(57)【要約】  キメラヒト／マウスＣＤ４０リガンドを含む、腫瘍溶解性ウイルスを開示する。キメラヒト／マウスＣＤ４０リガンドは、ＭＥＭ４０であり得る。腫瘍溶解性ウイルスは、複製可能であり得る。腫瘍溶解性ウイルスは、腫瘍溶解性単純ヘルペスウイルスであり得る。少なくとも１つのキメラヒト／マウスＣＤ４０リガンド、例えば、ＭＥＭ４０で武装した腫瘍溶解性ウイルスを、がんに罹患している患者に投与するステップを含む方法をさらに開示する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
腫瘍溶解性ウイルスゲノム内に挿入された異種核酸を含む腫瘍溶解性ウイルスを含み、
前記異種核酸が、転写制御エレメントに作動可能に連結しているＣＤ４０アゴニストをコードする配列を含む、組成物。
【請求項２】
前記腫瘍溶解性ウイルスが、複製可能である、請求項１に記載の組成物。
【請求項３】
複製可能な前記腫瘍溶解性ウイルスが、単純ヘルペスウイルス（ＨＳＶ）、アデノウイルス、ワクシニアウイルス、ポックスウイルス、コクサッキーウイルス、ポリオウイルス、麻疹ウイルス、パルボウイルス、レオウイルス、セネカバレーウイルス、ニューカッスル病ウイルス、レトロウイルス、水疱性口内炎ウイルス、レオウイルス、パラミクソウイルス、シンドビスウイルス、粘液腫ウイルス、マラバウイルス、インフルエンザウイルス、麻疹ウイルス、ムンプスウイルス、アレナウイルス、及びセムリキ森林ウイルスから選択される、請求項２に記載の組成物。
【請求項４】
複製可能な前記腫瘍溶解性ウイルスが、単純ヘルペスウイルスである、請求項３に記載の組成物。
【請求項５】
複製可能な前記腫瘍溶解性単純ヘルペスウイルスが、単純ヘルペスウイルス１型及び単純ヘルペスウイルス２型からなる群から選択される、請求項４に記載の組成物。
【請求項６】
複製可能な前記腫瘍溶解性単純ヘルペスウイルスが、機能性ＩＣＰ３４．５をコードする遺伝子を欠いている、請求項４に記載の組成物。
【請求項７】
転写制御エレメントに作動可能に連結しているＣＤ４０アゴニストをコードする配列を含む核酸が、ＩＣＰ３４．５をコードする遺伝子領域に挿入されている、請求項６に記載の組成物。
【請求項８】
複製可能な腫瘍溶解性単純ヘルペスウイルスが、機能性ＩＣＰ４７をコードする遺伝子を欠いている、請求項４に記載の組成物。
【請求項９】
ＣＤ４０アゴニストが、少なくとも１つのＣＤ４０リガンド（ＣＤ４０Ｌ）である、請求項１に記載の組成物。
【請求項１０】
少なくとも１つのＣＤ４０Ｌが、キメラヒト／マウスＣＤ４０リガンドである、請求項９に記載の組成物。
【請求項１１】
少なくとも１つのキメラヒト／マウスＣＤ４０リガンドが、ＩＳＦ３０（配列番号１）、ＩＳＦ３１（配列番号２）、ＩＳＦ３２（配列番号３）、ＩＳＦ３３（配列番号４）、ＩＳＦ３４（配列番号５）、ＩＳＦ３５（ＭＥＭ４０）（配列番号６）、ＩＳＦ３６（配列番号７）、ＩＳＦ３７（配列番号８）、ＩＳＦ３８（配列番号９）、ＩＳＦ３９（配列番号１０）、ＩＳＦ４０（配列番号１１）及びＩＳＦ４１（配列番号１２）からなる群から選択される、請求項１０に記載の組成物。
【請求項１２】
少なくとも１つのキメラヒト／マウスＣＤ４０リガンドが、ＭＥＭ４０（配列番号６）である、請求項１１に記載の組成物。
【請求項１３】
少なくとも１つのキメラヒト／マウスＣＤ４０リガンドが、ＩＳＦ３０（配列番号１）、ＩＳＦ３１（配列番号２）、ＩＳＦ３２（配列番号３）、ＩＳＦ３３（配列番号４）、ＩＳＦ３４（配列番号５）、ＩＳＦ３５（ＭＥＭ４０）（配列番号６）、ＩＳＦ３６（配列番号７）、ＩＳＦ３７（配列番号８）、ＩＳＦ３８（配列番号９）、ＩＳＦ３９（配列番号１０）、ＩＳＦ４０（配列番号１１）及びＩＳＦ４１（配列番号１２）からなる群から選択されるリガンドと少なくとも９０％の同一性を有する、請求項１０に記載の組成物。
【請求項１４】
ＣＤ４０アゴニストをコードする配列に作動可能に連結している転写制御エレメントが、転写プロモーターである、請求項１に記載の組成物。
【請求項１５】
転写プロモーターが、サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）プロモーターである、請求項１４に記載の組成物。
【請求項１６】
前記腫瘍溶解性ウイルスが、治療タンパク質をコードする１つまたは複数の異種遺伝子をさらに含む、請求項１に記載の組成物。
【請求項１７】
治療タンパク質をコードする１つまたは複数の異種遺伝子が、サイトカインをコードする遺伝子、ケモカインをコードする遺伝子、抗体をコードする遺伝子、プロドラッグ変換酵素をコードする遺伝子、及び免疫調節タンパク質をコードする遺伝子からなる群から選択される、請求項１６に記載の組成物。
【請求項１８】
免疫調節タンパク質をコードする遺伝子が、顆粒球マクロファージコロニー刺激因子（ＧＭ−ＣＳＦ）をコードする遺伝子を含む、請求項１７に記載の組成物。
【請求項１９】
ＧＭ−ＣＳＦをコードする異種遺伝子が、ヒトＧＭ−ＣＳＦをコードする、請求項１８に記載の組成物。
【請求項２０】
複製可能な前記腫瘍溶解性単純ヘルペスウイルスが、非実験用ウイルス株である、請求項４に記載の組成物。
【請求項２１】
複製可能な前記腫瘍溶解性単純ヘルペスウイルスが、ＨＳＶ  ＪＳ１株に由来する、請求項２０に記載の組成物。
【請求項２２】
薬学的に許容される担体をさらに含む、請求項１に記載の組成物。
【請求項２３】
腫瘍溶解性ウイルスゲノム内に挿入された異種核酸を含む腫瘍溶解性ウイルスを、腫瘍に罹患している患者に投与するステップ
を含み、前記核酸が、転写制御エレメントに作動可能に連結しているＣＤ４０アゴニストをコードする配列を含む、方法。
【請求項２４】
前記腫瘍溶解性ウイルスが、複製可能である、請求項２３に記載の方法。
【請求項２５】
複製可能な前記腫瘍溶解性ウイルスが、単純ヘルペスウイルス（ＨＳＶ）、アデノウイルス、ワクシニアウイルス、ポックスウイルス、コクサッキーウイルス、ポリオウイルス、麻疹ウイルス、パルボウイルス、レオウイルス、セネカバレーウイルス、ニューカッスル病ウイルス、レトロウイルス、水疱性口内炎ウイルス、レオウイルス、パラミクソウイルス、シンドビスウイルス、粘液腫ウイルス、マラバウイルス、インフルエンザウイルス、麻疹ウイルス、ムンプスウイルス、アレナウイルス、及びセムリキ森林ウイルスから選択される、請求項２４に記載の方法。
【請求項２６】
複製可能な前記腫瘍溶解性ウイルスが、単純ヘルペスウイルスである、請求項２５に記載の方法。
【請求項２７】
複製可能な前記腫瘍溶解性単純ヘルペスウイルスが、単純ヘルペスウイルス１型及び単純ヘルペスウイルス２型からなる群から選択される、請求項２６に記載の方法。
【請求項２８】
複製可能な前記腫瘍溶解性単純ヘルペスウイルスが、機能性ＩＣＰ３４．５をコードする遺伝子を欠いている、請求項２６に記載の方法。
【請求項２９】
転写制御エレメントに作動可能に連結しているＣＤ４０アゴニストをコードする配列を含む核酸が、ＩＣＰ３４．５をコードする遺伝子領域に挿入される、請求項２８に記載の方法。
【請求項３０】
複製可能な前記腫瘍溶解性単純ヘルペスウイルスが、機能性ＩＣＰ４７をコードする遺伝子を欠いている、請求項２６に記載の方法。
【請求項３１】
ＣＤ４０アゴニストが、少なくとも１つのＣＤ４０リガンド（ＣＤ４０Ｌ）である、請求項２３に記載の方法。
【請求項３２】
少なくとも１つのＣＤ４０Ｌが、キメラヒト／マウスＣＤ４０リガンドである、請求項３１に記載の方法。
【請求項３３】
少なくとも１つのキメラヒト／マウスＣＤ４０リガンドが、ＩＳＦ３０（配列番号１）、ＩＳＦ３１（配列番号２）、ＩＳＦ３２（配列番号３）、ＩＳＦ３３（配列番号４）、ＩＳＦ３４（配列番号５）、ＩＳＦ３５（ＭＥＭ４０）（配列番号６）、ＩＳＦ３６（配列番号７）、ＩＳＦ３７（配列番号８）、ＩＳＦ３８（配列番号９）、ＩＳＦ３９（配列番号１０）、ＩＳＦ４０（配列番号１１）及びＩＳＦ４１（配列番号１２）からなる群から選択される、請求項３２に記載の方法。
【請求項３４】
少なくとも１つのキメラヒト／マウスＣＤ４０リガンドが、ＭＥＭ４０（配列番号６）である、請求項３３に記載の方法。
【請求項３５】
少なくとも１つのキメラヒト／マウスＣＤ４０リガンドが、ＩＳＦ３０（配列番号１）、ＩＳＦ３１（配列番号２）、ＩＳＦ３２（配列番号３）、ＩＳＦ３３（配列番号４）、ＩＳＦ３４（配列番号５）、ＩＳＦ３５（ＭＥＭ４０）（配列番号６）、ＩＳＦ３６（配列番号７）、ＩＳＦ３７（配列番号８）、ＩＳＦ３８（配列番号９）、ＩＳＦ３９（配列番号１０）、ＩＳＦ４０（配列番号１１）及びＩＳＦ４１（配列番号１２）からなる群から選択されるリガンドと少なくとも９０％の同一性を有する、請求項３２に記載の方法。
【請求項３６】
ＣＤ４０アゴニストをコードする配列に作動可能に連結している転写制御エレメントが、転写プロモーターである、請求項２３に記載の方法。
【請求項３７】
転写プロモーターが、サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）プロモーターである、請求項３６に記載の方法。
【請求項３８】
前記腫瘍溶解性ウイルスが、治療タンパク質をコードする１つまたは複数の異種遺伝子をさらに含む、請求項２３に記載の方法。
【請求項３９】
治療タンパク質をコードする１つまたは複数の異種遺伝子が、サイトカインをコードする遺伝子、ケモカインをコードする遺伝子、抗体をコードする遺伝子、プロドラッグ変換酵素をコードする遺伝子、及び免疫調節タンパク質をコードする遺伝子からなる群から選択される、請求項３８に記載の方法。
【請求項４０】
免疫調節タンパク質をコードする遺伝子が、顆粒球マクロファージコロニー刺激因子（ＧＭ−ＣＳＦ）をコードする遺伝子を含む、請求項３９に記載の方法。
【請求項４１】
ＧＭ−ＣＳＦをコードする異種遺伝子が、ヒトＧＭ−ＣＳＦをコードする、請求項４０に記載の方法。
【請求項４２】
複製可能な前記腫瘍溶解性単純ヘルペスウイルスが、非実験用ウイルス株である、請求項２６に記載の方法。
【請求項４３】
複製可能な前記腫瘍溶解性単純ヘルペスウイルスが、ＨＳＶ  ＪＳ１株に由来する、請求項４２に記載の方法。
【請求項４４】
患者が、原発性または転移性のがんから選択されるがんを有する、請求項２３に記載の方法。
【請求項４５】
前記腫瘍溶解性ウイルスが、腫瘍内、静脈内、腹腔内、気管内、筋肉内、頭蓋内、内視鏡的、病巣内、経皮的、皮下、局所的に、または直接注射もしくは灌流により投与される、請求項２３に記載の方法。
【請求項４６】
前記腫瘍溶解性ウイルスが、１回または複数回投与される、請求項２３に記載の方法。
【請求項４７】
少なくとも１つの追加の治療薬を投与するステップをさらに含む、請求項２３に記載の方法。
【請求項４８】
少なくとも１つの追加の治療薬が、化学療法、免疫療法、外科手術、放射線療法、ウイルス療法、または生物学的療法である、請求項４７に記載の方法。
【請求項４９】
少なくとも１つの追加の治療薬が、ＭＥＭ４０をコードする非複製アデノウイルスである、請求項４７に記載の方法。
【請求項５０】
少なくとも１つの追加の治療薬が、腫瘍溶解性ウイルスの投与前に患者に投与される、請求項４７に記載の方法。
【請求項５１】
少なくとも１つの追加の治療薬が、腫瘍溶解性ウイルスの投与と同時に患者に投与される、請求項４７に記載の方法。
【請求項５２】
少なくとも１つの追加の治療薬が、腫瘍溶解性ウイルスの投与後に患者に投与される、請求項４７に記載の方法。
【請求項５３】
患者がヒトである、請求項２３に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本出願は、２０１６年１２月２１日出願の米国仮特許出願第６２／４３７，４７４号明細書の優先権を主張し、これは参照により本明細書に組み込まれる。
【０００２】
本発明は概して、ウイルス学、免疫学、及び医学の分野に関する。より詳細には、がん治療のための腫瘍溶解性ウイルスベクターの組成物に関する。
【背景技術】
【０００３】
腫瘍溶解性ウイルスは、二重の作用機序：１）直接的腫瘍溶解に至る、腫瘍細胞における選択的ウイルス複製による腫瘍細胞の殺傷と、２）破壊された腫瘍細胞から抗原を放出することによる全身性抗腫瘍免疫の誘導とを有する、がん治療薬の一クラスである。天然及び遺伝子改変ウイルスはともに開発の途上にある。アメリカ食品医薬品局（ＦＤＡ）は、２０１５年に初めての腫瘍溶解性ウイルスである、タリモジーン・ラハーパレプベック（ｔａｌｉｍｏｇｅｎｅ  ｌａｈｅｒｐａｒｅｐｖｅｃ）（ＩＭＬＹＧＩＣ（登録商標）、Ａｍｇｅｎ  Ｉｎｃ．製、サウザンドオークス、ＣＡ）、すなわちＫｏｈｌｈａｐｐら、２０１６年  Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈにより報告されている、黒色腫の局所治療のための、顆粒球マクロファージコロニー刺激因子（ＧＭ−ＣＳＦ）をコードする遺伝子改変ヘルペスウイルスを認可した。しかし、黒色腫は、多くの型のうちの１つにすぎない。さらに、ヘルペスウイルスは、がん治療に使用され得る多くのウイルスのうちの１つにすぎない。同様に、ＧＭ−ＣＳＦは、がん治療における使用について研究中の多くの化合物のうちの１つにすぎない。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００４】
【特許文献１】米国特許第５９２５５６５号明細書
【特許文献２】米国特許第７２２３５９３号明細書
【特許文献３】米国特許第７４９５０９０号明細書
【特許文献４】米国特許第７９２８２１３号明細書
【特許文献５】米国特許第５９３５８１９号明細書
【非特許文献】
【０００５】
【非特許文献１】Ｋｏｈｌｈａｐｐら、２０１６年  Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ２２（５）：１０４８〜１０５４
【非特許文献２】Ｌａｗｌｅｒら、２０１７年  ＪＡＭＡ  Ｏｎｃｏｌｏｇｙ３（６）：８４１〜８４９
【非特許文献３】Ｍａｃｅｊａｋら、１９９１年  Ｎａｔｕｒｅ３５３：９０〜９３
【非特許文献４】Ｐｅｌｌｅｔｉｅｒら、１９８８年  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  ａｎｄ  Ｃｅｌｌｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ８（３）：１１０３〜１１１２
【非特許文献５】Ｒｏｉｚｍａｎ１９９６年  ＰＮＡＳ９３：１１３０７〜１１３１２
【非特許文献６】Ｒｕｓｓｅｌｌら、２０１４年  Ｎａｔｕｒｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ３０（７）：６５８〜６７０
【非特許文献７】Ｓｉｎｇｈら、２０１７年  Ｎａｔｕｒｅ  Ｃｏｍｍｕｎｉｃａｔｉｏｎｓ８（１４４７）：１〜１０
【非特許文献８】ｖａｎ  Ｋｏｏｔｅｎら、２０００年  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｌｅｕｋｏｃｙｔｅ  Ｂｉｏｌｏｇｙ６７：２〜１７
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
したがって、がん治療のための腫瘍溶解性ウイルスベクターが必要とされ続けている。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
以下では、本開示のいくつかの態様の基本認識を提供するために本開示の簡略化した概要を示す。本概要は、本開示の徹底的な概説ではない。これは、本開示の鍵または重要な因子を明らかにすること、または本開示の範囲を正確に説明することを意図していない。この唯一の目的は、後に考察する、より詳細な説明の前置として簡略化した形態のいくつかの概念を示すことである。
【０００８】
いくつかの実施形態では、本開示は、キメラヒト／マウスＣＤ４０リガンドを含む腫瘍溶解性ウイルスに関する。
【０００９】
いくつかの実施形態では、本開示は、少なくとも１つのキメラヒト／マウスＣＤ４０リガンドを含む腫瘍溶解性ウイルスを含む組成物を、腫瘍に罹患している哺乳動物に投与するステップを含む方法に関する。
【００１０】
いずれの実施形態においても、キメラヒト／マウスＣＤ４０リガンドは、ＩＳＦ３０〜ＩＳＦ４１、例えばＩＳＦ３５（ＭＥＭ４０）から選択され得る。
【００１１】
ＩＳＦ３５（ＭＥＭ４０）を含む、ＩＳＦ３０〜ＩＳＦ３５をコードする導入遺伝子は、非腫瘍溶解性で非複製のアデノウイルス内に、これまでにトランスフェクトされている。しかし、このような導入遺伝子は、特に腫瘍溶解性単純ヘルペスウイルスを含む、腫瘍溶解性ウイルス内にトランスフェクトされたことはなかった。
【００１２】
本開示は、次の添付の図とともに用いる以下の記載を参照することにより理解され得る。
【図面の簡単な説明】
【００１３】
【図１】ＭＥＭ４０を発現する複製可能な単純ヘルペスウイルスであるＨＳＶ−ＭＥＭ４０の構築を、本明細書における実施形態に従って模式的に表す図である。
【図２】ＭＥＭ４０とヒトＧＭ−ＣＳＦの両方を発現する複製可能な単純ヘルペスウイルスである、ＨＳＶ−ＭＥＭ４０−ＧＭＣＳＦの構築を本明細書における実施形態に従って模式的に表す図である。
【図３】ＭＥＭ４０とヒトＧＭ−ＣＳＦの両方を発現する複製可能な単純ヘルペスウイルスである、ＨＳＶ−ＭＥＭ４０−ＧＭＣＳＦの構築を本明細書における実施形態に従って模式的に表す図である。
【図４】ＭＥＭ４０とヒトＧＭ−ＣＳＦの両方を発現する複製可能な単純ヘルペスウイルスであって、その遺伝子が内部リボソーム侵入部位（ＩＲＥＳ）配列により分離されている、複製可能な単純ヘルペスウイルスである、ＨＳＶ−ＭＥＭ４０−ＩＲＥＳ−ＧＭＣＳＦの構築を本明細書における実施形態に従って模式的に表す図である。
【発明を実施するための形態】
【００１４】
本開示の種々の例示的実施形態を以下に記載する。明確さのために、実際の履行の特徴のすべてを本明細書において記載はしない。もちろん、このような任意の実際の実施形態の開発において、多数の履行時特有の判断がなされて、開発者特有の目標、例えば、それぞれの履行ごとに変化する、システム関連及びビジネス関連の制約を有するコンプライアンスを達成しなければならないことが理解されよう。さらに、このような開発努力は、複雑かつ時間を要し得るが、それにもかかわらず、本開示の利点を有する当業者が取り組むべきルーティンであることが理解されよう。
【００１５】
添付の図を参照して、これより本主題を記載する。種々の構造は、説明のみを目的とし、当業者に周知の本開示の詳細を曖昧としないように、図面において模式的に表す。それにもかかわらず、添付の図面を包含して、本開示の例示的実施例を記載及び説明する。本明細書において使用する語句は、関連分野の当業者による語句の理解と一致した意味を有すると理解及び解釈されるべきである。用語または句の特別な定義、すなわち、当業者に理解される通常の及び慣習的意味と異なる定義を、本明細書の用語または句と一致して使用することにより暗示することは意図していない。用語または句が、特別な意味、すなわち、当業者に理解されるもの以外の意味を有することを意図する限りにおいて、このような特別な定義を定義的な方法で本明細書において明示的に説明し、この方法により用語または句の特別な定義を直接かつ明解に提供する。
【００１６】
本明細書において開示する主題は、種々の修飾及び代替形態を受け入れる余地があるが、その特定の実施形態は、図面において例示目的で示しており、本明細書において詳細に記載する。ただし、特定の実施形態の本明細書の記載が、開示する特定の形態に本開示を限定することを意図しないが、反対に、添付の特許請求の範囲により定義する本開示の趣旨及び範囲に属する、すべての修飾、等価物、及び代替物を包含することを意図することが理解されるべきである。
【００１７】
腫瘍溶解性ウイルスの概説
治療用腫瘍溶解性ウイルスの所望の治療活性についての選択または設計において、細胞表面タンパク質の自然トロピズムを介した、またはがん細胞を直接的に標的とするようにウイルスを操作することによる感染に対するがん細胞の選択的ターゲティング；がん細胞における選択的複製；ウイルス病原性の減弱；溶解活性の増強；ウイルスの急速な排出を導くことができる抗ウイルス免疫応答の修飾；及びサイトカイン、免疫アゴニスト、または免疫チェックポイント遮断物質を組み込むウイルスの遺伝子改変による全身性抗腫瘍免疫の修飾を含む、複数の生物学的特性が考えられ得る。
【００１８】
単純ヘルペスウイルス（ＨＳＶ）、アデノウイルス、ワクシニアウイルス、ポックスウイルス、コクサッキーウイルス、ポリオウイルス、麻疹ウイルス、パルボウイルス、レオウイルス、セネカバレーウイルス（Ｓｅｎｅｃａ  ｖａｌｌｅｙ  ｖｉｒｕｓ）、ニューカッスル病ウイルス、レトロウイルス、水疱性口内炎ウイルス、パラミクソウイルス、シンドビスウイルス、粘液腫ウイルス、マラバウイルス（Ｍａｒａｂａ  ｖｉｒｕｓ）、インフルエンザウイルス、ムンプスウイルス、アレナウイルス、及びセムリキ森林ウイルスを含むがこれらに限定されない、抗がん剤とみなされる多様な腫瘍溶解性ウイルス型が存在する。腫瘍溶解性ウイルスの例は、Russellら、２０１４年Nature Biotechnology及びLawlerら、２０１７年JAMA Oncologyにより考察されている。
【００１９】
複製可能な腫瘍溶解性単純ヘルペスウイルスは、１）非常に多様な腫瘍に感染するその能力、２）その固有の腫瘍溶解性、３）多くの非必須遺伝子（最大３０ｋｂ）が治療遺伝子により置換され得る、遺伝子操作のための十分な機会を提供する、その特徴が十分に明らかな大型のゲノム（１５２Ｋｂ）、４）感染した細胞における挿入変異を回避する、エピソームとして留まるその能力、及び５）起こり得る望まない複製を抑制する、抗ウイルス薬（例えば、バラシクロビル）としての有用性を含む、それを治療の適用に理想的なものとするいくつかの特性を有する。
【００２０】
ＣＤ４０アゴニストの概説
理論に拘束されるわけではないが、がん免疫療法の成功は、ＣＤ８＋Ｔ細胞が直接的な腫瘍の殺傷及び患者の生存に強力に関連するため、腫瘍特異的ＣＤ８＋Ｔ細胞免疫の増強に依存し得る。したがって、ＣＤ８＋Ｔ細胞応答を促進する治療様式は、がん免疫療法薬の開発における目標である。
【００２１】
ＣＤ４０受容体は、腫瘍壊死因子受容体ファミリーのメンバーであり、Ｂ細胞、専門的抗原提示細胞、及び非免疫細胞ならびに腫瘍により発現する（ｖａｎ  Ｋｏｏｔｅｎら、２０００年  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｌｅｕｋｏｃｙｔｅ  Ｂｉｏｌｏｇｙ）。腫瘍特異的Ｔ細胞応答を活性化するには、抗原提示細胞上のＣＤ４０受容体を活性化することが必要とされる。ＣＤ４＋Ｔ細胞は、ＣＤ４０とＣＤ１５４の相互作用を介して樹状細胞（ＤＣ）をライセンス化することによりＣＤ８＋Ｔ細胞のプライミングを増強する。さらに、ＣＤ４０とＣＤ１５４の相互作用により、ＣＤ８＋Ｔ細胞応答が早期に減少することを防ぐ。したがって、ＣＤ１５４によるＣＤ４０の活性化は、病原体及び腫瘍に対して有効な抗原特異的ＣＤ８Ｔ細胞免疫を誘導するのに必要なステップである（Ｓｉｎｇｈら、２０１７年  Ｎａｔｕｒｅ  Ｃｏｍｍｕｎｉｃａｔｉｏｎｓ）。この点で、抗体またはＣＤ４０同族リガンド（ＣＤ４０Ｌ）タンパク質のようなＣＤ４０アゴニスト療法は、がん免疫療法において有望な戦略であると考えられる。
【００２２】
ＩＳＦ３５の概説
ＩＳＦ３５（本明細書において「ＭＥＭ４０」とも呼ばれ得る）は、キメラヒト／マウスＣＤ４０リガンドであり、これはヒトＣＤ４０Ｌと９２％相同のアミノ酸配列を有する。参照により本明細書において組み込まれる、米国特許第７，４９５，０９０号明細書を参照されたい。（「ＣＤ４０リガンド」及び「ＣＤ４０Ｌ」は、本明細書において互換的に使用し得、「ＣＤ１５４」とも呼ばれ得る。）詳細には、この分子の細胞内、膜内、及び近位の細胞外ドメインをそれぞれ含有する領域であるドメインＩ、ＩＩ及びＩＩＩは、完全にヒト化されている。この分子のＣＤ４０結合タンパク質を含有するドメインＩＶでは、細胞における最適なＣＤ４０リガンドの発現に必要なマウスドメインのみが保持される。ＩＳＦ３５（ＭＥＭ４０）は、この分子の３’末端で完全にヒト化され、この場合、ヒトに投与すると、抗体結合によりマウスＣＤ１５４（ＣＤ４０リガンド）の活性が中和される。
【００２３】
ＩＳＦ３５に加えて、本出願人下の従事者は、キメラＣＤ４０リガンド構築物（ＩＳＦ３０〜ＩＳＦ４１）のパネルを発明した。ＩＳＦ３５は、現在までに実施される多くの非臨床的及び臨床的試験によるパネルにおいて特異的なキメラＣＤ４０リガンドである。
【００２４】
例示的実施例
いくつかの実施形態では、本開示は、少なくとも１つのキメラヒト／マウスＣＤ４０リガンドを含む腫瘍溶解性ウイルスに関する。
【００２５】
さらに他の実施形態では、本開示は、キメラヒト／マウスＣＤ４０リガンドを含む複製可能な腫瘍溶解性ウイルスに関する。
【００２６】
一実施形態では、本開示は、キメラヒト／マウスＣＤ４０リガンドを含む複製可能な腫瘍溶解性単純ヘルペスウイルスに関する。
【００２７】
さらに他の実施形態では、本開示は、キメラヒト／マウスＣＤ４０リガンドと、サイトカイン（例えば、ＧＭ−ＣＳＦ、ＴＮＦα）、インターロイキン（例えば、ＩＬ−２、ＩＬ−１２）、ケモカイン（例えば、ＲＡＮＴＥＳ）、マクロファージ炎症タンパク質（例えば、ＭＩＰ−３）、チェックポイント阻害物質（例えば、抗ＰＤ−１、抗ＣＤＴＡ４及び抗ＰＤ−Ｌ１）、または別の免疫調節タンパク質（例えば、ＯＸ４０リガンド）のような１つまたは複数の追加の免疫調節性または治療遺伝子の両方を含む複製可能な腫瘍溶解性単純ヘルペスウイルスに関する。
【００２８】
本開示は、ＣＤ４０アゴニストをコードする、単純ヘルペスウイルス（ＨＳＶ）、アデノウイルス、ワクシニアウイルス、ポックスウイルス、コクサッキーウイルス、ポリオウイルス、麻疹ウイルス、パルボウイルス、レオウイルス、セネカバレーウイルス、ニューカッスル病ウイルス、レトロウイルス、水疱性口内炎ウイルス、レオウイルス、パラミクソウイルス、シンドビスウイルス、粘液腫ウイルス、マラバウイルス、インフルエンザウイルス、麻疹ウイルス、ムンプスウイルス、アレナウイルス、及びセムリキ森林ウイルスを含む、腫瘍溶解性ウイルスを提供する。
【００２９】
ウイルス領域は、所望の治療特性を付与する複数の目的により改変し得る。治療特性の非限定的な例としては、ウイルス複製及び伝播の増強、腫瘍溶解性の増強、腫瘍細胞の正常細胞に対する選択的標的化、免疫活性化の増強、及びウイルスの宿主免疫系からの保護が挙げられ得る。上記の目的のため、ウイルス領域は、除去（完全または部分的欠失）、非機能化、修飾して機能を減弱、または他の配列により置換し得る。腫瘍溶解性ウイルスはまた、改変されて、治療タンパク質（複数可）及び／または免疫調節タンパク質（複数可）をコードする１つまたは複数の異種遺伝子を含み得る。特定の実施形態では、腫瘍溶解性ウイルスは、ＣＤ４０アゴニストをコードする異種遺伝子を含む。
【００３０】
いくつかの実施形態では、本開示は、免疫による腫瘍細胞の破壊と、ウイルスの腫瘍溶解作用（ｖｉｒａｌｙｔｉｃ）による腫瘍細胞の破壊の両方のための能力が向上した単純ヘルペスウイルスを提供する。ここで、単純ヘルペスウイルス株は、ＩＣＰ３４．５及びＩＣＰ４５をコードする遺伝子が非機能性とされている、ＨＳＶ１またはＨＳＶ２から構築され得る。さらに、単純ヘルペスウイルス株は、キメラヒト／マウスＣＤ４０リガンド免疫アゴニストタンパク質をコードする遺伝子を単独で、または１つまたは複数の追加の治療遺伝子（複数可）と組み合わせて保有し得る。
【００３１】
他の実施形態では、本開示は、少なくとも１つのキメラヒト／マウスＣＤ４０リガンドを含む腫瘍溶解性ウイルスを含む組成物を、腫瘍に罹患している患者に投与するステップを含む方法に関する。
【００３２】
実施形態では、キメラヒト／マウスＣＤ４０リガンドは、ＩＳＦ３０〜ＩＳＦ４１から選択され得、ＭＥＭ４０（ＩＳＦ３５）はそのメンバーである。
【００３３】
いくつかの実施形態では、本開示は、ＣＤ４０アゴニストをコードする、単純ヘルペスウイルス（ＨＳＶ）、アデノウイルス、ワクシニアウイルス、ポックスウイルス、コクサッキーウイルス、ポリオウイルス、麻疹ウイルス、パルボウイルス、レオウイルス、セネカバレーウイルス、ニューカッスル病ウイルス、レトロウイルス、水疱性口内炎ウイルス、レオウイルス、パラミクソウイルス、シンドビスウイルス、粘液腫ウイルス、マラバウイルス、インフルエンザウイルス、麻疹ウイルス、ムンプスウイルス、アレナウイルス、及びセムリキ森林ウイルスを含む、腫瘍溶解性ウイルスを提供する。
【００３４】
特定の実施形態では、本開示は、転写制御エレメントに作動可能に連結しているＣＤ４０アゴニストをコードする配列を含む、腫瘍溶解性単純ヘルペスウイルスに関する。
【００３５】
特定の実施形態では、腫瘍溶解性単純ヘルペスウイルスは、遺伝子改変して、キメラヒト／マウスＣＤ４０リガンド導入遺伝子を組み込み得る。
【００３６】
腫瘍溶解性ウイルスを遺伝子改変して、ＣＤ４０リガンド導入遺伝子を組み込み、キメラヒト／マウスＣＤ４０リガンド導入遺伝子を含むことは、当業者に既知の技術を使用して実施し得る。腫瘍溶解性ウイルスは、必要な調整エレメント（例えば、サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）プロモーターまたは代替プロモーター、ポリアデニル化ドメイン）を有するキメラヒト／マウスＣＤ４０リガンド導入遺伝子を含有して、感染細胞におけるキメラヒト／マウスＣＤ４０リガンド遺伝子の転写及びキメラヒト／マウスＣＤ４０リガンドポリペプチドの発現を可能とする。
【００３７】
一実施形態では、キメラヒト／マウスＣＤ４０リガンドは、ＩＳＦ３０（配列番号１）、ＩＳＦ３１（配列番号２）、ＩＳＦ３２（配列番号３）、ＩＳＦ３３（配列番号４）、ＩＳＦ３４（配列番号５）、ＩＳＦ３５（ＭＥＭ４０）（配列番号６）、ＩＳＦ３６（配列番号７）、ＩＳＦ３７（配列番号８）、ＩＳＦ３８（配列番号９）、ＩＳＦ３９（配列番号１０）、ＩＳＦ４０（配列番号１１）、及びＩＳＦ４１（配列番号１２）からなる群から選択され得る。
【００３８】
ＩＳＦ３０、ＩＳＦ３２、ＩＳＦ３４、ＩＳＦ３６、ＩＳＦ３８及びＩＳＦ４０のポリペプチド配列をコードする、ポリペプチド配列及び例示的核酸配列は、米国特許第７，９２８，２１３号明細書に開示されており、これによって本明細書に参照により組み込まれる。ＩＳＦ３１、ＩＳＦ３３、ＩＳＦ３５、ＩＳＦ３７、ＩＳＦ３９及びＩＳＦ４１のポリペプチド配列をコードする、ポリペプチド配列及び例示的核酸配列は、米国特許第７，４９５，０９０号明細書に開示されており、これによって本明細書に参照により組み込まれる。
【００３９】
さらなる実施形態では、キメラヒト／マウスＣＤ４０リガンドは、ＩＳＦ３５（ＭＥＭ４０）（配列番号６）であり得る。
【００４０】
異種キメラヒト／マウスＣＤ４０リガンドは、腫瘍溶解性ウイルスにおける任意の非必須な位置に挿入され得る。一実施形態では、腫瘍溶解性ウイルスは、複製可能のままである。
【００４１】
一実施形態では、少なくとも１つのキメラヒト／マウスＣＤ４０リガンドを含む腫瘍溶解性ウイルスは、ＩＳＦ３５−ＨＳＶ腫瘍溶解性ウイルスであり得る。ＨＳＶの使用は、このウイルス型をＦＤＡが事前承認したこと、ならびにＨＳＶを医薬品の開発において魅力的なものとする、上記のような、ＨＳＶのさらなる特性を考慮すると、望ましいものであり得る。
【００４２】
ＨＳＶは、非実験用ウイルス株であり得る。一実施形態では、腫瘍溶解性単純ヘルペスウイルスは、ＨＳＶ  ＪＳ１株に由来する。
【００４３】
特定の実施形態では、異種キメラヒト／マウスＣＤ４０リガンド核酸は、腫瘍溶解性単純ヘルペスウイルスのＩＣＰ３４．５遺伝子をコードする領域内に挿入し、ＩＣＰ３４．５遺伝子を非機能性とする。ＩＣＰ３４．５領域は、ウイルスの複製に必須ではない（米国特許第７，２２３，５９３号明細書、本明細書に参照により組み込まれる）。さらに、ＩＣＰ３４．５遺伝子の欠失または不活化により、ＨＳＶの神経毒性が減少し、腫瘍選択的複製がもたらされる（Roizman１９９６年Proceedings of the National Academy of Sciences）。
【００４４】
特定の実施形態では、キメラヒト／マウスＣＤ４０リガンドをコードする腫瘍溶解性単純ヘルペスウイルスからＩＣＰ４７遺伝子をまた、欠失させる。ＩＣＰ４７の欠失により、ＨＳＶが抗原提示を阻止することを防ぎ、ＵＳ１１発現を早め、増加させる（Roizman１９９６年Proceedings of the National Academy of Sciences）。
【００４５】
上記の目的で改変したウイルス領域は、完全もしくは部分的に除去するか、または他の遺伝子配列、特にＭＥＭ４０を置換もしくは挿入することにより非機能性とし得る。
【００４６】
腫瘍溶解性ウイルスは、遺伝子改変して、がん細胞における選択的複製；ウイルス病原性の減弱；溶解活性の増強；ウイルスの急速な排出を導く抗ウイルス免疫応答の修飾；及びウイルスによる全身性抗腫瘍免疫の修飾を含む、がん治療における使用のための１つまたは複数の特性をさらに向上し得る。
【００４７】
腫瘍溶解性ウイルスがＲＮＡゲノムを有する実施形態では、キメラヒト／マウスＣＤ４０リガンドをコードする遺伝子は、遺伝子をゲノム内に挿入する以前にＲＮＡウイルスゲノムから発現するのに適したものとされ得る。例えば、キメラヒト／マウスＣＤ４０リガンドをコードする遺伝子は、チミンのウラシルとの置換を行ってＲＮＡウイルスゲノムからの発現を容易にし得る。このような実施形態に適し得る他の改変は、当業者に既知である。
【００４８】
一実施形態では、本開示は、少なくとも１つのキメラヒト／マウスＣＤ４０リガンドを含む腫瘍溶解性ウイルスを含む組成物を、腫瘍に罹患している哺乳動物に投与するステップを含む方法に関する。腫瘍溶解性ウイルスは、複製可能であり得る。特定の実施形態では、腫瘍溶解性ウイルス及び少なくとも１つのキメラヒト／マウスＣＤ４０リガンドは、上記のものであり得る。一実施形態では、少なくとも１つのキメラヒト／マウスＣＤ４０リガンドを含む腫瘍溶解性ウイルスは、ＨＳＶ−ＭＥＭ４０複製可能な単純ヘルペスウイルスであり得る。
【００４９】
別の実施形態では、少なくとも１つのキメラヒト／マウスＣＤ４０リガンドを含む腫瘍溶解性ウイルスはまた、１つまたは複数の追加の治療タンパク質（複数可）をコードし得る。複数の異種遺伝子を腫瘍溶解性ウイルスゲノム内に組み込むことができる。特定の実施形態では、第２の免疫調節タンパク質は、ヒトＧＭ−ＣＳＦである。
【００５０】
選択した腫瘍溶解性ウイルス種及びキメラヒト／マウスＣＤ４０リガンド（複数可）に関係なく、少なくとも１つのキメラヒト／マウスＣＤ４０リガンドを含む腫瘍溶解性ウイルスは、ウイルスを腫瘍内注射により投与することによって、がん治療に使用し得る。しかし、静脈送達がまた考えられる。
【００５１】
理論に拘束されるわけではないが、少なくとも１つのキメラヒト／マウスＣＤ４０リガンドを含む腫瘍溶解性ウイルスは、二重の作用機序：１）がん細胞における腫瘍溶解性ウイルスの選択的ウイルス複製による腫瘍細胞の殺傷と、２）ウイルス免疫誘導とＣＤ４０リガンド免疫活性化の両方により生じる全身性抗腫瘍免疫の誘導とを有し得る。
【００５２】
調整エレメント
本開示においてに有用なベクターに含まれる発現カセットは、タンパク質をコードする配列に作動可能に連結している転写プロモーター、介在配列を含むスプライスシグナル、及び転写終結／ポリアデニル化配列を（５’から３’の方向に）含有する。真核細胞においてタンパク質をコードする遺伝子の転写を制御するプロモーター及びエンハンサーは、複数の遺伝的エレメントからなる。細胞機構は、各エレメントにより伝達される調整情報を集めて統合し、種々の遺伝子が、明確でしばしば複雑な転写調整のパターンを発達させることを可能とする。本開示に関連して使用するプロモーターは、恒常的で誘導性、かつ組織特異的プロモーターを含む。
【００５３】
プロモーター／エンハンサー
キメラヒト／マウスＣＤ４０リガンド核酸発現は、哺乳動物細胞、例えばヒト腫瘍細胞において機能的なプロモーターの制御下に置かれ得る。一実施形態では、キメラヒト／マウスＣＤ４０リガンドの発現を方向づけるプロモーターは、サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）プロモーターである。
【００５４】
本明細書において提供する発現構築物は、プログラミング遺伝子の発現を促進するプロモーターを含む。プロモーターは、ＲＮＡ合成の開始部位を配置するように機能する配列を一般に含む。この最良の例は、ＴＡＴＡボックスであるが、哺乳動物の末端デオキシヌクレオチドトランスフェラーゼ遺伝子のプロモーター及びＳＶ４０後期遺伝子のプロモーターのような、ＴＡＴＡボックスを欠くいくつかのプロモーターにおいては、開始部位それ自体の上流に存在する個別のエレメントは、開始部位を固定するのに役立つ。追加のプロモーターエレメントは、転写開始の頻度を調整する。これらは典型的には、開始部位の３０〜１１０ｂｐ上流の領域にあるが、プロモーターは、開始部位の下流にも機能エレメントを含有することが示されている。コードする配列をプロモーター「の制御下」に導くために、あるものは、転写リーディングフレームの転写開始部位の５’末端を選択したプロモーターの「下流」（すなわち、３’末端）に配置する。「上流」プロモーターは、ＤＮＡの転写を刺激し、コードされるＲＮＡの発現を促進する。
【００５５】
プロモーターエレメント間の間隔は、柔軟であることが多く、したがって、エレメントが逆位であるか、または互いに連動して移動した場合、プロモーター機能が保存される。個別のエレメントは、プロモーターに応じて、協同的または独立的に機能して転写を活性化し得ると考えられる。プロモーターは、核酸配列の転写活性化に関与するシス作用性調整配列を指す、「エンハンサー」と組み合わせて使用し得るか、または使用し得ない。
【００５６】
プロモーターは、核酸配列と自然に結合しており、コードする領域及び／またはエクソンの上流に位置する５’末端非コード配列を単離することにより得られ得る。このようなプロモーターは、「内在性」のものであると言及され得る。同様に、エンハンサーは、核酸配列と自然に結合しており、その配列の下流または上流に位置し得る。あるいは、コードする核酸領域を組換えまたは異種プロモーターの制御下に置くことにより特定の利点を得る。この組換えまたは異種プロモーターは、その自然環境において核酸配列と通常、結合しないプロモーターを指す。組換えまたは異種エンハンサーはまた、その自然環境において核酸配列と通常、結合しないエンハンサーを指す。このようなプロモーターまたはエンハンサーは、他の遺伝子のプロモーターまたはエンハンサー、及び他の任意のウイルス、または原核もしくは真核細胞から単離したプロモーターまたはエンハンサー、及び「自然発生」でない、すなわち、種々の転写調整領域の種々のエレメント、及び／または発現を変える変異を含有するプロモーターまたはエンハンサーを含み得る。
【００５７】
発現用に選択した細胞小器官、細胞型、組織、器官、または生物のＤＮＡ領域の発現を効果的に方向づけるプロモーター及び／またはエンハンサーを利用することができる。分子生物学の当業者は、タンパク質発現用のプロモーター、エンハンサー、及び細胞型の組合せの使用を一般に理解している。利用するプロモーターは、恒常的、組織特異的、誘導性、及び／または適切な条件下で有用であり、誘導したＤＮＡ領域の高レベルの発現を方向づけ、これにより組換えタンパク質及び／またはペプチドの大規模生産において好都合となり得る。プロモーターは、異種性または内在性であり得る。
【００５８】
プロモーターの非限定的な例としては、ＳＶ４０初期または後期プロモーター、サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）前初期プロモーター、ラウス肉腫ウイルス（ＲＳＶ）初期プロモーター；及び真核細胞プロモーターのような、初期または後期ウイルスプロモーターが挙げられる。
【００５９】
開始シグナル及び関連する発現
特定の開始シグナルはまた、コードする配列の効率的な翻訳のために本開示において提供する発現構築物において使用し得る。このようなシグナルは、ＡＴＧ開始コドンまたは隣接配列を含む。ＡＴＧ開始コドンを含む外因性の翻訳制御シグナルを用意する必要があり得る。当業者は、必要なシグナルを用意することが容易に可能である。開始コドンが、所望のコードする配列のリーディングフレームとともに「インフレーム」であって、全挿入物の翻訳を確実としなければならないことが十分に知られている。外因性の翻訳制御シグナル及び開始コドンは、天然または合成のいずれかであってもよい。発現の効率は、適切な転写エンハンサーエレメントを含むことにより増強し得る。
【００６０】
特定の実施形態では、内部リボソーム侵入部位（ＩＲＥＳ）エレメントの使用は、多重遺伝子、またはポリシストロン性のメッセージを生成するために使用する。ＩＲＥＳエレメントは、５’末端メチル化キャップに依存した翻訳のリボソームスキャニングモデルをバイパスし、内部部位で翻訳を開始することができる（Ｐｅｌｌｅｔｉｅｒら、１９８８年  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  ａｎｄ  Ｃｅｌｌｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ）。ピコルナウイルスファミリーの２つのメンバー（ポリオ及び脳心筋炎ウイルス）由来のＩＲＥＳエレメント（Ｐｅｌｌｅｔｉｅｒら、１９８８年  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  ａｎｄ  Ｃｅｌｌｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ）、ならびに哺乳動物メッセージ由来のＩＲＥＳ（Ｍａｃｅｊａｋら、１９９１年  Ｎａｔｕｒｅ）が報告されている。ＩＲＥＳエレメントは、異種オープンリーディングフレームに結合することができる。複数のオープンリーディングフレームをともに転写し、ＩＲＥＳによりそれぞれ分離して、ポリシストロン性メッセージを生成することができる。ＩＲＥＳエレメントは、各オープンリーディングフレームをリボソームに到達可能として効率的な翻訳を可能とする。複数の遺伝子は、単一のプロモーター／エンハンサーを使用して効率的に発現し、単一のメッセージを転写することができる（それぞれを参照により本明細書において組み込まれる、米国特許第５，９２５，５６５号明細書及び第５，９３５，８１９号明細書）。
【００６１】
ウイルス改変の方法
言及する種々の遺伝子は、遺伝子欠失（複数可）、置換（複数可）、または挿入（複数可）を含む、当分野において周知のいくつかの技術により機能的に不活性とし得る。同様に、ＭＥＭ４０及びＧＭ−ＣＳＦを含む免疫調節遺伝子は、当業者に周知の方法によりウイルスゲノム内に挿入し得る。このような種類の単純ヘルペスウイルスの改変は、相同組換え法によりなされ得る。例えば、ＨＳＶゲノムＤＮＡは、相同ＨＳＶ配列と隣接した変異配列を含むプラスミドベクターとともにトランスフェクトして、親ＨＳＶゲノムＤＮＡ領域の新規変異配列領域とのＤＮＡ組換え及び置換を生じ得る。
【００６２】
キメラヒト／マウスＣＤ４０リガンドを含む複製可能な腫瘍溶解性ウイルスの例示的構築を図１〜４に示す。
【００６３】
図１では、ＭＥＭ４０を発現する複製可能な単純ヘルペスウイルスであるＨＳＶ−ＭＥＭ４０は、模式的に表すように構築され得る。ＣＭＶプロモーターの上流及びウシ成長ホルモンポリアデニル化シグナル（ＰｏｌｙＡ）の下流に隣接するＭＥＭ４０  ｃＤＮＡを含むＭＥＭ−４０発現カセットは、ＩＣＰ３４．５遺伝子コード領域内に挿入する。さらに、ＩＣＰ４７遺伝子を欠失させた。
【００６４】
図２は、ＭＥＭ４０とヒトＧＭ−ＣＳＦの両方を発現する複製可能な単純ヘルペスウイルスであるＨＳＶ−ＭＥＭ４０−ＧＭＣＳＦの構築を模式的に表す。構築は、ＨＳＶ−ＭＥＭ４０（図１）と類似しているが、ヒトＧＭ−ＣＳＦ発現カセットを一方のＩＣＰ３４．５コード領域へ、及びＭＥＭ４０発現カセットを他方のＩＣＰ３４．５遺伝子コード領域へ挿入することを追加する。
【００６５】
図３は、ＭＥＭ４０とヒトＧＭ−ＣＳＦの両方を発現する複製可能な単純ヘルペスウイルスであるＨＳＶ−ＭＥＭ４０−ＧＭＣＳＦの構築を模式的に表す。構築は、ＨＳＶ−ＭＥＭ４０（図１）と類似しているが、ヒトＧＭ−ＣＳＦ発現カセットをＭＥＭ４０発現カセットとともに両ＩＣＰ３４．５遺伝子コード領域へ挿入することを追加する。
【００６６】
図４は、ＭＥＭ４０とヒトＧＭ−ＣＳＦの両方を発現する複製可能な単純ヘルペスウイルスであるＨＳＶ−ＭＥＭ４０−ＩＲＥＳ−ＧＭＣＳＦの構築を模式的に表す。構築は、ＨＳＶ−ＭＥＭ４０−ＧＭＣＳＦ（図２）と類似しているが、ヒトＧＭ−ＣＳＦ及びＭＥＭ４０遺伝子が、同一の発現カセットの一部であって、単一のＣＭＶプロモーターを使用して各タンパク質を同時発現させることが異なる。ＧＭ−ＣＳＦ及びＭＥＭ４０は、内部リボソーム侵入部位（ＩＲＥＳ）配列により分離して、複数の導入遺伝子を同時発現させる。
【００６７】
治療有用性についてウイルスをスクリーニングする方法
本開示の腫瘍溶解性ウイルス、またはその変異体もしくは誘導体は、腫瘍細胞における、その溶解能の試験により、その治療有用性について評価することができる。腫瘍細胞は、患者生検由来または外科的に切除した一次腫瘍細胞を含み得る。あるいは、腫瘍細胞は、腫瘍細胞株を含み得る。本開示のウイルスの細胞溶解活性は、ウイルスの段階希釈物に細胞を感染させて細胞溶解能（すなわちＩＣ５０）を測定することにより腫瘍細胞株においてｉｎ  ｖｉｔｒｏで判定することができる。細胞溶解活性を判定するための特定の方法は、当分野において周知のＭＴＳ、ＭＴＴ及びＡＴＰ比色測定法を含み得るが、これらに限定されない。
【００６８】
本開示の腫瘍溶解性ウイルスの、治療効果を引き起こす治療薬の量と毒性を引き起こす量との比較である治療指数は、腫瘍細胞株におけるウイルスの細胞溶解能の効力を、比較する正常細胞における細胞溶解能と比較することにより算出し得る。
【００６９】
本開示の腫瘍溶解性ウイルスは、腫瘍細胞及び／または正常細胞に感染し、腫瘍溶解性ウイルスによりコードされた機能的キメラヒト／マウスＣＤ４０リガンドポリペプチドを発現する、その能力を評価することにより、治療有用性について、さらに評価することができる。感染した細胞の細胞表面上に発現したキメラヒト／マウスＣＤ４０リガンドは、ヒトまたはマウスＣＤ４０抗体結合領域を特異的に認識する抗体を使用して、フローサイトメトリーにより評価することができる。キメラヒト／マウスＣＤ４０リガンドの機能的活性はまた、ｉｎ  ｖｉｔｒｏバイオアッセイを使用して調べることができ、この場合、キメラヒト／マウスＣＤ４０リガンドをコードする腫瘍溶解性ウイルスに感染した腫瘍または正常細胞は、下流でルシフェラーゼ応答エレメントと融合したＣＤ４０受容体を安定に発現するエフェクター細胞と混合して、誘導されたルシフェラーゼの発現を測定する。
【００７０】
本開示の腫瘍溶解性ウイルスは、同系または異種腫瘍マウスモデルの天然由来もしくは移植した腫瘍を含むマウスにおいて、腫瘍細胞の増殖を標的化するその能力、及び腫瘍形成または腫瘍細胞量を減少させる能力について、さらに評価することができる。腫瘍サイズにより測定する腫瘍量、腫瘍の再負荷からの免疫防御、及び動物生存率は、治療有用性及び動物腫瘍モデルについての万全の評価基準である。
【００７１】
治療及び投与の方法
選択した腫瘍溶解性ウイルス及びキメラヒト／マウスＣＤ４０リガンド（複数可）に関係なく、少なくとも１つのキメラヒト／マウスＣＤ４０リガンドを含む腫瘍溶解性ウイルスは、ウイルスを腫瘍内注射により投与することによって、がん治療に使用し得る。しかし、静脈内、腹腔内、気管内、筋肉内、頭蓋内、内視鏡的、病巣内、経皮的、皮下、局所的、または直接的注射もしくは灌流による経路を含む、他の送達経路がまた考えられる。
【００７２】
いくつかの実施形態では、少なくとも１つのキメラヒト／マウスＣＤ４０リガンドを発現する腫瘍溶解性ウイルスは、患者由来の細胞を培養すること、培養した細胞にウイルスを感染させること、及び感染した細胞を患者の体内に再導入することにより送達し得る。
【００７３】
少なくとも１つのキメラヒト／マウスＣＤ４０リガンドをコードする遺伝子を含む腫瘍溶解性ウイルスを使用した治療計画は、単回投与または複数回投与を含み得る。複数回投与は、反復スケジュールどおりに、及び／あるいは１つもしくは複数の事前投与の有効性、または１つもしくは複数の事前投与の副作用の１つもしくは複数の指標に応じて実施し得、とりわけそれは、本開示の利点を有する当業者に明らかであろう。
【００７４】
少なくとも１つのキメラヒト／マウスＣＤ４０リガンドをコードする導入遺伝子が、誘導性プロモーターの制御下にある実施例では、誘導性分子は、導入遺伝子を含む腫瘍溶解性ウイルスの１回または複数回の投与後に単回投与または複数回投与で患者に投与し得る。誘導性分子は、腫瘍溶解性ウイルスについての上記の送達経路のような任意の送達経路により投与し得る。
【００７５】
理論に拘束されるわけではないが、少なくとも１つのキメラヒト／マウスＣＤ４０リガンドを含む腫瘍溶解性ウイルスは、二重の作用機序：１）がん細胞における腫瘍溶解性ウイルスの選択的ウイルス複製による腫瘍細胞の殺傷と、２）ウイルス免疫誘導とＣＤ４０リガンド免疫活性化の両方により生じる全身性抗腫瘍免疫の誘導とを有し得る。
【００７６】
いくつかの実施形態では、組成物は、薬学的に許容される担体をさらに含む。「薬学的に許容される」は、担体が、患者への投与を意図する医薬における使用に適することを意味する。薬学的に許容される担体は、投与経路、特定の腫瘍溶解性ウイルスに必要とされる保存条件、及び本開示の利点を有する当業者に明らかな他の条件に応じて変化し得る。一実施形態では、薬学的に許容される担体は、生理食塩水であり得る。
【００７７】
さらに他の実施形態では、組成物は、ウイルスが腫瘍細胞へ侵入するためのエンハンサーのようなアジュバント、少なくとも１つのキメラヒト／マウスＣＤ４０リガンドをコードする遺伝子の転写を誘導する誘導性分子であって、この誘導性分子により活性化されたプロモーターの制御下に遺伝子を置く、誘導性分子等を構築物においてさらに含み得る。
【００７８】
追加の療法
いくつかの実施形態では、方法は、キメラヒト／マウスＣＤ４０をコードする腫瘍溶解性ウイルスによる治療を、１つまたは複数の追加の療法とともに、さらに含み得る。追加の療法は、放射線療法、外科的手術（例えば、乳腺腫瘍摘出術または乳房切除術）、化学療法、遺伝子療法、ＤＮＡ療法、ウイルス療法、ＲＮＡ療法、免疫療法、生物学的療法、骨髄移植、ナノ療法、モノクローナル抗体療法、または前述の組合せであり得る。追加の療法は、アジュバントまたはネオアジュバント療法の形態であり得る。
【００７９】
１つまたは複数の追加の療法のうちの任意の１つまたはすべては、腫瘍溶解性ウイルスの投与の前、同時、または後に実施し得る。
【００８０】
いくつかの実施形態では、追加の療法は、１つまたは複数の異種タンパク質を発現するウイルスのような第２のウイルスの投与である。異種タンパク質は、少なくとも１つのキメラヒト／マウスＣＤ４０リガンドを含み得る。一実施形態では、第２のウイルスは、ＭＥＭ４０をコードする非複製アデノウイルスである。
【００８１】
キット製品
キメラヒト／マウスＣＤ４０リガンドをコードする腫瘍溶解性ウイルスを含む製品またはキットをまた、本明細書において提供する。製品またはキットは、キメラヒト／マウスＣＤ４０リガンドをコードする腫瘍溶解性ウイルスを使用して、個人におけるがんの進行を治療もしくは遅延させるか、またはがんを有する個人の免疫機能を増強するための説明書を含む添付文書をさらに含むことができる。本明細書に記載のキメラヒト／マウスＣＤ４０リガンドをコードする腫瘍溶解性ウイルスのいくつかは、製品またはキットに含まれ得る。適した容器は、例えば、ビン、バイアル、バッグ及びシリンジを含む。容器は、ガラス、プラスチック（ポリ塩化ビニルまたはポリオレフィン等）または金属合金（ステンレス鋼等）のような多様な物質から形成し得る。いくつかの実施形態では、容器は、処方剤を保持し、容器上または容器に付随したラベルは、使用方法を示し得る。製品またはキットは、他の緩衝剤、希釈剤、フィルター、ニードル、シリンジ、及び使用説明書を有する添付文書を含む、商業的及び使用者の観点から望ましい他の物質をさらに含み得る。いくつかの実施形態では、製品は、別の薬剤（例えば、化学療法剤、及び抗腫瘍剤）のうちの１つまたは複数をさらに含む。１つまたは複数の薬剤に適した容器は、例えば、ビン、バイアル、バッグ及びシリンジを含む。
【００８２】
本開示は、本明細書における技術の利点を有する当業者に明らかな、様々ではあるが等価な方法で修飾され、実行され得る場合、上記に開示する特定の実施形態は、例示のみのものである。例えば、上記のプロセスステップは、異なる順序で実施し得る。さらに、以下の特許請求の範囲に記載する以外の、本明細書において示す、構成または設計の詳細に限定することを意図していない。したがって、上記に開示する特定の実施形態が、改変または修飾され得ることは明らかであり、このようなすべての変化形は、本開示の範囲及び趣旨に属するとみなされる。したがって、本明細書において求められる保護は、以下の特許請求の範囲に説明するものである。
【００８３】
参考文献
以下の参考文献は、本明細書において説明するものに補足する、例示的方法または他の詳細を提供する限りにおいて、参照により本明細書に詳細に組み込まれる。
【図１】
2020512392.tif 000002
【図２】
2020512392.tif 000003
【図３】
2020512392.tif 000004
【図４】
2020512392.tif 000005
【配列表】
2020512392000001.app
【手続補正書】
【提出日】令和1年9月26日(2019.9.26)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
腫瘍溶解性ウイルスゲノムに挿入された異種核酸を含む腫瘍溶解性ウイルスを含み、
前記核酸が、転写制御エレメントに作動可能に連結するＣＤ４０アゴニストをコードする配列を含む、組成物。
【請求項２】
前記腫瘍溶解性ウイルスが、単純ヘルペスウイルス（ＨＳＶ）、アデノウイルス、ワクシニアウイルス、ポックスウイルス、コクサッキーウイルス、ポリオウイルス、麻疹ウイルス、パルボウイルス、レオウイルス、セネカバレーウイルス、ニューカッスル病ウイルス、レトロウイルス、水疱性口内炎ウイルス、レオウイルス、パラミクソウイルス、シンドビスウイルス、粘液腫ウイルス、マラバウイルス、インフルエンザウイルス、麻疹ウイルス、ムンプスウイルス、アレナウイルス、及びセムリキ森林ウイルスから選択される、請求項１に記載の組成物。
【請求項３】
少なくとも１つの前記ＣＤ４０アゴニストが、キメラヒト／マウスＣＤ４０リガンドである、請求項１に記載の組成物。
【請求項４】
前記転写制御エレメントが、サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）プロモーターである、請求項１に記載の組成物。
【請求項５】
前記腫瘍溶解性ウイルスが、治療タンパク質をコードする１つまたは複数の異種遺伝子をさらに含む、請求項１に記載の組成物。
【請求項６】
腫瘍溶解性ウイルスゲノムに挿入された異種核酸を含む腫瘍溶解性ウイルスを含み、
前記核酸が、転写制御エレメントに作動可能に連結するＣＤ４０アゴニストをコードする配列を含む、腫瘍の治療に使用する組成物。
【請求項７】
前記腫瘍溶解性ウイルスが、単純ヘルペスウイルス（ＨＳＶ）、アデノウイルス、ワクシニアウイルス、ポックスウイルス、コクサッキーウイルス、ポリオウイルス、麻疹ウイルス、パルボウイルス、レオウイルス、セネカバレーウイルス、ニューカッスル病ウイルス、レトロウイルス、水疱性口内炎ウイルス、レオウイルス、パラミクソウイルス、シンドビスウイルス、粘液腫ウイルス、マラバウイルス、インフルエンザウイルス、麻疹ウイルス、ムンプスウイルス、アレナウイルス、及びセムリキ森林ウイルスから選択される、請求項６に記載の腫瘍の治療に使用する組成物。
【請求項８】
前記ＣＤ４０アゴニストが、キメラヒト／マウスＣＤ４０リガンドである、請求項６に記載の腫瘍の治療に使用する組成物。
【請求項９】
前記腫瘍溶解性ウイルスが、治療タンパク質をコードする１つまたは複数の異種遺伝子をさらに含む、請求項６に記載の腫瘍の治療に使用する組成物。
【請求項１０】
前記腫瘍が、原発性または転移性のがんから選択されるがんである、請求項６に記載の腫瘍の治療に使用する組成物。
【請求項１１】
前記組成物が、腫瘍内、静脈内、腹腔内、気管内、筋肉内、頭蓋内、内視鏡的、病巣内、経皮的、皮下、局所的に、または直接注射もしくは灌流により投与するように調製される、請求項６に記載の腫瘍の治療に使用する組成物。
【請求項１２】
腫瘍溶解性ウイルスゲノムに挿入された異種核酸を含む腫瘍溶解性ウイルスであって、前記核酸が、転写制御エレメントに作動可能に連結するＣＤ４０アゴニストをコードする配列を含む腫瘍溶解性ウイルスと、
少なくとも１つの追加の治療薬と、を含む、腫瘍の治療に使用する組成物。
【請求項１３】
前記腫瘍溶解性ウイルスが、単純ヘルペスウイルス（ＨＳＶ）、アデノウイルス、ワクシニアウイルス、ポックスウイルス、コクサッキーウイルス、ポリオウイルス、麻疹ウイルス、パルボウイルス、レオウイルス、セネカバレーウイルス、ニューカッスル病ウイルス、レトロウイルス、水疱性口内炎ウイルス、レオウイルス、パラミクソウイルス、シンドビスウイルス、粘液腫ウイルス、マラバウイルス、インフルエンザウイルス、麻疹ウイルス、ムンプスウイルス、アレナウイルス、及びセムリキ森林ウイルスから選択される、請求項１２に記載の腫瘍の治療に使用する組成物。
【請求項１４】
前記ＣＤ４０アゴニストが、キメラヒト／マウスＣＤ４０リガンドである、請求項１２に記載の腫瘍の治療に使用する組成物。
【請求項１５】
前記少なくとも１つの追加の治療薬が、ＭＥＭ４０をコードする非複製アデノウイルスである、請求項１２に記載の腫瘍の治療に使用する組成物。
療に使用する組成物。
【手続補正２】
【補正対象書類名】図面
【補正対象項目名】全図
【補正方法】変更
【補正の内容】
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【国際調査報告】
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