(57)【要約】抗αｖβ６抗体またはそのαｖβ６結合性断片の製剤及び投薬計画を提供する。これらの製剤は、例えば、線維症（例えば特発性肺線維症）、急性肺損傷及び急性腎損傷の治療において使用される。
2020531521.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
抗αｖβ６抗体またはそのαｖβ６結合性断片と、アルギニン塩酸塩（Ａｒｇ．ＨＣｌ）とを含む医薬組成物であって、前記抗αｖβ６抗体またはそのαｖβ６結合性断片が免疫グロブリン重鎖可変ドメイン（ＶＨ）及び免疫グロブリン軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）を含み、前記ＶＨ及びＶＬがそれぞれ、
（ａ）
ＶＨ−ＣＤＲ１が、配列番号１に示されるアミノ酸配列からなり、
ＶＨ−ＣＤＲ２が、配列番号２に示されるアミノ酸配列からなり、
ＶＨ−ＣＤＲ３が、配列番号３に示されるアミノ酸配列からなる、
ＶＨ相補性決定領域（ＣＤＲ）、及び
（ｂ）
ＶＬ−ＣＤＲ１が、配列番号４に示されるアミノ酸配列からなり、
ＶＬ−ＣＤＲ２が、配列番号５に示されるアミノ酸配列からなり、
ＶＬ−ＣＤＲ３が、配列番号６に示されるアミノ酸配列からなる、
ＶＬ  ＣＤＲ
を含み、前記組成物のｐＨが５．２〜５．７である、前記医薬組成物。
【請求項２】
前記組成物が前記抗αｖβ６抗体またはそのαｖβ６結合性断片を５０〜２００ｍｇ／ｍｌの濃度で含む、請求項１に記載の医薬組成物。
【請求項３】
前記組成物が前記抗αｖβ６抗体またはそのαｖβ６結合性断片を１００〜１７５ｍｇ／ｍｌの濃度で含む、請求項１に記載の医薬組成物。
【請求項４】
前記組成物が前記抗αｖβ６抗体またはそのαｖβ６結合性断片を１５０ｍｇ／ｍｌの濃度で含む、請求項１に記載の医薬組成物。
【請求項５】
前記組成物がＡｒｇ．ＨＣｌを５０〜２５０ｍＭの濃度で含む、請求項１〜４のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【請求項６】
前記組成物がＡｒｇ．ＨＣｌを１００〜２００ｍＭの濃度で含む、請求項１〜４のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【請求項７】
前記組成物がＡｒｇ．ＨＣｌを１５０ｍＭの濃度で含む、請求項１〜４のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【請求項８】
前記組成物がメチオニンを含む、請求項１〜７のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【請求項９】
前記組成物がメチオニンを０．５〜３０ｍＭの濃度で含む、請求項８に記載の医薬組成物。
【請求項１０】
前記組成物がメチオニンを１〜１０ｍＭの濃度で含む、請求項８に記載の医薬組成物。
【請求項１１】
前記組成物がメチオニンを５ｍＭの濃度で含む、請求項８に記載の医薬組成物。
【請求項１２】
前記組成物がポリソルベート８０（ＰＳ８０）を含む、請求項１〜１１のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【請求項１３】
前記組成物がＰＳ８０を０．０１〜０．１％の濃度で含む、請求項１２に記載の医薬組成物。
【請求項１４】
前記組成物がＰＳ８０を０．０３〜０．０８％の濃度で含む、請求項１２に記載の医薬組成物。
【請求項１５】
前記組成物がＰＳ８０を０．０５％の濃度で含む、請求項１２に記載の医薬組成物。
【請求項１６】
前記組成物がクエン酸ナトリウム及びクエン酸を含む、請求項１〜１５のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【請求項１７】
前記組成物がクエン酸ナトリウム及びクエン酸を５〜３０ｍＭの濃度で含む、請求項１６に記載の医薬組成物。
【請求項１８】
前記組成物がクエン酸ナトリウム及びクエン酸を１５〜２５ｍＭの濃度で含む、請求項１６に記載の医薬組成物。
【請求項１９】
前記組成物がクエン酸ナトリウム及びクエン酸を２０ｍＭの濃度で含む、請求項１６に記載の医薬組成物。
【請求項２０】
前記組成物のｐＨが５．３〜５．６である、請求項１〜１９のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【請求項２１】
前記組成物のｐＨが５．５である、請求項１〜１９のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【請求項２２】
前記組成物がチオール含有酸化防止剤を含む、請求項１〜２１のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【請求項２３】
前記チオール含有酸化防止剤が、ＧＳＨ、ＧＳＳＧ、ＧＳＨとＧＳＳＧとの組合せ、シスチン、システイン、及びシステインとシスチンとの組合せからなる群から選択される、請求項２２に記載の医薬組成物。
【請求項２４】
前記チオール含有酸化防止剤がＧＳＨである、請求項２２に記載の医薬組成物。
【請求項２５】
前記チオール含有酸化防止剤がＧＳＳＧである、請求項２２に記載の医薬組成物。
【請求項２６】
前記チオール含有酸化防止剤がＧＳＨとＧＳＳＧとの組合せである、請求項２２に記載の医薬組成物。
【請求項２７】
前記チオール含有酸化防止剤の濃度が０．０２〜２ｍＭである、請求項２２〜２６のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【請求項２８】
前記チオール含有酸化防止剤の濃度が０．２ｍＭである、請求項２２〜２６のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【請求項２９】
前記チオール含有酸化防止剤の濃度が０．４ｍＭである、請求項２２〜２６のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【請求項３０】
前記チオール含有酸化防止剤の濃度が１ｍＭである、請求項２２〜２６のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【請求項３１】
前記ＧＳＨの濃度が０．４ｍＭであり、前記ＧＳＳＧの濃度が０．２ｍＭである、請求項２６に記載の医薬組成物。
【請求項３２】
１２５〜１７５ｍｇ／ｍｌの濃度の前記抗αｖβ６抗体または前記そのαｖβ６結合性断片、
１２５〜１７５ｍＭの濃度のＡｒｇ．ＨＣｌ、
１〜１０ｍＭの濃度のメチオニン、
１５〜２５ｍＭの濃度のクエン酸ナトリウム及びクエン酸、ならびに
０．０３〜０．０８％の濃度のＰＳ８０
を含み、前記組成物のｐＨが５．３〜５．７である、請求項１に記載の医薬組成物。
【請求項３３】
１２５〜１７５ｍｇ／ｍｌの濃度の前記抗αｖβ６抗体または前記そのαｖβ６結合性断片、
１２５〜１７５ｍＭの濃度のＡｒｇ．ＨＣｌ、
１〜１０ｍＭの濃度のメチオニン、
１５〜２５ｍＭの濃度のクエン酸ナトリウム及びクエン酸、
０．０２〜２ｍＭの濃度のチオール含有酸化防止剤、ならびに
０．０３〜０．０８％の濃度のＰＳ８０
を含み、前記組成物のｐＨが５．３〜５．７である、請求項１に記載の医薬組成物。
【請求項３４】
１５０ｍｇ／ｍｌの濃度の前記抗αｖβ６抗体または前記そのαｖβ６結合性断片、
１５０ｍＭの濃度のＡｒｇ．ＨＣｌ、
５ｍＭの濃度のメチオニン、
２０ｍＭの濃度のクエン酸ナトリウム及びクエン酸、ならびに
０．０５％の濃度のＰＳ８０
を含み、前記組成物のｐＨが５．５である、請求項１に記載の医薬組成物。
【請求項３５】
１５０ｍｇ／ｍｌの濃度の前記抗αｖβ６抗体または前記そのαｖβ６結合性断片、
１５０ｍＭの濃度のＡｒｇ．ＨＣｌ、
５ｍＭの濃度のメチオニン、
２０ｍＭの濃度のクエン酸ナトリウム及びクエン酸、
０．４ｍＭの濃度のＧＳＨ、０．４ｍＭの濃度のシステイン、０．２ｍＭの濃度のＧＳＳＧ、０．２ｍＭの濃度のシスチン、０．２ｍＭの濃度のＧＳＳＨと０．４ｍＭの濃度の濃度のＧＳＳＧ、ならびに０．４ｍＭの濃度のシステインと０．２ｍＭの濃度のシスチンからなる群から選択される、チオール含有酸化防止剤、ならびに
０．０５％の濃度のＰＳ８０
を含み、前記組成物のｐＨが５．５である、請求項１に記載の医薬組成物。
【請求項３６】
（ｉ）前記ＶＨが、配列番号７と少なくとも８０％同一である配列からなり、前記ＶＬが、配列番号８と少なくとも８０％同一である配列からなるか、
（ｉｉ）前記ＶＨが、配列番号７と少なくとも９０％同一である配列からなり、前記ＶＬが、配列番号８と少なくとも９０％同一である配列からなるか、または
（ｉｉｉ）前記ＶＨが、配列番号７に示されるアミノ酸配列からなり、前記ＶＬが、配列番号８に示されるアミノ酸配列からなる、
請求項１〜３５のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【請求項３７】
前記抗αｖβ６抗体が免疫グロブリン重鎖及び免疫グロブリン軽鎖を含み、
（ｉ）前記重鎖が、配列番号９と少なくとも８０％同一である配列からなり、前記軽鎖が、配列番号１０と少なくとも８０％同一である配列からなるか、
（ｉｉ）前記重鎖が、配列番号９と少なくとも９０％同一である配列からなり、前記軽鎖が、配列番号１０と少なくとも９０％同一である配列からなるか、または
（ｉｉｉ）前記重鎖が、配列番号９に示されるアミノ酸配列からなり、前記軽鎖が、配列番号１０に示されるアミノ酸配列からなる、
請求項１〜３６のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【請求項３８】
線維症、急性肺損傷及び急性腎損傷からなる群から選択される症状の治療を、それを必要とするヒト対象において行う方法であって、
請求項１〜３７のいずれか１項に記載の医薬組成物を前記ヒト対象に投与すること
を含む、前記方法。
【請求項３９】
前記症状が線維症である、請求項３８に記載の方法。
【請求項４０】
前記線維症が肺線維症である、請求項３９に記載の方法。
【請求項４１】
前記肺線維症が特発性肺線維症である、請求項４０に記載の方法。
【請求項４２】
前記医薬組成物が前記ヒト対象に皮下投与される、請求項３８〜４１のいずれか１項に記載の方法。
【請求項４３】
前記医薬組成物の前記抗αｖβ６抗体またはそのαｖβ６結合性断片が４０ｍｇの用量で週に１回、前記ヒト対象に投与される、請求項３８〜４２のいずれか１項に記載の方法。
【請求項４４】
前記医薬組成物の前記抗αｖβ６抗体またはそのαｖβ６結合性断片が４８ｍｇの用量で週に１回、前記ヒト対象に投与される、請求項３８〜４２のいずれか１項に記載の方法。
【請求項４５】
前記医薬組成物の前記抗αｖβ６抗体またはそのαｖβ６結合性断片が５６ｍｇの用量で週に１回、前記ヒト対象に投与される、請求項３８〜４２のいずれか１項に記載の方法。
【請求項４６】
前記医薬組成物の前記抗αｖβ６抗体またはそのαｖβ６結合性断片が６４ｍｇの用量で週に１回、前記ヒト対象に投与される、請求項３８〜４２のいずれか１項に記載の方法。
【請求項４７】
前記医薬組成物の前記抗αｖβ６抗体またはそのαｖβ６結合性断片が０．５〜０．８ｍｇ／ｋｇの用量で週に１回、前記ヒト対象に投与される、請求項３８〜４２のいずれか１項に記載の方法。
【請求項４８】
前記医薬組成物の前記抗αｖβ６抗体またはそのαｖβ６結合性断片が０．５ｍｇ／ｋｇの用量で週に１回、前記ヒト対象に投与される、請求項３８〜４２のいずれか１項に記載の方法。
【請求項４９】
前記医薬組成物の前記抗αｖβ６抗体またはそのαｖβ６結合性断片が０．６ｍｇ／ｋｇの用量で週に１回、前記ヒト対象に投与される、請求項３８〜４２のいずれか１項に記載の方法。
【請求項５０】
前記医薬組成物の前記抗αｖβ６抗体またはそのαｖβ６結合性断片が０．７ｍｇ／ｋｇの用量で週に１回、前記ヒト対象に投与される、請求項３８〜４２のいずれか１項に記載の方法。
【請求項５１】
前記医薬組成物の前記抗αｖβ６抗体またはそのαｖβ６結合性断片が０．８ｍｇ／ｋｇの用量で週に１回、前記ヒト対象に投与される、請求項３８〜４２のいずれか１項に記載の方法。
【請求項５２】
線維症、急性肺損傷及び急性腎損傷からなる群から選択される症状の治療を、それを必要とするヒト対象において行う方法であって、
抗αｖβ６抗体またはそのαｖβ６結合性断片を４０ｍｇの用量で毎週１回、前記ヒト対象に皮下投与すること
を含み、前記抗αｖβ６抗体またはそのαｖβ６結合性断片が免疫グロブリン重鎖可変ドメイン（ＶＨ）及び免疫グロブリン軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）を含み、前記ＶＨ及びＶＬがそれぞれ、
（ａ）
ＶＨ−ＣＤＲ１が、配列番号１に示されるアミノ酸配列からなり、
ＶＨ−ＣＤＲ２が、配列番号２に示されるアミノ酸配列からなり、
ＶＨ−ＣＤＲ３が、配列番号３に示されるアミノ酸配列からなる、
ＶＨ相補性決定領域（ＣＤＲ）、及び
（ｂ）
ＶＬ−ＣＤＲ１が、配列番号４に示されるアミノ酸配列からなり、
ＶＬ−ＣＤＲ２が、配列番号５に示されるアミノ酸配列からなり、
ＶＬ−ＣＤＲ３が、配列番号６に示されるアミノ酸配列からなる、
ＶＬ  ＣＤＲ
を含む、前記方法。
【請求項５３】
線維症、急性肺損傷及び急性腎損傷からなる群から選択される症状の治療を、それを必要とするヒト対象において行う方法であって、
抗αｖβ６抗体またはそのαｖβ６結合性断片を４８ｍｇの用量で毎週１回、前記ヒト対象に皮下投与すること
を含み、前記抗αｖβ６抗体またはそのαｖβ６結合性断片が免疫グロブリン重鎖可変ドメイン（ＶＨ）及び免疫グロブリン軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）を含み、前記ＶＨ及びＶＬがそれぞれ、
（ａ）
ＶＨ−ＣＤＲ１が、配列番号１に示されるアミノ酸配列からなり、
ＶＨ−ＣＤＲ２が、配列番号２に示されるアミノ酸配列からなり、
ＶＨ−ＣＤＲ３が、配列番号３に示されるアミノ酸配列からなる、
ＶＨ相補性決定領域（ＣＤＲ）、及び
（ｂ）
ＶＬ−ＣＤＲ１が、配列番号４に示されるアミノ酸配列からなり、
ＶＬ−ＣＤＲ２が、配列番号５に示されるアミノ酸配列からなり、
ＶＬ−ＣＤＲ３が、配列番号６に示されるアミノ酸配列からなる、
ＶＬ  ＣＤＲ
を含む、前記方法。
【請求項５４】
線維症、急性肺損傷及び急性腎損傷からなる群から選択される症状の治療を、それを必要とするヒト対象において行う方法であって、
抗αｖβ６抗体またはそのαｖβ６結合性断片を５６ｍｇの用量で毎週１回、前記ヒト対象に皮下投与すること
を含み、前記抗αｖβ６抗体またはそのαｖβ６結合性断片が免疫グロブリン重鎖可変ドメイン（ＶＨ）及び免疫グロブリン軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）を含み、前記ＶＨ及びＶＬがそれぞれ、
（ａ）
ＶＨ−ＣＤＲ１が、配列番号１に示されるアミノ酸配列からなり、
ＶＨ−ＣＤＲ２が、配列番号２に示されるアミノ酸配列からなり、
ＶＨ−ＣＤＲ３が、配列番号３に示されるアミノ酸配列からなる、
ＶＨ相補性決定領域（ＣＤＲ）、及び
（ｂ）
ＶＬ−ＣＤＲ１が、配列番号４に示されるアミノ酸配列からなり、
ＶＬ−ＣＤＲ２が、配列番号５に示されるアミノ酸配列からなり、
ＶＬ−ＣＤＲ３が、配列番号６に示されるアミノ酸配列からなる、
ＶＬ  ＣＤＲ
を含む、前記方法。
【請求項５５】
線維症、急性肺損傷及び急性腎損傷からなる群から選択される症状の治療を、それを必要とするヒト対象において行う方法であって、
抗αｖβ６抗体またはそのαｖβ６結合性断片を６４ｍｇの用量で毎週１回、前記ヒト対象に皮下投与すること
を含み、前記抗αｖβ６抗体またはそのαｖβ６結合性断片が免疫グロブリン重鎖可変ドメイン（ＶＨ）及び免疫グロブリン軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）を含み、前記ＶＨ及びＶＬがそれぞれ、
（ａ）
ＶＨ−ＣＤＲ１が、配列番号１に示されるアミノ酸配列からなり、
ＶＨ−ＣＤＲ２が、配列番号２に示されるアミノ酸配列からなり、
ＶＨ−ＣＤＲ３が、配列番号３に示されるアミノ酸配列からなる、
ＶＨ相補性決定領域（ＣＤＲ）、及び
（ｂ）
ＶＬ−ＣＤＲ１が、配列番号４に示されるアミノ酸配列からなり、
ＶＬ−ＣＤＲ２が、配列番号５に示されるアミノ酸配列からなり、
ＶＬ−ＣＤＲ３が、配列番号６に示されるアミノ酸配列からなる、
ＶＬ  ＣＤＲ
を含む、前記方法。
【請求項５６】
前記ヒト対象に前記抗αｖβ６抗体またはその抗原結合性断片の用量が少なくとも４回投与される、請求項５２〜５５のいずれか１項に記載の方法。
【請求項５７】
前記ヒト対象に前記抗αｖβ６抗体またはその抗原結合性断片の用量が少なくとも７回投与される、請求項５２〜５５のいずれか１項に記載の方法。
【請求項５８】
前記ヒト対象に前記抗αｖβ６抗体またはその抗原結合性断片の用量が少なくとも１０回投与される、請求項５２〜５５のいずれか１項に記載の方法。
【請求項５９】
（ｉ）前記ＶＨが、配列番号７と少なくとも８０％同一である配列からなり、前記ＶＬが、配列番号８と少なくとも８０％同一である配列からなるか、
（ｉｉ）前記ＶＨが、配列番号７と少なくとも９０％同一である配列からなり、前記ＶＬが、配列番号８と少なくとも９０％同一である配列からなるか、または
（ｉｉｉ）前記ＶＨが、配列番号７に示されるアミノ酸配列からなり、前記ＶＬが、配列番号８に示されるアミノ酸配列からなる、
請求項５２〜５８のいずれか１項に記載の方法。
【請求項６０】
前記抗αｖβ６抗体が免疫グロブリン重鎖及び免疫グロブリン軽鎖を含み、
（ｉ）前記重鎖が、配列番号９と少なくとも８０％同一である配列からなり、前記軽鎖が、配列番号１０と少なくとも８０％同一である配列からなるか、
（ｉｉ）前記重鎖が、配列番号９と少なくとも９０％同一である配列からなり、前記軽鎖が、配列番号１０と少なくとも９０％同一である配列からなるか、または
（ｉｉｉ）前記重鎖が、配列番号９に示されるアミノ酸配列からなり、前記軽鎖が、配列番号１０に示されるアミノ酸配列からなる、
請求項５２〜５９のいずれか１項に記載の方法。
【請求項６１】
前記症状が線維症である、請求項５２〜６０のいずれか１項に記載の方法。
【請求項６２】
前記線維症が肺線維症である、請求項６１に記載の方法。
【請求項６３】
前記肺線維症が特発性肺線維症である、請求項６２に記載の方法。
【請求項６４】
４０ｍｇ、４８ｍｇ、５６ｍｇまたは６４ｍｇの固定用量の前記抗αｖβ６抗体またはそのαｖβ６結合性断片の皮下投与に適合した、請求項１〜３７のいずれか１項に記載の医薬組成物の無菌調合物を含むシリンジまたはポンプ。
【請求項６５】
請求項１〜３７のいずれか１項に記載の医薬組成物の無菌調合物を０．５〜５．０ｍＬ含むシリンジまたはポンプ。
【請求項６６】
抗αｖβ６抗体またはそのαｖβ６結合性断片の無菌調合物を含むシリンジまたはポンプであって、４０ｍｇ、４８ｍｇ、５６ｍｇまたは６４ｍｇの固定用量の前記抗αｖβ６抗体またはそのαｖβ６結合性断片の皮下投与に適合しており、前記抗αｖβ６抗体またはそのαｖβ６結合性断片が免疫グロブリン重鎖可変ドメイン（ＶＨ）及び免疫グロブリン軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）を含み、前記ＶＨ及びＶＬがそれぞれ、
（ａ）
ＶＨ−ＣＤＲ１が、配列番号１に示されるアミノ酸配列からなり、
ＶＨ−ＣＤＲ２が、配列番号２に示されるアミノ酸配列からなり、
ＶＨ−ＣＤＲ３が、配列番号３に示されるアミノ酸配列からなる、
ＶＨ相補性決定領域（ＣＤＲ）、及び
（ｂ）
ＶＬ−ＣＤＲ１が、配列番号４に示されるアミノ酸配列からなり、
ＶＬ−ＣＤＲ２が、配列番号５に示されるアミノ酸配列からなり、
ＶＬ−ＣＤＲ３が、配列番号６に示されるアミノ酸配列からなる、
ＶＬ  ＣＤＲ
を含む、前記シリンジまたはポンプ。
【請求項６７】
（ｉ）前記ＶＨが、配列番号７と少なくとも８０％同一である配列からなり、前記ＶＬが、配列番号８と少なくとも８０％同一である配列からなるか、
（ｉｉ）前記ＶＨが、配列番号７と少なくとも９０％同一である配列からなり、前記ＶＬが、配列番号８と少なくとも９０％同一である配列からなるか、または
（ｉｉｉ）前記ＶＨが、配列番号７に示されるアミノ酸配列からなり、前記ＶＬが、配列番号８に示されるアミノ酸配列からなる、
請求項６６に記載のシリンジまたはポンプ。
【請求項６８】
前記抗αｖβ６抗体が免疫グロブリン重鎖及び免疫グロブリン軽鎖を含み、
（ｉ）前記重鎖が、配列番号９と少なくとも８０％同一である配列からなり、前記軽鎖が、配列番号１０と少なくとも８０％同一である配列からなるか、
（ｉｉ）前記重鎖が、配列番号９と少なくとも９０％同一である配列からなり、前記軽鎖が、配列番号１０と少なくとも９０％同一である配列からなるか、または
（ｉｉｉ）前記重鎖が、配列番号９に示されるアミノ酸配列からなり、前記軽鎖が、配列番号１０に示されるアミノ酸配列からなる、
請求項６６または請求項６７に記載のシリンジまたはポンプ。
【請求項６９】
前記方法がさらに、前記ヒト対象に治療的有効量のピルフェニドン（ｐｒｉｆｅｎｉｄｏｎｅ）またはニンテダニブを投与することを含む、請求項３８〜６３のいずれか１項に記載の方法。
【請求項７０】
前記ヒト対象にピルフェニドン（ｐｒｉｆｅｎｉｄｏｎｅ）が以下：
【化９】
2020531521.tif 000038
のとおりに投与される、請求項６９に記載の方法。
【請求項７１】
前記ヒト対象に１５０ｍｇの固定用量のニンテダニブが１日２回投与される、請求項６９に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願の相互参照
本願は、２０１７年８月２２日に出願された米国仮出願第６２／５４８，７７２号の優先権の利益を主張するものであり、参照によりその内容全体を本明細書に援用する。
【０００２】
分野
本願は、総じて、抗αｖβ６抗体を含む医薬組成物及び臨床使用のための投薬計画、ならびにその用途に関する。
【背景技術】
【０００３】
インテグリンは細胞表面糖タンパク質受容体のスーパーファミリーであり、細胞外マトリックスタンパク質に結合し、細胞−細胞、及び細胞−細胞外マトリックス相互作用（一般に細胞接着事象と呼ばれる）を媒介する。これらの受容体は、非共有結合的に会合したアルファ（α）及びベータ（β）鎖から構成されるが、これらが組み合わさって、別個な細胞特異性及び接着特異性を有する様々な異種二量体タンパク質を生み出している。インテグリンは、細胞接着、遊走、侵入、分化、増殖、アポトーシス及び遺伝子発現を含めた様々な細胞プロセスを調節する。
【０００４】
αｖβ６受容体は、細胞表面異種二量体タンパク質として発現するインテグリンのファミリーの一メンバーである。αｖサブユニットが様々なβサブユニット（β１、β３、β５、β６及びβ８）と異種二量体を形成することができるとはいえ、αｖサブユニットとの異種二量体として発現することはβ６サブユニットにしかできない。αｖβ６インテグリンは、フィブロネクチン、ビトロネクチン、潜在関連ペプチド（ＬＡＰ）及びテネイシンＣに結合する細胞表面受容体であることが知られており、細胞外マトリックス上のＲＧＤトリペプチド結合部位を介してそれと相互作用する。αｖβ６の発現は上皮細胞に限定されており、健常組織では比較的低いレベルで発現し、発達、損傷及び創傷治癒の間は著しく上方制御される。
【０００５】
ＬＡＰに対するαｖβ６の結合はＴＧＦ−βからその活性状態への変換において重要であるので、結合を遮断すると、αｖβ６によって媒介されるＴＧＦ−βの活性化、及び関連する線維性病態が抑制され得る。
【０００６】
αｖβ６に結合する高親和性アンタゴニスト抗体は、ＴＧＦ−β関連障害の治療に有用であることが示されている。
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【０００７】
本開示は、一部において、抗αｖβ６抗体またはそのαｖβ６結合性断片を含有する組成物ならびに、とりわけ線維症、急性肺損傷及び急性腎損傷の治療におけるそれらの用途に関する。
【０００８】
一態様において、本開示は、抗αｖβ６抗体またはそのαｖβ６結合性断片と、アルギニン塩酸塩（Ａｒｇ．ＨＣｌ）とを含む医薬組成物を特徴とする。抗αｖβ６抗体またはそのαｖβ６結合性断片が免疫グロブリン重鎖可変ドメイン（ＶＨ）及び免疫グロブリン軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）を含む。場合によっては、ＶＨはＶＨ相補性決定領域（ＶＨ−ＣＤＲ）を含み、ここで、ＶＨ−ＣＤＲ１は、配列番号１または１１に示されるアミノ酸配列を含むかまたはそれからなり、ＶＨ−ＣＤＲ２は、配列番号２に示されるアミノ酸配列を含むかまたはそれからなり、ＶＨ−ＣＤＲ３は、配列番号３に示されるアミノ酸配列を含むかまたはそれからなり、また、ＶＬはＶＬ−ＣＤＲを含み、ここで、ＶＬ−ＣＤＲ１は、配列番号４に示されるアミノ酸配列を含むかまたはそれからなり、ＶＬ−ＣＤＲ２は、配列番号５に示されるアミノ酸配列を含むかまたはそれからなり、ＶＬ−ＣＤＲ３は、配列番号６に示されるアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる。組成物のｐＨは５．２〜５．７である。
【０００９】
特定の実施形態では、組成物は、抗αｖβ６抗体またはそのαｖβ６結合性断片を５０〜２００ｍｇ／ｍｌの濃度で含む。他の実施形態では、組成物は、抗αｖβ６抗体またはそのαｖβ６結合性断片を１００〜１７５ｍｇ／ｍｌの濃度で含む。他の実施形態では、組成物は、抗αｖβ６抗体またはそのαｖβ６結合性断片を１２５〜１７５ｍｇ／ｍｌの濃度で含む。さらに他の実施形態では、組成物は、抗αｖβ６抗体またはそのαｖβ６結合性断片を１５０ｍｇ／ｍｌの濃度で含む。
【００１０】
特定の実施形態では、組成物はＡｒｇ．ＨＣｌを５０〜２５０ｍＭの濃度で含む。別の実施形態では、組成物はＡｒｇ．ＨＣｌを１００〜２００ｍＭの濃度で含む。他の実施形態では、組成物はＡｒｇ．ＨＣｌを１２５〜１７５ｍＭの濃度で含む。さらに別の実施形態では、組成物はＡｒｇ．ＨＣｌを１５０ｍＭの濃度で含む。
【００１１】
特定の実施形態では、組成物はメチオニンを含む。ある場合には、組成物はメチオニンを０．５〜３０ｍＭの濃度で含む。他の例では、組成物はメチオニンを１〜１０ｍＭの濃度で含む。さらに他の例では、組成物はメチオニンを５ｍＭの濃度で含む。
【００１２】
特定の実施形態では、組成物はポリソルベート８０（ＰＳ８０）を含む。ある場合には、組成物はＰＳ８０を０．０１〜０．１％の濃度で含む。他の例では、組成物はＰＳ８０を０．０３〜０．０８％の濃度で含む。さらに他の例では、組成物はＰＳ８０を０．０５％の濃度で含む。
【００１３】
特定の実施形態では、組成物はクエン酸ナトリウム及びクエン酸を含む。場合によっては、組成物はクエン酸ナトリウム及びクエン酸を５〜３０ｍＭの濃度で含む。他の例では、組成物はクエン酸ナトリウム及びクエン酸を１５〜２５ｍＭの濃度で含む。他の例では、組成物はクエン酸ナトリウム及びクエン酸を２０ｍＭの濃度で含む。
【００１４】
特定の実施形態では、組成物のｐＨは５．３〜５．６である。一実施形態では、組成物のｐＨは５．５である。
【００１５】
特定の実施形態では、組成物はチオール含有酸化防止剤を含む。ある場合には、チオール含有酸化防止剤は、ＧＳＨ、ＧＳＳＧ、ＧＳＨとＧＳＳＧとの組合せ、シスチン、システイン、及びシステインとシスチンとの組合せからなる群から選択される。一例において、チオール含有酸化防止剤はＧＳＨである。一例において、チオール含有酸化防止剤はＧＳＳＧである。一例において、チオール含有酸化防止剤はＧＳＨとＧＳＳＧである。一例において、チオール含有酸化防止剤はシステインである。一例において、チオール含有酸化防止剤はシスチンである。一例において、チオール含有酸化防止剤はシステインとシスチンである。特定の実施形態では、チオール含有酸化防止剤は組成物中に０．０２〜２ｍＭの濃度で存在する。ある場合には、チオール含有酸化防止剤は組成物中に０．２ｍＭの濃度で存在する。他の例では、チオール含有酸化防止剤は組成物中に０．４ｍＭの濃度で存在する。さらに他の例では、チオール含有酸化防止剤は組成物中に１．０ｍＭの濃度で存在する。チオール含有酸化防止剤がＧＳＨとＧＳＳＧである場合、前者は０．４ｍＭの濃度で存在し、後者は０．２ｍＭの濃度で存在する。チオール含有酸化防止剤がシステインとシスチンである場合、前者は０．４ｍＭの濃度で存在し、後者は０．２ｍＭの濃度で存在する。
【００１６】
いくつかの実施形態では、医薬組成物は、１２５〜１７５ｍｇ／ｍｌの濃度の抗αｖβ６抗体またはそのαｖβ６結合性断片、１２５〜１７５ｍＭの濃度のＡｒｇ．ＨＣｌ、１〜１０ｍＭの濃度のメチオニン、１５〜２５ｍＭの濃度のクエン酸ナトリウム及びクエン酸、ならびに０．０３〜０．０８％の濃度のＰＳ８０を含む。組成物のｐＨは５．３〜５．７である。
【００１７】
いくつかの実施形態では、医薬組成物は、１２５〜１７５ｍｇ／ｍｌの濃度の抗αｖβ６抗体またはそのαｖβ６結合性断片、１２５〜１７５ｍＭの濃度のＡｒｇ．ＨＣｌ、１〜１０ｍＭの濃度のメチオニン、１５〜２５ｍＭの濃度のクエン酸ナトリウム及びクエン酸、０．０２〜２ｍＭの濃度のチオール含有酸化防止剤、ならびに０．０３〜０．０８％の濃度のＰＳ８０を含む。組成物のｐＨは５．３〜５．７である。
【００１８】
いくつかの実施形態では、１２５〜１７５ｍｇ／ｍｌの濃度の抗αｖβ６抗体またはそのαｖβ６結合性断片、１２５〜１７５ｍＭの濃度のＡｒｇ．ＨＣｌ、１５〜２５ｍＭの濃度のクエン酸ナトリウム緩衝剤（クエン酸ナトリウム及びクエン酸）、０．０２〜２ｍＭの濃度のチオール含有酸化防止剤、ならびに０．０３〜０．０８％の濃度のＰＳ８０を含む。組成物のｐＨは５．３〜５．７である。
【００１９】
いくつかの実施形態では、医薬組成物は、１５０ｍｇ／ｍｌの濃度の抗αｖβ６抗体またはそのαｖβ６結合性断片、１５０ｍＭの濃度のＡｒｇ．ＨＣｌ、５ｍＭの濃度のメチオニン、２０ｍＭの濃度のクエン酸ナトリウム及びクエン酸、ならびに０．０３〜０．０８％の濃度のＰＳ８０を含む。組成物のｐＨは５．５である。
【００２０】
いくつかの実施形態では、医薬組成物は、１５０ｍｇ／ｍｌの濃度の抗αｖβ６抗体またはそのαｖβ６結合性断片、１５０ｍＭの濃度のＡｒｇ．ＨＣｌ、５ｍＭの濃度のメチオニン、２０ｍＭの濃度のクエン酸ナトリウム及びクエン酸、０．４ｍＭの濃度のＧＳＨまたはシステイン、ならびに０．０３〜０．０８％の濃度のＰＳ８０を含む。組成物のｐＨは５．５である。
【００２１】
特定の実施形態では、ＶＨは、配列番号７と少なくとも８０％、少なくとも９０％、または１００％同一である配列からなり、ＶＬは、配列番号８と少なくとも８０％、少なくとも９０％、または１００％同一である配列からなる。
【００２２】
特定の実施形態では、重鎖は、配列番号９と少なくとも８０％、少なくとも９０％、または１００％同一である配列からなり、軽鎖は、配列番号１０と少なくとも８０％、少なくとも９０％、または１００％同一である配列からなる。
【００２３】
本開示はまた、αｖβ６によって媒介される症状の治療を、それを必要とするヒト対象において行う方法を特徴とする。方法は、本明細書に記載の医薬組成物をヒト対象に投与することを含む。場合によっては、αｖβ６によって媒介される症状は線維症である。具体的な実施形態では、線維症は、肺線維症、腎線維症、肝線維症または心臓線維症である。ある実施形態では、線維症は特発性肺線維症である。別の例では、αｖβ６によって媒介される症状は急性肺損傷である。別の例では、αｖβ６によって媒介される症状は急性腎損傷である。特定の実施形態では、医薬組成物はヒト対象に皮下投与される。ある場合には、医薬組成物の抗αｖβ６抗体またはそのαｖβ６結合性断片は４０〜６４ｍｇの用量で週に１回、ヒト対象に投与される。ある場合には、医薬組成物の抗αｖβ６抗体またはそのαｖβ６結合性断片は４０ｍｇの用量で週に１回、ヒト対象に投与される。ある場合には、医薬組成物の抗αｖβ６抗体またはそのαｖβ６結合性断片は４８ｍｇの用量で週に１回、ヒト対象に投与される。ある場合には、医薬組成物の抗αｖβ６抗体またはそのαｖβ６結合性断片は５６ｍｇの用量で週に１回、ヒト対象に投与される。ある場合には、医薬組成物の抗αｖβ６抗体またはそのαｖβ６結合性断片は６４ｍｇの用量で週に１回、ヒト対象に投与される。ある場合には、医薬組成物の抗αｖβ６抗体またはそのαｖβ６結合性断片は０．５〜０．８ｍｇ／ｋｇの用量で週に１回、ヒト対象に投与される。場合によっては、医薬組成物の抗αｖβ６抗体またはそのαｖβ６結合性断片は０．５ｍｇ／ｋｇの用量で週に１回、ヒト対象に投与される。場合によっては、医薬組成物の抗αｖβ６抗体またはそのαｖβ６結合性断片は０．６ｍｇ／ｋｇの用量で週に１回、ヒト対象に投与される。場合によっては、医薬組成物の抗αｖβ６抗体またはそのαｖβ６結合性断片は０．７ｍｇ／ｋｇの用量で週に１回、ヒト対象に投与される。場合によっては、医薬組成物の抗αｖβ６抗体またはそのαｖβ６結合性断片は０．８ｍｇ／ｋｇの用量で週に１回、ヒト対象に投与される。
【００２４】
別の態様では、本開示は、線維症、急性肺損傷及び急性腎損傷からなる群から選択されるαｖβ６によって媒介される症状の治療を、それを必要とするヒト対象において行う方法を提供する。方法は、抗αｖβ６抗体またはそのαｖβ６結合性断片を４０〜６４ｍｇの用量で毎週１回、ヒト対象に皮下投与することを含む。抗αｖβ６抗体またはそのαｖβ６結合性断片はＶＨ及びＶＬを含む。ＶＨは、ＶＨ−ＣＤＲ１が、配列番号１または１１に示されるアミノ酸配列を含むかまたはそれからなり、ＶＨ−ＣＤＲ２が、配列番号２に示されるアミノ酸配列を含むかまたはそれからなり、ＶＨ−ＣＤＲ３が、配列番号３に示されるアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる、ＶＨ−ＣＤＲを含み；また、ＶＬ−ＣＤＲ１が、配列番号４に示されるアミノ酸配列を含むかまたはそれからなり、ＶＬ−ＣＤＲ２が、配列番号５に示されるアミノ酸配列を含むかまたはそれからなり、ＶＬ−ＣＤＲ３が、配列番号６に示されるアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる、ＶＬ−ＣＤＲを含む。場合によっては、用量は４０ｍｇを毎週１回である。場合によっては、用量は４８ｍｇを毎週１回である。場合によっては、用量は５６ｍｇを毎週１回である。場合によっては、用量は６４ｍｇを毎週１回である。場合によっては、ヒト対象に抗αｖβ６抗体またはその抗原結合性断片の用量が少なくとも４回投与される。他の例では、ヒト対象に抗αｖβ６抗体またはその抗原結合性断片の用量が少なくとも７回投与される。さらに他の例では、ヒト対象に抗αｖβ６抗体またはその抗原結合性断片の用量が少なくとも１０回投与される。ある場合には、ＶＨは、配列番号７と少なくとも８０％、少なくとも９０％、または１００％同一である配列からなり、ＶＬは、配列番号８と少なくとも８０％、少なくとも９０％、または１００％同一である配列からなる。ある場合には、抗αｖβ６抗体は免疫グロブリン重鎖及び免疫グロブリン軽鎖を含み、重鎖が、配列番号９と少なくとも８０％、少なくとも９０％、または１００％同一である配列からなり、軽鎖が、配列番号１０と少なくとも８０％、少なくとも９０％、または１００％同一である配列からなる。場合によっては、症状は線維症である。具体的な実施形態では、線維症は肺線維症、腎線維症、肝線維症または心臓線維症である。ある実施形態では、線維症は特発性肺線維症である。別の例では、症状は急性肺損傷である。別の例では、症状は急性腎損傷である。
【００２５】
別の態様では、本開示は、本明細書に記載の医薬組成物の無菌調合物を含むシリンジまたはポンプであって、４０ｍｇ、４８ｍｇ、５６ｍｇまたは６４ｍｇの固定用量の抗αｖβ６抗体またはそのαｖβ６結合性断片の皮下投与に適合した、当該シリンジまたはポンプを特徴とする。場合によっては、シリンジまたはポンプは本明細書に記載の医薬組成物の無菌調合物を０．５〜５．０ｍＬ含む。場合によっては、シリンジまたはポンプは本明細書に記載の医薬組成物の無菌調合物を０．５〜１．０ｍＬ含む。具体的な実施形態では、本開示は、７０ｍｇ／ｍｌの抗αｖβ６抗体またはそのαｖβ６結合性断片を含んだ製剤を０．８ｍｌ含むシリンジまたはポンプを特徴とする。具体的な実施形態では、本開示は、５６ｍｇの固定用量の抗αｖβ６抗体またはそのαｖβ６結合性断片を含んだ製剤０．８ｍｌを含むシリンジまたはポンプを特徴とする。場合によっては、ポンプはＬＶＳＣポンプである。
【００２６】
別の態様では、本開示は、抗αｖβ６抗体またはそのαｖβ６結合性断片の無菌調合物を含むシリンジまたはポンプを特徴とする。シリンジまたはポンプは、４０ｍｇ、４８ｍｇ、５６ｍｇまたは６４ｍｇの固定用量の抗αｖβ６抗体またはそのαｖβ６結合性断片の皮下投与に適合している。抗αｖβ６抗体またはそのαｖβ６結合性断片はＶＨ及びＶＬを含む。ＶＨ−ＣＤＲは、配列番号１または１１に示されるアミノ酸配列からなるＶＨ−ＣＤＲ１、配列番号２に示されるアミノ酸配列からなるＶＨ−ＣＤＲ２、配列番号３に示されるアミノ酸配列からなるＶＨ−ＣＤＲ３を含む。ＶＬ−ＣＤＲは、配列番号４に示されるアミノ酸配列からなるＶＬ−ＣＤＲ１、配列番号５に示されるアミノ酸配列からなるＶＬ−ＣＤＲ２、及び配列番号６に示されるアミノ酸配列からなるＶＬ−ＣＤＲ３を含む。場合によっては、ＶＨは、配列番号７と少なくとも８０％、少なくとも９０％、または１００％同一である配列からなり、ＶＬは、配列番号８と少なくとも８０％、少なくとも９０％、または１００％同一である配列からなる。ある場合には、抗αｖβ６抗体は免疫グロブリン重鎖及び免疫グロブリン軽鎖を含み、重鎖が、配列番号９と少なくとも８０％、少なくとも９０％、または１００％同一である配列からなり、軽鎖が、配列番号１０と少なくとも８０％、少なくとも９０％、または１００％同一である配列からなる。
【００２７】
別の態様では、本開示は、本明細書に記載の医薬組成物とピルフェニドン（ｐｒｉｆｅｎｉｄｏｎｅ）とを含む併用治療計画を特徴とする。
【００２８】
さらに別の態様では、本開示は、本明細書に記載の医薬組成物とニンテダニブとを含む併用治療計画を特徴とする。
【００２９】
特に定義していない限り、本明細書中で使用する全ての科学技術用語は、本発明が属する分野の当業者によって通常理解されるのと同じ意味を有する。本明細書に記載のものと類似するまたは等価である方法及び材料を本発明の実施及び試験に使用することはできるが、例示的な方法及び材料を以下に記載する。本明細書中で言及される全ての刊行物、特許出願、特許及び他の参考文献は参照によりそれらの全体が本明細書に援用される。齟齬がある場合には定義を含めて本願が優先されることになる。材料、方法及び実施例は例示のためのものにすぎず、限定する意図はない。
【００３０】
本発明の他の特徴及び利点は以下の詳細な説明及び特許請求の範囲から明らかとなろう。
【図面の簡単な説明】
【００３１】
【図１Ａ】異なる賦形剤を含む１５０ｇ／ＬのＳＴＸ−１００製剤のサイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）によって決定された％総凝集を表すグラフである。
【図１Ｂ】異なる賦形剤を含む１５０ｇ／ＬのＳＴＸ−１００製剤１ｍＬあたりの総視認不可粒子を示す棒グラフである。試験した各製剤について、Ｔ＝０を左側の棒として表し、Ｔ＝４週を右側の棒として表す。
【図１Ｃ】異なる賦形剤を含む１５０ｇ／ＬのＳＴＸ−１００製剤の周囲温度での粘度を示す棒グラフである。
【図２】ｐＨ−アルギニンスクリーニング試験の結果を示す棒グラフである。試験した各製剤について、Ｔ＝０を左側の棒として表し、Ｔ＝１Ｍ  ４０℃を右側の棒として表す。
【図３】２５℃（上）及び４０℃（下）でＧＳＨがＳＴＸ−１００製剤の凝集に及ぼす影響を示すグラフである。ＳＴＸ−１００製剤は、１５０ｍｇ／ｍｌのＳＴＸ−１００、２０ｍＭのクエン酸塩／クエン酸、１５０ｍＭのアルギニン塩酸塩、５ｍＭのメチオニン、０．０５％のＰＳ８０、及び５．５のｐＨを有し、さらに、ＧＳＨを含有しないか０．４ｍＭのＧＳＨを含有するかのどちらかである。
【図４】ＧＳＨ（０．４ｍＭ）を含有するかしないかのどちらかであるＳＢ４（Ｅｎｂｒｅｌ（登録商標）を参考にするエタネルセプトバイオシミラーであるＢＥＮＥＰＡＬＩ（登録商標））製剤（ＳＢ４が５０ｍｇ／ｍｌ、リン酸ナトリウムが１０ｍＭ、ＮａＣｌが１４０ｍＭ、スクロースが１％、ｐＨ６．２）の２５℃及び４０℃でのＨＭＷ種の百分率を表すグラフを示す。
【図５】ＧＳＨ（０．４ｍＭ）を含有するかしないかのどちらかである抗αｖβ５インテグリン抗体（ＳＴＸ２００）製剤（抗体が５０ｍｇ／ｍｌ、ヒスチジンが２０ｍＭ、ソルビトールが５％、ＰＳ８０が０．０５％、ｐＨ６．５）の２５℃及び４０℃でのＨＭＷ種の百分率を表すグラフを示す。
【発明を実施するための形態】
【００３２】
本願は、抗αｖβ６抗体及びそのαｖβ６結合性断片の医薬組成物及び投薬計画ならびに、限定されないが線維症、急性肺損傷、急性腎損傷及びがんなどの疾患の治療におけるそれらの使用を提供する。
【００３３】
αｖβ６
αｖβ６は、上皮細胞上に発現するインテグリンである。それは、フィブロネクチン、ビトロネクチン、サイトタクチン、テネイシンならびに潜在関連ペプチド１及び３（ＬＡＰ１及びＬＡＰ３）−ＴＧＦ−β１の潜在型前駆体のＮ末端２７８アミノ酸−を含めたいくつかのリガンドにアルギニン−グリシン−アスパラギン酸（「ＲＧＤ」）モチーフとの直接相互作用によって結合することができる。ＴＧＦ−βサイトカインは、成熟Ｃ末端側ＴＧＦ−βサイトカインに非共有結合的に会合しているＮ末端側ＬＡＰを有する潜在型複合体として合成される。潜在型ＴＧＦ−β複合体は、その同族受容体に結合することができず、このため、活性型へと変換されて初めて生物学的に活性となる。ＬＡＰ１またはＬＡＰ３に対するαｖβ６の結合は、潜在型複合体の配座が変化してＴＧＦ−βとその受容体との結合が可能になることの結果として、ＴＧＦ−β１及びＴＧＦ−β３の潜在型前駆体の活性化をもたらす。このため、αｖβ６の発現の上方制御はＴＧＦ−βの局所活性化をもたらし得、それが今度は下流事象のカスケードの事象を活性化させ得る。ＴＧＦ−β１サイトカインは、細胞増殖、分化及び免疫応答を調節する多面的な増殖因子である。
【００３４】
ヒトインテグリンαｖのアミノ酸配列（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ−Ｐ０６７５６（ＩＴＡＶ＿ＨＵＭＡＮ）を以下に示す（下線部は３０ａａのシグナルペプチド配列である）。
【化１】
2020531521.tif 000003
【化２】
2020531521.tif 000004
成熟αｖタンパク質は配列番号１２のアミノ酸３１〜１０４８に相当する。
【００３５】
ヒトインテグリンβ６のアミノ酸配列（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ−Ｐ１８５６４（ＩＴＢ６＿ＨＵＭＡＮ）を以下に示す（下線部は２１ａａのシグナルペプチド配列である）。
【化３】
2020531521.tif 000005
【００３６】
成熟β６タンパク質は配列番号１３のアミノ酸２２〜７８８に相当する。
【００３７】
本明細書に記載の抗体は、配列番号１２の位置３１〜１０４８に示されるアミノ酸配列及び配列番号１３の位置２２〜７８８に示されるアミノ酸配列を有するαｖβ６タンパク質に特異的に結合することができる。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の抗体は、配列番号１３の位置２２〜７８８に示されるアミノ酸配列を有するβ６タンパク質に特異的に結合することができる。
【００３８】
抗αｖβ６抗体
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の組成物及び方法に使用される抗αｖβ６抗体またはそのαｖβ６結合性断片は、「ＳＴＸ−１００」と呼称される抗体の３つの重鎖可変ドメイン相補性決定領域（ＣＤＲ）を含む。いくつかの実施形態では、抗αｖβ６抗体またはそのαｖβ６結合性断片はＳＴＸ−１００の３つの軽鎖可変ドメインＣＤＲを含む。さらに他の実施形態では、抗αｖβ６抗体またはそのαｖβ６結合性断片は、ＳＴＸ−１００の３つの重鎖可変ドメインＣＤＲ及び３つの軽鎖可変ドメインＣＤＲを含む。ＣＤＲは、当技術分野で知られている任意のＣＤＲ定義、例えば、Ｋａｂａｔ、Ｃｈｏｔｈｉａ、ＡｂｙｓｉｓによるＣｈｏｔｈｉａ、改良Ｃｈｏｔｈｉａ／ＡｂＭの定義に基づくかまたはコンタクト定義に基づくものであり得る。ＳＴＸ−１００の例示的なＣＤＲ配列（Ｋａｂａｔによる）を以下の表１に示す。
表１：ＳＴＸ−１００のＫａｂａｔ  ＣＤＲの配列
【表１】
2020531521.tif 000006
【００３９】
いくつかの態様では、抗αｖβ６抗体またはそのαｖβ６結合性断片は、配列番号１に示されるアミノ酸配列またはＧＦＴＦＳＲＹＶＭＳ（配列番号１１）を含むかまたはそれからなるＶＨ  ＣＤＲ１、配列番号２に示されるアミノ酸配列を含むかまたはそれからなるＶＨ  ＣＤＲ２、及び配列番号３に示されるアミノ酸配列を含むかまたはそれからなるＶＨ  ＣＤＲ３を含む。いくつかの実施形態では、抗αｖβ６抗体またはそのαｖβ６結合性断片は、配列番号４に示されるアミノ酸配列を含むかまたはそれからなるＶＬ  ＣＤＲ１、配列番号５に示されるアミノ酸配列を含むかまたはそれからなるＶＬ  ＣＤＲ２、及び配列番号６に示されるアミノ酸配列を含むかまたはそれからなるＶＬ  ＣＤＲ３を含む。
【００４０】
特定の態様では、抗αｖβ６抗体またはそのαｖβ６結合性断片は、配列番号１〜６に示されるアミノ酸配列を含むＣＤＲを含む。特定の態様では、抗αｖβ６抗体またはそのαｖβ６結合性断片は、配列番号１１、２、３、４、５及び６に示されるアミノ酸配列を含むＣＤＲを含む。特定の態様では、抗αｖβ６抗体またはそのαｖβ６結合性断片は、配列番号１〜６に示されるアミノ酸配列からなるＣＤＲを含む。特定の態様では、抗αｖβ６抗体またはそのαｖβ６結合性断片は、配列番号１１、２、３、４、５及び６に示されるアミノ酸配列からなるＣＤＲを含む。
【００４１】
ＳＴＸ−１００は、インテグリンαｖβ６に特異的に結合するヒト化されたヒトＩｇＧ１／ヒトカッパモノクローナル抗体である。
【００４２】
ＳＴＸ−１００の重鎖可変ドメイン（ＶＨ）は、以下のアミノ酸配列（太字はＶＨ  ＣＤＲ（Ｋａｂａｔ定義）である）を含むかまたはそれからなる。
【化４】
2020531521.tif 000007
【００４３】
ＳＴＸ−１００の軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）は、以下のアミノ酸配列（太字はＶＬ  ＣＤＲ（Ｋａｂａｔ定義）である）を含むかまたはそれからなる。
【化５】
2020531521.tif 000008
【００４４】
特定の実施形態では、抗αｖβ６抗体またはそのαｖβ６結合性断片は、配列番号７に示されるアミノ酸配列を含むかまたはそれからなるＶＨを含む。いくつかの実施形態では、抗αｖβ６抗体またはそのαｖβ６結合性断片は、αｖβ６に選択的に結合するものであり、ＳＴＸ−１００のＶＨドメイン（配列番号７）のアミノ酸配列と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％もしくはそれ以上同一であるかまたは、配列番号７に比べて少なくとも１〜５アミノ酸残基であって４０、３０、２０、１５もしくは１０よりも少ない残基が異なった、ＶＨドメインを含む。いくつかの実施形態では、これらの抗αｖβ６抗体またはそのαｖβ６結合性断片は、αｖβ６とそのリガンドである潜在関連ペプチド（ＬＡＰ）との結合を遮断するものであり、これは、精製ｈｓαｖβ６かβ６発現細胞かのどちらかに対するリガンド結合の遮断によって判定される。いくつかの実施形態では、これらの抗αｖβ６抗体またはそのαｖβ６結合性断片は、これらの特性：（ｉ）高い親和性でαｖβ６に特異的に結合する、（ｉｉ）１０Ｄ５抗体（ＷＯ９９／０７４０５）に比べてより低いＩＣ５０値でＬＡＰ、フィブロネクチン、ビトロネクチンまたはテネイシンに対するαｖβ６の結合を阻害する、（ｉｉｉ）ＴＧＦ−βの活性化を遮断または阻害する、（ｉｖ）β６サブユニットに特異的に結合する、及び（ｖ）パラフィン包埋組織の免疫染色などの免疫染色手順においてαｖβ６を認識する、のうちの１つ以上（例えば、１つ、２つ、３つ、４つ）を有する。
【００４５】
特定の実施形態では、抗αｖβ６抗体またはそのαｖβ６結合性断片は、配列番号８に示されるアミノ酸配列を含むかまたはそれからなるＶＬを含む。いくつかの実施形態では、抗αｖβ６抗体またはそのαｖβ６結合性断片は、αｖβ６に選択的に結合するものであり、ＳＴＸ−１００のＶＬドメイン（配列番号８）のアミノ酸配列と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％もしくはそれ以上同一であるかまたは、配列番号８に比べて少なくとも１〜５アミノ酸残基であって４０、３０、２０、１５もしくは１０よりも少ない残基が異なった、ＶＬドメインを含む。いくつかの実施形態では、これらの抗αｖβ６抗体またはそのαｖβ６結合性断片は、αｖβ６とそのリガンドである潜在関連ペプチド（ＬＡＰ）との結合を遮断するものであり、これは、精製ｈｓαｖβ６かβ６発現細胞かのどちらかに対するリガンド結合の遮断によって判定される。いくつかの実施形態では、これらの抗αｖβ６抗体またはそのαｖβ６結合性断片は、これらの特性：（ｉ）高い親和性でαｖβ６に特異的に結合する、（ｉｉ）１０Ｄ５抗体（ＷＯ９９／０７４０５）に比べてより低いＩＣ５０値でＬＡＰ、フィブロネクチン、ビトロネクチンまたはテネイシンに対するαｖβ６の結合を阻害する、（ｉｉｉ）ＴＧＦ−βの活性化を遮断または阻害する、（ｉｖ）β６サブユニットに特異的に結合する、及び（ｖ）パラフィン包埋組織の免疫染色などの免疫染色手順においてαｖβ６を認識する、のうちの１つ以上（例えば、１つ、２つ、３つ、４つ）を有する。
【００４６】
いくつかの実施形態では、抗αｖβ６抗体またはそのαｖβ６結合性断片は、配列番号７に示されるアミノ酸配列を有するＶＨ、及び配列番号８に示されるアミノ酸配列を有するＶＬを含む。いくつかの実施形態では、抗αｖβ６抗体またはそのαｖβ６結合性断片は、αｖβ６に選択的に結合するものであり、（ｉ）ＳＴＸ−１００のＶＨドメイン（配列番号７）のアミノ酸配列と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％もしくはそれ以上同一であるＶＨドメイン、及び（ｉｉ）ＳＴＸ−１００のＶＬドメイン（配列番号８）のアミノ酸配列と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％もしくはそれ以上同一であるＶＬドメインを含む；または、配列番号７及び／または配列番号８に比べて少なくとも１〜５アミノ酸残基であって４０、３０、２０、１５もしくは１０よりも少ない残基が異なっている。いくつかの実施形態では、これらの抗αｖβ６抗体またはそのαｖβ６結合性断片は、αｖβ６とそのリガンドである潜在関連ペプチド（ＬＡＰ）との結合を遮断するものであり、これは、精製ｈｓαｖβ６かβ６発現細胞かのどちらかに対するリガンド結合の遮断によって判定される。いくつかの実施形態では、これらの抗αｖβ６抗体またはそのαｖβ６結合性断片は、これらの特性：（ｉ）高い親和性でαｖβ６に特異的に結合する、（ｉｉ）１０Ｄ５抗体（ＷＯ９９／０７４０５）に比べてより低いＩＣ５０値でＬＡＰ、フィブロネクチン、ビトロネクチンまたはテネイシンに対するαｖβ６の結合を阻害する、（ｉｉｉ）ＴＧＦ−βの活性化を遮断または阻害する、（ｉｖ）β６サブユニットに特異的に結合する、及び（ｖ）パラフィン包埋組織の免疫染色などの免疫染色手順においてαｖβ６を認識する、のうちの１つ以上（例えば、１つ、２つ、３つ、４つ）を有する。
【００４７】
以下に列挙される成熟重鎖（配列番号９）及び成熟軽鎖（配列番号１０）からなる抗体は「ＳＴＸ−１００」または「ＢＧ０００１１」または「ＢＧ１１」と呼称される。ＳＴＸ−１００はＩｇＧ１／カッパ抗体である。
成熟ＳＴＸ−１００重鎖（ＨＣ）［太字はＨ−ＣＤＲ１、Ｈ−ＣＤＲ２及びＨ−ＣＤＲ３であり、下線部は定常領域であり、太字の下線部はＮ結合型グリコシル化部位である］
【化６】
2020531521.tif 000009
成熟ＳＴＸ−１００軽鎖（ＬＣ）［太字はＬ−ＣＤＲ１、Ｌ−ＣＤＲ２及びＬ−ＣＤＲ３であり、下線部は定常領域である］
【化７】
2020531521.tif 000010
【００４８】
特定の実施形態では、抗αｖβ６抗体またはそのαｖβ６結合性断片は、配列番号９に示されるアミノ酸配列を有するＨＣを含む。いくつかの実施形態では、抗αｖβ６抗体またはそのαｖβ６結合性断片は、αｖβ６に選択的に結合するものであり、配列番号９のアミノ酸配列と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％もしくはそれ以上同一であるかまたは、配列番号９に比べて少なくとも１〜５アミノ酸残基であって４０、３０、２０、１５もしくは１０よりも少ない残基が異なった、ＨＣを含む。特定の実施形態では、抗αｖβ６抗体またはそのαｖβ６結合性断片は、重鎖定常領域における１〜５個のアミノ酸置換を別とすれば、配列番号９に示される重鎖を含む。いくつかの実施形態では、これらの抗αｖβ６抗体またはそのαｖβ６結合性断片は、αｖβ６とそのリガンドである潜在関連ペプチド（ＬＡＰ）との結合を遮断するものであり、これは、精製ｈｓαｖβ６かβ６発現細胞かのどちらかに対するリガンド結合の遮断によって判定される。いくつかの実施形態では、これらの抗αｖβ６抗体またはそのαｖβ６結合性断片は、これらの特性：（ｉ）高い親和性でαｖβ６に特異的に結合する、（ｉｉ）１０Ｄ５抗体（ＷＯ９９／０７４０５）に比べてより低いＩＣ５０値でＬＡＰ、フィブロネクチン、ビトロネクチンまたはテネイシンに対するαｖβ６の結合を阻害する、（ｉｉｉ）ＴＧＦ−βの活性化を遮断または阻害する、（ｉｖ）β６サブユニットに特異的に結合する、及び（ｖ）パラフィン包埋組織の免疫染色などの免疫染色手順においてαｖβ６を認識する、のうちの１つ以上（例えば、１つ、２つ、３つ、４つ）を有する。
【００４９】
特定の実施形態では、抗αｖβ６抗体またはそのαｖβ６結合性断片は、配列番号１０に示されるアミノ酸配列を有するＬＣを含む。いくつかの実施形態では、抗αｖβ６抗体またはそのαｖβ６結合性断片は、αｖβ６に選択的に結合するものであり、配列番号１０のアミノ酸配列と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％もしくはそれ以上同一であるかまたは、配列番号１０に比べて少なくとも１〜５アミノ酸残基であって４０、３０、２０、１５もしくは１０よりも少ない残基が異なった、ＬＣを含む。特定の実施形態では、抗αｖβ６抗体またはそのαｖβ６結合性断片は、軽鎖定常領域における１〜５個のアミノ酸置換を別とすれば、配列番号１０に示される軽鎖を含む。いくつかの実施形態では、これらの抗αｖβ６抗体またはそのαｖβ６結合性断片は、αｖβ６とそのリガンドである潜在関連ペプチド（ＬＡＰ）との結合を遮断するものであり、これは、精製ｈｓαｖβ６かβ６発現細胞かのどちらかに対するリガンド結合の遮断によって判定される。いくつかの実施形態では、これらの抗αｖβ６抗体またはそのαｖβ６結合性断片は、これらの特性：（ｉ）高い親和性でαｖβ６に特異的に結合する、（ｉｉ）１０Ｄ５抗体（ＷＯ９９／０７４０５）に比べてより低いＩＣ５０値でＬＡＰ、フィブロネクチン、ビトロネクチンまたはテネイシンに対するαｖβ６の結合を阻害する、（ｉｉｉ）ＴＧＦ−βの活性化を遮断または阻害する、（ｉｖ）β６サブユニットに特異的に結合する、及び（ｖ）パラフィン包埋組織の免疫染色などの免疫染色手順においてαｖβ６を認識する、のうちの１つ以上（例えば、１つ、２つ、３つ、４つ）を有する。
【００５０】
特定の実施形態では、抗αｖβ６抗体またはそのαｖβ６結合性断片は、配列番号９に示されるアミノ酸配列を有するＨＣ、及び配列番号１０に示されるアミノ酸配列を有するＬＣを含む。いくつかの実施形態では、抗αｖβ６抗体またはそのαｖβ６結合性断片はヒトαｖβ６に選択的に結合するものであり、（ｉ）配列番号９のアミノ酸配列と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％もしくはそれ以上同一である、または配列番号９に比べて少なくとも１〜５アミノ酸残基であって４０、３０、２０、１５もしくは１０よりも少ない残基が異なった、ＨＣ、及び（ｉｉ）配列番号１０のアミノ酸配列と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％もしくはそれ以上同一である、または配列番号１０に比べて少なくとも１〜５アミノ酸残基であって４０、３０、２０、１５もしくは１０よりも少ない残基が異なった、ＬＣを含む。いくつかの実施形態では、これらの抗αｖβ６抗体またはそのαｖβ６結合性断片は、αｖβ６とそのリガンドである潜在関連ペプチド（ＬＡＰ）との結合を遮断するものであり、これは、精製ｈｓαｖβ６かβ６発現細胞かのどちらかに対するリガンド結合の遮断によって判定される。いくつかの実施形態では、これらの抗αｖβ６抗体またはそのαｖβ６結合性断片は、これらの特性：（ｉ）高い親和性でαｖβ６に特異的に結合する、（ｉｉ）１０Ｄ５抗体（ＷＯ９９／０７４０５）に比べてより低いＩＣ５０値でＬＡＰ、フィブロネクチン、ビトロネクチンまたはテネイシンに対するαｖβ６の結合を阻害する、（ｉｉｉ）ＴＧＦ−βの活性化を遮断または阻害する、（ｉｖ）β６サブユニットに特異的に結合する、及び（ｖ）パラフィン包埋組織の免疫染色などの免疫染色手順においてαｖβ６を認識する、のうちの１つ以上（例えば、１つ、２つ、３つ、４つ）を有する。
【００５１】
特定の実施形態では、抗αｖβ６抗体はＩｇＧ抗体である。具体的な実施形態では、抗αｖβ６抗体は、例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＭ、ＩｇＡ１、ＩｇＡ２、ＩｇＤ及びＩｇＥから選択される重鎖定常領域を有する。一実施形態では、抗αｖβ６抗体はヒトＩｇＧ１アイソタイプのものである。別の実施形態では、抗αｖβ６抗体はヒトＩｇＧ２アイソタイプのものである。さらに別の実施形態では、抗αｖβ６抗体はヒトＩｇＧ３アイソタイプのものである。さらに別の実施形態では、抗αｖβ６抗体はヒトＩｇＧ４アイソタイプのものである。さらなる実施形態では、抗体は、例えばヒトカッパまたはヒトラムダ軽鎖から選択される軽鎖定常領域を有する。特定の実施形態では、抗αｖβ６抗体はヒトＩｇＧ１／ヒトカッパ抗体である。ある場合には、重鎖定常領域はヒト型、またはヒト定常領域の改変型である。場合によっては、ヒト定常領域は、少なくとも１個であって２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９または２０個以下の置換を含み得る。ある実施形態では、改変型ヒトＦｃ領域は改変型ヒトＩｇＧ１  Ｆｃ領域である。ある場合には、抗αｖβ６抗体の定常領域は、所望の機能的特性（例えば、改変されたエフェクター機能または半減期、軽減されたグリコシル化）を付与する１つ以上のアミノ酸残基の突然変異によって改変されている。例えば、Ｆｃ領域（例えばヒトＩｇＧ１  Ｆｃ領域）のＮ結合型グリコシル化を防止または軽減するためにＮ結合型グリコシル化部位が置換されていてもよい。
【００５２】
いくつかの実施形態では、抗αｖβ６抗体は完全長（完全）抗体または実質的に完全長である。タンパク質は、少なくとも１つ、好ましくは２つの完全な重鎖、及び少なくとも１つ、好ましくは２つの完全な軽鎖を含み得る。いくつかの実施形態では、抗αｖβ６抗体はαｖβ６結合性断片である。ある場合には、αｖβ６結合性断片はＦａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆａｃｂ、Ｆｖ、一本鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）、ｓｃ（Ｆｖ）２、またはダイアボディである。
【００５３】
抗体、例えばＳＴＸ−１００、またはそのαｖβ６結合性断片は、例えば、列挙されるアミノ酸配列をコードする合成遺伝子を作製し発現させること、またはヒト生殖細胞系遺伝子を突然変異させて列挙されるアミノ酸配列をコードする遺伝子を形成させることによって作られ得る。さらに、この抗体及び他の抗αｖβ６抗体は、例えば、以下の方法の１つ以上を用いて生産され得る。
【００５４】
抗体を生産する方法
抗αｖβ６抗体またはαｖβ６結合性断片は、細菌細胞または真核細胞で産生され得る。いくつかの抗体、例えばＦａｂ’を細菌細胞、例えばＥ．ｃоｌｉ細胞で産生させることができる。また、抗体を形質転換細胞株（例えば、ＣＨＯ、２９３Ｅ、ＣＯＳ）などの真核細胞で産生させることもできる。加えて、酵母細胞、例えば、Ｐｉｃｈｉａ（例えば、Ｐｏｗｅｒｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  Ｍｅｔｈｏｄｓ．２５１：１２３−３５（２００１）を参照されたい）、ＨａｎｓｅｕｌａまたはＳａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓにおいて抗体（例えばｓｃＦｖ’）を発現させることができる。関心対象の抗体を産生させるためには、抗体をコードするポリヌクレオチドを構築し、発現ベクターに導入し、その後、好適な宿主細胞において発現させる。本明細書に記載のαｖβ６抗体のＶＨ及び／またはＶＬ、ＨＣ及び／またはＬＣを含む抗αｖβ６抗体をコードするポリヌクレオチドは当業者によって容易に予想されるであろう。標準的な分子生物学の技術を用いて組換え発現ベクターを作製し、宿主細胞にトランスフェクトし、形質転換体を選抜し、宿主細胞を培養し、抗体を回収する。
【００５５】
細菌細胞（例えばＥ．ｃоｌｉ）において抗αｖβ６抗体またはαｖβ６結合性断片を発現させたい場合、発現ベクターは、細菌細胞でのベクターの増殖を可能にする特徴を有していなければならない。加えて、Ｅ．ｃоｌｉ、例えば、ＪＭ１０９、ＤＨ５α、ＨＢ１０１、またはＸＬ１−Ｂｌｕｅを宿主として使用する場合、ベクターは、Ｅ．ｃоｌｉにおける効率的な発現をさせることができるプロモーター、例えば、ｌａｃＺプロモーター（Ｗａｒｄ  ｅｔ  ａｌ．，３４１：５４４−５４６（１９８９））、ａｒａＢプロモーター（Ｂｅｔｔｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ，２４０：１０４１−１０４３（１９８８））またはＴ７プロモーターを有していなければならない。そのようなベクターの例としては、例えば、Ｍ１３系列ベクター、ｐＵＣ系列ベクター、ｐＢＲ３２２、ｐＢｌｕｅｓｃｒｉｐｔ、ｐＣＲ−Ｓｃｒｉｐｔ、ｐＧＥＸ−５Ｘ−１（Ｐｈａｒｍａｃｉａ）、「ＱＩＡｅｘｐｒｅｓｓシステム」（ＱＩＡＧＥＮ）、ｐＥＧＦＰ、及びｐＥＴ（この発現ベクターを使用する場合、宿主は、Ｔ７ＲＮＡポリメラーゼを発現させるＢＬ２１であることが好ましい）が挙げられる。発現ベクターは抗体分泌のためのシグナル配列を含有していてもよい。Ｅ．ｃоｌｉのペリプラズム内に産生させるためには、抗体分泌のためのシグナル配列としてｐｅｌＢシグナル配列（Ｌｅｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｂａｃｔｅｒｉｏｌ．，１６９：４３７９（１９８７））を使用してもよい。細菌における発現のためには、塩化カルシウム法または電気穿孔法を用いて発現ベクターを細菌細胞内に導入してもよい。
【００５６】
動物細胞、例えば、ＣＨＯ、ＣＯＳ及びＮＩＨ３Ｔ３細胞において抗体を発現させたい場合、発現ベクターは、これらの細胞での発現に必要なプロモーター、例えば、ＳＶ４０プロモーター（Ｍｕｌｌｉｇａｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ，２７７：１０８（１９７９））、ＭＭＬＶ−ＬＴＲプロモーター、ＥＦ１αプロモーター（Ｍｉｚｕｓｈｉｍａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．，１８：５３２２（１９９０））、またはＣＭＶプロモーターを含む。免疫グロブリンまたはそのドメインをコードする核酸配列に加えて、組換え発現ベクターはさらなる配列、例えば、宿主細胞におけるベクターの複製を調節する配列（例えば複製起点）及び選択マーカー遺伝子を保有し得る。選択マーカー遺伝子は、ベクターが中に導入されている宿主細胞の選択を容易にする（例えば、米国特許第４，３９９，２１６号、第４，６３４，６６５号及び第５，１７９，０１７号を参照のこと）。例えば、典型的には、選択マーカー遺伝子は、ベクターが導入されている宿主細胞にＧ４１８、ヒグロマイシンまたはメトトレキサートなどの薬物に対する抵抗性を付与する。選択マーカーを有するベクターの例としては、ｐＭＡＭ、ｐＤＲ２、ｐＢＫ−ＲＳＶ、ｐＢＫ−ＣＭＶ、ｐＯＰＲＳＶ、及びｐＯＰ１３が挙げられる。
【００５７】
一実施形態では、抗体は哺乳動物細胞において産生される。抗体を発現させるための例示的な哺乳動物宿主細胞としては、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ細胞）（例えばＫａｕｆｍａｎ  ａｎｄ  Ｓｈａｒｐ（１９８２）Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１５９：６０１−６２１に記載されているようなＤＨＦＲ選択マーカーと共に使用されるＵｒｌａｕｂ  ａｎｄ  Ｃｈａｓｉｎ（１９８０）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ７７：４２１６−４２２０に記載のｄｈｆｒ−ＣＨＯ細胞を含む）、ヒト胚性腎臓２９３細胞（例えば、２９３、２９３Ｅ、２９３Ｔ）、ＣＯＳ細胞、ＮＩＨ３Ｔ３細胞、リンパ球細胞株、例えばＮＳ０骨髄腫細胞及びＳＰ２細胞、ならびに遺伝子導入動物、例えば遺伝子導入哺乳動物からの細胞が挙げられる。例えば、細胞は乳腺上皮細胞である。
【００５８】
例示的な抗体発現用システムにおいて、抗αｖβ６抗体（例えばＳＴＸ−１００）の抗体重鎖と抗体軽鎖との両方をコードする組換え発現ベクターをリン酸カルシウム媒介トランスフェクションによってｄｈｆｒ−ＣＨＯ細胞に導入する。組換え発現ベクター内で抗体重軽鎖遺伝子はそれぞれ、遺伝子の高レベルの転写を促すためにエンハンサー／プロモーター調節エレメント（例えば、ＳＶ４０、ＣＭＶ、アデノウイルスなどに由来するもの、例えば、ＣＭＶエンハンサー／ＡｄＭＬＰプロモーター調節エレメントまたはＳＶ４０エンハンサー／ＡｄＭＬＰプロモーター調節エレメント）に機能的に繋げられている。組換え発現ベクターはさらにＤＨＦＲ遺伝子も保有するが、これは、ベクターがトランスフェクトされたＣＨＯ細胞を、メトトレキサート選択／増幅を用いて選択することを可能にするものである。選択された形質転換宿主細胞を培養して抗体重軽鎖を発現させ、培養培地から抗体を回収する。
【００５９】
抗体を遺伝子導入動物によって産生させることもできる。例えば、米国特許第５，８４９，９９２号には、遺伝子導入哺乳動物の乳腺において抗体を発現させる方法が記載されている。乳特異的プロモーター、及び関心対象の抗体をコードする核酸、及び分泌のためのシグナル配列を含む、導入遺伝子を構築する。そのような遺伝子導入哺乳動物の雌が産生する乳は、その中に分泌された関心対象の抗体を含む。抗体は乳から精製され得るかまたは、いくつかの用途において直接使用され得る。本明細書に記載の核酸の１つ以上を含む動物も提供される。
【００６０】
本開示の抗体は、宿主細胞の内部または外部（例えば培地）から単離されて実質的に純粋で均質な抗体として精製され得る。抗体の単離及び精製のためには、抗体精製に一般的に用いられる単離及び精製の方法が用いられ得るが、これは何ら特定の方法に限定されない。抗体は、例えば、カラムクロマトグラフィー、濾過、限外濾過、塩析、溶媒沈澱、溶媒抽出、蒸留、免疫沈降、ＳＤＳ−ポリアクリルアミドゲル電気泳動、等電点電気泳動、透析及び再結晶を適切に選択し組み合わせることによって単離及び精製され得る。クロマトグラフィーとしては、例えば、親和性クロマトグラフィー、イオン交換クロマトグラフィー、疎水性クロマトグラフィー、ゲル濾過、逆相クロマトグラフィー及び吸着クロマトグラフィーが挙げられる（Ｓｔｒａｔｅｇｉｅｓ  ｆｏｒ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ  ａｎｄ  Ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｃｏｕｒｓｅ  Ｍａｎｕａｌ．Ｅｄ  Ｄａｎｉｅｌ  Ｒ．Ｍａｒｓｈａｋ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ，１９９６）。クロマトグラフィーを、ＨＰＬＣ及びＦＰＬＣなどの液相クロマトグラフィーを用いて行うことができる。親和性クロマトグラフィーに使用するカラムには、プロテインＡカラム及びプロテインＧカラムが含まれる。プロテインＡカラムを用いるカラムの例としては、Ｈｙｐｅｒ  Ｄ、ＰＯＲＯＳ、及びセファロースＦＦ（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）が挙げられる。本開示には、これらの精製方法によって高度に精製された抗体も含まれる。
【００６１】
抗αｖβ６抗体組成物
本開示はさらに、本明細書に記載の抗αｖβ６抗体またはそのαｖβ６結合性断片を含む組成物（例えば医薬組成物）を提供する。例えば、抗αｖβ６抗体組成物は、免疫グロブリン重鎖可変ドメイン（ＶＨ）及び免疫グロブリン軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）を含む抗αｖβ６抗体またはそのαｖβ６結合性断片を含み、ＶＨはＨ−ＣＤＲを含むものであり、ＶＬはＳＴＸ−１００のＬ−ＣＤＲを含むものである。場合によっては、重鎖ＣＤＲ（Ｈ−ＣＤＲ）は、配列番号１、配列番号２及び配列番号３に示されるアミノ酸配列を含むかまたはそれからなり、軽鎖ＣＤＲ（Ｌ−ＣＤＲ）は、配列番号４、配列番号５及び配列番号６に示されるアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる。場合によっては、重鎖ＣＤＲ（Ｈ−ＣＤＲ）は、配列番号１１、配列番号２及び配列番号３に示されるアミノ酸配列を含むかまたはそれからなり、軽鎖ＣＤＲ（Ｌ−ＣＤＲ）は、配列番号４、配列番号５及び配列番号６に示されるアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる。いくつかの実施形態では、抗αｖβ６抗体組成物は、（ｉ）配列番号７に示されるアミノ酸配列と少なくとも８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％同一であるアミノ酸配列を含むかまたはそれからなるＶＨ、及び（ｉｉ）配列番号８に示されるアミノ酸配列と少なくとも８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％同一であるアミノ酸配列を含むかまたはそれからなるＶＬを含んだ、抗αｖβ６抗体またはそのαｖβ６結合性断片を含む。特定の実施形態では、抗αｖβ６抗体組成物は、（ｉ）配列番号９に示されるアミノ酸配列と少なくとも８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％同一であるアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる重鎖、及び（ｉｉ）配列番号１０に示されるアミノ酸配列と少なくとも８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％同一であるアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる軽鎖を含んだ、抗αｖβ６抗体を含む。いくつかの実施形態では、抗αｖβ６抗体はαｖβ６に選択的に結合する。いくつかの実施形態では、これらの抗αｖβ６抗体またはそのαｖβ６結合性断片は、αｖβ６とそのリガンドである潜在関連ペプチド（ＬＡＰ）との結合を遮断するものであり、これは、精製ｈｓαｖβ６かβ６発現細胞かのどちらかに対するリガンド結合の遮断によって判定される。いくつかの実施形態では、これらの抗αｖβ６抗体またはそのαｖβ６結合性断片は、これらの特性：（ｉ）高い親和性でαｖβ６に特異的に結合する、（ｉｉ）１０Ｄ５抗体（ＷＯ９９／０７４０５）に比べてより低いＩＣ５０値でＬＡＰ、フィブロネクチン、ビトロネクチンまたはテネイシンに対するαｖβ６の結合を阻害する、（ｉｉｉ）ＴＧＦ−βの活性化を遮断または阻害する、（ｉｖ）β６サブユニットに特異的に結合する、及び（ｖ）パラフィン包埋組織の免疫染色などの免疫染色手順においてαｖβ６を認識する、のうちの１つ以上（例えば、１つ、２つ、３つ、４つ）を有する。
【００６２】
特定の実施形態では、これらの組成物は高濃度の抗αｖβ６抗体組成物である。「高濃度の抗αｖβ６抗体組成物」とは、抗αｖβ６抗体またはそのαｖβ６結合性断片を１００ｍｇ／ｍｌより高く３００ｍｇ／ｍｌより低い濃度で含む組成物を意味する。場合によっては、抗αｖβ６抗体組成物は抗αｖβ６抗体またはそのαｖβ６結合性断片を５０〜２５０ｍｇ／ｍｌの濃度で含む。場合によっては、抗αｖβ６抗体組成物は抗αｖβ６抗体またはそのαｖβ６結合性断片を５０〜２２５ｍｇ／ｍｌの濃度で含む。他の例では、抗αｖβ６抗体組成物は抗αｖβ６抗体またはそのαｖβ６結合性断片を７５〜２２５ｍｇ／ｍｌの濃度で含む。他の例では、抗αｖβ６抗体組成物は抗αｖβ６抗体またはそのαｖβ６結合性断片を５０〜２００ｍｇ／ｍｌの濃度で含む。他の例では、抗αｖβ６抗体組成物は抗αｖβ６抗体またはそのαｖβ６結合性断片を７５〜１６５ｍｇ／ｍｌの濃度で含む。他の例では、抗αｖβ６抗体組成物は抗αｖβ６抗体またはそのαｖβ６結合性断片を１００〜２２５ｍｇ／ｍｌの濃度で含む。さらに他の例では、抗αｖβ６抗体組成物は抗αｖβ６抗体またはそのαｖβ６結合性断片を１２５〜２２５ｍｇ／ｍｌの濃度で含む。他の例では、抗αｖβ６抗体組成物は抗αｖβ６抗体またはそのαｖβ６結合性断片を１２５〜１７５ｍｇ／ｍｌの濃度で含む。場合によっては、抗αｖβ６抗体組成物は抗αｖβ６抗体またはそのαｖβ６結合性断片を２４０ｍｇ／ｍｌの濃度で含む。場合によっては、抗αｖβ６抗体組成物は抗αｖβ６抗体またはそのαｖβ６結合性断片を２２５ｍｇ／ｍｌの濃度で含む。場合によっては、抗αｖβ６抗体組成物は抗αｖβ６抗体またはそのαｖβ６結合性断片を２００ｍｇ／ｍｌの濃度で含む。場合によっては、抗αｖβ６抗体組成物は抗αｖβ６抗体またはそのαｖβ６結合性断片を１７５ｍｇ／ｍｌの濃度で含む。場合によっては、抗αｖβ６抗体組成物は抗αｖβ６抗体またはそのαｖβ６結合性断片を１５０ｍｇ／ｍｌの濃度で含む。他の例では、抗αｖβ６抗体組成物は抗αｖβ６抗体またはそのαｖβ６結合性断片を１２５ｍｇ／ｍｌの濃度で含む。ある場合には、抗αｖβ６抗体組成物は抗αｖβ６抗体またはそのαｖβ６結合性断片を１００ｍｇ／ｍｌの濃度で含む。
【００６３】
本明細書に記載の抗αｖβ６抗体またはそのαｖβ６結合性断片を含む組成物（例えば医薬組成物）は、様々な形態のうちのいずれか１つにあり得る。これらとしては、例えば、液体溶液（例えば、注射液及び点滴液）、分散体または懸濁液が挙げられる。好ましい形態は、意図される投与様式及び治療用途によって決まり得る。特定の実施形態では、本明細書に記載の医薬組成物は無菌の注射液または点滴液の形態である。
【００６４】
無菌注射液は、所要量の本明細書に記載の抗体を原料の１つまたは組合せと混合してその後に無菌濾過することによって調製され得る。一般に、分散体は、基礎分散媒及び必要な他の原料を含有する無菌ビヒクルの中に本明細書に記載の抗体を混ぜ込むことによって調製される。無菌注射液を調製するための無菌粉末の場合、例示的な調製方法は、本明細書に記載の抗体と任意のさらなる所望の原料とが合わさった粉末を、先に無菌濾過されたそれらの溶液から得る真空乾燥及び凍結乾燥である。例えば、レシチンなどのコーティング剤の使用、分散体の場合での必要な粒径の維持、及び界面活性剤の使用によって、溶液の適度の流動性を維持することができる。
【００６５】
抗αｖβ６抗体組成物（例えば医薬組成物）はさらに、１つ以上の賦形剤を含んでいてもよい。
【００６６】
一実施形態では、賦形剤は、その賦形剤を含まない医薬組成物の中の抗体の凝集及び／または粘度と比較して、組成物中の抗体の凝集及び／または粘度を減らす／低減する。特定の実施形態では、そのような賦形剤はアルギニンである。一例において、賦形剤はＬ−アルギニン塩酸塩である。アルギニン（例えばＬ−アルギニン塩酸塩）は組成物中に４０〜２６０ｍＭ、５０〜２５０ｍＭ、５０〜２００ｍＭ、５０〜１５０ｍＭ、５０〜１２５ｍＭ、５０〜１００ｍＭ、７５〜２５０ｍＭ、７５〜２００ｍＭ、７５〜１５０ｍＭ、または７５〜１００ｍＭの濃度で含まれ得る。特定の実施形態では、アルギニン（例えば、Ａｒｇ．ＨＣｌ）は組成物中に５０〜２５０ｍＭの濃度で存在する。他の実施形態では、アルギニン（例えば、Ａｒｇ．ＨＣｌ）は組成物中に５０〜２００ｍＭの濃度で存在する。場合によっては、アルギニン（例えばアルギニン塩酸塩）は組成物中に８０ｍＭ、１００ｍＭ、１２０ｍＭ、１２５ｍＭ、１３０ｍＭ、１３５ｍＭ、１４０ｍＭ、１４５ｍＭ、１５０ｍＭ、２２０ｍＭまたは２６０ｍＭの濃度で含まれ得る。具体例において、アルギニン（例えばアルギニン塩酸塩）は組成物中に１００ｍＭの濃度で含まれ得る。別の具体例において、アルギニン（例えばアルギニン塩酸塩）は組成物中に１５０ｍＭの濃度で含まれ得る。
【００６７】
アルギニンを含有する溶液は、室温またはより高い温度（例えば４０℃）でのインキュベーション後に視認可能粒子を発達させることがある。スクロースを添加することによって、視認可能粒子の形成を軽減または防止することができる。さらに、スクロースは、視認不可微粒子の計数を低下させることができる。いくつかの実施形態では、抗αｖβ６抗体組成物はスクロースを０．０５〜５％、０．０５〜４％、０．０５〜３％、１〜５％、１〜４％、１〜３％、２〜５％、２〜４％、または２〜３％の濃度で含む。特定の実施形態では、抗αｖβ６抗体組成物はスクロースを０．５％、１％、１．５％、２％、２．５％、３％、３．５％、４％、４．５％または５％の濃度で含む。ある実施形態では、抗αｖβ６抗体組成物はスクロースを３％の濃度で含む。別のある実施形態では、抗αｖβ６抗体組成物はスクロースを１％の濃度で含む。
【００６８】
一実施形態では、抗αｖβ６抗体組成物はメチオニンを含む。一例において、メチオニンは組成物中に０．５〜２５ｍＭの濃度で含まれる。別の例では、メチオニンは組成物中に１〜１０ｍＭの濃度で含まれる。別の例では、メチオニンは組成物中に３〜８ｍＭの濃度で含まれる。一例において、メチオニンは組成物中に１ｍＭ、２ｍＭ、５ｍＭ、１０ｍＭ、１５ｍＭ、２０ｍＭまたは２５ｍＭの濃度で含まれる。ある例において、メチオニンは組成物中に１０ｍＭの濃度で含まれる。別のある例において、メチオニンは組成物中に５ｍＭの濃度で含まれる。
【００６９】
抗体製品製造は、いくつかのステップ、例えば、原薬及びバルク製剤化、濾過、出荷、貯留、充填、凍結乾燥、検査、梱包及び貯蔵などを含み得る複雑なプロセスである。これらのステップの間、抗体は多種多様な形態のストレス、例えば、撹拌、温度、光曝露及び酸化に曝され得る。これらの類のストレスは抗体の変性及び凝集を招くことがあるが、これは製品の質を悪化させるものであり、生産バッチの損失を招く可能性さえある。撹拌は、製造プロセスの過程において抗体治療剤が曝される一般的な物理的ストレスの１つである。撹拌は例えば混合、限外濾過／透析濾過、圧送、出荷及び充填の最中に起こる。撹拌によって引き起こされるストレスから抗体組成物を保護するために、組成物はポリソルベートを含み得る。特定の実施形態では、組成物はポリソルベート８０を０．０１〜０．５％、０．０１〜０．１％、０．０１〜０．０９％、０．０１〜０．０８％、０．０１〜０．０７％、０．０１〜０．０６％、０．０１〜０．０５％、０．０１〜０．０４％、または０．０１〜０．０３％の濃度で含む。特定の実施形態では、組成物はポリソルベート８０を０．０２〜０．０８％の濃度で含む。いくつかの実施形態では、組成物はポリソルベート８０を０．０１％、０．０２％、０．０３％、０．０４％、０．０５％、０．０６％、０．０７％、０．０８％、０．０９％または０．１％の濃度で含む。ある実施形態では、組成物はポリソルベート８０を０．０５％の濃度で含む。
【００７０】
いかなる抗体組成物も、良好な緩衝能を提供する緩衝剤によって利益を得る。特定の実施形態では、抗体組成物はクエン酸ナトリウム及びクエン酸を緩衝剤として含む。特定の実施形態では、組成物はクエン酸ナトリウム及びクエン酸を５〜５０ｍＭ、５〜４０ｍＭ、５〜３５ｍＭ、５〜３０ｍＭ、５〜２５ｍＭ、１０〜５０ｍＭ、１０〜４０ｍＭ、１０〜３０ｍＭ、１０〜２５ｍＭ、１５〜５０ｍＭ、１５〜４０ｍＭ、１５〜３０ｍＭ、または１５〜２５ｍＭの濃度で含む。特定の実施形態では、組成物はクエン酸ナトリウム及びクエン酸を５〜３５ｍＭの濃度で含む。特定の実施形態では、組成物はクエン酸ナトリウム及びクエン酸を１０〜３０ｍＭの濃度で含む。いくつかの実施形態では、組成物はクエン酸ナトリウム及びクエン酸を５ｍＭ、１０ｍＭ、１５ｍＭ、２０ｍＭ、２５ｍＭ、３０ｍＭまたは３５ｍＭの濃度で含む。ある実施形態では、組成物はクエン酸ナトリウム及びクエン酸を２０ｍＭの濃度で含む。
【００７１】
抗体組成物のｐＨは５．０〜６．５であり得る。場合によっては、抗体組成物のｐＨは５．２〜６．２であり得る。場合によっては、抗体組成物のｐＨは、５．０、５．１、５．２、５．３、５．４、５．５、５．６、５．７、５．８、５．９、６．０、６．１、６．２、６．３、６．４、または６．５である。ある実施形態では、抗体組成物のｐＨは５．５である。
【００７２】
ある場合には、抗αｖβ６抗体組成物はＬ−アルギニン塩酸塩（例えば、１５０ｍＭ）及びメチオニン（例えば５ｍＭ）を含む。場合によっては、これらの組成物のｐＨは５．５である。
【００７３】
ある場合には、抗αｖβ６抗体組成物は、Ｌ−アルギニン塩酸塩（例えば１５０ｍＭ）、メチオニン（例えば５ｍＭ）及び緩衝剤（例えば２０ｍＭのクエン酸ナトリウム及びクエン酸）を含む。場合によっては、これらの組成物のｐＨは５．５である。
【００７４】
ある場合には、抗αｖβ６抗体組成物は、Ｌ−アルギニン塩酸塩（例えば１５０ｍＭ）、メチオニン（例えば５ｍＭ）及びＰＳ８０（例えば０．０５％）を含む。場合によっては、これらの組成物のｐＨは５．５である。
【００７５】
特定の実施形態では、抗αｖβ６抗体組成物は、Ｌ−アルギニン塩酸塩（例えば１５０ｍＭ）、メチオニン（例えば５ｍＭ）、クエン酸ナトリウム及びクエン酸（例えば２０ｍＭ）ならびにＰＳ８０（例えば０．０５％）を含み、ｐＨが５．２〜６．２である。いくつかの実施形態では、抗αｖβ６組成物は、Ｌ−アルギニン塩酸塩（例えば１５０ｍＭ）、メチオニン（例えば５ｍＭ）、クエン酸ナトリウム及びクエン酸（例えば２０ｍＭ）ならびにＰＳ８０（例えば０．０５％）を含み、ｐＨが５．５である。特定の実施形態では、抗αｖβ６組成物は、Ｌ−アルギニン塩酸塩（例えば１５０ｍＭ）、メチオニン（例えば５ｍＭ）、クエン酸ナトリウム及びクエン酸（例えば２０ｍＭ）、ＰＳ８０（例えば０．０５％）ならびにスクロース（３％以下）を含み、ｐＨが５．２〜６．２である。いくつかの実施形態では、抗αｖβ６組成物は、Ｌ−アルギニン塩酸塩、メチオニン、クエン酸ナトリウム及びクエン酸、ＰＳ８０を含み、ｐＨが５．５である。これらの実施形態の全てにおいて、抗αｖβ６抗体は１００〜１６５ｍｇ／ｍｌの濃度で存在する。一例において、抗αｖβ６抗体は１５０ｍｇ／ｍｌの濃度で存在する。一例において、抗αｖβ６抗体は１００ｍｇ／ｍｌの濃度で存在する。
【００７６】
ある場合には、抗αｖβ６組成物は、チオール含有酸化防止剤（例えば、還元型グルタチオン（ＧＳＨ）、酸化型グルタチオン（ＧＳＳＧ）、ＧＳＨ＋ＧＳＳＧ、システイン、シスチン、システイン＋シスチン）を０．０２〜２ｍＭ（例えば、０．０２、０．０３、０．０５、０．０６、０．０８、０．１、０．２、０．３、０．４、０．５、０．６、０．７、０．８、０．９、１．０、１．１、１．２、１．３、１．４、１．５、１．６、１．７、１．８、１．９または２．０ｍＭ）の濃度で含む。そのようなチオール含有酸化防止剤は、不都合な、または誤架橋したジスルフィド結合を切断することができ、好都合な、または適切に架橋したジスルフィド結合の形成を促進することができる。これは、抗体またはその断片の本来の確証の安定化をもたらすであろうし、凝集速度を落とさせるであろう。これらの分子の酸化防止剤特性は、凝集を招く酸化プロセスを減速させ得る。ある場合には、組成物はＧＳＨを０．４ｍＭの濃度で含む。ある場合には、組成物はＧＳＳＧを０．２ｍＭの濃度で含む。ある場合には、組成物は０．４ｍＭの濃度のＧＳＨ及び０．２ｍＭの濃度のＧＳＳＧを含む。ある場合には、組成物はシステインを０．４ｍＭの濃度で含む。ある場合には、組成物はシスチンを０．２ｍＭの濃度で含む。ある場合には、組成物は０．４ｍＭの濃度のシステイン及び０．２ｍＭの濃度のシスチンを含む。
【００７７】
特定の実施形態では、抗αｖβ６抗体組成物は、Ｌ−アルギニン塩酸塩（例えば１５０ｍＭ）、メチオニン（例えば５ｍＭ）、クエン酸ナトリウム及びクエン酸（例えば２０ｍＭ）、チオール含有酸化防止剤、例えば、ＧＳＨ、ＧＳＳＧ、ＧＳＨとＧＳＳＧ、システイン、シスチン、またはシステインとシスチン（例えば、０．０２〜２ｍＭ）、ならびにＰＳ８０（例えば０．０５％）を含み、ｐＨが５．２〜６．２である。いくつかの実施形態では、抗αｖβ６抗体組成物は、Ｌ−アルギニン塩酸塩（例えば１５０ｍＭ）、メチオニン（例えば５ｍＭ）、クエン酸ナトリウム及びクエン酸（例えば２０ｍＭ）、チオール含有酸化防止剤、例えば、ＧＳＨ、ＧＳＳＧ、ＧＳＨとＧＳＳＧ、システイン、シスチン、またはシステインとシスチン（例えば、０．０２〜２ｍＭ）、ならびにＰＳ８０（例えば０．０５％）を含み、ｐＨが５．５である。特定の実施形態では、抗αｖβ６抗体組成物は、Ｌ−アルギニン塩酸塩（例えば１５０ｍＭ）、メチオニン（例えば５ｍＭ）、クエン酸ナトリウム及びクエン酸（例えば２０ｍＭ）、ＰＳ８０（例えば０．０５％）、チオール含有酸化防止剤、例えば、ＧＳＨ、ＧＳＳＧ、ＧＳＨとＧＳＳＧ、システイン、シスチン、またはシステインとシスチン（例えば、０．０２〜２ｍＭ）、ならびにスクロース（３％以下）を含み、ｐＨが５．２〜６．２である。いくつかの実施形態では、抗αｖβ６抗体組成物は、Ｌ−アルギニン塩酸塩、メチオニン、ヒスチジン、ＰＳ８０、及びチオール含有酸化防止剤、例えば、ＧＳＨ、ＧＳＳＧ、ＧＳＨとＧＳＳＧ、システイン、シスチン、またはシステインとシスチンを含み、ｐＨが５．５である。これらの実施形態の全てにおいて、抗αｖβ６抗体は１００〜１６５ｍｇ／ｍｌの濃度で存在する。一例において、抗αｖβ６抗体は１５０ｍｇ／ｍｌの濃度で存在する。一例において、抗αｖβ６抗体は１００ｍｇ／ｍｌの濃度で存在する。
【００７８】
特定の実施形態では、抗αｖβ６抗体組成物は、Ｌ−アルギニン塩酸塩（例えば１５０ｍＭ）、クエン酸ナトリウム緩衝剤（クエン酸ナトリウム及びクエン酸）（例えば２０ｍＭ）、チオール含有酸化防止剤、例えば、ＧＳＨ、ＧＳＳＧ、ＧＳＨとＧＳＳＧ、システイン、シスチン、またはシステインとシスチン（例えば、０．０２〜２ｍＭ）、ならびにＰＳ８０（例えば０．０５％）を含み、ｐＨが５．２〜６．２である。いくつかの実施形態では、抗αｖβ６抗体組成物は、Ｌ−アルギニン塩酸塩（例えば１５０ｍＭ）、クエン酸ナトリウム及びクエン酸（例えば２０ｍＭ）、チオール含有酸化防止剤、例えば、ＧＳＨ、ＧＳＳＧ、ＧＳＨとＧＳＳＧ、システイン、シスチン、またはシステインとシスチン（例えば、０．０２〜２ｍＭ）、ならびにＰＳ８０（例えば０．０５％）を含み、ｐＨが５．５である。特定の実施形態では、抗αｖβ６抗体組成物は、Ｌ−アルギニン塩酸塩（例えば１５０ｍＭ）、クエン酸ナトリウム及びクエン酸（例えば２０ｍＭ）、ＰＳ８０（例えば０．０５％）、チオール含有酸化防止剤、例えば、ＧＳＨ、ＧＳＳＧ、ＧＳＨとＧＳＳＧ、システイン、シスチン、またはシステインとシスチン（例えば、０．０２〜２ｍＭ）、ならびにスクロース（３％以下）を含み、ｐＨが５．２〜６．２である。いくつかの実施形態では、抗αｖβ６抗体組成物は、Ｌ−アルギニン塩酸塩、ヒスチジン、ＰＳ８０及び、チオール含有酸化防止剤、例えば、ＧＳＨ、ＧＳＳＧ、ＧＳＨとＧＳＳＧ、システイン、シスチン、またはシステインとシスチンを含み、ｐＨが５．５である。これらの実施形態の全てにおいて、抗αｖβ６抗体は１００〜１６５ｍｇ／ｍｌの濃度で存在する。一例において、抗αｖβ６抗体は１５０ｍｇ／ｍｌの濃度で存在する。一例において、抗αｖβ６抗体は１００ｍｇ／ｍｌの濃度で存在する。
【００７９】
特定の実施形態では、組成物（例えば医薬組成物）は、７５〜２５０ｍｇ／ｍｌの濃度の抗αｖβ６抗体またはそのαｖβ６結合性断片、５０〜２００ｍＭの濃度のアルギニン（例えばＬ−アルギニン塩酸塩）、１〜１０ｍＭの濃度のメチオニン、０．０１〜０．１％の濃度のポリソルベート８０、１０〜３０ｍＭの濃度のクエン酸ナトリウム及びクエン酸、ならびに０〜３％の濃度のスクロースを含む。組成物のｐＨは５．２〜６．０である。特定の実施形態では、組成物の抗αｖβ６抗体またはそのαｖβ６結合性断片は、ＳＴＸ−１００のＣＤＲ（例えば、配列番号１または１１、２、３、４、５及び６）を含むＶＨ及びＶＬを含む。特定の実施形態では、組成物の抗αｖβ６抗体またはそのαｖβ６結合性断片は、配列番号７及び８をそれぞれ含むＶＨ及びＶＬを含む。いくつかの実施形態では、組成物の抗αｖβ６抗体またはそのαｖβ６結合性断片は、配列番号９及び１０をそれぞれ含む重鎖及び軽鎖を含む。一実施形態では、組成物はｐＨが５．５であり、１５０ｍｇ／ｍｌの濃度のＳＴＸ−１００またはそのＳＴＸ−１００結合性断片、１５０ｍＭの濃度のＬ−アルギニン塩酸塩、５ｍＭの濃度のメチオニン、０．０５％の濃度のポリソルベート８０、ならびに２０ｍＭの濃度のクエン酸ナトリウム及びクエン酸を含む。特定の実施形態では、組成物はさらにチオール含有酸化防止剤（例えば、ＧＳＨ、ＧＳＳＧ、ＧＳＨ＋ＧＳＳＧ、システイン、シスチン、システイン＋シスチン）を０．０２〜２ｍＭの濃度で含む。いくつかの実施形態では、組成物はさらにスクロースを０．０１〜３％の濃度で含む。特定の実施形態では、組成物の抗αｖβ６抗体またはそのαｖβ６結合性断片は、ＳＴＸ−１００のＣＤＲ（例えば、配列番号１または１１、２、３、４、５及び６）を含むＶＨ及びＶＬを含む。特定の実施形態では、組成物の抗αｖβ６抗体またはそのαｖβ６結合性断片は、配列番号７及び８をそれぞれ含むＶＨ及びＶＬを含む。いくつかの実施形態では、組成物の抗αｖβ６抗体またはそのαｖβ６結合性断片は、配列番号９及び１０をそれぞれ含む重鎖及び軽鎖を含む。
【００８０】
一実施形態では、組成物はｐＨが５．５であり、１５０ｍｇ／ｍｌの濃度のＳＴＸ−１００またはそのＳＴＸ−１００結合性断片、１５０ｍＭの濃度のＬ−アルギニン塩酸塩、０．０２〜２ｍＭの濃度のチオール含有酸化防止剤（例えば、ＧＳＨ、ＧＳＳＧ、ＧＳＨ＋ＧＳＳＧ、システイン、シスチン、システイン＋シスチン）、０．０５％の濃度のポリソルベート８０、ならびに２０ｍＭの濃度のクエン酸ナトリウム及びクエン酸を含む。一実施形態では、チオール含有酸化防止剤は０．４ｍＭの濃度のＧＳＨである。一実施形態では、チオール含有酸化防止剤は０．４ｍＭの濃度のＧＳＨ及び０．２ｍＭの濃度のＧＳＳＧである。別の実施形態では、チオール含有酸化防止剤は０．４ｍＭの濃度のシステインである。別の実施形態では、チオール含有酸化防止剤は０．４ｍＭの濃度のシステイン及び０．２ｍＭの濃度のシスチンである。
【００８１】
投薬
上記抗αｖβ６抗体（例えばＳＴＸ−１００）またはそのαｖβ６結合性断片は様々な用量で対象、例えばヒト対象に投与され得る。抗αｖβ６抗体（例えばＳＴＸ−１００）またはそのαｖβ６結合性断片は、固定用量として（つまり、患者の体重に無関係に）、またはｍｇ／ｋｇ用量で（つまり、対象の体重に基づいて変化する用量で）投与され得る。本明細書中で使用する単位剤形または「固定用量」は、治療する対象のための単位投薬量として適した物理的に不連続な単位を指し、各単位は、所望の治療効果を生み出すべく算出された所定量の活性化合物を、必要な医薬担体と一緒に、及び任意選択的に他の薬剤と一緒に含有する。単回または多回投薬量が与えられ得る。治療は数日間、数週間、数ヶ月間、さらには数年間継続され得る。
【００８２】
特定の実施形態では、成人ヒト対象における本明細書に記載の適応症を治療するためには、抗αｖβ６抗体（例えばＳＴＸ−１００）またはそのαｖβ６結合性断片の投薬量は、４０〜６４ｍｇの固定用量を週に１回である。一実施形態では、成人ヒト対象における本明細書に記載の適応症を治療するためには、抗αｖβ６抗体（例えばＳＴＸ−１００）またはそのαｖβ６結合性断片の投薬量は、４０ｍｇの固定用量を週に１回である。別の実施形態では、抗αｖβ６抗体またはそのαｖβ６結合性断片の投薬量は、４８ｍｇの固定用量を週に１回である。別の実施形態では、抗αｖβ６抗体またはそのαｖβ６結合性断片の投薬量は、５６ｍｇの固定用量を週に１回である。別の実施形態では、抗αｖβ６抗体またはそのαｖβ６結合性断片の投薬量は、６４ｍｇの固定用量を週に１回である。
【００８３】
特定の実施形態では、成人ヒト対象における本明細書に記載の適応症を治療するためには、抗αｖβ６抗体（例えばＳＴＸ−１００）またはそのαｖβ６結合性断片の投薬量は０．３〜１．０ｍｇ／ｋｇのｍｇ／ｋｇ用量である。一実施形態では、成人ヒト対象における本明細書に記載の適応症を治療するためには、抗αｖβ６抗体（例えばＳＴＸ−１００）またはそのαｖβ６結合性断片の投薬量は０．５〜０．８ｍｇ／ｋｇのｍｇ／ｋｇ用量である。一実施形態では、成人ヒト対象における本明細書に記載の適応症を治療するためには、抗αｖβ６抗体（例えばＳＴＸ−１００）またはそのαｖβ６結合性断片の投薬量は０．５ｍｇ／ｋｇのｍｇ／ｋｇ用量である。別の実施形態では、成人ヒト対象における本明細書に記載の適応症を治療するためには、抗αｖβ６抗体（例えばＳＴＸ−１００）またはそのαｖβ６結合性断片の投薬量は０．６ｍｇ／ｋｇのｍｇ／ｋｇ用量である。別の実施形態では、成人ヒト対象における本明細書に記載の適応症を治療するためには、抗αｖβ６抗体（例えばＳＴＸ−１００）またはそのαｖβ６結合性断片の投薬量は０．７ｍｇ／ｋｇのｍｇ／ｋｇ用量である。さらに別の実施形態では、成人ヒト対象における本明細書に記載の適応症を治療するためには、抗αｖβ６抗体（例えばＳＴＸ−１００）またはそのαｖβ６結合性断片の投薬量は０．８ｍｇ／ｋｇのｍｇ／ｋｇ用量である。
【００８４】
場合によっては、抗αｖβ６抗体またはそのαｖβ６結合性断片を、当技術分野で認められているＩＰＦ用治療剤の治療的有効量と組み合わせて投与する。
【００８５】
本発明の抗体と組み合わせて使用され得る、当技術分野で認められている例示的な治療選択肢としては、コルチコステロイド（プレドニゾン）、シクロホスファミド（Ｃｙｔｏｘａｎ（登録商標））、アザチオプリン（Ｉｍｕｒａｎ（登録商標））、ミコフェノール酸モフェチル（Ｃｅｌｌｃｅｐｔ（登録商標）、Ｍｙｆｏｒｔｉｃ（登録商標））、Ｎ−アセチルシステイン（ＮＡＣ）、ニンテダニブ（Ｏｆｅｖ（登録商標））、ピルフェニドン（Ｅｓｂｒｉｅｔ（登録商標）、Ｐｉｒｆｅｎｅｘ（登録商標）、Ｐｉｒｅｓｐａ（登録商標））、プロトンポンプ阻害剤（Ｐｒｉｌｏｓｅｃ  ＯＴＣ（登録商標）、Ｎｅｘｉｕｍ（登録商標）、その他）、または補助酸素療法が挙げられる。
【００８６】
一実施形態では、本発明の抗体をピルフェニドン（ｐｒｉｆｅｎｉｄｏｎｅ）またはニンテダニブと併用する。場合によっては、本発明の抗体と組み合わせて対象にピルフェニドン（ｐｒｉｆｅｎｉｄｏｎｅ）を以下：
【化８】
2020531521.tif 000011
のとおりに投与する。場合によっては、本発明の抗体と併用して対象に１５０ｍｇの固定用量のニンテダニブの治療的有効量を１日２回投与する。
【００８７】
場合によっては、結合組織成長因子（ＣＴＧＦ）の活性を阻害する抗体、例えば、限定されないが、完全ヒトモノクローナル抗体であるパムレブルマブと組み合わせて抗αｖβ６抗体またはそのαｖβ６結合性断片を投与する。
【００８８】
場合によっては、治療的有効量の選択的オートタキシン阻害剤（例えばＧＬＰＧ１６９０）と組み合わせて抗αｖβ６抗体またはそのαｖβ６結合性断片を投与する。
【００８９】
場合によっては、抗αｖβ６抗体またはそのαｖβ６結合性断片を治療的有効量のＧＢＴ−４４０と組み合わせて投与する。
【００９０】
医薬組成物は「治療的有効量」の本明細書に記載の薬剤を含み得る。そのような有効量は、投与される薬剤の効果に基づいて、または１つより多い薬剤を使用する場合には薬剤の合わさった効果に基づいて決定され得る。薬剤の治療的有効量はまた、個体の疾患状態、年齢、性別及び体重、ならびに個体における所望の応答を引き出す化合物の能力などの因子によっても様々であり得る。治療的有効量はまた、治療上有益な効果が組成物のいかなる毒性または有害影響も上回るものである。特定の実施形態では、抗αｖβ６抗体またはそのαｖβ６結合性断片の治療的有効量は４０〜６４ｍｇである。一実施形態では、抗αｖβ６抗体またはそのαｖβ６結合性断片の治療的有効量は４０ｍｇである。別の実施形態では、抗αｖβ６抗体またはそのαｖβ６結合性断片の治療的有効量は４８ｍｇである。さらに別の実施形態では、抗αｖβ６抗体またはそのαｖβ６結合性断片の治療的有効量は５６ｍｇである。さらに別の実施形態では、抗αｖβ６抗体またはそのαｖβ６結合性断片の治療的有効量は６４ｍｇである。
【００９１】
抗αｖβ６抗体またはそのαｖβ６結合性断片の投与経路及び／または様式は個々の対象に合わせて変えることができる。多くの用途において、投与経路は、皮下注射（ＳＣ）、静脈内注射もしくは輸注（ＩＶ）、腹腔内投与（ＩＰ）または筋肉内注射のうちの１つである。一実施形態では、投与経路は皮下である。別の実施形態では、投与経路は静脈内である。
【００９２】
抗αｖβ６抗体またはそのαｖβ６結合性断片を単独で、または非αｖβ６抗体薬剤（複数可）と組み合わせて含む医薬組成物は、医療装置で投与され得る。装置は、緊急事態において例えば訓練されていない対象または当分野の救急隊員が使用することができ、医療施設及び他の医療設備へ移動させることができるような、可搬性、室温保管、及び使用し易さなどの特徴を有して設計されたものであり得る。装置は、例えば、抗αｖβ６抗体またはそのαｖβ６結合性断片を含む医薬調合物を保存するための１つ以上の筐体を含み得、抗αｖβ６抗体または他の薬剤の１つ以上の単位用量を送達するように構成され得る。
【００９３】
例えば、針なし皮下注射装置、例えば、ＵＳ５，３９９，１６３、５，３８３，８５１、５，３１２，３３５、５，０６４，４１３、４，９４１，８８０、４，７９０，８２４または４，５９６，５５６に開示されている装置で医薬組成物を投与することができる。よく知られている埋植物及びモジュールの例としては、制御された速度で医薬を皮膚の中に分注するための埋込型微量輸注ポンプを開示しているＵＳ４，４８７，６０３、医薬を皮膚の中に投与するための治療装置を開示しているＵＳ４，４８６，１９４、正確な輸注速度で医薬を送達するための医薬輸注ポンプを開示しているＵＳ４，４４７，２３３、連続的薬物送達のための可変流量埋込型輸注機器を開示しているＵＳ４，４４７，２２４、複数のチャンバ区画を有する浸透圧薬物送達システムを開示しているＵＳ４，４３９，１９６、浸透圧薬物送達システムを開示しているＵＳ４，４７５，１９６が挙げられる。他にも多くの装置、埋植物、送達システム及びモジュールが知られている。
【００９４】
一実施形態では、シリンジで抗αｖβ６抗体またはそのαｖβ６結合性断片をヒト対象に投与する。別の実施形態では、皮下送達用ポンプで抗αｖβ６抗体またはそのαｖβ６結合性断片をヒト対象に投与する。いくつかの実施形態では、自動注射器で抗αｖβ６抗体またはそのαｖβ６結合性断片をヒト対象に投与する。他の実施形態では、皮下用大容量注射器で抗αｖβ６抗体またはそのαｖβ６結合性断片をヒト対象に投与する。
【００９５】
本開示は、抗αｖβ６抗体（例えばＳＴＸ−１００）またはそのαｖβ６結合性断片の無菌調合物を含むポンプまたはシリンジを提供する。シリンジまたはポンプは、抗αｖβ６抗体またはそのαｖβ６結合性断片の皮下投与に適合したものであり得る。ある場合には、シリンジまたはポンプは、固定用量（複数可）（例えば、４０ｍｇ、４８ｍｇ、５６ｍｇまたは６４ｍｇ）の抗αｖβ６抗体またはそのαｖβ６結合性断片を送達する。
【００９６】
本開示はまた、上記医薬組成物の無菌調合物を含むポンプ、シリンジまたは注射器（例えば、自動注射器、皮下用大容量注射器）を提供する。シリンジまたはポンプは、抗αｖβ６抗体またはそのαｖβ６結合性断片を含む医薬組成物の皮下投与に適したものであり得る。ある場合には、シリンジまたはポンプは、固定用量（複数可）（例えば、４０ｍｇ、４８ｍｇ、５６ｍｇまたは６４ｍｇ）の抗αｖβ６抗体またはそのαｖβ６結合性断片を送達する。
【００９７】
治療方法
本開示の抗体は、αｖβ６によって媒介される疾患の防止を含めた治療に有用である。例えば、これらの抗体を使用して、ＴＧＦ−βの活性化を遮断すること、または他の任意のリガンド、例えば、フィブロネクチン、ビトロネクチン及びテネイシンに対するβ６の結合を遮断することによって線維症（例えば、肺線維症、腎線維症、肺線維症、心臓線維症）、急性肺損傷、急性腎損傷、アルポート症候群、乾癬、強皮症及び、肺、肝臓または腎臓の硬化症を治療することができる。この手法の新規性としては、（１）それがＴＧＦ−βとその受容体との結合ではなくＴＧＦ−βの活性化を遮断すること、（２）それがＴＧＦ−βを全身的ではなく局所的に（つまり、αｖβ６上方制御の部位で）阻害することができること、及び（３）それがリガンドに対するαｖβ６の結合を阻害することが挙げられる。
【００９８】
本開示の抗体は、線維性疾患または症状の他にも、がんまたはがん転移（腫瘍成長及び浸潤を含む）、特に上皮癌を治療するのに有用である。上皮癌のサブセットは、扁平上皮細胞癌腫、例えば、頭頸部、口腔、乳房、肺、前立腺、子宮頸部、咽頭、結腸、膵臓及び卵巣のがんである。
【００９９】
本発明のさらなる実施形態において、αｖβ６結合抗体またはその断片は、癌腫を有するかまたはそれを発症するリスクがあるヒトを治療するための治療計画において使用され得る。本発明のそのような方法は、がんならびに、腫瘍成長、転移及び血管新生を含めた関連事象を治療するのに役立つ。とりわけ、疾患に罹患している哺乳動物の組織または細胞におけるαｖβ６発現のレベルの上昇を特徴とし、上昇したレベルでαｖβ６が発現している組織または細胞を標的としてそれらの組織または細胞を排除する治療が奏効する疾患またはがんに、そのような手法を用いることができる。これらの方法でとりわけ治療することができる疾患としては、上皮組織の転移がん（すなわち転移癌腫及び／または腺癌）が挙げられ、これには、乳房、卵巣、前立腺、肝臓、肺、膵臓、結腸、頭頸部組織（例えば、口腔、咽頭、舌及び喉頭組織）、子宮内膜、子宮頸部、胃及び脾臓のものが含まれる。本発明のこれらの方法による治療に特に適しているのは、子宮内膜、膵臓、結腸（例えば結腸直腸癌腫）、子宮頸部、肺及び乳房の癌腫である（乳房の非浸潤性乳管癌（ＤＣＩＳ）及び非浸潤性小葉癌（ＬＣＩＳ）を含む）。
【０１００】
以下は本発明の実施の例である。それらは決して本発明の範囲を限定するとみなされるべきでない。
【実施例】
【０１０１】
これらの実施例は、一部において、ＳＴＸ−１００の安定な高濃度（例えば１００ｍｇ／ｍｌ以上）の液体製剤の開発に関する。
【０１０２】
実施例１：製剤化前評価
最初の製剤化前評価の間、加速安定性試験を行ってＳＴＸ−１００の高濃度液体製剤に適するｐＨ、緩衝剤及び賦形剤成分を探索した。１０ｍＭのクエン酸Ｎａ／クエン酸ｐＨ５．０、１５０ｍＭのアルギニン塩酸塩（アルギニン−ＨＣｌ）を含有する製剤マトリックスを比較のための対照として使用した。賦形剤スクリーニングのために、グリシン、リジン、アルギニン−ＨＣｌ及びメチオニンのようなアミノ酸、ソルビトール、トレハロース、マンニトール、スクロースのような糖、及び緩衝剤系、例えばクエン酸塩及び酢酸塩を試験した。４．４〜５．７のｐＨ範囲も評価した。
【０１０３】
製剤に対して、加速安定性評価を４０℃のインキュベーションで４週間にわたって実施した。以下の品質特性を追跡評価した：視認可能微粒子及び澄明性、％高分子量種（ＳＥＣによる）、総視認不可微粒子（ＭＦＩによる）、濁度（ＯＤ３４０による）、ｐＨ、フラグメンテーション（ＧＸＩＩによる）、％総酸性アイソフォーム（ｉＣＩＥＦによる）、ならびにＴ０での粘度。最大重み付けを凝集物レベル及び粒子形成のような重要品質特性（ＣＱＡ）に割り当て、製剤選択において利用した。凝集物レベル及び粒子形成の量が最も少ない製剤をさらなる評価のために選択した。
【０１０４】
データは、アルギニン及びトレハロースを含有する製剤が他のものに比べて最も安定であることを示した（表２、図１Ａ〜図１Ｃ、及び図２）。
表２。製剤化前の緩衝剤−賦形剤スクリーニング試験の結果
【表２】
2020531521.tif 000012
【０１０５】
２５ｍＭのメチオニンの付加的存在は、アルギニン含有製剤に対してより大きな凝集耐性を付与した（図１Ａ）。
【０１０６】
加速条件下、７５〜３００ｍＭのＡｒｇ−ＨＣｌを含有する製剤がｐＨ４．４ではゲル形成を呈したのに対し、ｐＨ５．２〜５．７の範囲ではゲル形成が認められなかった（図２）。図１Ａ及び図２にみられるように、これらの製剤で認められた％総凝集物の増加は、緩衝剤−賦形剤スクリーニング及びｐＨ−アルギニンスクリーニングの全体においてもより低かった。１５０ｍＭのＡｒｇＨＣｌでは、ｐＨ５．２とｐＨ５．７との間に凝集に有意差はなく（図２）、凝集を最小限に抑える所望の設定点がこのｐＨ範囲内に含まれている可能性が最も高いであろうことが示唆された。
【０１０７】
実施例２：中長期安定性試験及び製剤選択
長期（２４ヶ月）安定性試験を遂行するために、実施例１の製剤化前結果に基づいて以下の５つの液体製剤及び対応する容器−閉鎖具（ＣＣ）を選択した：
１）ロット＃１８１６９−６２：１５０ｍｇ／ｍＬのＳＴＸ−１００を含む、２０ｍＭのクエン酸Ｎａ／クエン酸、ｐＨ５．３、１５０ｍＭのアルギニン塩酸塩（Ａｒｇ．ＨＣｌ）、０．０５％のＰＳ−８０（３ｍＬのＳｃｈｏｔｔバイアルに１ｍＬ充填）
２）ロット＃１８１６９−６４：１５０ｍｇ／ｍＬのＳＴＸ−１００を含む、２０ｍＭのクエン酸Ｎａ／クエン酸、ｐＨ５．３、１５０ｍＭのアルギニン塩酸塩（Ａｒｇ．ＨＣｌ）、０．０５％のＰＳ−８０（ＢＤ  Ｈｙｐａｋプレフィル用シリンジに１ｍＬ充填、２７Ｇ針）
３）ロット＃１８１６９−６６：１５０ｍｇ／ｍＬのＳＴＸ−１００を含む、２０ｍＭのクエン酸Ｎａ／クエン酸、ｐＨ５．３、１５０ｍＭのアルギニン塩酸塩（Ａｒｇ．ＨＣｌ）、２５ｍＭのメチオニン、０．０５％のＰＳ−８０（ＢＤ  Ｈｙｐａｋプレフィル用シリンジに１ｍＬ充填、２７Ｇ針）
４）ロット＃１８１６９−６７：１５０ｍｇ／ｍＬのＳＴＸ−１００を含む、２０ｍＭのクエン酸Ｎａ／クエン酸、ｐＨ５．３、２００ｍＭのトレハロース、０．０５％のＰＳ−８０（ＢＤ  Ｈｙｐａｋプレフィル用シリンジに１ｍＬ充填、２７Ｇ針）
５）ロット＃１８１６９−７２：２５０ｍｇ／ｍＬのＳＴＸ−１００を含む、２０ｍＭのクエン酸Ｎａ／クエン酸、ｐＨ５．３、１５０ｍＭのアルギニン塩酸塩（Ａｒｇ．ＨＣｌ）、２５ｍＭのメチオニン、０．０５％のＰＳ−８０（ＢＤ  Ｈｙｐａｋプレフィル用シリンジに１ｍＬ充填、２７Ｇ針）。
凝集データ：安定性データは、上に列挙される５つ全ての製剤が５℃で１２ヶ月の貯蔵全体にわたって低い凝集傾向を呈し、全ての製剤にわたって％総凝集物の増加が０．２〜０．３％しかなかったことを示した（表３）。
表３。ＳＥＣ−ＵＰＬＣを用いて測定された長期％総凝集物データ
【表３】
2020531521.tif 000013
データは、プレフィル用シリンジ内（１８１６９−６４）及びバイアル内（１８１６９−６２）に保持された製剤に凝集物レベルの有意差がないことも示している。
視認不可微粒子（ＳＶＰ）データ：凝集データは、安定な液体製剤については有望であったが、マイクロフローイメージング、ＭＦＩによる高い視認不可微粒子（ＳＶＰ）計数の兆候がいくらかあった（表４、表５及び表６）。
表４。総視認不可微粒子／ｍＬ（ＭＦＩ）
【表４−１】
2020531521.tif 000014
【表４−２】
2020531521.tif 000015
表５。視認不可微粒子（＞１０ｕｍ）／ｍＬ（ＭＦＩ）
【表５−１】
2020531521.tif 000016
【表５−２】
2020531521.tif 000017
表６。視認不可微粒子（＞２５ｕｍ）／ｍＬ（ＭＦＩ）
【表６】
2020531521.tif 000018
【０１０８】
しかしながら、これらのＳＶＰは主に、実験室規模のＵＦ／ＤＦプロセス、充填前貯蔵、試験室への出荷の間のＳＴＸ−１００原薬（ＤＳ）の取扱い及び処理、ならびに試験方法に関してあり得る問題に起因していると考えられる。１０ｕｍより大きなＳＶＰの成長速度（ＭＦＩによってより高い感度で検知される）は、２００ｍＭのトレハロースを含有する１８１６９−６７を除くどのアルギニン−ＨＣｌ含有製剤においても大して不安定性を示唆していない。ＳＶＰ計数はまた、バイアル体裁に比べてプレフィル用シリンジ体裁の製剤においてより高いことも認められた。これは、試験方法もまた、そのようなシリンジで一般的に発生するかなりの量のシリコーンオイル微小滴を同定したことを示している。光遮蔽に基づくＨＩＡＣ法（ＵＳＰ−７８８準拠）によるＳＶＰ分析は、所望の５℃の貯蔵条件において不安定性を示さなかった（表７及び表８）。
表７。視認不可微粒子（＞１０ｕｍ）／ｍＬ（ＨＩＡＣ）
【表７】
2020531521.tif 000019
表８。視認不可微粒子（＞２５ｕｍ）／ｍＬ（ＨＩＡＣ）
【表８−１】
2020531521.tif 000020
【表８−２】
2020531521.tif 000021
酸化データ：ＳＴＸ−１００試料に対する過去の強制酸化分析は、第２重鎖ＣＤＲ中に含まれているＭｅｔ−５５ならびにＦｃ領域内の他の２つのメチオニン（Ｍｅｔ−２５５及びＭｅｔ−４３１）の酸化傾向を明らかにした。構造−活性関係性試験から、これらの残基における酸化は抗原に対する結合活性に何ら変化をもたらさないことが明らかになった。この試験では、これらの残基における経時的酸化が、酸化剤であり得るポリソルベート８０の存在に起因する不安定性を招くか否かについても調べた。ＬｙｓＣ切断によって生成した対応するペプチドの中に含まれているＭｅｔ残基（ペプチドＨ２中のＭｅｔ−５５、ペプチドＨ１５中のＭｅｔ−２５５、及びペプチドＨ３０中のＭｅｔ−４３１）において生成させた後にＬＣＭＳ法を用いて％酸化を決定した。全体として、各部位での酸化の大きな増加はなかったが、製剤中の賦形剤としてのメチオニンの存在はこの酸化反応を抑制した（表９Ａ及び表９Ｂ）。
表９Ａ。５℃で保存された製剤に対する酸化分析
【表９Ａ−１】
2020531521.tif 000022
【表９Ａ−２】
2020531521.tif 000023
表９Ｂ。２５℃で保存された製剤に対する酸化分析
【表９Ｂ−１】
2020531521.tif 000024
【表９Ｂ−２】
2020531521.tif 000025
視認可能微粒子データ：外観（微粒子）観察結果からは、５℃で１２ヶ月の貯蔵期間全体にわたってどの製剤についても視認可能微粒子の顕著な増加が何ら示されなかった（表１０Ａ）。視認可能微粒子は２５℃での長期貯蔵において出現し（表１０Ｂ）、おそらくは、この温度での大型ＳＶＰ（＞２５ｕｍ）の増加とのつながりがある。
表１０Ａ。５℃での視認可能微粒子の長期評価
【表１０Ａ−１】
2020531521.tif 000026
【表１０Ａ−２】
2020531521.tif 000027
表１０Ｂ。２５℃での視認可能微粒子の長期評価
【表１０Ｂ−１】
2020531521.tif 000028
【表１０Ｂ−２】
2020531521.tif 000029
節目アッセイ：ｔ＝０、６、１２ヶ月で試験された他の安定性アッセイ、例えばＣＥ−ＳＤＳ（非還元下）、ｉｃＩＥＦ、浸透圧、粘度及び力価を本明細書では節目アッセイとして分類する。このデータは、５℃で１２ヶ月にわたって試料における顕著な分解を何ら示していない（表１１Ａ〜表１１Ｅ）。
表１１Ａ。ｔ＝０で実施した節目アッセイ
【表１１Ａ】
2020531521.tif 000030
表１１Ｂ。５℃で保存された製剤に対してｔ＝６ヶ月で実施した節目アッセイ
【表１１Ｂ】
2020531521.tif 000031
表１１Ｃ。２５℃で保存された製剤に対してｔ＝６ヶ月で実施した節目アッセイ
【表１１Ｃ】
2020531521.tif 000032
表１１Ｄ。５℃で保存された製剤に対してｔ＝１２ヶ月で実施した節目アッセイ
【表１１Ｄ】
2020531521.tif 000033
表１１Ｅ。２５℃で保存された製剤に対してｔ＝１２ヶ月で実施した節目アッセイ
【表１１Ｅ】
2020531521.tif 000034
色、澄明性及びｐＨデータ：１８１６９−７２を除く全ての製剤において目視観察された色は、５℃で１年の期間全体にわたってＢＹ３未満（ＢＹ４〜ＢＹ５またはＢＹ３〜ＢＹ４）にとどまった。１８１６９−７２の色は９ヶ月目までＢＹ３〜ＢＹ４であり、１２ヶ月目にはＢＹ３〜ＢＹ２と観察された。全ての製剤の澄明性は、５℃での貯蔵全体にわたって３０ＮＴＵ未満（６〜１８ＮＴＵまたは１８〜３０ＮＴＵ）にとどまった。
結論：製剤１８１６９−６２、１８１６９−６４、１８１６９−６６及び１８１６９−７２は、１年にわたって許容限界内で安定であることが分かった。この期間にわたる最重要特性：％総凝集物及び視認不可微粒子（ＨＩＡＣ）の傾向は、製剤１８１６９−６４及び１８１６９−６６がどちらもプレフィル用シリンジ（ＰＦＳ）薬物製品（ＤＰ）のために続行されるのに適していることを示唆している。
【０１０９】
実施例３：製剤の粘度の特性評価
高濃度のＳＴＸ−１００製剤の粘度に対するｐＨ及びメチオニン濃度の影響を、完全実施要因実験計画（ＤＯＥ）試験を用いて評価した。以下の製剤パラメータを変更した：
１）ｐＨ：５．０、５．５、６．０
２）メチオニン：０、１０、２５ｍＭ
３）タンパク質濃度：１５０、２２０、２４０及び２６０ｍｇ／ｍＬ
基本製剤緩衝液は、２０ｍＭのクエン酸／クエン酸Ｎａ、１５０ｍＭのアルギニンＨＣｌ、０．０５％のＰＳ８０であった。
【０１１０】
データは、ＳＴＸ−１００製剤の粘度が、２０ｍＭのクエン酸Ｎａ／クエン酸、１５０ｍＭのアルギニン−ＨＣｌ、０．０５％のＰＳ−８０を含有する基本製剤に近いｐＨまたはメチオニン濃度のどちらによっても影響をあまり受けないことを示した。５℃及び２５℃のデータはどちらも、２つの製剤パラメータの各々について０．０５未満のｐ値を示さなかった。粘度に対する有意な影響力を有する唯一の溶液パラメータは、調べた範囲の中で予期されたタンパク質濃度であった。これらの結果は、製剤の粘度に悪影響を与えることなくｐＨ及び賦形剤レベルをこの設計空間内で変化させることができることを示す。
【０１１１】
実施例４：薬物製品線引き試験
この試験は、メチオニン含有量を５ｍＭから１０ｍＭまで増加させること及びポリソルベート８０レベルを０．０５から０．０３％まで下げることが長期安定性特性に与える影響を調べるために行った。
【０１１２】
以下の２つの製剤を調製し、代表的なプレフィル用シリンジに充填した（０．８ｍＬをＢＤ  Ｈｙｐａｋ  ＳＴＷ  ２７Ｇ  ＰＦＳに充填）。
【０１１３】
製剤Ａ：１５０ｍｇ／ｍＬのＳＴＸ−１００、２０ｍＭのクエン酸Ｎａ／クエン酸、ｐＨ５．５、１５０ｍＭのアルギニン−ＨＣｌ、１０ｍＭのメチオニン、０．０５％のポリソルベート８０。
【０１１４】
製剤Ｂ：１５０ｍｇ／ｍＬのＳＴＸ−１００、２０ｍＭのクエン酸Ｎａ／クエン酸、ｐＨ５．５、１５０ｍＭのアルギニン−ＨＣｌ、５ｍＭのメチオニン、０．０３％のポリソルベート８０。
【０１１５】
％ＨＭＷ及び視認不可微粒子の傾向に基づき、２〜８℃での長期安定性からの結果は同等の安定性を示した。情報目的のために２５℃及び４０℃においても安定性データを収集した。製剤はそれらの酸化種の含有量に有意差があるとは見受けられなかった。
【０１１６】
かくして、データは製剤におけるポリソルベート８０及びメチオニン濃度の柔軟性を示している。
【０１１７】
実施例５：プロセス安定性試験
この試験は、異なるポリソルベート８０界面活性剤レベルが小規模ＤＳ容器（ＰＣ製ボトル及びバッグ）内のＳＴＸ−１００の安定性、及びプレフィル用シリンジ（ＰＦＳ）内の代表的ＤＰに及ぼす影響を評価した。製剤を２つの異なるストレスに供した：
ａ）複数回の凍結解凍サイクル（１、３及び５回の凍結解凍サイクル）、
ｂ）振盪誘導撹拌ストレス（６５０ｒｐｍで７２時間、周囲条件で旋回振盪）、及び
ｃ）代表的周囲環境での保持時間（選択されたＰＳ−８０レベルのみ）。
【０１１８】
評価のために選択された種々のＰＳ−８０レベルは、２０ｍＭのクエン酸Ｎａ／クエン酸、ｐＨ５．５、１５０ｍＭのアルギニン−ＨＣｌ、５ｍＭのメチオニンを含有する１５０ｍｇ／ｍＬのＳＴＸ−１００製剤中に０、０．０１、０．０２、０．０５、０．０８、０．１％ｗ／ｖであった。評価のために使用した容器閉鎖システムはポリカーボネート製ボトル（５ｍＬボトルに１ｍＬ充填）、小型ＤＳバッグ（３０ｍＬ容量、５または１５ｍＬ充填）、ＰＦＳシリンジ（１５０ｍｇ／ｍＬで０．８ｍＬか０．３ｍＬかのどちらか、または４０ｍｇ／ｍＬで０．３ｍＬが充填された、ＢＤ  Ｈｙｐａｋ４７３６８３１９とプランジャー（４７１６５９１９））であった。
【０１１９】
調べた製品品質特性は、視認される外観（微粒子）、濁度（Ａ３４０）、％総凝集物（ＳＥＣ）、タンパク質濃度（ＳｏｌｏＶＰＥ法）及び視認不可微粒子（ＭＦＩ）であった。
【０１２０】
１５０ｍｇ／ｍＬで０．８ｍＬのＳＴＸ−１００の目標薬物製品充填体積からの結果は、製剤中に０．０１％のＰＳ−８０が存在する限り、ＳＴＸ−１００シリンジを６５０ｒｐｍで７２時間、遮光された周囲温度で撹拌することが視認可能微粒子に対して最小限の影響力を有することを示した。０．０２％ＰＳ８０試料中に１つの塵状粒子が観察されたが、これは環境によるものであると見受けられる。０〜０．０１％のＰＳ８０を含有する製剤では撹拌後に可溶性凝集物はたった０．０５〜０．１％だけ増加したが、可溶性凝集物の観察可能な増加は他のどの製剤にもなかった。濁度データは、０．１％のＰＳ８０を含むものを除く全ての製剤についてＯＤ３４０の顕著な増加を何ら示さず、比較的高いレベルのＰＳ８０にいくらか原因があることを示していた。しかしながら、ＳＶＰデータは、ＰＳ８０が存在している限り顕著な粒子形成傾向を何ら示さない。プロセス試験結果は、凍結解凍ストレス、撹拌ストレス及びプロセス保持時間から製剤を保護するのに０．０５％ｗ／ｖがポリソルベート８０の最適レベルであることを示唆した。製品開発目的のためにＰＳ８０レベルについて示唆される規格は０．０５＋／−０．０２５％ｗ／ｖである。
【０１２１】
実施例６：製剤の選択
上記試験全てに基づき、以下のＳＴＸ−１００製剤は、長期貯蔵（２〜８℃で１年）、最悪状況撹拌ストレス（６５０ｒｐｍで７２時間）及び最悪状況凍結解凍ストレス（５回の凍結解凍サイクル）にわたって許容される安定性を呈した：１５０ｍｇ／ｍＬのＳＴＸ−１００、２０ｍＭのクエン酸Ｎａ／クエン酸、１５０ｍＭのアルギニン−ＨＣｌ、５ｍＭのメチオニン、０．０５％ｗ／ｖのポリソルベート８０、ｐＨ５．５。
【０１２２】
安定性特性の傾向に基づき、この製剤は、代表的なプレフィルドシリンジ製品において２〜８℃で２４ヶ月を超える安定性を保証する。
【０１２３】
実施例７：チオール基含有賦形剤を含むＳＴＸ−１００製剤の安定性
ＳＴＸ−１００製剤に対するチオール基含有賦形剤の添加は、貯蔵中の高分子量種の発達によって判定される凝集を軽減する。
【０１２４】
対照ＳＴＸ−１００製剤はＳＴＸ−１００が１５０ｍｇ／ｍＬ、クエン酸塩／クエン酸が２０ｍＭ、Ｌ−アルギニンＨＣｌが１５０ｍＭ、メチオニンが５ｍＭ、ポリソルベート８０が０．０５％、ｐＨ５．５であった。対照製剤にチオール基含有賦形剤：ＧＳＨを混入した。製剤を２５℃及び４０℃で保存した。図３に示すように、ＧＳＨの添加は貯蔵中の凝集を軽減した。
【０１２５】
グルタチオンの添加は、別の抗体であるＳＴＸ２００に悪影響を与え、凝集の増加が認められた（図５）。ＳＴＸ２００は非グリコシル化分子であり、高温での配座安定性が乏しいことを示している。このため、分子の折りたたみが開かれることでチオール基が露出し、それは結果としてグルタチオン中のチオールとの架橋を受け易くなり、さらなる凝集が促進される。グルタチオンは、２５℃でＳＢ４（Ｅｎｂｒｅｌ（登録商標）を参考にするエタネルセプトバイオシミラーであるＢＥＮＥＰＡＬＩ（登録商標））の凝集動態に対して何ら影響を及ぼさなかったが、４０℃ではより速い凝集を促進した（図４）。
【０１２６】
実施例８：ＳＴＸ−１００製剤の安定性データ
１５０ｍＭのＡｒｇ．ＨＣＬ、５ｍＭのメチオニン、０．０５％のＰＳ８０を含有するｐＨ５．５の２０ｍＭのクエン酸ナトリウム緩衝液の中に含まれた５０及び１００ｍｇ／ｍＬのＳＴＸ−１００製剤をシリンジ内に充填したもの（０．８ｍＬ／シリンジ）についての安定性試験データは、２〜８℃で保存する場合の３６ヶ月間の安定性を支持している。これは、２〜８℃の長期貯蔵条件での安定性データに基づく。以下の表１２及び表１３を参照されたい。この薬物製品データに基づいて、５６ｍｇの用量を送達するために選択される７０ｍｇ／ｍＬの製剤（０．８ｍＬ／シリンジ）に３６ヶ月間の安定性を付与することができる。
表１２：２〜８℃で保存された１ｍＬシリンジ内の１００ｍｇ／ｍＬのＳＴＸ−１００薬物製品の安定性データ
【表１２−１】
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【表１２−２】
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表１３：２〜８℃で保存された１ｍＬシリンジ内の５０ｍｇ／ｍＬのＳＴＸ−１００薬物製品の安定性データ
【表１３】
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【０１２７】
他の実施形態
本発明をその詳細な説明と併せて記載してきたが、上記の記載は本発明を例示すること及びその範囲を限定しないことを意図したものであり、本発明は、別記の特許請求の範囲によって画定されるものである。他の態様、利点及び改変形態は以下の請求項の範囲内に含まれる。
【図１Ａ】
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【図１Ｂ】
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【図１Ｃ】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【配列表】
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【国際調査報告】
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