(57)【要約】一態様では、本発明は、対象におけるがんを予防または処置するための方法を提供する。一部の実施形態では、方法は、Ｃｈｋ１阻害剤である化合物１の治療有効量を投与することを含む。他の実施形態では、方法は、Ｗｅｅ１阻害剤の治療有効量を投与することをさらに含む。医薬組成物およびキットも本明細書において提供される。対象におけるがんを予防または処置するための方法であって、（ｉ）化合物１または薬学的に許容されるその塩；および（ｉｉ）Ｗｅｅ１阻害剤または薬学的に許容されるその塩の治療有効量を前記対象に投与することを含む、方法。
2020512977.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
対象におけるがんを予防または処置するための方法であって、（ｉ）化合物１または薬学的に許容されるその塩；および（ｉｉ）Ｗｅｅ１阻害剤または薬学的に許容されるその塩の治療有効量を前記対象に投与することを含む、方法。
【請求項２】
前記Ｗｅｅ１阻害剤がＡＺＤ−１７７５である、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記がんが、急性骨髄性白血病、食道がん、胃がん、マントル細胞リンパ腫、非小細胞肺がん（ＮＳＣＬＣ）、卵巣がん、頭頸部がん、肝臓がん、膵臓がん、前立腺がんおよび中枢神経系がんからなる群から選択される、請求項１または２に記載の方法。
【請求項４】
前記がんが転移性がんである、請求項１から３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５】
前記がんが多剤耐性がんである、請求項１から４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６】
化合物１の用量が、前記対象の体重１ｋｇあたり約１ｍｇから１００ｍｇの間である、請求項１から５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項７】
前記化合物１の用量が、前記対象の体重１ｋｇあたり約１２．５ｍｇである、請求項６に記載の方法。
【請求項８】
前記化合物１の用量が、前記対象の体重１ｋｇあたり約２５ｍｇである、請求項６に記載の方法。
【請求項９】
前記化合物１の用量が、前記対象の体重１ｋｇあたり約５０ｍｇである、請求項６に記載の方法。
【請求項１０】
前記ＡＺＤ−１７７５の用量が前記対象の体重１ｋｇあたり約３０ｍｇである、請求項２から９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１１】
前記化合物１の用量が前記対象の体重１ｋｇあたり約２５ｍｇであり、前記ＡＺＤ−１７７５の用量が前記対象の体重１ｋｇあたり約３０ｍｇである、請求項６から１０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１２】
化合物１および前記Ｗｅｅ１阻害剤が共投与される、請求項１から１１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１３】
化合物１および前記Ｗｅｅ１阻害剤が同時にまたは連続的に共投与される、請求項１２に記載の方法。
【請求項１４】
化合物１または前記Ｗｅｅ１阻害剤が経口、静脈内、筋肉内、皮下または腫瘍内に投与される、請求項１から１３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１５】
前記対象を処置することが、腫瘍体積の低減をもたらす、請求項１から１４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１６】
前記対象を処置することが、がんの１つまたは複数の徴候または症状の減少または除去をもたらす、請求項１から１５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１７】
前記対象を処置することが、生存時間の増加をもたらす、請求項１から１６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１８】
前記対象ががんを有さない、請求項１から１４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１９】
ＤＮＡ損傷剤を投与することをさらに含む、請求項１から１４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２０】
（ｉ）化合物１または薬学的に許容されるその塩；
（ｉｉ）Ｗｅｅ１阻害剤または薬学的に許容されるその塩；および
（ｉｉｉ）薬学的に許容される担体
を含む、医薬組成物。
【請求項２１】
前記Ｗｅｅ１阻害剤がＡＺＤ−１７７５である、請求項１９に記載の医薬組成物。
【請求項２２】
化合物１が約０．１ｎＭから２，０００ｎＭの間の濃度で存在する、請求項２０または２１に記載の医薬組成物。
【請求項２３】
ＡＺＤ−１７７５が約０．１ｎＭから１，０００ｎＭの間の濃度で存在する、請求項２１または２２に記載の医薬組成物。
【請求項２４】
ＤＮＡ損傷剤を含む、請求項１９から２２のいずれかに記載の医薬組成物。
【請求項２５】
請求項２０から２３のいずれか一項に記載の医薬組成物を含む、対象におけるがんを予防または処置するためのキット。
【請求項２６】
使用のための指示をさらに含む、請求項２５に記載のキット。
【請求項２７】
１つまたは複数の試薬をさらに含む、請求項２５または２６に記載のキット。
【請求項２８】
前記組成物がＤＮＡ損傷剤を含む、請求項２５から２７のいずれかに記載のキット。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願の引用
本願は、米国仮出願第６２／４８０，１０１号（２０１７年３月３１日提出）の利益を主張する。本願は、すべての目的のためにその全体が参考として援用される。
【０００２】
発明の分野
本発明は、がんの処置に関する組成物、方法および使用を対象とする。種々の態様および実施形態は、一般に、Ｃｈｋ１阻害剤、例えば、Ｗｅｅ１阻害剤とのその組合せ、ならびにがんの処置においてそのような化合物および組合せを調製または使用する方法に関する。
【背景技術】
【０００３】
発明の背景
がんは、合衆国および世界中で医療に相当な負荷を負わせ、社会に大きな影響を及ぼす疾患である。合衆国だけでも、２０１６年に１６０万人を超える人々が新たにがんを有すると診断され、約６０万人ががんで死亡したと推定されている。がんは、身体における実質的にすべての細胞型から生じる腫瘍を含む非常に不均一な疾患であり、広範な環境的および遺伝的危険因子と関連している。さらに、がんは、すべての年齢、すべての民族、文化および社会経済学的群を襲う。
【０００４】
Ｃｈｋ１は、セリン／スレオニンキナーゼであり、ＤＮＡ損傷および複製ストレスへの応答における細胞周期チェックポイントの誘導に関与している。Ｃｈｋ１阻害は、内部ＳおよびＧ２／Ｍチェックポイントを抑止し、腫瘍細胞を周知のＤＮＡ損傷剤に選択的に感受性にすることが示されている（例えば、McNeely,  S.ら、Pharmacology  &  Therapeutics  ２０１４年（dx.doi.org/10.1016/j.pharmthera.2013.10.005）を参照されたい）。
【０００５】
化学療法および放射線治療への耐性、従来の治療に関する臨床的課題は、Ｃｈｋ１が関連付けられているＤＮＡ損傷応答の活性化と関連しており（Nature  ２００６年；４４４巻（７号）：７５６〜７６０頁）、Ｃｈｋ１の阻害は、肺がん脳転移を放射線治療に感受性にする（Biochem.  Biophys.  Res.  Commun.  ２０１１年；４０６巻（１号）：５３〜８頁）。
Ｃｈｋ１阻害剤は、単剤（single  agent）としてまたは組合せ物でのいずれでも、例としてＤＮＡ損傷およびチェックポイント経路の構成的活性化が遺伝的不安定性を駆動している腫瘍細胞を処置することにおいて、有用である。種々の試みが、Ｃｈｋ１キナーゼの阻害剤を開発するために行われている。例えば、ＰＣＴ出願公開第ＷＯ２００３／０１０４４４号および第ＷＯ２００５／０７２７３３号は、Ｃｈｋ１キナーゼ阻害剤としてアリール／ヘテロアリールウレア化合物を開示している。米国特許出願公開第２００５／０２１５５５６号は、キナーゼ阻害剤として大環状ウレアを開示している。ＰＣＴ出願公開第ＷＯ２００２／０７０４９４号、第ＷＯ２００６／０１４３５９号および第ＷＯ２００６／０２１００２号は、Ｃｈｋ１阻害剤としてアリールおよびヘテロアリールウレアを開示している。ＰＣＴ出願公開第ＷＯ２０１１／１４１７１６号および第ＷＯ２０１３／０７２５０２号は、両方ともＣｈｋ１阻害剤として置換ピラジニルフェニルウレアを開示している。ＰＣＴ出願公開第ＷＯ２００５／００９４３５号および第ＷＯ２０１０／０７７７５８号は、Ｃｈｋ１キナーゼ阻害剤としてアミノピラゾールを開示している。
前述の努力にも関わらず、がん細胞をＤＮＡ損傷およびアポトーシス経路の活性化にさらに感受性にするため、ならびにがん細胞が他の化学療法および放射線治療による処置に耐性になりにくくするための治療剤として使用され得る、細胞周期チェックポイント阻害剤に対する必要は残ったままである。本発明は、これらの必要を満たし、関連する有利点をさらに提供する。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００６】
【特許文献１】国際公開第２００３／０１０４４４号
【特許文献２】国際公開第２００５／０７２７３３号
【特許文献３】米国特許出願公開第２００５／０２１５５５６号明細書
【特許文献４】国際公開第２００２／０７０４９４号
【特許文献５】国際公開第２００６／０１４３５９号
【特許文献６】国際公開第２００６／０２１００２号
【特許文献７】国際公開第２０１１／１４１７１６号
【特許文献８】国際公開第２０１３／０７２５０２号
【特許文献９】国際公開第２００５／００９４３５号
【特許文献１０】国際公開第２０１０／０７７７５８号
【非特許文献】
【０００７】
【非特許文献１】McNeely,  S.ら、Pharmacology  &  Therapeutics  ２０１４年（dx.doi.org/10.1016/j.pharmthera.2013.10.005）
【非特許文献２】Nature  ２００６年；４４４巻（７号）：７５６〜７６０頁）
【非特許文献３】Biochem.  Biophys.  Res.  Commun.  ２０１１年；４０６巻（１号）：５３〜８頁
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【０００８】
発明の簡単な概要
一部の態様では、本開示は、対象におけるがんを予防または処置するための方法であって、化合物１の治療有効量およびＷｅｅ１阻害剤の治療有効量を対象に投与することを含む、方法を提供する。一部の実施形態では、Ｗｅｅ１阻害剤は、アダボセルチブ（adavosertib）（すなわち、ＡＺＤ−１７７５）である。
【０００９】
一部の実施形態では、がんは、急性骨髄性白血病、食道がん、胃がん、マントル細胞リンパ腫、非小細胞肺がん（ＮＳＣＬＣ）、卵巣がん、頭頸部がん、肝臓がん、膵臓がん、前立腺がんおよび中枢神経系がんからなる群から選択される。他の実施形態では、がんは、転移性がんである。一部の他の実施形態では、がんは、多剤耐性がんである。
【００１０】
一部の実施形態では、化合物１の用量は、対象の体重１ｋｇあたり約１ｍｇから１００ｍｇの間である。一部の実施形態では、化合物１の用量は、対象の体重１ｋｇあたり約１２．５ｍｇである。他の実施形態では、化合物１の用量は、対象の体重１ｋｇあたり約２５ｍｇである。一部の他の実施形態では、化合物１の用量は、対象の体重１ｋｇあたり約５０ｍｇである。他の実施形態では、ＡＺＤ−１７７５の用量は対象の体重１ｋｇあたり約３０ｍｇである。特定の実施形態では、化合物１の用量は対象の体重１ｋｇあたり約２５ｍｇであり、ＡＺＤ−１７７５の用量は対象の体重１ｋｇあたり約３０ｍｇである。
【００１１】
一部の実施形態では、化合物１およびＷｅｅ１阻害剤は、共投与される。他の実施形態では、化合物１およびＷｅｅ１阻害剤は、同時にまたは連続的に共投与される。特定の実施形態では、化合物１またはＷｅｅ１阻害剤は経口、静脈内、筋肉内、皮下または腫瘍内に投与される。
【００１２】
一部の実施形態では、対象を処置することは、腫瘍体積の低減をもたらす。他の実施形態では、対象を処置することは、がんの１つまたは複数の徴候または症状の減少または除去をもたらす。一部の他の実施形態では、対象を処置することは、生存時間の増加をもたらす。特定の実施形態では、投与は予防のためであり、対象はがんを有さない。
【００１３】
他の態様では、本発明は、化合物１および薬学的に許容される担体を含む医薬組成物を提供する。一部の実施形態では、医薬組成物は、Ｗｅｅ１阻害剤をさらに含む。一部の実施形態では、Ｗｅｅ１阻害剤は、ＡＺＤ−１７７５である。
【００１４】
一部の実施形態では、化合物１は、約０．１ｎＭから２，０００ｎＭの間の濃度で存在する。一部の実施形態では、Ｗｅｅ１阻害剤（例えば、ＡＺＤ−１７７５）は、約０．１ｎＭから１，０００ｎＭの間の濃度で存在する。
【００１５】
さらに他の態様では、本発明は、本発明の医薬組成物を含む、対象におけるがんを予防または処置するためのキットを提供する。一部の実施形態では、キットは、使用のための指示をさらに含む。一部の実施形態では、キットは、１つまたは複数の試薬をさらに含む。
【００１６】
本発明の他の目的、特性および有利点は、続く詳細な記載および図面から当業者に明らかである。
【図面の簡単な説明】
【００１７】
【図１】図１は、がんにおけるＤＮＡ損傷応答および細胞周期調節系（cell  cycle  control  axis）を示す。
【００１８】
【図２】図２は、化合物１の種々の薬物特性を示す。
【００１９】
【図３Ａ−Ｂ】図３Ａ〜３Ｄは、化合物１が、Ｃｈｋ１の強力で選択的な阻害剤であることを示す。図３Ａは、さまざまなキナーゼファミリーを示す。図３Ｂは、化合物１の酵素選択性を示す。「ＴＢＤ」は、値が決定されること意味する。図３Ｃは、酵素に対する化合物１の効力を示す。図３Ｄは、細胞に対する化合物１の効力を示す。
【図３Ｃ−Ｄ】図３Ａ〜３Ｄは、化合物１が、Ｃｈｋ１の強力で選択的な阻害剤であることを示す。図３Ａは、さまざまなキナーゼファミリーを示す。図３Ｂは、化合物１の酵素選択性を示す。「ＴＢＤ」は、値が決定されること意味する。図３Ｃは、酵素に対する化合物１の効力を示す。図３Ｄは、細胞に対する化合物１の効力を示す。
【００２０】
【図４】図４は、化合物１が、多様な組織学的起源由来である癌細胞株において活性であったことを示す。横軸は、総癌集団についてＩＣ５０値の中央値で交差する。ＩＣ５０値は、癌パネルについての中央値ＩＣ５０に対してプロットされている。
【００２１】
【図５Ａ−Ｂ】図５Ａ〜５Ｄは、化合物１が、非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）異種移植モデルにおいて活性であったことを示す。データは、群平均＋／−Ｓ．Ｅ．Ｍを表す。図５Ａは、ＳＫ−ＭＥＳ  ＮＳＣＬＣ腫瘍モデルでの腫瘍体積への化合物１の効果を示す。図５Ｂは、ＮＣＩ−Ｈ７２７  ＮＳＣＬＣ腫瘍モデルでの腫瘍体積への化合物１の効果を示す。図５Ｃは、ＳＫ−ＭＥＳ  ＮＳＣＬＣ腫瘍モデルでの体重への化合物１の効果を示す。図５Ｄは、ＮＣＩ−Ｈ７２７  ＮＳＣＬＣ腫瘍モデルでの体重への化合物１の効果を示す。
【図５Ｃ−Ｄ】図５Ａ〜５Ｄは、化合物１が、非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）異種移植モデルにおいて活性であったことを示す。データは、群平均＋／−Ｓ．Ｅ．Ｍを表す。図５Ａは、ＳＫ−ＭＥＳ  ＮＳＣＬＣ腫瘍モデルでの腫瘍体積への化合物１の効果を示す。図５Ｂは、ＮＣＩ−Ｈ７２７  ＮＳＣＬＣ腫瘍モデルでの腫瘍体積への化合物１の効果を示す。図５Ｃは、ＳＫ−ＭＥＳ  ＮＳＣＬＣ腫瘍モデルでの体重への化合物１の効果を示す。図５Ｄは、ＮＣＩ−Ｈ７２７  ＮＳＣＬＣ腫瘍モデルでの体重への化合物１の効果を示す。
【００２２】
【図６Ａ−Ｂ】図６Ａ〜６Ｃは、化合物１およびＡＺＤ−１７７５が相乗的であり、単剤として細胞活性の特有のパターンを示したことを示す。データは、群平均＋／−Ｓ．Ｅ．Ｍを表す。黒矢印は、開始細胞数（細胞増殖抑制限度（cytostatic  limit））に対応するシグナルを表す。図６Ａは、ＳＫ−ＭＥＳ  ＮＳＣＬＣ腫瘍モデルでの細胞生存率における化合物１とＡＺＤ−１７７５との種々の組合せの効果を示す。図６Ｂは、ＮＣＩ−Ｈ７２７  ＮＳＣＬＣ腫瘍モデルでの細胞生存率における化合物１とＡＺＤ−１７７５との種々の組合せの効果を示す。図６Ｃは、化合物１とＡＺＤ−１７７５との比較を示し、種々のがん細胞株におけるＩＣ５０値を示す。
【図６Ｃ】図６Ａ〜６Ｃは、化合物１およびＡＺＤ−１７７５が相乗的であり、単剤として細胞活性の特有のパターンを示したことを示す。データは、群平均＋／−Ｓ．Ｅ．Ｍを表す。黒矢印は、開始細胞数（細胞増殖抑制限度（cytostatic  limit））に対応するシグナルを表す。図６Ａは、ＳＫ−ＭＥＳ  ＮＳＣＬＣ腫瘍モデルでの細胞生存率における化合物１とＡＺＤ−１７７５との種々の組合せの効果を示す。図６Ｂは、ＮＣＩ−Ｈ７２７  ＮＳＣＬＣ腫瘍モデルでの細胞生存率における化合物１とＡＺＤ−１７７５との種々の組合せの効果を示す。図６Ｃは、化合物１とＡＺＤ−１７７５との比較を示し、種々のがん細胞株におけるＩＣ５０値を示す。
【００２３】
【図７Ａ−Ｂ】図７Ａおよび７Ｂは、化合物１およびＡＺＤ−１７７５がＮＣＩ−Ｈ７２７  ＮＳＣＬＣ異種移植腫瘍モデルにおいて活性であったことを示す。データは、群平均＋／−Ｓ．Ｅ．Ｍを表す。図７Ａは、化合物１およびＡＺＤ−１７７５、単独および組合せの、腫瘍体積への効果を示す。図７Ｂは、化合物１およびＡＺＤ−１７７５、単独および組合せの、体重への効果を示す。
【００２４】
【図８】図８は、化合物１への感受性についての造血細胞株のスクリーニングの結果を示す。
【００２５】
【図９Ａ−Ｂ】図９Ａおよび９Ｂは、化合物１が、マントル細胞リンパ腫細胞株において単剤抗増殖活性を実証したことを示す。図９Ａは、増殖アッセイの結果を示す。図９Ｂは、図９Ａに示す細胞株についてのＩＣ５０値を示す。
【００２６】
【図１０Ａ−Ｂ】図１０Ａ〜１０Ｄは、化合物１が、マントル細胞リンパ腫腫瘍異種移植モデルにおいて単剤として活性であり、耐容性が良好であったことを示す。図１０Ａは、Ｊｅｋｏ−１腫瘍成長への化合物１の効果を示す。図１０Ｂは、Ｊｅｋｏ−１腫瘍モデルにおける体重への化合物１の効果を示す。図１０Ｃは、Ｍａｖｅｒ−１腫瘍成長への化合物１の効果を示す。図１０Ｄは、Ｍａｖｅｒ−１腫瘍モデルにおける体重への化合物１の効果を示す。
【図１０Ｃ−Ｄ】図１０Ａ〜１０Ｄは、化合物１が、マントル細胞リンパ腫腫瘍異種移植モデルにおいて単剤として活性であり、耐容性が良好であったことを示す。図１０Ａは、Ｊｅｋｏ−１腫瘍成長への化合物１の効果を示す。図１０Ｂは、Ｊｅｋｏ−１腫瘍モデルにおける体重への化合物１の効果を示す。図１０Ｃは、Ｍａｖｅｒ−１腫瘍成長への化合物１の効果を示す。図１０Ｄは、Ｍａｖｅｒ−１腫瘍モデルにおける体重への化合物１の効果を示す。
【００２７】
【図１１Ａ−Ｃ】図１１Ａ〜１１Ｄは、化合物１がＷｅｅ１阻害剤との組合せで、マントル細胞リンパ腫細胞株において相乗的抗増殖作用を示したことを示す。図１１Ａは、Ｊｅｋｏ−１細胞への化合物１およびＡＺＤ−１７７５の効果を示す。図１１Ｂは、Ｍａｖｅｒ−１細胞への化合物１およびＡＺＤ−１７７５の効果を示す。図１１Ｃは、Ｚ−１３８細胞への化合物１およびＡＺＤ−１７７５の効果を示す。図１１Ｄは、Ｊｅｋｏ−１、Ｚ−１３８およびＭａｖｅｒ−１細胞についての組合せ指数を示す。
【図１１Ｄ】図１１Ａ〜１１Ｄは、化合物１がＷｅｅ１阻害剤との組合せで、マントル細胞リンパ腫細胞株において相乗的抗増殖作用を示したことを示す。図１１Ａは、Ｊｅｋｏ−１細胞への化合物１およびＡＺＤ−１７７５の効果を示す。図１１Ｂは、Ｍａｖｅｒ−１細胞への化合物１およびＡＺＤ−１７７５の効果を示す。図１１Ｃは、Ｚ−１３８細胞への化合物１およびＡＺＤ−１７７５の効果を示す。図１１Ｄは、Ｊｅｋｏ−１、Ｚ−１３８およびＭａｖｅｒ−１細胞についての組合せ指数を示す。
【００２８】
【図１２】図１２は、Ｊｅｋｏ−１、Ｚ−１３８およびＭａｖｅｒ−１細胞におけるホスホ−Ｈ２Ａ．Ｘアッセイの結果を示す。
【００２９】
【図１３Ａ−Ｃ】図１３Ａ〜１３Ｃは、マントル細胞リンパ腫細胞株におけるアポトーシスの化合物１誘導が、Ｗｅｅ１阻害の併用で増加したことを示す。図１３Ａは、Ｊｅｋｏ−１細胞におけるカスパーゼ−３／７アッセイの結果を示す。図１３Ｂは、Ｍａｖｅｒ−１細胞におけるカスパーゼ−３／７アッセイの結果を示す。図１３Ｃは、Ｚ−１３８細胞におけるカスパーゼ−３／７アッセイの結果を示す。
【００３０】
【図１４Ａ−Ｂ】図１４Ａおよび１４Ｂは、化合物１の抗腫瘍活性が、Ｊｅｋｏ−１マントル細胞リンパ腫腫瘍モデルにおいてＷｅｅ１阻害剤と組み合わされた場合に増強されたことを示す。図１４Ａは、腫瘍成長への化合物１およびＡＺＤ−１７７５の効果を示す。図１４Ｂは、体重への化合物１およびＡＺＤ−１７７５の効果を示す。
【００３１】
【図１５Ａ−Ｃ】図１５Ａ〜１５Ｃは、化合物１が、ＡＭＬ細胞株において抗増殖活性を実証し、ＤＮＡ損害を誘導したことを示す。図１５Ａは、複数の細胞株における増殖アッセイの結果を示す。図１５Ｂは、図１５Ａにおいて示された細胞株における化合物１  ＩＣ５０値を示す。図１５Ｃは、ホスホ−Ｈ２Ａ．Ｘ（Ｓ１３９）アッセイの結果を示す。
【００３２】
【図１６Ａ−Ｂ】図１６Ａおよび１６Ｂは、化合物１が、ＭＶ−４１１  ＡＭＬ腫瘍異種移植モデルにおいて単剤として活性であり、耐容性が良好であったことを示す。図１６Ａは、ＭＶ−４１１腫瘍成長への化合物１の効果を示す。図１６Ｂは、ＭＶ−４１１腫瘍モデルにおける体重への化合物１の効果を示す。
【発明を実施するための形態】
【００３３】
発明の詳細な説明
Ｉ．序論
チェックポイントキナーゼ１（Ｃｈｋ１）は、ＳおよびＧ２相において細胞周期進行を停止することによって遺伝毒性ストレスに応答して細胞分裂を制御する、セリン／スレオニンタンパク質キナーゼである。Ｃｈｋ１の薬理学的阻害は、増加したＤＮＡ複製ストレスを有する腫瘍細胞を標的とし、ＤＮＡ複製チェックポイント機能の解放（uncoupling）ならびにＤＮＡ損傷および細胞死の誘導をもたらす。これらの特性は、発がん性シグナル伝達および並行するＤＮＡ損傷応答経路機能の喪失によって駆動される高い複製ストレスを有するがんにおいてＣｈｋ１阻害を、単剤としての新たな治療手法にする。
【００３４】
細胞周期制御およびＤＮＡ損傷応答（ＤＤＲ）シグナル伝達を標的化することは、がん治療のための臨床的に検証された手法である。図１に示すとおり、Ｃｈｋ１は、細胞分裂周期および細胞性ＤＤＲシグナル伝達の重要なモジュレーターである。Ｃｈｋ１は、ＤＮＡ損傷およびＤＮＡ複製ストレスに応答して細胞分裂周期を制御する。さらに、Ｃｈｋ１は、他のＤＤＲおよび細胞周期制御経路と並行して機能し、その多くは、がん細胞において制御解除されている。がんにおけるＤＤＲおよび細胞周期制御の喪失は、Ｃｈｋ１阻害への感受性を増加させる。
【００３５】
細胞分裂周期２５（Ｃｄｃ２５）は、サイクリンを活性化し、サイクリン依存性キナーゼ（Ｃｄｋ）活性の増加をもたらすホスファターゼである。Ｃｈｋ１阻害剤は、Ｃｈｋ１によるＣｄｃ２５の調節を破壊することによって細胞周期チェックポイント活性化を遮断し、サイクリンおよびＣｄｋ活性の増加をもたらす。加えて、図１に示すとおり、Ｗｅｅ１は、サイクリン活性化およびＣｄｋ活性を制御するようにＣｈｋ１と並行して機能する。
【００３６】
本発明は、Ｃｈｋ１阻害剤化合物１が、多数の異なるがんに対応する広範ながん細胞株において腫瘍成長および細胞生存率を抑制するという発見に、部分的に、基づいている。本発明は、化合物１がＷｅｅ１の阻害剤、細胞周期チェックポイント制御因子として機能する別のタンパク質、との組合せで与えられた場合に相乗効果を示すという発見にも部分的に基づいている。化合物１とＷｅｅ１の阻害剤との組合せ処置は、１未満のChou-Talalay組合せ指標（Chou-Talalay  combination  index）（ＣＩ）をもたらす。Chou-Talalayは、薬物組合せにおける、相加効果（ＣＩ＝１）、相乗性（ＣＩ＜１）および拮抗作用（ＣＩ＞１）についての定量的定義を提供する広く使用されている方法である。例えば、Chou,  T.  C.,  Cancer  Res.  ２０１０年、７０巻（２号）、４４０〜６頁を参照されたい。
【００３７】
ＩＩ．定義
他を具体的に示す場合を除いて、本明細書で使用するすべての技術的および科学的用語は、本発明が属する技術分野の当業者によって一般に理解されるのと同じ意味を有する。加えて、本明細書に記載される方法または材料と類似のまたは等価の任意の方法または材料は、本発明の実施において使用され得る。本発明の目的のために、次の用語は定義される。
【００３８】
本明細書において使用される用語「１つの（ａ）」、「１つの（ａｎ）」または「その（ｔｈｅ）」は、１つのメンバーを含む態様を含むだけでなく、１つより多いメンバーを含む態様も含む。例えば、単数形「１つの（ａ）」、「１つの（ａｎ）」および「その（ｔｈｅ）」は、内容が他を明確に示す場合を除いて、複数の参照物を含む。したがって、例えば、「細胞（ａ  ｃｅｌｌ）」への言及は、複数のそのような細胞を含み、「薬剤（ｔｈｅ  ａｇｅｎｔ）」への言及は、当業者に公知の１つまたは複数の薬剤への言及を含むなどである。
【００３９】
本明細書において使用される用語「約」および「およそ」は、測定の所与の性質および確度で測定された量に関する許容される誤差の程度を一般に意味するものとする。典型的、例示的な誤差の程度は、所与の値または値の範囲の２０パーセント（％）以内、好ましくは１０％以内、より好ましくは５％以内である。「約Ｘ」への言及は、具体的には、少なくとも値Ｘ、０．９５Ｘ、０．９６Ｘ、０．９７Ｘ、０．９８Ｘ、０．９９Ｘ、１．０１Ｘ、１．０２Ｘ、１．０３Ｘ、１．０４Ｘおよび１．０５Ｘを示す。したがって「約Ｘ」は、例えば「０．９８Ｘ」の特許請求の範囲の限定を支持する書面による記載を教示および提供することを意図する。
【００４０】
代替的に、生物学系では用語「約」および「およそ」は、所与の値の一桁以内、好ましくは５倍以内、より好ましくは２倍以内である値を意味し得る。本明細書において示される数量は、他に述べられる場合を除いて概数であり、用語「約」または「およそ」は、明確に述べられていない場合、推定され得ることを意味する。
【００４１】
「約」が数値範囲の最初に適用されている場合、それは範囲の両端に適用される。したがって「約５から２０％」は、「約５％から約２０％」と等価である。「約」が値のセットの最初の値に適用されている場合、それはセットにおけるすべての値に適用される。したがって、「約７、９または１１ｍｇ／ｋｇ」は、「約７、約９または約１１ｍｇ／ｋｇ」と等価である。
【００４２】
本明細書において使用される用語「または」は、一般に非排他的に解釈されるべきである。例えば、「ＡまたはＢを含む組成物」への特許請求は、ＡおよびＢ両方を含む組成物を有する態様を典型的には表す。しかし「または」は、矛盾無く組み合わせられない、示された態様（例えば、９と１０との間または７と８との間である組成物ｐＨ）を排除すると解釈されるべきである。
【００４３】
群「ＡまたはＢ」は、群「ＡおよびＢからなる群から選択される」と典型的には等価である。
【００４４】
本明細書において使用される用語「含む」は、追加的成分を排除しないとして一般に解釈するべきである。例えば、「Ａを含む組成物」への特許請求は、ＡおよびＢ；Ａ、ＢおよびＣ；Ａ、Ｂ、ＣおよびＤ；Ａ、Ｂ、Ｃ、ＤおよびＥ；などを含む組成物を網羅する。
【００４５】
本明細書において使用される用語「対象」、「個体」および「患者」は、本明細書において脊椎動物、好ましくは哺乳動物、より好ましくはヒトを指すように互換的に用いられる。哺乳動物としては、これだけに限らないが、マウス、ラット、サル、ヒト、家畜、競技用動物およびペットが挙げられる。ｉｎ  ｖｉｖｏで得られるまたはｉｎ  ｖｉｔｒｏで培養される生物学的実体の組織、細胞およびそれらの後代も包含される。
【００４６】
本明細書において使用される、用語「治療有効量」は、示された障害、状態または精神状態に関して望ましい結果をもたらすために十分な投薬量を含む。望ましい結果は、投薬のレシピエントにおける主観的または客観的改善を含み得る。例えば、化合物１などのＣｈｋ１阻害剤；ＡＺＤ−１７７５などのＷｅｅ１阻害剤；またはＣｈｋ１阻害剤とＷｅｅ１阻害剤との組合せの有効量は、がん（例えば、急性骨髄性白血病、食道がん、胃がん、マントル細胞リンパ腫、非小細胞肺がん（ＮＳＣＬＣ）、卵巣がん、頭頸部がん、肝臓がん、膵臓がん、前立腺がんまたは中枢神経系がん）の徴候、症状または原因を軽減するために十分な量を含む。別の例として、化合物１などのＣｈｋ１阻害剤；ＡＺＤ−１７７５などのＷｅｅ１阻害剤；またはＣｈｋ１阻害剤とＷｅｅ１阻害剤との組合せの有効量は、転移性または多剤耐性がんの徴候、症状または原因を軽減するために十分な量を含む。別の例として、化合物１などのＣｈｋ１阻害剤；ＡＺＤ−１７７５などのＷｅｅ１阻害剤；またはＣｈｋ１阻害剤とＷｅｅ１阻害剤との組合せの有効量は、がんの発展を予防するために十分な量を含む。
【００４７】
したがって、治療有効量は、腫瘍成長を遅くする、逆行させるもしくは予防する、生存時間を増加させるまたは腫瘍増悪もしくは転移を阻害する量であってよい。同様に例えば、化合物１などのＣｈｋ１阻害剤；ＡＺＤ−１７７５などのＷｅｅ１阻害剤；またはＣｈｋ１阻害剤とＷｅｅ１阻害剤との組合せの有効量は、対象に投与された場合に、がんを有する対象において実質的な改善をもたらすために十分な量を含む。有効量は、処置されるがんの種類およびステージ、投与される１つまたは複数の組成物（例えば、化合物１などのＣｈｋ１阻害剤；ＡＺＤ−１７７５などのＷｅｅ１阻害剤；またはＣｈｋ１阻害剤とＷｅｅ１阻害剤との組合せを含む）の種類および濃度ならびに同様に投与される他の薬物の量で変動する場合がある。
【００４８】
本明細書における目的のために、治療有効量は、当技術分野において公知であり得る考慮事項によって決定される。量は、がんに罹患している対象において望ましい治療効果を達成するために有効でなければならない。治療有効量は、処置される疾患の種類および重症度ならびに処置レジメンに特に依存する。治療有効量は、適切に設計された臨床試験（例えば、用量範囲研究）において典型的には決定され、当業者は治療有効量を判定するための治験をどのように適切に実施するかを承知している。一般に公知のとおり、治療有効量は、身体での治療薬剤（例えば、化合物１などのＣｈｋ１阻害剤；ＡＺＤ−１７７５などのＷｅｅ１阻害剤；もしくはＣｈｋ１阻害剤とＷｅｅ１阻害剤との組合せ）または組成物の分布プロファイル、種々の薬理学的パラメーター（例えば、身体での半減期）と望ましくない副作用との間の関係、ならびに年齢および性別などの他の要因などが挙げられる種々の要因に依存する。
【００４９】
用語「生存期間」または「生存時間」は、疾患の診断、または疾患（例えば、がん）に対する治療の特定のコースの開始もしくは完了後の時間の長さを指す。用語「全生存期間」は、がんなどの疾患を有すると診断されたまたは処置された後に定義された期間生存している患者を記載する臨床エンドポイントを含む。用語「無病生存期間」は、患者が疾患の徴候を有さずに（例えば、既知の再発を有さずに）生存している間の、特定の疾患（例えば、がん）についての処置後の時間の長さを含む。ある特定の実施形態では、無病生存期間は、具体的な治療の有効性を評価するために使用される臨床的パラメーターであり、１または５年間の単位で通常測定される。用語「無増悪生存期間」は、患者が疾患の追加的症状を有さずに疾患を有して生存している特定の疾患（例えば、がん）について処置中のおよび処置後の時間の長さを含む。一部の実施形態では、生存期間は、中央値または平均値として表現される。
【００５０】
本明細書において使用される、用語「処置すること（treating）」としては、これだけに限らないが、レシピエントの健康状態（例えば、患者のがんの状態）に有益な変化をもたらす方法および操作が挙げられる。変化は、主観的または客観的のいずれであってもよく、処置されるがんの症状または徴候などの特性に関連していてよい。例えば、患者が疼痛の減少を述べる場合、それにより疼痛の上首尾の処置が生じている。例えば、腫脹の量が減少した場合、それにより炎症の有益な処置が生じている。同様に、臨床医が、がん細胞の数、がん細胞の増殖、がん腫瘍の大きさまたは別の抗がん薬物へのがん細胞の抵抗性の低減などの客観的変化を述べる場合、それによりがんの処置も有益であった。レシピエントの状態の悪化を予防することも、上記用語により含まれている。本明細書において使用される処置することは、化合物１などのＣｈｋ１阻害剤およびＡＺＤ−１７７５などのＷｅｅ１阻害剤；またはＣｈｋ１阻害剤とＷｅｅ１阻害剤との組合せを、がん（例えば、急性骨髄性白血病、食道がん、胃がん、マントル細胞リンパ腫、非小細胞肺がん（ＮＳＣＬＣ）、卵巣がん、頭頸部がん、肝臓がん、膵臓がん、前立腺がんもしくは中枢神経系がん）を有する患者に投与することも含む。
【００５１】
用語「投与すること（ａｄｍｉｎｉｓｔｅｒｉｎｇ）」および「投与（ａｄｍｉｎｉｓｔｒａｔｉｏｎ）」は、対象への、経口投与、局所接触、坐薬としての投与、静脈内、腹腔内、筋肉内、病巣内、腫瘍内、髄腔内（intrathecal）、鼻腔内（例えば、吸入、鼻用ミストもしくは滴下剤）、または皮下投与、または緩慢放出デバイス、例えばミニ浸透圧ポンプの移植を含む。投与は、非経口および経粘膜（例えば、頬側、舌下、口蓋、歯肉、鼻、膣、直腸または経皮）が挙げられる任意の経路によってである。非経口投与としては、例えば、静脈内、筋肉内、小動脈内、皮内、皮下、腹腔内、室内（intraventricular）および頭蓋内が挙げられる。送達の他の様式としては、これだけに限らないが、リポソーム製剤、静脈内注入、経皮的パッチなどの使用が挙げられる。当業者は、がんに関連する１つまたは複数の症状を予防または緩和するために、本発明の方法により化合物１などのＣｈｋ１阻害剤；ＡＺＤ−１７７５などのＷｅｅ１阻害剤；またはＣｈｋ１阻害剤とＷｅｅ１阻害剤との組合せの治療有効量を投与するための追加的方法を承知している。
【００５２】
本明細書において使用される、用語「共投与すること（co-administering）」は、２つまたはそれより多い構造的に異なる化合物の連続的なまたは同時の投与を含む。例えば、２つまたはそれより多い構造的に異なる薬学的に活性な化合物は、２つまたはそれより多い構造的に異なる活性な薬学的に活性な化合物を含有する経口投与用に適合された医薬組成物を投与することによって共投与され得る。別の例として、２つまたはそれより多い構造的に異なる化合物は、一方の化合物を投与し、次に他方の化合物を投与することによって共投与され得る。２つまたはそれより多い構造的に異なる化合物は、Ｃｈｋ１阻害剤（例えば、化合物１）およびＷｅｅ１阻害剤（例えば、ＡＺＤ−１７７５）から構成されてよい。一部の実施形態では、共投与される化合物は、同じ経路によって投与される。他の実施形態では、共投与される化合物は、異なる経路を介して投与される。例えば、一方の化合物は経口投与されてよく、他方の化合物は、例えば静脈内、筋肉内、皮下または腹腔内注射を介して連続的にまたは同時に投与されてよい。同時にまたは連続的に投与される化合物または組成物は、Ｃｈｋ１阻害剤およびＷｅｅ１阻害剤が対象においてまたは細胞において有効な濃度で同時に存在するように投与され得る。
【００５３】
本明細書において使用される、用語「薬学的に許容される担体」は、細胞、生物または対象への活性剤の投与を補助する物質を指す。「薬学的に許容される担体」は、本発明の組成物に含まれてよく、対象に顕著な有害な毒性学的作用を生じない担体または賦形剤を指す。薬学的に許容される担体の非限定的例としては、水、ＮａＣｌ、生理食塩液、乳酸リンゲル、通常のショ糖（normal  sucrose）、通常のグルコース（normal  glucose）、結合剤、充填剤、崩壊剤、滑沢剤、コーティング剤、甘味剤、香料および着色料、リポソーム、分散媒、マイクロカプセル、カチオン性脂質担体、等張剤ならびに吸収遅延剤などが挙げられる。担体は、安定性、無菌性および等張性（例えば、抗菌保存剤、抗酸化剤、キレート剤および緩衝剤）を有する製剤を提供するため、微生物の作用を予防するため（例えば、パラベン、クロロブタノール、フェノール、ソルビン酸などのような抗菌剤および抗真菌剤）または食用の風味を有する製剤を提供するためなどの物質であってもよい。一部の実施形態では、担体は、標的細胞または組織へのペプチドまたはオリゴペプチドの送達を促進する剤である。当業者は、他の医薬用担体が本発明において有用であることを認識している。
【００５４】
本明細書において使用される、用語「がん」は、異常な細胞の調節されていない成長によって特徴付けられる疾患のクラスのメンバーを含むことが意図される。用語は、進行型、再発、転移前および転移後のがんを含むすべてのステージおよびグレードのがんを含む。薬物耐性および多剤耐性がんも含まれる。本発明の方法による処置に好適ながんとしては、胃がん、肺がん（例えば、非小細胞肺がん（ＮＳＣＬＣ））、卵巣がん、乳がん、結腸直腸がん、神経系がん（例えば、中枢神経系がん）、副腎がん、膀胱がん、血液がん（例えば、白血病、急性骨髄性白血病、マントル細胞リンパ腫、未分化大細胞リンパ腫（ＡＬＣＬ）、Ｂ細胞急性リンパ芽球性白血病、バーキットリンパ腫、慢性リンパ球性白血病、慢性骨髄性白血病、多発性骨髄腫、急性前骨髄球性白血病、Ｔ細胞急性リンパ芽球性白血病）、骨がん、子宮頸がん、食道がん、眼がん、腎臓がん、頭頸部がん、肝臓がん、筋肉がん、鼻がん、膵臓がん、咽頭がん、胎盤がん、前立腺がん、皮膚がん、軟部組織がん、顎下腺がん、甲状腺がん、舌がんおよび子宮がんが挙げられる。本明細書において使用される「腫瘍」は、１つまたは複数のがん性細胞を含む。がんの組合せは上記用語によって排除されない。
【００５５】
がんの文脈では、用語「ステージ」は、がんの程度の分類を指す。がんをステージ分類する場合に考慮する要因としては、これだけに限らないが、腫瘍の大きさ、近くの組織への腫瘍侵襲、および腫瘍が他の部位に転移しているかどうかが挙げられる。あるステージを別のステージから識別するための特異的基準およびパラメーターは、がんの種類に応じて変動する場合がある。がんのステージ分類は、例えば、予後を決定したり、または最も好適な処置選択肢（複数可）を確認したりすることを支援するために使用される。
【００５６】
がんステージ分類システムの非限定的一例は、「ＴＮＭ」システムと称される。ＴＮＭシステムでは、「Ｔ」は、主な腫瘍の大きさおよび程度を指し、「Ｎ」は、がんが拡がっている近くのリンパ節の数を指し、「Ｍ」は、がんが転移しているかどうかを指す。「ＴＸ」は、主な腫瘍が測定できないことを意味する。「Ｔ０」は、主な腫瘍を見出すことができないことを意味しており、「Ｔ１」、「Ｔ２」、「Ｔ３」および「Ｔ４」は、主な腫瘍の大きさおよび程度を意味しており、大きな数が大きな腫瘍または近くの組織に成長している腫瘍に対応する。「ＮＸ」は、近くのリンパ節においてがんが測定できないことを意味し、「Ｎ０」は、近くのリンパ節にがんが無いことを意味し、「Ｎ１」、「Ｎ２」、「Ｎ３」および「Ｎ４」は、がんが拡がっているリンパ節の数および位置を意味し、大きな数字は、がんを含有するリンパ節の数の多さに対応する。「ＭＸ」は、転移が測定できないことを意味しており、「Ｍ０」は、転移が生じていないことを意味し、「Ｍ１」は、がんが身体の他の部分に転移していることを意味する。
【００５７】
がんステージ分類システムの別の非限定的例として、がんは、５つのステージ：「ステージ０」、「ステージＩ」、「ステージＩＩ」、「ステージＩＩＩ」または「ステージＩＶ」の１つを有するとして分類または段階分けされる。ステージ０は、異常な細胞が存在するが、近くの組織に拡がっていないことを意味する。これは、上皮内癌（ＣＩＳ）とも一般に呼ばれる。ＣＩＳはがんではないが、次にがんに発展する可能性がある。ステージＩ、ＩＩおよびＩＩＩは、がんが存在することを意味する。より大きな数字は、腫瘍の大きさがより大きいことまたは近くの組織に拡がった腫瘍に対応する。ステージＩＶは、がんが転移していることを意味する。当業者は、さまざまながんステージ分類システムに通じており、それらを容易に応用または解釈できる。
【００５８】
用語「化合物１」は、Ｃｈｋ１の阻害剤として作用する、５−（（５−（４−（４−フルオロ−１−メチルピペリジン−４−イル）−２−メトキシフェニル）−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）アミノ）ピラジン−２−カルボニトリルを指す。
【００５９】
「ＡＺＤ１７７５」、「ＭＫ−１７７５」および「ＭＫ１７７５」としても公知の用語「ＡＺＤ−１７７５」は、次の構造：
【化１】
2020512977.tif 000003
を有する、２−アリル−１−（６−（２−ヒドロキシプロパン−２−イル）ピリジン−２−イル）−６−（（４−（４−メチルピペラジン−１−イル）フェニル）アミノ）−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−３（２Ｈ）−オンを指す。
ＡＺＤ−１７７５は、Ｗｅｅ１の高度に選択的、ＡＴＰ競合的な、小分子阻害剤であり、酵素に対する約５．１８ｎＭのＩＣ５０を有する。ｉｎ  ｖｉｔｒｏでＡＺＤ−１７７５は、細胞に基づくアッセイにおいて約８０ｎＭのＥＣ５０を有して、Ｗｅｅ１活性を阻害し、ＤＮＡ損傷およびＧ２チェックポイントエスケープを誘導する。ｐ５３−欠損細胞株において、ＡＺＤ−１７７５は、ゲムシタビン、シスプラチン、カルボプラチンおよびトポテカンなどのＤＮＡ損傷剤との組合せで使用された場合に、細胞傷害性を増加させる。
【００６０】
用語「チェックポイントキナーゼ１」または「Ｃｈｋ１」は、ヒトにおいてＣＨＥＫ１遺伝子によってコードされている「ＣＨＥＫ１」としても公知のセリン／スレオニンキナーゼを指す。Ｃｈｋ１は、ＤＮＡ損傷応答（ＤＤＲ）および細胞周期チェックポイント応答を調和させる。Ｃｈｋ１活性化は、細胞周期チェックポイント活性化、細胞周期停止、ＤＮＡ修復および細胞死を生じる。Ｃｈｋ１は、ＵＶ誘発損傷、ＤＮＡ複製ストレスおよび鎖間架橋から生じ得る単一鎖ＤＮＡの検出によって引き起こされ得る、ＡＴＲによるリン酸化に応答して活性化される。複製タンパク質Ａ、クラスピン、Ｔｉｍ−Ｔｉｐｉｎ複合体、Ｒａｄ１７およびＤＮＡトポイソメラーゼ２結合タンパク質１（ＴｏｐＢＰ１）などの他のタンパク質は、Ｃｈｋ１活性化に関与する。加えて、キナーゼＰＫＢ／ＡＫＴ、ＭＡＰＫＡＰＫおよびｐ９０／ＲＳＫなどのタンパク質は、Ｃｈｋ１のＡＲＴ非依存性活性化に関与する。
【００６１】
Ｃｈｋ１の主な標的の１つは、Ｃｈｋ１によって阻害されるホスファターゼＣｄｃ２５であり、細胞周期の重要なドライバーであるサイクリンおよびサイクリン依存性キナーゼ（Ｃｄｋ）活性の不活性化を生じる。それによりＣｈｋ１阻害は、サイクリンおよびＣｄｋ活性の活性化、最終的には細胞周期を通じた進行を促進する。
【００６２】
ヒトＣｈｋ１  ｍＲＮＡ配列の非限定的例は、ＧｅｎＢａｎｋ参照番号ＮＭ＿００１１１４１２１→ＮＰ＿００１１０７５９３、ＮＭ＿００１１１４１２２→ＮＰ＿００１１０７５９４、ＮＭ＿００１２４４８４６→ＮＰ＿００１２３１７７５、ＮＭ＿００１２７４→ＮＰ＿００１２６５およびＮＭ＿００１３３０４２７→ＮＰ＿００１３１７３５６の下、記載されている。
【００６３】
用語「Ｃｈｋ１阻害剤」は、Ｃｈｋ１活性を低減または除去する任意の化合物（例えば、薬学的に活性な化合物）を指す。Ｃｈｋ１阻害剤は、例えば、１つまたは複数のシグナル伝達分子、タンパク質もしくは他の化合物によってＣｈｋ１活性化の低減もしくは除去を生じ得る（例えば、Ｃｈｋ１阻害剤は、ＡＴＲによるリン酸化に応答してＣｈｋ１活性化を減少もしくは除去し得る）、またはすべてのシグナル伝達分子、タンパク質もしくは他の化合物によるＣｈｋ１活性化の低減もしくは除去を生じ得る。用語は、Ｃｈｋ１による１つまたは複数のタンパク質または細胞シグナル伝達構成要素の活性化または不活性化を減少または除去する化合物（例えば、Ｃｈｋ１阻害剤は、Ｃｄｃ２５ホスファターゼ活性のＣｈｋ１依存性阻害を減少もしくは除去し得る）も含む。Ｃｈｋ１阻害剤は、Ｃｈｋ１発現を阻害する化合物（例えば、Ｃｈｋ１転写もしくは翻訳を阻害する化合物）も含む。
【００６４】
用語「Ｗｅｅ１」は、ヒトにおいてＷＥＥ１遺伝子によってコードされる核セリン／スレオニンキナーゼを指す。Ｗｅｅ１は、「Ｗｅｅ１  Ｇ２チェックポイントキナーゼ」および「Ｗｅｅ１Ａキナーゼ」としても公知である。Ｗｅｅ１は、リン酸化によって細胞周期チェックポイントを活性化し、それによりサイクリンおよびＣｄｋ活性を阻害する。Ｗｅｅ１は、Ｇ２／Ｍチェックポイント、細胞サイズチェックポイント、およびＤＮＡ損傷チェックポイントの制御において機能する。さらに高度な真核生物では、Ｗｅｅ１は、リン酸化および分解によって不活性化される。ＳＣＦタンパク質複合体（Ｅ３ユビキチンリガーゼ）は、ユビキチン化によってＷｅｅ１を制御する。追加的に、ＳＣＦによるＷｅｅ１の認識は、ポロ様キナーゼ１（Polio-like  kinase  1）（Ｐｌｋ１）およびＣｄｃ２によるＷｅｅ１のリン酸化によって媒介される。Ｗｅｅ１は、クルッペル様因子２（Ｋｌｆ２）によっても負に制御される。ヒトＷｅｅ１  ｍＲＮＡ配列の非限定的例は、ＧｅｎＢａｎｋ参照番号ＮＭ＿００３３９０→ＮＰ＿００３３８１の下、記載されている。
【００６５】
用語「Ｗｅｅ１阻害剤」は、Ｗｅｅ１活性を低減または除去する任意の化合物（例えば、薬学的に活性な化合物）を指す。Ｗｅｅ１阻害剤は、例えば、１つまたは複数のシグナル伝達分子、タンパク質もしくは他の化合物によるＷｅｅ１活性化の低減もしくは除去を生じ得る、またはすべてのシグナル伝達分子、タンパク質もしくは他の化合物によるＷｅｅ１活性化の低減もしくは除去を生じ得る。用語は、Ｗｅｅ１による１つまたは複数のタンパク質または細胞シグナル伝達構成要素の活性化または不活性化を減少もしくは除去する化合物も含む（例えば、Ｗｅｅ１阻害剤は、サイクリンおよびＣｄｋ活性のＷｅｅ１依存性不活性化を減少もしくは除去し得る）。Ｗｅｅ１阻害剤は、Ｗｅｅ１発現を阻害する化合物（例えば、Ｗｅｅ１転写もしくは翻訳を阻害する化合物）も含む。
【００６６】
ＡＺＤ−１７７５に加えて、Ｗｅｅ１阻害剤の他の例は、例えば、米国特許第７，８３４，０１９号、第７，９３５，７０８号、第８，２８８，３９６号、第８，４３６，００４号、第８，７１０，０６５号、第８，７１６，２９７号、第８，７９１，１２５号、第８，７９６，２８９号、第９，０５１，３２７号、第９，１８１，２３９号、第９，７１４，２４４号、第９，７１８，８２１号および第９，８５０，２４７号、米国特許出願公開第２０１０／０１１３４４５号および第２０１６／０２２２４５９号ならびに国際特許出願公開第ＷＯ２００２／０９０３６０号、第２０１５／０１９０３７号、第２０１７／０１３４３６号、第２０１７／２１６５５９号、第２０１８／０１１５６９号および第２０１８／０１１５７０号に記載されている。これらの特許および公報の開示は、参照により本明細書に組み込まれる。
【００６７】
ＩＩＩ．実施形態の記載
Ａ．がんを予防または処置するための方法
一態様では、本開示は、対象におけるがん（例えば、急性骨髄性白血病、食道がん、胃がん、マントル細胞リンパ腫、非小細胞肺がん（ＮＳＣＬＣ）、卵巣がん、頭頸部がん、肝臓がん、膵臓がん、前立腺がんまたは中枢神経系がん）を予防または処置するための方法であって、対象にチェックポイントキナーゼ１（Ｃｈｋ１）阻害剤の治療有効量を投与することを含む方法を提供する。
【００６８】
本発明の方法によるがんの予防または処置のために好適なＣｈｋ１阻害剤は、その全体がすべての目的のために参照により本明細書に組み込まれるＰＣＴ出願公開第ＷＯ２０１５／１２０３９０号に開示されている。特定の実施形態では、Ｃｈｋ１阻害剤は、化合物１または薬学的に許容されるその塩である。
【００６９】
一部の実施形態では、方法は、Ｗｅｅ１阻害剤の治療有効量を対象に投与することをさらに含む。一部の実施形態では、Ｗｅｅ１阻害剤は、ピラゾロピリミジン誘導体、ピリドピリミジン、４−（２−クロロフェニル）−９−ヒドロキシピロロ［３，４−ｃ］カルバゾール−１，３−（２Ｈ，６Ｈ）−ジオン（「Ｗｅｅ１阻害剤」または「Ｃｈｋ１阻害剤Ｖ」としても公知（ＣＡＳ番号６２２８５５−３７−２））、６−ブチル−４−（２−クロロフェニル）−９−ヒドロキシピロロ［３，４−ｃ］カルバゾール−１，３−（２Ｈ，６Ｈ）−ジオン（「Ｗｅｅ１阻害剤ＩＩ」としても公知（ＣＡＳ番号６２２８５５５０−９））、４−（２−フェニル）−９−ヒドロキシピロロ［３，４−ｃ］カルバゾール−１，３−（２Ｈ，６Ｈ）−ジオン（「Ｗｅｅ１阻害剤ＩＩＩ」または「Ｃｈｋ１阻害剤ＩＶ」としても公知（ＣＡＳ番号１１７７１５０−８９−８））、抗Ｗｅｅ１抗体、および抗Ｗｅｅ１低分子干渉ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）分子からなる群から選択される。一部の実施形態では、ピリドピリミジンは、ピリド［２，３−ｄ］ピリミジン（ＰＤ０１６６２８５または６−（２，６−ジクロロフェニル）−２−［４−［２−（ジエチルアミノ）エトキシ］アニリノ］−８−メチルピリド［２，３−ｄ］ピリミジン−７−オンとしても公知）である。一部の実施形態では、ピラゾロピリミジン誘導体は、ＡＺＤ−１７７５である。一部の実施形態では、ピラゾロピリミジンは、メチル４−（４−（（２−アリル−１−（６−（２−ヒドロキシプロパン−２−イル）ピリジン−２−イル）−３−オキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−６−イル）アミノ）フェニル）ピペラジン−１−カルボキシレート（すなわち、ＣＪＭ０６１）である。一部の実施形態では、ピラゾロピリミジンは、異なるカルバメート基（例えば、エチル）を有する類似体化合物である。
【００７０】
本開示の方法は、多くのがんを予防または処置するために好適である。一部の実施形態では、予防または処置されるがんの種類は、胃がん、肺がん（例えば、非小細胞肺がん（ＮＳＣＬＣ））、卵巣がん、乳がん、結腸直腸がん、頭頸部がん、神経系がん（例えば、中枢神経系がん）、副腎がん、膀胱がん、血液がん（例えば、白血病、急性骨髄性白血病、マントル細胞リンパ腫、未分化大細胞リンパ腫、Ｂ細胞急性リンパ芽球性白血病、バーキットリンパ腫、慢性リンパ球性白血病、慢性骨髄性白血病、多発性骨髄腫、急性前骨髄球性白血病、Ｔ細胞急性リンパ芽球性白血病）、骨がん、子宮頸がん、食道がん、眼がん、腎臓がん、肝臓がん、筋肉がん、鼻がん、膵臓がん、咽頭がん、胎盤がん、前立腺がん、皮膚がん、軟部組織がん、顎下腺がん、甲状腺がん、舌がんおよび子宮がんからなる群から選択される。特定の実施形態では、予防または処置されるがんは、急性骨髄性白血病、胃がん、食道がん、マントル細胞リンパ腫、非小細胞肺がん（ＮＳＣＬＣ）、卵巣がん、頭頸部がん、肝臓がん、膵臓がん、前立腺がんおよび中枢神経系がんからなる群から選択される。一部の実施形態では、がんは転移性がんである。一部の実施形態では、がんは進行がんである。一部の実施形態では、がんは薬物耐性がんである。一部の実施形態では、がんは多剤耐性がんである。一部の実施形態では、がんは、進行型、転移性または薬物耐性である。一部の実施形態では、がんはマントル細胞リンパ腫である。一部の実施形態では、がんはマントル細胞リンパ腫であり、対象は、ｔ（１１；１４）（ｑ１３；ｑ３２）の染色体転座を有する。特定の実施形態では、がんは乳がんまたは転移性乳がんである。
【００７１】
一部の実施形態では、Ｃｈｋ１阻害剤（例えば、化合物１）の治療有効量は、対象の体重１ｋｇあたり約０．１ｍｇから１０ｍｇの間（例えば、対象の体重１ｋｇあたり約０．１、０．２、０．３、０．４、０．５、０．６、０．７、０．８、０．９、１、１．５、２、２．５、３、３．５、４、４．５、５、５．５、６、６．５、７、７．５、８、８．５、９、９．５または１０ｍｇ）である。他の実施形態では、Ｃｈｋ１阻害剤（例えば、化合物１）の治療有効量は、対象の体重１ｋｇあたり約１０ｍｇから１００ｍｇの間（例えば、対象の体重１ｋｇあたり約１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５５、６０、６５、７０、７５、８０、８５、９０、９５または１００ｍｇ）である。一部の実施形態では、Ｃｈｋ１阻害剤（例えば、化合物１）の治療有効量は、対象の体重１ｋｇあたり少なくとも約１００ｍｇから５００ｍｇ（例えば、対象の体重１ｋｇあたり少なくとも約１００、１２５、１５０、１７５、２００、２２５、２５０、２７５、３００、３２５、３５０、３７５、４００、４２５、４５０、４７５または５００ｍｇ）である。一部の実施形態では、Ｃｈｋ１阻害剤（例えば、化合物１）の治療有効量は、対象の体重１ｋｇあたり約１ｍｇから５０ｍｇの間（例えば、対象の体重１ｋｇあたり約１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９または５０ｍｇ）である。一部の実施形態では、Ｃｈｋ１阻害剤（例えば、化合物１）の治療有効量は、対象の体重１ｋｇあたり約７．５ｍｇである。一部の実施形態では、Ｃｈｋ１阻害剤（例えば、化合物１）の治療有効量は、対象の体重１ｋｇあたり約１２．５ｍｇである。一部の他の実施形態では、Ｃｈｋ１阻害剤（例えば、化合物１）の治療有効量は、対象の体重１ｋｇあたり約２０ｍｇである。他の実施形態では、Ｃｈｋ１阻害剤（例えば、化合物１）の治療有効量は、対象の体重１ｋｇあたり約２５ｍｇである。一部の実施形態では、Ｃｈｋ１阻害剤（例えば、化合物１）の治療有効量は、対象の体重１ｋｇあたり約５０ｍｇである。
【００７２】
一部の実施形態では、Ｃｈｋ１阻害剤（例えば、化合物１）の用量は、約１ｍｇから１００ｍｇの間（例えば約１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、５５、６０、６５、７０、７５、８０、８５、９０、９５または１００ｍｇ）のＣｈｋ１阻害剤を含む。他の実施形態では、Ｃｈｋ１阻害剤（例えば、化合物１）の用量は、約１００ｍｇから１，０００ｍｇの間（例えば、約１００、１０５、１１０、１１５、１２０、１２５、１３０、１３５、１４０、１４５、１５０、１５５、１６０、１６５、１７０、１７５、１８０、１８５、１９０、１９５、２００、２０５、２１０、２１５、２２０、２２５、２５０、２７５、３００、３２５、３５０、３７５、４００、４２５、４５０、４７５、５００、５２５、５５０、５７５、６００、６２５、６５０、６７５、７００、７２５、７５０、７７５、８００、８２５、８５０、８７５、９００、９２５、９５０、９７５または１，０００ｍｇ）のＣｈｋ１阻害剤を含む。
【００７３】
一部の実施形態では、Ｃｈｋ１阻害剤（例えば、化合物１）の用量は、少なくとも約１，０００ｍｇから１０，０００ｍｇ（例えば、少なくとも約１，０００、１，１００、１，２００、１，３００、１，４００、１，５００、１，６００、１，７００、１，８００、１，９００、２，０００、２，１００、２，２００、２，３００、２，４００、２，５００、２，６００、２，７００、２，８００、２，９００、３，０００、３，１００、３，２００、３，３００、３，４００、３，５００、３，６００、３，７００、３，８００、３，９００、４，０００、４，１００、４，２００、４，３００、４，４００、４，５００、４，６００、４，７００、４，８００、４，９００、５，０００、５，１００、５，２００、５，３００、５，４００、５，５００、５，６００、５，７００、５，８００、５，９００、６，０００、６，１００、６，２００、６，３００、６，４００、６，５００、６，６００、６，７００、６，８００、６，９００、７，０００、７，１００、７，２００、７，３００、７，４００、７，５００、７，６００、７，７００、７，８００、７，９００、８，０００、８，１００、８，２００、８，３００、８，４００、８，５００、８，６００、８，７００、８，８００、８，９００、９，０００、９，１００、９，２００、９，３００、９，４００、９，５００、９，６００、９，７００、９，８００、９，９００、１０，０００ｍｇまたはそれより多く）のＣｈｋ１阻害剤である。
【００７４】
一部の実施形態では、Ｃｈｋ１阻害剤（例えば、化合物１）の用量は、治療有効量のＣｈｋ１阻害剤を含有する。他の実施形態では、Ｃｈｋ１阻害剤（例えば、化合物１）の用量は、Ｗｅｅ１阻害剤を伴わずに投与される場合、治療有効量未満のＣｈｋ１阻害剤を含有する。
【００７５】
一部の実施形態では、Ｗｅｅ１阻害剤（例えば、ＡＺＤ−１７７５）の治療有効量は、対象の体重１ｋｇあたり約０．１ｍｇから１０ｍｇの間（例えば、対象の体重１ｋｇあたり約０．１、０．２、０．３、０．４、０．５、０．６、０．７、０．８、０．９、１、１．５、２、２．５、３、３．５、４、４．５、５、５．５、６、６．５、７、７．５、８、８．５、９、９．５または１０ｍｇ）である。他の実施形態では、Ｗｅｅ１阻害剤（例えば、ＡＺＤ−１７７５）の治療有効量は、対象の体重１ｋｇあたり約１０ｍｇから１００ｍｇの間（例えば、対象の体重１ｋｇあたり約１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５５、６０、６５、７０、７５、８０、８５、９０、９５または１００ｍｇ）である。一部の実施形態では、Ｗｅｅ１阻害剤の治療有効量は（例えば、ＡＺＤ−１７７５、好ましくは最大６０ｍｇ／ｋｇ、毎日２回または１２０ｍｇ／ｋｇであるが）、対象の体重１ｋｇあたり少なくとも約１００ｍｇから５００ｍｇ（例えば、対象の体重１ｋｇあたり少なくとも約１００、１２５、１５０、１７５、２００、２２５、２５０、２７５、３００、３２５、３５０、３７５、４００、４２５、４５０、４７５、５００ｍｇまたはそれより多く）である。一部の実施形態では、Ｗｅｅ１阻害剤（例えば、ＡＺＤ−１７７５）の治療有効量は、対象の体重１ｋｇあたり約４ｍｇである。一部の実施形態では、Ｗｅｅ１阻害剤（例えば、ＡＺＤ−１７７５）の治療有効量は、対象の体重１ｋｇあたり約１５ｍｇである。一部の他の実施形態では、Ｗｅｅ１阻害剤（例えば、ＡＺＤ−１７７５）の治療有効量は、対象の体重１ｋｇあたり約３０ｍｇである。
【００７６】
一部の実施形態では、Ｗｅｅ１阻害剤（例えば、ＡＺＤ−１７７５）の用量は、約１ｍｇから１００ｍｇの間（例えば、約１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、５５、６０、６５、７０、７５、８０、８５、９０、９５、または１００ｍｇ）のＷｅｅ１阻害剤を含む。他の実施形態では、Ｗｅｅ１阻害剤（例えば、ＡＺＤ−１７７５）の用量は、約１００ｍｇから１，０００ｍｇの間（例えば、約１００、１０５、１１０、１１５、１２０、１２５、１３０、１３５、１４０、１４５、１５０、１５５、１６０、１６５、１７０、１７５、１８０、１８５、１９０、１９５、２００、２０５、２１０、２１５、２２０、２２５、２５０、２７５、３００、３２５、３５０、３７５、４００、４２５、４５０、４７５、５００、５２５、５５０、５７５、６００、６２５、６５０、６７５、７００、７２５、７５０、７７５、８００、８２５、８５０、８７５、９００、９２５、９５０、９７５、または１，０００ｍｇ）のＷｅｅ１阻害剤を含む。
【００７７】
特定の実施形態では、Ｗｅｅ１阻害剤（例えば、ＡＺＤ−１７７５）の用量は、約１００ｍｇから４００ｍｇの間（例えば、約１００、１２５、１５０、１７５、２００、２２５、２５０、２７５、３００、３２５、３５０、３７５または４００ｍｇ）のＷｅｅ１阻害剤を含む。一部の実施形態では、Ｗｅｅ１阻害剤の用量は、約２２５ｍｇのＷｅｅ１阻害剤を含む。
【００７８】
一部の実施形態では、Ｗｅｅ１阻害剤（例えば、ＡＺＤ−１７７５）の用量は、少なくとも約１，０００ｍｇから１０，０００ｍｇ（例えば、少なくとも約１，０００、１，１００、１，２００、１，３００、１，４００、１，５００、１，６００、１，７００、１，８００、１，９００、２，０００、２，１００、２，２００、２，３００、２，４００、２，５００、２，６００、２，７００、２，８００、２，９００、３，０００、３，１００、３，２００、３，３００、３，４００、３，５００、３，６００、３，７００、３，８００、３，９００、４，０００、４，１００、４，２００、４，３００、４，４００、４，５００、４，６００、４，７００、４，８００、４，９００、５，０００、５，１００、５，２００、５，３００、５，４００、５，５００、５，６００、５，７００、５，８００、５，９００、６，０００、６，１００、６，２００、６，３００、６，４００、６，５００、６，６００、６，７００、６，８００、６，９００、７，０００、７，１００、７，２００、７，３００、７，４００、７，５００、７，６００、７，７００、７，８００、７，９００、８，０００、８，１００、８，２００、８，３００、８，４００、８，５００、８，６００、８，７００、８，８００、８，９００、９，０００、９，１００、９，２００、９，３００、９，４００、９，５００、９，６００、９，７００、９，８００、９，９００、１０，０００ｍｇまたはそれより多く）のＷｅｅ１阻害剤である。
【００７９】
一部の実施形態では、Ｗｅｅ１阻害剤（例えば、ＡＺＤ−１７７５）の用量は、治療有効量のＷｅｅ１阻害剤を含有する。他の実施形態では、Ｗｅｅ１阻害剤（例えば、ＡＺＤ−１７７５）の用量は、Ｗｅｅ１阻害剤がＣｈｋ１阻害剤を伴わずに投与される場合に、治療有効量未満のＷｅｅ１阻害剤を含有する。
【００８０】
一部の実施形態では、方法は、Ｃｈｋ１およびＷｅｅ１阻害剤の有効性を増加させるために第３の、ＤＮＡ損傷剤の治療有効量を対象に投与することをさらに含む。一部の実施形態では、ＤＮＡ損傷剤は、代謝拮抗薬（例えば、カペシタビン、５−フルオロウラシル、ゲムシタビンもしくはペメトレキセド）、トポイソメラーゼポイズンもしくは阻害剤（例えば、カンプトテシンもしくはエトポシド）、アルキル化剤（例えば、ナイトロジェンマスタード、ニトロソウレア、テモゾロミドもしくはＳ２３９０６）または架橋薬（例えば、シスプラチン、カルボプラチン、オキサリプラチンもしくはマイトマイシンＣ）である。
【００８１】
一部の実施形態では、ＤＮＡ損傷剤の治療有効量は、対象の体重１ｋｇあたり約０．１ｍｇから１０ｍｇの間（例えば、対象の体重１ｋｇあたり約０．１、０．２、０．３、０．４、０．５、０．６、０．７、０．８、０．９、１、１．５、２、２．５、３、３．５、４、４．５、５、５．５、６、６．５、７、７．５、８、８．５、９、９．５または１０ｍｇ）である。他の実施形態では、ＤＮＡ損傷剤の治療有効量は、対象の体重１ｋｇあたり約１０ｍｇから１００ｍｇの間（例えば、対象の体重１ｋｇあたり約１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５５、６０、６５、７０、７５、８０、８５、９０、９５または１００ｍｇ）である。一部の実施形態では、ＤＮＡ損傷剤の治療有効量は、対象の体重１ｋｇあたり少なくとも約１００ｍｇから５００ｍｇ（例えば、対象の体重１ｋｇあたり少なくとも約１００、１２５、１５０、１７５、２００、２２５、２５０、２７５、３００、３２５、３５０、３７５、４００、４２５、４５０、４７５、５００ｍｇまたはそれより多く）である。
【００８２】
一部の実施形態では、ＤＮＡ損傷剤の用量は、約１ｍｇから１００ｍｇの間（例えば、約１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、５５、６０、６５、７０、７５、８０、８５、９０、９５または１００ｍｇ）のＷｅｅ１阻害剤を含む。他の実施形態では、ＤＮＡ損傷剤の用量は、約１００ｍｇから１，０００ｍｇの間（例えば、約１００、１０５、１１０、１１５、１２０、１２５、１３０、１３５、１４０、１４５、１５０、１５５、１６０、１６５、１７０、１７５、１８０、１８５、１９０、１９５、２００、２０５、２１０、２１５、２２０、２２５、２５０、２７５、３００、３２５、３５０、３７５、４００、４２５、４５０、４７５、５００、５２５、５５０、５７５、６００、６２５、６５０、６７５、７００、７２５、７５０、７７５、８００、８２５、８５０、８７５、９００、９２５、９５０、９７５、または１，０００ｍｇ）のＤＮＡ損傷剤を含む。
【００８３】
特定の実施形態では、ＤＮＡ損傷剤の用量は、約１００ｍｇから４００ｍｇの間（例えば、約１００、１２５、１５０、１７５、２００、２２５、２５０、２７５、３００、３２５、３５０、３７５または４００ｍｇ）の第３のＤＮＡ損傷剤を含む。
【００８４】
一部の実施形態では、ＤＮＡ損傷剤の用量は、少なくとも約１，０００ｍｇから１０，０００ｍｇ（例えば、少なくとも約１，０００、１，１００、１，２００、１，３００、１，４００、１，５００、１，６００、１，７００、１，８００、１，９００、２，０００、２，１００、２，２００、２，３００、２，４００、２，５００、２，６００、２，７００、２，８００、２，９００、３，０００、３，１００、３，２００、３，３００、３，４００、３，５００、３，６００、３，７００、３，８００、３，９００、４，０００、４，１００、４，２００、４，３００、４，４００、４，５００、４，６００、４，７００、４，８００、４，９００、５，０００、５，１００、５，２００、５，３００、５，４００、５，５００、５，６００、５，７００、５，８００、５，９００、６，０００、６，１００、６，２００、６，３００、６，４００、６，５００、６，６００、６，７００、６，８００、６，９００、７，０００、７，１００、７，２００、７，３００、７，４００、７，５００、７，６００、７，７００、７，８００、７，９００、８，０００、８，１００、８，２００、８，３００、８，４００、８，５００、８，６００、８，７００、８，８００、８，９００、９，０００、９，１００、９，２００、９，３００、９，４００、９，５００、９，６００、９，７００、９，８００、９，９００、１０，０００ｍｇまたはそれより多く）のＷｅｅ１阻害剤である。
【００８５】
一部の実施形態では、ＤＮＡ損傷剤の用量は、ＤＮＡ損傷剤の治療有効量を含有する。他の実施形態では、ＤＮＡ損傷剤の用量は、ＤＮＡ損傷剤がＣｈｋ１およびＷｅｅ１阻害剤を伴わずに投与される場合、治療有効量未満のＤＮＡ損傷剤を含有する。
【００８６】
例えば、動物研究（例えば、げっ歯類およびサル）から得られたデータは、ヒトにおける使用のための投薬量範囲を調合するために使用され得る。本発明の化合物の投薬量は、毒性をほとんどまたはまったく伴わないＥＤ５０を含む循環濃度の範囲内に好ましくはある。投薬量は、使用される投薬形態および投与の経路に応じてこの範囲内で変動し得る。本発明の方法における使用のための任意の組成物（例えば、化合物１などのＣｈｋ１阻害剤；ＡＺＤ−１７７５などのＷｅｅ１阻害剤；またはＣｈｋ１阻害剤とＷｅｅ１阻害剤との組合せを含む）について、治療有効用量は、細胞培養アッセイから最初に概算されてよい。用量は、細胞培養において決定されたＩＣ５０（症状の最大半量阻害を達成する試験化合物の濃度）を含む循環血漿濃度範囲を達成するために動物モデルにおいて調合されてよい。そのような情報は、ヒトでの有用な用量をさらに正確に決定するために使用されてよい。血漿中のレベルは、例えば高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）によって測定され得る。
【００８７】
組成物（例えば、化合物１などのＣｈｋ１阻害剤、ＡＺＤ−１７７５などのＷｅｅ１阻害剤、またはＣｈｋ１阻害剤とＷｅｅ１阻害剤との組合せを含む）の好適な用量が、達成される望ましい効果に関する組成物の効力に依存することはさらに理解される。これらの組成物の１つまたは複数が哺乳動物に投与される場合、医師、獣医師または研究者は、例えば、最初に比較的低い用量を処方し、次に好適な応答が得られるまで用量を増加させてよい。加えて、任意の具体的な哺乳動物対象のための具体的な用量レベルが、使用される具体的な組成物の活性；対象の年齢、体重、全体的健康、性別および食事；投与の時期；投与の経路；排出の速度および様式；任意の薬物組合せの効果；および調節される発現または活性の程度を含む種々の要因に依存することは理解される。
【００８８】
ある特定の実施形態では、Ｃｈｋ１阻害剤（例えば、化合物１）とＷｅｅ１阻害剤（例えば、ＡＺＤ−１７７５）との組合せが、対象に投与される。Ｃｈｋ１阻害剤（例えば、化合物１）とＷｅｅ１阻害剤（例えば、ＡＺＤ−１７７５）とが対象に共投与される場合、Ｃｈｋ１阻害剤およびＷｅｅ１阻害剤は、同時または連続的のいずれかで投与されてよい。
【００８９】
ある特定の実施形態では、ＤＮＡ損傷剤も対象に投与される。ＤＮＡ損傷剤が対象に共投与される場合、Ｃｈｋ１阻害剤およびＷｅｅ１阻害剤は、なお、ＤＮＡ損傷剤と同時に、または連続的に、のいずれかで投与されてよい。
【００９０】
一部の実施形態では、Ｃｈｋ１阻害剤（例えば、化合物１）およびＷｅｅ１阻害剤（例えば、ＡＺＤ−１７７５）の両方が同じときに投与される。他の実施形態では、Ｃｈｋ１阻害剤（例えば、化合物１）およびＷｅｅ１阻害剤（例えば、ＡＺＤ−１７７５）は、同じときには投与されないが、１日あたり同じ回数で投与される、または１週間あたり同じ回数で投与される、または１ヵ月あたり同じ回数で投与される（例えば、両者は、１日１回、１日２回、１週間に１回、１週間に２回投与されるなど）。一部の他の実施形態では、Ｃｈｋ１阻害剤（例えば、化合物１）およびＷｅｅ１阻害剤（例えば、ＡＺＤ−１７７５）は、異なる投薬スケジュールで与えられる。非限定的例として、Ｃｈｋ１阻害剤は１日１回投与され、Ｗｅｅ１阻害剤は１日２回投与される、逆も同様。別の非限定的例として、Ｃｈｋ１阻害剤は１日１回投与され、Ｗｅｅ１阻害剤（inhiibtor）は、２、３、４、５、６日またはそれより多い日ごとに１回投与される、逆も同様。当業者は、これだけに限らないが、疾患または悪性状態の重症度、それまでの処置、対象の全体的健康または年齢および存在する他の疾患を含む、ある特定の要因が、対象を有効に処置するために必要な投薬量および時期に影響を与える場合があることを理解する。さらに、治療有効量の組成物（例えば、化合物１などのＣｈｋ１阻害剤；ＡＺＤ−１７７５などのＷｅｅ１阻害剤；またはＣｈｋ１阻害剤とＷｅｅ１阻害剤との組合せを含む）を用いる対象の処置は、単一の処置を含んでよく、または好ましくは一連の処置を含んでよい。
【００９１】
本発明の方法により投与される組成物（例えば、化合物１などのＣｈｋ１阻害剤；ＡＺＤ−１７７５などのＷｅｅ１阻害剤；またはＣｈｋ１阻害剤とＷｅｅ１阻害剤との組合せを含む）の最適な投薬量、毒性および治療効果は、投与される組成物の相対的効力に応じて変動する場合があり、細胞培養または実験動物における標準的薬学的手順によって、例えばＬＤ５０（集団の５０％に致死性の用量）およびＥＤ５０（集団の５０％に治療的に有効な用量）を決定することによって決定され得る。毒性効果と治療効果との間の用量比は、治療指数であり、比、ＬＤ５０／ＥＤ５０として表され得る。大きな治療指数を示す薬剤が、好ましい。毒性副作用を表す薬剤は、使用され得る一方で、正常細胞への損傷可能性を最少化し、それにより副作用を低減するために、そのような薬剤を罹患した組織部位に標的化する送達系を設計するために注意が払われるべきである。
【００９２】
最適な投薬スケジュールは、対象の身体における活性成分蓄積の測定値から算出され得る。一般に、投薬量は、体重１ｋｇあたり約１ｎｇから約１，０００ｍｇであり、毎日、毎週、毎月または毎年１回または複数回与えられてよい。当業者は、最適な投薬量、投薬方法および反復数を容易に決定できる。当業者は、当技術分野において公知の確立されたプロトコールおよび本開示に従ってヒトへのＣｈｋ１阻害剤またはＣｈｋ１阻害剤とＷｅｅ１阻害剤との組合せの投与のための最適な投与を決定することができる。
【００９３】
Ｃｈｋ１阻害剤（例えば、化合物１）およびＷｅｅ１阻害剤（例えば、ＡＺＤ−１７７５）が同時にまたは連続的に投与されるかどうかに関わらず、Ｃｈｋ１阻害剤およびＷｅｅ１阻害剤の用量は、本明細書に記載の任意の用量であってよい。一部の実施形態では、Ｃｈｋ１阻害剤およびＷｅｅ１阻害剤の用量は、治療有効量である。他の実施形態では、Ｃｈｋ１阻害剤の用量は治療有効量であり、Ｗｅｅ１阻害剤の用量は治療有効量未満である（すなわち、Ｗｅｅ１阻害剤の１回または複数回の続く用量が、対象に治療有効量が送達されるように投与される）。一部の他の実施形態では、Ｗｅｅ１阻害剤の用量は治療有効量であり、Ｃｈｋ１阻害剤の用量は治療有効量未満である（すなわち、Ｃｈｋ１阻害剤の１回または複数回の続く用量が、対象に治療有効量が送達されるように投与される）。一部の実施形態では、化合物１の用量は、対象の体重１ｋｇあたり約７．５ｍｇ、１２．５ｍｇ、２０ｍｇ、２５ｍｇまたは５０ｍｇであり、ＡＺＤ−１７７５の用量は、対象の体重１ｋｇあたり約１５ｍｇまたは３０ｍｇである。
【００９４】
Ｃｈｋ１阻害剤（例えば、化合物１）およびＷｅｅ１阻害剤（例えば、ＡＺＤ−１７７５）が対象に同時に共投与される場合、Ｃｈｋ１阻害剤およびＷｅｅ１阻害剤は同じ経路によって、または異なる経路によって投与されてよい。非限定的例として、Ｃｈｋ１阻害剤およびＷｅｅ１阻害剤は、経口で同時に投与されてよい。別の非限定的例として、Ｃｈｋ１阻害剤は、経口で投与されてよく、Ｗｅｅ１阻害剤は同じときに別の経路によって（例えば、静脈内、筋肉内、皮下、腫瘍内にもしくは腹腔内に）投与されてよい。代替的にＷｅｅ１阻害剤は、経口で投与されてよく、Ｃｈｋ１阻害剤は同じときに別の経路（例えば、静脈内、筋肉内、皮下、腫瘍内にまたは腹腔内に）によって投与されてよい。
【００９５】
連続的な共投与のために、Ｃｈｋ１阻害剤（例えば、化合物１）は、Ｗｅｅ１阻害剤（例えば、ＡＺＤ−１７７５）の前に投与されてよい、逆も同様。一部の実施形態では、Ｃｈｋ１阻害剤およびＷｅｅ１阻害剤は、同じ経路によって投与されるが、Ｃｈｋ１阻害剤およびＷｅｅ１阻害剤の投与は、ある程度の時間量離されている。他の実施形態では、Ｃｈｋ１阻害剤およびＷｅｅ１阻害剤は、異なる経路によって投与され、Ｃｈｋ１阻害剤およびＷｅｅ１阻害剤の投与は、ある程度の時間量離されている。非限定的例として、Ｃｈｋ１阻害剤は経口で投与され、Ｗｅｅ１阻害剤は次にいくらか後に経口で投与される、逆も同様。別の非限定的例として、Ｃｈｋ１阻害剤は経口で投与され、Ｗｅｅ１阻害剤は次に別の経路（例えば、静脈内、筋肉内、皮下、腫瘍内にまたは腹腔内に）によっていくらか後に投与される、逆も同様。
【００９６】
連続的な共投与のために、当業者は、Ｃｈｋ１阻害剤（例えば、化合物１）およびＷｅｅ１阻害剤（例えば、ＡＺＤ−１７７５）の投与の間の適切な時間量を容易に決定できる。一部の実施形態では、Ｃｈｋ１阻害剤およびＷｅｅ１阻害剤の投与は、約１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９  ５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０分間またはそれより長く離されている。他の実施形態では、Ｃｈｋ１阻害剤およびＷｅｅ１阻害剤の投与は、約１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４時間またはそれより長く離されている。一部の他の実施形態では、Ｃｈｋ１阻害剤およびＷｅｅ１阻害剤の投与は、約１、２、３、４、５、６、７日間またはそれより長く離されている。さらに他の実施形態では、Ｃｈｋ１阻害剤およびＷｅｅ１阻害剤の投与は、約１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２週間またはそれより長く離されている。一部の実施形態では、Ｃｈｋ１阻害剤およびＷｅｅ１阻害剤の投与は、約１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４ヵ月またはそれより長く離されている。
【００９７】
一部の実施形態では、Ｃｈｋ１阻害剤、Ｗｅｅ１阻害剤またはＣｈｋ１阻害剤とＷｅｅ１阻害剤との組合せは、１日に１、２、３、４、５回またはそれより多く投与される。他の実施形態では、Ｃｈｋ１阻害剤、Ｗｅｅ１阻害剤、またはＣｈｋ１阻害剤とＷｅｅ１阻害剤との組合せは、１週間に１、２、３、４、５、６、７回またはそれより多く投与される。一部の他の実施形態では、Ｃｈｋ１阻害剤、Ｗｅｅ１阻害剤、またはＣｈｋ１阻害剤とＷｅｅ１阻害剤との組合せは、１ヵ月に１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０回またはそれより多く投与される。
【００９８】
一部の実施形態では、Ｃｈｋ１阻害剤、Ｗｅｅ１阻害剤、またはＣｈｋ１阻害剤とＷｅｅ１阻害剤との組合せは、約１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０日間またはそれより長い日ごとに投与される。他の実施形態では、Ｃｈｋ１阻害剤、Ｗｅｅ１阻害剤、またはＣｈｋ１阻害剤とＷｅｅ１阻害剤との組合せは、約１、２、３、４週間またはそれより長い週ごとに投与される。一部の他の実施形態では、Ｃｈｋ１阻害剤、Ｗｅｅ１阻害剤、またはＣｈｋ１阻害剤とＷｅｅ１阻害剤との組合せは、約１、２、３、４、５、６、７、８、８、１０、１１、１２ヵ月またはそれより長い月ごとに投与される。
【００９９】
上首尾の処置に続いて、がん（例えば、急性骨髄性白血病、食道がん、胃がん、マントル細胞リンパ腫、非小細胞肺がん（ＮＳＣＬＣ）、卵巣がん、頭頸部がん、肝臓がん、膵臓がん、前立腺がんまたは中枢神経系がん）の再発を予防するための維持療法を対象が受けることは望ましい場合がある。
【０１００】
有効量の決定は、特に本明細書で提供する詳細な開示に照らして、十分に当業者の能力の範囲内である。一般に、組成物（例えば、Ｃｈｋ１阻害剤、Ｗｅｅ１阻害剤またはＣｈｋ１阻害剤とＷｅｅ１阻害剤との組合せを含む）の効果的なまたは有効な量は、低用量または少量の組成物を最初に投与し、次に、最小限の毒性副作用を伴ってまたはまったく伴わずに望ましい効果が処置された対象において観察されるまで、投与される用量または投薬量を徐々に増加させることによって決定される。
【０１０１】
組成物（例えば、化合物１などのＣｈｋ１阻害剤；ＡＺＤ−１７７５などのＷｅｅ１阻害剤；またはＣｈｋ１阻害剤とＷｅｅ１阻害剤との組合せを含む）の１回または複数回の投与は、患者によって必要とされ、耐容性である投薬量および頻度に応じて投与される。任意の事象において、組成物は、患者を有効に処置するために十分な量の組成物を提供するべきである。一般に、用量は、患者に許容されない毒性をもたらすことなく、疾患の症状または徴候を予防、処置または回復させるために十分である。
【０１０２】
一部の実施形態では、対象を処置することは、がん（例えば、急性骨髄性白血病、食道がん、胃がん、マントル細胞リンパ腫、非小細胞肺がん（ＮＳＣＬＣ）、卵巣がん、頭頸部がん、肝臓がん、膵臓がん、前立腺がんもしくは中枢神経系がん）細胞成長を阻害すること、がん細胞増殖を阻害すること、がん細胞遊走を阻害すること、がん細胞浸潤を阻害すること、がんの１つまたは複数の徴候もしくは症状を減少させることもしくは除去すること、がん腫瘍の大きさ（例えば、体積）を低減すること、がん腫瘍の数を低減すること、がん細胞の数を低減すること、がん細胞壊死、ピロトーシス、腫瘍症（oncosis）、アポトーシス、オートファジーもしくは他の細胞死を誘導すること、対象の生存時間を増加させることまたは、別の薬物もしくは療法の治療効果を増強することを含む。特定の実施形態では、対象はがんを有さない。
Ｂ．医薬組成物
【０１０３】
別の態様では、本開示は、Ｃｈｋ１阻害剤および薬学的に許容される担体を含む医薬組成物を提供する。一部の実施形態では、Ｃｈｋ１阻害剤は、ＰＣＴ出願公開第ＷＯ２０１５／１２０３９０号に開示されているＣｈｋ１阻害剤である。一部の実施形態では、Ｃｈｋ１阻害剤は化合物１である。
【０１０４】
一部の実施形態では、医薬組成物は、Ｗｅｅ１阻害剤をさらに含む。特定の実施形態では、Ｗｅｅ１阻害剤は、ピラゾロピリミジン誘導体、ピリドピリミジン、４−（２−クロロフェニル）−９−ヒドロキシピロロ［３，４−ｃ］カルバゾール−１，３−（２Ｈ，６Ｈ）−ジオン、６−ブチル−４−（２−クロロフェニル）−９−ヒドロキシピロロ［３，４−ｃ］カルバゾール−１，３−（２Ｈ，６Ｈ）−ジオン、４−（２−フェニル）−９−ヒドロキシピロロ［３，４−ｃ］カルバゾール−１，３−（２Ｈ，６Ｈ）−ジオン、抗Ｗｅｅ１抗体および抗Ｗｅｅ１低分子干渉ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）分子からなる群から選択される。一部の実施形態では、ピリドピリミジンはピリド［２，３−ｄ］ピリミジンである。特定の実施形態では、ピラゾロピリミジン誘導体はＡＺＤ−１７７５である。
【０１０５】
一部の実施形態では、Ｃｈｋ１阻害剤（例えば、化合物１）は、約０．１ｎＭから１０ｎＭの間の濃度（例えば、約０．１、０．２、０．３、０．４、０．５、０．６、０．７、０．８、０．９、１．０、１．５、２、２．５、３、３．５、４、４．５、５、５．５、６、６．５、７、７．５、８、８．５、９、９．５または１０ｎＭ）で存在する。他の実施形態では、Ｃｈｋ１阻害剤は、約１０ｎＭから１００ｎＭの間の濃度（例えば、約１０、１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、５５、６０、６５、７０、７５、８０、８５、９０、９５または１００ｎＭ）で存在する。一部の他の実施形態では、Ｃｈｋ１阻害剤は、約１００ｎＭから１，０００ｎＭの間の濃度（例えば、約１００、１５０、２００、２５０、３００、３５０、４００、４５０、５００、５５０、６００、６５０、７００、７５０、８００、８５０、９００、９５０または１，０００ｎＭ）で存在する。さらに他の実施形態では、Ｃｈｋ１阻害剤は、少なくとも約１，０００ｎＭから１０，０００ｎＭの濃度（例えば、少なくとも約１，０００、１，１００、１，２００、１，３００、１，４００、１，５００、１，６００、１，７００、１，８００、１，９００、２，０００、２，１００、２，２００、２，３００、２，４００、２，５００、２，６００、２，７００、２，８００、２，９００、３，０００、３，１００、３，２００、３，３００、３，４００、３，５００、３，６００、３，７００、３，８００、３，９００、４，０００、４，１００、４，２００、４，３００、４，４００、４，５００、４，６００、４，７００、４，８００、４，９００、５，０００、５，１００、５，２００、５，３００、５，４００、５，５００、５，６００、５，７００、５，８００、５，９００、６，０００、６，１００、６，２００、６，３００、６，４００、６，５００、６，６００、６，７００、６，８００、６，９００、７，０００、７，１００、７，２００、７，３００、７，４００、７，５００、７，６００、７，７００、７，８００、７，９００、８，０００、８，１００、８，２００、８，３００、８，４００、８，５００、８，６００、８，７００、８，８００、８，９００、９，０００、９，１００、９，２００、９，３００、９，４００、９，５００、９，６００、９，７００、９，８００、９，９００、１０，０００ｎＭまたはそれより多く）で存在する。
【０１０６】
一部の実施形態では、Ｗｅｅ１阻害剤（例えば、ＡＺＤ−１７７５）は、約０．１ｎＭから１０ｎＭの間の濃度（例えば、約０．１、０．２、０．３、０．４、０．５、０．６、０．７、０．８、０．９、１．０、１．５、２、２．５、３、３．５、４、４．５、５、５．５、６、６．５、７、７．５、８、８．５、９、９．５または１０ｎＭ）で存在する。他の実施形態では、Ｗｅｅ１阻害剤は、約１０ｎＭから１００ｎＭの間の濃度（例えば、約１０、１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、５５、６０、６５、７０、７５、８０、８５、９０、９５または１００ｎＭ）で存在する。一部の他の実施形態では、Ｗｅｅ１阻害剤は、約１００ｎＭから１，０００ｎＭの間の濃度（例えば、約１００、１５０、２００、２５０、３００、３５０、４００、４５０、５００、５５０、６００、６５０、７００、７５０、８００、８５０、９００、９５０または１，０００ｎＭ）で存在する。さらに他の実施形態では、Ｗｅｅ１阻害剤は、少なくとも約１，０００ｎＭから１０，０００ｎＭの濃度（例えば、少なくとも約１，０００、１，１００、１，２００、１，３００、１，４００、１，５００、１，６００、１，７００、１，８００、１，９００、２，０００、２，１００、２，２００、２，３００、２，４００、２，５００、２，６００、２，７００、２，８００、２，９００、３，０００、３，１００、３，２００、３，３００、３，４００、３，５００、３，６００、３，７００、３，８００、３，９００、４，０００、４，１００、４，２００、４，３００、４，４００、４，５００、４，６００、４，７００、４，８００、４，９００、５，０００、５，１００、５，２００、５，３００、５，４００、５，５００、５，６００、５，７００、５，８００、５，９００、６，０００、６，１００、６，２００、６，３００、６，４００、６，５００、６，６００、６，７００、６，８００、６，９００、７，０００、７，１００、７，２００、７，３００、７，４００、７，５００、７，６００、７，７００、７，８００、７，９００、８，０００、８，１００、８，２００、８，３００、８，４００、８，５００、８，６００、８，７００、８，８００、８，９００、９，０００、９，１００、９，２００、９，３００、９，４００、９，５００、９，６００、９，７００、９，８００、９，９００、１０，０００ｎＭまたはそれより多く）で存在する。
【０１０７】
一部の実施形態では、ＤＮＡ損傷剤は、約０．１ｎＭから１０ｎＭの間の濃度（例えば、約０．１、０．２、０．３、０．４、０．５、０．６、０．７、０．８、０．９、１．０、１．５、２、２．５、３、３．５、４、４．５、５、５．５、６、６．５、７、７．５、８、８．５、９、９．５または１０ｎＭ）で存在する。他の実施形態では、ＤＮＡ損傷剤は、約１０ｎＭから１００ｎＭの間の濃度（例えば、約１０、１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、５５、６０、６５、７０、７５、８０、８５、９０、９５または１００ｎＭ）で存在する。一部の他の実施形態では、ＤＮＡ損傷剤は、約１００ｎＭから１，０００ｎＭの間の濃度（例えば、約１００、１５０、２００、２５０、３００、３５０、４００、４５０、５００、５５０、６００、６５０、７００、７５０、８００、８５０、９００、９５０または１，０００ｎＭ）で存在する。さらに他の実施形態では、ＤＮＡ損傷剤は、少なくとも約１，０００ｎＭから１０，０００ｎＭの濃度（例えば、少なくとも約１，０００、１，１００、１，２００、１，３００、１，４００、１，５００、１，６００、１，７００、１，８００、１，９００、２，０００、２，１００、２，２００、２，３００、２，４００、２，５００、２，６００、２，７００、２，８００、２，９００、３，０００、３，１００、３，２００、３，３００、３，４００、３，５００、３，６００、３，７００、３，８００、３，９００、４，０００、４，１００、４，２００、４，３００、４，４００、４，５００、４，６００、４，７００、４，８００、４，９００、５，０００、５，１００、５，２００、５，３００、５，４００、５，５００、５，６００、５，７００、５，８００、５，９００、６，０００、６，１００、６，２００、６，３００、６，４００、６，５００、６，６００、６，７００、６，８００、６，９００、７，０００、７，１００、７，２００、７，３００、７，４００、７，５００、７，６００、７，７００、７，８００、７，９００、８，０００、８，１００、８，２００、８，３００、８，４００、８，５００、８，６００、８，７００、８，８００、８，９００、９，０００、９，１００、９，２００、９，３００、９，４００、９，５００、９，６００、９，７００、９，８００、９，９００、１０，０００ｎＭまたはそれより多く）で存在する。
【０１０８】
本発明の医薬組成物は、薬学の技術分野において周知の任意の方法によって調製され得る。本発明での使用のために好適な薬学的に許容される担体としては、リン酸緩衝食塩水、水および乳液（油／水もしくは水／油乳液など）が挙げられる任意の標準的な医薬用担体、緩衝剤および賦形剤、ならびに種々の種類の湿潤剤またはアジュバントが挙げられる。好適な医薬用担体およびそれらの製剤は、Remington's  Pharmaceutical  Sciences（Mack  Publishing  Co.、Easton、第１９版、１９９５年）に記載されている。好ましい医薬用担体は、活性剤の意図される投与様式に依存する。
【０１０９】
本発明の医薬組成物は、活性成分として化合物１などのＣｈｋ１阻害剤；ＡＺＤ−１７７５などのＷｅｅ１阻害剤；もしくはＣｈｋ１阻害剤とＷｅｅ１阻害剤との組合せ、または任意の薬学的に許容されるその塩、および薬学的に許容される担体または賦形剤または希釈剤を含み得る。医薬組成物は、他の治療用成分を必要に応じて含有してよい。
【０１１０】
組成物（例えば、化合物１などのＣｈｋ１阻害剤；ＡＺＤ−１７７５などのＷｅｅ１阻害剤；またはＣｈｋ１阻害剤とＷｅｅ１阻害剤との組合せ）は、活性成分として、従来の薬学的化合技術に従って好適な薬学的担体または賦形剤と密接に混合して組み合わされてよい。投与のために望ましい調製物の形態のために好適な任意の担体または賦形剤は、本明細書において開示される化合物との使用が想定されている。
【０１１１】
医薬組成物は経口、局所、非経口、肺、鼻または直腸への投与のために好適なものを含む。任意の所与の症例における投与の最も好適な経路は、がん状態の性質および重症度に、ならびに必要に応じてがんのステージにも部分的に依存する。
【０１１２】
他の医薬組成物は全身（例えば、経腸的または非経口）投与のために好適なものを含む。全身投与としては、経口、直腸、舌下または唇下投与が挙げられる。非経口投与としては、例えば、静脈内、筋肉内、小動脈内、皮内、皮下、腹腔内、室内および頭蓋内が挙げられる。送達の他の様式としては、これだけに限らないが、リポソーム製剤、静脈内注入、経皮的パッチなどの使用が挙げられる。特定の実施形態では、本発明の医薬組成物は、腫瘍内に投与され得る。
【０１１３】
肺への投与のための組成物としては、これだけに限らないが、本明細書に記載の化合物（例えば、化合物１などのＣｈｋ１阻害剤；ＡＺＤ−１７７５などのＷｅｅ１阻害剤；もしくはＣｈｋ１阻害剤とＷｅｅ１阻害剤との組合せ）またはその塩の粉末、および好適な担体もしくは潤滑剤の粉末から構成される乾燥粉末組成物が挙げられる。肺への投与のための組成物は、当業者に公知の任意の好適な乾燥粉末吸入器デバイスから吸入されてよい。
【０１１４】
全身投与のための組成物としては、これだけに限らないが、本明細書に記載される組成物（例えば、化合物１などのＣｈｋ１阻害剤；ＡＺＤ−１７７５などのＷｅｅ１阻害剤；またはＣｈｋ１阻害剤とＷｅｅ１阻害剤との組合せ）および好適な担体または賦形剤の粉末からなる乾燥粉末組成物が挙げられる。全身投与のための組成物は、これだけに限らないが、錠剤、カプセル剤、丸剤、シロップ剤、液剤および懸濁剤によって表され得る。
【０１１５】
一部の実施形態では、組成物（例えば、化合物１などのＣｈｋ１阻害剤；ＡＺＤ−１７７５などのＷｅｅ１阻害剤；またはＣｈｋ１阻害剤とＷｅｅ１阻害剤との組合せ）は、薬学的界面活性剤をさらに含む。他の実施形態では、組成物は、凍結保護物質をさらに含む。一部の実施形態では、凍結保護物質は、グルコース、ショ糖、トレハロース、乳糖、グルタミン酸ナトリウム、ＰＶＰ、ＨＰβＣＤ、ＣＤ、グリセロール、マルトース、マンニトールおよびサッカロースからなる群から選択される。
【０１１６】
本発明における使用のための医薬組成物または医薬は、１つまたは複数の生理学的に許容される担体または賦形剤を使用して標準的な技術によって製剤化されてよい。好適な医薬用担体は、本明細書およびRemington:  The  Science  and  Practice  of  Pharmacy、第２１版、University  of  the  Sciences  in  Philadelphia、Lippencott  Williams  &  Wilkins  （２００５年）に記載されている。
【０１１７】
組成物（例えば、化合物１などのＣｈｋ１阻害剤；ＡＺＤ−１７７５などのＷｅｅ１阻害剤；またはＣｈｋ１阻害剤とＷｅｅ１阻害剤との組合せ）の放出調節非経口製剤は、インプラント、油性注射剤（oily  injection）としてまたは粒子システムとして作製されてよい。送達システムの概説について、参照により本明細書に組み込まれるBanga,  A.J.、THERAPEUTIC  PEPTIDES  AND  PROTEINS:  FORMULATION,  PROCESSING,  AND  DELIVERY  SYSTEMS、Technomic  Publishing  Company,  Inc.、Lancaster、PA、（１９９５年）を参照されたい。粒子システムとしては、ミクロスフェア、微小粒子、マイクロカプセル、ナノカプセル、ナノスフェアおよびナノ粒子が挙げられる。
【０１１８】
ポリマーは、本発明の組成物のイオン放出調節のために使用され得る。制御された薬物送達における使用のための種々の分解性および非分解性ポリマーマトリクスは、当技術分野において公知である（Langer  R.、Accounts  Chem.  Res.、２６巻：５３７〜５４２頁（１９９３年））。例えば、ブロックコポリマー、ポロキサマー（polaxamer）４０７は、低温では粘稠の流動性の液体として存在するが、体温では半固体のゲルを形成する。それは、組換えインターロイキン２およびウレアーゼの製剤化および持続送達のための有効なビヒクルであると示されている（Johnstonら、Pharm.  Res.、９巻：４２５〜４３４頁（１９９２年）およびPecら、J.  Parent.  Sci.  Tech.、４４巻（２号）：５８  ６５頁（１９９０年））。代替的にヒドロキシアパタイトは、タンパク質の放出調節のためのマイクロキャリアとして使用されている（Ijntemaら、Int.  J.  Pharm.、１１２巻：２１５〜２２４頁（１９９４年））。さらに別の態様では、リポソームは、脂質カプセル化薬の放出調節および薬物標的化のために使用される（Betageriら、LIPOSOME  DRUG  DELIVERY  SYSTEMS、Technomic  Publishing  Co.,  Inc.、Lancaster、PA（１９９３年））。治療用タンパク質の制御された送達のための多数の追加のシステムは、公知である。例えば、それぞれが参照により本明細書に組み込まれる米国特許第５，０５５，３０３号、第５，１８８，８３７号、第４，２３５，８７１号、第４，５０１，７２８号、第４，８３７，０２８号、第４，９５７，７３５号および第５，０１９，３６９号、第５，０５５，３０３号、第５，５１４，６７０号、第５，４１３，７９７号、第５，２６８，１６４号、第５，００４，６９７号、第４，９０２，５０５号、第５，５０６，２０６号、第５，２７１，９６１号、第５，２５４，３４２号および第５，５３４，４９６号を参照されたい。
【０１１９】
Ｃｈｋ１阻害剤（例えば、化合物１）、Ｗｅｅ１阻害剤（例えば、ＡＺＤ−１７７５）またはＣｈｋ１阻害剤とＷｅｅ１阻害剤との組合せの経口投与のために、医薬組成物または医薬は、薬学的に許容される賦形剤を用いる従来の手段によって調製される例えば錠剤またはカプセル剤の形態であってよい。本発明は、Ｃｈｋ１阻害剤、Ｗｅｅ１阻害剤もしくはＣｈｋ１阻害剤とＷｅｅ１阻害剤との組合せ、またはこれらの薬物の乾燥固形粉末を、（ａ）希釈剤または充填剤、例えば、乳糖、ブドウ糖、ショ糖、マンニトール、ソルビトール、セルロース（例えば、エチルセルロース、微結晶セルロース）、グリシン、ペクチン、ポリアクリレートまたはリン酸水素カルシウム、硫酸カルシウム、（ｂ）滑沢剤、例えば、シリカ、滑石、ステアリン酸、マグネシウム塩もしくはカルシウム塩、ステアリン酸金属塩（metallic  stearate）、コロイド状二酸化ケイ素、水素添加植物油、トウモロコシデンプン、安息香酸ナトリウム、酢酸ナトリウムもしくはポリエチレングリコール；錠剤のために（ｃ）結合剤、例えば、ケイ酸マグネシウムアルミニウム、デンプンペースト、ゼラチン、トラガント、メチルセルロース、カルボキシメチルセルロースナトリウム、ポリビニルピロリドンもしくはヒドロキシプロピルメチルセルロース；所望により（ｄ）崩壊剤、例えば、デンプン（例えば、ジャガイモデンプンもしくはデンプンナトリウム）、グリコレート、アガー、アルギン酸もしくはそのナトリウム塩、または発泡性混合物；（ｅ）湿潤剤、例えば、ラウリル硫酸ナトリウム、または（ｆ）吸収剤、着色剤、香料および甘味剤、と共に含む錠剤およびゼラチンカプセル剤を提供する。
【０１２０】
錠剤は、当技術分野において公知の方法によりフィルムコートまたは腸溶コートのいずれかをされていてよい。経口投与のための液体調製物は、例えば、液剤、シロップ剤もしくは懸濁剤の形態をとってよく、または使用前に水または他の好適なビヒクルを用いて構成するための乾燥産物として提供してよい。そのような液体調製物は、薬学的に許容される添加物、例えば、懸濁化剤、例えばソルビトールシロップ、セルロース誘導体もしくは水素化食用脂；乳化剤、例えば、レシチンもしくはアラビアゴム；非水性ビヒクル、例えばアーモンド油、油性エステル、エチルアルコールもしくは分別植物油（fractionated  vegetable  oil）；および保存剤、例えば、メチルもしくはプロピル−ｐ−ヒドロキシベンゾエートまたはソルビン酸を用いて従来の手段によって調製され得る。調製物は、適宜緩衝塩、香料、着色剤または甘味剤も含有してよい。所望により、経口投与のための調製物は、活性化合物（複数可）の放出調節をもたらすように適切に製剤化されてよい。
【０１２１】
Ｃｈｋ１阻害剤、Ｗｅｅ１阻害剤またはＣｈｋ１阻害剤とＷｅｅ１阻害剤との組合せの局所投与のための典型的な製剤としては、クリーム剤、軟膏剤、スプレー剤、ローション剤およびパッチ剤が挙げられる。しかし医薬組成物は、任意の種類の投与、例えば、シリンジもしくは他のデバイスを用いる、皮内、真皮下、静脈内、筋肉内、鼻腔内、脳内、気管内、動脈内、腹腔内、膀胱内（intravesical）、胸膜内、冠動脈内（intracoronary）または腫瘍内注射のために製剤化されてよい。吸入による投与（例えば、エアロゾル）のため、または経口もしくは直腸投与のための製剤も想定される。
【０１２２】
経皮適用のために好適な製剤は、明細書に記載の１つまたは複数の化合物の有効量を、必要に応じて担体と共に含む。好ましい担体は、宿主の皮膚を通じた通過を補助するために吸収性の薬理学的に許容される溶媒を含む。例えば、経皮デバイスは、裏打ち部材（backing  member）、化合物を必要に応じて担体と共に含有するリザーバー、必要に応じて調節された所定の速度で長期間にわたって化合物を宿主の皮膚に送達するための速度調節用バリアー、およびデバイスを皮膚に固定するための手段を含む帯具の形態である。マトリクス経皮製剤も使用され得る。
【０１２３】
本明細書に記載される組成物および製剤（例えば、Ｃｈｋ１阻害剤、Ｗｅｅ１阻害剤、またはＣｈｋ１阻害剤とＷｅｅ１阻害剤との組合せを含む）は、注射による、例えばボーラス注射または持続注入による非経口投与のために製剤化され得る。注射のための製剤は、単位投与形態、例えば保存剤を添加されたアンプル中もしくは多用量容器中であってよい。注射可能な組成物は、好ましくは水性等張液剤または懸濁剤であり、坐薬は、脂肪性の乳液または懸濁物から好ましくは調製される。組成物は、滅菌されていてよい、または保存剤、安定剤、湿潤剤もしくは乳化剤、溶解促進剤（solution  promoter）、浸透圧制御用の塩または緩衝剤、などのアジュバントを含有してよい。代替的に、活性成分（複数可）は、使用前の好適なビヒクル、例えば、無菌発熱物質不含有水を用いて構成するための粉末形態であってよい。加えて、それらは、他の治療に有益な物質も含有してよい。組成物は、それぞれ従来の混合、造粒またはコーティング方法により調製される。
【０１２４】
吸入による投与のために、好適な噴霧剤、例えば、ジクロロジフルオロメタン、トリクロロフルオロメタン、ジクロロテトラフルオロエタン、二酸化炭素または他の好適な気体の使用を伴って、組成物（例えば、Ｃｈｋ１阻害剤、Ｗｅｅ１阻害剤、またはＣｈｋ１阻害剤とＷｅｅ１阻害剤との組合せを含む）は、加圧されたパックまたはネブライザーからのエアロゾルスプレー提示（presentation）の形態で都合よく送達され得る。加圧されたエアロゾルの場合、投薬単位は、計量された量を送達するためにバルブを用意することによって決定され得る。吸入またはインサフレーターにおける使用のための例えばゼラチンのカプセルおよびカートリッジは、化合物（複数可）および好適な粉末基剤、例えば乳糖またはデンプンの粉末混合物を含有して製剤化されてよい。
【０１２５】
組成物（例えば、Ｃｈｋ１阻害剤、Ｗｅｅ１阻害剤、またはＣｈｋ１阻害剤とＷｅｅ１阻害剤との組合せを含む）は、直腸組成物、例えば従来の坐薬基剤、例えばココアバターもしくは他のグリセリドを含有する、例えば坐薬または停留浣腸に製剤化されてもよい。
【０１２６】
さらに、活性成分（複数可）は、デポ製剤として製剤化されてよい。そのような長時間作用型製剤は、埋め込み（例えば、皮下にもしくは筋肉内に）または筋肉内注射によって投与されてよい。したがって、例えば、本明細書に記載の１つまたは複数の化合物は、好適なポリマー材料または疎水性材料（例えば許容される油中の乳液として）またはイオン交換樹脂を用いて、または難溶性誘導体として、例えば難溶性塩として、製剤化されてよい。
Ｃ．キット
【０１２７】
別の態様では、本発明は、対象におけるがんを予防または処置するためのキットを提供し、キットは、本発明の医薬組成物（例えば、Ｃｈｋ１阻害剤（例えば、化合物１もしくは本明細書に記載の別のＣｈｋ１阻害剤）、本明細書に記載のＷｅｅ１阻害剤を含む医薬組成物、またはＣｈｋ１阻害剤およびＷｅｅ１阻害剤（例えば、ＡＺＤ−１７７５もしくは本明細書に記載の別のＷｅｅ１阻害剤）を含む医薬組成物を含む。
【０１２８】
キットは、多数のがんを予防または処置するために好適である。一部の実施形態では、予防されるまたは処置されるがんの種類は、胃がん、頭頸部がん、肺がん（例えば、非小細胞肺がん（ＮＳＣＬＣ））、卵巣がん、乳がん、結腸直腸がん、神経系がん（例えば、中枢神経系がん）、副腎がん、膀胱がん、血液がん（例えば、白血病、急性骨髄性白血病、マントル細胞リンパ腫、未分化大細胞リンパ腫、Ｂ細胞急性リンパ芽球性白血病、バーキットリンパ腫、慢性リンパ球性白血病、慢性骨髄性白血病、多発性骨髄腫、急性前骨髄球性白血病、Ｔ細胞急性リンパ芽球性白血病）、骨がん、子宮頸がん、食道がん、眼がん、腎臓がん、肝臓がん、筋肉がん、鼻がん、膵臓がん、咽頭がん、胎盤がん、前立腺がん、皮膚がん、軟部組織がん、顎下腺がん、甲状腺がん、舌がんおよび子宮がんからなる群から選択される。特定の実施形態では、予防されるまたは処置されるがんは、急性骨髄性白血病、食道がん、胃がん、マントル細胞リンパ腫、非小細胞肺がん（ＮＳＣＬＣ）、卵巣がん、頭頸部がん、肝臓がん、膵臓がん、前立腺がんおよび中枢神経系がん、からなる群から選択される。一部の実施形態では、がんは転移性がんである。他の実施形態では、がんは進行がんである。一部の他の実施形態では、がんは薬物耐性がんである。一部の実施形態では、がんは多剤耐性がんである。一部の実施形態では、がんは進行型、転移性または薬物耐性である。一部の実施形態では、がんはマントル細胞リンパ腫である。一部の実施形態では、がんはマントル細胞リンパ腫であり、対象は、ｔ（１１；１４）（ｑ１３；ｑ３２）の染色体転座を有する。特定の実施形態では、がんは乳がんまたは転移性乳がんである。
【０１２９】
本発明の種々の方法を実行するための材料および試薬は、方法の遂行を促進するためにキットで提供されてよい。本明細書において使用される、用語「キット」は、プロセス、アッセイ、分析または操作を促進する物品の組合せを含む。特に本発明のキットは、例えば、診断、予後、治療などを含む広範な応用において有用性を見出す。
【０１３０】
キットは、化学試薬および他の構成要素を含有してよい。加えて、本発明のキットは、非限定的にキット使用者のための指示、Ｃｈｋ１阻害剤（例えば、化合物１）、Ｗｅｅ１阻害剤（例えば、ＡＺＤ−１７７５）もしくはその医薬組成物またはＣｈｋ１阻害剤とＷｅｅ１阻害剤との組合せまたはその医薬組成物を投与するための器具（apparatus）および試薬、試料チューブ、ホルダー、トレー、ラック、ディッシュ、プレート、溶液、バッファまたは他の化学試薬を含んでよい。本発明のキットは、簡便な保存および安全な輸送のために、例えば蓋を有する箱の中に、包装されてもよい。
【実施例】
【０１３１】
ＩＶ．実施例
本発明は、具体的な実施例の方法によってさらに詳細に記載される。続く実施例は、例示的目的のためだけに提供され、いかなる様式でも本発明を限定することを意図されない。当業者は、本質的に同じ結果を得るために変更または改変され得る種々の重要でないパラメーターを容易に認識する。
【０１３２】
本明細書で提供する実施例は、経口で生体利用可能な、選択的小分子Ｃｈｋ１阻害剤化合物１の固形および血液系腫瘍由来細胞株における活性を強調する。化合物１は、タンパク質キナーゼのパネルに対して限定的なオフターゲット活性を有するＣｈｋ１に対するサブナノモル濃度酵素阻害剤である。ｉｎ  ｖｉｔｒｏで大細胞株パネルについて評価する場合、化合物１は、固形および血液系腫瘍由来細胞株において単剤として広範な効力範囲を、３０ｎＭから５０μＭを超える範囲のＩＣ５０値を有して実証した。
【０１３３】
胃がん、非小細胞肺がんおよび卵巣がんが挙げられるいくつかの固形腫瘍型は、ｉｎ  ｖｉｔｒｏで化合物１に対して感受性が高まったことが実証された。化合物１を用いた感受性細胞株の処置は、リン酸化ヒストンＨ２ＡＸによって測定されるＤＮＡ損傷の誘導および細胞死の誘導を生じた。化合物１は、ＳＫ−ＭＥＳ−１およびＮＣＩ−Ｈ７２７  ＮＳＣＬＣ腫瘍異種移植モデルにおいてｉｎ  ｖｉｖｏで単剤として活性であり、処置マウスの体重に対する影響は最小限であった。化合物１の強力な単剤活性に加えて、Ｗｅｅ１阻害剤ＡＺＤ−１７７５との組合せは、複数の固形腫瘍細胞株においてｉｎ  ｖｉｔｒｏで高度に相乗的であり、組合せは、ＮＳＣＬＣ腫瘍異種移植モデルにおいていずれの薬剤単独よりもさらに効果的であった。
【０１３４】
加えて、いくつかの血液系腫瘍型は、ｉｎ  ｖｉｔｒｏおよびｉｎ  ｖｉｖｏで化合物１対して感受性が高まったことが実証された。化合物１は、Ｊｅｋｏ−１異種移植モデルにおける完全な腫瘍退縮を含んで、ｉｎ  ｖｉｔｒｏおよびｉｎ  ｖｉｖｏで、マントル細胞リンパ腫（ＭＣＬ）および急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）細胞株への注目すべき単剤活性を実証した。さらに、化合物１は、ＡＭＬ−由来細胞株において強い抗増殖活性およびＤＮＡ損傷の誘導、ならびにＭＶ−４１１腫瘍異種移植モデルにおける単剤活性を示した。
【０１３５】
これらの実施例において示された実験結果は、化合物１が高度に強力で選択的なＣｈｋ１阻害剤であることを実証する。特に化合物１は、Ｃｈｋ１に対してサブナノモル濃度の効力を示し、オフターゲットキナーゼ活性は限定的であった（すなわち、Ｃｈｋ２に対してよりもＣｈｋ１に対して１，０００倍を超えて選択性である）。さらに、化合物１は、経口生体利用能および低い流出比（柔軟な投薬スケジュールおよび多剤耐性およびＣＮＳ転移がんの処置を可能にする）、良好な代謝安定性、ＣＹＰ阻害傾向がない、優れたｈＥＲＧ阻害指数および、心臓毒性のリスクが低いこと（カニクイザルサル安全性薬理学的研究結果に基づく）などの魅力的な薬学的特性を実証した。加えて、化合物１は、複数の腫瘍モデルにおいて単剤として強力な活性を実証しただけでなく、相乗活性がＷｅｅ１阻害剤との組合せで観察された。相乗効果は、ＤＮＡ損傷、アポトーシスおよび腫瘍調節の誘導において観察された。これらのデータは、化合物１が、固形および血液系腫瘍疾患の処置のための臨床的有用性を有することを示す。
【０１３６】
（実施例１）
化合物１、新規、経口で利用可能なチェックポイントキナーゼ１阻害剤の薬物特性
化合物１は、その一部が図２に示されている多数の優れた薬物特性を示すＣｈｋ１阻害剤である。特に化合物１は、限定的なオフターゲット活性を有してＣｈｋ１に対してサブナノモル濃度の効力を示す。加えて、化合物１は、好ましい吸収、分布、代謝および排出（ＡＤＭＥ）特性、薬物動態ならびに経口生体利用能を示す。７日間反復用量耐容性研究は、マウス、ラットおよびカニクイザルにおいて完了しており、カニクイザルサルＧＬＰ心血管系安全性研究（補正ＱＴ（ＱＴｃ）間隔、左室圧（ＬＶＰ）および収縮エンドポイントを含む）において所見はなかった。化合物１は、単剤として活性であるが、化学療法剤およびＷｅｅ１阻害剤との組合せでも活性である。
【０１３７】
（実施例２）
化合物１の選択性および効力
化合物１の酵素選択性
化合物１を、図３Ａに示すものを含む１２０個のキナーゼのパネルに対して１μＭ  ＡＴＰ濃度を使用してスクリーニングした。８０％を超えて阻害されたすべてのキナーゼおよびＣｈｋ２を図３Ｂに示す。各キナーゼについてＡＴＰ  Ｋｍで測定したＩＣ５０値を、図３ＢにＣｈｋ１と比較して示す。細胞ＩＣ５０値を関連細胞株においてホスホエピトープ特異的抗体（phosphor-epitope-specific  antibody）を使用するシグナル伝達アッセイから得た。
【０１３８】
酵素および細胞に対する化合物１の効力
酵素アッセイを、１０μＭの［γ−３３Ｐ］−ＡＴＰおよび、Ｒｅａｃｔｉｏｎ  Ｂｉｏｌｏｇｙ  Ｃｏｒｐ．から得た２０μＭのペプチド基質ＫＫＫＶＳＲＳＧＬＹＲＳＰＳＭＰＥＮＬＮＲＰＲ（配列番号１）を使用して実施した。図３Ｃに見られるとおり、ＩＣ５０は０．１２４ｎＭであった。
【０１３９】
細胞Ｃｈｋ１を、ウサギ抗Ｃｈｋ１セリン２９６ホスホエピトープ抗体（Ｃｅｌｌ  Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  Ｉｎｃ．から得た）を用いる免疫ブロット法によって、１８時間アッセイにおいて、ＨＴ−２９結腸癌細胞を使用してアッセイした。このアッセイの結果を図３Ｄに示す。ＩＣ５０は０．５１０９ｎＭであった。
【０１４０】
（実施例３）
ｉｎ  ｖｉｔｒｏスクリーニング
多様ながん細胞株に対する詳細なスクリーニングを、単剤としての化合物１に感受性を示す腫瘍型を同定するために実施した。２３２個の癌由来細胞株のパネルを化合物１またはシスプラチンの希釈物を使用してハイスループット増殖アッセイにおいてスクリーニングした。細胞株を、３０μＭの開始濃度を使用して９つの用量レベルを達成した化合物１またはシスプラチンのｈａｌｆ−ｌｏｇ希釈物段階で処置し、７２時間後にＣｅｌｌＴｉｔｅｒ−Ｇｌｏ（登録商標）アッセイ（Ｐｒｏｍｅｇａ）を使用して増殖についてアッセイした。ＩＣ５０（ＥＣ５０）値を非線形回帰モデルを使用して用量応答データをフィッティングすることによって算出した。
【０１４１】
図４は、化合物１が多様な組織学的起源由来の癌細胞株で成長を阻害することに有効であったことを示す。さらに、固有の活性パターンが、化合物１をシスプラチンと比較した場合に観察された。化合物１に特に感受性であった腫瘍型としては、食道がん、胃がん、非小細胞肺がん（ＮＳＣＬＣ）、卵巣がんおよび白血病が挙げられる。
【０１４２】
（実施例４）
ＮＳＣＬＣ異種移植モデルにおけるｉｎ  ｖｉｖｏスクリーニング
化合物１のｉｎ  ｖｉｖｏ有効性を評価するために、２つの異なるＮＳＣＬＣ異種移植モデルを使用した。ＳＫ−ＭＥＳ−１またはＮＣＩ−Ｈ７２７腫瘍細胞を胸腺欠損ヌードマウスの側腹部に皮下接種した。腫瘍が体積約２００ｍｍ３に達したら、マウスを研究群（１群あたりｎ＝１０匹）に無作為化した。マウスを化合物１を１日あたり１回１２．５、２５または５０ｍｇ／ｋｇの用量で用いて経口経管栄養によって処置した。動物がビヒクルだけを投与された陰性対照群も含めた。
【０１４３】
ＳＫ−ＭＥＳ−１腫瘍への効果を図５Ａおよび５Ｃに示し、ＮＣＩ−Ｈ７２７腫瘍への効果を図５Ｂおよび５Ｄに示す）。図５Ａ〜５Ｄにおいて見られるとおり、化合物１は、両方の異種移植モデルにおいて腫瘍成長を用量依存的様式で阻害した。
【０１４４】
（実施例５）
Ｗｅｅ１阻害剤との組合せでの化合物１の細胞スクリーニングおよび特徴付け
単剤としての化合物１の有効性を試験することに加えて、化合物１をＷｅｅ１阻害剤ＡＺＤ−１７７５との組合せで検査した。ＳＫ−ＭＥＳ−１およびＮＣＩ−Ｈ７２７腫瘍細胞を、用量設定した化合物１またはＷｅｅ−１阻害剤ＡＺＤ−１７７５の単独および組合せの両方を用いて処置した。細胞増殖をＣｅｌｌＴｉｔｅｒ−Ｇｌｏ（登録商標）アッセイ（Ｐｒｏｍｅｇａ）を使用して薬物添加７２時間後に測定した。図６Ａ〜６Ｃに見られるとおり、化合物１とＡＺＤ−１７７５との組合せは、相乗効果を示した。さらに、活性の固有のパターンが薬物を単剤として検査した場合に観察された。
【０１４５】
図６Ａは、ＳＫ−ＭＥＳ  ＮＳＣＬＣがん細胞を抑制するように化合物１とＡＺＤ−１７７５との種々の組合せを使用して実施した細胞生存率アッセイの結果を示す。細胞生存率は、用量依存的様式で抑制された。同様に、化合物１とＡＺＤ−１７７５との種々の組合せをＮＣＩ−Ｈ７２７  ＮＳＣＬＣ細胞に対して検査した場合、生存率の用量依存的抑制が観察された（図６Ｂ）。両薬物のＩＣ５０値を複数の細胞株で検査し、その比較を図６Ｃに示す。
【０１４６】
（実施例６）
Ｗｅｅ１阻害剤との組合せでの化合物１のｉｎ  ｖｉｖｏ活性
ＮＣＩ−Ｈ７２７  ＮＳＣＬＣ腫瘍異種移植モデルを使用して、化合物１（１日１回２５ｍｇ／ｋｇ）およびＡＺＤ−１１７７５（１日１回３０ｍｇ／ｋｇ）の両方を個々におよび組合せで、腫瘍の大きさを抑制するそれらの能力について検査した（図７Ａおよび７Ｂ）。ＮＣＩ−Ｈ７２７腫瘍細胞を胸腺欠損ヌードマウスの側腹部に皮下接種した。腫瘍が体積約２００ｍｍ３に達したら、マウスを研究群（１群あたりｎ＝１０匹）に無作為化した。化合物１およびＡＺＤ−１７７５を経口経管栄養によって投与した。顕著な相乗効果が、２つの薬物を組み合わせた場合に観察された。
【０１４７】
（実施例７）
血液系腫瘍由来細胞株のハイスループットｉｎ  ｖｉｔｒｏスクリーニング
約７０個の造血細胞株のパネルを７２時間増殖アッセイ（ＣｒｏｗｎＢｉｏ  Ｏｍｎｉｐａｎｅｌ）において化合物１への感受性についてスクリーニングした。スクリーニングした細胞株は、未分化大細胞リンパ腫（ＡＬＣＬ）、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、Ｂ細胞急性リンパ芽球性白血病（Ｂ−ＡＬＬ）、バーキットリンパ腫、慢性リンパ球性白血病（ＣＬＬ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、マントル細胞リンパ腫（ＭＣＬ）、多発性骨髄腫（ＭＭ）、急性前骨髄球性白血病（ＰＭＬ）、およびＴ細胞急性リンパ芽球性白血病（Ｔ−ＡＬＬ）を示す細胞株を含んでいた。図８に示すとおり、化合物１による抑制に特に感受性であった血液系腫瘍由来細胞株のサブセットは、ＭＣＬおよびＡＭＬ細胞株を含んでいた。
【０１４８】
（実施例８）
ＭＣＬ細胞株における抗増殖活性
マントル細胞リンパ腫（ＭＣＬ）は、稀であり、通常は、合衆国においておよそ１５，０００名の患者を冒す非ホジキンリンパ腫の高悪性度形態である。大多数のＭＣＬ患者は、サイクリンＤ１の過剰発現をもたらすｔ（１１；１４）（ｑ１３；ｑ３２）の染色体転座を保有する。Ｃｈｋ１およびＷｅｅ１キナーゼがＣｄｋ／サイクリン活性の制御因子であることから、ＭＣＬは、Ｃｈｋ１阻害剤単独にまたはＷｅｅ１阻害剤との組合せに固有に感受性にされ得る。
【０１４９】
ＭＣＬ細胞増殖を阻害する化合物１の能力を評価するために、ＭＣＬ細胞株を化合物１のｈａｌｆ−ｌｏｇ段階希釈物を用いて９６ウエルフォーマットにおいて処置し、ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ−Ｇｌｏ（登録商標）アッセイ（Ｐｒｏｍｅｇａ）を使用して７２時間後にアッセイした（図９Ａ）。Ｚ−１３８、Ｊｅｋｏ−１、Ｍａｖｅｒ−１、Ｇｒａｎｔａ−５１９およびＲＥＣ−１細胞株についてのＩＣ５０値を図９Ｂに示す。これらのデータは、化合物１が複数のＭＣＬ細胞株において強力な単剤抗増殖活性（single-agent  anti-proliferative  activity）を実証したことを示す。
【０１５０】
（実施例９）
ＭＣＬ異種移植モデルにおける単剤としての化合物１
化合物１の効果を２つの異なるマントル細胞リンパ腫（ＭＣＬ）異種移植モデルにおいて評価した。Ｊｅｋｏ−１およびまたはＭａｖｅｒ−１細胞をＣＢ１７．ＳＣＩＤマウス（Ｊｅｋｏ−１細胞について）または胸腺欠損ヌードマウス（Ｍａｖｅｒ−１細胞について）の側腹部に皮下接種した。腫瘍が体積約２００ｍｍ３に達したら、マウスを研究群（１群あたりｎ＝１０匹）に無作為化した。マウスを経口経管栄養によって化合物１を用いて、または陰性対照としてビヒクルだけを用いて処置した。ある処置群では、化合物１を１日１回、２１日間投与した。他の処置群では、化合物１を１日２回、３サイクル投与し、各サイクルは、３日間連続の処置に続く４日間連続の無処置で構成された。
【０１５１】
図１０Ａおよび１０Ｃに示すとおり、両方の処置レジメンは、それぞれＪｅｋｏ−１およびＭａｖｅｒ−１モデルの両方において腫瘍成長を有意に阻害した。さらに、図１０Ｂおよび１０Ｄは、化合物１が良好に耐容性であったことを示す。
【０１５２】
（実施例１０）
ＭＣＬ細胞株における化合物１とＷｅｅ１阻害剤との相乗性
いくつかのマントル細胞リンパ腫（ＭＣＬ）細胞株において、化合物１とＷｅｅ１阻害剤とを組み合わせることの効果を試験するために、ｉｎ  ｖｉｔｒｏアッセイを実施した。ＭＣＬ細胞を、漸増濃度の化合物１と組み合わせた、用量設定したＷｅｅ１阻害剤、ＡＺＤ−１７７５を用いて処置した。増殖を７２時間で測定した。阻害がＪｅｋｏ−１（図１１Ａ）、Ｍａｖｅｒ−１（図１１Ｂ）およびＺ−１３８（図１１Ｃ）細胞株のアッセイにおいて観察された。
【０１５３】
加えて、ＭＣＬ細胞を等効力の比の化合物１とＡＺＤ−１７７５とを用いて処置し、組合せ指数（ＣＩ）値をChou-Talalay法およびＣａｌｃｕＳｙｎソフトウェア（Caner  Res.  ２０２０年１月１５日；７０巻（２号）：４４０〜６頁）を使用して算出した。Ｊｅｋｏ−１、Ｚ−１３８およびＭａｖｅｒ−１細胞についてのＣＩ値を図１１Ｄに示す。これらのデータは、化合物１がＷｅｅ１阻害剤との組合せでＭＣＬ細胞株において相乗的抗増殖作用を示したことを示す。
【０１５４】
（実施例１１）
ＭＣＬ細胞株におけるＤＮＡ損傷およびアポトーシス誘導
ＤＮＡ損傷を誘導する化合物１の能力を評価するために、マントル細胞リンパ腫（ＭＣＬ）細胞株を、用量設定した化合物１単独またはＷｅｅ１阻害剤ＡＺＤ−１７７５との組合せを用いて１８時間処置した。細胞を溶解し、ホスホ−Ｈ２Ａ．Ｘ（Ｓ１３９）レベルを免疫ブロットによってアッセイし、ＬＩ−ＣＯＲ  Ｏｄｙｓｓｅｙ  ｉｍａｇｅｒで検出した。図１２に示すとおり、化合物１は、複数のＭＣＬ細胞株（Ｊｅｋｏ−１、Ｚ−１３８およびＭａｖｅｒ−１細胞）においてＤＮＡ損傷を誘導し、ＤＮＡ損傷誘導が、Ｗｅｅ１が同時に阻害される場合に増強された。
【０１５５】
アポトーシス誘導を、用量設定した化合物１単独またはＡＺＤ−１７７５との組合せを用いてＭＣＬ細胞を１８時間処置することによって研究した。処置に続いて、カスパーゼ−３／７誘導をＣａｓｐａｓｅ−Ｇｌｏ（登録商標）３／７アッセイ（Ｐｒｏｍｅｇａ）を使用して評価した。検査した３つのＭＣＬ株はＪｅｋｏ−１（図１３Ａ）、Ｍａｖｅｒ−１（図１３Ｂ）およびＺ−１３８（図１３Ｃ）であった。これらのデータは、複数のＭＣＬ細胞株においてアポトーシスを誘導する化合物１の能力が同時のＷｅｅ１阻害によって増強されたことを示す。
【０１５６】
（実施例１２）
化合物１とＷｅｅ１阻害剤との組合せのｉｎ  ｖｉｖｏ研究
Ｊｅｋｏ−１マントル細胞リンパ腫（ＭＣＬ）腫瘍異種移植モデルを化合物１およびＷｅｅ１阻害剤を用いたＣｈｋ１阻害の組合せ効果を研究するために使用した。Ｊｅｋｏ−１細胞をＣＢ１７．ＳＣＩＤマウスの側腹部に皮下接種した。腫瘍が体積約２００ｍｍ３に達したら、マウスを研究群（１群あたりｎ＝１０匹）に無作為化した。マウスを化合物１（７．５ｍｇ／ｋｇ）、ＡＺＤ−１７７５（１５ｍｇ／ｋｇ）または両方を用いて、経口経管栄養によって１日１回、３サイクル処置した（各サイクルは、３日間連続の処置に続く４日間連続の無処置で構成された）。マウスがビヒクルだけによって処置される陰性対照群を含んだ。
【０１５７】
図１４Ａに示すとおり、Ｊｅｋｏ−１腫瘍成長は、両方の薬剤単独によって阻害され、腫瘍成長の阻害は、両方の薬剤が投与された場合に、有意に増強された。図１４Ｂは、化合物１およびＡＺＤ−１７７５が、単独および組合せの両方で、研究動物によって良好に耐容されたことを示す。これらの結果は、化合物１の抗腫瘍活性がＭＣＬ腫瘍モデルにおいてＷｅｅ１阻害剤を用いて増強されたことを示す。
【０１５８】
（実施例１３）
ＡＭＬ細胞株における化合物１活性のｉｎ  ｖｉｔｒｏ研究
急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）細胞への化合物１の効果を試験するために、いくつかのＡＭＬ細胞株を化合物１のｈａｌｆ−ｌｏｇ段階希釈物を用いて９６ウエルフォーマットにおいて処置し、ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ−Ｇｌｏ（登録商標）アッセイ（Ｐｒｏｍｅｇａ）を使用して７２時間後に増殖についてアッセイした。図１５Ａおよび１５Ｂにおいて示されるとおり、化合物１は、複数のＡＭＬ細胞株において抗増殖活性を実証した。
【０１５９】
加えて、ＤＮＡ損傷を誘導する化合物１の能力をＴＨＰ−１  ＡＭＬ細胞においてアッセイした。これらの実験について、ＴＨＰ−１細胞を化合物１を用いて１８時間処置し、ホスホ−Ｈ２Ａ．ＸをＬｕｍｉｎｅｘアッセイ（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ）を使用して測定した。図１５Ｃに示すとおり、化合物１はＴＨＰ−１細胞においてＤＮＡ損傷を用量依存的様式で誘導できた。
【０１６０】
（実施例１４）
ＡＭＬ細胞における化合物１活性のｉｎ  ｖｉｖｏ研究
ＭＶ−４１１腫瘍異種移植モデルを、ＡＭＬ腫瘍成長をｉｎ  ｖｉｖｏで阻害する化合物１の能力を検査するために使用した。ＭＶ−４１１細胞をＭａｔｒｉｇｅｌと１：１の比で混合し、メスＮＯＤ．ＳＣＩＤマウスの右側腹部に皮下注射した。腫瘍が体積約１００から２００ｍｍ３に達したら、マウスを研究群（１群あたりｎ＝１０匹）に無作為化し、経口経管栄養によって化合物１を投薬した。
【０１６１】
図１６Ａは、化合物１がＭＶ−４１１腫瘍成長を用量依存的様式で阻害したことを示す。図１６Ｂは、化合物１の研究動物の体重への効果を示す。併せて、これらの結果は、化合物１がＭＶ−４１１異種移植腫瘍モデルにおいて単剤として活性であり、良好に耐容されたことを示す。
【０１６２】
本明細書に記載の実施例および実施形態が例示的目的だけのためであり、種々の改変または変更がそれらを踏まえて当業者に示唆され、本出願の精神および範囲ならびに添付の特許請求の範囲内に含まれることは理解される。本明細書において引用されるすべての公報、特許、特許出願および配列受託番号は、その全体がすべての目的のために参照により本明細書に組み込まれる。
【表１】
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【図１】
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【図２】
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【図３Ａ−Ｂ】
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【図３Ｃ−Ｄ】
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【図４】
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【図５Ａ−Ｂ】
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【図５Ｃ−Ｄ】
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【図６Ａ−Ｂ】
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【図６Ｃ】
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【図７Ａ−Ｂ】
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【図８】
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【図９Ａ−Ｂ】
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【図１０Ａ−Ｂ】
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【図１０Ｃ−Ｄ】
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【図１１Ａ−Ｃ】
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【図１１Ｄ】
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【図１２】
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【図１３Ａ−Ｃ】
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【図１４Ａ−Ｂ】
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【図１５Ａ−Ｃ】
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【図１６Ａ−Ｂ】
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【配列表】
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【国際調査報告】
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