(57)【要約】  本発明は、ベータ−シトステロール又はその薬学的に許容されるエステルまたはその食用に許容可能なエステルと、有機カルボン酸コフォーマとの共結晶、ベータ−シトステロール１分子当たり１．２５分子の水を有するベータ−シトステロールと、ベータ−シトステロール及び有機カルボン酸の共結晶を含む組み合わせとの水和物結晶形態、並びにベータ−シトステロール１分子当たり１．２５分子の水を有するベータ−シトステロールの水和物結晶形態に関する。本発明はまた、それらの調製方法、及びそれらを含む組成物、医薬、又は栄養補助食品若しくは機能性食品としての使用と並んで、特に、脂質代謝、血液中の脂質の循環レベル、及び／又は組織及び臓器の脂質組成の変化を伴う疾患又は状態の予防及び／又は治療における使用に関する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
ベータ−シトステロール又はその薬学的に許容可能なエステル又は食用に許容可能なエステルと、有機カルボン酸コフォーマとの共結晶。
【請求項２】
ベータ−シトステロールと有機カルボン酸コフォーマの共結晶である、請求項１に記載の共結晶。
【請求項３】
有機カルボン酸が、Ｌ−乳酸、プロピオン酸、チモン酸、コハク酸、アスコルビン酸、没食子酸、２，４−ジヒドロキシ安息香酸、３，４−ジヒドロキシ安息香酸、３−ヒドロキシ安息香酸、４−ヒドロキシ安息香酸及び３，５−ジヒドロキシ安息香酸からなる群から選択される、請求項１〜２のいずれかに記載の共結晶。
【請求項４】
有機カルボン酸が、Ｌ−乳酸、プロピオン酸、チモン酸、コハク酸、アスコルビン酸及び没食子酸からなる群から選択される、請求項１〜３のいずれかに記載の共結晶。
【請求項５】
Ｃｕ−Ｋα放射線、λ＝１．５４０６Åにおいて２．３及び４．６±０．３度２シータに特徴的なピークを含むＸ線ディフラクトグラムを有することを特徴とする、ベータ−シトステロール及びＬ−乳酸一水和物との共結晶である、請求項１〜４のいずれかに記載の共結晶。
【請求項６】
Ｃｕ−Ｋα放射線、λ＝１．５４０６Åにおいて２．２及び４．４±０．３度２シータに特徴的なピークを含むＸ線ディフラクトグラムを有することを特徴とする、ベータ−シトステロール及びプロピオン酸一水和物の共結晶である、請求項１〜４のいずれかに記載の共結晶。
【請求項７】
Ｃｕ−Ｋα放射線、λ＝１．５４０６Åにおいて２．２及び４．５±０．３度２シータに特徴的なピークを含むＸ線ディフラクトグラムを有することを特徴とする、ベータ−シトステロール及びチモン酸一水和物の共結晶である、請求項１〜４のいずれかに記載の共結晶。
【請求項８】
７．９及び１６．３±０．３度２シータ（Ｃｕ−Ｋα放射線、λ＝１．５４０６Å）に特徴的なピークを含むＸ線ディフラクトグラムを有することを特徴とする、ベータ−シトステロール及び没食子酸の共結晶である、請求項１〜４のいずれかに記載の共結晶。
【請求項９】
１１．４及び１６．２±０．３度２シータ（Ｃｕ−Ｋα放射線、λ＝１．５４０６Å）に特徴的なピークを含むＸ線ディフラクトグラムを有することを特徴とする、ベータ−シトステロール及び２，４−ジヒドロキシ安息香酸の共結晶である、請求項１〜４のいずれかに記載の共結晶。
【請求項１０】
２．３及び１５．９±０．３度２シータ（Ｃｕ−Ｋα放射線、λ＝１．５４０６Å）に特徴的なピークを含むＸ線ディフラクトグラムを有することを特徴とする、ベータ−シトステロール及び３，４−ジヒドロキシ安息香酸の共結晶である、請求項１〜４のいずれかに記載の共結晶。
【請求項１１】
１０．７及び１５．９±０．３度２シータ（Ｃｕ−Ｋα放射線、λ＝１．５４０６Å）に特徴的なピークを含むＸ線ディフラクトグラムを有することを特徴とする、ベータ−シトステロール及び３，５−ジヒドロキシ安息香酸の共結晶である、請求項１〜４のいずれかに記載の共結晶。
【請求項１２】
２．３及び４．６±０．３度２シータ（Ｃｕ−Ｋα放射線、λ＝１．５４０６Åにおいて特徴的なピークを含むＸ線ディフラクトグラムを有することを特徴とする、ベータ−シトステロール及び３，５−ジヒドロキシ安息香酸の共結晶である、請求項１〜４のいずれかに記載の共結晶。
【請求項１３】
４．６及び１２．９±０．３度２シータ（Ｃｕ−Ｋα放射線、λ＝１．５４０６Åにおいて特徴的なピークを含むＸ線ディフラクトグラムを有することを特徴とする、ベータ−シトステロール及び３−ヒドロキシ安息香酸の共結晶である、請求項１〜４のいずれかに記載の共結晶。
【請求項１４】
６．６及び１３．５±０．３度２シータ（Ｃｕ−Ｋα放射線、λ＝１．５４０６Åにおいて特徴的なピークを含むＸ線ディフラクトグラムを有することを特徴とする、ベータ−シトステロール及び４−ヒドロキシ安息香酸の共結晶である、請求項１〜４のいずれかに記載の共結晶。
【請求項１５】
１５．８及び１７．９±０．３度２シータ（Ｃｕ−Ｋα放射線、λ＝１．５４０６Åにおいて特徴的なピークを含むＸ線ディフラクトグラムを有することを特徴とする、ベータ−シトステロール及び４−ヒドロキシ安息香酸の共結晶である、請求項１〜４のいずれかに記載の共結晶。
【請求項１６】
ベータ−シトステロール１分子当たり１．２５分子の水を有するベータ−シトステロール又はその薬学的に許容されるエステル又はその食用に許容可能なエステルの水和物結晶形態。
【請求項１７】
Ｃｕ−Ｋα放射線、λ＝１．５４０６Åにおいて３．２及び４．７±０．３度２シータに特徴的なピークを含むＸ線ディフラクトグラムを有することを特徴とする、請求項１６に記載の水和物結晶形態。
【請求項１８】
以下：
請求項１〜１５のいずれかに定義されるベータ−シトステロール及び有機カルボン酸の共結晶と；
ベータ−シトステロール及び有機アルコールの共結晶、或いは請求項１６〜１７のいずれかに定義される１．２５分子の水を有するベータ−シトステロールの水和物結晶形態からなる群から選択されるベータ−シトステロールの結晶とを含む組み合わせ。
【請求項１９】
有効量の、請求項１〜１７のいずれかに定義されるベータ−シトステロールの結晶；或いは、請求項１８に定義される組み合わせと共に、１つ以上の適切で許容可能な賦形剤又は担体を含む組成物。
【請求項２０】
医薬として使用するための；或いは脂質代謝、血液中の脂質の循環レベル、及び／又は組織及び臓器の脂質組成の変化を伴う疾患若しくは状態の予防及び／又は治療で使用するための、請求項１〜１７のいずれかに定義されるベータ−シトステロールの結晶；或いは、請求項１８に定義される組み合わせ；或いは、請求項１９に定義される組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本出願は、２０１７年６月２２日付で出願された欧州特許出願第１７３８２３９０．７号の利益を主張する。
【０００２】
本発明は、ベータ−シトステロール又はその薬学的に許容可能なエステル又はその食用に許容可能なエステルの結晶、それらを調製する方法、及びそれらを含む組成物に関する。また、医薬、栄養補助食品、又は機能性食品としての使用にも関する。
【背景技術】
【０００３】
動脈硬化は、動脈壁の肥厚、硬化、弾性の喪失である。このプロセスは、臓器及び組織への血流を徐々に制限し、アテローム性動脈硬化症によってもたらされる深刻な健康上のリスクにつながる可能性がある。アテローム性動脈硬化症（動脈硬化性血管疾患（ａｒｔｅｒｉｏｓｃｌｅｒｏｔｉｃ  ｖａｓｃｕｌａｒ  ｄｉｓｅａｓｅ）又はＡＳＶＤとも称される）は、動脈壁の中及び上にアテロームが蓄積することによって引き起こされる動脈硬化の特定の形態である。アテロームは、動脈壁の内層に変性物質が蓄積することである。アテロームを形成する変性物質は、主にマクロファージ細胞、脂質（脂肪化合物）、及び線維性結合組織で構成されている。
【０００４】
１つ又は複数の特定の血中脂質画分の上昇の正確な意義は不明であるが、血清コレステロール値の上昇（高コレステロール血症としても知られている）がアテローム性動脈硬化症のプロセスの病因における最も重要な要因であると考えられる十分な証拠が開示されている。したがって、血清コレステロールレベルを低下させる効果的な薬理学的薬剤を見出すため集中的な努力がなされてきた。血中の高レベルのコレステロール、特に高レベルのコレステロール−ＬＤＬ、またかなりの程度、コレステロール−ＨＤＬに対するコレステロール−ＬＤＬの高い比率は、動脈硬化、アテローム性動脈硬化症、並びにその他の血管及び心血管系の変化及び疾患のリスク因子と考えられている。
【０００５】
フィトステロール（植物ステロール）は、植物ステロール及び植物スタノール（フィトスタノール）の両方を包含する植物ステロイド（又はフィトステロイド）であり、コレステロールに類似した構造を持つ化合物である。特に、それらの構造は、炭素側鎖及び／又は二重結合の有無（例えば、シトステロール及びシトスタノール）でのみ異なる。フィトステロールは植物界に広く分布しており、特に植物油及びアボカドに見られる。しかしながら、フィトステロールは人体によって合成されないため、体内での存在は食事の一部としての消費の結果である。
【０００６】
特に、β−シトステロール（又はベータ−シトステロール）は、（１７−（５−エチル−６−メチルヘプタン−２−イル）−１０，１３−ジメチル−２，３，４，７，８，９，１１，１２，１４，１５，１６，１７−ドデカヒドロ−１Ｈ−シクロペンタ［ａ］フェナンスレン−３−オールの国際一般名（ＩＮＮ：Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  Ｎｏｎｐｒｏｐｒｉｅｔａｒｙ  Ｎａｍｅ）である。β−シトステロールは、現在の食事と、多くのフィトステロール系機能性食品又は栄養補助食品に豊富に含まれるフィトステロールである。ベータ−シトステロールの構造は、式（Ｉ）に対応する：
【化１】
2020524704.tif 000002
【０００７】
技術水準で開示された幾つかの臨床研究は、フィトステロールが腸管腔でのコレステロール吸収を阻害することにより、おそらく他のあまり知られていないメカニズムによって血清コレステロールレベルを低下させることを実証した。特に、ベータ−シトステロールは、細胞によるコレステロールの取り込み又はコレステロールのエステル化の妨害によりコレステロールと競合するため、血清総量及びＬＤＬコレステロールレベルの低下に有用である。実際、ベータ−シトステロールは、その適応症についてＦＤＡ（食品医薬品局）によって承認されている。
【０００８】
さらに、動脈硬化に関しては、トリグリセリド等の他の脂質実体にも重点が置かれている。したがって、様々な程度の有効性及び種々の脂質画分に対する特異性を有する低脂血症特性を持つ薬理学的物質を見出すための集中的な努力が行われてきた。
【０００９】
異なる固体形態の有効成分は異なる特性を有する場合があり、例えば溶解度又はバイオアベイラビリティに関して特定の利点を提供することが知られている。したがって、ある種の製剤にはより適した形態もあり、他の異なる製剤には他の形態が適していることから、新たな固体形態の発見は、有効成分の薬物動態学的及び／又は薬理学的又は他の物理化学的特性、そして結果として有効成分を含む医薬製剤の特性を改善することを可能とする。
【００１０】
特に、近年、有効成分の薬物動態データを改善するための実行可能な戦略として共結晶の形成が浮上している。有効成分又は有効成分の塩を少なくとも１つのコフォーマ（共結晶の第２成分）と共結晶化することにより、有効成分の既存の固体形態又はその塩と比較して、独自の特性を有する有効成分の新たな固体状態の形態が作製される。しかしながら、共結晶の形成は予測不可能であり、実際には常に可能とは限らない。さらに、化合物が形成されるまで、化合物の特定の共結晶の特性を予測する方法はない。特定の共結晶を得るための適切なコフォーマと適した条件を見つけるには、多大な時間、労力、資源が必要となる場合がある。
【００１１】
ベータ−シトステロールの一水和物及び半水和物の形態は、技術水準において開示されている。特に、ベータ−シトステロールの一水和物は、アセトンと水の混合物中でのベータ−シトステロールの結晶化により得られ、次に、乾燥大気条件に一水和物を供することにより、対応する半水和物が得られた（非特許文献１；Ｌｅｅｎａ  Ｉ．Ｃｈｒｉｓｔｉａｎｓｅｎ  ｅｔ  ａｌ．“Ａ  ｎｏｖｅｌ  ｍｅｔｈｏｄ  ｏｆ  ｐｒｏｄｕｃｉｎｇ  ａ  ｍｉｃｒｏｃｒｙｓｔａｌｌｉｎｅ  ｂｅｔａ−ｓｉｔｏｓｔｅｒｏｌ  ｓｕｓｐｅｎｓｉｏｎ  ｉｎ  ｏｉｌ”を参照されたい）。さらに、ベータ−シトステロールの他の一水和物及び反水和物の形態は、ポリソルベート８０とのベータ−シトステロールの結晶化によって得られた（非特許文献２；Ｌ．Ｃｈｒｉｓｔｉａｎｓｅｎ  ｅｔ  ａｌ．“Ｅｆｆｅｃｔ  ｏｆ  ｂｅｔａ−ｓｉｔｏｓｔｅｒｏｌ  ｏｎ  ｐｒｅｃｉｐｉｔａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｃｈｏｌｅｓｔｅｒｏｌ  ｆｒｏｍ  ｎｏｎ−ａｑｕｅｏｕｓ  ａｎｄ  ａｑｕｅｏｕｓ  ｓｏｌｕｔｉｏｎｓ”を参照されたい）。最後に、さらなる一水和物及び半水和物の形態も、油懸濁液中のベータ−シトステロールの結晶化により得られた（非特許文献３；Ａｎｎａ  ｖｏｎ  Ｂｏｎｓｄｏｒｆｆ−Ｎｉｋａｎｄｅｒ  ｅｔ  ａｌ．“Ｐｈｙｓｉｃａｌ  ｃｈａｎｇｅｓ  ｏｆ  ｂｅｔａ−ｓｉｔｏｓｔｅｒｏｌ  ｃｒｙｓｔａｌｓ  ｉｎ  ｏｉｌｙ  ｓｕｓｐｅｎｓｉｏｎｓ  ｄｕｒｉｎｇ  ｈｅａｔｉｎｇ”を参照されたい）。上記のベータ−シトステロールの水和物及び半水和物はいずれも、Ｘ線粉末回折（ＸＲＰＤ）によって特性評価されている。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【００１２】
【非特許文献１】Ｅｕｒｏｐｅａｎ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，２００２，ｖｏｌ．１５，ｐｐ．２６１−２６９
【非特許文献２】Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃｓ，２００３，ｖｏｌ．２５４，ｐｐ．１５５−１６６
【非特許文献３】ＡＡＰＳ  Ｐｈａｒｍ．Ｓｃｉ．Ｔｅｃｈ．２００５，ｖｏｌ６（３）ａｒｔｉｃｌｅ５１
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１３】
当該技術分野で知られているところでは、種々の脂質画分に対する様々な程度の有効性及び特異性を有する低脂血症特性を持つ新たな薬理学的物質を見出すニーズが依然として存在している。
【００１４】
本発明者らは、ベータ−シトステロール又はその薬学的に許容可能なエステル又はその食用に許容可能なエステルが、水素結合供与体コフォーマとして有機カルボン酸コフォーマと共結晶を形成できることを見出した。これらの共結晶は、高い薬理活性を有し、例えば、血中コレステロール及び血中トリグリセリド又はトリアシルグリセロールの特定の画分を含む、高血中脂質レベルの低下及び／又は正常血漿若しくは血中脂質レベルの維持に寄与する。ベータ−シトステロール又はその薬学的に許容可能なエステル又はその食用に許容可能なエステルの共結晶の提供は、本発明者らが本発明のかかる共結晶が循環脂質レベルの確定脂質画分を下げるのにはるかに効果的で選択的であるということを見出したことから、血中の脂質レベルの正常化又は維持に関連する課題を克服するための新たな手段を与える。
【００１５】
一方で、本発明者らは、水素結合供与体コフォーマとして有機カルボン酸を有するベータ−シトステロール又はその薬学的に許容可能なエステル又はその食用に許容可能なエステルの共結晶が、既知の無水物形態、技術水準に記載される一水和物形態及び半水和物形態よりも循環コレステロールレベルを低下させるのにはるかに効果的で選択的であることを発見した。
【００１６】
他方で、本発明者らは、水素結合ドナーコフォーマとして有機アルコールを有するベータ−シトステロール又はその薬学的に許容可能なエステル又はその食用に許容可能なエステルの共結晶が、既知の無水物形態形、一水和物形態及び半水和物形態よりも循環トリグリセリドレベルの低下においてはるかに効果的で選択的であることも見出した。
【００１７】
発明者らはまた、ベータ−シトステロール１分子当たり１．２５分子の水を有し、循環トリグリセリドレベルを下げるのに効果的で選択的な、ベータ−シトステロールの水和物結晶形態、又はその薬学的に許容可能なエステル、又はその食用に許容可能なエステルを見出した。
【００１８】
有利には、ベータ−シトステロール、又はその薬学的に許容可能なエステル、又はその食用に許容可能なエステル及び有機カルボン酸の共結晶と、ベータ−シトステロール及び有機アルコールの共結晶との、或いはベータ−シトステロール１分子当たり１．２５分子の水を有するベータ−シトステロール、又はその薬学的に許容可能なエステル、又はその食用に許容可能なエステルの水和物結晶形態との組み合わせは、循環脂質レベルを下げるのにはるかに効果的である。特に、血中のコレステロール及びトリグリセリドの両方のレベルを下げることができるため、この組み合わせは特に有利である。さらに、この組み合わせはまた、かかる投与が２つの有効成分の別個の組成物を含む限り、両方の有効成分を別々に、連続的に又は同時に投与できるため、有利である。
【００１９】
従って、本発明の結晶により、脂質代謝、血液中の脂質の循環レベル、及び／又は組織及び臓器の脂質組成、またそのゲノム特性を含、治療される患者の特定の特性の変化を伴う疾患又は状態の特定の状態に基づいて、異常な血清脂質レベルの個別の治療（精密医療又は精密栄養）を設計することができる。
【発明を解決するための手段】
【００２０】
従って、本発明の第１の態様は、ベータ−シトステロール又はその薬学的に許容可能なエステル又は食用に許容可能なエステルと有機カルボン酸コフォーマの共結晶に関する。
【００２１】
本発明の第２の態様は、ベータ−シトステロール１分子当たり１．２５分子の水を有するベータ−シトステロールの水和物結晶形態、又はその薬学的に許容可能なエステル、又はその食用に許容可能なエステルに関する。
【００２２】
本発明の第３の態様は、ベータ−シトステロール、又はその薬学的に許容可能なエステル、又はその食用に許容可能なエステルと有機カルボン酸との共結晶；及びベータ−シトステロール、又はその薬学的に許容可能なエステル、又はその食用に許容可能なエステルと有機アルコールとの共結晶、或いはベータ−シトステロール１分子当たり１．２５分子の水を有するベータ−シトステロール、又はその薬学的に許容可能なエステル、又はその食用に許容可能なエステルの水和物結晶形態からなる群から選択されるベータ−シトステロールを含む組み合わせに関する。
【００２３】
本発明の第４の態様は、有効量のａ）ベータ−シトステロール、又はその薬学的に許容可能なエステル、又はその食用に許容可能なエステルと有機カルボン酸コフォーマとの共結晶；又はベータ−シトステロール１分子当たり１．２５分子の水を有するベータ−シトステロール、若しくはその薬学的に許容可能なエステル、若しくはその食用に許容可能なエステルの水和物結晶形態；又はベータ−シトステロール、若しくはその薬学的に許容可能なエステル、若しくはその食用に許容可能なエステルと有機カルボン酸との共結晶と；ベータ−シトステロールと有機アルコールの共結晶、及びベータ−シトステロール１分子当たり１．２５分子の水を有するベータ−シトステロール、又はその薬学的に許容可能なエステル、又はその食用に許容可能なエステルの水和物結晶形態からなる群から選択されるベータ−シトステロールの結晶、又はその薬学的に許容可能なエステル、又はその食用の許容可能なエステルとを含む組み合わせのいずれかを、１つ又は複数の適切で許容可能な賦形剤又は担体と共に含む、組成物に関する。
【００２４】
本発明の第５の態様は、医薬として使用するための上に定義されるベータ−シトステロールの共結晶、上に定義されるベータ−シトステロールの水和物結晶形態、或いは上に定義される組み合わせに関する。
【００２５】
医薬として使用するための上に定義される組成物も本発明の一部である。
【００２６】
そして、本発明の第６の態様は、脂質代謝、血液中の脂質の循環レベル、及び／又は組織及び臓器の脂質組成の変化を伴う疾患若しくは状態の予防及び／又は治療で使用するための、上に定義されるベータ−シトステロールの共結晶；上に定義されるベータ−シトステロールの水和物結晶形態、或いは上に定義される組み合わせに関する。
【００２７】
脂質代謝、血液中の脂質の循環レベル、及び／又は組織及び臓器の脂質組成の変化を伴う疾患又は状態の予防及び／又は治療に使用するための上に定義される組成物も本発明の一部である。
【図面の簡単な説明】
【００２８】
【図１】本発明のベータ−シトステロールとＬ−乳酸との共結晶のＸ線粉末ディフラクトグラム（ＸＲＰＤ：Ｘ−ｒａｙ  ｐｏｗｄｅｒ  ｄｉｆｆｒａｃｔｏｇｒａｍ）を示す。スペクトルは、強度（Ｉ；カウント）対２シータ（°）を表す。
【図２】本発明のベータ−シトステロールとプロピオン酸との共結晶のＸ線粉末ディフラクトグラム（ＸＲＰＤ）を示す。スペクトルは、強度（Ｉ；カウント）対２シータ（°）を表す。
【図３】本発明のベータ−シトステロールとプロピオン酸との共結晶のＴＧＡを示す。サーモグラムは、損失重量（％重量／重量）対温度（℃）を表す。
【図４】本発明のベータ−シトステロールとプロピオン酸との共結晶のＤＳＣを示す。ＤＳＣ熱曲線は、熱流（ｍ／Ｗ）対温度（℃）を表す。
【図５】本発明のベータ−シトステロールとチモン酸との共結晶のＸ線粉末ディフラクトグラム（ＸＲＰＤ）を示す。スペクトルは、強度（Ｉ；カウント）対２シータ（°）を表す。
【図６】本発明のベータ−シトステロールとチモン酸との共結晶のＴＧＡを示す。サーモグラムは、損失重量（％重量／重量）対温度（℃）を表す。
【図７】本発明のベータ−シトステロールとチモン酸との共結晶のＤＳＣを示す。ＤＳＣ熱曲線は、熱流（ｍ／Ｗ）対温度（℃）を表す。
【図８】本発明のベータ−シトステロールとベンジルアルコールとの共結晶のＸ線粉末ディフラクトグラム（ＸＲＰＤ）を示す。スペクトルは、強度（Ｉ；カウント）対２シータ（°）を表す。
【図９】本発明のベータ−シトステロールとベンジルアルコールとの共結晶のＴＧＡを示す。サーモグラムは、損失重量（％重量／重量）対温度（℃）を表す。
【図１０】本発明のベータ−シトステロールとベンジルアルコールとの共結晶のＤＳＣを示す。ＤＳＣ熱曲線は、熱流（ｍ／Ｗ）対温度（℃）を表す。
【図１１】本発明のベータ−シトステロールの水和物結晶形態のＸ線粉末ディフラクトグラム（ＸＲＰＤ）を示す。スペクトルは、強度（Ｉ；カウント）対２シータ（°）を表す。
【図１２】本発明のベータ−シトステロールの水和物結晶形態のＴＧＡを示す。サーモグラムは、損失重量（％重量／重量）対温度（℃）を表す。
【図１３】本発明のベータ−シトステロールの水和物結晶形態のＤＳＣを示す。ＤＳＣ熱曲線は、熱流（ｍ／Ｗ）対温度（℃）を表す。
【図１４】１Ａ欄は、初期時間（Ｔ０；治療前）でのｍｇ／ｄＬとして表されるコレステロール濃度を示し；１Ｂ欄は、各実験群（成体雄性、ゴールデンシリアンハムスター）のＴ０に対する経口脂肪負荷５時間後（Ｔ５）でのｍｇ／ｄＬで表されるコレステロール濃度の減少を示す。実験群は次の通りである：Ａはビヒクル群（脂肪負荷）に対応し、Ｂはベータ−シトステロールの市販認可サンプルに対応し、Ｃは本発明のベータ−シトステロールとプロピオン酸との共結晶に対応し、Ｄは本発明のベータ−シトステロールの水和物結晶形態に対応し、Ｅは本発明のベータ−シトステロールとベンジルアルコールとの結晶に対応する。文字のａ及びｂは群間の違いを示し、ａはＤ群対Ａ群のｐ＝０．０６４を示し、ｂはＥ群対Ａ群のｐ＝０．０５９を示す。
【図１５】各実験群における初期時間（Ｔ０；治療前；左列）及び経口脂肪負荷後５時間（Ｔ５−右列）でのｍｇ／ｄＬとして表される血漿トリグリセリド濃度を示す。実験群は次の通りである：Ａはビヒクル群（脂肪負荷）に対応し、Ｂはベータ−シトステロールの市販認可サンプルに対応し、Ｃは本発明のベータ−シトステロールとプロピオン酸との共結晶に対応し、Ｄは本発明のベータ−シトステロールの水和物結晶形態に対応し、Ｅは本発明のベータ−シトステロールとベンジルアルコールとの結晶に対応する。化合物Ｃは、化合物Ａと化合物Ｂの両方と比較して、Ｔ５でより低いレベルを示し、ここで、文字のａ及びｂは群間の違いを示し、ａはｐ＝０．０１３、ｂはｐ＝０．０３２を示す。
【図１６】異なる実験群における初期時間（Ｔ０）での基礎レベルと比較した、治療後５時間（Ｔ５）に関連するβ−シトステロール血漿レベルの変動パーセンテージを示す。実験群は次の通りである：Ａはビヒクル群（脂肪負荷）に対応し、Ｂはベータ−シトステロールの市販認可サンプルに対応し、Ｃは本発明のベータ−シトステロールとプロピオン酸との共結晶に対応し、Ｄは本発明のベータ−シトステロールの水和物結晶形態に対応し、Ｅは本発明のベータ−シトステロールとベンジルアルコールとの結晶に対応する。化合物Ｂは対照（ａ群）と比較して減少を示し、化合物Ｄは対照（ａ群）と比較して減少を示した。文字のａ及びｂは群間の違いを示し、ａはｐ＝０．０６１を示し、ｂはｐ＝０．０２０を示す。
【図１７】本発明のベータ−シトステロールと没食子酸との共結晶のＸ線粉末ディフラクトグラム（ＸＲＰＤ）を示す。スペクトルは、強度（Ｉ；カウント）対２シータ（°）を表す。
【図１８】本発明のベータ−シトステロールと没食子酸との共結晶のＴＧＡを示す。サーモグラムは、損失重量（％重量／重量）対温度（℃）を表す。
【図１９】本発明のベータ−シトステロールと没食子酸との共結晶のＤＳＣを示す。ＤＳＣ熱曲線は、熱流（ｍ／Ｗ）対温度（℃）を表す。
【図２０】本発明のベータ−シトステロールと２，４−ジヒドロキシ安息香酸との共結晶のＸ線粉末ディフラクトグラム（ＸＲＰＤ）を示す。スペクトルは、強度（Ｉ；カウント）対２シータ（°）を表す。
【図２１】本発明のベータ−シトステロールと２，４−ジヒドロキシ安息香酸との共結晶のＴＧＡを示す。サーモグラムは、損失重量（％重量／重量）対温度（℃）を表す。
【図２２】本発明のベータ−シトステロールと２，４−ジヒドロキシ安息香酸との共結晶のＤＳＣを示す。ＤＳＣ熱曲線は、熱流（ｍ／Ｗ）対温度（℃）を表す。
【図２３】本発明のベータ−シトステロールと３，４−ジヒドロキシ安息香酸との共結晶のＸ線粉末ディフラクトグラム（ＸＲＰＤ）を示す。スペクトルは、強度（Ｉ；カウント）対２シータ（°）を表す。
【図２４】本発明のベータ−シトステロールと３，４−ジヒドロキシ安息香酸との共結晶のＴＧＡを示す。サーモグラムは、損失重量（％重量／重量）対温度（℃）を表す。
【図２５】本発明のベータ−シトステロールと３，４−ジヒドロキシ安息香酸との共結晶のＤＳＣを示す。ＤＳＣ熱曲線は、熱流（ｍ／Ｗ）対温度（℃）を表す。
【図２６】本発明のベータ−シトステロールと３，５−ジヒドロキシ安息香酸との形態Ａの共結晶のＸ線粉末ディフラクトグラム（ＸＲＰＤ）を示す。スペクトルは、強度（Ｉ；カウント）対２シータ（°）を表す。
【図２７】本発明のベータ−シトステロールと３，５−ジヒドロキシ安息香酸との形態Ａの共結晶のＴＧＡを示す。サーモグラムは、損失重量（％重量／重量）対温度（℃）を表す。
【図２８】本発明のベータ−シトステロールと３，５−ジヒドロキシ安息香酸形態７との共結晶の形態ＡのＤＳＣを示す。ＤＳＣ熱曲線は、熱流（ｍ／Ｗ）対温度（℃）を表す。
【図２９】本発明のベータ−シトステロールと３，５−ジヒドロキシ安息香酸との形態Ｂの共結晶のＸ線粉末ディフラクトグラム（ＸＲＰＤ）を示す。スペクトルは、強度（Ｉ；カウント）対２シータ（°）を表す。
【図３０】本発明のベータ−シトステロールと３，５−ジヒドロキシ安息香酸との形態Ｂの共結晶のＴＧＡを示す。サーモグラムは、損失重量（％重量／重量）対温度（℃）を表す。
【図３１】本発明のベータ−シトステロールと３，５−ジヒドロキシ安息香酸との形態Ｂの共結晶のＤＳＣを示す。ＤＳＣ熱曲線は、熱流（ｍ／Ｗ）対温度（℃）を表す。
【図３２】本発明のベータ−シトステロールと３−ヒドロキシ安息香酸との共結晶のＸ線粉末ディフラクトグラム（ＸＲＰＤ）を示す。スペクトルは、強度（Ｉ；カウント）対２シータ（°）を表す。
【図３３】本発明のベータ−シトステロールと３−ヒドロキシ安息香酸との共結晶のＴＧＡを示す。サーモグラムは、損失重量（％重量／重量）対温度（℃）を表す。
【図３４】本発明のベータ−シトステロールと３−ヒドロキシ安息香酸との共結晶のＤＳＣを示す。ＤＳＣ熱曲線は、熱流（ｍ／Ｗ）対温度（℃）を表す。
【図３５】本発明のベータ−シトステロールと４−ヒドロキシ安息香酸の共結晶との形態ＡのＸ線粉末ディフラクトグラム（ＸＲＰＤ）を示す。スペクトルは、強度（Ｉ；カウント）対２シータ（°）を表す。
【図３６】本発明のベータ−シトステロールと４−ヒドロキシ安息香酸との形態Ａの共結晶のＴＧＡを示す。サーモグラムは、損失重量（％重量／重量）対温度（℃）を表す。
【図３７】本発明のベータ−シトステロールと４−ヒドロキシ安息香酸との形態Ａの共結晶のＤＳＣを示す。ＤＳＣ熱曲線は、熱流（ｍ／Ｗ）対温度（℃）を表す。
【図３８】本発明のベータ−シトステロールと４−ヒドロキシ安息香酸との形態Ｂの共結晶のＸ線粉末ディフラクトグラム（ＸＲＰＤ）を示す。スペクトルは、強度（Ｉ；カウント）対２シータ（°）を表す。
【図３９】本発明のベータ−シトステロールと４−ヒドロキシ安息香酸との形態Ｂの共結晶のＴＧＡを示す。サーモグラムは、損失重量（％重量／重量）対温度（℃）を表す。
【図４０】本発明のベータ−シトステロールと４−ヒドロキシ安息香酸との形態Ｂの共結晶のＤＳＣを示す。ＤＳＣ熱曲線は、熱流（ｍ／Ｗ）対温度（℃）を表す。
【図４１】Ｐｈ．Ｅｕｒ．のベータ−シトステロールの標準サンプルのＨＰＬＣ分析のクロマトグラムを示す。クロマトグラムは、面積（ＡＵ）対分（分）を表す。クロマトグラムにおいて：１はスチグマステロールである６．４３３分のピーク１に対応し；２はカンペステロールである７．９３３分のピーク２に対応し、３はベータ−シトステロールである９．２６７分のピーク３に対応する。
【図４２】ベータ−シトステロールの循環レベルを示す。データは、対照群（対照群Ａ、１．０に設定）に対する参照群と試験群の血漿中ベータ−シトステロールのフォールド変化率として示される。平均値±ＳＥＭ（ｎ＝７〜８動物／群）。ａ≠ｂ≠ｃ（ｐ≦０．０５０、一元配置分散分析及びＬＳＤポスト−ホック検定）；＊参照Ｂ１に対する相違（ｐ＜０．０５、スチューデントのｔ検定）。実験群は次の通りである：比較群Ａは、比較サンプルＡ（対照）が与えられた高脂肪食に対応し、比較群Ｂ１は、比較サンプルＢ１−市販のベータ−シトステロール（参照）が与えられた高脂肪食に対応し、比較群Ｂ２は、比較サンプルＢ２−市販のベータ−シトステロール（参照）が与えられた高脂肪食に対応し、試験群Ｃは、サンプルＣ（ベータ−シトステロールとプロピオン酸形態２との共結晶）が与えられた高脂肪食に対応し、試験群Ｇ１は、サンプルＧ１（ベータ−シトステロールと没食子酸形態５との共結晶）が与えられた高脂肪食に対応し、試験群Ｇ２は、サンプルＧ２（ベータ−シトステロールと没食子酸形態５との共結晶）を与えられた高脂肪食に対応する。文字のａ及びｂは群間の違いを示し、ａはｐ＝０．０１３を示し、ｂはｐ＝０．０３２を示す。
【発明を実施するための形態】
【００２９】
本出願において本明細書で使用される全ての用語は、特に明記しない限り、当該技術分野で知られている通常の意味で理解されるものとする。本出願で使用される特定の用語の他のより具体的な定義は以下に示す通りであり、特に明示的に定義された定義がより広い定義を提供しない限り、明細書及び特許請求の範囲全体に均一に適用されることを意図している。
【００３０】
本発明の目的のため、与えられた範囲は、範囲の下限及び上限の両方の終点を含む。温度、時間、共結晶成分の比率等の与えられた範囲は、特に明記されていない限り、およそと見なされるべきである。
【００３１】
本発明の目的のため、「共結晶」という用語は、本明細書では、室温（２０℃〜２５℃）で単位格子を構成し、弱い相互作用で相互作用する少なくとも２つの異なる成分を有する結晶実体を指す。したがって、共結晶では、１つの成分が１つ又は複数の中性成分と結晶化する。共結晶は、結晶格子内に１つ又は複数の溶媒分子を含んでもよい。したがって、「共結晶水和物」又は「水和物共結晶」という用語は同じ意味を持ち、交換可能に使用される。それらの用語は、結晶格子の溶媒として水を含む共結晶を指す。
【００３２】
「によって得られる共結晶」という表現は、それを得るためのプロセスによって本発明の各特定の共結晶を定義するため本明細書で使用され、本明細書に開示される対応するプロセスのいずれかによって得ることができる生成物を指す。本発明の目的のために、「得ることができる」、「得られる」という表現、及び同等の表現は交換可能に使用され、いずれにしても、「得ることができる」という表現は「得られる」という表現を包含する。
【００３３】
「体積パーセント（％）」又は「体積／体積％」又は「ｖ／ｖ％」という用語は同じ意味を持ち、交換可能に使用される。それらの用語は総溶液量に対する溶質の量を指す。
【００３４】
Ｘ線ディフラクトグラムの特徴的なピークの値が与えられる場合、これらは「近似」値であるとされる。値は、対応する一覧又は表に示される値であり、Ｃｕ−Ｋα放射線λ＝１．５４０６ÅのＸ線回折計で測定された±０．３度２シータであることを理解される。
【００３５】
本発明の共結晶の成分の比が明示される場合、それは共結晶を形成する成分間のモル比を指す。「モル比」という用語は、共結晶の各成分の化学量論量をモル数で表すために使用されている。モル比は、１Ｈ  ＮＭＲ（プロトン核磁気共鳴）、熱重量分析（ＴＧＡ）又は単結晶Ｘ線回折（ＳＣＸＲＤ）によって決定され得る。ＮＭＲ又はＴＧＡに従ってモル比の値が与えられる場合、これらは測定誤差のために「近似」値であるとされる。モル比が言及される場合、それはモル比±０．２％に対応することを理解されたい。結果のばらつきは、１Ｈ  ＮＭＲ及びＴＧＡの機器の固有の感度によるものである。
【００３６】
本明細書に開示される「スラリー化」という用語は、化合物の懸濁液を撹拌することにより洗浄又は分散するために溶媒を使用する任意のプロセスを指す。
【００３７】
「室温」という用語は、加熱又は冷却を行わない環境の温度を指し、一般に２０℃〜２５℃で構成される。
【００３８】
「一晩」という用語は、１０時間〜２０時間の時間間隔を指す。
【００３９】
「１日」という用語は、２０時間〜２８時間の時間間隔を指す。
【００４０】
「混和性有機溶媒」という用語は、組み合わされた場合、単一相を形成する有機溶媒を指し、これは、こうして得られた混合物がとりわけ成分濃度及び温度の特定の条件下で「単相」であることを意味する。さらに、「水混和性有機溶媒」という用語は、反応が行われる温度で水と単相溶液を形成することができる有機溶媒を指す。本明細書で使用される「単相」という用語は、液相を１つだけ含む反応媒質、及びかかる反応媒質を使用する方法も指す。単相媒質の幾つかの例は、水、水溶液、及び互いに混和する水溶液及び有機溶媒を含む溶液である。
【００４１】
「非混和性有機溶媒」という用語は、組み合わされた場合、２つの相を形成する有機溶媒を指し、これは、こうして得られた混合物がとりわけ成分濃度及び温度の特定の条件下で「二相性」であることを意味する。さらに、「水非混和性有機溶媒」という用語は、反応が行われる温度で水と二相を形成することができる有機溶媒を指す。本明細書で使用される場合、「二相性」という用語は、２つの非混和性液相、例えば水相と水非混和性有機溶媒相とを含む反応媒体を指す。「二相性」という用語は、かかる反応媒質を使用する方法を説明するためにも使用され得る。
【００４２】
「アルキル」という用語は、明細書又は特許請求の範囲で指定される数の炭素原子を含む飽和した直鎖の又は分岐した炭化水素鎖を指す。例としては、とりわけ、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ブチル、イソブチル、ｓｅｃ−ブチル、及びｔｅｒｔ−ブチルの基が挙げられる。
【００４３】
「（Ｃ６〜Ｃ１２）アリール」という用語は、１つ又は複数の環及び６個〜１２個の環員を含む芳香族の既知の環系を指し、全ての環員は炭素原子を含む。（Ｃ６〜Ｃ１２）アリールの例としては、フェニル及びナフタレンが挙げられる。本明細書で使用される「既知の環系」という用語は、化学的に実現可能であり、当該技術分野で知られている環系を指し、したがって化学的に不可能な環系を除外することを意図する。
【００４４】
本発明で定義される基（Ｃ１〜Ｃ８）アルキル及び（Ｃ６〜Ｃ１２）アリールは、非置換であってもよく、又は本明細書に記載される通り置換基され得る、任意の利用可能な位置に配置される置換基である。
【００４５】
「アルケニル」という用語は、明細書又は特許請求の範囲に明示される数の炭素原子を含み、少なくとも１つの二重結合も含む直鎖の又は分岐した炭化水素鎖を指す。例として、エテニル、２−プロペニル、及び１−プロペニルが挙げられる。
【００４６】
「アルキニル」という用語は、明細書又は特許請求の範囲で指定される数の炭素原子を含み、少なくとも１つの三重結合も含む直鎖の又は分岐した炭化水素鎖を指す。
【００４７】
本明細書で使用される「食用」という用語は、非毒性で消費に適していることを意味する。
【００４８】
上述のように、本発明の第１の態様は、ベータ−シトステロール、又はその薬学的に許容可能なエステル、又はその食用に許容可能なエステルと、水素結合供与体コフォーマとの共結晶の提供である。
【００４９】
一実施形態では、ベータ−シトステロールと水素結合供与体コフォーマとのベータ−シトステロールの共結晶は、薬学的に許容可能なエステルの形態である。本明細書で使用される「薬学的に許容可能なエステル」という用語は、無機酸又は有機酸を含む薬学的に許容可能な非毒性酸から形成されるエステルを包含する。エステルに関する制限はないが、医学において治療目的で使用される場合は、薬学的に許容可能でなくてはならない。
【００５０】
一実施形態では、ベータ−シトステロールと水素結合供与体コフォーマとのベータ−シトステロールの共結晶は、食用に許容可能なエステルの形態である。本明細書で使用される「食用に許容可能なエステル」という用語は、無機酸又は有機酸を含む食用に許容可能な非毒性酸から形成されるエステルを包含する。
【００５１】
ベータ−シトステロールのエステルは、無機酸及び有機酸を含む薬学的に許容可能な非毒性酸及び食用酸から調製され得る。かかる酸としては、とりわけ、酢酸、酪酸、プロピオン酸、ベンゼンスルホン酸、安息香酸、カンファースルホン酸、クエン酸、エタンスルホン酸、フマル酸、グルコン酸、グルタミン酸、臭化水素酸、塩酸、乳酸、マレイン酸、リンゴ酸、マンデル酸、メタン硫酸、リン酸、コハク酸、硫酸、酒石酸及びｐ−トルエン硫酸が挙げられる。かかる酸としては、とりわけ（Ｃ６〜Ｃ２２）アルキル脂肪酸、（Ｃ６〜Ｃ２２）アルケニル脂肪酸も挙げられる。（Ｃ６〜Ｃ２２）アルキル脂肪酸には、（Ｃ６〜Ｃ１２）アルキル鎖の脂肪族尾部を含む中鎖脂肪酸、及び（Ｃ１３〜Ｃ２２）アルキル鎖の脂肪族尾部を含む長鎖脂肪酸が含まれる。（Ｃ６〜Ｃ２２）アルケニル脂肪酸には、（Ｃ６〜Ｃ１２）アルケニル鎖の脂肪族尾部を含む中鎖脂肪酸、及び（Ｃ１３〜Ｃ２２）アルケニル鎖の脂肪族尾部を含む長鎖脂肪酸が含まれる。適切な脂肪酸の例としては、とりわけ、オレイン酸、ポリ酸、ステアリン酸、エイコサペンタエン酸、ドコサヘキサエン酸、ラウリン酸及びミリスチン酸が挙げられる。
【００５２】
一実施形態では、共結晶は、ベータ−シトステロールと水素結合供与体コフォーマとの共結晶である。
【００５３】
「水素結合供与体」という用語は、水素結合を介して電気陰性原子と相互作用することができる少なくとも１つの電気陽性水素原子を有する化合物を指す。
【００５４】
一実施形態では、ベータ−シトステロールの共結晶は、水素結合供与体コフォーマが有機カルボン酸及び有機アルコールからなる群から選択される。
【００５５】
一実施形態では、ベータ−シトステロールの共結晶は、ベータ−シトステロールと、有機カルボン酸及び有機アルコールからなる群から選択される水素結合供与体コフォーマとのの水和物共結晶であり、一水和物共結晶であることが好ましい。
【００５６】
「有機カルボン酸」という用語は、少なくとも１つの−ＣＯＯＨ基を含む薬学的に許容可能な有機酸を指す。一実施形態では、ベータ−シトステロールの共結晶は、水素結合供与体コフォーマが、Ｒ１−（ＣＯＯＨ）ｎ及び
【化２】
2020524704.tif 000003
の化合物から選択される有機カルボン酸であり、式中、Ｒ１は、（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル、（Ｃ２〜Ｃ６）アルケニル、及び（Ｃ２〜Ｃ６）アルキニルからなる群より選択され、任意に１つ又は複数のヒドロキシル基で置換され；Ｒ２は、Ｈ及びＯＨからなる群から選択され；Ｒ３は、Ｈ及び−ＣＯＯＨからなる群から選択され；Ｒ４は（ｃ１〜Ｃ６）アルキルであり；ｎは１〜３から選択された整数である。
【００５７】
一実施形態では、ベータ−シトステロールの共結晶は、水素結合供与体コフォーマが、Ｌ−乳酸、プロピオン酸、チモン酸、コハク酸、アスコルビン酸、没食子酸、２，４−ジヒドロキシ安息香酸、３，４−ジヒドロキシ安息香酸、３−ヒドロキシ安息香酸、４−ヒドロキシ安息香酸、及び３，５−ジヒドロキシ安息香酸からなる群から選択される有機カルボン酸であるものである。一実施形態では、ベータ−シトステロールの共結晶は、水素結合供与体コフォーマが、Ｌ−乳酸、チモン酸、コハク酸、アスコルビン酸、没食子酸、２，４−ジヒドロキシ安息香酸、３，４−ジヒドロキシ安息香酸、３−ヒドロキシ安息香酸、４−ヒドロキシ安息香酸、及び３，５−ジヒドロキシ安息香酸からなる群から選択される有機カルボン酸であるものである。
【００５８】
一実施形態では、本発明の共結晶は、共結晶形態１と名付けられた、ベータ−シトステロールとＬ−乳酸との共結晶である。本発明の目的のため、Ｌ−乳酸は、２−（Ｓ）ヒドロキシプロパン酸の国際一般名（ＩＮＮ）であり、ＣＡＳ番号７９−３３−４を有する。Ｌ−乳酸の構造は以下の通りである。
【化３】
2020524704.tif 000004
【００５９】
一実施形態では、本発明のベータ−シトステロールとＬ−乳酸との共結晶は、およそ２．３及び４．６±０．３度２シータ（Ｃｕ−Ｋα放射線、λ＝１．５４０６Å）に特徴的なピークを含むＸ線粉末ディフラクトグラムを有することを特徴とする。一実施形態では、本発明のベータ−シトステロールとＬ−乳酸との共結晶は、１４．５、１５．７、及び１７．５±０．３度２シータ（Ｃｕ−Ｋα放射線、λ＝１．５４０６Å）に更に特徴的なピークを含むＸ線粉末ディフラクトグラムを有することを特徴とする。
【００６０】
より具体的には、本発明のベータ−シトステロールとＬ−乳酸との共結晶は、Ｘ線粉末ディフラクトグラムにおいて、表１に示される、度２θ（°）の２シータ単位で表されるピークのパターンを示すことを特徴とする。
【００６１】
表１：選択されたピークのリスト（相対強度が１％以上のピークのみを示す）：
【数１】
2020524704.tif 000005
【００６２】
本発明のベータ−シトステロールとＬ−乳酸との共結晶は、図１のようなＸ線ディフラクトグラムを更に特徴とし得る。
【００６３】
一実施形態では、本発明の共結晶は、共結晶形態２と名付けられた、ベータ−シトステロールとプロピオン酸との共結晶である。本発明の目的のため、プロピオン酸は、プロパン酸の国際一般名（ＩＮＮ）であり、ＣＡＳ番号７９−０９−４を有する。プロピオン酸の構造は以下の通りである：
【化４】
2020524704.tif 000006
【００６４】
一実施形態では、本発明のベータ−シトステロールとプロピオン酸との共結晶は、およそ２．２及び４．４±０．３度２シータ（Ｃｕ−Ｋα放射線、λ＝１．５４０６Å）に特徴的なピークを含むＸ線粉末ディフラクトグラムを有することを特徴とする。一実施形態では、本発明のベータ−シトステロールとプロピオン酸との共結晶は、１１．８、１２．４、及び１４．８±０．３度２シータ（Ｃｕ−Ｋα放射線、λ＝１．５４０６Å）に更に特徴的なピークを含むＸ線粉末ディフラクトグラムを有することを特徴とする。
【００６５】
より具体的には、本発明のベータ−シトステロールとプロピオン酸との共結晶は、Ｘ線粉末ディフラクトグラムにおいて、表２に示される度２θ（°）の２シータ単位で表されるピークのパターンを示すことを特徴とする。
【００６６】
表２：選択されるピークの一覧（０．５％以上の相対強度を持つピークのみを示す）：
【数２】
2020524704.tif 000007
【００６７】
本発明のベータ−シトステロールとプロピオン酸との共結晶は、図２のようなＸ線ディフラクトグラムを更に特徴とし得る。
【００６８】
本発明のベータ−シトステロールとプロピオン酸との共結晶の熱重量分析（ＴＧ）分析は、３０℃〜３００℃で３５．０％の第１の重量減少を更に特徴とし得る（図３を参照されたい）。
【００６９】
本発明のベータ−シトステロールとプロピオン酸との共結晶は、ＤＳＣ（示差走査熱量測定）分析による、７９．２Ｊ／ｇの関連する熱を伴う４４°Ｃでの幅広い吸熱現象（４つの現象の重複）を更に特徴とし得る（図４を参照されたい）。
【００７０】
一実施形態では、下記式のベータ−シトステロールとプロピオン酸との共結晶は、モル比２：１である。
【００７１】
一実施形態では、共結晶ベータ−シトステロール及びプロピオン酸は水和物共結晶であり；好ましくは、ベータ−シトステロールとプロピオン酸との共結晶は、２：１のベータ−シトステロール：プロピオン酸のモル比を有する一水和物共結晶である。
【００７２】
単結晶Ｘ線回折によって得られた上に定義される共結晶ベータ−シトステロール：プロピオン酸の構造データは一水和物共結晶に対応し、以下に示される：
【数３】
2020524704.tif 000008
【００７３】
一実施形態では、本発明の共結晶は、共結晶形態３と名付けられた、ベータ−シトステロールとチモン酸との共結晶である。本発明の目的では、チモン酸は、４−ヒドロキシ−２−メチル−５−オキソ−２，５−ジヒドロフラン−２−カルボン酸の国際一般名（ＩＮＮ）であり、ＣＡＳ番号２４８９１−７１−２を有する。チモン酸の構造は以下の通りである：
【化５】
2020524704.tif 000009
【００７４】
一実施形態では、本発明のベータ−シトステロールとチモン酸との共結晶は、およそ２．２及び４．５±０．３度２シータ（Ｃｕ−Ｋα放射線、λ＝１．５４０６Å）に特徴的なピークを含むＸ線粉末ディフラクトグラムを有することを特徴とする。一実施形態では、本発明のベータ−シトステロールとチモン酸との共結晶は、６．７、１５．４、及び１８．０±０．３度２シータ（Ｃｕ−Ｋα放射線、λ＝１．５４０６Å）に更に特徴的なピークを含むＸ線粉末ディフラクトグラムを有することを特徴とする。
【００７５】
より具体的には、本発明のベータ−シトステロールとチモン酸との共結晶は、Ｘ線粉末ディフラクトグラムにおいて、表３に示される度２θ（°）の２シータ単位で表されるピークのパターンを示すことを特徴とする。
【００７６】
表３：選択されたピークの一覧（相対強度が１％以上のピークのみを示す）：
【数４】
2020524704.tif 000010
【００７７】
本発明のベータ−シトステロールとチモン酸との共結晶は、図５のようなＸ線ディフラクトグラムを更に特徴とし得る。
【００７８】
本発明のベータ−シトステロールとチモン酸との共結晶の熱重量分析（ＴＧ）分析は、３０℃〜１１８℃で２．４％の第１の重量減少、及び１１８℃〜３００℃での３６．６％の第２の重量減少を更に特徴とし得る（図６を参照されたい）。
【００７９】
本発明のベータ−シトステロールとチモン酸との共結晶は、ＤＳＣ（示差走査熱量測定）分析による、１５．９Ｊ／ｇの関連する熱を伴う５９℃での第１の広い吸熱現象、及び４２．１Ｊ／ｇの関連する熱を伴う１２５℃での第２の吸熱現象を更に特徴とし得る（図７を参照されたい）。
【００８０】
一実施形態では、下記式のベータ−シトステロールとチモン酸との共結晶は、モル比２：１である。
【００８１】
一実施形態では、共結晶ベータ−シトステロール及びチモン酸は水和物共結晶であり；好ましくは、ベータ−シトステロールとチモン酸との共結晶は、ベータ−シトステロール：チモン酸のモル比２：１を有する一水和物共結晶である。
【００８２】
一実施形態では、本発明の共結晶は、共結晶形態５と名付けられた、ベータ−シトステロールと没食子酸との共結晶である。本発明の目的では、没食子酸は、３，４，５−トリヒドロキシ安息香酸の国際一般名（ＩＮＮ）であり、ＣＡＳ番号１４９−９１−７を有する。没食子酸の構造は以下の通りである：
【化６】
2020524704.tif 000011
【００８３】
一実施形態では、本発明のベータ−シトステロールと没食子酸との共結晶は、およそ７．９及び１６．３±０．３度２シータ（Ｃｕ−Ｋα放射線、λ＝１．５４０６Å）に特徴的なピークを含むＸ線粉末ディフラクトグラムを有することを特徴とする。一実施形態では、本発明のベータ−シトステロールと没食子酸との共結晶は、２．３、１３．０、及び１５．９±０．３度２シータ（Ｃｕ−Ｋα放射線、λ＝１．５４０６Å）に更に特徴的なピークを含むＸ線粉末ディフラクトグラムを有することを特徴とする。
【００８４】
より具体的には、本発明のベータ−シトステロールと没食子酸との共結晶は、Ｘ線粉末ディフラクトグラムにおいて、表６に示される度２θ（°）の２シータ単位で表されるピークのパターンを示すことを特徴とする。
【００８５】
表６：選択されたピークの一覧（相対強度が１％以上のピークのみを示す）：
【数５】
2020524704.tif 000012
【００８６】
本発明のベータ−シトステロールと没食子酸との共結晶は、図１７のようなＸ線ディフラクトグラムを更に特徴とし得る。
【００８７】
本発明のベータ−シトステロールと没食子酸との共結晶の熱重量分析（ＴＧ）分析は、１９４℃で始まる熱融解／分解現象を更に特徴とし得る（図１８を参照されたい）。
【００８８】
本発明のベータ−シトステロールと没食子酸との共結晶は、ＤＳＣ（示差走査熱量測定）分析による、６３．８Ｊ／ｇの関連する熱を伴う１９４°Ｃでの吸熱現象を特徴とすることもある（図１９を参照されたい）。
【００８９】
一実施形態では、下記式のベータ−シトステロールと２，４−ジヒドロキシ安息香酸との共結晶は、モル比２：１である。
【００９０】
一実施形態では、本発明の共結晶は、共結晶形態６と名付けられた、ベータ−シトステロールと２，４−ジヒドロキシ安息香酸との共結晶である。本発明の目的では、２，４−ジヒドロキシ安息香酸はＣＡＳ番号８９−８６−１を有する。２，４−ジヒドロキシ安息香酸の構造は以下の通りである：
【化７】
2020524704.tif 000013
【００９１】
一実施形態では、本発明のベータ−シトステロールと２，４−ジヒドロキシ安息香酸との共結晶は、およそ１１．４及び１６．２±０．３度２シータ（Ｃｕ−Ｋα放射線、λ＝１．５４０６Å）に特徴的なピークを含むＸ線粉末ディフラクトグラムを有することを特徴とする。一実施形態では、本発明のベータ−シトステロールと２，４−ジヒドロキシ安息香酸との共結晶は、４．６、１５．８、及び１７．９±０．３度２シータ（Ｃｕ−Ｋα放射線、λ＝１．５４０６Å）に更に特徴的なピークを含むＸ線粉末ディフラクトグラムを有することを特徴とする。
【００９２】
より具体的には、本発明のベータ−シトステロールと２，４−ジヒドロキシ安息香酸との共結晶は、Ｘ線粉末ディフラクトグラムにおいて、表７に示される度２θ（°）の２シータ単位で表されるピークのパターンを示すことを特徴とする。
【００９３】
表７：選択されたピークの一覧（相対強度が１％以上のピークのみを示す）：
【数６】
2020524704.tif 000014
【００９４】
本発明のベータ−シトステロールと２，４−ジヒドロキシ安息香酸との共結晶は、図２０のようなＸ線ディフラクトグラムを更に特徴とし得る。
【００９５】
本発明のベータ−シトステロールと２，４−ジヒドロキシ安息香酸との共結晶の熱重量分析（ＴＧ）分析は、１５１℃で始まる熱融解／分解現象を更に特徴とし得る（図２１を参照されたい）。
【００９６】
また、本発明のベータ−シトステロールと２，４−ジヒドロキシ安息香酸との共結晶は、５１．７Ｊ／ｇの全関連する熱を伴う２つの重複した現象：ＤＳＣ（示差走査熱量測定）分析による、１５１℃での第１の広い吸熱現象及び１６７℃のピークを伴う第２の吸熱減少を更に特徴とし得る（図２２を参照されたい）。
【００９７】
一実施形態では、下記式のベータ−シトステロールと２，４−ジヒドロキシ安息香酸との共結晶は、モル比１：１である。
【００９８】
一実施形態では、本発明の共結晶は、共結晶形態７と名付けられた、ベータ−シトステロールと３，４−ジヒドロキシ安息香酸との共結晶である。本発明の目的では、３，４−ジヒドロキシ安息香酸はＣＡＳ番号９９−５０−３を有する。３，４−ジヒドロキシ安息香酸の構造は以下の通りである：
【化８】
2020524704.tif 000015
【００９９】
一実施形態では、本発明のベータ−シトステロールと３，４−ジヒドロキシ安息香酸との共結晶は、２．３及び１５．９±０．３度２シータ（Ｃｕ−Ｋα放射線、λ＝１．５４０６Å）に特徴的なピークを含むＸ線粉末ディフラクトグラムを有することを特徴とする。一実施形態では、本発明のベータ−シトステロールと３，４−ジヒドロキシ安息香酸との共結晶は、４．６、１５．１、及び１６．６±０．３度２シータ（Ｃｕ−Ｋα放射線、λ＝１．５４０６Å）に更に特徴的なピークを含むＸ線粉末ディフラクトグラムを有することを特徴とする。
【０１００】
より具体的には、本発明のベータ−シトステロールと３，４−ジヒドロキシ安息香酸との共結晶は、Ｘ線粉末ディフラクトグラムにおいて、表８に示される度２θ（°）の２シータ単位で表されるピークのパターンを示すことを特徴とする。
【０１０１】
表８：選択されたピークの一覧（相対強度が１％以上のピークのみを示す）：
【数７】
2020524704.tif 000016
【０１０２】
本発明のベータ−シトステロールと３，４−ジヒドロキシ安息香酸との共結晶は、図２３のようなＸ線ディフラクトグラムを更に特徴とし得る。
【０１０３】
本発明のベータ−シトステロールと３，４−ジヒドロキシ安息香酸との共結晶の熱重量分析（ＴＧ）分析は、２９℃〜１１６℃で２．１％の重量減少を更に特徴とし得る（図２４を参照されたい）。
【０１０４】
本発明のベータ−シトステロールと３，４−ジヒドロキシ安息香酸との共結晶は、ＤＳＣ（示差走査熱量測定）分析による、４５．４Ｊ／ｇの関連する熱を伴う３８℃での第１の広い吸熱現象、及び４６．４Ｊ／ｇの関連する熱を伴う１５７℃での第２の吸熱現象を更に特徴とし得る（図２５を参照されたい）。
【０１０５】
一実施形態では、下記式のベータ−シトステロールと３，４−ジヒドロキシ安息香酸との共結晶は、モル比１：２である。
【０１０６】
一実施形態では、共結晶ベータ−シトステロール及び３，４−ジヒドロキシ安息香酸は水和物共結晶であり；好ましくは、ベータ−シトステロールと３，４−ジヒドロキシ安息香酸との共結晶は、１：２のベータ−シトステロール：３，４−ジヒドロキシ安息香酸のモル比を有する一水和物共結晶である。
【０１０７】
一実施形態では、本発明の共結晶は、ベータ−シトステロールと３，５−ジヒドロキシ安息香酸との共結晶である。本発明の目的では、３，５−ジヒドロキシ安息香酸はＣＡＳ番号９９−１０−５を有する。３，５−ジヒドロキシ安息香酸の構造以下の通りである：
【化９】
2020524704.tif 000017
【０１０８】
一実施形態では、本発明の共結晶は、ベータ−シトステロールと、形態８と名付けられた３，５−ジヒドロキシ安息香酸との形態Ａの共結晶である。
【０１０９】
一実施形態では、本発明のベータ−シトステロールと３，５−ジヒドロキシ安息香酸との形態Ａの共結晶は、１０．７及び１５．９±０．３度２シータ（Ｃｕ−Ｋα放射線、λ＝１．５４０６Å）に特徴的なピークを含むＸ線粉末ディフラクトグラムを有することを特徴とする。一実施形態では、本発明のベータ−シトステロールと３，５−ジヒドロキシ安息香酸との形態Ａの共結晶は、１３．４、１６．３、及び１７．９±０．３度２シータ（Ｃｕ−Ｋα放射線、λ＝１．５４０６Å）に更に特徴的なピークを含むＸ線粉末ディフラクトグラムを有することを特徴とする。
【０１１０】
より具体的には、本発明のベータ−シトステロールと３，５−ジヒドロキシ安息香酸との形態Ａの共結晶は、Ｘ線粉末ディフラクトグラムにおいて、表９に示される度２θ（°）の２シータ単位で表されるピークのパターンを示すことを特徴とする。
【０１１１】
表９：選択されたピークの一覧（相対強度が１％以上のピークのみを示す）：
【数８】
2020524704.tif 000018
【０１１２】
本発明のベータ−シトステロールと３，５−ジヒドロキシ安息香酸との形態Ａの共結晶は、図２６のようなＸ線ディフラクトグラムを更に特徴とし得る。
【０１１３】
本発明のベータ−シトステロールと３，５−ジヒドロキシ安息香酸との形態Ａの共結晶の熱重量分析（ＴＧ）分析は、２９℃〜８９℃で１．９％の重量減少を更に特徴とし得る（図２７を参照されたい）。
【０１１４】
本発明のベータ−シトステロールと３，５−ジヒドロキシ安息香酸との形態Ａの共結晶は、ＤＳＣ（示差走査熱量測定）分析による、２４．８Ｊ／ｇの関連する熱を伴う４５℃での第１の広い吸熱現象、９．６Ｊ／ｇの関連する熱を伴う８７℃での第２の吸熱現象、及び４３．０Ｊ／ｇの関連する熱を伴う１６２℃での第３の吸熱現象を更に特徴とし得る（図２８を参照されたい）。
【０１１５】
一実施形態では、以下の式のベータ−シトステロールと３，５−ジヒドロキシ安息香酸との形態Ａの共結晶は、２：１のモル比である。
【０１１６】
一実施形態では、形態Ａの共結晶ベータ−シトステロール及び３，５−ジヒドロキシ安息香酸は水和物共結晶であり；好ましくは、ベータ−シトステロールと３，５−ジヒドロキシ安息香酸との形態Ａの共結晶は、１：１のベータ−シトステロール：３，５−ジヒドロキシ安息香酸のモル比を有する一水和物共結晶である。
【０１１７】
一実施形態では、本発明の共結晶は、ベータ−シトステロールと、形態９と名付けられた３，５−ヒドロキシ安息香酸との形態Ｂの共結晶である。
【０１１８】
一実施形態では、本発明のベータ−シトステロールと３，５−ジヒドロキシ安息香酸との形態Ｂの共結晶は、２．３及び４．６±０．３度２シータ（Ｃｕ−Ｋα放射線、λ＝１．５４０６Å）に特徴的なピークを含むＸ線粉末ディフラクトグラムを有することを特徴とする。一実施形態では、本発明のベータ−シトステロールと３，５−ジヒドロキシ安息香酸との形態Ｂの共結晶は、１０．７、１２．９、及び１５．３±０．３度２シータ（Ｃｕ−Ｋα放射線、λ＝１．５４０６Å）に更に特徴的なピークを含むＸ線粉末ディフラクトグラムを有することを特徴とする。
【０１１９】
より具体的には、本発明のベータ−シトステロールと３，５−ジヒドロキシ安息香酸との形態Ｂの共結晶は、Ｘ線粉末ディフラクトグラムにおいて、表１０に示される度２θ（°）の２シータ単位で表されるピークのパターンを示すことを特徴とする。
【０１２０】
表１０：選択されたピークの一覧（相対強度が１％以上のピークのみを示す）：
【数９】
2020524704.tif 000019
【０１２１】
本発明のベータ−シトステロールと３，５−ジヒドロキシ安息香酸との形態Ｂの共結晶は、図２９のようなＸ線ディフラクトグラムを更に特徴とし得る。
【０１２２】
本発明のベータ−シトステロールと３，５−ジヒドロキシ安息香酸との形態Ｂの共結晶の熱重量分析（ＴＧ）分析は、２９℃〜７１℃で３．１％の重量減少を更に特徴とし得る（図３０を参照されたい）。
【０１２３】
本発明のベータ−シトステロールと３，５−ジヒドロキシ安息香酸との形態Ｂの共結晶は、ＤＳＣ（示差走査熱量測定）分析による、４０．７Ｊ／ｇの関連する熱を伴う４８℃での第１の広い吸熱現象、３９．７Ｊ／ｇの関連する熱を伴う１６２℃での第２の吸熱現象、及び１７．２Ｊ／ｇの関連する熱を伴う２３１℃での第３の吸熱現象を更に特徴とし得る（図３１を参照されたい）。
【０１２４】
一実施形態では、以下の式のベータ−シトステロールと３，５−ジヒドロキシ安息香酸との形態Ｂの共結晶は、１：１のモル比である。
【０１２５】
一実施形態では、形態Ｂの共結晶ベータ−シトステロール及び３，５−ジヒドロキシ安息香酸は水和物共結晶であり；好ましくは、ベータ−シトステロールと３，５−ジヒドロキシ安息香酸との形態Ｂの共結晶は、１：１のベータ−シトステロール：３，５−ジヒドロキシ安息香酸のモル比を有する一水和物共結晶である。
【０１２６】
一実施形態では、本発明の共結晶は、共結晶形態１０と名付けられた、ベータ−シトステロールと３−ヒドロキシ安息香酸との共結晶である。本発明の目的では、３−ヒドロキシ安息香酸はＣＡＳ番号９９−０６−９を有する。３−ヒドロキシ安息香酸の構造は以下の通りである。
【化１０】
2020524704.tif 000020
【０１２７】
一実施形態では、本発明のベータ−シトステロールと３−ヒドロキシ安息香酸との共結晶は、４．６及び１２．９±０．３度２シータ（Ｃｕ−Ｋα放射線、λ＝１．５４０６Å）に特徴的なピークを含むＸ線粉末ディフラクトグラムを有することを特徴とする。一実施形態では、本発明のベータ−シトステロールと３−ヒドロキシ安息香酸との共結晶は、１１．６、１３．３、及び１５．２±０．３度２シータ（Ｃｕ−Ｋα放射線、λ＝１．５４０６Å）に更に特徴的なピークを含むＸ線粉末ディフラクトグラムを有することを特徴とする。
【０１２８】
より具体的には、本発明のベータ−シトステロールと３−ヒドロキシ安息香酸との共結晶は、Ｘ線粉末ディフラクトグラムにおいて、表１１に示される度２θ（°）の２シータ単位で表されるピークのパターンを示すことを特徴とする。
【０１２９】
表１１：選択されたピークの一覧（相対強度が１％以上のピークのみを示す）：
【数１０】
2020524704.tif 000021
【０１３０】
本発明のベータ−シトステロールと３−ヒドロキシ安息香酸との共結晶は、図３２のようなＸ線ディフラクトグラムを更に特徴とし得る。
【０１３１】
本発明のベータ−シトステロールと３−ヒドロキシ安息香酸との共結晶の熱重量分析（ＴＧ）分析は、２９℃〜１０９℃で１．０％の重量減少を更に特徴とし得る（図３３を参照されたい）。
【０１３２】
本発明のベータ−シトステロールと３−ヒドロキシ安息香酸との共結晶は、ＤＳＣ（示差走査熱量測定）分析による、２９．３Ｊ／ｇの関連する熱を伴う７２℃での第１の広い吸熱現象、及び４０．１Ｊ／ｇの関連する熱を伴う１２５℃での第２の吸熱現象を更に特徴とし得る（図３４を参照されたい）。
【０１３３】
一実施形態では、ベータ−シトステロールと下式の３−ヒドロキシ安息香酸との共結晶は、２：１のモル比である。
【０１３４】
一実施形態では、共結晶ベータ−シトステロール及び３−ヒドロキシ安息香酸は水和物共結晶であり；好ましくは、ベータ−シトステロールと３−ヒドロキシ安息香酸との共結晶は、２：１のベータ−シトステロール：３−ヒドロキシ安息香酸のモル比を有する一水和物共結晶である。
【０１３５】
一実施形態では、本発明の共結晶は、ベータ−シトステロールと４−ヒドロキシ安息香酸との共結晶である。本発明の目的では、４−ヒドロキシ安息香酸はＣＡＳ番号９９−９６−７を有する。４−ヒドロキシ安息香酸の構造は以下の通りである：
【化１１】
2020524704.tif 000022
【０１３６】
一実施形態では、本発明の共結晶は、ベータシトステロールと形態１１と名付けられた４−ヒドロキシ安息香酸との形態Ａの共結晶である。
【０１３７】
一実施形態では、本発明のベータ−シトステロールと４−ヒドロキシ安息香酸との形態Ａの共結晶は、６．６及び１３．５±０．３度２シータ（Ｃｕ−Ｋα放射線、λ＝１．５４０６Å）に特徴的なピークを含むＸ線粉末ディフラクトグラムを有することを特徴とする。一実施形態では、本発明のベータ−シトステロールと４−ヒドロキシ安息香酸との形態Ａの共結晶は、２．２、１３．１及び１４．２±０．３度２シータ（Ｃｕ−Ｋα放射線、λ＝１．５４０６Å）に更に特徴的なピークを含むＸ線粉末ディフラクトグラムを有することを特徴とする。
【０１３８】
より具体的には、本発明のベータ−シトステロールと４−ヒドロキシ安息香酸との形態Ａの共結晶は、Ｘ線粉末ディフラクトグラムにおいて、表１２に示される度２θ（°）の２シータ単位で表されるピークのパターンを示すことを特徴とする。
【０１３９】
表１２：選択されたピークの一覧（相対強度が１％以上のピークのみを示す）：
【数１１】
2020524704.tif 000023
【０１４０】
本発明のベータ−シトステロールと４−ヒドロキシ安息香酸との形態Ａの共結晶は、図３５のようなＸ線ディフラクトグラムを更に特徴とし得る。
【０１４１】
本発明のベータ−シトステロールと４−ヒドロキシ安息香酸との形態Ａの共結晶の熱重量分析（ＴＧ）分析は、２９℃〜８６℃で１．３％の重量減少を更に特徴とし得る（図３６を参照されたい）。
【０１４２】
本発明のベータ−シトステロールと４−ヒドロキシ安息香酸との形態Ａの共結晶は、ＤＳＣ（示差走査熱量測定）分析による、３５．１Ｊ／ｇの関連する熱を伴う３５℃での第１の広い吸熱現象、及び４６．８Ｊ／ｇの関連する熱を伴う１６３℃での第２の吸熱現象を更に特徴とし得る（図３７を参照されたい）。
【０１４３】
一実施形態では、以下の式のベータ−シトステロールと４−ヒドロキシ安息香酸との形態Ａの共結晶は、１：１のモル比である。
【０１４４】
一実施形態では、形態Ａの共結晶ベータ−シトステロール及び４−ヒドロキシ安息香酸は水和物共結晶であり；好ましくは、ベータ−シトステロールと４−ヒドロキシ安息香酸との形態Ａの共結晶は、１：１のベータ−シトステロール：４−ヒドロキシ安息香酸のモル比を有する半和物共結晶である。
【０１４５】
一実施形態では、本発明の共結晶は、ベータ−シトステロールと形態１２と名付けられた４−ヒドロキシ安息香酸とのＢ形態の共結晶である。
【０１４６】
一実施形態では、本発明のベータ−シトステロールと４−ヒドロキシ安息香酸との形態Ｂの共結晶は、１５．８及び１７．９±０．３度２シータ（Ｃｕ−Ｋα放射線、λ＝１．５４０６Å）に特徴的なピークを含むＸ線粉末ディフラクトグラムを有することを特徴とする。一実施形態では、本発明のベータ−シトステロールと４−ヒドロキシ安息香酸との形態Ｂの共結晶は２．３、１２．４、及び１６．８±０．３度２シータ（Ｃｕ−Ｋα放射線、λ＝１．５４０６Å）に更に特徴的なピークを含むＸ線粉末ディフラクトグラムを有することを特徴とする。
【０１４７】
より具体的には、本発明のベータ−シトステロールと４−ヒドロキシ安息香酸との形態Ｂの共結晶は、Ｘ線粉末ディフラクトグラムにおいて、表１３に示される度２θ（°）の２シータ単位で表されるピークのパターンを示すことを特徴とする。
【０１４８】
表１３：選択されたピークの一覧（相対強度が１％以上のピークのみを示す）：
【数１２】
2020524704.tif 000024
【０１４９】
本発明のベータ−シトステロールと４−ヒドロキシ安息香酸との形態Ｂの共結晶は、図３８のようなＸ線ディフラクトグラムを更に特徴とし得る。
【０１５０】
本発明のベータ−シトステロールと４−ヒドロキシ安息香酸との形態Ｂの共結晶の熱重量分析（ＴＧ）分析は、１４５℃で始まる熱融解／分解現象を更に特徴とし得る（図３９を参照されたい）。
【０１５１】
本発明のベータ−シトステロールと４−ヒドロキシ安息香酸との形態Ｂの共結晶は、ＤＳＣ（示差走査熱量測定）分析による、６０．７Ｊ／ｇの関連する熱を伴う１４５°Ｃでの幅広い吸熱現象を特徴とすることもある（図４０を参照されたい）。
【０１５２】
一実施形態では、下記式のベータ−シトステロールと４−ヒドロキシ安息香酸との形態Ｂの共結晶はモル比１：１である。
【０１５３】
上述のように、本発明の第１の態様は、ベータ−シトステロールと水素結合供与体コフォーマとの共結晶の提供である。一実施形態では、ベータ−シトステロールと水素結合供与体コフォーマとの共結晶は、水素結合供与体コフォーマが有機アルコールであるものである。「有機アルコール」という用語は、１つ又は複数のヒドロキシル基を持つ有機化合物を指す。一実施形態では、ベータ−シトステロールの共結晶は、水素結合供与体コフォーマが式Ｒ５ＣＨ２ＯＨの有機アルコールであり、Ｒ５が（Ｃ１〜Ｃ８）アルキル、（Ｃ６〜Ｃ１２）アリール、及び（Ｃ６〜Ｃ１２）アリ−ル−（Ｃ１〜Ｃ８）アルキルから選択される。
【０１５４】
一実施形態では、ベータ−シトステロールの共結晶は、水素結合供与体コフォーマがベンジルアルコール、エタノール及びイソプロパノールからなる群から選択される有機アルコールであるものである。
【０１５５】
一実施形態では、本発明の共結晶は、共結晶形態４と名付けられた、ベータ−シトステロールとベンジルアルコールとの共結晶である。本発明の目的では、ベンジルアルコールは、フェニルメタノールの国際一般名（ＩＮＮ）であり、ＣＡＳ番号１００−５１−６を有する。ベンジルアルコールの構造は以下の通りである：
【化１２】
2020524704.tif 000025
【０１５６】
一実施形態では、本発明のベータ−シトステロールとベンジルアルコールの共結晶は、およそ２．３及び４．７±０．３度２シータ（Ｃｕ−Ｋα放射線、λ＝１．５４０６Å）に特徴的なピークを含むＸ線粉末ディフラクトグラムを有することを特徴とする。一実施形態では、本発明のベータ−シトステロールとベンジルアルコールの共結晶は、９．０、１１．７及び１５．０±０．３度２シータ（Ｃｕ−Ｋα放射線、λ＝１．５４０６Å）に更に特徴的なピークを含むＸ線粉末ディフラクトグラムを有することを特徴とする。
【０１５７】
より具体的には、本発明のベータ−シトステロールとベンジルアルコールとの共結晶は、表４に示す度２θ（°）の２シータ単位で表されるピークのパターンをＸ線粉末ディフラクトグラムに示すことを特徴とする。
【０１５８】
表４：選択されたピークのリスト（相対強度が０．５％以上のピークのみを示す）：
【数１３】
2020524704.tif 000026
【０１５９】
本発明のベータ−シトステロールとベンジルアルコールとの共結晶は、図８のようなＸ線ディフラクトグラムを更に特徴とし得る。
【０１６０】
本発明のベータ−シトステロールとベンジルアルコールとの共結晶の熱重量分析（ＴＧ）分析は、ベータ−シトステロールとベンジルアルコールにより、３０℃〜２６０℃で３１．９％の第１の重量減少、２６０℃〜３００℃での１．２％の第２の重量減少も特徴とする（図９を参照されたい）。
【０１６１】
本発明のベータ−シトステロールとベンジルアルコールとの共結晶は、ＤＳＣ（示差走査熱量測定）分析による、４２．９Ｊ／ｇの関連する熱を伴う４５℃での第１の広い吸熱現象、及び１２５℃での第２の広い吸熱現象及び２０６．２Ｊ／の関連する熱を更に特徴とし得る（図１０を参照されたい）。
【０１６２】
一実施形態では、下記式のベータ−シトステロールとベンジルアルコールとの共結晶は、モル比４：１である。
【０１６３】
一実施形態では、共結晶ベータ−シトステロール及びベンジルアルコールは水和物共結晶であり；好ましくは、ベータ−シトステロールとベンジルアルコールとの共結晶は、ベータ−シトステロール：ベンジルアルコールのモル比が４：１の一水和物共結晶である。
【０１６４】
単結晶Ｘ線回折によって得られた上に定義される共結晶ベータ−シトステロール：ベンジルアルコールの構造データは一水和物共結晶に対応し、以下に示される：
【数１４】
2020524704.tif 000027
【０１６５】
本発明の第２の態様は、ベータ−シトステロール１分子当たり１．２５分子の水を有するベータ−シトステロール、又はその薬学的に許容可能なエステル、又はその食用に許容可能なエステルの水和物結晶形態に関する。一実施形態では、本発明のベータ−シトステロールの水和物結晶のベータ−シトステロールは、その薬学的に許容可能なエステル又はその食用に許容可能なエステルの形態である。水分子の値が与えられる場合、測定誤差のためにこれらは「近似」値であるとされる。１．２５の水分含量が言及される場合、それは１〜１．５０で構成される水分含量に対応すると理解されたい。
【０１６６】
一実施形態では、本発明のベータ−シトステロールの水和物結晶形態は、およそ３．２及び４．７±０．３度２シータ（Ｃｕ−Ｋα放射線、λ＝１．５４０６Å）に特徴的なピークを含むＸ線粉末ディフラクトグラムを有することを特徴とする。一実施形態において、本発明のベータ−シトステロールの水和物結晶形態は、９．０、１２．１及び１４．８±０．３度２シータ（Ｃｕ−Ｋα放射線、λ＝１．５４０６Å）に更に特徴的なピークを含むＸ線粉末ディフラクトグラムを有することを特徴とする。
【０１６７】
より具体的には、本発明のベータ−シトステロールの水和物結晶形態は、Ｘ線粉末ディフラクトグラムにおいて、表５に示される度２θ単位（°）の２シータ単位で表されるピークのパターンを示すことを特徴とする。
【０１６８】
表５：選択されたピークの一覧（相対強度が１％以上のピークのみを示す）：
【数１５】
2020524704.tif 000028
【０１６９】
本発明のベータ−シトステロールの水和物結晶形態は、図１１のようなＸ線ディフラクトグラムを更に特徴とし得る。
【０１７０】
本発明のベータ−シトステロールの水和物結晶形態の熱重量分析（ＴＧ）分析は、ベータ−シトステロール１分子当たり１．２５分子のＨ２Ｏに起因する、３３℃〜１５４℃での５．１％の第１の重量減少（理論上は５．８％の重量減少）、及び１５４℃〜３００℃での２．６％の第２の重量減少を更に特徴とし得る（図１２を参照されたい）。
【０１７１】
本発明のベータ−シトステロールの水和物結晶形態は、ＤＳＣ（示差走査熱量測定）分析による９４．８Ｊ／ｇの関連する熱を伴う７７℃での第１の広い吸熱現象及び５８．６Ｊ／ｇの関連する熱を伴う１３５℃での第２の吸熱現象を更に特徴とし得る（図１３を参照されたい）。
【０１７２】
本発明の第１及び第２の態様のベータ−シトステロール又はその薬学的に許与可能なエステル又はその食用に許容可能なエステルの結晶形態の調製方法の提供も本発明の一部である。本発明のベータ−シトステロールの結晶形態は、純粋な形態として、又は種々のフィトステロール及びフィトスタノールを含む混合物として調製されてもよい。
【０１７３】
本発明の結晶形態の調製方法は、ベータ−シトステロール、又は代替としてフィトステロール／フィトスタノールの混合物）を対応するコフォーマと接触させることを含む。本発明において出発物質として使用されるベータ−シトステロールは商業的に入手可能である。通常、ベータ−シトステロールは結晶形態の混合物として入手可能である。この混合物は、無水ベータ−シトステロールと水和ベータ−シトステロールによって形成され得て、これらは、例えば４０：６０〜６０：４０等の種々の比率であってもよい。特に、ベータ−シトステロールの無水物と水和物の混合物は５０：５０である。
【０１７４】
一実施形態では、本発明のベータ−シトステロールとＬ−乳酸との共結晶（共結晶形態１）の調製方法は、（ａ）Ｌ−乳酸の混合物中のベータ−シトステロールを混和性有機溶媒中にスラリー化すること；（ｂ）そのようにして得られた共結晶を単離することを含む。
【０１７５】
一実施形態では、工程（ａ）は、混和性有機溶媒；好ましくは、（Ｃ１〜Ｃ６）アルコール、（Ｃ１〜Ｃ４）アルキル−ＣＯ−（Ｃ１〜Ｃ４）アルキル、（Ｃ１〜Ｃ４）アルキル−ＣＯ−Ｏ−（Ｃ１〜Ｃ４）アルキル及びその混合物の存在下で実施される。「アルコール」という用語は、少なくとも１つの水素原子がヒドロキシル基で置換され、明細書又は特許請求の範囲で指定される数の炭素原子を含む「アルカン」を指す。「アルカン」という用語は、明細書又は特許請求の範囲で指定される数の炭素原子を含む飽和された分岐した又は直鎖の炭化水素を指す。例としては、メタノール、エタノール、ｎ−プロパノール、イソプロパノール、ブタノール、イソブタノール、及びｓｅｃ−ブタノールが挙げられる。「アルキル」という用語は上に定義される通りである。一実施形態では、工程（ａ）は酢酸エチルの存在下で実施される。
【０１７６】
一実施形態では、単離工程（ｂ）は、例えば、次の操作：濾過、真空下での濾過、デカンテーション及び遠心分離、又は他の適切な技術の１つ又は複数によって、水等の溶媒を除去することを含んでもよい。好ましくは、工程（ｂ）は、固体の濾過、及びそれに続く洗浄工程；好ましくは水を用いて実行される。一実施形態では、工程（ｂ）は、単離された共結晶を乾燥させる、好ましくは、共結晶は室温で、好ましくは真空条件下で乾燥させることを更に含む。一般に、真空には０．５ｍｂａｒ〜３ｍｂａｒの圧力がかかる。
【０１７７】
また、本発明のベータ−シトステロールとＬ−乳酸との共結晶は、その調製プロセスによって定義され得る。したがって、本発明のこの態様は、任意に、プロセスの任意の好ましい又は特定の実施形態、及び上に開示されるプロセスの特徴の幾つかの可能な組み合わせを含む、前述のプロセスのいずれかによって得られる、上で定義されるベータ−シトステロールとＬ−乳酸との共結晶（共結晶形態１）として製剤化され得る。
【０１７８】
一実施形態では、本発明のベータ−シトステロールとプロピオン酸との共結晶（共結晶形態２）の調製プロセスは、（ａ’）ベータ−シトステロール及びプロピオン酸を１：１０〜１：５０のモル比で混合すること、（ｂ’）そのようにして得られた共結晶を分離することを含む。
【０１７９】
一実施形態では、本発明のベータ−シトステロールとプロピオン酸との共結晶（共結晶形態２）の調製方法は、工程（ａ’）で得られた混合物に貧溶媒を添加することを含む、追加の工程（ｃ）を更に含む。本明細書で使用される場合、「貧溶媒」という用語は、結晶の溶解性が制限されているか又は溶解性がない、結晶化を促進できる溶媒を指す。一実施形態では、貧溶媒は、水、ペンタン、ヘプタン、エチレングリコール、メタノール、アセトニトリル、及びエタノールからなる群から選択される。
【０１８０】
一実施形態では、本発明のベータ−シトステロールとプロピオン酸と共結晶（共結晶形態２）の調製方法の工程（ａ’）は、ベータ−シトステロール及びプロピオン酸を１：２〜１：１００；好ましくは１：１０〜１：５０のモル比で混合することを含む。
【０１８１】
一実施形態では、本発明のベータ−シトステロールとプロピオン酸との共結晶（共結晶形態２）を調製するための工程（ｂ’）は、（ｄ）最初に、そのようにして得られた結晶を８０ｍｍＨｇ〜５００ｍｍＨｇ、好ましくは１００ｍｍＨｇ〜３００ｍｍＨｇの真空下で乾燥させること、及び（ｅ）次いで、工程（ｄ）で得られた結晶に気流を通過させることを含む。
【０１８２】
工程（ａ）について上に開示される全ての実施形態は、工程（ａ’）にも適用される。一実施形態では、工程（ａ’）は室温で実行される。別の実施形態では、工程（ａ’）は、有機溶媒の不在下を意味するニート条件（ｎｅａｔ  ｃｏｎｄｉｔｉｏｎ）で実施される。工程（ｂ）について上に開示される全ての実施形態は、工程（ｂ’）にも適用される。
【０１８３】
本発明のベータ−シトステロールとプロピオン酸との共結晶、特に共結晶ベータ−シトステロール：プロピオン酸は、その調製プロセスによっても定義され得る。したがって、本発明のこの態様は、任意に、プロセスの任意の好ましい又は特定の実施形態、及び上に開示されるプロセスの特徴の幾つかの可能な組み合わせを含む、前述のプロセスのいずれかによって得られる、上で定義されるベータ−シトステロールとプロピオン酸との共結晶（共結晶形態２）として製剤化され得る。
【０１８４】
一実施形態では、本発明のベータ−シトステロールとチモン酸との共結晶（共結晶形態３）の調製プロセスは、（ａ’’）ベータ−シトステロールを混和性有機溶媒中でプロピオン酸と混合すること、（ｂ’’）そのようにして得られた共結晶を分離することを含む。
【０１８５】
工程（ａ）について上に開示される全ての実施形態は、工程（ａ’’）にも適用される。一実施形態では、工程（ａ’’）は室温で実行される。一実施形態では、工程（ａ’’）はアセトンの存在下で実行される。工程（ｂ）について上に開示される全ての実施形態は、工程（ｂ’’）にも適用される。
【０１８６】
本発明のベータ−シトステロールとチモン酸との共結晶、特に共結晶ベータ−シトステロール：チモン酸を、その調製プロセスによって定義することもできる。したがって、本発明のこの態様は、任意に、プロセスの任意の好ましい又は特定の実施形態、及び上に開示されるプロセスの特徴の幾つかの可能な組み合わせを含む、前述のプロセスのいずれかによって得られる、上で定義されるベータ−シトステロールとチモン酸との共結晶（共結晶形態３）として製剤化され得る。
【０１８７】
一実施形態では、本発明のベータ−シトステロールとベンジルアルコールの共結晶（共結晶形態４）の調製方法は、（ａ’’’）５０℃〜７５℃で構成される温度でベータ−シトステロールをベンジルアルコールと混合した後、４℃〜８℃まで温度を冷却すること；（ｂ’’’）そのようにして得られた共結晶を分離することを含む。
【０１８８】
工程（ｂ）について上に開示される全ての実施形態は、工程（ｂ’’’）にも適用される。好ましくは、工程（ｂ’’’）は次の方法：（ｉ）工程（ａ’’’）で得られたゲルをデカントすること；（ｉｉ）工程（ｉ）で得られたゲルを水非混和性有機溶媒に溶解し、乾燥するまで溶媒を蒸発させること；（ｉｉｉ）工程（ｉｉ）で得られた乾燥固体を水非混和性有機溶媒に混合し、乾燥するまで溶媒を蒸発させること；及び（ｉｖ）工程（ｉｉｉ）で得られた固体を濾過し、分離された共結晶を乾燥させること；で実行され、好ましくは、共結晶は室温で、好ましくは真空条件下で乾燥される。一般に、真空には０．５ｍｂａｒ〜３ｍｂａｒの圧力がかかる。
【０１８９】
一実施形態では、工程（ｂ’’’）の工程（ｉｉ）は、（Ｃ１〜Ｃ６）アルカン、（Ｃ１〜Ｃ４）アルキル−Ｏ−（Ｃ１〜Ｃ４）アルキル（ジアルキルエーテル）及びそれらの混合物からなる群から選択される水非混和性有機溶媒の存在下で実施される。「アルカン」及び「アルキル」という用語は上に定義される通りである。一実施形態では、（ｂ’’’）の工程（ｉｉ）はペンタンの存在下で実行され、（ｂ’’’）の工程（ｉｉｉ）は、ジエチルエーテルの存在下で実行される。
【０１９０】
本発明のベータ−シトステロールとベンジルアルコールとの共結晶は、その調製プロセスによっても定義され得る。したがって、本発明のこの態様は、任意に、プロセスの任意の好ましい又は特定の実施形態、及び上に開示されるプロセスの特徴の幾つかの可能な組み合わせを含む、前述のプロセスのいずれかによって得られる、上で定義されるベータ−シトステロールと上に定義されるベンジルアルコールとの共結晶（共結晶形態４）として製剤化され得る。
【０１９１】
一実施形態では、本発明のベータ−シトステロールと没食子酸との共結晶（共結晶形態５）の調製プロセスは、（ａｖ）ベータ−シトステロールを混和性有機溶媒中で没食子酸酸と混合すること、（ｂｖ）そのようにして得られた共結晶を分離することを含む。
【０１９２】
工程（ａ）について上に開示される全ての実施形態は、工程（ａｖ）にも適用される。一実施形態では、工程（ａｖ）は室温で実行される。一実施形態では、工程（ａｖ）は酢酸エチルの存在下で実行される。工程（ｂ）について上に開示される全ての実施形態は、工程（ｂｖ）にも適用される。
【０１９３】
また、本発明のベータ−シトステロールと没食子酸との共結晶は、その調製プロセスによって定義され得る。したがって、本発明のこの態様は、任意に、プロセスの任意の好ましい又は特定の実施形態、及び上に開示されるプロセスの特徴の幾つかの可能な組み合わせを含む、前述のプロセスのいずれかによって得られる、上で定義されるベータ−シトステロールと没食子酸との共結晶（共結晶形態５）として製剤化され得る。
【０１９４】
一実施形態では、本発明のベータ−シトステロールと２，４−ジヒドロキシ安息香酸との共結晶（共結晶形態６）の調製プロセスは、（ａｖｉ）ベータ−シトステロールを混和性有機溶媒中で２，４−ジヒドロキシ安息香酸と混合すること、（ｂｖｉ）そのようにして得られた共結晶を分離することを含む。
【０１９５】
工程（ａ）について上に開示される全ての実施形態は、工程（ａｖｉ）にも適用される。一実施形態では、工程（ａｖｉ）は室温で実行される。一実施形態では、工程（ａｖｉ）は酢酸エチルの存在下で実行される。工程（ｂ）について上に開示される全ての実施形態は、工程（ｂｖｉ）にも適用される。
【０１９６】
また、本発明のベータ−シトステロールと２，４−ジヒドロキシ安息香酸との共結晶は、その調製プロセスによって定義され得る。したがって、本発明のこの態様は、任意に、プロセスの任意の好ましい又は特定の実施形態、及び上に開示されるプロセスの特徴の幾つかの可能な組み合わせを含む、前述のプロセスのいずれかによって得られる、上で定義されるベータ−シトステロールと２，４−ジヒドロキシ安息香酸との共結晶（共結晶形態６）として製剤化され得る。
【０１９７】
一実施形態では、本発明のベータ−シトステロールと３，４−ジヒドロキシ安息香酸との共結晶（共結晶形態７）の調製プロセスは、（ａｖｉｉ）ベータ−シトステロールを混和性有機溶媒中で３，４−ジヒドロキシ安息香酸と混合すること、（ｂｖｉｉ）そのようにして得られた共結晶を分離することを含む。
【０１９８】
工程（ａ）について上に開示される全ての実施形態は、工程（ａｖｉｉ）にも適用される。一実施形態では、工程（ａｖｉｉ）は室温で実行される。一実施形態では、工程（ａｖｉｉ）は酢酸エチルの存在下で実行される。工程（ｂ）について上に開示される全ての実施形態は、工程（ｂｖｉｉ）にも適用される。
【０１９９】
また、本発明のベータ−シトステロールと３，４−ジヒドロキシ安息香酸との共結晶は、その調製プロセスによって定義され得る。したがって、本発明のこの態様は、任意に、プロセスの任意の好ましい又は特定の実施形態、及び上に開示されるプロセスの特徴の幾つかの可能な組み合わせを含む、前述のプロセスのいずれかによって得られる、上で定義されるベータ−シトステロールと３，４−ジヒドロキシ安息香酸との共結晶（共結晶形態７）として製剤化され得る。
【０２００】
一実施形態では、本発明のベータ−シトステロールと３，５−ジヒドロキシ安息香酸との形態Ａの共結晶（共結晶形態８）の調製プロセスは、（ａｖｉｉｉ）ベータ−シトステロールを混和性有機溶媒中で３，５−ジヒドロキシ安息香酸と混合すること、（ｂｖｉｉｉ）そのようにして得られた共結晶を分離することを含む。
【０２０１】
工程（ａ）について上に開示される全ての実施形態は、工程（ａｖｉｉｉ）にも適用される。一実施形態では、工程（ａｖｉｉｉ）は室温で実行される。一実施形態では、工程（ａｖｉｉｉ）は酢酸エチルの存在下で実行される。工程（ｂ）について上に開示される全ての実施形態は、工程（ｂｖｉｉｉ）にも適用される。
【０２０２】
また、本発明のベータ−シトステロールと３，５−ジヒドロキシ安息香酸との形態Ａの共結晶は、その調製プロセスによって定義され得る。したがって、本発明のこの態様は、任意に、プロセスの任意の好ましい又は特定の実施形態、及び上に開示されるプロセスの特徴の幾つかの可能な組み合わせを含む、前述のプロセスのいずれかによって得られる、上で定義されるベータ−シトステロールと３，５−ジヒドロキシ安息香酸との形態Ａの共結晶（共結晶形態８）として製剤化され得る。
【０２０３】
一実施形態では、本発明のベータ−シトステロールと３，５−ジヒドロキシ安息香酸との形態Ｂの共結晶（共結晶形態９）の調製プロセスは、（ａｖｉｉｉｉ）ベータ−シトステロールを混和性有機溶媒中で３，５−ジヒドロキシ安息香酸と混合すること、（ｂｖｉｉｉｉ）そのようにして得られた共結晶を分離することを含む。
【０２０４】
工程（ａ）について上に開示される全ての実施形態は、工程（ａｖｉｉｉｉ）にも適用される。一実施形態では、工程（ａｖｉｉｉｉ）は室温で実行される。一実施形態では、工程（ａｖｉｉｉｉ）は酢酸エチルの存在下で実行される。工程（ｂ）について上に開示される全ての実施形態は、工程（ｂｖｉｉｉｉ）にも適用される。
【０２０５】
また、本発明のベータ−シトステロールと３，５−ジヒドロキシ安息香酸との形態Ｂの共結晶は、その調製プロセスによって定義され得る。したがって、本発明のこの態様は、任意に、プロセスの任意の好ましい又は特定の実施形態、及び上に開示されるプロセスの特徴の幾つかの可能な組み合わせを含む、前述のプロセスのいずれかによって得られる、上で定義されるベータ−シトステロールと３，５−ジヒドロキシ安息香酸との形態Ｂの共結晶（共結晶形態９）として製剤化され得る。
【０２０６】
一実施形態では、本発明のベータ−シトステロールと３−ヒドロキシ安息香酸との共結晶（共結晶形態１０）の調製プロセスは、（ａｖｖ）ベータ−シトステロールを混和性有機溶媒中で３−ヒドロキシ安息香酸と混合すること、（ｂｖｖ）そのようにして得られた共結晶を分離することを含む。
【０２０７】
工程（ａ）について上に開示される全ての実施形態は、工程（ａｖｖ）にも適用される。一実施形態では、工程（ａｖｖ）は室温で実行される。一実施形態では、工程（ａｖｖ）は酢酸エチルの存在下で実行される。工程（ｂ）について上に開示される全ての実施形態は、工程（ｂｖｖ）にも適用される。
【０２０８】
また、本発明のベータ−シトステロールと３−ヒドロキシ安息香酸との共結晶は、その調製プロセスによって定義され得る。したがって、本発明のこの態様は、任意に、プロセスの任意の好ましい又は特定の実施形態、及び上に開示されるプロセスの特徴の幾つかの可能な組み合わせを含む、前述のプロセスのいずれかによって得られる、上で定義されるベータ−シトステロールと３−ヒドロキシ安息香酸との共結晶（共結晶形態１０）として製剤化され得る。
【０２０９】
一実施形態では、本発明のベータ−シトステロールと４−ヒドロキシ安息香酸との形態Ａの共結晶（共結晶形態１１）の調製プロセスは、（ａｖｖｉ）ベータ−シトステロールを混和性有機溶媒中で４−ヒドロキシ安息香酸と混合すること、（ｂｖｖｉ）そのようにして得られた共結晶を分離することを含む。
【０２１０】
工程（ａ）について上に開示される全ての実施形態は、工程（ａｖｖｉ）にも適用される。一実施形態では、工程（ａｖｖｉ）は室温で実行される。一実施形態では、工程（ａｖｖｉ）は酢酸エチルの存在下で実行される。工程（ｂ）について上に開示される全ての実施形態は、工程（ｂｖｖｉ）にも適用される。
【０２１１】
また、本発明のベータ−シトステロールと４−ヒドロキシ安息香酸との形態Ａの共結晶は、その調製プロセスによって定義され得る。したがって、本発明のこの態様は、任意に、プロセスの任意の好ましい又は特定の実施形態、及び上に開示されるプロセスの特徴の幾つかの可能な組み合わせを含む、前述のプロセスのいずれかによって得られる、上で定義されるベータ−シトステロールと４−ヒドロキシ安息香酸との形態Ａの共結晶（共結晶形態１１）として製剤化され得る。
【０２１２】
一実施形態では、本発明のベータ−シトステロールと４−ヒドロキシ安息香酸との形態Ｂの共結晶（共結晶形態１２）の調製プロセスは、（ａｖｖｉｉ）ベータ−シトステロールを混和性有機溶媒中で４−ヒドロキシ安息香酸と混合すること、（ｂｖｖｉｉ）そのようにして得られた共結晶を分離することを含む。
【０２１３】
工程（ａ）について上に開示される全ての実施形態は、工程（ａｖｖｉｉ）にも適用される。一実施形態では、工程（ａｖｖｉｉ）は室温で実行される。一実施形態では、工程（ａｖｖｉｉ）は酢酸エチルの存在下で実行される。工程（ｂ）について上に開示される全ての実施形態は、工程（ｂｖｖｉｉｉ）にも適用される。
【０２１４】
また、本発明のベータ−シトステロールと４−ヒドロキシ安息香酸との形態Ｂの共結晶は、その調製プロセスによって定義され得る。したがって、本発明のこの態様は、任意に、プロセスの任意の好ましい又は特定の実施形態、及び上に開示されるプロセスの特徴の幾つかの可能な組み合わせを含む、前述のプロセスのいずれかによって得られる、上で定義されるベータ−シトステロールと４−ヒドロキシ安息香酸との形態Ｂの共結晶（共結晶形態１２）として製剤化され得る。
【０２１５】
一実施形態では、本発明の１．２５分子の水を有するベータ−シトステロールの水和物結晶の調製プロセスは、（ａ’’’’）ベータ−シトステロールを水混和性有機溶媒と混合すること、（ｂ’’’’）そのようにして得られた共結晶を分離することを含む。
【０２１６】
一実施形態では、工程（ａ’’’’）の水混和性有機溶媒は、（Ｃ１〜Ｃ４）アルキル−ＣＯ−（Ｃ１〜Ｃ４）アルキル、（Ｃ１〜Ｃ４）アルキル−ＣＯ−Ｏ−（Ｃ１〜Ｃ４）アルキル、水、シクロ（Ｃ５〜Ｃ６）アルカン、フェニル−（Ｃ１〜Ｃ４）アルキル、ハロゲン−（Ｃ１〜Ｃ４）アルカン、及びそれらの混合物からなる群から選択される。一実施形態では、工程（ａ’’’’）の水混和性有機溶媒は、アセトン、酢酸エチル、水、シクロヘキサン、クロロホルム、テトラヒドロフラン、トルエン、ジクロロメタン、及びそれらの混合物からなる群から選択され；好ましくは、アセトン及び酢酸エチルである。用語シクロアルカンは、説明又は特許請求の範囲で指定された数の炭素原子を含む「環状」アルカンを指す。シクロアルカンという用語には、炭素環式アルカン又は複素環式アルカンが含まれる。「炭素環式」アルカンという用語は、炭素原子の環の各メンバーである環状アルカンを指す。炭素環式アルカンの例としては、シクロペンタン及びシクロヘキサンが挙げられる。「複素環式」アルカンという用語は、少なくとも１個の炭素原子がＮ、ＮＨ、Ｏ、又はＳの原子で置換されている「炭素環式」化合物を指す。複素環式アルカンの例としては、テトラヒドロフラン及びテトラヒドロピランが挙げられる。「ハロゲン−アルカン」という用語は、少なくとも１個の水素原子がハロゲン原子で置換され、明細書又は特許請求の範囲で指定される数の炭素原子を含むアルカンを指す。ハロゲンアルカンの例としては、クロロホルム、トリクロロエタン及びジクロロエタンが挙げられる。
【０２１７】
一実施形態では、工程（ａ’’’’）は、有機酸の存在下で実施される。一実施形態では、工程（ａ’’’’）は、プロピオン酸、酢酸、ギ酸及びそれらの混合物からなる群から選択される有機酸；好ましくはプロピオン酸の存在下で実施される。
【０２１８】
工程（ａ）について上に開示される全ての実施形態は、工程（ａ’’’’）にも適用される。一実施形態では、工程（ａ’’’’）は室温で実行される。一実施形態では、工程（ａ’’’’）はアセトンの存在下で実行される。工程（ｂ）について上に開示される全ての実施形態は、工程（ｂ’’’’）にも適用される。
【０２１９】
本発明のベータ−シトステロールの水和物結晶形態は、その調製プロセスによっても定義され得る。したがって、本発明のこの態様は、任意に、プロセスの任意の好ましい又は特定の実施形態、及び上に開示されるプロセスの特徴の幾つかの可能な組み合わせを含む、前述のプロセスのいずれかによって得られる、上で定義されるベータ−シトステロールの水和物結晶形態として製剤化され得る。
【０２２０】
本発明のベータ−シトステロールの結晶の調製方法は、高い化学収率及び高い多形純度で結晶を得ることができるため有利である。典型的には、上述のプロセスで得られる結晶の化学純度は９０面積％以上、好ましくは９５面積％以上である。典型的には、上述のプロセスで得られる結晶は、Ｃｕ−Ｋα放射線λ＝１．５４０６ÅのＸ線回折計を使用した場合、Ｘ線粉末回折測定ではベータ−シトステロールの他の結晶形態が検出できないような多形純度を有する。
【０２２１】
本発明の第３の態様は、ベータ−シトステロール、又はその薬学的に許容可能なエステル、又はその食用に許容可能なエステルと、上に定義される有機カルボン酸との共結晶；及び上に定義されるベータ−シトステロールと有機アルコールとの共結晶からなる群から選択される、ベータ−シトステロール、又はその薬学的に許容可能なエステル、又はその食用に許容可能なエステルの結晶、及び上に定義される１．２５分子の水を有する、ベータ−シトステロール、又はその薬学的に許容可能なエステル、又はその食用に許容可能なエステルの水和物結晶形態を含む組み合わせに関する。
【０２２２】
上に定義されるベータ−シトステロールの結晶について上に開示される実施形態はいずれも本発明の組み合わせにも適用される。
【０２２３】
一実施形態では、組み合わせは：上に定義されるベータ−シトステロールと有機カルボン酸との共結晶；及び上に定義されるベータ−シトステロールと有機アルコールとの共結晶を含むものである。
【０２２４】
一実施形態では、本発明の組み合わせは、ベータ−シトステロールと、Ｌ−乳酸、プロピオン酸、チモン酸、コハク酸、アスコルビン酸、没食子酸、２，４−ジヒドロキシ安息香酸、３，４−ジヒドロキシ安息香酸、３−ヒドロキシ安息香酸、４−ヒドロキシ安息香酸、及び３，５−ジヒドロキシ安息香酸からなる群から選択される有機カルボン酸との共結晶を含むものである。一実施形態では、本発明の組み合わせは、ベータ−シトステロールと、Ｌ−乳酸、プロピオン酸、チモン酸、コハク酸、アスコルビン酸、及び没食子酸からなる群から選択される有機カルボン酸との共結晶；好ましくはベータ−シトステロールとプロピオン酸の共結晶を含むものである。一実施形態では、本発明の組み合わせは、ベータ−シトステロールと、Ｌ−乳酸、チモン酸、コハク酸、アスコルビン酸、及び没食子酸からなる群から選択される有機カルボン酸との共結晶を含むものである。一実施形態では、本発明の組み合わせは、ベータ−シトステロールと、ベンジルアルコール、エタノール及びイソプロパノールからなる群から選択される有機アルコール；好ましくはベンジルアルコールとの結晶を含むものである。
【０２２５】
一実施形態では、本発明の組み合わせは、ベータ−シトステロールと、Ｌ−乳酸、プロピオン酸、チモン酸、コハク酸、アスコルビン酸、没食子酸、２，４−ジヒドロキシ安息香酸、３，４−ジヒドロキシ安息香酸、３−ヒドロキシ安息香酸、４−ヒドロキシ安息香酸、及び３，５−ジヒドロキシ安息香酸からなる群から選択される有機カルボン酸との共結晶を含むものである。一実施形態では、本発明の組み合わせは、ベータ−シトステロールと、Ｌ−乳酸、プロピオン酸、チモン酸、コハク酸、没食子酸、及びアスコルビン酸からなる群から選択される有機カルボン酸との共結晶；好ましくはベータ−シトステロールとプロピオン酸との共結晶；並びにベータ−シトステロールと、ベンジルアルコール、エタノール及びイソプロパノールからなる群から選択される有機アルコール；好ましくはベンジルアルコールとの結晶を含むものである。特定の実施形態では、本発明の組み合わせは、プロピオン酸及びベンジルアルコールを含むものである。
【０２２６】
一実施形態では、本発明の組み合わせは、ベータ−シトステロールと、Ｌ−乳酸、チモン酸、コハク酸、アスコルビン酸、没食子酸、２，４−ジヒドロキシ安息香酸、３，４−ジヒドロキシ安息香酸、３−ヒドロキシ安息香酸、４−ヒドロキシ安息香酸、及び３，５−ジヒドロキシ安息香酸からなる群から選択される有機カルボン酸との共結晶を含むものである。一実施形態では、本発明の組み合わせは、ベータ−シトステロールと、Ｌ−乳酸、チモン酸、コハク酸、没食子酸、及びアスコルビン酸からなる群から選択される有機カルボン酸との共結晶；並びにベータ−シトステロールと、ベンジルアルコール、エタノール及びイソプロパノールからなる群から選択される有機アルコール；好ましくはベンジルアルコールとの結晶を含むものである。
【０２２７】
一実施形態では、本発明の組み合わせは、上に定義される共結晶形態１、共結晶形態２、共結晶形態３、共結晶形態５、共結晶形態６、共結晶形態７、共結晶形態８、共結晶形態９、共結晶形態１０、共結晶形態１１、及び共結晶形態１２からなる群から選択される、ベータ−シトステロールと有機カルボン酸との共結晶；好ましくは上に定義される共結晶形態２；並びにベータ−シトステロールと、ベンジルアルコール、エタノール、及びイソプロパノールからなる群から選択される有機アルコールとの結晶；好ましくは共結晶形態４を含むものである。特定の実施形態では、本発明の組み合わせは、上に定義される共結晶形態２及び共結晶形態４を含むものである。
【０２２８】
一実施形態では、本発明の組み合わせは、上に定義される共結晶形態１、共結晶形態３、共結晶形態５、共結晶形態６、共結晶形態７、共結晶形態８、共結晶形態９、共結晶形態１０、共結晶形態１１、及び共結晶形態１２からなる群から選択される、ベータ−シトステロールと有機カルボン酸との共結晶；並びにベータ−シトステロールと、ベンジルアルコール、エタノール、及びイソプロパノールからなる群から選択される有機アルコールとの結晶；好ましくは共結晶形態４を含むものである。
【０２２９】
一実施形態では、組み合わせは：上に定義されるベータ−シトステロールと有機カルボン酸との共結晶；及び上に定義される１．２５分子の水を有するベータ−シトステロールの水和物結晶形態を含む。
【０２３０】
一実施形態では、本発明の組み合わせは、ベータ−シトステロールと、Ｌ−乳酸、プロピオン酸、チモン酸、コハク酸、アスコルビン酸、没食子酸、２，４−ジヒドロキシ安息香酸、３，４−ジヒドロキシ安息香酸、３−ヒドロキシ安息香酸、４−ヒドロキシ安息香酸、及び３，５−ジヒドロキシ安息香酸からなる群から選択される有機カルボン酸との共結晶を含むものである。一実施形態では、本発明の組み合わせは、ベータ−シトステロールと、Ｌ−乳酸、プロピオン酸、チモン酸、コハク酸、没食子酸、及びアスコルビン酸からなる群から選択される有機カルボン酸との共結晶；好ましくはベータ−シトステロールとプロピオン酸との共結晶；並びにベータ−シトステロール１分子当たり１．２５分子の水を有する、上に定義されるベータ−シトステロールの水和物結晶形態を含むものである。特定の実施形態では、本発明の組み合わせは、プロピオン酸とベータ−シトステロール１分子当たり１．２５分子の水を有するベータ−シトステロールの水和物結晶形とを含むものである。
【０２３１】
一実施形態では、本発明の組み合わせは、ベータ−シトステロールと、Ｌ−乳酸、チモン酸、コハク酸、アスコルビン酸、没食子酸、２，４−ジヒドロキシ安息香酸、３，４−ジヒドロキシ安息香酸、３−ヒドロキシ安息香酸、４−ヒドロキシ安息香酸、及び３，５−ジヒドロキシ安息香酸からなる群から選択される有機カルボン酸との共結晶を含むものである。一実施形態では、本発明の組み合わせは、ベータ−シトステロールと、Ｌ−乳酸、チモン酸、コハク酸、没食子酸、及びアスコルビン酸からなる群から選択される有機カルボン酸との共結晶；並びにベータ−シトステロール１分子当たり１．２５分子の水を有する、上に定義されるベータ−シトステロールの水和物結晶形態を含むものである。
【０２３２】
一実施形態では、本発明の組み合わせは、共結晶形態１、共結晶形態２、共結晶形態３、共結晶形態５、共結晶形態６、共結晶形態７、共結晶形態８、共結晶形態９、共結晶形態１０、共結晶形態１１、及び共結晶形態１２からなる群から選択される、ベータ−シトステロールと有機カルボン酸との共結晶；好ましくは共結晶形態２；並びに上に定義される、ベータ−シトステロール１分子当たり１．２５分子の水を有するベータ−シトステロールの水和物結晶形態を含むものである。特定の実施形態では、本発明の組み合わせは、共結晶形態２と、ベータ−シトステロール１分子当たり１．２５分子の水を有するベータ−シトステロールの水和物結晶形とを含むものである。
【０２３３】
一実施形態では、本発明の組み合わせは、共結晶形態１、共結晶形態３、共結晶形態５、共結晶形態６、共結晶形態７、共結晶形態８、共結晶形態９、共結晶形態１０、共結晶形態１１、及び共結晶形態１２からなる群から選択される、ベータ−シトステロールと有機カルボン酸との共結晶；並びに上に定義される、ベータ−シトステロール１分子当たり１．２５分子の水を有するベータ−シトステロールの水和物結晶形態を含むものである。
【０２３４】
上述のように、本発明の第４の態様は、有効量の、上に定義されるベータ−シトステロールと有機カルボン酸との共結晶；上に定義されるベータ−シトステロールの水和物結晶形態；或いは、上に定義される組み合わせを、１つ又は複数の適切な許容可能な賦形剤又は担体と共に含む組成物に関する。
【０２３５】
「有効量」という用語は、その適用後に治療効果を提供する本発明のベータ−シトステロールの結晶、或いはベータ−シトステロールの結晶の組み合わせの量を指す。
【０２３６】
一実施形態では、本発明の第４の態様の組成物は、薬学的有効量の、上に定義されるベータ−シトステロールの共結晶、上に定義されるベータ−シトステロールの水和物結晶形態、又は上に定義されるベータ−シトステロールの結晶の組み合わせを、１つ又は複数の適切な薬学的に許容可能な賦形剤又は担体と共に含む、医薬組成物である。「医薬組成物」という用語は、上に定義される共結晶、上に定義される水和物結晶形態、又は上に定義される組み合わせと、希釈剤又は担体等の他の化学成分との混合物を指す。医薬組成物は、生物への共結晶の投与を容易にする。
【０２３７】
一実施形態では、本発明の第４の態様の組成物は、有効量の上に定義されるベータ−シトステロールの共結晶、上に定義される水和物結晶形態、又は上に定義される組み合わせを、１つ又は複数の適切な食用に許容可能な賦形剤又は担体と共に含む食用組成物である。
【０２３８】
食用組成物には、栄養補助食品又は機能性食品が含まれる。一実施形態では、食用組成物は栄養補助食品である。本明細書で使用される「栄養補助食品」、「食品サプリメント」又は「栄養サプリメント」という用語は、食事を補足し、不足している又は人の食事で十分な量が摂取されていない可能性があるほか、健康に有益な効果を持つ生物活性化合物でもある、ビタミン、ミネラル、繊維、脂肪酸、又はアミノ酸等の栄養素を提供することを意図した調製物を指す。栄養補助食品を、錠剤、カプセル剤、ソフトゲル、ゲルキャップ、液体、粉末、バー（ｂａｒ）、飲料、シェイク、その他の食品の形にすることができる。「許容可能な賦形剤又は担体」という用語は、許容可能な材料、組成物又はビヒクルを指し、限定されずに、充填剤、希釈剤、結合剤、滑沢剤及び崩壊剤が含まれる。各成分は、組成物の他の成分と適合性があるという意味で許容可能でなければならない。また、過度の毒性、刺激、アレルギー反応、免疫原性、若しくはその他の問題、又は合理的なベネフィット／リスク比に見合った合併症を伴うことなく、人間及び動物の組織又は臓器と接触して使用するのに適していなければならない。
【０２３９】
一実施形態では、食用組成物は機能性食品である。本明細書で使用される「機能性食品」という用語は、栄養素を供給するという基本的な役割を超えて身体機能を維持するのに役立つ健康食品又は機能性食品を指す。それらは、機能性食品を製造するための食品添加物として使用され得る。したがって、半固体製品、固体製品、液体製品、又は濃縮物や粉末等のそれらの派生物に添加されてもよい。食品添加物が液体製品に添加される場合、得られる製品は機能性飲料として知られている。「機能性飲料」という用語は、基本的な栄養を超えて身体機能を維持するのに役立つ追加の成分で強化された飲料を指す。食品の例は、ミルク、及びヨーグルト又はチーズ等の派生物、ジュース、清涼飲料、スポーツ飲料等、又は蒸留された及び発酵させた飲料等のその他の飲料を含む飲料；サラダドレッシング；イエローファットスプレッド（ｙｅｌｌｏｗ  ｆａｔ  ｓｐｒｅａｄ）；マヨネーズ；チョコレート、キャンディー、ゼリー等の菓子；パスタ；シリアル；ベーカリー（ｂａｋｅｒｙ）で構成される一覧から選択される。
【０２４０】
本発明の組成物は、技術水準においてよく知られている方法に従って調製され得る。適切な賦形剤及び／又は担体、ならびにそれらの量は、調製される製剤の種類に従って、当業者によって容易に決定され得る。
【０２４１】
上に定義されるベータ−シトステロールの共結晶、上に定義されるベータ−シトステロールの水和物結晶形態と並んで、上に定義される組み合わせについての上に開示される実施形態はいずれも、本発明の組成物にも適用される。
【０２４２】
本発明の第５の態様は、医薬として使用するための、上に定義されるベータ−シトステロールの共結晶、上に定義される水和物結晶形態、又は上に定義される組み合わせに関する。さらに、医薬として使用するための上に定義される組成物も本発明の一部である。
【０２４３】
上述のように、本発明の第６の態様は、脂質代謝、血液中の脂質の循環レベル、及び／又は組織及び臓器の脂質組成の変化を伴う疾患又は状態の予防及び／又は治療に使用するための上に定義されるベータ−シトステロールの共結晶、上に定義される水和物結晶形態、又は上に定義される組み合わせに関する。この態様は、脂質代謝、血液中の脂質の循環レベル及び／又は組織及び臓器の脂質組成の変化を伴う疾患又は状態の予防及び／又は治療のための医薬又は食物原料又はサプリメントの調製のための上に定義されるベータ−シトステロールの共結晶、上に定義される水和物結晶形態、又は上に定義される組み合わせの使用としても製剤化され得る。本発明はまた、脂質代謝、血中脂質の循環レベル、及び／又は組織の脂質組成の変化を伴う疾患又は状態に罹患している、又は罹患しやすい哺乳動物の予防及び／又は治療のための方法に関し、該方法は、有効量の上に定義されるベータ−シトステロールの共結晶、上に定義される水和物結晶形態、又は上に定義される組み合わせを、１つ又は複数の許容可能な賦形剤又は担体と共に、上記哺乳動物に投与することを含む。
【０２４４】
一実施形態では、脂質代謝、血液中の脂質の循環レベル、及び／又は組織及び臓器の脂質組成の変化を伴う疾患又は状態は、高コレステロール血症、高トリグリセリド血症、シトステロール血症及び混合脂質異常症、心血管疾患、並びに糖尿病からなる群から選択される病理学的、生理学的又は機能的変化である。一実施形態では、脂質代謝、血液中の脂質の循環レベル、及び／又は組織及び器官の脂質組成の変化を伴う疾患又は状態は、高コレステロール血症、高トリグリセリド血症、シトステロール血症及び混合脂質異常症からなる群から選択される。
【０２４５】
さらに、脂質代謝、血液中の脂質の循環レベル、及び／又は組織及び臓器の脂質組成の変化を伴う疾患又は状態の予防及び／又は治療に使用するための上に定義される組成物も本発明の一部である。
【０２４６】
「高コレステロール血症」という用語は、血液中の過剰なコレステロールを伴う疾患又は状態、すなわち総コレステロールレベルが標準レベルよりも高い場合、特により高いＬＤＬコレステロールに関連する場合に生じる現象を指す。「高トリグリセリド血症」という用語は、血液中の過剰なトリグリセリドを伴う疾患又は状態を指す。「混合脂質異常症」という用語は、血液中の過剰なレベルのコレステロール及びトリグリセリドを伴う疾患又は状態を指す。「シトステロール血症」という用語は、食事性ステロール（植物ステロール及びコレステロールを含む）の腸管吸収の増加及び胆汁排泄の低下を伴う疾患又は状態を指し；この遺伝性代謝障害は高コレステロール血症に関連する。
【０２４７】
疾患又は状態が高コレステロール血症である実施形態では、予防及び／又は治療は、ベータ−シトステロールと上に定義される有機アルコール；好ましくはベンジルアルコール、エタノール、及びイソプロパノールから選択される；より好ましくはベンジルアルコールとの共結晶；更に好ましくは形態４の共結晶；或いは、上に定義されるベータ−シトステロールの水和物結晶形態を投与することを含む。
【０２４８】
疾患又は状態が高トリグリセリド血症である実施形態では、予防及び／又は治療は、ベータ−シトステロールと、上に定義される；好ましくは、Ｌ−乳酸、プロピオン酸、チモン酸、コハク酸、アスコルビン酸、没食子酸、２，４−ジヒドロキシ安息香酸、３，４−ジヒドロキシ安息香酸、３−ヒドロキシ安息香酸、４−ヒドロキシ安息香酸及び３，５−ジヒドロキシ安息香酸から選択され；好ましくは、Ｌ−乳酸、プロピオン酸、ザイモン酸、コハク酸、没食子酸及びアスコルビン酸からなる群から選択される有機カルボン酸との共結晶；より好ましくは、共結晶形態１、共結晶形態２、共結晶形態、共結晶形態５、共結晶形態６、共結晶形態７、共結晶形態８、共結晶形態９、共結晶形態１０、共結晶形態１１及び共結晶形態１２；より好ましくは、共結晶形態１、共結晶形態２、共結晶形態３、更により好ましくは共結晶形態２を投与することを含む。
【０２４９】
疾患又は状態が高トリグリセリド血症である実施形態では、予防及び／又は治療は、ベータ−シトステロールと、上に定義される；好ましくは、Ｌ−乳酸、チモン酸、コハク酸、アスコルビン酸、没食子酸、２，４−ジヒドロキシ安息香酸、３，４−ジヒドロキシ安息香酸、３−ヒドロキシ安息香酸、４−ヒドロキシ安息香酸及び３，５−ジヒドロキシ安息香酸から選択され；好ましくは、Ｌ−乳酸、チモン酸、コハク酸、没食子酸及びアスコルビン酸からなる群から選択される有機カルボン酸との共結晶；より好ましくは、共結晶形態１、共結晶形態、共結晶形態５、共結晶形態６、共結晶形態７、共結晶形態８、共結晶形態９、共結晶形態１０、共結晶形態１１及び共結晶形態１２；より好ましくは、共結晶形態１、共結晶形態３を投与することを含む。
【０２５０】
疾患又は状態が混合脂質異常症である実施形態では、予防及び／又は治療は、上に定義される組み合わせを投与することを含む。
【０２５１】
一実施形態では、上に定義される使用のための組み合わせ、治療は、上に定義されるベータ−シトステロールと有機カルボン酸との共結晶；及びベータ−シトステロールと上に定義される有機アルコールとの共結晶、及び上に定義される水和物結晶形態からなる群から選択されるベータ−シトステロールの結晶の同時、別個又は逐次の投与を含む。治療が、各組成物に本発明の結晶の１つを含む２つの別個の組成物の投与を含むことを意味する。
【０２５２】
共結晶、水和物、及び組み合わせと並んで、上に定義される組成物について上記に開示される全ての実施形態は、使用する共結晶、水和物、組み合わせ、又は組成物にも適用される。
【０２５３】
上に定義される共結晶、上に定義される水和物、上に定義される組み合わせを含む食品材料も本発明の一部である。一実施形態では、食品材料は、食品サプリメント及び機能性食品から選択される。「栄養補助食品」という用語は、通常の食事を補うことを目的とする栄養学的又は生理学的な効果を有する栄養素又はその他の物質の濃縮原料を指す。言い換えれば、食物サプリメントとは、通常の食事を補うことを目的とし、単独で又は組み合わせて、ビタミン若しくはミネラル、又は栄養学的若しくは生理学的な効果を有するその他の物質の濃縮原料である、任意の食物を意味する。「機能性食品」という用語は、基本的な栄養のニーズを超えて追加の生理学的利益を提供する食品又は食品の原料を指す。
【０２５４】
また、上に定義される共結晶、上に定義される水和物、上に定義される組み合わせ、及び脂質代謝、血液中の脂質の循環レベル及び／又は組織及び臓器の脂質組成変化を伴う疾患又は状態の予防及び／又は治療で使用するための指示書を含むパッケージも本発明の一部である。
【０２５５】
さらに、上に定義される組成物と、脂質代謝、血液中の脂質の循環レベル、及び／又は組織及び器官の脂質組成の変化を伴う疾患又は状態の予防及び／又は治療で使用するための指示書を含むパッケージも本発明の一部でもある。
【０２５６】
また、本発明の一部であり、胆石、風邪、インフルエンザ、後天性免疫不全症候群（ＡＩＤＳ）、関節リウマチ、結核、乾癬、アレルギー、子宮頸癌、線維筋痛症、全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）、喘息、脱毛、気管支炎、片頭痛、良性前立腺過形成（ＢＰＨ）、閉経、疼痛、慢性疲労症候群、腫脹、及び性機能障害からなる群から選択される疾患若しくは状態の治療における使用のための、上に定義されるベータ−シトステロールの共結晶、上に定義される水和物結晶形態、又は上に定義される組み合わせも本発明の一部である。
【０２５７】
創傷治癒剤として使用するための、上に定義されるベータ−シトステロールの共結晶、上に定義される水和物結晶形態、又は上に定義される組み合わせも本発明の一部である。さらに、創傷治癒剤として使用するための上記定義の組成物も本発明の一部である。「創傷治癒」という表現は、任意の種類の任意の部位の創傷治癒後の皮膚（又は他の臓器）が自己修復する複雑なプロセスに関連している。創傷治癒は、正常及び障害のある創傷治癒であってもよい。後者は、特に糖尿病、血管炎、動脈閉塞性疾患、慢性静脈性潰瘍及び／又は感染性潰瘍と並んで、治癒の不十分な胃潰瘍等の疾患の場合に見られる。また、創傷治癒の障害は、ケアを必要とする人の対麻痺等の神経支配障害、ハンセン病、神経障害、及び褥瘡の場合にも見られる。特に腸の手術、並びに皮膚及び他の臓器の移植の後、それぞれ、弱い縫合及び治癒の障害が発生した場合に、創傷治癒の障害も生じる。創傷治癒の障害は、骨折、火傷、ステロイドを使用した治療の場合にも見られる。
【０２５８】
本明細書で使用される「創傷」という用語は、例えば、創傷の治癒の遅延又は困難、及び慢性創傷を含む、任意の組織の傷害を含む。創傷の例としては、開放創及び閉鎖創の両方が含まれる。「創傷」という用語は、例えば、種々の方法で（例えば、外傷により誘発される長時間の床上安静及び創傷による褥瘡）及び様々な特徴を伴う皮膚及び皮下組織の損傷も含み得る。創傷は、創傷の深さに応じて４つのグレード：ｉ）上皮に限定されるグレードＩの創傷；ｉｉ）真皮に広がるグレードＩＩの傷；ｉｉｉ）皮下組織に広がるグレードＩＩＩの傷；及びｉｖ）グレードＩＶ（又は全層創傷）創傷のいずれかに分類され得る。
【０２５９】
本明細書及び特許請求の範囲を通して、「含む」及びその単語の変形は、その他の技術的特徴、付加物、構成要素、又は工程を排除することを意図するものでない。さらに、「含む」という単語は、「からなる」の場合を包含する。本発明の更なる目的、利点、特徴は、本明細書の検討により当業者に明らかとなる、又は本発明の実施によって習得され得る。以下の実施例は、実例として提供され、それらは、本発明の限定を意図するものではない。図面に関連し、特許請求の範囲において括弧内に配置された参照符号は、特許請求の範囲の明瞭度を高めるためだけのものであり、特許請求の範囲を限定するものとして解釈されるものではない。さらに、本発明は、本明細書に記載される特定及び好ましい実施形態の全ての可能性のある組み合わせを包含する。
【実施例】
【０２６０】
一般的な考慮事項
本発明の結晶の調製に使用されるベータ−シトステロール、ベンジル酸、乳酸、プロピオン酸及びピルビン酸（実験欄１を参照されたい）は、Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈにより市販されており、化学純度はそれぞれ７０％以上、９９％、８５％以上、９９％、及び９８％である。本発明において出発物質として使用されるベータ−シトステロールは、Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ（バッチ番号ＢＣＢ５００６７Ｖ及びＢＣＢＭ５６９９Ｖ）により商業的に入手可能であり、化学純度は７０％以上である。市販のベータ−シトステロールのＰＸＲＤは、ベータ−シトステロールが無水乾燥ベータ−シトステロール（そのＰＸＲＤは、Ｅｖｅｌｙｎ  Ｍｏｒｅｎｏ−Ｃａｌｖｏ，  ｅｔ  ａｌ．“Ａ  Ｎｅｗ  Ｍｉｃｒｏｃｒｙｓｔａｌｌｉｎｅ  Ｐｈｙｔｏｓｔｅｒｏｌ  Ｐｏｌｙｍｏｒｐｈ  Ｇｅｎｅｒａｔｅｄ  Ｕｓｉｎｇ  ＣＯ２−Ｅｘｐａｎｄｅｄ  Ｓｏｌｖｅｎｔｓ”．Ｃｒｙｓｔ．Ｇｒｏｗｔｈ．＆Ｄｅｓｉｇｎ．，２０１４，ｖｏｌ．１４，ｐｐ．５８−６８に開示されている「ＬＯＦＦＥＴ」形態に対応する）及び一水和物ベータ−シトステロール（そのＰＸＲＤは、Ａｒｇａｙ  ｅｔ  ａｌ．“Ｃｒｙｓｔａｌ  ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ  ｏｆ  ｓｔｉｇｍａｓｔ−５−ｅｎ−３β−ｏｌ  ｍｏｎｏｈｙｄｒａｔｅ，Ｃ２９Ｈ５２Ｏ２”．Ｚｅｉｔｓｃｈｒｉｆｔ  ｆｕｅｒ  Ｋｒｉｓｔａｌｌｏｇｒａｐｈｉｅ，１９９６，ｖｏｌ．２１１（１０），ｐｐ．７２５−７２７に開示されている「ＴＥＸＱＯＣ」に対応する）の重量比１：１の混合物であることを示した。さらに、市販のベータ−シトステロールのＧＣ−ＭＳ分析は、ベータ−シトステロールがベータ−シトステロール（８３％〜８８％）、スチグマステロール（３％〜７％）及びカンペステロール（８％〜１０％）の混合物であることを示した（実験部分の欄４を参照されたい）。
【０２６１】
粉末Ｘ線回折（ＰＸＲＤ）分析は、厚さ１０マイクロメートルのポリエステルフィルムまたは厚さ１５マイクロメートルのポリアミド（カプトン）フィルムの間に粉末サンプルを挟み込んで行い、以下：ＣｕＫα放射線（λ＝１．５４１８Å）；作動力：４５ｋＶ及び４０ｍＡ；０．４ミリメートルのビーム高さを規定する入射ビームスリット；入射及び回折ビ−ム０．０２ラジアンＳｏｌｌｅｒスリット；ＰＩＸｃｅｌ検出器：有効長＝３．３４７°；２θ／θは、０．０２６°２θの工程サイズ、及び１工程当たり７６秒の測定時間で２°２θ〜４０°２θをスキャンする実験条件で、集束ミラ−及びフラットなサンプル透過幾何学を備えた収束ビームの構成で、半径２４０ミリメートルのＰＡＮａｌｙｔｉｃａｌ  Ｘ’Ｐｅｒｔ  ＰＲＯ  ＭＰＤ  ｑ／ｑ粉末回折計で分析した。Ｘ線ディフラクトグラムは、本発明のベータ−シトステロールの結晶形のＸ線粉末回折パターン（強度（カウント）対２θ角（°））を示す。
【０２６２】
単結晶Ｘ線回折（ＳＣＸＲＤ）構造は、多層モノクロメ−タ−を備えたＤ８  Ｖｅｎｔｕｒｅシステムで解明され、Ｍｏマイクロフォーカス（λ＝０．７１０７３Å）も使用される。フレ−ムを、ＳＡＩＮＴアルゴリズムを使用してＢｒｕｋｅｒ  ＳＡＩＮＴソフトウェアパッケージと統合した。マルチスキャン法（ＳＡＤＡＢＳ）を使用して、吸収効果のデータを補正した。構造は、結晶構造の自動的な解明のためのコンピュータプログラムであるＢｒｕｋｅｒ  ＳＨＥＬＸＴＬ  Ｓｏｆｔｗａｒｅ  Ｐａｃｋａｇｅを使用して解明及び改良され、ＳＨＥＬＸＬコンピュータプログラム用のＱｔグラフィカルユーザインターフェースであるＳｈｅｌＸｌｅバージョン４．８．０を用いるフル−マトリクス最小二乗法によって改良された。
【０２６３】
示差走査熱量測定（ＤＳＣ）分析は、Ｍｅｔｔｌｅｒ−Ｔｏｌｅｄｏ  ＤＳＣ−８２２ｅ熱量計を使用して実施した。実験条件：容量４０μＬのアルミニウム坩堝、流速５０ｍＬ／分の乾燥窒素雰囲気、加熱速度１０℃／分。熱量計を、純度９９．９９％のインジウムで較正した。
【０２６４】
Ｍｅｔｔｌｅｒ−Ｔｏｌｅｄｏ  ＴＧＡ−８５１ｅ熱天秤で熱重量分析（ＴＧＡ）を実施した。実験条件：体積７０μＬのアルミナ坩堝、流速５０ｍＬ／分の乾燥窒素雰囲気、加熱速度１０℃／分。
【０２６５】
ベータ−シトステロールと本発明の水和物結晶との共結晶のＨＰＬＣ−ＭＳ分析は、それらがベータ−シトステロール（８３％〜８８％）、スチグマステロール（３％〜７％）及びカンペステロール（８％〜１０％）の混合物を含むことを示した（実験部の欄４を参照されたい）。特に、ベータ−シトステロールと、Ｌ−乳酸、プロピオン酸、チモン酸、コハク酸、アスコルビン酸、没食子酸、２，４−ジヒドロキシ安息香酸、３，４−ジヒドロキシ安息香酸、３−ヒドロキシ安息香酸、４−ヒドロキシ安息香酸、３，５−ジヒドロキシ安息香酸からなる群から選択される有機カルボン酸との共結晶；ベータ−シトステロールと、ベンジルアルコール、エタノール及びイソプロパノールからなる群から選択される有機アルコールとの共結晶；並びに本発明のベータ−シトステロール１分子当たり水がベータ−シトステロール（８３％〜８８％）、スチグマステロール（３％〜７％）及びカンペステロール（８％〜１０％）含む場合、１．２５分子を有するベータ−シトステロールの水和物結晶形態。
【０２６６】
１．ベータ−シトステロールと水素結合供与体コフォーマとの共結晶
１．１．ベータ−シトステロールと有機カルボン酸との共結晶
１．１．１．ベータ−シトステロールとＬ−乳酸との共結晶
【０２６７】
調製プロセス
ベータ−シトステロール（２０ｍｇ、０．０４８ｍｍｏｌ）、Ｌ−乳酸（０．１ｍＬ）及び酢酸エチル（０．２ｍＬ）の懸濁液を室温で５日間撹拌した。そのようにして得られた結晶を濾過し、真空下で乾燥させた。
【０２６８】
１．１．２．ベータ−シトステロールとプロピオン酸との共結晶
調製プロセス１
ベータ−シトステロール（５００ｍｇ、１．２１ｍｍｏｌ）及びプロピオン酸（２．５ｍＬ）の溶液を室温で１日間、空気に開放して撹拌した。そのようにして得られた結晶を濾過し、真空下で乾燥させた。
【０２６９】
調製プロセス２
プロピオン酸（５００ｍＬ）を含むベータ−シトステロール（５０ｇ）を完全に溶解するまで（１時間）懸濁した。室温で水（１０００ｍＬ）を添加し、穏やかに撹拌すると白色固体が沈殿した。そのようにして得られた結晶を濾過し、真空下（約２００ｍｍ  Ｈｇ）で２時間乾燥させた。最終的に、濾過された結晶に空気流を８時間通すことにより結晶を乾燥させた。
【０２７０】
１．１．３．ベータ−シトステロールとチモン酸との共結晶
調製プロセス
ベータ−シトステロール（５００ｍｇ、１．２１ｍｏｌ）、ピルビン酸（２．５ｍＬ）及びアセトン（５．０ｍＬ）の溶液を室温で１日間撹拌した。そのようにして得られた結晶を濾過し、真空下で乾燥させた。
【０２７１】
１．１．４．ベータ−シトステロールと没食子酸との共結晶
調製プロセス
ベータ−シトステロール（６２５ｍｇ、１．５１ｍｍｏｌ）及び没食子酸（９７．７ｍｇ、０．５７ｍｍｏｌ）を室温で酢酸エチル（５．０ｍＬ）に懸濁し、一晩撹拌した。そのようにして得られた結晶を濾過し、真空下で乾燥させた。
【０２７２】
１．１．５．ベータ−シトステロールと２，４−ジヒドロキシ安息香酸との共結晶
調製プロセス
ベータ−シトステロール（１００ｍｇ、０．２４１ｍｍｏｌ）及び２，４−ジヒドロキシ安息香酸（４１ｍｇ、０．２６６ｍｍｏｌ）を室温で酢酸エチル（０．３ｍＬ）に懸濁し、一晩撹拌した。そのようにして得られた結晶を濾過し、真空下で乾燥させた。
【０２７３】
１．１．６．ベータ−シトステロールと３，４−ジヒドロキシ安息香酸との共結晶
調製プロセス
３，４−ジヒドロキシ安息香酸（４．０ｇ、２５．９５ｍｍｏｌ）を酢酸エチル（１５ｍＬ）中で２時間撹拌した。懸濁液を濾過し、ベータ−シトステロール（２．０ｇ、４．８２ｍｍｏｌ）を加え、室温で一晩撹拌した。そのようにして得られた結晶を濾過し、真空下で乾燥させた。
【０２７４】
１．１．７．ベータ−シトステロールと３，５−ジヒドロキシ安息香酸との形態Ａの共結晶
調製プロセス
ベータ−シトステロール（１００ｍｇ、０．２４１ｍｍｏｌ）及び３，５−ジヒドロキシ安息香酸（４１ｍｇ、０．２６６ｍｍｏｌ）を室温で酢酸エチル（０．３ｍＬ）に懸濁し、一晩撹拌した。そのようにして得られた結晶を濾過し、真空下で乾燥させた。
【０２７５】
１．１．８．ベータ−シトステロールと３，５−ジヒドロキシ安息香酸との形態Ｂの共結晶
調製プロセス
ベータ−シトステロール（１００ｍｇ、０．２４１ｍｍｏｌ）及び３，５−ジヒドロキシ安息香酸（４１ｍｇ、０．２６６ｍｍｏｌ）を室温で酢酸エチル（２．０ｍＬ）に溶解した。溶液を一晩撹拌し、大気に開放した。そのようにして得られた結晶を濾過し、真空下で乾燥させた。
【０２７６】
１．１．９．ベータ−シトステロールと３−ヒドロキシ安息香酸との共結晶
調製プロセス
ベータ−シトステロール（１００ｍｇ、０．２４１ｍｍｏｌ）及び３−ヒドロキシ安息香酸（３７ｍｇ、０．２６８ｍｍｏｌ）を室温で酢酸エチル（０．４ｍＬ）に懸濁し、一晩撹拌した。そのようにして得られた結晶を濾過し、真空下で乾燥させた。
【０２７７】
１．１．１０．ベータ−シトステロールと４−ヒドロキシ安息香酸との形態Ａの共結晶
調製プロセス
４−ヒドロキシ安息香酸（４．０ｇ、２８．９６ｍｍｏｌ）を酢酸エチル（１５ｍＬ）中で２時間撹拌した。懸濁液を濾過し、ベータ−シトステロール（２．５ｇ、６．０３ｍｍｏｌ）を加え、混合物を室温で一晩撹拌した。そのようにして得られた結晶を濾過し、真空下で乾燥させた。
【０２７８】
１．１．１１．ベータ−シトステロールと４−ヒドロキシ安息香酸との形態Ｂの共結晶
調製プロセス
ベータ−シトステロール（１００ｍｇ、０．２４１ｍｍｏｌ）及び４−ヒドロキシ安息香酸（３７ｍｇ、０．２６８ｍｍｏｌ）を室温で酢酸エチル（２．０ｍＬ）に溶解し、一晩撹拌して大気に開放した。そのようにして得られた結晶を濾過し、真空下で乾燥させた。
【０２７９】
１．２．ベータ−シトステロールと有機アルコールとの共結晶
１．２．１．ベータ−シトステロールとベンジルアルコ−ルとの共結晶
調製プロセス
ベータ−シトステロール（１ｇ、２．４１１ｍｍｏｌ）のベンジルアルコール（４．０ｍＬ）溶液を７０℃に加熱し、１時間で室温までゆっくりと冷却した。その後、温度を４℃〜８℃に冷却し、ゲルが沈殿するまで１日間保持した。溶液をデカントし、透明な溶液になるまでペンタンを加えた後、溶液を蒸発乾固させた。その後、透明な溶液になるまでジエチルエーテルを加え、蒸発乾固させてゲルを得ると、これは一晩で固体に変化した。そのようにして得られた固体を濾過し、真空下で乾燥させて、ベータ−シトステロールとベンジルアルコールとの共結晶を得た。
【０２８０】
２．ベータ−シトステロールの水和物結晶形態
調製プロセス
ベータ−シトステロール（５００ｍｇ、１．２１ｍｍｏｌ）、プロピオン酸（２．５ｍＬ）及びアセトン（５ｍＬ）の溶液を室温で１日間撹拌した。そのようにして得られた結晶を濾過し、真空下で乾燥させて、本発明の水和物結晶形態を得た。
【０２８１】
３．活性試験
活性試験は、脂質の経口摂取後、又は本発明のベータ−シトステロールの結晶若しくは本発明の範囲外である比較の認可されたベータ−シトステロールを補足した脂質の経口摂取後のグルコース、コレステロール、トリグリセリド及びベータ−シトステロールの循環レベルの低下の割合を決定することに焦点を当てる。
【０２８２】
活動性試験で使用される比較ベータ−シトステロールは、欧州議会および理事会の規則（ＥＣ）２５８／９７（文書番号Ｃ（２００４）１２４３）−２００４／３３３／ＥＣによる通知（Ｏｆｆｉｃｉａｌ  Ｊｏｕｒｎａｌ  Ｌ  １０５，１４／０４／２００４  Ｐ．００４０−００４２を参照されたい）のもと、新規食品又は新規食品成分としてフィトステロール／フィトスタノールを添加した、イエローファットスプレッド、サラダドレッシング、乳タイプ製品、発酵乳タイプ製品、大豆飲料及びチーズタイプ製品の市場での販売を認可する２００４年３月３１日の委員会決定で認可された化合物に対応する。認可されたベータ−シトステロールは次の組成（ガスクロマトグラフィー−炎イオン化検出器−ＧＣ−ＦＩＤで測定）を有する：８０％未満のベータ−シトステロール、１５％未満のベータ−シトスタノール、４０％未満のカンペステロール、５％未満のカンペスタノール、３０％未満のスチグマステロール、３％未満のブラシカステロール、３％未満のその他のエステロール／スタノール。
【０２８３】
サンプル
−比較サンプルＡ（対照ビヒクル）：ラードの経口負荷（２．５ｇ／ｋｇ  ＢＷ）
−比較サンプルＢ（参照）：市販のベータ−シトステロール（０．５１３ｇ／ｋｇ  ＢＷ、ハムスターに換算した推奨ヒト等価用量の２．５倍に相当）を補足したラードの経口負荷（２．５ｇ／ｋｇ  ＢＷ）。
−サンプルＣ：本発明のベータ−シトステロールとプロピオン酸との共結晶（０．５１３ｇ／ｋｇ  ＢＷ）を補足したラードの経口負荷（２．５ｇ／ｋｇ  ＢＷ）。
−サンプルＤ：本発明のベータ−シトステロールの水和物結晶形態（０．５１３ｇ／ｋｇ  ＢＷ）を補足したラードの経口負荷（２．５ｇ／ｋｇ  ＢＷ）。
−サンプルＥ：本発明のベータ−シトステロールとベンジルアルコールとの共結晶を補充したラードの経口負荷（２．５ｇ／ｋｇ  ＢＷ）（０．５１３ｇ／ｋｇ  ＢＷ）。
ＢＷは体重を表す。
【０２８４】
動物及び治療
活動試験で使用した動物は、１６週齢の雄性ゴールデンシリアンハムスターであった。１群当たり７匹の動物の５つの実験群を設けた。実験群は次の通りである：
−比較群Ａ：比較サンプルＡで治療（対照ビヒクル）；
−比較群Ｂ：比較サンプルＢで治療（参照）；
−テスト群Ｃ：サンプルＣで治療；
−テスト群Ｄ：サンプルＤで治療；及び
−テスト群Ｅ：サンプルＥで治療。
【０２８５】
この試験を、過去２４時間に４０％のカロリー制限を受けた動物に対して行った。全ての実験群において、ラードに０．５１３ｇ／ｋｇ  ＢＷの本発明の比較ベータ−シトステロール又は結晶を補足し、これは、ヒトでの使用に推奨される用量の２．５倍に相当し、ハムスターでの使用に適合されている（Ｒｅａｇａｎ−Ｓｈａｗ，ｅｔ  ａｌ，“Ｄｏｓｅ  ｔｒａｎｓｌａｔｉｏｎ  ｆｒｏｍ  ａｎｉｍａｌ  ｔｏ  ｈｕｍａｎ  ｓｔｕｄｉｅｓ  ｒｅｖｉｓｉｔｅｄ”．ＦＡＳＥＢ  Ｊ．２００７，ｖｏｌ．２２，ｐｐ．６５９−６６１を参照されたい）。
【０２８６】
サンプリング
試験前及び初期（Ｔ０）に、ヘパリン毛細血管で伏在静脈から血液を採取した。次に、ラードの経口負荷を受けてから５時間後（Ｔ５）、動物は、活性ペントバルビタールナトリウム（ペントバルビタール２００ｍｇ／ｍＬの致死量、ベトキノール）に基づく致死麻酔の腹腔内注射を受けた。ペントバルビタールナトリウムの致死量（生理食塩水で２５ｍｇ／ｍＬに事前希釈）の投与の量を、各動物の個々の体重に基づいて計算した。
【０２８７】
動物が鎮静したことを確認した後、胸郭のレベルで小さな切開を行って失血させた後、心臓穿刺（２１Ｇ針付き５ｍＬシリンジ）で血液を採取した。血液凝固を防ぐため、針及び注射器の内部を濾過されたＥＤＴＡ（０．５Ｍ、ｐＨ＝８）に予め浸漬した。血液を４℃にて１０分間３５００ｒｐｍで遠心分離して血漿を得て、使用するまで−２０℃で凍結させた。
【０２８８】
測定
血漿コレステロール値は、Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓが提供する総コレステロールキット（参照：Ｍ１１５０５ｃ−０５１８）を用いて測定された。血漿トリグリセリドレベルは、Ｓｉｇｍａトリグリセリド測定キット（参照：ＴＲ０１００）で測定された。血中グルコース濃度は、Ａｃｃｕ−ｃｈｅｃｋ  Ａｖｉｖａ  血糖値測定器（Ｒｏｃｈｅ、参照：０６４５３９７０）の試験条片を使用して測定した。
【０２８９】
血漿中のフィトステロールの測定は、イオン性炎検出器（ＨＰ−５ＭＳカラム（長さ３０ｍ、直径０．２５ｍｍを使用するＧＳ−ＦＩＤ））及びヘリウム移動相フロー０．８ｍＬ・分−１を使用したガスクロマトグラフィー（ＧＣ−７８９０Ａ、Ａｇｉｌｅｎｔ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）と組み合わせた鹸化及び誘導体化後に行われた）。（Ｇａｒｃｉａ−Ｌｌａｔａｓ，Ｇ．ｅｔ  ａｌ．“Ｓｉｍｕｌｔａｎｅｏｕｓ  ｑｕａｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｓｅｒｕｍ  ｐｈｙｔｏｓｔｅｒｏｌｓ  ａｎｄ  ｃｈｏｌｅｓｔｅｒｏｌ  ｐｒｅｃｕｒｓｏｒｓ  ｕｓｉｎｇ  ａ  ｓｉｍｐｌｅ  ｇａｓ  ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｉｃ  ｍｅｔｈｏｄ”．Ｅｕｒｏｐｅａｎ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｌｉｐｉｄ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，２０１２，ｖｏｌ  １１４（５），ｐｐ．５２０−５２６；及びＡｎｄｒａｄｅ，Ｉ．ｅｔ  ａｌ．“Ａｄｖａｎｃｅｓ  ｉｎ  ａｎａｌｙｔｉｃａｌ  ｍｅｔｈｏｄｓ  ｔｏ  ｓｔｕｄｙ  ｃｈｏｌｅｓｔｅｒｏｌ  ｍｅｔａｂｏｌｉｓｍ：ｔｈｅ  ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｓｅｒｕｍ  ｎｏｎｃｈｏｌｅｓｔｅｒｏｌ  ｓｔｅｒｏｌｓ”．Ｂｉｏｍｅｄｉｃａｌ  Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ，２０１３，ｖｏｌ．２７（１０），ｐｐ．１２３４−１２４２を参照されたい）。
【０２９０】
統計分析
データの結果を、平均±平均誤差（ＳＥＭ）として提示する。ＳＰＳＳ  １．９ソフトウェア（米国イリノイ州シカゴ）を使用して、統計分析を実施した。群間の比較を、分散分析（一元配置分散分析）に続いてフィッシャーのポスト−ホック分析（ＬＳＤ、最小有意差）によって行った。異なる群のＴ０とＴ５の比較は、反復測定のＡＮＯＶＡ検定（ＡＮＯＶＡ）を使用して実行され、続いてＬＳＤ分析とペア平均のｔ検定を行った。
【０２９１】
結果
Ａ．グルコース
分析された時点で、全ての実験群間で循環グルコースレベルに有意差は観察されなかった。
【０２９２】
Ｂ．コレステロール
図１４に示すように、初期（Ｔ０）の血漿コレステロール値は、全ての実験群間で差はなかった。次に、本発明のベータ−シトステロールとプロピオン酸との共結晶（試験サンプルＣ）の投与は、比較サンプルＡ及びＢ（それぞれ、１７％及び２５％）と同様に、５時間で測定された血漿コレステロールレベルを減少させた（２１％）。
【０２９３】
それにもかかわらず、本発明のベータ−シトステロールの水和物結晶形態（試験サンプルＤ）及びベータ−シトステロールとベンジルアルコールとの共結晶（試験サンプルＥ）の投与は、血漿コレステロール濃度を（絶対値で）それぞれ２９％と３１％の割合で有意に低下させた（それぞれｐ＝０．０６４及びｐ＝０．０５９対比較サンプル対照Ａ）。
【０２９４】
Ｃ．トリグリセリド
図１５に示すように、初期（Ｔ０）の血漿トリグリセリドレベルは、全ての実験群間で差はなかった。
【０２９５】
それにもかかわらず、比較サンプルＡ及びＢの投与は、それぞれ４４％及び３９％の５時間（Ｔ５）でのトリグリセリド血症のわずかな増加をもたらした。比較すると、本発明のベータ−シトステロールの水和物結晶形態（試験サンプルＤ）及びベータ−シトステロールとベンジルアルコールとの共結晶（試験サンプルＥ）の投与は、トリグリセリド血症の増加を減弱させ、それぞれトリグリセリド濃度の２％及び７％の減少を引き起こした。
【０２９６】
さらに、本発明のベータ−シトステロールとプロピオン酸との共結晶（試験サンプルＣ）の投与は、血漿トリグリセリド濃度を２０％有意に低下させた（ｐ＝０．０１２  Ｔ０対Ｔ５及びｐ＝０．０６対比較サンプルＢ）。
【０２９７】
Ｄ．シトステロール血症
図１６に示すように、比較サンプルＡの投与直後、循環β−シトステロールレベルは変更されなかった。
【０２９８】
一方、比較サンプルＢの投与は、初期値（Ｔ０）に対して循環レベルの２３％の減少を促進した（ｐ＝０．０６１対比較サンプルＡ−対照）。同様に、本発明のベータ−シトステロールとプロピオン酸との共結晶（試験サンプルＣ）及びベータ−シトステロールとベンジルアルコールとの共結晶（試験サンプルＥ）の投与も、ベータ−シトステロールの循環レベルを同様に減少させた（それぞれ１４％及び１２％対それらのＴ０値）。
【０２９９】
それにもかかわらず、β−シトステロールの水和物結晶形態（試験サンプルＤ）について、β−シトステロールの循環レベルを低下させる有意に顕著な効果が観察された。特に、Ｔ０値に関連して３４％の減少が観察された（ｐ＝０．０２対比較サンプルＡ−対照）。
【０３００】
４．出発物質として、及び本発明の共結晶において使用されるベータ−シトステロール中のスチグマステロール及びカンペステロールの量の測定
この試験は、本発明の共結晶及び水和物の調製において出発物質として使用される商業的に入手可能なベータ−シトステロールに存在するスチグマステロール及びカンペステロールの割合を決定することに焦点を当てる。さらに、この試験はまた、本発明の共結晶及び水和物に依然として存在するスチグマステロール及びカンペステロールの割合の決定にも焦点を当てる。
【０３０１】
４．１．分析方法
４．１．１．ガスクロマトグラフィー−質量分析（ＧＳ−ＭＳ）
−試験サンプル：１．０１ｍｇの試験化合物を１ｍＬのジクロロメタン：メタノール（１：１）に溶解した。試験したサンプルは、本発明のベータ−シトステロールと没食子酸形態５との共結晶であり、ｓｉｇｍａ−ａｌｄｒｉｃｈ（バッチＢＣＢ５００６７Ｖ）によって商業的に得られるベータ−シトステロールであった。
−試験したサンプル及び標準サンプルの誘導体化：両方の溶液１００μＬを完全に乾燥させた。次に、Ｎ，Ｏ−ビス（トリメチルシリル）トリフルオロアセトアミド（ＢＳＴＦＡ）１５０μＬを加え、得られた溶液を１５０℃まで１時間加熱した。溶液を室温で冷却し、窒素（Ｎ２）気流の下で完全に乾燥させた。両方の固体を１ｍＬのヘキサンに懸濁した。最後に、各溶液１μＬを注入した。
−機器：Ｔｈｅｒｍｏ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ  ＩＴＱ  ９００に接続されたＴｈｅｒｍｏ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ  Ｔｒａｃｅ  ＧＣ  Ｕｌｔｒａ
−カラム：Ｔｅｋｎｏｋｒｏｍａ  Ｓａｐｉｅｎｓ  Ｘ５−ＭＳ  ３０ｍ×０．２５ｍｍ  ｄ．ｉ．×０．２５μｍ  ｄ．ｆ．
−クロマトグラフィー条件：
インジェクター：インジェクタースプリット／スプリットレス
インジェクターモード：スプリットレス
スプリットレス時間：１分
インジェクター温度：３００℃
気体：Ｈｅ（１ｍＬ／分）
オ−ブン法：初期温度：４０℃、等温：１分
工程１：１５℃／分の速度で４０℃〜１８０℃に加熱する。
工程２：１８０℃〜３２０℃に６℃／分の速度で加熱、等温：２５分
検出器：イオン源温度：２００℃。
インターフェース温度：３２０℃。
溶媒遅延：５分
質量範囲：５０ｕｍａ〜９００ｕｍａ。
【０３０２】
４．１．２．高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）
−試験サンプル：１０ｍｇの試験化合物を１０ｍＬのテトラヒドロフラン（ＴＨＦ）に溶解した。各サンプルを３回準備した。試験したサンプルは次の通りであった：ベータ−シトステロールとプロピオン酸形態２との共結晶、ベータ−シトステロールとチモン酸形態３との共結晶、水１．２５分子を有するベータ−シトステロールの水和物結晶、ベータ−シトステロールと没食子酸形態５との共結晶、ベータ−シトステロールと２，４−ジヒドロキシ安息香酸形態６との共結晶、ベータ−シトステロールと３，４−ジヒドロキシ安息香酸形態７との共結晶、ベータ−シトステロールと４−ヒドロキシ安息香酸共結晶形態１１との形態Ａの共結晶、及びベータ−シトステロールと４−ヒドロキシ安息香酸形態１２との形態Ｂ共結晶。
−標準サンプル：Ｐｈ．Ｅｕによるベータ−シトステロール。参照標準、参照（Ｙ０００１６１５）、（７２．５％Ｃ２９Ｈ５０Ｏ）。
−検量線：およそ１５００ｍｇ／Ｌのベータ−シトステロール（１０ｍｇ／５ｍＬ）のＴＨＦ原液を調製した。ＴＨＦで希釈して、０．４ｍｇ／Ｌ〜１１００ｍｇ／Ｌの標準液を更に３つ調製した。全ての標準を２回注入した。
−機器：
クロマトグラフ：Ｗａｔｅｒｓ  Ａｌｌｉａｎｃｅ２６９５。
検出器：Ｗａｔｅｒｓ  ＰＤＡ２９９６。
バランス：Ｍｅｔｌｌｅｒ  Ｔｏｌｅｄｏ  ＡＴ２６１。
ソフトウェア：Ｅｍｐｏｗｅｒ，Ｗａｔｅｒｓ．
−分析条件：
カラム：ＹＭＣ−Ｐａｃｋ  Ｐｒｏ  Ｃ１８、５μｍ、１２ｎｍ、５０ｍｍ×４．６ｍｍ。
移動相：メタノール／アセトニトリル２０：８０（体積／体積）
流量：１．０ｍＬ／分。
注入：１０μＬ
検出：２１０ｎｍ。
【０３０３】
４．１．３．高速液体クロマトグラフィー−高分解能質量（ＨＰＬＣ−ＨＲＭＳ）
−試験したサンプルは、本発明のベータ−シトステロールと没食子酸形態５との共結晶であった。
−機器：クロマトグラフ：Ａｃｃｅｌａ（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｆｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）。
検出器：Ａｃｃｅｌａ（ＰＤＡ）＋ＬＴＱ−Ｏｒｂｉｔｒａｐ  Ｖｅｌｏｓ（ＨＲＭＳ）。
ソフトウェア：Ｘｃａｌｉｂｕｒ（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｆｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）。
−分析条件：カラム：ＹＭＣ−Ｐａｃｋ  Ｐｒｏ  Ｃ１８、５μｍ、１２ｎｍ、５０ｍｍ×４．６ｍｍ。
移動相：メタノール／アセトニトリル２０：８０（体積／体積）
流量：１．０ｍＬ／分。
注入：１０μＬ
検出（ＵＶ）：２１０ｎｍ。
イオン源（ＭＳ）：ＡＰＣＩ
極性（ＭＳ）：陽性
【０３０４】
４．１．４．結果
４．１．４．１．ＨＰＬＣ分析によって得られた結果
６．４３３分、７．９３３分、９．２６７分の標準的なβ−シトステロールＰｈ．Ｅｕｒ．のＨＰＬＣ分析中に３つの重要なピークが観察された（図４１を参照されたい）。それらのピークを、以下の構造を有するＨＲＭＳ分析に従って、それぞれスチグマステロール、カンペステロール及びベータ−シトステロールに割り当てた：
【化１３】
2020524704.tif 000029
【０３０５】
各化合物の分子量は次の通りであった：
スチグマステロール（ピーク１）：：ＭＳ（ＥＳ）（＋）：３９５．３７［Ｃ２９Ｈ４７］＋。
カンペステロール（ピーク２）：ＭＳ（ＥＳ）（＋）：３８３．３７［Ｃ２８Ｈ４７］＋。
β−シトステロール（ピーク３）ＭＳ（ＥＳ）（＋）：３９７．３８［Ｃ２９Ｈ４９］＋。
【０３０６】
上で定義したように、試験した全てのサンプルで同じピークが観察された。結果を以下の表１４に要約する。
【０３０７】
表１４は、テストしたサンプル中のスチグマステロール（ピーク１）、カンペステロール（ピーク２）、及びベータ−シトステロールのＨＰＬＣ定量を示す。略語ＲＴは、分（分）で表される保持時間（ＲＴ）に対応し、面積はパーセンテージ（重量／重量）で表される。
【０３０８】
表１４
【数１６】
2020524704.tif 000030
【０３０９】
４．１．４．２．ＧＳ−ＭＳ分析によって得られた結果
ベータ−シトステロールと没食子酸形態５との共結晶のトリメチルシリル誘導体サンプルと、ｓｉｇｍａ−ａｌｄｒｉｃｈの所業的に入手可能なベータ−シトステロール（バッチ番号ＢＣＢ５００６７Ｖ）の両方のＧＳ−ＭＳ中に、３つの重要なピークが観察され、これは、本発明の全て固体形態に存在する３つのフィトステロールの同一性を高精度で確認するものである。
【０３１０】
観測されたピークは次の通りである：
−ベータ−シトステロール−ＴＭＳ：分子量４８８．３３；
−カンペステロール−ＴＭＳ：分子量４７２．３７；及び
−スチグマステロール−ＴＭＳ：分子量４８６．３６。
【０３１１】
４．１．４．３．結論
上記の結果は、出発物質として使用されたベータ−シトステロールと並んで、得られた本発明の共結晶及び水和形態のベータ−シトステロールの両方が、スチグマステロールのＨＰＬＣで測定された３〜７面積／面積、カンペステロールのＨＰＬＣで測定された８〜１０面積／面積、及びＨＰＬＣベータ−シトステロールで測定された８３〜８８面積／面積を含むことを示す。
【０３１２】
５．溶解度試験
この試験は、絶食時模擬腸液（ＦａＳＳＩＦ−Ｖ２）の溶解性の評価に焦点を当てる。
【０３１３】
５．１．サンプル
−比較サンプルＡ（参照）：Ｐｈ．Ｅｕ．参照標準、参照（Ｙ０００１６１５）によるベータ−シトステロールの標準サンプル
−サンプルＡ：本発明の１．２５分子の水を有するベータ−シトステロールの水和物結晶
−サンプルＢ：本発明のベータ−シトステロールと没食子酸形態５との共結晶
【０３１４】
５．２．可溶化媒質
溶解度を、Ｂｉｏｒｅｌｅｖａｎｔ．ｃｏｍによって述べられるように、マレイン酸バッファー（ｐＨ＝６．５）を使用して調製されたＦａＳＳＩＦ−Ｖ２培地で測定する。
【０３１５】
５．３．方法
５．３．１．振盪フラスコ（ＳＦ：Ｓｈａｋｅ−ｆｌａｓｋ）手順
全ての実験を２５±１℃の温度制御下で行う。ｍｇで表される試験済みサンプルの重量、及びｍＬで表されるＦａＳＳＩＦの最終容量は、以下の表に定義される通りである。
【数１７】
2020524704.tif 000031
【０３１６】
振盪時間：回転撹拌機で２４時間。４時間〜５時間振盪した後、ｐＨを測定し、必要に応じて初期値（６．５）に再調整する。
−平衡時間：２４時間
−最終的なｐＨ測定
−相分離：親水性フィルター（ＰＴＦＥメンブレン、０．４５μｍ多孔サイズ、直径４ｍｍ、Ｍｉｌｌｅｘ−ＬＨ、Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ）による濾過。濾過の前に、フィルターをサンプル溶液で１時間調整した。その後、サンプルの最初の液滴を阻止して濾過を開始した。
−固体形態の特徴：濾過後に得られた固体をＸＲＰＤで分析し、振盪フラスコ手順後に得られた正確な固体形態を把握する。共結晶の場合、ＸＲＰＤ分析により、実験が共晶点条件下で行われていることを確認する。
−液相を、ＡＰＩ及びコフォーマの定量に使用する。
【０３１７】
５．３．２．ＨＰＬＣの定量
−機器：Ｓｈｉｍａｄｚｕ  ＨＰＬＣ、ダイオードアレイ検出器（ＳＰＤ−Ｍ１０ＡＶＰｌ）、２つのポンプ（ＬＣ−１０ＡＤＶＰ）、自動注入器（ＳＩＬ−１０ＡＤＶＰ）及びカラムオーブン（ＣＴＯ−１０ＡＳＶＰ）。
【０３１８】
−カラム：
比較サンプルＡ及びサンプルＡの定量：Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ  Ｋｉｎｅｔｅｘ  Ｃ１８、１００ｍｍ×４．６ｍｍ、２．６μｍ。
サンプルＢの定量：Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ  Ｌｕｎａ  Ｃ１８、１５０ｍｍ×４．６ｍｍ、５μｍ。
【０３１９】
−条件：
比較サンプルＡ及びサンプルＡの定量：８０％メタノール−２０％アセトニトリルで構成される移動相。定組成条件。流量：０．８ｍＬ／分。注入量：２０μＬ。
【０３２０】
サンプルＢの定量：ｐＨ＝３の２０ｍＭギ酸（Ａ）及びメタノール（Ｂ）で構成される移動相。グラジエント条件：０分〜３分、５％Ｂ；８分、１０％Ｂ；１５分、１００％Ｂ；１７分、５％Ｂ；２５分、５％Ｂ．流量：１ｍＬ／分、注入量：１０μＬ
【０３２１】
定量波長：比較サンプルＡの場合２１０ｎｍ、サンプルＡの場合２８０ｎｍ
【０３２２】
５．４．結果
第１部：較正曲線
以下の表は、較正に使用した試験したサンプル及びコフォーマの標準に関する情報、及び較正曲線から取得した平均品質パラメータを示す。
【数１８】
2020524704.tif 000032
【０３２３】
第２部：検出及び定量の限界
比較サンプルＡに対するＬＯＤ及びＬＯＱを次の通り決定した：
−ＬＯＱ：Ｓ／Ｎ比が１０になる濃度である。ＬＯＱを決定するため、所望のＳ／Ｎ比が得られるまで、種々の濃度の比較サンプルＡを注入した。ＬＯＱ＝０．３ｍｇ  Ｌ−１。
−ＬＯＤ：Ｓ／Ｎ比が３になる濃度。ＬＯＤを決定するため、所望のＳ／Ｎ比が得られるまで、種々の濃度の比較サンプルＡを注入した。ＬＯＤ＝０．１ｍｇ  Ｌ−１。
【０３２４】
第３部：溶解度の結果
振盪フラスコ（ＳＦ）実験で得られた濾過溶液中の比較サンプルＡ、サンプルＡ、及びサンプルＢの量を、記載される方法に従って定量した。
【０３２５】
サンプルＡ及びＢの溶解度は、各サンプルの化学量論を考慮して、「Ｓ．Ｊ．Ｂｅｔｈｕｎｅ，Ｎ．Ｈｕａｎｇ，Ａ．Ｊａｙａｓａｎｋａｒ，Ｎ．Ｒｏｄｒｉｇｕｅｚ−Ｈｏｒｎｅｄｏ，Ｃｒｙｓｔａｌ  Ｇｒｏｗｔｈ  ａｎｄ  Ｄｅｓｉｇｎ  ９，２００９，３９７６−３９８８」に記載される共晶点の平衡濃度により計算される。
【０３２６】
以下の表は、種々の試験サンプルで得られた結果を示し、表中、ｌｏｇＳはｍｏｌ／Ｌ単位のＳの対数、［ＡＰＩ］はＳＦ実験による溶液中のベータ−シトステロールの濃度、ｎは反復数、ＰＸＲＤ分析は、ＳＦ実験後に得られる固体／ｓ  形状／ｓを示す。
【数１９】
2020524704.tif 000033
【０３２７】
得られた結果は、本発明のベータ−シトステロールと没食子酸との共結晶が、残りの試験サンプルよりも可溶性であることを指摘している。本発明の１．２５分子の水を有する１：１．２５形態のベータ−シトステロールの水和物結晶は、商業的に入手可能なベータ−シトステロール（比較サンプルＡ）よりも溶解性が高い。
【０３２８】
理論に縛られることなく、溶液中のベータ−シトステロールの量は、溶液と平衡状態にある固体の形態に依存するようである。これは、ベータ−シトステロールと没食子酸との共結晶において、溶液中のベータ−シトステロールの量が当技術分野で開示されているベータ−シトステロールの一水和物結晶と平衡状態にあることを示すＰＸＲＤの結果と一致する。
【０３２９】
６．バイオアベイラビリティの評価
本発明のベータ−シトステロールの結晶、又は本発明の範囲外であるＰｈ．Ｅｕ．参照標準、参照（Ｙ０００１６１５）から入手可能なベータ−シトステロールの比較標準サンプルのいずれかを補足した、３週間の高脂肪食に供された動物（ハムスター）の血漿サンプル中のベータ−シトステロールレベルを測定することにより、本発明のベータ−シトステロールの結晶のバイオアベイラビリティの評価を行った。
【０３３０】
６．１．試験したサンプル
−比較サンプルＡ（対照）：高脂肪食（脂肪のカロリーの６０％、Ｄ１２４９２、米国のＲｅｓｅａｒｃｈ  ｄｉｅｔｓ）。
−比較サンプルＢ１（参照）：ベータ−シトステロールの比較標準サンプル（０．２６４ｇ／ｋｇ  ＢＷ、これはハムスターに換算された、推奨されるヒトの等価用量（３５．７１ｍｇ／Ｋｇ又は２．５ｇ／７０Ｋｇ）に相当する）を補足した高脂肪食（脂肪由来カロリー６０％、Ｄ１２４９２、米国のＲｅｓｅａｒｃｈ  ｄｉｅｔｓ）。
−比較サンプルＢ２（参考）：商業的に認可されたベータ−シトステロール（０．５２８ｇ／ｋｇ  ＢＷ、これは、ハムスターに換算した推奨ヒト等価線量の２倍に相当する）を補足した高脂肪食（脂肪由来カロリー６０％、Ｄ１２４９２、米国のＲｅｓｅａｒｃｈ  ｄｉｅｔｓ）。
−サンプルＣ：本発明のベータ−シトステロールとプロピオン酸との共結晶（ベータ−シトステロールとプロピオン酸形態２との共結晶）（０．２６４ｇ／ｋｇ  ＢＷのベータ−シトステロールに相当）で補足した高脂肪食（脂肪由来カロリー６０％、Ｄ１２４９２、米国のＲｅｓｅａｒｃｈ  ｄｉｅｔｓ）。
−サンプルＧ１：本発明のベータ−シトステロールと没食子酸との共結晶（ベータ−シトステロール０．１５８ｇ／ｋｇ  ＢＷに相当）で補足した高脂肪食（脂肪由来カロリー６０％、Ｄ１２４９２、米国のＲｅｓｅａｒｃｈ  ｄｉｅｔｓ）。
−サンプルＧ２：本発明のベータ−シトステロールと没食子酸の共結晶（ベータ−シトステロールと没食子酸形態５との共結晶）を補足した高脂肪食（脂肪由来カロリー６０％、Ｄ１２４９２、米国のＲｅｓｅａｒｃｈ  ｄｉｅｔｓ）（サンプルＧ１のおよそ２倍の０．３３０ｇのベータ−シトステロール／ｋｇＢＷに等しい）。
ＢＷは体重を表す。
【０３３１】
６．２．動物及び治療
このバイオアベイラビリティの評価試験で使用した動物は、生後８ヶ月の雄性ゴールデンシリアンハムスターであった。１群当たり８匹の動物の６つの実験群を設けた。実験群は次のとおりである：
−比較群Ａ：比較サンプルＡ（対照）を与えた；
−比較群Ｂ１：比較サンプルＢ１を与えた（参照）；
−比較群Ｂ２：比較サンプルＢ２を与えた（参照）；
−テスト群Ｃ：サンプルＣを与えた；
−テスト群Ｇ１：サンプルＧ１を与えた；及び
−テスト群Ｇ２：サンプルＧ２を与えた。
【０３３２】
この試験は、各サンプルを２１日間自由に摂取させて維持した動物に対して実施された。全ての実験群において、ヒトでの使用に推奨される用量の最大２倍（２．５ｇ／日）の範囲の用量で、ハムスターでの使用に適合させて、比較ベータ−シトステロール又は本発明の結晶を食事に補足した（Ｒｅａｇａｎ−Ｓｈａｗ，ｅｔ  ａｌ，“Ｄｏｓｅ  ｔｒａｎｓｌａｔｉｏｎ  ｆｒｏｍ  ａｎｉｍａｌ  ｔｏ  ｈｕｍａｎ  ｓｔｕｄｉｅｓ  ｒｅｖｉｓｉｔｅｄ”．ＦＡＳＥＢ  Ｊ．２００７，ｖｏｌ．２２，ｐｐ．６５９−６６１を参照されたい）。
【０３３３】
６．３．サンプリング
試験サンプルを２１日間給餌した後、動物は、自由な給餌条件下で、活性ペントバルビタールナトリウム（２００ｍｇ／ｍＬのペントバルビタール、ドレタール、ベトキノールの致死量）に基づく致死麻酔の腹腔内注射を受けた。ペントバルビタールナトリウムの致死量（生理食塩水で２５ｍｇ／ｍＬに事前希釈）の投与の量を、各動物の個々の体重に基づいて計算した。
【０３３４】
動物が鎮静したことを確認した後、胸郭のレベルで小さな切開を行って失血させた後、心臓穿刺（２１Ｇ針付き５ｍＬシリンジ）で血液を採取した。血液凝固を防ぐため、針及び注射器の内部を濾過されたＥＤＴＡ（０．５Ｍ、ｐＨ＝８）に予め浸漬した。血液を４℃にて１０分間１０００ｇで遠心分離して血漿を得て、使用するまで−８０℃で凍結させた。
【０３３５】
６．４．測定
血漿中のフィトステロールの測定は、イオン性炎検出器（ＨＰ−５ＭＳカラム（長さ３０ｍ、直径０．２５ｍｍを使用するＧＳ−ＦＩＤ））及びヘリウム移動相フロー０．８ｍＬ・分−１を使用したガスクロマトグラフィー（ＧＣ−７８９０Ａ、Ａｇｉｌｅｎｔ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）と組み合わせた鹸化及び誘導体化後に行われた）。（Ｇａｒｃｉａ−Ｌｌａｔａｓ，Ｇ．ｅｔ  ａｌ．“Ｓｉｍｕｌｔａｎｅｏｕｓ  ｑｕａｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｓｅｒｕｍ  ｐｈｙｔｏｓｔｅｒｏｌｓ  ａｎｄ  ｃｈｏｌｅｓｔｅｒｏｌ  ｐｒｅｃｕｒｓｏｒｓ  ｕｓｉｎｇ  ａ  ｓｉｍｐｌｅ  ｇａｓ  ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｉｃ  ｍｅｔｈｏｄ”。Ｅｕｒｏｐｅａｎ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｌｉｐｉｄ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，２０１２，ｖｏｌ  １１４（５），ｐｐ．５２０−５２６、及びＡｎｄｒａｄｅ，Ｉ．ｅｔ  ａｌ．“Ａｄｖａｎｃｅｓ  ｉｎ  ａｎａｌｙｔｉｃａｌ  ｍｅｔｈｏｄｓ  ｔｏ  ｓｔｕｄｙ  ｃｈｏｌｅｓｔｅｒｏｌ  ｍｅｔａｂｏｌｉｓｍ：ｔｈｅ  ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｓｅｒｕｍ  ｎｏｎｃｈｏｌｅｓｔｅｒｏｌ  ｓｔｅｒｏｌｓ”。Ｂｉｏｍｅｄｉｃａｌ  Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ，２０１３，ｖｏｌ．２７（１０），ｐｐ．１２３４−１２４２を参照されたい）。
【０３３６】
６．５．統計分析
データの結果を、平均±標準誤差（ＳＥＭ）として提示した。ＩＢＭ  ＳＰＳＳ  Ｓｔａｔｉｓｔｉｃｓ  ２４．０（米国イリノイ州シカゴ）を使用して、統計分析を実施した。群間の比較を、分散分析（一元配置分散分析）に続いてフィッシャーのポスト−ホック分析（ＬＳＤ、最小有意差）によって行った。スチューデントのｔ検定を２つの群間の単一比較にも使用した。有意水準をｐ≦０．０５に設定した。
【０３３７】
６．６．結果
６．６．１．シトステロール血症
シトステロール血症に対する治療の影響に関して、データは１に設定された対照群（比較群Ａ）に対する変動の比率として示される。２１日間の市販のベータ−シトステロールの経口投与は、両方の用量において化合物の循環レベルの増加をもたらして用量依存的な応答を示し；参照サンプルＢ１の投与は、対照（比較群Ａ）に対して２．４倍の倍変化（ＦＣ）をもたらし、参照サンプルＢ２の投与は、対照（比較群Ａ）に対してＦＣの５．３の増加をもたらした。本発明のベータ−シトステロールとプロピオン酸との共結晶（試験サンプルＣ）及び本発明のベータ−シトステロールと没食子酸との共結晶（試験サンプルのＧ１及びＧ２）の投与はまた、ベータ−シトステロールの循環レベルの増加、比較群Ａに対して、それぞれ６．４、４．７及び７．９のＦＣの増加を促進した。
【０３３８】
それにもかかわらず、本発明のベータ−シトステロールとプロピオン酸との共結晶（テストサンプルＣ）のベータ−シトステロールの循環レベルを増加させる有意な効果が、同じ用量の市販のベータ−シトステロール（比較群Ｂ１）で治療された参照群と比較して観察された。特に、参照サンプルＢ１の値に関連して２．７のＦＣ増分が観察された（ｐ＝０．０１２６対比較サンプルＢ１、スチューデントｔ検定）。
【０３３９】
７．粒子サイズ試験
この試験は、Ｐｈ．Ｅｕ．参照標準、参照（Ｙ０００１６１５）によるベータ−シトステロールの比較標準サンプルと比較した、本発明の共結晶の粒子サイズを提供する。
【０３４０】
７．１．試験したサンプル
−比較サンプルＡ：Ｐｈ．Ｅｕ．参照標準、参照（Ｙ０００１６１５）によるベータ−シトステロールの比較標準サンプル。
−サンプルＡ：本発明の１．２５分子の水を有するベータ−シトステロールの水和物結晶
−サンプルＢ：本発明のベータ−シトステロールと没食子酸形態５との共結晶
−サンプルＣ：本発明のベータ−シトステロールとプロピオン酸形態２との共結晶
【０３４１】
７．２．方法
粒径をレーザ回折によって行った。この目的のために、Ｂｅｃｋｍａｎ−Ｃｏｕｌｔｅｒモデル、ＬＳ１３３２０レーザ回折計（米国カリフォルニア州フラートン）にＭｉｃｒｏ．Ｌｉｑｕｉｄ  Ｍｏｄｕｌｅ（ＭＬＭ）湿式分散モジュ−ル、光学モデル（Ｆｒａｕｎｈｏｆｅｒ．Ｒｄｆ、ＰＩＤＳ）を装備させた。測定範囲は０．４μｍ〜２０００μｍである。
【０３４２】
７．３．結果
以下の表は、試験したサンプルの平均、表面加重平均直径（Ｄ（３，２））、標準偏差（Ｓ．Ｄ）、及びＤ１０、Ｄ５０及びＤ９０を示す。
【数２０】
2020524704.tif 000034
【０３４３】
上記の結果は、本発明のベータ−シトステロールの共結晶の粒子サイズがベータ−シトステロールより小さいことを示している。
【０３４４】
引用文献一覧
１．Ｌｅｅｎａ  Ｉ．Ｃｈｒｉｓｔｉａｎｓｅｎ  ｅｔ  ａｌ．“Ａ  ｎｏｖｅｌ  ｍｅｔｈｏｄ  ｏｆ  ｐｒｏｄｕｃｉｎｇ  ａ  ｍｉｃｒｏｃｒｙｓｔａｌｌｉｎｅ  ｂｅｔａ−ｓｉｔｏｓｔｅｒｏｌ  ｓｕｓｐｅｎｓｉｏｎ  ｉｎ  ｏｉｌ”Ｅｕｒｏｐｅａｎ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，２００２，ｖｏｌ．１５，ｐｐ．２６１−２６９．
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１０．Ｇａｒｃｉａ−Ｌｌａｔａｓ，  Ｇ．ｅｔ  ａｌ．“Ｓｉｍｕｌｔａｎｅｏｕｓ  ｑｕａｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｓｅｒｕｍ  ｐｈｙｔｏｓｔｅｒｏｌｓ  ａｎｄ  ｃｈｏｌｅｓｔｅｒｏｌ  ｐｒｅｃｕｒｓｏｒｓ  ｕｓｉｎｇ  ａ  ｓｉｍｐｌｅ  ｇａｓ  ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｉｃ  ｍｅｔｈｏｄ”．Ｅｕｒｏｐｅａｎ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｌｉｐｉｄ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，２０１２，ｖｏｌ  １１４（５），ｐｐ．５２０−５２６．
１１．Ａｎｄｒａｄｅ，Ｉ．ｅｔ  ａｌ．“Ａｄｖａｎｃｅｓ  ｉｎ  ａｎａｌｙｔｉｃａｌ  ｍｅｔｈｏｄｓ  ｔｏ  ｓｔｕｄｙ  ｃｈｏｌｅｓｔｅｒｏｌ  ｍｅｔａｂｏｌｉｓｍ：ｔｈｅ  ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｓｅｒｕｍ  ｎｏｎｃｈｏｌｅｓｔｅｒｏｌ  ｓｔｅｒｏｌｓ”．Ｂｉｏｍｅｄｉｃａｌ  Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ，２０１３，ｖｏｌ．２７（１０），ｐｐ．１２３４−１２４２．
【図１】
2020524704.tif 000035
【図２】
2020524704.tif 000036
【図３】
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【図４】
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【図５】
2020524704.tif 000039
【図６】
2020524704.tif 000040
【図７】
2020524704.tif 000041
【図８】
2020524704.tif 000042
【図９】
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【図１０】
2020524704.tif 000044
【図１１】
2020524704.tif 000045
【図１２】
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【図１３】
2020524704.tif 000047
【図１４】
2020524704.tif 000048
【図１５】
2020524704.tif 000049
【図１６】
2020524704.tif 000050
【図１７】
2020524704.tif 000051
【図１８】
2020524704.tif 000052
【図１９】
2020524704.tif 000053
【図２０】
2020524704.tif 000054
【図２１】
2020524704.tif 000055
【図２２】
2020524704.tif 000056
【図２３】
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【図２４】
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【図２５】
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【図２６】
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【図２７】
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【図２８】
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【図２９】
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【図３０】
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【図３１】
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【図３２】
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【図３３】
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【図３４】
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【図３５】
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【図３６】
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【図３７】
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【図３８】
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【図３９】
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【図４０】
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【図４１】
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【図４２】
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【国際調査報告】
2020524704.tif 000077
2020524704.tif 000078
2020524704.tif 000079
2020524704.tif 000080
2020524704.tif 000081