(57)【要約】  本発明は、不十分なレベルのプログラニュリン（ＰＧＲＮ）を修正するのに有用であることが分かったモノクローナル抗ソルチリン抗体に関する。特に、これらの抗体は、前頭側頭型認知症（ＦＴＤ）及び筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）並びにアルツハイマー病（ＡＤ）などの他の神経変性疾患の治療に使用され得る。
2020527152.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
配列番号１４６によって定義されるソルチリンのＥ領域内に特異的に結合することが可能な抗体又はその抗原結合フラグメント。
【請求項２】
前記抗原結合フラグメントは、Ｆｖフラグメント（例えば、一本鎖Ｆｖ又はジスルフィド結合Ｆｖ）、Ｆａｂ様フラグメント（例えば、Ｆａｂフラグメント、Ｆａｂ’フラグメント又はＦ（ａｂ）２フラグメント）及びドメイン抗体（例えば、単一のＶＨ可変領域又はＶＬ可変領域）からなる群から選択される、請求項１に記載の抗体又はその抗原結合フラグメント。
【請求項３】
無傷の抗体からなる、先行請求項に記載の抗体。
【請求項４】
前記抗体は、サブタイプＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３又はＩｇＧ４の抗体からなる群から選択される、先行請求項のいずれか一項に記載の抗体又はその抗原結合フラグメント。
【請求項５】
配列番号１４６によって定義されるソルチリンのＥ領域に結合する、先行請求項のいずれか一項に記載の抗体又はその抗原結合フラグメント。
【請求項６】
配列番号１４６で定義されるソルチリンのＥ領域内の少なくとも１または複数の連続アミノ酸、例えば１、２、３、４、５、６又は７連続アミノ酸に結合する、先行請求項のいずれか一項に記載の抗体又はその抗原結合フラグメント。
【請求項７】
以下の特性：
ａ．０．５〜１０ｎＭ、例えば１〜５ｎＭ若しくは１〜２ｎＭ又はさらにそれを超える、例えば０．５ｐＭ〜５００ｐＭの、ソルチリンに対する結合親和性（ＫＤ）、
ｂ．ソルチリン発現細胞によってＰＧＲＮのクリアランスを減少させ且つ／又は阻害する能力、
ｃ．ソルチリン発現細胞によってＰＧＲＮのエンドサイトーシスを減少させ且つ／又は阻害する能力、
ｄ．脳内のＰＧＲＮの量及び／又は濃度を増加させる能力、及び／又は
ｅ．ヒト−ソルチリン発現ノックインマウスにおいて血漿中のＰＧＲＮの量及び／又は濃度を増加させる能力
の１つ又は複数を示す、先行請求項のいずれか一項に記載の抗体又はその抗原結合フラグメント。
【請求項８】
ＰＧＲＮのクリアランスを減少させ且つ／又は阻害する前記抗体又はその抗原結合フラグメントの前記能力は、２２ｎＭ以下、例えば２２ｎＭ〜１ｎＭ、又は１０ｎＭ〜１ｎＭ、又は５ｎＭ〜１ｎＭのＩＣ５０でＰＧＲＮのクリアランスを減少させ且つ／又は阻害することを含む、先行請求項１〜７のいずれか一項に記載の抗体又はその抗原結合フラグメント。
【請求項９】
ヒト、ヒト化、組み換え又はキメラ抗体である、先行請求項のいずれか一項に記載の抗体又はその抗原結合フラグメント。
【請求項１０】
ａ．配列番号１を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１、
ｂ．配列番号２を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２、
ｃ．配列番号３を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３、
ｄ．配列番号４を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１、
ｅ．配列番号５を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２、及び
ｆ．配列番号６を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３
を含む、先行請求項のいずれか一項に記載の抗体又はその抗原結合フラグメント。
【請求項１１】
配列番号１０９を含む重鎖可変領域を含む、請求項１０に記載の抗体又はその抗原結合フラグメント。
【請求項１２】
配列番号１１０を含む軽鎖可変領域を含む、請求項１０に記載の抗体又はその抗原結合フラグメント。
【請求項１３】
請求項１１及び１２に記載の重鎖可変領域及び軽鎖可変領域の両方を含む、請求項１０に記載の抗体又はその抗原結合フラグメント。
【請求項１４】
ａ．配列番号７を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１、
ｂ．配列番号８を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２、
ｃ．配列番号９を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３、
ｄ．配列番号１０を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１、
ｅ．配列番号１１を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２、及び
ｆ．配列番号１２を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３
を含む、請求項１〜９のいずれか一項に記載の抗体又はその抗原結合フラグメント。
【請求項１５】
配列番号１１１を含む重鎖可変領域を含む、請求項１４に記載の抗体又はその抗原結合フラグメント。
【請求項１６】
配列番号１１２を含む軽鎖可変領域を含む、請求項１４に記載の抗体又はその抗原結合フラグメント。
【請求項１７】
請求項１５及び１６に記載の重鎖可変領域及び軽鎖可変領域の両方を含む、請求項１４に記載の抗体又はその抗原結合フラグメント。
【請求項１８】
ａ．配列番号１３を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１、
ｂ．配列番号１４を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２、
ｃ．配列番号１５を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３、
ｄ．配列番号１６を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１、
ｅ．配列番号１７を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２、及び
ｆ．配列番号１８を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３
を含む、請求項１〜９のいずれか一項に記載の抗体又はその抗原結合フラグメント。
【請求項１９】
配列番号１１３を含む重鎖可変領域を含む、請求項１８に記載の抗体又はその抗原結合フラグメント。
【請求項２０】
配列番号１１４を含む軽鎖可変領域を含む、請求項１８に記載の抗体又はその抗原結合フラグメント。
【請求項２１】
請求項１９及び２０に記載の重鎖可変領域及び軽鎖可変領域の両方を含む、請求項１８に記載の抗体又はその抗原結合フラグメント。
【請求項２２】
ａ．配列番号１９を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１、
ｂ．配列番号２０を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２、
ｃ．配列番号２１を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３、
ｄ．配列番号２２を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１、
ｅ．配列番号２３を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２、及び
ｆ．配列番号２４を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３
を含む、請求項１〜９のいずれか一項に記載の抗体又はその抗原結合フラグメント。
【請求項２３】
配列番号１１５を含む重鎖可変領域を含む、請求項２２に記載の抗体又はその抗原結合フラグメント。
【請求項２４】
配列番号１１６を含む軽鎖可変領域を含む、請求項２２に記載の抗体又はその抗原結合フラグメント。
【請求項２５】
請求項２３及び２４に記載の重鎖可変領域及び軽鎖可変領域の両方を含む、請求項２２に記載の抗体又はその抗原結合フラグメント。
【請求項２６】
ａ．配列番号２５を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１、
ｂ．配列番号２６を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２、
ｃ．配列番号２７を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３、
ｄ．配列番号２８を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１、
ｅ．配列番号２９を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２、及び
ｆ．配列番号３０を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３
を含む、請求項１〜９のいずれか一項に記載の抗体又はその抗原結合フラグメント。
【請求項２７】
配列番号１１７を含む重鎖可変領域を含む、請求項２６に記載の抗体又はその抗原結合フラグメント。
【請求項２８】
配列番号１１８を含む軽鎖可変領域を含む、請求項２６に記載の抗体又はその抗原結合フラグメント。
【請求項２９】
請求項２７及び２８に記載の重鎖可変領域及び軽鎖可変領域の両方を含む、請求項２６に記載の抗体又はその抗原結合フラグメント。
【請求項３０】
ａ．配列番号３１を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１、
ｂ．配列番号３２を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２、
ｃ．配列番号３３を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３、
ｄ．配列番号３４を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１、
ｅ．配列番号３５を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２、及び
ｆ．配列番号３６を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３
を含む、請求項１〜９のいずれか一項に記載の抗体又はその抗原結合フラグメント。
【請求項３１】
配列番号１１９を含む重鎖可変領域を含む、請求項３０に記載の抗体又はその抗原結合フラグメント。
【請求項３２】
配列番号１２０を含む軽鎖可変領域を含む、請求項３０に記載の抗体又はその抗原結合フラグメント。
【請求項３３】
請求項３１及び３２に記載の重鎖可変領域及び軽鎖可変領域の両方を含む、請求項３０に記載の抗体又はその抗原結合フラグメント。
【請求項３４】
ａ．配列番号３７を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１、
ｂ．配列番号３８を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２、
ｃ．配列番号３９を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３、
ｄ．配列番号４０を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１、
ｅ．配列番号４１を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２、及び
ｆ．配列番号４２を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３
を含む、請求項１〜９のいずれか一項に記載の抗体又はその抗原結合フラグメント。
【請求項３５】
配列番号１２１を含む重鎖可変領域を含む、請求項３４に記載の抗体又はその抗原結合フラグメント。
【請求項３６】
配列番号１２２を含む軽鎖可変領域を含む、請求項３４に記載の抗体又はその抗原結合フラグメント。
【請求項３７】
請求項３５及び３６に記載の重鎖可変領域及び軽鎖可変領域の両方を含む、請求項３４に記載の抗体又はその抗原結合フラグメント。
【請求項３８】
ａ．配列番号４３を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１、
ｂ．配列番号４４を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２、
ｃ．配列番号４５を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３、
ｄ．配列番号４６を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１、
ｅ．配列番号４７を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ、２及び
ｆ．配列番号４８を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３
を含む、請求項１〜９のいずれか一項に記載の抗体又はその抗原結合フラグメント。
【請求項３９】
配列番号１２３を含む重鎖可変領域を含む、請求項３８に記載の抗体又はその抗原結合フラグメント。
【請求項４０】
配列番号１２４を含む軽鎖可変領域を含む、請求項３８に記載の抗体又はその抗原結合フラグメント。
【請求項４１】
請求項３９及び４０に記載の重鎖可変領域及び軽鎖可変領域の両方を含む、請求項３８に記載の抗体又はその抗原結合フラグメント。
【請求項４２】
ａ．配列番号４９を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１、
ｂ．配列番号５０を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２、
ｃ．配列番号５１を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３、
ｄ．配列番号５２を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１、
ｅ．配列番号５３を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２、及び
ｆ．配列番号５４を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３
を含む、請求項１〜９のいずれか一項に記載の抗体又はその抗原結合フラグメント。
【請求項４３】
配列番号１２５を含む重鎖可変領域を含む、請求項４２に記載の抗体又はその抗原結合フラグメント。
【請求項４４】
配列番号１２６を含む軽鎖可変領域を含む、請求項４２に記載の抗体又はその抗原結合フラグメント。
【請求項４５】
請求項４３及び４４に記載の重鎖可変領域及び軽鎖可変領域の両方を含む、請求項４２に記載の抗体又はその抗原結合フラグメント。
【請求項４６】
ａ．配列番号５５を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１、
ｂ．配列番号５６を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２、
ｃ．配列番号５７を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３、
ｄ．配列番号５８を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１、
ｅ．配列番号５９を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２、及び
ｆ．配列番号６０を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３
を含む、請求項１〜９のいずれか一項に記載の抗体又はその抗原結合フラグメント。
【請求項４７】
配列番号１２７を含む重鎖可変領域を含む、請求項４６に記載の抗体又はその抗原結合フラグメント。
【請求項４８】
配列番号１２８を含む軽鎖可変領域を含む、請求項４６に記載の抗体又はその抗原結合フラグメント。
【請求項４９】
請求項４７及び４８に記載の重鎖可変領域及び軽鎖可変領域の両方を含む、請求項４６に記載の抗体又はその抗原結合フラグメント。
【請求項５０】
ａ．配列番号６１を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１、
ｂ．配列番号６２を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２、
ｃ．配列番号６３を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３、
ｄ．配列番号６４を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１、
ｅ．配列番号６５を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２、及び
ｆ．配列番号６６を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３
を含む、請求項１〜９のいずれか一項に記載の抗体又はその抗原結合フラグメント。
【請求項５１】
配列番号１２９を含む重鎖可変領域を含む、請求項５０に記載の抗体又はその抗原結合フラグメント。
【請求項５２】
配列番号１３０を含む軽鎖可変領域を含む、請求項５０に記載の抗体又はその抗原結合フラグメント。
【請求項５３】
請求項５１及び５２に記載の重鎖可変領域及び軽鎖可変領域の両方を含む、請求項５０に記載の抗体又はその抗原結合フラグメント。
【請求項５４】
ａ．配列番号６７を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１、
ｂ．配列番号６８を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２、
ｃ．配列番号６９を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３、
ｄ．配列番号７０を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１、
ｅ．配列番号７１を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２、及び
ｆ．配列番号７２を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３
を含む、請求項１〜９のいずれか一項に記載の抗体又はその抗原結合フラグメント。
【請求項５５】
配列番号１３１を含む重鎖可変領域を含む、請求項５４に記載の抗体又はその抗原結合フラグメント。
【請求項５６】
配列番号１３２を含む軽鎖可変領域を含む、請求項５４に記載の抗体又はその抗原結合フラグメント。
【請求項５７】
請求項５５及び５６に記載の重鎖可変領域及び軽鎖可変領域の両方を含む、請求項５４に記載の抗体又はその抗原結合フラグメント。
【請求項５８】
ａ．配列番号７３を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１、
ｂ．配列番号７４を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２、
ｃ．配列番号７５を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３、
ｄ．配列番号７６を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１、
ｅ．配列番号７７を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２、及び
ｆ．配列番号７８を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３
を含む、請求項１〜９のいずれか一項に記載の抗体又はその抗原結合フラグメント。
【請求項５９】
配列番号１３３を含む重鎖可変領域を含む、請求項５８に記載の抗体又はその抗原結合フラグメント。
【請求項６０】
配列番号１３４を含む軽鎖可変領域を含む、請求項５８に記載の抗体又はその抗原結合フラグメント。
【請求項６１】
請求項５９及び６０に記載の重鎖可変領域及び軽鎖可変領域の両方を含む、請求項５８に記載の抗体又はその抗原結合フラグメント。
【請求項６２】
ａ．配列番号７９を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１、
ｂ．配列番号８０を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２、
ｃ．配列番号８１を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３、
ｄ．配列番号８２を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１、
ｅ．配列番号８３を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２、及び
ｆ．配列番号８４を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３
を含む、請求項１〜９のいずれか一項に記載の抗体又はその抗原結合フラグメント。
【請求項６３】
配列番号１３５を含む重鎖可変領域を含む、請求項６２に記載の抗体又はその抗原結合フラグメント。
【請求項６４】
配列番号１３６を含む軽鎖可変領域を含む、請求項６２に記載の抗体又はその抗原結合フラグメント。
【請求項６５】
請求項６３及び６４に記載の重鎖可変領域及び軽鎖可変領域の両方を含む、請求項６２に記載の抗体又はその抗原結合フラグメント。
【請求項６６】
ａ．配列番号８５を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１、
ｂ．配列番号８６を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２、
ｃ．配列番号８７を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３、
ｄ．配列番号８８を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１、
ｅ．配列番号８９を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２、及び
ｆ．配列番号９０を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３
を含む、請求項１〜９のいずれか一項に記載の抗体又はその抗原結合フラグメント。
【請求項６７】
配列番号１３７を含む重鎖可変領域を含む、請求項６６に記載の抗体又はその抗原結合フラグメント。
【請求項６８】
配列番号１３８を含む軽鎖可変領域を含む、請求項６６に記載の抗体又はその抗原結合フラグメント。
【請求項６９】
請求項６７及び６８に記載の重鎖可変領域及び軽鎖可変領域の両方を含む、請求項６６に記載の抗体又はその抗原結合フラグメント。
【請求項７０】
ａ．配列番号９１を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１、
ｂ．配列番号９２を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２、
ｃ．配列番号９３を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３、
ｄ．配列番号９４を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１、
ｅ．配列番号９５を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２、及び
ｆ．配列番号９６を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３
を含む、請求項１〜９のいずれか一項に記載の抗体又はその抗原結合フラグメント。
【請求項７１】
配列番号１３９を含む重鎖可変領域を含む、請求項７０に記載の抗体又はその抗原結合フラグメント。
【請求項７２】
配列番号１４０を含む軽鎖可変領域を含む、請求項７０に記載の抗体又はその抗原結合フラグメント。
【請求項７３】
請求項７１及び７２に記載の重鎖可変領域及び軽鎖可変領域の両方を含む、請求項７０に記載の抗体又はその抗原結合フラグメント。
【請求項７４】
ａ．配列番号９７を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１、
ｂ．配列番号９８を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２、
ｃ．配列番号９９を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３、
ｄ．配列番号１００を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１、
ｅ．配列番号１０１を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２、及び
ｆ．配列番号１０２を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３
を含む、請求項１〜９のいずれか一項に記載の抗体又はその抗原結合フラグメント。
【請求項７５】
配列番号１４１を含む重鎖可変領域を含む、請求項７４に記載の抗体又はその抗原結合フラグメント。
【請求項７６】
配列番号１４２を含む軽鎖可変領域を含む、請求項７４に記載の抗体又はその抗原結合フラグメント。
【請求項７７】
請求項７５及び７６に記載の重鎖可変領域及び軽鎖可変領域の両方を含む、請求項７４に記載の抗体又はその抗原結合フラグメント。
【請求項７８】
ａ．配列番号１０３を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１、
ｂ．配列番号１０４を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２、
ｃ．配列番号１０５を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３、
ｄ．配列番号１０６を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１、
ｅ．配列番号１０７を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２、及び
ｆ．配列番号１０８を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３
を含む、請求項１〜９のいずれか一項に記載の抗体又はその抗原結合フラグメント。
【請求項７９】
配列番号１４３を含む重鎖可変領域を含む、請求項７８に記載の抗体又はその抗原結合フラグメント。
【請求項８０】
配列番号１４４を含む軽鎖可変領域を含む、請求項７８に記載の抗体又はその抗原結合フラグメント。
【請求項８１】
請求項７９及び８０に記載の重鎖可変領域及び軽鎖可変領域の両方を含む、請求項７８に記載の抗体又はその抗原結合フラグメント。
【請求項８２】
先行請求項のいずれか一項に記載の抗体又はその抗原結合フラグメントを含む調製物であって、ソルチリンに結合することが可能でないか又は前記調製物の抗ソルチリン機能性を実質的に変更しないかのいずれかである、自然発生する抗体を実質的に含まず、前記機能性は、
（ｉ）ソルチリンに対する結合親和性（ＫＤ）、
（ｉｉ）ソルチリン発現細胞によってＰＧＲＮのクリアランスを減少させ且つ／又は阻害する能力、
（ｉｉｉ）ソルチリン発現細胞によってＰＧＲＮのエンドサイトーシスを減少させ且つ／又は阻害する能力、
（ｉｖ）ヒト−ソルチリン発現ノックインマウスにおいて血漿中のＰＧＲＮの量及び／又は濃度を増加させる能力、及び／又は
（ｖ）慢性的に投与されるときの、前頭側頭型認知症（ＦＴＤ）、筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）又はアルツハイマー病（ＡＤ）の治療を提供する能力
からなる群から選択される、調製物。
【請求項８３】
先行請求項のいずれか一項に記載のモノクローナル抗体又はその抗原結合フラグメントを含む調製物であって、前記モノクローナル抗体は、自然発生抗ソルチリン抗体の構造と比べてそのアミノ酸配列の構造変化を有し、前記構造変化は、前記モノクローナル抗体が、前記自然発生抗ソルチリン抗体によって示される機能性と比べて変化した機能性を示すことを引き起こし、前記機能性は、
（ｉ）ソルチリンに対する結合親和性（ＫＤ）、
（ｉｉ）ソルチリン発現細胞によってＰＧＲＮのクリアランスを減少させ且つ／又は阻害する能力、
（ｉｉｉ）ソルチリン発現細胞によってＰＧＲＮのエンドサイトーシスを減少させ且つ／又は阻害する能力、
（ｉｖ）ヒト−ソルチリン発現ノックインマウスにおいて血漿中のＰＧＲＮの量及び／又は濃度を増加させる能力、
（ｖ）脳内のＰＧＲＮの量及び／又は濃度を増加させる能力、又は
（ｖｉ）慢性的に投与されるときの、前頭側頭型認知症（ＦＴＤ）、筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）及び／又はアルツハイマー病（ＡＤ）の治療を提供する能力
からなる群から選択される、調製物。
【請求項８４】
請求項１〜８１のいずれか一項に記載の抗体若しくはその抗原結合フラグメント又は請求項８２および８３のいずれか一項に記載の調製物と、薬学的に許容できる担体とを含む医薬組成物。
【請求項８５】
医薬に使用するための、請求項１〜８１のいずれか一項に記載の抗体若しくはその抗原結合フラグメント、又は請求項８２および８３のいずれか一項に記載の調製物、又は請求項８４に記載の医薬組成物。
【請求項８６】
患者の脳内の減少したＰＧＲＮレベル又は減少した機能的ＰＧＲＮに関連する疾患を治療するのに使用するための、請求項１〜８１のいずれか一項に記載の抗体若しくはその抗原結合フラグメント、又は請求項８２および８３のいずれか一項に記載の調製物、又は請求項８４に記載の医薬組成物。
【請求項８７】
患者の脳内の減少したＰＧＲＮ又は減少した機能的ＰＧＲＮレベルに関連する疾患を治療するための薬剤の製造における、請求項１〜８１のいずれか一項に記載の抗体若しくはその抗原結合フラグメント、又は請求項８２および８３のいずれか一項に記載の調製物、又は請求項８４に記載の医薬組成物の使用。
【請求項８８】
患者の脳内の減少したＰＧＲＮ又は減少した機能的ＰＧＲＮレベルに関連する疾患を予防又は治療する方法であって、有効投与量の、請求項１〜８１のいずれか一項に記載の抗体若しくはその抗原結合フラグメント、又は請求項８２および８３のいずれか一項に記載の調製物、又は請求項８４に記載の医薬組成物を投与する工程を含む方法。
【請求項８９】
前記疾患は、ＦＴＤ、ＡＬＳ又はタンパク質症、例えばＡＤである、請求項８６に記載の使用のための抗体若しくはその抗原結合フラグメント、又は請求項８７に記載の使用、又は請求項８８に記載の方法。
【請求項９０】
前記治療は、長期であり、好ましくは少なくとも２週間、例えば少なくとも１か月間、又は少なくとも６か月間、又は少なくとも１年間にわたる、請求項８６に記載の使用のための抗体若しくはその抗原結合フラグメント、又は請求項８７に記載の使用、又は請求項８８に記載の方法。
【請求項９１】
請求項１〜８１のいずれか一項に記載の抗体若しくはその抗原結合フラグメント、又は請求項８２および８３のいずれか一項に記載の調製物、又は請求項８４に記載の医薬組成物を含むキット。
【請求項９２】
ヒト細胞株、非ヒト哺乳動物細胞株、昆虫、酵母又は細菌細胞株などの細胞株において生産又は製造された、請求項１〜８１のいずれか一項に記載の抗体又はその抗原結合フラグメント。
【請求項９３】
ＣＨＯ細胞株、ＨＥＫ細胞株、ＢＨＫ−２１細胞株、マウス細胞株（ミエローマ細胞株など）、線維肉腫細胞株、ＰＥＲ．Ｃ６細胞株、ＨＫＢ−１１細胞株、ＣＡＰ細胞株及びＨｕＨ−７ヒト細胞株において生産される、請求項９２に記載の抗体又はその抗原結合フラグメント。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、不十分なレベルのプログラニュリン（ＰＧＲＮ）を修正するのに有用なモノクローナル抗ソルチリン抗体に関する。特に、これらの抗体は、前頭側頭型認知症（ＦＴＤ）及び筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）の治療に使用され得る。さらに、モノクローナル抗体は、アルツハイマー病（ＡＤ）などの神経変性疾患を治療するのに有用であり得ることも予測される。
【０００２】
配列表の参照
本出願は、米国特許法施行規則（３７  Ｃ．Ｆ．Ｒ．）第１．８２１条に従う１つ又は複数の配列表（以下を参照されたい）を含み、これは、コンピュータ可読媒体（ファイル名：０９９３＿ＳＴ２５．ｔｘｔ、２０１６年６月２２日に作成され、１４４ｋＢのサイズを有する）で開示され、このファイルは、全体が参照により本明細書に援用される。
【背景技術】
【０００３】
ソルチリンは、プロニューロトロフィンのアポトーシス促進効果を仲介し、ニューロトロフィン受容体の輸送及びソーティングを仲介することが報告されている受容体である（Ｎｙｋｊａｅｒ  ｅｔ  ａｌ，２０１２，Ｔｒｅｎｄｓ  Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．２０１２；３５（４）：２６１−７０；Ｇｌｅｒｕｐ  ｅｔ  ａｌ，Ｈａｎｄｂ  Ｅｘｐ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌ，２０１４；２２０：１６５−８９、Ｃａｒｌｏ  ｅｔ  ａｌ，Ｊ  Ｍｏｌ  Ｍｅｄ（Ｂｅｒｌ）．２０１４  Ｓｅｐ；９２（９）：９０５−１１）。ニューロテンシンを含むいくつかのソルチリンリガンドが同定されており、ニューロテンシンに対する高親和性結合部位は、Ｘ線結晶構造解析により、ソルチリン分子中のβプロペラトンネルの内部にあることが突き止められた（Ｑｕｉｓｔｇａａｒｄ  ｅｔ  ａｌ，Ｎａｔ  Ｓｔｒｕｃｔ  Ｍｏｌ  Ｂｉｏｌ．２００９  Ｊａｎ；１６（１）：９６−８；Ｑｕｉｓｔｇａａｒｄ  ｅｔ  ａｌ，Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｓｃｉ．２０１４，Ｓｅｐ；２３（９）：１２９１−３００）。さらに最近では、ソルチリンは、成長因子プログラニュリンの高親和性受容体として機能することが示された（ＰＧＲＮ、Ｈｕ  ｅｔ  ａｌ．Ｎｅｕｒｏｎ．２０１０  Ｎｏｖ  １８；６８（４）：６５４−６７。
【０００４】
ＰＧＲＮ（（プロエピセリン、グラニュリン−エピセリン前駆体、ＰＣ細胞誘導成長因子、アクログラニン））は、抗炎症性及び神経栄養性作用を有する分泌型グリコシル化タンパク質である（最近の報告については、Ｎｇｕｙｅｎ，Ｔｒｅｎｄｓ  Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ  Ｍｅｔａｂ．２０１３  Ｄｅｃ；２４（１２）：５９７−６０６を参照されたい）。ＰＧＲＮは、グラニュリンにタンパク質分解的に切断されるが、ＰＧＲＮ及びグラニュリンの生理学的役割並びにそれらの受容体の特性に関して、まだ分かっていないことが多くある。ＰＧＲＮは、細胞周期調節及び細胞運動性（Ｈｅ，Ｚ．＆Ｂａｔｅｍａｎ，Ａ．，Ｊ．ＭｏＩ．Ｍｅｄ．５７：６００−６１２（２００３）；Ｍｏｎａｍｉ，Ｇ．，ｅｔ  ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．（５（５：７１０３−７１１０（２００６））、創傷修復、炎症（Ｚｈｕ，Ｊ．，ｅｔ  ａｌ．，Ｃｅｌｌ  ７７７：８６７−８７８（２００２））、血管内皮成長因子（ＶＥＧＦ）などの成長因子の誘導（Ｔａｎｇｋｅａｎｇｓｉπｓｉｎ，Ｗ．＆Ｓｅｒｒｅｒｏ，Ｇ，Ｃａｒｃｉｎｏｇｅｎｅｓｉｓ  ２５．１５８７−１５９２（２００４））及び腫瘍発生（Ｈｅ，Ｚ．＆Ｂａｔｅｍａｎ，Ａ．，Ｊ．ＭｏＩ．Ｍｅｄ．８１：６００−６１２（２００３）、Ｍｏｎａｍｉ，Ｇ．，ｅｔ  ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ（５（５：７１０３−７１１０（２００６）；Ｓｅｒｒｅｒｏ，Ｇ．，Ｂｉｏｃｈｅｍ  Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍｕｎ．５０５−４０９−４１３（２００３）、Ｌｕ，Ｒ＆Ｓｅｒｒｅｒｏ，Ｇ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  Ｕ．ＳＡ  ９８  １４２−１４７（２００１）；Ｌｉａｕ，Ｌ  Ｍ．，ｅｔ  ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．６０：１３５３−１３６０（２０００））を含むいくつかの細胞機能に関与している。ＰＧＲＮは、ＴＮＦ受容体に結合することが報告されている（Ｔａｎｇ  Ｗ  ｅｔ  ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２０１１，３３２（６０２８）：４７８−８４）が、この観察は、他の者によっても試みられた（Ｃｈｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ  Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．２０１３，３３（２１）：９２０２−９２１３）。
【０００５】
ソルチリンへのＰＧＲＮの結合は、ニューロテンシン部位にマッピングされ、ニューロテンシンと同様に、ＰＧＲＮのＣ末端ドメインのみを介して仲介されることが報告されており（Ｚｈｅｎｇ  ｅｔ  ａｌ．ＰＬｏＳ  Ｏｎｅ．２０１１；６（６）：ｅ２１０２３；Ｌｅｅ  ｅｔ  ａｌ．Ｈｕｍ  Ｍｏｌ  Ｇｅｎｅｔ．２０１３）、したがって、ニューロテンシンは、ＰＧＲＮ及び他のリガンドとのソルチリンの相互作用をブロックすることが示された。結合すると直ちに、ソルチリンは、ＰＧＲＮのリソソームクリアランスを仲介し、それにより細胞外ＰＧＲＮレベルを調節する（Ｈｕ  ｅｔ  ａｌ．２０１０）。したがって、ソルチリンのノックダウン又は過剰発現が細胞培養物中の細胞外ＰＧＲＮレベルを調節することが示され（Ｃａｒｒａｓｑｕｉｌｌｏ  ｅｔ  ａｌ．Ａｍ  Ｊ  Ｈｕｍ  Ｇｅｎｅｔ．２０１０  Ｄｅｃ  １０；８７（６）：８９０−７）、マウスにおいて、ソルチリン欠乏は、ＰＧＲＮレベルを増加させ、ＰＧＲＮ＋／−マウスにおける血漿及び脳ＰＧＲＮレベルを回復させることが報告された（Ｈｕ  ｅｔ  ａｌ．２０１０）。興味深いことに、ソルチリンに近い一塩基ヌクレオチド多型（ＳＮＰ）が血漿ＰＧＲＮの減少及びソルチリンｍＲＮＡレベルの増加に関連していた（Ｃａｒｒａｓｑｕｉｌｌｏ  ｅｔ  ａｌ．Ａｍ  Ｊ  Ｈｕｍ  Ｇｅｎｅｔ．２０１０  Ｄｅｃ  １０；８７（６）：８９０−７）。これらの観察は、ソルチリンが細胞外ＰＧＲＮの主要調節因子であることを示唆している。
【０００６】
ＰＧＲＮは、前頭側頭型認知症（ＦＴＤ）、行動及び意味の変化によって特徴付けられる進行性認知症並びに前頭側頭葉変性症（ＦＴＬＤ）及びＴＡＲ  ＤＮＡ結合タンパク質−４３（ＴＤＰ−４３）又はタウ封入体を含有する神経封入体に関連付けられている（Ｂａｋｅｒ  ｅｔ  ａｌ，２００６，Ｎａｔｕｒｅ．２００６  Ａｕｇ  ２４；４４２（７１０５）：９１６−９；Ｃｒｕｔｓ  ｅｔ  ａｌ，Ｎａｔｕｒｅ  ４４２：９２０−９２４（２００６）；Ａｍ  Ｊ  Ｈｕｍ  Ｇｅｎｅｔ．２０１０  Ｄｅｃ  １０；８７（６）：８９０−７、Ｍ  ｅｔ  ａｌ，Ｔｒｅｎｄｓ  ｉｎ  Ｇｅｎｅｔｉｃｓ  ２４：１８６−１９４（２００８））。散発性及び家族性ＦＴＤの事例の大部分は、ＡＬＳと同様にＴＤＰ−４３病変を示し（約５０％）、ＦＴＤ−ＴＤＰ４３及びＡＬＳは、共通の病理及び遺伝因子及び症状のいくらかの重複のため、疾患スペクトラムを成すものと一部の人々に見なされている（Ｉｔｏ  Ｄ  Ｎｅｕｒｏｌｏｇｙ．２０１１  Ｏｃｔ  ２５；７７（１７）：１６３６−４３；Ｂｏｘｅｒ  ＡＬ  ｅｔ  ａｌ，Ａｌｚｈｅｉｍｅｒｓ  Ｄｅｍｅｎｔ．２０１３  Ｍａｒ；９（２）：１７６−８８；Ｒａｄｅｍａｋｅｒｓ  ｅｔ  ａｌ，Ｎａｔ  Ｒｅｖ  Ｎｅｕｒｏｌ．２０１２  Ａｕｇｕｓｔ；８（８）：４２３−４３４）。ＦＴＤに使用可能な疾患修飾治療選択肢はない。ＴＤＰ−４３病変を有する前頭側頭型認知症患者の一部は、ＰＧＲＮハプロ不全をもたらすグラニュリン遺伝子（ＧＲＮ）の機能喪失突然変異を有する。グラニュリン遺伝子の７５を超える異なる突然変異（全て、ＰＧＲＮレベル及び／又は機能の低下をもたらす）がＦＴＤと関連付けられ、血漿及び脳中の増加する細胞外ＰＧＲＮが疾患過程を抑え得るものと考えられる。
【０００７】
ＰＧＲＮ突然変異は、アルツハイマー病（ＡＤ）にも関連付けられており（Ｓｈｅｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，２０１４，Ｇｅｎｅ．２０１４  Ｊｕｎ  １；５４２（２）：１４１−５；Ｂｒｏｕｗｅｒｓ  ｅｔ  ａｌ．，２００８，Ｎｅｕｒｏｌｏｇｙ．２００８  Ａｕｇ  ２６；７１（９）：６５６−６４）、これは、ＰＧＲＮ欠乏がＡＤ発症に重要な役割を果たし得ることを示唆している。さらに、マウスＡＤモデルにおけるＰＧＲＮの神経保護的効果が観察されており（Ｍｉｎａｍｉ  ｅｔ  ａｌ，２０１４，Ｎａｔ  Ｍｅｄ．２０１４  Ｏｃｔ；２０（１０）：１１５７−６４）、これは、ＰＧＲＮの増強がＡＤ及びおそらく他の神経変性疾患に有益であり得るという考えに裏付けを与える。
【０００８】
本出願は、細胞モデル及びマウスにおいてＰＧＲＮを調節し得る抗ヒトソルチリン抗体の生成及び同定を記載する。それらの抗体は、ソルチリンにおける、既に報告されたプログラニュリン結合部位、いわゆるニューロテンシン部位と離れた領域に意外にも結合し、細胞外ＰＧＲＮを増加させることがさらに可能である。
【０００９】
本発明者らは、６つのソルチリン結合領域を規定し、ある領域（「領域Ｅ」）に結合する有効な抗体を確認した。これらの抗体は、ソルチリンへのＰＧＲＮの結合をブロックしないが、ＰＧＲＮレベルに影響を与え、ＰＧＲＮレベルを増加させ、これは、これらの抗体の新規な作用機序を示唆している。ＰＧＲＮは、神経保護及び抗炎症性効果を有するため、本発明者らの発見は、ソルチリンを標的にするこのような抗体が、ＦＴＤ／ＦＴＬＤを含む様々な神経変性疾患の治療に有益な効果を有する可能性が高いことを示す。ＴＤＰ−４３病変を有するＦＴＤ／ＦＴＬＤ患者のサブグループは、ＰＧＲＮハプロ不全をもたらす、ＰＧＲＮをコードする遺伝子の突然変異を有する。ソルチリン抗体は、このＰＧＲＮ欠損を防ぐことが予想され、ＰＧＲＮレベルは、ＴＤＰ４３の機能及び病変に影響を与え得る他のＴＤＰ−４３タンパク質症（ＡＬＳ及びＰＧＲＮ機能の増大が神経保護作用を有し得る他の神経変性疾患（ＡＤを含む）におけるものを含む）に罹患している患者に同様の治療効果を与える可能性が高い。
【発明の概要】
【００１０】
本発明の発明者らは、配列番号１４６で定義される「Ｅ領域」と示される新規なソルチリン領域に意外にも結合し、患者の脳内のＰＧＲＮレベルを調節することができるモノクローナル抗体を生成した。
【００１１】
本発明は、患者の脳内の減少したＰＧＲＮレベルに関連する疾患を予防又は治療する方法であって、有効投与量の、ソルチリンのＥ領域に結合する抗体又はその抗原結合フラグメントを投与する工程を含む方法にも関する。これらの疾患としては、特にＦＴＤ、ＡＬＳ及びタンパク質症、例えばＡＤ、ＰＤが挙げられる。
【図面の簡単な説明】
【００１２】
【図１】抗体の選択における工程を示す。Ａ〜Ｅは、それぞれのソルチリン結合抗体を、実施例１及び配列番号１４７〜１５５に記載されるようにシャッフル構築物に基づいて割り当てた領域を指す。「その他」は、１つの領域に割り当てることができず、Ａ領域とＢ領域との間の境界で結合し得る抗体を指す。Ｔｅｔは、テトラオドン−ソルチリンにも結合する抗体を指す。
【図２Ａ】ソルチリンシャッフル構築物への結合に基づいた抗体の領域割り当てを示す。  パネルＡは、実施例１に記載されているように抗体の領域割り当てに使用されるシャッフル構築物の線形図を示す。アミノ酸残基をテトラオドンソルチリン配列（黒色で示される）（配列番号１４９）に由来する対応するアミノ酸に交換したヒトソルチリン配列（配列番号１４５）（灰色で示される部分）に基づいて、ソルチリンシャッフル構築物を生成した（実施例１〜３）。  パネルＢは、Ａにおいて線形に示されるシャッフル構築物の予測される構造を示す。暗色の残基は、シャッフル構築物における対応するテトラオドン配列に変更された残基を示す。  パネルＣは、それぞれＤ領域及びＥ領域クラスに割り当てられた抗体の結合パターンを示す。「＋」は、所与のシャッフル構築物への結合を示し、「−」は、結合がないことを示す。異なるシャッフル構築物への結合パターンに基づいて、抗体を領域に割り当てた。得られる抗体領域クラスは、Ａ〜Ｅによって示される。示されるＤ及びＥ領域抗体では、「＋」によって示されるように両方がヒト配列に結合し（全て灰色）、「−」によって示されるようにいずれもテトラオドン配列に結合しない（全て黒色）が、Ｅ領域抗体は、ｈＢ４５６７８シャッフル構築物に結合した一方、Ｄ領域抗体は、結合せず、パネルＡに示されるように結合の局在化をもたらした。Ｅ領域抗体について、以下のシャッフル領域への結合が観察された：ｈｓｏｒｔ、ｈＢ０６−１０、Ｂ１２３９０、ｈＢ４５６７８。抗体は、ｈＢ０１−０５及びテトラオドン構築物に結合しなかった。抗体は、２つを除いて、完全テトラオドンソルチリンタンパク質に結合しなかった。テトラオドン配列に結合することが可能な２つの抗体が「ｔｅｔ」と示された。「その他」は、１つの領域に割り当てることができなかった抗体を指す。
【図２Ｂ】図２Ａと同じ。
【図２Ｃ】図２Ａと同じ。
【図３−１】ヒトＥ領域抗体の結合親和性を示す。実施例２に記載されるように、Ｏｃｔｅｔ３８４ＲＥＤ（ＥＣ５０、ｎｇ／ｍｌ）を用いたバイオレイヤー干渉法によるソルチリン構築物に対する結合親和性。ＮＢは、結合なしを示す。０．１〜１０ｎｇ／ｍｌ及び＞１０ｎｇ／ｍｌの値は、結合を示す。領域割り当ては、様々なソルチリンシャッフル構築物に対する抗体の結合パターンに基づいて行った（図２）。ソルチリン構築物ｈＢ０１−０５及びＴｅｔｒａによる結合がないことは、これらの抗体がＥ領域に結合することを示唆する。
【図３−２】図３−１と同じ。
【図３−３】図３−１と同じ。
【図４−１】Ｅ領域抗体間のクロスブロッキングを示す。各抗体がヒト野生型ソルチリンに結合されて、抗体−ソルチリン複合体が形成された。全ての他のＥ領域抗体を、予め形成された抗体−ソルチリン複合体への結合について試験した（実施例８）。同じか又は異なる領域からのソルチリン抗体間のクロスブロッキングを、抗体−ソルチリン結合の阻害を分析することによって決定した。ソルチリン−ＥＣＤ−Ｈｉｓへの抗体の結合を、上述されるＯｃｔｅｔ  ３８４ＲＥＤを用いたバイオレイヤー干渉法によって測定した。左列は、一次（固定化）抗体を示し、上行は、二次抗体（固定化抗体に対して試験される抗体）を示す。ソルチリン−ＥＣＤ−Ｈｉｓへの一次及び二次抗体の両方の結合は、０．１より高い反応値をもたらし、両方の抗体がタンパク質の異なる領域に結合していたことを示し得る。０．１未満の反応値は、二次抗体の結合がないこと及び固定化（一次）抗体による有効なクロスブロッキングを示し、これは、両方の抗体がソルチリンの同じ領域に結合することを示唆する。「ｘ」は、結合なしを示し、したがって、抗体は、互いにブロックする。「ｂ」は、ソルチリンへの両方の抗体の結合を示し、したがって互いにクロスブロックしない。Ｅ領域からの２６のうちの２２の抗体は、群からの全ての抗体をクロスブロックし、残りの４つの抗体は、２６のうちの２０の抗体をクロスブロックし、これは、抗体の大部分がソルチリンにおける同じ領域又は隣接する領域に結合することを示唆する。
【図４−２】図４−１と同じ。
【図４−３】図４−１と同じ。
【図４−４】図４−１と同じ。
【図５】見掛け上健常な男性（１８歳）から生成された神経分化誘導多能性幹細胞（ｉＰＳＣ）における細胞外ＰＧＲＮに対するソルチリン抗体の効果を示す（実施例９）。
【図６】ソルチリンヒトＥ領域結合抗体で処理されたヒトソルチリンノックイン（ＫＩ）マウスにおける血漿ＰＧＲＮレベルを示す（実施例１０）。抗体＃３０は、アイソタイプ対照抗体である抗ＨＥＬで処理されたマウスと比較して血漿ＰＧＲＮレベルを増加させる。マウスに皮下投与によって１０ｍｇ／ｋｇの試験抗体を注入した。マウスを４８時間後に殺処分し、血液試料を分析のために採取した。血漿ＰＧＲＮをＥＬＩＳＡによって測定した。データは、平均±ＳＤとして示される。データをｔ検定によって分析した。***ｐ＜０．００１。
【図７Ａ】図７ＡおよびＢは、見掛け上健常な個体及びＰＧＲＮ  Ｒ４９３Ｘ患者から生成された神経分化誘導多能性幹細胞（ｉＰＳＣ）における細胞外ＰＧＲＮに対するソルチリン抗体の効果を示す（実施例１１）。
【図７Ｂ】図７Ａと同じ。
【図８Ａ】図８（Ａ〜Ｆ）は、抗体３０の立体配座エピトープをカバーする代表的なペプチドを示す。示されるペプチドの全ては、０．５Ｄより大きい交換からの保護を示す（実施例１２）。
【図８Ｂ】図８Ａと同じ。
【図８Ｃ】図８Ａと同じ。
【図８Ｄ】図８Ａと同じ。
【図８Ｅ】図８Ａと同じ。
【図８Ｆ】図８Ａと同じ。
【発明を実施するための形態】
【００１３】
発明の詳細な説明
本明細書において使用される際、「ソルチリン」という用語は、ソルチリンタンパク質（例えば、Ｑ９９５２３、１及び２としてＵｎｉＰｒｏｔにおいて同定される）と同義である。ソルチリンのアミノ酸の番号付けは、以下に示されるように配列番号１４５に対して示され、メチオニン（Ｍ）は、アミノ酸１である。
【化１】
2020527152.tif 000003
【００１４】
本明細書において使用される際、「Ｅ領域」という用語は、以下に示される配列番号１４６：
【化２】
2020527152.tif 000004
におけるアミノ酸からなるソルチリンの領域（配列番号１４５の残基６１２〜７５３に対応する）を指すことが意図される。
【００１５】
Ｅ領域抗体について、以下のシャッフル領域への結合が観察された：ｈｓｏｒｔ、ｈＢ０６−１０、Ｂ１２３９０、ｈＢ４５６７８。抗体は、ｈＢ０１−０５及びｔｅｔｒａに結合しなかった。
【００１６】
ＰＧＲＮ遺伝子（プロエピセリン、グラニュリン−エピセリン前駆体、ＰＣ細胞誘導成長因子、アクログラニン）は、前駆体ＰＧＲＮからタンパク質分解的に切断され得る、６〜２５ｋＤａの範囲のより小さいグラニュリンモチーフの７．５の反復を有する６８．５ｋＤａ分泌型糖タンパク質をコードする（Ｈｅ，Ｚ．＆Ｂａｔｅｍａｎ，Ａ．，Ｊ．ＭｏＩ．Ｍｅｄ．８１：６００−６Ｘ２（２００３））。非神経細胞において、ＰＧＲＮは、細胞周期調節及び細胞運動性（Ｈｅ，Ｚ．＆Ｂａｔｅｍａｎ，Ａ．，Ｊ．ＭｏＩ．Ｍｅｄ．５７：６００−６１２（２００３）；Ｍｏｎａｍｉ，Ｇ．，ｅｔ  ａｈ，Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．（５（５：７１０３−７１１０（２００６））、創傷修復、炎症（Ｚｈｕ，Ｊ．，ｅｔ  ａｈ，Ｃｅｌｌ  ７７７：８６７−８７８（２００２））、血管内皮成長因子（ＶＥＧＦ）などの成長因子の誘導（Ｔａｎｇｋｅａｎｇｓｉπｓｉｎ，Ｗ．＆Ｓｅｒｒｅｒｏ，Ｇ，Ｃａｒｃｉｎｏｇｅｎｅｓｉｓ  ２５．１５８７−１５９２（２００４））及び腫瘍発生（Ｈｅ，Ｚ．＆Ｂａｔｅｍａｎ，Ａ．，Ｊ．ＭｏＩ．Ｍｅｄ．８１：６００−６１２（２００３）、Ｍｏｎａｍｉ，Ｇ．，ｅｔ  ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ（５（５：７１０３−７１１０（２００６）；Ｓｅｒｒｅｒｏ，Ｇ．，Ｂｉｏｃｈｅｍ  Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍｕｎ．５０５−４０９−４１３（２００３）、Ｌｕ，Ｒ＆Ｓｅｒｒｅｒｏ，Ｇ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓａ  Ｕ．ＳＡ  ９８  １４２−１４７（２００１）；Ｌｉａｕ，Ｌ  Ｍ．，ｅｔ  ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．６０：１３５３−１３６０（２０００））などの様々な事象に関連付けられている。
【００１７】
ＰＧＲＮ突然変異は、ハプロ不全をもたらし（Ｂａｋｅｒ，Ｍ．，ｅｔ  ａｈ，Ｎａｔｕｒｅ  ４４２：９１６−９１９（２００６）；Ｃｒｕｔｓ，Ｍ．，ｅｔ  ａｈ，Ｎａｔｕｒｅ  ４４２：９２０−９２４（２００６））、家族性ＦＴＤの事例のほぼ５０％に存在することが知られており、ＰＧＲＮ突然変異は、ＦＴＤの主な遺伝的要因とされている（Ｃｒｕｔｓ，Ｍ．＆Ｖａｎ  Ｂｒｏｅｃｋｈｏｖｅｎ，Ｃ，Ｔｒｅｎｄｓ  Ｇｅｎｅｔ．２４：１８６−１９４（２００８）；Ｌｅ  Ｂｅｒ，Ｉ．，ｅｔ  ａｈ，Ｂｒａｉｎ  １２９：３０５１−３０６５（２００６））。ＰＧＲＮ突然変異の機能喪失ヘテロ接合特性は、健常個体において、ＰＧＲＮ発現が、ＦＴＤの発症から健常個体を保護するのに用量依存的な重要な役割を果たすことを示唆する。
【００１８】
本発明に関連して、「抗体」（Ａｂ）という用語は、分子（「抗原」）のエピトープに結合する能力を有する、免疫グロブリン分子又は本発明のある実施形態によれば、免疫グロブリン分子のフラグメントを指す。天然抗体は、典型的に、通常、少なくとも２つの重（Ｈ）鎖及び少なくとも２つの軽（Ｌ）鎖から構成される四量体を含む。各重鎖は、重鎖可変領域（本明細書においてＶＨと略記される）及び３つの領域（ＣＨ１、ＣＨ２及びＣＨ３）から構成される重鎖定常領域から構成される。重鎖は、ＩｇＧ（ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３及びＩｇＧ４サブタイプ）を含む任意のアイソタイプのものであり得る。各軽鎖は、軽鎖可変領域（本明細書においてＶＬと略記される）及び軽鎖定常領域（ＣＬ）から構成される。軽鎖は、κ鎖及びλ鎖を含む。重鎖及び軽鎖可変領域は、典型的に、抗原認識に関与する一方、重鎖及び軽鎖定常領域は、免疫系の様々な細胞（例えば、エフェクター細胞）及び古典的補体系の第１の成分（Ｃ１ｑ）を含む、宿主組織又は宿主因子への免疫グロブリンの結合を仲介し得る。ＶＨ及びＶＬ領域は、「フレームワーク領域」（ＦＲ）と呼ばれるより保存される配列の領域が散在する「相補性決定領域」と呼ばれる超可変性の領域にさらに細分され得る。各ＶＨ及びＶＬは、アミノ末端からカルボキシ末端に以下の順序：ＦＲ１−ＣＤＲ１−ＦＲ２−ＣＤＲ２−ＦＲ３−ＣＤＲ３−ＦＲ４で配置される３つのＣＤＲ領域及び４つのＦＲ領域から構成される。重鎖及び軽鎖の可変領域は、抗原と相互作用する結合領域を含有する。特に関連があるのは、自然界に存在し得るものと異なる物理的環境中で存在するように「単離され」ているか、又はアミノ酸配列中の天然抗体と異なるように修飾された抗体及びそれらの抗原結合フラグメントである。
【００１９】
「エピトープ」という用語は、抗体への特異的結合が可能な抗原決定基を意味する。エピトープは、通常、アミノ酸又は糖側鎖などの分子の表面基からなり、通常、特定の三次元構造特性及び特定の電荷特性を有する。立体配座エピトープ及び線状エピトープは、後者ではなく、前者への結合が変性溶媒の存在下で常に失われる点で区別される。エピトープは、特異的抗原結合ペプチドによって有効に遮断されるアミノ酸残基（言い換えると、アミノ酸残基は、特異的抗原結合ペプチドのフットプリント内にある）など、結合に直接関与するアミノ酸残基及び結合に直接関与しない他のアミノ酸残基を含み得る。
【００２０】
本明細書において使用される際、「抗体の抗原結合フラグメント」という用語は、エピトープに結合することが可能な抗体のフラグメント、部分、領域又はドメイン（それがどのように産生されるかにかかわらず（例えば、切断により、組み換えにより、合成的になど））を意味し、したがって、「抗原結合」という用語は、例えば、「抗体の抗原結合フラグメント」が「抗体のエピトープ結合フラグメント」と同じであることが意図されるように、「エピトープ結合」と同じことを意味することが意図される。抗原結合フラグメントは、このような抗体のＣＤＲ領域の１、２、３、４、５又は６つ全てを含有し得、このようなエピトープに結合することが可能であるが、このような抗体のものと異なるこのようなエピトープに対して特異性、親和性又は選択性を示し得る。しかしながら、好ましくは、抗原結合フラグメントは、このような抗体のＣＤＲ領域の６つ全てを含有するであろう。抗体の抗原結合フラグメントは、単一のポリペプチド鎖（例えば、ｓｃＦｖ）の一部であるか若しくはそれを含み得るか、又はアミノ末端及びカルボキシル末端（例えば、二重特異性抗体、Ｆａｂフラグメント、Ｆａｂ2フラグメントなど）をそれぞれ有する２つ以上のポリペプチド鎖の一部であるか若しくはそれを含み得る。抗原結合能力を示す抗体のフラグメントは、例えば、無傷の抗体のプロテアーゼ切断によって得られる。より好ましくは、Ｆｖフラグメントの２つの領域、ＶＬ及びＶＨは、別個の遺伝子によって天然にコードされるか、又はこのような遺伝子配列をコードするポリヌクレオチド（例えば、それらのコードｃＤＮＡ）は、ＶＬ及びＶＨ領域が結合して一価抗原結合分子を形成する単一のタンパク質鎖（単一鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）として知られている；例えば、Ｂｉｒｄ  ｅｔ  ａｌ．，（１９８８）Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２４２：４２３−４２６；及びＨｕｓｔｏｎ  ｅｔ  ａｌ．（１９８８）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．（Ｕ．Ｓ．Ａ．）８５：５８７９−５８８３を参照されたい）としてそれらが作製されるのを可能にするフレキシブルリンカーにより、組み換え方法を用いて結合され得る。代わりに、単一のポリペプチド鎖のＶＬ及びＶＨ領域が一緒に結合するのを可能にするには短すぎるフレキシブルリンカー（例えば、約９個未満の残基）を用いることにより、二重特異性抗体（ｂｉｓｐｅｃｉｆｉｃ  ａｎｔｉｂｏｄｙ）、二重特異性抗体（ｄｉａｂｏｄｙ）又は同様の分子（２つのこのようなポリペプチド鎖が一緒に結合して、二価抗原結合分子を形成する）を形成することができる（二重特異性抗体の説明については、例えば、ＰＮＡＳ  ＵＳＡ  ９０（１４），６４４４−８（１９９３）を参照されたい）。本発明の範囲内に包含される抗原結合フラグメントの例としては、（ｉ）Ｆａｂ’又はＦａｂフラグメント、ＶＬ、ＶＨ、ＣＬ及びＣＨ１領域からなる一価フラグメント又は国際公開第２００７０５９７８２号パンフレットに記載されている一価抗体；（ｉｉ）Ｆ（ａｂ’）２フラグメント、ヒンジ領域においてジスルフィド架橋によって連結された２つのＦａｂフラグメントを含む二価フラグメント；（ｉｉｉ）ＶＨ及びＣＨ１領域から本質的になるＦｄフラグメント；（ｉｖ）ＶＬ及び���Ｈ領域から本質的になるＦｖフラグメント、（ｖ）ＶＨ領域から本質的になり、ドメイン抗体（Ｈｏｌｔ  ｅｔ  ａｌ；Ｔｒｅｎｄｓ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．２００３  Ｎｏｖ；２ｉ（ｌｌ）：４８４−９０）とも呼ばれるｄＡｂフラグメント（Ｗａｒｄ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ  ３４１，５４４−５４６（１９８９））；（ｖｉ）ラクダ科動物（ｃａｍｅｌｉｄ）又はナノボディ（Ｒｅｖｅｔｓ  ｅｔ  ａｌ；Ｅｘｐｅｒｔ  Ｏｐｉｎ  Ｂｉｏｌ  Ｔｈｅｒ．２００５  Ｊａｎ；５＿（ｌ）：ｌ  ｌｌ−２４）及び（ｖｉｉ）単離された相補性決定領域（ＣＤＲ）が挙げられる。さらに、Ｆｖフラグメントの２つの領域、ＶＬ及びＶＨが別個の遺伝子によってコードされるが、それらは、ＶＬ及びＶＨ領域が組み合わされて、一価分子を形成する単一のタンパク質鎖（単一鎖抗体又は単一鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）として知られている、例えばＢｉｒｄ  ｅｔ  ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２４２，４２３−４２６（１９８８）及びＨｕｓｔｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，ＰＮＡＳ  ＵＳＡ  ８５，５８７９−５８８３（１９８８）を参照されたい）としてそれらが作製されるのを可能にする合成リンカーにより、組み換え方法を用いて結合され得る。本発明に関連して、これらの及び他の有用な抗体フラグメントは、本明細書においてさらに説明される。抗体という用語は、特に規定されない限り、キメラ抗体及びヒト化抗体などの抗体様ポリペプチド並びに酵素的切断、ペプチド合成及び組み換え技術などの任意の公知の技術によって提供される、抗原（抗原結合フラグメント）に結合する能力を保持する抗体フラグメントも含むことも理解されるべきである。生成される抗体は、任意のアイソタイプを有し得る。本明細書において使用される際、「アイソタイプ」は、重鎖定常領域遺伝子によってコードされる免疫グロブリンクラス（例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３又はＩｇＧ４）を指す。このような抗体フラグメントは、当業者に公知の従来の技術を用いて得られ、所望のエピトープに結合することが可能な好適なフラグメントは、無傷の抗体と同じように有用性について容易にスクリーニングされ得る。
【００２１】
「二重特異性抗体」という用語は、それぞれ独立した標的を標的にする２つの独立した抗原結合フラグメントを含有する抗体を指す。これらの標的は、異なるタンパク質上に存在するエピトープ又は同じ標的上に存在する異なるエピトープであり得る。二重特異性抗体分子は、親単一特異性二価抗体分子のＨＣの定常領域における補償的アミノ酸改変を用いて作製され得る。得られるヘテロ二量体抗体は、２つの異なる親単一特異性抗体から与えられる１つのＦａｂを含有する。Ｆｃ領域におけるアミノ酸改変は、時間を経ても安定した二重特異性を有するヘテロ二量体抗体の向上した安定性をもたらす（Ｒｉｄｇｗａｙ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ  ９，６１７−６２１（１９９６）、Ｇｕｎａｓｅｋａｒａｎ  ｅｔ  ａｌ．，ＪＢＣ  ２８５，１９６３７−１（２０１０）、Ｍｏｏｒｅ  ｅｔ  ａｌ．，ＭＡＢ  ３：６  ５４６−５５７（２０１１）、Ｓｔｒｏｐ  ｅｔ  ａｌ．，ＪＭＢ  ４２０，２０４−２１９（２０１２）、Ｍｅｔｚ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ  ２５：１０  ５７１−５８０（２０１２）、Ｌａｂｒｉｊｎ  ｅｔ  ａｌ．，ＰＮＡＳ  １１０：１１３，５１４５−５１５０（２０１３）、Ｓｐｒｅｔｅｒ  Ｖｏｎ  Ｋｒｅｕｄｅｎｓｔｅｉｎ  ｅｔ  ａｌ．，ＭＡＢ  ５：５  ６４６−６５４（２０１３））。二重特異性抗体は、ＳｃＦｖ融合を用いて生成される分子も含み得る。次に、２つの単一特異性ｓｃｆｖは、独立して、単一の二重特異性分子を生成するために安定したヘテロ二量体を形成することが可能なＦｃ領域に結合される（Ｍａｂｒｙ  ｅｔ  ａｌ．，ＰＥＤＳ  ２３：３  １１５−１２７（２０１０）。二重特異性分子は、二重の結合能を有する。
【００２２】
「抗ソルチリン抗体」又は「ソルチリン抗体」（記載される文脈に応じて、本明細書において同義的に使用される）は、ソルチリン、特にソルチリンＥ領域、配列番号１４６に特異的に結合する抗体その抗原結合フラグメントである。ソルチリンＥ領域に結合する抗ソルチリン抗体は、通常、２２ｎＭ以下、例えば２２ｎＭ〜１ｎＭ、１０ｎＭ〜１ｎＭ又は５ｎＭ〜１ｎＭ又はさらにそれを超える、例えば約１ｐＭ又は１〜５ｐＭの親和性（ＩＣ５０）を有するＥ領域内の１、２、３、４、５、６又は７連続アミノ酸の立体配座エピトープ又は線状エピトープに結合するであろう。
【００２３】
本明細書において使用される際の「ヒト抗体」という用語（「ｈｕｍＡｂ」又は「ＨｕＭａｂ」と略記され得る）は、ヒト生殖細胞系列免疫グロブリン配列に由来する可変領域及び定常領域を有する抗体を含むことが意図される。本発明のヒト抗体は、ヒト生殖細胞系列免疫グロブリン配列によってコードされないアミノ酸残基を含み得る（例えば、インビトロでのランダム若しくは部位特異的突然変異により、又は遺伝子再構成中に、又は体細胞突然変異により誘発される突然変異）。
【００２４】
本明細書において使用される際の「モノクローナル抗体」又は「モノクローナル抗体組成物」という用語は、単一の分子組成物の抗体分子の調製物を指す。従来のモノクローナル抗体組成物は、特定のエピトープに対する単一の結合特異性及び親和性を示す。特定の実施形態において、モノクローナル抗体は、２つ以上のＦａｂ領域から構成され得、それにより２つ以上の標的に対する特異性を高める。「モノクローナル抗体」又は「モノクローナル抗体組成物」という用語は、任意の特定の産生方法（例えば、組み換え、トランスジェニック、ハイブリドーマなど）によって限定されることは意図されていない。「抗体ＸＸ」という用語は、そのそれぞれの配列番号によって定義される軽鎖、軽鎖可変領域又は軽鎖可変領域ＣＤＲ１〜３及びそのそれぞれの配列番号によって定義される重鎖、重鎖可変領域又は重鎖可変領域ＣＤＲ１〜３を含むか又はそれからなる抗体又はその抗原結合フラグメント（例えば、抗体「６００３−０５６」）を示すことが意図される。特定の実施形態において、抗体又はその抗原結合フラグメントは、それらの配列番号によって定義されて含むそれらの全重鎖可変領域及びそれらの配列番号によって定義されるそれらの軽鎖可変領域によって定義される。
【００２５】
アミノ酸残基の番号付けは、ＩＭＧＴ（登録商標）、国際ＩｍＭｕｎｏＧｅｎｅＴｉｃｓ情報システム（登録商標）又はＫａｂａｔ，Ｅ．Ａ．，Ｗｕ，Ｔ．Ｔ．，Ｐｅｒｒｙ，Ｈ．Ｍ．，Ｇｏｔｔｅｓｍａｎｎ，Ｋ．Ｓ．＆Ｆｏｅｌｌｅｒ，Ｃ．（１９９１）．Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，５ｔｈ  ｅｄｉｔ．，ＮＩＨ  Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ  ｎｏ．９１−３２４２、米国保健福祉省（Ｕ．Ｓ．Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ  ａｎｄ  Ｈｕｍａｎ  Ｓｅｒｖｉｃｅｓ）；Ｃｈｏｔｈｉａ，Ｃ．＆Ｌｅｓｋ，Ａ．Ｍ．（１９８７）又はＣａｎｏｎｉｃａｌ  ｓｔｒｕｃｔｕｒｅｓ  Ｆｏｒ  Ｔｈｅ  Ｈｙｐｅｒｖａｒｉａｂｌｅ  ｄｏｍａｉｎｓ  Ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｇｌｏｂｌｉｎｓ．Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１９６，９０１−９１７によって行われ得る。
【００２６】
本明細書において使用される際、抗体又はその抗原結合フラグメントは、別のエピトープと比べてそのエピトープと、より高頻度で、より迅速に、より長い期間及び／又はより高い親和性又は結合活性で反応又は会合する場合、別の分子（すなわちエピトープ）の領域に「特異的に」結合すると言われる。一実施形態において、本発明の抗体又はその抗原結合フラグメントは、別の分子よりその標的（ソルチリン）に少なくとも１０倍強く、好ましくは少なくとも５０倍強く、より好ましくは少なくとも１００倍強く結合する。好ましくは、抗体又はその抗原結合フラグメントは、生理学的条件下において、例えば生体内で結合する。したがって、「ソルチリンに特異的に結合する」とは、このような特異性で及び／又はこのような条件下でソルチリンに結合する抗体又はその抗原結合フラグメントの能力を包含する。このような結合を決定するのに好適な方法が当業者に公知であり、例示的な方法が添付の実施例に記載されている。本明細書において使用される際、所定の抗原への抗体の結合に関連して、「結合」という用語は、典型的に、抗原をリガンドとして及び抗体を検体として用いてＢＩＡｃｏｒｅ（登録商標）３０００又はＴ２００機器のいずれかにおいて例えば表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）技術によって決定した際の約１０-7Ｍ以下、例えば約１０-8Ｍ以下、例えば約１０-9Ｍ以下のＫＤに対応する親和性での結合を指し、所定の抗原又は密接に関連している抗原以外の非特異的抗原（例えば、ＢＳＡ、カゼイン）への結合に対するその親和性より少なくとも１０倍低い、例えば少なくとも１００倍低い、例えば少なくとも１，０００倍低い、例えば少なくとも１０，０００倍低い、例えば少なくとも１００，０００倍低いＫＤに対応する親和性で所定の抗原に結合する。親和性がより低くなる量は、抗体のＫＤに依存するため、抗体のＫＤが非常に低い（すなわち抗体が非常に特異的である）場合、抗原に対する親和性が非特異的抗原に対する親和性より低くなる量は、少なくとも１０，０００倍であり得る。特に、本発明は、例えば、Ｏｃｔｅｔ  ３８４ＲＥＤ（実施例７）を用いたバイオレイヤー干渉法によって決定されるとき、２２ｎＭ以下、例えば２２ｎＭ〜１ｎＭ、１０ｎＭ〜１ｎＭ又は５ｎＭ〜１ｎＭに対応する結合親和性を示す抗ソルチリン抗体に関する。
【００２７】
本発明の特定の実施形態において、本発明は、ソルチリンへの結合についてｈｕｍＡｂ抗体３０又はｈｕｍＡｂ抗体９００と競合することが可能な抗体又はその抗原結合フラグメントに関する。別の実施形態において、本発明は、配列番号１４６に定義されるソルチリンのＥ領域への結合について抗体３０と競合することが可能な抗体又はその抗原結合フラグメントに関する。このような競合的な結合の阻害は、当該技術分野において周知のアッセイ及び方法を用いて、例えば固定化ヒトソルチリンとともにＢＩＡｃｏｒｅ（登録商標）チップを用いて、試験される抗体ポリペプチドを用いて及び用いずに対照抗体（抗体「３０」又は「９００」など）とともにインキュベートして決定され得る。代わりに、ペアワイズマッピング手法が使用され得、この手法では、対照抗体（抗体「３０」又は「９００」など）がＢＩＡｃｏｒｅ（登録商標）チップの表面に固定され、ヒトソルチリン抗原が固定化抗体に結合され、次に二次抗体がヒトソルチリンに対する同時結合能力について試験される（開示内容が参照により本明細書に援用される‘ＢＩＡｃｏｒｅ（登録商標）Ａｓｓａｙ  Ｈａｎｄｂｏｏｋ’，ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ  Ｌｉｆｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，２９−０１９４−００  ＡＡ  ０５／２０１２を参照されたい）。代わりに、Ｏｃｔｅｔ  ３８４Ｒｅｄ（実施例７及び８）又は競合的な結合を示す同様の手法の使用である。
【００２８】
本明細書において使用される際の「ｋｄ」（秒−１又は１／秒）という用語は、特定の抗体−抗原相互作用の解離速度定数を指す。前記値は、ｋｏｆｆ値とも呼ばれる。
【００２９】
本明細書において使用される際の「ｋａ」（Ｍ−１×秒−１又は１／Ｍ秒）という用語は、特定の抗体−抗原相互作用の結合速度定数を指す。
【００３０】
本明細書において使用される際の「ＫＤ」（Ｍ）という用語は、特定の抗体−抗原相互作用の解離平衡定数を指し、ｋｄをｋａで除算することによって得られる。
【００３１】
本明細書において使用される際の「ＫＡ」（Ｍ−１又は１／Ｍ）という用語は、特定の抗体−抗原相互作用の結合平衡定数を指し、ｋａをｋｄで除算することによって得られる。
【００３２】
一実施形態において、本発明は、以下の特性：
（ｉ）０．５〜１０ｎＭ、例えば１〜５ｎＭ又は１〜２ｎＭの、ソルチリンに対する結合親和性（ＫD）、
（ｉｉ）ソルチリン発現細胞によってＰＧＲＮのクリアランスを減少させ且つ／又は阻害する能力、
（ｉｉｉ）ソルチリン発現細胞によってＰＧＲＮのエンドサイトーシスを減少させ且つ／又は阻害する能力、
（ｉｖ）ヒト−ソルチリン発現ノックインマウスにおいて血漿中のＰＧＲＮの量及び／又は濃度を増加させる能力
の１つ又は複数を示す抗体又はその抗原結合フラグメントに関する。
【００３３】
「ソルチリン発現細胞によってＰＧＲＮのクリアランスを減少させ且つ／又は阻害する能力」という用語は、実施例９に開示されるＥＬＩＳＡアッセイによって測定した際、少なくとも２０％、例えば２５％〜５００％、２５％〜４００％又は２５％〜２００％だけ培地中のＰＧＲＮの濃度を増加させる能力を含む。
【００３４】
「ヒト−ソルチリン発現ノックインマウスにおいて血漿中のＰＧＲＮの量及び／又は濃度を増加させる能力」は、実施例１０に開示されるＥＬＩＳＡアッセイによって測定した際に少なくとも２５％であるが、好ましくは５０〜５００パーセントだけ血漿中のＰＧＲＮの濃度を増加させる能力を含む。
【００３５】
いくつかの抗体において、ＣＤＲのごく一部、すなわちＳＤＲと呼ばれる、結合に必要とされるＣＤＲ残基のサブセットは、ヒト化抗体において結合を保持するのに必要とされる。関連するエピトープに接触せず、ＳＤＲ中にないＣＤＲ残基は、過去の研究に基づいて（例えば、ＣＤＲ  Ｈ２中の残基Ｈ６０〜Ｈ６５は、必要とされないことが多い）、Ｃｈｏｔｈｉａ超可変ループの外側にあるＫａｂａｔ  ＣＤＲの領域から（Ｋａｂａｔ  ｅｔ  ａｌ．（１９９２）ＳＥＱＵＥＮＣＥＳ  ＯＦ  ＰＲＯＴＥＩＮＳ  ＯＦ  ＩＭＭＵＮＯＬＯＧＩＣＡＬ  ＩＮＴＥＲＥＳＴ，Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ  Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ  Ｎｏ．９１−３２４２；Ｃｈｏｔｈｉａ，Ｃ．ｅｔ  ａｌ．（１９８７）“Ｃａｎｏｎｉｃａｌ  Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅｓ  Ｆｏｒ  Ｔｈｅ  Ｈｙｐｅｒｖａｒｉａｂｌｅ  Ｒｅｇｉｏｎｓ  Ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｇｌｏｂｕｌｉｎｓ”，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１９６：９０１−９１７を参照されたい）、分子モデリングによって及び／又は実験により、又はＧｏｎｚａｌｅｓ，Ｎ．Ｒ．ｅｔ  ａｌ．（２００４）“ＳＤＲ  Ｇｒａｆｔｉｎｇ  Ｏｆ  Ａ  Ｍｕｒｉｎｅ  Ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ｕｓｉｎｇ  Ｍｕｌｔｉｐｌｅ  Ｈｕｍａｎ  Ｇｅｒｍｌｉｎｅ  Ｔｅｍｐｌａｔｅｓ  Ｔｏ  Ｍｉｎｉｍｉｚｅ  Ｉｔｓ  Ｉｍｍｕｎｏｇｅｎｉｃｉｔｙ”，Ｍｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．４１：８６３−８７２に記載されるように特定され得る。１つ又は複数のドナーＣＤＲ残基が存在しないか又は全ドナーＣＤＲが省略される位置におけるこのようなヒト化抗体において、この位置を占めるアミノ酸は、受容体抗体配列において（Ｋａｂａｔ番号付けによって）対応する位置を占めるアミノ酸であり得る。含まれるＣＤＲ中のドナーアミノ酸に対する受容体のこのような置換の数は、競合する考慮事項のバランスを反映する。このような置換は、ヒト化抗体中のマウスアミノ酸の数を減少させ、結果として、潜在的な免疫原性を低下させるのに潜在的に有利である。しかしながら、置換は、親和性の変化も引き起こすことがあり、親和性の著しい低下は回避されるのが好ましい。ＣＤＲ内の置換の位置及び置換するアミノ酸も、実験により選択され得る。
【００３６】
ＣＤＲ残基の単一のアミノ酸改変が機能的結合の喪失をもたらし得るという事実（Ｒｕｄｉｋｏｆｆ，Ｓ．ｅｔｃ．（１９８２）“Ｓｉｎｇｌｅ  Ａｍｉｎｏ  Ａｃｉｄ  Ｓｕｂｓｔｉｔｕｔｉｏｎ  Ａｌｔｅｒｉｎｇ  Ａｎｔｉｇｅｎ−ｂｉｎｄｉｎｇ  Ｓｐｅｃｉｆｉｃｉｔｙ”，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．（ＵＳＡ）７９（６）：１９７９−１９８３）は、別の機能的ＣＤＲ配列を系統的に同定するための手段を提供する。このような変異体ＣＤＲを得るための１つの好ましい方法において、ＣＤＲをコードするポリヌクレオチドが突然変異を起こされて（例えば、ランダム突然変異により、又は部位特異的方法（例えば、突然変異遺伝子座をコードするプライマーによるポリメラーゼ連鎖媒介性増幅）により）、置換アミノ酸残基を有するＣＤＲを生成する。元の（機能的）ＣＤＲ配列中の関連する残基の同一性を、置換される（非機能的）変異体ＣＤＲ配列の同一性と比較することにより、その置換についてのＢＬＯＳＵＭ６２．ｉｉｊ置換スコアが特定され得る。ＢＬＯＳＵＭシステムは、信頼できるアラインメントについて配列のデータベースを分析することによって作成されるアミノ酸置換のマトリックスを提供する（Ｅｄｄｙ，Ｓ．Ｒ．（２００４）“Ｗｈｅｒｅ  Ｄｉｄ  Ｔｈｅ  ＢＬＯＳＵＭ６２  Ａｌｉｇｎｍｅｎｔ  Ｓｃｏｒｅ  Ｍａｔｒｉｘ  Ｃｏｍｅ  Ｆｒｏｍ？”，Ｎａｔｕｒｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈ．２２（８）：１０３５−１０３６；Ｈｅｎｉｋｏｆｆ，Ｊ．Ｇ．（１９９２）“Ａｍｉｎｏ  ａｃｉｄ  ｓｕｂｓｔｉｔｕｔｉｏｎ  ｍａｔｒｉｃｅｓ  ｆｒｏｍ  ｐｒｏｔｅｉｎ  ｂｌｏｃｋｓ”，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．（ＵＳＡ）８９：１０９１５−１０９１９；Ｋａｒｌｉｎ，Ｓ．ｅｔ  ａｌ．（１９９０）“Ｍｅｔｈｏｄｓ  Ｆｏｒ  Ａｓｓｅｓｓｉｎｇ  Ｔｈｅ  Ｓｔａｔｉｓｔｉｃａｌ  Ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｃｅ  Ｏｆ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｓｅｑｕｅｎｃｅ  Ｆｅａｔｕｒｅｓ  Ｂｙ  Ｕｓｉｎｇ  Ｇｅｎｅｒａｌ  Ｓｃｏｒｉｎｇ  Ｓｃｈｅｍｅｓ”，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．（ＵＳＡ）８７：２２６４−２２６８；Ａｌｔｓｃｈｕｌ，Ｓ．Ｆ．（１９９１）“Ａｍｉｎｏ  Ａｃｉｄ  Ｓｕｂｓｔｉｔｕｔｉｏｎ  Ｍａｔｒｉｃｅｓ  Ｆｒｏｍ  Ａｎ  Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ  Ｔｈｅｏｒｅｔｉｃ  Ｐｅｒｓｐｅｃｔｉｖｅ”，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２１９，５５５−５６５。現在、最先端のＢＬＯＳＵＭデータベースは、ＢＬＯＳＵＭ６２データベース（ＢＬＯＳＵＭ６２．ｉｉｊ）である。表１は、ＢＬＯＳＵＭ６２．ｉｉｊ置換スコアを示す（スコアが高くなるほど、置換がより保存的になり、ひいては置換が機能に影響を与えない可能性が高くなる）。得られるＣＤＲを含む抗原結合フラグメントがソルチリンに結合できない場合、例えば、ＢＬＯＳＵＭ６２．ｉｉｊ置換スコアは、不十分に保存的であると見なされ、より高い置換スコアを有する新たな置換候補が選択され、生成される。したがって、例えば元の残基がグルタミン酸塩（Ｅ）であり、非機能的置換残基がヒスチジン（Ｈ）である場合、ＢＬＯＳＵＭ６２．ｉｉｊ置換スコアは０であり、より保存的な変化（アスパラギン酸塩、アスパラギン、グルタミン又はリジンなどへの）��好ましい。
【００３７】
【表１】
2020527152.tif 000005
【００３８】
したがって、本発明は、改良されたＣＤＲを同定するためのランダム突然変異の使用を想定している。本発明に関連して、保存的置換は、以下の３つの表の１つ又は複数に反映されているアミノ酸の種類の範囲内の置換によって定義され得る。
【００３９】
【表２】
2020527152.tif 000006
【００４０】
【表３】
2020527152.tif 000007
【００４１】
【表４】
2020527152.tif 000008
【００４２】
より保存的な置換基としては、バリン−ロイシン−イソロイシン、フェニルアラニン−チロシン、リジン−アルギニン、アラニン−バリン及びアスパラギン−グルタミンが挙げられる。
【００４３】
アミノ酸のさらなる基は、例えば、Ｃｒｅｉｇｈｔｏｎ（１９８４）Ｐｒｏｔｅｉｎｓ：Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ  ａｎｄ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ（２ｄ  Ｅｄ．１９９３），Ｗ．Ｈ．Ｆｒｅｅｍａｎ  ａｎｄ  Ｃｏｍｐａｎｙに記載されている原理を用いて配合され得る。
【００４４】
ファージディスプレイ技術は、ＣＤＲ親和性を増加させる（又は低下させる）のに代わりに使用され得る。親和性成熟と呼ばれるこの技術は、突然変異又は「ＣＤＲウォーキング」を用い、再選択は、標的抗原又はその抗原性の抗原結合フラグメントを使用して、初期抗体又は親抗体と比較した際、抗原に対するより高い（又はより低い）親和性で結合するＣＤＲを有する抗体を同定する（例えば、Ｇｌａｓｅｒ  ｅｔ  ａｌ．（１９９２）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  １４９：３９０３を参照されたい）。単一のヌクレオチドではなくコドン全体の突然変異誘発は、アミノ酸突然変異の半ランダム化レパートリーをもたらす。変異体クローンのプールからなるライブラリーが構築され得、変異体クローンのそれぞれが単一のＣＤＲ中の単一のアミノ酸改変により異なり、各ＣＤＲ残基に対して各可能なアミノ酸置換を提示する変異体を含む。抗原に対する増加した（又は低下した）結合親和性を有する突然変異体は、固定化突然変異体を標識抗原と接触させることによってスクリーニングされ得る。当該技術分野において公知の任意のスクリーニング方法は、抗原に対する増加した又は低下した親和性を有する突然変異体抗体を同定するのに使用され得る（例えば、ＥＬＩＳＡ）（Ｗｕ  ｅｔ  ａｌ．１９９８，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．（Ｕ．Ｓ．Ａ．）９５：６０３７；Ｙｅｌｔｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，１９９５，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  １５５：１９９４を参照されたい）。軽鎖をランダム化するＣＤＲウォーキングが使用され得る（Ｓｃｈｉｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，１９９６，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏ．２６３：５５１を参照されたい）。
【００４５】
このような親和性成熟を達成するための方法は、例えば、Ｋｒａｕｓｅ，Ｊ．Ｃ．ｅｔ  ａｌ．（２０１１）“Ａｎ  Ｉｎｓｅｒｔｉｏｎ  Ｍｕｔａｔｉｏｎ  Ｔｈａｔ  Ｄｉｓｔｏｒｔｓ  Ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ｂｉｎｄｉｎｇ  Ｓｉｔｅ  Ａｒｃｈｉｔｅｃｔｕｒｅ  Ｅｎｈａｎｃｅｓ  Ｆｕｎｃｔｉｏｎ  Ｏｆ  Ａ  Ｈｕｍａｎ  Ａｎｔｉｂｏｄｙ”，ＭＢｉｏ．２（１）ｐｉｉ：ｅ００３４５−１０．ｄｏｉ：１０．１１２８／ｍＢｉｏ．００３４５−１０；Ｋｕａｎ，Ｃ．Ｔ．ｅｔ  ａｌ．（２０１０）“Ａｆｆｉｎｉｔｙ−Ｍａｔｕｒｅｄ  Ａｎｔｉ−Ｇｌｙｃｏｐｒｏｔｅｉｎ  ＮＭＢ  Ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ  Ｉｍｍｕｎｏｔｏｘｉｎｓ  Ｔａｒｇｅｔｉｎｇ  Ｍａｌｉｇｎａｎｔ  Ｇｌｉｏｍａｓ  Ａｎｄ  Ｍｅｌａｎｏｍａｓ”，Ｉｎｔ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ  １０．１００２／ｉｊｃ．２５６４５；Ｈａｃｋｅｌ，Ｂ．Ｊ．ｅｔ  ａｌ．（２０１０）“Ｓｔａｂｉｌｉｔｙ  Ａｎｄ  ＣＤＲ  Ｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎ  Ｂｉａｓｅｓ  Ｅｎｒｉｃｈ  Ｂｉｎｄｅｒ  Ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌｉｔｙ  Ｌａｎｄｓｃａｐｅｓ”，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．４０１（１）：８４−９６；Ｍｏｎｔｇｏｍｅｒｙ，Ｄ．Ｌ．ｅｔ  ａｌ．（２００９）“Ａｆｆｉｎｉｔｙ  Ｍａｔｕｒａｔｉｏｎ  ａｎｄ  Ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ  Ｏｆ  Ａ  Ｈｕｍａｎ  Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ａｇａｉｎｓｔ  ＨＩＶ−１  ｇｐ４１”，ＭＡｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  １（５）：４６２−４７４；Ｇｕｓｔｃｈｉｎａ，Ｅ．ｅｔ  ａｌ．（２００９）“Ａｆｆｉｎｉｔｙ  Ｍａｔｕｒａｔｉｏｎ  Ｂｙ  Ｔａｒｇｅｔｅｄ  Ｄｉｖｅｒｓｉｆｉｃａｔｉｏｎ  Ｏｆ  Ｔｈｅ  ＣＤＲ−Ｈ２  Ｌｏｏｐ  Ｏｆ  Ａ  Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ｆａｂ  Ｄｅｒｉｖｅｄ  Ｆｒｏｍ  Ａ  Ｓｙｎｔｈｅｔｉｃ  Ｎａｉｖｅ  Ｈｕｍａｎ  Ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ｌｉｂｒａｒｙ  Ａｎｄ  Ｄｉｒｅｃｔｅｄ  Ａｇａｉｎｓｔ  Ｔｈｅ  Ｉｎｔｅｒｎａｌ  Ｔｒｉｍｅｒｉｃ  Ｃｏｉｌｅｄ−Ｃｏｉｌ  Ｏｆ  Ｇｐ４１  Ｙｉｅｌｄｓ  Ａ  Ｓｅｔ  Ｏｆ  Ｆａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  Ｗｉｔｈ  Ｉｍｐｒｏｖｅｄ  ＨＩＶ−１  Ｎｅｕｔｒａｌｉｚａｔｉｏｎ  Ｐｏｔｅｎｃｙ  Ａｎｄ  Ｂｒｅａｄｔｈ”，Ｖｉｒｏｌｏｇｙ  ３９３（１）：１１２−１１９；最後にＷ．Ｊ．ｅｔ  ａｌ．（２００９）“Ａｆｆｉｎｉｔｙ  Ｍａｔｕｒａｔｉｏｎ  Ｏｆ  Ａ  Ｈｕｍａｎｉｚｅｄ  Ｒａｔ  Ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ｆｏｒ  Ａｎｔｉ−ＲＡＧＥ  Ｔｈｅｒａｐｙ：Ｃｏｍｐｒｅｈｅｎｓｉｖｅ  Ｍｕｔａｇｅｎｅｓｉｓ  Ｒｅｖｅａｌｓ  Ａ  Ｈｉｇｈ  Ｌｅｖｅｌ  Ｏｆ  Ｍｕｔａｔｉｏｎａｌ  Ｐｌａｓｔｉｃｉｔｙ  Ｂｏｔｈ  Ｉｎｓｉｄｅ  Ａｎｄ  Ｏｕｔｓｉｄｅ  Ｔｈｅ  Ｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔａｒｉｔｙ−Ｄｅｔｅｒｍｉｎｉｎｇ  Ｒｅｇｉｏｎｓ”，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．３８８（３）：５４１−５５８；Ｂｏｓｔｒｏｍ，Ｊ．ｅｔ  ａｌ．（２００９）“Ｉｍｐｒｏｖｉｎｇ  Ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ｂｉｎｄｉｎｇ  Ａｆｆｉｎｉｔｙ  Ａｎｄ  Ｓｐｅｃｉｆｉｃｉｔｙ  Ｆｏｒ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ  Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ”，Ｍｅｔｈｏｄｓ  Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．５２５：３５３−３７６；Ｓｔｅｉｄｌ，Ｓ．ｅｔ  ａｌ．（２００８）“Ｉｎ  Ｖｉｔｒｏ  Ａｆｆｉｎｉｔｙ  Ｍａｔｕｒａ���ｉｏｎ  Ｏｆ  Ｈｕｍａｎ  ＧＭ−ＣＳＦ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  Ｂｙ  Ｔａｒｇｅｔｅｄ  ＣＤＲ−Ｄｉｖｅｒｓｉｆｉｃａｔｉｏｎ”，Ｍｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．４６（１）：１３５−１４４；及びＢａｒｄｅｒａｓ，Ｒ．ｅｔ  ａｌ．（２００８）“Ａｆｆｉｎｉｔｙ  Ｍａｔｕｒａｔｉｏｎ  Ｏｆ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  Ａｓｓｉｓｔｅｄ  Ｂｙ  Ｉｎ  Ｓｉｌｉｃｏ  Ｍｏｄｅｌｉｎｇ”，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．（ＵＳＡ）１０５（２６）：９０２９−９０３４に記載されている。
【００４６】
したがって、包含される抗体又はそれらの抗原結合フラグメントのＣＤＲ変異体の配列は、置換により、例えば置換される４つのアミノ酸残基、３つのアミノ酸残基、２つのアミノ酸残基又は１つのアミノ酸残基により、親抗体のＣＤＲの配列と異なり得る。本発明の一実施形態によれば、ＣＤＲ領域中のアミノ酸は、上記の３つの表において定義されるように、保存的置換で置換され得ることがさらに想定される。
【００４７】
「トランスジェニック非ヒト動物」という用語は、１つ又は複数のヒト重鎖及び／又は軽鎖導入遺伝子又は導入染色体（動物の天然ゲノムＤＮＡに統合されるか又は非統合のいずれか）を含み、完全ヒト抗体を発現することが可能なゲノムを有する非ヒト動物を指す。例えば、トランスジェニックマウスは、マウスが、ソルチリン抗原及び／又はソルチリンを発現する細胞で免疫されるときにヒト抗ソルチリン抗体を産生するように、ヒト軽鎖導入遺伝子及びヒト重鎖導入遺伝子又はヒト重鎖導入染色体のいずれかを有し得る。ヒト重鎖導入遺伝子は、トランスジェニックマウス、例えばＨｕＭＡｂマウス（ＨＣｏ７又はＨＣｏ１２マウスなど）の場合と同様に、マウスの染色体ＤＮＡに統合され得るか、又はヒト重鎖導入遺伝子は、国際公開第０２／４３４７８号パンフレットに記載されるように、導入染色体ＫＭマウスの場合と同様に染色体過剰に維持され得る。このようなトランスジェニック及び導入染色体マウス（本明細書においてまとめて「トランスジェニックマウス」と呼ばれる）は、Ｖ−Ｄ−Ｊ組み換え及びアイソタイプスイッチングを行うことにより、所与の抗原（ＩｇＧ、ＩｇＡ、ＩｇＭ、ＩｇＤ及び／又はＩｇＥなど）に対するヒトモノクローナル抗体の複数のアイソタイプを産生することが可能である。
【００４８】
トランスジェニック、非ヒト動物も、特定の抗体をコードする遺伝子を導入することにより、例えば動物の乳汁中で発現される、タンパク質をコードする遺伝子に抗体遺伝子を作動可能に連結することにより、特定の抗原に対する抗体の産生に使用され得る。
【００４９】
本明細書において使用される際の「治療」又は「治療すること」という用語は、疾患又は障害の進行又は重症度を改善するか、遅らせるか、軽減するか、又は抑制すること、又はこのような疾患又は障害の１つ又は複数の症状又は副作用を改善するか、遅らせるか、軽減するか、又は抑制することを意味する。本発明の趣旨では、「治療」又は「治療すること」は、有益な又は所望の臨床結果を得るための手法をさらに意味し、ここで、「有益な又は所望の臨床結果」としては、限定はされないが、部分的であるか又は全体的であるか、検出可能か又は検出不可能かにかかわらず、症状の軽減、障害又は疾患の程度の減少、安定した（すなわち悪化していない）疾患又は障害状態、疾患又は障害状態の進行の遅延又は緩徐化、疾患又は障害状態の改善又は緩和及び疾患又は障害の寛解が挙げられる。
【００５０】
「有効量」は、本発明の抗体又はその抗原結合フラグメントに適用される場合、意図される生物学的効果又は所望の治療結果（限定はされないが臨床結果を含む）を達成するのに必要な投与量及び期間にわたる十分な量を指す。「治療的に有効な量」という語句は、本発明の抗体又はその抗原結合フラグメントに適用される場合、障害若しくは疾患の状態の進行又は障害若しくは疾患の症状の進行を改善するか、緩和するか、安定させるか、抑制するか、遅らせるか、軽減するか、又は遅延させるのに十分な抗体又はその抗原結合フラグメントの量を表すことが意図される。一実施形態において、本発明の方法は、他の化合物と組み合わせた、抗体又はその抗原結合フラグメントの投与を提供する。このような場合、「有効量」は、意図される生物学的効果を引き起こすのに十分な組合せの量である。
【００５１】
本発明の抗ソルチリン抗体又はその抗原結合フラグメントの治療的に有効な量は、個体の病状、年齢、性別及び体重並びに抗ソルチリン抗体又はその抗原結合フラグメントが個体における所望の応答を引き起こす能力などの要因に応じて変化し得る。治療的に有効な量は、抗体又は抗体部分の何らかの毒性又は有害作用を、治療的に有益な効果が上回る量でもある。
【００５２】
本発明の抗体は、好ましくは、ヒト又はヒト化抗体である。
【００５３】
この領域におけるアミノ酸残基の番号付けは、例えば、ＩＭＧＴ（登録商標）、国際ＩｍＭｕｎｏＧｅｎｅＴｉｃｓ情報システム（登録商標）又はＫａｂａｔ，Ｅ．Ａ．，Ｗｕ，Ｔ．Ｔ．，Ｐｅｒｒｙ，Ｈ．Ｍ．，Ｇｏｔｔｅｓｍａｎｎ，Ｋ．Ｓ．＆Ｆｏｅｌｌｅｒ，Ｃ．（１９９１）．Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，５ｔｈ  ｅｄｉｔ．，ＮＩＨ  Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ  ｎｏ．９１−３２４２、米国保健福祉省（Ｕ．Ｓ．Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ  ａｎｄ  Ｈｕｍａｎ  Ｓｅｒｖｉｃｅｓ）；Ｃｈｏｔｈｉａ，Ｃ．＆Ｌｅｓｋ，Ａ．Ｍ．（１９８７）又はＣａｎｏｎｉｃａｌ  ｓｔｒｕｃｔｕｒｅｓ  Ｆｏｒ  Ｔｈｅ  Ｈｙｐｅｒｒｖａｒｉａｂｌｅ  ｄｏｍａｉｎｓ  Ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｇｌｏｂｌｉｎｓ．Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１９６，９０１−９１７を使用して行われ得る。
【００５４】
抗体６００３−０２８：
したがって、本発明は、
（ａ）配列番号１のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ１、
（ｂ）配列番号２のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２、
（ｃ）配列番号３のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３、
（ｄ）配列番号４のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ１、
（ｅ）配列番号５のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２、及び
（ｆ）配列番号６のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３
を含むか又はそれからなる抗体又はその抗原結合フラグメントに関する。
【００５５】
好ましくは、モノクローナル抗体は、配列番号１０９の重鎖可変領域及び配列番号１１０の軽鎖可変領域を含むか又はそれからなり得る。
【００５６】
抗体６００３−０５６：
したがって、本発明は、
ａ．配列番号７を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１、
ｂ．配列番号８を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２、
ｃ．配列番号９を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３、
ｄ．配列番号１０を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１、
ｅ．配列番号１１を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２、及び
ｆ．配列番号１２を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３
を含むか又はそれからなる抗体又はその抗原結合フラグメントに関する。
【００５７】
好ましくは、モノクローナル抗体は、配列番号１１１の重鎖可変領域及び配列番号１１２の軽鎖可変領域を含むか又はそれからなり得る。
【００５８】
抗体６００３−１２８６：
したがって、本発明は、
ａ．配列番号１３を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１、
ｂ．配列番号１４を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２、
ｃ．配列番号１５を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３、
ｄ．配列番号１６を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１、
ｅ．配列番号１７を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２、及び
ｆ．配列番号１８を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３
を含むか又はそれからなる抗体又はその抗原結合フラグメントに関する。
【００５９】
好ましくは、モノクローナル抗体は、配列番号１１３の重鎖可変領域及び配列番号１１４の軽鎖可変領域を含むか又はそれからなり得る。
【００６０】
抗体６００３−０３０：
したがって、本発明は、
ａ．配列番号１９を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１、
ｂ．配列番号２０を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２、
ｃ．配列番号２１を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３、
ｄ．配列番号２２を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１、
ｅ．配列番号２３を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２、及び
ｆ．配列番号２４を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３
を含むか又はそれからなる抗体又はその抗原結合フラグメントに関する。
【００６１】
好ましくは、モノクローナル抗体は、配列番号１１５の重鎖可変領域及び配列番号１１６の軽鎖可変領域を含むか又はそれからなり得る。
【００６２】
抗体６００３−１２７７：
したがって、本発明は、
ａ．配列番号２５を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１、
ｂ．配列番号２６を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２、
ｃ．配列番号２７を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３、
ｄ．配列番号２８を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１、
ｅ．配列番号２９を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２、及び
ｆ．配列番号３０を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３
を含むか又はそれからなる抗体又はその抗原結合フラグメントに関する。
【００６３】
好ましくは、モノクローナル抗体は、配列番号１１７の重鎖可変領域及び配列番号１１８の軽鎖可変領域を含むか又はそれからなり得る。
【００６４】
抗体６００３−３８１：
したがって、本発明は、
ａ．配列番号３１を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１、
ｂ．配列番号３２を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２、
ｃ．配列番号３３を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３、
ｄ．配列番号３４を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１、
ｅ．配列番号３５を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２、及び
ｆ．配列番号３６を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３
を含むか又はそれからなる抗体又はその抗原結合フラグメントに関する。
【００６５】
好ましくは、モノクローナル抗体は、配列番号１１９の重鎖可変領域及び配列番号１２０の軽鎖可変領域を含むか又はそれからなり得る。
【００６６】
抗体６００３−０８３：
したがって、本発明は、
ａ．配列番号３７を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１、
ｂ．配列番号３８を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２、
ｃ．配列番号３９を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３、
ｄ．配列番号４０を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１、
ｅ．配列番号４１を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２、及び
ｆ．配列番号４２を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３
を含むか又はそれからなる抗体又はその抗原結合フラグメントに関する。
【００６７】
好ましくは、モノクローナル抗体は、配列番号１２１の重鎖可変領域及び配列番号１２２の軽鎖可変領域を含むか又はそれからなり得る。
【００６８】
抗体６００３−７９９：
したがって、本発明は、
ａ．配列番号４３を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１、
ｂ．配列番号４４を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２、
ｃ．配列番号４５を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３、
ｄ．配列番号４６を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１、
ｅ．配列番号４７を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２、及び
ｆ．配列番号４８を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３
を含むか又はそれからなる抗体又はその抗原結合フラグメントに関する。
【００６９】
好ましくは、モノクローナル抗体は、配列番号１２３の重鎖可変領域及び配列番号１２４の軽鎖可変領域を含むか又はそれからなり得る。
【００７０】
抗体６００３−９１０：
したがって、本発明は、
ａ．配列番号４９を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１、
ｂ．配列番号５０を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２、
ｃ．配列番号５１を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３、
ｄ．配列番号５２を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１、
ｅ．配列番号５３を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２、及び
ｆ．配列番号５４を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３
を含むか又はそれからなる抗体又はその抗原結合フラグメントに関する。
【００７１】
好ましくは、モノクローナル抗体は、配列番号１２５の重鎖可変領域及び配列番号１２６の軽鎖可変領域を含むか又はそれからなり得る。
【００７２】
抗体６００３−４２３：
したがって、本発明は、
ａ．配列番号５５を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１、
ｂ．配列番号５６を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２、
ｃ．配列番号５７を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３、
ｄ．配列番号５８を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１、
ｅ．配列番号５９を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２、及び
ｆ．配列番号６０を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３
を含むか又はそれからなる抗体又はその抗原結合フラグメントに関する。
【００７３】
好ましくは、モノクローナル抗体は、配列番号１２７の重鎖可変領域及び配列番号１２８の軽鎖可変領域を含むか又はそれからなり得る。
【００７４】
抗体６００３−８２２：
したがって、本発明は、
ａ．配列番号６１を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１、
ｂ．配列番号６２を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２、
ｃ．配列番号６３を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３、
ｄ．配列番号６４を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１、
ｅ．配列番号６５を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２、及び
ｆ．配列番号６６を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３
を含むか又はそれからなる抗体又はその抗原結合フラグメントに関する。
【００７５】
好ましくは、モノクローナル抗体は、配列番号１２９の重鎖可変領域及び配列番号１３０の軽鎖可変領域を含むか又はそれからなり得る。
【００７６】
抗体６００３−８８６：
したがって、本発明は、
ａ．配列番号６７を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１、
ｂ．配列番号６８を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２、
ｃ．配列番号６９を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３、
ｄ．配列番号７０を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１、
ｅ．配列番号７１を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２、及び
ｆ．配列番号７２を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３
を含むか又はそれからなる抗体又はその抗原結合フラグメントに関する。
【００７７】
好ましくは、モノクローナル抗体は、配列番号１３１の重鎖可変領域及び配列番号１３２の軽鎖可変領域を含むか又はそれからなり得る。
【００７８】
抗体６００３−０７２：
したがって、本発明は、
ａ．配列番号７３を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１、
ｂ．配列番号７４を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２、
ｃ．配列番号７５を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３、
ｄ．配列番号７６を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１、
ｅ．配列番号７７を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２、及び
ｆ．配列番号７８を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３
を含むか又はそれからなる抗体又はその抗原結合フラグメントに関する。
【００７９】
好ましくは、モノクローナル抗体は、配列番号１３３の重鎖可変領域及び配列番号１３４の軽鎖可変領域を含むか又はそれからなり得る。
【００８０】
抗体６００３−９００：
したがって、本発明は、
ａ．配列番号７９を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１、
ｂ．配列番号８０を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２、
ｃ．配列番号８１を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３、
ｄ．配列番号８２を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１、
ｅ．配列番号８３を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２、及び
ｆ．配列番号８４を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３
を含むか又はそれからなる抗体又はその抗原結合フラグメントに関する。
【００８１】
好ましくは、モノクローナル抗体は、配列番号１３５の重鎖可変領域及び配列番号１３６の軽鎖可変領域を含むか又はそれからなり得る。
【００８２】
抗体６００３−９３６：
したがって、本発明は、
ａ．配列番号８５を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１、
ｂ．配列番号８６を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２、
ｃ．配列番号８７を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３、
ｄ．配列番号８８を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１、
ｅ．配列番号８９を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２、及び
ｆ．配列番号９０を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３
を含むか又はそれからなる抗体又はその抗原結合フラグメントに関する。
【００８３】
好ましくは、モノクローナル抗体は、配列番号１３７の重鎖可変領域及び配列番号１３８の軽鎖可変領域を含むか又はそれからなり得る。
【００８４】
抗体６００３−４０８：
したがって、本発明は、
ａ．配列番号９１を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１、
ｂ．配列番号９２を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２、
ｃ．配列番号９３を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３、
ｄ．配列番号９４を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１、
ｅ．配列番号９５を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２、及び
ｆ．配列番号９６を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３
を含むか又はそれからなる抗体又はその抗原結合フラグメントに関する。
【００８５】
好ましくは、モノクローナル抗体は、配列番号１３９の重鎖可変領域及び配列番号１４０の軽鎖可変領域を含むか又はそれからなり得る。
【００８６】
抗体６００３−４７１：
したがって、本発明は、
ａ．配列番号９７を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１、
ｂ．配列番号９８を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２、
ｃ．配列番号９９を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３、
ｄ．配列番号１００を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１、
ｅ．配列番号１０１を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２、及び
ｆ．配列番号１０２を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３
を含むか又はそれからなる抗体又はその抗原結合フラグメントに関する。
【００８７】
好ましくは、モノクローナル抗体は、配列番号１４１の重鎖可変領域及び配列番号１４２の軽鎖可変領域を含むか又はそれからなり得る。
【００８８】
抗体６００３−９７２：
したがって、本発明は、
ａ．配列番号１０３を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１、
ｂ．配列番号１０４を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２、
ｃ．配列番号１０５を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３、
ｄ．配列番号１０６を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１、
ｅ．配列番号１０７を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２、及び
ｆ．配列番号１０８を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３
を含むか又はそれからなる抗体又はその抗原結合フラグメントに関する。
【００８９】
好ましくは、モノクローナル抗体は、配列番号１４３の重鎖可変領域及び配列番号１４４の軽鎖可変領域を含むか又はそれからなり得る。
【００９０】
上述される抗体は、一実施形態によれば、前記ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及び／又はＣＤＲ３（ＨＣ及び／又はＶＣ）配列からの、４つ以下のアミノ酸差、又は３つ以下のアミノ酸差、又は２つ以下のアミノ酸差、又は１つ以下のアミノ酸差を有する変異体をさらに含み得る。
【００９１】
さらに、抗体は、薬学的に許容できる担体と一緒に組成物中にあり得る。本発明の抗体は、治療に使用され得る。特に、本発明の抗体は、ＦＴＤ又はＡＬＳ又はタンパク質症（アルツハイマー病（ＡＤ）など）を治療するのに使用され得る。
【００９２】
本発明によって想定される治療は、長期であり得、患者は、少なくとも２週間、例えば少なくとも１ヶ月間、６ヶ月間、１年間又はそれを超えて治療され得る。
【００９３】
本発明の抗体は、例えば、Ｋｏｈｌｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ  ２５６，４９５（１９７５）によって最初に記載されているハイブリドーマ方法によって産生されるモノクローナル抗体であり得るか、又は組み換えＤＮＡ若しくは他の方法によって産生されるモノクローナル抗体であり得る。モノクローナル抗体は、例えば、Ｃｌａｃｋｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ  ３５２，６２４−６２８（１９９１）及びＭａｒｋｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．ＭｏＩ．Ｂｉｏｌ．２２２，５８１−５９７（１９９１）に記載されている技術を用いて、ファージ抗体ライブラリーからも単離され得る。モノクローナル抗体は、任意の好適な源から得られる。したがって、例えば、モノクローナル抗体は、例えば、表面において抗原を発現する細胞又は該当する抗原をコードする核酸の形態において、該当する抗原で免疫されたマウスから得られるマウス脾臓Ｂリンパ球細胞から調製されるハイブリドーマから得られる。モノクローナル抗体は、免疫されたヒト又は非ヒト哺乳動物（ラット、ウサギ、イヌ、ヒツジ、ヤギ、霊長類など）の抗体発現細胞に由来するハイブリドーマからも得られる。
【００９４】
一実施形態において、本発明の抗体は、ヒト抗体である。ソルチリンに対するヒトモノクローナル抗体は、マウス系ではなくヒト免疫系の部分を有するトランスジェニック又は染色体導入マウスを用いて生成され得る。このようなトランスジェニック及び染色体導入マウスは、本明細書においてそれぞれＨｕＭＡｂマウス及びＫＭマウスと呼ばれるマウスを含む。
【００９５】
ＨｕＭＡｂマウスは、内因性μ及びＫ鎖遺伝子座を不活性化する標的突然変異と一緒に、再配列されていないヒト重鎖可変及び定常（μ及びＹ）並びに軽鎖可変及び定常（κ）鎖免疫グロブリン配列をコードするヒト免疫グロブリン遺伝子のミニ遺伝子座を含む（Ｌｏｎｂｅｒｇ，Ｎ．ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ  ３６８，８５６−８５９（１９９４））。したがって、マウスは、マウスＩｇＭ又はＫの減少した発現を示し、免疫化に応答して、導入されたヒト重鎖及び軽鎖導入遺伝子がクラススイッチ及び体細胞突然変異を起こして、高親和性ヒトＩｇＧ、κモノクローナル抗体を生成する（Ｌｏｎｂｅｒｇ，Ｎ．ｅｔ  ａｌ．（１９９４）、上記を参照されたい；Ｌｏｎｂｅｒｇ，Ｎ．，Ｈａｎｄｂｏｏｋ  ｏｆ  Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ  １１３，４９−１０１（１９９４）、Ｌｏｎｂｅｒｇ，Ｎ．ａｎｄ  Ｈｕｓｚａｒ，Ｄ．，Ｉｎｔｅｒｎ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｖｏｌ．１３  ６５−９３（１９９５）及びＨａｒｄｉｎｇ，Ｆ．ａｎｄ  Ｌｏｎｂｅｒｇ，Ｎ．，Ａｎｎ．Ｎ．Ｙ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ  ７６４  ５３６−５４６（１９９５）に概説されている）。ＨｕＭＡｂマウスの作製は、Ｔａｙｌｏｒ，Ｌ．ｅｔ  ａｌ．，Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  ２０，６２８７−６２９５（１９９２）、Ｃｈｅｎ，Ｊ．ｅｔ  ａｌ．，Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  ５，６４７−６５６（１９９３）、Ｔｕａｉｌｌｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５２，２９１２−２９２０（１９９４）、Ｔａｙｌｏｒ，Ｌ．ｅｔ  ａｌ．，Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  ６，５７９−５９１（１９９４）、Ｆｉｓｈｗｉｌｄ，Ｄ．ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  １４，８４５−８５１（１９９６）に詳細に記載されている。米国特許第５，５４５，８０６号明細書、米国特許第５，５６９，８２５号明細書、米国特許第５，６２５，１２６号明細書、米国特許第５，６３３，４２５号明細書、米国特許第５，７８９，６５０号明細書、米国特許第５，８７７，３９７号明細書、米国特許第５，６６１，０１６号明細書、米国特許第５，８１４，３１８号明細書、米国特許第５，８７４，２９９号明細書、米国特許第５，７７０，４２９号明細書、米国特許第５，５４５，８０７号明細書、国際公開第９８／２４８８４号パンフレット、国際公開第９４／２５５８５号パンフレット、国際公開第９３／１２２７号パンフレット、国際公開第９２／２２６４５号パンフレット、国際公開第９２／０３９１８号パンフレット及び国際公開第０１／０９１８７号パンフレットも参照されたい。
【００９６】
ＨＣｏ７、ＨＣｏ１２、ＨＣｏ１７及びＨＣｏ２０マウスは、それらの内因性軽鎖（κ）遺伝子におけるＪＫＤ破壊（Ｃｈｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，ＥＭＢＯ  Ｊ．１２，８１１−８２０（１９９３）に記載されているように）、それらの内因性重鎖遺伝子におけるＣＭＤ破壊（国際公開第０１／１４４２４号パンフレットの実施例１に記載されているように）及びＫＣｏ５ヒトκ軽鎖導入遺伝子（Ｆｉｓｈｗｉｌｄ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  １４，８４５−８５１（１９９６）に記載されているように）を有する。さらに、ＨＣｏ７マウスは、ＨＣｏ７ヒト重鎖導入遺伝子（米国特許第５，７７０，４２９号明細書に記載されているように）を有し、ＨＣｏ１２マウスは、ＨＣｏ１２ヒト重鎖導入遺伝子（国際公開第０１／１４４２４号パンフレットの実施例２に記載されているように）を有し、ＨＣｏ１７マウスは、ＨＣｏ１７ヒト重鎖導入遺伝子（国際公開第０１／０９１８７号パンフレットの実施例２に記載されているように）を有し、ＨＣｏ２０マウスは、ＨＣｏ２０ヒト重鎖導入遺伝子を有する。得られるマウスは、内因性マウス重鎖及びκ軽鎖遺伝子座の破壊のためにバックグラウンドのホモ接合体においてヒト免疫グロブリン重鎖及びκ軽鎖導入遺伝子を発現する。
【００９７】
ＫＭマウス株において、内因性マウスκ軽鎖遺伝子は、Ｃｈｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，ＥＭＢＯ  Ｊ．１２，８１１−８２０（１９９３）に記載されているようにホモ接合的に破壊されており、内因性マウス重鎖遺伝子は、国際公開第０１／０９１８７号パンフレットの実施例１に記載されているようにホモ接合的に破壊されている。このマウス株は、Ｆｉｓｈｗｉｌｄ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  １４，８４５−８５１（１９９６）に記載されているように、ヒトκ軽鎖導入遺伝子、ＫＣｏ５を保有する。このマウス株は、国際公開第０２／４３４７８号パンフレットに記載されているように、染色体１４フラグメントｈＣＦ（ＳＣ２０）から構成されるヒト重鎖導入染色体も保有する。ＨＣｏ１２−Ｂａｌｂ／ｃ、ＨＣｏ１７−Ｂａｌｂ／ｃ及びＨＣｏ２０−Ｂａｌｂ／ｃマウスは、国際公開第０９／０９７００６号パンフレットに記載されているように、ＨＣｏ１２、ＨＣｏ１７及びＨＣｏ２０をＫＣｏ５［Ｊ／Ｋ］（Ｂａｌｂ）に交差させることによって生成され得る。
【００９８】
ＫＭマウス株において、内因性マウスκ軽鎖遺伝子は、Ｃｈｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，ＥＭＢＯ  Ｊ．１２，８１１−８２０（１９９３）に記載されているようにホモ接合的に破壊されており、内因性マウス重鎖遺伝子は、国際公開第０１／０９１８７号パンフレットの実施例１に記載されているようにホモ接合的に破壊されている。このマウス株は、Ｆｉｓｈｗｉｌｄ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  １４，８４５−８５１（１９９６）に記載されているように、ヒトκ軽鎖導入遺伝子、ＫＣｏ５を保有する。このマウス株は、国際公開第０２／４３４７８号パンフレットに記載されているように、染色体１４抗原結合フラグメントｈＣＦ（ＳＣ２０）から構成されるヒト重鎖導入染色体も保有する。
【００９９】
これらのトランスジェニックマウスに由来する脾細胞は、周知の技術に従って、ヒトモノクローナル抗体を分泌するハイブリドーマを生成するのに使用され得る。本発明のヒトモノクローナル若しくはポリクローナル抗体又は他の種に由来する本発明の抗体は、該当する免疫グロブリン重鎖及び軽鎖配列についてトランスジェニックな別の非ヒト哺乳動物又は植物の生成及び回収可能な形態での抗体の産生によって遺伝子導入的にも生成され得る。哺乳動物におけるトランスジェニック産生に関連して、抗体は、ヤギ、ウシ又は他の哺乳動物の乳汁中で産生され、それから回収され得る。例えば、米国特許第５，８２７，６９０号明細書、米国特許第５，７５６，６８７号明細書、米国特許第５，７５０，１７２号明細書及び米国特許第５，７４１，９５７号明細書を参照されたい。
【０１００】
本発明の抗体は、任意のアイソタイプのものであり得る。アイソタイプの選択は、典型的に、ＡＤＣＣ誘導などの所望のエフェクター機能によって導かれる。例示的なアイソタイプは、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３及びＩｇＧ４である。ヒト軽鎖定常領域、κ又はλのいずれかが使用され得る。必要に応じて、本発明の抗ソルチリン抗体のクラスは、公知の方法によってスイッチされ得る。例えば、元はＩｇＭであった本発明の抗体は、本発明のＩｇＧ抗体にクラススイッチされ得る。さらに、クラススイッチ技術は、あるＩｇＧサブクラスを別のＩｇＧサブクラスに、例えばＩｇＧｌからＩｇＧ２に変換するのに使用され得る。したがって、本発明の抗体のエフェクター機能は、様々な治療的使用のために、例えばＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４抗体へのアイソタイプスイッチによって変更され得る。一実施形態において、本発明の抗体は、ＩｇＧ１抗体、例えばＩｇＧ１、κである。抗体は、そのアミノ酸配列が、他のアイソタイプと比べてそのアイソタイプに最も相同性が高い場合、特定のアイソタイプのものであると言われる。
【０１０１】
一実施形態において、本発明の抗体は、完全長抗体、好ましくはＩｇＧ抗体、特にＩｇＧ１、κ抗体である。別の実施形態において、本発明の抗体は、抗体抗原結合フラグメント又は一本鎖抗体である。
【０１０２】
抗体及びその抗原結合フラグメントは、例えば、従来の技術を用いた抗原結合断片化によって得られ、抗原結合フラグメントは、全抗体について本明細書に記載されるのと同じように有用性についてスクリーニングされ得る。例えば、Ｆ（ａｂ’）２抗原結合フラグメントは、抗体をペプシンで処理することによって生成され得る。得られるＦ（ａｂ’）２抗原結合フラグメントは、ジスルフィド架橋を還元するように処理されて、Ｆａｂ’抗原結合フラグメントを生成し得る。Ｆａｂ抗原結合フラグメントはＩｇＧ抗体をパパインで処理することによって得られ、Ｆａｂ’抗原結合フラグメントは、ＩｇＧ抗体のペプシン消化により得られる。Ｆ（ａｂ’）抗原結合フラグメントは、チオエーテル結合又はジスルフィド結合により、以下に記載されるＦａｂ’を結合することによっても生成され得る。Ｆａｂ’抗原結合フラグメントは、Ｆ（ａｂ’）２のヒンジ領域のジスルフィド結合を切断することによって得られる抗体抗原結合フラグメントである。Ｆａｂ’−抗原結合フラグメントは、Ｆ（ａｂ’）２抗原結合フラグメントをジチオスレイトールなどの還元剤で処理することによって得られる。抗体抗原結合フラグメントは、組み換え細胞におけるこのような抗原結合フラグメントをコードする核酸の発現によっても生成され得る（例えば、Ｅｖａｎｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈ．１８４、１２３−３８（１９９５）を参照されたい）。例えば、Ｆ（ａｂ’）２抗原結合フラグメントの一部をコードするキメラ遺伝子は、このような切断された抗体抗原結合フラグメント分子を生成するために、Ｈ鎖のＣＨ１領域及びヒンジ領域をコードするＤＮＡ配列、続いて翻訳停止コドンを含み得る。
【０１０３】
一実施形態において、抗ソルチリン抗体は、一価抗体、好ましくはヒンジ領域の欠失を有する国際公開第２００７０５９７８２号パンフレット（その全体が参照により本明細書に援用される）に記載されている一価抗体である。したがって、一実施形態において、抗体は、一価抗体であり、前記抗ソルチリン抗体は、ｉ）前記一価抗体の軽鎖をコードする核酸構築物を提供する工程であって、前記構築物は、選択された抗原特異的抗ソルチリン抗体のＶＬ領域をコードするヌクレオチド配列及びＩｇの定常ＣＬ領域をコードするヌクレオチド配列を含み、選択された抗原特異的抗体のＶＬ領域をコードする前記ヌクレオチド配列及びＩｇのＣＬ領域をコードする前記ヌクレオチド配列は、作動可能に一緒に連結され、ＩｇＧ１サブタイプの場合、ＣＬ領域をコードするヌクレオチド配列は、ポリクローナルヒトＩｇＧの存在下で又は動物若しくはヒトに投与されるとき、ＣＬ領域の同一のアミノ酸配列を含む他のペプチドとともにジスルフィド結合又は共有結合を形成することが可能なアミノ酸をＣＬ領域が含まないように修飾されている、工程と、ｉｉ）前記一価抗体の重鎖をコードする核酸構築物を提供する工程であって、前記構築物は、選択された抗原特異的抗体のＶＨ領域をコードするヌクレオチド配列及びヒトＩｇの定常ＣＨ領域をコードするヌクレオチド配列を含み、ＣＨ領域をコードするヌクレオチド配列は、ヒンジ領域に対応する領域及びＩｇサブタイプによって必要とされるようにＣＨ３領域などのＣＨ領域の他の領域がポリクローナルヒトＩｇＧの存在下で又は動物ヒトに投与されるとき、ヒトＩｇのＣＨ領域の同一のアミノ酸配列を含む他のペプチドとともに、ジスルフィド結合、又は共有結合、又は安定した非共有重鎖間結合の形成に関与するアミノ酸残基を含まないように修飾されており、選択された抗原特異的抗体のＶＨ領域をコードする前記ヌクレオチド配列及び前記ＩｇのＣＨ領域をコードする前記ヌクレオチド配列は、作動可能に一緒に連結される、工程と、ｉｉｉ）前記一価抗体を生成するために細胞発現系を提供する工程と、ｉｖ）（ｉｉｉ）の細胞発現系の細胞内で（ｉ）及び（ｉｉ）の核酸構築物を共発現することにより、前記一価抗体を生成する工程とを含む方法によって構築される。
【０１０４】
同様に、一実施形態において、抗ソルチリン抗体は、
（ｉ）本明細書に記載される本発明の抗体の可変領域又は前記領域の抗原結合部分、及び
（ｉｉ）免疫グロブリンのＣＨ領域又はＣＨ２及びＣＨ３領域を含むその領域
を含む一価抗体であり、ここで、ＣＨ領域又はその領域は、ヒンジ領域に対応する領域及び免疫グロブリンがＩｇＧ４サブタイプでない場合、ＣＨ３領域などのＣＨ領域の他の領域がポリクローナルヒトＩｇＧの存在下で同一のＣＨ領域とともにジスルフィド結合を形成するか、又は同一のＣＨ領域とともに他の共有結合又は安定した非共有重鎖間結合を形成することが可能なアミノ酸残基を含まないように修飾されている。
【０１０５】
さらなる実施形態において、一価抗体の重鎖は、ヒンジ領域全体が欠失しているように修飾されている。
【０１０６】
別のさらなる実施形態において、前記一価抗体の配列は、それがＮ結合型グリコシル化のための受容体部位を含まないように修飾されている。
【０１０７】
本発明は、抗ソルチリン結合領域（例えば、抗ソルチリンモノクローナル抗体のソルチリン結合領域）が、２つ以上のエピトープを標的にする二価又は多価二重特異性骨格の一部である「二重特異性抗体」も含む（例えば、第２のエピトープは、二重特異性抗体が、血液脳関門などの生物学的障壁を越える改良されたトランスサイトーシスを示し得るように、活性な輸送受容体のエピトープを含み得る）。したがって、別のさらなる実施形態において、抗ソルチリン抗体の一価Ｆａｂは、異なるタンパク質を標的にするさらなるＦａｂ又はｓｃｆｖに結合されて、二重特異性抗体を生成し得る。二重特異性抗体は、二重機能、例えば抗ソルチリン結合領域によって与えられる治療機能及び血液脳関門などの生物学的障壁を越える輸送を促進するために受容体分子に結合し得る輸送機能を有し得る。
【０１０８】
本発明の抗体及びその抗原結合フラグメントは、一本鎖抗体も含む。一本鎖抗体は、重鎖及び軽鎖Ｆｖ領域が結合されたペプチドである。一実施形態において、本発明は、本発明の抗ソルチリン抗体のＦｖにおける重鎖及び軽鎖がペプチド一本鎖において（典型的に、約１０、１２、１５つ又はそれを超えるアミノ酸残基の）フレキシブルペプチドリンカーと結合される一本鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）を提供する。このような抗体を産生する方法は、例えば、米国特許第４，９４６，７７８号明細書、Ｐｌｕｃｋｔｈｕｎ  ｉｎ  Ｔｈｅ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ  ｏｆ  Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ，ｖｏｌ．１１３，Ｒｏｓｅｎｂｕｒｇ  ａｎｄ  Ｍｏｏｒｅ  ｅｄｓ．Ｓｐｒｉｎｇｅｒ−Ｖｅｒｌａｇ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，ｐｐ．２６９−３１５（１９９４）、Ｂｉｒｄ  ｅｔ  ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２４２，４２３−４２６（１９８８）、Ｈｕｓｔｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，ＰＮＡＳ  ＵＳＡ  ８５，５８７９−５８８３（１９８８）及びＭｃＣａｆｆｅｒｔｙ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ  ３４８，５５２−５５４（１９９０）に記載されている。一本鎖抗体は、単一のＶＨ及びＶＬのみが使用される場合、一価であり、２つのＶＨ及びＶＬが使用される場合、二価であるか、又は３つ以上のＶＨ及びＶＬが使用される場合、多価であり得る。
【０１０９】
本明細書に記載される抗体及びその抗原結合フラグメントは、任意の好適な数の修飾アミノ酸の包含及び／又はこのような共役置換基との結合によって修飾され得る。これに関連する適合性は、一般に、非誘導体化親抗ソルチリン抗体に関連するソルチリン選択性及び／又はソルチリン特異性を少なくとも実質的に保持する能力によって決定される。１つ又は複数の修飾アミノ酸の包含は、例えば、ポリペプチド血清半減期を増加させ、ポリペプチド抗原性を低下させるか、又はポリペプチド貯蔵安定性を増加させるのに有利であり得る。アミノ酸は、例えば、組み換え産生の際に翻訳と同時に若しくは翻訳後に修飾されるか（例えば、哺乳類細胞における発現の際のＮ−Ｘ−Ｓ／ＴモチーフにおけるＮ結合型グリコシル化）又は合成手段によって修飾される。修飾アミノ酸の非限定的な例としては、グリコシル化アミノ酸、硫酸化アミノ酸、プレニル化（例えば、ファルネシル化、ゲラニルゲラニル化）アミノ酸、アセチル化アミノ酸、アシル化アミノ酸、ＰＥＧ化アミノ酸、ビオチン化アミノ酸、カルボキシル化アミノ酸、リン酸化アミノ酸などが挙げられる。アミノ酸の修飾の当業者の指針となるのに十分な言及は、文献全体を通して十分にある。例のプロトコルは、Ｗａｌｋｅｒ（１９９８）Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  Ｏｎ  ＣＤ−Ｒｏｍ，Ｈｕｍａｎａ  Ｐｒｅｓｓ，Ｔｏｔｏｗａ，ＮＪに見られる。修飾アミノ酸は、例えば、グリコシル化アミノ酸、ＰＥＧ化アミノ酸、ファルネシル化アミノ酸、アセチル化アミノ酸、ビオチン化アミノ酸、脂質部分にコンジュゲートされたアミノ酸又は有機誘導化剤にコンジュゲートされたアミノ酸から選択され得る。
【０１１０】
本発明の抗体及びその抗原結合フラグメントは、例えば、それらの血中半減期を増加させるために、ポリマーへの共有結合によっても化学修飾され得る。例示的なポリマー及びそれらをペプチドに結合するための方法は、例えば、米国特許第４，７６６，１０６号明細書、米国特許第４，１７９，３３７号明細書、米国特許第４，４９５，２８５号明細書及び米国特許第４，６０９，５４６号明細書に示されている。さらなる例示的なポリマーとしては、ポリオキシエチル化ポリオール及びポリエチレングリコール（ＰＥＧ）（例えば、約１，０００〜約４０，０００、例えば約２，０００〜約２０，０００、例えば約３，０００〜１２，０００ｇ／ｍｏｌの分子量を有するＰＥＧ）が挙げられる。
【０１１１】
本発明の抗体及びその抗原結合フラグメントは、診断法において又は画像診断用リガンドとしてさらに使用され得る。
【０１１２】
一実施形態において、１つ又は複数の放射性標識アミノ酸を含む本発明の抗体及びその抗原結合フラグメントが提供される。放射性標識抗ソルチリン抗体は、診断及び治療目的の両方に使用され得る（放射性標識分子への結合は、別の考えられる特徴である）。このような標識の非限定的な例としては、限定はされないが、ビスマス（213Ｂｉ）、炭素（11Ｃ、13Ｃ、14Ｃ）、クロム（51Ｃｒ）、コバルト（57Ｃｏ、60Ｃｏ）、銅（64Ｃｕ）、ジスプロシウム（165Ｄｙ）、エルビウム（169Ｅｒ）、フッ素（18Ｆ）、ガドリニウム（153Ｇｄ、159Ｇｄ）、ガリウム（68Ｇａ、67Ｇａ）、ゲルマニウム（68Ｇｅ）、金（198Ａｕ）、ホルミウム（166Ｈｏ）、水素（3Ｈ）、インジウム（111Ｉｎ、112Ｉｎ、113Ｉｎ、115Ｉｎ）、ヨウ素（121Ｉ、123Ｉ、125Ｉ、131Ｉ）、イリジウム（192Ｉｒ）、鉄（59Ｆｅ）、クリプトン（81mＫｒ）、ランタン（140Ｌａ）、ルテチウム（177Ｌｕ）、マンガン（54Ｍｎ）、モリブデン（99Ｍｏ）、窒素（13Ｎ、15Ｎ）、酸素（15Ｏ）、パラジウム（103Ｐｄ）、リン（32Ｐ）、カリウム（42Ｋ）、プラセオジム（142Ｐｒ）、プロメチウム（149Ｐｍ）、レニウム（186Ｒｅ、188Ｒｅ）、ロジウム（105Ｒｈ）、ルビジウム（81Ｒｂ、82Ｒｂ）、ルテニウム（82Ｒｕ、97Ｒｕ）、サマリウム（153Ｓｍ）、スカンジウム（47Ｓｃ）、セレン（75Ｓｅ）、ナトリウム（24Ｎａ）、ストロンチウム（85Ｓｒ、89Ｓｒ、92Ｓｒ）、硫黄（35Ｓ）、テクネチウム（99Ｔｃ）、タリウム（201Ｔｌ）、スズ（113Ｓｎ、117Ｓｎ）、キセノン（133Ｘｅ）、イッテルビウム（169Ｙｂ、175Ｙｂ、177Ｙｂ）、イットリウム（90Ｙ）及び亜鉛（65Ｚｎ）が挙げられる。放射性標識アミノ酸及び関連するペプチド誘導体を調製するための方法は、当該技術分野において公知である（例えば、Ｊｕｎｇｈａｎｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ  Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒａｐｙ  ａｎｄ  Ｂｉｏｔｈｅｒａｐｙ  ６５５−６８６（２ｎｄ  ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｃｈａｆｎｅｒ  ａｎｄ  Ｌｏｎｇｏ，ｅｄｓ．，Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ  Ｒａｖｅｎ（１９９６））並びに米国特許第４，６８１，５８１号明細書、米国特許第４，７３５，２１０号明細書、米国特許第５，１０１，８２７号明細書、米国特許第５，１０２，９９０号明細書（米国再発行特許第３５，５００号明細書）、米国特許第５，６４８，４７１号明細書及び米国特許第５，６９７，９０２号明細書を参照されたい。例えば、放射性同位体がクロラミンＴ法によって結合され得る（Ｌｉｎｄｅｇｒｅｎ，Ｓ．ｅｔ  ａｌ．（１９９８）“Ｃｈｌｏｒａｍｉｎｅ−Ｔ  Ｉｎ  Ｈｉｇｈ−Ｓｐｅｃｉｆｉｃ−Ａｃｔｉｖｉｔｙ  Ｒａｄｉｏｉｏｄｉｎａｔｉｏｎ  Ｏｆ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  Ｕｓｉｎｇ  Ｎ−Ｓｕｃｃｉｎｉｍｉｄｙｌ−３−（Ｔｒｉｍｅｔｈｙｌｓｔａｎｎｙｌ）Ｂｅｎｚｏａｔｅ  Ａｓ  Ａｎ  Ｉｎｔｅｒｍｅｄｉａｔｅ”，Ｎｕｃｌ．Ｍｅｄ．Ｂｉｏｌ．２５（７）：６５９−６６５；Ｋｕｒｔｈ，Ｍ．ｅｔ  ａｌ．（１９９３）“Ｓｉｔｅ−Ｓｐｅｃｉｆｉｃ  Ｃｏｎｊｕｇａｔｉｏｎ  Ｏｆ  Ａ  Ｒａｄｉｏｉｏｄｉｎａｔｅｄ  Ｐｈｅｎｅｔｈｙｌａｍｉｎｅ  Ｄｅｒｉｖａｔｉｖｅ  Ｔｏ  Ａ  Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ｒｅｓｕｌｔｓ  Ｉｎ  Ｉｎｃｒｅａｓｅｄ  Ｒａｄｉｏａｃｔｉｖｉｔｙ  Ｌｏｃａｌｉｚａｔｉｏｎ  Ｉｎ  Ｔｕｍｏｒ”，Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．３６（９）：１２５５−１２６１；Ｒｅａ，Ｄ．Ｗ．ｅｔ  ａｌ．（１９９０）“Ｓｉｔｅ−ｓｐｅｃｉｆｉｃａｌｌｙ  ｒａｄｉｏｉｏｄｉｎａｔｅｄ  ａｎｔｉｂｏｄｙ  ｆｏｒ  ｔａｒｇｅｔｉｎｇ  ｔｕｍｏｒｓ”，Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．５０（３  Ｓｕｐｐｌ）：８５７ｓ−８６１ｓ）。
【０１１３】
本発明は、蛍光標識（希土類キレート（例えば、ユウロピウムキレート）など）、フルオレセイン型標識（例えば、フルオレセイン、フルオレセインイソチオシアネート、５−カルボキシフルオレセイン、６−カルボキシフルオレセイン、ジクロロトリアジニルアミンフルオレセイン）、ローダミン型標識（例えば、ＡＬＥＸＡ  ＦＬＵＯＲ（登録商標）５６８（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）、ＴＡＭＲＡ（登録商標）又はダンシルクロリド）、ＶＩＶＯＴＡＧ  ６８０  ＸＬ  ＦＬＵＯＲＯＣＨＲＯＭＥ（商標）（Ｐｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ）、フィコエリトリン；ウンベリフェロン、Ｌｉｓｓａｍｉｎｅ；シアニン；フィコエリトリン、Ｔｅｘａｓ  Ｒｅｄ、ＢＯＤＩＰＹ  ＦＬ−ＳＥ（登録商標）（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）又はそれらの類似体（これらは全て、光学的検出に好適である）を用いて検出可能に標識される抗ソルチリン抗体及びその抗原結合フラグメントも提供する。化学発光標識が用いられ得る（例えば、ルミノール、ルシフェラーゼ、ルシフェリン及びイクオリン）。このような診断及び検出は、本発明の診断用分子を、限定はされないが、様々な酵素、限定はされないが、西洋ワサビペルオキシダーゼ、アルカリホスファターゼ、β−ガラクトシダーゼ若しくはアセチルコリンエステラーゼを含む酵素を含む検出可能な物質又は限定はされないが、ストレプトアビジン／ビオチン及びアビジン／ビオチンなどの補欠分子族複合体に結合することによっても行われ得る。
【０１１４】
化学発光標識が用いられ得る（例えば、ルミノール、ルシフェラーゼ、ルシフェリン及びイクオリン）。このような診断及び検出は、本発明の診断用分子を、限定はされないが、様々な酵素、限定はされないが、西洋ワサビペルオキシダーゼ、アルカリホスファターゼ、β−ガラクトシダーゼ若しくはアセチルコリンエステラーゼを含む酵素を含む検出可能な物質又は限定はされないが、ストレプトアビジン／ビオチン及びアビジン／ビオチンなどの補欠分子族複合体に結合することによっても行われ得る。常磁性標識も用いられ得、好ましくはポジトロン放出型断層撮影法（ＰＥＴ）又は単一光子放射コンピュータ断層撮影法（ＳＰＥＣＴ）を用いて検出される。このような常磁性標識としては、限定はされないが、アルミニウム（Ａｌ）、バリウム（Ｂａ）、カルシウム（Ｃａ）、セリウム（Ｃｅ）、ジスプロシウム（Ｄｙ）、エルビウム（Ｅｒ）、ユウロピウム（Ｅｕ）、ガドリニウム（Ｇｄ）、ホルミウム（Ｈｏ）、イリジウム（Ｉｒ）、リチウム（Ｌｉ）、マグネシウム（Ｍｇ）、マンガン（Ｍｎ）、モリブデン（Ｍ）、ネオジム（Ｎｄ）、オスミウム（Ｏｓ）、酸素（Ｏ）、パラジウム（Ｐｄ）、白金（Ｐｔ）、ロジウム（Ｒｈ）、ルテニウム（Ｒｕ）、サマリウム（Ｓｍ）、ナトリウム（Ｎａ）、ストロンチウム（Ｓｒ）、テルビウム（Ｔｂ）、ツリウム（Ｔｍ）、スズ（Ｓｎ）、チタン（Ｔｉ）、タングステン（Ｗ）及びジルコニウム（Ｚｉ）、特にＣｏ+2、ＣＲ+2、Ｃｒ+3、Ｃｕ+2、Ｆｅ+2、Ｆｅ+3、Ｇａ+3、Ｍｎ+3、Ｎｉ+2、Ｔｉ+3、Ｖ+3及びＶ+4の常磁性イオン、様々なポジトロン放出型断層撮影法を用いたポジトロン放出金属及び非放射性常磁性金属イオンを含有する化合物が挙げられる。
【０１１５】
したがって、一実施形態において、本発明の抗ソルチリン抗体又はそのソルチリン結合フラグメントは、蛍光標識、化学発光標識、常磁性標識、放射性同位体標識又は酵素標識で標識され得る。フラグメントの標識抗体は、被験体の脳における前記ソルチリンの存在又は量を検出又は測定するのに使用され得る。この方法は、前記ソルチリンに結合された抗ソルチリン抗体又はソルチリン結合フラグメントのインビボイメージングの検出又は測定を含み得、このようなソルチリンに結合された前記抗ソルチリン抗体又はソルチリン結合フラグメントのエクスビボイメージングを含み得る。
【０１１６】
さらなる態様において、本発明は、本発明の抗体又はその抗原結合フラグメントの１つ又は複数のポリペプチド鎖をコードする発現ベクターに関する。このような発現ベクターは、本発明の抗体及び抗原結合フラグメントの組み換え産生に使用され得る。
【０１１７】
本発明に関連して、発現ベクターは、染色体ベクター、非染色体ベクター及び合成核酸ベクター（好適な組の発現制御要素を含む核酸配列）を含む、任意の好適なＤＮＡ又はＲＮＡベクターであり得る。このようなベクターの例としては、ＳＶ４０の誘導体、細菌プラスミド、ファージＤＮＡ、バキュロウイルス、酵母プラスミド、プラスミド及びファージＤＮＡの組合せに由来するベクター及びウイルス核酸（ＲＮＡ又はＤＮＡ）ベクターが挙げられる。一実施形態において、抗ソルチリン抗体コード核酸は、例えば、線形発現要素（例えば、Ｓｙｋｅｓ  ａｎｄ  Ｊｏｈｎｓｔｏｎ，Ｎａｔ  Ｂｉｏｔｅｃｈ  １２，３５５−５９（１９９７）に記載されているように）、圧縮核酸ベクター（例えば、米国特許第６，０７７，８３５号明細書及び／又は国際公開第００／７００８７号パンフレットに記載されているように）、ｐＢＲ３２２、ｐＵＣ  １９／１８又はｐＵＣ  １１８／１１９、「ミッジ」最小サイズ核酸ベクターなどのプラスミドベクター（例えば、Ｓｃｈａｋｏｗｓｋｉ  ｅｔ  ａｌ．，ＭｏＩ  Ｔｈｅｒ  ３，７９３−８００（２００１）に記載されているように）を含む裸のＤＮＡ又はＲＮＡベクターにおいて、又はＣａＰＯ4沈殿構築物などの沈殿核酸ベクター構築物（例えば、国際公開第００／４６１４７号パンフレット、Ｂｅｎｖｅｎｉｓｔｙ  ａｎｄ  Ｒｅｓｈｅｆ，ＰＮＡＳ  ＵＳＡ  ８３，９５５１−５５（１９８６）、Ｗｉｇｌｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｅｌｌ  １４，７２５（１９７８）及びＣｏｒａｒｏ  ａｎｄ  Ｐｅａｒｓｏｎ，Ｓｏｍａｔｉｃ  Ｃｅｌｌ  Ｇｅｎｅｔｉｃｓ  ２，６０３（１９８１）に記載されているように）として含まれる。このような核酸ベクター及びその使用法は、当該技術分野において周知である（例えば、米国特許第５，５８９，４６６号明細書及び米国特許第５，９７３，９７２号明細書を参照されたい）。
【０１１８】
一実施形態において、ベクターは、細菌細胞における抗ソルチリン抗体又はその抗原結合フラグメントの発現に好適である。このようなベクターの例としては、ＢｌｕｅＳｃｒｉｐｔ（Ｓｔｒａｔａｇｅｎｅ）、ｐＩＮベクター（Ｖａｎ  Ｈｅｅｋｅ＆Ｓｃｈｕｓｔｅｒ，Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ  ２６４，５５０３−５５０９（１９８９）、ｐＥＴベクター（Ｎｏｖａｇｅｎ，Ｍａｄｉｓｏｎ，ＷＩ）など）などの発現ベクターが挙げられる。
【０１１９】
発現ベクターは、さらに又は代わりに、酵母系における発現に好適なベクターであり得る。酵母系における発現に好適な任意のベクターが用いられ得る。好適なベクターとしては、例えば、α因子、アルコールオキシダーゼ及びＰＧＨなどの構成的又は誘導性プロモータを含むベクターが挙げられる（Ｆ．Ａｕｓｕｂｅｌ  ｅｔ  ａｌ．，ｅｄ．Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｇｒｅｅｎｅ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  ａｎｄ  Ｗｉｌｅｙ  ＩｎｔｅｒＳｃｉｅｎｃｅ  Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ（１９８７）、Ｇｒａｎｔ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｅｎｚｙｍｏｌ  １５３，５１６−５４４（１９８７）、Ｍａｔｔａｎｏｖｉｃｈ，Ｄ．ｅｔ  ａｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ  Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．８２４，３２９−３５８（２０１２）、Ｃｅｌｉｋ，Ｅ．ｅｔ  ａｌ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．Ａｄｖ．３０（５），１１０８−１１１８（２０１２）、Ｌｉ，Ｐ．ｅｔ  ａｌ．Ａｐｐｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．１４２（２），１０５−１２４（２００７）、Ｂｏｅｅｒ，Ｅ．ｅｔ  ａｌ．Ａｐｐｌ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．７７（３），５１３−５２３（２００７）、ｖａｎ  ｄｅｒ  Ｖａａｒｔ，Ｊ．Ｍ．Ｍｅｔｈｏｄｓ  Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１７８，３５９−３６６（２００２）及びＨｏｌｌｉｇｅｒ，Ｐ．Ｍｅｔｈｏｄｓ  Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１７８，３４９−３５７（２００２）に概説されている）。
【０１２０】
本発明の発現ベクターにおいて、抗ソルチリン抗体コード核酸は、任意の好適なプロモータ、エンハンサー及び他の発現促進要素を含むか又はそれらと結合され得る。このような要素の例としては、強力な発現プロモータ（例えば、ヒトＣＭＶ  ＩＥプロモータ／エンハンサー並びにＲＳＶ、ＳＶ４０、ＳＬ３−３、ＭＭＴＶ及びＨＩＶ  ＬＴＲプロモータ）、有効なポリ（Ａ）終止配列、大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）におけるプラスミド産物の複製起点、選択可能なマーカーとしての抗生物質抵抗性遺伝子及び／又は好都合なクローニング部位（例えば、ポリリンカー）が挙げられる。核酸は、ＣＭＶ  ＩＥなどの構成的プロモータとは対照的に誘導性プロモータも含み得る（当業者は、このような用語が、実際に、特定の条件下における遺伝子発現の程度の記述語であることを認識するであろう）。
【０１２１】
さらに他の態様において、本発明は、本明細書に定義される本発明の抗体又はその抗原結合フラグメント又は本明細書に定義される本発明の二重特異性分子を産生するトランスフェクトーマなど、組み換え真核生物又は原核生物宿主細胞に関する。宿主細胞の例としては、酵母、細菌及び哺乳類細胞（ＣＨＯ又はＨＥＫ細胞など）が挙げられる。例えば、一実施形態において、本発明は、本発明の抗ソルチリン抗体又はその抗原結合フラグメントの発現のための配列コードを含む細胞ゲノムに安定に組み込まれた核酸を含む細胞を提供する。別の実施形態において、本発明は、本発明の抗ソルチリン抗体又はその抗原結合フラグメントの発現のための配列コードを含む、プラスミド、コスミド、ファージミド又は線形発現要素など、融合されていない核酸を含む細胞を提供する。
【０１２２】
さらなる態様において、本発明は、本発明の抗ソルチリン抗体を産生するための方法であって、ａ）本明細書において上述されるように本発明のハイブリドーマ又は宿主細胞を培養する工程と、ｂ）培地から本発明の抗体を精製する工程とを含む方法に関する。
【０１２３】
一実施形態において、本発明は、調製物であって、このような用語が本明細書において使用される際、本明細書に定義される抗ソルチリン抗体を含み、ソルチリンに結合することが可能でないか又は調製物の抗ソルチリン機能性を実質的に変更しないかのいずれかである、自然発生する抗体を実質的に含まない調製物に関する。したがって、このような調製物は、自然発生する血清又はこのような血清の精製誘導体を包含せず、抗ソルチリン抗体と、調製物の抗ソルチリン抗体の機能性を変更しない別の抗体との混合物を含み、ここで、このような機能性は、
（ｉ）ソルチリンに対する結合親和性（ＫD）、
（ｉｉ）ａ、
（ｉｉｉ）ソルチリン発現細胞によってＰＧＲＮのクリアランスを減少させ且つ／又は阻害する能力、
（ｉｖ）ソルチリン発現細胞によってＰＧＲＮのエンドサイトーシスを減少させ且つ／又は阻害する能力、
（ｖ）ヒト−ソルチリン発現ノックインマウスにおいて血漿中のＰＧＲＮの量及び／又は濃度を増加させる能力、脳内のＰＧＲＮの量及び／又は濃度を増加させる能力、及び／又は
（ｖｉ）慢性的に投与されるときの、前頭側頭型認知症（ＦＴＤ）及び／又は筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）の治療を提供する能力
である。
【０１２４】
本発明は、特に、天然抗ソルチリン抗体の構造と比べてそのアミノ酸配列の構造変化を（そのＣＤＲ、可変領域、フレームワーク残基及び／又は定常領域のいずれかに）有するこのような抗ソルチリン抗体の調製物であって、前記構造変化は、抗ソルチリン抗体モノクローナル抗体が、前記天然抗ソルチリン抗体によって示される機能性と比べて著しく変化した機能性（すなわち機能性の２０％超の相違、４０％超の相違、６０％超の相違、８０％超の相違、１００％超の相違、１５０％超の相違、２倍超の相違、４倍超の相違、５倍超の相違又は１０倍超の相違）を示すことを引き起こし、このような機能性は、
（ｉ）ソルチリンに対する結合親和性（ＫD）、
（ｉｉ）ソルチリン発現細胞によってＰＧＲＮのクリアランスを減少させ且つ／又は阻害する能力、
（ｉｉｉ）ソルチリン発現細胞によってＰＧＲＮのエンドサイトーシスを減少させ且つ／又は阻害する能力、
（ｉｖ）ヒト−ソルチリン発現ノックインマウスにおいて血漿中のＰＧＲＮの量及び／又は濃度を増加させる能力、
（ｖ）脳内のＰＧＲＮの量及び／又は濃度を増加させる能力、及び／又は
（ｖｉ）慢性的に投与されるときの、前頭側頭型認知症（ＦＴＤ）、筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）及び／又はアルツハイマー病（ＡＤ）の治療を提供する能力
であり、特に、このような変化した機能性は、構造変化の結果であり、したがってそれと切り離すことができない、調製物に関する。
【０１２５】
自然発生する抗体を「実質的に含まない」という用語は、このような調製物におけるこのような自然発生する抗体の、又は調製物のソルチリン結合特性を実質的に変更しないこのような調製物におけるある濃度のこのような自然発生する抗体の包含の完全な非存在を指す。抗体は、それが自然発生する対応物を有さないか、又はそれを自然に伴う成分から分離若しくは精製されている場合、「単離」されていると言われる。
【０１２６】
「自然発生する抗体」という用語は、それがこのような調製物に関する場合、生きたヒト又は他の動物内でそれらの免疫系の機能の自然な結果として誘発される抗体（自然発生する自己抗体を含む）を指す。
【０１２７】
したがって、本発明の調製物は、抗ソルチリン抗体及びソルチリンによって保有されないエピトープに結合することが可能な意図的に加えられるさらなる抗体を含有するこのような調製物を除外せず、実際は明確にそれを包含する。このような調製物は、特に、調製物が、前頭側頭型認知症（ＦＴＤ）及び／又は筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）を治療する際に向上した有効性を示すその実施形態を含む。
【０１２８】
本発明のその抗原結合フラグメントの抗体は、様々な細胞株、例えばヒト細胞株、非ヒト哺乳動物細胞株及び昆虫細胞株、例えばＣＨＯ細胞株、ＨＥＫ細胞株、ＢＨＫ−２１細胞株、マウス細胞株（ミエローマ細胞株など）、線維肉腫細胞株、ＰＥＲ．Ｃ６細胞株、ＨＫＢ−１１細胞株、ＣＡＰ細胞株及びＨｕＨ−７ヒト細胞株において生産され得る（内容が参照により本明細書に援用される、Ｄｕｍｏｎｔ  ｅｔ  ａｌ，２０１５，Ｃｒｉｔ  Ｒｅｖ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．Ｓｅｐ  １８：１−１３．）。
【０１２９】
さらに他の態様において、本発明は、
（ｉ）本明細書に定義される抗ソルチリン抗体又はその抗原結合フラグメント又は調製物であって、このような用語が本明細書において定義される際、このような抗ソルチリン抗体又はその抗原結合フラグメントを含む調製物、及び
（ｉｉ）薬学的に許容できる担体
を含む医薬組成物に関する。
【０１３０】
医薬組成物は、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｙ，２２ｎｄ  Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｇｅｎｎａｒｏ，Ｅｄ．，Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏ．，Ｅａｓｔｏｎ，ＰＡ，２０１３に開示されているものなどの従来の技術に従って、薬学的に許容できる担体又は希釈剤並びに任意の他の公知の補助剤及び賦形剤とともに製剤化され得る。
【０１３１】
薬学的に許容できる担体又は希釈剤並びに任意の他の公知の補助剤及び賦形剤は、本発明の選択された化合物及び選択された投与方法に好適であるべきである。医薬組成物の担体及び他の成分のための適合性は、エピトープ結合に対する（例えば、それほど大きくない影響（１０％以下の相対的阻害、５％以下の相対的阻害など））、本発明の選択された化合物又は医薬組成物の所望の生物学的特性に対する大きい悪影響がないことに基づいて決定される。
【０１３２】
本発明の医薬組成物は、希釈剤、充填剤、塩、緩衝液、洗浄剤（例えば、Ｔｗｅｅｎ−２０又はＴｗｅｅｎ−８０などの非イオン性洗浄剤）、安定剤（例えば、糖又はタンパク質を含まないアミノ酸）、防腐剤、組織固定剤、可溶化剤及び／又は医薬組成物に含めるのに好適な他の材料も含み得る。希釈剤は、組合せの生物学的活性に影響を与えないように選択される。このような希釈剤の例は、蒸留水、リン酸緩衝生理食塩水、リンゲル液、デキストロース溶液及びハンクス溶液である。さらに、医薬組成物又は製剤は、他の担体又は非毒性の、非治療的、非免疫原性安定剤なども含み得る。組成物は、タンパク質、キトサンのような多糖類、ポリ乳酸、ポリグリコール酸及びコポリマー（例えば、ラテックス機能化セファロース、アガロース、セルロースなど）、ポリマーアミノ酸、アミノ酸コポリマー及び脂質凝集体（例えば、油滴又はリポソーム）など、大型のゆっくりと代謝される高分子も含み得る。
【０１３３】
本発明の医薬組成物中の活性成分の実際の投与量レベルは、特定の患者、組成物及び投与方法に対する所望の治療反応を達成するのに有効な活性成分の量を得るように変化され得る。選択された投与量レベルは、用いられる本発明の特定の組成物の活性又はそのアミド、投与経路、投与時期、用いられる特定の化合物の排せつ速度、治療期間、用いられる特定の組成物と組み合わせて使用される他の薬剤、化合物及び／又は材料、治療される患者の年齢、性別、体重、病態、全体的な健康及び過去の病歴並びに医療分野において周知の同様の要因を含む様々な薬物動態学的要因に応じて決まる。
【０１３４】
医薬組成物は、予防的及び／又は治療的処置のための非経口、局所、経口又は経鼻手段を含む、任意の好適な経路及び方法によって投与され得る。一実施形態において、本発明の医薬組成物は、非経口的に投与される。本明細書において使用される際の「非経口投与」及び「非経口的に投与される」という語句は、通常、注射による、腸内及び局所投与以外の投与方法を意味し、表皮、静脈内、筋肉内、動脈内、髄腔内、嚢内、眼窩内、心腔内、皮内、腹腔内、腱内、経気管、皮下、表皮下、関節内、被膜下、くも膜下、脊髄内、頭蓋内、胸腔内、硬膜外及び胸骨内注射及び注入を含む。インビボ及びインビトロで本発明の化合物を投与するさらなる好適な経路が当該技術分野において周知であり、当業者によって選択され得る。一実施形態において、その医薬組成物は、静脈内又は皮下注射又は注入によって投与される。
【０１３５】
薬学的に許容できる担体としては、本発明の化合物と生理学的に適合性の、あらゆる好適な溶媒、分散媒、コーティング、抗菌及び抗真菌剤、等張剤、酸化防止剤及び吸収遅延剤などが挙げられる。
【０１３６】
本発明の医薬組成物に用いられ得る好適な水性及び非水性担体の例としては、水、生理食塩水、リン酸緩衝生理食塩水、エタノール、デキストロース、ポリオール（グリセロール、プロピレングリコール、ポリエチレングリコールなど）及びそれらの好適な混合物、オリーブ油、トウモロコシ油、ピーナッツ油、綿実油及びゴマ油などの植物油、カルボキシメチルセルロースコロイド溶液、トラガカントガム及び注射可能な有機酸エステル（オレイン酸エチルなど）及び／又は様々な緩衝液が挙げられる。他の担体が医薬品分野において周知である。
【０１３７】
薬学的に許容できる担体は、滅菌注射用溶液又は分散体の即時調製用の滅菌水溶液又は分散体及び滅菌粉末を含む。薬学的に活性な物質のためのこのような媒体及び薬剤の使用は、当該技術分野において公知である。従来の媒体又は薬剤が活性化合物と適合しない場合を除いて、本発明の医薬組成物におけるそれらの使用が想定される。
【０１３８】
適切な流動性は、例えば、レシチンなどのコーティング材料の使用により、分散体の場合、所要の粒度の維持及び界面活性剤の使用によって維持され得る。
【０１３９】
本発明の医薬組成物は、薬学的に許容できる酸化防止剤、例えば（１）水溶性酸化防止剤（アスコルビン酸、システイン塩酸塩、重硫酸ナトリウム、メタ重亜硫酸ナトリウム、亜硫酸ナトリウムなど）、（２）油溶性酸化防止剤（パルミチン酸アスコルビル、ブチル化ヒドロキシアニソール（ＢＨＡ）、ブチル化ヒドロキシトルエン（ＢＨＴ）、レシチン、没食子酸プロピル、α−トコフェロールなど）、及び（３）金属キレート剤（クエン酸、エチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ）、ソルビトール、酒石酸、リン酸など）も含み得る。
【０１４０】
本発明の医薬組成物は、組成物中に糖類、ポリアルコール（マンニトール、ソルビトール、グリセロールなど）又は塩化ナトリウムなどの等張剤も含み得る。
【０１４１】
本発明の医薬組成物は、医薬組成物の保存可能期間又は有効性を向上させ得る、防腐剤、湿潤剤、乳化剤、分散剤、防腐剤又は緩衝液など、選択された投与経路に適切な１つ又は複数の補助剤も含有し得る。本発明の化合物は、インプラント、経皮パッチ及びマイクロカプセル化送達システムを含む、制御放出製剤などの速放性から化合物を保護する担体とともに調製され得る。このような担体は、ゼラチン、モノステアリン酸グリセリル、ジステアリン酸グリセリル、生分解性、生体適合性ポリマー（エチレン酢酸ビニル、ポリ無水物、ポリグリコール酸、コラーゲン、ポリオルトエステル及びポリ乳酸など）を単独で又はワックス又は当該技術分野において周知の他の材料とともに含み得る。このような製剤の調製のための方法は、一般に、当業者に公知である。例えば、Ｓｕｓｔａｉｎｅｄ  ａｎｄ  Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ  Ｒｅｌｅａｓｅ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ  Ｓｙｓｔｅｍｓ，Ｊ．Ｒ．Ｒｏｂｉｎｓｏｎ，ｅｄ．，Ｍａｒｃｅｌ  Ｄｅｋｋｅｒ，Ｉｎｃ．，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，１９７８を参照されたい。
【０１４２】
一実施形態において、本発明の化合物は、インビボでの適切な分配を確実にするように製剤化され得る。非経口投与用の薬学的に許容できる担体は、滅菌注射用溶液又は分散体の即時調製用の滅菌水溶液又は分散体及び滅菌粉末を含む。薬学的に活性な物質のためのこのような媒体及び薬剤の使用は、当該技術分野において公知である。従来の媒体又は薬剤が活性化合物と適合しない場合を除いて、本発明の医薬組成物におけるそれらの使用が想定される。補助的な活性化合物も、組成物に組み込まれ得る。
【０１４３】
注射用の医薬組成物は、典型的に、製造及び貯蔵の条件下で滅菌性且つ安定性でなければならない。組成物は、溶液、マイクロエマルション、リポソーム又は高い薬剤濃度に好適な他の規則構造として製剤化され得る。担体は、例えば、水、エタノール、ポリオール（グリセロール、プロピレングリコール、ポリエチレングリコールなど）及びそれらの好適な混合物、植物油（オリーブ油など）及び注射可能な有機酸エステル（オレイン酸エチルなど）を含有する、水性又は非水性溶媒又は分散媒であり得る。適切な流動性は、例えば、レシチンなどのコーティングの使用により、分散体の場合、所要の粒度の維持及び界面活性剤の使用により維持され得る。多くの場合、組成物中に等張剤、例えば糖類、ポリアルコール（グリセロール、マンニトール、ソルビトールなど）又は塩化ナトリウムを含むことが好ましいであろう。注射用組成物の持続的吸収は、抗体の吸収を遅らせる物質、例えば一ステアリン酸塩及びゼラチンを組成物中に含むことによってもたらされ得る。滅菌注射用溶液は、例えば、上に列挙されるような成分の１つ又は組合せを含む適切な溶媒中に所要量の活性化合物を組み込むこと、必要に応じて、その後の滅菌精密ろ過によって調製され得る。一般に、分散体は、塩基性分散媒及び例えば上に列挙される成分からの所要の他の成分を含む滅菌ビヒクル中に活性化合物を組み込むことによって調製される。滅菌注射用溶液の調製のための滅菌粉末の場合、調製方法の例は、予め滅菌ろ過されたそれらの溶液から活性成分及び任意のさらなる所望の成分の粉末を得る真空乾燥及びフリーズドライ（凍結乾燥）である。
【０１４４】
滅菌注射用溶液は、上に列挙されるような成分の１つ又は組合せを含む適切な溶媒中に所要量の活性化合物を組み込むこと、必要に応じて、その後の滅菌精密ろ過によって調製され得る。一般に、分散体は、塩基性分散媒及び上に列挙される成分からの所要の他の成分を含む滅菌ビヒクル中に活性化合物を組み込むことによって調製される。滅菌注射用溶液の調製のための滅菌粉末の場合、調製方法の例は、予め滅菌ろ過されたそれらの溶液から活性成分及び任意のさらなる所望の成分の粉末を得る真空乾燥及びフリーズドライ（凍結乾燥）である。
【０１４５】
治療の上記の方法及び本明細書に記載される使用における投与計画は、最適な望ましい反応（例えば、治療反応）を提供するように調整される。例えば、単回ボーラスが投与され得、いくつかの分割量は、時間をかけて投与され得るか、又は用量は、治療状況の要件によって示されるように比例的に減少又は増加され得る。非経口組成物は、投与のしやすさ及び投与の均一性のために単位剤形で製剤化され得る。本明細書において使用される際の単位剤形は、治療される被験体のための統一された投与量として適した物理的に別個の単位を指し、各単位は、所要の医薬担体に関連して所望の治療効果を生じるように計算された所定の量の活性化合物を含有する。本発明の単位剤形の仕様は、（ａ）活性化合物の独自の特性及び得られる具体的な治療効果、並びに（ｂ）個体における敏感性の治療のためのこのような活性化合物の配合の技術分野に固有の制限に左右され、それらに直接依存する。
【０１４６】
抗ソルチリン抗体の有効投与量及び投与計画は、治療される疾患又は病態に応じて決まり、当業者によって決定され得る。治療的に有効な量の本発明の抗体の例示的な非限定的な範囲は、約０．１〜１０ｍｇ／ｋｇ／体重、例えば約０．１〜５ｍｇ／ｋｇ／体重、例えば約０．１〜２ｍｇ／ｋｇ／体重、例えば約０．１〜１ｍｇ／ｋｇ／体重、例えば約０．１５、約０．２、約０．５、約１、約１．５又は約２ｍｇ／ｋｇ／体重である。
【０１４７】
当該技術分野において通常の技能を有する医師又は獣医は、必要とされる医薬組成物の有効量を容易に決定及び処方することができる。例えば、医師又は獣医は、医薬組成物に用いられる抗ソルチリン抗体の用量を、所望の治療効果を得るために必要とされるより少ないレベルから開始し、所望の効果が得られるまで投与量を徐々に増加し得る。一般に、本発明の組成物の好適な１日用量は、治療効果を生じるのに有効な最低用量である化合物の量であろう。このような有効用量は、一般に、上述される要因に応じて決まる。投与は、例えば、静脈内、筋肉内、腹腔内又は皮下であり得、例えば標的の部位の近位で投与され得る。必要に応じて、医薬組成物の有効１日用量は、任意選択的に単位剤形において、１日を通して適切な間隔で別々に投与される２回、３回、４回、５回、６回又はそれを超える分割用量として投与され得る。本発明の化合物は、単独で投与されることが可能であるが、上述されるように医薬組成物として化合物を投与するのが好ましい。
【０１４８】
本発明の標識抗体又はその抗原結合フラグメントは、疾患又は障害を検出、診断又は監視するために診断目的で使用され得る。本発明は、限定はされないが、ＦＴＤ、ＡＬＳ又はタンパク質症（アルツハイマー病（ＡＤ）などの）を含む、神経変性又は認知疾患又は障害の検出又は診断を提供し、（ａ）ソルチリンに特異的に結合する１つ又は複数の抗体を用いて、被験体の細胞又は組織試料内のピログルタミルＡβフラグメントの存在を測定する工程と、（ｂ）抗原のレベルを制御レベル、例えば正常な組織試料におけるレベルと比較し、それにより、抗原の制御レベルと比較した、抗原の測定レベルの増加が疾患又は障害を示すか、又は疾患又は障害の重症度を示す工程とを含む。
【０１４９】
本発明の抗体又はその抗原結合フラグメントは、当該技術分野において周知の免疫組織化学法を用いて、生物学的試料内のソルチリン又はソルチリンの抗原結合フラグメントを測定するのに使用され得る。タンパク質を検出するのに有用な他の抗体ベースの方法としては、酵素結合免疫測定法（ＥＬＩＳＡ）及び放射免疫測定法アッセイ（ＲＩＡ）及びメソスケールディスカバリープラットフォームベースのアッセイ（ＭＳＤ）などの免疫測定法が挙げられる。好適な抗体標識がこのようなキット及び方法に使用され得、当該技術分野において公知の標識としては、酵素標識（アルカリホスファターゼ及びグルコースオキシダーゼなど）、放射性同位体標識（ヨウ素（125Ｉ、131Ｉ）、炭素（14Ｃ）、硫黄（35Ｓ）、トリチウム（3Ｈ）、インジウム（121Ｉｎ）及びテクネチウム（99mＴｃ）など）、及び発光標識（ルミノール及びルシフェラーゼなど）、及び蛍光標識（フルオレセイン及びローダミンなど）が挙げられる。
【０１５０】
標識抗ソルチリン抗体又はそれらのソルチリン結合フラグメントの存在は、診断目的のためにインビボで検出され得る。一実施形態において、診断は、ａ）有効量のこのような標識分子を被験体に投与する工程、ｂ）投与後、所定の時間間隔にわたって待機して、標識分子をＡβ堆積の部位（存在する場合）で濃縮させ、非結合標識分子がバックグラウンドレベルになるまで除去されるのを可能にする工程、ｃ）バックグラウンドレベルを決定する工程、及びｄ）バックグラウンドレベルを超える標識分子の検出が、被験体が疾患又は障害に罹患していることを示すか、又は疾患又は障害の重症度を示すように、被験体中の標識分子を検出する工程を含む。このような実施形態によれば、分子は、当業者に公知の特定のイメージングシステムを用いた検出に好適なイメージング部分で標識される。バックグラウンドレベルは、検出された標識抗体の量を、特定のイメージングシステムのために予め決定された標準値と比較することを含む、当該技術分野において公知の様々な方法によって決定され得る。本発明の診断法に使用され得る方法及びシステムとしては、限定はされないが、コンピュータ断層撮影法（ＣＴ）、ポジトロン放出型断層撮影法（ＰＥＴ）などの全身スキャン、磁気共鳴画像法（ＭＲＩ）及び超音波検査法が挙げられる。
【０１５１】
さらなる態様において、本発明は、医薬に使用するための、本発明の抗体又はその抗原結合フラグメントに関する。
【０１５２】
さらなる態様において、本発明は、患者の脳内の減少したＰＧＲＮレベルに関連する疾患を治療するのに使用するための、本発明の抗体又はその抗原結合フラグメントに関する。
【０１５３】
さらなる態様において、本発明は、患者の脳内の減少したＰＧＲＮレベルに関連する疾患を治療するための薬剤の製造における、本発明の抗体又はその抗原結合フラグメントの使用に関する。
【０１５４】
さらなる態様において、本発明は、患者の脳内の減少したＰＧＲＮ又は減少した機能的ＰＧＲＮレベルに関連する疾患を予防又は治療する方法であって、有効投与量の、本発明の抗体又はその抗原結合フラグメントを投与する工程を含む方法に関する。
【０１５５】
本発明のそれらの態様の使用及び方法において、疾患は、ＦＴＤ、ＡＬＳ又はタンパク質症（ＡＤなど）であるのが好ましい。
【０１５６】
好ましくは、本発明のそれらの態様の使用及び方法において、治療は、長期であり、好ましくは少なくとも２週間、例えば少なくとも１ヶ月間、６ヶ月間、１年間又はそれを超える期間にわたる。
【０１５７】
さらなる態様において、本発明は、本発明の抗体又はその抗原結合フラグメントを含むキットを提供する。
【０１５８】
【表５−１】
2020527152.tif 000009
【０１５９】
【表５−２】
2020527152.tif 000010
【０１６０】
【表５−３】
2020527152.tif 000011
【０１６１】
【表５−４】
2020527152.tif 000012
【０１６２】
【表５−５】
2020527152.tif 000013
【０１６３】
【表５−６】
2020527152.tif 000014
【０１６４】
以前に公開されたようである文献の本明細書における列挙又は説明は、文献が従来技術の一部であるか又は普通の一般知識であることの確認として必ずしも解釈されるものではない。
【０１６５】
実施形態
本文及び実施例から明らかであろうように、本発明は、以下の実施形態にさらに関する。
【０１６６】
１．ソルチリンに特異的に結合し、ソルチリンへのＰＧＲＮの結合を阻害することが可能な抗体又はその抗原結合フラグメント。
【０１６７】
２．抗体は、無傷の（intact）抗体を含むか又はそれからなる、実施形態１に記載の抗体又はその抗原結合フラグメント。
【０１６８】
３．抗原結合フラグメントは、Ｆｖフラグメント（例えば、一本鎖Ｆｖ又はジスルフィド結合Ｆｖ）、Ｆａｂ様フラグメント（例えば、Ｆａｂフラグメント又はＦ（ａｂ’）2フラグメント）及びドメイン抗体（例えば、単一のＶH可変領域又はＶL可変領域）からなる群から選択される抗原結合フラグメントを含むか又はそれからなる、実施形態１又は２に記載の抗体又はその抗原結合フラグメント。
【０１６９】
４．抗体は、サブタイプＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３又はＩｇＧ４の抗体からなる群から選択される、いずれかの先行する実施形態に記載の抗体又はその抗原結合フラグメント。
【０１７０】
５．配列番号１４６に定義されるソルチリンのＥ領域に特異的に結合する、いずれかの先行する実施形態に記載の抗体又はその抗原結合フラグメント。
【０１７１】
６．配列番号１４６に定義されるソルチリンのＥ領域の少なくとも３連続アミノ酸、例えば４、５、６又は７連続アミノ酸に特異的に結合する、いずれかの先行する実施形態に記載の抗体又はその抗原結合フラグメント。
【０１７２】
７．以下の特性：
（ｉ）０．５〜１０ｎＭ、例えば１〜５ｎＭ又は１〜２ｎＭ又はさらにそれを超える、例えば０．５ｐＭ〜５００ｐＭの、ソルチリンに対する結合親和性（ＫD）、
（ｉｉ）ソルチリン発現細胞によってＰＧＲＮのクリアランスを減少させ且つ／又は阻害する能力、
（ｉｉｉ）ソルチリン発現細胞によってＰＧＲＮのエンドサイトーシスを減少させ且つ／又は阻害する能力、
（ｉｖ）ヒト−ソルチリン発現ノックインマウスにおいて血漿中のＰＧＲＮの量及び／又は濃度を増加させる能力
の１つ又は複数を示す、いずれかの先行する実施形態に記載の抗体又はその抗原結合フラグメント。
【０１７３】
８．ヒト又はヒト化抗体である、実施形態５に記載の抗体又はその抗原結合フラグメント。
【０１７４】
９．ヒト又はヒト化抗体である、実施形態６に記載の抗体又はその抗原結合フラグメント。
【０１７５】
１０．ヒト又はヒト化抗体である、いずれかの先行する実施形態に記載の抗体又はその抗原結合フラグメント。
【０１７６】
１１．表５に定義される抗体のそれぞれについて列挙されるＣＤＲ１〜３軽鎖の１つ又は複数を含む軽鎖可変領域、又は４つ以下のアミノ酸差、又は３つ以下のアミノ酸差、又は２つ以下のアミノ酸差、又は１つ以下のアミノ酸差を有するアミノ酸配列を含む、いずれかの先行する実施形態に記載の抗体又はその抗原結合フラグメント。
【０１７７】
１２．表５に定義される抗体のそれぞれについて列挙されるＣＤＲ１〜３軽鎖を含む軽鎖可変領域を含む、実施形態１１に記載の抗体又はその抗原結合フラグメント。
【０１７８】
１３．表５に定義される抗体のそれぞれについて列挙されるアミノ酸配列ＶＬを含むか又はそれからなる軽鎖可変領域を含む、実施形態１１又は１２に記載の抗体又はその抗原結合フラグメント。
【０１７９】
１４．表５に定義される抗体のそれぞれについて列挙されるＶＬのアミノ酸配列を含むか又はそれからなる軽鎖を含む、実施形態１１〜１３のいずれかに記載の抗体又はその抗原結合フラグメント。
【０１８０】
１５．表５に定義される抗体のそれぞれについて列挙される１つ又は複数のＣＤＲ１〜３重鎖、又は４つ以下のアミノ酸差、又は３つ以下のアミノ酸差、又は２つ以下のアミノ酸差、又は１つ以下のアミノ酸差を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変領域を含む、いずれかの先行する実施形態に記載の抗体又はその抗原結合フラグメント。
【０１８１】
１６．表５に定義される抗体のそれぞれについて列挙されるＣＤＲ１〜３重鎖を含む重鎖可変領域を含む、実施形態１５に記載の抗体又はその抗原結合フラグメント。
【０１８２】
１７．表５に定義される抗体のそれぞれについて列挙されるＶＨのアミノ酸配列を含むか又はそれからなる重鎖可変領域を含む、実施形態１５又は１６に記載の抗体又はその抗原結合フラグメント。
【０１８３】
１８．表５に定義される抗体のそれぞれについて列挙されるアミノ酸配列ＶＬを含むか又はそれからなる重鎖を含む、実施形態１５〜１７のいずれかに記載の抗体又はその抗原結合フラグメント。
【０１８４】
１９．表５に定義される抗体のそれぞれについて列挙されるＶＬのアミノ酸配列を含むか又はそれからなる軽鎖可変領域及び表５に定義される抗体のそれぞれについて列挙されるＶＨのアミノ酸配列を含むか又はそれからなる重鎖可変領域を含む、いずれかの先行する実施形態に記載の抗体又はその抗原結合フラグメント。
【０１８５】
２０．表５に定義される抗体のそれぞれについて列挙されるＶＬのアミノ酸配列を含むか又はそれからなる軽鎖及び表５に定義される抗体のそれぞれについて列挙されるＶＨのアミノ酸配列を含むか又はそれからなる重鎖を含む、いずれかの先行する実施形態に記載の抗体又はその抗原結合フラグメント。
【０１８６】
２１．ソルチリンへの結合について、実施形態２０に記載の抗体又はその抗原結合フラグメントと競合する、いずれかの先行する実施形態に記載の抗体又はその抗原結合フラグメント。
【０１８７】
２２．Ｆｃ領域を含む、いずれかの先行する実施形態に記載の抗体又はその抗原結合フラグメント。
【０１８８】
２３．生体内半減期を増加させるための部分をさらに含む、いずれかの先行する実施形態に記載の抗体又はその抗原結合フラグメント。
【０１８９】
２４．生体内半減期を増加させるための部分は、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、ヒト血清アルブミン、グリコシル化基、脂肪酸及びデキストランからなる群から選択される、実施形態２２に記載の抗体又はその抗原結合フラグメント。
【０１９０】
２５．検出可能な部分をさらに含む、いずれかの先行する実施形態に記載の抗体又はその抗原結合フラグメント。
【０１９１】
２６．検出可能な部分は、蛍光標識、化学発光標識、常磁性標識、放射性同位体標識又は酵素標識からなる群から選択される、実施形態２５に記載の抗体又はその抗原結合フラグメント。
【０１９２】
２７．検出可能な部分は、放射性同位体を含むか又はそれからなる、実施形態２５又は２６に記載の抗体又はその抗原結合フラグメント。
【０１９３】
２８．放射性同位体は、99mＴｃ、111Ｉｎ、67Ｇａ、68Ｇａ、72Ａｓ，89Ｚｒ、123Ｉ及び201Ｔｌからなる群から選択される、実施形態２６又は２７に記載の抗体又はその抗原結合フラグメント。
【０１９４】
２９．検出可能な部分は、常磁性同位体を含むか又はそれからなる、実施形態２５に記載の抗体又はその抗原結合フラグメント。
【０１９５】
３０．常磁性同位体は、157Ｇｄ、55Ｍｎ、162Ｄｙ、52Ｃｒ及び56Ｆｅからなる群から選択される、実施形態２９に記載の抗体又はその抗原結合フラグメント。
【０１９６】
３１．検出可能な部分は、ＳＰＥＣＴ、ＰＥＴ、ＭＲＩ、光学又は超音波イメージングなどのイメージング技術によって検出可能である、実施形態２５〜３０のいずれかに記載の抗体又はその抗原結合フラグメント。
【０１９７】
３２．検出可能な部分は、結合部分を介して間接的に抗体又はその抗原結合フラグメントに結合される、実施形態２５〜３１のいずれかに記載の抗体又はその抗原結合フラグメント。
【０１９８】
３３．結合部分は、１，４，７，１０−テトラアザシクロドデカン−１，４，７，１０，四酢酸（ＤＯＴＡ）の誘導体、デフェロキサミン（ＤＦＯ）、ジエチレントリアミン五酢酸（ＤＴＰＡ）の誘導体、Ｓ−２−（４−イソチオシアナトベンジル）−１，４，７−トリアザシクロノナン−１，４，７−三酢酸（ＮＯＴＡ）の誘導体及び１，４，８，１１−テトラアザシクロドデカン−１，４，８，１１−四酢酸（ＴＥＴＡ）の誘導体からなる群から選択される、実施形態３２に記載の抗体又はその抗原結合フラグメント。
【０１９９】
３４．実施形態１〜３３のいずれかに記載の抗体又はその抗原結合フラグメントをコードする単離された核酸分子。
【０２００】
３５．ｃＤＮＡ分子である、実施形態３４に記載の核酸分子。
【０２０１】
３６．実施形態３４又は３５に記載の核酸分子を含むベクター。
【０２０２】
３７．実施形態３４〜３６のいずれかに記載の核酸分子を含む組み換え宿主細胞。
【０２０３】
３８．実施形態１〜３３のいずれかに記載の抗体又は抗原結合フラグメントを産生するための方法であって、コードされた抗体又はその抗原結合フラグメントの発現を可能にする条件下において、実施形態３７に記載の宿主細胞を培養する工程を含む方法。
【０２０４】
３９．先行する実施形態のいずれか１つに記載の抗体又はその抗原結合フラグメントを含む調製物であって、ソルチリンに結合することが可能でないか又は調製物の抗ソルチリン機能性を実質的に変更しないかのいずれかである、自然発生する抗体を実質的に含まず、前記機能性は、
（ｉ）ソルチリンに対する結合親和性（ＫＤ）、
（ｉｉ）ソルチリン発現細胞によってＰＧＲＮのクリアランスを減少させ且つ／又は阻害する能力、
（ｉｉｉ）ソルチリン発現細胞によってＰＧＲＮのエンドサイトーシスを減少させ且つ／又は阻害する能力、
（ｉｖ）ヒト−ソルチリン発現ノックインマウスにおいて血漿中のＰＧＲＮの量及び／又は濃度を増加させる能力、及び／又は
（ｖ）慢性的に投与されるときの、前頭側頭型認知症（ＦＴＤ）及び／又は筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）の治療を提供する能力
からなる群から選択される、調製物。
【０２０５】
４０．先行する実施形態のいずれか１つに記載のモノクローナル抗体又はその抗原結合フラグメントを含む調製物であって、前記モノクローナル抗体は、天然抗ソルチリン抗体の構造と比べてそのアミノ酸配列の構造変化を有し、前記構造変化は、前記モノクローナル抗体が、前記天然抗ソルチリン抗体によって示される機能性と比べて変化した機能性を示すことを引き起こし、前記機能性は、
（ｉ）ソルチリンに対する結合親和性（ＫＤ）、
（ｉｉ）ソルチリン発現細胞によってＰＧＲＮのクリアランスを減少させ且つ／又は阻害する能力、
（ｉｉｉ）ソルチリン発現細胞によってＰＧＲＮのエンドサイトーシスを減少させ且つ／又は阻害する能力、
（ｉｖ）ヒト−ソルチリン発現ノックインマウスにおいて血漿中のＰＧＲＮの量及び／又は濃度を増加させる能力、及び／又は
（ｖ）慢性的に投与されるときの、前頭側頭型認知症（ＦＴＤ）及び／又は筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）の治療を提供する能力
である、調製物。
【０２０６】
４１．実施形態１〜３３のいずれかに記載の抗体若しくはその抗原結合フラグメント又は実施形態３９〜４０のいずれか１つに記載の調製物と、薬学的に許容できる担体とを含む医薬組成物。
【０２０７】
４２．医療に使用するための、実施形態１〜３３のいずれかに記載の抗体若しくはその抗原結合フラグメント又は実施形態３９〜４０のいずれか１つに記載の調製物。
【０２０８】
４３．患者の脳内の減少したＰＧＲＮ又は減少した機能的ＰＧＲＮレベルに関連する疾患を予防及び／又は治療するのに使用するための、実施形態１〜３３のいずれかに記載の抗体若しくはその抗原結合フラグメント又は実施形態３９〜４０のいずれか１つに記載の調製物。
【０２０９】
４４．患者の脳内の減少したＰＧＲＮレベルに関連する疾患を予防及び／又は治療するための薬剤の製造における、実施形態１〜３３のいずれかに記載の抗体若しくはその抗原結合フラグメント又は実施形態３９〜４０のいずれか１つに記載の調製物の使用。
【０２１０】
４５．疾患は、ＦＴＤ、ＡＬＳ、タンパク質症、例えばＡＤ、ＰＤからなる群から選択される、実施形態４３に記載の使用のための抗体若しくはその抗原結合フラグメント又は実施形態４４に記載の使用。
【０２１１】
４６．患者の脳内の減少したＰＧＲＮレベルに関連する疾患を予防又は治療する方法であって、有効投与量の、実施形態１〜３３のいずれかに記載の抗体若しくはそのフラグメント、実施形態３９〜４０のいずれか１つに記載の調製物又は実施形態４１に記載の医薬組成物を投与する工程を含む方法。
【０２１２】
４７．疾患は、ＦＴＤ、ＡＬＳ又はタンパク質症、例えばＡＤ、ＰＤからなる群から選択される、実施形態４３に記載の使用のための抗体若しくはその抗原結合フラグメント、又は実施形態４４に記載の使用、又は実施形態４６に記載の方法。
【０２１３】
４８．治療は、長期である、実施形態４６又は４７に記載の使用のための抗体若しくはその抗原結合フラグメント、又は使用、又は方法。
【０２１４】
４９．長期治療は、少なくとも２週間、例えば少なくとも１ヶ月間、６ヶ月間、１年間又はそれを超える期間にわたる、実施形態４８に記載の使用のための抗体若しくはその抗原結合フラグメント、又は使用、又は方法。
【０２１５】
５０．ソルチリンに特異的に結合することが可能であるが、結合は、ソルチリンへのニューロテンシン又はＡＦ３８４６９（Ｓｃｈｒｏｅｄｅｒ  ＴＪ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏｏｒｇ  Ｍｅｄ  Ｃｈｅｍ  Ｌｅｔｔ．２０１４  Ｊａｎ  １；２４（１）：１７７−８０）の結合を阻害しないか又は実質的に阻害しない、実施形態１〜３３のいずれかに記載の抗体若しくはその抗原結合フラグメント、実施形態３９〜４０のいずれか１つに記載の調製物又は実施形態４１に記載の医薬組成物。
【０２１６】
５１．実施形態１〜３３のいずれかに記載の抗体若しくはその抗原結合フラグメント、実施形態３９〜４０のいずれか１つに記載の調製物又は実施形態４１に記載の医薬組成物を含むキット。
【０２１７】
ここで、本発明の特定の態様を実施する好ましい非限定的な実施例が添付の図を参照して説明される。
【実施例】
【０２１８】
実施例１〜３は、ソルチリン構築物の生成を説明する
実施例１は、シャッフル構築物を開示する。実施例２は、ソルチリン構築物の発現を開示する。実施例３は、ソルチリン構築物の精製を開示する。
【０２１９】
実施例４〜６は、ソルチリン抗体の生成を説明する
実施例４は、免疫化及びハイブリドーマを開示する。実施例５は、配列分析を開示する。実施例６は、抗体の精製を開示する。
【０２２０】
実施例７〜１１は、ソルチリン抗体の特性評価を説明する
実施例７は、ソルチリンへの結合を開示する。実施例８は、ソルチリン抗体のクロスブロッキング能力を開示する。実施例９は、ｉＰＳＣ中の細胞外ＰＧＲＮレベルを開示し、実施例１０は、血漿ＰＧＲＮレベルを開示する。
【０２２１】
実施例１
ハイブリドーマスクリーニングプロセス及び抗体のパネルの多様化の両方に使用するために、いわゆる「シャッフル構築物」を設計し、構築し、産生し、ヒトソルチリン及び著しく低い配列相同性を有する遠縁の種（テトラオドン）の両方に由来するアミノ酸配列を含有する一連のキメラソルチリン分子を作製した。特定のキメラ構築物への抗体の結合の喪失を除いて、これらのキメラ構築物のソルチリン構造全体及び機能性が保持され得るという原理は、特定の交換された領域の結合の改善を示すであろう。可溶性細胞外領域（ＥＣＤ、ａａ  １−７５５）構築物をＢＡＰタグ（ビオチンアクセプタペプチド）のいずれかで標識し、ビオチンリガーゼ又はＨｉｓタグの共発現によってタンパク質の「インビトロ」ビオチン化を可能にして、容易な精製を可能にした。以下のタンパク質をコードする発現ベクターを調製した：ＳＯＲＴ−ＥＣＤＢＡＰ、ＳＯＲＴ−ＥＣＤＢＡＰ−ｈＢ０１−０５、ＳＯＲＴ−ＥＣＤＢＡＰ−ｈＢ０６−１０、ＳＯＲＴ−ＥＣＤＢＡＰ−ｈＢ１２３９０、ＳＯＲＴ−ＥＣＤＢＡＰ−ｈＢ４５６７８、ＳＯＲＴ−ＥＣＤＢＡＰ−ｔｅｔｒａ、ＳＯＲＴ、ＳＯＲＴ−ｔｅｔｒａ。
【０２２２】
ソルチリン配列は、配列番号１４７〜１５５において見られ、図２は、ソルチリンシャッフル構築物への結合に基づいた抗体の領域割り当ての概略図を示す。
【０２２３】
実施例２
抗体の発現の場合、実施例４、５及び６に記載されるような、適切な重鎖及び軽鎖ベクターをＨＥＫ−２９３Ｆ細胞において共発現させた。
【０２２４】
実施例３：Ｈｉｓタグ化ソルチリンの精製
ＳＯＲＴＥＣＤＨｉｓをＨＥＫ−２９３Ｆ細胞において発現させた。タンパク質中のＨｉｓ−タグは、固定化金属親和性クロマトグラフィーによる精製を可能にする。このプロセスにおいて、ＮｉＮＴＡ  Ｓｕｐｅｒｆｌｏｗ  Ｃａｒｔｒｉｄｇｅ（Ｑｉａｇｅｎ）を５０ｍＭのＮＡＨ2ＰＯ4、３００ｍＭのＮａＣｌ及び１０ｍＭのイミダゾールｐＨ８．０で平衡化する。カラムに１分間の滞留時間でＨｉｓタグ化タンパク質を充填する。カラムを５０ｍＭのＮＡＨ2ＰＯ4、３００ｍＭのＮａＣｌ及び２０ｍＭのイミダゾールｐＨ８．０で洗浄する。タンパク質を５０ｍＭのＮＡＨ2ＰＯ4、３００ｍＭのＮａＣｌ及び２５０ｍＭのイミダゾールｐＨ８．０で溶離する。続いて、タンパク質を、１０．０００ｍｗｃｏのカットオフを有するＳｌｉｄｅ−Ａ−Ｌｙｚｅｒ（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）を用いてＰＢＳに透析する。透析後、タンパク質を、０．２ミクロンのＳＦＣＡフィルタ（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）を用いて滅菌ろ過する。
【０２２５】
クローンを、ＱＰＣＲを用いて、ソルチリンｍＲＮＡ発現について特性評価した。次に、最も高い発現クローンを、抗ソルチリンポリクローナル抗体（ポリクローナルヤギソルチリンビオチン化Ａｂ、Ｃａｔ．Ｎｏ：ＢＡＦ２９３４（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ））を用いてＦＡＣＳ（Ｇｕａｖａ，Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ）によって分析して、ソルチリンの表面発現レベルを決定した。
【０２２６】
実施例４
Ａ  −  トランスジェニックマウスの免疫化手順
抗体ＨｕＭａｂソルチリンは、ＨｕＭＡｂマウス株ＨＣｏ１２、ＨＣｏ１７、ＨＣｏ２０、ＨＣｏ１２−ＢＡＬＢ／ｃ、ＨＣｏ１７−ＢＡＬＢ／ｃ及びＨＣｏ２０−ＢＡＬＢ／ｃ（ヒトモノクローナル抗体；Ｍｅｄａｒｅｘ  Ｉｎｃ．，Ｓａｎ  Ｊｏｓｅ，ＣＡ，ＵＳＡ）の免疫化から得られた。これらのマウスは、マウス免疫グロブリン（Ｉｇ）重鎖及びマウスκ軽鎖をダブルノックアウトされ、これは、完全マウスの抗体の発現を実質的に不活性化する。様々なマウス株をヒトＩｇ重鎖及びヒトＩｇκ軽鎖遺伝子座の挿入によってトランスジェニックにし、これは、ヒトＶＨ（重鎖の可変領域）及びＶＬ（軽鎖の可変領域）遺伝子の数が異なる。ＨＣｏ１２−ＢＡＬＢ／ｃマウスは、ＫＣｏ５−ＢＡＬＢ／ｃ（κ軽鎖トランスジェニック）マウスとの異種交配によって得られた。
【０２２７】
４８匹のマウスを、１４日間の間隔を空けて、２０μｇのＳＯＲＴＥＣＤＨｉｓ（配列番号１５５）で腹腔内に（ＩＰ）及び同じタンパク質で皮下に（ＳＣ、尾基底に）交互に免疫した。４回のＩＰ及び４回のＳＣで最大８回の免疫化を行った。
【０２２８】
１つのプロトコルにおいて、第１の免疫化を完全フロイントアジュバント（ＣＦＡ；Ｄｉｆｃｏ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，Ｄｅｔｒｏｉｔ，ＭＩ，ＵＳＡ）中のＳＯＲＴＥＣＤＨｉｓで行い、次の免疫化を不完全フロイントアジュバント（ＩＦＡ）中で行った。第２のプロトコルは、全ての免疫化工程における補助剤としてＳＡＳを使用した。血清抗体価が十分であることが分かった（１／５０以下の血清の希釈物は、少なくとも２回連続の、隔週のスクリーニング事象において、抗原特異的スクリーニングアッセイにおいて陽性であることが分かった）とき、マウスに対し、融合の４及び３日前に１００μＬのＰＢＳ中の１０μｇのＳＯＲＴＥＣＤＨｉｓタンパク質を静脈内に（ＩＶ）２回さらに投与した（ｂｏｏｓｔ）。
【０２２９】
Ｂ  −  ＨｕＭａｂハイブリドーマ−生成
上に定義されるような十分な抗原特異的抗体価発現を有するＨｕＭＡｂマウスを殺処分し、腹部大動脈及び大静脈に隣接する脾臓及びリンパ節を採取した。マウスミエローマ細胞株との脾細胞及びリンパ節細胞の融合は、基本的に製造業者の指示に従って、ＣＥＥＦ  ５０  Ｅｌｅｃｔｒｏｆｕｓｉｏｎ  Ｓｙｓｔｅｍ（Ｃｙｔｏ  Ｐｕｌｓｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｇｌｅｎ  Ｂｕｒｎｉｅ，ＭＤ，ＵＳＡ）を用いた電気融合によって行った。融合細胞を、ＨｙＱ  ｍＡＤＣＦ−Ｍａｂ（Ｐｅｒｂｉｏ）中の１０％のＦｅｔａｌ  Ｃｌｏｎｅ  Ｉ  Ｂｏｖｉｎｅ血清（Ｐｅｒｂｉｏ）、１ｍＭのピルビン酸ナトリウム（Ｃａｍｂｒｅｘ）、０．５Ｕ／ｍＬのペニシリン、０．５Ｕ／ｍＬのストレプトマイシン（Ｃａｍｂｒｅｘ）、５０μＭの２−メルカプトエタノール（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）、６００ｎｇ／ｍＬのインターロイキン６（ＩＬ−６）（Ｓｔｒａｔｈｍａｎｎ）、１×ＨＡＴ（Ｓｉｇｍａ）及び０．５ｍｇ／ｍＬのカナマイシン（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）を含有する融合培地に播種した。１０日後、上清を収集し、細胞を、ＨｙＱ  ｍＡＤＣＦ−Ｍａｂ中の１０％のＦｅｔａｌ  Ｃｌｏｎｅ  Ｉ  Ｂｏｖｉｎｅ血清、０．５Ｕ／ｍＬのペニシリン、０．５Ｕ／ｍＬのストレプトマイシン、６００ｎｇ／ｍＬのＩＬ−６及び１×ｐｒｏＨＴ（Ｃａｍｂｒｅｘ）を含有する収集培地で洗浄した。ハイブリドーマ培養物の上清を、一次スクリーニングアッセイ及びＳＯＲＴＥＣＤＢＡＰ（配列番号１４７）、ＳＯＲＴＥＣＤＢＡＰｈＢ０６−１０（配列番号１５２）、ＳＯＲＴＥＣＤＢＡＰｈＢ１２３９０（配列番号１５３）に結合されたストレプトアビジンビーズによってスクリーニングして、ハイブリドーマ産生ヒト（又はキメラ）抗ソルチリン抗体を検出した。最も良好な一次ウェルからのハイブリドーマ細胞を、４０％のＣｌｏｎｅＭｅｄｉａ（Ｇｅｎｅｔｉｘ，Ｈａｍｐｓｈｉｒｅ，ＵＫ）及び６０％のＨｙＱ  ２×完全培地（Ｈｙｃｌｏｎｅ，Ｗａｌｔｈａｍ，ＵＳＡ）から作製された半固形培地に播種した。各一次ウェルについて、Ｇｅｎｅｔｉｘ黒色６ウェルプレートのウェルを播種した。各ウェルから、ＣｌｏｎｅＰｉｘ  ｓｙｓｔｅｍ（Ｇｅｎｅｔｉｘ）を用いて２５個のサブクローンを採取した。サブクローンを収集培地中に採取した。７日後、サブクローンの上清をソルチリン特異的ヒトＩｇＧ結合について再度スクリーニングし、ヒトＩｇＧ濃度を、Ｏｃｔｅｔ  ３８４ｒｅｄ（Ｆｏｒｔｅｂｉｏ，Ｍｅｎｌｏ  Ｐａｒｋ，ＵＳＡ）を用いて測定した。各一次ウェルから最も良好なサブクローンを選択し、６００ｎｇ／ｍＬのＩＬ−６、０．５Ｕ／ｍＬのペニシリン、０．５Ｕ／ｍＬのストレプトマイシン及び１×ｐｒｏＨＴのみを含有する展開培地中で展開させた。このサブクローンを１つの９６ウェルプレートウェルから１つの２４ウェルプレートウェル、４つの２４ウェルプレートウェル、６つの６ウェルプレートウェルに展開させた。このプロセスによって得られたクローンを初代クローン（ＰＣ）と表した。
【０２３０】
本発明の抗ソルチリンＨｕＭａｂ抗体を同定し、配列分析を行った。
【０２３１】
実施例５：ソルチリン特異的ＨｕＭａｂ可変領域の配列分析及び発現ベクターにおけるクローニング
製造業者の指示に従って、ＳＭＡＲＴ  ＲＡＣＥ  ｃＤＮＡ  Ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎキット（Ｃｌｏｎｔｅｃｈ）を用いて、全ＲＮＡを０．２〜５×１０６個のハイブリドーマ細胞から調製し、５’−ＲＡＣＥ−相補的ＤＮＡ（ｃＤＮＡ）を１００ｎｇの全ＲＮＡから調製した。ＶＨ及びＶＬコード領域をＰＣＲによって増幅させ、ライゲーション非依存クローニング（Ａｓｌａｎｉｄｉｓ，Ｃ．ａｎｄ  Ｐ．Ｊ．ｄｅ  Ｊｏｎｇ，Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ  １９９０；１８（２０）：６０６９−７４）により、ｐ３３Ｇ１ｆ及びｐ３３κ発現ベクター（ヒトＩｇＧ１／κ定常領域コード配列を含む）中において、フレーム内で直接クローニングした。各抗体について、１６個のＶＬクローン及び１６個のＶＨクローンをシークエンシングした。適切なオープンリーディングフレーム（ＯＲＦ）を有するクローンをさらなる研究及び発現のために選択した。重鎖及び軽鎖の全ての組合せのベクターを、２９３ｆｅｃｔｉｎを用いて、ＦｒｅｅｓｔｙｌｅＴＭ  ２９３−Ｆ細胞中で一時的に共発現させた。
【０２３２】
得られた配列は、本明細書において配列表（配列番号１〜１４４）に示される。ＣＤＲ配列は、公開されている指針に従って定義された。
【０２３３】
実施例６：抗体の精製
培養物の上清を０．２μｍのデッドエンドフィルタ上でろ過し、５ｍＬのタンパク質Ａカラム（ｒＰｒｏｔｅｉｎ  Ａ  ＦＦ，Ａｍｅｒｓｈａｍ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ）に充填し、０．１Ｍのクエン酸−ＮａＯＨ、ｐＨ３で溶離した。溶出液を２Ｍのトリス−ＨＣｌ、ｐＨ９で直ちに中和し、１２．６ｍＭのＮａＨ2ＰＯ4、１４０ｍＭのＮａＣｌ、ｐＨ７．４（Ｂ．Ｂｒａｕｎ）に対してＯ／Ｎ（一晩）透析した。透析後、試料を０．２μｍのデッドエンドフィルタ上で滅菌ろ過した。純度をＳＤＳ−ＰＡＧＥによって決定し、濃度を比濁法及び２８０ｎｍでの吸光度によって測定した。精製された抗体を分割し、−８０℃で貯蔵した。解凍してから、精製された抗体アリコートを４℃に保持した。質量分析法を行って、ハイブリドーマによって発現される抗体重鎖及び軽鎖の分子量を特定した。
【０２３４】
実施例７：ソルチリンの組み換え細胞外領域に対するソルチリン特異的ＨｕＭａｂの親和性
ソルチリンへの抗ソルチリンＨｕＭａｂ抗体の結合反応速度を、Ｏｃｔｅｔ  ３８４ＲＥＤ（Ｆｏｒｔｅｂｉｏ，Ｍｅｎｌｏ  Ｐａｒｋ，ＵＳＡ）を用いて決定した。２μｇ／ｍｌのＨｕＭａｂ溶液を試料希釈剤（ＦｏｒｔｅＢｉｏ，ａｒｔ．Ｎｏ．１８−５０２８）中での希釈によって作製した。Ｐｒｏｔ  Ａセンサー（ＦｏｒｔｅＢｉｏ，ａｒｔ．ｎｏ．１８−０００４）を少なくとも６００秒間にわたってキネティクス緩衝液（ＰＢＳ中１：１０の試料希釈剤）で予め湿らせた。続いて、センサーを６００秒間にわたってＨｕＭａｂ溶液で固定した。ベースライン反応は、１２０秒間にわたってキネティクス緩衝液に浸漬することによって得られた。ＳＯＲＴＥＣＤ構築物の会合が１０００秒間のインキュベーション中に行われた。この後、１００秒間にわたるキネティクス緩衝液中での解離が続いた。解離後、センサーを再生し（１０ｍＭのグリシンｐＨ１．０）、５秒間にわたって３回中和した（キネティクス緩衝液）。全てのＨｕＭａｂを、４つの濃度のＳＯＲＴＥＣＤ構築物（１０、５、２．５及び１．２５μｇ／ｍｌ）を用いて分析した。７６．８ｋＤＡの分子量をＳＯＲＴＥＣＤＨｉｓに使用した。データを、グローバルフルフィットを用いて、ＦｏｒｔｅＢｉｏ  Ａｎａｌｙｓｉｓ  ６．４ソフトウェアと適合させた。結果が図３に示される。
【０２３５】
実施例８：抗ソルチリンＨｕＭ抗体の抗体クロスブロック
抗体クロスブロック試験を、Ｏｃｔｅｔ  ３８４ＲＥＤ（Ｆｏｒｔｅｂｉｏ，Ｍｅｎｌｏ  Ｐａｒｋ，ＵＳＡ）を用いて行った。２μｇ／ｍｌのＨｕＭａｂ抗体溶液を試料希釈剤（ＦｏｒｔｅＢｉｏ，ａｒｔ．Ｎｏ．１８−５０２８）中での希釈によって作製した。アミン反応性センサー（ＦｏｒｔｅＢｉｏ，ａｒｔ．ｎｏ．１８−０００８）をＨｕＭａｎｔｉｂｏｄｙの固定化に使用した。アミン反応性センサーへのカップリング前にＨｕＭａｎｔｉｂｏｄｙをＭＥＳ  ｐＨ６．０緩衝液（１８−５０２７）中で希釈した。カップリングを３０℃及び１０００ｒｐｍで以下の通りに行った：アミン反応性センサーをＰＢＳ中で予め湿らせ、続いて、３００秒間にわたって（製造業者の指示に従って）ＥＤＣ／ＮＨＳ（ＦｏｒｔｅＢｉｏ．Ａｒｔ．ｎｏ．１８−１０３３／１８−１０３４）活性化溶液で活性化した。活性化センサーを６００秒間にわたりＨｕＭａｎｔｉｂｏｄｙで固定化した。固定化センサーをエタノールアミンとの残っているアミン反応性のためにクエンチした（ＦｏｒｔｅＢｉｏ，ｃａｔ  ｎｏ．１８−１０３９）。クエンチ後、センサーを、使用するまでＰＢＳ中に入れた。クロスブロック分析は、３０℃及び１０００ｒｐｍでベースライン反応を設定することから開始する。ベースライン反応は、１２０秒間にわたって試料希釈剤に浸漬することによって得られた。ＳＯＲＴＥＣＤＨｉｓの会合は、３００秒間にわたって行われ、その直後に３００秒間にわたってＨｕＭａｂの会合が行われた。ＨｕＭａｂの会合後、センサーを再生し（１０ｍＭのグリシンｐＨ１．０）、５秒間にわたって３回中和した（試料希釈剤）。データを、ＦｏｒｔｅＢｉｏ  Ａｎａｌｙｓｉｓ  ６．４ソフトウェアを用いて処理した。
【０２３６】
抗体を異なるソルチリンシャッフル構築物（図２及び図３）についてのそれらの結合プロファイルに基づいて分類した。領域Ｅからの全ての抗体がヒト野生型ソルチリンＥＣＤにおける同じ領域に結合することを確認するために、野生型ヒトソルチリンＥＣＤへの互いの結合をブロックするそれらの能力を、Ｏｃｔｅｔ３８４  ｒｅｄを用いたクロスブロッキング試験において特性評価した。例えば、同じ領域からの抗体を試験したとき、一次抗体は、二次抗体の結合をブロックし、逆も同様であった。一方、異なる領域からの抗体を試験したとき、１つのみの領域が一次抗体によってブロックされ、残りの領域は、二次抗体が結合するのに利用されるため、クロスブロッキングはなかった。図４は、Ｅ領域からの２６のうちの２２の抗体が群からの全ての抗体をクロスブロックし、残りの４つの抗体が２６のうちの２０の抗体をクロスブロックすることを示し、これは、これらの抗体の大部分がソルチリンにおける同じ領域に結合し、それらの残りが重複する結合部位を有し、且つ／又はＥ領域に近接して結合することを裏付ける。これは、シャッフル構築物に基づいた領域Ｅに対する抗体の分類を裏付ける。さらに、これらのデータは、キメラソルチリン構築物が天然のヒト野生型ソルチリンＥＣＤとの類似性を保持することも裏付ける。
【０２３７】
実施例９：
ｉＰＳＣ中の細胞外ＰＧＲＮについてのＥＬＩＳＡアッセイ
ソルチリンＥ領域抗体９００は、ＰＧＲＮレベルを増加させた一方、対照抗体Ｂ１２は、細胞外プログラニュリンレベルに影響を与えなかった。アッセイを、９６ウェルプレートに平板培養された成長因子成熟ｉＰＳＣニューロンを用いて行った。抗体を細胞培地に加えた。培養培地を７２時間の曝露後に収集し、ヒトＰＧＲＮ  ＥＬＩＳＡ（Ｂｉｏｖｅｎｄｏｒ）によって分析し、製造業者の指示に従って試料を分析した。ソルチリンヒト抗体９００は、ｉＰＳＣニューロンから収集された培地におけるＰＧＲＮレベルを増加させた一方、対照抗体Ｂ１２の効果は、見られなかった（図５）。細胞に曝されていない抗体を含む培地は、ＰＧＲＮ  ＥＬＩＳＡにおいてシグナルを示さなかった。ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ−Ｇｌｏ  Ｌｕｍｉｎｅｓｃｅｎｔ細胞生存率アッセイ（Ｐｒｏｍｅｇａ）は、抗体適用の生存率に対する効果を示さなかった。データは、平均±ＳＤとして示される。データを一元配置Ａｎｏｖａ、続いてダネットの分析によって分析した。***ｐ＜０．００１。
【０２３８】
Ｒａｓｍｕｓｓｅｎ  ｅｔ  ａｌ．（Ｓｔｅｍ  Ｃｅｌｌ  Ｒｅｐｏｒｔｓ．２０１４  Ｓｅｐ  ９；３（３）：４０４−１３．）に記載されるような非統合的方法による再プログラミングにより、見掛け上健常な男性（１８歳）から採取されたヒト線維芽細胞からｉＰＳＣ系統を生成した。ＮＨＤＦ  Ｋ１＿ｓｈｐ５３と命名されたクローン（ＢＩＯＮｉ０１０−Ａとして、誘導された多能性幹細胞のＥｕｒｏｐｅａｎ  Ｂａｎｋに寄託された）を使用した。ｉＰＳＣをマトリゲル（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）上のｍＴｅＳＲ１培地（Ｓｔｅｍｃｅｌｌ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）において単層中で培養した。二重ＳＭＡＤ阻害（高密度で平板培養されたｉＰＳＣのＮ３培地（ＲＡ、０．５ｍＭのＧｌｕｔａＭＡＸ−Ｉ、０．５％のＮＥＡ、５０μＭの２−メルカプトエタノール及び２．５μｇ／ｍＬのインスリンとともに０．５％のＮ２、１％のＢ２７が補充された、５０％のＤＭＥＭ／Ｆ１２＋５０％のＮｅｕｒｏｂａｓａｌ培地）中における１００ｎＭのＬＤＮ及び１０μＭのＳＢ４３１５４２により、神経分化を０日目に開始させた。細胞を１２日目に分割し、以後、ポリ−Ｌ−オルニチン／ラミニンにおいて平板培養した。ＬＤＮ及びＳＢ４３１５４２を１３日目から取り出した。この時点から、神経前駆細胞（ＮＰＣ）が２１日目に凍結されて、ＮＰＣバンクが生成されるまで細胞をほぼ５日ごとに分割した。これらのＮＰＣを解凍し、約４日間増殖させてから、２５日目に再度平板培養し、２６日目から最終的な成熟培地（２０ｎｇ／ｍＬのＢＤＮＦ、１０ｎｇ／ｍＬのＧＤＮＦ、５００μＭのｄｂ−ｃＡＭＰ、２００μＭのアスコルビン酸を含むＮ３）に供した。３２日目に細胞を成熟培地中のアッセイプレートへの日の最終的な再度の平板培養に供した。ＦＡＣＳ試験により、同様に生成された他の系統からのｉＰＳＣニューロンにおけるソルチリン受容体の表面発現を確認した。抗体を５６日目に適用し、試料を５９日目に収集した。
【０２３９】
実施例１０  マウスにおける血漿ＰＧＲＮレベルに対する抗体の効果
血漿中のＰＧＲＮレベルに対する抗体の効果を分析するために、ヒト化ソルチリンＫＩマウスに単回注入（１０ｍｇ／ｋｇ）のソルチリン抗体又はアイソタイプ対照を皮下注入によって与えた。動物に麻酔をかけ、投与後４８時間の時点で殺処分し、血漿ＰＧＲＮレベルをＥＬＩＳＡによって決定した。
【０２４０】
マウスに０．４ｍｌのＡｖｅｒｔｉｎ  ＩＰで麻酔をかけ、心臓の血液を収集し、５００ｕｌのｋＥＤＴＡバイアルに移した。試料を、４Ｃで１５分間にわたって３６００Ｇで遠心分離するまで氷上に保持した。血漿をｍｉｃｒｏｎｉｃバイアルにピペットで取り、−２０Ｃで凍結させた。試料中のＰＧＲＮを製造業者の指示に従ってＰＧＲＮ  ＥＬＩＳＡキット（Ａｄｉｐｏｇｅｎ）を用いて測定した。
【０２４１】
ソルチリンｈｕｍａｂ、＃３０で処理されたマウスは、抗ＨＥＬ、アイソタイプ対照抗体と比較して４８時間後の血漿ＰＧＲＮレベルの増加を示した。結果が図６に見られる。
【０２４２】
実施例１１
図７Ａ及びＢは、見掛け上健常な個体及びＰＧＲＮ  Ｒ４９３Ｘ患者から生成された神経分化誘導多能性幹細胞（ｉＰＳＣ）中の細胞外ＰＧＲＮに対するソルチリン抗体の効果を示す。
【０２４３】
抗ソルチリンヒト抗体＃７２、＃１２７７、＃８３、＃９００、＃７９９、＃８８６、＃２８、＃４７１、＃１２８６、＃８２２、＃４２３、＃５６、＃３８１、＃９３６は、細胞外ＰＧＲＮレベルを増加させた一方、対照抗体Ｂ１２は、増加させなかった。アッセイを、９６ウェルプレートに平板培養された成長因子成熟ｉＰＳＣニューロンを用いて行った。抗体を細胞培地に加えた。ｉＰＳＣニューロンからの培養培地を７２時間の曝露後に収集し、製造業者の指示に従ってヒトＰＧＲＮ  ＥＬＩＳＡ（Ｂｉｏｖｅｎｄｏｒ）によって分析した。細胞に曝されていない抗体を含む培地は、ＰＧＲＮ  ＥＬＩＳＡにおいてシグナルを示さなかった。ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ−Ｇｌｏ  Ｌｕｍｉｎｅｓｃｅｎｔ細胞生存率アッセイ（Ｐｒｏｍｅｇａ）は、抗体適用の生存率（細胞内ＡＴＰレベルの定量）に対する効果を示さなかった。データは、各実行において６通りで３つの実験実行の平均±ＳＥＭとして示される。データを一元配置Ａｎｏｖａ、続いてダネットの分析によって分析した。*ｐ＜０．０５、**ｐ＜０．０１、***ｐ＜０．００１、****ｐ＜０．０００１。
【０２４４】
見掛け上健常な個体（１８歳の男性）及びＰＧＲＮ  Ｒ４９３Ｘ患者（６５歳の男性）から採取されたヒト線維芽細胞からのｉＰＳＣ系統を非統合的方法に従って再プログラミングした。使用されるクローンは、ＢＩＯＮｉ０１０−Ａ（見掛け上健常な個体）及びＬＵＢｉ００１−Ａ（ＰＧＲＮ  Ｒ４９３Ｘ患者）と名付けられた。それらは、誘導された多能性幹細胞のＥｕｒｏｐｅａｎ  Ｂａｎｋに寄託され、Ｅｕｒｏｐｅａｎ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ  ｏｆ  Ａｕｔｈｅｎｔｉｃａｔｅｄ  Ｃｅｌｌ  Ｃｕｌｔｕｒｅｓによって分配される。ｉＰＳＣをそれぞれｍＴｅＳＲ１培地（Ｓｔｅｍｃｅｌｌ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）及びＥｓｓｅｎｔｉａｌ  ８培地（Ｇｉｂｃｏ）中のマトリゲル（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）において単層中で培養した。高密度で平板培養されたｉＰＳＣのＮ３培地（ＲＡ、０．５ｍＭのＧｌｕｔａＭＡＸ−Ｉ、０．５％のＮＥＡ、５０μＭの２−メルカプトエタノール及び２．５μｇ／ｍＬのインスリンとともに０．５％のＮ２、１％のＢ２７が補充された５０％のＤＭＥＭ／Ｆ１２＋５０％のＮｅｕｒｏｂａｓａｌ培地）中において、二重ＳＭＡＤ阻害（１００ｎＭのＬＤＮ及び１０μＭのＳＢ４３１５４２）により、神経分化を０日目に開始した。細胞を１２日目に分割し、以後、ポリ−Ｌ−オルニチン／ラミニンにおいて平板培養した。ＬＤＮ及びＳＢ４３１５４２を１３日目から２０ｎｇ／ｍｌのＦＧＦ２と交換した。この時点から、神経前駆細胞（ＮＰＣ）が２１日目に凍結されて、ＮＰＣバンクが生成されるまで細胞をほぼ５日ごとに分割した。これらのＮＰＣを解凍し、増殖させてから、２５日目に再度平板培養し、２６日目から成熟培地（２０ｎｇ／ｍＬのＢＤＮＦ、１０ｎｇ／ｍＬのＧＤＮＦ、５００μＭのｄｂ−ｃＡＭＰ、２００μＭのアスコルビン酸を含むＮ３）に供した。３２日目に細胞を成熟培地中のアッセイプレートに最終的に再度平板培養した。ＢＩＯＮｉ０１０−Ａ  ｉＰＳＣニューロンにおけるＦＡＣＳ試験により、ソルチリン受容体の表面発現を確認した。抗体を５７日目に適用し、試料を７２時間後、すなわち６０日目に収集した。
【０２４５】
実施例１２：水素／重水素交換、続いて質量分析法によるプログラニュリン−ソルチリン相互作用を標的にする抗体のエピトープマッピング
水素／重水素交換、続いて質量分析法（ＨＤＸ−ＭＳ）において、タンパク質中の骨格アミド水素の交換速度が測定される。これにより、プロリン残基を除く全タンパク質骨格の立体配座動態を調べることが可能である。交換反応の速度は、骨格アミドの水素結合状態及びより低い程度に溶媒露出度によって決定される。例えば、リガンドの存在によって引き起こされるこれらの２つのパラメータのわずかな変化が重水素取り込みの変化として観察され得る。
【０２４６】
重水素取り込みの変化を亜局在化するために、タンパク質は、酸安定性プロテアーゼ（例えば、ペプシン）で処理され、これは、典型的に１０〜１５のアミノ酸の局所領域を生成する。リガンドの存在下で摂動を示す領域が結合界面に直接関与されるか、又は結合事象によってアロステリックに影響される。
【０２４７】
抗体のエピトープマッピング
ソルチリン（配列番号１５６）の細胞外領域の重水素取り込みを、Ｅ領域に結合するｍＡｂ３０の非存在下及び存在下で測定した。測定を定常状態条件下で行うのを確実にするために、複合体を２５℃で１５分間平衡化してから交換反応を開始させた。交換反応を重水素化緩衝液（９９％のＤ２Ｏ、２０ｍＭのトリス、１５０ｍＭのＮａＣｌ、ｐＤｒｅａｄ＝７．６）中へのタンパク質試料の１：９（ｖ／ｖ）の希釈によって開始させた。様々な時点（１５秒、１分、１０分、１時間及び８時間）後、交換反応を氷冷クエンチ緩衝液（２Ｍのグリシン、０．８Ｍのトリス−（２−カルボキシエチル）ホスフィン（ＴＣＥＰ）、ｐＨ＝２．３）による１：１（ｖ／ｖ）の希釈によってクエンチし、それによりｐＨを２．４６に低下させた。クエンチされた試料を直ちに−８０°の冷凍庫内に入れ、分析するまで貯蔵した。完全に重水素化された対照試料を重水素化変性緩衝液（６Ｍの塩化グアニジウム、９９％のＤ２Ｏ、２０ｍＭのトリス、１５０ｍＭのＮａＣｌ、ｐＤｒｅａｄ＝７．６）中へのソルチリン試料の１：９（ｖ／ｖ）の希釈によって調製し、続いて、２５℃で１６時間インキュベートしてからそれらをクエンチし、上述されるように処理した。
【０２４８】
クエンチされた試料を解凍し、家庭で充填されるペプシンカラム（６０μＬの内部体積、Ｔｈｅｒｍｏ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ  Ｉｎｃ．から入手したペプシンビーズ）を備えた冷却された（０℃）逆相ＵＰＬＣ−ＨＤＸ−システム（Ｗａｔｅｒｓ  Ｉｎｃ．，ＵＳＡ）に注入した。ここで、重水素化タンパク質試料を２０℃でオンラインペプシン消化に供し、得られた消化性ペプチドを逆相ＵＰＬＣによって分離した。ペプチドを質量分析計（Ｓｙｎａｐｔ  Ｇ２質量分析計、Ｗａｔｅｒｓ  Ｉｎｃ，ＵＫ）中へのエレクトロスプレーイオン化によってイオン化し、ここで、ペプチドを最終的な質量決定前にイオン移動度によってさらに分離した。
【０２４９】
データ非依存（ＭＳｅ）及びデータ依存収集の組合せを用いたタンデム質量分析法により、完全に還元された非重水素化試料においてペプチドの同定を行った。
【０２５０】
データ分析
ペプチドの同定
収集された質量スペクトルは、ＧＦＰに対して補正されたロックマスであり、前駆体及びフラグメントイオンを局所タンパク質データベースに適合させるＰＬＧＳ  ３．０において分析された。全てのペプチドの同定を手動で慎重に評価した。
【０２５１】
重水素取り込みの決定：収集された質量スペクトルは、ＧＦＰに対して補正されたロックマスであり、ソフトウェアＤｙｎａｍＸ  ３．０（Ｗａｔｅｒｓ  Ｉｎｃ．，ＵＳＡ）を用いて、抗体の非存在下又は存在下でソルチリンの全てのペプチドについての重水素取り込みを決定した。
【０２５２】
０．５Ｄより大きい交換からの保護が抗体の存在下で観察された場合、ペプチドは、結合エピトープの一部であるとみなされた。
【０２５３】
【表６】
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【図１】
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【図２Ａ】
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【図２Ｂ】
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【図２Ｃ】
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【図３−１】
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【図３−２】
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【図３−３】
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【図４−１】
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【図４−２】
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【図４−３】
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【図４−４】
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【図５】
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【図６】
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【図７Ａ】
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【図７Ｂ】
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【図８Ａ】
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【図８Ｂ】
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【図８Ｃ】
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【図８Ｄ】
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【図８Ｅ】
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【図８Ｆ】
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【配列表】
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【国際調査報告】
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