３ｐｇ／ｍＬである。
【００４３】
頭部ＣＴを実施するのかどうかを決定又は査定するための、上記において記載された方法は、軽度又は中等度〜重度のＴＢＩを有すると評価されたヒト対象を、ＴＢＩのための処置により処置するステップをさらに含みうる。したがって、ＴＢＩのために処置される患者はまた、任意選択的に、任意の処置コース中及びこの後においてモニタリングもされる。代替的に、前記方法は、軽度ＴＢＩ又は中等度ＴＢＩを有すると評価された対象（まだ今のところ処置を受けていない可能性がある対象のような対象）をモニタリングするステップをさらに含みうる。
【００４４】
頭部ＣＴを実施するのかどうかを決定又は査定するための、上記において同定された方法において、試料（又は生物学的試料）は、全血試料、血清試料又は血漿試料でありうる。具体的に、試料（又は生物学的試料）は、全血試料でありうる。代替的に、試料（又は生物学的試料）は、血清試料でありうる。代替的に、試料（又は生物学的試料）は、血漿試料でありうる。
【００４５】
頭部ＣＴを実施するのかどうかを決定又は査定するための、上記において記載された方法において、ＵＣＨ−Ｌ１は、イムノアッセイを使用して測定又は検出されうる。上記において記載された方法の別の態様において、試料（又は生物学的試料）は、全血試料であることが可能であり、ＵＣＨ−Ｌ１は、イムノアッセイを使用して測定又は検出されうる。上記において記載された方法における、別の態様において、試料（又は生物学的試料）は、血清試料であることが可能であり、ＵＣＨ−Ｌ１は、イムノアッセイを使用して測定又は検出されうる。上記において記載された方法における、別の態様において、試料（又は生物学的試料）は、血漿試料であることが可能であり、ＵＣＨ−Ｌ１は、イムノアッセイを使用して測定又は検出されうる。
【００４６】
上記において記載された方法のうちのいずれかにおいて、一部の実施形態において、第２の試料は、推測される頭部損傷後、約５時間〜約１６時間又は約３時間〜約６時間の間に、対象から採取されうる。より具体的に、第２の試料は、推測される頭部損傷の約３時間、約４時間、約５時間、約６時間、約７時間、約８時間、約９時間、約１０時間、約１１時間又は約１２時間後に、対象から採取されうる。
【００４７】
上記において記載された方法のうちのいずれかは、試料に対するアッセイを実施して、ＵＣＨ−Ｌ１ではない、１つ以上の、他のバイオマーカーのレベルを測定又は検出するステップをさらに含みうる。
【００４８】
上記において記載された方法のうちのいずれかにおいて、アッセイは、
（ａ）１つ以上の、他のバイオマーカーの、第１の試料中レベル及び第２の試料中レベルを測定又は検出するステップ、
（ｂ）１つ以上の、他のバイオマーカーのレベルの、第１の試料から、第２の試料への低下又は上昇を決定するステップ、及び
（ｃ）１つ以上の、他のバイオマーカーの、第１の試料中レベルから、１つ以上の、他のバイオマーカーの、第２の試料中レベルへの、統計学的に有意な低下又は上昇が見られる場合に、対象を、軽度ＴＢＩを有すると評価するステップ
を含みうる。
【００４９】
上記において記載された方法において、１つ以上の、他のバイオマーカーは、Ｓ１００β、ニューロン特異的エノラーゼ（ＮＳＥ）、グリア細胞線維性酸性タンパク質（ＧＦＡＰ）、アポリポタンパク質１、タウ、Ｃ反応性タンパク質（ＣＲＰ）、遊離脳由来神経栄養因子（ＢＤＮＦ）、ｐ−タウ、総ＢＤＮＦ、トロポニンＩ（ＴｎＩ）及びこれらの組合せからなる群から選択される。より具体的に、１つ以上の、他のバイオマーカーは、Ｓ１００β、ＢＤＮＦ又はＣＲＰである。
【００５０】
上記において記載された方法のうちのいずれかにおいて、ＵＣＨ−Ｌ１のレベルは、イムノアッセイを実施することにより測定されうる。例えば、ＵＣＨ−Ｌ１のレベルは、
（ａ）試料を、同時に、又は任意の順序において逐次的に、
（１）ＵＣＨ−Ｌ１上又はＵＣＨ−Ｌ１断片上のエピトープに結合して捕捉抗体−ＵＣＨ−Ｌ１抗原複合体を形成する捕捉抗体、及び
（２）検出可能な標識を含み、捕捉抗体が結合していないＵＣＨ−Ｌ１上のエピトープに結合してＵＣＨ−Ｌ１抗原−検出抗体複合体を形成する検出抗体
と接触させることにより、捕捉抗体−ＵＣＨ−Ｌ１抗原−検出抗体複合体が形成されること、並びに
（ｂ）ＵＣＨ−Ｌ１の、試料中量又は試料中濃度を、捕捉抗体−ＵＣＨ−Ｌ１抗原−検出抗体複合体内の検出可能な標識により発生したシグナルに基づき測定すること
により測定されうる。
【００５１】
上記において記載された方法のうちのいずれかにおいて、試料は、全血試料、血清試料、脳脊髄液試料又は血漿試料でありうる。一態様において、試料は、全血試料である。別の態様において、試料は、血清試料である。さらに別の態様において、試料は、血漿試料である。このような試料は、様々な方式により得られうる。例えば、試料は、対象が、物理的振盪、閉鎖性頭部外傷若しくは開放性頭部外傷を結果としてもたらす外部の機械的力若しくは他の力、１回以上の転倒、爆発又は爆破による鈍的衝撃により引き起こされた頭部損傷、又は他の種類の鈍的外傷を負った後に、得られうる。代替的に、対象が、化学物質、毒素又は化学物質と毒素との組合せを摂取した、又はこれらへと曝露された後において、試料が得られうる。化学物質又は毒素の例は、火、カビ、アスベスト、害虫駆除剤、殺虫剤、有機溶剤、塗料、糊、ガス、有機金属、乱用薬物又はこれらの１つ以上の組合せである。なお、さらに、試料は、自己免疫疾患、代謝性障害、脳腫瘍、低酸素症、ウイルス、髄膜炎、水頭症又はこれらの組合せを患う対象から得られうる。
【００５２】
上記において記載された方法のうちのいずれかは、ヒト対象の臨床状態、ヒト対象の検査値、軽度又は中等度〜重度のＴＢＩを患うものとしての、ヒト対象の分類、ヒト対象による、低レベル又は高レベルのＵＣＨ−Ｌ１の呈示、及びヒト対象が、頭部損傷を負った可能性がある、任意の事象のタイミングからなる群から選択された因子に関わらず、任意のヒト対象に対して実行されうる。
【図面の簡単な説明】
【００５３】
【図１】損傷からの時間と対比した、バイオマーカーであるＵＣＨ−Ｌ１についての結果を示す図である。
【図２】ＣＴと相関するＵＣＨ−Ｌ１レベルについての、時点によるＲＯＣ（ｒｅｃｅｉｖｅｒ  ｏｐｅｒａｔｉｎｇ  ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃ）解析を示す図である。
【図３】ＣＴと相関する、時点１と比較した、時点２におけるＵＣＨ−Ｌ１レベルの変化（「デルタ」（すなわち、時点２−時点１））についての、ＲＯＣ（ｒｅｃｅｉｖｅｒ  ｏｐｅｒａｔｉｎｇ  ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃ）解析を示す図である。
【図４】ＣＴと相関する、ＵＣＨ−Ｌ１結果の絶対量（「絶対デルタ」）（すなわち、時点２におけるＵＣＨ−Ｌ１レベルと、時点１におけるＵＣＨ−Ｌ１レベルとの絶対差違）についての、ＲＯＣ（ｒｅｃｅｉｖｅｒ  ｏｐｅｒａｔｉｎｇ  ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃ）解析を示す図である。
【図５】時点によるＵＣＨ−Ｌ１アッセイ結果についての箱髭図を示す図である。
【図６】時点による検査結果についての、アッセイ反応速度Ｚスコア中央値を示す図である。
【図７Ａ】陰性のＣＴスキャン結果と対比した、陽性のＣＴスキャン結果と相関する、時点１（頭部損傷後０〜６時間以内に採取された）及び時点２（時点１の試料の３〜６時間後に採取された）におけるＵＣＨ−Ｌ１アッセイ結果についての箱髭図である。
【図７Ｂ】陰性のＣＴスキャン結果と対比した、陽性のＣＴスキャン結果と相関する、時点１及び時点２におけるＵＣＨ−Ｌ１アッセイ結果についてのＲＯＣ曲線を示す図である。
【図８Ａ】陰性のＣＴスキャン結果と対比した、陽性のＣＴスキャン結果と相関する、時点１（頭部損傷後６〜１２時間以内に採取された）及び時点２（時点１の試料の３〜６時間後に採取された）におけるＵＣＨ−Ｌ１アッセイ結果についての箱髭図である。
【図８Ｂ】陰性のＣＴスキャン結果と対比した、陽性のＣＴスキャン結果と相関する、時点１及び時点２におけるＵＣＨ−Ｌ１アッセイ結果についてのＲＯＣ曲線を示す図である。
【図９Ａ】第１の試料をいつ採取したのかについての時間範囲による、陰性のＣＴスキャン結果と対比した、陽性のＣＴスキャン結果と相関する、時点２と時点１との差違又は変化（「デルタ」）によるＵＣＨ−Ｌ１アッセイ結果についての箱髭図である。図９Ａは、０〜６時間群についての箱髭図を示す。
【図９Ｂ】第１の試料をいつ採取したのかについての時間範囲による、陰性のＣＴスキャン結果と対比した、陽性のＣＴスキャン結果と相関する、時点２と時点１との差違又は変化（「デルタ」）によるＵＣＨ−Ｌ１アッセイ結果についての箱髭図である。図９Ｂは、６〜１２時間群についての箱髭図を示す。
【図１０Ａ】第１の試料をいつ採取したのかについての時間範囲による、陰性のＣＴスキャン結果と対比した、陽性のＣＴスキャン結果と相関する、ＵＣＨ−Ｌ１結果の絶対量（「絶対デルタ」）（すなわち、時点２と、時点１との絶対差違）についての箱髭図である。図１０Ａは、０〜６時間群についての箱髭図を示す。
【図１０Ｂ】第１の試料をいつ採取したのかについての時間範囲による、陰性のＣＴスキャン結果と対比した、陽性のＣＴスキャン結果と相関する、ＵＣＨ−Ｌ１結果の絶対量（「絶対デルタ」）（すなわち、時点２と、時点１との絶対差違）についての箱髭図である。図１０Ｂは、６〜１２時間群についての箱髭図を示す。
【図１１Ａ】中等度の／重度のＴＢＩ  ＧＣＳスコアと対比した、軽度ＴＢＩ  ＧＣＳスコアと相関する、時点１（頭部損傷後０〜６時間以内に採取された）及び時点２（時点１の試料の３〜６時間後に採取された）におけるＵＣＨ−Ｌ１アッセイ結果についての箱髭図である。
【図１１Ｂ】中等度の／重度のＴＢＩ  ＧＣＳスコアと対比した、軽度ＴＢＩ  ＧＣＳスコアと相関する、時点１及び時点２におけるＵＣＨ−Ｌ１アッセイ結果についてのＲＯＣ曲線を示す図である。
【図１２Ａ】中等度の／重度のＴＢＩ  ＧＣＳスコアと対比した、軽度ＴＢＩ  ＧＣＳスコアと相関する、時点１（頭部損傷後６〜１２時間以内に採取された）及び時点２（時点の１試料の３〜６時間後に採取された）におけるＵＣＨ−Ｌ１アッセイ結果についての箱髭図である。
【図１２Ｂ】中等度の／重度のＴＢＩ  ＧＣＳスコアと対比した、軽度ＴＢＩ  ＧＣＳスコアと相関する、時点１及び時点２におけるＵＣＨ−Ｌ１アッセイ結果についてのＲＯＣ曲線を示す図である。
【図１３Ａ】第１の試料をいつ採取したのかについての時間範囲による、中等度の／重度のＴＢＩ  ＧＣＳスコアと対比した、軽度ＴＢＩ  ＧＣＳスコアと相関する、時点２と時点１との差違又は変化（「デルタ」）によるＵＣＨ−Ｌ１アッセイ結果についての箱髭図である。図１３Ａは、０〜６時間群についての箱髭図を示す。
【図１３Ｂ】第１の試料をいつ採取したのかについての時間範囲による、中等度の／重度のＴＢＩ  ＧＣＳスコアと対比した、軽度ＴＢＩ  ＧＣＳスコアと相関する、時点２と時点１との差違又は変化（「デルタ」）によるＵＣＨ−Ｌ１アッセイ結果についての箱髭図である。図１３Ｂは、６〜１２時間群についての箱髭図を示す。
【図１４Ａ】中等度の／重度のＴＢＩ  ＧＣＳスコアと対比した、軽度ＴＢＩ  ＧＣＳスコアと相関する、絶対量（「絶対デルタ」）によるＵＣＨ−Ｌ１アッセイ結果（すなわち、時点１（頭部損傷後０〜６時間以内に採取された）と、時点２（時点１の試料の３〜６時間後に採取された）との絶対差違）についての箱髭図である。
【図１４Ｂ】中等度の／重度のＴＢＩ  ＧＣＳスコアと対比した、軽度ＴＢＩ  ＧＣＳスコアと相関する、絶対量（「絶対デルタ」）によるＵＣＨ−Ｌ１アッセイ結果についてのＲＯＣ曲線を示す図である。
【図１５Ａ】中等度の／重度のＴＢＩ  ＧＣＳスコアと対比した、軽度ＴＢＩ  ＧＣＳスコアと相関する、ＵＣＨ−Ｌ１結果の絶対量（「絶対デルタ」）（すなわち、時点１（頭部損傷後６〜１２時間以内に採取された）と、時点２（時点１の試料の３〜６時間後に採取された）との絶対差違）についての箱髭図である。
【図１５Ｂ】中等度の／重度のＴＢＩ  ＧＣＳスコアと対比した、軽度ＴＢＩ  ＧＣＳスコアと相関する、ＵＣＨ−Ｌ１結果の絶対量（「絶対デルタ」）についてのＲＯＣ曲線を示す図である。
【図１６】中等度の／重度のＴＢＩ  ＧＣＳスコアと対比した、軽度ＴＢＩ  ＧＣＳスコアと相関する、時点１（頭部損傷後０〜６時間以内に採取された）と、時点２（時点１の試料の３〜６時間後に採取された）との、ＵＣＨ−Ｌ１レベルの倍数変化についてのＲＯＣ曲線を示す図である。
【図１７】ＣＴスキャンと相関する、ＵＣＨ−Ｌ１結果の絶対量（「絶対デルタ」）（すなわち、時点１（頭部損傷後０〜１０時間以内に採取された）と、時点２（時点１の試料の３〜６時間後に採取された）との絶対差違）についてのＲＯＣ曲線を示す図である。
【図１８】ＣＴスキャンと相関する、ＵＣＨ−Ｌ１結果の絶対量（「絶対デルタ」）（すなわち、時点１（頭部損傷の１０時間を超える時間後に採取された）と、時点２（時点１の試料の３〜６時間後に採取された）との絶対差違）についてのＲＯＣ曲線を示す図である。
【図１９】中等度の／重度のＴＢＩ  ＧＣＳスコアと対比した、軽度ＴＢＩ  ＧＣＳスコアと相関する、ＵＣＨ−Ｌ１結果の絶対量（「絶対デルタ」）（すなわち、時点１（頭部損傷後０〜１１時間以内に採取された）と、時点２（時点１の試料の３〜６時間後に採取された）との絶対差違）についてのＲＯＣ曲線を示す図である。
【図２０】中等度の／重度のＴＢＩ  ＧＣＳスコアと対比した、軽度ＴＢＩ  ＧＣＳスコアと相関する、ＵＣＨ−Ｌ１結果の絶対量（「絶対デルタ」）（すなわち、時点１（頭部損傷の１１時間を超える時間後に採取された）と、時点２（時点１の試料の３〜６時間後に採取された）との絶対差違）についてのＲＯＣ曲線を示す図である。
【図２１】中等度の／重度のＴＢＩ  ＧＣＳスコアと対比した、軽度ＴＢＩ  ＧＣＳスコアと相関する、ＵＣＨ−Ｌ１結果の絶対量（「絶対デルタ」）（すなわち、時点１（頭部損傷後０〜１０時間以内に採取された）と、時点２（時点１の試料の３〜６時間後に採取された）との絶対差違）についてのＲＯＣ曲線を示す図である。
【図２２】中等度の／重度のＴＢＩ  ＧＣＳスコアと対比した、軽度ＴＢＩ  ＧＣＳスコアと相関する、ＵＣＨ−Ｌ１結果の絶対量（「絶対デルタ」）（すなわち、時点１（頭部損傷の１２時間を超える時間後に採取された）と、時点２（時点１の試料の３〜６時間後に採取された）との絶対差違）についてのＲＯＣ曲線を示す図である。
【発明を実施するための形態】
【００５４】
本発明は、早期バイオマーカーであるユビキチンカルボキシ末端ヒドロラーゼＬ１（ＵＣＨ−Ｌ１）を使用して、軽度又は中等度〜重度の外傷性脳損傷（ＴＢＩ）のような、頭部への損傷を負っている対象（例えば、ヒト対象のような）の診断及び査定の一助となる方法に関する。これらの方法は、頭部への損傷又は頭部への推測される損傷から２４時間以内の異なる時点において対象から採取された１つ以上の試料（例えば、生物学的試料のような）中のＵＣＨ−Ｌ１レベルを検出するステップを伴う。頭部への損傷後又は推測される損傷後最初の２４時間以内におけるその後のＵＣＨ−Ｌ１レベルの低下に後続されうる、ＵＣＨ−Ｌ１レベルの上昇（ｉｎｃｒｅａｓｅ）又は上昇（ｅｌｅｖａｔｅｄ）の検出は、対象を正確に査定又は診断すること、及びこれにより、その後の早期処置を可能とし、軽度又は中等度〜重度の外傷性脳損傷を伴う患者をモニタリングする一助を提供する。例えば、損傷又は推測される損傷後２〜６時間以内のように最初の６時間以内に採取された第１の試料中の、第１の試料が採取された３〜６時間後のような約０．５〜１０時間後に採取された第２の試料中と比較した、ＵＣＨ−Ｌ１レベルの統計学的に有意な変化を有する対象は、中等度〜重度の外傷性脳損傷を有する対象として同定されうる。別の例において、基準レベルより高いＵＣＨ−Ｌ１レベルを有する対象もまた、中等度〜重度の外傷性脳損傷を有する対象として同定されうる。別の例において、少なくとも、絶対量の上昇又は低下を有する対象もまた、中等度〜重度の外傷性脳損傷を有する対象として同定されうる。
【００５５】
本発明はまた、頭部への損傷を負っている対象が、ＵＣＨ−Ｌ１のレベルに基づく、頭部コンピュータ断層撮影（ＣＴ）スキャンから利益を得、したがって、ＣＴスキャンを受けるのかどうかを決定する一助となる方法にも関する。これらの方法は、頭部への損傷又は頭部への、推測される損傷から２４時間以内の、異なる時点において、対象から採取された、１つ以上の試料中のＵＣＨ−Ｌ１レベルを検出するステップを伴う。頭部への損傷後又は推測される損傷後、最初の２４時間以内に、その後のＵＣＨ−Ｌ１レベルの低下に後続されうる、ＵＣＨ−Ｌ１レベルの上昇（ｉｎｃｒｅａｓｅ）又は上昇（ｅｌｅｖａｔｅｄ）の検出は、対象が、頭部ＣＴスキャンを受けるべきであるのかどうかを決定する一助を提供する。例えば、損傷又は推測される損傷後２〜６時間以内のように最初の６時間以内に採取された第１の試料中の、第１の試料が採取された３〜６時間後のような約０．５〜１０時間後に採取された第２の試料中と比較した、ＵＣＨ−Ｌ１レベルの統計学的に有意な変化を有する対象は、頭部ＣＴスキャンが陽性となる可能性が高く、したがって、ＣＴスキャンを施されることから利益を得る対象として同定されうる。別の例において、基準レベルより高いＵＣＨ−Ｌ１レベルを有する対象もまた、頭部ＣＴスキャンが陽性となる可能性が高く、したがって、ＣＴスキャンを施されることから利益を得る対象として同定されうる。別の例において、少なくとも、絶対量の上昇又は低下を有する対象もまた、頭部ＣＴスキャンが陽性となる（したがって、例えば、潜在的なＴＢＩを指し示す）可能性が高く、したがって、ＣＴスキャンを施されることから利益を得る対象として同定されうる。
【００５６】
本明細書の本節及び全開示において使用された節の小見出しは、構成上の目的だけのものであり、限定的であることを意図するものではない。
【００５７】
１．定義
そうでないことが規定されない限りにおいて、本明細書において使用された、全ての技術用語及び科学用語は、当業者により一般に理解される意味と同じ意味を有する。齟齬が生じる場合は、定義を含む本文献に従う。本発明の実施又は試験において、本明細書において記載された方法及び材料と同様又は同等な方法及び材料も使用されうるが、下記において、好ましい方法及び材料について記載される。本明細書において言及された、全ての刊行物、特許出願、特許及び他の参考文献は、参照によりそれらの全体において組み込まれる。本明細書において開示された材料、方法及び例は、例示的なものであるに過ぎず、限定を意図するものではない。
【００５８】
本明細書において使用された「〜を含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅ（ｓ））」、「〜を含む（ｉｎｃｌｕｄｅ（ｓ））」「〜を有すること」、「〜を有する」、「〜でありうる」、「〜を含有する」という用語は、さらなる行為又は構造の可能性を除外しない、オープンエンドな移行句、移行用語又は移行語である。単数形の「ある」及び「その」は、文脈によりそうでないことが明らかに指示されない限りにおいて、複数の指示対象を含む。本開示はまた、明示されているのであれ、そうでないのであれ、本明細書において提示された実施形態又は要素「を含み」、これら「からなり」、これら「から本質的になる」、他の実施形態も想定する。
【００５９】
本明細書において、数値範囲を列挙するために、それらの間に介在する、同じ精度を伴う各数が明示的に想定される。例えば、６〜９の範囲について、６及び９に加えて、７及び８の数も想定され、６．０〜７．０の範囲について、６．０、６．１、６．２、６．３、６．４、６．５、６．６、６．７、６．８、６．９及び７．０の数が、明示的に想定される。
【００６０】
本明細書において「アフィニティー成熟抗体」とは、標的抗原に対する抗体のアフィニティー（すなわち、ＫＤ、ｋｄ又はｋａ）の変更を有さない親抗体と比較した改善を結果としてもたらす、１つ以上のＣＤＲ内の、１カ所以上の変更を伴う抗体を指すように使用される。例示的なアフィニティー成熟抗体は、標的抗原に対する、ナノモル単位なお又はピコモル単位のアフィニティーを有する。ＢｉｏＤｉｓｐｌａｙ法を使用して調製されたコンビナトリアル抗体ライブラリーのスクリーニングを含め、アフィニティー成熟抗体を作製するための様々な手順が当技術分野において公知である。例えば、Ｍａｒｋｓら、ＢｉｏＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙ、１０：７７９〜７８３（１９９２）は、ＶＨとＶＬとのドメインシャッフリングによるアフィニティー成熟について記載している。ＣＤＲ残基及び／又はフレームワーク残基のランダム突然変異誘発については、Ｂａｒｂａｓら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ、９１：３８０９〜３８１３（１９９４）；Ｓｃｈｉｅｒら、Ｇｅｎｅ、１６９：１４７〜１５５（１９９５）；Ｙｅｌｔｏｎら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．、１５５：１９９４〜２００４（１９９５）；Ｊａｃｋｓｏｎら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．、１５４（７）：３３１０〜３３１９（１９９５）及びＨａｗｋｉｎｓら、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．、２２６：８８９〜８９６（１９９２）により記載されている。選択的突然変異誘発位置及び活性増強アミノ酸残基を伴う接触位置はたは超変異位置における選択的突然変異については、米国特許第６，９１４，１２８Ｂ１号において記載されている。
【００６１】
本明細書において使用された「抗体（ａｎｔｉｂｏｄｙ）」及び「抗体（ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ）」とは、モノクローナル抗体、多特異性抗体、ヒト抗体、ヒト化抗体（完全ヒト化抗体又は部分的ヒト化抗体）、鳥類（例えば、アヒル又はガチョウ）抗体、サメ抗体、クジラ抗体及び非霊長動物（例えば、ウシ、ブタ、ラクダ、ラマ、ウマ、ヤギ、ウサギ、ヒツジ、ハムスター、モルモット、ネコ、イヌ、ラット、マウスなど）抗体又は非ヒト霊長動物（例えば、サル、チンパンジーなど）抗体を含む哺乳動物抗体などであるがこれらに限定されない動物抗体、組換え抗体、キメラ抗体、単鎖Ｆｖ（「ｓｃＦｖ」）、単鎖抗体、単一ドメイン抗体、Ｆａｂ断片、Ｆ（ａｂ’）断片、Ｆ（ａｂ’）２断片、ジスルフィド連結型Ｆｖ（「ｓｄＦｖ」）及び抗イディオタイプ（「抗Ｉｄ」）抗体、二重ドメイン抗体、二重可変ドメイン（ＤＶＤ）又は三重可変ドメイン（ＴＶＤ）抗体（二重可変ドメイン免疫グロブリン及びそれらを作り出すための方法について、各々の内容が参照により本明細書に組み込まれるＷｕ，Ｃ．ら、Ｎａｔｕｒｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ、２５（１１）：１２９０〜１２９７（２００７）及びＰＣＴ国際出願第２００１／０５８９５６号において記載されている）並びに上記のうちのいずれかの、機能的に活性なエピトープ結合性断片を指す。特に、抗体は、免疫グロブリン分子及び免疫グロブリン分子の免疫活性断片、すなわち、解析物結合性部位を含有する分子を含む。免疫グロブリン分子は、任意の種類（例えば、ＩｇＧ、ＩｇＥ、ＩｇＭ、ＩｇＤ、ＩｇＡ及びＩｇＹ）、クラス（例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１及びＩｇＡ２）又はサブクラスの分子でありうる。簡潔さのために、本明細書において、解析物に対する抗体は、「抗解析物抗体」又は、単に、「解析物抗体」（例えば、抗ＵＣＨ−Ｌ１抗体又はＵＣＨ−Ｌ１抗体）と称されることが多い。
【００６２】
本明細書において使用された「抗体断片」とは、抗原結合性部位又は可変領域を含む、無傷抗体の部分を指す。部分は、無傷抗体のＦｃ領域の重鎖定常ドメイン（すなわち、抗体アイソタイプに応じて、ＣＨ２、ＣＨ３又はＣＨ４）を含まない。抗体断片の例は、Ｆａｂ断片、Ｆａｂ’断片、Ｆａｂ’−ＳＨ断片、Ｆ（ａｂ’）２断片、Ｆｄ断片、Ｆｖ断片、ダイアボディー、単鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）分子、１つだけの軽鎖可変ドメインを含有する単鎖ポリペプチド、軽鎖可変ドメインの３つのＣＤＲを含有する単鎖ポリペプチド、１つだけの重鎖可変領域を含有する単鎖ポリペプチド及び重鎖可変領域の３つのＣＤＲを含有する単鎖ポリペプチドを含むがこれらに限定されない。
【００６３】
「曲線下面積」又は「ＡＵＣ」とは、ＲＯＣ曲線下面積を指す。ＲＯＣ曲線下ＡＵＣとは、精度についての尺度である。ＡＵＣが１であることが、完全な検査を表すのに対し、ＡＵＣが０．５であることは、非有意な検査を表す。好ましいＡＵＣは、少なくとも約０．７００、少なくとも約０．７５０、少なくとも約０．８００、少なくとも約０．８５０、少なくとも約０．９００、少なくとも約０．９１０、少なくとも約０．９２０、少なくとも約０．９３０、少なくとも約０．９４０、少なくとも約０．９５０、少なくとも約０．９６０、少なくとも約０．９７０、少なくとも約０．９８０、少なくとも約０．９９０又は少なくとも約０．９９５でありうる。
【００６４】
本明細書において、「ビーズ」と「粒子」とは、互換的に使用され、実質的に球形の固体支持体を指す。ビーズ又は粒子の一例は、マイクロ粒子である。本明細書において使用されうるマイクロ粒子は、当技術分野において公知である、任意の種類でありうる。例えば、ビーズ又は粒子は、磁気ビーズ又は磁気粒子でありうる。磁気ビーズ／粒子は、強磁性、フェリ磁性、常磁性、超常磁性又は磁性流体でありうる。例示的な強磁性材料は、Ｆｅ、Ｃｏ、Ｎｉ、Ｇｄ、Ｄｙ、ＣｒＯ２、ＭｎＡｓ、ＭｎＢｉ、ＥｕＯ及びＮｉＯ／Ｆｅを含む。フェリ磁性材料の例は、ＮｉＦｅ２Ｏ４、ＣｏＦｅ２Ｏ４、Ｆｅ３Ｏ４（又はＦｅＯ．Ｆｅ２Ｏ３）を含む。ビーズは、磁性であり、１つ以上の非磁性層により取り囲まれた、固体コア部分を有しうる。代替的に、磁性部分は、非磁性コアの周囲の層でありうる。マイクロ粒子は、本明細書において記載された方法において働く、任意のサイズ、例えば、約０．７５〜約５ｎｍ又は約１〜約５ｎｍ又は約１〜約３ｎｍでありうる。
【００６５】
本明細書において、「結合性タンパク質」とは、例えば、ポリペプチド、抗原、化合物若しくは他の分子、又は任意の種類の基質のような、結合パートナーに結合し、これと共に複合体を形成する、単量体又は多量体のタンパク質を指すように使用される。結合性タンパク質は、結合パートナーに特異的に結合する。結合性タンパク質は、抗体のほか、当技術分野において公知であり、本明細書の下記において記載される、これらの抗原結合性断片及びこれらの他の多様な形態及び誘導体並びに抗原分子又は抗原分子上の特定の部位（エピトープ）に結合する、１つ以上の抗原結合性ドメインを含む他の分子を含む。したがって、結合性タンパク質は、四量体の免疫グロブリンである抗体、ＩｇＧ分子、ＩｇＧ１分子、モノクローナル抗体、キメラ抗体、ＣＤＲグラフト抗体、ヒト化抗体、アフィニティー成熟抗体及び抗原に結合する能力を保持する、任意のこのような抗体の断片を含むがこれらに限定されない。
【００６６】
本明細書において、「二特異性抗体」とは、それらのうちの１つだけが機能的な二特異性抗体である複数の異なる免疫グロブリン分子種を結果としてもたらす形で、クァドローマ技術（Ｍｉｌｓｔｅｉｎら、Ｎａｔｕｒｅ、３０５（５９３４）：５３７〜５４０（１９８３）を参照されたい）、２つの異なるモノクローナル抗体の化学的コンジュゲーション（Ｓｔａｅｒｚら、Ｎａｔｕｒｅ、３１４（６０１２）：６２８〜６３１（１９８５）を参照されたい）、又はＦｃ領域内の突然変異を導入するＫＩＨ（ｋｎｏｂ−ｉｎｔｏ−ｈｏｌｅ）法若しくは同様の手法（Ｈｏｌｌｉｇｅｒら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ、９０（１４）：６４４４〜６４４８（１９９３）を参照されたい）により作出された全長抗体を指すように使用される。二特異性抗体は、その２つの結合性アーム（ＨＣ／ＬＣの１つの対）のうちの１つにおける、１つの抗原（又はエピトープ）に結合し、その第２のアーム（ＨＣ／ＬＣの異なる対）における、異なる抗原（又はエピトープ）に結合する。この定義により、二特異性抗体は、２つの顕著に異なる抗原結合性アーム（特異性配列及びＣＤＲ配列の両方）を有し、それが結合する各抗原について一価である。
【００６７】
本明細書において、「ＣＤＲ」とは、抗体の可変配列内の「相補性決定領域」を指すように使用される。重鎖及び軽鎖の可変領域の各々において、３つずつのＣＤＲが存在する。重鎖又は軽鎖のＮ末端から順に、これらの領域は、可変領域の各々について、「ＣＤＲ１」、「ＣＤＲ２」及び「ＣＤＲ３」と表記されている。本明細書において使用された「ＣＤＲセット」という用語は、単一の可変領域において生じる、３つのＣＤＲの群であって、抗原に結合するＣＤＲの群を指す。したがって、抗原結合性部位は、重鎖可変領域及び軽鎖可変領域の各々に由来するＣＤＲセットを含む、６つのＣＤＲを含みうる。単一のＣＤＲ（例えば、ＣＤＲ１、ＣＤＲ２又はＣＤＲ３）を含むポリペプチドは、「分子認識単位」と称されうる。抗原−抗体複合体についての結晶構造解析は、ＣＤＲのアミノ酸残基が、結合された抗原との、広範な接触部を形成し、この場合、最も広範な抗原の接触部は、重鎖ＣＤＲ３との接触部であることを裏付けている。したがって、分子認識単位は、主に、抗原結合性部位の特異性の一因となりうる。一般に、ＣＤＲ残基は、抗原への結合に対する影響に、直接、かつ、極めて実質的に関与する。
【００６８】
これらのＣＤＲの正確な境界は、異なるシステムに従い、異なる形で規定されている。Ｋａｂａｔ（Ｋａｂａｔら、「Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ（Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ、Ｂｅｔｈｅｓｄａ、Ｍｄ．（１９８７）及び（１９９１））により記載されているシステムは、抗体の任意の可変領域へと適用可能である、明確な残基番号付けシステムを提示するだけではなく、また、３つのＣＤＲを規定する、正確な残基の境界も提示している。これらのＣＤＲは、「Ｋａｂａｔ  ＣＤＲ」と称されうる。Ｃｈｏｔｈｉａ及び同僚（Ｃｈｏｔｈｉａ及びＬｅｓｋ、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．、１９６：９０１〜９１７（１９８７）；並びにＣｈｏｔｈｉａら、Ｎａｔｕｒｅ、３４２：８７７〜８８３（１９８９））は、Ｋａｂａｔ  ＣＤＲ内の、ある特定の下位部分（ｓｕｂ−ｐｏｒｔｉｏｎ）が、アミノ酸配列のレベルにおいて、大きな多様性を有するにもかかわらず、ほぼ同一なペプチド骨格のコンフォメーションを取ることを見出した。これらの下位部分は、「Ｌ」及び「Ｈ」が、それぞれ、軽鎖領域及び重鎖領域を名指す、「Ｌ１」、「Ｌ２」及び「Ｌ３」、又は「Ｈ１」、「Ｈ２」及び「Ｈ３」と名指された。これらの領域は、「Ｃｈｏｔｈｉａ  ＣＤＲ」と称される場合があり、これらは、Ｋａｂａｔ  ＣＤＲと重複する境界を有する。Ｋａｂａｔ  ＣＤＲと重複するＣＤＲを規定する他の境界について、Ｐａｄｌａｎ、ＦＡＳＥＢ  Ｊ．、９：１３３〜１３９（１９９５）；及びＭａｃＣａｌｌｕｍ、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．、２６２（５）：７３２〜７４５（１９９６）により記載されている。さらに他のＣＤＲの境界の定義は、本明細書のシステムの定義に厳密に従わない場合もあり、特定の残基若しくは残基群なお又は全ＣＤＲが、抗原への結合に、著明な影響を及ぼさないという予測又は実験による知見に照らして、短くなる場合もあり、長くなる場合もあるが、それでも、Ｋａｂａｔ  ＣＤＲと重複する。本明細書において使用された方法は、これらのシステムのうちのいずれに従い規定されたＣＤＲも用いうるが、ある特定の実施形態は、Ｋａｂａｔより規定されたＣＤＲ又はＣｈｏｔｈｉａにより規定されたＣＤＲを使用する。
【００６９】
「構成要素（ｃｏｍｐｏｎｅｎｔ）」、「構成要素（ｃｏｍｐｏｎｅｎｔｓ）」又は「少なくとも１つの構成要素」とは、一般に、本明細書において記載された方法及び当技術分野において公知である他の方法に従う、患者の尿試料、全血試料、血清試料又は血漿試料のような被験試料についてのアッセイのためのキット内に含まれうる捕捉抗体、検出試薬又は検出コンジュゲート、較正物質、対照、感度パネル、容器、緩衝液、希釈剤、塩、酵素、酵素に対する補因子、検出試薬、前処理試薬／溶液、基質（例えば、溶液としての）、停止溶液などを指す。一部の構成要素は、溶液でありうる、又はアッセイにおける使用のための復元のために、凍結乾燥させられうる。
【００７０】
本明細書において使用された「ＣＴスキャン」とは、コンピュータ断層撮影（ＣＴ）スキャンを指す。ＣＴスキャンは、異なる角度から得られた、一連のＸ線画像を組み合わせ、コンピュータ処理を使用して、体内の骨、血管及び軟部組織についての断面画像又は切片を創出する。ＣＴスキャンは、Ｘ線ＣＴ、ポジトロン放射断層撮影（ＰＥＴ）、単一光子放射コンピュータ断層撮影（ＳＰＥＣＴ）、コンピュータ軸方向断層撮影（ＣＡＴスキャン）又はコンピュータ支援断層撮影を使用しうる。ＣＴスキャンは、従来のＣＴスキャン又は渦巻き状／らせん状ＣＴスキャンでありうる。従来のＣＴスキャンにおいて、スキャンは、切片ごとに得られ、各切片のスキャンの後、停止及び次の切片への移動、例えば、腹部の上方から、骨盤への移動がなされる。従来のＣＴスキャンは、動きによるアーチファクトを回避するために、患者が息を止めることを要求する。渦巻き状／らせん状ＣＴスキャンは、連続スキャンであり、渦巻き状に得られ、スキャンされた画像が連続的であるので、工程がはるかに迅速である。
【００７１】
本明細書において使用された、抗体の「誘導体」とは、純正抗体又は親抗体と比較した場合、そのアミノ酸配列に対する、１つ以上の修飾を有する抗体を指す場合があり、修飾ドメイン構造を呈しうる。誘導体は、標的（抗原）に特異的に結合することが可能なアミノ酸配列を採用するだけでなく、天然抗体内で見出された、典型的なドメイン構成を採用することもさらに可能でありうる。抗体誘導体の典型的な例は、他のポリペプチドへとカップリングさせた抗体、再配列された抗体ドメイン又は抗体の断片である。誘導体はまた、少なくとも１つのさらなる化合物、例えば、タンパク質ドメインも含むことが可能であり、前記タンパク質ドメインは、共有結合又は非共有結合により連結されている。連結は、当技術分野で公知の方法に従う遺伝子融合に基づきうる。抗体を含む融合タンパク質内に存在するさらなるドメインは、ペプチドリンカーであると有利な、可動性リンカーにより連結されることが好ましい場合があり、この場合、前記ペプチドリンカーは、さらなるタンパク質ドメインのＣ末端及び抗体のＮ末端又はこの逆の間の距離にわたるのに十分な長さである、複数の、親水性で、ペプチド結合されたアミノ酸を含む。抗体は、生物学的活性に適するコンフォメーションを有する、又は、例えば、固体支持体、生物学的活性物質（例えば、サイトカイン又は成長ホルモン）、化学的薬剤、ペプチド、タンパク質若しくは薬物に選択的に結合する、エフェクター分子へと連結されうる。
【００７２】
本明細書において「アッセイにより決定された」とは、任意の適切なアッセイによる、基準レベル又は絶対量の決定を指すように使用される。一部の実施形態において、基準レベル又は絶対量の決定は、対象に由来する試料へと適用されるアッセイと同じ種類のアッセイにより（例えば、イムノアッセイ、タンパク質免疫沈降、免疫電気泳動、化学分析、ＳＤＳ−ＰＡＧＥ及びウェスタンブロット解析又はタンパク質免疫染色、電気泳動解析、タンパク質アッセイ、競合的結合アッセイ、機能的タンパク質アッセイ、又は高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）若しくは液体クロマトグラフィー−質量分析（ＬＣ／ＭＳ）のような、クロマトグラフィー法若しくは分光法により）達成されうる。一部の実施形態において、基準レベル又は絶対量の決定は、対象に由来する試料へと適用されるアッセイと同じ種類のアッセイにより、同じアッセイ条件下において達成されうる。本明細書において言及される通り、本開示は、例示的な基準レベル及び絶対量（例えば、異なる時点における基準レベルを比較することにより計算された絶対量）を提示する。本明細書における本開示を、他のアッセイに適合させて、本開示により提示された記載に基づき、これらの他のアッセイについて、アッセイ特異的な基準レベル及び絶対量を得ることは、十分に、当業者の技術の範囲内にある。例えば、頭部への損傷を負ったことが既知のヒト対象から得られた試料（そして、より特定すると、（ｉ）軽度ＴＢＩ又は（ｉｉ）中等度〜重度のＴＢＩを負ったことが既知のヒト対象から得られた試料）及び頭部への損傷を負っていないことが既知のヒト対象から得られた試料（そして、より特定すると、いずれかのＴＢＩを負ったことが既知のヒト対象から得られた試料）を含むトレーニング試料のセットは、アッセイ特異的な基準レベル及び絶対量を得るのに使用されうる。本明細書において、「アッセイにより決定され」、列挙されたレベルの「感度」及び／又は「特異度」を有する、基準レベル又は絶対量は、前記基準レベル又は絶対量が、本発明の方法において採用された場合に、列挙された感度及び／又は特異度についての方法をもたらすことが決定された、基準レベル又は絶対量を指すように使用されることが理解される。例えば、複数の異なる可能な基準レベル及び絶対量を使用する、アッセイデータについての統計学的解析の反復により、本発明の方法において与えられた基準レベル又は絶対量と関連する感度及び特異度を決定することは、十分に、当業者の技術の範囲内にある。
【００７３】
本明細書において「乱用薬物」とは、非医学的理由（例えば、気晴らし効果及び／又は気分を変える効果のような）のために服用される、１つ以上の添加物質（薬物のような）を指すように使用される。このような乱用薬物への、過剰な耽溺、これらの使用又はこれらへの依存は、「物質乱用」と称されることが多い。乱用薬物の例は、アルコール、バルビツレート、ベンゾジアゼピン、カナビス、コカイン、幻覚剤（ケタミン、メスカリン（ペヨーテ）、ＰＣＰ、シロシビン、ＤＭＴ及び／又はＬＳＤのような）、メタカロン、オピオイド、アンフェタミン（メタンフェタミンを含む）、同化ステロイド、吸入剤（すなわち、例えば、ニトレート、スプレー塗料、洗浄液、マーカー、糊などのような、向精神特性を含有する揮発性物質を含有する物質）及びこれらの組合せを含む。
【００７４】
本明細書において、「二重特異性抗体」とは、その２つの結合性アーム（ＨＣ／ＬＣの対）の各々において、２つの異なる抗原（又はエピトープ）に結合しうる全長抗体（ＰＣＴ公開第０２／０２７７３号を参照されたい）を指すように使用される。したがって、二重特異性結合タンパク質は、同一な特異性及び同一なＣＤＲ配列を伴う、２つの同一な抗原結合性アームを有し、それが結合する各抗原について二価である。
【００７５】
本明細書において、「二重可変ドメイン」とは、二価結合性タンパク質（２つの抗原結合性部位）、四価結合性タンパク質（４つの抗原結合性部位）、又は多価結合性タンパク質でありうる結合性タンパク質上の、２つ以上の抗原結合性部位を指すように使用される。ＤＶＤは、単一特異性、すなわち、１つの抗原（又は１つの特異性エピトープ）に結合することが可能な場合もあり、多特異性、すなわち、２つ以上の抗原（すなわち、同じ標的抗原分子の２つ以上のエピトープ又は異なる標的抗原２つ以上のエピトープ）に結合することが可能な場合もある。好ましいＤＶＤ結合性タンパク質は、２つの重鎖ＤＶＤポリペプチド及び２つの軽鎖ＤＶＤポリペプチドを含み、「ＤＶＤ免疫グロブリン」又は「ＤＶＤ−Ｉｇ」と称される。したがって、このようなＤＶＤ−Ｉｇ結合性タンパク質は、四量体であり、ＩｇＧ分子と類似するが、ＩｇＧ分子より多くの抗原結合性部位をもたらす。したがって、四量体ＤＶＤ−Ｉｇ分子の各半分は、ＩｇＧ分子の半分と類似し、重鎖ＤＶＤポリペプチド及び軽鎖ＤＶＤポリペプチドを含むが、単一の抗原結合性ドメインをもたらす、ＩｇＧ分子の重鎖及び軽鎖の対と異なり、ＤＶＤ−Ｉｇの重鎖及び軽鎖の対は、２つ以上の抗原結合性部位をもたらす。
【００７６】
ＤＶＤ−Ｉｇ結合性タンパク質の各抗原結合性部位は、ドナー（「親」）モノクローナル抗体に由来しうるので、抗原結合性部位１つ当たり、合計６つのＣＤＲであって、抗原への結合に関与するＣＤＲを伴う、重鎖可変ドメイン（ＶＨ）及び軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）を含みうる。したがって、２つの異なるエピトープ（すなわち、２つの異なる抗原分子の、２つの異なるエピトープ又は同じ抗原分子の、２つの異なるエピトープ）に結合するＤＶＤ−Ｉｇ結合性タンパク質は、第１の親モノクローナル抗体に由来する抗原結合性部位及び第２の親モノクローナル抗体の抗原結合性部位を含む。
【００７７】
ＤＶＤ−Ｉｇ結合性分子のデザイン、発現及び特徴付けについての記載は、ＰＣＴ公開第２００７／０２４７１５号、米国特許第７，６１２，１８１号及びＷｕら、Ｎａｔｕｒｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈ．、２５：１２９０〜１２９７（２００７）においてなされている。このようなＤＶＤ−Ｉｇ分子の好ましい例は、構造式：ＶＤ１−（Ｘ１）ｎ−ＶＤ２−Ｃ−（Ｘ２）ｎ［式中、ＶＤ１は、第１の重鎖可変ドメインであり、ＶＤ２は、第２の重鎖可変ドメインであり、Ｃは、重鎖定常ドメインであり、Ｘ１は、それがＣＨ１ではないことを条件として、リンカーであり、Ｘ２は、Ｆｃ領域であり、ｎは、０又は１であるが、好ましくは１である］を含む重鎖；及び構造式：ＶＤ１−（Ｘ１）ｎ−ＶＤ２−Ｃ−（Ｘ２）ｎ［式中、ＶＤ１は、第１の軽鎖可変ドメインであり、ＶＤ２は、第２の軽鎖可変ドメインであり、Ｃは、軽鎖定常ドメインであり、Ｘ１は、これがＣＨ１ではないことを条件として、リンカーであり、Ｘ２は、Ｆｃ領域を含まず、ｎは、０又は１であるが、好ましくは１である］を含む軽鎖を含む。このようなＤＶＤ−Ｉｇは、２つのこのような重鎖及び２つのこのような軽鎖を含むことが可能であり、この場合、各鎖は、可変領域の間に介在する定常領域を伴わずに、タンデムにより連結された可変ドメインを含み、重鎖及び軽鎖は、会合して、タンデムの機能的抗原結合性部位を形成し、重鎖及び軽鎖の対は、重鎖及び軽鎖の別の対と会合して、４つの機能的な抗原結合性部位を伴う、四量体の結合性タンパク質を形成しうる。別の例において、ＤＶＤ−Ｉｇ分子は、各々が可変ドメインの間に介在する定常領域を伴わずに、タンデムに連結された、３つの可変ドメイン（ＶＤ１、ＶＤ２、ＶＤ３）を含む重鎖及び軽鎖を含むことが可能であり、この場合、重鎖及び軽鎖の対は、会合して、３つの抗原結合性部位を形成することが可能であり、重鎖及び軽鎖の対は、重鎖及び軽鎖の別の対と会合して、６つの抗原結合性部位を伴う、四量体の結合性タンパク質を形成しうる。
【００７８】
好ましい実施形態において、ＤＶＤ−Ｉｇ結合性タンパク質は、その親モノクローナル抗体により結合された同じ標的分子に結合するだけでなく、また、その親モノクローナル抗体のうちの１つ以上の、１つ以上の所望の特性も保有する。好ましくは、このようなさらなる特性は、親モノクローナル抗体のうちの１つ以上の抗体パラメータである。その親モノクローナル抗体のうちの１つ以上に由来するＤＶＤ−Ｉｇ結合性タンパク質に寄与されうる抗体パラメータは、抗原特異性、抗原アフィニティー、効力、生物学的機能、エピトープの認識、タンパク質の安定性、タンパク質の可溶性、作製効率、免疫原性、薬物動態、バイオアベイラビリティー、組織との交差反応性、及びオーソログ抗原への結合を含むがこれらに限定されない。
【００７９】
ＤＶＤ−Ｉｇ結合性タンパク質は、ＵＣＨ−Ｌ１の、少なくとも１つのエピトープに結合する。ＤＶＤ−Ｉｇ結合性タンパク質の非限定例は、ＵＣＨ−Ｌ１の、１つ以上のエピトープに結合するＤＶＤ−Ｉｇ結合性タンパク質、ヒトＵＣＨ−Ｌ１のエピトープ及び別の種（例えば、マウス）のＵＣＨ−Ｌ１のエピトープに結合するＤＶＤ−Ｉｇ結合性タンパク質及びヒトＵＣＨ−Ｌ１のエピトープ及び別の標的分子のエピトープに結合するＤＶＤ−Ｉｇ結合性タンパク質を含む。
【００８０】
本明細書において使用された「ダイナミックレンジ」とは、アッセイのリードアウトが、解析される試料中の標的分子又は解析物の量と比例する範囲を指す。
【００８１】
本明細書において使用された「〜を査定すること」及び「〜を査定する」とは、外傷性脳損傷の存在、非存在及び／又は程度などの、頭部損傷と関連する情報を得るために、頭部損傷又は推測される頭部損傷を伴う対象を評価することを指す。「〜を査定すること」は、対象に由来する試料中の、ＵＣＨ−Ｌ１のようなＴＢＩバイオマーカーを検出すること、このレベルを測定すること、及び／又はこれを定量することを含みうる。「〜を査定すること」はまた、頭部損傷又は推測される頭部損傷を伴う対象についての、多様な臨床評価であって、ＧＣＳ評価、ＧＯＳＥ評価及び／又はイメージング解析（例えば、ＣＴスキャン又はＭＲＩイメージング）を実施することなどであるがこれらに限定されない臨床評価を実施することも含みうる。
【００８２】
「エピトープ（ｅｐｉｔｏｐｅ）」又は「エピトープ（ｅｐｉｔｏｐｅｓ）」又は「目的のエピトープ」とは、認識され、その特異的結合パートナー上の相補的な部位に結合しうる、任意の分子上の部位を指す。分子及び特異的結合パートナーは、特異的結合対の一部である。例えば、エピトープは、ポリペプチド、タンパク質、ハプテン、炭水化物抗原（糖脂質、糖タンパク質又はリポ多糖のようであるがこれらに限定されない）又は多糖の上にありうる。その特異的結合パートナーは、抗体でありうるがこれに限定されない。
【００８３】
本明細書において使用された「Ｆａｂ（ｆｒａｇｍｅｎｔ  ａｎｔｉｇｅｎ−ｂｉｎｄｉｎｇ）断片」又は「Ｆａｂ断片」とは、抗原に結合し、１つの抗原結合性部位である、１つの完全な軽鎖及び１つの重鎖の一部を含有する抗体の断片を指す。Ｆａｂは、ＶＬドメイン、ＶＨドメイン、ＣＬドメイン及びＣＨ１ドメインからなる一価断片である。Ｆａｂは、各重鎖及び各軽鎖の、１つの定常ドメイン及び１つの可変ドメインから構成される。可変ドメインは、単量体のアミノ末端において、相補性決定領域のセットを含む、パラトープ（抗原結合性部位）を含有する。したがって、Ｙ字の各アームは、抗原上のエピトープに結合する。Ｆａｂ断片は、例えば、免疫グロブリン単量体を、２つのＦａｂ断片及びＦｃ断片へと切断するのに使用されうる、酵素であるパパインを使用して、当技術分野において記載されている通りに作出されうる、又は組換え手段により作製されうる。
【００８４】
本明細書において使用された「Ｆ（ａｂ’）２断片」とは、ヒンジ領域の一部を無傷のままとしながら、Ｆｃ領域の大半を除去する、全ＩｇＧ抗体のペプシン消化により作出された抗体を指す。Ｆ（ａｂ’）２断片は、ジスルフィド結合により、一体に連結された、２つの抗原結合性Ｆ（ａｂ）部分を有するので、分子量を約１１０ｋＤａとする、二価断片である。二価抗体断片（Ｆ（ａｂ’）２断片）は、全ＩｇＧ分子より小型であり、組織への良好な浸透を可能とするので、免疫組織化学における、良好な抗原認識を容易とする。Ｆ（ａｂ’）２断片の使用はまた、生細胞上のＦｃ受容体又はプロテインＡ／Ｇへの非特異的結合も回避する。Ｆ（ａｂ’）２断片は、抗原に結合し、かつ、これを沈殿させうる。
【００８５】
本明細書において使用された「フレームワーク」（ＦＲ）又は「フレームワーク配列」とは、ＣＤＲを除いた、可変領域の残りの配列を意味しうる。ＣＤＲ配列の正確な定義は、異なるシステム（例えば、上記を参照されたい）により決定されうるため、フレームワーク配列の意味は、これに応じて異なる解釈を受ける。６つのＣＤＲ（軽鎖のＣＤＲ−Ｌ１、ＣＤＲ−Ｌ２及びＣＤＲ−Ｌ３並びに重鎖のＣＤＲ−Ｈ１、ＣＤＲ−Ｈ２及びＣＤＲ−Ｈ３）はまた、軽鎖上及び重鎖上のフレームワーク領域を、各鎖上の４つの部分領域（ＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３及びＦＲ４）へも分割するが、ここで、ＣＤＲ１は、ＦＲ１及びＦＲ２の間に位置し、ＣＤＲ２は、ＦＲ２及びＦＲ３の間に位置し、ＣＤＲ３は、ＦＲ３及びＦＲ４の間に位置する。他の研究者により言及される通りに、特定の部分領域を、ＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３又はＦＲ４と指定しない場合、フレームワーク領域は、単一の、天然の免疫グロブリン鎖の可変領域内の、ＦＲの組合せを表す。本明細書において使用されたＦＲは、４つの部分領域のうちの１つを表し、ＦＲは、フレームワーク領域を構成する、４つの部分領域のうちの２つ以上を表す。
【００８６】
当技術分野において公知の技法を使用して、非ヒト抗体をヒト化するのに、重鎖及び軽鎖の「アクセプター」フレームワーク配列（又は、単に、「アクセプター」配列）として使用されうる、ヒト重鎖及びヒト軽鎖のＦＲ配列は、当技術分野において公知である。一実施形態において、ヒト重鎖及びヒト軽鎖のアクセプター配列は、Ｖ−ｂａｓｅ（ｈｙｐｅｒｔｅｘｔ  ｔｒａｎｓｆｅｒｐｒｏｔｏｃｏｌ：／／ｖｂａｓｅ．ｍｒｃ−ｃｐｅ．ｃａｍ．ａｃ．ｕｋ／）又は国際的なＩｍＭｕｎｏＧｅｎｅＴｉｃｓ（登録商標）（ＩＭＧＴ（登録商標））情報システム（ｈｙｐｅｒｔｅｘｔ  ｔｒａｎｓｆｅｒｐｒｏｔｏｃｏｌ：／／ｉｍｇｔ．ｃｉｎｅｓ．ｆｒ／ｔｅｘｔｓ／ＩＭＧＴｒｅｐｅｒｔｏｉｒｅ／ＬｏｃｕｓＧｅｎｅｓ／）のような、一般に公開されているデータベースにおいて列挙されたフレームワーク配列から選択される。
【００８７】
本明細書において使用された「機能的な抗原結合性部位」とは、標的抗原に結合することが可能な、結合性タンパク質（例えば、抗体）上の部位を意味しうる。抗原結合性部位の抗原結合アフィニティーは、抗原結合性部位が由来する、親の結合性タンパク質、例えば、親抗体ほど強くない場合があるが、抗原に結合する能力は、抗原に結合するタンパク質、例えば、抗体を査定するための、公知の様々な方法のうちのいずれか１つを使用して測定可能でなければならない。さらに、多価タンパク質、例えば、本明細書の多価抗体の抗原結合性部位の各々の抗原結合アフィニティーは、定量的に同じである必要はない。
【００８８】
本明細書において使用された「ＧＣＳ（Ｇｌａｓｇｏｗ  Ｃｏｍａ  Ｓｃａｌｅ）」又は「ＧＣＳ」とは、全般的な社会的能力又は他者への依存に基づき、脳損傷の転帰を推定及び類別するための、１５点のスケールを指す。検査は、運動応答、言語応答及び開眼応答を、これらの値：Ｉ．運動応答（６：指示に完全に従う；５：侵害刺激を位置特定する；４：侵害刺激から身を引く；３：異常屈曲、すなわち、除皮質姿勢；２：伸長応答、すなわち、除脳姿勢及び１：応答なし）；ＩＩ．言語応答（５：意識清明で見当識がある；４：混乱しているが、一貫した発話；３：不適切な単語及び単語からなる支離滅裂な文章；２：理解不可能な音声及び１：音声なし）及びＩＩＩ．開眼（４：自発的開眼；３：発話に応じた開眼；２：疼痛に応じた開眼及び１：開眼なし）により測定する。最終的なスコアは、Ｉ＋ＩＩ＋ＩＩＩの値を足し合わせることにより決定される。最終的なスコアは、生存についての４つの可能なレベルへと類別される場合があり、数が小さいほど、より重度損傷及び予後不良を指し示す：軽度（１３〜１５）；中等度身体障害（９〜１２）（３０分間を超える意識の喪失；消失する場合もあり、消失しない場合もある、身体機能障害又は認知機能障害；リハビリから利益を得る）；重度身体障害（３〜８）（昏迷：意識不明状態：有意味な応答なし、自発的な活動なし）；及び植物状態（３未満）（睡眠覚醒周期；目覚めるが、環境との相互作用なし；疼痛に対する、位置特定されない応答）。中等度脳損傷とは、２０分間〜６時間の意識喪失及び９〜１２のＧＣＳ（Ｇｌａｓｇｏｗ  Ｃｏｍａ  Ｓｃａｌｅ）を結果としてもたらす脳損傷と規定される。重度脳損傷とは、６時間を超える意識喪失及び３〜８のＧＣＳ（Ｇｌａｓｇｏｗ  Ｃｏｍａ  Ｓｃａｌｅ）を結果としてもたらす脳損傷と規定される。
【００８９】
本明細書において使用された「ＧＯＳ（Ｇｌａｓｇｏｗ  Ｏｕｔｃｏｍｅ  Ｓｃａｌｅ）」とは、機能的転帰についてのグローバルスケールであって、患者の状態を、５つの類型：死、植物状態、重度身体障害、中等度身体障害又は回復良好のうちの１つへと評価するグローバルスケールを指す。
【００９０】
本明細書において互換的に使用された「ＧＯＳＥ（Ｅｘｔｅｎｄｅｄ  Ｇｌａｓｇｏｗ  Ｏｕｔｃｏｍｅ  Ｓｃａｌｅ）」又は「ＧＯＳＥ」は、重度身体障害、中等度身体障害及び回復良好の類型を、表１において示される、上下の類型へと細分することによる、８つの類型への、より詳細な類別を提示する。
【００９１】
【表１】
2020512550.tif 000002
【００９２】
本明細書において、「ヒト化抗体」は、非ヒト種（例えば、マウス）に由来する重鎖可変領域配列及び軽鎖可変領域配列を含むが、ＶＨ配列及び／又はＶＬ配列の少なくとも一部が、より「ヒト様」となる、すなわち、ヒト生殖細胞系列可変配列と、より類似するように変更された抗体について記載するのに使用される。「ヒト化抗体」とは、目的の抗原に免疫特異的に結合し、ヒト抗体のアミノ酸配列を実質的に有するフレームワーク（ＦＲ）領域及び非ヒト抗体のアミノ酸配列を実質的に有する相補性決定領域（ＣＤＲ）を含む、抗体又はこの変異体、誘導体、類似体若しくは断片である。本明細書において使用された、ＣＤＲの文脈における「実質的に」という用語は、非ヒト抗体ＣＤＲのアミノ酸配列と、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％又は少なくとも９９％同一なアミノ酸配列を有するＣＤＲを指す。ヒト化抗体は、少なくとも１つであるが、典型的に２つの可変ドメイン（Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、ＦａｂＣ、Ｆｖ）であって、ＣＤＲ領域の全て又は実質的に全てが、非ヒト免疫グロブリン（すなわち、ドナー抗体）のＣＤＲ領域に対応し、フレームワーク領域の全て又は実質的に全てが、ヒト免疫グロブリンコンセンサス配列のフレームワーク領域である可変ドメインの実質的に全てを含む。ある実施形態において、ヒト化抗体はまた、免疫グロブリン定常領域（Ｆｃ）、典型的に、ヒト免疫グロブリンのＦｃ領域の少なくとも一部も含む。一部の実施形態において、ヒト化抗体は、軽鎖のほか、重鎖の、少なくとも可変ドメインを含有する。抗体はまた、重鎖の、ＣＨ１領域、ヒンジ領域、ＣＨ２領域、ＣＨ３領域及びＣＨ４領域も含みうる。一部の実施形態において、ヒト化抗体は、ヒト化軽鎖だけを含有する。一部の実施形態において、ヒト化抗体は、ヒト化重鎖だけを含有する。具体的な実施形態において、ヒト化抗体は、軽鎖及び／又はヒト化重鎖のヒト化可変ドメインだけを含有する。
【００９３】
ヒト化抗体は、ＩｇＭ、ＩｇＧ、ＩｇＤ、ＩｇＡ、及びＩｇＥを含む、免疫グロブリンの任意のクラス並びに、限定なしに述べると、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、及びＩｇＧ４を含む、任意のアイソタイプから選択されうる。ヒト化抗体は、１つを超えるクラス又はアイソタイプに由来する配列を含むことが可能であり、特定の定常ドメインは、当技術分野において周知の技法を使用して、所望のエフェクター機能を最適化するように選択されうる。
【００９４】
ヒト化抗体のフレームワーク領域及びＣＤＲは、親配列に正確に対応する必要がなく、例えば、ドナー抗体ＣＤＲ又はコンセンサスフレームワークは、この部位におけるＣＤＲ残基又はフレームワーク残基が、ドナー抗体又はコンセンサスフレームワークに対応しないように、少なくとも１つのアミノ酸残基の置換、挿入及び／又は欠失により突然変異誘発されてもよい。しかし、好ましい実施形態において、このような突然変異は、広範にわたる突然変異ではない。通例、ヒト化抗体残基のうちの、少なくとも８０％、好ましくは、少なくとも８５％、より好ましくは、少なくとも９０％であり、最も好ましくは、少なくとも９５％は、親のＦＲ配列及びＣＤＲ配列の残基に対応する。本明細書において使用された「コンセンサスフレームワーク」という用語は、コンセンサスの免疫グロブリン配列内のフレームワーク領域を指す。本明細書において使用された「コンセンサスの免疫グロブリン配列」という用語は、類縁の免疫グロブリン配列のファミリーにおいて、最も高頻度で発生するアミノ酸（又はヌクレオチド）から形成された配列（例えば、Ｗｉｎｎａｋｅｒ、「Ｆｒｏｍ  Ｇｅｎｅｓ  ｔｏ  Ｃｌｏｎｅｓ」（Ｖｅｒｌａｇｓｇｅｓｅｌｌｓｃｈａｆｔ、Ｗｅｉｎｈｅｉｍ、１９８７）を参照されたい）を指す。したがって、「コンセンサスの免疫グロブリン配列」は、「コンセンサスフレームワーク領域」及び／又は「コンセンサスＣＤＲ」を含みうる。免疫グロブリンのファミリーにおいて、コンセンサス配列内の各位置は、ファミリー内のこの位置において、最も高頻度で発生するアミノ酸により占有されている。２つのアミノ酸が、同等に高頻度で発生する場合、いずれもが、コンセンサス配列内に含まれうる。
【００９５】
本明細書の、２つ以上のポリペプチド配列又はポリヌクレオチド配列の文脈において使用された「同一な」又は「同一性」とは、配列が、指定された領域にわたり同じである、指定された百分率の残基を有することを意味しうる。百分率は、２つの配列を、最適にアライメントし、２つの配列を、指定された領域にわたり比較し、両方の配列内において、同一な残基が生じる位置の数を決定して、マッチした位置の数を求め、マッチした位置の数を、指定された領域内の位置の総数により除し、結果を、１００により乗じて、配列同一性の百分率を求めることにより計算されうる。２つの配列の長さが異なる、又はアライメントが１つ以上の粘着末端をもたらし、指定された比較領域が、単一の配列だけを含む場合、単一の配列の残基は、計算の分母に組み入れられるが、分子に組み入れられない。
【００９６】
本明細書において互換的に使用された「頭部への損傷」又は「頭部損傷」とは、頭皮、頭蓋骨又は脳への、任意の外傷を指す。このような損傷は、頭蓋骨上の軽症の瘤だけを含みうる、又は重篤な脳損傷でありうる。このような損傷は、脳への一次損傷及び／又は脳への二次損傷を含む。一次脳損傷は、初期傷害時に生じ、脳の物理的構造のずれの結果としてもたらされる。より具体的に、一次脳損傷は、外傷性事象時に生じる、実質（組織、血管）への物理的ダメージであり、周囲の脳組織のせん断及び圧迫を結果としてもたらす。二次脳損傷は、一次損傷に後続して生じ、一連の細胞過程を伴いうる。より具体的に、二次脳損傷は、一次脳損傷の後、ある期間（数時間〜数日間）にわたり発展する変化を指す。二次脳損傷は、脳内の、細胞、化学物質、組織又は血管の変化の全体のカスケードであって、脳組織のさらなる破壊に寄与するカスケードを含む。
【００９７】
頭部への損傷は、閉鎖性又は開放性（穿通性）でありうる。閉鎖性頭部損傷とは、頭皮、頭蓋骨又は脳への外傷であって、ぶつかる物体による頭蓋骨への貫通が見られない外傷を指す。開放性頭部損傷は、頭皮、頭蓋骨又は脳への外傷であって、ぶつかる物体による頭蓋骨への貫通が見られる外傷を指す。頭部への損傷は、人の物理的振盪、外部の機械による鈍的打撃又は閉鎖性頭部外傷若しくは開放性頭部外傷を結果としてもたらす他の力（例えば、自動車、航空機、列車などによる車両事故のような車両事故；野球のバットによる痛撃又は火器からの痛撃のような頭部への痛撃）、脳血管発作（例えば、脳卒中）、１回以上の転倒（例えば、スポーツ又は他の活動における）、爆発若しくは爆破（まとめて、「爆破損傷」）及び他の種類の鈍的外傷に引き起こされうる。代替的に、頭部への損傷は、化学物質、毒素又は化学物質と毒素との組合せの摂取及び／又はこれらへの曝露により引き起こされうる。このような化学物質及び／又は毒素の例は、火、カビ、アスベスト、害虫駆除剤、殺虫剤、有機溶剤、塗料、糊、ガス（一酸化炭素、硫化水素及びシアン化物のような）、有機金属（メチル水銀、テトラエチル鉛及び有機スズのような）及び／又は１つ以上の乱用薬物を含む。代替的に、頭部への損傷は、自己免疫疾患、代謝性障害、脳腫瘍、１つ以上のウイルス、髄膜炎、水頭症、低酸素症又はこれらの組合せを対象が患うことの結果として引き起こされうる。場合によって、任意のこのような事象又は損傷が生じた、又は起こったのかどうかを確認することは不可能である。例えば、患者又は対象において、病歴が見られない場合があり、対象は、発話が不可能な場合があり、対象は、どのような事象に曝露されたのか気づいている場合があるなどである。本明細書においてこのような状況は、対象「は、頭部への損傷を負った可能性がある」と記載される。本明細書の、ある特定の実施形態において、閉鎖性頭部損傷は、脳卒中などの脳血管発作を含まず、明確にこれを除外する。
【００９８】
本明細書において使用された「単離ポリヌクレオチド」とは、その単離ポリヌクレオチドが、その由来において、「単離ポリヌクレオチド」が天然において共に見出されるポリヌクレオチドの全部若しくは一部に付随していない；それが天然においては連結されてないポリヌクレオチドと作動可能に連結されている；又は天然においてより大きな配列の一部として存在してはいないようなポリヌクレオチド（例えば、ゲノム、ｃＤＮＡ若しくは合成由来又はこれらの一部の組合せによる）を意味しうる。
【００９９】
本明細書において使用された「標識」及び「検出可能な標識」とは、抗体と解析物との反応を検出可能とするように、抗体又は解析物へと接合された部分を指し、このように標識された抗体又は解析物は、「検出可能に標識された」と称される。標識は、視覚手段又は計測手段により検出可能なシグナルをもたらしうる。多様な標識は、色原体、蛍光化合物、化学発光化合物、放射性化合物などのようなシグナル発生物質を含む。標識の代表例は、光をもたらす部分、例えば、アクリジニウム化合物及び蛍光をもたらす部分、例えば、フルオレセインを含む。他の標識も、本明細書において記載されている。この点で、部分自体は、検出可能でない場合もあるが、さらに別の部分と反応すると、検出可能となりうる。「検出可能に標識された」という用語は、このような標識を包含することが意図される。
【０１００】
当技術分野において公知である、任意の適切な、検出可能な標識が使用されうる。例えば、検出可能な標識は、放射性標識（３Ｈ、１４Ｃ、３２Ｐ、３３Ｐ、３５Ｓ、９０Ｙ、９９Ｔｃ、１１１Ｉｎ、１２５Ｉ、１３１Ｉ、１７７Ｌｕ、１６６Ｈｏ及び１５３Ｓｍのような）、酵素標識（西洋ワサビペルオキシダーゼ、アルカリペルオキシダーゼ、グルコース６−リン酸デヒドロゲナーゼなどのような）、化学発光標識（アクリジニウムエステル、チオエステル又はスルホンアミド；ルミノール、イソルミノール、フェナントリジニウムエステルなどのような）、蛍光標識（フルオレセイン（例えば、５−フルオレセイン、６−カルボキシフルオレセイン、３’６−カルボキシフルオレセイン、５（６）−カルボキシフルオレセイン、６−ヘキサクロロフルオレセイン、６−テトラクロロフルオレセイン、イソチオシアン酸フルオレセインなど）のような）、ローダミン、フィコビリタンパク質、Ｒ−フィコエリトリン、量子ドット（例えば、硫化亜鉛によりキャッピングされたセレン化カドミウム）、測熱標識又はイムノポリメラーゼ連鎖反応標識でありうる。標識、標識手順及び標識の検出への導入は、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｐｒｏｂｅｓ，Ｉｎｃ．、Ｅｕｇｅｎｅ、Ｏｒｅｇｏｎにより公刊された、ハンドブックとカタログとの組合せである、Ｐｏｌａｋ及びＶａｎ  Ｎｏｏｒｄｅｎ、「Ｉｎｔｒｏｄｕｃｔｉｏｎ  ｔｏ  Ｉｍｍｕｎｏｃｙｔｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ」、２版、Ｓｐｒｉｎｇｅｒ  Ｖｅｒｌａｇ、Ｎ．Ｙ．（１９９７）並びにＨａｕｇｌａｎｄ、「Ｈａｎｄｂｏｏｋ  ｏｆ  Ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｔ  Ｐｒｏｂｅｓ  ａｎｄ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｃｈｅｍｉｃａｌｓ」（１９９６）において見出される。蛍光標識は、ＦＰＩＡ（例えば、参照によりそれらの全体において本明細書に組み込まれた、米国特許第５，５９３，８９６号、同第５，５７３，９０４号、同第５，４９６，９２５号、同第５，３５９，０９３号及び同第５，３５２，８０３号を参照されたい）において使用されうる。アクリジニウム化合物は、同種化学発光アッセイにおける検出可能な標識（例えば、Ａｄａｍｃｚｙｋら、Ｂｉｏｏｒｇ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．Ｌｅｔｔ．、１６：１３２４〜１３２８（２００６）；Ａｄａｍｃｚｙｋら、Ｂｉｏｏｒｇ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．Ｌｅｔｔ．、４：２３１３〜２３１７（２００４）；Ａｄａｍｃｚｙｋら、Ｂｉｏｒｇ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．Ｌｅｔｔ．、１４：３９１７〜３９２１（２００４）及びＡｄａｍｃｚｙｋら、Ｏｒｇ．Ｌｅｔｔ．、５：３７７９〜３７８２（２００３）を参照されたい）として使用されうる。
【０１０１】
一態様において、アクリジニウム化合物は、アクリジニウム−９−カルボキサミドである。アクリジニウム９−カルボキサミドを調製するための方法については、Ｍａｔｔｉｎｇｌｙ、Ｊ．Ｂｉｏｌｕｍｉｎ．Ｃｈｅｍｉｌｕｍｉｎ．、６：１０７〜１１４（１９９１）；Ａｄａｍｃｚｙｋら、Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．、６３：５６３６〜５６３９（１９９８）；Ａｄａｍｃｚｙｋら、Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ、５５：１０８９９〜１０９１４（１９９９）；Ａｄａｍｃｚｙｋら、Ｏｒｇ．Ｌｅｔｔ．、１：７７９〜７８１（１９９９）；Ａｄａｍｃｚｙｋら、Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ  Ｃｈｅｍ．、１１：７１４〜７２４（２０００）；Ｍａｔｔｉｎｇｌｙら、「Ｌｕｍｉｎｅｓｃｅｎｃｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ：Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ  ａｎｄ  Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ」、Ｄｙｋｅ，Ｋ．Ｖ．編、ＣＲＣ  Ｐｒｅｓｓ：Ｂｏｃａ  Ｒａｔｏｎ、７７〜１０５（２００２）；Ａｄａｍｃｚｙｋら、Ｏｒｇ．Ｌｅｔｔ．、５：３７７９〜３７８２（２００３）；並びに米国特許第５，４６８，６４６号、同第５，５４３，５２４号及び同第５，７８３，６９９号（それらの各々が、参照によりその全体において、これについてのその教示について、本明細書に組み込まれる）において記載されている。
【０１０２】
アクリジニウム化合物の別の例は、アクリジニウム−９−カルボキシレートアリールエステルである。式ＩＩのアクリジニウム−９−カルボキシレートアリールエステルの例は、１０−メチル−９−（フェノキシカルボニル）アクリジニウムフルオロスルホネート（Ｃａｙｍａｎ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ、Ａｎｎ  Ａｒｂｏｒ、ＭＩから市販されている）である。アクリジニウム−９−カルボキシレートアリールエステルを調製するための方法については、ＭｃＣａｐｒａら、Ｐｈｏｔｏｃｈｅｍ．Ｐｈｏｔｏｂｉｏｌ．、４：１１１１〜２１（１９６５）；Ｒａｚａｖｉら、Ｌｕｍｉｎｅｓｃｅｎｃｅ、１５：２４５〜２４９（２０００）；Ｒａｚａｖｉら、Ｌｕｍｉｎｅｓｃｅｎｃｅ、１５：２３９〜２４４（２０００）及び米国特許第５，２４１，０７０号（それらの各々が、参照によりその全体において、これについてのその教示について、本明細書に組み込まれる）において記載されている。このようなアクリジニウム−９−カルボキシレートアリールエステルは、シグナルの強度及び／又はシグナルの迅速性の点において、少なくとも１つのオキシダーゼによる、解析物の酸化において生成された過酸化水素についての、有効な化学発光指示薬である。アクリジニウム−９−カルボキシレートアリールエステルの化学発光過程は、迅速に、すなわち、１秒間未満において完了されるが、アクリジニウム−９−カルボキサミドの化学発光は、２秒間を超えて遷延する。しかし、アクリジニウム−９−カルボキシレートアリールエステルは、タンパク質の存在下において、その化学発光特性を失う。したがって、その使用は、シグナルの発生時及び検出時における、タンパク質の非存在を要求する。試料中のタンパク質を分離又は除去するための方法は、当業者に周知であり、限外濾過、抽出、沈殿、透析、クロマトグラフィー及び／又は消化（例えば、Ｗｅｌｌｓ、「Ｈｉｇｈ  Ｔｈｒｏｕｇｈｐｕｔ  Ｂｉｏａｎａｌｙｔｉｃａｌ  Ｓａｍｐｌｅ  Ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎ．Ｍｅｔｈｏｄｓ  ａｎｄ  Ａｕｔｏｍａｔｉｏｎ  Ｓｔｒａｔｅｇｉｅｓ」、Ｅｌｓｅｖｉｅｒ  （２００３）を参照されたい）を含むがこれらに限定されない。被験試料から除去又は分離されるタンパク質の量は、約４０％、約４５％、約５０％、約５５％、約６０％、約６５％、約７０％、約７５％、約８０％、約８５％、約９０％又は約９５％でありうる。アクリジニウム−９−カルボキシレートアリールエステル及びその使用に関する、さらなる詳細については、２００７年４月９日において出願された、米国特許出願第１１／６９７，８３５号において明示されている。アクリジニウム−９−カルボキシレートアリールエステルは、脱気無水Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）又は含水コール酸ナトリウムのような、任意の適切な溶媒中に溶解されうる。
【０１０３】
「連結配列」又は「連結ペプチド配列」とは、１つ以上の、目的のポリペプチド配列（例えば、全長配列、配列断片など）へと接続された、天然又は人工のポリペプチド配列を指す。「接続された」という用語は、連結配列の、目的のポリペプチド配列への接合を指す。このようなポリペプチド配列は、１つ以上のペプチド結合により接合されることが好ましい。連結配列は、約４〜約５０アミノ酸の長さを有しうる。好ましくは、連結配列の長さは、約６〜約３０アミノ酸である。天然の連結配列は、人工の連結配列を創出するように、アミノ酸の置換、付加又は欠失により修飾されうる。連結配列は、組換えＦａｂ内の使用を含む、多くの目的で使用されうる。例示的な連結配列は、以下を含むがこれらに限定されない：（ｉ）ＨＨＨＨＨＨ（配列番号２）のアミノ酸配列を有する、６×Ｈｉｓタグのようなヒスチジン（Ｈｉｓ）タグは、目的のポリペプチド及び抗体の単離及び精製を容易とする連結配列として有用である；（ｉｉ）Ｈｉｓタグなどのエンテロキナーゼ切断部位は、目的のタンパク質及び抗体の単離及び精製において使用される。エンテロキナーゼ切断部位は、Ｈｉｓタグと併せて、目的のタンパク質及び抗体の単離及び精製において使用されることが多い。当技術分野において、多様なエンテロキナーゼ切断部位が公知である。エンテロキナーゼ切断部位の例は、ＤＤＤＤＫ（配列番号３）のアミノ酸配列及びその誘導体（例えば、ＡＤＤＤＤＫ（配列番号４）など）を含むがこれらに限定されない；（ｉｉｉ）その他の配列も、単鎖可変領域断片の軽鎖可変領域及び／又は重鎖可変領域を連結又は接続するのに使用されうる。他の連結配列の例は、Ｂｉｒｄら、Ｓｃｉｅｎｃｅ、２４２：４２３〜４２６（１９８８）；Ｈｕｓｔｏｎら、ＰＮＡＳ  ＵＳＡ８５：５８７９〜５８８３（１９８８）及びＭｃＣａｆｆｅｒｔｙら、Ｎａｔｕｒｅ、３４８：５５２〜５５４（１９９０）において見出されうる。連結配列はまた、薬物の接合又は固体支持体への接合のような、さらなる機能のためにも修飾されうる。本開示の文脈において、モノクローナル抗体は、例えば、Ｈｉｓタグ、エンテロキナーゼ切断部位又はこれらの両方のような連結配列を含有しうる。
【０１０４】
本明細書において使用された「モノクローナル抗体」とは、実質的に同種である抗体の集団から得られた抗体を指し、すなわち、集団を構成する個別の抗体は、少量で存在しうる可能な天然の突然変異を除き、同一である。モノクローナル抗体は、高度に特異的であり、単一の抗原に対して方向付けられている。さらに、異なる決定基（エピトープ）に対して方向付けられた、異なる抗体を含むことが典型的な、ポリクローナル抗体調製物とは対照的に、各モノクローナル抗体は、抗原上の単一の決定基に対して方向付けられている。本明細書におけるモノクローナル抗体は、とりわけ、重鎖及び／又は軽鎖の一部が、特定の種に由来する、又は特定の抗体クラス若しくは抗体サブクラスに属する抗体内の、対応する配列と同一又は相同である一方、鎖の残りの部分は、別の種に由来する、又は別の抗体クラス若しくは抗体サブクラスに属する抗体内の、対応する配列と同一又は相同である「キメラ」抗体のほか、それらが、所望の生体活性を呈する限りにおいて、このような抗体の断片も含む。
【０１０５】
本明細書において使用された「ＭＲＩ」とは、健常及び疾患両方の体内における解剖学及び生理学的過程についての描像を形成するように、放射線医学において使用される医学的イメージング法である、磁気共鳴イメージングを指す。核磁気共鳴（ＮＭＲ）学に基づくＭＲＩスキャナーは、強力な磁界、ラジオ波及び磁界勾配を使用して、体内についての画像を作成する。
【０１０６】
本明細書において、「多価結合性タンパク質」とは、２つ以上の抗原結合性部位（本明細書において、「抗原結合性ドメイン」ともまた称される）を含む結合性タンパク質を指すように使用される。多価結合性タンパク質は、３つ以上の抗原結合性部位を有するように操作されていることが好ましく、一般に、天然の抗体ではない。「多特異性結合性タンパク質」という用語は、２つ以上の、類縁又は非類縁の標的に結合しうる結合性タンパク質であって、同じ標的分子の、２つ以上の異なるエピトープへの結合が可能な結合性タンパク質を含む結合性タンパク質を指す。
【０１０７】
本明細書において互換的に使用された「陰性予測値」又は「ＮＰＶ」とは、対象が、陰性の検査結果を有する場合に、陰性の転帰を有する確率を指す。
【０１０８】
本明細書において使用された「基準レベル」とは、診断的有効性、予後診断的有効性又は治療的有効性を評価するのに使用され、本明細書において、多様な臨床パラメータ（例えば、疾患の存在、疾患の病期、疾患の重症度、疾患の進行、非進行又は改善など）と連関づけられた、又は関連づけられた、アッセイカットオフ値を指す。本明細書において使用された「絶対量」とは、異なる時点において採取された、又は検査され、基準レベルと同様に、本明細書において、多様な臨床パラメータ（例えば、疾患の存在、疾患の病期、疾患の重症度、疾患の進行、非進行又は改善など）と連関づけられた、又は関連づけられた、少なくとも２つのアッセイ結果の間の変化又は差違の絶対値を指す。本明細書において使用された「絶対値」とは、その符号に関わらず、すなわち、それが正であるのか、負であるのかに関わらず、実数の大きさ（例えば、２つの比較されたレベル（第１の時点において採取されたレベル及び第２の時点において採取されたレベルのような）の間の差違のような）を指す。
【０１０９】
本開示は、例示的な基準レベル及び絶対量（例えば、異なる時点における基準レベルを比較することにより計算された）を提示する。しかし、基準レベル及び絶対量は、イムノアッセイの性質（例えば、利用された抗体、反応条件、試料の純度など）に応じて、変動する場合があり、アッセイは、比較及び標準化されうることが周知である。さらに、本明細書における本開示を、他のイムノアッセイに適合させて、本開示により提示された記載に基づき、これらの他のイムノアッセイについて、イムノアッセイ特異的な基準レベル及び絶対量を得ることは、十分に、当業者の技術の範囲内にある。基準レベル及び絶対量の正確な値は、アッセイ間において変動しうるが、本明細書において記載された知見は、一般に、適用可能であり、他のアッセイへの外挿が可能であるものとする。例えば、本明細書において提示されるデータは、ＴＢＩの文脈におけるＵＣＨ−Ｌ１レベルについて、より大きな時間分解能をもたらし、単一時点評価に限定されない。本開示によるデータは、ＵＣＨ−Ｌ１レベルが、損傷後において、動的に変動し、これが、様々な異なるアッセイを使用して査定されうることを裏付ける。
【０１１０】
「ポイントオブケアデバイス」とは、ポイントオブケア（すなわち、検査室の外部）又はこの近傍の、患者ケアの時間及び場所（病院、診療所、救急ケア施設又は他の医療ケア施設、患者の自宅、介護施設及び／又は長期ケア施設及び／又はホスピス施設のような）において、医学的診断検査を提供するのに使用されるデバイスを指す。ポイントオブケアデバイスの例は、Ａｂｂｏｔｔ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ（Ａｂｂｏｔｔ  Ｐａｒｋ、ＩＬ）（例えば、ｉ−ＳＴＡＴ及びｉ−ＳＴＡＴ  Ａｌｉｎｉｔｙ、Ｕｎｉｖｅｒｓａｌ  Ｂｉｏｓｅｎｓｏｒｓ（Ｒｏｗｖｉｌｌｅ、Ａｕｓｔｒａｌｉａ））（ＵＳ２００６／０１３４７１３を参照されたい）、Ａｘｉｓ−Ｓｈｉｅｌｄ  ＰｏＣ  ＡＳ（Ｏｓｌｏ、Ｎｏｒｗａｙ）及びＣｌｉｎｉｃａｌ  Ｌａｂ  Ｐｒｏｄｕｃｔｓ（Ｌｏｓ  Ａｎｇｅｌｅｓ、ＵＳＡ）により作製されたポイントオブケアデバイスを含む。
【０１１１】
本明細書において互換的に使用された「陽性予測値」又は「ＰＰＶ」とは、対象が、陽性の検査結果を有する場合に、陽性の転帰を有する確率を指す。
【０１１２】
本明細書において記載されたイムノアッセイ及びキットの文脈における「品質管理試薬」は、較正物質、対照及び感度パネルを含むがこれらに限定されない。「較正物質」又は「標準物質」（例えば、複数のような、１つ以上の）は、抗体又は解析物のような、解析物の濃度を内挿するための、較正曲線（検量線）を確立するために使用されることが典型的である。代替的に、基準レベル又は対照レベルの近傍（例えば、「低」レベル、「中」レベル、又は「高」レベル）にある、単一の較正物質も使用されうる。「感度パネル」を含むように、複数の較正物質（すなわち、１つを超える較正物質又は変動量の較正物質）が使用されうる。
【０１１３】
「ＲＯＣ（ｒｅｃｅｉｖｅｒ  ｏｐｅｒａｔｉｎｇ  ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃ）」曲線又は「ＲＯＣ」曲線とは、その識別閾値が変動するのに応じて、二項分類子システムの作動を例示する、グラフによるプロットを指す。例えば、ＲＯＣ曲線は、診断検査の、異なる可能なカットオフ点についての、偽陽性率に対する真陽性率のプロットでありうる。ＲＯＣ曲線は、多様な閾値状況において、陽性中の真陽性の割合（ＴＰＲ＝真陽性率）を、陰性中の偽陽性の割合（ＦＰＲ＝偽陽性率）と対比してプロットすることにより創出される。ＴＰＲはまた、感度としても公知であり、ＦＰＲは、［１−特異度又は真陰性率］である。ＲＯＣ曲線は、感度と特異度とのトレードオフ（任意の感度の上昇は、特異度の低下により伴われる）；曲線が、ＲＯＣ空間の左側境界に近接し、次いで、上側境界に近接するほど、検査は、より正確となること；曲線が、ＲＯＣ空間の４５度の対角線に近接するほど、検査は、より正確でなくなること；カットオフ点における接線の傾きが、検査のこの値についての尤度比（ＬＲ）を与えること及び曲線下面積が、検定の精度の尺度であることを裏付ける。
【０１１４】
「組換え抗体（ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ  ａｎｔｉｂｏｄｙ）」及び「組換え抗体（ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ  ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ）」とは、組換え法により、１つ以上のモノクローナル抗体の全部又は一部をコードする核酸配列を、適切な発現ベクターへとクローニングし、その後、抗体を、適切な宿主細胞において発現させるステップを含む、１つ以上のステップにより調製された抗体を指す。用語は、組換えにより作製されたモノクローナル抗体、キメラ抗体、ヒト化抗体（完全ヒト化抗体又は部分的ヒト化抗体）、抗体断片から形成された多特異性構造又は多価構造、二官能性抗体、ヘテロコンジュゲートＡｂ、ＤＶＤ−Ｉｇ（登録商標）及び本明細書の（ｉ）において記載された他の抗体（二重可変ドメイン免疫グロブリン及びそれらを作り出すための方法について、Ｗｕ，Ｃ．ら、Ｎａｔｕｒｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ、２５：１２９０〜１２９７（２００７）において記載されている）を含むがこれらに限定されない。本明細書において使用された「二官能性抗体」という用語は、１つの抗原性部位に対する特異性を有する第１のアーム及び異なる抗原性部位に対する特異性を有する第２のアームを含む抗体を指す。すなわち、二官能性抗体は、二重特異性を有する。
【０１１５】
本明細書において使用された、対象（例えば、患者）についての「危険性の評価」、「危険性の分類」、「危険性の同定」又は「危険性の層別化」とは、対象に関する処置決定が、より情報を得た状態ベースにおいてなされうるように、疾患の発生又は疾患の進行を含む将来の事象の発生の危険性を予測するためのバイオマーカーを含む因子についての査定を指す。
【０１１６】
本明細書において使用された「試料」、「被験試料」、「検体」、「患者試料」及び「生物学的試料」は、互換的に使用される場合があり、全血、組織、尿、血清、血漿、羊水、脳脊髄液、胎盤細胞又は胎盤組織、内皮細胞、白血球又は単球のような血液試料でありうる。試料は、患者から得られた通りに直接使用されうる、又は濾過、蒸留、抽出、濃縮、遠心分離、干渉成分の不活化、試薬の添加など、本明細書において論じられている形において、又は当技術分野において公知である、別の形において、試料の特徴を変更するように前処置されうる。一実施形態において、試料は、全血試料、血漿又は血清試料である。別の実施形態において、試料は、全血である。別の実施形態において、試料は、血清である。さらに別の実施形態において、試料は、血漿である。さらに他の実施形態において、試料は、ヒトから得られた全血試料である。さらに別の実施形態において、試料は、ヒトから得られた血漿試料である。なお、さらに別の実施形態において、試料は、ヒトから得られた血清試料である。
【０１１７】
試料を得るのに、様々な細胞型、組織又は体液が用いられうる。このような細胞型、組織及び体液は、生検試料及び剖検試料のような組織切片、組織学的目的のために採取された凍結切片、血液（全血のような）、血漿、血清、赤血球、血小板、間質液、脳脊髄液などを含みうる。細胞型及び組織はまた、リンパ液、脳脊髄液、により回収された体液も含みうる。組織又は細胞型は、細胞試料を、ヒト及び非ヒト動物から摘出することにより用意されうるが、また、あらかじめ単離された細胞（例えば、別の者により、別の時間において、かつ／又は別の目的のために単離された）を使用することによっても達せられうる。処置履歴又は転帰履歴を有する組織のようなアーカイブ組織もまた、使用されうる。タンパク質又はヌクレオチドの単離及び／又は精製は、必要でない場合もある。
【０１１８】
「感度」とは、その転帰が陽性である対象であって、陽性であると正しく同定された対象の比率（例えば、対象が検査されつつある疾患又は医学的状態を伴う対象を、正しく同定する比率）を指す。例えば、これは、対象を、軽度ＴＢＩを有する対象ではなく、中等度〜重度のＴＢＩを有すると、正しく同定すること、対象を、中等度〜重度のＴＢＩを有する対象ではなく、軽度ＴＢＩを有すると、正しく同定すること、対象を、ＴＢＩを有さない対象ではなく、中等度〜重度のＴＢＩを有すると、正しく同定すること又は対象を、ＴＢＩを有さない対象ではなく、軽度ＴＢＩを有すると、正しく同定することを含みうる。
【０１１９】
本明細書において使用された、アッセイの「特異度」とは、その転帰が陰性である対象であって、陰性であると正しく同定された対象の比率（例えば、対象が検査されつつある疾患又は医学的状態を有さない対象を、正しく同定する比率）を指す。例えば、これは、対象を、軽度ＴＢＩを有する対象ではなく、中等度〜重度のＴＢＩを有さないと、正しく同定すること、対象を、中等度〜重度のＴＢＩを有する対象ではなく、軽度ＴＢＩを有さないと、正しく同定すること又は対象をいずれかのＴＢＩを有さないと、正しく同定することを含みうる。
【０１２０】
「較正組成物のシリーズ」とは、公知の濃度のＵＣＨ−Ｌ１を含む複数の組成物であって、組成物の各々が、シリーズ内の他の組成物とＵＣＨ−Ｌ１の濃度が異なる組成物を指す。
【０１２１】
本明細書において使用された「単一分子の検出」とは、濃度が極めて低レベルの（ｐｇ／ｍＬ又はフェムトグラム／ｍＬレベルのような）被験試料中の解析物の単一分子の検出及び／又は測定を指す。当技術分野において、多数の異なる単一分子解析器又はデバイスが公知であり、ナノポア及びナノウェルデバイスを含む。ナノポアデバイスの例については、参照によりその全体において本明細書に組み込まれた、国際特許公開第２０１６／１６１４０２号において記載されている。ナノウェルデバイスの例については、参照によりその全体において本明細書に組み込まれた、国際特許公開第２０１６／１６１４００号において記載されている。
【０１２２】
本明細書において互換的に使用された、「固相」又は「固体支持体」とは、（１）１つ以上の捕捉剤若しくは捕捉のための特異的結合パートナー又は（２）１つ以上の検出剤若しくは検出のための特異的結合パートナーを接合させ、かつ／又は誘引し、固定化させる、任意の材料を指す。固相は、捕捉剤を誘引し、固定化させる、その内因性の能力について選択されうる。代替的に、固相は、（１）捕捉剤若しくは捕捉のための特異的結合パートナー又は（２）検出剤若しくは検出のための特異的結合パートナーを誘引し、固定化させる能力を有する、連結剤を付加されている。例えば、連結剤は、捕捉剤（例えば、捕捉のための特異的結合パートナー）又は検出剤（例えば、検出のための特異的結合パートナー）自体若しくは（１）捕捉剤若しくは捕捉のための特異的結合パートナー又は（２）検出剤若しくは検出のための特異的結合パートナーへとコンジュゲートされた帯電物質に対して、逆向きに帯電した帯電物質を含みうる。一般に、連結剤は、固相上に固定化され（固相へと接合され）、結合反応を介して、（１）捕捉剤若しくは捕捉のための特異的結合パートナー又は（２）検出剤若しくは検出のための特異的結合パートナーを固定化させる能力を有する、任意の結合パートナー（好ましくは特異的結合パートナー）でありうる。連結剤は、アッセイの実施前に、又はアッセイの実施時に、捕捉剤の、固相材料への間接的結合を可能とする。例えば、固相は、例えば、試験管、マイクロ滴定ウェル、シート、ビーズ、微粒子、チップ及び当業者に公知の他の構成を含む、プラスチック、誘導体化プラスチック、磁性金属又は非磁性金属、ガラス又はシリコンでありうる。
【０１２３】
本明細書において使用された「特異的結合」又は「〜に特異的に結合すること」とは、抗体、タンパク質、又はペプチドの、第２の化学的分子種との相互作用を指す場合があり、この場合、相互作用は、化学的分子種上の特定の構造（例えば、抗原性決定基又はエピトープ）の存在に依存する；例えば、抗体は、タンパク質一般ではなく、特異的なタンパク質構造を認識し、これに結合する。抗体が、エピトープ「Ａ」に対して特異的である場合、エピトープＡを含有する分子（又は遊離のＡ、非標識Ａ）の、標識「Ａ」及び抗体を含有する反応物中の存在は、抗体に結合された標識Ａの量を低減する。
【０１２４】
「特異的結合パートナー」とは、特異的結合対のメンバーである。特異的結合対は、化学物質又は物理的手段を介して、互いと特異的に結合する、２つの異なる分子を含む。したがって、一般的なイムノアッセイの、抗原と抗体との特異的結合対に加えて、他の特異的結合対は、ビオチン及びアビジン（又はストレプトアビジン）、炭水化物及びレクチン、相補的なヌクレオチド配列、エフェクター分子及び受容体分子、補因子及び酵素、酵素及び酵素阻害剤などを含みうる。さらに、特異的結合対は、元の特異的結合メンバーの類似体、例えば、解析物類似体であるメンバーを含みうる。免疫反応性の特異的結合メンバーは、抗原、抗原断片並びにモノクローナル抗体及びポリクローナル抗体のほか、単離されたものであれ、組換えにより作製されたものであれ、これらの複合体及び断片を含む抗体を含む。
【０１２５】
本明細書において使用された「統計学的に有意な」とは、２つ以上の変数の間の関係が、ランダムな偶然以外の何かにより引き起こされる可能性を指す。統計学的仮説検定は、データセットの結果が、統計学的に有意であるのかどうかを決定するのに使用される。統計学的仮説検定において、統計学的有意な結果は、検定統計量について観察されたｐ値が、研究について規定された有意性レベル未満である場合なら、いかなる場合にも達せられる。ｐ値とは、少なくとも帰無仮説が真である場合に観察される結果と、少なくとも同程度に極端な結果を得る確率である。統計学的仮説解析の例は、ウィルコクソンの符合順位検定、ｔ検定、カイ二乗検定又はフィッシャーの正確検定を含む。本明細書において使用された「著明な」とは、統計学的に有意であることが決定されていない変化（例えば、統計学的仮説検定にかけられていない可能性がある）を指す。
【０１２６】
本明細書において互換的に使用された、「対象」及び「患者」とは、哺乳動物（例えば、ウシ、ブタ、ラクダ、ラマ、ウマ、ヤギ、ウサギ、ヒツジ、ハムスター、モルモット、ネコ、イヌ、ラット及びマウス、非ヒト霊長動物（例えば、カニクイザル又はアカゲザル、チンパンジーなどのようなサル）及びヒト）を含むがこれらに限定されない、任意の脊椎動物を指す。一部の実施形態において、対象は、ヒト又は非ヒトでありうる。一実施形態において、対象は、ヒトである。対象又は患者は、他の形態の処置を受けつつある場合がある。
【０１２７】
本明細書において、「〜を処置する」、「〜を処置すること」又は「処置」は各々、疾患及び／若しくは損傷又はこのような用語が適用される、このような疾患の、１つ以上の症状を阻止、緩和すること又はこれらの進行を阻害することについて記載するのに、互換的に使用される。対象の状態に依存して、用語はまた、疾患を予防することも指し、疾患の発生を予防すること又は疾患と関連する症状を予防することを含む。処置は、急性的に、又は慢性的に実施されうる。用語はまた、疾患への罹患の前における、疾患又はこのような疾患と関連する症状の重症度を軽減することも指す。罹患の前における、疾患の重症度のこのような予防又は低減は、医薬組成物の、投与時において疾患に罹患していない対象への投与を指す。「〜を予防すること」はまた、疾患又はこのような疾患と関連する、１つ以上の症状の再発を予防することも指す。「処置」及び「治療的に」とは、「〜を処置すること」が、上記において規定された通りである場合の、処置する行為を指す。
【０１２８】
本明細書において互換的に使用された「外傷性脳損傷」又は「ＴＢＩ」とは、広範囲にわたる症状及び身体障害を伴う複合損傷を指す。ＴＢＩは、他の損傷と同様の、急性事象であることが最も多い。ＴＢＩは、「軽度」、「中等度」又は「重度」と分類されうる。ＴＢＩの原因は、多様であり、人力による物理的振盪、自動車事故、火器による損傷、脳血管発作（例えば、脳卒中）、転倒、爆発又は爆破及び他の種類の鈍的外傷を含む。ＴＢＩの他の原因は、１つ以上の化学物質又は毒素（火、カビ、アスベスト、害虫駆除剤及び殺虫剤、有機溶剤、塗料、糊、ガス（一酸化炭素、硫化水素及びシアン化物のような）、有機金属（メチル水銀、テトラエチル鉛及び有機スズのような）、１つ以上の乱用薬物又はこれらの組合せ）の摂取及び／又はこれらへの曝露を含む。代替的に、ＴＢＩは、自己免疫疾患、代謝性障害、脳腫瘍、低酸素症、１つ以上のウイルス、髄膜炎、水頭症又はこれらの組合せを患うヒト対象において生じうる。若年成人及び老齢者は、ＴＢＩの危険性が最も高い年齢群である。本明細書の、ある特定の実施形態において、外傷性脳損傷又はＴＢＩは、脳卒中のような脳血管発作を含まず、明確にこれを除外する。
【０１２９】
本明細書において使用された「軽度ＴＢＩ」とは、意識喪失が短時間であり、通例数秒間若しくは数分間であり、かつ／又は意識混濁及び見当識の喪失が、１時間より短い脳損傷を指す。軽度ＴＢＩはまた、脳振盪、軽症の頭部外傷、軽症のＴＢＩ、軽症の脳損傷及び軽症の頭部損傷とも称される。ＭＲＩ及びＣＴスキャンは、正常であることが多いが、軽度ＴＢＩを伴う個体は、頭痛、思考困難、記憶問題、注意欠陥、気分変動及び欲求不満のような認知問題を有しうる。
【０１３０】
軽度ＴＢＩは、最も高頻度のＴＢＩであり、初期損傷時に、見逃されることが多い。典型的に、対象は、１３〜１５（１３〜１５又は１４〜１５のような）の間のＧＣＳ（Ｇｌａｓｇｏｗ  Ｃｏｍａ  Ｓｃａｌｅ）数を有する。軽度ＴＢＩを伴う人々のうち、１５パーセント（１５％）は、３カ月間以上にわたり持続する症状を有する。軽度ＴＢＩは、頭部の強制的な運動又は精神状態の短い変化（意識混濁、見当識の喪失又は記憶喪失）を引き起こす衝撃又は３０分間未満にわたる意識喪失の結果として規定される。軽度ＴＢＩの一般的な症状は、疲労感、頭痛、視覚障害、記憶喪失、注意／集中力の低下、睡眠障害、回転性めまい／平衡感覚の喪失、易刺激性（感情障害）、抑うつ感覚及び発作を含む。軽度ＴＢＩと関連する他の症状は、悪心、嗅覚喪失、光及び音への過敏性、気分の変化、迷子若しくは意識混濁及び／又は思考遅滞を含む。
【０１３１】
本明細書において使用された「中等度ＴＢＩ」とは、意識喪失及び／又は意識混濁並びに見当識の喪失が、１〜２４時間の間であり、対象が、９〜１３（９〜１２又は９〜１３のような）の間のＧＣＳ（Ｇｌａｓｇｏｗ  Ｃｏｍａ  Ｓｃａｌｅ）数を有する脳損傷を指す。中等度ＴＢＩを伴う個体は、脳イメージング結果の異常を有する。本明細書において使用された「重度ＴＢＩ」とは、意識喪失が、２４時間を超え、損傷又は穿通性頭蓋骨損傷後の記憶喪失が、２４時間より長く、対象が、３〜８の間のＧＣＳ（Ｇｌａｓｇｏｗ  Ｃｏｍａ  Ｓｃａｌｅ）数を有する脳損傷を指す。欠損は、高レベルの認知機能の機能障害〜昏睡状態の範囲にわたる。生存者は、腕部又は脚部の機能の限定、発話又は言語の異常、思考能力の喪失又は感情問題を有しうる。重度損傷を伴う個体は、長期にわたる不応状態に置かれたままになりうる重度ＴＢＩを伴う多くの人々の場合、機能及び自立を最大化するために、長期にわたるリハビリが必要となることが多い。
【０１３２】
中等度〜重度のＴＢＩの一般的な症状は、注意に関する困難、集中力、散漫性、記憶、処理速度、混乱、固執、衝動性、言語処理及び／又は「実行機能」、発話された単語の無理解（受容失語症）、発話及び理解されることの困難（表現失語症）、発話の不明瞭、発話が極めて速い又は極めて遅い、読むときの問題、書くときの問題、接触、温度、運動の解釈、下肢の位置及び微細な識別、感覚的印象の、心理学的に有意味なデータへの統合又はパターン化に関する困難、部分的又は全体的な視覚の喪失、眼筋力の低下及び二重視覚（複視）、かすみ目、距離を判断するときの問題、非自発的な眼運動（眼振）、光不耐性（羞明）、聴覚問題、のような、聴力の低下又は喪失、耳が鳴ること（耳鳴り）、音に対する過敏性、嗅覚の喪失又は低下（無嗅覚）、味覚の喪失又は低下、てんかんと関連する痙攣であって、いくつかの種類であることが可能であり、意識、感覚的認知又は運動、腸及び膀胱の制御の破壊を伴いうる痙攣、睡眠障害、気力の喪失、食欲の変化、体内温度の調節、月経困難、依存性行動、感情能力、意欲の欠如、易刺激性、攻撃、抑うつ、脱抑制又は意識の否認／欠如を含む認知欠損を含む。
【０１３３】
本明細書において互換的に使用された「ユビキチンカルボキシ末端ヒドロラーゼＬ１（ＵＣＨ−Ｌ１）」又は「ＵＣＨ−Ｌ１」とは、ヒトにおいて、ＵＣＨ−Ｌ１遺伝子によりコードされた脱ユビキチン化酵素を指す。ユビキチンカルボキシル末端エステラーゼＬ１及びユビキチンチオールエステラーゼとしてもまた公知のＵＣＨ−Ｌ１は、その産物が、ユビキチンの、小型のＣ末端付加物を加水分解して、ユビキチン単量体を発生させる遺伝子ファミリーのメンバーである。
【０１３４】
「ＵＣＨ−Ｌ１状態」とは、ある時点（ＵＣＨ−Ｌ１の単一の測定値を伴う時点のような）における、ＵＣＨ−Ｌ１のレベル若しくは量、モニタリング（対象において、ＵＣＨ−Ｌ１量の上昇又は低下を同定する反復検査を伴うモニタリングのような）と関連する、ＵＣＨ−Ｌ１のレベル若しくは量、外傷性脳損傷（一次脳損傷であれ、かつ／又は二次脳損傷であれ）のための処置と関連する、ＵＣＨ−Ｌ１のレベル若しくは量又はこれらの組合せを意味しうる。
【０１３５】
本明細書において、「変異体」は、アミノ酸の挿入、欠失又は保存的置換により、アミノ酸配列が異なるが、少なくとも１つの生物学的活性を保持するペプチド又はポリペプチドについて記載するのに使用される。「生物学的活性」の代表例は、特異的抗体により結合される能力又は免疫反応を促進する能力を含む。本明細書において、変異体はまた、少なくとも１つの生物学的活性を保持するアミノ酸配列を伴う基準タンパク質と実質的に同一なアミノ酸配列を伴うタンパク質について記載するのにも使用される。当技術分野において、アミノ酸の保存的置換、すなわち、アミノ酸を、類似の特性（例えば、親水性、帯電の程度及び帯電領域の分布）を有する、異なるアミノ酸により置き換えることは、典型的に、小さな変化を伴うこととして当技術分野において認識されている。当技術分野において理解された通り、これらの小さな変化は、部分的に、アミノ酸の疎水性指数を検討することにより同定されうる（Ｋｙｔｅら、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１５７：１０５〜１３２（１９８２））。アミノ酸の疎水性指数は、その疎水性及び電荷の検討に基づく。当技術分野において、同様の疎水性指数を有するアミノ酸は、置換される場合があるが、なおも、タンパク質の機能を保持することが公知である。一態様において、±２の疎水性指数を有するアミノ酸は、置換される。アミノ酸の親水性もまた、生物学的機能を保持するタンパク質を結果としてもたらす置換を明らかにするのに使用されうる。ペプチドの文脈における、アミノ酸の親水性についての検討は、抗原性及び免疫原性とよく相関することが報告されている、有用な尺度である、このペプチドの局所平均親水性の最大値の計算を可能とする（参照により本明細書に組み込まれる、米国特許第４，５５４，１０１号）。同様の親水性値を有するアミノ酸による置換は、生物学的活性、例えば、当技術分野において理解された免疫原性を保持するペプチドを結果としてもたらしうる。置換は、互いから±２以内の親水性値を有するアミノ酸により実施されうる。アミノ酸の疎水性指数及び親水性値のいずれも、このアミノ酸の特定の側鎖の影響を受ける。生物学的機能と適合性であるアミノ酸置換は、疎水性、親水性、電荷、サイズ及び他の特性により明らかにされる通り、アミノ酸の相対的類似性に依存し、特に、これらのアミノ酸の側鎖に依存すると理解されることは、この観察と符合する。「変異体」はまた、抗原的に反応性の抗ＵＣＨ−Ｌ１抗体の断片であって、アミノ酸配列内の、対応する抗ＵＣＨ−Ｌ１抗体の断片と異なるが、なおも抗原的に反応性であり、ＵＣＨ−Ｌ１との結合について、対応する抗ＵＣＨ−Ｌ１抗体の断片と競合しうる断片を指すようにも使用されうる。「変異体」はまた、タンパク質分解、リン酸化又は他の翻訳後修飾によるような、異なる形でプロセシングされているが、その抗原反応性を保持する、ポリペプチド又はこの断片について記載するのにも使用されうる。
【０１３６】
本明細書において、「ベクター」とは、連結された別の核酸を運びうる核酸分子について記載するのに使用される。ベクターの１つの種類は、さらなるＤＮＡセグメントがライゲーションされうる、環状二本鎖ＤＮＡループを指す、「プラスミド」である。ベクターの別の種類は、さらなるＤＮＡセグメントが、ウイルスゲノムへとライゲーションされうる、ウイルスベクターである。ある特定のベクターは、これらが導入される宿主細胞内の自己複製が可能である（例えば、細菌の複製起点及び哺乳動物エピソームベクターを有する細菌ベクター）。他のベクター（例えば、哺乳動物の非エピソームベクター）は、宿主細胞へと導入されると、宿主細胞のゲノムへと組み込まれ、これにより、宿主ゲノムと共に複製されうる。さらに、ある特定のベクターは、作動的に連結される遺伝子の発現を方向付けることが可能である。本明細書において、このようなベクターは、「組換え発現ベクター」（又は、単に、「発現ベクター」）と称される。一般に、組換えＤＮＡ法において有用な発現ベクターは、プラスミドの形態にあることが多い。プラスミドは、最も一般に、ベクターの形態で使用されるので、「プラスミド」と「ベクター」とは、互換的に使用されうる。しかし、ウイルスベクター（例えば、複製欠損性のレトロウイルス、アデノウイルス、及びアデノ随伴ウイルス）のような、同等な機能を果たす、発現ベクターの他の形態も使用されうる。この点で、ベクターのＲＮＡ形（ウイルス性ＲＮＡベクターを含む）もまた、本開示の文脈において使用されうる。
【０１３７】
そうでないことが規定されない限りにおいて、本明細書において使用される技術用語及び科学用語は、当業者により一般に理解される意味と同じ意味を有するものとする。例えば、本明細書において記載された、細胞培養法及び組織培養法、分子生物学、免疫学、微生物学、遺伝学並びにタンパク質化学及び核酸化学及びハイブリダイゼーションとの関連において使用された用語法、並びにこれらについての技法は、周知の用語法及び技法であり、当技術分野において一般的に使用されている用語法及び技法である。用語の意味及び範囲は、明確であるものとするが、万一、なんらかの潜在的な曖昧さが生じた場合、本明細書において提示された定義が、任意の辞書又は外部の定義に対して優先される。さらに、文脈により、そうでないことが要求されない限りにおいて、単数形の用語は、複数形を含み、複数形の用語は、単数形を含むものとする。
【０１３８】
２．ヒト対象が、頭部への損傷を負ったのかどうかについての診断及び査定の一助となる方法
本開示は、他の方法の中でとりわけ、ヒト対象が、頭部への損傷を負った、又は負った可能性があるのかどうかについての診断及び査定の一助となる方法に関する。本方法は、推測される頭部への損傷を伴う対象における、外傷性脳損傷の程度を診断及び査定すること（例えば、対象が、軽度ＴＢＩ又は中等度〜重度のＴＢＩを有するのかどうかを決定すること）の一助となりうる。本明細書において使用された「対象が、軽度外傷性脳損傷又は中等度〜重度の外傷性脳損傷を有するのかどうかを決定するステップ」とは、対象の、軽度ＴＢＩ又は中等度〜重度のＴＢＩを有する可能性が、そうでない場合より高いことを決定する（例えば、臨床評価データのような、他の情報を伴う）方法の使用を指す。方法は、対象への、推測される損傷から、２４時間以内に試料を得るステップ、試料を、外傷性脳損傷の早期バイオマーカーに対する抗体、ユビキチンカルボキシ末端ヒドロラーゼＬ１（ＵＣＨ−Ｌ１）からなる、外傷性脳損傷の早期バイオマーカーと接触させて、抗体とＵＣＨ−Ｌ１との複合体の形成を可能とするステップを含みうる。代替法において、本方法は、損傷から２４時間以内にヒト対象から採取された第１の試料及び第１の試料が採取された第１の時点の後である第２の時点（例えば約３時間〜約６時間後）においてヒト対象から採取された第２の試料である、第１の時点において採取された第１の試料及び第２の時点において採取された第２の試料を、ヒト対象から得るステップ、並びに第１の試料中及び第２の試料中において、個別に、外傷性脳損傷の早期バイオマーカーに対する抗体、ユビキチンカルボキシ末端ヒドロラーゼＬ１（ＵＣＨ−Ｌ１）からなる、外傷性脳損傷の早期バイオマーカーと接触させて、抗体とＵＣＨ−Ｌ１との複合体の形成を可能とするステップを含みうる。方法はまた、結果として得られる抗体−ＵＣＨ−Ｌ１複合体を検出するステップも含む。早期バイオマーカーは、推測される損傷後、約０〜約６時間以内に上昇し、次いで、外傷性脳損傷を伴う対象において、低下又は上昇する。一部の実施形態において、ＵＣＨ−Ｌ１の存在の開始は、頭部への損傷後、約０、約０．５時間、約１時間、約２時間、約３時間、約４時間、約５時間、又は約６時間以内に現れる。試料は、対象に由来する生物学的試料（例えば、血清試料又は血液試料）でありうる。
【０１３９】
一部の実施形態において、方法は、第１の試料及び、任意選択的に、第２の試料に対するアッセイを実施して、ユビキチンカルボキシ末端ヒドロラーゼＬ１（ＵＣＨ−Ｌ１）の、第１の試料中及び／又は第２の試料中レベルを測定又は検出するステップであって、第１の試料が推測される頭部への損傷後２４時間以内である第１の時点において対象から採取され、第２の試料が第１の時点の後である第２の時点（例えば、第１の時点の約３時間〜約６時間後）において対象から採取されるステップ；並びに外傷性脳損傷の程度を決定することにより、対象が、頭部への損傷を負っているのかどうかを決定するステップを含む。（ｉ）ＵＣＨ−Ｌ１の、第１の試料及び／又は第２の試料中レベルが、ＵＣＨ−Ｌ１の基準レベルより高い場合、対象が、中等度〜重度の外傷性脳損傷を有すると決定され、ＵＣＨ−Ｌ１の第１の試料及び／又は第２の試料中レベルが、ＵＣＨ−Ｌ１の基準レベルより低い場合、対象が、軽度外傷性脳損傷を有すると決定される；（ｉｉ）ＵＣＨ−Ｌ１の第１の試料中レベルからＵＣＨ−Ｌ１の第２の試料中レベルへ、統計学的に有意な上昇若しくは低下が見られる場合、対象が、中等度〜重度の外傷性脳損傷を有すると決定され、ＵＣＨ−Ｌ１の第１の試料中レベルからＵＣＨ−Ｌ１の、第２の試料中レベルへ、統計学的に有意な上昇若しくは低下が見られない場合、対象が、軽度外傷性脳損傷を有すると決定される；（ｉｉｉ）ＵＣＨ−Ｌ１のレベルが、第１の試料から第２の試料へ、少なくとも絶対量の低下若しくは上昇をする場合、対象が、中等度〜重度の外傷性脳損傷を有すると決定される、若しくは、ＵＣＨ−Ｌ１のレベルの第１の試料から第２の試料へ、少なくとも絶対量の低下若しくは上昇が見られない場合、対象が、軽度外傷性脳損傷を有すると決定される；（ｉｖ）ＵＣＨ−Ｌ１のレベルが、第１の試料から第２の試料へ、少なくとも第１の絶対量の低下若しくは上昇する場合、対象が、中等度〜重度の外傷性脳損傷を有すると決定される、若しくは、ＵＣＨ−Ｌ１のレベルが、第１の試料から第２の試料へ、少なくとも第２の絶対量の低下若しくは上昇をする場合、対象が、軽度外傷性脳損傷を有すると決定される；又は（ｖ）ＵＣＨ−Ｌ１の試料中レベルがＵＣＨ−Ｌ１の基準レベルより高い、若しくはＵＣＨ−Ｌ１の第１の時点において採取された試料中レベルからＵＣＨ−Ｌ１の第２の時点において採取された試料中レベルへ量Ｘの有意な上昇若しくは低下が見られる場合、対象が、中等度〜重度の外傷性脳損傷を有すると決定され、ＵＣＨ−Ｌ１の試料中レベルがＵＣＨ−Ｌ１の基準レベルより低い、若しくはＵＣＨ−Ｌ１の第１の時点において採取された試料中レベルからＵＣＨ−Ｌ１の第２の時点において採取された試料中レベルへ量Ｘを超える有意な上昇若しくは低下が見られない場合、対象が、軽度外傷性脳損傷を有すると決定される。一部の実施形態において、第１の絶対量と、第２の絶対量とは、同じでありうる。一部の実施形態において、第１の絶対量と、第２の絶対量とは、異なりうる。本明細書において使用された「Ｘ」とは、０以外の値を有する整数を指す。本明細書において使用された「対象が、軽度外傷性脳損傷又は中等度〜重度の外傷性脳損傷を有するのかどうかを決定するステップ」とは、対象の、軽度ＴＢＩ又は中等度〜重度のＴＢＩを有する可能性が、そうでない場合より高いことを、他の方法を伴うか又は伴わずに決定する方法の使用を指す。
【０１４０】
一部の実施形態において、対象は、アッセイが実施される前に、又は実施された後において、ＧＣＳ（Ｇｌａｓｇｏｗ  Ｃｏｍａ  Ｓｃａｌｅ）スコアを受けている。一部の実施形態において、対象は、ＧＣＳ（Ｇｌａｓｇｏｗ  Ｃｏｍａ  Ｓｃａｌｅ）スコアに基づき、中等度〜重度の外傷性脳損傷を有すると推測される。一部の実施形態において、基準レベルは、中等度〜重度の外傷性脳損傷を有する対象と相関する。一部の実施形態において、基準レベルは、基準レベルを同定するのに、対応するアッセイの種類を使用する、対応する試料の解析により、中等度〜重度の外傷性脳損傷を有する対象と相関する。
【０１４１】
代替的に、一部の実施形態において、対象は、アッセイが実施される前に、ＧＣＳ（Ｇｌａｓｇｏｗ  Ｃｏｍａ  Ｓｃａｌｅ）スコアを受けていない場合がある。代替的に、一部の実施形態において、対象は、アッセイが、実施された後において、ＧＣＳ（Ｇｌａｓｇｏｗ  Ｃｏｍａ  Ｓｃａｌｅ）スコアを受けていない場合がある。加えて、他の実施形態において、対象は、アッセイが実施される前に、頭部ＣＴを受ける場合がある。代替的にまた、他の実施形態において、対象は、アッセイが実施される前に、頭部ＣＴを受けていない場合がある。なお、さらに、対象は、アッセイが実施される前に、ＧＣＳ（Ｇｌａｓｇｏｗ  Ｃｏｍａ  Ｓｃａｌｅ）又は頭部ＣＴを受けていない場合がある。なお、さらなる実施形態において、対象は、アッセイが実施される前に、ＧＣＳ（Ｇｌａｓｇｏｗ  Ｃｏｍａ  Ｓｃａｌｅ）を受けているが、頭部ＣＴを受けていない場合がある。なお、さらなる実施形態において、対象は、アッセイが実施される前に、頭部ＣＴを受けているが、ＧＣＳ（Ｇｌａｓｇｏｗ  Ｃｏｍａ  Ｓｃａｌｅ）を受けていない場合がある。なお、さらなる実施形態において、対象は、アッセイが実施される前に、頭部ＣＴ及びＧＣＳ（Ｇｌａｓｇｏｗ  Ｃｏｍａ  Ｓｃａｌｅ）を受けている場合がある。
【０１４２】
一部の実施形態において、基準レベルは、３〜１２のＧＣＳ（Ｇｌａｓｇｏｗ  Ｃｏｍａ  Ｓｃａｌｅ）スコアと相関する。一部の実施形態において、対象は、ＧＣＳ（Ｇｌａｓｇｏｗ  Ｃｏｍａ  Ｓｃａｌｅ）スコアに基づき、軽度外傷性脳損傷を有すると推測される。一部の実施形態において、基準レベルは、軽度外傷性脳損傷を有する対象と相関する。一部の実施形態において、基準レベルは、１３〜１５のＧＣＳ（Ｇｌａｓｇｏｗ  Ｃｏｍａ  Ｓｃａｌｅ）スコアと相関する。一部の実施形態において、基準レベルは、基準レベルを同定するのに、対応するアッセイの種類を使用する、対応する試料の解析により、軽度外傷性脳損傷を有する対象と相関する。
【０１４３】
一般に、基準レベルはまた、被験試料を、ＵＣＨ−Ｌ１についてアッセイしたときに得られた結果を評価するためのベンチマークとしても利用されうる。一般に、このような比較を行う場合に、基準レベルは、解析物の存在、量又は濃度の、ＴＢＩの特定の病期若しくはエンドポイント又は特定の徴候との連関又は関連が成立させられうるような、十分な回数及び適切な条件下において、特定のアッセイを行うことにより得られる。典型的に、基準レベルは、基準対象（又は対象の集団）についてのアッセイにより得られる。測定されるＵＣＨ−Ｌ１は、このＵＣＨ−Ｌ１断片、この分解産物及び／又は酵素によるこの切断産物を含みうる。
【０１４４】
一部の実施形態において、基準レベルは、少なくとも約８５％〜約１００％の間の感度及び少なくとも約３０％〜約１００％の間の特異度を有するアッセイにより決定される。一部の実施形態において、感度は、少なくとも約８５．０％、少なくとも約８７．５％、少なくとも約９０．０％、少なくとも約９５．０％、少なくとも約９９．０％、少なくとも約９９．１％、少なくとも約９９．２％、少なくとも約９９．３％、少なくとも約９９．４％、少なくとも約９９．５％、少なくとも約９９．６％、少なくとも約９９．７％、少なくとも約９９．８％、少なくとも約９９．９％、又は約１００．０％である。一部の実施形態において、特異度は、少なくとも約３０．０％、少なくとも約３１．０％、少なくとも約３２．０％、少なくとも約３３．０％、少なくとも約３４．０％、少なくとも約３５．０％、少なくとも約３６．０％、少なくとも約３７．０％、少なくとも約３８．０％、少なくとも約３９．０％、少なくとも約４０．０％、少なくとも約４５．０％、少なくとも約５０．０％、少なくとも約５５．０％、少なくとも約６０．０％、少なくとも約６５．０％、少なくとも約７０．０％、少なくとも約７５．０％、少なくとも約８０．０％、少なくとも約８５．０％、少なくとも約９０．０％、少なくとも約９１．０％、少なくとも約９２．０％、少なくとも約９３．０％、少なくとも約９４．０％、少なくとも約９５．０％、少なくとも約９６．０％、少なくとも約９７．０％、少なくとも約９８．０％、少なくとも約９９．０％、少なくとも約９９．１％、少なくとも約９９．２％、少なくとも約９９．３％、少なくとも約９９．４％、少なくとも約９９．５％、少なくとも約９９．６％、少なくとも約９９．７％、少なくとも約９９．８％、少なくとも約９９．９％、又は約１００．０％である。例えば、感度は、少なくとも約９９％であり、特異度は、少なくとも約７５％である、感度は、少なくとも約９９％であり、特異度は、少なくとも約９９％である、又は感度は、約１００％であり、特異度は、約１００％である。一部の実施形態において、感度は、少なくとも約９９％であり、特異度は、少なくとも約７５％である。さらに他の実施形態において、感度は、少なくとも約９９％であり、特異度は、少なくとも約９９％である。なお、さらなる実施形態において、感度は、約１００％であり、特異度は、約１００％である。
【０１４５】
一部の実施形態において、基準レベルは、少なくとも約５０ｐｇ／ｍＬ〜約１２０００ｐｇ／ｍＬの間でありうる。一部の実施形態において、基準レベルは、少なくとも約５０ｐｇ／ｍＬ〜約１２０００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約５０ｐｇ／ｍＬ〜約１１０００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約５０ｐｇ／ｍＬ〜約１００００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約５０ｐｇ／ｍＬ〜約９５００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約５０ｐｇ／ｍＬ〜約９０００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約５０ｐｇ／ｍＬ〜約８５００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約５０ｐｇ／ｍＬ〜約８０００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約５０ｐｇ／ｍＬ〜約７５００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約５０ｐｇ／ｍＬ〜約７０００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約５０ｐｇ／ｍＬ〜約６５００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約５０ｐｇ／ｍＬ〜約６０００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約５０ｐｇ／ｍＬ〜約５５００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約５０ｐｇ／ｍＬ〜約５０００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約５０ｐｇ／ｍＬ〜約４５００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約５０ｐｇ／ｍＬ〜約４０００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約５０ｐｇ／ｍＬ〜約３５００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約５０ｐｇ／ｍＬ〜約３０００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約５０ｐｇ／ｍＬ〜約２５００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約５０ｐｇ／ｍＬ〜約２０００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約５０ｐｇ／ｍＬ〜約１５００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約５０ｐｇ／ｍＬ〜約１０００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約５０ｐｇ／ｍＬ〜約９００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約５０ｐｇ／ｍＬ〜約８００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約５０ｐｇ／ｍＬ〜約７００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約５０ｐｇ／ｍＬ〜約６００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約５０ｐｇ／ｍＬ〜約５００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約１００ｐｇ／ｍＬ〜約１２０００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約１００ｐｇ／ｍＬ〜約１１０００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約１００ｐｇ／ｍＬ〜約１００００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約１００ｐｇ／ｍＬ〜約９５００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約１００ｐｇ／ｍＬ〜約９０００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約１００ｐｇ／ｍＬ〜約８５００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約１００ｐｇ／ｍＬ〜約８０００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約１００ｐｇ／ｍＬ〜約７５００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約１００ｐｇ／ｍＬ〜約７０００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約１００ｐｇ／ｍＬ〜約６５００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約１００ｐｇ／ｍＬ〜約６０００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約１００ｐｇ／ｍＬ〜約５５００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約１００ｐｇ／ｍＬ〜約５０００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約１００ｐｇ／ｍＬ〜約４５００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約１００ｐｇ／ｍＬ〜約４０００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約１００ｐｇ／ｍＬ〜約３５００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約１００ｐｇ／ｍＬ〜約３０００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約１００ｐｇ／ｍＬ〜約２５００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約１００ｐｇ／ｍＬ〜約２０００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約１００ｐｇ／ｍＬ〜約１５００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約１００ｐｇ／ｍＬ〜約１０００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約１００ｐｇ／ｍＬ〜約９００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約１００ｐｇ／ｍＬ〜約８００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約１００ｐｇ／ｍＬ〜約７００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約１００ｐｇ／ｍＬ〜約６００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約１００ｐｇ／ｍＬ〜約５００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約１５０ｐｇ／ｍＬ〜約１２０００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約１５０ｐｇ／ｍＬ〜約１１０００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約１５０ｐｇ／ｍＬ〜約１００００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約１５０ｐｇ／ｍＬ〜約９５００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約１５０ｐｇ／ｍＬ〜約９０００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約１５０ｐｇ／ｍＬ〜約８５００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約１５０ｐｇ／ｍＬ〜約８０００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約１５０ｐｇ／ｍＬ〜約７５００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約１５０ｐｇ／ｍＬ〜約７０００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約１５０ｐｇ／ｍＬ〜約６５００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約１５０ｐｇ／ｍＬ〜約６０００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約１５０ｐｇ／ｍＬ〜約５５００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約１５０ｐｇ／ｍＬ〜約５０００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約１５０ｐｇ／ｍＬ〜約４５００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約１５０ｐｇ／ｍＬ〜約４０００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約１５０ｐｇ／ｍＬ〜約３５００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約１５０ｐｇ／ｍＬ〜約３０００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約１５０ｐｇ／ｍＬ〜約２５００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約１５０ｐｇ／ｍＬ〜約２０００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約１５０ｐｇ／ｍＬ〜約１５００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約１５０ｐｇ／ｍＬ〜約１０００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約１５０ｐｇ／ｍＬ〜約９００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約１５０ｐｇ／ｍＬ〜約８００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約１５０ｐｇ／ｍＬ〜約７００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約１５０ｐｇ／ｍＬ〜約６００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約１５０ｐｇ／ｍＬ〜約５００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約２００ｐｇ／ｍＬ〜約１２０００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約２００ｐｇ／ｍＬ〜約１１０００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約２００ｐｇ／ｍＬ〜約１００００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約２００ｐｇ／ｍＬ〜約９５００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約２００ｐｇ／ｍＬ〜約９０００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約２００ｐｇ／ｍＬ〜約８５００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約２００ｐｇ／ｍＬ〜約８０００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約２００ｐｇ／ｍＬ〜約７５００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約２００ｐｇ／ｍＬ〜約７０００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約２００ｐｇ／ｍＬ〜約６５００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約２００ｐｇ／ｍＬ〜約６０００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約２００ｐｇ／ｍＬ〜約５５００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約２００ｐｇ／ｍＬ〜約５０００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約２００ｐｇ／ｍＬ〜約４５００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約２００ｐｇ／ｍＬ〜約４０００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約２００ｐｇ／ｍＬ〜約３５００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約２００ｐｇ／ｍＬ〜約３０００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約２００ｐｇ／ｍＬ〜約２５００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約２００ｐｇ／ｍＬ〜約２０００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約２００ｐｇ／ｍＬ〜約１５００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約２００ｐｇ／ｍＬ〜約１０００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約２００ｐｇ／ｍＬ〜約９００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約２００ｐｇ／ｍＬ〜約８００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約２００ｐｇ／ｍＬ〜約７００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約２００ｐｇ／ｍＬ〜約６００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約２００ｐｇ／ｍＬ〜約５００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約３００ｐｇ／ｍＬ〜約１２０００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約３００ｐｇ／ｍＬ〜約１１０００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約３００ｐｇ／ｍＬ〜約１００００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約３００ｐｇ／ｍＬ〜約９５００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約３００ｐｇ／ｍＬ〜約９０００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約３００ｐｇ／ｍＬ〜約８５００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約３００ｐｇ／ｍＬ〜約８０００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約３００ｐｇ／ｍＬ〜約７５００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約３００ｐｇ／ｍＬ〜約７０００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約３００ｐｇ／ｍＬ〜約６５００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約３００ｐｇ／ｍＬ〜約６０００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約３００ｐｇ／ｍＬ〜約５５００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約３００ｐｇ／ｍＬ〜約５０００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約３００ｐｇ／ｍＬ〜約４５００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約３００ｐｇ／ｍＬ〜約４０００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約３００ｐｇ／ｍＬ〜約３５００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約３００ｐｇ／ｍＬ〜約３０００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約３００ｐｇ／ｍＬ〜約２５００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約３００ｐｇ／ｍＬ〜約２０００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約３００ｐｇ／ｍＬ〜約１５００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約３００ｐｇ／ｍＬ〜約１０００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約３００ｐｇ／ｍＬ〜約９００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約３００ｐｇ／ｍＬ〜約８００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約３００ｐｇ／ｍＬ〜約７００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約３００ｐｇ／ｍＬ〜約６００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約３００ｐｇ／ｍＬ〜約５００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約４００ｐｇ／ｍＬ〜約１２０００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約４００ｐｇ／ｍＬ〜約１１０００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約４００ｐｇ／ｍＬ〜約１００００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約４００ｐｇ／ｍＬ〜約９５００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約４００ｐｇ／ｍＬ〜約９０００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約４００ｐｇ／ｍＬ〜約８５００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約４００ｐｇ／ｍＬ〜約８０００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約４００ｐｇ／ｍＬ〜約７５００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約４００ｐｇ／ｍＬ〜約７０００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約４００ｐｇ／ｍＬ〜約６５００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約４００ｐｇ／ｍＬ〜約６０００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約４００ｐｇ／ｍＬ〜約５５００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約４００ｐｇ／ｍＬ〜約５０００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約４００ｐｇ／ｍＬ〜約４５００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約４００ｐｇ／ｍＬ〜約４０００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約４００ｐｇ／ｍＬ〜約３５００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約４００ｐｇ／ｍＬ〜約３０００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約４００ｐｇ／ｍＬ〜約２５００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約４００ｐｇ／ｍＬ〜約２０００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約４００ｐｇ／ｍＬ〜約１５００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約４００ｐｇ／ｍＬ〜約１０００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約４００ｐｇ／ｍＬ〜約９００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約４００ｐｇ／ｍＬ〜約８００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約４００ｐｇ／ｍＬ〜約７００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約４００ｐｇ／ｍＬ〜約６００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約４００ｐｇ／ｍＬ〜約５００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約５００ｐｇ／ｍＬ〜約１２０００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約５００ｐｇ／ｍＬ〜約１１０００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約５００ｐｇ／ｍＬ〜約１００００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約５００ｐｇ／ｍＬ〜約９５００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約５００ｐｇ／ｍＬ〜約９０００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約５００ｐｇ／ｍＬ〜約８５００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約５００ｐｇ／ｍＬ〜約８０００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約５００ｐｇ／ｍＬ〜約７５００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約５００ｐｇ／ｍＬ〜約７０００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約５００ｐｇ／ｍＬ〜約６５００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約５００ｐｇ／ｍＬ〜約６０００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約５００ｐｇ／ｍＬ〜約５５００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約５００ｐｇ／ｍＬ〜約５０００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約５００ｐｇ／ｍＬ〜約４５００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約５００ｐｇ／ｍＬ〜約４０００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約５００ｐｇ／ｍＬ〜約３５００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約５００ｐｇ／ｍＬ〜約３０００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約５００ｐｇ／ｍＬ〜約２５００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約５００ｐｇ／ｍＬ〜約２０００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約５００ｐｇ／ｍＬ〜約１５００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約５００ｐｇ／ｍＬ〜約１０００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約５００ｐｇ／ｍＬ〜約９００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約５００ｐｇ／ｍＬ〜約８００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約５００ｐｇ／ｍＬ〜約７００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約５００ｐｇ／ｍＬ〜約６００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約１０００ｐｇ／ｍＬ〜約１２０
００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約１０００ｐｇ／ｍＬ〜約１１０００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約１０００ｐｇ／ｍＬ〜約１００００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約１０００ｐｇ／ｍＬ〜約９５００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約１０００ｐｇ／ｍＬ〜約９０００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約１０００ｐｇ／ｍＬ〜約８５００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約１０００ｐｇ／ｍＬ〜約８０００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約１０００ｐｇ／ｍＬ〜約７５００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約１０００ｐｇ／ｍＬ〜約７０００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約１０００ｐｇ／ｍＬ〜約６５００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約１０００ｐｇ／ｍＬ〜約６０００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約１０００ｐｇ／ｍＬ〜約５５００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約１０００ｐｇ／ｍＬ〜約５０００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約１０００ｐｇ／ｍＬ〜約４５００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約１０００ｐｇ／ｍＬ〜約４０００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約１０００ｐｇ／ｍＬ〜約３５００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約１０００ｐｇ／ｍＬ〜約３０００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約１０００ｐｇ／ｍＬ〜約２５００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約１０００ｐｇ／ｍＬ〜約２０００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約１０００ｐｇ／ｍＬ〜約１５００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約２０００ｐｇ／ｍＬ〜約１２０００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約２０００ｐｇ／ｍＬ〜約１１０００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約２０００ｐｇ／ｍＬ〜約１００００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約２０００ｐｇ／ｍＬ〜約９５００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約２０００ｐｇ／ｍＬ〜約９０００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約２０００ｐｇ／ｍＬ〜約８５００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約２０００ｐｇ／ｍＬ〜約８０００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約２０００ｐｇ／ｍＬ〜約７５００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約２０００ｐｇ／ｍＬ〜約７０００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約２０００ｐｇ／ｍＬ〜約６５００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約２０００ｐｇ／ｍＬ〜約６０００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約２０００ｐｇ／ｍＬ〜約５５００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約２０００ｐｇ／ｍＬ〜約５０００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約２０００ｐｇ／ｍＬ〜約４５００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約２０００ｐｇ／ｍＬ〜約４０００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約２０００ｐｇ／ｍＬ〜約３５００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約２０００ｐｇ／ｍＬ〜約３０００ｐｇ／ｍＬの間、又は少なくとも約２０００ｐｇ／ｍＬ〜約２５００ｐｇ／ｍＬの間でありうる。例えば、基準レベルは、少なくとも約６５ｐｇ／ｍＬ〜約９０１９ｐｇ／ｍＬの間でありうる。一部の実施形態において、基準レベルは、少なくとも約５０ｐｇ／ｍＬ、少なくとも約５５ｐｇ／ｍＬ、少なくとも約６０ｐｇ／ｍＬ、少なくとも約６５ｐｇ／ｍＬ、少なくとも約７０ｐｇ／ｍＬ、少なくとも約７５ｐｇ／ｍＬ、少なくとも約８０ｐｇ／ｍＬ、少なくとも約８５ｐｇ／ｍＬ、少なくとも約９０ｐｇ／ｍＬ、少なくとも約９５ｐｇ／ｍＬ、少なくとも約９６ｐｇ／ｍＬ、少なくとも約９７ｐｇ／ｍＬ、少なくとも約９８ｐｇ／ｍＬ、少なくとも約９９ｐｇ／ｍＬ、少なくとも約１００ｐｇ／ｍＬ、少なくとも約１５０ｐｇ／ｍＬ、少なくとも約２００ｐｇ／ｍＬ、少なくとも約２０５ｐｇ／ｍＬ、少なくとも約２０６ｐｇ／ｍＬ、少なくとも約２０７ｐｇ／ｍＬ、少なくとも約２０８ｐｇ／ｍＬ、少なくとも約２０９ｐｇ／ｍＬ、少なくとも約２１０ｐｇ／ｍＬ、少なくとも約２２０ｐｇ／ｍＬ、少なくとも約２３０ｐｇ／ｍＬ、少なくとも約２３８ｐｇ／ｍＬ、少なくとも約２４０ｐｇ／ｍＬ、少なくとも約２５０ｐｇ／ｍＬ、少なくとも約３００ｐｇ／ｍＬ、少なくとも約３１１ｐｇ／ｍＬ、少なくとも約３２０ｐｇ／ｍＬ、少なくとも約３３０ｐｇ／ｍＬ、少なくとも約３５０ｐｇ／ｍＬ、少なくとも約３６０ｐｇ／ｍＬ、少なくとも約３７０ｐｇ／ｍＬ、少なくとも約３８０ｐｇ／ｍＬ、少なくとも約３９０ｐｇ／ｍＬ、少なくとも約４００ｐｇ／ｍＬ、少なくとも約４５０ｐｇ／ｍＬ、少なくとも約５００ｐｇ／ｍＬ、少なくとも約５０５ｐｇ／ｍＬ、少なくとも約５０６ｐｇ／ｍＬ、少なくとも約５０７ｐｇ／ｍＬ、少なくとも約５０８ｐｇ／ｍＬ、少なくとも約５０９ｐｇ／ｍＬ、少なくとも約５１０ｐｇ／ｍＬ、少なくとも約５２０ｐｇ／ｍＬ、少なくとも約５３０ｐｇ／ｍＬ、少なくとも約５４０ｐｇ／ｍＬ、少なくとも約５５０ｐｇ／ｍＬ、少なくとも約５６０ｐｇ／ｍＬ、少なくとも約５６５ｐｇ／ｍＬ、少なくとも約５６９ｐｇ／ｍＬ、少なくとも約５７０ｐｇ／ｍＬ、少なくとも約７００ｐｇ／ｍＬ、少なくとも約７１０ｐｇ／ｍＬ、少なくとも約７２０ｐｇ／ｍＬ、少なくとも約７３０ｐｇ／ｍＬ、少なくとも約７４０ｐｇ／ｍＬ、少なくとも約７５０ｐｇ／ｍＬ、少なくとも約８００ｐｇ／ｍＬ、少なくとも約８５０ｐｇ／ｍＬ、少なくとも約９００ｐｇ／ｍＬ、少なくとも約９５０ｐｇ／ｍＬ、少なくとも約１０００ｐｇ／ｍＬ、少なくとも約１１００ｐｇ／ｍＬ、少なくとも約１２００ｐｇ／ｍＬ、少なくとも約１３００ｐｇ／ｍＬ、少なくとも約１４００ｐｇ／ｍＬ、少なくとも約１５００ｐｇ／ｍＬ、少なくとも約１６００ｐｇ／ｍＬ、少なくとも約１７００ｐｇ／ｍＬ、少なくとも約１８００ｐｇ／ｍＬ、少なくとも約１９００ｐｇ／ｍＬ、少なくとも約２０００ｐｇ／ｍＬ、少なくとも約２５００ｐｇ／ｍＬ、少なくとも約３０００ｐｇ／ｍＬ、少なくとも約３５００ｐｇ／ｍＬ、少なくとも約４０００ｐｇ／ｍＬ、少なくとも約４５００ｐｇ／ｍＬ、少なくとも約５０００ｐｇ／ｍＬ、少なくとも約５５００ｐｇ／ｍＬ、少なくとも約６０００ｐｇ／ｍＬ、少なくとも約６５００ｐｇ／ｍＬ、少なくとも約７０００ｐｇ／ｍＬ、少なくとも約７５００ｐｇ／ｍＬ、少なくとも約８０００ｐｇ／ｍＬ、少なくとも約８５００ｐｇ／ｍＬ、少なくとも約９０００ｐｇ／ｍＬ、少なくとも約９０１０ｐｇ／ｍＬ、少なくとも約９０２０ｐｇ／ｍＬ、少なくとも約９５００ｐｇ／ｍＬ、少なくとも約１００００ｐｇ／ｍＬ、少なくとも約１１０００ｐｇ／ｍＬ、又は少なくとも約１２０００ｐｇ／ｍＬでありうる。一部の実施形態において、基準レベルは、少なくとも約５０ｐｇ／ｍＬ〜約１２０００ｐｇ／ｍＬの間でありうる。他の実施形態において、基準レベルは、少なくとも約６５ｐｇ／ｍＬ〜約９０１９ｐｇ／ｍＬの間でありうる。
【０１４６】
一部の実施形態において、第１の試料は、推測される損傷後２４時間以内に採取され、第２の試料は、第１の試料が採取された後、約３時間〜約６時間以内に採取され、基準レベルは、上記において記載された、特定の感度及び特異度を有するアッセイにより決定される。例えば、第１の試料は、推測される損傷後、約０時間以内に、約３０分以内に、約１時間以内に、約２時間以内に、約３時間以内に、約４時間以内に、約５時間以内に、約６時間以内に、約７時間以内に、約８時間以内に、約９時間以内に、約１０時間以内に、約１１時間以内に、約１２時間以内に、約１３時間以内に、約１４時間以内に、約１５時間以内に、約１６時間以内に、約１７時間以内に、約１８時間以内に、約１９時間以内に、約２０時間以内に、約２１時間以内に、約２２時間以内に、約２３時間以内に、約２４時間以内に、又は約２４時間を超えて採取されうる。
【０１４７】
一部の実施形態において、第１の試料は、推測される損傷後、約０〜約１時間以内に、約０〜約２時間以内に、約０〜約３時間以内に、約０〜約４時間以内に、約０〜約５時間以内に、約０〜約６時間以内に、約０〜約７時間以内に、約０〜約８時間以内に、約０〜約９時間以内に、約０〜約１０時間以内に、約０〜約１１時間以内に、約０〜約１２時間以内に、約０〜約１８時間以内に、約６〜約１２時間以内に、約１２〜約１８時間以内に、約１８〜約２４時間以内に、又は２４時間を超えて採取され、基準レベルは、約１００％の感度及び少なくとも約７５％の特異度、少なくとも約９９％の感度及び少なくとも約７５％の特異度又は約１００％の感度及び約１００％の特異度のような、少なくとも約８５％〜１００％の間の感度及び少なくとも約３０％〜１００％の間の特異度のような、特定の感度及び特異度を有するアッセイにより決定される。
【０１４８】
一部の実施形態において、第１の試料は、約０〜約６時間以内に得られる場合があり、基準レベルは、約３１１ｐｇ／ｍＬである場合があり、アッセイは、約１００％の感度及び少なくとも約３３％の特異度を有する。一部の実施形態において、第１の試料は、約０〜約６時間以内に得られる場合があり、基準レベルは、約５０９ｐｇ／ｍＬである場合があり、アッセイは、約１００％の感度及び少なくとも約６６％の特異度を有する。一部の実施形態において、第１の試料は、約０〜約６時間以内に得られる場合があり、基準レベルは、約７１０ｐｇ／ｍＬである場合があり、アッセイは、約１００％の感度及び少なくとも約９２％の特異度を有する。一部の実施形態において、第１の試料は、約０〜約６時間以内に得られる場合があり、基準レベルは、約９０１９ｐｇ／ｍＬである場合があり、アッセイは、約１００％の感度及び約１００％の特異度を有する。
【０１４９】
一部の実施形態において、第１の試料は、推測される損傷後、約６時間〜１２時間の間に得られる場合があり、基準レベルは、約６５ｐｇ／ｍＬ〜約９０１９ｐｇ／ｍＬの間であり、少なくとも約８５％〜約１００％の間の感度及び少なくとも約３０％〜約１００％の間の特異度を有するアッセイにより決定される。一部の実施形態において、第１の試料は、推測される損傷後、約６時間〜１２時間の間に採取され、基準レベルは、約９８ｐｇ／ｍＬであり、約１００％の感度及び少なくとも約３０％の特異度を有するアッセイにより決定される。一部の実施形態において、第１の試料は、推測される損傷後、約６時間〜１２時間の間に採取され、基準レベルは、約２０９ｐｇ／ｍＬであり、約１００％の感度及び少なくとも約６３％の特異度を有するアッセイにより決定される。一部の実施形態において、第１の試料は、推測される損傷後、約６時間〜１２時間の間に採取され、基準レベルは、約２３８ｐｇ／ｍＬであり、少なくとも約９０％の感度及び少なくとも約７０％の特異度を有するアッセイにより決定される。一部の実施形態において、第１の試料は、推測される損傷後、約６時間〜１２時間の間に採取され、基準レベルは、約５６９ｐｇ／ｍＬであり、少なくとも約９０％の感度及び少なくとも約９６％の特異度を有するアッセイにより決定される。
【０１５０】
一部の実施形態において、対象が、軽度又は中等度〜重度のＴＢＩを有するのかどうかを決定するように、第１の試料は、第１の時点において得られ、第２の試料は、第２の時点において得られる。一部の実施形態において、第１の時点は、頭部への損傷又は推測される損傷の約０〜約２４時間後である。例えば、第１の時点は、推測される損傷後、約０〜約２４時間、約０〜約２０時間、約０〜約１８時間、約０〜約１６時間、約０〜約１４時間、約０〜約１２時間、約０〜約１０時間、約０〜約８時間、約０〜約６時間、約０〜約４時間、約０〜約２時間、約０〜約１時間、約０〜約１．５時間、約０．５時間〜約２４時間、約０．５時間〜約２０時間、約０．５時間〜約１８時間、約０．５時間〜約１６時間、約０．５時間〜約１４時間、約０．５時間〜約１２時間、約０．５時間〜約１０時間、約０．５時間〜約８時間、約０．５時間〜約６時間、約０．５時間〜約４時間、約０．５時間〜約２時間、約０．５時間〜約１時間、約０．５時間〜約１．５時間、約１時間〜約２４時間、約１時間〜約２０時間、約１時間〜約１８時間、約１時間〜約１６時間、約１時間〜約１４時間、約１時間〜約１２時間、約１時間〜約１０時間、約１時間〜約８時間、約１時間〜約６時間、約１時間〜約４時間、約１時間〜約２時間、約２時間〜約２４時間、約２時間〜約２０時間、約２時間〜約１８時間、約２時間〜約１６時間、約２時間〜約１４時間、約２時間〜約１２時間、約２時間〜約１０時間、約２時間〜約８時間、約２時間〜約６時間、約２時間〜約４時間、約３時間〜約２４時間、約３時間〜約２０時間、約３時間〜約１８時間、約３時間〜約１６時間、約３時間〜約１４時間、約３時間〜約１２時間、約３時間〜約１０時間、約３時間〜約８時間、約３時間〜約６時間、約３時間〜約４時間、約４時間〜約２４時間、約４時間〜約２０時間、約４時間〜約１８時間、約４時間〜約１６時間、約４時間〜約１４時間、約４時間〜約１２時間、約４時間〜約１０時間、約４時間〜約８時間、約４時間〜約６時間、約６時間〜約２４時間、約６時間〜約２０時間、約６時間〜約１８時間、約６時間〜約１６時間、約６時間〜約１４時間、約６時間〜約１２時間、約６時間〜約１０時間、約６時間〜約８時間、約１２時間〜約２４時間、約１２時間〜約２０時間、約１２時間〜約１８時間、約１２時間〜約１６時間、約１２時間〜約１４時間、約１８時間〜約２４時間の間又は約２４時間を超えた時点でありうる。例えば、第１の時点は、約０時間〜６時間の間、約６時間〜１２時間の間、約１２時間〜１８時間の間又は約１８時間〜２４時間の間でありうる。一部の実施形態において、第１の時点は、約０時間〜６時間の間である。一部の実施形態において、第１の時点は、約６時間〜約１２時間の間である。一部の実施形態において、第１の時点は、約１２時間〜約１８時間の間である。他の実施形態において、第１の時点は、約１８時間〜約２４時間の間である。
【０１５１】
一部の実施形態において、第２の時点は、第１の時点の約３時間〜約６時間後のような、第１の時点の約１時間〜約１０時間後である。一部の実施形態において、第２の時点は、第１の時点の約１時間、約２時間、約３時間、約４時間、約５時間、約６時間、約７時間、約８時間、約９時間、又は約１０時間後である。
【０１５２】
一部の実施形態において、統計学的に有意な上昇又は低下は、ＵＣＨ−Ｌ１の第１の時点において採取された第１の試料中レベルからＵＣＨ−Ｌ１の第２の時点において採取された第２の試料中レベルへ、少なくとも約０．１倍若しくは少なくとも約０．１分の１、少なくとも約０．２倍若しくは少なくとも約０．２分の１、少なくとも約０．３倍若しくは少なくとも約０．３分の１、少なくとも約０．４倍若しくは少なくとも約０．４分の１、少なくとも約０．５倍若しくは少なくとも約０．５分の１、少なくとも約０．５５倍若しくは少なくとも約０．５５分の１、少なくとも約０．６倍若しくは少なくとも約０．６分の１、少なくとも約０．７倍若しくは少なくとも約０．７分の１、少なくとも約０．７３倍若しくは少なくとも約０．７３分の１、少なくとも約０．８倍若しくは少なくとも約０．８分の１、少なくとも約０．９倍若しくは少なくとも約０．９分の１、少なくとも約１倍若しくは少なくとも約１分の１、少なくとも約１．５倍若しくは少なくとも約１．５分の１、少なくとも約２倍若しくは少なくとも約２分の１、少なくとも約３倍若しくは少なくとも約３分の１、少なくとも約４倍若しくは少なくとも約４分の１、少なくとも約５倍若しくは少なくとも約５分の１、少なくとも約６倍若しくは少なくとも約６分の１、少なくとも約７倍若しくは少なくとも約７分の１、少なくとも約８倍若しくは少なくとも約８分の１、少なくとも約９倍若しくは少なくとも約９分の１、少なくとも約１０倍若しくは少なくとも約１０分の１、少なくとも約１１倍若しくは少なくとも約１１分の１、少なくとも約１２倍若しくは少なくとも約１２分の１、少なくとも約１３倍若しくは少なくとも約１３分の１、少なくとも約１４倍若しくは少なくとも約１４分の１、少なくとも約１５倍若しくは少なくとも約１５分の１、少なくとも約１６倍若しくは少なくとも約１６分の１、少なくとも約１７倍若しくは少なくとも約１７分の１、少なくとも約１８倍若しくは少なくとも約１８分の１、少なくとも約１９倍若しくは少なくとも約１９分の１又は少なくとも約２０倍若しくは少なくとも約２０分の１である。一部の実施形態において、ＵＣＨ−Ｌ１の第１の時点において採取された第１の試料中レベルからＵＣＨ−Ｌ１の第２の時点において採取された第２の試料中レベルへ、少なくとも約０．１分の１、少なくとも約０．２分の１、少なくとも約０．３分の１、少なくとも約０．４分の１、少なくとも約０．５分の１、少なくとも約０．５５分の１、少なくとも約０．６分の１、少なくとも約０．７分の１、少なくとも約０．７３分の１、少なくとも約０．８分の１、少なくとも約０．９分の１、少なくとも約１分の１、少なくとも約１．５分の１、少なくとも約２分の１、少なくとも約３分の１、少なくとも約４分の１、少なくとも約５分の１、少なくとも約６分の１、少なくとも約７分の１、少なくとも約８分の１、少なくとも約９分の１、少なくとも約１０分の１、少なくとも約１１分の１、少なくとも約１２分の１、少なくとも約１３分の１、少なくとも約１４分の１、少なくとも約１５分の１、少なくとも約１６分の１、少なくとも約１７分の１、少なくとも約１８分の１、少なくとも約１９分の１又は少なくとも約２０分の１の、統計学的に有意な低下は、対象が、中等度〜重度の外傷性脳損傷を有することを指し示す。一部の実施形態において、ＵＣＨ−Ｌ１の第１の時点において採取された第１の試料中レベルからＵＣＨ−Ｌ１の、第２の時点において採取された第２の試料中レベルへ、少なくとも約０．１倍、少なくとも約０．２倍、少なくとも約０．３倍、少なくとも約０．４倍、少なくとも約０．５倍、少なくとも約０．５５倍、少なくとも約０．６倍、少なくとも約０．７倍、少なくとも約０．７３倍、少なくとも約０．８倍、少なくとも約０．９倍、少なくとも約１倍、少なくとも約１．５倍、少なくとも約２倍、少なくとも約３倍、少なくとも約４倍、少なくとも約５倍、少なくとも約６倍、少なくとも約７倍、少なくとも約８倍、少なくとも約９倍、少なくとも約１０倍、少なくとも約１１倍、少なくとも約１２倍、少なくとも約１３倍、少なくとも約１４倍、少なくとも約１５倍、少なくとも約１６倍、少なくとも約１７倍、少なくとも約１８倍、少なくとも約１９倍又は少なくとも約２０倍の、統計学的に有意な上昇は、対象が、中等度〜重度の外傷性脳損傷を有することを指し示す。
【０１５３】
一部の実施形態において、統計学的に有意な上昇又は低下は、ＵＣＨ−Ｌ１の第１の時点において採取された第１の試料中レベルからＵＣＨ−Ｌ１の第２の時点において採取された第２の試料中レベルへ、約０．１倍未満若しくは約０．１分の１を超える、約０．２倍未満若しくは約０．２分の１を超える、約０．３倍未満若しくは約０．３分の１を超える、約０．４倍未満若しくは約０．４分の１を超える、約０．５倍未満若しくは約０．５分の１を超える、少なくとも約０．５５倍若しくは少なくとも約０．５５分の１、少なくとも約０．６倍若しくは少なくとも約０．６分の１、少なくとも約０．７倍若しくは少なくとも約０．７分の１、少なくとも約０．７３倍若しくは少なくとも約０．７３分の１、少なくとも約０．８倍若しくは少なくとも約０．８分の１、少なくとも約０．９倍若しくは少なくとも約０．９分の１、約１倍未満若しくは約１分の１を超える、約１．５倍未満若しくは約１．５分の１を超える、約２倍未満若しくは約２分の１を超える、約３倍未満若しくは約３分の１を超える、約４倍未満若しくは約４分の１を超える、約５倍未満若しくは約５分の１を超える、約６倍未満若しくは約６分の１を超える、約７倍未満若しくは約７分の１を超える、約８倍未満若しくは約８分の１を超える、約９倍未満若しくは約９分の１を超える、約１０倍未満若しくは約１０分の１を超える、約１１倍未満若しくは約１１分の１を超える、約１２倍未満若しくは約１２分の１を超える、約１３倍未満若しくは約１３分の１を超える、約１４倍未満若しくは約１４分の１を超える、約１５倍未満若しくは約１５分の１を超える、約１６倍未満若しくは約１６分の１を超える、約１７倍未満若しくは約１７分の１を超える、約１８倍未満若しくは約１８分の１を超える、約１９倍未満若しくは約１９分の１を超える、又は約２０倍未満である、若しくは約２０分の１を超える。一部の実施形態において、ＵＣＨ−Ｌ１の第１の時点において採取された第１の試料中レベルからＵＣＨ−Ｌ１の第２の時点において採取された第２の試料中レベルへ、約０．１分の１を超える、約０．２分の１を超える、約０．３分の１を超える、約０．４分の１を超える、約０．５分の１を超える、少なくとも約０．５５分の１、少なくとも約０．６分の１、少なくとも約０．７分の１、少なくとも約０．７３分の１、少なくとも約０．８分の１、少なくとも約０．９分の１、約１分の１を超える、約１．５分の１を超える、約２分の１を超える、約３分の１を超える、約４分の１を超える、約５分の１を超える、約６分の１を超える、約７分の１を超える、約８分の１を超える、約９分の１を超える、約１０分の１を超える、約１１分の１を超える、約１２分の１を超える、約１３分の１を超える、約１４分の１を超える、約１５分の１を超える、約１６分の１を超える、約１７分の１を超える、約１８分の１を超える、約１９分の１を超える、又は約２０分の１を超える、統計学的に有意な低下は、対象が、中等度〜重度の外傷性脳損傷を有することを指し示す。一部の実施形態において、ＵＣＨ−Ｌ１の第１の時点において採取された第１の試料中レベルからＵＣＨ−Ｌ１の第２の時点において採取された第２の試料中レベルへ、約０．１倍未満、約０．２倍未満、約０．３倍未満、約０．４倍未満、約０．５倍未満、少なくとも約０．５５倍、少なくとも約０．６倍、少なくとも約０．７倍、少なくとも約０．７３倍、少なくとも約０．８倍、少なくとも約０．９倍、約１倍未満、約１．５倍未満、約２倍未満、約３倍未満、約４倍未満、約５倍未満、約６倍未満、約７倍未満、約８倍未満、約９倍未満、約１０倍未満、約１１倍未満、約１２倍未満、約１３倍未満、約１４倍未満、約１５倍未満、約１６倍未満、約１７倍未満、約１８倍未満、約１９倍未満又は約２０倍未満の、統計学的に有意な上昇は、対象が、中等度〜重度の外傷性脳損傷を有することを指し示す。一部の実施形態において、ＵＣＨ−Ｌ１の第１の時点において採取された第１の試料中レベルからＵＣＨ−Ｌ１の第２の時点において採取された第２の試料中レベルへ、統計学的に有意な上昇又は低下が見られないことは、対象が、軽度外傷性脳損傷を有することを指し示す。
【０１５４】
一部の実施形態において、統計学的に有意な上昇又は低下は、ＵＣＨ−Ｌ１の第２の時点において採取された第２の試料中レベルからＵＣＨ−Ｌ１の第１の時点において採取された第１の試料中レベルへ、約０．１倍を超える、若しくは約０．１分の１未満、約０．２倍を超える、若しくは約０．２分の１未満、約０．３倍を超える、若しくは約０．３分の１未満、約０．４倍を超える、若しくは約０．４分の１未満、約０．５倍を超える、若しくは約０．５分の１未満、約０．５５倍を超える、若しくは約０．５５分の１未満、少なくとも約０．６倍若しくは少なくとも約０．６分の１、少なくとも約０．７倍若しくは少なくとも約０．７分の１、少なくとも約０．７３倍若しくは少なくとも約０．７３分の１、少なくとも約０．８倍若しくは少なくとも約０．８分の１、少なくとも約０．９倍若しくは少なくとも約０．９分の１、約１倍を超える、若しくは約１分の１未満、約１．５倍を超える、若しくは約１．５分の１未満、約２倍を超える、若しくは約２分の１未満、約３倍を超える、若しくは約３分の１未満、約４倍を超える、若しくは約４分の１未満、約５倍を超える、若しくは約５分の１未満、約６倍を超える、若しくは約６分の１未満、約７倍を超える、若しくは約７分の１未満、約８倍を超える、若しくは約８分の１未満、約９倍を超える、若しくは約９分の１未満、約１０倍を超える、若しくは約１０分の１未満、約１１倍を超える、若しくは約１１分の１未満、約１２倍を超える、若しくは約１２分の１未満、約１３倍を超える、若しくは約１３分の１未満、約１４倍を超える、若しくは約１４分の１未満、約１５倍を超える、若しくは約１５分の１未満、約１６倍を超える、若しくは約１６分の１未満、約１７倍を超える、若しくは約１７分の１未満、約１８倍を超える、若しくは約１８分の１未満、約１９倍を超える、若しくは約１９分の１未満又は約２０倍を超える、若しくは約２０分の１未満である。一部の実施形態において、ＵＣＨ−Ｌ１の第２の時点において採取された第２の試料中レベルからＵＣＨ−Ｌ１の第１の時点において採取された第１の試料中レベルへ、約０．１分の１未満、約０．２分の１未満、約０．３分の１未満、約０．４分の１未満、約０．５分の１未満、約０．５５分の１未満、少なくとも約０．６分の１、少なくとも約０．７分の１、少なくとも約０．７３分の１、少なくとも約０．８分の１、少なくとも約０．９分の１、約１分の１未満、約１．５分の１未満、約２分の１未満、約３分の１未満、約４分の１未満、約５分の１未満、約６分の１未満、約７分の１未満、約８分の１未満、約９分の１未満、約１０分の１未満、約１１分の１未満、約１２分の１未満、約１３分の１未満、約１４分の１未満、約１５分の１未満、約１６分の１未満、約１７分の１未満、約１８分の１未満、約１９分の１未満又は約２０分の１未満の、統計学的に有意な低下は、対象が、中等度〜重度の外傷性脳損傷を有することを指し示す。一部の実施形態において、ＵＣＨ−Ｌ１の第２の時点において採取された第２の試料中レベルからＵＣＨ−Ｌ１の第１の時点において採取された第１の試料中レベルへ、約０．１倍を超える、約０．２倍を超える、約０．３倍を超える、約０．４倍を超える、約０．５倍を超える、約０．５５倍を超える、少なくとも約０．６倍、少なくとも約０．７倍、少なくとも約０．７３倍、少なくとも約０．８倍、少なくとも約０．９倍、約１倍を超える、約１．５倍を超える、約２倍を超える、約３倍を超える、約４倍を超える、約５倍を超える、約６倍を超える、約７倍を超える、約８倍を超える、約９倍を超える、約１０倍を超える、約１１倍を超える、約１２倍を超える、約１３倍を超える、約１４倍を超える、約１５倍を超える、約１６倍を超える、約１７倍を超える、約１８倍を超える、約１９倍を超える、又は約２０倍を超える、統計学的に有意な上昇は、対象が、中等度〜重度の外傷性脳損傷を有することを指し示す。一部の実施形態において、ＵＣＨ−Ｌ１の第２の時点において採取された第２の試料中レベルからＵＣＨ−Ｌ１の第１の時点において採取された第１の試料中レベルへ、統計学的に有意な上昇又は低下が見られないことは、対象が、軽度外傷性脳損傷を有することを指し示す。
【０１５５】
一部の実施形態において、第１の時点は、推測される頭部損傷の約０〜約１２時間後であり、統計学的に有意な上昇は、第２の時点から第１の時点へ、約１倍を超える。一部の実施形態において、第１の時点は、推測される頭部損傷の約０〜約１２時間後であり、統計学的に有意な上昇は、第２の時点から第１の時点へ、約０．７３倍を超える。一部の実施形態において、第１の時点は、推測される頭部損傷の約０〜約１２時間後であり、ＵＣＨ−Ｌ１の基準レベルは、約３５０ｐｇ／ｍＬ〜約５５０ｐｇ／ｍＬの間であり、統計学的に有意な上昇は、第２の時点から第１の時点へ、約０．７３倍を超える。
【０１５６】
一部の実施形態において、絶対量は、少なくとも約７０％〜約１００％の間の感度及び少なくとも約３０％〜約１００％の間の特異度を有するアッセイにより決定されうる。一部の実施形態において、感度は、少なくとも約７０．０％、少なくとも約７５．０％、少なくとも約８０．０％、少なくとも約８５．０％、少なくとも約８７．５％、少なくとも約９０．０％、少なくとも約９５．０％、少なくとも約９９．０％、少なくとも約９９．１％、少なくとも約９９．２％、少なくとも約９９．３％、少なくとも約９９．４％、少なくとも約９９．５％、少なくとも約９９．６％、少なくとも約９９．７％、少なくとも約９９．８％、少なくとも約９９．９％、又は約１００．０％である。一部の実施形態において、特異度は、少なくとも約３０．０％、少なくとも約３１．０％、少なくとも約３２．０％、少なくとも約３３．０％、少なくとも約３４．０％、少なくとも約３５．０％、少なくとも約３６．０％、少なくとも約３７．０％、少なくとも約３８．０％、少なくとも約３９．０％、少なくとも約４０．０％、少なくとも約４５．０％、少なくとも約５０．０％、少なくとも約５５．０％、少なくとも約６０．０％、少なくとも約６５．０％、少なくとも約７０．０％、少なくとも約７５．０％、少なくとも約８０．０％、少なくとも約８５．０％、少なくとも約９０．０％、少なくとも約９１．０％、少なくとも約９２．０％、少なくとも約９３．０％、少なくとも約９４．０％、少なくとも約９５．０％、少なくとも約９６．０％、少なくとも約９７．０％、少なくとも約９８．０％、少なくとも約９９．０％、少なくとも約９９．１％、少なくとも約９９．２％、少なくとも約９９．３％、少なくとも約９９．４％、少なくとも約９９．５％、少なくとも約９９．６％、少なくとも約９９．７％、少なくとも約９９．８％、少なくとも約９９．９％、又は少なくとも約１００．０％である。例えば、感度は、少なくとも約９９％であり、特異度は、少なくとも約７５％である、感度は、少なくとも約９９％であり、特異度は、少なくとも約９９％である、又は感度は、約１００％であり、特異度は、約１００％である。
【０１５７】
一部の実施形態において、絶対量は、少なくとも約２０ｐｇ／ｍＬ〜約６１００ｐｇ／ｍＬの間でありうる。一部の実施形態において、絶対量は、少なくとも約２０ｐｇ／ｍＬ〜約６１００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約２０ｐｇ／ｍＬ〜約６０００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約２０ｐｇ／ｍＬ〜約５５００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約２０ｐｇ／ｍＬ〜約５０００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約２０ｐｇ／ｍＬ〜約４５００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約２０ｐｇ／ｍＬ〜約４０００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約２０ｐｇ／ｍＬ〜約３５００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約２０ｐｇ／ｍＬ〜約３０００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約２０ｐｇ／ｍＬ〜約２５００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約２０ｐｇ／ｍＬ〜約２０００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約２０ｐｇ／ｍＬ〜約１５００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約２０ｐｇ／ｍＬ〜約１０００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約２０ｐｇ／ｍＬ〜約９００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約２０ｐｇ／ｍＬ〜約８００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約２０ｐｇ／ｍＬ〜約７００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約２０ｐｇ／ｍＬ〜約６００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約２０ｐｇ／ｍＬ〜約５００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約２０ｐｇ／ｍＬ〜約４００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約２０ｐｇ／ｍＬ〜約３００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約２０ｐｇ／ｍＬ〜約２００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約２０ｐｇ／ｍＬ〜約１００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約２０ｐｇ／ｍＬ〜約５０ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約２５ｐｇ／ｍＬ〜約６１００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約２５ｐｇ／ｍＬ〜約６０００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約２５ｐｇ／ｍＬ〜約５５００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約２５ｐｇ／ｍＬ〜約５０００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約２５ｐｇ／ｍＬ〜約４５００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約２５ｐｇ／ｍＬ〜約４０００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約２５ｐｇ／ｍＬ〜約３５００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約２５ｐｇ／ｍＬ〜約３０００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約２５ｐｇ／ｍＬ〜約２５００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約２５ｐｇ／ｍＬ〜約２０００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約２５ｐｇ／ｍＬ〜約１５００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約２５ｐｇ／ｍＬ〜約１０００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約２５ｐｇ／ｍＬ〜約９００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約２５ｐｇ／ｍＬ〜約８００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約２５ｐｇ／ｍＬ〜約７００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約２５ｐｇ／ｍＬ〜約６００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約２５ｐｇ／ｍＬ〜約５００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約２５ｐｇ／ｍＬ〜約４００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約２５ｐｇ／ｍＬ〜約３００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約２５ｐｇ／ｍＬ〜約２００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約２５ｐｇ／ｍＬ〜約１００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約２５ｐｇ／ｍＬ〜約５０ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約５０ｐｇ／ｍＬ〜約６１００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約５０ｐｇ／ｍＬ〜約６０００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約５０ｐｇ／ｍＬ〜約５５００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約５０ｐｇ／ｍＬ〜約５０００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約５０ｐｇ／ｍＬ〜約４５００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約５０ｐｇ／ｍＬ〜約４０００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約５０ｐｇ／ｍＬ〜約３５００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約５０ｐｇ／ｍＬ〜約３０００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約５０ｐｇ／ｍＬ〜約２５００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約５０ｐｇ／ｍＬ〜約２０００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約５０ｐｇ／ｍＬ〜約１５００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約５０ｐｇ／ｍＬ〜約１０００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約５０ｐｇ／ｍＬ〜約９００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約５０ｐｇ／ｍＬ〜約８００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約５０ｐｇ／ｍＬ〜約７００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約５０ｐｇ／ｍＬ〜約６００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約５０ｐｇ／ｍＬ〜約５００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約５０ｐｇ／ｍＬ〜約４００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約５０ｐｇ／ｍＬ〜約３００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約５０ｐｇ／ｍＬ〜約２００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約５０ｐｇ／ｍＬ〜約１００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約１００ｐｇ／ｍＬ〜約６１００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約１００ｐｇ／ｍＬ〜約６０００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約１００ｐｇ／ｍＬ〜約５５００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約１００ｐｇ／ｍＬ〜約５０００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約１００ｐｇ／ｍＬ〜約４５００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約１００ｐｇ／ｍＬ〜約４０００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約１００ｐｇ／ｍＬ〜約３５００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約１００ｐｇ／ｍＬ〜約３０００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約１００ｐｇ／ｍＬ〜約２５００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約１００ｐｇ／ｍＬ〜約２０００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約１００ｐｇ／ｍＬ〜約１５００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約１００ｐｇ／ｍＬ〜約１０００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約１００ｐｇ／ｍＬ〜約９００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約１００ｐｇ／ｍＬ〜約８００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約１００ｐｇ／ｍＬ〜約７００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約１００ｐｇ／ｍＬ〜約６００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約１００ｐｇ／ｍＬ〜約５００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約１００ｐｇ／ｍＬ〜約４００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約１００ｐｇ／ｍＬ〜約３００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約１００ｐｇ／ｍＬ〜約２００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約１２９ｐｇ／ｍＬ〜約６１００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約１２９ｐｇ／ｍＬ〜約６０００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約１２９ｐｇ／ｍＬ〜約５５００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約１２９ｐｇ／ｍＬ〜約５０００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約１２９ｐｇ／ｍＬ〜約４５００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約１２９ｐｇ／ｍＬ〜約４０００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約１２９ｐｇ／ｍＬ〜約３５００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約１２９ｐｇ／ｍＬ〜約３０００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約１２９ｐｇ／ｍＬ〜約２５００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約１２９ｐｇ／ｍＬ〜約２０００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約１２９ｐｇ／ｍＬ〜約１５００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約１２９ｐｇ／ｍＬ〜約１０００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約１２９ｐｇ／ｍＬ〜約９００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約１２９ｐｇ／ｍＬ〜約８００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約１２９ｐｇ／ｍＬ〜約７００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約１２９ｐｇ／ｍＬ〜約６００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約１２９ｐｇ／ｍＬ〜約５００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約１２９ｐｇ／ｍＬ〜約４００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約１２９ｐｇ／ｍＬ〜約３００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約１２９ｐｇ／ｍＬ〜約２００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約２００ｐｇ／ｍＬ〜約６１００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約２００ｐｇ／ｍＬ〜約６０００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約２００ｐｇ／ｍＬ〜約５５００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約２００ｐｇ／ｍＬ〜約５０００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約２００ｐｇ／ｍＬ〜約４５００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約２００ｐｇ／ｍＬ〜約４０００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約２００ｐｇ／ｍＬ〜約３５００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約２００ｐｇ／ｍＬ〜約３０００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約２００ｐｇ／ｍＬ〜約２５００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約２００ｐｇ／ｍＬ〜約２０００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約２００ｐｇ／ｍＬ〜約１５００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約２００ｐｇ／ｍＬ〜約１０００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約２００ｐｇ／ｍＬ〜約９００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約２００ｐｇ／ｍＬ〜約８００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約２００ｐｇ／ｍＬ〜約７００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約２００ｐｇ／ｍＬ〜約６００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約２００ｐｇ／ｍＬ〜約５００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約２００ｐｇ／ｍＬ〜約４００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約２００ｐｇ／ｍＬ〜約３００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約３００ｐｇ／ｍＬ〜約６１００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約３００ｐｇ／ｍＬ〜約６０００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約３００ｐｇ／ｍＬ〜約５５００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約３００ｐｇ／ｍＬ〜約５０００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約３００ｐｇ／ｍＬ〜約４５００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約３００ｐｇ／ｍＬ〜約４０００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約３００ｐｇ／ｍＬ〜約３５００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約３００ｐｇ／ｍＬ〜約３０００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約３００ｐｇ／ｍＬ〜約２５００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約３００ｐｇ／ｍＬ〜約２０００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約３００ｐｇ／ｍＬ〜約１５００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約３００ｐｇ／ｍＬ〜約１０００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約３００ｐｇ／ｍＬ〜約９００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約３００ｐｇ／ｍＬ〜約８００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約３００ｐｇ／ｍＬ〜約７００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約３００ｐｇ／ｍＬ〜約６００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約３００ｐｇ／ｍＬ〜約５００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約３００ｐｇ／ｍＬ〜約４００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約４００ｐｇ／ｍＬ〜約６１００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約４００ｐｇ／ｍＬ〜約６０００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約４００ｐｇ／ｍＬ〜約５５００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約４００ｐｇ／ｍＬ〜約５０００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約４００ｐｇ／ｍＬ〜約４５００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約４００ｐｇ／ｍＬ〜約４０００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約４００ｐｇ／ｍＬ〜約３５００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約４００ｐｇ／ｍＬ〜約３０００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約４００ｐｇ／ｍＬ〜約２５００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約４００ｐｇ／ｍＬ〜約２０００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約４００ｐｇ／ｍＬ〜約１５００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約４００ｐｇ／ｍＬ〜約１０００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約４００ｐｇ／ｍＬ〜約９００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約４００ｐｇ／ｍＬ〜約８００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約４００ｐｇ／ｍＬ〜約７００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約４００ｐｇ／ｍＬ〜約６００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約４００ｐｇ／ｍＬ〜約５００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約５００ｐｇ／ｍＬ〜約６１００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約５００ｐｇ／ｍＬ〜約６０００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約５００ｐｇ／ｍＬ〜約５５００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約５００ｐｇ／ｍＬ〜約５０００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約５００ｐｇ／ｍＬ〜約４５００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約５００ｐｇ／ｍＬ〜約４０００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約５００ｐｇ／ｍＬ〜約３５００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約５００ｐｇ／ｍＬ〜約３０００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約５００ｐｇ／ｍＬ〜約２５００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約５００ｐｇ／ｍＬ〜約２０００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約５００ｐｇ／ｍＬ〜約１５００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約５００ｐｇ／ｍＬ〜約１０００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約５００ｐｇ／ｍＬ〜約９００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約５００ｐｇ／ｍＬ〜約８００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約５００ｐｇ／ｍＬ〜約７００ｐｇ／ｍＬの間、又は少なくとも約５００ｐｇ／ｍＬ〜約６００ｐｇ／ｍＬの間でありうる。一部の実施形態において、絶対量は、少なくとも約２０ｐｇ／ｍＬ、少なくとも約２１ｐｇ／ｍＬ、少なくとも約２２ｐｇ／ｍＬ、少なくとも約２３ｐｇ／ｍＬ、少なくとも約２４ｐｇ／ｍＬ、少なくとも約２５ｐｇ／ｍＬ、少なくとも約２６ｐｇ／ｍＬ、少なくとも約２７ｐｇ／ｍＬ、少なくとも約２８ｐｇ／ｍＬ、少なくとも約２９ｐｇ／ｍＬ、少なくとも約３０ｐｇ／ｍＬ、少なくとも約３５ｐｇ／ｍＬ、少なくとも約４０ｐｇ／ｍＬ、少なくとも約４５ｐｇ／ｍＬ、少なくとも約５０ｐｇ／ｍＬ、少なくとも約５５ｐｇ／ｍＬ、少なくとも約６０ｐｇ／ｍＬ、少なくとも約６５ｐｇ／ｍＬ、少なくとも約７０ｐｇ／ｍ
Ｌ、少なくとも約７５ｐｇ／ｍＬ、少なくとも約８０ｐｇ／ｍＬ、少なくとも約８５ｐｇ／ｍＬ、少なくとも約９０ｐｇ／ｍＬ、少なくとも約９５ｐｇ／ｍＬ、少なくとも約１００ｐｇ／ｍＬ、少なくとも約１１０ｐｇ／ｍＬ、少なくとも約１２０ｐｇ／ｍＬ、少なくとも約１２９ｐｇ／ｍＬ、少なくとも約１３０ｐｇ／ｍＬ、少なくとも約１４０ｐｇ／ｍＬ、少なくとも約１５０ｐｇ／ｍＬ、少なくとも約２００ｐｇ／ｍＬ、少なくとも約２５０ｐｇ／ｍＬ、少なくとも約３００ｐｇ／ｍＬ、少なくとも約３５０ｐｇ／ｍＬ、少なくとも約４００ｐｇ／ｍＬ、少なくとも約４５０ｐｇ／ｍＬ、少なくとも約５００ｐｇ／ｍＬ、少なくとも約５５０ｐｇ／ｍＬ、少なくとも約６００ｐｇ／ｍＬ、少なくとも約７００ｐｇ／ｍＬ、少なくとも約８００ｐｇ／ｍＬ、少なくとも約９００ｐｇ／ｍＬ、少なくとも約１０００ｐｇ／ｍＬ、少なくとも約１５００ｐｇ／ｍＬ、少なくとも約２０００ｐｇ／ｍＬ、少なくとも約２５００ｐｇ／ｍＬ、少なくとも約２５２８ｐｇ／ｍＬ、少なくとも約３０００ｐｇ／ｍＬ、少なくとも約４０００ｐｇ／ｍＬ、少なくとも約５０００ｐｇ／ｍＬ、少なくとも約６０００ｐｇ／ｍＬ、又は少なくとも約６１００ｐｇ／ｍＬでありうる。
【０１５８】
一部の実施形態において、第１の試料は、約０〜約６時間以内に得られる場合があり、基準レベルは、約１００％の感度及び約１００％の特異度を有するアッセイにより決定された、約２５２８ｐｇ／ｍＬでありうる。一部の実施形態において、第１の試料は、約０〜約６時間以内に得られる場合があり、基準レベルは、少なくとも約７０％の感度及び少なくとも約９２％の特異度を有するアッセイ決定された、約１２９ｐｇ／ｍＬでありうる。一部の実施形態において、第１の試料は、約０〜約１０時間以内に得られる場合があり、基準レベルは、約１００％の感度及び少なくとも約３６％の特異度を有するアッセイにより決定された、約２５ｐｇ／ｍＬでありうる。一部の実施形態において、第１の試料は、約０〜約１１時間以内に得られる場合があり、基準レベルは、約１００％の感度及び少なくとも約３２％の特異度を有するアッセイにより決定された、約２５ｐｇ／ｍＬでありうる。一部の実施形態において、第１の試料は、約０〜約１２時間以内に得られる場合があり、基準レベルは、少なくとも約７５％の感度及び少なくとも約７６％の特異度を有するアッセイにより決定された、約１２９ｐｇ／ｍＬでありうる。
【０１５９】
一部の実施形態において、方法は、下記において記載される通り、中等度〜重度の外傷性脳損傷を有すると評価された対象を、外傷性脳損傷処置により処置するステップをさらに含む。一部の実施形態において、方法は、下記において記載される通り、軽度外傷性脳損傷を有すると評価されたヒト対象をモニタリングするステップをさらに含む。
【０１６０】
本明細書において記載された方法において利用されたアッセイの性質は、それほど重要ではなく、検査は、例えば、イムノアッセイ、臨床化学アッセイ、単一分子検出アッセイ、タンパク質免疫沈降、免疫電気泳動、化学解析、ＳＤＳ−ＰＡＧＥ及びウェスタンブロット解析又はタンパク質免疫染色、電気泳動解析、タンパク質アッセイ、競合的結合アッセイ、機能的タンパク質アッセイ、又は高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）若しくは液体クロマトグラフィー−質量分析（ＬＣ／ＭＳ）のような、クロマトグラフィー法若しくは分光法のような、当技術分野において公知である、任意のアッセイでありうる。また、当業者に公知の臨床化学フォーマットのアッセイも利用されうる。このようなアッセイについては、本明細書の第９〜１１節において、さらに詳細に記載されている。当技術分野において、特異的な試料型を利用するアッセイ（例えば、血清を用いるイムノアッセイ又は全血を利用するポイントオブケアデバイスのような）において使用された値（例えば、基準レベル、カットオフ、閾値、特異度、感度、較正物質及び／又は対照の濃度など）は、アッセイ標準化のような、当技術分野において公知の技法を使用して、他のアッセイフォーマットへと外挿されうることが公知である。例えば、アッセイの標準化が実施されうる、１つの方式は、比較法に見合う傾きを得るように、試料濃度の読取りを高値又は低値とするために、アッセイにおいて利用される較正物質へ係数を適用することによるものである。１つのアッセイにおいて得られた結果を、別のアッセイへと標準化する、他の方法も周知であり、文献において記載されている（例えば、その内容が、参照により本明細書に組み込まれた、Ｄａｖｉｄ  Ｗｉｌｄ、「Ｉｍｍｕｎｏａｓｓａｙ  Ｈａｎｄｂｏｏｋ」、４版、３．５章、３１５〜３２２頁を参照されたい）。
【０１６１】
３．頭部への損傷を負った可能性があるヒト対象における、外傷性脳損傷の程度を決定する一助となる方法
本開示は、推測される頭部への損傷を伴うヒト対象における、外傷性脳損傷の程度を決定する（例えば、対象が、軽度外傷性脳損傷又は中等度〜重度の外傷性脳損傷を有するのかどうかを決定するステップ）一助となる方法に関する。本明細書において使用された「ヒト対象における外傷性脳損傷の程度を決定すること」とは、対象の、軽度ＴＢＩ又は中等度〜重度のＴＢＩを有する可能性が、そうでない場合より高いことを、他の方法を伴うか又は伴わずに決定する方法の使用を指す。本方法は、対象から得られた、少なくとも２つの試料に対して、アッセイを実施するステップ及び少なくとも２つの試料中に、外傷性脳損傷の早期バイオマーカーを検出するステップを含む。第１の試料は、損傷から２４時間以内に、ヒト対象から採取され、第２の試料は、第１の試料が採取された、約３〜約６時間後に、ヒト対象から採取される。早期バイオマーカーは、ユビキチンカルボキシ末端ヒドロラーゼＬ１（ＵＣＨ−Ｌ１）である。ＵＣＨ−Ｌ１は、頭部への損傷の発生後、約２〜約２４時間以内に現れる。ＵＣＨ−Ｌ１の存在の開始は、推測される損傷の発生後、約０〜約６時間以内に現れる。ＵＣＨ−Ｌ１のレベルは、第１の試料及び第２の試料の各々について決定される。ＵＣＨ−Ｌ１のレベルは、低下又は上昇することが決定される。外傷性脳損傷の程度は、ＵＣＨ−Ｌ１のレベルが、第１の試料から第２の試料へ、低下するのか、上昇するのか、又は同じレベルを維持するのかに基づき、対象において決定される。早期バイオマーカーは、推測される損傷後、約０〜約６時間以内に上昇し、次いで、外傷性脳損傷を伴う対象において、低下又は上昇する。一部の実施形態において、ＵＣＨ−Ｌ１の存在の開始は、頭部への損傷後、約０、約０．５時間、約１時間、約２時間、約３時間、約４時間、約５時間、又は約６時間以内に現れる。試料は、生物学的試料でありうる。
【０１６２】
本方法は、対象から得られた、少なくとも２つの試料に対して、アッセイを実施するステップを含む。第１の試料は、対象から、推測される損傷後２４時間以内に採取され、第２の試料は、第１の試料が採取された約３〜約６時間後に、対象から採取される。方法は、少なくとも２つの試料中に、ユビキチンカルボキシ末端ヒドロラーゼＬ１（ＵＣＨ−Ｌ１）からなる外傷性脳損傷の早期バイオマーカーを検出するステップであって、ＵＣＨ−Ｌ１の存在の開始が、推測される頭部損傷後、約０〜約６時間以内に現れるステップ；第１の試料及び第２の試料の各々におけるＵＣＨ−Ｌ１のレベルを決定し、ＵＣＨ−Ｌ１のレベルが、第１の試料から第２の試料へ、低下又は上昇するのかどうかを決定するステップ；及びＵＣＨ−Ｌ１のレベルが、第１の試料から第２の試料へ、低下するのか、上昇するのか、又は同じレベルを維持するのかに基づき、対象における外傷性脳損傷の程度を決定するステップを含む。
【０１６３】
一部の実施形態において、第１の試料が、推測される損傷から２４時間以内である、第１の時点において、対象から採取され、第２の試料は、第１の時点の後である、第２の時点において、対象から採取され、ＵＣＨ−Ｌ１のレベルが、第１の試料から、第２の試料へと低下する場合に、対象は、軽度又は軽度〜重度の外傷性脳損傷を有することが決定される。一部の実施形態において、ＵＣＨ−Ｌ１は、上昇したレベルから、少なくとも約５％低下する。例えば、ＵＣＨ−Ｌ１レベルは、上昇したレベルから、約５％、約１０％、約２０％、約３０％、約４０％、約５０％、約６０％、約７０％、約８０％、約９０％、約１００％、約２００％、約３００％、約４００％、約５００％、約６００％、約７００％、約８００％、約９００％、又は約１０００％低下しうる。一部の実施形態において、ＵＣＨ−Ｌ１は、上昇したレベルから、少なくとも約０．１分の１、少なくとも約０．２分の１、少なくとも約０．３分の１、少なくとも約０．４分の１、少なくとも約０．５分の１、少なくとも約０．５５分の１、少なくとも約０．６分の１、少なくとも約０．７分の１、少なくとも約０．７３分の１、少なくとも約０．８分の１、少なくとも約０．９分の１、少なくとも約１分の１、少なくとも約１．５分の１、少なくとも約２分の１、少なくとも約３分の１、少なくとも約４分の１、少なくとも約５分の１、少なくとも約６分の１、少なくとも約７分の１、少なくとも約８分の１、少なくとも約９分の１、少なくとも約１０分の１、少なくとも約１１分の１、少なくとも約１２分の１、少なくとも約１３分の１、少なくとも約１４分の１、少なくとも約１５分の１、少なくとも約１６分の１、少なくとも約１７分の１、少なくとも約１８分の１、少なくとも約１９分の１又は少なくとも約２０分の１に低下する。一部の実施形態において、ＵＣＨ−Ｌ１は、上昇したレベルから、約０．１分の１を超える、約０．２分の１を超える、約０．３分の１を超える、約０．４分の１を超える、約０．５分の１を超える、約０．５５分の１を超える、少なくとも約０．６分の１、少なくとも約０．７分の１、少なくとも約０．７３分の１、少なくとも約０．８分の１、少なくとも約０．９分の１、約１分の１を超える、約１．５分の１を超える、約２分の１を超える、約３分の１を超える、約４分の１を超える、約５分の１を超える、約６分の１を超える、約７分の１を超える、約８分の１を超える、約９分の１を超える、約１０分の１を超える、約１１分の１を超える、約１２分の１を超える、約１３分の１を超える、約１４分の１を超える、約１５分の１を超える、約１６分の１を超える、約１７分の１を超える、約１８分の１を超える、約１９分の１を超える、又は約２０分の１を超えるレベルに低下する。
【０１６４】
一部の実施形態において、第１の時点は、推測される損傷の約０〜約１２時間後であり、統計学的に有意な上昇は、第２の時点から第１の時点へ、約１倍を超える。一部の実施形態において、第１の時点は、推測される損傷の約０〜約１２時間後であり、統計学的に有意な上昇は、第２の時点から第１の時点へ、約０．７３倍を超える。一部の実施形態において、第１の時点は、推測される損傷の約０〜約１２時間後であり、ＵＣＨ−Ｌ１の基準レベルは、約３５０ｐｇ／ｍＬ〜約５５０ｐｇ／ｍＬの間であり、統計学的に有意な上昇は、第２の時点から第１の時点へ、約０．７３倍を超える。
【０１６５】
一部の実施形態において、対象は、ＵＣＨ−Ｌ１の、第１の試料中レベルが、ＵＣＨ−Ｌ１の、第２の試料中レベルと比較して、少なくとも約２０ｐｇ／ｍＬ〜少なくとも約６１００ｐｇ／ｍＬ変化（すなわち、上昇又は低下）する場合に、軽度又は軽度〜重度の外傷性脳損傷を有すると評価される。一部の実施形態において、ＵＣＨ−Ｌ１レベルの変化（すなわち、上昇又は低下）は、少なくとも約２０ｐｇ／ｍＬ〜約６１００ｐｇ／ｍＬ、少なくとも約２５ｐｇ／ｍＬ〜約６１００ｐｇ／ｍＬ、少なくとも約３０ｐｇ／ｍＬ〜約６１００ｐｇ／ｍＬ、少なくとも約４０ｐｇ／ｍＬ〜約６１００ｐｇ／ｍＬ、少なくとも約５０ｐｇ／ｍＬ〜約６１００ｐｇ／ｍＬ、少なくとも約１００ｐｇ／ｍＬ〜約６１００ｐｇ／ｍＬ、少なくとも約１２９ｐｇ／ｍＬ〜約６１００ｐｇ／ｍＬ、少なくとも約２００ｐｇ／ｍＬ〜約６１００ｐｇ／ｍＬ、少なくとも約３００ｐｇ／ｍＬ〜約６１００ｐｇ／ｍＬ、少なくとも約４００ｐｇ／ｍＬ〜約６１００ｐｇ／ｍＬ、少なくとも約５００ｐｇ／ｍＬ〜約６１００ｐｇ／ｍＬ、少なくとも約６００ｐｇ／ｍＬ〜約６１００ｐｇ／ｍＬ、少なくとも約７００ｐｇ／ｍＬ〜約６１００ｐｇ／ｍＬ、少なくとも約８００ｐｇ／ｍＬ〜約６１００ｐｇ／ｍＬ、少なくとも約９００ｐｇ／ｍＬ〜約６１００ｐｇ／ｍＬ、少なくとも約１０００ｐｇ／ｍＬ〜約６１００ｐｇ／ｍＬ、少なくとも約２０００ｐｇ／ｍＬ〜約６１００ｐｇ／ｍＬ、少なくとも約３０００ｐｇ／ｍＬ〜約６１００ｐｇ／ｍＬ、少なくとも約４０００ｐｇ／ｍＬ〜約６１００ｐｇ／ｍＬ、少なくとも約５０００ｐｇ／ｍＬ〜約６１００ｐｇ／ｍＬ、少なくとも約２０ｐｇ／ｍＬ〜約４０００ｐｇ／ｍＬ、少なくとも約２５ｐｇ／ｍＬ〜約４０００ｐｇ／ｍＬ、少なくとも約３０ｐｇ／ｍＬ〜約４０００ｐｇ／ｍＬ、少なくとも約４０ｐｇ／ｍＬ〜約４０００ｐｇ／ｍＬ、少なくとも約５０ｐｇ／ｍＬ〜約４０００ｐｇ／ｍＬ、少なくとも約１００ｐｇ／ｍＬ〜約４０００ｐｇ／ｍＬ、少なくとも約１２９ｐｇ／ｍＬ〜約４０００ｐｇ／ｍＬ、少なくとも約２００ｐｇ／ｍＬ〜約４０００ｐｇ／ｍＬ、少なくとも約３００ｐｇ／ｍＬ〜約４０００ｐｇ／ｍＬ、少なくとも約４００ｐｇ／ｍＬ〜約４０００ｐｇ／ｍＬ、少なくとも約５００ｐｇ／ｍＬ〜約４０００ｐｇ／ｍＬ、少なくとも約６００ｐｇ／ｍＬ〜約４０００ｐｇ／ｍＬ、少なくとも約７００ｐｇ／ｍＬ〜約４０００ｐｇ／ｍＬ、少なくとも約８００ｐｇ／ｍＬ〜約４０００ｐｇ／ｍＬ、少なくとも約９００ｐｇ／ｍＬ〜約４０００ｐｇ／ｍＬ、少なくとも約１０００ｐｇ／ｍＬ〜約４０００ｐｇ／ｍＬ、少なくとも約２０００ｐｇ／ｍＬ〜約４０００ｐｇ／ｍＬ、少なくとも約３０００ｐｇ／ｍＬ〜約４０００ｐｇ／ｍＬ、少なくとも約２０ｐｇ／ｍＬ〜約２５００ｐｇ／ｍＬ、少なくとも約２５ｐｇ／ｍＬ〜約２５００ｐｇ／ｍＬ、少なくとも約３０ｐｇ／ｍＬ〜約２５００ｐｇ／ｍＬ、少なくとも約４０ｐｇ／ｍＬ〜約２５００ｐｇ／ｍＬ、少なくとも約５０ｐｇ／ｍＬ〜約２５００ｐｇ／ｍＬ、少なくとも約１００ｐｇ／ｍＬ〜約２５００ｐｇ／ｍＬ、少なくとも約１２９ｐｇ／ｍＬ〜約２５００ｐｇ／ｍＬ、少なくとも約２００ｐｇ／ｍＬ〜約２５００ｐｇ／ｍＬ、少なくとも約３００ｐｇ／ｍＬ〜約２５００ｐｇ／ｍＬ、少なくとも約４００ｐｇ／ｍＬ〜約２５００ｐｇ／ｍＬ、少なくとも約５００ｐｇ／ｍＬ〜約２５００ｐｇ／ｍＬ、少なくとも約６００ｐｇ／ｍＬ〜約２５００ｐｇ／ｍＬ、少なくとも約７００ｐｇ／ｍＬ〜約２５００ｐｇ／ｍＬ、少なくとも約８００ｐｇ／ｍＬ〜約２５００ｐｇ／ｍＬ、少なくとも約９００ｐｇ／ｍＬ〜約２５００ｐｇ／ｍＬ、少なくとも約１０００ｐｇ／ｍＬ〜約２５００ｐｇ／ｍＬ、少なくとも約２０００ｐｇ／ｍＬ〜約２５００ｐｇ／ｍＬ、少なくとも約２０ｐｇ／ｍＬ〜約１０００ｐｇ／ｍＬ、少なくとも約２５ｐｇ／ｍＬ〜約１０００ｐｇ／ｍＬ、少なくとも約３０ｐｇ／ｍＬ〜約１０００ｐｇ／ｍＬ、少なくとも約４０ｐｇ／ｍＬ〜約１０００ｐｇ／ｍＬ、少なくとも約５０ｐｇ／ｍＬ〜約１０００ｐｇ／ｍＬ、少なくとも約１００ｐｇ／ｍＬ〜約１０００ｐｇ／ｍＬ、少なくとも約１２９ｐｇ／ｍＬ〜約１０００ｐｇ／ｍＬ、少なくとも約２００ｐｇ／ｍＬ〜約１０００ｐｇ／ｍＬ、少なくとも約３００ｐｇ／ｍＬ〜約１０００ｐｇ／ｍＬ、少なくとも約４００ｐｇ／ｍＬ〜約１０００ｐｇ／ｍＬ、少なくとも約５００ｐｇ／ｍＬ〜約１０００ｐｇ／ｍＬ、少なくとも約６００ｐｇ／ｍＬ〜約１０００ｐｇ／ｍＬ、少なくとも約７００ｐｇ／ｍＬ〜約１０００ｐｇ／ｍＬ、少なくとも約８００ｐｇ／ｍＬ〜約１０００ｐｇ／ｍＬ、少なくとも約９００ｐｇ／ｍＬ〜約１０００ｐｇ／ｍＬ、少なくとも約２０ｐｇ／ｍＬ〜約５００ｐｇ／ｍＬ、少なくとも約２５ｐｇ／ｍＬ〜約５００ｐｇ／ｍＬ、少なくとも約３０ｐｇ／ｍＬ〜約５００ｐｇ／ｍＬ、少なくとも約４０ｐｇ／ｍＬ〜約５００ｐｇ／ｍＬ、少なくとも約５０ｐｇ／ｍＬ〜約５００ｐｇ／ｍＬ、少なくとも約１００ｐｇ／ｍＬ〜約５００ｐｇ／ｍＬ、少なくとも約１２９ｐｇ／ｍＬ〜約５００ｐｇ／ｍＬ、少なくとも約２００ｐｇ／ｍＬ〜約５００ｐｇ／ｍＬ、少なくとも約３００ｐｇ／ｍＬ〜約５００ｐｇ／ｍＬ、少なくとも約４００ｐｇ／ｍＬ〜約５００ｐｇ／ｍＬ、少なくとも約２０ｐｇ／ｍＬ〜約１００ｐｇ／ｍＬ、少なくとも約２５ｐｇ／ｍＬ〜約１００ｐｇ／ｍＬ、少なくとも約３０ｐｇ／ｍＬ〜約１００ｐｇ／ｍＬ、少なくとも約４０ｐｇ／ｍＬ〜約１００ｐｇ／ｍＬ、少なくとも約５０ｐｇ／ｍＬ〜約１００ｐｇ／ｍＬ、少なくとも約２０ｐｇ／ｍＬ〜約５０ｐｇ／ｍＬ、少なくとも約２５ｐｇ／ｍＬ〜約５０ｐｇ／ｍＬ、少なくとも約３０ｐｇ／ｍＬ〜約５０ｐｇ／ｍＬ、又は少なくとも約４０ｐｇ／ｍＬ〜約５０ｐｇ／ｍＬでありうる。
【０１６６】
例えば、変化（すなわち、上昇又は低下）は、少なくとも約２０ｐｇ／ｍＬ、少なくとも約２５ｐｇ／ｍＬ、少なくとも約３０ｐｇ／ｍＬ、少なくとも約４０ｐｇ／ｍＬ、少なくとも約５０ｐｇ／ｍＬ、少なくとも約６０ｐｇ／ｍＬ、少なくとも約７０ｐｇ／ｍＬ、少なくとも約８０ｐｇ／ｍＬ、少なくとも約９０ｐｇ／ｍＬ、少なくとも約１００ｐｇ／ｍＬ、少なくとも約１２９ｐｇ／ｍＬ、少なくとも約２００ｐｇ／ｍＬ、少なくとも約３００ｐｇ／ｍＬ、少なくとも約４００ｐｇ／ｍＬ、少なくとも約５００ｐｇ／ｍＬ、少なくとも約６００ｐｇ／ｍＬ、少なくとも約７００ｐｇ／ｍＬ、少なくとも約８００ｐｇ／ｍＬ、少なくとも約９００ｐｇ／ｍＬ、少なくとも約１０００ｐｇ／ｍＬ、少なくとも約１５００ｐｇ／ｍＬ、少なくとも約２０００ｐｇ／ｍＬ、少なくとも約２５２８ｐｇ／ｍＬ、少なくとも約２５００ｐｇ／ｍＬ、少なくとも約３０００ｐｇ／ｍＬ、少なくとも約３５００ｐｇ／ｍＬ、少なくとも約４０００ｐｇ／ｍＬ、少なくとも約４５００ｐｇ／ｍＬ、少なくとも約５０００ｐｇ／ｍＬ、少なくとも約５５００ｐｇ／ｍＬ、少なくとも約６０００ｐｇ／ｍＬ、又は少なくとも約６１００ｐｇ／ｍＬでありうる。
【０１６７】
一部の実施形態において、第１の試料は、推測される損傷後２４時間以内に採取される。例えば、第１の試料は、推測される損傷後、約０時間以内に、約１時間以内に、約２時間以内に、約３時間以内に、約４時間以内に、約５時間以内に、約６時間以内に、約７時間以内に、約８時間以内に、約９時間以内に、約１０時間以内に、約１１時間以内に、約１２時間以内に、約１３時間以内に、約１４時間以内に、約１５時間以内に、約１６時間以内に、約１７時間以内に、約１８時間以内に、約１９時間以内に、約２０時間以内に、約２１時間以内に、約２２時間以内に、約２３時間以内に、約２４時間以内に、又は約２４時間を超えて採取されうる。一部の実施形態において、第１の試料は、推測される損傷後、約０〜約１時間以内に、約０〜約２時間以内に、約０〜約３時間以内に、約０〜約４時間以内に、約０〜約５時間以内に、約０〜約６時間以内に、約０〜約７時間以内に、約０〜約８時間以内に、約０〜約９時間以内に、約０〜約１０時間以内に、約０〜約１１時間以内に、約０〜約１２時間以内に、約０〜約１８時間以内に、約６〜約１２時間以内に、約１２〜約１８時間以内に、約１８〜約２４時間以内に、又は約２４時間を超えて採取される。
【０１６８】
一部の実施形態において、第２の試料は、第１の試料が得られた、約３時間〜約６時間後のように、第１の試料が得られた後、約１時間〜約１０時間以内に得られる。一部の実施形態において、第２の試料は、第１の試料が得られた後、約１時間、約２時間、約３時間、約４時間、約５時間、約６時間、約７時間、約８時間、約９時間又は約１０時間以内に得られる。
【０１６９】
一部の実施形態において、第１の試料は、推測される損傷の０〜約６時間後に採取され、ＵＣＨ−Ｌ１のレベルが、第１の試料から第２の試料へ、少なくとも約２０ｐｇ／ｍＬ〜少なくとも約６１００ｐｇ／ｍＬの間で上昇又は低下する場合に、対象は、中等度〜重度の外傷性脳損傷を有することが決定される。
【０１７０】
一部の実施形態において、第１の試料は、約０〜約６時間以内に得られる場合があり、ＵＣＨ−Ｌ１レベルの上昇又は低下は、少なくとも約２５２８ｐｇ／ｍＬである。一部の実施形態において、第１の試料は、約０〜約６時間以内に得られる場合があり、ＵＣＨ−Ｌ１レベルの上昇又は低下は、少なくとも約１２９ｐｇ／ｍＬである。一部の実施形態において、第１の試料は、約０〜約１０時間以内に得られる場合があり、ＵＣＨ−Ｌ１レベルの上昇又は低下は、少なくとも約２５ｐｇ／ｍＬである。一部の実施形態において、第１の試料は、約０〜約１１時間以内に得られる場合があり、ＵＣＨ−Ｌ１レベルの上昇又は低下は、少なくとも約２５ｐｇ／ｍＬである。一部の実施形態において、第１の試料は、約０〜約１２時間以内に得られる場合があり、ＵＣＨ−Ｌ１レベルの上昇又は低下は、少なくとも約１２９ｐｇ／ｍＬである。
【０１７１】
一部の実施形態において、対象は、検出されたＵＣＨ−Ｌ１−抗体複合体の量が、頭部への損傷又は推測される損傷後、約０時間〜約６時間以内に、対象から採取された、１つ以上の第１の試料中の増大量（例えば、約１００ｐｇ／ｍＬ〜約１０００ｐｇ／ｍＬ）へと上昇する場合に、中等度〜重度の外傷性脳損傷を患うと考えられうる。一部の実施形態において、ＵＣＨ−Ｌ１レベルは、頭部への損傷後、約０〜約６時間、約０．５時間〜約６時間、約１時間〜約６時間、約１．５時間〜約６時間、約２時間〜約６時間、約２．５時間〜約６時間、約３時間〜約６時間、約４時間〜約６時間、約５時間〜約６時間、約０〜約５時間、約０．５時間〜約５時間、約１時間〜約５時間、約１．５時間〜約５時間、約２時間〜約５時間、約２．５時間〜約５時間、約３時間〜約５時間、約４時間〜約５時間、約０〜約４時間、約０．５時間〜約４時間、約１時間〜約４時間、約１．５時間〜約４時間、約２時間〜約４時間、約２．５時間〜約４時間、約３時間〜約４時間、約０〜約３時間、約０．５時間〜約３時間、約１時間〜約３時間、約１．５時間〜約３時間、約２時間〜約３時間、約２．５時間〜約３時間、約０〜約２．５時間、約０．５時間〜約２．５時間、約１時間〜約２．５時間、約１．５時間〜約２．５時間、約２時間〜約２．５時間、約０〜約２時間、約０．５時間〜約２時間、約１時間〜約２時間、又は約１．５時間〜約２時間以内に上昇しうる。一部の実施形態において、ＵＣＨ−Ｌ１レベルは、頭部への損傷後、約０、約０．５時間、約１時間、約１．５時間、約２時間、約２．５時間、約３時間、約３．５時間、約４時間、約４．５時間、約５時間、約５．５時間、又は約６時間以内に上昇しうる。
【０１７２】
一部の実施形態において、ＵＣＨ−Ｌ１レベルは、頭部への損傷又は推測される損傷の後における増大量へと上昇しうる。ＵＣＨ−Ｌ１の増大量は、約２０ｐｇ／ｍＬ〜少なくとも約２５０００ｐｇ／ｍＬの間でありうる。例えば、ＵＣＨ−Ｌ１の増大量は、少なくとも約２０ｐｇ／ｍＬ〜少なくとも約２５０００ｐｇ／ｍＬ、少なくとも約５０ｐｇ／ｍＬ〜少なくとも約２５０００ｐｇ／ｍＬ、少なくとも約１００ｐｇ／ｍＬ〜少なくとも約２５０００ｐｇ／ｍＬ、少なくとも約２００ｐｇ／ｍＬ〜少なくとも約２５０００ｐｇ／ｍＬ、少なくとも約３００ｐｇ／ｍＬ〜少なくとも約２５０００ｐｇ／ｍＬ、少なくとも約４００ｐｇ／ｍＬ〜少なくとも約２５０００ｐｇ／ｍＬ、少なくとも約５００ｐｇ／ｍＬ〜少なくとも約２５０００ｐｇ／ｍＬ、少なくとも約１０００ｐｇ／ｍＬ〜少なくとも約２５０００ｐｇ／ｍＬ、少なくとも約２０００ｐｇ／ｍＬ〜少なくとも約２５０００ｐｇ／ｍＬ、少なくとも約３０００ｐｇ／ｍＬ〜少なくとも約２５０００ｐｇ／ｍＬ、少なくとも約４０００ｐｇ／ｍＬ〜少なくとも約２５０００ｐｇ／ｍＬ、少なくとも約５０００ｐｇ／ｍＬ〜少なくとも約２５０００ｐｇ／ｍＬ、少なくとも約２０ｐｇ／ｍＬ〜少なくとも約１５０００ｐｇ／ｍＬ、少なくとも約５０ｐｇ／ｍＬ〜少なくとも約１５０００ｐｇ／ｍＬ、少なくとも約１００ｐｇ／ｍＬ〜少なくとも約１５０００ｐｇ／ｍＬ、少なくとも約２００ｐｇ／ｍＬ〜少なくとも約１５０００ｐｇ／ｍＬ、少なくとも約３００ｐｇ／ｍＬ〜少なくとも約１５０００ｐｇ／ｍＬ、少なくとも約４００ｐｇ／ｍＬ〜少なくとも約１５０００ｐｇ／ｍＬ、少なくとも約５００ｐｇ／ｍＬ〜少なくとも約１５０００ｐｇ／ｍＬ、少なくとも約１０００ｐｇ／ｍＬ〜少なくとも約１５０００ｐｇ／ｍＬ、少なくとも約２０００ｐｇ／ｍＬ〜少なくとも約１５０００ｐｇ／ｍＬ、少なくとも約３０００ｐｇ／ｍＬ〜少なくとも約１５０００ｐｇ／ｍＬ、少なくとも約４０００ｐｇ／ｍＬ〜少なくとも約１５０００ｐｇ／ｍＬ、少なくとも約５０００ｐｇ／ｍＬ〜少なくとも約１５０００ｐｇ／ｍＬ、少なくとも約１００００ｐｇ／ｍＬ〜少なくとも約１５０００ｐｇ／ｍＬ、少なくとも約２０ｐｇ／ｍＬ〜少なくとも約１００００ｐｇ／ｍＬ、少なくとも約５０ｐｇ／ｍＬ〜少なくとも約１００００ｐｇ／ｍＬ、少なくとも約１００ｐｇ／ｍＬ〜少なくとも約１００００ｐｇ／ｍＬ、少なくとも約２００ｐｇ／ｍＬ〜少なくとも約１００００ｐｇ／ｍＬ、少なくとも約３００ｐｇ／ｍＬ〜少なくとも約１００００ｐｇ／ｍＬ、少なくとも約４００ｐｇ／ｍＬ〜少なくとも約１００００ｐｇ／ｍＬ、少なくとも約５００ｐｇ／ｍＬ〜少なくとも約１００００ｐｇ／ｍＬ、少なくとも約１０００ｐｇ／ｍＬ〜少なくとも約１００００ｐｇ／ｍＬ、少なくとも約２０００ｐｇ／ｍＬ〜少なくとも約１００００ｐｇ／ｍＬ、少なくとも約３０００ｐｇ／ｍＬ〜少なくとも約１００００ｐｇ／ｍＬ、少なくとも約４０００ｐｇ／ｍＬ〜少なくとも約１００００ｐｇ／ｍＬ、少なくとも約５０００ｐｇ／ｍＬ〜少なくとも約１００００ｐｇ／ｍＬ、少なくとも約２０ｐｇ／ｍＬ〜少なくとも約５０００ｐｇ／ｍＬ、少なくとも約５０ｐｇ／ｍＬ〜少なくとも約５０００ｐｇ／ｍＬ、少なくとも約１００ｐｇ／ｍＬ〜少なくとも約５０００ｐｇ／ｍＬ、少なくとも約２００ｐｇ／ｍＬ〜少なくとも約５０００ｐｇ／ｍＬ、少なくとも約３００ｐｇ／ｍＬ〜少なくとも約５０００ｐｇ／ｍＬ、少なくとも約４００ｐｇ／ｍＬ〜少なくとも約５０００ｐｇ／ｍＬ、少なくとも約５００ｐｇ／ｍＬ〜少なくとも約５０００ｐｇ／ｍＬ、少なくとも約１０００ｐｇ／ｍＬ〜少なくとも約５０００ｐｇ／ｍＬ、少なくとも約２０００ｐｇ／ｍＬ〜少なくとも約５０００ｐｇ／ｍＬ、少なくとも約３０００ｐｇ／ｍＬ〜少なくとも約５０００ｐｇ／ｍＬ、少なくとも約４０００ｐｇ／ｍＬ〜少なくとも約５０００ｐｇ／ｍＬ、少なくとも約２０ｐｇ／ｍＬ〜少なくとも約１０００ｐｇ／ｍＬ、少なくとも約５０ｐｇ／ｍＬ〜少なくとも約１０００ｐｇ／ｍＬ、少なくとも約１００ｐｇ／ｍＬ〜少なくとも約１０００ｐｇ／ｍＬ、少なくとも約２００ｐｇ／ｍＬ〜少なくとも約１０００ｐｇ／ｍＬ、少なくとも約３００ｐｇ／ｍＬ〜少なくとも約１０００ｐｇ／ｍＬ、少なくとも約４００ｐｇ／ｍＬ〜少なくとも約１０００ｐｇ／ｍＬ、又は少なくとも約５００ｐｇ／ｍＬ〜少なくとも約１０００ｐｇ／ｍＬの間でありうる。一部の実施形態において、ＵＣＨ−Ｌ１の増大量は、少なくとも約１００ｐｇ／ｍＬ、少なくとも約２００ｐｇ／ｍＬ、少なくとも約３００ｐｇ／ｍＬ、少なくとも約４００ｐｇ／ｍＬ、少なくとも約５００ｐｇ／ｍＬ、少なくとも約６００ｐｇ／ｍＬ、少なくとも約７００ｐｇ／ｍＬ、少なくとも約８００ｐｇ／ｍＬ、少なくとも約９００ｐｇ／ｍＬ、少なくとも約１０００ｐｇ／ｍＬ、少なくとも約２１０００ｐｇ／ｍＬ、少なくとも約３０００ｐｇ／ｍＬ、少なくとも約４０００ｐｇ／ｍＬ、少なくとも約５０００ｐｇ／ｍＬ、少なくとも約１００００ｐｇ／ｍＬ、又は少なくとも約１５０００ｐｇ／ｍＬでありうる。
【０１７３】
一部の実施形態において、方法は、下記において記載される通り、中等度〜重度の外傷性脳損傷を有すると評価された対象を、外傷性脳損傷処置により処置するステップをさらに含む。一部の実施形態において、方法は、下記において記載される通り、軽度外傷性脳損傷を有すると評価された対象をモニタリングするステップをさらに含む。
【０１７４】
本明細書において記載された方法において利用されたアッセイの性質は、それほど重要ではなく、検査は、例えば、イムノアッセイ、タンパク質免疫沈降、免疫電気泳動、化学解析、ＳＤＳ−ＰＡＧＥ及びウェスタンブロット解析若しくはタンパク質免疫染色、電気泳動解析、タンパク質アッセイ、競合的結合アッセイ、機能的タンパク質アッセイ又は高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）若しくは液体クロマトグラフィー−質量分析（ＬＣ／ＭＳ）のような、クロマトグラフィー法若しくは分光法のような、当技術分野において公知である、任意のアッセイでありうる。また、当業者に公知の臨床化学フォーマットのアッセイも利用されうる。このようなアッセイについては、本明細書の第９〜１１節において、さらに詳細に記載されている。
【０１７５】
４．頭部への損傷を負ったヒト対象に対して、ＣＴスキャンを実施するのかどうかを査定するための方法
本開示は、他の方法の中でとりわけ、推測される頭部への損傷を負った、又は負った可能性があるヒト対象に対して、コンピュータ断層撮影（ＣＴ）スキャンを実施するのかどうかについての決定又は査定の一助となる方法に関する。本明細書において使用された「ヒト対象に対して、ＣＴスキャンを実施するのかどうかについての決定」とは、対象の頭部ＣＴスキャンが陽性となる可能性が、そうでない場合より高いことを、他の方法を伴うか又は伴わずに決定する方法の使用を指す。具体的に、このような方法は、（ａ）推測される損傷から２４時間以内に対象から採取された第１の試料、及び第１の試料が採取された約３〜約６時間後に対象から採取された第２の試料である、対象から得られた少なくとも２つの試料に対するアッセイを実施するステップ；（ｂ）少なくとも２つの試料中に、ユビキチンカルボキシ末端ヒドロラーゼＬ１（ＵＣＨ−Ｌ１）からなる外傷性脳損傷の早期バイオマーカーを検出するステップであって、ＵＣＨ−Ｌ１の存在の開始が、推測される頭部損傷後、約０〜約６時間以内に現れるステップ；（ｃ）第１の試料及び第２の試料の各々におけるＵＣＨ−Ｌ１のレベルを決定し、ＵＣＨ−Ｌ１のレベルが、第１の試料から第２の試料へ、低下又は上昇するのかどうかを決定するステップ；及び（ｄ）ＵＣＨ−Ｌ１のレベルが、第１の試料から第２の試料へ、低下するのか、上昇するのか、又は同じレベルを維持するのかに基づき、対象に対して、ＣＴスキャンを実施するのかどうかを決定するステップを含みうる。一部の実施形態において、ＵＣＨ−Ｌ１の第１の試料又は第２の試料中レベルが、ＵＣＨ−Ｌ１の基準レベルより高い場合に、ＣＴスキャンは、対象に対して実施される。一部の実施形態において、ＵＣＨ−Ｌ１の第１の試料中レベル又は第２の試料中レベルが、ＵＣＨ−Ｌ１の基準レベルより低い場合に、ＣＴスキャンは、対象に対して実施されない。一部の実施形態において、ＵＣＨ−Ｌ１の第１の試料中レベルからＵＣＨ−Ｌ１の第２の試料中レベルへ、統計学的に有意な上昇若しくは低下が見られる場合に、ＣＴスキャンは、対象に対して実施される。一部の実施形態において、ＵＣＨ−Ｌ１の第１の試料中レベルからＵＣＨ−Ｌ１の第２の試料中レベルへ、統計学的に有意な上昇若しくは低下が見られない場合に、ＣＴスキャンは、対象に対して実施されない。一部の実施形態において、ＵＣＨ−Ｌ１のレベルが、第１の試料から第２の試料へ、少なくとも絶対量の低下若しくは上昇をする場合に、ＣＴスキャンは、対象に対して実施される。一部の実施形態において、ＵＣＨ−Ｌ１のレベルの第１の試料から第２の試料へ、少なくとも絶対量の低下若しくは上昇が見られない場合に、ＣＴスキャンは、対象に対して実施されない。一部の実施形態において、ＵＣＨ−Ｌ１の第１の試料中レベルがＵＣＨ−Ｌ１の基準レベルより高い、又はＵＣＨ−Ｌ１の第１の試料中レベルからＵＣＨ−Ｌ１の第２の試料中レベルへ統計学的に有意な上昇若しくは低下が見られる場合に、ＣＴスキャンは、対象に対して実施される。一部の実施形態において、ＵＣＨ−Ｌ１の第１の試料中レベルがＵＣＨ−Ｌ１の基準レベルより低い、又はＵＣＨ−Ｌ１の第１の試料中レベルからＵＣＨ−Ｌ１の第２の試料中レベルへ統計学的に有意な上昇若しくは低下が見られない場合に、ＣＴスキャンは、対象に対して実施されない。試料は、生物学的試料でありうる。
【０１７６】
一部の実施形態において、対象は、アッセイが実施される前に、又は実施された後において、ＣＴスキャンを受けている。一部の実施形態において、対象は、ＣＴスキャンに基づき、外傷性脳損傷を有すると推測される。一部の実施形態において、基準レベルは、陽性の頭部ＣＴスキャンと相関する。
【０１７７】
一般に、基準レベルは、被験試料を、ＵＣＨ−Ｌ１についてアッセイしたときに得られた結果を評価するためのベンチマークとして利用されうる。一般に、このような比較を行う場合に、基準レベルは、解析物の存在、量又は濃度の、ＴＢＩの特定の病期若しくはエンドポイント又は特定の徴候との連関又は関連が成立させられうるような、十分な回数及び適切な条件下において、特定のアッセイを行うことにより得られる。典型的に、基準レベルは、基準対象（又は対象の集団）についてのアッセイにより得られる。測定されるＵＣＨ−Ｌ１は、このＵＣＨ−Ｌ１断片、この分解産物及び／又は酵素によるこの切断産物を含みうる。
【０１７８】
一部の実施形態において、基準レベルは、少なくとも約８０％〜約１００％の間の感度及び少なくとも約３０％〜約１００％の間の特異度を有するアッセイにより決定される。一部の実施形態において、感度は、少なくとも約８０．０％、少なくとも約８５．０％、少なくとも約８７．５％、少なくとも約９０．０％、少なくとも約９５．０％、少なくとも約９９．０％、少なくとも約９９．１％、少なくとも約９９．２％、少なくとも約９９．３％、少なくとも約９９．４％、少なくとも約９９．５％、少なくとも約９９．６％、少なくとも約９９．７％、少なくとも約９９．８％、少なくとも約９９．９％、又は少なくとも約１００．０％である。一部の実施形態において、特異度は、少なくとも約３０．０％、少なくとも約３１．０％、少なくとも約３２．０％、少なくとも約３３．０％、少なくとも約３４．０％、少なくとも約３５．０％、少なくとも約３６．０％、少なくとも約３７．０％、少なくとも約３８．０％、少なくとも約３９．０％、少なくとも約４０．０％、少なくとも約４５．０％、少なくとも約５０．０％、少なくとも約５５．０％、少なくとも約６０．０％、少なくとも約６５．０％、少なくとも約７０．０％、少なくとも約７５．０％、少なくとも約８０．０％、少なくとも約８５．０％、少なくとも約９０．０％、少なくとも約９１．０％、少なくとも約９２．０％、少なくとも約９３．０％、少なくとも約９４．０％、少なくとも約９５．０％、少なくとも約９６．０％、少なくとも約９７．０％、少なくとも約９８．０％、少なくとも約９９．０％、少なくとも約９９．１％、少なくとも約９９．２％、少なくとも約９９．３％、少なくとも約９９．４％、少なくとも約９９．５％、少なくとも約９９．６％、少なくとも約９９．７％、少なくとも約９９．８％、少なくとも約９９．９％、又は少なくとも約１００．０％である。例えば、感度は、少なくとも約９９％であり、特異度は、少なくとも約７５％である、感度は、少なくとも約９９％であり、特異度は、少なくとも約９９％である、又は感度は、約１００％であり、特異度は、約１００％である。
【０１７９】
一部の実施形態において、基準レベルは、少なくとも約５０ｐｇ／ｍＬ〜少なくとも約１０００ｐｇ／ｍＬの間でありうる。一部の実施形態において、基準レベルは、少なくとも約５０ｐｇ／ｍＬ〜約１０００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約５０ｐｇ／ｍＬ〜約９００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約５０ｐｇ／ｍＬ〜約８００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約５０ｐｇ／ｍＬ〜約７５０ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約５０ｐｇ／ｍＬ〜約７００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約５０ｐｇ／ｍＬ〜約６００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約５０ｐｇ／ｍＬ〜約５００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約５０ｐｇ／ｍＬ〜約４００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約５０ｐｇ／ｍＬ〜約３００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約５０ｐｇ／ｍＬ〜約２００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約１００ｐｇ／ｍＬ〜約１０００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約１００ｐｇ／ｍＬ〜約９００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約１００ｐｇ／ｍＬ〜約８００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約１００ｐｇ／ｍＬ〜約７５０ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約１００ｐｇ／ｍＬ〜約７００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約１００ｐｇ／ｍＬ〜約６００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約１００ｐｇ／ｍＬ〜約５００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約１００ｐｇ／ｍＬ〜約４００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約１００ｐｇ／ｍＬ〜約３００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約１００ｐｇ／ｍＬ〜約２００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約１５０ｐｇ／ｍＬ〜約１０００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約１５０ｐｇ／ｍＬ〜約９００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約１５０ｐｇ／ｍＬ〜約８００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約１５０ｐｇ／ｍＬ〜約７５０ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約１５０ｐｇ／ｍＬ〜約７００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約１５０ｐｇ／ｍＬ〜約６００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約１５０ｐｇ／ｍＬ〜約５００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約１５０ｐｇ／ｍＬ〜約４００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約１５０ｐｇ／ｍＬ〜約３００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約１５０ｐｇ／ｍＬ〜約２００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約２００ｐｇ／ｍＬ〜約１０００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約２００ｐｇ／ｍＬ〜約９００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約２００ｐｇ／ｍＬ〜約８００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約２００ｐｇ／ｍＬ〜約７５０ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約２００ｐｇ／ｍＬ〜約７００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約２００ｐｇ／ｍＬ〜約６００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約２００ｐｇ／ｍＬ〜約５００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約２００ｐｇ／ｍＬ〜約４００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約２００ｐｇ／ｍＬ〜約３００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約３００ｐｇ／ｍＬ〜約１０００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約３００ｐｇ／ｍＬ〜約９００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約３００ｐｇ／ｍＬ〜約８００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約３００ｐｇ／ｍＬ〜約７５０ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約３００ｐｇ／ｍＬ〜約７００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約３００ｐｇ／ｍＬ〜約６００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約３００ｐｇ／ｍＬ〜約５００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約３００ｐｇ／ｍＬ〜約４００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約４００ｐｇ／ｍＬ〜約１０００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約４００ｐｇ／ｍＬ〜約９００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約４００ｐｇ／ｍＬ〜約８００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約４００ｐｇ／ｍＬ〜約７５０ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約４００ｐｇ／ｍＬ〜約７００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約４００ｐｇ／ｍＬ〜約６００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約４００ｐｇ／ｍＬ〜約５００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約５００ｐｇ／ｍＬ〜約１０００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約５００ｐｇ／ｍＬ〜約９００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約５００ｐｇ／ｍＬ〜約８００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約５００ｐｇ／ｍＬ〜約７５０ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約５００ｐｇ／ｍＬ〜約７００ｐｇ／ｍＬの間、又は少なくとも約５００ｐｇ／ｍＬ〜約６００ｐｇ／ｍＬの間でありうる。例えば、基準レベルは、少なくとも約５０ｐｇ／ｍＬ、５５ｐｇ／ｍＬ、６０ｐｇ／ｍＬ、６５ｐｇ／ｍＬ、７０ｐｇ／ｍＬ、７５ｐｇ／ｍＬ、８０ｐｇ／ｍＬ、８５ｐｇ／ｍＬ、９０ｐｇ／ｍＬ、９５ｐｇ／ｍＬ、９６ｐｇ／ｍＬ、９７ｐｇ／ｍＬ、９８ｐｇ／ｍＬ、９８ｐｇ／ｍＬ、１００ｐｇ／ｍＬ、１５０ｐｇ／ｍＬ、２００ｐｇ／ｍＬ、２５０ｐｇ／ｍＬ、３００ｐｇ／ｍＬ、３５０ｐｇ／ｍＬ、３７０ｐｇ／ｍＬ、４００ｐｇ／ｍＬ、４５０ｐｇ／ｍＬ、５００ｐｇ／ｍＬ、５０９ｐｇ／ｍＬ、５５０ｐｇ／ｍＬ、６００ｐｇ／ｍＬ、７００ｐｇ／ｍＬ、８００ｐｇ／ｍＬ、９００ｐｇ／ｍＬ又は１０００ｐｇ／ｍＬでありうる。
【０１８０】
一部の実施形態において、第１の試料は、推測される損傷後２４時間以内に採取される。例えば、第１の試料は、推測される損傷後、約０時間以内に、約３０分以内に、約１時間以内に、約２時間以内に、約３時間以内に、約４時間以内に、約５時間以内に、約６時間以内に、約７時間以内に、約８時間以内に、約９時間以内に、約１０時間以内に、約１１時間以内に、約１２時間以内に、約１３時間以内に、約１４時間以内に、約１５時間以内に、約１６時間以内に、約１７時間以内に、約１８時間以内に、約１９時間以内に、約２０時間以内に、約２１時間以内に、約２２時間以内に、約２３時間以内に、約２４時間以内に、又は約２４時間を超えて採取されうる。一部の実施形態において、第１の試料は、推測される損傷後、約０〜約６時間以内に、約６〜約１２時間以内に、約１２〜約１８時間以内に、約１８〜約２４時間以内に、又は２４時間を超えて採取される。
【０１８１】
一部の実施形態において、第２の試料は、第１の試料が得られた後、約３時間〜約６時間後のように、第１の試料が得られた後、約１時間〜約１０時間以内に得られる。一部の実施形態において、第２の試料は、第１の試料が得られた後、約１時間、約２時間、約３時間、約４時間、約５時間、約６時間、約７時間、約８時間、約９時間又は約１０時間以内に得られる。
【０１８２】
一部の実施形態において、第１の試料は、推測される損傷後２４時間以内に採取され、基準レベルは、上記において記載された、特定の感度及び特異度を有するアッセイにより決定される。一部の実施形態において、試料は、推測される損傷後、約０〜約６時間以内に、約０〜約７時間以内に、約０〜約８時間以内に、約０〜約９時間以内に、約０〜約１０時間以内に、約０〜約１１時間以内に、約０〜約１２時間以内に、約６〜約１２時間以内に、約１２〜約１８時間以内に、約１８〜約２４時間以内に、又は２４時間を超えて採取され、基準レベルは、約１００％の感度及び少なくとも約７５％の特異度、少なくとも約９９％の感度及び少なくとも約７５％の特異度又は約１００％の感度及び約１００％の特異度のような、特定の感度及び特異度を有するアッセイにより決定される。
【０１８３】
一部の実施形態において、第１の試料は、推測される損傷後、約０時間〜６時間の間に得られる場合があり、基準レベルは、少なくとも約３７０ｐｇ／ｍＬであり、約１００％の感度及び少なくとも約３７．５％の特異度を有するアッセイにより決定される。一部の実施形態において、第１の試料は、推測される損傷後、約０時間〜６時間の間に採取され、基準レベルは、約５０９ｐｇ／ｍＬであり、約１００％の感度及び少なくとも約７５％の特異度を有するアッセイにより決定される。一部の実施形態において、第１の試料は、推測される損傷後、約６時間〜１２時間の間に採取され、基準レベルは、約９６ｐｇ／ｍＬであり、少なくとも約９６％の感度及び少なくとも約３０％の特異度を有するアッセイにより決定される。一部の実施形態において、第１の試料は、推測される損傷後、約６時間〜１２時間の間に採取され、基準レベルは、約８６ｐｇ／ｍＬであり、少なくとも約８６％の感度及び少なくとも約３５％の特異度を有するアッセイにより決定される。
【０１８４】
一部の実施形態において、絶対量は、少なくとも約８０％〜約１００％の間の感度及び少なくとも約３０％〜約１００％の間の特異度を有するアッセイにより決定されうる。一部の実施形態において、感度は、少なくとも約８０．０％、少なくとも約８５．０％、少なくとも約８７．５％、少なくとも約９０．０％、少なくとも約９５．０％、少なくとも約９９．０％、少なくとも約９９．１％、少なくとも約９９．２％、少なくとも約９９．３％、少なくとも約９９．４％、少なくとも約９９．５％、少なくとも約９９．６％、少なくとも約９９．７％、少なくとも約９９．８％、少なくとも約９９．９％又は少なくとも約１００．０％である。一部の実施形態において、特異度は、少なくとも約３０．０％、少なくとも約３１．０％、少なくとも約３２．０％、少なくとも約３３．０％、少なくとも約３４．０％、少なくとも約３５．０％、少なくとも約３６．０％、少なくとも約３７．０％、少なくとも約３８．０％、少なくとも約３９．０％、少なくとも約４０．０％、少なくとも約４５．０％、少なくとも約５０．０％、少なくとも約５５．０％、少なくとも約６０．０％、少なくとも約６５．０％、少なくとも約７０．０％、少なくとも約７５．０％、少なくとも約８０．０％、少なくとも約８５．０％、少なくとも約９０．０％、少なくとも約９１．０％、少なくとも約９２．０％、少なくとも約９３．０％、少なくとも約９４．０％、少なくとも約９５．０％、少なくとも約９６．０％、少なくとも約９７．０％、少なくとも約９８．０％、少なくとも約９９．０％、少なくとも約９９．１％、少なくとも約９９．２％、少なくとも約９９．３％、少なくとも約９９．４％、少なくとも約９９．５％、少なくとも約９９．６％、少なくとも約９９．７％、少なくとも約９９．８％、少なくとも約９９．９％、又は少なくとも約１００．０％である。例えば、感度は、少なくとも約９９％であることが可能であり、特異度は、少なくとも約７５％でありうる、感度は、少なくとも約９９％であることが可能であり、特異度は、少なくとも約９９％でありうる又は感度は、約１００％であることが可能であり、特異度は、約１００％でありうる。
【０１８５】
一部の実施形態において、絶対量は、少なくとも約２０ｐｇ／ｍＬ〜約６１００ｐｇ／ｍＬの間でありうる。一部の実施形態において、絶対量は、少なくとも約２０ｐｇ／ｍＬ〜約６１００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約２０ｐｇ／ｍＬ〜約６０００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約２０ｐｇ／ｍＬ〜約５５００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約２０ｐｇ／ｍＬ〜約５０００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約２０ｐｇ／ｍＬ〜約４５００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約２０ｐｇ／ｍＬ〜約４０００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約２０ｐｇ／ｍＬ〜約３５００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約２０ｐｇ／ｍＬ〜約３０００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約２０ｐｇ／ｍＬ〜約２５００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約２０ｐｇ／ｍＬ〜約２０００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約２０ｐｇ／ｍＬ〜約１５００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約２０ｐｇ／ｍＬ〜約１０００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約２０ｐｇ／ｍＬ〜約９００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約２０ｐｇ／ｍＬ〜約８００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約２０ｐｇ／ｍＬ〜約７００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約２０ｐｇ／ｍＬ〜約６００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約２０ｐｇ／ｍＬ〜約５００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約２０ｐｇ／ｍＬ〜約４００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約２０ｐｇ／ｍＬ〜約３００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約２０ｐｇ／ｍＬ〜約２００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約２０ｐｇ／ｍＬ〜約１００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約２０ｐｇ／ｍＬ〜約５０ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約２５ｐｇ／ｍＬ〜約６１００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約２５ｐｇ／ｍＬ〜約６０００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約２５ｐｇ／ｍＬ〜約５５００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約２５ｐｇ／ｍＬ〜約５０００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約２５ｐｇ／ｍＬ〜約４５００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約２５ｐｇ／ｍＬ〜約４０００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約２５ｐｇ／ｍＬ〜約３５００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約２５ｐｇ／ｍＬ〜約３０００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約２５ｐｇ／ｍＬ〜約２５００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約２５ｐｇ／ｍＬ〜約２０００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約２５ｐｇ／ｍＬ〜約１５００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約２５ｐｇ／ｍＬ〜約１０００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約２５ｐｇ／ｍＬ〜約９００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約２５ｐｇ／ｍＬ〜約８００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約２５ｐｇ／ｍＬ〜約７００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約２５ｐｇ／ｍＬ〜約６００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約２５ｐｇ／ｍＬ〜約５００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約２５ｐｇ／ｍＬ〜約４００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約２５ｐｇ／ｍＬ〜約３００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約２５ｐｇ／ｍＬ〜約２００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約２５ｐｇ／ｍＬ〜約１００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約２５ｐｇ／ｍＬ〜約５０ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約５０ｐｇ／ｍＬ〜約６１００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約５０ｐｇ／ｍＬ〜約６０００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約５０ｐｇ／ｍＬ〜約５５００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約５０ｐｇ／ｍＬ〜約５０００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約５０ｐｇ／ｍＬ〜約４５００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約５０ｐｇ／ｍＬ〜約４０００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約５０ｐｇ／ｍＬ〜約３５００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約５０ｐｇ／ｍＬ〜約３０００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約５０ｐｇ／ｍＬ〜約２５００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約５０ｐｇ／ｍＬ〜約２０００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約５０ｐｇ／ｍＬ〜約１５００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約５０ｐｇ／ｍＬ〜約１０００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約５０ｐｇ／ｍＬ〜約９００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約５０ｐｇ／ｍＬ〜約８００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約５０ｐｇ／ｍＬ〜約７００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約５０ｐｇ／ｍＬ〜約６００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約５０ｐｇ／ｍＬ〜約５００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約５０ｐｇ／ｍＬ〜約４００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約５０ｐｇ／ｍＬ〜約３００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約５０ｐｇ／ｍＬ〜約２００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約５０ｐｇ／ｍＬ〜約１００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約１００ｐｇ／ｍＬ〜約６１００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約１００ｐｇ／ｍＬ〜約６０００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約１００ｐｇ／ｍＬ〜約５５００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約１００ｐｇ／ｍＬ〜約５０００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約１００ｐｇ／ｍＬ〜約４５００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約１００ｐｇ／ｍＬ〜約４０００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約１００ｐｇ／ｍＬ〜約３５００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約１００ｐｇ／ｍＬ〜約３０００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約１００ｐｇ／ｍＬ〜約２５００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約１００ｐｇ／ｍＬ〜約２０００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約１００ｐｇ／ｍＬ〜約１５００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約１００ｐｇ／ｍＬ〜約１０００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約１００ｐｇ／ｍＬ〜約９００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約１００ｐｇ／ｍＬ〜約８００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約１００ｐｇ／ｍＬ〜約７００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約１００ｐｇ／ｍＬ〜約６００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約１００ｐｇ／ｍＬ〜約５００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約１００ｐｇ／ｍＬ〜約４００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約１００ｐｇ／ｍＬ〜約３００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約１００ｐｇ／ｍＬ〜約２００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約１２９ｐｇ／ｍＬ〜約６１００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約１２９ｐｇ／ｍＬ〜約６０００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約１２９ｐｇ／ｍＬ〜約５５００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約１２９ｐｇ／ｍＬ〜約５０００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約１２９ｐｇ／ｍＬ〜約４５００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約１２９ｐｇ／ｍＬ〜約４０００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約１２９ｐｇ／ｍＬ〜約３５００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約１２９ｐｇ／ｍＬ〜約３０００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約１２９ｐｇ／ｍＬ〜約２５００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約１２９ｐｇ／ｍＬ〜約２０００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約１２９ｐｇ／ｍＬ〜約１５００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約１２９ｐｇ／ｍＬ〜約１０００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約１２９ｐｇ／ｍＬ〜約９００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約１２９ｐｇ／ｍＬ〜約８００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約１２９ｐｇ／ｍＬ〜約７００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約１２９ｐｇ／ｍＬ〜約６００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約１２９ｐｇ／ｍＬ〜約５００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約１２９ｐｇ／ｍＬ〜約４００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約１２９ｐｇ／ｍＬ〜約３００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約１２９ｐｇ／ｍＬ〜約２００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約２００ｐｇ／ｍＬ〜約６１００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約２００ｐｇ／ｍＬ〜約６０００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約２００ｐｇ／ｍＬ〜約５５００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約２００ｐｇ／ｍＬ〜約５０００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約２００ｐｇ／ｍＬ〜約４５００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約２００ｐｇ／ｍＬ〜約４０００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約２００ｐｇ／ｍＬ〜約３５００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約２００ｐｇ／ｍＬ〜約３０００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約２００ｐｇ／ｍＬ〜約２５００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約２００ｐｇ／ｍＬ〜約２０００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約２００ｐｇ／ｍＬ〜約１５００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約２００ｐｇ／ｍＬ〜約１０００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約２００ｐｇ／ｍＬ〜約９００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約２００ｐｇ／ｍＬ〜約８００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約２００ｐｇ／ｍＬ〜約７００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約２００ｐｇ／ｍＬ〜約６００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約２００ｐｇ／ｍＬ〜約５００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約２００ｐｇ／ｍＬ〜約４００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約２００ｐｇ／ｍＬ〜約３００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約３００ｐｇ／ｍＬ〜約６１００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約３００ｐｇ／ｍＬ〜約６０００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約３００ｐｇ／ｍＬ〜約５５００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約３００ｐｇ／ｍＬ〜約５０００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約３００ｐｇ／ｍＬ〜約４５００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約３００ｐｇ／ｍＬ〜約４０００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約３００ｐｇ／ｍＬ〜約３５００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約３００ｐｇ／ｍＬ〜約３０００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約３００ｐｇ／ｍＬ〜約２５００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約３００ｐｇ／ｍＬ〜約２０００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約３００ｐｇ／ｍＬ〜約１５００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約３００ｐｇ／ｍＬ〜約１０００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約３００ｐｇ／ｍＬ〜約９００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約３００ｐｇ／ｍＬ〜約８００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約３００ｐｇ／ｍＬ〜約７００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約３００ｐｇ／ｍＬ〜約６００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約３００ｐｇ／ｍＬ〜約５００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約３００ｐｇ／ｍＬ〜約４００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約４００ｐｇ／ｍＬ〜約６１００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約４００ｐｇ／ｍＬ〜約６０００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約４００ｐｇ／ｍＬ〜約５５００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約４００ｐｇ／ｍＬ〜約５０００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約４００ｐｇ／ｍＬ〜約４５００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約４００ｐｇ／ｍＬ〜約４０００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約４００ｐｇ／ｍＬ〜約３５００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約４００ｐｇ／ｍＬ〜約３０００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約４００ｐｇ／ｍＬ〜約２５００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約４００ｐｇ／ｍＬ〜約２０００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約４００ｐｇ／ｍＬ〜約１５００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約４００ｐｇ／ｍＬ〜約１０００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約４００ｐｇ／ｍＬ〜約９００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約４００ｐｇ／ｍＬ〜約８００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約４００ｐｇ／ｍＬ〜約７００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約４００ｐｇ／ｍＬ〜約６００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約４００ｐｇ／ｍＬ〜約５００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約５００ｐｇ／ｍＬ〜約６１００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約５００ｐｇ／ｍＬ〜約６０００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約５００ｐｇ／ｍＬ〜約５５００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約５００ｐｇ／ｍＬ〜約５０００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約５００ｐｇ／ｍＬ〜約４５００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約５００ｐｇ／ｍＬ〜約４０００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約５００ｐｇ／ｍＬ〜約３５００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約５００ｐｇ／ｍＬ〜約３０００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約５００ｐｇ／ｍＬ〜約２５００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約５００ｐｇ／ｍＬ〜約２０００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約５００ｐｇ／ｍＬ〜約１５００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約５００ｐｇ／ｍＬ〜約１０００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約５００ｐｇ／ｍＬ〜約９００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約５００ｐｇ／ｍＬ〜約８００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約５００ｐｇ／ｍＬ〜約７００ｐｇ／ｍＬの間、又は少なくとも約５００ｐｇ／ｍＬ〜約６００ｐｇ／ｍＬの間でありうる。一部の実施形態において、絶対量は、少なくとも約２０ｐｇ／ｍＬ、少なくとも約２１ｐｇ／ｍＬ、少なくとも約２２ｐｇ／ｍＬ、少なくとも約２３ｐｇ／ｍＬ、少なくとも約２４ｐｇ／ｍＬ、少なくとも約２５ｐｇ／ｍＬ、少なくとも約２６ｐｇ／ｍＬ、少なくとも約２７ｐｇ／ｍＬ、少なくとも約２８ｐｇ／ｍＬ、少なくとも約２９ｐｇ／ｍＬ、少なくとも約３０ｐｇ／ｍＬ、少なくとも約３５ｐｇ／ｍＬ、少なくとも約４０ｐｇ／ｍＬ、少なくとも約４５ｐｇ／ｍＬ、少なくとも約５０ｐｇ／ｍＬ、少なくとも約５５ｐｇ／ｍＬ、少なくとも約６０ｐｇ／ｍＬ、少なくとも約６５ｐｇ／ｍＬ、少なくとも約７０ｐｇ／ｍ
Ｌ、少なくとも約７５ｐｇ／ｍＬ、少なくとも約８０ｐｇ／ｍＬ、少なくとも約８５ｐｇ／ｍＬ、少なくとも約９０ｐｇ／ｍＬ、少なくとも約９５ｐｇ／ｍＬ、少なくとも約１００ｐｇ／ｍＬ、少なくとも約１１０ｐｇ／ｍＬ、少なくとも約１２０ｐｇ／ｍＬ、少なくとも約１２９ｐｇ／ｍＬ、少なくとも約１３０ｐｇ／ｍＬ、少なくとも約１４０ｐｇ／ｍＬ、少なくとも約１５０ｐｇ／ｍＬ、少なくとも約２００ｐｇ／ｍＬ、少なくとも約２５０ｐｇ／ｍＬ、少なくとも約３００ｐｇ／ｍＬ、少なくとも約３５０ｐｇ／ｍＬ、少なくとも約４００ｐｇ／ｍＬ、少なくとも約４５０ｐｇ／ｍＬ、少なくとも約５００ｐｇ／ｍＬ、少なくとも約５５０ｐｇ／ｍＬ、少なくとも約６００ｐｇ／ｍＬ、少なくとも約７００ｐｇ／ｍＬ、少なくとも約８００ｐｇ／ｍＬ、少なくとも約９００ｐｇ／ｍＬ、少なくとも約１０００ｐｇ／ｍＬ、少なくとも約１５００ｐｇ／ｍＬ、少なくとも約２０００ｐｇ／ｍＬ、少なくとも約２５００ｐｇ／ｍＬ、少なくとも約２５２８ｐｇ／ｍＬ、少なくとも約３０００ｐｇ／ｍＬ、少なくとも約４０００ｐｇ／ｍＬ、少なくとも約５０００ｐｇ／ｍＬ、少なくとも約６０００ｐｇ／ｍＬ、又は少なくとも約６１００ｐｇ／ｍＬでありうる。
【０１８６】
一部の実施形態において、試料は、推測される損傷後、０〜１０時間以内に採取され、約２５ｐｇ／ｍＬなどの絶対量は、少なくとも約８５％の感度及び少なくとも約４１％の特異度を有するアッセイにより決定される。一部の実施形態において、試料は推測される損傷後０〜１０時間以内に採取され、絶対量が約２５ｐｇ／ｍＬである。一部の実施形態において、試料は推測される損傷後０〜１０時間以内に採取され、約２３ｐｇ／ｍＬなどの絶対量は少なくとも約９０％の感度及び少なくとも約３５％の特異度を有するアッセイにより決定される。一部の実施形態において、試料は推測される損傷後０〜１０時間以内に採取され、絶対量が約２３ｐｇ／ｍＬである。
【０１８７】
一部の実施形態において、ＵＣＨ−Ｌ１の第１の時点において採取された第１の試料中レベルからＵＣＨ−Ｌ１の第２の時点において採取された第２の試料中レベルへ、統計学的に有意な上昇若しくは低下が見られる場合に、ＣＴスキャンは、対象に対して実施される。一部の実施形態において、ＵＣＨ−Ｌ１の第１の時点において採取された第１の試料中レベルからＵＣＨ−Ｌ１の第２の時点において採取された第２の試料中レベルへ、統計学的に有意な上昇若しくは低下が見られない場合に、ＣＴスキャンは、対象に対して実施されない。一部の実施形態において、統計学的に有意な上昇又は低下は、ＵＣＨ−Ｌ１の第１の時点において採取された第１の試料中レベルからＵＣＨ−Ｌ１の第２の時点において採取された第２の試料中レベルへ、約０．１倍を超える、若しくは約０．１分の１未満、約０．２倍を超える、若しくは約０．２分の１未満、約０．３倍を超える、若しくは約０．３分の１未満、約０．４倍を超える、若しくは約０．４分の１未満、約０．５倍を超える、若しくは約０．５分の１未満、約０．５５倍を超える、若しくは約０．５５分の１未満、約０．６倍を超える、若しくは約０．６分の１未満、約０．７倍を超える、若しくは約０．７分の１未満、約０．７３倍を超える、若しくは約０．７３分の１未満、約０．８倍を超える、若しくは約０．８分の１未満、約０．９倍を超える、若しくは約０．９分の１未満、約１倍を超える、若しくは約１分の１未満、約１．５倍を超える、若しくは約１．５分の１未満、約１．８１倍を超える、若しくは約１．８１分の１未満、約２倍を超える、若しくは約２分の１未満、約３倍を超える、若しくは約３分の１未満、約４倍を超える、若しくは約４分の１未満、約５倍を超える、若しくは約５分の１未満、約６倍を超える、若しくは約６分の１未満、約７倍を超える、若しくは約７分の１未満、約８倍を超える、若しくは約８分の１未満、約９倍を超える、若しくは約９分の１未満、約１０倍を超える、若しくは約１０分の１未満、約１１倍を超える、若しくは約１１分の１未満、約１２倍を超える、若しくは約１２分の１未満、約１３倍を超える、若しくは約１３分の１未満、約１４倍を超える、若しくは約１４分の１未満、約１５倍を超える、若しくは約１５分の１未満、約１６倍を超える、若しくは約１６分の１未満、約１７倍を超える、若しくは約１７分の１未満、約１８倍を超える、若しくは約１８分の１未満、約１９倍を超える、若しくは約１９分の１未満又は約２０倍を超える、若しくは約２０分の１未満である。一部の実施形態において、ＵＣＨ−Ｌ１の、第１の時点において採取された第１の試料中レベルから、ＵＣＨ−Ｌ１の、第２の時点において採取された第２の試料中レベルへの、約０．１分の１未満、約０．２分の１未満、約０．３分の１未満、約０．４分の１未満、約０．５分の１未満、約０．５５分の１未満、約０．６分の１未満、約０．７分の１未満、約０．７３分の１未満、約０．８分の１未満、約０．９分の１未満、約１分の１未満、約１．５分の１未満、約１．８１分の１未満、約２分の１未満、約３分の１未満、約４分の１未満、約５分の１未満、約６分の１未満、約７分の１未満、約８分の１未満、約９分の１未満、約１０分の１未満、約１１分の１未満、約１２分の１未満、約１３分の１未満、約１４分の１未満、約１５分の１未満、約１６分の１未満、約１７分の１未満、約１８分の１未満、約１９分の１未満又は約２０分の１未満の、統計学的に有意な低下は、対象が、ＣＴスキャンを実施されるべきであることを指し示す。一部の実施形態において、ＵＣＨ−Ｌ１の第１の時点において採取された第１の試料中レベルからＵＣＨ−Ｌ１の第２の時点において採取された第２の試料中レベルへ、約０．１倍を超える、約０．２倍を超える、約０．３倍を超える、約０．４倍を超える、約０．５倍を超える、約０．５５倍を超える、約０．６倍を超える、約０．７倍を超える、約０．７３倍を超える、約０．８倍を超える、約０．９倍を超える、約１倍を超える、約１．５倍を超える、約１．８１倍を超える、約２倍を超える、約３倍を超える、約４倍を超える、約５倍を超える、約６倍を超える、約７倍を超える、約８倍を超える、約９倍を超える、約１０倍を超える、約１１倍を超える、約１２倍を超える、約１３倍を超える、約１４倍を超える、約１５倍を超える、約１６倍を超える、約１７倍を超える、約１８倍を超える、約１９倍を超える、又は約２０倍を超える、統計学的に有意な上昇は、対象が、ＣＴスキャンを実施されるべきであることを指し示す。
【０１８８】
一部の実施形態において、統計学的に有意な上昇又は低下は、ＵＣＨ−Ｌ１の第１の時点において採取された第１の試料中レベルからＵＣＨ−Ｌ１の第２の時点において採取された第２の試料中レベルへ、約０．１倍未満若しくは約０．１分の１を超える、約０．２倍未満若しくは約０．２分の１を超える、約０．３倍未満若しくは約０．３分の１を超える、約０．４倍未満若しくは約０．４分の１を超える、約０．５倍未満若しくは約０．５分の１を超える、少なくとも約０．５５倍若しくは少なくとも約０．５５分の１、少なくとも約０．６倍若しくは少なくとも約０．６分の１、少なくとも約０．７倍若しくは少なくとも約０．７分の１、少なくとも約０．７３倍若しくは少なくとも約０．７３分の１、少なくとも約０．８倍若しくは少なくとも約０．８分の１、少なくとも約０．９倍若しくは少なくとも約０．９分の１、約１倍未満若しくは約１分の１を超える、約１．５倍未満若しくは約１．５分の１を超える、約１．８１倍未満若しくは約１．８１分の１を超える、約２倍未満若しくは約２分の１を超える、約３倍未満若しくは約３分の１を超える、約４倍未満若しくは約４分の１を超える、約５倍未満若しくは約５分の１を超える、約６倍未満若しくは約６分の１を超える、約７倍未満若しくは約７分の１を超える、約８倍未満若しくは約８分の１を超える、約９倍未満若しくは約９分の１を超える、約１０倍未満若しくは約１０分の１を超える、約１１倍未満若しくは約１１分の１を超える、約１２倍未満若しくは約１２分の１を超える、約１３倍未満若しくは約１３分の１を超える、約１４倍未満若しくは約１４分の１を超える、約１５倍未満若しくは約１５分の１を超える、約１６倍未満若しくは約１６分の１を超える、約１７倍未満若しくは約１７分の１を超える、約１８倍未満若しくは約１８分の１を超える、約１９倍未満若しくは約１９分の１を超える、又は約２０倍未満である、若しくは約２０分の１を超える。一部の実施形態において、ＵＣＨ−Ｌ１の、１の時点において採取された第１の試料中レベルからＵＣＨ−Ｌ１の第２の時点において採取された第２の試料中レベルへ、約０．１分の１を超える、約０．２分の１を超える、約０．３分の１を超える、約０．４分の１を超える、約０．５分の１を超える、少なくとも約０．５５分の１、少なくとも約０．６分の１、少なくとも約０．７分の１、少なくとも約０．７３分の１、少なくとも約０．８分の１、少なくとも約０．９分の１、約１分の１を超える、約１．５分の１を超える、約１．８１分の１を超える、約２分の１を超える、約３分の１を超える、約４分の１を超える、約５分の１を超える、約６分の１を超える、約７分の１を超える、約８分の１を超える、約９分の１を超える、約１０分の１を超える、約１１分の１を超える、約１２分の１を超える、約１３分の１を超える、約１４分の１を超える、約１５分の１を超える、約１６分の１を超える、約１７分の１を超える、約１８分の１を超える、約１９分の１を超える、又は約２０分の１を超える、統計学的に有意な低下は、対象が、ＣＴスキャンを実施されるべきであることを指し示す。一部の実施形態において、ＵＣＨ−Ｌ１の第１の時点において採取された第１の試料中レベルからＵＣＨ−Ｌ１の第２の時点において採取された第２の試料中レベルへ、約０．１倍未満、約０．２倍未満、約０．３倍未満、約０．４倍未満、約０．５倍未満、少なくとも約０．５５倍、少なくとも約０．６倍、少なくとも約０．７倍、少なくとも約０．７３倍、少なくとも約０．８倍、少なくとも約０．９倍、約１倍未満、約１．５倍未満、約１．８１倍未満、約２倍未満、約３倍未満、約４倍未満、約５倍未満、約６倍未満、約７倍未満、約８倍未満、約９倍未満、約１０倍未満、約１１倍未満、約１２倍未満、約１３倍未満、約１４倍未満、約１５倍未満、約１６倍未満、約１７倍未満、約１８倍未満、約１９倍未満又は約２０倍未満の、統計学的に有意な上昇は、対象が、ＣＴスキャンを実施されるべきであることを指し示す。一部の実施形態において、ＵＣＨ−Ｌ１の第１の時点において採取された第１の試料中レベルからＵＣＨ−Ｌ１の第２の時点において採取された第２の試料中レベルへ、統計学的に有意な上昇又は低下が見られないことは、対象が、ＣＴスキャンを実施される必要がないことを指し示す。
【０１８９】
一部の実施形態において、第１の時点は、推測される損傷の約０〜約１２時間後であり、統計学的に有意な上昇若しくは低下は、第１の時点から第２の時点へ、約２倍未満若しくは約２分の１を超える。一部の実施形態において、第１の時点は、推測される損傷の約０〜約１２時間後であり、統計学的に有意な上昇若しくは低下は、第１の時点から第２の時点へ、約１．８１倍未満若しくは約１．８１分の１を超える。一部の実施形態において、第１の時点は、推測される損傷の約０〜約１２時間後であり、統計学的に有意な上昇は、第２の時点から第１の時点へ、約０．５０倍を超える。一部の実施形態において、第１の時点は、推測される損傷の約０〜約１２時間後であり、統計学的に有意な上昇は、第２の時点から第１の時点へ、約０．５５倍を超える。
【０１９０】
一部の実施形態において、方法は、下記において記載される通り、対象を、外傷性脳損傷処置により処置するステップ及び／又は対象をモニタリングするステップをさらに含む。
【０１９１】
本明細書において記載された方法において利用されたアッセイの性質は、それほど重要ではなく、検査は、例えば、イムノアッセイ、タンパク質免疫沈降、免疫電気泳動、化学解析、ＳＤＳ−ＰＡＧＥ及びウェスタンブロット解析若しくはタンパク質免疫染色、電気泳動解析、タンパク質アッセイ、競合的結合アッセイ、機能的タンパク質アッセイ又は高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）若しくは液体クロマトグラフィー−質量分析（ＬＣ／ＭＳ）のような、クロマトグラフィー法若しくは分光法のような、当技術分野において公知である、任意のアッセイでありうる。また、当業者に公知の臨床化学フォーマットのアッセイも利用されうる。このようなアッセイについては、本明細書の第９〜１１節において、さらに詳細に記載されている。
【０１９２】
５．頭部損傷を有することが推測されるヒト対象の頭部ＣＴスキャンが、陽性となるのか、陰性となるのかを予測する方法
本開示は、他の方法の中でとりわけ、頭部への損傷を有することが推測されるヒト対象の頭部ＣＴスキャンが、陽性となるのか、陰性となるのかについての予測の一助となる方法に関する。本明細書において使用された「ヒト対象に対して、ＣＴスキャンを実施するのかどうかについての予測」とは、対象の頭部ＣＴスキャンが陽性となる可能性が、そうでない場合より高いことを、他の方法を伴うか又は伴わずに予測する方法の使用を指す。本方法は、（ａ）第１の試料及び、任意選択的に、第２の試料に対するアッセイを実施して、ユビキチンカルボキシ末端ヒドロラーゼＬ１（ＵＣＨ−Ｌ１）の、試料中レベルを測定又は検出するステップであって、第１の試料が推測される頭部への損傷後２４時間以内である第１の時点において対象から採取され、第２の試料が第１の時点の後である第２の時点（例えば、第１の時点の約３時間〜約６時間後）において、対象から採取されるステップ；（ｂ）第１の試料中及び／又は第２の試料中に、ユビキチンカルボキシ末端ヒドロラーゼＬ１（ＵＣＨ−Ｌ１）からなる外傷性脳損傷の早期バイオマーカーを検出するステップ；並びに（ｃ）ＵＣＨ−Ｌ１レベルに基づき、対象の頭部ＣＴスキャンが陽性となるのか、陰性となるのかを決定するステップを含む。対象は、（ｉ）ＵＣＨ−Ｌ１の第１の試料及び／又は第２の試料中レベルが、ＵＣＨ−Ｌ１の基準レベルより高い場合に、頭部ＣＴスキャンが陽性となる可能性が高いと決定され、ＵＣＨ−Ｌ１の第１の試料及び／又は第２の試料中レベルが、ＵＣＨ−Ｌ１の基準レベルより低い場合に、頭部ＣＴスキャンが陰性となる可能性が高いと決定される；（ｉｉ）ＵＣＨ−Ｌ１の第１の試料中レベルからＵＣＨ−Ｌ１の第２の試料中レベルへ、統計学的に有意な上昇若しくは低下が見られる場合に、頭部ＣＴスキャンが陽性となる可能性が高いと決定され、ＵＣＨ−Ｌ１の第１の試料中レベルからＵＣＨ−Ｌ１の第２の試料中レベルへ、統計学的に有意な上昇若しくは低下が見られない場合に、頭部ＣＴスキャンが陰性となる可能性が高いと決定される；（ｉｉｉ）ＵＣＨ−Ｌ１のレベルが、第１の試料から第２の試料へ、少なくとも絶対量の低下若しくは上昇をする場合に、頭部ＣＴスキャンが陽性となる可能性が高いと決定され、ＵＣＨ−Ｌ１のレベルの第１の試料から第２の試料へ、少なくとも絶対量の低下若しくは上昇が見られない場合に、頭部ＣＴスキャンが陰性となる可能性が高いと決定される；又は（ｉｖ）ＵＣＨ−Ｌ１の、第１の試料中レベルがＵＣＨ−Ｌ１の基準レベルより高い、又はＵＣＨ−Ｌ１の第１の試料中レベルからＵＣＨ−Ｌ１の第２の試料中レベルへ統計学的に有意な上昇若しくは低下が見られる場合に、頭部ＣＴスキャンが陽性となる可能性が高いと決定され、ＵＣＨ−Ｌ１の第１の試料中レベルがＵＣＨ−Ｌ１の基準レベルより低い、又はＵＣＨ−Ｌ１の第１の試料中レベルからＵＣＨ−Ｌ１の第２の試料中レベルへ統計学的に有意な上昇若しくは低下が見られない場合に、頭部ＣＴスキャンが陰性となる可能性が高いと決定される。試料は、生物学的試料でありうる。
【０１９３】
一部の実施形態において、第１の試料及び／又は第２の試料は、推測される損傷後、約２時間〜約１２時間の間に、対象から採取される。例えば、第１の試料及び／又は第２の試料は、頭部への損傷後、約２時間〜約１２時間の間、約２時間〜約１０時間、約２時間〜約８時間、約２時間〜約６時間、約２時間〜約４時間、約４時間〜約１２時間、約４時間〜約１０時間、約４時間〜約８時間、約４時間〜約６時間、約６時間〜約１２時間、約６時間〜約１０時間、又は約６時間〜約８時間に採取される。一部の実施形態において、第１の試料及び／又は第２の試料は、損傷の約２時間、約３時間、約４時間、約５時間、約６時間、約７時間、約８時間、約９時間、約１０時間、約１１時間又は約１２時間後に採取される。
【０１９４】
一部の実施形態において、対象は、第１の試料中及び／又は第２の試料中のＵＣＨ−Ｌ１のレベルが、約１００ｐｇ／ｍＬ又は３００ｐｇ／ｍＬ以上である場合に、頭部ＣＴスキャンが陽性となる可能性が高いと評価され、対象は、第１の試料中及び／又は第２の試料中のＵＣＨ−Ｌ１のレベルが、約１００ｐｇ／ｍＬ又は３００ｐｇ／ｍＬ未満である場合に、外傷性脳損傷を有さないと評価される。一部の実施形態において、対象は、第１の試料中及び／又は第２の試料中のＵＣＨ−Ｌ１のレベルが、約５０ｐｇ／ｍＬ、約１００ｐｇ／ｍＬ、約１５０ｐｇ／ｍＬ、約２００ｐｇ／ｍＬ、約２５０ｐｇ／ｍＬ、約３００ｐｇ／ｍＬ、約３５０ｐｇ／ｍＬ、約４００ｐｇ／ｍＬ、約４５０ｐｇ／ｍＬ又は約５００ｐｇ／ｍＬ以上である場合に、頭部ＣＴスキャンが陽性となる可能性が高いと決定される。一部の実施形態において、対象は、第１の試料中及び／又は第２の試料中のＵＣＨ−Ｌ１のレベルが、約５０ｐｇ／ｍＬ、約１００ｐｇ／ｍＬ、約１５０ｐｇ／ｍＬ、約２００ｐｇ／ｍＬ、約２５０ｐｇ／ｍＬ、約３００ｐｇ／ｍＬ、約３５０ｐｇ／ｍＬ、約４００ｐｇ／ｍＬ、約４５０ｐｇ／ｍＬ又は約５００ｐｇ／ｍＬ未満である場合に、頭部ＣＴスキャンが陰性となる可能性が高いと決定される。
【０１９５】
一部の実施形態において、基準レベルは、少なくとも約８０％〜約１００％の間の感度及び少なくとも約３０％〜約１００％の間の特異度を有するアッセイにより決定されうる。一部の実施形態において、感度は、少なくとも約８０．０％、少なくとも約８５．０％、少なくとも約８７．５％、少なくとも約９０．０％、少なくとも約９５．０％、少なくとも約９９．０％、少なくとも約９９．１％、少なくとも約９９．２％、少なくとも約９９．３％、少なくとも約９９．４％、少なくとも約９９．５％、少なくとも約９９．６％、少なくとも約９９．７％、少なくとも約９９．８％、少なくとも約９９．９％又は少なくとも約１００．０％である。一部の実施形態において、特異度は、少なくとも約３０．０％、少なくとも約３１．０％、少なくとも約３２．０％、少なくとも約３３．０％、少なくとも約３４．０％、少なくとも約３５．０％、少なくとも約３６．０％、少なくとも約３７．０％、少なくとも約３８．０％、少なくとも約３９．０％、少なくとも約４０．０％、少なくとも約４５．０％、少なくとも約５０．０％、少なくとも約５５．０％、少なくとも約６０．０％、少なくとも約６５．０％、少なくとも約７０．０％、少なくとも約７５．０％、少なくとも約８０．０％、少なくとも約８５．０％、少なくとも約９０．０％、少なくとも約９１．０％、少なくとも約９２．０％、少なくとも約９３．０％、少なくとも約９４．０％、少なくとも約９５．０％、少なくとも約９６．０％、少なくとも約９７．０％、少なくとも約９８．０％、少なくとも約９９．０％、少なくとも約９９．１％、少なくとも約９９．２％、少なくとも約９９．３％、少なくとも約９９．４％、少なくとも約９９．５％、少なくとも約９９．６％、少なくとも約９９．７％、少なくとも約９９．８％、少なくとも約９９．９％、又は少なくとも約１００．０％である。例えば、感度は、少なくとも約９９％であり、特異度は、少なくとも約７５％である、感度は、少なくとも約９９％であり、特異度は、少なくとも約９９％である、又は感度は、約１００％であり、特異度は、約１００％である。
【０１９６】
一部の実施形態において、基準レベルは、少なくとも約５０ｐｇ／ｍＬ〜約１０００ｐｇ／ｍＬの間でありうる。一部の実施形態において、基準レベルは、少なくとも約５０ｐｇ／ｍＬ〜約１０００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約５０ｐｇ／ｍＬ〜約９００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約５０ｐｇ／ｍＬ〜約８００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約５０ｐｇ／ｍＬ〜約７５０ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約５０ｐｇ／ｍＬ〜約７００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約５０ｐｇ／ｍＬ〜約６００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約５０ｐｇ／ｍＬ〜約５００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約５０ｐｇ／ｍＬ〜約４００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約５０ｐｇ／ｍＬ〜約３００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約５０ｐｇ／ｍＬ〜約２００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約１００ｐｇ／ｍＬ〜約１０００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約１００ｐｇ／ｍＬ〜約９００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約１００ｐｇ／ｍＬ〜約８００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約１００ｐｇ／ｍＬ〜約７５０ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約１００ｐｇ／ｍＬ〜約７００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約１００ｐｇ／ｍＬ〜約６００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約１００ｐｇ／ｍＬ〜約５００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約１００ｐｇ／ｍＬ〜約４００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約１００ｐｇ／ｍＬ〜約３００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約１００ｐｇ／ｍＬ〜約２００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約１５０ｐｇ／ｍＬ〜約１０００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約１５０ｐｇ／ｍＬ〜約９００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約１５０ｐｇ／ｍＬ〜約８００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約１５０ｐｇ／ｍＬ〜約７５０ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約１５０ｐｇ／ｍＬ〜約７００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約１５０ｐｇ／ｍＬ〜約６００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約１５０ｐｇ／ｍＬ〜約５００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約１５０ｐｇ／ｍＬ〜約４００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約１５０ｐｇ／ｍＬ〜約３００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約１５０ｐｇ／ｍＬ〜約２００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約２００ｐｇ／ｍＬ〜約１０００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約２００ｐｇ／ｍＬ〜約９００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約２００ｐｇ／ｍＬ〜約８００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約２００ｐｇ／ｍＬ〜約７５０ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約２００ｐｇ／ｍＬ〜約７００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約２００ｐｇ／ｍＬ〜約６００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約２００ｐｇ／ｍＬ〜約５００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約２００ｐｇ／ｍＬ〜約４００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約２００ｐｇ／ｍＬ〜約３００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約３００ｐｇ／ｍＬ〜約１０００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約３００ｐｇ／ｍＬ〜約９００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約３００ｐｇ／ｍＬ〜約８００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約３００ｐｇ／ｍＬ〜約７５０ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約３００ｐｇ／ｍＬ〜約７００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約３００ｐｇ／ｍＬ〜約６００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約３００ｐｇ／ｍＬ〜約５００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約３００ｐｇ／ｍＬ〜約４００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約４００ｐｇ／ｍＬ〜約１０００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約４００ｐｇ／ｍＬ〜約９００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約４００ｐｇ／ｍＬ〜約８００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約４００ｐｇ／ｍＬ〜約７５０ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約４００ｐｇ／ｍＬ〜約７００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約４００ｐｇ／ｍＬ〜約６００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約４００ｐｇ／ｍＬ〜約５００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約５００ｐｇ／ｍＬ〜約１０００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約５００ｐｇ／ｍＬ〜約９００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約５００ｐｇ／ｍＬ〜約８００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約５００ｐｇ／ｍＬ〜約７５０ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約５００ｐｇ／ｍＬ〜約７００ｐｇ／ｍＬの間、又は少なくとも約５００ｐｇ／ｍＬ〜約６００ｐｇ／ｍＬの間でありうる。例えば、基準レベルは、少なくとも約５０ｐｇ／ｍＬ、５５ｐｇ／ｍＬ、６０ｐｇ／ｍＬ、６５ｐｇ／ｍＬ、７０ｐｇ／ｍＬ、７５ｐｇ／ｍＬ、８０ｐｇ／ｍＬ、８５ｐｇ／ｍＬ、９０ｐｇ／ｍＬ、９５ｐｇ／ｍＬ、９６ｐｇ／ｍＬ、９７ｐｇ／ｍＬ、９８ｐｇ／ｍＬ、９８ｐｇ／ｍＬ、１００ｐｇ／ｍＬ、１５０ｐｇ／ｍＬ、２００ｐｇ／ｍＬ、２５０ｐｇ／ｍＬ、３００ｐｇ／ｍＬ、３５０ｐｇ／ｍＬ、３７０ｐｇ／ｍＬ、４００ｐｇ／ｍＬ、４５０ｐｇ／ｍＬ、５００ｐｇ／ｍＬ、５０９ｐｇ／ｍＬ、５５０ｐｇ／ｍＬ、６００ｐｇ／ｍＬ、７００ｐｇ／ｍＬ、８００ｐｇ／ｍＬ、９００ｐｇ／ｍＬ又は１０００ｐｇ／ｍＬでありうる。
【０１９７】
一部の実施形態において、対象の頭部ＣＴスキャンが、陽性となるのか、陰性となるのかを決定するように、第１の試料は推測される損傷から２４時間以内である第１の時点において得られ、第２の試料が第１の時点の後である第２の時点又は、任意選択的に、第３の時点若しくは第４の時点において得られる。一部の実施形態において、第１の時点は、頭部への損傷又は推測される損傷の約０〜約２４時間後である。例えば、第１の時点は、推測される損傷の約０〜約２４時間、約０〜約２０時間、約０〜約１８時間、約０〜約１６時間、約０〜約１４時間、約０〜約１２時間、約０〜約１０時間、約０〜約８時間、約０〜約６時間、約０〜約４時間、約０〜約２時間、約０〜約１時間、約０〜約１．５時間、約０．５時間〜約２４時間、約０．５時間〜約２０時間、約０．５時間〜約１８時間、約０．５時間〜約１６時間、約０．５時間〜約１４時間、約０．５時間〜約１２時間、約０．５時間〜約１０時間、約０．５時間〜約８時間、約０．５時間〜約６時間、約０．５時間〜約４時間、約０．５時間〜約２時間、約０．５時間〜約１時間、約０．５時間〜約１．５時間、約１時間〜約２４時間、約１時間〜約２０時間、約１時間〜約１８時間、約１時間〜約１６時間、約１時間〜約１４時間、約１時間〜約１２時間、約１時間〜約１０時間、約１時間〜約８時間、約１時間〜約６時間、約１時間〜約４時間、約１時間〜約２時間、約２時間〜約２４時間、約２時間〜約２０時間、約２時間〜約１８時間、約２時間〜約１６時間、約２時間〜約１４時間、約２時間〜約１２時間、約２時間〜約１０時間、約２時間〜約８時間、約２時間〜約６時間、約２時間〜約４時間、約３時間〜約２４時間、約３時間〜約２０時間、約３時間〜約１８時間、約３時間〜約１６時間、約３時間〜約１４時間、約３時間〜約１２時間、約３時間〜約１０時間、約３時間〜約８時間、約３時間〜約６時間、約３時間〜約４時間、約４時間〜約２４時間、約４時間〜約２０時間、約４時間〜約１８時間、約４時間〜約１６時間、約４時間〜約１４時間、約４時間〜約１２時間、約４時間〜約１０時間、約４時間〜約８時間、約４時間〜約６時間、約６時間〜約２４時間、約６時間〜約２０時間、約６時間〜約１８時間、約６時間〜約１６時間、約６時間〜約１４時間、約６時間〜約１２時間、約６時間〜約１０時間、約６時間〜約８時間、約１２時間〜約２４時間、約１２時間〜約２０時間、約１２時間〜約１８時間、約１２時間〜約１６時間、約１２時間〜約１４時間、約１８時間〜約２４時間の間又は約２４時間を超える時点でありうる。例えば、第１の時点は、約０時間〜６時間の間、約６時間〜１２時間の間、約１２時間〜１８時間の間又は約１８時間〜２４時間の間でありうる。
【０１９８】
一部の実施形態において、第２の時点又は、任意選択的に、第３の時点若しくは第４の時点は、第１の時点の約１時間〜約１０時間後、例えば第１の時点の約３時間〜約６時間後である。一部の実施形態において、第２の時点は、第１の時点の約１時間、約２時間、約３時間、約４時間、約５時間、約６時間、約７時間、約８時間、約９時間、又は約１０時間後である。
【０１９９】
一部の実施形態において、統計学的に有意な上昇又は低下は、ＵＣＨ−Ｌ１の第１の時点において採取された第１の試料中レベルからＵＣＨ−Ｌ１の第２の時点又は任意選択的に、第３の時点若しくは第４の時点において採取された第２の試料中レベルへ、少なくとも約１倍若しくは少なくとも約１分の１、少なくとも約１．５倍若しくは少なくとも約１．５分の１、少なくとも約２倍若しくは少なくとも約２分の１、少なくとも約３倍若しくは少なくとも約３分の１、少なくとも約４倍若しくは少なくとも約４分の１、少なくとも約５倍若しくは少なくとも約５分の１、少なくとも約６倍若しくは少なくとも約６分の１、少なくとも約７倍若しくは少なくとも約７分の１、少なくとも約８倍若しくは少なくとも約８分の１、少なくとも約９倍若しくは少なくとも約９分の１、少なくとも約１０倍若しくは少なくとも約１０分の１、少なくとも約１１倍若しくは少なくとも約１１分の１、少なくとも約１２倍若しくは少なくとも約１２分の１、少なくとも約１３倍若しくは少なくとも約１３分の１、少なくとも約１４倍若しくは少なくとも約１４分の１、少なくとも約１５倍若しくは少なくとも約１５分の１、少なくとも約１６倍若しくは少なくとも約１６分の１、少なくとも約１７倍若しくは少なくとも約１７分の１、少なくとも約１８倍若しくは少なくとも約１８分の１、少なくとも約１９倍若しくは少なくとも約１９分の１又は少なくとも約２０倍若しくは少なくとも約２０分の１である。一部の実施形態において、ＵＣＨ−Ｌ１の第１の時点において採取された第１の試料中レベルからＵＣＨ−Ｌ１の第２の時点又は任意選択的に、第３の時点若しくは第４の時点において採取された第２の試料中レベルへ、少なくとも約１分の１、少なくとも約１．５分の１、少なくとも約２分の１、少なくとも約３分の１、少なくとも約４分の１、少なくとも約５分の１、少なくとも約６分の１、少なくとも約７分の１、少なくとも約８分の１、少なくとも約９分の１、少なくとも約１０分の１、少なくとも約１１分の１、少なくとも約１２分の１、少なくとも約１３分の１、少なくとも約１４分の１、少なくとも約１５分の１、少なくとも約１６分の１、少なくとも約１７分の１、少なくとも約１８分の１、少なくとも約１９分の１又は少なくとも約２０分の１の、統計学的に有意な低下は、対象の頭部ＣＴスキャンが陽性となることを指し示す。一部の実施形態において、ＵＣＨ−Ｌ１の第１の時点において採取された第１の試料中レベルからＵＣＨ−Ｌ１の第２の時点又は任意選択的に、第３の時点若しくは第４の時点において採取された第２の試料中レベルへ、少なくとも約１倍、少なくとも約１．５倍、少なくとも約２倍、少なくとも約３倍、少なくとも約４倍、少なくとも約５倍、少なくとも約６倍、少なくとも約７倍、少なくとも約８倍、少なくとも約９倍、少なくとも約１０倍、少なくとも約１１倍、少なくとも約１２倍、少なくとも約１３倍、少なくとも約１４倍、少なくとも約１５倍、少なくとも約１６倍、少なくとも約１７倍、少なくとも約１８倍、少なくとも約１９倍又は少なくとも約２０倍の、統計学的に有意な上昇は、対象の頭部ＣＴスキャンが陽性となることを指し示す。一部の実施形態において、ＵＣＨ−Ｌ１の第１の時点において採取された第１の試料中レベルからＵＣＨ−Ｌ１の第２の時点又は任意選択的に、第３の時点若しくは第４の時点において採取された第２の試料中レベルへ、統計学的に有意な上昇又は低下が見られないことは、対象の頭部ＣＴスキャンが陰性となることを指し示す。
【０２００】
一部の実施形態において、統計学的に有意な上昇又は低下は、ＵＣＨ−Ｌ１の第２の時点において採取された第２の試料中レベルから、ＵＣＨ−Ｌ１の第１の時点又は任意選択的に、第３の時点若しくは第４の時点において採取された第１の試料中レベルへ、約０．１倍を超える、若しくは約０．１分の１未満、約０．２倍を超える、若しくは約０．２分の１未満、約０．３倍を超える、若しくは約０．３分の１未満、約０．４倍を超える、若しくは約０．４分の１未満、約０．５倍を超える、若しくは約０．５分の１未満、約０．５５倍を超える、若しくは約０．５５分の１未満、約０．６倍を超える、若しくは約０．６分の１未満、約０．７倍を超える、若しくは約０．７分の１未満、約０．７３倍を超える、若しくは約０．７３分の１未満、約０．８倍を超える、若しくは約０．８分の１未満、約０．９倍を超える、若しくは約０．９分の１未満、約１倍を超える、若しくは約１分の１未満、約１．５倍を超える、若しくは約１．５分の１未満、約１．８１倍を超える、若しくは約１．８１分の１未満、約２倍を超える、若しくは約２分の１未満、約３倍を超える、若しくは約３分の１未満、約４倍を超える、若しくは約４分の１未満、約５倍を超える、若しくは約５分の１未満、約６倍を超える、若しくは約６分の１未満、約７倍を超える、若しくは約７分の１未満、約８倍を超える、若しくは約８分の１未満、約９倍を超える、若しくは約９分の１未満、約１０倍を超える、若しくは約１０分の１未満、約１１倍を超える、若しくは約１１分の１未満、約１２倍を超える、若しくは約１２分の１未満、約１３倍を超える、若しくは約１３分の１未満、約１４倍を超える、若しくは約１４分の１未満、約１５倍を超える、若しくは約１５分の１未満、約１６倍を超える、若しくは約１６分の１未満、約１７倍を超える、若しくは約１７分の１未満、約１８倍を超える、若しくは約１８分の１未満、約１９倍を超える、若しくは約１９分の１未満又は約２０倍を超える、若しくは約２０分の１未満である。一部の実施形態において、ＵＣＨ−Ｌ１の第２の時点において採取された第２の試料中レベルからＵＣＨ−Ｌ１の第１の時点又は任意選択的に、第３の時点若しくは第４の時点において採取された第１の試料中レベルへ、約０．１分の１未満、約０．２分の１未満、約０．３分の１未満、約０．４分の１未満、約０．５分の１未満、約０．５５分の１未満、約０．６分の１未満、約０．７分の１未満、約０．７３分の１未満、約０．８分の１未満、約０．９分の１未満、約１分の１未満、約１．５分の１未満、約１．８１分の１未満、約２分の１未満、約３分の１未満、約４分の１未満、約５分の１未満、約６分の１未満、約７分の１未満、約８分の１未満、約９分の１未満、約１０分の１未満、約１１分の１未満、約１２分の１未満、約１３分の１未満、約１４分の１未満、約１５分の１未満、約１６分の１未満、約１７分の１未満、約１８分の１未満、約１９分の１未満又は約２０分の１未満の、統計学的に有意な低下は、対象の頭部ＣＴスキャンが陽性となる可能性が高いことを指し示す。一部の実施形態において、ＵＣＨ−Ｌ１の第２の時点において採取された第２の試料中レベルからＵＣＨ−Ｌ１の第１の時点又は任意選択的に、第３の時点若しくは第４の時点において採取された第１の試料中レベルへ、約０．１倍を超える、約０．２倍を超える、約０．３倍を超える、約０．４倍を超える、約０．５倍を超える、約０．５５倍を超える、約０．６倍を超える、約０．７倍を超える、約０．７３倍を超える、約０．８倍を超える、約０．９倍を超える、約１倍を超える、約１．５倍を超える、約１．８１倍を超える、約２倍を超える、約３倍を超える、約４倍を超える、約５倍を超える、約６倍を超える、約７倍を超える、約８倍を超える、約９倍を超える、約１０倍を超える、約１１倍を超える、約１２倍を超える、約１３倍を超える、約１４倍を超える、約１５倍を超える、約１６倍を超える、約１７倍を超える、約１８倍を超える、約１９倍を超える、又は約２０倍を超える、統計学的に有意な上昇は、対象の頭部ＣＴスキャンが陽性となる可能性が高いことを指し示す。一部の実施形態において、ＵＣＨ−Ｌ１の第２の時点又は任意選択的に、第３の時点若しくは第４の時点において採取された第２の試料中レベルからＵＣＨ−Ｌ１の第１の時点において採取された第１の試料中レベルへ、統計学的に有意な上昇又は低下が見られないことは、対象の頭部ＣＴスキャンが陰性となる可能性が高いことを指し示す。
【０２０１】
一部の実施形態において、統計学的に有意な上昇又は低下は、ＵＣＨ−Ｌ１の第１の時点において採取された第１の試料中レベルからＵＣＨ−Ｌ１の第２の時点において採取された第２の試料中レベルへ、約０．１倍未満若しくは約０．１分の１を超える、約０．２倍未満若しくは約０．２分の１を超える、約０．３倍未満若しくは約０．３分の１を超える、約０．４倍未満若しくは約０．４分の１を超える、約０．５倍未満若しくは約０．５分の１を超える、少なくとも約０．５５倍若しくは少なくとも約０．５５分の１、少なくとも約０．６倍若しくは少なくとも約０．６分の１、少なくとも約０．７倍若しくは少なくとも約０．７分の１、少なくとも約０．７３倍若しくは少なくとも約０．７３分の１、少なくとも約０．８倍若しくは少なくとも約０．８分の１、少なくとも約０．９倍若しくは少なくとも約０．９分の１、約１倍未満若しくは約１分の１を超える、約１．５倍未満若しくは約１．５分の１を超える、約１．８１倍未満若しくは約１．８１分の１を超える、約２倍未満若しくは約２分の１を超える、約３倍未満若しくは約３分の１を超える、約４倍未満若しくは約４分の１を超える、約５倍未満若しくは約５分の１を超える、約６倍未満若しくは約６分の１を超える、約７倍未満若しくは約７分の１を超える、約８倍未満若しくは約８分の１を超える、約９倍未満若しくは約９分の１を超える、約１０倍未満若しくは約１０分の１を超える、約１１倍未満若しくは約１１分の１を超える、約１２倍未満若しくは約１２分の１を超える、約１３倍未満若しくは約１３分の１を超える、約１４倍未満若しくは約１４分の１を超える、約１５倍未満若しくは約１５分の１を超える、約１６倍未満若しくは約１６分の１を超える、約１７倍未満若しくは約１７分の１を超える、約１８倍未満若しくは約１８分の１を超える、約１９倍未満若しくは約１９分の１を超える、又は約２０倍未満である、若しくは約２０分の１を超える。一部の実施形態において、ＵＣＨ−Ｌ１の第１の時点において採取された第１の試料中レベルからＵＣＨ−Ｌ１の第２の時点において採取された第２の試料中レベルへ、約０．１分の１を超える、約０．２分の１を超える、約０．３分の１を超える、約０．４分の１を超える、約０．５分の１を超える、少なくとも約０．５５分の１、少なくとも約０．６分の１、少なくとも約０．７分の１、少なくとも約０．７３分の１、少なくとも約０．８分の１、少なくとも約０．９分の１、約１分の１を超える、約１．５分の１を超える、約１．８１分の１を超える、約２分の１を超える、約３分の１を超える、約４分の１を超える、約５分の１を超える、約６分の１を超える、約７分の１を超える、約８分の１を超える、約９分の１を超える、約１０分の１を超える、約１１分の１を超える、約１２分の１を超える、約１３分の１を超える、約１４分の１を超える、約１５分の１を超える、約１６分の１を超える、約１７分の１を超える、約１８分の１を超える、約１９分の１を超える、又は約２０分の１を超える、統計学的に有意な低下は、対象が、ＣＴスキャンが陽性となる可能性が高いことを指し示す。一部の実施形態において、ＵＣＨ−Ｌ１の第１の時点において採取された第１の試料中レベルからＵＣＨ−Ｌ１の第２の時点において採取された第２の試料中レベルへ、約０．１倍未満、約０．２倍未満、約０．３倍未満、約０．４倍未満、約０．５倍未満、少なくとも約０．５５倍、少なくとも約０．６倍、少なくとも約０．７倍、少なくとも約０．７３倍、少なくとも約０．８倍、少なくとも約０．９倍、約１倍未満、約１．５倍未満、約１．８１倍未満、約２倍未満、約３倍未満、約４倍未満、約５倍未満、約６倍未満、約７倍未満、約８倍未満、約９倍未満、約１０倍未満、約１１倍未満、約１２倍未満、約１３倍未満、約１４倍未満、約１５倍未満、約１６倍未満、約１７倍未満、約１８倍未満、約１９倍未満又は約２０倍未満の、統計学的に有意な上昇は、対象の頭部ＣＴスキャンが陽性となる可能性が高いことを指し示す。一部の実施形態において、ＵＣＨ−Ｌ１の第１の時点において採取された第１の試料中レベルからＵＣＨ−Ｌ１の第２の時点において採取された第２の試料中レベルへ、統計学的に有意な上昇又は低下が見られないことは、対象の頭部ＣＴスキャンが陰性となる可能性が高いことを指し示す。
【０２０２】
一部の実施形態において、第１の時点は、推測される損傷の約０〜約１２時間後であり、統計学的に有意な上昇若しくは低下は、第１の時点から第２の時点へ、約２倍未満若しくは約２分の１を超える。一部の実施形態において、第１の時点は、推測される損傷の約０〜約１２時間後であり、統計学的に有意な上昇若しくは低下は、第１の時点から第２の時点へ、約１．８１倍未満若しくは約１．８１分の１を超える。一部の実施形態において、第１の時点は、推測される損傷の約０〜約１２時間後であり、統計学的に有意な上昇は、第２の時点から第１の時点へ、約０．５０倍を超える。一部の実施形態において、第１の時点は、推測される損傷の約０〜約１２時間後であり、統計学的に有意な上昇は、第２の時点から第１の時点へ、約０．５５倍を超える。
【０２０３】
一部の実施形態において、対象は、ＵＣＨ−Ｌ１のレベルが、第１の試料から第２の試料へ、少なくとも絶対量の低下若しくは上昇する場合に、頭部ＣＴスキャンが陽性となる可能性が高いと評価される。一部の実施形態において、絶対量は、少なくとも約２０ｐｇ／ｍＬ〜約６１００ｐｇ／ｍＬの間である。一部の実施形態において、絶対量は、少なくとも約２０ｐｇ／ｍＬ〜約６１００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約２０ｐｇ／ｍＬ〜約６０００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約２０ｐｇ／ｍＬ〜約５５００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約２０ｐｇ／ｍＬ〜約５０００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約２０ｐｇ／ｍＬ〜約４５００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約２０ｐｇ／ｍＬ〜約４０００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約２０ｐｇ／ｍＬ〜約３５００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約２０ｐｇ／ｍＬ〜約３０００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約２０ｐｇ／ｍＬ〜約２５００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約２０ｐｇ／ｍＬ〜約２０００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約２０ｐｇ／ｍＬ〜約１５００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約２０ｐｇ／ｍＬ〜約１０００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約２０ｐｇ／ｍＬ〜約９００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約２０ｐｇ／ｍＬ〜約８００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約２０ｐｇ／ｍＬ〜約７００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約２０ｐｇ／ｍＬ〜約６００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約２０ｐｇ／ｍＬ〜約５００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約２０ｐｇ／ｍＬ〜約４００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約２０ｐｇ／ｍＬ〜約３００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約２０ｐｇ／ｍＬ〜約２００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約２０ｐｇ／ｍＬ〜約１００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約２０ｐｇ／ｍＬ〜約５０ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約２５ｐｇ／ｍＬ〜約６１００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約２５ｐｇ／ｍＬ〜約６０００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約２５ｐｇ／ｍＬ〜約５５００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約２５ｐｇ／ｍＬ〜約５０００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約２５ｐｇ／ｍＬ〜約４５００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約２５ｐｇ／ｍＬ〜約４０００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約２５ｐｇ／ｍＬ〜約３５００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約２５ｐｇ／ｍＬ〜約３０００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約２５ｐｇ／ｍＬ〜約２５００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約２５ｐｇ／ｍＬ〜約２０００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約２５ｐｇ／ｍＬ〜約１５００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約２５ｐｇ／ｍＬ〜約１０００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約２５ｐｇ／ｍＬ〜約９００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約２５ｐｇ／ｍＬ〜約８００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約２５ｐｇ／ｍＬ〜約７００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約２５ｐｇ／ｍＬ〜約６００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約２５ｐｇ／ｍＬ〜約５００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約２５ｐｇ／ｍＬ〜約４００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約２５ｐｇ／ｍＬ〜約３００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約２５ｐｇ／ｍＬ〜約２００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約２５ｐｇ／ｍＬ〜約１００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約２５ｐｇ／ｍＬ〜約５０ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約５０ｐｇ／ｍＬ〜約６１００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約５０ｐｇ／ｍＬ〜約６０００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約５０ｐｇ／ｍＬ〜約５５００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約５０ｐｇ／ｍＬ〜約５０００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約５０ｐｇ／ｍＬ〜約４５００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約５０ｐｇ／ｍＬ〜約４０００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約５０ｐｇ／ｍＬ〜約３５００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約５０ｐｇ／ｍＬ〜約３０００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約５０ｐｇ／ｍＬ〜約２５００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約５０ｐｇ／ｍＬ〜約２０００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約５０ｐｇ／ｍＬ〜約１５００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約５０ｐｇ／ｍＬ〜約１０００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約５０ｐｇ／ｍＬ〜約９００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約５０ｐｇ／ｍＬ〜約８００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約５０ｐｇ／ｍＬ〜約７００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約５０ｐｇ／ｍＬ〜約６００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約５０ｐｇ／ｍＬ〜約５００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約５０ｐｇ／ｍＬ〜約４００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約５０ｐｇ／ｍＬ〜約３００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約５０ｐｇ／ｍＬ〜約２００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約５０ｐｇ／ｍＬ〜約１００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約１００ｐｇ／ｍＬ〜約６１００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約１００ｐｇ／ｍＬ〜約６０００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約１００ｐｇ／ｍＬ〜約５５００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約１００ｐｇ／ｍＬ〜約５０００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約１００ｐｇ／ｍＬ〜約４５００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約１００ｐｇ／ｍＬ〜約４０００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約１００ｐｇ／ｍＬ〜約３５００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約１００ｐｇ／ｍＬ〜約３０００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約１００ｐｇ／ｍＬ〜約２５００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約１００ｐｇ／ｍＬ〜約２０００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約１００ｐｇ／ｍＬ〜約１５００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約１００ｐｇ／ｍＬ〜約１０００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約１００ｐｇ／ｍＬ〜約９００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約１００ｐｇ／ｍＬ〜約８００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約１００ｐｇ／ｍＬ〜約７００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約１００ｐｇ／ｍＬ〜約６００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約１００ｐｇ／ｍＬ〜約５００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約１００ｐｇ／ｍＬ〜約４００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約１００ｐｇ／ｍＬ〜約３００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約１００ｐｇ／ｍＬ〜約２００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約１２９ｐｇ／ｍＬ〜約６１００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約１２９ｐｇ／ｍＬ〜約６０００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約１２９ｐｇ／ｍＬ〜約５５００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約１２９ｐｇ／ｍＬ〜約５０００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約１２９ｐｇ／ｍＬ〜約４５００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約１２９ｐｇ／ｍＬ〜約４０００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約１２９ｐｇ／ｍＬ〜約３５００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約１２９ｐｇ／ｍＬ〜約３０００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約１２９ｐｇ／ｍＬ〜約２５００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約１２９ｐｇ／ｍＬ〜約２０００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約１２９ｐｇ／ｍＬ〜約１５００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約１２９ｐｇ／ｍＬ〜約１０００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約１２９ｐｇ／ｍＬ〜約９００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約１２９ｐｇ／ｍＬ〜約８００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約１２９ｐｇ／ｍＬ〜約７００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約１２９ｐｇ／ｍＬ〜約６００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約１２９ｐｇ／ｍＬ〜約５００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約１２９ｐｇ／ｍＬ〜約４００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約１２９ｐｇ／ｍＬ〜約３００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約１２９ｐｇ／ｍＬ〜約２００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約２００ｐｇ／ｍＬ〜約６１００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約２００ｐｇ／ｍＬ〜約６０００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約２００ｐｇ／ｍＬ〜約５５００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約２００ｐｇ／ｍＬ〜約５０００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約２００ｐｇ／ｍＬ〜約４５００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約２００ｐｇ／ｍＬ〜約４０００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約２００ｐｇ／ｍＬ〜約３５００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約２００ｐｇ／ｍＬ〜約３０００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約２００ｐｇ／ｍＬ〜約２５００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約２００ｐｇ／ｍＬ〜約２０００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約２００ｐｇ／ｍＬ〜約１５００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約２００ｐｇ／ｍＬ〜約１０００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約２００ｐｇ／ｍＬ〜約９００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約２００ｐｇ／ｍＬ〜約８００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約２００ｐｇ／ｍＬ〜約７００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約２００ｐｇ／ｍＬ〜約６００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約２００ｐｇ／ｍＬ〜約５００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約２００ｐｇ／ｍＬ〜約４００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約２００ｐｇ／ｍＬ〜約３００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約３００ｐｇ／ｍＬ〜約６１００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約３００ｐｇ／ｍＬ〜約６０００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約３００ｐｇ／ｍＬ〜約５５００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約３００ｐｇ／ｍＬ〜約５０００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約３００ｐｇ／ｍＬ〜約４５００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約３００ｐｇ／ｍＬ〜約４０００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約３００ｐｇ／ｍＬ〜約３５００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約３００ｐｇ／ｍＬ〜約３０００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約３００ｐｇ／ｍＬ〜約２５００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約３００ｐｇ／ｍＬ〜約２０００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約３００ｐｇ／ｍＬ〜約１５００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約３００ｐｇ／ｍＬ〜約１０００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約３００ｐｇ／ｍＬ〜約９００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約３００ｐｇ／ｍＬ〜約８００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約３００ｐｇ／ｍＬ〜約７００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約３００ｐｇ／ｍＬ〜約６００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約３００ｐｇ／ｍＬ〜約５００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約３００ｐｇ／ｍＬ〜約４００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約４００ｐｇ／ｍＬ〜約６１００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約４００ｐｇ／ｍＬ〜約６０００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約４００ｐｇ／ｍＬ〜約５５００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約４００ｐｇ／ｍＬ〜約５０００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約４００ｐｇ／ｍＬ〜約４５００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約４００ｐｇ／ｍＬ〜約４０００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約４００ｐｇ／ｍＬ〜約３５００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約４００ｐｇ／ｍＬ〜約３０００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約４００ｐｇ／ｍＬ〜約２５００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約４００ｐｇ／ｍＬ〜約２０００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約４００ｐｇ／ｍＬ〜約１５００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約４００ｐｇ／ｍＬ〜約１０００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約４００ｐｇ／ｍＬ〜約９００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約４００ｐｇ／ｍＬ〜約８００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約４００ｐｇ／ｍＬ〜約７００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約４００ｐｇ／ｍＬ〜約６００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約４００ｐｇ／ｍＬ〜約５００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約５００ｐｇ／ｍＬ〜約６１００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約５００ｐｇ／ｍＬ〜約６０００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約５００ｐｇ／ｍＬ〜約５５００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約５００ｐｇ／ｍＬ〜約５０００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約５００ｐｇ／ｍＬ〜約４５００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約５００ｐｇ／ｍＬ〜約４０００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約５００ｐｇ／ｍＬ〜約３５００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約５００ｐｇ／ｍＬ〜約３０００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約５００ｐｇ／ｍＬ〜約２５００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約５００ｐｇ／ｍＬ〜約２０００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約５００ｐｇ／ｍＬ〜約１５００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約５００ｐｇ／ｍＬ〜約１０００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約５００ｐｇ／ｍＬ〜約９００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約５００ｐｇ／ｍＬ〜約８００ｐｇ／ｍＬの間、少なくとも約５００ｐｇ／ｍＬ〜約７００ｐｇ／ｍＬの間、又は少なくとも約５００ｐｇ／ｍＬ〜約６００ｐｇ／ｍＬの間でありうる。一部の実施形態において、絶対量は、少なくとも約２０ｐｇ／ｍＬ、少なくとも約２１ｐｇ／ｍＬ、少なくとも約２２ｐｇ／ｍＬ、少なくとも約２３ｐｇ／ｍＬ、少なくとも約２４ｐｇ／ｍＬ、少なくとも約２５ｐｇ／ｍＬ、少なくとも約２６ｐｇ／ｍＬ、少なくとも約２７ｐｇ／ｍＬ、少なくとも約２８ｐｇ／ｍＬ、少なくとも約２９ｐｇ／ｍＬ、少なくとも約３０ｐｇ／ｍＬ、少なくとも約３５ｐｇ／ｍＬ、少なくとも約
４０ｐｇ／ｍＬ、少なくとも約４５ｐｇ／ｍＬ、少なくとも約５０ｐｇ／ｍＬ、少なくとも約５５ｐｇ／ｍＬ、少なくとも約６０ｐｇ／ｍＬ、少なくとも約６５ｐｇ／ｍＬ、少なくとも約７０ｐｇ／ｍＬ、少なくとも約７５ｐｇ／ｍＬ、少なくとも約８０ｐｇ／ｍＬ、少なくとも約８５ｐｇ／ｍＬ、少なくとも約９０ｐｇ／ｍＬ、少なくとも約９５ｐｇ／ｍＬ、少なくとも約１００ｐｇ／ｍＬ、少なくとも約１１０ｐｇ／ｍＬ、少なくとも約１２０ｐｇ／ｍＬ、少なくとも約１２９ｐｇ／ｍＬ、少なくとも約１３０ｐｇ／ｍＬ、少なくとも約１４０ｐｇ／ｍＬ、少なくとも約１５０ｐｇ／ｍＬ、少なくとも約２００ｐｇ／ｍＬ、少なくとも約２５０ｐｇ／ｍＬ、少なくとも約３００ｐｇ／ｍＬ、少なくとも約３５０ｐｇ／ｍＬ、少なくとも約４００ｐｇ／ｍＬ、少なくとも約４５０ｐｇ／ｍＬ、少なくとも約５００ｐｇ／ｍＬ、少なくとも約５５０ｐｇ／ｍＬ、少なくとも約６００ｐｇ／ｍＬ、少なくとも約７００ｐｇ／ｍＬ、少なくとも約８００ｐｇ／ｍＬ、少なくとも約９００ｐｇ／ｍＬ、少なくとも約１０００ｐｇ／ｍＬ、少なくとも約１５００ｐｇ／ｍＬ、少なくとも約２０００ｐｇ／ｍＬ、少なくとも約２５００ｐｇ／ｍＬ、少なくとも約２５２８ｐｇ／ｍＬ、少なくとも約３０００ｐｇ／ｍＬ、少なくとも約４０００ｐｇ／ｍＬ、少なくとも約５０００ｐｇ／ｍＬ、少なくとも約６０００ｐｇ／ｍＬ、又は少なくとも約６１００ｐｇ／ｍＬでありうる。
【０２０４】
一部の実施形態において、試料は、推測される損傷後０〜１０時間以内に採取され、約２５ｐｇ／ｍＬのような絶対量は、少なくとも約８５％の感度及び少なくとも約４１％の特異度を有するアッセイにより決定される。一部の実施形態において、試料は、推測される損傷後０〜１０時間以内に採取され、絶対量が、約２５ｐｇ／ｍＬである。一部の実施形態において、試料は、推測される損傷後０〜１０時間以内に採取され、約２３ｐｇ／ｍＬのような絶対量は、少なくとも約９０％の感度及び少なくとも約３５％の特異度を有するアッセイにより決定される。一部の実施形態において、試料は、推測される損傷後０〜１０時間以内に採取され、絶対量が、約２３ｐｇ／ｍＬである。
【０２０５】
本明細書において記載された方法において利用されたアッセイの性質は、それほど重要ではなく、検査は、例えば、イムノアッセイ、タンパク質免疫沈降、免疫電気泳動、化学解析、ＳＤＳ−ＰＡＧＥ及びウェスタンブロット解析若しくはタンパク質免疫染色、電気泳動解析、タンパク質アッセイ、競合的結合アッセイ、機能的タンパク質アッセイ又は高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）若しくは液体クロマトグラフィー−質量分析（ＬＣ／ＭＳ）のような、クロマトグラフィー法若しくは分光法のような、当技術分野において公知である、任意のアッセイでありうる。また、当業者に公知の臨床化学フォーマットのアッセイも利用されうる。このようなアッセイについては、本明細書の第９〜１１節において、さらに詳細に記載されている。
【０２０６】
６．頭部への損傷を負ったヒト対象における、軽度又は中等度〜重度の外傷性脳損傷の、早期検出の一助となる方法
本開示は、頭部への損傷を負った、又は負った可能性があるヒト対象における、外傷性脳損傷の早期検出の一助となる方法に関する。方法は、頭部への損傷を負った、又は負った可能性があるヒト対象における、外傷性脳損傷の早期検出（例えば、対象が、外傷性脳損傷を有するのかどうかを決定すること）の一助となりうる。本明細書において使用された「対象が外傷性脳損傷を有するのかどうかを決定すること」とは、対象の、ＴＢＩを有する可能性が、そうでない場合より高いことを決定する（例えば、臨床評価データのような、他の情報を伴う）方法の使用を指す。方法は、ヒト対象に由来する試料に対するアッセイを実施して、ユビキチンカルボキシ末端ヒドロラーゼＬ１（ＵＣＨ−Ｌ１）の、第１の試料中及び第２の試料中においてレベルを測定又は検出するステップを含む。第１の試料は、頭部への損傷後２４時間以内にヒト対象から採取され、第２の試料は、第１の試料が採取された約３時間〜約６時間後にヒト対象から採取される。ＵＣＨ−Ｌ１のレベルの、第１の試料から第２の試料への低下又は下落が決定され、対象は、ＵＣＨ−Ｌ１の第１の試料中レベルからＵＣＨ−Ｌ１の第２の試料中レベルへ統計学的に有意な低下が見られる場合に、軽度又は中等度〜重度の外傷性脳損傷を有すると評価される。試料は、生物学的試料でありうる。
【０２０７】
一部の実施形態において、統計学的に有意な低下は、ＵＣＨ−Ｌ１レベルの低下又は下落であって、ＵＣＨ−Ｌ１の第１の試料中レベルより少なくとも５％低くなる低下又は下落を含む。一部の実施形態において、統計学的に有意な低下は、ＵＣＨ−Ｌ１レベルの低下又は下落であって、ＵＣＨ−Ｌ１の第２の試料中レベルが、ＵＣＨ−Ｌ１の、第１の試料中レベルより、約５％〜約１０００％低いレベルである低下又は下落を含む。例えば、ＵＣＨ−Ｌ１レベルは、より、少なくとも約５％、約６％、約７％、約８％、約９％、約１０％、約１１％、約１２％、約１３％、約１４％、約１５％、約１６％、約１７％、約１８％、約１９％、約２０％、約２１％、約２２％、約２３％、約２４％、約２５％、約２６％、約２７％、約２８％、約２９％、約３０％、約３１％、約３２％、約３３％、約３４％、約３５％、約３６％、約３７％、約３８％、約３９％、約４０％、約４１％、約４２％、約４３％、約４４％、約４５％、約４６％、約４７％、約４８％、約４９％、約５０％、約６０％、約７０％、約８０％、約９０％、約１００％、約２００％、約３００％、約４００％、約５００％、約６００％、約７００％、約８００％、約９００％、又は約１０００％低いレベルでありうる。一部の実施形態において、ＵＣＨ−Ｌ１レベルは、ＵＣＨ−Ｌ１の第１の試料中レベルの、少なくとも約１分の１、少なくとも約１．５分の１、少なくとも約２分の１、少なくとも約３分の１、少なくとも約４分の１、少なくとも約５分の１、少なくとも約６分の１、少なくとも約７分の１、少なくとも約８分の１、少なくとも約９分の１、少なくとも約１０分の１、少なくとも約１１分の１、少なくとも約１２分の１、少なくとも約１３分の１、少なくとも約１４分の１、少なくとも約１５分の１、少なくとも約１６分の１、少なくとも約１７分の１、少なくとも約１８分の１、少なくとも約１９分の１又は少なくとも約２０分の１の低いレベルでありうる。
【０２０８】
一部の実施形態において、統計学的に有意な低下は、ＵＣＨ−Ｌ１レベルの低下又は下落であって、ＵＣＨ−Ｌ１の第２の試料中レベルが、ＵＣＨ−Ｌ１の第１の試料中レベルより、少なくとも約２０ｐｇ／ｍＬ〜少なくとも約６１００ｐｇ／ｍＬ低いレベルである低下又は下落を含む。
【０２０９】
任意選択的に、本方法は、ステップ（ｂ）において決定されたＵＣＨ−Ｌ１の濃度又は量を、例えば、基準レベルと比較するステップをさらに含む。さらに、任意選択的に、本方法は、比較が、ステップ（ｂ）において決定されたＵＣＨ−Ｌ１の濃度又は量が、例えば、基準レベルに照らして、望ましくなく変更されたことを示す場合、対象を、１つ以上の医薬組成物により、ある期間にわたり処置するステップを含む。
【０２１０】
特に、疾患の進行及び／若しくは処置をモニタリングする、又は対象が、軽度又は中等度〜重度の外傷性脳損傷を発症する危険性を決定するために利用された基準レベルに照らして、ＵＣＨ−Ｌ１又はＵＣＨ−Ｌ１断片の量又は濃度は、「不変」でありうるか、「好適」でありうる（又は「好適に変更されうる」）か又は「望ましくない」場合がある（又は「望ましくなく変更されうる」）。「上昇した（ｅｌｅｖａｔｅｄ）」又は「上昇した（ｉｎｃｒｅａｓｅｄ）」とは、典型的若しくは正常なレベル若しくは範囲（例えば、基準レベル）以上である、又は別の基準レベル又は範囲（例えば、初期試料又はベースライン試料）以上である、被験試料中の量又は濃度を指す。「低下した」又は「低減された」という用語は、典型的若しくは正常なレベル若しくは範囲（例えば、基準レベル）以下である、又は別の基準レベル又は範囲（例えば、初期試料又はベースライン試料）以下である、被験試料中の量又は濃度を指す。「変更された」という用語は、典型的若しくは正常なレベル若しくは範囲（例えば、基準レベル）を超えて、又は別の基準レベル又は範囲（例えば、初期試料又はベースライン試料）を超えて変更された（上昇又は低下させられた）、試料中の量又は濃度を指す。
【０２１１】
ＵＣＨ−Ｌ１の典型的又は正常なレベル又は範囲は、標準的な慣行に従い規定される。いわゆるレベルの変更又は変更は、実験における誤差又は試料のばらつきによって説明されえない、典型的若しくは正常なレベル若しくは範囲又は基準レベル若しくは基準範囲と比較した、任意の正味の変化が見られる場合に、生じたと考えられうる。したがって、特定の試料中において測定されたレベルは、いわゆる正常対象に由来する、同様の試料中において決定されたレベル又はレベルの範囲と比較される。この文脈において、「正常対象」とは、検出可能な疾患又は障害を伴わない個体であり、「正常」（場合によって、「対照」とも称される）な患者又は集団とは、例えば、それぞれ、検出可能な疾患又は障害を呈しない患者又は集団である。「見かけ上正常な対象」とは、ＵＣＨ−Ｌ１が、評価されていない、又は評価されつつある正常対象（すなわち、検出可能な疾患又は障害を伴わない個体）である。解析物が、正常において、検出不能である（例えば、正常レベルはゼロである、又は正常集団の約２５〜約７５百分位数の範囲内にある）が、被験試料中において検出される場合に、並びに解析物が、被験試料中、正常レベルより高レベルにおいて存在する場合に、解析物のレベルは、「上昇した」という。したがって、本開示は、とりわけ、軽度若しくは中等度〜重度の外傷性脳損傷を有する、又はこれらを有する危険性がある対象についてスクリーニングする方法を提示する。
【０２１２】
一般に、基準レベルはまた、被験試料を、ＵＣＨ−Ｌ１についてアッセイしたときに得られた結果を評価するためのベンチマークとしても利用されうる。一般に、このような比較を行う場合に、基準レベルは、解析物の存在、量又は濃度の、ＴＢＩの特定の病期若しくはエンドポイント又は特定の徴候との連関又は関連が成立させられうるような、十分な回数及び適切な条件下において、特定のアッセイを行うことにより得られる。典型的に、基準レベルは、基準対象（又は対象の集団）についてのアッセイにより得られる。測定されるＵＣＨ−Ｌ１は、このＵＣＨ−Ｌ１断片、この分解産物及び／又は酵素によるこの切断産物を含みうる。
【０２１３】
この方法における基準レベルは、軽度又は中等度〜重度の外傷性脳損傷を有する患者における、ＵＣＨ−Ｌ１のレベルでありうる。一部の実施形態において、ＵＣＨ−Ｌ１の、５ｐｇ／ｍＬ、１０ｐｇ／ｍＬ、２０ｐｇ／ｍＬ、３０ｐｇ／ｍＬ、４０ｐｇ／ｍＬ、５０ｐｇ／ｍＬ、６０ｐｇ／ｍＬ、７０ｐｇ／ｍＬ、８０ｐｇ／ｍＬ、９０ｐｇ／ｍＬ、１００ｐｇ／ｍＬ、５００ｐｇ／ｍＬ、１０００ｐｇ／ｍＬ、５０００ｐｇ／ｍＬ、１００００ｐｇ／ｍＬ又は５００００ｐｇ／ｍＬ以上の血清中レベルは、対象を、軽度又は中等度〜重度の外傷性脳損傷を有するものとして同定する。任意選択的に、場合によって、ＵＣＨ−Ｌ１の、１０００００ｐｇ／ｍＬ、５０００００ｐｇ／ｍＬ、１００００００ｐｇ／ｍＬ、１５００００ｐｇ／ｍＬ、２０００００ｐｇ／ｍＬ又は５０００００ｐｇ／ｍＬ以上の血清中レベルは、対象を、軽度又は中等度〜重度の外傷性脳損傷を有するものとして同定する。
【０２１４】
一部の実施形態において、方法は、下記において記載される通り、ＣＴスキャンを施されることが決定されたヒト対象を、外傷性脳損傷処置により処置するステップをさらに含む。一部の実施形態において、方法は、下記において記載される通り、ＣＴスキャンを施されることが決定されたヒト対象をモニタリングするステップをさらに含む。
【０２１５】
本明細書において記載された方法において利用されたアッセイの性質は、それほど重要ではなく、検査は、例えば、イムノアッセイ、タンパク質免疫沈降、免疫電気泳動、化学解析、ＳＤＳ−ＰＡＧＥ及びウェスタンブロット解析若しくはタンパク質免疫染色、電気泳動解析、タンパク質アッセイ、競合的結合アッセイ、機能的タンパク質アッセイ又は高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）若しくは液体クロマトグラフィー−質量分析（ＬＣ／ＭＳ）などの、クロマトグラフィー法若しくは分光法のような、当技術分野において公知である任意のアッセイでありうる。また、当業者に公知の臨床化学フォーマットのアッセイも利用されうる。このようなアッセイについては、本明細書の第９〜１１節において、さらに詳細に記載されている。
【０２１６】
７．ＵＣＨ−Ｌ１の、他のバイオマーカーとの組合せ
一部の実施形態において、本方法は、試料に対するアッセイを実施して、１つ以上の他のバイオマーカーのレベルを測定又は検出するステップをさらに含む。アッセイは、１つ以上の他のバイオマーカーの、試料中レベルを測定するアッセイであって、イムノアッセイ、質量分析などのアッセイでありうる。また、当業者に公知の臨床化学フォーマットのアッセイも利用されうる。一部の実施形態において、アッセイは、１つ以上の他のバイオマーカーの、第１の試料中レベル及び第２の試料中レベルを測定又は検出するステップ、１つ以上の他のバイオマーカーのレベルの、第１の試料から、第２の試料への、上昇（ｉｎｃｒｅａｓｅ）及び／若しくは低下又は上昇（ｒｉｓｅ）若しくは下落を決定するステップ、並びに１つ以上の他のバイオマーカーの、第１の試料中レベルから、１つ以上の他のバイオマーカーの、第２の試料中レベルへの、統計学的に有意な上昇若しくは低下が見られる場合に、ヒト対象を、軽度又は中等度〜重度の外傷性脳損傷を有すると評価するステップを含む。
【０２１７】
本発明は、ＵＣＨ−Ｌ１の、疾患に特異的な、１つ以上のバイオマーカー又はイムノアッセイとの組合せが、健常対照と、疾患を伴う個体との、ＵＣＨ−Ｌ１を単独で測定することと比較して、より良好な識別をもたらすことを想定する。例えば、ＵＣＨ−Ｌ１及びさらなる外傷性脳損傷バイオマーカーのパネルを測定することは、健常対照と、疾患を伴う個体との、ＵＣＨ−Ｌ１単独のパネルと比較して、より良好な識別をもたらしうる。ＵＣＨ−Ｌ１の、少なくとも１つ以上のバイオマーカーとの組合せは、健常対照と、軽度又は中等度〜重度の外傷性脳損傷を有する個体との、より良好な識別をもたらしうる。１つ以上のバイオマーカーの例は、グリア原線維性酸性タンパク質（ＧＦＡＰ）、Ｓ１００カルシウム結合性タンパク質Ｂ（Ｓ１００β）、ニューロン特異的エノラーゼ（ＮＳＥ）、クリスタリンＢ鎖（ＣＲＹＡＢ）、脳脂質結合性タンパク質（ＢＬＢＰ）、アルドラーゼＣ（ＡＬＤＯＣ）、星状細胞リンタンパク質１５（ＰＥＡ１５）、グルタミンシンターゼ（ＧＳ）、アポリポタンパク質１、タウ、Ｃ反応性タンパク質（ＣＲＰ）、遊離脳由来神経栄養因子（ＢＤＮＦ）、ｐ−タウ、総ＢＤＮＦ、トロポニンＩ（ＴｎＩ）及びこれらの組合せを含む。一部の実施形態において、１つ以上の、他のバイオマーカーは、Ｓ１００β、ＣＲＰ、アポリポタンパク質１又はクリスタリンＢ鎖（ＣＲＹＡＢ）である。
【０２１８】
８．外傷性脳損傷を患う対象の処置及びモニタリング
上記において記載された方法において、軽度外傷性脳損傷又は中等度〜重度の外傷性脳損傷のような外傷性脳損傷を有すると同定又は評価された対象は、処置又はモニタリングされうる。一部の実施形態において、方法は、外傷性脳損傷を有すると評価されたヒト対象を、当技術分野において公知である任意の処置のような、外傷性脳損傷処置により処置するステップをさらに含む。例えば、外傷性脳損傷の処置は、頭部への損傷の重症度に応じて、様々な形態を取りうる。例えば、軽度ＴＢＩを患う対象の場合、処置は、休息、スポーツのような身体活動を控えること、日向に出るときの光線の回避又はサングラスの着用、頭痛又は偏頭痛を緩和するための投薬、抗悪心薬などのうちの１つ以上を含みうる。重度ＴＢＩを患う患者のための処置は、１つ以上の適切な薬物（例えば、利尿剤、抗痙攣薬、個体を鎮静させ、薬物誘導性昏睡へと導く薬物など）又は他の医薬若しくは生物医薬（ＴＢＩの処置のために公知の医薬又は将来開発される医薬）、１つ以上の手術手順（例えば、血腫の除去、頭蓋骨骨折の修復、減圧開頭術など）及び１つ以上の治療（例えば、１つ以上のリハビリ、認知行動学的治療、アンガーマネージメント、心理カウンセリングなど）を含みうる。一部の実施形態において、方法は、外傷性脳損傷（例えば、軽度又は中等度〜重度の外傷性脳損傷）を有すると評価されたヒト対象をモニタリングするステップをさらに含む。一部の実施形態において、軽度外傷性脳損傷又は重度外傷性脳損傷のような外傷性脳損傷を有すると同定された対象は、ＣＴスキャン又はＭＲＩによりモニタリングされうる。
【０２１９】
９．ＵＣＨ−Ｌ１のレベルを測定するための方法
上記において記載された方法において、ＵＣＨ−Ｌ１レベルは、イムノアッセイ、タンパク質免疫沈降、免疫電気泳動、化学解析、ＳＤＳ−ＰＡＧＥ及びウェスタンブロット解析若しくはタンパク質免疫染色のような抗体依存的方法などの電気泳動解析、タンパク質アッセイ、競合的結合アッセイ、機能的タンパク質アッセイ、又は高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）若しくは液体クロマトグラフィー−質量分析（ＬＣ／ＭＳ）などのクロマトグラフィー法若しくは分光法などの、任意の手段により測定されうる。また、当業者に公知の臨床化学フォーマットのアッセイも利用されうる。
【０２２０】
一部の実施形態において、ＵＣＨ−Ｌ１のレベルを測定するステップは、試料を、第１の特異的結合メンバー及び第２の特異的結合メンバーと接触させるステップを含む。一部の実施形態において、第１の特異的結合メンバーは、捕捉抗体であり、第２の特異的結合メンバーは、検出抗体である。一部の実施形態において、ＵＣＨ−Ｌ１のレベルを測定するステップは、試料を、同時に、又は任意の順序において逐次的に、（１）ＵＣＨ−Ｌ１上又はＵＣＨ−Ｌ１断片上のエピトープに結合して捕捉抗体−ＵＣＨ−Ｌ１抗原複合体を形成する捕捉抗体、及び（２）検出可能な標識を含み、捕捉抗体が結合していないＵＣＨ−Ｌ１上のエピトープに結合してＵＣＨ−Ｌ１抗原−検出抗体複合体を形成する検出抗体と接触させることにより、捕捉抗体−ＵＣＨ−Ｌ１抗原−検出抗体複合体が形成されること、並びにＵＣＨ−Ｌ１の、試料中量又は試料中濃度を、捕捉抗体−ＵＣＨ−Ｌ１抗原−検出抗体複合体内の検出可能な標識により発生したシグナルに基づき測定することを含む。
【０２２１】
一部の実施形態において、第１の特異的結合メンバーは、固体支持体上に固定化される。一部の実施形態において、第２の特異的結合メンバーは、固体支持体上に固定化される。一部の実施形態において、第１の特異的結合メンバーは、下記で記載されるＵＣＨ−Ｌ１抗体である。
【０２２２】
一部の実施形態において、試料は、希釈される、又は希釈されない。試料は、約１〜約２５マイクロリットル、約１〜約２４マイクロリットル、約１〜約２３マイクロリットル、約１〜約２２マイクロリットル、約１〜約２１マイクロリットル、約１〜約２０マイクロリットル、約１〜約１８マイクロリットル、約１〜約１７マイクロリットル、約１〜約１６マイクロリットル、約１５マイクロリットル又は約１マイクロリットル、約２マイクロリットル、約３マイクロリットル、約４マイクロリットル、約５マイクロリットル、約６マイクロリットル、約７マイクロリットル、約８マイクロリットル、約９マイクロリットル、約１０マイクロリットル、約１１マイクロリットル、約１２マイクロリットル、約１３マイクロリットル、約１４マイクロリットル、約１５マイクロリットル、約１６マイクロリットル、約１７マイクロリットル、約１８マイクロリットル、約１９マイクロリットル、約２０マイクロリットル、約２１マイクロリットル、約２２マイクロリットル、約２３マイクロリットル、約２４マイクロリットル又は約２５マイクロリットルでありうる。一部の実施形態において、試料は、約１〜約１５０マイクロリットル若しくはこれ未満又は約１〜約２５マイクロリットル若しくはこれ未満である。
【０２２３】
ポイントオブケアデバイス以外の、一部の測定器（例えば、Ａｂｂｏｔｔ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ製の測定器であるＡＲＣＨＩＴＥＣＴ（登録商標）及び他のコア検査測定器のような）は、ＵＣＨ−Ｌ１の、２５，０００ｐｇ／ｍＬ以上の試料中レベルを測定することが可能でありうる。
【０２２４】
他の検出法は、ナノポアデバイス又はナノウェルデバイスの使用を含む、又はこれらにおける使用に適合させられうる。ナノポアデバイスの例については、参照によりその全体において本明細書に組み込まれた、国際特許公開第２０１６／１６１４０２号において記載されている。ナノウェルデバイスの例については、参照によりその全体において本明細書に組み込まれた、国際特許公開第２０１６／１６１４００号において記載されている。
【０２２５】
１０．ＵＣＨ−Ｌ１抗体
本明細書において記載された方法は、「ＵＣＨ−Ｌ１抗体」と称される、ユビキチンカルボキシ末端ヒドロラーゼＬ１（「ＵＣＨ−Ｌ１」）（又はこの断片）に特異的に結合する単離抗体を使用しうる。ＵＣＨ−Ｌ１抗体は、ＵＣＨ−Ｌ１状態を外傷性脳損傷の尺度として評価するか、ＵＣＨ−Ｌ１の試料中の存在を検出するか、ＵＣＨ−Ｌ１の試料中量を定量するか、若しくはＵＣＨ−Ｌ１の試料中の存在を検出し、かつ、ＵＣＨ−Ｌ１の試料中量を定量するために、使用されうる。本開示を通して使用された「〜を測定すること」、「〜を検出すること」及び「〜を定量すること」という用語並びにこれらの任意の派生形は、ＵＣＨ−Ｌ１の、試料中レベルを評価するための、本明細書において開示された方法について記載するように、互換的に使用されうる。
【０２２６】
ａ．ユビキチンカルボキシ末端ヒドロラーゼＬ１（ＵＣＨ−Ｌ１）
「ユビキチンＣ末端ヒドロラーゼ」としてもまた公知のユビキチンカルボキシ末端ヒドロラーゼＬ１（ＵＣＨ−Ｌ１）（「ＵＣＨ−Ｌ１」）は、脱ユビキチン化酵素である。ＵＣＨ−Ｌ１は、遺伝子ファミリーのメンバーであり、その産物は、ユビキチンの小型のＣ末端付加物を加水分解して、ユビキチン単量体を発生させる。ＵＣＨ−Ｌ１の発現は、ニューロン及びびまん性神経内分泌系の細胞並びにそれらの腫瘍に、高度に特異的である。ＵＣＨ−Ｌ１は、全てのニューロン内に、豊富に存在し（全脳タンパク質のうちの、１〜２％を占める）、とりわけ、ニューロン及び精巣／卵巣において発現される。ＵＣＨ−Ｌ１の触媒三残基は、そのヒドロラーゼ活性の一因となる、９０位におけるシステイン、１７６位におけるアスパラギン酸及び１６１位におけるヒスチジンを含有する。
【０２２７】
ヒトＵＣＨ−Ｌ１は、以下のアミノ酸配列：
【０２２８】
【化１】
2020512550.tif 000003
を有しうる。
【０２２９】
ヒトＵＣＨ−Ｌ１は、配列番号１の断片又は変異体でありうる。ＵＣＨ−Ｌ１の断片は、５〜２２５アミノ酸の間、１０〜２２５アミノ酸の間、５０〜２２５アミノ酸の間、６０〜２２５アミノ酸の間、６５〜２２５アミノ酸の間、１００〜２２５アミノ酸の間、１５０〜２２５アミノ酸の間、１００〜１７５アミノ酸の間又は１７５〜２２５アミノ酸の間の長さでありうる。断片は、配列番号１に由来する、連続番号のアミノ酸を含みうる。
【０２３０】
ｂ．ＵＣＨ−Ｌ１認識抗体
抗体は、ＵＣＨ−Ｌ１、この断片、ＵＣＨ−Ｌ１のエピトープ又はこの変異体に結合する抗体である。抗体は、抗ＵＣＨ−Ｌ１抗体の断片又はこの変異体若しくは誘導体でありうる。抗体は、ポリクローナル又はモノクローナル抗体でありうる。抗体は、キメラ抗体、単鎖抗体、アフィニティー成熟抗体、ヒト抗体、ヒト化抗体、完全ヒト抗体又はＦａｂ断片のような抗体断片又はこれらの混合物でありうる。抗体の断片又は誘導体は、Ｆ（ａｂ’）２断片、Ｆｖ断片又はｓｃＦｖ断片を含みうる。抗体の誘導体は、ペプチド模倣体により作製されうる。さらに、単鎖抗体を作製するために記載されている技法は、単鎖抗体を作製するように適合させられうる。
【０２３１】
抗ＵＣＨ−Ｌ１抗体は、キメラ抗ＵＣＨ−Ｌ１又はヒト化抗ＵＣＨ−Ｌ１抗体でありうる。一実施形態において、ヒト化抗体及びキメラ抗体のいずれも、一価である。一実施形態において、ヒト化抗体及びキメラ抗体のいずれも、Ｆｃ領域へと連結された、単一のＦａｂ領域を含む。
【０２３２】
ヒト抗体は、ファージディスプレイ技術又はヒト免疫グロブリン遺伝子を発現するトランスジェニックマウスにより導出されうる。ヒト抗体は、ヒトのインビボにおける免疫応答の結果として作出及び単離されうる。例えば、Ｆｕｎａｒｏら、ＢＭＣ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ、２００８（８）：８５を参照されたい。したがって、抗体は、ヒトの産物であることが可能であり、動物レパートリーではない場合がある。抗体は、ヒト由来であるため、自己抗原に対する反応性の危険性は、最小化されうる。代替的に、標準的な酵母ディスプレイライブラリー及び酵母ディスプレイ技術は、ヒト抗ＵＣＨ−Ｌ１抗体を選択及び単離するのに使用されうる。例えば、ナイーブヒト単鎖可変断片（ｓｃＦｖ）のライブラリーは、ヒト抗ＵＣＨ−Ｌ１抗体を選択するのに使用されうる。トランスジェニック動物は、ヒト抗体を発現させるのに使用されうる。
【０２３３】
ヒト化抗体は、所望の抗原に結合する非ヒト種抗体に由来する抗体分子であって、非ヒト種に由来する、１つ以上の相補性決定領域（ＣＤＲ）及びヒト免疫グロブリン分子に由来するフレームワーク領域を有する抗体分子でありうる。
【０２３４】
抗体は、それが、当技術分野において公知の抗体と異なる生物学的機能を保有するという点で、公知の抗体と識別可能である。
【０２３５】
（１）エピトープ
抗体は、ＵＣＨ−Ｌ１（配列番号１）、その断片又はその変異体に、免疫特異的に結合しうる。抗体は、エピトープ領域内の、少なくとも３アミノ酸、少なくとも４アミノ酸、少なくとも５アミノ酸、少なくとも６アミノ酸、少なくとも７アミノ酸、少なくとも８アミノ酸、少なくとも９アミノ酸又は少なくとも１０アミノ酸を免疫特異的に認識することが可能であり、これらに結合しうる。抗体は、エピトープ領域のうちの、少なくとも３連続アミノ酸、少なくとも４連続アミノ酸、少なくとも５連続アミノ酸、少なくとも６連続アミノ酸、少なくとも７連続アミノ酸、少なくとも８連続アミノ酸、少なくとも９連続アミノ酸又は少なくとも１０連続アミノ酸を有するエピトープを免疫特異的に認識することが可能であり、これらに結合しうる。
【０２３６】
ｃ．抗体の調製／作製
抗体は、当業者に周知の技法を含む、様々な技法のうちのいずれかにより調製されうる。一般に、抗体は、従来の技法を介して、又は組換え体であってもよい抗体の作製を可能とするための、適切な細菌細胞宿主若しくは哺乳動物細胞宿主への抗体の遺伝子、重鎖及び／若しくは軽鎖のトランスフェクションを介して、モノクローナル抗体の作出を含む細胞培養法により、作製されうる。「トランスフェクション」という用語の多様な形態は、外因性ＤＮＡの、原核宿主細胞又は真核宿主細胞への導入のために一般に使用されている、多種多様な技法、例えば、電気穿孔、リン酸カルシウム沈殿、ＤＥＡＥ−デキストラントランスフェクションなどを包含することが意図される。抗体を、原核宿主細胞又は真核宿主細胞において発現させることが可能であるが、そのような真核細胞（そして、特に、哺乳動物の細胞）は、原核細胞より、アセンブルし、適正にフォールディングされ、免疫学的に活性である抗体を分泌する可能性が高いため、抗体の、真核細胞内の発現が好ましく、哺乳動物宿主細胞内の発現が最も好ましい。
【０２３７】
組換え抗体を発現させるための、例示的な哺乳動物宿主細胞は、例えば、Ｋａｕｆｍａｎ及びＳｈａｒｐ、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．、１５９：６０１〜６２１（１９８２）において記載されているようにＤＨＦＲ選択用マーカーと共に使用されるチャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞（Ｕｒｌａｕｂ及びＣｈａｓｉｎ、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ、７７：４２１６〜４２２０（１９８０）において記載されているｄｈｆｒ−ＣＨＯ細胞を含む）、ＮＳ０骨髄腫細胞、ＣＯＳ細胞及びＳＰ２細胞を含む。抗体遺伝子をコードする組換え発現ベクターが、哺乳動物宿主細胞へと導入される場合、抗体は、宿主細胞内の抗体の発現又はより好ましくは宿主細胞が増殖される培養培地への抗体の分泌を可能とするのに十分な時間にわたり、宿主細胞を培養することにより作製される。抗体は、標準的なタンパク質精製法を使用して、培養培地から回収されうる。
【０２３８】
宿主細胞はまた、Ｆａｂ断片又はｓｃＦｖ分子のような、機能的抗体断片を作製するのにも使用されうる。上記の手順に対する変動は、実施されうることが理解される。例えば、宿主細胞に、抗体の軽鎖及び／又は重鎖の機能的断片をコードするＤＮＡをトランスフェクトすることが所望されうる。組換えＤＮＡ技術はまた、目的の抗原への結合に必要でない軽鎖及び重鎖の一方又は両方をコードするＤＮＡの一部又は全部を除去するのにも使用されうる。また、このような切断型ＤＮＡ分子から発現させた分子も、抗体に包含される。加えて、１つの重鎖及び１つの軽鎖が、抗体（すなわち、ヒトＵＣＨ−Ｌ１に結合する抗体）であり、他の重鎖及び軽鎖が、ヒトＵＣＨ−Ｌ１以外の抗原に特異的である、二官能性抗体も、抗体を、標準的な化学的架橋法を介して、第２の抗体へと架橋することにより作製されうる。
【０２３９】
抗体又はこの抗原結合性部分を組換え発現させるための好ましい系において、抗体重鎖及び抗体軽鎖の両方をコードする組換え発現ベクターが、リン酸カルシウム媒介型トランスフェクションにより、ｄｈｆｒ−ＣＨＯ細胞へと導入される。組換え発現ベクター内において、高レベルの遺伝子の転写を駆動するように、抗体重鎖遺伝子及び抗体軽鎖遺伝子の各々が、ＣＭＶエンハンサー／ＡｄＭＬＰプロモーター調節エレメントへと作動的に連結される。組換え発現ベクターはまた、メトトレキサートによる選択／増幅を使用するベクターをトランスフェクトされたＣＨＯ細胞の選択を可能とするＤＨＦＲ遺伝子も保有する。抗体の重鎖及び軽鎖の発現を可能とするように、選択された形質転換体の宿主細胞が培養され、無傷抗体が培養培地から回収される。組換え発現ベクターを調製し、宿主細胞にトランスフェクトし、形質転換体について選択し、宿主細胞を培養し、抗体を培養培地から回収するのに、標準的な分子生物学法が使用される。なお、さらに、組換え抗体を合成する方法は、組換え抗体が合成されるまで、宿主細胞を、適切な培養培地中において培養することによる。方法は、組換え抗体を、培養培地から単離するステップをさらに含みうる。
【０２４０】
モノクローナル抗体を調製する方法は、所望の特異性を有する抗体を作製することが可能な不死細胞株の調製を伴う。このような細胞株は、免疫化された動物から得られた脾臓細胞から作製されうる。動物は、ＵＣＨ−Ｌ１又はこの断片及び／若しくは変異体により免疫化されうる。動物を免疫化するのに使用されるペプチドは、ヒトＦｃ、例えば、ヒト抗体のＦｃ（ｆｒａｇｍｅｎｔ  ｃｒｙｓｔａｌｌｉｚａｂｌｅ）領域又はテール領域をコードするアミノ酸を含みうる。次いで、脾臓細胞が、例えば、骨髄腫細胞融合パートナーとの融合により免疫化される。様々な融合法が利用されうる。例えば、脾臓細胞及び骨髄腫細胞が、非イオン性界面活性剤と、数分間にわたり組み合わされ、次いで、低密度において、ハイブリッド細胞の増殖を支援するが、骨髄腫細胞の増殖を支援しない選択培地上に播種される。このような一技法は、ヒポキサンチン、アミノプテリン、チミジン（ＨＡＴ）選択を使用する。別の技法は、電気融合を含む。十分な時間、通例、約１〜２週間の後、ハイブリッド体のコロニーが観察される。単一のコロニーが選択され、それらの培養物上清は、ポリペプチドに対する結合活性について試験される。高度な反応性及び特異性を有するハイブリドーマが使用されうる。
【０２４１】
モノクローナル抗体は、増殖するハイブリドーマコロニーの上清から単離されうる。加えて、収率を増強するように、ハイブリドーマ細胞株の、マウスのような、適切な脊椎動物宿主の腹腔への注射のような、多様な技法が利用されうる。次いで、モノクローナル抗体は、腹水又は血液から採取されうる。夾雑物は、クロマトグラフィー、ゲル濾過、沈殿及び抽出のような、従来の技法により、抗体から除去されうる。アフィニティークロマトグラフィーは、抗体を精製する工程において使用されうる方法の例である。
【０２４２】
タンパク質分解酵素であるパパインは、ＩｇＧ分子を優先的にいくつかの断片に切断して、これらのうちの２つの（Ｆ（ａｂ）断片）の各々が、無傷の抗原結合部位を含む、共有結合的ヘテロ二量体を含む断片をもたらす。酵素であるペプシンは、ＩｇＧ分子を切断して、両方の抗原結合性部位を含む、Ｆ（ａｂ’）２断片を含む、いくつかの断片をもたらすことが可能である。
【０２４３】
Ｆｖ断片は、ＩｇＭの、優先的なタンパク質分解性切断により作製されうるが、まれな場合に、ＩｇＧ免疫グロブリン分子又はＩｇＡ免疫グロブリン分子の優先的なタンパク質分解性切断によっても作製されうる。Ｆｖ断片は、組換え法を使用して導出されうる。Ｆｖ断片は、天然抗体分子の抗原認識能及び抗原結合能の大半を保持する抗原結合部位を含む、非共有結合的ＶＨ：：ＶＬヘテロ二量体を含む。
【０２４４】
抗体、抗体断片又は誘導体は、それぞれ、ＣＤＲに対する支持をもたらし、ＣＤＲの、互いに対する空間的関係を規定する、重鎖及び軽鎖のフレームワーク（「ＦＲ」）のセットの間に挿入された、重鎖及び軽鎖の相補性決定領域（「ＣＤＲ」）のセットを含みうる。ＣＤＲのセットは、重鎖Ｖ領域又は軽鎖Ｖ領域からなる、３つの超可変領域を含有しうる。
【０２４５】
必須の特異性を有する抗体を作製又は単離する、他の適する方法であって、当技術分野において公知の方法を使用して、例えば、Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ  Ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ（Ｃａｍｂｒｉｄｇｅｓｈｉｒｅ、ＵＫ）、ＭｏｒｐｈｏＳｙｓ（Ｍａｒｔｉｎｓｒｅｉｄ／Ｐｌａｎｅｇｇ、Ｄｅｌ．）、Ｂｉｏｖａｔｉｏｎ（Ａｂｅｒｄｅｅｎ、Ｓｃｏｔｌａｎｄ、ＵＫ）、ＢｉｏＩｎｖｅｎｔ（Ｌｕｎｄ、Ｓｗｅｄｅｎ）のような、多様な市販品の販売元から市販されている、ペプチドライブラリー又はタンパク質ライブラリー（例えば、バクテリオファージライブラリー、リボソームライブラリー、オリゴヌクレオチドライブラリー、ＲＮＡライブラリー、ｃＤＮＡライブラリー、酵母ライブラリーなどのディスプレイライブラリーであるがこれらに限定されない）から組換え抗体を選択する方法を含むがこれらに限定されない方法が使用されうる。米国特許第４，７０４，６９２号；同第５，７２３，３２３号；同第５，７６３，１９２号；同第５，８１４，４７６号；同第５，８１７，４８３号；同第５，８２４，５１４号；同第５，９７６，８６２号を参照されたい。代替的な方法は、ヒト抗体のレパートリーを作製することが可能な、トランスジェニック動物の免疫化（例えば、ＳＣＩＤマウス、Ｎｇｕｙｅｎら（１９９７）、Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．、４１：９０１〜９０７；Ｓａｎｄｈｕら（１９９６）、Ｃｒｉｔ．Ｒｅｖ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．、１６：９５〜１１８；Ｅｒｅｎら（１９９８）、Ｉｍｍｕｎｏｌ．、９３：１５４〜１６１）であって、当技術分野において公知であり、かつ／又は本明細書において記載された、トランスジェニック動物の免疫化に依拠する。このような技法は、リボソームディスプレイ（Ｈａｎｅｓら（１９９７）、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ、９４：４９３７〜４９４２；Ｈａｎｅｓら（１９９８）、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ、９５：１４１３０〜１４１３５）；単一細胞による抗体作製技術（例えば、選択リンパ球抗体法（「ＳＬＡＭ」）（米国特許第５，６２７，０５２号、Ｗｅｎら（１９８７）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．、１７：８８７〜８９２；Ｂａｂｃｏｏｋら（１９９６）、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ、９３：７８４３〜７８４８）；ゲル微小液滴及びフローサイトメトリー（Ｐｏｗｅｌｌら（１９９０）、Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．、８：３３３−３３７；Ｏｎｅ  Ｃｅｌｌ  Ｓｙｓｔｅｍｓ（Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ、Ｍａｓｓ．）；Ｇｒａｙら（１９９５）、Ｊ．Ｉｍｍ．Ｍｅｔｈ．、１８２：１５５〜１６３；Ｋｅｎｎｙら（１９９５）、Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌ．、１３：７８７〜７９０）；Ｂ細胞の選択（Ｓｔｅｅｎｂａｋｋｅｒｓら（１９９４）、Ｍｏｌｅｃ．Ｂｉｏｌ．Ｒｅｐｏｒｔｓ、１９：１２５〜１３４（１９９４））を含むがこれらに限定されない。
【０２４６】
アフィニティー成熟抗体は、当技術分野において公知である、多数の手順のうちのいずれか１つにより作製されうる。例えば、Ｍａｒｋｓら、ＢｉｏＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙ、１０：７７９〜７８３（１９９２）は、ＶＨとＶＬとのドメインシャッフリングによるアフィニティー成熟について記載している。ＣＤＲ残基及び／又はフレームワーク残基のランダム突然変異誘発については、Ｂａｒｂａｓら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ、９１：３８０９〜３８１３（１９９４）；Ｓｃｈｉｅｒら、Ｇｅｎｅ、１６９：１４７〜１５５（１９９５）；Ｙｅｌｔｏｎら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．、１５５：１９９４〜２００４（１９９５）；Ｊａｃｋｓｏｎら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．、１５４（７）：３３１０〜３３１９（１９９５）；Ｈａｗｋｉｎｓら、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．、２２６：８８９〜８９６（１９９２）により記載されている。選択的突然変異誘発位置及び活性増強アミノ酸残基を伴う接触位置又は超変異位置における選択的突然変異については、米国特許第６，９１４，１２８Ｂ１号において記載されている。
【０２４７】
抗体の変異体はまた、抗体をコードするポリヌクレオチドを、トランスジェニック動物又はこのような抗体をそれらのミルク中に産生するヤギ、ウシ、ウマ、ヒツジなどのような哺乳動物をもたらすのに適する宿主へと送達することを使用しても調製されうる。これらの方法は、当技術分野において公知であり、例えば、米国特許第５，８２７，６９０号；同第５，８４９，９９２号；同第４，８７３，３１６号；同第５，８４９，９９２号；同第５，９９４，６１６号；同第５，５６５，３６２号及び同第５，３０４，４８９号において記載されている。
【０２４８】
抗体の変異体はまた、このような抗体、指定された部分又は変異体を、植物の部分又はこれらから培養された細胞において産生する、トランスジェニック植物及び培養植物細胞（例えば、タバコ、トウモロコシ、及びウキクサであるがこれらに限定されない）をもたらすように、ポリヌクレオチドを送達することによっても調製されうる。例えば、Ｃｒａｍｅｒら（１９９９）、Ｃｕｒｒ．Ｔｏｐ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．、２４０：９５〜１１８及びこの文献において引用された参考文献は、例えば、誘導性プロモーターを使用する、大量の組換えタンパク質を発現するトランスジェニックのタバコ葉の産生について記載している。トランスジェニックトウモロコシは、他の組換え系において産生された、又は天然の供給源から精製された哺乳動物タンパク質と同等の生物学的活性を伴う哺乳動物タンパク質を、市販品生産のレベルにおいて発現させるのに使用されている。例えば、Ｈｏｏｄら、Ａｄｖ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．Ｂｉｏｌ．（１９９９）、４６４：１２７〜１４７及びこの文献において引用された参考文献を参照されたい。抗体の変異体はまた、単鎖抗体（ｓｃＦｖ）のような抗体断片を含むトランスジェニック植物の種子であって、タバコの種子及びバレイショの塊茎を含む種子からも大量に作製されている。例えば、Ｃｏｎｒａｄら（１９９８）、Ｐｌａｎｔ  Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．、３８：１０１〜１０９及びこの文献において引用された参考文献を参照されたい。したがって、抗体はまた、公知の方法に従いトランスジェニック植物を使用しても作製されうる。
【０２４９】
抗体の誘導体は、例えば、外因性配列を付加して、免疫原性を修飾する、又は結合、アフィニティー、オン速度、オフ速度、アビディティー、特異性、半減期若しくは他の任意の適切な特徴を低減、増強若しくは修飾することにより作製されうる。一般に、可変領域及び定常領域の非ヒト配列を、ヒトアミノ酸又は他のアミノ酸により置換しながら、非ヒトＣＤＲ配列又はヒトＣＤＲ配列のうちの一部又は全部は維持される。
【０２５０】
小型の抗体断片は、２つの抗原結合性部位を有するダイアボディーであって、断片が、同じポリペプチド鎖において、軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）へと接続された重鎖可変ドメイン（ＶＨ）（ＶＨ−ＶＬ）を含む、ダイアボディーでありうる。例えば、ＥＰ４０４，０９７；ＷＯ９３／１１６１及びＨｏｌｌｉｎｇｅｒら（１９９３）、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ、９０：６４４４〜６４４８を参照されたい。同じ鎖上の２つのドメイン間の対合を可能とするには短すぎるリンカーを使用することにより、ドメインは、別の鎖の相補性ドメインと対合し、２つの抗原結合性部位を創出するように強いられる。また、参照によりその全体において本明細書に組み込まれ、かつ、１つ以上のアミノ酸が、親抗体の超可変領域内へと挿入され、標的抗原に対する結合アフィニティーが、この抗原に対する親抗体の結合アフィニティーの少なくとも約２倍強い抗体変異体についても開示する、Ｃｈｅｎらによる、米国特許第６，６３２，９２６号も参照されたい。
【０２５１】
抗体は、直鎖状抗体でありうる。当技術分野において、直鎖状抗体を作るための手順が公知であり、Ｚａｐａｔａら（１９９５）、Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｅｎｇ．、８（１０）：１０５７〜１０６２において記載されている。略述すると、これらの抗体は、抗原結合領域の対を形成する、タンデムのＦｄセグメント（ＶＨ−ＣＨ１−ＶＨ−ＣＨ１）の対を含む。直鎖状抗体は、二重特異性又は単一特異性でありうる。
【０２５２】
抗体は、プロテインＡ精製、硫酸アンモニウム沈殿又はエタノール沈殿、酸抽出、アニオン交換クロマトグラフィー又はカチオン交換クロマトグラフィー、ホスホセルロースクロマトグラフィー、疎水性相互作用クロマトグラフィー、アフィニティークロマトグラフィー、ヒドロキシアパタイトクロマトグラフィー及びレクチンクロマトグラフィーを含むがこれらに限定されない、公知の方法により、組換え細胞培養物から回収及び精製されうる。高速液体クロマトグラフィー（「ＨＰＬＣ」）もまた、精製のために使用されうる。
【０２５３】
抗体を検出可能に標識することは、有用でありうる。抗体を、これらの薬剤へとコンジュゲートさせるための方法は、当技術分野において公知である。例示だけを目的として述べると、抗体は、放射性原子、発色団、フルオロフォアなどのような検出可能部分により標識されうる。このような標識抗体は、インビボにおける、又は単離された被験試料中の診断法のために使用されうる。このような標識抗体は、サイトカイン、リガンド、別の抗体へと連結されうる。抗腫瘍効果を達成するための、抗体へのカップリングに適する薬剤は、インターロイキン２（ＩＬ−２）及び腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）のようなサイトカイン；光力学療法における使用のための光増感剤であって、アルミニウム（ＩＩＩ）フタロシアニンテトラスルホン酸、ヘマトポルフィリン及びフタロシアニンを含む光増感剤；ヨウ素１３１（１３１Ｉ）、イットリウム９０（９０Ｙ）、ビスマス２１２（２１２Ｂｉ）、ビスマス２１３（２１３Ｂｉ）、テクネシウム９９ｍ（９９ｍＴｃ）、レニウム１８６（１８６Ｒｅ）及びレニウム１８８（１８８Ｒｅ）のような放射性核種；ドキソルビシン、アドリアマイシン、ダウノルビシン、メトトレキサート、ダウノマイシン、ネオカルチノスタチン及びカルボプラチンのような抗生剤；ジフテリア毒素、緑膿菌外毒素Ａ、ブドウ球菌エンテロトキシンＡ、アブリンＡ毒素、リシンＡ（脱グリコシル化リシンＡ及び天然リシンＡ）、ＴＧＦ−アルファ毒素、タイワンコブラに由来する細胞毒素（ナジャ・ナジャ・アトラ）及びゲロニン（植物毒素）のような、細菌毒素、植物毒素及び他の毒素；レストリクトシン（アスペルギルス・レストリクツスにより産生されたリボソーム不活化タンパク質）、サポリン（サポナリア・オフィキナリスに由来するリボソーム不活化タンパク質）及びＲＮアーゼのような、植物、細菌及び真菌に由来する、リボソーム不活化タンパク質；チロシンキナーゼ阻害剤；ｌｙ２０７７０２（二フッ素化プリンヌクレオシド）；抗嚢胞剤を含有するリポソーム（例えば、アンチセンスオリゴヌクレオチド、毒素をコードするプラスミド、メトトレキサートなど）並びに他の抗体又はＦ（ａｂ）のような抗体断片を含む。
【０２５４】
ハイブリドーマ技術、選択リンパ球抗体法（ＳＬＡＭ）、トランスジェニック動物及び組換え抗体ライブラリーの使用を介する抗体の作製については、下記において、より詳細に記載される。
【０２５５】
（１）ハイブリドーマ技術を使用する、抗ＵＣＨ−Ｌ１モノクローナル抗体
モノクローナル抗体は、当技術分野において公知の、多種多様な技法であって、ハイブリドーマ、組換え及びファージディスプレイ技術又はこれらの組合せの使用を含む技法を使用して調製されうる。例えば、モノクローナル抗体は、当技術分野において公知であり、例えば、Ｈａｒｌｏｗら、「Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ」、２版（Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ、Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ、１９８８）；Ｈａｍｍｅｒｌｉｎｇら、「Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  ａｎｄ  Ｔ−Ｃｅｌｌ  Ｈｙｂｒｉｄｏｍａｓ」（Ｅｌｓｅｖｉｅｒ、Ｎ．Ｙ．、１９８１）において教示されているハイブリドーマ法を含むハイブリドーマ法を使用して作製されうる。また、本明細書において使用された「モノクローナル抗体」という用語は、ハイブリドーマ技術を介して作製された抗体に限定されないことも留意される。「モノクローナル抗体」という用語は、任意の真核生物クローン、原核生物クローン又はファージクローンを含む単一クローンに由来する抗体を指し、それが作製された方法を指すものではない。
【０２５６】
本方法により作製されるモノクローナル抗体並びに抗体を作出する方法は、本発明の抗体を分泌するハイブリドーマ細胞を培養するステップを含みうるが、この場合、ハイブリドーマは、ＵＣＨ−Ｌ１により免疫化された動物、例えば、ラット又はマウスから単離された脾臓細胞を、骨髄腫細胞と融合させ、次いで、融合体から生じるハイブリドーマを、本発明のポリペプチドに結合することが可能な抗体を分泌するハイブリドーマクローンについてスクリーニングすることにより作出されることが好ましい。略述すると、ラットは、ＵＣＨ−Ｌ１抗原により免疫化されうる。好ましい実施形態において、ＵＣＨ−Ｌ１抗原は、免疫応答を刺激するように、アジュバントと共に投与される。このようなアジュバントは、フロイント完全アジュバント又はフロイント不完全アジュバント、ＲＩＢＩ（ムラミルジペプチド）又はＩＳＣＯＭ（免疫刺激性複合体）を含む。このようなアジュバントは、ポリペプチドを、局所的な沈着物内に封入することにより、急速な分散から保護しうる、又はこのようなアジュバントは、マクロファージ及び免疫系の他の構成要素に対して走化性である因子を分泌するように、宿主を刺激する物質を含有しうる。ポリペプチドが投与される場合、免疫化スケジュールは、何週間かにわたる、２回以上のポリペプチドの投与を伴うことが好ましいが、ポリペプチドの単回投与もまた、使用されうる。
【０２５７】
ＵＣＨ−Ｌ１抗原による動物の免疫化の後、抗体及び／又は抗体産生細胞が、動物から得られうる。抗ＵＣＨ−Ｌ１抗体含有血清は、動物から採血する、又は動物を屠殺することにより、動物から得られる。血清は、動物から得られたままに使用されてもよく、免疫グロブリン画分が血清から得られてもよく、又は抗ＵＣＨ−Ｌ１抗体が血清から精製されてもよい。このようにして得られた血清又は免疫グロブリンは、ポリクローナルであるので、一連の異種特性を有する。
【０２５８】
免疫応答が検出されたら、例えば、ラット血清中において、抗原であるＵＣＨ−Ｌ１に特異的な抗体が検出されたら、ラット脾臓が摘出され、脾臓細胞が単離される。次いで、脾臓細胞が、周知の技法により、任意の適切な骨髄腫細胞、例えば、Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｔｙｐｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ（ＡＴＣＣ、Ｍａｎａｓｓａｓ、Ｖａ．、ＵＳ）から市販されている細胞株である、ＳＰ２０に由来する細胞へと融合させられる。ハイブリドーマが選択され、限界希釈によりクローニングされる。次いで、ハイブリドーマクローンが、当技術分野において公知の方法により、ＵＣＨ−Ｌ１に結合することが可能な抗体を分泌する細胞についてアッセイされる。ラットを、陽性のハイブリドーマクローンにより免疫化することにより、一般に、高レベルの抗体を含有する腹水が作出されうる。
【０２５９】
別の実施形態において、抗体を産生する免疫化ハイブリドーマが、免疫化された動物から調製されうる。免疫化の後、動物は、屠殺され、当技術分野において周知の通り、脾臓Ｂ細胞は、免疫化された骨髄腫細胞へと融合される。例えば、Ｈａｒｌｏｗ及びＬａｎｅ、前出を参照されたい。好ましい実施形態において、骨髄腫細胞は、免疫グロブリンポリペプチドを分泌しない（非分泌性細胞株）。融合及び抗生剤による選択の後、ハイブリドーマは、ＵＣＨ−Ｌ１若しくはこの部分又はＵＣＨ−Ｌ１を発現する細胞を使用してスクリーニングされる。好ましい実施形態において、初期スクリーニングは、酵素免疫測定アッセイ（ＥＬＩＳＡ）又はラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ）、好ましくはＥＬＩＳＡを使用して実施される。ＥＬＩＳＡスクリーニングの例は、ＰＣＴ公開第００／３７５０４号において提示されている。
【０２６０】
抗ＵＣＨ−Ｌ１抗体を産生するハイブリドーマは、ロバストなハイブリドーマの増殖、高度な抗体の産生、及び所望の抗体特徴を含む、所望の特徴について選択され、クローニングされ、さらにスクリーニングされる。ハイブリドーマは、インビボの同系動物、免疫系を欠く動物、例えば、ヌードマウスにおいて、又はインビトロの細胞培養物中において培養され、拡大されうる。ハイブリドーマを選択し、クローニングし、拡大する方法は、当業者に周知である。
【０２６１】
好ましい実施形態において、ハイブリドーマは、ラットハイブリドーマである。別の実施形態において、ハイブリドーマは、マウス、ヒツジ、ブタ、ヤギ、ウシ又はウマのような、ヒト以外でラット以外の種において作製される。さらに別の好ましい実施形態において、ハイブリドーマは、ヒト非分泌性骨髄腫が、抗ＵＣＨ−Ｌ１抗体を発現するヒト細胞と融合させられた、ヒトハイブリドーマである。
【０２６２】
特異的エピトープを認識する抗体断片は、公知の技法により作出されうる。例えば、本発明のＦａｂ断片及びＦ（ａｂ’）２断片は、パパイン（２つの同一なＦａｂ断片をもたらす）又はペプシン（Ｆ（ａｂ’）２断片をもたらす）のような酵素を使用する、免疫グロブリン分子のタンパク質分解性切断により作製されうる。ＩｇＧ分子のＦ（ａｂ’）２断片は、大型の（「親」）ＩｇＧ分子の、２つの抗原結合性部位であって、親ＩｇＧ分子の、両方の軽鎖（軽鎖可変領域及び定常領域を含有する）、重鎖のＣＨ１ドメイン及びジスルフィド形成ヒンジ領域を含む、抗原結合性部位を保持する。したがって、Ｆ（ａｂ’）２断片は、親ＩｇＧ分子と同様に、抗原分子を架橋することが可能である。
【０２６３】
（２）ＳＬＡＭを使用する、抗ＵＣＨ−Ｌ１モノクローナル抗体
本発明の別の態様において、組換え抗体は、米国特許第５，６２７，０５２号；ＰＣＴ公開第９２／０２５５１号及びＢａｂｃｏｏｋら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ、９３：７８４３〜７８４８（１９９６）において記載されている通り、当技術分野において、選択リンパ球抗体法（ＳＬＡＭ）と称される手順を使用して、単一の単離リンパ球から作出される。この方法において、ビオチンのようなリンカーを使用して、抗原であるＵＣＨ−Ｌ１、ＵＣＨ−Ｌ１のサブユニット又はこの断片が、ヒツジ赤血球へとカップリングされ、ＵＣＨ−Ｌ１に対する特異性を伴う抗体を分泌する単一細胞を同定するのに使用される、抗原特異的溶血プラークアッセイを使用して、目的の抗体を分泌する、単一の細胞、例えば、免疫化された動物のうちのいずれか１つに由来するリンパ球がスクリーニングされる。目的の抗体分泌細胞を同定した後、重鎖可変領域及び軽鎖可変領域のｃＤＮＡが、逆転写酵素ＰＣＲ（ＲＴ−ＰＣＲ）により、細胞からレスキューされ、次いで、これらの可変領域を、ＣＯＳ細胞又はＣＨＯ細胞のような、哺乳動物宿主細胞内の、適切な免疫グロブリン定常領域（例えば、ヒト定常領域）の文脈において発現させる。次いで、インビボにおいて選択されたリンパ球に由来する、増幅された免疫グロブリン配列をトランスフェクトされた宿主細胞は、例えば、ＵＣＨ−Ｌ１に対する抗体を発現する細胞を単離するように、トランスフェクト細胞をパニングすることにより、インビトロにおいて、さらなる解析及び選択を経る場合がある。増幅された免疫グロブリン配列は、インビトロアフィニティー成熟法によるように、インビトロにおいて、さらに操作されうる。例えば、ＰＣＴ公開第９７／２９１３１号及びＰＣＴ公開第００／５６７７２号を参照されたい。
【０２６４】
（３）トランスジェニック動物を使用する、抗ＵＣＨ−Ｌ１モノクローナル抗体
本発明の別の実施形態において、抗体は、ヒト免疫グロブリン遺伝子座の一部又は全部を含む非ヒト動物を、ＵＣＨ−Ｌ１抗原により免疫化することにより作製される。ある実施形態において、非ヒト動物は、ヒト免疫グロブリン遺伝子座の大型断片を含み、マウス抗体の作製が欠損する操作マウス株である、ＸＥＮＯＭＯＵＳＥ（登録商標）トランスジェニックマウスである。例えば、Ｇｒｅｅｎら、Ｎａｔｕｒｅ  Ｇｅｎｅｔｉｃｓ、７：１３〜２１（１９９４）並びに米国特許第５，９１６，７７１号；同第５，９３９，５９８号；同第５，９８５，６１５号；同第５，９９８，２０９号；同第６，０７５，１８１号；同第６，０９１，００１号；同第６，１１４，５９８号及び同第６，１３０，３６４号を参照されたい。また、ＰＣＴ公開第９１／１０７４１号；ＰＣＴ公開第９４／０２６０２号；ＰＣＴ公開第９６／３４０９６号；ＰＣＴ公開第９６／３３７３５号；ＰＣＴ公開第９８／１６６５４号；ＰＣＴ公開第９８／２４８９３号；ＰＣＴ公開第９８／５０４３３号；ＰＣＴ公開第９９／４５０３１号；ＰＣＴ公開第９９／５３０４９号；ＰＣＴ公開第００／０９５６０号及びＰＣＴ公開第００／３７５０４号も参照されたい。ＸＥＮＯＭＯＵＳＥ（登録商標）トランスジェニックマウスは、完全ヒト抗体の成人様ヒトレパートリーを産生し、抗原特異的ヒトモノクローナル抗体を発生させる。ＸＥＮＯＭＯＵＳＥ（登録商標）トランスジェニックマウスは、ヒト重鎖遺伝子座及びｘ軽鎖遺伝子座の、メガ塩基サイズの、生殖細胞系列構成のＹＡＣ断片を導入することにより、ヒト抗体レパートリーのうちの約８０％を含有する。その開示が参照により組み込まれた、Ｍｅｎｄｅｚら、Ｎａｔｕｒｅ  Ｇｅｎｅｔｉｃｓ、１５：１４６〜１５６（１９９７）；Ｇｒｅｅｎ及びＪａｋｏｂｏｖｉｔｓ、Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．、１８８：４８３〜４９５（１９９８）を参照されたい。
【０２６５】
（４）組換え抗体ライブラリーを使用する、抗ＵＣＨ−Ｌ１モノクローナル抗体
インビトロ法もまた、本発明の抗体を作るのに使用できる場合があり、この場合、所望のＵＣＨ−Ｌ１結合特異性を有する抗体を同定するのに、抗体ライブラリーがスクリーニングされる。組換え抗体ライブラリーの、このようなスクリーニングのための方法は、当技術分野において周知であり、例えば、それらの各々の内容が、参照により本明細書に組み込まれた、米国特許第５，２２３，４０９号（Ｌａｄｎｅｒら）；ＰＣＴ公開第９２／１８６１９号（Ｋａｎｇら）；ＰＣＴ公開第９１／１７２７１号（Ｄｏｗｅｒら）；ＰＣＴ公開第９２／２０７９１号（Ｗｉｎｔｅｒら）；ＰＣＴ公開第９２／１５６７９号（Ｍａｒｋｌａｎｄら）；ＰＣＴ公開第９３／０１２８８号（Ｂｒｅｉｔｌｉｎｇら）；ＰＣＴ公開第９２／０１０４７号（ＭｃＣａｆｆｅｒｔｙら）；ＰＣＴ公開第９２／０９６９０号（Ｇａｒｒａｒｄら）；Ｆｕｃｈｓら、Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ、９：１３６９〜１３７２（１９９１）；Ｈａｙら、Ｈｕｍ．Ａｎｔｉｂｏｄ．Ｈｙｂｒｏｄｏｍａｓ、３：８１〜８５（１９９２）；Ｈｕｓｅら、Ｓｃｉｅｎｃｅ、２４６：１２７５〜１２８１（１９８９）；ＭｃＣａｆｆｅｒｔｙら、Ｎａｔｕｒｅ、３４８：５５２〜５５４（１９９０）；Ｇｒｉｆｆｉｔｈｓら、ＥＭＢＯＪ．、１２：７２５〜７３４（１９９３）；Ｈａｗｋｉｎｓら、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．、２２６：８８９〜８９６（１９９２）；Ｃｌａｃｋｓｏｎら、Ｎａｔｕｒｅ、３５２：６２４〜６２８（１９９１）；Ｇｒａｍら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ、８９：３５７６〜３５８０（１９９２）；Ｇａｒｒａｒｄら、Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ、９：１３７３〜１３７７（１９９１）；Ｈｏｏｇｅｎｂｏｏｍら、Ｎｕｃｌ．Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．、１９：４１３３〜４１３７（１９９１）；Ｂａｒｂａｓら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ、８８：７９７８〜７９８２（１９９１）；米国特許出願公開第２００３／０１８６３７４号及びＰＣＴ公開第９７／２９１３１号、において記載されている方法を含む。
【０２６６】
組換え抗体ライブラリーは、ＵＣＨ−Ｌ１又はＵＣＨ−Ｌ１の部分により免疫化された対象に由来しうる。代替的に、組換え抗体ライブラリーは、ヒトＵＣＨ−Ｌ１により免疫化されていないヒト対象に由来する、ヒト抗体ライブラリーのように、ナイーブ対象、すなわち、ＵＣＨ−Ｌ１により免疫化されていない対象に由来しうる。本発明の抗体は、ヒトＵＣＨ−Ｌ１を含むペプチドを伴う組換え抗体ライブラリーをスクリーニングして、これにより、ＵＣＨ−Ｌ１を認識する抗体を選択することにより選択される。このようなスクリーニング及び選択を行うための方法は、前出の段落内の参考文献において記載されている方法のように、当技術分野において周知である。ＵＣＨ−Ｌ１に対して、特定の結合アフィニティーを有する、本発明の抗体であって、ヒトＵＣＨ−Ｌ１から、特定のＫｏｆｆ速度定数により解離する抗体のような抗体を選択するために、所望のＫｏｆｆ速度定数を有する抗体を選択するように、当技術分野において公知の表面プラズモン共鳴法が使用されうる。ｈＵＣＨ−Ｌ１に対する、特定の中和活性を有する本発明の抗体であって、特定のＩＣ５０を伴う抗体のような抗体を選択するために、ＵＣＨ−Ｌ１活性の阻害を評価するための、当技術分野において公知の標準的方法が使用されうる。
【０２６７】
一態様において、本発明は、ヒトＵＣＨ−Ｌ１に結合する、単離抗体又はこの抗原結合性部分に関する。任意選択的に、抗体は、中和抗体である。多様な実施形態において、抗体は、組換え抗体又はモノクローナル抗体である。
【０２６８】
例えば、抗体はまた、当技術分野において公知である、多様なファージディスプレイ法を使用しても作出されうる。ファージディスプレイ法において、機能的な抗体ドメインは、それらをコードするポリヌクレオチド配列を保有するファージ粒子の表面に提示される。このようなファージは、レパートリー又はコンビナトリアル抗体ライブラリー（例えば、ヒト又はマウスの）から発現させた抗原結合性ドメインを提示するのに用いられうる。目的の抗原に結合する抗原結合性ドメインを発現するファージは、抗原により、例えば、標識抗原又は固体表面若しくはビーズに結合された、若しくはこれらへと捕捉された抗原を使用して選択又は同定されうる。これらの方法において使用されたファージは典型的に、ファージから発現させたｆｄ結合性ドメイン及びＭ１３結合性ドメインを、組換えにより、ファージ遺伝子ＩＩＩタンパク質又はファージ遺伝子ＶＩＩＩタンパク質へと融合させた、Ｆａｂ抗体ドメイン、Ｆｖ抗体ドメイン又はジスルフィド安定化Ｆｖ抗体ドメインと共に含む、繊維状ファージである。抗体を作るのに使用されうるファージディスプレイ法の例は、Ｂｒｉｎｋｍａｎｎら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ、１８２：４１〜５０（１９９５）；Ａｍｅｓら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ、１８４：１７７〜１８６（１９９５）；Ｋｅｔｔｌｅｂｏｒｏｕｇｈら、Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．、２４：９５２〜９５８（１９９４）；Ｐｅｒｓｉｃら、Ｇｅｎｅ、１８７：９〜１８（１９９７）；Ｂｕｒｔｏｎら、Ａｄｖａｎｃｅｓ  ｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ、５７：１９１〜２８０（１９９４）；ＰＣＴ公開第９２／０１０４７号；ＰＣＴ公開第９０／０２８０９号；ＰＣＴ公開第９１／１０７３７号；ＰＣＴ公開第９２／０１０４７号；ＰＣＴ公開第９２／１８６１９号；ＰＣＴ公開第９３／１１２３６号；ＰＣＴ公開第９５／１５９８２号；ＰＣＴ公開第９５／２０４０１号及び米国特許第５，６９８，４２６号；同第５，２２３，４０９号；同第５，４０３，４８４号；同第５，５８０，７１７号；同第５，４２７，９０８号；同第５，７５０，７５３号；同第５，８２１，０４７号；同第５，５７１，６９８号；同第５，４２７，９０８号；同第５，５１６，６３７号；同第５，７８０，２２５号；同第５，６５８，７２７号；同第５，７３３，７４３号及び同第５，９６９，１０８号において開示されているファージディスプレイ法を含む。
【０２６９】
上記の参考文献において記載された通り、ファージ選択の後、ファージに由来する抗体のコード領域は、単離され、ヒト抗体を含む全抗体又は他の任意の所望の抗原結合性断片を作出するのに使用され、例えば、下記において詳細に記載される通り、哺乳動物細胞、昆虫細胞、植物細胞、酵母及び細菌を含む、任意の所望の宿主内において発現させうる。ＰＣＴ公開第９２／２２３２４号；Ｍｕｌｌｉｎａｘら、ＢｉｏＴｅｃｈｎｉｑｕｅｓ、１２（６）：８６４〜８６９（１９９２）；Ｓａｗａｉら、Ａｍ．Ｊ．Ｒｅｐｒｏｄ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．、３４：２６〜３４（１９９５）及びＢｅｔｔｅｒら、Ｓｃｉｅｎｃｅ、２４０：１０４１〜１０４３（１９８８）において開示されている方法のような、当技術分野において公知の方法を使用して、例えば、Ｆａｂ断片、Ｆａｂ’断片及びＦ（ａｂ’）２断片を組換えにより作製する技法もまた利用されうる。単鎖Ｆｖ抗体を作製するのに使用されうる技法の例は、米国特許第４，９４６，７７８号及び同第５，２５８，４９８号；Ｈｕｓｔｏｎら、Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ、２０３：４６〜８８（１９９１）；Ｓｈｕら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ、９０：７９９５〜７９９９（１９９３）及びＳｋｅｒｒａら、Ｓｃｉｅｎｃｅ、２４０：１０３８〜１０４１（１９８８）において記載されている技法を含む。
【０２７０】
ファージディスプレイによる組換え抗体ライブラリーのスクリーニングに対する代替法である、大型のコンビナトリアルライブラリーをスクリーニングするための、当技術分野において公知である、他の方法も、本発明の抗体の同定へと適用されうる。代替的発現系の１つの種類は、組換え抗体ライブラリーをＲＮＡ−タンパク質融合体として発現させた発現系であって、ＰＣＴ公開第９８／３１７００号（Ｓｚｏｓｔａｋ及びＲｏｂｅｒｔｓ）並びにＲｏｂｅｒｔｓ及びＳｚｏｓｔａｋ、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ、９４：１２２９７〜１２３０２（１９９７）において記載されている発現系である。３’末端において、ペプチジルアクセプター抗生剤であるピューロマイシンを保有する、合成ｍＲＮＡのインビトロ翻訳により、この系の、ｍＲＮＡと、ｍＲＮＡがコードする、ペプチド又はタンパク質との間において、共有結合的融合が創出される。したがって、特異的ｍＲＮＡは、抗体又はこの部分の、二重特異性抗原への結合のような、コードされたペプチド又はタンパク質、例えば、抗体又はこの部分の特性に基づき、ｍＲＮＡの複合体混合物（例えば、コンビナトリアルライブラリー）から濃縮されうる。このようなライブラリーのスクリーニングから回収された、抗体又はこの部分をコードする核酸配列は、上記において記載された（例えば、哺乳動物の宿主細胞内の）組換え手段により発現され、さらに、突然変異が、当初選択された配列へと導入された、ｍＲＮＡ−ペプチド融合体のスクリーニングのさらなるラウンドにより、又は上記において記載された、インビトロにおける、組換え抗体のアフィニティー成熟のための他の方法により、さらなるアフィニティー成熟にかけられうる。この方法論の好ましい例は、ＰＲＯｆｕｓｉｏｎディスプレイ技術である。
【０２７１】
別の手法において、抗体はまた、当技術分野において公知の酵母ディスプレイ法を使用しても作出されうる。酵母ディスプレイ法において、抗体ドメインを、酵母細胞壁へとテザリングし、それらを、酵母の表面上に提示するのに、遺伝子法が使用される。特に、このような酵母は、レパートリー又はコンビナトリアル抗体ライブラリー（例えば、ヒト又はマウスの）から発現させた抗原結合性ドメインを提示するのに用いられうる。抗体を作るのに使用されうる、酵母ディスプレイ法の例は、参照により本明細書に組み込まれた、米国特許第６，６９９，６５８号（Ｗｉｔｔｒｕｐら）において開示された酵母ディスプレイ法を含む。
【０２７２】
ｄ．組換えＵＣＨ−Ｌ１抗体の作製
抗体は、当技術分野において公知である、多数の技法のうちのいずれかにより作製されうる。例えば、重鎖及び軽鎖をコードする発現ベクターが標準的技法により宿主細胞へとトランスフェクトされた、宿主細胞からの発現である。「トランスフェクション」という用語の多様な形態は、外因性ＤＮＡの、原核宿主細胞又は真核宿主細胞への導入のために一般に使用されている、多種多様な技法、例えば、電気穿孔、リン酸カルシウム沈殿、ＤＥＡＥ−デキストラントランスフェクションなどを包含することが意図される。本発明の抗体を、原核宿主細胞又は真核宿主細胞において発現させることが可能であるが、そのような真核細胞（そして、特に、哺乳動物の細胞）は、原核細胞より、アセンブルし、適正にフォールディングさせられ、免疫学的に活性である抗体を分泌する可能性が高いため、抗体の、真核細胞内の発現が好ましく、哺乳動物宿主細胞内の発現が最も好ましい。
【０２７３】
本発明の組換え抗体を発現させるための、例示的な哺乳動物宿主細胞は、例えば、Ｋａｕｆｍａｎ及びＳｈａｒｐ、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．、１５９：６０１〜６２１（１９８２）において記載されているようにＤＨＦＲ選択用マーカーと共に使用されるチャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞（Ｕｒｌａｕｂ及びＣｈａｓｉｎ、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ、７７：４２１６〜４２２０（１９８０））において記載されている、ｄｈｆｒ−ＣＨＯ細胞を含む）、ＮＳ０骨髄腫細胞、ＣＯＳ細胞及びＳＰ２細胞を含む。抗体遺伝子をコードする組換え発現ベクターが、哺乳動物宿主細胞へと導入される場合、抗体は、宿主細胞内の抗体の発現又は、より好ましくは、宿主細胞が増殖される培養培地への抗体の分泌を可能とするのに十分な時間にわたり、宿主細胞を培養することにより作製される。抗体は、標準的なタンパク質精製法を使用して、培養培地から回収されうる。
【０２７４】
宿主細胞はまた、Ｆａｂ断片又はｓｃＦｖ分子のような、機能的抗体断片を作製するのにも使用されうる。上記の手順に対する変動は、実施されうることが理解される。例えば、宿主細胞に、本発明の抗体の軽鎖及び／又は重鎖の機能的断片をコードするＤＮＡをトランスフェクトすることが所望されうる。組換えＤＮＡ技術はまた、目的の抗原への結合に必要でない軽鎖及び重鎖の一方又は両方をコードするＤＮＡの一部又は全部を除去するのにも使用されうる。また、このような切断型ＤＮＡ分子から発現させた分子も、本発明の抗体に包含される。加えて、１つの重鎖及び１つの軽鎖が、本発明の抗体（すなわち、ヒトＵＣＨ−Ｌ１に結合する抗体）であり、他の重鎖及び軽鎖が、ヒトＵＣＨ−Ｌ１以外の抗原に特異的である、二官能性抗体も、本発明の抗体を、標準的な化学的架橋法を介して、第２の抗体へと架橋することにより作製されうる。二官能性抗体はまた、二官能性抗体をコードするように操作された核酸を発現させることによっても作製されうる。
【０２７５】
本発明の抗体又はこの抗原結合性部分を組換え発現させるための好ましい系において、抗体重鎖及び抗体軽鎖の両方をコードする組換え発現ベクターが、リン酸カルシウム媒介型トランスフェクションにより、ｄｈｆｒ−ＣＨＯ細胞へと導入される。組換え発現ベクター内において、高レベルの遺伝子の転写を駆動するように、抗体重鎖遺伝子及び抗体軽鎖遺伝子の各々が、ＣＭＶエンハンサー／ＡｄＭＬＰプロモーター調節エレメントへと作動的に連結される。組換え発現ベクターはまた、メトトレキサートによる選択／増幅を使用するベクターをトランスフェクトされたＣＨＯ細胞の選択を可能とするＤＨＦＲ遺伝子も保有する。抗体の重鎖及び軽鎖の発現を可能とし、無傷抗体が培養培地から回収されるように、選択された形質転換体の宿主細胞が培養される。組換え発現ベクターを調製し、宿主細胞にトランスフェクトし、形質転換体について選択し、宿主細胞を培養し、抗体を培養培地から回収するのに、標準的な分子生物学法が使用される。なお、さらに、本発明は、本発明の組換え抗体が合成されるまで、本発明の宿主細胞を、適切な培養培地中において培養することにより、本発明の組換え抗体を合成する方法を提供する。方法は、組換え抗体を、培養培地から単離するステップをさらに含みうる。
【０２７６】
（１）ヒト化抗体
ヒト化抗体は、目的の抗原に免疫特異的に結合し、ヒト抗体のアミノ酸配列を実質的に有するフレームワーク（ＦＲ）領域及び非ヒト抗体のアミノ酸配列を実質的に有する相補性決定領域（ＣＤＲ）を含む、抗体又はこの変異体、誘導体、類似体若しくは部分でありうる。ヒト化抗体は、所望の抗原に結合する非ヒト種抗体であって、非ヒト種に由来する、１つ以上の相補性決定領域（ＣＤＲ）及びヒト免疫グロブリン分子に由来するフレームワーク領域を有する非ヒト種抗体に由来しうる。
【０２７７】
本明細書において使用された、ＣＤＲの文脈における「実質的に」という用語は、非ヒト抗体ＣＤＲのアミノ酸配列と、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％又は少なくとも９９％同一なアミノ酸配列を有するＣＤＲを指す。ヒト化抗体は、少なくとも１つであるが、典型的に２つの可変ドメイン（Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、ＦａｂＣ、Ｆｖ）であって、ＣＤＲ領域の全て又は実質的に全てが、非ヒト免疫グロブリン（すなわち、ドナー抗体）のＣＤＲ領域に対応し、フレームワーク領域の全て又は実質的に全てが、ヒト免疫グロブリンコンセンサス配列のフレームワーク領域である可変ドメインの実質的に全てを含む。一態様に従い、ヒト化抗体はまた、免疫グロブリン定常領域（Ｆｃ）、典型的に、ヒト免疫グロブリンのＦｃ領域の少なくとも一部も含む。一部の実施形態において、ヒト化抗体は、軽鎖、及び重鎖の少なくとも可変ドメインの両方を含有する。抗体はまた、重鎖の、ＣＨ１領域、ヒンジ領域、ＣＨ２領域、ＣＨ３領域及びＣＨ４領域も含みうる。一部の実施形態において、ヒト化抗体は、ヒト化軽鎖だけを含有する。一部の実施形態において、ヒト化抗体は、ヒト化重鎖だけを含有する。具体的な実施形態において、ヒト化抗体は、軽鎖及び／又は重鎖のヒト化可変ドメインだけを含有する。
【０２７８】
ヒト化抗体は、ＩｇＭ、ＩｇＧ、ＩｇＤ、ＩｇＡ、及びＩｇＥを含む、免疫グロブリンの任意のクラス、並びに、限定なしに述べると、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、及びＩｇＧ４を含む、任意のアイソタイプから選択されうる。ヒト化抗体は、１つを超えるクラス又はアイソタイプに由来する配列を含むことが可能であり、特定の定常ドメインは、当技術分野において周知の技法を使用して、所望のエフェクター機能を最適化するように選択されうる。
【０２７９】
ヒト化抗体のフレームワーク領域及びＣＤＲは、親配列に正確に対応する必要がない、例えば、ドナー抗体ＣＤＲ又はコンセンサスフレームワークは、この部位におけるＣＤＲ残基又はフレームワーク残基が、ドナー抗体又はコンセンサスフレームワークに対応しないように、少なくとも１つのアミノ酸残基の置換、挿入及び／又は欠失により突然変異誘発されうる。しかし、一実施形態において、このような突然変異は、広範にわたる突然変異ではない。通例、ヒト化抗体残基のうちの、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％又は少なくとも９９％は、親のＦＲ配列及びＣＤＲ配列の残基に対応する。本明細書において使用された「コンセンサスフレームワーク」という用語は、コンセンサスの免疫グロブリン配列内のフレームワーク領域を指す。本明細書において使用された「コンセンサスの免疫グロブリン配列」という用語は、類縁の免疫グロブリン配列のファミリーにおいて、最も高頻度で発生するアミノ酸（又はヌクレオチド）から形成された配列（例えば、Ｗｉｎｎａｋｅｒ、「Ｆｒｏｍ  Ｇｅｎｅｓ  ｔｏ  Ｃｌｏｎｅｓ」（Ｖｅｒｌａｇｓｇｅｓｅｌｌｓｃｈａｆｔ、Ｗｅｉｎｈｅｉｍ、Ｇｅｒｍａｎｙ、１９８７）を参照されたい）を指す。免疫グロブリンのファミリーにおいて、コンセンサス配列内の各位置は、ファミリー内のこの位置において、最も高頻度で発生するアミノ酸により占有されている。２つのアミノ酸が、同等に高頻度で発生する場合、いずれもが、コンセンサス配列内に含まれうる。
【０２８０】
ヒト化抗体は、ヒトレシピエントにおける、これらの部分の治療適用の持続時間及び有効性を制限する、抗ヒト齧歯動物抗体に対する、望ましくない免疫応答を最小化するようにデザインされうる。ヒト化抗体は、非ヒトである供給源から、それへと導入された、１つ以上のアミノ酸残基を有しうる。これらの非ヒト残基は、典型的に、可変ドメインから採取される、「インポート」残基と称されることが多い。ヒト化は、超可変領域配列を、ヒト抗体の対応する配列で置換することにより実施されうる。したがって、このような「ヒト化」抗体は、実質的に無傷に満たないヒト可変ドメインが、非ヒト種に由来する、対応する配列により置換されたキメラ抗体である。例えば、その内容が、参照により本明細書に組み込まれた、米国特許第４，８１６，５６７号を参照されたい。ヒト化抗体は、一部の超可変領域残基と、おそらく、一部のＦＲ残基とが、齧歯動物抗体内の相似部位に由来する残基により置換されたヒト抗体でありうる。本発明の抗体のヒト化又は操作は、米国特許第５，７２３，３２３号；同第５，９７６，８６２号；同第５，８２４，５１４号；同第５，８１７，４８３号；同第５，８１４，４７６号；同第５，７６３，１９２号；同第５，７２３，３２３号；同第５，７６６，８８６号；同第５，７１４，３５２号；同第６，２０４，０２３号；同第６，１８０，３７０号；同第５，６９３，７６２号；同第５，５３０，１０１号；同第５，５８５，０８９号；同第５，２２５，５３９号及び同第４，８１６，５６７号において記載されている方法のようであるがこれらに限定されない、任意の公知の方法を使用して実施されうる。
【０２８１】
ヒト化抗体は、ＵＣＨ−Ｌ１に対する高アフィニティー及び他の好適な生物学的特性を保持しうる。ヒト化抗体は、親配列及びヒト化配列についての三次元モデルを使用して、親配列及び多様な概念的ヒト化産物を解析する工程により調製されうる。三次元免疫グロブリンモデルは、一般に利用可能である。選択された候補免疫グロブリン配列の、可能な三次元コンフォメーション構造を例示及び提示するコンピュータプログラムが利用可能である。これらの表示の検討は、残基の、候補免疫グロブリン配列の機能における鍵となる役割についての解析、すなわち、候補免疫グロブリンがその抗原に結合する能力に影響を及ぼす残基についての解析を可能とする。このようにして、ＵＣＨ−Ｌ１に対するアフィニティーの上昇のような、所望の抗体特徴が達成されるように、ＦＲ残基が、レシピエント及びインポート配列から選択され、組み合わされうる。一般に、超可変領域残基は、直接、かつ、最も実質的に、抗原結合への影響に関与しうる。
【０２８２】
ヒト化に対する代替法として、ヒト抗体（本明細書において、「完全ヒト抗体」ともまた言及された）が作出されうる。例えば、ＰＲＯｆｕｓｉｏｎ及び／又は酵母関連技術を介して、ヒト抗体を、ライブラリーから単離することが可能である。また、トランスジェニック動物（例えば、免疫化すると、内因性の免疫グロブリン産生の非存在下において、ヒト抗体の完全レパートリーを作製することが可能なマウス）を作製することも可能である。例えば、キメラマウス及び生殖細胞系列突然変異体マウスにおける、抗体重鎖接合領域（ＪＨ）遺伝子のホモ接合性の欠失は、内因性抗体産生の完全な阻害を結果としてもたらす。ヒト生殖細胞系列免疫グロブリン遺伝子アレイの、このような生殖細胞系列突然変異体マウスへの移入は、抗原投与時における、ヒト抗体の産生を結果としてもたらす。ヒト化抗体又は完全ヒト抗体は、それらの各々の内容が、参照により本明細書に組み込まれた、米国特許第５，７７０，４２９号；同第５，８３３，９８５号；同第５，８３７，２４３号；同第５，９２２，８４５号；同第６，０１７，５１７号；同第６，０９６，３１１号；同第６，１１１，１６６号；同第６，２７０，７６５号；同第６，３０３，７５５号；同第６，３６５，１１６号；同第６，４１０，６９０号；同第６，６８２，９２８号及び同第６，９８４，７２０号において記載されている方法に従い調製されうる。
【０２８３】
ｅ．抗ＵＣＨ−Ｌ１抗体
抗ＵＣＨ−Ｌ１抗体は、上記において記載された技法を使用して、並びに、当技術分野において公知である、規定の技法を使用して作出されうる。一部の実施形態において、抗ＵＣＨ−Ｌ１抗体は、Ｕｎｉｔｅｄ  Ｓｔａｔｅ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ（型番：０３１３２０）、Ｃｅｌｌ  Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ（型番：３５２４）、Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ（型番：ＨＰＡ００５９９３）、Ｓａｎｔａ  Ｃｒｕｚ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｉｎｃ．（型番：ｓｃ−５８５９３又はｓｃ−５８５９４）、Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ（型番：ＭＡＢ６００７）、Ｎｏｖｕｓ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌｓ（型番：ＮＢ６００−１１６０）、Ｂｉｏｒｂｙｔ（型番：ｏｒｂ３３７１５）、Ｅｎｚｏ  Ｌｉｆｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｉｎｃ．（型番：ＡＤＩ−９０５−５２０−１）、Ｂｉｏ−Ｒａｄ（型番：ＶＭＡ００００４）、ＢｉｏＶｉｓｉｏｎ（型番：６１３０−５０）、Ａｂｃａｍ（型番：ａｂ７５２７５又はａｂ１０４９３８）、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ（型番：４８００１２）、ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ（型番：ＭＡ１−４６０７９、ＭＡ５−１７２３５、ＭＡ１−９０００８  、又はＭＡ１−８３４２８）、ＥＭＤ  Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ（型番：ＭＡＢＮ４８）、又はＳｉｎｏ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｃ．（型番：５０６９０−Ｒ０１１）から市販されているＵＣＨ−Ｌ１抗体のような非コンジュゲートＵＣＨ−Ｌ１抗体でありうる。抗ＵＣＨ−Ｌ１抗体は、ＢｉｏＶｉｓｉｏｎ（型番：６９６０−２５）又はＡｖｉｖａ  Ｓｙｓｔｅｍｓ  Ｂｉｏｌｏｇｙ（型番：ＯＡＡＦ０１９０４−ＦＩＴＣ）から市販されている、コンジュゲートＵＣＨ−Ｌ１抗体のように、フルオロフォアへとコンジュゲートされうる。
【０２８４】
１１．方法の変化形
試料中に存在する目的の解析物（ＵＣＨ−Ｌ１）の存在又は量を決定する、開示された方法は、上記において記載された通りでありうる。方法はまた、解析物を解析するための他の方法を念頭に置いて、適合させられる場合もある。周知の変化形の例は、酵素による検出（酵素イムノアッセイ（ＥＩＡ）又は酵素免疫測定アッセイ（ＥＬＩＳＡ））を含む、サンドイッチイムノアッセイ（例えば、モノクローナル−ポリクローナルサンドイッチイムノアッセイ）、競合阻害イムノアッセイ（例えば、フォワード競合阻害イムノアッセイ及びリバース競合阻害イムノアッセイ）、酵素多重化イムノアッセイ法（ＥＭＩＴ）、競合結合アッセイのようなイムノアッセイ、生物発光エネルギー移動（ＢＲＥＴ）、ワンステップ抗体検出アッセイ、同種アッセイ、異種アッセイ、キャプチャーオンザフライアッセイなどを含むがこれらに限定されない。
【０２８５】
ａ．イムノアッセイ
目的の解析物及び／又はペプチド若しくはこれらの断片（例えば、ＵＣＨ−Ｌ１及び／又はペプチド若しくはこれらの断片、すなわち、ＵＣＨ−Ｌ１断片）は、ＵＣＨ−Ｌ１抗体を、イムノアッセイにおいて使用して解析されうる。解析物（例えば、ＵＣＨ−Ｌ１）の存在又は量は、抗体を使用し、解析物（例えば、ＵＣＨ−Ｌ１）への特異的結合を検出して決定されうる。例えば、抗体又はこの抗体断片は、解析物（例えば、ＵＣＨ−Ｌ１）に特異的に結合しうる。所望の場合、抗体のうちの１つ以上は、１つ以上の、市販のモノクローナル／ポリクローナル抗体と組み合わせて使用されうる。このような抗体は、Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ，Ｉｎｃ．（Ｍｉｎｎｅａｐｏｌｉｓ、ＭＮ）及びＥｎｚｏ  Ｌｉｆｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ，Ｉｎｃ．（Ｐｌｙｍｏｕｔｈ  Ｍｅｅｔｉｎｇ、ＰＡ）のような企業から市販されている。
【０２８６】
体内試料中に存在する、解析物（例えば、ＵＣＨ−Ｌ１）の存在又は量は、サンドイッチイムノアッセイ（例えば、放射性同位元素の検出（ラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ））及び酵素による検出（酵素イムノアッセイ（ＥＩＡ）又は酵素免疫測定アッセイ（ＥＬＩＳＡ）（例えば、Ｑｕａｎｔｉｋｉｎｅ  ＥＬＩＳＡ  Ａｓｓａｙ、Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ、Ｍｉｎｎｅａｐｏｌｉｓ、ＭＮ）を含む、モノクローナル−モノクローナルサンドイッチイムノアッセイ、モノクローナル−ポリクローナルサンドイッチイムノアッセイ）のようなイムノアッセイを使用して、たやすく決定されうる。使用されうるポイントオブケアデバイスの例は、ｉ−ＳＴＡＴ（登録商標）（Ａｂｂｏｔｔ、Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ、Ａｂｂｏｔｔ  Ｐａｒｋ、ＩＬ）である。使用されうる、他の方法は、化学発光マイクロ粒子イムノアッセイ、特に、例として述べると、ＡＲＣＨＩＴＥＣＴ（登録商標）自動式解析器（Ａｂｂｏｔｔ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ、Ａｂｂｏｔｔ  Ｐａｒｋ、ＩＬ）を利用する化学発光マイクロ粒子イムノアッセイを含む。他の方法は、例えば、質量分析及び解析物（例えば、ＵＣＨ−Ｌ１）に対する抗解析物（例えば、抗ＵＣＨ−Ｌ１）抗体（モノクローナル、ポリクローナル、キメラ、ヒト化、ヒトなど）又はこれらの抗体断片を使用する、免疫組織化学（例えば、組織生検に由来する切片を伴う）を含む。他の検出法は、例えば、それらの各々が、参照によりその全体において本明細書に組み込まれた、米国特許第６，１４３，５７６号；同第６，１１３，８５５号；同第６，０１９，９４４号；同第５，９８５，５７９号；同第５，９４７，１２４号；同第５，９３９，２７２号；同第５，９２２，６１５号；同第５，８８５，５２７号；同第５，８５１，７７６号；同第５，８２４，７９９号；同第５，６７９，５２６号；同第５，５２５，５２４号及び同第５，４８０，７９２号において記載されている検出法を含む。抗体の、解析物（例えば、ＵＣＨ−Ｌ１）への特異的免疫的結合は、抗体へと接合された、蛍光タグ又は発光タグ、金属及び放射性核種のような直接的標識を介して、又はアルカリホスファターゼ又は西洋ワサビペルオキシダーゼのような間接的標識を介して検出されうる。
【０２８７】
固定化された抗体又はこの断片の使用は、イムノアッセイへと組み込まれうる。抗体は、磁性粒子又はクロマトグラフィーマトリックス粒子、アッセイプレート（マイクロ滴定プレートのような）の表面、固体基質材料の小片などのような、様々な支持体へと固定化されうる。アッセイストリップは、固体支持体上のアレイ内の抗体又は複数の抗体をコーティングすることにより調製されうる。次いで、このストリップは、被験試料へと浸漬させられ、有色スポットのような、測定可能なシグナルを発生させるように、洗浄及び検出ステップを介して、速やかに処理されうる。
【０２８８】
同種フォーマットが使用されうる。例えば、被験試料が、対象から得られた後に、混合物が調製されうる。混合物は、解析物（例えば、ＵＣＨ−Ｌ１）について評価される被験試料、第１の特異的結合パートナー及び第２の特異的結合パートナーを含有する。混合物を形成するのに、被験試料、第１の特異的結合パートナー及び第２の特異的結合パートナーが添加される順序は、それほど重要ではない。被験試料は、第１の特異的結合パートナー及び第２の特異的結合パートナーと同時に接触される。一部の実施形態において、第１の特異的結合パートナーと、被験試料中に含有された、任意のＵＣＨ−Ｌ１とは、第１の特異的結合パートナー−解析物（例えば、ＵＣＨ−Ｌ１）抗原複合体を形成することが可能であり、第２の特異的結合パートナーは、第１の特異的結合パートナー−目的の解析物（例えば、ＵＣＨ−Ｌ１）−第２の特異的結合パートナー複合体を形成しうる。一部の実施形態において、第２の特異的結合パートナーと、被験試料中に含有された、任意のＵＣＨ−Ｌ１とは、第２の特異的結合パートナー−解析物（例えば、ＵＣＨ−Ｌ１）抗原複合体を形成することが可能であり、第１の特異的結合パートナーは、第１の特異的結合パートナー−目的の解析物（例えば、ＵＣＨ−Ｌ１）−第２の特異的結合パートナー複合体を形成しうる。第１の特異的結合パートナーは、抗解析物抗体（例えば、配列番号１の、少なくとも３連続アミノ酸を含むアミノ酸配列を有するエピトープに結合する抗ＵＣＨ−Ｌ１抗体）でありうる。第２の特異的結合パートナーは、抗解析物抗体（例えば、配列番号１の、少なくとも３連続アミノ酸を含むアミノ酸配列を有するエピトープに結合する抗ＵＣＨ−Ｌ１抗体）でありうる。さらに、第２の特異的結合パートナーは、上記において記載された、検出可能な標識により標識されるか、又はこれを含有する。
【０２８９】
異種フォーマットが使用されうる。例えば、被験試料が、対象から得られた後に、第１の混合物が調製されうる。混合物は、解析物（例えば、ＵＣＨ−Ｌ１）について評価される被験試料及び第１の特異的結合パートナーを含有し、この場合、第１の特異的結合パートナーと、被験試料中に含有された、任意のＵＣＨ−Ｌ１とは、第１の特異的結合パートナー−解析物（例えば、ＵＣＨ−Ｌ１）抗原複合体を形成する。第１の特異的結合パートナーは、抗解析物抗体（例えば、配列番号１の、少なくとも３連続アミノ酸を含むアミノ酸配列を有するエピトープに結合する抗ＵＣＨ−Ｌ１抗体）でありうる。混合物を形成するのに、被験試料及び第１の特異的結合パートナーが添加される順序は、それほど重要ではない。
【０２９０】
第１の特異的結合パートナーは、固相上に固定化されうる。イムノアッセイにおいて使用される固相（第１の特異的結合パートナー、及び、任意選択的に、第２の特異的結合パートナー）は、磁性粒子、ビーズ、試験管、マイクロ滴定プレート、キュベット、膜、足場形成分子、薄膜、濾紙、ディスク及びチップのようであるがこれらに限定されない、当技術分野において公知である、任意の固相でありうる。固相がビーズである実施形態において、ビーズは、磁気ビーズ又は磁性粒子でありうる。磁気ビーズ／磁性粒子は、強磁性、フェリ磁性、常磁性、超常磁性又は磁性流体でありうる。例示的な強磁性材料は、Ｆｅ、Ｃｏ、Ｎｉ、Ｇｄ、Ｄｙ、ＣｒＯ２、ＭｎＡｓ、ＭｎＢｉ、ＥｕＯ及びＮｉＯ／Ｆｅを含む。フェリ磁性材料の例は、ＮｉＦｅ２Ｏ４、ＣｏＦｅ２Ｏ４、Ｆｅ３Ｏ４（又はＦｅＯ．Ｆｅ２Ｏ３）を含む。ビーズは、磁性であり、１つ以上の非磁性層により取り囲まれた固体コア部分を有しうる。代替的に、磁性部分は、非磁性コアの周囲の層でありうる。第１の特異的結合メンバーが固定化される固体支持体は、乾燥形態又は液体で保管されうる。磁気ビーズは、第１の特異的結合メンバーが固定化される磁気ビーズを伴う試料と接触させる前に、又はこの後で、磁界下に置かれうる。
【０２９１】
第１の特異的結合パートナー−解析物（例えば、ＵＣＨ−Ｌ１）抗原複合体を含有する混合物が形成された後に、当技術分野において公知である、任意の技法を使用して、任意の結合されなかった解析物（例えば、ＵＣＨ−Ｌ１）が、複合体から除去される。例えば、結合されなかった解析物（例えば、ＵＣＨ−Ｌ１）は、洗浄することにより除去されうる。しかし、被験試料中に存在する、全ての解析物（例えば、ＵＣＨ−Ｌ１）が、第１の特異的結合パートナーにより結合させられるように、第１の特異的結合パートナーは、被験試料中に存在する、任意の解析物（例えば、ＵＣＨ−Ｌ１）に対する過剰量において存在することが所望される。
【０２９２】
任意の結合されなかった解析物（例えば、ＵＣＨ−Ｌ１）が除去された後に、第２の特異的結合パートナーが、混合物へと添加されて、第１の特異的結合パートナー−目的の解析物（例えば、ＵＣＨ−Ｌ１）−第２の特異的結合パートナー複合体を形成する。第２の特異的結合パートナーは、抗解析物抗体（例えば、配列番号１の、少なくとも３連続アミノ酸を含むアミノ酸配列を有するエピトープに結合する抗ＵＣＨ−Ｌ１抗体）でありうる。さらに、第２の特異的結合パートナーは、上記において記載された、検出可能な標識により標識されるか、又は検出可能な標識を含有する。
【０２９３】
固定化された抗体又はこの断片の使用は、イムノアッセイへと組み込まれうる。抗体は、磁性粒子又はクロマトグラフィーマトリックス粒子（磁気ビーズのような）、ラテックス粒子又は表面修飾ラテックス粒子、ポリマー又はポリマー薄膜、プラスチック又はプラスチック薄膜、平面状基質、アッセイプレート（マイクロ滴定プレートのような）の表面、固体基質材料の小片などのような、様々な支持体へと固定化されうる。アッセイストリップは、固体支持体上のアレイ内の抗体又は複数の抗体をコーティングすることにより調製されうる。次いで、このストリップは、被験試料へと浸漬させられ、有色スポットのような、測定可能なシグナルを発生させるように、洗浄及び検出ステップを介して、速やかに処理されうる。
【０２９４】
（１）サンドイッチイムノアッセイ
サンドイッチイムノアッセイは、抗体（すなわち、少なくとも１つの捕捉抗体）と、検出抗体（すなわち、少なくとも１つの検出抗体）とからなる、２つの層の間の抗原の量を測定する。捕捉抗体及び検出抗体は、抗原、例えば、ＵＣＨ−Ｌ１のような、目的の解析物上の、異なるエピトープに結合する。捕捉抗体の、エピトープへの結合は、検出抗体の、エピトープへの結合に干渉しないことが所望される。モノクローナル抗体又はポリクローナル抗体のいずれも、サンドイッチイムノアッセイにおける、捕捉抗体及び検出抗体として使用されうる。
【０２９５】
一般に、少なくとも２つの抗体が、被験試料中の解析物（例えば、ＵＣＨ−Ｌ１）を分離及び定量するのに利用される。より具体的に、少なくとも２つの抗体は、解析物（例えば、ＵＣＨ−Ｌ１）の、ある特定のエピトープに結合し、「サンドイッチ」と称される免疫複合体を形成する。１つ以上の抗体が、被験試料中の解析物（例えば、ＵＣＨ−Ｌ１）を捕捉する（これらの抗体は、しばしば、「捕捉」抗体（ａｎｔｉｂｏｄｙ）又は「捕捉」抗体（ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ）と称する）のに使用される場合があり、１つ以上の抗体が、検出可能な（すなわち、定量可能な）標識を、サンドイッチに結合させるのに使用される（これらの抗体は、しばしば、「検出」抗体（ａｎｔｉｂｏｄｙ）又は「検出」抗体（ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ）と称する）。サンドイッチアッセイにおいて、抗体の、そのエピトープへの結合は、アッセイ中の他の任意の抗体の、そのそれぞれのエピトープへの結合により減弱されない。抗体は、解析物（例えば、ＵＣＨ−Ｌ１）を含有することが推測される被験試料と接触された、１つ以上の第１の抗体が、第２の抗体又は後続の抗体により認識されるエピトープの全部又は一部に結合せず、これにより、１つ以上の第２の検出抗体が、解析物（例えば、ＵＣＨ−Ｌ１）に結合する能力に干渉しないように選択される。
【０２９６】
抗体は、前記イムノアッセイ中の、第１の抗体として使用されうる。抗体は、解析物（例えば、ＵＣＨ−Ｌ１）上のエピトープに免疫特異的に結合する。本発明の抗体に加えて、前記イムノアッセイは、第１の抗体により認識されない、又は結合されないエピトープに免疫特異的に結合する、第２の抗体を含みうる。
【０２９７】
解析物（例えば、ＵＣＨ−Ｌ１）を含有することが推測される被験試料は、少なくとも１つの、第１の捕捉抗体（又は抗体）及び少なくとも１つの、第２の検出抗体と同時に、又は逐次的に接触されうる。サンドイッチアッセイフォーマットにおいて、被験試料を含有することが推測される解析物（例えば、ＵＣＨ−Ｌ１）はまず、第１の抗体−解析物（例えば、ＵＣＨ−Ｌ１）抗原複合体の形成を可能とする条件下で、特定のエピトープに特異的に結合する、少なくとも１つの、第１の捕捉抗体と接触される。１つを超える捕捉抗体が使用される場合、第１の複数の捕捉抗体−ＵＣＨ−Ｌ１抗原複合体が形成される。サンドイッチアッセイにおいて、抗体、好ましくは、少なくとも１つの捕捉抗体は、被験試料に予測される解析物（例えば、ＵＣＨ−Ｌ１）の最大量に対するモル過剰量において使用される。例えば、マイクロ粒子コーティング緩衝液１ｍｌ当たり約５μｇ／ｍｌ〜約１ｍｇ／ｍｌの抗体が使用されうる。
【０２９８】
ｉ．抗ＵＣＨ−Ｌ１捕捉抗体
任意選択的に、被験試料を、少なくとも１つの、第１の捕捉抗体と接触させる前に、少なくとも１つの、第１の捕捉抗体は、第１の抗体−解析物（例えば、ＵＣＨ−Ｌ１）複合体の、被験試料からの分離を容易とする固体支持体に結合されうる。当技術分野において公知である、任意の固体支持体であって、ウェル、チューブ又はビーズ（マイクロ粒子のような）の形態のポリマー材料から作られた固体支持体を含むがこれらに限定されない固体支持体が使用されうる。抗体（ａｎｔｉｂｏｄｙ（又はａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ））は、そのような結合が、解析物（例えば、ＵＣＨ−Ｌ１）に結合する抗体の能力に干渉しないという条件において、吸着により、化学的カップリング剤を使用する共有結合により、又は当技術分野において公知である他の手段により、固体支持体に結合されうる。さらに、必要な場合、固体支持体は、抗体上の多様な官能基との反応性を可能とするように、誘導体化されうる。このような誘導体化は、無水マレイン酸、Ｎ−ヒドロキシスクシンイミド及び１−エチル−３−（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミドのようであるがこれらに限定されない、ある特定のカップリング剤の使用を必要とする。
【０２９９】
その後、解析物（例えば、ＵＣＨ−Ｌ１）を含有することが推測される被験試料は、第１の捕捉抗体（又は複数の抗体）−解析物（例えば、ＵＣＨ−Ｌ１）複合体の形成を可能とするためにインキュベートされる。インキュベーションは、約４．５〜約１０．０のｐＨ、約２℃〜約４５℃の温度において、少なくとも約１分間〜約１８時間、約２〜６分間、約７〜１２分間、約５〜１５分間又は約３〜４分間の時間にわたり実行されうる。
【０３００】
ｉｉ．検出抗体
次いで、第１の／複数の捕捉抗体−解析物（例えば、ＵＣＨ−Ｌ１）複合体の形成後、複合体は、少なくとも１つの、第２の検出抗体（第１の／複数の抗体−解析物（例えば、ＵＣＨ−Ｌ１）抗原−第２の抗体複合体の形成を可能とする条件下において）と接触される。一部の実施形態において、被験試料は、捕捉抗体と同時に、検出抗体と接触される。第１の抗体−解析物（例えば、ＵＣＨ−Ｌ１）複合体が、１つを超える検出抗体と接触される場合、第１の／複数の捕捉抗体−解析物（例えば、ＵＣＨ−Ｌ１）−複数の抗体検出複合体が形成される。少なくとも第２の（及び後続の）抗体が、第１の抗体−解析物（例えば、ＵＣＨ−Ｌ１）複合体と接触される場合、第１の抗体と同様に、上記において記載された条件と同様の条件下におけるインキュベーション時間が、第１の／複数の抗体−解析物（例えば、ＵＣＨ−Ｌ１）−第２の／複数の抗体複合体の形成に要求される。好ましくは、少なくとも１つの、第２の抗体は、検出可能な標識を含有する。検出可能な標識は、第１の／複数の抗体−解析物（例えば、ＵＣＨ−Ｌ１）−第２の／複数の抗体複合体の形成の前に、これと同時に、又はこの後に、少なくとも１つの、第２の抗体に結合されうる。当技術分野において公知である、任意の検出可能な標識が使用されうる。
【０３０１】
化学発光アッセイは、Ａｄａｍｃｚｙｋら、Ａｎａｌ．Ｃｈｉｍ．Ａｃｔａ、５７９（１）：６１〜６７（２００６）において記載されている方法に従い実施されうる。任意の適切なアッセイフォーマットが使用されうるが、マイクロプレート用化学発光測定器（Ｍｉｔｈｒａｓ  ＬＢ−９４０、Ｂｅｒｔｈｏｌｄ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ  Ｕ．Ｓ．Ａ．，ＬＬＣ、Ｏａｋ  Ｒｉｄｇｅ、ＴＮ）は、小容量の複数の試料についてのアッセイを、迅速に可能とする。化学発光測定器は、９６ウェル黒色ポリスチレン製マイクロプレート（Ｃｏｓｔａｒ、型番：３７９２）を使用する、複数の試薬注入器を装備されうる。各試料が、個別のウェルへと添加されうるのに続き、利用されたアッセイの種類により決定される通り、他の試薬の同時的／逐次的な添加がなされうる。酸性化によるように、アクリジニウムアリールエステルを利用する、中性溶液中又は塩基性溶液中の擬塩基の形成は回避されることが所望される。次いで、化学発光応答が、ウェルごとに記録される。この点で、化学発光応答を記録するための時間は、部分的に、利用された試薬の添加と、特定のアクリジニウムの添加との間の遅延に依存する。
【０３０２】
化学発光アッセイのための混合物を形成するのに、被験試料及び特異的結合パートナーが添加される順序は、それほど重要ではない。第１の特異的結合パートナーが、アクリジニウム化合物により、検出可能に標識される場合、検出可能に標識された第１の特異的結合パートナー−ＵＣＨ−Ｌ１抗原複合体が形成される。代替的に、第２の特異的結合パートナーが使用され、第２の特異的結合パートナーが、アクリジニウム化合物により、検出可能に標識される場合、検出可能に標識された第１の特異的結合パートナー−解析物（例えば、ＵＣＨ−Ｌ１）−第２の特異的結合パートナー複合体が形成される。標識されたものであれ、標識されていないものであれ、結合されなかった、任意の特異的結合パートナーは、洗浄のような、当技術分野において公知である、任意の技法を使用して、混合物から除去されうる。
【０３０３】
過酸化水素は、混合物中、インサイチューにおいて発生されうる、又は上記において記載されたアクリジニウム化合物の添加の前に、これと同時に、又はこの後に、混合物へと施されうる、若しくは供給されうる。過酸化水素は、当業者に明らかであるような、多数の方式により、インサイチューにおいて発生されうる。
【０３０４】
代替的に、過酸化水素の供給源は、混合物へと、単純に添加されうる。例えば、過酸化水素の供給源は、過酸化水素を含有することが公知である、１つ以上の緩衝液又は他の溶液でありうる。この点で、過酸化水素の溶液が、単純に添加されうる。
【０３０５】
少なくとも１つの塩基性溶液を、試料へと、同時的に、又はその後において添加したら、検出可能なシグナル、すなわち、ＵＣＨ−Ｌ１の存在を示す化学発光シグナルが発生する。塩基性溶液は、少なくとも１つの塩基を含有し、１０以上、好ましくは、１２以上のｐＨを有する。塩基性溶液の例は、水酸化ナトリウム、水酸化カリウム、水酸化カルシウム、水酸化アンモニウム、水酸化マグネシウム、ナトリウム炭酸、炭酸水素ナトリウム、水酸化カルシウム、炭酸カルシウム及び重炭酸カルシウムを含むがこれらに限定されない。試料へと添加される塩基性溶液の量は、塩基性溶液の濃度に依存する。使用された塩基性溶液の濃度に基づき、当業者は、試料へと添加される塩基性溶液の量を容易に決定しうる。化学発光標識以外の他の標識も利用されうる。例えば、酵素標識（アルカリホスファターゼを含むがこれに限定されない）が利用されうる。
【０３０６】
発生した化学発光シグナル又は他のシグナルは、当業者に公知の規定の技法を使用して検出されうる。発生したシグナルの強度に基づき、目的の解析物（例えば、ＵＣＨ−Ｌ１）の、試料中の量が定量されうる。具体的に、目的の解析物（例えば、ＵＣＨ−Ｌ１）の、試料中の量は、発生したシグナルの強度に比例する。存在する解析物（例えば、ＵＣＨ−Ｌ１）の量は、発生した光の量を、解析物（例えば、ＵＣＨ−Ｌ１）についての検量線と比較することにより、又は参照標準物質との比較により定量されうる。検量線は、解析物（例えば、ＵＣＨ−Ｌ１）の公知の濃度の系列希釈液又は溶液を使用して、質量分析、重量測定法及び当技術分野において公知の他の技法により作成されうる。
【０３０７】
（２）フォワード競合阻害アッセイ
フォワード競合フォーマットにおいて、公知の濃度の、標識された目的の解析物（例えば、蛍光標識、切断可能なリンカーと接合されたタグなどを有する解析物（例えば、ＵＣＨ−Ｌ１））のアリコートが、被験試料中の目的の解析物（例えば、ＵＣＨ−Ｌ１）と、目的の解析物抗体（例えば、ＵＣＨ−Ｌ１抗体）への結合について競合するように使用される。
【０３０８】
フォワード競合アッセイにおいて、固定化された特異的結合パートナー（抗体のような）は、被験試料及び標識された目的の解析物、目的の解析物の断片又は目的の解析物の変異体と、逐次的に、又は同時に接触されうる。目的の解析物ペプチド、目的の解析物の断片又は目的の解析物の変異体は、切断可能なリンカーと接合されたタグから構成された、検出可能な標識を含む、任意の検出可能な標識により標識されうる。このアッセイにおいて、抗体は、固体支持体へと固定化されうる。代替的に、抗体は、マイクロ粒子又は平面状基質のような固体支持体上に固定化された、抗分子種抗体のような抗体へとカップリングされうる。
【０３０９】
標識された目的の解析物、被験試料及び抗体は、サンドイッチアッセイフォーマットとの関連において、上記で記載された条件と同様の条件下においてインキュベートされる。次いで、抗体−目的の解析物複合体の、２つの異なる分子種が作出されうる。具体的に述べると、作出された抗体−目的の解析物複合体のうちの１つが、検出可能な標識（例えば、蛍光標識など）を含有するのに対し、他の抗体−目的の解析物複合体は、検出可能な標識を含有しない。抗体−目的の解析物複合体は、検出可能な標識の定量の前に、残りの被験試料から分離されうるが、そうされなくともよい。次いで、抗体−目的の解析物複合体が、残りの被験試料から分離されるのかどうかに関わらず、抗体−目的の解析物複合体内において検出可能な標識の量が定量される。次いで、目的の解析物（膜に会合した目的の解析物、可溶性の目的の解析物、可溶性の目的の解析物の断片、目的の解析物（膜に会合した目的の解析物又は可溶性の目的の解析物）の変異体又はこれらの任意の組合せのような）の、被験試料中濃度が、例えば、上記で記載された通りに決定されうる。
【０３１０】
（３）リバース競合阻害アッセイ
リバース競合アッセイにおいて、固定化された目的の解析物（例えば、ＵＣＨ−Ｌ１）は、被験試料及び少なくとも１つの標識された抗体と、逐次的に、又は同時に接触されうる。
【０３１１】
目的の解析物は、上記においてサンドイッチアッセイフォーマットとの関連において論じられた固体支持体のような固体支持体に結合される。
【０３１２】
固定化された目的の解析物、被験試料及び少なくとも１つの標識された抗体は、サンドイッチアッセイフォーマットとの関連において、上記において記載された条件と同様の条件下においてインキュベートされる。次いで、目的の解析物−抗体複合体の２つの異なる分子種が作出されうる。具体的に述べると、作出された目的の解析物−抗体複合体のうちの１つが、固定化され、検出可能な標識（例えば、蛍光標識など）を含有するのに対し、他の目的の解析物−抗体複合体は、固定化されず、検出可能な標識を含有しない。固定化されなかった目的の解析物−抗体複合体及び残りの被験試料は、洗浄のような、当技術分野において公知の技法を介して、固定化された目的の解析物−抗体複合体の存在から除去される。次いで、固定化されなかった目的の解析物−抗体複合体が除去されたら、タグの切断後に、固定化された、目的の解析物−抗体複合体内の、検出可能な標識の量が定量される。次いで、目的の解析物の、被験試料中濃度が、上記で記載された通り、検出可能な標識の数量を比較することにより決定されうる。
【０３１３】
（４）ワンステップイムノアッセイ又は「キャプチャーオンザフライ」アッセイ
キャプチャーオンザフライアッセイにおいて、固体基質は、固定化剤によりあらかじめコーティングされている。捕捉剤、解析物（例えば、ＵＣＨ−Ｌ１）及び検出剤が、固体基質へと併せて添加されるのに続き、検出の前に、洗浄ステップがなされる。捕捉剤は、解析物（例えば、ＵＣＨ−Ｌ１）に結合することが可能であり、固定化剤のためのリガンドを含む。捕捉剤及び検出剤は、本明細書において記載された、又は当技術分野で公知である、捕捉又は検出が可能な、抗体又は他の任意の部分でありうる。リガンドは、ペプチドタグを含むことが可能であり、固定化剤は、抗ペプチドタグ抗体を含みうる。代替的に、リガンド及び固定化剤は、キャプチャーオンザフライアッセイのために利用されるように、併せて結合することが可能な薬剤の任意の対（例えば、特異的結合対及び当技術分野で公知であるような他の対）でありうる。１つを超える解析物が測定されうる。一部の実施形態において、固体基質は、抗原によりコーティングされる場合があり、解析される解析物は、抗体である。
【０３１４】
ワンステップイムノアッセイ又は「キャプチャーオンザフライ」における、ある特定の、他の実施形態において、固定化剤（ビオチン、ストレプトアビジンなどのような）によりあらかじめコーティングされた固体支持体（マイクロ粒子のような）並びに少なくとも第１の特異的結合メンバー及び第２の特異的結合メンバー（それぞれ、捕捉試薬及び検出試薬として機能する）が使用される。第１の特異的結合メンバーは、固定化剤のためのリガンド（例えば、固体支持体上の固定化剤が、ストレプトアビジンである場合、第１の特異的結合メンバー上のリガンドは、ビオチンでありうる）を含み、また、目的の解析物（例えば、ＵＣＨ−Ｌ１）にも結合する。第２の特異的結合メンバーは、検出可能な標識を含み、目的の解析物（例えば、ＵＣＨ−Ｌ１）に結合する。固体支持体並びに第１の特異的結合メンバー及び第２の特異的結合メンバーは、被験試料へと（逐次的に、又は同時に）添加されうる。第１の特異的結合メンバー上のリガンドは、固体支持体上の固定化剤に結合して、固体支持体／第１の特異的結合メンバー複合体を形成する。試料中に存在する、任意の目的の解析物は、固体支持体／第１の特異的結合メンバー複合体に結合して、固体支持体／第１の特異的結合メンバー／解析物複合体を形成する。第２の特異的結合メンバーは、固体支持体／第１の特異的結合メンバー／解析物複合体に結合し、検出可能な標識が検出される。検出の前に、任意選択の洗浄ステップが利用されうる。ワンステップアッセイにおける、ある特定の実施形態において、１つを超える解析物が測定されうる。ある特定の、他の実施形態において、２つを超える特異的結合メンバーが利用されうる。ある特定の、他の実施形態において、複数の検出可能な標識が添加されうる。ある特定の、他の実施形態において、複数の、目的の解析物が検出されうる、又はこれらの量、レベル若しくは濃度が、測定、決定若しくは評価されうる。
【０３１５】
キャプチャーオンザフライアッセイの使用は、本明細書において記載され、当技術分野において公知である、様々なフォーマットにおいてなされうる。例えば、フォーマットは、上記において記載されたようなサンドイッチアッセイでありうるが、代替的に、競合アッセイであることも可能であり、単一特異性の結合メンバーを利用しうる、又は公知であるような、他の変化形も使用しうる。
【０３１６】
１２．他の因子
上記において記載された、診断法、予後診断法及び／又は評価法は、診断、予後診断及び評価のための他の因子の使用をさらに含みうる。一部の実施形態において、外傷性脳損傷は、ＧＣＳ（Ｇｌａｓｇｏｗ  Ｃｏｍａ  Ｓｃａｌｅ）又はＧＯＳＥ（Ｅｘｔｅｎｄｅｄ  Ｇｌａｓｇｏｗ  Ｏｕｔｃｏｍｅ  Ｓｃａｌｅ）を使用して診断されうる。他の検査、スケール又は指標もまた、単独で、又はＧＣＳ（Ｇｌａｓｇｏｗ  Ｃｏｍａ  Ｓｃａｌｅ）と組み合わせて使用されうる。例は、ＲＬＡＳ（Ｒａｎｃｈｏｓ  Ｌｏｓ  Ａｍｉｇｏｓ  Ｓｃａｌｅ）である。ＲＬＡＳ（Ｒａｎｃｈｏｓ  Ｌｏｓ  Ａｍｉｇｏｓ  Ｓｃａｌｅ）は、意識、認知、行動及び環境との相互作用のレベルを測定する。ＲＬＡＳ（Ｒａｎｃｈｏｓ  Ｌｏｓ  Ａｍｉｇｏｓ  Ｓｃａｌｅ）は、レベルＩ：応答なし；レベルＩＩ：一般的な応答；レベルＩＩＩ：局所的応答；レベルＩＶ：混乱（興奮）；レベルＶ：混乱（不適切）；レベルＶＩ：混乱（適切）；レベルＶＩＩ：自動的（適切）及びレベルＶＩＩＩ：意図的（適切）を含む。
【０３１７】
１３．試料
一部の実施形態において、試料は、ヒト対象が、物理的振盪、閉鎖性頭部外傷若しくは開放性頭部外傷を結果としてもたらす外部の機械的力若しくは他の力、１回以上の転倒、爆発又は爆破による鈍的衝撃により引き起こされた頭部損傷、又は他の種類の鈍的外傷を負った後に、得られる。一部の実施形態において、ヒト対象が、化学物質、毒素又は化学物質と毒素との組合せを摂取した、又はこれらへと曝露された後において、試料が得られる。このような化学物質及び／又は毒素の例は、火、カビ、アスベスト、害虫駆除剤、殺虫剤、有機溶剤、塗料、糊、ガス（一酸化炭素、硫化水素及びシアン化物のような）、有機金属（メチル水銀、テトラエチル鉛及び有機スズのような）及び／又は１つ以上の乱用薬物を含む。一部の実施形態において、試料は、自己免疫疾患、代謝性障害、脳腫瘍、低酸素症、１つ以上のウイルス、髄膜炎、水頭症又はこれらの組合せを患うヒト対象から得られる。
【０３１８】
さらに別の実施形態において、本明細書において記載された方法は、また、下記において記載される抗ＵＣＨ−Ｌ１抗体又はこれらの抗体断片を使用して、対象におけるＵＣＨ−Ｌ１のレベルを決定することにより、対象が、軽度外傷性脳損傷を有する、又はこれを発症する危険性があるのかどうかを決定するのにも使用されうる試料を使用する。したがって、特定の実施形態において、本開示はまた、本明細書において論じられ、当技術分野において公知である、外傷性脳損傷を有する、又はこの危険性がある対象が、治療又は処置の候補であるのかどうかを決定するための方法も提示する。一般に、対象は、少なくとも（ｉ）頭部への損傷を受けた対象；（ｉｉ）１つ以上の化学物質及び／若しくは毒素を摂取した、及び／若しくはこれらへと曝露された対象；（ｉｉｉ）自己免疫疾患、代謝性障害、脳腫瘍、低酸素症、１つ以上のウイルス、髄膜炎、水頭症を患う、若しくはこれらの任意の組合せを患う対象又は（ｉｖ）（ｉ）〜（ｉｉｉ）の任意の組合せ若しくはＴＢＩを有する、又はＴＢＩの危険性があると診断された対象（例えば、自己免疫疾患、代謝性障害、脳腫瘍、低酸素症、１つ以上のウイルス、髄膜炎、水頭症若しくはこれらの組合せを患う対象のような）及び／又は本明細書において記載された、望ましくない（すなわち、臨床的に所望されない）濃度又は量のＵＣＨ−Ｌ１又はＵＣＨ−Ｌ１断片を顕示した対象である。
【０３１９】
ａ．被験試料又は生物学的試料
本明細書において使用された「試料」、「被験試料」、「生物学的試料」とは、ＵＣＨ−Ｌ１を含有する、又はこれを含有することが推測される体液試料を指す。試料は、任意の適切な供給源に由来しうる。場合によって、試料は、液体、流動性の粒子状固体又は固体粒子の懸濁流体を含みうる。場合によって、試料は、本明細書において記載された解析の前に処理されうる。例えば、試料は、解析の前に、その供給源から、分離又は精製されうるが、ある特定の実施形態において、ＵＣＨ−Ｌ１を含有する非処理試料が、直接的にアッセイされうる。特定の例において、ＵＣＨ−Ｌ１の供給源は、ヒト体内物質（例えば、体液、全血、血清、血漿のような血液、尿、唾液、汗、痰、精液、粘液、涙液、リンパ液、羊水、間質液、肺洗浄液、脳脊髄液、糞便、組織、臓器など）である。組織は、骨格筋組織、肝臓組織、肺組織、腎臓組織、心筋組織、脳組織、骨髄、子宮頸部組織、皮膚などを含みうるがこれらに限定されない。試料は、液体試料又は固体試料の液体抽出物でありうる。ある特定の場合、試料の供給源は、組織の分解／細胞の溶解により可溶化されうる、臓器又は生検試料のような組織でありうる。
【０３２０】
広範にわたる容量の体液試料が解析されうる。少数の例示的な実施形態において、試料容量は、約０．５ｎＬ、約１ｎＬ、約３ｎＬ、約０．０１μＬ、約０．１μＬ、約１μＬ、約５μＬ、約１０μＬ、約１００μＬ、約１ｍＬ、約５ｍＬ、約１０ｍＬなどでありうる。場合によって、体液試料の容量は、約０．０１μＬ〜約１０ｍＬの間、約０．０１μＬ〜約１ｍＬの間、約０．０１μＬ〜約１００μＬの間又は約０．１μＬ〜約１０μＬの間である。
【０３２１】
場合によって、体液試料は、アッセイにおける使用の前に希釈されうる。例えば、ＵＣＨ−Ｌ１の供給源が、ヒト体液（例えば、血液、血清）である実施形態において、体液は、適切な溶媒（例えば、ＰＢＳ緩衝液のような緩衝液）により希釈されうる。体液試料は、使用の前に、約１倍、約２倍、約３倍、約４倍、約５倍、約６倍、約１０倍、約１００倍以上希釈されうる。他の場合に、体液試料は、アッセイにおける使用の前に希釈されない。
【０３２２】
場合によって、試料は、解析前処理を経る場合がある。解析前処理は、非特異的タンパク質の除去及び／又は効果的であるが廉価で実施可能な混合機能性のような、さらなる機能性をもたらしうる。解析前処理の一般的方法は、動電トラッピング、ＡＣ動電現象、表面音響波、等速電気泳動、誘電泳動、電気泳動又は当技術分野において公知である、他の前濃縮法の使用を含みうる。場合によって、体液試料は、アッセイにおける使用の前に濃縮されうる。例えば、ＵＣＨ−Ｌ１の供給源が、ヒト体液（例えば、血液、血清）である実施形態において、体液は、沈殿、蒸発、濾過、遠心分離又はこれらの組合せにより濃縮されうる。体液試料は、使用の前に、約１倍、約２倍、約３倍、約４倍、約５倍、約６倍、約１０倍、約１００倍以上濃縮されうる。
【０３２３】
ｂ．対照
対照試料を含むことが所望でありうる。対照試料は、上記において記載された通り、対象に由来する試料と共時的に解析されうる。対象試料から得られた結果は、対照試料から得られた結果と比較されうる。試料についてのアッセイ結果が比較されうる、検量線が用意されうる。このような検量線は、マーカーのレベルを、アッセイ単位、すなわち、蛍光標識が使用される場合なら、蛍光のシグナル強度の関数として提示する。複数のドナーから採取された試料を使用して、正常健常組織におけるＵＣＨ−Ｌ１の基準レベル並びに上記において明示された特徴のうちの１つ以上を有しうるドナーから採取された組織内の、「危険性がある」ＵＣＨ−Ｌ１のレベルについての検量線が用意されうる。
【０３２４】
したがって、上記を念頭に置いて、ＵＣＨ−Ｌ１の、被験試料中の存在、量又は濃度を決定するための方法が提供される。方法は、例えば、ＵＣＨ−Ｌ１上のエピトープに結合する、少なくとも１つの捕捉抗体及び捕捉抗体に対するエピトープと異なる、ＵＣＨ−Ｌ１上のエピトープに結合する、少なくとも１つの検出抗体を利用するイムノアッセイにより、被験試料を、ＵＣＨ−Ｌ１についてアッセイするステップを含み、任意選択的に、検出可能な標識を含み、ＵＣＨ−Ｌ１の、被験試料中の存在、量又は濃度についての、直接的指標又は間接的指標として、検出可能な標識により発生したシグナルを、ＵＣＨ−Ｌ１の、較正物質中の存在、量又は濃度についての、直接的指標又は間接的指標として発生されたシグナルと比較するステップを含む。較正物質は、任意選択的に、較正物質の各々が、系列内の他の較正物質とＵＣＨ−Ｌ１の濃度が異なる、較正物質の系列の一部であり、これが好ましい。
【０３２５】
１４．キット
本明細書において、被験試料を、ＵＣＨ−Ｌ１又はＵＣＨ−Ｌ１断片についてアッセイ又は評価するために使用されうるキットが提示される。キットは、被験試料を、ＵＣＨ−Ｌ１についてアッセイするための、少なくとも１つの構成要素、被験試料を、ＵＣＨ−Ｌ１についてアッセイするための指示書を含む。例えば、キットは、被験試料を、ＵＣＨ−Ｌ１について、イムノアッセイ、例えば、化学発光マイクロ粒子イムノアッセイによりアッセイするための指示書を含みうる。キット内に含まれる指示書は、パッケージング材料に貼付されうる、又はパッケージの添付文書として含まれうる。指示書は、典型的に、文書又は印刷物でありうるが、このようなものに限定されない。このような指示書を保存し、これらを末端使用者へと通信することが可能な、任意のメディアが、本開示により想定される。このようなメディアは、電子保存メディア（例えば、磁気ディスク、テープ、カートリッジ、チップ）、光学メディア（例えば、ＣＤ  ＲＯＭ）などを含むがこれらに限定されない。本明細書において使用された「指示書」は、指示書を提供するインターネットサイトのアドレスを含みうる。
【０３２６】
少なくとも１つの構成要素は、ＵＣＨ−Ｌ１に特異的に結合する、１つ以上の単離抗体又はこれらの抗体断片を含む、少なくとも１つの組成物を含みうる。抗体は、ＵＣＨ−Ｌ１捕捉抗体及び／又はＵＣＨ−Ｌ１検出抗体でありうる。
【０３２７】
代替的に、又は、加えて、キットは、較正物質若しくは対照、例えば、精製され、任意選択的に、凍結乾燥させられたＵＣＨ−Ｌ１及び／又はアッセイを行うための、少なくとも１つの容器（例えば、抗ＵＣＨ−Ｌ１モノクローナル抗体により、あらかじめコーティングされうる、チューブ、マイクロ滴定プレート又はストリップ）及び／又はそれらのうちの一方が濃縮溶液、検出可能な標識（例えば、酵素標識）のための基質溶液若しくは停止溶液として提供されうる、アッセイ緩衝液若しくは洗浄緩衝液のような緩衝液を含みうる。好ましくは、キットは、アッセイを実施するのに必要な、全ての構成要素、すなわち、試薬、標準物質、緩衝液、希釈剤などを含む。指示書はまた、検量線を作成するための指示書も含みうる。
【０３２８】
キットは、ＵＣＨ−Ｌ１を定量するための参照標準物質をさらに含みうる。参照標準物質は、ＵＣＨ−Ｌ１濃度を内挿及び／又は外挿するための検量線を確立するのに利用されうる。参照標準物質は、高度のＵＣＨ−Ｌ１濃度レベル、例えば、約１０００００ｐｇ／ｍＬ、約１２５０００ｐｇ／ｍＬ、約１５００００ｐｇ／ｍＬ、約１７５０００ｐｇ／ｍＬ、約２０００００ｐｇ／ｍＬ、約２２５０００ｐｇ／ｍＬ、約２５００００ｐｇ／ｍＬ、約２７５０００ｐｇ／ｍＬ若しくは約３０００００ｐｇ／ｍＬ；中程度のＵＣＨ−Ｌ１濃度レベル、例えば、約２５０００ｐｇ／ｍＬ、約４００００ｐｇ／ｍＬ、約４５０００ｐｇ／ｍＬ、約５００００ｐｇ／ｍＬ、約５５０００ｐｇ／ｍＬ、約６００００ｐｇ／ｍＬ、約７５０００ｐｇ／ｍＬ若しくは約１０００００ｐｇ／ｍＬ及び／又は低度のＵＣＨ−Ｌ１濃度レベル、例えば、約１ｐｇ／ｍＬ、約５ｐｇ／ｍＬ、約１０ｐｇ／ｍＬ、約１２．５ｐｇ／ｍＬ、約１５ｐｇ／ｍＬ、約２０ｐｇ／ｍＬ、約２５ｐｇ／ｍＬ、約３０ｐｇ／ｍＬ、約３５ｐｇ／ｍＬ、約４０ｐｇ／ｍＬ、約４５ｐｇ／ｍＬ、約５０ｐｇ／ｍＬ、約５５ｐｇ／ｍＬ、約６０ｐｇ／ｍＬ、約６５ｐｇ／ｍＬ、約７０ｐｇ／ｍＬ、約７５ｐｇ／ｍＬ、約８０ｐｇ／ｍＬ、約８５ｐｇ／ｍＬ、約９０ｐｇ／ｍＬ、約９５ｐｇ／ｍＬ若しくは約１００ｐｇ／ｍＬを含みうる。
【０３２９】
キット内に提供される、任意の抗体であって、ＵＣＨ−Ｌ１に特異的な組換え抗体のような抗体は、フルオロフォア、放射性部分、酵素、ビオチン／アビジン標識、発色団、化学発光標識などのような、検出可能な標識を組み込むことが可能である、又はキットは、抗体を標識付けするための試薬若しくは抗体（例えば、検出抗体）を検出するための試薬及び／又は解析物（例えば、ＵＣＨ−Ｌ１）を標識付けするための試薬若しくは解析物（例えば、ＵＣＨ−Ｌ１）を検出するための試薬を含みうる。抗体、較正物質及び／又は対照は、個別の容器内に用意されうる、又は適切なアッセイフォーマット、例えば、マイクロ滴定プレートへとあらかじめ分注されうる。
【０３３０】
任意選択的に、キットは、品質管理のための構成要素（例えば、感度パネル、較正物質及び陽性対照）を含む。品質管理試薬の調製は、当技術分野において周知であり、様々な免疫診断用生成物のための添付シート上に記載されている。感度パネルメンバーは、任意選択的に、アッセイ性能の特徴を確立するのに使用され、さらに、任意選択的に、イムノアッセイキット試薬の完全性及びアッセイの標準化についての、有用な指標である。
【０３３１】
キットはまた、任意選択的に、診断的アッセイを行うのに要求される、又は品質管理査定を容易とする、他の試薬であって、緩衝液、塩、酵素、酵素補因子、基質、検出試薬などのような試薬も含みうる。被験試料の単離及び／又は処理のための緩衝液及び溶液（例えば、前処理試薬）のような、他の構成要素もまた、キットに含まれうる。加えて、キットは、１つ以上の他の対照も含みうる。キットの構成要素のうちの１つ以上は、凍結乾燥させられる場合があり、この場合、キットは、凍結乾燥させられた構成要素の復元に適する試薬をさらに含みうる。
【０３３２】
キットの多様な構成要素は、必要に応じて、任意選択的に、適切な容器、例えば、マイクロ滴定プレートにより提供される。キットは、試料を保持又は保存するための容器（例えば、尿試料、全血試料、血漿試料又は血清試料のための容器又はカートリッジ）をさらに含みうる。適切な場合、キットはまた、任意選択的に、反応槽、混合槽及び試薬又は被験試料の調製を容易とする他の構成要素も含有しうる。キットはまた、シリンジ、ピペット、鉗子、計量スプーンなどのような、被験試料を得る一助となるための、１つ以上の器具も含みうる。
【０３３３】
検出可能な標識が、少なくとも１つのアクリジニウム化合物である場合、キットは、少なくとも１つのアクリジニウム−９−カルボキサミド、少なくとも１つのアクリジニウム−９−カルボキシレートアリールエステル、又はこれらの任意の組合せを含みうる。検出可能な標識が、少なくとも１つのアクリジニウム化合物である場合、キットはまた、緩衝液、溶液及び／又は少なくとも１つの塩基性溶液のような、過酸化水素の供給源も含みうる。所望の場合、キットは、磁性粒子、ビーズ、試験管、マイクロ滴定プレート、キュベット、膜、足場形成分子、薄膜、濾紙、ディスク又はチップのような固相を含有しうる。
【０３３４】
所望の場合、キットは、単独で、又は被験試料を、外傷性脳損傷又は障害のバイオマーカーのようなバイオマーカーでありうる、別の解析物についてアッセイするための指示書とさらに組み合わせて、１つ以上の構成要素をさらに含みうる。
【０３３５】
ａ．キット及び方法の適合
本明細書において記載されたイムノアッセイにより、ＵＣＨ−Ｌ１の、被験試料中濃度を評価又は決定するためのキット（又はこの構成要素）並びに方法は、例えば、米国特許第５，０６３，０８１号、米国特許出願公開第２００３／０１７０８８１号、同第２００４／００１８５７７号、同第２００５／００５４０７８号及び同第２００６／０１６０１６４号において記載されており、例えば、Ａｂｂｏｔｔ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ（Ａｂｂｏｔｔ  Ｐａｒｋ、ＩＬ）により、Ａｂｂｏｔｔ  Ｐｏｉｎｔ  ｏｆ  Ｃａｒｅ（ｉ−ＳＴＡＴ（登録商標）又はｉ−ＳＴＡＴ  Ａｌｉｎｉｔｙ、Ａｂｂｏｔｔ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ）として市販されている、様々な自動式システム及び半自動式システム（固相がマイクロ粒子を含むシステムを含む）のほか、米国特許第５，０８９，４２４号及び同第５，００６，３０９号において記載されており、例えば、Ａｂｂｏｔｔ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ（Ａｂｂｏｔｔ  Ｐａｒｋ、ＩＬ）により、ＡＲＣＨＩＴＥＣＴ（登録商標）又はＡｂｂｏｔｔ  Ａｌｉｎｉｔｙデバイスのシリーズとして市販されているシステムにおける使用に適合させられうる。
【０３３６】
自動式システム又は半自動式システムの、非自動式システム（例えば、ＥＬＩＳＡ）と比較した、一部の差違は、第１の特異的結合パートナー（例えば、解析物抗体又は捕捉抗体）が、接合された基質（サンドイッチの形成及び解析物の反応性に影響を及ぼしうる）並びに捕捉ステップ、検出ステップ及び／又は任意選択の洗浄ステップの長さ及びタイミングを含む。ＥＬＩＳＡのような非自動式フォーマットが、試料及び捕捉試薬（例えば、約２時間）を伴う、比較的長いインキュベーション時間を要求しうるのに対し、自動式フォーマット又は半自動式フォーマット（例えば、ＡＲＣＨＩＴＥＣＴ（登録商標）及び任意の後継のプラットフォーム、Ａｂｂｏｔｔ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ）は、比較的短いインキュベーション時間（例えば、ＡＲＣＨＩＴＥＣＴ（登録商標）の場合、約１８分間）を有しうる。同様に、ＥＬＩＳＡのような非自動式フォーマットが、コンジュゲート試薬のような検出抗体を、比較的長いインキュベーション時間（例えば、約２時間）にわたりインキュベートするのに対し、自動式フォーマット又は半自動式フォーマット（例えば、ＡＲＣＨＩＴＥＣＴ（登録商標）及び任意の後継のプラットフォーム）は、比較的短いインキュベーション時間（例えば、ＡＲＣＨＩＴＥＣＴ（登録商標）及び任意の後継のプラットフォームの場合、約４分間）を有しうる。
【０３３７】
Ａｂｂｏｔｔ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓから市販されている、他のプラットフォームは、ＡｘＳＹＭ（登録商標）、ＩＭｘ（登録商標）（例えば、参照によりその全体において本明細書に組み込まれた、米国特許第５，２９４，４０４号を参照されたい）、ＰＲＩＳＭ（登録商標）、ＥＩＡ（ビーズ）及びＱｕａｎｔｕｍ（商標）ＩＩ並びに他のプラットフォームを含むがこれらに限定されない。加えて、アッセイ、キット及びキットの構成要素は、例えば、電気化学アッセイシステム又は他の携帯型アッセイシステム若しくはポイントオブケアアッセイシステム上の、他のフォーマットにおいて利用されうる。前述の通り、本開示は、例えば、サンドイッチイムノアッセイを実施する、市販の、Ａｂｂｏｔｔ  Ｐｏｉｎｔ  ｏｆ  Ｃａｒｅ（ｉ−ＳＴＡＴ（登録商標）、Ａｂｂｏｔｔ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ）電気化学イムノアッセイシステムに適用可能である。イムノセンサー並びにこれらの製造法及び単回使用のための検査デバイスにおける動作については、例えば、参照によりこれに関するそれらの教示について本明細書に組み込まれた、米国特許第５，０６３，０８１号、米国特許出願公開第２００３／０１７０８８１号、同第２００４／００１８５７７号、同第２００５／００５４０７８号及び同第２００６／０１６０１６４号において記載されている。
【０３３８】
特に、アッセイの、ｉ−ＳＴＡＴ（登録商標）システムへの適合に関して、以下の構成が好ましい。微細加工シリコンチップが、金製の電流測定用作業電極及び銀塩化銀基準電極の対と共に作製される。作業電極のうちの１つにおいて、捕捉抗体を固定化されたポリスチレンビーズ（直径を０．２ｍｍとする）が、電極上の、パターン化されたポリビニルアルコールのポリマーコーティングへと接着させられる。このチップが、イムノアッセイに適する流体フォーマットと共に、ｉ−ＳＴＡＴ（登録商標）カートリッジへとアセンブルされる。シリコンチップの部分に、それらのうちのいずれも、検出可能に標識されうる、１つ以上のＵＣＨ−Ｌ１抗体（ＵＣＨ−Ｌ１に結合しうる、１つ以上のモノクローナル／ポリクローナル抗体又はこれらの断片、これらの変異体又はこれらの変異体の断片）又は１つ以上の抗ＵＣＨ−Ｌ１ＤＶＤ−Ｉｇ（又はＵＣＨ−Ｌ１に結合しうる、これらの断片、これらの変異体又はこれらの変異体の断片）のような、ＵＣＨ−Ｌ１に対する特異的結合パートナーが存在する。カートリッジの流体パウチ内に、ｐ−アミノフェノールホスフェートを含む水性試薬が存在する。
【０３３９】
作動時に、ＴＢＩを患うことが推測される対象に由来する試料が、検査カートリッジの保持チャンバーへと添加され、カートリッジが、ｉ−ＳＴＡＴ（登録商標）リーダーへと挿入される。カートリッジ内のポンプエレメントが、試料を、チップを含有する導管へと押し出す。試料は、センサーと接触され、酵素コンジュゲートを、試料へと溶存させる。試料は、センサーにわたり振動させられて、約２〜１２分間にわたる、サンドイッチの形成を促進する。アッセイの最後から二番目のステップにおいて、試料は、廃液チャンバーへと押し出され、アルカリホスファターゼ酵素に対する基質を含有する洗浄液が、過剰量の酵素コンジュゲート及び試料を、センサーチップから洗い落とすのに使用される。アッセイの最後のステップにおいて、アルカリホスファターゼ標識は、ｐ−アミノフェノールホスフェートと反応して、リン酸基を切断し、作業電極において、遊離ｐ−アミノフェノールを、電気化学的に酸化させる。測定された電流に基づき、リーダーは、組み込まれたアルゴリズム及び工場において決定された較正曲線により、ＵＣＨ−Ｌ１の、試料中量を計算することが可能となる。
【０３４０】
本明細書において記載された方法及びキットは、必然的に、イムノアッセイを実行するための、他の試薬及び方法を包含する。例えば、当技術分野において公知であり、かつ／又は、コンジュゲート希釈剤及び／若しくは較正物質希釈剤として、例えば、洗浄用に、たやすく調製若しくは最適化され利用されうる、多様な緩衝液が包含される。例示的なコンジュゲート希釈剤は、ある特定のキット（Ａｂｂｏｔｔ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ、Ａｂｂｏｔｔ  Ｐａｒｋ、ＩＬ）において利用され、２−（Ｎ−モルホリノ）エタンスルホン酸（ＭＥＳ）、塩、タンパク質ブロッキング剤、抗微生物剤及び界面活性剤を含有する、ＡＲＣＨＩＴＥＣＴ（登録商標）コンジュゲート希釈剤である。例示的な較正物質希釈剤は、ＭＥＳ、他の塩、タンパク質ブロッキング剤及び抗微生物剤を含有する緩衝液を含む、ある特定のキット（Ａｂｂｏｔｔ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ、Ａｂｂｏｔｔ  Ｐａｒｋ、ＩＬ）において利用された、ＡＲＣＨＩＴＥＣＴ（登録商標）ヒト較正物質希釈剤である。加えて、２００８年１２月３１日に出願された、米国特許出願第６１／１４２，０４８号において記載されている通り、シグナル発生の改善は、例えば、シグナル増幅剤としてのシグナル抗体へと連結された核酸配列を使用する、ｉ−ＳＴＡＴ（登録商標）カートリッジフォーマットにおいて得られうる。ｉ−Ｓｔａｔに使用されたような、カートリッジの、マルチプレックス使用への適合については、例えば、その内容が参照により本明細書に組み込まれた、米国特許第６，４３８，４９８号のような特許文献において記載されている。
【０３４１】
本明細書において記載された方法及びキットはまた、単一分子カウンティングも伴いうる。ある特定の実施形態において、解析物を解析するための方法は、試料中に存在する解析物を評価するステップを伴いうる。ある特定の実施形態において、評価するステップは、解析物の試料中の存在及び／又は解析物の試料中濃度を決定するために使用されうる。ある特定の実施形態において、方法はまた、試料中に存在する、複数の異なる解析物の存在及び／又は濃度を決定するためにも使用されうる。
【０３４２】
１つ以上の目的の解析物の単一分子の検出を可能とする、当技術分野において公知である、任意のデバイスが、本明細書において記載されたシステムにおいて使用されうる。例えば、デバイスは、マイクロ流体デバイス、デジタルマイクロ流体デバイス（ＤＭＦ）、表面音響波ベースのマイクロ流体デバイス（ＳＡＷ）、統合型ＤＭＦ／解析物検出デバイス、統合型ＳＡＷ／解析物検出デバイス又はロボットベースのアッセイ処理ユニットでありうる。使用されうる他のデバイスの例は、Ｑｕａｎｔｅｒｉｘ  ＳＩＭＯＡ（商標）（Ｌｅｘｉｎｇｔｏｎ、ＭＡ）、Ｓｉｎｇｕｌｅｘ製の単一分子カウンティング（ＳＭＣ（商標））技術（Ａｌａｍｅｄａ、ＣＡ、例えば、その内容が、参照により本明細書に組み込まれた、米国特許第９，２３９，２８４号を参照されたい）などを含む。
【０３４３】
本明細書の、ある特定の実施形態は、外傷性脳損傷のような疾患を評価するのに利用されると有利であるが、アッセイ及びキットはまた、適宜、任意選択的に、他の疾患、障害及び状態におけるＵＣＨ−Ｌ１を評価するのにも利用されうる。
【０３４４】
アッセイ法はまた、外傷性脳損傷のような疾患を改善する化合物を同定するのにも使用されうる。例えば、ＵＣＨ−Ｌ１を発現する細胞は、候補化合物と接触されうる。本明細書において記載されたアッセイ法を使用して、化合物と接触された細胞内の、ＵＣＨ−Ｌ１の発現レベルは、対照細胞内の発現レベルと比較されうる。
【実施例】
【０３４５】
本発明は、以下の非限定例により例示された、複数の態様を有する。
【０３４６】
１５．実施例
当業者に、本明細書において記載された、本開示の方法の、他の適切な改変及び適合は、たやすく適用可能かつ認識可能であり、本開示の範囲又は本明細書において開示された態様及び実施形態から逸脱しない限りにおいて、適切な同等物を使用してなされうることが容易に明らかとなる。さて、本開示について詳細に記載してきたが、これは、本開示の実施形態の、一部の態様を例示することだけを意図するものであり、本開示の範囲に対して限定的であると考えられるべきではない、以下の例を参照することにより、より明確に理解される。本明細書において言及された、全ての雑誌の参考文献、米国特許及び刊行物の開示は、参照によりそれらの全体において本明細書に組み込まれている。
【０３４７】
本発明は、以下の非限定例により例示された、複数の態様を有する。
【０３４８】
［実施例１］
ｉ−ＳＴＡＴ（登録商標）ＵＣＨ−Ｌ１アッセイ
ｉ−ＳＴＡＴ（登録商標）ＵＣＨ−Ｌ１アッセイを、ＴＢＩ患者集団研究において使用した。捕捉モノクローナル抗体としての抗体Ａ及び検出モノクローナル抗体としての抗体Ｂ及び抗体Ｃのようなモノクローナル抗体対を使用した。抗体Ａは、Ａｂｂｏｔｔ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ（Ａｂｂｏｔｔ  Ｐａｒｋ、ＩＬ）社内において開発された、例示的な抗ＵＣＨ−Ｌ１抗体である。抗体Ｂ及び抗体Ｃは、ＵＣＨ−Ｌ１の異なるエピトープを認識し、Ｂａｎｙａｎ  Ｂｉｏｍａｒｋｅｒｓ（Ａｌａｃｈｕａ、Ｆｌｏｒｉｄａ）により開発された、試料中の抗原の検出を増強する。Ａｂｂｏｔｔ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ（Ａｂｂｏｔｔ  Ｐａｒｋ、ＩＬ）社内において開発された、他の抗体もまた、捕捉抗体又は検出抗体として、多様な組合せにおいて、併せて使用された場合に、同様のシグナルの増強を示す、又はこれを示すことが期待されている。ＵＣＨ−Ｌ１アッセイデザインを、鍵となる性能属性に対して査定した。カートリッジ構成は、抗体構成：抗体Ａ（捕捉抗体）／抗体Ｂ＋Ｃ（検出抗体）；試薬条件：０．８％の固体、１２５μｇ／ｍＬのＦａｂアルカリホスファターゼクラスターコンジュゲート及び試料注入口の印字：ＵＣＨ−Ｌ１標準物質であった。アッセイ時間は、１０〜１５分間（試料捕捉時間を７〜１２分間とする）であった。
【０３４９】
［実施例２］
ＴＢＩ集団研究（ＴＲＡＣＫ−ＴＢＩ）
Ｔｒａｎｓｆｏｒｍｉｎｇ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  ａｎｄ  Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｋｎｏｗｌｅｄｇｅ  ｉｎ  Ｔｒａｕｍａｔｉｃ  Ｂｒａｉｎ  Ｉｎｊｕｒｙ（ＴＲＡＣＫ−ＴＢＩ）研究とは、大規模かつ複雑なプロジェクトである。その機関間連携及び官民連携は、１１の臨床施設、７つのコア、のべ約５０の共同研究機関、共同研究企業及び支援団体から構成される。３つの臨床施設からの臨床データに基づく、初期のＴＲＡＣＫ−ＴＢＩパイロット研究は、ＴＢＩ  Ｃｏｍｍｏｎ  Ｄａｔａ  Ｅｌｅｍｅｎｔｓを精緻化する一助となり、ＴＲＡＣＫ−ＴＢＩ研究のための、ＴＢＩ  Ｉｎｆｏｍａｔｉｏｎ  Ｃｏｍｍｏｎｓの原型を創出した。
【０３５０】
対象群：合計２，７００〜３０００例のＴＢＩ患者を、３つの臨床群：１．救急科において査定され、退院した患者（ＥＤ）；２．入院したが、ＩＣＵ入院ではない患者（ＡＤＭ）及び３．ＩＣＵへの入院患者（ＩＣＵ）間に、均等に登録し、クリニカルケアパスにより細分化した。頭蓋外外傷を伴うが、ＴＢＩを伴わない、臨床群１つ当たりのさらなる患者１００例（ｎ＝３００）を、対照として登録して、患者の全登録数３０００例とした。この層別化計画は、比較有効性研究（ＣＥＲ）解析を容易とし、従来の「軽度ＴＢＩ／中等度ＴＢＩ／重度ＴＢＩ」への細分化による制約を受けなかった。データ収集は、クリニカルケアパス（ＥＤ、ＡＤＭ、ＩＣＵ）及び各目的の要件に依存した。各群内の患者を、収集されるデータの範囲を規定する、３つのコホートへと層別化した。
【０３５１】
対照は、以下の基準を満たした、成人の整形外科外傷患者であった：１．それらの四肢末端及び／又は骨盤損傷及び／又は肋骨骨折について、略式損傷スコアが≦４であること（非致死性のスコア）；２．推測される頭部損傷について、ＥＤにおいて、ＣＴ又はＭＲＩを経たという基準が該当しなかったことを除き、ＴＢＩ対象と同じ組入れ基準及び除外基準を満たしたこと。意識喪失（ＬＯＣ）、意識障害及び外傷後貧血（ＰＴＡ）／ＲＡについての潜在的なコントロールについてインタビューすることにより、ＴＢＩを、進行中の損傷として除外した；３．各施設が、ＴＢＩコホートに由来する年齢及び性別の分布に従い、標的に対する対照の数についての計画を提供されたこと；及び４．ＭＲＩ来院を完了させることができなかった場合、対照は、追跡のためのＣＡ−ＭＲＩコホートへと登録され、２週間後における総合評価（ＣＡ）へと送られたこと。
【０３５２】
対象の適格性：Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｃｏｎｇｒｅｓｓ  ｏｆ  Ｒｅｈａｂｉｌｉｔａｔｉｏｎ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ（ＡＣＲＭ）Ｃｒｉｔｅｒｉａに従う急性ＴＢＩの履歴を伴って救急科（ＥＤ）を訪れる全ての年齢の成人患者であって、以下：任意の期間にわたる意識喪失（ＬＯＣ）；事故の直前又は直後における、任意の記憶喪失事象（例えば、健忘症）；事故時における、精神状態の任意の異変（放心、方向喪失及び／又は意識混濁の感覚）；及び／又は永続性の場合もあり、永続性でない場合もある局所神経障害のうちの≧１つにより顕示された外傷誘導性の脳機能の生理学的破壊を負った成人患者を登録した。外傷誘導性は、頭部が殴打されること、頭部を物体にぶつけること又は外部からの、頭部への、直接的外傷を伴わずに、脳が加速／減速運動を経ること（例えば、むち打ち状態）を含んだ。
【０３５３】
使用された組入れ／除外基準を、表２に示す。
【０３５４】
【表２】
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【０３５５】
３つの臨床群（すなわち、ＥＤ、ＡＤＭ及びＩＣＵ）の各々について、対象を、３つの異なる評価コホート：略式評価（ＢＡ）コホート、圧縮評価（ＣＡ）コホート又は総合評価＋ＭＲＩ（ＣＡ＋ＭＲＩ）コホートのうちの１つに入れた。追跡率を８０％とするマイルストーン計画について、表３を参照されたい。
【０３５６】
【表３】
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【０３５７】
略式評価（ＢＡ）コホートは、ＥＤ群、ＡＤＭ群及びＩＣＵ群について、４００例ずつの対象を伴う、合計１２００例の対象を含んだ。ＢＡコホートについて、以下のデータ：人口学的データ及び全臨床経過データ；１日目（損傷から＜２４時間）における、血清、血漿、ＤＮＡ及びＲＮＡのための採血；１日目におけるベースラインの回収から３〜６時間以内における、血清のための採血の反復（この構成要素を含むことは、施設に応じて、任意選択的である）；入院経過の一部として、１日目から取得された臨床脳ＣＴスキャン；並びにＮＩＮＤＳ  ＣＤＥウェブサイト上に公開されている、ＮＩＨ  ＴＢＩ−ＣＤＥ  ｖ．２．０のＣｏｒｅ転帰尺度を使用して、構造化された電話インタビューを介して、２週間後、３、６及び１２カ月後において収集された転帰データを収集した。
【０３５８】
圧縮評価（ＣＡ）コホートは、ＥＤ群、ＡＤＭ群及びＩＣＵ群について、３００例ずつの対象＋１００例ずつの対照を伴う、合計１２００例の対象を含んだ。ＣＡコホートについて、以下のデータ：人口学的データ及び全臨床経過データ；ＡＤＭ群及びＩＣＵ群についての、高密度の、毎日の臨床データ；１日目（損傷から＜２４時間）における、血清、血漿、ＲＮＡ及びＤＮＡのための採血；１日目におけるベースラインの回収から３〜６時間以内における、血清のための採血の反復（この構成要素を含むことは、施設に応じて、任意選択的である）；ＡＤＭ及びＩＣＵについての、３日目（４８〜７２時間後）及び５日目（９６〜１２０時間後）の、血清、血漿及びＲＮＡのための採血；１〜５日目における脳脊髄液の回収（この構成要素を含むことは、施設に応じて、任意選択的である）；入院経過の一部として取得された、全ての臨床脳ＣＴスキャン；２週間後及び６カ月間後における、血清、血漿及びＲＮＡのための採血；並びにＮＩＨ  ＴＢＩ−ＣＤＥ  ｖ．２．０のＣｏｒｅ転帰尺度、Ｂａｓｉｃ転帰尺度及びＳｕｐｐｌｅｍｅｎｔａｌ転帰尺度を使用して、構造化された対面インタビューを介して、２週間後、６及び１２カ月後において収集され、構造化された電話インタビューを介して、３カ月後において収集された転帰データを収集した。
【０３５９】
総合評価＋ＭＲＩ（ＣＡ＋ＭＲＩ）コホートは、ＥＤ群、ＡＤＭ群及びＩＣＵ群について、２００例ずつを伴う、合計６００例の対象を含んだ。ＣＡ＋ＭＲＩコホートについて、以下のデータ：人口学的データ及び全臨床経過データ；ＡＤＭ群及びＩＣＵ群についての、高密度の、毎日の臨床データ；１日目（損傷から＜２４時間）における、血清、血漿、ＲＮＡ及びＤＮＡのための採血；１日目におけるベースラインの回収から３〜６時間以内における、血清のための採血の反復（この構成要素を含むことは、施設に応じて、任意選択的である）；ＡＤＭ及びＩＣＵについての、３日目（４８〜７２時間後）及び５日目（９６〜１２０時間後）における、血清、血漿及びＲＮＡのための採血；１〜５日目における脳脊髄液の回収（この構成要素を含むことは、施設に応じて、任意選択的である）；入院経過の一部として取得された、全ての臨床頭部ＣＴスキャン；２週間後及び６カ月間後における、血清、血漿及びＲＮＡのための採血；２週間後及び６カ月間後において取得された、３Ｔ精査のためのＭＲＩ；並びにＮＩＨ  ＴＢＩ−ＣＤＥ  ｖ．２．０のＣｏｒｅ転帰尺度、Ｂａｓｉｃ転帰尺度及びＳｕｐｐｌｅｍｅｎｔａｌ転帰尺度を使用して、構造化された対面インタビューを介して、２週間後、６及び１２カ月後において収集され、構造化された電話インタビューを介して、３カ月後において収集された転帰データを収集した。
【０３６０】
登録したら、院内において、データ収集が始まった。ＣＡ＋ＭＲＩ患者について、２週間後のＭＲＩは、損傷日から１４日±４日後に完了させた。対応する、２週間後の転帰は、２週間後のＭＲＩから±３日後に完了させた。ＣＡ患者及びＢＡ患者について、２週間後の転帰は、損傷日から１４日後の±４日後に完了させた。３カ月後の転帰は、損傷日から９０日後の±７日後に完了させた。ＣＡ＋ＭＲＩ患者について、６カ月後のＭＲＩは、損傷日から１８０日後の±１４日後に完了し、対応する６カ月後の転帰は、６カ月後のＭＲＩから±１４日後に完了させた。ＣＡ患者及びＢＡ患者について、６カ月後の転帰は、損傷日から１８０日後の±１４日後に完了させた。ＢＴＡＣＴ（Ｂｒｉｅｆ  Ｔｅｓｔ  ｏｆ  Ａｄｕｌｔ  Ｃｏｇｎｉｔｉｏｎ  ｂｙ  Ｔｅｌｅｐｈｏｎｅ）は、転帰から±７日後（しかし、同じ日ではなく、損傷から２０１日後以下である）に完了させるものとする。１２カ月後の転帰は、損傷日から３６０日後の±３０日後に完了させた。
【０３６１】
ＵＣＨ−Ｌ１を、ｉ−ＳＴＡＴアッセイフォーマットの、５９例のＴＲＡＣＫ  ＴＢＩ患者のサブセット内において測定した（表４）。
【０３６２】
【表４】
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【０３６３】
脳損傷から２４時間以内における採血に加えて、各患者に、頭部ＣＴ、神経精神医学的検査、ＧＣＳ（Ｇｌａｓｇｏｗ  Ｃｏｍａ  Ｓｃａｌｅ）スコアを含む、広範な医学的査定を施し、また、多くの患者に、損傷の２週間以内に、追跡ＭＲＩも施した。細心の標準化採血プロトコール及び加工に続き、血漿試料を、−８０℃における保存のためにアリコート分割し、その後、融解させ、調べた。各試料を、二連の試行にかけ、列挙された結果は、２回の試行の平均とした。図１は、ＵＣＨ−Ｌ１レベルが、損傷後、最初の２４時間を通して、損傷と相関したことを示す（範囲：約２〜２３時間）。表４は、ＥＴＯＨ消費は、ＴＢＩ、特に、重度ＴＢＩと関連することが多いので、エタノール（ＥＴＯＨ）レベルは、バイオマーカーレベルと相関しなかったことを示す（ピアソン相関＝０．０２３、ｐ値＝０．８９）。
【０３６４】
表５は、ＣＴスキャンにより確認された、ＵＣＨ−Ｌ１基準レベルを使用する、ＴＢＩ患者の可能な転帰を示す。
【０３６５】
【表５】
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【０３６６】
感度は、検査：ＴＰ／ＴＴＢＩにより決定し、特異度は、検査：ＴＮＯＴ  ＴＢＩにより決定した。ＰＰＶは、ＴＰ／ＴＰＯＳＩＴＩＶＥにより決定した。ＮＰＶは、ＴＮ／ＴＮＥＧＡＴＩＶＥにより決定した。精度は、（ＴＰ＋ＴＮ）／ＴＡＬＬ  ＳＵＢＪＥＣＴＳにより決定した。
【０３６７】
表６は、１００ｐｇ／ｍＬ及び３００ｐｇ／ｍＬのＵＣＨ−Ｌ１カットオフレベルを、イメージング結果と比較して使用する結果を示す。これらのＵＣＨ−Ｌ１カットオフ値を使用して、頭部損傷を負っている、又は負った可能性がある対象を、外傷性脳損傷の存在又は非存在について査定することができる。例えば、本開示の方法は、イメージング結果に基づき、ＵＣＨ−Ｌ１レベルが、少なくとも１００ｐｇ／ｍＬである対象の、外傷性脳損傷を負った確率が、８６％を超えることを決定しうる。加えて、本開示の方法は、イメージング結果に基づき、ＵＣＨ−Ｌ１レベルが、少なくとも３００ｐｇ／ｍＬである対象の、外傷性脳損傷を負った確率が、９６％を超えることを決定しうる。
【０３６８】
【表６】
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【０３６９】
この標本サイズ集団におけるＵＣＨ−Ｌ１アッセイのために、３００ｐｇ／ｍＬの基準レベルを使用したところ、バイオマーカー結果は、３カ月後におけるＧＯＳＥ（Ｅｘｔｅｎｄｅｄ  Ｇｌａｓｇｏｗ  Ｏｕｔｃｏｍｅ  Ｓｃｏｒｅ）を、良好に予測した（ｐ値＝０．００８２）。ＵＣＨ−Ｌ１レベルは、損傷後、最初の２４時間を通して、損傷と相関した（範囲：約２〜２３時間）。マーカーの出現〜消失のこの時間は、このアッセイについての当初の予想を超えた。このデータは、ＴＢＩを伴う患者における、頭部ＣＴ／ＭＲＩに対する必要を予測するときの、ＵＣＨ−Ｌ１アッセイの、優れた感度／特異度及び範囲を裏付ける。
【０３７０】
図２及び３は、時点ごと（図２）及び時点２におけるＵＣＨ−Ｌ１レベルの、時点１と比較した変化（図３）による、全ての対象についての、ＵＣＨ−Ｌ１及びＣＴスキャン結果に対する、ＲＯＣ（ｒｅｃｅｉｖｅｒ  ｏｐｅｒａｔｉｎｇ  ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃ）解析を示す。図４は、絶対量（「絶対デルタ」）（すなわち、第１の時点（「時点１」）におけるＵＣＨ−Ｌ１レベル〜第２の時点（「時点２」）におけるＵＣＨ−Ｌ１レベルの間の変化）による、全ての対象についての、ＵＣＨ−Ｌ１レベル及びＣＴスキャン結果に対する、ＲＯＣ（ｒｅｃｅｉｖｅｒ  ｏｐｅｒａｔｉｎｇ  ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃ）解析を示す。
【０３７１】
表７は、患者１９１例の標本サイズにおける、ＴＲＡＣＫデータの解析、とりわけ、時点２と時点１との間の、ＵＣＨ−Ｌ１レベルの変化についての解析を示す。時点１の試料は、損傷から２４時間以内に採取し、時点２の試料は、時点１の試料を採取した、約３〜６時間後に採取した。ＵＣＨ−Ｌ１は、時点１〜時点２において、有意な変化を示すと考えられる（ｎ＝１９１、デルタ中央値（すなわち、時点１〜時点２の変化）＝−３８ｐｇ／ｍＬ、ウィルコクソンの符合順位検定によるｐ値＜０．０００１）。また、図５及び６も参照されたい。図５は、時点１及び時点２における、研究の全ての患者において決定されたＵＣＨ−Ｌ１レベルを指し示す箱髭図を示す。図６は、時点による検査結果についての、アッセイ反応速度Ｚスコア中央値を示す。これらのデータは、単に、時点を比較する解析であったが、ＣＴ、ＭＲＩ又はＧＣＳ＋／−に基づかない。
【０３７２】
【表７】
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【０３７３】
１９１例の試料によるＴＲＡＣＫデータを、時点１の試料を、いつ採取したのか、例えば、損傷の０〜約６時間後（「０〜６時間群」）、損傷の約６〜約１２時間後（「６〜１２時間群」）に基づき、さらに解析したところ、これらは、頭部ＣＴスキャン結果及び／又はＧＣＳスコアと相関した。ＵＣＨ−Ｌ１の、時点１の試料中レベル及び時点２の試料中レベルを、陽性若しくは陰性の頭部ＣＴスキャン結果及び／又はＧＣＳスコアと比較したところ、軽度又は中等度の／重度のＴＢＩが指し示された。この解析は、時点１の試料を採取した時間に基づいたので、群１つ当たりの対象の数は、小さかった。表８を参照されたい。
【０３７４】
【表８】
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【０３７５】
ＣＴスキャン：図７Ａ及び７Ｂは、頭部ＣＴスキャンが陽性又は陰性であった、０〜６時間群に由来する対象におけるＵＣＨ−Ｌ１結果を示す。図８Ａ及び８Ｂは、頭部ＣＴスキャンが陽性又は陰性であった、６〜１２時間群に由来する対象におけるＵＣＨ−Ｌ１結果を示す。図７Ａ及び８Ａは、頭部ＣＴスキャンが陽性又は陰性であった対象の、時点１及び時点２におけるＵＣＨ−Ｌ１レベルの分布を示す。ＣＴが陽性の対象におけるＵＣＨ−Ｌ１レベルは、０〜６時間群及び６〜１２時間群のいずれについても、時点１及び時点２の両方において、ＣＴが陰性の対象におけるＵＣＨ−Ｌ１レベルより高かった。ＣＴスキャンが陽性である、０〜６時間群に由来する対象におけるＵＣＨ−Ｌ１レベルは、時点１〜時点２において、顕著に低下した。図７Ｂ及び８Ｂは、時点１及び時点２におけるＵＣＨ−Ｌ１レベルを、ＣＴスキャン結果と相関させるＲＯＣ曲線を示す。ＲＯＣ曲線に基づく、０〜６時間群及び６〜１２時間群についての基準レベルの感度及び特異度を、表９に示す。
【０３７６】
【表９】
2020512550.tif 000013
【０３７７】
図９Ａが、頭部ＣＴスキャンが陽性又は陰性であった、０〜６時間群に由来する対象における、ＵＣＨ−Ｌ１の、時点２の試料中レベルの、時点１の試料中レベルからの変化（「デルタ」）を示すのに対し、図１０Ａは、この群のＵＣＨ−Ｌ１レベルの絶対量（「絶対デルタ」）を示す。図９Ｂが、頭部ＣＴスキャンが陽性又は陰性であった、６〜１２時間群に由来する対象における、ＵＣＨ−Ｌ１の、時点２の試料中レベルの、時点１の試料中レベルからの変化（「デルタ」）を示すのに対し、図１０Ｂは、この群のＵＣＨ−Ｌ１レベルの絶対量（「絶対デルタ」）を示す。頭部ＣＴスキャンが陽性である対象は、時点１〜時点２におけるＵＣＨ−Ｌ１レベルの低下又は変化が、頭部ＣＴスキャンが陰性である対象と比較して大きかった。０〜６時間群に由来する対象は、ＵＣＨ−Ｌ１レベルの変化が、６〜１２時間群に由来する対象と比較して大きかった。時点１の試料を、損傷後０〜１０時間の間に採取し（「０〜１０時間群」）、それぞれの時点２の試料と比較した試料並びに時点１の試料を、損傷後１０時間を超えて採取し（「＞１０時間群」）、それぞれの時点２の試料と比較した試料について検討するために、データを解析した。図１７及び１８は、０〜１０時間群及び＞１０時間群のそれぞれについて、ＵＣＨ−Ｌ１レベルの絶対量（「絶対デルタ」）を、ＣＴスキャン結果と相関させるＲＯＣ曲線を示す。ＲＯＣ曲線に基づく、０〜１０時間群についての、ＵＣＨ−Ｌ１レベルの絶対量（又は時点１〜時点２の間の変化）についての、感度及び特異度を、表１０に示す。
【０３７８】
【表１０】
2020512550.tif 000014
【０３７９】
ＣＴスキャンについての倍数変化解析：時点１におけるレベルと時点２におけるレベルとの間の倍数変化を、０〜６時間群の対象１２〜１４例において決定した。図１６は、頭部ＣＴスキャンの陽性又は陰性と相関した、ＵＣＨ−Ｌ１レベルの倍数変化（時点１におけるＵＣＨ−Ｌ１レベル／時点２におけるＵＣＨ−Ｌ１レベル）についてのＲＯＣ曲線を示す。時点１の試料を、損傷後最初の６時間以内に採取した場合、１．５の倍数基準レベル（すなわち、時点１の結果／時点２の結果）は、８３％の感度及び７５％の特異度を有した。この倍数基準レベルは、対象における陽性のＣＴを良好に予測し、この場合、１．５未満の倍数変化は、対象における陽性のＣＴスキャン結果を予測した。
【０３８０】
時点１におけるレベルと時点２におけるレベルとの間の倍数変化を、０〜１２時間群の対象において決定した。ＵＣＨ−Ｌ１レベルの倍数変化（時点１におけるＵＣＨ−Ｌ１レベル／時点２におけるＵＣＨ−Ｌ１レベル）についてのＲＯＣ曲線は、頭部ＣＴスキャンの陽性又は陰性と相関した（データは示さない）。時点１の試料を、損傷後最初の１２時間以内に採取した場合、１．８１の倍数基準レベル（すなわち、時点１の結果／時点２の結果）は、９３％の感度及び３６％の特異度を有した。この倍数基準レベルは、対象における陽性のＣＴを良好に予測し、この場合、１．８１未満の倍数変化は、対象における陽性のＣＴスキャン結果を予測したことから、対象を、ＣＴスキャンを必要とする対象として分類する。ＵＣＨ−Ｌ１レベルの倍数変化（時点２におけるＵＣＨ−Ｌ１レベル／時点１におけるＵＣＨ−Ｌ１レベル）についてのＲＯＣ曲線は、頭部ＣＴスキャンの陽性又は陰性と相関した（データは示さない）。時点１の試料を、損傷後最初の１２時間以内に採取した場合、０．５５の倍数基準レベル（すなわち、時点２の結果／時点１の結果）は、９３％の感度及び３６％の特異度を有した。この倍数基準レベルは、対象における陽性のＣＴを良好に予測し、この場合、０．５５を超える倍数変化は、対象における陽性のＣＴスキャン結果を予測したことから、対象を、ＣＴスキャンを必要とする対象として分類する一方、０．５５未満の倍数変化は、対象を、ＣＴスキャンに対する必要について、陰性として分類する。
【０３８１】
ＲＯＣ解析はまた、時点１におけるＵＣＨ−Ｌ１レベルが、５５０ｐｇ／ｍＬを超える、又は時点２〜時点１の間の倍数変化が、０．５５を超える場合、対象を、ＣＴスキャンに対する必要について、陽性として分類し；時点１におけるＵＣＨ−Ｌ１レベルが、５５０ｐｇ／ｍＬ未満である、又は時点２〜時点１の間の倍数変化が、０．５５未満である場合、対象を、ＣＴスキャンに対する必要について、陰性として分類することを示すのにも実施した。これらの基準レベルは、１００％の感度及び３２％の特異度を有した。
【０３８２】
ＧＣＳスコア：図１１Ａ及び１１Ｂは、それらのＧＣＳスコアに基づき、軽度又は中等度〜重度の（「中等度の／重度の」）ＴＢＩを有すると同定された、０〜６時間群に由来する対象におけるＵＣＨ−Ｌ１結果を示す。図１２Ａ及び１２Ｂは、それらのＧＣＳスコアに基づき、軽度又は中等度〜重度の（「中等度の／重度の」）ＴＢＩを有すると同定された、６〜１２時間群に由来する対象におけるＵＣＨ−Ｌ１結果を示す。図１１Ａ及び１２Ａは、軽度又は中等度の／重度を有すると決定された対象の、時点１及び時点２におけるＵＣＨ−Ｌ１レベルの分布を示す。中等度の／重度の対象におけるＵＣＨ−Ｌ１レベルは、０〜６時間群及び６〜１２時間群のいずれについても、時点１及び時点２の両方において、軽度の対象より高かった。０〜６時間群及び６〜１２時間群におけるＵＣＨ−Ｌ１レベルは、時点１〜時点２において、顕著に低下した。図１１Ｂ及び１２Ｂは、時点１及び時点２におけるＵＣＨ−Ｌ１レベルを、ＧＣＳスコアと相関させるＲＯＣ曲線を示す。ＲＯＣ曲線に基づく、０〜６時間群及び６〜１２時間群についての基準レベルの感度及び特異度を、表１１に示す。
【０３８３】
【表１１】
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【０３８４】
図１３Ａは、０〜６時間群の対象における、ＵＣＨ−Ｌ１の、時点２の試料中レベルの、時点１の試料中レベルからの変化（「デルタ」）を示す。図１３Ｂは、６〜１２時間群の対象における、ＵＣＨ−Ｌ１の、時点２の試料中レベルの、時点１の試料中レベルからの変化（「デルタ」）を示す。
【０３８５】
図１４Ａは、０〜６時間群のＵＣＨ−Ｌ１レベルの絶対量（又は時点１〜時点２の間の変化；「絶対デルタ」）を示し、図１４Ｂは、時点１及び時点２におけるＵＣＨ−Ｌ１レベルを、ＧＣＳスコア（中等度の／重度のと対比した軽度）と相関させるＲＯＣ曲線を示す。図１５Ａは、６〜１２時間群のＵＣＨ−Ｌ１レベルの絶対量（又は時点１〜時点２の間の変化；「絶対デルタ」）を示し、図１５Ｂは、時点１及び時点２におけるＵＣＨ−Ｌ１レベルを、ＧＣＳスコア（中等度の／重度のと対比した軽度）と相関させるＲＯＣ曲線を示す。ＧＣＳスコアに基づき、中等度の／重度のＴＢＩを有することが決定された対象は、時点１〜時点２におけるＵＣＨ−Ｌ１レベルの低下又は変化が、ＧＣＳスコアに基づき、軽度ＴＢＩを有することが決定された対象と比較して大きかった。０〜６時間群に由来する中等度の／重度の対象は、ＵＣＨ−Ｌ１レベルの変化が、６〜１２時間群に由来する対象と比較して、著明に大きかった。ＲＯＣ曲線に基づく、０〜６時間群及び６〜１２時間群についての、ＵＣＨ−Ｌ１レベルの絶対量（又は時点１〜時点２の間の変化）についての、感度及び特異度を、表１２に示す。
【０３８６】
【表１２】
2020512550.tif 000016
【０３８７】
時点１の試料を、損傷後０〜１０時間の間に採取し（「０〜１０時間群」）、損傷後０〜１１時（「０〜１１時間群」）、又は損傷後０〜１２時間（「０〜１２時間群」）、それぞれの時点２の試料と比較した試料について検討するために、データを解析した。時点１の試料を、損傷後１１時間を超えて採取し（「＞１１時間群」）、それぞれの時点２の試料と比較した試料について検討するために、データを解析した。図１９及び２０は、０〜１１時間群及び＞１１時間群のそれぞれについて、ＵＣＨ−Ｌ１レベルの絶対量（「絶対デルタ」）を、ＣＴスキャン結果と相関させるＲＯＣ曲線を示す。図２１及び２２は、０〜１０時間群及び０〜１２時間群のそれぞれについて、ＵＣＨ−Ｌ１レベルの絶対量（「絶対デルタ」）を、ＣＴスキャン結果と相関させるＲＯＣ曲線を示す。ＲＯＣ曲線に基づく、０〜１０時間、０〜１１時間群及び０〜１２時間群についての、ＵＣＨ−Ｌ１レベルの絶対量（又は時点１〜時点２の間の変化）についての、感度及び特異度を、表１３に示す。
【０３８８】
【表１３】
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【０３８９】
ＧＣＳスコアについての倍数変化解析：時点２におけるレベルと時点１におけるレベルとの間の倍数変化を、０〜１２時間群の対象において決定した。ＵＣＨ−Ｌ１レベルの倍数変化（時点２におけるＵＣＨ−Ｌ１レベル／時点１におけるＵＣＨ−Ｌ１レベル）についてのＲＯＣ曲線は、ＧＣＳスコアと相関した（データは示さない）。時点１の試料を、損傷後最初の１２時間以内に採取した場合、０．７３の倍数基準レベル（すなわち、時点２の結果／時点１の結果）は、６７％の感度及び４８％の特異度を有した。この倍数基準レベルは、対象における中等度〜重度のＴＢＩを良好に予測し、この場合、０．７３以上の倍数変化は、対象における中等度〜重度のＴＢＩを予測した。
【０３９０】
ＲＯＣ解析はまた、時点１におけるＵＣＨ−Ｌ１レベルが、５５０ｐｇ／ｍＬ以上である、又は時点２〜時点１の間の倍数変化が、０．７３を超える場合、対象を、中等度〜重度のＴＢＩを有する対象として分類し；時点１におけるＵＣＨ−Ｌ１レベルが、５５０ｐｇ／ｍＬ未満である、又は時点２〜時点１の間の倍数変化が、０．７３未満である場合、対象を、軽度ＴＢＩを有する対象として分類することを示すのにも実施した。これらの基準レベルは、１００％の感度及び４２．５％の特異度を有した。
【０３９１】
ＲＯＣ解析はまた、時点１におけるＵＣＨ−Ｌ１レベルが、４５０ｐｇ／ｍＬ以上である、又は時点２〜時点１の間の倍数変化が、０．７３を超える場合、対象を、中等度〜重度のＴＢＩを有する対象として分類し；時点１におけるＵＣＨ−Ｌ１レベルが、４５０ｐｇ／ｍＬ未満である、又は時点２〜時点１の間の倍数変化が、０．７３未満である場合、対象を、軽度ＴＢＩを有する対象として分類することを示すのにも実施した。これらの基準レベルは、１００％の感度及び４０％の特異度を有した。
【０３９２】
ＲＯＣ解析はまた、時点１におけるＵＣＨ−Ｌ１レベルが、３５０ｐｇ／ｍＬ以上である、又は時点２〜時点１の間の倍数変化が、０．７３を超える場合、対象を、中等度〜重度のＴＢＩを有する対象として分類し；時点１におけるＵＣＨ−Ｌ１レベルが、５５０ｐｇ／ｍＬ未満である、又は時点２〜時点１の間の倍数変化が、０．７３未満である場合、対象を、軽度ＴＢＩを有する対象として分類することを示すのにも実施した。これらの基準レベルは、１００％の感度及び３２．５％の特異度を有した。
【０３９３】
まとめると、本開示は、特異的なＵＣＨ−Ｌ１基準値及び対象を外傷性脳損傷について査定するのに使用されうる、対応するアッセイ法を、標準的な臨床評価に加えて、又はこれに対する代替法として提示する。
【０３９４】
前出の詳細な記載及び付属の実施例は、例示的なものであるに過ぎず、併載の特許請求の範囲及びそれらの均等物だけによって規定される、本発明の範囲に対する限定として理解されないものとすることが理解される。
【０３９５】
開示された実施形態に対する、多様な変化及び改変が、当業者に明らかである。この精神及び範囲から逸脱しない限りにおいて、限定せずに述べると、化学構造、置換基、誘導体、中間体、合成、組成物、製剤又は本発明の使用法に関する変化及び改変を含む、このような変化及び改変がなされうる。
【０３９６】
完全を期するため、本発明の多様な態様は、以下の番号付けされた条項に明示される。
【０３９７】
条項１．頭部への損傷を負った、又は負った可能性があるヒト対象の診断及び査定の一助となる方法であって、ａ）推測される頭部への損傷後の２４時間以内に、対象から採取された試料に対するアッセイを実施して、ユビキチンカルボキシ末端ヒドロラーゼＬ１（ＵＣＨ−Ｌ１）の、試料中レベルを測定又は検出するステップ；及びｂ）対象が、軽度又は中等度〜重度の外傷性脳損傷（ＴＢＩ）を負っているのかどうかを決定するステップであって、（ｉ）ＵＣＨ−Ｌ１の、試料中レベルが、ＵＣＨ−Ｌ１の基準レベルより高い場合、対象が、中等度〜重度の外傷性脳損傷を有すると決定され、ＵＣＨ−Ｌ１の、試料中レベルが、ＵＣＨ−Ｌ１の基準レベルより低い場合、対象が、軽度外傷性脳損傷を有すると決定される；（ｉｉ）ＵＣＨ−Ｌ１の第１の時点において採取された試料中レベルからＵＣＨ−Ｌ１の第２の時点において採取された試料中レベルへ、統計学的に有意な上昇若しくは低下が見られる場合、対象が、中等度〜重度の外傷性脳損傷を有すると決定され、ＵＣＨ−Ｌ１の第１の時点において採取された試料中レベルからＵＣＨ−Ｌ１の第２の時点において採取された試料中レベルへ、統計学的に有意な上昇若しくは低下が見られない場合、対象が、軽度外傷性脳損傷を有すると決定される；（ｉｉｉ）ＵＣＨ−Ｌ１のレベルが、第１の試料から第２の試料へ、少なくとも絶対量の低下若しくは上昇する場合、対象が、中等度〜重度の外傷性脳損傷を有すると決定される、若しくは、ＵＣＨ−Ｌ１のレベルの、第１の試料から、第２の試料への、少なくとも絶対量の低下若しくは上昇が見られない場合、対象が、軽度外傷性脳損傷を有すると決定される；（ｉｖ）ＵＣＨ−Ｌ１のレベルが、第１の試料から第２の試料へ、少なくとも第１の絶対量の低下若しくは上昇する場合、対象が、中等度〜重度の外傷性脳損傷を有すると決定される、若しくは、ＵＣＨ−Ｌ１のレベルが、第１の試料から第２の試料へ、少なくとも第２の絶対量の低下若しくは上昇をする場合、対象が、軽度外傷性脳損傷を有すると決定される；又は（ｖ）ＵＣＨ−Ｌ１の、試料中レベルが、ＵＣＨ−Ｌ１の基準レベルより高い、若しくはＵＣＨ−Ｌ１の第１の時点において採取された試料中レベルからＵＣＨ−Ｌ１の第２の時点において採取された試料中レベルへ量Ｘの有意な上昇若しくは低下が見られる場合、対象が、中等度〜重度の外傷性脳損傷を有すると決定され、ＵＣＨ−Ｌ１の、試料中レベルが、ＵＣＨ−Ｌ１の基準レベルより低い、若しくはＵＣＨ−Ｌ１の第１の時点において採取された試料中レベルからＵＣＨ−Ｌ１の第２の時点において採取された試料中レベルへ量Ｘを超える有意な上昇若しくは低下が見られない場合、対象が、軽度外傷性脳損傷を有すると決定されるステップを含む方法。
【０３９８】
条項２．第１の時点が、推測される損傷の約０〜約１２時間後であり、統計学的に有意な上昇又は低下が、第２の時点から第１の時点へ、約１倍を超える、若しくは約１分の１未満である；第１の時点が、推測される損傷の約０〜約１２時間後であり、統計学的に有意な上昇又は低下が、第２の時点から第１の時点へ、約０．７３倍を超える、若しくは約０．７３分の１未満である；又は第１の時点が、推測される損傷の約０〜約１２時間後であり、ＵＣＨ−Ｌ１の基準レベルが、約３５０ｐｇ／ｍＬ〜約５５０ｐｇ／ｍＬの間であり、統計学的に有意な上昇若しくは低下が、第２の時点から第１の時点へ、約０．７３倍を超える、若しくは約０．７３分の１未満である、条項１に記載の方法。
【０３９９】
条項３．対象が、アッセイが実施される前に、又は実施された後において、ＧＣＳ（Ｇｌａｓｇｏｗ  Ｃｏｍａ  Ｓｃａｌｅ）スコアを受けている、条項１又は２に記載の方法。
【０４００】
条項４．対象が、ＧＣＳ（Ｇｌａｓｇｏｗ  Ｃｏｍａ  Ｓｃａｌｅ）スコアに基づき、中等度〜重度の外傷性脳損傷を有すると推測される、条項３に記載の方法。
【０４０１】
条項５．基準レベルが、中等度外傷性脳損傷及び重度外傷性脳損傷を有する対象と相関する、条項４に記載の方法。
【０４０２】
条項６．基準レベルが、３〜１２のＧＣＳ（Ｇｌａｓｇｏｗ  Ｃｏｍａ  Ｓｃａｌｅ）スコアと相関する、条項５に記載の方法。
【０４０３】
条項７．対象が、ＧＣＳ（Ｇｌａｓｇｏｗ  Ｃｏｍａ  Ｓｃａｌｅ）スコアに基づき、軽度外傷性脳損傷を有すると推測される、条項３に記載の方法。
【０４０４】
条項８．基準レベルが、軽度外傷性脳損傷を有する対象と相関する、条項７に記載の方法。
【０４０５】
条項９．基準レベルが、１３〜１５のＧＣＳ（Ｇｌａｓｇｏｗ  Ｃｏｍａ  Ｓｃａｌｅ）スコアと相関する、条項８に記載の方法。
【０４０６】
条項１０．基準レベルが、少なくとも約８５％〜１００％の間の感度及び少なくとも約３０％〜１００％の間の特異度を有するアッセイにより決定される、条項１〜９のいずれか一項に記載の方法。
【０４０７】
条項１１．基準レベルが、少なくとも約９９％の感度及び少なくとも約７５％の特異度を有するアッセイにより決定される、条項１〜１０のいずれか一項に記載の方法。
【０４０８】
条項１２．基準レベルが、少なくとも約５０ｐｇ／ｍＬ〜約１２０００ｐｇ／ｍＬの間である、条項１〜１１のいずれか一項に記載の方法。
【０４０９】
条項１３．基準レベルが、少なくとも約６５ｐｇ／ｍＬ〜約９０１９ｐｇ／ｍＬの間である、条項１〜１２のいずれか一項に記載の方法。
【０４１０】
条項１４．試料が、推測される損傷後０〜６時間以内に採取され、基準レベルが、約１００％の感度及び少なくとも約３３％の特異度を有するアッセイにより決定される、条項１〜１３のいずれか一項に記載の方法。
【０４１１】
条項１５．試料が、推測される損傷後０〜６時間以内に採取され、基準レベルが、約３１１ｐｇ／ｍＬである、条項１４に記載の方法。
【０４１２】
条項１６．試料が、推測される損傷後０〜６時間以内に採取され、基準レベルが、約１００％の感度及び約１００％の特異度を有するアッセイにより決定される、条項１〜１３のいずれか一項に記載の方法。
【０４１３】
条項１７．試料が、推測される損傷後０〜６時間以内に採取され、基準レベルが、約９０１９ｐｇ／ｍＬである、条項１６に記載の方法。
【０４１４】
条項１８．試料が、推測される損傷後、約６時間〜１２時間の間に採取され、基準レベルが、約１００％の感度及び少なくとも約３０％の特異度を有するアッセイにより決定される、条項１〜１３のいずれか一項に記載の方法。
【０４１５】
条項１９．試料が、推測される損傷後、約６時間〜１２時間の間に採取され、基準レベルが、約９８ｐｇ／ｍＬである、条項１８に記載の方法。
【０４１６】
条項２０．試料が、推測される損傷後、約６時間〜１２時間の間に採取され、基準レベルが、約１００％の感度及び少なくとも約６３％の特異度を有するアッセイにより決定される、条項１〜１３のいずれか一項に記載の方法。
【０４１７】
条項２１．試料が、推測される損傷後、約６時間〜１２時間の間に採取され、基準レベルが、約２０９ｐｇ／ｍＬである、条項２０に記載の方法。
【０４１８】
条項２２．試料が、推測される損傷後、約６時間〜１２時間の間に採取され、少なくとも約９０％の感度及び少なくとも約９６％の特異度を有するアッセイにより決定される、条項１〜１３のいずれか一項に記載の方法。
【０４１９】
条項２３．試料が、推測される損傷後、約６時間〜１２時間の間に採取され、基準レベルが、約５６９ｐｇ／ｍＬである、条項２２に記載の方法。
【０４２０】
条項２４．絶対量が、中等度外傷性脳損傷及び重度外傷性脳損傷を有する対象と相関する、条項４に記載の方法。
【０４２１】
条項２５．絶対量が、３〜１２のＧＣＳ（Ｇｌａｓｇｏｗ  Ｃｏｍａ  Ｓｃａｌｅ）スコアと相関する、条項２４に記載の方法。
【０４２２】
条項２６．絶対量が、軽度外傷性脳損傷を有する対象と相関する、条項７に記載の方法。
【０４２３】
条項２７．絶対量が、１３〜１５のＧＣＳ（Ｇｌａｓｇｏｗ  Ｃｏｍａ  Ｓｃａｌｅ）スコアと相関する、条項２６に記載の方法。
【０４２４】
条項２８．絶対量が、少なくとも約７０％〜１００％の間の感度及び少なくとも約３０％〜１００％の間の特異度を有するアッセイにより決定される、条項１〜４、７又は２４〜２７のいずれか一項に記載の方法。
【０４２５】
条項２９．試料が、推測される損傷後０〜６時間以内に採取され、絶対量が、約１００％の感度及び約１００％の特異度を有するアッセイにより決定される、条項２８に記載の方法。
【０４２６】
条項３０．試料が、推測される損傷後０〜６時間以内に採取され、絶対量が、約２５２８ｐｇ／ｍＬである、条項２９に記載の方法。
【０４２７】
条項３１．試料が、推測される損傷後６〜１２時間以内に採取され、絶対量が、少なくとも約７０％の感度及び少なくとも約９２％の特異度を有するアッセイにより決定される、条項３０に記載の方法。
【０４２８】
条項３２．試料が、推測される損傷後６〜１２時間以内に採取され、絶対量が、約１２９ｐｇ／ｍＬである、条項３１に記載の方法。
【０４２９】
条項３３．試料が、推測される損傷後０〜１０時間以内に採取され、絶対量が、約１００％の感度及び少なくとも約３６％の特異度を有するアッセイにより決定される、条項２８に記載の方法。
【０４３０】
条項３４．試料が、推測される損傷後６〜１２時間以内に採取され、絶対量が、約２５ｐｇ／ｍＬである、条項３３に記載の方法。
【０４３１】
条項３５．試料が、推測される損傷後０〜１１時間以内に採取され、絶対量が、約１００％の感度及び少なくとも約３２％の特異度を有するアッセイにより決定される、条項２８に記載の方法。
【０４３２】
条項３６．試料が、推測される損傷後０〜１１時間以内に採取され、絶対量が、約２５ｐｇ／ｍＬである、条項３５に記載の方法。
【０４３３】
条項３７．試料が、推測される損傷後０〜１２時間以内に採取され、絶対量が、少なくとも約７５％の感度及び少なくとも約７６％の特異度を有するアッセイにより決定される、条項２８に記載の方法。
【０４３４】
条項３８．試料が、推測される損傷後０〜１２時間以内に採取され、絶対量が、約１２９ｐｇ／ｍＬである、条項３７に記載の方法。
【０４３５】
条項３９．推測される頭部への損傷を負った、又は負った可能性があるヒト対象における外傷性脳損傷の程度を査定する方法であって、ａ）推測される損傷から２４時間以内に対象から採取された第１の試料、及び第１の試料が採取された約３〜約６時間後に対象から採取された第２の試料である、対象から得られた少なくとも２つの試料に対するアッセイを実施するステップ；ｂ）少なくとも２つの試料中に、ユビキチンカルボキシ末端ヒドロラーゼＬ１（ＵＣＨ−Ｌ１）からなる外傷性脳損傷の早期バイオマーカーを検出するステップであって、ＵＣＨ−Ｌ１の存在の開始が、推測される損傷の約０〜約６時間後以内に現れるステップ；ｃ）第１の試料及び第２の試料の各々におけるＵＣＨ−Ｌ１のレベルを決定し、ＵＣＨ−Ｌ１のレベルが、第１の試料から第２の試料へ、低下又は上昇するのかどうかを決定するステップ；並びにｄ）ＵＣＨ−Ｌ１のレベルが、第１の試料から第２の試料へ、低下するのか、上昇するのか、又は同じレベルを維持するのかに基づき、対象における外傷性脳損傷の程度を決定するステップを含む方法。
【０４３６】
条項４０．第１の試料が、推測される損傷後０〜約６時間以内に採取される、条項３９に記載の方法。
【０４３７】
条項４１．ＵＣＨ−Ｌ１のレベルが、第１の試料から第２の試料へ、少なくとも約２０ｐｇ／ｍＬ〜少なくとも約６１００ｐｇ／ｍＬの間で上昇又は低下する場合に、対象が、中等度〜重度の外傷性脳損傷を有することが決定される、条項３９又は４０に記載の方法。
【０４３８】
条項４２．第１の試料が、推測される損傷後０〜約６時間以内に採取され、ＵＣＨ−Ｌ１のレベルが、少なくとも約２５２８ｐｇ／ｍＬ上昇又は低下する、条項４１に記載の方法。
【０４３９】
条項４３．第１の試料が、推測される損傷後６〜約１２時間以内に採取され、ＵＣＨ−Ｌ１のレベルが、少なくとも約１２９ｐｇ／ｍＬ上昇又は低下する、条項４１に記載の方法。
【０４４０】
条項４４．第１の試料が、推測される損傷後０〜約１０時間以内又は約１１時間後に採取され、ＵＣＨ−Ｌ１のレベルが、少なくとも約２５ｐｇ／ｍＬ上昇又は低下する、条項４１に記載の方法。
【０４４１】
条項４５．第１の試料が、推測される損傷後０〜約１２時間以内に採取され、ＵＣＨ−Ｌ１のレベルが、少なくとも約１２９ｐｇ／ｍＬ上昇又は低下する、条項４１に記載の方法。
【０４４２】
条項４６．中等度〜重度の外傷性脳損傷を有すると評価されたヒト対象を、外傷性脳損傷処置により処置するステップをさらに含む、条項１〜４５のいずれか一項に記載の方法。
【０４４３】
条項４７．軽度外傷性脳損傷を有すると評価されたヒト対象をモニタリングするステップをさらに含む、条項１〜４５のいずれか一項に記載の方法。
【０４４４】
条項４８．推測される頭部への損傷を負った、又は負った可能性があるヒト対象に対して、頭部コンピュータ断層撮影（ＣＴ）スキャンを実施するのかどうかの決定の一助となる方法であって、ａ）推測される損傷から２４時間以内に対象から採取された第１の試料、及び第１の試料が採取された約３〜約６時間後に対象から採取された第２の試料である、対象から得られた少なくとも２つの試料に対するアッセイを実施するステップ；ｂ）少なくとも２つの試料中に、ユビキチンカルボキシ末端ヒドロラーゼＬ１（ＵＣＨ−Ｌ１）からなる外傷性脳損傷の早期バイオマーカーを検出するステップであって、ＵＣＨ−Ｌ１の存在の開始が、推測される損傷後約０〜約６時間以内に現れるステップ；ｃ）第１の試料及び第２の試料の各々におけるＵＣＨ−Ｌ１のレベルを決定し、ＵＣＨ−Ｌ１のレベルが、第１の試料から第２の試料へ、低下又は上昇するのかどうかを決定するステップ；並びにｄ）ＵＣＨ−Ｌ１のレベルが、第１の試料から第２の試料へ、低下するのか、上昇するのか、又は同じレベルを維持するのかに基づき、対象に対して、ＣＴスキャンを実施するのかどうかを決定するステップを含む方法。
【０４４５】
条項４９．（ｉ）ＵＣＨ−Ｌ１の、第１の試料中レベルが、ＵＣＨ−Ｌ１の基準レベルより高い場合に、ＣＴスキャンが、対象に対して実施され、ＵＣＨ−Ｌ１の、第１の試料中レベルが、ＵＣＨ−Ｌ１の基準レベルより低い場合に、ＣＴスキャンが、対象に対して実施されない；（ｉｉ）ＵＣＨ−Ｌ１の、第１の試料中レベルから、ＵＣＨ−Ｌ１の、第２の試料中レベルへの、統計学的に有意な上昇若しくは低下が見られる場合に、ＣＴスキャンが、対象に対して実施され、ＵＣＨ−Ｌ１の、第１の試料中レベルから、ＵＣＨ−Ｌ１の、第２の試料中レベルへの、統計学的に有意な上昇若しくは低下が見られない場合に、ＣＴスキャンが、対象に対して実施されない；（ｉｉｉ）ＵＣＨ−Ｌ１のレベルが、第１の試料から第２の試料へ、少なくとも絶対量の低下若しくは上昇する場合に、ＣＴスキャンが、対象に対して実施され、ＵＣＨ−Ｌ１のレベルの、第１の試料から、第２の試料への、少なくとも絶対量の低下若しくは上昇が見られない場合に、ＣＴスキャンが、対象に対して実施されない；又は（ｉｖ）ＵＣＨ−Ｌ１の、第１の試料中レベルが、ＵＣＨ−Ｌ１の基準レベルより高い、又はＵＣＨ−Ｌ１の、第１の試料中レベルから、ＵＣＨ−Ｌ１の、第２の試料中レベルへの、統計学的に有意な上昇若しくは低下が見られる場合に、ＣＴスキャンが、対象に対して実施され、ＵＣＨ−Ｌ１の、第１の試料中レベルが、ＵＣＨ−Ｌ１の基準レベルより低い、若しくはＵＣＨ−Ｌ１の、第１の試料中レベルから、ＵＣＨ−Ｌ１の、第２の試料中レベルへの、統計学的に有意な上昇若しくは低下が見られない場合に、ＣＴスキャンが、対象に対して実施されない、条項４８に記載の方法。
【０４４６】
条項５０．第１の時点が、推測される損傷の約０〜約１２時間後であり、統計学的に有意な上昇若しくは低下が、第１の時点から第２の時点へ、約２倍未満若しくは約２分の１を超える；第１の時点が、推測される損傷の約０〜約１２時間後であり、統計学的に有意な上昇若しくは低下が、第１の時点から第２の時点へ、約１．８１倍未満若しくは約１．８１分の１を超える；第１の時点が、推測される損傷の約０〜約１２時間後であり、統計学的に有意な上昇が、第２の時点から第１の時点へ、約０．５０倍を超える；第１の時点が、推測される損傷の約０〜約１２時間後であり、統計学的に有意な上昇が、第２の時点から第１の時点へ、約０．５５倍を超える；又は第１の時点が、推測される損傷の約０〜約１２時間後であり、ＵＣＨ−Ｌ１の基準レベルが、約５５０ｐｇ／ｍＬであり、統計学的に有意な上昇が、第２の時点から第１の時点へ、約０．５５倍を超える、条項４９に記載の方法。
【０４４７】
条項５１．対象が、アッセイが実施される前に、又は実施された後において、ＣＴスキャンを受けている、条項４８〜５０のいずれか一項に記載の方法。
【０４４８】
条項５２．対象が、ＣＴスキャンに基づき、外傷性脳損傷を有すると推測される、条項５１に記載の方法。
【０４４９】
条項５３．基準レベルが、頭部コンピュータ断層撮影の陽性と相関する、条項４９、５１又は５２のいずれか一項に記載の方法。
【０４５０】
条項５４．基準レベルが、少なくとも約８０％〜１００％の間の感度及び少なくとも約３０％〜１００％の間の特異度を有するアッセイにより決定される、条項４９又は５１〜５３のいずれか一項に記載の方法。
【０４５１】
条項５５．基準レベルが、少なくとも約５０ｐｇ／ｍＬ〜約１０００ｐｇ／ｍＬの間である、条項４９又は５１〜５４のいずれか一項に記載の方法。
【０４５２】
条項５６．基準レベルが、少なくとも約８６ｐｇ／ｍＬ〜約７００ｐｇ／ｍＬの間である、条項４９又は５１〜５５のいずれか一項に記載の方法。
【０４５３】
条項５７．試料が、推測される損傷後０〜６時間以内に採取され、基準レベルが、約１００％の感度及び少なくとも約３７．５％の特異度を有するアッセイにより決定される、条項４９又は５１〜５６のいずれか一項に記載の方法。
【０４５４】
条項５８．試料が、推測される損傷後０〜６時間以内に採取され、基準レベルが、約３７０ｐｇ／ｍＬである、条項５７に記載の方法。
【０４５５】
条項５９．試料が、推測される損傷後０〜６時間以内に採取され、基準レベルが、約１００％の感度及び少なくとも約７５％の特異度を有するアッセイにより決定される、条項４９又は５１〜５６のいずれか一項に記載の方法。
【０４５６】
条項６０．試料が、推測される損傷後０〜６時間以内に採取され、基準レベルが、約５０９ｐｇ／ｍＬである、条項５９に記載の方法。
【０４５７】
条項６１．試料が、推測される損傷後、約６時間〜１２時間の間に採取され、少なくとも約９６％の感度及び少なくとも約３０％の特異度を有するアッセイにより決定される、条項４９又は５１〜５６のいずれか一項に記載の方法。
【０４５８】
条項６２．試料が、推測される損傷後、約６時間〜１２時間の間に採取され、基準レベルが、約９６ｐｇ／ｍＬである、条項６１に記載の方法。
【０４５９】
条項６３．試料が、推測される損傷後、約６時間〜１２時間の間に採取され、少なくとも約８６％の感度及び少なくとも約３５％の特異度を有するアッセイにより決定される、条項４９又は５１〜５６のいずれか一項に記載の方法。
【０４６０】
条項６４．試料が、推測される損傷後、約６時間〜１２時間の間に採取され、基準レベルが、約８６ｐｇ／ｍＬである、条項６３に記載の方法。
【０４６１】
条項６５．試料が、推測される損傷後、約０時間〜１２時間の間に採取され、基準レベルが、約１００％の感度及び少なくとも約３２％の特異度を有するアッセイにより決定される、条項４９又は５１〜５６のいずれか一項に記載の方法。
【０４６２】
条項６６．試料が、推測される損傷後、約６時間〜１２時間の間に採取され、基準レベルが、約５５０ｐｇ／ｍＬである、条項６５に記載の方法。
【０４６３】
条項６７．絶対量が、頭部コンピュータ断層撮影の陽性と相関する、条項４９、５１又は５２のいずれか一項に記載の方法。
【０４６４】
条項６８．絶対量が、少なくとも約８０％〜１００％の間の感度及び少なくとも約３０％〜１００％の間の特異度を有するアッセイにより決定される、条項６７に記載の方法。
【０４６５】
条項６９．試料が、推測される損傷後０〜１０時間以内に採取され、絶対量が、少なくとも約８５％の感度及び少なくとも約４１％の特異度を有するアッセイにより決定される、条項６８に記載の方法。
【０４６６】
条項７０．試料が、推測される損傷後０〜１０時間以内に採取され、絶対量が、約２５ｐｇ／ｍＬである、条項６９に記載の方法。
【０４６７】
条項７１．試料が、推測される損傷後０〜１０時間以内に採取され、絶対量が、少なくとも約９０％の感度及び少なくとも約３５％の特異度を有するアッセイにより決定される、条項６８に記載の方法。
【０４６８】
条項７２．試料が、推測される損傷後０〜１０時間以内に採取され、絶対量が、約２３ｐｇ／ｍＬである、条項７１に記載の方法。
【０４６９】
条項７３．第２の試料が、ヒト対象から、頭部への損傷後、約５時間〜約１６時間又は約３時間〜約６時間の間に採取される、条項１〜７２のいずれか一項に記載の方法。
【０４７０】
条項７４．第２の試料が、ヒト対象から、頭部への損傷の約３時間、約４時間、約５時間、約６時間、約７時間、約８時間、約９時間、約１０時間、約１１時間又は約１２時間後に採取される、条項１〜７３のいずれか一項に記載の方法。
【０４７１】
条項７５．試料に対するアッセイを実施して、ＵＣＨ−Ｌ１ではない、１つ以上の、他のバイオマーカーのレベルを測定又は検出するステップをさらに含む、条項１〜７４のいずれか一項に記載の方法。
【０４７２】
条項７６．アッセイが、Ｉ．１つ以上の他のバイオマーカーの、第１の試料中レベル及び第２の試料中レベルを測定又は検出するステップ、ＩＩ．１つ以上の他のバイオマーカーのレベルの、第１の試料から第２の試料へ低下又は上昇を決定するステップ、及びＩＩＩ．１つ以上の他のバイオマーカーの第１の試料中レベルから１つ以上の他のバイオマーカーの第２の試料中レベルへ、統計学的に有意な低下若しくは上昇が見られる場合に、ヒト対象を、軽度外傷性脳損傷を有すると評価するステップを含む、条項７５に記載の方法。
【０４７３】
条項７７．１つ以上の他のバイオマーカーが、Ｓ１００β、ニューロン特異的エノラーゼ（ＮＳＥ）、グリア細胞線維性酸性タンパク質（ＵＣＨ−Ｌ１）、アポリポタンパク質１、タウ、Ｃ反応性タンパク質（ＣＲＰ）、遊離脳由来神経栄養因子（ＢＤＮＦ）、ｐ−タウ、総ＢＤＮＦ、トロポニンＩ（ＴｎＩ）及びこれらの組合せからなる群から選択される、条項７５又は７６に記載の方法。
【０４７４】
条項７８．１つ以上の他のバイオマーカーが、Ｓ１００β、ＢＤＮＦ又はＣＲＰである、条項７７に記載の方法。
【０４７５】
条項７９．軽度外傷性脳損傷を有すると評価されたヒト対象を、軽度外傷性脳損傷処置により処置するステップをさらに含む、条項１〜７８のいずれか一項に記載の方法。
【０４７６】
条項８０．軽度外傷性脳損傷を有すると評価されたヒト対象をモニタリングするステップをさらに含む、条項１〜７９のいずれか一項に記載の方法。
【０４７７】
条項８１．ＵＣＨ−Ｌ１のレベルを測定するステップが、イムノアッセイによりなされる、条項１〜８０のいずれか一項に記載の方法。
【０４７８】
条項８２．ＵＣＨ−Ｌ１のレベルを測定するステップが、Ａ．試料を、同時に、又は任意の順序において逐次的に、（１）ＵＣＨ−Ｌ１上又はＵＣＨ−Ｌ１断片上のエピトープに結合して捕捉抗体−ＵＣＨ−Ｌ１抗原複合体を形成する捕捉抗体、及び（２）検出可能な標識を含み、捕捉抗体が結合していないＵＣＨ−Ｌ１上のエピトープに結合してＵＣＨ−Ｌ１抗原−検出抗体複合体を形成する検出抗体と接触させることにより、捕捉抗体−ＵＣＨ−Ｌ１抗原−検出抗体複合体が形成されること、並びにＢ．ＵＣＨ−Ｌ１の、試料中量又は試料中濃度を、捕捉抗体−ＵＣＨ−Ｌ１抗原−検出抗体複合体内の検出可能な標識により発生したシグナルに基づき測定することを含む、条項１〜８１のいずれか一項に記載の方法。
【０４７９】
条項８３．試料が、全血試料、血清試料、脳脊髄液試料及び血漿試料からなる群から選択される、条項１〜８２のいずれか一項に記載の方法。
【０４８０】
条項８４．試料が、ヒト対象が、物理的振盪、閉鎖性頭部外傷若しくは開放性頭部外傷を結果としてもたらす外部の機械的力若しくは他の力、１回以上の転倒、爆発又は爆破による鈍的衝撃により引き起こされた頭部への損傷、又は他の種類の鈍的外傷を負った後に得られる、条項１〜８３のいずれか一項に記載の方法。
【０４８１】
条項８５．ヒト対象が、化学物質、毒素又は化学物質と毒素との組合せを摂取した、又はこれらへと曝露された後において試料が得られる、条項１〜８３のいずれか一項に記載の方法。
【０４８２】
条項８６．化学物質又は毒素が、火、カビ、アスベスト、害虫駆除剤、殺虫剤、有機溶剤、塗料、糊、ガス、有機金属、乱用薬物又はこれらの１つ以上の組合せである、条項８５に記載の方法。
【０４８３】
条項８７．試料が、自己免疫疾患、代謝性障害、脳腫瘍、低酸素症、ウイルス、髄膜炎、水頭症又はこれらの組合せを患うヒト対象から得られる、条項１〜８３のいずれか一項に記載の方法。
【０４８４】
条項８８．ヒト対象の臨床状態、ヒト対象の検査値、軽度、中等度〜重度の外傷性脳損傷を患うものとしての、ヒト対象の分類、ヒト対象による、低レベル又は高レベルのＵＣＨ−Ｌ１の呈示、及び前記ヒト対象が、頭部への損傷を負った可能性がある、任意の事象のタイミングからなる群から選択された因子に関わらず、任意のヒト対象に対して実行されうる、条項１〜８３のいずれか一項に記載の方法。
【０４８５】
条項８９．頭部損傷（外傷性脳損傷のような）を負った、又は負った可能性があるヒト対象の診断及び査定の一助となる方法であって、
ａ）推測される頭部損傷後２４時間以内に、対象から採取された試料（生物学的試料のような）に対するアッセイを実施して、ユビキチンカルボキシ末端ヒドロラーゼＬ１（ＵＣＨ−Ｌ１）の、試料中レベルを測定又は検出するステップ；及び
ｂ）対象が、軽度又は中等度〜重度の外傷性脳損傷（ＴＢＩ）を負っているのかどうかを決定するステップであって、
（ｉ）ＵＣＨ−Ｌ１の、試料中レベルが、ＵＣＨ−Ｌ１の基準レベルより高い場合、対象が、中等度〜重度の外傷性脳損傷を有すると決定され、ＵＣＨ−Ｌ１の、試料中レベルが、ＵＣＨ−Ｌ１の基準レベルより低い場合、対象が、軽度外傷性脳損傷を有すると決定される；
（ｉｉ）ＵＣＨ−Ｌ１の、第１の時点において採取された試料中レベルから、ＵＣＨ−Ｌ１の、第２の時点において採取された試料中レベルへの、統計学的に有意な上昇若しくは低下が見られる場合、対象が、中等度〜重度の外傷性脳損傷を有すると決定され、ＵＣＨ−Ｌ１の、第１の時点において採取された試料中レベルから、ＵＣＨ−Ｌ１の、第２の時点において採取された試料中レベルへの、統計学的に有意な上昇若しくは低下が見られない場合、対象が、軽度外傷性脳損傷を有すると決定される；
（ｉｉｉ）ＵＣＨ−Ｌ１のレベルが、第１の試料から第２の試料へ、少なくとも絶対量の低下若しくは上昇する場合、対象が、中等度〜重度の外傷性脳損傷を有すると決定される、若しくはＵＣＨ−Ｌ１のレベルの第１の試料から第２の試料へ、少なくとも絶対量の低下若しくは上昇が見られない場合、対象が、軽度外傷性脳損傷を有すると決定される；
（ｉｖ）ＵＣＨ−Ｌ１のレベルが、第１の試料から第２の試料へ、少なくとも第１の絶対量の低下若しくは上昇する場合、対象が、中等度〜重度の外傷性脳損傷を有すると決定される、若しくはＵＣＨ−Ｌ１のレベルが、第１の試料から第２の試料へ、少なくとも第２の絶対量の低下若しくは上昇する場合、対象が、軽度外傷性脳損傷を有すると決定される；又は
（ｖ）ＵＣＨ−Ｌ１の試料中レベルがＵＣＨ−Ｌ１の基準レベルより高い、若しくはＵＣＨ−Ｌ１の第１の時点において採取された試料中レベルからＵＣＨ−Ｌ１の第２の時点において採取された試料中レベルへ量Ｘの有意な上昇若しくは低下が見られる場合、対象が、中等度〜重度の外傷性脳損傷を有すると決定され、ＵＣＨ−Ｌ１の試料中レベルがＵＣＨ−Ｌ１の基準レベルより低い、若しくはＵＣＨ−Ｌ１の第１の時点において採取された試料中レベルからＵＣＨ−Ｌ１の第２の時点において採取された試料中レベルへ量Ｘを超える有意な上昇若しくは低下が見られない場合、対象が、軽度外傷性脳損傷を有すると決定される
ステップ
を含む方法。
【０４８６】
条項９０．ヒト対象を、頭部損傷（外傷性脳損傷のような）について査定する方法であって、
ａ）推測される頭部損傷後２４時間以内に、対象から採取された試料（生物学的試料のような）に対するアッセイを実施して、ユビキチンカルボキシ末端ヒドロラーゼＬ１（ＵＣＨ−Ｌ１）の、試料中レベルを測定するステップ；及び
ｂ）対象が、軽度又は中等度〜重度の外傷性脳損傷（ＴＢＩ）を負っているのかどうかを決定するステップであって、
（ｉ）ＵＣＨ−Ｌ１の試料中レベルがＵＣＨ−Ｌ１の基準レベルより高い場合、対象が中等度〜重度のＴＢＩを負っており、ＵＣＨ−Ｌ１の試料中レベルがＵＣＨ−Ｌ１の基準レベルより低い場合、対象が軽度ＴＢＩを負っている；
（ｉｉ）ＵＣＨ−Ｌ１の第１の時点において採取された試料中レベルからＵＣＨ−Ｌ１の第２の時点において採取された試料中レベルへ、統計学的に有意な上昇若しくは低下が見られる場合、対象が中等度〜重度のＴＢＩを負っており、ＵＣＨ−Ｌ１の第１の時点において採取された試料中レベルからＵＣＨ−Ｌ１の第２の時点において採取された試料中レベルへ、統計学的に有意な上昇若しくは低下が見られない場合、対象が軽度ＴＢＩを負っている；
（ｉｉｉ）ＵＣＨ−Ｌ１のレベルが、第１の試料から第２の試料へ、少なくとも絶対量の低下若しくは上昇する場合、対象が中等度〜重度のＴＢＩを負っており、ＵＣＨ−Ｌ１のレベルの第１の試料から第２の試料への少なくとも絶対量の低下若しくは上昇が見られない場合、対象が軽度ＴＢＩを負っている；又は
（ｉｖ）ＵＣＨ−Ｌ１のレベルが、第１の試料から第２の試料へ、少なくとも第１の絶対量の低下若しくは上昇する場合、対象が中等度〜重度のＴＢＩを負っており、ＵＣＨ−Ｌ１のレベルが、第１の試料から第２の試料へ、少なくとも第２の絶対量の低下若しくは上昇する場合、対象が軽度ＴＢＩを負っている
ステップ
を含む方法。
【０４８７】
条項９１．第１の時点が、推測される頭部損傷の約０〜約１２時間後であり、統計学的に有意な上昇又は低下が、
（ａ）第２の時点から第１の時点へ、約１倍を超える、若しくは約１分の１未満；
（ｂ）第２の時点から第１の時点へ、約０．７３倍を超える、若しくは約０．７３分の１未満；又は
（ｃ）第２の時点から第１の時点へ、約０．７３倍を超える、若しくは約０．７３分の１未満
からなる群から選択され、ＵＣＨ−Ｌ１の基準レベルが、約３５０ｐｇ／ｍＬ〜約５５０ｐｇ／ｍＬの間である、条項８９又は９０に記載の方法。
【０４８８】
条項９２．対象が、アッセイが実施される前に、又は実施された後において、ＧＣＳ（Ｇｌａｓｇｏｗ  Ｃｏｍａ  Ｓｃａｌｅ）スコアを受けている、条項８９〜９１のいずれかに記載の方法。
【０４８９】
条項９３．対象が、ＧＣＳ（Ｇｌａｓｇｏｗ  Ｃｏｍａ  Ｓｃａｌｅ）スコアに基づき、中等度〜重度のＴＢＩを有すると推測される、条項９２に記載の方法。
【０４９０】
条項９４．基準レベルが、中等度〜重度のＴＢＩを有する対象と相関する、条項８９〜９３のいずれかに記載の方法。
【０４９１】
条項９５．基準レベルが、３〜１２のＧＣＳ（Ｇｌａｓｇｏｗ  Ｃｏｍａ  Ｓｃａｌｅ）スコアと相関する、条項９４に記載の方法。
【０４９２】
条項９６．対象が、ＧＣＳ（Ｇｌａｓｇｏｗ  Ｃｏｍａ  Ｓｃａｌｅ）スコアに基づき、軽度ＴＢＩを有すると推測される、条項９２に記載の方法。
【０４９３】
条項９７．基準レベルが、軽度ＴＢＩを有する対象と相関する、条項８９〜９２のいずれかに記載の方法。
【０４９４】
条項９８．基準レベルが、１３〜１５のＧＣＳ（Ｇｌａｓｇｏｗ  Ｃｏｍａ  Ｓｃａｌｅ）スコアと相関する、条項９７に記載の方法。
【０４９５】
条項９９．基準レベルが、（ａ）少なくとも約８５％〜約１００％の間の感度及び少なくとも約３０％〜約１００％の間の特異度を有するアッセイにより決定される；（ｂ）少なくとも約９９％の感度及び少なくとも約７５％の特異度を有するアッセイにより決定される；（ｃ）少なくとも約５０ｐｇ／ｍＬ〜約１２０００ｐｇ／ｍＬの間である；又は（ｄ）少なくとも約６５ｐｇ／ｍＬ〜約９０１９ｐｇ／ｍＬの間である、条項８９〜９８のいずれかに記載の方法。
【０４９６】
条項１００．試料が、（ａ）推測される頭部損傷後、約０〜約６時間以内に採取され、基準レベルが、約１００％の感度及び少なくとも約３３％の特異度を有するアッセイにより決定される；（ｂ）推測される頭部損傷後、約０〜約６時間以内に採取され、基準レベルが、約１００％の感度及び約１００％の特異度を有するアッセイにより決定される；（ｃ）推測される頭部損傷後、約６時間〜約１２時間の間に採取され、基準レベルが、約１００％の感度及び少なくとも約３０％の特異度を有するアッセイにより決定される；（ｄ）推測される頭部損傷後、約６時間〜約１２時間の間に採取され、基準レベルが、約１００％の感度及び少なくとも約６３％の特異度を有するアッセイにより決定される；又は（ｅ）推測される頭部損傷後、約６時間〜約１２時間の間に採取され、少なくとも約９０％の感度及び少なくとも約９６％の特異度を有するアッセイにより決定される、条項８９〜９９のいずれかに記載の方法。
【０４９７】
条項１０１．試料が、（ａ）推測される頭部損傷後０〜約６時間以内に採取され、基準レベルが、約３１１ｐｇ／ｍＬである；（ｂ）推測される頭部損傷後０〜６時間以内に採取され、基準レベルが、約９０１９ｐｇ／ｍＬである；（ｃ）推測される頭部損傷後、約６時間〜約１２時間の間に採取され、基準レベルが、約９８ｐｇ／ｍＬである；（ｄ）推測される頭部損傷後、約６時間〜約１２時間の間に採取され、基準レベルが、約２０９ｐｇ／ｍＬである；又は（ｅ）推測される頭部損傷後、約６時間〜約１２時間の間に採取され、基準レベルが、約５６９ｐｇ／ｍＬである、条項８９〜１００のいずれかに記載の方法。
【０４９８】
条項１０２．絶対量が、中等度〜重度のＴＢＩを有する対象と相関する、条項８９又は９０に記載の方法。
【０４９９】
条項１０３．絶対量が、３〜１２のＧＣＳ（Ｇｌａｓｇｏｗ  Ｃｏｍａ  Ｓｃａｌｅ）スコアと相関する、条項１０２に記載の方法。
【０５００】
条項１０４．絶対量が、軽度ＴＢＩを有する対象と相関する、条項８９又は９０に記載の方法。
【０５０１】
条項１０５．絶対量が、１３〜１５のＧＣＳ（Ｇｌａｓｇｏｗ  Ｃｏｍａ  Ｓｃａｌｅ）スコアと相関する、条項１０４に記載の方法。
【０５０２】
条項１０６．絶対量が、少なくとも約７０％〜約１００％の間の感度及び少なくとも約３０％〜約１００％の間の特異度を有するアッセイにより決定される、条項８９、９０、及び１０２〜１０５のいずれかに記載の方法。
【０５０３】
条項１０７．試料が、（ａ）推測される頭部損傷後、約０〜約６時間以内に採取され、絶対量が、約１００％の感度及び約１００％の特異度を有するアッセイにより決定される；（ｂ）推測される頭部損傷後、約６〜約１２時間以内に採取され、絶対量が、少なくとも約７０％の感度及び少なくとも約９２％の特異度を有するアッセイにより決定される；（ｃ）推測される頭部損傷後、約０〜約１０時間以内に採取され、絶対量が、約１００％の感度及び少なくとも約３６％の特異度を有するアッセイにより決定される；（ｄ）推測される頭部損傷後、約０〜約１１時間以内に採取され、絶対量が、約１００％の感度及び少なくとも約３２％の特異度を有するアッセイにより決定される；又は（ｅ）推測される頭部損傷後、約０〜約１２時間以内に採取され、絶対量が、少なくとも約７５％の感度及び少なくとも約７６％の特異度を有するアッセイにより決定される、条項１０６に記載の方法。
【０５０４】
条項１０８．試料が、（ａ）推測される頭部損傷後、約０〜約６時間以内に採取され、絶対量が、約２５２８ｐｇ／ｍＬである；（ｂ）推測される頭部損傷後、約６〜約１２時間以内に採取され、絶対量が、約１２９ｐｇ／ｍＬである；（ｃ）推測される頭部損傷後、約６〜約１２時間以内に採取され、絶対量が、約２５ｐｇ／ｍＬである；（ｄ）推測される頭部損傷後０〜１１時間以内に採取され、絶対量が、約２５ｐｇ／ｍＬである；又は（ｅ）推測される頭部損傷後、約０〜約１２時間以内に採取され、絶対量が、約１２９ｐｇ／ｍＬである、条項１０６又は１０７に記載の方法。
【０５０５】
条項１０９．頭部損傷を負った、又は負った可能性があるヒト対象における外傷性脳損傷の程度を決定する一助となる方法であって、
ａ）推測される頭部損傷から２４時間以内に対象から採取された第１の試料、及び第１の試料が採取された約３〜約６時間後に対象から採取された第２の試料である、対象から得られた少なくとも２つの試料（生物学的試料のような）に対するアッセイを実施するステップ；
ｂ）少なくとも２つの試料中に、ユビキチンカルボキシ末端ヒドロラーゼＬ１（ＵＣＨ−Ｌ１）からなる外傷性脳損傷の早期バイオマーカーを検出するステップであって、ＵＣＨ−Ｌ１の存在の開始が、推測される頭部損傷後、約０〜約６時間以内に現れるステップ；
ｃ）第１の試料及び第２の試料の各々におけるＵＣＨ−Ｌ１のレベルを決定し、ＵＣＨ−Ｌ１のレベルが、第１の試料から第２の試料へ、低下又は上昇するのかどうかを決定するステップ；及び
ｄ）ＵＣＨ−Ｌ１のレベルが、第１の試料から第２の試料へ、低下するのか、上昇するのか、又は同じレベルを維持するのかに基づき、対象における外傷性脳損傷の程度を決定するステップであって、対象が、軽度又は中等度〜重度の外傷性脳損傷を負っているのかどうかを決定することを含む、外傷性脳損傷の程度を決定するステップ
を含む方法。
【０５０６】
条項１１０．ヒト対象における外傷性脳損傷（ＴＢＩ）の程度を査定する方法であって、
ａ）アッセイを実施して、推測される頭部損傷から２４時間以内に対象から採取された第１の試料、及び第１の試料が採取された約３〜約６時間後に対象から採取された第２の試料である、対象から得られた少なくとも２つの試料（生物学的試料のような）中の、ユビキチンカルボキシ末端ヒドロラーゼＬ１（ＵＣＨ−Ｌ１）を定量するステップ；並びに
ｂ）ＵＣＨ−Ｌ１のレベルが、第１の試料から第２の試料へ、低下するのか、上昇するのか、又は同じレベルを維持するのかに基づき、対象におけるＴＢＩの程度を決定するステップであって、対象が、軽度又は中等度〜重度の外傷性脳損傷を負っているのかどうかを決定することを含む、外傷性脳損傷の程度を決定するステップ
を含む方法。
【０５０７】
条項１１１．第１の試料が、推測される頭部損傷後、約０〜約６時間以内に採取される、条項１０９又は１１０に記載の方法。
【０５０８】
条項１１２．ＵＣＨ−Ｌ１のレベルが、第１の試料から第２の試料へ、少なくとも約２０ｐｇ／ｍＬ〜少なくとも約６１００ｐｇ／ｍＬの間で上昇又は低下する場合に、対象が、中等度〜重度のＴＢＩを有することが決定される、条項１０９〜１１１のいずれかに記載の方法。
【０５０９】
条項１１３．第１の試料が、（ａ）推測される頭部損傷後、約０〜約６時間以内に採取され、ＵＣＨ−Ｌ１のレベルが、少なくとも約２５２８ｐｇ／ｍＬ上昇若しくは低下する；（ｂ）推測される頭部損傷後、約６〜約１２時間以内に採取され、ＵＣＨ−Ｌ１のレベルが、少なくとも約１２９ｐｇ／ｍＬ上昇若しくは低下する；（ｃ）推測される頭部損傷後、約０〜約１０時間以内に採取され、ＵＣＨ−Ｌ１のレベルが、少なくとも約２５ｐｇ／ｍＬ上昇若しくは低下する；（ｄ）推測される頭部損傷後、約０〜約１１時間以内に採取され、ＵＣＨ−Ｌ１のレベルが、少なくとも約２５ｐｇ／ｍＬ上昇若しくは低下する；又は（ｅ）推測される頭部損傷後、約０〜約１２時間以内に採取され、ＵＣＨ−Ｌ１のレベルが、少なくとも約１２９ｐｇ／ｍＬ上昇又は低下する、条項１０９又は１１０に記載の方法。
【０５１０】
条項１１４．（ａ）軽度又は中等度〜重度のＴＢＩを有すると評価されたヒト対象を、ＴＢＩのための処置により処置するステップ；及び、任意選択的に、（ｂ）前記処置を受けた後のヒト対象をモニタリングするステップをさらに含む、条項８９〜１１３のいずれかに記載の方法。
【０５１１】
条項１１５．軽度又は中等度〜重度のＴＢＩを有すると評価されたヒト対象をモニタリングするステップをさらに含む、条項８９〜１１３のいずれかに記載の方法。
【０５１２】
条項１１６．頭部損傷（外傷性脳損傷のような）を負った、又は負った可能性があるヒト対象に対して、頭部コンピュータ断層撮影（ＣＴ）スキャンを実施するのかどうかの決定の一助となる方法であって、
ａ）推測される頭部損傷から２４時間以内に対象から採取された第１の試料、及び第１の試料が採取された約３〜約６時間後に対象から採取された第２の試料である、対象から得られた少なくとも２つの試料（生物学的試料のような）中の、ユビキチンカルボキシ末端ヒドロラーゼＬ１（ＵＣＨ−Ｌ１）を検出又は測定するアッセイを実施するステップ；
ｂ）第１の試料及び第２の試料の各々におけるＵＣＨ−Ｌ１のレベルを決定し、ＵＣＨ−Ｌ１のレベルが、第１の試料から第２の試料へ、低下又は上昇するのかどうかを決定するステップ；及び
ｃ）ＵＣＨ−Ｌ１のレベルが、第１の試料から第２の試料へ、低下するのか、上昇するのか、又は同じレベルを維持するのかに基づき、対象に対して、ＣＴスキャンを実施するのかどうかを決定するステップであって、
（ｉ）ＵＣＨ−Ｌ１の、第１の試料中レベルがＵＣＨ−Ｌ１の基準レベルより高い場合に、ＣＴスキャンが実施され、ＵＣＨ−Ｌ１の第１の試料中レベルがＵＣＨ−Ｌ１の基準レベルより低い場合に、ＣＴスキャンが実施されない；
（ｉｉ）ＵＣＨ−Ｌ１の第１の試料中レベルからＵＣＨ−Ｌ１の第２の試料中レベルへ、統計学的に有意な上昇若しくは低下が見られる場合に、ＣＴスキャンが実施され、ＵＣＨ−Ｌ１の第１の試料中レベルからＵＣＨ−Ｌ１の第２の試料中レベルへ、統計学的に有意な上昇若しくは低下が見られない場合に、ＣＴスキャンが実施されない；又は
（ｉｉｉ）ＵＣＨ−Ｌ１のレベルが、第１の試料から第２の試料へ、少なくとも絶対量の低下若しくは上昇する場合に、ＣＴスキャンが実施され、ＵＣＨ−Ｌ１のレベルの第１の試料から第２の試料へ、少なくとも絶対量の低下若しくは上昇が見られない場合に、ＣＴスキャンが実施されない
ステップ
を含む方法。
【０５１３】
条項１１７．ヒト対象に対して、頭部コンピュータ断層撮影（ＣＴ）スキャンを実施するのかどうかを査定する方法であって、
ａ）アッセイを実施して、推測される頭部損傷後約２４時間以内に対象から採取された第１の試料、及び第１の試料が採取された約３〜約６時間後に対象から採取された第２の試料である、対象から得られた少なくとも２つの試料（生物学的試料のような）中の、ユビキチンカルボキシ末端ヒドロラーゼＬ１（ＵＣＨ−Ｌ１）を定量するステップ；並びに
ｂ）ＵＣＨ−Ｌ１のレベルが、第１の試料から第２の試料へ、低下するのか、上昇するのか、又は同じレベルを維持するのかに基づき、対象に対して、ＣＴスキャンを実施するのかどうかを決定するステップであって、
（ｉ）ＵＣＨ−Ｌ１の第１の試料中レベルがＵＣＨ−Ｌ１の基準レベルより高い場合に、ＣＴスキャンが実施され、ＵＣＨ−Ｌ１の第１の試料中レベルがＵＣＨ−Ｌ１の基準レベルより低い場合に、ＣＴスキャンが実施されない；
（ｉｉ）ＵＣＨ−Ｌ１の第１の試料中レベルからＵＣＨ−Ｌ１の第２の試料中レベルへ統計学的に有意な上昇若しくは低下が見られる場合に、ＣＴスキャンが実施され、ＵＣＨ−Ｌ１の第１の試料中レベルからＵＣＨ−Ｌ１の第２の試料中レベルへ統計学的に有意な上昇若しくは低下が見られない場合に、ＣＴスキャンが実施されない；又は
（ｉｉｉ）ＵＣＨ−Ｌ１のレベルが、第１の試料から第２の試料へ、少なくとも絶対量の低下若しくは上昇する場合に、ＣＴスキャンが実施され、ＵＣＨ−Ｌ１のレベルの第１の試料から第２の試料へ少なくとも絶対量の低下若しくは上昇が見られない場合に、ＣＴスキャンが実施されない
ステップ
を含む方法。
【０５１４】
条項１１８．第１の時点が、推測される頭部損傷の約０〜約１２時間後であり、統計学的に有意な上昇若しくは低下が、第１の時点から第２の時点へ、約２倍未満若しくは約２分の１を超える；第１の時点が、推測される頭部損傷の約０〜約１２時間後であり、統計学的に有意な上昇若しくは低下が、第１の時点から第２の時点へ、約１．８１倍未満若しくは約１．８１分の１を超える；第１の時点が、推測される頭部損傷の約０〜約１２時間後であり、統計学的に有意な上昇が、第２の時点から第１の時点へ、約０．５０倍を超える；第１の時点が、推測される頭部損傷の約０〜約１２時間後であり、統計学的に有意な上昇が、第２の時点から第１の時点へ、約０．５５倍を超える；又は第１の時点が、推測される頭部損傷の約０〜約１２時間後であり、ＵＣＨ−Ｌ１の基準レベルが、約５５０ｐｇ／ｍＬであり、統計学的に有意な上昇が、第２の時点から第１の時点へ、約０．５５倍を超える、条項１１６又は１１７に記載の方法。
【０５１５】
条項１１９．対象が、アッセイが実施される前に、又は実施された後において、ＣＴスキャンを受けている、条項１１６〜１１８のいずれかに記載の方法。
【０５１６】
条項１２０．対象が、ＣＴスキャンに基づき、外傷性脳損傷を有すると推測される、条項１１９に記載の方法。
【０５１７】
条項１２１．基準レベルが、陽性の頭部ＣＴスキャンと相関する、条項１１６〜１２０のいずれかに記載の方法。
【０５１８】
条項１２２．基準レベルが、（ａ）少なくとも約８０％〜約１００％の間の感度及び少なくとも約３０％〜約１００％の間の特異度を有するアッセイにより決定される；（ｂ）少なくとも約５０ｐｇ／ｍＬ〜約１０００ｐｇ／ｍＬの間である；又は（ｃ）少なくとも約８６ｐｇ／ｍＬ〜約７００ｐｇ／ｍＬの間である、条項１１６〜１２１のいずれかに記載の方法。
【０５１９】
条項１２３．試料が、（ａ）推測される頭部損傷後、約０〜約６時間以内に採取され、基準レベルが、約１００％の感度及び少なくとも約３７．５％の特異度を有するアッセイにより決定される；（ｂ）推測される頭部損傷後、約０〜約６時間以内に採取され、基準レベルが、約１００％の感度及び少なくとも約７５％の特異度を有するアッセイにより決定される；（ｃ）推測される頭部損傷後、約６時間〜約１２時間の間に採取され、少なくとも約９６％の感度及び少なくとも約３０％の特異度を有するアッセイにより決定される；（ｄ）推測される頭部損傷後、約６時間〜約１２時間の間に採取され、少なくとも約８６％の感度及び少なくとも約３５％の特異度を有するアッセイにより決定される；又は（ｅ）推測される頭部損傷後、約０時間〜約１２時間の間に採取され、基準レベルが、約１００％の感度及び少なくとも約３２％の特異度を有するアッセイにより決定される、条項１１６〜１２２のいずれかに記載の方法。
【０５２０】
条項１２４．試料が、（ａ）推測される頭部損傷後、約０〜約６時間以内に採取され、基準レベルが、約３７０ｐｇ／ｍＬである；（ｂ）推測される頭部損傷後、約０〜約６時間以内に採取され、基準レベルが、約５０９ｐｇ／ｍＬである；（ｃ）推測される頭部損傷後、約６時間〜約１２時間の間に採取され、基準レベルが、約９６ｐｇ／ｍＬである；（ｄ）推測される頭部損傷後、約６時間〜約１２時間の間に採取され、基準レベルが、約８６ｐｇ／ｍＬである；又は（ｅ）推測される頭部損傷後、約６時間〜約１２時間の間に採取され、基準レベルが、約５５０ｐｇ／ｍＬである、条項１１６〜１２３のいずれかに記載の方法。
【０５２１】
条項１２５．絶対量が、陽性の頭部ＣＴスキャンと相関する、条項１１６又は１１７に記載の方法。
【０５２２】
条項１２６．絶対量が、少なくとも約８０％〜約１００％の間の感度及び少なくとも約３０％〜約１００％の間の特異度を有するアッセイにより決定される、条項１１６又は１１７に記載の方法。
【０５２３】
条項１２７．試料が、（ａ）推測される頭部損傷後、約０〜約１０時間以内に採取され、絶対量が、少なくとも約８５％の感度及び少なくとも約４１％の特異度を有するアッセイにより決定される；又は（ｂ）推測される頭部損傷後、約０〜約１０時間以内に採取され、絶対量が、少なくとも約９０％の感度及び少なくとも約３５％の特異度を有するアッセイにより決定される、条項１２６に記載の方法。
【０５２４】
条項１２８．試料が、（ａ）推測される頭部損傷後、約０〜約１０時間以内に採取され、絶対量が、約２５ｐｇ／ｍＬである；又は（ｂ）推測される頭部損傷後、約０〜約１０時間以内に採取され、絶対量が、約２３ｐｇ／ｍＬである、条項１２６に記載の方法。
【０５２５】
条項１２９．第２の試料が、推測される頭部損傷後約５時間〜約１６時間又は約３時間〜約６時間の間に対象から採取される、条項８９〜１２８のいずれかに記載の方法。
【０５２６】
条項１３０．第２の試料が、推測される頭部損傷の約３時間、約４時間、約５時間、約６時間、約７時間、約８時間、約９時間、約１０時間、約１１時間又は約１２時間後に、対象から採取される、条項８９〜１２８のいずれかに記載の方法。
【０５２７】
条項１３１．試料に対するアッセイを実施して、ＵＣＨ−Ｌ１ではない、１つ以上の、他のバイオマーカーのレベルを測定又は検出するステップをさらに含む、条項８９〜１３０のいずれかに記載の方法。
【０５２８】
条項１３２．アッセイが、
（ａ）１つ以上の、他のバイオマーカーの第１の試料中レベル及び第２の試料中レベルを測定又は検出するステップ、
（ｂ）１つ以上の、他のバイオマーカーのレベルの第１の試料から第２の試料への低下又は上昇を決定するステップ、及び
（ｃ）１つ以上の他のバイオマーカーの第１の試料中レベルから１つ以上の他のバイオマーカーの第２の試料中レベルへ、統計学的に有意な低下又は上昇が見られる場合に、対象を、軽度ＴＢＩを有すると評価するステップ
を含む、条項１３１に記載の方法。
【０５２９】
条項１３３．１つ以上の、他のバイオマーカーが、Ｓ１００β、ニューロン特異的エノラーゼ（ＮＳＥ）、グリア細胞線維性酸性タンパク質（ＵＣＨ−Ｌ１）、アポリポタンパク質１、タウ、Ｃ反応性タンパク質（ＣＲＰ）、遊離脳由来神経栄養因子（ＢＤＮＦ）、ｐ−タウ、総ＢＤＮＦ、トロポニンＩ（ＴｎＩ）及びこれらの組合せからなる群から選択される、条項１３１又は１３２に記載の方法。
【０５３０】
条項１３４．１つ以上の、他のバイオマーカーが、Ｓ１００β、ＢＤＮＦ又はＣＲＰである、条項１３３に記載の方法。
【０５３１】
条項１３５．（ａ）軽度又は中等度〜重度のＴＢＩを有すると評価されたヒト対象を、ＴＢＩのための処置により処置するステップ；及び、任意選択的に、（ｂ）前記処置を受けた後のヒト対象をモニタリングするステップをさらに含む、条項８９〜１３４のいずれかに記載の方法。
【０５３２】
条項１３６．軽度又は中等度〜重度のＴＢＩを有すると評価されたヒト対象をモニタリングするステップをさらに含む、条項８９〜１３５のいずれかに記載の方法。
【０５３３】
条項１３７．ＵＣＨ−Ｌ１のレベルを測定するステップが、イムノアッセイを実施することを含む、条項８９〜１３６のいずれかに記載の方法。
【０５３４】
条項１３８．ＵＣＨ−Ｌ１のレベルを測定するステップが、
（ａ）試料を、同時に、又は任意の順序において逐次的に、
（１）ＵＣＨ−Ｌ１上又はＵＣＨ−Ｌ１断片上のエピトープに結合して捕捉抗体−ＵＣＨ−Ｌ１抗原複合体を形成する捕捉抗体、及び
（２）検出可能な標識を含み、捕捉抗体が結合していないＵＣＨ−Ｌ１上のエピトープに結合してＵＣＨ−Ｌ１抗原−検出抗体複合体を形成する検出抗体
と接触させることにより、捕捉抗体−ＵＣＨ−Ｌ１抗原−検出抗体複合体が形成されること、並びに
（ｂ）ＵＣＨ−Ｌ１の、試料中量又は試料中濃度を、捕捉抗体−ＵＣＨ−Ｌ１抗原−検出抗体複合体内の検出可能な標識により発生したシグナルに基づき測定すること
を含む、条項８９〜１３７のいずれかに記載の方法。
【０５３５】
条項１３９．試料が、全血試料、血清試料、脳脊髄液試料及び血漿試料からなる群から選択される、条項８９〜１３８のいずれかに記載の方法。
【０５３６】
条項１４０．対象が、物理的振盪、閉鎖性頭部外傷若しくは開放性頭部外傷を結果としてもたらす外部の機械的力若しくは他の力、１回以上の転倒、爆発又は爆破による鈍的衝撃により引き起こされた頭部損傷、又は他の種類の鈍的外傷を負った後に、試料が得られる、条項８９〜１３９のいずれかに記載の方法。
【０５３７】
条項１４１．対象が、化学物質、毒素又は化学物質と毒素との組合せを摂取した、又はこれらへと曝露された後において、試料が得られる、条項８９〜１３９のいずれかに記載の方法。
【０５３８】
条項１４２．化学物質又は毒素が、火、カビ、アスベスト、害虫駆除剤、殺虫剤、有機溶剤、塗料、糊、ガス、有機金属、乱用薬物又はこれらの１つ以上の組合せである、条項１４１に記載の方法。
【０５３９】
条項１４３．試料が、自己免疫疾患、代謝性障害、脳腫瘍、低酸素症、ウイルス、髄膜炎、水頭症又はこれらの組合せを患う対象から得られる、条項８９〜１３９のいずれかに記載の方法。
【０５４０】
条項１４４．ヒト対象の臨床状態、ヒト対象の検査値、軽度又は中等度〜重度のＴＢＩを患うヒト対象の分類、ヒト対象による、低レベル又は高レベルのＵＣＨ−Ｌ１の呈示、及びヒト対象が、頭部損傷を負った可能性がある、任意の事象のタイミングからなる群から選択された因子に関わらず、任意のヒト対象に対して実行されうる、条項８９〜１３９のいずれかに記載の方法。
【０５４１】
条項１４５．試料が、生物学的試料である、条項８９〜１４４のいずれかに記載の方法。
【０５４２】
条項１４６．試料が、全血試料である、条項８９〜１４５のいずれかに記載の方法。
【０５４３】
条項１４７．試料が、血清試料である、条項８９〜１４５のいずれかに記載の方法。
【０５４４】
条項１４８．試料が、血漿試料である、条項８９〜１４５のいずれかに記載の方法。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７Ａ】
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【図７Ｂ】
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【図８Ａ】
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【図８Ｂ】
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【図９Ａ】
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【図９Ｂ】
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【図１０Ａ】
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【図１０Ｂ】
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【図１１Ａ】
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【図１１Ｂ】
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【図１２Ａ】
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【図１２Ｂ】
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【図１３Ａ】
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【図１３Ｂ】
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【図１４Ａ】
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【図１４Ｂ】
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【図１５Ａ】
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【図１５Ｂ】
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【図１６】
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【図１７】
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【図１８】
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【図１９】
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【図２０】
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【図２１】
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【図２２】
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【国際調査報告】
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