(57)【要約】  本発明は、ヒト皮膚細胞を提供する工程と、前記皮膚細胞の少なくとも１本の染色体の特定の領域の少なくとも２個のＣｐＧジヌクレオチドのメチル化レベルを決定する工程と、前記ＣｐＧヌクレオチドのメチル化レベルと少なくとも１人のヒト個体の暦年齢との間の相関を表す、経験的に決定されたデータと、決定された前記メチル化レベルとを比較することによって、前記皮膚細胞の生物学的年齢を決定する工程とを含む、ヒト皮膚の生物学的年齢を決定する方法に関する。【選択図】図３６
2020527031.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ヒト皮膚の生物学的年齢を決定する方法であって、
ａ）ヒト皮膚細胞の少なくとも２個のＣｐＧジヌクレオチドのメチル化レベルを決定する工程と、
ｂ）前記ＣｐＧヌクレオチドのメチル化レベルと少なくとも１人のヒト個体の暦年齢との間の相関を表す、経験的に決定されたデータと、決定された前記メチル化レベルとを比較することによって、前記皮膚細胞の生物学的年齢を決定する工程と
を含む、方法。
【請求項２】
メチル化レベルが決定される各ＣｐＧジヌクレオチドは、配列番号１から配列番号２０５までから選択されるヌクレオチド配列の一部である、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
ヒト皮膚細胞の２個のＣｐＧジヌクレオチドのメチル化レベルが決定される、前記請求項のいずれかに記載の方法。
【請求項４】
メチル化レベルが決定されるＣｐＧジヌクレオチドの少なくとも１個は、配列番号５１、配列番号９１、配列番号１１０、配列番号１７９、配列番号２０２、配列番号２０３、配列番号２０４及び配列番号２０５からなるグループから選択されるヌクレオチド配列の一部である、前記請求項のいずれかに記載の方法。
【請求項５】
メチル化レベルが決定される各ＣｐＧジヌクレオチドは、配列番号５１、配列番号９１、配列番号１１０、配列番号１７９、配列番号２０２、配列番号２０３、配列番号２０４及び配列番号２０５からなるグループから選択されるヌクレオチド配列の一部である、前記請求項のいずれかに記載の方法。
【請求項６】
前記データは、少なくとも１個の１次回帰式、好ましくは、少なくとも２個の１次回帰を含む１個の式を含む、前記請求項のいずれか１項に記載の方法。
【請求項７】
前記ヒト個体の暦年齢を推定する工程を更に含む、前記請求項のいずれかに記載の方法。
【請求項８】
前記暦年齢は、前記生物学的年齢の５．２５年以内と推定される、請求項７に記載の方法。
【請求項９】
ヒト個体の健康状態を示す値ｈを計算する工程を更に含み、ここでｈは前記生物学的年齢及び前記暦年齢に基づいて計算される、請求項１ないし８に記載の方法。
【請求項１０】
ｈは、生物学的年齢と暦年齢との間の差に基づいて計算される、請求項９に記載の方法。
【請求項１１】
前記皮膚細胞を活性剤と接触させる工程を更に含む、前記請求項のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１２】
前記生物学的年齢は、前記皮膚細胞を活性剤と接触させる前及び後に決定される、請求項１１に記載の方法。
【請求項１３】
請求項１ないし１０のいずれか１項に記載の方法を含む、活性剤を試験する方法であって、
ｃ）前記皮膚細胞を活性剤と接触させる工程と、
ｄ）請求項１ないし１０のいずれか１項に記載の方法に従って、工程ｃ）の前記皮膚細胞の生物学的年齢を決定する工程と、
ｅ）工程ａ）及びｂ）で決定された生物学的年齢を、工程ｄ）で決定された生物学的年齢と比較する工程と
を更に含む、方法。
【請求項１４】
工程ｃ）はインビボ又はインビトロのいずれかで実行される、請求項１３に記載の方法。
【請求項１５】
前記活性剤は、化粧品及び／又は医薬品である、請求項１３又は１４に記載の方法。
【請求項１６】
ヒト皮膚の表現型の老化の兆候を予防及び／又は処置する活性剤を同定するための、請求項１３ないし１５のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１７】
請求項１ないし１０のいずれか１項に記載の方法に従ってヒト皮膚の生物学的年齢を決定するための核酸分子の使用であって、
前記核酸分子は、
ａ）配列番号１ないし配列番号２０５からなるグループから選択される少なくとも１本の配列を含むヌクレオチド配列と、
ｂ）ａ）のヌクレオチド配列から、前記ＣｐＧジヌクレオチドを除いて、ヌクレオチドの最大１０％、好ましくは、最大５個の置換によって相違するヌクレオチド配列と、
ｃ）ａ）及び／又はｂ）のヌクレオチド配列の相補鎖に対応するヌクレオチド配列と
からなるグループから選択される少なくとも１本のヌクレオチド配列を含む、使用。
【請求項１８】
２本のヌクレオチド配列が選択される、請求項１７に記載の使用。
【請求項１９】
ヒト皮膚の生物学的年齢を決定する方法をコンピュータに実行させるためのコンピュータで実行可能な指令を保存した、コンピュータで読み取り可能な媒体であって、
前記指令は、
ａ）ヒト皮膚細胞の少なくとも２個のＣｐＧジヌクレオチドの決定されたメチル化レベルの少なくとも２個の数値を入力すること、
ｂ）前記ＣｐＧジヌクレオチドのメチル化レベルと少なくとも１人のヒト個体の暦年齢との間の相関を表す保存されたデータと、決定された前記メチル化レベルの前記数値とを比較すること、及び
ｃ）前記生物学的年齢を表示すること
を含む、媒体。
【請求項２０】
前記保存されたデータは、少なくとも１個の１次回帰式、好ましくは、少なくとも２個の１次回帰を含む１個の式を含む、請求項１９に記載のコンピュータで読み取り可能な媒体。
【請求項２１】
配列番号１ないし配列番号２０５からなるグループから選択される少なくとも１本のヌクレオチド配列の少なくとも２個のＣｐＧヌクレオチドを増幅及び／又は配列決定するための少なくとも１個のオリゴヌクレオチドプライマーを含む、請求項１ないし１０のいずれか１項に記載の方法に従ってヒト皮膚の生物学的年齢を決定するためのキット。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、ＤＮＡの特定部位のエピジェネティクス的パターンの解析によるヒトの皮膚の生物学的年齢の決定に関する。皮膚サンプルの選択されたＣｐＧ部位のメチル化レベルが、ヒト皮膚の生物学的年齢の正確な決定のために評価される。その後、測定された生物学的年齢は、５．０５年未満の平均絶対誤差で暦年齢と相関する。
【背景技術】
【０００２】
ＤＮＡのエピジェネティクス的変化は経時的に発生することが知られており、ヒト個体の老化過程の程度の指標として認識されている。特に、ＣｐＧジヌクレオチドのメチル化の程度は年齢と相関するとして同定されている。
【０００３】
さまざまなＣｐＧジヌクレオチドの解析による生物学的年齢の決定方法が知られている。例えば非特許文献１には、血液中の１０２個のＣｐＧ部位が個体の生物学的年齢の推定に適するとして同定されている。説明された方法は、３個のＣｐＧ部位からのデータを用いて、５年未満の暦年からの平均絶対偏差を達成する。特許文献１も血液細胞を解析し、年齢に相関する前記１０２個のＣｐＧ部位のうちの６個に基づいて、被験者の暦年齢を予測する。６個のＣｐＧ部位に基づいて生物学的年齢を決定する予測は、約４．５３年ないし最大１０．３０年暦年齢と相違することがわかった。別の研究では、血液細胞からの３５３個のＣｐＧ部位を特徴付けることにより、±３．６年の暦年齢と生物学的年齢との相違が非特許文献２により見つけられた。
【０００４】
エピジェネティクス的変化の解析における血液サンプルの使用は、血液中に存在するさまざまな細胞タイプが異なるＤＮＡメチル化パターンを有するために最適ではない。さらに、細菌及びウイルス感染が血液中の細胞組成を有意に変化でき、これがメチル化パターンを変動させる可能性がある。
【０００５】
ヒトの皮膚も、年齢と相関するエピジェネティクス的変化の解析のモデルとして用いられており、個体の暦年齢と相関する。非特許文献２に基づく既知の予測指標（predictor）が、非特許文献３においてヒト表皮について用いられ、平均絶対予測誤差（average absolute prediction error）は１４．５年であった。これは、公表された予測指標が表皮サンプルの暦年齢を過小評価することを示す。非特許文献３では、４５０，０００個のＣｐＧジヌクレオチドのメチル化を用いて更なる予測指標が開発され、アレイに基づくアプローチによって同時に解析された。当該方法を用いて決定された生物学的年齢は、暦年齢との誤差が５．２５年未満であった。しかし、当該方法の欠点は、解析に必要な部位が多数であり、これは時間もコストもかかる。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００６】
【特許文献１】欧州特許ＥＰ  ２  ７１１  ４３１号公報
【非特許文献】
【０００７】
【非特許文献１】Weidner et al, Genome Biology, 2014 15R24
【非特許文献２】Horvath, Genome Biology 2013, 14:R115
【非特許文献３】Bormann et al, Aging Cell, 2016, 15, page 563 to 571
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００８】
したがって、個体の生物学的年齢を決定する改善され、及び／又は、代替的な方法を提供することが望ましい。好ましくは、より少数のＣｐＧ部位を用いる方法を提供することが望ましい。
【課題を解決するための手段】
【０００９】
本発明は添付する特許請求の範囲に特定される。
【００１０】
第１の局面によれば、ヒト皮膚の生物学的年齢を決定する方法が提供される。該方法は、
ａ）ヒト皮膚細胞の少なくとも２個のＣｐＧジヌクレオチドのメチル化レベルを決定すること、
ｂ）前記ＣｐＧヌクレオチドのメチル化レベルと少なくとも１人のヒト個体の暦年齢との間の相関を表す、経験的に決定されたデータと、決定された前記メチル化レベルとを比較することによって、前記皮膚細胞の生物学的年齢を決定すること
を含む。
【００１１】
第２の局面によれば、第１の局面に従う方法を含む、活性剤の試験方法が提供される。該方法は、さらに、
ｃ）前記皮膚細胞を活性剤と接触させる工程と、
ｄ）第１の局面の方法に従って工程ｃ）の皮膚細胞の生物学的年齢を決定する工程と、
ｅ）工程ａ）およびｂ）で決定された生物学的年齢を工程ｄ）で決定された生物学的年齢と比較する工程と
をさらに含む。
【００１２】
第３の局面によれば、第１の局面の方法に従ってヒト皮膚の生物学的年齢を決定するための核酸分子の使用を提供する。該核酸分子は、
ａ）配列番号１ないし配列番号２０５からなるグループから選択される少なくとも１本の配列を含むヌクレオチド配列と、
ｂ）ａ）のヌクレオチド配列から、前記ＣｐＧジヌクレオチドを除いて、ヌクレオチドの最大１０％、好ましくは、最大５個の置換によって相違するヌクレオチド配列と、
ｃ）ａ）及び／又はｂ）のヌクレオチド配列の相補鎖に対応するヌクレオチド配列と
からなるグループから選択される少なくとも１本のヌクレオチド配列を含む。
【００１３】
第４の局面によれば、ヒト皮膚の生物学的年齢を決定する方法をコンピュータに実行させるためのコンピュータで実行可能な指令を保存した、コンピュータで読み取り可能な媒体が提供される。前記指令は、
ａ）ヒト皮膚細胞の少なくとも２個のＣｐＧジヌクレオチドの決定されたメチル化レベルの少なくとも２個の数値を入力すること、
ｂ）前記ＣｐＧジヌクレオチドのメチル化レベルと少なくとも１人のヒト個体の暦年齢との間の相関を表す保存されたデータと、決定された前記メチル化レベルの前記数値とを比較すること、及び
ｃ）前記生物学的年齢を表示すること
を含む。
【００１４】
第５の局面によれば、第１の局面の方法に従ってヒト皮膚の生物学的年齢を決定するためのキットが提供される。該キットは、配列番号１ないし配列番号２０５からなるグループから選択される少なくとも１本のヌクレオチド配列の少なくとも２個のＣｐＧヌクレオチドを増幅及び／又は配列決定するための少なくとも１個のオリゴヌクレオチドプライマーを含む。
【００１５】
本発明の特定の実施態様は、
・個体からのサンプル収集の望ましい容易さ、
・バイオインフォマティクス的データ取得の望ましい速さ、
・バイオインフォマティクス的データ取得の望ましい容易さ、
・データ収集の望ましいコスト効率の高さ、
・年齢予測の望ましい正確さ
の利点の１つ以上を提供する場合がある。
【００１６】
本発明の上記の局面の特定のいずれか１つ以上に関して提供される詳細、実施例及び設定は、本発明の全ての局面に等しく適用される。すべての可能な変形における本明細書に説明する実施態様、実施例及び設定のいずれかの組み合わせは、本明細書で表記されるか、文脈と明らかに矛盾するかしない限り、本発明に包含される。
【００１７】
本発明は、以下の図面を参照してさらに説明される。
【図面の簡単な説明】
【００１８】
【図１】配列番号１ないし６のＣｐＧ部位及びヌクレオチド配列の表。
【図２】配列番号７ないし１２のＣｐＧ部位及びヌクレオチド配列の表。
【図３】配列番号１３ないし１８のＣｐＧ部位及びヌクレオチド配列の表。
【図４】配列番号１９ないし２４のＣｐＧ部位及びヌクレオチド配列の表。
【図５】配列番号２５ないし３０のＣｐＧ部位及びヌクレオチド配列の表。
【図６】配列番号３１ないし３６のＣｐＧ部位及びヌクレオチド配列の表。
【図７】配列番号３７ないし４２のＣｐＧ部位及びヌクレオチド配列の表。
【図８】配列番号４３ないし４８のＣｐＧ部位及びヌクレオチド配列の表。
【図９】配列番号４９ないし５４のＣｐＧ部位及びヌクレオチド配列の表。
【図１０】配列番号５５ないし６０のＣｐＧ部位及びヌクレオチド配列の表。
【図１１】配列番号６１ないし６６のＣｐＧ部位及びヌクレオチド配列の表。
【図１２】配列番号６７ないし７２のＣｐＧ部位及びヌクレオチド配列の表。
【図１３】配列番号７３ないし７８のＣｐＧ部位及びヌクレオチド配列の表。
【図１４】配列番号７９ないし８４のＣｐＧ部位及びヌクレオチド配列の表。
【図１５】配列番号８５ないし９０のＣｐＧ部位及びヌクレオチド配列の表。
【図１６】配列番号９１ないし９６のＣｐＧ部位及びヌクレオチド配列の表。
【図１７】配列番号９７ないし１０２のＣｐＧ部位及びヌクレオチド配列の表。
【図１８】配列番号１０３ないし１０８のＣｐＧ部位及びヌクレオチド配列の表。
【図１９】配列番号１０９ないし１１４のＣｐＧ部位及びヌクレオチド配列の表。
【図２０】配列番号１１５ないし１２０のＣｐＧ部位及びヌクレオチド配列の表。
【図２１】配列番号１２１ないし１２６のＣｐＧ部位及びヌクレオチド配列の表。
【図２２】配列番号１２７ないし１３２のＣｐＧ部位及びヌクレオチド配列の表。
【図２３】配列番号１３３ないし１３８のＣｐＧ部位及びヌクレオチド配列の表。
【図２４】配列番号１３９ないし１４４のＣｐＧ部位及びヌクレオチド配列の表。
【図２５】配列番号１４５ないし１５０のＣｐＧ部位及びヌクレオチド配列の表。
【図２６】配列番号１５１ないし１５６のＣｐＧ部位及びヌクレオチド配列の表。
【図２７】配列番号１５７ないし１６２のＣｐＧ部位及びヌクレオチド配列の表。
【図２８】配列番号１６３ないし１６８のＣｐＧ部位及びヌクレオチド配列の表。
【図２９】配列番号１６９ないし１７４のＣｐＧ部位及びヌクレオチド配列の表。
【図３０】配列番号１７５ないし１８０のＣｐＧ部位及びヌクレオチド配列の表。
【図３１】配列番号１８１ないし１８６のＣｐＧ部位及びヌクレオチド配列の表。
【図３２】配列番号１８７ないし１９２のＣｐＧ部位及びヌクレオチド配列の表。
【図３３】配列番号１９３ないし１９８のＣｐＧ部位及びヌクレオチド配列の表。
【図３４】配列番号１９９ないし２０４のＣｐＧ部位及びヌクレオチド配列の表。
【図３５】配列番号２０５のＣｐＧ部位及びヌクレオチド配列の表。
【図３６】２個の代表的なＣｐＧマーカーｃｇ０６３３５８６７及びｃｇ１３８４８５９８についての年齢に伴うメチル化の変化を表すグラフ。
【図３７】式：７０．００２＋８．９９２＊ｃｇ０６３３５８６７＋１２．９９８＊ｃｇ１３８４８５９８を使って、マーカーｃｇ０６３３５８６７及びｃｇ１３８４８５９８を用いる暦年齢と生物学的年齢との相関を表すグラフ。
【発明を実施するための形態】
【００１９】
発明の詳細な説明
以下の説明及び図面の参照は、本発明の代表的な実施態様に関するものであると理解され、特許請求の範囲を限定するものではない。
【００２０】
本発明は、選択されたＣｐＧヌクレオチドのメチル化レベルがヒト皮膚の生物学的年齢を決定できるという知見に基づく。
【００２１】
年齢の増加（老化）は年をとる過程である。年齢は、暦年齢及び生物学的年齢のようにさまざまなやり方で認識される場合がある。
【００２２】
本明細書で用いられるところの用語「暦年齢」は、個体の誕生から経過してきた時間の量を指す。本明細書で用いられるところの用語「個体」は、ヒトの個体を指す。
【００２３】
本明細書で用いられるところの「生物学的年齢」は、ＤＮＡのエピジェネティクス的変化の程度のような、個体の肉体的な変化を指す。ＤＮＡのエピジェネティクス的変化の程度は皮膚サンプルで決定される。生物学的年齢は皮膚サンプルから決定され、個体の生物学的年齢と相関する。本明細書で開示される生物学的年齢は、本発明の第１の局面の方法を用いて決定される。特に、特定のＣｐＧジヌクレオチドのメチル化レベルが本発明の一部として評価される。前記メチル化レベルは、例えば、メチル化特異的ＰＣＲ法、亜硫酸水素塩処理ＤＮＡ配列解析法、ＣＨＩＰシーケンシング法（Ｉｌｌｕｍｉｎａのメチル化ＢｅａｄＣｈｉｐ技術）、分子反転プローブアッセイ法、メチル化ＣＡＰシーケンシング法、次世代シーケンシング法、ＣＯＢＲＡアッセイ法、メチル化特異的制限酵素消化パターン法、又は、ＭａｓｓＡＲＲＡＹアッセイ法によって決定できる。
【００２４】
特定の実施態様では、ヒト皮膚の生物学的年齢は個体の生物学的年齢に等しい。
【００２５】
生物学的年齢は、遺伝的背景、疾患及び生活スタイルのような多くのパラメーターの影響を受ける場合がある。
【００２６】
生物学的年齢は暦年齢と異なる場合がある。生物学的年齢は、暦年齢と比較するとき、個体の健康の兆候を提供する場合がある。例えば、生物学的年齢が暦年齢より低い場合には、老化の生物学的レベルで老化の兆候が予想ほど顕著ではないと結論してもよい。これは、当該個体の健康状態が良いことを示す場合がある。逆に、生物学的年齢が暦年齢より高い場合には、当該個体の健康状態が悪いことの兆候と理解されてもよい。
【００２７】
特定の実施態様では、本発明の方法に従って使用されるヒト皮膚細胞は、当該個体から必要とされる皮膚サンプル全てを採取することにより得られる。特定の実施態様では、本発明の方法に従って使用されるヒト皮膚細胞は、インビトロ法を用いる皮膚細胞の培養により得られる。
【００２８】
個体からのサンプルの採取は、吸引水疱作製法、パンチ生検法、薄片生検法を用いるか、あるいは、形成外科手術、吊り上げ、移植等のようないずれかの外科的手法の間かに実行される場合がある。
【００２９】
皮膚サンプルは、表皮又は真皮から取られる場合がある。
【００３０】
ヒトの皮膚細胞は、個体から採取された皮膚細胞の小サンプルから培養される場合がある。採取された前記ヒト皮膚細胞は、ペトリ皿のような容器内で、必須栄養素を供給する培地又は基質において、インビトロで成育される場合がある。
【００３１】
使用されるヒト皮膚細胞は、採取された細胞と培養細胞との混合物の場合がある。
【００３２】
特定の実施態様では、本発明に従うＣｐＧジヌクレオチドを含む染色体の特定の領域は、コーディング領域又は非コーディング領域の場合がある。特定の実施態様では、前記ＣｐＧジヌクレオチドは、コーディング領域及び／又は非コーディング領域に存在する場合がある。前記ＣｐＧジヌクレオチドは、単一の特定領域か、異なる複数の特定領域かに存在する場合がある。
【００３３】
特定の実施態様では、染色体の特定領域は、図１ないし３５に示される配列番号１から配列番号２０５までの少なくとも１本のヌクレオチド配列を含む。各配列番号と本発明のＣｐＧジヌクレオチドとの対応関係は、図１ないし３５に示される。
【００３４】
特定の実施態様では、第１の局面の方法は、２個のＣｐＧジヌクレオチドのメチル化レベルを決定することを含む場合がある。メチル化レベルが決定される２個のＣｐＧジヌクレオチドは、例えば、配列番号９、配列番号１３、配列番号１６、配列番号１９、配列番号２１、配列番号２５、配列番号３５、配列番号３６、配列番号４３、配列番号４５、配列番号６５、配列番号７１、配列番号７７、配列番号９４  ９７、配列番号１０２、配列番号１１１、配列番号１２９、配列番号１５及び配列番号１６８のような同一のヌクレオチド配列の場合がある。前記２個のＣｐＧジヌクレオチドは、それぞれが独立に配列番号１から配列番号２０５までから選択された、異なるジヌクレオチド配列の場合がある。
【００３５】
特定の実施態様では、第１の局面の方法は、３個のＣｐＧジヌクレオチドのメチル化レベルを決定することを含む場合がある。特定の実施態様では、第１の局面の方法は、４個のＣｐＧジヌクレオチドのメチル化レベルを決定することを含む場合がある。特定の実施態様では、第１の局面の方法は、５個のＣｐＧジヌクレオチドのメチル化レベルを決定することを含む場合がある。特定の実施態様では、第１の局面の方法は、６個のＣｐＧジヌクレオチドのメチル化レベルを決定することを含む場合がある。特定の実施態様では、第１の局面の方法は、７個のＣｐＧジヌクレオチドのメチル化レベルを決定することを含む場合がある。特定の実施態様では、第１の局面の方法は、８個のＣｐＧジヌクレオチドのメチル化レベルを決定することを含む場合がある。特定の実施態様では、第１の局面の方法は、９個のＣｐＧジヌクレオチドのメチル化レベルを決定することを含む場合がある。特定の実施態様では、第１の局面の方法は、１０個のＣｐＧジヌクレオチドのメチル化レベルを決定することを含む場合がある。特定の実施態様では、第１の局面の方法は、少なくとも２個で、３個以内のＣｐＧジヌクレオチドのメチル化レベルを決定することを含む場合がある。特定の実施態様では、第１の局面の方法は、少なくとも２個で、４個以内のＣｐＧジヌクレオチドのメチル化レベルを決定することを含む場合がある。特定の実施態様では、第１の局面の方法は、少なくとも２個で、５個以内のＣｐＧジヌクレオチドのメチル化レベルを決定することを含む場合がある。特定の実施態様では、第１の局面の方法は、少なくとも２個で、６個以内のＣｐＧジヌクレオチドのメチル化レベルを決定することを含む場合がある。特定の実施態様では、第１の局面の方法は、少なくとも２個で、７個以内のＣｐＧジヌクレオチドのメチル化レベルを決定することを含む場合がある。特定の実施態様では、第１の局面の方法は、少なくとも２個で、８個以内のＣｐＧジヌクレオチドのメチル化レベルを決定することを含む場合がある。特定の実施態様では、第１の局面の方法は、少なくとも２個で、９個以内のＣｐＧジヌクレオチドのメチル化レベルを決定することを含む場合がある。特定の実施態様では、第１の局面の方法は、少なくとも２個で、１０個以内のＣｐＧジヌクレオチドのメチル化レベルを決定することを含む場合がある。
【００３６】
特定の実施態様は、第１の局面の方法を含む、ヒト個体の暦年齢を推定する方法に関する。例えば、ヒト個体の暦年齢を推定する方法は、１）ヒト皮膚細胞の少なくとも２個のＣｐＧジヌクレオチドのメチル化レベルを決定する工程、２）前記ＣｐＧヌクレオチドのメチル化レベルと少なくとも１人のヒト個体の暦年齢との相関を表す、経験的に決定されたデータと、決定された前記メチル化レベルとを比較することによって、前記皮膚細胞の生物学的年齢を決定する工程と、前記暦年齢を推定する工程とを含む。
【００３７】
特定の実施態様では、第１の局面の方法は、ヒト個体の暦年齢を推定する工程を更に含む。本発明の方法を用いると、生物学的年齢と暦年齢との間の相関は高く、生物学的年齢と暦年齢との差、本明細書に説明される方法によって決定される平均絶対誤差（ＭＡＥ）は、約７年以下、約６年以下、約５．５年以下、約５年以下、約４．５年以下、約４年以下、約３．５年以下、約３年以下、約２年以下、約１．５年以下、約１年以下、約０．５年以下、約０年以下である。
【００３８】
生物学的年齢と暦年齢との差は１人の個体について決定される場合がある。全個体由来のデータポイントに重ね合わせた最良適合線からの単一データポイントの偏差は、約０年から約１５年までばらつく場合がある。例えば、前記最良適合線からの単一データポイントの偏差は、約０年、約１年、約２年、約３年、約４年、約５年、約６年、約７年、約８年、約９年、約１０年、約１１年、約１２年、約１３年、約１４年、約１５年であろう。これは、当該ヒト個体及び当該ヒト皮膚の健康状態の兆候である。
【００３９】
特定の実施態様では、未知の個体の生物学的年齢が上記説明のとおり決定される。この生物学的年齢から、当該個体の暦年齢が使用された前記ＣｐＧデータポイントについて予測されるＭＡＥを適用することにより推定される。
【００４０】
特定の実施態様では、２個のＣｐＧジヌクレオチドのメチル化レベルが決定される方法を用いるとき、生物学的年齢と暦年齢との間の相関は、予測よりも良い。生物学的年齢と暦年齢との間の相関は、例えば、合計３個のＣｐＧジヌクレオチド、合計４個のＣｐＧジヌクレオチド、合計５個のＣｐＧジヌクレオチド、合計６個のＣｐＧジヌクレオチド、合計７個のＣｐＧジヌクレオチド、合計８個のＣｐＧジヌクレオチド、合計９個のＣｐＧジヌクレオチド、合計１０個のＣｐＧジヌクレオチドのような、更なるＣｐＧジヌクレオチドのメチル化レベルを決定することによってさらに改善する場合がある。しかし、２個のＣｐＧヌクレオチドのメチル化レベルを用いる方法は実務上広範の許容される結果をもたらすが、更なるＣｐＧジヌクレオチドのメチル化レベルの考慮は、前記相関の改善をもたらすかもしれないが、この改善はＣｐＧジヌクレオチドを追加するごとに減少することが指摘される。
【００４１】
特定の実施態様では、生物学的年齢及び暦年齢が、ヒト個体及びヒト皮膚の健康の指標である値ｈを計算するために用いられる。特定の実施態様では、値ｈは式（Ｉ）に従って計算される。
ｈ＝生物学的年齢  −  暦年齢  （Ｉ）
【００４２】
特定の実施態様は個体の健康を評価する方法に関し、該方法は、第１の局面の方法と、値ｈを決定することとを含む。例えば、個体の健康を評価する方法は、１）ヒト皮膚細胞の少なくとも２個のＣｐＧジヌクレオチドのメチル化レベルを決定する工程と、２）前記ＣｐＧヌクレオチドのメチル化レベルと少なくとも１人のヒト個体の暦年齢との間の相関を表す、経験的に決定されたデータと、決定された前記メチル化レベルとを比較することによって、前記皮膚細胞の生物学的年齢を決定する工程と、３）暦年齢を推定する工程と、４）値ｈを決定するために、前記生物学的年齢を前記暦年齢から減算する工程とを含む。
【００４３】
理論に拘泥することを望むものではないが、式（Ｉ）から得られる値ｈが正の場合、当該ヒト個体の健康状態は悪い。この場合、より大きい数ｈは、より小さい数ｈに比べて、当該ヒト個体の健康状態がより悪いことを示す。式（Ｉ）から得られるｈの数値が負の場合、当該個体の健康状態は良いと推測してもかまわない。
【００４４】
値ｈが正の場合、この数値の減少は望ましいかもしれず、当該個体の健康状態を改善する。値ｈは、運動、健康的な食事、適正な量の睡眠、十分な水の摂取、及び／又は、ストレス回避のような沢山の手段によって低下する場合がある。
【００４５】
値ｈは、医薬品及び／又は化粧品の形態で皮膚細胞に活性剤を適用することによっても低下する場合がある。前記活性剤は、インビトロ又はインビボで前記皮膚細胞に接触する場合がある。インビトロ法を用いると、前記活性剤は皮膚細胞の培地に添加される。インビボ法を用いると、ヒト個体の皮膚細胞は、局所、皮下、又は、皮内投与を用いて前記活性剤と接触される場合がある。
【００４６】
本明細書に用いられるところの「活性剤」は、個体に対して治療的効果及び／又は美容的効果を有するいずれかの薬剤である。治療的効果は、疾患の処置及び／又は予防である。美容的効果は、分子的老化の兆候を処置及び／又は予防するような、外観の改善である。分子的老化の兆候は、例えば、幹細胞枯渇、細胞間コミュニケーションの変化、ゲノム不安定性、テロメア摩耗、エピジェネティクス的変化、蛋白質恒常性の喪失、無秩序な栄養素認識、ミトコンドリア機能不全、細胞老化、及び、増殖能の変化である。個体に適用されるとき、化粧品は、ヒトの皮膚の表現型の老化の兆候、例えば、シワ形成、青白い顔色、創傷治癒能力の低下、弾性及び張りの喪失を予防及び／又は処置する場合もある。
【００４７】
特定の実施態様では生物学的年齢は、皮膚細胞を活性剤と接触させる前及び後に決定される。例えば、生物学的年齢が決定され、皮膚細胞が活性剤と接触され、その後、生物学的年齢が決定される。皮膚細胞を活性剤と接触させる前と後の生物学的年齢が比較される。処置後の生物学的年齢の減少は、当該活性剤の治療的効果及び／又は美容的効果を示す。皮膚細胞の活性剤との接触と、生物学的年齢の決定との間の時間は異なってもかまわない。皮膚細胞を活性剤と接触させる工程と、生物学的年齢を決定する工程とは、前記活性剤の前記皮膚細胞への経時的な効果についての情報を提供するために繰り返される場合がある。本方法は、活性のある化粧品及び／又は医薬化合物及び／又は抽出物を同定するための迅速で費用効率の高いやり方であるという利点を有する場合がある。
【００４８】
特定の実施態様では、本発明に従う方法は、以下の効果の１つ以上を有する場合がある。
・生物学的年齢からの暦年齢の推測の精度の向上
・暦年齢と生物学的年齢との間の相関の信頼性の向上
・生物学的年齢を決定する費用の低減
・生物学的年齢を決定するのに要する時間の短縮
・医薬品又は化粧品の生物学的年齢への効果を決定する方法の効率化
【００４９】
本発明は、相互に排他的な特徴の組み合わせを例外として、本明細書で言及された特徴及び／又は限定のいずれかの組み合わせを含む場合がある。前述の説明は、本発明を説明する目的のための本発明の特定の実施態様に向けられる。しかし、本明細書に説明される実施態様の多くの改変及び変形が可能であることは当業者に自明であろう。かかる改変及び変形の全ては、添付する特許請求の範囲に特定されるとおり、本発明の範囲内であることが意図される。
【００５０】
疑問を避けるために、本出願は、以下に番号を付した段落で説明される発明の主題に向けられる。
【００５１】
１．ヒト皮膚の生物学的年齢を決定する方法であって、
ａ）ヒト皮膚細胞を提供する工程と、
ｂ）前記皮膚細胞の少なくとも１本の染色体の特定の領域の少なくとも２個のＣｐＧジヌクレオチドのメチル化レベルを決定する工程と、
ｃ）前記ＣｐＧヌクレオチドのメチル化レベルと少なくとも１人のヒト個体の暦年齢との間の相関を表す、経験的に決定されたデータと、決定された前記メチル化レベルとを比較することによって、前記皮膚細胞の生物学的年齢を決定する工程と
を含む、方法。
【００５２】
２．前記皮膚細胞はヒト個体から採取される、段落１の方法。
【００５３】
３．前記皮膚細胞はインビトロで培養される、段落１の方法。
【００５４】
４．前記ヒト皮膚細胞の１本又は２本の染色体の特定の領域の２個のＣｐＧジヌクレオチドのメチル化が決定される、番号が付された前記段落のいずれかに記載の方法。
【００５５】
５．前記染色体の特定の領域のそれぞれは、配列番号１から配列番号２０５までから選択される少なくとも１本のヌクレオチド配列を含む、番号が付された前記段落のいずれか１つに記載の方法。
【００５６】
６．前記ヌクレオチド配列の１本又は２本は配列番号５１から配列番号１１０までから選択される、番号が付された前記段落のいずれかに記載の方法。
【００５７】
７．前記ヌクレオチド配列の少なくとも１本は、配列番号９１、配列番号１７９、配列番号２０２、配列番号２０３、配列番号２０４及び配列番号２０５から選択される、番号が付された前記段落のいずれかに記載の方法。
【００５８】
８．前記データは、少なくとも１個の一次回帰式を含み、好ましくは、少なくとも２個の１次回帰を含む１個の式を含む、番号が付された前記段落のいずれか１つに記載の方法。
【００５９】
９．前記ヒト個体の暦年齢を推定する工程を更に含む、番号が付された前記段落のいずれかに記載の方法。
【００６０】
１０．前記暦年齢は生物学的年齢の５．２５年以内であると推定される、段落９に記載の方法。
【００６１】
１１．生物学的年齢及び暦年齢に基づいて計算されるヒト個体の健康状態を示す値ｈを計算する工程をさらに含む、番号が付された前記段落のいずれかに記載の方法。
【００６２】
１２．ｈは生物学的年齢と暦年齢との差に基づいて計算される、段落１１に記載の方法。
【００６３】
１３．前記皮膚細胞を活性剤と接触させる工程を更に含む、番号が付された前記段落のいずれか１つに記載の方法。
【００６４】
１４．前記生物学的年齢は、活性剤に前記皮膚細胞を接触させる前及び後に決定される、段落１３に記載の方法。
【００６５】
１５．段落１ないし１０のいずれか１つの段落に記載の方法を含む活性剤の試験方法であって、
ｄ）活性剤に工程ａ）の皮膚細胞を接触させる工程と、
ｅ）段落１ないし１０のいずれか１つの段落に記載の方法に従って工程ｄ）の皮膚細胞の生物学的年齢を決定する工程と、
ｆ）工程ａ）ないしｃ）で決定される生物学的年齢を、工程ｅ）で決定される生物学的年齢と比較する工程と
を更に含む、方法。
【００６６】
１６．工程ｄ）はインビボ又はインビトロのいずれかで実行される、段落１５に記載の方法。
【００６７】
１７．前記活性剤は、化粧品及び／又は医薬品である、段落１５又は１６に記載の方法。
【００６８】
１８．ヒト皮膚の表現型の老化の兆候を予防及び／又は処置する活性剤を同定するための、段落１５ないし１７のいずれか１つの段落に記載の方法。
【００６９】
１９．段落１ないし１８のいずれか１つの段落に記載の方法に従ってヒト皮膚の生物学的年齢を決定するための核酸分子の使用であって、
前記核酸分子は、
ｄ）配列番号１ないし配列番号２０５からなるグループから選択される少なくとも１本の配列を含む、ヌクレオチド配列と、
ｅ）ａ）のヌクレオチド配列から、前記ＣｐＧジヌクレオチドを除いて、ヌクレオチドの最大１０％、好ましくは、最大５個の置換によって相違するヌクレオチド配列と、
ｆ）ａ）及び／又はｂ）のヌクレオチド配列の相補鎖に対応するヌクレオチド配列と
からなるグループから選択される少なくとも１本のヌクレオチド配列を含む、使用。
【００７０】
２０．２本のヌクレオチド配列が選択される、段落１９に記載の使用。
【００７１】
２１．ヒト皮膚の生物学的年齢を決定する方法をコンピュータに実行させるためのコンピュータで実行可能な指令を保存した、コンピュータで読み取り可能な媒体であって、前記指令は、
ｄ）前記ヒト皮膚細胞の少なくとも１本の染色体の特定の領域の少なくとも２個で１０個以内のＣｐＧジヌクレオチドの決定されたメチル化レベルの少なくとも２個で１０個以内の数値を入力すること、
ｅ）前記ＣｐＧジヌクレオチドのメチル化レベルと少なくとも１人のヒト個体の暦年齢との間の相関を表す保存されたデータと、決定された前記メチル化レベルの前記数値とを比較すること、及び
ｆ）前記生物学的年齢を表示すること
を含む、媒体。
【００７２】
２２．前記保存されたデータは、少なくとも１個の一次回帰式を含み、好ましくは、少なくとも２個の１次回帰を含む１個の式を含む、段落２１に記載のコンピュータで読み取り可能な媒体。
【００７３】
２３．配列番号１ないし配列番号２０５からなるグループから選択される少なくとも１本のヌクレオチド配列の少なくとも２個のＣｐＧヌクレオチドを増幅及び／又は配列決定するための少なくとも１個のオリゴヌクレオチドプライマーを含む、段落１ないし１０のいずれか１つの段落に記載の方法に従ってヒト皮膚の生物学的年齢を決定するためのキット。
【実施例】
【００７４】
皮膚サンプル及び患者のグループ
ＤＮＡメチル化アレイ（Ｉｌｌｕｍｉｎａ  ４５０ｋ  ＢｅａｄＣｈｉｐ）からの１０８個の表皮サンプル（Ｂｏｒｍａｎｎ，  Ａｇｉｎｇ  Ｃｅｌｌ  ２０１６）のデータが収集された。年齢と関連するＣｐＧ部位を得るために、サンプルの暦年齢と、各ＣｐＧ部位の対応するベータ値との間の相関係数（ｒ）が計算された。多変数線形モデルが２２５個のＣｐＧ部位の完全なセットを用いてトレーニングされた。
【００７５】
適切なＣｐＧの組み合わせを見つけるために、完全なサンプルセットが、トレーニングセットとテストセットとに分けられた。単一のＣｐＧか、少なくとも２個のＣｐＧのＣｐＧの組み合わせかがそれらの予測精度のために選択された。
【００７６】
ｃｇ０６３３５８６７及びｃｇ１３８４８５９８という２個のＣｐＧマーカーについてのメチル化の年齢依存性変化の相関が図２に示される。
【００７７】
皮膚サンプルは、２３歳ないし５４歳の健常ボランティアから吸引水疱作製法を用いて収集された。全表皮サンプルについて、皮膚の表皮部分が熱剥離法により真皮部分から分離された。角化細胞を単離するためには、表皮はディスパーゼＩＩ（Ｒｏｃｈｅ、０４９４２０７８００１）消化により真皮から分離され、トリプシン（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ、＃２５２０００５６）処理後に角化細胞が単離された。
【００７８】
ＤＮＡ単離及び亜硫酸水素塩変換
ＤＮＡはＱＩＡａｍｐ  ＤＮＡ  Ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｏｒ  Ｋｉｔ（Ｑｉａｇｅｎ、＃５６５０４）を用いて単離された。５００ｎｇのＤＮＡの次亜塩素酸塩変換は、ＥｐｉＴｅｃｔ  Ｂｉｓｕｌｆｉｔｅ  Ｋｉｔ（Ｑｉａｇｅｎ、＃５９１０４）でインビトロで培養されたヒト角化細胞と、エクスビボのヒト表皮サンプルとを用いて実施された。ＤＮＡは製造者のプロトコールによって変換されたが、インキュベーション時間は２時間５５分のかわりに４時間５５分で行った。
【００７９】
アンプリコンＰＣＲ及び配列決定
ＣｐＧを解析するために、アンプリコンがＰＣＲ法を用いて生成された。ＰＣＲ法は、次亜塩素酸塩で変換されたＤＮＡと、ＰｙｒｏＭａｒｋ  ＰＣＲ  Ｋｉｔ（Ｑｉａｇｅｎ、＃９７８７０３）とを用いて実施された。ＰＣＲ組成物は表１に示される。ＰＣＲ法はアニーリング温度５５°Ｃで実施された。
【００８０】
【表１】
2020527031.tif 000003
１ＭｇＣｌ２、フォワードプライマー及びリバースプライマーは水溶液として使用された。
【００８１】
ＰＣＲ断片は、ＴＡＥ緩衝液中での１％アガロースゲルで分離（ｕｎｒａｖｅｌｌｅｄ）され、ゲルから切り出される。アンプリコンはＱｉａｑｕｉｃｋゲル抽出キット（Ｑｉａｇｅｎ、＃２８７０６）を用いて精製された。
【００８２】
ＤＮＡ配列決定は、４５４−シーケンシングアプローチ（Ｒｏｃｈｅ）を用いて製造者のプロトコールに従って実行された。
【００８３】
メチル化の程度は、メチル化及び非メチル化リードの比率から決定された。
【００８４】
生物学的年齢の計算
生物学的年齢を計算するために、ＣｐＧ遺伝子座でのメチル化の割合が決定され、ベータ値を提供した。平均ベータ値（β）は、各ＣｐＧ遺伝子座及び各サンプルについて計算された。その後、これは、式（１）を用いてｍ値（ｍ）に変換された。
ｍ  ＝  ｌｏｇ（β／１−β）      （１）
【００８５】
ｍ値は、その後、例えば、ｃｇ０６３３５８６７及びｃｇ１３８４８５９８について式（２）ないし（４）の１つで使用される。
生物学的年齢  ＝  ７０．００２  ＋  ８．９９２＊ｍｃｇ０６３３５８６７  ＋  １２．９９８＊ｍｃｇ１３８４８５９８      （２）
生物学的年齢  ＝  ６８．７８５  ＋  ７．３４６＊ｍｃｇ０６３３５８６７  ＋  １５．８６５＊ｍｃｇ１３８４８５９８      （３）
生物学的年齢  ＝  ６０．３７２  ＋  ６．９２３＊ｍｃｇ０６３３５８６７  ＋  １２．９０４＊ｍｃｇ１３８４８５９８      （４）
【００８６】
他のＣｐＧジヌクレオチドについて使用できるかもしれない式のその他の例は以下を含む。
【００８７】
ｃｇ１３８４８５９８及びｃｇ２５０１５７３３について式（５）ないし（７）の１つ
生物学的年齢  ＝  ４９．９１３５  ＋  ３２．３３７３＊ｍｃｇ１３８４８５９８−４．３８２３＊ｍｃｇ２５０１５７３３      （５）
生物学的年齢  ＝  ４０．０７３１  ＋  １１．７５４８＊ｍｃｇ１３８４８５９８−３．７２６９＊ｍｃｇ２５０１５７３３      （６）
生物学的年齢  ＝  ６６．５４０９  ＋  ６．００１５＊ｍｃｇ１３８４８５９８  ＋  ０．５２６９＊ｍｃｇ２５０１５７３３      （７）
【００８８】
ｃｇ０６３３５８６７及びｃｇ１２４９４３７３について式（８）ないし（１０）の１つ
生物学的年齢  ＝  ７７．９９３０  ＋  １３．８９５６＊ｍｃｇ０６３３５８６７−１１．１６３２＊ｍｃｇ１２４９４３７３      （８）
生物学的年齢  ＝  ４５．５０５  ＋  ４．１０３＊ｍｃｇ０６３３５８６７−３．８９＊ｍｃｇ１２４９４３７３      （９）
生物学的年齢  ＝  ７３．５０６  ＋  ５．２０３＊ｍｃｇ０６３３５８６７−３．６３＊ｍｃｇ１２４９４３７３      （１０）
【００８９】
ｃｇ２３３６８７８７及びｃｇ０３２７１８９３について式（１１）ないし（１３）の１つ
生物学的年齢  ＝  ４９．０８４９  ＋  ２３．５９１１＊ｍｃｇ２３３６８７８７−１７．７１１６＊ｍｃｇ０３２７１８９３         （１１）
生物学的年齢  ＝  ３４．９２８  ＋  ８．１２９＊ｍｃｇ２３３６８７８７−５．８６８＊ｍｃｇ０３２７１８９３      （１２）
生物学的年齢  ＝  ６４．４５４  ＋  ８．１４９＊ｍｃｇ２３３６８７８７−３．８７２＊ｍｃｇ０３２７１８９３      （１３）
【００９０】
ｃｇ１１０８４３３４及びｃｇ２４２１７９４８について式（１４）ないし（１６）の１つ
生物学的年齢  ＝  ６９．９６９７  ＋  ２４．００１６＊ｍｃｇ１１０８４３３４−１１．８７４９＊ｍｃｇ２４２１７９４８      （１４）
生物学的年齢  ＝  ５４．７９２  ＋  １１．６８５＊ｍｃｇ１１０８４３３４−６．４６５＊ｍｃｇ２４２１７９４８      （１５）
生物学的年齢  ＝  ５０．９８５  ＋  ３．２２６＊ｍｃｇ１１０８４３３４  ＋  ６．１４７＊ｍｃｇ２４２１７９４８      （１６）
【実施例１】
【００９１】
皮膚サンプルは６人の個体から収集され、上記に提供された方法に従って解析された。解析されたＣｐＧヌクレオチドは、ｃｇ０６３３５８６７及びｃｇ１３８４８５９８であった。以下の生物学的年齢の計算は、式（２）を用いて実行され、暦年齢と比較された。
【００９２】
被験者１
暦年齢：３０歳
マーカーｃｇ０６３３５８６７：
測定されたβ値（ｃｇ０６３３５８６７）：０．１７０２
計算されたｍ値（ｃｇ０６３３５８６７）：
ｌｏｇ２（０．１７０２／１−０．１７０２）＝−２．２８５５３２６
マーカーｃｇ１３８４８５９８：
測定されたβ値（ｃｇ１３８４８５９８）：０．２５
計算されたｍ値（ｃｇ１３８４８５９８）：
ｌｏｇ２（０．２５／１−０．２５）＝−１．５８４９６２５
生物学的年齢：
７０．００２＋８．９９２×（−２．２８５５３２６）＋１２．９９８×（−１．５８４９６２５）＝２８．８５歳
暦年齢及び生物学的年齢の差：１．１５年
【００９３】
被験者２
暦年齢：３５歳
マーカーｃｇ０６３３５８６７：
測定されたβ値（ｃｇ０６３３５８６７）：０．２２８６
計算されたｍ値（ｃｇ０６３３５８６７）：
ｌｏｇ２（０．２２８６／１−０．２２８６）＝−１．７５４６５３７
マーカーｃｇ１３８４８５９８：
測定されたβ値（ｃｇ１３８４８５９８）：０．３７７５
計算されたｍ値（ｃｇ１３８４８５９８）：
ｌｏｇ２（０．３７７５／１−０．３７７５）＝−０．７２１５９７２
生物学的年齢：
７０．００２＋８．９９２×（−１．７５４６５３７）＋１２．９９８×（−０．７２１５９７２）＝４４．８４歳
暦年齢及び生物学的年齢の差：９．８４年
【００９４】
被験者３
暦年齢：５７歳
マーカーｃｇ０６３３５８６７：
測定されたβ値（ｃｇ０６３３５８６７）：０．１６８１
計算されたｍ値（ｃｇ０６３３５８６７）：
ｌｏｇ２（０．１６８１／１−０．１６８１）＝−２．３０７０９０４
マーカーｃｇ１３８４８５９８：
測定されたβ値（ｃｇ１３８４８５９８）：０．５５１４
計算されたｍ値（ｃｇ１３８４８５９８）：
ｌｏｇ２（０．５５１４／１−０．５５１４）＝０．２９７６６９６
生物学的年齢：
７０．００２＋８．９９２×（−２．３０７０９０４）＋１２．９９８×（０．２９７６６９６）＝５３．１３歳
暦年齢及び生物学的年齢の差：３．８７年
【００９５】
被験者４
暦年齢：７２歳
マーカーｃｇ０６３３５８６７：
測定されたβ値（ｃｇ０６３３５８６７）：０．３２６２
計算されたｍ値（ｃｇ０６３３５８６７）：
ｌｏｇ２（０．３２６２／１−０．３２６２）＝−１．０４６５６３６
マーカーｃｇ１３８４８５９８：
測定されたβ値（ｃｇ１３８４８５９８）：０．６０７１
計算されたｍ値（ｃｇ１３８４８５９８）：
ｌｏｇ２（０．６０７１／１−０．６０７１）＝０．６２７７７２０１
生物学的年齢：
７０．００２＋８．９９２×（−１．０４６５６３６）＋１２．９９８×（０．６２７７７２０１）＝６８．７５歳
暦年齢及び生物学的年齢の差：３．２５年
【００９６】
図３７に示すとおり、計算された生物学的年齢は、６人の個体の各１人の暦年齢に対してプロットされた。これらのデータポイントにわたる平均絶対誤差は５．０５年であったが、これは、本発明に基づいて計算された生物学的年齢と、暦年齢との間の相関の程度が高いことを実証する。さらに、良好な相関が全ての年齢で見られた。本発明は全てのサンプルで生物学的年齢を高精度で予測するため、逸脱する生物学的年齢は個体の健康状態を示す。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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【図１４】
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【図１５】
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【図１６】
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【図１７】
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【図１８】
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【図１９】
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【図２０】
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【図２１】
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【図２２】
2020527031.tif 000025
【図２３】
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【図２４】
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【図２５】
2020527031.tif 000028
【図２６】
2020527031.tif 000029
【図２７】
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【図２８】
2020527031.tif 000031
【図２９】
2020527031.tif 000032
【図３０】
2020527031.tif 000033
【図３１】
2020527031.tif 000034
【図３２】
2020527031.tif 000035
【図３３】
2020527031.tif 000036
【図３４】
2020527031.tif 000037
【図３５】
2020527031.tif 000038
【図３６】
2020527031.tif 000039
【図３７】
2020527031.tif 000040
【配列表】
2020527031000001.app
【国際調査報告】
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2020527031.tif 000042
2020527031.tif 000043
2020527031.tif 000044
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