(57)【要約】  創傷、熱傷、乾癬、にきび、およびアトピー性皮膚炎を含む、炎症、炎症性障害、および／または炎症を特徴とする状態の治療に使用するための配列Ａｌａ−Ｌｙｓ−Ｐｒｏ−Ｓｅｒ−Ｔｙｒ−Ｈｙｐ−Ｈｙｐ−Ｔｈｒ−ＤＯＰＡ−Ｌｙｓのペプチドまたはその塩を提供する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
炎症、炎症性障害、および／または炎症を特徴とする障害もしくは状態の治療に使用するための化合物Ａｌａ−Ｌｙｓ−Ｐｒｏ−Ｓｅｒ−Ｔｙｒ−Ｈｙｐ−Ｈｙｐ−Ｔｈｒ−ＤＯＰＡ−Ｌｙｓまたはその塩。
【請求項２】
炎症、炎症性障害、および／または炎症を特徴とする障害もしくは状態の治療のための薬剤を製造するための化合物Ａｌａ−Ｌｙｓ−Ｐｒｏ−Ｓｅｒ−Ｔｙｒ−Ｈｙｐ−Ｈｙｐ−Ｔｈｒ−ＤＯＰＡ−Ｌｙｓまたはその塩の使用。
【請求項３】
炎症、炎症性障害、および／または炎症を特徴とする障害もしくは状態の治療方法であって、そのような治療を必要とする患者への化合物Ａｌａ−Ｌｙｓ−Ｐｒｏ−Ｓｅｒ−Ｔｙｒ−Ｈｙｐ−Ｈｙｐ−Ｔｈｒ−ＤＯＰＡ−Ｌｙｓまたはその塩の投与を含む方法。
【請求項４】
前記炎症性障害が、乾癬、にきび、湿疹、および皮膚炎から選択される、請求項１に記載の使用のための化合物、請求項２に記載の使用、または請求項３に記載の方法。
【請求項５】
前記皮膚炎がアトピー性皮膚炎である、請求項４に記載の使用のための化合物、使用、または方法。
【請求項６】
前記炎症を特徴とする状態または障害が創傷または熱傷である、請求項４に記載の使用のための化合物、使用、または方法。
【請求項７】
前記創傷が、擦り傷、引っ掻き傷、切開、裂傷、皮膚穿刺、剥離、打撲、瘢痕または水疱である、請求項６に記載の使用のための化合物、使用、または方法。
【請求項８】
Ａｌａ−Ｌｙｓ−Ｐｒｏ−Ｓｅｒ−Ｔｙｒ−Ｈｙｐ−Ｈｙｐ−Ｔｈｒ−ＤＯＰＡ−Ｌｙｓまたはその塩が局所製剤の形態で局所的に投与される、請求項１〜７のいずれか一項に記載の使用のための化合物、使用、または方法。
【請求項９】
前記炎症、炎症性障害、および／または炎症を特徴とする状態が、皮膚への直接局所投与により治療される、請求項１〜８のいずれか一項に記載の使用のための化合物、使用、または方法。
【請求項１０】
前記炎症、炎症性障害、および／または炎症を特徴とする状態が、粘膜表面への直接局所投与により治療される、請求項１〜８のいずれか一項に記載の使用のための化合物、使用、または方法。
【請求項１１】
Ａｌａ−Ｌｙｓ−Ｐｒｏ−Ｓｅｒ−Ｔｙｒ−Ｈｙｐ−Ｈｙｐ−Ｔｈｒ−ＤＯＰＡ−Ｌｙｓまたはその塩を、医薬的または化粧品として許容されるアジュバント、希釈剤または担体と混合して含む組成物。
【請求項１２】
炎症部位への局所投与に適した請求項１１に記載の組成物。
【請求項１３】
前記炎症部位が皮膚または粘膜表面である、請求項１２に記載の組成物。
【請求項１４】
炎症、炎症性障害、および／または炎症を特徴とする障害もしくは状態の治療のための薬剤の製造のための、請求項１１〜１３のいずれか一項に定義される組成物の使用。
【請求項１５】
前記炎症性障害、または炎症を特徴とする状態もしくは障害が、請求項４〜７のいずれか一項で定義される、請求項１４に記載の使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、既知の化合物の新規使用に関する。
【背景技術】
【０００２】
炎症は、典型的には、例えば、微生物の侵入、特定の抗原、損傷細胞、または物理的および／もしくは化学的因子に対する局所的な組織応答として特徴付けられる。炎症反応は通常、有害物質および損傷した組織の両方を破壊、希釈、または隔離し、ならびに組織の治癒を開始する働きをする保護機構である。
【０００３】
炎症は、物理的な外傷、感染、何らかの慢性疾患（例えば、乾癬および関節リウマチなどの自己免疫疾患）、ならびに／または外部刺激に対する化学的および／もしくは生理学的反応（例えば、アレルギー反応の一部として）に起因する場合がある。炎症性メディエータが血流と局所血管の拡張を増加させ、発赤と熱、体液の滲出を引き起こし、しばしば局所的な腫脹、炎症領域への白血球遊走、および疼痛をもたらす、一連の複雑な事象が関与する場合がある。
【０００４】
多くの状態／障害は、異常な組織損傷炎症によって特徴付けられ、および／またはそれによって引き起こされる。そのような状態は典型的に、免疫防御機構の活性化によって特徴付けられ、宿主にとって有益というよりもより有害である効果をもたらし、一般に、種々の程度の、組織の発赤もしくは充血、腫脹、高体温、疼痛、かゆみ、細胞死、組織破壊、細胞増殖、および／または機能喪失に関連している。例には、炎症性腸疾患、関節リウマチ、多発性硬化症、乾癬、糸球体腎炎、および移植拒絶が含まれる。
【０００５】
典型的には、一連の複雑な事象が、発赤および熱をもたらす局所血管の拡張による血流の増加、、しばしば局所的な腫脹をもたらす白血球および血漿の血管外遊出、、感覚神経の活性化（一部の組織で疼痛をもたらす）、および機能の喪失などの炎症性変化をもたらす。これらの炎症性変化は、好中球、単球、マクロファージ、およびリンパ球などの細胞を、血管作用性アミン、サイトカイン、補体因子、および活性酸素種などの炎症性メディエータと共に含む細胞および生化学的事象のカスケードによって引き起こされる。
【０００６】
とりわけ、炎症は、創傷治癒プロセスにおいて重要な役割を果たす。したがって、創傷および熱傷は、炎症が関連する状態として分類することができる。当該技術分野における従来的な考え方は、創傷治癒の進行に有害であるため、開放創に抗炎症薬を直接適用すべきではないというものである。
【０００７】
Ｍｙｔｉｌｕｓ  ｅｄｕｌｉｓの足のタンパク質（ｍｅｆｐ）としても知られるイガイ接着タンパク質（ＭＡＰ）は、Ｍｙｔｉｌｕｓ  ｅｄｕｌｉｓ、Ｍｙｔｉｌｕｓ  ｃｏｒｕｓｃｕｓ、およびＰｅｒｎａ  ｖｉｒｉｄｉｓなどの海洋貝類によって分泌されるタンパク質である。接着タンパク質は、それが産生および保管されている足糸腺からイガイによって分泌される。岩などの固体の表面だけでなく、金属、木材、ガラスなどの他の固体物体の表面に分泌されると、イガイを固体物体に固定する防水結合が形成される。イガイは、典型的には、群で、沿岸のサンゴ礁または船の底に接着する。結合は信じられないほど強力であり、沿岸水域の波の影響に抵抗する能力を有している。
【０００８】
Ｍｙｔｉｌｕｓ  ｅｄｕｌｉｓ、Ｍｙｔｉｌｕｓ  ｇａｌｌｏｐｒｏｖｉｎｃｉａｌｉｓ、Ｍｙｔｉｌｕｓ  ｃａｌｉｆｏｒｎｉａｓ、およびＰｅｒｎａ  ｖｉｒｉｄｉｓの研究により、これまでのところ、イガイに由来する１１種類の別個の接着タンパク質サブタイプが同定されている：ｍｆｐ−１（「ｍｅｆｐ−１」と称されることもあり、以下では同義的に使用される）、ｍｆｐ−２／ｍｅｆｐ−２、ｍｆｐ−３／ｍｅｆｐ−３、ｍｆｐ−４／ｍｅｆｐ−４、ｍｆｐ−５／ｍｅｆｐ−５、ｍｆｐ−６／ｍｅｆｐ−６；コラーゲンｐｒｅ−ＣＯＬ−Ｐ、ｐｒｅ−ＣＯＬ−Ｄ、ｐｒｅ−ＣＯＬ−ＮＧ、および、イガイの足のマトリックスタンパク質ＰＴＭＰ（近位糸状部マトリックスタンパク質）とＤＴＭＰ（遠位近位糸状部マトリックスタンパク質）。例えば、Ｚｈｕ  ｅｔ  ａｌ，Ａｄｖａｎｃｅｓ  ｉｎ  Ｍａｒｉｎｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ，３２，５６０（２０１４）、およびＧａｏ  ｅｔ  ａｌ，Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ａｎｈｕｉ  Ａｇｒ．Ｓｃｉ．，３９，１９８６０（２０１１））を参照されたい。
【０００９】
そのサブタイプを含むすべてのイガイ接着タンパク質は、以下を含むという点で２つの構造特徴を有している：（１）リジンは、タンパク質が（ＮＨ２末端により）高い正電荷負荷を運ぶようにする、（２）３，４−ジヒドロキシフェニルアラニン（ＤＯＰＡ、ドーパミン）、そのカテコール部分は、強力な共有結合の形成をもたらし、その結果、イガイ接着タンパク質が固体表面に結合する能力を担う。
【００１０】
イガイの接着タンパク質生成物に基づく製品は、現在、限られた分野で使用されている（組織接着剤としての微小細胞接着、ならびに創傷および熱傷の治療を含む）。市販の製品は、イガイ接着タンパク質の溶液として直接使用されるか、または使用前に溶解するための凍結乾燥粉末として保存される。
【００１１】
配列：Ａｌａ−Ｌｙｓ−Ｐｒｏ−Ｓｅｒ−Ｔｙｒ−Ｈｙｐ−Ｈｙｐ−Ｔｈｒ−ＤＯＰＡ−Ｌｙｓのデカペプチド（以下「ＭＡＰペプチド」とも呼ぶ）は、ＭＡＰの医薬的に許容される低分子量誘導体であり、ＷａｉｔｅによりＩｎｔ．Ｊ．Ａｄｈｅｓｉｏｎ  ａｎｄ  Ａｄｈｅｓｉｖｅｓ，７，９（１９８７）に、最初に開示された。例えば、ＹａｍａｍｏｔｏによりＪ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．，Ｐｅｒｋｉｎ  Ｔｒａｎｓ．１，６１３（１９８７）に記載されるように、ＭＡＰペプチドは、天然に存在するＭＡＰの低分子量誘導体として誘導および／もしくは単離され得るか、または合成され得る。１，６１３（１９８７）．Ｄａｌｓｉｎ  ｅｔ  ａｌ，Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．，１２５，４２５３（２００３）も参照されたい。
【００１２】
出願人の知る限り、炎症または炎症性障害の治療におけるＭＡＰペプチドの使用は、先行技術には開示されていない。
【発明の概要】
【００１３】
本発明によれば、炎症の治療に使用するための、配列Ａｌａ−Ｌｙｓ−Ｐｒｏ−Ｓｅｒ−Ｔｙｒ−Ｈｙｐ−Ｈｙｐ−Ｔｈｒ−ＤＯＰＡ−Ｌｙｓ（ＭＡＰペプチド）の（単離された）ペプチド化合物、またはその塩が提供される。
【００１４】
言及され得るＭＡＰペプチドの塩には、医薬的に許容される塩、ならびに化粧品として許容される塩、例えば医薬的にまたは化粧品として許容される酸付加塩および塩基付加塩などが含まれる。このような塩は、従来の手段によって、例えば、遊離ペプチドと、１当量以上の適切な酸または塩基とを、任意選択的に、塩が不溶である溶媒中または媒体中で反応させ、次いで、標準的な技法を使用して（例えば、真空下で、凍結乾燥によって、またはろ過によって）、該溶媒または該媒体を除去することによって形成されてもよい。塩はまた、例えば適切なイオン交換樹脂を使用して、塩の形態の有効成分の対イオンを別の対イオンと交換することによって、調製されてもよい。
【００１５】
好ましい塩には、例えば、塩酸塩、重硫酸塩、マレイン酸塩、メシレート、トシレート、カルシウムおよびマグネシウムなどのアルカリ土類金属塩、またはナトリウムおよびカリウム塩などのアルカリ金属塩が含まれる。
【００１６】
ＭＡＰペプチドおよびその塩は、生物学的（例えば薬理学的）活性を有するため有用である。したがって、ＭＡＰペプチド／塩は、ヒトおよび動物の医療薬として有用である。したがって、それらは医薬として（および／または獣医学で）示されるが、化粧品および／または医療機器の一部としても使用できる。
【００１７】
ＭＡＰペプチド／塩はそれ自体で薬理活性を有する場合があるが、そのような活性を持ち得ないが、投与され、かつその後代謝されまたは化学的に変換されてＭＡＰペプチドを形成し得る、それらの特定の医薬的に許容される（例えば「保護された」）誘導体が存在できまたは調製できる。したがって、そのような化合物（該化合物はいくらかの薬理学的活性を有し得るが、但し、そのような活性は該化合物が代謝／変換される活性化合物の活性よりもかなり低い）は、ＭＡＰペプチドの「プロドラッグ」として記載され得る。
【００１８】
本明細書で使用する場合、プロドラッグへの言及には、投与後の所定の時間内に、実験的に検出可能な量でＭＡＰペプチドを形成する化合物が含まれる。ＭＡＰペプチドのすべてのプロドラッグは、本発明の範囲内に含まれる。
【００１９】
「炎症の治療」は、原因にかかわらず身体の任意の器官（軟部組織、関節、神経、血管系、内臓器官、特に粘膜表面、および特に皮膚を含む）における炎症の治療を含み、そしてまた、そのようなすべての炎症性障害もしくは状態、および／または炎症を特徴とする（例えば、症状として）障害もしくは状態を含む。
【００２０】
炎症状態は、免疫防御機構の活性化を特徴とする場合があり（および典型的にそうであり）、宿主にとって有益というよりも有害な効果をもたらす。そのような状態は一般に、種々の程度の、組織の発赤もしくは充血、腫脹、高体温、疼痛（うずきを含む）、体液の滲出、かゆみ（掻痒症）、細胞死および組織破壊、細胞増殖、ならびに／または機能喪失に関連している。
【００２１】
言及され得る炎症状態には、動脈炎、糖尿病、メタボリックシンドローム、酒さ、喘息およびアレルギー、強直性脊椎炎、慢性閉塞性肺疾患、痛風性関節炎、炎症性腸疾患（クローン病および潰瘍性大腸炎など）、多発性硬化症、変形性関節症、膵炎、前立腺炎、乾癬性関節炎、関節リウマチ、腱炎、滑液包炎、シェーグレン症候群、全身性エリテマトーデス、ブドウ膜炎、じんましん、血管炎、肥満細胞症、糖尿病性血管合併症、片頭痛、アテローム性動脈硬化症、および関連する心血管障害が含まれる。具体的に言及され得る疾患状態は、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）である。
【００２２】
さらに特に言及され得る炎症状態には、感染（ウイルス感染および／もしくは細菌感染など）に起因する炎症など、皮膚または粘膜（口腔、鼻、眼、膣、子宮頸部、および／もしくは肛門直腸の粘膜、特に口腔または鼻の粘膜を含む）の炎症、またはアレルギー／アトピー性状態（鼻炎、咽頭炎、歯周炎、歯肉炎、眼球乾燥症、結膜炎、皮膚炎、じんましん（ｕｒｔｉｃａｒｉａ）（じんましん（ｈｉｖｅｓ））、および食物アレルギーなど）、ならびにヘルペス、薬疹、多形性光疹、日焼け、皮膚がんの初期症状（紅斑のような皮膚病変）、病的脱毛（皮膚移植後を含む）、化学発疹、乾癬、多形性紅斑、毛包炎、湿疹、および外耳炎などの他の炎症状態が含まれる。具体的に言及される疾患状態は、多形性光疹である。
【００２３】
より具体的には、ＭＡＰペプチドおよびその塩は、炎症を特徴とする特定の状態、および／または炎症が関連している特定の状態を治療するために使用され得る。そのような状態には、創傷（擦り傷（引っ掻き傷）、（手術の切開を含む）切開、裂傷、刺し傷、剥離、打撲、および瘢痕化を含む）、火傷（皮膚移植などの、熱傷後の手術に起因する炎症を含む）、ならびに痔疾などの他の状態が含まれ得る。
【００２４】
皮膚または粘膜の創傷は、膜表面の内部または外部の身体的損傷から生じるか、またはそれによって引き起こされる可能性がある（すなわち、根本的な生理学的障害の症状である）。
【００２５】
身体的（例えば、「開放」）創傷は、鋭器（切り傷、切開、刺し傷）または鈍器／機械的力（裂傷、擦り傷、剥離）、身体的打撃（打撲）、熱または化学物質（熱傷および水疱）、紫外線（日焼け）、寒さ（しもやけまたは凍傷）によって引き起こされ得る。創傷は表在性（表皮および／もしくは真皮のみの損傷）、または全層創傷（表皮および／または真皮の下の損傷）であり得る。深刻な場合には、筋肉、骨、関節、さらには内臓器官などの皮下および／または粘膜下組織が損傷を受ける場合がある。
【００２６】
ＭＡＰペプチドおよびその塩は、創傷自体および治癒プロセスに関連する炎症、疼痛（うずきを含む）、および／または掻痒症（かゆみ）を治療するだけでなく、創傷からの体液の滲出、感染のリスクの予防にも使用することができ、瘢痕およびメラニン色素沈着などの炎症および／または創傷治癒プロセスに起因する生理学的反応の予防にも使用することができる。
【００２７】
瘢痕は、炎症および／または創傷治癒の結果であり、そのような炎症／治癒の結果である線維性組織の形成の一般的な用語である。
【００２８】
ＭＡＰペプチドおよびその塩はまた、炎症および／または創傷治癒に起因するメラニン色素沈着の産生の抑制に有用であり得る。ＭＡＰペプチドおよびその塩はまた、メラニン色素沈着に関連する障害、例えば、肝斑、そばかす、メラノーシス、頬部発疹、および他の色素沈着症、メラノーマを伴う皮膚がん、ならびに日光への曝露によって引き起こされる色素沈着症、またはにきびのような皮膚疾患などの抑制に有用であり得る。
【００２９】
創傷は、疾患または障害の結果として生じる場合もある。そのようなものには、水疱、ならびに／または皮膚および粘膜の潰瘍が含まれ得る。これらは、しばしば長続きし、治療が困難である一般的な症状である。皮膚組織は、しばしば損傷、除去、液化、感染、および／または壊死することがあり得る。潰瘍は、特に感染した場合、治癒するのが困難であり、費用がかかり、健康に二次的な結果をもたらす可能性がある。また、患者に大きな心理的ストレスと経済的損失をもたらし、全般的な幸福と生活の質の両方に影響を与える可能性がある。
【００３０】
代替的に、ＭＡＰペプチドおよびその塩が特に有用である炎症性皮膚状態または疾患には、乾癬、にきび、湿疹、および皮膚炎、特にアレルギー性／アトピー性皮膚炎が含まれる。
【００３１】
乾癬は、慢性の炎症性皮膚疾患であり、再発する傾向がある（一部の患者は生涯治癒しない）。乾癬の臨床症状には、主に紅斑および鱗屑が含まれる。これは、全身に発生する可能性があるが、頭皮および手足でより一般的に観察される。
【００３２】
にきびは、濾胞性（毛包脂腺ユニット）慢性の炎症性皮膚疾患であり、その発生は、皮脂過多、毛包脂腺管の閉塞（閉鎖面皰と開放面皰を含む）、細菌感染および炎症反応などの主な要因と密接に関連し、若年期に発生する傾向があり、顔面の多形性の皮膚病変を特徴とする。したがって、にきびという用語には、通常のにきびおよびにきび酒さ（すなわち、赤鼻）が含まれる。
【００３３】
湿疹は、様々な内的および外的要因によって引き起こされる強いかゆみを伴う皮膚の炎症反応である。急性、亜急性、および慢性の３つの段階がある。急性期には滲出液が生成される傾向があるが、慢性期には浸潤および肥大が含まれる。皮膚病変は、しばしばかゆみを伴い、容易に再発する。
【００３４】
皮膚炎は、粗さ、発赤、かゆみ、湿疹、および乾燥を特徴とする、一般的な皮膚疾患である。皮膚炎によって引き起こされる小さなしこり、難治性潰瘍、および色素斑は、すぐに治療しないと、基底細胞がん、扁平上皮がん、および悪性黒色腫に発展する場合がある。皮膚炎は、物質（接触性皮膚炎）またはアレルギー（アレルギー性／アトピー性皮膚炎）を含む、様々な内部および外部の感染性または非感染性の要因によって引き起こされる場合がある。また、脂漏性皮膚炎（脂漏性湿疹）およびすべての形態のステロイド依存性皮膚炎（光線過敏性脂漏、口周囲皮膚炎、酒さ様皮膚炎、ステロイド酒さ、ステロイド誘発酒さ、医原性酒さ（ｉａｔｒｏｓａｃｅａ）、ステロイド皮膚炎様酒さ、局所コルチコステロイド誘発性酒さ様皮膚炎、より具体的には、局所コルチコステロイドの（非制御使用、乱用または誤用を含む）長期治療後の顔面野における、紅潮、紅斑、毛細血管拡張、萎縮、丘疹および／または膿疱を特徴とする、顔面コルチコステロイド依存性皮膚炎（ＦＣＡＤ）または顔面コルチコステロイド依存性皮膚炎（ＦＣＤＤ）を含み、例えば、Ｘｉａｏ  ｅｔ  ａｌ，Ｊ．Ｄｅｒｍａｔｏｌ．，４２，６９７（２０１５）、およびＬｕ  ｅｔ  ａｌ，Ｃｌｉｎ．Ｅｘｐ．Ｄｅｒｍａｔｏｌ．，３５，６１８（２００９）を参照されたい）も含まれる。
【００３５】
ＭＡＰペプチドおよびその塩は、本明細書で一般的および具体的に言及したものを含む様々な状態によって引き起こされる紅斑、発赤および腫脹、浮腫、水疱、ならびに水疱性類天疱瘡の緩和に肯定的な効果を有し、皮下組織液の滲出を阻害し、かつそのような炎症状態によって引き起こされるかゆみおよび疼痛を抑制し得ることが見出された。
【００３６】
言及され得る他の炎症状態には以下が含まれる：
（ａ）口腔粘膜炎、アフタ性潰瘍、中耳炎、喉頭炎、気管炎、食道炎、胃炎、腸炎、および全腸炎（細菌性赤痢、慢性アメーバ性赤痢、住血吸虫症、非特異的潰瘍性大腸炎、および局所腸炎を含む）、子宮頸管炎および子宮頸管内膜炎、子宮内膜炎、吸入傷害などによって引き起こされる炎症などの粘膜炎症、ならびにがんに関連する粘膜炎症、および口腔、鼻咽頭、耳、喉、気管、胃腸管、子宮頸部などの粘膜表面に影響を及ぼす感染（例えば、風邪もしくはインフルエンザなどのウイルス感染）。
【００３７】
（ｂ）例えば、骨折、骨および関節の化膿性感染症、リウマチ性骨疾患による炎症、ならびに化膿性骨髄炎（急性、慢性、限局性、硬化性、外傷後）、化膿性関節炎、骨腫瘍（骨腫、類骨骨腫、軟骨腫）、骨嚢胞、破骨細胞腫、原発性骨肉腫（骨肉腫、軟骨肉腫、骨線維肉腫、ユーイング肉腫、非ホジキンリンパ腫、骨髄腫、脊索腫）、転移性骨腫瘍、骨の腫瘍様病変（骨嚢胞、動脈瘤骨嚢胞、好酸球性肉芽腫、線維性形成異常）、ならびにリウマチ性関節炎に関連する整形外科の炎症。
【００３８】
（ｃ）末梢多発神経炎、顔面神経炎、末梢神経炎、皮下神経炎、尺骨神経炎、肋間神経炎などの神経炎症。
【００３９】
（ｄ）筋炎、靭帯炎、腱炎、嚢胞炎、リンパ節炎、腺窩炎、扁桃炎、滑膜炎、筋膜炎などの、皮下および粘膜下の軟部組織の炎症、ならびに筋肉、靭帯、筋膜、腱、滑膜、脂肪、関節嚢、およびリンパ組織の損傷、挫傷、または裂傷によって引き起こされる軟部組織の炎症。
【００４０】
（ｅ）アレルギー性白血球破砕性血管炎、アレルギー性皮膚血管炎、結節性多発動脈炎、血栓性血管炎、肉芽腫性血管炎、リンパ球性血管炎、血液組成の異常を伴う血管炎、およびリウマチ性血管炎などの血管炎症、ならびにアレルギー性白血球破砕性血管炎、結節性多発動脈炎、血栓性血管炎、肉芽腫性血管炎、リンパ球性血管炎、血液組成の異常を伴う血管炎、およびリウマチ性血管炎によって引き起こされる血管がんに関連する血管炎症。
【００４１】
（ｆ）心膜炎、心筋炎、心内膜炎、肺炎、肝炎、脾炎、腎炎  膵炎、膀胱炎、卵巣炎、前立腺炎および胃潰瘍の治療を含むが、これらに限定されない、心臓、胃、腸、肺、肝臓、脾臓、腎臓、膵臓、膀胱、卵巣、および前立腺などの内臓器官の炎症。
【００４２】
本発明のさらなる態様によれば、炎症、炎症性障害、および／または炎症を特徴とする障害／状態（例えば、症状として）の治療方法が提供され、この方法は、そのような治療を必要とする患者へのＭＡＰペプチドまたはその塩の投与を含む。
【００４３】
誤解を避けるために、本発明の文脈において、「治療」、「療法」、および「治療法」という用語は、治療を必要とする患者の療法的または緩和的治療、ならびに炎症および／または炎症性疾患にかかりやすい患者の、予防的治療および／または診断を含む。
【００４４】
「患者」には、爬虫類、および好ましくは哺乳類（特にヒト）の患者が含まれる。
【００４５】
本発明によれば、ＭＡＰペプチド／塩は、医薬的に許容される剤形（複数可）の化合物（複数可）を含む医薬調製物の形態で、好ましくは、局所的または全身的に、例えば、経口的、静脈内または動脈内（血管内および他の血管周囲装置／剤形（例えば、ステント）を含む）、筋肉内、皮膚、皮下、経粘膜的（例えば、舌下もしくは頬側）、直腸、膣内、経皮的、経鼻的、肺（例えば、気管もしくは気管支）、局所的に、または任意の他の非経口経路で、投与される。吸入（例えば、経鼻的）による投与は、治療される症状が鼻炎または気道のウイルス感染（風邪、インフルエンザ）に起因する炎症である場合に特に有用である。肺投与は、治療される症状がＣＯＰＤの場合に特に有用である。局所投与形態は、例えば、粉末エアロゾルを使用することにより、またはネブライザーなどの適切な霧化技術または装置を使用する水性ミストにより、有効成分を含むスプレーを作成することにより強化され得る。
【００４６】
ＭＡＰペプチド／その塩の好ましい送達形態には、適切な（例えば、医薬的に許容される）媒体および／または市販の製剤での炎症部位への局所的送達が含まれるが、経口、静脈内、皮膚もしくは皮下、鼻腔、筋肉内、または腹腔内送達も含み得る。
【００４７】
ＭＡＰペプチドおよびその塩は、一般に、意図する投与経路および標準的な医薬または他の実施（例えば、化粧品）を考慮して選択することができる（例えば、医薬的に許容される）アジュバント、希釈剤、または担体と混合した１つ以上の（例えば、医薬）製剤の形態で投与される。そのような医薬的に許容される担体は、活性化合物に対して化学的に不活性であり得、使用条件下で有害な副作用または毒性を有しないものであり得る。そのような医薬的に許容される担体はまた、有効成分の即時放出または放出調節を付与し得る。
【００４８】
適切な医薬製剤は、市販されているか、または文献、例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ  Ｔｈｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｙ，２２ｎｄ  ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｐｒｅｓｓ（２０１２）、およびＭａｒｔｉｎｄａｌｅ−Ｔｈｅ  Ｃｏｍｐｌｅｔｅ  Ｄｒｕｇ  Ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ，３８ｔｈ  Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｐｒｅｓｓ（２０１４）、ならびにそこで参照されている文書に記載されている技術に従って調製でき、すべての文書の関連する開示は、参照により本明細書に組み込まれる。そうでなければ、ＭＡＰペプチドおよびその塩を含む適切な製剤の調製は、常用技術を使用して当業者によって非発明的方法で達成され得る。
【００４９】
ＭＡＰペプチド／塩は、エマルジョン、懸濁液および／もしくは溶液などの水性製剤（例えば、生理食塩水含有製剤（例えば、溶液）、リン酸塩含有製剤（例えば、溶液）、酢酸塩含有製剤（例えば、溶液）またはホウ酸塩含有製剤（例えば、溶液）などの（任意選択的）緩衝水性製剤（例えば、溶液））、または凍結乾燥粉末の形態であってもよい。
【００５０】
代替的に、有効成分を適切な賦形剤と組み合わせて以下を調製することもできる：
・ゲル製剤（これに関する適切なゲルマトリックス材料には、セルロース誘導体、カルボマーおよびアルギン酸塩、トラミカンガム、ゼラチン、ペクチン、カラギーナン、ジェランガム、デンプン、キサンタンガム、カチオン性グアーガム、寒天、非セルロース多糖類、ビニルポリマー、アクリル樹脂、ポリビニルアルコール、カルボキシポリマー、特に、ヒアルロン酸が含まれる）、
・ローション（凝縮物、これに関する適切なマトリックス材料には、セルロース誘導体、グリセリン、非セルロース多糖類、種々の分子量のポリエチレングリコール、およびプロパンジオールが含まれる）、
・ペーストまたは軟膏（これに関する適切なペーストマトリックス材料には、グリセリン、ワセリン、パラフィン、種々の分子量のポリエチレングリコールなどが含まれる）、
・クリームまたはフォーム（これに関する適切な賦形剤（例えば、発泡剤）には、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、ゼラチン、種々の分子量のポリエチレングリコール、ドデシル硫酸ナトリウム、脂肪アルコールポリオキシエチレンエーテルスルホン酸ナトリウム、コーングルテン粉末、およびアクリルアミドが含まれる）、
・粉末エアロゾル（これに関する適切な賦形剤には、マンニトール、グリシン、デキストリン、デキストロース、スクロース、ラクトース、ソルビトール、およびポリソルベートが含まれる）、ならびに／または
・経口用または吸入用の液体（エアロゾル）スプレー（これに関する適切な賦形剤には、ヒアルロン酸などの粘度調整剤、乳化剤、緩衝剤、アルコール、水、保存剤、甘味料、香料などが含まれる）。
【００５１】
グリセロール、グリセリン、ポリエチレングリコール、トレハロース、グリセロール、ワセリン、パラフィン油、ヒアルロン酸、およびその塩（例えば、ナトリウムおよびカリウム塩）、オクタン酸／カプリン酸トリグリセリドなどの保湿剤、ならびに／またはビタミンおよびグルタチオンなどの酸化防止剤、ならびに／または酸、塩基、およびｐＨ緩衝液などのｐＨ調整剤も、必要に応じてそのような製剤に含まれてもよい。さらに、ヘキサデカノール（セチルアルコール）、脂肪酸（例えば、ステアリン酸）、ドデシル硫酸ナトリウム（ラウリル硫酸ナトリウム）、ソルビタンエステル（例えば、ステアリン酸ソルビタン、オレイン酸ソルビタンなど）、モノアシルグリセリド（モノステアリン酸グリセリンなど）ポリエトキシ化アルコール、ポリビニルアルコール、ポリオールエステル、ポリオキシエチレンアルキルエーテル（例えば、ポリオキシエチレンソルビタンモノオレエート）、ポリオキシエチレンヒマシ油誘導体、エトキシ化脂肪酸エステル、ポリオキシルグリセリド、ラウリルジメチルアミンオキシド、胆汁酸塩（例えば、デオキシコール酸ナトリウム、コール酸ナトリウム）、リン脂質、Ｎ，Ｎ−ジメチルドデシルアミン−Ｎ−オキシド、ヘキサデシルトリメチルアンモニウムブロマイド、ポロキサマー、レシチン、ステロール（例えばコレステロール）、糖エステル、ポリソルベートなどの界面活性剤／乳化剤、フェノキシエタノール、エチルヘキシグリセリンなどの保存剤、ならびに、アクリロイルジメチルタウレート／ＶＰコポリマーなどの増粘剤が含まれてもよい。特に、ステアリン酸、モノステアリン酸グリセリル、ヘキサデカノール、ステアリン酸ソルビタン、セチルアルコール、オクタン酸／カプリン酸グリセリドなどが、特にクリーム製剤に含まれてもよい。
【００５２】
ＭＡＰペプチド／塩、ならびにそれらを含む（例えば、医薬）製剤（例えば、上述のような、水溶液、ゲル、クリーム、軟膏、ローション／凝縮物、フォームおよび／またはペースト）は、適切なマトリックス材料とさらに組み合わせて、皮膚または粘膜表面などの生物学的表面に適用するための包帯または治療パッチを調製することもできる。したがって、そのような製剤は、ガーゼ、不織布、または絹紙などのマトリックス材料に含浸するために使用されてもよい。代替的に、治療パッチは、例えば、バンドエイド、顔面マスク、アイマスク、ハンドマスク、フットマスクなどであってもよい。
【００５３】
そのような包帯を創傷に適用する際に使用するためにワセリンを使用してもよいが、ワセリンを使用する必要なく、ＰＥＧ（例えば、ＰＥＧ４００）ベースの軟膏をマトリックス材料と組み合わせて包帯を調製できることもわかった。
【００５４】
ＭＡＰペプチドおよびその塩はまた、血小板型増殖因子（血小板由来増殖因子、ＰＤＧＦを含む）、骨肉腫由来増殖因子（ＯＤＧＦ）、上皮増殖因子（ＥＧＦ）、形質転換増殖因子（ＴＧＦαおよびＴＧＦβ）、線維芽細胞増殖因子（αＦＧＦ、βＦＧＦ）、インスリン様増殖因子（ＩＧＦ−Ｉ、ＩＧＦ−ＩＩ）、神経増殖因子（ＮＧＦ）、インターロイキン型増殖因子（ＩＬ−１、ＩＬ−１、ＩＬ−３）、エリスロポエチン（ＥＰＯ）、およびコロニー刺激因子（ＣＳＦ）から選択される１つ以上の増殖因子による治療と組み合わせることもできる。
【００５５】
本発明のさらなる態様によれば、ＭＡＰペプチドのその塩と、アジュバント、希釈剤または担体などの１つ以上の医薬的に許容される賦形剤とを含む（例えば医薬）組成物が提供される。好ましい組成物は、皮膚または粘膜表面への局所投与用である。
【００５６】
有効成分の投与は、連続的または断続的であり得る。投与形態は、投与のタイミングおよび頻度によっても決定され得るが、炎症の療法的治療の場合、状態の重症度によっても決まる。
【００５７】
障害、および治療される患者、ならびに投与経路に応じて、ＭＡＰペプチドおよびその塩は、様々な治療有効用量で治療を必要とする患者へ投与され得る。
【００５８】
同様に、製剤中の有効成分の量は、治療される状態の重症度および患者によって決まるが、当業者によって決定され得る。
【００５９】
いずれにせよ、開業医または他の当業者は、状態の重症度および投与経路に応じて、個々の患者に最も好適な実際の投与量を日常的に決定することができるだろう。上述の投与量は、平均の場合の例であり、当然のことながら、より高いまたはより低い投与量範囲が妥当である個々の事例があり得、それらも本発明の範囲内である。
【００６０】
投与は、１日１回〜４回投与することができる。
【００６１】
水溶液生成物におけるＭＡＰペプチドまたはその塩の適切な濃度は、すべての場合において、遊離（非塩）ペプチドとして計算されて、約０．０１（例えば、約０．１）ｍｇ／ｍｌ〜約１５．０（例えば、約１．５）ｍｇ／ｍｌであってもよく、適切なｐＨ値は、約１．０〜約７．０の範囲（例えば、約３．０から約６．５）である。
【００６２】
ＭＡＰペプチド／塩の適切な局所用量は、すべての場合において、遊離（非塩）ペプチドとして計算されて、約０．１〜約５０μｇ／ｃｍ２の治療部位、例えば、約１〜約２０μｇ／ｃｍ２の治療部位の範囲であり、約２〜約１０μｇ／ｃｍ２）の治療部位、例えば、約５μｇ／ｃｍ２の治療部位の範囲である。
【００６３】
いずれにせよ、哺乳動物、特にヒトに投与される用量は、本発明の文脈において、妥当な時間枠（上述のように）にわたって哺乳動物の治療反応をもたらすのに十分でなければならない。当業者は、正確な用量および組成ならびに最も適切な送達レジメンの選択が、とりわけ製剤の薬理学的特性、治療される状態の性質および重症度、レシピエントの体調および精神状態、ならびに治療を受ける患者の年齢、状態、体重、性別および反応、疾患の病期／重症度、ならびに患者間の遺伝的差異によっても影響されることを認識するであろう。
【００６４】
本明細書に記載の使用および方法において、ＭＡＰペプチドおよびその塩は、炎症および／または炎症性障害の治療に有用な１つ以上の有効成分（他の抗炎症剤）と組み合わせてもよい。したがって、そのような患者は、（および／またはすでに）そのような他の有効成分の１つ以上の投与に基づく治療を受けている場合もあり、それにより、ＭＡＰペプチド／塩による治療の前、それに加えて、および／またはその後に、本明細書に記載されている有効成分の１つ以上の処方用量を受け取ることを意味する。
【００６５】
炎症の治療においてＭＡＰペプチド／その塩と組み合わせて使用され得るそのような抗炎症剤には、炎症および／またはその症状の１つとして炎症を特徴とする疾患の治療に有用な治療剤が含まれる。治療される状態に応じて、そのような抗炎症剤には、ＮＳＡＩＤ、ロイコトリエン受容体拮抗薬（例えば、モンテルカスト）、コルチコステロイド、鎮痛薬、および例えば以下に記載のトリプシンなどの特定の酵素も含まれ得る。ＭＡＰペプチド／塩は、ロイコトリエンＢ４（ＬＴＢ４）と組み合わせることもできる。
【００６６】
これに関連して、ＭＡＰペプチド／塩はまた、Ｍｙｔｉｌｕｓ  ｅｄｕｌｉｓ（ムラサキイガイ）などのイガイ種に由来し得る任意の接着タンパク質であって、、例えばコラーゲンｐｒｅ−ＣＯＬ−Ｐ、ｐｒｅ−ＣＯＬ−Ｄおよびｐｒｅ−ＣＯＬ−ＮＧ、イガイの足のマトリックスタンパク質ＰＴＭＰおよびＤＴＭＰ、さらに好ましくは、ｍｆｐまたはｍｅｆｐ  、例えばｍｅｆｐ−２、ｍｅｆｐ−３、ｍｅｆｐ−４、ｍｅｆｐ−５、ｍｅｆｐ−６、特にｍｅｆｐ−１などイガイに由来するかまたは由来し得るすべてのサブタイプを含む全長タンパク質を含む接着タンパク質を含み、かつｍｅｆｐなどのこれらのタンパク質のいずれかの混合物または組み合わせを含む、１つ以上のイガイＭＡＰによる炎症の治療に使用するために、組み合わせることもできる。上述のＭＡＰサブタイプの混合物／組み合わせは、ＭＡＰ「構成要素」として提供され得るが、主要なＭＡＰサブタイプ（例えば、ｍｅｆｐ−１）の純度は、任意のそのような混合物の全量の少なくとも２５重量％であることが好ましい。
【００６７】
天然に存在するＭＡＰは、例えば、混合吸着クロマトグラフィー（中国特許第ＺＬ２００７１０１７９４９１．０号を参照）、カルボキシメチルイオン交換クロマトグラフィー（中国特許第ＺＬ２００７１０１７９４９２．５号を参照）、および／または塩析および透析（中国特許第ＺＬ２００９１００８７５６７．６号）によって調製され得る。ＭＡＰの商業的供給源には、ＵＳＵＮ  Ｂｉｏ  Ｃｏ．（中国、ＭＡＰ  Ｍｅｄｉｃａｌ  Ｄｅｖｉｃｅ（登録商標）として販売）、ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ（米国）、Ｋｏｌｌｏｄｉｓ（韓国）、およびＢｉｏｐｏｌｙｍｅｒ（スウェーデン）が含まれる。代替的に、ＭＡＰは、既知の組換えＤＮＡ法を使用して生成されてもよい。
【００６８】
ＭＡＰの他の（例えば、医薬的に許容される）誘導体は、ＭＡＰペプチド／その塩と組み合わされてもよく、例えば、約５００Ｄａ〜約２，０００Ｄａ（例えば、約８００Ｄａなどの約１，２００Ｄａ）の範囲の分子量を有する化合物を含む。そのような誘導体には、天然に存在するＭＡＰで同定された配列と同じ、または（例えばマイナーな）変異体であるアミノ酸配列を含む他の化合物も含まれる場合があり、化学的および／または生物学的プロセス（例えば、天然に存在するＭＡＰの化学修飾、または直接合成）によって合成できる。「天然に存在するＭＡＰで同定されたアミノ酸配列の（例えばマイナーな）変異体」とは、関連する天然に存在するＭＡＰの必要な特性に測定可能な程度の悪影響を与えない配列の変異を意味する。
【００６９】
ＭＡＰペプチド／塩を組み合わせることができる他の好ましい薬剤には、ＬＴＢ４（例えば、創傷や火傷を治療するため）、モンテルカスト（例えば、炎症全般を治療するため）、およびトリプシン（例として、例えばウイルス感染に関連する粘膜の炎症を治療するため）が含まれる。
【００７０】
ＭＡＰペプチド／塩は、投与すると副作用として炎症を引き起こすことが知られている他の治療薬と組み合わせることもできる。
【００７１】
ＭＡＰペプチド／塩がこのように他の治療薬と「組み合わされる」場合、有効成分は同じ製剤で一緒に投与されるか、異なる製剤で別々に（同時または順次）投与され得る。
【００７２】
そのような組み合わせ製品は、他の治療薬と併用したＭＡＰペプチドおよびその塩の投与を提供し、したがって、これらの製剤の少なくとも１つがＭＡＰペプチド／塩を含み、少なくとも１つが他の治療薬を含む別個の製剤として提示されてもよく、または組み合わせ調製物（すなわち、ＭＡＰペプチドおよび他の治療薬を含む単一製剤として提示）として提示（すなわち製剤化）されてもよい。
【００７３】
したがって、
【００７４】
（１）ＭＡＰペプチドもしくはその塩と、別の抗炎症剤、または副作用として炎症を引き起こすことが知られている薬剤と、医薬的に許容されるアジュバント、希釈剤もしくは担体と、を含む医薬製剤（この製剤は以下「組み合わせ調製物」という）、および
【００７５】
（２）以下の構成要素を含むパーツキットであって、
（Ａ）医薬的に許容されるアジュバント、希釈剤もしくは担体と混合したＭＡＰペプチドまたはその塩を含む医薬製剤と、
（Ｂ）医薬的に許容されるアジュバント、希釈剤もしくは担体と混合した別の抗炎症剤、または副作用として炎症を引き起こすことが知られている薬剤を含む医薬製剤と、を含む部分キットがさらに提供され、
この構成要素（Ａ）および（Ｂ）は、それぞれ、他方と一緒に投与するのに適した形態で提供される。
【００７６】
「約」という語が本明細書中で使用される場合、例えば、有効成分の濃度および／または用量、分子量、もしくはｐＨなどの量という文脈で使用される場合はいずれも、そのような変数は近似値であり、したがって本明細書で指定された数値から±１０％、例えば±５％、好ましくは±２％（例えば、±１％）変動し得ることが理解されるであろう。この点で、「約１０％」という用語は、例えば数１０について±約１０％、すなわち９％〜１１％の間を意味する。
【００７７】
ＭＡＰペプチド／その塩は、その状態自体が、器質性炎症性疾患であるか、炎症に関連するか、もしくは炎症を特徴とするかどうか（例えば、創傷、火傷またはウイルス感染）にかかわらず、炎症を特徴とする様々な状態に使用できるという利点を有する。
【００７８】
本明細書に記載された用途と方法は、上述の状態の治療において、炎症性障害または他の治療に使用するための先行技術で公知である類似の方法（治療）と比較して、医師および／もしくは患者にとって便利であり、効果的であり、毒性が低く、広範囲の活性を有し、強力であり、副作用が少ないか、または類似の方法（治療）を上回る他の有用な薬理学的特性を有し得るという利点も有し得る。
【００７９】
本発明を以下の実施例により説明するが、図１および図２は、それぞれ実施例１および２に従ってマウスに誘発された空気嚢からの滲出物から得られた様々な炎症マーカーのＥＬＩＳＡ試験結果を示し、図３は急性創傷マウスモデルにおける様々な製剤についての創傷治癒を示す。
【図面の簡単な説明】
【００８０】
【図１】実施例１に従ってマウスに誘発された空気嚢からの滲出物から得られた様々な炎症マーカーのＥＬＩＳＡ試験結果を示す。
【図２】実施例２に従ってマウスに誘発された空気嚢からの滲出物から得られた様々な炎症マーカーのＥＬＩＳＡ試験結果を示す。
【図３】急性創傷マウスモデルにおける様々な製剤についての創傷治癒を示す図である。
【実施例】
【００８１】
実施例１
空気嚢モデル
２０〜３０ｇの重さの健康な成体の雄のＣ５７ＢＬ／６マウスは、中国の南京大学のＮａｎｊｉｎｇ  Ｂｉｏｍｅｄｉｃａｌ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ（ＮＢＲＩ）から供給された。実験を行う前に、マウスを標準化された条件下（一定温度または２２±２℃で、１２時間の明暗を交互に繰り返す）で飼育し、約１週間、水を含む標準的なマウス飼料を与えた。
【００８２】
全身麻酔は、腹腔内３％抱水クロラール（Ｓｉｎｏｐｈａｒｍ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｒｅａｇｅｎｔ  Ｃｏ．，Ｌｔｄ．、Ｓｈａｎｇｈａｉ，Ｃｈｉｎａ）、１ｍＬ／体重１０ｇ）を使用して実施された。滅菌空気注射の１日前に、背部全体の毛を剃り、脱毛した。
【００８３】
空気嚢は、マウスの肩甲骨内領域に滅菌空気（５ｍＬ）を皮下注射することによって生成された。３日後、嚢を維持するために、別の空気（３ｍＬ）の注射が行われた。急性炎症を誘発するために、この最終注射の３日後に、動物は滅菌カラギーナン溶液（ＣＰ  Ｋｅｌｃｏ，Ｔａｉｘｉｎｇ，Ｊｉａｎｇｓｕ  Ｐｒｏｖｉｎｃｅ，Ｃｈｉｎａ；  １％、０．５ｍＬ、０．９％の生理食塩水を１０ｍＬ含む攪拌中のビーカーに０．１ｇのカラギーナン粉末を添加することにより作製）の注射を受けた。マウスは、皮下空気嚢へのカラギーナン注射の１時間前および２３時間後に試験試料または媒体で前処理された。動物はカラギーナン注射の２４時間後に屠殺された。
【００８４】
皮膚生検は空気嚢から採取された。生検の一部は、ホルマリン（５０ｍＬの４０％ホルムアルデヒド溶液（Ｎａｎｃｈａｎｇ  Ｒａｉｎ  Ｄｅｗ  Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ  Ｅｑｕｉｐｍｅｎｔ  Ｃｏ．，Ｌｔｄ．、Ｎａｎｃｈａｎｇ，Ｈｕｂｅｉ  Ｐｒｏｖｅｎｃｅ，Ｃｈｉｎａ）に超純水を総体積５００ｍＬまで添加することにより作製）で固定され、パラフィンワックスへの組織学的包埋、薄切、染色により分析した。
【００８５】
空洞を４ｍＬの滅菌リン酸緩衝溶液（ｐＨ７．４、４ｇのＮａＣｌ、０．１ｇのＫＣｌ、１．７４９ｇのＮａ２ＨＰＯ４・１２Ｈ２Ｏ、および０．１ｇのＫＨ２ＰＯ４を超純水で溶解し、ＨＣｌでｐＨを７．４に調整し、水で総体積５００ｍＬまで希釈して調製された）で洗浄した。
【００８６】
滲出液を採取し、体積を定量化した。細胞の総数は、血球計算盤（ＡＤＶＩＡ  ２１２０  Ｈｅｍａｔｏｌｏｇｙ  Ｓｙｓｔｅｍ，Ｓｉｅｍｅｎｓ  Ｈｅａｌｔｈｉｎｅｅｒｓ）で決定した。浸出液を３０００ｒｐｍで１０分間、４℃で遠心分離し、上清を収集し、組織壊死因子アルファ（ＴＮＦ−α）、インターロイキン１ベータ（ＩＬ−１β）、インターロイキン６（ＩＬ−６）、インターロイキン１０（ＩＬ−１０）、プロスタグランジンＥ２（ＰＧＥ２）、インターフェロンガンマ（ＩＦＮ−γ）、および５−ヒドロキシトリプタミン（５−ＨＴ、セロトニン）について、標準ＥＬＩＳＡ試験キット（Ｄａｋｅｗｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈ  Ｃｏ．，Ｂｅｉｊｉｎｇ，ＣｈｉｎａからのＢｉｏｌｅｇｅｎｄ（商標）またはＡｂｃａｍ（Ｓｈａｎｇｈａｉ）Ｔｒａｄｉｎｇ  Ｃｏ．Ｌｔｄ，ＣｈｉｎａからのＡｂｃａｍ（商標））およびＥＬＩＳＡリーダー（ＳＨ−１０００  Ｈｉｔａｃｈｉ，Ｊａｐａｎ）を使用するＥＬＩＳＡ分析のために−２０℃で保存した。
【００８７】
モデルを検証するためにいくつかの予備実験を行った後、以下の表１に従って試験試料または媒体を投与することによりマウスを処理する実験を実施した。
【００８８】
表１では、Ｍ１−Ｂ、Ｍ２−Ｂ、Ｍ１−Ａ、およびＭ２−Ａ試料は、表に指定されているように、カラギーナン注射とは異なる時間に投与される指定濃度のＭＡＰ（Ｍｅｆｐ−１）溶液である。溶液は次のように調製された。ムラサキイガイは、Ｓｈａｎｄｏｎｇ  Ｐｒｏｖｉｎｃｅ，Ｃｈｉｎａの沿岸地域で採取された。イガイの足を収集し、小片に切断し、４ｍｏｌ／Ｌの尿素水溶液に５％の酢酸を含む抽出緩衝液中でホモジナイズした。粗抽出物を遠心分離後に収集し、液体クロマトグラフィーで精製した。精製タンパク質（半製品、濃度８ｍｇ／ｍＬ、ＨＰＬＣで測定した純度９１．７２％、ｐＨ４．２）は０℃で保存した。以下で使用した溶液は、この半製品に生理食塩水を加えることにより調製し、表１に記載されている濃度を得た。
【００８９】
また、表１の「テスト」は、スウェーデンのＩｎｎｏｖａｇｅｎ  ＡＢから入手したＭＡＰペプチドである。ペプチドは、関連するＭｅｆｐ−１アミノ酸配列に従って合成された。ペプチド粉末は−２０℃で保存し、３．０ｍｇ／ｍＬ、ｐＨ５．５の濃度で食塩水に溶解した。
【００９０】
デキサメタゾン（ＭｅｄＣｈｅｍＥｘｐｒｅｓｓ，Ｓｈａｎｇｈａｉ，Ｃｈｉｎａ）は粉末の形で得られ、超純水に溶解され、表１に記載されている濃度の溶液を得た。
【００９１】
表１に記載されているすべての物質は、空気嚢に直接注射することにより局所投与された。
【００９２】
【表１】
2020527135.tif 000002
【００９３】
各群の滲出液の体積と空気嚢壁の重量（平均±ＳＤ）を以下の表２に示す。
【００９４】
【表２】
2020527135.tif 000003
【００９５】
総細胞数と分類（×１０６／ｍＬ）を以下の表３に示す。
【００９６】
【表３】
2020527135.tif 000004
【００９７】
組織学的標本を分析し、炎症スコア、運動性スコア、浮腫スコアおよび運動性スコアを以下のように推定した。
【００９８】
ＨＥ染色切片を光学顕微鏡で観察し、知覚炎症レベルに応じて採点（１、２、または３ポイント）した（領域に散在する炎症細胞が少量のみの場合−１ポイント（軽度）、多くの炎症細胞が観察された場合−２ポイント（中程度）、そして、びまん性浸潤の場合−３ポイント（重度））。全体的な観察後、同様の採点システムが浮腫レベル（最も重度が３ポイント、軽度が１ポイント）に使用された。運動性スコアは、好中球の密度を表しており、炎症細胞に採用されているものと同じ方法論を採用している。
【００９９】
【表４】
2020527135.tif 000005
【０１００】
対照群では、嚢壁に少量の散在性炎症性細胞浸潤、軽度の浮腫が見られ、明らかな好中球浸潤は見られなかった。
【０１０１】
モデル群では、嚢壁は、全層に中程度から重度の慢性炎症性細胞浸潤、中程度から重度の浮腫、および散在性好中球浸潤を示した。
【０１０２】
陽性対照群では、嚢壁は中程度の慢性炎症性細胞浸潤、中程度の間質性浮腫、および少量の好中球浸潤を示した。
【０１０３】
Ｍ１−Ｂ群では、嚢壁は、全層に中程度から重度の慢性炎症性細胞浸潤、中程度から重度の浮腫、および少量の好中球浸潤を示した。
【０１０４】
Ｍ２−Ｂ群では、嚢壁は、全層に中程度の慢性炎症性細胞浸潤、中程度の浮腫、および少量の好中球浸潤を示した。
【０１０５】
テスト（ＭＡＰペプチド）群では、嚢壁は軽度から中程度の慢性炎症性細胞浸潤、間質性浮腫、少量の好中球浸潤を示した。
【０１０６】
Ｍ１−Ａ群では、嚢壁は軽度の慢性炎症性細胞浸潤、軽度の浮腫、およびいくつかの好中球浸潤を示した。
【０１０７】
Ｍ２−Ａ群では、嚢壁は中程度の慢性炎症性細胞浸潤、中程度の間質性浮腫、および少量の好中球浸潤を示した。
【０１０８】
ＴＮＦ−α、ＩＬ−６、ＩＬ−１０、およびＩＦＮ−γの滲出液のＥＬＩＳＡ試験結果は、常に安定した高い応答を示し、同様の変動傾向を示した。ＴＮＦ−α、ＩＬ−６、およびＩＦＮ−γの結果（±ＳＤ）を以下の表５に示し、図１にグラフで示す。
【０１０９】
【表５】
2020527135.tif 000006
【０１１０】
実施例２
空気嚢モデルＩＩ
本質的に上記実施例１に記載された手順と同じ手順に従い、以下の表６に従って試験試料または媒体を投与することによりマウスを治療した。
【０１１１】
この例では、ＭＡＰペプチドパウダーをｐＨ５．５で０．６ｍｇ／ｍＬの濃度で食塩水に溶解した。次に、０．５ｍＬの溶液を各群の空気嚢に注射した。
【０１１２】
【表６】
2020527135.tif 000007
【０１１３】
表７に示すように、上記の実施例１で概説したのと同様に、組織学的標本を分析し、採点した。
【０１１４】
【表７】
2020527135.tif 000008
【０１１５】
この例では、ＴＮＦ−α、ＩＬ−１β、およびＩＬ−６についてＥＬＩＳＡ分析を実施し、これらは図２にグラフで示す。結果は、ＭＡＰペプチドが非常に強い抗炎症作用を有することを示した。
【０１１６】
実施例３
急性創傷モデル
６〜８週齢の雄のＣ５７ＢＬ／６マウスは、Ｃｈａｎｇｚｈｏｕ  Ｃｖｅｎｓ  Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ  Ａｎｉｍａｌ  Ｃｏ．Ｌｔｄ（Ｃｈａｎｇｚｈｏｕ，Ｊｉａｎｇｓｕ  Ｐｒｏｖｉｎｃｅ，Ｃｈｉｎａ）から供給された。実験を行う前に、マウスを標準化された条件下（２２±２℃の一定温度で、１２時間の明暗を交互に繰り返す）で飼育し、約１週間、水を含む標準的なマウス飼料を与えた。
【０１１７】
全身麻酔は、腹腔内３％抱水クロラール（１ｍＬ／体重１０ｇ）を使用して実施された。背中の毛を乳児用毛剃り機で剃り、クリームで脱毛した。皮膚領域を拭き取り、７５％アルコールで２回滅菌した。
【０１１８】
直径８ｍｍのＥＭＳ皮膚生検パンチ（Ｅｌｅｃｔｒｏｎ  Ｍｉｃｒｏｓｃｏｐｙ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｐ．Ｏ．Ｂｏｘ  ５５０，１５６０  Ｉｎｄｕｓｔｒｙ  Ｒｏａｄ，Ｈａｔｆｉｅｌｄ，ＰＡ  ，ＵＳＡ）を使用して、背中の正中線の各側に１つの丸い創傷を作製した。皮膚の全層が除去され、創傷の深さが筋膜に達した。創傷を縫合せずに開いたままにした。
【０１１９】
以下の表８に示すように、０日目〜１２日目まで１日１回、５０μＬ／創傷で異なる薬物を局所投与した。対照群には創傷は与えなかった。モデル群には同量の生理食塩水が与えられた。各群には１２匹のマウスがいた。
【０１２０】
この実験では、ＭＡＰペプチドはＧＬ  Ｂｉｏｃｈｅｍ（Ｓｈａｎｇｈａｉ）Ｌｔｄから入手した。ペプチド粉末は−２０℃で保存し、３３μｇ／ｍＬの濃度で生理食塩水に溶解した。
【０１２１】
関連する群の各創傷表面に２０μＬのそれぞれの溶液を適用した。
【０１２２】
【表８】
2020527135.tif 000009
【０１２３】
創傷を、薬物投与後にガーゼと透明なドレッサーで包んだ。０日目から１日おきに創傷ごとに写真を撮影した。写真をコンピューターにスキャンし、ＩｍａｇｅＪ画像分析ソフトウェア（Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ，Ｃｈｉｎａ）を使用して創傷領域を計算した。
【０１２４】
０日目から１日おきに創傷ごとに写真を撮影した。創傷治癒は、創面収縮率（ＷＣＲ）によって計算し、
ＷＣＲ＝（Ａ０−Ａｔ）／Ａ０×１００％
式中、Ａ０とＡｔはそれぞれ、０日目の初期領域と測定日（時間ｔ）の創傷領域を指す。
【０１２５】
創傷治癒に対するＭＡＰペプチドの効果を表９および図３に示し、これらは、異なる群のＷＣＲを示している（表９の場合は±ＳＤ）。
【０１２６】
【表９】
2020527135.tif 000010
【０１２７】
上記のデータは、ＭＡＰペプチドがＭＡＰよりも創傷治癒に強い効果を持つことを示している。ＭＡＰペプチドの改善率は、
（ＷＣＲ  ＭＡＰペプチド群−ＷＣＲ  ＭＡＰ群）／ＷＣＲ  ＭＡＰ群ｘ  １００％で定義された。
６日目は、ＭＡＰ群より５２．９６％大きくなっている。
【０１２８】
３匹のマウスを、各群の創傷後４日目および７日目に、それぞれ頸椎脱臼により屠殺した。創傷の治癒を観察するために、２匹のマウスを１４日間飼育した。創傷組織を、創傷を作成するために使用されたのと同じ生検パンチによって採取した。次いで、５  ｍｍの組織を試料の中心から切除し、１０％中性緩衝ホルマリン（Ｎａｎｃｈａｎｇ  Ｒａｉｎ  Ｄｅｗ  Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ  Ｅｑｕｉｐｍｅｎｔ  Ｃｏ．，Ｌｔｄ．、Ｎａｎｃｈａｎｇ，Ｈｕｂｅｉ  Ｐｒｏｖｅｎｃｅ，Ｃｈｉｎａ）で保存し、パラフィンワックスへの組織学的包埋（ＨＥ）、薄切、染色により分析した。
【０１２９】
ＨＥおよびマッソン染色パラフィン切片を光学顕微鏡下で観察した。皮膚再生、線維芽細胞増殖、コラーゲン再生スコア、および炎症スコアが推定された。
【０１３０】
残余の試料は、他の指標検出のために−８０℃で保存した。組織を小片に切断し、液体窒素を加えて脆性を高めた。９ｍＬの生理食塩水を１ｇの組織に添加し、Ｔｉｓｓｕｅｌｙｓｅｒ（Ｓｈａｎｇｈａｉ  Ｊｉｎｇｘｉｎ  Ｉｎｄｕｓｔｒｉａｌ  Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ  Ｃｏ．，Ｌｔｄ．、Ｓｈａｎｇｈａｉ，Ｃｈｉｎａ）を使用して５５Ｈｚで６０秒間粉砕した後、８０００ｒｐｍで１０分間、４℃で遠心分離した。
【０１３１】
上清を回収し、抽出したタンパク質を、血管内皮増殖因子（ＶＥＧＦ）およびヒドロキシプロリン（Ｈｙｐ）アッセイのための標準ＥＬＩＳＡ試験キットとＥＬＩＳＡリーダー（ＳＨ−１０００  Ｈｉｔａｃｈｉ，Ｊａｐａｎ）を使用することによってＥＬＩＳＡ分析に使用した。ＥＬＩＳＡキットは、Ｂｅｉｊｉｎｇ  ４Ａ  Ｂｉｏｔｅｃｈ  Ｃｏ．，Ｌｔｄ．（Ｂｅｉｊｉｎｇ，Ｃｈｉｎａ）から購入した。（Ｂｅｉｊｉｎｇ，Ｃｈｉｎａ）．
【０１３２】
実施例４
多形性光線疹を治療するためのＭＡＰペプチド液体スプレー。
ＭＡＰペプチドを注射用水（ＷＦＩ、ＴＣ−ＲＯ−０．２５Ｔ  ／  ｈ−２水処理システム、Ｙａｎｇｚｈｏｕ  Ｔｉａｎｃｈｅｎｇ  Ｗａｔｅｒ  Ｔｒｅａｔｍｅｎｔ  Ｄｅｖｉｃｅｓ  ＆  Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ  Ｃｏ．，Ｌｔｄ．、Ｙａｎｇｚｈｏｕ，Ｃｈｉｎａから調製）に溶解した。溶液の濃度は１．５ｍｇ／ｍＬであった。溶液をスプレー装置に入れた。
【０１３３】
この研究に登録された被験者は、多形性光線疹（日光に敏感になった人の日光暴露によって引き起こされる発疹を特徴とする炎症状態）と診断された。治療前に、患者は皮膚の発赤、丘疹、かゆみ、腫れを含む症状を示した。
【０１３４】
被験者は、洗顔後、朝と夕方に液体スプレーを使用するよう義務付けられた。
【０１３５】
ＭＡＰペプチドスプレーを使用すると、１分以内にかゆみが軽減され、不快感が抑制された。観察された紅斑のほとんどは１分以内に緩和された。かゆみは、試験被験者の５０％で１分以内に完全に軽減された。５０％の被験者の紅斑は数時間で完全に消失した。
【０１３６】
ＭＡＰを含む同様の溶液（ＷＦＩで同じ濃度のスプレー）での治療と比較して、ＭＡＰペプチドはこの状態ではるかに迅速な紅斑緩和効率を示すことが観察された。
【０１３７】
実施例５
ＭＡＰペプチドスプレー（風邪の治療）
ＭＡＰペプチド（３０ｍｇ）を１０ｍＬの水に溶解した。トリプシン（３０ｍｇ、Ｓｉｃｈｕａｎ  Ｄｅｅｂｉｏ  Ｐｈａｒｍａｃｕｔｉｃａｌ  Ｃｏ．Ｌｔｄ．、Ｇｕａｎｈａｎ，Ｃｈｉｎａ）を別の１０ｍＬの水に溶解した。
【０１３８】
塩化カルシウム（０．１ｇ）、エタノール（０．５ｇ）、水溶性メントール（０．０１ｇ）、乳酸０．０１ｇおよびグリセロール（３０ｇ）（すべてＳｉｎｏｐｈａｒｍ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｒｅａｇｅｎｔ  Ｃｏ．Ｌｔｄ）を４９．３２ｍＬの水に一緒に混合した。
ＭＡＰペプチドおよびトリプシンを含む溶液をこの混合物に撹拌しながら加えて、噴霧用の液体を提供した。
【０１３９】
実施例６
吸入用ＭＡＰペプチド／トリプシンエアロゾル
エアロゾル製剤を、本質的に上記実施例５に記載されているように、２０ｍｇのＭＡＰペプチドと３０ｍｇのトリプシンから、今回はグリセロールなしで、合計９９．３２ｍＬの水で調製した。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【手続補正書】
【提出日】令和2年3月2日(2020.3.2)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
炎症、炎症性障害、および／または炎症を特徴とする障害もしくは状態の治療のための薬剤を製造するための化合物Ａｌａ−Ｌｙｓ−Ｐｒｏ−Ｓｅｒ−Ｔｙｒ−Ｈｙｐ−Ｈｙｐ−Ｔｈｒ−ＤＯＰＡ−Ｌｙｓまたはその塩の使用。
【請求項２】
前記炎症性障害が、乾癬、にきび、湿疹、および皮膚炎から選択される、請求項１に記載の使用。
【請求項３】
前記皮膚炎がアトピー性皮膚炎である、請求項２に記載の使用。
【請求項４】
前記炎症を特徴とする状態または障害が創傷または熱傷である、請求項１に記載の使用。
【請求項５】
前記創傷が、擦り傷、引っ掻き傷、切開、裂傷、皮膚穿刺、剥離、打撲、瘢痕または水疱である、請求項４に記載の使用。
【請求項６】
創傷が痔疾である、請求項４に記載の使用。
【請求項７】
Ａｌａ−Ｌｙｓ−Ｐｒｏ−Ｓｅｒ−Ｔｙｒ−Ｈｙｐ−Ｈｙｐ−Ｔｈｒ−ＤＯＰＡ−Ｌｙｓまたはその塩が局所製剤の形態で局所的に投与される、請求項１〜６のいずれか一項に記載の使用。
【請求項８】
前記炎症、炎症性障害、および／または炎症を特徴とする状態が、皮膚への直接局所投与により治療される、請求項１〜７のいずれか一項に記載の使用。
【請求項９】
前記炎症、炎症性障害、および／または炎症を特徴とする状態が、粘膜表面への直接局所投与により治療される、請求項１〜７のいずれか一項に記載の使用。
【請求項１０】
Ａｌａ−Ｌｙｓ−Ｐｒｏ−Ｓｅｒ−Ｔｙｒ−Ｈｙｐ−Ｈｙｐ−Ｔｈｒ−ＤＯＰＡ−Ｌｙｓまたはその塩を、医薬的または化粧品として許容されるアジュバント、希釈剤または担体と混合して含む組成物。
【請求項１１】
炎症部位への局所投与に適した請求項１０に記載の組成物。
【請求項１２】
前記炎症部位が皮膚または粘膜表面である、請求項１１に記載の組成物。
【請求項１３】
炎症、炎症性障害、および／または炎症を特徴とする障害もしくは状態の治療のための薬剤の製造のための、請求項１０〜１２のいずれか一項に定義される組成物の使用。
【請求項１４】
前記炎症性障害、または炎症を特徴とする状態もしくは障害が、請求項２〜６のいずれか一項で定義される、請求項１３に記載の使用。
【国際調査報告】
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