(57)【要約】  必要とする対象にアミド型麻酔薬を局所投与するための麻酔組成物が提供される。この麻酔組成物は、アミド型麻酔薬及び脂質混合物を含む高度に捕捉された脂質構造を５．５よりも高いｐＨの水性緩衝溶液で水和することにより調製される、捕捉されたアミド型麻酔薬を有する多層小胞体を有する。大規模な製造のため、及び先行技術と比べて高いリン脂質に対するアミド型麻酔薬のモル比含有量を提供するための簡単でより実行可能なプロセスを使用して麻酔組成物を調製するための方法も提供される。この麻酔組成物は、薬物送達に適合した有効性の長い継続時間を有する。【選択図】図３Ｂ
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
徐放性麻酔組成物の調製方法であって、
少なくとも１種のアミド型麻酔薬、及び
少なくとも１種のリン脂質を含む脂質混合物
を含む高度に捕捉された脂質構造（ＨＥＬＳ）を作製する工程と、
前記ＨＥＬＳを５．５〜８．０のｐＨの水性緩衝溶液で水和する工程と
を備え、前記ＨＥＬＳを水和する工程は、捕捉されたアミド型麻酔薬を有する多層小胞体（ＭＬＶ）を形成し、前記捕捉されたアミド型麻酔薬を有するＭＬＶのメジアン径が少なくとも１μｍである方法。
【請求項２】
前記ＨＥＬＳが、ケーキ、粉末、非膜固体塊状物、又はこれらの組み合わせの形態にある請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記捕捉されたアミド型麻酔薬を有するＭＬＶの中のリン脂質に対するアミド型麻酔薬のモル比が少なくとも０．５：１である請求項１に記載の方法。
【請求項４】
前記ＨＥＬＳを作製する工程が、
前記脂質混合物及び前記少なくとも１種のアミド型麻酔薬を溶媒系に溶解し、液体構造を形成する工程、及び
前記液体構造から前記溶媒系を除去する工程
を備える請求項１に記載の方法。
【請求項５】
前記溶媒系を除去する工程が、前記液体構造を凍結乾燥又は噴霧乾燥する工程を備える請求項４に記載の方法。
【請求項６】
前記溶媒系が、ｔｅｒｔ−ブタノール又はｔｅｒｔ−ブタノール／水共溶媒を含む請求項４に記載の方法。
【請求項７】
前記脂質混合物がコレステロールを含む請求項１に記載の方法。
【請求項８】
前記脂質混合物中のコレステロールのモル百分率が５０％以下である請求項７に記載の方法。
【請求項９】
前記少なくとも１種のリン脂質及びコレステロールが１：０．０１〜１：１のモル比にある請求項７に記載の方法。
【請求項１０】
前記少なくとも１種のアミド型麻酔薬が、リドカイン、ブピバカイン、レボブピバカイン、ロピバカイン、メピバカイン、ピロカイン、アルチカイン又はプリロカインである請求項１から請求項９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１１】
前記少なくとも１種のアミド型麻酔薬がロピバカイン塩基である請求項１から請求項９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１２】
前記水性緩衝溶液が１ｍＭ〜２００ｍＭの範囲の濃度のヒスチジンを含む請求項１から請求項９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１３】
必要とする対象に局所麻酔薬を局所投与するための徐放性麻酔組成物であって、前記組成物は、請求項１から請求項９のいずれか一項に記載の方法によって調製され、前記麻酔組成物の中の前記捕捉されたアミド型麻酔薬を有するＭＬＶのメジアン径が１μｍ以上である徐放性麻酔組成物。
【請求項１４】
前記捕捉されたアミド型麻酔薬を有するＭＬＶの中のリン脂質に対するアミド型麻酔薬のモル比が０．５：１以上である請求項１３に記載の徐放性麻酔組成物。
【請求項１５】
前記少なくとも１種のアミド型麻酔薬がロピバカイン塩基である請求項１３に記載の徐放性麻酔組成物。
【請求項１６】
前記水性緩衝溶液が、１ｍＭ〜２００ｍＭの範囲の濃度のヒスチジンを含む請求項１３に記載の徐放性麻酔組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願の相互参照
本願は、２０１７年８月２８日出願の米国仮出願第６２／５５０，９８３号、及び２０１８年１月２５日出願の米国仮出願第６２／６２１，７３０号に基づく優先権の利益を主張する。これらの米国仮出願の各々は、参照によりその全体が援用される。
【０００２】
技術分野
本発明は、徐放性麻酔組成物の送達のための薬物送達システムに関する。本発明は、この薬物送達システムの調製方法に関する。本発明は、有効性の長い継続時間を有する薬物送達システムに適合した徐放性医薬組成物にも関する。
【背景技術】
【０００３】
徐放性局所麻酔薬を開発するためのいくつかのアプローチが報告されており、その例としては、１）脱水−再水和方法を使用して多重膜リポソーム局所麻酔薬を調製すること（米国特許第６，９２６，９０５号明細書）、２）硫酸アンモニウム勾配充填（勾配ローディング）手順を使用して巨大多胞性（ｇｉａｎｔ  ｍｕｌｔｉｖｅｓｉｃｕｌａｒ：ＧＭＶ）リポソーム局所麻酔薬を調製すること（米国特許第７，３５７，９４４号明細書）、及び３）油中水手順を使用して多胞性リポソーム（ｍｕｌｔｉｌａｍｅｌｌａｒ  ｖｅｓｉｃｌｅ：ＭＶＬ）局所麻酔薬を調製すること（米国特許第８，１８２，８３５号明細書）が挙げられる。
【０００４】
脱水−再水和方法により多重膜リポソーム局所麻酔薬を調製するために、ｔｅｒｔ−ブタノールに溶解したリン脂質及びコレステロールが凍結乾燥され、次いで脱水されて、多層小胞体（ＭＬＶ）が形成され、このＭＬＶは、ホモジナイズされて、小型単層小胞体（ｓｍａｌｌ  ｕｎｉｌａｍｅｌｌａｒ  ｖｅｓｉｃｌｅ：ＳＵＶ）が得られる。次に、局所麻酔薬、例えばブピバカイン、がこのＳＵＶ溶液に溶解され、引き続き凍結乾燥され、水和され、高浸透圧性生理食塩水で洗浄され、遊離のブピバカインが除去される。
【０００５】
ＧＭＶリポソーム局所麻酔薬を調製するために、脂質を溶媒に溶解し、その溶媒を除去し、硫酸アンモニウム溶液を用いて水和してＭＬＶを形成することにより、脂質薄膜が得られる。次いで、ＭＬＶは、ホモジナイズされて、ＳＵＶが得られ、このＳＵＶが凍結融解されてＧＭＶが生成される。外部のリポソーム媒体は、勾配を作り出すように置き換えられ、麻酔薬  −例えば、ブピバカイン−  が活発にＧＭＶの中へと充填され、そして封入されなかったブピバカインは除去される。
【０００６】
ＭＶＬ局所麻酔薬を調製するために、例えばブピバカインが、水溶液に容易に溶解されうるように好適な塩形態へと変換され、次いでブピバカイン水溶液は、機械的な乱流を伴う有機溶媒中で脂質成分と混合され、油中水エマルションが形成される。この油中水エマルションは、次に、第２水相に分散されて、溶媒小球体が形成される。最後に、有機溶媒を除去した後に、ＭＶＬ局所麻酔薬が得られる。
【０００７】
１９９１年に、Ｌｅｇｒｏｓら（米国特許第５，２４４，６７８号明細書）は、Ｌ−α−ホスファチジルコリン（ＥＰＣ）及びコレステロールを４：３のモル比で含むＭＬＶリポソームブピバカインの調製を開示した。その後、このグループは、ＥＰＣ及び無極性の麻酔薬から構成される脂質薄膜を作製し、続いてこの脂質薄膜を、上記無極性の麻酔薬が無電荷の形態に留まるｐＨ調整した緩衝液で水和することによる、リポソーム麻酔薬の調製を開示した（米国特許第６，１４９，９３７号明細書）。例えば、リポソームブピバカインを調製する際に、脂質薄膜は、好ましくはｐＨ８．１の緩衝液で水和され（ブピバカインのｐＫａは８．１である）、この緩衝液は、５０％のブピバカインを電荷を帯びていない形態に維持する。Ｌｅｇｒｏｓらは、冷凍乾燥した、リポソームに封入された両親媒性薬物組成物の調製方法も開示した（国際公開第１９９７０４２９３６号パンフレット）。この両親媒性薬物組成物は、脂質成分及び両親媒性薬物組成物、特にブピバカインを含む薄膜を生成し、この薄膜をｐＨ８．１の緩衝溶液で水和してリポソームに封入されたブピバカインを形成し、このリポソームに封入されたブピバカインを膜安定剤としてのソルビトールと一緒に冷凍乾燥し、次いで使用前に再水和してＭＬＶリポソームブピバカインを得ることにより、得られる。
【０００８】
先行技術の上記の例のいくつかは、薬物の高い程度の捕捉、すなわち高い薬物対脂質比を達成できない。先行技術の例のいくつかは推定上の高薬物対脂質比を有する配合物を例証するが、これらの配合物を製造することは、長々しい手順及び高い製造コストを伴う。それゆえ、徐放性リポソーム局所麻酔薬を製造するための、改善され簡略化された製造プロセスに対するニーズは、まだ満たされないでいる。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００９】
【特許文献１】米国特許第６，９２６，９０５号明細書
【特許文献２】米国特許第７，３５７，９４４号明細書
【特許文献３】米国特許第８，１８２，８３５号明細書
【特許文献４】米国特許第５，２４４，６７８号明細書
【特許文献５】米国特許第６，１４９，９３７号明細書
【特許文献６】国際公開第１９９７０４２９３６号パンフレット
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【００１０】
本発明は、１工程凍結乾燥を用いて、局所麻酔薬と１以上のリン脂質及び／又はコレステロールを含む脂質混合物とを含む高度に捕捉された脂質構造（ｈｉｇｈｌｙ  ｅｎｔｒａｐｐｅｄ  ｌｉｐｉｄ  ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ：ＨＥＬＳ）を得て、次いでこのＨＥＬＳをｐＨ調整した緩衝溶液で水和して、捕捉された局所麻酔薬及び任意に捕捉されていない局所麻酔薬を伴う多層小胞体（ＭＬＶ）を形成する、徐放性麻酔組成物の調製方法を提供する。この徐放性麻酔組成物は、最小の毒性で、麻酔の即効性及び局所麻酔の長い継続時間をもたらす。いくつかの実施形態では、この局所麻酔薬はアミド型麻酔薬である。
【００１１】
本発明に係る例示的な局所麻酔薬は、ロピバカイン等のアミド型麻酔薬である。使用されてもよい他の局所麻酔薬としては、リドカイン、ブピバカイン及びレボブピバカインが挙げられる。いくつかの実施形態では、本発明に係るＨＥＬＳは、無極性のロピバカイン、リン脂質、及びコレステロールを溶媒系、例えば、ｔｅｒｔ−ブタノール単独又はｔｅｒｔ−ブタノール／水共溶媒に溶解し、続いて凍結乾燥技術を用いてその溶媒系を除去することにより調製される。いくつかの実施形態では、ロピバカイン組成物は、上記ＨＥＬＳを５．５よりも高いｐＨの薬学的に許容できる緩衝溶液で水和することにより形成される。理論上電荷を帯びていないロピバカインは、ｐＫａ（ロピバカインのｐＫａは８．１である）からの算出に基づくと、ｐＨ６．０では利用可能なロピバカインの０．８％である。しかしながら、ｐＨ６．０の緩衝液が水和溶液として選択されるとき、得られた麻酔組成物の会合効率（ＡＥ）は６４％超であり、これは、電荷を帯びていないアミド型麻酔薬の百分率は、ＡＥに大きくは寄与しないことを実証する。
【００１２】
とはいうものの、薬学的に許容できる緩衝溶液のｐＨ値は、麻酔組成物のＭＬＶ中の未捕捉の麻酔薬に対する捕捉された麻酔薬の比を調整するために選択することができる。ある実施形態では、麻酔組成物の捕捉されたアミド型麻酔薬を有するＭＬＶの中のリン脂質に対するアミド型麻酔薬のモル比（ｍｏｌ薬物：ｍｏｌリン脂質）は少なくとも０．５：１であり、十分な量のアミド型麻酔薬を、それを必要とする対象に提供して、インビボ局所投与後の麻酔の継続時間を延長することができる。加えて、未捕捉のアミド型麻酔薬の量を制限することで、最小の最大血漿中濃度（Ｃｍａｘ）曝露で迅速な麻酔開始を成し遂げることができる。
【００１３】
本発明の他の目的、利点及び新規な特徴は、添付の図面と併せて解釈されると、以下の詳細な説明からより明らかとなる。
【図面の簡単な説明】
【００１４】
【図１】図１は、ロピバカイン組成物（ｐＨ５．５ヒスチジン溶液で水和されたもの、黒四角；ｐＨ６．０ヒスチジン溶液で水和されたもの、黒三角；及びｐＨ６．５ヒスチジン溶液で水和されたもの、黒丸）の皮下（ＳＣ）注射後、又は未処方ロピバカイン（白菱形）のＳＣ注射後のラット中のロピバカインの血漿中濃度を示すグラフである（すべてのデータは、平均±標準偏差（ＳＤ）として示されている）。
【図２Ａ】図２Ａ及び図２Ｂは、機械的刺激に対するマウスの後肢逃避反応閾値への、ロピバカイン組成物（丸）、ロピバカイン（四角）及びビヒクル（三角）のＳＣ投与後の効果を描く一連のグラフである（すべてのデータは、平均±平均値の標準誤差（ＳＥＭ）として示されている）。図２Ａは、時間対逃避反応閾値（ｇ）のグラフでのプロットである。
【図２Ｂ】図２Ａ及び図２Ｂは、機械的刺激に対するマウスの後肢逃避反応閾値への、ロピバカイン組成物（丸）、ロピバカイン（四角）及びビヒクル（三角）のＳＣ投与後の効果を描く一連のグラフである（すべてのデータは、平均±平均値の標準誤差（ＳＥＭ）として示されている）。図２Ｂは、時間対機械的閾値の変化（％）のグラフでのプロットである。
【図３Ａ】図３Ａ及び図３Ｂは、同じ投薬量のロピバカインと比較した、ロピバカイン組成物の１回の皮内（ＩＣ）注射後の経時的な麻酔効果を描く一連のグラフである（すべてのデータは、平均±ＳＥＭとして示されている）。図３Ａは、ロピバカイン組成物（黒四角）又はロピバカイン（白四角）のＩＣ膨疹あたり３．０ｍｇを投薬されたモルモットコホートに対する麻酔効果を示す。
【図３Ｂ】図３Ａ及び図３Ｂは、同じ投薬量のロピバカインと比較した、ロピバカイン組成物の１回の皮内（ＩＣ）注射後の経時的な麻酔効果を描く一連のグラフである（すべてのデータは、平均±ＳＥＭとして示されている）。図３Ｂは、ロピバカイン組成物（黒三角）又はロピバカイン（白三角）のＩＣ膨疹あたり１．５ｍｇを投与されたモルモットコホートに対する麻酔効果を示す。
【発明を実施するための形態】
【００１５】
上記及び本開示全体にわたって用いられる場合、以下の用語は、特段の記載がないかぎり、以下の意味を有すると理解されるものとする。
【００１６】
本願明細書で使用する場合、単数形の「ａ」、「ａｎ」及び「ｔｈｅ」は、文脈と明らかに矛盾する場合でないかぎり、複数の指示対象を含む。
【００１７】
本明細書中のすべての数は、「約」によって修飾されていると理解されうる。この「約」は、量、時間的な継続等の測定可能な値に言及するとき、特定された値から±１０％、好ましくは±５％、より好ましくは±１％、さらにより好ましくは±０．１％の変動を包含することを意味する。というのも、そのような変動は、特段の記載がないかぎり、所望の量の薬物を得るために適切であるからである。
【００１８】
「会合効率」（ＡＥ）は、麻酔組成物中の多層小胞体（ＭＬＶ）によって捕捉された薬物物質の量を表し、もとの麻酔組成物の中の薬物物質の量に対するＭＬＶ中に捕捉された薬物物質の量の比によって算出される。捕捉された薬物を有するＭＬＶは、ＭＬＶの物理的特性及び当該技術分野における一般的知識に従って当該技術分野で公知の方法により得ることができる。好ましくは、捕捉された薬物物質を有するＭＬＶは、遠心分離法、例えば、従来の遠心分離、密度勾配遠心分離、分画遠心法を使用して、又は濾過方法、例えば、ダイアフィルトレーション（透析濾過）、ゲル濾過、膜濾過法により、麻酔組成物から未捕捉の薬物を分離することにより得ることができる。
【００１９】
多層小胞体
用語「多層小胞体（ＭＬＶ）」（単複の場合とも）は、本願明細書で使用する場合、小胞を形成する１以上の二重層の膜によって外部の媒体から隔離された水性の内部空間を有することを特徴とする粒子を指す。多層小胞体の二重膜は、通常、脂質、すなわち、空間的に分離された疎水性ドメイン及び親水性ドメインを含む合成又は天然由来の両親媒性分子によって形成される。本発明のある実施形態では、多層小胞体は脂質二重膜の複数の層によって形成される。
【００２０】
一般に、ＭＬＶの二重膜は、典型的にはリン脂質、ジグリセリド、二脂肪鎖糖脂質等の二脂肪鎖脂質、スフィンゴミエリン及びスフィンゴ糖脂質等の単一脂質、コレステロール及びその誘導体等のステロイド、並びにこれらの組み合わせを含む脂質混合物を含む。本発明に係るリン脂質の例としては、１，２−ジラウロイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（ＤＬＰＣ）、１，２−ジミリストイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（ＤＭＰＣ）、１，２−ジパルミトイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（ＤＰＰＣ）、１−パルミトイル−２−ステアロイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（ＰＳＰＣ）、１−パルミトイル−２−オレオイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスファチジルコリン（ＰＯＰＣ）、１，２−ジステアロイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（ＤＳＰＣ）、１，２−ジオレオイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（ＤＯＰＣ）、水添大豆ホスファチジルコリン（ＨＳＰＣ）、１，２−ジミリストイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホ−（１’−ｒａｃ−グリセロール）（ナトリウム塩）（ＤＭＰＧ）、１，２−ジパルミトイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホ−（１’−ｒａｃ−グリセロール）（ナトリウム塩）（ＤＰＰＧ）、１−パルミトイル−２−ステアロイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホ−（１’−ｒａｃ−グリセロール）（ナトリウム塩）（ＰＳＰＧ）、１，２−ジステアロイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホ−（１’−ｒａｃ−グリセロール）（ナトリウム塩）（ＤＳＰＧ）、１，２−ジオレオイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホ−（１’−ｒａｃ−グリセロール）（ＤＯＰＧ）、１，２−ジミリストイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホ−Ｌ−セリン（ナトリウム塩）（ＤＭＰＳ）、１，２−ジパルミトイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホ−Ｌ−セリン（ナトリウム塩）（ＤＰＰＳ）、１，２−ジステアロイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホ−Ｌ−セリン（ナトリウム塩）（ＤＳＰＳ）、１，２−ジオレオイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホ−Ｌ−セリン（ＤＯＰＳ）、１，２−ジミリストイル−ｓｎ−グリセロ−３−リン酸塩（ナトリウム塩）（ＤＭＰＡ）、１，２−ジパルミトイル−ｓｎ−グリセロ−３−リン酸塩（ナトリウム塩）（ＤＰＰＡ）、１，２−ジステアロイル−ｓｎ−グリセロ−３−リン酸塩（ナトリウム塩）（ＤＳＰＡ）、１，２−ジオレオイル−ｓｎ−グリセロ−３−リン酸塩（ナトリウム塩）（ＤＯＰＡ）、１，２−ジパルミトイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン（ＤＰＰＥ）、１−パルミトイル−２−オレオイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン（ＰＯＰＥ）、１，２−ジステアロイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン（ＤＳＰＥ）、１，２−ジオレオイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン（ＤＯＰＥ）、１，２−ジパルミトイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホ−（１’−ミオイノシトール）（アンモニウム塩）（ＤＰＰＩ）、１，２−ジステアロイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホイノシトール（アンモニウム塩）（ＤＳＰＩ）、１，２−ジオレオイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホ−（１’−ミオイノシトール）（アンモニウム塩）（ＤＯＰＩ）、カルジオリピン、Ｌ−α−ホスファ���ジルコリン（ＥＰＣ）、及びＬ−α−ホスファチジルエタノールアミン（ＥＰＥ）が挙げられるが、これらに限定されない。
【００２１】
局所麻酔薬
用語「局所麻酔薬」は、神経終末部における興奮の低下又は末梢神経における伝導（伝達）プロセスの阻害によって引き起こされる対象の限局的な領域における感覚の喪失を引き起こす物質の１以上の群を指す。いくつかの実施形態では、この局所麻酔薬はアミド型麻酔薬である。典型的なアミド型麻酔薬構造は、分子の中心の近傍で−ＮＨＣＯ−連結によってつながる親油性部分及び親水性部分を含有する。好適なアミド型麻酔薬としては、リドカイン、ブピバカイン、レボブピバカイン、ロピバカイン、メピバカイン、ピロカイン、アルチカイン及びプリロカインが挙げられるが、これらに限定されない。ある実施形態では、上記アミド型麻酔薬はロピバカイン塩基である。
【００２２】
高度に捕捉された脂質構造
用語「高度に捕捉された脂質構造」（ＨＥＬＳ）は、脂質混合物及び１以上のアミド型麻酔薬を含有する固相の凍結乾燥されたケーキ又は乾燥粉末であって、組成物の貯蔵寿命を延ばすように製造し、長期に保存することができ、そして臨床使用の直前に水和することができるものを指す。上記の脂質混合物は、コレステロールなしで１以上のリン脂質を含むことができるし、又は、全脂質混合物の量に対して５０％以下のコレステロールのモル百分率を有して１以上のリン脂質を含むことができる。あるいは、脂質混合物に対するコレステロールのモル百分率は、約０％〜約５０％、任意に約３３％〜約４０％である。本発明のいくつかの実施形態では、リン脂質（１又は複数種）及びコレステロールは１：１〜３：１のモル比にある。
【００２３】
上記ＨＥＬＳは、１）脂質混合物及び１以上のアミド型麻酔薬を溶媒系に溶解し、均一な溶液を形成するための１以上の溶媒を含む液体構造を形成し、２）この溶媒（１又は複数種）を除去して、脂質混合物及びアミド型麻酔薬（１又は複数種）の処方物を固化することにより、調製することができる。溶媒除去は、冷凍乾燥（凍結乾燥）又は噴霧乾燥等の公知の技法を用いて実施することができる。冷凍乾燥に好適な溶媒系の例としては、アセトン、アセトニトリル、エタノール、ｎ−プロパノール、イソプロパノール、ｎ−ブタノール、メタノール、ジクロロメタン、ジメチルスルホキシド、及び四塩化炭素等の他の非水溶媒を伴う又は伴わない、ｔｅｒｔ−ブタノール及びｔｅｒｔ−ブタノール／水共溶媒系が挙げられるが、これらに限定されない。噴霧乾燥に好適な溶媒系の例としては、水、エタノール、メタノール、クロロホルム、ジクロロメタン、ジエチルエーテル、四塩化炭素、酢酸エチル及びジオキサンが挙げられるが、これらに限定されない。
【００２４】
麻酔組成物
用語「麻酔組成物」は、局所投与に好適な多層小胞体（ＭＬＶ）生成物を指す。ある実施形態では、麻酔組成物は、ＭＬＶによって捕捉されたアミド型麻酔薬、及び未捕捉のアミド型麻酔薬を含む。用語「捕捉する」又は「捕捉」は、標的薬物物質を封入するか、標的薬物物質を包埋する（埋め込む）か、又は標的薬物物質と会合するＭＬＶの二重膜を指す。捕捉されたアミド型麻酔薬を有するＭＬＶは、当該技術分野で公知の方法により、好ましくは、遠心分離法、例えば、従来の遠心分離、密度勾配遠心分離、分画遠心法を使用して、又は濾過方法、例えば、ダイアフィルトレーション、ゲル濾過、膜濾過法により、麻酔組成物から未捕捉のアミド型麻酔薬を分離することにより得ることができる。本発明に係る捕捉されたアミド型麻酔薬を有するＭＬＶの粒度分布は、当該技術分野で公知の種々の方法によって決定することができる。捕捉されたアミド型麻酔薬を有するＭＬＶの例示的な粒径は１μｍ以上であり、任意に、５μｍ超、例えば５μｍ〜５０μｍ、又は１０μｍ〜２５μｍの範囲にある。あるいは、当該麻酔組成物の捕捉されたアミド型麻酔薬を有するＭＬＶのメジアン径（Ｄ５０）は１μｍ以上であり、任意に、５μｍ超、例えば５μｍ〜５０μｍ、又は１０μｍ〜２５μｍの範囲にある。
【００２５】
使用のための当該麻酔組成物を調製するために、ＨＥＬＳは、５．５を超えるｐＨ値の水性緩衝溶液で水和される。いくつかの実施形態では、この水性緩衝溶液は、５．５〜８．０、任意に６．０〜７．５のｐＨ範囲にある。
【００２６】
本発明に係る好適な水性緩衝溶液は、クエン酸（クエン酸塩）、酢酸（酢酸塩）、リンゴ酸（リンゴ酸塩）、ピペラジン、コハク酸（コハク酸塩）、２−（Ｎ−モルホリノ）エタンスルホン酸（ＭＥＳ）、ヒスチジン、ビストリス（ｂｉｓ−ｔｒｉｓ）、リン酸（リン酸塩）、エタノールアミン、Ｎ−（２−アセトアミド）イミノ二酢酸（ＡＤＡ）、炭酸（炭酸塩）、Ｎ−（２−アセトアミド）−２−アミノエタンスルホン酸（ＡＣＥＳ）、１，４−ピペラジンジエタンスルホン酸（ＰＩＰＥＳ）、３−モルホリノ−２−ヒドロキシプロパンスルホン酸（ＭＯＰＳＯ）、イミダゾール、Ｎ，Ｎ−ビス（２−ヒドロキシエチル）−２−アミノエタンスルホン酸（ＢＥＳ）、４−（２−ヒドロキシエチル）ピペラジン−１−エタンスルホン酸（ＨＥＰＥＳ）、トリエタノールアミン、リジン、トリス、及びグリシルグリシンを含むが、これらに限定されない。当該組成物中の未捕捉のアミド型麻酔薬の量は、臨床的適応及び総注射投薬量に基づいて水性緩衝溶液に対する適切なｐＨ値を選択することにより、麻酔薬の分配係数に基づいて調整することができる。
【００２７】
いくつかの実施形態では、水性緩衝溶液は、１ｍＭ〜２００ｍＭ、１０ｍＭ〜１５０ｍＭ、又は４０ｍＭ〜１２０ｍＭの範囲の濃度のヒスチジンを含む。
【００２８】
未捕捉のアミド型麻酔薬の量は、遠心分離法によって決定される当該麻酔組成物の会合効率（ＡＥ）の関数である。数学的には、未捕捉のアミド型麻酔薬の量は、以下のように表される。
【数１】
2020531540.tif 000003
上記式中、Ａ未捕捉は、未捕捉のアミド型麻酔薬の量であり、Ａ全は、麻酔組成物中のアミド型麻酔薬の全量であり、ＡＥは、ＭＬＶ中に捕捉されたアミド型麻酔薬の量を麻酔組成物中のアミド型麻酔薬の全量で除算することにより得られる。本発明に係るＡＥは、少なくとも６０％、任意に７０％〜９５％である。
【００２９】
捕捉されたアミド型麻酔薬を有するＭＬＶのリン脂質に対するアミド型麻酔薬のモル比（ｍｏｌ薬物：ｍｏｌリン脂質、Ｄ：ＰＬ）は、好ましくは少なくとも０．５：１であり、０．７：１、０．９：１、１．２：１、又は１．４：１が挙げられるが、これらに限定されず、捕捉されたアミド型麻酔薬を有するＭＬＶのメジアン径（Ｄ５０）は、好ましくは１μｍ以上、例えば５μｍ以上、任意に、５μｍ〜２０μｍ、又は５μｍ〜１５μｍの範囲内にある。
【００３０】
当該麻酔組成物のアミド型麻酔薬の濃度は、臨床治療の利益を成し遂げるためには２ｍｇ／ｍＬよりも高い必要がある。好適なアミド型麻酔薬の濃度としては、２ｍｇ／ｍＬ〜３０ｍｇ／ｍＬ及び１０ｍｇ／ｍＬ〜２０ｍｇ／ｍＬが挙げられるが、これらに限定されない。本発明の麻酔組成物の中の未捕捉の麻酔薬の限定された量は、より高い最大耐量（中枢神経系及び心血管系の毒性を引き起こす血漿中麻酔薬濃度に依存する）を成し遂げるという恩恵をもたらすことができ、即効性の有効性を提供するために使用することができる。いくつかの実施形態では、ロピバカイン組成物の投与後のＣｍａｘは、未処方（未組成物化）ロピバカインの投与後のＣｍａｘの１６．７％であり、これは、この麻酔薬の安全窓の範囲内で６倍高い承認された臨床投薬量が使用されてもよいことを示す。
【００３１】
臨床使用のために、ＡＥは、本発明のある実施形態では、７０％〜９５％の範囲にある。捕捉されたアミド型麻酔薬を有する残留するＭＬＶは、このアミド型麻酔薬を治療上有効な投薬量をその局所部位で維持するように、局所環境へと徐々に放出するためのデポーとして作用する。いくつかの実施形態では、本発明に係るロピバカイン組成物の１回のＳＣ投与から導かれるロピバカインの半減期は、未処方ロピバカインの半減期と比べて、少なくとも１０倍延びている。本発明のロピバカイン組成物の投与後の麻酔効果の継続時間は、未処方ロピバカインの麻酔効果の継続時間を超えて有意に延長される。
【００３２】
本開示は、以下の具体的な非限定的な例を参照してさらに説明される。
【実施例】
【００３３】
以下の例は、本発明の特定の実施形態の調製及び特性を例証する。
【００３４】
実施例１
ロピバカイン組成物の調製
ＨＳＰＣ及びＤＭＰＣは、ＮＯＦ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ（日油株式会社）から購入した。コレステロールは、Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ（シグマ・アルドリッチ）から購入し、ロピバカインはＡｐｏｌｌｏ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ（アポロ・サイエンティフィック）又はＤｉｓｈｍａｎ（ディッシュマン）から購入した。すべての他の化学物質はＳｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈから購入した。
【００３５】
いくつかのＨＥＬＳを調製するために、以下のモル比、ＨＳＰＣ：コレステロール：ロピバカイン＝１．５：１：２．２、ＨＳＰＣ：コレステロール：ロピバカイン＝２：１：２．９、ＤＭＰＣ：コレステロール：ロピバカイン＝２：１：２．９、及びＤＭＰＣ：ＤＰＰＧ：コレステロール：ロピバカイン＝１．８５：０．１５：１：２．９のロピバカインを有する異なる脂質混合物を使用した。上記脂質及びロピバカインを混合し、次いでｔｅｒｔ−ブタノール又はｔｅｒｔ−ブタノール／水共溶媒系（１／１、体積／体積）に溶解し、液体構造を形成した。各液体構造試料を３０〜６０分間冷凍し、次いで一晩凍結乾燥し、凍結乾燥したケーキの形態でＨＥＬＳを得た。
【００３６】
ビヒクル対照のための脂質構造を調製するために、ＤＭＰＣ：コレステロール＝２：１のモル比の脂質混合物を秤量し、次いでｔｅｒｔ−ブタノールに溶解した。得られた試料を６０分間冷凍し、次いで一晩凍結乾燥し、ビヒクルの凍結乾燥したケーキを得た。
【００３７】
上記凍結乾燥したケーキを、異なるｐＨ値の異なる緩衝液で、好適な温度（例えば、ＤＭＰＣについては２５℃／常温（ＡＴ）より高く、ＨＳＰＣについては６０℃より高い）で２〜１０分間水和し、それぞれロピバカイン組成物及びビヒクル組成物を形成した。
【００３８】
実施例２
ロピバカイン組成物の特性解析
上記の調製物の各々の会合効率（ＡＥ）を以下のようにして決定した。各ロピバカイン組成物の２００マイクロリットルを遠心分離機に移し、４℃で、３０００×ｇで５分間回転した。上清を静かに移した後、捕捉されたロピバカインを有するＭＬＶを得て、２００μＬの最終体積に再懸濁した。基準の吸光度標品を、各薬物物質（例えば、ロピバカイン）に対して、既知の濃度の試験薬物物質の溶液に基づいて確立した。もとのロピバカイン組成物及び捕捉されたロピバカインを有するＭＬＶの両方の薬物量を、紫外／可視（ＵＶ／Ｖｉｓ）分光光度計を用いて測定した。ＡＥは、上記ロピバカイン組成物の中の薬物量に対する捕捉されたロピバカインを有するＭＬＶの中の薬物量の比を表す。捕捉されたロピバカインを有するＭＬＶのＤ：ＰＬは、ＨＥＬＳのＤ：ＰＬにＡＥを乗じることにより算出した。結果の要約を表１に示す。
【００３９】
各ロピバカイン組成物の粒径は、レーザー回折アナライザー（ＬＡ−９５０Ｖ２、Ｈｏｒｉｂａ（堀場））を用いて測定した。ＨＥＬＳ（ＤＭＰＣ：コレステロール＝２：１）を５０ｍＭヒスチジン緩衝液（ｐＨ６．５）で水和することにより形成した、捕捉されたロピバカインを有するＭＬＶのメジアン径（Ｄ５０）は、１１．１±０．３μｍ（ｎ＝３）であった。
【００４０】
【表１】
2020531540.tif 000004
【００４１】
実施例３
ロピバカイン組成物の薬物動態研究
頸静脈カニュレーション施術済みの（ＪＶＣ）雌のスプラーグドーリー（Ｓｐｒａｇｕｅ−Ｄａｗｌｅｙ）ラットを、薬物動態（ＰＫ）研究のために使用した。このラットを、１２時間明／１２時間暗の概日周期で稼働し、水及び食料を自由に提供する飼育室内で飼育した。ロピバカイン組成物を実施例１に従って調製し、ＤＭＰＣ：コレステロール：ロピバカイン＝２：１：２．９のＨＥＬＳを、それぞれｐＨ５．５、６．０及び６．５の５０ｍＭヒスチジン緩衝液で水和した。未処方ロピバカインは、ロピバカイン塩酸塩一水和物を０．９％ＮａＣｌ中に２４．０ｍｇ／ｍＬで溶解することにより調製した。ラットの群（一群あたりｎ＝３又は４）に投与したそれぞれのリポソームロピバカイン組成物及び未処方ロピバカインのインビボＰＫプロファイルを、２０．０ｍｇ／ｋｇのロピバカインの投薬量での皮下（ＳＣ）注射後に比較した。血液試料を注射後１５分、１時間、２時間、４時間、８時間、２４時間、４８時間及び７２時間で採取した。血漿試料を、遠心分離によって得て、分析まで−８０℃で凍結して保った。これらの試料から得たＰＫデータを、ノンコンパートメントモデル（ＷｉｎＮｏｎｌｉｎ（登録商標）ソフトウェア）を用いて解析した。このモデルから誘導されたＰＫパラメータを表２に示す。
【００４２】
【表２】
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【００４３】
ロピバカイン組成物のＣｍａｘは、水和溶液のｐＨ値がよりアルカリ性である場合に、より低かった。未処方ロピバカイン群と比べて、Ｃｍａｘは、ｐＨ５．５のヒスチジン溶液で水和したロピバカイン組成物については５５．５％、ｐＨ６．０のヒスチジン溶液で水和したロピバカイン組成物については３５．５％、ｐＨ６．５のヒスチジン溶液で水和したロピバカイン組成物については１６．７％であった。すべての３つのロピバカイン組成物の半減期（Ｔ１／２）は、未処方ロピバカインの半減期（Ｔ１／２）と比べて、有意に延びていた。曲線下面積（ＡＵＣ０−ｔ）に基づくと、ロピバカイン組成物の注射の７２時間後にロピバカインの８４．６％〜９０．８％が放出された。このＰＫ研究の結果を図１に示す。同じ投薬量の投与後、すべてのロピバカイン組成物群において血漿中のロピバカインを７２時間まで検出することができたが、しかしながら、未処方ロピバカイン群では、２４時間後には血漿中でロピバカインは検出できなかった。
【００４４】
実施例４
肢切開マウスモデルにおける麻酔効果
野生型の雄のＣ５７／ＢＬ６マウス（８週齢、Ｅｎｖｉｇｏ（エンヴィーゴ））を、Ａｎｅｓｔｈｅｓｉｏｌｏｇｙ．  ２００３年１０月；９９（４）：１０２３−７及びＪ  Ｎｅｕｒｏｓｃｉ  Ｍｅｔｈｏｄｓ．  １９９４年７月；５３（１）：５５−６３に記載されているような肢切開後の麻酔有効性を評価するために使用した。マウス飼育室は、光を使用しないことを確保するために１２時間明／１２時間暗の概日周期で稼働し、研究者及び実験助手が暗周期の間にマウスルームに入らないようにする。ロピバカイン組成物及びビヒクル（媒質）を実施例１に従って調製し、ＤＭＰＣ：コレステロール：ロピバカイン＝２：１：２．９のＨＥＬＳ及びＤＭＰＣ：コレステロール＝２：１のビヒクルの脂質構造を、各々、ｐＨ６．０の５０ｍＭヒスチジン緩衝液で水和した。未処方ロピバカインは、０．１Ｎ  ＨＣｌを含有する９．４％スクロース溶液中に１８．３ｍｇ／ｍＬでロピバカインを溶解することにより調製した。上記ロピバカイン組成物、未処方ロピバカイン、及びビヒクル（一群あたりｎ＝８）のインビボ有効性研究を、切開あたり０．１８ｍｇのロピバカインの投薬量での肢切開後のＳＣ注射の後に比較した。
【００４５】
３２匹のマウスのベースライン（Ｔ＝−２時間）機械的（ｖｏｎ  Ｆｒｅｙ）閾値（収縮閾値）を外科手術に先立って取得した。ベースライン閾値は、マウスの左後肢で測定した。すべての３２匹のマウスは、その左後肢に足底切開（長さ５ｍｍ及び深さ５ｍｍ）を受けた。手術後２時間（Ｔ＝０時間）で、各マウスの機械的閾値を再評価し、各マウスにおける機械的アロディニアの存在を確認した。３２匹のマウスを４つの群にランダム化した（一群あたり８匹のマウス）。２．５％イソフルラン麻酔で麻酔するあいだに、各マウスは、ビヒクル（１０μＬ）、ロピバカイン組成物（１８．３ｍｇ／ｍＬの１０μＬ）又は未処方ロピバカイン（１８．３ｍｇ／ｍＬの１０μＬ）のＳＣ注射を受けた。各マウスの５０％後肢逃避反応閾値を、ベースライン時間点（−２）、及びＳＣ注射処置後の指定の時間点（０時間、１時間、２時間、３時間、４時間、５時間、６時間、８時間及び２４時間）で上げ下げ法を用いて得た。
【００４６】
肢切開後のロピバカイン組成物（丸）、未処方ロピバカイン（四角）及びビヒクル（三角）の麻酔有効性を図２Ａ及び図２Ｂに示す。各処置群についての平均５０％逃避反応閾値をグラフ化した。逃避反応閾値（ｇ）として提示したデータを時間に対してプロットした（図２Ａ）。個々のマウスのベースライン機械的感受性のばらつきを補正するために、外科手術及び処置後の各マウスの５０％後肢逃避反応閾値をそれ自身のベースライン５０％逃避反応閾値（Ｔ＝−２時間）に対して規格化した。各処置群についての平均の規格化５０％逃避反応閾値をグラフ化した。ベースライン閾値に対する機械的閾値の％変化として提示したデータを時間に対してプロットした（図２Ｂ）。投与後のロピバカイン組成物及び未処方ロピバカインによる麻酔の開始時は同様であり、逃避反応閾値は、第１時間点（Ｔ＝１時間）で０．０４ｇからそれぞれ０．２６ｇ及び０．２２ｇまで上昇した。ロピバカイン組成物群は、最大（約８８％）かつ最長（少なくとも５時間）の鎮痛作用をもたらし、未処方ロピバカイン群も、ビヒクル群と比べていくらかの程度の無痛覚をもたらした。
【００４７】
実施例５
改変ＩＣ膨疹ピン刺激モデルを用いたモルモットに対する麻酔効果
雄のモルモット（８週齢、約５００ｇ、Ｃｈａｒｌｅｓ  Ｒｉｖｅｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ（チャールズ・リバー・ラボラトリーズ））を用いて、Ｊ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌ  Ｅｘｐ  Ｔｈｅｒ．  １９４５；８５：７８−８４に記載されているように麻酔有効性を評価した。すべてのモルモットを、ケージあたり２匹の動物で群ケージの中で飼育し、適正な養育及び富化（エンリッチメント）を確実にするためにモルモット食料（Ｈｅａｌｔｈｙ  Ｐｅｔ（登録商標））及び水を自由に摂取させた。この飼育条件を１２時間明／１２時間暗の概日周期で、６５〜７５°Ｆ（約１８〜２３℃）で制御した。１２日間の実験室条件への馴化の初期期間の後、モルモットを無作為に１番から８番まで番号を付けた。ロピバカイン組成物を実施例１に従って調製し、ＤＭＰＣ：コレステロール：ロピバカイン＝２：１：２．９のＨＥＬＳをｐＨ６．０の５０ｍＭヒスチジン緩衝液で水和した。未処方ロピバカインを、ロピバカイン塩酸塩一水和物を超純水中に２０．５ｍｇ／ｍＬへ溶解することにより調製した。
【００４８】
上記モルモット（一群あたりｎ＝４又は６）のこのインビボ有効性研究は、それぞれＩＣ膨疹あたり３．０ｍｇのロピバカイン及びＩＣ膨疹あたり１．５ｍｇのロピバカインの投薬量での皮内（ＩＣ）注射後に、ロピバカイン組成物及び未処方ロピバカインを比較した。実験の１日前にモルモットの背中の毛を剃った。実験の日に、４つの領域を薬物投与前に背中に線引きし、これらの領域の感受性をピン刺激によって決定した。各動物は、４つの指定された配合物を背中に受け、これらはそれぞれ４つの膨疹を作り出した。注射部位でのピン刺激に対する反応を、配合物の注射後０分、１５分、１時間、２時間、４時間、５時間、６時間、８時間、１０時間、１２時間、及び２３時間で試験した。各時間点で、ピン刺激を、最初に膨疹の外部の対照領域に加えた。膨疹の外部でのピン刺激に対する動物の正常な反応を観察した後、６回の刺激を膨疹内部に加え、モルモットが反応できなかった刺激を無反応と記録した。すべての刺激に対して１００％応答を提示した動物は、さらなる時間点ではモニタリングしなかった。
【００４９】
同じ投薬量の未処方ロピバカイン群と比較したロピバカイン組成物群の麻酔効果を決定し、結果を図３Ａ及び図３Ｂに示す。３．０ｍｇ（図３Ａ）及び１．５ｍｇロピバカイン（図３Ｂ）の投薬量の両方でのロピバカイン組成物及び未処方ロピバカインの両方の麻酔の開始を、最初の時間点で、つまり１５分以内に観察した。ロピバカイン組成物群は、両方の投薬量についての未処方ロピバカイン群について観察したものと比べて、持続した麻酔効果を呈した。ＩＣ膨疹あたり３ｍｇのロピバカインの投薬量については、未処方ロピバカイン群と比べて、有意に持続した麻酔効果を、ロピバカイン組成物群について注射後１０時間及び１２時間で観察した（ｐ＜０．０５）。ＩＣ膨疹あたり１．５ｍｇのロピバカインの投薬量についても、未処方ロピバカイン群と比べて、麻酔効果は、ロピバカイン組成物群について長く持続し、有意差（ｐ＜０．０５）は注射後２時間、４時間及び５時間で認められた。
【図１】
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【図２Ａ】
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【図２Ｂ】
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【図３Ａ】
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【図３Ｂ】
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【手続補正書】
【提出日】令和1年7月8日(2019.7.8)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
徐放性麻酔組成物の調製方法であって、
少なくとも１種のアミド型麻酔薬、及び
少なくとも１種のリン脂質を含む脂質混合物
を含む高度に捕捉された脂質構造（ＨＥＬＳ）を作製する工程と、
前記ＨＥＬＳを５．５〜８．０のｐＨの水性緩衝溶液で水和する工程と
を備え、前記ＨＥＬＳを水和する工程は、捕捉されたアミド型麻酔薬を有する多層小胞体（ＭＬＶ）を形成し、前記捕捉されたアミド型麻酔薬を有するＭＬＶのメジアン径が少なくとも１μｍであり、前記捕捉されたアミド型麻酔薬を有するＭＬＶの中のリン脂質に対するアミド型麻酔薬のモル比が少なくとも０．５：１である方法。
【請求項２】
前記ＨＥＬＳが、ケーキ、粉末、非膜固体塊状物、又はこれらの組み合わせの形態にある請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記ＨＥＬＳを作製する工程が、
前記脂質混合物及び前記少なくとも１種のアミド型麻酔薬を溶媒系に溶解し、液体構造を形成する工程、及び
前記液体構造から前記溶媒系を除去する工程
を備える請求項１に記載の方法。
【請求項４】
前記溶媒系を除去する工程が、前記液体構造を凍結乾燥又は噴霧乾燥する工程を備える請求項３に記載の方法。
【請求項５】
前記溶媒系が、ｔｅｒｔ−ブタノール又はｔｅｒｔ−ブタノール／水共溶媒を含む請求項３に記載の方法。
【請求項６】
前記脂質混合物がコレステロールを含む請求項１に記載の方法。
【請求項７】
前記脂質混合物中のコレステロールのモル百分率が５０％以下である請求項６に記載の方法。
【請求項８】
前記少なくとも１種のリン脂質及びコレステロールが１：０．０１〜１：１のモル比にある請求項６に記載の方法。
【請求項９】
前記少なくとも１種のアミド型麻酔薬が、リドカイン、ブピバカイン、レボブピバカイン、ロピバカイン、メピバカイン、ピロカイン、アルチカイン又はプリロカインである請求項１から請求項８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１０】
前記少なくとも１種のアミド型麻酔薬がロピバカイン塩基である請求項１から請求項８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１１】
前記水性緩衝溶液が１ｍＭ〜２００ｍＭの範囲の濃度のヒスチジンを含む請求項１から請求項８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１２】
必要とする対象に局所麻酔薬を局所投与するための徐放性麻酔組成物であって、前記組成物は、請求項１から請求項８のいずれか一項に記載の方法によって調製され、前記麻酔組成物の中の前記捕捉されたアミド型麻酔薬を有するＭＬＶのメジアン径が少なくとも１μｍであり、前記捕捉された局所麻酔薬を有するＭＬＶの中のリン脂質に対するアミド型麻酔薬のモル比が少なくとも０．５：１である徐放性麻酔組成物。
【請求項１３】
前記少なくとも１種のアミド型麻酔薬がロピバカイン塩基である請求項１２に記載の徐放性麻酔組成物。
【請求項１４】
前記水性緩衝溶液が、１ｍＭ〜２００ｍＭの範囲の濃度のヒスチジンを含む請求項１２に記載の徐放性麻酔組成物。
【国際調査報告】
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2020531540.tif 000012
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