(57)【要約】【書類】  本発明は、ケルセチン、リン脂質および非常に自由に水溶性の担体を含む粉末固体分散物に関する。本発明はまた、粉末固体分散体、ならびに前記固体分散体を含む医薬組成物、栄養補助食品組成物および化粧品組成物の調製方法に関する。【選択図】図１【特許請求の範囲】
【請求項１】
ケルセチン、リン脂質、および水に非常に溶けるないし自由に溶ける担体を含む粉末固体分散体であって、ケルセチン対リン脂質の重量比が５：１〜１：１の範囲である分散体。
【請求項２】
ケルセチンがケルセチン二水和物で請求項１に記載の粉末固体分散体。
【請求項３】
前記リン脂質が、大豆、ひまわりまたは卵由来のレシチン、ホスファチジルコリン、ホスファチジルセリン、ホスファチジルエタノールアミン、またはそれらの混合物からなる群から選択され、前記アシル基は同一であるかまたは異なり、大部分がパルミチン酸、ステアリン酸、オレイン酸、リノール酸、リノレン酸に由来する、請求項１または２に記載の粉末固体分散体。
【請求項４】
ケルセチン対リン脂質の重量比が２：１〜１：１の範囲で請求項１〜３のいずれか１項に記載の粉末固体分散体。
【請求項５】
担体が、単糖および二糖；多価アルコール；可溶性オリゴ糖および多糖からなる群から選択される、請求項１〜４のいずれか１項に記載の粉末固体分散体。
【請求項６】
単糖および二糖が、スクロース、フルクトース、マルトデキストリンからなる群から選択される、請求項５に記載の粉末固体分散体。
【請求項７】
前記多価アルコールが、マンニトール、ソルビトール、キシリトールからなる群から選択される、請求項５に記載の粉末固体分散体。
【請求項８】
前記可溶性オリゴ糖および多糖がデキストランまたはプルランである請求項５に記載の粉末固体分散体。
【請求項９】
ケルセチン対担体重量比が１：５〜５：１の範囲である請求項１〜８のいずれか１項に記載の粉末固体分散体。
【請求項１０】
ケルセチン対担体重量比が１：２〜３：１の範囲である請求項９に記載の粉末固体分散体。
【請求項１１】
平均粒度分布が１００μｍ〜３００μｍである請求項１〜１０のいずれかに記載の粉末固体分散体。
【請求項１２】
Ｘ線回折パターンが、８．９±０．２、１３．５±０．２、２６．０±０．２、２７．８±０．２θ角（ＣｕＫα λ＝１．５４１９Å）にピークを有することで特徴づけられる請求項１〜１１のいずれかに１項に記載の粉末固体分散体。
【請求項１３】
ケルセチン、リン脂質および水溶性担体を加熱しながら、適当な無水有機溶媒に溶解または懸濁させ、次いで溶媒を除去して粉末固体分散体を得ることを含む、請求項１〜１２のいずれか１項に記載の粉末固体分散体の調製方法。
【請求項１４】
以下の工程を含む、請求項１３に記載の方法: 
ａ）５重量％未満の水を含む有機溶媒中のケルセチンの溶液の調製する工程; 
ｂ）工程ａ）で使用したのと同じ溶媒中でリン脂質の溶液／懸濁液を調製する工程; 
ｃ）工程ａ）で得られたケルセチンの溶液を、工程ｂ）で得られたリン脂質の溶液／懸濁液と反応させる工程; 
ｄ）工程ｃ）で得られた混合物に、水に非常に溶解するないし自由に溶解する担体を添加し、真空下または噴霧乾燥下で溶媒を除去して、粉末固体分散体を形成する工程。
【請求項１５】
以下の工程を含む、請求項１３に記載の方法: 
ａ１）５重量％未満の水を含む有機溶媒中のケルセチンの溶液［溶液（Ｓ１）］を調製する工程; 
ｂ１）溶液（Ｓ１）にリン脂質および水に非常に溶解するないし自由に溶解する担体を添加して、ケルセチン、リン脂質および担体の溶液または懸濁液［溶液または懸濁液（Ｓ３）］を準備する工程、
ｃ１）真空下または噴霧乾燥下で溶媒を除去して、粉末固体分散体を形成する工程。
【請求項１６】
有機溶媒が、エチルアルコール、イソプロピルアルコール、ｎ−プロピルアルコール、ｎ−ブタノール、酢酸エチル、アセトンからなる群から選択される、請求項１２〜１５のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１７】
工程ａ）〜ｄ）が４０℃〜８０℃の範囲の温度で実施される、請求項１４に記載の方法。
【請求項１８】
工程ａ１）およびｂ１）が４０℃〜８０℃の範囲の温度で実施される、請求項１５に記載の方法。
【請求項１９】
請求項１〜１２に記載の粉末固体分散体と、１つ以上の薬学的および食品許容の賦形剤とを含む、経口投与のための製剤。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、リン脂質および水に非常にない自由に溶ける担体を含む粉末固体分散体に関する。本発明はまた、前記粉末固体分散体および前記粉末固体分散体を含む医薬組成物、栄養補助食品組成物および化粧品組成物の調製方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
式（Ｉ）を有するケルセチン（すなわち、２−（３，４−ジヒドロキシフェニル）−３，５，７−トリヒドロキシ−４Ｈ−クロメン−４−オン）は、フラボノイドのサブクラスであるフラボノールの化学ファミリーに属する。ケルセチンは親油性シトロン黄色粉末であり、水に実質的に不溶であるが、エタノール、メタノール、アセトンおよび他の親油性有機溶媒に可溶である。ケルセチンの融点は３１６℃である。
【０００３】
【化１】
2020527549.tif 000002
【０００４】
ケルセチンは、主にケルセチン配糖体として、リンゴ、グレープ、タマネギ、ケイパー、ベリー、ラディッシュを含む多くの果物および野菜中に存在する。ケルセチンは、抗酸化作用、抗炎症作用、抗アレルギー作用および抗喘息作用を含む、ヒトの健康に対する多くの潜在的な有益な効果を有する。ケルセチンの抗アレルギー活性および抗喘息活性は、肥満細胞および好塩基球によるヒスタミン放出に対する阻害効果によって媒介される。ケルセチンはまた、異なる作用機構によるその潜在的な抗癌効果についても研究されている。ヒトの健康に対するこれらの潜在的な有益な効果の結果として、ケルセチンは、栄養補助食品および医薬成分として注目を集めている。
【０００５】
しかしながら、ケルセチンの潜在的な効力は主にその非常に低い水溶性からくる、その低くかつ可変的な生物学的利用能によって制限される。経口生物学的利用能が低く、変動するため、その薬理学的活性を保証するために、ケルセチンの高い単位用量が必要とされる。
【０００６】
ケルセチンの生体内吸収の高い変動性は動物に関する多くの研究によって実証されており、異なる食餌因子がケルセチン吸収に強く影響し得ることが示されている（Nishijima, T. et al(2009) Journal of agricultural and food chemistry, 57 (6), 2583-2587; Tamura, M. et al (2007) Journal of food science, 72 (９); Azuma, K. et al（2003）。
【０００７】
様々なアプローチがケルセチン吸収を改善するために検討されており、これには、マイクロエマルジョンおよびナノエマルジョンへの（Gao, Y. et al（2009）Colloids and Surfaces B: Biointerfaces, 71(2)、306-314)、固体脂質ナノ粒子への(Li, H. et al. (2009) Journal of Controlled Release、133（3）、238−244）、シクロデキストリン包含複合体への(Aytac, Z. et al. (2016) Food chemistry、197、864-871）、ポリマーナノ粒子への(Patel, A. R., et al. （2012）Food Chemistry, 133(2), 423-429) 組込みが含まれる。
【０００８】
しかし、これらのアプローチの大部分が低い封入装填量、製造の複雑さ、費用対効果的な工業規模の製造方法の欠如を含む多くの欠点を有する。さらに、これらのアプローチの大部分は実験室規模でのみ適用されており、ケルセチン経口生物学的利用能の潜在的な改善は、生体外または生体内動物研究のみで実証されている。
【０００９】
ＣＮ１８１３６７７号公開公報(UNIV SICHUAN [CN]、2006年８月９日公開）はケルセチンリポソーム注射粉末およびその調製方法に関する。リポソーム粉末がケルセチン、ポリグリコール−ホスファチジルエタノールアミン、レシチン、コレステロールおよび賦形剤（例えば、ソルビトール、マンニトール、グルコース、カン糖またはトレハロース）から作製され、ケルセチン、ポリグリコール−ホスファチジルエタノールアミン、レシチンおよびコレステロールをクロロホルムおよびメタノールに溶解させ、溶媒を蒸発させて乾燥残渣を得、滅菌ブロスおよび賦形剤を添加して水溶液を得、これを超音波処理し、凍結乾燥させて粉末を得る工程を経て調製される。
【００１０】
2014年4月9日に公開されたＣＮ１０２５８０１１１公報(UNIV SICHUAN)は、シクロデキストリン中に捕捉されたケルセチンを含むリポソームを開示する。具体的には、リポソームが溶液を得るために無水アルコール、ｎ−ブチルアルコールおよびエーテルの１つ以上から選択される溶媒中のヒドロキシプロピル−β−シクロデキストリンの溶液にケルセチンを添加すること；溶液に卵黄レシチンまたは大豆リン脂質、コレステロール、ポリエチレングリコール−ジステアリル酸、ホスファチジルエタノールアミンを添加すること；続いて得られた溶液をスクロースの水溶液に添加し、凍結乾燥によって溶媒を除去することを含むプロセスによって調製される。リポソームにおいて、レシチンまたは大豆リン脂質は、ケルセチンに対して過剰に使用され；より詳しくは、ケルセチンとレシチンまたは大豆リン脂質との間の重量比が１：５〜１：５０である。
【００１１】
2010年12月8日に公開されたＣＮ１０１９０４８２１号公開公報(LINGMIN JIANG; LEI GAO)は３００ｎｍ未満、好ましくは１００〜３００ｎｍの平均直径を有し、ケルセチン、界面活性剤および凍結乾燥保護剤からなるケルセチンナノ凍結乾燥粉末に関する。界面活性剤はとりわけ、リン脂質または大豆レシチンであり得、凍結乾燥保護剤は多糖類またはポリオールである。ケルセチン粉末は完全に水中で実施されるプロセスによって製造され、具体的には界面活性剤が水中に分散され、次いでケルセチンが添加され、得られた懸濁液が加圧下で均質化され、凍結乾燥される。凍結乾燥保護剤は、ケルセチンの添加前または凍結乾燥前に界面活性剤分散液に添加することができる。
【００１２】
ＣＮ１８１３６７７号公開公報、ＣＮ１０２５８０１１１号公報およびＣＮ１０１９０４８２１号公開公報のいずれも、その調製が水の使用を含むリポソームを開示する。
Hong-Bo Yang、et al（2017) Joint International Conference on Materials Science and Engineering Application、April 2017、pages 1-7）はテトラヒドロフラン中に１：２の重量比でケルセチンおよびリン脂質を溶解し、撹拌し、濾過し、真空下５０℃で乾燥することによる、リン脂質中のケルセチンの固体分散体の調製を開示している。Ｘ線はケルセチン自体が結晶性固体であることを示唆するが、固体分散体のＸ線分析は固体分散体中にケルセチンが非晶質形態で存在することを示す。
【００１３】
Sang Hyun Park et al. Mass Spectrometry Letters, vol.７,no.3, 2016年9月30日、79〜83頁）はケルセチン、親水性ポリマーおよび担体をエチルアルコールに溶解し、次いで蒸発させて残渣を得、これをＨＰＭＧ、ＰＥＧ８０００、PVP K４０および水に溶解させて透明な溶液を得て、これを凍結乾燥させて固体分散体を得ることにより、ケルセチンの固体分散体を調製することを教示している。この文献は、ケルセチンがこのようにして結晶形態から非晶質形態に変換されることを述べている。ケルセチンの吸収が不十分で変動しやすいため、その経口生物学的利用能を促進し、それに応じて全身循環へのより一定した吸収および薬理学的活性を保証することができる送達システムを開発する必要性が依然として存在する。
【図面の簡単な説明】
【００１４】
【図１】本発明の固体分散体（ケルセチン：リン脂質：担体重量比＝３：３：２）、ケルセチン二水和物およびケルセチン二水和物の物理的混合物（ケルセチン：リン脂質：担体重量比＝３：３：２）のＸ線回折パターンを示す図である。
【発明の概要】
【００１５】
本発明は、ケルセチン、リン脂質、および水に非常に溶けるないし自由に溶ける担体を含む粉末固体分散体に関する。
【００１６】
本発明はまた、無水有機溶媒に溶解または懸濁させ、加熱下でケルセチン、リン脂質および水溶性担体を溶解または懸濁させ、次いで溶媒を除去して粉末固体分散体を得ることを含む粉末固体分散体の調製方法に関する。
【００１７】
本発明のさらなる目的は、粉末固体分散体と、１つ以上の薬学的および食品に許容される賦形剤とを含む、経口投与のための製剤である。
【発明を実施するための形態】
【００１８】
驚くべきことに、ケルセチン、リン脂質、および水に非常に溶けるないし自由に溶ける担体を含む、好ましくはそれらからなる粉末固体分散物は、ヒトにおけるケルセチンの改善された溶解性および経口生物学的利用能によって特徴付けられることが見出された。
【００１９】
好ましい実施形態によれば、ケルセチンはケルセチン二水和物である。
【００２０】
リン脂質は大豆、ひまわりまたは卵からのレシチン、ホスファチジルコリン、ホスファチジルセリン、ホスファチジルエタノールアミン、またはそれらの混合物からなる群から選択されてもよく、ここで、同じであっても異なっていてもよいアシル基は主にパルミチン酸、ステアリン酸、オレイン酸、リノール酸、リノレン酸から誘導される。好ましい実施形態ではレシチンは大豆またはヒマワリレシチンであり、より好ましい実施形態ではレシチンはヒマワリレシチンである。
【００２１】
ケルセチン対リン脂質の重量比は、５：１〜１：１、好ましくは２：１〜１：１の範囲であり得る。
本発明によれば、用語「非常に溶ける(very soluble)」および用語「自由に溶ける(freely soluble)」はヨーロッパ薬局方５．０に定義されるように、以下のスキームで報告される意味を有する。
【００２２】
【表１】
2020527549.tif 000003
【００２３】
使用される用語は、１５℃〜２５℃の間の温度で定義された有意性を有する。
【００２４】
「担体」という用語は、以下では「水に非常に溶けるないし自由に溶ける担体」を示すために使用される。担体は、単糖および二糖（スクロース、フルクトース、マルトデキストリンなど）；多価アルコール（マンニトール、ソルビトール、キシリトールなど）；可溶性オリゴ糖および多糖（デキストラン、プルランなど）からなる群から選択されてもよい。好ましい態様において、担体はマルトデキストリンである。
【００２５】
ケルセチン対キャリアの重量比は、１：５〜５：１、好ましくは１：２〜３：１の範囲である。疑義を排除するために、本願発明を通して、範囲が示される場合、範囲の端が含まれる。
【００２６】
好ましくは、本発明の固体分散体は１００μｍ〜３００μｍの範囲の平均粒径分布を有する。
【００２７】
好ましくは、本発明の固体分散体がケルセチン、リン脂質および上記で定義した担体のみからなる。好ましい実施形態では、本発明の固体分散体がケルセチン、ヒマワリレシチンおよびマルトデキストリンからなり、別の好ましい実施形態では本発明の固体分散体がケルセチン、ヒマワリレシチンおよびフルクトースからなる。
【００２８】
理論に束縛されるものではないが、担体は粉末固体分散体の性能に対して基本的な役割を果たし、ケルセチンの迅速な溶解速度を促進し、その経口生物学的利用能を促進するのに寄与すると考えられる。また、可溶性担体は、最終生成物の物理的性質を最適化する際に関連する役割も果たすと考えられる。
【００２９】
本発明の固体分散体において、ケルセチンの物理化学的性質は、ケルセチン／リン脂質の重量比が低くても、ケルセチンの薬理学的性能が改善されるほど、有意に改変されることが見出された。驚くべきことに、ケルセチン、特にケルセチン二水和物はリン脂質中に大量に組み込むことができ、本発明の固体分散体のＸ線が、かなりの量の結晶が依然として存在することを示しているにもかかわらず、水中での溶解が速いことが観察された。実際に、Hong-Bo Yang et alおよびSang Hyun Park g et alの前述の刊行物の教示に基づいて、当業者は急速な溶解は、結晶形態のケルセチンが存在しないことに起因すると考えるであろう。
【００３０】
本発明の固体分散体は、塩素化溶媒の使用を回避し、凍結乾燥工程を全く含まず、パイロットおよび工業装置で容易にスケールアップすることができるプロセス（または方法）を用いて有利に調製することができる。
【００３１】
したがって、本発明のさらなる目的は、５重量％未満の水を含む有機溶媒に溶解または懸濁させ、加熱下でケルセチン、リン脂質および水溶性担体を溶解または懸濁させ、次いで溶媒を除去して粉末固体分散体を得ることを含む、本発明による粉末固体分散体の調製方法である。
【００３２】
一実施形態では、プロセスが以下のステップを含む: 
ａ）ケルセチンの有機溶媒溶液［溶液（Ｓ１）］を調製する工程; 
ｂ）工程ａ）で使用したのと同じ溶媒中のリン脂質の溶液／懸濁液［溶液または懸濁液（Ｓ２）］を調製する工程; 
ｃ）工程ａ）で得られたケルセチンの溶液を工程ｂ）で得られたリン脂質の溶液／懸濁液と接触させて、さらなる溶液または懸濁液［懸濁液または溶液（Ｓ３）］を準備する工程; 
ｄ）工程ｃ）で得られた溶液または懸濁液に、水に非常に溶けるないし自由に溶ける担体を添加する工程、
ｅ）真空下または噴霧乾燥下で溶媒を除去して、粉末固体分散体を形成する工程。
【００３３】
別の実施形態では、プロセスが以下のステップを含む: 
ａ1）５重量％未満の水を含む有機溶媒中のケルセチンの溶液［溶液（Ｓ１）］を調製する工程; 
ｂ1）溶液（Ｓ１）にリン脂質および非常に溶けるから水担体に自由に溶ける担体を添加して、溶液中にケルセチン、リン脂質および担体を含む溶液または懸濁液［溶液または懸濁液（Ｓ３）］中に準備する工程、
ｃ1）真空下または噴霧乾燥下で溶媒を除去して、粉末固体分散体を形成する工程。
【００３４】
有機溶媒は大気圧で８０℃以下の沸点を有する食品用溶媒であり、好ましくは溶媒がＣ1〜Ｃ４の直鎖または分岐鎖アルコール、酢酸エチルまたはアセトンであり、より好ましくは溶媒がエチルアルコール、イソプロピルアルコール、ｎ−プロピルアルコール、ｎ−ブタノール、酢酸エチル、アセトンを含む群から選択される。さらにより好ましくは、溶媒がエタノールおよび酢酸エチルから選択される。
【００３５】
本発明の方法は５重量％未満の水を含有する溶媒を使用して実施され、それは水に溶解する工程を全く含まない。
【００３６】
ケルセチン、リン脂質および担体の溶解または懸濁は加熱下で行われ、特に好ましい実施形態の工程ａ）〜ｄ）およびｂ１）は加熱下で行われ、典型的には加熱が３０℃〜溶媒沸点、好ましくは４０℃〜８０℃、より好ましくは５０℃〜６０℃の範囲の温度で、ケルセチン、リン脂質および担体の溶解または懸濁が完全になるまで、または部分的に完了するまで行われる。当業者はケルセチン、リン脂質および担体の完全または部分的な可溶化（すなわち、懸濁）を得るために必要な時間を決定することができるのであろう。
【００３７】
疑義を排除するために、本出願において、用語「溶液」は目視検査で、選択された温度で透明である液体組成物を意味し；用語「懸濁液」は目視検査では不透明であるが、それにもかかわらず均一である液体組成物を意味する。
【００３８】
工程ｅ）またはｃ１）の後、粉末固体分散体を調整して、１００μｍ〜３００μｍの前述の範囲内の所望の粒径分布を得てもよく、最終的に、その物理的および技術的特性をさらに改善するために、二酸化ケイ素、タルク、ステアリン酸マグネシウムなどの薬学的および食品許容の賦形剤と混合してもよい。
【００３９】
ケルセチンおよびリン脂質が装填されている、水に非常に溶けるないし自由に溶ける担体への迅速な溶解は、ケルセチン湿潤性および迅速な溶解を増強するのに寄与する。結果として、吸収部位における高いケルセチン濃度が生成され、胃腸管の吸収膜を通るケルセチンの受動的拡散の駆動力である高い濃度勾配を決定する。
【００４０】
理論に束縛されるものではないが、本発明の方法の間の選択された有機溶媒中のケルセチンおよびリン脂質の完全または少なくとも部分的な共溶解はケルセチンの溶解性および経口生物学的利用能の改善に寄与すると考えられる。
【００４１】
示差走査熱量測定（ＤＳＣ）による熱量分析を行って、融解エンタルピー（Ｊ／ｇ）の減少に基づいて、全結晶性未配合ケルセチンと比較した、特にケルセチン二水和物と比較した、粉末固体分散物中のケルセチンのアモルファス化の程度を決定した。Ｘ線分析も行った。本発明の粉末固体分散体のＸ線回折パターンは、８．９±０．２、１３．５±０．２、２６．０±０．２および２７．８±０．２θ角（ＣｕＫα λ＝１．５４１９Å）に特徴的なピークを示した。
【００４２】
したがって、本発明のさらなる目的はケルセチン、リン脂質、およびケルセチン対リン脂質の重量比が５：１〜１：１の範囲であり、８．９±０．２、１３．５±０．２、２６．０±０．２、および２７．８±０．２θ角（ＣｕＫα λ＝１．５４１９Å）に特徴的なＸ線回折パターンピークを特徴とする、好ましくはケルセチン、リン脂質、および水に非常に溶けるないし自由に溶ける担体からなる粉末固体分散体である。
【００４３】
疑義を排除するために、ケルセチン、リン脂質、担体、重量比および粒径に関するすべての好ましい定義および実施形態が、本発明のこの目的に適用される。
【００４４】
本発明の粉末固体分散体は錠剤およびカプセルのような従来の固体剤形に容易に組み込むことができるが、使用できる、または即席の液体製剤にも組み込むことができるケルセチンの最も重要な適用分野の１つを代表するスポーツ栄養分野において特に有用である。
【００４５】
本発明の別の目的は、本発明の粉末固体分散体と、崩壊剤、滑沢剤、バインダー、コーティング剤、着色剤、吸収促進剤、可溶化剤、安定剤、香味料、甘味料、防腐剤、防酸化剤などの１つ以上の薬学的および食品に許容される賦形剤とを含有する経口投与のための製剤である。
【００４６】
本発明による製剤は、例えば、Remington's Pharmaceutical Handbook、Mack Publishing Co、NY USAに記載されているような従来の技術に従って調製することができる。
【００４７】
本発明の製剤の投薬形態の例には、コーティングされた錠剤またはコーティングされていない錠剤、咀嚼錠、カプセル、軟ゼラチンカプセル、硬ゼラチンカプセル、カプレット、ロゼンジ、咀嚼可能なロゼンジ、即席およびすぐに使用できる液体製剤、およびそれらの組み合わせが含まれる。
【００４８】
本発明の粉末固体分散体中に含まれるケルセチンの改善された溶解度を、模擬胃液および腸液中で評価した。
【００４９】
ケルセチンの粉末固体分散体の経口生物学的利用能を、ヒトにおいて（未処方の、遊離形態の）ケルセチンと比較して評価した。
【００５０】
結果は、本発明による粉末固体分散物中のケルセチンの経口生物学的利用能がケルセチン二水和物（未処方、遊離形態）と比較して有意に改善されたことを示す。
【００５１】
ヒトを対象に関する薬物動態学的研究により、本発明の粉末固体分散体のケルセチンについて、ケルセチンそれ自体と比較して約５０倍の経口生物学的利用能の改善が確認された。
【００５２】
得られた粉末固形分散体は、ケルセチンの高含量、ケルセチンの溶解度および溶解速度の改善、ケルセチンそれ自体と比較した場合のヒトにおけるケルセチンの経口生物学的利用能の改善（ＡＵＣおよびＣmax）を特徴とする。これら全ては驚くべきことであり、実際に、本発明の粉末固形分散体のＤＳＣ分析は体液中での可溶化および生物学的利用能を増加させるために必要であると考えられるケルセチンのほとんど定量的なアモルファス化を示すようであったが、Ｘ線分析は二水和物形態とは異なる結晶形態のケルセチンの有意なピークを示した。
【００５３】
以下の実施例は、本発明をさらに記載する。
【実施例】
【００５４】
実施例１：粉末固体分散体の調製
ケルセチン二水和物３７５ｇをエチルアルコール１３Ｌに添加し、次いで６０℃で加熱し、完全に溶解するまで約１５分間混合した。
【００５５】
３７５ｇのヒマワリレシチンおよび２５０ｇのマルトデキストリンをケルセチン溶液に添加した。得られた懸濁液を５０℃で約６０分間撹拌した。ソフトな塊が得られるまで、溶媒を減圧下で除去した。残りの溶媒を真空下、５０℃で約１２時間、１００００ｐｐｍ未満のエチルアルコール残渣まで除去した。
【００５６】
実施例２：粉末固体分散体の調製
ケルセチン二水和物３５０ｇを酢酸エチル１２ Ｌに加え、次いで６０℃で加熱し、完全に溶解するまで約１５分間混合した。
【００５７】
３００ｇのヒマワリレシチンおよび３５０ｇの微細フルクトースをケルセチン溶液に添加した。得られた懸濁液を５０℃で約６０分間撹拌した。ソフトな塊が得られるまで、溶媒を減圧下で除去した。残存する溶媒を真空下５０℃で約１６時間除去し、酢酸エチルが５０００ｐｐｍ未満残留するまで除去した。
【００５８】
実施例３：ＤＳＣ（示差走査熱量測定）およびＸ線分析による粉末固体分散体の特性評価
実施例１で得られた粉末固体分散体を、（未配合の、遊離形態の）ケルセチン二水和物と比較して、ＤＳＣによって分析した。分析は、Mettler DSC１ Systemを用いて行った。熱流は、５０ｍｌ／分の窒素流下で、ピンホールを有する閉じたアルミニウムるつぼ（４０μｌ体積）を使用して、線形加熱速度（１０℃／分）で３０〜３００℃で記録した。約５〜１０ｍｇの粉末を各測定に使用した。熱プロファイルは、専用のソフトウェアによって取得し、綿密化した。
【００５９】
固体分散ＤＳＣ曲線におけるケルセチンの吸熱ピークの消失は、ほぼ定量的なアモルファス化を示すと考えられる。代わりに、実施例１で得られた粉末固体分散体のＸＲＤＰ(Ｘ線回折パターン）を、ケルセチン二水和物、および実施例１で得られた固体分散体と同じ定性的組成（物理的混合物）を有する物理的混合物（図参照）と比較したところ、本発明の固体分散体は、依然としてかなりの量の結晶形態を含有するが、ケルセチン二水和物そのものあるいは物理的混合物中に存在するケルセチン二水和物とは違っていることが示された。
【００６０】
本実施例のケルセチン二水和物のＸＲＤＰは、相対強度１００％（正味強度７０９６カウント）で、１２．５ ２θ角度で最も強い回折ピークを特徴とする。物理的混合物では１２．５ ２θ角度での同じピークが最も強いままであり（相対強度１００％、正味強度２５７７カウント）、一方、１２．５ ２θ角度での固体分散体ではノイズベースラインのみが検出可能である。
【００６１】
反対に、この実施例の固体分散体のＸＲＤＰでは最も強い回折ピークが１００％の相対強度（正味強度５０１カウント）を有する１３．５ ２θ角度であり、一方、ケルセチン二水和物および物理的混合物ＸＲＤＰの両方において、１３．５ ２θではノイズベースラインのみが検出可能である。
【００６２】
結晶化度に関する限り、ＢｒｕｋｅｒソフトウェアDiffrac EVA v.３．１およびそのアルゴリズム「結晶化度」によれば、実施例の３つの原料についてＸＲＤＰから計算された結晶化度は、ケルセチン二水和物＝８５％；物理的混合物＝４７％；固体分散物＝３７％である。
【００６３】
実施例４：粉末固体分散物の特性化−模擬胃腸液における溶解度研究
実施例１で得られたケルセチン二水和物、ケルセチン粉末固体分散物、および前記固体分散物の成分の機械的（物理的）混合物を、高過剰の分析物の存在下で、以下の模擬胃腸液を使用して、比較溶解度実験に供した: 
空腹時模擬胃液； 
空腹時模擬腸液； 
摂食状態模擬腸液。
等量のケルセチンを実験中に使用した。
ケルセチン二水和物、実施例１のケルセチン粉末固体分散物および機械的（物理的）混合物を磁気撹拌下に２時間保持した。
上清を濾過し、ケルセチン濃度をＨＰＬＣ分析によって計算した。
これらの溶解度研究の結果を以下の表１に報告する: 
【００６４】
【表２】
2020527549.tif 000004
【００６５】
溶解度研究の結果は結晶形態の有意な量のケルセチンの存在にもかかわらず、本発明の粉末固体分散物はケルセチン二水和物自体あるいはリン脂質との機械的混合物よりも、はるかに可溶性であることを示す。
【００６６】
実施例５：ヒトにおける薬物動態試験
空腹時条件下の健常ボランティアにおける単回用量無作為化クロスオーバー薬物動態試験を、５００ｍｇの（未製剤）ケルセチン脱水物、５００ｍｇのケルセチン（４０％）粉末固体分散体（２００ｍｇのケルセチン二水和物に相当）および２５０ｍｇのケルセチン（４０％）粉末固体分散体（１００ｍｇのケルセチン二水和物に相当）を含有するフィルムコーティング錠を用いて行った。
【００６７】
平均薬物動態パラメータ（ＡＵＣ 0-∞ ; Cmax）を下記の表２に報告する: 
【００６８】
【表３】
2020527549.tif 000005
【００６９】
結果は結晶形態のケルセチンの有意量の存在にもかかわらず、本発明の固形分散体はケルセチン二水和物それ自体よりもはるかに高いＡＵＣおよびＣｍａｘを有することを示す。
【００７０】
実施例６：ケルセチン粉末固体分散体を含有する製剤（フィルムコーティング錠）
定量組成                            （ｍｇ／錠）
ケルセチン固体分散体（実施例１）        ２５０．０ ｍｇ 
リン酸二カルシウム二水和物              ２７０．０ ｍｇ 
マンニトール                            １８０．０ ｍｇ 
クロスカルメロースナトリウム              ４０．０ ｍｇ 
二酸化ケイ素                              １５．０ ｍｇ 
タルク                                    １５．０ ｍｇ 
ステアリン酸マグネシウム                  １０．０ ｍｇ 
フィルムコーティング                      ２０．０ ｍｇ
実施例７：ケルセチン粉末固体分散体（軟ゼラチンカプセル）を含有する製剤 
定量組成                            （ｍｇ／錠）
ケルセチン固体分散体（実施例２）        ３００．０ ｍｇ 
亜麻仁油                                ３４５．０ ｍｇ 
蜜蝋                                      １０．０ ｍｇ 
レシチン液                                  ５．０ ｍｇ 
実施例８：ケルセチン粉末固形分散体（分散用顆粒）を含有する製剤 
定量組成                            （ｍｇ／錠）
ケルセチン固体分散体（実施例１）        ５００．０ ｍｇ 
マルトデキストリン                    ２３３０．０ ｍｇ 
グアーガム                              ３００．０ ｍｇ 
風味                                    ２００．０ ｍｇ 
クエン酸                                １５５．０ ｍｇ 
スクラロース                              １５．０ ｍｇ 
【図１】
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【国際調査報告】
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