(57)【要約】  本開示は、癌、すなわち膵臓癌又は食道癌を処置するか又はその進行を遅延させることを必要とするヒト対象に治療的有効量のヒストンメチルトランスフェラーゼの阻害剤、ＳＥＴＤ２を投与することによる、癌、すなわち膵臓癌又は食道癌を処置するか又はその進行を遅延させるための方法及び医薬組成物を提供する。
2020530844.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
癌の処置を必要とする対象に治療的有効量のＳＥＴＤ２阻害剤を投与することを含む、癌を処置する方法。
【請求項２】
（ｉ）癌細胞を有効量のＳＥＴＤ２阻害剤と接触させ；（ｉｉ）前記癌細胞の増殖を減弱させるか又は阻害することを含む、癌細胞の増殖を減弱させるか又は阻害する方法。
【請求項３】
前記ＳＥＴＤ２阻害剤が、ポリペプチド、ＤＮＡ及びＲＮＡからなる群から選択される、請求項１又は２に記載の方法。
【請求項４】
前記ＳＥＴＤ２阻害剤が、（ｉ）ＳＥＴＤ２ポリペプチドに特異的に結合する単離結合分子；（ｉｉ）ＳＥＴＤ２ポリペプチドのリガンドに特異的に結合する単離結合分子；又は（ｉｉｉ）ＳＥＴＤ２ポリペプチドに対して生じる抗血清である、請求項１〜３の何れか１項に記載の方法。
【請求項５】
前記阻害剤が、ＳＥＴＤ２ポリペプチドに特異的に結合する、抗体又は抗体の抗原結合断片である、請求項１〜４の何れか１項に記載の方法。
【請求項６】
前記抗体が、ポリクローナル、モノクローナル、マウス、ヒト、ヒト化又はキメラ抗体である、請求項５に記載の方法。
【請求項７】
前記抗原結合断片が、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖ、ｓｃＦｖ、ｓｄＦｖ断片、ＶＨドメイン又はＶＬドメインである、請求項５に記載の方法。
【請求項８】
前記ＳＥＴＤ２阻害剤が、ストリンジェントな条件又は遺伝子編集系下で、ＳＥＴＤ２ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列とハイブリッド形成する、ＲＮＡｉ、ｍｉＲＮＡ、ｓｉＲＮＡ、ｓｈＲＮＡ、アンチセンスＲＮＡ、アンチセンスＤＮＡ、デコイ分子、デコイＤＮＡ、２本鎖ＤＮＡ、１本鎖ＤＮＡ、複合化ＤＮＡ、カプセル化ＤＮＡ、ウイルスＤＮＡ、プラスミドＤＮＡ、ネイキッドＲＮＡ、カプセル化ＲＮＡ、ウイルスＲＮＡ、２本鎖ＲＮＡ、ＲＮＡ干渉を生成可能な分子又はそれらの組み合わせである、請求項１〜３の何れか１項に記載の方法。
【請求項９】
前記ＳＥＴＤ２阻害剤が、配列番号１〜４からなる群から選択されるｓｉＲＮＡである、請求項８に記載の方法。
【請求項１０】
前記遺伝子編集系がＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ９である、請求項８に記載の方法。
【請求項１１】
前記ＳＥＴＤ２阻害剤が低分子化合物である、請求項１〜３の何れか１項に記載の方法。
【請求項１２】
前記低分子化合物が、Ｎ−プロピルシネファンギン及びＮ−ベンジルシネファンギンからなる群から選択されるシネファンギン誘導体である、請求項１１に記載の方法。
【請求項１３】
前記癌又は癌細胞が、副腎癌、腺房細胞癌、聴神経腫、末端黒子型メラノーマ、先端汗腺腫、腺癌、腺様嚢胞癌、腺腫、腺腫様歯原性腫瘍、腺扁平上皮癌、脂肪組織新生物、副腎皮質癌、ＡＩＤＳ関連リンパ腫、胞巣状横紋筋肉腫、胞状軟部肉腫、エナメル上皮線維腫、未分化大細胞リンパ腫、未分化甲状腺癌、血管筋脂肪腫、血管肉腫、星状細胞腫、非定型奇形腫様ラブドイド腫瘍、基底細胞癌、胆道癌、膀胱癌、芽細胞腫、骨癌、乳癌、脳癌、癌腫、上皮内の癌腫、癌肉腫、軟骨腫瘍、セメント質腫、骨髄肉腫、軟骨腫、脊索腫、絨毛癌、脈絡叢乳頭腫、腎臓の明細胞肉腫、頭蓋咽頭腫、皮膚Ｔ細胞リンパ腫、子宮頸癌、結直腸癌、デゴス病、線維形成性小円形細胞腫瘍、胚芽異形成性神経上皮腫瘍、未分化胚細胞腫、胚性癌腫、内分泌腺新生物、卵黄嚢腫瘍、食道癌、線維肉腫、濾胞性リンパ腫、濾胞性甲状腺癌、神経節腫、胃腸癌、生殖細胞腫瘍、妊娠性絨毛癌、巨細胞線維芽細胞種、骨の巨細胞腫瘍、グリア腫瘍、神経膠芽腫、神経膠腫、大脳神経膠腫症、グルカゴン産生腫瘍、性腺芽腫、顆粒膜細胞腫瘍、ギナンドロブラストーマ、胆嚢癌、胃癌、血管芽細胞腫、頭頸部癌、血管外皮腫、肝芽細胞腫、肝細胞癌、肝脾Ｔ細胞リンパ腫、浸潤性小葉癌、腸癌、腎臓癌、喉頭癌、悪性黒子、致死性正中癌、白血病、ライディッヒ細胞腫瘍、脂肪肉腫、肺癌、リンパ管腫、リンパ血管肉腫、リンパ上皮腫、肝臓癌、小細胞肺癌、非小細胞肺癌、悪性線維性組織球腫、悪性末梢神経鞘腫瘍、悪性トリトン腫瘍、縦隔生殖細胞腫瘍、乳房の髄質癌、髄質甲状腺癌、髄芽腫、メラノーマ、髄膜腫、メルケル細胞癌、中皮腫、転移性尿路上皮癌、ミュラー管混合腫瘍、粘液性腫瘍、筋肉組織新生物、菌状息肉腫、粘液性脂肪肉腫、粘液腫、粘液肉腫、上咽頭癌、神経鞘腫、神経芽細胞腫、神経線維腫、神経腫、結節状メラノーマ、眼の癌、乏突起星細胞腫、乏突起膠腫、オンコサイトーマ、視神経鞘髄膜腫、視神経腫瘍、口腔癌、骨肉腫、卵巣癌、乳頭状甲状腺癌、傍神経節腫、松果体芽細胞腫、松果体細胞腫、下垂体細胞腫、下垂体腺腫、下垂体腫瘍、形質細胞腫、多胚腫、原発性中枢神経系リンパ腫、原発性滲出性リンパ腫、原発性腹膜癌、前立腺癌、膵臓癌、咽頭癌、腹膜偽粘液腫、腎臓細胞癌、腎臓髄質癌、網膜芽細胞腫、横紋筋腫、横紋筋肉腫、直腸癌、肉腫、神経鞘腫症、セミノーマ、セルトリ細胞腫瘍、性索性腺間質腫瘍、皮膚癌、小細胞癌、軟組織肉腫、ソマトスタチン産生腫瘍、脊椎腫瘍、扁平上皮癌、滑膜肉腫、小腸癌、扁平上皮癌、胃癌、精巣腫瘍、甲状腺癌、移行細胞癌、咽喉癌、尿膜管癌、泌尿生殖器癌、尿路上皮癌、ぶどう膜メラノーマ、子宮癌、疣状癌、視覚路神経膠腫、外陰癌、膣癌、ワルチン腫瘍、ウィルムス腫瘍、頭頸部の扁平上皮癌、食道の腺癌扁平上皮癌（ａｄｅｎｏｃａｒｃｉｎｏｍａ  ｓｑｕａｍｏｕｓ  ｃｅｌｌ  ｃａｒｃｉｎｏｍａ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｅｓｏｐｈａｇｕｓ）、胃の腺癌、結腸の腺癌、肝細胞癌、胆道系の胆管細胞癌、胆嚢の腺癌、膵臓の腺癌、乳房の乳管内上皮内癌、乳房の腺癌、肺の腺癌、肺の扁平上皮癌、膀胱の移行細胞癌、膀胱の扁平上皮癌、子宮頸部の扁平上皮癌、子宮頸部の腺癌、子宮内膜癌、陰茎扁平上皮癌及び皮膚の扁平上皮癌からなる群から選択される、請求項１〜１２の何れか１項に記載の方法。
【請求項１４】
前記癌が膵臓癌であるか、又は前記癌細胞が膵臓癌由来であるか、又は前記癌が食道癌であるか、又は前記癌細胞が食道癌由来である、請求項１３に記載の方法。
【請求項１５】
前記癌又は癌細胞が、食道癌、腎臓癌、胃癌、肝細胞癌、神経膠芽腫、中枢神経系（ＣＮＳ）癌、軟組織癌、肺癌、乳癌、膀胱／尿路癌、頭頸部癌、前立腺癌、血液癌、膵臓癌、皮膚癌、子宮内膜癌、卵巣癌及び結直腸癌からなる群から選択される、請求項１〜１２の何れか１項に記載の方法。
【請求項１６】
前記癌又は癌細胞が血液癌であるか、又は前記癌細胞が血液癌由来である、請求項１〜１２の何れか１項に記載の方法。
【請求項１７】
前記血液癌が、急性リンパ性白血病（ＡＬＬ）、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）、小リンパ性リンパ腫（ＳＬＬ）、多発性骨髄腫（ＭＭ）、ホジキンリンパ腫（ＨＬ）、非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）、マントル細胞リンパ腫（ＭＣＬ）、辺縁帯Ｂ細胞リンパ腫、脾臓辺縁帯リンパ腫、濾胞性リンパ腫（ＦＬ）、ワルデンストレームマクログロブリン血症（ＷＭ）、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫（ＤＬＢＣＬ）、辺縁帯リンパ腫（ＭＺＬ）、ヘアリー細胞白血病（ＨＣＬ）、バーキットリンパ腫（ＢＬ）、リヒター形質転換、急性好酸球性白血病、急性赤血球白血病、急性リンパ芽球性白血病、急性巨核芽球白血病、急性単球性白血病、急性前骨髄球性白血病、急性骨髄性白血病、Ｂ細胞前リンパ性白血病、Ｂ細胞リンパ腫、ＭＡＬＴリンパ腫、前駆体Ｔリンパ芽球性リンパ腫、Ｔ細胞リンパ腫、肥満細胞白血病、成人Ｔ細胞白血病／リンパ腫、アグレッシブＮＫ細胞白血病及び血管免疫芽細胞性Ｔ細胞リンパ腫からなる群から選択される、請求項１６に記載の方法。
【請求項１８】
前記対象が哺乳動物である、請求項１又は３〜１７の何れか１項に記載の方法。
【請求項１９】
前記対象がヒトである、請求項１又は３〜１７の何れか１項に記載の方法。
【請求項２０】
前記ＳＥＴＤ２阻害剤が全身又は局所投与用に処方される、請求項１又は３〜１９の何れか１項に記載の方法。
【請求項２１】
前記ＳＥＴＤ２阻害剤が、経口、鼻腔、腹腔内又は腫瘍内投与用に処方される、請求項１又は３〜２０の何れか１項に記載の方法。
【請求項２２】
前記ＳＥＴＤ２阻害剤が、静脈内投与、筋肉内投与又は皮下投与用に処方される、請求項１又は３〜２０の何れか１項に記載の方法。
【請求項２３】
１つ以上のさらなる治療剤を投与する段階をさらに含む、請求項１〜２２の何れか１項に記載の方法。
【請求項２４】
前記ＳＥＴＤ２阻害剤が、ヒストンＨ３上のリジン３６のトリメチル化（Ｈ３Ｋ３６ｍｅ３）を阻害する、請求項１〜２３の何れか１項に記載の方法。
【請求項２５】
請求項１又は３〜２４の何れか１項に記載の癌を処置する方法での使用のためのＳＥＴＤ２阻害剤。
【請求項２６】
癌の処置を必要とする対象においてＳＥＴＤ２の活性を阻害することを含む、癌を処置するための方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
電子提出された配列リストに対する参照
出願とともに提出されたＡＳＣＩＩテキストファイル（名称３５６２．０１２０００＿Ｓｅｑｕｅｎｃｅ＿ｌｉｓｔｉｎｇ＿ＳＴ２５．ｔｘｔ；サイズ：１，１４２バイト；及びデータ作成日：２０１７年８月１４日）の電子提出配列リストの内容は、その全体において参照により本明細書中に組み込まれる。
【０００２】
本開示は、一般的にはエピジェネティックに基づく癌療法の分野に関する。とりわけ、本開示は、ヒトヒストンメチルトランスフェラーゼ、ＳＥＴＤ２を阻害することにより癌を処置するための方法及び医薬組成物に関する。
【背景技術】
【０００３】
ヒストン上の特異的なアミノ酸部位へのメチル基の選択的付加は、ヒストンメチルトランスフェラーゼ（ＨＭＴ）として知られる酵素のファミリーの作用により制御される。特定の遺伝子の発現のレベルは、関連のあるヒストン部位での１つ以上のメチル基の有無により影響を受ける。特定のヒストン部位でのメチル基の特異的な効果は、メチル基がヒストンデメチラーゼにより除去されるまで、又は修飾されたヒストンがヌクレオソーム代謝回転を通じて置き換えられるまで持続する。同様に、他の酵素クラスは、他の化学種でＤＮＡ及びヒストンを修飾し得、さらに他の酵素は、遺伝子発現の制御をもたらすためにこれらの種を除去し得る。
【０００４】
ＳＥＴＤ２は、３番染色体のサイトジェニック（ｃｙｔｏｇｅｎｉｃ）バンドｐ２１．３１（３ｐ２１．３１）に局在するヒトヒストンメチルトランスフェラーゼである。頭文字「ＳＥＴＤ２」は、Ｓｕｐｐｒｅｓｓｏｒ  ｏｆ  ｖａｒｉｅｇａｔｉｏｎ，Ｅｎｈａｎｃｅｒ  ｏｆ  ｚｅｓｔｅ，ａｎｄ  Ｔｒｉｔｈｏｒａｘ  ｄｏｍａｉｎ  ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ  ２を表す。ＳＥＴＤ２タンパク質は、３個の保存的機能ドメイン：（１）三つ組みＡＷＳ−ＳＥＴ−ＰｏｓｔＳＥＴドメイン；（２）ＷＷドメイン；及び（３）Ｓｅｔ２−Ｒｂｐ１インタラティング（「ＳＲＩ」）ドメインを含む。これらの３個の機能ドメインは、ＳＥＴＤ２の生物学的機能を定める。Ｌｉ，Ｊ．ｅｔ  ａｌ．，Ｏｎｃｏｔａｒｇｅｔ  ７：５０７１９−５０７３４（２０１６）を参照。ＳＥＴＤ２は、基質としてジメチル化Ｌｙｓ−３６（Ｈ３Ｋ３６ｍｅ２）を使用する、ヒストンＨ３のリジン３６（Ｌｙｓ−３６）（Ｈ３Ｋ３６ｍｅ３）のトリメチル化に関与する単一ヒト遺伝子であると考えられる。Ｅｄｍｕｎｄｓ，Ｊ．Ｗ．ｅｔ  ａｌ．，Ｔｈｅ  ＥＭＢＯ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ２７：４０６−４２０（２００８）。
【０００５】
特に、ヒトＳＥＴＤ２は腫瘍サプレッサー機能を有することが示されている。Ｌｉ，Ｊ．ｅｔ  ａｌ．，Ｏｎｃｏｔａｒｇｅｔ  ７：５０７１９−５０７３４（２０１６）。例えばヒトＳＥＴＤ２の不活性化は、腎臓細胞癌（ＲＣＣ）で報告されている。Ｌａｒｋｉｎ，Ｊ．ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ  Ｒｅｖｉｅｗｓ  ９：１４７−１５５（２０１２）。また、乳癌試料でのＳＥＴＤ２の発現レベルは、隣接する非癌性組織（ＡＮＣＴ）試料中よりも顕著に低いものとして報告されている。Ｎｅｗｂｏｌｄ，Ｒ．Ｆ．及びＭｏｋｂｅｌ，Ｋ．，Ａｎｔｉｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  ３０：３３０９−３３１１（２０１０）。さらに、急性白血病の患者でＳＥＴＤ２における二対立遺伝子突然変異及び機能喪失点突然変異が報告された。Ｚｈｕ，Ｘ．ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ  Ｇｅｎｅｔｉｃｓ  ４６：２８７−２９３（２０１４）。ＳＥＴＤ２における突然変異は、高悪性度の神経膠腫でも報告されている。Ｆｏｎｔｅｂａｓｓｏ，Ａ．Ｍ．ｅｔ  ａｌ．，Ａｃｔａ  Ｎｅｕｒｏｐａｔｈｏｌ．１２５：６５９−６６９（２０１３）。
【０００６】
１世紀を超えて科学的研究及び臨床研究に力が入れられてきたにもかかわらず、現在まで癌の治癒は最大の医学的難問の１つであり続けている。癌処置は主に、外科手術、放射線療法及び／又は細胞毒性のある化学療法の組み合わせに依存している。そして、有効な癌療法が存在する一方で、最適以下の応答、再発性−難治性の疾患及び／又は１つ以上の治療剤に対する耐性は依然として難しい問題である。したがって、全タイプの癌の処置のための、より有効で、安全で耐久性のある治療法が医学において必要とされている。
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【０００７】
本開示は、腫瘍サプレッサーとしてのその既知の機能性にかかわらず、特に癌及び膵臓癌及び食道癌を処置するために使用され得るヒトＳＥＴＤ２を阻害する驚くべき予想外の発見に関する。
【０００８】
一態様において、本開示は、癌の処置を必要とする対象に治療的有効量のＳＥＴＤ２阻害剤を投与することを含む、癌を処置する方法を対象とする。
【０００９】
一態様において、本開示は、（ｉ）癌細胞を有効量のＳＥＴＤ２阻害剤と接触させ；（ｉｉ）その癌細胞の増殖を減弱させるか又は阻害することを含む、癌細胞の増殖を減弱させるか又は阻害する方法を対象とする。
【００１０】
特定の実施形態において、ＳＥＴＤ２阻害剤は、ポリペプチド、ＤＮＡ及びＲＮＡからなる群から選択される。
【００１１】
特定の実施形態において、ＳＥＴＤ２阻害剤は、（ｉ）ＳＥＴＤ２ポリペプチドに特異的に結合する単離結合分子；（ｉｉ）ＳＥＴＤ２ポリペプチドのリガンドに特異的に結合する単離結合分子；又は（ｉｉｉ）ＳＥＴＤ２ポリペプチドに対して生じる抗血清である。
【００１２】
特定の実施形態において、ＳＥＴＤ２阻害剤は、ＳＥＴＤ２ポリペプチドに特異的に結合する、抗体又は抗体の抗原結合断片である。特定の実施形態において、抗体は、ポリクローナル、モノクローナル、マウス、ヒト、ヒト化又はキメラ抗体である。特定の実施形態において、抗原結合断片は、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖ、ｓｃＦｖ、ｓｄＦｖ断片、ＶＨドメイン又はＶＬドメインである。
【００１３】
特定の実施形態において、ＳＥＴＤ２阻害剤は、ストリンジェントな条件又は遺伝子編集系下で、ＳＥＴＤ２ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列に対してハイブリッド形成する、ＲＮＡｉ、ｍｉＲＮＡ、ｓｉＲＮＡ、ｓｈＲＮＡ、アンチセンスＲＮＡ、アンチセンスＤＮＡ、デコイ分子、デコイＤＮＡ、２本鎖ＤＮＡ、１本鎖ＤＮＡ、複合化ＤＮＡ、カプセル化ＤＮＡ、ウイルスＤＮＡ、プラスミドＤＮＡ、ネイキッドＲＮＡ、カプセル化ＲＮＡ、ウイルスＲＮＡ、２本鎖ＲＮＡ、ＲＮＡ干渉を生成可能な分子又はそれらの組み合わせである。特定の実施形態において、ＳＥＴＤ２阻害剤は、配列番号１〜４からなる群から選択されるｓｉＲＮＡである。特定の実施形態において、遺伝子編集系はＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ９である。
【００１４】
特定の実施形態において、ＳＥＴＤ２阻害剤は低分子化合物である。特定の実施形態において、低分子化合物は、Ｎ−プロピルシネファンギン及びＮ−ベンジルシネファンギンからなる群から選択されるシネファンギン誘導体である。
【００１５】
特定の実施形態において、癌又は癌細胞は、副腎癌、腺房細胞癌、聴神経腫、末端黒子型メラノーマ、先端汗腺腫、腺癌、腺様嚢胞癌、腺腫、腺腫様歯原性腫瘍、腺扁平上皮癌、脂肪組織新生物、副腎皮質癌、ＡＩＤＳ関連リンパ腫、胞巣状横紋筋肉腫、胞状軟部肉腫、エナメル上皮線維腫、未分化大細胞リンパ腫、未分化甲状腺癌、血管筋脂肪腫、血管肉腫、星状細胞腫、非定型奇形腫様ラブドイド腫瘍、基底細胞癌、胆道癌、膀胱癌、芽細胞腫、骨癌、乳癌、脳癌、癌腫、上皮内の癌腫、癌肉腫、軟骨腫瘍、セメント質腫、骨髄肉腫、軟骨腫、脊索腫、絨毛癌、脈絡叢乳頭腫、腎臓の明細胞肉腫、頭蓋咽頭腫、皮膚Ｔ細胞リンパ腫、子宮頸癌、結直腸癌、デゴス病、線維形成性小円形細胞腫瘍、胚芽異形成性神経上皮腫瘍、未分化胚細胞腫、胚性癌腫、内分泌腺新生物、卵黄嚢腫瘍、食道癌、線維肉腫、濾胞性リンパ腫、濾胞性甲状腺癌、神経節腫、胃腸癌、生殖細胞腫瘍、妊娠性絨毛癌、巨細胞線維芽細胞種、骨の巨細胞腫瘍、グリア腫瘍、神経膠芽腫、神経膠腫、大脳神経膠腫症、グルカゴン産生腫瘍、性腺芽腫、顆粒膜細胞腫瘍、ギナンドロブラストーマ、胆嚢癌、胃癌、血管芽細胞腫、頭頸部癌、血管外皮腫、肝芽細胞腫、肝細胞癌、肝脾Ｔ細胞リンパ腫、浸潤性小葉癌、腸癌、腎臓癌、喉頭癌、悪性黒子、致死性正中癌、白血病、ライディッヒ細胞腫瘍、脂肪肉腫、肺癌、リンパ管腫、リンパ血管肉腫、リンパ上皮腫、肝臓癌、小細胞肺癌、非小細胞肺癌、悪性線維性組織球腫、悪性末梢神経鞘腫瘍、悪性トリトン腫瘍、縦隔生殖細胞腫瘍、乳房の髄質癌、髄質甲状腺癌、髄芽腫、メラノーマ、髄膜腫、メルケル細胞癌、中皮腫、転移性尿路上皮癌、ミュラー管混合腫瘍、粘液性腫瘍、筋肉組織新生物、菌状息肉腫、粘液性脂肪肉腫、粘液腫、粘液肉腫、上咽頭癌、神経鞘腫、神経芽細胞腫、神経線維腫、神経腫、結節状メラノーマ、眼の癌、乏突起星細胞腫、乏突起膠腫、オンコサイトーマ、視神経鞘髄膜腫、視神経腫瘍、口腔癌、骨肉腫、卵巣癌、乳頭状甲状腺癌、傍神経節腫、松果体芽細胞腫、松果体細胞腫、下垂体細胞腫、下垂体腺腫、下垂体腫瘍、形質細胞腫、多胚腫、原発性中枢神経系リンパ腫、原発性滲出性リンパ腫、原発性腹膜癌、前立腺癌、膵臓癌、咽頭癌、腹膜偽粘液腫、腎臓細胞癌、腎臓髄質癌、網膜芽細胞腫、横紋筋腫、横紋筋肉腫、直腸癌、肉腫、神経鞘腫症、セミノーマ、セルトリ細胞腫瘍、性索性腺間質腫瘍、皮膚癌、小細胞癌、軟組織肉腫、ソマトスタチン産生腫瘍、脊椎腫瘍、扁平上皮癌、滑膜肉腫、小腸癌、扁平上皮癌、胃癌、精巣腫瘍、甲状腺癌、移行細胞癌、咽喉癌、尿膜管癌、泌尿生殖器癌、尿路上皮癌、ぶどう膜メラノーマ、子宮癌、疣状癌、視覚路神経膠腫、外陰癌、膣癌、ワルチン腫瘍、ウィルムス腫瘍、頭頸部の扁平上皮癌、食道の腺癌扁平上皮癌（ａｄｅｎｏｃａｒｃｉｎｏｍａ  ｓｑｕａｍｏｕｓ  ｃｅｌｌ  ｃａｒｃｉｎｏｍａ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｅｓｏｐｈａｇｕｓ）、胃の腺癌、結腸の腺癌、肝細胞癌、胆道系の胆管細胞癌、胆嚢の腺癌、膵臓の腺癌、乳房の乳管内上皮内癌、乳房の腺癌、肺の腺癌、肺の扁平上皮癌、膀胱の移行細胞癌、膀胱の扁平上皮癌、子宮頸部の扁平上皮癌、子宮頸部の腺癌、子宮内膜癌、陰茎扁平上皮癌及び皮膚の扁平上皮癌からなる群から選択される。
【００１６】
特定の実施形態において、癌は膵臓癌であるか、又は癌細胞は膵臓癌由来であるか、又は癌は食道癌であるか、又は癌細胞は食道癌由来である。
【００１７】
特定の実施形態において、癌又は癌細胞は、食道癌、腎臓癌、胃癌、肝細胞癌、神経膠芽腫、中枢神経系（ＣＮＳ）癌、軟組織癌、肺癌、乳癌、膀胱／尿路癌、頭頸部癌、前立腺癌、血液癌、膵臓癌、皮膚癌、子宮内膜癌、卵巣癌及び結直腸癌からなる群から選択される。
【００１８】
特定の実施形態において、癌又は癌細胞は血液癌であるか、又は癌細胞は血液癌由来である。
【００１９】
特定の実施形態において、血液癌は、急性リンパ性白血病（ＡＬＬ）、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）、小リンパ性リンパ腫（ＳＬＬ）、多発性骨髄腫（ＭＭ）、ホジキンリンパ腫（ＨＬ）、非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）、マントル細胞リンパ腫（ＭＣＬ）、辺縁帯Ｂ細胞リンパ腫、脾臓辺縁帯リンパ腫、濾胞性リンパ腫（ＦＬ）、ワルデンストレームマクログロブリン血症（ＷＭ）、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫（ＤＬＢＣＬ）、辺縁帯リンパ腫（ＭＺＬ）、ヘアリー細胞白血病（ＨＣＬ）、バーキットリンパ腫（ＢＬ）、リヒター形質転換、急性好酸球性白血病、急性赤血球白血病、急性リンパ芽球性白血病、急性巨核芽球白血病、急性単球性白血病、急性前骨髄球性白血病、急性骨髄性白血病、Ｂ細胞前リンパ性白血病、Ｂ細胞リンパ腫、ＭＡＬＴリンパ腫、前駆体Ｔリンパ芽球性リンパ腫、Ｔ細胞リンパ腫、肥満細胞白血病、成人Ｔ細胞白血病／リンパ腫、アグレッシブＮＫ細胞白血病及び血管免疫芽細胞性Ｔ細胞リンパ腫からなる群から選択される。
【００２０】
特定の実施形態において、対象は哺乳動物である。特定の実施形態において、対象はヒトである。
【００２１】
特定の実施形態において、ＳＥＴＤ２阻害剤は、全身又は局所投与用に処方される。特定の実施形態において、ＳＥＴＤ２阻害剤は、経口、鼻腔、腹腔内又は腫瘍内投与用に処方される。特定の実施形態において、ＳＥＴＤ２阻害剤は、静脈内投与、筋肉内投与又は皮下投与用に処方される。
【００２２】
特定の実施形態において、本方法は、１つ以上のさらなる治療剤を投与する段階をさらに含む。
【００２３】
特定の実施形態において、ＳＥＴＤ２阻害剤は、ヒストンＨ３上のリジン３６（Ｈ３Ｋ３６ｍｅ３）のトリメチル化を阻害する。
【００２４】
一態様において、本開示は、癌を処置する方法における使用のためのＳＥＴＤ２阻害剤を対象とする。
【００２５】
一態様において、本開示は、癌を処置することを必要とする対象においてＳＥＴＤ２の活性を阻害することを含む、癌を処置するための方法を対象とする。
【図面の簡単な説明】
【００２６】
【図１Ａ−１Ｂ】図１Ａ〜１Ｂは、ＳＥＴＤ２を含む、様々な遺伝子を標的とするＣＲＩＳＰＲプールライブラリスクリーニングの結果を示す棒グラフである。図１Ａに対して及び図１Ｂのｘ軸上で表１において列挙される細胞株にプールしたレンチウイルスライブラリを感染させたが、そこで各レンチウイルスプラスミドは、ＣＲＩＳＰＲ関連Ｃａｓ９ポリペプチドをコードするポリヌクレオチド及び１本鎖ガイドＲＮＡ（ｓｇＲＮＡ）をコードするポリヌクレオチドを含んだ。グラフ上の各バーは、（図１Ａにおける１つの対照細胞株、ＭＣＦ１０Ａを除き）ヒト癌細胞株に相当し、Ｙ軸上のＬｏｇＰスコアは、集団からの特定の標的の枯渇を表す。したがって、ＬｏｇＰスコアは、特定の遺伝子上での各細胞株の依存性を指す。この場合、ＬｏｇＰスコアが２．５を下回る各細胞株は、生存についてＳＥＴＤ２に依存する。試験した全ての２５０個の細胞株に対するデータは表１で与え、図１Ａでプロットする。乳房、食道、腎臓、肺、胃、膀胱／尿路、子宮内膜、皮膚、造血系（すなわちＤＬＢＣＬ及びＡＭＬ）、軟組織、ＣＮＳ、膵臓及び卵巣の癌由来の細胞株によりＳＥＴＤ２枯渇に対する感受性が示された。図１Ｂは、膵管腺癌（ＰＤＡＣ）由来の細胞株を示し、これは、ＰＤＡＣがＳＥＴＤ２枯渇に対する顕著な感受性を示すものと思われることを示す。
【図２Ａ−２Ｄ】図２Ａ〜２Ｄは、ＰＤＡＣ由来細胞株、ＳＵ８６８６が、二重ｓｇＲＮＡアッセイに基づき、ヒトＳＥＴＤ２に依存することを示す、ＣＲＩＳＰＲプールスクリーニング検証の例を提供する。ＳＭＡＲＣＡ２遺伝子もまた陰性対照として標的化した。図２Ａは、機能ドメイン（ＡＷＳ、ＳＥＴ、ＰＳ、ＬＣＲ、ＷＷ、ＳＲＩ）を示す、（２５６４アミノ酸を有する）ヒトＳＥＴＤ２タンパク質の概略図である。ＳＥＴＤ２遺伝子内の標的部位の相対的位置は、それらの部位を標的とするｓｇＲＮＡ（ｓｇ＿７、ｓｇ＿９、ｓｇ＿２４１及びｓｇ＿２４２）によって表される。ＳＥＴＤ２遺伝子のこれらの部位は、ｓｇ＿２４１又は及び／又はｓｇ＿２４２で標的化されたＳＥＴドメイン内の活性部位を含め、標的化した。図２Ｂは、ＳＵ８６８６細胞株内のＳＥＴＤ２又はＳＭＡＲＣＡ２の何れかの二重ｓｇＲＮＡ標的化の効果を示すグラフである。ｙ軸は、細胞数の倍率変化（ｌｏｇ１０スケール）に相当し、ｘ軸は感染後の日数に相当する。ＳＥＴＤ２の活性部位を標的とする２つのｓｇＲＮＡ（すなわちｓｇ＿２４１又はｓｇ＿２４２）のうち少なくとも１つが含まれたｓｇＲＮＡの組み合わせが、この細胞株の増殖に対して劇的な効果を有することが分かった。その一方、ＳＥＴＤ２活性部位の外側の領域のみを標的とするｓｇＲＮＡ（ｓｇ＿７及びｓｇ＿９）は細胞増殖に影響を及ぼさなかった。同様に、陰性対照ＳＭＡＲＣＡ２を不活性化したｓｇＲＮＡは増殖に影響がなかった。図２Ｃは、経時的にＳＥＴＤ２を標的とするｓｇＲＮＡ（ｓｇ＿７及びｓｇ＿２４１）での感染を生き延びた細胞の遺伝子型を表す棒グラフである。ｓｇＲＮＡ切断部位の次世代シーケンシング（ＮＧＳ）を使用して、野生型又はインフレーム若しくはアウト・オブ・フレーム挿入又は欠失（「ｉｎｄｅｌ」）を有するものの何れかとして、生存細胞の遺伝子型を調べた。この棒グラフは、ＳＥＴＤ２  ｓｇＲＮＡ感染細胞において、アレルの野生型（切断されていない）集団が経時的に増加することを示し、このことから、機能的ＳＥＴＤ２を有する細胞が、非機能的ＳＥＴＤ２を有する細胞よりも生存面での利点を有することが示される。図２Ｄは、経時的にＳＭＡＲＣＡ２  ｓｇＲＮＡによる感染を生き延びる細胞（陰性対照）の遺伝子型を示す棒グラフである。この棒グラフは、ＳＭＡＲＣＡ２  ｓｇＲＮＡと関連する遺伝子型が経時的に一定のままであることを示し、このことから、ＳＵ８６８６生存能力及び成長にＳＭＡＲＣＡ２活性が必要とされないことが示される。
【図３Ａ−３Ｂ】図３Ａ〜３Ｂは、ＯＥ２１食道癌細胞株のＣＲＩＳＰＲドメインプールスクリーニングにより、ＳＥＴＤ感受性に重要なものとしてＳＥＴドメインが同定されることを示す。図３Ａは、機能ドメイン（ＡＷＳ、ＳＥＴ、ＰＳ、ＬＣＲ、ＷＷ、ＳＲＩ）を示す、（２５６４個のアミノ酸を有する）ヒトＳＥＴＤ２タンパク質の概略図である。図３Ｂは、ＳＥＴＤ２遺伝子の全長を標的とするｓｇＲＮＡを利用したスクリーニングからのパーセント枯渇を示す棒グラフである。このデータから、ＳＥＴドメイン及び（「ＳＥＴと関連する」（ＡＷＳ）ドメインを含む）コードタンパク質の機能に重要である他のドメインが、タンパク質の他の領域よりも高い比率で枯渇していることが示される。これは、機能ドメインが他の領域よりも突然変異に対して耐性がかなり低いという事実ゆえである。これらのデータから、低分子阻害剤でのＳＥＴＤ２のＳＥＴドメイン／活性部位の標的化の結果、この食道癌細胞株において増殖表現型（すなわち増殖低下）が生じるという仮説が強く裏付けられる。
【図４】図４は、ＣＲＩＳＰＲスクリーニングアッセイに対する標的検証の試みをまとめる表である。代表的な細胞株は第１のカラムで示される。この結果から、細胞株がＳＥＴＤ２枯渇に対して感受性であるか又は非感受性であるかが示される。選択された細胞株に対するＣＲＩＳＰＲプールスクリーニングの結果は「Ｅｐｉプールカラム」で示す。ドメイン特異的なＣＲＩＳＰＲプールスクリーニングの結果は「Ｅｐｉｄｏｍａｉｎプールカラム」で示す。これらの結果から、この効果に対してＳＥＴＤ２に対するＳＥＴドメインが必要とされることが示される。（図２で示されるような）ＳＥＴＤ２及びＮＧＳ確認を標的とする二重ｓｇＲＮＡ  ＣＲＩＳＰＲアッセイによる細胞株におけるＣＲＩＳＰＲプールスクリーニングの結果の検証は「増殖」及び「ＮＧＳ」カラムで示す。
【数１】
2020530844.tif 000003
斜線模様としてマークされたボックスは感受性であり；灰色のボックスは非感受性であり；
【数２】
2020530844.tif 000004
格子模様としてマークされたボックスは不確定な結果を示し；白色のボックスは、データが利用可能でないことを示す。
【発明を実施するための形態】
【００２７】
定義
本発明の理解を促進するために、いくつかの用語及び句を以下で定義する。
【００２８】
「含む（ｉｎｃｌｕｄｅ）」、「含むこと（ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ）」、「含有する（ｃｏｎｔａｉｎ）」、「含有すること（ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ）」などのオープンタームは、「を含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」を意味する。これらのオープンエンドの移行句は、引用されていないさらなる要素又は方法段階を除外しない、要素、方法段階などのオープンエンドの一覧を導入するために使用される。態様が「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」という語とともに本明細書中に記載される場合は常に、「からなる（ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇ  ｏｆ）」及び／又は「基本的に〜からなる（ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇ  ｅｓｓｅｎｔｉａｌｌｙ  ｏｆ）」という用語で記載される類似の態様も提供される。
【００２９】
本開示及び特許請求の範囲で使用される場合、単数形「ａ」、「ａｎ」及び「ｔｈｅ」は、文脈からの明らかな別段の指示がない限り、複数形を含む。例えば「細胞（ａ  ｃｅｌｌ）」は、単一の細胞並びに複数の細胞を含み、それらの混合物を含む。
【００３０】
「ＳＥＴＤ２」（ＳＥＴ  Ｄｏｍａｉｎ  Ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ  ２、ハンチンチン相互作用タンパク質Ｂ、リジンＮ−メチルトランスフェラーゼ３Ａ、ハンチンチン酵母パートナーＢ、ＥＣ２．１．１．４３、Ｐ２３１ＨＢＰ、ＨＩＰ−１、ＨＩＦ−１、ＫＭＴ３Ａ、ＨＹＰＢ、ＳＥＴ２、ヒストン−リジンＮ−メチルトランスフェラーゼＳＥＴＤ２、ハンチンチン相互作用タンパク質１、ハンチンチン相互作用タンパク質１、ＳＥＴ  Ｄｏｍａｉｎ  Ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ  Ｐｒｏｔｅｉｎ２、ＫＩＡＡ１７３２、ＨＳＰＣ０６９、ＨＢＰ２３１、ＨＳＥＴ２、ＨＩＦ１及びＬＬＳとしても知られる）という用語は、別段の指示がない限り、ネイティブヒストンメチルトランスフェラーゼＳＥＴＤ２を指す。「ヒトＳＥＴＤ２」は、ネイティブヒトヒストンメチルトランスフェラーゼＳＥＴＤ２を指す。「ＳＥＴＤ２」は、全長、未プロセシングＳＥＴＤ２、並びに細胞内でのプロセシングの結果生じるＳＥＴＤ２の何らかの形態を包含する。この用語は、ＳＥＴＤ２の天然の変異体、例えばスプライス変異体、アレル変異体及びアイソフォームも包含する。ＳＥＴＤ２は、様々な供給源から、例えばヒト組織型又は他の動物組織型から単離され得るか、又は組み換え若しくは合成方法により調製され得る。ＳＥＴＤ２又はＳＥＴＤ２ポリペプチド配列をコードするヒト遺伝子配列の例としては、ＮＣＢＩ  Ｇｅｎｅ  ＩＤ  ２９０７２、ＨＧＮＣ：１８４２０及びＳＥＴＤ２転写変異体１、ｍＲＮＡ−ＮＣＢＩ参照配列：ＮＭ＿０１４１５９．６が挙げられるが限定されない。ＳＥＴＤ２をコードするヒト遺伝子は３番染色体の短腕上に位置する。「ＳＥＴＤ２」という用語は、本明細書中で使用される場合、一般にヒトＳＥＴＤ２をコードする遺伝子を指すが、一方で、ＳＥＴＤ２の他の哺乳動物型も企図される。
【００３１】
本明細書中で使用される場合、「ＳＥＴＤ２の機能ドメイン」は、ＳＥＴＤ２の生物学的機能を定めると考えられるＳＥＴＤ２の３個の保存的機能ドメインのうち１つを指す。これらの機能ドメインは、（１）三つ組みＡＷＳ−ＳＥＴ−ＰｏｓｔＳＥＴドメイン；（２）ＷＷドメイン；及び（３）Ｓｅｔ２−Ｒｂｐ１相互作用（「ＳＲＩ」）ドメイン（Ｌｉ，Ｊ．ｅｔ  ａｌ．，Ｏｎｃｏｔａｒｇｅｔ  ７：５０７１９−５０７３４（２０１６））であり、次のように記載され得る：
ＡＷＳ−ＳＥＴ−ＰｏｓｔＳＥＴｄｏｍａｉｎ。何らかの理論により縛られることを望むものではないが、ヒトＳＥＴドメインは、酵母から哺乳動物へと進化的に保存され、一部の細菌及びウイルスでも見出される１３０アミノ酸のモチーフであると考えられる。ＳＥＴドメインは、通常、ＡＷＳ（ＳＥＴと関連）及びＰｏｓｔＳＥＴドメインが隣接するマルチドメインの一部として存在する。一般に、ＳＥＴ−ドメイン含有タンパク質は、１個又は数個のメチル基をＳ−アデノシル−Ｌ−メチオニンからヒストン又は他のタンパク質のリジン又はアルギニン残基のアミノ基に移す。この転移はフランキングＡＷＳ及びＰｏｓｔＳＥＴ領域に依存すると考えられ、これは数個の保存的システイン残基を含有する。他のメチルトランスフェラーゼと対照的に、ＳＥＴ−ドメイン含有メチルトランスフェラーゼは、基質解離なく複数回のメチル化を促進するα−シート構造を有する。
【００３２】
ＷＷドメイン。「ＷＷドメイン」は、２０〜２２アミノ酸離れている２個の保存的トリプトファン（Ｗ）残基の存在を指す。結合アッセイは、ＷＷドメインが優先的にプロリンリッチであるセグメントに結合し、様々な分子過程に関与するためのタンパク質−タンパク質相互作用に介在することを示す。何らかの理論により縛られることを望むものではないが、ＷＷドメインは、プロリン−プロリン−ｘ−チロシン（ＰＰｘＹ）、ホスホ−セリン−プロリン（ｐ−ＳＰ）又はホスホ−スレオニン−プロリン（ｐ−ＳＴ）のようなモチーフを認識し、タンパク質結合に介在すると考えられる。ＷＷドメイン含有遺伝子の異常な発現は、ＨＤ、アルツハイマー病及び多発癌サブタイプなどの疾患と関連付けられている。何らかの理論により縛られることを望むものではないが、ＳＥＴＤ２のＣ末端領域におけるＷＷドメインは、ＨＤ関連ポリグルタミントラックの長さにかかわらず、そのプロリンリッチセグメントを介してハンチンチンタンパク質と相互作用し、ＴＰ５３とも相互作用し得ると考えられる。ＳＥＴＤ２は、ＷＷドメインに先行するプロリンリッチのストレッチを含有する。このプロリンリッチのストレッチは、ＳＥＴＤ２のＷＷドメインがハンチンチンの及びおそらくはまた他のタンパク質のプロリンリッチのストレッチと相互作用することを阻止し得る分子内ＷＷ相互作用ドメインとして機能する。
【００３３】
ＳＲＩドメイン。何らかの理論により縛られることを望むものではないが、Ｓｅｔ２  Ｒｐｂ１相互作用（「ＳＲＩ」）ドメインは、Ｒｐｂ１の高リン酸化Ｃ末端ドメイン（ＣＴＤ）、ＲＮＡ  Ｐｏｌ  ＩＩの最大サブユニットと相互作用すると考えられる。また何らかの理論により縛られることを望むものではないが、ヒトにおいて、ＲＮＡ  Ｐｏｌ  ＩＩの主要なＣ末端ドメイン−ドッキング部位は、ＳＥＴＤ２の第１及び第２のヘリックスに位置すると考えられる。このドメインは、活発に転写される遺伝子にＳＥＴＤ２の活性を向けると考えられる。
【００３４】
「実質的に同様」又は「実質的に同じ」という句は、本明細書中で使用される場合、その値により目安とされる生物学的特徴の文脈内で、当業者が、２つの値間の差に対して殆ど又は全く生物学的及び／又は統計学的有意性がないと考えるような、２個の数値間の十分に高い類似度を示す（例えばＫｄ値）。
【００３５】
「単離」されているポリペプチド、抗体、ポリヌクレオチド、ベクター、細胞又は組成物は、天然で見られない形態である、ポリペプチド、抗体、ポリヌクレオチド、ベクター、細胞又は組成物である。単離されている、ポリペプチド、抗体、ポリヌクレオチド、ベクター、細胞又は組成物は、それらがもはや天然で見られる形態ではない程度に精製されているものを含む。いくつかの実施形態において、単離されている、抗体、ポリヌクレオチド、ベクター、細胞又は組成物は、実質的に純粋である。
【００３６】
本明細書中で使用される場合「実質的に純粋」とは、少なくとも５０％純粋（すなわち夾雑物不含）、少なくとも９０％純粋、少なくとも９５％純粋、少なくとも９８％純粋又は少なくとも９９％純粋である物質を指す。
【００３７】
「ポリヌクレオチド」又は「核酸」は、本明細書中で交換可能に使用される場合、何れかの長さのヌクレオチドのポリマーを指し、ＤＮＡ及びＲＮＡの両方を含む。本ヌクレオチドは、デオキシリボヌクレオチド、リボヌクレオチド、修飾ヌクレオチド若しくは塩基及び／又はそれらの類似体、又はＤＮＡ若しくはＲＮＡポリメラーゼによりポリマーに組み込まれ得る何れかの基質であり得る。ポリヌクレオチドは、修飾ヌクレオチド、例えばメチル化ヌクレオチド及びそれらの類似体などを含み得る。存在する場合、ヌクレオチド構造に対する修飾は、ポリマーの組み立て前又は後に与えられ得る。ヌクレオチドの配列は、非ヌクレオチド成分により中断され得る。
【００３８】
「ポリペプチド」、「ペプチド」及び「タンパク質」という用語は、何れかの長さのアミノ酸のポリマーを指すために本明細書中で交換可能に使用される。本ポリマーは直鎖状又は分岐状であり得、これは修飾アミノ酸を含み得、非アミノ酸が途中に入り得る。この用語はまた、天然に又は介入により修飾されているアミノ酸ポリマーも包含する；例えば、ジスルフィド結合形成、グリコシル化、脂質付加、アセチル化、リン酸化又は何らかの他の操作若しくは修飾、例えば標識成分との複合化。例えば１つ以上のアミノ酸の類似体（例えば非天然アミノ酸などを含む）、並びに当技術分野で公知の他の修飾を含有するポリペプチドも定義内に含まれる。本開示のポリペプチドは抗体に基づくので、特定の実施形態において、本ポリペプチドが１本鎖又は会合した鎖として生じ得ることが理解される。
【００３９】
「同一である」又はパーセント「同一性」という用語は、２つ以上の核酸又はポリペプチドの文脈において、何れの保存的アミノ酸置換も配列同一性の一部としてみなさずに、比較及び一致を最大化するためにアライン（必要に応じてギャップを導入）した場合に、同じであるか、又は、同じであるヌクレオチド若しくはアミノ酸残基の指定されるパーセンテージを有する２つ以上の配列若しくはサブ配列を指す。パーセント同一性は、配列比較ソフトウェア若しくはアルゴリズムを使用して、又は目視により測定され得る。
【００４０】
アミノ酸又はヌクレオチド配列のアライメントを得るために使用され得る様々なアルゴリズム及びソフトウェアが当技術分野で公知である。配列アライメントアルゴリズムの非限定的な一例は、Ｋａｒｌｉｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．９０：５８７３−５８７７（１９９３）において改変され、ＮＢＬＡＳＴ及びＸＢＬＡＳＴプログラム（Ａｌｔｓｃｈｕｌ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．２５：３３８９−３４０２（１９９１））に組み込まれるとおりの、Ｋａｒｌｉｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．８７：２２６４−２２６８（１９９０）により記載されるアルゴリズムである。特定の実施形態において、Ａｌｔｓｃｈｕｌ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．２５：３３８９−３４０２（１９９７）に記載のようにＧａｐｐｅｄ  ＢＬＡＳＴを使用し得る。ＢＬＡＳＴ−２、ＷＵ−ＢＬＡＳＴ−２（Ａｌｔｓｃｈｕｌ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ  ２６６：４６０−４８０（１９９６））、ＡＬＩＧＮ，ＡＬＩＧＮ−２（Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ，Ｓｏｕｔｈ  Ｓａｎ  Ｆｒａｎｃｉｓｃｏ，Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ）又はＭｅｇａｌｉｇｎ（ＤＮＡＳＴＡＲ）は、配列をアラインするために使用し得るさらなる公開ソフトウェアプログラムである。特定の実施形態において、２つのヌクレオチド配列間のパーセント同一性は、ＧＣＧソフトウェア（例えばＮＷＳｇａｐｄｎａ．ＣＭＰマトリクス及び４０、５０、６０、７０又は９０のギャップウェイト及び１、２、３、４、５又は６の長さウェイトを使用）においてＧＡＰプログラムを使用して決定される。特定の代替的な実施形態において、２つのアミノ酸配列間のパーセント同一性を決定するために、Ｎｅｅｄｌｅｍａｎ及びＷｕｎｓｃｈのアルゴリズム（Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．４８：４４４−４５３（１９７０））を組み込むＧＣＧソフトウェアパッケージ中のＧＡＰプログラムを使用し得る（例えばＢｌｏｓｓｕｍ  ６２マトリクス又はＰＡＭ２５０マトリクスの何れか及び１６、１４、１２、１０、８、６又は４のギャップウェイト及び１、２、３、４、５の長さウェイトを使用）。或いは、特定の実施形態において、ヌクレオチド又はアミノ酸配列間のパーセント同一性は、Ｍｙｅｒｓ及びＭｉｌｌｅｒのアルゴリズム（ＣＡＢＩＯＳ、４：１１−１７（１９８９））を使用して決定される。例えば、パーセント同一性は、残基表、１２のギャップ長ペナルティー及び４のギャップペナルティーとともに、ＡＬＩＧＮプログラム（バージョン２．０）を使用して、及びＰＡＭ１２０を使用して決定され得る。特定のアライメントソフトウェアによる最大アライメントに対する適切なパラメーターは当業者により決定され得る。特定の実施形態において、アライメントソフトウェアの初期設定パラメーターが使用される。特定の実施形態において、第２のアミノ酸配列に対する第１のアミノ酸配列のパーセント同一性「Ｘ」は１００ｘ（Ｙ／Ｚ）として計算され、式中、（目視又は特定の配列アライメントプログラムによりアラインした場合）Ｙは、第１及び第２の配列のアライメントにおいて同一である一致としてスコア化されたアミノ酸残基の数であり、Ｚは第２の配列における残基の総数である。第１の配列の長さが第２の配列よりも長い場合、第２の配列に対する第１の配列のパーセント同一性は、第１の配列に対する第２の配列のパーセント同一性よりも大きい。
【００４１】
非限定例として、参照配列に対して何らかの特定のポリヌクレオチドがある特定のパーセント配列同一性（例えば少なくとも８０％同一である、少なくとも８５％同一である、少なくとも９０％同一である、及びいくつかの実施形態において、少なくとも９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％同一である）を有するか否かは、特定の実施形態において、Ｂｅｓｔｆｉｔプログラム（Ｗｉｓｃｏｎｓｉｎ  Ｓｅｑｕｅｎｃｅ  Ａｎａｌｙｓｉｓ  Ｐａｃｋａｇｅ，Ｖｅｒｓｉｏｎ  ８  ｆｏｒ  Ｕｎｉｘ，Ｇｅｎｅｔｉｃｓ  Ｃｏｍｐｕｔｅｒ  Ｇｒｏｕｐ，Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｐａｒｋ，５７５  Ｓｃｉｅｎｃｅ  Ｄｒｉｖｅ，Ｍａｄｉｓｏｎ，ＷＩ  ５３７１１）を使用して決定し得る。Ｂｅｓｔｆｉｔは、２つの配列間の相同性の最良のセグメントを見出すために、Ｓｍｉｔｈ及びＷａｔｅｒｍａｎ，Ａｄｖａｎｃｅｓ  ｉｎ  Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｍａｔｈｅｍａｔｉｃｓ  ２：４８２  ４８９（１９８１）のローカル相同性アルゴリズムを使用する。特定の配列が例えば本開示による参照配列に対して９５％同一であるか否かを決定するためにＢｅｓｔｆｉｔ又は何らかの他の配列アライメントプログラムを使用する場合、パラメーターは、同一性のパーセントが参照ヌクレオチド配列の全長に対して計算され、参照配列中のヌクレオチドの総数の最大５％までの相同性のギャップが許されるように設定される。
【００４２】
いくつかの実施形態において、本明細書中に記載の２つの核酸又はポリペプチドは実質的に同一であり、つまり、それらは、配列比較アルゴリズムを使用して、又は目視により測定してアラインした場合、比較し、一致を最大にするためにアラインするとき、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％及びいくつかの実施形態において少なくとも９５％、９６％、９７％、９８％、９９％ヌクレオチド又はアミノ酸残基同一性を有する。特定の実施形態において、同一性は、少なくとも約１０、約２０、約４０〜６０残基長若しくはその間にある何らかの整数値である配列の領域にわたり、又は６０〜８０残基より長い領域、少なくとも約９０〜１００残基にわたり存在するか、又は配列は、例えばヌクレオチド配列のコード領域など、比較される配列の全長にわたり実質的に同一である。
【００４３】
本明細書中で使用される場合、「対象」という用語は、特定の処置のレシピエントとしようとする、ヒト、非ヒト霊長類、げっ歯類などを含むが限定されない何らかの動物（例えば哺乳動物）を指す。一般的には、「対象」及び「患者」という用語は、ヒト対象に関して本明細書中で交換可能に使用される。
【００４４】
「腫瘍」及び「新生物」は、前癌及び上皮病変を含め、良性（非癌性）であれ、又は悪性（癌性）であれ、過剰な細胞成長又は増殖の結果生じる組織の何らかの塊を指す。
【００４５】
「癌」、「癌性」又は「悪性腫瘍」という用語は、交換可能に使用され、細胞の集団が無制御又は無調節の細胞成長又は増殖を特徴とする哺乳動物（すなわちヒト）における生理学的状態を指す。癌の例としては、例えば、癌腫、リンパ腫、芽細胞腫、肉腫、骨髄腫及び白血病が挙げられる。本開示の方法及び医薬組成物で処置され得る癌タイプの非限定例としては、食道癌、腎臓癌、胃癌、肝細胞癌、神経膠芽腫、中枢神経系（ＣＮＳ）癌、軟組織癌、肺癌、乳癌、膀胱／尿路癌、頭頸部癌、前立腺癌、血液癌、膵臓癌、結直腸癌、皮膚癌、子宮内膜癌、卵巣癌及び結直腸癌が挙げられる。
【００４６】
患者において「再発した」癌という用語は、完全又は部分的寛解の何れかを以前に達成したが、６か月以上後に疾患進行のエビデンスを示す患者を指す。
【００４７】
患者において「難治性」癌という用語は、治療失敗となったことがあるか又は最後の抗癌療法から６か月以内に疾患が進行した患者を指す。
【００４８】
（例えば特定の化学療法レジメンでの）処置に対して「応答しない」又は「あまり応答しない」腫瘍は、承認動物モデル又はヒト臨床試験において処置なし又はプラセボ処置と比較した場合に、その処置に対する応答について統計学的に有意な改善を示さないか、又は最初の処置に応答するが、処置の継続につれて成長する。
【００４９】
「医薬処方物」という用語は、活性成分の生物学的活性が有効になることが可能となるような形態、及びその処方物が投与される対象に許容できない毒性があるさらなる成分を含有しないような形態である調製物を指す。このような処方物は無菌性であり得る。
【００５０】
「治療的有効量」という用語は、対象又は哺乳動物において疾患又は障害を「処置」するのに有効である治療剤（例えばＳＥＴＤ２の低分子阻害剤）の量を指す。癌の場合、治療的有効量の薬剤は、癌細胞数を減少させ得、癌細胞の増殖を減弱させ得、腫瘍サイズを縮小させ得、末梢器官への癌細胞浸潤を抑制し得（すなわち、幾分遅延、いくつかの実施形態において停止）、腫瘍転移を抑制し得（すなわち、幾分遅延、いくつかの実施形態において停止）、腫瘍成長を幾分抑制し得、及び／又は癌と関連する症状の１つ以上を幾分軽減し得る。「処置する」の本明細書中での定義を参照。これは、薬剤が成長を防ぎ、存在する癌細胞を死滅させ得る程度まで、細胞分裂停止性及び／又は細胞毒性であり得る。
【００５１】
「予防的有効量」という用語は、所望の予防結果を達成するための投与量で、及びそれに必要な時間にわたり有効な量を指す。一般的には、予防的用量は疾患の前又は疾患のより早期の段階で対象において使用されるので、予防的有効量は治療的有効量未満であり得るが、必ずしもそうである必要はない。
【００５２】
「処置する」、「処置」、「処置すること」、「治療効果を有する」、「緩和する」、「緩和すること」又は「進行を遅らせる」などの用語は、１）癌などの診断された病的障害を治癒させる、根絶する、遅くする、その症状を和らげる、及び／又はその進行を停止させる治療的処置；及び２）癌を予防する、及び／又はその発現を遅くする予防又は予防的処置の両方を指す。したがって、処置を必要とする者には、障害が既にある者；障害を有する傾向がある者；及びその障害が予防されるべきである者が含まれる。特定の実施形態において、新薬承認に対するＮａｔｉｏｎａｌ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ及びＵ．Ｓ．Ｆｏｏｄ  ａｎｄ  Ｄｒｕｇ  Ａｄｍｉｎｉｓｔｒａｔｉｏｎ（ＦＤＡ）により設定される標準によりそれぞれ測定した場合、患者が次のうち１つ以上：悪疫の軽減、生存時間の延長、腫瘍無増悪時間の延長、腫瘍質量の減少、腫瘍量の減少及び／又は腫瘍無転移時間、腫瘍無再発時間又は進行性疾患までの時間の延長、腫瘍応答、完全寛解（ＣＲ）、部分的応答（ＰＲ）、安定疾患、無増悪生存（ＰＦＳ）、全生存（ＯＳ）を示すとき、対象は、本開示の方法に従い、癌に対して首尾よく「処置される」。Ｊｏｈｎｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｏｎｃｏｌ．２１：１４０４−１４１１（２００３）を参照。いくつかの実施形態において、「治療効果」は、上記で定義される場合、毒性又は有害な副作用の軽減及び／又は忍容性の向上も包含する。
【００５３】
「投与する」とは、当業者にとって公知の様々な方法及び送達系の何れかを使用した、本明細書中で記載されるようなＳＥＴＤ２阻害剤（及び／又は１つ以上のさらなる治療剤）の対象への物理的な導入を指す。投与経路としては、経口、粘膜、局所、静脈内、筋肉内、皮下、腹腔内、脊髄又は他の非経口の投与経路、例えば注射又は点滴によるもの、が挙げられる。本明細書中で使用される場合、「非経口投与」という句は、静脈内、筋肉内、動脈内、くも膜下腔内、リンパ内、病巣内、嚢内、眼窩内、心臓内、皮内、腹腔内、経気管、皮下、表皮下、関節内、嚢下、くも膜下、脊髄内、硬膜外及び胸骨内注射及び点滴、並びにインビボエレクトロポレーションを含むが限定されない投与様式を意味する。投与は、例えば１回、複数回及び／又は１回以上の延長期間にわたり行われ得る。
【００５４】
ＳＥＴＤ２阻害剤及び１つ以上の他の治療剤の組み合わせなどの「薬剤の組み合わせ」という用語は、同時に、連続的に、又は同時及び連続的の両方で、同じ対象にこれらの薬剤を投与することを指す。例として、同じ又は異なる投与経路の何れかによる、別の治療剤の投与に先行するか、又はそれに続く（例えば時間、日、週又は月）ＳＥＴＤ２阻害剤の投与は、その薬剤が単一の医薬処方物中で一緒に投与されるか又は別個の医薬処方物中で投与されるかにかかわらず、薬剤の組み合わせの投与を構成する。
【００５５】
「癌細胞の増殖を減弱させるか又は阻害する」という用語は、本明細書中で使用される場合、本明細書中で記載のように、哺乳動物（例えばヒト）癌由来の１つ以上の細胞の成長のインビトロ、エクスビボ又はインビボでの低下を指す。
【００５６】
別段指示される場合を除き、量、比、材料の物理的特性及び／又は使用を示す本開示の全ての数字は、「約」という語により修飾されるものと理解されたい。「約」という用語は、数字又は数の範囲を指す場合、言及される数字又は範囲が近似であり、例えば実験による変動内（又は統計学的な実験によるエラー内）であることを意味し、したがって、数字又は数の範囲は、例えば述べられる数字又は数の範囲の１％〜１５％変動し得る。
【００５７】
ＳＥＴＤ２阻害剤
本開示は、癌を有する対象に対する画期的な処置を提供する。本開示は、腫瘍サプレッサーとしてのその既知の機能にもかかわらず、ヒストンメチルトランスフェラーゼ、ＳＥＴＤ２の阻害が癌及び特に膵臓癌及び食道癌を処置するために使用され得るという、驚くべき予想外の発見に関する。
【００５８】
この処置は、とりわけこの処置を必要とする対象に治療的有効量のヒストンメチルトランスフェラーゼ、ＳＥＴＤ２の阻害剤を投与し、癌を処置することを含む。
【００５９】
本明細書中で使用される場合、「ＳＥＴＤ２の阻害剤」又は「ＳＥＴＤ２阻害剤」という用語は、ヒトＳＥＴＤ２の活性を調整、例えば下方制御する何らかの分子又は化合物を指す。例えば、ＳＥＴＤ２阻害剤は、ＳＥＴＤ２のヒストンメチルトランスフェラーゼ活性を阻害し得る。例えば、ＳＥＴＤ２阻害剤は、精製酵素アッセイにおいてＳＥＴＤ２について、約１ｎＭ〜約１０，０００ｎＭ、約１ｎＭ〜約１，０００ｎＭ、約１ｎＭ〜約５００ｎＭ、約１ｎＭ〜約１００ｎＭ、約１ｎＭ〜約５０ｎＭ又は約１ｎＭ〜約１０ｎＭの生化学的５０％阻害濃度（ＩＣ５０）を示す化合物であり得る。
【００６０】
いくつかの実施形態において、「ヒトＳＥＴＤ２の活性を下方制御（又は阻害）すること」は、ヒストン３のリジン３６のトリメチル化を阻害することを指す。
【００６１】
いくつかの実施形態において、ＳＥＴＤ２阻害剤は、例えばポリペプチド、ＤＮＡ又はＲＮＡであり得る。ＳＥＴＤ２の阻害剤はまた、例えば、ＳＥＴＤ２ポリペプチドに特異的に結合する分子、ＳＥＴＤ２ポリペプチドのリガンドに特異的に結合する分子、ＳＥＴＤ２ポリペプチド、可溶性ＳＥＴＤ２ポリペプチド又は、ＳＥＴＤ２ポリペプチドの細胞外ドメインを含むか、基本的にそれからなるか、又はそれからなる可溶性ＳＥＴＤ２ポリペプチドに対して生じる抗血清でもあり得る。
【００６２】
いくつかの実施形態において、ＳＥＴＤ２阻害剤は、例えば、ＳＥＴＤ２ポリペプチドに特異的に結合する抗体又はＳＥＴＤ２ポリペプチドに特異的に結合する抗体の抗原結合断片でもあり得る。いくつかの実施形態において、本抗体は、ポリクローナル、モノクローナル、マウス、ヒト、ヒト化又はキメラ抗体である。モノクローナル及びポリクローナル抗ＳＥＴＤ２抗体は市販されており、例えばＴｈｅｒｍｏ  Ｆｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ及びＭｉｌｌｉｐｏｒｅ  Ｓｉｇｍａから購入し得る。いくつかの実施形態において、抗原結合断片は、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖ、ｓｃＦｖ、ｓｄＦｖ断片、ＶＨドメイン又はＶＬドメインである。
【００６３】
いくつかの実施形態において、ＳＥＴＤ２阻害剤は、ＳＥＴＤ２ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列とハイブリッド形成する、例えばＲＮＡｉ、ｍｉＲＮＡ、ｓｉＲＮＡ、ｓｈＲＮＡ、アンチセンスＲＮＡ、アンチセンスＤＮＡ、デコイ分子、デコイＤＮＡ、２本鎖ＤＮＡ、１本鎖ＤＮＡ、複合型ＤＮＡ、カプセル化ＤＮＡ、ウイルスＤＮＡ、プラスミドＤＮＡ、ネイキッドＲＮＡ、カプセル化ＲＮＡ、ウイルスＲＮＡ、２本鎖ＲＮＡ、ＲＮＡ干渉を生成可能な分子又はそれらの組み合わせでもあり得る。
【００６４】
ＳＥＴＤ２の下方制御は、遺伝子編集技術によっても達成され得る。いくつかの実施形態において、ＳＥＴＤ２阻害剤は、例えば、クラスター化して規則的に配置される短い回文配列リピート（ＣＲＩＳＰＲ）−Ｃａｓ９系であり得る。ＣＲＩＳＰＲ−Ｃａｓ９系は、癌生物学における応用とともに文献中に記載されており、例えばＣａｓ９ヌクレアーゼ及びシングルガイドＲＮＡ（ｓｇＲＮＡ）を含み得る。Ｓａｎｃｈｅｚ−Ｒｉｖｅｒａ，Ｆ．Ｊ．及びＪａｃｋｓ，Ｔ．，「Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ  ｏｆ  ｔｈｅ  ＣＲＩＳＰＲ−Ｃａｓ９  Ｓｙｓｔｅｍ  ｉｎ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ」、Ｎａｔ  Ｒｅｖ  Ｃａｎｃｅｒ  １５：３８７−３９５（２０１５）；Ｃｈｅｎ，Ｓ．ｅｔ  ａｌ．，「ＣＲＩＳＰＲ−Ｃａｓ９：ｆｒｏｍ  Ｇｅｎｏｍｅ  Ｅｄｉｔｉｎｇ  ｔｏ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ」、Ｉｎｔ．Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｓｃｉ．１２：１４２７−１４３６（２０１６）を参照。例えば、Ｃａｓ９ヌクレアーゼと一緒にＳＥＴＤ２遺伝子を標的とするｓｇＲＮＡは、対象に投与され得、それにより、ＳＥＴＤ２活性の下方制御（すなわちヒストンＨ３のリジン３６のトリメチル化阻害）を引き起こすＳＥＴＤ２遺伝子の特定の配列の消失を引き起こし得る。特に、ＳＥＴ、ＡＷＳ、ＰＳ、ＳＲＩ又はＷＷドメインは、消失のためにＣＲＩＳＰＲ−Ｃａｓ９を用いて標的化され得る。ＣＲＩＳＰＲ−Ｃａｓ９系の非限定例は、配列ＡＧＣＡＣＣＡＧＴＡＡＣＡＧＡＧＣＣＡＧ（配列番号５）を有するｓｇＲＮＡ標的配列＃１、配列ＧＡＣＴＧＴＧＡＡＣＧＧＡＣＡＡＣＴＧＡ（配列番号６）を有するｓｇＲＮＡ標的配列＃２及びＣａｓ９  ｍＲＮＡを含む。いくつかの実施形態において、ｓｇＲＮＡ及びＣａｓ９  ｍＲＮＡは、別個のベクターにおいてそれぞれ含有され得る。いくつかの実施形態において、ｓｇＲＮＡは、両方とも第１のベクター中に含有され得、Ｃａｓ９  ｍＲＮＡは第２のベクターに含有され得る。いくつかの実施形態において、ｓｇＲＮＡ及びＣａｓ９  ｍＲＮＡは全て１つのベクター中に含有され得る。当業者は、必要とする対象への投与のためにＣＲＩＳＰＲ−Ｃａｓ９系を処方するための試薬及び方法を知っている。
【００６５】
ＣＲＩＳＰＲ−Ｃａｓ９に基づく系に加えて、例えば細菌フランシセラ・ノビシダ（Ｆｒａｎｃｉｓｅｌｌａ  ｎｏｖｉｃｉｄａ）のＣＲＩＳＰＲ／Ｃｐｆ１系など、ＳＥＴＤ２を阻害するために、他の代替的なＣＲＩＳＰＲに基づく系を使用し得る。Ｚｅｔｓｃｈｅ，Ｂ．ｅｔ  ａｌ．，Ｃｅｌｌ  １６３：７５９−７７１（２０１５）；Ｆｏｎｆａｒａ，Ｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ  ５３２：５１７−５２１（２０１６）を参照。
【００６６】
ＣＲＩＳＰＲに基づく系に加えて、ＳＥＴＤ２を阻害するために、他の遺伝子編集技術、例えばジンクフィンガーヌクレアーゼ（ＺＦＮ）、転写活性化因子様エフェクターヌクレアーゼ（ＴＡＬＥＮ）及び改変ホーミングメガヌクレアーゼも使用し得る。例えば、Ｍａｅｄｅｒ，Ｍ．Ｌ．及びＧｅｒｓｂａｃｈ，Ｃ．Ａ．，「Ｇｅｎｏｍｅ−ｅｄｉｔｉｎｇ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ  ｆｏｒ  Ｇｅｎｅ  ａｎｄ  Ｃｅｌｌ  Ｔｈｅｒａｐｙ」、Ｍｏｌ．Ｔｈｅｒ．２４：４３０−４４６（２０１６）；Ｇａｊ，Ｔ．ｅｔ  ａｌ．，「ＺＦＮ，ＴＡＬＥＮ  ａｎｄ  ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ−ｂａｓｅｄ  ｍｅｔｈｏｄｓ  ｆｏｒ  ｇｅｎｏｍｅ  ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ」、Ｔｒｅｎｄｓ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ  ３１：３９７−４０５（２０１３）；Ｐｅｒｅｚ−Ｐｉｎｅｒａ，Ｐ．ｅｔ  ａｌ．，「Ａｄｖａｎｃｅｓ  ｉｎ  ｔａｒｇｅｔｅｄ  ｇｅｎｏｍｅ  ｅｄｉｔｉｎｇ」、Ｃｕｒｒ  Ｏｐｉｎ  Ｃｈｅｍ  Ｂｉｏｌ  １６：２６８−２７７（２０１２）を参照。
【００６７】
いくつかの実施形態において、本開示の方法で使用されるＳＥＴＤ２阻害剤は、ＳＥＴＤ２の１つ以上の活性を選択的に標的とし、下方制御する低分子（すなわち約１，５００ｇ／ｍｏｌ未満の分子量の分子、例えば約１００ｇ／ｍｏｌ〜約１，５００ｇ／ｍｏｌ）化学的化合物である。いくつかの実施形態において、ＳＥＴＤ２の低分子阻害剤はシネファンギン誘導体である。シネファンギンは、Ｓ−アデノシルメチオニン（ＳＡＭ）の類似体である。いくつかの実施形態において、シネファンギン類似体は、Ｎ−アルキル（メチル、エチル、プロピル、ベンジル）シネファンギンである。いくつかの実施形態において、Ｎ−アルキルシネファンギンはＮ−プロピルシネファンギン（Ｐｒ−ＳＮＦ）又はＮ−ベンジルシネファンギン（Ｂｎ−ＳＮＦ）である。シネファンギン誘導体の合成及びヒトメチルトランスフェラーゼＳＥＴＤ２に対するそれらの阻害プロファイルは、Ｚｈｅｎｇ，Ｗ．ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．１３４：１８００４−１８０１４（２０１２）に記載されており、これはその全体において参照により組み込まれる。
【００６８】
ある実施形態において、ＳＥＴＤ２阻害剤は、ＳＥＴＤ２ポリペプチド（ＤＮＡ又はＲＮＡの何れか）をコードする標的核酸と全体的又は部分的に相補的であり、それとハイブリッド形成し得るアンチセンス核酸又はオリゴヌクレオチドである。例えば、アンチセンス核酸又はオリゴヌクレオチドは、５’又は３’非翻訳領域と相補的であり得るか、又はＳＥＴＤ２をコードする少なくとも１つの核酸分子の翻訳開始コドン（５’非翻訳及び翻訳領域）と重複し得る。非限定例として、アンチセンスオリゴヌクレオチドは、次の領域：ｍＲＮＡキャップ領域、翻訳開始部位；翻訳終結部位；転写開始部位；転写終結部位；ポリアデニル化シグナル；３’非翻訳領域；５’非翻訳領域；５’コード領域、ｍｉｄコード領域；３’コード領域：ＤＮＡ複製開始及び伸長部位を標的とし、これとハイブリッド形成し得る。
【００６９】
いくつかの実施形態において、２本鎖核酸（すなわち、ＤＮＡ：ＤＮＡ又はＤＮＡ：ＲＮＡ）に結合して、安定な三重ヘリックス又は３本鎖核酸を形成するオリゴヌクレオチドが構築され得る。このような３本鎖オリゴヌクレオチドは、ＳＥＴＤ２をコードする核酸の転写及び／又は発現を阻害し得る。３本鎖ヘリックス形成の塩基対形成規則を使用して３本鎖オリゴヌクレオチドが構築される。
【００７０】
またさらなる実施形態において、非天然部分を有する部分を含有するオリゴヌクレオチドを本方法において使用し得る。したがって、オリゴヌクレオチドは、糖部分又は糖間結合が変化しているものであり得る。これらの間でも代表的なものは、ホスホロチオエート及び当技術分野で公知の他のイオウ含有種である。好ましい実施形態において、オリゴヌクレオチドのリン酸ジエステル結合の少なくとも１つが、組成物が活性を調整しようとするＲＮＡが局在する細胞の領域に浸透する能力を促進するために機能する構造で置換されている。このような置換が、ホスホロチオエート結合、リン酸メチル結合又は短鎖アルキル若しくはシクロアルキル構造を含むことが好ましい。
【００７１】
他の実施形態において、リン酸ジエステル結合は、同時に実質的に非イオン性及び非キラルである構造で、又はキラル及びエナンチオマー的に特異的である構造で置換される。当業者は、逆方向末端ヌクレオチドを含め、開示される方法での使用のために他の結合を選択可能である。オリゴヌクレオチドは、少なくともいくつかの修飾塩基形態を含む種も含み得る。したがって、天然で通常見出されるもの以外のプリン及びピリミジンをそのように使用し得る。同様に、ヌクレオチドサブユニットのフラノシル部分上の修飾も影響を受け得る。このような修飾の例は、２’−Ｏ−アルキル−及び２’−ハロゲン−置換ヌクレオチドである。糖部分の２’位置の修飾のいくつかの非限定例としては、ＯＨ、ＳＨ、ＳＣＨ３、Ｆ、ＯＣＨ３、ＯＣＮ、Ｏ（ＣＨ２）、ＮＨ２及びＯ（ＣＨ２）ｎＣＨ３が挙げられ、ここでｎは１〜約１０である。このようなオリゴヌクレオチドは、天然のオリゴヌクレオチド又は天然の構造とは１つ以上の差異を有する合成オリゴヌクレオチドで機能的に交換可能である。全てのこのような類似体は、それらがその機能を阻害するためにＳＥＴＤ２をコードする少なくとも１つの核酸分子とハイブリッド形成するために効果的に機能する限り、本明細書により包含される。
【００７２】
或いは、標的とされる器官、組織又は細胞集団へのヌクレオチド配列の送達のために、レトロウイルス、アデノウイルス、ヘルペス又はワクシニアウイルス由来又は様々な細菌プラスミド由来の発現ベクターが使用され得る。ヒトＳＥＴＤ２ポリペプチドをコードする核酸配列と相補的である核酸配列を発現する組み換えベクターを構築するために、当業者にとって周知の方法が使用され得る。
【００７３】
ＲＮＡ干渉（ＲＮＡｉ）は、ｍｉＲＮＡ又はｄｓＲＮＡ（低分子干渉ＲＮＡ；ｓｉＲＮＡ）により誘導される転写後遺伝子サイレンシング過程であり、遺伝子発現を調整するために使用されている。ＲＮＡｉは、ＳＥＴＤ２を阻害するために本明細書中で記載される治療方法において使用され得る。一般に、ＲＮＡｉは、細胞を２本鎖ｓｉＲＮＡ又は低分子ヘアピンＲＮＡ（ｓｈＲＮＡ）と接触させることにより行われている。しかし、崩壊に対するＲＮＡの感受性ゆえに細胞外でのＲＮＡの操作は面倒である。したがって、使用しようとするｓｉＲＮＡの１本の鎖を含む低分子干渉ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）分子又は中間体ｓｉＲＮＡ分子（ｓｈＲＮＡなど）をコードするデオキシリボ核酸（ＤＮＡ）組成物も本明細書中に包含される。したがって、本願は単離ＤＮＡ分子を提供し、これは、ｓｉＲＮＡの成分であるとき、標的ＲＮＡのＲＮＡ干渉（ＲＮＡｉ）を媒介する中間体ｓｉＲＮＡをコードする少なくとも約１６ヌクレオチドの発現可能な鋳型ヌクレオチド配列を含む。本願は、標的細胞においてＳＥＴＤ２をコードする核酸分子の発現を調整するためのＲＮＡ干渉（ＲＮＡｉ）の使用にさらに関する。治療的適用が特定の作用様式に限定されない一方で、ＲＮＡｉは、ＲＮＡ誘導サイレンシング複合体（ＲＩＳＣ）によるメッセンジャーＲＮＡ（例えばＳＥＴＤ２の遺伝子のｍＲＮＡ）の崩壊を含み得、これは転写される標的ｍＲＮＡの翻訳を阻止する。或いは、これは、標的とされる遺伝子の転写を遮断するゲノムＤＮＡのメチル化も含み得る。ＲＮＡｉにより引き起こされる遺伝子発現の抑制は一時的であり得るか、又はこれはより安定、さらには永久的であり得る。
【００７４】
「低分子干渉ＲＮＡ」（ｓｉＲＮＡ）もＳＥＴＤ２阻害剤として本方法で使用され得る。ｓｉＲＮＡは、ＲＮＡ干渉（ＲＮＡｉ）又は遺伝子サイレンシングに介在可能なあらゆる核酸分子を指す。例えば、ｓｉＲＮＡは、タンパク質発現（例えばＳＥＴＤ２タンパク質発現）を特異的に妨害するそれらの能力にちなんで名づけられた約１０〜約３０ヌクレオチド長の２本鎖ＲＮＡ分子であり得る。ある実施形態において、本開示のｓｉＲＮＡは、１２〜２８ヌクレオチド長、より好ましくは１５〜２５ヌクレオチド長、さらにより好ましくは１９〜２３ヌクレオチド長、最も好ましくは２１〜２３ヌクレオチド長である。したがって、好ましいｓｉＲＮＡは、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８ヌクレオチド長である。本明細書中で使用される場合、ｓｉＲＮＡ分子は、ＲＮＡのみを含有する分子に限定される必要はないが、化学的に修飾されたヌクレオチド及び非ヌクレオチドをさらに包含する。ｓｉＲＮＡは、ＲＮＡ干渉によって標的細胞においてＳＥＴＤ２の発現を低下させるために設計され得る。ｓｉＲＮＡは、センス領域及びアンチセンス領域を含み得、ここでアンチセンス領域は、ＳＥＴＤ２をコードする核酸分子についてｍＲＮＡ配列に対して相補的な配列を含み、センス領域は、この遺伝子のｍＲＮＡのアンチセンス配列に相補的な配列を含む。ｓｉＲＮＡ分子は、２つの核酸断片から組み立てられ得、一方の断片はセンス領域を含み、第２の断片はｓｉＲＮＡ分子のアンチセンス領域を含む。センス領域及びアンチセンス領域はまた、リンカー分子を介して共有結合的に連結され得る。リンカー分子は、ポリヌクレオチドリンカー又は非ポリヌクレオチドリンカーであり得る。
【００７５】
ある実施形態において、ＳＥＴＤ２阻害剤は、配列番号１、配列番号２、配列番号３及び配列番号４からなる群から選択されるヒトＳＥＴＤ２  ｓｉＲＮＡである。
ＵＡＡＡＧＧＡＧＧＵＡＵＡＵＣＧＡＡＵ（配列番号１）
ＧＡＧＡＧＧＵＡＣＵＣＧＡＵＣＡＵＡＡ（配列番号２）
ＧＣＵＣＡＧＡＧＵＵＡＡＣＧＵＵＵＧＡ（配列番号３）
ＣＣＡＡＡＧＡＵＵＣＡＧＡＣＡＵＡＵＡ（配列番号４）
【００７６】
リボザイム（リボ核酸酵素から、またＲＮＡ酵素又は触媒活性ＲＮＡとも呼ばれる）は、化学反応を触媒するＲＮＡ分子である。一部のリボザイムは、定められたＲＮＡ配列を標的とする酵素として、バイオセンサーとして、及び機能的ゲノミクス及び遺伝子探索における適用のために、治療剤において重要な役割を果たし得る。リボザイムは、発現が下方制御されることが所望されるＳＥＴＤ２をコードする核酸分子からの遺伝子の転写物を特異的に切断するように遺伝子改変され得る。
【００７７】
（ＳＥＴＤ２の発現を低下させる配列を部分的に又は全てコードする）遺伝子又は遺伝物質の細胞への送達は、何らかの障害の遺伝子治療処置における第１の段階である。多数の送達方法が当業者にとって周知である。好ましくは、核酸は、インビボ又はエクスビボ遺伝子治療の使用のために投与される。非ウイルスベクター送達系としては、ＤＮＡプラスミド、ネイキッド核酸及びリポソームなどの送達ビヒクルと複合体化した核酸が挙げられる。ウイルスベクター送達系としては、ＤＮＡ及びＲＮＡウイルスが挙げられるが、これらは、細胞への送達後にエピソーム性又は組み込まれたゲノムの何れかを有する。
【００７８】
核酸の送達のためのＲＮＡ又はＤＮＡに基づくウイルス系の使用は、身体において特異的な細胞にウイルスを標的化するため、及びウイルスペイロードを核に輸送するための高度に進化した過程を利用する。患者（インビボ）にウイルスベクターを直接投与し得るか、又はインビトロでの細胞及び修飾された細胞を処置するためにそれらを使用し、次いで患者に投与（エクスビボ）し得る。核酸送達のための従来からのウイルスに基づく系は、遺伝子移行のための、レトロウイルス、レンチウイルス、アデノウイルス、アデノ随伴及び単純ヘルペスウイルスベクターを含み得る。ウイルスベクターは現在のところ、標的細胞及び組織において遺伝子移行の最も効率的で万能な方法である。宿主ゲノムにおける組み込みは、レトロウイルス、レンチウイルス及びアデノ随伴ウイルス遺伝子移行方法により可能であり、その結果、挿入された導入遺伝子の長期発現がもたらされることが多い。さらに、多くの異なる細胞タイプ及び標的組織で高い形質導入効率が観察されている。
【００７９】
核酸の一過性発現が好ましい適用において、アデノウイルスに基づく系が一般的に使用される。アデノウイルスに基づくベクターは、多くの細胞タイプにおいて非常に高い形質導入効率が可能であり、細胞分裂を必要としない。このようなベクターを用いて、高いタイター及び発現レベルが得られている。このベクターは、比較的単純な系において大量に産生され得る。標的核酸を用いて細胞に形質導入するために、例えば核酸及びペプチドのインビトロ産生において、及びインビボ及びエクスビボ遺伝子治療手順のために、アデノ随伴ウイルス（「ＡＡＶ」）ベクターも使用される。
【００８０】
組み換えアデノ随伴ウイルスベクター（ｒＡＡＶ）は、欠陥及び非病原性パルボウイルスアデノ随伴２型ウイルスに基づく有望な代替的遺伝子送達系である。全てのベクターは、導入遺伝子発現カセットに隣接するＡＡＶ  １４５ｂｐ逆方向末端反復のみを保持するプラスミド由来である。形質導入される細胞のゲノムへの組み込みゆえの効率的な遺伝子移行及び安定な導入遺伝子送達は、このベクター系に対する重要な特性である。
【００８１】
複製欠陥組み換えアデノウイルスベクター（Ａｄ）は、一過性の発現遺伝子治療において主に使用されるが；それは、これらが高いタイターで産生され得、容易に多くの様々な細胞タイプに感染するからである。殆どのアデノウイルスベクターは、導入遺伝子がＡｄ  Ｅ１ａ、Ｅ１ｂ及びＥ３遺伝子を置き換え；続いて複製欠陥ベクターがトランスで欠損遺伝子機能を供給するヒト２９３細胞において増殖させられるように改変される。Ａｄベクターは、インビボで複数のタイプの組織に対して形質導入し得、それには、肝臓、腎臓及び筋肉組織で見出されるものなどの非分裂の分化した細胞が含まれる。従来からのＡｄベクターは大きな運搬能を有する。
【００８２】
多くの遺伝子治療適用において、遺伝子治療ベクターが特定の組織タイプ、例えばグリア細胞などに高い特異性の度合いで送達されることが所望される。ウイルスベクターは、一般的には、ウイルスの外表面でウイルスコートタンパク質との融合タンパク質としてリガンドを発現させることによって、ある種の細胞タイプに対する特異性を有するように修飾される。リガンドは、関心のある細胞タイプ上で存在することが知られる受容体に対する親和性を有するように選択される。
【００８３】
個体対象への投与によって、一般的には全身投与（例えば、静脈内、腫瘍内、腹腔内、筋肉内、皮下又は頭蓋内点滴）又は局所適用によって、遺伝子治療ベクターをインビボで送達し得る。或いは、ベクターをエクスビボで、個々の患者（例えば、リンパ球、骨髄吸引液及び組織バイオプシー）から外植された細胞又はユニバーサルドナー造血幹細胞など、細胞に送達し、続いて、通常はベクターを組み込んでいる細胞に対する選択後に、対象へ細胞を再移植し得る。
【００８４】
ある実施形態において、細胞の遺伝子移入及び遺伝子治療のためのエクスビボ手順で幹細胞が使用される。幹細胞を使用することに対する長所は、それらをインビトロで他の細胞型に分化させ得るか、又は適切な位置（骨髄など）でそれらが生着する哺乳動物（細胞のドナーなど）に導入され得ることである。例えばＧＭ−ＣＳＦ、ＩＦＮ−γ及びＴＮＦ−αなどのサイトカインを用いてＣＤ３４＋細胞をインビトロで臨床的に重要な免疫細胞型に分化させるための方法は公知である。
【００８５】
公知の方法を使用して形質導入及び分化のために幹細胞が単離される。例えば、不要な細胞、例えばＣＤ４＋及びＣＤ８＋（Ｔ細胞）、ＣＤ４５＋（ｐａｎＢ細胞）、ＧＲ−１（顆粒球）及びｌａｄ（分化した抗原提示細胞）などに結合する抗体を用いて骨髄細胞をパニングすることによって、幹細胞を骨髄細胞から単離し得る。
【００８６】
ＳＥＴＤ２阻害剤の投与
本明細書中に記載のＳＥＴＤ２阻害剤を投与する適切な方法は、阻害剤（すなわち低分子、ＤＮＡ、ＲＮＡ、タンパク質、抗体）の性質に基づいており、当業者にとって周知である。本明細書中に記載のＳＥＴＤ２阻害剤は、経口、非経口、皮下、静脈内、筋肉内、腹腔内、経皮、くも膜下腔内、鼻腔内、経粘膜、腫瘍内、直腸、膣内若しくは頬側経路によって、又は吸入によって投与され得る。例えば、点滴注入などの静脈内注射、筋肉内注射、腹腔内注射、皮下注射、坐薬、腸洗浄、経口腸溶コーティング剤が選択され得、必要に応じて、患者の年齢及び状態に依存して、投与の方法が選択され得る。本明細書中に記載のＳＥＴＤ２阻害剤が全身的に（例えば静脈内注射により）又は局所的に（例えば、くも膜下腔内、腫瘍内又はリンパ節に）投与され得る。
【００８７】
本開示のＳＥＴＤ２阻害剤の適切な投与量は、例えば、全て処置する医師の判断で、処置しようとする癌のタイプ、癌の、重症度、経過及びステージ、癌の応答性、以前の治療、患者の臨床歴などのいくつかの要因に依存する。いくつかの実施形態において、ＳＥＴＤ２阻害剤の投与量は約０．０１ｍｇ／ｋｇ〜約１０００ｍｇ／ｋｇ体重である。いくつかの実施形態において、ＳＥＴＤ２阻害剤の投与量は約１ｍｇ／ｋｇ〜約５００ｍｇ／ｋｇ体重である。いくつかの実施形態において、ＳＥＴＤ２阻害剤の投与量は約０．１ｍｇ／日〜約５０ｇ／日；約０．１ｍｇ／日〜約２５ｇ／日；約０．１ｍｇ／日〜約１０ｇ／日；約０．１ｍｇ／日〜約３ｇ／日；又は約０．１ｍｇ／日〜約１ｇ／日である。或いはＳＥＴＤ２阻害剤の投与量は１〜２０００ｍｇ及び好ましくは１００〜１０００ｍｇ／患者の範囲である。
【００８８】
いくつかの実施形態において、ＳＥＴＤ２阻害剤は、１回又は数日から数か月続く一連の処置にわたり、又は治癒が達成されるまで、又は疾患状態の軽減（例えば腫瘍サイズの縮小）が達成されるまで投与され得る。
【００８９】
いくつかの実施形態において、本明細書中に記載のＳＥＴＤ２阻害剤は、１日に、週に、月に又は１年に１回又は複数回与えられ得る。特定の実施形態において、ＳＥＴＤ２阻害剤は毎日１回、２日に１回、３日に１回又は４日に１回与えられる。特定の実施形態において、ＳＥＴＤ２阻害剤は、１日２回、１日３回又は１日４回与えられる。特定の実施形態において、ＳＥＴＤ２阻害剤は週に１回与えられる。特定の実施形態において、ＳＥＴＤ２阻害剤は２週間に１回与えられる。特定の実施形態において、ＳＥＴＤ２阻害剤は３週間に１回与えられる。いくつかの実施形態において、ＳＥＴＤ２阻害剤は４週間に１回与えられる。いくつかの実施形態において、ＳＥＴＤ２阻害剤は１か月に１回与えられる。
【００９０】
いくつかの実施形態において、本明細書中に記載のＳＥＴＤ２阻害剤は、最初により高い「負荷」用量で投与し、続いてより低い用量で１回以上投与し得る。いくつかの実施形態において、投与頻度も変更し得る。いくつかの実施形態において、投与レジメンは、最初の用量を投与し、続いて１日２回、１日１回、２日に１回、３日に１回又は３日ごと、又は週に１回、さらなる用量（又は「維持」用量）を投与し得ることを含み得る。例えば、最初の負荷用量を投与し、続いて例えば最初の用量の半分の１日維持用量を投与する投与レジメンを含み得る。又は、投与レジメンは、最初の負荷用量を投与し、続いて例えば１日おきに最初の用量の半分の維持用量を投与することを含み得る。又は投与レジメンは、３日間にわたり３回最初の用量を投与し、続いて例えば１日おきに同じ量の維持用量を投与することを含み得る。
【００９１】
当業者は、処置されている特定の対象の状況に依存して、レシピエントの、年齢、性別、健康及び体重、処置しようとする状態又は障害、障害の重症度、併用処置のタイプ及びもしあれば所望される効果の性質などの要因を考慮して、投与される投与量、投与経路及び投与頻度が変動することを認める。
【００９２】
当業者は、患者の臨床応答、副作用などに依存して一連の治療中に、又は治療の異なる相（すなわち処置又は維持）中に、ＳＥＴＤ２阻害剤の投与量及び／又は投与頻度が変化し得る（増減）ことも認める。
【００９３】
医薬組成物
本明細書中に記載の方法で使用されるＳＥＴＤ２阻害剤は、必要とする対象（すなわち癌に罹患している対象）への投与に適切な医薬組成物へと処方され得る。本明細書中で使用される場合、「医薬組成物」は、薬学的に許容可能な担体、賦形剤、滑沢剤、緩衝剤、抗菌剤、増量剤（例えばマンニトール）、抗酸化剤（例えばアスコルビン酸又は亜硫酸水素ナトリウム）などを含むが限定されない他の化学的成分との、本明細書中に記載のような１つ以上の薬剤（例えばＳＥＴＤ２阻害剤又は１つ以上の他の治療剤とのＳＥＴＤ２阻害剤）又は生理学的に許容可能なその塩若しくはプロドラッグの調製物を指す。医薬組成物の目的は、対象への薬剤の投与を促進することである。
【００９４】
「薬学的に許容可能な担体」、「賦形剤」及び「アジュバント」及び「生理学的に許容可能なビヒクル」などの用語は、本明細書中に記載のＳＥＴＤ２阻害剤と一緒に患者に投与され得、その薬理学的活性を破壊又は抑止しない許容可能な担体又はアジュバントを指すものとして理解されたい。本明細書中で使用されるとき、薬学的に許容可能な賦形剤としては、所望の特定の剤型に適切である場合、ありとあらゆる溶媒、分散媒又は他の液体ビヒクル、分散又は懸濁補助剤、希釈剤、造粒剤及び／又は分散剤、界面活性剤、等張剤、増粘剤又は乳化剤、保存剤、結合剤、滑沢剤又は油、着色料、甘味料又は香味剤、安定化剤、抗酸化剤、抗微生物剤又は抗真菌剤、浸透圧調整剤、ｐＨ調整剤、緩衝液、キレート剤、シオプロテクタント（ｃｙｏｐｒｏｔｅｃｔａｎｔ）及び／又は増量剤が挙げられるが限定されない。医薬組成物を処方するための様々な賦形剤及び本組成物を調製するための技術は当技術分野で周知である（Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｙ，２１ｓｔ  Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ａ．Ｒ．Ｇｅｎｎａｒｏ（Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ，Ｗｉｌｌｉａｍｓ  ＆  Ｗｉｌｋｉｎｓ，Ｂａｌｔｉｍｏｒｅ，ＭＤ，２００６；その全体において参照により本明細書中に組み込まれる）。
【００９５】
代表的な希釈剤としては、炭酸カルシウム又ナトリウム、リン酸カルシウム、リン酸水素カルシウム、リン酸ナトリウム、ラクトース、スクロース、セルロース、微結晶セルロース、カオリン、マンニトール、ソルビトールなど及び／又はそれらの組み合わせが挙げられるが限定されない。
【００９６】
代表的な造粒剤及び／又は分散剤としては、デンプン、アルファ化デンプン又は微結晶性デンプン、アルギン酸、グアーガム、寒天、ポリ（ビニル−ピロリドン）、（プロビドン）、架橋ポリ（ビニル−ピロリドン）（クロスポビドン）、セルロース、メチルセルロース、カルボキシメチルセルロース、架橋カルボキシメチルセルロースナトリウム（クロスカルメロース）、ケイ酸マグネシウムアルミニウム（ＶＥＥＧＵＭ（登録商標））、ラウリル硫酸ナトリウムなど及び／又はそれらの組み合わせが挙げられるが限定されない。
【００９７】
代表的な界面活性剤及び／又は乳化剤としては、天然の乳化剤（例えば、アカシア、寒天、アルギン酸、アルギン酸ナトリウム、トラガカント、コンドラクス（ｃｈｏｎｄｒｕｘ）、コレステロール、キサンタン、ペクチン、ゼラチン、卵黄、カゼイン、羊毛脂、コレステロール、ワックス及びレシチン）、ソルビタン脂肪酸エステル（例えばポリオキシエチレンソルビタンモノオレエート［ＴＷＥＥＮ（登録商標）８０］、ソルビタンモノパルミテート［ＳＰＡＮ（登録商標）４０］、グリセリルモノオレエート、ポリオキシエチレンエステル、ポリエチレングリコール脂肪酸エステル（例えばＣＲＥＭＯＰＨＯＲ（登録商標））、ポリオキシエチレンエーテル（例えばポリオキシエチレンラウリルエーテル［ＢＲＩＪ（登録商標）３０］）、ＰＬＵＯＲＩＮＣ（登録商標）Ｆ６８、ＰＯＬＯＸＡＭＥＲ（登録商標）１８８など及び／又はそれらの組み合わせが挙げられるが限定されない。
【００９８】
代表的な結合剤としては、デンプン、ゼラチン、糖（例えばスクロース、グルコース、デキストロース、デキストリン、モラセス、ラクトース、ラクチトール、マンニトール）、アミノ酸（例えばグリシン）、天然及び合成ゴム（例えばアカシア、アルギン酸ナトリウム）、エチルセルロース、ヒドロキシエチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロースなど及びそれらの組み合わせが挙げられるが限定されない。
【００９９】
代表的な抗酸化剤としては、アルファトコフェロール、アスコルビン酸、アコルビルパルミテート（ａｃｏｒｂｙｌ  ｐａｌｍｉｔａｔｅ）、ベンジルアルコール、ブチル化ヒドロキシアニソール、ｍ−クレゾール、メチオニン、ブチル化ヒドロキシトルエン、モノチオグリセロール、メタ重亜硫酸ナトリウム又はカリウム、プロピオン酸、没食子酸プロピル、アスコルビン酸ナトリウムなど及びそれらの組み合わせが挙げられるが限定されない。
【０１００】
代表的なキレート剤としては、エチレンジアミンテトラ酢酸（ＥＤＴＡ）、クエン酸一水和物、エデト酸二ナトリウム、フマル酸、リンゴ酸、リン酸、エデト酸ナトリウム、酒石酸、エデト酸三ナトリウムなど及びそれらの組み合わせが挙げられるが限定されない。
【０１０１】
代表的な抗菌又は抗真菌剤としては、塩化ベンザルコニウム、ベンゼトニウム塩化物、メチルパラベン、エチルパラベン、プロピルパラベン、ブチルパラベン、安息香酸、ヒドロキシ安息香酸、安息香酸カリウム又はナトリウム、ソルビン酸カリウム又はナトリウム、プロピオン酸ナトリウム、ソルビン酸など及びそれらの組み合わせが挙げられるが限定されない。
【０１０２】
代表的な保存剤としては、ビタミンＡ、ビタミンＣ、ビタミンＥ、ベータ−カロテン、クエン酸、アスコルビン酸、ブチル化ヒドロキシアニソール、エチレンジアミン、ラウリル硫酸ナトリウム（ＳＬＳ）、ラウリルエーテル硫酸ナトリウム（ＳＬＥＳ）など及びそれらの組み合わせが挙げられるが限定されない。
【０１０３】
ｐＨを調節するための代表的な緩衝液としては、リン酸ナトリウム、クエン酸ナトリウム、コハク酸ナトリウム、ヒスチジン（又はヒスチジン−ＨＣｌ）、リンゴ酸ナトリウム、炭酸ナトリウムなど及び／又はそれらの組み合わせが挙げられるが限定されない。
【０１０４】
代表的な滑沢剤としては、ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸カルシウム、ステアリン酸、シリカ、タルク、麦芽、水素添加植物油、ポリエチレングリコール、安息香酸ナトリウム、ラウリル硫酸ナトリウム又はマグネシウムなど及びそれらの組み合わせが挙げられるが限定されない。
【０１０５】
本明細書中に記載の医薬組成物又は処方物は、凍結中に本明細書中に記載のポリヌクレオチドを安定化するための凍結保護物質を含有し得る。代表的な凍結保護物質としては、マンニトール、スクロース、トレハロース、ラクトース、グリセロール、デキストロースなど及びそれらの組み合わせが挙げられるが限定されない。
【０１０６】
本開示のＳＥＴＤ２阻害剤の投与は、腫瘍細胞との究極的な接触に分子を導入するために通常使用される経路の何れかによるものである。ＳＥＴＤ２阻害剤を含む医薬組成物は、何らかの適切な方法、例えば非経口、脳室内、経口、局所、直腸、膣、鼻腔、頬側で、又は埋め込み型リザーバーを介して投与され得る。本明細書中で使用される場合、「非経口」という用語は、皮下、静脈内、筋肉内、関節内、滑膜内、胸骨内、くも膜下腔内、肝内、病巣内及び頭蓋内注射又は点滴技術を含む。
【０１０７】
非経口処方物は、単回ボーラス投与、点滴又はローディングボーラス投与とそれに続く維持投与であり得る。これらの組成物は、特定の固定又は変動間隔、例えば週に２回又は週に１回などで投与され得る。いくつかの実施形態において、ＳＥＴＤ２阻害剤は静脈内投与される。
【０１０８】
特定の実施形態において、本医薬組成物は、例えばカプセル、錠剤、水性懸濁液又は溶液を含む許容可能な剤型で経口投与され得る。特定の実施形態において、本医薬組成物は、鼻腔エアロゾル又は吸入によっても投与され得る。このような組成物は、生理食塩水中の溶液として、ベンジルアルコール又は他の適切な保存剤、バイオアベイラビリティを促進するための吸収促進剤及び／又は他の従来からの可溶化又は分散剤を使用して調製され得る。
【０１０９】
当業者は、何らかの特定の患者に対する具体的な投与量及び治療レジメンが、使用される特定の治療剤、患者の年齢、体重、総体的健康状態、性別及び食餌及び投与時間、排泄率、薬物の組み合わせ及び処置されている特定の疾患の重症度を含む様々な要因に依存することを認める。医療従事者によるこのような要因の判断は、当技術分野の通常の技術内である。この量は、処置しようとする個々の患者、投与経路、処方タイプ、使用される化合物の特徴、疾患の重症度及び所望の効果にも依存する。使用される量は、当技術分野で周知の薬理学的及び薬物動態学的な原理により決定され得る。
【０１１０】
いくつかの実施形態において、本明細書中で記載のようなＳＥＴＤ２阻害剤は、１つ以上のさらなる治療剤及び／又は治療手順と組み合わせて投与される。いくつかの実施形態において、本明細書中で記載のようなＳＥＴＤ２阻害剤は、１つ以上のさらなる治療剤と同時処方され得る、及び／又は同時投与され得る。いくつかの実施形態において、本明細書中に記載の方法は、少なくとも１つのさらなる治療剤を対象に投与することをさらに含む。
【０１１１】
癌を処置する方法
一態様において、本開示は、癌を処置するか又はその進行を遅延させることを必要とする対象に、上記のものなど、治療的有効量のＳＥＴＤ２阻害剤を投与することによって、対象おいて癌を処置するか又はその進行を遅延させる方法を提供する。
【０１１２】
開示される方法及び医薬組成物によって多くのタイプの癌を処置し得る。いくつかの実施形態において、癌は、副腎癌、腺房細胞癌、聴神経腫、末端黒子型メラノーマ、先端汗腺腫、腺癌、腺様嚢胞癌、腺腫、腺腫様歯原性腫瘍、腺扁平上皮癌、脂肪組織新生物、副腎皮質癌、ＡＩＤＳ関連リンパ腫、胞巣状横紋筋肉腫、胞状軟部肉腫、エナメル上皮線維腫、未分化大細胞リンパ腫、未分化甲状腺癌、血管筋脂肪腫、血管肉腫、星状細胞腫、非定型奇形腫様ラブドイド腫瘍、基底細胞癌、胆道癌、膀胱癌、芽細胞腫、骨癌、乳癌、脳癌、癌腫、上皮内の癌腫、癌肉腫、軟骨腫瘍、セメント質腫、骨髄肉腫、軟骨腫、脊索腫、絨毛癌、脈絡叢乳頭腫、腎臓の明細胞肉腫、頭蓋咽頭腫、皮膚Ｔ細胞リンパ腫、子宮頸癌、結直腸癌、デゴス病、線維形成性小円形細胞腫瘍、胚芽異形成性神経上皮腫瘍、未分化胚細胞腫、胚性癌腫、内分泌腺新生物、卵黄嚢腫瘍、食道癌、線維肉腫、濾胞性リンパ腫、濾胞性甲状腺癌、神経節腫、胃腸癌、生殖細胞腫瘍、妊娠性絨毛癌、巨細胞線維芽細胞種、骨の巨細胞腫瘍、グリア腫瘍、神経膠芽腫、神経膠腫、大脳神経膠腫症、グルカゴン産生腫瘍、性腺芽腫、顆粒膜細胞腫瘍、ギナンドロブラストーマ、胆嚢癌、胃癌、血管芽細胞腫、頭頸部癌、血管外皮腫、肝芽細胞腫、肝細胞癌、肝脾Ｔ細胞リンパ腫、浸潤性小葉癌、腸癌、腎臓癌、喉頭癌、悪性黒子、致死性正中癌、白血病、ライディッヒ細胞腫瘍、脂肪肉腫、肺癌、リンパ管腫、リンパ血管肉腫、リンパ上皮腫、肝臓癌、小細胞肺癌、非小細胞肺癌、悪性線維性組織球腫、悪性末梢神経鞘腫瘍、悪性トリトン腫瘍、縦隔生殖細胞腫瘍、乳房の髄質癌、髄質甲状腺癌、髄芽腫、メラノーマ、髄膜腫、メルケル細胞癌、中皮腫、転移性尿路上皮癌、ミュラー管混合腫瘍、粘液性腫瘍、筋肉組織新生物、菌状息肉腫、粘液性脂肪肉腫、粘液腫、粘液肉腫、上咽頭癌、神経鞘腫、神経芽細胞腫、神経線維腫、神経腫、結節状メラノーマ、眼の癌、乏突起星細胞腫、乏突起膠腫、オンコサイトーマ、視神経鞘髄膜腫、視神経腫瘍、口腔癌、骨肉腫、卵巣癌、乳頭状甲状腺癌、傍神経節腫、松果体芽細胞腫、松果体細胞腫、下垂体細胞腫、下垂体腺腫、下垂体腫瘍、形質細胞腫、多胚腫、原発性中枢神経系リンパ腫、原発性滲出性リンパ腫、原発性腹膜癌、前立腺癌、膵臓癌、咽頭癌、腹膜偽粘液腫、腎臓細胞癌、腎臓髄質癌、網膜芽細胞腫、横紋筋腫、横紋筋肉腫、直腸癌、肉腫、神経鞘腫症、セミノーマ、セルトリ細胞腫瘍、性索性腺間質腫瘍、皮膚癌、小細胞癌、軟組織肉腫、ソマトスタチン産生腫瘍、脊椎腫瘍、扁平上皮癌、滑膜肉腫、小腸癌、扁平上皮癌、胃癌、精巣腫瘍、甲状腺癌、移行細胞癌、咽喉癌、尿膜管癌、泌尿生殖器癌、尿路上皮癌、ぶどう膜メラノーマ、子宮癌、疣状癌、視覚路神経膠腫、外陰癌、膣癌、ワルチン腫瘍、ウィルムス腫瘍、頭頸部の扁平上皮癌、食道の腺癌扁平上皮癌（ａｄｅｎｏｃａｒｃｉｎｏｍａ  ｓｑｕａｍｏｕｓ  ｃｅｌｌ  ｃａｒｃｉｎｏｍａ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｅｓｏｐｈａｇｕｓ）、胃の腺癌、結腸の腺癌、肝細胞癌、胆道系の胆管細胞癌、胆嚢の腺癌、膵臓の腺癌、乳房の乳管内上皮内癌、乳房の腺癌、肺の腺癌、肺の扁平上皮癌、膀胱の移行細胞癌、膀胱の扁平上皮癌、子宮頸部の扁平上皮癌、子宮頸部の腺癌、子宮内膜癌、陰茎扁平上皮癌及び皮膚の扁平上皮癌からなる群から選択される。
【０１１３】
いくつかの実施形態において、癌は、食道癌、腎臓癌、胃癌、肝細胞癌、神経膠芽腫、中枢神経系（ＣＮＳ）癌、軟組織癌、肺癌、乳癌、膀胱／尿路癌、頭頸部癌、前立腺癌、血液癌、膵臓癌、皮膚癌、子宮内膜癌、卵巣癌又は結直腸癌である。
【０１１４】
いくつかの実施形態において、癌は膵臓癌である。いくつかの実施形態において、癌は食道癌である。
【０１１５】
いくつかの実施形態において、癌は、急性リンパ性白血病（ＡＬＬ）、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）、小リンパ性リンパ腫（ＳＬＬ）、多発性骨髄腫（ＭＭ）、ホジキンリンパ腫（ＨＬ）、非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）、マントル細胞リンパ腫（ＭＣＬ）、辺縁帯Ｂ細胞リンパ腫、脾臓辺縁帯リンパ腫、濾胞性リンパ腫（ＦＬ）、ワルデンストレームマクログロブリン血症（ＷＭ）、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫（ＤＬＢＣＬ）、辺縁帯リンパ腫（ＭＺＬ）、ヘアリー細胞白血病（ＨＣＬ）、バーキットリンパ腫（ＢＬ）、リヒター形質転換、急性好酸球性白血病、急性赤血球白血病、急性リンパ芽球性白血病、急性巨核芽球白血病、急性単球性白血病、急性前骨髄球性白血病、急性骨髄性白血病、Ｂ細胞前リンパ性白血病、Ｂ細胞リンパ腫、ＭＡＬＴリンパ腫、前駆体Ｔリンパ芽球性リンパ腫、Ｔ細胞リンパ腫、肥満細胞白血病、成人Ｔ細胞白血病／リンパ腫、アグレッシブＮＫ細胞白血病及び血管免疫芽細胞性Ｔ細胞リンパ腫からなる群から選択される血液癌である。
【０１１６】
いくつかの実施形態において、血液癌は、急性リンパ性白血病（ＡＬＬ）、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）、小リンパ性リンパ腫（ＳＬＬ）、多発性骨髄腫（ＭＭ）、非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）、マントル細胞リンパ腫（ＭＣＬ）、濾胞性リンパ腫（ＦＬ）、ワルデンストレームマクログロブリン血症（ＷＭ）、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫（ＤＬＢＣＬ）、節外性及び結節性ＭＺＬを含む辺縁帯リンパ腫（ＭＺＬ）、ヘアリー細胞白血病（ＨＣＬ）、バーキットリンパ腫（ＢＬ）及びリヒター形質転換からなる群から選択される。
【０１１７】
いくつかの実施形態において、癌は、従来の化学療法に対して難治性である。
【０１１８】
いくつかの実施形態において、癌は再発している。
【０１１９】
本明細書中に記載の方法において使用されるＳＥＴＤ２阻害剤（単独又は１つ以上のさらなる治療剤又は治療手順と併用）は、当業者により決定されるような何らかの順序又は何らかの間隔で投与され得る。
【０１２０】
いくつかの実施形態において、本明細書中に記載の方法による処置は、不確定に（すなわち維持療法として）続き得る。いくつかの実施形態において、本明細書中に記載の方法による処置は、最長で約１８週間、最長で約１７週間、最長で約１６週間、最長で約１５週間、最長で約１４週間、最長で約１３週間又は最長で約１２週間続き得る。いくつかの実施形態において、処置は約１２週間続き得る。いくつかの実施形態において、本明細書中に記載の方法による処置は、約１週間〜約５２週間、約１週間〜約２６週間、約１週間〜約１２週間、約１週間〜約６週間、約６週間〜約５２週間、約６週間〜約２６週間又は約１２週間〜約５２週間続き得る。いくつかの実施形態において、本明細書中に記載の方法による処置は５２週間を超えて続き得る。
【０１２１】
本発明は、さらなる限定として解釈されるべきではない次の例によってさらに例示される。本願を通じて引用される全ての特許及び非特許参考文献の内容はそれらの全体において参照により本明細書中に明確に組み込まれる。
【実施例】
【０１２２】
実施例１
膵管腺癌（ＰＤＡＣ）細胞株は増殖についてＳＥＴＤ２に依存する
ＣＲＩＳＰＲプールスクリーニング。２４９種類の癌細胞株及び非形質転換ＭＣＦ１０Ａ細胞株（対照）に、ヒトＳＥＴＤ２を含む異なる遺伝子を標的とするＣＲＩＳＰＲ−ｓｇＲＮＡのライブラリを含有するプールしたレンチウイルスを感染させた。細胞株は、ＡＴＣＣ、ＤＳＭＺ又はＪＣＲＢ細胞バンクから得た。図１Ａ及び１Ｂにおけるグラフ上の各バーは細胞株を表す。グラフのＹ軸上のＬｏｇＰスコアは集団からの特定の標的の枯渇を表す。したがって、ＬｏｇＰスコアは、特定の遺伝子への各細胞株の依存性を示す。この場合、ＬｏｇＰスコアが−２．５を下回る各細胞株は生存についてＳＥＴＤ２に依存した。全ての細胞株及びそれらの平均ＬｏｇＰ及び中央値倍率変化値を表１で与える。
【０１２３】
図１Ａは、試験した全ての２５０種類の細胞株に対するプロットを示す。図１Ｂは、膵管腺癌（ＰＤＡＣ）由来の細胞株に対するプロットを示す。注目すべきことに、図１Ｂは、いくつかの膵臓癌細胞株がＳＥＴＤ２遺伝子の枯渇に著しく高い感受性を有したことを示す。
【０１２４】
膵臓癌由来の細胞株がＳＥＴＤ２枯渇に対して感受性であったことを明らかにすることに加えて、図１Ａは、ＳＥＴＤ２枯渇に対する感受性を示すさらなる癌細胞株に、乳房、食道、腎臓、肺、胃、膀胱／尿路、子宮内膜、皮膚、造血系（ＤＬＢＣＬ及びＡＭＬ）、軟組織、ＣＮＳ及び卵巣細胞株が含まれたことを示す。
【０１２５】
【表１】
2020530844.tif 000005
【０１２６】
【表２】
2020530844.tif 000006
【０１２７】
【表３】
2020530844.tif 000007
【０１２８】
【表４】
2020530844.tif 000008
【０１２９】
【表５】
2020530844.tif 000009
【０１３０】
【表６】
2020530844.tif 000010
【０１３１】
ＣＲＩＳＰＲプールスクリーニングの検証。ＳＵ８６８６は、膵管腺癌由来の細胞株である。ＳＥＴＤ２の２つの部位を標的とする二重ｓｇＲＮＡを含有するＣＲＩＳＰＲウイルスを細胞株に感染させた。自動化細胞カウントにより細胞株の増殖を経時的に測定した。図２Ｂで示されるように、ＳＥＴＤ２の活性部位を標的とする２つのｓｇＲＮＡの一方又は両方が含まれたｓｇＲＮＡの組み合わせが、この膵臓癌細胞株の増殖に対して劇的な効果を有することが分かった。対照的に、陰性対照、ＳＭＡＲＣＡ２を標的としたｓｇＲＮＡは増殖に対して影響がなかった。
【０１３２】
次に、図２Ｃ及び２Ｄで示されるｓｇＲＮＡ切断部位の次世代シーケンシング（ＮＧＳ）を使用して、図２Ｂにおける増殖データを確認した。図２Ｃ及び２Ｄの棒グラフは、経時的に感染を生き延びた細胞の遺伝子型を示す。
【数３】
2020530844.tif 000011
格子模様で塗られた棒は野生型（非切断）アレルのパーセンテージを示し；白色の棒はインフレーム挿入及び欠失（おそらく非不活性化）を示し；
【数４】
2020530844.tif 000012
斜線模様で塗られた棒はアウト・オブ・フレーム挿入及び欠失（非不活性化）を示す。図２Ｃで示されるように、ＳＥＴＤ２  ｓｇＲＮＡ感染細胞において、アレルの野生型（非切断）集団は経時的に増加し、このことから、機能的ＳＥＴＤ２を有する細胞は、生存に関して非機能的ＳＥＴＤ２を有する細胞に勝る長所を有することが示される。対照的に、図２Ｄから、ＳＭＡＲＣＡ２  ｓｇＲＮＡと関連する遺伝子型は経時的に一定のままであることが示され、このことからＳＭＡＲＣＡ２活性はＳＵ８６８６生存能及び成長に必要とされないことが示唆される。
【０１３３】
結論として、図２Ｂ〜Ｄから、ＰＤＡＣ細胞株、ＳＵ８６８６が、二重ｓｇＲＮＡアッセイに基づき、増殖についてＳＥＴＤ２に依存することが示される。
【０１３４】
ＣＲＩＳＰＲドメインプールスクリーニングによりＳＥＴドメインが同定される。このスクリーニングは、ＳＥＴＤ２遺伝子の全長を標的とするｓｇＲＮＡを利用した（図３Ａで示される）。コードされるタンパク質の機能に重要であるドメインは、タンパク質の他の領域よりも高い率で枯渇させられる。これは、機能的ドメインが突然変異に対して他の領域よりも耐性がかなり低いという事実ゆえである。図３Ｂで示されるように、ＯＥ２１食道細胞株のＣＲＩＳＰＲドメインスクリーニングは、ＳＥＴドメイン及びＳＥＴＤ２の「ＳＥＴと関連する」（ＡＷＳ）ドメインからの非常に強い枯渇シグナルを示し（図３Ａで示される）、このことから、例えば低分子阻害剤でのＳＥＴＤ２のＳＥＴドメイン／活性部位の標的化の結果、この細胞株で成長表現型（すなわち増殖減弱）が生じることが示される。
【０１３５】
二重アッセイ標的検証のまとめ。標的検証試験のまとめを図４の表で提供する。選択した細胞株に対するＣＲＩＳＰＲプールスクリーニングの結果は、「Ｅｐｉプールカラム」で示す。ドメイン特異的なＣＲＩＳＰＲプールスクリーニングの結果は「Ｅｐｉｄｏｍａｉｎプールカラム」で示す。これらの結果から、効果に対してＳＥＴＤ２のＳＥＴドメインが必要とされることが示される。二重ｓｇＲＮＡ  ＣＲＩＳＰＲアッセイ（図２Ｂ）及びＮＧＳ確認による細胞株におけるＣＲＩＳＰＲプールスクリーニングの結果の検証（図２Ｃ及び図２Ｄで示されるように）は、図４の「増殖」及び「ＮＧＳ」カラムで示される。
【数５】
2020530844.tif 000013
斜線模様でマークされるボックスは感受性が高く；灰色のボックスは非感受性であり；
【数６】
2020530844.tif 000014
格子模様としてマークされるボックスは不確定の結果を示し；白色のボックスはデータが利用不可であることを示す。
【０１３６】
結論：二重シグナルＲＮＡ（ｓｇＲＮＡ）アッセイに基づき、膵臓癌細胞株、ＳＵ８６８６並びにいくつかの他の癌由来細胞株、例えば乳房、卵巣、肺、胃、腎臓、食道、膀胱、ＣＮＳ、軟組織及び皮膚由来のものなどは、それらの生存能及び成長についてＳＥＴＤ２活性及び特にＳＥＴドメインに依存する。したがって、（すなわちアルキル−シネファンギンなどの低分子阻害剤で）ヒストンメチルトランスフェラーゼＳＥＴＤ２を阻害することは、多くの癌及び特に膵臓癌の処置に対して広範囲にわたる影響がある。
【０１３７】
本発明は、特定の機能及びその関係の実行を例示する機能的な構成要素を活用し、以上で記載してきた。これらの機能的な構成要素の境界は、その記載の便宜のために本明細書中で任意に定められている。特定の機能及びその関係が適切に実施される限り、代替境界（ａｌｔｅｒｎａｔｅ  ｂｏｕｎｄａｒｉｅｓ）も画定し得る。
【０１３８】
具体的な実施形態の前述の記載は、他者が当技術分野の技術内の知識を適用することにより、不要な実験なく、本発明の全般的な概念から逸脱することなく、様々な適用に対して、このような具体的な実施形態を容易に改変及び／又は適応させ得るように、本発明の全般的性質を完全に明らかにする。したがって、このような適応及び改変は、本明細書中で提示される教示及び助言に基づいて、開示される実施形態の同等物の意味及び範囲内であるものとする。本願の用語法又は用語が教示及び助言に照らして熟練者により解釈されるべきように、本明細書中の用語又は用語法が説明目的であり、限定ではないことを理解されたい。
【０１３９】
本願で言及される全ての特許及び刊行物は、本開示が属する当業者のレベルを示す。全ての特許及び刊行物は、各個々の刊行物が参照により組み込まれることが具体的に及び個々に示されるかのようなものと同程度まで参照により本明細書中に組み込まれる。
【図１Ａ】
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【図１Ｂ】
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【図２Ａ−２Ｂ】
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【図２Ｃ−２Ｄ】
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【図３Ａ】
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【図３Ｂ】
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【図４】
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【国際調査報告】
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