(57)【要約】本願発明は、可能性ある候補薬剤と幹細胞の接触のステップを含む癌若しくは転移性癌の処置若しくは予防用薬剤の同定法、及び、幹細胞の分化を誘導する又は幹細胞多用性若しくは幹細胞の増殖を阻害する薬剤を同定し、このような薬剤を抗癌剤であると決定する方法に関する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
以下のステップを含む癌若しくは転移性癌の処置若しくは予防のための作用薬を同定する方法；
(i)                可能性ある候補薬剤と幹細胞を接触させる、
(ii)               幹細胞の分化を誘導する、又は幹細胞多能性若しくは幹細胞成長を阻害する、薬剤を同定する。
【請求項２】
幹細胞が、ナイーブ状態幹細胞である、請求項１の方法。
【請求項３】
ステップ(i)において、幹細胞はナイーブ状態若しくはプライムド状態幹細胞であり、そこで、ナイーブ状態幹細胞における薬剤の効果が、プライムド状態幹細胞における効果に比較され、そこで、もし、薬剤が、プライムド状態幹細胞にくらべナイーブ状態幹細胞においてより大きな効果をもつならば、当該薬剤は、抗癌剤であると決定される、請求項１の方法。
【請求項４】
薬剤が、ポリクローナル抗体、モノクローナル抗体、抗体断片融合蛋白質、抗体ミミック、ペプチド、ペプチドミミック、低分子、若しくは天然物である、請求項１の方法。
【請求項５】
幹細胞が、ヒト細胞である、請求項１の方法。
【請求項６】
幹細胞が、NME7ABを含む培地中で培養されることにより、ナイーブ状態に維持される、請求項１の方法。
【請求項７】
幹細胞が、NME7-X1を含む培地中で培養されることにより、ナイーブ状態に維持される、請求項１の方法。
【請求項８】
癌が、卵巣癌、乳癌、黒色腫、前立腺癌、結腸癌、肺癌、あるいは膵臓癌である、請求項１の方法。
【請求項９】
癌が、MUC1陽性若しくはMUC1*陽性癌である、請求項１の方法。
【請求項１０】
癌が、NME7AB陽性癌である、請求項１の方法。
【請求項１１】
癌が、NME7-X1陽性癌である、請求項１の方法。
【請求項１２】
薬剤は、原則的に、非細胞毒性である、請求項１の方法。
【請求項１３】
薬剤が、繊維芽細胞若しくは繊維芽細胞始原細胞に、非細胞毒性である、請求項１の方法。
【請求項１４】
請求項１の方法によって得られた薬剤を、対象に投与することを含む癌の予防・治療方法。
【請求項１５】
癌が、卵巣癌、乳癌、黒色腫、前立腺癌、結腸癌、肺癌、あるいは膵臓癌である、請求項１４の方法。
【請求項１６】
癌が、MUC1陽性若しくはMUC1*陽性癌である、請求項１４の方法。
【請求項１７】
癌が、NME7AB陽性癌である、請求項１４の方法。
【請求項１８】
癌が、NME7-X1陽性癌である、請求項１４の方法。
【請求項１９】
請求項１の方法によって得られた薬剤を、対象に投与することを含む癌の転移の予防方法。
【請求項２０】
請求項１の方法によって得られた薬剤を、対象に投与することを含む癌の増殖、移動、侵襲の阻害方法。
【請求項２１】
請求項１の方法によって得られた薬剤を、対象に投与することを含む転移性癌の増殖の阻害方法。
【請求項２２】
プライムド状態幹細胞に比べて、ナイーブ状態幹細胞において、アップレギュレートされる遺伝子若しくは遺伝子産物を同定することを含む、医薬品開発用抗癌若しくは抗転移標的を同定する方法。
【請求項２３】
プライムド状態幹細胞に比べて、ナイーブ状態幹細胞において、ダウンレギュレートされる遺伝子若しくは遺伝子産物を同定することを含む、医薬品開発用抗癌若しくは抗転移標的を同定する方法。
【請求項２４】
以下のステップを含む抗癌若しくは抗転移性癌作用薬を同定する方法；
（１）         プライムド状態幹細胞に比べて、ナイーブ状態幹細胞において、ダウンレギュレートされる遺伝子若しくは遺伝子産物を同定する、
（２）         薬剤とナイーブ幹細胞を接触させる、
（３）         ナイーブ状態幹細胞において、ダウンレギュレートされる遺伝子若しくは遺伝子産物の発現若しくは活性を上昇させる薬剤を同定する。
【請求項２５】
以下のステップを含む抗癌若しくは抗転移性癌作用薬を同定する方法；
（１）         プライムド状態幹細胞に比べて、ナイーブ状態幹細胞において、アップレギュレートされる遺伝子若しくは遺伝子産物を同定する、
（２）         薬剤とナイーブ幹細胞を接触させる、
（３）         ナイーブ状態幹細胞において、アップレギュレートされる遺伝子若しくは遺伝子産物の発現若しくは活性を阻害する薬剤を同定する。
【請求項２６】
以下のステップを含む抗癌若しくは抗転移性癌作用薬を同定する方法；
（１）         繊維芽細胞に比べて、ナイーブ状態幹細胞において、アップレギュレートされる遺伝子若しくは遺伝子産物を同定する、
（２）         薬剤とナイーブ幹細胞を接触させる、
（３）         ナイーブ状態幹細胞において、アップレギュレートされる遺伝子若しくは遺伝子産物の発現若しくは活性を阻害する薬剤を同定する。
【請求項２７】
以下のステップを含む抗癌若しくは抗転移性癌作用薬を同定する方法；
（１）         繊維芽細胞に比べて、ナイーブ状態幹細胞において、ダウンレギュレートされる遺伝子若しくは遺伝子産物を同定する、
（２）         薬剤とナイーブ幹細胞を接触させる、
（３）         ナイーブ状態幹細胞において、ダウンレギュレートされる遺伝子若しくは遺伝子産物の発現若しくは活性を上昇させる薬剤を同定する。
【請求項２８】
アップレギュレートされる遺伝子が、e-カドヘリン、CXCR4、β-カテニン、AXIN2、MUC1、NME7あるいはNME7-X1である、請求項２５又は２６による方法。
【請求項２９】
アップレギュレートされる遺伝子が、CXCR4である、請求項２５又は２６による方法。
【請求項３０】
ダウンレギュレートされる遺伝子が、幹細胞が分化を開始するとき、アップレギュレートされる遺伝子である、請求項２４又は２７による方法。
【請求項３１】
ダウンレギュレートされる遺伝子が、フィブロネクチン、ビメンチン、若しくはNF1である、請求項２４又は２７による方法。
【請求項３２】
ダウンレギュレートされる遺伝子が、microRNA-145である、請求項２４又は２７による方法。
【請求項３３】
ダウンレギュレートされる遺伝子が、HES3、GNAS、VLDLR、EXT1、FBXL17、RHOCあるいはGREB 1Lから選ばれるスーパーエンハンサー標的遺伝子である、請求項２４又は２７による方法。
【請求項３４】
以下のステップを含む抗癌若しくは抗転移性癌作用薬を同定する方法；
（１）  プライムド状態幹細胞若しくは繊維芽細胞に比べて、ナイーブ状態幹細胞において、アップレギュレートされるmicroRNAを同定する、
（２）  薬剤とナイーブ幹細胞を接触させる、
（３）  ナイーブ状態幹細胞において、アップレギュレートされるmicroRNAの発現若しくは活性を阻害する薬剤を同定する。
【請求項３５】
式１の化合物；
式１
【化１】
2020512002.tif 000121
RlはHであり、任意に置換C1-C6アルキル;  任意に置換C3-C4シクロアルキル;  任意に置換C2-C6アルケニル;  任意に置換C1-C6アルコキシ;  任意に置換C6-C12アリル;   N、SおよびOから独立して選ばれた1〜4の環原子をもつ任意に置換C1-C9ヘテロアリル;  制限されないがベンジルまたはアルファ−メチルベンジルのような任意に置換C7-C15 アリルアルキル; N、SおよびOから独立して選ばれた1〜4の環原子をもつ任意に置換C2-C15ヘテロアリルアルキル;  任意に置換C7-C15アリルアルケニル;  任意に置換C3-C8シクロアルキル;  あるいは任意に置換C4-C8シクロアルキルアルキルである;
R2は水素であり、制限されないがメトキシ若しくはエトキシのようなC1-C6アルコキシ、トリフルオロメチル、ハロゲン、メチルカルボキシ、エチルカルボキシ、任意に置換C1-C6アルキル、-OH、-SH、-NH2、-N3、-CN、-NO2、-CHO、-COOH、-CONH2、-C(=NH)NH2、あるいは-SO3H;
ここで、置換は、ハロゲン、トリフルオロメチル、メチルカルボキシ、エチルカルボキシ、メトキシ、エトキシ、C1-C6アルコキシ、C1-C6アルキル、-OH、-OCH3、-OC2H5、-O-Cl-C4アルキル、-SH、-NH2、-N3、-CN、-NO2、-CHO、-COOH、-CONH2、-C(=NH)NH2、あるいは-SO3Hから、独立に、選ばれた、１若しくは１以上で置換されることを意味する。
【請求項３６】
式２の化合物；
式２
【化２】
2020512002.tif 000122
RlはHであり、任意に置換C1-C6アルキル;  任意に置換C2-C6アルケニル;  任意に置換C1-C6アルコキシ;  任意に置換C6-C12アリル;   N、SおよびOから独立して選ばれた1〜4の環原子をもつ任意に置換C1-C9ヘテロアリル;  制限されないがベンジルまたはアルファ−メチルベンジルのような任意に置換C7-C15 アリルアルキル;  N、SおよびOから独立して選ばれた1〜4の環原子をもつ任意に置換C1-C9ヘテロアリルアルキル;  任意に置換C7-C15 アリルアルケニル;  任意に置換C3-C8シクロアルキル;  あるいは任意に置換C4-C8シクロアルキルアルキルである；
R2はHであり、制限されないがメトキシ若しくはエトキシのようなC1-C6アルコキシ、トリフルオロメチル、ハロゲン、メチルカルボキシ、エチルカルボキシ、任意に置換C1-C6アルキル、-OH、-SH、-NH2、-N3、-CN、-NO2、-CHO、-COOH、-CONH2、-C(=NH)NH2、あるいは-SO3Hである；
Zlは結合基であり、-NH-、-O-、-S-、-CH(CH3)-、-(CH2)n-、-C3-C7シクロアルキル-CH2-、-CH=CH-、-CO-、-SO-、-SO2-あるいは-C(=NH)-、-CH2NH(CO)-、-CH2NH(CO)O-、-CH2NH(CO)NH;  -(CH2)nNH(CO)-、-(CH2)nNH (CO)O、-(CH2)mNH(CO)NH-;  -C3-C7 シクロアルキル-CH2NH(CO)-、-C3-C7シクロアルキル-CH2NCH3(CO)-、-C3-C7シクロアルキル-CH2NH(CO)O-、-C3-C7シクロアルキル-CH2NCH3(CO)O-、-C3-C7シクロアルキル-CH2NH(CO)NH-、-C3-C7シクロアルキル-CH2NCH3(CO)NH-、-(CH2)nN(CH2CH2C6H5)-、あるいは任意に置換C6-C12アリル;
Z3は、-OH、-OCH3、-O-C1-C6アルキル、-O-CH2C6H5、-NH2、-NH(C1-C6アルキル)、-N(C1-C6アルキル)2、-C1-C6アルキルである;
R3はH、任意に置換C1-C9アルキル、C2-C6アルケニルである;  任意に置換C6-C12アリル、N、SおよびOから独立して選ばれた1〜4の環原子をもつ任意に置換C1-C9ヘテロアリル;  制限されないがベンジル若しくはアルファ-メチルベンジルのような任意に置換C7-C15アリルアルキル;  あるいは任意に置換C3-C7シクロアルキル;  -(CH2)n-NH(CO)O-(Cl-C6アルキル); -CH2O(CH2)P-NH(CO)O-(C1-C6)アルキル; -(CH2)p-NHCO(CH2)m-NH(CO)O-C1-C6アルキル; -NH(CO)O-tert-ブチル;-O-tert-ブチル; あるいは-tert-ブチル; CONH-アリル; m = 1-5; n=1-8; p=1-9;
ここで、置換は、ハロゲン、トリフルオロメチル、メチルカルボキシ、エチルカルボキシ、メトキシ、エトキシ、C1-C6アルコキシ、C1-C6アルキル、-OH、-OCH3、-OC2H5、-O-Cl-C4アルキル、-SH、-NH2、-N3、-CN、-NO2、-CHO、-COOH、-CONH2、-C(=NH)NH2、あるいは-SO3Hから、独立に、選ばれた、１若しくは１以上で置換されることを意味する。
【請求項３７】
式３の化合物；
式３
【化３】
2020512002.tif 000123
RlはH、任意に置換C1-C6アルキル;  任意に置換C2-C6アルケニル;  任意に置換C1-C6アルコキシ;  任意に置換C6-C12アリル; N、SおよびOから独立して選ばれた1〜4の環原子をもつ任意に置換C1-C9ヘテロアリル;  制限されないがベンジルまたはアルファ−メチルベンジルのような任意に置換C7-C15 アリルアルキル;  N、SおよびOから独立して選ばれた1〜4の環原子をもつ任意に置換C1-C9ヘテロアリルアルキル;  任意に置換C7-C15 アリルアルケニル;  任意に置換若しくは未置換 C3-C8シクロアルキル;  あるいは、任意に、置換C4-C8シクロアルキルアルキルである;
R2は水素、制限されないがメトキシ若しくはエトキシのようなC1-C6アルコキシ、トリフルオロメチル、ハロゲン、メチルカルボキシ、エチルカルボキシ、任意に置換C1-C6アルキル、-OH、-SH、-NH2、-N3、-CN、-NO2、-CHO、-COOH、-CONH2、-C(=NH)NH2、あるいは-SO3H;
Glは結合基であり、-NH-、-O-、-S-、-CH(CH3)-、-(CH2)n-、-C3-C7シクロアルキル-、-C3-C7シクロアルキル-CH2-、-CH=CH-、-CO-、-SO-、-SO2-、-C(=NH)-、-CH2NH(CO)-、-CH2NH(CO)O-、-CH2NH(CO)NH-;  -(CH2)nNH(CO)-、- (CH2)nNH (CO)O-、-(CH2)mNH(CO)NH-;  -C3-C7 シクロアルキル-NH(CO)-、-C3-C7シクロアルキル-CH2NH(CO)O-、-C3-C7シクロアルキル-NH(CO)NH-、-N(CH2CH2C6H5)-、制限されないが-シクロヘキシル-CH2-のような-C3-C7シクロアルキル-CH2-である;
Z2は結合基であり、-NH-、-O-、-S-、-CH(CH3)-、-(CH2)n-、-CH=CH-、-CO-、-SO-、-SO2-、-C(=NH)-、-CH2NH(CO)-、-CH2NH(CO)O-、-CH2NH(CO)NH-;  -(CH2)pNH(CO)-、- (CH2)pNH (CO)O-、-(CH2)pNH(CO)NH-;  -C3-C7 シクロアルキル-NH(CO)-、-C3-C7シクロアルキル-NCH3(CO)-、-C3-C7シクロアルキル-CH2NH(CO)O-、-C3-C7シクロアルキル-CH2NCH3(CO)O-、-C3-C7シクロアルキル-NH(CO)NH-、-C3-C7シクロアルキル-NCH3(CO)NH-、-N(CH2CH2C6H5)-;あるいは、任意に、置換C6-C12アリルである;
Z3は、-OH、-OCH3、-O-C1-C6アルキル、-O-CH2C6H5、-NH2、-NH(C1-C6アルキル)、-N(C1-C6アルキル)2、-C1-C6アルキルである;
R5はH、メチルあるいは任意に置換C1-C6アルキルである;
R4はH、制限されないがtert-ブチルのような任意に置換C1-C9アルキル;  任意に置換C2-C6アルケニル;   制限されないが任意に置換ナフチルのような任意に置換C6-C12アリル;  N、SおよびOから独立して選ばれた1〜4の環原子をもつ任意に置換C1-C9ヘテロアリル;  制限されないがベンジル若しくはアルファ-メチルベンジルのような置換C7-C15アリルアルキル;  任意に置換C3-C7シクロアルキル;-(CH2)P-NH(CO)O-(Cl-C6アルキル); - CH2O(CH2)P-NH(CO)O-(C1-C6)アルキル; -(CH2)p-NHCO(CH2)n-NH(CO)O-Cl-C6アルキル;  -NH(CO)O-tert-ブチル; あるいは-O-tert-ブチルである; m = 1-5;   n=1-8;   p=1-9;
ここで、置換は、ハロゲン、トリフルオロメチル、メチルカルボキシ、エチルカルボキシ、制限されないがメトキシ若しくはエトキシのようなC1-C6アルコキシ、C1-C6アルキル、-OH、-OCH3、-OC2H5、-O-Cl-C4アルキル、-SH、-NH2、-N3、-CN、-NO2、-CHO、-COOH、-CONH2、-C(=NH)NH2、あるいは-SO3Hから、独立に、選ばれた、１若しくは１以上で置換されることを意味する。
【請求項３８】
式４の化合物；
式４
【化４】
2020512002.tif 000124
RlはH、任意に置換C1-C6アルキル;  任意に置換C2-C6アルケニル;  任意に置換C1-C6アルコキシ;  任意に置換C6-C12アリル; N、SおよびOから独立して選ばれた1〜4の環原子をもつ任意に置換C1-C9ヘテロアリル;  制限されないがベンジルまたはアルファ−メチルベンジルのような任意に置換C7-C15 アリルアルキル;   N、SおよびOから独立して選ばれた1〜4の環原子をもつ任意に置換C1-C9ヘテロアリルアルキル;  任意に置換C7-C15 アリルアルケニル;  任意に置換C3-C8シクロアルキル;  あるいは任意に置換C4-C8シクロアルキルアルキルである;
R2は水素、制限されないがメトキシ若しくはエトキシのようなC1-C6アルコキシ、トリフルオロメチル、ハロゲン、メチルカルボキシ、エチルカルボキシ、任意に置換C1-C6アルキル、-OH、-SH、-NH2、-N3、-CN、-NO2、- CHO、-COOH、-CONH2、-C(=NH)NH2あるいは-SO3Hで置換されたフェニル環である。
Glは結合基であり、-NH-、-O-、-S-、-CH(CH3)-、-(CH2)n-、-C3-C7シクロアルキル-、-C3-C7シクロアルキル-CH2-、-CH=CH-、-CO-、-SO-、-SO2-、-C(=NH)-、-CH2NH(CO)-、-CH2NH(CO)O-、-CH2NH(CO)NH-;  -(CH2)nNH(CO)-、-(CH2)nNH (CO)O-、-(CH2)mNH(CO)NH-;  -C3-C7 シクロアルキル-NH(CO)-、-C3-C7シクロアルキル-CH2NH(CO)O-、-C3-C7シクロアルキル-NH(CO)NH-、-N(CH2CH2C6H5)-、制限されないが-シクロヘキシル-CH2-のようなC3-C7シクロアルキル-CH2-である。
Z2は結合基であり、-NH-、-O-、-S-、-CH(CH3)-、-(CH2)n-、-CH=CH-、-CO-、-SO-、-SO2-、-C(=NH)-、-CH2NH(CO)-、-CH2NH(CO)O-、-CH2NH(CO)NH-;  -(CH2)pNH(CO)-、- (CH2)pNH (CO)O-、-(CH2)pNH(CO)NH-;  -C3-C7 シクロアルキル-NH(CO)-、-C3-C7シクロアルキル-CH2NH(CO)O-、-C3-C7シクロアルキル-NH(CO)NH-、あるいは-N(CH2CH2C6H5)-である;
Z3は、-OH、-OCH3、-O-C1-C6アルキル、-OCH2C6H5、-NH2、-NH(C1-C6アルキル)、-N(C1-C6アルキル)2、-C1-C6アルキルである;
R5は、H、メチルあるいは任意に置換C1-C6アルキルである;
Xは、H、C1-C3アルキルあるいはC1-C3アリルアルキルである;
m = 1-5; n=1-8; p=1-9;
ここで置換とは、ハロゲン、トリフルオロメチル、メチルカルボキシ、エチルカルボキシ、メトキシ、エトキシ、C1-C6アルコキシ、C1-C6アルキル、-OH、-OCH3、-OC2H5、-O-Cl-C4アルキル、-SH、-NH2、-N3、-CN、-NO2、-CHO、-COOH、-CONH2、-C(=NH)NH2、あるいは-SO3Hから、独立に、選ばれた、１若しくは１以上で置換されることを意味する。
【請求項３９】
式５の化合物；
式５
【化５】
2020512002.tif 000125
RlはH、任意に置換C1-C6アルキル;  任意に置換C2-C6アルケニル;  任意に置換C1-C6アルコキシ;  任意に置換C6-C12アリル基; N、SおよびOから独立して選ばれた1〜4の環原子をもつ任意に置換C1-C9ヘテロアリル;  制限されないがベンジルまたはアルファ−メチルベンジルのような任意に置換C7-C15 アリルアルキル;   N、SおよびOから独立して選ばれた1〜4の環原子をもつ任意に置換C1-C9ヘテロアリルアルキル;  任意に置換アリルアルケニル;  任意に置換C3-C8シクロアルキル;  あるいは、任意に置換C4-C8シクロアルキルアルキルである;
R2は水素、制限されないがメトキシ若しくはエトキシのようなC1-C6アルコキシ、トリフルオロメチル、ハロゲン、メチルカルボキシ、エチルカルボキシ、任意に置換C1-C6アルキル、-OH、-SH、-NH2 、-N3、-CN、-NO2、- CHO、-COOH、-CONH2、-C(=NH)NH2あるいは-SO3Hである;
G2は結合基であり、-NH-、-O-、-S-、-CH(CH3)-、-(CH2)n-、-CH=CH-、-CO-、-SO-、-SO2-、-C(=NH)-、-CH2NH(CO)-、-CH2NH(CO)O-、-CH2NH(CO)NH-;  -(CH2)nNH(CO)-、-(CH2)nNH (CO)O-、-(CH2)mNH(CO)NH-;  制限されないが-シクロヘキシル-のようなC3-C7シクロアルキル-、あるいは-N(CH2CH2C6H5)-である。
Z2は結合基であり、-NH-、-O-、-S-、-CH(CH3)-、-(CH2)n-、-CH=CH-、-CO-、-SO-、-SO2-、-C(=NH)-、-CH2NH(CO)-、-CH2NH(CO)O-、-CH2NH(CO)NH-;  -(CH2)pNH(CO)-、- (CH2)pNH (CO)O-、-(CH2)pNH(CO)NH-;  -C3-C7 シクロアルキル-NH(CO)-、-C3-C7シクロアルキル-CH2NH(CO)O-、-C3-C7シクロアルキル-NH(CO)NH-、あるいは-N(CH2CH2C6H5)-である;
Z3は、-OH、-OCH3、-O-C1-C6アルキル、-OCH2C6H5、-NH2、-NH(C1-C6アルキル)、-N(C1-C6アルキル)2、-C1-C6アルキルである;
R5はH、メチルあるいは任意に置換C1-C6アルキルである;
Xは、H、C1-C3アルキルあるいはC1-C3アリルアルキルである;
m = 1-5; n=1-8; p=1-9;
ここで置換とは、ハロゲン、トリフルオロメチル、メチルカルボキシ、エチルカルボキシ、メトキシ、エトキシ、C1-C6アルコキシ、C1-C6アルキル、-OH、-OCH3、-OC2H5、-O-Cl-C4アルキル、-SH、-NH2、-N3、-CN、-NO2、-CHO、-COOH、-CONH2、-C(=NH)NH2、あるいは-SO3Hから、独立に、選ばれた、１若しくは１以上で置換されることを意味する。
【請求項４０】
式６の化合物；
式６
【化６】
2020512002.tif 000126
RlはH、任意に置換C1-C6アルキル;  任意に置換C2-C6アルケニル;  任意に置換C1-C6アルコキシ;  任意に置換C6-C12アリル;  N、SおよびOから独立して選ばれた1〜4の環原子をもつ任意に置換C1-C9ヘテロアリル;  制限されないがベンジルまたはアルファ−メチルベンジルのような任意に置換C7-C15 アリルアルキル; N、SおよびOから独立して選ばれた1〜4の環原子をもつ任意に置換C1-C9ヘテロアリルアルキル;  任意に置換C7-C15 アリルアルケニル;  任意に置換C3-C8シクロアルキル;  あるいは任意に置換C4-C8シクロアルキルアルキルである;
R2は水素、制限されないがメトキシ若しくはエトキシのようなC1-C6アルコキシ、トリフルオロメチル、ハロゲン、メチルカルボキシ、エチルカルボキシ、任意に置換C1-C6アルキル、-OH、-SH、-NH2、-N3、-CN、-NO2、-CHO、-COOH、-CONH2、-C(=NH)NH2、あるいは-SO3Hである;
R5はH、メチルあるいは任意に置換C1-C6アルキルである;
Xは、H、C1-C3アルキルあるいはC1-C3アリルアルキルである;
Z2は結合基であり、-NH-、-O-、-S-、-CH(CH3)-、-(CH2)n-、-CH=CH-、-CO-、-SO-、-SO2-、-C(=NH)-、-CH2NH(CO)-、-CH2NH(CO)O-、-CH2NH(CO)NH-;  -(CH2)nNH(CO)-、- (CH2)nNH (CO)O-、-(CH2)mNH(CO)NH-;  -C3-C7 シクロアルキル-NH(CO)-、-C3-C7シクロアルキル-CH2NH(CO)O-、-C3-C7シクロアルキル-NH(CO)NH-、あるいは-N(CH2CH2C6H5)-である
Z3は、-OH、-OCH3、-O-C1-C6アルキル、-OCH2C6H5、-NH2、-NH(C1-C6アルキル)、-N(C1-C6アルキル)2、-C1-C6アルキルである;
m = l-5; n=l-8;
ここで置換とは、ハロゲン、トリフルオロメチル、メチルカルボキシ、エチルカルボキシ、メトキシ、エトキシ、C1-C6アルコキシ、C1-C6アルキル、-OH、-OCH3、-OC2H5、-O-Cl-C4アルキル、-SH、-NH2、-N3、-CN、-NO2、-CHO、-COOH、-CONH2、-C(=NH)NH2、あるいは-SO3Hから、独立に、選ばれた、１若しくは１以上で置換されることを意味する。
【請求項４１】
式７の化合物；
式７
【化７】
2020512002.tif 000127
RlはH、任意に置換C1-C6アルキル;   C3-C4 シクロアルキル;  任意に置換C2-C6アルケニル;  任意に置換C1-C6アルコキシ;任意に置換C6-C12アリル基;   N、SおよびOから独立して選ばれた1〜4の環原子をもつ任意に置換C1-C9ヘテロアリル;  制限されないがベンジル若しくはアルファ-メチルベンジルのような置換C7 -C15アリルアルキル;   N、SおよびOから独立して選ばれた1〜4の環原子をもつ任意に置換C1-C9ヘテロアリルアルキル;  任意に置換C7-C15 アリルアルケニル;  任意に置換C3-C8シクロアルキル;  あるいは任意に置換C4-C8シクロアルキルアルキルである;
R2は水素、制限されないがメトキシ若しくはエトキシのようなC1-C6アルコキシ、トリフルオロメチル、ハロゲン、メチルカルボキシ、エチルカルボキシ、任意に置換C1-C6アルキル、-OH、-SH、-NH2、-N3、-CN、-NO2、-CHO、-COOH、-CONH2、-C(=NH)NH2、あるいは-SO3Hである;
R8はH、任意に置換C1-C6アルキル;   C3-C4 シクロアルキル;  任意に置換C2-C6アルケニル;  任意に置換C1-C6アルコキシ;  任意に置換C6-C12アリル;  N、SおよびOから独立して選ばれた1〜4の環原子をもつ任意に置換C1-C9ヘテロアリル;制限されないがベンジル若しくはアルファ-メチルベンジルのような置換C7 -C15アリルアルキル;   N、SおよびOから独立して選ばれた1〜4の環原子をもつ任意に置換C1-C9ヘテロアリルアルキル;  任意に置換C7-C15 アリルアルケニル;  任意に置換C3-C8シクロアルキル;  あるいは任意に置換C4-C8シクロアルキルアルキル;
ここで置換とは、ハロゲン、トリフルオロメチル、メチルカルボキシ、エチルカルボキシ、メトキシ、エトキシ、C1-C6アルコキシ、C1-C6アルキル、-OH、-OCH3、-OC2H5、-O-Cl-C4アルキル、-SH、-NH2、-N3、-CN、-NO2、-CHO、-COOH、-CONH2、-C(=NH)NH2、あるいは-SO3Hから、独立に、選ばれた、１若しくは１以上で置換されることを意味する。
【請求項４２】
式８の化合物；
式８
【化８】
2020512002.tif 000128
そこでは、XはO、NH、SあるいはCH2である;
Yは、O、N-Rl、N-CH2-R1、CH-R1あるいはCH-CH2-R1である;
R0はH、あるいはC1-C5アルキルである。
RlはH、C1-5アルキル、任意に置換アリル、任意に置換ヘテロアリルである;
R2はH、あるいは任意に置換アリルである;
R3はHあるいはC1-3アルキルである;
mは0またはlである;また、
nは0またはlである;
ここで置換とは、ハロゲン、トリフルオロメチル、メチルカルボキシ、エチルカルボキシ、メトキシ、エトキシ、C1-C6アルコキシ、C1-C6アルキル、-OH、-OCH3、-OC2H5、-O-Cl-C4アルキル、-SH、-NH2、-N3、-CN、-NO2、-CHO、-COOH、-CONH2、-C(=NH)NH2、あるいは-SO3Hから、独立に、選ばれた、１若しくは１以上で置換されることを意味する。
【請求項４３】
式９の化合物；
式９
【化９】
2020512002.tif 000129
そこでは、Qはヘテラリルである;
R0はHあるいはC1-4アルキルである;
XはO、NH、CH2である;
R5はHまたはCH3である;また、
nは1、2あるいは3である。
【請求項４４】
式１０の化合物；
式１０
【化１０】
2020512002.tif 000130
そこでは、R0はHあるいはC1-4アルキルである;
XはO、NHあるいはCH2である;
R5はHあるいはC1-4アルキルである;
GはNH、-CH=CH-、OまたはSである;また、
nは1または2である。
【請求項４５】
式１１の化合物；
式１１
【化１１】
2020512002.tif 000131
そこでは、R0はHあるいはC1-4アルキルである;
Xは0、CH2あるいはNHである;
R4はH、CH3、OH、NH2である;
R5はHあるいはC1-4アルキルである;また、
nは1-3である。
【請求項４６】
式１２の化合物；
式１２
【化１２】
2020512002.tif 000132
そこでは、R0はHあるいはC1-4アルキルである;
XはO、NHあるいはCH2である;そして
YはNまたはCHである。
【請求項４７】
式１３の化合物；
式１３
【化１３】
2020512002.tif 000133
そこでは、R0はHあるいはC1-4アルキルである;そして
XはO、NHあるいはCH2である。
【請求項４８】
式１４の化合物；
式１４
【化１４】
2020512002.tif 000134
そこでは、R0はHあるいはC1-4アルキルである;そして
XはO、NHあるいはCH2である。
【請求項４９】
式１５の化合物；
式１５
【化１５】
2020512002.tif 000135
RlはH、任意に置換C1-C6アルキル;任意に置換C2-C6アルケニル;任意に置換C1-C6アルコキシ;任意に置換C6-C12アリル基; N、SおよびOから独立して選ばれた1〜4の環原子をもつ任意に置換C1-C9ヘテロアリル;制限されないがベンジルまたはアルファ−メチルベンジルのような任意に置換C7-C15 アリルアルキル; N、SおよびOから独立して選ばれた1〜4の環原子をもつ任意に置換C1-C9ヘテロアリルアルキル;任意に置換C7-C15 アリルアルケニル;任意に置換C3-C8シクロアルキル;あるいは任意に置換C4-C8シクロアルキルアルキルである;
R2は水素、制限されないがメトキシ若しくはエトキシのようなC1-C6アルコキシ、トリフルオロメチル、ハロゲン、メチルカルボキシ、エチルカルボキシ、任意に置換C1-C6アルキル、-OH、-SH、-NH2、-N3、-CN、-NO2、-CHO、-COOH、-CONH2、-C(=NH)NH2、あるいは-SO3Hである。
R5は、H、メチル、エチル、C1-C6アルキル、C1-C3アリルアルキルあるいは2-フェニルエチルである;
Z2は結合基であり、-NH-、-O-、-S-、-CH(CH3)-、-(CH2)n-、-CH=CH-、-CO-、-SO-、-SO2-、-C(=NH)-、-CH2NH(CO)-、-CH2NH(CO)O-、-CH2NH(CO)NH-;  -(CH2)nNH(CO)-、- (CH2)nNH (CO)O-、-(CH2)mNH(CO)NH-である;
R4はH、制限されないがtert-ブチルのような任意に置換C1-C9アルキル;任意に置換C2-C6アルケニル; 制限されないが任意に置換フェニルのような任意に置換C6-C12アリル; N、SおよびOから独立して選ばれた1〜4の環原子をもつ任意に置換C1-C9ヘテロアリル;制限されないがベンジル若しくはアルファ-メチルベンジルのような置換C7 -C15アリルアルキル; - O-tert-ブチル;
m = l-5; n=l-8;
ここで置換とは、ハロゲン、トリフルオロメチル、メチルカルボキシ、エチルカルボキシ、メトキシ、エトキシ、C1-C6アルコキシ、C1-C6アルキル、-OH、-OCH3、-OC2H5、-O-Cl-C4アルキル、-SH、-NH2、-N3、-CN、-NO2、-CHO、-COOH、-CONH2、-C(=NH)NH2、あるいは-SO3Hから、独立に、選ばれた、１若しくは１以上で置換されることを意味する。
【請求項５０】
式１６の化合物；
式１６
【化１６】
2020512002.tif 000136
G3はCHまたはNである;
RlはH、任意に置換C1-C6アルキル;任意に置換C2-C6アルケニル;任意に置換C1-C6アルコキシ;任意に置換C6-C12アリル基; N、SおよびOから独立して選ばれた1〜4の環原子をもつ任意に置換C1-C9ヘテロアリル;制限されないがベンジルまたはアルファ−メチルベンジルのような任意に置換C7-C15 アリルアルキル; N、SおよびOから独立して選ばれた1〜4の環原子をもつ任意に置換C1-C9ヘテロアリルアルキル;任意に置換C7-C15 アリルアルケニル;任意に置換C3-C8シクロアルキル;あるいは任意に置換C4-C8シクロアルキルアルキルである;
R2は水素、制限されないがメトキシ若しくはエトキシのようなC1-C6アルコキシ、トリフルオロメチル、ハロゲン、メチルカルボキシ、エチルカルボキシ、任意に置換C1-C6アルキル、-OH、-SH、-NH2、-N3、-CN、-NO2、-CHO、-COOH、-CONH2、-C(=NH)NH2、あるいは-SO3Hである。
R5は、メチル、エチル、C1-C6アルキル、C1-C3アリルアルキルあるいは2-フェニルエチルである;
Z2は結合基であり、-NH-、-O-、-S-、-CH(CH3)-、-CH2-、-(CH2)n-、-CH=CH-、-CO-、-SO-、-SO2-、-C(=NH)-、-CH2NH(CO)-、-CH2NH(CO)O-、-CH2NH(CO)NH-;  -(CH2)nNH(CO)-、-(CH2)nNH (CO)O-、-(CH2)mNH(CO)NH-である;
R4はH、制限されないがtert-ブチルのような任意に置換C1-C9アルキル;  任意に置換C2-C6アルケニル;   制限されないが任意に置換フェニルのような任意に置換C6-C12アリル; N、SおよびOから独立して選ばれた1〜4の環原子をもつ任意に置換C1-C9ヘテロアリル;  制限されないがベンジル若しくはアルファ-メチルベンジルのような置換C7 -C15アリルアルキル; -O-tert-ブチル;
m = l-5; n=l-8;
ここで置換とは、ハロゲン、トリフルオロメチル、メチルカルボキシ、エチルカルボキシ、メトキシ、エトキシ、C1-C6アルコキシ、C1-C6アルキル、-OH、-OCH3、-OC2H5、-O-Cl-C4アルキル、-SH、-NH2、-N3、-CN、-NO2、-CHO、-COOH、-CONH2、-C(=NH)NH2、あるいは-SO3Hから、独立に、選ばれた、１若しくは１以上で置換されることを意味する。
【請求項５１】
式１７の化合物；
式１７
【化１７】
2020512002.tif 000137
RlはH、任意に置換C1-C6アルキル;任意に置換C2-C6アルケニル;任意に置換C1-C6アルコキシ;任意に置換C6-C12アリル; N、SおよびOから独立して選ばれた1〜4の環原子をもつ任意に置換C1-C9ヘテロアリル;制限されないがベンジルまたはアルファ−メチルベンジルのような任意に置換C7-C15 アリルアルキル; N、SおよびOから独立して選ばれた1〜4の環原子をもつ任意に置換C1-C9ヘテロアリルアルキル;任意に置換C7-C15 アリルアルケニル;任意に置換C3-C8シクロアルキル;あるいは任意に置換C4-C8シクロアルキルアルキルである;
R2は水素、制限されないがメトキシ若しくはエトキシのようなC1-C6アルコキシ、トリフルオロメチル、ハロゲン、メチルカルボキシ、エチルカルボキシ、任意に置換C1-C6アルキル、-OH、-SH、-NH2、-N3、-CN、-NO2、-CHO、-COOH、-CONH2、-C(=NH)NH2、あるいは-SO3Hである。
R5は、H、メチル、エチル、C1-C6アルキル、C1-C3アリルアルキルあるいは2-フェニルエチルである;
Z2は結合基であり、-NH-、-O-、-S-、-CH(CH3)-、-CH2-、-(CH2)n-、-CH=CH-、-CO-、-SO-、-SO2-、-C(=NH)-、-CH2NH(CO)-、-CH2NH(CO)O-、-CH2NH(CO)NH-;  -(CH2)nNH(CO)-、-(CH2)nNH(CO)O-、-(CH2)mNH(CO)NH-である;
R4はH、制限されないがtert-ブチルのような任意に置換C1-C9アルキル;  任意に置換C2-C6アルケニル;   制限されないが任意に置換フェニルのような任意に置換C6-C12アリル; N、SおよびOから独立して選ばれた1〜4の環原子をもつ任意に置換C1-C9ヘテロアリル;制限されないがベンジル若しくはアルファ-メチルベンジルのような置換C7 -C15アリルアルキル; - O-tert-ブチル;
m = l-5; n=l-8;
ここで置換とは、ハロゲン、トリフルオロメチル、メチルカルボキシ、エチルカルボキシ、メトキシ、エトキシ、C1-C6アルコキシ、C1-C6アルキル、-OH、-OCH3、-OC2H5、-O-Cl-C4アルキル、-SH、-NH2、-N3、-CN、-NO2、-CHO、-COOH、-CONH2、-C(=NH)NH2、あるいは-SO3Hから、独立に、選ばれた、１若しくは１以上で置換されることを意味する。
【請求項５２】
式１〜１７の化合物を対象に投与すること、又は図１８A〜１８Eに示された化合物を対象に投与すること、又は本願明細書の段落０２００に記述の化合物を対象に投与することを含む、対象における癌を処置する方法。
【請求項５３】
化合物が、本願明細書の段落０２００に記述と同様に描写されるいずれかである、請求項５２に記載の方法。
【請求項５４】
癌が、MUC1陽性若しくはMUC1*陽性癌である、請求項５２の方法。
【請求項５５】
癌が、NME7AB陽性癌若しくはNME7-X1陽性癌である、請求項５２の方法。
【請求項５６】
次のステップを含む、癌若しくは癌転移を予防若しくは処置する方法；
（１）  患者からの癌サンプルを分析し、MUC1*陽性、NME7AB陽性若しくはNME7-X1陽性であることを決定する；そして
（２）  式１〜１７の化合物の有効量を患者に投与する。
【請求項５７】
分析ステップが、PCRによって行われる、請求項５６に記載の方法。
【請求項５８】
癌サンプルが、EEF1A1遺伝子のmRNA発現レベルの少なくとも0.5％であるMUC1遺伝子、NME7遺伝子、NME7-X1遺伝子のmRNA発現レベルであるとき、それは、MUC1*陽性、NME7AB陽性若しくはNME7-X1陽性であると決定される。
【請求項５９】
分析ステップが、免疫組織化学によって行われる、請求項５６に記載の方法。
【請求項６０】
癌サンプルが、PSMGFRペプチド若しくはN-10ペプチドに結合する抗体と接触され、病理学的標準スコア1-4（＋〜＋＋＋＋）で組織が染色され、MUC1*陽性であると決定される、請求項５６に記載の方法。
【請求項６１】
癌サンプルが、NME7のB3ペプチドに結合する抗体と接触され、病理学的標準スコア1-4（＋〜＋＋＋＋）で組織が染色され、NME7AB陽性若しくはNME7-X1陽性であると決定される、請求項５６に記載の方法。
【請求項６２】
次のステップを含む、炎症性疾患及びその状態を予防若しくは治療する薬剤を同定する方法:
(１)    作用薬に、幹細胞を暴露し、そして
(２)    幹細胞多分化能あるいは増殖を阻害するか、幹細胞分化を引き起こす作用薬を同定する、そこでは、作用薬またはそのアナログは、炎症性疾患またはその状態を治療するための作用薬である。
【請求項６３】
炎症性疾患若しくはその状態が、慢性関節リウマチ、炎症性の腸症候群、クローン病、変形性関節症、喘息、皮膚炎、乾癬、嚢胞性繊維症、遅延性移植および慢性の実質器官拒絶、多発性硬化症、全身性紅斑性狼瘡、シェーグレン症候群、橋本甲状腺炎、多発性筋炎、強皮症、アジソン病、白斑、悪性貧血、糸球体腎炎、肺線維症、自己免疫性の糖尿病、糖尿病性網膜症、鼻炎、乏血再潅流傷害、ポスト血管形成術再狭窄、慢性閉塞性肺疾患(COPD)、グレーブス病、消化管アレルギー、結膜炎、アテローム性動脈硬化、冠動脈疾患、狭心症、癌転移、小動脈疾病あるいはミトコンドリアの疾病、である請求項６２に記載の方法。
【請求項６４】
幹細胞と接触された時、幹多分化能あるいは増殖を阻害する、あるいは幹細胞分化を引き起こす、作用薬を、その必要のある人に投与することを含む炎症性疾患若しくはその状態を治療する方法。
【請求項６５】
炎症性疾患若しくはその状態が、慢性関節リウマチ、炎症性の腸症候群、クローン病、変形性関節症、喘息、皮膚炎、乾癬、嚢胞性繊維症、遅延性移植および慢性の実質器官拒絶、多発性硬化症、全身性紅斑性狼瘡、シェーグレン症候群、橋本甲状腺炎、多発性筋炎、強皮症、アジソン病、白斑、悪性貧血、糸球体腎炎、肺線維症、自己免疫性の糖尿病、糖尿病性網膜症、鼻炎、乏血再潅流傷害、ポスト血管形成術再狭窄、慢性閉塞性肺疾患(COPD)、グレーブス病、消化管アレルギー、結膜炎、アテローム性動脈硬化、冠動脈疾患、狭心症、癌転移、小動脈疾病あるいはミトコンドリアの疾病、である請求項６４に記載の方法。
【請求項６６】
作用薬が、式１〜１７の化合物、又は図１８A〜１８Eに示された化合物、又は本願明細書の段落０２００に記述の化合物である、請求項６４に記載の方法。
【請求項６７】
癌進展の危険がある患者若しくは癌と診断された患者を治療する方法であって以下の工程を含む:
１）ある化合物の存在下で、ナイーブ幹細胞及び繊維芽細胞を育てる;
２）ナイーブ幹細胞の多能性若しくは増殖を阻害する化合物を特定する；
３）当該化合物が、繊維芽細胞に殆ど若しくは全く効果をもたないことを確認する; 
４）該化合物は、癌細胞の増殖若しくは侵襲を阻害すると結論を下し；そして、
５）癌転移の処置若しくは予防のために、該化合物の有効量を患者に投与する。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、一般に、幹細胞を分化する化合物の機能が特徴である癌の治療のための方法および組成に関する。
【背景技術】
【０００２】
標準状態の下で培養されたヒト幹細胞が、真に、多能性の状態でないことは最近発見された。もっと正確に言えば、それらは、様々なメチル化マークの蓄積によって証拠づけられるように、ある分化を受け、ある細胞運命決定をなされていた。
【０００３】
ヒト培養された幹細胞をマウス胚の細胞と比較する時、ヒト培養された幹細胞は、胚の外胚葉部分からのマウス幹細胞のように見え、むしろそのように活動していることが決定された。それは、むしろ真の内部細胞塊の多能性幹細胞ではなく、分化し始めていた。研究者は、真実の多能性幹細胞を内部細胞塊“ナイーブ”、そしてより分化した細胞を“プライムド”と呼んだ。
【０００４】
さらなる研究は、マウスとヒト両方のプライムド状態幹細胞が、bFGFでの培養によって、自己複製したことを示し、しかし、LIFでの培養によって、マウスのナイーブ幹細胞が自己複製したことを示した。ヒト幹細胞をナイーブ状態で成長させる成長因子は知られていなかった。プライムド状態の幹細胞は自発的な分化の傾向があり、手仕事で、分化する部分を吟味され、一方、ナイーブ幹細胞は、自然に自発的な分化に抵抗する。さらに、プライムド幹細胞は、単一細胞として継代できず、非常に低いクローニング効率を持つ。一方、ナイーブ幹細胞は、単一細胞として継代ができ、高いクローニング効率がある。女性のナイーブ幹細胞は、2つの活性X染色体を持っている。しかし、プライムド状態の幹細胞は、メチル化によって既に1つのX染色体を不活性化した。さらに、ナイーブ状態幹細胞が、はるかにより少ないメチル化マークを持ち、それらは実質的に細胞運命決定として知られ、初期の分化決定であり、それは幹細胞がなりうる成熟細胞のタイプを制限することが今や知られる。
【発明の概要】
【０００５】
本発明の1つの様相では、薬のスクリーニングは、どの作用薬が、優先的に、プライムド幹細胞以上に、ナイーブ幹細胞の多分化能を阻害する能力について、選別されるかを示す。選別される作用薬は、抗体、抗体様分子、多クローンで、単クローン、抗体フラグメント融合蛋白質、抗体擬態、ペプチド若しくはペプチド擬態、小分子若しくは天然産物でありえる。
【０００６】
本発明の作用薬の別の様相では、それは癌増殖を阻害し、転移癌細胞の増殖を阻害し、癌細胞の転移能を阻害し、ここで、該作用薬は、ナイーブ幹細胞の、分化を引き起こすか若しくは多分化能を阻害する能力、および、プライムド幹細胞の、分化を引き起こすか若しくは多分化能を阻害する、相対的な能力のなさによって、同定される。
【０００７】
まだ、本発明の別の様相では、開示される作用薬は、癌の治療若しくは予防用の、抗癌若しくは抗転移薬として使用のために開示される。
【０００８】
本発明の別の様相では、新規癌治療若しくは抗転移薬の標的は、プライムド幹細胞においてではなくナイーブ幹細胞でアップレギュレートされる遺伝子の同定により特定される。
【０００９】
まだ、本発明の別の様相では、新規癌治療若しくは抗転移薬の標的は、プライムド幹細胞でではなくナイーブ幹細胞でアップレギュレートされるmicroRNAsの同定により特定される。
【００１０】
1つの様相では、本発明は、次のステップを含む、癌若しくは転移癌の処置若しくは予防のための作用薬を同定する方法を指向する；
【００１１】
（i）可能性ある作用薬と幹細胞を接触させ、そして (ii)幹細胞の分化を引き起こす、又は幹細胞の多分化能あるいは幹細胞の増殖を阻害する、作用薬を同定する。そこではそのような作用薬は、抗ガン剤だろうと決定される。
幹細胞はナイーブ状態幹細胞でありうる。あるいは、ステップ(i)で、幹細胞はナイーブ状態若しくはプライムド状態の幹細胞でありうる。そこではナイーブ状態幹細胞に対する作用薬の効果は、プライムド状態の幹細胞に対する影響と比較され、プライムド状態の幹細胞と比較して、作用薬がナイーブ状態幹細胞により大きな効果があれば、そこでは、該作用薬が抗ガン剤でありうると決定できる。作用薬は、多クローン性抗体、単クローン抗体、分子様抗体、抗体フラグメント融合蛋白質、抗体擬態、ペプチド、ペプチド擬態、小分子あるいは天然産物でありうる。幹細胞は、ヒト由来でありうる。幹細胞は、NME7ABあるいはNME7-X1を含む培地中で培養することにより、ナイーブ状態で維持されうる。癌は、卵巣癌、乳癌、黒色腫、前立腺癌、結腸癌、肺癌、あるいは膵臓癌でありうる。癌は、MUC1陽性あるいはMUCl*陽性癌でありうる。癌は、NME7ABあるいはNME7-X1陽性癌でありうる。作用薬は、一般に細胞毒性がない。作用薬は、繊維芽細胞あるいは繊維芽細胞始原細胞に細胞毒性がない。
【００１２】
別の様相では、本発明は、上記の方法によって得られた作用薬を、対象に投与することを含む、癌を予防若しくは治療する方法を指向する。癌は、卵巣癌、乳癌、黒色腫、前立腺癌、結腸癌、肺癌、あるいは膵臓癌でありうる。癌は、MUC1陽性あるいはMUCl*陽性癌でありうる。癌は、NME7ABあるいはNME7-X1陽性癌でありうる。
【００１３】
別の様相では、本発明は、上記の方法によって得られた作用薬を、対象に投与することを含む、癌を予防若しくは治療する方法を指向する。
【００１４】
別の様相では、本発明は、上記の方法によって得られた作用薬を、対象に投与することを含む、癌増殖、移動あるいは侵襲性を阻害する方法を指向する。
【００１５】
別の様相では、本発明は、上記の方法によって得られた作用薬を、対象に投与することを含む、転移癌細胞の増殖を阻害する方法を指向する。
【００１６】
別の様相では、本発明は、プライムド状態の幹細胞と比較して、ナイーブ状態幹細胞でアップレギュレートされる遺伝子若しくは遺伝子産物を同定することを含む、創薬のための、抗癌あるいは抗転移標的を同定する方法を指向する。
【００１７】
別の様相では、本発明は、プライムド状態の幹細胞と比較して、ナイーブ状態幹細胞でダウンレギュレートされる遺伝子若しくは遺伝子産物を同定することを含む、創薬のための、抗癌あるいは抗転移標的を同定する方法を指向する。
【００１８】
別の様相では、本発明は、(i)プライムド状態の幹細胞と比較して、ナイーブ状態幹細胞でダウンレギュレートされる遺伝子若しくは遺伝子産物を同定すること; (ii) 作用薬とナイーブ幹細胞を接触させること;そして(iii)ナイーブ状態幹細胞でのダウンレギュレートされた遺伝子若しくは遺伝子産物の発現あるいは活性を増加させる作用薬を同定すること、を含む抗癌あるいは抗転移作用薬を同定する方法を指向する。ダウンレギュレートされた遺伝子は、幹細胞が分化を始める場合アップレギュレートされる遺伝子でありうる。ダウンレギュレートされた遺伝子は、フィブロネクチン、ビメンチンあるいはNF1でありうる。
【００１９】
別の様相では、本発明は、(i)プライムド状態の幹細胞と比較して、ナイーブ状態幹細胞でアップレギュレートされる遺伝子若しくは遺伝子産物を同定すること; (ii) 作用薬とナイーブ幹細胞を接触させること;及び (iii)ナイーブ状態幹細胞でアップレギュレートされた遺伝子若しくは遺伝子産物の発現あるいは活性を阻害する作用薬を同定すること、を含む抗癌若しくは抗転移作用薬を同定する方法を指向する。アップレギュレートされた遺伝子は、e-カドヘリン、CXCR4、β-カテニン、AXIN2、MUC1、NME7あるいはNME7-X1でありえる。
【００２０】
別の様相では、本発明は、(i)繊維芽細胞と比較して、ナイーブ状態幹細胞でアップレギュレートされる遺伝子あるいは遺伝子産物を同定すること; (ii) 作用薬とナイーブ幹細胞を接触させること;そして(iii)ナイーブ状態幹細胞でアップレギュレートされた遺伝子若しくは遺伝子産物の発現あるいは活性を阻害する作用薬を同定すること、を含む抗癌若しくは抗転移作用薬を同定する方法を指向する。アップレギュレートされた遺伝子は、e-カドヘリン、CXCR4、β-カテニン、AXIN2、MUC1、NME7あるいはNME7-X1でありうる。
【００２１】
別の様相では、本発明は、(i)繊維芽細胞と比較して、ナイーブ状態幹細胞でダウンレギュレートされる遺伝子あるいは遺伝子産物を同定すること; (ii) 作用薬とナイーブ幹細胞を接触させること;そして(iii)ナイーブ状態幹細胞中のダウンレギュレートされた遺伝子若しくは遺伝子産物の発現あるいは活性を増加させる作用薬を同定すること、を含む抗癌若しくは抗転移作用薬を同定する方法を指向する。ダウンレギュレートされた遺伝子は、幹細胞が分化を始める場合、アップレギュレートされる遺伝子でありうる。ダウンレギュレートされた遺伝子は、フィブロネクチン、ビメンチン、NF1あるいはmicroRNA145でありうる。ダウンレギュレートされた遺伝子は、HES3、GNAS、VLDLR、EXT1、FBXL17、RHOCあるいはGREB 1Lのようなスーパーエンハンサー標的遺伝子でありうる。
【００２２】
別の様相では、本発明は、(i)プライムド幹細胞あるいは繊維芽細胞と比較して、ナイーブ状態幹細胞でアップレギュレートされるmicroRNAを同定すること; (ii) 作用薬とナイーブ幹細胞を接触させること;そして(iii)ナイーブ状態幹細胞でアップレギュレートされたmicroRNAの発現あるいは活性を阻害する作用薬を同定すること、を含む抗癌若しくは抗転移作用薬を同定する方法を指向する。
【００２３】
別の様相では、本発明は式1〜17の化合物を指向する。
【００２４】
別の様相では、本発明は対象に式１〜１７の化合物若しくは図18A-18Eに記述の化合物若しくは本明細書に記述の化合物若しくは段落０２００に記述の化合物を投与することを含む、対象の癌を治療する方法を指向する。癌は、MUC1陽性、MUCl*陽性、あるいはMUC1陰性癌でありうる。癌はNME7AB若しくはNME7-X1陽性癌でありうる。
【００２５】
別の様相では、本発明は、次のステップを含む癌あるいは癌転移を予防若しくは治療する方法を指向する:
(i)     患者からの癌のサンプルを分析し、それがMUCl*陽性、NME7AB陽性若しくはNME7-X1陽性であることを決定する; そして、
【００２６】
(ii)  有効な量の式１〜１７の化合物を患者に投与する。
分析ステップは、PCRによって行なわれうる。1つの様相中で、癌のサンプルが、EEF1A1遺伝子のmRNA発現レベルの少なくとも0.5%のレベルである、MUCl遺伝子、NME7遺伝子あるいはNME7-X1遺伝子のmRNAを発現する場合、それは、MUCl*陽性、NME7AB陽性、あるいはNME7-X1陽性であると決定される。分析ステップは、免疫組織化学によって行なわれうる。
1つの様相中で、癌のサンプルが、PSMGFRペプチドあるいはN-10ペプチドに結合する抗体と接触され、病理学的標準スコア1-4（＋〜＋＋＋＋）で組織が染色される場合、それはMUCl*陽性である判断される。癌のサンプルが、NME7のB3ペプチドに結合する抗体と接触され、病理学的標準スコア1-4（＋〜＋＋＋＋）で組織が染色される場合、それはNME7AB陽性あるいはNME7-X1陽性であると判断される。
【００２７】
別の様相では、本発明は、次のステップを含む炎症性疾患及びその状態を予防若しくは治療する方法を指向する:
(i)  作用薬に、幹細胞を暴露し、(ii)  幹細胞多分化能あるいは増殖を阻害するか、幹細胞分化を引き起こす作用薬を同定するステップを含むみ、そこでは、作用薬またはそのアナログは、炎症性疾患またはその状態を治療するための作用薬である。
炎症性疾患若しくはその状態は、慢性関節リウマチ、炎症性の腸症候群、クローン病、変形性関節症、喘息、皮膚炎、乾癬、嚢胞性繊維症、遅延性移植および慢性の実質器官拒絶、多発性硬化症、全身性紅斑性狼瘡、シェーグレン症候群、橋本甲状腺炎、多発性筋炎、強皮症、アジソン病、白斑、悪性貧血、糸球体腎炎、肺線維症、自己免疫性の糖尿病、糖尿病性網膜症、鼻炎、乏血再潅流傷害、ポスト血管形成術再狭窄、慢性閉塞性肺疾患(COPD)、グレーブス病、消化管アレルギー、結膜炎、アテローム性動脈硬化、冠動脈疾患、狭心症、癌転移、小動脈疾病あるいはミトコンドリアの疾病。
【００２８】
別の様相では、本発明は、幹細胞と接触された時、幹多分化能あるいは増殖を阻害する、あるいは幹細胞分化を引き起こす、作用薬を、その必要のある人に投与することを含む炎症性疾患若しくはその状態を治療する方法を指向する。
炎症性疾患若しくはその状態は、慢性関節リウマチ、炎症性の腸症候群、クローン病、変形性関節症、喘息、皮膚炎、乾癬、嚢胞性繊維症、遅延性移植および慢性の実質器官拒絶、多発性硬化症、全身性紅斑性狼瘡、シェーグレン症候群、橋本甲状腺炎、多発性筋炎、強皮症、アジソン病、白斑、悪性貧血、糸球体腎炎、肺線維症、自己免疫性の糖尿病、糖尿病性網膜症、鼻炎、乏血再潅流傷害、ポスト血管形成術再狭窄、慢性閉塞性肺疾患(COPD)、グレーブス病、消化管アレルギー、結膜炎、アテローム性動脈硬化、冠動脈疾患、狭心症、癌転移、小動脈疾病あるいはミトコンドリアの疾病でありえる。作用薬は、式１〜１７あるいは図18A-18Eの化合物、あるいは本明細書で記述された若しくは段落０２００で記述の化合物でありえる。
【００２９】
これらおよび本発明の他の目的は、本発明の以下の記述、ここに添付の参照図面、およびここに以下の請求項からより完全に理解される。
【図面の簡単な説明】
【００３０】
本発明は、以下に記述の詳細な説明、実例としてのみ開示された、それゆえ本発明を限定するものではない、添付の図面からより完全に理解される、ここで;
【００３１】
【図１】図1は、ナイーブ状態あるいはプライムド状態の幹細胞の、多分化能、増殖を阻害するか又は分化を引き起こす、それらの能力に関してテストされた、1セットの小分子の化学構造を示す。
【００３２】
【図２】図2は、小分子、抗MUC1*Fab「E6」、MUC1*細胞外領域ペプチド「FLR」および抗NME7抗体#56と#61の、テスト結果を要約するテーブルである。
【００３３】
【図３】図3A-3Lは、MEFの層上で、成長因子FGFを有する幹細胞培地において成長し、そして、検査試験薬の存在下で3日間処置された、10X拡大写真のヒトプライムド状態幹細胞を示す。3Aは、抗MUCl* Fab、命名E6が存在する状態で培養された、プライムド幹細胞の写真を示す。3Bは、MUCl*細胞外領域ペプチド、FLRが存在する状態で培養された、プライムド幹細胞の写真を示す。3Cは、コントロールのプライムド幹細胞の写真を示す。3Dは、0.2%DMSOでの小分子のコントロールとして、0.2%DMSOで培養された、プライムド幹細胞の写真を示す。3Eは、MN0642が存在する状態で培養された、プライムド幹細胞の写真を示す。3Fは、MN1130が存在する状態で培養された、プライムド幹細胞の写真を示す。3Gは、MN0572が存在する状態で培養された、プライムド幹細胞の写真を示す。3Hは、MN0947が存在する状態で培養された、プライムド幹細胞の写真を示す。31は、MN0129が存在する状態で培養された、プライムド幹細胞の写真を示す。3Jは、MN0676が存在する状態で培養された、プライムド幹細胞の写真を示す。3Kは、MN0992が存在する状態で培養された、プライムド幹細胞の写真を示す。また、3Lは、MN0402が存在する状態で培養された、プライムド幹細胞の写真を示す。
【００３４】
【図４】図4A-4Lは、MEFの層上で、成長因子FGFを有する幹細胞培地において成長し、そして、検査試験薬の存在下で3日間処置された、20X拡大写真のヒトプライムド状態幹細胞を示す。点線は、幹細胞多分化能あるいは増殖が阻害されるあるいは分化が引き起こされる領域を示す。4Aは、抗MUCl* Fab、命名E6が存在する状態で培養された、プライムド幹細胞の写真を示す。4Bは、MUCl* ecdペプチド細胞外領域ペプチド、FLRとして知られる、が存在する状態で、培養された、プライムド幹細胞の写真を示す。4Cは、コントロールのプライムド幹細胞の写真を示す。4Dは、0.2%DMSOでの小分子のコントロールとして、0.2%DMSOで培養された、プライムド幹細胞の写真を示す。4Eは、MN0642が存在する状態で培養された、プライムド幹細胞の写真を示す。4Fは、MN1130が存在する状態で培養された、プライムド幹細胞の写真を示す。4Gは、MN0572が存在する状態で培養された、プライムド幹細胞の写真を示す。4Hは、MN0947が存在する状態で培養された、プライムド幹細胞の写真を示す。41は、MN0129が存在する状態で培養された、プライムド幹細胞の写真を示す。4Jは、MN0676が存在する状態で培養された、プライムド幹細胞の写真を示す、図4Kは、MN0992が存在する状態で培養された、プライムド幹細胞の写真を示す。また、3Lは、MN0402が存在する状態で培養された、プライムド幹細胞の写真を示す。
【００３５】
【図５】図5A-5Lは、MEFの層上で、成長因子FGFを有さない幹細胞培地において成長し、そして、検査試験薬の存在下で3日間処置された、10X拡大写真のヒトプライムド状態幹細胞を示す。5Aは、抗MUCl* Fab、E6が存在する状態で培養された、プライムド幹細胞の写真を示す。5Bは、MUCl*細胞外領域ペプチド、FLRが存在する状態で培養された、プライムド幹細胞の写真を示す。5Cは、抗NME7多クローン性抗体#56が存在する状態で培養された、プライムド幹細胞の写真を示す。5Dは、抗NME7多クローン性抗体#61が存在する状態で培養された、プライムド幹細胞の写真を示す。5Eは、MN0642が存在する状態で培養された、プライムド幹細胞の写真を示す。5Fは、MN1130が存在する状態で培養された、プライムド幹細胞の写真を示す。5Gは、MN0572が存在する状態で培養された、プライムド幹細胞の写真を示す。5Hは、MN0947が存在する状態で培養された、プライムド幹細胞の写真を示す。51は、MN0129が存在する状態で培養された、プライムド幹細胞の写真を示す。5Jは、MN0676が存在する状態で培養された、プライムド幹細胞の写真を示す。5Kは、MN0992が存在する状態で培養された、プライムド幹細胞の写真を示す。また図、5Lは、MN0402が存在する状態で培養された、プライムド幹細胞の写真を示す。
【００３６】
【図６】図6A-6Lは、MEFの層上で、成長因子FGFを有さない幹細胞培地において成長し、そして、検査試験薬の存在下で3日間処置された、20X拡大写真のヒトプライムド状態幹細胞を示す。点線は、幹細胞多分化能あるいは増殖が阻害されるあるいは分化が引き起こされる領域を示す。6Aは、抗MUCl* Fab、E6が存在する状態で培養された、プライムド幹細胞の写真を示す。6Bは、MUCl*細胞外領域ペプチド、FLRが存在する状態で培養された、プライムド幹細胞の写真を示す。6Cは、抗NME7多クローン性抗体#56が存在する状態で培養された、プライムド幹細胞の写真を示す。6Dは、抗NME7多クローン性抗体#61が存在する状態で培養された、プライムド幹細胞の写真を示す。6Eは、MN0642が存在する状態で培養された、プライムド幹細胞の写真を示す。6Fは、MN1130が存在する状態で培養された、プライムド幹細胞の写真を示す。6Gは、MN0572が存在する状態で培養された、プライムド幹細胞の写真を示す。6Hは、MN0947が存在する状態で培養された、プライムド幹細胞の写真を示す。61は、MN0129が存在する状態で培養された、プライムド幹細胞の写真を示す。6Jは、MN0676が存在する状態で培養された、プライムド幹細胞の写真を示す。6Kは、MN0992が存在する状態で培養された、プライムド幹細胞の写真を示す。また6Lは、MN0402が存在する状態で培養された、プライムド幹細胞の写真を示す。
【００３７】
【図７】図7A-7Lは、MUCl*抗体、C3、表面上で、NME7ABを有する幹細胞培地において成長し、そして、検査試験薬の存在下で3日間処置された、10X拡大写真のヒトナイーブ状態幹細胞を示す。点線は、幹細胞多分化能あるいは増殖が阻害されるあるいは分化が引き起こされる領域を示す。7Aは、抗MUCl* Fab、E6が存在する状態で培養されたナイーブ幹細胞の写真を示す。7Bは、MUCl*細胞外領域ペプチド、FLRが存在する状態で培養されたナイーブ幹細胞の写真を示す。7Cはコントロールのナイーブ幹細胞の写真を示す。7Dは、0.2%DMSOでの小分子のコントロールとして、0.2%DMSOで培養された、ナイーブ幹細胞の写真を示す。7Eは、MN0642が存在する状態で培養されたナイーブ幹細胞の写真を示す。7Fは、MN1130が存在する状態で培養されたナイーブ幹細胞の写真を示す。7Gは、MN0572が存在する状態で培養されたナイーブ幹細胞の写真を示す。7Hは、MN0947が存在する状態で培養された、ナイーブ幹細胞の写真を示す。71は、MN0129が存在する状態で培養された、ナイーブ幹細胞の写真を示す。7JはMN0676が存在する状態で培養されたナイーブ幹細胞の写真を示す。  7Kは、MN0992が存在する状態で培養されたナイーブ幹細胞の写真を示す。また7Lは、MN0402が存在する状態で培養されたナイーブ幹細胞の写真を示す。
【００３８】
【図８】図8A-8Lは、MUCl*抗体、C3、表面上で、NME7ABを有する幹細胞培地において成長し、そして、検査試験薬の存在下で3日間処置された、20X拡大写真のヒトナイーブ状態幹細胞を示す。点線は、幹細胞多分化能あるいは増殖が阻害されるあるいは分化が引き起こされる領域を示す。8Aは、抗MUCl*Fab、E6が存在する状態で培養されたナイーブ幹細胞の写真を示す。8Bは、MUCl*細胞外領域ペプチド、FLRが存在する状態で培養されたナイーブ幹細胞の写真を示す。8Cは、コントロールのナイーブ幹細胞の写真を示す。8Dは、0.2%DMSOでの小分子のコントロールとして、0.2%DMSOで培養された、ナイーブ幹細胞の写真を示す。8Eは、MN0642が存在する状態で培養されたナイーブ幹細胞の写真を示す。8Fは、MN1130が存在する状態で培養されたナイーブ幹細胞の写真を示す。8Gは、MN0572が存在する状態で培養されたナイーブ幹細胞の写真を示す。8Hは、MN0947が存在する状態で培養されたナイーブ幹細胞の写真を示す。81は、MN0129が存在する状態で培養されたナイーブ幹細胞の写真を示す。8JはMN0676が存在する状態で培養されたナイーブ幹細胞の写真を示す。8Kは、MN0992が存在する状態で培養されたナイーブ幹細胞の写真を示す。また8Lは、MN0402が存在する状態で培養されたナイーブ幹細胞の写真を示す。
【００３９】
【図９】図9A-9Lは、MUCl*抗体、C3、表面上で、NME7ABを有しない幹細胞培地において成長し、そして、検査試験薬の存在下で3日間処置された、10X拡大写真のヒトナイーブ状態幹細胞を示す。点線は、幹細胞多分化能あるいは増殖が阻害されるあるいは分化が引き起こされる領域を示す。9Aは、抗MUCl*Fab、E6が存在する状態で培養されたナイーブ幹細胞の写真を示す。9Bは、MUCl*細胞外領域ペプチド、FLRが存在する状態で培養されたナイーブ幹細胞の写真を示す。9Cは、抗NME7多クローン性抗体#56が存在する状態で培養されたナイーブ幹細胞の写真を示す。9Dは、抗NME7多クローン性抗体#61が存在する状態で培養されたナイーブ幹細胞の写真を示す。9Eは、MN0642が存在する状態で培養されたナイーブ幹細胞の写真を示す。9Fは、MN1130が存在する状態で培養されたナイーブ幹細胞の写真を示す。9Gは、MN0572が存在する状態で培養されたナイーブ幹細胞の写真を示す。9Hは、MN0947が存在する状態で培養されたナイーブ幹細胞の写真を示す。91は、MN0129が存在する状態で培養されたナイーブ幹細胞の写真を示す、9JはMN0676が存在する状態で培養されたナイーブ幹細胞の写真を示す。9Kは、MN0992が存在する状態で培養されたナイーブ幹細胞の写真を示す。また9Lは、MN0402が存在する状態で培養されたナイーブ幹細胞の写真を示す。
【００４０】
【図１０】図10A-10Lは、MUCl*抗体、C3、表面上で、NME7ABを有しない幹細胞培地において成長し、そして、検査試験薬の存在下で3日間処置された、20X拡大写真のヒトナイーブ状態幹細胞を示す。点線は、幹細胞多分化能あるいは増殖が阻害されるあるいは分化が引き起こされる領域を示す。10Aは、抗MUCl*Fab、E6が存在する状態で培養されたナイーブ幹細胞の写真を示す。10Bは、MUCl*細胞外領域ペプチド、FLRが存在する状態で培養されたナイーブ幹細胞の写真を示す。10Cは、抗NME7多クローン性抗体#56が存在する状態で培養されたナイーブ幹細胞の写真を示す。10Dは、抗NME7多クローン性抗体#61が存在する状態で培養されたナイーブ幹細胞の写真を示す。10Eは、MN0642が存在する状態で培養されたナイーブ幹細胞の写真を示す。10Fは、MN1130が存在する状態で培養されたナイーブ幹細胞の写真を示す。10Gは、MN0572が存在する状態で培養されたナイーブ幹細胞の写真を示す。10Hは、MN0947が存在する状態で培養されたナイーブ幹細胞の写真を示す。10Iは、MN0129が存在する状態で培養されたナイーブ幹細胞の写真を示す。10 Jは、MN0676が存在する状態で培養されたナイーブ幹細胞の写真を示す。10Kは、MN0992が存在する状態で培養されたナイーブ幹細胞の写真を示す。また10Lは、MN0402が存在する状態で培養されたナイーブ幹細胞の写真を示す。
【００４１】
【図１１】図11A-11Fは、先にMEF上でbFGFにおいて成長され、実験中bFGFがない状態で培養され、そして検査薬で3日間処置されたヒトプライムド状態幹細胞の4X拡大の写真を示す。点線は、幹細胞多分化能あるいは増殖が阻害されるあるいは分化が引き起こされる領域を示す。11Aは、コントロールのスクランブル化配列siRNAが存在する状態で培養された、プライムド幹細胞の写真を示す。11Bは、BRD4特異的siRNAが存在する状態で培養されたプライムド幹細胞の写真を示す。11Cは、JMJD6特異的siRNAが存在する状態で培養されたプライムド幹細胞の写真を示す。11Dは、著名なBRD4阻害剤JQ1 aka JQ1の不活性立体異性体が存在する状態で培養されたプライムド幹細胞の写真を示す。11Eは、500nMで著名なBRD4阻害剤JQ1 aka JQ1+の活性立体異性体が存在する状態で培養された、プライムド幹細胞の写真を示す。また、11Fは、lμMで著名なBRD4阻害剤JQ1+の活性立体異性体が存在する状態で培養された、プライムド幹細胞の写真を示す。
【００４２】
【図１２】図12A-12Fは、先にMEF上でbFGFにおいて成長され、実験中bFGFがない状態で培養され、そして検査薬で3日間処置されたヒトプライムド状態幹細胞の20X拡大の写真を示す。点線は、幹細胞多分化能あるいは増殖が阻害されるあるいは分化が引き起こされる領域を示す。12Aは、コントロールのスクランブル化配列siRNAの存在下で培養された、プライムド幹細胞の写真を示す。12Bは、BRD4特異的siRNAが存在する状態で培養された、プライムド幹細胞の写真を示す。12Cは、JMJD6特異的siRNAが存在する状態で培養された、プライムド幹細胞の写真を示す。12Dは、著名なBRD4阻害剤JQl aka JQ1の不活性立体異性体が存在する状態で培養された、プライムド幹細胞の写真を示す。12 Eは、500nMの著名なBRD4阻害剤JQl aka JQ1+の活性立体異性体が存在する状態で培養されたプライムド幹細胞の写真を示す。また12 Fは、lμMの著名なBRD4阻害剤JQ1+の活性立体異性体が存在する状態で培養されたプライムド幹細胞の写真を示す。
【００４３】
【図１３】図13A-13Fは、先にMUCl*抗体表面、C3上でNME7ABにおいて成長され、実験中NME7ABがない状態で培養され、そして検査薬で3日間処置されたヒトナイーブ状態幹細胞の4X拡大の写真を示す。点線は、幹細胞多分化能あるいは増殖が阻害されるあるいは分化が引き起こされる領域を示す。13Aは、コントロールのスクランブル化配列siRNAが存在する状態で培養されたナイーブ幹細胞の写真を示す。13Bは、BRD4特異的siRNAが存在する状態で培養されたナイーブ幹細胞の写真を示す。13Cは、JMJD6特異的siRNAが存在する状態で培養されたナイーブ幹細胞の写真を示す。13Dは、著名なBRD4阻害剤JQl aka JQ1の不活性立体異性体が存在する状態で培養されたナイーブ幹細胞の写真を示す。13 Eは、500nMの著名なBRD4阻害剤JQl aka JQ1+の活性立体異性体が存在する状態で培養されたナイーブ幹細胞の写真を示す。3 Fは、lμMの著名なBRD4阻害剤JQ1+の活性立体異性体が存在する状態で培養されたナイーブ幹細胞の写真を示す。
【００４４】
【図１４】図14A-14Fは、先にMUCl*抗体表面、C3上でNME7ABにおいて成長され、実験中NME7ABがない状態で培養され、そして検査薬で3日間処置された、ヒトナイーブ状態幹細胞の20X拡大写真を示す。点線は、幹細胞多分化能あるいは増殖が阻害されるあるいは分化が引き起こされる領域を示す。14Aは、コントロールのスクランブル化配列siRNAが存在する状態で培養された写真を示す。14Bは、BRD4特異的siRNAが存在する状態で培養されたナイーブ幹細胞の写真を示す。14Cは、JMJD6特異的siRNAが存在する状態で培養されたナイーブ幹細胞の写真を示す。14Dは、著名なBRD4阻害剤JQl aka JQ1の不活性立体異性体が存在する状態で培養されたナイーブ幹細胞の写真を示す。14Eは、500nMの著名なBRD4阻害剤JQl aka JQ1+の活性立体異性体が存在する状態で培養されたナイーブ幹細胞の写真を示す。また14Fは、lμMの著名なBRD4阻害剤JQ1+の活性立体異性体が存在する状態で培養されたナイーブ幹細胞の写真を示す。
【００４５】
【図１５】図15A-15Fは、先にMUCl*抗体表面、C3上でNME1二量体において成長され、実験中にNME7ABがない状態で培養され、そして検査薬で3日間処置された、ヒトナイーブ状態幹細胞の4X拡大写真を示す。点線は、幹細胞多分化能あるいは増殖が阻害されるあるいは分化が引き起こされる領域を示す。15Aは、コントロールのスクランブル化配列siRNAが存在する状態で培養された写真を示す。15Bは、BRD4特異的siRNAが存在する状態で培養されたナイーブ幹細胞の写真を示す。15Cは、JMJD6特異的siRNAが存在する状態で培養されたナイーブ幹細胞の写真を示す。15Dは、著名なBRD4阻害剤JQl aka JQ1の不活性立体異性体が存在する状態で培養されたナイーブ幹細胞の写真を示す。15Eは、500nMの著名なBRD4阻害剤JQl aka JQ1+の活性立体異性体が存在する状態で培養されたナイーブ幹細胞の写真を示す。また15Fは、lμMの著名なBRD4阻害剤JQ1+の活性立体異性体が存在する状態で培養されたナイーブ幹細胞の写真を示す。
【００４６】
【図１６】図16A-16Fは、先にMUCl*抗体表面、C3上でNME1二量体において成長され、実験中にNME1二量体がない状態で培養され、そして検査薬で3日間処置された、ヒトナイーブ状態幹細胞の20X拡大写真を示す。点線は、幹細胞多分化能あるいは増殖が阻害されるあるいは分化が引き起こされる領域を示す。16Aは、コントロールのスクランブル化配列siRNAが存在する状態で培養された写真を示す。16Bは、BRD4特異的siRNAが存在する状態で培養されたナイーブ幹細胞の写真を示す。16Cは、JMJD6特異的siRNAが存在する状態で培養されたナイーブ幹細胞の写真を示す。16Dは、著名なBRD4阻害剤JQl aka JQ1の不活性立体異性体が存在する状態で培養されたナイーブ幹細胞の写真を示す。16 Eは、500nMの著名なBRD4阻害剤JQl aka JQ1+の活性立体異性体が存在する状態で培養されたナイーブ幹細胞の写真を示す。また16Fは、lμMの著名なBRD4阻害剤JQ1+の活性立体異性体が存在する状態で培養されたナイーブ幹細胞の写真を示す。
【００４７】
【図１７−１】図17は、本発明者が以前に示したいくつかと同様に、癌細胞移動を阻害することを以前に報告したいくつかの化合物の化学構造を示す。
【図１７−２】同上
【図１７−３】同上
【００４８】
【図１８Ａ】図18A-18Eは、本発明の化合物と様々の他の以前に既知の化学的化合物の生物学的データの要約を示す。
【図１８Ｂ】同上
【図１８Ｃ】同上
【図１８Ｄ】同上
【図１８Ｅ】同上
【００４９】
【図１９】図19A-19Pは、癌転移の特徴である癌細胞移動を阻害することを以前に報告されたコントロール若しくは小分子の培地のいずれかと3日間培養されたヒト幹細胞の写真を示す。19A-19Hは、先にMUCl*抗体表面、C3上で成長因子NME7ABにおいて成長させるが、実験中はNME7ABがない状態で培養されたナイーブ状態幹細胞である。図19I-19Pでは、先に不活性化MEFsの層上で成長因子FGFにおいて育てられたが、実験中はFGFがない状態で培養されたプライムド状態の幹細胞である。
【００５０】
【図２０】図20は、癌細胞移動の測定されたパーセント阻害を示す棒グラフである。使用された癌細胞株はT47D乳癌細胞株である。多ウェルプレートはコラーゲンで覆われ、また、細胞は、細胞が付着するまでウェルの中心に入ることから細胞を制限するカモノハシ・システムを使用して植えつけられた。126時間で細胞から離れたままであるパーセント・エリアは、イメージJを使用し測定され、図示された。テストされた作用薬は次のとおりである:抗MUCl*Fab「E6」、それは生体外で・生体内で、事実上、テストされたすべてのMUCl*陽性細胞の増殖を阻害することが示された; JQ1、それは生体外で・生体内で、癌細胞移動および増殖を阻害することが報告されたBRD4阻害剤;一連の癌細胞の移動の割合を阻害することが他のものによって報告された小分子;及び本発明の新規小分子。
【００５１】
【図２１】図21A-21Pは、126時間での癌細胞移動分析の代表的な写真を示し、そこでは癌細胞は、作用薬のパネルで処置された。もし他の方法で示されなかったならば、小分子は6μM終濃度で投薬された。「＋」あるいは「−」は、各々の作用薬が、ナイーブ/プライムド幹細胞分析でえたスコアを示す。例えば＋＋＋/−は、化合物がナイーブ幹細胞の多分化能および増殖をおおいに阻害したが、プライムド幹細胞に効果がなかったことを示す。図21A細胞は、コントロールPBSで処置された。図21B-21D細胞は、抗MUCl*FabE6で処置された。図21E-21Iは、時間0で、DMSOのコントロール量で処置された細胞を示す。図21F-21GはJQ1で処置された細胞を示す。図21H-21Mは、126時間でDMSOのコントロール量で処置された細胞を示す。図21Jは、新規分子MN1194で処置された細胞を示す。図21Kは、新規分子MN1186で処置された細胞を示す。図21Lは、新規分子MN1137で処置された細胞を示す。図21Nは、新規分子MN1193で処置された細胞を示す。図21Oは、新規分子MN1203で処置された細胞を示す。図21Pは、新規分子MN1184で処置された細胞を示す。
【００５２】
【図２２】図22A-22Xは、癌細胞移動分析の結果を示し、ナイーブ幹細胞多分化能あるいは増殖を阻害した本発明の新規化合物が、癌細胞侵襲あるいは移動を阻害するそれらの能力に関してテストされた。図22A-22Uは、本発明の新規化合物若しくはコントロールのDMSO単独、が存在する状態で、120時間での、T47D乳癌細胞上で行なわれた移動、侵襲分析の写真を示す。図22Vは、多くの化合物のために、時間0、24時間あるいは48時間に、癌細胞移動の測定された阻害を示すグラフである。図22Wは、単位がμMである場合における、濃度の関数として小分子の阻害作用を示すグラフである。図22Xは、本発明の小分子のIC50が、どのように測定され計算されたか示すグラフである。
【００５３】
【図２３】図23A-23Dは、コントロールとして0.2%DMSOでのみ処置された、培養でのヒト線維芽細胞の写真を示す。
【００５４】
【図２４】図24A-24Fは、ヒトナイーブ状態幹細胞(図24A、24D)、ヒトプライムド状態幹細胞(図24B、24E)、あるいはヒト線維芽細胞(図24C、24F)での、不活性鏡像異性体JQ1−(図24D-24F)の効果に対してJQ1＋(図24A-24C)の効果の写真を示す。
【００５５】
【図２５】図25A-25F は、ヒト線維芽細胞始原細胞の増殖に関し、本発明の化合物に対して以前に既知の癌細胞移動阻害剤について比較された、JQ1の効果の写真を示す。
【００５６】
【図２６】図26A-26Hは、幹細胞コントロール実験および以前に既知の化合物、Dorsomorphinでの写真を示す。図26A-26Bは、化合物が溶かされたDMSOと同じ濃度での、プライムド状態幹細胞培養を示す。図26E-26Fは、化合物が溶かされたDMSOの同じ濃度でのナイーブ状態幹細胞培養を示す。図26C-26Dは、プライムド状態幹細胞に対するDorsomorphinの効果を示す。図26G-26Hは、ナイーブ状態幹細胞に対するDorsomorphinの効果を示す。
【００５７】
【図２７−１】図27A-27Fは、先にMUCl*抗体表面C3上で、NME7ABにおいて育てられたが、実験中にNME7ABがない状態で培養され、そしてもし他の方法で示されなかったならば、6μMの終濃度で小分子候補薬によって3日間処置されたヒトナイーブ状態幹細胞の写真を示す。各パネルでは、−又は＋、＋＋、＋＋＋あるいは＋＋＋＋のスコアが与えられ、そこで「‐」によって示された濃度では、幹細胞の多分化能若しくは増殖に候補薬が明白な効果がなかったことを示す。「+」は穏やかな効果を示す。また、"++++"は、多分化能若しくは増殖に対するおおきな効果を示す。増殖の阻害は、幹細胞の層で、ホール若しくはブランクエリアとして観察できる。多分化能の阻害、それは分化の誘導である、は、核のサイズの減少、細胞の伸長および平滑化、或いは細胞の丸まりとプレートからの遊離を伴う細胞サイズの増加として観察される。
【００５８】
【図２７−２】ヒト図27G-27Lは。先にMEF層上で、FGFにおいて育てられたが、実験中にFGFがない状態で培養され、もし他の方法で示されなかったならば、6μMの終濃度で小分子候補薬と3日間処置されたヒトプライムド状態幹細胞について写真を示す。各パネルでは、-、+、++、+++あるいは++++のスコアが与えられ、そこで「‐」によって示された濃度では、幹細胞の多分化能若しくは増殖に、候補薬が明白な効果がなかったことを示す。「+」は穏やかな効果を示す。また、"++++"は、多分化能若しくは増殖に対する大きな効果を示す。プライムド状態幹細胞は、ナイーブ幹細胞のような単一層ではなく定義されたコロニーで成長する。増殖の阻害は、コロニー・サイズの減少とみなすことができる。多分化能の阻害、それはまた分化の誘導である、は、核のサイズの減少、細胞の伸長および平滑化、或いは細胞の丸まりとプレートからの遊離を伴う細胞サイズの増加として観察される。
【００５９】
【図２８−１】図28A-28Lは、異なるヒト幹細胞株に対して行われたコントロール実験の写真を示す。図28A、28B、28E、28Fは、第2のX染色体が再活性化されたという文献によって証拠づけられるような、ナイーブ状態である女性の誘導多能性幹細胞株、iPS 9X、の写真を示す。図28C、28D、28G、28Hは、プライムド状態で幹細胞を維持するbFGFで成長する、ヒト胚性幹細胞株、HES-3、である。図28I-28Lは、ATCCから利用可能な、ヒト線維芽細胞、BJ株の写真を示す。
【図２８−２】同上
【００６０】
【図２９−１】図29A-29Fは、先にMUCl*抗体表面、C3上でNME7ABにおいて育てられるが、実験中はNME7ABがない状態で培養され、もし他の方法で示されなかったならば、6μMの終濃度で小分子候補薬と3日間接触させた、ヒトナイーブ状態幹細胞の写真を示す。各パネルでは、-、+、++、+++あるいは++++のスコアが与えられ、そこで「‐」によって示された濃度では、幹細胞の多分化能若しくは増殖に候補薬が明白な効果がなかったことを示す。「+」は穏やかな効果を示す。また、"++++"は、多分化能若しくは増殖に対するおおきな効果を示す。増殖の阻害は、幹細胞の層で、ホール若しくはブランクの領域と見なすことができる。多分化能の阻害、それはまた分化の誘導である、は、核のサイズの減少、細胞の伸長および平滑化、或いは細胞の丸まりとプレートからの遊離を伴う細胞サイズの増加として観察される。
【００６１】
【図２９−２】図29G-29Lは、先にMEFs上でFGFにおいて育てられるが、実験中はFGFがない状態で培養され、もし他の方法で示されなかったならば、6μMの終濃度で小分子候補薬と3日間接触させた、ヒトプライムド状態幹細胞の写真を示す。各パネルでは、-、+、++、+++あるいは++++のスコアが与えられ、そこで「‐」によって示された濃度では、幹細胞の多分化能若しくは増殖に候補薬が明白な効果がなかったことを示す。「+」は穏やかな効果を示す。また、"++++"は、多分化能若しくは増殖に対するおおきな効果を示す。増殖の阻害は、幹細胞の層で、ホール若しくはブランクの領域と見なすことができる。多分化能の阻害、それはまた分化の誘導である、は、核のサイズの減少、細胞の伸長および平滑化、或いは細胞の丸まりとプレートからの遊離を伴う細胞サイズの増加として観察される。
【００６２】
【図２９−３】図29M-29Rは、もし他の方法で示されなかったならば、6μMの終濃度で小分子候補薬によって3日間処置されたヒト線維芽細胞の写真を示す。各パネルでは、-、+、++、+++あるいは++++のスコアが与えられ、そこで「‐」によって示された濃度では、候補薬が細胞の形態若しくは増殖に明白な効果がなかったことを示す。「+」は穏やかな効果を示す。また、"++++"は、細胞の形態若しくは増殖に対するおおきな効果を示す。
【００６３】
【図３０】図30A-30Fは、薬スクリーニング実験の次のシリーズで使用された幹細胞株でのコントロール実験の写真を示す。
【００６４】
【図３１−１】図31-35 A〜Fは、先にMUC1＊抗体表面、C3上でNME7ABにおいて育てられるが、実験中はNME7ABがない状態で培養され、もし他の方法で示されなかったならば、6μMの終濃度で小分子候補薬と3日間接触させた、ヒトナイーブ状態幹細胞の写真を示す。各パネルでは、-、+、++、+++あるいは++++のスコアが与えられ、そこで「‐」によって示された濃度では、幹細胞の多分化能若しくは増殖に候補薬が明白な効果がなかったことを示す。「+」は穏やかな効果を示す。また、"++++"は、多分化能若しくは増殖に対するおおきな効果を示す。増殖の阻害は、幹細胞の層で、ホール若しくはブランクの領域と見なすことができる。多分化能の阻害、それはまた分化の誘導である、は、核のサイズの減少、細胞の伸長および平滑化、或いは細胞の丸まりとプレートからの遊離を伴う細胞サイズの増加として観察される。
【００６５】
図31-35G〜Lは、先にMEFs上でFGFにおいて育てられるが、実験中はFGFがない状態で培養され、もし他の方法で示されなかったならば、6μMの終濃度で小分子候補薬と3日間接触させた、ヒトプライムド状態幹細胞の写真を示す。各パネルでは、-、+、++、+++あるいは++++のスコアが与えられ、そこで「‐」によって示された濃度では、幹細胞の多分化能若しくは増殖に候補薬が明白な効果がなかったことを示す。「+」は穏やかな効果を示す。また、"++++"は、多分化能若しくは増殖に対するおおきな効果を示す。プライムド状態の幹細胞は、ナイーブ幹細胞のような一定の層ではなく定義されたコロニーで成長する。多分化能の阻害、それはまた分化の誘導である、は、核のサイズの減少、細胞の伸長および平滑化、或いは細胞の丸まりとプレートからの遊離を伴う細胞サイズの増加として観察される。
【００６６】
図31-35 M-Rは、もし他の方法で示されなかったならば、6μMの終濃度で小分子候補薬によって3日間処置されたヒト線維芽細胞の写真を示す。各パネルでは、-、+、++、+++あるいは++++のスコアが与えられ、そこで「‐」によって示された濃度では、候補薬が細胞の形態若しくは増殖に明白な効果がなかったことを示す。「+」は穏やかな効果を示す。また、"++++"は、細胞の形態若しくは増殖に対するおおきな効果を示す。
【図３１−２】同上
【図３１−３】同上
【図３２−１】同上
【図３２−２】同上
【図３２−３】同上
【図３３−１】同上
【図３３−２】同上
【図３３−３】同上
【図３４】同上
【図３５−１】同上
【図３５−２】同上
【図３５−３】同上
【００６７】
【図３６】図36A1-36L4は、120時間で、一連の濃度に本発明の化合物が存在する状態で、若しくはコントロール、DMSOだけ、において、T47D乳癌細胞で行なわれた、癌細胞移動、侵襲分析の写真を示す。
【００６８】
【図３７】図37は、120時間で、一連の濃度に本発明の化合物が存在する状態で、若しくはコントロール、DMSOだけ、において、T47D乳癌細胞で行なわれた、癌細胞移動、侵襲の阻害能に関し、化合物各々の測定されたIC50カーブを示す。
【００６９】
【図３８】図38A1-38R4は、120時間で、一連の濃度に本発明の化合物が存在する状態で、若しくはコントロール、DMSOだけ、において、T47D乳癌細胞で行なわれた、癌細胞移動、侵襲分析の写真を示す。
【００７０】
【図３９】図39は、120時間で、一連の濃度に本発明の化合物が存在する状態で、若しくはコントロール、DMSOだけ、において、T47D乳癌細胞で行なわれた、癌細胞移動、侵襲の阻害能に関し、化合物各々の測定されたIC50カーブを示す。
【００７１】
【図４０】図40A1-40R4は、120時間で、一連の濃度に本発明の化合物が存在する状態で、若しくはコントロール、DMSOだけ、において、T47D乳癌細胞で行なわれた、癌細胞移動、侵襲分析の写真を示す。
【００７２】
【図４１】図41は、120時間で、一連の濃度に本発明の化合物が存在する状態で、若しくはコントロール、DMSOだけ、において、T47D乳癌細胞で行なわれた、癌細胞移動、侵襲の阻害能に関し、化合物各々の測定されたIC50カーブを示す。
【００７３】
【図４２】図42A1-42R4は、122時間で、一連の濃度に本発明の化合物が存在する状態で、若しくはコントロール、DMSOだけ、において、T47D乳癌細胞で行なわれた、癌細胞移動、侵襲分析の写真を示す。
【００７４】
【図４３】図43は、122時間で、一連の濃度に本発明の化合物が存在する状態で、若しくはコントロール、DMSOだけ、において、T47D乳癌細胞で行なわれた、癌細胞移動、侵襲の阻害能に関し、化合物各々の測定されたIC50カーブを示す。
【００７５】
【図４４】図44A1-44R4は、124時間で、一連の濃度に本発明の化合物が存在する状態で、若しくはコントロール、DMSOだけ、において、T47D乳癌細胞で行なわれた、癌細胞移動、侵襲分析の写真を示す。
【００７６】
【図４５】図45は、124時間で、一連の濃度に本発明の化合物が存在する状態で、若しくはコントロール、DMSOだけ、において、T47D乳癌細胞で行なわれた、癌細胞移動、侵襲の阻害能に関し、化合物各々の測定されたIC50カーブを示す。
【００７７】
【図４６】図46A-46Fは、試験化合物にあるように、DMSOの同じ濃度で処置された、コントロール幹細胞および繊維芽細胞の写真を示す。図46A-46Cは、10X拡大写真である。図46D-46Fは、20X拡大写真である。図46Aと46Dはナイーブ状態幹細胞の写真である。図46Bおよび46Eはプライムド状態の幹細胞の写真である。図46Cおよび46Fはヒト線維芽細胞の写真である。
【００７８】
【図４７−１】図47-49 A〜Fは、先にMUC1＊抗体表面、C3上でNME7ABにおいて育てられるが、実験中はNME7ABがない状態で培養され、6μMの終濃度で小分子候補薬と24時間接触させた、ヒトナイーブ状態幹細胞の写真を示す。各パネルでは、-、+、++、+++あるいは++++のスコアが与えられ、そこで「‐」によって示された濃度では、幹細胞の多分化能若しくは増殖に候補薬が明白な効果がなかったことを示す。「+」は穏やかな効果を示す。また、"++++"は、多分化能若しくは増殖に対するおおきな効果を示す。増殖の阻害は、幹細胞の層で、ホール若しくはブランクの領域と見なすことができる。多分化能の阻害、それはまた分化の誘導である、は、核のサイズの減少、細胞の伸長および平滑化、或いは細胞の丸まりとプレートからの遊離を伴う細胞サイズの増加として観察される。
【００７９】
【図４７−２】図47-49G〜Lは、先にMEFs上でFGFにおいて育てられるが、実験中はFGFがない状態で培養され、6μMの終濃度で小分子候補薬と24時間接触させた、ヒトプライムド状態幹細胞の写真を示す。各パネルでは、-、+、++、+++あるいは++++のスコアが与えられ、そこで「‐」によって示された濃度では、幹細胞の多分化能若しくは増殖に候補薬が明白な効果がなかったことを示す。「+」は穏やかな効果を示す。また、"++++"は、多分化能若しくは増殖に対するおおきな効果を示す。プライムド状態の幹細胞は、ナイーブ幹細胞のような一定の層ではなく定義されたコロニーで成長する。多分化能の阻害、それはまた分化の誘導である、は、核のサイズの減少、細胞の伸長および平滑化、或いは細胞の丸まりとプレートからの遊離を伴う細胞サイズの増加として観察される。
【００８０】
【図４７−３】図47-49M-Rは、6μMの終濃度で小分子候補薬によって3日間処置されたヒト線維芽細胞の写真を示す。各パネルでは、-、+、++、+++あるいは++++のスコアが与えられ、そこで「‐」によって示された濃度では、候補薬が細胞の形態若しくは増殖に明白な効果がなかったことを示す。「+」は穏やかな効果を示す。また、"++++"は、細胞の形態若しくは増殖に対するおおきな効果を示す。
【図４８−１】同上  図４７−１
【図４８−２】同上  図４７−２
【図４８−３】同上  図４７−３
【図４９−１】同上  図４７−１
【図４９−２】同上  図４７−２
【図４９−３】同上  図４７−３
【００８１】
【図５０】図50A-50Fは、細胞が、試験化合物にあるように、DMSOの同じ濃度で処置された場合の、実験の次のセットのためのコントロール幹細胞および繊維芽細胞の写真を示す。図50A-50Cは、10X拡大写真である。図50D-50Fは、20X拡大写真である。図50Aと50Dはナイーブ状態幹細胞の写真である。図50Bおよび50Eは、プライムド状態の幹細胞の写真である。図50Cおよび50Fは、ヒト線維芽細胞の写真である。
【００８２】
【図５１−１】図51-54 A〜Fは、先にMUC1＊抗体表面、C3上でNME7ABにおいて育てられるが、実験中はNME7ABがない状態で培養され、6μMの終濃度で小分子候補薬とブリーフ24時間接触させた、ヒトナイーブ状態幹細胞の写真を示す。各パネルでは、-、+、++、+++あるいは++++のスコアが与えられ、そこで「‐」によって示された濃度では、幹細胞の多分化能若しくは増殖に候補薬が明白な効果がなかったことを示す。「+」は穏やかな効果を示す。また、"++++"は、多分化能若しくは増殖に対するおおきな効果を示す。増殖の阻害は、幹細胞の層で、ホール若しくはブランクの領域と見なすことができる。多分化能の阻害、それはまた分化の誘導である、は、核のサイズの減少、細胞の伸長および平滑化、或いは細胞の丸まりとプレートからの遊離を伴う細胞サイズの増加として観察される。
【００８３】
【図５１−２】図51-54GLは、先にMEFs上でFGFにおいて育てられるが、実験中はFGFがない状態で培養され、6μMの終濃度で小分子候補薬とブリーフ24時間接触させた、ヒトプライムド状態幹細胞の写真を示す。各パネルでは、-、+、++、+++あるいは++++のスコアが与えられ、そこで「‐」によって示された濃度では、幹細胞の多分化能若しくは増殖に候補薬が明白な効果がなかったことを示す。「+」は穏やかな効果を示す。また、"++++"は、多分化能若しくは増殖に対するおおきな効果を示す。プライムド状態の幹細胞は、ナイーブ幹細胞のような一定の層ではなく定義されたコロニーで成長する。多分化能の阻害、それはまた分化の誘導である、は、核のサイズの減少、細胞の伸長および平滑化、或いは細胞の丸まりとプレートからの遊離を伴う細胞サイズの増加として観察される。
【００８４】
【図５１−３】図51-54M-Rは、6μMの終濃度で小分子候補薬によって3日間処置されたヒト線維芽細胞の写真を示す。各パネルでは、-、+、++、+++あるいは++++のスコアが与えられ、そこで「‐」によって示された濃度では、候補薬が細胞の形態若しくは増殖に明白な効果がなかったことを示す。「+」は穏やかな効果を示す。また、"++++"は、細胞の形態若しくは増殖に対するおおきな効果を示す。
【図５２−１】同上  図５１−１
【図５２−２】同上  図５１−２
【図５２−３】同上  図５１−３
【図５３−１】同上  図５１−１
【図５３−２】同上  図５１−２
【図５３−３】同上  図５１−３
【図５４−１】同上  図５１−１
【図５４−２】同上  図５１−２
【図５４−３】同上  図５１−３
【００８５】
【図５５】図55A-55Fは、細胞が、試験化合物にあるように、DMSOの同じ濃度で処置された場合における、実験の次のセットのためのコントロール幹細胞および繊維芽細胞の写真を示す。図55A-55Cは、10X拡大写真である。図55D-55Fは、20X拡大写真である。図55Aと55Dは、ナイーブ状態幹細胞の写真である。図55Bおよび55Eは、プライムド状態の幹細胞の写真である。図55Cおよび55Fは、ヒト線維芽細胞の写真である。
【００８６】
【図５６−１】図56-64 A〜Fは、先にMUC1＊抗体表面、C3上でNME7ABにおいて育てられるが、実験中はNME7ABがない状態で培養され、6μMの終濃度で小分子候補薬とブリーフ24時間接触させた、ヒトナイーブ状態幹細胞の写真を示す。各パネルでは、-、+、++、+++あるいは++++のスコアが与えられ、そこで「‐」によって示された濃度では、幹細胞の多分化能若しくは増殖に候補薬が明白な効果がなかったことを示す。「+」は穏やかな効果を示す。また、"++++"は、多分化能若しくは増殖に対するおおきな効果を示す。増殖の阻害は、幹細胞の層で、ホール若しくはブランクの領域と見なすことができる。多分化能の阻害、それはまた分化の誘導である、は、核のサイズの減少、細胞の伸長および平滑化、或いは細胞の丸まりとプレートからの遊離を伴う細胞サイズの増加として観察される。
【００８７】
【図５６−２】図56-64GLは、先にMEFs上でFGFにおいて育てられるが、実験中はFGFがない状態で培養され、6μMの終濃度で小分子候補薬とブリーフ24時間接触させた、ヒトプライムド状態幹細胞の写真を示す。各パネルでは、-、+、++、+++あるいは++++のスコアが与えられ、そこで「‐」によって示された濃度では、幹細胞の多分化能若しくは増殖に候補薬が明白な効果がなかったことを示す。「+」は穏やかな効果を示す。また、"++++"は、多分化能若しくは増殖に対するおおきな効果を示す。プライムド状態の幹細胞は、ナイーブ幹細胞のような一定の層ではなく定義されたコロニーで成長する。多分化能の阻害、それはまた分化の誘導である、は、核のサイズの減少、細胞の伸長および平滑化、或いは細胞の丸まりとプレートからの遊離を伴う細胞サイズの増加として観察される。
【００８８】
【図５６−３】図56-64M-Rは、6μMの終濃度で小分子候補薬によって3日間処置されたヒト線維芽細胞の写真を示す。各パネルでは、-、+、++、+++あるいは++++のスコアが与えられ、そこで「‐」によって示された濃度では、候補薬が細胞の形態若しくは増殖に明白な効果がなかったことを示す。「+」は穏やかな効果を示す。また、"++++"は、細胞の形態若しくは増殖に対するおおきな効果を示す。
【図５７−１】同上  図５６−１
【図５７−２】同上  図５６−２
【図５７−３】同上  図５６−３
【図５８−１】同上  図５６−１
【図５８−２】同上  図５６−２
【図５８−３】同上  図５６−３
【図５９−１】同上  図５６−１
【図５９−２】同上  図５６−２
【図５９−３】同上  図５６−３
【図６０−１】同上  図５６−１
【図６０−２】同上  図５６−２
【図６０−３】同上  図５６−３
【図６１−１】同上  図５６−１
【図６１−２】同上  図５６−２
【図６１−３】同上  図５６−３
【図６２−１】同上  図５６−１
【図６２−２】同上  図５６−２
【図６２−３】同上  図５６−３
【図６３−１】同上  図５６−１
【図６３−２】同上  図５６−２
【図６３−３】同上  図５６−３
【図６４−１】同上  図５６−１
【図６４−２】同上  図５６−２
【図６４−３】同上  図５６−３
【００８９】
【図６５】図65 A-Lは、示された濃度の化合物の単一添加での120時間後の、T47D乳癌細胞の移動を阻害するその能力に関して、新規化合物1420の効果がテストされる癌細胞移動の分析の写真を示す。
【００９０】
【図６６】図66A1-66R4は、示された濃度の化合物の単一添加での120時間後の、T47D乳癌細胞の移動を阻害するその能力に関して、本発明化合物の効果がテストされる癌細胞移動の分析の写真を示す。
【００９１】
【図６７】図67A1-67R4は、示された濃度の化合物の単一添加での120時間後の、T47D乳癌細胞の移動を阻害するその能力に関して、本発明化合物の効果がテストされる癌細胞移動の分析の写真を示す。
【００９２】
【図６８】図68A1-68H3は、示された濃度の化合物の単一添加での120時間後の、T47D乳癌細胞の移動を阻害するその能力に関して、本発明化合物の効果がテストされる癌細胞移動の分析の写真を示す。
【００９３】
【図６９】図69A1-69K3は、示された濃度の化合物の単一添加での120時間後の、T47D乳癌細胞の移動を阻害するその能力に関して、本発明化合物の効果がテストされる癌細胞移動の分析の写真を示す。
【００９４】
【図７０】図70A1-70I2は、示された濃度の化合物の単一添加での120時間後の、T47D乳癌細胞の移動を阻害するその能力に関して、本発明化合物の効果がテストされる癌細胞移動の分析の写真を示す。
【００９５】
【図７１】図71-75は、120時間で、一連の濃度に本発明の化合物が存在する状態で、若しくはコントロール、DMSOだけ、において、T47D乳癌細胞で行なわれた、癌細胞移動、侵襲の阻害能に関し、化合物各々の測定されたIC50カーブを示す
【図７２】同上
【図７３】同上
【図７４】同上
【図７５】同上
【００９６】
【図７６】図76A1-76L3は、示された濃度の化合物の単一添加での120時間後の、T47D乳癌細胞の移動を阻害するその能力に関して、本発明化合物の効果がテストされる癌細胞移動の分析の写真を示す。
【００９７】
【図７７】図77A1-77R4は、示された濃度の化合物の単一添加での120時間後の、T47D乳癌細胞の移動を阻害するその能力に関して、本発明化合物の効果がテストされる癌細胞移動の分析の写真を示す。
【００９８】
【図７８】図78A1-78T3は、示された濃度の化合物の単一添加での120時間後の、T47D乳癌細胞の移動を阻害するその能力に関して、本発明化合物の効果がテストされる癌細胞移動の分析の写真を示す。
【００９９】
【図７９】図79-80は、120時間で、一連の濃度に本発明の化合物が存在する状態で、若しくはコントロール、DMSOだけ、において、T47D乳癌細胞で行なわれた、癌細胞移動、侵襲の阻害能に関し、化合物各々の測定されたIC50カーブを示す。
【図８０】同上
【０１００】
【図８１】図81A1-81J4は、示された濃度の化合物の単一添加での120時間後の、ハーセプチン耐性乳癌細胞株、BT474-耐性の移動を阻害するその能力に関して、本発明化合物の効果がテストされる癌細胞移動の分析の写真を示す。
【０１０１】
【図８２】図82は、120時間で、一連の濃度に本発明の化合物が存在する状態で、若しくはコントロール、DMSOだけ、において、ハーセプチン耐性乳癌細胞株、BT474-耐性、akaBT-Res2で行なわれた、癌細胞移動、侵襲の阻害能に関し、化合物各々の測定されたIC50カーブを示す。
【０１０２】
【図８３】図83A1-83F4は、癌細胞移動分析の写真を示し、本発明の化合物の効果が、HCT-MUCl*の移動を阻害するそれらの能力に関してテストされた。それは、MUC1-陰性HCT-116結腸癌細胞が成長因子レセプターMUCl*で安定してトランスフェクトされた加工細胞株である。本発明の化合物は、一連の濃度に添加され、イメージが該化合物の添加後72時間で得られた。
【０１０３】
【図８４】図84は、72時間で、一連の濃度に本発明の化合物が存在する状態で、若しくはコントロール、DMSOだけ、において、HCT-MUCl*癌細胞で行なわれた、癌細胞移動、侵襲の阻害能に関し、化合物各々の測定されたIC50カーブを示す。
【０１０４】
【図８５】図85A1-85J4は、癌細胞移動分析の写真を示し、そこにおいて、本発明の化合物の効果が、BT20s、3倍陰性乳癌細胞株の移動を阻害するそれらの能力に関してテストされた。本発明の化合物は、一連の濃度に添加され、また、イメージは化合物の添加72時間後に得られた。
【０１０５】
【図８６】図86は、72時間で、一連の濃度に本発明の化合物が存在する状態で、若しくはコントロール、DMSOだけ、において、BT20s 、3倍陰性乳癌細胞で行なわれた、癌細胞移動、侵襲の阻害能に関し、化合物各々の測定されたIC50カーブを示す。
【０１０６】
【図８７】図87A1-87J4は、癌細胞移動の分析の写真を示し、そこで、本発明の化合物の効果が、MUC1陰性HCT-116結腸癌細胞の移動を阻害するそれらの能力に関してテストされた。本発明の化合物は、一連の濃度に添加され、また、イメージは化合物の添加72時間後に得られた。
【０１０７】
【図８８】図88は、72時間で、一連の濃度に本発明の化合物が存在する状態で、若しくはコントロール、DMSOだけ、において、HCT-116結腸癌細胞で行なわれた、癌細胞移動、侵襲の阻害能に関し、化合物各々の測定されたIC50カーブを示す。
【０１０８】
【図８９−１】図89A-89Hは、示された濃度の本発明の化合物で72時間処置された、ナイーブ状態幹細胞のRT-PCR測定のグラフを示し、そこでは測定された遺伝子は、AXIN2、ベータ・カテニンのための代用物、加えて、HES3、GNAS、VLDLR、EXTl、FBXL17、RHOC、及びGREB 1Lであり、これらはすべて分化の誘導にとって重要なスーパーエンハンサー標的遺伝子である。
【図８９−２】同上
【０１０９】
【図９０】図90A-90Cは、示された濃度の本発明の化合物で72時間処置された、癌細胞のRT-PCR測定のグラフを示し、そこで測定された遺伝子は、AXIN2、ベータ・カテニンのための代用物、それは分化が引き起こされるとともに阻害される、加えて、NME7ABおよびNME7-X1であり、それは転移性の成長因子である。
【０１１０】
【図９１】図91A-91Cは、示された濃度で本発明の化合物で72時間処置されたナイーブ状態幹細胞のRT-PCR測定のグラフを示し、そこで測定される遺伝子は、micro-RNA-145、それらは幹細胞分化の前兆である。
【０１１１】
【図９２】図92A-92Cは、示された濃度で本発明の化合物で72時間処置されたT47D癌細胞のRT-PCR測定のグラフを示し、そこで測定される遺伝子は、micro-RNA-145、それらは幹細胞分化の前兆である、である
【発明を実施するための形態】
【０１１２】
定義
【０１１３】
本願において、「a」「an」は、単一および複数の対象の両方を参照するために使用される。
【０１１４】
ここに使用されるように、「about」（約）あるいは「substantially」（実質的に）の文言は、一般に、正確な数に制限されることからの余地を提供する。例えば、ポリペプチド配列の長さのコンテキストで使用されるように、「約」あるいは「実質的に」は、ポリペプチドがアミノ酸の参照された数に制限されたものではないことを示す。少数のアミノ酸がN末端若しくはC末端に付加する又はN末端若しくはC末端からの欠失は、その結合活性のような機能的な活性が存在する限り、包含される。
【０１１５】
ここに使用されるように、1若しくはそれ以上のさらなら治療剤との“組み合わせ”での投与は、同時に、伴って、及び任意の順に連続する投与を含む。
【０１１６】
ここに使用されるように、「キャリアー」は、使用された量と濃度でそれに露出した（処置された）細胞若しくは哺乳動物へ無毒な、薬学的に受容可能なキャリアー、添加剤あるいは安定剤を含む。多くの場合、薬学的に受容可能なキャリアーは水性のpH緩衝液である。薬学的に受容可能なキャリアーの例は、制限なしで、リン酸塩、クエン酸塩および他の有機酸のような緩衝液;  アスコルビン酸を含む酸化防止剤;  低分子量(約10残基未満)ポリペプチド;  血清アルブミン、ゼラチンあるいは免疫グロブリンのようなタンパク質;  ポリビニルピロリドンのような親水性重合体;  グリシン、グルタミン、アスパラギン、アルギニンあるいはリジンのようなアミノ酸;  単糖類、二糖類、およびブドウ糖、マンノースあるいはデキストリンを含む他の炭水化物;  EDTAのようなキレート剤;  マンニトールまたはソルビトールのような糖アルコール;  ナトリウムのような塩形成対イオン;  またはTWEEN登録商標、ポリエチレングリコール(PEG)およびPLURONICS登録商標のような非イオン性界面活性剤、を含む。
【０１１７】
ここに使用されるように「薬学的に受容可能なキャリアー及び/又は希釈剤」は、全ての溶剤、分散培地、コーティング抗菌および抗カビ剤、等張剤、及び吸収遅延作用薬およびその他同種のものを含む。培地および薬学的活性質の作用薬の使用は、当該技術分野において周知である。どんな従来の培地あるいは作用薬も有効成分と相容れないものでない限り、その治療組成物でのその使用は考慮される。補足的な有効成分も組成に組み入れることができる。
【０１１８】
投与のしやすさおよび量の均一性のための投与単位形式の非経口組成物を製剤化することは特に有利である。ここに使用されるような投与単位形式は、哺乳類対象物が処置されるべき単一の量として適した物理的に別々の単位を指す;  活性剤の前もって定義した量を含む単位はそれぞれ要求された薬剤のキャリアーと協力して所望の治療効果を生むために計算された。本発明の投与単位形式の明細は、(a)活性剤特異的な特性および達成されるべき格別の治療効果、および(b)肉体の健康が害される病気の状態をもつ対象における疾病の治療用の活性剤のような、調剤技術における本来的な制限によって必須とするものに依存する又は該制限に直接に依存する。
【０１１９】
主要な有効成分は、投与単位形式において、適切な薬学的に受容可能なキャリアーを、便宜な有効な投与のために、有効量で調剤される。単位投与剤形は、例えば、0.5μgから約2000 mgまで幅がある量で、主要活性化合物を含むことができる。比例して発現されるなら、活性化合物は、キャリアーの約0.5μg/mlから、に、一般に、存在する。補足の有効成分を含む組成の場合には、投与量は、当該成分の投与の常用量および投与方法を参照して決定される。
【０１２０】
用語「MUC1成長因子レセプター」(MGFR)は、機能的な定義であり、MUClレセプターのその部分を意味し、それは、細胞増殖を促進するために、成長因子のような活性化リガンド又は開裂酵素のような修飾酵素と反応する。MUClのMGFR部位は、細胞表面に接近している、及びMGFR(PSMGFR)の一次配列によって殆どすべてが定義される、その細胞外の部分である。MGFRは、未修飾ペプチド、および例えばリン酸化、グリコシレーションなどのような酵素修飾を受けたペプチドの両方を包括する。本発明の結果は、この部位が、細胞からのIBRのいくらか若しくはすべての遊離を引き起こす腫瘍形成に関連したサイトで、MUC1開裂に関し、該リガンドにアクセス可能になるメカニズムと一致している。MGFRは、また、MUCl*として知られている。
【０１２１】
下記に定義されるように、用語、「MUC1成長因子レセプターの一次配列」(PSMGFR)あるいは「FLR」は、いくつかの場合でMGFRの大部分あるいはすべて、及び該ペプチド配列の機能的なバリアント及び断片、を定義する。
PSMGFRは、表１にリストされる配列番号3及び20まで(つまり1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19あるいは20)のアミノ酸置換の整数値をもつそれの機能的バリアント及び断片の全て、及び／又はそのN末端及び／又はC末端で20までのアミノ酸付加若しくは欠失のいかなる整数値をもつそれの機能的バリアント及び断片の全て、を定義する。上記のコンテキスト中の「機能的なバリアント若しくは断片」は、配列番号3のペプチドに特異的に結合するか若しくは特異的に反応する能力をもつ、配列番号3のペプチドに特異的に結合するか若しくは特異的に反応するリガンドをもつ、バリアント若しくは断片を参照する。配列番号3のPSMGFRペプチドの機能的なバリアントであるPSMGFRの1つの例 (nat-PSMGFRと参照 - 「native」の意味)は、配列番号11(var-PSMGFRと参照)であり、それは、native-SRYの代わりに‐SPY‐配列を含むことで、nat-PSMGFRと異なる (配列表の太文字を参照)。nativeの型と比較された時、var-PSMGFRは立体的の安定性を増強しており、それは抗体産生のためにのようなある適用にとって重要である。PSMGFRは、未修飾ペプチド、及び例えばリン酸化、グリコシレーションなどのような酵素修飾を受けたペプチドの両方を包括する。
【０１２２】
ここに使用されるように、用語「PSMGFR」は、
GTINVHDVETQFNQYKTEAASRYNLTISDVSVSDVPFPFSAQSGA(配列番号: 3)
として記述されるMUC1成長因子レセプターの一次配列の頭字語である。この点では、「N-10 PSMGFR」、「N-15 PSMGFR」あるいは「N-20 PSMGFR」での「N-数」は、PSMGFRのN末端で欠失されたアミノ酸残基の数を指す。同様に「C10 PSMGFR」、「C15 PSMGFR」あるいは「C-20 PSMGFR」での「C-数」は、PSMGFRのC末端で欠失されたアミノ酸残基の数を指す。
【０１２３】
ここに使用されるように、「MUC1 *の細胞外領域」はタンデムリピート領域が欠けているMUC1タンパク質の細胞外の部分を指す。ほとんどの場合、MUCl*は、MUCl*部分が、縦列反復が欠けている短い細胞外領域、膜貫通領域および細胞質尾部から成る、開裂産物である。恐らく1つを超える酵素によってそれを開裂することができるように見えるので、MUC1の開裂の正確な位置は知られていない。MUCl*の細胞外領域は、ほとんどのPSMGFR配列を含むが、付加的に10-20のN-末端アミノ酸があってもよい。
【０１２４】
ここに使用されるように、1-10と番号付けられた「NMEファミリータンパク質」あるいは「NMEファミリーメンバータンパク質」は、それらすべてに少なくとも1つのNDPK(ヌクレオチド・ピロ燐酸塩キナーゼ)領域をもつので、一まとめにされたタンパク質である。ある場合には、NDPK領域は、ADPへのATPの転換を触媒することができる点では機能的ではない。NMEタンパク質は、以前は、HIとH2と番号付けられたNM23タンパク質として知られていた。最近、10もの(10)NMEファミリーメンバーが同定された。ここに、NM23とNMEという用語は互換的である。ここに、用語NME1、NME2、NME5、NME6、NME7、NME8およびNME9は、NMEバリアントと同様に天然蛋白質も参照するために使用される。ある場合には、これらのバリアントは、より可溶か、あるいは大腸菌において一層よく発現するか、天然の配列タンパク質より可溶である。例えば、明細書で使用されるようなNME7は、天然蛋白質又は、変異が大腸菌中の可溶の、適切に折り畳まれたタンパク質の高収率発現を許容するので、優れた商用適用可能性を持っているNME7-ABのような、バリアントを意味する場合がある。NME7-ABは主としてNME7 AおよびB領域から成るが、天然蛋白質のN末端にある、ほとんどのDM10領域(配列番号: 12)が欠けている。ここに引用されるような「NME1」は、「NM23-H1」と互換可能である。本発明は、NMEタンパク質の正確な配列によって制限されていないことはさらに意図される。NM23-S 120Gと呼ばれる突然変異体NME1-S 120Gは、本願の全体にわたって互換的に使用される。S 120G突然変異体およびP96S突然変異体は、二量体形成に対するそれらの指向性のために好適であるが、NM23二量体、NME1二量体あるいは二量体NME1若しくは二量体NM23として、ここに参照される。
【０１２５】
ここに参照されるようなNME7は、分子量が約42kDaをもつ、天然NME7を意味するように意図される。
【０１２６】
「NME7のファミリー」は、約30kDa、33kDaの分子量をもつ天然に生じた若しくは人工的に創生された開裂型、約25kDaの分子量をもつ開裂型、NME7b、NME7-X1、NME7-ABあるいは組み換えのNME7タンパク質のような配列番号５によって表されるNME7の約１〜９５のアミノ酸NME7である、DM10リーダー配列（配列番号12）を欠く若しくは部分的に欠くバリアント、NME7 をより効果的若しくは商業的により価値あるようにする、優れた発現、産生率の増加、溶解性若しくは他の特性を可能にするように、その配列が変異されたこれらのバリアント、と同様に、完全長NME7を参照する。「NME7のファミリー」は、さらに「NME7-ABのような」タンパク質を含んでもよく、それは、癌細胞で発現される30〜33kDaの範囲のタンパク質である。
【０１２７】
ここに使用されるように、「分化を引き起こす、幹細胞多分化能を阻害する若しくは幹細胞の増殖を阻害する」作用薬は、タンパク質、小分子あるいは核酸を参照し、それは、単独で若しくは組み合わせで、幹細胞を、プライムド状態において或いはナイーブ状態において、分化をおこす、幹細胞多分化能若しくは幹細胞成長を阻害することをおこす。そのような作用薬の例は、SMAD阻害剤およびdorsomorphinを含む。
【０１２８】
ここに使用されるように、プライムド幹細胞に関して「ナイーブ状態においてアップレギュレートされた遺伝子の発現あるいは活性を阻害する」作用薬は、タンパク質、小分子あるいは核酸を参照し、それは、単独で若しくは組み合わせで、ナイーブ幹細胞において正常にアップレギュレートされた遺伝子の阻害を引き起こす。そのような作用薬の例は、siRNA、アンチセンス核酸および小分子を含む。
【０１２９】
ここに使用されるように、プライムド幹細胞に関して「ナイーブ状態においてダウンレギュレートされた遺伝子の発現あるいは活性を増加させる」作用薬は、タンパク質、小分子あるいは核酸を参照し、それは、単独で若しくは組み合わせで、ナイーブ幹細胞において正常にダウンレギュレートされた遺伝子のアップレギュレーションを引き起こす。そのような作用薬の例は、ビメンチン、フィブロネクチンおよびNF1 及びmiR-145のようなmicroRNAsのような、分化を示すタンパク質をコードする遺伝子を含む。
【０１３０】
ここに使用されるように、繊維芽細胞に関して「ナイーブ状態においてアップレギュレートされた遺伝子の発現あるいは活性を阻害する」作用薬は、タンパク質、小分子あるいは核酸を参照し、それは、単独で若しくは組み合わせで、ナイーブ幹細胞中の通常アップレギュレートされた遺伝子の阻害を引き起こす。そのような作用薬の例は、ビメンチン、フィブロネクチン、NF1あるいはそれら自身の遺伝子産物をコードする遺伝子、多分化能遺伝子OCT4、 SOX2、KLF4あるいはc-Myc、への特異的siRNA、或いはアンチセンス核酸を含む。
【０１３１】
ここに使用されるように、繊維芽細胞に関して、「ナイーブ状態においてダウンレギュレートされた遺伝子の発現若しくは活性を増加させる」作用薬は、タンパク質、小分子あるいは核酸を参照し、それは、単独で若しくは組み合わせで、ナイーブ幹細胞中の正常においてダウンレギュレートされた遺伝子のアップレギュレーションを引き起こす。そのような作用薬の例は、ダウンレギュレートされた遺伝子をコードする核酸あるいはタンパク質それら自身、およびSMAD阻害剤、dorsomorphinおよびその他同種のもののような分化を引き起こす作用薬を含む。
【０１３２】
ここに使用されるように、「多分化能を促進する」あるいは、「幹様若しくは癌様の状態への体細胞を振り向ける」作用薬は、タンパク質、小分子あるいは核酸を参照し、それは、単独で若しくは組み合わせで、あるいは遺伝子的兆候がより幹細胞若しくは癌細胞に密接に似ているものに変異するように、ある遺伝子の発現を、誘導若しくは阻害する。実例は、NME1二量体、NME7、NME7-X1、NME7-AB、2i、5i、「MBD3、CHD4、BRD4、あるいはJMJD6の発現を阻害するsiRNAのような核酸」、「NDPK領域を収容する領域を好適にもつ、ヒトNME1、NME2、NME5、NME6、NME7、NME 8、あるいはNME9への高い配列相同性がある、微生物のNMEタンパク質」を含み、限定されない。
【０１３３】
ここに使用されるように、「小分子」と呼ばれる作用薬に関して、それは、50Daと2000Daの間、好適には150daと1000daの間、より好適には200Daと750Daの間の分子量をもつ分子を基礎にする、合成化学若しくは化学的な分子でありうる。
【０１３４】
ここに使用されるように、分子が自然界において存在する限り、「天然産物」と呼ばれている作用薬に関して、それは化学分子あるいは生体分子でありうる。
【０１３５】
用語「癌」は、ここに使用されるように、次のものを含み、それらに制限されない:胆道癌;膀胱癌;膠芽腫とmedulloblastomasを含む脳腫瘍;乳癌;子宮頸癌;絨毛癌;結腸癌;子宮内膜癌;食道癌;胃癌;急性リンパ球・骨髄性白血病を含む血液の新生物;多発性骨髄腫; AIDSの関連する白血病および成人T細胞白血病リンパ腫;ボーエン病とパジェットを含む上皮内の新生物疾病;肝臓癌;肺癌;ホジキン病とリンパ球性リンパ腫を含むリンパ腫;神経芽細胞腫;扁平上皮癌を含む口腔癌;上皮細胞、間質細胞、生殖細胞および間充織細胞から発生するものを含む卵巣癌;膵臓癌;前立腺癌;結腸癌、直腸癌;平滑筋肉腫、横紋筋肉腫、脂肪肉腫、繊維肉腫および骨肉腫を含む肉腫;皮膚癌を含む黒色腫、カポジ肉腫、basocellular癌および扁平上皮癌;精上皮腫のような胚の腫瘍、非精上皮腫(奇形腫、絨毛癌)およびストロマの腫瘍および胚細胞腫瘍を含む睾丸癌;甲状の腺癌および髄様癌を含む甲状腺癌;また腺癌とウィルムス腫瘍を含む腎臓癌。
好ましい癌は以下である;乳、前立腺、結腸、肺、卵巣、結腸直腸、また脳の腫瘍。良性若しくは有害な型の新生物も癌の状態の範囲内に考慮される。
【０１３６】
ここに記述されるような用語「癌治療」は、次のものを含み、それに制限さない:化学療法、放射線療法、合併療法あるいは前述の方法の任意のコンビネーション。変わるかもしれない治療の様相は次のものを含み、それに制限されない：量、投与のタイミングあるいは期間若しくは療法;
そして、他の治療と組み合わせることも可能であるし、組み合わせないこともありえ、それはさらに量、タイミングあるいは期間において異なりうる。癌の別の治療法は外科である。それは単独であるいは前述の治療方法のうちのいずれかと組み合わせで利用することができる。医術技術のうちの通常技術の1つは適切な治療を決定可能である。
【０１３７】
ここに使用されるように、「炎症性疾患」若しくはコンデションは、特別の領域で非特異性の免疫反応を含む免疫反応によって特徴づけられる疾病または症状を指す。
そのような疾病あるいは症状は、以下を含み、そしてそれらに制限されない；慢性関節リウマチ、炎症性の腸症候群、クローン病、変形性関節症、喘息、皮膚炎、乾癬、嚢胞性繊維症、遅延性移植および慢性の実質器官拒絶、多発性硬化症、全身性紅斑性狼瘡、シェーグレン症候群、橋本甲状腺炎、多発性筋炎、強皮症、アジソン病、白斑、悪性貧血、糸球体腎炎、肺線維症、自己免疫性の糖尿病、糖尿病性網膜症、鼻炎、乏血再潅流傷害、ポスト血管形成術再狭窄、慢性閉塞性肺疾患(COPD)、グレーブス病、消化管アレルギー、結膜炎、アテローム性動脈硬化、冠動脈疾患、狭心症、癌転移、小動脈疾病あるいはミトコンドリアの疾病。
【０１３８】
ここに使用されるように、「体サンプル」は対象から得られた任意の体組織または体液のサンプルを指す。体液、例えばリンパ、唾液、血液、尿、ミルク、乳分泌などが好適である。血液はある態様において好適である。ここに記述された様々な方法で使用される組織及び/又は細胞のサンプルは、次のものを含み、これらに限定されない、標準法によって得ることができる:細切採取法および細胞擦過を含む組織生検、針生検、また吸引あるいは他の方法による、採血あるいは他の体液の採取。
【０１３９】
「対象」は、ここに使用されるように、任意の哺乳動物(好適には人間)、およびできれば対象内のサイトへの本発明組成物の投与により治療されうる疾病がある哺乳動物を指す。例えば、ヒト、ヒト以外の霊長類、牛、馬、ブタ、羊、ヤギ、犬あるいは猫を含む。一般に、本発明はヒトでの使用を指向する。
【０１４０】
ここに使用されるように、「MUC1-陽性癌」あるいは「MUCl*-陽性癌」は、MUC1の異常な発現によって特徴づけられる癌を参照し、そこで、異常とは、MUC1遺伝子若しくは遺伝子産物の過剰発現、あるいは、健康な状態で、細胞の頂縁あるいは菅腔縁に限定される正常なMUCl若しくはMUCl*の発現パターンの損失、又は開裂されそして細胞表面から流失したMUC1の量の増加を参照する。
【０１４１】
配列表フリーテキスト
【０１４２】
a、g、c、t以外のヌクレオチド・シンボルの使用については、それらは、WIPO標準ST.25、付則2、表１で特定された協定に従い、そこではkはtまたはgを表わす; nはa、c、tあるいはgを表わす; mはaあるいはc表す; rはaあるいはgを表す; sはcまたはgを表わす; wはaあるいはtを表わし、yはcまたはtを表わす。
【０１４３】
MTPGTQSPFF LLLLLTVLTV VTGSGHASST PGGEKETSAT QRSSVPSSTE KNAVSMTSSV LSSHSPGSGS STTQGQDVTL APATEPASGS AATWGQDVTS VPVTRPALGS TTPPAHDVTS APDNKPAPGS TAPPAHGVTS APDTRPAPGS TAPPAHGVTS APDTRPAPGS TAPPAHGVTS APDTRPAPGS TAPPAHGVTS APDTRPAPGS TAPPAHGVTS APDTRPAPGS TAPPAHGVTS APDTRPAPGS TAPPAHGVTS APDTRPAPGS TAPPAHGVTS APDTRPAPGS TAPPAHGVTS APDTRPAPGS TAPPAHGVTS APDTRPAPGS TAPPAHGVTS APDTRPAPGS TAPPAHGVTS APDTRPAPGS TAPPAHGVTS APDTRPAPGS TAPPAHGVTS APDTRPAPGS TAPPAHGVTS APDTRPAPGS TAPPAHGVTS APDTRPAPGS TAPPAHGVTS APDTRPAPGS TAPPAHGVTS APDTRPAPGS TAPPAHGVTS APDTRPAPGS TAPPAHGVTS APDTRPAPGS TAPPAHGVTS APDTRPAPGS TAPPAHGVTS APDTRPAPGS TAPPAHGVTS APDTRPAPGS TAPPAHGVTS APDTRPAPGS TAPPAHGVTS APDTRPAPGS TAPPAHGVTS APDTRPAPGS TAPPAHGVTS APDTRPAPGS TAPPAHGVTS APDTRPAPGS TAPPAHGVTS APDTRPAPGS TAPPAHGVTS APDTRPAPGS TAPPAHGVTS APDTRPAPGS TAPPAHGVTS APDTRPAPGS TAPPAHGVTS APDTRPAPGS TAPPAHGVTS APDTRPAPGS TAPPAHGVTS APDTRPAPGS TAPPAHGVTS APDTRPAPGS TAPPAHGVTS APDTRPAPGS TAPPAHGVTS APDTRPAPGS TAPPAHGVTS APDTRPAPGS TAPPAHGVTS  APDTRPAPGS  TAPPAHGVTS  APDNRPALGS  TAPPVHNVTS  ASGSASGSAS  TLVHNGTSAR ATTTPASKST   PFSIPSHHSD   TPTTLASHST   KTDASSTHHS   SVPPLTSSNH   STSPQLSTGV   SFFFLSFHIS NLQFNSSLED PSTDYYQELQ RDISEMFLQI YKQGGFLGLS NIKFRPGSVV VQLTLAFREG TINVHDVETQ  FNQYKTEAAS  RYNLTISDVS   VSDVPFPFSA   QSGAGVPGWG  IALLVLVCVL    VALAIVYLIA   LAVCQCRRKN YGQLDIFPAR  DTYHPMSEYP  TYHTHGRYVP   PSSTDRSPYE   KVSAGNGGSS  LSYTNPAVAA  ASANL
(配列番号: l)  全長MUClレセプター(ムチン1前駆物質、GenbankアッセションNo．: P15941)。
【０１４４】
GTINVHD  VETQFNQ  YKTEAASR  YNLTISD  VSVSDVP  FPFSAQS  GAGVPGW  GIALLVL  VCVLVAL  AIVYLIA  LAVCQ  CR  RKNYGQL  DIFPARD  TYHPMSE  YPTYHTH  GRYVPPS  STDRSPY  EKVSAGN  GGSSLSY  TNPAVAA  ASANL
(配列番号: 2)   N末端にnat-PSMGFRを持ち、全長MUC1レセプターの膜貫通及び細胞質の配列を含む、欠失MUClレセプタ・アイソフォーム。
【０１４５】
GTINVHD VETQFNQ YKTEAASR YNLTISD VSVSDVP FPFSAQS GA
(配列番号: 3)  MUCl成長因子レセプター(nat-PSMGFR -「PSMGFR」の例)の天然一次配列の細胞外領域を記述する。
【０１４６】
QFNQYKTE  AASRYNLTIS DVSVSD VPFPFS AQSGA
(配列番号: 4)  N末端の10アミノ酸が除去されたPSMGFRのN-10ペプチドを記述する。
【０１４７】
DPETMNHS ERFVFIAE WYDPNAS LLRRYEL LFYPGDGS VEMHD VKNHRTFL KRTKYDN  LHLEDLF  IGNKVNV  FSRQLVL  IDYGDQY TARQLGS RKEKTLA LIKPDAIS KAGEIIE IINKAGF TITKLKM MMLSRKE ALDFHVD HQSRPFF NELIQFI TTGPII AMEILRD DAICEWK RLLGPAN SGVARTD ASESIRAL FGTDGIR NAAHGPD SFASAAR EMELFFP SSGGCGP ANTAKFT NCTCCIV KPHAVSE GMLNTLY SVHFVNR RAMFIFL MYFMYRK
(配列番号: 5)  NME7アミノ酸配列 (NME7: GENBANK ACCESSION AB209049)。
【０１４８】
MEKTLALIKPDAISKAGEIIEIINKAGFTITKLKMMMLSRKEALDFHVDHQSRPFFNELIQFITTGPIIAMEILRDDAICEWKRLLGPANSGVARTDASESIRALFGTDGIRNAAHGPDSFASAAREMELFFPSSGGCGPANTAKFTNCTCCIVKPHAVSEGLLGKILMAIRDAGFEISAMQMFNMDRVNVEEFYEVYKGVVTEYHDMVTEMYSGPCVAMEIQQNNATKTFREFCGPADPEIARHLRPGTLRAIFGKTKIQNAVHCTDLPEDGLLEVQYFFKILDN
(配列番号: 6)  ヒトNME7-AB。
【０１４９】
MMMLSRKEALDFHVDHQSRPFFNELIQFITTGPIIAMEILRDDAICEWKRLLGPANSGVARTDASESIRALFGTDGIRNAAHGPDSFASAAREMELFFPSSGGCGPANTAKFTNCTCCIVKPHAVSEGLLGKILMAIRDAGFEISAMQMFNMDRVNVEEFYEVYKGVVTEYHDMVTEMYSGPCVAMEIQQNNATKTFREFCGPADPEIARHLRPGTLRAIFGKTKIQNAVHCTDLPEDGLLEVQYFFKILDN*
(配列番号: 7)  ヒトNME7-X1
【０１５０】
MEKTLALIKPDAISKAGEIIEIINKAGFTITKLKMMMLSRKEALDFHVDHQSRPFFNELIQFITTGPIIAMEILRDDAICEWKRLLGPANSGVARTDASESIRALFGTDGIRNAAHGPDSFASAAREMELFF -
(配列番号:8)   ヒトNME7-A1。
【０１５１】
MPSSGGCGPANTAKFTNCTCCIVKPHAVSEGLLGKILMAIRDAGFEISAMQMFNMDRVNVEEFYEVYKGVVTEYHDMVTEMYSGPCVAMEIQQNNATKTFREFCGPADPEIARHLRPGTLRAIFGKTKIQNAVHCTDLPEDGLLEVQYFFKILDN
(配列番号: 9) ヒトNME7-B3。
【０１５２】
AIFGKTKIQNAVHCTDLPEDGLLEVQYFF
(配列番号: 10) B3であり、それはNME7Bペプチド3(B領域)である。
【０１５３】
GTINVHDVETQFNQYKTEAASPYNLTISDVSVSDVPFPFSAQSGA
(配列番号: 11)  増強された安定性を持っているMUC1成長因子レセプターの天然一次配列の「SPY」の機能的なバリアントの細胞外領域 (var-PSMGFR - 「PSMGFR」の例)。
【０１５４】
MNHSERFVFIAEWYDPNASLLRRYELLFYPGDGSVEMHDVKNHRTFLKRTKYDNLHLEDLFIGNKVNVFSRQLVLIDYGDQYTARQLGSRK
(配列番号: 12)   NME7のDM10領域。
【０１５５】
癌細胞および幹細胞
【０１５６】
幹細胞と癌細胞は多くの共通点を持つ。研究者は、未分化幹細胞のマーカーの多くが、実際に、癌細胞のマーカーであることを今日発見している。反対に、以前、癌のマーカーと考えられた分子マーカーの多くは、今日、幹細胞マーカーとして再定義されている。例えば、私たちは、以前に、転移癌のマーカーであると確認されたCXCR4が、ナイーブ幹細胞のマーカーであることを見出した。癌細胞は、上皮が間充織遷移(EMT)への途上であると特徴付けられ、そこでは、上皮細胞が最終的に分化され、間充織細胞がより少ない分化で、幹様細胞である(Mani et al.,2008)。腫瘍学者は、癌ステージの進行としてそれを長く観察し、影響を受けた細胞は、ますます少ない成熟若しくは分化のようであり、むしろ幹細胞のように見なした。病理学者は、癌ステージを分類するために分化の程度の外観を使用し、早期癌は穏やかに分化すると分類し、攻撃的若しくは転移癌は殆ど分化していないと分類した。
【０１５７】
さらに、私たちは、以前にすべての癌の75%以上の増殖を仲介する成長因子レセプターMUCl*が、多能性のヒト幹細胞に100%存在するという発見を報告した(Hikitaら、2008年; Smaggheら、2013年)。より最近、私たちは成長因子、NME7AB、それは結合し、MUCl*の成長、生存、自己複製機能を活性化する、を見出した (Carter、2016年ら)。ヒト幹細胞は、ただ一つの成長因子として、NME7ABを含む最少培地で培養することにより、多能性の状態で維持することができる。NME7AB中で培養された幹細胞は、ナイーブと呼ばれる最も初期の状態で維持される。NME7ABは3日ヒト桑実胚のすべての細胞中にあり、そこではすべての細胞が最も早いナイーブ状態にある。ヒト胚盤胞の5日までに、NME7ABは、内部細胞塊に局在し、そこでは、該細胞は定義においてナイーブである。NME7ABは、それが精巣で見つかるという点を除いて、ヒト胚盤胞の5日後にターンオフされる。しかしながら、私たちは、NME7は、NME7ABおよびNME7-X1に対応する欠失型で、攻撃的および転移癌で発現されることを見出した(WO2015/023694)。私たちは、通常の癌細胞へのNME7ABの添加が、わずか50の注入された癌細胞、そこでは非転移性の癌細胞が腫瘍を形成するのに4〜6Mの移植細胞を必要とする、から動物に腫瘍を形成するより転移性の癌細胞へ移行をさせることを証明した。さらに、NME7ABの動物への注入は、移植された癌細胞を転移性化した。これらのデータは、さらに、幹細胞と癌細胞の間、及びより詳しくは攻撃的若しくは転移癌とナイーブ幹細胞の間で、分子レベルで、機能的なリンクを証明した。
【０１５８】
これらの結果は、幹細胞で多分化能を促進する経路は、癌を促進するのと同じ経路であることを示唆する。幹多分化能あるいは増殖を阻害するか、幹細胞分化を引き起こす作用薬は、患者に投与された時、癌の予防若しくは治療用の効果的な抗癌物質である作用薬である。
【０１５９】
本発明者は、ナイーブ状態の幹細胞を変換する若しくは維持する作用薬が、より転移性の状態への癌細胞を移行させることができることを示した。
したがって、ナイーブ幹細胞は、攻撃的細胞若しくは転移癌細胞に多くのパスウェイにおいて類似している。これらの結果は、ナイーブ幹細胞での多分化能を促進する経路が癌細胞での転移を促進するのと同じ経路であることを示唆する。この予測は、ナイーブな幹多分化能あるいは増殖を阻害するか、幹細胞分化を引き起こす作用薬が、患者に投与された時、転移癌の予防若しくは治療用の効果的な抗癌物質である作用薬であるということを示す。
【０１６０】
ナイーブ幹細胞とプライムド幹細胞の間の大きな差異は、これらの別個の2つのタイプの幹細胞が、異なる経路によって、多能性に成長しそして分化に抵抗することを示唆する。したがって、プライムド状態の幹細胞ではなく、ナイーブ幹細胞の多分化能若しくは増殖を阻害するか、プライムド状態の幹細胞により穏やかな効果がある候補薬は、攻撃的若しくは転移癌の治療若しくは予防にとても有効な候補薬である。
【０１６１】
本発明の1つの様相では、幹細胞が、候補薬でありうる作用薬の存在下で培養され、作用薬が幹細胞多分化能若しくは増殖を阻害する、あるいは幹細胞分化を引き起こすということを観察され、そして、該作用薬は、癌の予防あるいは治療のための患者に投与される。本発明の1つの様相では、幹細胞はヒトである。別の様相では、幹細胞はナイーブ状態である。ある場合には、幹細胞は、NME 1二量体、NME7、NME7AB、NME7-X1、あるいはナイーブ状態で幹細胞を維持することが報告された他の方法(Silvaら、2008年; Hannaら、2010年; Gafniら、2013年; Theunissenら、2014年; Wareら、2014年)中で培養することにより、ナイーブ状態に維持された。まだ別の様相では、当該作用薬は、ナイーブ幹細胞の、多分化能若しくは増殖を阻害するかあるいは分化を引き起こすことが観察され、非プライムド状態幹細胞ではされなかった、あるいは該作用薬は、プライムド状態の幹細胞により劣った効果があり、あるいは、該作用薬は進展する危険をもつ若しくは転移癌と診断された患者に投与される。多能性幹細胞がすべてMUCl*陽性であること及びナイーブ幹細胞はNME7ABを発現することを私たちが見出したので、上記されるように同定された作用薬は、MUCl*陽性、NME7AB陽性あるいはNME7-X1陽性癌の治療に極めて有効である。
【０１６２】
癌の用語
【０１６３】
用語としての癌の「移動」および「侵襲」は、ここに使用されるように、同意語であり、転移癌細胞の特性である。
【０１６４】
ここに使用されるような、移動分析は、コラーゲン、フィブロネクチンあるいはその他同種のもののような細胞間マトリックス・タンパク質で表面を覆い、その表面上へ癌細胞をプレーテイングする（蒔く）ことを参照され、しかしエリアからそれらを取り除く、又はエリア上に蒔かれることからそれらを制限することには参照されず、そして、その後、それらが制限領域へ移動するか、有効な阻害剤が存在する状態で、制限領域へ移動することを阻害されるかの、細胞を写真化することを参照する。どの細胞がエリアから撤去されるかの移動分析は、スクラッチ(scratch)分析あるいはウーンド(wound)分析と呼ばれ、そしてエリアで蒔かれることから細胞を制限するものは、ここでカモノハシ(platypus)分析と呼ばれる。
【０１６５】
ここに使用されるような、転移癌は、近隣の組織に浸潤したか侵襲したか、リンパ節へ移動したか、オリジナルの癌の器官以外の器官へ移動した癌を含む。ここに使用されるように、用語転移癌は、容易に転移性になると知られている癌を含む。例えば、皮膚のある深さにある黒色腫は、予測可能な期間内に統計的に転移する。別の例は予測可能な期間内に、特に肝臓に、転移すると知られている膵臓癌である。
【０１６６】
病理学者は、腫瘍の攻撃性若しくは転移性の可能性を評価する2つの主要な方法を持っている。1つの方法は、グレード若しくは病期を割り当てることである。グレード1は、腫瘍細胞は、よく分化されると呼ばれ、殆ど正常細胞のように見えることを意味する。よく分化された癌細胞は、遅い成長でもある。グレード2は、適度に分化されている腫瘍を意味し、したがって、より急成長している。グレード3は、腫瘍細胞が非常に異常に見え、貧弱にしか分化していないように見え、それは最も急成長している癌細胞である。
【０１６７】
病理学者は、さらにバイオプシーを実施された組織および他の診断法の分析に基づいた腫瘍をスコア化するTNMシステムを使用する。「T」は隣接した組織への進展を表わし、「N」はリンパ節の関与を表わし、また、「M」は遠位の器官への転移を表わす。具体的には、Tスコアは0〜4で変動し、0が腫瘍の証拠を示さず、4が隣接した組織へ進展した大きな腫瘍に関係のあることを意味する。Nスコアは0〜3で変動し、N0がリンパ節関与の証拠を示さないこと、Nlは癌が近くのリンパ節あるいは少数の結節に広がったことを意味する。N2とN3は、リンパ節の多数、及び／又はより離れた結節に腫瘍が広がったことを意味する。
Mスコアは0あるいは1である。M0は、転移の証拠を示さず、Mlは、離れた器官あるいは起源の器官以外の器官に癌が広がったことを意味する。
【０１６８】
薬のスクリーニング
【０１６９】
ここで、私たちは、癌、転移癌、あるいは癌再発の予防のための予防若しくは治療用薬剤を同定するための検討および方法について記述する。1つの態様で、これら、薬剤は、MUC1-陽性、MUCl*-陽性、NME7-陽性、NME7AB陽性あるいはNME7-X1-陽性である癌の予防若しくは治療向けである。私たちは、ナイーブ幹細胞の増殖および多分化能をコントロールするシグナル経路が、プライムド幹細胞の増殖および多分化能をコントロールするものとは異なることを特定した。さらに、私たちは、ナイーブ幹細胞の増殖あるいは多分化能を仲介するのと同じ経路が癌細胞の増殖および転移の可能性をさらに仲介することを見出した。
私たちは、幹細胞多分化能あるいは増殖を阻害するか、幹細胞分化を引き起こす作用薬が、癌細胞増殖を阻害し、患者に投与された時、癌の予防若しくは治療のための有能な作用薬である作用薬であることを見出した。ナイーブ幹細胞多分化能あるいは増殖を阻害するか、ナイーブ幹細胞分化を引き起こす作用薬は、癌細胞移動を阻害する作用薬である。それは転移癌の特徴で、患者に投与された時攻撃的若しくは転移癌の予防若しくは治療用の効果的な抗癌物質である。多分化能若しくは増殖を阻害するか、プライムド幹細胞ではなくナイーブ幹細胞の幹細胞分化を引き起こすか、プライムド幹細胞に遠いより劣った効果がある作用薬は、攻撃的若しくは転移癌の予防若しくは治療のための有能な作用薬である。
【０１７０】
かくして、癌進展の危険がある患者若しくは癌と診断された患者を治療する治療薬を同定するためには以下の工程がある:
1)多能性の状態で幹細胞を育てる;
2)候補薬と多能性幹細胞の個体群を接触させる;
3) 多能性幹細胞の多分化能若しくは増殖を阻害するか、多能性幹細胞の分化を引き起こす候補薬を同定する;そして、
4) 多能性幹細胞の多分化能若しくは増殖を阻害するか、多能性幹細胞の分化を引き起こす候補薬が、抗ガン剤であると結論を下す。
【０１７１】
転移癌進展の危険がある患者若しくは転移癌と診断された患者を治療する治療薬を同定するためには以下の工程がある:
1)ナイーブ状態の幹細胞を育てる;
2)候補薬と幹細胞を接触させる;
3) ナイーブ幹細胞の多分化能若しくは増殖を阻害するか、ナイーブ幹細胞の分化を引き起こす候補薬を同定する;そして、
4) ナイーブ幹細胞の多分化能若しくは増殖を阻害するか、ナイーブ幹細胞の分化を引き起こす候補薬が攻撃性の癌若しくは癌転移の治療若しくは予防のための抗ガン剤であると結論を下す。
【０１７２】
代替えにおいて、転移癌進展の危険がある患者若しくは転移癌と診断された患者を治療する治療薬を同定するためには以下の工程がある:
1)ナイーブ状態の幹細胞を育てて、任意に、平行してプライムド状態の幹細胞を育てる;
2)候補薬と幹細胞の両方の個体群を接触させる;
3) ナイーブ幹細胞の多分化能若しくは増殖を阻害するか、ナイーブ幹細胞の分化を引き起こす候補薬、しかし、任意に、プライムド幹細胞ではこれらをおこさないあるいはプライムド幹細胞においてはるかに劣った効果がある、候補薬を同定する；そして
4) ナイーブ幹細胞の多分化能若しくは増殖を阻害するか、ナイーブ幹細胞の分化を引き起こす候補薬、しかし、任意に、プライムド幹細胞ではこれらをおこさないあるいはプライムド幹細胞においてはるかに劣った効果がある、候補薬は癌転移の治療若しくは予防のための抗ガン剤であると結論を下す。
【０１７３】
抗癌若しくは抗転移作用薬としてのそれらの可能性を評価するこれらの方法でスクリーニングされた作用薬は、小分子、天然産物、抗体、抗体フラグメント、ライブラリーあるいは抗体あるいは抗体フラグメント、ペプチド、ペプチドミミックス、核酸、アンチセンス核酸、DNA、RNA、コーディングあるいは非コードの阻害RNA、バクテリア及び微生物を含み、これらに限定されず、あらゆる形態でありうる。本発明の1つの様相では、幹細胞はヒト起源である。さらに、本発明の別の様相では、幹細胞は霊長類起源である。加えて、本発明の別の様相では、幹細胞は哺乳動物起源である。さらに、加えて、本発明の別の様相では、幹細胞はげっ歯動物起源である。
【０１７４】
本発明の別の様相では、新規癌治療あるいは抗転移薬の標的は、プライムド幹細胞でではなくナイーブ幹細胞でアップレギュレートされる遺伝子の同定により特定される。
また、本発明の別の様相では、新規癌治療あるいは抗転移薬の標的は、プライムド幹細胞でではなくナイーブ幹細胞でアップレギュレートされるmicroRNAsの同定により特定される。
【０１７５】
薬のスクリーニング結果
【０１７６】
WO2009/042815は、直接の結合分析で、一連のcarboline分子が、MUCl*およびNMEタンパク質、特にNMEl二量体およびNME7ABの細胞外領域間の相互作用を阻害したことを明らかにした。私たちは、MUC1*-NME相互作用を阻害したcarbolinesの同じシリーズが、さらに癌細胞増殖を阻害したことを以前に示した。私たちは、プライムド状態の幹細胞と比較されたナイーブ幹細胞の多分化能あるいは増殖を阻害するそれらの能力に関して、3つの carbolinesを含む、10の小分子および生物学的製剤のパネルをテストした。私たちは、以前に、抗MUCl*単クローン抗体のFab、E6、あるいはMUCl*の細胞外領域に対応する合成ペプチド、FLR加えてPSMGFRとして知られている、は、MUC1*-NME7ABあるいはMUC1*-NME1相互作用を阻害することによって、癌および幹細胞の多分化能と増殖を阻害したことを証明した。さらに、私たちは新規抗NME7抗体#56および#61をテストした。#61は#56よりはるかに有力であるが、それらが通常も癌細胞を転移性癌に形質転換するNME7ABの能力を阻害することを以前に示した。私たちは、MUCl*NME7AB若しくはMUC1*-NME1相互作用を阻害することにより、いくつかのcarboline小分子が癌の増殖を阻害することをさらに以前に示した。
【０１７７】
JQ1は、伝えられるところによれば、BRD4を阻害し、癌細胞移動および癌細胞増殖を阻害すると示されたが、幹細胞にどんな効果があるかは報告されなかった、小分子である。幹細胞スクリーニング検査は、以下の幹細胞成長因子が、存在する状態およびない状態の両方で行なわれた:ナイーブ幹細胞を育てるためのNME7ABあるいはプライムド幹細胞を育てるためのFGF。もし同種の成長因子が存在すれば、生物学的製剤若しくは小分子は、結果を得るためには、離れて競合しなければならない。したがって、成長因子、プライムド幹細胞用のFGFあるいはナイーブ幹細胞用のNME7ABまたはNMEl二量体、が不存在だった場合、私たちは結果をもっとよく見ることが必要である。結果は図2のテーブルで要約される。幹細胞に対する化合物の影響は視覚的に決定された。また、化合物は最も大きな影響である4と共に、顕著な効力でない0でO〜4にランクした。観察された主な効果は、多能性幹細胞形態、それは細胞質比率への大きな核を備えた小さな円形細胞の玉石パターンであり、からの分化した幹細胞の形態、それは細胞質比率へのより小さな核を備えた長方形の大きなおよび平らになった細胞である、への変化である。いくつかの化合物は、さらに厳しく幹細胞の増殖を阻害した。化合物は、ナイーブ状態幹細胞あるいはプライムド状態の幹細胞のいずれかへ6μMの終濃度で加えられた。特別なケースでは、ナイーブ状態幹細胞は、NME7ABまたはNME1二量体を含む培地中で培養することにより、ナイーブ状態で維持された。しかしながら、2iおよび5i(Silvaら、2008年、NicholsおよびSmitH2O09年、Theunissenら、2014年)のような他の方法は、よりナイーブ状態で幹細胞を維持するために使用することができる。この場合、培地を含むどんなbFGFもプライムド状態で幹細胞を維持するであろうことは知られているが、プライムド状態の幹細胞はMEFの層上でbFGFにおいて培養された。
【０１７８】
私たちは、プライムド幹細胞増殖ではなくナイーブ幹細胞増殖において、JQIが阻害作用を持っていることを示した。さらに、従来の研究は、JQlが、抗炎症作用を有することを示した(Belkinaら、2013年; Mengら、2014年)。したがって、この研究で同定された化合物は、さらに抗炎症作用を有しているに違いなく、肥満、喘息、慢性消化性潰瘍、結核、慢性関節リウマチ、慢性歯周炎、潰瘍性大腸炎およびクローン病、慢性副鼻腔炎、慢性活動性肝炎などでの炎症治療に役立つ。
【０１７９】
テストされた10個の小分子および4つの生物学的製剤において、どれもMN1130以外のプライムド幹細胞にどんな効果もなく、それはプライムド幹細胞コロニーに適度の効果があった。しかしながら、同じ作用薬がナイーブ幹細胞でテストされた時、4つの生物学的製剤のうちの3つおよび3 carbolinesのうちの2つに、有意に、幹細胞多分化能および増殖を阻害し、そして分化の誘導をおこした。作用薬が、幹細胞が分化を始める場合(点線によって示された)におこる形態変化と一致しているナイーブ幹細胞の形態学の変化を引き起こしたことに注意がいる。細胞は平坦になり、より紡錘体形をとり、細胞質に対する核の比率は減少する。
【０１８０】
図1に描写された小分子に加えて、抗MUCl*Fab、FLRペプチド、aka PSMGFRペプチド、および抗NME7抗体#56および#61がテストされた。図2は、ナイーブ対プライムド幹細胞でこれらの薬剤候補がどのように履行されたの要約であり、確認された薬がヒットする薬は、その化合物が、ナイーブ幹細胞の分化を誘導するが、FGFに育てられたプライムド幹細胞において、効果がない若しくはより劣った効果であるものである。図3〜10は、小分子、Fab、MUCl*細胞外領域ペプチド「FLR」あるいは小分子で処置された幹細胞の写真を示す。図3〜6は、作用薬または化合物のどれも、有意に、プライムド状態幹細胞の分化を誘導しなかった。しかしながら、図7〜10は、いくつかの作用薬は、ナイーブ状態幹細胞の分化を誘導することを示す。分化する部分は、点線によって示される。これらの濃度で、特に、抗MUCl*E6 Fab、FLRペプチド、抗NME7 #61、MN572、MN0642およびMN1130の全てが、ナイーブ状態幹細胞の分化を誘導し、そして、癌の有力な阻害剤および転移癌の阻害剤であると予測される。癌または転移癌の予防若しくは治療のための患者に、それらを投与することができる。E6 Fabは、すべてのMUCl*陽性癌細胞の増殖を阻害することが示された。さらに、抗MUCl*E6 Fabは、強力に動物中のMUCl*陽性腫瘍の成長を阻害することが示された。合成MN0642は、同様に癌細胞の増殖を生体外で阻害することが示された。FLR(PSMGFR)ペプチドおよび抗NME7#61は、転移癌細胞への通常癌細胞の変異を阻害することが示された。
【０１８１】
本発明の化合物に似ていないが、癌増殖あるいは移動を阻害することが報告された他のいくつかの小分子は、多分化能若しくは増殖を阻害するか、あるいは幹細胞、特にナイーブ幹細胞、の分化を引き起こすことについてテストされその効果が見出された。例えば、伝えられるところによれば、carbolines(JQ1(+))(図1)に似ていない、小分子が、炎症について(Belkina、2013年ら)、癌多分化能について(FillippakopoμLos、2010年ら)および癌細胞移動について(唐、2013年ら)阻害を達成する。伝えられるところによれば、JQ1(+)は、BRD4を阻害し、また、その不活性鏡像異性体JQl(-)は、なんらの効果をもたない(FillippakopoμLos、2010年ら)。BRD4が、NME7のレギュレーター、腫瘍誘発遺伝子c-Mycのレギュレーターおよび癌細胞および幹細胞の選択された２，３の遺伝子を過剰発現するスーパーエンハンサーのコンポーネントであることが報告された。これらの時において、BRD4のこれらの著名な機能のどれが正確かは完全に明らかではない。プライムド状態の幹細胞は、JQ1(+)、不活性立体異性体JQl(-)、BRD4特異的siRNAあるいはJMJD6特異的siRNAで、3日間処置された。これらの作用薬のどれも、プライムド状態の幹細胞の分化を引き起こすようには見えなかったが、JQ1(+)は、プライムド幹細胞コロニーのサイズに適度の効果があり(図11)、そしてまた、異常な形態を引き起こすように見えた（図12）。しかしながら、JQ1(+)は、劇的に、ナイーブ状態幹細胞の分化を誘導し、またそれらの増殖を阻害した(図14 E-F、15E-Fおよび16E-F)。ナイーブ幹細胞が、NME7AB (図13-14)若しくはNME1二量体(図15-16)において培養され、JQ1(+)は、ナイーブ幹細胞多分化能および増殖を阻害しそして分化を誘導した。JQ1(+)が、炎症、癌細胞移動および癌細胞増殖の既知の阻害剤であるので、これらの結果は、炎症あるいは癌の予防若しくは治療の有効な治療手段としての作用薬が、また、ナイーブ幹細胞多分化能あるいは増殖を阻害する若しくは幹細胞分化を引き起こすことを示す。したがって、ナイーブ幹細胞多分化能あるいは増殖を阻害するか、幹細胞分化を引き起こす作用薬は、炎症あるいは癌の予防若しくは治療のさらに有効な治療手段を提供する。
【０１８２】
その後、私たちは、攻撃的若しくは転移癌の特性である、癌増殖あるいは移動を阻害すると知られていた作用薬(図17)(Hormら、2012年; Meng & Yue、2014年; Zhenら、2014年)を含む作用薬の拡張パネルをテストした。さらに、私たちは一連の新しい小分子を合成し、幹細胞薬スクリーニング検査でそれらをテストし、次に、癌細胞移動、侵襲あるいは増殖を阻害するそれらの能力をテストするために一連の生物検定でそれらをテストした。幹細胞スクリーニングおよび生物検定の結果は、図18A-18Eのテーブルで要約される。
【０１８３】
図19A-19Pは、既知の抗移動化合物デキサメサゾンとSU11274を添加された、コントロール幹細胞あるいは幹細胞の写真を示す。
【０１８４】
有力な癌細胞移動は、他の組織の癌細胞侵襲および転移の特性である。典型的な移動分析は、フィブロネクチン、コラーゲンあるいはその他同種のもので、細胞培養プレートを被覆し、癌細胞を蒔き、そして細胞を通って瘢痕アクロス（scar across）作り、癌細胞が空間に侵襲するためにとる時間を測定することを含む。もっと信頼できるデータを与える代替アプローチは、カモノハシ・システムであり、それは1つの、各々の中心に円を閉鎖するプラグの並置のセットを備えた特別な多ウェル細胞培養プレートを使う。プラグが適所にある間、癌細胞は蒔かれ、次に、細胞がプレート表面に付着の後、それらが除去される。候補薬は、各々のウェルに添加され、写真が、癌細胞移動あるいは侵襲に対する候補薬の阻害作用を追跡する時間のファンクションとして得られる。私たちの癌細胞移動分析では、空所へ移動した細胞の数の量は、イメージJソフトウェアを使用して計られた。そのような癌細胞移動分析の結果を要約する棒グラフは、図20に示される。既知の抗移動化合物の効果は、抗MUCl*FabE6および最初の数個の小分子リード、と比較された。癌細胞移動分析の結果は図21に示される。それらの活性を要約する癌細胞移動分析および棒グラフの写真は、図22に示される。既知の抗移動分子SU11274と比較された、2つの新しい小分子MN1186およびMN1194の効果は、図22A-22Uで示される。図22Vは、多くの化合物のために時間0と24時間あるいは48時間に癌細胞移動の測定された阻害を示すグラフである。図22Wは、その濃度の関数として小分子の阻害作用を示すグラフである。図22Xは、本発明の小分子のIC50がどのように測定され計算されたか示すグラフである。
【０１８５】
ヒト多能性幹細胞は、すべてMUCl*陽性である。ナイーブ状態幹細胞は、また、MUCl*の活性化リガンドである原始的な成長因子NME7ABを発現する。乳癌細胞株T47Dは、転移性乳癌患者に由来した。T47D細胞は、任意の市販の入手可能な細胞株のMUCl*の最高水準を発現する。私たちは、そのT47D細胞が、さらにNME7ABおよび代替接合アイソフォームNME7-X1、それは両方ともMUCl*成長因子レセプターを活性化する成長因子である、を発現した。
【０１８６】
化合物のヒットは、幹細胞多分化能あるいは増殖を阻害するそれらの能力のための幹細胞薬スクリーニング分析で最初に同定される。その後、私たちは、転移癌の特徴である癌細胞移動、侵襲を阻害するそれらの能力に関して、ヒットをテストする。次に、最後に、私たちは、癌細胞増殖を阻害するそれらの能力に関して、ヒットをテストする。そして、結果は、幹細胞多分化能及び／又は増殖を阻害する化合物が、癌細胞移動、侵襲性及び／又は増殖を阻害したということである。これらの研究は、発明の化合物が、広範囲の癌細胞の、移動及び／又は侵襲を阻害することを示した。本発明の化合物は、DU145(MUC1*+/NME7AB+++/NME7-Xl+++)前立腺癌細胞、SK-OV-3(MUC1*+)卵巣癌細胞、A549(MUCl*LO)肺癌細胞)、PC-3(MUC1*-/ NME7AB+++/NME7-X1+++)前立腺癌細胞、CHL-1(MUC1*+/NME7+)メラノーマ細胞、OV-90(MUC1*-)卵巣癌細胞、CAPAN-2(MUC1*+)膵癌細胞、ZR-75-1(MUC1*++)乳癌細胞、及びその他のものと同様に、の移動、侵襲及び／又は増殖を阻害することが示された。
【０１８７】
癌細胞移動あるいは増殖についての小分子阻害の検討も、BRD4阻害剤JQ1+及びその不活性鏡像異性体JQ1-、c-Met阻害剤SU11274、及び他の図17に示されたもの、のような、癌細胞移動あるいは侵襲の以前に報告された阻害剤を使用して、行なわれた。これらの化合物のうちのいくつかは、ある程度の癌細胞移動あるいは侵襲を阻害した。しかしながら、大部分は、さらに繊維芽細胞の増殖をも阻害した。それは、正常な健康細胞のための代替えであり、それはそれらが患者に有毒副作用を持つことを示唆する。
【０１８８】
本発明の化合物用の生物学的テストデータは、図18A-18Eで示される。
【０１８９】
癌治療がもっとターゲット化されるようになるとともに、そのゴールは、優先的に、癌細胞の増殖、移動あるいは侵襲を阻害し、一方で正常な健康細胞でこの上なく小さな作用がある、治療薬を開発することである。正常な最終分化細胞は、幹細胞または癌細胞が行うような、分割をし続けないので、「正常な」細胞株というのはない。しかしながら、繊維芽細胞は、幹細胞よりもっと分化され、定義された期間の間自己再生することができる。私たちは、これらの化合物がまさに細胞毒性的だったか、それらが選択的に幹細胞および重要なことに癌細胞に作用したかどうか、正常な健康な細胞では作用がなかったかどうかを判断するために本発明の選択された化合物をテストした。ここで、私たちは、代替として繊維芽細胞を正常細胞に使用した。繊維芽細胞は、形態を変更しないので、この分析の読み出しは、化合物が増殖に関して持った効果のみについてである。6μMの複数試験化合物が、ヒト線維芽細胞を育てるために、別々に加えられた後48時間あるいは72時間で、写真をえた。化合物はそれぞれ、「+」が繊維芽細胞増殖の25%阻害、"++"が50%の増殖阻害および"+++"が75%の増殖阻害を示す、繊維芽細胞増殖における効果のために得点された。図23A-23Dは、コントロールとして0.2%DMSOでのみ処置された、培養でのヒト線維芽細胞の写真を示す。
図24A-24Fは、両方とも500nM終濃度(図24D-24F)で、ヒトナイーブ状態幹細胞(図24A、24D)において、ヒトプライムド状態幹細胞(図24B、24E)において、あるいはヒト線維芽細胞(図24C、24F)において、不活性鏡像異性体JQ1-の効果に対してJQ1+(図24A-24C)の効果の写真を示す。確認できるように、JQ1+は、プライムド状態の幹細胞上でのように、繊維芽細胞で同じ効果があり、それは後の繊維芽細胞始原細胞に効果がなかった化合物より、より多くの副作用を持つだろうということを示す。図25A-25Fは、ヒト線維芽細胞始原細胞の増殖に関し、本発明の化合物である誘導体に導くオリジナルのヒットに対しの、既知の癌細胞移動阻害剤JQ1とSU11274の効果の写真を示す。図で見ることができるように、本発明のほとんどの新規化合物は、繊維芽細胞の増殖には効果がほとんどあるいはまったくない。さらに、それらは、プライムド状態の幹細胞に効果がほとんどあるいはまったくないが、私たちが癌細胞のための代替であると信じるナイーブ状態幹細胞に最大の阻害効果を持っている。本発明の化合物が、ナイーブ幹細胞多分化能および増殖、そして癌細胞移動および増殖を強力に阻害するが、繊維芽細胞始原細胞に対する効果は何もないという事実は、当該化合物が、細胞毒性薬でないことを示す。対照的に、他の以前に報告された癌細胞移動阻害剤は、それらが幹および癌細胞でもった、繊維芽細胞始原細胞で同じ効果をもち、それはそれらが患者に対する有毒副作用を恐らく持つだろうということを示す。
【０１９０】
実験は、本発明の新規化合物が、分化として知られている成熟を引き起こすことにより、幹細胞と癌細胞の両方の、多分化能、増殖及び/又は移動を阻害することを示す。本発明の化合物で処置されたナイーブ幹細胞のRT-PCR測定は、本発明の化合物が分化マーカーのアップレギュレーションを引き起こしたことを示した。本発明の化合物での治療の結果として、濃度依存的な方法で、その発現が増加した遺伝子は、フィブロネクチンとビメンチン、その両方は幹細胞が分化を開始するとき増加、およびNF1、これは幹細胞が神経系譜へ分化し始める場合に増加する最初の遺伝子のうちの1つ、である。本発明の化合物での処置に応じて、フィブロネクチン、ビメンチンあるいはNF1発現が増加するという事実は、該化合物が、分化を引き起こしそして最終的に分化した細胞は自己複製しないことを示す。したがって、癌細胞が定義によって、脱分化したので、分化のマーカーを引き起こす本発明の化合物は、癌の治療に役立つ、つまり、定義による、癌細胞は脱分化し、それは継続的に自己複製を可能にするからである。癌細胞が、本発明の化合物で処置された時、e-カドヘリン、それは癌ではアップレギュレートされている、がダウンレギュレートされた。癌細胞移動および増殖の既知の阻害剤、JQ1+およびSU11274が、分化のマーカーのアップレギュレーションを引き起こさなかったこと、つまり幹細胞の分化を引き起こす、に注目する。同様に、本発明の新規化合物は、癌細胞の分化を引き起こした。転移マーカー、e-カドヘリンの発現は減少し、分化マーカー、フィブロネクチン、ビメンチンおよびNF1の発現が増加された。
【０１９１】
本発明の新規化合物は高度に特異的である。それらは、特異的に、幹細胞と癌細胞の、多分化能及び/又は増殖を阻害する。本発明の新規化合物は、MUCl*陽性及び/又はNME7ABあるいはNME7-X1陽性である癌に対して極めて有効である。私たちは、NMEl二量体、NME7ABおよびNME7-X1が、すべてMUCl*成長因子レセプターのリガンドを活性化し、それらがその細胞外領域に結合することを見出したが、NME7ABおよびNME7-X1の両方が他の結合パートナーを持っており、MUCl*と無関係に、腫瘍形成性に影響を及ぼすことができるという多くの証拠をみいだした。
【０１９２】
NME7ABは、最も初期のナイーブ幹細胞を成長させる自然な成長因子である。NME7ABだけで、ナイーブヒト幹細胞の増殖および多分化能に十分である。ヒト3日胚盤胞では、細胞はすべて、NME7ABに陽性である。5日までに、NME7AB細胞は、内部細胞塊に制限され、それは定義によってナイーブ状態幹細胞を含む。NME7ABは、すべてのナイーブ幹細胞で発現されるが、伝えられるところによれば、それは精巣以外においては成人の組織で発現されない。しかしながら、私たちは、検査したすべての転移癌にそれを見出だした。私たちは、ナイーブ幹細胞および癌細胞の両方が、NME7ABおよびNME7-X1を分泌することを示した。私たちは、幹細胞と癌細胞の両方で、NME7ABおよびNME7-X1の両方が、MUCl*細胞外領域へ結合し、MUCl*細胞外領域のリガンド誘導二量体化を経て多分化能と増殖を活性化することを示す。私たちが行なった多数の免疫組織化学研究は、NME7ABおよびNME7-X1の両方が癌細胞で過剰発現され、発現の増加は、腫瘍病期に相関する。PCR実験は、本発明の化合物が、癌細胞中のNME7ABおよびNME7-X1の発現の減少を引き起こすことを示す。
【０１９３】
リード化合物の構造活性相関(SAR)が分析され、新規誘導体化合物が、効能を高め、IC50(最大の効力の半分の濃度)を減少させ、溶解度を改善するゴールで設計され合成された。これらの化合物の構造は、化合物番号MN1292〜 MN1471として示された。図18A-18Eのテーブルは、これらの化合物の各々で行なわれた生物学的検定の結果を示す。図26-35は、ナイーブ状態幹細胞、プライムド状態幹細胞あるいは繊維芽細胞に対する化合物の効果の写真を示す。幹細胞多分化能、特にナイーブ状態多分化能、を阻害するが、繊維芽細胞のようなより多く成熟した細胞に影響しない化合物は、有効な癌治療用治療剤であると予測される。図18の作表されたデータで見ることができるように、新規化合物MN1292-MN1471の多くは、強力に、低いナノモラー幅にあるIC50で、癌細胞移動および増殖を阻害する。幹細胞スクリーニングでは、これらの化合物は、ナイーブ幹細胞多分化能を阻害したが、より多く成熟したプライムド状態の幹細胞あるいはなおより多く成熟した繊維芽細胞に効果がほとんどあるいはまったくなかった。図36-45は、癌細胞移動に対するこれらの新規化合物の効果を定量する写真、グラフおよびIC50カーブを示す。
【０１９４】
構造活性相関の分析とさらなる医薬品化学技術は、癌細胞移動、侵襲および増殖の、さらに有力で選択的な阻害薬に導いた。データは、構造活性相関から得られた知識と医薬品化学技術は、この化合物群のIC50濃度の大きな減少に導いたことを示す。例えば、MN1413は、より多く成熟したプライムド状態の幹細胞に効果がなく、さらに繊維芽細胞、それは正常細胞のための代替、に効果がない一方で、100%あるいはスコア「4」で、ナイーブ幹細胞多分化能および増殖を阻害した。MN1413は、10nMのIC50をもって83%で癌細胞移動を阻害し、約50%で癌細胞増殖を阻害した。MN1423は、100%であるいは「4」のスコアで、ナイーブ幹細胞多分化能および増殖を、阻害したが、プライムド状態の幹細胞あるいは繊維芽細胞に効果がなかった。MN1423は、12nMのIC50をもって84%で癌細胞移動を阻害し、約50%で癌細胞増殖を阻害した。MN1428は、100%であるいは「4」のスコアで、ナイーブ幹細胞多分化能および増殖を、阻害したが、プライムド状態の幹細胞あるいは繊維芽細胞に効果がなかった。MN1428は、7nMのIC50をもって79%で癌細胞移動を阻害した。これらの化合物の幹細胞薬物検査の結果は、図46-64に示される。これらの図は、プライムド状態の幹細胞あるいは繊維芽細胞、そこでは繊維芽細胞は正常な健康細胞の代替、に事実上効果がない、一方、これらの化合物がナイーブ幹細胞の多分化能および増殖を阻害する能力を明確化する。図65-88は、癌細胞移動あるいは侵襲でのこれらの化合物の効果を示す写真とグラフ、及び各化合物のIC50を示すグラフを示す。
【０１９５】
本発明の化合物が、腫瘍細胞移動および侵襲を阻害したことは顕著である。また、そのような活性は、癌細胞が共通の癌成長因子レセプター、MUCl*に陽性だったか陰性だったかどうかに依存しなかった。ナイーブ幹細胞の100%が、MUCl*陽性であることを留意されたい。ほとんどの癌は、同様にMUCl*陽性である。私たちは、本発明の化合物が、T47D乳癌細胞、BT20 3倍陰性乳癌細胞、BT474-Res2 chemo耐性HER2陽性乳癌細胞、SKOV3卵巣癌細胞、DU145前立腺癌細胞およびCapan2膵癌細胞、他に多くのものと同様、を含むMUCl*癌細胞株に対し癌細胞移動を阻害したことを示した。しかしながら、本発明の化合物も、いくつかのMUCl*陰性前立腺癌細胞の移動を阻害することが示された。例えば、本発明の化合物は、PC3前立腺癌細胞およびHCT-116 MUCl*陰性結腸癌細胞の移動および増殖を阻害した。
【０１９６】
これらのデータは、、分化を引き起こすキー遺伝子の発現を引き起こすことにより、移動と侵襲によって証拠づけられる、癌細胞攻撃性を、本発明の化合物がブッロクするメカニズムと一致している。本発明の化合物で処置されたナイーブ幹細胞のRT-PCR測定は、分化マーカーのアップレギュレーションを示した。本発明の化合物での治療の結果、その発現が増加した遺伝子は、濃度依存的に、フィブロネクチン、ビメンチンおよびNFlであり、それらはすべて分化マーカーである。
【０１９７】
分化と関係のある典型的な遺伝子に加えて、私たちは、本発明の化合物での治療に続く幹細胞と癌細胞の両方で特定のスーパーエンハンサー遺伝子の発現を確認した。胚性幹細胞では、すべての媒介物質コンポーネントのおよそ40%が、数百のエンハンサー・サイトだけで蓄積され、したがって、これらはスーパーエンハンサーと呼ばれる。スーパーエンハンサーは、典型的なエンハンサーの数倍において、標的遺伝子の発現を増加させ、その結果、幹細胞の場合でのように、多能性に成長するべきか若しくは分化するべきであるかどうかのような、キー細胞運命決定を急速に履行することができる。幹細胞が多能性に成長するべきか若しくは分化するべきかどうかのようなキー細胞運命決定を経てのブリード（bleed）は、胚の分化の壊滅的な結果を持つ。研究者は、このスーパーエンハンサー現象が、単に幹細胞と癌細胞にのみ生じることを最近見出した。これらの非常に増強された遺伝子は、幹様若しくは癌若しくは脱分化された状態および分化された状態の間の前後にトグルできるマスターON/OFFスイッチを構成する。私たちは、ナイーブ幹細胞でではなくより多く成熟したプライムド状態の幹細胞中のスーパーエンハンサーによってアップレギュレートされる遺伝子が幹細胞と癌細胞の両方の分化の重大な媒介物質になるだろうと仮定した。癌細胞は脱分化される、したがって、分化の誘導は、癌増殖および転移を阻害するだろう。ナイーブ幹細胞でではなくプライムド状態の幹細胞で非常にアップレギュレートした遺伝子は、LIN7A、VLDLR、GNAS、ZIC5、HES3、BDNF、FBXL17、RHOC、KLHL4、GREB 1L、EXT1、FEZF1、SΜLF1、BRD2、CDH9およびLRRTM2を含む。特に興味のあるのは、BRD2であり、それは、クロマチン、HES3、それは基礎的な螺旋ループ螺旋転写因子を制御する、とGNAS、それは分化にとって重要な多数の要因の活性を仲介する、との相互作用によって、1,450の他の遺伝子の発現を自身制御する。これらの遺伝子の発現を増加させる化合物、あるいは上記にリストされた他のスーパーエンハンサー遺伝子のいずれかは、それらの分化を引き起こすことにより癌を阻害するだろう。さらに、私たちは、最近、β-カテニンは幹細胞分化のキーレギュレータであることを見出した。活性化された、核のβ-カテニンの発現の減少は、幹細胞の分化を引き起こす。核の活性化されたβ-カテニンを定量することは困難なので、β-カテニンの代替えとしてAXIN2を測定することが一般的である、というのは、その発現が直接核の活性化されたβ-カテニンによって引き起こされるからである。私たち及び他は、microRNA-145(miR-145)の増加した発現は、幹細胞分化のオンセットの前兆であることを示し (Xu, N, et al. MicroRNA-145 RegμLates OCT4, SOX2, and KLF4 and Represses Pluripotency in Human Embryonic Stem Cells. Cell. 137(4), p647-658, 15 May 2009. DOI: 10.1016/j.cell.2009.02.038; and Smagghe et al PLoS ONE 2013)。SachdevaおよびMo(Cancer Res: 70(1); 378-87, 2010)、miR-145の増加した発現が、腫瘍細胞移動および侵襲を阻害すると報告した。彼らは、miR-145が、直接、腫瘍転移遺伝子MUC1、そしてextension によって、MUCl*、それは活性化されたβ-カテニンの発現を抑制、を抑制すると報告した。
【０１９８】
私たちは、これらのスーパーエンハンサー遺伝子、AXIN2、活性化β- カテニンの代替え、miR-145、MUC1、およびMUCl*リガンドNME7ABおよびNME7-X1のうちのいくつかの発現の変化を測定するためにRT-PCRを使用した。これらの実験は、本発明の化合物が、分化の重大な媒介物質であるスーパーエンハンサーのいくつかの標的遺伝子の発現を引き起こすことを示した。
さらに、本発明の化合物は、AXIN2、そしてextensionによって、β-カテニン、それは分化を引き起こす、の発現を抑制した  (図89A-89B)。さらに、本発明の化合物は、MUCl*リガンドNME7ABおよびNME7-X1、それは生体外及び動物で癌転移を引き起こす、の発現を抑制した(図90)。本発明の化合物は、さらに分化を引き起こし、かつ腫瘍細胞侵襲および移動を抑えると示されたmiR-145の発現を増加させた。図91A-91Cは、化合物MN1413、MN1423および1428で処置されたナイーブ状態幹細胞のRT-PCR測定のグラフを示す。見ることができるように、これらの化合物は、miR-145の発現を増加させた。図92A-92Cは、化合物MN1413、MN1423および1428で処置されたT47D癌細胞のRT-PCR測定のグラフを示す。見ることができるように、これらの化合物は、また、癌細胞中のmiR-145の発現を増加させた。したがって、本発明の化合物は、少なくとも一部分、βカテニン、MUClおよびその成長因子NME7ABの発現を減少させている間、分化にとって重要な遺伝子、それらのうちのいくらかはスーパーエンハンサー標的遺伝子であり、およびmiR-145、の発現を引き起こすことにより、腫瘍細胞移動および侵襲性を阻害する。本発明の新規化合物は、癌と転移癌の治療若しくは予防のための強力な作用薬である。本発明の新規化合物は、MUCl*陽性、及び／又はNME7AB若しくはNME7-X1陽性である癌の治療にとても有効になりえる。本発明の1つの様相では、患者からの生体試料は、MUCl*、NME7ABあるいはNME7-X 1の存在に関してテストされ、そして患者の癌がMUC1 *、NME7ABあるいはNME7-X1には陽性であるとの確認にもとづき、本発明の化合物が、癌を予防若しくは治療するのに適切な量を患者に投与される。1つの実例では、患者サンプルはPCRのようなテストにさらされ、MUCl、NME7あるいはNME7-X1をコードする核酸の量を決定される。本発明の1つの様相では、患者の癌は、各該当する遺伝子の発現が、ヒト多能性幹細胞でのそれらの発現と比較可能あるいはより高いならば、MUCl*陽性、NME7AB陽性あるいはNME7-X1陽性であると想定される。本発明の別の様相では、患者の癌は、各該当する遺伝子の発現が、それらの細胞でのEEF1A1発現の0.5%若しくはそれ以上である場合、MUCl*陽性、NME7AB陽性あるいはNME7-X1陽性であると想定される。さらに、本発明の別の様相では、患者の癌は、患者の組織標本がPSMGFRペプチドあるいはN-10ペプチドに結合する抗体と接触され、病理学的標準得点1-4(+〜++++)で組織の染色を受ける場合、MUCl*陽性であると考えられる。本発明の別の様相では、患者の癌は、患者の組織標本がNME7のB3ペプチドに結合する抗体と接触され、病理学的標準得点1-4(+〜++++)で組織の染色を受ける場合、NME7AB陽性あるいはNME7-X1陽性であると想定される。
【０１９９】
化合物
【０２００】
以下に、癌の治療若しくは予防での使用のための化合物を例示する。
以下に例証された化合物を要約する表は、図l8A-18Eで記述された。
【表Ａ−１】
2020512002.tif 000002
【表Ａ−２】
2020512002.tif 000003
【表Ａ−３】
2020512002.tif 000004
【表Ａ−４】
2020512002.tif 000005
【表Ａ−５】
2020512002.tif 000006
【表Ａ−６】
2020512002.tif 000007
【表Ａ−７】
2020512002.tif 000008
【表Ａ−８】
2020512002.tif 000009
【表Ａ−９】
2020512002.tif 000010
【表Ａ−１０】
2020512002.tif 000011
【表Ａ−１１】
2020512002.tif 000012
【表Ａ−１２】
2020512002.tif 000013
【表Ａ−１３】
2020512002.tif 000014
【表Ａ−１４】
2020512002.tif 000015
【表Ａ−１５】
2020512002.tif 000016
【表Ａ−１６】
2020512002.tif 000017
【表Ａ−１７】
2020512002.tif 000018
【０２０１】
ここに記述されたものは、癌若しくは癌転移の治療若しくは予防で使用される化合物である。
ここに記述された化合物のコンテキストでは、次の定義が適用される:
【０２０２】
本明細書のコンテキスト中で、置換基において「アルキル」置換基若しくはアルキルモエテイー（部分）は、他に記載がなければ、直鎖若しくは分枝鎖でありえ、又は一若しくはそれ以上のシクロアルキル基である若しくは含みうる。適切なアルキル基は、Cl-C9アルキル基、C1-C6アルキル基、C1-C4アルキル基およびC1-C3アルキル基を含むが、これに制限されない。アルキル基/部分の例は、メチル、エチル、n-プロピル基、i-プロピル基、n-ブチル、i-ブチル、t-ブチル、n-ペンチル、2,4,4-トリメチルペンチル、2-メチルシクロペンチル、シクロペンチルメチルおよび以下に例証されるようなシクロアルキル基/部分を含む。アルキル基はすべて、もし他で述べられなかったならば、置換基を有していてもよいし、もたなくともよい。
【０２０３】
「アルキル」は、異種原子を含んでいないアルキル基を指す。したがって、該文言は、メチル、エチル、プロピル、ブチル、ペンチル、ヘキシル、ヘプチル、オクチル、ノニル、デシル、ウンデシル、ドデシルおよびその他同種のもののような直鎖アルキル基を含む。該文言は、これらに限定されないが、次の例で提供される次のものを含む、直鎖アルキル基の分枝鎖異性体を含む: 
【表Ｂ】
2020512002.tif 000019
【０２０４】
「ハロゲン」あるいは「ハロ」は、クロロ、ブロモ、フルオロおよびヨード基を指す。用語「ハロアルキル」は、1つ以上のハロゲン原子で置換アルキルラジカルを指す。用語「ハロアルコキシ」は、1つ以上のハロゲン原子で置換アルコキシラジカルを指す。
【０２０５】
「ハロアルキル」置換基若しくは置換基におけるハロアルキル部分は、1以上、例えば1、2、3、4あるいは5、の水素原子がハロゲン原子、つまり、フッ素、塩素、臭素あるいはヨウ素原子によって、独立して置換されている、アルキル基若しくは部分を指す。適切なハロアルキル基は、制限されないが、ハロ(Cl-C3)アルキル、そしてハロ(Cl-Cn)アルキルを含む。ハロアルキル基/部分の例は、フルオロメチル、ジフルオロメチル、トリフルオロメチルおよび2,2,2-トリフルオロエチルを含む。
【０２０６】
シクロアルキル置換基若しくは置換基中のシクロアルキル部分は、例えば、3〜8つの炭素原子を含む飽和ヒドロカルビル環を指し、その例は、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチルおよびシクロヘキシルを含む。他に説明がなければ、シクロアルキル置換基あるいは部分は、単環、二環(例えば、融合された若しくはスピロ)、多環ヒドロカルビル環を含む。シクロアルキル置換基あるいは置換基中のシクロアルキル部分は、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチルおよびシクロヘキシルを含む。
【０２０７】
「ヘテロアルキル」置換基若しくは置換基中のヘテロアルキル部分は、アルキル基若しくは部分であって、そこで、それによって該基若しくは部分が分子の残りに結合するあらゆる第二級若しくは第三級炭素原子を含んでいる、1〜4つの第二級若しくは第三級炭素原子が、第二級炭素原子の場合は窒素、酸素および硫黄から選ばれるヘテロ原子によって、第三級炭素原子の場合は窒素によって、独立して置換される、を参照する。ヘテロアルキル基/部分の例は、メトキシ、メチルアミノ、メチルスルファニル、エトキシ、エチルアミノ、ジメチルアミノ、エチルスルファニル、プロピルオキシ、メトキシエチル、プロピルアミノ、メチルエチルアミノ、プロピルスルファニル、メチルスルファニルエチル、テトラヒドロピラニルオキシ、N-メチルピロリジニル、及び/又は以下に記載の例示されるへテロシクロアルキル基/部分を含む。
【０２０８】
「ヘテロシクロアルキル」置換基若しくは置換基中のヘテロシクロアルキル部分は、シクロアルキル基若しくは部分であって、そこで、それによって該基若しくは部分が分子の残りに結合するあらゆる第二級若しくは第三級炭素原子を含んでいる、1〜4つの第二級若しくは第三級炭素原子が、第二級炭素原子の場合は窒素、酸素および硫黄から選ばれるヘテロ原子によって、第三級炭素原子の場合は窒素によって、独立して置換される、を参照する。ヘテロシクロアルキル基/部分の例は、テトラヒドロフラニル、ピロリジニル、テトラヒドロチオフェニル、テトラヒドロピラニル、ピペリジニル、ピペラジニル、モルフォリニル及びチモルフォリニルを含む。
【０２０９】
「アルケニル」置換基若しくは置換基中のアルケニル部分は、1つ以上の炭素-炭素二重結合をもつ不飽和のアルキル基若しくは部分を指す。限定されないが、適切な「アルケニル」は、C1-C9アルケニル、C1-C6アルケニル、C1-C4アルケニルおよびC1-C3アルケニルを含む。アルケニル基/部分の例は、エテニル、プロペニル、1-ブテニル、2-ブテニル、1-ペンテニル、1-ヘキセニル、1,3-ブタジエニル、1,3-ペンタジエニル、1,4-ペンタジエニル、1,4-ヘキサジエニルおよび以下に例証されるようなシクロアルケニル基/部分を含む。
【０２１０】
「シクロアルケニル」置換基若しくは置換基中のシクロアルケニル部分は、1つ以上の炭素-炭素二重結合をもち、そして、例えば3〜8つの炭素原子、その例はシクロペント-l-エン-1-イル、シクロヘキサ-l-エン-l-イルおよびシクロヘキサ-l,3-ジエン-l-イルを含む、を含む、不飽和のハイドロカルビニル環を指す。他に記述がなければ、シクロアルケニル置換基若しくは部分は、単環、二環（例えば、融合された若しくはスピロ）及び多環ハイドロカルビニル環を含む。
【０２１１】
「ヘテロアルケニル」置換基若しくは置換基中のヘテロアルケニル部分は、アルケニル基若しくは部分であり、そこで、それによって該基若しくは部分が分子の残りに結合するあらゆる第二級若しくは第三級炭素原子を含んでいる、1〜4つの第二級若しくは第三級炭素原子が、第二級炭素原子の場合は窒素、酸素および硫黄から選ばれるヘテロ原子によって、第三級炭素原子の場合は窒素によって、独立して置換される、を参照する。ヘテロアルケニル基/部分の例は、エテニルオキシ、エテニルアミノ、エテニルスルファニル、エテニルオキシエチル及び以下に例証されるようなヘテロシクロアルケニル基/部分を含む。
【０２１２】
「ヘテロシクロアルケニル」置換基若しくは置換基中のヘテロシクロアルケニル部分は、シクロアルケニル基若しくは部分であり、そこで、それによって該基若しくは部分が分子の残りに結合するあらゆる第二級若しくは第三級炭素原子を含んでいる、1〜4つの第二級若しくは第三級炭素原子が、第二級炭素原子の場合は窒素、酸素および硫黄から選ばれるヘテロ原子によって、第三級炭素原子の場合は窒素によって、独立して置換される、を参照する。ヘテロシクロアルケニル基/部分の例は、ジヒドロピラニル及びジヒドロフラニルを含む。
【０２１３】
「アルキニル」置換基あるいは置換基中のアルキニル部分は、1つ以上の炭素‐炭素三重結合がある不飽和のアルキル基若しくは部分を指す。アルキニル基/部分の例は、エチニル、プロパルギル、but-l-イニル及びbut-2-イニルを含む。
【０２１４】
「ヘテロアルキニル」置換基若しくは置換基中のヘテロアルキニル部分はアルキニル基若しくは部分であり、そこで、それによって該基若しくは部分が分子の残りに結合するあらゆる第二級若しくは第三級炭素原子を含んでいる、1〜4つの第二級若しくは第三級炭素原子が、第二級炭素原子の場合は窒素、酸素および硫黄から選ばれるヘテロ原子によって、第三級炭素原子の場合は窒素によって、独立して置換される、を参照する。ヘテロアルキニル基/部分の例は、エチニルオキシとプロパルギルアミノを含む。
【０２１５】
「アリル」置換基あるいは置換基中のアリル基を含む部分は、単環芳香族炭化水素および多環縮合環芳香族炭化水素を含む。アリル基/部分の例は、フェニル、ナフチル、アントラセニルおよびフェナンスレニルを含む。
【０２１６】
「ヘテロアリル」置換基あるいは置換基中のヘテロアリル部分は、単環芳香族および多環縮合環芳香族基であり、そこで、1〜4つの環原子が、独立して、窒素、酸素および硫黄から選ばれ、環原子の残りが炭素である。
ヘテロアリル基/部分の例は下記を含む:
【表Ｃ】
2020512002.tif 000020
【０２１７】
本発明の目的のために、部分の組み合わせは、1つの基として、例えばアリルアルキル、アリルアルケニル、アリルアルキニル、アルキルアリル、アルケニルアリル、及びアルキニルアリルに参照され、最後の言及された部分は、基が分子の残りに結合している原子を含む。シクロアルキルアルキルの一例は、シクロプロピルメチルである。
【０２１８】
どこで、接頭語「ヘテロ」が、一つの基として、例えば、ヘテロ(アリールアルキル)に参照される部分の組合せに関して使用される場合、組み合せ内の部分のいずれか若しくは全てがヘテロ部分である。かくして、用語へテロ(アリールアルキル)は、ヘテロアリルアルキル、アリルヘテロアルキル及びヘテロアリルヘテロアルキルを包含する。ヘテロ(アリルアルキル)基/部分の例は、ピリジニルメチル、フェノキシ、N-アニリニル及びピリジニルオキシエチルを含む。
【０２１９】
基が置換されることができるとの記述は、基が、例えば、ハロゲン、トリフルオロメチル、メチルカルボキシ、エチルカルボキシ、メトキシ、エトキシ、C1-C6アルコキシ、C1-C6アルキル、-OH、-SH、-NH2、-N3、-CN、-NO2、-CHO、-COOH、-CONH2、-C(=NH)NH2、あるいは-SO3Hから選ばれる、独立して、一若しくはそれ以上で、置換されうる。
以下の定義で、R数字、Z数字、G数字は、説明及び各請求項において、各数字は下付き表示としていないが、各式の図面においては、いずれも下付き表示とした。
【０２２０】
1つの様相では、本発明は、式-1の化合物を示す:
式１
【化１】
2020512002.tif 000021
【０２２１】
RlはHであり、任意に置換C1-C6アルキル;  任意に置換C3-C4シクロアルキル;  任意に置換C2-C6アルケニル;  任意に置換C1-C6アルコキシ;  任意に置換C6-C12アリル;   N、SおよびOから独立して選ばれた1〜4の環原子をもつ任意に置換C1-C9ヘテロアリル;  制限されないがベンジルまたはアルファ−メチルベンジルのような任意に置換C7-C15 アリルアルキル; N、SおよびOから独立して選ばれた1〜4の環原子をもつ任意に置換C2-C15ヘテロアリルアルキル;  任意に置換C7-C15アリルアルケニル;  任意に置換C3-C8シクロアルキル;  あるいは任意に置換C4-C8シクロアルキルアルキルである;
【０２２２】
R2は水素であり、制限されないがメトキシ若しくはエトキシのようなC1-C6アルコキシ、トリフルオロメチル、ハロゲン、メチルカルボキシ、エチルカルボキシ、任意に置換C1-C6アルキル、-OH、-SH、-NH2、-N3、-CN、-NO2、-CHO、-COOH、-CONH2、-C(=NH)NH2、あるいは-SO3H;
【０２２３】
ここで、置換は、ハロゲン、トリフルオロメチル、メチルカルボキシ、エチルカルボキシ、制限されないがメトキシ若しくはエトキシのようなC1-C6アルコキシ、C1-C6アルキル、-OH、-OCH3、-OC2H5、-O-Cl-C4アルキル、-SH、-NH2、-N3、-CN、-NO2、-CHO、-COOH、-CONH2、-C(=NH)NH2、あるいは-SO3Hから、独立に、選ばれた、１若しくは１以上で置換されることを意味する。
【０２２４】
1つの態様では、RlはC2-C4アルキル、あるいはC3-C4シクロアルキルでありえる。
【０２２５】
1つの態様では、Rlはメチルでありえる。
【０２２６】
1つの態様では、Rlはエチル、イソプロピル、シクロプロピルあるいはイソブチルでありえる。
【０２２７】
1つの態様では、Rlはエチル、イソプロピルあるいはシクロプロピルでありえる、
【０２２８】
1つの態様では、R2はH、ハロゲンあるいはメチルでありえる。
【０２２９】
1つの態様では、R2はH、F、ClあるいはMeでありえる。
【０２３０】
1つの態様では、R2はHである。
【０２３１】
1つの態様では、Rlはエチル、イソプロピル、シクロプロピルあるいはイソブチルである。また、R2は水素、ハロゲン、トリフルオロメチル、メチルカルボキシ、エチルカルボキシ、制限されないがメトキシ若しくはエトキシのようなC1-C6アルコキシ、C1-C6アルキル、-OH、-SH、-NH2、-N3、-CN、-NO2、-CHO、-COOH、-CONH2、-C(=NH)NH2、あるいは-SO3Hである。
【０２３２】
別の態様では、Rlはエチル、イソプロピル、シクロプロピルあるいはイソブチルであり、R2は水素、ハロゲン、トリフルオロメチル、メチルカルボキシ、エチルカルボキシ、制限されないがメトキシ若しくはエトキシのようなC1-C6アルコキシ、C1-C6アルキル、-OH、-NH2、-CN、-CHO、-COOH、あるいは-CONH2である。
【０２３３】
別の態様では、Rlはエチル、イソプロピル、あるいはシクロプロピルであり、R2は水素、ハロゲン、トリフルオロメチル、メチルカルボキシ、エチルカルボキシ、制限されないがメトキシ若しくはエトキシのようなC1-C6アルコキシ、あるいはC1-C6アルキルである。
【０２３４】
1つの様相では、本発明は、化学式2の化合物を示す:
式２：
【化２】
2020512002.tif 000022
【０２３５】
RlはHであり、任意に置換C1-C6アルキル;  任意に置換C2-C6アルケニル;  任意に置換C1-C6アルコキシ;  任意に置換C6-C12アリル;   N、SおよびOから独立して選ばれた1〜4の環原子をもつ任意に置換C1-C9ヘテロアリル;  制限されないがベンジルまたはアルファ−メチルベンジルのような任意に置換C7-C15 アリルアルキル;  N、SおよびOから独立して選ばれた1〜4の環原子をもつ任意に置換C1-C9ヘテロアリルアルキル;  任意に置換C7-C15 アリルアルケニル;  任意に置換C3-C8シクロアルキル;  あるいは任意に置換C4-C8シクロアルキルアルキルである；
【０２３６】
R2はHであり、制限されないがメトキシ若しくはエトキシのようなC1-C6アルコキシ、トリフルオロメチル、ハロゲン、メチルカルボキシ、エチルカルボキシ、任意に置換C1-C6アルキル、-OH、-SH、-NH2、-N3、-CN、-NO2、-CHO、-COOH、-CONH2、-C(=NH)NH2、あるいは-SO3Hである；
【０２３７】
Zlは結合基であり、-NH-、-O-、-S-、-CH(CH3)-、-(CH2)n-、-C3-C7シクロアルキル-CH2-、-CH=CH-、-CO-、-SO-、-SO2-あるいは-C(=NH)-、-CH2NH(CO)-、-CH2NH(CO)O-、-CH2NH(CO)NH-;  -(CH2)nNH(CO)-、-(CH2)nNH(CO)O-、-(CH2)mNH(CO)NH-;  -C3-C7 シクロアルキル-CH2NH(CO)-、-C3-C7シクロアルキル-CH2NCH3(CO)-、-C3-C7シクロアルキル-CH2NH(CO)O-、-C3-C7シクロアルキル-CH2NCH3(CO)O-、-C3-C7シクロアルキル-CH2NH(CO)NH-、-C3-C7シクロアルキル-CH2NCH3(CO)NH-、-(CH2)nN(CH2CH2C6H5)-、あるいは任意に置換C6-C12アリル;
【０２３８】
Z3は、-OH、-OCH3、-O-C1-C6アルキル、-O-CH2C6H5、-NH2、-NH(C1-C6アルキル)、-N(C1-C6アルキル)2、-C1-C6アルキルである;
【０２３９】
R3はH、任意に置換C1-C9アルキル、C2-C6アルケニルである;  任意に置換C6-C12アリル、N、SおよびOから独立して選ばれた1〜4の環原子をもつ任意に置換C1-C9ヘテロアリル;  制限されないがベンジル若しくはアルファ-メチルベンジルのような任意に置換C7 -C15アリルアルキル;  あるいは任意に置換C3-C7シクロアルキル;  -(CH2)n-NH(CO)O-(Cl-C6アルキル); -CH2O(CH2)P-NH(CO)O-(C1-C6)アルキル; -(CH2)p-NHCO(CH2)m-NH(CO)O-C1-C6アルキル; -NH(CO)O-tert-ブチル;-O-tert-ブチル; あるいは-tert-ブチル; CONH-アリル;
【０２４０】
m = 1-5; n=1-8; p=1-9;
【０２４１】
ここで、置換は、ハロゲン、トリフルオロメチル、メチルカルボキシ、エチルカルボキシ、制限されないがメトキシ若しくはエトキシのようなC1-C6アルコキシ、C1-C6アルキル、-OH、-OCH3、-OC2H5、-O-Cl-C4アルキル、-SH、-NH2、-N3、-CN、-NO2、-CHO、-COOH、-CONH2、-C(=NH)NH2、あるいは-SO3Hから、独立に、選ばれた、１若しくは１以上で置換されることを意味する。
【０２４２】
1つの態様では、RlはH、C1-C4アルキル(例えばメチル、エチル、イソプロピル、イソブチル)、フェニル、ハロゲン置換フェニル、メチルカルボキシ置換フェニル、メトキシ置換フェニル、エトキシ置換フェニル、メチル置換フェニル;  ヘテロアリル、ピリジル、ベンジル、あるいはアルファ-メチルベンジルである。
【０２４３】
1つの態様では、RlはHあるいはC2-C4アルキルでありえる。
【０２４４】
1つの態様では、RlはHである。
【０２４５】
1つの態様では、R2はH、ハロゲン、メチルあるいはメトキシでありえる。
【０２４６】
1つの態様では、Zlは結合基であり、-NH-、-CH2-、-(CH2)2-、-(CH2)3-、-CH=CH-、置換フェニル、-CH2NH(CO)O-、-(CH2)2NH(CO)O-、-(CH2)3NH(CO)O-、-(CH2)4NH(CO)O-、-(CH2)5NH(CO)O-、-CH2NH(CO)-、-CH(CH3)NH(CO)O-、-CH2NH(CO)NH-、-CH2NH(CO)CH2NH(CO)O-、-CH2O(CH2)2NH(CO)O-あるいは-シクロヘキシル-CH2NH(CO)O-でありえる。
【０２４７】
1つの態様では、Z3は、-OH、-OCH3、-O-C1-C6アルキル、-NH2、-N(C1-C6アルキル)2あるいは-C1-C6アルキルでありえる。
【０２４８】
1つの態様では、R3は、エチル、ブチル、イソブチル、ペンチル、2,4,4-トリメチルペンチル、ヘプチル、オクチル、フェニル；メチル、エチル、ハロゲン、エトキシ若しくはメトキシで置換フェニル基である。
【０２４９】
1つの態様では、Rlはイソブチル、R3は-NH(CO)O-tert-ブチル、R2は水素、ハロゲン、トリフルオロメチル、メチルカルボキシ、エチルカルボキシ、メトキシ、エトキシ、C1-C6アルコキシ、C1-C6アルキル、-OH、-SH、-NH2、-N3、-CN、-NO2、-CHO、-COOH、-CONH2、-C(=NH)NH2あるいは-SO3Hでありえる。
【０２５０】
別の態様では、Rlはイソブチル、Zlはシクロヘキシルメチル、R3は-NH(CO)O-tert-ブチルである、R2は水素、ハロゲン、トリフルオロメチル、メチルカルボキシ、エチルカルボキシ、制限されないがメトキシ/エトキシのようなC1-C6アルコキシ、C1-C6アルキル、-OH、-SH、-NH2、-N3、-CN、-NO2、-CHO、-COOH、-CONH2、-C(=NH)NH2あるいは-SO3Hである。
【０２５１】
1つの態様では、Rlはイソブチル、ZlはC1-C5アルキル、R3は-NH(CO)O-tert-ブチルあるいは-NH(CO)CH2-イソプロピル、R2は水素、ハロゲン、トリフルオロメチル、メチルカルボキシ、エチルカルボキシ、制限されないがメトキシ若しくはエトキシのようなC1-C6アルコキシ、C1-C6アルキル、-OH、-SH、-NH2、-N、-CN、-NO2、-CHO、-COOH、-CONH2、-C(=NH)NH2あるいは-SO3Hでありうる。
【０２５２】
1つの態様では、Rlはイソブチル、R3は-NH(CO)O-tert-ブチル、そして、R2は水素、ハロゲン、トリフルオロメチル、メチルカルボキシ、エチルカルボキシ、制限されないがメトキシ若しくはエトキシのようなC1-C6アルコキシ、C1-C6アルキル、-OH、-SH、-NH2、-N3、-CN、-NO2、-CHO、-COOH、-CONH2、-C(=NH)NH2あるいは-SO3Hでありうる。
【０２５３】
1つの態様では、Rlはエチル、イソブチル、イソプロピル、ベンジル、Zlは(CH2)4-9-、R3は-NH(CO)O-tert-ブチル、R2は水素、ハロゲン、トリフルオロメチル、メチルカルボキシ、エチルカルボキシ、メトキシ、エトキシ、C1-C6アルコキシ、C1-C6アルキル、-OH、-SH、-NH2、-N3、-CN、-NO2、-CHO、-COOH、-CONH2、-C(=NH)NH2あるいは-SO3Hである。
【０２５４】
1つの態様では、Zlは (CH2)4-9-、R3は-NH(CO)O-tert-ブチル、R2は水素、Rlは水素、ハロゲン、トリフルオロメチル、メチルカルボキシ、エチルカルボキシ、制限されないがメトキシ若しくはエトキシのようなC1-C6アルコキシ、C1-C6アルキル、-OH、-SH、-NH2、-N3、CN、-NO2、-CHO、-COOH、-CONH2、-C(=NH)NH2あるいは-SO3Hである。
【０２５５】
1つの態様では、Z１はシクロヘキシルメチルあるいはC3-C7シクロアルキル-CH2-基、R3は-NH(CO)O-tert-ブチル、Rlはイソブチル、R2はハロゲン、メチル、あるいはメトキシである。
【０２５６】
1つの様相では、本発明は、化学式3の化合物を示す:
式３
【化３】
2020512002.tif 000023
【０２５７】
RlはH、任意に置換C1-C6アルキル;  任意に置換C2-C6アルケニル;  任意に置換C1-C6アルコキシ;  任意に置換C6-C12アリル; N、SおよびOから独立して選ばれた1〜4の環原子をもつ任意に置換C1-C9ヘテロアリル;  制限されないがベンジルまたはアルファ−メチルベンジルのような任意に置換C7-C15 アリルアルキル;  N、SおよびOから独立して選ばれた1〜4の環原子をもつ任意に置換C1-C9ヘテロアリルアルキル;  任意に置換C7-C15 アリルアルケニル;  任意に置換若しくは未置換 C3-C8シクロアルキル;  あるいは、任意に、置換C4-C8シクロアルキルアルキルである;
【０２５８】
R2は水素、制限されないがメトキシ若しくはエトキシのようなC1-C6アルコキシ、トリフルオロメチル、ハロゲン、メチルカルボキシ、エチルカルボキシ、任意に置換C1-C6アルキル、-OH、-SH、-NH2、-N3、-CN、-NO2、-CHO、-COOH、-CONH2、-C(=NH)NH2、あるいは-SO3H;
【０２５９】
Glは結合基であり、-NH-、-O-、-S-、-CH(CH3)-、-(CH2)n-、-C3-C7シクロアルキル-、-C3-C7シクロアルキル-CH2-、-CH=CH-、-CO-、-SO-、-SO2-、-C(=NH)-、-CH2NH(CO)-、-CH2NH(CO)O-、-CH2NH(CO)NH-;  -(CH2)nNH(CO)-、- (CH2)nNH (CO)O-、-(CH2)mNH(CO)NH-;-C3-C7 シクロアルキル-NH(CO)-、-C3-C7シクロアルキル-CH2NH(CO)O-、-C3-C7シクロアルキル-NH(CO)NH-、-N(CH2CH2C6H5)-、制限されないが-シクロヘキシル-CH2-のような-C3-C7シクロアルキル-CH2-である;
【０２６０】
Z2は結合基であり、-NH-、-O-、-S-、-CH(CH3)-、-(CH2)n-、-CH=CH-、-CO-、-SO-、-SO2-、-C(=NH)-、-CH2NH(CO)-、-CH2NH(CO)O-、-CH2NH(CO)NH-;  -(CH2)pNH(CO)-、- (CH2)pNH (CO)O-、-(CH2)pNH(CO)NH-;  -C3-C7 シクロアルキル-NH(CO)-、-C3-C7シクロアルキル-NCH3(CO)-、-C3-C7シクロアルキル-CH2NH(CO)O-、-C3-C7シクロアルキル-CH2NCH3(CO)O-、-C3-C7シクロアルキル-NH(CO)NH-、-C3-C7シクロアルキル-NCH3(CO)NH-、-N(CH2CH2C6H5)-;あるいは、任意に、置換C6-C12アリルである;
【０２６１】
Z3は、-OH、-OCH3、-O-C1-C6アルキル、-O-CH2C6H5、-NH2、-NH(C1-C6アルキル)、-N(C1-C6アルキル)2、-C1-C6アルキルである;
【０２６２】
R5はH、メチルあるいは任意に置換C1-C6アルキルである;
【０２６３】
R4はH、制限されないがtert-ブチルのような任意に置換C1-C9アルキル;  任意に置換C2-C6アルケニル;   制限されないが任意に置換ナフチルのような任意に置換C6-C12アリル;  N、SおよびOから独立して選ばれた1〜4の環原子をもつ任意に置換C1-C9ヘテロアリル;  制限されないがベンジル若しくはアルファ-メチルベンジルのような置換C7-C15アリルアルキル;  任意に置換C3-C7シクロアルキル;-(CH2)P-NH(CO)O-(Cl-C6アルキル); - CH2O(CH2)P-NH(CO)O-(C1-C6)アルキル; -(CH2)p-NHCO(CH2)n-NH(CO)O-Cl-C6アルキル;  -NH(CO)O-tert-ブチル; あるいは-O-tert-ブチルである;
【０２６４】
m = 1-5;   n=1-8;   p=1-9;
【０２６５】
ここで、置換は、ハロゲン、トリフルオロメチル、メチルカルボキシ、エチルカルボキシ、制限されないがメトキシ若しくはエトキシのようなC1-C6アルコキシ、C1-C6アルキル、-OH、-OCH3、-OC2H5、-O-Cl-C4アルキル、-SH、-NH2、-N3、-CN、-NO2、-CHO、-COOH、-CONH2、-C(=NH)NH2、あるいは-SO3Hから、独立に、選ばれた、１若しくは１以上で置換されることを意味する。
【０２６６】
1つの態様では、Rlは、水素、C1-C4アルキル(例えばメチル、エチル、イソプロピル、イソブチル)、ベンジル、ピリジルのようなヘテロアリル、フェニル、およびハロゲン、トリフルオロメチル、メトキシ、シアノ、あるいはジアルキルアミノで置換されたフェニルである。
【０２６７】
1つの態様では、RlはHあるいはC1-C4アルキルでありえる。
【０２６８】
1つの態様では、RlはHである。
【０２６９】
1つの態様では、R2は水素、ハロゲン、メチルあるいはメトキシでありえる。
【０２７０】
1つの態様では、R2はHである。
【０２７１】
1つの態様では、Z2は-O-、-NH-、-CH2-、-(CH2)2-、-(CH2)3-、-(CH2)4-、-(CH2)5-、-CH(CH3)-、-CH2NH(CO)CH2-、-CH2O(CH2)2-、-シクロヘキシル-CH2-あるいは結合基である。
【０２７２】
1つの態様では、Z2はOである。
【０２７３】
1つの態様では、Z3は、-OH、-OCH3、-O-C1-C6アルキル、-NH2、-N(C1-C6アルキル)2あるいは-C1-C6アルキルでありえる。
【０２７４】
1つの態様では、Glは、-(CH2)-、-(CH2)2-、-(CH2)3-、-(CH2)4-、-(CH2)5-、- CH2OCH2CH2-、-CH(CH3)-、-CH2NHCOCH2 -あるいは-シクロヘキシル-CH2-でありうる。
【０２７５】
1つの態様では、Glは、-シクロヘキシル-CH2-である。
【０２７６】
1つの態様では、R5は、水素、メチルあるいは2-フェニルエチルでありえる。
【０２７７】
1つの態様では、R5は、メチルである。
【０２７８】
1つの態様では、R4は、任意に置換フェニル、ナフチル、ベンジル、置換イソプロピルあるいはt-ブチルでありえる。
【０２７９】
１つの態様では、R4は、C4アルキル、例えばt-ブチルでありえる。
【０２８０】
1つの態様では、ともに得られたZ2とR4は、-O-C4アルキル、例えば-O-t-ブチルのような-O-C1-C4アルキルである。
【０２８１】
1つの態様では、Rlはイソブチル、R5は水素、Z2は酸素、そしてR4はtert-ブチルであり、Glは酸素をもたず、R2は水素、ハロゲン、トリフルオロメチル、メチルカルボキシ、エチルカルボキシ、制限されないがメトキシ若しくはエトキシのようなCl-C6アルコキシ、C1-C6アルキル、-OH、-SH、-NH2、-N3、-CN、-NO2、-CHO、-COOH、-CONH2、-C(=NH)NH2、あるいは-SO3Hである。
【０２８２】
別の態様では、Rlはイソブチル、R5は水素、Z2は酸素、R4はtert-ブチル、Glはシクロヘキシルメチル、R2は水素、ハロゲン、トリフルオロメチル、メチルカルボキシ、エチルカルボキシ、制限されないがメトキシ若しくはエトキシのようなC1-C6アルコキシ、C1-C6アルキル、-OH、-SH、-NH2、-N3、-CN、-NO2、-CHO、-COOH、-CONH2、-C(=NH)NH2、あるいは-SO3Hである。
【０２８３】
別の態様では、Rlはイソブチル、R5は水素、Z2は酸素またはCH2、R4はtert-ブチルあるいはイソプロピル、GlはC1-C5アルキレン、R2は水素、ハロゲン、トリフルオロメチル、メチルカルボキシ、エチルカルボキシ、制限されないがメトキシ若しくはエトキシのようなC1-C6アルコキシ、Cl-C6アルキル、-OH、-SH、-NH2、-N3、-CN、-NO2、- CHO、-COOH、-CONH2、-C(=NH)NH2あるいは-SO3Hである。
【０２８４】
1つの態様Rlでは、イソブチル、R5は水素、Z2は酸素、R4はtert-ブチル、そしてR2は水素、ハロゲン、トリフルオロメチル、メチルカルボキシ、エチルカルボキシ、制限されないがメトキシ若しくはエトキシのようなC1-C6アルコキシ、C1-C6アルキル、-OH、-SH、-NH2、-N3、-CN、-NO2、- CHO、-COOH、-CONH2、-C(=NH)NH2あるいは-SO3Hである。
【０２８５】
1つの態様では、Rlはエチル、イソブチル、イソプロピルあるいはベンジルである、R5は水素、Z2は酸素、R4はtert-ブチル、Glは -(CH2)4-9-、R2は水素、ハロゲン、トリフルオロメチル、メチルカルボキシ、エチルカルボキシ、制限されないがメトキシ若しくはエトキシのようなC1-C6アルコキシ、Cl-C6アルキル、-OH、-SH、-NH2、-N3、-CN、-NO2、- CHO、-COOH、-CONH2、-C(=NH)NH2あるいは-SO3Hである。。
【０２８６】
1つの態様では、R5は水素、Z2は酸素、R4はtert-ブチル、Glは-(CH2)4-9-、R2は水素、Rlは水素、ハロゲン、トリフルオロメチル、メチルカルボキシ、エチルカルボキシ、制限されないがメトキシ若しくはエトキシのようなC1-C6アルコキシ、Cl-C6アルキル、-OH、-SH、-NH2、-N3、-CN、-NO2、- CHO、-COOH、-CONH2、-C(=NH)NH2あるいは-SO3Hで置換されたフェニル環である。
【０２８７】
別の態様では、R5は水素、Z2は酸素、R4はtert-ブチル、Rlはイソブチル、R2はハロゲン、メチル、あるいはメトキシ、GlはシクロヘキシルメチルあるいはC3-C7シクロアルキル-CH2-基である。
【０２８８】
1つの様相では、本発明は、化学式4の化合物を示す:
式４
【化４】
2020512002.tif 000024
【０２８９】
RlはH、任意に置換C1-C6アルキル;  任意に置換C2-C6アルケニル;  任意に置換C1-C6アルコキシ;  任意に置換C6-C12アリル; N、SおよびOから独立して選ばれた1〜4の環原子をもつ任意に置換C1-C9ヘテロアリル;  制限されないがベンジルまたはアルファ−メチルベンジルのような任意に置換C7-C15 アリルアルキル;   N、SおよびOから独立して選ばれた1〜4の環原子をもつ任意に置換C1-C9ヘテロアリルアルキル;  任意に置換C7-C15 アリルアルケニル;  任意に置換C3-C8シクロアルキル;  あるいは任意に置換C4-C8シクロアルキルアルキルである;
【０２９０】
R2は水素、制限されないがメトキシ若しくはエトキシのようなC1-C6アルコキシ、トリフルオロメチル、ハロゲン、メチルカルボキシ、エチルカルボキシ、任意に置換C1-C6アルキル、-OH、-SH、-NH2、-N3、-CN、-NO2、- CHO、-COOH、-CONH2、-C(=NH)NH2あるいは-SO3Hで置換されたフェニル環である。
【０２９１】
Glは結合基であり、-NH-、-O-、-S-、-CH(CH3)-、-(CH2)n-、-C3-C7シクロアルキル-、-C3-C7シクロアルキル-CH2-、-CH=CH-、-CO-、-SO-、-SO2-、-C(=NH)-、-CH2NH(CO)-、-CH2NH(CO)O-、-CH2NH(CO)NH-;  -(CH2)nNH(CO)-、- (CH2)nNH (CO)O-、-(CH2)mNH(CO)NH-;  -C3-C7 シクロアルキル-NH(CO)-、-C3-C7シクロアルキル-CH2NH(CO)O-、-C3-C7シクロアルキル-NH(CO)NH-、-N(CH2CH2C6H5)-、制限されないが-シクロヘキシル-CH2-のようなC3-C7シクロアルキル-CH2-である。
【０２９２】
Z2は結合基であり、-NH-、-O-、-S-、-CH(CH3)-、-(CH2)n-、-CH=CH-、-CO-、-SO-、-SO2-、-C(=NH)-、-CH2NH(CO)-、-CH2NH(CO)O-、-CH2NH(CO)NH-;  -(CH2)pNH(CO)-、- (CH2)pNH (CO)O-、-(CH2)pNH(CO)NH-;  -C3-C7 シクロアルキル-NH(CO)-、-C3-C7シクロアルキル-CH2NH(CO)O-、-C3-C7シクロアルキル-NH(CO)NH-、あるいは-N(CH2CH2C6H5)-である;
【０２９３】
Z3は、-OH、-OCH3、-O-C1-C6アルキル、-OCH2C6H5、-NH2、-NH(C1-C6アルキル)、-N(C1-C6アルキル)2、-C1-C6アルキルである;
【０２９４】
R5は、H、メチルあるいは任意に置換C1-C6アルキルである;
【０２９５】
Xは、H、C1-C3アルキルあるいはC1-C3アリルアルキルである;
【０２９６】
m = 1-5; n=1-8; p=1-9;
【０２９７】
ここで置換とは、ハロゲン、トリフルオロメチル、メチルカルボキシ、エチルカルボキシ、メトキシ、エトキシ、C1-C6アルコキシ、C1-C6アルキル、-OH、-OCH3、-OC2H5、-O-Cl-C4アルキル、-SH、-NH2、-N3、-CN、-NO2、-CHO、-COOH、-CONH2、-C(=NH)NH2、あるいは-SO3Hから、独立に、選ばれた、１若しくは１以上で置換されることを意味する。
【０２９８】
1つの態様では、Rlは水素、メチル、エチル、イソプロピル、イソブチル、ベンジル、ピリジルのようなヘテロアリル、フェニル、及びハロゲン、メチル、トリフルオロメチル、メトキシ、シアノ、あるいはジアルキルアミノで置換されたフェニルである。
【０２９９】
1つの態様では、R 1は、HあるいはC1-C4アルキルでありえる。
【０３００】
1つの態様では、Rlは、Hである。
【０３０１】
1つの態様では、R2は、水素、ハロゲン、メチルあるいはメトキシでありえる。
【０３０２】
1つの態様では、Rは、Hである。
【０３０３】
1つの態様では、Glは、-(CH2)-、-(CH2)2-、-(CH2)3-、-(CH2)4-、-(CH2)5-、-CH2OCH2CH2-、-CH(CH3)-、-CH2NHCOCH2-、-CH2O(CH2)2-、-シクロヘキシル-CH2-若しくは結合基である。
【０３０４】
1つの態様では、Glは-シクロヘキシル-CH2-である。
【０３０５】
1つの態様では、Z2はO、NH、-CH2- あるいは結合基である。
【０３０６】
1つの態様では、Z2はOである。
【０３０７】
1つの態様では、Z3は、-OH、-OCH3、-O-C1-C6アルキル、-NH2、-N(C1-C6アルキル)2あるいは-C1-C6アルキルでありえる。
【０３０８】
1つの態様では、Z3はC1-C4アルキルでありえる。
【０３０９】
1つの態様では、Z3はメチルである。
【０３１０】
1つの態様では、R5は水素またはメチルでありえる。
【０３１１】
1つの態様では、R5はメチルである。
【０３１２】
1つの態様では、Xは水素またはメチルでありえる。
【０３１３】
1つの態様では、Xはメチルである。
【０３１４】
1つの態様では、Rlはイソブチル、R5は水素、Xはメチル、Z2は酸素、Glは鎖全長4-9の結合長で酸素原子をもたない、R2は水素、ハロゲン、トリフルオロメチル、メチルカルボキシ、エチルカルボキシ、制限されないがメトキシ若しくはエトキシのようなC1-C6アルコキシ、C1-C6アルキル、-OH、-SH、-NH2 、-N3、-CN、-NO2、- CHO、-COOH、-CONH2、-C(=NH)NH2あるいは-SO3Hである。
【０３１５】
別の態様では、Rlはイソブチル、R5は水素、Xはメチル、Z2は酸素、Glはシクロヘキシルメチル、R2は水素、ハロゲン、トリフルオロメチル、メチルカルボキシ、エチルカルボキシ、制限されないがメトキシ若しくはエトキシのようなCl-C6アルコキシ、C1-C6アルキル、-OH、-SH、-NH2 、-N3、-CN、-NO2、- CHO、-COOH、-CONH2、-C(=NH)NH2あるいは-SO3Hである
【０３１６】
別の態様では、Rlはイソブチル、R5は水素、Xはメチルまたは水素、Z2は酸素またはCH2である、GlはCl-5のメチレン基、R2は水素、ハロゲン、トリフルオロメチル、メチルカルボキシ、エチルカルボキシ、制限されないがメトキシ若しくはエトキシのようなC1-C6アルコキシ、Cl-C6アルキル、-OH、-SH、-NH2 、-N3、-CN、-NO2、- CHO、-COOH、-CONH2、-C(=NH)NH2あるいは-SO3Hである。
【０３１７】
別の態様では、Rlはイソブチル、R5は水素、Xはメチル、Z2は酸素、Glは4-9の結合長のリンカーである。また、R2は水素、ハロゲン、トリフルオロメチル、メチルカルボキシ、エチルカルボキシ、制限されないがメトキシ若しくはエトキシのようなC1-C6アルコキシ、C1-C6アルキル、-OH、-SH、-NH2 、-N3、-CN、-NO2、- CHO、-COOH、-CONH2、-C(=NH)NH2あるいは-SO3Hである。
【０３１８】
別の態様では、Rlはエチル、イソブチル、イソプロピル、ベンジル、R5は水素、Xはメチル、Z2は酸素、Glは(CH2)4-9-、R2は水素、ハロゲン、トリフルオロメチル、メチルカルボキシ、エチルカルボキシ、制限されないがメトキシ若しくはエトキシのようなC1-C6アルコキシ、C1-C6アルキル、-OH、-SH、-NH2 、-N3、-CN、-NO2、- CHO、-COOH、-CONH2、-C(=NH)NH2あるいは-SO3Hである。
【０３１９】
別の態様では、R5は水素、Xはメチル、Z2は酸素、Glは(CH2)4-9-、R2は水素、Rlは、水素、ハロゲン、トリフルオロメチル、メチルカルボキシ、エチルカルボキシ、メトキシ、エトキシ、C1-C6アルコキシ、C1-C6アルキル、-OH、-SH、-NH2 、-N3、-CN、-NO2、- CHO、-COOH、-CONH2、-C(=NH)NH2あるいは-SO3Hで置換されたフェニル環である。
【０３２０】
別の態様では、R5は水素、Xはメチル、Z2は酸素、Rlはイソブチル、R2はハロゲン、メチル、あるいはメトキシ、GlはシクロヘキシルメチルあるいはC3-C7シクロアルキル-CH2-基である。
【０３２１】
1つの様相では、本発明は、化学式5の化合物を示す:
式５
【化５】
2020512002.tif 000025
【０３２２】
RlはH、任意に置換C1-C6アルキル;  任意に置換C2-C6アルケニル;  任意に置換C1-C6アルコキシ;  任意に置換C6-C12アリル基; N、SおよびOから独立して選ばれた1〜4の環原子をもつ任意に置換C1-C9ヘテロアリル;  制限されないがベンジルまたはアルファ−メチルベンジルのような任意に置換C7-C15 アリルアルキル;   N、SおよびOから独立して選ばれた1〜4の環原子をもつ任意に置換C1-C9ヘテロアリルアルキル;  任意に置換アリルアルケニル;  任意に置換C3-C8シクロアルキル;  あるいは、任意に置換C4-C8シクロアルキルアルキルである;
【０３２３】
R2は水素、制限されないがメトキシ若しくはエトキシのようなC1-C6アルコキシ、トリフルオロメチル、ハロゲン、メチルカルボキシ、エチルカルボキシ、任意に置換C1-C6アルキル、-OH、-SH、-NH2 、-N3、-CN、-NO2、- CHO、-COOH、-CONH2、-C(=NH)NH2あるいは-SO3Hである;
【０３２４】
G2は結合基であり、-NH-、-O-、-S-、-CH(CH3)-、-(CH2)n-、-CH=CH-、-CO-、-SO-、-SO2-、-C(=NH)-、-CH2NH(CO)-、-CH2NH(CO)O-、-CH2NH(CO)NH-;  -(CH2)nNH(CO)-、- (CH2)nNH (CO)O-、-(CH2)mNH(CO)NH-;  制限されないが-シクロヘキシルのような-C3-C7シクロアルキル-、あるいは-N(CH2CH2C6H5)-である。
【０３２５】
Z2は結合基であり、-NH-、-O-、-S-、-CH(CH3)-、-(CH2)n-、-CH=CH-、-CO-、-SO-、-SO2-、-C(=NH)-、-CH2NH(CO)-、-CH2NH(CO)O-、-CH2NH(CO)NH-;  -(CH2)pNH(CO)-、- (CH2)pNH (CO)O-、-(CH2)pNH(CO)NH-;  -C3-C7 シクロアルキル-NH(CO)-、-C3-C7シクロアルキル-CH2NH(CO)O-、-C3-C7シクロアルキル-NH(CO)NH-、あるいは-N(CH2CH2C6H5)-である;
【０３２６】
Z3は、-OH、-OCH3、-O-C1-C6アルキル、-OCH2C6H5、-NH2、-NH(C1-C6アルキル)、-N(C1-C6アルキル)2、-C1-C6アルキルである;
【０３２７】
R5はH、メチルあるいは任意に置換C1-C6アルキルである;
【０３２８】
Xは、H、C1-C3アルキルあるいはC1-C3アリルアルキルである;
【０３２９】
m = 1-5; n=1-8; p=1-9;
【０３３０】
ここで置換とは、ハロゲン、トリフルオロメチル、メチルカルボキシ、エチルカルボキシ、メトキシ、エトキシ、C1-C6アルコキシ、C1-C6アルキル、-OH、-OCH3、-OC2H5、-O-Cl-C4アルキル、-SH、-NH2、-N3、-CN、-NO2、-CHO、-COOH、-CONH2、-C(=NH)NH2、あるいは-SO3Hから、独立に、選ばれた、１若しくは１以上で置換されることを意味する。
【０３３１】
1つの態様の中で、Rlは水素になりえる、C1-C4アルキル(例えばメチル、エチル、イソプロピル、イソブチル)、ベンジル、ピリジルのようなヘテロアリル、フェニル、“ハロゲン、トリフルオロメチル、メチル、メトキシ、シアノ、あるいはジアルキルアミノ”で置換されたフェニル、。
【０３３２】
1つの態様では、RlはHあるいはC1-C4アルキルでありえる。
【０３３３】
1つの態様では、RlはHである。
【０３３４】
1つの態様では、R2は水素、ハロゲン、メチルあるいはメトキシでありえる。
【０３３５】
1つの態様では、R2はHである。
【０３３６】
1つの態様では、G2は結合基であり、-CH2-、-(CH2)2-、-(CH2)3-、-(CH2)4-、-CH2OCH2-、-CH(CH3)-、-CH2NHCO-あるいは-シクロヘキシル-である。
【０３３７】
1つの態様では、G2はシクロヘキシルである。
【０３３８】
1つの態様では、Z2はO、CH2あるいはNHである。
【０３３９】
1つの態様では、Z2はOである。
【０３４０】
1つの態様では、Z3は、-OH、-OCH3、-O-C1-C6アルキル、-NH2、-N(C1-C6アルキル)2あるいは-C1-C6アルキルでありえる。
【０３４１】
1つの態様では、Z3はC1-C4アルキルである。
【０３４２】
1つの態様では、Z3はメチルである。
【０３４３】
1つの態様では、R5は水素またはメチルでありえる。
【０３４４】
1つの態様では、R5はメチルである。
【０３４５】
1つの態様では、Xは水素またはメチルでありえる。
【０３４６】
1つの態様では、Xはメチルである。
【０３４７】
1つの態様では、Rlはイソブチル、R5は水素、Z2は酸素、R5は水素、Xはメチル、G2は酸素をもたない、R2は水素、ハロゲン、トリフルオロメチル、メチルカルボキシ、エチルカルボキシ、メトキシ、エトキシ、C1-C6アルコキシ、C1-C6アルキル、-OH、-SH、-NH2、-N3、-CN、-NO2、-CHO、-COOH、-CONH2、-C(=NH)NH2、あるいは-SO3Hである。
【０３４８】
別の態様では、Rlはイソブチル、R5は水素、Xはメチル、Z2は酸素、G2はシクロヘキシル、R2は、水素、ハロゲン、トリフルオロメチル、メチルカルボキシ、エチルカルボキシ、メトキシ、エトキシ、C1-C6アルコキシ、C1-C6アルキル、-OH、-SH、-NH2、-N3、-CN、-NO2、-CHO、-COOH、-CONH2、-C(=NH)NH2、あるいは-SO3Hである。
【０３４９】
別の態様では、Rlはイソブチル、Z2は酸素またはCH2、R5は水素またはメチル、Xはメチル、G2は結合基あるいは-(CH2)1-4-、R2は水素、ハロゲン、トリフルオロメチル、メチルカルボキシ、エチルカルボキシ、メトキシ若しくはエトキシのようなC1-C6アルコキシ、C1-C6アルキル、-OH、-SH、-NH2、-N3、-CN、-NO2、-CHO、-COOH、-CONH2、-C(=NH)NH2、あるいは-SO3Hである。
【０３５０】
1つの態様では、Rlはイソブチル、Z2は酸素、R5は水素、Xはメチル、R2は、水素、ハロゲン、トリフルオロメチル、メチルカルボキシ、エチルカルボキシ、メトキシ、エトキシ、C1-C6アルコキシ、C1-C6アルキル、-OH、-SH、-NH2、-N3、-CN、-NO2、-CHO、-COOH、-CONH2、-C(=NH)NH2、あるいは-SO3Hである。
【０３５１】
別の態様では、Rlはエチル、イソブチル、イソプロピル、ベンジル、Z2は酸素、R5は水素、Xはメチル、G2は-(CH2)2-5、R2は水素、ハロゲン、トリフルオロメチル、メチルカルボキシ、エチルカルボキシ、制限されないがメトキシ若しくはエトキシのようなC1-C6アルコキシ、Cl-C6アルキル、-OH、-SH、-NH2、-N3、-CN、-NO2、-CHO、-COOH、-CONH2、-C(=NH)NH2、あるいは-SO3Hである。
【０３５２】
別の態様では、R5は水素、Xはメチル、Z2は酸素、G2は-(CH2)2-5、R2は水素、Rlは、水素、ハロゲン、トリフルオロメチル、メチルカルボキシ、エチルカルボキシ、メトキシ、エトキシ、C1-C6アルコキシ、C1-C6アルキル、-OH、-SH、-NH2、-N3、-CN、-NO2、-CHO、-COOH、-CONH2、-C(=NH)NH2、あるいは-SO3Hで置換されたフェニル環である。
【０３５３】
別の態様では、R5は水素、Xはメチル、Z2は酸素、Rlはイソブチル、R2はハロゲン、メチル、あるいはメトキシ、G2はシクロヘキシルあるいはC3-C7シクロアルキル-CH2-基である。
【０３５４】
1つの様相では、本発明は、化学式6の化合物を示す:
式６
【化６】
2020512002.tif 000026
【０３５５】
RlはH、任意に置換C1-C6アルキル;  任意に置換C2-C6アルケニル;  任意に置換C1-C6アルコキシ;  任意に置換C6-C12アリル;  N、SおよびOから独立して選ばれた1〜4の環原子をもつ任意に置換C1-C9ヘテロアリル;  制限されないがベンジルまたはアルファ−メチルベンジルのような任意に置換C7-C15 アリルアルキル; N、SおよびOから独立して選ばれた1〜4の環原子をもつ任意に置換C1-C9ヘテロアリルアルキル;  任意に置換C7-C15 アリルアルケニル;  任意に置換C3-C8シクロアルキル;  あるいは任意に置換C4-C8シクロアルキルアルキルである;
【０３５６】
R2は水素、制限されないがメトキシ若しくはエトキシのようなC1-C6アルコキシ、トリフルオロメチル、ハロゲン、メチルカルボキシ、エチルカルボキシ、任意に置換C1-C6アルキル、-OH、-SH、-NH2、-N3、-CN、-NO2、-CHO、-COOH、-CONH2、-C(=NH)NH2、あるいは-SO3Hである;
【０３５７】
R5はH、メチルあるいは任意に置換C1-C6アルキルである;
【０３５８】
Xは、H、C1-C3アルキルあるいはC1-C3アリルアルキルである;
【０３５９】
Z2は結合基であり、-NH-、-O-、-S-、-CH(CH3)-、-(CH2)n-、-CH=CH-、-CO-、-SO-、-SO2-、-C(=NH)-、-CH2NH(CO)-、-CH2NH(CO)O-、-CH2NH(CO)NH-;  -(CH2)nNH(CO)-、- (CH2)nNH (CO)O-、-(CH2)mNH(CO)NH-;  -C3-C7 シクロアルキル-NH(CO)-、-C3-C7シクロアルキル-CH2NH(CO)O-、-C3-C7シクロアルキル-NH(CO)NH-、あるいは-N(CH2CH2C6H5)-である
【０３６０】
Z3は、-OH、-OCH3、-O-C1-C6アルキル、-OCH2C6H5、-NH2、-NH(C1-C6アルキル)、-N(C1-C6アルキル)2、-C1-C6アルキルである;
【０３６１】
m = l-5; n=l-8;
【０３６２】
ここで置換とは、ハロゲン、トリフルオロメチル、メチルカルボキシ、エチルカルボキシ、メトキシ、エトキシ、C1-C6アルコキシ、C1-C6アルキル、-OH、-OCH3、-OC2H5、-O-Cl-C4アルキル、-SH、-NH2、-N3、-CN、-NO2、-CHO、-COOH、-CONH2、-C(=NH)NH2、あるいは-SO3Hから、独立に、選ばれた、１若しくは１以上で置換されることを意味する。
【０３６３】
1つの態様では、Rlはイソプロピルまたはイソブチルでありえる。
【０３６４】
1つの態様では、RlはHである。
【０３６５】
1つの態様では、R2はH、ハロゲンあるいはメチルでありえる。
【０３６６】
1つの態様では、R2はHである。
【０３６７】
1つの態様では、R5はHでありえる。
【０３６８】
1つの態様では、Xはメチルでありえる。
【０３６９】
1つの態様では、Z2はOでありえる。
【０３７０】
1つの態様では、Z3は、-OH、-OCH3、-O-C1-C6アルキル、-NH2、-N(C1-C6アルキル)2、-C1-C6アルキルでありえる。
【０３７１】
1つの態様では、Z3はC1-C4アルキルでありえる。
【０３７２】
1つの態様では、Z3はメチルである。
【０３７３】
1つの態様では、Rlはイソブチル、R5は水素、Z2は酸素、Xは水素、R2は水素、ハロゲン、トリフルオロメチル、メチルカルボキシ、エチルカルボキシ、制限されないがメトキシ若しくはエトキシのようなC1-C6アルコキシ、C1-C6アルキル、-OH、-SH、-NH2、-N3、-CN、-NO2、-CHO、-COOH、-CONH2、-C(=NH)NH2、あるいは-SO3Hである。
【０３７４】
別の態様では、Rlはイソプロピル、R5は水素、Z2は酸素、Xは水素、R2は水素、ハロゲン、トリフルオロメチル、メチルカルボキシ、エチルカルボキシ、制限されないがメトキシ若しくはエトキシのようなC1-C6アルコキシ、C1-C6アルキル、-OH、-SH、-NH2、-N3、-CN、-NO2、-CHO、-COOH、-CONH2、-C(=NH)NH2、あるいは-SO3Hである。
【０３７５】
別の態様では、Rlはイソブチルまたはイソプロピル、R5は水素またはメチル、Z2は酸素、Xは水素、R2は水素、ハロゲン、トリフルオロメチル、メチルカルボキシ、エチルカルボキシ、制限されないがメトキシ若しくはエトキシのようなC1-C6アルコキシ、C1-C6アルキル、-OH、-SH、-NH2、-N3、-CN、-NO2、-CHO、-COOH、-CONH2、-C(=NH)NH2、あるいは-SO3Hである。
【０３７６】
別の態様では、Rlはイソブチルまたはイソプロピル、R5は水素、Z2は-CH2-あるいは酸素、Xは水素またはCH3、R2は水素、ハロゲン、トリフルオロメチル、メチルカルボキシ、エチルカルボキシ、制限されないがメトキシ若しくはエトキシのようなC1-C6アルコキシ、C1-C6アルキル、-OH、-SH、-NH2、-N3、-CN、-NO2、-CHO、-COOH、-CONH2、-C(=NH)NH2、あるいは-SO3Hである。
【０３７７】
1つの様相では、本発明は、化学式7の化合物を示す:
式７
【化７】
2020512002.tif 000027
【０３７８】
RlはH、任意に置換C1-C6アルキル;   C3-C4 シクロアルキル;  任意に置換C2-C6アルケニル;  任意に置換C1-C6アルコキシ;
任意に置換C6-C12アリル基;   N、SおよびOから独立して選ばれた1〜4の環原子をもつ任意に置換C1-C9ヘテロアリル;  制限されないがベンジル若しくはアルファ-メチルベンジルのような置換C7 -C15アリルアルキル;   N、SおよびOから独立して選ばれた1〜4の環原子をもつ任意に置換C1-C9ヘテロアリルアルキル;  任意に置換C7-C15 アリルアルケニル;  任意に置換C3-C8シクロアルキル;  あるいは任意に置換C4-C8シクロアルキルアルキルである;
【０３７９】
R2は水素、制限されないがメトキシ若しくはエトキシのようなC1-C6アルコキシ、トリフルオロメチル、ハロゲン、メチルカルボキシ、エチルカルボキシ、任意に置換C1-C6アルキル、-OH、-SH、-NH2、-N3、-CN、-NO2、-CHO、-COOH、-CONH2、-C(=NH)NH2、あるいは-SO3Hである;
【０３８０】
R8はH、任意に置換C1-C6アルキル;   C3-C4 シクロアルキル;  任意に置換C2-C6アルケニル;  任意に置換C1-C6アルコキシ;  任意に置換C6-C12アリル;  N、SおよびOから独立して選ばれた1〜4の環原子をもつ任意に置換C1-C9ヘテロアリル;
制限されないがベンジル若しくはアルファ-メチルベンジルのような置換C7 -C15アリルアルキル;   N、SおよびOから独立して選ばれた1〜4の環原子をもつ任意に置換C1-C9ヘテロアリルアルキル;  任意に置換C7-C15 アリルアルケニル;  任意に置換C3-C8シクロアルキル;  あるいは任意に置換C4-C8シクロアルキルアルキル;
【０３８１】
ここで置換とは、ハロゲン、トリフルオロメチル、メチルカルボキシ、エチルカルボキシ、メトキシ、エトキシ、C1-C6アルコキシ、C1-C6アルキル、-OH、-OCH3、-OC2H5、-O-Cl-C4アルキル、-SH、-NH2、-N3、-CN、-NO2、-CHO、-COOH、-CONH2、-C(=NH)NH2、あるいは-SO3Hから、独立に、選ばれた、１若しくは１以上で置換されることを意味する。
【０３８２】
1つの態様では、RlはC2-C4アルキル、あるいはC3-C4シクロアルキルでありえる。
【０３８３】
1つの態様では、Rlはエチル、イソプロピルあるいはイソブチルでありえる。
【０３８４】
1つの態様では、Rlはエチルまたはイソプロピルでありえる。
【０３８５】
1つの態様では、R2はH、ハロゲンあるいはメチルでありえる。
【０３８６】
1つの態様では、R2はH、F、ClあるいはMeでありえる。
【０３８７】
1つの態様では、R2はHである。
【０３８８】
1つの態様では、R8はHである。
【０３８９】
1つの態様では、R8はMeである。
【０３９０】
1つの態様では、Rlはエチル、イソプロピルあるいはイソブチル、R2は水素、ハロゲン、トリフルオロメチル、メチルカルボキシ、エチルカルボキシ、制限されないがメトキシ若しくはエトキシのようなC1-C6アルコキシ、C1-C6アルキル、-OH、-SH、-NH2、-N3、-CN、-NO2、-CHO、-COOH、-CONH2、-C(=NH)NH2、あるいは-SO3Hである。
【０３９１】
別の態様では、Rlはエチル、イソプロピルあるいはイソブチル、R2は水素、ハロゲン、トリフルオロメチル、メチルカルボキシ、エチルカルボキシ、制限されないがメトキシ若しくはエトキシのようなC1-C6アルコキシ、C1-C6アルキル、-OH、-NH2、-CN、-CHO、-COOH、あるいは-CONH2である。
【０３９２】
別の態様では、Rlはエチル若しくはイソプロピル、R2は水素、ハロゲン、トリフルオロメチル、メチルカルボキシ、エチルカルボキシ、制限されないがメトキシ若しくはエトキシのようなC1-C6アルコキシ、あるいはC1-C6アルキルである。
[
【０３９３】
1つの様相では、本発明は、化学式8の化合物を示す:
式８
【化８】
2020512002.tif 000028
【０３９４】
そこでは、XはO、NH、SあるいはCH2である;
【０３９５】
Yは、O、N-Rl、N-CH2-R1、CH-R1あるいはCH-CH2-R1である;
【０３９６】
R0はH、あるいはC1-C5アルキルである。
【０３９７】
RlはH、C1-5アルキル、任意に置換アリル、任意に置換ヘテロアリルである;
【０３９８】
R2はH、あるいは任意に置換アリルである;
【０３９９】
R3はHあるいはC1-3アルキルである;
【０４００】
mは0またはlである;また、
【０４０１】
nは0またはlである;
【０４０２】
ここで置換とは、ハロゲン、トリフルオロメチル、メチルカルボキシ、エチルカルボキシ、メトキシ、エトキシ、C1-C6アルコキシ、C1-C6アルキル、-OH、-OCH3、-OC2H5、-O-Cl-C4アルキル、-SH、-NH2、-N3、-CN、-NO2、-CHO、-COOH、-CONH2、-C(=NH)NH2、あるいは-SO3Hから、独立に、選ばれた、１若しくは１以上で置換されることを意味する。
【０４０３】
いくつかの態様では、XはでOでありうる。二者択一に、XはCH2でありうる。
【０４０４】
いくつかの態様では、YはO、N-RlあるいはCH-R1でありうる。いくつかの態様では、YはN-Rlでありうる。あるいは、YはCH-R1でありうる。
【０４０５】
ある態様では、R0はHまたはメチルである。
【０４０６】
いくつかの態様では、RlはH、任意に置換アリル、任意に置換ヘテロアリルである;また、R2はHである。二者択一で、RlはH、R2は任意に置換アリルである。
【０４０７】
RlとR2のコンテキストでは、用語「任意に置換アリル」は、フェニル若しくは置換フェニルを参照する。置換アリル若しくはフェニルは、ハロゲン、メトキシ、メチル、アミノ及びニトロから選ばれる１若しくはそれ以上（例えば、1-3  若しくは  1-2）で置換されたアリル若しくはフェニルを参照する。
【０４０８】
Rlのコンテキストでは、用語「任意に置換ヘテロアリル」は任意に置換ピリジル、チアゾイル、イミダゾリルあるいはピリミジニルを参照する。ヘテロアリルは、ハロゲン、メトキシ、メチル、アミノ及びニトロから選ばれる１若しくはそれ以上（例えば、1-3  若しくは  1-2）で置換されうる。
【０４０９】
いくつかの態様では、Rlは、メチル、フェニル、4-ピリジル、3-ピリジル、2-ピリジル、4-アミノフェニル、4-フルオロフェニル、4-メトキシフェニル、4-ピリジル、3-ピリジル、2-ピリジル、4-ピリミジニル、4-ニトロフェニル、2-チアゾリル、4-(2-メチル)ピリジル、2-イミダゾリル、4-イミダゾリル、若しくは1-イミダゾリルである。
【０４１０】
いくつかの態様では、R3はHまたはメチルである。
【０４１１】
1つの態様では、YはN-Rlである; R0はCH3である; XはOまたはNHである; Rlは、フェニル、メチルあるいは4-ピリジル、3-ピリジルあるいは2-ピリジルのようなピリジルである; R2はHである; R3はHである; mは1である;また、nは1である。
【０４１２】
1つの態様では、YはCH-R1である; R0はCH3である; XはOまたはNHである; Rlはフェニル、又はハロゲン、アミノ、メトキシ若しくはニトロで置換されたフェニル（例えば4-アミノフェニル、4-フルオロフェニル、4-メトキシフェニル、4-ニトロフェニル）、又はピリジル(例えば4-ピリジル、3-ピリジル、2-ピリジル)、又はピリミジニル(例えば4-ピリミジニル)、2-チアゾリル、4-(2-メチル)ピリジル、4-ピリジルメチル、2-イミダゾリル、4-イミダゾリル又は1-イミダゾリルである。R2はHである; R3はHである; mは1である;また、nは0または1である。
【０４１３】
1つの態様では、YはOである; R0はCH3である; XはOである; R2はHである; R3はHである; mは1である;また、nは1である。
【０４１４】
1つの態様では、YはCH-R1である; R0はCH3である; XはOである; RlはHである; R2はHである; R3はHである; mは1である;また、nは1である。
【０４１５】
ここに例証されるように、化学式8の化合物は、MN1420、MN1427、MN1428、MN1429、MN1430、MN1432、MN1433、MN1434、MN1435、MN1436、MN1437、MN1438、MN1439、MN1440、MN1441、MN1442、MN1444、MN1445、MN1447、MN1448、MN1449、MN1450、MN1451、MN1452、MN1453、MN1454、MN1455、MN1456、MN1457 、MN1458、MN1459、MN1460あるいはMN1461から選ばれうる。
【０４１６】
1つの態様では、YはN-Rlである; Xは0である; R0はHまたはCH3である; Rlは、フェニル、メチル、4-ピリジル、3-ピリジルあるいは2-ピリジルである; R2はHである; R3はHである; mは1である;また、nは1である。
【０４１７】
1つの態様では、YはN-Rlである; XはNHである; R0はHまたはCH3である; Rlはフェニル、2-ピリジルあるいは3- ピリジルである; R2はHである; R3はHである; mは1である;また、nは1である。
【０４１８】
1つの態様では、YはCH-R1である; XはNHである; R0はCH3である; Rlは4-ピリジルあるいは2-ピリジルである; R2はHである; R3はHである; nは1である;また、mは1である。
【０４１９】
1つの態様では、YはCH-R1である; XはOである; R0はCH3である; Rlはフェニル、4-ピリジル、H、t-Bu-CON(CH3)-CH2-、-3-ピリジル、4-ピリミジニル、2-ピリミジニル、4-ニトロフェニル、2-チオゾリル、3-フルオロフェニル、4-メトキシフェニル、4-(2-メチル)ピリジル、4-ピリジルメチル、4-ピリジル、2-イミダゾリル、4-イミダゾリル、1-イミダゾリルあるいは4-アミノフェニルである。
【０４２０】
1つの様相で、本発明は、化学式9の化合物を示す:
式９
【化９】
2020512002.tif 000029
【０４２１】
そこでは、Qはヘテラリルである;
【０４２２】
R0はHあるいはC1-4アルキルである;
【０４２３】
XはO、NH、CH2である;
【０４２４】
R5はHまたはCH3である;また、
【０４２５】
nは1、2あるいは3である。
【０４２６】
いくつかの態様では、Qはモノサイクリック若しくはバイサイクリックヘテロアリルでありうる。例えば、Qは1-2の窒素原子を含むモノサイクリック若しくはバイサイクリックヘテロアリルでありうる。Qはピリジン、イソキノリン、インドールあるいはアザインドールでありうる。
【０４２７】
いくつかの態様では、R0はHまたはCH3でありうる。例えば、R0はCH3でありうる。
【０４２８】
いくつかの態様では、XはOである。
【０４２９】
いくつかの態様では、R5はHである。
【０４３０】
ここに例証されるように、化学式9の化合物は、MN1462、MN1463、MN1465、MN1468、MN1467およびMN1466から選ばれうる。
【０４３１】
1つの様相において、本発明は化学式１０の化合物を開示する:
式１０
【化１０】
2020512002.tif 000030
【０４３２】
そこでは、R0はHあるいはC1-4アルキルである;
【０４３３】
XはO、NHあるいはCH2である;
【０４３４】
R5はHあるいはC1-4アルキルである;
【０４３５】
GはNH、-CH=CH-、OまたはSである;また、
【０４３６】
nは1または2である。
【０４３７】
説明の目的のために、複素環の部分は位置2あるいは3の一方で接続される。
【０４３８】
いくつかの態様では、R0はHまたはCH3である。例えば、R0はCH3でありうる。
【０４３９】
いくつかの態様では、XはOである。
【０４４０】
いくつかの態様では、R5はHまたはCH3である。例えば、R5はHでありうる。
【０４４１】
いくつかの態様では、GはNHあるいは-CH=CH-である。
【０４４２】
ここに例証されるように、化学式10の化合物はMN1462、MN1463およびMN1465から選ばれうる。
【０４４３】
1つの様相では、本発明は、化学式11の化合物を示す:
式１１
【化１１】
2020512002.tif 000031
【０４４４】
そこでは、R0はHあるいはC1-4アルキルである;
【０４４５】
Xは0、CH2あるいはNHである;
【０４４６】
R4はH、CH3、OH、NH2である;
【０４４７】
R5はHあるいはC1-4アルキルである;また、
【０４４８】
nは1-3である。
【０４４９】
いくつかの態様では、R0はHまたはCH3である。例えば、R0はCH3である。
【０４５０】
いくつかの態様では、XはOである。
【０４５１】
いくつかの態様では、R5はHまたはCH3である。例えば、R5はHでありうる。
【０４５２】
いくつかの態様では、R4はHである。
【０４５３】
ここに例証されるように、化学式11の化合物はMN1468、MN1467およびMN1466から選ばれうる。
【０４５４】
1つの様相では、本発明は、化学式12の化合物を示す:
式１２
【化１２】
2020512002.tif 000032
【０４５５】
そこでは、R0はHあるいはC1-4アルキルである;
【０４５６】
XはO、NHあるいはCH2である;そして
【０４５７】
YはNまたはCHである。
【０４５８】
いくつかの態様では、R0はHまたはCH3である。例えば、R0はCH3である。
【０４５９】
いくつかの態様では、XはOである。
【０４６０】
いくつかの態様では、YはCHまたはNである。
【０４６１】
ここに例証されるように、化学式12の化合物はMN1431とMN1464から選ばれうる。
【０４６２】
1つの様相では、本発明は、化学式13の化合物を示す:
式１３
【化１３】
2020512002.tif 000033
【０４６３】
そこでは、R0はHあるいはC1-4アルキルである;そして
【０４６４】
XはO、NHあるいはCH2である。
【０４６５】
いくつかの態様では、R0はHまたはCH3である。例えば、R0はCH3である。
【０４６６】
いくつかの態様では、XはOである。
【０４６７】
1つの態様では、R0はCH3である。また、XはOである。
【０４６８】
ここに例証されるように、化学式13の化合物は合成のMN1434である。
【０４６９】
1つの様相では、本発明は、化学式14の化合物を示す:
式１４
【化１４】
2020512002.tif 000034
【０４７０】
そこでは、R0はHあるいはC1-4アルキルである;そして
【０４７１】
XはO、NHあるいはCH2である。
【０４７２】
いくつかの態様では、R0はHまたはCH3である。例えば、R0はCH3である。
【０４７３】
いくつかの態様では、XはOである。
【０４７４】
1つの態様では、R0はCH3である;また、XはOである。
【０４７５】
ここに例証されるように、化学式14の化合物は合成のMN1460である。
【０４７６】
1つの様相では、本発明は、化学式15の化合物を示す:
式１５
【化１５】
2020512002.tif 000035
【０４７７】
RlはH、任意に置換C1-C6アルキル;任意に置換C2-C6アルケニル;任意に置換C1-C6アルコキシ;任意に置換C6-C12アリル基; N、SおよびOから独立して選ばれた1〜4の環原子をもつ任意に置換C1-C9ヘテロアリル;制限されないがベンジルまたはアルファ−メチルベンジルのような任意に置換C7-C15 アリルアルキル; N、SおよびOから独立して選ばれた1〜4の環原子をもつ任意に置換C1-C9ヘテロアリルアルキル;任意に置換C7-C15 アリルアルケニル;任意に置換C3-C8シクロアルキル;あるいは任意に置換C4-C8シクロアルキルアルキルである;
【０４７８】
R2は水素、制限されないがメトキシ若しくはエトキシのようなC1-C6アルコキシ、トリフルオロメチル、ハロゲン、メチルカルボキシ、エチルカルボキシ、任意に置換C1-C6アルキル、-OH、-SH、-NH2、-N3、-CN、-NO2、-CHO、-COOH、-CONH2、-C(=NH)NH2、あるいは-SO3Hである。
【０４７９】
R5は、H、メチル、エチル、C1-C6アルキル、C1-C3アリルアルキルあるいは2-フェニルエチルである;
【０４８０】
Z2は結合基であり、-NH-、-O-、-S-、-CH(CH3)-、-(CH2)n-、-CH=CH-、-CO-、-SO-、-SO2-、-C(=NH)-、-CH2NH(CO)-、-CH2NH(CO)O-、-CH2NH(CO)NH-;  -(CH2)nNH(CO)-、- (CH2)nNH (CO)O-、-(CH2)mNH(CO)NH-である;
【０４８１】
R4はH、制限されないがtert-ブチルのような任意に置換C1-C9アルキル;任意に置換C2-C6アルケニル; 制限されないが任意に置換フェニルのような任意に置換C6-C12アリル; N、SおよびOから独立して選ばれた1〜4の環原子をもつ任意に置換C1-C9ヘテロアリル;制限されないがベンジル若しくはアルファ-メチルベンジルのような置換C7-C15アリルアルキル; -O-tert-ブチル;
【０４８２】
m = l-5; n=l-8;
【０４８３】
ここで置換とは、ハロゲン、トリフルオロメチル、メチルカルボキシ、エチルカルボキシ、メトキシ、エトキシ、C1-C6アルコキシ、C1-C6アルキル、-OH、-OCH3、-OC2H5、-O-Cl-C4アルキル、-SH、-NH2、-N3、-CN、-NO2、-CHO、-COOH、-CONH2、-C(=NH)NH2、あるいは-SO3Hから、独立に、選ばれた、１若しくは１以上で置換されることを意味する。
【０４８４】
1つの態様では、Rlはイソプロピルまたはイソブチルでありえる。
【０４８５】
1つの態様では、RlはHでありえる。
【０４８６】
1つの態様では、R2はH、ハロゲンあるいはメチルでありえる。
【０４８７】
1つの態様では、R5はHまたはCH3でありえる。例えば、R5はCH3である。
【０４８８】
1つの態様では、R4はt-ブチルである。
【０４８９】
1つの態様では、Z2はOでありえる。
【０４９０】
1つの態様では、Z2は-NH-でありえる。
【０４９１】
1つの態様では、Rlはイソブチルである、R5は水素である、Z2は酸素である、R4はt-ブチルである。
【０４９２】
また、R2は水素、ハロゲン、トリフルオロメチル、メチルカルボキシ、エチルカルボキシ、制限されないがメトキシ若しくはエトキシのようなC1-C6アルコキシ、C1-C6アルキル、-OH、-SH、-NH2、-N3、-CN、-NO2、-CHO、-COOH、-CONH2、-C(=NH)NH2、あるいは-SO3Hである。
【０４９３】
別の態様では、Rlはイソプロピルである、R5は水素である、Z2は酸素である、R4はt-ブチルである。
【０４９４】
別の態様では、RlはHである。また、R5はCH3である。例えば、RlはHでありうる; R5はCH3でありうる; R2はH、ハロゲンあるいはメチルでありうる; Z2は-O- あるいは-NH-である;また、R4はt-ブチルのようなC4アルキルでありうる。
【０４９５】
また、R2は水素、ハロゲン、トリフルオロメチル、メチルカルボキシ、エチルカルボキシ、制限されないがメトキシ若しくはエトキシのようなC1-C6アルコキシ、C1-C6アルキル、-OH、-SH、-NH2、-N3、-CN、-NO2、-CHO、-COOH、-CONH2、-C(=NH)NH2、あるいは-SO3Hである。
【０４９６】
別の態様では、Rlはイソブチルまたはイソプロピルである、R5は水素またはメチルである、Z2は酸素である、R4はt-ブチルである、またR2は水素、ハロゲン、トリフルオロメチル、メチルカルボキシ、エチルカルボキシ、制限されないがメトキシ若しくはエトキシのようなC1-C6アルコキシ、C1-C6アルキル、-OH、-SH、-NH2、-N3、-CN、-NO2、-CHO、-COOH、-CONH2、-C(=NH)NH2、あるいは-SO3Hである。
【０４９７】
別の態様では、Rlはイソブチルまたはイソプロピルである、R5は水素である、Z2は-CH2-あるいは酸素、R4はt-ブチル若しくは CH3である。また、R2は水素、ハロゲン、トリフルオロメチル、メチルカルボキシ、エチルカルボキシ、制限されないがメトキシ若しくはエトキシのようなC1-C6アルコキシ、C1-C6アルキル、-OH、-SH、-NH2、-N3、-CN、-NO2、-CHO、-COOH、-CONH2、-C(=NH)NH2、あるいは-SO3Hである。
【０４９８】
1つの様相では、本発明は、化学式16の化合物を示す:
式１６
【化１６】
2020512002.tif 000036
【０４９９】
G3はCHまたはNである;
【０５００】
RlはH、任意に置換C1-C6アルキル;任意に置換C2-C6アルケニル;任意に置換C1-C6アルコキシ;任意に置換C6-C12アリル基; N、SおよびOから独立して選ばれた1〜4の環原子をもつ任意に置換C1-C9ヘテロアリル;制限されないがベンジルまたはアルファ−メチルベンジルのような任意に置換C7-C15 アリルアルキル; N、SおよびOから独立して選ばれた1〜4の環原子をもつ任意に置換C1-C9ヘテロアリルアルキル;任意に置換C7-C15 アリルアルケニル;任意に置換C3-C8シクロアルキル;あるいは任意に置換C4-C8シクロアルキルアルキルである;
【０５０１】
R2は水素、制限されないがメトキシ若しくはエトキシのようなC1-C6アルコキシ、トリフルオロメチル、ハロゲン、メチルカルボキシ、エチルカルボキシ、任意に置換C1-C6アルキル、-OH、-SH、-NH2、-N3、-CN、-NO2、-CHO、-COOH、-CONH2、-C(=NH)NH2、あるいは-SO3Hである。
【０５０２】
R5は、メチル、エチル、C1-C6アルキル、C1-C3アリルアルキルあるいは2-フェニルエチルである;
【０５０３】
Z2は結合基であり、-NH-、-O-、-S-、-CH(CH3)-、-CH2-、-(CH2)n-、-CH=CH-、-CO-、-SO-、-SO2-、-C(=NH)-、-CH2NH(CO)-、-CH2NH(CO)O-、-CH2NH(CO)NH-;  -(CH2)nNH(CO)-、-(CH2)nNH (CO)O-、-(CH2)mNH(CO)NH-である;
【０５０４】
R4はH、制限されないがtert-ブチルのような任意に置換C1-C9アルキル;  任意に置換C2-C6アルケニル;   制限されないが任意に置換フェニルのような任意に置換C6-C12アリル; N、SおよびOから独立して選ばれた1〜4の環原子をもつ任意に置換C1-C9ヘテロアリル;  制限されないがベンジル若しくはアルファ-メチルベンジルのような置換C7 -C15アリルアルキル;-O-tert-ブチル;
【０５０５】
m = l-5; n=l-8;
【０５０６】
ここで置換とは、ハロゲン、トリフルオロメチル、メチルカルボキシ、エチルカルボキシ、メトキシ、エトキシ、C1-C6アルコキシ、C1-C6アルキル、-OH、-OCH3、-OC2H5、-O-Cl-C4アルキル、-SH、-NH2、-N3、-CN、-NO2、-CHO、-COOH、-CONH2、-C(=NH)NH2、あるいは-SO3Hから、独立に、選ばれた、１若しくは１以上で置換されることを意味する。
【０５０７】
1つの態様では、G3はHまたはNでありえる。
【０５０８】
1つの態様では、Rlは制限されないがメチル、エチル、プロピル、ブチルおよびシクロプロピルのようなC1-4アルキルでありえる。
【０５０９】
1つの態様では、Rlはイソプロピルまたはイソブチルでありえる。
【０５１０】
1つの態様では、Rlはメチルでありえる。
【０５１１】
1つの態様では、Rlはエチルでありえる。
【０５１２】
1つの態様では、Rlはシクロプロピルでありえる。
【０５１３】
1つの態様では、RlはHでありえる。
【０５１４】
1つの態様では、R2はH、ハロゲンあるいはメチルでありえる。
【０５１５】
1つの態様では、R5はHまたはCH3でありえる。例えば、R5はCH3でありえる。
【０５１６】
1つの態様では、R5はエチルでありえる。
【０５１７】
1つの態様では、R4はt-ブチルである。
【０５１８】
1つの態様では、Z2は-O-あるいは-NH-でありえる。例えば、Z2はOでありえ、二者択一で、Z2は-NH-でありえる。
【０５１９】
1つの態様では、R5はメチルである; Z2は-O-である;また、R4はt-ブチルである。
【０５２０】
1つの態様では、R5はメチルである; Z2は-NH-である;また、R4はt-ブチルである。
【０５２１】
1つの態様では、R5はHである; Z2は-O-である;また、R4はt-ブチルである。例えば、RlはまたC1-3アルキル;及び/又は、R2はHまたはメチルである。
【０５２２】
1つの態様では、RlはC1-4アルキルである; R2はH、ハロゲンあるいはメチルである; R5はメチルである; Z2は-O-である; R4はt-ブチルである。このコンテキストでは、G3はCHでありうる。
【０５２３】
1つの態様では、G3はNである、Rlはイソブチルである、R5は水素である、Z2は酸素である、R4はt-ブチルである。また、R2は水素、ハロゲン、トリフルオロメチル、メチルカルボキシ、エチルカルボキシ、制限されないがメトキシ若しくはエトキシのようなC1-C6アルコキシ、C1-C6アルキル、-OH、-SH、-NH2、-N3、-CN、-NO2、-CHO、-COOH、-CONH2、-C(=NH)NH2、あるいは-SO3Hである。
【０５２４】
別の態様では、G3はNである、Rlはイソブチルまたはイソプロピルである、R5は水素またはメチルである、Z2は酸素である、R4はt-ブチルである、またR2は水素、ハロゲン、トリフルオロメチル、メチルカルボキシ、エチルカルボキシ、制限されないがメトキシ若しくはエトキシのようなC1-C6アルコキシ、C1-C6アルキル、-OH、-SH、-NH2、-N3、-CN、-NO2、-CHO、-COOH、-CONH2、-C(=NH)NH2、あるいは-SO3Hである。
【０５２５】
別の態様では、G3はNである、Rlはイソブチルまたはイソプロピルである、R5は水素である、Z2はCH2あるいは酸素である、R4はt-ブチル若しくはCH3である。また、R2は水素、ハロゲン、トリフルオロメチル、メチルカルボキシ、エチルカルボキシ、制限されないがメトキシ若しくはエトキシのようなC1-C6アルコキシ、Cl-C6アルキル、-OH、-SH、-NH2、-N3、-CN、-NO2、-CHO、-COOH、-CONH2、-C(=NH)NH2、あるいは-SO3Hである。
【０５２６】
1つの様相では、本発明は、化学式17の化合物を示す:
式１７
【化１７】
2020512002.tif 000037
【０５２７】
RlはH、任意に置換C1-C6アルキル;任意に置換C2-C6アルケニル;任意に置換C1-C6アルコキシ;任意に置換C6-C12アリル;N、SおよびOから独立して選ばれた1〜4の環原子をもつ任意に置換C1-C9ヘテロアリル;制限されないがベンジルまたはアルファ−メチルベンジルのような任意に置換C7-C15 アリルアルキル; N、SおよびOから独立して選ばれた1〜4の環原子をもつ任意に置換C1-C9ヘテロアリルアルキル;任意に置換C7-C15 アリルアルケニル;任意に置換C3-C8シクロアルキル;あるいは任意に置換C4-C8シクロアルキルアルキルである;
【０５２８】
R2は水素、制限されないがメトキシ若しくはエトキシのようなC1-C6アルコキシ、トリフルオロメチル、ハロゲン、メチルカルボキシ、エチルカルボキシ、任意に置換C1-C6アルキル、-OH、-SH、-NH2、-N3、-CN、-NO2、-CHO、-COOH、-CONH2、-C(=NH)NH2、あるいは-SO3Hである。
【０５２９】
R5は、H、メチル、エチル、C1-C6アルキル、C1-C3アリルアルキルあるいは2-フェニルエチルである;
【０５３０】
Z2は結合基であり、-NH-、-O-、-S-、-CH(CH3)-、-CH2-、-(CH2)n-、-CH=CH-、-CO-、-SO-、-SO2-、-C(=NH)-、-CH2NH(CO)-、-CH2NH(CO)O-、-CH2NH(CO)NH-;  -(CH2)nNH(CO)-、-(CH2)nNH (CO)O-、-(CH2)mNH(CO)NH-である;
【０５３１】
R4はH、制限されないがtert-ブチルのような任意に置換C1-C9アルキル;  任意に置換C2-C6アルケニル;   制限されないが任意に置換フェニルのような任意に置換C6-C12アリル; N、SおよびOから独立して選ばれた1〜4の環原子をもつ任意に置換C1-C9ヘテロアリル;制限されないがベンジル若しくはアルファ-メチルベンジルのような置換C7 -C15アリルアルキル; - O-tert-ブチル;
【０５３２】
m = l-5; n=l-8;
【０５３３】
ここで置換とは、ハロゲン、トリフルオロメチル、メチルカルボキシ、エチルカルボキシ、メトキシ、エトキシ、C1-C6アルコキシ、C1-C6アルキル、-OH、-OCH3、-OC2H5、-O-Cl-C4アルキル、-SH、-NH2、-N3、-CN、-NO2、-CHO、-COOH、-CONH2、-C(=NH)NH2、あるいは-SO3Hから、独立に、選ばれた、１若しくは１以上で置換されることを意味する。
【０５３４】
1つの態様では、Rlはイソプロピルまたはイソブチルでありえる。
【０５３５】
1つの態様では、RlはHでありえる。
【０５３６】
1つの態様では、R2はH、ハロゲンあるいはメチルでありえる。例えば、R2はHでありえる。
【０５３７】
1つの態様では、R5はHまたはCH3でありえる。例えば、R5はCH3でありえる。
【０５３８】
1つの態様では、R4はt-ブチルである。
【０５３９】
1つの態様では、Z2は-O-あるいは-NH-でありえる。例えば、Z2はOでありえ、二者択一で、Z2は-NH-でありえる。
【０５４０】
1つの態様では、R5はメチルである; Z2は-O-である;また、R4はt-ブチルである。
【０５４１】
1つの態様では、R5はメチルである;
Z2は-NH-である;
また、R4はt-ブチルである。
【０５４２】
1つの態様では、Rlはイソブチルである、R5は水素である、Z2は酸素である、R4はt-ブチルである。また、R2は水素、ハロゲン、トリフルオロメチル、メチルカルボキシ、エチルカルボキシ、制限されないがメトキシ若しくはエトキシのようなC1-C6アルコキシ、C1-C6アルキル、-OH、-SH、-NH2、-N3、-CN、-NO2、-CHO、-COOH、-CONH2、-C(=NH)NH2、あるいは-SO3Hである。
【０５４３】
別の態様では、Rlはイソプロピルである、R5は水素である、Z2は酸素である、R4はt-ブチルである、またR2は水素、ハロゲン、トリフルオロメチル、メチルカルボキシ、エチルカルボキシ、制限されないがメトキシ若しくはエトキシのようなC1-C6アルコキシ、C1-C6アルキル、-OH、-SH、-NH2、-N3、-CN、-NO2、-CHO、-COOH、-CONH2、-C(=NH)NH2、あるいは-SO3Hである。
【０５４４】
別の態様では、Rlはイソブチルまたはイソプロピルである、R5は水素またはメチルである、Z2は酸素である、R4はt-ブチルである、またR2は水素、ハロゲン、トリフルオロメチル、メチルカルボキシ、エチルカルボキシ、制限されないがメトキシ若しくはエトキシのようなC1-C6アルコキシ、C1-C6アルキル、-OH、-SH、-NH2、-N3、-CN、-NO2、-CHO、-COOH、-CONH2、-C(=NH)NH2、あるいは-SO3Hである。
【０５４５】
別の態様では、Rlはイソブチルまたはイソプロピルである、R5は水素である、Z2は-CH2-あるいは酸素、R4はt-ブチル若しくはCH3である。また、R2は水素、ハロゲン、トリフルオロメチル、メチルカルボキシ、エチルカルボキシ、制限されないがメトキシ若しくはエトキシのようなC1-C6アルコキシ、C1-C6アルキル、-OH、-SH、-NH2、-N3、-CN、-NO2、-CHO、-COOH、-CONH2、-C(=NH)NH2、あるいは-SO3Hである。
【０５４６】
別の態様では、RlはHである; R2はHである; R5はCH3である; Z2は-O- あるいは-NH-である;また、R4はt-ブチルのようなC4アルキルである。
【０５４７】
化学アナログへの合成ルート
【０５４８】
この本願において記述された化合物は、既知文献に記述の周知の有機化学技術を使用して、合成された(反応スキームを参照)。
【０５４９】
環化方法A-E:
未置換トリプタミンおよび置換トリプタミンが、様々な溶剤および温度で、1,1,1,3,3,3-ヘキサフルオロイソプロパノール（ルイス酸）あるいはトリフルオロ酢酸(ブロンステッド酸)を使用して、テトラヒドロ-ベータ-カルボリンに R1とR2で置換を供給するために、ピクテ・スパングラー・タイプ複素環式化合物化反応での脂肪族および芳香族アルデヒドと反応をされた。
【０５５０】
カップリング方法F-H:
その後、テトラヒドロ-ベータ-カルボリンの塩基性第2窒素は、カップリング剤の存在する状態でカルボン酸によって、塩基が存在する状態で酸塩化物によって、尿素を生成するためにイソシアネートによって、アシル化された。
【０５５１】
ここに記述された各アナログに使用された特定の合成法については、物理的データおよび合成法テーブルを参照されたい。
反応スキーム
【化１８】
2020512002.tif 000038
【０５５２】
実験方法
【０５５３】
溶剤および試薬は、すべてシグマ・オールドリッチ、フィッシャーScientific、あるいは他の商用ベンダーから購入され、またさらなる精製なしで使用された。NMR実験で使用される重水素を含んだ溶剤は、すべてシグマ・オールドリッチから購入され、それ以上の精製なしで使用された。lH NMR実験は、すべてバリアン400MHzUnity Inova核磁気共鳴分光計を使用して行なわれた。lH NMRスペクトルは、遅延時間(dl)=1秒を使用して、16スキャンで得られた。スペクトル幅は、20ppm(-3ppmから20ppmまで)である。NMR実験は、カスタムNMRサービス(Ayer、MA)によって行なわれた。質量分光法実験はLC/MSを使用して行なわれた。サンプルは、各獲得につき1μLを注入する1mg/mLの濃度で、塩化メチレン中で典型的に準備された。質量分光法実験は、ブラウン大学(プロビデンス(RI))のTunLi Shen博士によって行なわれた。pH測定は、Hydracid紙1-6(Micro Essential Laboratory-Brookly(NY))の使用により、あるいはフィッシャーScientific pH計、モデル数AB15で決定された。試薬の制御された添加は、KD Scientific、モデル100シリンジ・ポンプに付着されたハミルトン10 mLガスタイトシリンジを使用し行われた。不活性の雰囲気は、針に付けられたperfectum針菅コネクターを使うバルーンとして、あるいはオールドリッチ・アトモス・グローブ・バッグにおいて、圧縮したアルゴン(ultra high purity-Igo’s Welding SupplyWatertown, MA)を使用して達成された。実験用ガラス器具は、Sigma-Aldrich,Ace glass,Chemglassa或いはVWR Scientificによって製造された。シリカゲル精製は、シグマ・オールドリッチ・シリカゲル(230-400のメッシュ、グレード60、cat.#717185)を使用して行なわれた。TLCは、EMD TLCシリカゲル60 F254プレート(2.5×7.5cm、cat.#1153410001)を使用して行なわれた。TLCは、I2-シリカゲルあるいは紫外線のいずれかによって視覚化された。高機能液体クロマトグラフ(HPLC)分析は、標準の溶媒勾配プログラム（Solvent A : 0.4%TFA in water; Solvent B :0.4%TFA in Acetonitrile; HPLC gradient: 5% B (0-0.5min), 100%B (ramp 0.5-5 min), 100%B (5-7 min), 5%B (7-7.01 min), 5%B (7.01-9 min)）を使用して、254nmおよび220nmでのUV検知で、Luna 5u C18(2)100Aカラム(50×2.00mm、Phenomenex)を使用して、Agilent HP1090 HPLCで得られた。
【０５５４】
合成実施例1(方法Dによる環化)
【化１９】
2020512002.tif 000039
【０５５５】
トリプタミン(1.00g、6.26 mmol)、メチル4-ホルミルベンゾアート(1.03g、6.24 mmol)および4Aモレキュラーシーブ(0.76g)が、1,2-ジクロロエテン(DCE)(30 mL)中でサスペンドされた。トリフルオロ酢酸(TFA)(285mg、2.50 mmol)が、該混合物に加えられ、反応は、明るい茶色の沈殿を産出して、還流された。混合物は30℃に冷やされ、また、4Aモレキュラーシーブはガラス綿プラグによって除去された。溶液は、飽和NaHCO3(15 mL)で冷却され、EtOAc(50 mL)で希釈された。有機質層は飽和NaClで洗われ、乾燥された（無水MgSO4)。溶媒は、薄茶色固体を産出して、バキュームによって除去された。この材料は、フラッシュ・カラムクロマトグラフイーによってさらに精製された:  MeOH、EtOAcおよびヘキサン(1:3:6)での溶出が、使用された。生成物を含む画分は、薄茶色固体を生産し合わされた(0.80g、42%収率; TLC Rf = 0.129(10%MeOH/30%EtOAc/Hexane); HPLC Rt = 3.254min)。この中間物は、次の化合物の合成で使用された: MN0642とMN1210。
【０５５６】
合成実施例3: MN1179(方法Bによる環化)
【化２０】
2020512002.tif 000040
【０５５７】
トリプタミン(5.00g、31.2 mmol)が、トルエン(100 mL)に加えらた。2-phenylプロピオンアルデヒド(4.2 mL(31.2 mmol))およびTFA(0.60 mL(7.8 mmol))は、混合物に加えられた。反応は、水を除去するために夜通しDean-Stark trapを使用して、混合され還流された。反応は、室温に冷やされ、EtOAc(100 mL)が加えられ、そして有機質層が飽和NaHCO3(3×25 mL)で、その後飽和NaCl(25 mL)で洗浄された。溶剤は、蒸発され、茶色の固体を産出した。固体はEtOAc(50 mL)に溶かされ、ヘプタン(50 mL)が加えられ、反応を止められた。溶液は濾過され、また、残った残物が乾燥された。固体はCH2Cl2に溶かされ、真空フラッシュ・クロマトグラフィーでさらに精製した: CH2Cl2中で0%、1%、3%、5%および5%MeOHから成る5画分。生成物を含む画分は合わされた。溶剤は、真空下で取り除かれ、固体(5.10g、59.1%収率; TLC Rf = 0.34(3%MeOH/CH2Cl2); HPLC Rt = 3.187min)を産出した。この中間物は次の化合物の合成で使用された: MN1130、MN1135、MN1151、MN1152およびMN1171。
【０５５８】
合成例4:
MN1180(方法Aによる環化)
【化２１】
2020512002.tif 000041
【０５５９】
トリプタミン(1.6g、10 mmol)が、l,l,l,3,3,3-ヘキサフルオロ-2-イソプロパノール(16 mL)に溶かされ、そして、注射器によってイソバレルアルデヒド(1.3 mL; 12 mmol)を加えた。その反応は18.5時間還流され加熱され、窒素の不活性大気下でかき混ぜられた。溶剤はバキュームで蒸発され、CHCl3(3×50 mL)で共沸された。ヘキサン(16 mL)が加えられ、また、混合物は10minのバス中で超音波処理され、次に、夜通し撹拌された。混合物は濾過され、固体(1.9g)を産出した。材料は、20分間5N NH4OH(10 mL)で混ぜられ粉砕されさらに精製された。成果物は、濾過され、H2O(2×20 mL)で洗浄された。結果として生じる固体は、濾過され、真空乾燥機で乾燥され、固体(1.60g、71.0%収率; TLC Rf = 0.30(10%MeOH/l%NH4OH/CH2Cl2); HPLC Rt = 3.081min)を得た。この中間物は次の化合物の合成で使用された:
【０５６０】
合成例5:  MN1180(方法Cによる環化)
【化２２】
2020512002.tif 000042
【０５６１】
トリプタミン(8.0g、50 mmol)がCH2C12(400 mL)に溶かされ、20分間アルゴンの不活性大気下に置かれた。イソバレルアルデヒド(5.36 mL(50.0 mmol))が溶液に加えられた。また、反応は20分間-80℃氷浴に置かれた。TFA(38.3 mL)が15分間ドロップワイズに添加された。反応は、温浴から取り除かれ、室温にされて、20時間混合した。溶剤は、蒸発され、ブラックオイルを産出した。該オイルは、CH2C12(250 mL)に溶かされ、１N NaOHが加えられ、振とうされた。沈殿物が集められ、真空乾燥機で乾燥され、17.9gのオリーブ色粉体(TFA塩)をえた。TFA塩は、アセトニトリルの還流から再結晶した。集められた固体は冷ACN(〜20 mL)で洗われ、乾燥され、結晶性固体(9.3g、54%収率;TLC Rf = 0.30(10%MeOH/l%NH4OH/CH2Cl2);HPLC Rt = 3.099min)をえた。
この中間物は次の化合物の合成で使用された:
MN1132、MN1133、MN1137、MN1138、MN1157、MN1186、MN1189、MN1190、MN1194、MN1195、MN1197、MN1203、MN1206、MN1207、MN1208、MN1209、MN1212、MN1213、MN1214、MN1220、MN1221、MN1222、MN1223、MN1224、MN1225、MN1226、MN1231、MN1232、MN1246。
【０５６２】
合成例7:
MN1130(方法Hまでにカップリング)
【化２３】
2020512002.tif 000043
【０５６３】
l-(l-フェニルエチル)-2,3,4,9-テトラヒドロ-lH-ピロド[3,4-b]インドール(276mg、1.00 mmol)がCHCl3(50 mL)に溶かされ、10分間窒素不活性雰囲気下の氷浴中で冷された。ブチル・イソシアネート(170μL  1.50 mmol)が、注射器によって加えられた。反応は、氷浴から取り除かれ、10分間室温に暖められた。HPLCは、反応が1時間で完了していることを示した。反応は、蒸発され、真空下で乾かされた。残渣は、EtOAc(100 mL)に溶かされ、1Mクエン酸(3x 25mL)、NaHCO3(3x 25mL)、NaCl(25 mL)で洗浄された。有機質層は、乾燥され(無水Na2SO4)、濾過され、そして、真空下で蒸発し、オフホワイト固体(339mg)を得た。材料は、さらに、1時間40%EtOAc/60%ヘキサン(3 mL)で、かき混ぜ研和(trituration)によってさらに精製され、その後研和によって生成物を集めた。その研和は、1時間40%EtOAc/60%ヘキサン(3 mL)でかき混ぜることにより繰り返された。結果として生じる固体は、濾過され、真空乾燥機で乾燥され、白い固体(138mg、36.7%収率; TLC Rf = 0.46(ヘキサン中40％EtOAc); HPLC Rt = 4.598min)；MSm/z 375.2412(100%rel.int.)を得た。この方法は次の化合物の合成で使用された: MN733、MN1130、MN1131、MN1158、MN1160、MN1169、MN1171、MN1172、MN1184。
【０５６４】
合成例8:
MN1132(方法Gによるカップリング)
【化２４】
2020512002.tif 000044
【０５６５】
l-イソブチル-2,3,4,9-テトラヒドロ-lH-ピリド[3,4-b]インドール(228mg、1.00 mmol)が、CH2C12(10 mL)に溶かされ、6分間窒素の不活性雰囲気下の氷浴中で冷された。オクタノイル塩化物(170μL  1.00 mmol)が、注射器で添加され、次いでトリエチルアミン(TEA)(140μL  1.00 mmol)が直接後続して加えられた。反応は氷浴から取り除かれ、10分間で室温に暖められた。HPLCは、反応が10分で完了していることを示した。溶液は、EtOAc(100 mL)で希釈され、１N HC1(3x 25mL)、飽和NaHCO3(3x 50mL)、NaCl(25 mL)で洗浄された。有機質層は乾燥され（無水Na2SO4）、濾過され、真空下で蒸発させた。結果として生じる油は、CH2C12(5 mL)に溶かされ、溶剤は真空下で除去された。油の残渣はヘキサン(3 mL)で洗浄され、なんらかのヘキサン-可溶な不純物を除去した。材料は、シリカゲル・クロマトグラフィーによってさらに精製された:ヘキサン中で、0%、5%、10%、15%および20%EtOAcから成る5画分 (200 mL、各々)。生成物を含む画分は、合わせられ、溶剤は真空下で除去され油をえた。油はCH2Cl2(~ 1 mL)に溶かされ、氷浴中でゆっくり蒸発され、白い固体を産出した。固体は、高真空下で乾かされ、黄色の油をえた(236mg、67.0%収率; TLC Rf = 0.28(ヘキサン中10%EtOAc); HPLC Rt = 5.299min); lH NMR(CDCl3、0.003%v/v TMS、400MHz):
δ0.85-1.10(9H、m)、1.20-1.40(8H、m)、1.55-1.80(5H、m)、2.30-2.55(2H、dq)、2.65-2.90(2H、m)、3.45-3.55(1H、m)、4.00-4.10(1H、dd)、5.87(1H、t)、7.10(1H、t)、7.15(1H、t)、7.30(1H、d)、7.47(1H、d)および7.80(1H、br s)。
この方法は次の化合物の合成で使用された: MN0477、MN0642、MN0908、MN1132、MN1133、MN1135、MN1137、MN1138、MN1152、MN1156、MN1157、MN1188、MN1193、MN1197、MN1203、MN1206、MN1207、MN1208、MN1209、MN1210、MN1211、MN1212、MN1213、MN1214、MN1216、MN1217、MN1218、MN1219。
【０５６６】
合成例11: MN1186(方法Fによるカップリング)
【化２５】
2020512002.tif 000045
【０５６７】
l-イソブチル-2,3,4,9-テトラヒドロ-lH-ピリド[3,4-b]インドール・TFA塩(410mg、1.20 mmol)、 l-エチル-3-(3-ジメチルアミノプロピル)カルボジイミド-HCl(EDC-HC1)(230mg、1.20 mmol)、4-ジメチルアミノピリジン(DMAP) (13mg、0.12 mmol)、ヒドロキシベンゾトリアゾール(HOBT)(61mg、0.40 mmol)及びBoc-グリシン(210mg、1.20 mmol)が、全て、アセトニトリル (ACN)(1.5 mL)、ジメチルホルムアミド(DMF) (6 mL)及びジイソプロピルエチルアミン(DIEA)(240μL、1.44 mmol)に溶解された。溶液は17時間撹拌された。溶液は、EtOAc(100 mL)で希釈され、1N HC1(3×25 mL)、飽和NaHCO3(3×25 mL)、NaCl(25 mL)で洗浄された。有機質層は乾燥され(無水Na2SO4)、ろ過され、真空下で蒸発させ、油を産出した。この材料は、次のものを使用して、シリカゲル・クロマトグラフィーによってさらに精製された:CH2Cl2中の0%、1%、2%、4%、4%、5%、5%、5%および5%EtOAcから成る9画分(200 mL)。生成物を含む画分は合わせられ、溶剤は、真空下で蒸発し、白い固体を得た(331mg、71.6%収率; TLC Rf = 0.59(CH2Cl2中の10%EtOAc); HPLC Rt = 4.577min); 1H NMR(CDC13、0.003%v/v TMS、400MHz):δΗ0.95(3H、d)1.10(3H、d)、1.45(9H、s)、1.55-1.85(3H、m)、2.70-2.93(2H、m)、3.40-3.55(1H、m)、3.87-4.20(3H、m)、5.60(1H、br s)、5.80(1H、dt)、7.05-7.20(2H、m)、7.30(1H、d)、7.45(1H、d)、7.80(1H、br s)．
【０５６８】
次の化合物がMN1186と似た方法で合成された: MN1462、MN1463、MN1464、MN1465、MN1466、MN1467、MN1468、MN1469、MN1470およびMN1471。
【０５６９】
合成例25: MN1254(方法Eによる環化)
【化２６】
2020512002.tif 000046
【０５７０】
トリプタミン(1.60g、10 mmol)が、溶けるまでヒートガンで加熱し渦巻きすることにより、EtOAc(5 mL)に溶かされた。その後、4-クロロベンズアルデヒド(1.48g、10.5 mmol)が加えられた。反応槽は、溶かすため、渦巻き、ヒートガンで加熱された。シッフ塩基中間体は、2分以内に沈殿された。反応混合物は、室温に冷やされ、中間体シッフ塩基はフリットグラスに集められ、次に、真空下で乾燥され、黄褐色のパウダーとして2.36gの中間体がえられた。シッフ塩基は、アセトニトリル/無水エタノール(12.5mL/12.5 mL)に溶かされた。ジオキサン中の4N HC1(4 mL、16 mmol)が加えられた。その溶液は、環化された生成物のHCl塩が沈殿し始めるポイントで還流し加熱された。その後、反応混合物は、-20Cまで冷やされ、固体がフリットグラスに集められた。生成物、l-(4-クロロフェニル)-2,3,4,9-テトラヒドロ-(lH-ピリド[3,4-b]インドール塩酸塩が、真空下で乾燥され、オフホワイト・パウダーの2.16gを得た、85%収率(68%全体として)： Mp: 163-165C(遊離塩基)。
【０５７１】
合成例27: MN0716(インドール・アナログ合成)
【化２７】
2020512002.tif 000047
【０５７２】
N-(4-tert-ブチルベンジル)-2-(lH-インドール-3-イル)エタンアミン:
無水EtOH(15 mL)中にあるトリプタミン(1.5g、9.4 mmol)の溶液に、4-t-ブチルベンズアルデヒド (2.0 mL、12 mmol)が加えられた。反応は、０℃に冷却する前に1時間攪拌され、その後、NaBH4(750mg、19 mmol)を添加した。溶液は、０℃でlhr撹拌された。溶液は真空内で濃縮され、次に、高真空下で乾かされた。その後、その反応はIN HCl(〜20mL)でとめられ、次に、EtOAc(100 mL)が添加され、沈殿を形成した。混合物は、固体のK2CO3で塩基性(pH10)になった。層は分離され、Na2O4上に乾かされ、そして蒸発さられ300mgの油を産生した。この材料は、最初に1N HCl(10 mL)を加えることにより精製され、次に、EtOAc(50 mL)が加えられN-(4-tert-ブチルベンジル)-2-(lH-インドール-3-イル)エタンアミンの沈殿が生じた(固体)： 260mg(9%収率); HPLC Rt(2.757min)。
【０５７３】
CH2Cl2にあるN-(4-tert-ブチルベンジル)-2-(lH-インドール-3-イル)エタンアミン(100mg、0.327 mmol)の氷冷溶液に、エチルイソシアネート(26μL、0.327 mmol)(CH2Cl2の1.5 mL中で０℃に冷却)が加えられた。反応は5分間０℃で撹拌された。lhrの後、エチルイソシアネートの0.2 equivが、加えられ、そしてさらに30分間撹拌された。溶液はCH2Cl2で希釈され、飽和NaHCO3で洗浄された。溶液は、ヘキサン/酢酸エチル[2:1〜1:1]でのシリカゲル溶出でクロマトグラフィーされ129mgを得た、生成物の100%収率; HPLC Rt 4.664min; TLC Rf 0.16（CH2Cl2中の10%EtOAc）。この方法は次の化合物の合成の中で使用された: MN0716、MN0733およびMN1058。
【０５７４】
合成例28: MN1292
【化２８】
2020512002.tif 000048
【０５７５】
6-フルオロ-l-イソブチル-2,3,4,9-テトラヒドロ-lH-ピリド[3,4-b]インドール(246mg、1.00 mmol)、l-エチル-3-(3-ジメチルアミノプロピル)カルボジイミド-HCl(EDC-HC1)(192mg、1.00 mmol)、4-ジメチルアミノピリジン(DMAP) (12mg、0.10 mmol)、ヒドロキシベンゾトリアゾール(HOBT)(51mg、0.33 mmol)、及び5-(tert-ブトキシカルボニルアミノ)ペンタン酸) (217mg、1.00 mmol)が、すべて、アセトニトリル(1.25 mL)、ジメチルホルムアミド (DMF)(5 mL)及びジイソプロピルエチルアミン (DIEA)(200μL、1.20 mmol)に溶解された。反応は室温で18時間撹拌された。反応混合物は、EtOAc(100 mL)で希釈され、NaCl(2×50 mL)、1Mクエン酸(3×25 mL)、飽和NaHCO3(3×25 mL)及び飽和NaCl(50 mL)で洗浄されれた。有機質層は、乾燥され（無水Na2SO4）、ろ過され、真空下で蒸発させた。この材料は、次のものを使用して、シリカゲル(25-30g)クロマトグラフィーによってさらに精製された:へキサン、ヘキサン中の27.5%EtOAcおよびヘキサン中の35%EtOAcから成る3画分(200 mL)。生成物を含む画分は合わせられ、溶剤は、真空下で蒸発させ固体(269mg、60.4%収率; TLC Rf = 0.14(ヘキサン中の30%EtOAc); HPLC Rt = 4.683min)をえた。
【０５７６】
合成例29: MN1293
【化２９】
2020512002.tif 000049
【０５７７】
7-フルオロ-l-イソブチル-2,3,4,9-テトラヒドロ-lH-ピリド[3,4-b]インドール(246mg、1.00 mmol)、l-エチル-3-(3-ジメチルアミノプロピル)カルボジイミド-HCl(EDC-HC1)(192mg、1.00 mmol)、4-ジメチルアミノピリジン(DMAP) (12mg、0.10 mmol)、ヒドロキシベンゾトリアゾール(HOBT)(51mg、0.33 mmol)、及びtrans-4-((tert-ブトキシカルボニルアミノ)メチル)シクロヘキサンカルボン酸(257mg、1.00 mmol)が、全て、アセトニトリル(1.25 mL)、ジメチルホルムアミド(DMF)(5 mL)及びジイソプロピルエチルアミン(DIEA)(200μL、1.20 mmol)に溶かされた。その反応は室温で18時間撹拌された。反応液はEtOAc(100 mL)で希釈され、飽和NaCl(2×50 mL)、1Mクエン酸(3×25 mL)、飽和NaHCO3(3×25 mL)、及び飽和NaCl(50 mL)で洗浄された。有機質層は、乾燥され（無水Na2SO4）、ろ過され、真空下で蒸発させた。この材料は、次のものを使用して、シリカゲル(25-30g)クロマトグラフィーによってさらに精製された:ヘキサン、ヘキサン中の25%EtOAcおよびヘキサン中の30%EtOAcから成る3画分(200 mL)。生成物を含む画分は合わせられ、溶剤は、真空下で蒸発され固体(280mg、57.7%収率; TLC Rf = 0.21(ヘキサン中の30%EtOAc); HPLC Rt = 4.885min)をえた。
【０５７８】
合成例30: MN1294
【化３０】
2020512002.tif 000050
【０５７９】
l-イソブチル-2,3,4,9-テトラヒドロ-lH-ピリド[3,4-b]インドール(228mg、1.00 mmol)、l-エチル-3-(3-ジメチルアミノプロピル)カルボジイミド-HCl(EDC-HC1)(192mg、1.00 mmol)、4-ジメチルアミノピリジン(DMAP) (12mg、0.10 mmol)、ヒドロキシベンゾトリアゾール(HOBT)(51mg、0.33 mmol)及び3,5,5-トリメチルヘキサン酸(158mg、1.00 mmol)が、すべて、アセトニトリル(1.25 mL)、ジメチルホルムアミド(DMF)(5 mL)及びジイソプロピルエチルアミン(DIEA)(200μL、1.20 mmol)に溶解された。反応は室温で18時間撹拌された。反応液はEtOAc(100 mL)で希釈され、飽和NaCl(2×50 mL)、1Mクエン酸(3×25 mL)、飽和NaHCO3(3×25 mL)、及び飽和NaCl(50 mL)で洗浄された。有機質層は、乾燥され（無水Na2SO4）、ろ過され、真空下で蒸発させた。この材料は、次のものを使用して、シリカゲル(25-30g)クロマトグラフィーによってさらに精製された:ヘキサン、ヘキサン中の10%EtOAcおよびヘキサン中の17%EtOAcから成る3画分(200 mL)。生成物を含む画分は合わせられ、溶剤は、真空下で蒸発され、固体(315mg、85.5%収率; TLC Rf = 0.12(ヘキサン中の10%EtOAc); HPLC Rt = 5.271min)をえた。
【０５８０】
合成例31: MN1305
【化３１】
2020512002.tif 000051
【０５８１】
6-フルオロ-l-イソプロピル-2,3,4,9-テトラヒドロ-lH-ピリド[3,4-b]インドール(232mg、1.00 mmol)、l-エチル-3-(3-ジメチルアミノプロピル)カルボジイミド-HCl(EDC-HC1)(192mg、1.00 mmol)、4-ジメチルアミノピリジン(DMAP) (12mg、0.10 mmol)、ヒドロキシベンゾトリアゾール(HOBT)(51mg)及びboc-グリシン(175mg、1.00 mmol)が、全て、アセトニトリル(1.25 mL)、ジメチルホルムアミド(DMF)(5 mL)及びジイソプロピルエチルアミン(DIEA)(200μL、1.20 mmol)に溶解された。反応は室温で48時間撹拌された。反応液はEtOAc(100 mL)で希釈され、飽和NaCl(2×50 mL)、1Mクエン酸(3×25 mL)、飽和NaHCO3(3×25 mL)、及び飽和NaCl(50 mL)で洗浄された。有機質層は、乾燥され（無水Na2SO4）、ろ過され、真空下で蒸発させた。この材料は、次のものを使用して、シリカゲル(25-30g)クロマトグラフィーによってさらに精製された：ヘキサンおよびヘキサン中の50%EtOAcから成る2画分(200 mL)。生成物を含む画分は合わせられ、溶剤は、真空下で蒸発され固体(360mg、92.4%収率; TLC Rf = 0.59 (ヘキサン中の50%EtOAc);HPLC Rt = 4.386min)を得た。
【０５８２】
MN1306  吉草酸と6-フルオロ-イソプロピル  カルボリン
【化３１−２】
2020512002.tif 000052
【０５８３】
6-フルオロ-l-イソプロピル-2,3,4,9-テトラヒドロ-lH-ピリド[3,4-b]インドール(232mg、1.00 mmol)、l-エチル-3-(3-ジメチルアミノプロピル)カルボジイミド-HCl(EDC-HC1)(192mg、1.00 mmol)、4-ジメチルアミノピリジン(DMAP) (12mg、0.10 mmol)、ヒドロキシベンゾトリアゾール(HOBT)(51mg、0.33 mmol)及びboc-吉草酸(217mg、1.00 mmol)が、全て、アセトニトリル(1.25 mL)、ジメチルホルムアミド(DMF)(5 mL)及びジイソプロピルエチルアミン(DIEA)(200μL、1.20 mmol)に溶解された。反応は室温で48時間撹拌された。反応液はEtOAc(100 mL)で希釈され、飽和NaCl(2×50 mL)、1Mクエン酸(3×25 mL)、飽和NaHCO3(3×25 mL)、及び飽和NaCl(50 mL)で洗浄された。有機質層は、乾燥され（無水Na2SO4）、ろ過され、真空下で蒸発させた。この材料は、次のものを使用して、シリカゲル(25-30g)クロマトグラフィーによってさらに精製された：ヘキサンおよびヘキサン中の50%EtOAcから成る2画分(200 mL)。生成物を含む画分は組み合わせられ、溶剤は、真空下で蒸発され固体(355mg、82.3%収率; TLC Rf = 0.24(ヘキサン中の50%EtOAc)); HPLC Rt = 4.504min）をえた。
【０５８４】
合成例32: MN1307
【化３３】
2020512002.tif 000053
【０５８５】
6-フルオロ-l-イソプロピル-2,3,4,9-テトラヒドロ-lH-ピリド[3,4-b]インドール(232mg、1.00 mmol)、l-エチル-3-(3-ジメチルアミノプロピル)カルボジイミド-HCl(EDC-HC1)(192mg、1.00 mmol)、4-ジメチルアミノピリジン(DMAP) (12mg、0.10 mmol)、ヒドロキシベンゾトリアゾール(HOBT)(51mg、0.33 mmol)及びboc-トラネキサム酸(257mg、1.00 mmol)が、全て、アセトニトリル(1.25 mL)、ジメチルホルムアミド(DMF)(5 mL)及びジイソプロピルエチルアミン(DIEA)(200μL、1.20 mmol)に溶解された。反応は室温で48時間撹拌された。反応液はEtOAc(100 mL)で希釈され、飽和NaCl(2×50 mL)、1Mクエン酸(3×25 mL)、飽和NaHCO3(3×25 mL)、及び飽和NaCl(50 mL)で洗浄された。有機質層は、乾燥され（無水Na2SO4）、ろ過され、真空下で蒸発させた。この材料は、次のものを使用して、シリカゲル(25-30g)クロマトグラフィーによってさらに精製された：ヘキサンおよびヘキサン中の50%EtOAcから成る2画分(200 mL)。生成物を含む画分は組み合わせられ、溶剤は、真空下で蒸発され固体 (391mg、82.9%収率; TLC Rf = 0.36(ヘキサン中の50%EtOAc); HPLC Rt = 4.712min)を得た。
【０５８６】
合成例33:   MN1308
【０５８７】
l-イソブチル-2,3,4,9-テトラハイドロ-lH-ピリド[3,4-b]インドール(456mg、2.00 mmol)、l-エチル-3-(3-ジメチルアミノプロピル)カルボジイミド-HCl(EDC-HC1)(383mg、2.00 mmol)、4-ジメチルアミノピリジン(DMAP) (24mg、0.20 mmol)、ヒドロキシベンゾトリアゾール(HOBT)(102mg、0.66 mmol)、及びS)-2-(tert-ブトキシカルボニルアミノ)-6-(2,2,2-トリフルオロアセトアミド)ヘキサン酸(684mg、2.00 mmol)が、全て、アセトニトリル(2. 5 mL)、ジメチルホルムアミド(DMF)(10 mL)及びジイソプロピルエチルアミン(DIEA)(400μL、2.40 mmol)に溶解された。反応は室温で18時間撹拌された。反応液はEtOAc(100 mL)で希釈され、飽和NaCl(2×50 mL)、1Mクエン酸(3×25 mL)、飽和NaHCO3(3×25 mL)、及び飽和NaCl(50 mL)で洗浄された。有機質層は、乾燥され（無水Na2SO4）、ろ過され、真空下で蒸発させた。この材料は、次のものを使用して、シリカゲル(25-30g)クロマトグラフィーによってさらに精製された； ヘキサン(200 mL)洗浄、ヘキサン中20%、25％、及び30％EtOAcから成る3画分(200 mL)。生成物を含む画分は合わせられ、溶剤は、真空下で蒸発され固体(820mg、74%収率; TLC Rf = 0.10(ヘキサン中の25%EtOAc); HPLC Rt = 4.743min)をえた。
【０５８８】
合成例34:  MN1309
【化３４】
2020512002.tif 000054
【０５８９】
tert-ブチル(2S)-1 -1 -イソブチル-3、4-ジヒドロ- 1H-ピリド[3,4-b]インドール-2(9H)-イル)-1-オキソ-6-(2,2,2-トリフルオロアセトアミド)ヘキサン-2-イルカルバメート(553mg、1.00 mmol)が、MeOH(100 mL)に溶かされた。K2CO3(690mg、5.00 mmol)が、溶液に加えられた。溶液は18時間還流された。溶剤は真空下で除去され、結果として生じる油は、EtOAc(100 mL)に溶かされた。溶液は1M NaOH(25 mL)、飽和NaCl(25 mL)で洗われた。有機質層は乾かされ(無水Na2SO4)、ろ過され、真空下で蒸発され固体(371mg、81.2%収率;TLC Rf = 0.05(CH2Cl2 中5%MeOH + 1%NH4OH);HPLC Rt = 3.909と3.955min(ジアステレオマー))を得た。
【０５９０】
合成例35: MN1310
【化３５】
2020512002.tif 000055
【０５９１】
l-イソブチル-2,3,4,9-テトラヒドロ-lH-ピリド[3,4-b]インドール(456mg、2.00 mmol)、l-エチル-3-(3-ジメチルアミノプロピル)カルボジイミド-HCl(EDC-HC1)(383mg、2.00 mmol)、4-ジメチルアミノピリジン(DMAP) (24mg、0.20 mmol)、ヒドロキシベンゾトリアゾール(HOBT)(102mg、0.66 mmol)及び(R)-2-(tert-ブトキシカルボニルアミノ)-5-(シクロヘキシルオキシ)-5-オキソペンタン酸) (659mg、2.00 mmol)が、全て、アセトニトリル(2. 5 mL)、ジメチルホルムアミド(DMF)(10 mL)及びジイソプロピルエチルアミン(DIEA)(400μL、2.40 mmol)に溶解された。反応は室温で18時間撹拌された。反応液はEtOAc(100 mL)で希釈され、飽和NaCl(2×50 mL)、1Mクエン酸(3×25 mL)、飽和NaHCO3(3×25 mL)、及び飽和NaCl(50 mL)で洗浄された。有機質層は、乾燥され（無水Na2SO4）、ろ過され、真空下で蒸発させた。この材料は、次のものを使用して、シリカゲル(25-30g)クロマトグラフィーによってさらに精製された； ヘキサン、ヘキサン中15％EtOAc 、ヘキサン中17.5% EtOAc、ヘキサン中22.5％EtOAcから成る4画分(200 mL)。生成物を含む画分は合わせられ、溶剤は、真空下で蒸発され固体(808mg、74.9%収率; TLC Rf = 0.20(ヘキサン中の20%EtOAc); HPLC Rt = 5.269min)を得た。
【０５９２】
合成例36:
【０５９３】
MN1311
【化３６】
2020512002.tif 000056
【０５９４】
l-イソブチル-2,3,4,9-テトラヒドロ-lH-ピリド[3,4-b]インドール(457mg、2.00 mmol)、l-エチル-3-(3-ジメチルアミノプロピル)カルボジイミド-HCl(EDC-HC1)(383mg、2.00 mmol)、4-ジメチルアミノピリジン(DMAP)(24mg、0.20 mmol)、ヒドロキシベンゾトリアゾール(HOBT)(102mg、0.66 mmol)及び(S)-4-(ベンジルオキシ)-2-(tert-ブトキシカルボニルアミノ)ブタン酸(619mg、2.00 mmol)が、全て、アセトニトリル(2. 5 mL)、ジメチルホルムアミド(DMF)(10 mL)及びジイソプロピルエチルアミン(DIEA)(400μL、2.40 mmol)に溶解された。反応は室温で18時間撹拌された。反応液はEtOAc(100 mL)で希釈され、飽和NaCl(2×50 mL)、1Mクエン酸(3×25 mL)、飽和NaHCO3(3×25 mL)、及び飽和NaCl(50 mL)で洗浄された。有機質層は、乾燥され（無水Na2SO4）、ろ過され、真空下で蒸発させた。この材料は、次のものを使用して、シリカゲル(25-30g)クロマトグラフィーによってさらに精製された； ヘキサン、ヘキサン中15％EtOAc 、ヘキサン中20% EtOAc、ヘキサン中25％EtOAcから成る4画分(200 mL)。生成物を含む画分は合わせられ、溶剤は、真空下で蒸発され固体(688mg、66.2%収率; TLC Rf = 0.34(ヘキサン中の30%EtOAc); HPLC Rt = 5.107min)を得た。
【０５９５】
合成例37: MN1312
【化３７】
2020512002.tif 000057
【０５９６】
l-イソブチル-2,3,4,9-テトラヒドロ-lH-ピリド[3,4-b]インドール(228mg、1.00 mmol)、l-エチル-3-(3-ジメチルアミノプロピル)カルボジイミド-HCl(EDC-HC1)(192mg、1.00 mmol)、4-ジメチルアミノピリジン(DMAP) (12mg、0.10 mmol)、ヒドロキシベンゾトリアゾール(HOBT)(51mg、0.33 mmol)及び(R)-5-アミノ-2-(tert-ブトキシカルボニルアミノ)-5-オキソペンタン酸(246mg、1.00 mmol)が、全て、アセトニトリル(1. 5 mL)、ジメチルホルムアミド(DMF)(5 mL)及びジイソプロピルエチルアミン(DIEA)(200μL、1.20 mmol)に溶解された。反応は室温で18時間撹拌された。反応液はEtOAc(100 mL)で希釈され、飽和NaCl(2×50 mL)、1Mクエン酸(3×25 mL)、飽和NaHCO3(3×25 mL)、及び飽和NaCl(50 mL)で洗浄された。有機質層は、乾燥され（無水Na2SO4）、ろ過され、真空下で蒸発させた。この材料は、次のものを使用して、シリカゲル(25-30g)クロマトグラフィーによってさらに精製された； CH2Cl2、CH2Cl2中4%、4.5%、及び5％MeOHから成る4画分(200 mL)。生成物を含む画分は合わせられ、溶剤は、真空下で蒸発され固体(264mg、57.8%収率; TLC Rf = 0.05(CH2Cl2中4%MeOH); HPLC Rt = 4.149min)を得た。
【０５９７】
合成例38: MN1317
【化３８】
2020512002.tif 000058
【０５９８】
l-イソブチル-2,3,4,9-テトラヒドロ-lH-ピリド[3,4-b]インドール(158.5mg、0.694 mmol)、1-エチル-3-(3-ジメチルアミノプロピル)カルボジイミド-HCl(EDC-HC1)(133mg、0.694 mmol)、4-ジメチルアミノピリジン(DMAP) (8.5mg、0.0694 mmol)、ヒドロキシベンゾトリアゾール(HOBT)(35mg、0.229 mmol)及び3-((tert-ブトキシカルボニルアミノ)メチル)シクロブタンカルボン酸(159mg、0.694 mmol)が、全て、アセトニトリル(867.5μl)、ジメチルホルムアミド(DMF)(3.47mL)及びジイソプロピルエチルアミン(DIEA)(134μL、0.833mmol)に溶解された。反応は室温で17時間撹拌された。反応液はEtOAc(100 mL)で希釈され、飽和NaCl(2×50 mL)、1Mクエン酸(3×25 mL)、飽和NaHCO3(3×25 mL)、及び飽和NaCl(50 mL)で洗浄された。有機質層は、乾燥され（無水Na2SO4）、ろ過され、真空下で蒸発させた。この材料は、次のものを使用して、シリカゲル(25-30g)クロマトグラフィーによってさらに精製された； ヘキサン、ヘキサン中20%、25%、及び32％EtOAcから成る4画分(200 mL)。生成物を含む画分は合わせられ、溶剤は、真空下で蒸発され固体(149mg、48.8%収率; TLC Rf = 0.12(ヘキサン中の25%EtOAc); HPLC Rt = 4.713min)を得た。
【０５９９】
合成例39: MN1318
【化３９】
2020512002.tif 000059
【０６００】
l-イソブチル-2,3,4,9-テトラヒドロ-lH-ピリド[3,4-b]インドール(158.5mg、0.694 mmol)、1-エチル-3-(3-ジメチルアミノプロピル)カルボジイミド-HCl(EDC-HC1)(133mg、0.694 mmol)、4-ジメチルアミノピリジン(DMAP) (8.5mg、0.0694 mmol)、ヒドロキシベンゾトリアゾール(HOBT)(35mg、0.229 mmol)及び2-trans-4-(tert-ブトキシカルボニルアミノ)シクロヘキシル)酢酸(178mg、0.694 mmol)が、全て、アセトニトリル(867.5μl)、ジメチルホルムアミド(DMF)(3.47mL)及びジイソプロピルエチルアミン(DIEA)(134μL、0.833mmol)に溶解された。反応は室温で17時間撹拌された。反応液はEtOAc(100 mL)で希釈され、飽和NaCl(2×50 mL)、1Mクエン酸(3×25 mL)、飽和NaHCO3(3×25 mL)、及び飽和NaCl(50 mL)で洗浄された。有機質層は、乾燥され（無水Na2SO4）、ろ過され、真空下で蒸発させた。この材料は、次のものを使用して、シリカゲル(25-30g)クロマトグラフィーによってさらに精製された； ヘキサン、ヘキサン中20%、25%、及び32％EtOAcから成る4画分(200 mL)。生成物を含む画分は合わせられ、溶剤は、真空下で蒸発され固体(163mg、50.2%収率; TLC Rf = 0.17(ヘキサン中の25%EtOAc); HPLC Rt = 4.870min)を得た。
【０６０１】
合成例40: MN1319
【化４０】
2020512002.tif 000060
【０６０２】
l-イソブチル-2,3,4,9-テトラヒドロ-lH-ピリド[3,4-b]インドール(158.5mg、0.694 mmol)、1-エチル-3-(3-ジメチルアミノプロピル)カルボジイミド-HCl(EDC-HC1)(133mg、0.694 mmol)、4-ジメチルアミノピリジン(DMAP) (8.5mg、0.0694 mmol)、ヒドロキシベンゾトリアゾール(HOBT)(35mg、0.229 mmol)及び3-(trans-4-(tert-ブトキシカルボニルアミノ)シクロヘキシル)プロパン酸(188mg、0.694 mmol)が、全て、アセトニトリル(867.5μl)、ジメチルホルムアミド(DMF)(3.47mL)及びジイソプロピルエチルアミン(DIEA)(134μL、0.833mmol)に溶解された。反応は室温で17時間撹拌された。反応液はEtOAc(100 mL)で希釈され、飽和NaCl(2×50 mL)、1Mクエン酸(3×25 mL)、飽和NaHCO3(3×25 mL)、及び飽和NaCl(50 mL)で洗浄された。有機質層は、乾燥され（無水Na2SO4）、ろ過され、真空下で蒸発させた。この材料は、次のものを使用して、シリカゲル(25-30g)クロマトグラフィーによってさらに精製された； ヘキサン、ヘキサン中20%、25%、及び32％EtOAcから成る4画分(200 mL)。生成物を含む画分は合わせられ、溶剤は、真空下で蒸発され固体(176mg、52.7%収率; TLC Rf = 0.13(ヘキサン中の25%EtOAc); HPLC Rt = 4.984min)を得た。
【０６０３】
合成例41: MN1320
【化４１】
2020512002.tif 000061
【０６０４】
l-イソブチル-2,3,4,9-テトラヒドロ-lH-ピリド[3,4-b]インドール(158.5mg、0.694 mmol)、1-エチル-3-(3-ジメチルアミノプロピル)カルボジイミド-HCl(EDC-HC1)(133mg、0.694 mmol)、4-ジメチルアミノピリジン(DMAP) (8.5mg、0.0694 mmol)、ヒドロキシベンゾトリアゾール(HOBT)(35mg、0.229 mmol)及び4-(tert-ブトキシカルボニルアミノ)メチル)安息香酸(174mg、0.694 mmol)が、全て、アセトニトリル(867.5μl)、ジメチルホルムアミド(DMF)(3.47mL)及びジイソプロピルエチルアミン(DIEA)(134μL、0.833mmol)に溶解された。反応は室温で17時間撹拌された。反応液はEtOAc(100 mL)で希釈され、飽和NaCl(2×50 mL)、1Mクエン酸(3×25 mL)、飽和NaHCO3(3×25 mL)、及び飽和NaCl(50 mL)で洗浄された。有機質層は、乾燥され（無水Na2SO4）、ろ過され、真空下で蒸発させた。この材料は、次のものを使用して、シリカゲル(25-30g)クロマトグラフィーによってさらに精製された； ヘキサン、ヘキサン中20%、25%、及び32％EtOAcから成る4画分(200 mL)。生成物を含む画分は合わせられ、溶剤は、真空下で蒸発され固体(162mg、50.6%収率; TLC Rf = 0.10(ヘキサン中の25%EtOAc); HPLC Rt = 4.771min)を得た。
【０６０５】
合成例42: MN1321
【化４２】
2020512002.tif 000062
【０６０６】
l-イソブチル-2,3,4,9-テトラヒドロ-lH-ピリド[3,4-b]インドール(158.5mg、0.694 mmol)、1-エチル-3-(3-ジメチルアミノプロピル)カルボジイミド-HCl(EDC-HC1)(133mg、0.694 mmol)、4-ジメチルアミノピリジン(DMAP) (8.5mg、0.0694 mmol)、ヒドロキシベンゾトリアゾール(HOBT)(35mg、0.229 mmol)及びtrans-4-((tert-ブトキシカルボニル(メチル)アミノ)メチル)シクロヘキサンカルボン酸(188mg、0.694 mmol)が、全て、アセトニトリル(867.5μl)、ジメチルホルムアミド(DMF)(3.47mL)及びジイソプロピルエチルアミン(DIEA)(134μL、0.833mmol)に溶解された。反応は室温で17時間撹拌された。反応液はEtOAc(100 mL)で希釈され、飽和NaCl(2×50 mL)、1Mクエン酸(3×25 mL)、飽和NaHCO3(3×25 mL)、及び飽和NaCl(50 mL)で洗浄された。有機質層は、乾燥され（無水Na2SO4）、ろ過され、真空下で蒸発させた。この材料は、次のものを使用して、シリカゲル(25-30g)クロマトグラフィーによってさらに精製された； ヘキサン、ヘキサン中20%、25%、及び30％EtOAcから成る4画分(200 mL)。生成物を含む画分は合わせられ、溶剤は、真空下で蒸発され固体(165mg、49.4%収率; TLC Rf = 0.15(ヘキサン中の25%EtOAc); HPLC Rt = 5.096min)を得た。
【０６０７】
合成例43: MN1322
【化４３】
2020512002.tif 000063
【０６０８】
l-イソブチル-2,3,4,9-テトラヒドロ-lH-ピリド[3,4-b]インドール(228mg、1.00 mmol)、l-エチル-3-(3-ジメチルアミノプロピル)カルボジイミド-HCl(EDC-HC1)(192mg、1.00 mmol)、4-ジメチルアミノピリジン(DMAP) (12mg、0.10 mmol)、ヒドロキシベンゾトリアゾール(HOBT)(51mg、0.33 mmol))及びboc-トラネキサム酸(250mg、1.00 mmol)が、すべて、アセトニトリル(1.25ml)、ジメチルホルムアミド(DMF)(5mL)及びジイソプロピルエチルアミン(DIEA)(200μL、1.2mmol)に溶解された。反応は室温で18時間撹拌された。反応液はEtOAc(100 mL)で希釈され、飽和NaCl(2×50 mL)、1Mクエン酸(3×25 mL)、飽和NaHCO3(3×25 mL)、及び飽和NaCl(50 mL)で洗浄された。有機質層は、乾燥され（無水Na2SO4）、ろ過され、真空下で蒸発させた。この材料は、次のものを使用して、シリカゲル(25-30g)クロマトグラフィーによってさらに精製された；ヘキサン中25%、35%、及び40％EtOAcから成る3画分(200 mL)。生成物を含む画分は合わせられ、溶剤は、真空下で蒸発され固体(250mg、55.1%収率; TLC Rf = 0.19(ヘキサン中の30%EtOAc); HPLC Rt = 4.739min)を得た。
【０６０９】
合成例44: MN1329
【化４４】
2020512002.tif 000064
【０６１０】
(4R)-シクロヘキシル-4-(tert-ブトキシカルボニルアミノ)-5-(l-イソブチル-3,4-ジヒドロ-(lH-ピリド[3,4-b]インドール-2(9H)-イル)-5-オキソペンタノエート(540mg、1.00 mmol)が、MeOH(18.4 mL)に溶かされた。H2O(5.3 mL)およびLiOH(210mg、5 mmol)が、混合物に加えられ撹拌された。4時間の後、溶剤の75%は真空下で除去された。混合物は分液漏斗に移され、H2O(25 mL)で希釈された。溶液はジエチルエーテル(4×25 mL)で洗浄された。水層は、pH試験紙によって決定されたpH 2まで、1N HC1(5mL)で酸性化され、CH2Cl2(4×50 mL)で抽出された。溶剤は、真空下で除去され、白い固体(369mg、80.7%収率; TLC Rf = 0.59(CH2Cl2中の5%MeOH + 1%HOAc); HPLC Rt = 4.304min得た。
【０６１１】
合成例45: MN1330
【化４５】
2020512002.tif 000065
【０６１２】
l-イソブチル7-メトキシ-2,3,4,9-テトラハイドロ-1-H-ピリド[3,4-b]インドール(159mg、0.614 mmol)、l-エチル-3-(3-ジメチルアミノプロピル)カルボジイミド-HCl(EDC-HC1)(118mg、0.614 mmol)、4-ジメチルアミノピリジン(DMAP) (7.5mg、0.0614 mmol)、ヒドロキシベンゾトリアゾール(HOBT)(31mg、0.203 mmol)及びtrans-4-(Boc-メチルアミノメチル)シクロヘキサンカルボン酸(167mg、0.614 mmol)が、全て、アセトニトリル(768μl)、ジメチルホルムアミド(DMF)(3.07mL)及びジイソプロピルエチルアミン(DIEA)(122μL、0.737mmol)に溶解された。反応は室温で17時間撹拌された。反応液はEtOAc(100 mL)で希釈され、飽和NaCl(2×50 mL)、1Mクエン酸(3×25 mL)、飽和NaHCO3(3×25 mL)、及び飽和NaCl(50 mL)で洗浄された。有機質層は、乾燥され（無水Na2SO4）、ろ過され、真空下で蒸発させた。この材料は、次のものを使用して、シリカゲル(25-30g)クロマトグラフィーによってさらに精製された； ヘキサン、ヘキサン中30%、40%、及び50％EtOAcから成る4画分(200 mL)。生成物を含む画分は合わせられ、溶剤は、真空下で蒸発され固体(218mg、69.4%収率; TLC Rf = 0.33(ヘキサン中の40%EtOAc); HPLC Rt = 5.031min)を得た。
【０６１３】
合成例46: MN1331
【化４６】
2020512002.tif 000066
【０６１４】
l-イソブチル6-メトキシ-2,3,4,9-テトラハイドロ-1H-ピリド[3,4-b]インドール(159mg、0.614 mmol)、l-エチル-3-(3-ジメチルアミノプロピル)カルボジイミド-HCl(EDC-HC1)(118mg、0.614 mmol)、4-ジメチルアミノピリジン(DMAP) (7.5mg、0.0614 mmol)、ヒドロキシベンゾトリアゾール(HOBT)(31mg、0.203 mmol)及びtrans-4-(Boc-メチルアミノメチル)シクロヘキサンカルボン酸(167mg、0.614 mmol)が、すべて、アセトニトリル(768μl)、ジメチルホルムアミド(DMF)(3.07mL)及びジイソプロピルエチルアミン(DIEA)(122μL、0.737mmol)に溶解された。反応は室温で17時間撹拌された。反応液はEtOAc(100 mL)で希釈され、飽和NaCl(2×50 mL)、1Mクエン酸(3×25 mL)、飽和NaHCO3(3×25 mL)、及び飽和NaCl(50 mL)で洗浄された。有機質層は、乾燥され（無水Na2SO4）、ろ過され、真空下で蒸発させた。この材料は、次のものを使用して、シリカゲル(25-30g)クロマトグラフィーによってさらに精製された； ヘキサン、ヘキサン中15%、25%、及び35％EtOAcから成る4画分(200 mL)。生成物を含む画分は合わせられ、溶剤は、真空下で蒸発され固体(159mg、50.6%収率; TLC Rf = 0.15(ヘキサン中の30%EtOAc); HPLC Rt = 4.986min)を得た。
【０６１５】
合成例47: MN1332
【化４７】
2020512002.tif 000067
l-イソブチル-7-メチル-2,3,4,9-テトラヒドロ-lH-ピリド[3,4-b]インドール・HCI(171mg、0.614 mmol)、1-エチル-3-(3-ジメチルアミノプロピル)カルボジイミド-HCl(EDC-HC1) (118mg、0.614 mmol)、4-ジメチルアミノピリジン(DMAP) (7.5mg、0.0614 mmol)、ヒドロキシベンゾトリアゾール(HOBT)(31mg、0.203 mmol) 及びtrans-4-(Boc-メチルアミノメチル)シクロヘキサンカルボン酸(167mg、0.614 mmol)が、すべて、アセトニトリル(768μl)、ジメチルホルムアミド(DMF)(3.07mL)及びジイソプロピルエチルアミン(DIEA)(122μL、0.737mmol)に溶解された。反応は室温で17時間撹拌された。反応液はEtOAc(100 mL)で希釈され、飽和NaCl(2×50 mL)、1Mクエン酸(3×25 mL)、飽和NaHCO3(3×25 mL)、及び飽和NaCl(50 mL)で洗浄された。有機質層は、乾燥され（無水Na2SO4）、ろ過され、真空下で蒸発させた。この材料は、次のものを使用して、シリカゲル(25-30g)クロマトグラフィーによってさらに精製された；ヘキサン中20%、25%、及び35％EtOAcから成る3画分(200 mL)。生成物を含む画分は合わせられ、溶剤は、真空下で蒸発され固体(238mg、78.2%収率; TLC Rf = 0.22(ヘキサン中の30%EtOAc); HPLC Rt = 5.231min)を得た; 
LCMS+ESI(14.555-14.672min),496.3594(M+l),518.3415(M+23);
lHNMR(CDCl3,0.003%v/vTMS,400MHz):δH0.90-1.15(9H,m),
1.46(9H,s),1.52-1.94(10H,m),2.56(1H,t),2.72-2.90(5H,m),2.97-3.21(2H,m),3.42-3.54(1H,m),4.10(1H,d),5.88(1H,q),7.05(1H,dd),7.28-7.39(2H,m),7.97(1H,br s)．
【０６１６】
合成例48: MN1333
【化４８】
2020512002.tif 000068
【０６１７】
l-イソブチル6-メチル-2,3,4,9-テトラハイドロ-1H-ピリド[3,4-b]インドール(150mg、0.614 mmol)、l-エチル-3-(3-ジメチルアミノプロピル)カルボジイミド-HCl(EDC-HC1)(118mg、0.614 mmol)、4-ジメチルアミノピリジン(DMAP) (7.5mg、0.0614 mmol)、ヒドロキシベンゾトリアゾール(HOBT)(31mg、0.203 mmol)及びtrans-4-(Boc-メチルアミノメチル)シクロヘキサンカルボン酸)(167mg、0.614 mmol)が、全て、アセトニトリル(768μl)、ジメチルホルムアミド(DMF)(3.07mL)及びジイソプロピルエチルアミン(DIEA)(122μL、0.737mmol)に溶解された。反応は室温で17時間撹拌された。反応液はEtOAc(100 mL)で希釈され、飽和NaCl(2×50 mL)、1Mクエン酸(3×25 mL)、飽和NaHCO3(3×25 mL)、及び飽和NaCl(50 mL)で洗浄された。有機質層は、乾燥され（無水Na2SO4）、ろ過され、真空下で蒸発させた。この材料は、次のものを使用して、シリカゲル(25-30g)クロマトグラフィーによってさらに精製された；ヘキサン、ヘキサン中15%、25%、及び35％EtOAcから成る４画分(200 mL)。生成物を含む画分は合わせられ、溶剤は、真空下で蒸発され固体 (233mg、76.6%収率; TLC Rf = 0.32(ヘキサン中の30%EtOAc); HPLC Rt = 5.238min)を得た。
【０６１８】
合成例49: MN1334
【化４９】
2020512002.tif 000069
【０６１９】
l-イソプロピル-6-メチル-2,3,4,9-テトラハイドロ-(lH-ピリド[3,4-b]インドール(140mg、0.614 mmol)、l-エチル-3-(3-ジメチルアミノプロピル)カルボジイミド-HCl(EDC-HC1)(118mg、0.614 mmol)、4-ジメチルアミノピリジン(DMAP) (7.5mg、0.0614 mmol)、ヒドロキシベンゾトリアゾール(HOBT)(31mg、0.203 mmol)及びtrans-4-(Boc-メチルアミノメチル)シクロヘキサンカルボン酸)(167mg、0.614 mmol)が、全て、アセトニトリル(768μl)、ジメチルホルムアミド(DMF)(3.07mL)及びジイソプロピルエチルアミン(DIEA)(122μL、0.737mmol)に溶解された。反応は室温で17時間撹拌された。反応液はEtOAc(100 mL)で希釈され、飽和NaCl(2×50 mL)、1Mクエン酸(3×25 mL)、飽和NaHCO3(3×25 mL)、及び飽和NaCl(50 mL)で洗浄された。有機質層は、乾燥され（無水Na2SO4）、ろ過され、真空下で蒸発させた。この材料は、次のものを使用して、シリカゲル(25-30g)クロマトグラフィーによってさらに精製された；ヘキサン、ヘキサン中30%、40%、及び50％EtOAcから成る４画分(200 mL)。生成物を含む画分は合わせられ、溶剤は、真空下で蒸発され固体(191mg、64.6%収率; TLC Rf = 0.35(ヘキサン中の40%EtOAc); HPLC Rt = 5.081min)を得た。
【０６２０】
合成例50: MN1335
【化５０】
2020512002.tif 000070
7-クロロ-l-イソブチル2,3,4,9-テトラハイドロ-lH-ピリド[3,4-b]インドール(161mg、0.614 mmol)、l-エチル-3-(3-ジメチルアミノプロピル)カルボジイミド-HCl(EDC-HC1) (118mg、0.614 mmol)、4-ジメチルアミノピリジン(DMAP) (7.5mg、0.0614 mmol)、ヒドロキシベンゾトリアゾール(HOBT)(31mg、0.203 mmol)及びtrans-4-(Boc-メチルアミノメチル)シクロヘキサンカルボン酸(167mg、0.614 mmol)が、全て、アセトニトリル(768μl)、ジメチルホルムアミド(DMF)(3.07mL)及びジイソプロピルエチルアミン(DIEA)(122μL、0.737mmol)に溶解された。反応は室温で17時間撹拌された。反応液はEtOAc(100 mL)で希釈され、飽和NaCl(2×50 mL)、1Mクエン酸(3×25 mL)、飽和NaHCO3(3×25 mL)、及び飽和NaCl(50 mL)で洗浄された。有機質層は、乾燥され（無水Na2SO4）、ろ過され、真空下で蒸発させた。この材料は、次のものを使用して、シリカゲル(25-30g)クロマトグラフィーによってさらに精製された；ヘキサン、ヘキサン中15%、25%、及び35％EtOAcから成る４画分(200 mL)。生成物を含む画分は合わせられ、溶剤は、真空下で蒸発され固体 (250mg、78.9%収率; TLC Rf = 0.30(ヘキサン中の30%EtOAc); HPLC Rt = 5.282min)を得た;
LCMS+ESI(14.672-14.905min),516.3049(M+l)および538.2867(M+23); 
lH NMR(CDC1,0.003%のv/v TMS,400MHz):δΗ0.94-1.15(8H,m), 1.41(9H,s),1.60- 1.94(10H,m),2.55(1H,t),2.71-2.91(5H,m),3.00-3.18(2H,m), 3.48(1H,t),4.07(1H,d),5.79-5.91(1H,m),6.92(1H,m),7.10(1H,s),7.32(1H,d),7.66(1H,br s)．
【０６２１】
合成例51: MN1336
【化５１】
2020512002.tif 000071
【０６２２】
6-クロロ- l-イソブチル-2,3,4,9-テトラヒドロ-lH-ピリド[3,4-b]インドール・TFA塩(221mg、0.614mmol)、l-エチル-3-(3-ジメチルアミノプロピル)カルボジイミド-HCl(EDC-HC1)(118mg、0.614 mmol)、4-ジメチルアミノピリジン(DMAP) (7.5mg、0.0614 mmol)、ヒドロキシベンゾトリアゾール(HOBT)(31mg、0.203 mmol)及びtrans-4-(Boc-メチルアミノメチル)シクロヘキサンカルボン酸(167mg、0.614 mmol)が、すべて、アセトニトリル(768μl)、ジメチルホルムアミド(DMF)(3.07mL)及びジイソプロピルエチルアミン(DIEA)(244μL、1.47mmol)に溶解された。反応は室温で17時間撹拌された。反応液はEtOAc(100 mL)で希釈され、飽和NaCl(2×50 mL)、1Mクエン酸(3×25 mL)、飽和NaHCO3(3×25 mL)、及び飽和NaCl(50 mL)で洗浄された。有機質層は、乾燥され（無水Na2SO4）、ろ過され、真空下で蒸発させた。この材料は、次のものを使用して、シリカゲル(25-30g)クロマトグラフィーによってさらに精製された；ヘキサン中25%、30%、及び35％EtOAcから成る3画分(200 mL)。生成物を含む画分は合わせられ、溶剤は、真空下で蒸発され固体(92mg、29.0%収率; TLC Rf = 0.20(ヘキサン中の30%EtOAc); HPLC Rt = 5.278min)を得た。
【０６２３】
合成例52: MN1337
【化５２】
2020512002.tif 000072
【０６２４】
7-フルオロ-l-イソブチル-2,3,4,9-テトラヒドロ-lH-ピリド[3,4-b]インドール(151mg、0.614 mmol)、l-エチル-3-(3-ジメチルアミノプロピル)カルボジイミド-HCl(EDC-HC1)(118mg、0.614 mmol)、4-ジメチルアミノピリジン(DMAP) (7.5mg、0.0614 mmol)、ヒドロキシベンゾトリアゾール(HOBT)(31mg、0.203 mmol)及びtrans-4-(Boc-メチルアミノメチル)シクロヘキサンカルボン酸(167mg、0.614 mmol)が、すべて、アセトニトリル(768μl)、ジメチルホルムアミド(DMF)(3.07mL)及びジイソプロピルエチルアミン(DIEA)(122μL、0.737mmol)に溶解された。反応は室温で17時間撹拌された。反応液はEtOAc(100 mL)で希釈され、飽和NaCl(2×50 mL)、1Mクエン酸(3×25 mL)、飽和NaHCO3(3×25 mL)、及び飽和NaCl(50 mL)で洗浄された。有機質層は、乾燥され（無水Na2SO4）、ろ過され、真空下で蒸発させた。この材料は、次のものを使用して、シリカゲル(25-30g)クロマトグラフィーによってさらに精製された；ヘキサン、ヘキサン中15%、25%、及び35％EtOAcから成る4画分(200 mL)。生成物を含む画分は合わせられ、溶剤は、真空下で蒸発され固体(159mg、51.8%収率; TLC Rf = 0.28(ヘキサン中の30%EtOAc); HPLC Rt = 5.124min)を得た。
【０６２５】
合成例53: MN1338
【化５３】
2020512002.tif 000073
【０６２６】
6-フルオロ-l-イソブチル-2,3,4,9-テトラヒドロ-lH-ピリド[3,4-b]インドール(151mg、0.614 mmol)、l-エチル-3-(3-ジメチルアミノプロピル)カルボジイミド-HCl(EDC-HC1)(118mg、0.614 mmol)、4-ジメチルアミノピリジン(DMAP) (7.5mg、0.0614 mmol)、ヒドロキシベンゾトリアゾール(HOBT)(31mg、0.203 mmol)及びtrans-4-(Boc-メチルアミノメチル)シクロヘキサンカルボン酸(167mg、0.614 mmol)が、すべて、アセトニトリル(768μl)、ジメチルホルムアミド(DMF)(3.07mL)及びジイソプロピルエチルアミン(DIEA)(122μL、0.737mmol)に溶解された。反応は室温で17時間撹拌された。反応液はEtOAc(100 mL)で希釈され、飽和NaCl(2×50 mL)、1Mクエン酸(3×25 mL)、飽和NaHCO3(3×25 mL)、及び飽和NaCl(50 mL)で洗浄された。有機質層は、乾燥され（無水Na2SO4）、ろ過され、真空下で蒸発させた。この材料は、次のものを使用して、シリカゲル(25-30g)クロマトグラフィーによってさらに精製された；ヘキサン、ヘキサン中15%、25%、及び35％EtOAcから成る4画分(200 mL)。生成物を含む画分は合わせられ、溶剤は、真空下で蒸発され固体(100mg、32.6%収率; TLC Rf = 0.42(ヘキサン中の40%EtOAc); HPLC Rt = 5.106min)を得た。
【０６２７】
合成例54: MN1339
【化５４】
2020512002.tif 000074
【０６２８】
7-フルオロ-l-イソプロピル-2,3,4,9-テトラヒドロ-lH-ピリド[3,4-b]インドール(143mg、0.614 mmol)、l-エチル-3-(3-ジメチルアミノプロピル)カルボジイミド-HCl(EDC-HC1)(118mg、0.614 mmol)、4-ジメチルアミノピリジン(DMAP) (7.5mg、0.0614 mmol)、ヒドロキシベンゾトリアゾール(HOBT)(31mg)(7.5mg、0.0614 mmol)及びtrans-4-(Boc-メチルアミノメチル)シクロヘキサンカルボン酸(167mg、0.614 mmol)が、すべて、アセトニトリル(768μl)、ジメチルホルムアミド(DMF)(3.07mL)及びジイソプロピルエチルアミン(DIEA)(122μL、0.737mmol)に溶解された。反応は室温で17時間撹拌された。反応液はEtOAc(100 mL)で希釈され、飽和NaCl(2×50 mL)、1Mクエン酸(3×25 mL)、飽和NaHCO3(3×25 mL)、及び飽和NaCl(50 mL)で洗浄された。有機質層は、乾燥され（無水Na2SO4）、ろ過され、真空下で蒸発させた。この材料は、次のものを使用して、シリカゲル(25-30g)クロマトグラフィーによってさらに精製された；ヘキサン、ヘキサン中30%、40%、及び50％EtOAcから成る4画分(200 mL)。生成物を含む画分は合わせられ、溶剤は、真空下で蒸発され固体(148mg、49.6%収率; TLC Rf = 0.32(ヘキサン中の40%EtOAc); HPLC Rt = 4.966min)を得た。
【０６２９】
合成例55: MN1340
【化５５】
2020512002.tif 000075
【０６３０】
6-フルオロ-l-イソプロピル-2,3,4,9-tetrariydro-lH-ピリド[3,4-b]インドール(65mg、0.280 mmol)、l-エチル-3-(3-ジメチルアミノプロピル)カルボジイミド-HCl(EDC-HC1)(54mg、0.280 mmol)、4-ジメチルアミノピリジン(DMAP) (3.4mg、0.028 mmol)、ヒドロキシベンゾトリアゾール(HOBT)(14mg、0.092 mmol)及びtrans-4-(Boc-メチルアミノメチル)シクロヘキサンカルボン酸(76mg、0.280 mmol)が、すべて、アセトニトリル(350μl)、ジメチルホルムアミド(DMF)(1.40mL)及びジイソプロピルエチルアミン(DIEA)(56μL、0.336mmol)に溶解された。反応は室温で17時間撹拌された。反応液はEtOAc(100 mL)で希釈され、飽和NaCl(2×50 mL)、1Mクエン酸(3×25 mL)、飽和NaHCO3(3×25 mL)、及び飽和NaCl(50 mL)で洗浄された。有機質層は、乾燥され（無水Na2SO4）、ろ過され、真空下で蒸発させた。この材料は、次のものを使用して、シリカゲル(25-30g)クロマトグラフィーによってさらに精製された；ヘキサン、ヘキサン中30%、40%、及び50％EtOAcから成る4画分(200 mL)。生成物を含む画分は合わせられ、溶剤は、真空下で蒸発され固体(94mg、69.1%収率; TLC Rf = 0.28(ヘキサン中の40%EtOAc); HPLC Rt = 4.947min)を得た。
【０６３１】
合成例56: MN1341
【化５６】
2020512002.tif 000076
【０６３２】
l-イソプロピル-2,3,4,9-テトラヒドロ-lH-ピリド[3,4-b]インドール(132mg、0.614 mmol)、1-エチル-3-(3-ジメチルアミノプロピル)カルボジイミド-HCl(EDC-HC1)(118mg、0.614 mmol)、4-ジメチルアミノピリジン(DMAP) (7.5mg、0.0614 mmol)、ヒドロキシベンゾトリアゾール(HOBT)(31mg、0.203 mmol)及びtrans-4-(Boc-メチルアミノメチル)シクロヘキサンカルボン酸(167mg、0.614 mmol)が、全て、アセトニトリル(768μl)、ジメチルホルムアミド(DMF)(3.07mL)及びジイソプロピルエチルアミン(DIEA)(122μL、0.737mmol)に溶解された。反応は室温で17時間撹拌された。反応液はEtOAc(100 mL)で希釈され、飽和NaCl(2×50 mL)、1Mクエン酸(3×25 mL)、飽和NaHCO3(3×25 mL)、及び飽和NaCl(50 mL)で洗浄された。有機質層は、乾燥され（無水Na2SO4）、ろ過され、真空下で蒸発させた。この材料は、次のものを使用して、シリカゲル(25-30g)クロマトグラフィーによってさらに精製された；ヘキサン、ヘキサン中30%、40%、及び50％EtOAcから成る4画分(200 mL)。生成物を含む画分は合わせられ、溶剤は、真空下で蒸発され固体(215mg、74.9%収率; TLC Rf = 0.12(ヘキサン中の30%EtOAc); HPLC Rt = 4.928min)を得た。
【０６３３】
合成例57: MN1352
【化５７】
2020512002.tif 000077
【０６３４】
l-シクロプロピル-2,3,4,9-テトラヒドロ-lH-ピリド[3,4-b]インドール(178mg、0.84mmol)、1-エチル-3-(3-ジメチルアミノプロピル)カルボジイミド-HCl(EDC-HC1)(161mg、0.84 mmol)、4-ジメチルアミノピリジン(DMAP) (10.3mg、0.084 mmol)、ヒドロキシベンゾトリアゾール(HOBT)(42mg、0.277 mmol)及びtrans-4-(Boc-メチルアミノメチル)シクロヘキサンカルボン酸(228mg、0.84 mmol)が、全て、アセトニトリル(1.05mL)、ジメチルホルムアミド(DMF)(4.2mL)及びジイソプロピルエチルアミン(DIEA)(167μL、1.01mmol)に溶解された。反応は室温で17時間撹拌された。反応液はEtOAc(100 mL)で希釈され、飽和NaCl(2×50 mL)、1Mクエン酸(3×25 mL)、飽和NaHCO3(3×25 mL)、及び飽和NaCl(50 mL)で洗浄された。有機質層は、乾燥され（無水Na2SO4）、ろ過され、真空下で蒸発させた。この材料は、次のものを使用して、シリカゲル(25-30g)クロマトグラフィーによってさらに精製された；ヘキサン、ヘキサン中25%、35%、及び45％EtOAcから成る4画分(200 mL)。生成物を含む画分は合わせられ、溶剤は、真空下で蒸発され固体(316mg、80.8%収率; TLC Rf = 0.27(ヘキサン中の40%EtOAc); HPLC Rt = 4.851min)を得た。
【０６３５】
合成例58: MN1353
【化５８】
2020512002.tif 000078
【０６３６】
l-シクロブチル-2,3,4,9-テトラヒドロ-lH-ピリド[3,4-b]インドール(190mg、0.84 mmol)、1-エチル-3-(3-ジメチルアミノプロピル)カルボジイミド-HCl(EDC-HC1)(161mg、0.84 mmol)、4-ジメチルアミノピリジン(DMAP) (10.3mg、0.084 mmol)、ヒドロキシベンゾトリアゾール(HOBT)(42mg、0.277 mmol)及びtrans-4-(Boc-メチルアミノメチル)シクロヘキサンカルボン酸(228mg、0.84 mmol)が、すべて、アセトニトリル(1.05mL)、ジメチルホルムアミド(DMF)(4.2mL)及びジイソプロピルエチルアミン(DIEA)(167μL、1.01mmol)に溶解された。反応は室温で17時間撹拌された。反応液はEtOAc(100 mL)で希釈され、飽和NaCl(2×50 mL)、1Mクエン酸(3×25 mL)、飽和NaHCO3(3×25 mL)、及び飽和NaCl(50 mL)で洗浄された。有機質層は、乾燥され（無水Na2SO4）、ろ過され、真空下で蒸発させた。この材料は、次のものを使用して、シリカゲル(25-30g)クロマトグラフィーによってさらに精製された；ヘキサン、ヘキサン中25%、30%、及び40％EtOAcから成る4画分(200 mL)。生成物を含む画分は合わせられ、溶剤は、真空下で蒸発され固体(370mg、75.7%収率; TLC Rf = 0.32(ヘキサン中の40%EtOAc); HPLC Rt = 5.002min)を得た。
【０６３７】
合成例59: MN1355中間物
【化５９−１】
2020512002.tif 000079
【０６３８】
トリプタミン(4.00g、25.0 mmol)が、MeOH(25mL全量)中の10%常水溶液で溶かされた。プロピオンアルデヒド(2.7 mL、37.4 mmol)が、注射器によって加えられ、ついで濃縮H2SO4(1.4 mL)が注射器によってゆっくり(発熱注意)加えられた。反応は夜通し還流された。反応は室温に冷却され、水酸化アンモニウムで塩基性し、固体をえた。固体は漏斗に集められ、ヘキサン(2x15 mL)でリンスされ、ついでジエチルエーテル(2x20 mL)でリンスした。濾液は、蒸発され、粗製物を得、EtOAc(20 mL)に溶かされ、ろ過された。濾液は蒸発され、残渣はEt2O(20 mL)に溶かされ、0.45μｍPTFEによってろ過され、蒸発させて2.0gの固体えた。
【０６３９】
合成例59: MN1355
【化５９−２】
2020512002.tif 000080
【０６４０】
l-エチル-2,3,4,9-テトラヒドロ-lH-ピリド[3,4-b]インドール(168mg、0.84 mmol)、l-エチル-3-(3-ジメチルアミノプロピル)カルボジイミド-HCl(EDC-HC1)(161mg、0.84 mmol)、4-ジメチルアミノピリジン(DMAP) (10.3mg、0.084 mmol)、ヒドロキシベンゾトリアゾール(HOBT)(42mg、0.277 mmol)及びtrans-4-(Boc-メチルアミノメチル)シクロヘキサンカルボン酸(228mg、0.84 mmol)が、全て、アセトニトリル(1.05mL)、ジメチルホルムアミド(DMF)(4.2mL)及びジイソプロピルエチルアミン(DIEA)(167μL、1.01mmol)に溶解された。反応は室温で17時間撹拌された。反応液はEtOAc(100 mL)で希釈され、飽和NaCl(2×50 mL)、1Mクエン酸(3×25 mL)、飽和NaHCO3(3×25 mL)、及び飽和NaCl(50 mL)で洗浄された。有機質層は、乾燥され（無水Na2SO4）、ろ過され、真空下で蒸発させた。この材料は、次のものを使用して、シリカゲル(25-30g)クロマトグラフィーによってさらに精製された；ヘキサン、ヘキサン中30%、40%、及び50％EtOAcから成る4画分(200 mL)。生成物を含む画分は合わせられ、溶剤は、真空下で蒸発され固体(229mg、60.1%収率; TLC Rf = 0.21(ヘキサン中の40%EtOAc); HPLC Rt = 4.812min)を得た。
【０６４１】
合成例60: MN1356
【化６０】
2020512002.tif 000081
【０６４２】
l-イソブチル8-メチル-2,3,4,9-テトラハイドロ-1H-ピリド[3,4-b]インドール(204mg、0.84 mmol)、l-エチル-3-(3-ジメチルアミノプロピル)カルボジイミド-HCl(EDC-HC1)(161mg、0.84 mmol)、4-ジメチルアミノピリジン(DMAP) (10.3mg、0.084 mmol)、ヒドロキシベンゾトリアゾール(HOBT)(42mg、0.277 mmol)及びtrans-4-(Boc-メチルアミノメチル)シクロヘキサンカルボン酸(228mg、0.84 mmol)が、全て、アセトニトリル(1.05mL)、ジメチルホルムアミド(DMF)(4.2mL)及びジイソプロピルエチルアミン(DIEA)(167μL、1.01mmol)に溶解された。反応は室温で17時間撹拌された。反応液はEtOAc(100 mL)で希釈され、飽和NaCl(2×50 mL)、1Mクエン酸(3×25 mL)、飽和NaHCO3(3×25 mL)、及び飽和NaCl(50 mL)で洗浄された。有機質層は、乾燥され（無水Na2SO4）、ろ過され、真空下で蒸発させた。この材料は、次のものを使用して、シリカゲル(25-30g)クロマトグラフィーによってさらに精製された；ヘキサン、ヘキサン中20%、25%、及び35％EtOAcから成る4画分(200 mL)。生成物を含む画分は合わせられ、溶剤は、真空下で蒸発され固体(266mg、63.9%収率; TLC Rf = 0.22(ヘキサン中の30%EtOAc); HPLC Rt = 5.247min)を得た。
【０６４３】
合成例61: MN1357
【化６１】
2020512002.tif 000082
【０６４４】
l-イソブチル5-メチル-2,3,4,9-テトラハイドロ-1H-ピリド[3,4-b]インドール(204mg、0.84 mmol)、l-エチル-3-(3-ジメチルアミノプロピル)カルボジイミド-HCl(EDC-HC1)(161mg、0.84 mmol)、4-ジメチルアミノピリジン(DMAP) (10.3mg、0.084 mmol)、ヒドロキシベンゾトリアゾール(HOBT)(42mg、0.277 mmol)及びtrans-4-(Boc-メチルアミノメチル)シクロヘキサンカルボン酸(228mg、0.84 mmol)が、全て、アセトニトリル(1.05mL)、ジメチルホルムアミド(DMF)(4.2mL)及びジイソプロピルエチルアミン(DIEA)(167μL、1.01mmol)に溶解された。反応は室温で17時間撹拌された。反応液はEtOAc(100 mL)で希釈され、飽和NaCl(2×50 mL)、1Mクエン酸(3×25 mL)、飽和NaHCO3(3×25 mL)、及び飽和NaCl(50 mL)で洗浄された。有機質層は、乾燥され（無水Na2SO4）、ろ過され、真空下で蒸発させた。この材料は、次のものを使用して、シリカゲル(25-30g)クロマトグラフィーによってさらに精製された；ヘキサン、ヘキサン中20%、25%、及び35％EtOAcから成る4画分(200 mL)。生成物を含む画分は合わせられ、溶剤は、真空下で蒸発され固体(370mg、88.9%収率; TLC Rf = 0.22(ヘキサン中の30%EtOAc); HPLC Rt = 5.197min)を得た。
【０６４５】
合成例62: MN1358
【化６２】
2020512002.tif 000083
【０６４６】
l-イソブチル9-メチル-2,3,4,9-テトラハイドロ-1H-ピリド[3,4-b]インドール(204mg、0.84 mmol)、l-エチル-3-(3-ジメチルアミノプロピル)カルボジイミド-HCl(EDC-HC1)(161mg、0.84 mmol)、4-ジメチルアミノピリジン(DMAP) (10.3mg、0.084 mmol)、ヒドロキシベンゾトリアゾール(HOBT)(42mg、0.277 mmol)及びtrans-4-(Boc-メチルアミノメチル)シクロヘキサンカルボン酸(228mg、0.84 mmol)が、全て、アセトニトリル(1.05mL)、ジメチルホルムアミド(DMF)(4.2mL)及びジイソプロピルエチルアミン(DIEA)(167μL、1.01mmol)に溶解された。反応は室温で17時間撹拌された。反応液はEtOAc(100 mL)で希釈され、飽和NaCl(2×50 mL)、1Mクエン酸(3×25 mL)、飽和NaHCO3(3×25 mL)、及び飽和NaCl(50 mL)で洗浄された。有機質層は、乾燥され（無水Na2SO4）、ろ過され、真空下で蒸発させた。この材料は、次のものを使用して、シリカゲル(25-30g)クロマトグラフィーによってさらに精製された；ヘキサン、ヘキサン中20%、25%、及び35％EtOAcから成る4画分(200 mL)。生成物を含む画分は合わせられ、溶剤は、真空下で蒸発され固体(327mg、78.5%収率; TLC Rf = 0.31(ヘキサン中の30%EtOAc); HPLC Rt = 5.312min)を得た。
【０６４７】
合成例63: MN1359
【化６３】
2020512002.tif 000084
【０６４８】
8-クロロ- l-イソブチル-2,3,4,9-テトラヒドロ-lH-ピリド[3,4-(b]インドール・TFA塩(158mg、0.42 mmol)、l-エチル-3-(3-ジメチルアミノプロピル)カルボジイミド-HCl(EDC-HCl)(81mg、0.42 mmol)、4-ジメチルアミノピリジン(DMAP) (5.1mg、0.042 mmol)、ヒドロキシベンゾトリアゾール(HOBT)(21mg、0.139mmol)及びtrans-4-(Boc-メチルアミノメチル)シクロヘキサンカルボン酸(114mg、0.42 mmol)が、全て、アセトニトリル(525μL)、ジメチルホルムアミド(DMF)(2.1mL)及びジイソプロピルエチルアミン(DIEA)(83μL、0.50mmol)に溶解された。反応は室温で17時間撹拌された。反応液はEtOAc(100 mL)で希釈され、飽和NaCl(2×50 mL)、1Mクエン酸(3×25 mL)、飽和NaHCO3(3×25 mL)、及び飽和NaCl(50 mL)で洗浄された。有機質層は、乾燥され（無水Na2SO4）、ろ過され、真空下で蒸発させた。この材料は、次のものを使用して、シリカゲル(25-30g)クロマトグラフィーによってさらに精製された；ヘキサン、ヘキサン中20%、25%、及び35％EtOAcから成る4画分(200 mL)。生成物を含む画分は合わせられ、溶剤は、真空下で蒸発され固体 (183mg、84.4%収率; TLC Rf = 0.32(ヘキサン中の30%EtOAc); HPLC Rt = 5.321min)を得た。
【０６４９】
合成例64: MN1360
【化６４】
2020512002.tif 000085
【０６５０】
5-クロロ-l-イソブチル-2,3,4,9-テトラヒドロ-lH-ピリド[3,4-b]インドール・TFA塩(158mg、0.42 mmol)、l-エチル-3-(3-ジメチルアミノプロピル)カルボジイミド-HCl(EDC-HCl)(81mg、0.42 mmol)、4-ジメチルアミノピリジン(DMAP) (5.1mg、0.042 mmol)、ヒドロキシベンゾトリアゾール(HOBT)(21mg、0.139 mmol)及びtrans-4-(Boc-メチルアミノメチル)シクロヘキサンカルボン酸(114mg、0.42 mmol)が、すべて、アセトニトリル(525μL)、ジメチルホルムアミド(DMF)(2.1mL)及びジイソプロピルエチルアミン(DIEA)(83μL、0.50mmol)に溶解された。反応は室温で17時間撹拌された。反応液はEtOAc(100 mL)で希釈され、飽和NaCl(2×50 mL)、1Mクエン酸(3×25 mL)、飽和NaHCO3(3×25 mL)、及び飽和NaCl(50 mL)で洗浄された。有機質層は、乾燥され（無水Na2SO4）、ろ過され、真空下で蒸発させた。この材料は、次のものを使用して、シリカゲル(25-30g)クロマトグラフィーによってさらに精製された；ヘキサン、ヘキサン中20%、25%、及び35％EtOAcから成る4画分(200 mL)。生成物を含む画分は合わせられ、溶剤は、真空下で蒸発され固体(135mg、62.3%収率; TLC Rf = 0.19(ヘキサン中の30%EtOAc); HPLC Rt = 5.327min)を得た。
【０６５１】
合成例65: MN1369
【化６５−１】
2020512002.tif 000086
【０６５２】
Boc-N-メチル-トラネキサム酸(176mg、0.65 mmol)およびフロロ-N,N,N’,N’-tetraメチルフォルムアミジニウムヘキサフルオロホスフェート(TFFH)(198mg、0.75 mmol)が、1,2-ジクロルエタン(DCE)(2.25 mL)およびジイソプロピルエチルアミン(DIEA)(372 μL(2.25 mmol))に溶かされた。これは30分間室温でかき混ぜられ、その後、メチル1-イソブチル-2,3,4,9-テトラヒドロ-lH-ピリド[3,4-b]インドール-3-カルボン酸塩(143mg、0.5 mmol)が添加された。反応物は、1時間８０℃で還流され、その後、Boc-N-メチル-トラネキサム酸(176mg、0.65 mmol)、フルオロ-N,N,N',N'-tetraメチルフォルムアミジニヘキサフルオロホスフェート(198mg、0.75 mmol)、ジイソプロピルエチルアミン(372μL、2.25 mmol)、1,2-ジクロルエタン(2.25mL)の溶液が加えられた。これは1.5時間80℃で還流され、トルエン(3x50mL)と共沸された。粗生成物はシリカゲル・クロマトグラフィーによって精製された。生成物は固体(141mg、52%)として回収された。
【０６５３】
合成例65: MN1342
【化６５−２】
2020512002.tif 000087
【０６５４】
トリプタミン(801mg、5 mmol)が1,1,1,3,3,3-ヘキサフルオロイソプロパノール(HFIP)(8mL)に溶かされ、注射器によってシクロプロパン・カルボキサアルデヒド(415μL(5.5 mmol))が加えられた。反応物は夜通し還流された。結果物は真空下で濃縮され、CHCl3(3x50mL)で共沸された。得られた粗生成物は、ヘキサン(2xl0mL)で粉にされ、固体がフィルタ(899mg、85%)上に集められた。
【０６５５】
合成例66: MN1362(EDCカップリング)
【化６６】
2020512002.tif 000088
【０６５６】
L-l,2,3,4-テトラハイドロノルハルマン-3-カルボキシル酸メチルエステル-HC1(267mg、1.00 mmol)、4-ジメチルアミノピリジン(DMAP)(12mg、0.1 mmol)、ヒドロキシベンゾトリアゾール(HOBT)(51mg、0.33 mmol)およびtrans-4-(Boc-メチルアミノメチル)シクロヘキサンカルボン酸(271mg、1.00 mmol)が、すべて、アセトニトリル(1.25 mL)、ジメチルホルムアミド(DMF) (5mL)、ジイソプロピルエチルアミン(DIEA) (396μL、2.4 mmol)に加えられた。その反応は室温で17時間撹拌された。反応液はEtOAc(100 mL)で希釈され、飽和NaCl(2×50 mL)、1Mクエン酸(3×25 mL)、飽和NaHCO3(3×25 mL)、及び飽和NaCl(50 mL)で洗浄された。有機質層は、乾燥され（無水Na2SO4）、ろ過され、真空下で蒸発させた。この材料は、次のものを使用して、シリカゲル(25-30g)クロマトグラフィーによってさらに精製された；ヘキサン、ヘキサン中EtOAcから成る画分(200 mL)。生成物を含む画分は合わせられ、溶剤は、真空下で蒸発され固体(280mg、57.9%収率; TLC Rf = 0.14(ヘキサン中の40%EtOAc); HPLC Rt = 4.507min)を得た。
【０６５７】
合成例67: MN1363(EDCカップリング)
【化６７】
2020512002.tif 000089
エチル2-(2,3,4,9-テトラヒドロ-lH-インデノ[2,l-c]ピリジン-l-イル)酢酸塩・HCI(160mg、0.42 mmol)、1-エチル-3-(3-ジメチルアミノプロピル)カルボジイミド-HCl(EDC-HC1) (81mg、0.42 mmol)、4-ジメチルアミノピリジン(DMAP) (5.1mg、0.042 mmol)、ヒドロキシベンゾトリアゾール(HOBT)(21mg、0.139 mmol)及びtrans-4-(Boc-メチルアミノメチル)シクロヘキサンカルボン酸(114mg、0.42 mmol)が、すべて、アセトニトリル(525μL)、ジメチルホルムアミド(DMF) (2.1mL)、ジイソプロピルエチルアミン(DIEA) (83μL、0.5mmol)に加えられた。反応は室温で17時間撹拌された。反応液はEtOAc(100 mL)で希釈され、飽和NaCl(2×50 mL)、1Mクエン酸(3×25 mL)、飽和NaHCO3(3×25 mL)、及び飽和NaCl(50 mL)で洗浄された。有機質層は、乾燥され（無水Na2SO4）、ろ過され、真空下で蒸発させた。この材料は、次のものを使用して、シリカゲル(25-30g)クロマトグラフィーによってさらに精製された；ヘキサン、ヘキサン中35%、45%、及び65％EtOAcから成る4画分(200 mL)。生成物を含む画分は合わせられ、溶剤は、真空下で蒸発され固体 (116mg、54.1%収率; TLC Rf = 0.20(ヘキサン中の40%EtOAc); HPLC Rt = 4.846min)を得た。
【０６５８】
合成例68:中間物(HFIP環化)
【化６８】
2020512002.tif 000090
【０６５９】
6-メチルトリプタミン(380mg、2.18 mmol)が、1,1,1,3,3,3-ヘキサフルオロイソプロパノール(3.5 mL)に溶かされた。シクロプロパンカルバルデヒド(96 μL、 2.62 mmol)が、注射器によって加えられた。反応は、16時間の60℃で、アルミニウム加熱ブロックに置かれた。溶剤は真空下で除去され、CHCl3(3×50 mL)と共沸された。生成物はろ過され、真空下で乾かされて、固体(413mg、83.7%収率;TLC Rf = 0.23(CH2Cl2中5％MeOH + 1%NH3);HPLC Rt = 2.942min)をえた。
【０６６０】
合成例69:中間物(HFIP環化)
【化６９】
2020512002.tif 000091
【０６６１】
6-クロロトリプタミン(424mg、2.18 mmol)が、1,1,1,3,3,3-ヘキサフルオロイソプロパノール(3.5 mL)に溶かされた。シクロプロパンカルバルデヒド(196 μL、 2.62 mmol)が、注射器によって加えられた。反応は、16時間の60℃でアルミニウム加熱ブロックに置かれた。溶剤は真空下で除去され、CHCl3(3×50 mL)と共沸された。生成物はろ過され、真空下で乾かされて、固体(414mg、77.0%収率;TLC Rf = 0.20(CH2Cl2中5%MeOH + 1%NH3);HPLC Rt = 3.102min)を得た。
【０６６２】
合成例70:中間物(HFIP環化)
【化７０】
2020512002.tif 000092
【０６６３】
6-メチルトリプタミン(370mg、2.12 mmol)が、HFIP(3.4 mL)に溶かされた。イソブチルアルデヒドが加えられ、反応は16時間 60℃で還流された。反応物は真空下で濃縮され、CHC13(3×50 mL)と共沸された。結果物は、ろ過され、真空下で乾かされ、固体(164mg、29.2%収率; TLC Rf = 0.20(CH2Cl2中5%MeOH + 1%NH3); HPLC Rt = 3.095minを得た。
【０６６４】
合成例71:中間物(TFA環化)
【化７１】
2020512002.tif 000093
【０６６５】
6-クロロトリプタミン(500mg、2.57 mmol)がCH2Cl2(21 mL)に溶かされた。イソブチルアルデヒド(234 μL、2.57 mmol)が、注射器によって溶液に加えられた。また、混合物は5分間ドライアイス・プロパノール浴槽に置かれた。TFA(1.97 mL、25.7 mmol)が、6min以上にドロップワイスに反応液に加えられ、次に氷浴から取り除かれ、室温に暖められた。反応物はトルエン(3×50 mL)と共沸され、ジエチルエーテル(5×10 mL)で粉にされ、白い固体(793mg、85.1%収率; TLC Rf = 0.25(CH2Cl2中5%MeOH + 1%NH3); HPLC Rt = 3.156minをえた。
【０６６６】
合成例72:中間物(HFIP環化)
【化７２】
2020512002.tif 000094
【０６６７】
5-メチルトリプタミン(172mg、1.00 mmol)が、1,1,1,3,3,3-ヘキサフルオロイソプロパノール(1.6 mL)に溶かされた。シクロプロパンカルバルデヒド(90 μL、 1.0 mmol)が、注射器によって加えられた。16時間後、溶剤は真空下で除去され、結果として生じる固体は、CHCl3(3×50 mL)と共沸された。固体はEtOH(5 mL)に溶かされ、Et2O(60 mL)およびEt2O(1.2 mL)中1N HClが溶液に加えられた。
生成物はろ過され、真空下で乾かされ、固体(138mg、61.0%収率;TLC Rf = 0.21(CH2Cl2中5%MeOH + 1%NH3;HPLC Rt = 2.910min)を得た。
【０６６８】
合成例73: MN1369(TFFHを使用する選択肢カップリング方法)
【化７３】
2020512002.tif 000095
【０６６９】
メチルl-イソブチル-2,3,4,9-テトラヒドロ-lH-インデノ[2,l-c]ピリジン-3-カルボン酸塩(143mg、0.50 mmol)、trans-4-(Boc-メチルアミノメチル)シクロヘキサンカルボン酸(352mg、1.30 mmol)及びテトラメチルフルオロフォルムアミジニウムヘキサフルオロホスフェート(TFFH)(396mg、1.50 mmol)）が、1,2-ジクロルエタン(DCE)(4.50 mL)およびジイソプロピルエチルアミン(DIEA)(744μL、4.50 mmol)に溶かされ、90分間撹拌された。反応液はトルエン(3×50 mL)と共沸された。この材料は、次のものを使用して、シリカゲル(25-30g)クロマトグラフィーによってさらに精製された: CH2Cl2、CH2Cl2中の6%EtOAc、CH2Cl2中の10%EtOAc、CH2Cl2中の15%EtOAcおよびCH2Cl2中の20%EtOAcから成る5画分(200 mL)。生成物を含む画分は合わされた。また、溶剤は固体(190mg)を得た。この材料は、次のものを使用して、シリカゲル(25-30g)クロマトグラフィーによってさらに精製された:ヘキサン、ヘキサン中の25%EtOAc、ヘキサン中の30%EtOAc、ヘキサン中の35%EtOAc、ヘキサン中の40%EtOAcおよびヘキサン中の65%EtOAcから成る6画分(200 mL)。生成物を含む画分は組み合わせられ、溶剤は、真空下蒸発され、固体(141mg、52.3%収率; TLC Rf = 0.29(ヘキサン中の40%EtOAc); HPLC Rt = 4.910min)を得た。
【０６７０】
合成例74: MN1370(エステル加水分解)
【化７４】
2020512002.tif 000096
【０６７１】
エチル2-(2-(trans-4-((tert-ブトキシカルボニル(メチル)アミノ)メチル)シクロヘキサンカルボニル)-2,3,4,9-テトラヒドロ-lH-ピリド[3,4-b]インドール-l-イル)酢酸塩(77mg、0.15 mmol)が、MeOH(2.76 mL)に溶解され、H2O(800μL)が注射器によって混合物に加えられた。LiOH(32mg、0.75 mmol)が、混合物に加えられた。反応はHPLCによって1時間の後に完了していると処理され、溶剤は真空下で蒸発された。固体は、H2O(25 mL)に溶かされ、ジエチルエーテル(4×50 mL)で洗浄された。水層は1N HC1(5 mL)で酸性化された。生成物は、CH2Cl2(4x 50mL)で抽出され、乾燥され(無水MgSO4)、ろ過され、真空下で蒸発されて、固体(66mg、91%収率;TLC Rf = 0.17(CH2Cl2中の2%MeOH + 1%HOAc);HPLC Rt = 4.373min)を得た。
【０６７２】
合成例75: MN1371(エステル加水分解)
【化７５】
2020512002.tif 000097
【０６７３】
メチル2-(trans-4-((tert-ブトキシカルボニル(メチル)アミノ)メチル)シクロヘキサンカルボニル)-l-イソブチル-2,3,4,9-テトラヒドロ-lH-ピリド[3,4-b]インドール-3-カルボン酸塩(81mg、0.15 mmol)が、MeOH(4.76 mL) に溶かされ、H2O (800 μL)が、注射器によって混合物に加えられた。LiOH(32mg、0.75 mmol)とジメチルホルムアミド (DMF)(2 mL)が混合物に加えられた。反応はHPLCによって23時間後に完了として処理され、溶剤はフード下で蒸発された。固体は、H2O(35 mL)に溶かされ、ジエチルエーテル(4×50 mL)で洗浄された。水層は1N HC1(7 mL)で酸性化された。生成物は、CH2Cl2(4x 50mL)で抽出された、乾燥され(無水MgSO4)、ろ過され、真空下で蒸発され、固体(60mg、74%収率;TLC Rf = 0.36(CH2Cl2中の2%MeOH + 1%HOAc);HPLC Rt = 4.506min)をえた。
【０６７４】
合成例76: MN1372(エステル加水分解)
【化７６】
2020512002.tif 000098
【０６７５】
メチル2-(trans-4-((tert-ブトキシカルボニル(メチル)アミノ)メチル)シクロヘキサンカルボニル)-2,3,4,9-テトラヒドロ-lH-ピリド[3,4-b]インドール-3-カルボン酸塩(73mg、0.15 mmol)が、MeOH(2.76 mL)に溶かされ、H2O(800μL)が、注射器によって混合物に加えられた。LiOH(32mg、0.75 mmol)が、混合物に加えられた。反応はHPLCによって1時間の後に完了していると処理され、溶剤は真空下で蒸発された。固体は、H2O(25 mL)に溶かされ、ジエチルエーテル(4×50 mL)で洗浄された。水層は1N HC1(5 mL)で酸性化された。生成物は、CH2Cl2(4x 50mL)で抽出された、乾燥され(無水MgSO4)、ろ過され、真空下で蒸発され、固体(63mg、89%収率;TLC Rf = 0.15(CH2Cl2中の2%MeOH + 1%HOAc);HPLC Rt = 4.216min)をえた。
【０６７６】
合成例77:中間物(H2SO4環化)
【化７７】
2020512002.tif 000099
【０６７７】
6-クロロトリプタミン(389mg、2.00 mmol)が、MeOH(2 mL)中の10%常水溶液で溶かされた。プロピオンアルデヒド(216μL mL、3.00 mmol)が、注射器によって加えられ、その後濃縮H2SO4(1.4 mL)が、注射器によってゆっくり加えられた。反応は17時間還流された。反応物は室温に冷やされ、次に、水酸化アンモニウムで塩基性し、固体を得た。溶液は、ヘキサン(2×15 mL)およびEt2O(2×20 mL)で粉にされた。結果物はろ過され、濾液は蒸発させた。結果として生じる固体は、EtOAc(20 mL)に溶かされ、ろ過された。濾液は、Et2O(15 mL)に溶かされ、0.45μｍPTFEでろ過され、フードの下で乾燥させた。結果物はアンモニア(3 mL)に溶かされ、EtOAc(2×10 mL)で抽出された。生成物はEtOAc(8 mL)で抽出され、H2O(3 mL)、１N NaOH(1 mL)及び飽和NaCl(3 mL)で洗浄した。結果物は、乾燥され、ろ過されて、溶剤は真空下で除去された。固体はジエチルエーテル(10 mL)に溶かされ、ろ過された。濾液は、蒸発され、固体(161mg、34.3%収率; TLC Rf = 0.19(CH2Cl2中の2%MeOH + 1%HOAc); HPLC Rt = 3.071min)をえた。
【０６７８】
合成例78:中間物(TFA環化)
【化７８】
2020512002.tif 000100
【０６７９】
6-メチルトリプタミン(360.7mg、2.07 mmol)がCH2Cl2(16 mL)に溶かされた。混合物は、プロピオンアルデヒド(180μL、2.48 mmol)が注射器によって加えられる間攪拌され、その結果溶液を澄明にした。反応液は5分間ドライアイス/2-プロパノール浴槽中で冷やされ、次に、CH2Cl2(4.76 mL)中10%TFA溶液が8分間注射器によって滴加された。反応は17時間起こされ、室温にゆっくり暖められた。混合物は濃縮され、真空下で乾燥され、茶色の固体を得た。結果物は、ACN(2×2 mL)およびEtOAc(2 mL)で粉にされた。固体は、フィルタに集められ、高真空下で乾かされオフホワイト固体(395mg、61.3%収率; TLC Rf = 0.14(CH2Cl2中5%MeOH + 1%NH3); HPLC Rt = 2.933min)をえた。
【０６８０】
合成例79:中間物(TFA環化)
【化７９】
2020512002.tif 000101
【０６８１】
4-メチルトリプタミン(348mg、2.00 mmol)が、CH2Cl2 (16 mL)に溶かされた。混合物は、プロピオンアルデヒド(174μL、2.4 mmol)が注射器によって加えられる間5分間攪拌され、その結果溶液を澄明にした。反応液は5分間ドライアイス-プロパノール浴槽中で冷やされ、次に、CH2Cl2(4.6 mL)中10%TFA溶液が8分間注射器によってドロップワイスに添加された。反応は17時間起こされ、室温にゆっくり暖められた。混合物は濃縮され、真空下で乾燥され、茶色の固体を得た。結果物は、ACN(2×2 mL)およびジエチルエーテル(25 mL)で粉にされた。固体は、フィルタに集められ、高真空下で乾かされオフホワイト固体 (443mg、103%収率; TLC Rf = 0.14(CH2Cl2中5%MeOH + 1%NH3); HPLC Rt = 2.916min)をえた。
【０６８２】
合成例80:中間物(TFA環化)
【０６８３】
4-メチルトリプタミン(174mg、1.00 mmol)がCH2Cl2 (8 mL)に溶かされた。イソブチルアルデヒド(90 μL、1.0 mmol)が溶液に加えられ、混合物は5分間ドライアイス/2-プロパノール浴槽に置かれた。TFA(765μL、10 mmol))は、2分間注射器によって反応液にドロップワイスで加えられた。反応物はドライアイス浴槽から取り除かれ、1時間室温に暖められた。溶剤は真空下で除去され、結果として生じる赤い油の物質は、真空下で乾かされた。結果物はトルエン(3×50 mL)と共沸され、Et2O(2×6 mL)およびACNで粉にされ固体(183mg、56.2%収率;TLC Rf = 0.26(CH2Cl2中5%MeOH + 1% NH3);HPLC Rt = 3.009min)をえた。
【０６８４】
合成例81: MN1377(EDCカップリング)
【化８１】
2020512002.tif 000102
7-クロロ-l-イソプロピル-2,3,4,9-テトラヒドロ-lH-ピリド[3,4-b]インドール・TFA塩(181mg、0.50 mmol)、l-エチル-3-(3-ジメチルアミノプロピル)カルボジイミド-HCl(EDC-HC1) (96mg、0.50 mmol)、4-ジメチルアミノピリジン(DMAP) (6mg、0.05 mmol)、ヒドロキシベンゾトリアゾール(HOBT)(51mg、0.165 mmol)及びtrans-4-(Boc-メチルアミノメチル)シクロヘキサンカルボン酸(136mg、0.50 mmol)が、すべて、アセトニトリル(625μL)、ジメチルホルムアミド(DMF) (2.5mL)、ジイソプロピルエチルアミン(DIEA) (100μL、0.60mmol)に加えられた。反応は室温で17時間撹拌された。反応液はEtOAc(100 mL)で希釈され、飽和NaCl(2×50 mL)、1Mクエン酸(3×25 mL)、飽和NaHCO3(3×25 mL)、及び飽和NaCl(50 mL)で洗浄された。有機質層は、乾燥され（無水Na2SO4）、ろ過され、真空下で蒸発させた。この材料は、次のものを使用して、シリカゲル(25-30g)クロマトグラフィーによってさらに精製された；ヘキサン、ヘキサン中30%、40%、及び45％EtOAcから成る4画分(200 mL)。生成物を含む画分は合わせられ、溶剤は、真空下で蒸発され固体 (200mg、79.7%収率; TLC Rf = 0.29(ヘキサン中の40%EtOAc); HPLC Rt = 5.103min)を得た。
【０６８５】
合成例82: MN1378(EDCカップリング)
【化８２】
2020512002.tif 000103
【０６８６】
7-クロロ-l-エチル-2,3,4,9-テトラハイドロ-lH-(117mg、0.50 mmol)、1-エチル-3-(3-ジメチルアミノプロピル)カルボジイミド-HCl(EDC-HC1)(96mg、0.50 mmol)、4-ジメチルアミノピリジン(DMAP) (6mg、0.05 mmol)、ヒドロキシベンゾトリアゾール(HOBT)(51mg、0.165 mmol)及びtrans-4-(Boc-メチルアミノメチル)シクロヘキサンカルボン酸(136mg、0.50 mmol)が、すべて、アセトニトリル(625μL)、ジメチルホルムアミド(DMF) (2.5mL)、ジイソプロピルエチルアミン(DIEA) (100μL、0.60mmol)に加えられた。反応は室温で17時間撹拌された。反応液はEtOAc(100 mL)で希釈され、飽和NaCl(2×50 mL)、1Mクエン酸(3×25 mL)、飽和NaHCO3(3×25 mL)、及び飽和NaCl(50 mL)で洗浄された。有機質層は、乾燥され（無水Na2SO4）、ろ過され、真空下で蒸発させた。この材料は、次のものを使用して、シリカゲル(25-30g)クロマトグラフィーによってさらに精製された；ヘキサン、ヘキサン中30%、40%、及び45％EtOAcから成る4画分(200 mL)。生成物を含む画分は合わせられ、溶剤は、真空下で蒸発され固体(187mg、76.6%収率; TLC Rf = 0.18(ヘキサン中の40%EtOAc); HPLC Rt = 4.978min)を得た。
【０６８７】
合成例83: MN1379(EDCカップリング)
【化８３】
2020512002.tif 000104
【０６８８】
7-クロロ-l-シクロプロピル-2,3,4,9-tetrahyd(123mg、0.50 mmol)、l-エチル-3-(3-ジメチルアミノプロピル)カルボジイミド-HCl(EDC-HC1)(96mg、0.50 mmol)、4-ジメチルアミノピリジン(DMAP) (6mg、0.05 mmol)、ヒドロキシベンゾトリアゾール(HOBT)(51mg、0.165 mmol)及びtrans-4-(Boc-メチルアミノメチル)シクロヘキサンカルボン酸 (136mg、0.50 mmol)が、全て、アセトニトリル(625μL)、ジメチルホルムアミド(DMF) (2.5mL)、ジイソプロピルエチルアミン(DIEA) (100μL、0.60mmol)に加えられた。反応は室温で17時間撹拌された。反応液はEtOAc(100 mL)で希釈され、飽和NaCl(2×50 mL)、1Mクエン酸(3×25 mL)、飽和NaHCO3(3×25 mL)、及び飽和NaCl(50 mL)で洗浄された。有機質層は、乾燥され（無水Na2SO4）、ろ過され、真空下で蒸発させた。この材料は、次のものを使用して、シリカゲル(25-30g)クロマトグラフィーによってさらに精製された；ヘキサン、ヘキサン中30%、40%、及び45％EtOAcから成る4画分(200 mL)。生成物を含む画分は合わせられ、溶剤は、真空下で蒸発され固体(128mg、51.2%収率; TLC Rf = 0.23(ヘキサン中の40%EtOAc); HPLC Rt = 5.008min)を得た。
【０６８９】
合成例84: MN1380(EDCカップリング)
【化８４】
2020512002.tif 000105
l-イソプロピル-7-メチル-2,3,4,9-テトラハイドロ・HCI(132mg、0.50 mmol)、1-エチル-3-(3-ジメチルアミノプロピル)カルボジイミド-HCl(EDC-HC1) (96mg、0.50 mmol)、4-ジメチルアミノピリジン(DMAP) (6mg、0.05 mmol)、ヒドロキシベンゾトリアゾール(HOBT)(51mg、0.165 mmol)及びtrans-4-(Boc-メチルアミノメチル)シクロヘキサンカルボン酸(136mg、0.50 mmol)が、全て、アセトニトリル(625μL)、ジメチルホルムアミド(DMF) (2.5mL)、ジイソプロピルエチルアミン(DIEA) (200μL、1.20mmol)に加えられた。反応は室温で17時間撹拌された。反応液はEtOAc(100 mL)で希釈され、飽和NaCl(2×50 mL)、1Mクエン酸(3×25 mL)、飽和NaHCO3(3×25 mL)、及び飽和NaCl(50 mL)で洗浄された。有機質層は、乾燥され（無水Na2SO4）、ろ過され、真空下で蒸発させた。この材料は、次のものを使用して、シリカゲル(25-30g)クロマトグラフィーによってさらに精製された；ヘキサン、ヘキサン中32%、42%、及び65％EtOAcから成る4画分(200 mL)。生成物を含む画分は合わせられ、溶剤は、真空下で蒸発され固体(200mg、83.0%収率; TLC Rf = 0.25(ヘキサン中の40%EtOAc); HPLC Rt = 5.034min)を得た。
【０６９０】
合成例85: MN1381(EDCカップリング)
【化８５】
2020512002.tif 000106
【０６９１】
l-エチル-7-メチル-2,3,4,9-テトラヒドロ-lH-ピリド[3,4-b]インドール・TFA塩(164mg、0.50 mmol)、 l-エチル-3-(3-ジメチルアミノプロピル)カルボジイミド-HCl(EDC-HC1)(96mg、0.50 mmol)、4-ジメチルアミノピリジン(DMAP) (6mg、0.05 mmol)、ヒドロキシベンゾトリアゾール(HOBT)(51mg、0.165 mmol)及びtrans-4-(Boc-メチルアミノメチル)シクロヘキサンカルボン酸(136mg、0.50 mmol)が、すべて、アセトニトリル(625μL)、ジメチルホルムアミド(DMF) (2.5mL)、ジイソプロピルエチルアミン(DIEA) (100μL、0.6mmol)に加えられた。反応は室温で17時間撹拌された。反応液はEtOAc(100 mL)で希釈され、飽和NaCl(2×50 mL)、1Mクエン酸(3×25 mL)、飽和NaHCO3(3×25 mL)、及び飽和NaCl(50 mL)で洗浄された。有機質層は、乾燥され（無水Na2SO4）、ろ過され、真空下で蒸発させた。この材料は、次のものを使用して、シリカゲル(25-30g)クロマトグラフィーによってさらに精製された；ヘキサン、ヘキサン中32%、42%、及び50％EtOAcから成る4画分(200 mL)。生成物を含む画分は合わせられ、溶剤は、真空下で蒸発され固体(202mg、86.4%収率; TLC Rf = 0.21(ヘキサン中の40%EtOAc); HPLC Rt = 4.913min)を得た。
【０６９２】
合成例86: MN1382(EDCカップリング)
【化８６】
2020512002.tif 000107
【０６９３】
l-シクロプロピル-7-メチル-2,3,4,9-テトラヒドロ-lH-ピリド[3,4-b]インドール(113mg、0.50 mmol)、l-エチル-3-(3-ジメチルアミノプロピル)カルボジイミド-HCl(EDC-HC1)(96mg、0.50 mmol)、4-ジメチルアミノピリジン(DMAP) (6mg、0.05 mmol)、ヒドロキシベンゾトリアゾール(HOBT)(51mg、0.165 mmol)及びtrans-4-(Boc-メチルアミノメチル)シクロヘキサンカルボン酸(136mg、0.50 mmol)が、全て、アセトニトリル(625μL)、ジメチルホルムアミド(DMF) (2.5mL)、ジイソプロピルエチルアミン(DIEA) (100μL、0.6mmol)に加えられた。反応は室温で17時間撹拌された。反応液はEtOAc(100 mL)で希釈され、飽和NaCl(2×50 mL)、1Mクエン酸(3×25 mL)、飽和NaHCO3(3×25 mL)、及び飽和NaCl(50 mL)で洗浄された。有機質層は、乾燥され（無水Na2SO4）、ろ過され、真空下で蒸発させた。この材料は、次のものを使用して、シリカゲル(25-30g)クロマトグラフィーによってさらに精製された；ヘキサン、ヘキサン中32%、42%、及び50％EtOAcから成る4画分(200 mL)。生成物を含む画分は合わせられ、溶剤は、真空下で蒸発され固体(217mg、90.5%収率; TLC Rf = 0.26(ヘキサン中の40%EtOAc); HPLC Rt = 4.939min)を得た。
【０６９４】
合成例: MN1376中間物(TFA環化)
【０６９５】
4-メチルトリプタミン(174mg、1.00 mmol)が、CH2Cl2 (8 mL)に溶かされた。混合物に、イソブチルアルデヒド(91μL、1.0 mmol))が注射器によって加えられる間5分間攪拌され、その結果溶液を澄明にした。反応液は5分間ドライアイス・プロパノール浴槽中で冷やされ、次に、トリフルオロ酢酸(765 μL、10.00 mmol)が2分間注射器によってドロップワイスに添加された。反応は1時間処理され、室温にゆっくり暖められた。混合物は濃縮され、真空下で乾燥され、赤色の固体を得た。結果物は、トルエン(3×50 mL)と共沸され、ジエチルエーテル(2×6 mL)およびACN(10 mL)で粉にされた。固体は、フィルタに集められ、高真空で乾燥され、l-イソプロピル-5-メチル-2,3,4,9-テトラヒドロ-lH-ピリド[3,4-b]インドール(183mg、56.2%収率; TLC Rf = 0.71(CH2Cl2 中20%MeOH + 1%NH3); HPLC Rt = 3.064min)をえた。
【０６９６】
合成例: MN1383(EDCカップリング)
【０６９７】
l-イソプロピル-5-メチル-2,3,4,9-テトラハイドロ(171mg、0.50 mmol)、l-エチル-3-(3-ジメチルアミノプロピル)カルボジイミド-HCl(EDC-HC1)(96mg、0.50 mmol)、4-ジメチルアミノピリジン(DMAP) (6mg、0.05 mmol)、ヒドロキシベンゾトリアゾール(HOBT)(25mg、0.165 mmol)及びtrans-4-(Boc-メチルアミノメチル)シクロヘキサンカルボン酸(136mg、0.50 mmol)が、全て、アセトニトリル(625μL)、ジメチルホルムアミド(DMF) (2.5mL)、ジイソプロピルエチルアミン(DIEA) (100μL、0.6mmol)に加えられた。反応は室温で17時間撹拌された。反応液はEtOAc(100 mL)で希釈され、飽和NaCl(2×50 mL)、1Mクエン酸(3×25 mL)、飽和NaHCO3(3×25 mL)、及び飽和NaCl(50 mL)で洗浄された。有機質層は、乾燥され（無水Na2SO4）、ろ過され、真空下で蒸発させた。この材料は、次のものを使用して、シリカゲル(25-30g)クロマトグラフィーによってさらに精製された；ヘキサン、ヘキサン中32%、42%、及び50％EtOAcから成る4画分(200 mL)。生成物を含む画分は合わせられ、溶剤は、真空下で蒸発され固体(155mg、64.4%収率; TLC Rf = 0.28(ヘキサン中の40%EtOAc); HPLC Rt = 4.993min)を得た。
【０６９８】
合成例88: MN1384(EDCカップリング)
【０６９９】
l-エチル-5-メチル-2,3,4,9-テトラヒドロ-lH-ピリド[3,4-b]インドール・TFA塩(164mg、0.50 mmol)、 l-エチル-3-(3-ジメチルアミノプロピル)カルボジイミド-HCl(EDC-HC1)(96mg、0.50mmol)、4-ジメチルアミノピリジン(DMAP) (6mg、0.05 mmol)、ヒドロキシベンゾトリアゾール(HOBT)(51mg、0.165 mmol)及びtrans-4-(Boc-メチルアミノメチル)シクロヘキサンカルボン酸(136mg、0.50 mmol)が、すべて、アセトニトリル(625μL)、ジメチルホルムアミド(DMF) (2.5mL)、ジイソプロピルエチルアミン(DIEA) (100μL、0.6mmol)に加えられた。反応は室温で17時間撹拌された。反応液はEtOAc(100 mL)で希釈され、飽和NaCl(2×50 mL)、1Mクエン酸(3×25 mL)、飽和NaHCO3(3×25 mL)、及び飽和NaCl(50 mL)で洗浄された。有機質層は、乾燥され（無水Na2SO4）、ろ過され、真空下で蒸発させた。この材料は、次のものを使用して、シリカゲル(25-30g)クロマトグラフィーによってさらに精製された；ヘキサン、ヘキサン中32%、42%、及び50％EtOAcから成る4画分(200 mL)。生成物を含む画分は合わせられ、溶剤は、真空下で蒸発され固体(203mg、86.9%収率; TLC Rf = 4.877(ヘキサン中の40%EtOAc); HPLC Rt = 0.19min)を得た。
【０７００】
合成例89: MN1385(EDCカップリング)
【０７０１】
l-シクロプロピル-5-メチル-2,3,4,9-tetrahyd(131mg、0.50 mmol)、l-エチル-3-(3-ジメチルアミノプロピル)カルボジイミド-HCl(EDC-HC1)(96mg、0.50 mmol)、4-ジメチルアミノピリジン(DMAP) (6mg、0.05 mmol)、ヒドロキシベンゾトリアゾール(HOBT)(51mg、0.165 mmol)及びtrans-4-(Boc-メチルアミノメチル)シクロヘキサンカルボン酸(136mg、0.50 mmol)が、全て、アセトニトリル(625μL)、ジメチルホルムアミド(DMF) (2.5mL)、ジイソプロピルエチルアミン(DIEA) (200μL、1.2mmol)に加えられた。反応は室温で17時間撹拌された。反応液はEtOAc(100 mL)で希釈され、飽和NaCl(2×50 mL)、1Mクエン酸(3×25 mL)、飽和NaHCO3(3×25 mL)、及び飽和NaCl(50 mL)で洗浄された。有機質層は、乾燥され（無水Na2SO4）、ろ過され、真空下で蒸発させた。この材料は、次のものを使用して、シリカゲル(25-30g)クロマトグラフィーによってさらに精製された；ヘキサン、ヘキサン中32%、42%、及び50％EtOAcから成る4画分(200 mL)。生成物を含む画分は合わせられ、溶剤は、真空下で蒸発され固体(212mg、88.4%収率; TLC Rf = 0.26(ヘキサン中の40%EtOAc); HPLC Rt = 4.909min)を得た。
【０７０２】
合成例90:MN1386（カルバメート形成）
【０７０３】
(l-イソプロピル-3,4-ジヒドロ-lH-ピリド[3,4-b]インドール-2(9H)-イル)(trans-4-((メチルアミノ)メチル)シクロヘキシル)メタノン(110mg、0.30 mmol)が、CH2Cl2(4.5 mL)に溶かされ、5分間氷浴の中で冷された。イソプロピルクロロフォルメート(150μL、0.30 mmol)が、溶液にドロップワイスに加えられ、トリエチルアミン(TEA)(167μL、1.20 mmol)添加が後続した。反応液は室温に暖められ、溶剤は蒸発させた。結果として生じる固体は、EtOAc(200 mL)に溶かされ、1N NaOH(3×50 mL)、1N HC1(3×50 mL)、飽和NaCl(50 mL)で洗った。有機質層は、乾燥され(無水Na2SO4)、ろ過され、真空下で蒸発された。この材料は、ヘキサンおよびヘキサン中のEtOAcから成る画分(200 mL)を使用して、シリカゲル(25-30g)クロマトグラフィーによってさらに精製された。生成物を含む画分は合わせられ、溶剤は真空下蒸発され、固体(131mg、96.3%収率; TLC Rf = 0.43(ヘキサン中の50%EtOAc); HPLC Rt = 4.769min)を得た。
【０７０４】
合成例91:MN1387（カルバメート形成）
【０７０５】
(l-イソプロピル-3,4-ジヒドロ-lH-ピリド[3,4-b]インドール-2(9H)-イル)(trans-4-((メチルアミノ)メチル)シクロヘキシル)メタノン(110mg、0.30 mmol)がCH2Cl2 (4.5 mL)に溶かされ、5分間氷浴の中で冷された。ベンジルクロロフォルメート(176 μL(0.30 mmol)が、溶液にドロップワイスに加えられ、トリエチルアミン(TEA)(167μL、1.20 mmol)添加が後続した。反応液は室温に暖められ、溶剤は蒸発させた。結果として生じる固体は、EtOAc(200 mL)に溶かされ、1N NaOH(3×50 mL)、1N HC1(3×50 mL)、飽和NaCl(50 mL)で洗った。有機質層は、乾かされ(無水Na2SO4)、ろ過され、真空下で蒸発された。この材料は、ヘキサンおよびヘキサン中のEtOAcから成る画分(200 mL)を使用して、シリカゲル(25-30g)クロマトグラフィーによってさらに精製された。生成物を含む画分は合わせられ、溶剤は真空下蒸発され、固体(138mg、91.7%収率; TLC Rf = 0.46(ヘキサン中の50%EtOAc); HPLC Rt = 4.891min)を得た。
【０７０６】
合成例92:MN1388（アミド形成）
【０７０７】
(l-イソプロピル-3,4-ジヒドロ-lH-ピリド[3,4-b]インドール-2(9H)-イル)(trans-4-((メチルアミノ)メチル)シクロヘキシル)メタノン (220mg、0.60 mmol)が、CH2Cl2 (9 mL)に溶かされ、5分間氷浴の中で冷された。プロピオン酸クロライド(53μL(0.60 mmol)およびトリエチルアミン(TEA)(335μL、2.4 mmol)が、溶液に、ドロップワイスに加えられた。反応液は室温に暖められ、溶剤は蒸発させた。結果として生じる固体は、EtOAc(200 mL)に溶かされ、1N NaOH(1×25 mL)、1N HCl(1×25 mL)、飽和NaCl(1×50 mL)で洗浄した。有機質層は、乾かされ(無水Na2SO4)、ろ過され、真空下で蒸発された。この材料は、次のものを使用して、シリカゲル(25-30g)クロマトグラフィーによってさらに精製された:ヘキサン、ヘキサン中の75%EtOAc、ヘキサン中の90%EtOAcおよびEtOAcから成る4画分(200 mL)。生成物を含む画分は合わせられ、溶剤は真空下で蒸発され、固体(201mg、76.6%収率; TLC Rf = 0.14(ヘキサン中の70%EtOAc); HPLC Rt = 4.292min)を得た。
【０７０８】
MN1389(アミド形成)
【０７０９】
(l-イソプロピル-3,4-ジヒドロ-lH-ピリド[3,4-b]インドール-2(9H)-イル)(trans-4-((メチルアミノ)メチル)シクロヘキシル)メタノン(220mg、0.60 mmol)が、CH2Cl2 (9 mL)に溶かされ、5分間氷浴で冷却された。3,3-ジメチルブタノイル塩化物(84μL、0.60 mmol)およびトリエチルアミン(TEA)(335μL、2.4 mmol)が、溶液にドロップワイスに加えられた。反応液は室温に暖められ、溶剤は蒸発された。結果として生じる固体は、EtOAc(200 mL)に溶かされ、1N NaOH(1×25 mL)、1N HC1(1×25 mL)、飽和NaCl(1×50 mL)で洗浄した。有機質層は、乾かされ(無水Na2SO4)、ろ過され、真空下で蒸発された。この材料は、次のものを使用して、シリカゲル(25-30g)クロマトグラフィーによってさらに精製された:ヘキサン、ヘキサン中の50%EtOAc、ヘキサン中の60%EtOAcおよびヘキサン中の70%EtOAcから成る4画分(200 mL)。生成物を含む画分は合わせられ、溶剤は真空下蒸発され、固体(230mg、82.3%収率; TLC Rf = 0.17(ヘキサン中の50%EtOAc); HPLC Rt = 4.723min)を得た。
【０７１０】
合成例94:MN1390(アミド形成)
【０７１１】
(l-イソプロピル-3,4-ジヒドロ-lH-ピリド[3,4-b]インドール-2(9H)-イル)(trans-4-((メチルアミノ)メチル)シクロヘキシル)メタノン (220mg、0.60 mmol)が、CH2Cl2 (9 niL)に溶かされ、5分間氷浴の中で冷された。フェニルアセチル塩化物(80 μL、0.60 mmol)およびトリエチルアミン(TEA)(335 μL、2.4 mmol)は、溶液に、ドロップワイスに加えられた。反応液は室温に暖められ、溶剤は蒸発させた。結果として生じる固体は、EtOAc(200 mL)に溶かされ、1N NaOH(1×25 mL)、1N HC1(1×25 mL)、飽和NaCl(1×50 mL)で洗浄した。有機質層は、乾かされ(無水Na2SO4)、ろ過され、真空下で蒸発された。この材料は、次のものを使用して、シリカゲル(25-30g)クロマトグラフィーによってさらに精製された:ヘキサン、ヘキサン中の60%EtOAc、ヘキサン中の70%EtOAcおよびヘキサン中の80%EtOAcから成る4画分(200 mL)。生成物を含む画分は合わせられ、溶剤は真空下蒸発され、固体(221mg、75.8%収率; TLC Rf = 0.15(ヘキサン中の60%EtOAc); HPLC Rt=4.569min)。
)を得た。
【０７１２】
合成例95: MN1391(尿素形成)
【０７１３】
(l-イソプロピル-3,4-ジヒドロ-lH-ピリド[3,4-b]インドール-2(9H)-イル)(trans-4-((メチルアミノ)メチル)シクロヘキシル)メタノン(129mg、0.35 mmol)が、CHCl3(8.75 mL)に溶かされ、5分間窒素の不活性雰囲気下の氷浴中で冷された。エチルイソシアネート(56 μL、0.7 mmol)が、溶液に加えられ、反応液は室温に暖められた。混合物は濃縮され、真空下で乾かされた。この材料は、次のものを使用して、シリカゲル(25-30g)クロマトグラフィーによってさらに精製された: CH2Cl2、CH2Cl2中の3%MeOH、CH2Cl2中の4%MeOHおよびCH2Cl2中の5%MeOHから成る4画分(200 mL)。生成物を含む画分は合わせられ、溶剤は真空下蒸発され、固体(138mg、89.9%収率; TLC Rf = 0.23(CH2Cl2中の4%MeOH); HPLC Rt = 4.178min)を得た。
【０７１４】
合成例96: MN1392(Boc基置換)
【０７１５】
(l-イソプロピル-3,4-ジヒドロ-lH-ピリド[3,4-b]インドール-2(9H)-イル)(trans-4-((メチルアミノ)メチル)シクロヘキシル)メタノン(129mg、0.35 mmol)が、CHCl3(8.75 mL)に溶かされ、5分間窒素の不活性雰囲気下の氷浴中で冷却された。t-ブチル・イソシアネート(82μL、0.7 mmol)が、溶液に加えられ、反応液は、室温に暖められた。混合物は濃縮され、真空下で乾かされた。この材料は、次のものを使用して、シリカゲル(25-30g)クロマトグラフィーによってさらに精製された:ヘキサン、ヘキサン中の50%EtOAc、ヘキサン中の60%EtOAcおよびヘキサン中の70%EtOAcから成る4画分(200 mL)。生成物を含む画分は合わせられ、溶剤は真空下蒸発され、固体(152mg、93.1%収率; TLC Rf = 0.14(ヘキサン中の50%EtOAc); HPLC Rt = 4.524min)を得た。
【０７１６】
合成例97: MN1393(Boc基置換)
【０７１７】
(l-イソプロピル-3,4-ジヒドロ-lH-ピリド[3,4-b]インドール-2(9H)-イル)(trans-4-((メチルアミノ)メチル)シクロヘキシル)メタノン(129mg、0.35 mmol)が、CHCl3(8.75 mL)に溶かされ、5分間窒素の不活性雰囲気下の氷浴の中で冷された。フェニルイソシアネート(76 μL、0.7 mmol)が、溶液に加えられ、反応液は室温に暖められた。その混合物は濃縮され、真空下で乾かされた。この材料は、次のものを使用して、シリカゲル(25-30g)クロマトグラフィーによってさらに精製された:ヘキサン、ヘキサン中の50%EtOAc、ヘキサン中の60%EtOAcおよびヘキサン中の70%EtOAcから成る4画分(200 mL)。生成物を含む画分は合わせられ、溶剤は真空下蒸発され、、固体(144mg、84.5%収率; TLC Rf = 0.13(ヘキサン中の50%EtOAc); HPLC Rt = 4.484min)を得た。
【０７１８】
合成例98:
MN1394(EDCカップリング)
【０７１９】
l-メチル-2,3,4,9-テトラハイドロ-lH-ピリド[3(186mg、1.00 mmol)、l-エチル-3-(3-ジメチルアミノプロピル)カルボジイミド-HCl(EDC-HC1)(192mg、1.00 mmol)、4-ジメチルアミノピリジン(DMAP) (12mg、0.1 mmol)、ヒドロキシベンゾトリアゾール(HOBT)(51mg、0.33 mmol)及びtrans-4-(Boc-メチルアミノメチル)シクロヘキサンカルボン酸(271mg、1.00 mmol)が、全て、アセトニトリル(1.25 mL)、ジメチルホルムアミド(DMF) (5mL)、ジイソプロピルエチルアミン(DIEA) (200μL、1.20mmol)に加えられた。その反応は室温で17時間撹拌された。反応液はEtOAc(100 mL)で希釈され、飽和NaCl(2×50 mL)、1Mクエン酸(3×25 mL)、飽和NaHCO3(3×25 mL)、及び飽和NaCl(50 mL)で洗浄された。有機質層は、乾燥され（無水Na2SO4）、ろ過され、真空下で蒸発させた。この材料は、次のものを使用して、シリカゲル(25-30g)クロマトグラフィーによってさらに精製された；ヘキサン、ヘキサン中の40%EtOAc、ヘキサン中の52%EtOAcおよびヘキサン中の60%EtOAcから成る4画分(200 mL)。生成物を含む画分は合わせられ、溶剤は、真空下で蒸発され固体 (342mg、77.9%収率; TLC Rf = 0.31(ヘキサン中の50%EtOAc); HPLC Rt = 4.672min)を得た。
【０７２０】
合成例99: MN1395(EDCカップリング)
【０７２１】
2,3,4,9-テトラヒドロ-lH-ピリド[3,4-b]インドール(172mg、1.00 mmol)、l-エチル-3-(3-ジメチルアミノプロピル)カルボジイミド-HCl(EDC-HC1)(192mg、1.00 mmol)、4-ジメチルアミノピリジン(DMAP)(12mg、0.1 mmol)、ヒドロキシベンゾトリアゾール(HOBT)(51mg、0.33 mmol)およびtrans-4-(Boc-メチルアミノメチル)シクロヘキサンカルボン酸(271mg、1.00 mmol)が、全て、アセトニトリル(1.25 mL)、ジメチルホルムアミド(DMF) (5mL)、ジイソプロピルエチルアミン(DIEA) (200μL、1.20mmol)に加えられた。その反応は室温で17時間撹拌された。反応液はEtOAc(100 mL)で希釈され、飽和NaCl(2×50 mL)、1Mクエン酸(3×25 mL)、飽和NaHCO3(3×25 mL)、及び飽和NaCl(50 mL)で洗浄された。有機質層は、乾燥され（無水Na2SO4）、ろ過され、真空下で蒸発させた。この材料は、次のものを使用して、シリカゲル(25-30g)クロマトグラフィーによってさらに精製された；ヘキサン、ヘキサン中の40%EtOAc、ヘキサン中の60%EtOAcおよびヘキサン中の70%EtOAcから成る4画分(200 mL)。生成物を含む画分は合わせられ、溶剤は、真空下で蒸発され固体(339mg、79.7%収率; TLC Rf = 0.23(ヘキサン中の50%EtOAc); HPLC Rt = 4.555min)を得た。
【０７２２】
合成例100: MN1396(還元的アミノ化)
【０７２３】
(l-イソプロピル-3,4-ジヒドロ-lH-ピリド[3,4-b]インドール-2(9H)-イル)(trans-4-((メチルアミノ)メチル)シクロヘキシル)メタノン(110mg、0.30 mmol)及びNaBH(OAc)3(95mg、0.45 mmol)が、1,2-ジクロルエタン(1,2-DCE)(3 mL)に溶かされた。プロピオンアルデヒド(22μL、0.30 mmol)が、加えられ、混合物は80℃に加熱され、4.5時間撹拌された。反応液はEtOAc(50 mL)および1M K2CO3で希釈された。水層はEtOAc(2×50 mL)で抽出され、水層が合わされた。EtOAc層は、飽和NaCl(20 mL)で洗浄され、乾かされ(無水Na2SO4)、ろ過され、真空下で蒸発された。この材料は、次のものを使用して、シリカゲル(25-30g)クロマトグラフィーによってさらに精製された: CH2Cl2、CH2Cl2中の4%MeOH + 1%NH3、CH2Cl2中の5%MeOH + 1%NH3、CH2Cl2中の7%MeOH + 1%NH3およびCH2Cl2中の9%MeOH + 1%NH3から成る5画分(200 mL)。生成物を含む画分は合わせられ、溶剤は真空下蒸発され、、固体(50mg、40.7%収率; TLC Rf = 0.26(CH2Cl2中5%MeOH + 1%NH3); HPLC Rt = 3.735minを得た。
【０７２４】
合成例101: MN1397(還元的アミノ化)
【０７２５】
(l-イソプロピル-3,4-ジヒドロ-lH-ピリド[3,4-b]インドール-2(9H)-イル)(trans-4-((メチルアミノ)メチル)シクロヘキシル)メタノン(110mg、0.30 mmol)が、1,2-ジクロルエタン(3 mL)に溶かされた。3,3-ジメチルブタナール(38μL、 0.30 mmol)及びNaBH(OAc)3(64mg、0.45 mmol)が、溶液に加えられ、撹拌され、30分間80℃に加熱された。溶液はEtOAc(50 mL)で希釈され、1M K2CO3(25 mL)で洗浄された。生成物はEtOAc(2×50 mL)で抽出され、洗浄され、飽和NaCl(1×20 mL)で洗浄され、乾かされ (無水Na2SO4)、ろ過された。溶剤は、真空下で蒸発され、固体(154mg、114%収率; TLC Rf = 0.15(CH2Cl2中の5%MeOH); HPLC Rt = 4.044min)をえた。
【０７２６】
合成例102: MN1398(還元的アミノ化)
【０７２７】
(l-イソプロピル-3,4-ジヒドロ-lH-ピリド[3,4-b]インドール-2(9H)-イル)(trans-4-((メチルアミノ)メチル)シクロヘキシル)メタノン(110mg、0.30 mmol)が、1、2-ディクロロエタン(3 mL)に溶かされた。イソバレルアルデヒド(33μL、0.30 mmol)およびNaBH(OAc)3(64mg、0.45 mmol)が、溶液に加えられ、撹拌され、30分間80℃で加熱された。溶液はEtOAc(50 mL)で希釈され、1M K2CO3(25 mL)で洗浄された。生成物はEtOAc(2×50 mL)で抽出された、飽和NaCl(1×20 mL)で洗浄され、乾かされた(無水Na2SO4)、ろ過された。溶剤は、真空下で蒸発され、固体(132mg、101%収率; TLC Rf = 0.46(CH2Cl2中の10%MeOH); HPLC Rt = 3.972min)をえた。
【０７２８】
合成例102:
MN1399(アミド形成)
【０７２９】
(l-イソプロピル-3,4-ジヒドロ-lH-ピリド[3,4-b]インドール-2(9H)-イル)(trans-4-((メチルアミノ)メチル)シクロヘキシル)メタノン(110mg、0.30 mmol)及びNaHB(OAc)3(95mg、0.45 mmol)が1,2-ジクロルエタン(1,2-DCE)(3 mL)に溶かされた。ベンズアルデヒド(31μL、0.30 mmol)が、加えられ、混合物は80℃に加熱され、4.5時間撹拌された。反応液は、EtOAc(50 mL)および1M H2CO3で希釈された。水層はEtOAc(2×50 mL)で抽出され、水層が合わされた。EtOAc層は、飽和NaCl(20 mL)で洗浄され、乾かされ (無水Na2SO4)、ろ過され、真空下で蒸発された。この材料は、次のものを使用して、シリカゲル(25-30g)クロマトグラフィーによってさらに精製された:CH2Cl2、CH2Cl2中の1%MeOH +1%NH3、CH2Cl2中の2%MeOH +1%NH3、CH2Cl2 中の3%MeOH + 1%NH3、CH2Cl2中の4%MeOH +1%NH3、及びCH2Cl2中の5%MeOH +1%NH3、からなる6画分(200 mL)。生成物を含む画分は合わせられ、溶剤は真空下蒸発され、、固体(83mg、60.4%収率; TLC Rf = 0.26(CH2Cl2中5%MeOH + 1%NH3); HPLC Rt = 3.929minを得た。
【０７３０】
合成例104: MN1400(Boc開裂)
【０７３１】
tert-ブチル(trans-4-(l-イソプロピル-2,3,4,9-テトラヒドロ-lH-ピリド[3,4-b]インドール-2-カルボニル)シクロヘキシル)メチル(メチル)カルバメート(2.2814g、4.88 mmol)がCH2Cl2 (30 mL)に溶かされた。トリフルオロ酢酸(TFA)(30 mL)が溶液に加えられ、30分間処理された。結果物は、H2O(80 mL)およびCH2Cl2 (100 mL)に溶かされ、10M NaOH(1 mL)で塩基化された。生成物は、CH2Cl2 (2×100 mL)で抽出され、乾かされ(無水MgSO4)、ろ過され、溶剤は、真空下で除去され、オフ-ホワイト/黄色固体(1.667g)をえた。固体は、冷アセトニトリル(ACN)(2×5 mL)に溶かされ、30秒撹拌され、ろ過された。溶剤は蒸発され、固体(1.38g)をえた。固体はRT（室温） ACN(5 mL)に溶かされ、30秒撹拌され、ろ過された。溶剤は蒸発され固体をえた。固体は4分間室温でRT（室温） ACN(5 mL)で撹拌された。溶剤は、蒸発され、固体(707mg、39.4%収率; TLC Rf = 0.16(CH2Cl2中の10%MeOH + 1%NH3); HPLC Rt = 3.559min)をえた。
【０７３２】
合成例105: MN1401(EDCカップリング)
【０７３３】
2,3,4,9-Tetrariydro-lH-ピリド[3,4-b]ind(215mg、1.00 mmol)、1-エチル-3-(3-ジメチルアミノプロピル)カルボジイミド-HCl(EDC-HC1)(192mg、1.00 mmol)、4-ジメチルアミノピリジン(DMAP) (12mg、0.1 mmol)、ヒドロキシベンゾトリアゾール(HOBT)(51mg、0.33 mmol)及びtrans-4-(Boc-メチルアミノメチル)シクロヘキサンカルボン酸 (271mg、1.00 mmol)が、全て、アセトニトリル(1.25 mL)、ジメチルホルムアミド(DMF) (5mL)、ジイソプロピルエチルアミン(DIEA) (200μL、1.20mmol)に加えられた。その反応は室温で17時間撹拌された。反応液はEtOAc(100 mL)で希釈され、飽和NaCl(2×50 mL)、1Mクエン酸(3×25 mL)、飽和NaHCO3(3×25 mL)、及び飽和NaCl(50 mL)で洗浄された。有機質層は、乾燥され（無水Na2SO4）、ろ過され、真空下で蒸発させた。この材料は、次のものを使用して、シリカゲル(25-30g)クロマトグラフィーによってさらに精製された；CH2Cl2、CH2Cl2中の3%MeOH、CH2Cl2中の4%MeOH、CH2Cl2 中の4.5%MeOH、CH2Cl2中の5%MeOH、及びCH2Cl2中の6%MeOH、からなる7画分(200 mL)。生成物を含む画分は合わせられ、溶剤は、真空下で蒸発され固体(210mg、44.8%収率; TLC Rf = 0.15(CH2Cl2中の4%MeOH); HPLC Rt = 4.089min)を得た。
【０７３４】
合成例106: MN1402(EDCカップリング)
【０７３５】
ベンジル2,3,4,9-テトラハイドロ-lH-ピリド[3,4-b]indo(306mg、1.00 mmol)、l-エチル-3-(3-ジメチルアミノプロピル)カルボジイミド-HCl(EDC-HC1)(192mg、1.00 mmol)、4-ジメチルアミノピリジン(DMAP) (12mg、0.1 mmol)、ヒドロキシベンゾトリアゾール(HOBT)(51mg、0.33 mmol)及びtrans-4-(Boc-メチルアミノメチル)シクロヘキサンカルボン酸)(271mg、1.00 mmol)が、全て、アセトニトリル(1.25 mL)、ジメチルホルムアミド(DMF) (5mL)、ジイソプロピルエチルアミン(DIEA) (200μL、1.20mmol)に加えられた。その反応は室温で17時間撹拌された。反応液はEtOAc(100 mL)で希釈され、飽和NaCl(2×50 mL)、1Mクエン酸(3×25 mL)、飽和NaHCO3(3×25 mL)、及び飽和NaCl(50 mL)で洗浄された。有機質層は、乾燥され（無水Na2SO4）、ろ過され、真空下で蒸発させた。この材料は、次のものを使用して、シリカゲル(25-30g)クロマトグラフィーによってさらに精製された；アセトニトリル(1.25 mL)、ジメチルホルムアミド(DMF) (5mL)、ジイソプロピルエチルアミン(DIEA) (200μL、1.20mmol)に加えられた。その反応は室温で17時間撹拌された。反応液はEtOAc(100 mL)で希釈され、飽和NaCl(2×50 mL)、1Mクエン酸(3×25 mL)、飽和NaHCO3(3×25 mL)、及び飽和NaCl(50 mL)で洗浄された。有機質層は、乾燥され（無水Na2SO4）、ろ過され、真空下で蒸発させた。この材料は、次のものを使用して、シリカゲル(25-30g)クロマトグラフィーによってさらに精製された；ヘキサン、ヘキサン中の30%EtOAc、ヘキサン中の40%EtOAcおよびヘキサン中の55%EtOAcから成る4画分(200 mL)。生成物を含む画分は合わせられ、溶剤は真空下蒸発され、固体(246mg、43.9%収率; TLC Rf = 0.24(ヘキサン中の40%EtOAc); HPLC Rt = 4.919min)を得た。
【０７３６】
合成例107:
MN1403(EDCカップリング)
【０７３７】
3-メチル-2,3,4,9-テトラハイドロ-lH-ピリド[3(186mg、1.00 mmol)、l-エチル-3-(3-ジメチルアミノプロピル)カルボジイミド-HCl(EDC-HC1)(192mg、1.00 mmol)、4-ジメチルアミノピリジン(DMAP) (12mg、0.1 mmol)、ヒドロキシベンゾトリアゾール(HOBT)(51mg、0.33 mmol)及びtrans-4-(Boc-メチルアミノメチル)シクロヘキサンカルボン酸(271mg、1.00 mmol)が、全て、アセトニトリル(1.25 mL)、ジメチルホルムアミド(DMF) (5mL)、ジイソプロピルエチルアミン(DIEA) (200μL、1.20mmol)に加えられた。その反応は室温で17時間撹拌された。反応液はEtOAc(100 mL)で希釈され、飽和NaCl(2×50 mL)、1Mクエン酸(3×25 mL)、飽和NaHCO3(3×25 mL)、及び飽和NaCl(50 mL)で洗浄された。有機質層は、乾燥され（無水Na2SO4）、ろ過され、真空下で蒸発させた。この材料は、次のものを使用して、シリカゲル(25-30g)クロマトグラフィーによってさらに精製された；ヘキサン、ヘキサン中の30%EtOAc、ヘキサン中の50%EtOAcおよびヘキサン中の60%EtOAcから成る4画分(200 mL)。生成物を含む画分は合わせられ、溶剤は真空下蒸発され、固体(352mg、80.1%収率; TLC Rf = 0.30(ヘキサン中の50%EtOAc); HPLC Rt = 4.674min)を得た。
【０７３８】
合成例108: MN1404(HFIP環化)
【０７３９】
α-メチルトリプタミン(174mg、1.00 mmol)が、ヘキサフルオロ-2-プロパノール(HFIP)(1.6 mL)に溶かされた。パラホルムアルデヒド(30mg、1.0 mmol)がHFIP(1.0 mL)に溶かされ、250μL部で、前者溶液にドロップワイスに加えられた。90分以上、反応液は、CHCl3(3×50 mL)と共沸され、固体(188mg、101%収率;TLC Rf = 0.31(CH2C12中の10%MeOH + 1%NH3);HPLC Rt = 2.717min)をえた。
【０７４０】
合成例109: MN1405(HFIP環化)
【０７４１】
D-トリプトファンベンジルエステル(400mg、1.36 mmol)が、ヘキサフルオロ-2-プロパノール(HFIP)(2.2 mL)に溶かされた。パラホルムアルデヒド(45mg、1.49 mmol)がHFIP(1.61 mL)に溶かされ、lh以上で340μL部を前者の溶液にドロップワイスに加えられ、攪拌された。20時間後、溶剤は真空下で除去された。反応液は、CHCl3(3×50 mL)と共沸され、真空下で乾かされ、固体(3.0mg、0.72%収率; TLC Rf = 0.26(CH2Cl2中5%MeOH + 1%NH3); HPLC Rt = 3.505min)をえた。
【０７４２】
合成例110:MN1406(アミドへのエステル)
【０７４３】
ランタン(III)トリフルオロメタンスルフォナート(La(OTf)3)(80mg、0.136 mmol)が、真空下で、200+℃にヒートガンを使用して加熱された。アルゴンはチューブに埋め戻され、L-l,2,3,4-テトラハイドロノルハルマン-3-カルボン酸メチルエステル・HC1(520mg、1.95 mmol)が加えられた。固体は、EtOH(12 mL)中の2N NH3に溶かされた。反応液はキャップされ、48時間60℃で加熱された。混合物は室温に冷やされ、0.45μｍシリンジでろ過され、真空下で乾燥させた。La(TFl)3(80mg、0.136 mmol)が、加えられ、20分間90℃で加熱された。濾液はEtOH中の2N NH3に溶かされ、3日間60℃で加熱された。溶剤は蒸発され、結果として生じる固体は、H2O(50 mL)およびEtOAc(20 mL)に溶かされ、EtOAc(25 mL)で洗われ、H2O(2×10 mL)で抽出された。水層は蒸発された。この材料は、CH2Cl2、MeOH、CH2Cl2中1%NH3とから成る画分(400 mL)を使用して、シリカゲル(25-30g)クロマトグラフィーによってさらに精製された。生成物を含む画分は合わせられ、溶剤は真空下蒸発され、、固体(48mg、11.4%収率; TLC Rf = 0.26(CH2Cl2中の10%MeOH + 1%NH3); HPLC Rt = 1.460min)を得た。
【０７４４】
合成例111: MN1407(カルボン酸へのエステル)
【０７４５】
L-l,2,3,4-テトラハイドロノルハルマン-3-カルボキシル酸メチルエステル・HC1(532mg、2.00 mmol)が、1N NaOH(20 mL)に溶かされ、30分間還流され加熱された。結果物は、エルレンマイヤーフラスコに移され、氷浴に置かれた。冷却に際して、塩凝固1N HC1(23 mL)が、pHが5まで、加えられ、沈殿は残った。白い固体はフリット化グラスに集められた。固体は、デシケーターの中で夜通し乾かされ、2日間高真空下でさらに乾かされ、固体(396mg、91.6%収率;TLC Rf = 0.60(ブタノール:水:酢酸[3:1:1]);HPLC Rt = 2.418min)をえた。
【０７４６】
合成例112: MN1408(アミドへのエステル)
【０７４７】
ランタン(III)トリフルオロメタンスルフォナート(La(OTf)3)(20mg、0.0341 mmol)が、30分間オーブン中で113〜114℃に加熱された。材料は、高真空下に置かれ、ヒートガンで2-3分間加熱され、その後真空下で室温に冷された。L 1,2,3,4-テトラハイドロノルハルマン-3-カルボン酸メチルエステル・HC1(130mg、0.30 mmol)が、混合物に加えられ、30分間真空下で乾かされ、ヒートガンで約150℃で簡潔に加熱した。反応混合物は、2時間60℃で加熱され、濃厚卵白溶液となった。溶液は氷浴に置かれ、白い結晶がフリット化グラスに集められた。固体は冷H2O(3 mL)で洗われ、固体(101mg、88.1%収率; TLC Rf = 0.42(CH2Cl2中の10%MeOH + 1%NH3); HPLC Rt = 2.404min)を産出して、2日間真空下で乾かされた。
【０７４８】
合成例113: MN1409(EDCカップリング)
【０７４９】
エチル2,3,4,9-テトラハイドロ-lH-ピリド[3,4-b]indo(181mg、0.74 mmol)、l-エチル-3-(3-ジメチルアミノプロピル)カルボジイミド-HCl(EDC-HC1)(150mg、0.78 mmol)、4-ジメチルアミノピリジン(DMAP) (10mg、0.078 mmol)、ヒドロキシベンゾトリアゾール(HOBT)(40mg、0.26 mmol)及びtrans-4-(Boc-メチルアミノメチル)シクロヘキサンカルボン酸(212mg、0.78 mmol)が、全て、アセトニトリル(975μL)、ジメチルホルムアミド(DMF) (3.9mL)、ジイソプロピルエチルアミン(DIEA) (156μL、0.94mmol)に加えられた。その反応は室温で5日間撹拌された。反応液はEtOAc(100 mL)で希釈され、飽和NaCl(2×50 mL)、1Mクエン酸(3×25 mL)、飽和NaHCO3(3×25 mL)、及び飽和NaCl(50 mL)で洗浄された。有機質層は、乾燥され（無水Na2SO4）、ろ過され、真空下で蒸発させた。この材料は、次のものを使用して、シリカゲル(25-30g)クロマトグラフィーによってさらに精製された； ヘキサン、ヘキサン中の30%EtOAc、ヘキサン中の37%EtOAc、ヘキサン中の40%EtOAcおよびヘキサン中の50%EtOAcから成る5画分(200 mL)。生成物を含む画分は合わせられ、溶剤は真空下蒸発され、、固体(100mg、27.2%収率; TLC Rf = 0.18(ヘキサン中の40%EtOAc); HPLC Rt = 4.680min)を得た。
【０７５０】
合成例114: MN1410(EDCカップリング)
【０７５１】
イソプロピル2,3,4,9-テトラハイドロ-lH-ピリド[3,4-b]indo(201mg、0.78 mmol)、l-エチル-3-(3-ジメチルアミノプロピル)カルボジイミド-HCl(EDC-HC1)(150mg、0.78 mmol)、4-ジメチルアミノピリジン(DMAP) (10mg、0.078 mmol)、ヒドロキシベンゾトリアゾール(HOBT)(40mg、0.26 mmol)及びtrans-4-(Boc-メチルアミノメチル)シクロヘキサンカルボン酸(212mg、0.78 mmol)が、全て、アセトニトリル(975μL)、ジメチルホルムアミド(DMF) (3.9mL)、ジイソプロピルエチルアミン(DIEA) (156μL、0.94mmol)に加えられた。その反応は室温で5日間撹拌された。反応液はEtOAc(100 mL)で希釈され、飽和NaCl(2×50 mL)、1Mクエン酸(3×25 mL)、飽和NaHCO3(3×25 mL)、及び飽和NaCl(50 mL)で洗浄された。有機質層は、乾燥され（無水Na2SO4）、ろ過され、真空下で蒸発させた。この材料は、次のものを使用して、シリカゲル(25-30g)クロマトグラフィーによってさらに精製された；ヘキサン、ヘキサン中の30%EtOAc、ヘキサン中の37%EtOAc、ヘキサン中の40%EtOAcおよびヘキサン中の50%EtOAcから成る5画分(200 mL)。生成物を含む画分は合わせられ、溶剤は真空下蒸発され、、固体(125mg、31.3%収率; TLC Rf = 0.21(ヘキサン中の40%EtOAc); HPLC Rt = 4.790min)を得た。
【０７５２】
合成例115: MN1411(EDCカップリング)
【０７５３】
(S)-N-メチル-2,3,4,9-テトラヒドロ-lH-ピリド[3,4-b]インドール-3-カルボキサミド(200mg、0.872 mmol)、4-ジメチルアミノピリジン(DMAP)(10.6mg、0.087 mmol)、ヒドロキシベンゾトリアゾール(HOBT)(88mg、0.576 mmol)およびtrans-4-(Boc-メチルアミノメチル)シクロヘキサンカルボン酸(237mg、0.872mmol)が、すべて、アセトニトリル(1.1mL)、ジメチルホルムアミド(DMF) (8mL)、ジイソプロピルエチルアミン(DIEA) (396μL、2.4mmol)に加えられた。その反応は室温で2日間、60℃で6時間、撹拌された。反応液はEtOAc(100 mL)で希釈され、飽和NaCl(2×50 mL)、1Mクエン酸(3×25 mL)、飽和NaHCO3(3×25 mL)、及び飽和NaCl(50 mL)で洗浄された。有機質層は、乾燥され（無水Na2SO4）、ろ過され、真空下で蒸発させた。結果物は、ヘキサン(20 mL)で粉にされ、ヘキサン(20 mL)中20%EtOAcで溶出された。
溶剤は、真空下蒸発され、固体(200mg、47.5%収率; TLC Rf = 0.32(CH2Cl2中の5%MeOH); HPLC Rt = 4.187minを得た。
【０７５４】
合成例116: MN1412(尿素形成)
【０７５５】
(l-イソブチル-3,4-ジヒドロ-lH-ピリド[3,4-b]インドール-2(9H)-イル)(trans-4-((メチルアミノ)メチル)シクロヘキシル)メタノン (114mg、0.30 mmol)が、CHCl3(7.5 mL)に溶かされ、氷浴で5分間冷された。t-ブチル・イソシアネート(68μL、0.60 mmol)が、溶液に加えられ、反応混合物は、10分間撹拌された。反応物は氷浴から取り除かれ、室温に暖められた。混合物は濃縮され、真空下で乾かされた。この材料は、次のものを使用して、シリカゲル(25-30g)クロマトグラフィーによってさらに精製された:ヘキサン、ヘキサン中の40%EtOAc、ヘキサン中の70%EtOAcおよびヘキサン中の80%EtOAcから成る4画分(200 mL)。生成物を含む画分は合わせられ、溶剤は真空下蒸発され、固体(50mg、34.7%収率; TLC Rf = 0.37(ヘキサン中の60%EtOAc); HPLC Rt = 4.703min)を得た。
【０７５６】
合成例117: MN1413(尿素形成)
【０７５７】
(l-シクロプロピル-3,4-ジヒドロ-lH-ピリド[3,4-b]インドール-2(9H)-イル)(trans-4-((メチルアミノ)メチル)シクロヘキシル)メタノン (1.803g、5.1 mmol)が、CHCl3(50 mL)に溶かされ、氷浴中で5分間冷された。t-ブチル・イソシアネート(1.16 mL(10.2 mmol)が、溶液に添加され、反応混合物が、20分間撹拌された。混合物は、濃縮され、真空下乾燥され、固体(2.6969g)をえた。この材料は、次のものを使用して、シリカゲル(160g)クロマトグラフィーによってさらに精製された:ヘキサン、ヘキサン中の30%EtOAc、ヘキサン中の40%EtOAc、ヘキサン中の50%EtOAc、ヘキサン中の60%EtOAcおよびヘキサン中の70%EtOAcから成る6画分(1L)。生成物を含む画分は合わせられ、溶剤は真空下蒸発され、オフホワイト固体(2.0442mg、86.3%収率; TLC Rf = 0.22(ヘキサン中の60%EtOAc); HPLC Rt = 4.410min)を得た; LCMS(ESI)m/z: [M+H] +C28H40N4O2 464.6428のため Calcd; Found 465.3244; lH NMR(CDCl3,0.003%のv/v TMS,400MHz):δH0.40-0.50(m, 1H), 0.57-0.80 (m, 3H), 1.00-1.15 (m, 2H), 1.20-1.27 (m, 1H), 1.35 (s, 9H), 1.50-1.70 (m, 3H), 1.75-1.85 (m, 3H), 1.95 (d, 1H), 2.56 (t, 1H), 2.85 (s, 4H), 3.13 (d, 2H), 3.56-3.70 (m, 1H), 4.10-4.23 (m, 2H), 5.20 (d, 1H), 7.01 (dd, 1H), 7.16 (dd, 1H), 7.33 (d, 1H), 7.46 (d, 1H), 8.02 (s, 1H)。
【０７５８】
合成例118: MN1414(尿素形成)
【０７５９】
(l-エチル-3,4-ジヒドロ-lH-ピリド[3,4-b]インドール-2(9H)-イル)(trans-4-((メチルアミノ)メチル)シクロヘキシル)メタノン(73mg、0.20 mmol)が、CHCl3(5 mL)に溶かされ、氷浴中で5分間冷された。t-ブチル・イソシアネート(46μL(0.40 mmol)が、溶液に加えられ、反応混合物が、10分間撹拌された。反応物は氷浴から取り除かれ、室温に暖められた。混合物は濃縮され、真空下で乾かされた。この材料は、次のものを使用して、シリカゲル(25-30g)クロマトグラフィーによってさらに精製された:ヘキサン、ヘキサン中の40%EtOAc、ヘキサン中の70%EtOAcおよびヘキサン中の80%EtOAcから成る4画分(200 mL)。生成物を含む画分は合わせられ、溶剤は真空下蒸発され、、固体(63mg、69.6%収率; TLC Rf = 0.17(ヘキサン中の60%EtOAc); HPLC Rt = 4.414min)を得た。
【０７６０】
合成例119: MN1415(チオ尿素形成)
【０７６１】
(1 -イソプロピル-3、4-ジヒドロ- 1H-ピリド[3,4-b]インドール-2(9H)-イル)(trans-4-((メチルアミノ)メチル)シクロヘキシル)メタノン(92mg、0.25 mmol)が、CHCl3(6.25 mL)に溶かされた。tert-ブチル・イソチオシアン酸塩(38.5μL、0.303 mmol))が加えられ、夜通し撹拌された。21時間で、トリス(2-アミノエチル)アミン、ポリマーバウンド(188mg、0.75 mmol)が、過剰のイソチオシアン酸塩と反応するために反応物に加えられた。22時間で、反応物は0.45μM PTFEフィルタを通ってろ過された。溶剤は真空下で蒸発し、高真空下で乾かされた。この材料は、次のものを使用して、シリカゲル(25-30g)クロマトグラフィーによってさらに精製された:ヘキサン、ヘキサン中の40%EtOAc、ヘキサン中の45%EtOAcおよびヘキサン中の50%EtOAcから成る4画分(200 mL)。生成物を含む画分は合わせられ、溶剤は真空下蒸発され、、固体(101mg、83.7%収率; TLC Rf = 0.17(ヘキサン中の50%EtOAc); HPLC Rt = 4.760min)を得た。
【０７６２】
合成例120: MN1416(Boc開裂)
【０７６３】
tert-ブチル(trans-4-(l-イソブチル-2,3,4,9-テトラヒドロ-lH-ピリド[3,4-b]インドール-2-カルボニル)シクロヘキシル)メチル(メチル)カルバメート(330mg、0.685 mmol)が、CH2Cl2 (10 mL)およびTFA(10 mL)に溶かされた。反応物は、10分間撹拌された。溶剤は除去され、結果物は高真空下に置かれた。結果として生じた固体は、攪拌中、H2O(50 mL)およびCH2Cl2 (50 mL)中にサスペンドされた。溶液が塩基性になるまで、10N NaOHが加えられ、生成物はCH2Cl2 (3×50 mL)で抽出され、乾かされ(無水MgSO4)、ろ過された。溶剤は、真空下で除去され、固体(250mg、48.2%収率; TLC Rf = 0.24(CH2Cl2中の10%MeOH + 1%NH3); HPLC Rt = 3.689minをえた。
【０７６４】
合成例121: MN1417(Boc開裂)
【０７６５】
tert-ブチル(trans-4-(l-エチル-2,3,4,9-テトラヒドロ-lH-ピリド[3,4-b]インドール-2-カルボニル)シクロヘキシル)メチル(メチル)カルバメート(212mg、0.467 mmol)が、CH2Cl2 (10 mL)およびTFA(10 mL)に溶かされた。反応物は10分間撹拌された。溶剤は除去され、結果物は高真空下におかれた。結果として生じる固体は、H2O(50 mL)およびCH2Cl2 (50 mL)中にサスペンドされ、その間撹拌された。溶液が塩基性にまで、10N NaOHが加えられた。また、生成物はCH2Cl2 (3×50 mL)で抽出され、乾かされ(無水MgSO4)、ろ過された。溶剤は、真空下で除去され、固体(146mg、88.4%収率; TLC Rf = 0.19(CH2Cl2中の10%MeOH + 1%NH3); HPLC Rt = 3.407min)をえた。
【０７６６】
合成例122: MN1418(熱分解Boc開裂)
【０７６７】
tert-ブチル(trans-4-(l-シクロプロピル-2,3,4,9-テトラヒドロ-lH-ピリド[3,4-b]インドール-2-カルボニル)シクロヘキシル)メチル(メチル)カルバメート(308、0.66 mmol)が、225℃、38分間、アルミニウム・ブロックにおいて適切に、加熱された。室温に冷ました後に、結果として生じる油は、高真空下に置かれ、粉状の薄茶色固体(225mg、93.3%収率; TLC Rf = 0.21(CH2Cl2中の10%MeOH + 1%NH3); HPLC Rt = 3.461min)をえた。
【０７６８】
合成例123: MN1421(α-メチル・トリプタミン環化)
【０７６９】
(R)-α-メチルトリプタミン(990mg、5.68 mmol)が、1,1,1,3,3,3-ヘキサフルオロイソプロパノール(9.1 mL)に溶かされた。HFIP中のパラホルムアルデヒド(2.85 mL)の2.0M溶液が、28分間で、溶液にドロップワイスに加えられた。反応液は真空下で濃縮され、CHCl3(3×100 mL)と共沸され、固体(1.053g)をえた。固体は、ACN(6 mL)で滴定され、ろ過され、高真空下で乾かされ、固体(919mg、86.7%収率; TLC Rf = 0.27(CH2Cl2中の10%MeOH + 1%NH3); HPLC Rt = 2.660minをえた。
【０７７０】
合成例124: MN1422(EDCカップリング)
【０７７１】
(R)-3-メチル-2,3,4,9-テトラヒドロ-lH-ピリド[3,4-b]インドール(867.5mg、4.66 mmol)、1-エチル-3-(3-ジメチルアミノプロピル)カルボジイミド-HCl(EDC-HC1)(983mg、5.13 mmol)、4-ジメチルアミノピリジン(DMAP) (57mg、0.466 mmol)、ヒドロキシベンゾトリアゾール(HOBT)(236mg、1.54 mmol)及びtrans-4-(Boc-メチルアミノメチル)シクロヘキサンカルボン酸(1.264および4.66 mmol)が、全て、すべて、アセトニトリル(5.8mL)、ジメチルホルムアミド(DMF) (23mL)、ジイソプロピルエチルアミン(DIEA) (925μL、5.59mmol)に加えられた。その反応は室温で17時間撹拌された。反応液はEtOAc(100 mL)で希釈され、飽和NaCl(2×50 mL)、1Mクエン酸(3×25 mL)、飽和NaHCO3(3×25 mL)、及び飽和NaCl(50 mL)で洗浄された。有機質層は、乾燥され（無水Na2SO4）、ろ過され、真空下で蒸発させ、固体(1.9213g、93.8%収率; TLC Rf = 0.26(ヘキサン中の50%EtOAc); HPLC Rt = 4.633min)を得た。
【０７７２】
合成例125: MN1423(尿素形成)
【０７７３】
（(R)-3-メチル-3,4-ジヒドロ-lH-ピリド[3,4-b]インドール-2(9H)-イル)(trans-4-((メチルアミノ)メチル)シクロヘキシル)メタノン(1.14g、3.36 mmol)が、CHCl3(50 mL)に溶かされ、氷浴に置かれた。tert-ブチル・イソシアネート(767μL、6.72 mmol))が注射器によって溶液に加えられた。反応は20分で完了していると想定した。反応液は真空下で濃縮され、高真空下で乾かし、固体(1.64g)をえた。この材料は、次のものを使用して、シリカゲル(160g)クロマトグラフィーによってさらに精製された:ヘキサン、ヘキサン中の50%EtOAc、ヘキサン中の60%EtOAc、ヘキサン中の70%EtOAc、ヘキサン中の80%EtOAcおよびヘキサン中の90%EtOAcから成る6画分(200 mL)。生成物を含む画分は合わせられ、溶剤は真空下蒸発され、、固体(1.28g、87.0%収率; TLC Rf = 0.20(ヘキサン中の70%EtOAc); HPLC Rt = 4.259min)を得た; LCMS (ESI) m/z: [M + H]+ Calcd for C26H38N402 438.6055; Found 439.3105; lH NMR (CDC1 , 0.003% v/v TMS, 400MHz): δΗ 1.00-1.30 (m, 5H), 1.35 (s, 9H), 1.45-1.55 (m, 3H), 1.55-1.70 (m, 3H), 1.75-1.90 (m, 4H), 2.50-2.63 (m, 1H), 2.65-2.77 (m, 1H), 2.82 (s, 3H), 3.00-3.10 (m, 1H), 3.12 (d, 2H), 4.00-4.20 (m, 2H), 4.55-4.65 (m, 1H), 5.40-5.50 (m, 2H), 7.07 (dd, 1H), 7.15 (dd, 1H), 7.31 (d, 1H), 7.44 (d, 1H), 7.93 (s, 1H)。
【０７７４】
合成例126:中間物(エステル形成)
【０７７５】
4-[(エチルアミノ)メチル)シクロヘキサン-l-カルボン酸塩酸塩(500mg、2.26 mmol)が、EtOH(10mL、12.5 mmol)中の1.25M HC1に溶かされ、アルゴンの不活性雰囲気下のコンデンサーを使用して、78℃で加熱され撹拌された。その後、溶液は48時間還流され、固体をえた。固体は、EtOH(10 mL)に溶解され、ロトベープされ（rotovaped）、白い固体をえた。固体はEtOAc(100 mL)に溶かされ、1M K2CO3(2×10 mL)と飽和NaCl(10 mL)で洗浄され、真空下で蒸発され、油(564mg、99%収率; HPLC(200nm)  Rt＝2.540min)をえた。
【０７７６】
合成例127:中間物(尿素形成)
【０７７７】
エチル4-((エチルアミノ)メチル)シクロヘキサンカルボキシレート(564mg、2.26 mmol)が、CHCl3(20 mL)に溶かされ、氷浴中で冷された。t-ブチル・イソシアネート(387 μL、3.39 mmol))が溶液に加えられ、また、トリエチルアミン(TEA)が2分間で溶液にドロップワイスに加えられた。反応混合物は、氷浴から除去され、45分間室温で撹拌された。反応液はロトベープされ（rotovaped）、高真空下で乾かされた。結果物は、EtOAc(100 mL)に溶かされ、1Mクエン酸(3×25 mL)、1M NaHCO3(3×25 mL)、飽和NaCl(50 mL)で洗浄した。結果物は、Na2SO4で乾かされ、ろ過されて、ロトベープされ（rotovaped）油をえた。油は、高真空下で乾かされ、結晶化し、固体(677mg、96.0%収率; HPLC-ELSD Rt = 4.306min)をえた。
【０７７８】
合成例128:中間物(エステル加水分解)
【０７７９】
エチル4-((3-tert-ブチルl-エチルウレイド)メチル)シクロヘキサンカルボキシラート(677mg、2.17 mmol)が、1N NaOH(10 mL(10 mmol))に溶かされ、アルゴンの不活性雰囲気下で攪拌しながら90℃に加熱された。2時間後、10M NaOH(3 mL(30 mmol))およびEtOH(3 mL)が、反応液に加えられた。その混合物は1時間80℃に加熱され、次に、室温に冷された。溶液はロトベープされ（rotovaped）された。また、結果物はH2O(6 mL)に溶かされ、ｐH が2まで、冷濃縮H2SO4で酸性化された。生成物は、EtOAc(3×200 mL)およびIN HCl(20 mL)で抽出された。有機質層は35mL飽和NaCl + IN HClで洗浄され、Na2SO4上で乾燥させた。
溶剤は、高真空下で蒸発され、固体(370mg、60%収率; HPLC(200nm)[cis/trans(1:2)]Rt = 3.563,3.475min)をえた。
【０７８０】
合成例129: MN1424(EDCカップリング)
【０７８１】
6,7,8,9-テトラヒドロ5H-ピロロ[2,3-b:5,4-c']ジピリジン(250mg、1.44 mmol)、1-エチル-3-(3-ジメチルアミノプロピル)カルボジイミド-HCl(EDC-HC1)(331mg、1.73 mmol)、4-ジメチルアミノピリジン(DMAP)(18mg、0.144 mmol)、ヒドロキシベンゾトリアゾール(HOBT)(74mg、0.48 mmol)およびtrans-4-(Boc-メチルアミノメチル)シクロヘキサンカルボン酸(392mg、1.44 mmol)が、すべて、アセトニトリル(1.8mL)、ジメチルホルムアミド(DMF) (7.2mL)、ジイソプロピルエチルアミン(DIEA) (357μL、2.16mmol)に溶解された。その反応は室温で20時間撹拌された。反応混合物はEtOAc(100 mL)で希釈され、飽和NaCl(2×50 mL)、0.2M 2-(N-モルフォリノ)エタンスルフォン酸(MES)pH 緩衝液(2×25 mL)、飽和NaHCO3(3×25 mL)、及び飽和NaCl(50 mL)で洗浄された。有機質層は、乾燥され（無水Na2SO4）、ろ過され、真空下で蒸発され、固体(408mg)を得た。生成物は、EtOAc(20 mL)に溶かされ、1Mクエン酸(3×50 mL)で抽出され、EtOAc(10 mL)で洗浄した。pHが7.8まで、10M NaOHが溶液に加えられた。生成物は、EtOAc(3×100 mL)で抽出され、乾かされて(無水Na2SO4)、ろ過され、フード下で蒸発させた。この材料は、次のものを使用して、シリカゲル(25-30g)クロマトグラフィーによってさらに精製された: CH2Cl2、CH2Cl2中の2%MeOH、CH2Cl2中の4%MeOH、CH2Cl2中の6%MeOH、CH2Cl2中の8%MeOHおよびCH2Cl2中の10%MeOHから成る6画分(200 mL)。生成物を含む画分は合わせられ、溶剤は真空下蒸発され、、固体(217mg、35.3%収率; TLC Rf = 0.19(CH2Cl2中の4%MeOH); HPLC Rt = 3.579min)を得た。
【０７８２】
合成例130: MN1425(EDCカップリング)
【０７８３】
l-エチル-2,3,4,9-テトラハイドロ-lH-ピリド[3,4-b]インドール (100mg、0.50 mmol)、l-エチル-3-(3-ジメチルアミノプロピル)カルボジイミド-HCl(EDC-HC1)(105mg、0.55 mmol)、4-ジメチルアミノピリジン(DMAP) (6mg、0.05 mmol)、ヒドロキシベンゾトリアゾール(HOBT)(25mg、0.165 mmol)及びtrans-4-((3-tert-ブチルl-エチルureido)メチル)シクロヘキサンカルボン酸が、全て、アセトニトリル(625μL)、ジメチルホルムアミド(DMF) (2.5mL)、ジイソプロピルエチルアミン(DIEA) (100μL、0.60mmol)に溶解された。その反応は室温で48時間撹拌された。反応混合物はEtOAc(100 mL)で希釈され、飽和NaCl(2×50 mL)、1Mクエン酸(3×25 mL)、飽和NaHCO3(3×25 mL)、及び飽和NaCl(50 mL)で洗浄された。有機質層は、乾燥され（無水Na2SO4）、ろ過され、真空下で蒸発された。この材料は、次のものを使用して、シリカゲル(25-30g)クロマトグラフィーによってさらに精製された: ヘキサン、ヘキサン中の40%EtOAc、ヘキサン中の50%EtOAcおよびヘキサン中の60%EtOAcから成る4画分(200 mL)。生成物を含む画分は合わせられ、溶剤は真空下蒸発され、固体(73mg)をえた。この材料は、次のものを使用して、シリカゲル(25-30g)クロマトグラフィーによってさらに精製された: CH2Cl2、CH2Cl2中の12%EtOAc、CH2Cl2中の22%EtOAc、CH2Cl2中の25%EtOAcおよびCH2Cl2中の35%EtOAcから成る5画分(200 mL)。生成物を含む画分は合わせられ、溶剤は真空下蒸発され、固体(81mg、34.7%収率; TLC Rf = 0.30(ヘキサン中の60%EtOAc); HPLC[cis/trans(1:4)]Rt = 4.648,4.514min)を得た。
【０７８４】
合成例131: MN1426(EDCカップリング)
【０７８５】
l-シクロプロピル-2,3,4,9-テトラハイドロ-lH-ピリド[3,4-b] インドール(106mg、0.50 mmol)、1-エチル-3-(3-ジメチルアミノプロピル)カルボジイミド-HCl(EDC-HC1)(105mg、0.55 mmol)、4-ジメチルアミノピリジン(DMAP) (6mg、0.05 mmol)、ヒドロキシベンゾトリアゾール(HOBT)(25mg、0.165 mmol)及びtrans-4-((3-tert-ブチルl-エチルureido)メチル)シクロヘキサンカルボン酸 (136mg、0.50 mmol)が、全て、アセトニトリル(625μL)、ジメチルホルムアミド(DMF) (2.5mL)、ジイソプロピルエチルアミン(DIEA) (100μL、0.60mmol)に溶解された。その反応は室温で48時間撹拌された。反応混合物はEtOAc(100 mL)で希釈され、飽和NaCl(2×50 mL)、1Mクエン酸(3×25 mL)、飽和NaHCO3(3×25 mL)、及び飽和NaCl(50 mL)で洗浄された。有機質層は、乾燥され（無水Na2SO4）、ろ過され、真空下で蒸発された。この材料は、次のものを使用して、シリカゲル(25-30g)クロマトグラフィーによってさらに精製された:ヘキサン、ヘキサン中の40%EtOAc、ヘキサン中の50%EtOAcおよびヘキサン中の60%EtOAcから成る4画分(200 mL)。生成物を含む画分は合わせられ、溶剤は真空下蒸発され、固体(142mg)を得た。この材料は、次のものを使用して、シリカゲル(25-30g)クロマトグラフィーによってさらに精製された: CH2Cl2、CH2Cl2中の10%EtOAc、CH2Cl2中の20%EtOAc、CH2Cl2中の25%EtOAcおよびCH2Cl2中の35%EtOAcから成る5画分(200 mL)。
生成物を含む画分は合わせられ、溶剤は真空下蒸発され、固体(85mg、35.5%収率;TLC Rf = 0.37(ヘキサン中の60%EtOAc);HPLC[cis/trans(1:4)]Rt = 4.687,4.554min)を得た。
【０７８６】
合成例132: MN1443(尿素形成)
【０７８７】
アザカルボリン（Azacarboline）中間物(114mg、0.26 mmol)が、CHCl3(20 mL)およびジイソプロピルエチルアミン(DIEA)(100μL(0.60 mmol))に溶かされた。t-ブチル・イソシアネート(32 μL、0.286 mmol)が、注射器によって溶液に加えられた。反応は45分間室温で撹拌された。反応液は、ロトベイプされ(rotovaped)、高真空下で乾かされた。結果物は次のものを使用して、シリカゲル(25-30g)クロマトグラフィーによって精製された: CH2Cl2、CH2Cl2中の2%MeOH、CH2Cl2中の5%MeOHおよびCH2Cl2中の8%MeOHから成る4画分(200 mL)。生成物を含む画分は合わせられ、溶剤は真空下蒸発された。その後、生成物はEtOAc(100 mL)に溶かされ、1M NaOH(3x20 mL)、pH 7.0 0.2M MESバッファー(3x20 mL)、1M NaOH(1x20 mL)および塩水(1x25 mL)で洗浄された。有機質層は、乾かされ(無水Na2SO4)、ろ過され、真空下で蒸発され、固体(70mg、63.3%収率; TLC Rf = 0.15(CH2Cl2中の5%MeOH); HPLC Rt = 3.212minをえた。
【０７８８】
実施例：クエン酸、NaHCO3とのEDCカップリング（ワークアップ） - MN142-O-EDCカップリング
【化８５】
2020512002.tif 000108
【０７８９】
4-フェニルピペリジン(161mg、1.00 mmol)、 l-エチル-3-(3-ジメチルアミノプロピル)カルボジイミド-HCl(EDC-HC1)(192mg、1.00 mmol)、4-ジメチルアミノピリジン(DMAP)(12mg、0.1 mmol)、ヒドロキシベンゾトリアゾール(HOBT)(51mg、0.33 mmol)およびtrans-4-(Boc-メチルアミノメチル)シクロヘキサンカルボン酸(271mg、1.00mmol)が、すべて、アセトニトリル(1.25mL)、ジメチルホルムアミド(DMF) (5mL)、ジイソプロピルエチルアミン(DIEA) (200μL、1.20mmol)に溶解された。その反応は室温で17時間撹拌された。反応混合物はEtOAc(100 mL)で希釈され、飽和NaCl(2×50 mL)、1Mクエン酸(3×25 mL)、飽和NaHCO3(3×25 mL)、及び飽和NaCl(50 mL)で洗浄された。有機質層は、乾燥され（無水Na2SO4）、ろ過され、真空下で蒸発された。この材料は、次のものを使用して、シリカゲル(25-30g)クロマトグラフィーによってさらに精製された:ヘキサン、ヘキサン中の25%EtOAc、ヘキサン中の30%EtOAcおよびヘキサン中の35%EtOAcから成る4画分(200 mL)。生成物を含む画分は合わせられ、溶剤は真空下蒸発され、固体(330mg、79.6%収率; TLC Rf = 0.39(ヘキサン中の50%EtOAc); HPLC Rt = 4.702min)を得た。
【０７９０】
MN1429、MN1430、MN1431、MN1432、MN1434、MN1449、MN1450、MN1451、MN1452、MN1453およびMN1454は、MN1420と同様の方法で提供された。
【０７９１】
実施例: MESバッファー、NaHCO3とのEDCカップリング（ワークアップ）: MN1428-EDCカプリング
【化８６】
2020512002.tif 000109
4-(4-ピリジニル)ピペリジン(65mg、0.40 mmol)、l-エチル-3-(3-ジメチルアミノプロピル)カルボジイミド-HC1(EDC-HC1)(84mg、0.44 mmol)、4-ジメチルアミノピリジン(DMAP)(5mg、0.04 mmol)、ヒドロキシベンゾトリアゾール(HOBT)(20mg、0.132 mmol)およびtrans-4-(Boc-メチルアミノメチル)シクロヘキサンカルボン酸(82mg、0.30 mmol)が、すべて、アセトニトリル(500μL)、ジメチルホルムアミド(DMF)(2 mL)、ジイソプロピルエチルアミン(DIEA)(79μL、0.48 mmol)に溶かされた。反応は室温で17時間撹拌された。
反応液は、EtOAc(100 mL)で希釈され、飽和NaCl(2×50 mL)、0.2M MES pH 7バッファー(3×25 mL)、飽和NaHCO3(3×25 mL)、及び飽和NaCl(50 mL)で洗浄された。有機質層は、乾燥され（無水Na2SO4）、ろ過され、真空下で蒸発された。この材料は、次のものを使用して、シリカゲル(25-30g)クロマトグラフィーによってさらに精製された: CH2Cl2、CH2Cl2中の2%MeOH、CH2Cl2中の4%MeOHおよびCH2Cl2中の5%MeOHから成る4画分(200 mL)。生成物を含む画分は合わせられ、溶剤は真空下蒸発され、固体(124mg、99.5%収率; TLC Rf = 0.22(CH2Cl2中の4%MeOH); HPLC Rt = 3.409min)を得た。
【０７９２】
MN1427、MN1447およびMN1448はMN1428と同様のやり方で準備された。
【０７９３】
合成例: MN1428T(トシル)
【０７９４】
tert-ブチル・メチル((4-(4-(ピリジン-4-イル)ピペリジン-l-カルボニル)シクロヘキシル)メチル)カルバメート(3.3066g、7.9568 mmol)が、ジエチルエーテル(250 mL)に溶かされ、次に、0.45μm PTFE注射器フィルタによってろ過された。溶液は、ジエチルエーテル(150 mL)に溶かされた、p-トルエン・スルホン酸(1.5144g、7.956 mmol)と混合され、沈殿を生じた。混合物は濃縮され、真空下で乾かされた。結果物は、沸騰アセトニトリル(10 mL)から再結晶され、素早く冷やされた。そして、結果として生じる固体は、漏斗に集められた。
その後、これは、沸騰アセトニトリル(20 mL)から再び再結晶し、3日間で室温にゆっくり冷やされ、母液はデカントオフされた。固体は、室温でアセトニトリル(5 mL)ですすがれ、漏斗に集められ、16時間真空デシケーターの中で乾かされ、白い固体(2.08g、44.5%収率; HPLC Rt = 3.329min)をえた。
【０７９５】
K2CO3とのDCCカップリングワークアップの例:MN1433 - DCCカップリング
【化８７】
2020512002.tif 000110
【０７９６】
合成例MN1433(DCCカップリング)
【０７９７】
1-メチルピペラジン(100mg、1.00 mmol)、 N,N′-ジシクロヘキシルカルボジイミド(227mg、1.10 mmol)、1-ヒドロキシベンゾトリアゾール(51mg、0.33 mmol)及びtrans-4-(Boc-メチルアミノメチル)シクロヘキサン)カルボン酸(271mg、1.00 mmol)が、すべてアセトニトリル(10.0 mL)に溶かされた。反応は室温で16時間撹拌された。結果として生じる沈殿は、移し、漏斗上で集められた。そして、濾液は真空下で蒸発された。濾液からの結果として生じる油は、EtOAc(5 mL)に溶かされ、0.22μm PTFE注射器フィルタによってろ過され、次に、EtOAc(95 mL)で希釈された。この溶液は、1M K2CO3(3×33 mL)および塩水(1×50 mL)で洗浄された。有機質層は、乾かされ(無水Na2SO4)、ろ過され、真空下で蒸発された。この材料は、次のものを使用して、シリカゲル(25-30g)クロマトグラフィーによってさらに精製された: CH2Cl2+ 1%NH3、CH2Cl2中の1%MeOH + 1% NH3、CH2Cl2中の2%MeOH + 1% NH3、CH2Cl2中の5%MeOH+ 1% NH3およびCH2Cl2中の10%MeOH + 1% NH3から成る5画分(200 mL)。生成物を含む画分は合わせられ、溶剤は真空下蒸発され、油(319mg、90.2%収率; TLC Rf = 0.16(CH2Cl2中の4%MeOH + 1%NH3); HPLC Rt = 3.133minを得た。次の化合物が同様のやり方で合成された: MN1433、MN1437、MN1438、MN1455、MN1456、MN1457、MN1458、MN1459、MN1460。
【０７９８】
NaOH/MOPS/HClとのDCCカップリングワークアップの例:MN1456-DCC
【化８８】
2020512002.tif 000111
【０７９９】
4-(ピペリジン-4-イルメチル)ピリジン(88mg、0.5 mmol)及びtrans-4-(Boc-メチルアミノメチル)シクロヘキサン)カルボン酸 (136mg、0.5 mmol)が、両方とも、N,N′-ジシクロヘキシルカルボジイミド(DCC)(113mg、0.55 mmol)の追加添加に先立ってアセトニトリル(5 mL)に溶かされた。24時間で、反応はフリット化グラスを通ってろ過され、溶剤は真空下で除去され、固体をえた。結果として生じる固体は、EtOAc(100 mL)に溶かされ、1N NaOH(3×25 mL)およびpH 8 0.2M MOPSバッファー(3×20 mL)で洗浄された。生成物は、0.1N HCl(3×50 mL)で抽出され、10N NaOH(5 mL)で塩基性にし、CH2Cl2(3×50 mL)で抽出し、塩水(30 mL)で洗った。有機質層は乾かされ (無水MgSO4)、ろ過されて、溶剤は真空下で除去された。また、結果として生じる固体は、真空下で乾かされた。これは、次のものを使用して、シリカゲル(25-30g)クロマトグラフィーによってさらに精製された:ヘキサン、ヘキサン中の35%アセトン、ヘキサン中の50%アセトンおよびヘキサン中の65%アセトンから成る4画分(200 mL)。生成物を含む画分は合わせられ、溶剤は真空下蒸発され、固体(46mg、21%収率; TLC Rf = 0.29(CH2Cl2中の5%MeOH); HPLC-200nm Rt 3.401=min)を得た。
【０８００】
MN1456、MN1457、MN1458、MN1459およびMN1460は、MN1455と同様に合成された。
【０８０１】
NaOH/塩水とのEDCカップリングワークアップの例: MN1435 - DCCカップリング
【化８９】
2020512002.tif 000112
【０８０２】
l -ピペラジン(4-ピリジル)(326mg、2.00 mmol)、ヒドロキシベンゾトリアゾール(HOBT)(101mg、0.66 mmol)、N,N′-ジシクロヘキシルカルボジイミド(DCC)(454mg、2.2 mmol)およびBoc-trans-4-(アミノメチル)シクロヘキサン-l-カルボン酸(515mg、2.00 mmol)が、すべて、アセトニトリル(100 mL)に溶かされた。反応は室温で72時間撹拌された。反応液はろ過され、濾液は真空下で蒸発された。結果物は、EtOAc(8 mL)に溶かされ、注射器を使い0.22μmPTFEフィルターによってろ過された。濾液はEtOAc(100 mL)で希釈され、1M NaOH(3×25 mL)及び飽和NaCl(50 mL)で洗浄された。有機質層は、乾かされ(無水Na2SO4)、ろ過され、真空下で蒸発された。この材料は、次のものを使用して、シリカゲル(25-30g)クロマトグラフィーによってさらに精製された: CH2Cl2+ 1%NH3、CH2Cl2中の1%MeOH + 1% NH3、CH2Cl2中の5%MeOH + 1% NH3、CH2Cl2中の12%MeOH+ 1% NH3およびCH2Cl2中の20%MeOH + 1% NH3から成る3画分(200 mL) 。生成物を含む画分は合わせられ、溶剤は真空下蒸発され、固体(755.5mg mg、93.8%収率; TLC Rf = 0.33(CH2Cl2中の10%MeOH + 1%NH3); HPLC-200nm Rt 3.137=min)を得た。
【０８０３】
MN1436、MN1437およびMN1438はMN1435と同様の方法で合成された。
【０８０４】
t-ブチル尿素アナログの合成の例: MN1439 -- カップリング、Boc-開裂、尿素形成スキーム。
【化９０】
2020512002.tif 000113
【０８０５】
MN1435 Boc開裂
【０８０６】
tert-ブチルメチル(((ls,4s)-4-(4-(ピリジン-4-イル)ピペラジン-l-カルボニル)シクロヘキシル)メチル)カルバメート(652.8mg、1.62 mmol)が、トリフルオロ酢酸(7 mL)を加える前にCH2Cl2(7 mL)に溶かされた。反応は20min振とうされ、トルエン(100 mL)で希釈され、蒸発された。結果として生じる残渣は、1,4-ジオキサン(25 mL)に溶かされ、真空下で蒸発された。これは、真空下で乾かされ、固体(1.401g、201%収率[residual TFA]; TLC Rf = 0.24(CH2Cl2中の10%MeOH + 1%NH3); HPLC-200nm Rt 0.846=min)をえた。
【０８０７】
MN1439 - 尿素形成
【化９１】
2020512002.tif 000114
【０８０８】
(4-(アミノメチル)シクロヘキシル)、4-(ピリジン-4-イル)ピペラジン-(l-イル・メタノンX-TFA複合体(1.62 mmol)が、注射器によってtert-ブチル・イソシアネート(457μL、4 mmol)およびN,N-ジイソプロピルエチルアミン(2.4 mL、13.78 mmol)を加える前にCHCl3(50 mL)中でサスペンドされた。反応は室温で16時間撹拌された。反応液は真空下で蒸発された。この材料は次のものを使用して、シリカゲル(25-30g)クロマトグラフィーによって精製された: CH2Cl2+ 1%NH3、CH2Cl2中の5%MeOH + 1% NH3、CH2Cl2中の10%MeOH + 1% NH3、CH2Cl2中の15%MeOH+ 1% NH3から成る3画分(200 mL)。生成物を含む画分は合わせられ、溶剤は真空下蒸発され、固体(469mg)を得た。この材料はTFA-DIEAで汚染されており、EtOAcに溶解し、その後、1N NaOH(3x25 mL)および塩水(25mL)で洗うことによりさらに精製され、Na2SO4で乾かし、蒸発させて292mg(45%収率)えた; TLC Rf = 0.24(CH2Cl2中の10%MeOH + 1%NH3); HPLC-200nm Rt 2.887=min。
【０８０９】
MN1440、MN1441、MN1442、MN1444およびMN1445はMN1439と同様の方法で合成された。
【０８１０】
MN1461(EDCカップリング)  ニトロ還元
【化９２】
2020512002.tif 000115
4-(4-ニトロフェニル)ピペリジン(206mg、1 mmol)、l-エチル-3-(3-ジメチルアミノプロピル)カルボジイミド-HC1(EDC-HC1)(211mg、1.10 mmol)、4-ジメチルアミノピリジン(DMAP)(12mg、0.10 mmol)、ヒドロキシベンゾトリアゾール(HOBT)(51mg、0.33 mmol)およびtrans-4-(Boc-メチルアミノメチル)シクロヘキサンカルボン酸(271mg、1.00 mmol)が、アセトニトリル(1.25 mL)、ジメチルホルムアミド(DMF)(5 mL)およびジイソプロピルエチルアミン(DIEA)(200μL、1.2 mmol)に溶かされた。反応は室温で17時間撹拌された。その後、反応液はEtOAc(100 mL)で希釈され、NaCl(2×50 mL)、1Mクエン酸(3×25 mL)、飽和NaHCO3(3×25 mL)、飽和NaCl(50 mL)で洗浄された。有機質層は、乾かされ(無水Na2SO4)、ろ過され、真空下で蒸発された。この材料は、次のものを使用して、シリカゲル(25-30g)クロマトグラフィーによってさらに精製された:ヘキサン、ヘキサン中の20%のアセトン、ヘキサン中の30%のアセトンおよびヘキサン中の40%のアセトンから成る4画分(200 mL)。生成物を含む画分は合わせられ、溶剤は真空下蒸発され、固体(274.6mg、60%収率; TLC Rf = 0.31(CH2Cl2中の5%MeOH); HPLC(200nm)Rt = 3.263minを得た。
【０８１１】
tert-ブチル・メチル(((ls,4s)-4-(4-(4-ニトロフェニル)シクロヘキサンカルボニル)シクロヘキシル)メチルカルバメート(147mg、0.32 mmol)が、炭素(37mg)上のパラジウムの添加の前に、メタノール(5 mL)に溶かされた。反応は、Arの不活性雰囲気下で水素ガスを除去させる前にバルーンを使い2時間水素付加した。反応液は、セライト（celite）によってろ過され、濾液は、真空下で蒸発され、固体(120mg、87%収率;TLC Rf = 0.31(CH2Cl2)中の5%MeOH);HPLC(200nm)Rt = 3.263min)をえた。
表１  物理学的データと合成法表
【表１−１】
2020512002.tif 000116
【表１−２】
2020512002.tif 000117
【表１−３】
2020512002.tif 000118
【表１−４】
2020512002.tif 000119
【表１−５】
2020512002.tif 000120
【０８１２】
化合物の生物活性の要約
【０８１３】
図18A-18Eは構造活性相関図を示す。癌細胞移動の阻害率（％）が、創傷治癒分析において行なわれた。コントロールと比較して候補薬の存在下で、侵襲した癌細胞が占領する％比率が、写真から細胞を数えることを可能にするイメージJ細胞ソフトウェアによって計られた。IC50は、いくつかの化合物濃度で移動実験を行ない、次に、ヒル式(Hill’s equation)を適用することにより計算された。癌細胞増殖の阻害は、候補薬の存在若しくは不存在下で、自動細胞計数をすることによって計られた。数量化されたデータは、図18A-18Eで示される。ここで、癌細胞増殖の阻害は、増殖が、25%まで阻害された場合1、50%まで阻害された場合2、75%まで阻害された場合3、増殖の阻害に最も高い程度を4、最も低い程度を0とスコア化した。幹細胞の多分化能あるいは増殖に対する候補薬の効果は、細胞形態学と細胞密度に基づいて、形態若しくは細胞数における変化なしを0、増殖の阻害を示すはるかに少数の細胞に加え、分化する細胞の形態を呈する幹細胞で、最もおおきな効果である4と、視覚によってスコアされた。実施例として、図30A-30Fは、ナイーブ幹細胞、プライムド幹細胞および繊維芽細胞コントロールの写真を示す。図31A-31Fは、ナイーブ状態幹細胞での本発明の化合物の効果を示し、そこで、「+」サインの数が、化合物の、多分化能、ナイーブ幹細胞の増殖あるいはそれらの分化を引き起こす能力を阻害する能力について、0-4のスコアを示す。図31G-31Lは、より多く成熟したプライムド状態幹細胞における効果の相対的欠如を示し、図31M-31Rは、これらの化合物が、正常な健康細胞のための代替である繊維芽細胞に効果がないことを示す。図36-44及び65-87は、癌細胞移動および侵襲を阻害することに関し、本発明化合物の写真およびIC50グラフを示す。癌細胞移動は、転移癌の特徴である。
【０８１４】
ここで、次のステップを含む、腫瘍侵襲、移動および転移の阻害剤である作用薬を同定する方法について記述する:
【０８１５】
1)  ある化合物が存在する状態で、ナイーブ幹細胞および繊維芽細胞を培養する;
【０８１６】
2)  当該化合物が、ナイーブ幹細胞の、増殖及び/又は多分化能を阻害することを確認する;
【０８１７】
3)  当該化合物が、繊維芽細胞に効果がほとんどあるいはまったくないことを確認する;
そして
【０８１８】
4)  当該化合物が、癌細胞の増殖若しくは侵襲性を阻害すると結論づける。
【０８１９】
要約すると、ナイーブ幹細胞に最も大きな効果があった化合物は、それらがナイーブ幹細胞多分化能及び/又は増殖を阻害し、プライムド状態の幹細胞あるいは繊維芽細胞に効果がほとんどないという点で、癌細胞移動および侵襲の有力な阻害剤である。ある場合には、その化合物は、さらに癌細胞増殖を阻害した。本発明の化合物は、侵襲としても知られている癌細胞移動の有力な阻害剤であるので、これらの化合物は癌転移の治療若しくは予防に有用である。
【０８２０】
本発明者は、プライムド状態の幹細胞においてスーパーエンハンサーによって占められ、しかし、ナイーブ状態幹細胞ではない、遺伝子は、分化のマスターレギュレーターであると仮定した。確かに、HES3、それは基本的な螺旋ループ螺旋転写因子を調節する、およびGNAS、それらは分化にとって重要な因子のホストの活性を仲介する、及びナイーブ状態幹細胞ではなくプライムド状態の幹細胞でアップレギュレートされた他のスーパーエンハンサー遺伝子標的を加えて、本発明の化合物によってアップレギュレートされる(図89A-89H)。上昇したβ-カテニンとMUC1は、癌移動、侵襲および転移にリンクされた(Sachdeva and Mo, Cancer Res: 70(1); 378-87, 2010)。本発明の化合物は、活性なβ-カテニンの量の減少(図89A; 図90A)、およびMUC1*リガンドNME7ABおよびNME7-X1の発現の減少 (図90B、90C)を引き起こす。活性化された核のβ-カテニンを測定することは技術的に難しいので、AXIN2、その発現は活性化された核のβ-カテニン-によって直接引き起こされるので、を代わりに測定することが一般的である。MicroRNA-145は、幹細胞分化のハービンガーとして同定された(Xu, N, et al. MicroRNA-145 Regulates OCT4, SOX2, and KLF4 and Represses Pluripotency in Human Embryonic Stem Cells. Cell. 137(4), p647-658, 15 May 2009. DOI: 10.1016/j.cell.2009.02.038; Smagghe et al, "MUCl* Ligand, NM23-H1, is a Novel Growth Factor that Maintains Human Stem Cells in a More Naive State," PLoS ONE http://dx.plos.org/10.1371/journal.pone.0058601 2013)。SachdevaとMoは、miR-145が腫瘍移動および侵襲を阻害すると報告した。ここで、本発明者は、本発明の化合物がmiR-145の発現を増加させることを見出した(図91A-91Cおよび図92A-92C)。
【０８２１】
本発明の1つの様相において、有効な量の1あるいはそれ以上の化合物MN1292〜MN1471が、癌をもつ若しくは癌進展のリスクのあると診断された患者に投与された。本発明の別の様相では、式1-17によって記述された化合物の有効な量の1つあるいは１つ以上が、癌をもつ若しくは癌進展のリスクがあると診断された患者に投与された。1つの様相では、本発明の化合物は、転移の治療若しくは予防のための患者に投与される。別の、本発明の様相において、本発明化合物は、侵襲性が特徴の癌の治療のために患者に投与される。さらに別の様相では、本発明の化合物は、グレードまたは病期2である癌と診断された患者に投与される。また別の様相では、本発明の化合物は、0でないT、NあるいはMで得点される癌と診察された患者に投与される。まだ別の様相では、本発明の化合物は、MUC1陽性あるいはMUCl*陽性癌と診断された患者に投与される。別の様相では、本発明の化合物は、NME7、NME7ABあるいはNME7-X1の陽性の癌と診断された患者に投与される。
【０８２２】
医薬品組成物
【０８２３】
本発明の化合物にあるものは、非対称的に置換された炭素原子を含む。そのような非対称的に置換された炭素原子は、特別の非対称的に置換された炭素原子での立体異性体の混合物若しくは単独の立体異性体を含む本発明の化合物に帰着する場合がある。結果として、本発明の化合物の単一のジアステレオマーと同様に、ラセミ混合物、ジアステレオマーの混合物も、本発明に含まれている。用語「S」および「R」配置は、ここに使用されるように、the IUPAC 1974 "RECOMMENDATIONS FOR SECTION E, FUNDAMENTAL STEREOCHEMISTRY," Pure  Appl. Chem. 45: 13-30, 1976lによって定義された通りである。用語、α及びβは、環式化合物の環位置のために使用される。リファレンスプレーンのαサイドは、好ましい置換が、より低い番号付けられた位置であるそのサイドである。リファレンスプレーンの反対側にあるこれらの置換は、βディスクリプタを割り当てられる。この使用法は、環式のステレオペアレンツ（stereoparents）のためのそれと異なることは注目されるべきであり、そこでは「α」は「プレーンより下の」を意味し、また絶対立体配置を示す。用語、α及びβ配置は、ここに使用されるように、「"Chemical Abstracts Index Guide," Appendix IV, paragraph 203, 1987」によって定義された通りである。
【０８２４】
ここに使用される用語「薬学的に受容可能な塩類」は本発明の化合物の無毒な酸若しくはアルカリ土類金属塩類を指す。これらの塩類は、化合物の最終単離および精製中にインサイチュウに調製、あるいは、各々、適切な有機若しくは無機の酸若しくは塩基と、別々に、塩基若しくは酸の機能を反応させることにより調製できる。代表的な塩類は以下含み、しかし制限されない:酢酸塩、アジピン酸塩、アルギン酸塩、クエン酸塩、アスパラギン酸塩、安息香酸塩、ベンゼンスルフォネート、重硫酸塩、酪酸塩、樟脳酸塩、カンフォスルフォネート、ジグルコネート、シクロペンタンプロピオネート、ドデシルスルフォネート、エタンスルフォネート、グルコヘプタノエート、グリセロ燐酸塩、ヘミ硫酸塩、ヘプタノエート、ヘキサノエート、フマレート、塩酸塩、ヒドロブロミド、ヨウ化水素酸塩、2-ヒドロキシエタンスルフォネート、乳酸塩、マレイン酸塩、メタンスルフォネート、ニコチネート、2-ナフタレンスルフォネート、シュウ酸塩、パモエート、ペクチン酸塩、過硫酸塩、3-フェニルプロピオン酸塩、ピクリン酸塩、ピバレート、プロピオン酸塩、琥珀酸塩、硫酸塩、酒石酸塩、チオシアン酸塩、p-トルエンスルフォネートおよびウンデカノエート。さらに、塩基性の窒素含有基は、メチル-、エチル-、プロピル-およびブチル-クロライド、ブロマイド及びイオダイドのようなハロゲン化アルキルのような作用薬、ジメチル-、ジエチル-、ジブチル-及びジアミル-硫酸塩のようなジアルキル硫酸塩、デシル-、ラウリル-、ミリスチル-およびステアリル-クロライド、ブロマイド及びイオダイドのような長連鎖ハロゲン化物、ベンジル-とフェネチル-臭化物他のようなハロゲン化アラルキルの4つに分割することができる。水あるいは油可溶若しくは分散される生成物はそれらによって得られる。
【０８２５】
薬学的に受容可能な酸付加塩を形成するために使用されうる酸の例は、塩酸、硫酸およびリン酸のような無機酸、シュウ酸、マレイン酸、メタンスルホン酸、コハク酸およびクエン酸のような有機酸を含む。塩基性付加塩類は、本発明の化合物の最終単離中及び精製中にインサイチュウに調製、あるいは別々に、薬学的に受容可能な金属陽イオンの水酸化物、炭酸塩あるいは重炭酸塩のような適切な塩基とあるいはアンモニア若しくは有機第一級、二級若しくは三級アミンと、カルボン酸部分を反応させることによって、調製される。薬学的に受容可能な塩類は以下を含み、制限されない;  制限されないが、非毒性の、アンモニウム、第四級アンモニウム及び、アンモニウム、テトラメチルアンモニウム、テトラエチルアンモニウム、メチルアミン、ジメチルアミン、トリメチルアミン、トリエチルアミン、エチルアミンなどを含むアミン陽イオン、と同様に、ナトリウム、リチウム、カリウム、カルシウム、マグネシウム、アルミニウム塩類などのようなアルカリおよびアルカリ土類金属に基づいた陽イオンを含む。塩基性付加塩類の形成に役立つ他の代表的な有機アミンは、ジエチルアミン、エチレンジアミン、エタノールアミン、ジエタノールアミン、ピペラジンなどを含む。
【０８２６】
ここに使用される用語「薬学的に受容可能なプロドラッグ」は、本発明の化合物の、可能なところで、両性イオン型と同様に、合理的なベネフィット・リスク比が釣り合っていて、それらの意図した用途に有効であり、不適当な毒性、刺激、アレルギー反応など無しに、ヒトおよび下等動物の組織と接する使用に適していて、医学的見識の範囲内の、本発明の化合物のプロドラッグを指す。用語「プロドラッグ」は、例えば、血液中での加水分解によって、上記式の親化合物を生じるように、急速に生体内で転換される化合物を指す。完全な議論は、Higuchi,T及びV.Stella「"Pro-drugs as Novel Delivery Systems," A.C.S. Symposium Series 14, and in "Bioreversible Carriers in Drug Design," in Edward B. Roche (ed.), American Pharmaceutical Association, Pergamon Press, 1987,」で提供され、両方が参照によってここに本発明に組込まれる。
【０８２７】
本発明の化合物は、癌細胞の増殖を阻害において、生体外であるいは生体内で有用である。該化合物は、薬学的に受容可能なキャリアーあるいは賦形剤と共に、単独であるいは組成物において使用されうる。適切な薬学的に受容可能なキャリアーあるいは賦形剤は、例えば、処理作用薬およびドラッグ・デリバリー修飾薬及びエンハンサーを含み、例えばリン酸カルシウム、ステアリン酸マグネシウム、タルク、単糖類、二糖類、デンプン、ゼラチン、セルロース、メチルセルロース、カルボキシルメチルセルロースナトリウム、デキストロース、ヒドロキシプロピル-β-シクロデキストリン、ポリビニル-ピロリジノン、低溶解ワックス、イオン交換樹脂などが例示され、それらは任意の2以上のコンビネーションでも使用可能である。他の適切な薬学的に受容可能な添加剤は、「"Remington's Pharmaceutical Sciences," Mack Pub. Co., New Jersey, 1991」、であり、参照によって本発明に組み込まれる。
【０８２８】
本発明の化合物の有効量は、一般に、ここに記述の分析のうちのどれかによって、当業者に既知の他のMUCl*陽性活性分析によって、或いは、癌の症状の阻害若しくは緩和の検知によって、MUCl*陽性活性を検出可能に阻害するのに十分な量を含む。
【０８２９】
単一の投与剤形を生産するためにキャリア材料と結合しうる有効成分の量は、処置されるホストおよび投与の特別な態様に依存して変わりうる。しかしながら、任意の特別の患者のための特定の投与レベルは、使用された特定の化合物の活性、年齢、体重、健康状態、性、食事、投与時間、投与経路、排出の割合、併用薬、および治療を受ける特別の疾病の重症度を含む様々な要因に依存するであろうことは理解されうる。与えられた状況のための治療上有効な量は、容易にルーチン実験によって決定することができ、通常の臨床技術および判断内にある。
【０８３０】
本発明の目的のために、治療上有効な投与量は、一般に、単一で、若しくは分割して、ホストに投与される総一日量であり、例えば、0.001〜1000mg/kg体重/日、より好適には、1.0〜30mg/kg体重/日である。投与単位組成は、日投与量を構築するためにそのそのような量のサブ倍数(amounts of submultiples)を含みうる。
【０８３１】
本発明の化合物は、従来の無毒な薬学的に受容可能なキャリアー、補助薬および望まれるような賦形剤を含む投与単位処方で、経口、非経口、舌下、エアロゾル状散布若しくは吸入スプレー、直腸であるいは局所的に投与されうる。局所的投与は、さらに経皮的な貼付剤若しくはイオン泳動具のような経皮的な投与の使用を含みうる。ここに使用される用語、非経口投与薬は、皮下注射、静脈内、筋肉内、胸骨内注射あるいは注入技術を含む。
【０８３２】
注射可能な製剤、例えば、水性の無菌注射剤あるいは油性の懸濁剤は、適切な分散あるいは湿潤剤および沈澱防止剤を使用して、既知の手段によって製剤化されうる。無菌注射剤製剤は、さらに1,3-プロパンジオール中溶液として、例えば無毒な非経口的に受容可能な希釈剤若しくは溶剤中の無菌注射剤溶液若しくは懸濁剤でありうる。使用されるかもしれない受容可能な賦形剤および溶剤には、水、リンゲル液および等張食塩水がある。さらに、無菌の不揮発性油は、溶媒として若しくは懸濁ミディウムとして慣例通りに使用されうる。この目的のために、いかなるブランドの不揮発性油も、合成モノ-若しくはジ-グリセリドを含めて使用されうる。さらに、オレイン酸のような脂肪酸は注射可能な製剤に使用可能である。
【０８３３】
薬剤の直腸内投与用坐剤は、薬を、常温では固体であり、直腸温で液体であり、直腸で溶けて、薬をリリースする、ココアバターとポリエチレングリコールのような適切な非刺激性の賦形剤と混合することにより製剤化することができる。
【０８３４】
経口投与用の固体の剤形はカプセル剤、タブレット、丸剤、散剤および果粒剤を含む。そのような固体の剤形では、活性成分は、精製白糖ラクトースあるいはデンプンのような少なくとも1つの不活性の希釈剤と混合されうる。そのような剤形は、さらに通常の手段として、例えば、ステアリン酸マグネシウムのような滑沢剤、不活性希釈剤以外の付加物質も含みうる。カプセル剤、タブレットおよび丸剤の場合には、剤形がさらに緩衝剤を含みうる。タブレットと丸剤は、さらに腸溶性皮膜で製剤化することができる。
【０８３５】
経口投与用の液体投与剤形は、薬学的に受容可能な、水のような当業者が一般に使用する不活性の賦形剤を含む、乳剤、溶液、懸濁、シロップ剤、およびエリキシル剤、を含みうる。そのような組成は、さらに、湿潤剤のような補助薬、乳化および懸濁剤、シクロデキストリンおよび甘味剤、芳香剤、味付け剤を含みうる。
【０８３６】
本発明の化合物は、また、リポソームの形で投与することができる。
当該技術分野で知られているように、リポソームは一般にリン脂質あるいは他の脂質物質に由来する。リポソームは、水性のミディアム中で分散するモノまたは多重層状の水和された液晶によって形成される。リポソームを形成することができる、無毒で、生理学上受容可能で、代謝できる如何なる脂質も使用することができる。リポソームの型での本発明の組成は、本発明の化合物に加えて、安定剤、保存剤、添加剤などを含むことができる。好ましい脂質は、自然でも合成でもよく、リン脂質およびフォスファチジルコリン(レシチン)である。リポソームを形成する方法は当技術分野で知られている。例えば、プレスコットを参照（"Methods in Cell Biology," Volume XIV, Academic Press, New York, 1976, p. 33 et seq.）。
【０８３７】
唯一の活性な薬剤の作用薬として本発明の化合物を投与することができるが、さらに、それらは癌の治療で使用される、1つ以上の他の作用薬と併用して使用することができる。癌の治療のための本発明の化合物と併用して有用な代表的な作用薬は、例えば、イリノテカン、トポテカン、ゲムシタビン、グリーベック、ハーセプチン、5-フルオロウラシル、ロイコボリン、カルボプラチン、シスプラチン、タクサネス、テザシタビン、シクロホスファミド、ビンカアルカロイド、イマチニブ、アントラサイクリン、リツキシマブ、トラスツズマブ、トポイソメラーゼI阻害剤、及び他の癌化学療法剤である。
【０８３８】
本発明の化合物と併用して使用される、上記の化合物は、「the Physicians' Desk Reference (PDR) 47th Edition (1993)」に示される治療量で使用されることがことができ、それは参照によって本発明に組込まれ、当業者に既知の治療有効量で使用される。
【０８３９】
本発明の化合物および他の制癌剤は、推奨された最大の臨床の量、あるいはより低用量で投与することができる。本発明の組成中の活性化合物の投与レベルは、投与経路、その病気の重症度および患者の反応に依存して、所望の治療効果を得るように変えられうる。併用は、個別の組成として、あるいは両方の作用薬を含む単一の剤形として、投与することができる。併用として投与された時、治療薬は、それは同時に若しくは別々のときに与えられる、個別の組成として製剤化することができ、あるいは、単一の組成として与えられる治療薬として製剤化できる。
【０８４０】
慢性骨髄性白血病(CML)のような血液の癌では、染色体転座は実質的に活性化されたBCR-ABLチロシンキナーゼが原因である。そのような患者は、Ablキナーゼ活性の阻害の結果として、GLEEVECR登録商標、低分子チロシンキナーゼ阻害剤、に応答する。しかしながら、進行期疾病を持った多くの患者が、GLEEVECRに最初は応答するが、Ablキナーゼ・ドメインにおける抵抗性を与える突然変異により後で再発する。生体外での研究は、その結果を誘発するために、BCR-Avlが、Rafキナーゼ経路を使うことを実証した。さらに、同じ経路の1つを超えるキナーゼを阻害することは、抵抗性を与える突然変異に対し補足的保護を可能にする。従って、本発明の別の様相では、本発明の化合物は、少なくとも1つの追加の作用薬に対する抵抗性を逆転する若しくは防ぐために、慢性骨髄性白血病(CML)のような、血液の癌の治療において、GLEEVECRのような少なくとも1つの追加の作用薬と併用して使用される。
【０８４１】
本発明の別の様相では、本発明の1つ以上の化合物を含むキットが提供される。代表的なキットは、該化合物のMUCl*阻害量を投与することにより、細胞増殖疾患を治療するための指示書を含む添付文書あるいは他のラベル及び本発明化合物を含む。
【０８４２】
本発明はここに記述された特定の態様によってその範囲が制限されるものではない。確かに、ここに記述されたものに加えて、本発明の様々な変更は、上述の記述及び図面から、当業者には明白である。そのような変更は、本願発明の請求の範囲以内にあることが意図される。以下の実施例は、本発明の実施の具体的態様を示すもので、本発明を限定するものではない。
【実施例】
【０８４３】
実施例1
ナイーブ状態幹細胞の増殖。
【０８４４】
幹細胞、胚若しくは誘導多能性の幹細胞(iPS)が、ヒト組み換えNME7ABを2〜32nM、好適には4〜8nM、より好適には4nMの濃度に含む、最小無血清培地で培養された。表面への付着を促進するために、細胞培養プレートは、MN-C3あるいはC3あるいはMN-C8と呼ばれる抗MUCl*単クローン抗体を、2〜100μg/mLコーティング溶液の濃度で被覆された。濃度は3〜50 ug/mLが好適であり、6〜12.5 ug/mLがもっと好適である。この実験では、MN-C3の12.5μg/mLが使用された。抗体被覆プレートは、幹細胞を植え付ける前に４℃で夜通しインキュベートされた。ロー・キナーゼI阻害剤が、表面への付着を増強するために添加された。ある場合には、NME7ABが、幹細胞をナイーブ様状態に戻すために誘導する、ヒト組み換えNME1二量体と置き換えられた。
【０８４５】
実施例2
プライムド状態の幹細胞の増殖。
【０８４６】
幹細胞、胚若しくは誘導多能性幹細胞(iPS)が、8ng/mLの濃度でヒト組み換えbFGFを含む最小無血清培地で培養された。幹細胞は、追加の非特徴化成長因子及びサイトカインを分泌する、不活性化されたマウス胚繊維芽細胞、aka MEF、の層に植え付けられた。
【０８４７】
実施例3
転移癌の阻害剤の薬剤スクリーン
【０８４８】
ヒトナイーブ状態およびプライムド幹細胞が、正常な分化フリーの増殖を保証するために、少なくとも5継代の間、平行に培養された。幹細胞は1つのウェル当たり50,000細胞で12のウェル細胞培養プレートに植えつけられた。細胞は、それぞれの培地、bFGF培地あるいはNME7AB培地のいずれかにおいて、24時間培養された。その後、示された時、培地は除去され、bFGFまたはNME7ABが欠けている培地と取り替えられた。ナイーブ幹細胞の分化を引き起こすその能力に関してテストされる作用薬が、示された濃度で培地に加えられた。72時間の後、写真は得られ、図1-10に示された。
【０８４９】
実施例4
癌若しくは転移癌の阻害剤用薬剤スクリーン
【０８５０】
ヒトナイーブ状態およびプライムド幹細胞が、正常な分化フリーの増殖を保証するために、少なくとも5継代の間、平行に培養された。幹細胞は1つのウェル当たり50,000細胞で12のウェル細胞培養プレートに植えつけられた。細胞は、それぞれの培地、bFGF培地あるいはNME7AB培地のいずれかにおいて、24時間培養された。その後、培地は除去され、bFGFまたはNME7ABが欠けている培地と取り替えられた。BRD4阻害剤JQ1若しくは不活性立体異性体が、500nM若しくは1μMで加えられ、ナイーブ幹細胞の分化を引き起こすそれらの能力のためにテストした。培地は48時間の後に変更され、BRD4阻害剤を含む新鮮な培地と取り替えられた。4日後に、実験は止められた。写真が取られ、詳しい分析のために細胞ペレットが集められた。図11-16参照。
【０８５１】
実施例5
移動分析
【０８５２】
癌細胞移動実験のために、癌細胞が、Oris細胞移動分析コラーゲン−１被覆96ウェルプレート（Platypus Technologies LLC, Madison, WI）に、種々の濃度に植えつけられた。コラーゲン-1被覆96ウェルプレートは、各々の底に付着している特定の真空プラグを組込み、細胞が広がらないエリアを作った。一旦、細胞が各々のウェルへ高密度で植え付けられたならば、それらは、ウェルの底に付着されるために18 - 24時間の時間を与えられる。24時間後、プラグがプレートから取り除かれ、次に、小分子アナログがウェルに加えられた。イメージは、各々のウェルで得られ、各々のウェルのために時間0(T=0)を表す。イメージは、24、48、72、96および120時間の時間ポイントでウェルで得られた。データ分析は、これら特別な時間ポイントで得られたイメージを使い行われた。イメージは、ImageJ(Rasband, W.S., ImageJ, U. S. National Institutes of Health, Bethesda, Maryland, USA, http://imagej.nih.gov/ij/, 1997-2016.)へ導入され、細胞無しに残っているエリアが計算された。小分子アナログ対DMSOコントロールの有効性を決定するために、各時間ポイントで集められたエリアが、各々のウェルの残存するパーセント・エリアに帰着して、T=0イメージのエリアと比較された。その後、集められたデータは、各実験中のDMSOコントロールに標準化された。
【０８５３】
実施例6
増殖分析
【０８５４】
癌細胞増殖実験のために、癌細胞が、一定の密度(6000細胞/ウェル)で、96-well White-walled/Clear-bottom Tissue Culture Treated plate (Corning Incorporated, Big Flats, NY)に植えつけられた。小分子アナログが、2%FBSを有する培地にT=24時間で添加された。小分子の添加に続いて、細胞は、植えつけ後、24、48、72および96時間での目視確認/検討をおこなうのに、120時間手をつけないまま留置した。120時間マークに、カルセイン螢光分析(Thermo Fisher Scientific, Waltham, MA)が、プレート上で行なわれた。カルセイン螢光分析(終濃度0.5 μM)は、細胞の生存率を評価するために使用された。癌細胞螢光は、TECAN SAFIRE2分光光度計プレート・リーダで測定された。その後、プレートは、オリンパスIX71螢光イメージ顕微鏡を使いイメージ化され、えられたイメージのモンタージュが、ImageJを使用してえられた。
【０８５５】
参照文献
[00855] Nichols J, Smith A. Naive and primed pluripotent states. Cell Stem Cell. 2009;4:487-492.
[00856] Silva J, Barrandon O, Nichols J, Kawaguchi J, Theunissen TW, A Smith. Promotion of reprogramming to ground state pluripotency by signal inhibition. PLoS Biol. 2008;6:e253.
[00857] Gafni O, Weinberger L, Mansour AA, Manor YS, Chomsky E, Ben-Yosef D, Kalma Y, Viukov S, Maza I, Zviran A, Rais Y, Shipony Z, Mukamel Z, Krupalnik V, Zerbib M, Geula S, Caspi I, Schneir D, Shwartz T, Gilad S, Amann-Zalcenstein D, Benjamin S, Amit I, Tanay A, Massarwa R, Novershtern N, Hanna JH. Derivation of novel human ground state naive pluripotent stem cells. Nature. 2013;504:282-286.
[00858] Theunissen TW, Powell BE, Wang H, Mitalipova M, Faddah DA, Reddy J, Fan ZP, Maetzel D, Ganz K, Shi L, Lungjangwa T, Imsoonthornruksa S, Stelzer Y, Rangarajan S, D'Alessio A, Zhang J, Gao Q, Dawlaty MM, Young RA, Gray NS, Jaenisch R. Systematic identification of culture conditions for induction and maintenance of naive human pluripotency. Cell Stem Cell. 2014;15:471-487.
[00859] Smagghe BJ, Stewart AK, Carter MG et al. MUC1* ligand, NM23-H1, is a novel growth factor that maintains human stem cells in a more naive state. PLoS One. 2013;8:e58601.
[00860] Hikita ST, Kosik KS, Clegg DO et al. MUC1* mediates the growth of human pluripotent stem cells. PLoS One. 2008;3:e3312.
[00861] Hanna J, Cheng AW, Saha K, Kim J, Lengner CJ, Soldner F, Cassady JP, Muffat J, Carey BW, Jaenisch R.. Human embryonic stem cells with biological and epigenetic characteristics similar to those of mouse ESCs. Proc Natl Acad Sci U S A. 2010;107:9222-9227.
[00862] Ware CB, Nelson AM, Mecham B, Hesson J, Zhou W, Jonlin EC, Jimenez-Caliani AJ, Deng X, Cavanaugh C, Cook S, Tesar PJ, Okada J, Margaretha L, Sperber H, Choi M, Blau CA, Treuting PM, Hawkins RD, Cirulli V, Ruohola-Baker H.. Derivation of naive human embryonic stem cells. Proc Natl Acad Sci U S A. 2014;111:4484-4489.
[00863] Belkina AC, Nikolajczyk BS, Denis GV. BET protein function is required for inflammation: Brd2 genetic disruption and BET inhibitor JQ1 impair mouse macrophage inflammatory responses. J Immunol. 2013; 190(7):3670-8.
[00864] Tang X, Peng R, Phillips JE, Deguzman J, Ren Y, Apparsundaram S, Luo Q, Bauer CM, Fuentes ME, DeMartino JA, Tyagi G, Garrido R, Hogaboam CM, Denton CP, Holmes AM, Kitson C, Stevenson CS, Budd DC. Assessment of Brd4 inhibition in idiopathic pulmonary fibrosis lung fibroblasts and in vivo models of lung fibrosis. Am J Pathol. 2013 183(2):470-9
[00865] Filippakopoulos P, Qi J, Picaud S, Shen Y, Smith WB, Fedorov O, Morse EM, Keates T, Hickman TT, Felletar I, Philpott M, Munro S, McKeown MR, Wang Y, Christie AL, West N, Cameron MJ, Schwartz B, Heightman TD, La Thangue N, French CA, Wiest O, Kung AL, Knapp S, Bradner JE. Selective inhibition of BET bromodomains. Nature. 2010;468(7327): 1067-73
[00866] Tang X, Peng R, Phillips JE, Deguzman J, Ren Y, Apparsundaram S, Luo Q, Bauer CM, Fuentes ME, DeMartino JA, Tyagi G, Garrido R, Hogaboam CM, Denton CP, Holmes AM, Kitson C, Stevenson CS, Budd DC. Assessment of Brd4 inhibition in idiopathic pulmonary fibrosis lung fibroblasts and in vivo models of lung fibrosis. Am J Pathol. 2013;183(2):470-9
[00867] Horm TM, Bitler BG, Broka DM, Louderbough JM, Schroeder JA. MUC1 drives c-Met-dependent migration and scattering. Mol Cancer Res. 2012 10(12): 1544-54
[00868] Meng XG, Yue SW. Dexamethasone disrupts cytoskeleton organization and migration of T47D Human breast cancer cells by modulating the AKT/mTOR/RhoA pathway. Asian Pac J Cancer Prev. 2014; 15(23): 10245-50.
[00869] Zheng C1, Fang Y, Tong W, Li G, Wu H, Zhou W, Lin Q, Yang F, Yang Z, Wang P, Peng Y, Pang X, Yi Z, Luo J, Liu M, Chen Y. Synthesis and biological evaluation of novel tetrahydro-P-carboline derivatives as antitumor growth and metastasis agents through inhibiting the transforming growth factor-β signaling pathway. J Med Chem. 2014;57(3)
[00870] Carter MG, Smagghe BJ, Stewart AK, Rapley JA, Lynch E, Bernier KJ, Keating KW, Hatziioannou VM, Hartman EJ, Bamdad CC. A Primitive Growth Factor, NME7AB , Is Sufficient to Induce Stable Naive State Human Pluripotency; Reprogramming in This Novel Growth Factor Confers Superior Differentiation. Stem Cells. 2016;34(4):847-59.
[00871] Mani SA, Guo W, Liao MJ, Eaton EN, Ayyanan A, Zhou AY, Brooks M, Reinhard F, Zhang CC, Shipitsin M, Campbell LL, Polyak K, Brisken C, Yang J, Weinberg RA.The epithelial-mesenchymal transition generates cells with properties of stem cells. Cell. 2008; 133(4)
[00872] S. Meng, L. Zhang, Y. Tang, Q. Tu, L. Zheng, L. Yu, D. Murray, J. Cheng, S.H. Kim, X. Zhou and J. Chen, BET Inhibitor JQl Blocks Inflammation and Bone Destruction. J Dent Res. 2014; 93(7): 657-662.
[00873] All of the references cited herein are incorporated by reference in their entirety.
[00874] Those skilled in the art will recognize, or be able to ascertain using no more than routine experimentation, many equivalents to the specific embodiments of the invention specifically described herein.
【図１】
2020512002.tif 000138
【図２】
2020512002.tif 000139
【図３】
2020512002.tif 000140
【図４】
2020512002.tif 000141
【図５】
2020512002.tif 000142
【図６】
2020512002.tif 000143
【図７】
2020512002.tif 000144
【図８】
2020512002.tif 000145
【図９】
2020512002.tif 000146
【図１０】
2020512002.tif 000147
【図１１】
2020512002.tif 000148
【図１２】
2020512002.tif 000149
【図１３】
2020512002.tif 000150
【図１４】
2020512002.tif 000151
【図１５】
2020512002.tif 000152
【図１６】
2020512002.tif 000153
【図１７−１】
2020512002.tif 000154
【図１７−２】
2020512002.tif 000155
【図１７−３】
2020512002.tif 000156
【図１８Ａ】
2020512002.tif 000157
【図１８Ｂ】
2020512002.tif 000158
【図１８Ｃ】
2020512002.tif 000159
【図１８Ｄ】
2020512002.tif 000160
【図１８Ｅ】
2020512002.tif 000161
【図１９−１】
2020512002.tif 000162
【図１９−２】
2020512002.tif 000163
【図２０】
2020512002.tif 000164
【図２１】
2020512002.tif 000165
【図２２】
2020512002.tif 000166
【図２３】
2020512002.tif 000167
【図２４】
2020512002.tif 000168
【図２５】
2020512002.tif 000169
【図２６】
2020512002.tif 000170
【図２７−１】
2020512002.tif 000171
【図２７−２】
2020512002.tif 000172
【図２８−１】
2020512002.tif 000173
【図２８−２】
2020512002.tif 000174
【図２９−１】
2020512002.tif 000175
【図２９−２】
2020512002.tif 000176
【図２９−３】
2020512002.tif 000177
【図３０】
2020512002.tif 000178
【図３１−１】
2020512002.tif 000179
【図３１−２】
2020512002.tif 000180
【図３１−３】
2020512002.tif 000181
【図３２−１】
2020512002.tif 000182
【図３２−２】
2020512002.tif 000183
【図３２−３】
2020512002.tif 000184
【図３３−１】
2020512002.tif 000185
【図３３−２】
2020512002.tif 000186
【図３３−３】
2020512002.tif 000187
【図３４】
2020512002.tif 000188
【図３５−１】
2020512002.tif 000189
【図３５−２】
2020512002.tif 000190
【図３５−３】
2020512002.tif 000191
【図３６】
2020512002.tif 000192
【図３７】
2020512002.tif 000193
【図３８】
2020512002.tif 000194
【図３９】
2020512002.tif 000195
【図４０】
2020512002.tif 000196
【図４１】
2020512002.tif 000197
【図４２】
2020512002.tif 000198
【図４３】
2020512002.tif 000199
【図４４】
2020512002.tif 000200
【図４５】
2020512002.tif 000201
【図４６】
2020512002.tif 000202
【図４７−１】
2020512002.tif 000203
【図４７−２】
2020512002.tif 000204
【図４７−３】
2020512002.tif 000205
【図４８−１】
2020512002.tif 000206
【図４８−２】
2020512002.tif 000207
【図４８−３】
2020512002.tif 000208
【図４９−１】
2020512002.tif 000209
【図４９−２】
2020512002.tif 000210
【図４９−３】
2020512002.tif 000211
【図５０】
2020512002.tif 000212
【図５１−１】
2020512002.tif 000213
【図５１−２】
2020512002.tif 000214
【図５１−３】
2020512002.tif 000215
【図５２−１】
2020512002.tif 000216
【図５２−２】
2020512002.tif 000217
【図５２−３】
2020512002.tif 000218
【図５３−１】
2020512002.tif 000219
【図５３−２】
2020512002.tif 000220
【図５３−３】
2020512002.tif 000221
【図５４−１】
2020512002.tif 000222
【図５４−２】
2020512002.tif 000223
【図５４−３】
2020512002.tif 000224
【図５５】
2020512002.tif 000225
【図５６−１】
2020512002.tif 000226
【図５６−２】
2020512002.tif 000227
【図５６−３】
2020512002.tif 000228
【図５７−１】
2020512002.tif 000229
【図５７−２】
2020512002.tif 000230
【図５７−３】
2020512002.tif 000231
【図５８−１】
2020512002.tif 000232
【図５８−２】
2020512002.tif 000233
【図５８−３】
2020512002.tif 000234
【図５９−１】
2020512002.tif 000235
【図５９−２】
2020512002.tif 000236
【図５９−３】
2020512002.tif 000237
【図６０−１】
2020512002.tif 000238
【図６０−２】
2020512002.tif 000239
【図６０−３】
2020512002.tif 000240
【図６１−１】
2020512002.tif 000241
【図６１−２】
2020512002.tif 000242
【図６１−３】
2020512002.tif 000243
【図６２−１】
2020512002.tif 000244
【図６２−２】
2020512002.tif 000245
【図６２−３】
2020512002.tif 000246
【図６３−１】
2020512002.tif 000247
【図６３−２】
2020512002.tif 000248
【図６３−３】
2020512002.tif 000249
【図６４−１】
2020512002.tif 000250
【図６４−２】
2020512002.tif 000251
【図６４−３】
2020512002.tif 000252
【図６５】
2020512002.tif 000253
【図６６】
2020512002.tif 000254
【図６７】
2020512002.tif 000255
【図６８】
2020512002.tif 000256
【図６９】
2020512002.tif 000257
【図７０】
2020512002.tif 000258
【図７１】
2020512002.tif 000259
【図７２】
2020512002.tif 000260
【図７３】
2020512002.tif 000261
【図７４】
2020512002.tif 000262
【図７５】
2020512002.tif 000263
【図７６】
2020512002.tif 000264
【図７７】
2020512002.tif 000265
【図７８】
2020512002.tif 000266
【図７９】
2020512002.tif 000267
【図８０】
2020512002.tif 000268
【図８１】
2020512002.tif 000269
【図８２】
2020512002.tif 000270
【図８３】
2020512002.tif 000271
【図８４】
2020512002.tif 000272
【図８５】
2020512002.tif 000273
【図８６】
2020512002.tif 000274
【図８７】
2020512002.tif 000275
【図８８】
2020512002.tif 000276
【図８９−１】
2020512002.tif 000277
【図８９−２】
2020512002.tif 000278
【図９０】
2020512002.tif 000279
【図９１】
2020512002.tif 000280
【図９２】
2020512002.tif 000281
【配列表】
2020512002000001.app
【国際調査報告】
2020512002.tif 000282
2020512002.tif 000283
2020512002.tif 000284
2020512002.tif 000285
2020512002.tif 000286
2020512002.tif 000287
2020512002.tif 000288