(57)【要約】４−（４−（４−（（（２−（２，６−ジオキソピペリジン−３−イル）−１−オキソイソインドリン−４−イル）オキシ）メチル）ベンジル）ピペラジン−１−イル）−３−フルオロベンゾニトリル、またはその鏡像異性体、鏡像異性体の混合物、互変異性体、もしくは薬学的に許容される塩、及びそのような化合物を使用して多発性骨髄腫を治療、予防、または管理するための方法が本明細書に提供される。本化合物を含む医薬組成物、及び本組成物の使用方法も提供される。【選択図】図１Ａ、図１Ｂ
2020526534.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
化合物であって、式
【化１】
2020526534.tif 000073
１
の化合物１、またはその鏡像異性体、鏡像異性体の混合物、互変異性体、アイソトポログ、もしくは薬学的に許容される塩である、前記化合物。
【請求項２】
化合物であって、式
【化２】
2020526534.tif 000074
２
の化合物２、またはその互変異性体、アイソトポログ、もしくは薬学的に許容される塩である、前記化合物。
【請求項３】
前記化合物が、化合物１の互変異性体である、請求項１に記載の化合物。
【請求項４】
前記化合物が、化合物１の鏡像異性体である、請求項１に記載の化合物。
【請求項５】
前記化合物が、化合物１の鏡像異性体の混合物である、請求項１に記載の化合物。
【請求項６】
前記化合物が、化合物１の薬学的に許容される塩である、請求項１に記載の化合物。
【請求項７】
前記化合物が、化合物２の互変異性体である、請求項２に記載の化合物。
【請求項８】
前記化合物が、化合物２の薬学的に許容される塩である、請求項２に記載の化合物。
【請求項９】
請求項１に記載の化合物を含む、医薬組成物。
【請求項１０】
請求項２に記載の化合物を含む、医薬組成物。
【請求項１１】
治療有効量の請求項１に記載の化合物を、それを必要とする患者に投与することを含む、多発性骨髄腫の治療方法。
【請求項１２】
前記多発性骨髄腫が、再発性、不応性、または耐性である、請求項１１に記載の方法。
【請求項１３】
前記多発性骨髄腫が、レナリドミド不応性または耐性である、請求項１２に記載の方法。
【請求項１４】
前記多発性骨髄腫が、ポマリドミド不応性または耐性である、請求項１２に記載の方法。
【請求項１５】
前記多発性骨髄腫が、新たに診断された多発性骨髄腫である、請求項１１に記載の方法。
【請求項１６】
追加で、第２の活性剤を投与することを含む、請求項１１〜１５のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１７】
前記第２の活性剤が、デキサメタゾンである、請求項１６に記載の方法。
【請求項１８】
前記第２の活性剤が、ボルテゾミブである、請求項１６に記載の方法。
【請求項１９】
治療有効量の請求項２に記載の化合物を、それを必要とする患者に投与することを含む、多発性骨髄腫の治療方法。
【請求項２０】
前記多発性骨髄腫が、再発性、不応性、または耐性である、請求項１９に記載の方法。
【請求項２１】
前記多発性骨髄腫が、レナリドミド不応性または耐性である、請求項２０に記載の方法。
【請求項２２】
前記多発性骨髄腫が、ポマリドミド不応性または耐性である、請求項２０に記載の方法。
【請求項２３】
前記多発性骨髄腫が、新たに診断された多発性骨髄腫である、請求項１９に記載の方法。
【請求項２４】
追加で、第２の活性剤を投与することを含む、請求項１９〜２３のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２５】
前記第２の活性剤が、デキサメタゾンである、請求項２４に記載の方法。
【請求項２６】
前記第２の活性剤が、ボルテゾミブである、請求項２４に記載の方法。
【請求項２７】
多発性骨髄腫を治療する方法に使用するための請求項１に記載の化合物であって、前記方法が、治療有効量の前記化合物を、それを必要とする患者に投与することを含む、前記化合物。
【請求項２８】
前記多発性骨髄腫が、再発性、不応性、または耐性である、請求項２７に記載の使用のための化合物。
【請求項２９】
前記多発性骨髄腫が、レナリドミド不応性または耐性である、請求項２８に記載の使用のための化合物。
【請求項３０】
前記多発性骨髄腫が、ポマリドミド不応性または耐性である、請求項２８に記載の使用のための化合物。
【請求項３１】
前記多発性骨髄腫が、新たに診断された多発性骨髄腫である、請求項２７に記載の使用のための化合物。
【請求項３２】
前記方法が、第２の活性剤を投与することを更に含む、請求項２７〜３１のいずれか１項に記載の使用のための化合物。
【請求項３３】
前記第２の活性剤が、デキサメタゾンである、請求項３２に記載の使用のための化合物。
【請求項３４】
前記第２の活性剤が、ボルテゾミブである、請求項３２に記載の使用のための化合物。
【請求項３５】
多発性骨髄腫を治療する方法に使用するための請求項２に記載の化合物であって、前記方法が、治療有効量の前記化合物を、それを必要とする患者に投与することを含む、前記化合物。
【請求項３６】
前記多発性骨髄腫が、再発性、不応性、または耐性である、請求項３５に記載の使用のための化合物。
【請求項３７】
前記多発性骨髄腫が、レナリドミド不応性または耐性である、請求項３６に記載の使用のための化合物。
【請求項３８】
前記多発性骨髄腫が、ポマリドミド不応性または耐性である、請求項３６に記載の使用のための化合物。
【請求項３９】
前記多発性骨髄腫が、新たに診断された多発性骨髄腫である、請求項３５に記載の使用のための化合物。
【請求項４０】
前記方法が、第２の活性剤を投与することを更に含む、請求項３５〜３９のいずれか１項に記載の使用のための化合物。
【請求項４１】
前記第２の活性剤が、デキサメタゾンである、請求項４０に記載の使用のための化合物。
【請求項４２】
前記第２の活性剤が、ボルテゾミブである、請求項４０に記載の使用のための化合物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本出願は、２０１７年７月１０日に出願された米国仮出願第６２／５３０，７７８号、２０１７年１１月３０日に出願された米国仮出願第６２／５９３，１８５号、及び２０１８年５月２３日に出願された米国仮出願第６２／６７５，５８１号の利益を主張するものであり、それらは全て、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。
【０００２】
４−（４−（４−（（（２−（２，６−ジオキソピペリジン−３−イル）−１−オキソイソインドリン−４−イル）オキシ）メチル）ベンジル）ピペラジン−１−イル）−３−フルオロベンゾニトリル、またはその鏡像異性体、鏡像異性体の混合物、互変異性体、もしくは薬学的に許容される塩、及びそのような化合物を使用して多発性骨髄腫を治療、予防、または管理するための方法が本明細書に提供される。本化合物を含む医薬組成物、及び併用治療を含む組成物の使用方法も提供される。
【背景技術】
【０００３】
多発性骨髄腫（ＭＭ）は、骨髄の形質細胞のがんである。通常、形質細胞は抗体を産生し、免疫機能において主要な役割を果たす。しかしながら、これらの細胞の未制御な成長は、骨痛及び骨折、貧血、感染、ならびに他の合併症をもたらす。多発性骨髄腫は、２番目に多い血液悪性腫瘍であるが、多発性骨髄腫のはっきりした原因は不明のままである。多発性骨髄腫は、血液、尿、及び臓器において、Ｍタンパク質及び他の免疫グロブリン（抗体）、アルブミン、ならびにベータ−２−ミクログロブリンを含むがこれらに限定されない高レベルのタンパク質の原因となるが、例外として、一部の患者（１％〜５％と推定される）は、骨髄腫細胞がこれらのタンパク質を分泌しない（非分泌型骨髄腫と呼ばれる）。パラプロテインとしても知られるＭタンパク質（モノクローナルタンパク質の略）は、骨髄腫形質細胞によって産生される特に異常なタンパク質であり、非分泌型骨髄腫を有するか、または骨髄腫細胞が重鎖を伴う免疫グロブリン軽鎖を産生する患者を除き、多発性骨髄腫のほぼ全ての患者の血液及び尿中に見られる。
【０００４】
骨痛を含む骨格症状は、多発性骨髄腫の中でも最も臨床的に顕著な症状である。悪性形質細胞は、カルシウムを骨から浸出させて溶解破壊の原因となる破骨細胞刺激因子（ＩＬ−１、ＩＬ−６、及びＴＮＦ）を放出する。高カルシウム血症は別の症状である。サイトカインとも称される破骨細胞刺激因子はアポトーシスまたは骨髄腫細胞死を妨げる場合がある。患者の５０パーセントは、診断時に放射線学的に検出可能な骨髄腫関連骨格破壊を有する。多発性骨髄腫の他の一般的な臨床症状には、多発ニューロパチー、貧血、過粘稠、感染、及び腎不全が含まれる。
【０００５】
現在の多発性骨髄腫療法は、患者の多発性骨髄腫細胞を根絶するために、手術、幹細胞移植、化学療法、免疫療法、及び／または放射線治療のうちの１つ以上を伴う場合がある。現在の療法のアプローチは全て、患者にとって顕著な欠点を伴う。
【０００６】
過去１０年間で、新規治療薬、特にレナリドミド及びポマリドミドなどの免疫調節薬は、多発性骨髄腫患者における奏功率ならびに長期無増悪生存（ＰＦＳ）及び全生存（ＯＳ）を大幅に増加させた。しかしながら、骨髄（ＢＭ）形態、免疫固定法を用いたタンパク質電気泳動、及び軽鎖定量化の感受性を下回る持続レベルの残存疾患は、これらの患者が完全奏功（ＣＲ）を達成した後でも、多くの多発性骨髄腫の患者に存在し、最終的には疾患の再発の原因となる。骨髄腫における最小残存疾患（ＭＲＤ）は、無増悪生存（ＰＦＳ）の独立予測因子であり、効果的な治療の同定を改善するための代替試験のエンドポイントとして、特に生存差を同定するために現在５〜１０年間の経過観察を必要とする最先端試験を検討中である。したがって、多発性骨髄腫の患者における最小残存疾患（ＭＲＤ）を監視することにより、ＰＦＳ及びＯＳを予測し、治療決定を行う際の予後値を提供する。骨髄腫における最小残存疾患（ＭＲＤ）の検出には治療後の０．０１％閾値（１０−４）を使用することができる、すなわち、総骨髄単核細胞の割合として１０−４細胞以下の多発性骨髄腫細胞を有することはＭＲＤ陰性と見なされ、１０−４細胞以上はＭＲＤ陽性と見なされる。１０−４ＭＲＤ閾値は、元は技術的能力に基づいたが、定量的なＭＲＤの検出が現在、フローサイトメトリーにより１０−５、及びハイスループットシーケンシングにより１０−６で可能である。（Ｒａｗｓｔｒｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｌｏｏｄ  ２０１５；１２５（１２）：１９３２−１９３５）。ＭＲＤの測定方法には、ＶＤＪのＤＮＡシーケンシング、ポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）（対立遺伝子特異的ＰＣＲ、ＡＳＯ  ＰＣＲ）、及びマルチパラメータフローサイトメトリー（ＭＰＦ）が含まれる。例えばクローン型プロファイル測定に基づいたＭＲＤのアッセイは、米国特許第８，６２８，９２７号（Ｆａｈａｍら）にも記載されており、これは参照により本明細書に組み込まれる。
【０００７】
従来の療法に伴う毒性及び／または副作用を低減または回避しつつ、多発性骨髄腫を治療、予防、及び管理するための安全かつ効果的な化合物及び方法（多発性骨髄腫が新たに診断されたか、または標準的な治療に不応性である患者のためを含む）が、かなり必要とされている。
【０００８】
本出願の第２節におけるいずれの参考文献の引用または特定も、その参考文献が本出願の先行技術であるという承認として解釈されるべきではない。
【発明の概要】
【０００９】
多発性骨髄腫の治療の際の化合物、化合物を含む医薬組成物、及びその使用方法が本明細書に提供される。一実施形態では、本明細書に提供される組成物及び方法に使用するための化合物は、４−（４−（４−（（（２−（２，６−ジオキソピペリジン−３−イル）−１−オキソイソインドリン−４−イル）オキシ）メチル）ベンジル）ピペラジン−１−イル）−３−フルオロベンゾニトリル（化合物１）： 
【化１】
2020526534.tif 000003
１
またはその鏡像異性体、鏡像異性体の混合物、互変異性体、アイソトポログ、もしくは薬学的に許容される塩である。
【００１０】
一実施形態では、本明細書に提供される組成物及び方法に使用するための化合物は、（Ｓ）−４−（４−（４−（（（２−（２，６−ジオキソピペリジン−３−イル）−１−オキソイソインドリン−４−イル）オキシ）メチル）ベンジル）ピペラジン−１−イル）−３−フルオロベンゾニトリル（化合物２）：
【化２】
2020526534.tif 000004
２
またはその互変異性体、アイソトポログ、もしくは薬学的に許容される塩である。
【００１１】
別の実施形態では、本明細書に提供される組成物及び方法に使用するための化合物は、（Ｒ）−４−（４−（４−（（（２−（２，６−ジオキソピペリジン−３−イル）−１−オキソイソインドリン−４−イル）オキシ）メチル）ベンジル）ピペラジン−１−イル）−３−フルオロベンゾニトリル（化合物３）：
【化３】
2020526534.tif 000005
３
またはその互変異性体、アイソトポログ、もしくは薬学的に許容される塩である。
【００１２】
有効な濃度の本明細書に提供される化合物、例えば、化合物１、化合物２、もしくは化合物３、またはそれらの鏡像異性体、鏡像異性体の混合物、互変異性体、アイソトポログ、もしくは薬学的に許容される塩を含有し、任意選択で少なくとも１つの薬学的担体を含む、適切な経路及び手段による投与のために製剤化された医薬組成物も提供される。
【００１３】
一実施形態では、医薬組成物は多発性骨髄腫の治療に有効な量を送達する。一実施形態では、医薬組成物は多発性骨髄腫の予防に有効な量を送達する。一実施形態では、医薬組成物は多発性骨髄腫の寛解に有効な量を送達する。
【００１４】
療法、例えば多発性骨髄腫またはその症状に対して活性を有する別の医薬品と組み合わせて、本明細書に提供される化合物もしくは組成物、またはそれらの鏡像異性体、鏡像異性体の混合物、互変異性体、アイソトポログ、もしくは薬学的に許容される塩を使用する併用療法も本明細書に提供される。本方法の範囲内の療法の例としては、手術、化学療法、放射線療法、生物学的療法、幹細胞移植、細胞療法、及びそれらの組み合わせが挙げられるが、これらに限定されない。
【００１５】
本明細書に提供される化合物もしくは組成物、またはその薬学的に許容される誘導体は、上記の療法のうちの１つ以上の投与と同時に、投与前に、または投与後に投与され得る。本明細書に提供される化合物を含有する医薬組成物及び上記の療法のうちの１つ以上も提供される。
【００１６】
一実施形態では、治療上有効な濃度の化合物を含有する有効量の化合物または組成物は、治療される多発性骨髄腫の症状を呈する個体に投与される。その量は、多発性骨髄腫の１つ以上の症状を寛解または除去するのに有効である。治療方法の実施において、治療上有効な濃度の化合物を含有する有効量の化合物または組成物は、それを必要とする多発性骨髄腫患者に投与される。
【００１７】
医薬組成物の成分の１つ以上が充填された容器を１つ以上備える医薬パックあるいはキットが更に提供される。そのような容器（複数可）には、任意選択で、医薬品または生物学的製品の製造、使用、または販売を管轄する政府機関により規定された書式の説明書を付随させることができ、この説明書は、ヒト投与に関する製造、使用、または販売の政府機関による承認が織り込まれている。パックまたはキットには、投与様式、薬物投与の順序（例えば、別々、順次、または同時）などに関する情報のラベルを付けることができる。
【００１８】
本明細書に記載の主題のこれら及び他の態様は、以下の発明を実施するための形態を参照することにより明らかになるであろう。
【発明を実施するための形態】
【００１９】
Ａ．定義
別途定義されない限り、本明細書で使用されるすべての技術用語及び科学用語は、当業者によって一般的に理解されるものと同じ意味を有する。全ての特許、出願、公開出願、及び他の出版物は、参照によりその全体が組み込まれる。本明細書の用語に対して複数の定義がある場合、特に記載のない限り、本節の定義を優先する。
【００２０】
「ＩＣ５０」は、インビトロまたは本明細書に記載の細胞ベースのアッセイのいずれかにより測定される、受容体結合、受容体活性、細胞成長または増殖などの最大応答の５０％阻害を達成する特定の試験化合物の量、濃度、または投薬量を指す。
【００２１】
薬学的に許容される塩には、限定されないが、アミン塩、例えば、限定されないが、Ｎ，Ｎ’−ジベンジルエチレンジアミン、クロロプロカイン、クロロプロカイン、コリン、アンモニア、ジエタノールアミン、及び他のヒドロキシアルキルアミン、エチレンジアミン、Ｎ−メチルグルカミン、プロカイン、Ｎ−ベンジルフェネチルアミン、１−パラ−クロロベンジル−２−ピロリジン−１’−イルメチル−ベンズイミダゾール、ジエチルアミン、及び他のアルキルアミン、ピペラジン及びトリス（ヒドロキシメチル）アミノメタン；アルカリ金属塩、例えば、限定されないが、リチウム、カリウム、及びナトリウム；アルカリ土塁金属塩、例えば、限定されないが、バリウム、カルシウム、及びマグネシウム；遷移金属塩、例えば、限定されないが、亜鉛；ならびに他の金属塩、例えば、限定されないが、リン酸水素ナトリウム及びリン酸二ナトリウムが含まれ、また限定されないが、鉱酸の塩、例えば、限定されないが、塩酸塩及び硫酸塩；ならびに有機酸の塩、例えば、限定されないが、酢酸塩、乳酸塩、リンゴ酸塩、酒石酸塩、クエン酸塩、アスコルビン酸塩、コハク酸塩、酪酸塩、吉草酸塩、フマル酸塩、及び有機スルホン酸塩も含まれる。
【００２２】
特に具体的に記載がない限り、化合物が代替互変異性体、位置異性体、及び／または立体異性体形をとり得る場合、全ての代替異性体は、特許請求される対象の範囲内に包含されるものとする。例えば、化合物が２つの互変異性体形のうち１つを有し得る場合、両方の互変異性体が本明細書において包含されるものとする。
【００２３】
したがって、本明細書に提供される化合物は、鏡像異性体として純粋であるか、または立体異性体もしくはジアステレオマー混合物であり得る。本明細書で使用される場合、及び特に記載がない限り、「立体異性体として純粋」という用語は、ある化合物の１つの立体異性体を含み、その化合物の他の立体異性体を実質的に含まない組成物を意味する。例えば、１つのキラル中心を有するある化合物の立体異性体として純粋な組成物は、その化合物の反対の鏡像異性体を実質的に含まない。２つのキラル中心を有するある化合物の立体異性体として純粋な組成物は、その化合物の他のジアステレオマーを実質的に含まない。典型的な、立体異性体として純粋な化合物は、その化合物の１つの立体異性体を約８０重量％超及びその化合物の他の立体異性体を約２０重量％未満、より好ましくはその化合物の１つの立体異性体を約９０重量％超及びその化合物の他の立体異性体を約１０重量％未満、さらにより好ましくはその化合物の１つの立体異性体を約９５重量％超及びその化合物の他の立体異性体を約５重量％未満、最も好ましくはその化合物の１つの立体異性体を約９７重量％超及びその化合物の他の立体異性体を約３重量％未満、含む。本明細書で使用される場合、立体異性体として純粋な化合物は、その化合物の１つの立体異性体を約８０重量％超、より好ましくはその化合物の１つの立体異性体を約９０重量％超、さらにより好ましくはその化合物の１つの立体異性体を約９５重量％超、最も好ましくはその化合物の１つの立体異性体を約９７重量％超、含む。本明細書で使用される場合、及び特に記載がない限り、「立体異性体として濃縮された」という用語は、ある化合物の１つの立体異性体を約６０重量％超、好ましくは約７０重量％超、より好ましくはある化合物の１つの立体異性体を約８０重量％超含む組成物を意味する。本明細書で使用される場合、及び特に記載がない限り、「鏡像異性体として純粋」という用語は、１つのキラル中心を有する化合物の鏡像異性体として純粋な組成物を意味する。同様に、「立体異性体として濃縮された」という用語は、１つのキラル中心を有する化合物の立体異性体として濃縮された組成物を意味する。本明細書で使用される場合、立体異性体またはジアステレオマー混合物は、ある化合物の２つ以上の立体異性体を含む組成物を意味する。化合物の典型的な立体異性体混合物は、その化合物の１つの立体異性体を約５０重量％及びその化合物の他の立体異性体を約５０重量％含む、またはその化合物の１つの立体異性体を約５０重量％超及びその化合物の他の立体異性体を約５０重量％未満含む、またはその化合物の１つの立体異性体を約４５重量％超及びその化合物の他の立体異性体を約５５重量％未満含む、またはその化合物の１つの立体異性体を約４０重量％超及びその化合物の他の立体異性体を約６０重量％未満含む、またはその化合物の１つの立体異性体を約３５重量％超及びその化合物の他の立体異性体を約６５重量％未満含む。
【００２４】
本明細書に提供される化合物はキラル中心を含有し得ることを理解されたい。そのようなキラル中心は、（Ｒ）もしくは（Ｓ）構成のいずれかのものであり得るか、またはそれらの混合物であり得る。本明細書に提供される化合物のキラル中心はインビボでエピメリ化を受けることを理解されたい。そのため、当業者は、インビボでエピメリ化を受ける化合物に関して、その（Ｒ）形態の化合物の投与がその（Ｓ）形態の化合物の投与と等しいことを認識するだろう。
【００２５】
光学的に活性な（＋）及び（−）、（Ｒ）−及び（Ｓ）−、または（Ｄ）−及び（Ｌ）−異性体は、キラルシントンもしくはキラル試薬を使用して調製されるか、またはキラル固定相のクロマトグラフィーなどの従来の技法を使用して分割され得る。
【００２６】
本明細書で使用される場合、「アイソトポログ」は、同位体的に濃縮された化合物である。「同位体として濃縮された」という用語は、その原子の天然同位体組成物以外の同位体組成物を有する原子を指す。「同位体として濃縮された」とは、その原子の天然同位体組成物以外の同位体組成物を有する少なくとも１つの原子を含有する化合物も指し得る。「同位体組成」という用語は、所与の原子について存在する各同位体の量を指す。放射標識された、及び同位体として濃縮された化合物は、治療薬、例えば、多発性骨髄腫治療薬、研究試薬、例えば、結合アッセイ試薬、及び診断薬、例えば、インビボ造影剤として有用である。本明細書に記載の化合物の同位体変化は全て、放射性であるか否かにかかわらず、本明細書に提供される実施形態の範囲に包含されることが意図される。いくつかの実施形態では、化合物のアイソトポログが提供され、例えば、化合物１、化合物２、または化合物３のアイソトポログは、重水素、炭素１３、または窒素１５が濃縮された化合物である。いくつかの実施形態では、本明細書に提供されるアイソトポログは重水素濃縮された化合物である。いくつかの実施形態では、本明細書に提供されるアイソトポログは重水素濃縮された化合物であり、重水素の濃縮はキラル中心で生じる。
【００２７】
本明細書の説明において、科学名と化学構造との間に矛盾がある場合、構造が優先する。
【００２８】
本明細書で使用される場合、「多発性骨髄腫」は、悪性形質細胞を特徴とする血液学的状態を指し、次の障害：意義不明の単クローン性ガンマグロブリン血症（ＭＧＵＳ）、低リスク、中程度のリスク、及び高リスクの多発性骨髄腫、新たに診断された多発性骨髄腫（低リスク、中程度のリスク、及び高リスクの新たに診断された多発性骨髄腫を含む）、移植適応及び移植非適応多発性骨髄腫、くすぶり型（無症候性）多発性骨髄腫（低リスク、中程度のリスク、及び高リスクのくすぶり型多発性骨髄腫を含む）、活動性多発性骨髄腫、孤立性形質細胞腫、髄外性形質細胞腫、形質細胞白血病、中枢神経系多発性骨髄腫、軽鎖骨髄腫、非分泌型骨髄腫、免疫グロブリンＤ骨髄腫、及び免疫グロブリンＥ骨髄腫、ならびにサイクリンＤ転座（例えば、ｔ（１１；１４）（ｑ１３；ｑ３２）、ｔ（６；１４）（ｐ２１；３２）、ｔ（１２；１４）（ｐ１３；ｑ３２）、またはｔ（６；２０）；）、ＭＭＳＥＴ転座（例えば、ｔ（４；１４）（ｐ１６；ｑ３２））、ＭＡＦ転座（例えば、ｔ（１４；１６）（ｑ３２；ｑ３２）、ｔ（２０；２２）、ｔ（１６；２２）（ｑ１１；ｑ１３）、またはｔ（１４；２０）（ｑ３２；ｑ１１））、または他の染色体因子（例えば、１７ｐ１３または染色体１３の欠失、ｄｅｌ（１７／１７ｐ）、非高二倍体、及び増加（１ｑ））などの遺伝子異常を特徴とする多発性骨髄腫を含む。
【００２９】
本明細書で使用される場合、及び特に記載がない限り、「ｔｒｅａｔ（治療する）」、「ｔｒｅａｔｉｎｇ（治療する）」、及び「ｔｒｅａｔｍｅｎｔ（治療）」という用語は、治療される疾患または状態、例えば多発性骨髄腫に関連する症状の感受性を緩和または低減することを指す。
【００３０】
「予防」という用語は、特定の疾患または障害、例えば多発性骨髄腫の症状の阻害を含む。いくつかの実施形態では、多発性骨髄腫の家族歴のある患者は予防レジメンの候補である。一般に、「予防」という用語は、症状の発生前に、特に多発性骨髄腫のリスクがある患者への薬物の投与を指す。
【００３１】
本明細書で使用される場合、及び特に記載がない限り、「管理する」という用語は、多発性骨髄腫などの特定の疾患もしくは障害の再発を、それに罹患していた患者において予防すること、疾患もしくは障害に罹患していた患者が寛解期にとどまる時間を延長すること、患者の死亡率を低減すること、及び／または管理される疾患もしくは障害に関連する症状の重症度の低減もしくは回避を維持することを包含する。
【００３２】
本明細書で使用される場合、「対象」または「患者」は、動物、典型的には、ヒト患者などのヒトを含む哺乳類である。
【００３３】
「再発した」という用語は、治療後に多発性骨髄腫が寛解した患者の、骨髄腫細胞が復帰する、及び／または骨髄中の正常細胞が低減する状況を示す。
【００３４】
「不応性または耐性」という用語は、患者の、集中治療後でさえも、骨髄腫細胞が骨髄に残存し、正常細胞が低減する状況を示す。
【００３５】
本明細書で使用される場合、「導入療法」は、がんなどの疾患を理由に与えられる最初の治療、または疾患の完全寛解を誘導する目的で与えられる最初の治療を示す。それ自体で使用される場合、導入療法は、利用可能な最善の治療として認められるものである。残存がんが検出された場合、患者は、再導入と呼ばれる別の療法で治療される。患者が導入療法後に完全寛解にある場合、患者の寛解を延長するまたは潜在的に治癒するために追加の地固め療法及び／または維持療法が与えられる。
【００３６】
本明細書で使用される場合、「地固め療法」は、寛解が最初に達成された後、疾患を理由に与えられる治療を示す。例えば、がんの地固め療法は、初期療法後にがんが消失した後、与えられる治療である。地固め療法として、放射線療法、幹細胞移植、またはがん薬物療法を用いた治療を挙げることができる。地固め療法は、強化療法及び寛解後療法とも称する。
【００３７】
本明細書で使用される場合、「維持療法」は、寛解または最良奏功が達成された後に、再発を防ぐまたは遅らせる目的で、疾患を理由に与えられる治療を示す。維持療法として、化学療法、ホルモン療法、または標的療法を挙げることができる。
【００３８】
本明細書で使用される場合、「寛解」とは、がん、例えば、多発性骨髄腫の兆候及び症状の減少または消失である。部分寛解では、がんの兆候及び症状の一部が消失するが、全てではない。完全寛解では、がんの全ての兆候及び症状が消失するが、がんは依然として体内に存在する可能性がある。
【００３９】
本明細書で使用される場合、「移植」は、幹細胞レスキューによる高用量療法を指す。造血（血液）または骨髄幹細胞は、治療としてではなく、高用量療法、例えば高用量の化学療法及び／または放射線後の患者を救うために使用される。移植は、「自家」幹細胞移植（ＡＳＣＴ）を含み、これは、採取され、置換細胞として使用される患者自身の幹細胞の使用を指す。いくつかの実施形態では、移植はタンデム移植または複数移植も含む。
【００４０】
本明細書で使用される場合、かつ別途指定されない限り、化合物の「治療有効量」及び「有効量」は、疾患、例えば多発性骨髄腫の治療、予防、及び／もしくは管理に治療的利益を提供するか、または治療される疾患もしくは障害に関連する１つ以上の症状を遅延させるもしくは最小限に抑えるのに十分な量を指す。「治療有効量」及び「有効量」という用語は、療法全体を改善する、疾患もしくは障害の症状または原因を低減または回避する、あるいは別の治療薬の治療有効性を増強する量も包含し得る。
【００４１】
「共投与」及び「組み合わせて」という用語は、１つ以上の治療薬（例えば、本明細書に提供される化合物及び別の抗多発性骨髄腫剤、抗がん剤、または支持療法剤（ｓｕｐｐｏｒｔｉｖｅ  ｃａｒｅ  ａｇｅｎｔ））を、同時に、一斉に、または特定の時間制限なく順次のいずれかで投与することを含む。一実施形態では、薬剤は、細胞内または患者の体内に同時に存在するか、または生物学的もしくは治療作用を同時に発揮する。一実施形態では、治療薬は、同じ組成物または単位剤形中にある。別の実施形態では、治療薬は、別の組成物または単位剤形中にある。
【００４２】
「支持療法剤」という用語は、化合物１、化合物２、もしくは化合物３、あるいはそれらの鏡像異性体もしくは鏡像異性体の混合物、互変異性体、アイソトポログ、または薬学的に許容される塩による治療からの有害作用を治療、予防、または管理する任意の物質を指す。
【００４３】
「生物学的療法」という用語は、臍帯血、幹細胞、成長因子などの生物学的治療薬の投与を指す。
【００４４】
多発性骨髄腫などのがんの文脈において、阻害は、とりわけ、疾患進行の阻害、腫瘍成長の阻害、原発性腫瘍の低減、腫瘍関連症状の軽減、腫瘍分泌因子の阻害、原発性または続発性腫瘍の出現の遅延、原発性または続発性腫瘍の発達の鈍化、原発性または続発性腫瘍の発生の減少、疾患の二次的作用の遅延またはその重症度の低下、腫瘍成長の停止及び腫瘍退縮、進行までの時間（ＴＴＰ）の延長、無増悪生存期間（ＰＦＳ）の増加、全生存期間（ＯＳ）の増加により評価することができる。ＯＳは、本明細書で使用される場合、治療開始から、理由を問わず死亡に至るまでの時間を意味する。ＴＴＰは、本明細書で使用される場合、治療開始から、腫瘍進行までの時間を意味する；ＴＴＰは死亡を含まない。一実施形態では、ＰＦＳは、治療開始から、腫瘍進行または死亡までの時間を意味する。一実施形態では、ＰＦＳは、化合物の最初の投与から、疾患進行の最初の発生、または理由を問わず死亡までの時間を意味する。一実施形態では、ＰＦＳ率は、カプランマイヤー推量を用いてコンピュータで計算される。無事象生存期間（ＥＦＳ）は、治療開始から、疾患進行、理由を問わず治療中止、または死亡を含むあらゆる治療失敗までの時間を意味する。一実施形態では、全奏効率（ＯＲＲ）は、奏効を達成した患者のパーセンテージを意味する。一実施形態では、ＯＲＲは、完全奏効及び部分奏効を達成した患者のパーセンテージの合計を意味する。一実施形態では、ＯＲＲは、ＩＭＷＧ治療効果判定統一基準による、最良奏功≧部分奏功（ＰＲ）の患者のパーセンテージを意味する。一実施形態では、奏効期間（ＤｏＲ）は、奏功の達成から再発または疾患進行までの時間である。一実施形態では、ＤｏＲは、奏功の達成≧部分奏功（ＰＲ）から再発または疾患進行までの時間である。一実施形態では、ＤｏＲは、最初の奏功の記述から、最初の進行性疾患または死亡の記述までの時間である。一実施形態では、ＤｏＲは、最初の奏功≧部分奏功（ＰＲ）の記述から、最初の進行性疾患または死亡の記述までの時間である。一実施形態では、奏功までの時間（ＴＴＲ）は、化合物の最初の投与から、最初の奏功の記述までの時間を意味する。一実施形態では、ＴＴＲは、化合物の最初の投与から、最初の奏功≧部分奏功（ＰＲ）の記述までの時間を意味する。極端な場合、完全阻害は、本明細書において、予防または化学予防とみなされる。この文脈において、「予防」という用語は、臨床的に明らかながんの発症を完全に防ぐこと、または明らかな発症前段階のがんの発生を防ぐこといずれかを含む。この定義に同じく包含されることを意図するものには、悪性細胞への形質転換の予防、または前悪性細胞から悪性細胞への進行の停止または反転がある。これには、がん発症のリスクがあるものの予防的治療が含まれる。
【００４５】
ある特定の実施形態では、多発性骨髄腫の治療は、下に示される奏功及びエンドポイントの定義を使用して、多発性骨髄腫の治療効果判定国際統一基準（ＩＵＲＣ）により評価することができる（Ｄｕｒｉｅ  ＢＧＭ，Ｈａｒｏｕｓｓｅａｕ  Ｊ−Ｌ，Ｍｉｇｕｅｌ  ＪＳ，ｅｔ  ａｌ．Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  ｕｎｉｆｏｒｍ  ｒｅｓｐｏｎｓｅ  ｃｒｉｔｅｒｉａ  ｆｏｒ  ｍｕｌｔｉｐｌｅ  ｍｙｅｌｏｍａ．Ｌｅｕｋｅｍｉａ，２００６；（１０）１０：１−７を参照されたい）。
【表１】
2020526534.tif 000006
略号：ＣＲ、完全奏功；ＦＬＣ、遊離軽鎖；ＰＲ、部分奏功；ＳＤ、安定した疾患；ｓＣＲ、厳密完全奏効；ＶＧＰＲ、非常に良い部分奏効。
ａ全ての奏効カテゴリは、任意の新規療法を実施する前に任意の時点で行われた２つの連続評価を必要とする；全てのカテゴリは、Ｘ線検査が行われた場合に進行性または新たな骨病変についてわかるエビデンスがないことも必要とする。Ｘ線検査はこれらの奏功要件を満たす必要はない。
ｂ繰り返して骨髄生検で確認する必要はない。
ｃクローン細胞の有／無はκ／λ比に基づく。κ／λ比の異常を免疫組織化学検査及び／または免疫蛍光法により分析するためには、最低でも１００個の形質細胞を必要とする。異常クローンの存在を反映した異常な比は、κ／λが＞４：１または＜１：２である。
ｄ測定可能な疾患とは、以下の測定値の少なくとも１つにより定義される：骨髄形質細胞≧３０％；血清Ｍタンパク質≧１ｇ／ｄｌ（≧１０ｇｍ／ｌ）［１０ｇ／ｌ］；尿Ｍタンパク質≧２００ｍｇ／２４ｈ；血清ＦＬＣアッセイ：関与ＦＬＣレベル≧１０ｍｇ／ｄｌ（≧１００ｍｇ／ｌ）；ただし、血清ＦＬＣ比が異常な場合。
【００４６】
本明細書で使用される場合、ＥＣＯＧ状態は、以下に示すとおり、米国東海岸がん臨床試験グループ（ＥＣＯＧ）パフォーマンスステータスを示す（Ｏｋｅｎ  Ｍ，ｅｔ  ａｌ  Ｔｏｘｉｃｉｔｙ  ａｎｄ  ｒｅｓｐｏｎｓｅ  ｃｒｉｔｅｒｉａ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｅａｓｔｅｒｎ  Ｃｏｏｐｅｒａｔｉｖｅ  Ｏｎｃｏｌｏｇｙ  Ｇｒｏｕｐ．Ａｍ  Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ｏｎｃｏｌ  １９８２；５（６）：６４９−６５５）：
【表２】
2020526534.tif 000007
【００４７】
本明細書で使用される場合、「約」という用語は、特に記載がない限り、本用語により修飾される値の＋／−１０％の値を指す。例えば、「約１０ｍｇ／ｍ２」という用語は、９ｍｇ／ｍ２〜１１ｍｇ／ｍ２の範囲を意味する。
【図面の簡単な説明】
【００４８】
Ｂ．図面の簡単な説明
【図１】（Ａ）レナリドミド耐性Ｈ９２９−１０５１細胞において、経時的にカスパーゼ３誘導倍率（別名、アポトーシス指標）の曲線下面積により測定される、アポトーシス誘導の変化。横座標：対数ｎＭ（化合物）、縦座標：アポトーシス指標。最良適合線は、ＧｒａｐｈＰａｄ  Ｐｒｉｓｍにおいて計算された３パラメータロジスティク方程式である。（Ｂ）Ｈ９２９−１０５１細胞における化合物１及び化合物Ａの濃度応答曲線の曲線下面積は、６時間曝露し、希釈して化合物濃度を約２０倍低減した後の、化合物のアポトーシスを誘導する能力を比較するために使用された。
【００４９】
【図２】レナリドミド耐性ＭＭ細胞Ｈ９２９−１０５１における、ポマリドミド−デキサメタゾンの併用処置と単剤化合物２（Ａ）、及び化合物２−デキサメタゾンでの併用処置（Ｂ）での抗増殖活性の比較。増殖は、１２０時間の処置後にＡＴＰ決定アッセイ（ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ−Ｇｌｏ）を使用して評価した。背景を除去し、ＤＭＳＯ対照（１００％の対照）に正規化することにより対照パーセントを計算した。各データ点は、２つ組で少なくとも３回の独立した実験の平均を表す。
【００５０】
【図３】（Ａ）未刺激のＰＢＭＣ、及び（Ｂ）７２時間化合物２で処置されたＴＨＬＥ−２に対する抗増殖作用は、ＡＴＰ決定アッセイ（ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ−Ｇｌｏ）を使用して評価した。背景を除去し、ＤＭＳＯ対照（１００％の対照）に正規化することにより対照パーセントを計算した。
【００５１】
【図４】レナリドミド耐性Ｈ９２９−１０５１異種移植モデルにおける連続投与での化合物２の抗腫瘍活性。雌のＳＣＩＤマウスの右腹側部に１０×１０６Ｈ９２９−１０５１腫瘍細胞を接種した。処置開始時にマウスを処置群（ｎ＝１０／群）に無作為化した。腫瘍がおよそ１２０ｍｍ３になった１４日目に試験品での処置を開始した。
【００５２】
【図５】染色体転座により分類した多発性骨髄腫細胞株における化合物２の抗増殖活性。グラフは、ＭＭで見られる一般的な転座を含有する１５ＭＭ細胞株についてフローサイトメトリーにより生存細胞数を測定した濃度応答成長曲線の曲線下面積（ＡＵＣ）を表す。報告されたＡＵＣ値は用量応答曲線下面積に対応し、値０は全用量での増殖／生存率の完全な低減に対応し、値１００００は増殖／生存率の低減なしに対応する。細胞株は最初に、見られる染色体転座により分類され、次に転座が高リスクであることが知られているか否かにより分類される。
【００５３】
【図６】レナリドミド及びポマリドミド耐性多発性骨髄腫細胞株における化合物２及びポマリドミドの抗増殖活性。ＩＣ５０＝対照と比較して細胞成長を５０％阻害する化合物２及びポマリドミドの濃度。化合物２及びポマリドミド抗増殖ＩＣ５０値（棒）の比較を示すグラフは、表１１に提示される親（ＤＦ１５、ＮＣＩ−Ｈ９２９、及びＯＰＭ２）、レナリドミド耐性（ＮＣＩ−Ｈ９２９−１０５１）、またはポマリドミド耐性（ＮＣＩ−Ｈ９２９−Ｐ０１、ＯＰＭ２−Ｐ０１、ＯＰＭ２−Ｐ１、ＯＰＭ２−Ｐ１０、及びＤＦ１５Ｒ）ＭＭ細胞株において、ＣｅｌｌＴｉｔｒｅ−Ｇｌｏを使用して決定された。
【００５４】
【図７】骨髄亜集団のゲーティング戦略。
【００５５】
【図８】インビトロ好中球前駆体分化の最終期、最大３日間にわたって毎日短期間化合物２に曝露する作用。健康なドナーの骨髄由来のＣＤ３４＋細胞を、１、２、または３日間連続して各々の日に、１、１０、及び１００ｎＭの濃度で化合物２に曝露した。生存細胞のみが分析に含まれた。データはドナー１及び２の結果の平均であり、それぞれ、曝露６時間後のＣＤ３４−／ＣＤ３３＋／ＣＤ１１ｂ＋及びＣＤ３４−／ＣＤ３３−／ＣＤ１１ｂ＋として定義されるＩＩＩ期及びＩＶ期の細胞のパーセンテージの例を表す。
【００５６】
【図９】３日間連続して化合物２に６時間曝露した後の好中球前駆体の最終期成熟。健康なドナーの骨髄由来のＣＤ３４＋細胞を、１０日目から３日間連続して各々の日に、１、１０、または１００ｎＭの濃度で６時間化合物２に曝露した。データは、ドナー番号１及び番号２からの、ＣＤ３４−／ＣＤ３３＋／ＣＤ１１ｂ＋として定義されるＩＩＩ期細胞及びＣＤ３４−／ＣＤ３３−／ＣＤ１１ｂ＋として定義されるＩＶ期細胞の平均パーセンテージを表す。エラーバーは標準偏差を表す。
【００５７】
【図１０】５日間連続して化合物２に６時間曝露した後の好中球前駆体の最終期成熟。健康なドナーの骨髄由来のＣＤ３４＋細胞を、１０日目から５日連続して各々の日に、１、１０、または１００ｎＭの濃度で６時間化合物２に曝露した。データは、ドナー番号１及び番号２からの、ＣＤ３４−／ＣＤ３３＋／ＣＤ１１ｂ＋として定義されるＩＩＩ期細胞及びＣＤ３４−／ＣＤ３３−／ＣＤ１１ｂ＋として定義されるＩＶ期細胞の平均パーセンテージを表す。エラーバーは標準偏差を表す。
【００５８】
【図１１】単剤デキサメタゾンの処理スケジュール表。
【００５９】
【図１２】デキサメタゾンもしくは化合物２単独、または異なる濃度で組み合わせて１回曝露した後の骨髄分化中の成熟好中球のパーセンテージ。健康なドナーの骨髄由来のＣＤ３４＋細胞を、１３日目に、化合物２（６時間）及びデキサメタゾン（３０時間）単独（上の列）、または１、１０、もしくは１００ｎＭの濃度で組み合わせて（下の列）曝露した。下のパネルの各々において、化合物２の濃度は異なり、デキサメタゾンの濃度は１ｎＭ（左）、１０ｎＭ（中央）、または１００ｎＭ（右）で一定に保たれた。組み合わせについて、培養物を両薬剤に同時に６時間曝露した。次いで、細胞を洗浄し、その後２４時間デキサメタゾンとともに再度インキュベートした。次いで、細胞を洗浄し、残りの研究の間、化合物２またはデキサメタゾンなしで再度インキュベートした。データは、ドナー３、４、及び５からのＣＤ３４−／ＣＤ３３＋／ＣＤ１１ｂ＋として定義されるＩＶ期細胞のパーセンテージを表す。赤線は、ＤＭＳＯ対照のＩＶ期細胞のレベルの５０％を表す。
【００６０】
【図１３】レナリドミド耐性多発性骨髄腫細胞株における、アポトーシスに対するデキサメタゾン単独、または化合２、レナリドミド、及びポマリドミドとの組み合わせでの処置の作用。ｙ軸はＤＭＳＯからのカスパーゼ−３の倍率変化を示し、ｘ軸はデキサメタゾンの対数濃度である。
【００６１】
【図１４】化合物２は、ヒト末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）を直接活性化して、濃度依存様式でＫ５６２赤骨髄球性（ｅｒｙｔｈｒｏｍｙｅｌｏｃｙｔｉｃ）白血病細胞を溶解する。（左）化合物２、レナリドミド、ポマリドミド、またはＤＭＳＯでプレインキュベートしたヒトＰＢＭＣと共培養したＫ５６２細胞の代表的な蛍光活性化細胞選別プロット。（右）共培養での生存可能なＫ５６２細胞において濃度依存的減少を示すＰＩ−アネキシンＶ−Ｋ５６２細胞のパーセンテージの生データ。データは平均として提示され、エラーバーは平均の標準誤差を表す。
【００６２】
【図１５】免疫細胞を化合物２で直接活性化して、レナリドミド感受性及びレナリドミド耐性多発性骨髄腫細胞株を溶解する。末梢血単核ドナー細胞（ＰＢＭＣ）（エフェクター細胞）を、示される試験品または化合物２で２時間前処理した後、抗ＣＤ３抗体でコーティングしたプレート上で７２時間培養した。未処置のＣＦＳＥ標識多発性骨髄腫細胞株と共培養する前に、ＰＢＭＣを洗浄し、化合物が存在しない培地に設置し、次いで、２４時間、多発性骨髄腫細胞株（標的細胞）と共培養した。免疫細胞媒介多発性骨髄腫細胞死滅の増加は、（Ａ）ＮＣＩ−Ｈ９２９細胞または（Ｂ）Ｈ９２９−１０５１細胞のいずれかと共培養した（標的エフェクター比１：５）化合物２で処理したＰＢＭＣにおいて明らかであった。
【００６３】
【図１６】化合物で刺激した免疫細胞は、多発性骨髄腫細胞が共培養前にレナリドミド、ポマリドミド、または化合物２で前処理される場合に増強された腫瘍細胞死滅を示す。末梢血単核細胞を、レナリドミド、ポマリドミド、または化合物２で２時間プレインキュベートした後、抗ＣＤ３抗体でコーティングしたプレート上で７２時間培養した。同時に、４つの多発性骨髄腫（ＭＭ）細胞株を、試験品を含有する培地中で培養した。７２時間後、細胞を２４時間一緒に共培養した（標的エフェクター［Ｔ：Ｅ］比１：５）。試験した全ての細胞型（Ａ）ＮＣＩ−Ｈ９２９、（Ｂ）Ｈ９２９−１０５１、（Ｃ）ＯＰＭ２、及び（Ｄ）ＯＰＭ２  Ｐ１０細胞株において、免疫細胞媒介ＭＭ死滅の増加は、ＭＭ単独培養（各列の左側のグラフ）と比較して、共培養において明らかであった（各列の右側のグラフ）。化合物はＰＢＭＣ生存率に対してほとんど作用がなかった（各列の中央のグラフに示される）。
【００６４】
【図１７】化合物２はＭＭ細胞株においてＣＤ３８の発現を上方調節する。ＣＤ３８の細胞表面発現は、化合物２またはポマリドミドで７２時間前処理したＭＭ細胞において評価した。用量応答作用は、ＯＰＭ−２及びＯＰＭ−２．Ｐ１０細胞株について示される。
【００６５】
【図１８】化合物２はＭＭ細胞のダラツムマブ媒介ＡＤＣＣを増加させる。７つのＭＭ細胞株を、化合物２またはポマリドミドの致死量以下の濃度で７２時間処理した後、ＡＤＣＣアッセイのためにエフェクター対標的［Ｅ：Ｔ］比１０：１でＮＫ細胞と共培養した。グラフは７つのＭＭ細胞株について得られた代表的なデータを図示する。２つの異なるドナーからのＮＫ細胞でアッセイを２回行った。ＤＭＳＯ対照は未処理の腫瘍細胞でのベースラインＮＫ細胞活性であり、アイソタイプ及びＤａｒａは、それぞれ、未処理の腫瘍細胞での、アイソタイプ対照及びダラツムマブの存在下のＮＫ細胞活性であり、アイソタイプ＋化合物及びＤａｒａ＋化合物は、それぞれ、処理された腫瘍細胞での、アイソタイプ対照及びダラツムマブの存在下のＮＫ細胞活性である。
【００６６】
【図１９】化合物２は、ＭＭ細胞のダラツムマブ媒介ＡＤＣＰを増強する。食作用アッセイはエフェクター対標的比［Ｅ：Ｔ］２：１で行った。６つのＭＭ細胞株＋／−化合物２またはポマリドミドでの前処理はダラツムマブ媒介ＡＤＣＰを受けた。Ａ）ＯＰＭ２細胞株でのＡＤＣＰの代表的な画像。マクロファージは赤であり、ＯＰＭ２細胞は緑である。Ｂ）フローサイトメトリーによる食作用の定量化。ＤＭＳＯ対照は未処理の腫瘍細胞でのベースラインＮＫ細胞活性であり、アイソタイプ及びＤａｒａは、それぞれ、未処理の腫瘍細胞での、アイソタイプ対照及びダラツムマブの存在下のＮＫ細胞活性であり、アイソタイプ＋化合物及びＤａｒａ＋化合物は、それぞれ、処理された腫瘍細胞での、アイソタイプ対照及びダラツムマブの存在下のＮＫ細胞活性である。
【００６７】
【図２０】化合物２とプロテアソーム阻害剤との組み合わせは、ＭＭ細胞モデルにおいて、アポトーシスの増加をもたらす。ＭＭ細胞株を、ボルテゾミブまたはＤＭＳＯのパルスで１時間処理し、続いて洗浄した。前処理した細胞を、異なる濃度の化合物２とともに７２時間インキュベートし、続いて試料を７−ＡＡＤ及びアネキシン−Ｖ溶液で染色し、フローサイトメトリーにより分析した。Ａ）化合物２単独のまたはボルテゾミブで前処理した生存細胞のパーセント。Ｂ）様々な処理条件でのＯＰＭ２−Ｐ１０細胞の散布図。
【００６８】
【図２１】ＭＭ細胞における化合物２とボルテゾミブまたはカルフィルゾミブとの組み合わせ。４つのＭＭ細胞株を、ボルテゾミブまたはＤＭＳＯのパルスで１時間処理し、続いて洗浄した。前処理した細胞を、異なる濃度の化合物２とともに７２時間インキュベートし、続いて試料を７−ＡＡＤ及びアネキシン−Ｖ溶液で染色し、フローサイトメトリーにより分析した。Ａ）化合物２単独のまたはボルテゾミブで前処理した抗増殖作用。Ｂ）化合物２単独のまたはカルフィルゾミブで前処理した抗増殖作用。ＤＲＣ＝用量応答曲線
【００６９】
【図２２】ヒストンデアセチラーゼ阻害剤、化学療法剤、Ｂｃｌ−２阻害剤、Ｍｃｌ−１阻害剤、ＢＥＴ阻害剤、またはＬＳＤ−１阻害剤と組み合わせた化合物２によるＭＭ細胞の処理が示される。ＭＭ細胞株のパネルにわたって１３の小分子阻害剤と組み合わせた化合物２による処理について相乗作用の計算を行った。青色のボックスは、化合物２と組み合わせたときの相乗作用であるウェルのパーセンテージを図示する。＊はヌルモデルとは異なる表面応答の重要性を表す。
【００７０】
【図２３】レナリドミド耐性Ｈ９２９−１０５１異種移植モデルおける、単剤としてまたは組み合わせでの化合物２（０．１ｍｇ／ｋｇ、ｑｄ）及びデキサメタゾン（０．５ｍｇ／ｋｇ、ｑｄ）での処理の作用。
【００７１】
【図２４】レナリドミド耐性ＮＣＩ−Ｈ９２９（Ｈ９２９−１０５１）多発性骨髄腫／形質細胞腫異種移植モデルにおける、化合物２単独及びボルテゾミブとの組み合わせでの抗腫瘍活性。投与日はＸ軸の矢印で示される。
【００７２】
Ｃ．化合物
化合物４−（４−（４−（（（２−（２，６−ジオキソピペリジン−３−イル）−１−オキソイソインドリン−４−イル）オキシ）メチル）ベンジル）ピペラジン−１−イル）−３−フルオロベンゾニトリル（「化合物１」と称される）、
【化４】
2020526534.tif 000008
１
あるいはその鏡像異性体もしくは鏡像異性体の混合物、互変異性体、アイソトポログ、または薬学的に許容される塩を本明細書に提供する。
【００７３】
ある特定の実施形態では、本明細書に提供される組成物及び方法に使用するための化合物は、化合物１、あるいはその鏡像異性体もしくは鏡像異性体の混合物、互変異性体、アイソトポログ、または薬学的に許容される塩である。
【００７４】
化合物（Ｓ）−４−（４−（４−（（（２−（２，６−ジオキソピペリジン−３−イル）−１−オキソイソインドリン−４−イル）オキシ）メチル）ベンジル）ピペラジン−１−イル）−３−フルオロベンゾニトリル（「化合物２」と称される）
【化５】
2020526534.tif 000009
２
またはその互変異性体、アイソトポログ、もしくは薬学的に許容される塩も本明細書に提供される。
【００７５】
ある特定の実施形態では、本明細書に提供される組成物及び方法に使用するための化合物は、化合物２、またはその互変異性体、アイソトポログ、もしくは薬学的に許容される塩である。
【００７６】
化合物（Ｒ）−４−（４−（４−（（（２−（２，６−ジオキソピペリジン−３−イル）−１−オキソイソインドリン−４−イル）オキシ）メチル）ベンジル）ピペラジン−１−イル）−３−フルオロベンゾニトリル（「化合物３」とも称される）
【化６】
2020526534.tif 000010
３
またはその互変異性体、アイソトポログ、もしくは薬学的に許容される塩も本明細書に提供される。
【００７７】
ある特定の実施形態では、本明細書に提供される組成物及び方法に使用するための化合物は、化合物３、またはその互変異性体、アイソトポログ、もしくは薬学的に許容される塩である。
【００７８】
化合物１が本明細書に提供される。化合物１の互変異性体が本明細書に提供される。化合物１の鏡像異性体が本明細書に提供される。化合物１の鏡像異性体の混合物が本明細書に提供される。化合物１の薬学的に許容される塩が本明細書に提供される。
【００７９】
化合物２が本明細書に提供される。化合物２の互変異性体が本明細書に提供される。化合物２の薬学的に許容される塩が本明細書に提供される。
【００８０】
化合物３が本明細書に提供される。化合物３の互変異性体が本明細書に提供される。化合物３の薬学的に許容される塩が本明細書に提供される。
【００８１】
本明細書に提供される化合物の同位体として濃縮された類似体も本明細書に提供される。薬物動態（「ＰＫ」）、薬力学（「ＰＤ」）、及び毒性プロファイルを改善するための医薬品の同位体濃縮（例えば、重水素化または重水素濃縮）は、いくつかのクラスの薬物によって以前に示されている。例えば、Ｌｉｊｉｎｓｋｙ  ｅｔ．ａｌ．，Ｆｏｏｄ  Ｃｏｓｍｅｔ．Ｔｏｘｉｃｏｌ．，２０：３９３（１９８２）、Ｌｉｊｉｎｓｋｙ  ｅｔ．ａｌ．，Ｊ．Ｎａｔ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｉｎｓｔ．，６９：１１２７（１９８２）、Ｍａｎｇｏｌｄ  ｅｔ．ａｌ．，Ｍｕｔａｔｉｏｎ  Ｒｅｓ．３０８：３３（１９９４）、Ｇｏｒｄｏｎ  ｅｔ．ａｌ．，Ｄｒｕｇ  Ｍｅｔａｂ．Ｄｉｓｐｏｓ．，１５：５８９（１９８７）、Ｚｅｌｌｏ  ｅｔ．ａｌ．，Ｍｅｔａｂｏｌｉｓｍ，４３：４８７（１９９４）、Ｇａｔｅｌｙ  ｅｔ．ａｌ．，Ｊ．Ｎｕｃｌ．Ｍｅｄ．，２７：３８８（１９８６）、Ｗａｄｅ  Ｄ，Ｃｈｅｍ．Ｂｉｏｌ．Ｉｎｔｅｒａｃｔ．１１７：１９１（１９９９）を参照されたい。いずれの特定の理論によって限定されることなく、化合物の同位体濃縮は、例えば、（１）望ましくない代謝産物を低減または取り除くために、（２）親薬物の半減期を増加させるために、（３）所望の作用を達成するために必要とされる投与回数を減少させるために、（４）所望の作用を達成するために必要な投与量を減少させるために、（５）いずれかが形成される場合、活性代謝産物の形成を増加させるために、及び／または（６）特定の組織における有害な代謝産物の産生を減少させるために、及び／または併用療法が意図的であるかにかかわらず、併用療法用のより有効な薬物及び／またはより安全な薬物を創出するために使用され得る。原子のその同位体のうちの１つへの置換により、しばしば、化学反応の反応速度に変化がもたらされる。この現象は、速度論的同位体作用（「ＫＩＥ」）として知られている。例えば、Ｃ−Ｈ結合が化学反応の律速ステップ（すなわち、最高の遷移状態エネルギーを持つステップ）中に破壊される場合、重水素のその水素への置換は、反応速度の減少を引き起こし、このプロセスは遅くなるであろう。この現象は、重水素速度論的同位体作用（「ＤＫＩＥ」）として知られている。（例えば、Ｆｏｓｔｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ａｄｖ．Ｄｒｕｇ  Ｒｅｓ．，ｖｏｌ．１４，ｐｐ．１−３６（１９８５）、Ｋｕｓｈｎｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃａｎ．Ｊ．Ｐｈｙｓｉｏｌ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．，ｖｏｌ．７７，ｐｐ．７９−８８（１９９９）を参照されたい）。ＤＫＩＥの規模は、Ｃ−Ｈ結合が破壊される所定の反応の速度と、重水素が水素に置換される同じ反応の速度との比率として表すことができる。ＤＫＩＥは、約１（同位体作用なし）〜非常に大きい数、例えば、５０以上の範囲に及び得、この反応は、重水素が水素に置換される場合、５０倍以上遅い場合があることを意味する。特定の理論によって制限されるものではないが、高いＤＫＩＥ値は、不確定な原理の結果であるトンネリングとして知られている現象に一部よる可能性がある。トンネリングは、少量の水素原子に起因しており、またトンネリングが生じるのはプロトンを包含する遷移状態が、必要とされる活性化エネルギーの不在下で時���形成することができるためである。重水素が水素よりも大きな質量を有しているため、この現象を受けている確率は統計的に非常に低い。
【００８２】
三重水素（「Ｔ」）は、研究、核融合炉、中性子発生装置、及び放射性医薬品に使用される水素の放射性同位体である。三重水素は、核内に２個の中性子を有し、かつ３に近い原子量を有する水素原子である。それは、非常に低い濃度で環境において天然に生じ、最も一般には、Ｔ２Ｏとして見出される。三重水素は緩徐に壊変し（半減期＝１２．３年）、ヒトの皮膚の外層を貫通することができない低エネルギーベータ粒子を放出する。内部被曝は、この同位体に関連する主要なハザードであるが、顕著な健康リスクがもたらされるには多量に摂取しなければならない。重水素と比較して、三重水素が有害なレベルに到達する前に消費されなければならない量は少ない。水素に対する三重水素（「Ｔ」）の置換により、重水素よりもさらに強い結合が生じ、数の上ではより大きな同位体作用を付与する。
【００８３】
同様に、炭素に対する１３Ｃまたは１４Ｃ、硫黄に対する３３Ｓ、３４Ｓ、または３６Ｓ、窒素に対する１５Ｎ、及び酸素に対する１７Ｏまたは１８Ｏを含むが、これらに限定されない他の元素に対する同位体の置換により、同様の速度論的同位体作用がもたらされるであろう。
【００８４】
動物の身体は、治療薬などの異物をその循環系から排除する目的のための様々な酵素を発現する。そのような酵素の例としては、それらの異物と反応し、腎排泄のためにそれらをより極性の中間体または代謝産物に変換するための、チトクロームＰ４５０酵素（「ＣＹＰ」）、エステラーゼ、プロテアーゼ、リダクターゼ、デヒドロゲナーゼ、及びモノアミンオキシダーゼが挙げられる。医薬化合物の最も一般的な代謝反応のいくつかは、炭素−水素（Ｃ−Ｈ）結合の、炭素−酸素（Ｃ−Ｏ）または炭素−炭素（Ｃ−Ｃ）π結合のいずれかへの酸化を伴う。得られる代謝産物は、生理学的条件下で安定または不安定であり得、親化合物と比べて実質的に異なる薬物動態、薬力学、及び急性かつ長期毒性プロファイルを有し得る。多くの薬物に関して、そのような酸化は迅速である。結果として、これらの薬物は、しばしば、複数のまたは高い日用量の投与を必要とする。
【００８５】
本明細書に提供される化合物のある特定の位置での同位体濃縮は、天然の同位体組成を有する同様の化合物と比較して、本明細書に提供される化合物の薬物動態、薬力学、及び／または毒性学的プロファイルに影響を及ぼす検出可能なＫＩＥをもたらし得る。一実施形態では、重水素濃縮は、代謝中にＣ−Ｈ結合切断の部位で行われる。
【００８６】
一実施形態では、化合物１のアイソトポログ、あるいはその鏡像異性体もしくは鏡像異性体の混合物、互変異性体、または薬学的に許容される塩が、本明細書に提供される。いくつかの実施形態では、化合物１のアイソトポログは、重水素濃縮された化合物１、あるいはその鏡像異性体もしくは鏡像異性体の混合物、互変異性体、または薬学的に許容される塩である。いくつかの実施形態では、化合物１のアイソトポログは、重水素濃縮された化合物１、あるいはその鏡像異性体もしくは鏡像異性体の混合物、互変異性体、または薬学的に許容される塩であり、重水素濃縮はキラル中心で生じる。別の実施形態では、化合物２のアイソトポログ、またはその互変異性体、もしくは薬学的に許容される塩が、本明細書に提供される。いくつかの実施形態では、化合物２のアイソトポログは、重水素濃縮された化合物２、またはその互変異性体、もしくは薬学的に許容される塩である。いくつかの実施形態では、化合物２のアイソトポログは、重水素濃縮された化合物２、またはその互変異性体、もしくは薬学的に許容される塩であり、重水素濃縮はキラル中心で生じる。
【００８７】
ある特定の実施形態では、４−（４−（４−（（（２−（２，６−ジオキソピペリジン−３−イル）−１−オキソイソインドリン−４−イル）オキシ）メチル）ベンジル）ピペラジン−１−イル）−３−フルオロベンゾニトリルのアイソトポログ、あるいは鏡像異性体もしくは鏡像異性体の混合物、互変異性体、または薬学的に許容される塩が、本明細書に提供され、４−（４−（４−（（（２−（２，６−ジオキソピペリジン−３−イル）−１−オキソイソインドリン−４−イル）オキシ）メチル）ベンジル）ピペラジン−１−イル）−３−フルオロベンゾニトリル分子のうちの１つ以上の原子位置（複数可）は、例えば重水素で同位体として濃縮される。本明細書のある特定の実施形態は、以下の式の化合物を提供し：
【化７】
2020526534.tif 000011
式中、１つ以上のＹ原子（すなわち、Ｙ１、Ｙ２、Ｙ３、Ｙ４、Ｙ５、Ｙ６、Ｙ７、Ｙ８、Ｙ９、Ｙ１０、Ｙ１１、Ｙ１２、Ｙ１３、Ｙ１４、Ｙ１５、Ｙ１６、Ｙ１７、Ｙ１８、Ｙ１９、Ｙ２０、Ｙ２１、Ｙ２２、Ｙ２３、Ｙ２４、Ｙ２５、Ｙ２６、Ｙ２７、Ｙ２８、Ｙ２９、及びＹ３０）は、重水素で同位体として濃縮された水素（複数可）であり、任意の残りのＹ原子（複数可）は、非濃縮水素原子（複数可）である。
【００８８】
一実施形態では、化合物は以下の式の化合物である：
【化８】
2020526534.tif 000012
。
【００８９】
一実施形態では、化合物は以下の式の化合物である：
【化９】
2020526534.tif 000013
。
【００９０】
ある特定の実施形態では、示されるＹ原子のうちの１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、６つ、７つ、８つ、９つ、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６，１７，１８，１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、または全てが重水素で同位体として濃縮され、任意の残りのＹ原子（複数可）は、非濃縮水素（複数可）である。一実施形態では、示されるＹ原子のうちの１つは、重水素で同位体として濃縮され、任意の残りのＹ原子（複数可）は、非濃縮水素である。一実施形態では、Ｙ５が重水素で同位体として濃縮される。
【００９１】
ある特定の実施形態では、化合物のグルタルイミド部分上の１つ以上のＹ原子（Ｙ１、Ｙ２、Ｙ３、Ｙ４、Ｙ５、及びＹ２７）が重水素濃縮される。ある特定の実施形態では、化合物のイソインドリノン部分上の１つ以上のＹ原子（Ｙ６、Ｙ７、Ｙ８、Ｙ９、及びＹ１０）が重水素濃縮される。ある特定の実施形態では、化合物のフェニルアルキル部分上の１つ以上のＹ原子（Ｙ１１、Ｙ１２、Ｙ１３、Ｙ１４、Ｙ１５、Ｙ１６、Ｙ１７、及びＹ１８）が重水素濃縮される。ある特定の実施形態では、化合物のピペラジン部分上の１つ以上のＹ原子（Ｙ１９、Ｙ２０、Ｙ２１、Ｙ２２、Ｙ２３、Ｙ２４、Ｙ２５、及びＹ２６）が重水素濃縮される。ある特定の実施形態では、化合物の遠位のフェニル環部分上の１つ以上のＹ原子（Ｙ２８、Ｙ２９、及びＹ３０）が重水素濃縮される。本明細書に提供される化合物は、本明細書に開示される重水素濃縮体の任意の組み合わせであり得る。換言すると、重水素濃縮されたグルタルイミド部分、重水素濃縮されたイソインドリン部分、重水素濃縮されたフェニルアルキル部分、重水素濃縮されたピペラジン部分、及び重水素濃縮された遠位のフェニル環部分の任意の組み合わせが本明細書に包含される。
【００９２】
一実施形態では、Ｙ１及びＹ２が重水素濃縮され、任意の残りのＹ原子は非濃縮水素である。一実施形態では、Ｙ３及びＹ４が重水素濃縮され、任意の残りのＹ原子は非濃縮水素である。一実施形態では、Ｙ５が重水素濃縮され、任意の残りのＹ原子は非濃縮水素である。一実施形態では、Ｙ１〜Ｙ５が重水素濃縮され、任意の残りのＹ原子は非濃縮水素である。一実施形態では、Ｙ３〜Ｙ５が重水素濃縮され、任意の残りのＹ原子は非濃縮水素である。一実施形態では、Ｙ６及びＹ７が重水素濃縮され、任意の残りのＹ原子は非濃縮水素である。一実施形態では、Ｙ８〜Ｙ１０が重水素濃縮され、任意の残りのＹ原子は非濃縮水素である。一実施形態では、Ｙ１１及びＹ１２が重水素濃縮され、任意の残りのＹ原子は非濃縮水素である。一実施形態では、Ｙ１３〜Ｙ１６が重水素濃縮され、任意の残りのＹ原子は非濃縮水素である。一実施形態では、Ｙ１７及びＹ１８が重水素濃縮され、任意の残りのＹ原子は非濃縮水素である。一実施形態では、Ｙ１１〜Ｙ１８が重水素濃縮され、任意の残りのＹ原子は非濃縮水素である。一実施形態では、Ｙ１９〜Ｙ２６が重水素濃縮され、任意の残りのＹ原子は非濃縮水素である。一実施形態では、Ｙ２７が重水素濃縮され、任意の残りのＹ原子は非濃縮水素である。一実施形態では、Ｙ２８〜Ｙ３０が重水素濃縮され、任意の残りのＹ原子は非濃縮水素である。
【００９３】
一実施形態では、化合物１のアイソトポログは、化合物１−Ｄ：
【化１０】
2020526534.tif 000014
（１−Ｄ）である。
【００９４】
別の実施形態では、化合物１のアイソトポログは、
【化１１】
2020526534.tif 000015
の混合物である。
【００９５】
また別の実施形態では、化合物２のアイソトポログは、化合物２−Ｄ：
【化１２】
2020526534.tif 000016
（２−Ｄ）である。
【００９６】
また別の実施形態では、化合物３のアイソトポログは、化合物３−Ｄ：
【化１３】
2020526534.tif 000017
（３−Ｄ）である。
【００９７】
ある特定の実施形態では、重水素濃縮された位置のいずれかは独立して、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、または約１００％の重水素存在量を有する。一実施形態では、Ｙ５は、重水素濃縮され、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、または約１００％の重水素存在量を有する。
【００９８】
一実施形態では、化合物１−ＤのＤ（キラル中心で）は、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、または約１００％の重水素存在量を有する。一実施形態では、Ｄは、少なくとも９０％の重水素存在量を有する。
【００９９】
一実施形態では、化合物２−ＤのＤ（キラル中心で）は、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、または約１００％の重水素存在量を有する。一実施形態では、Ｄは、少なくとも９０％の重水素存在量を有する。
【０１００】
一実施形態では、化合物３−ＤのＤ（キラル中心で）は、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、または約１００％の重水素存在量を有する。一実施形態では、Ｄは、少なくとも９０％の重水素存在量を有する。
【０１０１】
ある特定の実施形態では、本明細書に提供される重水素濃縮された化合物は、少なくとも５％、少なくとも１０％、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％の鏡像体過剰率を有する。立体異性体純度の更なる例としては、少なくとも１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７  １８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、または９９％の鏡像体過剰率が挙げられる。
【０１０２】
一実施形態では、化合物２−Ｄは、少なくとも５％、少なくとも１０％、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％の鏡像体過剰率を有する。一実施形態では、化合物２−Ｄは、少なくとも９０％の鏡像体過剰率を有する。
【０１０３】
一実施形態では、化合物３−Ｄは、少なくとも５％、少なくとも１０％、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％の鏡像体過剰率を有する。一実施形態では、化合物３−Ｄは、少なくとも９０％の鏡像体過剰率を有する。
【０１０４】
本明細書に提供される重水素濃縮された化合物は、本明細書に提供される合成スキーム及び実施例に従うが、対応する重水素濃縮された出発材料（複数可）を使用して調製することができる。本明細書に提供される重水素濃縮された化合物は、ＷＯ２０１４／０３９４２１及びＷＯ２０１４／１１６５７３（それらの各々の全ては参照により本明細書に組み込まれる）に記載されるものを含むがこれらに限定されない、当業者に既知の一般化学に従い調製して、重水素濃縮されたイソインドリノン及びグルタルイミド化合物を調製することもできる。
【０１０５】
Ｄ．化合物１、化合物２、及び化合物３の調製
本明細書に提供される化合物は、当業者に既知の方法により、ならびに本明細書の実施例の節に記載されるものと同様の手順及びその日常的な修正に従い調製することができる。化合物の調製のための例示的な反応スキームは、化合物１、化合物２、及び化合物３については以下のスキーム１、ならびに化合物２についてはスキーム２に図示される。
【０１０６】
スキーム１に示されるように、３−ヒドロキシ−２−メチル安息香酸の保護（例えば、メチルエステル及びｔｅｒｔ−ブチル（ジメチル）シリルエーテル形成による）に続いて、例えばＮ−ブロモスクシンイミド及びアゾビスイソブチロニトリルを使用して臭素化を行った。塩基（ＤＩＥＡなど）の存在下で、メチル−４，５−ジアミノ−５−オキソ−ペンタノエート（Ｈ−Ｄ，Ｌ−Ｇｌｕ（ＯＭｅ）−ＮＨ２とも称される）と反応させることにより、誘導体化されたイソインドリンを形成し、続いて、炭酸カリウムなどの塩基を使用してＴＢＳ脱保護を行った。塩基（炭酸カリウムなど）の存在下で、誘導体化されたイソインドリンと１，４−ビス（ブロモメチル）ベンゼンとの反応に続いて、カリウムｔｅｒｔ−ブトキシドの存在下でグルタルイミド形成を行った。最後に、３−フルオロ−４−（ピペラジン−１−イル）ベンゾニトリルと反応させて、標的の化合物１を得た。キラル分離により化合物２及び化合物３を得る。
【化１４】
2020526534.tif 000018
スキーム１
【０１０７】
あるいは、スキーム２に例示されるように、塩基（ＤＩＥＡなど）の存在下で、２−（ブロモメチル）−３−［ｔｅｒｔ−ブチル（ジメチル）シリル］オキシ−安息香酸メチル中間体とキラルｔｅｒｔ−ブチル（４Ｓ）−４，５−ジアミノ−５−オキソ−ペンタノエート（Ｈ−Ｌ−Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）−ＮＨ２とも称される；Ｈ−Ｄ−Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）−ＮＨ２との反応により反対の鏡像異性体が得られる）とを反応させることにより、誘導体化されたイソインドリンを形成し、続いて、フッ化テトラブチルアンモニウムを使用してＴＢＳ脱保護を行った。塩基（炭酸カリウムなど）の存在下で、誘導体化されたイソインドリンと４−（４−（４−（クロロメチル）ベンジル）ピペラジン−１−イル）−３−フルオロベンゾニトリルもしくはその塩との反応に続いて、脱保護及びグルタルイミド形成を行い、標的の化合物２を得た。
【化１５】
2020526534.tif 000019
スキーム２．
【０１０８】
当業者は、例示的スキーム及び実施例に記載する手順を修正して所望の製品に達する方法を知っているであろう。
【０１０９】
一態様では、化合物１、
【化１６】
2020526534.tif 000020
１
あるいはその鏡像異性体もしくは鏡像異性体の混合物、互変異性体、またはアイソトポログを調製するための方法が本明細書に提供され、本方法は、化合物１を提供するのに好適な条件下で、化合物１ａ
【化１７】
2020526534.tif 000021
１ａ
あるいはその鏡像異性体もしくは鏡像異性体の混合物、互変異性体、またはアイソトポログを、塩基の存在下、有機溶媒中で３−フルオロ−４−（ピペラジン−１−イル）ベンゾニトリルと接触させることを含み、式中、Ｘは脱離基である。
【０１１０】
一実施形態では、本方法は、化合物１の鏡像異性体、例えば化合物２、
【化１８】
2020526534.tif 000022
２
を調製するための方法であり、本方法は、化合物２を提供するのに好適な条件下で、化合物１ａの鏡像異性体、例えば、化合物２ａ
【化１９】
2020526534.tif 000023
２ａ
を、塩基の存在下、有機溶媒中で３−フルオロ−４−（ピペラジン−１−イル）ベンゾニトリルと接触させることを含み、式中、Ｘは脱離基である。
【０１１１】
一実施形態では、Ｘは、ハロゲン、例えば、ＢｒまたはＣｌである。別の実施形態では、Ｘは、メタンスルホネート（−ＯＭｓとも称される）。一実施形態では、溶媒は、アセトニトリル、ＴＨＦ、またはＤＭＳＯである。他では、塩基は、ＤＩＥＡまたはＴＥＡである。いくつかの実施形態では、接触は、高温、例えば、約３５℃〜約５０℃で行われる。
【０１１２】
いくつかの実施形態では、本方法は、化合物１ａ、
【化２０】
2020526534.tif 000024
１ａ
あるいはその鏡像異性体もしくは鏡像異性体の混合物、互変異性体、またはアイソトポログを調製することを更に含み、本方法は、化合物１ａを提供するのに好適な条件下で、化合物１ｂ、
【化２１】
2020526534.tif 000025
１ｂ
あるいはその鏡像異性体もしくは鏡像異性体の混合物、互変異性体、またはアイソトポログを、有機溶媒中でカリウムｔｅｒｔ−ブトキシドと接触させることを含む。
【０１１３】
一実施形態では、本方法は、化合物１ａの鏡像異性体、例えば、化合物２ａ、
【化２２】
2020526534.tif 000026
２ａ
を調製するための方法であり、本方法は、化合物２ａを提供するのに好適な条件下で、化合物１ｂの鏡像異性体、例えば、化合物２ｂを、
【化２３】
2020526534.tif 000027
２ｂ
有機溶媒中でカリウムｔｅｒｔ−ブトキシドと接触させることを含む。
【０１１４】
一実施形態では、ＸはＢｒである。一実施形態では、溶媒はＴＨＦである。いくつかの実施形態では、接触は、低温、例えば、約−７０℃〜約−８０℃で行われる。
【０１１５】
いくつかの実施形態では、本方法は、化合物１ｂ、
【化２４】
2020526534.tif 000028
１ｂ
あるいはその鏡像異性体もしくは鏡像異性体の混合物、互変異性体、またはアイソトポログを調製することを更に含み、本方法は、化合物１ｂを提供するのに好適な条件下で、化合物１ｃ、
【化２５】
2020526534.tif 000029
１ｃ
あるいはその鏡像異性体もしくは鏡像異性体の混合物、互変異性体、またはアイソトポログを、塩基の存在下、有機溶媒中で
【化２６】
2020526534.tif 000030
と接触させることを含む。
【０１１６】
一実施形態では、本方法は、化合物１ｂの鏡像異性体、例えば化合物２ｂ、
【化２７】
2020526534.tif 000031
２ｂ
を調製するための方法であり、本方法は、化合物１ｂを提供するのに好適な条件下で、化合物１ｃの鏡像異性体、例えば、化合物２ｃ、
【化２８】
2020526534.tif 000032
２ｃ
を、塩基の存在下、有機溶媒中で
【化２９】
2020526534.tif 000033
と接触させることを含む。
【０１１７】
一実施形態では、ＸはＢｒである。一実施形態では、溶媒はアセトニトリルである。いくつかの実施形態では、塩基は炭酸カリウムである。いくつかの実施形態では、接触は、高温、例えば、約５０℃〜約７０℃で行われる。
【０１１８】
いくつかの実施形態では、本方法は、化合物１ｃ、
【化３０】
2020526534.tif 000034
１ｃ
あるいはその鏡像異性体もしくは鏡像異性体の混合物、互変異性体、またはアイソトポログを調製することを更に含み、本方法は、化合物１ｃを提供するのに好適な条件下で、化合物１ｄ、
【化３１】
2020526534.tif 000035
１ｄ
あるいはその鏡像異性体もしくは鏡像異性体の混合物、互変異性体、またはアイソトポログを、溶媒中で塩基と接触させることを含む。
【０１１９】
一実施形態では、本方法は、化合物１ｃの鏡像異性体、例えば、化合物２ｃ、
【化３２】
2020526534.tif 000036
２ｃ
を調製するための方法であり、本方法は、化合物２ｃを提供するのに好適な条件下で、化合物１ｄの鏡像異性体、例えば、化合物２ｄ、
【化３３】
2020526534.tif 000037
２ｄ
を、溶媒中で塩基と接触させることを含む。
一実施形態では、溶媒は水である。いくつかの実施形態では、塩基は炭酸カリウムである。
【０１２０】
いくつかの実施形態では、本方法は、化合物１ｄ、
【化３４】
2020526534.tif 000038
１ｄ
あるいはその鏡像異性体もしくは鏡像異性体の混合物、互変異性体、またはアイソトポログを調製することを更に含み、本方法は、化合物１ｄを提供するのに好適な条件下で、化合物１ｅ、
【化３５】
2020526534.tif 000039
１ｅ
あるいはその鏡像異性体もしくは鏡像異性体の混合物、互変異性体、またはアイソトポログを、塩基の存在下、溶媒中で２−（ブロモメチル）−３−［ｔｅｒｔ−ブチル（ジメチル）シリル］オキシ−安息香酸メチルと接触させることを含む。
【０１２１】
一実施形態では、本方法は、化合物１ｄの鏡像異性体、例えば、化合物２ｄ、
【化３６】
2020526534.tif 000040
２ｄ
を調製するための方法であり、本方法は、化合物２ｄを提供するのに好適な条件下で、化合物１ｅの鏡像異性体、例えば、化合物２ｅ、
【化３７】
2020526534.tif 000041
２ｅ
を、塩基の存在下、溶媒中で２−（ブロモメチル）−３−［ｔｅｒｔ−ブチル（ジメチル）シリル］オキシ−安息香酸メチルと接触させることを含む。
【０１２２】
一実施形態では、溶媒はアセトニトリルである。いくつかの実施形態では、塩基はＤＩＥＡである。いくつかの他の実施形態では、接触は、高温、例えば、約５０℃〜約７０℃で行われる。
【０１２３】
別の態様では、化合物１、
【化３８】
2020526534.tif 000042
１
あるいはその鏡像異性体もしくは鏡像異性体の混合物、互変異性体、またはアイソトポログを調製するための方法が本明細書に提供され、本方法は、化合物１を提供するのに好適な条件下で、化合物１ｆ
【化３９】
2020526534.tif 000043
１ｆ
あるいはその鏡像異性体もしくは鏡像異性体の混合物、互変異性体、またはアイソトポログを、有機溶媒中で酸と接触させることを含む。
【０１２４】
一実施形態では、本方法は、化合物１の鏡像異性体、例えば化合物２、
【化４０】
2020526534.tif 000044
２
を調製するための方法であり、本方法は、化合物２を提供するのに好適な条件下で、化合物１ｆの鏡像異性体、例えば、化合物２ｆ、
【化４１】
2020526534.tif 000045
２ｆ
を、有機溶媒中で酸と接触させることを含む。
【０１２５】
一実施形態では、溶媒はアセトニトリルである。他では、酸は、ベンゼンスルホン酸である。いくつかの実施形態では、接触は、高温、例えば、約７５℃〜約９５℃で行われる。
【０１２６】
いくつかの実施形態では、本方法は、化合物１ｆ、
【化４２】
2020526534.tif 000046
１ｆ
あるいはその鏡像異性体もしくは鏡像異性体の混合物、互変異性体、またはアイソトポログを調製することを更に含み、本方法は、化合物１ｆを提供するのに好適な条件下で、化合物１ｇ
【化４３】
2020526534.tif 000047
１ｇ
あるいはその鏡像異性体もしくは鏡像異性体の混合物、互変異性体、またはアイソトポログを、塩基の存在下、溶媒中で４−（４−（４−（クロロメチル）ベンジル）ピペラジン−１−イル）−３−フルオロベンゾニトリルまたはその塩と接触させることを含む。
【０１２７】
一実施形態では、本方法は、化合物１ｆの鏡像異性体、例えば、化合物２ｆ、
【化４４】
2020526534.tif 000048
２ｆ
を調製するための方法であり、本方法は、化合物２ｆを提供するのに好適な条件下で、化合物１ｇの鏡像異性体、例えば、化合物２ｇ、
【化４５】
2020526534.tif 000049
２ｇ
を、塩基の存在下、溶媒中で４−（４−（４−（クロロメチル）ベンジル）ピペラジン−１−イル）−３−フルオロベンゾニトリルまたはその塩と接触させることを含む。
【０１２８】
一実施形態では、溶媒はＤＭＦである。一実施形態では、溶媒はＤＭＳＯである。他では、塩基は炭酸カリウムである。いくつかの実施形態では、接触は、高温、例えば、約３５℃〜約５５℃で行われる。
【０１２９】
いくつかの実施形態では、化合物１ｆを調製するための方法は、精製方法を更に含み、本精製方法は、（ｉ）化合物１ｆ（遊離塩基）を第１の溶媒中で酸と接触させ、（ｉｉ）濾過して、化合物１ｆの酸性塩を得、（ｉｉｉ）第２の溶媒中の化合物１ｆの酸性塩を塩基で洗浄して、化合物１ｆ（遊離塩基）を得ることを含む。一実施形態では、酸は、酒石酸（例えば、Ｌ−酒石酸）である。一実施形態では、第１の溶媒はメタノールである。一実施形態では、化合物１ｆの酸性塩は、化合物１ｆの酒石酸塩（例えば、Ｌ−酒石酸塩）である。一実施形態では、第２の溶媒は、２−メチルテトラヒドロフランである。一実施形態では、塩基は炭酸カリウムである。
【０１３０】
いくつかの実施形態では、化合物１ｆの鏡像異性体、例えば化合物２ｆを調製するための方法は、精製方法を更に含み、本精製方法は、（ｉ）化合物２ｆ（遊離塩基）を第１の溶媒中で酸と接触させ、（ｉｉ）濾過して、化合物２ｆの酸性塩を得、（ｉｉｉ）第２の溶媒中の化合物２ｆの酸性塩を塩基で洗浄して、化合物２ｆ（遊離塩基）を得ることを含む。一実施形態では、酸は、酒石酸（例えば、Ｌ−酒石酸）である。一実施形態では、第１の溶媒はメタノールである。一実施形態では、化合物２ｆの酸性塩は、化合物２ｆの酒石酸塩（例えば、Ｌ−酒石酸塩）である。一実施形態では、第２の溶媒は、２−メチルテトラヒドロフランである。一実施形態では、塩基は炭酸カリウムである。
【０１３１】
いくつかの実施形態では、本方法は、４−（４−（４−（クロロメチル）ベンジル）ピペラジン−１−イル）−３−フルオロベンゾニトリルまたはその塩を調製することを更に含み、本方法は、４−（４−（４−（クロロメチル）ベンジル）ピペラジン−１−イル）−３−フルオロベンゾニトリルを提供するのに好適な条件下で、４−（クロロメチル）ベンズアルデヒドを、還元剤の存在下、溶媒中で３−フルオロ−４−（ピペラジン−１−イル）ベンゾニトリルと接触させることを含む。
【０１３２】
一実施形態では、還元剤は、トリ酢酸水素化ホウ素ナトリウム（ＮａＢＨ（ＯＡｃ）４）である。一実施形態では、溶媒はトルエンである。一実施形態では、接触は、酸の存在下で行われる。一実施形態では、酸は酢酸である。
【０１３３】
一実施形態では、本明細書に提供される方法において調製及び使用される４−（４−（４−（クロロメチル）ベンジル）ピペラジン−１−イル）−３−フルオロベンゾニトリルまたはその塩は、４−（４−（４−（クロロメチル）ベンジル）ピペラジン−１−イル）−３−フルオロベンゾニトリルのＨＣｌ塩である。一実施形態では、ＨＣｌ塩は、４−（４−（４−（クロロメチル）ベンジル）ピペラジン−１−イル）−３−フルオロベンゾニトリル遊離塩基を、イソプロパノール中の塩酸と接触させることにより調製される。
【０１３４】
Ｅ．治療及び予防方法
驚くべきことに、化合物１、化合物２、及び化合物３は、正常な細胞と比較して、多発性骨髄腫細胞の選択的細胞死滅、オフターゲット受容体における活性の低減、及びＣＹＰ酵素阻害の低減を含む安全性プロファイルの改善などの際立った特徴を有し、有害な薬物相互作用を低減する非常に強力な抗骨髄腫化合物であることが見出された。
【０１３５】
一実施形態では、化合物１、またはその鏡像異性体、鏡像異性体の混合物、互変異性体、アイソトポログ、もしくは薬学的に許容される塩を患者に投与することを含む、多発性骨髄腫を治療する方法が、本明細書に提供される。一実施形態では、多発性骨髄腫を治療する方法に使用するための、化合物１、またはその鏡像異性体、鏡像異性体の混合物、互変異性体、アイソトポログ、もしくは薬学的に許容される塩が本明細書に提供され、本方法は、この化合物を患者に投与することを含む。
【０１３６】
一実施形態では、化合物２、またはその互変異性体、アイソトポログ、もしくは薬学的に許容される塩を患者に投与することを含む、多発性骨髄腫を治療する方法が本明細書に提供される。一実施形態では、多発性骨髄腫を治療する方法に使用するための、化合物２、またはその互変異性体、アイソトポログ、もしくは薬学的に許容される塩が本明細書に提供され、本方法は、この化合物を患者に投与することを含む。
【０１３７】
一実施形態では、化合物３、またはその互変異性体、アイソトポログ、もしくは薬学的に許容される塩を患者に投与することを含む、多発性骨髄腫を治療する方法が本明細書に提供される。一実施形態では、多発性骨髄腫を治療する方法に使用するための、化合物３、またはその互変異性体、アイソトポログ、もしくは薬学的に許容される塩が本明細書に提供され、本方法は、この化合物を患者に投与することを含む。
【０１３８】
一実施形態では、本明細書に提供される化合物、例えば、化合物１、化合物２、もしくは化合物３、またはその鏡像異性体、鏡像異性体の混合物、互変異性体、アイソトポログ、もしくは薬学的に許容される塩を患者に投与することを含む、多発性骨髄腫を予防する方法が本明細書に提供される。一実施形態では、多発性骨髄腫を予防する方法に使用するための、本明細書に提供される化合物、例えば、化合物１、化合物２、もしくは化合物３、またはその鏡像異性体、鏡像異性体の混合物、互変異性体、アイソトポログ、もしくは薬学的に許容される塩が本明細書に提供され、本方法は、患者に対するこの化合物を含む。
【０１３９】
別の実施形態では、本明細書に提供される化合物、例えば、化合物１、化合物２、もしくは化合物３、またはその鏡像異性体、鏡像異性体の混合物、互変異性体、アイソトポログ、もしくは薬学的に許容される塩を患者に投与することを含む、多発性骨髄腫を管理する方法が本明細書に提供される。一実施形態では、多発性骨髄腫を管理する方法に使用するための、本明細書に提供される化合物、例えば、化合物１、化合物２、もしくは化合物３、またはその鏡像異性体、鏡像異性体の混合物、互変異性体、アイソトポログ、もしくは薬学的に許容される塩が本明細書に提供され、本方法は、この化合物を患者に投与することを含む。
【０１４０】
一実施形態では、患者の、多発性骨髄腫の治療効果判定国際統一基準（ＩＵＲＣ）により評価される治療奏功を誘導するための方法も本明細書に提供され（Ｄｕｒｉｅ  ＢＧＭ，Ｈａｒｏｕｓｓｅａｕ  Ｊ−Ｌ，Ｍｉｇｕｅｌ  ＪＳ，ｅｔ  ａｌ．Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  ｕｎｉｆｏｒｍ  ｒｅｓｐｏｎｓｅ  ｃｒｉｔｅｒｉａ  ｆｏｒ  ｍｕｌｔｉｐｌｅ  ｍｙｅｌｏｍａ．Ｌｅｕｋｅｍｉａ，２００６；（１０）１０：１−７）、有効量の本明細書に記載の化合物、例えば、化合物１、化合物２、もしくは化合物３、またはその鏡像異性体、鏡像異性体の混合物、互変異性体、アイソトポログ、もしくは薬学的に許容される塩を、多発性骨髄腫を有する患者に投与することを含む。別の実施形態では、患者において、多発性骨髄腫の治療効果判定国際統一基準（ＩＵＲＣ）により決定される、厳密完全奏功または非常に良好な部分奏功を達成するための方法が本明細書に提供され、有効量の本明細書に記載の化合物、例えば、化合物１、化合物２、もしくは化合物３、またはその鏡像異性体、鏡像異性体の混合物、互変異性体、アイソトポログ、もしくは薬学的に許容される塩を、多発性骨髄腫を有する患者に投与することを含む。別の実施形態では、患者の全生存期間、無増悪生存期間、無事象生存期間、進行までの時間、または無病生存期間の増加を達成するための方法が本明細書に提供され、有効量の本明細書に記載の化合物、例えば、化合物１、化合物２、もしくは化合物３、またはその鏡像異性体、鏡像異性体の混合物、互変異性体、アイソトポログ、もしくは薬学的に許容される塩を、多発性骨髄腫を有する患者に投与することを含む。別の実施形態では、患者の全生存期間の増加を達成するための方法が本明細書に提供され、有効量の本明細書に記載の化合物、例えば、化合物１、化合物２、もしくは化合物３、またはその鏡像異性体、鏡像異性体の混合物、互変異性体、アイソトポログ、もしくは薬学的に許容される塩を、多発性骨髄腫を有する患者に投与することを含む。別の実施形態では、患者の無増悪生存期間の増加を達成するための方法が本明細書に提供され、有効量の本明細書に記載の化合物、例えば、化合物１、化合物２、もしくは化合物３、またはその鏡像異性体、鏡像異性体の混合物、互変異性体、アイソトポログ、もしくは薬学的に許容される塩を、多発性骨髄腫を有する患者に投与することを含む。別の実施形態では、患者の無事象生存期間の増加を達成するための方法が本明細書に提供され、有効量の本明細書に記載の化合物、例えば、化合物１、化合物２、もしくは化合物３、またはその鏡像異性体、鏡像異性体の混合物、互変異性体、アイソトポログ、もしくは薬学的に許容される塩を、多発性骨髄腫を有する患者に投与することを含む。別の実施形態では、患者の進行までの時間の増加を達成するための方法本明細書に提供され、有効量の本明細書に記載の化合物、例えば、化合物１、化合物２、もしくは化合物３、またはその鏡像異性体、鏡像異性体の混合物、互変異性体、アイソトポログ、もしくは薬学的に許容される塩を、多発性骨髄腫を有する患者に投与することを含む。別の実施形態では、患者の無病生存期間の増加を達成するための方法が本明細書に提供され、有効量���本明細書に記載の化合物、例えば、化合物１、化合物２、もしくは化合物３、またはその鏡像異性体、鏡像異性体の混合物、互変異性体、アイソトポログ、もしくは薬学的に許容される塩を、多発性骨髄腫を有する患者に投与することを含む。
【０１４１】
多発性骨髄腫に対して以前に治療されているが、標準的な療法に対して非応答性であり、また以前に治療されていない患者の治療方法も本明細書に提供される。多発性骨髄腫を治療しようとして、手術を受けたことがある患者、ならびに受けたことがない患者の治療方法が更に包含される。移植療法を以前に受けたことがある患者、ならびに受けたことがない患者の治療方法も本明細書に提供される。
【０１４２】
再発性、不応性、または耐性である多発性骨髄腫の治療を含む方法が本明細書に提供される。再発性、不応性、または耐性である多発性骨髄腫の予防を含む方法が本明細書に提供される。再発性、不応性、または耐性である多発性骨髄腫の管理を含む方法が本明細書に提供される。いくつかのそのような実施形態では、骨髄腫は、原発性、二次性、三次性、四重、または五重の再発性多発性骨髄腫である。一実施形態では、本明細書に提供される方法は、最小残存疾患（ＭＲＤ）を低減、維持、または排除する。一実施形態では、本明細書に提供される方法は、治療有効量の本明細書に記載の化合物を投与することによる、意義不明の単クローン性ガンマグロブリン血症（ＭＧＵＳ）、低リスク、中程度のリスク、及び高リスクの多発性骨髄腫、新たに診断された多発性骨髄腫（低リスク、中程度のリスク、及び高リスクの新たに診断された多発性骨髄腫を含む）、移植適応及び移植非適応多発性骨髄腫、くすぶり型（無症候性）多発性骨髄腫（低リスク、中程度のリスク、及び高リスクのくすぶり型多発性骨髄腫を含む）、活動性多発性骨髄腫、孤立性形質細胞腫、髄外性形質細胞腫、形質細胞白血病、中枢神経系多発性骨髄腫、軽鎖骨髄腫、非分泌型骨髄腫、免疫グロブリンＤ骨髄腫、及び免疫グロブリンＥ骨髄腫などの様々な種類の多発性骨髄腫の治療、予防、または管理を包含する。別の実施形態では、本明細書に提供される方法は、治療有効量の本明細書に記載の化合物を投与することによる、サイクリンＤ転座（例えば、ｔ（１１；１４）（ｑ１３；ｑ３２）、ｔ（６；１４）（ｐ２１；３２）、ｔ（１２；１４）（ｐ１３；ｑ３２）、またはｔ（６；２０）；）、ＭＭＳＥＴ転座（例えば、ｔ（４；１４）（ｐ１６；ｑ３２））、ＭＡＦ転座（例えば、ｔ（１４；１６）（ｑ３２；ｑ３２）、ｔ（２０；２２）、ｔ（１６；２２）（ｑ１１；ｑ１３）、またはｔ（１４；２０）（ｑ３２；ｑ１１））、または他の染色体因子（例えば、１７ｐ１３または染色体１３の欠失、ｄｅｌ（１７／１７ｐ）、非高二倍体、及び増加（１ｑ））などの遺伝子異常を特徴とする多発性骨髄腫の治療、予防、または管理を包含する。
【０１４３】
一実施形態では、本方法は、治療有効量の化合物１、またはその鏡像異性体、鏡像異性体の混合物、互変異性体、アイソトポログ、もしくは薬学的に許容される塩を投与することを含む。別の実施形態では、本方法は、治療有効量の化合物２、またはその互変異性体、アイソトポログ、もしくは薬学的に許容される塩を投与することを含む。別の実施形態では、本方法は、治療有効量の化合物３、またはその互変異性体、アイソトポログ、もしくは薬学的に許容される塩を投与することを含む。
【０１４４】
いくつかの実施形態では、本方法は、導入療法として、治療有効量の化合物１、またはその鏡像異性体、鏡像異性体の混合物、互変異性体、アイソトポログ、もしくは薬学的に許容される塩を投与することを含む。別の実施形態では、本方法は、導入療法として、治療有効量の化合物２、またはその互変異性体、アイソトポログ、もしくは薬学的に許容される塩を投与することを含む。別の実施形態では、本方法は、導入療法として、治療有効量の化合物３、またはその互変異性体、アイソトポログ、もしくは薬学的に許容される塩を投与することを含む。いくつかの実施形態では、本方法は、地固め療法として、治療有効量の化合物１、またはその鏡像異性体、鏡像異性体の混合物、互変異性体、アイソトポログ、もしくは薬学的に許容される塩を投与することを含む。別の実施形態では、本方法は、地固め療法として、治療有効量の化合物２、またはその互変異性体、アイソトポログ、もしくは薬学的に許容される塩を投与することを含む。別の実施形態では、本方法は、地固め療法として、治療有効量の化合物３、またはその互変異性体、アイソトポログ、もしくは薬学的に許容される塩を投与することを含む。いくつかの実施形態では、本方法は、維持療法として、治療有効量の化合物１、またはその鏡像異性体、鏡像異性体の混合物、互変異性体、アイソトポログ、もしくは薬学的に許容される塩を投与することを含む。別の実施形態では、本方法は、維持療法として、治療有効量の化合物２、またはその互変異性体、アイソトポログ、もしくは薬学的に許容される塩を投与することを含む。別の実施形態では、本方法は、維持療法として、治療有効量の化合物３、またはその互変異性体、アイソトポログ、もしくは薬学的に許容される塩を投与することを含む。
【０１４５】
本明細書に記載の方法の特定の一実施形態では、多発性骨髄腫は、形質細胞白血病である。
【０１４６】
本明細書に記載の方法の一実施形態では、多発性骨髄腫は、高リスクの多発性骨髄腫である。いくつかのそのような実施形態では、高リスクの多発性骨髄腫は、再発性または不応性である。一実施形態では、高リスクの多発性骨髄腫は、最初の治療から１２か月以内に再発する多発性骨髄腫である。更に別の実施形態では、高リスクの多発性骨髄腫は、遺伝子異常、例えば、ｄｅｌ（１７／１７ｐ）及びｔ（１４；１６）（ｑ３２；ｑ３２）のうちの１つ以上を特徴とする多発性骨髄腫である。いくつかのそのような実施形態では、高リスクの多発性骨髄腫は、再発性、または以前の１つ、２つ、もしくは３つの治療に対して不応性である。
【０１４７】
一実施形態では、多発性骨髄腫はｐ５３突然変異を特徴とする。一実施形態では、ｐ５３突然変異はＱ３３１突然変異である。一実施形態では、ｐ５３突然変異はＲ２７３Ｈ突然変異である。一実施形態では、ｐ５３突然変異はＫ１３２突然変異である。一実施形態では、ｐ５３突然変異はＫ１３２Ｎ突然変異である。一実施形態では、ｐ５３突然変異はＲ３３７突然変異である。一実施形態では、ｐ５３突然変異はＲ３３７Ｌ突然変異である。一実施形態では、ｐ５３突然変異はＷ１４６突然変異である。一実施形態では、ｐ５３突然変異はＳ２６１突然変異である。一実施形態では、ｐ５３突然変異はＳ２６１Ｔ突然変異である。一実施形態では、ｐ５３突然変異はＥ２８６突然変異である。一実施形態では、ｐ５３突然変異はＥ２８６Ｋ突然変異である。一実施形態では、ｐ５３突然変異はＲ１７５突然変異である。一実施形態では、ｐ５３突然変異はＲ１７５Ｈ突然変異である。一実施形態では、ｐ５３突然変異はＥ２５８突然変異である。一実施形態では、ｐ５３突然変異はＥ２５８Ｋ突然変異である。一実施形態では、ｐ５３突然変異はＡ１６１突然変異である。一実施形態では、ｐ５３突然変異はＡ１６１Ｔ突然変異である。
【０１４８】
一実施形態では、多発性骨髄腫は、ｐ５３のホモ接合型欠失を特徴とする。一実施形態では、多発性骨髄腫は、野生型ｐ５３のホモ接合型欠失を特徴とする。
【０１４９】
一実施形態では、多発性骨髄腫は、野生型ｐ５３を特徴とする。
【０１５０】
一実施形態では、多発性骨髄腫は、１つ以上の発がん性ドライバーの活性化を特徴とする。一実施形態では、１つ以上の発がん性ドライバーは、Ｃ−ＭＡＦ、ＭＡＦＢ、ＦＧＦＲ３、ＭＭｓｅｔ、サイクリンＤ１、及びサイクリンＤからなる群から選択される。一実施形態では、多発性骨髄腫は、Ｃ−ＭＡＦの活性化を特徴とする。一実施形態では、多発性骨髄腫は、ＭＡＦＢの活性化を特徴とする。一実施形態では、多発性骨髄腫は、ＦＧＦＲ３及びＭＭｓｅｔの活性化を特徴とする。一実施形態では、多発性骨髄腫は、Ｃ−ＭＡＦ、ＦＧＦＲ３、及びＭＭｓｅｔの活性化を特徴とする。一実施形態では、多発性骨髄腫は、サイクリンＤ１の活性化を特徴とする。一実施形態では、多発性骨髄腫は、ＭＡＦＢ及びサイクリンＤ１の活性化を特徴とする。一実施形態では、多発性骨髄腫は、サイクリンＤの活性化を特徴とする。
【０１５１】
一実施形態では、多発性骨髄腫は、１つ以上の染色体転座を特徴とする。一実施形態では、染色体転座はｔ（１４；１６）である。一実施形態では、染色体転座はｔ（１４；２０）である。一実施形態では、染色体転座はｔ（４；１４）である。一実施形態では、染色体転座は、ｔ（４；１４）及びｔ（１４；１６）である。一実施形態では、染色体転座はｔ（１１；１４）である。一実施形態では、染色体転座はｔ（６；２０）である。一実施形態では、染色体転座はｔ（２０；２２）である。一実施形態では、染色体転座は、ｔ（６；２０）及びｔ（２０；２２）である。一実施形態では、染色体転座はｔ（１６；２２）である。一実施形態では、染色体転座は、ｔ（１４；１６）及びｔ（１６；２２）である。一実施形態では、染色体転座は、ｔ（１４；２０）及びｔ（１１；１４）である。
【０１５２】
一実施形態では、多発性骨髄腫は、Ｑ３３１  ｐ５３突然変異、Ｃ−ＭＡＦの活性化、及びｔ（１４；１６）における染色体転座を特徴とする。一実施形態では、多発性骨髄腫は、ｐ５３のホモ接合型欠失、Ｃ−ＭＡＦの活性化、及びｔ（１４；１６）における染色体転座を特徴とする。一実施形態では、多発性骨髄腫は、Ｋ１３２Ｎ  ｐ５３突然変異、ＭＡＦＢの活性化、及びｔ（１４；２０）における染色体転座を特徴とする。一実施形態では、多発性骨髄腫は、野生型ｐ５３、ＦＧＦＲ３及びＭＭｓｅｔの活性化、ならびにｔ（４；１４）における染色体転座を特徴とする。一実施形態では、多発性骨髄腫は、野生型ｐ５３、Ｃ−ＭＡＦの活性化、及びｔ（１４；１６）における染色体転座を特徴とする。一実施形態では、多発性骨髄腫は、ｐ５３のホモ接合型欠失、ＦＧＦＲ３、ＭＭｓｅｔ、及びＣ−ＭＡＦの活性化、ならびにｔ（４；１４）及びｔ（１４；１６）における染色体転座を特徴とする。一実施形態では、多発性骨髄腫は、ｐ５３のホモ接合型欠失、サイクリンＤ１の活性化、及びｔ（１１；１４）における染色体転座を特徴とする。一実施形態では、多発性骨髄腫は、Ｒ３３７Ｌ  ｐ５３突然変異、サイクリンＤ１の活性化、及びｔ（１１；１４）における染色体転座を特徴とする。一実施形態では、多発性骨髄腫は、Ｗ１４６  ｐ５３突然変異、ＦＧＦＲ３及びＭＭｓｅｔの活性化、ならびにｔ（４；１４）における染色体転座を特徴とする。一実施形態では、多発性骨髄腫は、Ｓ２６１Ｔ  ｐ５３突然変異、ＭＡＦＢの活性化、ならびにｔ（６；２０）及びｔ（２０；２２）における染色体転座を特徴とする。一実施形態では、多発性骨髄腫は、Ｅ２８６Ｋ  ｐ５３突然変異、ＦＧＦＲ３及びＭＭｓｅｔの活性化、ならびにｔ（４；１４）における染色体転座を特徴とする。一実施形態では、多発性骨髄腫は、Ｒ１７５Ｈ  ｐ５３突然変異、ＦＧＦＲ３及びＭＭｓｅｔの活性化、ならびにｔ（４；１４）における染色体転座を特徴とする。一実施形態では、多発性骨髄腫は、Ｅ２５８Ｋ  ｐ５３突然変異、Ｃ−ＭＡＦの活性化、ならびにｔ（１４；１６）及びｔ（１６；２２）における染色体転座を特徴とする。一実施形態では、多発性骨髄腫は、野生型ｐ５３、ＭＡＦＢ及びサイクリンＤ１の活性化、ならびにｔ（１４；２０）及びｔ（１１；１４）における染色体転座を特徴とする。一実施形態では、多発性骨髄腫は、Ａ１６１Ｔ  ｐ５３突然変異、サイクリンＤ１の活性化、及びｔ（１１；１４）における染色体転座を特徴とする。
【０１５３】
本明細書に記載の方法のいくつかの実施形態では、多発性骨髄腫は、移植適応の新たに診断された多発性骨髄腫である。別の実施形態では、多発性骨髄腫は、移植適応の新たに診断された多発性骨髄腫である。
【０１５４】
更に他の実施形態では、多発性骨髄腫は、初期の治療後の早期進行（例えば、１２か月未満）を特徴とする。また他の実施形態では、多発性骨髄腫は、自家幹細胞移植後の早期進行（例えば、１２か月未満）を特徴とする。別の実施形態では、多発性骨髄腫は、レナリドミド不応性である。別の実施形態では、多発性骨髄腫は、ポマリドミド不応性である。いくつかのそのような実施形態では、多発性骨髄腫は、ポマリドミド不応性であると予測される（例えば、分子特徴付けにより）。別の実施形態では、多発性骨髄腫は、再発性、または３つ以上の治療に対して不応性であり、プロテアソーム阻害剤（例えば、ボルテゾミブ、カルフィルゾミブ、イキサゾミブ、オプロゾミブ、またはマリゾミブ）及び免疫調節化合物（例えば、サリドマイド、レナリドミド、ポマリドミド、イベルドミド、またはアバドミド）に曝露されたか、またはプロテアソーム阻害剤及び免疫調節化合物に対して二重不応性である。また他の実施形態では、多発性骨髄腫は、再発性、または例えば、ＣＤ３８モノクローナル抗体（ＣＤ３８  ｍＡｂ、例えば、ダラツムマブまたはイサツキシマブ）、プロテアソーム阻害剤（例えば、ボルテゾミブ、カルフィルゾミブ、イキサゾミブ、またはマリゾミブ）、及び免疫調節化合物（例えば、サリドマイド、レナリドミド、ポマリドミド、イベルドミド、またはアバドミド）を含む、３つ以上の前の療法に対して不応性であるか、あるいはプロテアソーム阻害剤または免疫調節化合物及びＣＤ３８  ｍＡｂに対して二重不応性である。また他の実施形態では、多発性骨髄腫は、三重不応性であり、例えば、多発性骨髄腫は、プロテアソーム阻害剤（例えば、ボルテゾミブ、カルフィルゾミブ、イキサゾミブ、オプロゾミブ、またはマリゾミブ）、免疫調節化合物（例えば、サリドマイド、レナリドミド、ポマリドミド、イベルドミド、またはアバドミド）、及び本明細書に記載される他の１つの活性剤に対して不応性である。
【０１５５】
いくつかのそのような実施形態では、本方法は、導入療法として、治療有効量の化合物１、またはその鏡像異性体、鏡像異性体の混合物、互変異性体、アイソトポログ、もしくは薬学的に許容される塩を投与することを含む。別の実施形態では、本方法は、導入療法として、治療有効量の化合物２、またはその互変異性体、アイソトポログ、もしくは薬学的に許容される塩を投与することを含む。別の実施形態では、本方法は、導入療法として、治療有効量の化合物３、またはその互変異性体、アイソトポログ、もしくは薬学的に許容される塩を投与することを含む。
【０１５６】
ある特定の実施形態では、治療有効量の化合物１、化合物２、もしくは化合物３、または  その鏡像異性体、鏡像異性体の混合物、互変異性体、アイソトポログ、もしくは薬学的に許容される塩を、腎機能障害を伴う再発性／不応性多発性骨髄腫を有する患者に投与することを含む、腎機能障害またはその症状を伴う患者における再発性／不応性多発性骨髄腫を含む、多発性骨髄腫を治療、予防、及び／または管理する方法が本明細書に提供される。
【０１５７】
ある特定の実施形態では、治療有効量の化合物１、化合物２、もしくは化合物３、またはその鏡像異性体、鏡像異性体の混合物、互変異性体、アイソトポログ、もしくは薬学的に許容される塩を、多発性骨髄腫を有する虚弱な患者に投与することを含む、虚弱な患者における再発性もしくは不応性多発性骨髄腫またはその症状を含む、多発性骨髄腫を治療、予防、及び／または管理する方法が本明細書に提供される。いくつかのそのような実施形態では、虚弱な患者は、導入療法の非適応性またはデキサメタゾン治療不耐性を特徴とする。いくつかのそのような実施形態では、虚弱な患者は、高齢者、例えば、６５歳以上である。
【０１５８】
ある特定の実施形態では、治療有効量の化合物１、またはその互変異性体、アイソトポログ、もしくは薬学的に許容される塩を患者に投与することを含む、多発性骨髄腫を治療、予防、または管理する方法が本明細書に提供され、多発性骨髄腫は、第４線の再発性／不応性多発性骨髄腫である。ある特定の実施形態では、治療有効量の化合物２、またはその互変異性体、アイソトポログ、もしくは薬学的に許容される塩を患者に投与することを含む、多発性骨髄腫を治療、予防、または管理する方法が本明細書に提供され、多発性骨髄腫は、第４線の再発性／不応性多発性骨髄腫である。ある特定の実施形態では、治療有効量の化合物３、またはその互変異性体、アイソトポログ、もしくは薬学的に許容される塩を患者に投与することを含む、多発性骨髄腫を治療、予防、または管理する方法が本明細書に提供され、多発性骨髄腫は、第４線の再発性／不応性多発性骨髄腫である。
【０１５９】
ある特定の実施形態では、導入療法として治療有効量の化合物１、またはその互変異性体、アイソトポログ、もしくは薬学的に許容される塩を患者に投与することを含む、多発性骨髄腫を治療、予防、または管理する方法が本明細書に提供され、多発性骨髄腫は、新たに診断された移植適応多発性骨髄腫である。ある特定の実施形態では、導入療法として治療有効量の化合物２、またはその互変異性体、アイソトポログ、もしくは薬学的に許容される塩を患者に投与することを含む、多発性骨髄腫を治療、予防、または管理する方法が本明細書に提供され、多発性骨髄腫は、新たに診断された移植適応多発性骨髄腫である。ある特定の実施形態では、導入療法として治療有効量の化合物３、またはその互変異性体、アイソトポログ、もしくは薬学的に許容される塩を患者に投与することを含む、多発性骨髄腫を治療、予防、または管理する方法が本明細書に提供され、多発性骨髄腫は、新たに診断された移植適応多発性骨髄腫である。
【０１６０】
ある特定の実施形態では、他の療法もしくは移植の後の維持療法として治療有効量の化合物１、またはその互変異性体、アイソトポログ、もしくは薬学的に許容される塩を患者に投与することを含む、多発性骨髄腫を治療、予防、または管理する方法が本明細書に提供され、多発性骨髄腫は、他の療法または移植の前に新たに診断された移植適応多発性骨髄腫である。ある特定の実施形態では、他の療法もしくは移植の後の維持療法として治療有効量の化合物２、またはその互変異性体、アイソトポログ、もしくは薬学的に許容される塩を患者に投与することを含む、多発性骨髄腫を治療、予防、または管理する方法が本明細書に提供され、多発性骨髄腫は、他の療法または移植の前に新たに診断された移植適応多発性骨髄腫である。ある特定の実施形態では、他の療法もしくは移植の後の維持療法として治療有効量の化合物３、またはその互変異性体、アイソトポログ、もしくは薬学的に許容される塩を患者に投与することを含む、多発性骨髄腫を治療、予防、または管理する方法が本明細書に提供され、多発性骨髄腫は、他の療法または移植の前に新たに診断された移植適応多発性骨髄腫である。
【０１６１】
ある特定の実施形態では、他の療法もしくは移植の後の維持療法として治療有効量の化合物１、またはその互変異性体、アイソトポログ、もしくは薬学的に許容される塩を患者に投与することを含む、多発性骨髄腫を治療、予防、または管理する方法が本明細書に提供される。いくつかの実施形態では、多発性骨髄腫は、他の療法及び／または移植の前に新たに診断された移植適応多発性骨髄腫である。いくつかの実施形態では、移植前の他の療法は、化学療法、または化合物１、化合物２、もしくは化合物３での治療である。ある特定の実施形態では、他の療法もしくは移植の後の維持療法として治療有効量の化合物２、またはその互変異性体、アイソトポログ、もしくは薬学的に許容される塩を患者に投与することを含む、多発性骨髄腫を治療、予防、または管理する方法が本明細書に提供される。いくつかの実施形態では、多発性骨髄腫は、他の療法及び／または移植の前に新たに診断された移植適応多発性骨髄腫である。いくつかの実施形態では、移植前の他の療法は、化学療法、または化合物１、化合物２、もしくは化合物３での治療である。ある特定の実施形態では、他の療法もしくは移植の後の維持療法として治療有効量の化合物３、またはその互変異性体、アイソトポログ、もしくは薬学的に許容される塩を患者に投与することを含む、多発性骨髄腫を治療、予防、または管理する方法が本明細書に提供される。いくつかの実施形態では、多発性骨髄腫は、他の療法及び／または移植の前に新たに診断された移植適応多発性骨髄腫である。いくつかの実施形態では、移植前の他の療法は、化学療法、または化合物１、化合物２、もしくは化合物３での治療である。
【０１６２】
ある特定の実施形態では、治療有効量の化合物１、またはその互変異性体、アイソトポログ、もしくは薬学的に許容される塩を患者に投与することを含む、多発性骨髄腫を治療、予防、または管理する方法が本明細書に提供され、多発性骨髄腫は、再発性であるか、または以前の１つ、２つ、または３つの治療に対して不応性である高リスクの多発性骨髄腫である。ある特定の実施形態では、治療有効量の化合物２、またはその互変異性体、アイソトポログ、もしくは薬学的に許容される塩を患者に投与することを含む、多発性骨髄腫を治療、予防、または管理する方法が本明細書に提供され、多発性骨髄腫は、再発性であるか、または以前の１つ、２つ、または３つの治療に対して不応性である高リスクの多発性骨髄腫である。ある特定の実施形態では、治療有効量の化合物３、またはその互変異性体、アイソトポログ、もしくは薬学的に許容される塩を患者に投与することを含む、多発性骨髄腫を治療、予防、または管理する方法が本明細書に提供され、多発性骨髄腫は、再発性であるか、または以前の１つ、２つ、または３つの治療に対して不応性である高リスクの多発性骨髄腫である。
【０１６３】
ある特定の実施形態では、治療有効量の化合物１、またはその互変異性体、アイソトポログ、もしくは薬学的に許容される塩を患者に投与することを含む、多発性骨髄腫を治療、予防、または管理する方法が本明細書に提供され、多発性骨髄腫は、新たに診断された移植非適応多発性骨髄腫である。ある特定の実施形態では、治療有効量の化合物２、またはその互変異性体、アイソトポログ、もしくは薬学的に許容される塩を患者に投与することを含む、多発性骨髄腫を治療、予防、または管理する方法が本明細書に提供され、多発性骨髄腫は、新たに診断された移植非適応多発性骨髄腫である。ある特定の実施形態では、治療有効量の化合物３、またはその互変異性体、アイソトポログ、もしくは薬学的に許容される塩を患者に投与することを含む、多発性骨髄腫を治療、予防、または管理する方法が本明細書に提供され、多発性骨髄腫は、新たに診断された移植非適応多発性骨髄腫である。
【０１６４】
ある特定の実施形態では、化合物の治療または予防有効量は、約０．０１〜約２５ｍｇ／日、約０．０１〜約１０ｍｇ／日、約０．０１〜約５ｍｇ／日、約０．０１〜約２ｍｇ／日、約０．０１〜約１ｍｇ／日、約０．０１〜約０．５ｍｇ／日、約０．０１〜約０．２５ｍｇ／日、約０．１〜約２５ｍｇ／日、約０．１〜約１０ｍｇ／日、約０．１〜約５ｍｇ／日、約０．１〜約２ｍｇ／日、約０．１〜約１ｍｇ／日、約０．１〜約０．５ｍｇ／日、約０．１〜約０．２５ｍｇ／日、約０．５〜約２５ｍｇ／日、約０．５〜約１０ｍｇ／日、約０．５〜約５ｍｇ／日、約０．５〜２ｍｇ／日、約０．５〜約１ｍｇ／日、約１〜約２５ｍｇ／日、約１〜約１０ｍｇ／日、約１〜約５ｍｇ／日、約１〜約２．５ｍｇ／日、または約１〜約２ｍｇ／日である。一実施形態では、化合物１、化合物２、または化合物３の治療または予防有効量は、約０．１ｍｇ／日〜約０．４ｍｇ／日である。
【０１６５】
ある特定の実施形態では、治療または予防有効量は、約０．１、約０．２、約０．３、約０．４、約０．５、約０．６、約０．７、約０．８、約０．９、約１、約２、約３、約４、約５、約６、約７、約８、約９、約１０、約１５、約２０、または約２５ｍｇ／日である。いくつかのそのような実施形態では、治療または予防有効量は、約０．１、約０．２、約０．３、約０．４、約０．５、約０．６、約０．７ｍｇ／日である。
【０１６６】
一実施形態では、本明細書に記載の状態のための、化合物１、化合物２、もしくは化合物３、またはその鏡像異性体、鏡像異性体の混合物、互変異性体、アイソトポログ、もしくは薬学的に許容される塩の推奨される日用量の範囲は、約０．１ｍｇ〜約２５ｍｇ／日の範囲内であり、好ましくは、１日１回の単回投与として、または１日を通して分割用量で与えられる。他の実施形態では、投薬量は、約０．１〜約１０ｍｇ／日の範囲である。１日当たりの具体的な用量には、０．１、０．２、０．３、０．４、０．５、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、または２５ｍｇ／日が含まれる。より具体的な１日当たりの用量には、０．１、０．２、０．３、０．４、または０．５ｍｇ／日が含まれる。
【０１６７】
具体的な実施形態では、推奨される開始投薬量は、０．１、０．２、０．３、０．４、０．５、１、２、３、４、５、１０、１５、２０、または２５ｍｇ／日であり得る。別の実施形態では、推奨される開始投薬量は、０．１、０．２、０．３、０．４、または０．５ｍｇ／日であり得る。投与量は、１、２、３、４、または５ｍｇ／日に漸増され得る。
【０１６８】
ある特定の実施形態では、治療または予防有効量は、約０．００１〜約５ｍｇ／ｋｇ／日、約０．００１〜約４ｍｇ／ｋｇ／日、約０．００１〜約３ｍｇ／ｋｇ／日、約０．００１〜約２ｍｇ／ｋｇ／日、約０．００１〜約１ｍｇ／ｋｇ／日、０．００１〜約０．０５ｍｇ／ｋｇ／日、約０．００１〜約０．０４ｍｇ／ｋｇ／日、約０．００１〜約０．０３ｍｇ／ｋｇ／日、約０．００１〜約０．０２ｍｇ／ｋｇ／日、約０．００１〜約０．０１ｍｇ／ｋｇ／日、または約０．００１〜約０．００５ｍｇ／ｋｇ／日である。
【０１６９】
投与用量は、ｍｇ／ｋｇ／日以外の単位で表すことも可能である。例えば、非経口投与用の用量は、ｍｇ／ｍ２／日と表すことができる。当業者ならば、対象の身長または体重いずれかあるいは両方が与えられれば、用量をｍｇ／ｋｇ／日からｍｇ／ｍ２／日へと変換する方法方が容易にわかるであろう（ｗｗｗ．ｆｄａ．ｇｏｖ／ｃｄｅｒ／ｃａｎｃｅｒ／ａｎｉｍａｌｆｒａｍｅ．ｈｔｍを参照されたい）。例えば、６５ｋｇのヒトでは、１ｍｇ／ｋｇ／日の用量は、およそ３８ｍｇ／ｍ２／日と等しい。
【０１７０】
ある特定の実施形態では、本明細書に提供される方法のうちの１つで治療される患者は、化合物１、化合物２、もしくは化合物３、またはその鏡像異性体、鏡像異性体の混合物、互変異性体、アイソトポログ、もしくは薬学的に許容される塩を投与する前に多発性骨髄腫療法で治療されていない。ある特定の実施形態では、本明細書に提供される方法のうちの１つで治療される患者は、化合物１、化合物２、もしくは化合物３、またはその鏡像異性体、鏡像異性体の混合物、互変異性体、アイソトポログ、もしくは薬学的に許容される塩を投与する前に多発性骨髄腫療法で治療されている。ある特定の実施形態において、本明細書に提供される方法のうちの１つで治療される患者は、抗多発性骨髄腫療法に対して薬剤耐性が発達している。いくつかのそのような実施形態では、患者は、１つ、２つ、または３つの抗多発性骨髄腫療法に対して耐性が発達し、療法は、ＣＤ３８モノクローナル抗体（ＣＤ３８  ｍＡｂ、例えば、ダラツムマブまたはイサツキシマブ）、プロテアソーム阻害剤（例えば、ボルテゾミブ、カルフィルゾミブ、イキサゾミブ、またはマリゾミブ）、及び免疫調節化合物（例えば、サリドマイド、レナリドミド、ポマリドミド、イベルドミド、またはアバドミド）から選択される。
【０１７１】
本明細書に提供される方法は、患者の年齢に関係なく患者を治療することを包含する。いくつかの実施形態では、対象は１８歳以上である。他の実施形態では、対象は、１８、２５、３５、４０、４５、５０、５５、６０、６５、または７０歳超である。他の実施形態では、対象は、年齢６５歳未満である。他の実施形態では、対象は、６５歳超である。一実施形態では、対象は、６５歳超の年齢の対象など、高齢の多発性骨髄腫対象である。一実施形態では、対象は、７５歳超の年齢の対象など、高齢の多発性骨髄腫対象である。
【０１７２】
治療される疾患の状態及び対象の状態に応じて、本明細書に提供される化合物１、化合物２、もしくは化合物３、またはその鏡像異性体、鏡像異性体の混合物、互変異性体、アイソトポログ、もしくは薬学的に許容される塩は、非経口（例えば、筋肉内、腹腔内、静脈内、ＣＩＶ、嚢内注射もしくは注入、皮下注射、または埋植）、吸入、鼻腔内、膣内、直腸、舌下、または局部（例えば、経皮もしくは局所）投与経路により投与され得る。本明細書に提供される化合物１、化合物２、もしくは化合物３、またはその鏡像異性体、鏡像異性体の混合物、互変異性体、アイソトポログ、もしくは薬学的に許容される塩は、各投与経路に適する、単独でまたは組み合わせて、好適な投薬単位で、薬学的に許容される賦形剤、担体、アジュバント、及びビヒクルとともに製剤化され得る。
【０１７３】
一実施形態では、本明細書に提供される化合物１、化合物２、もしくは化合物３、またはその鏡像異性体、鏡像異性体の混合物、互変異性体、アイソトポログ、もしくは薬学的に許容される塩は、経口投与される。別の実施形態では、本明細書に提供される化合物１、化合物２、もしくは化合物３の化合物、またはその鏡像異性体、鏡像異性体の混合物、互変異性体、アイソトポログ、もしくは薬学的に許容される塩は、非経口投与される。更に別の実施形態では、本明細書に提供される化合物１、化合物２、もしくは化合物３の化合物、またはその鏡像異性体、鏡像異性体の混合物、互変異性体、アイソトポログ、もしくは薬学的に許容される塩は、静脈内投与される。
【０１７４】
本明細書に提供される化合物１、化合物２、もしくは化合物３の化合物、またはその鏡像異性体、鏡像異性体の混合物、互変異性体、アイソトポログ、もしくは薬学的に許容される塩は、例えば、単回ボーラス注射、経口用錠剤もしくは丸剤などの単一用量として、または例えば、経時的な連続注入もしくは経時的な分割ボーラス投与など、経時的に送達することができる。本明細書に記載の化合物は、必要な場合、例えば、患者の疾患が安定するかもしくは退縮するまで、または患者の疾患が進行するか、もしくは許容できない毒性が見られるまで、反復投与され得る。疾患の安定またはその欠如は、当該分野で既知である方法、例えば、患者の症状の評価、身体検査、Ｘ線、ＣＡＴ、ＰＥＴ、もしくはＭＲＩスキャンを用いて撮影された腫瘍の可視化、及び他の一般的に受け入れられた評価様式などにより、決定される。
【０１７５】
本明細書に提供される化合物１、化合物２、もしくは化合物３、またはその鏡像異性体、鏡像異性体の混合物、互変異性体、アイソトポログ、または薬学的に許容される塩は、１日に１回（ＱＤまたはｑｄ）投与されるか、または１日に２回（ＢＩＤまたはｂｉｄ）、１日に３回（ＴＩＤまたはｔｉｄ）、及び１日に４回（ＱＩＤまたはｑｉｄ）など、日用量を複数回に分割することができる。加えて、投与は、連続的（すなわち、連続した日付で日ごとに、すなわち毎日）、断続的、例えば、サイクル（すなわち、休薬期間を数日、数週間、または数か月含む）であってもよい。本明細書で使用される場合、「毎日」という用語は、本明細書に提供される化合物１、化合物２、もしくは化合物３などの治療化合物、またはその鏡像異性体、鏡像異性体の混合物、互変異性体、アイソトポログ、もしくは薬学的に許容される塩が、例えば、ある期間にわたって、１日１回または１回超投与されることを意味するように意図される。「連続」という用語は、本明細書に提供される化合物１、化合物２、もしくは化合物３などの治療化合物、またはその鏡像異性体、鏡像異性体の混合物、互変異性体、アイソトポログ、もしくは薬学的に許容される塩が、少なくとも７日間〜５２週間の期間中断されずに毎日投与されることを意味するように意図される。「断続的」または「断続して」という用語は、本明細書で使用される場合、定期的または不定期な間隔のいずれかで中断及び開始することを意味するように意図される。例えば、本明細書に提供される化合物１、化合物２、もしくは化合物３、またはその鏡像異性体、鏡像異性体の混合物、互変異性体、アイソトポログ、もしくは薬学的に許容される塩の間欠投与は、１週間に１〜６日投与すること、サイクルで（例えば、２〜８週間連続して毎日投与した後に、最大で１週間、投与を行わない休薬期間を伴って）投与すること、または隔日で投与することである。本明細書で使用される場合、「サイクル」という用語は、本明細書に提供される化合物１、化合物２、もしくは化合物３などの治療化合物、またはその鏡像異性体、鏡像異性体の混合物、互変異性体、アイソトポログ、もしくは薬学的に許容される塩が、毎日または連続してだが、休薬期間を伴って投与されることを意味するように意図される。いくつかのそのような実施形態では、２〜６日間、１日１回投与であり、その後５〜７日間は投与なしの休薬期間である。
【０１７６】
いくつかの実施形態では、投与の頻度は、約１日単位の投与〜約月単位の投与の範囲にある。ある特定の実施形態では、投与は、１日１回、１日２回、１日３回、１日４回、１日おきに１回、週に２回、週に１回、２週に１回、３週に１回、または４週に１回である。一実施形態では、本明細書に提供される化合物１、化合物２、もしくは化合物３、またはその鏡像異性体、鏡像異性体の混合物、互変異性体、アイソトポログ、もしくは薬学的に許容される塩は、１日１回投与される。別の実施形態では、本明細書に提供される化合物１、化合物２、もしくは化合物３、またはその鏡像異性体、鏡像異性体の混合物、互変異性体、アイソトポログ、もしくは薬学的に許容される塩は、１日２回投与される。更に別の実施形態では、本明細書に提供される化合物１、化合物２、もしくは化合物３、またはその鏡像異性体、鏡像異性体の混合物、互変異性体、アイソトポログ、もしくは薬学的に許容される塩は、１日３回投与される。また別の実施形態では、本明細書に提供される化合物１、化合物２、もしくは化合物３、またはその鏡像異性体、鏡像異性体の混合物、互変異性体、アイソトポログ、もしくは薬学的に許容される塩は、１日４回投与される。
【０１７７】
一実施形態では、治療有効量の化合物１、化合物２、または化合物３は、最大２０日間の投与期間に続いて休薬期間を含む治療サイクルで投与される。一実施形態では、治療有効量の化合物１、化合物２、または化合物３は、最大１５日間の投与期間に続いて休薬期間を含む治療サイクルで投与される。一実施形態では、治療有効量の化合物１、化合物２、または化合物３は、最大１０日間の投与期間に続いて休薬期間を含む治療サイクルで投与される。一実施形態では、治療有効量の化合物１、化合物２、または化合物３は、最大７日間の投与期間に続いて休薬期間を含む治療サイクルで投与される。一実施形態では、治療有効量の化合物１、化合物２、または化合物３は、最大５日間の投与期間に続いて休薬期間を含む治療サイクルで投与される。一実施形態では、治療有効量の化合物１、化合物２、または化合物３は、最大４日間の投与期間に続いて休薬期間を含む治療サイクルで投与される。一実施形態では、治療有効量の化合物１、化合物２、または化合物３は、最大３日間の投与期間に続いて休薬期間を含む治療サイクルで投与される。
【０１７８】
一実施形態では、治療サイクルは、最大１４日間の投与期間に続いて休薬期間を含む。一実施形態では、治療サイクルは、最大１０日間の投与期間に続いて休薬期間を含む。一実施形態では、治療サイクルは、最大７日間の投与期間に続いて休薬期間を含む。一実施形態では、治療サイクルは、最大５日間の投与期間に続いて休薬期間を含む。一実施形態では、治療サイクルは、最大４日間の投与期間に続いて休薬期間を含む。一実施形態では、治療サイクルは、最大３日間の投与期間に続いて休薬期間を含む。
【０１７９】
一実施形態では、休薬期間は、約２日間〜最大約１１日間である。一実施形態では、休薬期間は、約２日間〜最大約１０日間である。一実施形態では、休薬期間は、約２日間である。一実施形態では、休薬期間は、約３日間である。一実施形態では、休薬期間は、約４日間である。一実施形態では、休薬期間は、約５日間である。一実施形態では、休薬期間は、約６日間である。別の実施形態では、休薬期間は、約７日間である。別の実施形態では、休薬期間は、約８日間である。別の実施形態では、休薬期間は、約９日間である。別の実施形態では、休薬期間は、約１０日間である。別の実施形態では、休薬期間は、約１１日間である。
【０１８０】
一実施形態では、治療サイクルは、最大１５日間の投与期間に続いて約２日間〜最大約１０日間の休薬期間を含む。一実施形態では、治療サイクルは、最大１０日間の投与期間に続いて約２日間〜最大約１０日間の休薬期間を含む。一実施形態では、治療サイクルは、最大７日間の投与期間に続いて約２日間〜最大約１０日間の休薬期間を含む。一実施形態では、治療サイクルは、最大５日間の投与期間に続いて約２日間〜最大約１０日間の休薬期間を含む。一実施形態では、治療サイクルは、最大３日間の投与期間に続いて約１０日間〜最大約１５日間の休薬期間を含む。一実施形態では、治療サイクルは、最大３日間の投与期間に続いて約３日間〜最大約１５日間の休薬期間を含む。
【０１８１】
一実施形態では、治療サイクルは、最大１５日間の投与期間に続いて７日間の休薬期間を含む。一実施形態では、治療サイクルは、最大１０日間の投与期間に続いて５日間の休薬期間を含む。一実施形態では、治療サイクルは、最大１０日間の投与期間に続いて４日間の休薬期間を含む。一実施形態では、治療サイクルは、最大１０日間の投与期間に続いて３日間の休薬期間を含む。一実施形態では、治療サイクルは、最大１０日間の投与期間に続いて２日間の休薬期間を含む。一実施形態では、治療サイクルは、最大７日間の投与期間に続いて約７日間の休薬期間を含む。一実施形態では、治療サイクルは、最大５日間の投与期間に続いて５日間の休薬期間を含む。一実施形態では、治療サイクルは、最大３日間の投与期間に続いて１１日間の休薬期間を含む。別の実施形態では、治療サイクルは、最大５日間の投与期間に続いて９日間の休薬期間を含む。別の実施形態では、治療サイクルは、最大５日間の投与期間に続いて２日間の休薬期間を含む。別の実施形態では、治療サイクルは、最大３日間の投与期間に続いて４日間の休薬期間を含む。
【０１８２】
一実施形態では、治療サイクルは、２８日サイクルの１〜５日目に、治療有効量の化合物１、化合物２、または化合物３を投与することを含む。別の実施形態では、治療サイクルは、２８日サイクルの１〜１０日目に、化合物１、化合物２、または化合物３を投与することを含む。一実施形態では、治療サイクルは、２８日サイクルの１〜２１日目に、治療有効量の化合物１、化合物２、または化合物３を投与することを含む。別の実施形態では、治療サイクルは、７日サイクルの１〜５日目に、治療有効量の化合物１、化合物２、または化合物３を投与することを含む。別の実施形態では、治療サイクルは、７日サイクルの１〜７日目に、治療有効量の化合物１、化合物２、または化合物３を投与することを含む。一実施形態では、治療サイクルは、２８日サイクルの１〜１０日目及び１５〜２４日目に（本明細書において、２０／２８投与サイクルと称される）、治療有効量の化合物１、化合物２、または化合物３を投与することを含む。一実施形態では、治療サイクルは、２８日サイクルの１〜３日目及び１５〜１８日目に、治療有効量の化合物１、化合物２、または化合物３を投与することを含む。一実施形態では、治療サイクルは、２８日サイクルの１〜７日目及び１５〜２１日目に（本明細書において、１４／２８投与サイクルと称される）、治療有効量の化合物１、化合物２、または化合物３を投与することを含む。一実施形態では、治療サイクルは、２８日サイクルの１〜５日目及び１５〜１９日目に（本明細書において、１０／２８投与サイクルと称される）、治療有効量の化合物１、化合物２、または化合物３を投与することを含む。一実施形態では、治療サイクルは、２８日サイクルの１〜３日目及び１５〜１７日目に（本明細書において、６／２８投与サイクルと称される）、治療有効量の化合物１、化合物２、または化合物３を投与することを含む。
【０１８３】
一実施形態では、治療サイクルは、２１日サイクルの１〜１４日目に、治療有効量の化合物１、化合物２、または化合物３を投与することを含む。別の実施形態では、治療サイクルは、２１日サイクルの１〜４日目及び８〜１１日目に、化合物１、化合物２、または化合物３を投与することを含む。一実施形態では、治療サイクルは、２１日サイクルの１〜５日目及び８〜１２日目に、治療有効量の化合物１、化合物２、または化合物３を投与することを含む。別の実施形態では、治療サイクルは、２１日サイクルの１〜５日目及び１１〜１５日目に、治療有効量の化合物１、化合物２、または化合物３を投与することを含む。別の実施形態では、治療サイクルは、２１日サイクルの１〜５日目及び８〜１２日目、および１５〜１９日目に、治療有効量の化合物１、化合物２、または化合物３を投与することを含む。別の実施形態では、治療サイクルは、２１日サイクルの１〜４日目、８〜１１日目、及び１５〜１８日目に、治療有効量の化合物１、化合物２、または化合物３を投与することを含む。別の実施形態では、治療サイクルは、２１日サイクルの１〜４日目、８〜１０日目、及び１５〜１７日目に、治療有効量の化合物１、化合物２、または化合物３を投与することを含む。別の実施形態では、治療サイクルは、２１日サイクルの１〜３日目及び８〜１１日目に、治療有効量の化合物１、化合物２、または化合物３を投与することを含む。別の実施形態では、治療サイクルは、２１日サイクルの１〜３日目及び１１〜１３日目に、治療有効量の化合物１、化合物２、または化合物３を投与することを含む。
【０１８４】
本明細書に記載されるいずれの治療サイクルも、少なくとも２回、３回、４回、５回、６回、７回、８回以上のサイクルを繰り返すことができる。ある特定の場合、本明細書に記載される治療サイクルは、１〜約２４回のサイクル、約２〜約１６回のサイクル、または約２〜約４回のサイクルを含む。ある特定の場合、本明細書に記載される治療サイクルは、１〜約４回のサイクルを含む。ある特定の実施形態では、サイクル１〜４は、全て２８日サイクルである。いくつかの実施形態では、治療有効量の化合物１、化合物２、または化合物３は、２８日の１〜１３サイクルの間（例えば、約１年）投与される。ある特定の場合、サイクル療法は、サイクル回数を制限せず、療法は疾患進行するまで続けられる。ある特定の場合、サイクルは、本明細書に記載の投与期間及び／または休薬期間の長さを変更することを含み得る。
【０１８５】
一実施形態では、治療サイクルは、１日１回投与される約０．１ｍｇ／日、０．２ｍｇ／日、０．３ｍｇ／日、０．４ｍｇ／日、０．５ｍｇ／日、０．６ｍｇ／日、０．７ｍｇ／日、０．８ｍｇ／日、０．９ｍｇ／日、１．０ｍｇ／日、５．０ｍｇ／日、または１０ｍｇ／日の投薬量で、化合物１、化合物２、または化合物３を投与することを含む。一実施形態では、治療サイクルは、１日１回投与される約０．１ｍｇ／日、０．２ｍｇ／日、０．３ｍｇ／日、０．４ｍｇ／日、０．５ｍｇ／日、０．６ｍｇ／日、０．７ｍｇ／日、または０．８ｍｇ／日の投薬量で、化合物１、化合物２、または化合物３を投与することを含む。いくつかのそのような実施形態では、治療サイクルは、２８日サイクルの１〜１０日目に、約０．１ｍｇ、０．２ｍｇ、０．３ｍｇ、０．４ｍｇ、または０．５ｍｇの投薬量で、１日１回、化合物１、化合物２、または化合物３を投与することを含む。いくつかのそのような実施形態では、治療サイクルは、２８日サイクルの１〜１０日目及び１５〜２４日目に、約０．１ｍｇ、０．２ｍｇ、０．３ｍｇ、０．４ｍｇ、または０．５ｍｇの投薬量で、１日１回、化合物１、化合物２、または化合物３を投与することを含む。いくつかのそのような実施形態では、治療サイクルは、２８日サイクルの１〜１０日目及び１５〜２４日目に、約０．１ｍｇの投薬量で、１日１回、化合物１、化合物２、または化合物３を投与することを含む。他の実施形態では、治療サイクルは、２８日サイクルの１〜３日目に、約０．１ｍｇ、０．２ｍｇ、０．３ｍｇ、０．４ｍｇ、または０．５ｍｇの投薬量で、１日２回、化合物１、化合物２、または化合物３を投与することを含む。他の実施形態では、治療サイクルは、２８日サイクルの１〜３日目及び１５〜１９日目に、約０．１ｍｇ、０．２ｍｇ、０．３ｍｇ、０．４ｍｇ、または０．５ｍｇの投薬量で、１日２回、化合物１、化合物２、または化合物３を投与することを含む。他の実施形態では、治療サイクルは、２８日サイクルの１〜３日目及び１５〜１７日目に、約０．１ｍｇ、０．２ｍｇ、０．３ｍｇ、０．４ｍｇ、または０．５ｍｇの投薬量で、１日２回、化合物１、化合物２、または化合物３を投与することを含む。他の実施形態では、治療サイクルは、２８日サイクルの１〜３日目及び１５〜１７日目に、約０．２ｍｇの投薬量で、１日２回、化合物１、化合物２、または化合物３を投与することを含む。そのような一実施形態では、化合物は、２８日サイクル、例えば、サイクル１の１〜３日目（朝及び夜）、１４日目（夜のみ）、１５日目及び１６日目（朝及び夜）、ならびに１７日目（朝のみ）に投与される。
【０１８６】
Ｆ．第２の活性剤との併用療法
本明細書に提供される化合物１、化合物２、もしくは化合物３、またはその鏡像異性体、鏡像異性体の混合物、互変異性体、アイソトポログ、もしくは薬学的に許容される塩は、手術、生物学的療法（例えば、チェックポイント阻害剤での免疫療法を含む）、放射線療法、化学療法、幹細胞移植、細胞療法、または多発性骨髄腫を治療、予防、または管理するために現在使用される他の非薬物に基づく療法を含むが、これらに限定されない従来の療法と組み合わされるか、またはそれとともに（例えば、その療法前、その療法中、またはその療法後に）使用することもできる。本明細書に提供される化合物と従来の療法との併用使用は、ある特定の患者に予想外に有効である固有の治療レジメンを提供し得る。理論によって限定されるものではないが、本明細書に提供される化合物１、化合物２、または化合物３が、従来の療法と同時に与えられる場合、相加または相乗作用を提供し得ると考えられる。
【０１８７】
本明細書の他の箇所に論じられるように、手術、化学療法、放射線療法、生物学的療法、及び免疫療法を含むが、これらに限定されない従来の療法に関連する有害作用または望ましくない作用を低減、治療、及び／または予防する方法が、本明細書に包含される。本明細書に提供される化合物、例えば、化合物１、化合物２、もしくは化合物３、またはその鏡像異性体、鏡像異性体の混合物、互変異性体、アイソトポログ、もしくは薬学的に許容される塩、及び他の活性成分は、従来の療法に関連する有害作用の発生前、発生中、または発生後に投与され得る。
【０１８８】
本明細書に提供される化合物１、化合物２、もしくは化合物３、またはその鏡像異性体、鏡像異性体の混合物、互変異性体、アイソトポログ、もしくは薬学的に許容される塩は、本明細書に記載の多発性骨髄腫の治療及び／または予防に有用な他の治療薬と組み合わされるか、またはそれと組み合わせて使用することもできる。
【０１８９】
一実施形態では、１つ以上の第２の薬剤と組み合わせて、及び任意選択で、放射線療法、輸血、または手術と組み合わせて、化合物１、化合物２、もしくは化合物３、またはその鏡像異性体、鏡像異性体の混合物、互変異性体、アイソトポログ、もしくは薬学的に許容される塩を患者に投与することを含む、多発性骨髄腫を治療、予防、または管理する方法が、本明細書に提供される。
【０１９０】
本明細書で使用される場合、「組み合わせて」という用語は、２つ以上の療法（例えば、１つ以上の予防薬及び／または治療薬）の使用を含む。しかしながら、「組み合わせて」という用語の使用は、疾患または障害のある患者に療法（例えば、予防薬及び／または治療薬）が投与される順序を制限しない。第１の療法（例えば、本明細書に提供される化合物、例えば、化合物１、化合物２、もしくは化合物３、またはその鏡像異性体、鏡像異性体の混合物、互変異性体、アイソトポログ、もしくは薬学的に許容される塩などの予防薬もしくは治療薬）は、対象に、第２の療法剤（例えば、予防薬または治療薬）の投与前（例えば、５分間、１５分間、３０分間、４５分間、１時間、２時間、４時間、６時間、１２時間、２４時間、４８時間、７２時間、９６時間、１週間、２週間、３週間、４週間、５週間、６週間、８週間、または１２週間前）に、それと同時に、またはその後（例えば、５分間、１５分間、３０分間、４５分間、１時間、２時間、４時間、６時間、１２時間、２４時間、４８時間、７２時間、９６時間、１週間、２週間、３週間、４週間、５週間、６週間、８週間、または１２週間後）に投与され得る。三剤療法も、本明細書において企図され、同様に四剤療法も企図される。一実施形態では、第２の療法はデキサメタゾンである。
【０１９１】
化合物１、化合物２、もしくは化合物３またはその鏡像異性体、鏡像異性体の混合物、互変異性体、アイソトポログ、もしくは薬学的に許容される塩、及び１つ以上の第２の活性剤の患者への投与は、同一または異なる投与経路により、同時または順次に行うことができる。特定の活性剤に用いられる特定の投与経路の適切性は、活性剤自体（例えば、それが、血流に入る前に分解されることなく経口投与可能であるかどうか）による。
【０１９２】
化合物１、化合物２、もしくは化合物３またはその鏡像異性体、鏡像異性体の混合物、互変異性体、アイソトポログ、もしくは薬学的に許容される塩の投与経路は、第２の療法の投与経路とは無関係である。一実施形態では、化合物１、化合物２、もしくは化合物３、またはその鏡像異性体、鏡像異性体の混合物、互変異性体、アイソトポログ、もしくは薬学的に許容される塩は、経口投与される。別の実施形態では、化合物１、化合物２、または化合物３は、静脈内投与される。したがって、これらの実施形態によると、化合物１、化合物２、もしくは化合物３、またはその鏡像異性体、鏡像異性体の混合物、互変異性体、アイソトポログ、もしくは薬学的に許容される塩は、経口または静脈内投与され、第２の療法剤は、経口、非経口、腹腔内、静脈内、動脈内、経皮、舌下、筋肉内、直腸、経口腔与、鼻腔内、リポソーム、吸入を介した、膣内、眼内、カテーテルもしくはステントによる局部送達を介した、皮下、脂肪内、関節内与、髄腔内、または徐放剤形で投与をすることができる。一実施形態では、化合物１、化合物２、もしくは化合物３、またはその鏡像異性体、鏡像異性体の混合物、互変異性体、アイソトポログ、薬学的に許容される塩、及び第２の療法は、同じ投与様式、経口、またはＩＶにより投与される。別の実施形態では、化合物１、化合物２、もしくは化合物３、またはその鏡像異性体、鏡像異性体の混合物、互変異性体、アイソトポログ、もしくは薬学的に許容される塩は、１つの投与様式によって、例えばＩＶ投与されるが、第２の薬剤（抗多発性骨髄腫剤）は別の投与様式によって、例えば経口投与される。
【０１９３】
一実施形態では、第２の活性剤は、静脈内または皮下で、１日１回または２回、約１〜約１０００ｍｇ、約５〜約５００ｍｇ、約１０〜約３５０ｍｇ、または約５０〜約２００ｍｇの量で投与される。第２の活性剤の具体的な量は、使用される具体的な薬剤、治療または管理される多発性骨髄腫の種類、疾患の重症度及び病期、ならびに本明細書に提供される化合物１、化合物２、もしくは化合物３、またはその鏡像異性体、鏡像異性体の混合物、互変異性体、アイソトポログ、もしくは薬学的に許容される塩と、患者に同時に投与されるいずれかの任意の追加の活性剤との量に依存する。
【０１９４】
１つ以上の第２の活性成分または薬剤は、本明細書に提供される方法及び組成物において、化合物１、化合物２、または化合物３と一緒に使用することができる。第２の活性剤は、巨大分子（例えば、タンパク質）、小分子（例えば、合成無機、有機金属、または有機分子）、または細胞療法（例えば、ＣＡＲ細胞）であってもよい。
【０１９５】
本明細書に記載の方法及び組成物において使用され得る第２の活性剤の例としては、メルファラン、ビンクリスチン、シクロホスファミド、エトポシド、ドキソルビシン、ベンダムスチン、オビヌツズマブ、プロテアソーム阻害剤（例えば、ボルテゾミブ、カルフィルゾミブ、イキサゾミブ、オプロゾミブ、またはマリゾミブ）、ヒストンデアセチラーゼ阻害剤（例えば、パノビノスタット、ＡＣＹ２４１）、ＢＥＴ阻害剤（例えば、ＧＳＫ５２５７６２Ａ、ＯＴＸ０１５、ＢＭＳ−９８６１５８、ＴＥＮ−０１０、ＣＰＩ−０６１０、ＩＮＣＢ５４３２９、ＢＡＹ１２３８０９７、ＦＴ−１１０１、ＡＢＢＶ−０７５、ＢＩ  ８９４９９９、ＧＳ−５８２９、ＧＳＫ１２１０１５１Ａ（Ｉ−ＢＥＴ−１５１）、ＣＰＩ−２０３、ＲＶＸ−２０８、ＸＤ４６、ＭＳ４３６、ＰＦＩ−１、ＲＶＸ２１３５、ＺＥＮ３３６５、ＸＤ１４、ＡＲＶ−７７１、ＭＺ−１、ＰＬＸ５１１７、４−［２−（シクロプロピルメトキシ）−５−（メタンスルホニル）フェニル］−２−メチルイソキノリン−１（２Ｈ）−オン、ＥＰ１１３１３、及びＥＰ１１３３６）、ＢＣＬ２阻害剤（例えば、ベネトクラクスまたはナビトクラクス）、ＭＣＬ−１阻害剤（例えば、ＡＺＤ５９９１、ＡＭＧ１７６、ＭＩＫ６６５、Ｓ６４３１５、またはＳ６３８４５）、ＬＳＤ−１阻害剤（例えば、ＯＲＹ−１００１、ＯＲＹ−２００１、ＩＮＣＢ−５９８７２、ＩＭＧ−７２８９、ＴＡＫ−４１８、ＧＳＫ−２８７９５５２、４−［２−（４−アミノ−ピペリジン−１−ｙｌ）−５−（３−フルオロ−４−メトキシ−フェニル）−１−メチル−６−オキソ−１，６−ジヒドロピリミジン−４−イル］−２−フルオロ−ベンゾニトリルまたはその塩）、コルチコステロイド（例えば、プレドニゾン）、デキサメタゾン、抗体（例えば、エロツズマブなどのＣＳ１抗体、ダラツムマブもしくはイサツキシマブなどのＣＤ３８抗体、またはＢＣＭＡ抗体もしくは抗体コンジュゲート、例えば、ＧＳＫ２８５７９１６もしくはＢＩ  ８３６９０９）、チェックポイント阻害剤（本明細書に記載されるような）、またはＣＡＲ細胞（本明細書に記載されるような）のうちの１つ以上が挙げられる。
【０１９６】
一実施形態では、本明細書に記載の方法及び組成物において、化合物１、化合物２、もしくは化合物３、またはその鏡像異性体、鏡像異性体の混合物、互変異性体、アイソトポログ、もしくは薬学的に許容される塩と一緒に使用される第２の活性剤は、デキサメタゾンである。
【０１９７】
いくつかの実施形態では、デキサメタゾンは、２１日サイクルの１日目及び８日目に４ｍｇの用量で投与される。いくつかの他の実施形態では、デキサメタゾンは、２１日サイクルの１、４、８、及び１１日目に４ｍｇの用量で投与される。いくつかの実施形態では、デキサメタゾンは、２８日サイクルの１、８、及び１５日目に４ｍｇの用量で投与される。いくつかの他の実施形態では、デキサメタゾンは、２８日サイクルの１、４、８、１１、１５、及び１８日目に４ｍｇの用量で投与される。いくつかの実施形態では、デキサメタゾンは、２８日サイクルの１、８、１５、及び２２日目に４ｍｇの用量で投与される。そのような一実施形態では、デキサメタゾンは、サイクル１の１、１０、１５、及び２２日目に４ｍｇの用量で投与される。いくつかの実施形態では、デキサメタゾンは、２８日サイクルの１、３、１５、及び１７日目に４ｍｇの用量で投与される。そのような一実施形態では、デキサメタゾンは、サイクル１の１、３、１４、及び１７日目に４ｍｇの用量で投与される。
【０１９８】
いくつかの他の実施形態では、デキサメタゾンは、２１日サイクルの１日目及び８日目に８ｍｇの用量で投与される。いくつかの他の実施形態では、デキサメタゾンは、２１日サイクルの１、４、８、及び１１日目に８ｍｇの用量で投与される。いくつかの実施形態では、デキサメタゾンは、２８日サイクルの１、８、及び１５日目に８ｍｇの用量で投与される。いくつかの他の実施形態では、デキサメタゾンは、２８日サイクルの１、４、８、１１、１５、及び１８日目に８ｍｇの用量で投与される。いくつかの実施形態では、デキサメタゾンは、２８日サイクルの１、８、１５、及び２２日目に８ｍｇの用量で投与される。そのような一実施形態では、デキサメタゾンは、サイクル１の１、１０、１５、及び２２日目に８ｍｇの用量で投与される。いくつかの実施形態では、デキサメタゾンは、２８日サイクルの１、３、１５、及び１７日目に８ｍｇの用量で投与される。そのような一実施形態では、デキサメタゾンは、サイクル１の１、３、１４、及び１７日目に８ｍｇの用量で投与される。
【０１９９】
いくつかの実施形態では、デキサメタゾンは、２１日サイクルの１日目及び８日目に１０ｍｇの用量で投与される。いくつかの他の実施形態では、デキサメタゾンは、２１日サイクルの１、４、８、及び１１日目に１０ｍｇの用量で投与される。いくつかの実施形態では、デキサメタゾンは、２８日サイクルの１、８、及び１５日目に１０ｍｇの用量で投与される。いくつかの他の実施形態では、デキサメタゾンは、２８日サイクルの１、４、８、１１、１５、及び１８日目に１０ｍｇの用量で投与される。いくつかの実施形態では、デキサメタゾンは、２８日サイクルの１、８、１５、及び２２日目１０ｍｇの用量で投与される。そのような一実施形態では、デキサメタゾンは、サイクル１の１、１０、１５、及び２２日目に１０ｍｇの用量で投与される。いくつかの実施形態では、デキサメタゾンは、２８日サイクルの１、３、１５、及び１７日目に１０ｍｇの用量で投与される。そのような一実施形態では、デキサメタゾンは、サイクル１の１、３、１４、及び１７日目に１０ｍｇの用量で投与される。
【０２００】
いくつかの実施形態では、デキサメタゾンは、２１日サイクルの１日目及び８日目に２０ｍｇの用量で投与される。いくつかの他の実施形態では、デキサメタゾンは、２１日サイクルの１、４、８、及び１１日目に２０ｍｇの用量で投与される。いくつかの実施形態では、デキサメタゾンは、２８日サイクルの１、８、及び１５日目に２０ｍｇの用量で投与される。いくつかの他の実施形態では、デキサメタゾンは、２８日サイクルの１、４、８、１１、１５、及び１８日目に２０ｍｇの用量で投与される。いくつかの実施形態では、デキサメタゾンは、２８日サイクルの１、８、１５、及び２２日目に２０ｍｇの用量で投与される。そのような一実施形態では、デキサメタゾンは、サイクル１の１、１０、１５、及び２２日目に２０ｍｇの用量で投与される。いくつかの実施形態では、デキサメタゾンは、２８日サイクルの１、３、１５、及び１７日目に２０ｍｇの用量で投与される。そのような一実施形態では、デキサメタゾンは、サイクル１の１、３、１４、及び１７日目に２０ｍｇの用量で投与される。
【０２０１】
いくつかの実施形態では、デキサメタゾンは、２１日サイクルの１日目及び８日目に４０ｍｇの用量で投与される。いくつかの他の実施形態では、デキサメタゾンは、２１日サイクルの１、４、８、及び１１日目に４０ｍｇの用量で投与される。いくつかの実施形態では、デキサメタゾンは、２８日サイクルの１、８、及び１５日目に４０ｍｇの用量で投与される。そのような一実施形態では、デキサメタゾンは、サイクル１の１、１０、１５、及び２２日目に４０ｍｇの用量で投与される。いくつかの他の実施形態では、デキサメタゾンは、２８日サイクルの１、４、８、１１、１５、及び１８日目に４０ｍｇの用量で投与される。他のそのような実施形態では、デキサメタゾンは、２８日サイクルの１、８、１５、及び２２日目に４０ｍｇの用量で投与される。他のそのような実施形態では、デキサメタゾンは、２８日サイクルの１、３、１５、及び１７日目に４０ｍｇの用量で投与される。そのような一実施形態では、デキサメタゾンは、サイクル１の１、３、１４、及び１７日目に４０ｍｇの用量で投与される。
【０２０２】
別の実施形態では、本明細書に記載の方法及び組成物において、化合物１、化合物２、もしくは化合物３、またはその鏡像異性体、鏡像異性体の混合物、互変異性体、アイソトポログ、もしくは薬学的に許容される塩と一緒に使用される第２の活性剤は、ボルテゾミブである。更に別の実施形態では、本明細書に記載の方法及び組成物において、化合物１、化合物２、もしくは化合物３、またはその鏡像異性体、鏡像異性体の混合物、互変異性体、アイソトポログ、もしくは薬学的に許容される塩と一緒に使用される第２の活性剤は、ダラツムマブである。いくつかのそのような実施形態では、本方法は、デキサメタゾンの投与を更に含む。いくつかの実施形態では、本方法は、本明細書に記載のプロテアソーム阻害剤、本明細書に記載のＣＤ３８阻害剤、及び本明細書に記載のコルチコステロイドとともに、化合物１、化合物２、もしくは化合物３、またはその鏡像異性体、鏡像異性体の混合物、互変異性体、アイソトポログ、もしくは薬学的に許容される塩を投与することを含む。
【０２０３】
別の実施形態では、本明細書に記載の方法及び組成物において、化合物１、化合物２、もしくは化合物３、またはその鏡像異性体、鏡像異性体の混合物、互変異性体、アイソトポログ、もしくは薬学的に許容される塩と一緒に使用される第２の活性剤は、パノビノスタットである。いくつかのそのような実施形態では、本方法は、デキサメタゾンの投与を更に含む。
【０２０４】
別の実施形態では、本明細書に記載の方法及び組成物において、化合物１、化合物２、もしくは化合物３、またはその鏡像異性体、鏡像異性体の混合物、互変異性体、アイソトポログ、もしくは薬学的に許容される塩と一緒に使用される第２の活性剤は、ＡＣＹ２４１である。いくつかのそのような実施形態では、本方法は、デキサメタゾンの投与を更に含む。
【０２０５】
別の実施形態では、本明細書に記載の方法及び組成物において、化合物１、化合物２、もしくは化合物３、またはその鏡像異性体、鏡像異性体の混合物、互変異性体、アイソトポログ、もしくは薬学的に許容される塩と一緒に使用される第２の活性剤は、ビンクリスチンである。いくつかのそのような実施形態では、本方法は、デキサメタゾンの投与を更に含む。
【０２０６】
別の実施形態では、本明細書に記載の方法及び組成物において、化合物１、化合物２、もしくは化合物３、またはその鏡像異性体、鏡像異性体の混合物、互変異性体、アイソトポログ、もしくは薬学的に許容される塩と一緒に使用される第２の活性剤は、シクロホスファミドである。いくつかのそのような実施形態では、本方法は、デキサメタゾンの投与を更に含む。
【０２０７】
別の実施形態では、本明細書に記載の方法及び組成物において、化合物１、化合物２、もしくは化合物３、またはその鏡像異性体、鏡像異性体の混合物、互変異性体、アイソトポログ、もしくは薬学的に許容される塩と一緒に使用される第２の活性剤は、エトポシドである。いくつかのそのような実施形態では、本方法は、デキサメタゾンの投与を更に含む。
【０２０８】
別の実施形態では、本明細書に記載の方法及び組成物において、化合物１、化合物２、もしくは化合物３、またはその鏡像異性体、鏡像異性体の混合物、互変異性体、アイソトポログ、もしくは薬学的に許容される塩と一緒に使用される第２の活性剤は、ドキソルビシンである。いくつかのそのような実施形態では、本方法は、デキサメタゾンの投与を更に含む。
【０２０９】
別の実施形態では、本明細書に記載の方法及び組成物において、化合物１、化合物２、もしくは化合物３、またはその鏡像異性体、鏡像異性体の混合物、互変異性体、アイソトポログ、もしくは薬学的に許容される塩と一緒に使用される第２の活性剤は、ベネトクラクスである。いくつかのそのような実施形態では、本方法は、デキサメタゾンの投与を更に含む。
【０２１０】
別の実施形態では、本明細書に記載の方法及び組成物において、化合物１、化合物２、もしくは化合物３、またはその鏡像異性体、鏡像異性体の混合物、互変異性体、アイソトポログ、もしくは薬学的に許容される塩と一緒に使用される第２の活性剤は、ＡＭＧ１７６である。いくつかのそのような実施形態では、本方法は、デキサメタゾンの投与を更に含む。
【０２１１】
別の実施形態では、本明細書に記載の方法及び組成物において、化合物１、化合物２、もしくは化合物３、またはその鏡像異性体、鏡像異性体の混合物、互変異性体、アイソトポログ、もしくは薬学的に許容される塩と一緒に使用される第２の活性剤は、ＭＩＫ６６５である。いくつかのそのような実施形態では、本方法は、デキサメタゾンの投与を更に含む。
【０２１２】
別の実施形態では、本明細書に記載の方法及び組成物において、化合物１、化合物２、もしくは化合物３、またはその鏡像異性体、鏡像異性体の混合物、互変異性体、アイソトポログ、もしくは薬学的に許容される塩と一緒に使用される第２の活性剤は、ＧＳＫ５２５７６２Ａである。いくつかのそのような実施形態では、本方法は、デキサメタゾンの投与を更に含む。
【０２１３】
別の実施形態では、本明細書に記載の方法及び組成物において、化合物１、化合物２、もしくは化合物３、またはその鏡像異性体、鏡像異性体の混合物、互変異性体、アイソトポログ、もしくは薬学的に許容される塩と一緒に使用される第２の活性剤は、ＯＴＸ０１５である。いくつかのそのような実施形態では、本方法は、デキサメタゾンの投与を更に含む。
【０２１４】
別の実施形態では、本明細書に記載の方法及び組成物において、化合物１、化合物２、もしくは化合物３、またはその鏡像異性体、鏡像異性体の混合物、互変異性体、アイソトポログ、もしくは薬学的に許容される塩と一緒に使用される第２の活性剤は、４−［２−（シクロプロピルメトキシ）−５−（メタンスルホニル）フェニル］−２−メチルイソキノリン−１（２Ｈ）−オンである。いくつかのそのような実施形態では、本方法は、デキサメタゾンの投与を更に含む。
【０２１５】
別の実施形態では、本明細書に記載の方法及び組成物において、化合物１、化合物２、もしくは化合物３、またはその鏡像異性体、鏡像異性体の混合物、互変異性体、アイソトポログ、もしくは薬学的に許容される塩と一緒に使用される第２の活性剤は、４−［２−（４−アミノ−ピペリジン−１−イル）−５−（３−フルオロ−４−メトキシ−フェニル）−１−メチル−６−オキソ−１，６−ジヒドロピリミジン−４−イル］−２−フルオロ−ベンゾニトリル、またはその塩（例えば、ベシル酸塩）である。いくつかのそのような実施形態では、本方法は、デキサメタゾンの投与を更に含む。
【０２１６】
ある特定の実施形態では、化合物１、化合物２、もしくは化合物３、またはその鏡像異性体、鏡像異性体の混合物、互変異性体、アイソトポログ、もしくは薬学的に許容される塩は、チェックポイント阻害剤と組み合わせて投与される。一実施形態では、１つのチェックポイント阻害剤が、本明細書に提供される方法に関連して、化合物１、またはその互変異性体、アイソトポログ、もしくは薬学的に許容される塩と組み合わせて使用される。別の実施形態では、２つのチェックポイント阻害剤が、本明細書に提供される方法に関連して、化合物１、またはその互変異性体、アイソトポログ、もしくは薬学的に許容される塩と組み合わせて使用される。更に別の実施形態では、３つ以上のチェックポイント阻害剤が、本明細書に提供される方法に関連して、化合物１、化合物２、もしくは化合物３、またはその鏡像異性体、鏡像異性体の混合物、互変異性体、アイソトポログ、もしくは薬学的に許容される塩と組み合わせて使用される。
【０２１７】
本明細書で使用される場合、「免疫チェックポイント阻害剤」または「チェックポイント阻害剤」という用語は、１つ以上のチェックポイントタンパク質を、完全または部分的に低減するか、阻害するか、それと干渉するか、または調節する分子を示す。特定の理論に限定されるものではないが、チェックポイントタンパク質は、Ｔ細胞の活性化または機能を調節する。多数のチェックポイントタンパク質が知られており、例えば、ＣＴＬＡ−４及びそのリガンドであるＣＤ８０及びＣＤ８６；ならびにＰＤ−１及びそのリガンドであるＰＤ−Ｌ１及びＰＤ−Ｌ２などがある（Ｐａｒｄｏｌｌ，Ｎａｔｕｒｅ  Ｒｅｖｉｅｗｓ  Ｃａｎｃｅｒ，２０１２，１２，２５２−２６４）。これらのタンパク質は、Ｔ細胞応答の同時刺激または阻害的相互作用の原因であるように思われる。免疫チェックポイントタンパク質は、自己寛容性、ならびに生理的免疫応答の期間及び振幅を調節及び維持しているように思われる。免疫チェックポイント阻害剤は、抗体を含むか、または抗体に由来する。
【０２１８】
一実施形態では、チェックポイント阻害剤は、ＣＴＬＡ−４阻害剤である。一実施形態において、ＣＴＬＡ−４阻害剤は、抗ＣＴＬＡ−４抗体である。抗ＣＴＬＡ−４抗体の例としては、米国特許第５，８１１，０９７号、同第５，８１１，０９７号、同第５，８５５，８８７号、同第６，０５１，２２７号、同第６，２０７，１５７号、同第６，６８２，７３６号、同第６，９８４，７２０号、及び同第７，６０５，２３８号に記載されるものが挙げられるが、これらに限定されず、それらは全て、その全体が本明細書に組み込まれる。一実施形態では、抗ＣＴＬＡ−４抗体は、トレメリムマブ（チシリムマブまたはＣＰ−６７５、２０６としても知られる）である。別の実施形態では、抗ＣＴＬＡ−４抗体は、イピリムマブ（ＭＤＸ−０１０またはＭＤＸ−１０１としても知られる）である。イピリムマブは、ＣＴＬＡ−４に結合する完全ヒトモノクローナルＩｇＧ抗体である。イピリムマブは、Ｙｅｒｖｏｙ（商標）の商品名で販売されている。
【０２１９】
一実施形態では、チェックポイント阻害剤は、ＰＤ−１／ＰＤ−Ｌ１阻害剤である。ＰＤ−ｌ／ＰＤ−Ｌ１阻害剤の例としては、米国特許第７，４８８，８０２号、同第７，９４３，７４３号、同第８，００８，４４９号、同第８，１６８，７５７号、同第８，２１７，１４９号、ならびにＰＣＴ特許出願公開第ＷＯ２００３０４２４０２号、同第ＷＯ２００８１５６７１２号、同第ＷＯ２０１００８９４１１号、同第ＷＯ２０１００３６９５９号、同第ＷＯ２０１１０６６３４２号、同第ＷＯ２０１１１５９８７７号、同第ＷＯ２０１１０８２４００号、及び同第ＷＯ２０１１１６１６９９号に記載のものが挙げられるが、これらに限定されず、それらは全て、その全体が本明細書に組み込まれる。
【０２２０】
一実施形態では、チェックポイント阻害剤は、ＰＤ−１阻害剤である。一実施形態では、ＰＤ−１阻害剤は、抗ＰＤ−１抗体である。一実施形態では、抗ＰＤ−１抗体は、ＢＧＢ−Ａ３１７、ニボルマブ（ＯＮＯ−４５３８、ＢＭＳ−９３６５５８、またはＭＤＸ１１０６としても知られる）、またはペムブロリズマブ（ＭＫ−３４７５、ＳＣＨ  ９００４７５、またはランブロリズマブとしても知られる）である。一実施形態では、抗ＰＤ−１抗体は、ニボルマブである。ニボルマブは、ヒトＩｇＧ４抗ＰＤ−１モノクローナル抗体であり、Ｏｐｄｉｖｏ（商標）の商品名で販売されている。別の実施形態では、抗ＰＤ−１抗体は、ペムブロリズマブである。ペムブロリズマブは、ヒト化モノクローナルＩｇＧ４抗体であり、Ｋｅｙｔｒｕｄａ（商標）の商品名で販売されている。更に別の実施形態では、抗ＰＤ−１抗体は、ＣＴ−０１１というヒト化抗体である。ＣＴ−０１１は、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）の再発の治療において、単独投与では、奏効を示すことに失敗した。更に別の実施形態では、抗ＰＤ−１抗体は、ＡＭＰ−２２４という融合タンパク質である。別の実施形態では、ＰＤ−１抗体は、ＢＧＢ−Ａ３１７である。ＢＧＢ−Ａ３１７は、Ｆｃガンマ受容体Ｉに結合する能力が具体的に操作されており、高い親和性及び優れた標的特異性でＰＤ−１との固有の結合シグネチャを有するモノクローナル抗体である。
【０２２１】
一実施形態では、チェックポイント阻害剤は、ＰＤ−Ｌ１阻害剤である。一実施形態では、ＰＤ−Ｌ１阻害剤は、抗ＰＤ−Ｌ１抗体である。一実施形態では、抗ＰＤ−Ｌ１抗体は、ＭＥＤＩ４７３６（デュルバルマブ）である。別の実施形態では、抗ＰＤ−Ｌ１抗体は、ＢＭＳ−９３６５５９（ＭＤＸ−１１０５−０１としても知られる）である。更に別の実施形態では、ＰＤ−Ｌ１阻害剤は、アテゾリズマブ（ＭＰＤＬ３２８０Ａ、及びＴｅｃｅｎｔｒｉｑ（登録商標）としても知られる）である。
【０２２２】
一実施形態では、チェックポイント阻害剤は、ＰＤ−Ｌ２阻害剤である。一実施形態では、ＰＤ−Ｌ２阻害剤は、抗ＰＤ−Ｌ２抗体である。一実施形態では、抗ＰＤ−Ｌ２抗体は、ｒＨＩｇＭ１２Ｂ７Ａである。
【０２２３】
一実施形態では、チェックポイント阻害剤は、リンパ球活性化遺伝子３（ＬＡＧ−３）阻害剤である。一実施形態では、ＬＡＧ−３阻害剤は、ＩＭＰ３２１という可溶性Ｉｇ融合タンパク質である（Ｂｒｉｇｎｏｎｅ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，２００７，１７９，４２０２−４２１１）。別の実施形態では、ＬＡＧ−３阻害剤は、ＢＭＳ−９８６０１６である。
【０２２４】
一実施形態では、チェックポイント阻害剤は、Ｂ７阻害剤である。一実施形態では、Ｂ７阻害剤は、Ｂ７−Ｈ３阻害剤またはＢ７−Ｈ４阻害剤である。一実施形態では、Ｂ７−Ｈ３阻害剤は、ＭＧＡ２７１という抗Ｂ７−Ｈ３抗体である（Ｌｏｏ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｌｉｎ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．，２０１２，３８３４）。
【０２２５】
一実施形態では、チェックポイント阻害剤は、ＴＩＭ３（Ｔ細胞免疫グロブリンドメイン及びムチンドメイン３）阻害剤である（Ｆｏｕｒｃａｄｅ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．，２０１０，２０７，２１７５−８６、Ｓａｋｕｉｓｈｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．，２０１０，２０７，２１８７−９４）。
【０２２６】
一実施形態では、チェックポイント阻害剤は、ＯＸ４０（ＣＤ１３４）アゴニストである。一実施形態では、チェックポイント阻害剤は、抗ＯＸ４０抗体である。一実施形態では、抗ＯＸ４０抗体は、抗ＯＸ−４０である。別の実施形態では、抗ＯＸ４０抗体は、ＭＥＤＩ６４６９である。
【０２２７】
一実施形態では、チェックポイント阻害剤は、ＧＩＴＲアゴニストである。一実施形態では、チェックポイント阻害剤は、抗ＧＩＴＲ抗体である。一実施形態では、抗ＧＩＴＲ抗体は、ＴＲＸ５１８である。
【０２２８】
一実施形態では、チェックポイント阻害剤は、ＣＤ１３７アゴニストである。一実施形態では、チェックポイント阻害剤は、抗ＣＤ１３７抗体である。一実施形態では、抗ＣＤ１３７抗体は、ウレルマブである。別の実施形態では、抗ＣＤ１３７抗体は、ＰＦ−０５０８２５６６である。
【０２２９】
一実施形態では、チェックポイント阻害剤は、ＣＤ４０アゴニストである。一実施形態では、チェックポイント阻害剤は、抗ＣＤ４０抗体である。一実施形態では、抗ＣＤ４０抗体は、ＣＦ−８７０，８９３である。
【０２３０】
一実施形態では、チェックポイント阻害剤は、組換えヒトインターロイキン−１５（ｒｈＩＬ−１５）である。
【０２３１】
一実施形態では、チェックポイント阻害剤は、ＩＤＯ阻害剤である。一実施形態では、ＩＤＯ阻害剤は、ＩＮＣＢ０２４３６０である。別の実施形態では、ＩＤＯ阻害剤は、インドキシモドである。
【０２３２】
ある特定の実施形態では、本明細書に提供される併用療法は、本明細書に記載されるチェックポイント阻害剤のうちの２つ以上含む（同じまたは異なるクラスのチェックポイント阻害剤を含む）。更に、本明細書に提供される併用療法は、本明細書に記載される疾患の治療に適切であり当該分野で理解される場合は、本明細書に記載される第２の活性剤と組み合わせて使用することができる。
【０２３３】
ある特定の実施形態では、化合物１、化合物２、または化合物３は、それらの表面（例えば、修飾された免疫細胞）上の１つ以上のキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）を発現する１つ以上の免疫細胞と組み合わせて使用することができる。一般に、ＣＡＲは、第１のタンパク質（例えば、抗原結合タンパク質）由来の細胞外ドメイン、膜貫通ドメイン、及び細胞内シグナル伝達ドメインを含む。ある特定の実施形態では、いったん細胞外ドメインが腫瘍関連抗原（ＴＡＡ）または腫瘍特異的抗原（ＴＳＡ）などの標的タンパク質に結合すると、細胞内シグナル伝達ドメインを介してシグナルが生成され、これにより免疫細胞が活性化されて、例えば、標的タンパク質を発現する細胞を標的とし死滅させる。
【０２３４】
細胞外ドメイン：ＣＡＲの細胞外ドメインは、関心対象の抗原に結合する。ある特定の実施形態では、ＣＡＲの細胞外ドメインは、この抗原に結合する受容体、または受容体の一部分を含む。ある特定の実施形態では、細胞外ドメインは、抗体またはその抗原結合部分を含むか、抗体またはその抗原結合部分である。具体的な実施形態では、細胞外ドメインは、単鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）ドメインを含むか、または単鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）ドメインである。単鎖Ｆｖドメインは、例えば、柔軟なリンカーでＶＨに連結されたＶＬを含み得、これらのＶＬ及びＶＨは、この抗原に結合する抗体由来である。
【０２３５】
ある特定の実施形態では、本明細書に記載されるポリペプチドの細胞外ドメインにより認識される抗原は、腫瘍関連抗原（ＴＡＡ）または腫瘍特異的抗原（ＴＳＡ）である。様々な具体的な実施形態では、腫瘍関連抗原または腫瘍特異的抗原は、Ｈｅｒ２、前立腺幹細胞抗原（ＰＳＣＡ）、アルファ−フェトタンパク質（ＡＦＰ）、がん胎児性抗原（ＣＥＡ）、がん抗原−１２５（ＣＡ−１２５）、ＣＡ１９−９、カルレチニン、ＭＵＣ−１、Ｂ細胞成熟抗原（ＢＣＭＡ）、上皮膜タンパク質（ＥＭＡ）、上皮腫瘍抗原（ＥＴＡ）、チロシナーゼ、メラノーマ−２４関連抗原（ＭＡＧＥ）、ＣＤ１９、ＣＤ２２、ＣＤ２７、ＣＤ３０、ＣＤ３４、ＣＤ４５、ＣＤ７０、ＣＤ９９、ＣＤ１１７、ＥＧＦＲｖＩＩＩ（上皮成長因子変異体ＩＩＩ）、メソテリン、ＰＡＰ（前立腺酸性ホスファターゼ）、プロステイン、ＴＡＲＰ（Ｔ細胞受容体ガンマ代替リーディングフレームタンパク質）、Ｔｒｐ−ｐ８、ＳＴＥＡＰＩ（前立腺の６回膜貫通上皮抗原１）、クロモグラニン、サイトケラチン、デスミン、グリア線維性酸性タンパク質（ＧＦＡＰ）、総嚢胞性疾患液体タンパク質（ＧＣＤＦＰ−１５）、ＨＭＢ−４５抗原、タンパク質メラン−Ａ（Ｔリンパ球によって認識されるメラノーマ抗原；ＭＡＲＴ−Ｉ）、ｍｙｏ−Ｄ１、筋特異的アクチン（ＭＳＡ）、ニューロフィラメント、ニューロン特異的エノラーゼ（ＮＳＥ）、胎盤アルカリホスファターゼ、シナプトフィシス、チログロブリン、甲状腺転写因子−１、二量体形態のピルビン酸キナーゼアイソエンザイムＭ２型（腫瘍Ｍ２−ＰＫ）、異常なｒａｓタンパク質、または異常なｐ５３タンパク質であるが、これらに限定されない。ある特定の他の実施形態では、ＣＡＲの細胞外ドメインにより認識されるＴＡＡまたはＴＳＡは、インテグリンαｖβ３（ＣＤ６１）、ガレクチン、またはＲａｌ−Ｂである。
【０２３６】
ある特定の実施形態では、ＣＡＲの細胞外ドメインにより認識されるＴＡＡまたはＴＳＡは、がん／精巣（ＣＴ）抗原、例えば、ＢＡＧＥ、ＣＡＧＥ、ＣＴＡＧＥ、ＦＡＴＥ、ＧＡＧＥ、ＨＣＡ６６１、ＨＯＭ−ＴＥＳ−８５、ＭＡＧＥＡ、ＭＡＧＥＢ、ＭＡＧＥＣ、ＮＡ８８、ＮＹ−ＥＳ０−１、ＮＹ−ＳＡＲ−３５、ＯＹ−ＴＥＳ−１、ＳＰＡＮＸＢＩ、ＳＰＡ１７、ＳＳＸ、ＳＹＣＰＩ、またはＴＰＴＥである。
【０２３７】
ある特定の他の実施形態では、ＣＡＲの細胞外ドメインにより認識されるＴＡＡまたはＴＳＡは、炭水化物またはガングリオシド、例えば、ｆｕｃ−ＧＭＩ、ＧＭ２（がん胎児性抗原−免疫原性−１；ＯＦＡ−Ｉ−１）；ＧＤ２（ＯＦＡ−Ｉ−２）、ＧＭ３、ＧＤ３などである。
【０２３８】
ある特定の他の実施形態では、ＣＡＲの細胞外ドメインにより認識されるＴＡＡまたはＴＳＡは、アルファ−アクチン−４、Ｂａｇｅ−ｌ、ＢＣＲ−ＡＢＬ、Ｂｃｒ−Ａｂｌ融合タンパク質、ベータ−カテニン、ＣＡ１２５、ＣＡ１５−３（ＣＡ２７．２９＼ＢＣＡＡ）、ＣＡ１９５、ＣＡ２４２、ＣＡ−５０、ＣＡＭ４３、Ｃａｓｐ−８、ｃｄｃ２７、ｃｄｋ４、ｃｄｋｎ２ａ、ＣＥＡ、ｃｏａ−ｌ、ｄｅｋ−ｃａｎ融合タンパク質、ＥＢＮＡ、ＥＦ２、エプスタイン・バーウイルス抗原、ＥＴＶ６  ＡＭＬ１融合タンパク質、ＨＬＡ−Ａ２、ＨＬＡ−Ａｌｌ、ｈｓｐ７０−２、ＫＩＡＡ０２０５、Ｍａｒｔ２、Ｍｕｍ−１、２、及び３、ネオ−ＰＡＰ、ミオシンクラスＩ、ＯＳ−９、ｐｍｌ−ＲＡＲα融合タンパク質、ＰＴＰＲＫ、Ｋ−ｒａｓ、Ｎ−ｒａｓ、トリオースリン酸イソメラーゼ、Ｇａｇｅ３、４、５、６、７、ＧｎＴＶ、Ｈｅｒｖ−Ｋ−ｍｅｌ、Ｌａｇｅ−１、ＮＡ−８８、ＮＹ−Ｅｓｏ−１／Ｌａｇｅ−２、ＳＰ１７、ＳＳＸ  ２、ＴＲＰ２−Ｉｎｔ２、ｇｐ１００（Ｐｍｅｌ１７）、チロシナーゼ、ＴＲＰ−１、ＴＲＰ−２、ＭＡＧＥ−ｌ、ＭＡＧＥ−３、ＲＡＧＥ、ＧＡＧＥ−ｌ、ＧＡＧＥ−２、ｐ１５（５８）、ＲＡＧＥ、ＳＣＰ−１、Ｈｏｍ／Ｍｅｌ−４０、ＰＲＡＭＥ、ｐ５３、ＨＲａｓ、ＨＥＲ−２／ｎｅｕ、Ｅ２Ａ−ＰＲＬ、Ｈ４−ＲＥＴ、ＩＧＨ−ＩＧＫ、ＭＹＬ−ＲＡＲ、ヒトパピローマウイルス（ＨＰＶ）抗原Ｅ６及びＥ７、ＴＳＰ−１８０、ＭＡＧＥ−４、ＭＡＧＥ−５、ＭＡＧＥ−６、ｐ１８５ｅｒｂＢ２、ｐ１８０ｅｒｂＢ−３、ｃ−ｍｅｔ、ｎｍ−２３Ｈ１、ＰＳＡ、ＴＡＧ−７２−４、ＣＡ１９−９、ＣＡ７２−４、ＣＡＭ１７．１、ＮｕＭａ、Ｋ−ｒａｓ、１３−カテニン、Ｍｕｍ−１、ｐ１６、ＴＡＧＥ、ＰＳＭＡ、ＣＴ７、テロメラーゼ、４３−９Ｆ、５Ｔ４、７９１Ｔｇｐ７２、１３ＨＣＧ、ＢＣＡ２２５、ＢＴＡＡ、ＣＤ６８＼ＫＰ１、Ｃ０−０２９、ＦＧＦ−５、Ｇ２５０、Ｇａ７３３（ＥｐＣＡＭ）、ＨＴｇｐ−１７５、Ｍ３４４、ＭＡ−５０、ＭＧ７−Ａｇ、ＭＯＶ１８、ＮＢ／７０Ｋ、ＮＹ−Ｃ０−１、ＲＣＡＳ１、ＳＤＣＣＡＧ１６、ＴＡ−９０、ＴＡＡＬ６、ＴＡＧ７２、ＴＬＰ、またはＴＰＳである。
【０２３９】
様々な具体的実施形態では、腫瘍関連抗原または腫瘍特異的抗原は、Ｓ．Ａｎｇｕｉｌｌｅ  ｅｔ  ａｌ，Ｌｅｕｋｅｍｉａ（２０１２），２６，２１８６−２１９６に記載される、ＡＭＬ関連腫瘍抗原である。
【０２４０】
他の腫瘍関連抗原及び腫瘍特異的抗原は、当業者に既知である。
【０２４１】
ＴＳＡ及びＴＡＡに結合し、キメラ抗原受容体を構築するのに有用な受容体、抗体、及びｓｃＦｖは、当該分野で既知であり、それらをコードするヌクレオチド配列についても同様である。
【０２４２】
ある特定の具体的実施形態では、キメラ抗原受容体の細胞外ドメインにより認識される抗原は、一般的にはＴＳＡまたはＴＡＡであると見なされないが、そうであっても腫瘍細胞または腫瘍により引き起こされる傷害に関連する抗原である。ある特定の実施形態では、例えば、抗原は、例えば、成長因子、サイトカインもしくはインターロイキン、例えば、血管新生または血管形成に関連した成長因子、サイトカイン、もしくはインターロイキンである。そのような成長因子、サイトカイン、またはインターロイキンとしては、例えば、血管内皮成長因子（ＶＥＧＦ）、塩基性線維芽細胞成長因子（ｂＦＧＦ）、血小板由来成長因子（ＰＤＧＦ）、肝細胞成長因子（ＨＧＦ）、インスリン様成長因子（ＩＧＦ）、またはインターロイキン−８（ＩＬ−８）を挙げることができる。腫瘍は、その腫瘍に局所的な低酸素環境も作り出すことができる。そのため、他の具体的な実施形態では、抗原は、低酸素関連因子、例えば、ＨＩＦ−１α、ＨＩＦ−１β、ＨＩＦ−２α、ＨＩＦ−２β、ＨＩＦ−３α、またはＨＩＦ−３βである。腫瘍は、正常な組織への局所的損傷の原因ともなり、損傷関連分子パターン分子（ＤＡＭＰｓ；アラーミンとしても知られる）として知られる分子の放出の原因となる。したがって、ある特定の他の具体的な実施形態では、抗原は、ＤＡＭＰ、例えば、熱ショックタンパク質、クロマチン関連タンパク質高移動度群ボックス１（ＨＭＧＢ１）、Ｓ１００Ａ８（ＭＲＰ８、カルグラニュリンＡ）、Ｓ１００Ａ９（ＭＲＰ１４、カルグラニュリンＢ）、血清アミロイドＡ（ＳＡＡ）であるか、あるいは、デオキシリボ核酸、アデノシン三リン酸、尿酸、またはヘパリン硫酸あり得る。
【０２４３】
膜貫通ドメイン：ある特定の実施形態では、ＣＡＲの細胞外ドメインは、リンカー、スペーサー、またはヒンジポリペプチド配列、例えば、ＣＤ２８由来の配列またはＣＴＬＡ４由来の配列により、ポリペプチドの膜貫通ドメインに接続されている。膜貫通ドメインは、任意の膜貫通タンパク質の膜貫通ドメインから得るか、またはそれに由来し得、そのような膜貫通ドメインの全てまたは一部を含むことができる。具体的な実施形態では、膜貫通ドメインは、例えば、ＣＤ８、ＣＤ１６、サイトカイン受容体、及びインターロイキン受容体、または成長因子受容体などから得るか、またはそれに由来することができる。
【０２４４】
細胞内シグナル伝達ドメイン：ある実施形態では、ＣＡＲの細胞内ドメインは、Ｔ細胞の表面上で発現され、そのＴ細胞の活性化及び／または増殖を引き起こすタンパク質の細胞内ドメインまたはモチーフであるか、あるいはそれらを含む。そのようなドメインまたはモチーフは、ＣＡＲの細胞外部分への抗原の結合に応答してＴリンパ球の活性化に必要な一次抗原結合シグナルを伝送することができる。典型的には、このドメインまたはモチーフは、ＩＴＡＭ（免疫受容体チロシン活性化モチーフ）を含むか、またはＩＴＡＭである。ＣＡＲに適したＩＴＡＭ含有ポリペプチドとしては、例えば、ゼータＣＤ３鎖（ＣＤ３ζ）またはそのＩＴＡＭ含有部分が挙げられる。具体的な実施形態では、細胞内ドメインは、ＣＤ３ζ細胞内シグナル伝達ドメインである。他の具体的な実施形態では、細胞内ドメインは、リンパ球受容体鎖、ＴＣＲ／ＣＤ３複合体タンパク質、Ｆｅ受容体サブユニット、またはＩＬ−２受容体サブユニットに由来する。ある特定の実施形態では、ＣＡＲは更に、１つ以上の同時刺激ドメインまたはモチーフを、例えば、ポリペプチドの細胞内ドメインの一部として、含む。１つ以上の同時刺激ドメインまたはモチーフは、同時刺激ＣＤ２７ポリペプチド配列、同時刺激ＣＤ２８ポリペプチド配列、同時刺激ＯＸ４０（ＣＤ１３４）ポリペプチド配列、同時刺激４−１ＢＢ（ＣＤ１３７）ポリペプチド配列、または同時刺激誘導性Ｔ細胞同時刺激（ＩＣＯＳ）ポリペプチド配列、または他の同時刺激ドメインもしくはモチーフのうちの１つ以上、あるいはそれらの任意の組み合わせであり得るか、またはそれらを含むことができる。
【０２４５】
ＣＡＲは、Ｔ細胞生存モチーフも含み得る。Ｔ細胞生存モチーフは、抗原による刺激後にＴリンパ球の生存を促進する任意のポリペプチド配列またはモチーフであり得る。ある特定の実施形態では、Ｔ細胞生存モチーフは、ＣＤ３、ＣＤ２８、ＩＬ−７受容体（ＩＬ−７Ｒ）の細胞内シグナル伝達ドメイン、ＩＬ−１２受容体の細胞内シグナル伝達ドメイン、ＩＬ−１５受容体の細胞内シグナル伝達ドメイン、ＩＬ−２１受容体の細胞内シグナル伝達ドメイン、もしくはトランスフォーミング成長因子β（ＴＧＦβ）受容体の細胞内シグナル伝達ドメインであるか、またはそれらに由来する。
【０２４６】
ＣＡＲを発現する修飾免疫細胞は、例えば、Ｔリンパ球（Ｔ細胞、例えば、ＣＤ４＋Ｔ細胞またはＣＤ８＋Ｔ細胞）、細胞傷害性リンパ球（ＣＴＬ）、または天然キラー（ＮＫ）細胞であり得る。本明細書に提供される組成物及び方法で使用されるＴリンパ球は、ナイーブＴリンパ球またはＭＨＣ制限されたＴリンパ球であり得る。ある特定の実施形態では、Ｔリンパ球は、腫瘍浸潤性リンパ球（ＴＩＬ）である。ある特定の実施形態では、Ｔリンパ球は、腫瘍生検から単離されたものであるか、または腫瘍生検から単離されたＴリンパ球から拡張されたものである。ある特定の他の実施形態では、Ｔ細胞は、末梢血、臍帯血、またはリンパ液から単離されたものであるか、または末梢血、臍帯血、もしくはリンパ液から単離されたＴリンパ球から拡張されるものである。ＣＡＲを発現する修飾免疫細胞を生成させるために使用される免疫細胞は、当該分野で受け入れられた定法、例えば、血液収集、続いてアフェレーシス、及び任意選択で抗体を介した細胞単離または選別を使用して、単離することができる。
【０２４７】
修飾免疫細胞は、好ましくは、その修飾免疫細胞が投与される個体にとって自家性である。ある特定の他の実施形態では、修飾免疫細胞は、その修飾免疫細胞が投与される個体にとって、同種である。同種Ｔリンパ球またはＮＫ細胞が修飾されたＴリンパ球を調製するために使用される場合、個体における移植片対宿主病（ＧＶＨＤ）の可能性を低減するであろうＴリンパ球またはＮＫ細胞を選択することが好ましい。例えば、ある特定の実施形態では、ウイルス特異的Ｔリンパ球は、修飾されたＴリンパ球を調製するために選択され、そのようなリンパ球は、任意のレシピエント抗原に結合する著しく低減された天然能力を有することが予想され、それ故に、それらによって活性化されるであろう。ある特定の実施形態では、同種Ｔリンパ球のレシピエント媒介性拒絶は、１つ以上の免疫抑制剤、例えば、シクロスポリン、タクロリムス、シロリムス、シクロホスファミドなどの宿主への共投与により低減され得る。
【０２４８】
Ｔリンパ球、例えば、未修飾Ｔリンパ球、またはＣＤ３及びＣＤ２８を発現するＴリンパ球、またはＣＤ３ζシグナル伝達ドメイン及びＣＤ２８同時刺激ドメインを含むポリペプチドを含むＴリンパ球は、ＣＤ３及びＣＤ２８に対する抗体、例えば、ビーズに結合した抗体を使用して拡張され得、例えば、米国特許第５，９４８，８９３号、同第６，５３４，０５５号、同第６，３５２，６９４号、同第６，６９２，９６４号、同第６，８８７，４６６号、及び同第６，９０５，６８１号を参照されたい。
【０２４９】
修飾免疫細胞、例えば、修飾Ｔリンパ球は、所望される場合、修飾免疫細胞の実質的に全ての死滅を可能にする「自殺遺伝子」または「安全スイッチ」を任意選択で含むことができる。例えば、修飾Ｔリンパ球は、ある特定の実施形態では、ガンシクロビルと接触した時に、修飾Ｔリンパ球の死の原因となる、ＨＳＶチミジンキナーゼ遺伝子（ＨＳＶ−ＴＫ）を含み得る。別の実施形態では、修飾Ｔリンパ球は、誘導性カスパーゼ、例えば、誘導性カスパーゼ９（ｉｃａｓｐａｓｅ９）、例えば、カスパーゼ９と特定の低分子医薬を使用した二量体化を可能にするヒトＦＫ５０６結合タンパク質との融合タンパク質を含む。Ｓｔｒａａｔｈｏｆ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｌｏｏｄ  １  ０５（１１）：４２４７−４２５４（２００５）を参照されたい。
【０２５０】
ある特定の実施形態では、本明細書に提供される化合物１、化合物２、または化合物３は、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）Ｔ細胞と組み合わせて、様々な種類または段階の多発性骨髄腫を有する患者に投与される。ある特定の実施形態では、併用におけるＣＡＲ  Ｔ細胞は、Ｂ細胞成熟抗原（ＢＣＭＡ）を標的とし、より具体的な実施形態で、ＣＡＲ  Ｔ細胞は、ｂｂ２１２１またはｂｂ２１２１７である。いくつかの実施形態では、ＣＡＲ  Ｔ細胞は、ＪＣＡＲＨ１２５である。
【０２５１】
Ｇ．医薬組成物
本明細書に提供される医薬組成物は、治療有効量の１つ以上の本明細書に提供される化合物のうちの１つ以上と、任意選択で薬学的に許容される担体、希釈剤、または賦形剤とを含む。
【０２５２】
本化合物は、好適な薬学的調製物、例えば、経口投与用の溶液、懸濁液、錠剤、分散錠剤、丸剤、カプセル、粉末、徐放性製剤、もしくはエリキシル剤、または眼投与もしくは非経口投与用の滅菌溶液もしくは懸濁液、ならびに経皮パッチ調製物及び乾燥粉末吸入物に製剤化され得る。典型的には、上述の化合物は、当該技術分野で既知の技法及び手順を使用して医薬組成物に製剤化される（例えば、Ａｎｓｅｌ  Ｉｎｔｒｏｄｕｃｔｉｏｎ  ｔｏ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｄｏｓａｇｅ  Ｆｏｒｍｓ，Ｓｅｖｅｎｔｈ  Ｅｄｉｔｉｏｎ  １９９９を参照されたい）。
【０２５３】
組成物において、有効な濃度の１つ以上の化合物または薬学的に許容される塩は、好適な薬学的担体またはビヒクルと混合される（複数可）。ある特定の実施形態では、組成物中の化合物の濃度は、投与時に、多発性骨髄腫の症状及び／または進行のうちの１つ以上を治療、予防、または寛解させる量の送達に有効である。
【０２５４】
典型的には、組成物は、単回投薬量の投与のために製剤化される。組成物を製剤化するために、化合物の重量画分は、治療された状態が軽減または寛解されるような有効な濃度で選択されたビヒクル中で溶解、懸濁、分散、またはさもなければ混合される。本明細書に提供される化合物の投与に好適な薬学的担体またはビヒクルには、特定の投与様式に好適であることが当業者に既知の任意のそのような担体が含まれる。
【０２５５】
加えて、化合物は、組成物中の唯一の薬学的活性成分として製剤化され得るか、または他の活性成分と組み合わせられ得る。腫瘍標的リポソームなどの組織標的リポソームを含むリポソーム懸濁液は、薬学的に許容される担体としても好適であり得る。これらは、当業者に既知の方法により調製され得る。例えば、リポソーム製剤は、当該技術分野で知られるように調製され得る。簡潔には、多重膜小胞（ＭＬＶ）などのリポソームは、卵ホスファチジルコリンと脳ホスファチジルセリン（７：３のモル比）をフラスコの内側で乾燥させることによって形成され得る。二価の陽イオンを欠くリン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）中の本明細書に提供される化合物の溶液を添加し、脂質フィルムが分散するまでフラスコを振盪する。得られた小胞を洗浄して、カプセル化されていない化合物を除去し、遠心分離によってペレット化し、その後、ＰＢＳ中に再懸濁する。
【０２５６】
活性化合物は、望ましくない副作用の不在下で治療される患者に治療的に有用な作用を与えるのに十分な量で薬学的に許容される担体中に含まれる。治療上有効な濃度は、本明細書に記載のインビトロ及びインビボ系で化合物を試験することによって実験的に決定され、その後、それからヒトに対する投薬量が推定され得る。
【０２５７】
医薬組成物中の活性化合物の濃度は、活性化合物の吸収、組織分布、不活性化、代謝及び排泄速度、化合物の物理化学的特性、投薬スケジュール、及び投与される量、ならびに当業者に既知の他の因子に依存する。例えば、固形腫瘍及び血液由来腫瘍を含むがんの症状のうちの１つ以上を寛解するのに十分である量が送達される。
【０２５８】
非経口、皮内、皮下、または局部適用に使用される溶液または懸濁液は、以下の構成成分のうちのいずれかを含み得る：注射用蒸留水、生理食塩水、不揮発性油、ポリエチレングリコール、グリセリン、プロピレングリコール、ジメチルアセトアミド、または他の合成溶媒などの滅菌希釈剤、ベンジルアルコール及びメチルパラベンなどの抗微生物剤、アスコルビン酸及び重亜硫酸ナトリウムなどの抗酸化剤、エチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ）などのキレート剤、酢酸塩、クエン酸塩、及びリン酸塩などの緩衝液、ならびに塩化ナトリウムまたはデキストロースなどの等張性調節のための薬剤。非経口調製物は、アンプル、ペン、使い捨てシリンジ、またはガラス、プラスチック、もしくは他の好適な材料から作製された単一もしくは複数用量バイアルに封入され得る。
【０２５９】
化合物が不十分な溶解度を呈する場合、化合物を可溶化するための方法が使用され得る。かかる方法は、当業者に既知であり、ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）等の共溶媒の使用、ＴＷＥＥＮ（登録商標）等の界面活性剤の使用、または水性重炭酸ナトリウム中での溶解が挙げられるが、これらに限定されない。
【０２６０】
化合物（複数可）の混合または添加時に、得られた混合物は、溶液、懸濁液、エマルジョンなどであり得る。得られた混合物の形態は、意図される投与様式及び選択された担体またはビヒクル中の化合物の溶解度を含むいくつかの因子に依存する。有効な濃度は、治療される疾患、障害、または状態の症状を寛解するのに十分なものであり、実験的に決定され得る。
【０２６１】
医薬組成物は、好適な量の化合物またはその薬学的に許容される塩を含有する錠剤、カプセル、丸錠、粉末、顆粒、減菌非経口溶液もしくは懸濁液、及び経口溶液もしくは懸濁液、ならびに油水エマルジョンなどの単位剤形で、ヒト及び動物への投与のために提供される。薬学的治療的活性化合物及びその塩は、単位剤形または複数回剤形で製剤化及び投与される。本明細書で使用される場合、単位剤形は、当業者に既知であるように、ヒト及び動物の対象に好適であり、個々に包装された物理的に別個の単位を指す。各単位用量は、必要とされる薬学的担体、ビヒクル、または希釈剤とともに、所望の治療作用をもたらすのに十分な所定の量の治療的活性化合物を含有する。単位剤形の例としては、アンプル及びシリンジ、ならびに個々に包装された錠剤またはカプセルが挙げられる。単位剤形は、分数でまたはその倍数で投与され得る。複数回剤形は、分離された単位剤形で投与される単一容器に包装される複数の同一の単位剤形である。複数回剤形の例としては、バイアル、錠剤もしくはカプセルのボトル、またはパイントもしくはガロンのボトルが挙げられる。したがって、複数回剤形は、包装時に分離されていない複数の単位用量である。
【０２６２】
非毒性担体から作製された平衡０．００５％〜１００％の範囲の活性成分を含有する剤形または組成物が調製され得る。経口投与に関して、薬学的に許容される非毒性組成物は、例えば、医薬グレードのマンニトール、ラクトース、デンプン、ステアリン酸マグネシウム、滑石、セルロース誘導体、クロスカルメロースナトリウム、グルコース、スクロース、炭酸マグネシウム、またはサッカリンナトリウムなどの通常用いられる賦形剤のいずれかを組み込むことにより形成される。そのような組成物としては、溶液、懸濁液、錠剤、カプセル、粉末、ならびに徐放性製剤、例えば、限定されないが埋植及びマイクロカプセル封入送達系、ならびに生分解性、生体適合性ポリマー、例えば、コラーゲン、エチレン酢酸ビニル、ポリ無水物、ポリグリコール酸、ポリオルトエステル、ポリ乳酸、及びその他が挙げられる。これらの組成物の調製のための方法は、当業者に既知である。
【０２６３】
活性化合物または薬学的に許容される塩は、化合物を、持続放出製剤またはコーティングなどの、身体からの急速な排出から保護する担体とともに調製することができる。
【０２６４】
組成物は、所望の特性の組み合わせを得るために他の活性化合物を含み得る。本明細書に提供される化合物、または本明細書に記載のその薬学的に許容される塩は、有利に、酸化的ストレスに関連する疾患などの上記に称される疾患または医学的状態のうちの１つ以上を治療する際に有益であることが一般分野で知られる別の薬理学的薬剤と一緒に、治療または予防目的のためにも投与され得る。そのような併用療法は、本明細書に提供される治療の組成物及び方法のさらなる態様を構成することを理解されたい。
【０２６５】
Ｈ．化合物の活性及び特性の評価
標準的な生理学的、薬理学的、及び生化学的手順は、化合物を試験して、抗多発性骨髄腫増殖活性及び妥当な安全性プロファイルを含む、所望の特性を有するものを同定するのに利用可能である。
そのようなアッセイには、例えば、生化学的アッセイ、例えば、結合アッセイ、放射能組込みアッセイ、ならびに様々な細胞系アッセイが含まれる。
【０２６６】
イソインドリノン誘導体及びそれらの治療用途は、例えば、米国特許第８，５１８，９７２号に記載されている。驚くべきことに、化合物１、化合物２、及び化合物３は、実施例の節に示されるように、予想外かつ有益な特性を呈する。これらの有益な特性としては、抗多発性骨髄腫効力の大幅な増加、アポトーシスレベルの増加、及びデキサメタゾンとのより強力かつ効果的な組み合わせ奏功、ならびにα１アドレナリン作用性及びＤ２ドーパミン受容体（インビトロ及びインビボ）での機能活性の低減により示される予想外の安全性プロファイルの改善、細胞死滅選択性の改善（非骨髄腫細胞死滅の低減により示される）、ならびにＣＹＰ３Ａ４阻害の低減が挙げられる。
【０２６７】
前述の詳細な説明及び付随する実施例は、単に例示であり、主題の範囲に対する制限であると解釈されるべきではないことを理解されたい。開示される実施形態に対する様々な変更及び修正は、当業者には明らかであろう。限定されないが、本明細書に提供される化学構造、置換基、誘導体、中間体、合成、製剤、及び／または使用方法に関連するものを含むそのような変更及び修正は、その趣旨及び範囲から逸脱することなく行うことができる。本明細書に言及される米国特許及び出版物は、参照により組み込まれる。
【実施例】
【０２６８】
６．実施例
本発明のある特定の実施形態は、以下の非限定的な実施例によって例示される。
略号：
【表３】
2020526534.tif 000050
【０２６９】
実施例１：４−（４−（４−（（（２−（２，６−ジオキソピペリジン−３−イル）−１−オキソイソインドリン−４−イル）オキシ）メチル）ベンジル）ピペラジン−１−イル）−３−フルオロベンゾニトリル（化合物１）の合成。
【化４６】
2020526534.tif 000051
２−アミノ−５−メトキシ−５−オキソペンタン酸。窒素下の乾燥メタノール（２．５Ｌ）中の２−アミノペンタン二酸（２５０ｇ、１．７０ｍｏｌ）の懸濁液に、トリメチルシリルクロリド（２７７ｇ、２．５５ｍｏｌ）を３０分間かけて添加した。得られた透明の溶液を室温（２０℃）で３０分間攪拌した。１Ｈ  ＮＭＲは、出発材料が完全に消費されたことを示した。反応混合物を更に後処理することなく次のステップで使用した。１Ｈ  ＮＭＲ：４００ＭＨｚ  ＣＤ３ＯＤ  δ：４．１７−４．１５（ｍ，１Ｈ），３．７１（ｓ，３Ｈ），２．７０−２．６０（ｍ，２Ｈ），２．３３−２．２５（ｍ，２Ｈ）。
【０２７０】
２−（（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ）−５−メトキシ−５−オキソペンタン酸。上記の溶液にトリメチルアミン（２７５ｇ、２．７２ｍｏｌ）及び二炭酸ジ−ｔｅｒｔ−ブチル（４４７．３５ｇ、２．０５ｍｏｌ）を添加した。この反応混合物を２５℃で２時間撹拌した。溶液を濃縮して乾燥させ、その後、水（２．５Ｌ）を添加して残渣を溶解した。得られた水溶液を酢酸エチル（２００ｍＬ）で洗浄し、その後、ＨＣｌ（１Ｎ）でｐＨ＝３に酸性化し、酢酸エチル（１Ｌ×３）で抽出した。合わせた有機層を鹹水（８００ｍＬ）で洗浄し、硫酸ナトリウム上で乾燥させ、濾過し、濃縮して、２−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）−５−メトキシ−５−オキソ−ペンタン酸（２５０ｇ  ５６％収率、２ステップ）を白色固体として得た。１Ｈ  ＮＭＲ：４００ＭＨｚ  ＣＤ３ＯＤ  δ：４．１８−４．１１（ｍ，１Ｈ），３．６９（ｓ，３Ｈ），２．４８−２．４３（ｍ，２Ｈ），２．２１−２．１５（ｍ，１Ｈ），１．９５−１．９１（ｍ，１Ｈ），１．４６（ｓ，９Ｈ）。
【０２７１】
５−アミノ−４−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）−５−オキソ−ペンタン酸メチル。１，４−ジオキサン（１．５Ｌ）中の２−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）−５−メトキシ−５−オキソ−ペンタン酸（２００ｇ、７６５ｍｍｏｌ）の溶液に、二炭酸ジ−ｔｅｒｔ−ブチル（２６７ｇ、１．２２ｍｏｌ）及びピリジン（１２１ｇ、１．５３ｍｏｌ）を添加した。反応混合物を２５℃で３０分間攪拌し、炭酸アンモニウム（１８２ｇ、２．３０ｍｏｌ）を混合物に添加し、更に２５℃で１６時間攪拌した。回転蒸発により有機溶媒を除去し、ＨＣｌ（６Ｍ）により残渣をｐＨ＝３に酸性化し、その後、酢酸エチル（８００ｍＬ×３）で抽出した。合わせた有機相を鹹水（８００ｍＬ）で洗浄し、硫酸ナトリウム上で乾燥させ、濾過した。揮発性有機物を減圧下で除去して、５−アミノ−４−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）−５−オキソ−ペンタン酸メチル（１８０ｇ、９０％収率）を白色固体として得た。１Ｈ  ＮＭＲ：４００ＭＨｚ  ＣＤＣｌ３  δ：６．５１（ｓ，１Ｈ），５．９４（ｓ，１Ｈ），５．４３（ｓ，１Ｈ），４．２１（ｓ，１Ｈ），３．６３（ｓ，３Ｈ），２．５９−２．４０（ｍ，２Ｈ），２．１５−２．１１（ｍ，１Ｈ），１．９４−１．９０（ｍ，１Ｈ），１．４２（ｓ，９Ｈ）。
【０２７２】
４，５−ジアミノ−５−オキソ−ペンタン酸メチル塩酸塩。５−アミノ−４−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）−５−オキソ−ペンタン酸メチル（１８０ｇ、６９２ｍｍｏｌ）とＨＣｌ／酢酸エチル（３００ｍＬ、４Ｍ）との混合物を、２５℃で１２時間攪拌した。真空濾過により沈殿した固体を収集し、酢酸エチル（５００ｍＬ）で洗浄して、４，５−ジアミノ−５−オキソ−ペンタン酸メチル塩酸塩（１３０ｇ、９５％収率）を白色固体として得た。１Ｈ  ＮＭＲ：４００ＭＨｚ  ＣＤ３ＯＤ  δ：４．００−３．９６（ｍ，１Ｈ），３．７０（ｓ，３Ｈ），２．５９−２．５２（ｍ，２Ｈ），２．２２−２．１３（ｍ，２Ｈ）。
【０２７３】
３−ヒドロキシ−２−メチル−安息香酸メチル。４つのバッチ（各２００ｇ）を並行して実行した。メタノール（４．０Ｌ）中の３−ヒドロキシ−２−メチル−安息香酸（２００ｇ、１．３１ｍｏｌ）の溶液に、濃縮した硫酸（４７．７ｇ、４８６ｍｍｏｌ）を添加した。反応混合物を６０℃で１７時間攪拌し、８００ｍＬに濃縮した。得られた混合物を２０℃に冷却し、３０分間かけて水（４００ｍＬ）中にゆっくり注いだ。水（１２００ｍＬ）を３時間かけて２０℃で添加し、得られた混合物を２０℃で１時間攪拌した。真空濾過により沈殿した固体を収集し（４つのバッチを合わせて）、水／メタノール（１０００ｍＬ、９：１）で３回洗浄するか、または濾液がｐＨ＞３になるまで洗浄した。４５℃の真空下で固体を乾燥させて、３−ヒドロキシ−２−メチル−安息香酸メチル（７００ｇ、８０．４％収率）を灰色固体として得た。１Ｈ  ＮＭＲ：４００ＭＨｚ  ＤＭＳＯ−ｄ６  δ：９．７０（ｓ，１Ｈ），７．１８（ｔ，Ｊ＝６．８Ｈｚ，１Ｈ），７．０９（ｔ，Ｊ＝７．６Ｈｚ，１Ｈ），７．００（ｔ，Ｊ＝６．８Ｈｚ，１Ｈ），３．８１（ｓ，３Ｈ），２．２９（ｓ，３Ｈ）。
【０２７４】
３−［ｔｅｒｔ−ブチル（ジメチル）シリル］オキシ−２−メチル−安息香酸メチル。２つのバッチ（各２４０ｇ）を並行して実行した。ＤＭＦ（１．４０Ｌ）中の３−ヒドロキシ−２−メチル−安息香酸メチル（２４０ｇ、１．４４ｍｏｌ）の溶液に、イミダゾール（２４６ｇ、３．６１ｍｏｌ）及びｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリルクロリド（２３８ｇ、１．５８ｍｏｌ）を５℃で添加した。添加後、混合物を２０℃に温め、６時間攪拌した。酢酸イソプロピル（１７００ｍＬ）を添加し、その後、温度を３０℃より下に維持しながら、水（２０００ｍＬ）をゆっくり添加した。得られた混合物を攪拌し、有機相を分離した。合わせた有機相（２つのバッチを合わせた）を、水（１７００ｍＬ×３）で洗浄し、約１５００ｍＬ（ＫＦ＜０．０５％）に濃縮した。この生成物を酢酸イソプロピル溶液として保管し、これを更に精製することなく次のステップで使用した。
【０２７５】
２−（ブロモメチル）−３−［ｔｅｒｔ−ブチル（ジメチル）シリル］オキシ−安息香酸メチル。２つのバッチ（各約３７５ｇ）を並行して実行した。３−［ｔｅｒｔ−ブチル（ジメチル）シリル］オキシ−２−メチル−安息香酸メチル（約３７５ｇ、１．３４ｍｏｌ）の酢酸イソプロピル溶液に、Ｎ−ブロモスクシンイミド（２７４ｇ、１．５４ｍｏｌ）及びアゾビスイソブチロニトリル（４．４０ｇ、２６．８ｍｍｏｌ）を添加した。反応混合物を、少なくとも１時間かけて７０℃に加熱し、７０℃で４時間攪拌した。反応混合物を２０℃に冷却し、少なくとも１時間２０℃に維持した。濾過により２つのバッチの固体（スクシンイミド）を除去し、酢酸イソプロピル（７００ｍＬ）で洗浄した。濾液を、水（６０００ｍＬ）中の亜硫酸ナトリウム（７００ｇ）の溶液、続いて水（１５００ｍＬ）で洗浄した。４５℃の真空下で有機層を蒸留して乾燥させて、２−（ブロモメチル）−３−［ｔｅｒｔ−ブチル（ジメチル）シリル］オキシ−安息香酸メチル（９２０ｇ、９５．５％収率）を濃い橙色油状物として得た。１Ｈ  ＮＭＲ：４００ＭＨｚ  ＤＭＳＯ−ｄ６  δ：７．４５（ｄ，Ｊ＝６．８Ｈｚ，１Ｈ），７．３６（ｔ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，１Ｈ），７．１３（ｔ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，１Ｈ），４．９５（ｓ，２Ｈ），１．０２（ｓ，９Ｈ），０．２９（ｓ，６Ｈ）。
【０２７６】
５−アミノ−４−［４−［ｔｅｒｔ−ブチル（ジメチル）シリル］オキシ−１−オキソ−イソインドリン−２−イル］−５−オキソ−ペンタン酸メチル。アセトニトリル（２．５０Ｌ）中の４，５−ジアミノ−５−オキソ−ペンタン酸メチル塩酸塩（７４．５ｇ、３７９ｍｍｏｌ）の攪拌溶液に、２−（ブロモメチル）−３−［ｔｅｒｔ−ブチル（ジメチル）シリル］オキシ−安息香酸メチル（１２５ｇ、３４８ｍｍｏｌ）を添加した。１０分間かけて、懸濁液に滴下漏斗を通してジイソプロピルエチルアミン（８９．９ｇ、６９６ｍｍｏｌ）を添加し、その後、混合物を６０℃で１６時間攪拌した。反応混合物を、酢酸エチル（１．０Ｌ）で希釈し、ＨＣｌ（１Ｎ，１．０Ｌ）、重炭酸ナトリウム（飽和１．０Ｌ）、及び寒水（１．０Ｌ）で連続して洗浄した。有機層を濃縮して、粗製の５−アミノ−４−［４−［ｔｅｒｔ−ブチル（ジメチル）シリル］オキシ−１−オキソ−イソインドリン−２−イル］−５−オキソ−ペンタン酸メチル（１０８ｇ、粗製）を浅黄色固体として得た。ＬＣＭＳ：ｍ／ｚ  ４０７．３［Ｍ＋１］＋。
【０２７７】
５−アミノ−４−（４−ヒドロキシ−１−オキソ−イソインドリン−２−イル）−５−オキソ−ペンタン酸メチル。Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（３５０ｍＬ）中の５−アミノ−４−［４−［ｔｅｒｔ−ブチル（ジメチル）シリル］オキシ−１−オキソ−イソインドリン−２−イル］−５−オキソ−ペンタン酸メチル（１０８ｇ、２６６ｍｍｏｌ）の攪拌冷溶液に、水（４０ｍＬ）中の炭酸カリウム（１４．７ｇ、１０６ｍｍｏｌ）を５分間かけて少しずつ添加した。得られた反応混合物を１５℃で１５時間攪拌した。反応混合物を氷浴中で冷却し、ＨＣｌ（１２Ｍ、１５ｍＬ）を０〜５℃でゆっくり添加した。アセトニトリル（２００ｍＬ）を混合物に添加し、沈殿物が形成された。懸濁液を室温で１０分間攪拌し、濾過した。濾過ケークを酢酸エチル（２００ｍＬｘ５）で洗浄して生成物（５５ｇ）を得た。濾液を高真空下で濃縮して、粗製生成物（１００ｇ）を得、これをジクロロメタン（１．０Ｌ）中に溶解し、１５℃で１６時間放置した。白色固体が形成され、これを濾過して５ｇの生成物を得た。固体を合わせて、５−アミノ−４−（４−ヒドロキシ−１−オキソ−イソインドリン−２−イル）−５−オキソ−ペンタン酸メチル（６０  ｇ、７７％収率）を白色固体として得た。１Ｈ  ＮＭＲ：４００ＭＨｚ  ＤＭＳＯ−ｄ６  δ：７．５８（ｓ，１Ｈ），７．３１（ｔ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，１Ｈ），７．１９−−７．１４（ｍ，２Ｈ），７．０１（ｄ，Ｊ＝７．６Ｈｚ，１Ｈ），４．７５−４．７１（ｍ，１Ｈ），４．５０（ｄ，Ｊ＝１７．６Ｈｚ，１Ｈ），４．３２（ｄ，Ｊ＝１７．６Ｈｚ，１Ｈ），３．５１（ｓ，３Ｈ），２．２９−２．１８（ｍ，３Ｈ），２．０９−１．９９（ｍ，１Ｈ）。
【０２７８】
５−アミノ−４−［４−［［４−（ブロモメチル）フェニル］メトキシ］−１−オキソ−イソインドリン−２−イル］−５−オキソ−ペンタン酸メチル。２つの反応物（２５ｇ、８５．５ｍｍｏｌ）を並行して実行した。アセトニトリル（１Ｌ）中の１，４−ビス（ブロモメチル）ベンゼン（６７．７ｇ、２５７ｍｍｏｌ）、炭酸カリウム（１１．８ｇ、８５．５ｍｍｏｌ）、及び５−アミノ−４−（４−ヒドロキシ−１−オキソ−イソインドリン−２−ｙｌ）−５−オキソ−ペンタン酸メチル（２５ｇ、８５．５ｍｍｏｌ）の混合物を、６０℃で１６時間攪拌した。２つのバッチを合わせ、混合物を１５℃に冷却し、濾過した。濾液を濃縮し、シリカゲルクロマトグラフィー（酢酸エチル中５０％石油エーテル〜１００％酢酸エチルにより溶出する）により残渣を精製して、５−アミノ−４−［４−［［４−（ブロモメチル）フェニル］メトキシ］−１−オキソ−イソインドリン−２−イル］−５−オキソ−ペンタン酸メチル（５２ｇ、６３％収率）を白色固体として得た。１Ｈ  ＮＭＲ：４００ＭＨｚ  ＤＭＳＯ−ｄ６  δ：７．５９（ｓ，１Ｈ），７．５０−７．４４（ｍ，５Ｈ），７．３２−７．２８（ｍ，２Ｈ），７．１９（ｓ，１Ｈ），５．２６（ｓ，２Ｈ），４．７９−４．７１（ｍ，３Ｈ），４．５５（ｄ，Ｊ＝１７．６Ｈｚ，１Ｈ），４．４３（ｄ，Ｊ＝１７．６Ｈｚ，１Ｈ），３．５２（ｓ，３Ｈ），２．３０−２．１９（ｍ，３Ｈ），２．１０−２．０８（ｍ，１Ｈ）。
【０２７９】
３−［４−［［４−（ブロモメチル）フェニル］メトキシ］−１−オキソ−イソインドリン−２−イル］ピペリジン−２，６−ジオン。２つの反応物（２８．５ｇ、６０．０ｍｍｏｌ）を並行して実行した。５−アミノ−４−［４−［［４−（ブロモメチル）フェニル］メトキシ］−１−オキソ−イソインドリン−２−イル］−５−オキソ−ペンタン酸メチル（２８．５ｇ、６０．０ｍｍｏｌ）を、テトラヒドロフラン（７２０ｍＬ）中に溶解し、溶液を、ドライアイス／アセトン浴中で−７０℃に冷却した。攪拌しながら、カリウムｔｅｒｔ−ブトキシド（７．４ｇ、６６．０ｍｍｏｌ）を、透明の溶液に一度に添加した。反応混合物は淡黄色に変わり、攪拌を−７０℃で更に２時間継続した。温度を−７０℃に維持しながら、ＨＣｌ（１Ｎ、２６０ｍＬ）の冷却した溶液を反応混合物に素早く移した。混合物は直ぐに乳白色に変わり、ドライアイス／アセトン浴を取り除いた。混合物を濃縮して、テトラヒドロフランの大半を除去した。反応混合物の濃縮により、白色固体が沈殿した。白色スラリーを水（５００ｍＬ）で希釈し、その後、濾過した。濾過ケークを水（５００ｍＬ）で洗浄し、４０℃で１２時間真空オーブン中で乾燥させ、その後、酢酸エチル（５００ｍＬ）で洗浄した。バッチを合わせて、３−［４−［［４−（ブロモメチル）フェニル］メトキシ］−１−オキソ−イソインドリン−２−イル］ピペリジン−２，６−ジオン（４９．８５ｇ、９３％）を浅黄色固体として得た。１Ｈ  ＮＭＲ：４００ＭＨｚ  ＤＭＳＯ−ｄ６  δ：１０．９５（ｓ，１Ｈ），７．５１−７．４１（ｍ．，５Ｈ），７．３５−７．２８（ｍ，２Ｈ），５．２３（ｓ，２Ｈ），５．１２−５．０７（ｍ，１Ｈ），４．７０（ｓ，２Ｈ），４．４１（ｄ，Ｊ＝１７．６Ｈｚ，１Ｈ），４．２５（ｄ，Ｊ＝１７．６Ｈｚ，１Ｈ），２．９０−２．８４（ｍ，１Ｈ），２．５８−２．５３（ｍ，１Ｈ），２．４４−２．４１（ｍ，１Ｈ），１．９８−１．９５（ｍ，１Ｈ）。
【０２８０】
４−（４−（４−（（（２−（２，６−ジオキソピペリジン−３−イル）−１−オキソイソインドリン−４−イル）オキシ）メチル）ベンジル）ピペラジン−１−イル）−３−フルオロベンゾニトリル。３−（４−（（４−（ブロモメチル）ベンジル）オキシ）−１−オキソイソインドリン−２−イル）ピペリジン−２，６−ジオン（５．０ｇ、１１．２８ｍｍｏｌ）を、３−フルオロ−４−（ピペラジン−１−イル）ベンゾニトリル（２．３１５ｇ、１１．２８ｍｍｏｌ）、ジイソプロピルエチルアミン（５．９１ｍｌ、３３．８ｍｍｏｌ）、及びアセトニトリル（１００ｍｌ）とともにフラスコに入れた。反応混合物を４０℃で１８時間攪拌した。減圧下で揮発性有機物を除去し、標準的な方法により精製して、４−（４−（４−（（（２−（２，６−ジオキソピペリジン−３−イル）−１−オキソイソインドリン−４−イル）オキシ）メチル）ベンジル）ピペラジン−１−イル）−３−フルオロベンゾニトリルを得た。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ  １０．９７（ｓ，１Ｈ），７．６８（ｄｄ，Ｊ＝１．９６，１３．４５Ｈｚ，１Ｈ），７．５６（ｄｄ，Ｊ＝１．７７，８．３８Ｈｚ，１Ｈ），７．４３−７．５２（ｍ，３Ｈ），７．３０−７．３８（ｍ，４Ｈ），７．１１（ｔ，Ｊ＝８．８０Ｈｚ，１Ｈ），５．２４（ｓ，２Ｈ），５．１１（ｄｄ，Ｊ＝５．１４，１３．３３Ｈｚ，１Ｈ），４．３７−４．４６（ｍ，１Ｈ），４．２２−４．３０（ｍ，１Ｈ），３．５４（ｓ，２Ｈ），３．１２−３．２３（ｍ，４Ｈ），２．８４−２．９８（ｍ，１Ｈ），２．５２−２．６２（ｍ，５Ｈ），２．３６−２．４８（ｍ，１Ｈ），１．９２−２．０４（ｍ，１Ｈ）。ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ  ５６８．２  ［Ｍ＋１］＋。Ｃ３２Ｈ３０ＦＮ５Ｏ４の分析計算値：Ｃ，６７．７１；Ｈ，５．３３；Ｎ，１２．３４．実測値：Ｃ，６７．５０；Ｈ，５．４４；Ｎ  １２．３４。
【０２８１】
実施例２：（Ｓ）−４−（４−（４−（（（２−（２，６−ジオキソピペリジン−３−イル）−１−オキソイソインドリン−４−イル）オキシ）メチル）ベンジル）ピペラジン−１−イル）−３−フルオロベンゾニトリル（化合物２）の合成
【化４７】
2020526534.tif 000052
ｔｅｒｔ−ブチル（４Ｓ）−５−アミノ−４−（ベンジルオキシカルボニルアミノ）−５−オキソ−ペンタノエート。１，４−ジオキサン（１．５０Ｌ）中の（２Ｓ）−２−（ベンジルオキシカルボニルアミノ）−５−ｔｅｒｔ−ブトキシ−５−オキソ−ペンタン酸（１５０ｇ、４４５ｍｍｏｌ）の溶液に、ニ炭酸ジ−ｔｅｒｔ−ブチル（１５５ｇ、７１１ｍｍｏｌ）、ピリジン（７０．３ｇ、８８９ｍｍｏｌ）、及び重炭酸アンモニウム（１０５ｇ、１．３３ｍｏｌ）を添加した。反応混合物を１８℃で１６時間攪拌し、その後、濃縮した。酢酸エチル（５．０Ｌ）及び水（５．０Ｌ）中に残渣を溶解し、有機層を分離し、ＨＣｌ（３．０ｍＬ、１Ｎ）、飽和重炭酸ナトリウム（３．０Ｌ）、鹹水（３．０Ｌ）で洗浄し、無水硫酸ナトリウム上で乾燥させ、濾過し、濃縮して、粗製のｔｅｒｔ−ブチル（４Ｓ）−５−アミノ−４−（ベンジルオキシカルボニルアミノ）−５−オキソ−ペンタノエート（４５０ｇ、粗製）を白色固体として得、これを更に精製することなく次のステップで使用した。１Ｈ  ＮＭＲ  ４００ＭＨｚ  ＤＭＳＯ−ｄ６  δ：７．３５−７．３０（ｍ，５Ｈ），７．０２（ｓ，１Ｈ），５．０１（ｄ，Ｊ＝３．２Ｈｚ，１Ｈ），３．９３−３．９０（ｍ，１Ｈ），２．２０（ｔ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，２Ｈ），１．８８−１．８４（ｍ，１Ｈ），１．７２−１．６９（ｍ，１Ｈ），１．３５（ｓ，９Ｈ）。
【０２８２】
ｔｅｒｔ−ブチル（４Ｓ）−４，５−ジアミノ−５−オキソ−ペンタノエート。メタノール（１．０Ｌ）中のｔｅｒｔ−ブチル（４Ｓ）−５−アミノ−４−（ベンジルオキシカルボニルアミノ）−５−オキソ−ペンタノエート（１１２ｇ、３３３ｍｍｏｌ）の溶液に、窒素下で１０％パラジウム炭素（１５ｇ）を添加した。懸濁液を真空下で脱気し、水素で数回パージした。混合物を、３０℃で１６時間、水素ガス（４０ｐｓｉ）下で攪拌した。反応混合物を濾過し、濾液を濃縮して、粗製のｔｅｒｔ−ブチル（４Ｓ）−４，５−ジアミノ−５−オキソ−ペンタノエートを無色の油状物として得た。１Ｈ  ＮＭＲ  ４００ＭＨｚ  ＤＭＳＯ−ｄ６  δ：７．３０（ｓ，１Ｈ），６．９５（ｓ，１Ｈ），３．１０−３．０７（ｍ，１Ｈ），２．２７−２．２３（ｍ，２Ｈ），１．６９−１．７８（ｍ，１Ｈ），１．５９−１．５５（ｍ，１Ｈ），１．３８（ｓ，９Ｈ）。
【０２８３】
３−ヒドロキシ−２−メチル−安息香酸メチル。４つのバッチ（各２００ｇ）を並行して実行した。メタノール（４．０Ｌ）中の３−ヒドロキシ−２−メチル−安息香酸（２００ｇ、１．３１ｍｏｌ）の溶液に、濃縮した硫酸（４７．７ｇ、４８６ｍｍｏｌ）を添加した。この反応混合物を６０℃で１７時間撹拌した。反応混合物を８００ｍＬに濃縮した。得られた混合物を２０℃に冷却し、３０分間かけて水（４００ｍＬ）中にゆっくり注いだ。水（１２００ｍＬ）を３時間かけて２０℃で添加し、得られた混合物を２０℃で１時間攪拌した。真空濾過により沈殿した固体を収集し（４つのバッチを合わせて）、水／メタノール（１０００ｍＬ、９：１）で３回洗浄するか、または濾液がｐＨ＞３になるまで洗浄した。４５℃の真空下で固体を乾燥させて、３−ヒドロキシ−２−メチル−安息香酸メチル（７００ｇ、８０．４％収率）を灰色固体として得た。１Ｈ  ＮＭＲ：４００ＭＨｚ  ＤＭＳＯ−ｄ６  δ：９．７０（ｓ，１Ｈ），７．１８（ｔ，Ｊ＝６．８Ｈｚ，１Ｈ），７．０９（ｔ，Ｊ＝７．６Ｈｚ，１Ｈ），７．００（ｔ，Ｊ＝６．８Ｈｚ，１Ｈ），３．８１（ｓ，３Ｈ），２．２９（ｓ，３Ｈ）。
【０２８４】
３−［ｔｅｒｔ−ブチル（ジメチル）シリル］オキシ−２−メチル−安息香酸メチル。２つのバッチ（各２４０ｇ）を並行して実行した。Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（１．４０Ｌ）中の３−ヒドロキシ−２−メチル−安息香酸メチル（２４０ｇ、１．４４ｍｏｌ）の溶液に、イミダゾール（２４６ｇ、３．６１ｍｏｌ）及びｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリルクロリド（２３８ｇ、１．５８ｍｏｌ）を５℃で添加した。添加後、混合物を２０℃に温め、６時間攪拌した。酢酸イソプロピル（１７００ｍＬ）を添加し、その後、温度を３０℃より下に維持しながら、水（２０００ｍＬ）をゆっくり添加した。得られた混合物を攪拌し、続いて、有機相を分離した。合わせた有機物（２つのバッチを合わせた）を、水（１７００ｍＬ×３）で洗浄し、約１５００ｍＬ（ＫＦ＜０．０５％）に濃縮した。この生成物を酢酸イソプロピル溶液として保管し、これを更に精製することなく次のステップで使用した。
【０２８５】
２−（ブロモメチル）−３−［ｔｅｒｔ−ブチル（ジメチル）シリル］オキシ−安息香酸メチル。２つのバッチ（各約３７５ｇ）を並行して実行した。３−［ｔｅｒｔ−ブチル（ジメチル）シリル］オキシ−２−メチル−安息香酸メチル（約３７５ｇ、１．３４ｍｏｌ）の酢酸イソプロピル溶液に、Ｎ−ブロモスクシンイミド（２７４ｇ、１．５４ｍｏｌ）及びアゾビスイソブチロニトリル（４．４０ｇ、２６．８ｍｍｏｌ）を添加した。反応混合物を、少なくとも１時間かけて７０℃に加熱し、７０℃で４時間攪拌した。反応混合物を２０℃に冷却し、少なくとも１時間２０℃に維持した。濾過により２つのバッチの固体（スクシンイミド）を除去し、酢酸イソプロピル（７００ｍＬ）で洗浄した。濾液を、水（６０００ｍＬ）中の亜硫酸ナトリウム（７００ｇ）の溶液、続いて水（１５００ｍＬ）で洗浄した。４５℃の真空下で有機層を蒸留して乾燥させて、２−（ブロモメチル）−３−［ｔｅｒｔ−ブチル（ジメチル）シリル］オキシ−安息香酸メチル（９２０ｇ、９５．５％収率）を濃い橙色油状物として得た。１Ｈ  ＮＭＲ：４００ＭＨｚ  ＤＭＳＯ−ｄ６  δ：７．４５（ｄ，Ｊ＝６．８Ｈｚ，１Ｈ），７．３６（ｔ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，１Ｈ），７．１３（ｔ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，１Ｈ），４．９５（ｓ，２Ｈ），１．０２（ｓ，９Ｈ），０．２９（ｓ，６Ｈ）。
【０２８６】
（４Ｓ）−５−アミノ−４−［４−［ｔｅｒｔ−ブチル（ジメチル）シリル］オキシ−１−オキソ−イソインドリン−２−イル］−５−オキソ−ペンタン酸ｔｅｒｔ−ブチル。アセトニトリル（４．０Ｌ）中のｔｅｒｔ−ブチル（４Ｓ）−４，５−ジアミノ−５−オキソ−ペンタノエート（１３０ｇ、６４３ｍｍｏｌ）の溶液に、２−（ブロモメチル）−３−［ｔｅｒｔ−ブチル（ジメチル）シリル］オキシ−安息香酸メチル（２１０ｇ、５８４ｍｍｏｌ）及びジイソプロピルエチルアミン（１１３ｇ、８７７ｍｍｏｌ）を添加した。反応混合物を５０℃で１６時間撹拌した。反応混合物を濃縮して、アセトニトリルの大半を除去し、残渣をメチルｔｅｒｔ−ブチルエーテル（２．０Ｌ）及び水（１．５Ｌ）中に溶解し、有機層を、飽和リン酸二水素カリウム（１．０Ｌｘ２）、鹹水（１．０Ｌ）で洗浄し、無水硫酸ナトリウム上で乾燥させ、濾過し、濃縮して、粗製の（４Ｓ）−５−アミノ−４−［４−［ｔｅｒｔ−ブチル（ジメチル）シリル］オキシ−１−オキソ−イソインドリン−２−イル］−５−オキソ−ペンタン酸ｔｅｒｔ−ブチル（５２４ｇ）を得、これを更に精製することなく次のステップで使用した。
【０２８７】
（４Ｓ）−５−アミノ−４−（４−ヒドロキシ−１−オキソ−イソインドリン−２−イル）−５−オキソ−ペンタン酸ｔｅｒｔ−ブチル。メタノール（２．０Ｌ）中の（４Ｓ）−５−アミノ−４−［４−［ｔｅｒｔ−ブチル（ジメチル）シリル］オキシ−１−オキソ−イソインドリン−２−イル］−５−オキソ−ペンタン酸ｔｅｒｔ−ブチル（２７５ｇ、６１３ｍｍｏｌ，）の溶液に、フッ化テトラブチルアンモニウム三水和物（３８．７ｇ、１２３ｍｍｏｌ）を添加した。混合物を１８℃で１６時間撹拌した。反応混合物を濃縮して、メタノールの大半を除去し、残渣をジクロロメタン／水（３Ｌ／２Ｌ）中に溶解し、有機層を分離し、鹹水（１．０Ｌ）で洗浄し、無水硫酸ナトリウム上で乾燥させ、濾過し、濃縮して粗製生成物を得、これをシリカゲルカラムで精製して、生成物（２６０ｇ）を得た。生成物をアセトニトリル（７５０ｍＬ）に添加し、混合物を６０℃で２時間攪拌し、１８℃に冷却し、更に２時間攪拌した。固体を濾過し、ケークを乾燥させて、（４Ｓ）−５−アミノ−４−（４−ヒドロキシ−１−オキソ−イソインドリン−２−イル）−５−オキソ−ペンタン酸ｔｅｒｔ−ブチル（２４８ｇ、６０．５％収率）を灰色固体として得た。１Ｈ  ＮＭＲ  ４００ＭＨｚ  ＤＭＳＯ−ｄ６  δ：１０．００（ｓ，１Ｈ），７．５４（ｓ，１Ｈ），７．２９（ｔ，Ｊ＝７．６Ｈｚ，１Ｈ），７．１４（ｄ，Ｊ＝４．８Ｈｚ，２Ｈ），４．７２−４．６８（ｍ，１Ｈ），４．４９−４．２８（ｍ，２Ｈ），２．１７−１．９７（ｍ，４Ｈ），１．３１（ｓ，９Ｈ）。
【０２８８】
４−（４−（４−（クロロメチル）ベンジル）ピペラジン−１−イル）−３−フルオロベンゾニトリル。１，４−ビス（クロロメチル）ベンゼン（５１．２ｇ、２９２ｍｍｏｌ）を、アセトニトリル（１９５ｍＬ）及びＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（１９５ｍＬ）とともにフラスコに入れた。固体が溶解するまで、反応混合物を周囲温度で攪拌した。次いで、ジイソプロピルアミン（５１．１ｍＬ、２９２ｍｍｏｌ）を、３−フルオロ−４−（ピペラジン−１−イル）ベンゾニトリル（２０ｇ、９７ｍｍｏｌ）とともに添加した。反応物を６０℃で１時間加熱した。アセトニトリルを減圧下で除去した。残りの混合物を、酢酸エチル（１．０Ｌ）、水（７００ｍＬ）、及び鹹水（３００ｍＬ）との間で分配した。有機層を分離し、水層を酢酸エチルで２回抽出した。揮発性有機物を合わせ、減圧下で除去した。固体を、最小のジクロロメタン中に溶解し、シリカゲルカラム（３Ｌでヘキサン中０〜１００％酢酸エチル）で精製した。所望の生成物を含有する画分を合わせ、揮発性有機物を減圧下で除去した。残渣を最小のジクロロメタン中に溶解し、シリカゲルカラム（８００ｍＬでヘキサン中１０％の均一濃度の酢酸エチル、続いて４Ｌでヘキサン中２０〜８０％酢酸エチル）で２回目の精製を行った。所望の生成物を含有する画分を合わせ、揮発性有機物を減圧下で除去し、４−（４−（４−（クロロメチル）ベンジル）ピペラジン−１−イル）−３−フルオロベンゾニトリル（２２．７ｇ、６６．０ｍｍｏｌ、６７．７％収率）をオフホワイト色固体として得た。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ  ｐｐｍ  ７．３３−７．３９（ｍ，５Ｈ）７．２９（ｄ，Ｊ＝１．９６Ｈｚ，１Ｈ）７．２５（ｄ，Ｊ＝１．９６Ｈｚ，１Ｈ）６．９１（ｔ，Ｊ＝８．５６Ｈｚ，１Ｈ）４．６０（ｓ，２Ｈ）３．５８（ｓ，２Ｈ）３．１９−３．２７（ｍ，４Ｈ）２．５８−２．６６（ｍ，４Ｈ）。ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ  ３４４．２［Ｍ＋１］＋。
【０２８９】
５−アミノ−４−（４−（（４−（（４−（４−シアノ−２−フルオロフェニル）ピペラジン−１−イル）メチル）ベンジル）オキシ）−１−オキソイソインドリン−２−イル）−５−オキソペンタン酸（Ｓ）−ｔｅｒｔ−ブチル。５−アミノ−４−（４−ヒドロキシ−１−オキソイソインドリン−２−イル）−５−オキソペンタン酸（Ｓ）−ｔｅｒｔ−ブチル（２２．０５ｇ、６５．９ｍｍｏｌ）を、４−（４−（４−（クロロメチル）ベンジル）ピペラジン−１−イル）−３−フルオロベンゾニトリル（２２．６７ｇ，６５．９ｍｍｏｌ）、炭酸カリウム（１８．２３ｇ、１３２ｍｍｏｌ）、及びＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（３３０ｍＬ）とともにフラスコに入れた。反応混合物を４５℃に１６時間加熱した。反応物を酢酸エチル（５０ｍＬ）で希釈し、濾過した。濾液を、酢酸エチル（９００ｍＬ）と、水（６００ｍＬ）と、鹹水（２００ｍＬ）との間で分配した。有機層を単離し、水（６００ｍＬ）で洗浄した。有機層を硫酸ナトリウム上で乾燥させ、揮発物を減圧下で除去した。残渣をヘキサン中２０％酢酸エチルで処理し、揮発物を減圧下で除去し、５−アミノ−４−（４−（（４−（（４−（４−シアノ−２−フルオロフェニル）ピペラジン−１−イル）メチル）ベンジル）オキシ）−１−オキソイソインドリン−２−イル）−５−オキソペンタン酸（Ｓ）−ｔｅｒｔ−ブチル（４４．０２ｇ、６８．６ｍｍｏｌ、１０４％収率）をオフホワイト色固体として得た。ある程度のＤＭＦが残存したため、収量はわずかに定量を超えた。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ  ｐｐｍ  ７．４３−７．４９（ｍ，２Ｈ）７．４０（ｓ，４Ｈ）７．３６（ｄｄ，Ｊ＝８．３８，１．２８Ｈｚ，１Ｈ）７．２９（ｄ，Ｊ＝１．９６Ｈｚ，１Ｈ）７．２６（ｄ，Ｊ＝１．８３Ｈｚ，１Ｈ）７．１１（ｄｄ，Ｊ＝７．６４，１．１６Ｈｚ，１Ｈ）６．９２（ｔ，Ｊ＝８．５０Ｈｚ，１Ｈ）６．２３（ｂｒ  ｓ，１Ｈ）５．２４−５．３２（ｍ，１Ｈ）５．１５（ｓ，２Ｈ）４．８６−４．９４（ｍ，１Ｈ）４．３８−４．５５（ｍ，２Ｈ）３．６１（ｓ，２Ｈ）３．１８−３．３２（ｍ，４Ｈ）２．５８−２．７０（ｍ，４Ｈ）２．０９−２．４７（ｍ，４Ｈ）１．４３（ｓ，８Ｈ）。ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ  ６４２．４［Ｍ＋１］＋。
【０２９０】
（Ｓ）−４−（４−（４−（（（２−（２，６−ジオキソピペリジン−３−イル）−１−オキソイソインドリン−４−イル）オキシ）メチル）ベンジル）ピペラジン−１−イル）−３−フルオロベンゾニトリル。５−アミノ−４−（４−（（４−（（４−（４−シアノ−２−フルオロフェニル）ピペラジン−１−イル）メチル）ベンジル）オキシ）−１−オキソイソインドリン−２−イル）−５−オキソペンタン酸（Ｓ）−ｔｅｒｔ−ブチル（１２．１ｇ、１８．８６ｍｍｏｌ）を、アセトニトリル（１８９ｍＬ）及びベンゼンスルホン酸（３．９６ｇ、２４．５１ｍｍｏｌ）とともにバイアルに入れた。反応混合物を真空下に置き、窒素でパージした。これをもう１度繰り返し、その後、窒素雰囲気下で混合物を８５℃に一晩加熱した。温反応混合物をジクロロメタン（１０００ｍＬ）及び酢酸エチル（３００ｍＬ）を含有する分液漏斗に直接注いだ。この混合物に、重炭酸ナトリウム（９００ｍＬ）、水（１００ｍＬ）、及び鹹水（４５０ｍＬ）の飽和溶液を添加した。有機層を単離し、水層を、ジクロロメタン（８００ｍＬ）及び酢酸エチル（２００ｍＬ）で抽出した。合わせた有機層を無水硫酸マグネシウム上で乾燥させ、濃縮した。標準的な方法により精製して、標記化合物を得た。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ  ｐｐｍ  １０．９６（ｓ，１Ｈ）７．６８（ｄｄ，Ｊ＝１３．４５，１．８３Ｈｚ，１Ｈ）７．５６（ｄｄ，Ｊ＝８．４４，１．８３Ｈｚ，１Ｈ）７．４３−７．５２（ｍ，３Ｈ）７．２９−７．３９（ｍ，４Ｈ）７．１１（ｔ，Ｊ＝８．８０Ｈｚ，１Ｈ）５．２４（ｓ，２Ｈ）５．１１（ｄｄ，Ｊ＝１３．２０，５．１４Ｈｚ，１Ｈ）４．２２−４．４６（ｍ，２Ｈ）３．５４（ｓ，２Ｈ）３．１２−３．２２（ｍ，４Ｈ）２．８５−２．９７（ｍ，１Ｈ）２．５３−２．６２（ｍ，２Ｈ）２．３８−２．４８（ｍ，２Ｈ）１．９３−２．０３（ｍ，１Ｈ）。ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ  ５６８．２［Ｍ＋１］＋。
【０２９１】
実施例３：（Ｓ）−４−（４−（４−（（（２−（２，６−ジオキソピペリジン−３−イル）−１−オキソイソインドリン−４−イル）オキシ）メチル）ベンジル）ピペラジン−１−イル）−３−フルオロベンゾニトリル（化合物２）の合成
【化４８】
2020526534.tif 000053
４−（４−（４−（クロロメチル）ベンジル）ピペラジン−１−イル）−３−フルオロベンゾニトリル塩酸塩。トルエン（１４００ｍＬ）中の３−フルオロ−４−（ピペラジン−１−イル）ベンゾニトリル（１００ｇ）の溶液に、２５℃で酢酸（２８ｍＬ）を入れ、反応混合物を３０分間維持した。２５℃で４−（クロロメチル）ベンズアルデヒド（７９ｇ）を入れ、混合物を２時間維持した。トリ酢酸水素化ホウ素ナトリウム（各５２ｇ）を、２５℃で、３０分間ごとに３回入れた。混合物を２５℃で約１０時間攪拌した。水（６００ｍＬ）を１時間かけて入れ、その間、バッチ温度は３０℃より下に維持した。低層の大半は分離した。混合物を濾過し、低層を分離した。有機層を水（２００ｍＬ）で洗浄した。有機層に、ＩＰＡ（７５ｍＬ）、ＩＰＡ（８ｍｌ）中５〜６Ｎ  ＨＣｌ、次いで、トルエン（２０ｍｌ）中の４−（４−（４−（クロロメチル）ベンジル）ピペラジン−１−イル）−３−フルオロベンゾニトリル塩酸塩シード（２ｇ）のスラリーを入れた。混合物に、２時間かけて２５℃でＩＰＡ（１１５ｍｌ）中５〜６Ｎ  ＨＣｌを入れた。混合物を約１０時間維持し、濾過して粗製固体を得た。固体をトルエン（４００ｍｌ）で洗浄し、真空オーブン中で乾燥させて、４−（４−（４−（クロロメチル）ベンジル）ピペラジン−１−イル）−３−フルオロベンゾニトリル塩酸塩を淡黄色固体（１５２ｇ、８２％収率）を得た。１Ｈ  ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ  ｐｐｍ  １１．８２（ｓ，１Ｈ），７．５０−７．７９（ｍ，６Ｈ），７．１８−７．２４（ｍ，１Ｈ），４．８０（ｓ，２Ｈ），４．３８−４．３９（ｍ，２Ｈ），３．４４−３．７０（ｍ，２Ｈ），３．１４−３．４４（ｍ，６Ｈ）。
【０２９２】
（Ｓ）−５−アミノ−４−（４−（（４−（（４−（４−シアノ−２−フルオロフェニル）ピペラジン−１−イル）メチル）ベンジル）オキシ）−１−オキソイソインドリン−２−イル）−５−オキソペンタン酸ｔｅｒｔ−ブチル酒石酸塩。ＤＭＦ（６００ｍｌ）中の４−（４−（４−（クロロメチル）ベンジル）ピペラジン−１−イル）−３−フルオロベンゾニトリル塩酸塩（１００ｇ）及び（Ｓ）−５−アミノ−４−（４−ヒドロキシ−１−オキソイソインドリン−２−イル）−５−オキソペンタン酸ｔｅｒｔ−ブチル（９７ｇ）の混合物に、３５℃で炭酸カリウム（Ｋ２ＣＯ３）（７５ｇ）を入れ、反応混合物を２４時間維持した。混合物にトリメチルアミン（１１ｍｌ）を入れ、混合物を４５℃で約２時間攪拌した。混合物に、ＥｔＯＡｃ（１Ｌ）及び炭酸カリウム水溶液（５％、５００ｍＬ）を入れた。有機層を塩化ナトリウム水溶液（５％、５００ｍＬ）で洗浄した。混合物にＥｃｏｓｏｒｂ  Ｃ９４８  Ｅ−ｐａｋ（３０ｇ）を入れ、混合物を２時間維持した。混合物を濾過した。混合物に、４５℃で、メタノール（８５０ｍＬ）中のＬ−酒石酸（４７ｇ）の溶液を入れ、混合物を２時間維持した。混合物を２５℃に冷却した。固体を濾過して、（Ｓ）−５−アミノ−４−（４−（（４−（（４−（４−シアノ−２−フルオロフェニル）ピペラジン−１−イル）メチル）ベンジル）オキシ）−１−オキソイソインドリン−２−イル）−５−オキソペンタン酸ｔｅｒｔ−ブチルの酒石酸塩を得た。（１４５ｇ、７０％収率）。１Ｈ  ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ  ｐｐｍ  １．３１（ｓ，９Ｈ），１．８７−２．２７（ｍ，４Ｈ），２．５５（ｂｒ  ｓ，４Ｈ），３．１８（ｂｒ  ｓ，４Ｈ），４．２９（ｓ，２Ｈ），４．３６−４．６２（ｍ，２Ｈ），４．７１（ｄｄ，Ｊ＝４．２，１０．０Ｈｚ，１Ｈ），５．２２（ｓ，２Ｈ），７．１０（ｔ，Ｊ＝８．８Ｈｚ，１Ｈ），７．１８（ｓ，１Ｈ），７．２９（ｄ，Ｊ＝７．７Ｈｚ，２Ｈ），７．３３−７．４０（ｍ，２Ｈ），７．４０−７．５１（ｍ，３Ｈ），７．５１−７．６３（ｍ，２Ｈ）。
【０２９３】
（Ｓ）−４−（４−（４−（（（２−（２，６−ジオキソピペリジン−３−イル）−１−オキソイソインドリン−４−イル）オキシ）メチル）ベンジル）ピペラジン−１−イル）−３−フルオロベンゾニトリル。２−メチルテトラヒドロフラン（１Ｌ）中の（Ｓ）−５−アミノ−４−（４−（（４−（（４−（４−シアノ−２−フルオロフェニル）ピペラジン−１−イル）メチル）ベンジル）オキシ）−１−オキソイソインドリン−２−イル）−５−オキソペンタン酸ｔｅｒｔ−ブチルの酒石酸塩（１００ｇ）の溶液を、炭酸カリウム水溶液（１０％、８５ｍＬ）で洗浄した。低層を分離した。溶媒２−メチルテトラヒドロフランをアセトニトリルに交換して溶液を得た。溶液に、アセトニトリル（２００ｍｌ）中のベンゼンスルホン酸（６０ｇ）を、２時間かけて７０℃で添加した。標準的な方法により精製して、標記化合物を得た。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ  ｐｐｍ  １０．９６（ｓ，１Ｈ）７．６８（ｄｄ，Ｊ＝１３．４５，１．８３Ｈｚ，１Ｈ）７．５６（ｄｄ，Ｊ＝８．４４，１．８３Ｈｚ，１Ｈ）７．４３−７．５２（ｍ，３Ｈ）７．２９−７．３９（ｍ，４Ｈ）７．１１（ｔ，Ｊ＝８．８０Ｈｚ，１Ｈ）５．２４（ｓ，２Ｈ）５．１１（ｄｄ，Ｊ＝１３．２０，５．１４Ｈｚ，１Ｈ）４．２２−４．４６（ｍ，２Ｈ）３．５４（ｓ，２Ｈ）３．１２−３．２２（ｍ，４Ｈ）２．８５−２．９７（ｍ，１Ｈ）２．５３−２．６２（ｍ，２Ｈ）２．３８−２．４８（ｍ，２Ｈ）１．９３−２．０３（ｍ，１Ｈ）。ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ  ５６８．２［Ｍ＋１］＋。
【０２９４】
実施例４：（Ｓ）−４−（４−（４−（（（２−（２，６−ジオキソピペリジン−３−イル）−１−オキソイソインドリン−４−イル）オキシ）メチル）ベンジル）ピペラジン−１−イル）−３−フルオロベンゾニトリル（化合物２）の合成
【化４９】
2020526534.tif 000054
４−（４−（４−（クロロメチル）ベンジル）ピペラジン−１−イル）−３−フルオロベンゾニトリル塩酸塩。トルエン（１４００ｍＬ）中の３−フルオロ−４−（ピペラジン−１−イル）ベンゾニトリル（１００ｇ）の溶液に、２５℃で酢酸（２８ｍＬ）を入れ、混合物を３０分間維持した。２５℃で４−（クロロメチル）ベンズアルデヒド（７９ｇ）を入れ、混合物を２時間維持した。トリ酢酸水素化ホウ素ナトリウム（各５２ｇ）を、２５℃で、３０分間ごとに３回入れた。混合物を２５℃で約１０時間攪拌した。水（６００ｍＬ）を１時間かけて入れ、その間、バッチ温度は３０℃より下に維持した。低層の大半は分離した。混合物を濾過し、低層を分離した。有機層を水（２００ｍＬ）で洗浄した。有機層に、ＩＰＡ（７５ｍＬ）、ＩＰＡ（８ｍｌ）中５〜６Ｎ  ＨＣｌ、次いで、トルエン（２０ｍｌ）中の４−（４−（４−（クロロメチル）ベンジル）ピペラジン−１−イル）−３−フルオロベンゾニトリル塩酸塩シード（２ｇ）のスラリーを入れた。混合物に、２時間かけて２５℃でＩＰＡ（１１５ｍｌ）中５〜６Ｎ  ＨＣｌを入れた。混合物を約１０時間維持し、濾過して粗製固体を得た。固体をトルエン（４００ｍｌ）で洗浄し、真空オーブン中で乾燥させて、４−（４−（４−（クロロメチル）ベンジル）ピペラジン−１−イル）−３−フルオロベンゾニトリル塩酸塩を白色固体（１５２ｇ、８２％収率）を得た。１Ｈ  ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ  ｐｐｍ  １１．８２（ｓ，１Ｈ），７．５０−７．７９（ｍ，６Ｈ），７．１８−７．２４（ｍ，１Ｈ），４．８０（ｓ，２Ｈ），４．３８−４．３９（ｍ，２Ｈ），３．４４−３．７０（ｍ，２Ｈ），３．１４−３．４４（ｍ，６Ｈ）。
【０２９５】
（Ｓ）−５−アミノ−４−（４−（（４−（（４−（４−シアノ−２−フルオロフェニル）ピペラジン−１−イル）メチル）ベンジル）オキシ）−１−オキソイソインドリン−２−イル）−５−オキソペンタン酸ｔｅｒｔ−ブチル。ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）（７００ｍＬ）中の４−（４−（４−（クロロメチル）ベンジル）ピペラジン−１−イル）−３−フルオロベンゾニトリル塩酸塩（１００ｇ）及び（Ｓ）−５−アミノ−４−（４−ヒドロキシ−１−オキソイソインドリン−２−イル）−５−オキソペンタン酸ｔｅｒｔ−ブチル（８８ｇ）の混合物に、３５℃で炭酸カリウム（Ｋ２ＣＯ３）（７３ｇ）を入れ、混合物を２４時間維持した。混合物にＥｔＯＡｃ（１．２Ｌ）及び水（１．１Ｌ）を入れた。有機層を塩化ナトリウム水溶液（５％、１Ｌ）で洗浄した。混合物にｎ−ヘプタン（２００ｍＬ）を入れた。混合物を水性の酢酸（３％、１Ｌ）、水（１Ｌ）、Ｋ３ＰＯ４水溶液（２０％、１０Ｌ）、及び水（１０Ｌ）で洗浄した。溶媒を約１．２Ｌに蒸留した。混合物をｎ−ヘプタンで結晶化して、（Ｓ）−５−アミノ−４−（４−（（４−（（４−（４−シアノ−２−フルオロフェニル）ピペラジン−１−イル）メチル）ベンジル）オキシ）−１−オキソイソインドリン−２−イル）−５−オキソペンタン酸ｔｅｒｔ−ブチル（１４３ｇ、８５％収率）を得た。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ  ｐｐｍ  ７．４３−７．４９（ｍ，２Ｈ）７．４０（ｓ，４Ｈ）７．３６（ｄｄ，Ｊ＝８．３８，１．２８Ｈｚ，１Ｈ）７．２９（ｄ，Ｊ＝１．９６Ｈｚ，１Ｈ）７．２６（ｄ，Ｊ＝１．８３Ｈｚ，１Ｈ）７．１１（ｄｄ，Ｊ＝７．６４，１．１６Ｈｚ，１Ｈ）６．９２（ｔ，Ｊ＝８．５０Ｈｚ，１Ｈ）６．２３（ｂｒ  ｓ，１Ｈ）５．２４−５．３２（ｍ，１Ｈ）５．１５（ｓ，２Ｈ）４．８６−４．９４（ｍ，１Ｈ）４．３８−４．５５（ｍ，２Ｈ）３．６１（ｓ，２Ｈ）３．１８−３．３２（ｍ，４Ｈ）２．５８−２．７０（ｍ，４Ｈ）２．０９−２．４７（ｍ，４Ｈ）１．４３（ｓ，８Ｈ）。
【０２９６】
（Ｓ）−４−（４−（４−（（（２−（２，６−ジオキソピペリジン−３−イル）−１−オキソイソインドリン−４−イル）オキシ）メチル）ベンジル）ピペラジン−１−イル）−３−フルオロベンゾニトリル。アセトニトリル（１Ｌ）中（Ｓ）−５−アミノ−４−（４−（（４−（（４−（４−シアノ−２−フルオロフェニル）ピペラジン−１−イル）メチル）ベンジル）オキシ）−１−オキソイソインドリン−２−イル）−５−オキソペンタン酸ｔｅｒｔ−ブチル（１００ｇ）の溶液を、７０℃で維持した。溶液に、アセトニトリル（２００ｍＬ）中のベンゼンスルホン酸（７４ｇ）を、２時間かけて７０℃で添加した。標準的な方法により精製して、標記化合物を得た。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ  ｐｐｍ  １０．９６（ｓ，１Ｈ）７．６８（ｄｄ，Ｊ＝１３．４５，１．８３Ｈｚ，１Ｈ）７．５６（ｄｄ，Ｊ＝８．４４，１．８３Ｈｚ，１Ｈ）７．４３−７．５２（ｍ，３Ｈ）７．２９−７．３９（ｍ，４Ｈ）７．１１（ｔ，Ｊ＝８．８０Ｈｚ，１Ｈ）５．２４（ｓ，２Ｈ）５．１１（ｄｄ，Ｊ＝１３．２０，５．１４Ｈｚ，１Ｈ）４．２２−４．４６（ｍ，２Ｈ）３．５４（ｓ，２Ｈ）３．１２−３．２２（ｍ，４Ｈ）２．８５−２．９７（ｍ，１Ｈ）２．５３−２．６２（ｍ，２Ｈ）２．３８−２．４８（ｍ，２Ｈ）１．９３−２．０３（ｍ，１Ｈ）。ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ  ５６８．２［Ｍ＋１］＋。
【０２９７】
実施例５：４−（４−（４−（（（２−（２，６−ジオキソピペリジン−３−イル）−１−オキソイソインドリン−４−イル）オキシ）メチル）ベンジル）ピペラジン−１−イル−２，２，３，３，５，５，６，６−ｄ８）−３−フルオロベンゾニトリル
【化５０】
2020526534.tif 000055
３−フルオロ−４−（ピペラジン−１−イル−２，２，３，３，５，５，６，６−ｄ８）ベンゾニトリル。乾燥ＤＭＡ（６ｍＬ）中の３，４−ジフルオロベンゾニトリル（２７８ｍｇ、２．００ｍｍｏｌ）及びピペラジン−２，２，３，３，５，５，６，６−ｄ８（９４２ｍｇ、１０．０ｍｍｏｌ）の溶液を１１０℃で１６時間攪拌した。混合物を周囲温度に冷却し、混合しながらＨ２Ｏ（６０ｍＬ）にゆっくり添加した。混合物をＥｔＯＡｃ（３Ｘ）で抽出し、有機部分を合わせて、飽和ＮａＣｌ（３Ｘ）で洗浄し、ＭｇＳＯ４上で乾燥させ、濾過し、濃縮した。残った無色のシロップを真空下で乾燥させて、粗製生成物を白色固体（５９９ｍｇ）として得た。固体をＥｔＯＡｃ中に溶解し、溶液を、Ｈ２Ｏ（３Ｘ）、飽和水性ＮａＣｌ（３Ｘ）で洗浄し、ＭｇＳＯ４上で乾燥させた。乾燥させた溶液を濾過し、濃縮し、残渣を真空中で乾燥させて、標記化合物（４４７ｍｇ、１０５％）を白色固体として得た。ＬＣＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ  ２１４．２［Ｍ＋Ｈ］＋。
【０２９８】
４−（４−（４−（（（２−（２，６−ジオキソピペリジン−３−イル）−１−オキソイソインドリン−４−イル）オキシ）メチル）ベンジル）ピペラジン−１−イル−２，２，３，３，５，５，６，６−ｄ８）−３−フルオロベンゾニトリル。乾燥ＤＭＦ（５．０ｍＬ）中の３−［４−［［４−（ブロモメチル）フェニル］メトキシ］−１−オキソ−イソインドリン−２−イル］ピペリジン−２，６−ジオン（７３６ｍｇ、１．６６ｍｍｏｌ）及び３−フルオロ−４−（ピペラジン−１−イル−２，２，３，３，５，５，６，６−ｄ８）ベンゾニトリル（４２５ｍｇ、１．９９ｍｍｏｌ）の溶液に、ＤＩＥＡ（０．８７０ｍＬ、４．９９ｍｍｏｌ）を添加し、混合物を周囲温度で４時間攪拌した。混合物を濾過し（０．４５μｍナイロン膜）、溶液を標準的な方法により精製して、標記生成物（５３２ｍｇ、５６％）を得た。ＬＣＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ  ５７６．４［Ｍ＋Ｈ］＋。
【０２９９】
実施例６：多発性骨髄腫に対する抗増殖及びアポトーシス促進性作用
細胞培養材料：ヒト多発性骨髄腫細胞株を供給業者から購入し、表１に示されるように、培地中で、３７℃、５％ＣＯ２で培養した。レナリドミド及びポマリドミド耐性細胞株を、前に一般的に記載される方法により得た（Ｌｏｐｅｚ−Ｇｉｒｏｎａ  ｅｔ  ａｌ  Ｌｅｕｋｅｍｉａ  ２０１２；２６（１１）：２３３５）。全ての細胞株は対数期で維持され、細胞密度及び生存率は、Ｖｉ−ｃｅｌｌ  ＸＲ細胞生死アナライザー（Ｂｅｃｋｍａｎ  Ｃｏｕｌｔｅｒ，Ｂｒｅａ，ＣＡ）を使用して、トリパンブルー排除により監視された。
表１：試験された多発性骨髄腫細胞株
【表４】
2020526534.tif 000056
【０３００】
試験品の溶液の調製：最大容積が５０μＬと仮定して、最終ＤＭＳＯ容積０．１％に化合物を黒色３８４ウェルプレート（Ｃｏｒｎｉｎｇ  Ｉｎｃ．）に蒔いた。１：３希釈で１０μＭから開始する１０ポイント用量応答は、ＥＤＣ  ＡＴＳ−１００プラットホームを使用して超音波分注により２つ組で印刷された。あるいは、１：１０希釈で１０μＭから開始するか、または１：３希釈で１００ｎＭから開始する１０ポイント用量応答が使用された。
【０３０１】
細胞増殖アッセイ：血液細胞株（表１）の増殖／生存率に対する化合物の作用は、製造業者の指示に従い、ＣＴＧ（Ｐｒｏｍｅｇａ）を使用して、１２０時間インキュベートした後に評価された。血液細胞株は、Ｍｕｌｔｉｄｒｏｐ  Ｃｏｍｂｉ  Ｒｅａｇｅｎｔ  Ｄｉｓｐｅｎｓｅｒ（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ，Ｗａｌｔｈａｍ，ＭＡ）により、５０μＬの総容積中０．１×１０６細胞／ｍＬで化合物のプレートに分注された。１２０時間で、２５μＬ／ＣＴＧのウェルがＭｕｌｔｉｄｒｏｐ  Ｃｏｍｂｉ  Ｒｅａｇｅｎｔ  Ｄｉｓｐｅｎｓｅｒにより分注され、生存可能な細胞によるアデノシン三リン酸（ＡＴＰ）放出は、Ｅｎｖｉｓｉｏｎプラットホームを使用して、３０分後に相対発光単位として測定された。
【０３０２】
細胞アポトーシスアッセイ：化合物のアポトーシスを誘導する能力は、示される時点及び化合物濃度で、選択されたＭＭ細胞株において評価された。アポトーシスのマーカーとして、カスパーゼ−３の活性レベルを、生存細胞撮像を使用してＭＭ細胞において測定した。懸濁細胞を撮像するために、細胞がプレートの底に付着し、平らになるように、９６ウェルプレートをフィブロネクチンでコーティングした。化合物を添加する前夜に、Ｍｕｌｔｉｄｒｏｐ  Ｃｏｍｂｉ  Ｒｅａｇｅｎｔ  Ｄｉｓｐｅｎｓｅｒ（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ，Ｗａｌｔｈａｍ，ＭＡ）を使用して、細胞を９６ウェルプレートに添加した。Ｈｅｗｌｅｔｔ−Ｐａｃｋａｒｄ  Ｄ３００  Ｄｉｇｉｔａｌ  Ｄｉｓｐｅｎｓｅｒ（Ｔｅｃａｎ，Ｍａｎｎｅｄｏｒｆ，Ｓｗｉｔｚｅｒｌａｎｄ）を使用して、化合物を適切な９６ウェルプレートのウェル内の細胞の上に配置した。ＭＭ細胞株を化合物で処理し、６時間で培地を交換して、インビボでの化合物代謝回転を模倣し、化合物濃度を約２０倍希釈した。ＮｕｃＶｉｅｗ  ４８８  Ｃａｓｐａｓｅ−３  Ｅｎｚｙｍｅ  Ｓｕｂｓｔｒａｔｅ（Ｂｉｏｔｉｕｍ）の存在下で細胞を成長させ、標準的なインキュベータに収容したＩｎｃｕＣｙｔｅ  ＺＯＯＭ  Ｌｉｖｅ−Ｃｅｌｌ  Ａｎａｌｙｓｉｓ  Ｓｙｓｔｅｍ（Ｅｓｓｅｎ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ，Ａｎｎ  Ａｒｂｏｒ，ＭＩ）においてインキュベートした。カスパーゼ−３酵素基質の切断及び各ウェルの細胞コンフルエンスを、ＩｎｃｕＣｙｔｅ  ＺＯＯＭ  Ｓｙｓｔｅｍで、４〜６時間ごとに５日間、１０×で撮像することにより検出した。各ウェル／条件は同じプレート上で複製で実行され、各状態は各時点で捕捉した４つの１０×画像の平均であった。
【０３０３】
結果。化合物１及び化合物２は、ＭＭ細胞株に対する抗増殖活性を示す。この研究について選択されたＭＭ細胞株は、レナリドミド及び／またはポマリドミドに対して感受性及び耐性である株であり（表１）、２つの薬剤は、骨髄腫患者を治療するために臨床で使用された。増殖は、ＣｅｌｌＴｉｔｒｅ−Ｇｌｏ（登録商標）アッセイを使用して評価された。化合物とともにインキュベートされた培養物の結果は、各細胞株の対照培養物の結果に正規化された。化合物による細胞成長の阻害についてのＩＣ５０は、ＡｃｔｉｖｉｔｙＢａｓｅソフトウェアを使用して各細胞株について決定された。１２０時間後の培地に存在するＡＴＰレベルの定量的評価により決定されるとき、化合物１及び化合物２は、４つの細胞株において細胞増殖を強力に阻害した。化合物１及び化合物２の抗増殖ＩＣ５０値は、０．０７ｎＭ〜１９ｎＭの範囲であった（表２）。化合物１及び化合物２は、レナリドミド及び／またはポマリドミド耐性の細胞株に対しても非常に強力な多発性骨髄腫抗増殖活性を示した。
表２：液体培養物中のＭＭ細胞株における化合物１及び化合物２による細胞成長の阻害
【表５】
2020526534.tif 000057
【０３０４】
化合物１は、多発性骨髄腫細胞株においてアポトーシスを誘導した。ＭＭ細胞株におけるアポトーシスに対する化合物の作用を調査した。化合物の、アポトーシスを誘導し、このプロセスの開始を動力学的に特徴付ける能力を決定するために、カスパーゼ−３誘導を、レナリドミド耐性Ｈ９２９−１０５１細胞において経時的に測定した（図１）。Ｈ９２９−１０５１細胞を、１ｎＭ、１０ｎＭ、１００ｎＭ、及び１０００ｎＭの濃度の化合物とともにインキュベートし、アポトーシスを経時的に評価した。結果は、Ｈ９２９−１０５１細胞に関して、化合物１の濃度全てがおよそ４８時間から始まって、約７２時間のインキュベーションでほぼ最高の誘導に達するアポトーシスを誘導したことを示した。次に、曲線下面積（ＡＵＣ）を各濃度について計算し、各化合物の濃度応答曲線を生成するために使用した。これは、Ｈ９２９−１０５１においてアポトーシスを誘導する化合物１の能力の定量的エビデンスを提供した。驚くべきことに、化合物１によるアポトーシス誘導は、以前に報告された化合物３−（４−（（４−（（４−（２，４−ジフルオロフェニル）ピペラジン−１−イル）メチル）ベンジル）オキシ）−１−オキソイソインドリン−２−イル）ピペリジン−２，６−ジオン（米国特許第８，５１８，９７２号の実施例５．２８５）（化合物Ａ）について観察されたアポトーシス誘導よりも大幅に高かった。図１Ｂに示されるように、化合物１によるアポトーシス誘導（総ＡＵＣにより測定される）は、化合物Ａによるアポトーシス誘導と比較して、ほぼ３０％（１２６％）増加した。
【０３０５】
デキサメタゾンとの併用。化合物２単独またはデキサメタゾンと組み合わせたポマリドミドの活性は、ＭＭ細胞株のパネルにわたって評価された。図２は、レナリドミド耐性Ｈ９２９−１０５１細胞株の代表的な用量依存曲線一式であり、単剤化合物２がポマリドミド−デキサメタゾンの組み合わせよりも１０倍強力であり、同じくらい効果的であることを示す（図２、パネルＡ）。驚くべきことに、化合物２がデキサメタゾンと組み合わせられるとき、より強力な奏功をもたらすだけでなく、有効性も劇的に改善され（図２、パネルＢ）、ほぼ完全な細胞死滅が達成される。表３は、Ｈ９２９−１０５１細胞株において行われた単剤及びデキサメタゾン併用研究の効力（ＩＣ５０）を要約する。レナリドミド耐性細胞（Ｈ９２９−１０５１）における単剤ポマリドミドまたは化合物２のいずれか、及び１、０．１、または０．０１μＭの濃度のデキサメタゾン（Ｄｅｘ）の併用のいずれかのＩＣ５０が列記される。各ＩＣ５０は、少なくとも３回の独立した実験の平均である。増殖は、Ｃｅｌｌ  Ｔｉｔｅｒ−Ｇｌｏを使用して、５日目に監視された。一貫して、デキサメタゾンと組み合わせた化合物２は、デキサメタゾンと併用したポマリドミドよりも劇的に活性であり、この活性の増加は、１０〜１００倍低い濃度のデキサメタゾンで達成された。総合して、このデータは、有効性及び相乗作用を維持しながら、低用量のデキサメタゾンの使用を可能にすることによる、化合物２及びデキサメタゾンの併用治療の安全性の増加についての可能性を示す。
表３：レナリドミド耐性Ｈ９２９−１０５１細胞株における単剤としての化合物２及びポマリドミド、またはデキサメタゾンとの組み合わせに関する抗増殖ＩＣ５０値の比較
【表６】
2020526534.tif 000058
【０３０６】
正常な細胞に対する抗増殖選択性により評価されるインビトロ安全性評価。化合物２が一般的に細胞傷害性ではないことを示すために、不死化（但し、非腫瘍形成性）ヒト肝細胞由来細胞株ＴＨＬＥ−２（Ｐｆｅｉｆｅｒ  ｅｔ  ａｌ，Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ＵＳＡ．１９９３；９０（１１）：５１２３−７）及び健康な一次ヒトＰＢＭＣに対するカウンタースクリーニング（図３）を行った。化合物２は、上記に示されるＭＭ細胞株と比較して、ＴＨＬＥ−２細胞（ＩＣ５０＞１０μＭ）または未刺激の一次ヒトＰＢＭＣ（ＩＣ５０＞１０μＭ）に対してほとんど抗増殖作用がなかった。
【０３０７】
レナリドミド耐性多発性骨髄腫異種移植モデルにおける化合物２の抗腫瘍活性。研究の目的は、１、３、１０、及び３０ｍｇ／ｋｇの１日１回の投与（ＱＤ）での、Ｈ９２９−１０５１異種移植モデルにおける化合物２の単剤抗腫瘍活性を試験するためであった。有意（ｐ＜０．０００１）な抗腫瘍活性は全ての用量レベルで観察され、１、３、１０、及び３０ｍｇ／ｋｇで、それぞれ、７５％、８６％、８４％、及び８５％の腫瘍体積が低減した（図４）。
【０３０８】
結論：まとめると、このデータは、化合物１及び化合物２が非常に強力な抗多発性骨髄腫活性を示し、驚くべきことに、以前に報告された化合物である化合物Ａ及びポマリドミドと比較して、アポトーシスの大幅なレベル増加を示すことを示す。加えて、デキサメタゾンと併用した化合物２はより強力な奏功をもたらすだけでなく、有効性も劇的に改善する。加えて、正常な細胞と比較して、多発性骨髄腫の選択的細胞死滅が示された。
【０３０９】
実施例７：化合物１／化合物２のオフターゲット作用及び意義。
α１アドレナリン及びドーパミンＤ２受容体。方法：α１アドレナリン及びドーパミンＤ２受容体の結合及び機能アッセイは、それらの方法に従い、Ｅｕｒｏｆｉｎｓ  Ｃｅｒｅｐによって行われた。
【０３１０】
α１アドレナリン受容体。１０μＭでの結合。結合アッセイは、ラット大脳皮質における非選択的α１アドレナリン受容体に対する試験品の親和性を評価した。大脳皮質の膜破砕物を、１０μＭの試験品の不在下及び存在下で、０．２５ｎＭ［３Ｈ］プラゾシンとともに、室温で６０分間、２つ組でインキュベートした。インキュベーション期間の後、試料を、ガラスファイバフィルタを通して濾過し、フィルタを乾燥させ、その後、シンチレーションカウンターを使用して、放射能について計数した。結果は、対照放射性リガンド結合の平均阻害パーセントとして表される。
【０３１１】
結合ＩＣ５０。非選択的α１アドレナリン受容体の結合ＩＣ５０を決定するために、様々な濃度の試験品を、０．２５ｎＭ［３Ｈ］プラゾシンとともに２つ組でインキュベートした。化合物Ａを０．０１〜３０μＭで試験した。化合物ＡのＳ−鏡像異性体である化合物Ｂは、０．０００３〜１０μＭで試験した。化合物１及び化合物１のＳ−鏡像異性体である化合物２は、０．０３〜１００μＭでアッセイした。放射能は上述のように測定された。ＩＣ５０は、対照特異的結合の最大半量の阻害をもたらす濃度として定義された。
【０３１２】
アンタゴニスト活性。α１Ａ及びα１Ｂアドレナリン受容体に対する試験化合物の拮抗作用は、ヒト受容体トランスフェクトされたチャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞を使用して測定された。アンタゴニスト活性は、α１Ａ受容体アッセイにおけるアゴニスト（エピネフリン）誘導カルシウム動員、またはα１Ｂ受容体アッセイにおけるｃＡＭＰレベルに対する化合物の作用を測定することにより決定された。これらの実験では、ＣＨＯ細胞は、α１Ａ受容体アッセイでは試験品及びエピネフリン３ｎＭまたはα１Ｂ受容体アッセイでは３０００ｎＭとともに室温で２つ組インキュベートした。化合物Ａは、０．０１〜３０μＭでα１Ａ受容体アッセイにおいて試験された。化合物Ｂは、０．０００３〜３０μＭでα１Ａ及びα１Ｂ受容体アッセイにおいて試験された。化合物１及び化合物２は、α１Ａ受容体アッセイでは０．０３〜３０μＭで、そしてα１Ｂ受容体アッセイでは０．０３〜１００μＭでアッセイされた。α１Ａ受容体アッセイにおいて、細胞質カルシウムレベルは、蛍光プローブＦｌｕｏ４  Ｄｉｒｅｃｔを使用して、蛍光定量的に測定された。α１Ｂアドレナリン受容体アッセイにおける細胞内ｃＡＭＰレベルは、均一時間分解蛍光測定（ＨＴＲＦ）により測定された。拮抗作用ＩＣ５０は、対照アゴニスト応答の最大半量の阻害をもたらす濃度として定義された。
【０３１３】
ドーパミンＤ２受容体。１０μＭでの結合。結合アッセイは、トランスフェクトされたヒト胎児由来腎臓（ＨＥＫ）−２９３細胞におけるドーパミンＤ２受容体に対する試験品の親和性を評価した。Ｄ２Ｓ受容体アッセイにおいて結合を決定するために、試験品を、０．３ｎＭ［３Ｈ］メチルスピペロンまたは１ｎＭ［３Ｈ］７−ヒドロキシ−２−Ｎ，Ｎ−ジプロピルアミノテトラリン（７−ＯＨ−ＤＰＡＴ）とともにインキュベートした。０．３ｎＭの［３Ｈ］メチルスピペロンは、Ｄ２Ｌ結合アッセイにおいて対照リガンドとしても使用された。細胞膜破砕物を、１０μＭの試験品の不在下及び存在下で、リガンドとともに、室温で６０分間、２つ組でインキュベートした。インキュベーション期間の後、試料を、ガラスファイバフィルタを通して濾過し、フィルタを乾燥させ、その後、シンチレーションカウンターを使用して、放射能について計数した。結果は、対照放射性リガンド結合の平均阻害パーセントとして表される。
【０３１４】
結合ＩＣ５０。Ｄ２受容体アッセイにおいて結合ＩＣ５０を決定するために、ＨＥＫ−２９３を上述のように試験したが、様々な濃度の試験品で行った。化合物Ａは、Ｄ２Ｓ放射性リガンド結合アッセイにおいて０．０１〜３０μＭで試験された。化合物Ｂは、Ｄ２Ｓ及びＤ２Ｌの両方の結合アッセイにおいて０．０００３〜１０μＭで試験された。化合物１は、Ｄ２Ｓ及びＤ２Ｌの両方のアッセイにおいて０．０３〜１００μＭでアッセイされ、一方、化合物２は、Ｄ２Ｓアッセイでは０．０３〜１００μＭ、そしてＤ２Ｌアッセイでは０．０１〜１００μＭで試験された。ＩＣ５０は、対照特異的結合の最大半量の阻害をもたらす濃度として定義された。
【０３１５】
アゴニスト活性。ドーパミンＤ２Ｓ受容体に対する試験化合物の活性化作用は、ヒト受容体トランスフェクトされたＨＥＫ−２９３細胞を使用して評価された。アゴニスト活性をインピーダンス変調に対する化合物作用を測定することにより決定された。これらの実験では、ＨＥＫ−２９３細胞は、試験化合物とともに、２８℃で、２つ組でインキュベートされた。化合物Ａを０．０１〜３０μＭで試験した。化合物Ｂは０．０００３〜１０μＭで試験され、一方、化合物１及び化合物２は０．０１〜１０μＭでアッセイされた。ドーパミン（３μＭ）をアゴニスト対照として使用した。インピーダンスの測定は、細胞誘電分光を使用して、リガンドの添加後１０分間監視された。ＥＣ５０は、対照アゴニスト（ドーパミン）応答と比較して、最大半量の応答をもたらす濃度として定義された。
【０３１６】
結果。α１アドレナリン及びドーパミンＤ２受容体における１０μＭでの結合は、化合物１、化合物２、化合物Ａ、化合物Ｂ、及び米国特許第８，５１８，９７２号に例示されるいくつかの化合物について評価された（図４）。以前に開示された化合物は両受容体におけるリガンドの結合を完全に阻害したが、驚くべきことに、化合物１及び化合物２は、リガンド結合を阻害する能力の大幅な減少を示し、それぞれ、６７／６２％（α１アドレナリン受容体）及び５５／５２％（ドーパミンＤ２Ｓ）のみのリガンド結合の阻害を示した。したがって、α１アドレナリン及びドーパミンＤ２受容体における化合物Ａ及び化合物Ｂと比較した化合物１及び化合物２の異なる作用を更に分析した。
表４．α１アドレナリン及びドーパミンＤ２受容体に対する化合物Ａ、化合物Ｂ、化合物１、及び化合物２、ならびに以前に報告された化合物の作用
【化５１】
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【表７】
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2020526534.tif 000061
【０３１７】
α１アドレナリン受容体に対する化合物Ａ、化合物Ｂ、化合物１、及び化合物２の詳細な作用を表５に要約する。化合物Ａは、リガンドのα１アドレナリン受容体への結合を１０２％阻害した。受容体への化合物Ａの結合ＩＣ５０は０．０６４μＭであった。化合物Ａは、α１Ａアドレナリン受容体の強いアンタゴニストであることが示され、ＩＣ５０は０．０１４μＭであった。同様に、化合物Ｂは、１０μＭでリガンドのα１アドレナリン受容体への結合を９８〜１００％阻害し、結合ＩＣ５０は０．０２４μＭであった。α１アドレナリン受容体の強い拮抗作用は化合物Ｂで観察され、ＩＣ５０値は、α１Ａ及びα１Ｂ受容体に対して、それぞれ、０．００６４及び０．０７８μＭであった。驚くべきことに、対照的に、化合物１及び化合物２は両方ともα１アドレナリン受容体に対して弱い活性を有することが示された。化合物１による受容体拮抗作用のＩＣ５０値は、α１Ａ及びα１Ｂ受容体について、それぞれ、０．９８μＭ及び６．９μＭであった。比較可能な結果が化合物２について観察された。
表５．α１アドレナリン受容体に対する化合物Ａ、化合物Ｂ、化合物１、及び化合物２の作用
【表８】
2020526534.tif 000062
【０３１８】
ドーパミンＤ２受容体。ドーパミンＤ２受容体に対する化合物Ａ、化合物Ｂ、化合物１、及び化合物２の作用を表６に要約する。化合物Ａは、リガンドのドーパミンＤ２Ｓ受容体への結合を９９％阻害した。Ｄ２Ｓ受容体への化合物Ａの結合ＩＣ５０は０．１５μＭであった。化合物Ａは、ドーパミンＤ２Ｓ受容体の部分アゴニストであることが示され、ＥＣ５０は０．０１６μＭであった。同様に、化合物Ｂは、１０μＭでＤ２Ｓ受容体を９９％阻害し、結合ＩＣ５０は、Ｄ２Ｌ及びＤ２Ｓ受容体に対して、それぞれ、０．０８４及び０．０１６〜０．０４７μＭであった。驚くべきことに、対照的に、化合物１及び化合物２は両方ともドーパミンＤ２受容体に対して弱い活性を有することが示され、１０μＭでの阻害は≦５５％であり、結合ＩＣ５０値は≧２μＭであった。３回の独立した研究におけるドーパミンＤ２Ｓ受容体における化合物Ｂの機能活性化作用（ＥＣ５０）は、＞１０、２．７、及び１．９μＭであった。Ｄ２Ｓ受容体に対する化合物Ｂによる活性化作用の程度は化合物Ａにおいて観察されたものよりも小さいが、化合物１及び化合物２と比較して、化合物Ｂによる活性化作用は大きい傾向にあった。まとめると、１０μＭでの結合の阻害％、結合ＩＣ５０、及び活性化作用ＩＣ５０データは、化合物１及び化合物２と比較して、ドーパミンＤ２受容体に対する化合物Ａ及び化合物Ｂの強い活性を示した。この知見は、ラットにおける、化合物１によるものではなく（以下に論じられる）化合物ＡによるドーパミンＤ２活性化作用のエビデンス（すなわち、胃運動／排出の減少）と一致する。
表６．ドーパミンＤ２受容体に対する化合物Ａ、化合物Ｂ、化合物１、及び化合物２の作用
【表９】
2020526534.tif 000063
【０３１９】
雄のラットにおける７日間の探索的毒性学研究。方法．雄のＣＤ−ＩＧＳラット（ｎ＝５／毒性学評価群；ｎ＝４／毒物動態評価群）に、経口経管栄養（１０ｍＬ／ｋｇ）により、１００、３００、または１０００ｍｇ／ｋｇ／日でビヒクル（５０ｍＭシトレート中０．５％  ＨＰＭＣ／０．２５％  Ｔｗｅｅｎ−８０、ｐＨ２．６〜２．８）または試験品（化合物Ａまたは化合物１）を７日間連続で１日１回投与した。毒物動態用の血液試料は、１日目及び７日目に収集された。全てのラットは、投与前、１〜７日目の投与およそ１時間後、及び８日目の剖検前に、毒性の臨床兆候について観察された。体重は、１〜７日目の投与前及び剖検前に無作為に記録された。血液学及び血清化学分析用の試料は、最終投与のおよそ２４時間後の８日目に収集された。ラットは剖検のために８日目に安楽死させた。解剖病理学評価は、選択した組織の巨視的観察、臓器重量、及び病理組織検査からなった。
【０３２０】
結果。化合物Ａを７日間連続で毎日経口投与した後、全身曝露（ＡＵＣ０−ｔ）を１００〜１０００ｍｇ／ｋｇの投与依存様式で増加させた。７日目の曝露は１日目よりおよそ３〜７倍大きかった。７日目のＡＵＣは、１００、３００、及び１０００ｍｇ／ｋｇで、それぞれ、４４１、１２３０、及び１７６０μＭ・時間であった。毒性の臨床兆候（猫背、立毛、及び活動の減少）及び体重減少が≧３００ｍｇ／ｋｇで観察された。体重増加は１００ｍｇ／ｋｇでは見られなかった。異常な胃内容物（乾燥供給材料）が≧１００ｍｇ／ｋｇで肉眼で観察され、顕微的相関はなかった。この所見は、胃運動／排出の減少を示唆し、ドーパミンＤ２受容体のアゴニスト活性と一致する。試験品関連顕微的所見は、全投与レベルで、ラットの心臓における最小限の多巣性心筋壊死及び混合性細胞浸潤に限られた。この心病変の正確な原因は決定されないままであるが、所見は、ドーパミンＤ２受容体の活性化作用及び／またはα１−アドレナリン受容体の拮抗作用と一致する。これらの受容体の改変は、血管拡張につながり、血流の減少、低血圧、及び反射性頻脈の原因となる。心病変の位置（心尖、心室の心内膜表面）は、虚血機構を更に支持する。化合物１に関して、曝露（ＡＵＣ０−ｔ）も１００〜１０００ｍｇ／ｋｇの用量依存様式で増加し、７日目の曝露は１日目よりもおよそ２〜６倍大きかった。７日目の１００、３００、及び１０００ｍｇ／ｋｇのＡＵＣは、それぞれ、１４３、５１４、及び１２２０μＭ・時間であった。試験品関連の臨床知見はなかった。体重増加の最小限の減少が≧３００ｍｇ／ｋｇで観察された。驚くべきことに、化合物Ａとは対照的に、胃及び心臓への作用は、化合物１を投与されたラットにおいて観察されず、上述のＥｕｒｏｆｉｎｓ  Ｃｅｒｅｐにより観察されたα１アドレナリン及びドーパミンＤ２  受容体の活性の低減と一致した。
【０３２１】
ヒトチトクローム  ｐ４５０酵素の阻害剤としての化合物２及び化合物Ｂのインビトロ評価。化合物Ｂ及び化合物２がプールしたヒト肝臓ミクロソームにおいてチトクロームＰ４５０（ＣＹＰ）活性の直接または時間依存的阻害剤としての機能を果たす可能性を評価することが目的である。この研究では、９つのヒトチトクロームＰ４５０酵素、つまり、ＣＹＰ１Ａ２、ＣＹＰ２Ａ６、ＣＹＰ２Ｂ６、ＣＹＰ２Ｃ８、ＣＹＰ２Ｃ９、ＣＹＰ２Ｃ１９、ＣＹＰ２Ｄ６、ＣＹＰ２Ｅ１、及びＣＹＰ３Ａ４／５（２つの基質を使用する）を調査した。
【０３２２】
方法．化合物がＣＹＰ酵素の直接阻害剤としての機能を果たす可能性を検査するために、化合物Ｂ（０．０３〜３０μＭ）または化合物２（０．０３〜３０μＭ）及びＮＡＤＰＨ（１ｍＭ）の不在下または存在下で、プールしたヒト肝臓ミクロソームを、それらの見かけＫｍとほぼ等しい濃度で、プローブ基質とともにインキュベートした。加えて、化合物は、上述と同じ濃度で時間依存的阻害剤としての機能を果たすそれらの可能性について評価された。時間依存的阻害を評価する場合、化合物は、プローブ基質を添加する前に、ヒト肝臓ミクロソーム及びＮＡＤＰＨ（１ｍＭ）とともに３０分間プレインキュベートされた。適切なビヒクル対照に加えて、ＣＹＰアイソフォームの既知の直接阻害剤及び時間依存的阻害剤が正の対照として含まれた。インキュベーション後、プローブ基質代謝物の濃度を、確立されたＬＣ／ＭＳ／ＭＳ方法を使用して定量化した。阻害の程度は対照活性のパーセンテージとして表された。
【０３２３】
結果。化合物Ｂ。直接阻害を検査するために使用された実験条件下で、化合物Ｂ（最大３０μＭ）は、ＣＹＰ１Ａ２、ＣＹＰ２Ａ６、ＣＹＰ２Ｃ８、ＣＹＰ２Ｄ６、ＣＹＰ２Ｅ１、及びＣＹＰ３Ａ４／５（ミダゾラム）に対して阻害作用がほとんど（≦３０％）〜全くなかった。３０μＭで、化合物Ｂは、ＣＹＰ２Ｂ６、ＣＹＰ２Ｃ９、及びＣＹＰ２Ｃ１９活性を、それぞれ、５９、３８、及び４５％阻害した。化合物Ｂは、２．９２μＭのＩＣ５０値でＣＹＰ３Ａ４／５（テストステロン）を阻害した。時間依存的阻害を試験するために使用された条件下で、化合物Ｂ（最大３０μＭ）は、ＮＡＤＰＨとともに、またはそれなしで３０分間プレインキュベートした後、ＣＹＰ１Ａ２、ＣＹＰ２Ａ６、ＣＹＰ２Ｂ６、ＣＹＰ２Ｃ８、ＣＹＰ２Ｃ９、ＣＹＰ２Ｃ１９、ＣＹＰ２Ｄ６、及びＣＹＰ２Ｅ１の時間依存的阻害をほとんど〜全く示さなかった。化合物Ｂは、時間依存的様式でＣＹＰ３Ａ４／５を阻害した。シフトしたＩＣ５０値（ＮＡＤＰＨを伴う）は、基質としてのミダゾラム及びテストステロンに関して、それぞれ、２．２３及び１．９３μＭであった。
【０３２４】
化合物２。直接阻害を検査するために使用された実験条件下で、化合物２（最大３０μＭ）は、ＣＹＰ１Ａ２、ＣＹＰ２Ａ６、ＣＹＰ２Ｂ６、ＣＹＰ２Ｃ８、ＣＹＰ２Ｃ９、ＣＹＰ２Ｄ６、ＣＹＰ２Ｅ１、及びＣＹＰ３Ａ４／５（ミダゾラム）に対して阻害作用がほとんど（≦３０％）または全くなかった。３０μＭで、化合物２は、ＣＹＰ２Ｃ１９及びＣＹＰ３Ａ４／５（テストステロン）活性を、それぞれ、４１及び４６％阻害した。時間依存的阻害を試験するために使用された条件下で、化合物２（最大３０μＭ）は、ＮＡＤＰＨとともに、またはそれなしで３０分間プレインキュベートした後、ＣＹＰ１Ａ２、ＣＹＰ２Ａ６、ＣＹＰ２Ｂ６、ＣＹＰ２Ｃ８、ＣＹＰ２Ｃ９、ＣＹＰ２Ｃ１９、ＣＹＰ２Ｄ６、ＣＹＰ２Ｅ１、及びＣＹＰ３Ａ４／５（ミダゾラム）の時間依存的阻害をほとんど〜全く示さなかった。化合物２（３０μＭで）は、ＣＹＰ３Ａ４／５（テストステロン）活性を５９％（ＮＡＤＰＨを伴う）及び２３％（ＮＡＤＰＨなし）阻害し、これは、化合物２がＣＹＰ３Ａ４／５の弱い時間依存的阻害剤であったことを示した。
【０３２５】
結論。要約すると、化合物Ｂ（最大３０μＭ）は、ＣＹＰ１Ａ２、ＣＹＰ２Ａ６、ＣＹＰ２Ｃ８、ＣＹＰ２Ｄ６、ＣＹＰ２Ｅ１、及びＣＹＰ３Ａ４／５（ミダゾラム）に対する直接阻害作用がほとんど（≦３０％）〜全くなかった。化合物Ｂは、２．９２μＭのＩＣ５０値でＣＹＰ３Ａ４／５（テストステロン）を阻害した。化合物Ｂは、３０μＭで、ＣＹＰ２Ｂ６、ＣＹＰ２Ｃ９、及びＣＹＰ２Ｃ１９活性を、それぞれ、５９、３８、及び４５％阻害した。化合物Ｂ（最大３０μＭ）は、ＣＹＰ１Ａ２、ＣＹＰ２Ａ６、ＣＹＰ２Ｂ６、ＣＹＰ２Ｃ８、ＣＹＰ２Ｃ９、ＣＹＰ２Ｃ１９、ＣＹＰ２Ｄ６、及びＣＹＰ２Ｅ１の時間依存的阻害剤ではないが、ＣＹＰ３Ａ４／５の時間依存的阻害剤である。
【０３２６】
驚くべきことに、対照的に、化合物２（最大３０μＭ）は、試験したＣＹＰ酵素のいずれかに対して阻害作用がほとんど（≦３０％）〜全くなく、３０μＭで、化合物２は、ＣＹＰ２Ｃ１９及びＣＹＰ３Ａ４／５（テストステロン）活性を、それぞれ、４１及び４６％（すなわち、ＩＣ５０＞３０μＭ）しか阻害しなかった。化合物２（最大３０μＭ）もＣＹＰ３Ａ４／５の弱い時間依存的阻害剤である。ＣＹＰ２Ｃ１９及びＣＹＰ３Ａ４／５の阻害活性の低減は、他の薬物の代謝を含む、代謝に対する作用の低減の原因となり、したがって、有害な薬物相互作用の可能性を低減する。
【０３２７】
概要：正常な細胞を温存しながらの強力な抗多発性骨髄腫活性、アポトーシスレベルの大幅な増加、及びより強力かつ効果的なデキサメタゾンとの組み合わせ奏功の組み合わせは、化合物１及び化合物２が多発性骨髄腫の治療に有用であることを示す。加えて、驚くべきことに改善されたインビトロ及びインビボでのオフターゲットならびにＣＹＰプロファイル所見は、低用量のデキサメタゾンを使用する可能性と組み合わせて、化合物１及び化合物２が以前に報告された化合物と比べて改善された安全性プロファイルを有するはずであることを示す。
【０３２８】
実施例８：発がん性ドライバー、染色体転座、及びｐ５３突然変異を特徴とする多発性骨髄腫細胞株における化合物２誘導アポトーシス。
方法。ＭＭ患者に見られる高リスクの転座または突然変異であると考えられるものを含む、一般的な発がん性突然変異及び染色体転座を有する代表的なＭＭ細胞株の増殖及びアポトーシスの誘導に対する化合物の作用は、化合物と１２０時間インキュベートした後に、９６ウェルプレートフローサイトメトリーアッセイを利用して評価された。２０ＭＭ細胞株（表７及び８）（形質細胞白血病（ＰＣＬ）細胞株Ｌ３６３、ＪＪＮ−３、ＡＲＨ−７７、及びＳＫＭＭ−２を含む）を、０．０１５〜１００ｎＭの範囲の漸増濃度の化合物２またはポマリドミドで、２つ組で処理した。５ｍＭストックを使用して、化合物を、Ｈｅｗｌｅｔｔ−Ｐａｃｋａｒｄ  Ｄ３００  Ｄｉｇｉｔａｌ  Ｄｉｓｐｅｎｓｅｒを使用して、９６ウェルプレートの適切なウェルに予め配置した。Ｍｕｌｔｉｄｒｏｐ  Ｃｏｍｂｉ  Ｒｅａｇｅｎｔ  Ｄｉｓｐｅｎｓｅｒを使用して、細胞を９６ウェルプレートに添加した。処理の５日後、フローサイトメトリー分析を使用して、生存している、死亡している、またはアポトーシス性である細胞の数を決定した。処理の５日後、細胞をアネキシンＶとともにインキュベートして、曝露されたホスファチジルセリン、アポトーシス細胞表面マーカー、及び生体色素７−ＡＡＤ（無傷細胞膜を有する細胞から除外される）を染色し、フローサイトメトリー（Ａｔｔｕｎｅ（登録商標）、Ｔｈｅｒｍｏ  Ｆｉｓｈｅｒ）により分析した。次いで、分析を行って、各条件の生存細胞（アネキシンＶ及び７−ＡＡＤ二重陰性染色細胞）の数及びアポトーシス細胞のパーセンテージ（アネキシンＶ陽性細胞）を決定し、ＤＭＳＯ対照処理に対する相対を計算した。記載する全ての値はＤＭＳＯのみで処理された細胞に正規化された。全ての増殖及びアポトーシス誘導曲線を処理し、ＸＬＦｉｔ（ＩＤＢＳ，Ａｌａｍｅｄａ，ＣＡ）及びＧｒａｐｈＰａｄ  Ｐｒｉｓｍ  ７．０３（ＧｒａｐｈＰａｄ  Ｓｏｆｔｗａｒｅ，Ｌａ  Ｊｏｌｌａ，ＣＡ）を使用して、対照のパーセントとしてグラフ化した。各濃度の生存細胞数を、Ｍｉｃｒｏｓｏｆｔ  ＥｘｃｅｌにおいてＤＭＳＯ対照（１００％とみなされる）に正規化して、増殖曲線を生成した。次いで、対数（阻害剤）対正規化応答−変数スロープ分析を行うことにより、ＩＣ５０（５０％阻害を達成する化合物濃度）値を計算し、ＧｒａｐｈＰａｄ  Ｐｒｉｓｍ  ７．０３で曲線下面積分析を行うことにより、曲線下面積（ＡＵＣ）値を計算した。同様に、アポトーシス分析に関して、薬物誘導アポトーシスのパーセンテージは、「初期」（アネキシンＶ陽性及び７−ＡＡＤ陰性）及び「後期」アポトーシス（アネキシンＶ及び７−ＡＡＤ陽性）の両方の値を合わせ、背景値（ビヒクル対照ＤＭＳＯで処理された細胞）を差し引くことにより全ての用量に関して計算された。アポトーシス曲線のＡＵＣ値は、ＧｒａｐｈＰａｄ  Ｐｒｉｓｍ  ７．０３で曲線下面積分析を行うことにより計算された。用量応答曲線下面積（ＡＵＣ）は、アポトーシスを表す薬物の効力及び有効性を単一のパラメータに統合するため、計算された。フローサイトメトリーアッセイにおける化合物２及びポマリドミドのＩＣ５０値を表９に提示する。表１０は、ＭＭ細胞株のパネルのフローサイトメトリーア���セイを使用して、化合物２及びポマリドミドの活性を比較する用量応答曲線下面積（ＡＵＣ）を示す。
表７：多発性骨髄腫細胞株
【表１０】
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ＡＴＣＣ＝Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｔｙｐｅ  Ｔｉｓｓｕｅ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ；ＤＳＭＺ＝Ｇｅｒｍａｎ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｍｉｃｒｏｏｒｇａｎｉｓｍｓ  ａｎｄ  Ｃｅｌｌ  Ｃｕｌｔｕｒｅｓ；ＦＢＳ＝ウシ胎仔血清；ＩＬ−６＝インターロイキン６；ＪＣＲＢ＝Ｊａｐａｎｅｓｅ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｂｉｏｒｅｓｏｕｒｃｅｓ  Ｃｅｌｌ  Ｂａｎｋ；ＭＭ＝多発性骨髄腫；Ｎ／Ａ＝該当なし。
表８：多発性骨髄腫細胞株のパネルにおいて見られる発がん性ドライバー、染色体転座、及びｐ５３突然変異
【表１１】
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2020526534.tif 000067
ＨＤ＝ホモ接合型欠失；ｍｕｔ＝突然変異；ｗｔ＝野生型；−＝該当なし。ａ＝ナンセンス変異。ｂ＝たった１つのコピーを有するｗｔ  ｐ５３かまたは突然変異であるか、文献において矛盾する報告。
出典：Ｂｅｒｇｓａｇｅｌ，ｅｔ  ａｌ．Ｏｎｃｏｇｅｎｅ（２００１）；２０：５６１１−５６２２；Ｂｅｒｇｌｉｎｄ，ｅｔ  ａｌ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ（２００８）；５：６９９−７０８；Ｋｅａｔｓ，Ｊ．Ｃｏｍｍｏｎ  Ｇｅｎｅｔｉｃｓ  ｏｆ  Ｍｙｅｌｏｍａ  Ｃｅｌｌ  Ｌｉｎｅｓ  ［Ｉｎｔｅｒｎｅｔ］．Ｊｏｎａｔｈａｎ  Ｋｅａｔｓ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ．Ｔｒａｎｓｌａｔｉｏｎａｌ  Ｇｅｎｏｍｉｃｓ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ（ＴＧｅｎ）−Ｉｎｔｅｇｒａｔｅｄ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｇｅｎｏｍｉｃｓ  Ｄｉｖｉｓｉｏｎ．２０１２−［ｃｉｔｅｄ  ０５  Ｊａｎ  ２０１７］。
【０３２９】
結果。化合物２の抗増殖活性は、ＭＭ患者に見られる高リスクの転座または突然変異であると考えられるものを含む、一般的な発がん性突然変異及び染色体転座（表８）を有する代表的なＭＭ細胞株のパネルにわたって評価された（Ｊｏｈｎｓｏｎ，ｅｔ  ａｌ．Ｉｎｔ  Ｊ  Ｈｅｍａｔｏｌ．（２０１１）；９４：３２１−３３３；Ｚｈｏｕ，ｅｔ  ａｌ．Ｌｅｕｋｅｍｉａ（２００９）；２３：１９４１−１９５６；Ｔｅｒｐｏｓ，ｅｔ  ａｌ．Ｌｅｕｋ  Ｌｙｍｐｈｏｍａ（２００６）；４７：８０３−８１４；Ｔｏｎｏｎ，Ｈｅｍａｔｏｌ  Ｏｎｃｏｌ  Ｃｌｉｎ  Ｎｏｒｔｈ  Ａｍ．（２００７）；２１：９８５−１００６）。濃度応答曲線は、生存細胞数を測定して、ポマリドミドと比較した化合物２の抗増殖活性を示すために、フローサイトメトリーを使用して得た。化合物２及びポマリドミドのＩＣ５０値を表９に提示する。
表９：多発性骨髄腫細胞株における化合物２の抗増殖活性
【表１２】
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【０３３０】
化合物２のアポトーシス誘導作用は、治療の１２０時間後のフローサイトメトリーを使用して評価され、ポマリドミド治療と比較された。対照のパーセンテージは、用量応答曲線を生成し、これらの曲線下面積（ＡＵＣ）を計算するために、ＤＭＳＯ対照（１００％の対照）に正規化することにより計算された。報告されたＡＵＣ値は用量応答曲線下面積に対応し、値１００００は全用量でのアポトーシスの完全な誘導に対応し、値０はアポトーシスの誘導なしに対応する。各データ点は、各実験において少なくとも２つの試料を用いた２回の独立した実験を表す。（表１０）。
表１０：多発性骨髄腫細胞株における化合物２誘導アポトーシス
【表１３】
2020526534.tif 000069
2020526534.tif 000070
【０３３１】
結論。化合物２は、大半のＭＭ細胞株にわたって広く活性であり、中間のポマリドミド感受性を有する細胞株、及びポマリドミド耐性の細胞株において強い活性を示すことにより、ポマリドミドとは異なった。化合物２は、ｐ５３状態、発がん性ドライバー、または染色体転座が異なって、このＭＭ細胞株の範囲にわたって広く活性であった。例えば、ＯＰＭ２、ＬＰ−１、ＥＪＭ、Ｕ２６６、及びＲＰＭＩ−８２２６細胞は、変異体ｐ５３を有し、化合物２に感受性であった。加えて、ＮＣＩ−Ｈ９２９、ＫＭＳ−１１、ＫＭＳ  ３４、ＯＰＭ２、及びＬＰ−１細胞株は全て、ｔ（４；１４）「高リスク」ＭＭ染色体転座を含み、化合物２に感受性であった。ＳＫ−ＭＭ−２及びＥＪＭ細胞も化合物２に感受性であり、別の「高リスク」ＭＭ染色体転座ｔ（１４；２０）を含む。（図５）化合物２の、短期間の規定の曝露後にアポトーシスを誘導する能力は、疾患制御が集中的で断続的なスケジュールを使用して達成されることを可能にする。そのようなスケジュールは、現在のＭＭ化合物のより持続した投与で観察される血球減少を誘導する化合物２の可能性を低減することにより、治療指数も改善し得る。
【０３３２】
実施例９：化合物２はレナリドミドまたはポマリドミドに対する獲得耐性を有する多発性骨髄腫細胞株において活性を有する
化合物２の活性は、いずれかの化合物への連続曝露によりレナリドミドまたはポマリドミドに対する耐性を獲得したか、またはプロセスにおいて下方調節されたセレブロンレベルを獲得した細胞において試験された（図１１）。細胞を５日間処理し、その後、ＡＴＰ決定アッセイ（ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ−Ｇｌｏ）を使用して評価した。対照のパーセンテージは、背景を差し引いて、ＤＭＳＯ対照（１００％の対照）に正規化することにより計算された。レナリドミドまたはポマリドミドに対する獲得耐性を有する細胞株中のセレブロンの相対パーセンテージは、ウエスタンブロットにより決定され、親細胞株の量を１００％と指定して提示される。
【０３３３】
結果。図６は、親株（ＤＦ１５、ＮＣＩ−Ｈ９２９、及びＯＰＭ２）、レナリドミド耐性株（ＮＣＩ−Ｈ９２９−１０５１）、または５つのポマリドミド耐性細胞株（ＮＣＩ−Ｈ９２９−Ｐ０１、ＯＰＭ２−Ｐ０１、ＯＰＭ２−Ｐ１、ＯＰＭ２−Ｐ１０、及びＤＦ１５Ｒ）の増殖を測定する、化合物２及びポマリドミドの活性を比較するＩＣ５０の濃度応答曲線を示す。
表１１：化合物及び多発性骨髄腫細胞株において薬物耐性を発達させるために使用された化合物の濃度ならびにセレブロンタンパク質発現における変化の獲得
【表１４】
2020526534.tif 000071
Ｎ／Ａ＝該当なし；Ｐｏｍ＝ポマリドミド；＊背景レベル、実際のＣＲＢＮ（この細胞株において不在である）ではない
【０３３４】
結論：化合物２の最も際立った作用は、非腫瘍形成細胞上ではない、ＭＭ細胞株にわたる広く強力な抗増殖活性であった。化合物２は、ｔ（４；１４）、ｔ（１４；１６）などの高リスクの転座を含むＭＭ細胞株における強力な抗増殖活性を有する。レナリドミド及びポマリドミドと比較して、化合物２は大半のＭＭ細胞株の死滅において顕著により強力である。更に、化合物２は、カスパーゼ−３活性の誘導により測定されるとき、レナリドミド及びポマリドミドに対して獲得耐性を有するＭＭ細胞株においてアポトーシスを誘導した。
【０３３５】
実施例１０：骨髄前駆体の成人好中球への成熟に対する化合物２のエクスビボ作用
方法：健康なドナー（ＨＤ）からの骨髄（ＢＭ）ＣＤ３４＋細胞のエクスビボ培養物は、好中球特異的エクスビボ成熟を調査するために使用された。幹細胞因子（ＳＣＦ）、ｆｍｓ関連チロシンキナーゼ３リガンド（Ｆｌｔ３−Ｌ）、及び顆粒球コロニー刺激因子（Ｇ−ＣＳＦ）を培養培地に添加することにより、好中球前駆体のインビトロ分化を誘導した。図７に示されるように、５つの亜集団：造血幹細胞（ＨＳＣ、ＣＤ３４＋／ＣＤ３３−／ＣＤ１１ｂ−）ならびにＩ期（ＣＤ３４＋／ＣＤ３３＋／ＣＤ１１ｂ−）、ＩＩ期（ＣＤ３４−／ＣＤ３３＋／ＣＤ１１ｂ−）、ＩＩＩ期（ＣＤ３４−／ＣＤ３３＋／ＣＤ１１ｂ＋）、及びＩＶ期（ＣＤ３４−／ＣＤ３３−／ＣＤ１１ｂ＋）（未成熟から成熟へ）における細胞のパーセンテージとして、フローサイトメトリーにより、細胞分化を評価した。好中球前駆体の成熟に対する化合物２の作用が評価され、これらの事象のスケジュール依存を把握するために、異なる投与スケジュールが評価された。
【０３３６】
結果．毎日短期間の化合物２への曝露。好中球前駆体の成熟に対する、最大３日間連続した１、１０、及び１００ｎＭの化合物２での異なる曝露期間（２、４、及び６時間）の作用を、フローサイトメトリーを使用して予め指定した時点で評価した。結果は、好中球前駆体の後期成熟が化合物２によって遮断されたことを示し、成熟細胞は１日以上の曝露後に高濃度で数が大幅に低減した。ＩＩＩ期細胞表面免疫表現型を有する細胞の蓄積及びＩＶ期細胞表面免疫表現型（成熟好中球）を有する細胞集団の低減により証明されるように、成熟の停止は主に、ＩＩＩ期の好中球前駆体の発達において生じるようである。図８に示されるように、６時間のインキュベーションの例において、この成熟作用は、濃度依存的であり、個々の曝露期間（２、４、または６時間）によっては変わらないが、曝露の日数とともに増加する。重要なことには、死亡細胞において蓄積するアネキシンＶまたは７−アミノアクチノマイシンＤ陽性の細胞の割合において任意の検出可能な増加がないことにより証明されるように、化合物２に曝露された好中球前駆体及び成熟好中球の生存率は影響を受けなかった。
【０３３７】
化合物２への曝露後の成熟好中球の回復も系において評価された。本研究で利用したアッセイ系における未処理対照レベルの少なくとも５０％への成熟好中球レベルの回復は、臨床的に有意な好中球減少の誘導またはそれからの回復の不在と相関する。実際、化合物２なしでの１週間後、ＩＶ期細胞の割合は、その最下点から少なくとも５０％回復し（図８、下のパネル）、低濃度でより迅速かつ完全に回復する傾向がある。
【０３３８】
結論：結果は、化合物２で処理されたＭＭ患者の好中球減少の良好な管理が適切な投与スケジュールの使用で可能であり得ることを示す。
【０３３９】
毎日長期間の化合物２への曝露。好中球前駆体成熟の停止及び後の回復に対して異なるスケジュールが影響する可能性を更に特徴付けるために、成人好中球への、前述の期の骨髄前駆体成熟の各々の相対的割合における変化を、各日６または２４時間、１、１０、または１００ｎＭ化合物２に３日間または５日間連続して曝露した後、フローサイトメトリーにより評価した。健康なドナー由来のＣＤ３４＋ＢＭ細胞を、１０日目から開始して、各日６時間（ドナー番号１及び２）または２４時間（ドナー番号３及び４）、３日間または５日間連続、化合物２に曝露した。最終曝露が完了した後、細胞を洗浄し、化合物２の不在下で、２２日目まで再度インキュベートした。３日間または５日間連続した化合物２への６時間及び２４時間両方の曝露は、ＩＩＩ期好中球集団を増加させ、ＩＶ期集団の減少と対応し、ＩＩＩ期からＩＶへの成熟の遮断と一致した。それぞれ、図９及び図１０に示されるように、３日間及び５日間の６時間の曝露の例において、成熟停止からの回復速度は、濃度依存的であり、また毎日の曝露回数により影響を受け、高濃度の化合物２及び５日間対３日間の曝露後でより長引くが、毎日の曝露期間（６対２４時間）の変化は見かけ回復速度にほとんど影響しなかった。
【０３４０】
３日間連続して化合物２に曝露した後、５０％以上の正常な成熟の回復が試験した全ての条件において８〜１０日の休薬後に観察された（図１０、右側のパネル）。対照的に、５日間連続して化合物２に曝露した後の５０％以上の正常な成熟の回復は、８〜１０日の休薬後、１−及び１０−ｎＭ濃度に関してのみ観察された。最高濃度の化合物２（１００ｎＭ）では、より長い無薬物期間が好中球前駆体の成熟の回復に必要であり得る。しかしながら、この不完全な成熟の回復にもかかわらず、最大５日間の連続（２４時間）曝露を含む、試験した条件のいずれにおいても生存率の低下は観察されなかった。この知見は、６時間より長い化合物２への連続曝露により最適化された、骨髄腫細胞におけるアポトーシスの誘導と対照的である。
【０３４１】
５日スケジュールでの最終曝露後の６〜８日の間、初期段階のＩＶ期（成熟好中球）回復は１０−ｎＭ濃度の化合物２への曝露においてのみ観察され、一方、５日間にわたって１００ｎＭ化合物２に曝露された培養物において、この時間枠内で回復は観察されなかった。これらのデータは、連続日の日数増加にわたって高濃度の化合物２に曝露することが好中球前駆体の成熟停止（及び好中球減少）をより長引かせる前兆となり、回復速度が毎日の曝露期間（６対２４時間）とは無関係であることを示唆する。
【０３４２】
結論：まとめると、データは、患者の好中球減少の誘導及びそれからの回復が１日１回の投与と比較して化合物２のより集中的な投与（複数投与／日）により悪影響を受ける可能性がないことを示唆する。
【０３４３】
実施例１１：単剤として及び化合物２と組み合わせた好中球前駆体のインビトロ成熟に対するデキサメタゾンの作用
方法．好中球減少に対するデキサメタゾンの作用を理解するために、健康なドナー由来のＢＭ  ＣＤ３４＋細胞のインビトロ培養物を使用して、単剤として及び化合物２と組み合わせたデキサメタゾンにより媒介される好中球減少事象を評価した。このモデルにおけるデキサメタゾン単独療法の作用を定義するために、７つの異なる投与スケジュールを比較する１、１０、または１００ｎＭのデキサメタゾンへの曝露は３０時間維持された（図１１）。組み合わせ研究に関して、単一曝露化合物２（１、１０、または１００ｎＭ）及びデキサメタゾンは、培養の１３日目から開始して、それぞれ、６時間及び３０時間維持された。
【０３４４】
結果．結果は、好中球前駆体の成熟が試験した任意のスケジュール下で単剤デキサメタゾンへの曝露により影響は受けず、一方で、後期好中球前駆体の成熟が化合物２により遮断され（図１２）、成熟細胞の数は、１回の曝露後、全ての試験した濃度において低減したことを示した。この成熟停止は、化合物２がデキサメタゾンと組み合わされたときにも観察された。成熟の遮断は、化合物２の濃度に依存するが、デキサメタゾンの濃度の変化によっては変わらなかった。未成熟及び成熟好中球の生存率は、単独または組み合わせで、デキサメタゾンまたは化合物２により影響を受けなかった。休薬後、正常な成熟の完全な回復は、１週間の休薬後、全ての試験した条件下で観察された。
【０３４５】
結論．これらのデータは、化合物２により生じた好中球減少が投与スケジュールを修正することにより管理可能であるが、デキサメタゾンの同時治療によって緩和も悪化もしないことが予測されることを示す。
【０３４６】
実施例１２：レナリドミド耐性多発性骨髄腫に対する化合物２単独及びデキサメタゾンとの組み合わせでの作用。
方法：デキサメタゾンは、単剤として、または化合物２、ポマリドミド、またはレナリドミドと組み合わせてアポトーシスを誘導するその能力について評価された。アポトーシスの誘導は、レナリドミド耐性多発性骨髄腫細胞（Ｈ９２９−１０５１）において、カスパーゼ−Ｇｌｏを使用して測定された。デキサメタゾンは、超音波分注器を使用して、２０の濃度で分注された。試験品は、Ｈｅｗｌｅｔｔ−Ｐａｃｋａｒｄ  Ｄ３００  Ｄｉｇｉｔａｌ  Ｄｉｓｐｅｎｓｅｒで、デキサメタゾンウェルに単一濃度として添加された。アッセイの化合物の最終濃度は、デキサメタゾン（０．８μＭ〜０．００００２μＭ）、レナリドミド（１μＭ）、ポマリドミド（０．１μＭ）、及び化合物２（０．００１、０．０１、または０．１μＭ）であった。細胞はＭｕｌｔｉｄｒｏｐ分注器でアッセイプレートに分注され、２つ組のプレートがアッセイ用に作製された。アポトーシスの読み取りは、カスパーゼ−Ｇｌｏ  ３／７及びＣｅｌｌＴｉｔｅｒ−Ｇｌｏアッセイを使用して、化合物処理の７２時間後に行った。カスパーゼ−Ｇｌｏ  ３／７発光は、細胞数の違いを考慮するために、ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ−Ｇｌｏ発光に正規化された。処理した試料の倍率変化は、次のように計算された：処理した試料の正規化されたカスパーゼ／正規化されＤＭＳＯ対照の平均。
【０３４７】
結果：デキサメタゾン単独またはレナリドミド、ポマリドミド、もしくは化合物２と組み合わせたアポトーシスの活性は、カスパーゼ−３の誘導により測定された。化合物２は、デキサメタゾンと協同して、細胞生存率を低減し、濃度依存様式でデキサメタゾンのアポトーシスの能力を増強した。デキサメタゾン活性の開始は、化合物２の存在下で１対数シフトした。
【０３４８】
結論：化合物２は、デキサメタゾンのアポトーシス活性を増強し、臨床において化合物２と組み合わせて使用される場合、デキサメタゾンの用量を低減する可能性を示す。
【０３４９】
図１３に示されるように、劇的な双方向的相乗作用が、デキサメタゾンと組み合わせて、化合物２で処理された後に観察された。わずか１０ｎＭのデキサメタゾンが化合物２の細胞死滅能を増強し、低〜ナノモル以下の濃度の化合物２がデキサメタゾンのアポトーシス作用を増強する。
【０３５０】
実施例１３：化合物２は健康なヒトドナー由来の免疫細胞の抗腫瘍活性を増強する
末梢血単核細胞及びＫ５６２細胞を用いた共培養実験。方法：ヒト末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）の調製：健康なドナーから単離されたＰＢＭＣを、１×１０６細胞／ｍＬの密度で、１０％ＦＢＳとともにＲＰＭＩ  １６４０培地中で培養した。
【０３５１】
細胞培養：：Ｋ５６２細胞は対数期で維持され、細胞密度及び生存率は、Ｖｉ−ＣＥＬＬ（登録商標）ＸＲ細胞生死アナライザー（Ｂｅｃｋｍａｎ  Ｃｏｕｌｔｅｒ，Ｂｒｅａ，ＣＡ）を使用して、トリパンブルー排除により監視された。
【０３５２】
アッセイ手順：新しく単離したヒトＰＢＭＣを、２０単位／ｍＬの濃度で、組換えＩＬ−２とともに７２時間培養した。次に、末梢血単核細胞を沈降させ、２×１０６  細胞／ｍＬまで新しいＲＰＭＩ完全培地に再懸濁した。次いで、細胞を、示される濃度のＤＭＳＯまたは化合物で処理し、更に７２時間インキュベートした。次いで、ＰＢＭＣを新しいＲＰＭＩ完全培地で２回洗浄した後、共培養した。Ｋ５６２細胞を、１×１０６／ｍＬの細胞密度に再懸濁し、製造業者の指示に従い、１μＭ  ＣｅｌｌＴｒａｃｅ  ＣＦＳＥで染色した。次いで、標識したＫ５６２細胞を９６ウェル丸底プレートに１×１０５細胞／ウェルで播種した。次いで、末梢血単核細胞を、３つ組で、１：１５の比率で、同じ９６ウェルプレートに移し、３７℃で４時間インキュベートした。製造業者の指示に従い、アネキシンＶ−フルオレセインイソチオシアネート（ＦＩＴＣ）及びヨウ化プロピジウム（ＰＩ）を使用して、ＰＢＭＣ細胞による具体的な標的細胞溶解を測定し、試料をＦＡＣＳ  Ａｒｒａｙスキャンにかけた。非標識Ｋ５６２細胞、ＣｅｌｌＴｒａｃｅ  ＣＦＳＥ標識Ｋ５６２細胞、ならびにアネキシンＶ−ＦＩＴＣ−及びＰＩ標識された未処理のＫ５６２細胞は、対照として各アッセイに含まれた。
【０３５３】
化合物処理されたヒト末梢血単核細胞及び未処理の骨髄腫細胞株を用いた共培養アッセイ。方法：細胞培養。全ての骨髄腫細胞株は対数期で維持され、細胞密度及び生存率は、Ｖｉ−ＣＥＬＬ  ＸＲ細胞生死アナライザーを使用して、トリパンブルー排除により監視された。
【０３５４】
ＰＢＭＣ処理アッセイ手順。９６ウェル皿を抗ＣＤ３抗体（ＯＫＴ３、３μｇ／ｍＬ）で予めコーティングし、４℃で一晩インキュベートした後、実験を開始した。凍結ＰＢＭＣドナーを、３７℃で２分間、１０％ＦＢＳを含むＲＰＭＩ培地中で解凍し、細胞数及び生存率をＶｉ−ＣＥＬＬ（登録商標）（Ｂｅｃｋｍａｎ  Ｃｏｕｌｔｅｒ）で測定した。末梢血単核細胞を洗浄し、１×１０６細胞／ｍＬに希釈し、２００μＬの総容量の化合物処理したプレートに分注した。細胞を化合物とともに２時間インキュベートした後、抗ＣＤ３コーティングしたプレートに移し、３７℃で更に７２時間インキュベートした。７２時間後、ＰＢＭＣを遠心分離し、細胞をＲＰＭＩ培地＋１０％ＦＢＳで２回洗浄した。未処理のＭＭ細胞株（Ｈ９２９及びＨ９２９−１０５１）を、製造業者の指示に従い、ＣｅｌｌＴｒａｃｅ  ＣＦＳＥで標識し、０．１×１０６細胞／ｍＬの総濃度で、１００μＬの総容量のＵ字底９６ウェルプレートに再懸濁した。末梢血単核細胞を計数し、１：５の標的：エフェクター（Ｔ：Ｅ）比でＭＭ細胞に添加した。２４時間共培養した後、製造業者の指示に従い、アネキシンＶ−ＡＦ６４７及び７−ＡＡＤを使用して、ＰＢＭＣによる具体的な標的細胞溶解を測定し、試料をＡｔｔｕｎｅ  ＮｘＴ  Ｃｙｔｏｍｅｔｅｒ（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｆｉｓｈｅｒ）にかけた。
【０３５５】
ＰＢＭＣ及びＭＭ細胞処理アッセイ手順。９６ウェル皿を抗ＣＤ３抗体（ＯＫＴ３、３μｇ／ｍＬ）で予めコーティングし、４℃で一晩インキュベートした後、実験を開始した。凍結ＰＢＭＣドナー細胞を、３７℃で２分間、１０％ＦＢＳを含むＲＰＭＩ培地中で解凍し、細胞数及び生存率をＶｉ−ＣＥＬＬアナライザーで測定した。末梢血単核細胞を洗浄し、１×１０６細胞／ｍＬに希釈し、２００μＬの総容量の化合物処理したプレートに分注した。細胞を化合物とともに２時間インキュベートした後、抗ＣＤ３コーティングしたプレートに移し、更に７２時間インキュベートした。同時に、ＭＭ細胞株（ＮＣＩ−Ｈ９２９、Ｈ９２９−１０５１、ＯＰＭ２、ＯＰＭ２−Ｐ１０）を、０．１ｘ１０６細胞／ｍＬの最終濃度に希釈し、製造業者の指示に従い、ＣｅｌｌＴｒａｃｅ  ＣＦＳＥで標識した。次いで、多発性骨髄腫細胞株を、２００μＬの総容量の化合物処理したプレートに分注し、７２時間インキュベートした。７２時間後、ＰＢＭＣ及びＭＭ細胞を計数し、１：５の最終Ｔ：Ｅ比で、Ｕ字底９６ウェルプレートに移した。２４時間共培養した後、製造業者の指示に従い、アネキシンＶ−ＡＦ６４７及び７−ＡＡＤを使用して、ＰＢＭＣ細胞による具体的な標的細胞溶解を測定し、試料をＡｔｔｕｎｅ  ＮｘＴ  Ｃｙｔｏｍｅｔｅｒにかけた。
【０３５６】
結果．共培養モデルを使用して、健康なドナーから得たＰＢＭＣの抗腫瘍活性に対する化合物２の直接作用を決定した。ＩＬ−２活性化ＰＢＭＣの化合物２処理は、濃度依存様式で未処理Ｋ５６２細胞の死滅を誘導した（図１４、右側のパネル）。化合物２処理されたＰＢＭＣ（ＩＣ５０＝５．９ｐＭ）は、５０％の直接Ｋ５６２細胞死滅を達成する際に、ポマリドミド処理（ＰＯＭ；ＩＣ５０＝０．００４μＭ）ＰＢＭＣよりも約６００倍強力であり、レナリドミド処理（ＬＥＮ；ＩＣ５０＝０．０２μＭ）ＰＢＭＣよりも約２６００倍強力であった。化合物２はレナリドミド及びポマリドミドよりも強力であるが、奏功規模は化合物の間で類似した（図１４、右側のパネル）。
【０３５７】
化合物２とともにインキュベートされたＰＢＭＣの抗ＭＭ細胞活性に対する化合物２の作用は、感受性細胞における奏功と比較するために、耐性表現型を呈する細胞株において更に検査された。異なる共培養モデルにおいて、ＰＢＭＣドナー細胞を、化合物２、レナリドミド、またはポマリドミドで２時間前処理した後、抗ＣＤ３抗体コーティングされたプレート上で７２時間培養した。化合物２で処理した抗ＣＤ３抗体活性化ＰＢＭＣは、未処理レナリドミド感受性（ＮＣＩ−Ｈ９２９；ＩＣ５０＝０．００５μＭ）及びレナリドミド耐性（Ｈ９２９−１０５１；ＩＣ５０＝０．０００２μＭ）ＭＭ細胞株の腫瘍細胞溶解において、同程度に濃度依存的増加を示す（図１５）。化合物２は、生存可能なＭＭ細胞のパーセンテージの低減に関して、レナリドミド及びポマリドミドよりも強力であった。ＰＢＭＣにより細胞死滅の同様のレベルは、レナリドミド感受性及びレナリドミド耐性共培養腫瘍細胞に対しても見られ、ＰＢＭＣがそれらの耐性表現型と無関係な腫瘍細胞を死滅させるために刺激されたことを示す。
【０３５８】
化合物２とともに免疫細胞をプレインキュベートすることによりＭＭ細胞の標的化及び溶解が増強されたため、免疫媒介死滅へのそれらの感受性に対する化合物２とともにＭＭ細胞をプレインキュベートする作用も調査された（図１６、表１２）。４つのＭＭ細胞株及び抗ＣＤ３抗体活性化ＰＢＭＣを、化合物２、レナリドミド、またはポマリドミドとともに７２時間別個にプレインキュベートした。抗ＣＤ３抗体活性化ＰＢＭＣ及びＭＭ株を両方とも、化合物２、レナリドミド、またはポマリドミドで前処理し、続いて共培養した場合、ＰＢＭＣ誘導ＭＭ細胞溶解に対する作用は、死滅応答の効力及び規模の両方において増強された。単一ＭＭ細胞培養対腫瘍細胞共培養からのＩＣ５０値を比較すると、化合物２は、ＮＣＩ−Ｈ９２９細胞の死滅を約７０００倍増強し、Ｈ９２９−１０５１細胞の死滅を約６０００倍増強した。ポマリドミド耐性ＯＰＭ２−Ｐ１０細胞株に関して、ＭＭ細胞の化合物２処理は、免疫媒介死滅を約３０００倍増強した（表１２）。
表１２：単一培養対共培養における多発性骨髄腫細胞株の免疫媒介細胞死滅
【表１５】
2020526534.tif 000072
ＩＣ５０＝５０％細胞死滅をもたらす濃度。
【０３５９】
結論：化合物２処理されたＰＢＭＣは、レナリドミド及びポマリドミドで見られるのと同程度だが、非常に大きな効力で未処理のＫ５６２及びＭＭ細胞株の腫瘍溶解を誘導した。更に、腫瘍細胞死滅は、ＰＢＭＣ及びＭＭ細胞株の両方が化合物２で前処理された場合に非常に増強され、その強力な細胞自律作用に加えて、化合物２がＭＭ細胞株の免疫原性も増強し得ることを示す。ＭＭ細胞に対する強力な細胞自律及び免疫原性作用の組み合わせは、その免疫調節特性に加えて、化合物２を臨床の有望な候補にする。
【０３６０】
実施例１４：多発性骨髄腫に対するダラツムマブと組み合わせた化合物２の作用
多発性骨髄腫の治療に承認された抗ＣＤ３８抗体であるダラツムマブは、抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）、抗体依存性細胞食作用（ＡＤＣＰ）、及び補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）を通してその抗骨髄腫活性を発揮する。ダラツムマブと組み合わせた化合物２またはポマリドミドの作用は、ＭＭ細胞株において評価された。
【０３６１】
ＡＤＣＣアッセイ：ダラツムマブ媒介ＡＤＣＣに対する化合物２またはポマリドミドの作用は、ＭＭ細胞株のパネルにおいて、フローサイトメトリーによりインビトロで評価された。ＮＫ細胞を、１０Ｕ／ｍＬの組換えヒトＩＬ−２を含有するＮＫ培養培地中で一晩培養した後、アッセイを開始した。ＮＫ細胞を洗浄し、３．７５×１０６細胞／ｍＬでＮＫ細胞培養培地に再懸濁し戻した。ＭＭ細胞を、致死量以下の濃度の化合物２またはポマリドミドで７２時間前処理した後、ＡＤＣＣアッセイに使用した。ＭＭ細胞を洗浄し、製造業者の指示に従い、Ｔａｇ−ｉｔ  Ｖｉｏｌｅｔ（商標）Ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ  ａｎｄ  Ｃｅｌｌ  Ｔｒａｃｋｉｎｇ  Ｄｙｅで標識し、続いて、０．７５×１０６細胞／ｍＬの濃度でＮＫ培養培地に再懸濁した。９６ウェルプレートにおいて、１０：１のエフェクター対腫瘍比で、ＡＤＣＣアッセイを３つ組で行った。ＭＭ細胞（１０μＬ）を、ウェル中で１０μＬの２×濃度のダラツムマブと混合した後、２０μＬのＮＫ細胞を添加した。共培養物を３７℃で３時間インキュベートし、続いて５０μＬの７−ＡＡＤ溶液を室温で１５分にわたって添加した。ＢＤ  Ｃｅｌｅｓｔａフローサイトメトリーで分析を行った。
【０３６２】
ＡＤＣＰアッセイ：ダラツムマブ媒介ＡＤＣＰに対する化合物２またはポマリドミドの作用は、ＭＭ細胞株のパネルにおいて決定された。単球を、５０ｎｇ／ｍＬのＭ−ＣＳＦを含有する１００μＬ容積の完全ＡＩＭ−Ｖ培地において、４０，０００細胞／ウェルで９６ウェルプレートに蒔いた。細胞をプレート上に室温で１５分間定着させた後、９日間、３７℃、５％ＣＯ２インキュベータに入れてマクロファージに分化させる。培養培地を、３〜４日ごとに新しい完全培地で補充した。ＡＤＣＰアッセイの朝に、マクロファージを、３７℃、５％ＣＯ２で、２〜４時間血清欠乏させた後、ＭＭ細胞と共培養した。ＭＭ細胞を致死量以下の濃度の化合物２またはポマリドミドで７２時間前処理した。アッセイの日に、ＭＭ細胞をＰＢＳで洗浄し、ＣＳＦＥで１５分間標識した。等容量の２０％ＦＢＳで反応を停止させた。細胞をＰＢＳで２回洗浄し、１．６×１０６細胞／ｍＬで、ＡＩＭ−Ｖ培地に再懸濁した。次いで、５０μＬのＭＭ細胞を５０μＬの２μｇ／ｍＬダラツムマブと、室温で１０分間混合した後、血清欠乏させたマクロファージに添加した。各条件を３つ組でアッセイした。アッセイの最終容量は、エフェクターと標的との比率が２：１の１０％ヒト血清を含有する２００μＬであった。プレートを１分間５００ｒｐｍで回転させ、続いて、３７℃、５％ＣＯ２で３時間インキュベートした。インキュベーションの終わりに、プレートを１００μＬのＰＢＳで洗浄し、残りの細胞を抗ＣＤ１４及び抗ＣＤ１３８で染色して、それぞれ、マクロファージ及びＭＭ細胞を同定した。プレートを洗浄し、ウェルを１００μＬのＰＢＳで充填した。５０μＬの０．２５％トリプシンを添加して、マクロファージをウェルの底から剥離した。５０μＬの完全ＡＩＭ−Ｖ培地を添加して、試料を中和した。試料をフローサイトメトリーで分析した。食作用パーセントを、ＣＳＦＥ／ＣＤ１４二重陽性細胞をＣＤ１４＋細胞の総数で除し、１００を乗ずることによって決定した。
【０３６３】
結果：化合物２及びポマリドミドでＭＭ細胞を処理することによって、ＣＤ３８発現が用量依存的に増加した（図１７）。ＣＤ３８発現の程度は、ポマリドミドと比較して、化合物２でより大きく、低濃度で生じた。ＭＭ細胞＋／−化合物２またはポマリドミド前処理は、ダラツムマブを用いてＡＤＣＣアッセイにおいて評価された。化合物２で処理されたＭＭ細胞は、未処理細胞と比較して、ラツムマブで高い腫瘍溶解度を示した（図１８）。化合物２で処理された細胞も、ポマリドミド処理された細胞と比較して、ダラツムマブ媒介ＡＤＣＣにより感受性であった。化合物２及びポマリドミドの、ダラツムマブ媒介ＡＤＣＰを調節する能力も試験した。化合物２で処理されたＭＭ細胞は、未処理及びポマリドミド処理された細胞と比較して、ダラツムマブ媒介ＡＤＣＰにより感受性であった（図１９）。試験した１つの細胞株ＡＲＨ−７７のみが、化合物２またはポマリドミドのいずれかでは増強されたＡＤＣＰを示さなかったが、化合物２では増強されたＡＤＣＣを示した。
【０３６４】
結論：化合物２は、ＭＭ細胞においてＣＤ３８発現を上方調節し、ポマリドミドまたは未処理細胞と比較して、ダラツムマブ媒介ＡＤＣＣ及びＡＤＣＰを増加させた。このデータは、ダラツムマブと化合物２とを組み合わせることにより、ポマリドミドまたはダラツムマブ単独での組み合わせと比較して、ＭＭの治療により有効であり得ることを示唆する。
【０３６５】
実施例１５：多発性骨髄腫に対するプロテアソーム阻害剤と組み合わせた化合物２の作用
プロテアソーム阻害剤及び試験化合物で処理する２４時間前に、適切な数の細胞を、新しい培地中に０．２ｘ１０６／ｍＬの濃度に分けて、指数関数的に成長させた。処理の日に、化合物を新しくＤＭＳＯに溶媒和した。プロテアソーム阻害剤ボルテゾミブ、またはカルフィルゾミブを希釈し、ボルテゾミブについては１５０ｎＭまたは３００ｎＭ、そしてカルフィルゾミブについては３００ｎＭまたは５５０ｎＭの最終作業濃度で、予め温めた培養培地に添加した。プロテアソーム阻害剤の濃度は、臨床Ｃｍａｘ濃度、ならびに具体的な量のβ５プロテアソーム活性を阻害するために必要な期間及びＰＩの濃度を決定した各細胞株における以前の研究に基づいて決定された。細胞を計数し、適切な数を、プロテアソーム阻害剤を含有する培地中に入れ、十分に混合した。３７℃、５％ＣＯ２で１時間インキュベートした後、細胞を４０ｍＬの完全培地で２回洗浄して、プロテアソーム阻害剤を除去した。各プロテアソーム処理のアリコートをアッセイして、β５、β２、及びβ１サブユニット阻害の程度を確認した。細胞を０．１ｘ１０６／ｍＬに再懸濁し、１００μＬ／ウェルで、化合物２またはポマリドミドのいずれかの３倍滴定を含有する新しい培養品（ｃｕｌｔｕｒｅ−ｗａｒｅ）に入れた。残りの実験の間、蒔いた細胞を、３７℃、５％ＣＯ２で最大７２時間培養した。２４時間ごとに、プロテアソーム阻害を、Ｃｅｌｌ−Ｂａｓｅｄ  Ｐｒｏｔｅａｓｏｍｅ−Ｇｌｏ  Ａｓｓａｙにより監視した。増殖及びアポトーシスはフローサイトメトリーにより７２時間で測定された。ＡＰＣアネキシン−Ｖ及び７−ＡＡＤで細胞を染色して、培養物中の残った生存可能な細胞の数を数えた。
【０３６６】
結果．プロテアソーム阻害剤ボルテゾミブ、及びカルフィルゾミブへの曝露の臨床薬物動態（ＰＫ）及び薬力学（ＰＤ）を模倣するために、インビトロ細胞アッセイを確立した。モデルは、インビボで観察される迅速なクリアランスを達成する一方で、プロテアソーム阻害剤に短期間曝露し、続いて、臨床的に関連のあるプロテアソーム阻害剤の濃度で細胞に投与するために化合物を十分に洗浄することを用いる。更に、比較可能なレベルのβ５プロテアソーム阻害が全細胞株にわたって達成され得る。このモデルは、多発性骨髄腫及び形質細胞白血病細胞株（ポマリドミド耐性ＯＰＭ２．Ｐ１０、ＲＰＭＩ．８２２６、ならびに形質細胞白血病株Ｌ３６３及びＪＪＮ−３）のパネルにおいて、ボルテゾミブまたはカルフィルゾミブのいずれかと組み合わせて、化合物２の組み合わせ作用を評価するために使用された。
【０３６７】
ボルテゾミブ及び化合物２は、試験された両方のＭＭ株ＯＰＭ２．Ｐ１０及びＲＰＭＩ．８２２６、ならびに形質細胞白血病細胞株ＪＪＮ−３のうちの１つにおいて、組み合わせ作用を示した。Ｌ３６３細胞株における組み合わせ作用は、ボルテゾミブがこのインビトロアッセイの条件下で細胞生存率において単剤活性を有さなかったため、評価することができなかった（図２０及び図２１Ａ）。
【０３６８】
実験間のカルフィルゾミブ処理は、１時間の処理にわたって達成した細胞死滅パーセントにおいて変動したが、化合物２との組み合わせ作用は４つ全ての細胞株において示された（図２１Ｂ）。
【０３６９】
結論：驚くべきことに、化合物２は、臨床的に関連するプロテアソーム阻害レベルで、細胞死滅に関してその能力を維持する。ボルテゾミブまたはカルフィルゾミブのいずれかとの化合物２の組み合わせは、ＭＭ細胞に対するアポトーシス及び抗増殖活性の増加を示した。
【０３７０】
実施例１６：ヒストンデアセチラーゼ阻害剤、化学療法剤、Ｂｃｌ−２阻害剤、Ｍｃｌ−１阻害剤、ＢＥＴ阻害剤、またはＬＳＤ−１阻害剤と組み合わせた化合物２の作用。
化合物２及び様々な機構を有する小分子阻害剤を用いた併用治療の作用が、ＭＭ細胞株のパネルにおいて評価された。１３の小分子阻害剤が、それらの前臨床及び／またはＭＭに対する活性に基づいて、化合物２との併用研究に選択された。細胞株Ｈ９２９−１０５１、ＫＭＳ１１、ＫＭＳ−１２ＰＥ、Ｌ３６３、ＯＰＭ−Ｐ１０、及びＲＰＭＩ８２２６が、ＭＭ細胞株にわたって異なる遺伝的クラスター形成群を表すためにこの研究に選択された。併用治療のための化合物濃度は、単剤のＩＣ５０の１対数より上かつ２対数より下の範囲で選択された。併用薬剤は１：３希釈で６点用量応答曲線（ＤＲＣ）で投与され、化合物２は同様に１：３希釈で１０点ＤＲＣで投与された。併用実験は２回実行され、各時、別のプレートにデータを複製した。化合物を、超音波分注器を使用して、３８４ウェルプレートの適切なウェルに予め配置した。全てのＭＭ細胞株は、１ｘペニシリン−ストレプトマイシンを含有する示される細胞培養培地を使用して、３７℃、５％ＣＯ２で、インキュベータ内で培養された。Ｍｕｌｔｉｄｒｏｐ  Ｃｏｍｂｉ  Ｒｅａｇｅｎｔ  Ｄｉｓｐｅｎｓｅｒを使用して、化合物含有３８４ウェルプレートに細胞を添加し、３７℃、５％ＣＯ２で３日間インキュベートした。３日後、細胞を、発光検出器（ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ  Ｅｎｖｉｓｉｏｎ）で測定されたＣｅｌｌ  Ｔｉｔｅｒ−Ｇｌｏを介してＡＴＰ含有量のそれらのレベルについて評価した。
【０３７１】
最高単剤（ＨＡＳ）方法を使用して、用量応答曲線データにおける相乗作用を検出した。組み合わせは、応答曲面見込みから分析された。統計的枠組み（Ｖａｎ  Ｄｅｒ  Ｂｏｒｇｈｔ，Ｋ．，ｅｔ  ａｌ．，ＢＩＧＬ：Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌｌｙ  Ｉｎｔｕｉｔｉｖｅ  Ｇｅｎｅｒａｌｉｚｅｄ  Ｌｏｅｗｅ  ｎｕｌｌ  ｍｏｄｅｌ  ｆｏｒ  ｐｒｅｄｉｃｔｉｏｎ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｅｘｐｅｃｔｅｄ  ｃｏｍｂｉｎｅｄ  ｅｆｆｅｃｔ  ｃｏｍｐａｔｉｂｌｅ  ｗｉｔｈ  ｐａｒｔｉａｌ  ａｇｏｎｉｓｍ  ａｎｄ  ａｎｔａｇｏｎｉｓｍ；Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ  Ｒｅｐｏｒｔｓ，７（１），１７９３５−１−１７９３５−９（２０１７））を、２つの統計試験：１）完全応答曲面がヌルモデルとは異なる、２）単一のウェルはヌルモデルとは異なる、を用いたＨＡＳヌルモデルに加えて、分析に組み込んだ。
【０３７２】
結果：小分子阻害剤と組み合わせた化合物２による治療の作用が、多発性骨髄腫細胞株のパネルにおいて評価された。化合物２は１４の化合物と組み合わせてスクリーニングされ、相乗作用は６つの細胞株の全てのウェルにわたって計算された。デキサメタゾン及びエトポシドは、試験した６つの細胞株のうちの５つで、化合物２と組み合わせて有意な相乗作用を示した（図２２）。化合物２とＢＥＴ阻害剤（４−［２−（シクロプロピルメトキシ）−５−（メタンスルホニル）フェニル］−２−メチルイソキノリン−１（２Ｈ）−オン（化合物Ｄ）、ビラブレシブ、及びＧＳＫ５２５７６２Ａ）との組み合わせも、ＭＭ細胞において相乗的な活性を示し、３つの阻害剤の間で相乗作用の程度は異なった。化合物２とＡＭＧ１７６（ＭＣＬ−１阻害剤）との組み合わせは、３つの細胞株（ＫＭＳ１１、ＫＭＳ１２−ＰＥ、Ｌ３６３）において相乗的な活性を示し、一方、化合物２とＡＣＹ２４１及びパノビノスタット（ヒストンデアセチラーゼ阻害剤）との組み合わせは、それぞれ、Ｌ３６３／ＯＰＭ２−Ｐ１０及びＬ３６３／Ｈ９２９−１０５１において相乗的であった。４−［２−（４−アミノ−ピペリジン−１−ｙｌ）−５−（３−フルオロ−４−メトキシ−フェニル）−１−メチル−６−オキソ−１，６−ジヒドロピリミジン−４−イル］−２−フルオロ−ベンゾニトリル（化合物Ｅ）と組み合わせた化合物２は、Ｌ３６３及びＫＭＳ１２−ＰＥ細胞において相乗的であった。ＭＣＬ−１阻害剤ＭＩＫ６６５は、試験した６つのＭＭ細胞株において有意な相乗作用を示さなかった唯一の化合物であった。
【０３７３】
結論：１４の小分子のうちの１２と組み合わせた化合物２での治療は、試験したＭＭ細胞株のうちの少なくとも１つ以上において相乗的な活性を示した。化合物のうちの６つとの併用は、試験した少なくとも３つのＭＭ細胞株において相乗作用を示した（図２２）。このデータは、化合物２と試験した小分子阻害剤との併用治療が、相乗的な活性を有するいくつかを含む、ＭＭの潜在的な治療パラダイムを表すことを示唆する。
【０３７４】
実施例１７：化合物２単独及びデキサメタゾンとの組み合わせでのインビボ抗腫瘍活性
方法：レナリドミド耐性ＮＣＩ−Ｈ９２９（Ｈ９２９−１０５１）多発性骨髄腫／形質細胞腫の腫瘍を有する雌のＳＣＩＤマウスで、異種移植研究を行った。雌のＳＣＩＤマウスの右後肢上の腹側領域に、Ｈ９２９−１０５１細胞を皮下接種した。動物の接種後、腫瘍をおよそ１００ｍｍ３に成長させた後、無作為化した。腫瘍細胞接種後の１３日目に、７９〜１５７ｍｍ３の範囲のＨ９２９−１０５１腫瘍を有するマウスを一緒にプールし、様々な治療群に無作為化した。化合物２を、水中２％ＨＰＭＣに製剤化（懸濁液として）した。デキサメタゾンを、脱イオン水中０．５％ＣＭＣ／０．２５％  Ｔｗｅｅｎ  ８０に製剤化した。化合物２（０．１ｍｇ／ｋｇ）及びデキサメタゾン（０．５ｍｇ／ｋｇ）を、腫瘍細胞接種後の１３日目から開始して、研究期間の間、１日１回経口投与した。併用群において、動物は、腫瘍細胞接種後の１３日目から開始して、研究期間の間、化合物２（０．１ｍｇ／ｋｇ／日）及びデキサメタゾン（０．５ｍｇ／ｋｇ／日）を同時に受けた。カリパスを使用して腫瘍を週に２回測定し、式Ｗ２×Ｌ／２を使用して腫瘍体積を計算した。１元配置または２元配置分散分析（ＡＮＯＶＡ）を使用して、統計分析を行った。部分積方法を使用して、相乗作用計算を行った。
【０３７５】
結果：単剤化合物２での処置は、有意に（ｐ＜０．０１）Ｈ９２９−１０５１多発性骨髄腫の腫瘍成長を阻害した（−３４％）。単剤としてのデキサメタゾンでの処置は、Ｈ９２９−１０５１異種移植腫瘍成長をわずかに阻害した（−２０％）。０．５ｍｇ／ｋｇのデキサメタゾンと組み合わせて投与された０．１ｍｇ／ｋｇの化合物２での処置は、ビヒクル対照と比較した場合、腫瘍体積において、８４％の腫瘍体積の低減を示す有意な（ｐ＜０．０００１）減少をもたらした。ボンフェローニの事後検定を用いた２元配置ＡＮＯＶＡにおいて、この組み合わせ抗腫瘍活性は、化合物２単独（８４％対３４％  ＴＶＲ；ｐ＜０．０００１）またはデキサメタゾン単独（８４％対２０％  ＴＶＲ；ｐ＜０．０００１）よりも非常に良好である。部分積方法を使用して、０．１ｍｇ／ｋｇの化合物２と０．５ｍｇ／ｋｇのデキサメタゾンとの組み合わせ抗腫瘍活性は、腫瘍体積の減少に相乗的であると決定された。（図２３）
【０３７６】
結論：デキサメタゾンと組み合わせた化合物２は、ＮＣＩ−Ｈ９２９多発性骨髄腫／形質細胞腫の腫瘍モデルにおいて腫瘍体積の低減に相乗作用を呈し、化合物２とデキサメタゾンとの併用処置がレナリドミド耐性ＭＭモデルにおいて相乗的な抗腫瘍活性を示したことを示す。化合物２は、デキサメタゾンのアポトーシス活性を増強し、臨床において化合物２と組み合わせて使用される場合、デキサメタゾンの用量を低減する可能性を示す。
【０３７７】
実施例１８：化合物２単独及びボルテゾミブとの組み合わせでのインビボ抗腫瘍活性。
方法：レナリドミド耐性ＮＣＩ−Ｈ９２９（Ｈ９２９−１０５１）多発性骨髄腫／形質細胞腫の腫瘍を有する雌のＳＣＩＤマウスで、異種移植研究を行った。雌のＳＣＩＤマウスの右後肢上の腹側領域に、Ｈ９２９−１０５１細胞を皮下接種した。動物の接種後、腫瘍をおよそ５００ｍｍ３に成長させた後、無作為化した。腫瘍細胞接種後の３１日目に、３６６〜５３５ｍｍ３の範囲のＨ９２９−１０５１腫瘍を有するマウスを一緒にプールし、様々な治療群に無作為化した。化合物２を、水中２％ＨＰＭＣに製剤化（懸濁液として）した。ボルテゾミブを、生理食塩水中１％ＤＭＳＯに製剤化（溶液として）した。化合物２（１ｍｇ／ｋｇ）を、腫瘍細胞接種後の３１日目から開始して、３日間連続して、１日１回経口投与した。ボルテゾミブ（１ｍｇ／ｋｇ）を、腫瘍細胞接種後の３１日目に、単一用量として、静脈内投与した。併用群において、動物は、３１〜３３日目に、経口により化合物２（１ｍｇ／ｋｇ／日）を受け、ボルテゾミブは、３１日目に単一用量として静脈内投与された。３１日目に、ボルテゾミブは、化合物２の最初の投与１時間前に投与された。カリパスを使用して腫瘍を週に２回測定し、式Ｗ２×Ｌ／２を使用して腫瘍体積を計算した。腫瘍体積がおよそ２０００ｍｍ３の所定のエンドポイントに達した場合、動物を安楽死させた。１元配置または２元配置分散分析（ＡＮＯＶＡ）を使用して、最大５０日目まで統計分析を行った。部分積方法を使用して、相乗作用計算を行った。
【０３７８】
結果：腫瘍細胞接種後の３１〜３３日目に３日間連続して１日１回投与した場合（ｑｄｘ３）の、単剤化合物２での処置は、５０日目に、有意に（ｐ＜０．０００１）Ｈ９２９−１０５１多発性骨髄腫の腫瘍成長を阻害した（−４４％）。経時的に、化合物２（１ｍｇ／ｋｇ）で処置された動物の腫瘍は成長し、５８日目までにおよそ２０００ｍｍ３に達した。３１日目に単一用量で投与された場合、単剤としてのボルテゾミブでの処置は、５０日目に、Ｈ９２９−１０５１異種移植腫瘍成長を有意に（ｐ＜０．０００１）阻害した（−６０％）。経時的に、ボルテゾミブ（１ｍｇ／ｋｇ）で処置された動物の腫瘍は成長し、６６日目までにおよそ２０００ｍｍ３に達した。１ｍｇ／ｋｇ（単一用量）のボルテゾミブと組み合わせて投与された場合、１ｍｇ／ｋｇの化合物２での処置（ｑｄｘ３）は、ビヒクル対照と比較した場合、腫瘍体積において、５０日目までに９８％の腫瘍体積の低減を示す有意な（ｐ＜０．０００１）減少をもたらした。ボンフェローニの事後検定を用いた２元配置ＡＮＯＶＡにおいて、この組み合わせ抗腫瘍活性は、化合物２単独（９８％対４４％  ＴＶＲ；ｐ＜０．０００１）またはボルテゾミブ単独（９８％対６０％  ＴＶＲ；ｐ＜０．０００１）よりも非常に良好である。部分積方法を使用して、１ｍｇ／ｋｇの化合物２と１ｍｇ／ｋｇのデキサメタゾンとの組み合わせ抗腫瘍活性は、腫瘍体積の減少に相乗的であると決定された。驚くべきことに、腫瘍細胞接種の５３日目までに、化合物２とボルテゾミブとの組み合わせで処置された９匹の動物のうちの７匹は、腫瘍がなくなり、腫瘍がないままであった。（図２４）
【０３７９】
結論：ボルテゾミブと組み合わせた化合物２は、レナリドミド耐性ＮＣＩ−Ｈ９２９形質細胞腫の腫瘍モデルにおいて腫瘍体積の低減に相乗作用を呈し、驚くべきことに、動物の腫瘍がなくなった。
【０３８０】
実施例１９：第１相臨床試験−再発性及び不応性多発性骨髄腫
再発性及び不応性多発性骨髄腫（ＲＲＭＭ）の対象において、デキサメタゾンと組み合わせた化合物２の安全性、薬物動態、及び予備的な有効性を評価するために、第１相多施設、非盲検試験が行われた。
【０３８１】
目的：本試験の主な目的は、最低２つの化合物２投与スケジュールとともに、デキサメタゾンと組み合わせた化合物２の薬物動態（ＰＫ）、安全性／忍容性を評価し、最大投与可能量（ＭＴＤ）／推奨される第２部用量（ＲＰ２Ｄ）を定義することである。第２の目的は、デキサメタゾンと組み合わせた化合物２の予備的な有効性を評価することである。
【０３８２】
試験設計：これは、ＲＲＭＭの対象において、デキサメタゾンと組み合わせた化合物２の安全性、ＰＫ／ＰＤ、及び予備的な有効性を評価するための、非盲検、多施設、共同第１相試験である。全ての適格対象は、ＲＲＭＭにおいて臨床利益を付与することが知られている利用可能な療法に失敗するか、それに不耐性であるか、またはさもなければその候補者であってはならない。
【０３８３】
この試験は、以下の２部で実施した：パート１では、標準的な用量のデキサメタゾンを同時に用いた漸増用量の化合物２のＰＫ／ＰＤ及び安全性を評価し、最低２つの異なる投与スケジュールに従い投与された場合の組み合わせに対するＭＴＤ／ＲＰ２Ｄを決定する。パート２では、両投与スケジュールのＲＰ２Ｄの化合物２＋デキサメタゾンの単群拡大コホート（複数可）からなる。安全性、ＰＫ、及びＰＤ評価に加えて、対象は全員、Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  Ｍｙｅｌｏｍａ  Ｗｏｒｋｉｎｇ  Ｇｒｏｕｐ（ＩＭＷＧ）治療効果判定統一基準（Ｒａｊｋｕｍａｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｏｎｓｅｎｓｕｓ  ｒｅｃｏｍｍｅｎｄａｔｉｏｎｓ  ｆｏｒ  ｔｈｅ  ｕｎｉｆｏｒｍ  ｒｅｐｏｒｔｉｎｇ  ｏｆ  ｃｌｉｎｉｃａｌ  ｔｒｉａｌｓ：  ｒｅｐｏｒｔ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  Ｍｙｅｌｏｍａ  Ｗｏｒｋｓｈｏｐ  Ｃｏｎｓｅｎｓｕｓ  Ｐａｎｅｌ  １．Ｂｌｏｏｄ，２０１１，１１７（１８）：４６９１−５、Ｋｕｍａｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  Ｍｙｅｌｏｍａ  Ｗｏｒｋｉｎｇ  Ｇｒｏｕｐ  ｃｏｎｓｅｎｓｕｓ  ｃｒｉｔｅｒｉａ  ｆｏｒ  ｒｅｓｐｏｎｓｅ  ａｎｄ  ｍｉｎｉｍａｌ  ｒｅｓｉｄｕａｌ  ｄｉｓｅａｓｅ  ａｓｓｅｓｓｍｅｎｔ  ｉｎ  ｍｕｌｔｉｐｌｅ  ｍｙｅｌｏｍａ，Ｌａｎｃｅｔ  Ｏｎｃｏｌｏｇｙ，２０１６，１７：ｅ３２８−４６）による毎月の奏功評価を受け、疾患が進行する、毒性に耐えられなくなる、または試験治療の中止を医師もしくは対象が判断するまで、試験治療を継続することができる。
【０３８４】
本試験は、医薬品規制調和国際会議（ＩＣＨ）／医薬品の臨床試験の実施に関する基準（ＧＣＰ）及び適用される規制要件に準拠して行われる。
【０３８５】
パート１（用量漸増）：ＲＲＭＭの対象コホートは、その安全性、ＭＴＤ／ＲＰ２Ｄ、及びＰＫ／ＰＤプロファイルを評価するために、漸増用量の化合物２＋固定用量のデキサメタゾン（≧７５歳の対象においては４０ｍｇ／用量；２０ｍｇ／用量）を受ける。最低２つの異なる投与スケジュールがパート１で評価され、１つ目は、１０日間連続した１日１回（ＱＤ）の投与、続いて４日間の治療なし、の２回からなり、各々２８日サイクルである（２０／２８スケジュールと称される）。２つ目のスケジュールは、各サイクル、３日間連続で１日２回（ＢＩＤ）の投与、続いて１１日間の試験治療なし、の２回からなる（６／２８スケジュールと称される）。初期用量コホートは、２０／２８スケジュールで０．１ｍｇ／日の化合物２  ＱＤ、そして６／２８スケジュールで０．２ｍｇ  ＢＩＤを受ける。対象の割り付けは、一方または両方のスケジュールの対象スロットの利用可能性に付随してスポンサーにより割り当てられる。投与スケジュール間の切り替えは認められない。追加の投与スケジュール（例えば、２８日サイクルで、５日間の化合物２投与、続いて９日間の治療なし×２、または７日間の投与、続いて７日間の治療なし×２）は、２０／２８及び６／２８スケジュールに関連して、初期の安全性及びＰＫ／ＰＤ結果の成果を待つ間、プロトコルの改訂の条件に基づいて調査され得る。
【０３８６】
全ての投与スケジュールに関して、サイクル１、１〜２８日目は、ＭＴＤ決定の目的のための用量制限毒性（ＤＬＴ）評価期間を構成する。対象は、サイクル１において、２０／２８スケジュールの２０投与日のうちの少なくとも１６日、及び６／２８スケジュールの６投与日のうちの少なくとも５日（１０投与）規定用量の化合物２を受ける場合、またはＤＬＴを経験する場合、ＤＬＴについて評価される。ＤＬＴ評価不能対象は代替えされる。
【０３８７】
各スケジュールにおいて、対象が３人以上のコホートは、明瞭かつ議論する余地がなく外部原因に起因しない、２つのグレード２の治療下で発生した有害事象が生じるまで、逐次コホートにおいて１００％の増加量で増加させた用量の化合物２を受ける。以後、５０％を超えない用量増加が、最初のＤＬＴが生じるまで続く。共変数として、割り当てられた化合物２の用量、投与数／日（ＱＤ対ＢＩＤ）、及び各スケジュールの連続投与日の日数（３対１０）を用いて、いずれかの投与スケジュールで最初のＤＬＴが生じた後、ロジスティクス回帰を使用するベイズ用量漸増方法論を利用した。化合物２＋デキサメタゾンの組み合わせの毒性率は、全てのスケジュールに関して２０％である。
【０３８８】
対象内用量漸増は、ＤＬＴ評価期間中は、認められない；しかしながら、サイクル２以降、疾患進行のエビデンスのない対象で割り当てられた化合物２の用量に忍容である者は、割り当てられた投与スケジュール内の対象の少なくとも１つのコホートで適切に忍容されることが示された最高用量に（治験責任医師の裁量で、及び試験の医療監視員と相談して）漸増させることができる。
【０３８９】
パート２（コホート拡大）：パート１の完了時に、化合物２＋デキサメタゾンの単群拡大試験を２０人／投与スケジュールの対象において実施し、ＲＰ２Ｄ及びスケジュールでのその安全性、ＰＤ、及び有効性を更に評価した。
【０３９０】
化合物２＋デキサメタゾンについてのＲＰ２Ｄの決定時に、異なる以前の治療歴及び／または予後特徴を有する１つ以上の対象コホートにおいて、関心の他の抗骨髄腫剤、例えば抗ＣＤ３８と組み合わせた化合物２／デキサメタゾンの安全性／忍容性、ＰＫ、及び予備的な有効性の評価を、本プロトコルの一部として並行して開始することもできる。
【０３９１】
試験集団：最後の選択治療に不応性であり、再発性及び不応性疾患を有する対象に臨床利益を付与することが知られている利用可能な療法に失敗するか、それに不耐性であるか、またはさもなければその候補ではなく、０〜２の米国東海岸がん臨床試験グループパフォーマンスステータス（ＥＣＯＧ  ＰＳ）、測定可能な疾患、ならびに適切な骨髄、腎及び心機能を有するの≧１８歳のＭＭ対象が登録することができる。同種移植、非分泌型もしくは小分泌型ＭＭ、形質細胞白血病、または原発性不応性ＭＭ（すなわち、以前の治療レジメンに少なくともわずかな奏功歴がない）は除外される。
【０３９２】
選択基準：対象は、試験に登録するためには以下の基準を満たさなければならない：
１．同意説明文書（ＩＣＦ）に署名した時点で≧１８歳の対象。
２．対象は、任意の試験関連評価／手順が行われる前に、ＩＣＦを理解して自主的に署名しなければならない。
３．試験の来訪スケジュール及び他のプロトコル要件を遵守する意思があり、遵守することが可能である対象。
４．米国東海岸がん臨床試験グループ（ＥＣＯＧ）パフォーマンスステータスのスコアが、０、１、または２である。
５．対象は、文書によるＭＭの診断を有し、登録時に測定可能な疾患を有していなければならない。測定可能な疾患は、以下のように定義される：
ａ．ｓＰＥＰによるＭタンパク質量≧０．５ｇ／ｄＬ、または
ｂ．ｕＰＥＰによる≧２００ｍｇ／２４時間尿収集、または
ｃ．検出可能な血清もしくはＭタンパク質がない対象において、血清ＦＬＣレベル＞１００ｍｇ／Ｌ（ミリグラム／リットル）関与軽鎖、及び異常なカッパ／ラムダ（κ／λ）比、または
ｄ．免疫グロブリンクラスＡ（ＩｇＡ）を有する対象に関して、疾患が定量的免疫グロブリン測定によってしか確実に測定することができない骨髄腫の場合、血清ＩｇＡレベル≧０．５０ｇ／ｄＬ。
６．全ての対象は、
ａ．最後の骨髄腫療法の最終投与から６０日、または６０日以内の文書による疾患進行を有し、かつ
ｂ．ＲＲＭＭの対象に臨床利益を付与することが知られている利用可能な療法に失敗するか、それに不耐性であるか、またはさもなければその候補であってはならない。
注：前の選択療法には、個々に（任意の順序で）、または一緒に投与された、（最低でも）プロテアソーム阻害剤及びセレブロン調節剤が含まれなければならない。
７．対象は、以下の検査値を有していなければならない：
●≧７日間（ペグフィルグラスチムに関しては≧１４日間）成長因子支持なしでの絶対好中球数（ＡＮＣ）≧１．２５×１０９／Ｌ。
●ヘモグロビン（Ｈｇｂ）≧８ｇ／ｄＬ。
●≧７日間（骨髄において＞５０％形質細胞の対象に関しては≧５０×１０９／Ｌ）輸血せずに血小板（ｐｌｔ）≧７５×１０９／Ｌ。
●補正血清カルシウム≦１３．５ｍｇ／ｄＬ（≦３．４ｍｍｏｌ／Ｌ）。
●２４時間クレアチニンクリアランス（ＣｒＣｌ）≧４５ｍＬ／分。
●ＡＳＴ／ＳＧＯＴ及びＡＬＴ／ＳＧＰＴ≦３．０×正常上限（ＵＬＮ）。
●血清ビリルビン≦１．５×ＵＬＮ。
●尿酸≦７．５ｍｇ／ｄＬ（４４６μｍｏｌ／Ｌ）。
●ＰＴ／ＩＮＲ＜１．５×ＵＬＮ及び部分トロンボプラスチン時間（ＰＴＴ）＜１．５×ＵＬＮ（抗凝固療法を受けていない対象に関して）。
注：登録の＞３か月前に生じた血栓塞栓症に対して療法を受けた対象は、ワルファリン、低分子量ヘパリン、または他の承認された抗凝固療法レジメンによる抗凝固の安定したレジメンを受けている限り、適格者である。
８．妊娠する可能性のある女性（ＦＣＢＰ）は、
ａ．試験療法開始前に治験責任医師により検証される、２つの妊娠試験に陰性でなければならない。試験の間中及び化合物２の中止後の妊娠試験継続に同意しなければならない。これは、対象が異性との接触を真に禁欲＊していても適用される。
ｂ．中断せずに、化合物２の開始２８日前、試験療法中（投与中断中を含む）、及び試験療法の中止後２８日間、異性との接触を真に禁欲＊する（毎月見直され、源が確認されなければならない）ことを約束するか、または信頼できる避妊形態を２つ使用することに同意し、それに従うことができるかのいずれかでなければならない。
注：妊娠する可能性のある女性（ＦＣＢＰ）は、１）ある時点で初潮が始まっており、かつ２）子宮摘出もしくは両側卵巣摘出を受けていないか、または３）少なくとも２４か月連続して（すなわち、前２４か月連続していずれかの時点で月経があった）、自然閉経後ではない（がん療法後の無月経は妊娠する可能性から除外されない）女性である。
９．男性の対象は、
ａ．本試験に参加している間（投与中断中でも）及び化合物２の中止後少なくとも３か月の間（成功した精管切除を受けていても）、真に禁欲＊する（毎月見直されなければならない）ことを約束するか、または妊娠中の女性もしくは妊娠する可能性のある女性との性的接触中コンドームを使用することに同意しなければならない。
＊真の禁欲は、対象の好ましくかつ通常の生活様式と一致する場合に受け入れられる。周期的禁欲（例えば、カレンダー、排卵法、徴候体温法（ｓｙｍｐｔｏｔｈｅｒｍａｌ）、排卵後法）及び膣外射精法（膣外射精）は、避妊の方法として受け入れられない。
１０．男性は、化合物２を受けている間、及びその中止後９０日間、精液を提供することを控えることに同意しなければならない。
１１．全ての対象は、化合物２を受けている間、及びその中止後２８日間、血液を提供することを控えることに同意しなければならない。
【０３９３】
除外基準：以下のうちいずれかが存在する者は、対象としての登録から除外される：
１．対象が本試験に参加することを阻止すると思われる、顕著な病状、検査値異常、または精神病を有する対象。
２．対象がもし本試験に参加しようとした場合、その対象に許容不能なリスクを課す検査値異常の存在を含む任意の症状を有する対象。
３．本試験からのデータを解釈する能力を混乱させる任意の症状を有する対象。
４．非分泌型もしくは小分泌型多発性骨髄腫を有する対象。
５．形質細胞白血病または活動性軟骨膜骨髄腫症を有する対象。
６．文書による全身性軽鎖アミロイド症または多発ニューロパチー、臓器肥大、内分泌傷害、単クローン性ガンマグロブリン血症、及び皮膚病変（ＰＯＥＭＳ）症候群を有する対象。
７．免疫グロブリンクラスＭ（ＩｇＭ）骨髄腫を有する対象。
８．同種骨髄移植の病歴がない対象。
９．透析を受けている対象。
１０．≧グレード２の抹消性ニューロパチーを有する対象。
１１．化合物２の吸収を大幅に変更する可能性がある胃腸疾患を有する対象。
１２．以下のいずれかを含む、心機能障害または臨床上顕著な心疾患を有する対象：
●スクリーニング時にＥＣＨＯまたはＭＵＧＡスキャンにより測定したとき、ＬＶＥＦ＜４５％。
●スクリーニング時に、完全左脚ブロック、二束ブロック、または他の臨床上顕著な異常心電図（ＥＣＧ）所見。
●フレデリシアのＱＴ補正式を使用して＞４８０ミリ秒（ｍｓ）のＱＴｃ間隔が繰り返し認められることにより定義されるスクリーニングＥＣＧでのＱＴ間隔の延長、多形性心室頻拍の病歴または現在のリスク因子（例えば、心不全もしくは低カリウム血症、またはＱＴ延長症候群の家族歴）、及びＱＴ／ＱＴｃ間隔を延長させる薬物の同時投与。
●鬱血性心不全（ニューヨーク心臓協会クラスＩＩＩまたはＩＶ）。
●化合物２を開始する≦６か月前の不安定狭心症。
●異型狭心症を含む不安定または十分に制御されていない狭心症。
１３．強いＣＹＰ３Ａ調節薬の同時投与。
１４．半減期の≦５または化合物２の開始≦４週間前、どちらか短い方で前に全身性骨髄腫治療（承認または治験）を受けた対象。
１５．化合物２を開始する≦２週間前に大きな手術を受けた対象。注：対象は、最近受けた手術の任意の臨床上顕著な作用からも回復していなければならない。
１６．妊娠もしくは授乳している女性、または本試験参加中に妊娠する意図がある対象。
１７．既知のヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）に感染している対象。
１８．既知の活動性慢性肝炎ＢまたはＣウイルス（ＨＢＶ／ＨＣＶ）に感染している対象。
１９．継続的な全身性治療を必要とする同時発生二次がんの病歴を有する対象。
２０．治癒目的で治療された以下の非侵襲性悪性腫瘍を除き、≧３年間疾患がなかった対象でない限り、ＭＭ以外に以前に悪性腫瘍の病歴がある対象：
●皮膚の基底または扁平上皮癌。
●頸部または乳房の上皮内癌。
●ステージ１の膀胱癌。
●悪性腫瘍の腫瘍／結節／転移（ＴＮＭ）分類法を使用する、腫瘍の病期１ａもしくは１ｂ（Ｔ１ａもしくはＴ１ｂ）などの限局性前立腺癌の偶発的な組織学的所見または治癒目的で治療された前立腺癌。
２１．サリドマイド、レナリドミド、ポマリドミド、またはデキサメタゾンに対してアナフィラキシーの病歴がある対象。
２２．化合物２またはデキサメタゾンの製剤に含まれる賦形剤に対して既知のまたは疑われる過敏性がある対象。
２３．化合物２の開始１４日以内に以下のいずれかを受けた対象：
●血漿交換。
●ＭＭ関連骨病変の症候緩和のための局所療法以外の放射線療法。
２４．化合物２の最初の投与前１４日間以内に免疫抑制薬を受けた対象。以下はこの基準の例外である：
●鼻腔内、吸入、局部、または局所コルチコステロイド注射（例えば、関節内注射）。
●１０ｍｇ／日のプレドニゾンまたは等価物を超えない用量の全身性コルチコステロイド。
●過敏性反応に対する前薬物としてのステロイド（例えば、コンピュータ断層撮影（ＣＴ）検査の前薬物）。
２５．プロトコルが必要とする静脈血栓塞栓（ＶＴＥ）予防を受けることができないか、または受けたくない対象。
【０３９４】
試験期間：対象当たりの試験参加の平均期間は、およそ６か月であることが予想される。完全な登録には、完了までにおよそ２１か月かかると予想される（パート１に１８か月そしてパート２に３か月）。実薬治療及び治療後経過観察の完了は、更に６〜１２か月かかることが予想される。試験全体では、およそ３３か月続くことが予想される。
【０３９５】
試験終了は、プロトコルに事前に指定されるとおり、最後の対象の最後の来診により治療後経過観察が完了した日付、あるいは一次、二次、及び／または探索的分析のために必要な最後の対象から最後のデータ点を受領した日付いずれかで、どちらかより遅い方と定義される。
【０３９６】
試験治療：化合物２は、２０／２８スケジュールに登録した対象に関しては１日１回、または６／２８スケジュールに登録した対象に関しては１日２回のいずれかを経口投与される。２０／２８投与スケジュールに登録した対象に関して、化合物２は、少なくとも６時間続く夜間絶食後、少なくとも２４０ｍＬの水とともに朝に投与される。対象は、毎朝の投与後少なくとも２時間食事または他の薬物の摂取を控えなければならない。６／２８スケジュールに登録した対象は、各投与日の最初の投与に関して２０／２８スケジュールに概説される前述の指示に従う。２回目の投与は、朝の投与の１２±２時間後、食事の摂取少なくとも４時間後かつ摂取の２時間前に投与される。例として、６／２８投与スケジュールに登録した対象は、おそらく、７：００ａｍに化合物２の初期用量を受け、続いて、９：００ａｍに朝食、正午に昼食をとり、化合物２の２回目の用量を、早くて５：００ｐｍに受け、夜の食事を２時間後にとる（すなわち、７：００ｐｍより前ではない）ことができる。サイクル１においてのみ、化合物２は、１〜３日目（朝及び夜）、１４日目（夜のみ）、１５日目及び１６日目（朝及び夜）、ならびに１７日目（朝のみ）に投与されることに留意する。
【０３９７】
両投与スケジュールに関して、デキサメタゾンは、絶食状態で化合物２とともに、または食事とともに化合物２の少なくとも２時間後に投与される（両方とも同時に与えられるＰＫ評価日を除く）。それぞれ、２０／２８または６／２８投与スケジュールの各サイクルの１、８（サイクル１では１０日目のみ）、１５、及び２２日目、または１、３、１５（サイクル１では１４日目のみ）、及び１７日目に与えられるデキサメタゾンは、化合物２と同時に絶食状態で投与することができる。あるいは（デキサメタゾン誘導胃刺激の病歴を有する対象において）、両方とも全ての対象に同時に投与されなければならないＰＫ評価日を除き、化合物２の少なくとも２時間後に食事とともに投与することができる。全ての対象に関して、デキサメタゾンの各用量は、＜７５歳の対象には４０ｍｇ、そして≧７５歳の対象には２０ｍｇである。
【０３９８】
主要な有効性評価の概要：主な有効性評価項目は、ＩＭＷＧ治療効果判定統一基準により決定される、最良奏功が≧ＰＲである対象のパーセントとして定義される最良総合奏功率（ＯＲＲ）である（Ｒａｊｋｕｍａｒ  ｅｔ  ａｌ  Ｂｌｏｏｄ  ２０１１；１１７（１８）：４６９１−５）。対象は、毎月奏功評価を受ける。骨髄腫の奏功は、中央基準研究所で評価された検査治験（適切な場合、血清タンパク質電気泳動（ｓＰＥＰ）、尿タンパク質電気泳動（ｕＰＥＰ）、免疫固定法電気泳動（ＩＦＥ）、無血清軽鎖（ｓＦＬＣ）レベル、定量的免疫グロブリンＡ（ＩｇＡ）、形質細胞定量化のための骨髄）に基づいて、及び／または現場で（すなわち、形質細胞腫評価のための補正血清カルシウム、ポジトロン断層法／コンピュータ撮像（ＰＥＴ／ＣＴ）、もしくは磁気共鳴撮像（ＭＲＩ）、及び／または骨病変評価のためのＣＴもしくは骨格検査）試験施設治験責任医師により決定される。追加の有効性評価項目は、奏功時間（化合物２の最初の投与から最初の奏功の記述までの時間≧ＰＲ）、奏功期間（最初の奏功の記述（≧ＰＲ）から最初のＰＤもしくは死亡までの期間、及び無増悪生存（化合物２の最初の投与から疾患進行もしくは任意の原因による死亡の最初の発生までの時間）を含む。
【０３９９】
妥当なベースライン及び少なくとも１つのベースライン後の奏功評価を有する全ての安全性対象は、有効性分析に含まれる。治療が疾患進行以外の理由のため中止される場合、対象は、進行、同意の撤回、死亡もしくは新しい全身性抗骨髄腫療法の開始のいずれか最も早いものまで、指定した評価スケジュールに従い奏功評価を継続するように要望される。
【０４００】
主要な安全性評価の概要：この試験の安全性評価項目は、治療下で発生した有害事象（ＴＥＡＥ）、ならびに身体所見／バイタルサイン、選択された検査分析物、及び１２誘導心電図（ＥＣＧ）を含む。更なる安全性測定基準は、試験治療（化合物２及びデキサメタゾン両方）への曝露の程度、併用薬物使用の評価、及び妊娠する可能性のある女性（ＦＣＢＰ）の妊娠試験を含む。
【０４０１】
薬物動態評価の概要：ＰＫプロファイル（初期用量及び定常状態）は、化合物２、そのＲ−鏡像異性体（化合物３）、及びデキサメタゾンについて評価された。曝露応答分析は、適切な場合、化合物２  ＲＰ２Ｄの同定を補助するために行うことができる。
【０４０２】
上記に記載された実施形態は、例示であることしか意図せず、当業者は、具体的な化合物、材料、及び手順の多数の等価物を認識するか、または定法実験にすぎないものを使用して、それらを確認することができるだろう。そのような等価物は全て、本発明の範囲内にあり、添付の特許請求の範囲により包含される。
【図１】
2020526534.tif 000075
【図２】
2020526534.tif 000076
【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
2020526534.tif 000081
【図８】
2020526534.tif 000082
【図９】
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【図１０】
2020526534.tif 000084
【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
2020526534.tif 000087
【図１４】
2020526534.tif 000088
【図１５】
2020526534.tif 000089
【図１６Ａ】
2020526534.tif 000090
【図１６Ｂ】
2020526534.tif 000091
【図１６Ｃ】
2020526534.tif 000092
【図１６Ｄ】
2020526534.tif 000093
【図１７】
2020526534.tif 000094
【図１８−０１】
2020526534.tif 000095
【図１８−０２】
2020526534.tif 000096
【図１９Ａ】
2020526534.tif 000097
【図１９Ｂ−０１】
2020526534.tif 000098
【図１９Ｂ−０２】
2020526534.tif 000099
【図２０】
2020526534.tif 000100
【図２１Ａ】
2020526534.tif 000101
【図２１Ｂ】
2020526534.tif 000102
【図２２】
2020526534.tif 000103
【図２３】
2020526534.tif 000104
【図２４】
2020526534.tif 000105
【国際調査報告】
2020526534.tif 000106
2020526534.tif 000107
2020526534.tif 000108
2020526534.tif 000109