(57)【要約】  本発明は、侵襲性真菌感染（ＩＦＩ）／侵襲性真菌症（ＩＦＤ）、及び特に敗血症又は敗血症性ショックに関連した侵襲性真菌感染（ＩＦＩ）／侵襲性真菌症（ＩＦＤ）の診断及び／又はリスク層別化のための方法であって、検査されるべき患者由来のマーカーであるプロアドレノメデュリン（ｐｒｏＡＤＭ）又はその部分ペプチド若しくは断片、特に中央領域プロアドレノメデュリン（ＭＲ−ｐｒｏＡＤＭ）、又はマーカー組合せ（パネル、クラスター）に含まれる、プロアドレノメデュリン又はその部分ペプチド若しくは断片、特に中央領域プロアドレノメデュリンの判定が実施される、方法に関する。更に、本発明は、本方法を実施するための診断アッセイ及びキットに関する。【選択図】図３Ａ
2020530123.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
侵襲性真菌感染（ＩＦＩ）及び／又は侵襲性真菌症（ＩＦＤ）のインビトロ診断及び／又はリスク層別化のための方法であって、
検査されるべき患者由来のプロアドレノメデュリン（ｐｒｏＡＤＭ）（配列番号６）又はその部分ペプチド若しくは断片、特にその中央領域プロアドレノメデュリン（ＭＲ−ｐｒｏＡＤＭ）（配列番号３）の判定が実施されることを特徴とする、方法。
【請求項２】
敗血症及び／又は敗血症性ショックに関連した侵襲性真菌感染（ＩＦＩ）及び／又は侵襲性真菌症（ＩＦＤ）のインビトロ診断及び／又はリスク層別化のための方法であって、
検査されるべき患者由来のプロアドレノメデュリン（ｐｒｏＡＤＭ）（配列番号６）又はその部分ペプチド若しくは断片、特にその中央領域プロアドレノメデュリン（ＭＲ−ｐｒｏＡＤＭ）（配列番号３）の判定が実施されることを特徴とする、方法。
【請求項３】
前記断片が、ＰＡＭＰ（配列番号２）、ＭＲ−ｐｒｏＡＤＭ（中央領域プロアドレノメデュリン）（配列番号３）、ＡＤＭ（アドレノメデュリン）（配列番号４）、ＣＴ−ｐｒｏ−ＡＤＭ（アドレノテンシン）（配列番号５）からなる群のうちの少なくとも１つである、請求項１または２に記載の方法。
【請求項４】
前記侵襲性真菌感染（ＩＦＩ）及び／又は侵襲性真菌症（ＩＦＤ）が、特にＣａｎｄｉｄａ  ｓｐｐ．、Ｃ．ａｌｂｉｃａｎｓ、Ｃ．ｇｌａｂｒａｔａ、Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ  ｓｐｐ．、Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ  ｆｕｍｉｇａｔｕｓによって引き起こされることを特徴とする、請求項１から３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５】
判定が、検査されるべき患者からのＣ反応性タンパク質（ＣＲＰ）、ＴＮＦ−αなどのサイトカイン、例えば、ＩＬ−１０、ＩＬ−６、ＩＬ−２２、ＩＬ１７Ａ及びＩＬ−１７Ｂ、インターロイキン−1βなどのインターロイキン、プロカルシトニン及びその断片、プロ心房性ナトリウム利尿ペプチド及びその断片（ＡＮＰ、ｐｒｏ  ＡＮＰ）、プロアルギニンバソプレシン及びその断片（ＡＶＰ、ｐｒｏ−ＡＶＰ、コペプチン）、アンジオテンシンＩＩ、エンドセリン−１、グルカン、インターフェロンγ（ＩＮＦ−γ）、β−Ｄ−グルカン、ガラクトマンナン、並びにＶＣＡＭ又はＩＣＡＭなどの接着分子、連続臓器不全評価スコア（ＳＯＦＡ）、簡易急性生理学スコア（ＳＡＰＳＩＩスコア）、急性生理学及び慢性健康評価スコアＩＩ（ＡＰＡＣＨＥ  ＩＩ）スコア、肺炎重症度指数（ＰＳＩ）スコア、年齢、性別、家族歴、民族性、体重、体格指数（ＢＭＩ）、収縮期血圧、拡張期血圧、心拍数、体温からなる群から選択される少なくとも１種の更なるマーカー並びに／又は臨床スコア及び／若しくは臨床パラメータを用いて付加的に実施されることを特徴とする、請求項１から４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６】
前記マーカーの並行判定又は同時判定が実施されることを特徴とする、請求項１から５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項７】
前記判定が、少なくとも１つの患者試料に対して実施されることを特徴とする、請求項１から６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項８】
前記判定が、自動分析装置又は診断アッセイを使用して実施されることを特徴とする、請求項１から７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項９】
前記判定が、迅速試験によって、特に単一パラメータ判定又は複数パラメータ判定を用いて実施されることを特徴とする、請求項１から８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１０】
患者の前記層別化が、臨床判断、特に、侵襲性真菌感染（ＩＦＩ）及び／又は侵襲性真菌症（ＩＦＤ）、特に敗血症及び／又は敗血症性ショックに関連した侵襲性真菌感染（ＩＦＩ）及び／又は侵襲性真菌症（ＩＦＤ）の処置又は治療のための薬物による更なる処置を目的とすることを特徴とする、請求項１から９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１１】
前記患者が、重症の患者、特に、免疫不全患者及び／又は重度の好中球減少症患者、がん患者を含む、薬剤若しくは疾患により、又は免疫反応を誘発、増強、若しくは抑制する手段により免疫調節された患者からなる群から選択される、請求項１０に記載の方法。
【請求項１２】
前記診断及び／又はリスク層別化が、治療に伴うものとして、侵襲性真菌感染（ＩＦＩ）及び／又は侵襲性真菌症（ＩＦＤ）、特に敗血症及び／又は敗血症性ショックに関連した侵襲性真菌感染（ＩＦＩ）及び／又は侵襲性真菌症（ＩＦＤ）の予後のために、予防のために、早期検出及び鑑別診断による検出のために、重症度の評価のために、並びに経過を評価するために行われる、請求項１から１１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１３】
プロアドレノメデュリン（ｐｒｏＡＤＭ）又はその部分ペプチド若しくは断片、特に中央領域プロアドレノメデュリン（ＭＲ−ｐｒｏＡＤＭ）の症状の発生後（ｔ＝０）での６．９９ｎｍｏｌ／Ｌ以上のカットオフ値（閾値）、１日後（ｔ＝１ｄ）での８．５３ｎｍｏｌ／Ｌ以上のカットオフ値（閾値）、２日後（ｔ＝２ｄ）での５．１０ｎｍｏｌ／Ｌ以上のカットオフ値（閾値）が、前記診断及び／又はリスク層別化に有意であることを特徴とする、請求項１から１２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１４】
症状の発生後（ｔ＝０）、１日後（ｔ＝１ｄ）、２日後（ｔ＝２ｄ）での５ｎｍｏｌ／Ｌ未満のレベルのプロアドレノメデュリン（ｐｒｏＡＤＭ）又はその部分ペプチド若しくは断片、特に中央領域プロアドレノメデュリン（ＭＲ−ｐｒｏＡＤＭ）が、前記患者が侵襲性真菌感染（ＩＦＩ）及び／又は侵襲性真菌症（ＩＦＤ）に罹患していないことを示すことを特徴とする、請求項１から１３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１５】
症状の発生後（ｔ＝０）での２ｎｍｏｌ／Ｌ未満のレベルのプロアドレノメデュリン（ｐｒｏＡＤＭ）又はその部分ペプチド若しくは断片、特に中央領域プロアドレノメデュリン（ＭＲ−ｐｒｏＡＤＭ）が、前記患者が侵襲性真菌感染（ＩＦＩ）及び／又は侵襲性真菌症（ＩＦＤ）に罹患していないことを示すことを特徴とする、請求項１から１４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１６】
侵襲性真菌感染（ＩＦＩ）及び／又は侵襲性真菌症（ＩＦＤ）、特に敗血症及び／又は敗血症性ショックに関連した侵襲性真菌感染（ＩＦＩ）及び／又は侵襲性真菌症（ＩＦＤ）のインビトロ診断及び／又はリスク層別化のためのキット又は診断アッセイの使用であって、
プロアドレノメデュリン（ｐｒｏＡＤＭ）（配列番号６）又はその部分ペプチド若しくは断片、特に中央領域プロアドレノメデュリン（ＭＲ−ｐｒｏＡＤＭ）（配列番号３）、又はマーカー組合せに含まれるプロアドレノメデュリン又はその部分ペプチド若しくは断片、特に中央領域プロアドレノメデュリン、並びに／又は請求項５に記載の臨床スコア及び／若しくは臨床パラメータを判定するための検出試薬、並びに補助的物質を含む、キット又は診断アッセイの使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、真菌感染、特に敗血症又は敗血症性ショックに関連した侵襲性真菌感染（以下「ＩＦＩ」と省略）及び侵襲性真菌症（以下「ＩＦＤ」と省略して称する）の診断及び／又はリスク層別化のための方法であって、検査されるべき患者由来のマーカーであるプロアドレノメデュリン（ｐｒｏＡＤＭ）又はその部分ペプチド若しくは断片、特に中央領域プロアドレノメデュリン（ＭＲ−ｐｒｏＡＤＭ）、又はマーカー組合せ（パネル、クラスター）に含まれる、プロアドレノメデュリン又はその部分ペプチド若しくは断片、特に中央領域プロアドレノメデュリンの判定が実施される、方法に関する。更に、本発明は、本発明の方法を実施するための診断アッセイ及びキットに関する。
【背景技術】
【０００２】
とりわけＮ末端に２１アミノ酸のシグナル配列を含む前駆体ペプチドは、「プレプロアドレノメデュリン」（ｐｒｅ−ｐｒｏＡＤＭ）と称される（Ｋｉｔａｍｕｒａ  Ｋ，Ｓａｋａｔａ  Ｊ，Ｋａｎｇａｗａ  Ｋ，Ｋｏｊｉｍａ  Ｍ，Ｍａｔｓｕｏ  Ｈ，Ｅｔｏ  Ｔ．「Ｃｌｏｎｉｎｇ  ａｎｄ  ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｃＤＮＡ  ｅｎｃｏｄｉｎｇ  ａ  ｐｒｅｃｕｒｓｏｒ  ｆｏｒ  ｈｕｍａｎ  ａｄｒｅｎｏｍｅｄｕｌｌｉｎ」，Ｂｉｏｃｈｅｍ  Ｂｉｏｐｈｙｓ  Ｒｅｓ  Ｃｏｍｍｕｎ  １９９３：１９４：７２０−７２５）。
ｐｒｅ−ｐｒｏＡＤＭは、１８５アミノ酸を含み、配列番号１（図１）に記載の配列を有する。ｐｒｅ−ｐｒｏ−ＡＤＭの公知の断片としては、ＰＡＭＰ（アミノ酸２２〜４１）（配列番号２）、ＭＲ−ｐｒｏ−ＡＤＭ（中央領域プロアドレノメデュリン）（アミノ酸４５〜９２）（配列番号３）、ＡＤＭ（アドレノメデュリン）（アミノ酸９５〜１４６）（配列番号４）、ＣＴｐｒｏ−ＡＤＭ（アドレノテンシン）（アミノ酸１５３〜１８５）（配列番号５）、及び「プロアドレノメデュリン」（ｐｒｏＡＤＭ）（アミノ酸２２〜１８５）（配列番号６）が挙げられる。
【０００３】
周知のペプチドであるアドレノメデュリン（ＡＤＭ）は、５２アミノ酸（配列番号４）を含み、ｐｒｅ−ｐｒｏＡＤＭのアミノ酸９５〜１４６を含むペプチドであり、タンパク分解性切断によってｐｒｅ−ｐｒｏＡＤＭから形成される。しかしながら、アドレノメデュリンの安定性の欠如に加えて血漿中でのその短寿命のために（Ｌｅｗｉｓ  ＬＫ，Ｓｍｉｔｈ  ＭＷ，Ｙａｎｄｌｅ  ＴＧ，Ｒｉｃｈａｒｄｓ  ＡＭ，Ｎｉｃｈｏｌｌｓ  ＭＧ．「Ａｄｒｅｎｏｍｅｄｕｌｌｉｎ  ｍｅａｓｕｒｅｄ  ｉｎ  ｈｕｍａｎ  ｐｌａｓｍａ  ｂｙ  ｒａｄｉｏｉｍｍｕｎｏａｓｓａｙ：ｐｌａｓｍａ  ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ，ａｄｓｏｒｐｔｉｏｎ，ａｎｄ  ｓｔｏｒａｇｅ．」  Ｃｌｉｎ  Ｃｈｅｍ．４４：５７１−７，１９９８）、通常、信頼性が高い診断を行うことができないことは不利である。
【０００４】
今のところ、ｐｒｅ−ｐｒｏＡＤＭの切断で形成されるペプチド断片のうちの実質的にほんの少数の断片のみ、特に生理活性ペプチドのアドレノメデュリン（ＡＤＭ）及びｐｒｅ−ｐｒｏＡＤＭのシグナルペプチドの２１アミノ酸に続く２０アミノ酸（２２〜４１）を含むペプチドである「ＰＡＭＰ」が、より正確に特徴付けられている。
【０００５】
更に先行技術は、特に敗血症（欧州特許第１１２１６００（Ｂ１）号）を診断するために診断においてプロアドレノメデュリン（ｐｒｏＡＤＭ）及びアドレノメデュリンを判定する方法を記載している（欧州特許第０６２２４５８（Ｂ１）号，Ｌｅｗｉｓ  ＬＫ，Ｓｍｉｔｈ  ＭＷ，Ｙａｎｄｌｅ  ＴＧ，Ｒｉｃｈａｒｄｓ  ＡＭ，Ｎｉｃｈｏｌｌｓ  ＭＧ．「Ａｄｒｅｎｏｍｅｄｕｌｌｉｎ（１−５２）  ｍｅａｓｕｒｅｄ  ｉｎ  ｈｕｍａｎ  ｐｌａｓｍａ  ｂｙ  ｒａｄｉｏｉｍｍｕｎｏａｓｓａｙ：ｐｌａｓｍａ  ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ，ａｄｓｏｒｐｔｉｏｎ，ａｎｄ  ｓｔｏｒａｇｅ．」  Ｃｌｉｎ  Ｃｈｅｍ  １９９８；４４：５７１−７；Ｕｅｄａ  Ｓ，Ｎｉｓｈｉｏ  Ｋ，Ｍｉｎａｍｉｎｏ  Ｎ，Ｋｕｂｏ  Ａ，Ａｋａｉ  Ｙ，Ｋａｎｇａｗａ  Ｋ，ｅｔ  ａｌ．「Ｉｎｃｒｅａｓｅｄ  ｐｌａｓｍａ  ｌｅｖｅｌｓ  ｏｆ  ａｄｒｅｎｏｍｅｄｕｌｌｉｎ  ｉｎ  ｐａｔｉｅｎｔｓ  ｗｉｔｈ  ｓｙｓｔｅｍｉｃ  ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ  ｒｅｓｐｏｎｓｅ  ｓｙｎｄｒｏｍｅ．」  Ａｍ  Ｊ  Ｒｅｓｐｉｒ  Ｃｒｉｔ  Ｃａｒｅ  Ｍｅｄ  １９９９；１６０：１３２−６；Ｋｏｂａｙａｓｈｉ  Ｋ，Ｋｉｔａｍｕｒａ  Ｋ，Ｅｔｏｈ  Ｔ，Ｎａｇａｔｏｍｏ  Ｙ，Ｔａｋｅｎａｇａ  Ｍ，Ｉｓｈｉｋａｗａ  Ｔ，ｅｔ  ａｌ．「Ｉｎｃｒｅａｓｅｄ  ｐｌａｓｍａ  ａｄｒｅｎｏｍｅｄｕｌｌｉｎ  ｌｅｖｅｌｓ  ｉｎ  ｃｈｒｏｎｉｃ  ｃｏｎｇｅｓｔｉｖｅ  ｈｅａｒｔ  ｆａｉｌｕｒｅ．」  Ａｍ  Ｈｅａｒｔ  Ｊ  １９９６；１３１：９９４−８；Ｋｏｂａｙａｓｈｉ  Ｋ，Ｋｉｔａｍｕｒａ  Ｋ，Ｈｉｒａｙａｍａ  Ｎ，Ｄａｔｅ  Ｈ，Ｋａｓｈｉｗａｇｉ  Ｔ，Ｉｋｕｓｈｉｍａ  Ｉ，ｅｔ  ａｌ．「Ｉｎｃｒｅａｓｅｄ  ｐｌａｓｍａ  ａｄｒｅｎｏｍｅｄｕｌｌｉｎ  ｉｎ  ａｃｕｔｅ  ｍｙｏｃａｒｄｉａｌ  ｉｎｆａｒｃｔｉｏｎ．」  Ａｍ  Ｈｅａｒｔ  Ｊ  １９９６；１３１：６７６−８０）。
【０００６】
更に、プロアドレノメデュリンの更なる断片、すなわち、いわゆる中央領域プロアドレノメデュリン（ＭＲ−ｐｒｏＡＤＭ）が、診断目的について欧州特許第１４８８２０９（Ｂ１）号において開示されている（Ｓｔｒｕｃｋ  Ｊ，Ｔａｏ  Ｃ，Ｍｏｒｇｅｎｔｈａｌｅｒ  ＮＧ，Ｂｅｒｇｍａｎｎ  「Ａ．Ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ  ｏｆ  ａｎ  Ａｄｒｅｎｏｍｅｄｕｌｌｉｎ  ｐｒｅｃｕｒｓｏｒ  ｆｒａｇｍｅｎｔ  ｉｎ  ｐｌａｓｍａ  ｏｆ  ｓｅｐｓｉｓ  ｐａｔｉｅｎｔｓ．」  Ｐｅｐｔｉｄｅｓ  ２００４；２５：１３６９−７２；Ｍｏｒｇｅｎｔｈａｌｅｒ  ＮＧ，Ｓｔｒｕｃｋ  Ｊ，Ａｌｏｎｓｏ  Ｃ，Ｂｅｒｇｍａｎｎ  「Ａ．Ｍｅａｓｕｒｅｍｅｎｔ  ｏｆ  ｍｉｄ−ｒｅｇｉｏｎａｌ  ｐｒｏ−ａｄｒｅｎｏｍｅｄｕｌｌｉｎ  ｉｎ  ｐｌａｓｍａ  ｗｉｔｈ  ａｎ  ｉｍｍｕｎｏｌｕｍｉｎｏｍｅｔｒｉｃ  ａｓｓａｙ．」  Ｃｌｉｎ  Ｃｈｅｍ  ２００５；５１：１８２３−９；Ｃｈｒｉｓｔ−Ｃｒａｉｎ  Ｍ，Ｍｏｒｇｅｎｔｈａｌｅｒ  ＮＧ，Ｓｔｏｌｚ  Ｄ，Ｍｕｌｌｅｒ  Ｃ，Ｂｉｎｇｉｓｓｅｒ  Ｒ，Ｈａｒｂａｒｔｈ  Ｓ，ｅｔ  ａｌ．「Ｐｒｏ−ａｄｒｅｎｏｍｅｄｕｌｌｉｎ  ｔｏ  ｐｒｅｄｉｃｔ  ｓｅｖｅｒｉｔｙ  ａｎｄ  ｏｕｔｃｏｍｅ  ｉｎ  ｃｏｍｍｕｎｉｔｙ−ａｃｑｕｉｒｅｄ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａ  ［ＩＳＲＣＴＮ０４１７６３９７］．」  Ｃｒｉｔ  Ｃａｒｅ  ２００６；１０：Ｒ９６；Ｃｈｒｉｓｔ−Ｃｒａｉｎ  Ｍ，Ｍｏｒｇｅｎｔｈａｌｅｒ  ＮＧ，Ｓｔｒｕｃｋ  Ｊ，Ｈａｒｂａｒｔｈ  Ｓ，Ｂｅｒｇｍａｎｎ  Ａ，Ｍｕｌｌｅｒ  Ｂ．「Ｍｉｄ−ｒｅｇｉｏｎａｌ  ｐｒｏ−ａｄｒｅｎｏｍｅｄｕｌｌｉｎ  ａｓ  ａ  ｐｒｏｇｎｏｓｔｉｃ  ｍａｒｋｅｒ  ｉｎ  ｓｅｐｓｉｓ：ａｎ  ｏｂｓｅｒｖａｔｉｏｎａｌ  ｓｔｕｄｙ．」  Ｃｒｉｔ  Ｃａｒｅ  ２００５；９：Ｒ８１６−２４）。
【０００７】
診断のための（プレ）プロアドレノメデュリンのＮ末端断片、例えば、ＰＡＭＰは、欧州特許第０６２２４５８（Ｂ１）号にも記載されている（Ｈａｓｈｉｄａ  Ｓ，Ｋｉｔａｍｕｒａ  Ｋ，Ｎａｇａｔｏｍｏ  Ｙ，Ｓｈｉｂａｔａ  Ｙ，Ｉｍａｍｕｒａ  Ｔ，Ｙａｍａｄａ  Ｋ，ｅｔ  ａｌ．「Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ  ｏｆ  ａｎ  ｕｌｔｒａ−ｓｅｎｓｉｔｉｖｅ  ｅｎｚｙｍｅ  ｉｍｍｕｎｏａｓｓａｙ  ｆｏｒ  ｈｕｍａｎ  ｐｒｏ−ａｄｒｅｎｏｍｅｄｕｌｌｉｎ  Ｎ−ｔｅｒｍｉｎａｌ  ｐｅｐｔｉｄｅ  ａｎｄ  ｄｉｒｅｃｔ  ｍｅａｓｕｒｅｍｅｎｔ  ｏｆ  ｔｗｏ  ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  ｆｏｒｍｓ  ｏｆ  ＰＡＭＰ  ｉｎ  ｐｌａｓｍａ  ｆｒｏｍ  ｈｅａｌｔｈｙ  ｓｕｂｊｅｃｔｓ  ａｎｄ  ｐａｔｉｅｎｔｓ  ｗｉｔｈ  ｃａｒｄｉｏｖａｓｃｕｌａｒ  ｄｉｓｅａｓｅ．」  Ｃｌｉｎ  Ｂｉｏｃｈｅｍ  ２００４；３７：１４−２１）。
【０００８】
診断のための（プレ）プロアドレノメデュリンのＣ末端断片、すなわちＣＴ−ｐｒｏ−ＡＤＭ（アドレノテンシン）は、欧州特許第２１１１５５２（Ｂ１）号にも記載されている。
【０００９】
真菌に感染した患者の群は小さいようであるが、ＩＦＩ／ＩＦＤの数は、免疫不全患者数の増加、関連する併存症を有する高齢患者におけるより積極的な外科療法、及び腫瘍疾患数の増加に起因して増加している（Ｂａｓｓｅｔｔｉ  Ｍ，Ｒｉｇｈｉ  Ｅ，Ｃｏｓｔａ  Ａ  ｅｔ  ａｌ．（２００６）「Ｅｐｉｄｅｍｉｏｌｏｇｉｃａｌ  ｔｒｅｎｄｓ  ｉｎ  ｎｏｓｏｃｏｍｉａｌ  ｃａｎｄｉｄｅｍｉａ  ｉｎ  ｉｎｔｅｎｓｉｖｅ  ｃａｒｅ．」  ＢＭＣ  Ｉｎｆｅｃｔ  Ｄｉｓ  ６：２１）。これに関連して以下の３つの真菌種：Ｃａｎｄｉｄａ  ａｌｂｉｃａｎｓ（Ｃ．ａｌｂｉｃａｎｓ）、Ｃａｎｄｉｄａ  ｇｌａｂｒａｔａ（Ｃ．ｇｌａｂｒａｔａ）、及びＡｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ  ｆｕｍｉｇａｔｕｓが、ヨーロッパにおいて最も重要なようである（Ｌｉｃｈｔｅｎｓｔｅｒｎ  Ｃ，Ｈｅｒｏｌｄ  Ｃ，Ｍｉｅｔｈ  Ｍ  ｅｔ  ａｌ．（２０１５）「Ｒｅｌｅｖａｎｃｅ  ｏｆ  Ｃａｎｄｉｄａ  ａｎｄ  ｏｔｈｅｒ  ｍｙｃｏｓｅｓ  ｆｏｒ  ｍｏｒｂｉｄｉｔｙ  ａｎｄ  ｍｏｒｔａｌｉｔｙ  ｉｎ  ｓｅｖｅｒｅ  ｓｅｐｓｉｓ  ａｎｄ  ｓｅｐｔｉｃ  ｓｈｏｃｋ  ｄｕｅ  ｔｏ  ｐｅｒｉｔｏｎｉｔｉｓ．」  Ｍｙｃｏｓｅｓ  ５８：３９９−４０７）。
【００１０】
ＩＦＩ／ＩＦＤに罹患している患者の敗血症に関連する死亡率は、高いことが公知であり、Ｃａｎｄｉｄａ  ｓｐｐ．では４２％まで達し、Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ  ｓｐｐ．では更に高い（Ｓｈｏｒｒ  ＡＦ，Ｇｕｐｔａ  Ｖ，Ｓｕｎ  Ｘ  ｅｔ  ａｌ．（２００９）「Ｂｕｒｄｅｎ  ｏｆ  ｅａｒｌｙ−ｏｎｓｅｔ  ｃａｎｄｉｄｅｍｉａ：ａｎａｌｙｓｉｓ  ｏｆ  ｃｕｌｔｕｒｅ−ｐｏｓｉｔｉｖｅ  ｂｌｏｏｄｓｔｒｅａｍ  ｉｎｆｅｃｔｉｏｎｓ  ｆｒｏｍ  ａ  ｌａｒｇｅ  Ｕ．Ｓ．ｄａｔａｂａｓｅ．」  Ｃｒｉｔ  Ｃａｒｅ  Ｍｅｄ  ３７：２５１９−２５２６；ｑｕｉｚ  ２５３５，Ｔｒｏｆ  ＲＪ，Ｂｅｉｓｈｕｉｚｅｎ  Ａ，Ｄｅｂｅｔｓ−Ｏｓｓｅｎｋｏｐｐ  ＹＪ  ｅｔ  ａｌ．（２００７）  「Ｍａｎａｇｅｍｅｎｔ  ｏｆ  ｉｎｖａｓｉｖｅ  ｐｕｌｍｏｎａｒｙ  ａｓｐｅｒｇｉｌｌｏｓｉｓ  ｉｎ  ｎｏｎ−ｎｅｕｔｒｏｐｅｎｉｃ  ｃｒｉｔｉｃａｌｌｙ  ｉｌｌ  ｐａｔｉｅｎｔｓ．」  Ｉｎｔｅｎｓｉｖｅ  Ｃａｒｅ  Ｍｅｄ  ３３：１６９４−１７０３）。
【００１１】
敗血症は、一般に感染への宿主応答の調節不全によって引き起こされ（Ｓｉｎｇｅｒ  Ｍ，Ｄｅｕｔｓｃｈｍａｎ  ＣＳ，Ｓｅｙｍｏｕｒ  ＣＷ  ｅｔ  ａｌ．（２０１６）「Ｔｈｅ  Ｔｈｉｒｄ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  Ｃｏｎｓｅｎｓｕｓ  Ｄｅｆｉｎｉｔｉｏｎｓ  ｆｏｒ  Ｓｅｐｓｉｓ  ａｎｄ  Ｓｅｐｔｉｃ  Ｓｈｏｃｋ  （Ｓｅｐｓｉｓ−３）．」  Ｊａｍａ  ３１５：８０１−８１）、細菌によって最も頻繁に引き起こされる一方で、真菌感染又はウイルス感染は頻度が低い（Ｅｇｇｉｍａｎｎ  Ｐ，Ｇａｒｂｉｎｏ  Ｊ，Ｐｉｔｔｅｔ  Ｄ  （２００３）「Ｅｐｉｄｅｍｉｏｌｏｇｙ  ｏｆ  Ｃａｎｄｉｄａ  ｓｐｅｃｉｅｓ  ｉｎｆｅｃｔｉｏｎｓ  ｉｎ  ｃｒｉｔｉｃａｌｌｙ  ｉｌｌ  ｎｏｎ−ｉｍｍｕｎｏｓｕｐｐｒｅｓｓｅｄ  ｐａｔｉｅｎｔｓ．」  Ｌａｎｃｅｔ  Ｉｎｆｅｃｔ  Ｄｉｓ  ３：６８５−７０２）。結果として真菌血症は、任意抽出の敗血症症例のうちの３％にのみ存在する（Ｅｇｇｉｍａｎｎ（前掲））。これに反して、真菌は、腹膜炎において腹部の病巣から回収される最も単離される種の１つであり、多数の患者が彼らの入院の間に真菌の定着を呈する（Ｅｇｇｉｍａｎｎ（前掲））。
【００１２】
特に真菌血症に罹患している患者において、診断上の欠点は、この警戒すべき死亡率を相当助長するおそれがある。罹患患者のほんの一部のみで血液培養物が陽性を示し、培養培地上での真菌の増殖は非常に緩徐であることが知られている。それゆえに、幾つかの研究では、ＩＦＩ／ＩＦＤは、重症患者において最も高い頻度で病気の見逃しが起こることが示されている（Ｃｏｍｂｅｓ  Ａ，Ｍｏｋｈｔａｒｉ  Ｍ，Ｃｏｕｖｅｌａｒｄ  Ａ  ｅｔ  ａｌ．（２００４）「Ｃｌｉｎｉｃａｌ  ａｎｄ  ａｕｔｏｐｓｙ  ｄｉａｇｎｏｓｅｓ  ｉｎ  ｔｈｅ  ｉｎｔｅｎｓｉｖｅ  ｃａｒｅ  ｕｎｉｔ：ａ  ｐｒｏｓｐｅｃｔｉｖｅ  ｓｔｕｄｙ．」  Ａｒｃｈ  Ｉｎｔｅｒｎ  Ｍｅｄ  １６４：３８９−３９２）。
【００１３】
これら全ての結果として、生命を救う抗真菌療法は、行われないか、又は最短でも２〜３日遅れて開始されるかのいずれかである（Ａｂｅ  Ｍ，Ｋｉｍｕｒａ  Ｍ，Ａｒａｏｋａ  Ｈ  ｅｔ  ａｌ．（２０１６）「Ｉｓ  ｉｎｉｔｉａｌ  ｓｅｒｕｍ  （１，３）−ｂｅｔａ−ｄ−ｇｌｕｃａｎ  ｔｒｕｌｙ  ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ  ｗｉｔｈ  ｍｏｒｔａｌｉｔｙ  ｉｎ  ｐａｔｉｅｎｔｓ  ｗｉｔｈ  ｃａｎｄｉｄａｅｍｉａ？」  Ｃｌｉｎ  Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ  Ｉｎｆｅｃｔ  ２２：５７６）。このような遅延は、死亡率の増加に関連することが知られている。
【００１４】
この点に関して、ＩＦＩ／ＩＦＤの信頼性のある診断を提供する必要性、又は特に更なる臨床的判断に関して、及び特に真菌感染、特に敗血症若しくは敗血症性ショックに関連したＩＦＩ／ＩＦＤの重症度に関して、（リスク）層別化を実施する必要性が存在する。
【００１５】
しかしながら、ＩＦＩ／ＩＦＤの診断に対するプロアドレノメデュリン（ｐｒｏＡＤＭ）又はその部分ペプチド若しくは断片、特に中央領域プロアドレノメデュリン（ＭＲ−ｐｒｏＡＤＭ）の適合性は開示されておらず、同様に、敗血症又は敗血症性ショックに関連したＩＦＩ／ＩＦＤの診断は開示されていない。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１６】
本発明の目的は、真菌感染、特に敗血症又は敗血症性ショックに関連したＩＦＩ／ＩＦＤの診断及び／又はリスク層別化のための改善された方法を利用可能にすることである。
【課題を解決するための手段】
【００１７】
この目的は、真菌感染、特に敗血症又は敗血症性ショックに関連したＩＦＩ／ＩＦＤのインビトロ診断及び／又はリスク層別化のための方法であって、検査されるべき患者由来のマーカーであるプロアドレノメデュリン（ｐｒｏＡＤＭ）又はその部分ペプチド若しくは断片、特に中央領域プロアドレノメデュリン（ＭＲ−ｐｒｏＡＤＭ）、又はマーカー組合せ（パネル、クラスター）に含まれるプロアドレノメデュリン又はその部分ペプチド若しくは断片、特に中央領域プロアドレノメデュリンの判定が実施される、方法（以下、本発明による方法と称する）によって達成される。しかしながら、中央領域プロアドレノメデュリン（ＭＲ−ｐｒｏＡＤＭ）は、好ましい実施形態であり、高い血漿安定性を示し、このことは特に有利である。
【００１８】
本発明による上記断片は、好ましくは、群のうちの少なくとも１つ、ＰＡＭＰ（配列番号２）、ＭＲ−ｐｒｏ−ＡＤＭ（中央領域プロアドレノメデュリン）（配列番号３）、ＡＤＭ（アドレノメデュリン）（配列番号４）、ＣＴ−ｐｒｏ−ＡＤＭ（アドレノテンシン）（配列番号５）を指す。
【００１９】
更に、本発明によるプロアドレノメデュリン（ｐｒｏＡＤＭ）又はその部分ペプチド若しくは断片、特に中央領域プロアドレノメデュリン（ＭＲ−ｐｒｏＡＤＭ）は、糖質化、脂質化、又は誘導体化などの修飾を示し得る。
【００２０】
一態様では、侵襲性真菌感染（ＩＦＩ）及び／又は侵襲性真菌症（ＩＦＤ）のインビトロ診断及び／又はリスク層別化のための方法が、提供される。上記方法は、検査されるべき患者のプロアドレノメデュリン（ｐｒｏＡＤＭ）（配列番号６）、その部分ペプチド若しくは断片、又は中央領域プロアドレノメデュリン（ＭＲ−ｐｒｏＡＤＭ）（配列番号３）の（ｉ）レベル若しくは量、（ｉｉ）参照試料と比較した量の変化、又は（ｉｉｉ）存在を判定することを含む。
【００２１】
別の態様では、敗血症及び／又は敗血症性ショックに関連した侵襲性真菌感染（ＩＦＩ）及び／又は侵襲性真菌症（ＩＦＤ）のインビトロ診断及び／又はリスク層別化のための方法が提供される。上記方法は、検査されるべき患者のプロアドレノメデュリン（ｐｒｏＡＤＭ）（配列番号６）、その部分ペプチド若しくは断片、又は中央領域プロアドレノメデュリン（ＭＲ−ｐｒｏＡＤＭ）（配列番号３）の（ｉ）レベル若しくは量、（ｉｉ）参照試料と比較した量の変化、又は（ｉｉｉ）存在を判定することを含む。
【００２２】
別の態様では、侵襲性真菌感染（ＩＦＩ）及び／又は侵襲性真菌症（ＩＦＤ）を処置するため方法が提供される。上記方法は、検査されるべき患者のプロアドレノメデュリン（ｐｒｏＡＤＭ）（配列番号６）、その部分ペプチド若しくは断片、又は中央領域プロアドレノメデュリン（ＭＲ−ｐｒｏＡＤＭ）（配列番号３）の（ｉ）レベル若しくは量、（ｉｉ）参照試料と比較した量の変化、又は（ｉｉｉ）存在を判定することを含む。また上記方法は、ｐｒｏＡＤＭ若しくはＭＲ−ｐｒｏＡＤＭが検出される場合、又はｐｒｏＡＤＭ若しくはＭＲ−ｐｒｏＡＤＭの量が標準的な健常患者のレベル又は真菌感染若しくは侵襲性真菌症を有する患者のレベルを超える場合、上記患者を処置することも含む。処置は、上記患者に抗真菌剤を（例えば、静脈内投与によって）投与することを含み得る。幾つかの実施形態では、上記ＩＦＩ又はＩＦＤは、敗血症又は敗血症性ショックに関連する。幾つかの実施形態では、上記抗真菌剤は、ポリエン系抗真菌薬（例えば、（リポソーム）アンホテリシンＢ）、エキノカンジン（例えば、カスポファンギン）、アゾール系抗真菌薬（例えば、フルコナゾール）、アリルアミン及びモルホリン系抗真菌薬、及び代謝拮抗抗真菌薬（例えば、５−フルオロシトシン）からなる群から選択される。
【００２３】
上記態様の幾つかの実施形態では、上記その断片は、ＰＡＭＰ（配列番号２）、ＭＲ−ｐｒｏＡＤＭ（中央領域プロアドレノメデュリン）（配列番号３）、ＡＤＭ（アドレノメデュリン）（配列番号４）、及びＣＴ−ｐｒｏ−ＡＤＭ（アドレノテンシン）（配列番号５）からなる群から選択される。
【００２４】
上記態様の幾つかの実施形態では、上記侵襲性真菌感染（ＩＦＩ）又は侵襲性真菌症（ＩＦＤ）は、Ｃａｎｄｉｄａ  ｓｐｐ．、Ｃ．ａｌｂｉｃａｎｓ、Ｃ．ｇｌａｂｒａｔａ、Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ  ｓｐｐ．、Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ  ｆｕｍｉｇａｔｕｓによって引き起こされる。
【００２５】
上記態様の幾つかの実施形態では、判定は、検査されるべき患者からのＣ反応性タンパク質（ＣＲＰ）、ＴＮＦ−αなどのサイトカイン、例えば、ＩＬ−１０、ＩＬ−６、ＩＬ−２２、ＩＬ１７Ａ及びＩＬ−１７Ｂ、インターロイキン−１βなどのインターロイキン、プロカルシトニン及びその断片、プロ心房性ナトリウム利尿ペプチド及びその断片（例えば、ＡＮＰ及びプロＡＮＰ）、プロアルギニンバソプレシン及びその断片（例えば、ＡＶＰ、ｐｒｏ−ＡＶＰ、及びコペプチン）、アンジオテンシンＩＩ、エンドセリン−１、グルカン、インターフェロンγ（ＩＮＦ−γ）、β−Ｄ−グルカン、ガラクトマンナン、並びにＶＣＡＭ又はＩＣＡＭなどの接着分子、連続臓器不全評価スコア（ＳＯＦＡ）、簡易急性生理学スコア（ＳＡＰＳ  ＩＩスコア）、急性生理学及び慢性健康評価ＩＩ（ＡＰＡＣＨＥ  ＩＩ）スコア、肺炎重症度指数（ＰＳＩ）スコア、年齢、性別、家族歴、民族性、体重、体格指数（ＢＭＩ）、収縮期血圧、拡張期血圧、心拍数、体温からなる群から選択される、少なくとも１種の更なるマーカー並びに／又は臨床スコア及び／若しくは臨床パラメータを用いて付加的に実施される。
【００２６】
上記態様の幾つかの実施形態では、上記マーカーの並行判定又は同時判定が実施される。
【００２７】
上記態様の幾つかの実施形態では、上記判定は、少なくとも１つの患者試料に対して実施される。
【００２８】
上記態様の幾つかの実施形態では、上記判定は、自動分析装置又は診断アッセイを使用して実施される。
【００２９】
上記態様の幾つかの実施形態では、上記判定は、迅速試験によって、特に単一パラメータ判定又は複数パラメータ判定を用いて実施される。
【００３０】
上記態様の幾つかの実施形態では、患者の上記層別化は、臨床判断、特に、侵襲性真菌感染（ＩＦＩ）及び／又は侵襲性真菌症（ＩＦＤ）、特に敗血症及び／又は敗血症性ショックに関連した侵襲性真菌感染（ＩＦＩ）及び／又は侵襲性真菌症（ＩＦＤ）の処置又は治療のための薬物による更なる処置を目的とする。一部の実施形態では、上記患者は、重症患者、特に、免疫不全患者及び／又は重度の好中球減少症患者、がん患者を含む、薬剤若しくは疾患により、又は免疫反応を誘発、増強、若しくは抑制する手段により免疫調節された患者からなる群から選択される。
【００３１】
上記態様の幾つかの実施形態では、上記診断及び／又はリスク層別化は、治療に伴うものとして、侵襲性真菌感染（ＩＦＩ）及び／又は侵襲性真菌症（ＩＦＤ）、特に敗血症及び／又は敗血症性ショックに関連した侵襲性真菌感染（ＩＦＩ）及び／又は侵襲性真菌症（ＩＦＤ）の（ｉ）予後、（ｉｉ）予防、（ｉｉｉ）早期検出及び鑑別診断による検出、（ｉｖ）重症度の評価、並びに（ｖ）経過を評価すること、のうちの１つ以上のために行われる。
【００３２】
上記態様の幾つかの実施形態では、プロアドレノメデュリン（ｐｒｏＡＤＭ）又はその部分ペプチド若しくは断片、特に中央領域プロアドレノメデュリン（ＭＲ−ｐｒｏＡＤＭ）の症状の発生後（ｔ＝０）での６．９９ｎｍｏｌ／Ｌ以上のカットオフ値（閾値）、１日後（ｔ＝１ｄ）での８．５３ｎｍｏｌ／Ｌ以上のカットオフ値（閾値）、２日後（ｔ＝２ｄ）での５．１０ｎｍｏｌ／Ｌ以上のカットオフ値（閾値）は、上記診断及び／又はリスク層別化に有意（特異的）かつそれらを示す。
【００３３】
上記態様の幾つかの実施形態では、症状の発生後（ｔ＝０）、１日後（ｔ＝１ｄ）、２日後（ｔ＝２ｄ）での５ｎｍｏｌ／Ｌ未満のレベルのプロアドレノメデュリン（ｐｒｏＡＤＭ）又はその部分ペプチド若しくは断片、特に中央領域プロアドレノメデュリン（ＭＲ−ｐｒｏＡＤＭ）は、上記患者が侵襲性真菌感染（ＩＦＩ）及び／又は侵襲性真菌症（ＩＦＤ）に罹患していないことを示す。
【００３４】
上記態様の幾つかの実施形態では、症状の発生後（ｔ＝０）での２ｎｍｏｌ／Ｌ未満のレベルのプロアドレノメデュリン（ｐｒｏＡＤＭ）又はその部分ペプチド若しくは断片、特に中央領域プロアドレノメデュリン（ＭＲ−ｐｒｏＡＤＭ）は、上記患者が侵襲性真菌感染（ＩＦＩ）及び／又は侵襲性真菌症（ＩＦＤ）に罹患していないことを示す。
【００３５】
別の態様では、侵襲性真菌感染（ＩＦＩ）及び／又は侵襲性真菌症（ＩＦＤ）、特に敗血症及び／又は敗血症性ショックに関連した侵襲性真菌感染（ＩＦＩ）及び／又は侵襲性真菌症（ＩＦＤ）のインビトロ診断及び／又はリスク層別化のためのキット又は診断アッセイが、提供される。上記キットは、プロアドレノメデュリン（ｐｒｏＡＤＭ）（配列番号６）又はその部分ペプチド若しくは断片、特に中央領域プロアドレノメデュリン（ＭＲ−ｐｒｏＡＤＭ）（配列番号３）、又はマーカー組合せに含まれるプロアドレノメデュリン又はその部分ペプチド若しくは断片、特に中央領域プロアドレノメデュリン、並びに／又は請求項５に記載の臨床スコア及び／若しくは臨床パラメータを判定するための検出試薬、並びに補助的物質を含む。
【図面の簡単な説明】
【００３６】
【図１】ｐｒｅｐｒｏＡＤＭ（配列番号１）の配列を、関連する部分配列及び断片と共に示す図である。
【図２Ａ】敗血症性ショックを有する患者のインターロイキン（ＩＬ）−１７Ａの血漿濃度を示す図である。
【図２Ｂ】敗血症性ショックを有する患者のインターロイキン（ＩＬ）−１７Ａの血漿濃度を示す図である。
【００３７】
図２Ａにおいて、ＩＬ−１７Ａの血漿濃度は、真菌感染を有する（灰色のマス目に仕切られたボックス）、真菌の定着を有する（灰色の平面ボックス）、又はなんらの真菌所見のない（白色のボックス）、敗血症性ショックに罹患している患者において測定された。血漿試料は、敗血症性ショック発症時（Ｔ０）並びに１日（Ｔ１）、２日（Ｔ２）、７日（Ｔ３）、１４日（Ｔ４）、２１日（Ｔ５）及び２８日（Ｔ６）後に採取された。ボックスプロットにおけるデータを、中央値、第２５百分位数、第７５百分位数として、ウィスカーの端の第１０及び第９０百分位数と共に示す。記号及び有意性の高い順に関して：ｐ＜０．０５：*、ｐ＜０．０１：**、ｐ＜０．００１：***。
図２Ｂは、全ての参加している患者の敗血症発症時（Ｔ０）並びに１日（Ｔ１）、２日（Ｔ２）及び７日（Ｔ３）後でのインターロイキン（ＩＬ）−１７Ａを用いた、２８日目までの真菌感染の予測に関する受信者動作特性（ＲＯＣ）解析を示す。
【００３８】
【図３Ａ】敗血症性ショックを有する患者の中央領域プロアドレノメデュリン（ＭＲ−ｐｒｏＡＤＭ）の血漿濃度を示す図である。
【図３Ｂ】敗血症性ショックを有する患者の中央領域プロアドレノメデュリン（ＭＲ−ｐｒｏＡＤＭ）の血漿濃度を示す図である。  図３Ａにおいて、ＭＲ−ｐｒｏＡＤＭの血漿濃度は、真菌感染を有する（灰色のマス目に仕切られたボックス）、真菌の定着を有する（灰色の平面ボックス）、又はなんらの真菌所見のない（白色のボックス）、敗血症性ショックに罹患している患者において測定された。血漿試料は、敗血症性ショック発症時（Ｔ０）並びに１日（Ｔ１）、２日（Ｔ２）、７日（Ｔ３）、１４日（Ｔ４）、２１日（Ｔ５）及び２８日（Ｔ６）後に採取された。ボックスプロットにおけるデータを、中央値、第２５百分位数、第７５百分位数として、ウィスカーの端の第１０及び第９０百分位数と共に示す。記号及び有意性の高い順に関して：ｐ＜  ０．０５：＊、ｐ＜０．０１：＊＊、ｐ＜０．００１：＊＊＊。  図３Ｂは、全ての参加している患者の敗血症発症時（Ｔ０）並びに１日（Ｔ１）、２日（Ｔ２）及び７日（Ｔ３）後での中央領域プロアドレノメデュリン（ＭＲ−ｐｒｏＡＤＭ）を用いた、２８日目までの真菌感染の予測に関する受信者動作特性（ＲＯＣ）解析を示す。発明の詳細な説明
【００３９】
特に定義しない限り、本明細書において使用される技術用語及び科学用語は、本発明が属する技術分野の当業者により一般的に理解される意味と同じ意味を有する。
【００４０】
本発明による「診断する」は、関連する疾患、障害、合併症、又はリスクの判定、モニタリング、確認、細分類、及び予測を含む。「判定する」は、疾患、障害、合併症、又はリスクに気づくことに関する。「モニタリング」は、すでに診断された疾患、障害、合併症、又はリスクの経過を追うこと、例えば、疾患の進行又は疾患若しくは障害の進行に対する特定の処置の影響を解析することに関する。「確認」は、他の指標又はマーカーを使用してすでに実行された診断を補強又は実証することに関する。「細分類」は、診断された疾患、障害、合併症、又はリスクの異なる下位分類に従って診断を更に定義すること、例えば、疾患の軽症型及び重症型に従って定義することに関する。「予測」は、他の症状又はマーカーが顕在化するか、又は著しく変化する前に疾患障害又は合併症を予測することに関する。
【００４１】
本発明による用語「診断」は、ＩＦＩ／ＩＦＤのできる限り有利な経過を可能にすることを目的としてＩＦＩ／ＩＦＤの集中的な診断及び治療／処置のために、ＩＦＩ／ＩＦＤ、特により悪い予後を伴う敗血症又は敗血症性ショックに関連したＩＦＩ／ＩＦＤを有する患者を見出すことを含み得る。
【００４２】
本発明において、用語「リスク層別化」は、対象をそれらの更なる予後に従って異なるリスク群にグループ化することに関する。リスク層別化は、予防及び／又は治療手段を適用するための層別化にも関する。
【００４３】
このために、信頼性のある診断及び／又はリスク層別化を本発明による方法によって行うことができることは特に有利である。本発明による方法は、重症患者における真菌感染のより迅速な診断を導く臨床判断を可能にする。本発明による方法は、ＩＦＩ／ＩＦＤ、特に敗血症又は敗血症性ショックに関連したＩＦＩ／ＩＦＤのより迅速な診断を導く臨床判断を可能にする。かかる臨床判断は、ＩＦＩ／ＩＦＤ、特に敗血症又は敗血症性ショックに関連したＩＦＩ／ＩＦＤの処置又は治療のための薬物を使用した更なる処置も含む。
【００４４】
適切な処置は、救急室入院の際であっても、臨床判断と共にＩＦＩ／ＩＦＤ、特に敗血症又は敗血症性ショックに関連したＩＦＩ／ＩＦＤの早期診断及び鑑別を必要とする。ＩＦＩ／ＩＦＤにおける臨床症状は非特異的であり、真菌病原体の検出のための最近の診断ツールは関連した欠点に関連付けられるため、例えば、細菌又はウイルス病原体によって引き起こされる他の感染性疾患からの鑑別及び線引き、並びにＩＦＩ／ＩＦＤ、特に敗血症又は敗血症性ショックに関連したＩＦＩ／ＩＦＤの同定は、重要である。
【００４５】
かかる臨床判断は、ＩＦＩ／ＩＦＤ、特に敗血症又は敗血症性ショックに関連したＩＦＩ／ＩＦＤの処置又は治療のための薬物による更なる治療であって、ポリエン系抗真菌薬（例えば、（リポソーム）アンホテリシンＢ）、エキノカンジン（例えば、カスポファンギン）、アゾール系抗真菌薬（例えば、フルコナゾール）、アリルアミン及びモルホリン系抗真菌薬、代謝拮抗抗真菌薬（例えば、５−フルオロシトシン）の様な少なくとも１種の抗真菌剤が使用される治療を含む。
【００４６】
本発明による方法の別の好ましい実施形態では、診断及び／又はリスク層別化が、真菌感染、特に敗血症又は敗血症性ショックに関連したＩＦＩ／ＩＦＤの経過を評価するために行われる。
【００４７】
本発明による方法の別の好ましい実施形態では、診断及び／又はリスク層別化が、治療に伴うものとして、及び例えば、機械的人工換気、腎代替療法、又は抗真菌療法などの治療的な処置を調整するために、ＩＦＩ／ＩＦＤの経過について行われる。
【００４８】
治療的な処置の調整は、対象が以前のように更に治療されるかどうか、又は処置が適合されるかどうかの判断も含み得る。例えば、治療的な処置の調整は、対象が集中治療室（ＩＣＵ）若しくは救急部（ＥＤ）に維持されるかどうか、又は対象が解放されるかどうであり得る。
【００４９】
本発明による方法の別の好ましい実施形態では、ＩＦＩ／ＩＦＤの早期検出又は早期診断は、症状の発生後（ｔ＝０）、又は１日以内若しくは１日後（ｔ＝１ｄ）、又は２日以内若しくは２日後（ｔ＝２ｄ）に本発明の実施形態に従って実施される。
【００５０】
他の好ましい実施形態では、本発明は、上記実施形態のうちの１つによるＩＦＩ／ＩＦＤ、特に敗血症若しくは敗血症性ショックに関連したＩＦＩ／ＩＦＤの診断及び／若しくはリスク層別化のための方法又はＩＦＩ／ＩＦＤ、特に敗血症若しくは敗血症性ショックに関連したＩＦＩ／ＩＦＤの早期診断若しくは鑑別診断又は予後のインビトロ診断のための方法であって、プロアドレノメデュリン（ｐｒｏＡＤＭ）又はその部分ペプチド若しくは断片、特に中央領域プロアドレノメデュリン（ＭＲ−ｐｒｏＡＤＭ）の症状の発生後（ｔ＝０）での６．９９ｎｍｏｌ／Ｌ以上のカットオフ値（閾値）、１日後（ｔ＝１ｄ）での８．５３ｎｍｏｌ／Ｌ以上のカットオフ値（閾値）、２日後（ｔ＝２ｄ）での５．１０ｎｍｏｌ／Ｌ以上のカットオフ値（閾値）が上記診断及び／又はリスク層別化に有意（特異的）かつそれらを示す（図３を参照のこと）、方法に関する。
【００５１】
他の好ましい実施形態では、本発明は、上記実施形態のうちの１つによるＩＦＩ／ＩＦＤ、特に敗血症若しくは敗血症性ショックに関連したＩＦＩ／ＩＦＤの診断及び／若しくはリスク層別化のための方法又はＩＦＩ／ＩＦＤ、特に敗血症若しくは敗血症性ショックに関連したＩＦＩ／ＩＦＤの早期診断若しくは鑑別診断又は予後のインビトロ診断のための方法であって、症状の発生後（ｔ＝０）、１日後（ｔ＝１ｄ）、２日後（ｔ＝２ｄ）での５ｎｍｏｌ／Ｌ未満のレベルのプロアドレノメデュリン（ｐｒｏＡＤＭ）又はその部分ペプチド若しくは断片、特に中央領域プロアドレノメデュリン（ＭＲ−ｐｒｏＡＤＭ）が、患者がＩＦＩ／ＩＦＤに罹患していないことを示す、方法に関する。従って、患者は、このような除外診断によってＩＦＩ／ＩＦＤを除外する（図３を参照のこと）。
【００５２】
他の好ましい実施形態では、本発明は、上記実施形態のうちの１つによるＩＦＩ／ＩＦＤ、特に敗血症若しくは敗血症性ショックに関連したＩＦＩ／ＩＦＤの診断及び／若しくはリスク層別化のための方法又はＩＦＩ／ＩＦＤ、特に敗血症若しくは敗血症性ショックに関連したＩＦＩ／ＩＦＤの早期診断若しくは鑑別診断又は予後のインビトロ診断のための方法であって、症状の発生後（ｔ＝０）での２ｎｍｏｌ／Ｌ未満のレベルのプロアドレノメデュリン（ｐｒｏＡＤＭ）又はその部分ペプチド若しくは断片、特に中央領域プロアドレノメデュリン（ＭＲ−ｐｒｏＡＤＭ）が、患者がＩＦＩ／ＩＦＤに罹患していないことを示す、方法に関する。従って、患者は、このような除外診断によってＩＦＩ／ＩＦＤが除外されることとなる（図３を参照のこと）。
【００５３】
本発明の文脈において「敗血症」は、感染に対する全身性反応を指す。あるいは、敗血症は、慢性の感染プロセス又は感染を伴うＳＩＲＳの組み合わせとして観察され得る。敗血症は、感染及び全身性炎症反応の存在によって定義される臨床症候群として特徴付けられ得る（Ｌｅｖｙ  ＭＭ  ｅｔ  ａｌ．２００１「ＳＣＣＭ／ＥＳＩＣＭ／ＡＣＣＰ／  ＡＴＳ／ＳＩＳ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  Ｓｅｐｓｉｓ  Ｄｅｆｉｎｉｔｉｏｎｓ  Ｃｏｎｆｅｒｅｎｃｅ．」  Ｃｒｉｔ  Ｃａｒｅ  Ｍｅｄ．２００３  Ａｐｒ；３１  （４）：１２５０−６）。本明細書において使用される用語「敗血症」としては、敗血症、重症敗血症、及び敗血症性ショックが挙げられるが、これらに限定されない。この文脈において、重症敗血症は、臓器不全、低灌流異常又は敗血症誘発性低血圧を伴う敗血症を意味する。低灌流異常には、乳酸アシドーシス、乏尿及び精神状態の急性変化が含まれる。敗血症誘発性低血圧は、約９０ｍｍＨｇ未満の収縮期血圧の存在、又は低血圧の他の原因（例えば、心原性ショック）がない場合のベースラインから約４０ｍｍＨｇ以上の収縮期血圧の低減により定義される。敗血性ショックは、低灌流異常又は臓器不全の存在と共に、適切な輸液蘇生にも関わらず、敗血症誘発性低血圧の持続を有する重症敗血症として定義される（Ｂｏｎｅ  ＲＣ，Ｂａｌｋ  ＲＡ．，Ｃｅｒｒａ  ＦＢ．，Ｄｅｌｌｉｎｇｅｒ，ＲＰ．，Ｆｅｉｎ  ＡＭ．，Ｋｎａｕｓ  ＷＡ．，Ｓｃｈｅｉｎ  ＲＭ．，Ｓｉｂｂａｌｄ  ＷＪ．，「Ｄｅｆｉｎｉｔｉｏｎｓ  ｆｏｒ  ｓｅｐｓｉｓ  ａｎｄ  ｏｒｇａｎ  ｆａｉｌｕｒｅ  ａｎｄ  ｇｕｉｄｅｌｉｎｅｓ  ｆｏｒ  ｔｈｅ  ｕｓｅ  ｏｆ  ｉｎｎｏｖａｔｉｖｅ  ｔｈｅｒａｐｉｅｓ  ｉｎ  ｓｅｐｓｉｓ．」  Ｔｈｅ  ＡＣＣＰ／ＳＣＣＭ  Ｃｏｎｓｅｎｓｕｓ  Ｃｏｎｆｅｒｅｎｃｅ  Ｃｏｍｍｉｔｔｅｅ．Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｃｏｌｌｅｇｅ  ｏｆ  Ｃｈｅｓｔ  Ｐｈｙｓｉｃｉａｎｓ／Ｓｏｃｉｅｔｙ  ｏｆ  Ｃｒｉｔｉｃａｌ  Ｃａｒｅ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ．Ｃｈｅｓｔ  １９９２，１０１  （６），１６４４−５５）。
【００５４】
用語「敗血症」は、ＳＥＰＳＩＳ−２定義に基づく重症敗血症又は敗血症性ショックも含む（Ｂｏｎｅ  ｅｔ  ａｌ．，２００９）。用語「敗血症」は、ＳＥＰＳＩＳ−３定義の範囲以内にある対象も含む（Ｓｉｎｇｅｒ  Ｍ．，Ｄｅｕｔｓｃｈｍａｎｎ  ＣＳ，Ｓｅｙｍｏｕｒ  ＣＷ，Ｓｈａｎｋａｒ−Ｈａｒｉ  Ｍ，Ａｎｎａｎｅ  Ｄ，Ｂａｕｅｒ  Ｍ．，Ｂｅｌｌｏｍｏ  Ｒ．，Ｂｅｒｎａｒｄ  ＧＲ，Ｃｈｉｃｈｅ  ＪＤ，Ｃｏｏｐｅｒｓｍｉｔｈ  ＣＭ，Ｈｏｔｃｈｋｉｓｓ  ＲＳ，Ｌｅｖｙ  ＭＭ，Ｍａｒｓｈａｌｌ  ＪＣ，Ｍａｒｔｉｎ  ＧＳ，Ｏｐａｌ  ＳＭ，Ｒｕｂｅｎｆｅｌｄ，ｖａｎ  ｄｅｒ  Ｐｏｌｌ  Ｔ，Ｖｉｎｃｅｎｔ  ＪＬ，Ａｎｇｕｓ  ＤＣ．「Ｔｈｅ  Ｔｈｉｒｄ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  Ｃｏｎｓｅｎｓｕｓ  Ｄｅｆｉｎｉｔｉｏｎｓ  ｆｏｒ  Ｓｅｐｓｉｓ  ａｎｄ  Ｓｅｐｔｉｃ  Ｓｈｏｃｋ  （Ｓｅｐｓｉｓ−３）．」  ＪＡＭＡ  ２０１６，３１５  （８），８０１−８１０）。
【００５５】
本明細書において使用される用語「敗血症」は、敗血症の発症における全てのあり得るステージに関する。
【００５６】
本明細書で使用する場合、本発明の範囲内の「感染」は、潜在的に病原性の作用物質／病原体、生物及び／又は微生物による通常は無菌の組織又は体液の侵入により引き起こされる病理学的プロセスを意味し、好ましくは、真菌、細菌、ウイルス、及び／又は寄生虫による感染に関する。従って、感染は、細菌感染、ウイルス感染、及び／又は真菌感染であり得る。感染は、局所又は全身性感染であり得る。更に感染に罹患している対象は、同時に２つ以上の感染源に罹患し得る。例えば、対象は、ウイルス感及び真菌感染；細菌感染及び真菌感染、並びに細菌感染、真菌感染、及びウイルス感染に罹患し得る。
【００５７】
特に対象は、敗血症、重症敗血症、又は敗血症性ショックに罹患する。更に対象は、呼吸器疾患、好ましくは下気道の感染に罹患し得る。本明細書で使用する場合、呼吸器疾患は、高等生物においてガス交換を可能にする臓器及び組織に影響を及ぼす病態を含み、上気道、気管、気管支、気管支梢、肺胞、胸膜、及び胸腔、並びに呼吸神経及び呼吸筋の状態も含む。
【００５８】
更に対象は、腹部疾患、好ましくは消化管（胃、大腸、小腸）、肝臓、脾臓、及び膵臓を含む腹部領域の感染に罹患し得る。
【００５９】
本発明による方法の別の好ましい実施形態では、体液、特に血液、血清、血漿、脳脊髄液、尿、唾液、痰、並びに胸水の試料、好ましくは全血、血清、若しくは血漿又はこれらの混合物は、検査されるべき患者から採取され、診断は、インビボ／エクスビボで、すなわちヒト又は動物の体外で行われる。加えて当業者は、一部の試験試料は、分画又は精製手順、例えば、全血の血清又は血漿成分への分離後により容易に解析されることを理解するであろう。
【００６０】
従って、本発明の好ましい実施形態では、試料は、血液試料、血清試料、血漿試料、脳脊髄液試料、唾液試料、及び尿試料又は上述の試料のいずれかの抽出物からなる群から選択される。好ましくは、試料は、血液試料、最も好ましくは血清試料又は血漿試料である。
【００６１】
診断及び／又はリスク層別化は、少なくとも１つの患者試料中の成熟型アドレノメデュリン又はプロアドレノメデュリン（ｐｒｏＡＤＭ）又はその部分ペプチド若しくは断片、特に中央領域プロアドレノメデュリン（ＭＲ−ｐｒｏＡＤＭ）及びその存在する量若しくはレベル又は参照と比較した量若しくはレベルの変化の判定に基づいて行われ得る。
【００６２】
本発明の文脈において、用語「レベル」又は「量」は、患者から採取された試料中のプロアドレノメデュリン（ｐｒｏＡＤＭ）又はその部分ペプチド若しくは断片、特に中央領域プロアドレノメデュリン（ＭＲ−ｐｒｏＡＤＭ）の濃度（好ましくは重量／体積；ｗ／ｖとして表現される）に関する。
【００６３】
本発明の範囲内で、用語「ＩＦＩ／ＩＦＤ」は、ｔｈｅ  Ｅｕｒｏｐｅａｎ  Ｏｒｇａｎｉｚａｔｉｏｎ  ｆｏｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  ａｎｄ  Ｔｒｅａｔｍｅｎｔ  ｏｆ  Ｃａｎｃｅｒ／Ｉｎｖａｓｉｖｅ  ｆｕｎｇａｌ  ｉｎｆｅｃｔｉｏｎｓ（ＩＦＩ）Ｃｏｏｐｅｒａｔｉｖｅ  Ｇｒｏｕｐ；Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ  ｏｆ  Ａｌｌｅｒｇｙ  ａｎｄ  Ｉｎｆｅｃｔｉｏｕｓ  Ｄｉｓｅａｓｅｓ  Ｍｙｃｏｓｅｓ  Ｓｔｕｄｙ  Ｇｒｏｕｐ（ＥＯＲＴＣ／ＭＳＧ）Ｃｏｎｓｅｎｓｕｓ  Ｇｒｏｕｐ  ｉｎ  ２００２  ａｎｄ  ２００８による記載のように理解される（Ａｓｃｉｏｇｌｕ  Ｓ，Ｒｅｘ  ＪＨ，ｄｅ  Ｐａｕｗ  Ｂ，Ｂｅｎｎｅｔｔ  ＪＥ，Ｂｉｌｌｅ  Ｊ，Ｃｒｏｋａｅｒｔ  Ｆ，Ｄｅｎｎｉｎｇ  ＤＷ，Ｄｏｎｎｅｌｌｙ  ＪＰ，Ｅｄｗａｒｄｓ  ＪＥ，Ｅｒｊａｖｅｃ  Ｚ，Ｆｉｅｒｅ  Ｄ，Ｌｏｒｔｈｏｌａｒｙ  Ｏ，Ｍａｅｒｔｅｎｓ  Ｊ，Ｍｅｉｓ  ＪＦ，Ｐａｔｔｅｒｓｏｎ  ＴＦ，Ｒｉｔｔｅｒ  Ｊ，Ｓｅｌｌｅｓｌａｇ  Ｄ，Ｓｈａｈ  ＰＭ，Ｓｔｅｖｅｎｓ  ＤＡ，Ｗａｌｓｈ  ＴＪ；「Ｉｎｖａｓｉｖｅ  Ｆｕｎｇａｌ  Ｉｎｆｅｃｔｉｏｎｓ  Ｃｏｏｐｅｒａｔｉｖｅ  Ｇｒｏｕｐ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｅｕｒｏｐｅａｎ  Ｏｒｇａｎｉｚａｔｉｏｎ  ｆｏｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  ａｎｄ  Ｔｒｅａｔｍｅｎｔ  ｏｆ  Ｃａｎｃｅｒ；Ｍｙｃｏｓｅｓ  Ｓｔｕｄｙ  Ｇｒｏｕｐ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ  ｏｆ  Ａｌｌｅｒｇｙ  ａｎｄ  Ｉｎｆｅｃｔｉｏｕｓ  Ｄｉｓｅａｓｅｓ；」．Ｃｌｉｎ  Ｉｎｆｅｃｔ  Ｄｉｓ．２００２  Ｊａｎ  １；３４（１）：７−１４．Ｅｐｕｂ  ２００１  Ｎｏｖ  ２６；Ｄｅ  Ｐａｕｗ  Ｂ，Ｗａｌｓｈ  ＴＪ，Ｄｏｎｎｅｌｌｙ  ＪＰ，Ｓｔｅｖｅｎｓ  ＤＡ，Ｅｄｗａｒｄｓ  ＪＥ，Ｃａｌａｎｄｒａ  Ｔ，Ｐａｐｐａｓ  ＰＧ，Ｍａｅｒｔｅｎｓ  Ｊ，Ｌｏｒｔｈｏｌａｒｙ  Ｏ，Ｋａｕｆｆｍａｎ  ＣＡ，Ｄｅｎｎｉｎｇ  ＤＷ，Ｐａｔｔｅｒｓｏｎ  ＴＦ，Ｍａｓｃｈｍｅｙｅｒ  Ｇ，Ｂｉｌｌｅ  Ｊ，Ｄｉｓｍｕｋｅｓ  ＷＥ，Ｈｅｒｂｒｅｃｈｔ  Ｒ，Ｈｏｐｅ  ＷＷ，Ｋｉｂｂｌｅｒ  ＣＣ，Ｋｕｌｌｂｅｒｇ  ＢＪ，Ｍａｒｒ  ＫＡ，Ｍｕｈｏｚ  Ｐ，Ｏｄｄｓ  ＦＣ，Ｐｅｒｆｅｃｔ  ＪＲ，Ｒｅｓｔｒｅｐｏ  Ａ，Ｒｕｈｎｋｅ  Ｍ，Ｓｅｇａｌ  ＢＨ，Ｓｏｂｅｌ  ＪＤ，Ｓｏｒｒｅｌｌ  ＴＣ，Ｖｉｓｃｏｌｉ  Ｃ，Ｗｉｎｇａｒｄ  ＪＲ，Ｚａｏｕｔｉｓ  Ｔ，Ｂｅｎｎｅｔｔ  ＪＥ；「Ｅｕｒｏｐｅａｎ  Ｏｒｇａｎｉｚａｔｉｏｎ  ｆｏｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  ａｎｄ  Ｔｒｅａｔｍｅｎｔ  ｏｆ  Ｃａｎｃｅｒ／Ｉｎｖａｓｉｖｅ  Ｆｕｎｇａｌ  Ｉｎｆｅｃｔｉｏｎｓ  Ｃｏｏｐｅｒａｔｉｖｅ  Ｇｒｏｕｐ；Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ  ｏｆ  Ａｌｌｅｒｇｙ  ａｎｄ  Ｉｎｆｅｃｔｉｏｕｓ  Ｄｉｓｅａｓｅｓ  Ｍｙｃｏｓｅｓ  Ｓｔｕｄｙ  Ｇｒｏｕｐ  （ＥＯＲＴＣ／ＭＳＧ）  Ｃｏｎｓｅｎｓｕｓ  Ｇｒｏｕｐ．」  Ｃｌｉｎ  Ｉｎｆｅｃｔ  Ｄｉｓ．２００８  Ｊｕｎ  １５；４６（１２）：１８１３−２１．ｄｏｉ：１０．１０８６／５８８６６０）。
【００６４】
また本発明の範囲内で、用語「ＩＦＩ／ＩＦＤ」は、表在性の、局所の、定着した、良性の、自己限定的な真菌症又は真菌感染ではなく全身性の、汎発型の、深在性の、内臓性の、かつ重症の致命的な真菌感染の意味も有する。
【００６５】
用語「ＩＦＩ／ＩＦＤ」は、死亡及び罹患率の増加のような有害事象のリスクを包含する。
【００６６】
本明細書で使用する場合、用語「患者」は、医療を受けている、又は疾患のために医療を受けなければならない生きているヒト又は非ヒト生物を指す。これは、病理の徴候について調査されている明確な疾病を有さない人間を含む。従って、本明細書に記載の方法及びアッセイは、ヒト疾患及び獣医学的疾患に適用可能である。
【００６７】
本発明による診断又はリスク層別化に好ましい患者は重症患者、特に、移植を受けた患者、重度の好中球減少症を有する患者、又はがん患者などの免疫不全患者を含む、薬剤若しくは疾患により、又は免疫反応を誘発、増強、又は抑制する手段により免疫調節された患者である。従って、かかる前述の患者は、本発明によるリスク層別化に好ましい。
【００６８】
本発明による診断又はリスク層別化に好ましい患者は、敗血症、重症敗血症、若しくは敗血症性ショックと診断された重症患者、又は感染性疾患による症状を有するが敗血症を呈していない患者、局所感染（例えば、気道、尿路、腹部、皮膚、粘膜、生殖器、ＣＮＳ）を有する患者、機械的人工換気、輸液、腎代替療法により治療された患者、抗真菌療法を受けている患者、外科手術（特に、肝臓外科手術）を受けた患者、肝硬変を有する患者、及び外傷（多発外傷）を受けた患者であり得る。
【００６９】
本発明の方法は、以下を指す患者管理のために使用され得る：
●  病院又は集中治療室への入院の決定、
●  専門病院又は院内の専門部署への患者の再配置の決定、
●  集中治療室又は病院から早期退院のための評価、
●  資源配分（例えば、医師及び／又は看護職員、診断薬、治療薬）。
【００７０】
従って、本発明は、ＩＦＩ／ＩＦＤの診断及び／又はリスク層別化、特に、ＩＦＩ／ＩＦＤ、特に敗血症又は敗血症性ショックに関連したＩＦＩ／ＩＦＤの原因となる最もよく見られる病原体であるＣａｎｄｉｄａ  ｓｐｐ．（例えば、Ｃ．ａｌｂｉｃａｎｓ、Ｃ．ｇｌａｂｒａｔａ）、Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ  ｓｐｐ．（例えば、Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ  ｆｕｍｉｇａｔｕｓ）などによって引き起こされるＩＦＩ／ＩＦＤの診断及び／又はリスク層別化に関する。
【００７１】
非常に好ましい実施形態では、本発明は、敗血症および／または敗血症性ショックに関連したＩＦＩ／ＩＦＤの診断および／またはリスク層別化に関する。
【００７２】
用語「敗血症及び／又は敗血症性ショックに関連したＩＦＩ／ＩＦＤ」は、特にこれらの適応症の併存症を含む。すなわち既存の基礎疾患（指標疾患）、すなわちＩＦＩ／ＩＦＤに加えて、診断によって識別可能な既存の疾患プロファイル、すなわち敗血症及び／又は敗血症性ショックが判定される（すなわち、関連した疾患プロファイルが存在する）。この手法は、抗真菌剤（薬物）が患者に適時に適用される場合、最初のＩＦＩ／ＩＦＤによる敗血症及び／又は敗血症性ショックの有害な転帰を防止するのを可能にする。
【００７３】
別の実施形態では、プロアドレノメデュリン（ｐｒｏＡＤＭ）又はその部分ペプチド若しくは断片、特に中央領域プロアドレノメデュリン（ＭＲ−ｐｒｏＡＤＭ）の判定が、他のマーカーと共に付加的に行われ得、ここで、当該プロアドレノメデュリン（ｐｒｏＡＤＭ）又はその部分ペプチド若しくは断片、特に中央領域プロアドレノメデュリン（ＭＲ−ｐｒｏＡＤＭ）は、マーカー組合せ（パネル、クラスター）、特に好ましくはＩＦＩ／ＩＦＤ、特に敗血症又は敗血症性ショックに関連したＩＦＩ／ＩＦＤをすでに示しているものに含まれる。
【００７４】
このために、本発明は、本発明による方法の実施形態であって、判定が、検査されるべき患者からのＣ反応性タンパク質（ＣＲＰ）、ＴＮＦ−αなどのサイトカイン、例えば、ＩＬ−１０、ＩＬ−６、ＩＬ−２２、ＩＬ１７Ａ及びＩＬ−１７Ｂ、インターロイキン−1βなどのインターロイキン、プロカルシトニン及びその断片、プロ心房性ナトリウム利尿ペプチド及びその断片（ＡＮＰ、プロＡＮＰ）、プロアルギニンバソプレシン及びその断片（ＡＶＰ、ｐｒｏ−ＡＶＰ、コペプチン）、アンジオテンシンＩＩ、エンドセリン−１、グルカン、インターフェロンγ（ＩＮＦ−γ）、β−Ｄ−グルカン、ガラクトマンナン、並びにＶＣＡＭ又はＩＣＡＭなどの接着分子、連続臓器不全評価スコア（ＳＯＦＡ）、簡易急性生理学スコア（ＳＡＰＳＩＩスコア）、急性生理学及び慢性健康評価ＩＩ（ＡＰＡＣＨＥ  ＩＩ）スコア、肺炎重症度指数（ＰＳＩ）スコア、年齢、性別、家族歴、民族性、体重、体格指数（ＢＭＩ）、収縮期血圧、拡張期血圧、心拍数、体温の群から選択される、少なくとも１種の更なるマーカー又は臨床スコア若しくは臨床パラメータを用いて付加的に実施される実施形態に関する。
【００７５】
特に、体液中のガラクトマンナンの検出は、ヒトにおける侵襲性真菌感染（アスペルギルス症）を診断するために使用される。
【００７６】
本発明の別の実施形態では、本発明による方法は、マーカーの並行判定又は同時判定（例えば、９６穴以上のマルチタイタープレート）によって実施され得、ここで、当該判定は少なくとも１つの患者試料に実施される。
【００７７】
更に、本発明による方法及びその判定は、自動分析装置を使用して、特にＫｒｙｐｔｏｒ（Ｂ．Ｒ．Ａ．Ｈ．Ｍ．Ｓ  ＧｍｂＨ、Ｈｅｎｎｉｇｓｄｏｒｆ、Ｇｅｒｍａｎｙ）を使用して実施され得る。
【００７８】
別の実施形態では、本発明による方法及びその判定は、迅速試験（例えば、ラテラルフロー試験）によって、例えば、単一パラメータ判定又は複数パラメータ判定を使用して実施され得る。
【００７９】
更に本発明は、ＩＦＩ／ＩＦＤ、特に敗血症又は敗血症性ショックに関連したＩＦＩ／ＩＦＤのインビトロ診断及び／又はリスク層別化のためのプロアドレノメデュリン（ｐｒｏＡＤＭ）又はその部分ペプチド若しくは断片、特に中央領域プロアドレノメデュリン（ＭＲ−ｐｒｏＡＤＭ）、又はマーカー組合せ（パネル、クラスター）に含まれるプロアドレノメデュリン又はその部分ペプチド若しくは断片、特に中央領域プロアドレノメデュリンの使用に関する。マーカー組合せは、必要に応じて別の適切なマーカーを含有し得る。
【００８０】
本明細書において、プロアドレノメデュリン（ｐｒｏＡＤＭ）又はその部分ペプチド若しくは断片、特に中央領域プロアドレノメデュリン（ＭＲ−ｐｒｏＡＤＭ）のレベルの判定（又は測定若しくは検出）は、後述するように検出法及び／又は診断アッセイを使用して実行される。
【００８１】
別の目的は、対応する診断アッセイ又は本発明による方法を実施するためのかかるアッセイの使用を利用可能にすることである。
【００８２】
本明細書において言及されるように、「アッセイ」又は「診断アッセイ」は、診断薬の分野において適用される任意の種類のものであり得る。かかるアッセイは、一定の親和性を有する１種以上の捕捉プローブ（捕捉分子）への検出されるべき分析物の結合に基づき得る。捕捉分子と標的分子又は関心対象の分子との間の相互作用に関して、親和定数は、好ましくは１０8Ｍ-1を超える。
【００８３】
更にマーカーは、関心対象のタンパク質又はその断片の相対定量を判定するか、又は絶対定量を判定する方法などの質量分析ベースの方法によって判定され得る。
【００８４】
相対定量「ｒＳＲＭ」は、以下によって達成され得る。
【００８５】
１．試料中に検出された所定の標的断片ペプチドからのＳＲＭ（選択反応モニタリング）シグネチャピーク面積を、少なくとも第２の、第３、第４以上の生体試料中の標的断片ペプチドの同じＳＲＭシグネチャピーク面積と比較することにより、標的タンパク質の存在の増加又は低下を判定すること。
【００８６】
２．生体試料中に検出された所定のペプチド由来のＳＲＭシグネチャピーク面積を、異なる及び別個の生物学的供給源に由来する他の試料中の他のタンパク質からの断片ペプチドから生じたＳＲＭシグネチャピーク面積と比較することにより、標的タンパク質の存在の増加又は低下を判定することであって、ペプチド断片について２つの試料間のＳＲＭシグネチャピーク面積比較を、例えば、各試料において解析されたタンパク質の量に標準化する、判定すること。
【００８７】
３．ヒストンタンパク質の変化するレベルを様々な細胞条件下で発現レベルが変化しない他のタンパク質のレベルに標準化するために、所定の標的ペプチドについてのＳＲＭシグネチャピーク面積を、同一生体試料内の異なるタンパク質に由来する他の断片ペプチドからのＳＲＭシグネチャピーク面積と比較することにより、標的タンパク質の存在の増加又は低下を判定すること。
【００８８】
４．これらのアッセイは、未修飾の断片ペプチド及び標的タンパク質の修飾された断片ペプチドの両方に適用され得、修飾としては、リン酸化及び／又はグリコシル化、アセチル化、メチル化（モノ、ジ、トリ）、シトルリン化、ユビキチン化が挙げられるが、これらに限定されず、修飾されたペプチドの相対レベルは、未修飾のペプチドの相対量を判定するのと同じ方法で判定される。
【００８９】
所与のペプチドの絶対定量は、以下によって達成され得る。
【００９０】
１．個々の生体試料中の標的タンパク質からの所与の断片ペプチドについてのＳＲＭ／ＭＲＭシグネチャピーク面積を生体試料のタンパク質可溶化液に加えられた内部標準断片ペプチドのＳＲＭ／ＭＲＭシグネチャピーク面積と比較すること。内部標準は、調べられている標的タンパク質からの断片ペプチドの標識された合成バージョン又は標識された組換えタンパク質であり得る。この標準物質は、消化の前（組換えタンパク質では必須）又は後に既知量で試料に加えられ、生体試料中の内部標準断片ペプチドおよび天然の断片ペプチドの両方についてＳＲＭ／ＭＲＭシグネチャピーク面積が、別々に判定され得、続いて、両方のピーク面積が比較される。これは、未修飾断片ペプチドおよび修飾断片ペプチドに適用され得、修飾としては、リン酸化及び／又はグリコシル化、アセチル化、メチル化（例えば、モノ、ジ、又はトリメチル化）、シトルリン化、ユビキチン化が挙げられるが、これらに限定されず、修飾されたペプチドの絶対レベルは、未修飾のペプチドの絶対レベルを判定するのと同じ方法で判定され得る。
【００９１】
２．またペプチドは、外部検量線を使用して定量化され得る。正規曲線アプローチは、内部標準として一定量の重ペプチド及び試料に加えられた様々な量の合成の軽ペプチドを使用する。試験試料のものと類似する代表的なマトリックスが、マトリックス効果を説明する標準曲線を構築するために使用される必要がある。加えて、逆曲線法は、マトリックス中の内在性分析物の問題を回避し、一定量の軽ペプチドが、内部標準を作成するために内在性分析物の上に加えられ、様々な量の重ペプチドが一連の濃度標準を作成するために加えられる。正規曲線又は逆曲線のいずれかと比較されるべき試験試料は、検量線を作成するために使用されるマトリックスに加えられる内部標準と同じ量の標準ペプチドを加えられる。
【００９２】
本発明の文脈において、「捕捉分子」は試料由来の標的分子又は関心対象の分子、すなわち分析物（すなわち、本発明の文脈では心血管ペプチド）との結合に使用され得る分子である。従って、捕捉分子は、標的分子又は関心対象の分子に特異的に結合するために、空間的に及び表面特徴、例えば、表面電荷、疎水性、親水性、ルイス供与体及び／又は受容体の有無の観点の両方で適切に成形しなければならない。ここで、結合は例えば、捕捉分子と標的分子又は関心対象の分子との間のイオン結合、ファンデルワールス結合、π−π結合、σ−π結合、疎水性結合又は水素結合の相互作用、又は上述の相互作用のうちの２つ以上の組み合わせにより媒介され得る。本発明の文脈において、捕捉分子は例えば、核酸分子、炭水化物分子、ＲＮＡ分子、タンパク質、抗体、ペプチド又は糖タンパク質を含む群から選択され得る。好ましくは、捕捉分子は抗体であり、これには標的分子又は関心対象の分子に対する十分な親和性を有するそのフラグメントが含まれ、組換え抗体若しくは組換え抗体断片、並びに上記抗体の化学的及び／若しくは生化学的に修飾された誘導体、又はこれらの少なくとも１２アミノ酸の長さを有する変異鎖に由来する断片が含まれる。
【００９３】
好ましい検出法には、例えば、放射免疫アッセイ（ＲＩＡ）、化学発光及び蛍光免疫アッセイ、酵素結合免疫アッセイ（ＥＬＩＳＡ）、Ｌｕｍｉｎｅｘ（登録商標）ベースのビーズアレイ、タンパク質マイクロアレイアッセイなどの様々なフォーマット、並びに例えば、免疫クロマトグラフ細片試験などの迅速試験フォーマットの免疫アッセイが含まれる。
【００９４】
アッセイは同種又は異種アッセイ、競合及び非競合サンドイッチアッセイであり得る。特に好ましい実施形態では、アッセイはサンドイッチアッセイの形態であり、これは非競合免疫アッセイであり、検出及び／又は定量化されるべき分子が第１の抗体及び第２の抗体に結合される。第１の抗体は固相、例えば、ビーズ、ウェル若しくは他の容器の表面、チップ、又は細片に結合し得、第２の抗体は、例えば、色素、放射性同位体、又は反応性若しくは触媒活性部分で標識される抗体である。次いで、分析物に結合した標識抗体の量が適切な方法により測定される。「サンドイッチアッセイ」に伴う一般的組成及び手順は確立されており、当業者に公知である。（「Ｔｈｅ  Ｉｍｍｕｎｏａｓｓａｙ  Ｈａｎｄｂｏｏｋ」，Ｅｄ．Ｄａｖｉｄ  Ｗｉｌｄ，Ｅｌｓｅｖｉｅｒ  ＬＴＤ，Ｏｘｆｏｒｄ；３ｒｄ  ｅｄ．（Ｍａｙ  ２００５）；Ｈｕｌｔｓｃｈｉｇ  Ｃ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｕｒｒ  Ｏｐｉｎ  Ｃｈｅｍ  Ｂｉｏｌ．２００６  Ｆｅｂ；１０（１）：４−１０））。
【００９５】
特に好ましい実施形態では、アッセイは、いずれも液体反応混合物中に分散物として存在する少なくとも１種又は２種の捕捉分子、好ましくは抗体を含み、第１の標識成分は第１の捕捉分子に付着し、当該第１の標識成分は、蛍光又は化学発光の消光又は増幅に基づく標識システムの一部であり、当該標識付けシステムの第２の標識成分は第２の捕捉分子に付着し、従って両方の捕捉分子が分析物に結合すると、試料を含む溶液中で形成されたサンドイッチ複合体の検出を可能にする測定可能なシグナルが生成される。
【００９６】
更に好ましくは、上記標識システムは、蛍光色素又は化学発光色素、特にシアニン系の色素との組み合わせで希土類クリプテート又は希土類キレートを含む。
【００９７】
本発明の文脈において、蛍光ベースのアッセイは色素を使用することを含み、これは例えば、ＦＡＭ（５−又は６−カルボキシフルオレセイン）、ＶＩＣ、ＮＥＤ、フルオレセイン、フルオレセインイソチオシアネート（ＦＩＴＣ）、ＩＲＤ−７００／８００、シアニン色素、例えば、ＣＹ３、ＣＹ５、ＣＹ３．５、ＣＹ５．５、Ｃｙ７、キサンテン、６−カルボキシ−２’，４’，７’，４，７−ヘキサクロロフルオレセイン（ＨＥＸ）、ＴＥＴ、６−カルボキシ−４’，５’−ジクロロ−２’，７’−ジメトジフルオレセイン（6-Carboxy-4’,5’-dichloro-2’,7’-dimethodyfluorescein）（ＪＯＥ）、Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチル−６−カルボキシローダミン（ＴＡＭＲＡ）、６−カルボキシ−Ｘ−ローダミン（ＲＯＸ）、５−カルボキシローダミン−６Ｇ（Ｒ６Ｇ５）、６−カルボキシローダミン−６Ｇ（ＲＧ６）、ローダミン、ローダミングリーン、ローダミンレッド、ローダミン１１０、ＢＯＤＩＰＹ色素、例えば、ＢＯＤＩＰＹ  ＴＭＲ、オレゴングリーン、クマリン、例えば、ウンベリフェロン、ベンズイミド、例えば、Ｈｏｅｃｈｓｔ  ３３２５８；フェナントリジン、例えば、テキサスレッド、ヤキマイエロー、Ａｌｅｘａ  Ｆｌｕｏｒ、ＰＥＴ、臭化エチジウム、アクリジニウム染料、カルバゾール染料、フェノキサジン染料、ポルフィリン染料、ポリメチン染料などを含む群から選択され得る。
【００９８】
本発明の文脈において、化学発光ベースのアッセイは、Ｋｉｒｋ−Ｏｔｈｍｅｒ，「Ｅｎｃｙｃｌｏｐｅｄｉａ  ｏｆ  ｃｈｅｍｉｃａｌ  ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ」，４ｔｈ  ｅｄ．，ｅｘｅｃｕｔｉｖｅ  ｅｄｉｔｏｒ，Ｊ．Ｉ．Ｋｒｏｓｃｈｗｉｔｚ；ｅｄｉｔｏｒ，Ｍ．Ｈｏｗｅ−Ｇｒａｎｔ，Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  &  Ｓｏｎｓ，１９９３，ｖｏｌ．１５，ｐ．５１８−５６２における化学発光材料について記載された物理原理に基づき、色素の使用を含む。好ましい化学発光色素はアクリジニウムエステルである。
【００９９】
本発明の範囲内で、このような診断アッセイは特に、本発明による方法を実施するための装置であると最も広義に理解される。
【０１００】
本発明の範囲内で、バイオマーカーを検出及び測定するための診断アッセイは、真菌病原体又は真菌の分子を検出するアッセイ方法と組み合わせられ得る。真菌病原体又は真菌の分子を検出するために、分子診断の応用（例えば、ＰＣＲ）又は質量分析が適用され得る。更に、真菌の一部、特に、例えば、活発な増殖している真菌の一部（例えば、菌糸）又は無性生殖体（例えば、胞子）の一部を特異的に検出する抗体又は検出試薬が好ましい（いわゆるＩＳＣＡ  Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ）。
【０１０１】
特に上述の実施形態を考慮に入れると、更に本発明は、ＩＦＩ／ＩＦＤ、特に敗血症又は敗血症性ショックに関連したＩＦＩ／ＩＦＤのインビトロ診断又はリスク層別化のためのキット又はかかるキットの使用であって、調査されるべき患者において、プロアドレノメデュリン（ｐｒｏＡＤＭ）又はその部分ペプチド若しくは断片、特に中央領域プロアドレノメデュリン（ＭＲ−ｐｒｏＡＤＭ）、又はマーカー組合せ（パネル、クラスター）に含まれるプロアドレノメデュリン又はその部分ペプチド若しくは断片、特に中央領域プロアドレノメデュリンの判定が実施される、キット又はかかるキットの使用に関する。かかる検出試薬は、抗体などのような捕捉分子を含む。
【０１０２】
本発明の方法は、部分的にコンピュータにより実施されてもよく、コンピュータシステムによってサポートされてもよい。コンピュータシステムにおいて、判定されたマーカーのレベルは、診断、予後、リスク評価、及び／又はリスク層別化を示すスコアを算出するために、対象の他のマーカーレベル及び／又はパラメータと組み合わせられ得る。例えば、判定値は、コンピュータシステムに（医療従事者により手動で、又はそれぞれのマーカーレベルが判定された装置から自動的に）入力され得る。コンピュータシステムは、医療現場（例えば、ＩＣＵ又はＥＤ）にあり得るか、又はコンピュータネットワーク（例えば、インターネットを介して）を介して接続された遠隔地にあり得る。典型的には、コンピュータシステムは、コンピュータ可読媒体に値（例えば、マーカーレベル又はパラメータ、例えば、年齢、血圧、体重、性別など）を保存し、予め定義された、かつ／又は予め保存された基準レベル又は基準値に基づいてスコアを算出する。得られたスコアは、ユーザ（通常は医師などの医療従事者）のために表示及び／又は印刷される。あるいは、又は加えて、関連する予後、診断、評価、又は層別化が、ユーザ（通常は医師などの医療従事者）のために表示及び／又は印刷される。
【０１０３】
以下の実施例及び図は、本発明のより詳細な説明に役立つが、本発明は、これらの実施例及び図に限定されない。本明細書のいずれかの箇所でのこれらの実施例及び他の実施例の使用は例示にすぎず、本発明の、又は任意の例示された用語の範囲及び意味を限定するものではない。同様に、本発明は、本明細書に記載の任意の特定の好ましい実施形態に限定されない。実際、本発明の多数の改変及び変形が、本明細書を読むことで当業者に明らかになり得、かかる変形は、要旨又は範囲において本発明から逸脱しない範囲でなされ得る。従って本発明は、添付の請求の範囲の用語に加えてその請求項に与えられた等価物の全範囲によってのみ限定される。
【実施例】
【０１０４】
（実施例１）
研究デザイン。観察臨床研究は、地元の倫理委員会（Ｅｔｈｉｃｓ  Ｃｏｍｍｉｔｔｅｅ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｍｅｄｉｃａｌ  Ｆａｃｕｌｔｙ  ｏｆ  Ｈｅｉｄｅｌｂｅｒｇ，Ｔｒｉａｌ  Ｃｏｄｅ  Ｎｏ．Ｓ−０９７／２０１３／Ｇｅｒｍａｎ  Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｔｒｉａｌｓ  Ｒｅｇｉｓｔｅｒ：ＤＲＫＳ００００５４６３）の承認を得て、２０１３年１１月〜２０１５年１月の間にＨｅｉｄｅｌｂｅｒｇ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  Ｈｏｓｐｉｔａｌ、Ｇｅｒｍａｎｙの外科手術集中治療室で実施された。全ての被験患者又はその合法的な被指名人は、署名されたインフォームドコンセントを提出した。Ｓｕｒｖｉｖｉｎｇ  Ｓｅｐｓｉｓ  Ｃａｍｐａｉｇｎ：Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  Ｇｕｉｄｅｌｉｎｅｓ  ｆｏｒ  Ｍａｎａｇｅｍｅｎｔ  ｏｆ  Ｓｅｖｅｒｅ  Ｓｅｐｓｉｓ  ａｎｄ  Ｓｅｐｔｉｃ  Ｓｈｏｃｋ  ２０１２の基準に従って、敗血症性ショックに罹患している合計５０人の患者がこの研究に登録された（Ｄｅｌｌｉｎｇｅｒ  ＲＰ，Ｌｅｖｙ  ＭＭ，Ｒｈｏｄｅｓ  Ａ  ｅｔ  ａｌ．（２０１３）「Ｓｕｒｖｉｖｉｎｇ  ｓｅｐｓｉｓ  ｃａｍｐａｉｇｎ：ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  ｇｕｉｄｅｌｉｎｅｓ  ｆｏｒ  ｍａｎａｇｅｍｅｎｔ  ｏｆ  ｓｅｖｅｒｅ  ｓｅｐｓｉｓ  ａｎｄ  ｓｅｐｔｉｃ  ｓｈｏｃｋ：２０１２．」  Ｃｒｉｔ  Ｃａｒｅ  Ｍｅｄ  ４１：５８０−６３７。敗血症性ショックを有する患者の治療は、早期目標指向型治療（Ｒｏｍａｎｉ  Ｌ（２００４）「Ｉｍｍｕｎｉｔｙ  ｔｏ  ｆｕｎｇａｌ  ｉｎｆｅｃｔｉｏｎｓ．」  Ｎａｔ  Ｒｅｖ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  ４：１−２３）、感染病巣の除去及び広域抗生物質を含んだＲｏｍａｎｉ  Ｌ（２００４）「Ｉｍｍｕｎｉｔｙ  ｔｏ  ｆｕｎｇａｌ  ｉｎｆｅｃｔｉｏｎｓ．」Ｎａｔ  Ｒｅｖ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  ４：１−２３；Ｓｃｈｒｏｅｄｅｒ  Ｍ，Ｓｉｍｏｎ  Ｍ，Ｋａｔｃｈａｎｏｖ  Ｊ  ｅｔ  ａｌ．（２０１６）「Ｄｏｅｓ  ｇａｌａｃｔｏｍａｎｎａｎ  ｔｅｓｔｉｎｇ  ｉｎｃｒｅａｓｅ  ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃ  ａｃｃｕｒａｃｙ  ｆｏｒ  ＩＰＡ  ｉｎ  ｔｈｅ  ＩＣＵ？  Ａ  ｐｒｏｓｐｅｃｔｉｖｅ  ｏｂｓｅｒｖａｔｉｏｎａｌ  ｓｔｕｄｙ．」  Ｃｒｉｔ  Ｃａｒｅ  ２０：１３９；Ｚｅｄｅｋ  ＤＣ，Ｍｉｌｌｅｒ  ＭＢ（２００６）「Ｕｓｅ  ｏｆ  ｇａｌａｃｔｏｍａｎｎａｎ  ｅｎｚｙｍｅ  ｉｍｍｕｎｏａｓｓａｙ  ｆｏｒ  ｄｉａｇｎｏｓｉｓ  ｏｆ  ｉｎｖａｓｉｖｅ  ａｓｐｅｒｇｉｌｌｏｓｉｓ  ｉｎ  ａ  ｔｅｒｔｉａｒｙ−ｃａｒｅ  ｃｅｎｔｅｒ  ｏｖｅｒ  ａ  １２−ｍｏｎｔｈ  ｐｅｒｉｏｄ．」  Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ  ４４：１６０１）。
【０１０５】
血液試料を、敗血症発症時（Ｔ０）並びに１日（Ｔ１）、２日（Ｔ２）、７日（Ｔ３）１４日（Ｔ４）、２１日（Ｔ５）及び２８日（Ｔ６）後に採取した。関連するベースラインデータ（人口統計学的データ、主な感染部位）、臨床データ（簡易急性生理学スコア（ＳＡＰＳ  ＩＩ）、連続臓器不全評価スコア（ＳＯＦＡ）及び急性生理学健康評価スコア（ＡＰＡＣＨＥ  ＩＩ）などの疾患重症度スコア、外科的処置、抗真菌療法、転帰パラメータ）に加えて、慣例的な感染パラメータ（例えば、白血球、Ｃ反応性タンパク質（ＣＲＰ）、プロカルシトニン（ＰＣＴ）、体温）を収集した。
【０１０６】
免疫アッセイ。ＢＧの血漿濃度を、製造者の使用説明書に従ってＧｌｕｃａｔｅｌｌ（登録商標）−Ｋｉｔ（Ｐｙｒｏｑｕａｎｔ  Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｋ  ＧｍｂＨ）を使用して測定した。ＭＲ−ｐｒｏＡＤＭの血漿濃度を、新規のサンドイッチ免疫アッセイ（Ｋｒｙｐｔｏｒ  Ｃｏｍｐａｃｔ  Ｐｌｕｓ  Ａｎａｌｙｓｅｒ、ＢＲＡＨＭＳ、Ｈｅｎｎｉｇｓｄｏｒｆ、Ｇｅｒｍａｎｙ）と組み合わせたＴＲＡＣＥ（Ｔｉｍｅ  Ｒｅｓｏｌｖｅｄ  Ａｍｐｌｉｆｉｅｄ  Ｃｒｙｐｔａｔｅ  Ｅｍｉｓｓｉｏｎ）技術を使用して測定した。全ての患者における全ての時点において、ＧＭの濃度を、血漿試料の酵素結合免疫アッセイ（Ｐｌａｔｅｌｉａ（商標）  Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ  ＡＧ、Ｂｉｏｒａｄ、Ｍｕｎｉｃｈ）を使用して測定した。ただし、侵襲性アスペルギルス症（ＩＡ）が疑われる選択された症例においてのみ、気管支肺胞洗浄液（ＢＡＬＦ）中のＧＭ濃度を、同じ技術を使用して測定した。以下のＧＭ濃度を、カットオフ値として使用した：血漿＞０．５、ＢＡＬＦ＞１．０。
【０１０７】
フローサイトメトリー。ＩＩ−２、ＩＬ−４、ＩＬ−６、ＩＬ−１０、ＩＬ−１７Ａ、ＴＮＦ−ａ、及びＩＦＮ−γの血漿濃度を、製造者の使用説明書に従ってマルチプレックスアッセイ（Ｈｕｍａｎ  Ｔｈ１／Ｔｈ２／Ｔｈ１７  Ｃｙｔｏｋｉｎｅ  Ｋｉｔ、ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ、Ｈｅｉｄｅｌｂｅｒｇ、Ｇｅｒｍａｎｙ）を使用して、ＦＡＣＳＶｅｒｓｅフローサイトメーター（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ、Ｈｅｉｄｅｌｂｅｒｇ、Ｇｅｒｍａｎｙ）で測定した。
【０１０８】
臨床微生物学。
血液培養。血液培養試験は、Ｈｅｉｄｅｌｂｅｒｇ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  Ｈｏｓｐｉｔａｌにおいて他箇所に記載のように定型的に実行された（Ｇｕｍｂｉｎｇｅｒ  Ｃ，Ｈｕｇ  Ａ，Ｍｕｒｌｅ  Ｂ  ｅｔ  ａｌ．（２０１３）  「Ｅａｒｌｙ  ｂｌｏｏｄ−ｂａｓｅｄ  ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  ｔｅｓｔｉｎｇ  ｗａｓ  ｉｎｅｆｆｅｃｔｉｖｅ  ｉｎ  ｓｅｖｅｒｅ  ｓｔｒｏｋｅ  ｐａｔｉｅｎｔｓ．」  Ｊ  Ｎｅｕｒｏｌ  Ｓｃｉ  ３２５：４６−５０）。
全血試料を、無菌操作を適用した直接の静脈穿刺（例えば、前肘静脈）により得て、１０ｍＬの血液を、好気性及び嫌気性液体培地（ＢＡＣＴＥＣ  ＰＬＵＳ、ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ、Ｈｅｉｄｅｌｂｅｒｇ、Ｇｅｒｍａｎｙ）に播種した。培養液を、５日間インキュベートし（ＢＡＣＴＥＣ、ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ、Ｈｅｉｄｅｌｂｅｒｇ、Ｇｅｒｍａｎｙ）、陽性培養液を、ＶＩＴＥＫ２（Ｂｉｏｍｅｒｉｅｕｘ、Ｎｕｅｒｔｉｎｇｅｎ、Ｇｅｒｍａｎｙ）又はＭＡＬＤＩ  ＴＯＦ（Ｂｒｕｋｅｒ、Ｍａｄｉｓｏｎ、Ｗｌ、ＵＳＡ）による同定及び自動抗菌薬感受性試験（ＶＩＴＥＫ  ２）を含む、承認された病院内の標準的技術により解析した。
【０１０９】
気管分泌物、創傷スワブ及びドレナージ液の培養ベースの診断手順。要約すると、気管吸引物及びドレナージ液を、手作業でコロンビア（ＢＤ）、チョコレート（ｂＭ）、マッコンキー（ｂＭ）、Ｓｃｈａｅｄｌｅｒ及びカナマイシン−バンコマイシン（ＢＤ、バイプレート）、及び発色性カンジダ寒天培地（ＢＤ）に画線塗抹した一方で、創傷スワブを、ＰＲＥＶＩ  Ｉｓｏｌａ（商標）機器により半自動で同じ種類の寒天培地に播種した。全てのプレートを、記載のように嫌気性チャンバー（ＧａｓＰａｋ；Ｂｅｃｔｏｎ，Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ，Ｆｒａｎｋｌｉｎ  Ｌａｋｅｓ，ＮＪ）内で３７℃にて４８時間インキュベートしたＳｃｈａｅｄｌｅｒ−ＫＶのバイプレートを除き、５％ＣＯ２、３７℃にて２４〜４８時間インキュベートした（Ｍｉｓｃｈｎｉｋ  Ａ，Ｍｉｅｔｈ  Ｍ，Ｂｕｓｃｈ  ＣＪ  ｅｔ  ａｌ．（２０１２）  「Ｆｉｒｓｔ  ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ  ｏｆ  ａｕｔｏｍａｔｅｄ  ｓｐｅｃｉｍｅｎ  ｉｎｏｃｕｌａｔｉｏｎ  ｆｏｒ  ｗｏｕｎｄ  ｓｗａｂ  ｓａｍｐｌｅｓ  ｂｙ  ｕｓｅ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｐｒｅｖｉ  Ｉｓｏｌａ  ｓｙｓｔｅｍ  ｃｏｍｐａｒｅｄ  ｔｏ  ｍａｎｕａｌ  ｉｎｏｃｕｌａｔｉｏｎ  ｉｎ  ａ  ｒｏｕｔｉｎｅ  ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ：ｆｉｎｄｉｎｇ  ａ  ｃｏｓｔ−ｅｆｆｅｃｔｉｖｅ  ａｎｄ  ａｃｃｕｒａｔｅ  ａｐｐｒｏａｃｈ．」  Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ  ５０：２７３２−２７３６）。細菌及び真菌のコロニーを、ＭＡＬＤＩ−ＴｏＦ質量分析により同定し、自動ＡＳＴをＶＩＴＥＫ  ＩＩ装置（ｂＭ）で実行した。
【０１１０】
群定義。気道又はドレナージ液中のＣａｎｄｉｄａ  ｓｐｐ．を、定着として分類した。血液培養物、手術時のスワブにおける陽性結果及び肺浸潤に伴う深部気道検体中のＡｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ  ｓｐｐ．を、感染として分類した。
【０１１１】
抗カンジダ抗体力価。血清中のＣａｎｄｉｄａ  ａｌｂｉｃａｎｓ特異的ＩｇＭ、ＩｇＡ、及びＩｇＧ抗体を、Ｓｅｒｉｏｎ  ＥＬＩＳＡ  ｃｌａｓｓｉｃ（商標）Ｃａｎｄｉｄａ  ａｌｂｉｃａｎｓ  ＩｇＡ／ｌｇＧ／ｌｇＭ（ＥＳＲ  １１７Ａ／Ｇ／Ｍ、Ｖｉｒｉｏｎ  Ｓｅｒｉｏｎ、Ｗｕｅｒｚｂｕｒｇ、Ｇｅｒｍａｎｙ）を製造者の使用説明書に記載のようにして使用して、Ｂｅｈｒｉｎｇ  ＥＬＩＳＡ  Ｐｒｏｃｅｓｓｏｒ（ＢＥＰ  ＩＩＩ、Ｓｉｅｍｅｎｓ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ  Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ、Ｍａｒｂｕｒｇ、Ｇｅｒｍａｎｙ）を使用して検出及び定量化した（Ｚｏｕ  Ｍ，Ｔａｎｇ  Ｌ，Ｚｈａｏ  Ｓ  ｅｔ  ａｌ．（２０１２）  「Ｓｙｓｔｅｍａｔｉｃ  ｒｅｖｉｅｗ  ａｎｄ  ｍｅｔａ−ａｎａｌｙｓｉｓ  ｏｆ  ｄｅｔｅｃｔｉｎｇ  ｇａｌａｃｔｏｍａｎｎａｎ  ｉｎ  ｂｒｏｎｃｈｏａｌｖｅｏｌａｒ  ｌａｖａｇｅ  ｆｌｕｉｄ  ｆｏｒ  ｄｉａｇｎｏｓｉｎｇ  ｉｎｖａｓｉｖｅ  ａｓｐｅｒｇｉｌｌｏｓｉｓ．」  ＰＬｏＳ  Ｏｎｅ  ７：ｅ４３３４７）。
【０１１２】
統計解析。得られたデータを、電子データベース（Ｅｘｃｅｌ  ２０１０；Ｍｉｃｒｏｓｏｆｔ  Ｃｏｒｐ、Ｒｅｄｍｏｎｄ、ＵＳＡ）に入力し、ＳＰＳＳソフトウェア（Ｖｅｒｓｉｏｎ  ２１．０；ＳＰＳＳ，Ｉｎｃ．、Ｃｈｉｃａｇｏ、ＵＳＡ）を使用して評価した。カテゴリーデータを、絶対度数及び相対度数を使用して要約した。定量データを、四分位数付き中央値を使用して要約した。コルモゴロフ−スミルノフ検定を適用して、正規分布を確認した。異常に分布したデータであるため、評価のためにノンパラメトリック法を使用した（カテゴリーデータについてカイ二乗検定、連続データについてマン−ホウィットニーＵ検定）。真菌感染検出のための適切なカットオフ値を、ＲＯＣ解析を使用して算出した。ｐ値＜０．０５を、統計的に有意であるとみなした。記号及び有意性の高い順に関して：ｐ＜  ０．０５：＊、ｐ＜０．０１：＊＊、ｐ＜０．００１：＊＊＊。
【０１１３】
結果
患者の特徴。敗血症性ショックを有する合計５０人の患者が、掲示された研究に含まれた。患者の特徴を、表１に掲示する。基礎となる感染病巣は、腹部（ｎ＝４３；８６％）、続いて肺（ｎ＝６；１２％）及び尿生殖路（ｎ＝１；２％）であった。９０日及び２８日の全死亡率は、それぞれ、２２％（ｎ＝１１）及び３４％（ｎ＝１７）であった。ＩＣＵ及び入院期間の中央値は、それぞれ、２０日及び４４日であった。
【０１１４】
表１  患者の特徴（ｎ＝５０）
2020530123.tif 000003
データは、数字（対応する百分率値付き）または中央値（付随する四分位数付き）のいずれかとして提示される。
【０１１５】
真菌病原体及び感染部位。
培養ベースの微生物学的な診断。培養ベースの微生物学的診断によって評価されるように、真菌病原体は３３人の患者（６６．０％）に存在したが、１７人の患者（３４．０％）は陰性の真菌培養物を示した。真菌の分離株は、２５人（７５．８％）又は８人（２４．２％）の患者のそれぞれ１つ又は複数の位置で見出され、以下の部位に存在した：気道（ｎ＝１７；５１．５％）、腹部部位（ｎ＝２１；６３．６％）及び血液培養（ｎ＝３；９．１％）。真菌病原体有り又は真菌病原体無しの患者の特徴を、表１に掲示する。真菌病原体有りの患者は、研究に含まれる前により頻繁に肝切除を受けており、腎代替療法の必要性が有意に増加することを示した。罹患率の更なるマーカーに関して、真菌陽性の患者は、有意に長い期間の機械的人工換気を示し、気管切開の必要性が増加する傾向があった。更に、ＩＣＵ及び入院の期間は、真菌病原体有りの患者において有意に延長された。驚くべきことに、２８日死亡率は真菌病原体なしの患者において有意に増加したが、９０日死亡率は同等であることを示した。
【０１１６】
方法の項に記載されているように、群の定義に基づいて、定着及び感染が、それぞれ２２人（４４．０％）及び１１人（２２．０％）の患者に見出された。定着患者において、８人（１６．０％）の参加者は、気道分泌物中にのみＣａｎｄｉｄａ  ｓｐｐ．を示した（５×Ｃ．ａｌｂｉｃａｎｓ、１×Ｃ．ａｌｂｉｃａｎｓ及びＣ．ｇｌａｂｒａｔａ、２×Ｃ．ａｌｂｉｃａｎｓ及びＣ．ｓｐｐ．）が、６人（１２．０％）の患者では、Ｃａｎｄｉｄａ  ｓｐｐ．を、ドレナージ液のみから培養することができた（３×Ｃ．ａｌｂｉｃａｎｓ、２×Ｃ．ｇｌａｂｒａｔａ、１×Ｃ．ａｌｂｉｃａｎｓ及びＣ．ｇｌａｂｒａｔａ）。これに反して、８人（１６．０％）の患者は、両方の側で定着されていた（４×Ｃ．ａｌｂｉｃａｎｓ、１×Ｃ．ａｌｂｉｃａｎｓ及びＣ．ｓｐｐ．、３×Ｃ．ａｌｂｉｃａｎｓ及びＣ．ｇｌａｂｒａｔａ）。感染患者において、真菌血症が３人（６．０％）の患者に見出され（２×Ｃ．ａｌｂｉｃａｎｓ、１×Ｃ．ｇｌａｂｒａｔａ）、陽性の腹部創傷スワブが、７人（１４．０％）の患者に見出された（４×Ｃ．ａｌｂｉｃａｎｓ、１×Ｃ．ｇｌａｂｒａｔａ、１×Ｃ．ｋｒｕｓｅｉ、１×Ｃ．ａｌｂｉｃａｎｓ及びＣ．ｇｌａｂｒａｔａ）。更に、１人（２．０％）の患者において、Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ  ｆｕｍｉｇａｔｕｓが気道分泌物中に単離された。リスク因子に関して、研究に含まれる前の肝切除及び肝硬変が、真菌感染有りの患者においてより頻繁に観察することができた。更に、真菌感染に罹患している患者においてＩＣＵ滞在及び機械的人工換気の期間が有意に長くなり、気管切開の必要性が有意に増加した。罹患率は増加することが示されたが、２８日死亡率及び９０日死亡率は、感染した患者と感染していない患者との間で有意に差はなかった。
【０１１７】
抗真菌療法。合計５０人（４２．０％）の患者のうち２１人は、研究への参加の間に抗真菌療法を受けた。何らの真菌分離株無しの１７人の患者のうち、２人（１１．８％）の患者が、経験的抗真菌療法を受けた。残りの真菌分離株有りの３３人の患者のうち、１９人（５７．６％）の患者が抗真菌療法を受け、これは、１５人（７８．９％）患者において特異的治療の観点から開始された。その逆に、残りの４例（２１．１％）では、処置は、経験的治療の観点から開始され、これらの患者の全てにおいて、その後に中止された。７人（３３．３％）の患者において、最初の抗真菌療法が、疾患の経過中に変更された。
【０１１８】
（１，３）−β−Ｄ−グルカン（ＢＧ）。ＢＧの血漿濃度は、研究期間全体にわたって３つの部分群間で同等であり、従って、真菌感染の予測のための診断値とすることができなかった（データ非表示）。カンジダ性敗血症に罹患している患者でさえ、ＢＧの血漿濃度は、確実には増加しなかった。
【０１１９】
ガラクトマンナン（ＧＭ）。ＧＭの血漿濃度は、５０人の患者のうちの４６人（９２．０％）において、＜０．５のカットオフ値未満に維持された。これに反して、４人の患者（８．０％）は、なんらの他の（臨床的、放射線学的、培養的）徴候又はＩＡのリスク因子なし（データ非表示）にカットオフ値を超えて散発的に増加するＧＭ血漿濃度を示した。これらの症例において、ＧＭの血漿濃度の増加は、おそらく、ＧＭ濃度の増加に関連することが周知である基本的な抗生物質治療（例えば、ピペラシリン・タゾバクタム）に起因していた（Ｂｏｏｎｓａｒｎｇｓｕｋ，Ｖ．；Ｎｉｙｏｍｐａｔｔａｍａ，Ａ．；Ｔｅｏｓｉｒｉｍｏｎｇｋｏｌ，Ｃ；Ｓｒｉｗａｎｉｃｈｒａｋ，Ｋ．「Ｆａｌｓｅ−ｐｏｓｉｔｉｖｅ  ｓｅｒｕｍ  ａｎｄ  ｂｒｏｎｃｈｏａｌｖｅｏｌａｒ  ｌａｖａｇｅ  ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ  ｇａｌａｃｔｏｍａｎｎａｎ  ａｓｓａｙｓ  ｃａｕｓｅｄ  ｂｙ  ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ  ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃｓ．」  Ｓｃａｎｄ．Ｊ．Ｉｎｆｅｃｔ．Ｄｉｓ．２０１０，４２，４６１−４６８；Ｍｅｔａｎ，Ｇ．「Ｔｈｅ  ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎ  ｂｅｔｗｅｅｎ  ｐｉｐｅｒａｃｉｌｌｉｎ−ｔａｚｏｂａｃｔａｍ  ａｎｄ  ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ  ｇａｌａｃｔｏｍａｎｎａｎ  ａｎｔｉｇｅｎｅｍｉａ  ａｓｓａｙ：Ｉｓ  ｔｈｅ  ｓｔｏｒｙ  ｏｖｅｒ？」  Ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ  ２０１３，４１，２９３−２９４）。
【０１２０】
１人の患者は、ＢＡＬＦ中のＡｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ  ｆｕｍｉｇａｔｕｓの培養による検出により評価されたようにＩＡの診断を示し、これは、高解像度コンピュータ断層撮影によって確認された。更に、ＢＡＬＦ中のＧＭ濃度はカットオフ値を超えて増加したが、ＧＭの血漿濃度は全ての時点でカットオフ値未満に維持された。敗血症性ショック並びに既に存在する重度肥満症及びインスリン依存性糖尿病以外には、その患者は、ＩＡの典型的な素因的リスク因子（例えば、好中球減少症、細胞毒性剤で治療された血液腫瘍疾患、コルチコステロイドの摂取、先天性又は後天性免疫不全）を持たなかった。その患者は、アムホテリシンＢリポソームで６週間治療され、このことがカットオフ値を下回るＢＡＬＦ中のＧＭの減少をもたらした。更に、終了後、処置期間、ＢＡＬＦの培養は、Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ  ｆｕｍｉｇａｔｕｓについて陰性のままであった。
【０１２１】
抗カンジダ抗体力価。なんらの真菌所見のない患者亜群（ｎ＝１７）において、４人の患者（２３．５％）は、「偽」陽性の抗カンジダ抗体力価（＞１：３２０）を示したが、定着患者（ｎ＝２２）は、８１．８％（ｎ＝１８）において陽性の検査結果を有することを示した。真菌感染（ｎ＝１１）に罹患している患者も、８１．８％（ｎ＝９）において陽性の検査結果を示したが、残念なことに、（敗血症発症時に）カンジダ性敗血症を呈している２人の患者は、陽性の抗カンジダ抗体力価を示すことができなかった。
【０１２２】
真菌免疫に関して、ＩＮＦ−γ、ＩＬ−４、ＩＬ−６、ＩＬ−１０、ＩＬ−１７の血漿レベルと同様にＭＲ−ｐｒｏＡＤＭの血漿レベルに特別な注意が払われるべきである。炎症性サイトカインＩＮＦ−γの血漿レベルは、敗血症発症の７日後（Ｔ３）から始まって真菌感染に罹患している患者において、両方の対照群と比較して、それぞれ著しく有意に上昇することが示された。ＩＮＦ−γのこの増加は、感染患者における免疫抑制サイトカインＩＬ−１０及びＩＬ−４の有意な放出と並行した。ＩＬ−６の血漿レベルは、真菌感染に罹患している患者において、異なる時点、特に疾患の初期経過において（例えば、Ｔ０、Ｔ１において）、真菌の定着有りの又は何らの真菌所見のない敗血症患者と比較して有意に上昇することが示された。同時に、ＩＬ−１７Ａが、真菌感染に罹患している敗血症患者において、敗血症発症の最初の７日後以内で、真菌の定着有りの又は何らの真菌所見のない敗血症患者と比較して有意に上昇することが示された（図２Ａ）。
【０１２３】
従って、ＲＯＣ解析によって評価されるように、ＩＬ−１７Ａが、真菌感染を有する患者の早期検出のための適切なツールであることがわかった（真菌感染を有する患者対感染していない患者（＝何らの真菌分離株無しの患者＋定着患者）についてのＲＯＣ−ＡＵＣ、例えば、ｔ０：０．７１４；カットオフ値１４．１６５ｐｇ／ｍｌ→感度０．８１８；１−特異度０．３２３、ｔ１：０．７７６；カットオフ値：１４．２２ｐｇ／ｍｌ→感度．０．８１８；１−特異度０．２９、ｔ２：０．８６５  カットオフ値１５．００ｐｇ／ｍｌ→感度０．８１８；１−特異度０．１９４など）（図２Ｂ）。
【０１２４】
同じことがＭＲ−ｐｒｏＡＤＭの血漿レベルにも当てはまり、ＭＲ−ｐｒｏＡＤＭの血漿レベルは、感染患者において、真菌の定着及び何らの真菌所見のない患者と比較して有意に増加することが示された（図３Ａ）。従って、ＭＲ−ｐｒｏＡＤＭは、受信者動作特性（ＲＯＣ）解析によって評価されるように、真菌感染を有する患者の識別のための適切なツールであることが示された（真菌感染を有する患者対感染していない患者（＝上記参照）についてのＲＯＣ曲線下面積（ＡＵＣ）、例えば、ｔ０：０．７３８；カットオフ値：６，９９ｎｍｏｌ／ｌ→感度０．７２７；１−特異度０．３３３、ｔ１：０．７５５；カットオフ値：８．５３ｎｍｏｌ／ｌ→感度０．７２７；１−特異度０．２１２、ｔ２：０．７７４；カットオフ値５．１０ｎｍｏｌ／ｌ→感度０．８１８；１−特異度０．２７３など）（図３Ｂ）。
【０１２５】
表２  異なる感染及び炎症マーカーの血漿レベル。
2020530123.tif 000004
データを、四分位数（Ｑ１、Ｑ３）付きの中央値として提示する。
記号：＋＝真菌分離株無しの患者対定着患者、＋＋＝真菌分離株無しの患者対感染患者、＋＋＋＝定着患者対感染患者。血漿試料は、敗血症性ショック発症時（Ｔ０）、ならびに１日（Ｔ１）、２日（Ｔ２）、７日（Ｔ３）、１４日（Ｔ４）、２１日（Ｔ５）および２８日（Ｔ６）後に採取された。ｐ＜０．０５：*、ｐ＜０．０１：**、ｐ＜０．００１：***。
2020530123.tif 000005
データを、四分位数（Ｑ１、Ｑ３）付きの中央値として提示する。
記号：＋＝真菌分離株無しの患者対定着患者、＋＋＝真菌分離株無しの患者対感染患者、＋＋＋＝定着患者対感染患者。血漿試料は、敗血症性ショック発症時（Ｔ０）、ならびに１日（Ｔ１）、２日（Ｔ２）、７日（Ｔ３）、１４日（Ｔ４）、２１日（Ｔ５）および２８日（Ｔ６）後に採取された。ｐ＜０．０５：*、ｐ＜０．０１：**、ｐ＜０．００１：***。
2020530123.tif 000006
データを、四分位数（Ｑ１、Ｑ３）付きの中央値として提示する。
記号：＋＝真菌分離株無しの患者対定着患者、＋＋＝真菌分離株無しの患者対感染患者、＋＋＋＝定着患者対感染患者。血漿試料は、敗血症性ショック発症時（Ｔ０）、ならびに１日（Ｔ１）、２日（Ｔ２）、７日（Ｔ３）、１４日（Ｔ４）、２１日（Ｔ５）および２８日（Ｔ６）後に採取された。ｐ＜０．０５：*、ｐ＜０．０１：**、ｐ＜０．００１：***。
2020530123.tif 000007
データを、四分位数（Ｑ１、Ｑ３）付きの中央値として提示する。
記号：＋＝真菌分離株無しの患者対定着患者、＋＋＝真菌分離株無しの患者対感染患者、＋＋＋＝定着患者対感染患者。血漿試料は、敗血症性ショック発症時（Ｔ０）、ならびに１日（Ｔ１）、２日（Ｔ２）、７日（Ｔ３）、１４日（Ｔ４）、２１日（Ｔ５）および２８日（Ｔ６）後に採取された。ｐ＜０．０５：*、ｐ＜０．０１：**、ｐ＜０．００１：***。
2020530123.tif 000008
データを、四分位数（Ｑ１、Ｑ３）付きの中央値として提示する。
記号：＋＝真菌分離株無しの患者対定着患者、＋＋＝真菌分離株無しの患者対感染患者、＋＋＋＝定着患者対感染患者。血漿試料は、敗血症性ショック発症時（Ｔ０）、ならびに１日（Ｔ１）、２日（Ｔ２）、７日（Ｔ３）、１４日（Ｔ４）、２１日（Ｔ５）および２８日（Ｔ６）後に採取された。ｐ＜０．０５：*、ｐ＜０．０１：**、ｐ＜０．００１：***。
2020530123.tif 000009
データを、四分位数（Ｑ１、Ｑ３）付きの中央値として提示する。
記号：＋＝真菌分離株無しの患者対定着患者、＋＋＝真菌分離株無しの患者対感染患者、＋＋＋＝定着患者対感染患者。血漿試料は、敗血症性ショック発症時（Ｔ０）、ならびに１日（Ｔ１）、２日（Ｔ２）、７日（Ｔ３）、１４日（Ｔ４）、２１日（Ｔ５）および２８日（Ｔ６）後に採取された。ｐ＜０．０５：*、ｐ＜０．０１：**、ｐ＜０．００１：***。
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データを、四分位数（Ｑ１、Ｑ３）付きの中央値として提示する。
記号：＋＝真菌分離株無しの患者対定着患者、＋＋＝真菌分離株無しの患者対感染患者、＋＋＋＝定着患者対感染患者。血漿試料は、敗血症性ショック発症時（Ｔ０）、ならびに１日（Ｔ１）、２日（Ｔ２）、７日（Ｔ３）、１４日（Ｔ４）、２１日（Ｔ５）および２８日（Ｔ６）後に採取された。ｐ＜０．０５：*、ｐ＜０．０１：**、ｐ＜０．００１：***。
【０１２６】
本発明は、本明細書に記載の特定の実施形態によって範囲において限定されない。実際、本明細書に記載されるものに加えて本発明の様々な改変が、前述の説明及び添付の図から当業者に明らかとなるであろう。かかる改変は、添付の請求の範囲にあることを意図する。更に、全ての値が近似であり、説明のために提供されると理解されたい。
【０１２７】
特許、特許出願、刊行物、製品に関する文書、及びプロトコールが、本出願を通して引用され、それらの開示はそれらの全体が全ての目的のために参照により本明細書に組み込まれる。
【図１】
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【図２Ａ−２Ｂ】
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【図３Ａ−３Ｂ】
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【配列表】
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【国際調査報告】
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