(57)【要約】  本発明は、異なるジカウイルスエピトープに特異的に結合し、ＺＩＫＶの感染を強力に中和する多重特異性抗体及びその抗原結合断片に関する。本発明はまた、そのような抗体及び抗体断片をコードする核酸に関する。更に、本発明は、ＺＩＫＶ感染の予防及び治療における本発明の抗体及び抗体断片の使用に関する。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
異なるジカウイルスエピトープに特異的に結合することを特徴とする単離された多重特異性抗体又はその抗原結合断片。
【請求項２】
前記抗体又はその抗原結合断片が、ジカウイルス感染を中和する請求項１に記載の抗体又はその抗原結合断片。
【請求項３】
前記抗体又はその抗原結合断片が、ジカウイルスエスケープ変異体の生成を排除する請求項１から２のいずれかに記載の抗体又はその抗原結合断片。
【請求項４】
前記抗体又はその抗原結合断片が、ジカウイルス感染の抗体依存性増強に寄与しない請求項１から３のいずれかに記載の抗体又はその抗原結合断片。
【請求項５】
前記抗体又はその抗原結合断片に含まれる各ＣＤＲ又は各可変領域が、それぞれヒトのＣＤＲ又はヒトの可変領域であり、最も好ましくは前記抗体又はその抗原結合断片に含まれる全ての定常領域及び可変領域が、ヒトの定常領域及びヒトの可変領域である請求項１から４のいずれかに記載の抗体又はその抗原結合断片。
【請求項６】
前記抗体又はその抗原結合断片が、モノクローナル抗体である請求項１から５のいずれかに記載の抗体又はその抗原結合断片。
【請求項７】
前記抗体又はその抗原結合断片が、二重特異性、三重特異性、四重特異性、又は五重特異性であり、好ましくは前記抗体又はその抗原結合性断片が、二重特異性、三重特異性、又は四重特異性であり、より好ましくは前記抗体又はその抗原結合断片が、二重特異性又は三重特異性であり、更により好ましくは前記抗体又はその抗原結合断片が、二重特異性である請求項１から６のいずれかに記載の抗体又はその抗原結合断片。
【請求項８】
前記抗体又はその抗原結合断片が、二価、三価、四価、六価、又は八価であり、より好ましくは前記抗体又はその抗原結合性断片が、二価又は四価であり、最も好ましくは前記抗体又はその抗原結合断片が、四価である請求項１から７のいずれかに記載の抗体又はその抗原結合断片。
【請求項９】
前記抗体又はその抗原結合断片が、二重特異性で四価である請求項１から８のいずれかに記載の抗体又はその抗原結合断片。
【請求項１０】
抗体分子が、少なくとも２つの異なるジカウイルスエピトープに特異的に結合する異なるエピトープ結合部位のそれぞれの正確に２つのコピーを含む請求項１から９のいずれかに記載の抗体又はその抗原結合断片。
【請求項１１】
前記抗体又はその抗原結合断片が、ＩｇＧ型のものであり、好ましくはＩｇＧ１型のものであり、より好ましくはＩｇＧ１  ＣＨ１−ＣＨ２−ＣＨ３型の重鎖定常領域及びＩｇＧ  ＣＬ型の軽鎖定常領域を含み、更により好ましくは配列番号９１又は配列番号９２で表されるアミノ酸配列、又はその機能的配列変異体を含む又はからなるＩｇＧ１  ＣＨ１−ＣＨ２−ＣＨ３型の重鎖定常領域、及び配列番号９３又は配列番号９４で表されるアミノ酸配列、又はその機能的配列変異体を含む又はからなるＩｇＧ  ＣＬ型の軽鎖定常領域を含む請求項１から１０のいずれかに記載の抗体又はその抗原結合断片。
【請求項１２】
前記抗体又はその抗原結合断片が、Ｆｃ部分を含む請求項１から１１のいずれかに記載の抗体又はその抗原結合断片。
【請求項１３】
前記抗体又はその抗原結合断片が、前記Ｆｃ部分に突然変異を含み、前記突然変異がＦｃ受容体に対する前記抗体の結合を低減する請求項１２に記載の抗体又はその抗原結合断片。
【請求項１４】
前記抗体又はその抗原結合断片が、ＣＨ２  Ｌ４Ａ突然変異、ＣＨ２  Ｌ５Ａ突然変異、又はその両方を含む請求項１１及び１３のいずれかに記載の抗体又はその抗原結合断片。
【請求項１５】
前記抗体又はその抗原結合断片が、Ｆａｂｓ−ｉｎ−ｔａｎｄｅｍ−Ｉｇ抗体フォーマットのものである請求項１から１４のいずれかに記載の抗体又はその抗原結合断片。
【請求項１６】
前記抗体又はその抗原結合断片が、ＤＶＤ−Ｉｇ抗体フォーマットのものである請求項１から１４のいずれかに記載の抗体又はその抗原結合断片。
【請求項１７】
前記抗体又はその抗原結合断片が、Ｆｃ受容体のための結合部位を含まない、好ましくは前記抗体又はその抗原結合断片が、Ｆｃ領域を含まない、より好ましくは前記抗体又はその抗原結合断片が、Ｆｃ部分を含まない請求項１から９のいずれかに記載の抗体又はその抗原結合断片。
【請求項１８】
前記抗体又はその抗原結合断片が、ジカウイルスエンベロープタンパク質（ＺＩＫＶ  Ｅタンパク質）上の（少なくとも２つの）異なるエピトープに特異的に結合する請求項１から１７のいずれかに記載の抗体又はその抗原結合断片。
【請求項１９】
前記抗体又はその抗原結合断片が、ジカウイルスエンベロープタンパク質のドメインＩＩＩ（ＥＤＩＩＩ）に結合する請求項１から１８のいずれかに記載の抗体又はその抗原結合断片。
【請求項２０】
ジカウイルスエンベロープタンパク質のドメインＩＩＩが、配列番号２６３又は配列番号２６５で表されるアミノ酸配列を含む又はからなる請求項１９に記載の抗体又はその抗原結合断片。
【請求項２１】
ジカウイルスエンベロープタンパク質のドメインＩＩＩが、配列番号２６４で表されるアミノ酸配列を含む又はからなる請求項２０に記載の抗体又はその抗原結合断片。
【請求項２２】
前記抗体又はその抗原結合断片が、ＥＤＩＩＩのラテラルリッジ（ＬＲ）の１以上のアミノ酸残基及び／又はＥＤＩ−ＥＤＩＩＩヒンジ領域の１以上のアミノ酸残基を含むジカウイルスエンベロープタンパク質のエピトープに結合する請求項１から２１のいずれかに記載の抗体又はその抗原結合断片。
【請求項２３】
前記ジカウイルスエンベロープタンパク質のエピトープが、ＥＤＩＩＩのラテラルリッジ（ＬＲ）の１以上のアミノ酸残基及びＥＤＩ−ＥＤＩＩＩヒンジ領域の１以上のアミノ酸残基を含む請求項２２に記載の抗体又はその抗原結合断片。
【請求項２４】
前記抗体又はその抗原結合断片が、ＺＩＫＶ感染性ビリオン上に提示される四次エピトープに結合する請求項１から２３のいずれかに記載の抗体又はその抗原結合断片。
【請求項２５】
前記抗体又はその抗原結合断片が、ジカウイルスエンベロープタンパク質のドメインＩＩ（ＥＤＩＩ）に結合する請求項１から２４のいずれかに記載の抗体又はその抗原結合断片。
【請求項２６】
前記抗体又はその抗原結合断片が、（ｉ）ジカウイルスエンベロープタンパク質のドメインＩＩＩ（ＥＤＩＩＩ）に結合し、且つ（ｉｉ）ジカウイルスエンベロープタンパク質のドメインＩＩ（ＥＤＩＩ）に結合する請求項１から２５のいずれかに記載の抗体又はその抗原結合断片。
【請求項２７】
ジカウイルスエンベロープタンパク質のドメインＩＩＩが、配列番号２６３又は配列番号２６５、特に配列番号２６４で表されるアミノ酸配列を含む又はからなる請求項２６に記載の抗体又はその抗原結合断片。
【請求項２８】
前記抗体又はその抗原結合断片が、ＥＤＩＩＩのラテラルリッジ（ＬＲ）の１以上のアミノ酸残基及び／又はＥＤＩ−ＥＤＩＩＩヒンジ領域の１以上のアミノ酸残基を含むジカウイルスエンベロープタンパク質のエピトープに結合する請求項２６から２７のいずれかに記載の抗体又はその抗原結合断片。
【請求項２９】
前記抗体又はその抗原結合断片が、（ｉ）ジカウイルスエンベロープタンパク質のドメインＩＩＩ（ＥＤＩＩＩ）に結合し、且つ（ｉｉ）ＺＩＫＶ感染性ビリオン上に提示される四次エピトープに結合する請求項１から２５のいずれかに記載の抗体又はその抗原結合断片。
【請求項３０】
ジカウイルスエンベロープタンパク質のドメインＩＩＩが、配列番号２６３又は配列番号２６５、特に配列番号２６４で表されるアミノ酸配列を含む又はからなる請求項２９に記載の抗体又はその抗原結合断片。
【請求項３１】
前記抗体又はその抗原結合断片が、ＥＤＩＩＩのラテラルリッジ（ＬＲ）の１以上のアミノ酸残基及び／又はＥＤＩ−ＥＤＩＩＩヒンジ領域の１以上のアミノ酸残基を含むジカウイルスエンベロープタンパク質のエピトープに結合する請求項２９から３０のいずれかに記載の抗体又はその抗原結合断片。
【請求項３２】
前記抗体又はその抗原結合断片が、ＺＩＫＶの付着後工程を阻害することができる請求項１から３１のいずれかに記載の抗体又はその抗原結合断片。
【請求項３３】
前記抗体又はその抗原結合断片が、膜融合を阻害することができる請求項３２に記載の抗体又はその抗原結合断片。
【請求項３４】
前記抗体又はその抗原結合断片が、ＺＩＫＶ（粒子）の凝集を引き起こすことができる請求項１から３３のいずれかに記載の抗体又はその抗原結合断片。
【請求項３５】
前記抗体又はその抗原結合断片が、少なくとも１つのＣＤＲＨ１、少なくとも１つのＣＤＲＨ２、及び少なくとも１つのＣＤＲＨ３を含む重鎖と、少なくとも１つのＣＤＲＬ１、少なくとも１つのＣＤＲＬ２、及び少なくとも１つのＣＤＲＬ３を含む軽鎖とを含み、少なくとも１つのＣＤＲ、好ましくは前記少なくとも１つの重鎖ＣＤＲＨ３が、配列番号３、７５、３９、２１、５７、１０１、１０５、１０９、１１３、１１７、１２１、１２５、１２９、１３３、１３７、１４１、１４５、１４９、１５３、１５７、１６１、１６５、１６９、１７３、１７７、１８１、１８５、１８９、１９３、１９７、２０１、２０５、２０９、２１３、２１７、２２１、２２５、２２９、２３３、２３７、２４１、２４５、２４９、２５３、２５７、及び２６１のいずれかで表されるアミノ酸配列、又は少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するその機能的配列変異体を含む又はからなる請求項１から３４のいずれかに記載の抗体又はその抗原結合断片。
【請求項３６】
前記抗体又はその抗原結合断片が、少なくとも１つのＣＤＲＨ１、少なくとも１つのＣＤＲＨ２、及び少なくとも１つのＣＤＲＨ３を含む重鎖と、少なくとも１つのＣＤＲＬ１、少なくとも１つのＣＤＲＬ２、及び少なくとも１つのＣＤＲＬ３を含む軽鎖とを含み、少なくとも１つのＣＤＲ、好ましくは前記少なくとも１つの重鎖ＣＤＲＨ３が、配列番号３、３９、及び２１のいずれかで表されるアミノ酸配列、又は少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するその機能的配列変異体を含む又はからなる請求項３５に記載の抗体又はその抗原結合断片。
【請求項３７】
前記抗体又はその抗原結合断片が、少なくとも１つのＣＤＲＨ１、少なくとも１つのＣＤＲＨ２、及び少なくとも１つのＣＤＲＨ３を含む重鎖と、少なくとも１つのＣＤＲＬ１、少なくとも１つのＣＤＲＬ２、及び少なくとも１つのＣＤＲＬ３を含む軽鎖とを含み、少なくとも１つのＣＤＲ、好ましくは前記少なくとも１つの重鎖ＣＤＲＨ３が、配列番号３で表されるアミノ酸配列、又は少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するその機能的配列変異体を含む又はからなる請求項３６に記載の抗体又はその抗原結合断片。
【請求項３８】
前記抗体又はその抗原結合断片が、更なるＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、及びＣＤＲＨ３並びに更なるＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、及びＣＤＲＬ３を含み、少なくとも１つのＣＤＲ、好ましくは前記更なる重鎖ＣＤＲＨ３が、配列番号２１で表されるアミノ酸配列、又は少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するその機能的配列変異体を含む又はからなる請求項３７に記載の抗体又はその抗原結合断片。
【請求項３９】
前記抗体又はその抗原結合断片が、更なるＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、及びＣＤＲＨ３並びに更なるＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、及びＣＤＲＬ３を含み、少なくとも１つのＣＤＲ、好ましくは前記更なる重鎖ＣＤＲＨ３が、配列番号３９で表されるアミノ酸配列、又は少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するその機能的配列変異体を含む又はからなる請求項３７に記載の抗体又はその抗原結合断片。
【請求項４０】
前記抗体又はその抗原結合断片が、少なくとも１つのＣＤＲＨ１、少なくとも１つのＣＤＲＨ２、及び少なくとも１つのＣＤＲＨ３を含む重鎖と、少なくとも１つのＣＤＲＬ１、少なくとも１つＣＤＲＬ２、及び少なくとも１つのＣＤＲＬ３を含む軽鎖とを含み、
（ｉ）少なくとも１つの重鎖ＣＤＲＨ１は、配列番号１、１９、３７、５５、７３、９９、１０３、１０７、１１１、１１５、１１９、１２３、１２７、１３１、１３５、１３９、１４３、１４７、１５１、１５５、１５９、１６３、１６７、１７１、１７５、１７９、１８３、１８７、１９１、１９５、１９９、２０３、２０７、２１１、２１５、２１９、２２３、２２７、２３１、２３５、２３９、２４３、２４７、２５１、２５５、及び２５９のいずれかで表されるアミノ酸配列、又は少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するその機能的配列変異体を含み；
（ｉｉ）少なくとも１つのＣＤＲＨ２は、配列番号２、２０、３８、５６、７４、１００、１０４、１０８、１１２、１１６、１２０、１２４、１２８、１３２、１３６、１４０、１４４、１４８、１５２、１５６、１６０、１６４、１６８、１７２、１７６、１８０、１８４、１８８、１９２、１９６、２００、２０４、２０８、２１２、２１６、２２０、２２４、２２８、２３２、２３６、２４０、２４４、２４８、２５２、２５６、及び２６０のいずれかで表されるアミノ酸配列、又は少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するその機能的配列変異体を含み；及び／又は
（ｉｉｉ）少なくとも１つの重鎖ＣＤＲＨ３は、配列番号３、２１、３９、５７、７５、１０１、１０５、１０９、１１３、１１７、１２１、１２５、１２９、１３３、１３７、１４１、１４５、１４９、１５３、１５７、１６１、１６５、１６９、１７３、１７７、１８１、１８５、１８９、１９３、１９７、２０１、２０５、２０９、２１３、２１７、２２１、２２５、２２９、２３３、２３７、２４１、２４５、２４９、２５３、２５７、及び２６１のいずれかで表されるアミノ酸配列、又は少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するその機能的配列変異体を含む請求項１から３９のいずれかに記載の抗体又はその抗原結合断片。
【請求項４１】
前記抗体又はその抗原結合断片が、少なくとも１つのＣＤＲＨ１、少なくとも１つのＣＤＲＨ２、及び少なくとも１つのＣＤＲＨ３を含む重鎖と、少なくとも１つのＣＤＲＬ１、少なくとも１つＣＤＲＬ２、及び少なくとも１つのＣＤＲＬ３を含む軽鎖とを含み、
（ｉ）少なくとも１つの重鎖ＣＤＲＨ１は、配列番号１、１９、及び３７のいずれかで表されるアミノ酸配列、又は少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するその機能的配列変異体を含み；
（ｉｉ）少なくとも１つの重鎖ＣＤＲＨ２は、配列番号２、２０、及び３８のいずれかで表されるアミノ酸配列、又は少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するその機能的配列変異体を含み；及び／又は
（ｉｉｉ）少なくとも１つの重鎖ＣＤＲＨ３は、配列番号３、２１、及び３９のいずれかで表されるアミノ酸配列、又は少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するその機能的配列変異体を含む請求項４０に記載の抗体又はその抗原結合断片。
【請求項４２】
前記抗体又はその抗原結合断片が、少なくとも１つのＣＤＲＨ１、少なくとも１つのＣＤＲＨ２、及び少なくとも１つのＣＤＲＨ３を含む重鎖と、少なくとも１つのＣＤＲＬ１、少なくとも１つＣＤＲＬ２、及び少なくとも１つのＣＤＲＬ３を含む軽鎖とを含み、
（ｉ）少なくとも１つの重鎖ＣＤＲＨ１は、配列番号１で表されるアミノ酸配列、又は少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するその機能的配列変異体を含み；
（ｉｉ）少なくとも１つのＣＤＲＨ２は、配列番号２で表されるアミノ酸配列、又は少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するその機能的配列変異体を含み；及び／又は
（ｉｉｉ）少なくとも１つの重鎖ＣＤＲＨ３は、配列番号３で表されるアミノ酸配列、又は少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するその機能的配列変異体を含む請求項４１に記載の抗体又はその抗原結合断片。
【請求項４３】
前記抗体又はその抗原結合断片が、少なくとも１つのＣＤＲＨ１、少なくとも１つのＣＤＲＨ２、及び少なくとも１つのＣＤＲＨ３を含む重鎖と、少なくとも１つのＣＤＲＬ１、少なくとも１つＣＤＲＬ２、及び少なくとも１つのＣＤＲＬ３を含む軽鎖とを含み、
（ｉ）少なくとも１つのＣＤＲＬ１は、配列番号４、２２、及び４０のいずれかで表されるアミノ酸配列、又は少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するその機能的配列変異体を含み；
（ｉｉ）少なくとも１つのＣＤＲＬ２は、配列番号５、６、２３、２４、４１、及び４２のいずれかで表されるアミノ酸配列、又は少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するその機能的配列変異体を含み；及び／又は
（ｉｉｉ）少なくとも１つのＣＤＲＬ３は、配列番号７、２５、及び４３のいずれかで表されるアミノ酸配列、又は少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するその機能的配列変異体を含む請求項１から４２のいずれかに記載の抗体又はその抗原結合断片。
【請求項４４】
前記抗体又はその抗原結合断片が、少なくとも１つのＣＤＲＨ１、少なくとも１つのＣＤＲＨ２、及び少なくとも１つのＣＤＲＨ３を含む重鎖と、少なくとも１つのＣＤＲＬ１、少なくとも１つＣＤＲＬ２、及び少なくとも１つのＣＤＲＬ３を含む軽鎖とを含み、
（ｉ）少なくとも１つのＣＤＲＬ１は、配列番号４で表されるアミノ酸配列、又は少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するその機能的配列変異体を含み；
（ｉｉ）少なくとも１つのＣＤＲＬ２は、配列番号５又は配列番号６で表されるアミノ酸配列、又は少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するその機能的配列変異体を含み；及び／又は
（ｉｉｉ）少なくとも１つのＣＤＲＬ３アミノは、配列番号７で表されるアミノ酸配列、又は少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するその機能的配列変異体を含む請求項４３に記載の抗体又はその抗原結合断片。
【請求項４５】
前記抗体又はその抗原結合断片が、以下に示すＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、及びＣＤＲＨ３アミノ酸配列を含む請求項１から４４のいずれかに記載の抗体又はその抗原結合断片：（ｉ）配列番号１〜３、又は少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するその機能的配列変異体；（ｉｉ）配列番号１９〜２１、又は少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するその機能的配列変異体；（ｉｉｉ）配列番号３７〜３９、又は少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するその機能的配列変異体；（ｉｖ）配列番号５５〜５７、又は少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するその機能的配列変異体；（ｖ）配列番号７３〜７５、又は少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するその機能的配列変異体；（ｖｉ）配列番号９９〜１０１、又は少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するその機能的配列変異体；（ｖｉｉ）配列番号１０３〜１０５、又は少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するその機能的配列変異体；（ｖｉｉｉ）配列番号１０７〜１０９、又は少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するその機能的配列変異体；（ｉｘ）配列番号１１１〜１１３、又は少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するその機能的配列変異体；（ｘ）配列番号１１５〜１１７、又は少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するその機能的配列変異体；（ｘｉ）配列番号１１９〜１２１、又は少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するその機能的配列変異体；（ｘｉｉ）配列番号１２３〜１２５、又は少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するその機能的配列変異体；（ｘｉｉｉ）配列番号１２７〜１２９、又は少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するその機能的配列変異体；（ｘｉｖ）配列番号１３１〜１３３、又は少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するその機能的配列変異体；（ｘｖ）配列番号１３５〜１３７、又は少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するその機能的配列変異体；（ｘｖｉ）配列番号１３９〜１４１、又は少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するその機能的配列変異体；（ｘｖｉｉ）配列番号１４３〜１４５、又は少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するその機能的配列変異体；（ｘｖｉｉｉ）配列番号１４７〜１４９、又は少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するその機能的配列変異体；（ｘｉｘ）配列番号１５１〜１５３、又は少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するその機能的配列変異体；（ｘｘ）配列番号１５５〜１５７、又は少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するその機能的配列変異体；（ｘｘｉ）配列番号１５９〜１６１、又は少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するその機能的配列変異体；（ｘｘｉｉ）配列番号１６３〜１６５、又は少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するその機能的配列変異体；（ｘｘｉｉｉ）配列番号１６７〜１６９、又は少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するその機能的配列変異体；（ｘｘｉｖ）配列番号１７１〜１７３、又は少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するその機能的配列変異体；（ｘｘｖ）配列番号１７５〜１７７、又は少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するその機能的配列変異体；（ｘｘｖｉ）配列番号１７９〜１８１、又は少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するその機能的配列変異体；（ｘｘｖｉｉ）配列番号１８３〜１８５、又は少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するその機能的配列変異体；（ｘｘｖｉｉｉ）配列番号１８７〜１８９、又は少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するその機能的配列変異体；（ｘｘｉｘ）配列番号１９１〜１９３、又は少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するその機能的配列変異体；（ｘｘｘ）配列番号１９５〜１９７、又は少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するその機能的配列変異体；（ｘｘｘｉ）配列番号１９９〜２０１、又は少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するその機能的配列変異体；（ｘｘｘｉｉ）配列番号２０３〜２０５、又は少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するその機能的配列変異体；（ｘｘｘｉｉｉ）配列番号２０７〜２０９、又は少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するその機能的配列変異体；（ｘｘｘｉｖ）配列番号２１１〜２１３、又は少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも
９９％の配列同一性を有するその機能的配列変異体；（ｘｘｘｖ）配列番号２１５〜２１７、又は少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するその機能的配列変異体；（ｘｘｘｖｉ）配列番号２１９〜２２１、又は少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するその機能的配列変異体；（ｘｘｘｖｉｉ）配列番号２２３〜２２５、又は少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するその機能的配列変異体；（ｘｘｘｖｉｉｉ）配列番号２２７〜２２９、又は少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するその機能的配列変異体；（ｘｘｘｉｘ）配列番号２３１〜２３３、又は少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するその機能的配列変異体；（ｘｌ）配列番号２３５〜２３７、又は少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するその機能的配列変異体；（ｘｌｉ）配列番号２３９〜２４１、又は少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するその機能的配列変異体；（ｘｌｉｉ）配列番号２４３〜２４５、又は少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するその機能的配列変異体；（ｘｌｉｉｉ）配列番号２４７〜２４９、又は少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するその機能的配列変異体；（ｘｌｉｖ）配列番号２５１〜２５３、又は少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するその機能的配列変異体；（ｘｌｖ）配列番号２５５〜２５７、又は少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するその機能的配列変異体；又は（ｘｌｖｉ）配列番号２５９〜２６１、又は少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するその機能的配列変異体。
【請求項４６】
前記抗体又はその抗原結合断片が、以下に示すＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、及びＣＤＲＨ３アミノ酸配列並びにＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、及びＣＤＲＬ３アミノ酸配列を含む請求項４５に記載の抗体又はその抗原結合断片：（ｉ）配列番号１〜５及び７、又は少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するその機能的配列変異体；（ｉｉ）配列番号１〜４及び６〜７、又は少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するその機能的配列変異体；（ｉｉｉ）配列番号１９〜２３及び２５、又は少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するその機能的配列変異体；（ｉｖ）配列番号１９〜２２及び２４〜２５、又は少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するその機能的配列変異体；（ｖ）配列番号３７〜４１及び４３、又は少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するその機能的配列変異体；（ｖｉ）配列番号３７〜４０及び４２〜４３、又は少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するその機能的配列変異体；（ｖｉｉ）配列番号５５〜５９及び６１、又は少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するその機能的配列変異体；（ｖｉｉｉ）配列番号５５〜５８及び６０〜６１、又は少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するその機能的配列変異体；（ｉｘ）配列番号７３〜７７及び７９、又は少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するその機能的配列変異体；又は（ｘ）配列番号７３〜７６及び７８〜７９、又は少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するその機能的配列変異体。
【請求項４７】
前記抗体又はその抗原結合断片が、以下に示すＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、及びＣＤＲＨ３アミノ酸配列並びにＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、及びＣＤＲＬ３アミノ酸配列を含む請求項４６に記載の抗体又はその抗原結合断片：（ｉ）配列番号１〜５及び７、又は少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するその機能的配列変異体；又は（ｉｉ）配列番号１〜４及び６〜７、又は少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するその機能的配列変異体。
【請求項４８】
前記抗体又はその抗原結合断片が、以下に示すＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、及びＣＤＲＨ３アミノ酸配列並びにＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、及びＣＤＲＬ３アミノ酸配列を含む請求項４６から４７のいずれかに記載の抗体又はその抗原結合断片：（ｉ）配列番号１９〜２３及び２５、又は少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するその機能的配列変異体；又は（ｉｉ）配列番号１９〜２２及び２４〜２５、又は少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するその機能的配列変異体。
【請求項４９】
前記抗体又はその抗原結合断片が、以下の第１のエピトープ結合部位（ａ）及び第２のエピトープ結合部位（ｂ）を含む請求項４８に記載の抗体又はその抗原結合断片：
（ａ）以下に示すＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、及びＣＤＲＨ３アミノ酸配列並びにＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、及びＣＤＲＬ３アミノ酸配列を含む第１のエピトープ結合部位：（ｉ）配列番号１〜５及び７、又は少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するその機能的配列変異体；又は（ｉｉ）配列番号１〜４及び６〜７、又は少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するその機能的配列変異体、及び
（ｂ）以下に示すＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、及びＣＤＲＨ３アミノ酸配列並びにＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、及びＣＤＲＬ３アミノ酸配列を含む第２のエピトープ結合部位：（ｉ）配列番号１９〜２３及び２５、又は少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するその機能的配列変異体；又は（ｉｉ）配列番号１９〜２２及び２４〜２５、又は少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するその機能的配列変異体。
【請求項５０】
前記抗体又はその抗原結合断片が、以下に示すＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、及びＣＤＲＨ３アミノ酸配列並びにＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、及びＣＤＲＬ３アミノ酸配列を含む請求項４６から４９のいずれかに記載の抗体又はその抗原結合断片：（ｉ）配列番号３７〜４１及び４３、又は少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するその機能的配列変異体；又は（ｉｉ）配列番号３７〜４０及び４２〜４３、又は少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するその機能的配列変異体。
【請求項５１】
前記抗体又はその抗原結合断片が、以下の第１のエピトープ結合部位（ａ）及び第２のエピトープ結合部位（ｂ）を含む請求項５０に記載の抗体又はその抗原結合断片：
（ａ）以下に示すＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、及びＣＤＲＨ３アミノ酸配列並びにＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、及びＣＤＲＬ３アミノ酸配列を含む第１のエピトープ結合部位：（ｉ）配列番号１〜５及び７、又は少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するその機能的配列変異体；又は（ｉｉ）配列番号１〜４及び６〜７、又は少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するその機能的配列変異体、及び
（ｂ）以下に示すＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、及びＣＤＲＨ３アミノ酸配列並びにＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、及びＣＤＲＬ３アミノ酸配列を含む第２のエピトープ結合部位：（ｉ）配列番号３７〜４１及び４３、又は少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するその機能的配列変異体；又は（ｉｉ）配列番号３７〜４０及び４２〜４３、又は少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するその機能的配列変異体。
【請求項５２】
前記抗体又はその抗原結合断片が、重鎖可変領域（ＶＨ）及び任意に軽鎖可変領域（ＶＬ）を含み、前記重鎖可変領域（ＶＨ）が、配列番号８、２６、４４、６２、８０、１０２、１０６、１１０、１１４、１１８、１２２、１２６、１３０、１３４、１３８、１４２、１４６、１５０、１５４、１５８、１６２、１６６、１７０、１７４、１７８、１８２、１８６、１９０、１９４、１９８、２０２、２０６、２１０、２１４、２１８、２２２、２２６、２３０、２３４、２３８、２４２、２４６、２５０、２５４、２５８、及び２６２のいずれかで表されるアミノ酸配列、又は少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するその機能的配列変異体を含む又はからなる請求項１から５１のいずれかに記載の抗体又はその抗原結合断片。
【請求項５３】
前記抗体又はその抗原結合断片が、以下を含む請求項１から５２のいずれかに記載の抗体又はその抗原結合断片：（ｉ）配列番号８で表される重鎖可変領域（ＶＨ）アミノ酸配列、又は少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するその機能的配列変異体、及び／又は配列番号９で表される軽鎖可変領域（ＶＬ）アミノ酸配列、又は少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するその機能的配列変異体；（ｉｉ）配列番号２６で表される重鎖可変領域（ＶＨ）アミノ酸配列、又は少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するその機能的配列変異体、及び／又は配列番号２７で表される軽鎖可変領域（ＶＬ）アミノ酸配列、又は少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するその機能的配列変異体；（ｉｉｉ）配列番号４４で表される重鎖可変領域（ＶＨ）アミノ酸配列、又は少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するその機能的配列変異体、及び／又は配列番号４５で表される軽鎖可変領域（ＶＬ）アミノ酸配列、又は少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するその機能的配列変異体；（ｉｖ）配列番号６２で表される重鎖可変領域（ＶＨ）アミノ酸配列、又は少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するその機能的配列変異体、及び／又は配列番号６３で表される軽鎖可変領域（ＶＬ）アミノ酸配列、又は少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するその機能的配列変異体；又は（ｖ）配列番号８０で表される重鎖可変領域（ＶＨ）アミノ酸配列、又は少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するその機能的配列変異体、及び／又は配列番号８１で表される軽鎖可変領域（ＶＬ）アミノ酸配列、又は少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するその機能的配列変異体。
【請求項５４】
前記抗体又はその抗原結合断片が、以下を含む請求項５３に記載の抗体又はその抗原結合断片：配列番号８で表される重鎖可変領域（ＶＨ）アミノ酸配列、又は少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するその機能的配列変異体、及び／又は配列番号９で表される軽鎖可変領域（ＶＬ）アミノ酸配列、又は少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するその機能的配列変異体。
【請求項５５】
前記抗体又はその抗原結合断片が、配列番号２６で表される重鎖可変領域（ＶＨ）アミノ酸配列、又は少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するその機能的配列変異体、及び／又は配列番号２７で表される軽鎖可変領域（ＶＬ）アミノ酸配列、又は少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するその機能的配列変異体を含む請求項５３から５４のいずれかに記載の抗体又はその抗原結合断片。
【請求項５６】
前記抗体又はその抗原結合断片が、以下の第１のエピトープ結合部位（ａ）及び第２のエピトープ結合部位（ｂ）を含む請求項４８に記載の抗体又はその抗原結合断片：
（ａ）配列番号８で表される重鎖可変領域（ＶＨ）アミノ酸配列、又は少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するその機能的配列変異体、及び／又は配列番号９で表される軽鎖可変領域（ＶＬ）アミノ酸配列、又は少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するその機能的配列変異体を含む第１のエピトープ結合部位、及び
（ｂ）配列番号２６で表される重鎖可変領域（ＶＨ）アミノ酸配列、又は少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するその機能的配列変異体、及び／又は配列番号２７で表される軽鎖可変領域（ＶＬ）アミノ酸配列、又は少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するその機能的配列変異体を含む第２のエピトープ結合部位。
【請求項５７】
前記抗体又はその抗原結合断片が、配列番号４４で表される重鎖可変領域（ＶＨ）アミノ酸配列、又は少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するその機能的配列変異体、及び／又は配列番号４５で表される軽鎖可変領域（ＶＬ）アミノ酸配列、又は少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するその機能的配列変異体を含む請求項５３から５６のいずれかに記載の抗体又はその抗原結合断片。
【請求項５８】
前記抗体又はその抗原結合断片が、以下の第１のエピトープ結合部位（ａ）及び第２のエピトープ結合部位（ｂ）を含む請求項５７に記載の抗体又はその抗原結合断片：
（ａ）配列番号８で表される重鎖可変領域（ＶＨ）アミノ酸配列、又は少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するその機能的配列変異体、及び／又は配列番号９で表される軽鎖可変領域（ＶＬ）アミノ酸配列、又は少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するその機能的配列変異体を含む第１のエピトープ結合部位、及び
（ｂ）配列番号４４で表される重鎖可変領域（ＶＨ）アミノ酸配列、又は少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するその機能的配列変異体、及び／又は配列番号４５で表される軽鎖可変領域（ＶＬ）アミノ酸配列、又は少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するその機能的配列変異体を含む第２のエピトープ結合部位。
【請求項５９】
前記抗体又はその抗原結合断片が、Ｆａｂｓ−ｉｎ−ｔａｎｄｅｍ−Ｉｇ（ＦＩＴ−Ｉｇ）フォーマットであり、前記ＦＩＴ−Ｉｇフォーマットの外側Ｆａｂが、以下に示すＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、及びＣＤＲＨ３アミノ酸配列並びにＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、及びＣＤＲＬ３アミノ酸配列を含むエピトープ結合部位を含む請求項１から５８のいずれかに記載の抗体又はその抗原結合断片：（ｉ）配列番号１〜５及び７、又は少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するその機能的配列変異体；又は（ｉｉ）配列番号１〜４及び６〜７、又は少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するその機能的配列変異体。
【請求項６０】
前記ＦＩＴ−Ｉｇフォーマットの前記外側Ｆａｂが、配列番号８で表される重鎖可変領域（ＶＨ）アミノ酸配列、又は少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するその機能的配列変異体、及び／又は配列番号９で表される軽鎖可変領域（ＶＬ）アミノ酸配列、又は少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するその機能的配列変異体を含むエピトープ結合部位を含む請求項５９に記載の抗体又はその抗原結合断片。
【請求項６１】
前記ＦＩＴ−Ｉｇフォーマットの内側Ｆａｂが、以下に示すＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、及びＣＤＲＨ３アミノ酸配列並びにＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、及びＣＤＲＬ３アミノ酸配列を含むエピトープ結合部位を含む請求項５９から６０のいずれかに記載の抗体又はその抗原結合断片：（ｉ）配列番号１９〜２３及び２５、又は少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するその機能的配列変異体；又は（ｉｉ）配列番号１９〜２２及び２４〜２５、又は少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するその機能的配列変異体。
【請求項６２】
前記ＦＩＴ−Ｉｇフォーマットの前記内側Ｆａｂが、配列番号２６で表される重鎖可変領域（ＶＨ）アミノ酸配列、又は少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するその機能的配列変異体、及び／又は配列番号２７で表される軽鎖可変領域（ＶＬ）アミノ酸配列、又は少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するその機能的配列変異体を含むエピトープ結合部位を含む請求項６１に記載の抗体又はその抗原結合断片。
【請求項６３】
前記抗体又はその抗原結合断片が、精製抗体又は単鎖抗体、例えばｓｃＦｖである請求項１から６２のいずれかに記載の抗体又はその抗原結合断片。
【請求項６４】
医薬としての使用のための、請求項１から６３のいずれかに記載の抗体又はその抗原結合断片。
【請求項６５】
ジカウイルス感染の予防及び／又は治療における使用のための、請求項１から６４のいずれかに記載の抗体又はその抗原結合断片。
【請求項６６】
請求項１から６３のいずれかに記載の抗体又はその抗原結合断片、又は前記抗体又はその抗原結合断片の少なくとも１つのＣＤＲを含むその断片をコードする少なくとも１つのポリヌクレオチドを含むことを特徴とする核酸分子。
【請求項６７】
前記抗体又はその抗原結合断片のコード化断片が、３つのＣＤＲ、好ましくはエピトープ結合部位の３つ全ての重鎖ＣＤＲ（ＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、ＣＤＲＨ３）及び／又はエピトープ結合部位の３つ全ての軽鎖ＣＤＲ（ＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、ＣＤＲＬ３）を含む請求項６６に記載の核酸分子。
【請求項６８】
前記核酸分子が、モノ、バイ、又はマルチシストロン性である請求項６６から６７のいずれかに記載の核酸分子。
【請求項６９】
前記核酸分子が、ＤＮＡ又はＲＮＡである請求項６６から６８のいずれかに記載の核酸分子。
【請求項７０】
前記核酸分子が、ＤＮＡプラスミド又はｍＲＮＡである請求項６９に記載の核酸分子。
【請求項７１】
前記ポリヌクレオチド配列が、配列番号１０〜１８、２８〜３６、４６〜５４、６４〜７２、及び８２〜９０のいずれか１つで表される核酸配列、又は少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するその機能的配列変異体を含む又はからなる請求項６６から７０のいずれかに記載の核酸分子。
【請求項７２】
請求項６６から７１のいずれかに記載の核酸分子を含むことを特徴とするベクター。
【請求項７３】
請求項６６から７１のいずれかに記載の複数の核酸分子であって、各核酸分子が、請求項１から６３のいずれかに記載の抗体の断片又はその抗原結合断片の断片をコードする少なくとも１つのポリヌクレオチドを含むことを特徴とする複数の核酸分子。
【請求項７４】
請求項１から６３のいずれかに記載の抗体又はその抗原結合断片をコードする請求項７３に記載の複数の核酸。
【請求項７５】
好ましくは請求項１から６３のいずれかに記載の抗体又はその抗原結合断片をコードする請求項７２に記載の複数のベクター。
【請求項７６】
請求項１から６３のいずれかに記載の抗体又はその抗原結合断片を発現するか、又は請求項４０に記載のベクター若しくは請求項７５に記載の複数のベクターを含むことを特徴とする細胞。
【請求項７７】
請求項１から６３のいずれかに記載の抗体又はその抗原結合断片、請求項６６から７１のいずれかに記載の核酸分子、請求項７２に記載のベクター、請求項７３から７４のいずれかに記載の複数の核酸分子、請求項７５に記載の複数のベクター、及び／又は請求項７６に記載の細胞を含むことを特徴とする医薬組成物。
【請求項７８】
薬学的に許容し得る賦形剤、希釈剤、又は担体を更に含む請求項７７に記載の医薬組成物。
【請求項７９】
単回用量製品として提供される請求項７７から７８のいずれかに記載の医薬組成物。
【請求項８０】
請求項１から６３のいずれかに記載の抗体又はその抗原結合断片の量が、５００ｍｇを超えず、好ましくは２００ｍｇを超えず、より好ましくは１００ｍｇを超えず、更により好ましくは５０ｍｇを超えない請求項７７から７９のいずれかに記載の医薬組成物。
【請求項８１】
ジカウイルス感染の予防又は治療における使用のための、請求項１から６３のいずれかに記載の抗体又はその抗原結合断片、請求項６６から７１のいずれかに記載の核酸分子、請求項７２に記載のベクター、請求項７３から７４のいずれかに記載の複数の核酸分子、請求項７５に記載の複数のベクター、請求項７６に記載の細胞、又は請求項７７から８０のいずれかに記載の医薬組成物。
【請求項８２】
ジカウイルス感染と診断された被験体における又はジカ感染の症状を呈する被験体におけるジカウイルス感染の予防又は治療における請求項８１に記載の使用のための、抗体又はその抗原結合断片、核酸分子、ベクター、複数の核酸分子、複数のベクター、細胞、又は医薬組成物。
【請求項８３】
無症候性被験体における請求項８１に記載の使用のための、抗体又はその抗原結合断片、核酸分子、ベクター、複数の核酸分子、複数のベクター、細胞、又は医薬組成物。
【請求項８４】
妊娠している被験体における請求項８１から８３のいずれかに記載の使用のための、抗体又はその抗原結合断片、核酸分子、ベクター、複数の核酸分子、複数のベクター、細胞、又は医薬組成物。
【請求項８５】
（潜在的な）ジカウイルス感染後７日間までに、好ましくは（潜在的な）ジカウイルス感染後５日間までに、より好ましくは（潜在的な）ジカウイルス感染後４日間までに、更により好ましくは（潜在的な）ジカウイルス感染後３日間までに、最も好ましくは（潜在的な）ジカウイルス感染後１日間又は２日間までに投与される、請求項８１から８４のいずれかに記載の使用のための、抗体又はその抗原結合断片、核酸分子、ベクター、複数の核酸分子、複数のベクター、細胞、又は医薬組成物。
【請求項８６】
チェックポイント阻害剤と組み合わせて投与される、請求項８１から８５のいずれかに記載の使用のための、抗体又はその抗原結合断片、核酸分子、ベクター、複数の核酸分子、複数のベクター、細胞、又は医薬組成物。
【請求項８７】
０．００５〜１００ｍｇ／ｋｇの（単回）用量、好ましくは０．００７５〜５０ｍｇ／ｋｇの（単回）用量、より好ましくは０．０１〜１０ｍｇ／ｋｇの（単回）用量、更により好ましくは０．０５〜５ｍｇ／ｋｇの（単回）用量、特に好ましくは０．１〜１ｍｇ／ｋｇの（単回）用量で投与される、請求項８１から８６のいずれかに記載の使用のための、抗体又はその抗原結合断片、核酸分子、ベクター、複数の核酸分子、複数のベクター、細胞、又は医薬組成物。
【請求項８８】
抗ジカワクチンの抗原が正確な立体構造の特異的エピトープを含有していることを確認することによって前記ワクチンの品質をモニタリングするための、請求項１から６３のいずれかに記載の抗体又はその抗原結合断片、請求項６６から７１のいずれかに記載の核酸分子、請求項７２に記載のベクター、請求項７３から７４のいずれかに記載の複数の核酸分子、請求項７５に記載の複数のベクター、請求項７６に記載の細胞、又は請求項７７から８０のいずれかに記載の医薬組成物の使用。
【請求項８９】
ジカウイルス感染の（インビトロ）診断における、請求項１から６３のいずれかに記載の抗体又はその抗原結合断片、請求項６６から７１のいずれかに記載の核酸分子、請求項７２に記載のベクター、請求項７３から７４のいずれかに記載の複数の核酸分子、請求項７５に記載の複数のベクター、請求項７６に記載の細胞、又は請求項７７から８０のいずれかに記載の医薬組成物の使用。
【請求項９０】
請求項１から６３のいずれかに記載の少なくとも１つの抗体又はその抗原結合断片、請求項６６から７１のいずれかに記載の少なくとも１つの核酸分子、請求項７２に記載の少なくとも１つのベクター、請求項７３から７４のいずれかに記載の複数の核酸分子、請求項７５に記載の複数のベクター、請求項７６に記載の少なくとも１つの細胞、又は請求項７７から８０のいずれかに記載の少なくとも１つの医薬組成物を含むことを特徴とするキットオブパーツ。
【請求項９１】
被験体におけるジカウイルス感染を予防及び／又は治療する方法であって、請求項１から６３のいずれかに記載の抗体又はその抗原結合断片、請求項６６から７１のいずれかに記載の核酸分子、請求項７２に記載のベクター、請求項７３から７４のいずれかに記載の複数の核酸分子、請求項７５に記載の複数のベクター、請求項７６に記載の細胞、又は請求項７７から８０のいずれかに記載の医薬組成物をそれを必要とする被験体に投与することを含むことを特徴とする方法。
【請求項９２】
前記被験体が、ジカウイルス感染と診断された、又はジカウイルス感染の症状を呈する請求項９１に記載の方法。
【請求項９３】
前記被験体が、妊娠している請求項９１から９２のいずれかに記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、各種ジカウイルス（ＺＩＫＶ）エピトープに特異的に結合する多重特異性抗体及びその抗原結合断片に関する。このような抗体は、ジカウイルス（ＺＩＫＶ）の感染を強力に中和し、ジカウイルスエスケープ変異体（Ｚｉｋａ  ｖｉｒｕｓ  ｅｓｃａｐｅ  ｍｕｔａｎｔｓ）の生成を最小限にする又は無効化する。本発明はまた、そのような抗体及び抗体断片をコードする核酸に関する。更に、本発明は、ＺＩＫＶ感染の予防及び治療における本発明の抗体及び抗体断片の使用に関する。
【背景技術】
【０００２】
ジカウイルス（ＺＩＫＶ）は、蚊が媒介するフラビウイルスであり、公衆衛生上の緊急事態である。ＺＩＫＶは、ウガンダのジカ森林で１９４７年にマカクから最初に単離され（非特許文献１）、１９５４年にナイジェリアで最初のヒト感染が報告された（非特許文献２）。それ以来、アフリカや東南アジアでは、ＺＩＫＶ感染が散発的に報告されている（非特許文献３）が、２００７年にミクロネシアで（非特許文献４）、２０１３〜１４年にフランス領ポリネシアで流行が報告され、その後、大西洋大陸の他の国々にも広がっている（非特許文献５及び非特許文献６）。２０１５年にブラジルに入った後、ＺＩＫＶは急速に広がり、２０１６年２月に世界保健機関（ＷＨＯ）は国際問題の公衆衛生緊急事態を宣言した（非特許文献７；非特許文献８；非特許文献９）。ＺＩＫＶ感染の主な経路は、ヤブカ（Ａｅｄｅｓ  ｍｏｓｑｕｉｔｏｓ）による刺咬であるが、このウイルスはまた、性的に感染する（非特許文献１０）、垂直感染する（非特許文献１１）場合もある。ＺＩＫＶ感染の大部分は、無症候性であるか軽度の症状しか引き起こさないが、ＺＩＫＶ感染が成人のギラン・バレー症候群などの神経疾患合併症（非特許文献１２）及び及び発達中の胎児における小頭症を含む先天性欠陥（非特許文献１３；非特許文献１４；非特許文献１５）に至ることがあるというエビデンスがある。これは、ヒト神経前駆細胞に感染させる能力が高いことが原因である考えられる（非特許文献１６）。
【０００３】
ＺＩＫＶはフラビウイルス属に属し、これは、西ナイルウイルス、デングウイルス、ダニ媒介性脳炎ウイルス、黄熱病ウイルス、及び脳炎を引き起こす可能性のある他のウイルスも含む。フラビウイルスはエンベロープウイルスであり、正２０面体及び球形のジオメトリを有する。直径は約５０ｎｍである。ゲノムは線状のプラスセンスＲＮＡであり、非セグメントであり、長さは約１０〜１１ｋｂのである。フラビウイルスのゲノムは、３つの構造タンパク質（カプシド、ｐｒＭ、及びエンベロープ）及び８つの非構造タンパク質（ＮＳ１、ＮＳ２Ａ、ＮＳ２Ｂ、ＮＳ３、ＮＳ４Ａ、ＮＳ４Ｂ、ＮＳ５、及びＮＳ５Ｂ）をコードする。
【０００４】
フラビウイルスエンベロープ（Ｅ）タンパク質は融合を媒介し、中和抗体の主な標的であるが、非構造タンパク質１（ＮＳ１）は感染細胞によって分泌され、免疫回避及び病因に関与する（非特許文献１７）。２つの最近の構造研究は、ＺＩＫＶのＥタンパク質と、デングウイルス（ＤＥＮＶ）、黄熱病ウイルス（ＹＦＶ）及び西ナイルウイルス（ＷＮＶ）などの他のフラビウイルスのそれとの間の高い構造的類似性を示したが、ＺＩＫＶ神経栄養と関連している可能性があるユニークな特徴も示した（非特許文献１８；非特許文献１９）。同様に、ＺＩＫＶ  ＮＳ１の構造解析は、異なる静電特性を示すものの、他のフラビウイルスのＮＳ１とで保存された特性を示した（非特許文献２０）。
【０００５】
特定のフラビウイルスの特徴である現象は、異種ウイルスによる過去の感染によって惹起された交差反応性抗体の疾患増強活性である。４つの血清型が知られているデングウイルス（ＤＥＮＶ）の場合、一次感染が同じ血清型による再感染から防御するが、異なる血清型による再感染時に重症疾患の発症の危険因子であるという疫学的証拠がある（非特許文献２１）。疾患の悪化が、侵入するウイルスを中和することができないが、その代わりにＦｃ受容体発現（ＦｃＲ＋）細胞によるその捕捉を高め、ウイルス複製及び交差反応性記憶Ｔ細胞の活性化をもたらすＥ及びｐｒＭ特異的抗体によって引き起こされる。その結果として生じるサイトカインストームが、デング出血熱／デングショック症候群として知られる最も重篤な形態の疾患の基礎であると考えられる（非特許文献２２；非特許文献２３）。重度のデング熱における抗体の役割は、乳児における母体抗体の減少レベルが重度のデング熱の発生のリスクが高いことを示す研究によって裏付けられている（非特許文献２４；非特許文献２５；非特許文献２６；非特許文献２７）。
【０００６】
最近、ＤＥＮＶエンベロープタンパク質に反応する大部分の抗体がＺＩＫＶに結合するが、主要線状融合ループエピトープ（ＦＬＥ）を認識する抗体はＺＩＫＶを中和せず、代わりにＺＩＫＶ感染の抗体依存性増強（ＡＤＥ）を促進することが示された（非特許文献２８）。
【０００７】
更に、各種ウイルス、例えばジカウイルスなどの突然変異率の高い生物は、宿主細胞による破壊を回避するメカニズムとして、いわゆる「突然変異エスケープ」を用いることが多い。即ち、ウイルスは、その遺伝子型と表現型に突然変異を起こすことにより、宿主の免疫反応から自身を守ることができる（「エスケープ突然変異」と呼ばれる）。したがって、エスケープ変異体（即ち、エスケープ変異を有するウイルス）の生成は、抗体医薬の有効性を低下させる可能性がある。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【０００８】
【非特許文献１】Ｇ．  Ｗ．  Ａ．  Ｄｉｃｋ，  Ｓ．  Ｆ．  Ｋｉｔｃｈｅｎ，  Ａ．  Ｊ．  Ｈａｄｄｏｗ，  Ｚｉｋａ  ｖｉｒｕｓ．  Ｉ．  Ｉｓｏｌａｔｉｏｎｓ  ａｎｄ  ｓｅｒｏｌｏｇｉｃａｌ  ｓｐｅｃｉｆｉｃｉｔｙ．  Ｔｒａｎｓ．  Ｒ．  Ｓｏｃ．  Ｔｒｏｐ．  Ｍｅｄ．  Ｈｙｇ．  ４６，  ５０９−５２０  （１９５２）
【非特許文献２】Ｆ．  Ｎ．  Ｍａｃｎａｍａｒａ，  Ｚｉｋａ  ｖｉｒｕｓ：  ａ  ｒｅｐｏｒｔ  ｏｎ  ｔｈｒｅｅ  ｃａｓｅｓ  ｏｆ  ｈｕｍａｎ  ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ  ｄｕｒｉｎｇ  ａｎ  ｅｐｉｄｅｍｉｃ  ｏｆ  ｊａｕｎｄｉｃｅ  ｉｎ  Ｎｉｇｅｒｉａ．  Ｔｒａｎｓ．  Ｒ．  Ｓｏｃ．  Ｔｒｏｐ．  Ｍｅｄ．  Ｈｙｇ．  ４８，  １３９−１４５  （１９５４）
【非特許文献３】Ｄ．  Ｍｕｓｓｏ，  Ｖａｎ  Ｍａｉ  Ｃａｏ−Ｌｏｒｍｅａｕ，  Ｄ．  Ｊ．  Ｇｕｂｌｅｒ，  Ｚｉｋａ  ｖｉｒｕｓ：  ｆｏｌｌｏｗｉｎｇ  ｔｈｅ  ｐａｔｈ  ｏｆ  ｄｅｎｇｕｅ  ａｎｄ  ｃｈｉｋｕｎｇｕｎｙａ？  Ｔｈｅ  Ｌａｎｃｅｔ．  ３８６，  ２４３−２４４  （２０１５）
【非特許文献４】Ｍ．  Ｒ．  Ｄｕｆｆｙ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｚｉｋａ  ｖｉｒｕｓ  ｏｕｔｂｒｅａｋ  ｏｎ  Ｙａｐ  Ｉｓｌａｎｄ，  Ｆｅｄｅｒａｔｅｄ  Ｓｔａｔｅｓ  ｏｆ  Ｍｉｃｒｏｎｅｓｉａ．  Ｎ  Ｅｎｇｌ  Ｊ  Ｍｅｄ．  ３６０，  ２５３６−２５４３  （２００９）
【非特許文献５】Ｖ．−Ｍ．  Ｃａｏ−Ｌｏｒｍｅａｕ，  Ｄ．  Ｍｕｓｓｏ，  Ｅｍｅｒｇｉｎｇ  ａｒｂｏｖｉｒｕｓｅｓ  ｉｎ  ｔｈｅ  Ｐａｃｉｆｉｃ．  Ｌａｎｃｅｔ．  ３８４，  １５７１−１５７２  （２０１４）
【非特許文献６】Ｄ．  Ｍｕｓｓｏ，  Ｅ．  Ｊ．  Ｎｉｌｌｅｓ，  Ｖ．−Ｍ．  Ｃａｏ−Ｌｏｒｍｅａｕ，  Ｒａｐｉｄ  ｓｐｒｅａｄ  ｏｆ  ｅｍｅｒｇｉｎｇ  Ｚｉｋａ  ｖｉｒｕｓ  ｉｎ  ｔｈｅ  Ｐａｃｉｆｉｃ  ａｒｅａ．  Ｃｌｉｎ．  Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．  Ｉｎｆｅｃｔ．  ２０，  Ｏ５９５−６  （２０１４）
【非特許文献７】Ｌ．  Ｒ．  Ｂａｄｅｎ，  Ｌ．  Ｒ．  Ｐｅｔｅｒｓｅｎ，  Ｄ．  Ｊ．  Ｊａｍｉｅｓｏｎ，  Ａ．  Ｍ．  Ｐｏｗｅｒｓ，  Ｍ．  Ａ．  Ｈｏｎｅｉｎ，  Ｚｉｋａ  Ｖｉｒｕｓ．  Ｎ．  Ｅｎｇｌ．  Ｊ．  Ｍｅｄ．  ３７４，  １５５２−１５６３  （２０１６）
【非特許文献８】Ａ．  Ｓ．  Ｆａｕｃｉ，  Ｄ．  Ｍ．  Ｍｏｒｅｎｓ，  Ｚｉｋａ  Ｖｉｒｕｓ  ｉｎ  ｔｈｅ  Ａｍｅｒｉｃａｓ  −  Ｙｅｔ  Ａｎｏｔｈｅｒ  Ａｒｂｏｖｉｒｕｓ  Ｔｈｒｅａｔ．  Ｎ  Ｅｎｇｌ  Ｊ  Ｍｅｄ，  １６０１１３１４２１０１００９  （２０１６）
【非特許文献９】Ｄ．  Ｌ．  Ｈｅｙｍａｎｎ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｚｉｋａ  ｖｉｒｕｓ  ａｎｄ  ｍｉｃｒｏｃｅｐｈａｌｙ：  ｗｈｙ  ｉｓ  ｔｈｉｓ  ｓｉｔｕａｔｉｏｎ  ａ  ＰＨＥＩＣ？  Ｌａｎｃｅｔ．  ３８７，  ７１９−７２１  （２０１６）
【非特許文献１０】Ｄ．  Ｍｕｓｓｏ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｐｏｔｅｎｔｉａｌ  ｓｅｘｕａｌ  ｔｒａｎｓｍｉｓｓｉｏｎ  ｏｆ  Ｚｉｋａ  ｖｉｒｕｓ．  Ｅｍｅｒｇ  Ｉｎｆｅｃｔ  Ｄｉｓ．  ２１，  ３５９−３６１  （２０１５）
【非特許文献１１】Ｊ．  Ｍｌａｋａｒ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｚｉｋａ  Ｖｉｒｕｓ  Ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ  ｗｉｔｈ  Ｍｉｃｒｏｃｅｐｈａｌｙ．  Ｎ  Ｅｎｇｌ  Ｊ  Ｍｅｄ．  ３７４，  ９５１−９５８  （２０１６）
【非特許文献１２】Ｖ．−Ｍ．  Ｃａｏ−Ｌｏｒｍｅａｕ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｇｕｉｌｌａｉｎ−Ｂａｒｒｅ  Ｓｙｎｄｒｏｍｅ  ｏｕｔｂｒｅａｋ  ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ  ｗｉｔｈ  Ｚｉｋａ  ｖｉｒｕｓ  ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ  ｉｎ  Ｆｒｅｎｃｈ  Ｐｏｌｙｎｅｓｉａ：  ａ  ｃａｓｅ−ｃｏｎｔｒｏｌ  ｓｔｕｄｙ．  Ｌａｎｃｅｔ．  ０  （２０１６），  ｄｏｉ：１０．１０１６／Ｓ０１４０−６７３６（１６）００５６２−６
【非特許文献１３】Ｇ．  Ｃａｌｖｅｔ，  Ｒ．  Ｓ．  Ａｇｕｉａｒ，  Ａ．  Ｍｅｌｏ，  Ｓ．  Ａ．  Ｓａｍｐａｉｏ，  Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ  ａｎｄ  ｓｅｑｕｅｎｃｉｎｇ  ｏｆ  Ｚｉｋａ  ｖｉｒｕｓ  ｆｒｏｍ  ａｍｎｉｏｔｉｃ  ｆｌｕｉｄ  ｏｆ  ｆｅｔｕｓｅｓ  ｗｉｔｈ  ｍｉｃｒｏｃｅｐｈａｌｙ  ｉｎ  Ｂｒａｚｉｌ：  ａ  ｃａｓｅ  ｓｔｕｄｙ．  Ｌａｎｃｅｔ  Ｉｎｆｅｃｔ  Ｄｉｓ  （２０１６），  ｄｏｉ：１０．１０１６／ｓ１４７３−３０９９（１６）０００９５−５
【非特許文献１４】Ｊ．  Ｍｌａｋａｒ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｚｉｋａ  Ｖｉｒｕｓ  Ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ  ｗｉｔｈ  Ｍｉｃｒｏｃｅｐｈａｌｙ．  Ｎ  Ｅｎｇｌ  Ｊ  Ｍｅｄ．  ３７４，  ９５１−９５８  （２０１６）
【非特許文献１５】Ｅ．  Ｊ．  Ｒｕｂｉｎ，  Ｍ．  Ｆ．  Ｇｒｅｅｎｅ，  Ｌ．  Ｒ．  Ｂａｄｅｎ，  Ｚｉｋａ  Ｖｉｒｕｓ  ａｎｄ  Ｍｉｃｒｏｃｅｐｈａｌｙ．  Ｎ  Ｅｎｇｌ  Ｊ  Ｍｅｄ  （２０１６），  ｄｏｉ：１０．１０５６／ＮＥＪＭｅ１６０１８６２
【非特許文献１６】Ｈ．  Ｔａｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｚｉｋａ  Ｖｉｒｕｓ  Ｉｎｆｅｃｔｓ  Ｈｕｍａｎ  Ｃｏｒｔｉｃａｌ  Ｎｅｕｒａｌ  Ｐｒｏｇｅｎｉｔｏｒｓ  ａｎｄ  Ａｔｔｅｎｕａｔｅｓ  Ｔｈｅｉｒ  Ｇｒｏｗｔｈ．  Ｓｔｅｍ  Ｃｅｌｌ，  １−５  （２０１６）
【非特許文献１７】Ｄ．  Ａ．  Ｍｕｌｌｅｒ，  Ｐ．  Ｒ．  Ｙｏｕｎｇ，  Ｔｈｅ  ｆｌａｖｉｖｉｒｕｓ  ＮＳ１  ｐｒｏｔｅｉｎ：  ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  ａｎｄ  ｓｔｒｕｃｔｕｒａｌ  ｂｉｏｌｏｇｙ，  ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，  ｒｏｌｅ  ｉｎ  ｐａｔｈｏｇｅｎｅｓｉｓ  ａｎｄ  ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ  ａｓ  ａ  ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃ  ｂｉｏｍａｒｋｅｒ．  Ａｎｔｉｖｉｒａｌ  Ｒｅｓ．  ９８，  １９２−２０８  （２０１３）
【非特許文献１８】Ｌ．  Ｄａｉ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅｓ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｚｉｋａ  Ｖｉｒｕｓ  Ｅｎｖｅｌｏｐｅ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  ａｎｄ  Ｉｔｓ  Ｃｏｍｐｌｅｘ  ｗｉｔｈ  ａ  Ｆｌａｖｉｖｉｒｕｓ  Ｂｒｏａｄｌｙ  Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ  Ａｎｔｉｂｏｄｙ．  Ｃｅｌｌ  Ｈｏｓｔ  Ｍｉｃｒｏｂｅ  （２０１６），  ｄｏｉ：１０．１０１６／ｊ．ｃｈｏｍ．２０１６．０４．０１３
【非特許文献１９】Ｄ．  Ｓｉｒｏｈｉ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｔｈｅ  ３．８  Å  ｒｅｓｏｌｕｔｉｏｎ  ｃｒｙｏ−ＥＭ  ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ  ｏｆ  Ｚｉｋａ  ｖｉｒｕｓ．  Ｓｃｉｅｎｃｅ，  ａａｆ５３１６  （２０１６）
【非特許文献２０】Ｊ．  Ｋｉｍ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｚｉｋａ  ｖｉｒｕｓ  ＮＳ１  ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ  ｒｅｖｅａｌｓ  ｄｉｖｅｒｓｉｔｙ  ｏｆ  ｅｌｅｃｔｒｏｓｔａｔｉｃ  ｓｕｒｆａｃｅｓ  ａｍｏｎｇ  ｆｌａｖｉｖｉｒｕｓｅｓ，  １−６  （２０１６）
【非特許文献２１】Ｓ．  Ｂ．  Ｈａｌｓｔｅａｄ，  Ｄｅｎｇｕｅ  Ａｎｔｉｂｏｄｙ−Ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ  Ｅｎｈａｎｃｅｍｅｎｔ：  Ｋｎｏｗｎｓ  ａｎｄ  Ｕｎｋｎｏｗｎｓ．  Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ  Ｓｐｅｃｔｒ．  ２，  ２４９−２７１  （２０１４）
【非特許文献２２】Ｓ．  Ｂ．  Ｈａｌｓｔｅａｄ，  Ｎｅｕｔｒａｌｉｚａｔｉｏｎ  ａｎｄ  ａｎｔｉｂｏｄｙ−ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ  ｅｎｈａｎｃｅｍｅｎｔ  ｏｆ  ｄｅｎｇｕｅ  ｖｉｒｕｓｅｓ．  Ａｄｖ  Ｖｉｒｕｓ  Ｒｅｓ．  ６０，  ４２１−４６７  （２００３）
【非特許文献２３】Ｇ．  Ｓｃｒｅａｔｏｎ，  Ｊ．  Ｍｏｎｇｋｏｌｓａｐａｙａ，  Ｓ．  Ｙａｃｏｕｂ，  Ｃ．  Ｒｏｂｅｒｔｓ，  Ｎｅｗ  ｉｎｓｉｇｈｔｓ  ｉｎｔｏ  ｔｈｅ  ｉｍｍｕｎｏｐａｔｈｏｌｏｇｙ  ａｎｄ  ｃｏｎｔｒｏｌ  ｏｆ  ｄｅｎｇｕｅ  ｖｉｒｕｓ  ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ．  Ｎａｔ  Ｒｅｖ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．  １５，  ７４５−７５９  （２０１５）
【非特許文献２４】Ｓ．  Ｂ．  Ｈａｌｓｔｅａｄ，  Ｎｅｕｔｒａｌｉｚａｔｉｏｎ  ａｎｄ  ａｎｔｉｂｏｄｙ−ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ  ｅｎｈａｎｃｅｍｅｎｔ  ｏｆ  ｄｅｎｇｕｅ  ｖｉｒｕｓｅｓ．  Ａｄｖ  Ｖｉｒｕｓ  Ｒｅｓ．  ６０，  ４２１−４６７  （２００３）
【非特許文献２５】Ｓ．  Ｂ．  Ｈａｌｓｔｅａｄ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｄｅｎｇｕｅ  ｈｅｍｏｒｒｈａｇｉｃ  ｆｅｖｅｒ  ｉｎ  ｉｎｆａｎｔｓ：  ｒｅｓｅａｒｃｈ  ｏｐｐｏｒｔｕｎｉｔｉｅｓ  ｉｇｎｏｒｅｄ．  Ｅｍｅｒｇｉｎｇ  Ｉｎｆｅｃｔ  Ｄｉｓ．  ８，  １４７４−１４７９  （２００２）
【非特許文献２６】Ｔ．  Ｈ．  Ｎｇｕｙｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｄｅｎｇｕｅ  ｈｅｍｏｒｒｈａｇｉｃ  ｆｅｖｅｒ  ｉｎ  ｉｎｆａｎｔｓ：  ａ  ｓｔｕｄｙ  ｏｆ  ｃｌｉｎｉｃａｌ  ａｎｄ  ｃｙｔｏｋｉｎｅ  ｐｒｏｆｉｌｅｓ．  Ｊ  Ｉｎｆｅｃｔ  Ｄｉｓ．  １８９，  ２２１−２３２  （２００４）
【非特許文献２７】Ａ．  Ｌ．  Ｒｏｔｈｍａｎ，  Ｄｅｎｇｕｅ：  ｄｅｆｉｎｉｎｇ  ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ  ｖｅｒｓｕｓ  ｐａｔｈｏｌｏｇｉｃ  ｉｍｍｕｎｉｔｙ．  Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ｉｎｖｅｓｔ．  １１３，  ９４６−９５１  （２００４）
【非特許文献２８】Ｄｅｊｎｉｒａｔｔｉｓａｉ  Ｗ，  Ｓｕｐａｓａ  Ｐ，  Ｗｏｎｇｗｉｗａｔ  Ｗ，  Ｒｏｕｖｉｎｓｋｉ  Ａ，  Ｂａｒｂａ−Ｓｐａｅｔｈ  Ｇ，  Ｄｕａｎｇｃｈｉｎｄａ  Ｔ，  Ｓａｋｕｎｔａｂｈａｉ  Ａ，  Ｃａｏ−Ｌｏｒｍｅａｕ  ＶＭ，  Ｍａｌａｓｉｔ  Ｐ，  Ｒｅｙ  ＦＡ，  Ｍｏｎｇｋｏｌｓａｐａｙａ  Ｊ，  Ｓｃｒｅａｔｏｎ  ＧＲ：  Ｄｅｎｇｕｅ  ｖｉｒｕｓ  ｓｅｒｏ−ｃｒｏｓｓ−ｒｅａｃｔｉｖｉｔｙ  ｄｒｉｖｅｓ  ａｎｔｉｂｏｄｙ−ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ  ｅｎｈａｎｃｅｍｅｎｔ  ｏｆ  ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ  ｗｉｔｈ  ｚｉｋａ  ｖｉｒｕｓ．  Ｎａｔ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．  ２０１６  Ｊｕｎ  ２３．  ｄｏｉ：  １０．１０３８／ｎｉ．３５１５．  ［Ｅｐｕｂ  ａｈｅａｄ  ｏｆ  ｐｒｉｎｔ］
【０００９】
前記に鑑みて、本発明の目的は、ジカウイルス（ＺＩＫＶ）を強力に中和する多重特異性抗体を提供することである。そのような抗体は、好ましくは、ジカウイルス感染の抗体依存性増強（ＡＤＥ）に寄与しない。また、本発明の目的は、ＺＩＫＶエスケープ変異体の生成を排除又は最小限にする高度に特異的な抗ＺＩＫＶ抗体提供することである。
【００１０】
本発明の根底にある目的は、特許請求される主題によって解決される。
【００１１】
以下、本発明を詳細に説明するが、本発明は、本明細書に記載の特定の方法、プロトコル、及び試薬に、これらは変わる可能性があるので、限定されないことを理解されたい。また、本明細書で使用する用語は、添付の特許請求の範囲によってのみ限定される本発明の範囲を限定するものではないことを理解されたい。特段の断りがない限り、本明細書で使用される全ての技術用語及び科学用語は、当業者によって通常理解されるのと同じ意味を有する。
【００１２】
以下に、本発明の要素について説明する。これら要素は、具体的な実施形態と共に列挙されるが、これらを任意の方式で任意の数組み合わせて更なる実施形態を生み出すことができることを理解すべきである。様々に記載される実施例及び好ましい実施形態は、本発明を明示的に記載される実施形態に限定することを意図するものではない。この記載は、明示的に記載された実施形態を任意の数の開示された及び／又は好ましい要素と組み合わせる実施形態をサポート及び包含すると理解すべきである。更に、特に指定しない限り、本願における全ての記載された要素の任意の入れ換え及び組合せが本願の記載によって開示されるとみなすべきである。
【００１３】
本明細書及びその後に続く特許請求の範囲全体を通して、特に必要としない限り、用語「含む」並びに「含み」及び「含んでいる」等の変形は、指定されている部材、整数、又は工程を含むが、任意の他の指定されていない部材、整数、又は工程を除外するものではないことを意味すると理解される。用語「からなる」は、任意の他の指定されていない部材、整数、又は工程が除外される、用語「含む」の具体的な実施形態である。本発明において、用語「含む」は、用語「からなる」を包含する。したがって、用語「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」は、「含む（ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ）」及び「からなる（ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇ）」を包含し、例えば、Ｘを「含む」組成物は、Ｘのみからなっていてもよく、追加の何かを含んでいてもよい（例えば、Ｘ＋Ｙ）。
【００１４】
用語「ａ」及び「ａｎ」及び「ｔｈｅ」、並びに本発明の説明（特に、特許請求の範囲）において使用される同様の参照は、本明細書に指定されているか又は文脈上明示的に否定されていない限り、単数及び複数の両方を網羅すると解釈すべきである。本明細書における値の範囲の列挙は、単に、範囲内の各別個の値を個別に参照する簡易的な方法として機能することを意図する。本明細書において特に指定しない限り、各個別の値は、本明細書に個々に列挙されているかのように明細書に組み込まれる。明細書中のいずれの言語も、本発明の実施に必須の任意の請求されていない要素を示すと解釈されるべきではない。
【００１５】
用語「実質的に」は、「完全に」を除外するものではなく、例えば、Ｙを「実質的に含まない」組成物は、Ｙを完全に含んでいなくてもよい。必要な場合、用語「実質的に」は、本発明の定義から省略されることもある。
【００１６】
数値ｘに関連する用語「約」は、ｘ±１０％を意味する。
【００１７】
用語「疾患」は、本明細書で使用するとき、ヒト若しくは動物の身体又は正常な機能が損なわれているその部分のうちの１つの異常な状態を全て反映し、典型的には、識別可能な徴候及び症状によって顕在化し、且つヒト又は動物の寿命又は生活の質を低減するという点で、用語「疾病」及び（健康状態のような）「状態」と略同義であることを意図し、互換的に使用される。
【００１８】
本明細書で使用するとき、被験体又は患者の「治療」に対する言及は、防止、予防、軽減、寛解、及び療法を含むことを意図する。用語「被験体」又は「患者」は、本明細書では互換的に使用されて、ヒトを含む全ての哺乳類を意味する。被験体の例としては、ヒト、ウシ、イヌ、ネコ、ウマ、ヤギ、ヒツジ、ブタ、及びウサギが挙げられる。一実施形態では、患者はヒトである。
【００１９】
本明細書で使用するとき、用語「抗原結合断片」、「断片」、及び「抗体断片」は、抗体の抗原結合活性を保持している本発明の抗体の任意の断片を指すために互換的に使用される。抗体断片の例としては、単鎖抗体、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖ、又はｓｃＦｖが挙げられるが、これらに限定されない。更に、用語「抗体」は、本明細書で使用するとき、抗体及びその抗原結合断片の両方を含む。
【００２０】
本明細書で使用するとき、用語「抗体」は、本発明に係る特徴的な性質が保持されている限り、抗体全体、抗体断片、具体的には、抗原結合断片、ヒト抗体、キメラ抗体、ヒト化抗体、組み換え抗体、及び遺伝子操作された抗体（変異体又は突然変異抗体）を含むがこれらに限定されない様々な形態の抗体を包含する。ヒト抗体及びモノクローナル抗体が好ましく、ヒトモノクローナル抗体、具体的には、組み換えヒトモノクローナル抗体が特に好ましい。モノクローナル抗体が好ましく、ヒトＣＤＲ又はヒト可変領域を有するモノクローナル抗体が特に好ましい。特に、本発明に係る抗体又はその抗原結合断片は、好ましくはヒト抗体に由来する（即ち、ヒト抗体のＣＤＲ及び／又は可変領域を含む）。より好ましくは、本発明に係る抗体又はその抗原結合断片は、ヒト抗体の定常領域も含む。最も好ましくは、本発明に係る抗体の全ての定常及び可変領域、又はその抗原結合断片は、ヒト起源のもの、即ち、ヒト抗体の定常領域及び可変領域などのヒトの定常領域及びヒトの可変領域のものである。
【００２１】
ヒト抗体は、当技術分野において周知である（ｖａｎ  Ｄｉｊｋ，Ｍ．Ａ．，ａｎｄ  ｖａｎ  ｄｅ  Ｗｉｎｋｅｌ，Ｊ．Ｇ．，Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｃｈｅｍ．Ｂｉｏｌ．５（２００１）３６８−３７４）。ヒト抗体は、免疫時に、内因性免疫グロブリンが産生されていなくてもヒト抗体の完全レパートリー又はセレクションを産生することができるトランスジェニック動物（例えば、マウス）においても産生され得る。かかる生殖系列突然変異体マウスにヒト生殖系列免疫グロブリン遺伝子アレイを移植すると、抗原チャレンジ時にヒト抗体が産生される（例えば、Ｊａｋｏｂｏｖｉｔｓ，Ａ．，ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ９０（１９９３）２５５１−２５５５；Ｊａｋｏｂｏｖｉｔｓ，Ａ．，ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ  ３６２（１９９３）２５５−２５８；Ｂｒｕｇｇｅｍａｎｎ，Ｍ．，ｅｔ  ａｌ．，Ｙｅａｒ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．７（１９９３）３３４０を参照）。ヒト抗体は、ファージディスプレイライブラリでも産生され得る（Ｈｏｏｇｅｎｂｏｏｍ，Ｈ．Ｒ．，ａｎｄ  Ｗｉｎｔｅｒ，Ｇ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２２７（１９９２）３８１−３８８；Ｍａｒｋｓ，Ｊ．Ｄ．，ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２２２（１９９１）５８１−５９７）。Ｃｏｌｅ等及びＢｏｅｒｎｅｒ等の技術も、ヒトモノクローナル抗体を調製するために利用可能である（Ｃｏｌｅ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  ａｎｄ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｔｈｅｒａｐｙ，Ａｌａｎ  Ｒ．Ｌｉｓｓ，ｐ．７７（１９８５）；及びＢｏｅｒｎｅｒ，Ｐ．，ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４７（１９９１）８６−９５）。好ましくは、ヒトモノクローナル抗体は、Ｔｒａｇｇｉａｉ  Ｅ，Ｂｅｃｋｅｒ  Ｓ，Ｓｕｂｂａｒａｏ  Ｋ，Ｋｏｌｅｓｎｉｋｏｖａ  Ｌ，Ｕｅｍａｔｓｕ  Ｙ，Ｇｉｓｍｏｎｄｏ  ＭＲ，Ｍｕｒｐｈｙ  ＢＲ，Ｒａｐｐｕｏｌｉ  Ｒ，Ｌａｎｚａｖｅｃｃｈｉａ  Ａ．（２００４）：Ａｎ  ｅｆｆｉｃｉｅｎｔ  ｍｅｔｈｏｄ  ｔｏ  ｍａｋｅ  ｈｕｍａｎ  ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  ｆｒｏｍ  ｍｅｍｏｒｙ  Ｂ  ｃｅｌｌｓ：ｐｏｔｅｎｔ  ｎｅｕｔｒａｌｉｚａｔｉｏｎ  ｏｆ  ＳＡＲＳ  ｃｏｒｏｎａｖｉｒｕｓ．Ｎａｔ  Ｍｅｄ．１０（８）：８７１−５に記載の通り、改善されたＥＢＶ−Ｂ細胞の不死化を使用することによって調製される。用語「ヒト抗体」は、本明細書で使用するとき、本明細書に記載されている本発明に係る性質を生じさせるために、例えば可変領域又は定常領域が改変されたかかる抗体も含む。
【００２２】
本発明の抗体は、任意のアイソタイプ（例えば、ＩｇＡ、ＩｇＧ、ＩｇＭ、即ち、α、γ、又はμ重鎖）であってよいが、好ましくは、ＩｇＧである。ＩｇＧアイソタイプの中でも、抗体は、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、又はＩｇＧ４のサブクラスであってよく、ＩｇＧ１が好ましい。本発明の抗体は、κ又はλ軽鎖を有していてよい。
【００２３】
本発明に係る抗体又はその抗原結合断片は、精製抗体又は単鎖抗体、例えば、二重特異性単鎖Ｆｖ断片（ｓｃＦｖ）であることができる。
【００２４】
また、本発明は、本発明の抗体の断片、特に、前記抗体の抗原結合活性を保持している断片を提供する。特許請求の範囲を含む明細書は、一部の箇所では、抗体の抗原結合断片、抗体断片、変異体、及び／又は誘導体に明示的に言及するが、用語「抗体」又は「本発明の抗体」は、抗体の全てのカテゴリー、即ち、抗体の抗原結合断片、抗体断片、変異体、及び誘導体を含むことが理解される。
【００２５】
本発明の抗体の断片は、酵素、例えばペプシン若しくはパパインによる切断を含む方法によって、及び／又は化学還元によりジスルフィド結合を切断することによって前記抗体から得ることができる。或いは、抗体の断片は、重鎖又は軽鎖の配列の一部のクローニング及び発現によって得ることができる。例えば、本発明は、本発明の抗体由来のＣＤＲを含む二重特異性ｓｃＦｖを含む。
【００２６】
本発明の抗体断片は、一価又は多価相互作用を付与し得、様々な構造に含有され得る。例えば、ｓｃＦｖ分子を合成して、三価「トリアボディ」又は四価「テトラボディ」を作製することができる。ｓｃＦｖ分子は、Ｆｃ領域のドメインを含んでいてよく、その結果、二価ミニボディが生じる。
【００２７】
本発明に係る抗体は、精製形態で提供されてもよい。典型的には、抗体は、他のポリペプチドを実質的に含まない組成物、例えば、前記組成物の９０（重量）％未満、通常６０％未満、より通常は５０％未満が他のポリペプチドで構成される組成物中に存在する。
【００２８】
本発明に係る抗体は、ヒト及び／又は非ヒト（又は異種）宿主、例えば、マウスにおいて免疫原性であり得る。例えば、前記抗体は、非ヒト宿主では免疫原性であるが、ヒト宿主では免疫原性でないイディオトープを有し得る。ヒトで使用するための本発明の抗体は、マウス、ヤギ、ウサギ、ラット、非霊長類哺乳類等の宿主から容易には単離することができず、且つ一般的にヒト化によって又はゼノマウスから入手することができないものを含む。
【００２９】
本明細書で使用するとき、「中和抗体」は、宿主において感染を開始及び／又永続化させる病原体の能力を中和する、即ち、予防、阻害、低減、妨害、又は干渉することができるものである。用語「中和抗体」及び「中和する抗体」は、本明細書では互換的に使用される。これら抗体は、単独で使用してもよく、適切な製剤化に際して予防剤又は治療剤として、能動的ワクチン接種に関連して、診断ツールとして、又は本明細書に記載される生産ツールとして組み合わせて使用してもよい。
【００３０】
用量は、多くの場合、体重に関連して表される。したがって、［ｇ、ｍｇ、又は他の単位］／ｋｇ（又はｇ、ｍｇ等）として表される用量は、たとえ用語「体重」が明示的に言及されていないとしても、通常「体重１ｋｇ（又はｇ、ｍｇ等）当たりの」［ｇ、ｍｇ、又は他の単位］を指す。
【００３１】
用語「特異的結合」及び類似の参照は、非特異的固着を包含しない。
【００３２】
用語「ワクチン」とは、本明細書で使用するとき、典型的には、少なくとも１つの抗原、好ましくは免疫原を提供する予防又は治療的物質であると理解される。抗原又は免疫原は、ワクチン接種に好適な任意の物質に由来し得る。例えば、抗原又は免疫原は、細菌若しくはウイルス粒子等の病原体、又は腫瘍若しくは癌性組織に由来し得る。抗原又は免疫原は、身体の適応免疫系を刺激して適応免疫応答を提供する。具体的には、「抗原」又は「免疫原」は、典型的には、免疫系、好ましくは適応免疫系によって認識され得、且つ例えば、適応免疫応答の一部として抗体及び／又は抗原特異的Ｔ細胞を形成することによって、抗原特異的免疫応答を誘発することができる物質を指す。典型的には、抗原は、ＭＨＣ又はＴ細胞によって提示され得るペプチド又はタンパク質であってもよく、これらを含んでいてもよい。
【００３３】
本明細書で使用するとき、「配列変異体」（「変異体」とも称する）は、レファレンス配列における任意の変化を指し、レファレンス配列は、「配列の表及び配列番号」（配列表）に列挙されている配列、即ち、配列番号１〜配列番号２７３のいずれかである。したがって、用語「配列変異体」は、ヌクレオチド配列変異体及びアミノ酸配列変異体を含む。注目すべきは、本明細書に記載される配列変異体は、特に、機能的配列変異体、即ち、例えば抗体の生物学的機能を維持する配列変異体である。本発明の文脈において、そのような維持された生物学的機能は、好ましくは、ＺＩＫＶ感染の中和及び／又はＺＩＫＶ  Ｅタンパク質への抗体の結合である。したがって、好ましい配列変異体は、参照配列と少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の配列同一性を有する機能的配列変異体である。本明細書に使用される表現「少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の配列同一性を有する機能的配列変異体」という表現は、（ｉ）配列変異体が本明細書に記載されるように機能的であり、且つ（ｉｉ）％配列同一性が高いほど、より好ましい配列変異体であることを意味する。換言すれば、表現「少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の配列同一性を有する機能的配列変異体」は、特に、機能的配列改変体がそれぞれの参照配列に対して少なくとも７０％の配列同一性、好ましくは少なくとも７５％の配列同一性、好ましくは少なくとも８０％の配列同一性、より好ましくは少なくとも８５％の配列同一性、より好ましくは少なくとも８８％の配列同一性、更により好ましくは少なくとも９０％の配列同一性、、更により好ましくは少なくとも９２％の配列同一性、更により好ましくは少なくとも９５％の配列同一性、更により好ましくは少なくとも９６％の配列同一性、特に好ましくは少なくとも９７％の配列同一性、特に好ましくは少なくとも９８％の配列同一性、最も好ましくは少なくとも９９％の配列同一性を有することを意味する。
【００３４】
用語「配列変異体」は、特に、参照配列と比較して突然変異及び／又は置換を含むそのような変異体を含む。Ｆｃ部分配列の例示的な変異体には、ＣＨ２  ４、ＣＨ２  ５、又はその両方の位置でＬからＡへの置換を有するものが含まれるが、これらに限定されない。
【００３５】
配列同一性は、通常、レファレンス配列（即ち、本願に列挙される配列）の完全長に対して計算される。本明細書において言及するとき、同一性パーセントは、例えば、ＮＣＢＩ（ｔｈｅ  Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｃｅｎｔｅｒ  ｆｏｒ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ；ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｎｃｂｉ．ｎｌｍ．ｎｉｈ．ｇｏｖ／）によって指定されたデフォルトパラメータ［Ｂｌｏｓｕｍ６２マトリクス；ギャップオープンペナルティ＝１１、及びギャップエクステンションペナルティ＝１］を用いるＢＬＡＳＴを使用して決定することができる。
【００３６】
本明細書で使用するとき、「ヌクレオチド配列変異体」は、レファレンス配列におけるヌクレオチドのうちの１以上が欠失若しくは置換されているか、又は１以上のヌクレオチドがレファレンスヌクレオチド配列の配列に挿入されている、変化した配列を有する。ヌクレオチドは、標準的な一文字表記（Ａ、Ｃ、Ｇ、又はＴ）によって本明細書に言及される。遺伝子コードの縮重に起因して、「ヌクレオチド配列変異体」は、それぞれのレファレンスアミノ酸配列を変化させる、即ち、「アミノ酸配列変異体」を生じさせる場合もあり、そうではない場合もある。好ましい配列変異体は、アミノ酸配列変異体を生じさせない（サイレント突然変異）ヌクレオチド配列変異体である。しかし、他の非サイレント突然変異も範囲内であり、具体的には、レファレンスアミノ酸配列と少なくとも８０％、好ましくは少なくとも９０％、より好ましくは少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を生じさせる、突然変異ヌクレオチド配列も範囲内である。
【００３７】
「アミノ酸配列変異体」は、レファレンスアミノ酸におけるアミノ酸のうちの１以上が欠失、置換、又は１以上のアミノ酸がレファレンスアミノ酸配列の配列に挿入されている、変化した配列を有する。変化の結果、アミノ酸配列変異体は、レファレンス配列と少なくとも８０％同一、好ましくは少なくとも９０％同一、より好ましくは少なくとも９５％同一、最も好ましくは少なくとも９９％同一のアミノ酸配列を有する。少なくとも９０％同一の変異体配列は、レファレンス配列の１００アミノ酸当たり１０以下の変化、即ち、欠失、挿入、又は置換の任意の組合せを有する。
【００３８】
非保存的アミノ酸置換を有することが可能であるが、置換は、置換されたアミノ酸がレファレンス配列における対応するアミノ酸と類似の構造的又は化学的性質を有する保存的アミノ酸置換であることが好ましい。一例として、保存的アミノ酸置換は、ある脂肪族又は疎水性のアミノ酸（例えば、アラニン、バリン、及びイソロイシン）の別の脂肪族又は疎水性のアミノ酸による置換；あるヒドロキシル含有アミノ酸（例えば、セリン及びトレオニン）の別のヒドロキシル含有アミノ酸による置換；ある酸性残基（例えば、グルタミン酸又はアスパラギン酸）の別の酸性残基による置換；あるアミド含有残基（例えば、アスパラギン及びグルタミン）の別のアミド含有残基による置換；ある芳香族残基（例えば、フェニルアラニン及びチロシン）の別の芳香族残基による置換；ある塩基性残基（例えば、リジン、アルギニン、及びヒスチジン）の別の塩基性残基による置換；並びにある小アミノ酸（例えば、アラニン、セリン、トレオニン、メチオニン、及びグリシン）の別の小アミノ酸による置換を含む。
【００３９】
アミノ酸配列の挿入は、１残基から１００以上の残基を含有するポリペプチドに及ぶ長さの範囲のアミノ及び／又はカルボキシル末端融合、並びに単一又は複数のアミノ酸残基の配列内挿入を含む。末端挿入の例としては、アミノ酸配列のＮ又はＣ末端のレポーター分子又は酵素への融合が挙げられる。
【００４０】
重要なことに、配列変異体における変化は、それぞれのレファレンス配列の機能、本願の場合、例えば、抗体又はその抗原結合断片の配列が同じエピトープに結合する及び／又はＺＩＫＶの感染を十分に中和する機能を消失させるものではない。かかる機能を消失させることなしにそれぞれどのヌクレオチド及びアミノ酸残基を置換、挿入、又は欠失させることができるかを決定するための指針は、当技術分野において周知のコンピュータプログラムを使用することによって見出される。
【００４１】
本明細書で使用するとき、指定の核酸、ペプチド、ポリペプチド、又はタンパク質に「由来する」核酸配列又はアミノ酸配列は、核酸、ペプチド、ポリペプチド、又はタンパク質の起源を指す。好ましくは、特定の配列に由来する核酸配列又はアミノ酸配列は、これらが由来する配列又はその一部と本質的に同一のアミノ酸配列を有し、「本質的に同一」とは、上に定義した配列変異体を含む。好ましくは、特定のペプチド又はタンパク質に由来する核酸配列又はアミノ酸配列は、特定のペプチド又はタンパク質における対応するドメインに由来する。それに関して、「対応する」とは、特に、同じ機能に言及する。例えば、「細胞外ドメイン」は、（別のタンパク質の）別の「細胞外ドメイン」に対応する、又は「膜貫通ドメイン」は、（別のタンパク質の）別の「膜貫通ドメイン」に対応する。したがって、ペプチド、タンパク質、及び核酸の「対応する」部分は、当業者によって容易に同定可能である。同様に、他の配列に「由来する」配列は、通常、前記配列中にその起源を有することが当業者によって容易に同定可能である。
【００４２】
好ましくは、別の核酸、ペプチド、ポリペプチド、又はタンパク質に由来する核酸配列又はアミノ酸配列は、（それが由来する）出発核酸、ペプチド、ポリペプチド、又はタンパク質と同一であり得る。しかし、別の核酸、ペプチド、ポリペプチド、又はタンパク質に由来する核酸配列又はアミノ酸配列は、（それが由来する）出発核酸、ペプチド、ポリペプチド、又はタンパク質に対して１以上の突然変異を有していてもよく、具体的には、別の核酸、ペプチド、ポリペプチド、又はタンパク質に由来する核酸配列又はアミノ酸配列は、（それが由来する）出発核酸、ペプチド、ポリペプチド、又はタンパク質の上記機能性配列変異体であってよい。例えば、ペプチド／タンパク質において、１以上のアミノ酸残基を他のアミノ酸残基で置換してもよく、１以上のアミノ酸残基の挿入又は欠失が生じていてもよい。
【００４３】
本明細書で使用するとき、用語「突然変異」は、レファレンス配列、例えば、対応するゲノム配列と比較した、核酸配列及び／又はアミノ酸配列の変化に関する。例えばゲノム配列と比較した突然変異は、（自然界に存在する）体細胞突然変異、自然突然変異、例えば、酵素、化学物質、若しくは放射線によって誘導される誘導突然変異、又は部位特異的突然変異誘発（核酸配列及び／又はアミノ酸配列を特異的且つ故意に変化させるための分子生物学的方法）によって得られる突然変異であってよい。したがって、用語「突然変異」又は「突然変異する」とは、例えば、核酸配列及び／又はアミノ酸配列において突然変異を物理的に作製することも含むと理解されるものとする。突然変異は、１以上のヌクレオチド又はアミノ酸の置換、欠失、及び挿入に加えて、幾つかの連続するヌクレオチド又はアミノ酸の逆位も含む。アミノ酸配列に突然変異を生じさせるために、好ましくは、（組み換え）突然変異型ポリペプチドを発現させるために、前記アミノ酸配列をコードしているヌクレオチド配列に突然変異を導入してよい。突然変異は、例えば、あるアミノ酸をコードしている核酸分子のコドンを、例えば部位特異的突然変異誘発によって、変化させて異なるアミノ酸をコードしているコドンを生じさせることにより、又は核酸分子の１以上のヌクレオチドを突然変異させる必要無しに、ポリペプチドをコードしている核酸分子のヌクレオチド配列を理解し、ポリペプチドの変異体をコードしているヌクレオチド配列を含む核酸分子の合成を設計することによって、配列変異体を合成することにより行ってよい。
【００４４】
本明細書の本文中には幾つかの文献が引用されている。本明細書中に引用した各文献（全ての特許、特許出願、科学刊行物、製造者の明細書、指示書などを含む）は、上記又は下記のいずれかにかかわらず、参照によりその全体を本明細書に援用する。本明細書中のいかなるものも、本発明が、先行する発明によってそのような開示よりも先行する資格がないと認めるものとして解釈されるものではない。
【００４５】
本発明は、本明細書に記載の特定の方法、プロトコル、及び試薬に、これらは変わる可能性があるので、限定されないことを理解されたい。また、本明細書で使用する用語は、特定の実施形態を説明するためにのみ用いられるのであって、添付の特許請求の範囲によってのみ限定される本発明の範囲を限定するものではないことを理解されたい。特段の断りがない限り、本明細書で使用される全ての技術用語及び科学用語は、当業者によって通常理解されるのと同じ意味を有する。
【００４６】
異なるジカウイルスエピトープに結合する多重特異性抗体
本発明は、特に、異なるジカウイルスエピトープに特異的に結合する多重特異性抗体及びその抗原結合断片という発見に基づいている。そのような抗体は、ジカウイルスエスケープ変異体の生成を最小化又は排除する。特に、現在のところ、ジカウイルス感染に利用できる予防／治療は存在しない。本発明に係る抗体は、ジカウイルス感染の予防及び治療又は減弱に非常に有効である。更に、ジカウイルスに対する抗体の特異性により、これらの抗体はＡＤＥを誘発せず、むしろＡＤＥをブロックする。
【００４７】
第１の態様において、本発明は、異なるジカウイルスエピトープに特異的に結合する、単離された多重特異性抗体、又はその抗原結合断片を提供する。言い換えれば、本発明は、異なるジカウイルスエピトープに特異的に結合する少なくとも２つのエピトープ結合部位を含む、単離された多重特異性抗体又はその抗原結合断片を提供する。
【００４８】
重要なことに、１つだけの特異性を示す従来の（「通常の」）抗体とは異なり、多重特異性抗体は、少なくとも２つの異なるエピトープに結合することができる。本発明の場合、多重特異性抗体は、（少なくとも２つの）異なるジカウイルスエピトープに特異的に結合する。
【００４９】
したがって、本明細書で使用される「多重特異性」という用語は、異なるジカウイルス（ＺＩＫＶ）タンパク質などの異なる抗原、又は、同一のＺＩＫＶタンパク質などの同一の抗原の上の少なくとも２つの異なるエピトープに結合する能力を意味する。好ましくは、本発明に係る多重特異性抗体又はその抗原結合断片は、同一のＺＩＫＶタンパク質上の少なくとも２つの異なるエピトープ、最も好ましくはジカウイルスエンベロープ（Ｅ）タンパク質上の少なくとも２つの異なるエピトープに結合する。
【００５０】
好ましくは、本発明に係る抗体又はその抗原結合断片は、二重特異性、三重特異性、四重特異性、又は五重特異性であり、より好ましくは前記抗体又はその抗原結合性断片は、二重特異性、三重特異性、又は四重特異性であり、更により好ましくは前記抗体又はその抗原結合断片は、二重特異性又は三重特異性であり、最も好ましくは前記抗体又はその抗原結合断片は、二重特異性である。
【００５１】
本明細書で使用される「二重特異性」、「三重特異性」、「四重特異性」などの用語は、抗体又はその抗原結合断片が結合できる異なるエピトープの数を意味する。例えば、従来の単一特異性ＩｇＧ型抗体は、２つの同一のエピトープ結合部位（パラトープ）を有し、同一のエピトープにのみ結合できる（異なるエピトープには結合できない）。これとは異なり、多重特異性抗体は、少なくとも２つの異なるタイプのエピトープ結合部位（パラトープ）を有し、少なくとも２つの異なるエピトープに結合することができる。本明細書で使用される「パラトープ」という用語は、抗体のエピトープ結合部位を意味する。したがって、用語「パラトープ」及び「エピトープ結合部位」は、本明細書で相互変換可能に使用される。更に、単一の「特異性」とは、単一の抗体における１つ、２つ、３つ、又はそれ以上の同一のパラトープを意味し得る。単一の抗体分子におけるパラトープの実際の数は、「価数」と呼ばれる。好ましくは、本発明に係る抗体又はその抗原結合断片は、二価、三価、四価、六価、又は八価であり、より好ましくは、前記抗体又はその抗原結合断片は、二価又は四価であり、最も好ましくは、前記抗体又はその抗原結合断片は、四価である。
【００５２】
最も好ましくは、本発明に係る抗体又はその抗原結合断片は、二重特異性で四価である。
【００５３】
本発明に係る抗体又はその抗原結合断片は、少なくとも２つの異なるジカウイルスエピトープに特異的に結合する異なるエピトープ結合部位のそれぞれの正確に２つの（同一の）コピーを含むことも好ましい。
【００５４】
例えば、単一のネイティブなＩｇＧ抗体は、２つの同一のパラトープ（２つの同一のコピー）を有するので、単一特異性で二価である。しかし、多重特異性抗体は、少なくとも２つの（異なる）パラトープを含む。したがって、「多重特異性」という用語は、１超のパラトープと、２つ以上の異なるエピトープに結合する能力とを有する抗体及び抗原結合断片を意味する。「多重特異性抗体／抗原結合断片」という用語は、特に上で定義した二重特異性抗体を含むが、典型的には、特に３つ以上の異なるエピトープに結合するタンパク質、例えば、抗体、足場、即ち３つ以上のパラトープを有する抗体も含む。
【００５５】
特に、多重特異性抗体又はその抗原結合断片は、２つ以上のパラトープを含むことができ、抗体のパラトープのいずれもが少なくとも２つの異なるタイプのパラトープに属するようにいくつかのパラトープが同一であることができ、したがって抗体は少なくとも２つの特異性を有する。例えば、本発明に係る多重特異性抗体又はその抗原結合断片は４つのパラトープを含むことができ、各２つのパラトープが同一（即ち、同じ特異性を有する）であり、抗体又はその断片は、二重特異性で四価である（２つの特異性のそれぞれに対して２つの同一のパラトープ）。したがって、「１つの特異性」とは、特に同じ特異性を示す１つ以上のパラトープを意味し（通常、そのような１つ以上のパラトープが同一であることを意味する）、「２つの特異性」は、２つだけの特異性にのみ関与する限り、２、３、４、５、６、又はそれ以上のパラトープによって実現される。例えば、多重特異性抗体は、（少なくとも２つの）特異性ごとに１つの単一のパラトープを含むことができ、即ち、多重特異性抗体は合計で少なくとも２つのパラトープを含む。例えば、二重特異性抗体は、２つの特異性のそれぞれに対して１つの単一のパラトープを含む、即ち、抗体は合計２つのパラトープを含む。最も好ましくは、抗体は、２つの特異性のそれぞれに対して正確に２つの（同一の）パラトープを含む、即ち、抗体は合計で４つのパラトープを含む。或いは、抗体は、２つの特異性のそれぞれについて３つの（同一の）パラトープを含むことができ、即ち、抗体は合計で６つのパラトープを含む。
【００５６】
本明細書で使用される「抗原」という用語は、適応免疫応答の受容体の標的として、特に抗体、Ｔ細胞受容体、及び／又はＢ細胞受容体の標的として機能する任意の構造物質を意味する。「抗原決定基」としても知られる「エピトープ」は、免疫系、特に抗体、Ｔ細胞受容体、及び／又はＢ細胞受容体によって認識される抗原の一部（又は断片）である。したがって、１つの抗原は少なくとも１つのエピトープを有する、即ち、単一の抗原は１つ以上のエピトープを有する。抗原は、（ｉ）ペプチド、ポリペプチド、又はタンパク質、（ｉｉ）多糖、（ｉｉｉ）脂質、（ｉｖ）リポタンパク質又はリポペプチド、（ｖ）糖脂質、（ｖｉ）核酸、又は（ｖｉｉ）低分子薬又は毒素であり得る、したがって、抗原は、ペプチド、タンパク質、多糖、脂質、リポタンパク質及び糖脂質などのそれらの組合せ、核酸（例えば、ＤＮＡ、ｓｉＲＮＡ、ｓｈＲＮＡ、アンチセンスオリゴヌクレオチド、デコイＤＮＡ、プラスミド）、又は低分子薬（例えば、シクロスポリンＡ、パクリタキセル、ドキソルビシン、メトトレキサート、５−アミノレブリン酸）、又はそれらの任意の組合せであることができる。好ましくは、抗原は、（ｉ）ペプチド、ポリペプチド、又はタンパク質、（ｉｉ）多糖、（ｉｉｉ）脂質、（ｉｖ）リポタンパク質又はリポペプチド、及び（ｖ）糖脂質から選択され、より好ましくは、抗原はペプチド、ポリペプチド、又はタンパク質である。
【００５７】
本発明に係る抗体又はその抗原結合断片は、少なくとも２つの異なるジカウイルスエピトープに結合する。少なくとも異なるジカウイルスエピトープは、異なるジカウイルス（ＺＩＫＶ）タンパク質などの異なるジカウイルス抗原、又は同一のＺＩＫＶタンパク質などの同一のジカウイルス抗原の上に位置することができる。ＺＩＫＶ抗原／タンパク質の好ましい例としては、カプシド、ｐｒＭ、エンベロープ、及び非構造タンパク質ＮＳ１、ＮＳ２Ａ、ＮＳ２Ｂ、ＮＳ３、ＮＳ４Ａ、ＮＳ４Ｂ、ＮＳ５、及びＮＳ５Ｂが挙げられる。最も好ましくは、本発明に係る抗体又はその抗原結合断片は、ジカウイルスエンベロープタンパク質（ＺＩＫＶ  Ｅタンパク質）上の（少なくとも２つの）異なるエピトープに結合する。言い換えれば、最も好ましくは、本発明に係る抗体又はその抗原結合断片は、ジカウイルスエンベロープタンパク質（ＺＩＫＶ  Ｅタンパク質）上の異なるエピトープに特異的に結合する少なくとも２つのエピトープ結合部位を含む。ＺＩＫＶは、ヌクレオカプシドコアを含み、これは、コアタンパク質に包まれた１本鎖ＲＮＡを含む。ヌクレオカプシドのコアは、「膜タンパク質」と「エンベロープタンパク質」を有する脂質二重層膜によってカプセル化されている。ＺＩＫＶエンベロープタンパク質（Ｅタンパク質）は、主要な抗原である。ＺＩＫＶ  Ｅタンパク質の構造とドメインは、例えば、Ｄａｉ  Ｌ，  Ｓｏｎｇ  Ｊ，  Ｌｕ  Ｘ，  Ｄｅｎｇ  ＹＱ，  Ｍｕｓｙｏｋｉ  ＡＭ，  Ｃｈｅｎｇ  Ｈ，  Ｚｈａｎｇ  Ｙ，  Ｙｕａｎ  Ｙ，  Ｓｏｎｇ  Ｈ，  Ｈａｙｗｏｏｄ  Ｊ，  Ｘｉａｏ  Ｈ，  Ｙａｎ  Ｊ，  Ｓｈｉ  Ｙ，  Ｑｉｎ  ＣＦ，  Ｑｉ  Ｊ，  Ｇａｏ  ＧＦ．  Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅｓ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｚｉｋａ  Ｖｉｒｕｓ  Ｅｎｖｅｌｏｐｅ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  ａｎｄ  Ｉｔｓ  Ｃｏｍｐｌｅｘ  ｗｉｔｈ  ａ  Ｆｌａｖｉｖｉｒｕｓ  Ｂｒｏａｄｌｙ  Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ  Ａｎｔｉｂｏｄｙ．  Ｃｅｌｌ  Ｈｏｓｔ  Ｍｉｃｒｏｂｅ．  ２０１６  Ｍａｙ  １１；１９（５）：６９６−７０４に記載される。
【００５８】
好ましくは、本発明に係る抗体又はその抗原結合断片が結合する（少なくとも２つの）異なるジカウイルスエピトープは、非重複エピトープ（ｎｏｎ−ｏｖｅｒｌａｐｐｉｎｇ  ｅｐｉｔｏｐｅｓ）である。特に、本発明に係る抗体又はその抗原結合断片が結合する第１のジカウイルスエピトープを形成するアミノ酸は、本発明に係る抗体又はその抗原結合断片が結合する第２のジカウイルスエピトープを形成するアミノ酸と異なる。
【００５９】
本発明に係る抗体又はその抗原結合断片は、任意の抗体フォーマットのものであることができる。特に、多重特異性抗体は、好ましくは、全ＩｇＧ又はＩｇＧ様分子などの「全」抗体を含むが、本発明の文脈における抗原結合断片は、好ましくは、小さな組換えフォーマットを意味する。これは、例えば、二重特異性Ｔ−細胞エンゲージャー（ｅｎｇａｇｅｒｓ）に基づくフォーマット（ＢｉＴＥ（登録商標）（但し、本発明の文脈においては、両方の特異性がジカウイルスを標的とする、したがって、ＢｉＴＥ（登録商標）のＴ細胞特異性は（第２の）ＺＩＫＶ特異性に置き換えられてもよい）、タンデム単鎖可変断片分子（ｔａＦｖ）、ダイアボディ（Ｄｂ）、単鎖ダイアボディ（ｓｃＤｂ）、及びこれらの他の各種誘導体（Ｂｙｒｎｅ  Ｈ．  ｅｔ  ａｌ．  （２０１３）  Ｔｒｅｎｄｓ  Ｂｉｏｔｅｃｈ，  ３１  （１１）：  ６２１−６３２（図２に、各種二重特異性抗体フォーマットが示される）；  Ｗｅｉｄｌｅ  Ｕ．Ｈ．  ｅｔ  ａｌ．  （２０１３）  Ｃａｎｃｅｒ  Ｇｅｎｏｍｉｃｓ  ａｎｄ  Ｐｒｏｔｅｏｍｉｃｓ  １０：  １−１８（特に、図１に、各種二重特異性抗体フォーマットが示される）；及びＣｈａｎ，  Ａ．Ｃ．  ａｎｄ  Ｃａｒｔｅｒ，  Ｐ．Ｊ．  （２０１０）  Ｎａｔ  Ｒｅｖ  Ｉｍｍｕ  １０：  ３０１−３１６（図３に、各種二重特異性抗体フォーマットが示される）に記載される二重特性抗体フォーマットを参照）である。二重特異性抗体フォーマットの例としては、Ｆａｂｓ−ｉｎ−ｔａｎｄｅｍ−Ｉｇ、ＤＶＤ−Ｉｇ、ｑｕａｄｒｏｍａ、化学結合Ｆａｂ（断片抗原結合）、及びＢｉＴＥ（登録商標）（二重特異性Ｔ細胞エンゲージャー）が挙げられるが、これらに限定されない。本発明の一実施形態では、抗体は、好ましくは、Ｆａｂｓ−ｉｎ−ｔａｎｄｅｍ−Ｉｇ（ＦＩＴ−Ｉｇ）又はＤＶＤ−Ｉｇである。
【００６０】
したがって、本発明に係る抗体又はその抗原結合断片は、Ｆａｂｓ−ｉｎ−ｔａｎｄｅｍ−Ｉｇ（ＦＩＴ−Ｉｇ）；ＤＶＤ−Ｉｇ；ハイブリッドハイブリドーマ（クアドローマ）；多重特異性アンチカリンプラットフォーム（Ｐｉｅｒｉｓ）；ダイアボディ；単鎖ダイアボディ；タンデム単鎖Ｆｖ断片；ＴａｎｄＡｂｓ、三重特異性Ａｂｓ（Ａｆｆｉｍｅｄ）（１０５〜１１０ｋＤａ）；Ｄａｒｔｓ（デュアルアフィニティリターゲティング；マクロジェニックス）；二重特異性Ｘｍａｂｓ（Ｘｅｎｃｏｒ）；二重特異性Ｔ細胞エンゲージャー（Ｂｉｔｅｓ；Ａｍｇｅｎ；５５ｋＤａ）；トリプルボディ；トリボディ＝Ｆａｂ−ｓｃＦｖ  Ｆｕｓｉｏｎ  Ｐｒｏｔｅｉｎ（ＣｒｅａｔｉｖｅＢｉｏｌａｂｓ）多官能組換え抗体誘導体（１１０ｋＤａ）；Ｄｕｏｂｏｄｙプラットフォーム（Ｇｅｎｍａｂ）；ドック・アンド・ロックプラットフォーム；ノブインホール（ＫＩＨ）プラットフォーム；ヒト化二重特異性ＩｇＧ抗体（ＲＥＧＮ１９７９）（Ｒｅｇｅｎｅｒｏｎ）；Ｍａｂ２二重特異性抗体（Ｆ−Ｓｔａｒ）；ＤＶＤ−Ｉｇ＝デュアル可変ドメイン免疫グロブリン（Ａｂｂｏｔｔ）；カッパ−ラムダボディ；ＴＢＴＩ＝四価二重特異性タンデムＩｇ；及びＣｒｏｓｓＭａｂを含む群から選択することができる。
【００６１】
本発明に係る抗体又はその抗原結合断片は、ＣｒｏｓｓＭａｂ；ＤＡＦ（ツーインワン）；ＤＡＦ（フォーインワン）；ＤｕｔａＭａｂ；ＤＴ−ＩｇＧ；ノブインインホール共通ＬＣ；ノブインホールアセンブリ；チャージペア；Ｆａｂアーム交換；ＳＥＥＤボディ；トリオマブ；ＬＵＺ−Ｙ；Ｆｃａｂ；κλボディ；及び直交Ｆａｂを含む二重特異性ＩｇＧ様抗体（ＢｓＩｇＧ）から選択することができる。これらの二重特異性抗体フォーマットは、例えば、Ｓｐｉｅｓｓ  Ｃ．，  Ｚｈａｉ  Ｑ．  ａｎｄ  Ｃａｒｔｅｒ  Ｐ．Ｊ．  （２０１５）  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  ６７：  ９５−１０６、特に、図１及び対応する説明、例えば、ｐ．９５〜１０１に示され記載されている。
【００６２】
好ましくは、本発明に係る抗体又はその抗原結合断片は、ナノボディ；ナノボディ−ＨＡＳ；ＢｉＴＥ；ダイアボディ；ＤＡＲＴ；ＴａｎｄＡｂ；ｓｃＤｉａｂｏｄｙ；ｓｃ−ダイアボディ−ＣＨ３；ダイアボディ−ＣＨ３；トリプルボディ；ミニ抗体；ミニボディ；ＴｒｉＢｉミニボディ；ｓｃＦｖ−ＣＨ３  ＫＩＨ；Ｆａｂ−ｓｃＦｖ；ｓｃＦｖ−ＣＨ−ＣＬ−ｓｃＦｖ；Ｆ（ａｂ’）２；Ｆ（ａｂ’）２−ｓｃＦｖ２；ｓｃＦｖ−ＫＩＨ；Ｆａｂ−ｓｃＦｖ−Ｆｃ；四価ＨＣＡｂ；ｓｃダイアボディ−Ｆｃ；ダイアボディ−Ｆｃ；タンデムｓｃＦｖ−Ｆｃ；及びイントラボディを含む二重特異性抗体断片から選択することができる。これらの二重特異性抗体フォーマットは、例えば、Ｓｐｉｅｓｓ  Ｃ．，  Ｚｈａｉ  Ｑ．  ａｎｄ  Ｃａｒｔｅｒ  Ｐ．Ｊ．  （２０１５）  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  ６７：  ９５−１０６、特に、図１及び対応する説明、例えば、ｐ．９５〜１０１に示され記載されている。
【００６３】
より好ましくは、本発明に係る抗体又はその抗原結合断片は、ＤＶＤ−ＩｇＧ；ＩｇＧ（Ｈ）−ｓｃＦｖ；ｓｃＦｖ−（Ｈ）ＩｇＧ；ＩｇＧ（Ｌ）−ｓｃＦｖ；ｓｃＦＶ−（Ｌ）ＩｇＧ；ＩｇＧ（Ｌ，Ｈ）−Ｆｖ；ＩｇＧ（Ｈ）−Ｖ；Ｖ（Ｈ）−ＩｇＧ；ＩｇＧ（Ｌ）−Ｖ；Ｖ（Ｌ）−ＩｇＧ；ＫＩＨ  ＩｇＧ−ｓｃＦａｂ；２ｓｃＦｖ−ＩｇＧ；ＩｇＧ−２ｓｃＦｖ；ｓｃＦｖ４−Ｉｇ；ｓｃＦｖ４−Ｉｇ；  Ｚｙｂｏｄｙ；及びＤＶＩ−ＩｇＧ（フォーインワン）を含む更なる抗原結合部分を有するＩｇＧ付加抗体から選択することができる。これらの二重特異性抗体フォーマットは、例えば、Ｓｐｉｅｓｓ  Ｃ．，  Ｚｈａｉ  Ｑ．  ａｎｄ  Ｃａｒｔｅｒ  Ｐ．Ｊ．  （２０１５）  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  ６７：  ９５−１０６、特に、図１及び対応する説明、例えば、ｐ．９５〜１０１に示され記載されている。これらの抗体フォーマットのうち、ＤＶＤ−Ｉｇ（二重可変ドメイン免疫グロブリン（Ａｂｂｏｔｔ））が更により好ましい。この抗体フォーマットは、例えば、Ｗｕ  Ｃ，  Ｙｉｎｇ  Ｈ，  Ｇｒｉｎｎｅｌｌ  Ｃ，  Ｂｒｙａｎｔ  Ｓ，  Ｍｉｌｌｅｒ  Ｒ，  Ｃｌａｂｂｅｒｓ  Ａ，  Ｂｏｓｅ  Ｓ，  ＭｃＣａｒｔｈｙ  Ｄ，    Ｚｈｕ  ＲＲ，  Ｓａｎｔｏｒａ  Ｌ，  Ｄａｖｉｓ−Ｔａｂｅｒ  Ｒ，  Ｋｕｎｅｓ  Ｙ，  Ｆｕｎｇ  Ｅ，  Ｓｃｈｗａｒｔｚ  Ａ，  Ｓａｋｏｒａｆａｓ  Ｐ，  Ｇｕ  Ｊ，  Ｔａｒｃｓａ  Ｅ，  Ｍｕｒｔａｚａ  Ａ，  Ｇｈａｙｕｒ  Ｔ．  Ｓｉｍｕｌｔａｎｅｏｕｓ  ｔａｒｇｅｔｉｎｇ  ｏｆ  ｍｕｌｔｉｐｌｅ  ｄｉｓｅａｓｅ  ｍｅｄｉａｔｏｒｓ  ｂｙ  ａ  ｄｕａｌ−ｖａｒｉａｂｌｅ−ｄｏｍａｉｎ  ｉｍｍｕｎｏｇｌｏｂｕｌｉｎ．  Ｎａｔ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．  ２００７  Ｎｏｖ；２５（１１）：１２９０−７；又はＤｉＧｉａｍｍａｒｉｎｏ  Ｅ，  Ｇｈａｙｕｒ  Ｔ，  Ｌｉｕ  Ｊ．  Ｄｅｓｉｇｎ  ａｎｄ  ｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ  ｏｆ  ＤＶＤ−ＩｇＴＭ  ｍｏｌｅｃｕｌｅｓ  ｆｏｒ  ｄｕａｌ−ｓｐｅｃｉｆｉｃ  ｔａｒｇｅｔｉｎｇ．  Ｍｅｔｈｏｄｓ  Ｍｏｌ  Ｂｉｏｌ．  ２０１２；８９９：１４５−５６に詳細に記載されている。
【００６４】
最も好ましくは、本発明に係る抗体又はその抗原結合断片は、Ｆａｂｓ−ｉｎ−ｔａｎｄｅｍ−Ｉｇ（ＦＩＴ−Ｉｇ）フォーマットのＩｇＧ付加抗体である。言い換えれば、本発明に係る抗体又はその抗原結合断片は、最も好ましくはＦａｂｓ−ｉｎ−ｔａｎｄｅｍ−Ｉｇ（ＦＩＴ−Ｉｇ）フォーマットのものである。Ｆａｂｓ−ｉｎ−ｔａｎｄｅｍ−Ｉｇ（ＦＩＴ−Ｉｇ）フォーマットは、例えば、その全体を参照により本明細書に援用する国際公開第２０１５／１０３０７２  Ａ１号、又はＧｏｎｇ  Ｓ，  Ｒｅｎ  Ｆ，  Ｗｕ  Ｄ，  Ｗｕ  Ｘ，  Ｗｕ  Ｃ：  Ｆａｂｓ−ｉｎ−ｔａｎｄｅｍ  ｉｍｍｕｎｏｇｌｏｂｕｌｉｎ  ｉｓ  ａ  ｎｏｖｅｌ  ａｎｄ  ｖｅｒｓａｔｉｌｅ  ｂｉｓｐｅｃｉｆｉｃ  ｄｅｓｉｇｎ  ｆｏｒ  ｅｎｇａｇｉｎｇ  ｍｕｌｔｉｐｌｅ  ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ  ｔａｒｇｅｔｓ．  ＭＡｂｓ  ２０１７に詳細に記載されている。ＤＶＤ−Ｉｇと同様に、ＦＩＴ−Ｉｇも二重特異性の四価対称フォーマットである。ＦＩＴ−Ｉｇは、３つのポリペプチドを使用して産生され得る：即ち、ポリペプチド１は通常、好ましくはリンカーなしで、内側Ｆａｂ重鎖のＮ末端領域に融合した外側Ｆａｂの軽鎖を含む。ポリペプチド２は通常、外側Ｆａｂの重鎖可変領域とＣＨ１領域を含み、ポリペプチド３は通常、内側Ｆａｂの軽鎖を含む。したがって、ＦＩＴ−Ｉｇフォーマットの抗体は通常、「内部Ｆａｂ」及び「外部Ｆａｂ」を含む。
【００６５】
好ましくは、本発明に係る抗体又はその抗原結合断片は、ジカウイルス感染を中和する。言い換えれば、本発明に係る抗体又はその抗原結合断片は、好ましくはジカウイルスのウイルス感染性を低下させる。
【００６６】
実験室でウイルス感染性（又は「中和」）を研究及び定量するために、当業者は様々な標準的な「中和アッセイ」を知っている。中和アッセイのために、動物ウイルスを、典型的には、細胞及び／又は細胞系において増殖させる。本発明の文脈では、試験される抗体の存在下（又は非存在下）で培養細胞を一定量のジカウイルス（ＺＩＫＶ）と共にインキュベートする中和アッセイが好ましい。例えば、リードアウトとして、フローサイトメトリを使用することができる。或いは、他のリードアウトも考えられ、例えば、培養上清中に分泌されるＺＩＫＶ非構造タンパク質（例えば、ＺＩＫＶ  ＮＳ１）の量を測定するなどがある。例えば、ＺＩＫＶ非構造タンパク質１（ＮＳ１）抗原捕捉酵素結合免疫吸着測定法（ＥＬＩＳＡ）に基づく組織培養感染用量５０（ＴＣＩＤ５０）試験（ＴＣＩＤ５０−ＥＬＩＳＡ）を、ジカウイルスを滴定するために、標準プラークアッセイに代えて使用することができる。これは、デングウイルス（ＤＥＮＶ）の場合について次の文献に記載されているのと同様にして行われる：Ｌｉ  Ｊ，  Ｈｕ  Ｄ−Ｍ，  Ｄｉｎｇ  Ｘ−Ｘ，  Ｃｈｅｎ  Ｙ，  Ｐａｎ  Ｙ−Ｘ，  Ｑｉｕ  Ｌ−Ｗ，  Ｃｈｅ  Ｘ−Ｙ：  Ｅｎｚｙｍｅ−ｌｉｎｋｅｄ  ｉｍｍｕｎｏｓｏｒｂｅｎｔ  ａｓｓａｙ−ｆｏｒｍａｔ  ｔｉｓｓｕｅ  ｃｕｌｔｕｒｅ  ｉｎｆｅｃｔｉｏｕｓ  ｄｏｓｅ−５０  ｔｅｓｔ  ｆｏｒ  ｔｉｔｒａｔｉｎｇ  ｄｅｎｇｕｅ  ｖｉｒｕｓ．  ＰＬｏＳ  ＯＮＥ  ２０１１，  ６：ｅ２２５５３。このようなアッセイには、例えば、本願に記載のＺＩＫＶ  ＮＳ１結合抗体を有利に使用することができる。
【００６７】
ＺＩＫＶ中和アッセイの好ましい実施形態では、培養細胞、例えばＶｅｒｏ細胞を、試験すべき抗体の存在下又は非存在下で、例えば約４日間、一定量のＺＩＫＶと共にインキュベートする。インキュベート後、細胞を洗浄し、更に培養することができる。ウイルスの感染性を測定するために、フローサイトメトリを使用することができる。この目的のために、例えば２％ホルムアルデヒドで細胞を固定し、例えばＰＢＳ（リン酸緩衝化生理食塩水）中１％ＦＣＳ（ウシ胎仔血清）０．５％サポニンを透過させ、例えばマウス抗体４Ｇ２で染色することができる。次いで、細胞を、Ａｌｅｘａ  Ｆｌｕｏｒ４８８などの染料にコンジュゲートさせたヤギ抗マウスＩｇＧとインキュベートし、フローサイトメトリで分析することができる。或いは、生細胞を、例えばＷＳＴ−１試薬（Ｒｏｃｈｅ）を用いるフローサイトメトリによって検出することができる。そのような中和アッセイに使用される好ましいＺＩＫＶ株は、ＺＩＫＶ  Ｈ／ＰＦ／２０１３である。
【００６８】
本発明の抗体及び抗原結合断片は、高い中和力を有する。無抗体対照と比較して、ジカウイルスの５０％中和に必要な抗体の濃度（ＩＣ５０）は、例えば、最大約３μｇ／ｍｌ又は最大約１μｇ／ｍｌである。好ましくは、ＺＩＫＶの５０％中和に必要な本発明の抗体の濃度（ＩＣ５０）は、最大約５００ｎｇ／ｍｌであり、より好ましくはＺＩＫＶの５０％中和に必要な本発明の抗体の濃度（ＩＣ５０）は、最大約２５０ｎｇ／ｍｌであり、更により好ましくはＺＩＫＶの５０％中和に必要な本発明の抗体の濃度（ＩＣ５０）は、最大約１５０ｎｇ／ｍｌである。最も好ましくは、ＺＩＫＶの５０％中和に必要な本発明の抗体の濃度（ＩＣ５０）は、約１００ｎｇ／ｍｌ以下、例えば約９０ｎｇ／ｍｌ以下、約８０ｎｇ／ｍｌ以下、約７０ｎｇ／ｍｌ以下、約６０ｎｇ／ｍｌ以下、約５０ｎｇ／ｍｌ以下、約４５ｎｇ／ｍｌ以下、約４０ｎｇ／ｍｌ以下、約３５ｎｇ／ｍｌ以下、約３０ｎｇ／ｍｌ以下、約２５ｎｇ／ｍｌ以下、約２０ｎｇ／ｍｌ以下、又は特に好ましくは約１５ｎｇ／ｍｌ以下である。特に、ＺＩＫＶの５０％中和に必要な本発明の抗体の濃度（ＩＣ５０）は、好ましくは約５０ｎｇ／ｍｌ以下である。これは、ＺＩＫＶの５０％中和には、ごく低濃度の抗体しか必要とさらないことを意味する。ＺＩＫＶの５０％中和に必要とされる本発明の抗体の濃度（ＩＣ５０）は、当業者に知られている標準中和アッセイを用いて、又は特に上述のようにして測定することができる。
【００６９】
一般に、抗体の結合は、当業者によく知られた標準的なＥＬＩＳＡ（酵素結合免疫吸着測定法）の使用によって評価することができる。例示的な標準的ＥＬＩＳＡは、以下のように行うことができる。ＥＬＩＳＡプレートを、それに対する抗体の結合が試験される例えばＰＢＳ中のタンパク質／複合体／粒子（例えば、以下に説明するＤＥＮＶ結合の場合、ＤＥＮＶ  Ｅタンパク質及び／又はＤＥＮＶ  ＶＬＰを使用する）の十分量（例えば、１μｇ／ｍｌ）でコーティングする（例えば、４℃で一晩）。次いで、プレートを、ＰＢＳ中のウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）の１％ｗ／ｖ溶液でブロッキングし、試験する抗体と共にインキュベートする（例えば、室温で約１．５時間）。洗浄後、例えば、アルカリホスファターゼと結合されたヤギ抗ヒトＩｇＧを使用して抗体の結合を調べることができる。その後、プレートを洗浄し、必要な基質（例えば、ｐ−ＮＰＰ）を加え、プレートを、例えば４０５ｎｍで読み取ることができる。抗体結合の相対的親和性は、飽和時の最大結合の５０％を達成するために必要なｍＡｂ（ＥＣ５０）の濃度を測定することによって決定することができる。ＥＣ５０値は、可変スロープを有する４パラメータ非線形回帰を適用した結合曲線の補間によって計算することができる。
【００７０】
好ましくは、本発明に係る抗体又はその抗原結合断片は、デングウイルス様粒子及び／又はデングエンベロープタンパク質に本質的に結合しない。より好ましくは、本発明に係る抗体又はその抗原結合断片は、デングウイルス様粒子及び／又は４つのＤＥＮＶ血清型ＤＥＮＶ１、ＤＥＮＶ２、ＤＥＮＶ３、及びＤＥＮＶ４のいずれかのデングエンベロープタンパク質に本質的に結合しない。「本質的に結合しない」とは、抗体又はその抗原結合性断片について、デングウイルス様粒子（ＤＥＮＶ  ＶＬＰ）及び／又はデングエンベロープタンパク質（ＤＥＮＶ  Ｅタンパク質）に対する標準的ＥＬＩＳＡにおいて、１０２ｎｇ／ｍｌまで、好ましくは１０３ｎｇ／ｍｌまで、より好ましくは５×１０３ｎｇ／ｍｌまで、より好ましくは８×１０３ｎｇ／ｍｌまで、最も好ましくは１０４ｎｇ／ｍｌまで、ＥＣ５０値を測定できないことを意味する。換言すれば、標準的ＥＬＩＳＡにおけるデングウイルス様粒子（ＤＥＮＶ  ＶＬＰ）及び／又はデングエンベロープタンパク質（ＤＥＮＶ  Ｅタンパク質）に対する飽和時の最大結合の５０％（ＥＣ５０）を達成するために必要な抗体又はその抗原結合断片の濃度は、典型的には１０２ｎｇ／ｍｌ超、好ましくは１０３ｎｇ／ｍｌ超、より好ましくは５×１０３ｎｇ／ｍｌ超、更により好ましくは８×１０３ｎｇ／ｍｌ超、最も好ましくは１０４ｎｇ／ｍｌ超である。
【００７１】
好ましくは、本発明に係る抗体又はその抗原結合断片は、ジカウイルス感染の抗体依存性増強（ＡＤＥ）に寄与しない。より好ましくは、本発明に係る抗体又はその抗原結合断片は、ジカウイルス感染の抗体依存性増強（ＡＤＥ）をブロックする。
【００７２】
ＡＤＥは、例えば培養細胞又はＫ５６２細胞などの細胞株を用いるフローサイトメトリに基づくアッセイによって評価することができる。例えば、試験すべき抗体及びＺＩＫＶを３７℃で１時間混合し、５０００個のＫ５６２細胞／ウェルに加えることができる。４日間後、細胞を固定し、透過させ、ｍ４Ｇ２で染色する。これは、例えば、中和アッセイについて前述した通りである。感染細胞数は、中和アッセイについて前述したように、フローサイトメトリによって測定した。
【００７３】
好ましくは、本発明に係る抗体又はその抗原結合断片は、ＺＩＫＶエスケープ変異体の生成を排除する。エスケープ変異体の生成の排除は、当業者によって容易に評価することができる。例えば、エスケープ変異体を生成する抗体又は抗体断片の傾向を同定するために、ＺＩＫＶを、サブ中和濃度の（ｓｕｂ−ｎｅｕｔｒａｌｉｚｉｎｇ  ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｓ）対象とする抗体又はその抗原結合断片の存在下で繰り返し継代する。本願の実施例１０及び１１に示されるように、ＺＩＫＶエスケープ変異体（「ＭＡＲＭ」）は通常、ＺＩＫＶの３代目又は４代目の継代後に現れる。したがって、サブ中和濃度の抗体又はその抗原結合断片の存在下でウイルス（ＺＩＫＶ）を５回継代した後でも、ＺＩＫＶエスケープ変異体を同定できない場合、抗体は、ＺＩＫＶエスケープ変異体の生成を排除すると見なすことができる。より好ましくは、サブ中和濃度の本発明に係る抗体又はその抗原結合断片の存在下でウイルス（ＺＩＫＶ）を６回継代した後に、ＺＩＫＶエスケープ変異体を同定できない。更により好ましくは、サブ中和濃度の本発明に係る抗体又はその抗原結合断片の存在下でウイルス（ＺＩＫＶ）を７回継代した後に、ＺＩＫＶエスケープ変異体を同定できない。最も好ましくは、サブ中和濃度の本発明に係る抗体又はその抗原結合断片の存在下でウイルス（ＺＩＫＶ）を８回継代した後に、ＺＩＫＶエスケープ変異体を同定できない。
【００７４】
例えば、エスケープ変異体を生成する抗体又は抗体断片の傾向を評価するために、ＺＩＫＶ、例えば株Ｈ／ＰＦ／２０１３を、様々なサブ中和濃度の対象抗体／抗原結合断片と共に、例えば少なくとも３０分間、例えば約３７℃（体温）でインキュベートする。その後、（生）細胞、例えばＶｅｒｏ細胞を添加し、次いで、例えば少なくとも１日間、好ましくは３〜４日間、例えば約３７℃（体温）でインキュベートし、ウイルス増殖を可能にする。次いで、次の３つの条件から上清を選択することができる：即ち、単層の完全な保護が観察された対象抗体／抗原結合断片の最低濃度、細胞単層に対する部分的なＣＰＥ効果が観察された１つの濃度、及び細胞単層の１００％がＺＩＫＶ  ＣＰＥによって破壊された１つの濃度。選択された上清の一部は、ウイルスのマイクロ中和アッセイとその後の配列決定に使用することができる（エスケープ変異体を同定するため）、一方、（同一の）選択された上清の別の部分は、次の選択工程（継代）に使用することができる。即ち、次の継代のために、前記したように、選択し上清（の一部）を様々なサブ中和濃度の対象抗体／抗原結合断片と混合し、インキュベートした後、（生）細胞の添加とインキュベーションを前記のように行い、最終的に再び上清を選択する。この選択及び増殖プロセスを繰り返して、少なくとも５回の継代、好ましくは少なくとも６回の継代、より好ましくは少なくとも７回の継代、最も好ましくは少なくとも８回の継代を達成する。
【００７５】
好ましくは、本発明に係る抗体又はその抗原結合断片の少なくとも１つのエピトープ結合部位の各ＣＤＲ又は各可変領域は、それぞれヒトＣＤＲ又はヒト可変領域である。より好ましくは、本発明に係る抗体又はその抗原結合断片に含まれる各ＣＤＲ又は各可変領域は、それぞれヒトＣＤＲ又はヒト可変領域である。最も好ましくは、本発明に係る抗体又はその抗原結合断片に含まれる全ての定常領域及び可変領域は、ヒト定常領域及びヒト可変領域である。
【００７６】
また、本発明に係る抗体又はその抗原結合断片は、モノクローナル抗体であることが好ましく、本発明に係る抗体又はその抗原結合断片に含まれる各ＣＤＲ又は各可変領域が、それぞれヒトＣＤＲ又はヒト可変領域であるモノクローナル抗体であることが好ましい。
【００７７】
好ましくは、本発明に係る抗体又はその抗原結合断片は、ＩｇＧ１型、ＩｇＧ２型、ＩｇＧ３型、又はＩｇＧ４型などのＩｇＧ型、より好ましくはＩｇＧ１型のものである。より好ましくは、本発明に係る抗体又はその抗原結合断片は、（ｉ）ＩｇＧ１  ＣＨ１−ＣＨ２−ＣＨ３型の重鎖定常領域（ここで、「ＣＨ１」は重鎖の定常ドメイン１を意味し、「ＣＨ２」は重鎖の定常ドメイン２を意味し、「ＣＨ３」は重鎖の定常ドメイン３を意味する）；及び（ｉｉ）ＩｇＧ  ＣＬ型の軽鎖定常領域（ここで、「ＣＬ」は軽鎖の定常ドメインを意味する）を含む。更により好ましくは、本発明に係る抗体又はその抗原結合断片は、配列番号９１又は配列番号９２で表されるアミノ酸配列、又はその機能的配列変異体を含む又はからなるＩｇＧ１  ＣＨ１−ＣＨ２−ＣＨ３型の重鎖定常領域、及び配列番号９３又は配列番号９４で表されるアミノ酸配列、又はその機能的配列変異体を含む又はからなるＩｇＧ  ＣＬ型の軽鎖定常領域を含む。
【００７８】
したがって、本発明に係る抗体又はその抗原結合断片は、Ｆｃ部分を含むことが好ましい。より好ましくは、Ｆｃ部分は、ヒト起源、例えば、ヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、及び／又はＩｇＧ４に由来し、ヒトＩｇＧ１が特に好ましい。Ｆｃ部分を含む様々な多重特異性抗体フォーマットが当技術分野で知られている。Ｆｃ部分を含む好ましい抗体フォーマットは、前記したＩｇＧ付加抗体フォーマットである。典型的には、Ｆｃ部分を含む抗体は、Ｆｃ部分を含まない抗体又は抗体断片よりも効果的であり、より長い半減期を示す。
【００７９】
本明細書で使用するとき、用語「Ｆｃ部分」とは、パパイン切断部位の直ぐ上流のヒンジ領域（例えば、重鎖定常領域の最初の残基が１１４であるとすると、ネイティブＩｇＧにおける残基２１６）で始まり、免疫グロブリン重鎖のＣ末端で終わる免疫グロブリン重鎖の部分に由来する配列を指す。したがって、Ｆｃ部分は、完全Ｆｃ部分又はその一部（例えば、ドメイン）であってよい。完全Ｆｃ部分は、ヒンジドメイン、ＣＨ２ドメイン、及びＣＨ３ドメイン（例えば、ＥＵアミノ酸位置２１６〜４４６）を少なくとも含む。時に、追加のリジン残基（Ｋ）がＦｃ部分のＣ末端に存在するが、多くの場合、成熟抗体から切断される。Ｆｃ部分内のアミノ酸位置には、それぞれ、当技術分野において認識されているＫａｂａｔのＥＵ付番システムに従って番号が振られている。例えば、Ｋａｂａｔ  ｅｔ  ａｌ．，“Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ”，Ｕ．Ｓ．Ｄｅｐｔ．Ｈｅａｌｔｈ  ａｎｄ  Ｈｕｍａｎ  Ｓｅｒｖｉｃｅｓ，１９８３  ａｎｄ  １９８７を参照。
【００８０】
好ましくは、本発明において、Ｆｃ部分は、ヒンジ（例えば、上方、中央、及び／又は下方ヒンジ領域）ドメイン、ＣＨ２ドメイン、ＣＨ３ドメイン、又はこれらの変異体、一部、若しくは断片のうちの少なくとも１つを含む。好ましい実施形態では、Ｆｃ部分は、ヒンジドメイン、ＣＨ２ドメイン又はＣＨ３ドメインを少なくとも含む。より好ましくは、Ｆｃ部分は、完全Ｆｃ部分である。また、Ｆｃ部分は、天然Ｆｃ部分に対して１以上のアミノ酸挿入、欠失、又は置換を含んでいてもよい。例えば、ヒンジドメイン、ＣＨ２ドメイン、又はＣＨ３ドメイン（又はこれらの一部）のうちの少なくとも１つが欠失していてもよい。例えば、Ｆｃ部分は、（ｉ）ＣＨ２ドメイン（又はその一部）に融合しているヒンジドメイン（又はその一部）、（ｉｉ）ＣＨ３ドメイン（又はその一部）に融合しているヒンジドメイン（又はその一部）、（ｉｉｉ）ＣＨ３ドメイン（又はその一部）に融合しているＣＨ２ドメイン（又はその一部）、（ｉｖ）ヒンジドメイン（又はその一部）、（ｖ）ＣＨ２ドメイン（又はその一部）、又は（ｖｉ）ＣＨ３ドメイン又はその一部を含んでいてもよく、これらからなっていてもよい。
【００８１】
天然Ｆｃ部分によって付与される少なくとも１つの望ましい機能を保持しながら、天然免疫グロブリン分子の完全Ｆｃ部分とアミノ酸配列が異なるようにＦｃ部分を改変し得ることを当業者であれば理解するであろう。かかる機能としては、Ｆｃ受容体（ＦｃＲ）の結合、抗体の半減期の変更、ＡＤＣＣ機能、プロテインＡの結合、プロテインＧの結合、及び補体の結合が挙げられる。天然Ｆｃ部分のどこがかかる機能に関与する及び／又は必須であるかは、当業者に周知である。
【００８２】
例えば、補体カスケードを活性化するために、Ｃ１ｑは、抗原性標的に結合している少なくとも２分子のＩｇＧ１又は１分子のＩｇＭに結合する（Ｗａｒｄ，Ｅ．Ｓ．，ａｎｄ  Ｇｈｅｔｉｅ，Ｖ．，Ｔｈｅｒ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２（１９９５）７７−９４）。Ｂｕｒｔｏｎ，Ｄ．Ｒ．は、アミノ酸残基３１８〜３３７を含む重鎖領域が補体結合に関与していると記載している（Ｍｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２２（１９８５）１６１−２０６）。Ｄｕｎｃａｎ，Ａ．Ｒ．及びＷｉｎｔｅｒ，Ｇ．（Ｎａｔｕｒｅ  ３３２（１９８８）７３８−７４０）は、部位特異的突然変異誘発を使用して、Ｇｌｕ３１８、Ｌｙｓ３２０、及びＬｙｓ３２２がＣ１ｑに対する結合部位を形成すると報告した。Ｃ１ｑの結合におけるＧｌｕ３１８、Ｌｙｓ３２０、及びＬｙｓ３２２残基の役割は、これら残基を含有する短い合成ペプチドが補体媒介性溶解を阻害する能力によって確認された。
【００８３】
例えば、ＦｃＲ結合は、造血細胞における特殊な細胞表面受容体であるＦｃ受容体（ＦｃＲ）と（抗体の）Ｆｃ部分との相互作用によって媒介され得る。Ｆｃ受容体は、免疫グロブリンスーパーファミリーに属し、抗体でコーティングされた病原体の免疫複合体の食作用による除去と、抗体依存性細胞媒介細胞傷害作用（ＡＤＣＣ；Ｖａｎ  ｄｅ  Ｗｉｎｋｅｌ，Ｊ．Ｇ．，ａｎｄ  Ａｎｄｅｒｓｏｎ，Ｃ．Ｌ．，Ｊ．Ｌｅｕｋｏｃ．Ｂｉｏｌ．４９（１９９１）５１１−５２４）を介する、対応する抗体でコーティングされた赤血球及び様々な他の細胞標的（例えば、腫瘍細胞）の溶解とを両方媒介することが示されている。ＦｃＲは、免疫グロブリンクラスに対する特異性によって定義される；ＩｇＧ抗体に対するＦｃ受容体はＦｃγＲと称され、ＩｇＥの場合はＦｃεＲと称され、ＩｇＡの場合はＦｃαＲと称され、新生児Ｆｃ受容体はＦｃＲｎと称される。Ｆｃ受容体結合は、例えば、Ｒａｖｅｔｃｈ，Ｊ．Ｖ．，ａｎｄ  Ｋｉｎｅｔ，Ｊ．Ｐ．，Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．９（１９９１）４５７−４９２；Ｃａｐｅｌ，Ｐ．Ｊ．，ｅｔ  ａｌ．，Ｉｍｍｕｎｏｍｅｔｈｏｄｓ  ４（１９９４）２５−３４；ｄｅ  Ｈａａｓ，Ｍ．，ｅｔ  ａｌ．，Ｊ  Ｌａｂ．Ｃｌｉｎ．Ｍｅｄ．１２６（１９９５）３３０−３４１；及びＧｅｓｓｎｅｒ，Ｊ．Ｅ．，ｅｔ  ａｌ．，Ａｎｎ．Ｈｅｍａｔｏｌ．７６（１９９８）２３１−２４８に記載されている。
【００８４】
ネイティブＩｇＧ抗体のＦｃドメイン（ＦｃγＲ）による受容体の架橋は、食作用、抗体依存性細胞傷害作用、及び炎症メディエータの放出を含む広範なエフェクタ機能に加えて、免疫複合体のクリアランス及び抗体産生の調節も誘発する。したがって、受容体の架橋を提供するＦｃ部分（ＦｃγＲ）が好ましい。ヒトでは、３つのクラスのＦｃγＲが特徴付けられている。即ち、（ｉ）高い親和性で単量体ＩｇＧに結合し、マクロファージ、単球、好中球、及び好酸球で発現するＦｃγＲＩ（ＣＤ６４）；（ｉｉ）中〜低親和性で複合体化ＩｇＧに結合し、広く、特に白血球で発現し、抗体媒介性免疫において中心的な役割を果たすことが知られており、ＦｃγＲＩＩＡ、ＦｃγＲＩＩＢ、及びＦｃγＲＩＩＣに分類することができ、免疫系において様々な機能を発揮するが、同様の低親和性でＩｇＧ−Ｆｃに結合し、これら受容体のエクトドメインが高度に相同であるＦｃγＲＩＩ（ＣＤ３２）；並びに（ｉｉｉ）中〜低親和性でＩｇＧに結合し、ＮＫ細胞、マクロファージ、好酸球、及び幾つかの単球、並びにＴ細胞でみられ、ＡＤＣＣを媒介するＦｃγＲＩＩＩＡ及び好中球で高度に発現するＦｃγＲＩＩＩＢの２つのタイプとして存在するＦｃγＲＩＩＩ（ＣＤ１６）である。ＦｃγＲＩＩＡは、殺傷に関与する多くの細胞（例えば、マクロファージ、単球、好中球）でみられ、殺傷プロセスを活性化することができると考えられる。ＦｃγＲＩＩＢは、阻害プロセスにおいて役割を果たすと考えられ、Ｂ細胞、マクロファージ、並びに肥満細胞及び好酸球でみられる。重要なことに、全てのＦｃγＲＩＩＢのうちの７５％が肝臓でみられる（Ｇａｎｅｓａｎ，Ｌ．Ｐ．ｅｔ  ａｌ．，２０１２：ＦｃγＲＩＩｂ  ｏｎ  ｌｉｖｅｒ  ｓｉｎｕｓｏｉｄａｌ  ｅｎｄｏｔｈｅｌｉｕｍ  ｃｌｅａｒｓ  ｓｍａｌｌ  ｉｍｍｕｎｅ  ｃｏｍｐｌｅｘｅｓ．Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ    Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  １８９：４９８１−４９８８）。ＦｃγＲＩＩＢは、ＬＳＥＣと呼ばれる肝臓洞様血管内皮及び肝臓のクッパー細胞で多量に発現し、ＬＳＥＣは、小免疫複合体のクリアランスの主な部位である（Ｇａｎｅｓａｎ，Ｌ．Ｐ．ｅｔ  ａｌ．，２０１２：ＦｃγＲＩＩｂ  ｏｎ  ｌｉｖｅｒ  ｓｉｎｕｓｏｉｄａｌ  ｅｎｄｏｔｈｅｌｉｕｍ  ｃｌｅａｒｓ  ｓｍａｌｌ  ｉｍｍｕｎｅ  ｃｏｍｐｌｅｘｅｓ．Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  １８９：４９８１−４９８８）。
【００８５】
したがって、本発明では、ＦｃγＲＩＩｂに結合することができるかかる抗体及びその抗原結合断片、例えば、ＦｃγＲＩＩｂに結合するためのＦｃ部分、特にＦｃ領域を含む抗体、例えば、ＩｇＧ型抗体が好ましい。更に、Ｃｈｕ，Ｓ．Ｙ．ｅｔ  ａｌ．，２００８：Ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｂ  ｃｅｌｌ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ−ｍｅｄｉａｔｅｄ  ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｐｒｉｍａｒｙ  ｈｕｍａｎ  Ｂ  ｃｅｌｌｓ  ｂｙ  ｃｏｅｎｇａｇｅｍｅｎｔ  ｏｆ  ＣＤ１９  ａｎｄ  ＦｃｇａｍｍａＲＩＩｂ  ｗｉｔｈ  Ｆｃ−ｅｎｇｉｎｅｅｒｅｄ  ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ．Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  ４５，３９２６−３９３３によって記載されている通り、突然変異Ｓ２６７Ｅ及びＬ３２８Ｆを導入することによってＦｃ部分を改変してＦｃγＲＩＩＢの結合を強化することが可能である。それによって、免疫複合体のクリアランスを強化することができる（Ｃｈｕ，Ｓ．，ｅｔ  ａｌ．，２０１４：Ａｃｃｅｌｅｒａｔｅｄ  Ｃｌｅａｒａｎｃｅ  ｏｆ  ＩｇＥ  Ｉｎ  Ｃｈｉｍｐａｎｚｅｅｓ  Ｉｓ  Ｍｅｄｉａｔｅｄ  Ｂｙ  Ｘｍａｂ７１９５，Ａｎ  Ｆｃ−Ｅｎｇｉｎｅｅｒｅｄ  Ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ｗｉｔｈ  Ｅｎｈａｎｃｅｄ  Ａｆｆｉｎｉｔｙ  Ｆｏｒ  Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ  Ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ＦｃγＲＩＩｂ．Ａｍ  Ｊ  Ｒｅｓｐｉｒ  Ｃｒｉｔ，Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｔｈｏｒａｃｉｃ  Ｓｏｃｉｅｔｙ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  Ｃｏｎｆｅｒｅｎｃｅ  Ａｂｓｔｒａｃｔｓ）。したがって、本発明では、特にＣｈｕ，Ｓ．Ｙ．ｅｔ  ａｌ．，２００８：Ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｂ  ｃｅｌｌ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ−ｍｅｄｉａｔｅｄ  ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｐｒｉｍａｒｙ  ｈｕｍａｎ  Ｂ  ｃｅｌｌｓ  ｂｙ  ｃｏｅｎｇａｇｅｍｅｎｔ  ｏｆ  ＣＤ１９  ａｎｄ  ＦｃｇａｍｍａＲＩＩｂ  ｗｉｔｈ  Ｆｃ−ｅｎｇｉｎｅｅｒｅｄ  ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ．Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  ４５，３９２６−３９３３に記載されている通り、突然変異Ｓ２６７Ｅ及びＬ３２８Ｆを有する改変されたＦｃ部分を含む係る抗体又はその抗原結合断片が好ましい。
【００８６】
Ｂ細胞では、更なる免疫グロブリン産生及び例えばＩｇＥクラスへのアイソタイプスイッチを抑制する機能を有すると考えられる。マクロファージでは、ＦｃγＲＩＩＢは、ＦｃγＲＩＩＡを介して媒介されたとき食作用を阻害する作用を有する。好酸球及び肥満細胞では、ｂ形態は、ＩｇＥのその別個の受容体への結合を通してこれら細胞の活性化を抑制するのに役立ち得る。
【００８７】
ＦｃγＲＩ結合に関しては、ネイティブＩｇＧにおけるＥ２３３〜Ｇ２３６、Ｐ２３８、Ｄ２６５、Ｎ２９７、Ａ３２７、及びＰ３２９のうちの少なくとも１つを改変すると、ＦｃγＲＩへの結合が減少する。２３３位〜２３６位におけるＩｇＧ２残基をＩｇＧ１及びＩｇＧ４に置換すると、ＦｃγＲＩへの結合が１０３倍減少し、抗体感作赤血球に対するヒト単球応答が排除された（Ａｒｍｏｕｒ，Ｋ．Ｌ．，ｅｔ  ａｌ．Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２９（１９９９）２６１３−２６２４）。ＦｃγＲＩＩ結合に関しては、例えば、Ｅ２３３〜Ｇ２３６、Ｐ２３８、Ｄ２６５、Ｎ２９７、Ａ３２７、Ｐ３２９、Ｄ２７０、Ｑ２９５、Ａ３２７、Ｒ２９２、及びＫ４１４のうちの少なくとも１つのＩｇＧ突然変異について、ＦｃγＲＩＩＡの結合減少がみられる。ＦｃγＲＩＩＩ結合に関しては、例えば、Ｅ２３３〜Ｇ２３６、Ｐ２３８、Ｄ２６５、Ｎ２９７、Ａ３２７、Ｐ３２９、Ｄ２７０、Ｑ２９５、Ａ３２７、Ｓ２３９、Ｅ２６９、Ｅ２９３、Ｙ２９６、Ｖ３０３、Ａ３２７、Ｋ３３８、及びＤ３７６のうちの少なくとも１つの突然変異について、ＦｃγＲＩＩＩＡへの結合減少がみられる。Ｆｃ受容体についてのヒトＩｇＧ１における結合部位のマッピング、上述の突然変異部位、並びにＦｃγＩＲ及びＦｃγＲＩＩＡに対する結合を測定する方法は、Ｓｈｉｅｌｄｓ，Ｒ．Ｌ．，ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７６（２００１）６５９１−６６０４に記載されている。
【００８８】
重要なＦｃγＲＩＩに対する結合に関しては、ネイティブＩｇＧ  Ｆｃの２つの領域、即ち、（ｉ）ＩｇＧ  Ｆｃの下方ヒンジ部位、特に、アミノ酸残基Ｌ、Ｌ、Ｇ、Ｇ（２３４〜２３７、ＥＵ付番）、及び（ｉｉ）ＩｇＧ  ＦｃのＣＨ２ドメインの隣接領域、特に、下方ヒンジ領域に隣接する上方ＣＨ２ドメイン、例えば、Ｐ３３１の領域におけるループ及び鎖は、ＦｃγＲＩＩ及びＩｇＧの相互作用にとって重要であると考えられる（Ｗｉｎｅｓ，Ｂ．Ｄ．，ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２０００；１６４：５３１３−５３１８）。更に、ＦｃγＲＩは、ＩｇＧ  Ｆｃにおける同じ部位に結合すると考えられ、一方、ＦｃＲｎ及びプロテインＡは、ＩｇＧ  Ｆｃにおける異なる部位（ＣＨ２−ＣＨ３界面であると考えられる）に結合する（Ｗｉｎｅｓ，Ｂ．Ｄ．，ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２０００；１６４：５３１３−５３１８）。
【００８９】
例えば、Ｆｃ部分は、ＦｃＲｎの結合又は半減期の延長に必要であることが当技術分野において公知であるＦｃ部分の部分を少なくとも含んでいてもよく、又はからなっていてもよい。それに代えて又はそれに加えて、本発明の抗体のＦｃ部分は、プロテインＡの結合に必要であることが当技術分野において公知である部分を少なくとも含む、及び／又は本発明の抗体のＦｃ部分は、プロテインＧの結合に必要であることが当技術分野において公知であるＦｃｃ分子の一部を少なくとも含む。好ましくは、保持される機能は、ジカウイルス感染の中和であり、これはＦｃγＲの結合によって媒介されると考えられる。したがって、好ましいＦｃ部分は、ＦｃγＲの結合に必要であることが当技術分野において公知である部分を少なくとも含む。したがって、上に概説した通り、好ましいＦｃ部分は、（ｉ）ネイティブＩｇＧ  Ｆｃの下方ヒンジ部位、特に、アミノ酸残基Ｌ、Ｌ、Ｇ、Ｇ（２３４〜２３７、ＥＵ付番）、及び（ｉｉ）ネイティブＩｇＧ  ＦｃのＣＨ２ドメインの隣接領域、特に、下方ヒンジ領域に隣接する上方ＣＨ２ドメイン、例えばＰ３３１の領域、例えば、ネイティブＩｇＧ  Ｆｃのアミノ酸３２０〜３４０（ＥＵ付番）等のＰ３３１周辺のネイティブＩｇＧ  Ｆｃの上方ＣＨ２ドメインにおける少なくとも３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、又は１０個の連続するアミノ酸の領域におけるループ及び鎖を少なくとも含み得る。
【００９０】
好ましくは、本発明に係る抗体又はその抗原結合断片は、Ｆｃ領域を含む。本明細書で使用するとき、用語「Ｆｃ領域」とは、抗体重鎖の２以上のＦｃ部分によって形成される免疫グロブリンの部分を指す。例えば、Ｆｃ領域は、単量体又は「単鎖」Ｆｃ領域（即ち、ｓｃＦｃ領域）であってよい。単鎖Ｆｃ領域は、（例えば、単一の連続する核酸配列にコードされている）単一のポリペプチド鎖内で結合しているＦｃ部分で構成される。例示的なｓｃＦｃ領域は、国際公開第２００８／１４３９５４  Ａ２号に開示されている。好ましくは、Ｆｃ領域は、二量体Ｆｃ領域である。「二量体Ｆｃ領域」又は「ｄｃＦｃ」は、２つの別個の免疫グロブリン重鎖のＦｃ部分によって形成される二量体を指す。二量体Ｆｃ領域は、２つの同一のＦｃ部分のホモ二量体（例えば、天然免疫グロブリンのＦｃ領域）又は２つの非同一のＦｃ部分のヘテロ二量体であってよい。
【００９１】
Ｆｃ領域のＦｃ部分は、同じ又は異なるクラス及び／又はサブクラスであってよい。例えば、Ｆｃ部分は、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、又はＩｇＧ４サブクラスの免疫グロブリン（例えば、ヒト免疫グロブリン）に由来していてよい。好ましくは、Ｆｃ領域のＦｃ部分は、同じクラス及びサブクラスである。しかし、Ｆｃ領域（又はＦｃ領域の１以上のＦｃ部分）はキメラであってもよく、キメラＦｃ領域は、異なる免疫グロブリンクラス及び／又はサブクラスに由来するＦｃ部分を含み得る。例えば、二量体又は単鎖Ｆｃ領域のＦｃ部分のうちの少なくとも２つは、異なる免疫グロブリンクラス及び／又はサブクラスに由来していてよい。それに加えて又はそれに代えて、キメラＦｃ領域は、１以上のキメラＦｃ部分を含み得る。例えば、キメラＦｃ領域又は部分は、第１のサブクラスの免疫グロブリン（例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、又はＩｇＧ３サブクラス）の免疫グロブリンに由来する１以上の部分を含み得るが、一方、Ｆｃ領域又は部分の残りは、異なるサブクラスである。例えば、ＦｃポリペプチドのＦｃ領域又は部分は、第１のサブクラス（例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、又はＩｇＧ４サブクラス）の免疫グロブリンに由来するＣＨ２及び／又はＣＨ３ドメインと、第２のサブクラス（例えば、ＩｇＧ３サブクラス）の免疫グロブリンに由来するヒンジ領域とを含み得る。例えば、Ｆｃ領域又は部分は、第１のサブクラス（例えば、ＩｇＧ４サブクラス）の免疫グロブリンに由来するヒンジ及び／又はＣＨ２ドメインと、第２のサブクラス（例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、又はＩｇＧ３サブクラス）の免疫グロブリンに由来するＣＨ３ドメインとを含み得る。例えば、キメラＦｃ領域は、第１のサブクラス（例えば、ＩｇＧ４サブクラス）の免疫グロブリンに由来するＦｃ部分（例えば、完全Ｆｃ部分）と、第２のサブクラス（例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、又はＩｇＧ３サブクラス）の免疫グロブリンに由来するＦｃ部分とを含み得る。例えば、Ｆｃ領域又は部分は、ＩｇＧ４免疫グロブリンに由来するＣＨ２ドメインと、ＩｇＧ１免疫グロブリンに由来するＣＨ３ドメインとを含み得る。例えば、Ｆｃ領域又は部分は、ＩｇＧ４分子に由来するＣＨ１ドメイン及びＣＨ２ドメインと、ＩｇＧ１分子に由来するＣＨ３ドメインとを含み得る。例えば、Ｆｃ領域又は部分は、抗体の特定のサブクラスに由来するＣＨ２ドメインの一部、例えば、ＣＨ２ドメインのＥＵ２９２位〜３４０位を含み得る。例えば、Ｆｃ領域又は部分は、ＩｇＧ４部分に由来するＣＨ２の２９２位〜３４０位のアミノ酸とＩｇＧ１部分に由来するＣＨ２の残りとを含み得る（或いは、ＣＨ２の２９２〜３４０は、ＩｇＧ１部分に由来し、ＣＨ２の残りはＩｇＧ４部分に由来していてもよい）。
【００９２】
更に、Ｆｃ領域又はＦｃ部分は、（それに加えて又はそれに代えて）例えば、キメラヒンジ領域を含み得る。例えば、キメラヒンジは、例えば、一部はＩｇＧ１、ＩｇＧ２、又はＩｇＧ４分子（例えば、上方及び下方の中央ヒンジ配列）に由来し得、一部はＩｇＧ３分子（例えば、中央ヒンジ配列）に由来し得る。別の例では、Ｆｃ領域又は部分は、一部がＩｇＧ１分子に由来し、一部がＩｇＧ４分子に由来するキメラヒンジを含み得る。別の例では、キメラヒンジは、ＩｇＧ４分子由来の上方及び下方ヒンジドメインと、ＩｇＧ１分子由来の中央ヒンジドメインとを含み得る。かかるキメラヒンジは、例えば、ＩｇＧ４ヒンジ領域の中央ヒンジドメインにおけるＥＵ２２８位にプロリン置換（Ｓｅｒ２２８Ｐｒｏ）を導入することによって作製され得る。別の実施形態では、キメラヒンジは、ＩｇＧ２抗体に由来するＥＵ２３３位〜２３６位のアミノ酸及び／又はＳｅｒ２２８Ｐｒｏ突然変異を含み得、この場合、ヒンジの残りのアミノ酸は、ＩｇＧ４抗体由来である（例えば、配列ＥＳＫＹＧＰＰＣＰＰＣＰＡＰＰＶＡＧＰのキメラヒンジ）。更に、本発明に係る抗体のＦｃ部分において用いることができるキメラヒンジは、米国特許出願第２００５／０１６３７８３  Ａ１号に記載されている。
【００９３】
本発明では、Ｆｃ部分又はＦｃ領域は、ヒト免疫グロブリン配列に由来するアミノ酸配列（例えば、ヒトＩｇＧ分子由来のＦｃ領域又はＦｃ部分）を含む又はからなることが好ましい。しかし、ポリペプチドは、別の哺乳類種由来の１以上のアミノ酸を含み得る。例えば、霊長類Ｆｃ部分又は霊長類結合部位が被験体ポリペプチドに含まれていてもよい。或いは、１以上のマウスアミノ酸がＦｃ部分又はＦｃ領域に存在していてもよい。
【００９４】
好ましくは、本発明に係る抗体は、特に上記Ｆｃ部分に加えて、定常領域、特にＩｇＧの定常領域、好ましくはＩｇＧ１の定常領域、より好ましくはヒトＩｇＧ１の定常領域に由来する他の部分を含む。より好ましくは、本発明に係る抗体は、特に上記Ｆｃ部分に加えて、定常領域の他の部分全て、特にＩｇＧの定常領域の他の部分全て、好ましくはＩｇＧ１の定常領域の他の部分全て、より好ましくはヒトＩｇＧ１の定常領域の他の部分全てを含む。
【００９５】
定常領域の特に好ましい配列は、配列番号９１〜９４のアミノ酸配列である（例えば、それぞれ配列番号９５〜９８の核酸配列によってコードされる）。好ましくは、ＩｇＧ１  ＣＨ１−ＣＨ２−ＣＨ３のアミノ酸配列は、本明細書に記載の配列番号９１又はその機能的配列変異体で表される。更により好ましくは、ＩｇＧ１  ＣＨ１−ＣＨ２−ＣＨ３のアミノ酸配列は、「ＬＡＬＡ」変異が維持されている本明細書に記載の配列番号９２又はその機能的配列変異体で表される。
【００９６】
上に概説した通り、本発明に係る特に好ましい抗体は、ヒトＩｇＧ１に由来する（完全）Ｆｃ領域を含む。より好ましくは、本発明に係る抗体は、特にヒトＩｇＧ１に由来する（完全）Ｆｃ領域に加えて、ＩｇＧの定常領域の他の部分全て、好ましくは、ＩｇＧ１の定常領域の他の部分全て、より好ましくはヒトＩｇＧ１の定常領域の他の部分全ても含む。
【００９７】
いかなる理論にも拘束されるものではないが、ジカウイルス感染の抗体依存性増強（ＡＤＥ）は、抗体のＦｃ部分、特にＩｇＧ分子の重鎖のＦｃ部分のＦｃ受容体、例えば、宿主細胞上のＦｃγ受容体への結合によってもたらされると考えられる。したがって、本発明に係る抗体又はその抗原結合断片は、Ｆｃ部分に１以上の突然変異を含むことが好ましい。突然変異は、抗体のＦｃ受容体（ＦｃＲ）への結合を低減する、特にＦｃγ受容体（ＦｃγＲ）に対する抗体の結合を低減する任意の突然変異であることができる。一方、本発明に係る抗体は、（完全な）Ｆｃ部分／Ｆｃ領域を含み、ＦｃＲｎとの相互作用／結合が損なわれないことが好ましい。したがって、本発明に係る抗体又はその抗原結合断片は、（ｉ）Ｆｃγ受容体に対する抗体の結合を低減するが、ＦｃＲｎとの相互作用を損なわせない１以上の突然変異を含むことが特に好ましい。そのような突然変異の一例は、以下に記載される「ＬＡＬＡ」突然変異である。
【００９８】
一般に、抗体のＦｃ受容体への結合は、当業者に公知の様々な方法、例えばＥＬＩＳＡ（Ｈｅｓｓｅｌｌ  ＡＪ，  Ｈａｎｇａｒｔｎｅｒ  Ｌ，  Ｈｕｎｔｅｒ  Ｍ，  Ｈａｖｅｎｉｔｈ  ＣＥＧ，  Ｂｅｕｒｓｋｅｎｓ  ＦＪ，  Ｂａｋｋｅｒ  ＪＭ，  Ｌａｎｉｇａｎ  ＣＭＳ，  Ｌａｎｄｕｃｃｉ  Ｇ，  Ｆｏｒｔｈａｌ  ＤＮ，  Ｐａｒｒｅｎ  ＰＷＨＩ，  ｅｔ  ａｌ．：  Ｆｃ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ｂｕｔ  ｎｏｔ  ｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔ  ｂｉｎｄｉｎｇ  ｉｓ  ｉｍｐｏｒｔａｎｔ  ｉｎ  ａｎｔｉｂｏｄｙ  ｐｒｏｔｅｃｔｉｏｎ  ａｇａｉｎｓｔ  ＨＩＶ．  Ｎａｔｕｒｅ  ２００７，  ４４９：１０１−１０４；  Ｇｒｅｖｙｓ  Ａ，  Ｂｅｒｎ  Ｍ，  Ｆｏｓｓ  Ｓ，  Ｂｒａｔｌｉｅ  ＤＢ，  Ｍｏｅｎ  Ａ，  Ｇｕｎｎａｒｓｅｎ  ＫＳ，  Ａａｓｅ  Ａ，  Ｍｉｃｈａｅｌｓｅｎ  ＴＥ，  Ｓａｎｄｌｉｅ  Ｉ，  Ａｎｄｅｒｓｅｎ  ＪＴ：  Ｆｃ  Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ  ｏｆ  Ｈｕｍａｎ  ＩｇＧ１  ｆｏｒ  Ａｌｔｅｒｅｄ  Ｂｉｎｄｉｎｇ  ｔｏ  ｔｈｅ  Ｎｅｏｎａｔａｌ  Ｆｃ  Ｒｅｃｅｐｔｏｒ  Ａｆｆｅｃｔｓ  Ｆｃ  Ｅｆｆｅｃｔｏｒ  Ｆｕｎｃｔｉｏｎｓ．  ２０１５，  １９４：５４９７−５５０８）又はフローサイトメトリ（Ｐｅｒｅｚ  ＬＧ，  Ｃｏｓｔａ  ＭＲ，  Ｔｏｄｄ  ＣＡ，  Ｈａｙｎｅｓ  ＢＦ，  Ｍｏｎｔｅｆｉｏｒｉ  ＤＣ：  Ｕｔｉｌｉｚａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｉｍｍｕｎｏｇｌｏｂｕｌｉｎ  Ｇ  Ｆｃ  ｒｅｃｅｐｔｏｒｓ  ｂｙ  ｈｕｍａｎ  ｉｍｍｕｎｏｄｅｆｉｃｉｅｎｃｙ  ｖｉｒｕｓ  ｔｙｐｅ  １：  ａ  ｓｐｅｃｉｆｉｃ  ｒｏｌｅ  ｆｏｒ  ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  ａｇａｉｎｓｔ  ｔｈｅ  ｍｅｍｂｒａｎｅ−ｐｒｏｘｉｍａｌ  ｅｘｔｅｒｎａｌ  ｒｅｇｉｏｎ  ｏｆ  ｇｐ４１．  Ｊ  Ｖｉｒｏｌ  ２００９，  ８３：７３９７−７４１０；  Ｐｉｃｃｏｌｉ  Ｌ，  Ｃａｍｐｏ  Ｉ，  Ｆｒｅｇｎｉ  ＣＳ，  Ｒｏｄｒｉｇｕｅｚ  ＢＭＦ，  Ｍｉｎｏｌａ  Ａ，  Ｓａｌｌｕｓｔｏ  Ｆ，  Ｌｕｉｓｅｔｔｉ  Ｍ，  Ｃｏｒｔｉ  Ｄ，  Ｌａｎｚａｖｅｃｃｈｉａ  Ａ：  Ｎｅｕｔｒａｌｉｚａｔｉｏｎ  ａｎｄ  ｃｌｅａｒａｎｃｅ  ｏｆ  ＧＭ−ＣＳＦ  ｂｙ  ａｕｔｏａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  ｉｎ  ｐｕｌｍｏｎａｒｙ  ａｌｖｅｏｌａｒ  ｐｒｏｔｅｉｎｏｓｉｓ．  Ｎａｔ  Ｃｏｍｍｕｎ  ２０１５，  ６：１−９）により評価することができる、
【００９９】
一般に、本発明に係る抗体はグリコシル化されていてもよい。重鎖のＣＨ２ドメインに結合したＮ−結合型グリカンは、例えば、Ｃ１ｑ及びＦｃＲの結合に影響を及ぼすことがあり、アグリコシル化抗体はこれらの受容体に対してより低い親和性を有する。したがって、本発明に係る抗体のＦｃ部分のＣＨ２ドメインは、グリコシル化残基が非グリコシル化残基で置換された１以上の突然変異を含み得る。グリカン構造はまた、活性に影響を及ぼし得る。例えば、補体媒介性細胞死の差は、グリカンの二分岐鎖の末端におけるガラクトース糖の数（０、１、又は２）に依存して見られることがある。好ましくは、抗体のグリカンは、投与後にヒト免疫原性応答を引き起こさない。
【０１００】
更に、本発明に係る抗体は、ＦｃＲに対するそれらの結合親和性及び／又はそれらの血清半減期を非修飾抗体に比較して変化させるために、重鎖のＣＨ２又はＣＨ３ドメインの特定の領域にランダムなアミノ酸突然変異を導入することによって改変することができる。そのような修飾の例としては、アミノ酸残基２５０、３１４、及び４２８からなる群から選択される重鎖定常領域由来の少なくとも１つのアミノ酸の置換が挙げられるが、これらに限定されない。
【０１０１】
特に好ましくは、本発明の抗体のＦｃ部分は、ＣＨ２  ４、ＣＨ２  ５、又はその両方の位置に置換を含む。一般に、野生型ＩｇＧ１及びＩｇＧ３のＣＨ２の４位及び５位のアミノ酸はロイシン（「Ｌ」）である。好ましくは、本発明に係る抗体は、ＣＨ２  ４、ＣＨ２  ５、又はその両方の位置に、Ｌではないアミノ酸を含む。より好ましくは、本発明に係る抗体は、ＣＨ２  ４、ＣＨ２  ５、又はその両方の位置にアラニン（「Ａ」）を含む。最も好ましくは、本発明に係る抗体は、ＣＨ２  Ｌ４Ａ及びＣＨ２  Ｌ５Ａ置換の両方を含む。このような抗体は、本明細書では「ＬＡＬＡ」変異体と称する。興味深いことに、Ｆｃ部分におけるそのような「ＬＡＬＡ」突然変異は、ジカウイルス感染の抗体依存性増強（ＡＤＥ）におけるそれぞれの抗体の寄与の欠如をもたらすだけでなく、ジカウイルス感染の抗体依存性増強（ＡＤＥ）をブロックする。「ＬＡＬＡ」突然変異を含むＩｇＧ１  ＣＨ１−ＣＨ２−ＣＨ３の例示的なアミノ酸配列は、配列番号９２で表される。したがって、ＩｇＧ１  ＣＨ１−ＣＨ２−ＣＨ３のアミノ酸配列は、好ましくは、配列番号９２又は「ＬＡＬＡ」突然変異が維持された本明細書に記載のその機能的変異体である。最も好ましくは、抗体は、本明細書に記載のＦｃ部分に「ＬＡＬＡ」突然変異を含む前記ＦＩＴ−Ｉｇフォーマットのものである。
【０１０２】
好ましくは、本発明に係る抗体又はその抗原結合断片は、Ｆｃ受容体のための結合部位を含まない。より好ましくは、抗体又はその抗原結合断片は、Ｆｃ領域を含まず、更により好ましくは、抗体又はその抗原結合断片は、Ｆｃ部分を含まない。Ｆｃ部分を含まない様々な多重特異性抗体フォーマットが当技術分野で知られており、上に記載されている。
【０１０３】
前記したように、本発明に係る抗体又はその抗原結合断片は、好ましくは、ジカウイルスエンベロープタンパク質（ＺＩＫＶ  Ｅタンパク質）上の（少なくとも２つの）異なるエピトープに特異的に結合する。より好ましくは、抗体又はその抗原結合断片は、ジカウイルスエンベロープタンパク質のドメインＩＩＩ（ＥＤＩＩＩ、「ＤＩＩＩ」とも称される）に結合する。換言すれば、本発明に係る抗体又はその抗原結合断片は、ジカウイルスエンベロープタンパク質のドメインＩＩＩ（ＥＤＩＩＩ）の１以上のアミノ酸残基を含むジカウイルスエンベロープタンパク質のエピトープに結合することが好ましい。ＺＩＫＶは、コアタンパク質によって包まれた一本鎖ＲＮＡを含むヌクレオカプシドコアを含む。ヌクレオキャプシドコアは、「膜タンパク質」及び「エンベロープタンパク質」を有する脂質二重層膜によってカプセル化される。ＺＩＫＶエンベロープタンパク質（Ｅタンパク質）はドミナント抗原である。エンベロープタンパク質の外部ドメインは、次の３つの異なるドメインを含む：Ｅタンパク質ドメインＩ（ＥＤＩ）、Ｅタンパク質ドメインＩＩ（ＥＤＩＩ）、及びＥタンパク質ドメインＩＩＩ（ＥＤＩＩＩ）。ＥＤＩＩＩは、各種ＺＩＫＶ株間で高度に保存されている（各種ＺＩＫＶ株のＥＤＩＩＩのアミノ酸配列のアラインメントについては図８を参照）。ジカウイルスエンベロープタンパク質のドメインＩＩＩ（ＥＤＩＩＩ）に結合する抗体は、ジカウイルスエンベロープタンパク質のドメインＩ／ＩＩ（ＥＤＩ／ＩＩ）に結合する抗体と比較して、（ｉ）ＺＩＫＶの上昇した中和及び（ｉｉ）ＤＥＮＶとの低下した交差反応性（特に、本質的にＤＥＮＶとの交差反応性なし）を示す。
【０１０４】
したがって、抗体又はその抗原結合断片は、より好ましくは、ジカウイルスエンベロープタンパク質のドメインＩＩＩ（ＥＤＩＩＩ）に結合し、ＥＤＩＩＩは、以下のアミノ酸配列（配列番号２６３）を有する。
2020531000.tif 000002
ここで、Ｘは任意の（天然に存在する）アミノ酸であってもよい。換言すれば、本発明に係る抗体又はその抗原結合断片は、配列番号２６３の１以上のアミノ酸残基を含むジカウイルスエンベロープタンパク質のエピトープに結合することが好ましい。
【０１０５】
また、本発明に係る抗体又はその抗原結合断片は、ジカウイルスエンベロープタンパク質のドメインＩＩＩ（ＥＤＩＩＩ）に結合し、ＥＤＩＩＩは、以下のアミノ酸配列（配列番号２６５）を有することが好ましい。
2020531000.tif 000003
ここで、Ｘ１は、任意の（天然に存在する）アミノ酸、好ましくはＫ、Ａ、又はＥであり得る；
Ｘ２は、任意の（天然に存在する）アミノ酸、好ましくはＶ、Ｆ、又はＬであり得る；
Ｘ３は、任意の（天然に存在する）アミノ酸、好ましくはＳ又はＦであり得る；
Ｘ４は、任意の（天然に存在する）アミノ酸、好ましくはＩ又はＶであり得る；
Ｘ５は、任意の（天然に存在する）アミノ酸、好ましくはＴ又はＶであり得る；
Ｘ６は、任意の（天然に存在する）アミノ酸、好ましくはＬ又はＤであり得る；
Ｘ７は、任意の（天然に存在する）アミノ酸、好ましくはＶ又はＧであり得る；
Ｘ８は、任意の（天然に存在する）アミノ酸、好ましくはＡ又はＧであり得る；
Ｘ９は、Ｒを除く任意の（天然に存在する）アミノ酸、好ましくはＴ又はＡあり得る；
Ｘ１０は、任意の（天然に存在する）アミノ酸、好ましくはＶ又はＩであり得る；
Ｘ１１は、任意の（天然に存在する）アミノ酸、好ましくはＡ又はＶであり得る；
Ｘ１２は、任意の（天然に存在する）アミノ酸、好ましくはＭ又はＴであり得る；
Ｘ１３は、任意の（天然に存在する）アミノ酸、好ましくはＳ又はＧであり得る；
Ｘ１４は、任意の（天然に存在する）アミノ酸、好ましくはＥ又はＫであり得る；
Ｘ１５は、任意の（天然に存在する）アミノ酸、好ましくはＶ又はＩであり得る；
Ｘ１６は、任意の（天然に存在する）アミノ酸、好ましくはＥ、Ａ、Ｋ、又はＤであり得る；
Ｘ１７は、任意の（天然に存在する）アミノ酸、好ましくはＥ、Ａ、又はＫ、より好ましくはＫ又はＡであり得る。
【０１０６】
換言すれば、本発明に係る抗体又はその抗原結合断片は、配列番号２６５の１以上のアミノ酸残基を含むジカウイルスエンベロープタンパク質のエピトープに結合することが好ましい。
【０１０７】
例えば、ＥＤＩＩＩは、ＺＩＫＶ  Ｈ／ＰＦ／２０１３株（ＧｅｎＢａｎｋ受託番号ＫＪ７７６７９１）のＺＩＫＶ  Ｅタンパク質のアミノ酸３０９からアミノ酸４０３に亘る。したがって、抗体又はその抗原結合断片は、最も好ましくは、ジカウイルスエンベロープタンパク質のドメインＩＩＩ（ＥＤＩＩＩ）に結合し、ＥＤＩＩＩは以下のアミノ酸配列（配列番号２６４）を有する。
2020531000.tif 000004
【０１０８】
換言すれば、本発明に係る抗体又はその抗原結合断片は、配列番号２６４の１以上のアミノ酸残基を含むジカウイルスエンベロープタンパク質のエピトープに結合することが好ましい。
【０１０９】
より好ましくは、本発明に係る抗体又はその抗原結合断片は、ＥＤＩＩＩのラテラルリッジ（ＬＲ）の１以上のアミノ酸残基及び／又はＥＤＩ−ＥＤＩＩＩヒンジ領域の１以上のアミノ酸残基を含むジカウイルスエンベロープタンパク質のエピトープに結合する。ＥＤＩＩＩラテラルリッジ及びＥＤＩ−ＥＤＩＩＩヒンジ領域は当業者に知られており、例えば、次の文献に記載されている：Ｚｈａｏ，  Ｈ．，  Ｆｅｒｎａｎｄｅｚ，  Ｅ．，  Ｄｏｗｄ，  Ｋ．Ａ．，  Ｓｐｅｅｒ，  Ｓ．Ｄ．，  Ｐｌａｔｔ，  Ｄ．Ｊ．，  Ｇｏｒｍａｎ，  Ｍ．Ｊ．，  Ｇｏｖｅｒｏ，  Ｊ．，  Ｎｅｌｓｏｎ，  Ｃ．Ａ．，  Ｐｉｅｒｓｏｎ，  Ｔ．Ｃ．，  Ｄｉａｍｏｎｄ，  Ｍ．Ｓ．，  ｅｔ  ａｌ．  （２０１６）．  Ｓｔｒｕｃｔｕｒａｌ  Ｂａｓｉｓ  ｏｆ  Ｚｉｋａ  Ｖｉｒｕｓ−Ｓｐｅｃｉｆｉｃ  Ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ｐｒｏｔｅｃｔｉｏｎ．  Ｃｅｌｌ  １６６（４）：１０１６−２７  ａｎｄ  ｉｎ  Ｋｏｓｔｙｕｃｈｅｎｋｏ  ＶＡ，  Ｌｉｍ  ＥＸ，  Ｚｈａｎｇ  Ｓ，  Ｆｉｂｒｉａｎｓａｈ  Ｇ，  Ｎｇ  ＴＳ，  Ｏｏｉ  ＪＳ，  Ｓｈｉ  Ｊ，  Ｌｏｋ  ＳＭ．  Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｔｈｅｒｍａｌｌｙ  ｓｔａｂｌｅ  Ｚｉｋａ  ｖｉｒｕｓ．  Ｎａｔｕｒｅ．  ２０１６  Ｍａｙ  １９；５３３（７６０３）：４２５−８。いかなる理論にも拘束されるものではないが、（ｉ）ＬＲへの結合が、ウイルスの融合遷移状態を捕捉することにより融合を阻害することができ、（ｉｉ）ＥＤＩ−ＥＤＩＩＩヒンジ及びＥＤＩＩＩへの結合が、ＥＤＩＩＩの動きを防ぎ、三量体の融合後構造を形成し、それによって膜融合を停止させると考えられる。
【０１１０】
したがって、本発明に係る抗体又はその抗原結合断片は、ＺＩＫＶの付着後段階を阻害する（ことができる）ことが好ましい。「付着後」とは、典型的には、（ＺＩＫＶが標的とする細胞の）細胞膜にＺＩＫＶが付着した後のＺＩＫＶ感染の任意の段階を意味する。例えば、本発明に係る抗体又はその抗原結合断片は、好ましくは、膜融合を防止する（ことができる）。更に、本発明に係る抗体又はその抗原結合断片は、ＺＩＫＶ（粒子）の凝集を引き起こす（ことができる）ことも好ましい。最も好ましくは、本発明に係る抗体又はその抗原結合断片は、（ｉ）ＺＩＫＶの付着後工程を阻害し、（ｉｉ）ＺＩＫＶ（粒子）の凝集を引き起こす（ことができる）。
【０１１１】
特に好ましくは、本発明に係る抗体又はその抗原結合断片は、ＺＩＫＶ  ＥＤＩＩＩに結合する例示ヒト抗体ＺＫＡ１９０（実施例１、図１参照）の少なくとも１つのＣＤＲ、好ましくは６つ全てのＣＤＲ、より好ましくは可変領域、更により好ましくは両方の可変領域（即ち、エピトープ結合部位）（具体的には、特異性）を含む。本発明に係る抗体又はその抗原結合断片に含まれることが好ましいＺＫＡ１９０のＣＤＲ及び可変領域のアミノ酸配列は、以下の表１及び表２に記載される。
【０１１２】
抗体又はその抗原結合断片が、ＺＩＫＶ感染性ビリオン上に提示される四次エピトープ（ｑｕａｔｅｒｎａｒｙ  ｅｐｉｔｏｐｅ）に結合することもまた好ましい。かなりの中和活性にもかかわらず、そのような抗体は、典型的には、標準的な（前記のような）ＥＬＩＳＡ、即ち、インビトロで試験した場合、特に、精製された形態（即ち、ビリオン、ウイルス様粒子などの「外部／不含」ＺＩＫＶ  Ｅタンパク質）において組換えＺＩＫＶ  Ｅタンパク質又はＺＩＫＶ  ＥＤＩＩＩとの検出可能な結合を示さない。「検出可能な結合がない」とは、典型的には、標準的なＥＬＩＳＡにおいてＥＣ５０が１００００ｎｇ／ｍｌまで検出されなかったことを意味する。換言すれば、標準的ＥＬＩＳＡで検出可能なＥＣ５０が１００００ｎｇ／ｍｌを超える場合、それは「検出可能な結合がない」と称される。
【０１１３】
したがって、このような抗体は、本明細書では「中和非Ｅ結合」（ＮＮＢ）抗体とも称される。ＺＩＫＶ感染性ビリオン上に提示される四次エピトープは、典型的には、構造的エピトープである。例えば、ＺＩＫＶ感染性ビリオン上に提示された四次エピトープは、二量体を構成する２つのエンベロープタンパク質単量体の界面に形成され得るか（「エンベロープ二量体エピトープ」；ＥＤＥ）、又は隣接する二量体間に亘って形成され得る「ヘリンボーンエピトープ」）。
【０１１４】
特に好ましくは、本発明に係る抗体又はその抗原結合断片は、ＺＩＫＶ感染性ビリオン上に提示される四次エピトープに結合する例示ヒト抗体ＺＫＡ２３０（実施例１、図１参照）の少なくとも１つのＣＤＲ、好ましくは６つ全てのＣＤＲ、より好ましくは可変領域、更により好ましくは両方の可変領域（即ち、エピトープ結合部位）（具体的には、特異性）を含む。本発明に係る抗体又はその抗原結合断片に含まれることが好ましいＺＫＡ２３０のＣＤＲ及び可変領域のアミノ酸配列は、以下の表１及び表２に記載される。
【０１１５】
抗体又はその抗原結合断片が、ジカウイルスエンベロープタンパク質のドメインＩＩ（ＥＤＩＩ）に結合することも好ましい。ＥＤＩＩは、保存された融合ループを含む細長い指のようなドメインで、宿主細胞のエンドソーム膜と相互作用し、ＺＩＫＶ  Ｅタンパク質のおよそアミノ酸位置５２からアミノ酸位置１３２までと、およそアミノ酸位置１９３からアミノ酸位置２８０まで存在する（Ｄａｉ  Ｌ，  Ｓｏｎｇ  Ｊ，  Ｌｕ  Ｘ，  Ｄｅｎｇ  ＹＱ，  Ｍｕｓｙｏｋｉ  ＡＭ，  Ｃｈｅｎｇ  Ｈ，  Ｚｈａｎｇ  Ｙ，  Ｙｕａｎ  Ｙ，  Ｓｏｎｇ  Ｈ，  Ｈａｙｗｏｏｄ  Ｊ，  Ｘｉａｏ  Ｈ，  Ｙａｎ  Ｊ，  Ｓｈｉ  Ｙ，  Ｑｉｎ  ＣＦ，  Ｑｉ  Ｊ，  Ｇａｏ  ＧＦ．  Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅｓ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｚｉｋａ  Ｖｉｒｕｓ  Ｅｎｖｅｌｏｐｅ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  ａｎｄ  Ｉｔｓ  Ｃｏｍｐｌｅｘ  ｗｉｔｈ  ａ  Ｆｌａｖｉｖｉｒｕｓ  Ｂｒｏａｄｌｙ  Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ  Ａｎｔｉｂｏｄｙ．  Ｃｅｌｌ  Ｈｏｓｔ  Ｍｉｃｒｏｂｅ．  ２０１６  Ｍａｙ  １１；１９（５）：６９６−７０４）。
【０１１６】
特に好ましくは、本発明に係る抗体又はその抗原結合断片は、ＺＩＫＶ  ＥＤＩＩに結合する例示ヒト抗体ＺＫＡ１８５の少なくとも１つのＣＤＲ、好ましくは６つ全てのＣＤＲ、より好ましくは可変領域、更により好ましくは両方の可変領域（即ち、エピトープ結合部位）（具体的には、特異性）を含む。本発明に係る抗体又はその抗原結合断片に含まれることが好ましいＺＫＡ１８５のＣＤＲ及び可変領域のアミノ酸配列は、以下の表１及び表２に記載される。
【０１１７】
好ましくは、本発明に係る抗体又はその抗原結合断片は、（ｉ）ジカウイルスエンベロープタンパク質のドメインＩＩＩ（ＥＤＩＩＩ）に結合し、且つ（ｉｉ）ジカウイルスエンベロープタンパク質のドメインＩＩ（ＥＤＩＩ）に結合する。言い換えれば、本発明に係る抗体又はその抗原結合断片は、（ｉ）ジカウイルスエンベロープタンパク質のドメインＩＩＩ（ＥＤＩＩＩ）に特異的に結合するエピトープ結合部位、及び（ｉｉ）ジカウイルスエンベロープタンパク質のドメインＩＩ（ＥＤＩＩ）に特異的に結合するエピトープ結合部位を含むことが好ましい。前記したように、ジカウイルスエンベロープタンパク質のドメインＩＩＩは、配列番号２６３又は配列番号２６５に記載のアミノ酸配列、特に配列番号２６４に記載のアミノ酸配列を含む又はなることが好ましい。更に、前記したように、抗体又はその抗原結合断片は、ジカウイルスエンベロープタンパク質のエピトープに結合することも好ましく、これは、ＥＤＩＩＩのラテラルリッジ（ＬＲ）の１つ以上のアミノ酸残基及び／又はＥＤＩ−ＥＤＩＩＩヒンジ領域の１つ以上のアミノ酸残基を含む。言い換えれば、ＥＤＩＩＩを標的とするエピトープ結合部位は、好ましくは、ＥＤＩＩＩのラテラルリッジ（ＬＲ）の１つ以上のアミノ酸残基及び／又はＥＤＩ−ＥＤＩＩＩヒンジ領域の１つ以上のアミノ酸残基に結合する。
【０１１８】
本発明に係る抗体又はその抗原結合断片は、（ｉ）ジカウイルスエンベロープタンパク質のドメインＩＩＩ（ＥＤＩＩＩ）に結合し、且つ（ｉｉ）ＺＩＫＶ感染性ビリオン上に提示される四次エピトープに結合することも好ましい。言い換えれば、本発明に係る抗体又はその抗原結合断片は、（ｉ）ジカウイルスエンベロープタンパク質のドメインＩＩＩ（ＥＤＩＩＩ）に特異的に結合するエピトープ結合部位、及び（ｉｉ）ＺＩＫＶ感染性ビリオンに提示される四次エピトープに特異的に結合するエピトープ結合部位を含むことが好ましい。前記したように、ジカウイルスエンベロープタンパク質のドメインＩＩＩは、配列番号２６３又は配列番号２６５に記載のアミノ酸配列、特に配列番号２６４に記載のアミノ酸配列を含む又はからなることが好ましい。更に、前記したように、抗体又はその抗原結合断片は、ジカウイルスエンベロープタンパク質のエピトープに結合することも好ましく、これは、ＥＤＩＩＩのラテラルリッジ（ＬＲ）の１つ以上のアミノ酸残基及び／又はＥＤＩ−ＥＤＩＩＩヒンジ領域の１つ以上のアミノ酸残基を含む。言い換えれば、ＥＤＩＩＩを標的とするエピトープ結合部位は、好ましくは、ＥＤＩＩＩのラテラルリッジ（ＬＲ）の１つ以上のアミノ酸残基及び／又はＥＤＩ−ＥＤＩＩＩヒンジ領域の１つ以上のアミノ酸残基に結合する。
【０１１９】
一般に、本発明に係る抗体又はその抗原結合断片の単一のエピトープ結合部位（「パラトープ」又は「抗原受容体」とも呼ばれる）は、好ましくは、重鎖に（少なくとも）３個の相補性決定領域（ＣＤＲ）及び軽鎖に（少なくとも）３個のＣＤＲを含む。一般に、相補性決定領域（ＣＤＲ）は、重鎖可変ドメイン及び軽鎖可変ドメインに存在する超可変性領域である。典型的には、抗体の重鎖及び接続された軽鎖のＣＤＲは共に抗原受容体（エピトープ結合部位）を形成する。通常、３個のＣＤＲ（ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３）は、可変ドメインに非連続的に配置される。エピトープ結合部位は、典型的には、（例えば、２本の異なるポリペプチド鎖、即ち、重鎖及び軽鎖における）２つの可変ドメインで構成されるので、各エピトープ結合部位につき６個のＣＤＲ（重鎖：ＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、及びＣＤＲＨ３；軽鎖：ＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、及びＣＤＲＬ３）が存在する。重鎖及び／又は軽鎖におけるＣＤＲは、フレームワーク領域によって分離され得、フレームワーク領域（ＦＲ）は、ＣＤＲよりも「可変性」の低い可変ドメインにおける領域である。例えば、鎖（又はそれぞれの各鎖）は、３個のＣＤＲによって分離されている４個のフレームワーク領域で構成され得る。
【０１２０】
重鎖に３個の異なるＣＤＲ及び軽鎖に３個の異なるＣＤＲを含む各種の例示的なヒト抗ＺＩＫＡ  Ｅタンパク質の重鎖及び軽鎖の配列を決定した（以下の表１及び表２参照）。ＣＤＲアミノ酸の位置は、ＩＭＧＴ付番システムに従って定義される（ＩＭＧＴ：ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｉｍｇｔ．ｏｒｇ／；Ｌｅｆｒａｎｃ，Ｍ．−Ｐ．ｅｔ  ａｌ．（２００９）Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．３７，Ｄ１００６−Ｄ１０１２を参照）。好ましくは、本発明に係る抗体又はその抗原結合断片は、以下の例示的な抗体の少なくとも１つのＣＤＲを含む。より好ましくは、本発明に係る抗体又はその抗原結合断片は、以下の例示的な抗体の（エピトープ結合部位の）６つのＣＤＲ全てを含む。更により好ましくは、本発明に係る抗体又はその抗原結合断片は、以下の例示的な抗体の重鎖可変領域（ＶＨ）及び軽鎖可変領域（ＶＬ）を含む。
【０１２１】
表１は、例示的な抗体の重鎖ＣＤＲ（ＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、及びＣＤＲＨ３）及び重鎖可変領域（「ＶＨ」と称される）のアミノ酸配列の配列番号を示す。
【表１−１】
2020531000.tif 000005
【０１２２】
【表１−２】
2020531000.tif 000006
【０１２３】
【表１−３】
2020531000.tif 000007
【０１２４】
以下の表２は、例示的な抗体の軽鎖ＣＤＲ（ＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、及びＣＤＲＬ３）及び軽鎖可変領域（「ＶＬ」と称される）のアミノ酸配列の配列番号を示す。
【表２】
2020531000.tif 000008
【０１２５】
したがって、本発明に係る抗体又はその抗原結合断片は、表１及び／又は表２に示すＣＤＲ配列、ＶＨ配列、及び／又はＶＬ配列のうちの少なくとも１つに対して少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含むことが好ましい。
【０１２６】
本発明に係る抗体又はその抗原結合断片は、少なくとも１つのＣＤＲＨ１、少なくとも１つのＣＤＲＨ２、及び少なくとも１つのＣＤＲＨ３を含む重鎖と、少なくとも１つのＣＤＲＬ１、少なくとも１つのＣＤＲＬ２、及び少なくとも１つのＣＤＲＬ３を含む軽鎖とを含み、少なくとも１つのＣＤＲ、好ましくは少なくとも１つの重鎖ＣＤＲＨ３が、配列番号３、７５、３９、２１、５７、１０１、１０５、１０９、１１３、１１７、１２１、１２５、１２９、１３３、１３７、１４１、１４５、１４９、１５３、１５７、１６１、１６５、１６９、１７３、１７７、１８１、１８５、１８９、１９３、１９７、２０１、２０５、２０９、２１３、２１７、２２１、２２５、２２９、２３３、２３７、２４１、２４５、２４９、２５３、２５７、及び２６１のいずれかで表されるアミノ酸配列、又は少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するその機能的配列変異体を含む又はからなる。
【０１２７】
より好ましくは、本発明に係る抗体又はその抗原結合断片は、少なくとも１つのＣＤＲＨ１、少なくとも１つのＣＤＲＨ２、及び少なくとも１つのＣＤＲＨ３を含む重鎖と、少なくとも１つのＣＤＲＬ１、少なくとも１つのＣＤＲＬ２、及び少なくとも１つのＣＤＲＬ３を含む軽鎖とを含み、少なくとも１つのＣＤＲ、好ましくは少なくとも１つの重鎖ＣＤＲＨ３が、配列番号３、２１、３９、５７、及び７５のいずれかで表されるアミノ酸配列、又は少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するその機能的配列変異体を含む又はからなることが好ましい。より好ましくは、本発明に係る抗体又はその抗原結合断片は、少なくとも１つのＣＤＲＨ１、少なくとも１つのＣＤＲＨ２、及び少なくとも１つのＣＤＲＨ３を含む重鎖と、少なくとも１つのＣＤＲＬ１、少なくとも１つのＣＤＲＬ２、及び少なくとも１つのＣＤＲＬ３を含む軽鎖とを含み、少なくとも１つのＣＤＲ、好ましくは少なくとも１つの重鎖ＣＤＲＨ３が、配列番号３、２１、及び３９のいずれかで表されるアミノ酸配列、又は少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するその機能的配列変異体を含む又はからなることが好ましい。
【０１２８】
また、好ましくは、本発明に係る抗体又はその抗原結合断片は、少なくとも１つのＣＤＲＨ１、少なくとも１つのＣＤＲＨ２、及び少なくとも１つのＣＤＲＨ３を含む重鎖と、少なくとも１つのＣＤＲＬ１、少なくとも１つのＣＤＲＬ２、及び少なくとも１つのＣＤＲＬ３を含む軽鎖とを含み、少なくとも１つのＣＤＲ、好ましくは少なくとも１つの重鎖ＣＤＲＨ３が、配列番号２１又は配列番号３９で表されるアミノ酸配列、又は少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するその機能的配列変異体を含む又はからなることが好ましい。
【０１２９】
最も好ましくは、本発明に係る抗体又はその抗原結合断片は、少なくとも１つのＣＤＲＨ１、少なくとも１つのＣＤＲＨ２、及び少なくとも１つのＣＤＲＨ３を含む重鎖と、少なくとも１つのＣＤＲＬ１、少なくとも１つのＣＤＲＬ２、及び少なくとも１つのＣＤＲＬ３を含む軽鎖とを含み、少なくとも１つのＣＤＲ、好ましくは少なくとも１つの重鎖ＣＤＲＨ３が、配列番号３で表されるアミノ酸配列、又は少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するその機能的配列変異体を含む又はからなることが好ましい。
【０１３０】
より好ましくは、本発明に係る抗体又はその抗原結合断片は、少なくとも１つのＣＤＲＨ１、少なくとも１つのＣＤＲＨ２、及び少なくとも１つのＣＤＲＨ３を含む重鎖と、少なくとも１つのＣＤＲＬ１、少なくとも１つＣＤＲＬ２、及び少なくとも１つのＣＤＲＬ３を含む軽鎖とを含み、
（ｉ）少なくとも１つの重鎖ＣＤＲＨ１は、配列番号１、１９、３７、５５、７３、９９、１０３、１０７、１１１、１１５、１１９、１２３、１２７、１３１、１３５、１３９、１４３、１４７、１５１、１５５、１５９、１６３、１６７、１７１、１７５、１７９、１８３、１８７、１９１、１９５、１９９、２０３、２０７、２１１、２１５、２１９、２２３、２２７、２３１、２３５、２３９、２４３、２４７、２５１、２５５、及び２５９のいずれかで表されるアミノ酸配列、又は少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するその機能的配列変異体を含み；
（ｉｉ）少なくとも１つの重鎖ＣＤＲＨ２は、配列番号２、２０、３８、５６、７４、１００、１０４、１０８、１１２、１１６、１２０、１２４、１２８、１３２、１３６、１４０、１４４、１４８、１５２、１５６、１６０、１６４、１６８、１７２、１７６、１８０、１８４、１８８、１９２、１９６、２００、２０４、２０８、２１２、２１６、２２０、２２４、２２８、２３２、２３６、２４０、２４４、２４８、２５２、２５６、及び２６０のいずれかで表されるアミノ酸配列、又は少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するその機能的配列変異体を含み；及び／又は
（ｉｉｉ）少なくとも１つの重鎖ＣＤＲＨ３は、配列番号３、２１、３９、５７、７５、１０１、１０５、１０９、１１３、１１７、１２１、１２５、１２９、１３３、１３７、１４１、１４５、１４９、１５３、１５７、１６１、１６５、１６９、１７３、１７７、１８１、１８５、１８９、１９３、１９７、２０１、２０５、２０９、２１３、２１７、２２１、２２５、２２９、２３３、２３７、２４１、２４５、２４９、２５３、２５７、及び２６１のいずれかで表されるアミノ酸配列、又は少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するその機能的配列変異体を含む。
【０１３１】
更により好ましくは、本発明に係る抗体又はその抗原結合断片は、少なくとも１つのＣＤＲＨ１、少なくとも１つのＣＤＲＨ２、及び少なくとも１つのＣＤＲＨ３を含む重鎖と、少なくとも１つのＣＤＲＬ１、少なくとも１つＣＤＲＬ２、及び少なくとも１つのＣＤＲＬ３を含む軽鎖とを含み、
（ｉ）少なくとも１つの重鎖ＣＤＲＨ１は、配列番号１、１９、３７、５５、及び７３のいずれかで表されるアミノ酸配列、又は少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するその機能的配列変異体を含み；
（ｉｉ）少なくとも１つの重鎖ＣＤＲＨ２は、配列番号２、２０、３８、５６、及び７４のいずれかで表されるアミノ酸配列、又は少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するその機能的配列変異体を含み；及び／又は
（ｉｉｉ）少なくとも１つの重鎖ＣＤＲＨ３は、配列番号３、２１、３９、５７、及び７５のいずれかで表されるアミノ酸配列、又は少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するその機能的配列変異体を含む。
【０１３２】
更により好ましくは、本発明に係る抗体又はその抗原結合断片は、少なくとも１つのＣＤＲＨ１、少なくとも１つのＣＤＲＨ２、及び少なくとも１つのＣＤＲＨ３を含む重鎖と、少なくとも１つのＣＤＲＬ１、少なくとも１つＣＤＲＬ２、及び少なくとも１つのＣＤＲＬ３を含む軽鎖とを含み、
（ｉ）少なくとも１つの重鎖ＣＤＲＨ１は、配列番号１、１９、及び３７のいずれかで表されるアミノ酸配列、又は少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するその機能的配列変異体を含み；
（ｉｉ）少なくとも１つの重鎖ＣＤＲＨ２は、配列番号２、２０、及び３８のいずれかで表されるアミノ酸配列、又は少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するその機能的配列変異体を含み；及び／又は
（ｉｉｉ）少なくとも１つの重鎖ＣＤＲＨ３は、配列番号３、２１、及び３９のいずれかで表されるアミノ酸配列、又は少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するその機能的配列変異体を含む。
【０１３３】
更により好ましくは、本発明に係る抗体又はその抗原結合断片は、少なくとも１つのＣＤＲＨ１、少なくとも１つのＣＤＲＨ２、及び少なくとも１つのＣＤＲＨ３を含む重鎖と、少なくとも１つのＣＤＲＬ１、少なくとも１つＣＤＲＬ２、及び少なくとも１つのＣＤＲＬ３を含む軽鎖とを含み、
（ｉ）少なくとも１つの重鎖ＣＤＲＨ１は、配列番号１又は配列番号７３で表されるアミノ酸配列、又は少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するその機能的配列変異体を含み；
（ｉｉ）少なくとも１つの重鎖ＣＤＲＨ２は、配列番号２又は配列番号７４で表されるアミノ酸配列、又は少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するその機能的配列変異体を含み；及び／又は
（ｉｉｉ）少なくとも１つの重鎖ＣＤＲＨ３は、配列番号３又は配列番号７５で表されるアミノ酸配列、又は少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するその機能的配列変異体を含む。
【０１３４】
また、好ましくは、本発明に係る抗体又はその抗原結合断片は、少なくとも１つのＣＤＲＨ１、少なくとも１つのＣＤＲＨ２、及び少なくとも１つのＣＤＲＨ３を含む重鎖と、少なくとも１つのＣＤＲＬ１、少なくとも１つＣＤＲＬ２、及び少なくとも１つのＣＤＲＬ３を含む軽鎖とを含み、
（ｉ）少なくとも１つの重鎖ＣＤＲＨ１は、配列番号１９又は配列番号３７で表されるアミノ酸配列、又は少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するその機能的配列変異体を含み；
（ｉｉ）少なくとも１つの重鎖ＣＤＲＨ２は、配列番号２０又は配列番号３８で表されるアミノ酸配列、又は少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するその機能的配列変異体を含み；及び／又は
（ｉｉｉ）少なくとも１つの重鎖ＣＤＲＨ３は、配列番号２１又は配列番号３９で表されるアミノ酸配列、又は少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するその機能的配列変異体を含む。
【０１３５】
最も好ましくは、本発明に係る抗体又はその抗原結合断片は、少なくとも１つのＣＤＲＨ１、少なくとも１つのＣＤＲＨ２、及び少なくとも１つのＣＤＲＨ３を含む重鎖と、少なくとも１つのＣＤＲＬ１、少なくとも１つＣＤＲＬ２、及び少なくとも１つのＣＤＲＬ３を含む軽鎖とを含み、
（ｉ）少なくとも１つの重鎖ＣＤＲＨ１は、配列番号１で表されるアミノ酸配列、又は少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するその機能的配列変異体を含み；
（ｉｉ）少なくとも１つのＣＤＲＨ２は、配列番号２で表されるアミノ酸配列、又は少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するその機能的配列変異体を含み；及び／又は
（ｉｉｉ）少なくとも１つの重鎖ＣＤＲＨ３は、配列番号３で表されるアミノ酸配列、又は少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するその機能的配列変異体を含む。
【０１３６】
また、好ましくは、本発明に係る抗体又はその抗原結合断片は、少なくとも１つのＣＤＲＨ１、少なくとも１つのＣＤＲＨ２、及び少なくとも１つのＣＤＲＨ３を含む重鎖と、少なくとも１つのＣＤＲＬ１、少なくとも１つＣＤＲＬ２、及び少なくとも１つのＣＤＲＬ３を含む軽鎖とを含み、
（ｉ）少なくとも１つのＣＤＲＬ１は、配列番号４、２２、４０、５８、及び７６のいずれかで表されるアミノ酸配列、又は少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するその機能的配列変異体を含み；
（ｉｉ）少なくとも１つのＣＤＲＬ２は、配列番号５、６、２３、２４、４１、４２、５９、６０、７７、及び７８のいずれかで表されるアミノ酸配列、又は少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するその機能的配列変異体を含み；及び／又は
（ｉｉｉ）少なくとも１つのＣＤＲＬ３アミノは、配列番号７、２５、４３、６１、及び７９のいずれかで表されるアミノ酸配列、又は少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するその機能的配列変異体を含む。
【０１３７】
より好ましくは、本発明に係る抗体又はその抗原結合断片は、少なくとも１つのＣＤＲＨ１、少なくとも１つのＣＤＲＨ２、及び少なくとも１つのＣＤＲＨ３を含む重鎖と、少なくとも１つのＣＤＲＬ１、少なくとも１つＣＤＲＬ２、及び少なくとも１つのＣＤＲＬ３を含む軽鎖とを含み、
（ｉ）少なくとも１つのＣＤＲＬ１は、配列番号４、２２、及び４０のいずれかで表されるアミノ酸配列、又は少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するその機能的配列変異体を含み；
（ｉｉ）少なくとも１つのＣＤＲＬ２は、配列番号５、６、２３、２４、４１、及び４２のいずれかで表されるアミノ酸配列、又は少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するその機能的配列変異体を含み；及び／又は
（ｉｉｉ）少なくとも１つのＣＤＲＬ３は、配列番号７、２５、及び４３のいずれかで表されるアミノ酸配列、又は少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するその機能的配列変異体を含む。
【０１３８】
更により好ましくは、本発明に係る抗体又はその抗原結合断片は、少なくとも１つのＣＤＲＨ１、少なくとも１つのＣＤＲＨ２、及び少なくとも１つのＣＤＲＨ３を含む重鎖と、少なくとも１つのＣＤＲＬ１、少なくとも１つＣＤＲＬ２、及び少なくとも１つのＣＤＲＬ３を含む軽鎖とを含み、
（ｉ）少なくとも１つのＣＤＲＬ１は、配列番号４又は配列番号７６で表されるアミノ酸配列、又は少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するその機能的配列変異体を含み；
（ｉｉ）少なくとも１つのＣＤＲＬ２は、配列番号５、６、７７、及び７８のいずれかで表されるアミノ酸配列、又は少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するその機能的配列変異体を含み；及び／又は
（ｉｉｉ）少なくとも１つのＣＤＲＬ３は、配列番号７又は配列番号７９で表されるアミノ酸配列、又は少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するその機能的配列変異体を含む。
【０１３９】
また、好ましくは、本発明に係る抗体又はその抗原結合断片は、少なくとも１つのＣＤＲＨ１、少なくとも１つのＣＤＲＨ２、及び少なくとも１つのＣＤＲＨ３を含む重鎖と、少なくとも１つのＣＤＲＬ１、少なくとも１つＣＤＲＬ２、及び少なくとも１つのＣＤＲＬ３を含む軽鎖とを含み、
（ｉ）少なくとも１つのＣＤＲＬ１は、配列番号２２又は配列番号４０で表されるアミノ酸配列、又は少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するその機能的配列変異体を含み；
（ｉｉ）少なくとも１つのＣＤＲＬ２は、配列番号２３、２４、４１、及び４２のいずれかで表されるアミノ酸配列、又は少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するその機能的配列変異体を含み；及び／又は
（ｉｉｉ）少なくとも１つのＣＤＲＬ３は、配列番号２５又は配列番号４３で表されるアミノ酸配列、又は少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するその機能的配列変異体を含む。
【０１４０】
最も好ましくは、本発明に係る抗体又はその抗原結合断片は、少なくとも１つのＣＤＲＨ１、少なくとも１つのＣＤＲＨ２、及び少なくとも１つのＣＤＲＨ３を含む重鎖と、少なくとも１つのＣＤＲＬ１、少なくとも１つＣＤＲＬ２、及び少なくとも１つのＣＤＲＬ３を含む軽鎖とを含み、
（ｉ）少なくとも１つのＣＤＲＬ１は、配列番号４で表されるアミノ酸配列、又は少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するその機能的配列変異体を含み；
（ｉｉ）少なくとも１つのＣＤＲＬ２は、配列番号５又は配列番号６で表されるアミノ酸配列、又は少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するその機能的配列変異体を含み；及び／又は
（ｉｉｉ）少なくとも１つのＣＤＲＬ３アミノは、配列番号７で表されるアミノ酸配列、又は少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するその機能的配列変異体を含む。
【０１４１】
好ましくは、本発明に係る抗体又はその抗原結合断片は、以下に示すＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、及びＣＤＲＨ３アミノ酸配列を含む：（ｉ）配列番号１〜３、又は少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するその機能的配列変異体；（ｉｉ）配列番号１９〜２１、又は少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するその機能的配列変異体；（ｉｉｉ）配列番号３７〜３９、又は少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するその機能的配列変異体；（ｉｖ）配列番号５５〜５７、又は少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するその機能的配列変異体；（ｖ）配列番号７３〜７５、又は少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するその機能的配列変異体；（ｖｉ）配列番号９９〜１０１、又は少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するその機能的配列変異体；（ｖｉｉ）配列番号１０３〜１０５、又は少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するその機能的配列変異体；（ｖｉｉｉ）配列番号１０７〜１０９、又は少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するその機能的配列変異体；（ｉｘ）配列番号１１１〜１１３、又は少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するその機能的配列変異体；（ｘ）配列番号１１５〜１１７、又は少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するその機能的配列変異体；（ｘｉ）配列番号１１９〜１２１、又は少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するその機能的配列変異体；（ｘｉｉ）配列番号１２３〜１２５、又は少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するその機能的配列変異体；（ｘｉｉｉ）配列番号１２７〜１２９、又は少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するその機能的配列変異体；（ｘｉｖ）配列番号１３１〜１３３、又は少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するその機能的配列変異体；（ｘｖ）配列番号１３５〜１３７、又は少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するその機能的配列変異体；（ｘｖｉ）配列番号１３９〜１４１、又は少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するその機能的配列変異体；（ｘｖｉｉ）配列番号１４３〜１４５、又は少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するその機能的配列変異体；（ｘｖｉｉｉ）配列番号１４７〜１４９、又は少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するその機能的配列変異体；（ｘｉｘ）配列番号１５１〜１５３、又は少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するその機能的配列変異体；（ｘｘ）配列番号１５５〜１５７、又は少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するその機能的配列変異体；（ｘｘｉ）配列番号１５９〜１６１、又は少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するその機能的配列変異体；（ｘｘｉｉ）配列番号１６３〜１６５、又は少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するその機能的配列変異体；（ｘｘｉｉｉ）配列番号１６７〜１６９、又は少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するその機能的配列変異体；（ｘｘｉｖ）配列番号１７１〜１７３、又は少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するその機能的配列変異体；（ｘｘｖ）配列番号１７５〜１７７、又は少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するその機能的配列変異体；（ｘｘｖｉ）配列番号１７９〜１８１、又は少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するその機能的配列変異体；（ｘｘｖｉｉ）配列番号１８３〜１８５、又は少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するその機能的配列変異体；（ｘｘｖｉｉｉ）配列番号１８７〜１８９、又は少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するその機能的配列変異体；（ｘｘｉｘ）配列番号１９１〜１９３、又は少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するその機能的配列変異体；（ｘｘｘ）配列番号１９５〜１９７、又は少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するその機能的配列変異体；（ｘｘｘｉ）配列番号１９９〜２０１、又は少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するその機能的配列変異体；（ｘｘｘｉｉ）配列番号２０３〜２０５、又は少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するその機能的配列変異体；（ｘｘｘｉｉｉ）配列番号２０７〜２０９、又は少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するその機能的配列変異体；（ｘｘｘｉｖ）配列番号２１１〜２１３、又は少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するその機能的配
列変異体；（ｘｘｘｖ）配列番号２１５〜２１７、又は少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するその機能的配列変異体；（ｘｘｘｖｉ）配列番号２１９〜２２１、又は少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するその機能的配列変異体；（ｘｘｘｖｉｉ）配列番号２２３〜２２５、又は少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するその機能的配列変異体；（ｘｘｘｖｉｉｉ）配列番号２２７〜２２９、又は少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するその機能的配列変異体；（ｘｘｘｉｘ）配列番号２３１〜２３３、又は少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するその機能的配列変異体；（ｘｌ）配列番号２３５〜２３７、又は少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するその機能的配列変異体；（ｘｌｉ）配列番号２３９〜２４１、又は少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するその機能的配列変異体；（ｘｌｉｉ）配列番号２４３〜２４５、又は少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するその機能的配列変異体；（ｘｌｉｉｉ）配列番号２４７〜２４９、又は少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するその機能的配列変異体；（ｘｌｉｖ）配列番号２５１〜２５３、又は少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するその機能的配列変異体；（ｘｌｖ）配列番号２５５〜２５７、又は少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するその機能的配列変異体；又は（ｘｌｖｉ）配列番号２５９〜２６１、又は少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するその機能的配列変異体。
【０１４２】
したがって、本発明に係る抗体又はその抗原結合断片はまた、以下に示すＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、及びＣＤＲＨ３アミノ酸配列並びにＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、及びＣＤＲＬ３アミノ酸配列を含むことが好ましい：（ｉ）配列番号１〜５及び７、又は少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するその機能的配列変異体；（ｉｉ）配列番号１〜４及び６〜７、又は少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するその機能的配列変異体；（ｉｉｉ）配列番号１９〜２３及び２５、又は少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するその機能的配列変異体；（ｉｖ）配列番号１９〜２２及び２４〜２５、又は少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するその機能的配列変異体；（ｖ）配列番号３７〜４１及び４３、又は少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するその機能的配列変異体；（ｖｉ）配列番号３７〜４０及び４２〜４３、又は少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するその機能的配列変異体；（ｖｉｉ）配列番号５５〜５９及び６１、又は少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するその機能的配列変異体；（ｖｉｉｉ）配列番号５５〜５８及び６０〜６１、又は少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するその機能的配列変異体；（ｉｘ）配列番号７３〜７７及び７９、又は少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するその機能的配列変異体；又は（ｘ）配列番号７３〜７６及び７８〜７９、又は少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するその機能的配列変異体。
【０１４３】
より好ましくは、本発明に係る抗体又はその抗原結合断片はまた、以下に示すＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、及びＣＤＲＨ３アミノ酸配列並びにＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、及びＣＤＲＬ３アミノ酸配列を含む：（ｉ）配列番号１〜５及び７、又は少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するその機能的配列変異体；（ｉｉ）配列番号１〜４及び６〜７、又は少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するその機能的配列変異体；（ｉｉｉ）配列番号１９〜２３及び２５、又は少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するその機能的配列変異体；（ｉｖ）配列番号１９〜２２及び２４〜２５、又は少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するその機能的配列変異体；（ｖ）配列番号３７〜４１及び４３、又は少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するその機能的配列変異体；（ｖｉ）配列番号３７〜４０及び４２〜４３、又は少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するその機能的配列変異体；（ｖｉｉ）配列番号７３〜７７及び７９、又は少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するその機能的配列変異体；又は（ｖｉｉｉ）配列番号７３〜７６及び７８〜７９、又は少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するその機能的配列変異体。
【０１４４】
更により好ましくは、本発明に係る抗体又はその抗原結合断片はまた、以下に示すＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、及びＣＤＲＨ３アミノ酸配列並びにＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、及びＣＤＲＬ３アミノ酸配列を含む：（ｉ）配列番号１〜５及び７、又は少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するその機能的配列変異体；（ｉｉ）配列番号１〜４及び６〜７、又は少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するその機能的配列変異体；（ｉｉｉ）配列番号７３〜７７及び７９、又は少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するその機能的配列変異体；又は（ｉｖ）配列番号７３〜７６及び７８〜７９、又は少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するその機能的配列変異体。
【０１４５】
また、好ましくは、本発明に係る抗体又はその抗原結合断片は、以下に示すＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、及びＣＤＲＨ３アミノ酸配列並びにＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、及びＣＤＲＬ３アミノ酸配列を含む：（ｉ）配列番号１９〜２３及び２５、又は少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するその機能的配列変異体；（ｉｉ）配列番号１９〜２２及び２４〜２５、又は少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するその機能的配列変異体；（ｉｉｉ）配列番号３７〜４１及び４３、又は少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するその機能的配列変異体；又は（ｉｖ）配列番号３７〜４０及び４２〜４３、又は少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するその機能的配列変異体。
【０１４６】
更により好ましくは、本発明に係る抗体又はその抗原結合断片はまた、以下に示すＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、及びＣＤＲＨ３アミノ酸配列並びにＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、及びＣＤＲＬ３アミノ酸配列を含む：（ｉ）配列番号１〜５及び７、又は少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するその機能的配列変異体；又は（ｉｉ）配列番号１〜４及び６〜７、又は少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するその機能的配列変異体。
【０１４７】
また、好ましくは、本発明に係る前記抗体又はその抗原結合断片は、以下に示すＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、及びＣＤＲＨ３アミノ酸配列並びにＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、及びＣＤＲＬ３アミノ酸配列を含む：（ｉ）配列番号１９〜２３及び２５、又は少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するその機能的配列変異体；又は（ｉｉ）配列番号１９〜２２及び２４〜２５、又は少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するその機能的配列変異体。
【０１４８】
最も好ましくは、本発明に係る抗体又はその抗原結合断片は、以下の第１のエピトープ結合部位（ａ）及び第２のエピトープ結合部位（ｂ）を含む：（ａ）以下に示すＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、及びＣＤＲＨ３アミノ酸配列並びにＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、及びＣＤＲＬ３アミノ酸配列を含む第１のエピトープ結合部位：（ｉ）配列番号１〜５及び７、又は少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するその機能的配列変異体；又は（ｉｉ）配列番号１〜４及び６〜７、又は少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するその機能的配列変異体、及び（ｂ）以下に示すＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、及びＣＤＲＨ３アミノ酸配列並びにＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、及びＣＤＲＬ３アミノ酸配列を含む第２のエピトープ結合部位：（ｉ）配列番号１９〜２３及び２５、又は少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するその機能的配列変異体；又は（ｉｉ）配列番号１９〜２２及び２４〜２５、又は少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するその機能的配列変異体。
【０１４９】
また、好ましくは、本発明に係る前記抗体又はその抗原結合断片は、以下に示すＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、及びＣＤＲＨ３アミノ酸配列並びにＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、及びＣＤＲＬ３アミノ酸配列を含む：（ｉ）配列番号３７〜４１及び４３、又は少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するその機能的配列変異体；又は（ｉｉ）配列番号３７〜４０及び４２〜４３、又は少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するその機能的配列変異体。
【０１５０】
最も好ましくは、本発明に係る抗体又はその抗原結合断片は、以下の第１のエピトープ結合部位（ａ）及び第２のエピトープ結合部位（ｂ）を含む：（ａ）以下に示すＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、及びＣＤＲＨ３アミノ酸配列並びにＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、及びＣＤＲＬ３アミノ酸配列を含む第１のエピトープ結合部位：（ｉ）配列番号１〜５及び７、又は少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するその機能的配列変異体；又は（ｉｉ）配列番号１〜４及び６〜７、又は少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するその機能的配列変異体、及び（ｂ）以下に示すＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、及びＣＤＲＨ３アミノ酸配列並びにＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、及びＣＤＲＬ３アミノ酸配列を含む第２のエピトープ結合部位：（ｉ）配列番号３７〜４１及び４３、又は少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するその機能的配列変異体；又は（ｉｉ）配列番号３７〜４０及び４２〜４３、又は少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するその機能的配列変異体。
【０１５１】
更に、また、本発明に係る抗体又はその抗原結合断片は、重鎖可変領域（ＶＨ）及び任意に軽鎖可変領域（ＶＬ）を含むことが好ましく、重鎖可変領域（ＶＨ）は、配列番号８、２６、４４、６２、８０、１０２、１０６、１１０、１１４、１１８、１２２、１２６、１３０、１３４、１３８、１４２、１４６、１５０、１５４、１５８、１６２、１６６、１７０、１７４、１７８、１８２、１８６、１９０、１９４、１９８、２０２、２０６、２１０、２１４、２１８、２２２、２２６、２３０、２３４、２３８、２４２、２４６、２５０、２５４、２５８、及び２６２のいずれかで表されるアミノ酸配列、又は少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するその機能的配列変異体を含む又はからなる。
【０１５２】
更に、また、本発明に係る抗体又はその抗原結合断片は、以下を含むことが好ましい：（ｉ）配列番号８で表される重鎖可変領域（ＶＨ）アミノ酸配列、又は少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するその機能的配列変異体、及び／又は配列番号９で表される軽鎖可変領域（ＶＬ）アミノ酸配列、又は少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するその機能的配列変異体；（ｉｉ）配列番号２６で表される重鎖可変領域（ＶＨ）アミノ酸配列、又は少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するその機能的配列変異体、及び／又は配列番号２７で表される軽鎖可変領域（ＶＬ）アミノ酸配列、又は少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するその機能的配列変異体；（ｉｉｉ）配列番号４４で表される重鎖可変領域（ＶＨ）アミノ酸配列、又は少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するその機能的配列変異体、及び／又は配列番号４５で表される軽鎖可変領域（ＶＬ）アミノ酸配列、又は少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するその機能的配列変異体；（ｉｖ）配列番号６２で表される重鎖可変領域（ＶＨ）アミノ酸配列、又は少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するその機能的配列変異体、及び／又は配列番号６３で表される軽鎖可変領域（ＶＬ）アミノ酸配列、又は少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するその機能的配列変異体；又は（ｖ）配列番号８０で表される重鎖可変領域（ＶＨ）アミノ酸配列、又は少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するその機能的配列変異体、及び／又は配列番号８１で表される軽鎖可変領域（ＶＬ）アミノ酸配列、又は少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するその機能的配列変異体。
【０１５３】
より好ましくは、本発明に係る抗体又はその抗原結合断片は、以下を含む：（ｉ）配列番号８で表される重鎖可変領域（ＶＨ）アミノ酸配列、又は少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するその機能的配列変異体、及び／又は配列番号９で表される軽鎖可変領域（ＶＬ）アミノ酸配列、又は少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するその機能的配列変異体；（ｉｉ）配列番号２６で表される重鎖可変領域（ＶＨ）アミノ酸配列、又は少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するその機能的配列変異体、及び／又は配列番号２７で表される軽鎖可変領域（ＶＬ）アミノ酸配列、又は少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するその機能的配列変異体；（ｉｉｉ）配列番号４４で表される重鎖可変領域（ＶＨ）アミノ酸配列、又は少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するその機能的配列変異体、及び／又は配列番号４５で表される軽鎖可変領域（ＶＬ）アミノ酸配列、又は少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するその機能的配列変異体；又は（ｉｖ）配列番号８０で表される重鎖可変領域（ＶＨ）アミノ酸配列、又は少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するその機能的配列変異体、及び／又は配列番号８１で表される軽鎖可変領域（ＶＬ）アミノ酸配列、又は少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するその機能的配列変異体。
【０１５４】
更により好ましくは、本発明に係る抗体又はその抗原結合断片は、以下を含む：（ｉ）配列番号８で表される重鎖可変領域（ＶＨ）アミノ酸配列、又は少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するその機能的配列変異体、及び／又は配列番号９で表される軽鎖可変領域（ＶＬ）アミノ酸配列、又は少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するその機能的配列変異体；又は（ｉｉ）配列番号８０で表される重鎖可変領域（ＶＨ）アミノ酸配列、又は少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するその機能的配列変異体、及び／又は配列番号８１で表される軽鎖可変領域（ＶＬ）アミノ酸配列、又は少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するその機能的配列変異体。
【０１５５】
また、本発明に係る抗体又はその抗原結合断片は、以下を含むことが好ましい：（ｉ）配列番号２６で表される重鎖可変領域（ＶＨ）アミノ酸配列、又は少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するその機能的配列変異体、及び／又は配列番号２７で表される軽鎖可変領域（ＶＬ）アミノ酸配列、又は少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するその機能的配列変異体；又は（ｉｉ）配列番号４４で表される重鎖可変領域（ＶＨ）アミノ酸配列、又は少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するその機能的配列変異体、及び／又は配列番号４５で表される軽鎖可変領域（ＶＬ）アミノ酸配列、又は少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するその機能的配列変異体。
【０１５６】
更により好ましくは、本発明に係る抗体又はその抗原結合断片は、以下を含む：配列番号８で表される重鎖可変領域（ＶＨ）アミノ酸配列、又は少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するその機能的配列変異体、及び／又は配列番号９で表される軽鎖可変領域（ＶＬ）アミノ酸配列、又は少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するその機能的配列変異体。
【０１５７】
また、本発明に係る前記抗体又はその抗原結合断片は、以下を含むことが好ましい：配列番号２６で表される重鎖可変領域（ＶＨ）アミノ酸配列、又は少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するその機能的配列変異体、及び／又は配列番号２７で表される軽鎖可変領域（ＶＬ）アミノ酸配列、又は少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するその機能的配列変異体。
【０１５８】
最も好ましくは、本発明に係る前記抗体又はその抗原結合断片は、以下の第１のエピトープ結合部位（ａ）及び第２のエピトープ結合部位（ｂ）を含む：（ａ）配列番号８で表される重鎖可変領域（ＶＨ）アミノ酸配列、又は少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するその機能的配列変異体、及び／又は配列番号９で表される軽鎖可変領域（ＶＬ）アミノ酸配列、又は少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するその機能的配列変異体を含む第１のエピトープ結合部位；及び（ｂ）配列番号２６で表される重鎖可変領域（ＶＨ）アミノ酸配列、又は少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するその機能的配列変異体、及び／又は配列番号２７で表される軽鎖可変領域（ＶＬ）アミノ酸配列、又は少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するその機能的配列変異体を含む第２のエピトープ結合部位。
【０１５９】
また、本発明に係る前記抗体又はその抗原結合断片は、以下を含むことが好ましい：配列番号４４で表される重鎖可変領域（ＶＨ）アミノ酸配列、又は少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するその機能的配列変異体、及び／又は配列番号４５で表される軽鎖可変領域（ＶＬ）アミノ酸配列、又は少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するその機能的配列変異体。
【０１６０】
より好ましくは、本発明に係る前記抗体又はその抗原結合断片は、以下の第１のエピトープ結合部位（ａ）及び第２のエピトープ結合部位（ｂ）を含む：（ａ）配列番号８で表される重鎖可変領域（ＶＨ）アミノ酸配列、又は少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するその機能的配列変異体、及び／又は配列番号９で表される軽鎖可変領域（ＶＬ）アミノ酸配列、又は少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するその機能的配列変異体を含む第１のエピトープ結合部位；及び（ｂ）配列番号４４で表される重鎖可変領域（ＶＨ）アミノ酸配列、又は少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するその機能的配列変異体、及び／又は配列番号４５で表される軽鎖可変領域（ＶＬ）アミノ酸配列、又は少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するその機能的配列変異体を含む第２のエピトープ結合部位。
【０１６１】
特に好ましくは、本発明に係る抗体又はその抗原結合断片は、Ｆａｂｓ−ｉｎ−ｔａｎｄｅｍ−Ｉｇ（ＦＩＴ−Ｉｇ）フォーマットであり、ＦＩＴ−Ｉｇフォーマットの外側Ｆａｂは、以下に示すＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、及びＣＤＲＨ３アミノ酸配列並びにＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、及びＣＤＲＬ３アミノ酸配列を含むエピトープ結合部位を含む：（ｉ）配列番号１〜５及び７、又は少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するその機能的配列変異体；又は（ｉｉ）配列番号１〜４及び６〜７、又は少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するその機能的配列変異体。より好ましくは、ＦＩＴ−Ｉｇフォーマットの外側Ｆａｂは、配列番号８で表される重鎖可変領域（ＶＨ）アミノ酸配列、又は少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するその機能的配列変異体、及び／又は配列番号９で表される軽鎖可変領域（ＶＬ）アミノ酸配列、又は少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するその機能的配列変異体を含むエピトープ結合部位を含む。更により好ましくは、ＦＩＴ−Ｉｇフォーマットの内側Ｆａｂは、以下に示すＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、及びＣＤＲＨ３アミノ酸配列並びにＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、及びＣＤＲＬ３アミノ酸配列を含むエピトープ結合部位を含む：（ｉ）配列番号１９〜２３及び２５、又は少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するその機能的配列変異体；又は（ｉｉ）配列番号１９〜２２及び２４〜２５、又は少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するその機能的配列変異体。により好ましくは、ＦＩＴ−Ｉｇフォーマットの内側Ｆａｂは、配列番号２６で表される重鎖可変領域（ＶＨ）アミノ酸配列、又は少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するその機能的配列変異体、及び／又は配列番号２７で表される軽鎖可変領域（ＶＬ）アミノ酸配列、又は少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するその機能的配列変異体を含むエピトープ結合部位を含む。
【０１６２】
好ましくは、本発明に係る抗体又はその抗原結合断片は、医薬としての使用のためのものである。換言すれば、本発明に係る抗体又はその抗原結合断片は、医薬の調製に使用され得る。より好ましくは、本発明に係る抗体又はその抗原結合断片は、ジカウイルス感染の予防及び／又は治療に用いるためのものである。換言すれば、本発明に係る抗体又はその抗原結合断片は、ジカウイルス感染の予防及び／又は治療における医薬の調製又は使用において使用され得る。この側面については、以下、より詳細に説明する。
【０１６３】
核酸分子
別の態様では、本発明は、また、上記本発明に係る抗体若しくはその抗原結合断片、又は前記抗体若しくはその抗原結合断片の少なくとも１つのＣＤＲを含むその断片をコードしている少なくとも１つのポリヌクレオチドを含む核酸分子を提供する。核酸分子は、核酸成分を含む、好ましくはからなる分子である。核酸分子という用語は、好ましくは、ＤＮＡ又はＲＮＡ分子を指す。特に、用語「ポリヌクレオチド」と同義で用いられる。
【０１６４】
核酸分子は、好ましくは、糖／リン酸骨格のホスホジエステル結合によって互いに共有結合しているヌクレオチドモノマーを含む又はからなるポリマーである。また、用語「核酸分子」は、修飾核酸分子、例えば、塩基修飾、糖修飾、又は骨格修飾されたＤＮＡ又はＲＮＡ分子も包含する。
【０１６５】
本発明に係る核酸分子において、本発明に係る抗体又はその抗原結合断片のコード化断片は、抗体又はその抗原結合断片の少なくとも１つのＣＤＲを含む。表１及び表２は、本発明に係る例示的な抗体のＣＤＲ並びにＶＨ及びＶＬのアミノ酸配列の配列番号を示す。したがって、本発明に係る核酸分子は、好ましくは、表１及び表２に示されるアミノ酸配列の１つ以上をコードするポリヌクレオチドを含む。好ましくは、本発明に係る抗体又はその抗原結合断片のコード化断片は、３つのＣＤＲ、より好ましくは、エピトープ結合部位の３つ全ての重鎖ＣＤＲ（ＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、ＣＤＲＨ３）及び／又はエピトープ結合部位の３つ全ての軽鎖ＣＤＲ（ＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、ＣＤＲＬ３）を含む。したがって、抗体又はその抗原結合断片のコード化断片は、（正確に）３つ又は６つのＣＤＲを含むことが好ましい。したがって、本発明に係る核酸分子は、好ましくは、表１及び表２に示される３つ又は６つのＣＤＲアミノ酸配列、特に対応するＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、及びＣＤＲＨ３の各配列、及び／又はＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、及びＣＤＲＬ３の各配列をコードするポリヌクレオチドを含む。より好ましくは、抗体又はその抗原結合断片のコード化断片は、可変領域、例えば重鎖可変領域（ＶＨ）及び／又は軽鎖可変領域（ＶＬ）を含む。したがって、抗体又はその抗原結合断片のコード化断片は、（正確に）１つ又は２つの可変領域を含むことが好ましい。したがって、本発明に係る核酸分子は、好ましくは、表１及び表２に示される可変領域アミノ酸配列の１つ又は２つをコードするポリヌクレオチドを含む。最も好ましくは、抗体又はその抗原結合断片のコード化断片は、本発明に係る抗体又はその抗原結合断片の（完全な）ポリペプチド鎖を含む。そのような（完全な）ポリペプチド鎖は、例えば、（完全な）重鎖又は（完全な）軽鎖であり得る。しかし、そのような（完全な）ポリペプチド鎖は、多くの多重特異性抗体フォーマットにおいて当該技術分野で知られる重鎖及び軽鎖のエレメントの両方を含むこともできる（例えば、重鎖定常領域だけでなく、例えば、１つ以上の重鎖可変領域に加えて、軽鎖可変領域を含むポリペプチド鎖）。
【０１６６】
核酸分子は、のモノシストロン性、バイシストロン性、又はマルチシストロン性（トリシストロン性など）であることができる。バイシストロン性又はマルチシストロン性核酸分子は、典型的には、２つ（バイシストロン性）又はそれ以上（マルチシストロン性）のオープンリーディングフレーム（ＯＲＦ）を通常有し得る核酸分子である。この文脈におけるオープンリーディングフレームは、ペプチド又はタンパク質に翻訳可能なコドンの配列である。より一般的には、本発明の核酸分子は、本発明に係る少なくとも１つの抗体又はその抗原結合断片をコードする少なくとも１つのポリヌクレオチドを含む。本発明に係る核酸分子が１超のコーディングポリヌクレオチドを含む場合、第２、第３などのコーディングポリヌクレオチドは他のペプチド／タンパク質をコードしてもよく、及び／又は例えば、本発明に係る抗体又はその断片もコードしてもよく、これは、第１の抗体コード領域と同一又は異なっていてもよい。好ましい実施形態では、本発明の核酸分子は、少なくとも２つのコーディングポリヌクレオチド、例えば（正確に）２つ又は３つのコーディングポリヌクレオチドを含み、それらはすべて同一又は異なる抗体若しくはその断片又は変異体をコードする。例えば、本発明に係る抗体又はその抗原結合断片の異なる断片は、同一核酸分子上の異なるポリヌクレオチドによってコードされ得る。本発明の更に別の実施形態では、本発明の核酸分子は、同一コード領域内の１超の抗体又は抗体の断片をコードしてもよい。要約すると、本発明の核酸分子は、モノシストロン性、バイシストロン性、又はマルチシストロン性であることができる。
【０１６７】
例えば、好ましい一実施形態では、本発明に係る抗体又はその抗原結合断片は、単鎖抗体であり得る。この場合、抗体又はその抗原結合断片の完全な単鎖は、単一のポリヌクレオチドによってコードされていることが好ましい。したがって、本発明に係る核酸分子はモノシストロン性であることが好ましく、特に、本発明に係る抗体又はその抗原結合断片をコードする１つの（単一の）ポリヌクレオチドを含むことができる。
【０１６８】
また、本発明に係る抗体又はその抗原結合断片は、例えば重鎖及び軽鎖などの（正確に）２つの異なるポリペプチド鎖を含むことも好ましい。これは、２つの同一の重鎖と２つの同一の軽鎖、したがって、２つの異なるポリペプチド鎖を含む古典的なネイティブＩｇＧ分子によって例証することができる（抗体が最終的に４つのポリペプチド鎖を含む場合でも、それらは、２つの（異なる）ポリヌクレオチドによってコードされ得る）。好ましくは、本発明に係る抗体又はその抗原結合断片のそのような２つの異なるポリペプチド鎖（例えば、重鎖及び軽鎖）は、同一核酸分子上（例えば、バイシストロン性核酸分子において）又は（正確に２つの）異なる核酸分子上（例えば、各核酸分子はモノシストロン性であり得る）に位置し得る２つの異なるポリヌクレオチドによってコードされ得る。したがって、本発明に係る核酸分子はバイシストロン性であることが好ましく、特に、本発明に係る抗体又はその抗原結合断片を（一緒に）コードする（正確に）２つのポリヌクレオチドを含むことができる。本発明に係る核酸分子は、前記したように、本発明に係る抗体又はその抗原結合断片の断片（例えば、（完全な）ポリペプチド鎖）をコードする（少なくとも又は正確に）１つのポリヌクレオチドを含むことも好ましい。したがって、本発明に係る核酸分子はモノシストロン性であることが好ましい。更に、本発明に係る抗体又はその抗原結合断片は、複数の（例えば、モノシストロン性）核酸分子によってコードされてもよい。例えば、２つの異なるポリペプチド鎖を含む抗体は、２つの異なる核酸分子上に位置する２つのポリヌクレオチドによってコードされ得る。
【０１６９】
また、本発明に係る抗体又はその抗原結合断片は、（正確に）３つの異なるポリペプチド鎖を含むことも好ましい。したがって、核酸分子は、トリシストロン性である（例えば、本発明に係るそのような抗体又はその抗原結合断片に含まれる３つのポリペプチド鎖全てをコードする）ことが好ましい。しかし、核酸分子は、例えば、本発明に係るそのような抗体又はその抗原結合断片に含まれる１つ又は２つのポリペプチド鎖をコードするモノ又はバイシストロン性であることも好ましい。例えば、２つ又は３つの核酸分子などの複数の核酸分子が、本発明に係る抗体又はその抗原結合断片を（一緒に）コードし得る。
【０１７０】
例えば、本発明に係る抗体又はその抗原結合断片は、特に好ましくは、通常次の３つのポリペプチド鎖を含むＦａｂｓ−ｉｎ−ｔａｎｄｅｍ−Ｉｇ（ＦＩＴ−Ｉｇ）フォーマットである：
−好ましくは前記「ＬＡＬＡ」変異を有する定常ドメインＣＨ１−ＣＨ２−ＣＨ３を含む内側Ｆａｂの重鎖と外側Ｆａｂの軽鎖を含む又はからなるポリペプチド１であって、好ましくは、外側Ｆａｂの軽鎖が、好ましくはリンカーなしで、内側Ｆａｂの重鎖のＮ末端に融合しているポリペプチド１；
−外側Ｆａｂの重鎖（外側ＦａｂのＶＨ及びＣＨ１）を含む又はからなるポリペプチド２；及び
−内側Ｆａｂの軽鎖を含む又はからなるポリペプチド３。
【０１７１】
したがって、そのようなＦＩＴ−Ｉｇは、好ましくは、１つの（例えば、トリシストロン性）核酸分子、３つの（例えば、モノシストロン性）核酸分子、又は２つの（例えば、１つのモノシストロン性、１つのバイシストロン性）核酸分子によってコードされ得る。
【０１７２】
したがって、本発明に係る核酸分子は、本発明に係るＦＩＴ−Ｉｇ抗体のポリペプチド１をコードするポリヌクレオチドを含むことが好ましい。より好ましくは、核酸分子は、本発明に係るＦＩＴ−Ｉｇ抗体のポリペプチド２又はポリペプチド３をコードするポリヌクレオチドを含まない。そのような核酸分子は、好ましくはモノシストロン性である。
【０１７３】
また、本発明に係る核酸分子は、本発明に係るＦＩＴ−Ｉｇ抗体のポリペプチド２をコードするポリヌクレオチドを含むことも好ましい。より好ましくは、核酸分子は、本発明に係るＦＩＴ−Ｉｇ抗体のポリペプチド１又はポリペプチド３をコードするポリヌクレオチドを含まない。そのような核酸分子は、好ましくはモノシストロン性である。
【０１７４】
また、本発明に係る核酸分子は、本発明に係るＦＩＴ−Ｉｇ抗体のポリペプチド３をコードするポリヌクレオチドを含むことも好ましい。より好ましくは、核酸分子は、本発明に係るＦＩＴ−Ｉｇ抗体のポリペプチド１又はポリペプチド２をコードするポリヌクレオチドを含まない。そのような核酸分子は、好ましくはモノシストロン性である。
【０１７５】
また、本発明に係る核酸分子は、本発明に係るＦＩＴ−Ｉｇ抗体のポリペプチド１をコードするポリヌクレオチド及びポリペプチド２をコードするポリヌクレオチドを含むことも好ましい。より好ましくは、核酸分子は、本発明に係るＦＩＴ−Ｉｇ抗体のポリペプチド３をコードするポリヌクレオチドを含まない。そのような核酸分子は、好ましくはバイシストロン性である。
【０１７６】
また、本発明に係る核酸分子は、本発明に係るＦＩＴ−Ｉｇ抗体のポリペプチド１をコードするポリヌクレオチド及びポリペプチド３をコードするポリヌクレオチドを含むことも好ましい。より好ましくは、核酸分子は、本発明に係るＦＩＴ−Ｉｇ抗体のポリペプチド２をコードするポリヌクレオチドを含まない。そのような核酸分子は、好ましくはバイシストロン性である。
【０１７７】
また、本発明に係る核酸分子は、本発明に係るＦＩＴ−Ｉｇ抗体のポリペプチド２をコードするポリヌクレオチド及びポリペプチド３をコードするポリヌクレオチドを含むことも好ましい。より好ましくは、核酸分子は、本発明に係るＦＩＴ−Ｉｇ抗体のポリペプチド１をコードするポリヌクレオチドを含まない。そのような核酸分子は、好ましくはバイシストロン性である。
【０１７８】
本発明に係る核酸分子は、本発明に係るＦＩＴ−Ｉｇ抗体のポリペプチド１をコードするポリヌクレオチド、ポリペプチド２をコードするポリヌクレオチド、及びポリペプチド３をコードするポリヌクレオチドを含むことが特に好ましい。そのような核酸分子は、好ましくはトリシストロン性である。
【０１７９】
一般に、核酸分子は、ＤＮＡ分子又はＲＮＡ分子であり得る。核酸分子及び／又はポリヌクレオチドの例としては、例えば、組換えポリヌクレオチド、ベクター、オリゴヌクレオチド、ｒＲＮＡ、ｍＲＮＡ、ｍｉＲＮＡ、ｓｉＲＮＡ、若しくはｔＲＮＡなどのＲＮＡ分子、又はｃＤＮＡなどのＤＮＡ分子などが挙げられる。好ましくは、核酸分子は、ＤＮＡプラスミド又はｍＲＮＡ分子である。ＤＮＡプラスミドは、環状の、好ましくは二本鎖のＤＮＡ分子である。
【０１８０】
以下の表３は、本発明に係る例示的な抗体のＣＤＲ並びにＶＨ及びＶＬをコードしている例示的な核酸配列の配列番号を提供する。遺伝子コードの冗長性により、本発明は、これら核酸配列の配列変異体、特に、同じアミノ酸配列をコードしているかかる配列変異体も含む。
【０１８１】
表３は、５つの例示的な抗体（「ＺＫＡ１９０」、「ＺＫＡ６４」、「ＺＫＡ２３０」、「ＺＫＡ１８５」、及び「ＺＫＡ７８」）のＣＤＲ並びに重鎖可変領域（ＶＨ）及び軽鎖可変領域（ＶＬ）の例示的な核酸配列を示す。
【表３−１】
2020531000.tif 000009
【０１８２】
【表３−２】
2020531000.tif 000010
【０１８３】
【表３−３】
2020531000.tif 000011
【０１８４】
【表３−４】
2020531000.tif 000012
【０１８５】
【表３−５】
2020531000.tif 000013
【０１８６】
好ましくは、本発明に係る核酸分子の配列は、配列番号１０〜１８、２８〜３６、４６〜５４、６４〜７２、及び８２〜９０のいずれか１つ又はその機能性配列変異体で表される核酸配列を含む又はからなる。
【０１８７】
また、本発明に係る核酸配列は、表１及び表２に示すＣＤＲ、ＶＨ配列及び／又はＶＬ配列をコードしている核酸配列、例えば、表３に示す配列に対して少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の同一性を有する核酸配列を含むことも好ましい。
【０１８８】
一般に、核酸分子を操作して、特定の核酸配列を挿入、欠失、又は変更することができる。かかる操作による変化としては、制限酵素部位を導入する、コドン使用頻度を変更する、転写及び／又は翻訳調節配列を付加若しくは最適化する等の変化が挙げられるが、これらに限定されない。また、核酸を変化させて、コードされているアミノ酸を変更することも可能である。例えば、１以上の（例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０等）のアミノ酸置換、欠失、又は挿入を抗体のアミノ酸配列に導入することが有用であり得る。かかる点突然変異は、エフェクタ機能、抗原結合親和性、翻訳後修飾、免疫原性等を変化させることができたり、共有結合基（例えば、標識）を結合させるためのアミノ酸を導入することができたり、（例えば、精製目的のための）タグを導入することができたりする。突然変異は、特異的部位に導入することもでき、ランダムに導入し、続いてセレクション（例えば、分子進化）することもできる。例えば、本発明の（例示的な）抗体のＣＤＲ領域、ＶＨ配列及び／又はＶＬ配列のいずれかをコードしている１以上の核酸をランダムに又は定向的に突然変異させて、コードされているアミノ酸に様々な性質を導入することができる。かかる変化は、初期変化が保持され、他のヌクレオチド位置に新たな変化が導入される反復プロセスの結果であり得る。更に、独立した工程で得られた変化を組み合わせてもよい。コードされているアミノ酸に導入される様々な性質としては、親和性の強化を挙げることができるが、これに限定されない。
【０１８９】
更なる態様では、本発明は、本発明に係る抗体又はその抗原結合断片の断片をコードする少なくとも１つのポリヌクレオチドを各核酸分子が含む、前記した複数の核酸分子も提供する。好ましくは、複数の核酸分子によってコードされる複数の断片は、本発明に係る抗体又はその抗原結合断片を形成する。言い換えれば、本発明に係る複数の核酸分子は、本発明に係る（完全な）抗体又はその（完全な）抗原結合断片をコードすることが好ましい。これは、特に、（本発明に係る複数の核酸分子に加えて）更なる核酸分子が、本発明に係る（完全な）抗体又はその（完全な）抗原結合断片をコードする／生成するために必要とされないことを意味する。例えば、本発明に係る複数の核酸分子は、本発明に係る抗体又はその抗原結合断片の全てのポリペプチド鎖をコードする。
【０１９０】
本発明に係る複数の核酸分子の好ましい例は、（正確に）２つの核酸分子であり、各核酸分子が、１つの単一の又は１超（例えば、２又は３）のポリヌクレオチドを含み、各ポリヌクレオチドが、本発明に係る抗体又はその抗原結合断片の（異なる）ポリペプチド鎖をコードする。したがって、そのような複数の核酸分子の核酸分子は、好ましくはモノシストロン性又はバイシストロン性である。その例は、前記した本発明に係るＦＩＴ−Ｉｇ抗体を一緒にコードする２つの核酸分子である（例えば、ＦＩＴ−Ｉｇのポリペプチド１、２、及び３が２つの核酸分子によってコードされるように、対応するモノシストロン性核酸分子と組み合わせられる１つのバイシストロン性核酸分子（前記した通り））。
【０１９１】
別の好ましい例では、本発明は、各核酸分子が、本発明に係る抗体又はその抗原結合断片の（異なる）ポリペプチド鎖をコードする１つの（単一の）ポリヌクレオチドを含む（正確に）３つの核酸分子を提供する。したがって、そのような複数の核酸分子の核酸分子は、好ましくはモノシストロン性である。その例は、前記した本発明に係るＦＩＴ−Ｉｇ抗体を一緒にコードする３つの核酸分子（例えば、３つの（例えば、モノシストロン性）核酸分子であって、１つはＦＩＴ−Ｉｇのポリペプチド１をコードし、もう１つはＦＩＴ−Ｉｇのポリペプチド２をコードし、第３のものは、ＦＩＴ−Ｉｇのポリペプチド３をコードする核酸分子（前記した通り））。
【０１９２】
ベクター
本発明に係る核酸分子を含むベクター、例えば、発現ベクターも、本発明の範囲内に更に含まれる。好ましくは、ベクターは、上記核酸分子を含む。
【０１９３】
用語「ベクター」とは、核酸分子、好ましくは、組み換え核酸分子、即ち、自然界には存在しない核酸分子を指す。本発明におけるベクターは、所望の核酸配列を組み込むか又は保有させるのに好適である。かかるベクターは、ストレージベクター、発現ベクター、クローニングベクター、トランスファーベクター等であってよい。ストレージベクターは、核酸分子を便利に保管することができるベクターである。したがって、ベクターは、例えば、本発明に係る所望の抗体又はその抗原断片に対応する配列を含み得る。発現ベクターは、例えばＲＮＡ（例えば、ｍＲＮＡ）、又はペプチド、ポリペプチド、若しくはタンパク質等の発現産物を産生させるために使用することができる。例えば、発現ベクターは、プロモーター配列等のベクターの一続きの配列の転写に必要な配列を含んでいてよい。クローニングベクターは、典型的には、核酸配列をベクターに組み込むために用いることができるクローニングサイトを含むベクターである。クローニングベクターは、例えば、プラスミドベクター又はバクテリオファージベクターであってよい。トランスファーベクターは、細胞又は生物に核酸分子を移入するのに好適なベクター、例えば、ウイルスベクターであってよい。本発明におけるベクターは、例えば、ＲＮＡベクターであってもＤＮＡベクターであってもよい。好ましくは、ベクターは、ＤＮＡ分子、例えば、ＤＮＡプラスミドである。例えば、本願におけるベクターは、クローニングサイト、選択マーカー（例えば、抗生物質耐性因子）、及びベクターの増殖に好適な配列（例えば、複製起点）を含む。好ましくは、本願におけるベクターは、プラスミドベクターである。
【０１９４】
更なる態様において、本発明はまた、好ましくは本発明に係る抗体又はその抗原結合断片をコードする、本発明に係る複数のベクターを提供する。したがって、前記した本発明に係る複数の核酸分子の好ましい実施形態及び例は、本発明に係る複数のベクターにも適用される。
【０１９５】
細胞
更なる態様では、本発明は、本発明に係る抗体又はその抗原結合断片を発現する及び／又は本発明に係るベクター、又は本発明に係る複数のベクターを含む細胞も提供する。
【０１９６】
かかる細胞の例としては、真核細胞、例えば、酵母細胞、動物細胞、又は植物細胞が挙げられるが、これらに限定されない。好ましくは、細胞は、哺乳類細胞、より好ましくは、哺乳類細胞株である。好ましい例としては、ヒト細胞、ＣＨＯ細胞、ＨＥＫ２９３Ｔ細胞、ＰＥＲ．Ｃ６細胞、ＮＳ０細胞、ヒト肝細胞、骨髄腫細胞、又はハイブリドーマ細胞が挙げられる。
【０１９７】
特に、前記細胞に、本発明に係るベクター又は本発明に係る複数のベクター、好ましくは発現ベクター又はその複数のものをトランスフェクトしてよい。用語「トランスフェクション」とは、ＤＮＡ又はＲＮＡ（例えば、ｍＲＮＡ）の分子等の核酸分子を細胞、好ましくは真核細胞に導入することを指す。本発明において、用語「トランスフェクション」は、核酸分子を細胞、好ましくは真核細胞、例えば哺乳類細胞に導入するための当業者に公知の任意の方法を含む。かかる方法は、例えば、エレクトロポレーション、（例えば、カチオン性脂質及び／又はリポソームに基づく）リポフェクション、リン酸カルシウム沈殿、ナノ粒子に基づくトランスフェクション、ウイルスに基づくトランスフェクション、又はカチオン性ポリマー（例えば、ＤＥＡＥ−デキストラン又はポリエチレンイミン等）に基づくトランスフェクションを含む。好ましくは、導入は、非ウイルス的である。
【０１９８】
更に、例えば、本発明に係る抗体又はその抗原結合断片を発現させるために、本発明の細胞に本発明に係るベクター又は本発明に係る複数のベクターを安定的に又は一過的にトランスフェクトしてよい。好ましくは、本発明に係る抗体又はその抗原結合断片をコードしている本発明に係るベクター又は本発明に係る複数のベクターを細胞に安定的にトランスフェクトする。或いは、本発明に係る抗体又はその抗原結合断片をコードしている本発明に係るベクター又は本発明に係る複数のベクターを細胞に一過的にトランスフェクトすることも好ましい。
【０１９９】
抗体の任意の追加の特徴
本発明の抗体は、例えば、治療部位に送達するために薬物に結合させてもよく、対象となる細胞を含む部位のイメージングを容易にするために検出可能な標識に結合させてもよい。薬物及び検出可能な標識に抗体を結合させる方法は、検出可能な標識を使用するイメージング方法等、当技術分野において周知である。標識された抗体は、広範な標識を使用する広範なアッセイで使用することができる。本発明の抗体とＨＢｓＡｇ、対象となるエピトープとの間の抗体−抗原複合体の形成の検出は、検出可能な物質を抗体に結合させることによって容易になり得る。好適な検出手段としては、放射性核種、酵素、補酵素、蛍光物質、化学発光物質、色素原、酵素物質又は補因子、酵素阻害剤、補欠分子族複合体、フリーラジカル、粒子、色素等の標識の使用が挙げられる。好適な酵素の例としては、西洋ワサビペルオキシダーゼ、アルカリホスファターゼ、β−ガラクトシダーゼ、又はアセチルコリンステラーゼが挙げられ；好適な補欠分子族複合体の例としては、ストレプトアビジン／ビオチン及びアビジン／ビオチンが挙げられ；好適な蛍光物質の例としては、ウンベリフェロン、フルオレセイン、フルオレセインイソチオシアネート、ローダミン、ジクロロトリアジニルアミンフルオレセイン、ダンシルクロリド、又はフィコエリトリンが挙げられ；発光物質の例は、ルミノールであり；生物発光物質の例としては、ルシフェラーゼ、ルシフェリン、及びエクオリンが挙げられ；好適な放射活性物質の例としては、１２５Ｉ、１３１Ｉ、３５Ｓ、又は３Ｈが挙げられる。かかる標識された試薬は、例えば、ラジオイムノアッセイ、酵素イムノアッセイ、例えば、ＥＬＩＳＡ、蛍光イムノアッセイ等の様々な周知のアッセイで使用することができる。したがって、本発明に係る標識された抗体は、例えば、米国特許第３，７６６，１６２号、同第３，７９１，９３２号、同第３，８１７，８３７号、及び同第４，２３３，４０２号に記載の通り、かかるアッセイにおいて使用することができる。
【０２００】
本発明に係る抗体は、細胞毒、療法剤、又は放射性金属イオン若しくは放射性同位体等の治療部分にコンジュゲートさせることができる。放射性同位体の例としては、Ｉ−１３１、Ｉ−１２３、Ｉ−１２５、Ｙ−９０、Ｒｅ−１８８、Ｒｅ−１８６、Ａｔ−２１１、Ｃｕ−６７、Ｂｉ−２１２、Ｂｉ−２１３、Ｐｄ−１０９、Ｔｃ−９９、Ｉｎ−１１１等が挙げられるが、これらに限定されない。かかる抗体コンジュゲートは、所与の生物学的応答を調節するために用いることができ、薬物部分は、古典的な化学療法剤に限定されると解釈すべきではない。例えば、薬物部分は、所望の生物活性を有するタンパク質又はポリペプチドであってよい。かかるタンパク質としては、例えば、アブリン、リシンＡ、緑膿菌外毒素、又はジフテリア毒素等の毒素を挙げることができる。
【０２０１】
かかる治療部分を抗体にコンジュゲートさせる技術は、周知である。例えば、Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  ａｎｄ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｔｈｅｒａｐｙ、Ｒｅｉｓｆｅｌｄ等編（Ａｌａｎ  Ｒ．Ｌｉｓｓ，Ｉｎｃ．）、ｐｐ．２４３−２５６におけるＡｒｎｏｎ等（１９８５）「Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  ｆｏｒ  Ｉｍｍｕｎｏｔａｒｇｅｔｉｎｇ  ｏｆ  Ｄｒｕｇｓ  ｉｎ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｔｈｅｒａｐｙ」；Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ、Ｒｏｂｉｎｓｏｎ等編（第２版；Ｍａｒｃｅｌ  Ｄｅｋｋｅｒ，Ｉｎｃ．）、ｐｐ．６２３−６５３におけるＨｅｌｌｓｔｒｏｍ等編（１９８７）「Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  ｆｏｒ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ」；Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ’８４：Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  ａｎｄ  Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ、Ｐｉｎｃｈｅｒａ等編、ｐｐ．４７５−５０６（Ｅｄｉｔｒｉｃｅ  Ｋｕｒｔｉｓ，Ｍｉｌａｎｏ，Ｉｔａｌｙ，１９８５）におけるＴｈｏｒｐｅ（１９８５）「Ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ｃａｒｒｉｅｒｓ  ｏｆ  Ｃｙｔｏｔｏｘｉｃ  Ａｇｅｎｔｓ  ｉｎ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｔｈｅｒａｐｙ：Ａ  Ｒｅｖｉｅｗ」；Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  ｆｏｒ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ  ａｎｄ  Ｔｈｅｒａｐｙ、Ｂａｌｄｗｉｎ等編（Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，１９８５）、ｐｐ．３０３−３１６における「Ａｎａｌｙｓｉｓ，Ｒｅｓｕｌｔｓ，ａｎｄ  Ｆｕｔｕｒｅ  Ｐｒｏｓｐｅｃｔｉｖｅ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ  Ｕｓｅ  ｏｆ  Ｒａｄｉｏｌａｂｅｌｅｄ  Ａｎｔｉｂｏｄｙ  ｉｎ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｔｈｅｒａｐｙ」；及びＴｈｏｒｐｅ  ｅｔ  ａｌ．（１９８２）Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｒｅｖ．６２：１１９−１５８を参照。
【０２０２】
或いは、抗体又はその抗原結合断片は、二次抗体又はその抗体断片にコンジュゲートさせて、米国特許第４，６７６，９８０号に記載の通り抗体ヘテロコンジュゲートを形成することができる。更に、例えば米国特許第４，８３１，１７５号に記載の通り、標識と本発明の抗体との間にリンカーを使用してもよい。抗体又はその抗原結合断片は、放射性ヨウ素、インジウム、イットリウム、又は例えば米国特許第５，５９５，７２１号に記載の通り、当技術分野において公知の他の放射性粒子で直接標識し得る。治療は、例えば国際公開第００／５２０３１号、同第００／５２４７３号に記載の通り、同時に又は後で投与されるコンジュゲートした抗体及びコンジュゲートしていない抗体による治療との組合せからなっていてよい。
【０２０３】
また、本発明の抗体は、固体担持体に結合させてもよい。更に、本発明の抗体又はその抗原結合断片は、例えば、その循環半減期を延長するために、共有結合によってポリマーにコンジュゲートさせることによって化学的に修飾してよい。ポリマー、及びそれをペプチドに結合させる方法の例は、米国特許第４，７６６，１０６号、同第４，１７９，３３７号、同第４，４９５，２８５号、及び同第４，６０９，５４６号に示されている。幾つかの実施形態では、ポリマーは、ポリオキシエチル化ポリオール及びポリエチレングリコール（ＰＥＧ）から選択され得る。ＰＥＧは、室温で水に可溶性であり、一般式：Ｒ（Ｏ−ＣＨ２−ＣＨ２）ｎＯ−Ｒ（式中、Ｒは、水素、又はアルキル基若しくはアルカノール基等の保護基であってよい）を有する。好ましくは、保護基は、１個〜８個の炭素を有し得る。例えば、保護基は、メチルである。記号ｎは、正の整数である。一実施形態では、ｎは、１〜１，０００である。別の実施形態では、ｎは、２〜５００である。好ましくは、ＰＥＧは、１，０００〜４０，０００の平均分子量を有し、より好ましくは、ＰＥＧは、２，０００〜２０，０００の分子量を有し、更により好ましくは、ＰＥＧは、３，０００〜１２，０００の分子量を有する。更に、ＰＥＧは、少なくとも１つのヒドロキシ基を有し得、例えば、ＰＥＧは、末端ヒドロキシ基を有し得る。例えば、それは、活性化されて阻害剤の遊離アミノ基と反応する末端ヒドロキシ基である。しかし、本発明の共有結合によってコンジュゲートされたＰＥＧ／抗体を得るために、反応性基の種類及び量を変更してもよい。
【０２０４】
水溶性ポリオキシエチル化ポリオールも本発明において有用である。例えば、ポリオキシエチル化ソルビトール、ポリオキシエチル化グルコース、ポリオキシエチル化グリセロール（ＰＯＧ）等が挙げられる。一実施形態では、ＰＯＧが用いられる。任意の理論に縛られるものではないが、ポリオキシエチル化グリセロールのグリセロール骨格は、例えば、動物及びヒトにおいて、モノ−、ジ−、トリグリセリドに天然に存在するのと同じ骨格であるので、この分岐は、身体において必ずしも異物として認識される訳ではない。ＰＯＧは、ＰＥＧと同じ範囲の分子量を有し得る。循環半減期を延長するために用いることができる別の薬物送達系は、リポソームである。リポソーム送達系を調製する方法は、当業者に公知である。他の薬物送達系は、当技術分野において公知であり、例えば、Ｐｏｚｎａｎｓｋｙ  ｅｔ  ａｌ．（１９８０）及びＰｏｚｎａｎｓｋｙ（１９８４）に記載されている。
【０２０５】
本発明の抗体は、精製形態で提供され得る。典型的には、抗体は、他のポリペプチドを実質的に含まない組成物中に存在し、例えば、組成物の９０（重量）％未満、通常は６０％未満、より通常は５０％未満が他のポリペプチドで構成される。
【０２０６】
本発明の抗体は、非ヒト（又は異種）宿主、例えば、マウスにおいて免疫原性であり得る。特に、抗体は、非ヒト宿主において免疫原性であるが、ヒト宿主においては免疫原性でないイディオトープを有し得る。特に、ヒトで使用するための本発明の抗体は、マウス、ヤギ、ウサギ、ラット、非霊長類哺乳類等の宿主から容易に単離することができず、且つ一般にヒト化によってもゼノマウスからも得ることができないものが挙げられる。
【０２０７】
医薬組成物
また、本発明は、
（ｉ）本発明に係る抗体若しくはその抗原結合断片；
（ｉｉ）本発明に係る核酸分子若しくは複数の核酸分子をコードしている核酸；
（ｉｉｉ）本発明に係るベクター若しくは複数のベクター；及び／又は
（ｉｖ）本発明に係る細胞
のうちの１以上を含む医薬組成物を提供する。
【０２０８】
言い換えれば、本発明は、また、本発明に係る抗体又はその抗原結合断片を含む医薬組成物、本発明に係る核酸分子、本発明に係る複数の核酸分子、本発明に係るベクター、本発明に係る複数のベクター、及び／又は本発明に係る細胞を提供する。
【０２０９】
医薬組成物は、好ましくは、薬学的に許容し得る担体、希釈剤、及び／又は賦形剤を含有していてもよい。担体又は賦形剤は投与を容易にすることができるが、それ自体が、組成物を摂取する個体にとって有害な抗体の産生を誘導してはならない。また、毒性であってもならない。好適な担体は、タンパク質、ポリペプチド、リポソーム、多糖類、ポリ乳酸、ポリグリコール酸、高分子アミノ酸、アミノ酸コポリマー、及び不活性ウイルス粒子等の、大きく、ゆっくりと代謝される巨大分子であってよい。一般的に、本発明に係る医薬組成物中の薬学的に許容し得る担体は、活性成分であっても不活性成分であってもよい。好ましくは、本発明に係る医薬組成物中の薬学的に許容し得る担体は、ジカウイルス感染に関して活性成分ではない。
【０２１０】
薬学的に許容し得る塩、例えば、鉱酸塩（例えば、塩酸塩、臭化水素塩、リン酸塩、及び硫酸塩）又は有機酸の塩（例えば、酢酸塩、プロピオン酸塩、マロン酸塩、及び安息香酸塩）を用いてもよい。
【０２１１】
医薬組成物中の薬学的に許容し得る担体は、水、生理食塩水、グリセロール、及びエタノール等の液体を更に含有していてもよい。更に、湿潤剤若しくは乳化剤等の補助物質、又はｐＨ緩衝物質がかかる組成物中に存在していてもよい。かかる担体によって、被験体に服用させるために、医薬組成物を錠剤、丸剤、糖衣錠、カプセル剤、液剤、ゲル剤、シロップ剤、スラリー剤、及び懸濁剤として製剤化することができるようになる。
【０２１２】
本発明の医薬組成物は、様々な形態で調製することができる。例えば、前記組成物は、液体溶液又は懸濁液のいずれかとして、注射液として調製してよい。注射する前に液体ビヒクルの溶液又は懸濁液にするのに好適な固体形態を調製してもよい（例えば、保存剤を含有する滅菌水で再構成するための、Ｓｙｎａｇｉｓ（商標）及びＨｅｒｃｅｐｔｉｎ（商標）と同様の凍結乾燥組成物）。前記組成物は、例えば軟膏剤、クリーム剤、又は粉剤として、局所投与用に調製してもよい。前記組成物は、例えば錠剤若しくはカプセル剤として、噴霧剤として、又はシロップ剤として（任意で、風味付けされる）経口投与用に調製してもよい。前記組成物は、例えば微粉末又はスプレーを用いる吸入器として、肺内投与用に調製してもよい。前記組成物は、坐剤又は膣坐剤として調製してもよい。前記組成物は、例えば点眼剤として、鼻腔内、耳内、又は眼内投与用に調製してもよい。前記組成物は、被験体に投与する直前に複合組成物が再構成されるように設計されたキット形態であってもよい。例えば、凍結乾燥した抗体を、滅菌水又は滅菌バッファと共にキット形態で提供してよい。
【０２１３】
前記組成物中の活性成分は、抗体分子、抗体断片、又はこれらの変異体及び誘導体であることが好ましく、特に、前記組成物中の活性成分は、本発明に係る抗体、抗体断片、又はこれらの変異体及び誘導体である。したがって、消化管において分解されやすい。したがって、前記組成物が消化管を使用する経路によって投与される場合、前記組成物は、前記抗体を分解から保護するが、一旦消化管から吸収されたら前記抗体を放出させる剤を含有していてよい。
【０２１４】
薬学的に許容し得る担体についての詳細な検討は、Ｇｅｎｎａｒｏ（２０００）Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｙ，２０ｔｈ  ｅｄｉｔｉｏｎ，ＩＳＢＮ：０６８３３０６４７２から入手可能である。
【０２１５】
本発明の医薬組成物は、一般的に、５．５〜８．５のｐＨを有し、幾つかの実施形態では、これは、６〜８であり、他の実施形態では、約７である。ｐＨは、バッファを使用することによって維持することができる。前記組成物は、無菌及び／又はパイロジェンフリーであってよい。前記組成物は、ヒトに対して等張であってよい。一実施形態では、本発明の医薬組成物は、密封容器で提供される。
【０２１６】
幾つかの投与形態で存在する組成物が、本発明の範囲内であり、前記形態としては、例えば、ボーラス注射又は持続点滴等の注射又は点滴による非経口投与に好適な形態が挙げられるが、これらに限定されない。製品が注射又は注入用である場合、油性又は水性のビヒクルの懸濁液、溶液、又はエマルションの形態をとってもよく、懸濁化剤、保存剤、安定剤、及び／又は分散剤等の調合剤を含有していてもよい。或いは、抗体分子は、適切な無菌液体を用いて使用前に再構成するために乾燥形態であってもよい。ビヒクルは、典型的には、薬学的活性化合物等の化合物、特に、本発明に係る抗体を保存、輸送、及び投与するのに好適な物質であると理解される。例えば、ビヒクルは、薬学的活性化合物、特に、本発明に係る抗体を保存、輸送、及び／又は投与するのに好適な生理学的に許容し得る液体であってよい。製剤化すると、本発明の組成物を被験体に直接投与することができる。一実施形態では、前記組成物は、哺乳類、例えば、ヒト被験体への投与に適応する。
【０２１７】
本発明の医薬組成物は、経口、静脈内、筋肉内、動脈内、髄内、腹腔内、髄腔内、脳室内、経皮、経皮、局所、皮下、鼻腔内、経腸、舌下、膣内、又は直腸内経路が挙げられるがこれらに限定されない、任意の数の経路によって投与することができる。また、皮下噴射器を用いて、本発明の医薬組成物を投与してもよい。好ましくは、医薬組成物は、例えば錠剤、カプセル剤等として経口投与用に、局所投与用に、又は例えば液体溶液又は懸濁液等の注射剤として調製することができ、前記医薬組成物は、注射剤であることが特に好ましい。注射前に液体ビヒクルの溶液又は懸濁液にするのに好適な固体形態も好ましく、例えば、医薬組成物は凍結乾燥形態である。
【０２１８】
静脈内、皮膚、若しくは皮下への注射、又は罹患部位への注射等の注射については、活性成分は、好ましくは、パイロジェンフリーであり且つ好適なｐＨ、等張性、及び安定性を有する非経口的に許容し得る水溶液の形態である。当業者は、例えば、生食注射、リンゲル液、乳酸加リンゲル液等の等張ビヒクルを用いて好適な溶液をうまく調製することができる。必要に応じて、保存剤、安定剤、緩衝剤、抗酸化剤、及び／又は他の添加剤が含まれていてもよい。個体に投与されるのが本発明に係るポリペプチドであろうと、ペプチドであろうと、核酸分子であろうと、他の薬学的に有用な化合物であろうと、個体に対して効果を示すのに十分な「予防的に有効な量」又は「治療的に有効な量」（場合による）が投与されることが好ましい。実際に投与される量、並びに投与の速度及び時間推移は、処置されるものの性質及び重篤度に依存する。注射の場合、本発明に係る医薬組成物を、例えばプレフィルドシリンジで提供してよい。
【０２１９】
上に定義された本発明の医薬組成物は、カプセル剤、錠剤、水性懸濁剤、又は液剤が挙げられるがこれらに限定されない任意の経口的に許容し得る剤形で経口投与してよい。経口使用するための錠剤の場合、一般的に使用される担体としては、ラクトース及びコーンスターチが挙げられる。ステアリン酸マグネシウム等の滑沢剤も典型的に添加される。カプセル形態で経口投与する場合、有用な希釈剤としては、ラクトース及び乾燥コーンスターチが挙げられる。経口使用のために水性懸濁剤が必要な場合、活性成分、即ち、上に定義された本発明のトランスポータ−カーゴコンジュゲート分子を乳化剤及び懸濁化剤と合わせる。必要に応じて、特定の甘味剤、着香剤、又は着色剤を添加してもよい。
【０２２０】
また、特に、治療の標的が、例えば皮膚又は任意の他のアクセス可能な上皮組織の疾患を含む、局所適用によって容易にアクセス可能な領域又は器官を含むとき、本発明の医薬組成物を局所的に投与してもよい。これら領域又は器官のそれぞれに好適な局所製剤が容易に調製される。局所適用の場合、本発明の医薬組成物は、１以上の担体に懸濁又は溶解している本発明の医薬組成物、特に、上に定義されたその成分を含有する好適な軟膏剤に製剤化してよい。局所投与用の担体としては、鉱油、流動ワセリン、白色ワセリン、プロピレングリコール、ポリオキシエチレン、ポリオキシプロピレン化合物、乳化ワックス及び水が挙げられるが、これらに限定されない。或いは、本発明の医薬組成物は、好適なローション又はクリームに製剤化することもできる。本発明において、好適な担体としては、鉱油、モノステアリン酸ソルビタン、ポリソルベート６０、セチルエステルワックス、セテアリールアルコール、２−オクチルドデカノール、ベンジルアルコール、及び水が挙げられるが、これらに限定されない。
【０２２１】
投薬治療は、単回投与スケジュール又は複数回投与スケジュールであり得る。特に、医薬組成物は、単回用量製品として提供することができる。好ましくは、医薬組成物中の抗体の量は、特に単回投与の製品として提供される場合、２００ｍｇを超えず、より好ましくは１００ｍｇを超えず、更により好ましくは５０ｍｇを超えない。
【０２２２】
例えば、本発明に係る医薬組成物は、１日間、２日間、３日間、４日間、５日間、６日間、７日間、８日間、９日間、１０日間、１１日間、１２日間、１３日間、１４日間、１５日間、１６日間、１７日間、１８日間、１９日間、２０日間、若しくは２１日間、又はそれ以上の期間に亘って毎日、例えば、１日間当たり１回又は数回、例えば、１日間当たり１回、２回、３回、又は４回、好ましくは、１日間当たり１回又は２回、より好ましくは、１日間当たり１回、例えば、１ヶ月間、２ヶ月間、３ヶ月間、４ヶ月間、５ヶ月間、６ヶ月間の期間に亘って毎日投与してよい。好ましくは、本発明に係る医薬組成物は、１週間、２週間、３週間、４週間、５週間、６週間、７週間、８週間、９週間、１０週間、１１週間、１２週間、１３週間、１４週間、１５週間、１６週間、１７週間、１８週間、１９週間、２０週間、若しくは２１週間、又はそれ以上の期間の期間に亘って毎週、例えば、１週間当たり１回又は２回、例えば、１ヶ月間、２ヶ月間、３ヶ月間、４ヶ月間、５ヶ月間、６ヶ月間、７ヶ月間、８ヶ月間、９ヶ月間、１０ヶ月間、１１ヶ月間、若しくは１２ヶ月間の期間の期間に亘って毎週、又は２年間、３年間、４年間、若しくは５年間の期間の期間に亘って毎週投与してよい。更に、本発明に係る医薬組成物は、好ましくは、１年間、２年間、３年間、４年間、若しくは５年間、又はそれ以上の期間の期間に亘って毎月、例えば、１ヶ月間当たり１回、又はより好ましくは２ヶ月間毎に投与してよい。また、生涯投与を継続することも好ましい。更に、特に特定の適応症に関しては、例えば、非免疫被験体における偶発的曝露の場合にジカウイルス感染を予防するために１回だけ投与することも企図される。しかしながら、最も好ましい治療スケジュールは、１回以上の単回投与がジカ感染後できるだけ早く投与される、曝露後予防（ＰＥＰ）である。ジカ感染を予防する（即ち、ジカ感染前、特に非ジカ免疫化被験体において）ために１回以上の単回用量が投与される予防設定もまた好ましい。
【０２２３】
特に、単一用量、例えば、日用量、用量、又は月用量、好ましくは週用量については、本発明に係る医薬組成物中の抗体又はその抗原結合断片の量は、１ｇを超えない、好ましくは５００ｍｇを超えない、より好ましくは２００ｍｇを超えない、更により好ましくは、１００ｍｇを超えない、特に好ましくは５０ｍｇを超えないことが好ましい。
【０２２４】
医薬組成物は、典型的には、本発明の１以上の抗体を「有効」量、即ち、所望の疾患若しくは状態を治療、寛解、軽減、若しくは予防するか、又は検出可能な治療効果を呈するのに十分な量含む。治療効果は、病原性効力又は身体症状を低減又は軽減することも含む。任意の特定の被験体についての正確な有効量は、前記被験体の身長、体重、及び健康、状態の性質及び程度、並びに投与のために選択された治療法又は治療法の組合せに依存する。所与の状況についての有効量は、ルーチンな実験によって決定され、臨床医の判断の範囲内である。本発明の目的のために、本発明の抗体の有効量（例えば、医薬組成物中の抗体の量）は、一般的に、投与される個体の体重（例えば、ｋｇ）に関連して、約０．００５ｍｇ／ｋｇ〜約１００ｍｇ／ｋｇ、好ましくは約０．００７５ｍｇ／ｋｇ〜約５０ｍｇ／ｋｇ、より好ましくは約０．０１ｍｇ／ｋｇ〜約１０ｍｇ／ｋｇ、更により好ましくは、約０．０２ｍｇ／ｋｇ〜約５ｍｇ／ｋｇである。
【０２２５】
更に、本発明に係る医薬組成物は、更なる抗体、又は抗体ではない成分であってもよい追加の活性成分を含んでもよい。追加の活性成分は、好ましくはチェックポイント阻害剤である。本明細書に記載のＺＩＫＶ中和抗体又はその抗原結合断片が、更なる活性成分（共薬剤）として本明細書に記載されるＺＩＫＶ  ＮＳ１結合抗体又はその抗原結合断片と組み合わされることも好ましい。それにより、ＺＩＫＶの中和に加えて、ＮＳ１の病原性機能がブロックされ得る。本発明に係る医薬組成物は、追加の活性成分の１以上を含んでもよい。これは、例えば、併用療法の文脈で以下に共薬剤として記載されるものである。
【０２２６】
本発明に係る抗体又は抗原結合断片は、追加の活性成分と同じ医薬組成物中に存在していてもよく、又は好ましくは、本発明に係る抗体又は抗原結合断片は、第１の医薬組成物に含まれ、追加の活性成分は、第１の医薬組成物とは異なる第２の医薬組成物に含まれる。したがって、１超の追加の活性成分が企図される場合、各追加の活性成分と本発明に係る抗体又は抗原結合断片とは、好ましくは、異なる医薬組成物に含まれる。かかる異なる医薬組成物は、合わせて／同時に、又は別々の時点で若しくは別々の箇所（例えば、身体の別々の部分）に投与してよい。
【０２２７】
好ましくは、本発明に係る抗体又は抗原結合断片と追加の活性成分とは、相加的治療効果、又は好ましくは相乗的治療効果を提供する。用語「相乗作用」とは、２以上の活性剤の併用効果が、各活性剤の個々の効果の合計よりも大きいことを説明するために用いられる。したがって、２以上の剤の併用効果によって活性又はプロセスの「相乗的阻害」が生じる場合、前記活性又はプロセスの阻害が、各活性剤の阻害効果の合計よりも大きいことを意図する。用語「相乗的治療効果」とは、（多数のパラメータのうちのいずれかによって測定される）治療効果が、それぞれの個々の治療で観察される個々の治療効果の合計よりも大きい、２以上の治療の組合せで観察される治療効果を指す。
【０２２８】
ｇＺＫＡ１９０、ｇＺＫＡ６４、ｇＺＫＡ２３０、ｇＺＫＡ１８５、ｇＺＫＡ７８に係る抗体又はその抗原結合断片と薬学的に許容し得る担体とを含む医薬組成物が好ましい。
【０２２９】
一実施形態では、本発明の組成物は、本発明の抗体を含んでいてよく、前記抗体は、前記組成物中の全タンパク質の少なくとも５０重量％（例えば、６０％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又はそれ以上）を構成し得る。かかる組成物では、抗体は、好ましくは、精製形態である。
【０２３０】
また、本発明は、医薬組成物を調製する方法であって、（ｉ）本発明の抗体を調製する工程と、（ｉｉ）精製抗体を１以上の薬学的に許容し得る担体と混合する工程とを含む方法を提供する。
【０２３１】
別の実施形態では、医薬組成物を調製する方法は、抗体を１以上の薬学的に許容し得る担体と混合する工程を含み、前記抗体は、本発明の形質転換Ｂ細胞又は培養プラズマ細胞から得られたモノクローナル抗体である。
【０２３２】
治療目的のために抗体又はＢ細胞を送達する代りに、Ｂ細胞又は培養プラズマ細胞に由来する対象となるモノクローナル抗体（又はその活性断片）をコードしている核酸（典型的には、ＤＮＡ）を被験体に送達することもでき、その結果、前記核酸は、被験体においてインサイチュで発現して所望の治療効果を提供することができる。好適な遺伝子療法及び核酸送達ベクターは、当技術分野において公知である。
【０２３３】
医薬組成物は、特に複数回投与フォーマットにパッケージ化されている場合、抗微生物剤を含んでいてよい。前記医薬組成物は、洗浄剤、例えばＴｗｅｅｎ８０等のＴｗｅｅｎ（ポリソルベート）を含んでいてよい。洗浄剤は、一般的に、低濃度、例えば、０．０１％未満で存在する。また、組成物は、等張にするためにナトリウム塩（例えば、塩化ナトリウム）を含んでいてもよい。例えば、１０±２ｍｇ／ｍＬのＮａＣｌ濃度が典型的である。
【０２３４】
更に、医薬組成物は、特に、凍結乾燥される場合又は凍結乾燥物質から再構成された物質を含む場合、例えば、約１５ｍｇ／ｍＬ〜約３０ｍｇ／ｍＬ（例えば、２５ｍｇ／ｍＬ）の糖アルコール（例えば、マンニトール）又は二糖（例えば、スクロース又はトレハロース）を含んでいてよい。凍結乾燥用組成物のｐＨは、凍結乾燥前に５〜８、又は５．５〜７、又は約６．１に調整してよい。
【０２３５】
また、本発明の組成物は、１以上の免疫調節剤を含んでいてもよい。一実施形態では、免疫調節剤のうちの１以上は、アジュバントを含む。
【０２３６】
医学的処置、キット、及び使用
医学的処置
更なる態様では、本発明は、本発明に係る抗体又はその抗原結合断片、本発明に係る核酸分子、本発明に係るベクター、本発明に係る複数の核酸分子、本発明に係る複数のベクター、本発明に係る細胞、又は本発明に係る医薬組成物の、（ｉ）ジカウイルス感染の予防及び／又は治療；又は（ｉｉ）ジカウイルス感染の診断における使用を提供する。本発明に係る抗体又はその抗原結合断片（及び特にその前記好ましい実施形態）又は本発明に係る抗体又はその抗原結合断片をコードしている本発明に係る（複数の）核酸分子の使用は、（ｉ）本明細書に記載されるジカウイルス感染の予防及び／又は治療；又は（ｉｉ）本明細書に記載されるジカウイルス感染の診断に好ましい。
【０２３７】
診断方法は、抗体又は抗体断片をサンプルと接触させることを含んでいてよい。かかるサンプルは、被験体から単離することができ、例えば、鼻道、鼻腔、唾液腺、肺、肝臓、膵臓、腎臓、眼、耳、胎盤、消化管、心臓、卵巣、脳下垂体、副腎、甲状腺、脳、皮膚、又は血液、好ましくは血漿又は血清から採取した単離組織サンプルであってよい。また、前記診断方法は、特に抗体又は抗体断片をサンプルと接触させた後に、抗原／抗体複合体を検出することを含んでいてよい。かかる検出工程は、典型的には、作業台で、即ち、ヒト又は動物の身体と全く接触することなしに実施される。検出方法の例は、当業者に周知であり、例えば、ＥＬＩＳＡ（酵素結合免疫吸着測定法）が挙げられる。
【０２３８】
ジカウイルス感染の予防とは、特に、予防的セッティングを意味し、ここで被験体は、ジカウイルス感染と診断されなかった（診断が行われなかったか、又は診断結果が陰性であった）及び／又は被験体は、ジカウイルス感染の症状を呈さない。したがって、ジカウイルス感染の予防は、「曝露後予防」（ＰＥＰ）、即ち、可能なジカウイルス感染後、例えばジカウイルス感染地域における蚊の咬刺の後の予防的処置を含む。ジカウイルス感染の予防は、妊娠している被験体及び／又はジカウイルス感染地域に滞在する被験体（例えば、ジカウイルス感染地域に住む被験体又はジカウイルス感染地域を旅行する被験体）などの高リスク被験体において特に有用である。
【０２３９】
対照的に、治療的セッティングでは、被験体は典型的にはジカウイルスに感染し、ジカウイルス感染と診断されている、及び／又はジカウイルス感染の症状を呈している。ここで、ＺＩＫＶ感染の「治療」及び「療法」／「治療的」という用語には、（完全な）治癒及びＺＩＫＶ感染の減弱が含まれる。
【０２４０】
したがって、本発明に係る抗体又はその抗原結合断片、本発明に係る核酸分子、本発明に係るベクター、本発明に係る複数の核酸分子、本発明に係る複数のベクター、本発明に係る細胞、又は本発明に係る医薬組成物は、ジカウイルス感染と診断された被験体又はジカ感染の症状を示す被験体におけるジカウイルス感染の治療に好ましく使用される。
【０２４１】
また、本発明に係る抗体又はその抗原結合断片、本発明に係る核酸分子、本発明に係るベクター、本発明に係る複数の核酸分子、本発明に係る複数のベクター、本発明に係る細胞、又は本発明に係る医薬組成物は、無症候性被験体におけるジカウイルス感染の予防及び／又は治療に使用されることが好ましい。これらの被験体は、ジカウイルス感染と診断されていても、診断されていなくてもよい。
【０２４２】
好ましくは、本発明に係る抗体又はその抗原結合断片、本発明に係る核酸分子、本発明に係るベクター、本発明に係る複数の核酸分子、本発明に係る複数のベクター、本発明に係る細胞、又は本発明に係る医薬組成物は、妊娠している被験体におけるジカウイルス感染の予防及び／又は治療、特に先天性感染の予防に使用される。例えば、これは、Ｎｉｇｒｏ  Ｇ，  Ａｄｌｅｒ  ＳＰ，  Ｌａ  Ｔｏｒｒｅ  Ｒ，  Ｂｅｓｔ  ＡＭ，  Ｃｏｎｇｅｎｉｔａｌ  Ｃｙｔｏｍｅｇａｌｏｖｉｒｕｓ  Ｃｏｌｌａｂｏｒａｔｉｎｇ  Ｇｒｏｕｐ：  Ｐａｓｓｉｖｅ  ｉｍｍｕｎｉｚａｔｉｏｎ  ｄｕｒｉｎｇ  ｐｒｅｇｎａｎｃｙ  ｆｏｒ  ｃｏｎｇｅｎｉｔａｌ  ｃｙｔｏｍｅｇａｌｏｖｉｒｕｓ  ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ；  Ｎ  Ｅｎｇｌ  Ｊ  Ｍｅｄ  ２００５，  ３５３：１３５０−１３６２に記載されているように、ＨＣＭＶ先天性感染の予防の場合と同様の方法で行うことができる。
【０２４３】
如何なる理論にも拘束されるものではないが、本発明に係る抗体又はその抗原結合断片は、例えば、妊娠している被験体に投与されると、例えば、（ｉ．ｖ．）注射又は本明細書中に記載される他の投与経路で投与されると、ＦｃＲｎとの相互作用を介して胎盤を通過することができると考えられる。重要なことには、本明細書に記載の抗体の「ＬＡＬＡ」変異体とＦｃＲｎとの相互作用は損なわれない。ＦｃＲｎは、胎盤の第１期に既に発現していると考えられる。
【０２４４】
或いは、本発明に係る抗体若しくはその抗原結合断片、又は（複数の）核酸分子は、羊水外腔（ｅｘｔｒａ−ａｍｎｉｏｔｉｃ  ｓｐａｃｅ）に投与することもできる。
【０２４５】
好ましくは、本発明に係る抗体又はその抗原結合断片、本発明に係る核酸分子、本発明に係るベクター、本発明に係る複数の核酸分子、本発明に係る複数のベクター、本発明に係る細胞、又は本発明に係る医薬組成物は、ジカウイルス感染の予防及び／又は治療に使用され、前記抗体又はその抗原結合断片、核酸、ベクター、複数の核酸、複数のベクター、細胞、又は医薬組成物は、（潜在的な）ジカウイルス感染後７日間までに、好ましくは（潜在的な）ジカウイルス感染後５日間までに、より好ましくは（潜在的な）ジカウイルス感染後４日間までに、更により好ましくは（潜在的な）ジカウイルス感染後３日間までに、最も好ましくは（潜在的な）ジカウイルス感染後１日間又は２日間までに投与される。そのような治療スケジュールは、治療的セッティング及び予防的セッティング、特に曝露後予防（ＰＥＰ）において有用であり得る。
【０２４６】
ＰＥＰにおいては、典型的には、本発明に係る抗体又はその抗原結合断片、本発明に係る核酸分子、本発明に係るベクター、本発明に係る複数の核酸分子、本発明に係る複数のベクター、本発明に係る細胞、又は本発明に係る医薬組成物の投与は、潜在的なジカウイルス感染後、例えばＺＩＫＶ感染地地域での蚊の咬刺後、できる限り早く行う。したがって、ＰＥＰにおいて、本発明に係る抗体又はその抗原結合性断片、本発明に係る核酸分子、本発明に係るベクター、本発明に係る複数の核酸分子、本発明に係る複数のベクター、本発明に係る細胞、又は本発明に係る医薬組成物最初の投与は、典型的には、前記のように、（潜在的な）ＺＩＫＶ感染後１日間以上までである。
【０２４７】
また、本発明に係る抗体又はその抗原結合断片、本発明に係る核酸分子、本発明に係るベクター、本発明に係る複数の核酸分子、本発明に係る複数のベクター、本発明に係る細胞、又は本発明に係る医薬組成物は、ジカウイルス感染の予防及び／又は治療のために使用され、前記抗体又はその抗原結合断片、核酸、ベクター、複数の核酸、複数のベクター、細胞、又は医薬組成物が、（潜在的な）ジカウイルス感染前３ヶ月間まで、好ましくは（潜在的な）ジカウイルス感染前１ヶ月間まで、より好ましくは（潜在的な）ジカウイルス感染前２週間まで、更により好ましくは（潜在的な）ジカウイルス感染前１週間まで、最も好ましくは（潜在的な）ジカウイルス感染前１日間までに投与することが好ましい。そのような治療スケジュールは、特に、予防的セッティングを意味する。
【０２４８】
一般に、特にＰＥＰにおいて、本発明に係る抗体又はその抗原結合断片、本発明に係る核酸分子、本発明に係るベクター、本発明に係る複数の核酸分子、本発明に係る複数のベクター、本発明に係る細胞、又は本発明に係る医薬組成物の最初の投与の後、１回以上の後続の投与を行うことができ、好ましくは１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１、１５、１６、１７、１８、１９、２０、又は２１日間、１日ごと又は１日おきに一回量の投与を行う。また、本発明に係る抗体又はその抗原結合断片、本発明に係る核酸分子、本発明に係るベクター、本発明に係る複数の核酸分子、本発明に係る複数のベクター、本発明に係る細胞、又は本発明に係る医薬組成物の最初の投与の後、１回以上の後続の投与を行うことができ、好ましくは１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１、１５、１６、１７、１８、１９、２０、又は２１週間、１週間当たり１回又は２回の一回量の投与を行う。また、本発明に係る抗体又はその抗原結合断片、本発明に係る核酸分子、本発明に係るベクター、本発明に係る複数の核酸分子、本発明に係る複数のベクター、本発明に係る細胞、又は本発明に係る医薬組成物の最初の投与の後、１回以上の後続の投与を行うことができ、好ましくは１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１、１５、１６、１７、１８、１９、２０、又は２１週間、２週間又は４週間ごとに一回量の投与を行う。また、本発明に係る抗体又はその抗原結合断片、本発明に係る核酸分子、本発明に係るベクター、本発明に係る複数の核酸分子、本発明に係る複数のベクター、本発明に係る細胞、又は本発明に係る医薬組成物の最初の投与の後、１回以上の後続の投与を行うことができ、好ましくは１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１、１５、１６、１７、１８、１９、２０、又は２１ヶ月間、２ヶ月間又は４ヶ月間ごとに一回量の投与を行う。また、本発明に係る抗体又はその抗原結合断片、本発明に係る核酸分子、本発明に係るベクター、本発明に係る複数の核酸分子、本発明に係る複数のベクター、本発明に係る細胞、又は本発明に係る医薬組成物の最初の投与の後、１回以上の後続の投与を行うことができ、好ましくは１、２、３、４、５、６、７、８、９、又は１０年間、１年間当たり１回又は２回、一回量の投与を行う。
【０２４９】
好ましくは、本発明に係る抗体又はその抗原結合断片、本発明に係る核酸分子、本発明に係るベクター、本発明に係る複数の核酸分子、本発明に係る複数のベクター、本発明に係る細胞、又は本発明に係る医薬組成物は、０．００５〜１００ｍｇ／ｋｇ体重の（単回）用量、好ましくは０．００７５〜５０ｍｇ／ｋｇ体重の（単回）用量、より好ましくは０．０１〜１０ｍｇ／ｋｇ体重の（単回）用量、更に好ましくは０．０５〜５ｍｇ／ｋｇ体重の（単回）用量、特に好ましくは０．１〜１ｍｇ／ｋｇ体重の（単回）用量で投与される。
【０２５０】
本発明に係る抗体又はその抗原結合断片、本発明に係る核酸分子、本発明に係るベクター、本発明に係る複数の核酸分子、本発明に係る複数のベクター、本発明に係る細胞、又は本発明に係る医薬組成物は、経口、静脈内、筋肉内、動脈内、髄内、腹腔内、髄腔内、脳室内、経皮、経皮、局所、皮下、鼻腔内、経腸、舌下、膣内、又は直腸内経路などの、任意の数の経路によって投与することができる。静脈内投与、皮下投与、又は筋肉内が好ましく、静脈内投与又は皮下投与がより好ましい。
【０２５１】
妊娠している被験体においては、本発明に係る抗体若しくはその抗原結合断片、又は（複数の）核酸分子は、羊水内又は羊水外（例えば注射により）投与することもできる。
【０２５２】
したがって、本発明はまた、被験体におけるジカウイルス感染を予防及び／又は治療する方法を提供し、前記方法は、本発明に係る抗体又はその抗原結合断片、本発明に係る核酸分子、本発明に係るベクター、本発明に係る複数の核酸分子、本発明に係る複数のベクター、本発明に係る細胞、又は本発明に係る医薬組成物を、それを必要とする被験体に投与することを含む。この方法の好ましい実施形態は、前述の（及び併用療法に関する以下の）医学的使用の好ましい実施形態に対応する。例えば、この方法における好ましい被験体は、ジカウイルス感染と診断された、又はジカウイルス感染の症状を呈する被験体である。この方法における別の好ましい被験体は、妊娠している被験体である。
【０２５３】
併用療法
本発明に係る方法及び使用における本発明に係る抗体若しくはその抗原結合断片、本発明に係る核酸分子、本発明に係るベクター、本発明に係る複数の核酸分子、本発明に係る複数のベクター、本発明に係る細胞、又は本発明に係る医薬組成物の投与は、単独で実施してもよく、特にＺＩＫＶ感染を予防及び／又は治療するのに有用な助剤（本明細書では「追加の活性成分」とも称される）と組み合わせて実施してもよい。
【０２５４】
本発明は、ＺＩＫＶ感染を治療及び／又は予防するのに有用な他の治療レジメン又は助剤の前、同時、又は後に被験体に投与される、本発明に係る抗体若しくはその抗原結合断片、本発明に係る核酸分子、本発明に係るベクター、本発明に係る複数の核酸分子、本発明に係る複数のベクター、本発明に係る細胞、又は本発明に係る医薬組成物の投与を包含する。前記助剤と同時に投与される前記抗体、核酸、ベクター、細胞、又は医薬組成物は、同じ又は異なる組成物で、また、同じ又は異なる投与経路で投与してよい。
【０２５５】
前記他の治療レジメン又は助剤は、例えば、チェックポイント阻害剤であることができる。
【０２５６】
したがって、本発明の別の態様では、本発明に係る抗体若しくはその抗原結合断片、本発明に係る核酸分子、本発明に係るベクター、本発明に係る複数の核酸分子、本発明に係る複数のベクター、本発明に係る細胞、又は本発明に係る医薬組成物は、本明細書に記載の（医学的）使用のために、チェックポイント阻害剤と組み合わせて投与される。
【０２５７】
好ましいチェックポイント阻害剤は、ＰＤ−１／ＰＤ−Ｌ１及び／又はＣＴＬＡ４のブロックを目的とし、したがって、抗ＰＤ−１抗体、抗ＰＤ−Ｌ１抗体、及び抗ＣＴＬＡ４抗体を含む。
【０２５８】
したがって、本発明に係る医薬組成物は、追加の活性成分のうちの１以上を含み得る。
【０２５９】
また、本明細書に記載のＺＩＫＶ中和抗体又はその抗原結合断片は、更なる活性成分（共薬剤）として、ＺＩＫＶ  ＮＳ１結合抗体又はその抗原結合断片と組み合わされることが好ましい。それにより、ＺＩＫＶの中和に加えて、ＮＳ１の病原性機能がブロックされ得る。したがって、例えば、ＰＣＴ／ＥＰ２０１７／０６７５８１（その全体を本明細書に援用する）に記載のＺＩＫＶ  ＮＳ１結合抗体又はその抗原結合断片は、好ましい更なる活性成分（共薬剤）である。
【０２６０】
本発明に係る抗体若しくはその抗原結合断片、本発明に係る核酸分子、本発明に係るベクター、本発明に係る複数の核酸分子、本発明に係る複数のベクター、又は本発明に係る細胞は、追加の活性成分（助剤）と同じ医薬組成物中に存在していてもよく、又は好ましくは、本発明に係る抗体若しくはその抗原結合断片、本発明に係る核酸分子、本発明に係るベクター、本発明に係る複数の核酸分子、本発明に係る複数のベクター、又は本発明に係る細胞は、第１の医薬組成物に含まれ、追加の活性成分（助剤）は、第１の医薬組成物とは異なる第２の医薬組成物に含まれる。したがって、１超の追加の活性成分（助剤）が企図される場合、各追加の活性成分（助剤）は、好ましくは、異なる医薬組成物に含まれる。かかる異なる医薬組成物は、合わせて／同時に、又は別々の時点で若しくは別々の箇所（例えば、身体の別々の部分）に投与してよい。
【０２６１】
好ましくは、本発明に係る抗体又は抗原結合断片と追加の活性成分（助剤）とは、相加的治療効果、又は好ましくは相乗的治療効果を提供する。用語「相乗作用」とは、２以上の活性剤の併用効果が、各活性剤の個々の効果の合計よりも大きいことを説明するために用いられる。したがって、２以上の剤の併用効果によって活性又はプロセスの「相乗的阻害」を生じる場合、前記活性又はプロセスの阻害が、各活性剤の阻害効果の合計よりも大きいことを意図する。用語「相乗的治療効果」とは、（多数のパラメータのうちのいずれかによって測定される）治療効果が、それぞれの個々の治療で観察される個々の治療効果の合計よりも大きい、２以上の治療の組合せで観察される治療効果を指す。
【０２６２】
更なる使用及びキット
更なる態様では、本発明は、また、抗ジカワクチンの抗原が正確な立体構造の特異的エピトープを含有していることを確認することによって前記ワクチンの品質をモニタリングするための、本発明に係る抗体若しくはその抗原結合断片、本発明に係る核酸分子、本発明に係るベクター、本発明に係る複数の核酸分子、本発明に係る複数のベクター、本発明に係る細胞、又は本発明に係る医薬組成物の使用を提供する。チェックすべき抗ジカワクチンなどに含まれる好ましい抗原としては、（ｉ）前記ＺＩＫＶ  Ｅタンパク質のドメインＩＩＩ（ＥＤＩＩＩ）又は（ｉｉ）四次ＺＩＫＶエピトープを含む又はからなるＺＩＫＶエンベロープタンパク質又は任意の他の分子／複合体が挙げられる。
【０２６３】
更に、本発明は、また、ジカウイルス感染の（インビトロ）診断における、本発明に係る抗体若しくはその抗原結合断片、本発明に係る核酸分子、本発明に係るベクター、本発明に係る複数の核酸分子、本発明に係る複数のベクター、本発明に係る細胞、又は本発明に係る医薬組成物の使用を提供する。
【０２６４】
更に、単離された血液サンプル（例えば、全血、血清、及び／又は血漿）がジカウイルスに感染しているかどうかの判定における、本発明に係る抗体若しくはその抗原結合断片、本発明に係る核酸分子、本発明に係るベクター、本発明に係る複数の核酸分子、本発明に係る複数のベクター、本発明に係る細胞、又は本発明に係る医薬組成物の使用も提供される。
【０２６５】
上記の通り、診断方法は、抗体又は抗体断片をサンプルと接触させることを含んでいてよい。かかるサンプルは、被験体から単離することができ、例えば、鼻道、鼻腔、唾液腺、肺、肝臓、膵臓、腎臓、耳、眼、胎盤、消化管、心臓、卵巣、脳下垂体、副腎、甲状腺、脳、皮膚、又は血液、好ましくは血清又は血漿から採取した単離組織サンプルであってよい。また、前記診断方法は、特に抗体又は抗体断片をサンプルと接触させた後に、抗原／抗体複合体を検出することを含んでいてもよい。かかる検出工程は、典型的には、作業台で、即ち、ヒト又は動物の身体と全く接触することなしに実施される。検出方法の例は、当業者に周知であり、例えば、ＥＬＩＳＡ（酵素結合免疫吸着測定法）が挙げられる。
【０２６６】
更なる態様では、本発明はまた、本発明に係る少なくとも１つの抗体又はその抗原結合断片、本発明に係る少なくとも１つの核酸、本発明に係る複数の核酸、本発明に係る少なくとも１つのベクター、本発明に係る複数のベクター、本発明に係る少なくとも１つの細胞、及び／又は本発明に係る少なくとも１つの医薬組成物を含むキットオブパーツを提供する。更に、前記キットは、本発明に係る抗体又はその抗原結合断片、本発明に係る核酸分子、本発明に係るベクター、本発明に係る複数の核酸分子、本発明に係る複数のベクター、本発明に係る細胞、又は本発明に係る医薬組成物を投与するための手段、例えば注射器又は容器、リーフレット、及び／又は前記のように投与される共薬剤を含むことができる。
【図面の簡単な説明】
【０２６７】
【図１】図１は、４つのＺＩＫＶ免疫ドナー（ＺＫＡ、ＺＫＢ、ＺＫＣ、及びＺＫＤ）由来の抗体の、ＺＩＫＶ及びＤＥＮＶ１−４のＥタンパク質及びＺＩＫＶ  Ｅタンパク質のＥＤＩＩＩドメイン；ＮＮＢ中和非Ｅタンパク質結合抗体に対する反応性（ＥＬＩＳＡ）及びＺＩＫＶ及びＤＥＮＶ１中和活性を示す。
【図２】図２は、ＥＬＩＳＡによって測定した、ＺＩＫＶ及びＤＥＮＶ１  Ｅ及びＺＩＫＶ  ＥＤＩＩＩタンパク質に対するＺＫＡ１９０、ＺＫＡ７８、及びＺＫＡ６４抗体の結合を示す。
【図３】図３は、ＥＬＩＳＡによって測定した、ＺＩＫＶ  Ｅ、ＤＥＮＶ１  ＶＬＰ、及びＺＩＫＶ  ＥＤＩＩＩタンパク質に対するＺＫＡ１８５及びＺＫＡ１９０抗体の結合を示す。
【図４】図４は、実施例３について、フローサイトメトリで測定した、Ｖｅｒｏ細胞上のＺＩＫＶ（Ｈ／ＰＦ／２０１３株）及びＤＥＮＶ１に対するＺＫＡ１９０、ＺＫＡ６４、ＺＫＡ６４−ＬＡＬＡ、ＺＫＡ２３０、及びＺＫＡ７８抗体の中和活性（感染細胞の％）を示す。
【図５】図５は、実施例３について、細胞生存率の読み出し（ｗｓｔ−１、Ｒｏｃｈｅ）で測定した、Ｖｅｒｏ細胞上のＺＩＫＶ（Ｈ／ＰＦ／２０１３株）に対するＺＫＡ１９０、ＺＫＡ６４、ＺＫＡ１８５、ＺＫＡ２３０、及びＺＫＡ７８抗体の中和活性を示す。
【図６】図６は、実施例４について、フローサイトメトリで測定した、非許容性Ｋ５６２細胞上のＺＩＫＶ（Ｈ／ＰＦ／２０１３株）に対するＺＫＡ１９０、ＺＫＡ６４、ＺＫＡ６４−ＬＡＬＡ、ＺＫＡ１８５、ＺＫＡ２３０、及びＺＫＡ７８抗体の感染増強活性（ＡＤＥ、抗体依存性増強）（感染細胞の％）を示す。
【図７】図７は、実施例４について、４つのＺＩＫＶ免疫血漿及び１つのＤＥＮＶ免疫血漿が、Ｋ５６２細胞のＺＩＫＶ感染を増強するのと同様の能力を示したことを示す（上のパネル）。このＡＤＥ効果は、ＥＤＩＩＩ特異的ＺＫＡ６４−ＬＡＬＡ抗体によって、５つの免疫血漿全てにおいて完全にブロックされた（下のパネル）。
【図８】図８は、２０１３年以降のアジア系統由来の３９種のＺＩＫＶ株（１９４７年に単離されたアフリカ系統の原型株ＭＲ７６６を含む）のＥＤＩＩＩ領域のアミノ酸アラインメントを示す。
【図９】図９は、実施例３について、フローサイトメトリで測定した、Ｖｅｒｏ細胞上のＺＩＫＶ（Ｈ／ＰＦ／２０１３、ＭＲ７６６及びＭＲＳ＿ＯＰＹ＿Ｍａｒｔｉｎｉｑｕｅ＿ＰａＲｉ＿２０１５）の３種の株に対するＺＫＡ１９０及びＺＫＡ１９０−ＬＡＬＡ抗体の中和活性を示す（感染細胞の％）。
【図１０】図１０は、実施例５について、その量が増加するｍＡｂ（Ａ）の存在下での感染Ｖｅｒｏ細胞のパーセンテージで測定される、ＺＩＫＶの４株のパネルに対して試験したＺＫＡ１９０及びＣ８  ｍＡｂの中和を示す。また、ＩＣ５０値（Ｂ）及び統計値（Ｃ）も示す。データは、少なくとも２つの独立した実験を代表する。
【図１１】図１１は、実施例６について、抗体ＺＫＡ１９０によるＺＩＫＶ感染の中和及び増強を示す。（Ａ）Ｖｅｒｏ細胞のプラークアッセイ（左パネル）及びフルオロフォア標識抗Ｅ抗体を用いた感染ｈＮＰＣの間接免疫蛍光（右パネル）によって測定される、ＺＫＡ１９０、ＺＫＡ１９０−ＬＡＬＡ、及び対照ｍＡｂによるｈＮＰＣのＺＩＫＶ  ＰＲＶＡＢＣ５９株感染の中和。（Ｂ）ＺＫＡ１９０及びＺＫＡ１９０−ＬＡＬＡによる非許容性Ｋ５６２細胞のＺＩＫＶ感染のＡＤＥ。（Ｃ）異なるＺＩＫＶ陽性患者からの血漿血清の連続希釈物と共にプレインキュベートされたときにＫ５６２細胞に誘導されたＡＤＥ（左パネル）。ＺＫＡ１９０  ＬＡＬＡをＺＩＫＶ−血清複合体に添加すると、ＡＤＥが阻害される（右パネル）。（Ｄ）ＺＩＫＶが、ＤＥＮＶ免疫ドナー由来のｐｒＭ交差反応性ｍＡｂ（ＤＶ６２）の連続希釈液とプレインキュベートされたときにＫ５６２細胞に誘導されるＡＤＥ。ＺＫＡ１９０−ＬＡＬＡは、ｐｒＭ反応性抗体ＤＶ６２と複合体化すると、ＺＩＫＶのＡＤＥを阻害する。（Ｅ）示されたｍＡｂの連続希釈によるＤＥＮＶ２血漿（左パネル）又は抗ｐｒＭ  ＤＶ６２  ｍＡｂ（右パネル）のピーク増強希釈によって誘導されるＡＤＥに対する効果。
【図１２Ａ】図１２Ａは、実施例７について、ＺＫＡ１９０エピトープの同定及びＺＩＫＶ株におけるその保存の分析を示す。（Ａ）非標識化ＺＫＡ１９０  Ｆａｂの非存在下（黒色）又は存在下（赤色）における１５Ｎ標識化ＺＩＫＶ  ＥＤＩＩＩの［１５Ｎ、１Ｈ］−ＨＳＱＣスペクトルのオーバーレイ。相違から、抗体結合によって影響されるＥＤＩＩＩ残基を同定する。
【図１２Ｂ】図１２Ｂは、実施例７について、ＺＫＡ１９０エピトープの同定及びＺＩＫＶ株におけるその保存の分析を示す。（Ｂ）ＺＫＶ  ＥＤＩＩＩとの複合体中のＺＫＡ１９０  ＦａｂのＮＭＲエピトープマッピング。化学シフト摂動（ＣＳＰ、ｙ軸）は、ＥＤＩＩＩ残基番号に対してプロットされている。抗体結合によって影響される残基は赤色である。
【図１２Ｃ】図１２Ｃは、実施例７について、ＺＫＡ１９０エピトープの同定及びＺＩＫＶ株におけるその保存の分析を示す。（Ｃ）ＮＭＲエピトープマッピングによって同定されたＦＧループ中の残基は、Ｅタンパク質のｍｏｌモルＡに一部隠れているが、ｍｏｌＢ及びｍｏｌＣでは、大部分が露出している。Ｅタンパク質のＥＤＩＩＩは青色で着色した。ＮＭＲエピトープマッピングによって同定される残基は、ＦＧループ中のものが緑色で着色されていることを除いて、マゼンタで着色されている。隣接するＥタンパク質は灰色表面として示される。
【図１２Ｄ】図１２Ｄは、実施例７について、ＺＫＡ１９０エピトープの同定及びＺＩＫＶ株におけるその保存の分析を示す。（Ｄ）２０１６年１１月２４日現在のＺＩＫＶ  Ｒｅｓｏｕｒｃｅｓ（ＮＣＢＩ）データベースに見られる２１７種のＺＩＫＶ株由来の配列の分析によって計算されるＺＫＡ１９０エピトープにおけるアミノ酸残基保存レベル。
【図１２Ｅ】図１２Ｅは、実施例７について、ＺＫＡ１９０エピトープの同定及びＺＩＫＶ株におけるその保存の分析を示す。（Ｅ）エピトープとドッキング結果のパラトープとの間の電荷相補性を示すオープンブック表現。エピトープ及びパラトープの境界は緑色で囲まれている。Ｆａｂの重鎖と軽鎖の境界及びＥＤＩＩＩ上の対応するフットプリントは、黄色の破線で示されている。
【図１３】図１３は、実施例７について、ＮＭＲ及びドッキングによって同定されたＺＫＡ１９０エピトープを示す。（Ａ）ＺＩＫＶ  ＥＤＩＩＩの１２個の最も低いエネルギーのＮＭＲ構造のイラスト表示。ＺＫＡ１９０結合によって影響される残基は赤色で示される。コンストラクトのＮ末端における柔軟性は明らかである。（Ｂ）ＺＫＡ１９０のモデル：計算結果のドッキングと分子シミュレーションにより得られたＥＤＩＩＩ複合体の、ＮＭＲ結果による検証。ＥＤＩＩＩ（灰色）上のＮＭＲ同定されたエピトープは赤色である。ＺＫＡ１９０重鎖及び軽鎖は、それぞれ暗色及び薄緑色に着色されている。変異した場合に抗体結合に影響を及ぼす又は及ぼさないＥＤＩＩＩ残基は、それぞれ橙黄色及び青色のスティックとして示される。（Ｃ）ＮＭＲ同定されたＺＫＡ１９０エピトープ（赤色）は、ウイルス表面（白色）上で接近可能である。
【図１４】図１４は、実施例７及び実施例１０について、ｗｔ又は変異したＥＤＩＩＩのＺＫＡ１９０  ＩｇＧへの結合を示す。ＳＰＲデータ及び結合動力学が示される。結合に影響を及ぼす（赤色のハイライト）又は影響を及ぼさないＥＤＩＩＩ変異体は、図に示される通りである。
【図１５】図１５は、実施例８について、共焦点顕微鏡検査実験の結果を示す。ＺＫＡ１９０  Ｆａｂ又は完全ＩｇＧのいずれかのＩＣ５０値の１００００倍を超える濃度でインキュベートしたＺＩＫＶをＶｅｒｏ細胞に添加した。ＺＩＫＶ：抗体複合体は細胞内で検出され（緑色）、エンドソームと共局在する（赤色、黄色のオーバーレイ）。エンドソーム及び酸性オルガネラは、Ｌｙｓｏｔｒａｃｋｅｒ  ｒｅｄでマークされている。Ａｌｅｘａ−４８８コンジュゲートＺＫＡ１９０は緑色である。核はＤＡＰＩ（青色）で染色されている。
【図１６】図１６は、実施例９について、ＺＫＡ１９０の予防的及び治療的有効性を示す。（Ａ）ＺＫＡ１９０は、致死量のＺＩＫＶ株ＭＰ１７４５１を投与するマウス（（Ａ）におけるＡ１２９及び（Ｂ）におけるＡＧ１２９）に予防的に投与したとき、ＺＩＫＶ感染に対して強力に防御的である。実験は、１群あたりＮ＝４〜８頭のマウスを使用した。Ｋａｐｌａｎ−Ｍｅｉｅｒ生存曲線を示す（Ａ）。Ｍａｎｔｅｌ−Ｃｏｘ  ｌｏｇ−ｒａｎｋ検定を用いて有意性を判定した。パネルＡ、左上：５、１、及び０．２ｍｇ／ｋｇのＺＫＡ１９０対Ｃｔｒ  ｍＡｂ、Ｐ＝０．００３１；０．０４ｍｇ／ｋｇのＺＫＡ１９０対Ｃｔｒ  ｍＡｂ、Ｐ＝０．０１１６；５、１、０．２、及び０．０４ｍｇ／ｋｇのＺＫＡ１９０−ＬＡＬＡ対Ｃｔｒ  ｍＡｂ、Ｐ＝０．００３１。パネルＡ、右上：１４〜１５日間に亘ってモニターしたマウスの罹患率スコア（２つの異なるスコアリング方法を用いた；以下を参照（Ｄｏｗａｌｌ，  Ｓ．Ｄ．，  Ｇｒａｈａｍ，  Ｖ．Ａ．，  Ｒａｙｎｅｒ，  Ｅ．，  Ａｔｋｉｎｓｏｎ，  Ｂ．，  Ｈａｌｌ，  Ｇ．，  Ｗａｔｓｏｎ，  Ｒ．Ｊ．，  Ｂｏｓｗｏｒｔｈ，  Ａ．，  Ｂｏｎｎｅｙ，  Ｌ．Ｃ．，  Ｋｉｔｃｈｅｎ，  Ｓ．，  ａｎｄ  Ｈｅｗｓｏｎ，  Ｒ．  （２０１６）．  Ａ  Ｓｕｓｃｅｐｔｉｂｌｅ  Ｍｏｕｓｅ  Ｍｏｄｅｌ  ｆｏｒ  Ｚｉｋａ  Ｖｉｒｕｓ  Ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ．  ＰＬｏＳ  Ｎｅｇｌ  Ｔｒｏｐ  Ｄｉｓ  １０，  ｅ０００４６５８−１３）。パネルＡ、下のパネル：マウスの体重。パネルＢ：ＺＫＡ１９０又はＺＫＡ１９０−ＬＡＬＡを、ＺＩＫＶ感染後の異なる時点で１５ｍｇ／ｋｇで投与した。パネルＢ、左上：Ｋａｐｌａｎ−Ｍｅｉｅｒ生存曲線を示す。実験は、１群あたりＮ＝５頭のマウスを使用した。Ｍａｎｔｅｌ−Ｃｏｘ  ｌｏｇ−ｒａｎｋ検定を用いて有意性を判定した。１日目、２日目、３日目、又は４日目のいずれかに与えたＺＫＡ１９０及びＺＫＡ１９０−ＬＡＬＡ対Ｃｔｒ、Ｐ＝０．００１６。パネルＢ、右上：（Ｄｏｗａｌｌ  ｅｔ  ａｌ。、２０１６）にしたがい、１４日間に亘ってモニターしたマウスの罹患率スコア。マウスの体重減少について１４日間に亘ってモニターした（パネルＢ、下のパネル）。対照抗体は、ＲＳＶ  Ｆタンパク質に特異的なＭＰＥ８である（Ｃｏｒｔｉ，  Ｄ．，  ｅｔ  ａｌ．  Ｃｒｏｓｓ−ｎｅｕｔｒａｌｉｚａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｆｏｕｒ  ｐａｒａｍｙｘｏｖｉｒｕｓｅｓ  ｂｙ  ａ  ｈｕｍａｎ  ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  ａｎｔｉｂｏｄｙ．  Ｎａｔｕｒｅ  ５０１，  ４３９−４４３  （２０１３））。
【図１７】図１７は、実施例９について、ＺＩＫＶ株ＭＰ１７４１に対する抗ＺＩＫＶ  ＥＤＩＩＩ特異的ｍＡｂ  ＺＫＡ１９０の予防的有効性を示す。（Ａ）全ての動物の血中において、５日目にＰＦＵ／ｍｌとして測定したウイルス血症を示す。（Ｂ）全ての動物の血中、及び試験終了時に動物を屠殺したとき、又は人道的エンドポイントが満たされたときの血液及び指定組織において、５日目にｑＰＣＲによってゲノムコピー数／ｍｌとしてウイルス量を測定した。（Ｃ）マウスの体重減少について１４日間に亘ってモニターした。（Ｄ）５日目の血液試料中のヒト血清ＩｇＧ濃度。ノンパラメトリックな対応のないマンホイットニーＵ検定による対照抗体治療と比較して有意性を決定した。＊ｐ＜０．０５；＊＊ｐ＜０．０１；＊＊＊ｐ＜０．００１。
【図１８】図１８は、実施例９について、抗ＺＩＫＶ  ＥＤＩＩＩ特異的ｍＡｂ  ＺＫＡ１９０の治療効果を示す。（Ａ）全ての動物の血中において、５日目にＰＦＵとしてウイルス量を測定した。（Ｂ）全ての動物の血中、及び試験終了時に動物を屠殺したとき、又は人道的エンドポイントが満たされたときに血液及び指定組織において、５日目にｑＰＣＲによってゲノムコピー数としてウイルス量を測定した。ノンパラメトリックな対応のないマンホイットニーＵ検定による対照抗体治療と比較して有意性を決定した。＊ｐ＜０．０５；＊＊ｐ＜０．０１。（Ｃ）５日目の血液サンプル中のヒト血清ＩｇＧ濃度。
【図１９】図１９は、実施例１１及び実施例１２について、二重特異性ＦＩＴ−１  ｍＡｂへのＺＫＡ１９０のエンジニアリング及びそのインビトロ特性評価を示す。（Ａ）ＺＫＡ１８５及びＺＫＡ２３０  ｍＡｂｓは、ｍＡｂ存在下でのｍＡｂ量を上昇させたときの感染Ｖｅｒｏ細胞の割合によって決定される、ＺＩＫＶの４つの株の中和について試験した。データは、少なくとも２つの独立した実験を表す。（Ｂ）ＥＬＩＳＡにより評価される、ＺＫＡ１８５及びＺＫＡ２３０  ＩｇＧ及びＦａｂの組換えＺＩＫＶ  ＶＬＰ、Ｅ、及びＤＩＩＩ抗原への結合。（Ｃ）ＺＫＡ１９０、ＺＫＡ１８５、及びＺＫＡ２３０は、Ｈ／ＰＦ／２０１３（ｗｔ）及びＭＡＲＭ１−４の中和について試験した。（Ｄ）ＺＫＡ１９０によって結合された２つのＥタンパク質二量体の表面表示（緑色）；ＺＫＡ１９０  ＮＭＲ由来のエピトープは赤色である；ＭＡＲＭにおいて変異した位置は、黄色（Ｅ３７０）、青（Ｔ３３５）、オレンジ（Ｄ６７）、及びマゼンタ（Ｋ８４）で示されている。（Ｅ）ＦＩＴ−１のモデル。内側と外側のＦａｂ間の天然リンカーにより、ＦＩＴ−１抗体のＦａｂの柔軟な動きが可能になる。ＺＫＡ１８５及びＺＫＡ１９０の可変領域は、それぞれ青と緑で強調されている。（Ｆ）ＥＬＩＳＡにより評価される、ＦＩＴ−１  ＩｇＧ及びＦａｂの組換えＺＩＫＶ  ＶＬＰ、Ｅ、及びＤＩＩＩ抗原への結合。（Ｇ）ＺＫＡ１９０、ＺＫＡ１８５、及びＦＩＴ−１  ｍＡｂは、ＺＩＫＶの４つの株（ＩＣ５０値、Ｇ）及び４つのＭＡＲＭ（Ｈ）の中和について試験した。（Ｉ）ＺＫＡ１８５、ＺＫＡ２３０、ＦＩＴ−１  ＩｇＧ、及びＦａｂによるＺＩＫＶ  Ｈ／ＰＦ／２０１３株の中和（（Ａ）の場合と同様に測定）。（Ｊ）図３Ｇに示される共焦点顕微鏡実験。（Ｋ）ＦＩＴ−１  ＩｇＧ及びＦａｂの連続希釈による、抗ｐｒＭ  ＤＶ６２  ｍＡｂ又はＤＥＮＶ２血漿のピーク増強希釈によって誘導されるＡＤＥに対する効果。
【図２０】図２０は、ＦＩＴ−１の治療効果を示す。ＦＩＴ−１は、致死量のＺＩＫＶ株ＭＰ１７４５１を接種されたマウス（Ａ１２９）に異なる時点で治療的に投与されたときに、ＺＩＫＶ感染に対して非常に効果的である。実験では、各群Ｎ＝５〜６頭のマウスを使用した。（Ａ）カプラン・マイヤー生存曲線を示す。有意性は、Ｍａｎｔｅｌ−Ｃｏｘログランク検定を使用して決定した。１日目、２日目に投与した１５、５、及び１ｍｇ／ｋｇのＦＩＴ−１対Ｃｔｒ  ｍＡｂ、Ｐ＝０．００１２；３日目に投与した１５及び５ｍｇ／ｋｇのＺＫＡ１９０対Ｃｔｒ  ｍＡｂ、Ｐ＝０．００１２；３日目に投与した１ｍｇ／ｋｇのＺＫＡ１９０対Ｃｔｒ  ｍＡｂ、Ｐ＝０．０１７０。（Ｂ）２１日間に亘ってモニターしたマウスの罹患率スコア（Ｄｏｗａｌｌら、２０１６）。（Ｃ）ウイルス量は、全ての動物の血液中の５日目のＰＦＵとして測定した。（Ｄ）体重減少について２１日間に亘ってマウスをモニターした。パネルＡの対照ｍＡｂはＭＰＥ８  ｍＡｂである（ＲＳＶ  Ｆタンパク質に特異的（Ｃｏｒｔｉ，  Ｄ．，  ｅｔ  ａｌ．  Ｃｒｏｓｓ−ｎｅｕｔｒａｌｉｚａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｆｏｕｒ  ｐａｒａｍｙｘｏｖｉｒｕｓｅｓ  ｂｙ  ａ  ｈｕｍａｎ  ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  ａｎｔｉｂｏｄｙ．  Ｎａｔｕｒｅ  ５０１，  ４３９−４４３  （２０１３））。（Ｅ）ウイルス量は、全ての動物の血液中において５日目にｑＰＣＲによりゲノムコピーとして測定し、且つ研究終了時に動物を死滅させた時又は人道的エンドポイントが満たされたときに血液と示された組織で測定した。有意性は、ノンパラメトリック独立Ｍａｎｎ−ＷｈｉｔｎｅｙＵ検定によって、対照抗体処置と比較して求めた。＊ｐ＜０．０５；＊＊ｐ＜０．０１。
【図２１】図２１は、実施例１４について、マレーシアのＺＩＫＶを接種した後にＦＩＴ−１で処置した雌性ＡＧ１２９マウスが、プラセボ処置マウスと比較して死滅を免れたことを示す。
【図２２】図２２は、実施例１４について、ＦＩＴ−１で処置され且つＺＩＫＶを接種された雌の仔イヌにおける子宮内成長制限（ＩＵＧＲ）を示す。
【図２３】図２３は、実施例１４について、ＦＩＴ−１で処置され且つＺＩＫＶに感染させた雌の生誕日の子犬の平均体重を示す。
【図２４】図２４は、実施例１４について、ＦＩＴ−１で処置した雌から１１ｄｐｉに回収した胎盤の重量を示す。
【図２５】図２５は、実施例１４について、（Ａ）胎児、（Ｂ）胎盤、（Ｃ）母体脾臓、及び（Ｄ）母体脳におけるウイルスＲＮＡの定量を示す（＊＊＊Ｐ＜０．００１、＊＊Ｐ＜０．０１、ＭＰＥ８処置と比較）。
【図２６】図２６は、実施例１５について、ＺＩＫＶに感染させ且つウイルス接種の２４時間後又は７２時間後にＦＩＴ−１で処置した雄性ＡＧ１２９マウスの生存率を示す（＊Ｐ＜０．０５、ＭＰＥ８陰性対照処置と比較）。
【図２７】図２７は、実施例１５について、ＺＩＫＶの接種後の異なる時点でのＦＩＴ−１で処置したＡＧ１２９マウスの平均重量パーセント変化を示す。
【図２８】図２８は、実施例１５について、ＺＩＫＶの接種の２４時間後又は７２時間後にＦＩＴ−１で処置した雄性ＡＧ１２９マウスのＡ）精巣又はＢ）精巣上体の疾患スコアを示す。反応性Ａｂによる治療は、精巣及び精巣上体の疾患の減少をもたらす。
【図２９】図２９は、実施例１６について、試験した３つの群の血清中のウイルス量を示す。横線は、８６０ＧＣ／ｍＬのＬＬＯＱを示す。
【実施例】
【０２６８】
本発明の例示的な実施形態を、以下の実施例に提供する。以下の実施例は、説明のためにのみに示され、本発明の使用において当業者を助けるためのものである。これらの実施例は、本発明の範囲を何ら限定することを意図するものではない。
【０２６９】
実施例１：ＺＩＫＶ特異的抗体の単離及びモノクローナル抗体の産生
ＣＤ２２マイクロビーズ（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ  Ｂｉｏｔｅｃ）を用いて４体のＺＩＫＶ感染ドナー（ＺＫＡ、ＺＫＢ、ＺＫＣ、及びＺＫＤ）の凍結保存末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）からＩｇＧ＋記憶Ｂ細胞を単離し、その後、セルソーティングにより、ＩｇＭ、ＩｇＤ、及びＩｇＡを有する細胞を枯渇させた。次いで、ＺＩＫＶ感染ドナー由来の記憶Ｂ細胞を、これまでに記載されているように（Ｔｒａｇｇｉａｉ，  Ｅ．  ｅｔ  ａｌ．，  Ｎａｔ．  Ｍｅｄ．  １０，  ８７１−８７５，  ２００４）、多数の複製ウェル中でＥＢＶ（エプスタイン・バール・ウイルス）及びＣｐＧ（ＣｐＧオリゴデオキシヌクレオチド２００６）で不死化し、次いで培養上清を、ＺＩＫＶ  ＮＳ１タンパク質又はＺＩＫＶ  Ｅタンパク質へのそれらの結合を試験するために、３８４ウェルベースのマイクロ中和アッセイ及び結合アッセイ（ＥＬＩＳＡ）を並行して使用する一次スクリーニングで試験した。結合アッセイの結果（ＺＩＫＶ  Ｅタンパク質への結合）を図１に示す。
【０２７０】
中和アッセイをＶｅｒｏ細胞で行った。３８４ウェルプレート中、感染率（ｍ．ｏ．ｉ、感染多重度）が０．３５となるＺＩＫＶ  Ｈ／ＰＦ／２０１３を、３７％（５％ＣＯ２）で１時間、上清と共にインキュベートした後、予め播種した５，０００個のＶｅｒｏ細胞に添加した。これらを更に５日間インキュベートし、その後上清を除去し、ＷＳＴ−１試薬（Ｒｏｃｈｅ）を添加した。陽性培養物を回収して増殖させた。陽性培養物から、ＶＨ及びＶＬ配列をＲＴ−ＰＣＲによって回収した。抗体を、ヒトＩｇＧ１とＩｇカッパ又はＩｇラムダ発現ベクター（Ｍｉｃｈｅｌ  Ｎｕｓｓｅｎｚｗｅｉｇ（Ｒｏｃｋｅｆｅｌｌｅｒ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，  Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，  ＵＳ）から厚意により提供）にクローニングした。これについては、本質的には、以下に記載されている（Ｔｉｌｌｅｒ  Ｔ，  Ｍｅｆｆｒｅ  Ｅ，  Ｙｕｒａｓｏｖ  Ｓ，  Ｔｓｕｉｊｉ  Ｍ，  Ｎｕｓｓｅｎｚｗｅｉｇ  ＭＣ，  Ｗａｒｄｅｍａｎｎ  Ｈ  （２００８）  Ｅｆｆｉｃｉｅｎｔ  ｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  ｆｒｏｍ  ｓｉｎｇｌｅ  ｈｕｍａｎ  Ｂ  ｃｅｌｌｓ  ｂｙ  ｓｉｎｇｌｅ  ｃｅｌｌ  ＲＴ−ＰＣＲ  ａｎｄ  ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  ｖｅｃｔｏｒ  ｃｌｏｎｉｎｇ．  Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ３２９：  １１２−１２４）。モノクローナル抗体は、ＥＢＶ不死化Ｂ細胞から、又は２９３  Ｆｒｅｅｓｔｙｌｅ細胞（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）の一過性トランスフェクションによって産生した。Ｂ細胞又はトランスフェクトされた細胞からの上清を回収し、ＩｇＧをプロテインＡ又はプロテインＧクロマトグラフィー（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）によってアフィニティー精製し、ＰＢＳに対して脱塩した。
【０２７１】
図１は、選択されたＺＩＫＶ中和抗体の概要を提供する（それらのＣＤＲ及び重鎖／軽鎖可変領域のアミノ酸配列についての表１及び２参照）。図１の最後の２列は、ＺＩＫＶ及びＤＥＮＶ１（試験した場合）の中和活性（ＩＣ５０）を示す。他のカラムは、ＺＩＫＶ  Ｅタンパク質（ＺＩＫＶ  Ｅ）、ＤＥＮＶ１  Ｅタンパク質（ＤＥＮＶ１  Ｅ）、ＤＥＮＶ２  Ｅタンパク質（ＤＥＮＶ２  Ｅ）、ＤＥＮＶ３  Ｅタンパク質（ＤＥＮＶ３  Ｅ）、ＤＥＮＶ４  Ｅタンパク質（ＤＥＮＶ４  Ｅ）、ＤＥＮＶ１ウイルス様粒子（ＤＥＮＶ１  ＶＬＰ）、ＤＥＮＶ２ウイルス様粒子（ＤＥＮＶ２  ＶＬＰ）、ＤＥＮＶ３ウイルス様粒子（ＤＥＮＶ３  ＶＬＰ）、及びＤＥＮＶ４ウイルス様粒子（ＤＥＮＶ４  ＶＬＰ）、並びにＺＩＫＶ  Ｅタンパク質のＥＤＩＩＩ領域（ＤＩＩＩ  ＺＫＡ）に対する抗体の結合活性（ＥＣ５０）を提供する。
【０２７２】
実施例２：抗体ＺＫＡ１９０、ＺＫＡ１８５、ＺＫＡ２３０、ＺＫＡ６４、及びＺＫＡ７８の特徴付け
実施例１において、多数のＺＩＫＶ中和抗体を同定し、ＺＩＫＶ、特にＺＩＫＶ  Ｅタンパク質及びＺＩＫＶ  ＥＤＩＩＩに対する特異性並びにＤＥＮＶに対するそれらの交差反応性について特徴付けをした。次いで、実施例１に記載の抗体ＺＫＡ１９０（配列番号１〜１８）、ＺＫＡ１８５（配列番号１９〜３６）、ＺＫＡ２３０（配列番号３７〜５４）、ＺＫＡ６４（配列番号７３〜９０）、及びＺＫＡ７８（配列番号５５〜７２）を選択し、ＥＬＩＳＡにより、ＺＩＫＶ  Ｅタンパク質（「ＺＩＫＶ」）、ＺＩＫＶ  ＥＤＩＩＩ（「ＤＩＩＩＺＩ」）に対して更に試験し、またデングウイルス（ＤＥＮＶ、血清型番号１）のＥタンパク質に対しても試験した。この目的のために、標準ＥＬＩＳＡを使用した。簡潔には、ＥＬＩＳＡプレートを１又は３μｇ／ｍｌのＺＩＫＶ  Ｅタンパク質でコーティングし、ＰＢＳ中１０％ＦＣＳでブロッキングし、血清又はヒト抗体と共にインキュベートし、洗浄した。ＡＰコンジュゲートヤギ抗ヒトＩｇＧ（Ｓｏｕｔｈｅｒｎ  Ｂｉｏｔｅｃｈ）とのインキュベーションにより、結合した抗体を検出した。次いで、プレートを洗浄し、基質（ｐ−ＮＰＰ、Ｓｉｇｍａ）を添加し、プレートを４０５ｎｍで読み取った。モノクローナル抗体結合の相対的親和性は、飽和時の最大結合の５０％を達成するために必要な抗体の濃度（ＥＣ５０）を測定することによって決定した。
【０２７３】
結果を図３及び図４に示す。注目すべきことに、ＺＫＡ６４及びＺＫＡ１９０はＺＩＫＶ  Ｅ及びＺＩＫＶ  ＥＤＩＩＩ（「ＤＩＩＩ  ＺＩ」）と低いＥＣ５０値で結合し、これは、ＺＫＡ６４及びＺＫＡ１９０がＺＩＫＶ  Ｅタンパク質のドメインＩＩＩ（ＥＤＩＩＩ）に結合していることを示す。ＺＫＡ７８は、ＺＩＫＶ  Ｅに結合するがＺＩＫＶ  ＥＤＩＩＩには結合せず、これは、ＺＫＡ７８がＺＩＫＶ  Ｅに結合しているがＥＤＩＩＩ領域を標的化しないことを示す。それらのかなりのＺＩＫＶ中和活性（図１参照）にもかかわらず、抗体ＺＫＡ１８５及びＺＫＡ２３０は、ＺＩＫＶ  Ｅ及びＺＩＫＶ  ＥＤＩＩＩに対する検出可能な結合を示さなかった（図３）。したがって、ＺＫＡ１８５及びＺＫＡ２３０は、「中和非Ｅ結合」（ＮＮＢ）抗体と称した。これらのＮＮＢ抗体は、ＺＩＫＶ感染性ビリオン上に提示されるが、可溶性タンパク質上には提示されない四次エピトープを認識すると考えられる。
【０２７４】
更に、ＺＫＡ１９０、ＺＫＡ１８５、ＺＫＡ２３０、及びＺＫＡ６４はいずれも、ＤＥＮＶ  Ｅタンパク質（図１、ＤＥＮＶ１−４血清型、及び図３及び４）に対する検出可能な結合を示さず、これは、ＺＫＡ１９０、ＺＫＡ１８５、ＺＫＡ２３０、及びＺＫＡ６４がＺＩＫＶに対して特異的であり、デング熱ウイルスと交差反応性ではないことを示す。対照的に、ＺＩＫＶ  ＥＤＩ／ＩＩに結合するがＺＩＫＶ  ＥＤＩＩＩには結合しないと考えられるＺＫＡ７８（図２参照）は、ＤＥＮＶ  Ｅタンパク質に結合し（図１及び３）、これは、ＺＫＡ７８がＺＩＫＶとＤＥＮＶの両方に結合する交差反応性抗体であることを示す。
【０２７５】
これらの結果を更に確認するために、ＺＩＫＶ  Ｅタンパク質結合抗体ＺＫＡ１９０、ＺＫＡ６４、及びＺＫＡ７８を、デングウイルスのＥタンパク質（ＤＥＮＶ、血清型番号１〜４）に対して更に試験した。ＺＫＡ６４及びＺＫＡ１９０はＤＥＮＶ１−４  Ｅタンパク質に結合せず、これは、ＺＫＡ６４及びＺＫＡ１９０がＺＩＫＶに特異的であることを裏付ける。対照的に、ＺＫＡ７８はＤＥＮＶ１−４  Ｅに結合し、これは、ＺＫＡ７８がＺＩＫＶ及びＤＥＮＶの両方のＥタンパク質に結合する交差反応性抗体であることを裏付ける（図１参照）。
【０２７６】
実施例３：単離した抗体は、ＺＩＫＶ感染を強力に中和する
単離した抗体ＺＫＡ１９０、ＺＫＡ１８５、ＺＫＡ２３０、ＺＫＡ６４、及びＺＫＡ７８を、インビトロでＺＩＫＶ及びＤＥＮＶ１感染を中和する能力について試験した。
【０２７７】
抗体によるＤＥＮＶ及びＺＩＫＶ感染の中和は、マイクロ中和フローサイトメトリに基づくアッセイを用いて測定した。抗体の各種希釈物をＺＩＫＶ（ＭＯＩ０．３５）又は弱毒化ＤＥＮＶ１（いずれもＭＯＩ０．０４）と３７℃で１時間混合し、９６ウェル平底プレート中の５０００個のＶｅｒｏ細胞／ウェルに添加した。ＺＩＫＶについては４日後、ＤＥＮＶについては５日後に、細胞を２％ホルムアルデヒドで固定し、ＰＢＳ１％ＦＣＳ０．５％サポニン中に透過し、マウスｍＡｂ４Ｇ２で染色した。細胞を、Ａｌｅｘａ  Ｆｌｕｏｒ４８８（Ｊａｃｋｓｏｎ  Ｉｍｍｕｎｏ−  Ｒｅｓｅａｒｃｈ、１１５４８５１６４）にコンジュゲートさせたヤギ抗マウスＩｇＧとインキュベートし、フローサイトメトリで分析した。他の場合には、ＺＩＫＶ中和データは、また、ＷＳＴ−１試薬（Ｒｏｃｈｅ）を用いて細胞生存度を測定することによって決定される。中和力価（５０％阻害濃度［ＩＣ５０］）は、細胞のみの対照ウェルと比較して感染を５０％低下させた抗体濃度として表した。
【０２７８】
結果を図４、５、及び９に示す。ＥＤＩＩＩ特異的ｍＡｂ  ＺＫＡ６４及びＺＫＡ１９０及びＮＮＢ  ｍＡｂ  ＺＫＡ２３０は、ＺＩＫＶ中和（Ｈ／ＰＦ／２０１３株）において非常に強力であり、９及び１０ｎｇ／ｍｌでＩＣ５０値が９３であった（図４、上のパネル）。対照的に、交差反応性抗体ＺＫＡ７８は、ＺＩＫＶ感染性及び交差中和化ＤＥＮＶ１感染性を部分的にしか中和しなかった（図４、下のパネル）。同様のデータが、ＷＳＴ−１試薬で測定したＺＩＫＶ誘発細胞変性効果を測定することによって得られた（図５）。この第２のアッセイにおいて、ＮＮＢ抗体ＺＫＡ１８５も試験抗体のパネルに含まれ、最も強力な抗体ＺＫＡ１９０（ＥＤＩＩＩ特異的）及びＺＫＡ２３０（ＮＮＢ）と同様のＩＣ５０を示した。
【０２７９】
ＺＩＫＶ  Ｈ／ＰＨ／２０１３株を中和する能力（本実施例）に加えて、超強力なＺＫＡ６４及びＺＫＡ１９０抗体は、それぞれＺＩＫＶ株ＭＲ７６６及びＳＰＨ２０１５由来のＥタンパク質及びＥＤＩＩＩにも結合することに留意することが重要である（図１及び図２）。ＺＫＡ１９０及びＺＫＡ１９０−ＬＡＬＡは、２つの更なるＺＩＫＶ株（ＭＲ７６６及びＭＲＳ＿ＯＰＹ＿Ｍａｒｔｉｎｉｑｕｅ＿ＰａＲｉ＿２０１５）を効果的に中和することも確認された（図９）。まとめると、結果から、超強力ＺＫＡ６４及びＺＫＡ１９０抗体は、異なる遺伝子型及び起源（ウガンダ、フランスポリネシア、マルティニーク、及びブラジルの東アフリカ及びアジア人）に属する複数のＺＩＫＶ株と交差反応することが示される。
【０２８０】
実施例４：「ＬＡＬＡ」突然変異は、血清抗体によるＺＩＫＶ感染の抗体依存性の増強を阻害する
また、中和抗体を、非許容性Ｋ５６２細胞におけるＺＩＫＶの感染を増強する能力について試験した（抗体依存性増強アッセイ、ＡＤＥアッセイ）。ＡＤＥは、Ｋ５６２細胞を用いたフローベースのアッセイによって測定した。抗体及びＺＩＫＶ  Ｈ／ＰＦ／２０１３（ＭＯＩ０．１７５）を３７℃で１時間混合し、５０００個のＫ５６２細胞／ウェルに添加した。４日後、細胞を固定し、透過処理し、ｍ４Ｇ２で染色した。フローサイトメトリにより感染細胞の数を決定した。
【０２８１】
結果を図６に示す。抗体はいずれも、広い濃度範囲で、非許容性Ｋ５６２細胞におけるＺＩＫＶの感染を増強し、ある濃度では、Ｖｅｒｏ細胞に対するＺＩＫＶ感染を完全に中和した（図６）。注目すべきことに、ＥＤＩＩＩ特異的抗体ＺＫＡ６４及びＺＫＡ１９０は、１μｇ／ｍｌを超えるＫ５６２細胞のＺＩＫＶ感染を完全に中和したが、ＮＮＢ抗体ＺＫＡ２３０では中和できず、この結果は、Ｆｃ−ガンマ−受容体内在化ウイルスに対する遊離ウイルスの中和メカニズムが異なることによる可能性がある。対照的に、ＺＩＫＶ感染性を部分的にしか中和しない交差反応性ＺＫＡ７８は、Ｋ５６２細胞のＺＩＫＶ感染を効果的に増強した。これらの結果は、ＺＩＫＶ又はＤＥＮＶ感染のいずれかによって惹起される交差反応性抗体が異種ＡＤＥを媒介し得ることを示す。
【０２８２】
これに鑑み、ＡＤＥが免疫血清によっても誘導され得るかどうか、及びこれが「ＬＡＬＡ変異体」として送達される抗体を中和することによってブロックされ得るかどうかを調べた。ＬＡＬＡ変異体を得るために、部位特異的突然変異誘発を用いて天然ロイシンに代えてアラニンを置換することにより、重鎖の各々をＣＨ２ドメインのアミノ酸４及び５で突然変異させた。前記したように、（ヒトＩｇＧ１抗体の）ＬＡＬＡ変異体は、Ｆｃ−ガンマ−受容体及び補体に結合しない。
【０２８３】
ＺＩＫＶ  ＡＤＥにおけるＺＫＡ６４−ＬＡＬＡ抗体の効果を調べるために、ＡＤＥアッセイの阻害を用いた。ＺＩＫＶ又はＤＥＮＶ免疫血漿を用いてＺＩＫＶのＡＤＥが観察されたので、３７℃で３０分間、ＺＩＫＶ（ＭＯＩ０．１７５）を一次ＺＩＫＶ又はＤＥＮＶ感染ドナー由来の血漿と混合した。ＺＫＡ６４−ＬＡＬＡ抗体を５０μｇ／ｍｌで添加し、５０００個のＫ５６２細胞／ウェルと混合し、３日間インキュベートした。次いで、細胞を４Ｇ２で染色し、フローサイトメトリで分析した。
【０２８４】
結果を図７に示す。相同的なセッティングでは、回復期の患者から回収した４種のＺＩＫＶ免疫血漿及び１種のＤＥＮＶ免疫血漿は、Ｋ５６２細胞のＺＩＫＶ感染を増強する同様の能力を示した（図７、上のパネル）。このＡＤＥ効果は、ＥＤＩＩＩ特異的ＺＫＡ６４−ＬＡＬＡ抗体によって完全にブロックされた（図７、下のパネル）。注目すべきことに、ＺＩＫＶ及びＤＥＮＶ免疫血漿のＡＤＥ効果は、ＥＤＩＩＩ特異的ＺＫＡ６４−ＬＡＬＡ抗体によって完全にブロックされた。単一のＥＤＩＩＩ特異的ＬＡＬＡ抗体のＡＤＥブロッキング能は、血清増強抗体との競合において上回る（ｏｕｔ−ｃｏｍｐｅｔｅ）能力だけでなく、一旦エンドソームに内在化したウイルスを中和する能力にも関連し得る。
【０２８５】
これらの結果は、「ＬＡＬＡ」形態で発達したＺＫＡ１９０、ＺＫＡ２３０、ＺＫＡ１８５、又はＺＫＡ６４などの強力に中和する抗体が、先天性ＺＩＫＶ感染を予防するための予防的又は治療的設定（例えば、妊娠中の女性及び／又は高リスク領域に住む人々）で使用される有効性が高いことを示している。ＬＡＬＡ形態の使用は、ＺＩＫＶ  ＡＤＥのリスクを回避し、前記のように、既にＤＥＮＶに対して免疫されている患者の場合など、既存の交差反応性抗体のＡＤＥもブロックする可能性がある。
【０２８６】
実施例５：ＺＫＡ１９０は、従来技術の抗体ＥＤＥ１  ｍＡｂ  Ｃ８よりも強力にＺＩＫＶを中和する
従来技術の中和性が高い抗ＺＩＫＶ抗体と単離した中和抗体を比較するために、ＺＫＡ１９０の中和性能を従来技術の高中和性ｍＡｂ  ＥＤＥ１  Ｃ８（Ｂａｒｂａ−Ｓｐａｅｔｈ  Ｇ，  Ｄｅｊｎｉｒａｔｔｉｓａｉ  Ｗ，  Ｒｏｕｖｉｎｓｋｉ  Ａ，  Ｖａｎｅｙ  ＭＣ，  Ｍｅｄｉｔｓ  Ｉ，  Ｓｈａｒｍａ  Ａ，  Ｓｉｍｏｎ−Ｌｏｒｉｅｒｅ  Ｅ，  Ｓａｋｕｎｔａｂｈａｉ  Ａ，  Ｃａｏ−Ｌｏｒｍｅａｕ  ＶＭ，  Ｈａｏｕｚ  Ａ，  Ｅｎｇｌａｎｄ  Ｐ，  Ｓｔｉａｓｎｙ  Ｋ，  Ｍｏｎｇｋｏｌｓａｐａｙａ  Ｊ，  Ｈｅｉｎｚ  ＦＸ，  Ｓｃｒｅａｔｏｎ  ＧＲ，  Ｒｅｙ  ＦＡ．  Ｓｔｒｕｃｔｕｒａｌ  ｂａｓｉｓ  ｏｆ  ｐｏｔｅｎｔ  Ｚｉｋａ−ｄｅｎｇｕｅ  ｖｉｒｕｓ  ａｎｔｉｂｏｄｙ  ｃｒｏｓｓ−ｎｅｕｔｒａｌｉｚａｔｉｏｎ．  Ｎａｔｕｒｅ．  ２０１６  Ａｕｇ  ４；５３６（７６１４）：４８−５３）と比較した。両抗体の中和を、４種の異なるＺＩＫＶ株（Ｈ／ＰＦ／２０１３；ＭＲ７６６、ＭＲＳ−ＯＰＹ、及びＰＶ１０５５２）のパネルに対して試験した。
【０２８７】
簡潔には、ｍＡｂによるＺＩＫＶ感染の中和を、マイクロ中和フローサイトメトリに基づくアッセイを用いて測定した。ｍＡｂの各種希釈物をＺＩＫＶ（ＭＯＩ０．３５）と３７℃で１時間混合し、９６ウェル平底プレート中の５０００個のＶｅｒｏ細胞／ウェルに添加した。ＺＩＫＶについては４日後に、細胞を２％ホルムアルデヒドで固定し、１％ウシ胎仔血清（Ｈｙｃｌｏｎｅ）及び０．５％サポニンを含有するＰＢＳに透過させ、マウスｍＡｂ  ４Ｇ２で染色した。細胞を、Ａｌｅｘａ  Ｆｌｕｏｒ４８８（Ｊａｃｋｓｏｎ  Ｉｍｍｕｎｏ−Ｒｅｓｅａｒｃｈ、１１５４８５１６４）にコンジュゲートさせたヤギ抗マウスＩｇＧと共にインキュベートし、フローサイトメトリで分析した。中和力価（５０％阻害濃度［ＩＣ５０］）は、ウイルスのみの対照ウェルと比較して感染を５０％低下させた抗体濃度として表した。
【０２８８】
結果を図１０に示す。ＺＫＡ１９０  ｍＡｂは、０．６〜８ｎｇ／ｍｌの範囲のＩＣ５０を有するアフリカ系、アジア系、及びアメリカ系株を強力に中和した。これと比較して、従来技術の抗体Ｃ８は約２４倍弱かった。
【０２８９】
実施例６：抗体ＺＫＡ１９０の更なる特徴付け
抗体ＺＫＡ１９０の効力をインビトロ及びインビボで更に調べた。この目的のために、ｍＡｂをＩｇＧ１野生型（ｗｔ）フォーマット及びＩｇＧ１  Ｆｃ−ＬＡＬＡフォーマットで合成した。簡潔には、ＶＨ及びＶＬ配列を、ヒトＩｇγ１とＩｇκ又はＩｇλ発現ベクター（Ｍｉｃｈｅｌ  Ｎｕｓｓｅｎｚｗｅｉｇ（Ｒｏｃｋｅｆｅｌｌｅｒ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，  Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，  ＵＳ）から厚意により提供）にクローニングした。これについては、本質的には、以下に記載されている（Ｔｉｌｌｅｒ  Ｔ，  Ｍｅｆｆｒｅ  Ｅ，  Ｙｕｒａｓｏｖ  Ｓ，  Ｔｓｕｉｊｉ  Ｍ，  Ｎｕｓｓｅｎｚｗｅｉｇ  ＭＣ，  Ｗａｒｄｅｍａｎｎ  Ｈ：  Ｅｆｆｉｃｉｅｎｔ  ｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  ｆｒｏｍ  ｓｉｎｇｌｅ  ｈｕｍａｎ  Ｂ  ｃｅｌｌｓ  ｂｙ  ｓｉｎｇｌｅ  ｃｅｌｌ  ＲＴ−ＰＣＲ  ａｎｄ  ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  ｖｅｃｔｏｒ  ｃｌｏｎｉｎｇ．  Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ２００８，  ３２９：１１２−１２４）。組換えｍＡｂは、ＥＸＰＩ２９３細胞（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）の一過性トランスフェクションによって産生し、プロテインＡクロマトグラフィー（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）によって精製し、ＰＢＳに対して脱塩した。ＬＡＬＡ変異体を得るために、部位特異的突然変異誘発を用いて天然ロイシンに代えてアラニンを置換することにより、重鎖の各々をＣＨ２ドメインのアミノ酸４及び５で突然変異させた。前記したように、（ヒトＩｇＧ１抗体の）ＬＡＬＡ変異体は、Ｆｃ−ガンマ−受容体及び補体に結合しない。
【０２９０】
図１０Ａに示し、実施例５に記載したように、ＺＫＡ１９０を４種のＺＩＫＶ株のパネルに対して試験した。ＺＫＡ１９０  ｍＡｂは、０．００４〜０．０５ｎＭの範囲のＩＣ５０（図１０Ａ；０．６〜８ｎｇ／ｍｌ）でアフリカ系、アジア系、及びアメリカ系株を強力に中和した。
【０２９１】
ＺＩＫＶは、ヒト神経前駆細胞（ｈＮＰＣ）に感染し、細胞毒性の増大、細胞周期の調節不全、及び細胞増殖の減少を示すので、ｈＮＰＣにおいてＺＫＡ１９０及びＺＫＡ１９０−ＬＡＬＡを試験した。この目的のために、Ｍｏｖｅｍｅｎｔ  Ｄｉｓｏｒｄｅｒｓ  Ｂｉｏ−Ｂａｎｋ（Ｎｅｕｒｏｇｅｎｅｔｉｃｓ  Ｕｎｉｔ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｎｅｕｒｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ  ‘Ｃａｒｌｏ  Ｂｅｓｔａ’，  Ｍｉｌａｎ）から取得した成人男性線維芽細胞を、ＣｙｔｏＴｕｎｅ−ｉＰＳ  ２．０  Ｓｅｎｄａｉキット（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）を用いて再プログラム化した。ｈｉＰＳＣは、ｍＴｅＳＲ１（Ｓｔｅｍ  Ｃｅｌｌ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）のフィーダーフリー条件で維持した。胚様体（ＥＢ）を生成するために、解離したｈｉＰＳＣを、Ｎ２（０．５×）（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）、ヒトＮｏｇｇｉｎ（０．５ｍｇ／ｍｌ、Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍ）、ＳＢ４３１５４２（５μＭ、Ｓｉｇｍａ）、Ｙ２７６３２（１０μＭ、Ｍｉｌｔｅｎｙｉ  Ｂｉｏｔｅｃ）、及びペニシリン／ストレプトマイシン（１％、Ｓｉｇｍａ）（以下に記載：Ｍａｒｃｈｅｔｔｏ  ＭＣＮ，  Ｃａｒｒｏｍｅｕ  Ｃ，  Ａｃａｂ  Ａ，  Ｙｕ  Ｄ，  Ｙｅｏ  ＧＷ，  Ｍｕ  Ｙ，  Ｃｈｅｎ  Ｇ，  Ｇａｇｅ  ＦＨ，  Ｍｕｏｔｒｉ  ＡＲ：  Ａ  ｍｏｄｅｌ  ｆｏｒ  ｎｅｕｒａｌ  ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ  ａｎｄ  ｔｒｅａｔｍｅｎｔ  ｏｆ  Ｒｅｔｔ  ｓｙｎｄｒｏｍｅ  ｕｓｉｎｇ  ｈｕｍａｎ  ｉｎｄｕｃｅｄ  ｐｌｕｒｉｐｏｔｅｎｔ  ｓｔｅｍ  ｃｅｌｌｓ．  Ｃｅｌｌ  ２０１０，  １４３：５２７−５３９）を添加したｍＴｅＳＲ１中の低接着プレートにプレーティングした。ロゼットを得るために、ＥＢを、１０日間後に、Ｎ２（１：１００）、非必須アミノ酸（１％、ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）、及びペニシリン／ストレプトマイシンを含むＤＭＥＭ／Ｆ１２（Ｓｉｇｍａ）中のマトリゲル被覆プレート（１：１００、マトリゲル成長因子低下、Ｃｏｒｎｉｎｇ）にプレーティングした。１０日間後、細胞をＡｃｃｕｔａｓｅ（Ｓｉｇｍａ）で継代して、ＤＭＥＭ／Ｆ１２、Ｎ２（０．２５％）、Ｂ２７（０．５％、ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）、ペニシリン／ストレプトマイシン、及びＦＧＦ２（２０ｎｇ／ｍｌ、ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）を含有するＮＰＣ培地中で、マトリゲル被覆フラスコに播種した。ｈＮＰＣ（３×１０４）を、ＰＲＶＡＢＣ５９株による感染の３日間前に、２４ウェルプレート中のカバースリップ上にプレーティングした。ウイルスストックをｈＮＰＣへの添加前にｍＡｂ  １ｈと共にインキュベートして、０．５のＭＯＩを得た。ウイルス吸着の４時間後、培養上清を除去し、ｍＡｂを含む新鮮な培地を再添加した。感染後９６時間で上清を回収し、Ｖｅｒｏ細胞に対するプラークアッセイによってウイルス力価を測定した。間接免疫蛍光のために、リン酸緩衝化生理食塩水（ＰＢＳ、Ｅｕｒｏｃｌｏｎｅ）中の４％パラホルムアルデヒド（ＰＦＡ、Ｓｉｇｍａ）溶液中で細胞を３０分間固定した。固定した細胞を、０．２％Ｔｒｉｔｏｎ  Ｘ−１００（Ｓｉｇｍａ）及び１０％ロバ血清（Ｓｉｇｍａ）を含有するブロッキング溶液中で３０分間（ｍｉｎ）浸透させ、ブロッキング溶液中で一次抗体と４℃で一晩インキュベートした。以下の抗体を検出に使用した：抗エンベロープ（１：２００、Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ、ＭＡＢ１０２１６）。次いで、細胞をＰＢＳで洗浄し、Ｈｏｅｃｈｓｔ及び抗マウスＡｌｅｘａ  Ｆｌｕｏｒ−４８８二次抗体（ブロッキング溶液中１：１，０００、ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）と共に１時間インキュベートした。ＰＢＳ洗浄後、細胞を再び洗浄し、マウントした。結果を図１１Ａに示す。ＺＫＡ１９０及びＺＫＡ１９０−ＬＡＬＡのいずれも、ｈＮＰＣにおけるＺＩＫＶの感染及び複製を完全に停止させた。
【０２９２】
次に、ＡＤＥを引き起こすＺＫＡ１９０及びＺＫＡ１９０−ＬＡＬＡの能力を、実施例４に記載したようにＫ５６２細胞株で試験した。簡潔には、ＡＤＥは、Ｋ５６２細胞を用いたフローベースのアッセイによって測定した。簡潔には、ＺＫＡ１９０については、ＺＫＡ１９０及びＺＩＫＶ  Ｈ／ＰＦ／２０１３（ＭＯＩ０．１７５）を３７℃で１時間混合し、５０００個のＫ５６２細胞／ウェルに添加した。４日間後、細胞を固定し、透過処理し、ｍＡｂ  ｍ４Ｇ２で染色した。フローサイトメトリにより感染細胞の数を決定した。ＺＫＡ１９０−ＬＡＬＡについては、ＺＩＫＶ（ＭＯＩ０．１７５）を、一次ＺＩＫＶ感染ドナー由来の血漿と３７℃で３０分間混合した。ＺＫＡ１９０−ＬＡＬＡを５０μｇ／ｍｌ添加し、５０００個のＫ５６２細胞／ウェルと混合し、３日間インキュベートした。次いで、細胞を４Ｇ２で染色し、フローサイトメトリで分析した。結果を図１１Ｂに示す。ＺＫＡ１９０は、０．０００１〜１ｎＭのＡＤＥを支持する。予想通り、ＺＫＡ１９０−ＬＡＬＡはＡＤＥ活性を示さなかった。Ｋ５６２細胞中の４種のＺＩＫＶ免疫ドナーからの血漿によって誘導されるＡＤＥを阻害するＺＫＡ１９０−ＬＡＬＡの能力も試験した。結果を図１１Ｃに示す。ＺＫＡ１９０−ＬＡＬＡは、血漿抗体によって誘導されるＡＤＥを完全に阻害することが分かった（図１１Ｃ）。
【０２９３】
抗ｐｒＭ抗体は、フラビウイルスに対するヒト免疫応答の間に誘発される主な抗体の一部を形成し、インビトロでウイルス感染を増強することが示されている（Ｄｅｊｎｉｒａｔｔｉｓａｉ，  Ｗ．，  Ｊｕｍｎａｉｎｓｏｎｇ，  Ａ．，  Ｏｎｓｉｒｉｓａｋｕｌ，  Ｎ．，  Ｆｉｔｔｏｎ，  Ｐ．，  Ｖａｓａｎａｗａｔｈａｎａ，  Ｓ．，  Ｌｉｍｐｉｔｉｋｕｌ，  Ｗ．，  Ｐｕｔｔｉｋｈｕｎｔ，  Ｃ．，  Ｅｄｗａｒｄｓ，  Ｃ．，  Ｄｕａｎｇｃｈｉｎｄａ，  Ｔ．，  Ｓｕｐａｓａ，  Ｓ．，  ｅｔ  ａｌ．  （２０１０）．  Ｃｒｏｓｓ−ｒｅａｃｔｉｎｇ  ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  ｅｎｈａｎｃｅ  ｄｅｎｇｕｅ  ｖｉｒｕｓ  ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ  ｉｎ  ｈｕｍａｎｓ．  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ３２８，  ７４５−７４８）。Ｋ５６２細胞を、ＤＥＮＶ免疫ドナーに由来するｐｒＭ交差反応性抗体ＤＶ６２（Ｂｅｌｔｒａｍｅｌｌｏ，  Ｍ．，  Ｗｉｌｌｉａｍｓ，  Ｋ．Ｌ．，  Ｓｉｍｍｏｎｓ，  Ｃ．Ｐ．，  Ｍａｃａｇｎｏ，  Ａ．，  Ｓｉｍｏｎｅｌｌｉ，  Ｌ．，  Ｑｕｙｅｎ，  Ｎ．Ｔ．Ｈ．，  Ｓｕｋｕｐｏｌｖｉ−Ｐｅｔｔｙ，  Ｓ．，  Ｎａｖａｒｒｏ−Ｓａｎｃｈｅｚ，  Ｅ．，  Ｙｏｕｎｇ，  Ｐ．Ｒ．，  ｄｅ  Ｓｉｌｖａ，  Ａ．Ｍ．，  ｅｔ  ａｌ．  （２０１０）．  Ｔｈｅ  ｈｕｍａｎ  ｉｍｍｕｎｅ  ｒｅｓｐｏｎｓｅ  ｔｏ  Ｄｅｎｇｕｅ  ｖｉｒｕｓ  ｉｓ  ｄｏｍｉｎａｔｅｄ  ｂｙ  ｈｉｇｈｌｙ  ｃｒｏｓｓ−ｒｅａｃｔｉｖｅ  ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  ｅｎｄｏｗｅｄ  ｗｉｔｈ  ｎｅｕｔｒａｌｉｚｉｎｇ  ａｎｄ  ｅｎｈａｎｃｉｎｇ  ａｃｔｉｖｉｔｙ．  Ｃｅｌｌ  Ｈｏｓｔ  Ｍｉｃｒｏｂｅ  ８，  ２７１−２８３））の連続希釈液でプレインキュベートした。結果を図１１Ｄに示す。ＤＶ６２は、ＺＩＫＶ  ｐｒＭタンパク質と交差反応し、広範囲の濃度でＡＤＥを引き起こした（図１１Ｄ）。ＺＫＡ１９０−ＬＡＬＡは、未成熟又は部分的に未成熟のＺＩＫＶ粒子の抗ｐｒＭ  ＤＶ６２  ｍＡｂ誘導ＡＤＥを完全にブロックすることができる（図１１Ｄ）。
【０２９４】
最後に、濃度が上昇したヒト抗ＤＥＮＶ２血漿又はＤＶ６２の存在下でＺＩＫＶのＡＤＥを引き起こす又はブロックする各種濃度のＺＫＡ１９０、ＺＫＡ１９０−ＬＡＬＡ、及びＺＫＡ１９０  Ｆａｂの能力を試験した。結果を図１１Ｅに示す。低濃度でのＺＫＡ１９０は、ＺＩＫＶ感染のｐｒＭ  ＤＶ６２媒介ＡＤＥを上昇させたが、これは、未成熟及び成熟ビリオンの両方の侵入を促進するその能力と整合し、一方で、１．３ｎＭ（即ち、２００ｎｇ／ｍｌ）を超える濃度では、ＺＫＡ１９０は、ＤＥＮＶ血漿及びｍＡｂ  ＤＶ６２の両方によって誘導されるＡＤＥをブロックした。ＺＫＡ１９０−ＬＡＬＡ並びにそのＦａｂ断片は、０．０６ｎＭを超える濃度ではＡＤＥを減少させ、これは、両者が、融合などの付着後工程でウイルス感染を阻害することを示している
【０２９５】
実施例７：ＺＫＡ１９０は、ＥＤＩＩＩの保存された高度に接近可能な領域に結合する
残基レベルでのＺＫＡ１９０エピトープを決定するために、以下に記載されるように溶液ＮＭＲ分光法を用いた：Ｂａｒｄｅｌｌｉ，  Ｍ．，  Ｌｉｖｏｔｉ，  Ｅ．，  Ｓｉｍｏｎｅｌｌｉ，  Ｌ．，  Ｐｅｄｏｔｔｉ，  Ｍ．，  Ｍｏｒａｅｓ，  Ａ．，  Ｖａｌｅｎｔｅ，  Ａ．Ｐ．，  ａｎｄ  Ｖａｒａｎｉ，  Ｌ．  （２０１５）．  Ｅｐｉｔｏｐｅ  ｍａｐｐｉｎｇ  ｂｙ  ｓｏｌｕｔｉｏｎ  ＮＭＲ  ｓｐｅｃｔｒｏｓｃｏｐｙ．  Ｊ．  Ｍｏｌ．  Ｒｅｃｏｇｎｉｔ．  ２８，  ３９３−４００；  Ｓｉｍｏｎｅｌｌｉ，  Ｌ．，  Ｂｅｌｔｒａｍｅｌｌｏ，  Ｍ．，  Ｙｕｄｉｎａ，  Ｚ．，  Ｍａｃａｇｎｏ，  Ａ．，  Ｃａｌｚｏｌａｉ，  Ｌ．，  ａｎｄ  Ｖａｒａｎｉ，  Ｌ．  （２０１０）．  Ｒａｐｉｄ  ｓｔｒｕｃｔｕｒａｌ  ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｈｕｍａｎ  ａｎｔｉｂｏｄｙ−ａｎｔｉｇｅｎ  ｃｏｍｐｌｅｘｅｓ  ｔｈｒｏｕｇｈ  ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌｌｙ  ｖａｌｉｄａｔｅｄ  ｃｏｍｐｕｔａｔｉｏｎａｌ  ｄｏｃｋｉｎｇ．  Ｊ  Ｍｏｌ  Ｂｉｏｌ  ３９６，  １４９１−１５０７；  ａｎｄ  Ｓｉｍｏｎｅｌｌｉ，  Ｌ．，  Ｐｅｄｏｔｔｉ，  Ｍ．，  Ｂｅｌｔｒａｍｅｌｌｏ，  Ｍ．，  Ｌｉｖｏｔｉ，  Ｅ．，  Ｃａｌｚｏｌａｉ，  Ｌ．，  Ｓａｌｌｕｓｔｏ，  Ｆ．，  Ｌａｎｚａｖｅｃｃｈｉａ，  Ａ．，  ａｎｄ  Ｖａｒａｎｉ，  Ｌ．  （２０１３）．  Ｒａｔｉｏｎａｌ  Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ  ｏｆ  ａ  Ｈｕｍａｎ  Ａｎｔｉ−Ｄｅｎｇｕｅ  Ａｎｔｉｂｏｄｙ  ｔｈｒｏｕｇｈ  Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌｌｙ  Ｖａｌｉｄａｔｅｄ  Ｃｏｍｐｕｔａｔｉｏｎａｌ  Ｄｏｃｋｉｎｇ．  ＰＬｏＳ  ＯＮＥ  ８，  ｅ５５５６１。
【０２９６】
簡潔には、Ｂｒｕｋｅｒ  Ａｖａｎｃｅ  ７００ＭＨｚ  ＮＭＲ分光計を用いて３００Ｋでスペクトルを記録した。バックボーン共鳴の帰属については、標準的三重共鳴実験（ＨＮＣＯ、ＨＮ（ＣＡ）ＣＯ、ＨＮ（ＣＯ）ＣＡＣＢ、ＨＮＣＡＣＢ）を用い、一方、側鎖は、ＨＣＣＨ−ＴＯＣＳＹ及びＨＢＨＡ（ＣＯ）ＮＨ実験を用いてアノテートした。ＮＭＲ実験はいずれも、Ｔｏｐｓｐｉｎ  ２．１（Ｂｒｕｋｅｒ  Ｂｉｏｓｐｉｎ）を用いて行い、ＣＡＲＡで分析した。ＮＯＥＳＹクロスピークは、手動で割り当てられた化学シフトに基づくＣＹＡＮＡ「ｎｏｅａｓｓｉｇｎ」マクロを用いて自動的に割り当てた。標準的シミュレーテッドアニーリングプロトコルを用いたＣＹＡＮＡの構造計算に使用された上方距離制限は、７０ｍｓ  １５Ｎ及び１３Ｃ分解ＮＯＥＳＹスペクトルから誘導した。ＺＩＫＶ  ＥＤＩＩＩのバックボーンダイナミクスは、６００及び７００ＭＨｚ分光計で記録された１５Ｎ緩和測定値から誘導した。プロトン検出バージョンのＣＰＭＧ（Ｒ２）、反転回復（Ｒ１）、及び１５Ｎ｛１Ｈ｝定常状態ＮＯＥを利用した。Ｔ２シリーズの遅延設定は０〜０．２５秒間の範囲であり、Ｔ１シリーズの設定は０．０２〜２秒間の範囲とした。１５Ｎ｛１Ｈ｝−ＮＯＥ実験は、５秒間の緩和遅延を用いた。Ｒ１緩和率とＲ２緩和率は、自宅で作成したスクリプトを使用して測定データに対応する指数関数の最小二乗適合から導いた。緩和データは、ソフトウェアパッケージＤＹＮＡＭＩＣＳを使用して、モデルフリーアプローチで分析した。プログラムＲＯＴＤＩＦを用いて、緩和データ（８．５ｎｓ）から全体の相関時間を計算した。ＮＭＲエピトープマッピングは、これまでに記載されたように実施した（Ｂａｒｄｅｌｌｉ  ｅｔ  ａｌ．，  ２０１５；  Ｓｉｍｏｎｅｌｌｉ  ｅｔ  ａｌ．，  ２０１０；  ２０１３）。簡潔には、遊離又はＺＫＡ１９０  Ｆａｂに結合した標識化ＥＤＩＩＩの１５ＮＨＳＱＣスペクトルのオーバーレイは、複合体形成時にＮＭＲシグナルが変化したＥＤＩＩＩ残基の同定を可能にし、それらがＺＫＡ１９０結合の影響を受けたことを示す。変化は、手動検査及び化学シフト摂動（ＣＳＰ）、ＣＳＰ＝（（ΔσＨ）２＋（ΔσＮ／１０）２）１／２で確認した。ＮＭＲサンプルは、典型的には、２０ｍＭリン酸ナトリウム、５０ｍＭ  ＮａＣｌ、ｐＨ６．０中の８００μＭの［１５Ｎ、１３Ｃ］標識化ＥＤＩＩＩであった。ＥＤＩＩＩ：ＺＫＡ１９０  Ｆａｂ比が１：１．１であるＮＭＲエピトープマッピングには、過重水素化（公称７０％）２Ｈ、１５Ｎ  ＥＤＩＩＩ試料を使用した。ＥＤＩＩＩ濃度は、典型的には０．４ｍＭであった。
【０２９７】
ＮＭＲシグナルは局所的な化学的環境に強く依存するので、複合体形成時の変化は抗体結合の影響を受ける抗原残基を直接又はアロステリック効果によって同定する。遊離及び結合ＥＤＩＩＩのＮＭＲスペクトルを比較することにより（図１２Ａ）、ＺＫＡ１９０によって影響を受けた残基は、ＥＤＩＩＩのＬＲ、特にＢＣ、ＤＥ、及びＦＧループ並びにＥＤＩ−ＥＤＩＩＩヒンジの一部にマッピングした（図１３Ａ）。これらの残基は、ウガンダ１９４７単離株におけるＶ３４１Ｉ及びＥ３９３Ｄの置換を除いて、２１７種の既知のＺＩＫＶ株の間でほぼ同一である（図１２Ｄ）。これらの突然変異は、ＺＫＡ１９０によって効率的に中和されたＭＲ７６６株にも存在する（図１０Ａ）。複合体化していないＺＩＫＶ構造上のＺＫＡ１９０エピトープの分析は、５つ折頂点のＦＧループを除いて、エピトープが高度に接近可能であることを示した（図１３Ｂ及び１２Ｃ、分子Ａ）。
【０２９８】
計算ドッキングと、その後の、ＮＭＲに由来するエピトープ情報及びＥＤＩＩＩ突然変異誘発によって導かれ、検証された分子動力学シミュレーションにより、ＺＫＡ１９０は、形状及び電荷相補性によって特徴づけられる界面を介して結合することが示された（図１３Ｂ及び図１２Ｅ）。ドッキングは、ＺＫＡ１９０とＥＤＩＩＩ上のＦＧループとの間に直接の接触がないことを示し、抗体結合時のＮＭＲシグナルの変化がアロステリック効果に由来することを示唆している。この概念は、組換えＥＤＩＩＩ中（他のエピトープ領域中ではなく）のＦＧループ残基の突然変異が、ＥＤＩＩＩに対するＺＫＡ１９０の結合親和性に影響しないという事実によって支持される（図１３Ｂ及び図１４）。
【０２９９】
実施例８：ＺＫＡ１９０中和のメカニズム
ウイルスを効率的に中和するＺＫＡ１９０の能力は、細胞接着又は膜融合のいずれかの阻害を伴い得る。更なるメカニズムは、ウイルス粒子の架橋を介したウイルスの不活性化を伴い得る。
【０３００】
ＺＫＡ１９０  Ｆａｂは、対応するＩｇＧよりも効率は低いが、ＺＩＫＶを中和することができる。ＥＤＩ−ＥＤＩＩＩリンカーに結合することによって、ＺＫＡ１９０（Ｆａｂ及びＩｇＧの両方）は、宿主細胞膜へのウイルス融合に必要とされるＤＩＩＩの〜７０度の回転を阻害し得る（Ｂｒｅｓｓａｎｅｌｌｉ，  Ｓ．，  Ｓｔｉａｓｎｙ，  Ｋ．，  Ａｌｌｉｓｏｎ，  Ｓ．Ｌ．，  Ｓｔｕｒａ，  Ｅ．Ａ．，  Ｄｕｑｕｅｒｒｏｙ，  Ｓ．，  Ｌｅｓｃａｒ，  Ｊ．，  Ｈｅｉｎｚ，  Ｆ．Ｘ．，  ａｎｄ  Ｒｅｙ，  Ｆ．Ａ．  （２００４）．  Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ  ｏｆ  ａ  ｆｌａｖｉｖｉｒｕｓ  ｅｎｖｅｌｏｐｅ  ｇｌｙｃｏｐｒｏｔｅｉｎ  ｉｎ  ｉｔｓ  ｌｏｗ−ｐＨ−ｉｎｄｕｃｅｄ  ｍｅｍｂｒａｎｅ  ｆｕｓｉｏｎ  ｃｏｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ．  Ｅｍｂｏ  Ｊ  ２３，  ７２８−７３８；  Ｍｏｄｉｓ，  Ｙ．，  Ｏｇａｔａ，  Ｓ．，  Ｃｌｅｍｅｎｔｓ，  Ｄ．，  ａｎｄ  Ｈａｒｒｉｓｏｎ，  Ｓ．Ｃ．  （２００４）．  Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｄｅｎｇｕｅ  ｖｉｒｕｓ  ｅｎｖｅｌｏｐｅ  ｐｒｏｔｅｉｎ  ａｆｔｅｒ  ｍｅｍｂｒａｎｅ  ｆｕｓｉｏｎ．  Ｎａｔｕｒｅ  ４２７，  ３１３−３１９）。或いは、ＺＫＡ１９０は、標的細胞へのＺＩＫＶの結合を妨げ得る。
【０３０１】
膜融合を阻害するＺＫＡ１９０の能力は、共焦点顕微鏡分析によって支持される。この目的のために、Ｖｅｒｏ細胞を２４穴プレート中の直径１２ｍｍのカバースリップに７，５００細胞／ウェルで播種し、一晩インキュベートした。中和濃度のＡｌｅｘａ−４８８コンジュゲートｍＡｂ（０．７μＭ）の存在下又は非存在下、３７℃で３時間、細胞をＺＩＫＶ  Ｈ／ＰＦ／２０１３（ＭＯＩ１００）で感染させ、ＰＢＳで洗浄し、ＰＢＳ中の２％パラホルムアルデヒドで室温で３０分間インキュベートした。酸性化エンドソームは、固定前のインキュベーションの最後の３０分間、細胞に色素（５０ｎＭ）を添加することにより、Ｌｙｓｏｔｒａｃｋｅｒ  ｒｅｄ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）で同定した。固定化に続いて、ＰＢＳ及び５０ｍＭグリシンで十分な洗浄を行い、最後に、ＤＡＰＩ（Ｖｅｃｔｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ）を用いた蛍光のためのＶｅｃｔａｓｈｉｅｌｄマウンティング培地を用いた顕微鏡分析のためのカバースリップを調製した。６３×／１．４Ｎ．Ａ．対物レンズを備えたライカＴＣＳ  ＳＰ５顕微鏡を用いた共焦点顕微鏡法により試料を分析した。ＦＩＪＩソフトウェアを用いて画像解析及び処理を行った。
【０３０２】
結果を図１５に示す。共焦点顕微鏡分析は、ＩＣ５０を１０，０００倍超える中和濃度でＺＩＫＶと複合体化して初めて、ＺＫＡ１９０（Ｆａｂ又はＩｇＧ）がＶｅｒｏ細胞に入ることができることを示す（図１５）。
【０３０３】
実施例９：ＥＤＩＩＩ特異的ｍＡｂ  ＺＫＡ１９０のインビボでの特徴付け
それらの予防的及び治療的特性を評価するために、ＺＫＡ１９０及びＺＫＡ１９０−ＬＡＬＡを、致死量のＺＩＫＶ株ＭＰ１７５１（アフリカ系統）を摂取したＡ１２９マウスで試験した。それらの予防的効力を試験するために、ＺＫＡ１９０及びＺＫＡ１９０−ＬＡＬＡを、ウイルス摂取の１日前に投与した。
【０３０４】
５〜８週齢の雌性Ａ１２９マウス（ＩＦＮ−アルファ／ベータ受容体−／−）及び野生型１２９Ｓｖ／Ｅｖマウスに、ＰＢＳ中に各種用量で希釈したｍＡｂ（ＺＫＡ１９０、ＺＫＡ１９０−ＬＡＬＡ、及び対照抗体ＭＰＥ８（Ｃｏｒｔｉ，  Ｄ．，  ｅｔ  ａｌ．  Ｃｒｏｓｓ−ｎｅｕｔｒａｌｉｚａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｆｏｕｒ  ｐａｒａｍｙｘｏｖｉｒｕｓｅｓ  ｂｙ  ａ  ｈｕｍａｎ  ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  ａｎｔｉｂｏｄｙ．  Ｎａｔｕｒｅ  ５０１，  ４３９−４４３  （２０１３））を、腹腔内（ｉ．ｐ．）経路で５００μｌ投与した。ウイルス摂取の１日前又は１日、２日、３日、又は４日後に、ｍＡｂを投与した。動物に、１０２ｐｆｕのＺＩＫＶ（ＭＰ１７５１株）を皮下接種し、１４日間追跡した。体重及び温度を毎日モニターし、臨床観察を少なくとも１日２回記録した。摂取後５日目に、各動物から５０μｌの血液を、ＲＮＡｐｒｏｔｅｃｔ  ｔｕｂｅ（Ｑｉａｇｅｎ、ＵＫ）に回収し、−８０℃で凍結した。試験終了後（摂取後１４日目）又は動物が人道的エンドポイントに達したとき、剖検を行い、脳、脾臓、肝臓、腎臓、及び卵巣の血液及び切片をウイルス学的分析のために回収した。
【０３０５】
Ａ１２９マウスからの組織試料をＰＢＳに秤量し、セラミックビーズ及び自動ホモジナイザー（Ｐｒｅｃｅｌｌｙｓ、ＵＫ）を用いて６５００ｒｐｍで３０秒間のギャップの５秒サイクルを６回行ってホモジナイズした。ＲＮｅａｓｙ  Ｍｉｎｉ抽出キット（Ｑｉａｇｅｎ、ＵＫ）を用いるＲＮＡ抽出のために、２００μｌの組織ホモジネート又は血液溶液を６００μＬのＲＬＴ緩衝液（Ｑｉａｇｅｎ、ＵＫ）に移した。試料を最初のステップとしてＱＩＡｓｈｒｅｄｄｅｒ（Ｑｉａｇｅｎ、ＵＫ）に通した。被験動物からのウイルスＲＮＡの検出のために、ＺＩＫＶ特異的リアルタイムＲＴ−ＰＣＲアッセイを利用した。プライマー及びプローブ配列は、Ｑｕｉｃｋ  ｅｔ  ａｌ．、２０１７（Ｑｕｉｃｋ，  Ｊ，  Ｇｒｕｂａｕｇｈ  ＮＤ，  Ｐｕｌｌａｎ  ＳＴ，  Ｃｌａｒｏ  ＩＭ，  Ｓｍｉｔｈ  ＡＤ，  Ｇａｎｇａｖａｒａｐｕ  Ｋ，  Ｏｌｉｖｅｉｒａ  Ｇ，  Ｒｏｂｌｅｓ−Ｓｉｋｉｓａｋａ  Ｒ，  Ｒｏｇｅｒｓ  ＴＦ，  Ｂｅｕｔｌｅｒ  ＮＡ，  ｅｔ  ａｌ．：  Ｍｕｌｔｉｐｌｅｘ  ＰＣＲ  ｍｅｔｈｏｄ  ｆｏｒ  ＭｉｎＩＯＮ  ａｎｄ  Ｉｌｌｕｍｉｎａ  ｓｅｑｕｅｎｃｉｎｇ  ｏｆ  Ｚｉｋａ  ａｎｄ  ｏｔｈｅｒ  ｖｉｒｕｓ  ｇｅｎｏｍｅｓ  ｄｉｒｅｃｔｌｙ  ｆｒｏｍ  ｃｌｉｎｉｃａｌ  ｓａｍｐｌｅｓ．  Ｎａｔ  Ｐｒｏｔｏｃ  ２０１７，  １２：１２６１−１２７６）から採用し、インハウスでの最適化及び検証を、最適なマスターミックス及びサイクル条件を提供するために行った。リアルタイムＲＴ−ＰＣＲは、ＳｕｐｅｒＳｃｒｉｐｔ  ＩＩＩ  Ｐｌａｔｉｎｕｍ  Ｏｎｅ−ｓｔｅｐ  ｑＲＴ−ＰＣＲキット（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ、ＵＫ）を用いて行った。最終的なマスターミックス（１５μｌ）は、１０μｌの２×反応ミックス、１．２μｌのＰＣＲグレード水、０．２μｌの５０ｍＭ  ＭｇＳＯ４、１μｌの各プライマー（ＺＩＫＶ１０８６及びＺＩＫＶ１１６２ｃ、いずれも１８μＭワーキング濃度）、０．８μｌのプローブ（ＺＩＫＶ  １１０７−ＦＡＭ、２５μＭワーキング濃度）、及び０．８μｌのＳＳＩＩＩ酵素ミックスを含む。５μｌの鋳型ＲＮＡをマスターミックスに加え、２０μｌの最終反応容積を得た。使用したサイクル条件は、５０℃で１０分間、９５℃で２分間、続いて９５℃で１０秒間及び６０℃で４０秒間を４５サイクル、最後に４０℃で３０秒間の冷却ステップである。蛍光を用いた定量分析は、各６０℃ステップの終わりに行った。７５００ソフトウェアバージョン２．０．６を使用して、７５００  Ｆａｓｔプラットフォーム（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ、ＵＫ）で反応を実施し、分析した。サンプル中のウイルス量の定量は、一連の定量ＲＮＡオリゴヌクレオチド（Ｉｎｔｅｇｒａｔｅｄ  ＤＮＡ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）を用いて行った。このオリゴヌクレオチドは、ＧｅｎＢａｎｋアクセッション番号ＡＹ６３２５３５．２に基づくアッセイによって標的化されたＺＩＫＶ  ＲＮＡの７７塩基を含んでおり、ＨＰＬＣ精製で２５０ｎｍｏｌのスケールに合成された。
【０３０６】
結果を図１６、図１７、及び図１８に示す。ＺＫＡ１９０及びＺＫＡ１９０−ＬＡＬＡは、５、１、又は０．２ｍｇ／ｋｇの濃度での死亡及び罹患からマウスを保護することが示された（図１６Ａ〜Ｂ）。ＺＫＡ１９０−ＬＡＬＡ、及びより低い程度でＺＫＡ１９０は、０．０４ｍｇ／ｋｇの対照群と比較して、罹患及び死亡を遅延させた。血液及び器官におけるウイルス力価は、存在する血清抗体レベルが１μｇ／ｍｌ未満であっても、対照抗体処置動物と比較して有意に減少した（図１７Ａ〜Ｄ）。
【０３０７】
ＺＫＡ１９０の治療可能性を評価するために、ＺＩＫＶ感染後の異なる時点でＺＫＡ１９０及びＺＫＡ１９０−ＬＡＬＡを投与した。１５ｍｇ／ｋｇの投与量では、８０％〜１００％の生存率が達成され、感染後４日目に処置を行った場合でも罹患率は大幅に低下した（図１６Ｅ〜Ｇ）。全ての感染後の時点でのＺＫＡ１９０及びＺＫＡ１９０−ＬＡＬＡ処理は、対照抗体で処置した動物と比較して、ウイルス力価を有意に低下させ、処置が早いほど低下が大きいという明らかな傾向を示した（図１８Ａ〜１６Ｃ）。注目すべきことに、ＺＫＡ１９０−ＬＡＬＡは、感染後４日目にｍＡｂを与えた場合のＺＫＡ１９０と比較して、５日目の血液試料において有意に低下した抗ウイルス活性を示した。この結果は、コーティングされたビリオンの迅速なクリアランスを促進するＬＡＬＡ変異体の能力の低下に関連し得る。
【０３０８】
１６頭の処置マウスのうち、ＤＩＩＩにアミノ酸置換（Ｔ３３５Ｒ、エピトープの中心）を含む１頭のインビボエスケープ突然変異体（モノクローナル抗体耐性突然変異体１、ＭＡＲＭ１）が単離されたが、他の処置マウスからのウイルスはＥ突然変異を含まなかった。組換えＤＩＩＩへのＴ３３５Ｒ変異の導入は、ＳＰＲによって決定されるように、ＺＫＡ１９０結合を無効にすることを示した（図１４；実験方法については実施例７を参照）。
【０３０９】
実施例１０：ＺＩＫＶエスケープ変異体のインビトロ選択
抗体治療薬の使用により、エスケープ変異体が選択される場合がある。インビトロで耐性変異体（ＭＡＲＭ）を選択するＺＫＡ１９０の能力を評価するために、サブ中和濃度のＺＫＡ１９０の存在下で、ＺＩＫＶ（Ｈ／ＰＦ／２０１３）を継代した。
【０３１０】
簡潔に説明すれば、５００μｌ中の２０００ＴＣＩＤ５０のＨ／ＰＦ／２０１３  ＺＩＫＶを、各種濃度のｍＡｂを含む２５０μｌとインキュベートした（最終濃度２００μｇ／ｍｌから１：４の連続希釈を行う８種類の濃度）。混合物を３７℃で４５分間インキュベートした後、２５０μｌのＶｅｒｏ細胞懸濁液（３．２×１０６細胞）を添加し、２４ウェルプレートにて３７℃で３〜４日間インキュベートしてウイルスを増殖させた。選択の各工程の後、次の３つの条件から上清５００μｌを選択した：即ち、単層の完全な保護が観察されたｍＡｂの最低濃度、細胞単層に対する部分的なＣＰＥ効果が観察された１つの濃度、及び細胞単層の１００％がＺＩＫＶ  ＣＰＥによって破壊された１つの濃度。チューブを１０００×ｇで５分間遠心し、分注し、−８０℃で保存した。体積の半分は、選択と増殖プロセスを繰り返すために、各種濃度のｍＡｂと再度事前混合した。残りの上清をマイクロ中和アッセイとその後のウイルスの配列決定に使用した。
【０３１１】
選択されたＭＡＲＭウイルスのエスケープ変異を特定するために、ゲノムＲＮＡ抽出を行った後、ワンステップＰＣＲを行い、ＺＩＫＶ  Ｅタンパク質アンプリコンの増幅及び配列決定を行った。ＭＡＲＭ選択からの細胞上清（１４０μｌ）を、ＱＩＡａｍｐ  Ｖｉｒａｌ  ＲＮＡミニキット（Ｑｉａｇｅｎ）によるＲＮＡ抽出に使用した。Ｐｌａｔｉｎｉｕｍ  Ｔａｑ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）を用いるＳｕｐｅｒＳｃｒｉｐｔ  ＩＩＩワンステップＲＴ−ＰＣＲを使用して、ｃＤＮＡ合成とＰＣＲ増幅を同時に行った。１回の反応で、２５μｌの反応ミックス、８μｌの滅菌水、２μＭの各プライマー、１μｌのＲＮＡｓｅ  ｏｕｔ（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）、２μｌのＳｕｐｅｒｓｃｒｉｐｔ  ＩＩＩ  ＲＴ／Ｐｌａｔｉｎｕｍ  ＴａｑＭｉｘ、及び１２μｌのＲＮＡを使用して、最終反応量５０μｌとした。Ｅタンパク質のＮ末端部分には、プライマー対Ｚｉｋａ−Ｅ−Ｆ１  ５’−ＴＧＣＡＡＡＣＧＣＧＧＴＣＧＣＡＡＡＣＣＴＧＧＴＴＧ−３’（配列番号２６６）とＺＩＫＶ−Ｅ−Ｒ１  ５’−ＣＧＴＧＣＣＡＡＧＧＴＡＡＴＧＧＡＡＴＧＴＣＧＴＧ−３’（配列番号２６７）、Ｃ末端部分には、プライマー対ＺＩＫＶ−Ｅｆ１５３０  ５’−ＡＧＣＣＴＡＧＧＡＣＴＴＧＡＴＴＧＴＧＡＡＣＣＧＡ−３’（配列番号２６８）とＺＩＫＶ−Ｅ−Ｒ２７６９  ５’−ＴＴＡＣＡＧＡＴＣＣＣＡＣＡＡＣＧＡＣＣＧＴＣＡＧ−３’（配列番号２６９）を用いた。サイクル条件としては、５４℃で４０分間、９４℃で２分間、続いて９４℃で４５秒間、５０℃で４５秒間、６８℃で１．５分間のサイクルを４５回行い、６８℃で５分間の最終伸長工程と、最後に４℃で冷却した。ＰＣＲ産物を分析し、１．５％アガロースゲルから抽出し、ＧＦＸ  ＰＣＲ  ＤＮＡ及びＧｅｌ  Ｂａｎｄ  Ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎキット（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）で更に精製した。配列決定反応には、８μｌの精製ＰＣＲ産物を２μＭプライマーと混合し、最終容量１０μｌにして配列決定に付した（Ｍｉｃｒｏｓｙｎｔｈ）。Ｅタンパク質Ｎ末端産物は、ＺＩＫＶ−Ｅ−Ｆ２  ５’−ＡＣＴＴＧＧＴＣＡＴＧＡＴＡＣＴＧＣＴＧＡＴＴＧＣ−３’（配列番号２７０）とＺＩＫＶ−Ｅ−Ｒ２  ５’−ＴＣＧＧＴＴＣＡＣＡＡＴＣＡＡＧＴＣＣＴＡＧＧＣＴ−３’（配列番号２７１）を用いて配列決定し、Ｃ末端ＰＣＲ産物は、ＺＩＫＶ−Ｅ−ｆ２０５８  ５’−ＧＣＴＡＡＣＣＣＣＧＴＡＡＴＣＡＣＴＧＡＡＡＧＣＡ−３’（配列番号２７２）とＺＩＫＶ−Ｅ−ｒ２２４８  ５’−ＡＡＧＡＣＴＧＣＣＡＴＴＣＴＣＴＴＧＧＣＡＣＣＴＣ−３’（配列番号２７３）を用いて配列決定した。ＣＬＣ  Ｍａｉｎ  Ｗｏｒｋｂｅｎｃｈソフトウェア（ＣＬＣ  Ｂｉｏ、バージョン５）を使用して、配列を組み立て分析した。
【０３１２】
耐性変異体ＭＡＲＭ２は、選択の３ラウンド後に単離され、そのＥタンパク質は、ＤＩＩＩにＥ３７０Ｋ変異を示した。この変異は、ＺＫＡ１９０による中和を無効にしたが、抗体は、変異したＤＩＩＩに結合することができる（図１４）。インビボ（Ｔ３３５Ｒ）及びインビトロ（Ｅ３７０Ｋ）でのＭＡＲＭＳの変異は、それぞれＤＩＩＩのＢＣ及びＤＥループ上にあり、ＮＭＲで同定されたエピトープと一致している。
【０３１３】
実施例１１：本発明に係る二重特異性抗体の開発
ウイルスエスケープ変異体は、治療用抗体の有効性を大きく妨げる可能性がある。この問題を克服するために、本発明者らは、２つの高度に中和する抗体を組み合わせると、ウイルスエスケープの可能性が大幅に低下すると仮定した。これに鑑みて、ＺＫＡ１９０と、Ｅタンパク質上の異なる部位に向けられた他の強力に中和ｍＡｂとを組み合わせた一連の二重特異性抗体を生成した。そこで、中和性が高くＺＫＡ１９０と競合しないＺＫＡ１８５とＺＫＡ２３０の２つのｍＡｂに焦点を当てた。
【０３１４】
まず、４種のＺＩＫＶ株を交差中和する能力を前記したように分析した。ＺＫＡ１８５、及び程度は低いがＺＫＡ２３０は、アフリカ、アジア、及びアメリカの株を強力に中和し、ＩＣ５０は０．０２〜０．６２ｎＭの範囲であった（図１９Ａ）。ＺＫＡ１８５は、組換えＺＩＫＶ  Ｅタンパク質及びジカウイルス様粒子（ＶＬＰ）に高い親和性で結合するが、単離されたＤＩＩＩには結合しない（図１９Ｂ）。逆に、ＺＫＡ２３０はＺＩＫＶ  ＶＬＰに結合したが、組換えＥ又はＤＩＩＩには結合せず、このことは、ウイルス表面にのみ提示される四次エピトープを認識することを示唆している（図１９Ｂ）。ＺＫＡ１８５  ＩｇＧ及びＦａｂは、ＥＬＩＳＡによって同様の高親和性でＥ及びＶＬＰ抗原に結合することが示された。
【０３１５】
ＺＫＡ１８５及びＺＫＡ２３０エピトープ、並びにエスケープ変異体を生成するそれらの傾向を同定するために、ＺＫＡ１８５に対するＭＡＲＭ（ＭＡＲＭ３）及びＺＫＡ２３０に対するＭＡＲＭ（ＭＡＲＭ４）を、前記したようにサブ中和抗体濃度の存在下でウイルスを継代することによって単離した。ＭＡＲＭ３は、いずれもＤＩＩに位置するＫ８４ＥとＤ６７Ｈに置換を含んでいた（図１９Ｄ）。ＭＡＲＭ４は、複数の配列決定実験で確認された８４位での異なるアミノ酸置換（ＫからＧ、Ｅ、又はＲ）の混合物を示した。最後に、ＭＡＲＭ１〜４をＺＫＡ１９０、ＺＫＡ１８５、及びＺＫＡ２３０に対して試験した。ＺＫＡ１９０は、ＺＫＡ１８５及びＺＫＡ２３０のＭＡＲＭ、並びに親ウイルスを中和した（図１９Ｃ）。ＺＫＡ１８５は、ＺＫＡ１９０とＺＫＡ２３０の両方のＭＡＲＭを中和した。ＺＫＡ２３０は、ＺＫＡ１９０のＭＡＲＭ２のみを中和し、ＺＫＡ１９０のＭＡＲＭ１又はＺＫＡ１８５のＭＡＲＭ３は中和しなかった。
【０３１６】
複数の抗体の圧力からエスケープできるＭＡＲＭの開発に関する知見を得るために、ＺＫＡ１９０  ＭＡＲＭ２（Ｅ３７０Ｋ）を、ＺＫＡ１８５又はＺＫ２３０の存在下で連続的に継代した。それにより、３〜４回の継代後に二重ＭＡＲＭが出現することが分かった。ＺＫＡ２３０は余分なＫ８４Ｅ変異を導入し、ＺＫＡ１８５はＤ７６Ｇ変異で選択された。これらの知見は、選択が段階的に行われると、ＺＩＫＶが、異なる部位を標的とする複数の抗体による中和からエスケープできることを示し、ＺＩＫＶ  Ｅタンパク質の高い柔軟性を裏付けた。
【０３１７】
結論として、ＺＫＡ１８５は、ＺＩＫＶ株を強力に交差中和し、代替部位に結合し、ＺＫＡ１９０と競合しないため、二重特異性抗体の開発のためにＺＫＡ１９０と一緒に使用するために選択した。二重特異性抗体は、Ｆａｂｓ−ｉｎ−ｔａｎｄｅｍ−Ｉｇ（ＦＩＴ−Ｉｇ）と呼ばれる四価対称フォーマットで生成した。ＦＩＴ−Ｉｇは、例えば、国際公開第２０１５／１０３０７２  Ａ１号及びＧｏｎｇ  Ｓ，  Ｒｅｎ  Ｆ，  Ｗｕ  Ｄ，  Ｗｕ  Ｘ，  Ｗｕ  Ｃ：  Ｆａｂｓ−ｉｎ−ｔａｎｄｅｍ  ｉｍｍｕｎｏｇｌｏｂｕｌｉｎ  ｉｓ  ａ  ｎｏｖｅｌ  ａｎｄ  ｖｅｒｓａｔｉｌｅ  ｂｉｓｐｅｃｉｆｉｃ  ｄｅｓｉｇｎ  ｆｏｒ  ｅｎｇａｇｉｎｇ  ｍｕｌｔｉｐｌｅ  ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ  ｔａｒｇｅｔｓ．  ＭＡｂｓ  ２０１７に詳細に記載されている。
【０３１８】
ＦＩＴ−Ｉｇは、３つのポリペプチドを使用して産生され得る。ポリペプチド１は通常、内側Ｆａｂ重鎖のＮ末端領域に、好ましくはリンカーなしで融合した外側Ｆａｂの軽鎖を含む。ポリペプチド２は通常、外側Ｆａｂの重鎖可変領域とＣＨ１領域を含み、ポリペプチド３は通常、内側Ｆａｂの軽鎖を含みます。したがって、ＦＩＴ−Ｉｇフォーマットの抗体は通常、「内側Ｆａｂ」及び「外側Ｆａｂ」を含む。ＺＫＡ１９０Ｆａｂが外側又は内側のいずれかの位置に配置された２種類のＦＩＴ−Ｉｇを生成した。簡潔に説明すれば、ＦＩＴ−Ｉｇをコードする３つの遺伝子をコドン最適化し、Ｇｅｎｓｃｒｉｐｔで合成し、次のようにクローン化した：ｉ）完全定常領域（ラムダ又はカッパ）が続く外部ＦａｂのＶＬを、内部のＶＨに融合し、（ＬＡＬＡ変異をコードするように改変された）Ｉｇγ１発現ベクターにクローン化した。得られたポリペプチド１を、ＩｇＧ１  ＣＨ１−ヒンジ−ＣＨ２−ＣＨ３ドメインに融合された内側ＦａｂのＶＨ、外側ＦａｂのＶＬ及びＣＬにより形成される；ｉｉ）外側ＦａｂのＶＨ遺伝子（外側ＦａｂのＶＨとＣＨ１によって形成されるポリペプチド２をコードする）をＦａｂ発現ベクター（ＣＨ１システイン残渣２２０をコードするコドンの後に停止コドンが導入されたＩｇγ１発現ベクター）にクローン化した；ｉｉｉ）内部ＦａｂのＶＬ遺伝子を、Ｉｇκ又はＩｇλ発現ベクター（内部ＦａｂのＶＬ及びＣＬによって形成されるポリペプチド３をコードする）にクローン化する。組換えＦＩＴ−Ｉｇ  ｍＡｂは、プロテインＡクロマトグラフィー（ＧＥヘルスケア）によって生成され且つＰＢＳに対して脱塩された、モル比１：３：３の前記３つのコンストラクト（国際公開第２０１５／１０３０７２  Ａ１号に記載）を使用して、ＥＸＰＩ２９３細胞（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）の一過性トランスフェクションによって生成した。タンパク質を還元状態と非還元状態の両方でＳＤＳ−ＰＡＧＥで分析し、それらの濃度をＢＣＡ（Ｐｉｅｒｃｅ、Ｒｏｃｋｆｏｒｄ、ＩＬ）で決定した。非還元状態では、ＦＩＴ−Ｉｇは、約２５０ＫＤａの主要な単一バンドとして移動した。還元条件では、各ＦＩＴ−Ｉｇタンパク質は２つのバンドを生成し、１つのより高いＭＷバンドは約７５ＫＤａのポリペプチド１であり、１つのより低いＭＷバンドは約２５ＫＤａで重複するポリペプチド２と３の両方に対応する。溶液中のＦＩＴ−Ｉｇの物理的特性を更に研究するために、サイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）を使用して各タンパク質を分析した。ＰＢＳ中の精製ＦＩＴ−Ｉｇを、Ｓｕｐｅｒｄｅｘ  ２００  Ｉｎｃｒｅａｓｅ  ５／１５０  ＧＬにアプライした。全てのタンパク質は、２８０ｎｍ及び２１４ｎｍでのＵＶ検出を使用して決定した。  ＦＩＴ−Ｉｇタンパク質は、単一の主要なピークを示し、単量体タンパク質としての物理的均一性を示す。
【０３１９】
実施例１２：本発明に係る抗体（ＦＩＴ−１）のインビトロ特性評価
外側Ｆａｂ位置にＺＫＡ１９０、内側Ｆａｂ位置にＺＫＡ１８５を有するＦＩＴ−Ｉｇ二重特異性抗体（ここではＦＩＴ−１と称する）（図１９Ｅ）を選択し、更に特徴評価した。ＥＬＩＳＡにより、ＦＩＴ−１がＤＩＩＩ、Ｅ、及びＶＬＰに結合することが示された（図１９Ｆ）。ＦＩＴ−１はＺＩＫＶ株に対して高い中和効力を維持し、ＩＣ５０値は、親のＺＫＡ１９０及びＺＫＡ１８５抗体のＩＣ５０値とほぼ同じあった（図１９Ｇ）。ＦＩＴ−１は、ＬＡＬＡフォーマットのバックボーンＩｇＧ１抗体を使用して生成したため、ＡＤＥを引き起こす可能性がない。いくつかの証拠によれば、ＦＩＴ−１フォーマットのＺＫＡ１９０及びＺＫＡ１８５部分がいずれも活性であることを示唆している。まず、ＦＩＴ−１は、親ＺＫＡ１９０及びＺＫＡ１８５抗体よりも高い親和性でＥタンパク質に結合した（ＫＤ値：ＺＫＡ１８５  １．８ｎＭ、ＺＫＡ１９０  ９．３ｎＭ、及びＦＩＴ−１  ＫＤ＜１ｐＭ、これは、おそらくアビディティ効果による、より緩慢な解離速度による）。第二に、ＦＩＴ−１は、個々のｍＡｂｓとは異なり、ＺＫＡ１９０、ＺＫＡ１８５、及びＺＫＡ２３０  ＭＡＲＭをいずれも効果的に中和した（図１９Ｈ）。ＦＩＴ−１のＦａｂ断片（それぞれが１つのＺＫＡ１９０と１つのＺＫＡ１８５を含む）の中和活性は、約６倍低下した（図１９Ｉ、右側パネル）。
【０３２０】
次に、ＦＩＴ−１のＭＡＲＭを選択する能力を試験した（前記した通り）。しかし、８回の連続継代にもかかわらず、ＭＡＲＭは単離できなかった。対照的に、個々のｍＡｂを使用したときに、３〜４回の継代後にＭＡＲＭが出現した。これらの結果は、治療薬としてのＦＩＴ−１の使用がより安全であることを示唆している。これは、ＤＩＩＩとＤＩＩの両方で同時に突然変異が発生する可能性が低いからである。
【０３２１】
Ｖｅｒｏ細胞を使用した共焦点顕微鏡研究では、ＺＫＡ１９０としてのＦＩＴ−１が、結合後の段階（恐らく融合後）でウイルス感染を阻害する可能性が高いことを示した（図１９Ｊ）。
【０３２２】
最後に、ＦＩＴ−１及びそのＦａｂ断片は、それぞれ０．１ｎＭ及び１０ｎＭを超える濃度でヒト抗ＤＥＮＶ２血漿又はＤＶ６２のＡＤＥをブロックした（図１９Ｋ）。これは、ＦＩＴ−１は、ＡＤＥを引き起こさず、交差反応性抗体の中和が不十分であることにより単球細胞のＡＤＥをブロックできることを示す。
【０３２３】
実施例１３：ＦＩＴ−１のインビボ治療可能性
ＦＩＴ−１の治療可能性を評価するために、ＺＩＫＶ感染後の雌性Ａ１２９マウスに３つの異なる時点で３つの異なる用量（１５、５、及び１ｍｇ／ｋｇ）を投与した。簡潔に説明すれば、雌性Ａ１２９マウスを異なる１０群に割り当てた（対照と、各用量について３つの異なる投与時点での３つの異なる用量）。全ての動物に１０２ｐｆｕのＺＩＫＶ（ＭＰ１７５１株）を皮下投与し、１４日間追跡した。９つの処置群のマウスに、ＺＩＫＶウイルス接種後１日目、２日目、又は３日目に５００μｌの容量で腹腔内（ｉ．ｐ．）経路を介して１５、５、又は１ｍｇ／ｋｇでＰＢＳ中に希釈した二重特異性抗体ＦＩＴ−１を投与した。全ての動物の体重と体温を毎日モニターし、臨床観察を少なくとも１日に２回記録した。接種後５日目に、各動物から５０μｌの血液をＲＮＡｐｒｏｔｅｃｔチューブ（Ｑｉａｇｅｎ、ＵＫ）に回収し、−８０℃で凍結した。研究の終了時（接種後１４日目）又は動物が人道的エンドポイントに達したときに、剖検を行い、血液と脳及び卵巣の切片をウイルス学的分析のために回収したた。
【０３２４】
結果を図２０に示す。データから、１５ｍｇ／ｋｇの用量で、感染から３日後に処置を行った場合でも、罹患率の徴候なしに生存率が１００％であったことが示され（図２０Ａ）；ウイルス力価はなくなり、エスケープ変異体は検出されず、インビボでの高い有効性が示された。５ｍｇ／ｋｇを投与すると、生存率が７０〜１００％になり、感染後５日目にエスケープ変異体も検出されなかった。試験した最低用量（即ち、１ｍｇ／ｋｇ）は、感染後１日目又は２日目に投与した場合は保護を示したが、３日目には示さなかった。
【０３２５】
実施例１４：ＡＧ１２９マウスの先天性感染モデルにおける疾患に対するＦＩＴ−１の効果
ＦＩＴ−１による感染母動物の治療の、感染及び治療を受けた母動物から産まれた仔イヌに対する影響を、ＺＩＫＶによる先天性感染のマウスモデルで評価し、その結果、ＺＩＫＶによる先天性曝露後に生きた子孫が産まれた。このモデルでは、ＩＦＮ受容体が欠損しているＡＧ１２９マウスが使用され、これにより、胎盤でのウイルス複製、胎児へのウイルスの伝達、子宮内発育制限や聴覚障害などの潜在的な長期的影響がもたらされる。
【０３２６】
子宮内感染の状況における様々なパラメータに対するＦＩＴ−１治療の効果を試験した。この目的のために、マウスを性交後（ｄｐｃ）７日目にＺＩＫＶに感染させ、ウイルス接種の１日後又は３日後にＦＩＴ−１で処置した（実施例１３参照）。胎児や胎盤のウイルス力価や子宮内発育制限など、疾患の様々な結果を評価し、ＦＩＴ−１処置の効果を決定した。
【０３２７】
材料及び方法：
動物：４２頭の雌性ＡＧ１２９マウスを使用した。動物の群を、実験群に無作為に割り当て、個々に耳タグを付けた。ホルモンによる処置を、雌の発情を誘発するために行った。雌はそれぞれ雄と一緒に置かれ、性交後（ｄｐｃ）０．５日後に膣栓を調べた。
【０３２８】
ウイルス：ジカウイルスマレーシア（Ｐ６−７４０）を使用した。適切な接種量を、０．１ｍｌの容量でｓ．ｃ．注射により投与した。
【０３２９】
試験薬剤：ＦＩＴ−１は、４５ｍｇ／ｋｇの用量で投与した。非特異的対照抗体ＭＰＥ８−ＬＡＬＡ  Ｃｔｒ  ＩｇＧ１を、アイソタイプ対照プラセボ処置として使用した。
【０３３０】
ウイルスの定量化：定量的ＲＴ−ＰＣＲアッセイを使用して、様々な組織のウイルス力価を定量化した。ＴＲＩｚｏｌ（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、Ｃａｔ＃１５５９６０１８）を使用して、組織サンプルから総ＲＮＡを抽出した。２μｌのＲＮＡ調製物を増幅に使用した。増幅領域に亘る合成ＲＮＡの連続希釈液を使用して、ポジティブコントロールを作成した；未希釈合成ＺＩＫＶ  ＲＮＡは、１０８．０コピー／μｌであった。サンプルは、５０℃で３０分間、９５℃で１０分間の最初の単一サイクルに続き、９５℃で１５秒間、６０℃で６０秒間の４０サイクルに付した。未知量のサンプルは、合成ＺＩＫＶ  ＲＮＡの連続希釈から生成した曲線を使用してＣ（ｔ）値の外挿によって定量化した。
【０３３１】
実験設計：性交後（ｄｐｃ）７日目に母動物に接種し、ウイルス接種から２４時間後又は７２時間後にＦＩＴ−１で処置した。ウイルス接種から１１日後に各群２頭の母動物を剖検した。胎盤、胎児組織、脳組織、及び脾臓組織を、ＱＲＴ−ＰＣＲによるウイルス力価の測定のために回収した。各群２頭の雌を分娩中追跡した。頭部の後頭前頭径（ＯＦ）と仔イヌの頭殿長（ＣＲＬ）をデジタルノギスで記録し、式：ＣＲＬ  Ｘ  ＯＦによって仔イヌサイズを決定することにより子宮内成長制限を決定した。様々な時点で、仔イヌと母動物の体重を測定した。
【０３３２】
統計分析：Ｗｉｌｃｏｘｏｎログランク生存分析（Ｐｒｉｓｍ  ５、ＧｒａｐｈＰａｄ  Ｓｏｆｔｗａｒｅ，Ｉｎｃ）を使用して、生存データを分析した。
【０３３３】
結果と考察：
ＦＩＴ−１による処置は、先天性感染とＺＩＫＶ感染に関連する疾患のマウスモデルで評価した。ＦＩＴ−１による処置は、妊娠中の雌を保護し、処置を行った時期によらず、処置後の雌の大部分が死亡から保護された（図２１）。非特異的陰性対照抗体で処置された雌の死亡率は、以前の研究で観察されたものと同様であった。
【０３３４】
平均仔イヌサイズの測定値改善への傾向。ＦＩＴ−１で処置された母動物の仔イヌの平均サイズは、対照ＭＰＥ８で処置されたものよりも大きく、偽感染動物と同様であった（図２２）。この差は、胎児の体重に関してはより顕著ではなかった（体重については、全ての群が同様の平均値を示した（図２３））。ＦＩＴ−１で処置された母動物では胎盤重量が増加する傾向があった（図２４）。
【０３３５】
各種組織のウイルス力価を図２５に示す。ＦＩＴ−１で処置した母動物の胎児及び胎盤におけるウイルスＲＮＡの大幅な低下が観察された（それぞれ図２５Ａ及び図２５Ｂ）。この低下は、胎盤組織で特に顕著であり、ＺＩＫＶ  ＲＮＡレベルが約５−ｌｏｇ１０低下した。母体の脾臓と脳も、ＭＰＥ８と比較してＦＩＴ−１処置動物においてウイルスＲＮＡが大幅に低下し、レベルが数ｌｏｇ１０低下した（それぞれ図２５Ｃ及び図２５Ｄ）。
【０３３６】
結論
全体として、これらのデータは、先天的にＺＩＫＶに曝露された胎児の疾患の予防又は治療におけるＦＩＴ−１の保護的役割を裏付けている。胎児及び胎盤サイズのパラメータの改善傾向が観察され、様々な母体及び胎児の組織におけるウイルス力価の非常に大幅な低下が見られた。
【０３３７】
実施例１５：ＡＧ１２９マウスの精巣感染モデルにおける疾患に対するＦＩＴ−１の効果
男性の生殖管の性感染及び持続感染については、ＺＩＫＶに感染した男性で文献記載されている（Ｄ’Ｏｒｔｅｎｚｉｏ  Ｅ，  Ｍａｔｈｅｒｏｎ  Ｓ，  Ｙａｚｄａｎｐａｎａｈ  Ｙ，  ｅｔ  ａｌ．  Ｅｖｉｄｅｎｃｅ  ｏｆ  Ｓｅｘｕａｌ  Ｔｒａｎｓｍｉｓｓｉｏｎ  ｏｆ  Ｚｉｋａ  Ｖｉｒｕｓ．  Ｎ  Ｅｎｇｌ  Ｊ  Ｍｅｄ  ２０１６；  ３７４：２１９５−８）。ＡＧ１２９マウス株では、マウスの精巣でのウイルスの著しい複製を含む、ウイルス接種から約２週間後に重度の疾患が通常観察される（Ｊｕｌａｎｄｅｒ  ＪＧ，  Ｓｉｄｄｈａｒｔｈａｎ  Ｖ，  Ｅｖａｎｓ  Ｊ，  ｅｔ  ａｌ．  Ｅｆｆｉｃａｃｙ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｂｒｏａｄ−ｓｐｅｃｔｒｕｍ  ａｎｔｉｖｉｒａｌ  ｃｏｍｐｏｕｎｄ  ＢＣＸ４４３０  ａｇａｉｎｓｔ  Ｚｉｋａ  ｖｉｒｕｓ  ｉｎ  ｃｅｌｌ  ｃｕｌｔｕｒｅ  ａｎｄ  ｉｎ  ａ  ｍｏｕｓｅ  ｍｏｄｅｌ．  Ａｎｔｉｖｉｒａｌ  Ｒｅｓ  ２０１６；  １３７：１４−２２）。雄性ＡＧ１２９マウスの生殖管におけるウイルス複製の重要な部位には、精巣上体及び精巣、並びに各種副生殖腺が含まれる。
【０３３８】
本研究では、ＺＩＫＶ感染雄性マウスに対するＦＩＴ−１の効果が、精巣感染モデルで評価される。この目的のために、雄性ＡＧ１２９マウスにＺＩＫＶを感染させ、ＺＩＫＶ感染及びＦＩＴ−１による処置後の雄の生殖管の病理を評価する。
【０３３９】
材料及び方法：
動物：雄性ＡＧ１２９マウスを使用した。動物の群を実験群にランダムに割り当て、個別に耳タグを付けた。
【０３４０】
ウイルス：ジカウイルス（プエルトリコ株、ＰＲＶＡＢＣ−５９）。ｓ．ｃ．注射を介して１０２ＣＣＩＤ５０の接種量を、０．１ｍｌの体積で鼠径ひだに投与した。この接種量は通常、未処理ＡＧ１２９マウスでは致死的であり、接種後約２週間で死亡する。
【０３４１】
試験薬剤：ＦＩＴ−１を１５ｍｇ／ｋｇの用量で投与した。非特異的対照抗体ＭＰＥ８−ＬＡＬＡ  Ｃｔｒ  ＩｇＧ１を、アイソタイプ対照プラセボ処置として使用した。
【０３４２】
組織病理学：組織を回収し、中性緩衝ホルマリンで２４時間インキュベートした。適切な固定化後に、回収した全ての組織をトリミングし、通常の処理、パラフィン包埋、及び切片化を行うまで７０％エタノール中に維持した。全ての組織を、獣医解剖病理学レジデント及び委員会認定の獣医解剖病理学者により独立して盲目的に分析した。生殖管における炎症の重症度を評価するスコアリングシステムを開発した。
【０３４３】
実験設計：マウスをＺＩＫＶに感染させ、生存と体重変化についてウイルス接種後２８日間モニターした。１５ｍｇ／ｋｇのＦＩＴ−１による処置は、ウイルス接種から２４時間後又は７２時間後に行った。単回処置を０．１ｍｌの体積でｉ．ｐ．投与した。アイソタイプが一致した対照Ａｂ、ＭＰＥ８−ＬＡＬＡ  Ｃｒｔ  ＩｇＧ１を前記したように投与し、これは、ウイルス接種から２４時間後に行った。偽感染させたＦＩＴ−１処置マウスの群を毒性対照として含ませ、正常な対照群を含ませた。個々の体重は０で取得し、７〜２１ｄｐｉに１日おきに取得した。結膜炎、ハンチング、四肢の脱力又は麻痺を含む疾患の徴候についてマウスを毎日観察し、疾患の徴候の初期発症を記録した。３頭の動物のコホートを６ｄｐｉで剖検し、組織サンプルを組織病理学的分析のために回収した。
【０３４４】
統計分析：Ｗｉｌｃｏｘｏｎログランク生存分析（Ｐｒｉｓｍ  ５、ＧｒａｐｈＰａｄ  Ｓｏｆｔｗａｒｅ，Ｉｎｃ）を使用して、生存データを分析した。
【０３４５】
結果と考察：
ジカウイルス（ＺＩＫＶ）は、雄性生殖組織で最長６ヶ月間持続し、抗ウイルス治療の明確な標的となる。雄性生殖器の病理の予防又は軽減における二重特異性抗ＺＩＫＶ  Ａｂの有効性を決定するため、ＺＩＫＶのプエルトリコ分離株によるウイルス接種から２４時間後又は７２時間後にマウスの群を処置した。生存、体重変化、及び組織病理学を使用して、ｍＡｂ処置の有効性を決定した。アイソタイプ対照ｍＡｂであるＭＰＥ８−ＬＡＬＡ  Ｃｔｒ  ＩｇＧ１をプラセボ処置として使用した。
【０３４６】
プラセボｍＡｂ処置と比較して、生存率の有意な（Ｐ＜０．０５）改善が観察された（図２６）。接種後２４時間にＦＩＴ−１で処置されたマウスでは完全な生存が観察されたが、ウイルス接種後７２時間で処置されたマウスでは、ウイルス感染した動物が１頭生じた。この１頭の動物を、ウイルス接種から２４日間後に安楽死させたが、これはプラセボで処置した動物よりはるかに遅かった（図２６）。ＡＧ１２９マウスにＺＩＫＶを感染させると致死性となる（これはこのウイルスの典型的な自然感染よりも遥かに深刻である）ので、ＦＩＴ−１で見られる高いレベルの保護は非常に有望である。
【０３４７】
ＦＩＴ−１で処置したマウスの平均体重変化は、偽感染処置対照の体重変化と同様であったが、ＭＰＥ８で処置したマウスの平均体重は、７ｄｐｉ後に急速に低下した。これは、マウスを疾患から強力に保護したことを更に示している（図２７）。
【０３４８】
この研究の主な目的は、雄性生殖管に対する処置の効果を評価することであり、以前の研究では精巣と精巣上体が感染後に最も深刻な影響を受けたので、これらの組織の組織病理学に特別な注意を払った。２４時間の処置群の１頭の動物を除き、ＦＩＴ−１で処置したマウスの精巣又は精巣上体に疾患は観察されず（図２８）、ＦＩＴ−１治療の有効性を更に示している。ＦＩＴ−１は、また、ウイルス接種から７２時間後に処置を開始したときにマウスを疾患から保護し、この時点で、精巣又は精巣上体に観察可能な疾患を有する処置マウスはいなかった（図２８）。プラセボ処置群のマウスの大部分は、精巣（２／３）及び精巣上体（３／３）に炎症が見られた（図２８）が、この研究の疾患の重篤度はかなり軽度であった。
【０３４９】
結論：
ＦＩＴ−１による処置は、評価された全ての疾患パラメータの低下に有効であった。ウイルス接種後７２時間までの治療処置は非常に効果的であった。
【０３５０】
実施例１６：ＺＩＫＶを接種したアカゲザルにおけるＦＩＴ−１の予防及び治療効果
この研究では、ＺＩＫＶ株ＰＲＶＡＢＣ５９を接種したインドアカゲザル（ＩＲＭ）においてジカウイルス（ＺＩＫＶ）を標的とする二重特異性抗体の予防及び治療効果を評価した。１６頭のＩＲＭを３つの処置群に無作為に割り当てた。１つの群には、接種の１日間前にＦＩＴ−１を投与し（５ｍｇ／ｋｇ）、第２の群には、接種の１日間後に処置を施した（１５ｍｇ／ｋｇ）。第３の群は、接種の１日間前にアイソタイプ対照（ＦＩＴ−３、５ｍｇ／ｋｇ）で処置した。０日目に、全てのＩＲＭに、皮下（ＳＣ）注射により送達させるＺＩＫＶ株ＰＲＶＡＢＣ５９の１×１０５ＰＦＵを接種した。血清、尿、及び唾液を所定時点で回収し、定量的ＲＴ−ＰＣＲによって測定されるＺＩＫＶ量について試験した。
【０３５１】
方法：
研究日０日目の前に、Ｐｒｏｖａｎｔｉｓ  Ｓｏｆｔｗａｒｅを使用して、性別／体重に応じて１６頭のＩＲＭを各群に無作為に割り当てた。−１日目又は１日目に、動物に、以下の表４に記載された用量で静脈内に送達されるＦＩＴ−１又はアイソタイプ対照ＦＩＴ−３のいずれかを投与した。０日目に、全てのアカゲザルを麻酔し、動物１頭当たり１．０×１０５ＰＦＵの標的接種量を含む０．５ｍＬの野生型ＺＩＫＶ株ＰＲＶＡＢＣ５９を皮下注射により接種した。ＲＴ−ｑＰＣＲによるウイルス量の評価のために、表５に示す所定時点で、血液、尿、及び唾液の各サンプルを回収した。
【０３５２】
【表４】
2020531000.tif 000014
【０３５３】
【表５】
2020531000.tif 000015
【０３５４】
研究日−１日目（群１及び群３）及び研究日１日目（群２）に、麻酔した動物の右伏在静脈又は側静脈に、ＦＩＴ−１（ストック濃度：３．６７ｍｇ／ｍＬ）又はＦＩＴ−３（ストック濃度：３．７９ｍｇ／ｍＬ）を静脈内注射により投与した。
【０３５５】
ＺＩＫＶ株ＰＲＶＡＢＣ５９；ヒト／２０１５／プエルトリコ（アメリカ分離株）を、この研究において接種材料として使用した。ウイルス接種物の調製は、ＢＳＬ−２条件下にてクラスＩＩ生物学的安全性キャビネットで行った。ウイルスストックを３７±１℃の水浴で解凍し、ボルテックスし、ＶＰ−ＳＦＭで希釈して、２×１０５ＰＦＵ／ｍＬの適切な濃度の接種物を生成した。各シリンジに０．５ｍＬのウイルス接種物を充填し、投与のために動物施設に移すまで氷上で保管した。研究日０日目に、全ての動物に麻酔をし、注射部位を切り取り、アルコールで拭き、消去できないマーカーで印を付けた。動物の左前腕の前面に、０．５ｍＬのＺＩＫＶ分離株と表４に示す用量をＳＣ接種した。
【０３５６】
全てのマカクは、罹患と死亡の兆候について、隔離と研究期間中、毎日２回観察した。応答性並びに発疹、紅斑、結膜炎、眼分泌物、及び腫脹を含む臨床徴候について、動物を１日２回（８時間以上の間隔を空けて）観察した。全ての動物について、ＲＴ−ｑＰＣＲによるウイルス量のインビトロ試験のために、表５に示す各時点で血液を回収した。３０日目の最終出血時に、１動物当たり２０ｍＬを超えない量を回収した。全ての動物について、ウイルス排出のモニタリングするためのＲＴ−ｑＰＣＲによるインビトロ試験のために、表５に示す各時点で尿を回収した。動物は、研究の尿回収期間中に個別に収容した。尿をケージパン（ｃａｇｅ  ｐａｎｓ）から直接回収し、回収後に濡れた氷の上に置き、アリコートに分け、アッセイ試験の準備ができるまで−７０℃以下で保存した。唾液（よだれ）は、麻酔した動物からチューブに直接回収した（最大約０．５ｍＬ）。回収後、サンプルを濡れた氷の上に置き、アッセイ試験の準備ができるまで−７０℃以下で保存した。
【０３５７】
表５に示す各時点で回収した血清、尿、及び唾液の各サンプルにおけるＺＩＫＶゲノムを検出するために、ＲＴ−ｑＰＣＲ法を使用してウイルス量を測定した。ウイルス接種動物から回収したサンプルは、ＺＩＫＶ株ＰＲＶＡＢＣ５９の検出用に設計されたプライマーとプローブを使用して試験した。プライマー及びプローブ配列を含むＰＣＲ法の説明は公開されている（Ｇｏｅｂｅｌ  ｅｔ．  ａｌ．，  ２０１６，  Ａ  Ｓｅｎｓｉｔｉｖｅ  ｖｉｒｕｓ  ｙｉｅｌｄ  ａｓｓａｙ  ｆｏｒ  ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ  ｏｆ  ａｎｔｉｖｉｒａｌｓ  ａｇａｉｎｓｔ  Ｚｉｋａ  ｖｉｒｕｓ．  Ｊ．  Ｖｉｒｏｌ．  Ｍｅｔｈｏｄｓ）。ウイルスＲＮＡは、ＱＩＡｍｐ  Ｖｉｒａｌ  ＲＮＡミニキット（Ｑｉａｇｅｎ、５２９０６）を使用して体液から単離した。ウイルスＲＮＡを滅菌ＲＮａｓｅ及びＤＮａｓｅフリーＨ２Ｏで溶出し、−７０℃以下で保存した。このアッセイの定量下限（ＬＬＯＱ）は、１反応当たり１０コピーであると決定された。
【０３５８】
ウイルス接種物のアリコートを、Ｖｅｒｏ細胞に対する標準プラークアッセイにより逆滴定して、実際の送達量を確認した。接種物の１０倍連続希釈液を使用して、前日にプレーティングした６ウェルプレートのＶｅｒｏ細胞のコンフルエントな単層に感染させた。プレートを３７℃、５％ＣＯ２で１時間インキュベートした後、０．５％アガロースを含むオーバーレイ培地を添加した。識別可能なプラークが形成されるまでプレートを３日間インキュベートし、その後プレートを固定し、クリスタルバイオレットで染色してカウントした。
【０３５９】
結果
研究期間中、死亡と罹患の兆候について、アカゲザルを１日２回モニターした。全ての動物が、予定された最終日まで生存した。表５に示す各時点で、全ての動物の体重と体温を測定した。研究中に有意な体重減少はなかった。全ての動物は、研究期間中、体温の正常範囲を維持した。臨床観察は、数頭の動物の接種部位での軽度の発赤に限られた。
【０３６０】
表５に示す各時点で回収した血清、尿、及び唾液における各サンプルのＺＩＫＶゲノムを検出するために、ＲＴ−ｑＰＣＲ法を使用してウイルス量を測定した。血清中のウイルス量を図２９に示す。
【０３６１】
アイソタイプ対照で処置された群３の動物は、接種の翌日に血清中に検出可能なウイルス量を有した。４頭中３頭のウイルス量は、２日目又は３日目に１×１０５ゲノムコピー／ｍＬ（ＧＣ／ｍＬ）を超えてピークに達した。この群の平均血清ウイルス量は、３日目に１．１５×１０５ＧＣ／ｍＬでピークに達した。ウイルス量は、１頭の動物では４日目まで、残りの３頭では５日目までに、アッセイのＬＬＯＱ（８６０ＧＣ／ｍＬ）未満に低下した。
【０３６２】
接種の翌日に１５ｍｇ／ｋｇのＦＩＴ−１で処置した群２の動物は、処置前の平均ウイルス量が３．９９×１０３ＧＣ／ｍＬであった。２日目に、平均血清ウイルス量は、僅か９６．５ＧＣ／ｍＬに減少した。低レベルのウイルスＲＮＡが１日目の後に散発的に検出されたが、処置後の如何なる時点においても、群２の動物において、ＲＴ−ｑＰＣＲアッセイのＬＬＯＱ以上のウイルス量は検出されなかった。
【０３６３】
５ｍｇ／ｋｇのＦＩＴ−１による前処理により、群３と比較して１日目の平均血清ウイルス量を５０倍超減少した。接種後の如何なる時点においても、アッセイのＬＬＯＱ以上のウイルス量は検出されず、２日目まで、群１の動物の血清にウイルスＲＮＡが検出されなかった。
【０３６４】
散発性で低レベルのＺＩＫＶ  ＲＮＡのみが、動物の尿又は唾液から検出された。如何なる時点においても、動物の尿又は唾液において、アッセイのＬＬＯＱ以上のウイルス量は検出されなかった。
【０３６５】
ウイルス接種物のアリコートを、Ｖｅｒｏ細胞に対する標準プラークアッセイにより逆滴定して、実際の送達量を確認した。プラークアッセイによれば、１．７×１０５ＰＦＵ／ｍＬの力価であった。
【０３６６】
要約と結論：
この研究では、ＺＩＫＶ接種したＩＲＭにおけるＦＩＴ−１の予防及び治療効果を評価した。研究の過程を通して死亡はなく、臨床観察は、数頭の動物の接種部位における軽度の発赤に限られた。接種後に回収した血清中の、ＲＴ−ｑＰＣＲによって検出されたウイルス量が、研究のプライマリーエンドポイントであった。ウイルスＲＮＡは、アイソタイプ対照で処置した全ての動物の血清中で容易に検出され、ウイルス量は、２日目又は３日目にピークに達し、４日目又は５日目まで８６０ＧＣ／ｍＬのＬＬＯＱを超えるレベルを維持した。平均ピーク量は、３日目の１．１５×１０５ＧＣ／ｍＬであった。対照的に、５ｍｇ／ｋｇのＦＩＴ−１による予防的処置は、ＺＩＫＶ接種ＩＲＭのピークウイルス量とウイルスクリアランスまでの時間を効果的に低減させた。１日目に、この群の６頭全ての動物で低レベルのウイルスＲＮＡが検出されたが、２日目までには、どの動物にもウイルスＲＮＡが検出されなかった。如何なる時点においても、この群の動物の血清中に、８６０ＧＣ／ｍＬのＬＬＯＱを超えるＺＩＫＶ  ＲＮＡは検出されなかった。同様に、接種の翌日に、１５ｍｇ／ｋｇのＦＩＴ−１による治療的処置を行うと、アイソタイプ対照で処置した動物と比較して、ピークのウイルス量と血清からのウイルスクリアランスまでの時間が低減した。群２のアカゲザルは、１日目の平均ウイルス量が３．９９×１０３ＧＣ／ｍＬであったが、１日目の処置後、この群の血清中の平均ウイルス量は、２日目までに僅か９６．５ＧＣ／ｍＬに減少した。この群の動物には、観察期間の残りの期間中、ウイルス量が８６０ＧＣ／ｍＬのＬＬＯＱを超えた動物はいなかった。
【０３６７】
【表７−１】
2020531000.tif 000016
【０３６８】
【表７−２】
2020531000.tif 000017
【０３６９】
【表７−３】
2020531000.tif 000018
【０３７０】
【表７−４】
2020531000.tif 000019
【０３７１】
【表７−５】
2020531000.tif 000020
【０３７２】
【表７−６】
2020531000.tif 000021
【０３７３】
【表７−７】
2020531000.tif 000022
【０３７４】
【表７−８】
2020531000.tif 000023
【０３７５】
【表７−９】
2020531000.tif 000024
【０３７６】
【表７−１０】
2020531000.tif 000025
【０３７７】
【表７−１１】
2020531000.tif 000026
【０３７８】
【表７−１２】
2020531000.tif 000027
【０３７９】
【表７−１３】
2020531000.tif 000028
【０３８０】
【表７−１４】
2020531000.tif 000029
【０３８１】
【表７−１５】
2020531000.tif 000030
【０３８２】
【表７−１６】
2020531000.tif 000031
【０３８３】
【表７−１７】
2020531000.tif 000032
【０３８４】
【表７−１７】
2020531000.tif 000033
【０３８５】
【表７−１８】
2020531000.tif 000034
【０３８６】
【表７−１９】
2020531000.tif 000035
【図１】
2020531000.tif 000036
【図２】
2020531000.tif 000037
【図３】
2020531000.tif 000038
【図４】
2020531000.tif 000039
【図５】
2020531000.tif 000040
【図６】
2020531000.tif 000041
【図７】
2020531000.tif 000042
【図８】
2020531000.tif 000043
【図９】
2020531000.tif 000044
【図１０】
2020531000.tif 000045
【図１１】
2020531000.tif 000046
【図１２Ａ】
2020531000.tif 000047
【図１２Ｂ】
2020531000.tif 000048
【図１２Ｃ】
2020531000.tif 000049
【図１２Ｄ】
2020531000.tif 000050
【図１２Ｅ】
2020531000.tif 000051
【図１３】
2020531000.tif 000052
【図１４】
2020531000.tif 000053
【図１５】
2020531000.tif 000054
【図１６】
2020531000.tif 000055
【図１７】
2020531000.tif 000056
【図１８】
2020531000.tif 000057
【図１９】
2020531000.tif 000058
【図２０】
2020531000.tif 000059
【図２１】
2020531000.tif 000060
【図２２】
2020531000.tif 000061
【図２３】
2020531000.tif 000062
【図２４】
2020531000.tif 000063
【図２５】
2020531000.tif 000064
【図２６】
2020531000.tif 000065
【図２７】
2020531000.tif 000066
【図２８】
2020531000.tif 000067
【図２９】
2020531000.tif 000068
【配列表】
2020531000000001.app
【国際調査報告】
2020531000.tif 000069
2020531000.tif 000070
2020531000.tif 000071
2020531000.tif 000072
2020531000.tif 000073