(57)【要約】本発明は抗血管新生ペプチドを含む微粒子組成物と、たとえば、黄斑変性症の治療の方法と、を提供する。種々の態様及び実施形態では、本発明は抗血管新生ペプチドの持続放出を提供する微粒子組成物を提供する。本発明の微粒子は１：１を超える乳酸（ＬＡ）のグリコール酸（ＧＡ）に対する比（ＬＶＧ）を有するポリ（ラクチド−ｃｏ−グリコリド）（ＰＬＧＡ）を含み；微粒子はさらに、ＩＶ型コラーゲンのα５線維に由来する抗血管新生ペプチドを含む、たとえば、封入する。【選択図】図３
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
１：１を超える乳酸（ＬＡ）のグリコール酸（ＧＡ）に対する比（Ｌ／Ｇ）を有するポリ（ラクチド−ｃｏ−グリコリド）（ＰＬＧＡ）を含む微粒子であって、
前記微粒子がさらに、ＩＶ型コラーゲンのα５線維に由来する抗血管新生ペプチドを含む、前記微粒子。
【請求項２】
前記ＰＬＧＡが少なくとも６０：４０のＬ／Ｇである請求項１に記載の微粒子。
【請求項３】
前記ＰＬＧＡが６５：３５のＬ／Ｇである請求項２に記載の微粒子。
【請求項４】
前記ＰＬＧＡが７５：２５のＬ／Ｇである請求項２に記載の微粒子。
【請求項５】
前記ＰＬＧＡが８５：１５のＬ／Ｇである請求項２に記載の微粒子。
【請求項６】
前記抗血管新生ペプチドがアミノ酸配列ＬＲＲＦＳＴＸＰＸＸＸＸＮＩＮＮＶＸＮＦ（配列番号１）を有し、その際、Ｘは標準アミノ酸または遺伝的にコードされていないアミノ酸である請求項１〜５のいずれか１項に記載の微粒子。
【請求項７】
前記抗血管新生ペプチドがアミノ酸配列ＬＲＲＦＳＴＸＰＸＸＸＸＤＩＮＤＶＸＮＦ（配列番号２）を有し、その際、Ｘは標準アミノ酸または遺伝的にコードされていないアミノ酸である請求項１〜５のいずれか１項に記載の微粒子。
【請求項８】
前記抗血管新生ペプチドがＬＲＲＦＳＴＡＰＦＡＦＩＤＩＮＤＶＩＮＦ（配列番号３）またはＬＲＲＦＳＴＡＰＦＡＦＩＮＩＮＮＶＩＮＦ（配列番号４）である請求項６または７に記載の微粒子。
【請求項９】
前記抗血管新生ペプチドが
ＬＲＲＦＳＴＡＰＦＡＦＩＤＩＮＤＶＩＮＷ（配列番号５）、
ＦＴＮＩＮＮＶＴＮ（配列番号６）、
ＦＴＤＩＮＤＶＴＮ（配列番号７）、
（４−ＣｌＰｈｅ）（Ａｂｕ）ＮＩＮＮＶ（Ａｂｕ）ＮＦ（配列番号８）、
Ａ（Ａｂｕ）ＮＩＮＮＶ（Ａｂｕ）ＮＦ（配列番号９）、
Ｆ（Ａｂｕ）ＮＩＮＮＶ（Ａｂｕ）Ｎ（配列番号１０）、
Ｆ（ＡｌｌｙＧｌｙ）ＮＩＮＮＶ（ＡｌｌｙＧｌｙ）ＮＦ（配列番号１１）、
ＦＡＮＩＮＮＶＡＮＦ（配列番号１２）、
ＦＩＤＩＮＤＶＩＮＦ（配列番号１３）、
ＦＩＤＩＮＤＶＩＮＷ（配列番号１４）、
ＦＩＮＩＮＮＶＩＮＦ（配列番号１５）、
ＦＳＮＩＮＮＶＳＮＦ（配列番号１６）、
ＦＶＮＩＮＮＶＶＮＦ（配列番号１７）、
（ｄＬ）ＲＲ（ｄＬ）ＲＲＦＳＴＡＰＦＡＦＩＤＩＮＤＶＩＮＦ（配列番号１８）、
（ｄＬ）ＲＲＦＳＴＡＰＦＡＦＩＤＩＮＤＶＩＮ（ｄＦ）（配列番号１９）、
ＬＲＲＦＳＴＡＰＦ（ｄＡ）ＦＩＤＩＮＤＶＩＮＦ（配列番号２０）、
ＬＲＲＦＳＴＡＰＦＡＦＩＤＩＮＤＶＩＮ（ｄＦ）（配列番号２１）、
ＬＲＲＦＳＴＡＰＦｄＡＦＩＤＩＮＤＶＩＮＦ（配列番号２２）、
ＬＲＲＦＳＴＭＰＡＭＦ（Ａｂｕ）ＮＩＮＮＶ（Ａｂｕ）ＮＦ（配列番号２３）、
ＬＲＲＦＳＴＭＰＦ（ｄＡ）ＦＩＮＩＮＮＶＩＮＦ（配列番号２４）、
ＬＲＲＦＳＴＭＰＦ（Ｎｌｅ）Ｆ（Ａｂｕ）ＮＩＮＮＶ（Ａｂｕ）ＮＦ（配列番号２５）、
ＬＲＲＦＳＴＭＰＦＡＦ（Ａｂｕ）ＮＩＮＮＶ（Ａｂｕ）ＮＦ（配列番号２６）、
ＬＲＲＦＳＴＭＰＦＡＦＩＮＩＮＮＶＩＮＦ（配列番号２７）、
ＬＲＲＦＳＴＭＰＦｄＡＦＩＮＩＮＮＶＩＮＦ（配列番号２８）、
ＬＲＲＦＳＴＭＰＦＭ（４−ＣｌＰｈｅ）（Ａｂｕ）ＮＩＮＮＶ（Ａｂｕ）ＮＦ（配列番号２９）、
ＬＲＲＦＳＴＭＰＦＭＡ（Ａｂｕ）ＮＩＮＮＶ（Ａｂｕ）ＮＦ（配列番号３０）、
ＬＲＲＦＳＴＭＰＦＭＦ（Ａｂｕ）ＮＩＮＮＶ（Ａｂｕ）ＮＦ（配列番号３１）、
ＬＲＲＦＳＴＭＰＦＭＦ（ＡｌｌｙＧｌｙ）ＮＩＮＮＶ（ＡｌｌｙＧｌｙ）ＮＦ（配列番号３２）、
ＬＲＲＦＳＴＭＰＦＭＦＡＮＩＮＮＶＡＮＦ（配列番号３３）、
ＬＲＲＦＳＴＭＰＦＭＦＧＮＩＮＮＶＧＮＦ（配列番号３４）、
ＬＲＲＦＳＴＭＰＦＭＦＩＮＩＮＮ（配列番号３５）、
ＬＲＲＦＳＴＭＰＦＭＦＩＮＩＮＮＶＩＮＦ（配列番号３６）、
ＬＲＲＦＳＴＭＰＦＭＦＳＮＩＮＮＶＳＮＦ（配列番号３７）、
ＬＲＲＦＳＴＭＰＦＭＦＴＮＩＮＮ（配列番号３８）、
ＬＲＲＦＳＴＭＰＦＭＦＴＮＩＮＮＶＴＮＦ（配列番号３９）、または
ＬＲＲＦＳＴＭＰＦＭＦＶＮＩＮＮＶＶＮＦ（配列番号４０）
のいずれか１つである請求項１〜５のいずれか１項に記載の微粒子。
【請求項１０】
前記微粒子がほぼ球形である請求項１〜９のいずれか１項に記載の微粒子。
【請求項１１】
前記微粒子が非球形である、たとえば、楕円体である請求項１〜９のいずれか１項に記載の微粒子。
【請求項１２】
さらに、ＰＬＧＡ−ＰＥＧコポリマーを含む請求項１〜１１のいずれか１項に記載の微粒子。
【請求項１３】
約１０％〜約９５％のＰＬＧＡ−ＰＥＧコポリマー（ポリマーの質量で）を含む請求項１２に記載の微粒子。
【請求項１４】
前記微粒子が前記微粒子の重量で約０．１％〜約２０％のペプチドを含む請求項１〜１３のいずれか１項に記載の微粒子。
【請求項１５】
請求項１〜１４のいずれか１項に記載の微粒子と、薬学上許容できるキャリアまたは賦形剤とを含む医薬組成物。
【請求項１６】
任意で配列番号１または配列番号２から選択されるペプチドである過剰な遊離のペプチドをさらに含み、Ｘは標準アミノ酸または遺伝的にコードされていないアミノ酸である請求項１５に記載の医薬組成物。
【請求項１７】
配列番号３〜配列番号４０から選択される過剰な遊離のペプチドをさらに含む請求項１５に記載の医薬組成物。
【請求項１８】
前記組成物が約２０％〜約９５％の遊離のペプチド（モルで）を含む請求項１７に記載の医薬組成物。
【請求項１９】
前記微粒子によって含まれる前記抗血管新生ペプチドが前記遊離のペプチドと同じペプチドである請求項１７または１８に記載の医薬組成物。
【請求項２０】
前記微粒子によって含まれる前記抗血管新生ペプチドが前記遊離のペプチドとは異なるペプチドである請求項１７または１８に記載の医薬組成物。
【請求項２１】
黄斑変性症、黄斑浮腫、網膜静脈閉塞症及び糖尿病性網膜症の１以上を治療する方法であって、
必要とする対象に硝子体内投与によって請求項１５〜２０のいずれか１項に記載の医薬組成物を投与することを含む、前記方法。
【請求項２２】
前記対象が加齢性黄斑変性症（ＡＭＤ）を有する請求項２１に記載の方法。
【請求項２３】
前記ＡＭＤが湿性ＡＭＤである請求項２２に記載の方法。
【請求項２４】
前記対象が糖尿病性黄斑浮腫を有する請求項２１に記載の方法。
【請求項２５】
前記対象が網膜静脈閉塞症または糖尿病性網膜症を有する請求項２１に記載の方法。
【請求項２６】
前記医薬組成物が月に１回だけ投与される請求項２１〜２５のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２７】
前記医薬組成物が２ヵ月ごとに１回だけ投与される請求項２６に記載の方法。
【請求項２８】
前記医薬組成物が３ヵ月ごとに１回だけ投与される請求項２７に記載の方法。
【請求項２９】
前記医薬組成物が４ヵ月ごとに１回だけ投与される請求項２８に記載の方法。
【請求項３０】
前記医薬組成物が５ヵ月または６ヵ月ごとに１回だけ投与される請求項２８に記載の方法。
【請求項３１】
前記対象の状態が難治性である、またはＶＥＧＦ遮断療法に部分的にしか応答しない請求項２１〜３０のいずれか１項に記載の方法。
【請求項３２】
前記医薬組成物がＶＥＧＦ遮断療法の代わりに投与される請求項３１に記載の方法。
【請求項３３】
前記医薬組成物がＶＥＧＦ遮断療法を受けている患者に投与される請求項３１に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願への相互参照
本出願は、その内容が全体として参照によって本明細書に組み入れられる２０１７年５月８日に出願された米国仮特許出願番号６２／５０２，９１３の利益を主張する。
【０００２】
連邦支援の研究または開発
本発明は国立衛生研究所（ＮＩＨ）によって授与されたＲ２１−ＥＹ０２３１４８のもとでの政府の支援によって行われた。政府は本発明に特定の権利を有する。
【背景技術】
【０００３】
加齢性黄斑変性症（ＡＭＤ）は現在、失明の主要な原因である。それは１，０００万人を超えるアメリカ人を冒し、それは白内障と緑内障を合わせたものより多い。湿性ＡＭＤは網膜の背後の脈絡膜層における新しい血管の増殖を伴う。新しい血管は流体、脂質及び血液を漏らす傾向がある。漏出は瘢痕組織を形成させ、網膜細胞が機能するのを止めさせることができる。現在、湿性ＡＭＤの最も一般的で且つ有効な臨床治療は抗血管新生薬の定期的な硝子体内（眼内）注射である。そのような硝子体内注射は不愉快であり、控えめに言っても、特に定期的な硝子体内注射が毎月のように頻繁に発生する場合、患者のコンプライアンスを妨げる。従って、治療ごとに強力で、しかし、長期間の有効性を提供し、それによって頻繁ではない硝子体内注射を要する、湿性ＡＭＤ及び他の眼症状の治療についてニーズがある。
【０００４】
種々の態様及び実施形態にて、本発明はこれらのニーズに対処する。
【発明の概要】
【０００５】
種々の態様及び実施形態では、本発明は、抗血管新生ペプチドの持続放出を提供する微粒子組成物と、加齢性黄斑変性症（ＡＭＤ）、たとえば、湿性ＡＭＤのための治療法と、を提供する。
【０００６】
本発明の微粒子は１：１を超える乳酸（ＬＡ）のグリコール酸（ＧＡ）に対する比（Ｌ／Ｇ）を有するポリ（ラクチド−ｃｏ−グリコリド）（ＰＬＧＡ）を含み；微粒子はさらに、ＩＶ型コラーゲンのα５線維に由来する抗血管新生ペプチドを含む、たとえば、封入する。実施形態では、ＰＬＧＡは少なくとも６０：４０のＬ／Ｇ、たとえば、６５：３５のＬ／Ｇ、７５：２５のＬ／Ｇ、及び８５：１５のＬ／Ｇである。実施形態では、抗血管新生ペプチドは、配列番号１〜４０のいずれか１つのアミノ酸配列、たとえば、Ｘが標準アミノ酸または遺伝的にコードされていないアミノ酸であるＬＲＲＦＳＴＸＰＸＸＸＸＮＩＮＮＶＸＮＦ（配列番号１）、Ｘが標準アミノ酸または遺伝的にコードされていないアミノ酸であるＬＲＲＦＳＴＸＰＸＸＸＸＤＩＮＤＶＸＮＦ（配列番号２）、ＬＲＲＦＳＴＡＰＦＡＦＩＤＩＮＤＶＩＮＦ（配列番号３）、またはＬＲＲＦＳＴＡＰＦＡＦＩＮＩＮＮＶＩＮＦ（配列番号４）のアミノ酸配列を有する。実施形態では、微粒子は球形または非球形であり、たとえば、楕円体形状を有する。実施形態では、微粒子はさらに、ＰＬＧＡ−ＰＥＧコポリマーを含む。実施形態では、微粒子は、微粒子重量で約０．１〜約１０％のペプチド、たとえば、微粒子の重量で約５％のペプチドを含む。
【０００７】
本発明の態様及び実施形態には、本明細書に記載されている微粒子のいずれかと薬学上許容できるキャリアまたは賦形剤とを含む医薬組成物が含まれる。実施形態では、医薬組成物はさらに、たとえば、配列番号１〜４０、たとえば、Ｘが標準アミノ酸または遺伝的にコードされていないアミノ酸であるＬＲＲＦＳＴＸＰＸＸＸＸＮＩＮＮＶＸＮＦ（配列番号１）、Ｘが標準アミノ酸または遺伝的にコードされていないアミノ酸であるＬＲＲＦＳＴＸＰＸＸＸＸＤＩＮＤＶＸＮＦ（配列番号２）、ＬＲＲＦＳＴＡＰＦＡＦＩＤＩＮＤＶＩＮＦ（配列番号３）、またはＬＲＲＦＳＴＡＰＦＡＦＩＮＩＮＮＶＩＮＦ（配列番号４）の１以上から選択される過剰な遊離のペプチドを含む。実施形態では、遊離のペプチド及び微粒子のペプチドは同一ペプチドであり；あるいは、遊離のペプチド及び微粒子のペプチドは異なるペプチドである。これらの実施形態では、医薬組成物は１以上の遊離のペプチドに由来する初期効果と、微粒子に封入された１以上のペプチドの制御された持続放出を介した長期間の持続効果とを提供する。
【０００８】
本発明の態様及び実施形態には、黄斑変性症（たとえば、加齢性黄斑変性症、「ＡＭＤ」）、黄斑浮腫（たとえば、糖尿病性黄斑浮腫）、網膜静脈閉塞症及び糖尿病性網膜症の１以上を治療する方法が含まれる。方法は、必要とする対象に硝子体内投与によって本明細書に記載されている医薬組成物のいずれかを投与することを含む。実施形態では、ＡＭＤは「湿性」ＡＭＤである。実施形態では、医薬組成物は、月に１回だけ、たとえば、２ヵ月に１回だけ、３ヵ月に１回だけ、及び４ヵ月に１回だけ投与される。実施形態では、対象の症状は難治性であり、またはＶＥＧＦ遮断療法に部分的にしか応答しない。
【０００９】
本発明の実施形態は、図面及び以下の詳細な説明を参照して記載されるであろう。
【図面の簡単な説明】
【００１０】
【図１】ＡＸＴ１０７ペプチド（配列番号３）を封入しているポリ（ラクチド−ｃｏ−グリコリド）（ＰＬＧＡ）粒子の調製を示す図である。６５：３５の乳酸（ＬＡ）のグリコール酸（ＧＡ）に対する比（ＬＡ：ＧＡの比）（低い比の乳酸微粒子「ＬＭＰ」）及び８５：１５（高い比の乳酸微粒子「ＨＭＰ」）を有する微粒子を球形でまたは伸ばして（楕円体で）調製した。
【図２】図２Ａ及び２Ｂは、５％ペプチドを負荷した球形ＬＭＰ及び５％ペプチドを負荷した球形ＨＭＰの走査電子顕微鏡写真を示す図である。これらの微粒子は約５ミクロンの平均直径を有する（図２Ｃ参照）。図２Ｄは、ウサギの硝子体から回収した無傷の微粒子を示す図である。図２Ｅは、ＬＭＰ、中間比の乳酸微粒子（ＭＭＰ）及びＨＭＰからの１２週にわたるペプチドの累積放出を示す図である。
【図３】トランスジェニックｒｈｏＶＥＧＦマウスを用いた脈絡膜血管新生（ＣＮＶ）のマウスモデルまたは網膜下血管新生（網膜下ＮＶ）のマウスモデルにおける微粒子の硝子体内投与を評価するステップを示す図である。
【図４】図４Ａは、ＡＸＴ１０７を含有する微粒子はＣＮＶを抑制することにおいてアフリベルセプト（Ａ）と同じくらい有効であることを示し、併用（Ａ＋ＡＸＴ１０７）は追加の抑制を示す図である。「Ｃ」は対照。図４Ｂは、ＡＸＴ１０７を含有する微粒子が用量依存性にＣＮＶの退縮を促進することを示す図である。「ＢＬ」はベースラインである。図４Ｃ及び４Ｄは、ＡＸＴ１０７を含有する微粒子が網膜下血管新生を用量依存性に抑制し（図４Ｃ）、血管漏出を減らす（図４Ｄ）ことを示す図である。図４Ｅ〜図４Ｇは、ＡＸＴ１０７を含有する微粒子がウサギの眼にてＶＥＧＦ誘導の血管漏出を減らすことを示し、アフリベルセプト注射がもはや活性を示さない６０日目に至るまでの活性を示す図である。
【図５】図５Ａは、レーザー誘導のＣＮＶを抑制することにおけるＡＸＴ１０７を含有するＨＭＰの長期間の生体内有効性を示す図である。図５Ｂは、レーザー誘導のＣＮＶに続く退縮を促進することにおけるＡＸＴ１０７を含有するＨＭＰの生体内有効性を示す図である。図５Ｃは、レーザー誘導のＣＮＶを抑制することにおけるＡＸＴ１０７を含有するＬＭＰの長期の生体内有効性を示す図である。図５Ｄは、レーザー誘導のＣＮＶに続く退縮を促進することにおけるＡＸＴ１０７を含有するＬＭＰの生体内有効性を示す図である。図５Ｅ及び５Ｆは、ＡＸＴ１０７を含有する微粒子による処理に続いてトランスジェニックｒｈｏＶＥＧＦマウスにおける血管漏出が減ることを示す図である。
【図６】図６Ａは、楕円体ＨＭＰの走査電子顕微鏡写真を示す図である。図６Ｂは、レーザー誘導のＣＮＶを抑制することにおける楕円体ＨＭＰの生体内有効性を示す図である。
【図７】ウサギの眼に硝子体内注射したＡＸＴ１０７を封入した微粒子と同時製剤化したＡＸＴ１０７遊離ペプチド（５０μｇ）を示す図である。注射は、視軸の下に位置し、視覚を遮らない貯留物を形成する。
【発明を実施するための形態】
【００１１】
種々の実施形態では、本発明は、抗血管新生ペプチドの持続放出を提供する微粒子組成物と、たとえば、黄斑変性症、黄斑浮腫、網膜静脈閉塞症及び糖尿病性網膜症の治療方法と、を提供する。
【００１２】
一部の実施形態では、本発明は１：１を超えるＬＡ／ＧＡの比を有するポリ（ラクチド−ｃｏ−グリコリド）（ＰＬＧＡ）コポリマーを含む微粒子を提供する。微粒子はさらに、ＩＶ型コラーゲンのα５線維に由来する抗血管新生ペプチドを含む。種々の実施形態では、本発明は、難治性であってもよい、またはＶＥＧＦの遮断療法または阻害剤療法に対して部分的にしか応答しなくてもよい対象を含む、必要とする対象に硝子体内投与を行う際、さらに長い持続時間の作用を提供する。
【００１３】
一部の実施形態では、ＰＬＧＡポリマーは、５５／４５〜９５／５、たとえば：６０／４０、６５／３５、７０／３０、７５／２５、８０／２０、８５／１５、９０／１０、または９５／５のＬＡ／ＧＡ比（「Ｌ／Ｇ比」とも呼ばれる）に基づく。ＰＬＧＡはそのエステル結合の加水分解によって分解し、ＬＡ／ＧＡの比は生体内での分解の速度を調整するのに役立つ。一部の実施形態では、エステルで末端キャップするポリマー（遊離のカルボン酸とは対照的に）は、さらに長い分解半減期を提供する。実施形態では、ＰＬＧＡポリマーは１／１を超えるＬＡ／ＧＡ比に基づく。
【００１４】
以下の例では、高いＬ／Ｇ比（たとえば、８５／１５）を有する微粒子は低いＬ／Ｇ比（たとえば、６５／３５）を有する微粒子に比べて、さらに長いペプチド放出を有する傾向があった。高いＬ／Ｇ比を有する微粒子は生体内でさらに長い分解半減期を提供する。
【００１５】
一部の実施形態では、ＰＬＧＡは少なくとも６０：４０のＬ／Ｇである。たとえば、ＰＬＧＡは６５：３５のＬ／Ｇであってもよい。一部の実施形態では、ＰＬＧＡは少なくとも７５：２５のＬ／Ｇである。たとえば、ＰＬＧＡは約８５：１５のＬ／Ｇであってもよい。
【００１６】
一部の実施形態では、微粒子を製造するのに使用されるＰＬＧＡポリマーは約５０ｋＤａ〜約２００ｋＤａ、たとえば、１００ｋＤａ〜約２００ｋＤａの範囲での分子量を有する。微粒子は任意でさらに、ポリ（乳酸−ｃｏ−グリコール酸）ポリエチレングリコール（ＰＬＧＡ−ＰＥＧ）ブロックコポリマーを含んでもよい。一部の実施形態では、微粒子はＰＬＧＡポリマーとＰＬＧＡ−ＰＥＧポリマーとを含む。たとえば、微粒子は約１０％〜約９５％のＰＬＧＡ−ＰＥＧコポリマー（ポリマーの質量で）を含んでもよく、または一部の実施形態では、１０％〜５０％、もしくは１０％〜２５％、もしくは２５％〜９０％、もしくは５０％〜９０％、もしくは７０％〜９０％、もしくは８０％〜９５％のＰＬＧＡ−ＰＥＧコポリマーを含んでもよい。たとえば、微粒子は１０〜２５％のＰＬＧＡ−ＰＥＧコポリマー、または約７０％〜約９０％のＰＬＧＡ−ＰＥＧコポリマー、または約６０％〜約７５％のＰＬＧＡ−ＰＥＧコポリマー、または約４０％〜約６０％のＰＬＧＡ−ＰＥＧコポリマー、または約２０％〜約４０％のＰＬＧＡ−ＰＥＧコポリマーを含んでもよい。残りのポリマーは種々の実施形態ではＰＬＧＡであってもよい。一部の実施形態では、ブロックコポリマーのＰＥＧ部分は約１ｋＤａ〜約５ｋＤａ、または一部の実施形態では、約１ｋＤａ〜約３ｋＤａ、もしくは約３ｋＤａ〜約５ｋＤａの範囲であってもよい。さらに他の実施形態では、ブロックコポリマーのＰＥＧ部分は約５ｋＤａ〜約１０ｋＤａ、たとえば、約５ｋＤａ〜約８ｋＤａである。一部の実施形態では、微粒子は、約５００ｎｍ〜約２５μｍの範囲内、または約２〜約２０μｍ、または約５〜約１５μｍの範囲内のサイズ（平均の直径または長軸）を有する。一部の実施形態では、粒子は３〜６μｍの平均直径を持つ球形である。一部の実施形態では、微粒子は約−５ｍＶ〜約−４０ｍＶ、及び一部の実施形態では、約−１０ｍＶ〜約−３０ｍＶ（たとえば、約−２０、約−２５、または約−３０ｍＶ）の範囲内で負である１０ｍＭのＮａＣｌにおけるゼータ電位を有する。他の実施形態では、微粒子は、−１０ｍＶ〜＋１０ｍＶ、及び一部の実施形態では、約−５ｍＶ〜約＋５ｍＶ（たとえば、約−４または−２ｍＶ）の間でほぼ中性である１０ｍＭのＮａＣｌにおけるゼータ電位を有する。
【００１７】
種々の態様及び実施形態では、本明細書で開示されているペプチド及びペプチド剤は、全体として参照によって本明細書に組み入れられるＵＳ９，０５６，９２３、ＵＳ９，８０２，９８４、及びＷＯ２０１７／０８７８２５に記載されているような微粒子製剤の形態で送達される。たとえば、ペプチド剤は微粒子の表面に結合されてもよいし、及び／または微粒子内に封入されてもよい。
【００１８】
本発明の微粒子は本明細書に記載されている任意のペプチドまたはペプチド剤を封入してもよい。
【００１９】
ＩＶ型コラーゲンのα５線維に由来するペプチドには、そのそれぞれが全体として参照によって本明細書に組み入れられるＵＳ９，０５６，９２３、ＵＳ９，８０２，９８４、及びＷＯ２０１７／０８７８２５に記載されているものが挙げられる。
【００２０】
実施形態では、ペプチドはα５β１及びαＶβ３のインテグリンを標的とし、血管内皮増殖因子受容体（ＶＥＧＦＲ）、肝細胞増殖因子受容体（ＨＧＦＲ）、インスリン様増殖因子受容体（ＩＧＦＲ）及び血小板由来増殖因子受容体（ＰＤＧＦＲ）を含む複数の受容体を介してシグナル伝達を阻害する。一部の実施形態では、ペプチド剤は、血管透過性を調節するＴｉｅ２受容体キナーゼのシグナル伝達経路を活性化する。
【００２１】
種々の実施形態では、ペプチドは、Ｘが標準アミノ酸または遺伝的にコードされていないアミノ酸である、アミノ酸配列ＬＲＲＦＳＴＸＰＸＸＸＸＮＩＮＮＶＸＮＦ（配列番号１）、またはＬＲＲＦＳＴＸＰＸＸＸＸＤＩＮＤＶＸＮＦ（配列番号２）を含んでもよい。一部の実施形態では、７位でのＸはＭ、Ａ、またはＧであり；９位でのＸはＦ、Ａ、Ｙ、またはＧであり；１０位でのＸはＭ、Ａ、Ｇ、ｄＡ、またはＮｌｅであり；１１位でのＸはＦ、Ａ、Ｙ、Ｇ、または４−ＣｌＰｈｅであり；１２位及び１８位でのＸは独立してＡｂｕ、Ｇ、Ｓ、Ａ、Ｖ、Ｔ、Ｉ、ＬまたはＡｌｌｙｌ−Ｇｌｙから選択される。種々の実施形態では、ペプチドは約３０以下のアミノ酸、または約２５以下のアミノ酸、または約２４のアミノ酸、または約２３のアミノ酸、または約２２のアミノ酸、または約２１のアミノ酸、または約２０のアミノ酸を含有する。さらに他の実施形態では、配列番号１または２の１〜１０のアミノ酸の合計、たとえば、１、２または３のアミノ酸が１以上の末端から欠失される。ペプチドの誘導体には、配列番号１または２に関して１〜５のアミノ酸の置換、挿入または欠失（たとえば、まとめて１、２、３、４または５のアミノ酸の置換、挿入または欠失）を有するペプチドが挙げられる。一部の実施形態では、ＤＩＮＤＶまたはＮＩＮＮＶのコア配列は誘導体で維持される。アミノ酸置換は任意で、配列番号１または２の相当する位置にてＸによって占有される位置であることができる。ペプチドは一般に少なくとも８のアミノ酸を有する。例となるペプチドには、アミノ酸配列ＬＲＲＦＳＴＡＰＦＡＦＩＤＩＮＤＶＩＮＦ（配列番号３）またはＬＲＲＦＳＴＡＰＦＡＦＩＮＩＮＮＶＩＮＦ（配列番号４）を含むペプチドが挙げられる。
【００２２】
あるいは、微粒子は、配列番号１〜配列番号４によって定義され、ＬＲＲＦＳＴＡＰＦＡＦＩＤＩＮＤＶＩＮＷ（配列番号５）、ＦＴＮＩＮＮＶＴＮ（配列番号６）、またはＦＴＤＩＮＤＶＴＮ（配列番号７）を含むペプチドの種々の誘導体を含んでもよい。
【００２３】
一部の実施形態では、アミノ酸置換は独立して保存的置換または非保存的置換から選択される。これらのまたは他の実施形態では、ペプチドは一方または双方の末端に（まとめて）付加される１〜１０のアミノ酸を含む。Ｎ末端及び／またはＣ末端は任意で、別の化学基（アミンまたはカルボキシ以外、たとえば、アミドまたはチオール）によって占有されてもよく、それはＰＥＧまたはＰＬＧＡ−ＰＥＧコポリマーを含む他の部分の結合に有用であることができる。一部の実施形態では、Ｃ末端はアミド基によって占有される。
【００２４】
保存的置換は、たとえば、関与するアミノ酸残基の極性、電荷、サイズ、溶解性、疎水性、親水性及び／または両親媒性の性質における類似性に基づいて行われてもよい。２０の遺伝的にコードされたアミノ酸は以下の６つの標準アミノ酸の群にグループ分けすることができる：
（１）疎水性：Ｍｅｔ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ；
（２）中性の親水性：Ｃｙｓ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ；Ａｓｎ、Ｇｌｎ；
（３）酸性：Ａｓｐ、Ｇｌｕ；
（４）塩基性：Ｈｉｓ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ；
（５）鎖配向に影響を与える残基：Ｇｌｙ、Ｐｒｏ；及び
（６）芳香族：Ｔｒｐ、Ｔｙｒ、Ｐｈｅ。
【００２５】
本明細書で使用されるとき、「保存的置換」は、上記で示した６つの標準アミノ酸の群の同一群内に載せられた別のアミノ酸によるアミノ酸の交換として定義される。たとえば、ＡｓｐのＧｌｕによる交換はそのように修飾されたポリペプチドにて１つの負電荷を保持する。加えて、グリシン及びプロリンはαらせんを崩壊させるその能力に基づいて互いに置換されてもよい。上記６つの群の範囲内での一部の好まれる保存的置換は、以下亜群：（ｉ）Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ及びＩｌｅ；（ｉｉ）Ｓｅｒ及びＴｈｒ；（ｉｉ）Ａｓｎ及びＧｌｎ；（ｉｖ）Ｌｙｓ及びＡｒｇ；ならびに（ｖ）Ｔｙｒ及びＰｈｅの範囲内での交換である。
【００２６】
本明細書で使用されるとき、「非保存的置換」は、上記で示した６つの標準アミノ酸の群（１）〜（６）の異なる群に載せられた別のアミノ酸によるアミノ酸の交換として定義される。
【００２７】
種々の実施形態では、ペプチド剤は、約８〜約３０のアミノ酸、または約１０〜約２０のアミノ酸のペプチドであり、且つ、配列番号２、３、４、５、６または７の少なくとも４、少なくとも５または少なくとも６の連続するアミノ酸を有する。一部の実施形態では、ペプチドは少なくとも１、少なくとも２または少なくとも３のＤ−アミノ酸、たとえば、ｄＡ、ｄＬ及びｄＦを含有する。一部の実施形態では、ペプチドは１〜約５（たとえば、１、２または３）の遺伝的にコードされていないアミノ酸を含有し、それは任意で独立して２−アミノ酪酸（Ａｂｕ）、ノルロイシン（Ｎｌｅ）、４−クロロフェニルアラニン（４−ＣｌＰｈｅ）、及びアリルグリシン（ＡｌｌｙｌＧｌｙ）から選択される。一部の実施形態では、ペプチドは本明細書に記載されているアミノ酸配列に基づいてレトロ・インベルソ（逆向き鏡像体）型ペプチドである。
【００２８】
本開示に係る配列番号３〜配列番号７のペプチドの誘導体であってもよい例となるペプチド剤には
（４−ＣｌＰｈｅ）（Ａｂｕ）ＮＩＮＮＶ（Ａｂｕ）ＮＦ（配列番号８）、
Ａ（Ａｂｕ）ＮＩＮＮＶ（Ａｂｕ）ＮＦ（配列番号９）、
Ｆ（Ａｂｕ）ＮＩＮＮＶ（Ａｂｕ）Ｎ（配列番号１０）、
Ｆ（ＡｌｌｙＧｌｙ）ＮＩＮＮＶ（ＡｌｌｙＧｌｙ）ＮＦ（配列番号１１）、
ＦＡＮＩＮＮＶＡＮＦ（配列番号１２）、
ＦＩＤＩＮＤＶＩＮＦ（配列番号１３）、
ＦＩＤＩＮＤＶＩＮＷ（配列番号１４）、
ＦＩＮＩＮＮＶＩＮＦ（配列番号１５）、
ＦＳＮＩＮＮＶＳＮＦ（配列番号１６）、
ＦＶＮＩＮＮＶＶＮＦ（配列番号１７）、
（ｄＬ）ＲＲ（ｄＬ）ＲＲＦＳＴＡＰＦＡＦＩＤＩＮＤＶＩＮＦ（配列番号１８）、
（ｄＬ）ＲＲＦＳＴＡＰＦＡＦＩＤＩＮＤＶＩＮ（ｄＦ）（配列番号１９）、
ＬＲＲＦＳＴＡＰＦ（ｄＡ）ＦＩＤＩＮＤＶＩＮＦ（配列番号２０）、
ＬＲＲＦＳＴＡＰＦＡＦＩＤＩＮＤＶＩＮ（ｄＦ）（配列番号２１）、
ＬＲＲＦＳＴＡＰＦｄＡＦＩＤＩＮＤＶＩＮＦ（配列番号２２）、
ＬＲＲＦＳＴＭＰＡＭＦ（Ａｂｕ）ＮＩＮＮＶ（Ａｂｕ）ＮＦ（配列番号２３）、
ＬＲＲＦＳＴＭＰＦ（ｄＡ）ＦＩＮＩＮＮＶＩＮＦ（配列番号２４）、
ＬＲＲＦＳＴＭＰＦ（Ｎｌｅ）Ｆ（Ａｂｕ）ＮＩＮＮＶ（Ａｂｕ）ＮＦ（配列番号２５）、
ＬＲＲＦＳＴＭＰＦＡＦ（Ａｂｕ）ＮＩＮＮＶ（Ａｂｕ）ＮＦ（配列番号２６）、
ＬＲＲＦＳＴＭＰＦＡＦＩＮＩＮＮＶＩＮＦ（配列番号２７）、
ＬＲＲＦＳＴＭＰＦｄＡＦＩＮＩＮＮＶＩＮＦ（配列番号２８）、
ＬＲＲＦＳＴＭＰＦＭ（４−ＣｌＰｈｅ）（Ａｂｕ）ＮＩＮＮＶ（Ａｂｕ）ＮＦ（配列番号２９）、
ＬＲＲＦＳＴＭＰＦＭＡ（Ａｂｕ）ＮＩＮＮＶ（Ａｂｕ）ＮＦ（配列番号３０）、
ＬＲＲＦＳＴＭＰＦＭＦ（Ａｂｕ）ＮＩＮＮＶ（Ａｂｕ）ＮＦ（配列番号３１）、
ＬＲＲＦＳＴＭＰＦＭＦ（ＡｌｌｙＧｌｙ）ＮＩＮＮＶ（ＡｌｌｙＧｌｙ）ＮＦ（配列番号３２）、
ＬＲＲＦＳＴＭＰＦＭＦＡＮＩＮＮＶＡＮＦ（配列番号３３）、
ＬＲＲＦＳＴＭＰＦＭＦＧＮＩＮＮＶＧＮＦ（配列番号３４）、
ＬＲＲＦＳＴＭＰＦＭＦＩＮＩＮＮ（配列番号３５）、
ＬＲＲＦＳＴＭＰＦＭＦＩＮＩＮＮＶＩＮＦ（配列番号３６）、
ＬＲＲＦＳＴＭＰＦＭＦＳＮＩＮＮＶＳＮＦ（配列番号３７）、
ＬＲＲＦＳＴＭＰＦＭＦＴＮＩＮＮ（配列番号３８）、
ＬＲＲＦＳＴＭＰＦＭＦＴＮＩＮＮＶＴＮＦ（配列番号３９）、または
ＬＲＲＦＳＴＭＰＦＭＦＶＮＩＮＮＶＶＮＦ（配列番号４０）
が挙げられる。
【００２９】
特定の実施形態では、本明細書で開示されている組成物は配列番号１〜配列番号４０から選択されるアミノ酸配列に基づいた遊離のまたは封入されたレトロインベルソ型ペプチドを含む。レトロインベルソ型ペプチドは、そのアミノ酸配列が逆向きにされ、アミノ酸サブユニットのα中心のキラリティが同様に反転されている直鎖ペプチドである。これらのペプチドは、元々のＬ−アミノ酸ペプチドのそれに類似する側鎖トポロジーを維持するのに役立つように逆向き配列にＤ−アミノ酸を含めることによって設計される。レトロインベルソ型ペプチドは元々のＬ−アミノ酸ペプチドのそれに類似する側鎖トポロジーを維持し、また、ペプチドをタンパク質分解による分解に対してさらに耐性にする。実施形態では、レトロインベルソ型ペプチドはその対応するＬ−アミノ酸ペプチドに類似する結合特性を有し；レトロインベルソ型ペプチドは対応するＬ−アミノ酸ペプチドのペプチドエピトープの形状、タンパク質・タンパク質相互作用及び／またはタンパク質・ペプチドの界面を模倣する。
【００３０】
ペプチドまたはペプチド剤は、たとえば、固相合成のような周知の技法を用いて化学的に合成し、精製することができる。全体として参照によって本明細書に組み入れられるＵＳ９，０５１，３４９を参照のこと。
【００３１】
微粒子は一部の実施形態では実質的に球形である一方で、微粒子は任意で非球形（たとえば、楕円体）であってもよい。
【００３２】
物質が生物系とどのように相互作用するかに影響を与えることができる種々の物性及び化学特性がある。微粒子の場合、物質の選択、粒子のサイズ分布及び形状分布はすべて粒子の活動に影響を与える決定的なパラメーターである。粒子のサイズ及び形状の双方は粒子が生体の種々の細胞と相互作用する方法に影響を与えることができる。たとえば、粒子の形状は種々の細胞型がどのように上手く粒子を取り込むかに影響を与えることができ、その際、楕円体の粒子は普通、球形の粒子よりも細胞にとって取り込むのが難しい。従って、粒子の形状を伸ばすことは、たとえば、免疫系の細胞による粒子の望ましくない取り込みを減らすことができ、それによって生体内での粒子の半減期を延長する。粒子に基づく系の活動の最適化は粒子のサイズ及び形状の分布を調整することによって達成することができる。
【００３３】
一部の実施形態では、ポリマー転移温度を上回り、ポリマー分解温度までの温度にて微粒子を伸ばし、非球形の微粒子を形成する。一部の実施形態では、ポリマー転移温度を上回るが、それに近い温度で微粒子を伸ばす。たとえば、一部の実施形態では、ポリマー転移温度が約６０℃であれば、６０℃を上回り、約７０℃までの温度で微粒子を伸ばす。一部の実施形態では、ポリマー転移温度が約６０℃であれば、６０℃を上回り、約８０℃までの温度で微粒子を伸ばす。本明細書で使用されるとき、「ポリマー転移温度」はポリマーが硬質物質から軟質またはゴム様の物質に移行する温度範囲である。本明細書で使用されるとき、「ポリマー分解温度」はポリマーが分解し始める温度である。一部の実施形態では、微粒子は約６０℃〜約９０℃の温度で伸ばされて非球形の微粒子を形成する。一部の実施形態では、微粒子は約６０℃の温度で伸ばされる。
【００３４】
一部の実施形態では、粒子の直径及び／または粒子を伸ばす方法は、全体として参照によって本明細書に組み入れられるＷＯ２０１３／０８６５００及びＷＯ２０１６／１６４４５８で開示されたとおりである。
【００３５】
特定の実施形態では、三次元の微粒子は扁長の楕円体を含み、その際、ｘ軸に沿った寸法（ａ）はｙ軸に沿った寸法（ｂ）より大きく、ｙ軸に沿った寸法（ｂ）はｚ軸に沿った寸法（ｃ）に実質的に等しいので、扁長楕円体は方程式ａ＞ｂ＝ｃによって記載することができる。他の実施形態では、楕円体は三軸楕円体であり、その際、ｘ軸に沿った寸法（ａ）はｙ軸に沿った寸法（ｂ）より大きく、ｙ軸に沿った寸法（ｂ）はｚ軸に沿った寸法（ｃ）より大きいので、三軸楕円体は方程式ａ＞ｂ＞ｃによって記載することができる。さらに他の実施形態では、楕円体は扁平楕円体であり、その際、ｘ軸に沿った寸法（ａ）はｙ軸に沿った寸法（ｂ）に等しく、ｙ軸に沿った寸法（ｂ）はｚ軸に沿った寸法（ｃ）より大きいので、扁平楕円体は方程式ａ＝ｂ＞ｃによって記載することができる。しかしながら、現在開示されている非対称の粒子はａ＝ｂ＝ｃの実施形態を含まない。
【００３６】
さらに他の実施形態では、微粒子は約１．１から約５に及ぶアスペクト比を有する。他の実施形態では、アスペクト比は約５〜約１０の範囲を有する。一部の実施形態では、アスペクト比は約１．５〜約３．５の範囲を有する。
【００３７】
一部の実施形態では、楕円体粒子は最長軸に沿って約８〜約２５ミクロンであり、または一部の実施形態では、約１０〜約２０ミクロンである。
【００３８】
一部の態様では、医薬組成物は微粒子の集団と薬学上許容できるキャリアまたは賦形剤とを含む。一部の実施形態では、医薬組成物は微粒子の総重量の０．１〜約２０％または０．１〜約１０％でペプチドを含む。一部の実施形態では、組成物は微粒子の総重量の約１％〜約８％または約２％〜約８％でペプチドを含む。一部の実施形態では、組成物は微粒子の総重量の約１％〜約７％または約１％〜約５％でペプチドを含む。一部の実施形態では、組成物は微粒子組成物の総重量の約５％〜約１５％でペプチドを含む。種々の実施形態では、組成物は約５０μｇ〜約１ｍｇのペプチド剤（遊離のペプチド及び封入されたペプチドを含む）を含む。たとえば、例となる組成物は１００μｇ〜約５００μｇのペプチド、または一部の実施形態では、約１００μｇ〜約１ｍｇのペプチドを含む。
【００３９】
一部の実施形態では、医薬組成物はさらに、配列番号１〜配列番号４０、たとえば、配列番号１、配列番号２及び／または配列番号３のいずれか１つから選択されるペプチドのような過剰な遊離のペプチドを含む。実施形態では、医薬組成物は、配列番号１〜配列番号４０のいずれか１つから選択される１以上のペプチドを封入する微粒子と、配列番号１〜配列番号４０のいずれか１つから選択される１以上の遊離のペプチドとを含む。実施形態では、封入されたペプチドは遊離のペプチドと同一である。実施形態では、封入されたペプチドは遊離のペプチドとは異なる。これらの実施形態では、医薬組成物は、１以上の遊離のペプチドに由来する初期効果と、微粒子に封入された１以上のペプチドの制御された持続放出を介した長期間の持続効果とを提供する。実施形態では、組成物は約０．０１ｍｇ〜約１ｍｇまたは約０．０１〜約０．１ｍｇの遊離のペプチドを含む。一部の実施形態では、組成物は約０．０２ｍｇ〜約０．０８ｍｇの遊離のペプチドを含む。
【００４０】
種々の実施形態では、遊離のペプチドの量は組成物におけるペプチドの２０％〜約９５％（モルで）である。たとえば、例となる組成物は、約２０％〜約９０％の遊離のペプチド、約２０％〜約８０％の遊離のペプチド、または約２０％〜約６０％の遊離のペプチド、または約２０％〜約４０％の遊離のペプチドを有する。一部の実施形態では、組成物は、約４０％〜約８０％の遊離のペプチド、または約４０％〜約６０％の遊離のペプチド（たとえば、約５０％の遊離のペプチド）を有する。一部の実施形態では、組成物は約５０％〜約８０％の遊離のペプチド、または約５０％〜約７０％の遊離のペプチドを含む。ペプチドの残りは微粒子、たとえば、封入に関連する。
【００４１】
他の態様では、本発明は、黄斑変性症、黄斑浮腫、網膜静脈閉塞症、及び糖尿病性網膜症の１以上を治療する方法を提供する。方法は、必要とする対象に硝子体内投与によって本明細書に記載されている医薬組成物を投与することを含む。たとえば、対象は加齢性黄斑変性症（ＡＭＤ）、たとえば、湿性または乾性のＡＭＤを有してもよい。一部の実施形態では、対象は糖尿病性黄斑浮腫を有する。一部の実施形態では、対象は網膜静脈閉塞症または糖尿病性網膜症を有する。
【００４２】
記載されているように製剤化されたペプチドはα５β１及びαＶβ３のインテグリンを標的とし、血管内皮増殖因子受容体（ＶＥＧＦＲ）、肝細胞増殖因子受容体（ＨＧＦＲ）、インスリン様増殖因子受容体（ＩＧＦＲ）及び上皮増殖因子受容体（ＥＧＦＲ）を含む複数の受容体を介してシグナル伝達を阻害することができるとともに、Ｔｉｅ２の活性化を促進することができる。
【００４３】
組成物は長い持続時間の作用を有する。たとえば、医薬組成物は、月に１回、または一部の実施形態では、大体２ヵ月ごとに１回、または大体３ヵ月ごとに１回、または大体４ヵ月ごとに１回、または大体５または６ヵ月ごとに１回、投与してもよい。一部の実施形態では、組成物は、大体１年に２、３、または４回投与される。組成物は一般に硝子体内注射によって投与される。
【００４４】
一部の実施形態では、対象は難治性である状態、またはＶＥＧＦ遮断療法に部分的にしか応答しない状態を有する。一部の実施形態では、組成物は、失敗に終わったＶＥＧＦ遮断療法の後、またはＶＥＧＦ遮断療法の代替として投与される。一部の実施形態では、組成物はＶＥＧＦ遮断療法と併用して投与される。一部の実施形態では、ＶＥＧＦ遮断療法はアフリベルセプト（たとえば、ＥＹＬＥＡ）または類似の作用物質である。
【００４５】
本明細書及び添付の特許請求の範囲で使用されるとき、単数形態「ａ」、「ａｎ」及び「ｔｈｅ」は、文脈が明瞭に指示しない限り、複数の指示対象を含む。
【００４６】
具体的に述べられない限り、または文脈から明白でない限り、本明細書で使用されるとき、用語「または」は、「または」と「及び」の双方を含み、且つ対象とするように理解される。
【００４７】
具体的に述べられない限り、または文脈から明白でない限り、本明細書で使用されるとき、用語「約」は、当該技術における普通の許容誤差の範囲内、たとえば、プラスまたはマイナス１０％の範囲内として理解される。
【００４８】
本発明はさらに、以下の非限定の実施例によって説明される。
【実施例】
【００４９】
実施例１：乳酸のグリコール酸に対する高い比を有する微粒子は乳酸のグリコール酸に対する低い比を有する微粒子と比べて長時間ペプチド放出を有する
ポリ（ラクチド−ｃｏ−グリコリド）「ＰＬＧＡ」を含む微粒子は乳酸（ＬＡ）のグリコール酸（ＧＡ）に対する種々の比（ＬＡ：ＧＡの比）で調製し、ＡＸＴ１０７ペプチド（配列番号３のアミノ酸配列を有する）を負荷した。例として、６５：３５のＬＡ：ＧＡの比を含む乳酸が少ない微粒子（ＬＭＰ）、７５：２５のＬＡ：ＧＡの比を含む乳酸が中程度の微粒子（ＭＭＰ）、及び８５：１５のＬＡ：ＧＡの比を含む乳酸が多い微粒子（ＨＭＰ）をこの実施例で評価した。図１を参照のこと。ポリマー転移温度を上回る温度で伸ばさなかった場合（図１を参照）、５％のペプチドを負荷したＬＭＰ及びＨＭＰはおおまかに球形であること（図２Ａ及び図２Ｂを参照のこと）及び、約５ミクロンの平均直径を有する（図２Ｃを参照のこと）ことが見いだされた。
【００５０】
生体内での微粒子の構造的安定性を最初に調べるために、ＨＭＰをウサギの眼に注射し、その後回収した。図２Ｄに示すように、ウサギの硝子体から回収された微粒子は無傷であり、その形状を保持していた。
【００５１】
微粒子のペプチド放出特性を比較した。このために、ＡＸＴ１０７ペプチドを封入しているＬＭＰ、ＭＭＰ及びＨＭＰを生理食塩水にてインキュベートし、放出されたペプチドの累積量を定期的な間隔で測定した。図２Ｅに示すように、第１週では、放出されたペプチドの量は３つの型の微粒子についておおまかに類似していた。しかしながら、第２週までに、高いＬＡ：ＧＡ比の微粒子と比べると、さらに多くの負荷したペプチドがＬＭＰから放出されている。実験の終了時、第１２週では、元々負荷されたペプチドの約９０％がＬＭＰから放出されたのに対して、元々負荷されたペプチドのたった約４０％がＭＭＰから放出された。
【００５２】
これらのデータは、高いＬＡ：ＧＡ比を有する微粒子が低いＬＡ：ＧＡ比を有する微粒子に比べて封入されたペプチドの長期間放出を提供することを示している。従って、ペプチドの長期間放出が所望である場合、高いＬＡ：ＧＡ比を有する微粒子が使用されてもよい。
【００５３】
実施例２：ＡＸＴ１０７を含有する微粒子は生体内での血管新生及び血管漏出を減らす
脈絡膜血管新生（ＣＮＶ）及び網膜下血管新生（網膜下ＮＶ）の症状を治療し、及び／または軽減するＡＸＴ１０７を含有する微粒子の能力を評価した。ＣＮＶ及び網膜下ＮＶは加齢性黄斑変性症（ＡＭＤ）及び、特に「湿性」ＡＭＤに関連する。ここで、図３で説明しているように、ＣＮＶまたは網膜下ＮＶについてのマウスモデルを本質的に評価した。
【００５４】
図４Ａに示すように、ＡＸＴ１０７を含有する微粒子はレーザーが誘導したＣＮＶを抑制することにおいてアフリベルセプト（湿性黄斑変性症のためのＦＤＡが認可した治療：Ａ）と同じくらい有効だった。特に、アフリベルセプトとＡＸＴ１０７を含有する微粒子の併用（Ａ＋ＡＸＴ１０７）はいずれか単独の処理を超える追加の抑制を示した。図４ＢはＡＸＴ１０７を含有する微粒子が用量依存性にＣＮＶの退縮を促進することを示している。
【００５５】
同様に、図４Ｃに示すように、ＡＸＴ１０７を含有する微粒子は網膜下ＮＶを抑制することにおいて用量依存性に有効であり、血管漏出を減らすことにおいて有効だった。図４Ｄを参照のこと。
【００５６】
このモデルでは、ＡＸＴ１０７を含有する微粒子はＶＥＧＦが誘導する血管漏出を減らした（図４Ｅ〜４Ｇを参照のこと）。当初の処理の３０日後、ＡＸＴ１０７を含有する微粒子はアフリベルセプトよりも大きな有効性を有した。図４Ｆを参照のこと。さらに図４Ｇに示すように、ＡＸＴ１０７を含有する微粒子の単回注射は６０日目に至るまで活性を示したのに対して、アフリベルセプト注射はその時点ではもはや活性を示さなかった。
【００５７】
これらのデータは、ＡＸＴ１０７を含有する微粒子が、アフリベルセプトと少なくとも同じくらい有効である、血管新生及び血管漏出に対する活性を有するが、この活性はアフリベルセプトが活性を失くしたときを超えて持続することを示している。従って、ＡＸＴ１０７を含有する微粒子による治療は、アフリベルセプトによる治療よりも頻度の少ない投与、すなわち、硝子体内注射で済むことになる。
【００５８】
実施例３：ＡＸＴ１０７を含有するＨＭＰはＡＸＴ１０７を含有するＬＭＰよりも長く続く生体内での有効性を提供する
図５Ａに示すように、ＡＸＴ１０７を含有するＨＭＰはレーザーが誘導するＣＮＶを抑制することにおいて長期間（注射後少なくとも１６週まで）の生体内有効性を提供し；それらはレーザー誘導に続くＣＮＶの生体内退縮を促進した。図５Ｂを参照のこと。図５Ｃに示すように、ＡＸＴ１０７を含有するＬＭＰはレーザーが誘導するＣＮＶを抑制することにおいて持続した（注射後少なくとも８週まで）生体内有効性を提供した。注射の１２週後、ＡＸＴ１０７を含有するＬＭＰと空のＬＭＰとの間でほとんど差異はないと思われた。ＡＸＴ１０７を含有するＨＭＰと同様に、ＡＸＴ１０７を含有するＬＭＰはレーザー誘導に続く生体内退縮を促進した。図５Ｄを参照のこと。
【００５９】
最終的に、ＡＸＴ１０７を含有するＨＭＰはトランスジェニックｒｈｏＶＥＧＦマウス（網膜下ＮＶのマウスモデル）にて血管漏出を治療するのに有効だった。図５Ｅ及び図５Ｆを参照のこと。
【００６０】
これらのデータは、ＬＡ：ＧＡの高い比を有する微粒子がＬＡ：ＧＡの低い比を有する微粒子に比べてレーザー誘導のＣＮＶを抑制すること及びＣＮＶの生体内退縮を促進することにて長期間の有効性を提供することを示している。従って、ＬＡ：ＧＡの高い比を有する微粒子はペプチドの持続放出が所望の場合、有用であってもよい。
【００６１】
実施例４：ＡＸＴ１０７を含有する非球形の微粒子は生体内レーザー誘導のＣＮＶを治療するのに有効である。
図１に示すように、ＡＸＴ１０７を含有するＨＭＰを調製し、非球形、たとえば、楕円体形状に伸ばした。図６Ａはそのような非球形ＨＭＰを示す走査電子顕微鏡写真である。
【００６２】
図６Ｂに示すように、ＡＸＴ１０７を含有する非球形のＨＭＰはレーザー誘導のＣＮＶを抑制することにおいて強力な（注射後少なくとも１２週間）生体内有効性を提供した。１６週で、ＨＭＰの活性は測定可能なままだった。
【００６３】
これらのデータは、微粒子の形状が微粒子からペプチドカーゴが放出される速度に影響を与えてもよいことを示している。
【００６４】
実施例５：過剰な遊離のペプチドを伴ったＡＸＴ１０７ＭＰの製剤
ＡＸＴ１０７遊離のペプチド（５０μｇ）＋微粒子に封入したＡＸＴ１０７（微粒子の１ｍｇにて５０μｇ）の２５マイクロリットルをウサギの眼に硝子体内で注射した。図７で明らかにしたように、注射は視軸の下に位置し、視覚を妨害しない貯留物を形成する。貯留物は炎症を引き起こさず、封入されたペプチドの時間をかけた制御された放出を可能にする。
【００６５】
これらの実施例は、抗血管新生ペプチド（たとえば、ＡＸＴ１０７）がマウスにて脈絡膜血管新生（ＣＮＶ）を抑制し、その退縮を促進したこと、マウスにて網膜下血管新生を抑制し、その退縮を促進したこと、及びマウスとウサギにて血管漏出を抑えたことを実証している。乳酸のグリコール酸に対する様々な比を有するＰＬＧＡでペプチドを負荷した微粒子を製剤化し；乳酸が少ない微粒子と比べると、乳酸が多い微粒子（ＨＭＰ）は当初の処理後２ヵ月を超えた時点でＣＮＶの大きな抑制及びその退縮の促進を示した。ポリマー転移温度を上回り、ポリマー分解温度までの温度にて加熱することによって球形のペプチド負荷粒子を非球形（たとえば、楕円体）の形状に物理的に変形し；非球形の微粒子は球形の微粒子とは異なる特性を有した。さらに、非球形のＨＭＰは球形のＨＭＰよりも長く、有意なＣＮＶの抑制を示した。最終的に、封入されたペプチド及び遊離のペプチドを含む医薬組成物は、硝子体内に注射されると貯留物を形成し；視覚を妨害せず、炎症も引き起こさないこの貯留物はさらに、封入されたペプチドの時間をかけた制御された放出を可能にする。
【図１】
2020518651.tif 000003
【図２−１】
2020518651.tif 000004
【図２−２】
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【図２−３】
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【図２−４】
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【図３】
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【図４−１】
2020518651.tif 000009
【図４−２】
2020518651.tif 000010
【図４−３】
2020518651.tif 000011
【図５−１】
2020518651.tif 000012
【図５−２】
2020518651.tif 000013
【図５−３】
2020518651.tif 000014
【図６】
2020518651.tif 000015
【図７】
2020518651.tif 000016
【配列表】
2020518651000001.app
【国際調査報告】
2020518651.tif 000017
2020518651.tif 000018