(57)【要約】  連続水相および分散油滴を有する水中油型ナノエマルジョン組成物である。当該ナノエマルジョン組成物は、（ａ）クロベタゾールと；（ｂ）１種以上の油成分と；（ｃ）１種以上の界面活性剤とを、１種以上の薬学的に許容される賦形剤または担体と共に含んでなる。ナノエマルジョンの重量オスモル濃度が１００ｍＯｓｍ／Ｋｇ〜５００ｍＯｓｍ／Ｋｇで構成され、動的光散乱によって測定される液滴アベレージサイズが１ｎｍ〜５００ｎｍで構成され、油成分と、油成分および１種以上の界面活性剤の和との間の重量比が０．００１〜０．５で構成され、油成分とクロベタゾールとの間の重量比が１：１〜２００：１で構成され、界面活性剤とクロベタゾールとの間の重量比が２：１〜２００：１で構成される。本願はまた、当該ナノエマルジョン組成物の調製方法、医薬品としての使用、並びに、炎症性の疾患または状態の予防および／または治療における使用にも関する。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
連続水相および分散油滴を有する水中油型ナノエマルジョン組成物であって、
当該ナノエマルジョン組成物は、
（ａ）治療上有効量のクロベタゾールまたはその薬学的に許容される塩もしくはエステルと；
（ｂ）１種または複数種の油成分と；
（ｃ）１種または複数種の界面活性剤と；
を、１種または複数種の薬学的に許容される賦形剤または担体と共に、
含んでなり、
当該ナノエマルジョン組成物のオスモル濃度が１００ｍＯｓｍ／Ｋｇ〜５００ｍＯｓｍ／Ｋｇで構成され、
液滴アベレージサイズが動的光散乱によって測定される１ｎｍ〜５００ｎｍで構成され、
前記油成分と、該油成分と１種または複数種の界面活性剤の和との間の重量比が０．００１〜０．５で構成され、
前記油成分と、クロベタゾールまたはその薬学的に許容される塩もしくはエステルとの間の重量比が１：１〜２００：１で構成され；
前記界面活性剤と、クロベタゾールまたはその薬学的に許容される塩もしくはエステルとの間の重量比が２：１〜２００：１で構成される、
ことを特徴とする水中油型ナノエマルジョン組成物。
【請求項２】
０．００１重量％〜０．１重量％のプロピオン酸クロベタゾールを含む、請求項１に記載の水中油型ナノエマルジョン組成物。
【請求項３】
ｐＨが４．０〜８．０で構成される、請求項１又は２に記載の水中油型ナノエマルジョン組成物。
【請求項４】
前記油成分と、該油成分と１種または複数種の界面活性剤の和との間の重量比が０．００１〜０．４で構成される、請求項１〜３のいずれか一項に記載の水中油型ナノエマルジョン組成物。
【請求項５】
前記油成分と、クロベタゾールまたはその薬学的に許容される塩もしくはエステルとの間の重量比が１：１〜１００：１で構成される、請求項１〜４のいずれか一項に記載の水中油型ナノエマルジョン組成物。
【請求項６】
前記界面活性剤と、クロベタゾールまたはその薬学的に許容される塩もしくはエステルとの間の重量比が２：１〜１９０：１で構成される、請求項１〜５のいずれか一項に記載の水中油型ナノエマルジョン組成物。
【請求項７】
当該ナノエマルジョン組成物中のエタノールの量が０重量％〜３重量％で構成される、請求項１〜６のいずれか一項に記載の水中油型ナノエマルジョン組成物。
【請求項８】
前記油成分が、ヒマシ油；モノステアリン酸グリセリル；オレイン酸エチル；オレイン酸デシル；ミリスチン酸イソプロピル；パルミチン酸イソプロピル；イソステアリン酸イソプロピル；イソステアリン酸イソステアリル；乳酸ミリスチル；鉱油；軽鉱油；植物油；グリセリンと（Ｃ６〜Ｃ１２）脂肪アルキルのモノエステル，ジエステルまたはトリエステル；およびこれらの混合物からなる群から選択される、
請求項１〜７のいずれか一項に記載の水中油型ナノエマルジョン組成物。
【請求項９】
前記界面活性剤が、ソルビタンエステルエトキシレート誘導体、ソルビタンエステル誘導体、ポリ（エチレンオキシド）−ポリ（プロピレンオキシド）コポリマー、ポリオキシル３５ヒマシ油、ポリオキシル４０硬化ヒマシ油、ポリオキシル４０ステアレート、オクトキシノール４０、Ｄ−α−トコフェロールポリエチレングリコール１０００スクシネート（ＴＰＧＳ）およびこれらの混合物からなる群から選択される非イオン性界面活性剤である、請求項１〜８のいずれか一項に記載の水中油型ナノエマルジョン組成物。
【請求項１０】
ｐＨ調整剤をさらに含んでなり、当該ｐＨ調整剤は、
酢酸、ホウ酸、ソルビン酸、クエン酸、リン酸ナトリウム、第二リン酸ナトリウム、第一リン酸ナトリウム、リン酸二水素カリウム、塩酸、水酸化ナトリウム、チオ硫酸ナトリウム、亜硫酸ナトリウム、硫酸ナトリウム、トリス（ヒドロキシメチル）アミノメタン、トリス（ヒドロキシメチル）アミノメタン塩酸塩、炭酸水素ナトリウム、ホウ酸ナトリウム、酢酸ナトリウム、重硫酸ナトリウム、安息香酸ナトリウム、クエン酸ナトリウムおよびこれらの混合物からなる群から選択される、
請求項１〜９のいずれか一項に記載の水中油型ナノエマルジョン組成物。
【請求項１１】
等張化剤をさらに含んでなり、当該等張化剤は、
塩化ナトリウム、グリセリン、グルコース、マンニトール、ソルビトール、プロピレングリコールおよびこれらの混合物からなる群から選択される、
請求項１〜１０のいずれか一項に記載の水中油型ナノエマルジョン組成物。
【請求項１２】
眼科用組成物、鼻用組成物、耳用組成物または頬側組成物の形態である、請求項１〜１１のいずれか一項に記載の水中油型ナノエマルジョン組成物。
【請求項１３】
請求項１〜１２のいずれか一項に記載の水中油型ナノエマルジョン組成物を調製する方法であって、当該方法は、
（ａ）  クロベタゾールを油成分および界面活性剤と混合することによって、油相を調製するステップと；
（ｂ）  水相を調製するステップと；
（ｃ）  ステップ（ｂ）で得られた水相にステップ（ａ）で得られた油相を乳化するステップと；
（ｄ）  オプションとして、ステップ（ａ）、ステップ（ｂ）またはステップ（ｃ）の後で、ｐＨ；オスモル濃度；またはｐＨ及びオスモル濃度を調整するステップと；
（ｅ）  オプションとして、ステップ（ａ）、ステップ（ｂ）またはステップ（ｃ）において、１種または複数種の薬学的に許容される追加の賦形剤または担体を添加するステップと；
を含んでなる、ことを特徴とする方法。
【請求項１４】
医薬品として使用するための、請求項１〜１２のいずれか一項に記載の水中油型ナノエマルジョン組成物。
【請求項１５】
炎症性の疾患または状態の予防および／または治療に使用するための、請求項１〜１２のいずれか一項に記載の水中油型ナノエマルジョン組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、薬学の分野に関する。特に、本発明は、クロベタゾールを含有する組成物に関する。より具体的には、本発明は、クロベタゾールの水中油(oil-in-water)型ナノエマルジョン組成物、その調製方法、ならびに医薬品としての使用、特に炎症性疾患または状態の予防および／または治療におけるその使用に関する。
【背景技術】
【０００２】
プロピオン酸クロベタゾールは、ＣＡＳ番号２５１２２−４６−７を有する［１７−（２−クロロアセチル）−９−フルオロ−１１−ヒドロキシ−１０，１３，１６−トリメチル−３−オキソ−６，７，８，１１，１２，１４，１５，１６−オクタヒドロシクロペンタ［ａ］フェナントレン−１７−イル］プロパノエートの国際一般名（ＩＮＮ）である。プロピオン酸クロベタゾールの構造は、式（Ｉ）に対応する：
【０００３】
【化１】
2020524672.tif 000002
【０００４】
プロピオン酸クロベタゾールは、種々の炎症性疾患の治療に使用されるグルココルチコイドクラスのコルチコステロイドである。
【０００５】
一方では、プロピオン酸クロベタゾールは、湿疹、口唇ヘルペス、乾癬および硬化性苔癬を含む皮膚障害の治療に使用されている。これはまた、円形脱毛症、白斑、扁平苔癬（自己免疫性皮膚結節）および菌状息肉症（Ｔ細胞皮膚リンパ腫）を含むいくつかの自己免疫疾患を治療するのにも使用されている。これは非常に高い効力を有し、典型的には、密封包帯で使用すべきでなく、また長時間連続使用すべきでない。これはシャンプー、ムース、軟膏およびエモリエントクリームの体裁などの局所製剤の形態であり得る。
【０００６】
他方では、プロピオン酸クロベタゾールが、強力な抗炎症作用を示すので、種々の眼疾患、例えば、外部および前部の眼部位の炎症性疾患、例えば眼瞼炎、結膜炎、角膜炎、強膜炎、上強膜炎、虹彩炎、虹彩毛様体炎およびブドウ膜炎、ならびに眼手術後に発症する炎症性疾患を治療するための点眼薬の形態で有用であることも開示されている。
【０００７】
しかしながら、プロピオン酸クロベタゾールの水への溶解度が低いため、プロピオン酸クロベタゾールを含有する安定した組成物を、その薬物動態および薬力学特性を損なうことなく調製することは困難である。
【０００８】
プロピオン酸クロベタゾールの製剤を得るこのような困難さにもかかわらず、先行技術ではプロピオン酸クロベタゾールを含有するいくつかの製剤がある。特に、特許文献１は、眼に滴下注入するための液体パラフィン油およびリン脂質を含むプロピオン酸クロベタゾールの水中油型エマルジョンを開示している。エマルジョンは、製剤の粘度に起因する霧視または患者のコンプライアンスの欠如としての眼投与に関する制限を十分に認識している。特に、これらのエマルジョンは限られた生物学的利用能および透過性を有する。したがって、眼へのエマルジョンの局所投与後の眼の生物学的利用能は、依然として十分に解決されていない課題のままである。
【０００９】
さらに、眼組成物についての追加の制約はその滅菌である。クロベタゾールの安定性に影響を及ぼし得る熱または放射線処置を伴う眼組成物を滅菌するためのいくつかの技術が先行技術で開示されている。特に、特許文献１に開示されている組成物は、クロベタゾールのような極めて感受性の高い分子についてさらに、原薬の安定性を損なうおそれがある有効成分の均一な分布を得るための複雑な製造工程を必要とする。
【００１０】
その上、特許文献２は、乾癬を治療するためのプロピオン酸クロベタゾールの局所水中油型ナノエマルジョンを開示しており、該組成物は多量のアルコール、油成分および界面活性剤を含む。この特許出願に開示される組成物は、これらの投与経路にとって高い割合の溶媒または不適切な成分のために、眼または粘膜における不適切な耐容性の課題を依然として抱えている。さらに、このような組成物を得る方法は、薬物の安定性挙動を損なう高エネルギー方法を必要とする。最後に、特許文献２は、組成物からの有効成分の放出については言及しておらず、関連する活性は実証されていない。
【００１１】
したがって、当技術分野で知られていることから、適切な薬物動態特性および薬力学特性ならびにその施用後の適切な耐容性を有するプロピオン酸クロベタゾールを含有する安定な組成物を見つける余地がある。
【先行技術文献】
【特許文献】
【００１２】
【特許文献１】欧州特許第０８４４００１号明細書
【特許文献２】国際公開ＷＯ２０１７０３７６６３号公報
【発明の概要】
【００１３】
発明者らは、施用後に良好な感触が得られ、また炎症性疾患または状態を予防および／または治療するための適切な薬物動態特性および薬力学的特性も得られる、クロベタゾールを含有し、低含有量の油成分および界面活性剤ならびに有効成分の量に対する油成分または界面活性剤の特定の重量比および油成分と界面活性剤の和に対する油の量の特定の重量比を有する安定な水中油型ナノエマルジョン組成物を見出した。
【００１４】
一方では、本発明のナノエマルジョン組成物は、良好な安定性、有効成分または最終組成物の良好な安定性さえも有する。他方では、本発明のナノエマルジョン組成物はまた、クロベタゾールの不当な分布に関連する副作用が少なく、治療領域への有効量のクロベタゾールの良好な放出および吸収を可能にする。そして最後に、本発明のナノエマルジョンは、投与後も快適な感触および耐容性を有する。
【００１５】
したがって、本発明の第１の態様は、連続水相および分散油滴を有する水中油型ナノエマルジョン組成物であって、該ナノエマルジョンが、（ａ）治療上有効量のクロベタゾールまたはその薬学的に許容される塩もしくはエステルと；（ｂ）１種または複数の油成分と；（ｃ）１種または複数の界面活性剤とを、１種または複数の薬学的に許容される賦形剤または担体と共に含み、ナノエマルジョン組成物の重量オスモル濃度が１００ｍＯｓｍ／Ｋｇ〜５００ｍＯｓｍ／Ｋｇで構成され；動的光散乱によって測定される液滴アベレージサイズが１ｎｍ〜５００ｎｍで構成され；油成分と、油成分と１種または複数の界面活性剤の和との間の重量比が０．００１〜０．５で構成され；油成分とクロベタゾールまたはその薬学的に許容される塩もしくはエステルとの間の重量比が１：１〜２００：１で構成され；界面活性剤とクロベタゾールまたはその薬学的に許容される塩もしくはエステルとの間の重量比が２：１〜２００：１で構成される、水中油型ナノエマルジョン組成物に関する。
【００１６】
本発明の第２の態様は、（ａ）クロベタゾールを油成分および界面活性剤と混合することによって、油相を調製するステップと；（ｂ）水相を調製するステップと；（ｃ）ステップ（ｂ）で得られた水相でステップ（ａ）で得られた油相を乳化するステップと；（ｄ）場合により、ステップ（ａ）、ステップ（ｂ）またはステップ（ｃ）の後でｐＨ；重量オスモル濃度；ｐＨと重量オスモル濃度を調整するステップと；（ｅ）場合により、ステップ（ａ）、ステップ（ｂ）またはステップ（ｃ）で１種または複数の追加の薬学的に許容される賦形剤または担体を添加するステップとを含む、本発明の第１の態様で定義される水中油型ナノエマルジョン組成物を調製する方法に関する。
【００１７】
本発明の第３の態様は、医薬品として使用するための、本発明の第１の態様で定義される水中油型ナノエマルジョン組成物に関する。
【００１８】
また、本発明の第４の態様は、炎症性疾患または状態の予防および／または治療に使用するための、本発明の第１の態様で定義される水中油型ナノエマルジョン組成物に関する。
【図面の簡単な説明】
【００１９】
【図１】本発明の組成物１１（Ａ）および本発明の範囲外の比較組成物３４（Ｂ）のＨＥＴ−Ｃａｍ眼刺激アッセイを実施した後に得られた画像である。画像は、アッセイの初期時間（１）およびアッセイの終了時（２）（５分）に作成された。
【発明を実施するための形態】
【００２０】
本出願において本明細書で使用される全ての用語は、特に明記しない限り、当技術分野で知られている通常の意味で理解されるものとする。本出願で使用される一定の用語についての他のより具体的な定義は以下に示される通りであり、特に明示的に示される定義がより広い定義を提供しない限り、明細書および特許請求の範囲全体にわたって均一に適用されることを意図している。
【００２１】
本発明の目的のために、与えられる範囲は、範囲の下限と上限両方の終点を含む。
【００２２】
本出願において本明細書で使用される「クロベタゾール」という用語は、式（ＩＩ）の化合物を指す。
【００２３】
【化２】
2020524672.tif 000003
【００２４】
クロベタゾールは、塩の形態またはエステルの形態であり得る。特に、クロベタゾールは、上に定義される式（Ｉ）の化合物に対応するそのプロピオン酸エステルの形態であり得る。
【００２５】
「ナノエマルジョン」という用語は、一方の相が１ｎｍ〜５００ｎｍの動的光散乱によって測定されるアベレージサイズを有する液滴として他方の相に分散している、少なくとも２つの非混和性相を含むコロイド分散系を指す。
【００２６】
「アベレージサイズ（ａｖｅｒａｇｅ  ｓｉｚｅ）」および「ミーンサイズ（ｍｅａｎ  ｓｉｚｅ）」という用語は同じ意味を有し、互換的に使用される。これらは、液滴の平均直径を指す。これらの系のアベレージサイズは、当業者に知られている標準的な方法によって測定することができます。「アベレージサイズ」および「ミーンサイズ」とは、数がＤ（ｎ、５０）液滴アベレージサイズと理解される。Ｄ（ｎ、５０）液滴アベレージサイズは、液滴の５０％が規定値より大きい液滴で構成され、液滴の５０％が規定値より小さい液滴で構成される中位径である。本発明では、液滴のアベレージサイズの測定を、動的光散乱（ＤＬＳ）によって実施した。ＤＬＳは、異なる強度で光を散乱させるコロイドの２つの一般的な特性、チンダル効果（散乱）とブラウン運動を利用する。時間の分析は、数学的モデルを使用した強度変動に依存し、アベレージサイズの決定を可能する（Ｈａｓｓａｎ，Ｐ．ら「Ｍａｋｉｎｇ  ｓｅｎｓｅ  ｏｆ  Ｂｒｏｗｎｉａｎ  ｍｏｔｉｏｎ：ｃｏｌｌｏｉｄ  ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ  ｂｙ  ｄｙｎａｍｉｃ  ｌｉｇｈｔ  ｓｃａｔｔｅｒｉｎｇ」、Ｌａｎｇｍｕｉｒ、２０１５、第３１巻、３〜１２頁参照）。液滴はブラウン運動により常に移動しており、液滴のサイズとブラウン運動による速度の関係はストークス−アインシュタインの方程式で定義される。液滴が動き回ると、散乱光により強度変動が起こる。さらに、相関関数を得るために、シグナル強度をさまざまな時点でそれ自体と比較する。次いで、この情報を使用して、強度によるサイズ分布を計算し、これを体積または個数粒度分布に変換することができる。特に、液滴の直径（すなわち、液滴のミーンサイズ）は、Ｚｅｔａｓｉｚｅｒ  Ｎａｎｏ  ＺＳ（Ｍａｌｖｅｒｎ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ）を使用して決定される。本発明では、液滴のアベレージサイズ（Ｄ（ｎ、５０））の測定を、本出願で上に説明される計算を実施して、Ｚｅｔａｓｉｚｅｒ  Ｎａｎｏ  ＺＳ（Ｍａｌｖｅｒｎ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ）により動的光散乱（ＤＬＳ）によって直接（希釈なしで）測定した。
【００２７】
本発明のナノエマルジョン組成物は、水中油型ナノエマルジョンである。「水中油型」と「Ｏ／Ｗ型」という用語は同じ意味を有し、互換的に使用される。これらは、油が水相全体に液滴として分散しているナノエマルジョンを指す。
【００２８】
「重量百分率（％）」、「重量／重量％」および「ｗ／ｗ％」は同じ意味を有し、互換的に使用される。これらは、組成物の総重量に対する組成物の各成分の重量を指す。
【００２９】
「体積百分率（％）」、「体積／体積％」、および「ｖ／ｖ％」という用語は同じ意味を有し、互換的に使用される。これらは、組成物の総体積に対する組成物の各成分の体積を指す。
【００３０】
「％（ｗ／ｖ）」および「質量濃度」という用語は同じ意味を有し、互換的に使用される。これらは、成分の質量を組成物の体積で割ったものを指す。
【００３１】
「重量比」という用語は、所与の化合物と別の所与の化合物の、例えば、油成分とクロベタゾールとの間の重量の関係を指す。
【００３２】
「体積比」という用語は、所与の化合物と別の所与の化合物の、例えば、比較緩衝液試料中のアセトニトリルと水との間の体積の関係を指す。
【００３３】
「（重量）オスモル濃度」(osmolality)という用語は、溶媒１キログラム当たりの溶液の浸透圧（またはオスモル）に寄与する溶質のモルを指す。（重量）オスモル濃度は、浸透圧計を使用して試料の凝固点降下を測定することによって決定される。
【００３４】
「ｐＨ」という用語は、適切な、適当に標準化された電位差測定センサーおよび測定システムによって与えられる値として定義される。測定システムは、従来「ｐＨメーター」と呼ばれていた。ナノエマルジョンのｐＨは、伝統的な方法で測定される。
【００３５】
上述のように、本発明の第１の態様は、治療上有効量のクロベタゾールまたはその薬学的に許容される塩もしくはエステルを含む水中油型ナノエマルジョンに関する。本明細書で使用される「治療上有効量」という表現は、投与された場合、対処される疾患または状態の症状の１つまたは複数の発症を予防するまたはある程度緩和するのに十分なクロベタゾールまたはその薬学的に許容される塩もしくはエステルの量を指す。本発明により投与されるクロベタゾールの特定の用量は、当然、投与される活性クロベタゾール、投与経路、治療される特定の状態および同様の考慮事項を含む、症例を取り巻く特定の状況によって決定される。
【００３６】
一実施形態では、クロベタゾールが薬学的に許容される塩の形態である。本明細書で使用される「薬学的に許容される塩」という用語は、無機酸または有機酸を含む薬学的に許容される非毒性酸から形成される塩を包含する。塩に関する制限はないが、治療目的で使用される場合、これらは薬学的に許容されるものでなければならない。クロベタゾールの塩は、無機酸および有機酸を含む薬学的に許容される非毒性の酸から調製され得る。このような酸には、とりわけ、酢酸、ベンゼンスルホン酸、安息香酸、カンファースルホン酸、クエン酸、エタンスルホン酸、フマル酸、グルコン酸、グルタミン酸、臭化水素酸、塩酸、乳酸、マレイン酸、リンゴ酸、マンデル酸、メタンスルホン酸、リン酸、コハク酸、硫酸、酒石酸およびｐ−トルエンスルホン酸が含まれる。
【００３７】
一実施形態では、クロベタゾールが薬学的に許容されるエステルの形態である。本明細書で使用される「薬学的に許容されるエステル」という用語は、無機酸または有機酸を含む薬学的に許容される非毒性酸から形成されるエステルを包含する。エステルに関する制限はないが、治療目的で使用される場合、これらは薬学的に許容されるものでなければならない。クロベタゾールのエステルは、無機酸および有機酸を含む薬学的に許容される非毒性の酸から調製され得る。このような酸には、とりわけ、酢酸、酪酸、プロピオン酸、ベンゼンスルホン酸、安息香酸、カンファースルホン酸、クエン酸、エタンスルホン酸、フマル酸、グルコン酸、グルタミン酸、臭化水素酸、塩酸、乳酸、マレイン酸、リンゴ酸、マンデル酸、メタンスルホン酸、リン酸、コハク酸、硫酸、酒石酸およびｐ−トルエンスルホン酸が含まれる。一実施形態では、クロベタゾールが、酪酸クロベタゾールおよびプロピオン酸クロベタゾールからなる群から選択されるエステルの形態；好ましくは、式（Ｉ）のプロピオン酸クロベタゾールである。
【００３８】
一実施形態では、本発明の組成物が、治療上有効量のクロベタゾールが０．００１重量％〜０．１重量％、好ましくは０．０１重量％〜０．０５重量％；より好ましくは０．０５重量％で構成されるものである。一実施形態では、組成物が、０．００１重量％〜０．１重量％のプロピオン酸クロベタゾール；好ましくは、０．０１重量％〜０．０５重量％のプロピオン酸クロベタゾールを含むものである。
【００３９】
「油（オイル）」という用語は、本明細書では、一般的な意味で、室温で典型的には滑らかで粘性のある液体の幅広い種類の物質を識別するために使用される。ここで定義される油は、動物、鉱物、植物または合成起源のものであり得る。「油成分」という用語は、油、またはコロイド分散液中の複数の油の組み合わせを指す。「室温」という用語は、加熱または冷却を行わない環境の温度を指し、一般に２０℃〜２５℃である。
【００４０】
一実施形態では、本発明のナノエマルジョンの油成分が、モノグリセリド、ジグリセリド、またはトリグリセリドおよびこれらの混合物の（Ｃ４〜Ｃ２０）アルキルエステルである。一実施形態では、モノグリセリド、ジグリセリドまたはトリグリセリドの（Ｃ４〜Ｃ２０）アルキルエステルが、中鎖トリグリセリドである。「中鎖トリグリセリド」および「ＭＣＴ」という用語は同じ意味を有し、互換的に使用され、グリセリンと（Ｃ６〜Ｃ１２）脂肪酸のトリエステルを指す。ＭＣＴの例としては、カプロン酸（Ｃ６）、カプリル酸（Ｃ８）、カプリン酸（Ｃ１０）およびラウリン酸（Ｃ１２）が挙げられる。ＭＣＴの３つの脂肪酸残基は同じでも異なっていてもよく、好ましくは２つの異なる脂肪酸残基が存在する。一実施形態では、油が、カプロン酸、カプリル酸、カプリン酸、ラウリン酸およびこれらの混合物から選択される中鎖トリグリセリドであり；好ましくは、油がカプリル酸／カプリン酸トリグリセリドである。油成分としてＭＣＴを含む本発明のナノエマルジョン組成物は、ＭＣＴ中のクロベタゾールの溶解度が非常に高いため、特に有利であり、そのためＭＣＴの使用により、本発明のナノエマルジョン中の油含有量を減少させることができる。
【００４１】
代替実施形態では、本発明のナノエマルジョンの油成分が、オレイン酸エチル、オレイン酸デシル、ミリスチン酸イソプロピル、パルミチン酸イソプロピル、イソステアリン酸イソプロピル、イソステアリン酸イソステアリル、モノステアリン酸グリセリル、乳酸ミリスチル、ヒドロキシステアリン酸エチルヘキシル、ペラルゴン酸エチルヘキシル、トリエチルヘキサノイン、イソヘキサデカン、軽鉱油、鉱油、植物油、トリイソノナノイン、（Ｃ１２〜Ｃ１５）安息香酸アルキルおよびこれらの混合物からなる群から選択される；好ましくは、オレイン酸エチル、ミリスチン酸イソプロピル、パルミチン酸イソプロピル、イソステアリン酸イソプロピル、イソステアリン酸イソステアリル、オレイン酸デシル、ヒマシ油、アルガン油、トリイソノナノイン、（Ｃ１２〜Ｃ１５）安息香酸アルキルおよびこれらの混合物からなる群から選択されるモノグリセリド、ジグリセリドまたはトリグリセリドエステル以外である。
【００４２】
「アルキル」という用語は、明細書または特許請求の範囲で指定された数の炭素原子を含有する飽和、分岐または直鎖アルキル鎖を指す。
【００４３】
「植物油」という用語は、植物から抽出されたトリグリセリドを指す。植物油の例は、アルガン油、コーン油、パーム油、ヤシ油、綿実油、オリーブ油、落花生油、菜種油、ヒマワリ油、ゴマ油、大豆油、ベニバナ油、ヒマシ油、オリーブ油およびこれらの混合物である。
【００４４】
一実施形態では、油成分が、モノグリセリド、ジグリセリドまたはトリグリセリドの（Ｃ６〜Ｃ１２）アルキルエステルと、上に定義されるモノグリセリド、ジグリセリドまたはトリグリセリドエステル以外の油の混合物である。一実施形態では、油がＭＣＴとヒマシ油の混合物である。
【００４５】
上述のように、油成分とクロベタゾールまたはその薬学的に許容される塩もしくはエステルとの間の重量比は１：１〜２００：１で構成される。一実施形態では、油成分とクロベタゾールまたはその薬学的に許容される塩もしくはエステルとの間の重量比が１：１〜１００：１、好ましくは１：１〜９０：１で構成される。
【００４６】
本明細書で使用される「界面活性剤」という用語は、２つの液体間または液体と固体との間の表面張力または界面張力を低下させる化合物を指す。界面活性剤は、疎水性部分と親水性部分を有する。親水性部分の性質に応じて、界面活性剤は、非イオン性（非荷電であるが、極性の親水性部分を有する界面活性剤）、アニオン性（親水性部分が負に帯電した基を含む場合）、カチオン性（親水性部分が正に帯電した基を含む場合）または両性（親水性部分がカチオン基とアニオン基の両方を有する場合）として分類される。
【００４７】
一実施形態では、本発明のナノエマルジョンの１種または複数の界面活性剤が非イオン性界面活性剤である。非イオン性界面活性剤の例としては、それだけに限らないが、（Ｃ３０〜Ｃ４０）アルキルポリ（エチレンオキシド）、ポリ（エチレンオキシド）とポリ（プロピレンオキシド）のブロックコポリマー（一般にポロキサマーまたはポロキサミンと呼ばれる）、オクチルグルコシドおよびデシルマルトシドを含む（Ｃ８〜Ｃ１４）アルキルポリグルコシド、セチルアルコールおよびオレイルアルコールを含む脂肪アルコール、コカミドＭＥＡ、コカミドＤＥＡ、ソルビタンエステルおよびその誘導体またはソルビタンエステルエトキシレートおよびその誘導体が挙げられる。
【００４８】
一実施形態では、本発明のナノエマルジョンの１種または複数の界面活性剤が、３０〜４０オキシエチレン単位を有するポリオキシルヒマシ油、特にポリオキシル３５ヒマシ油（ポリエチレングリコール３５ヒマシ油としても知られる；Ｋｏｌｌｉｐｈｏｒ（登録商標）ＥＬ、Ｃｒｅｍｏｐｈｏｒ（登録商標）ＥＬとして販売）、４０〜６０オキシエチレン単位を有するポリオキシル硬化ヒマシ油、特にポリオキシル４０硬化ヒマシ油（ポリエチレングリコール４０硬化ヒマシ油としても知られる、Ｃｒｅｍｏｐｈｏｒ（登録商標）ＲＨ４０として販売）、ポリオキシエチレン２０ソルビタンモノオレエート（ポリソルベート８０としても知られ、Ｔｗｅｅｎ（登録商標）８０として販売）、ポリオキシエチレン２０ソルビタンモノステアレート（ポリソルベート６０としても知られ、Ｔｗｅｅｎ（登録商標）６０として販売）、ポリオキシエチレン２０ソルビタントリオレエート（ポリソルベート８５としても知られ、Ｔｗｅｅｎ（登録商標）８５として販売）、ポリオキシエチレン２０ソルビタントリステアレート（ポリソルベート６５としても知られ、Ｔｗｅｅｎ（登録商標）６５として販売）、ポリオキシエチレン２０ソルビタンモノラウレート（ポリソルベート２０としても知られている）、ポリオキシエチレン２０ソルビタンモノパルミテート（ポリソルベート４０としても知られている）、ポリオキシエチレン４ソルビタンモノラウレート（ポリソルベート２１としても知られ、Ｔｗｅｅｎ（登録商標）２１として販売）、ソルビタントリオレエート（Ｓｐａｎ（登録商標）８５として販売）、ソルビタントリステアレート、ソルビタンセスキオレエート、ソルビタンオレエート（Ｓｐａｎ（登録商標）８０として販売）、ソルビタンステアレート、ソルビタンイソステアレート、ソルビタンパルミテート、ソルビタンラウレート（Ｓｐａｎ（登録商標）２０として販売）、ポリエチレングリコールヘキサデシルエーテル（Ｂｒｉｊ（登録商標）Ｃ１０として販売）、グリセリルステアレート（Ｃｉｔｈｒｏｌ（登録商標）ＧＭＳ４０として販売）、グリセリルモノオレエート、グリコールステアレート、グリコールジステアレート、Ｄ−α−トコフェロールポリエチレングリコール１０００スクシネート（ＴＰＧＳ）、２個のオキシエチレン単位を有するポリオキシルステアリルエーテル、２〜２０個のオキシエチレン単位を有するポリオキシルヒマシ油、セトステアリルアルコール、ステアリルアルコール、オレス−２、ノノキシノール、オクトキシノール、オクチルフェノールポリメチレン、ポリオキシル４０ステアレート、ポリ（エチレンオキシド）−ポリ（プロピレンオキシド）コポリマー（特にポロキサマー１８８およびポロキサマー４０７）およびこれらの混合物からなる群から選択される非イオン性界面活性剤である。
【００４９】
一実施形態では、本発明のナノエマルジョンの１種または複数の界面活性剤が、ポリオキシル３５ヒマシ油、ポリオキシル４０硬化ヒマシ油、ポリオキシエチレン２０ソルビタンモノオレエート、ポリオキシエチレン２０ソルビタンモノステアレート、ポリオキシエチレン２０ソルビタントリオレエート、ポリオキシエチレン２０ソルビタンモノラウレート、ポリオキシエチレン２０ソルビタントリステアレート、ポリオキシエチレン２０ソルビタンモノパルミテート、ポリエチレングリコールヘキサデシルエーテル、グリセリルステアレート、Ｄ−α−トコフェロールポリエチレングリコール１０００スクシネート（ＴＰＧＳ）、ポロキサマー１８８、ポロキサマー４０７、ポリオキシ４０ステアレート、ソルビタンモノラウレート、オクトキシノール４０およびこれらの混合物からなる群から選択される非イオン性界面活性剤である。一実施形態では、本発明のナノエマルジョンの１種または複数の界面活性剤が、ポリオキシエチレン２０ソルビタンモノオレエートおよびポリオキシル３５ヒマシ油からなる群から選択される非イオン性界面活性剤である。
【００５０】
一実施形態では、本発明のナノエマルジョンの１種または複数の界面活性剤が、ソルビタンエステルエトキシレート誘導体、ソルビタンエステル誘導体、ポリ（エチレンオキシド）−ポリ（プロピレンオキシド）コポリマー、ポリオキシル３５ヒマシ油、ポリオキシル４０硬化ヒマシ油、ポリオキシル４０ステアレート、オクトキシノール４０、Ｄ−α−トコフェロールポリエチレングリコール１０００スクシネート（ＴＰＧＳ）およびこれらの混合物からなる群から選択される非イオン性界面活性剤である。
【００５１】
上述のように、界面活性剤とクロベタゾールまたはその薬学的に許容される塩もしくはエステルとの間の重量比は２：１〜２００：１で構成される。一実施形態では、界面活性剤とクロベタゾールまたはその薬学的に許容される塩もしくはエステルとの間の重量比が２：１〜１９０：１、好ましくは２：１〜１８０：１で構成される。
【００５２】
同様に上述のように、本発明のナノエマルジョンは、油成分と、油成分と１種または複数の界面活性剤の和との間の重量比が０．００１〜０．５で構成される。一実施形態では、油成分と、油成分と界面活性剤の和との間の重量比が、０．００１〜０．４；好ましくは、０．００５〜０．４；より好ましくは０．００５〜０．３で構成される。
【００５３】
一実施形態では、本発明のナノエマルジョンが、１００ｍＯｓｍ／Ｋｇ〜５００ｍＯｓｍ／ｋｇ；好ましくは、１５０ｍＯｓｍ／Ｋｇ〜４００ｍＯｓｍ／ｋｇで構成される重量オスモル濃度を有する。一実施形態では、本発明のナノエマルジョンが眼科用組成物である場合、重量オスモル濃度が１２０ｍＯｓｍ／Ｋｇ〜３８０ｍＯｓｍ／Ｋｇで構成される。これらの組成物は等張性であり、したがって眼投与に適しているため、有利である。
【００５４】
一実施形態では、本発明のナノエマルジョンが、１ｎｍ〜５００ｎｍで構成される；好ましくは１ｎｍ〜２５０ｎｍで構成される液滴アベレージサイズを有する。一実施形態では、本発明のナノエマルジョンが眼科用組成物である場合、動的光散乱によって測定される液滴アベレージサイズが１ｎｍ〜２５０ｎｍで構成される。ナノエマルジョン組成物は透明であり、霧視の不快感を回避するので、有利である。
【００５５】
一実施形態では、本発明のナノエマルジョンが４．０〜８．０で構成される；好ましくは４．５〜７．４で構成されるｐＨを有する。一実施形態では、本発明のナノエマルジョンが眼科用組成物である場合、組成物のｐＨが涙液のｐＨとして４．５〜７．４を含む。
【００５６】
一実施形態では、本発明のナノエマルジョンが、０重量％〜３重量％で構成されるエタノールの量を有し；好ましくは、エタノールの量が０重量％〜２重量％で構成される。エタノールの量が少ないと、眼、鼻または頬投与経路での不快な使用感を減らすことができるので、有利である。
【００５７】
上述のように、本発明のナノエマルジョンはまた、１種または複数の薬学的に許容される賦形剤または担体を含む。「許容される賦形剤または担体」という用語は、限定されないが、ｐＨ調整剤、保存剤、抗酸化剤、キレート化剤、安定剤、増粘剤、接着性ポリマー、浸透促進剤および等張化剤を含む、許容される材料、組成物またはビヒクルを指す。各成分は、組成物の他の成分と適合性であるという意味で許容されるものでなければならない。これもまた、合理的な利益／リスク比で、過度の毒性、刺激、アレルギー反応、免疫原性または他の課題もしくは合併症なしに、ヒトおよび動物の組織または器官と接触して使用するのに適していなければならない。
【００５８】
一実施形態では、本発明のナノエマルジョンが、１種または複数のｐＨ調整剤をさらに含む。「ｐＨ調整剤」という用語は、エマルジョンの安定性に影響を及ぼすことなく、最終製品のｐＨを所望のレベルに調整するために使用され得る酸または塩基またはこれらの混合物を指す。一実施形態では、本発明のナノエマルジョンが、乳酸およびその塩（乳酸ナトリウム、乳酸カリウムおよび乳酸カルシウムなど）、クエン酸およびその塩（クエン酸ナトリウム、クエン酸カリウム、クエン酸カルシウム、クエン酸リチウム、クエン酸三ナトリウムおよびクエン酸水素二ナトリウムなど）、酒石酸およびその塩（酒石酸ナトリウム、酒石酸カリウム、酒石酸カルシウムおよび酒石酸リチウムなど）、酢酸およびその塩（酢酸ナトリウム、酢酸カリウムおよび酢酸カルシウムなど）、塩酸、ホウ酸およびその塩（ホウ酸ナトリウム）、硫酸およびその塩（硫酸ナトリウムおよび硫酸カリウムなど）、硝酸、塩酸、リン酸およびその塩（リン酸二水素ナトリウム、リン酸一水素ナトリウム、リン酸二水素カリウム、リン酸リチウム、リン酸カリウムおよびリン酸カルシウムなど）、炭酸およびその塩（炭酸ナトリウム、炭酸水素ナトリウムおよび炭酸水素カリウムなど）、マレイン酸およびその塩（マレイン酸リチウム、マレイン酸ナトリウム、マレイン酸カリウムおよびマレイン酸カルシウム）、コハク酸およびその塩（コハク酸リチウム、コハク酸ナトリウム、コハク酸カリウムおよびコハク酸カルシウム）、水酸化ナトリウム、水酸化カリウム、トリエタノールアミン、ジイソプロパノールアミン、アンモニア、トリス（ヒドロキシメチル）アミノメタン、トリス（ヒドロキシメチル）アミノメタン塩酸塩、ならびにこれらの混合物からなる群から選択されるｐＨ調整剤をさらに含む。一実施形態では、ｐＨ調整剤が、トリス（ヒドロキシメチル）アミノメタン、トリス（ヒドロキシメチル）アミノメタン塩酸塩、リン酸二水素カリウム、リン酸水素二ナトリウムおよびこれらの混合物からなる群から選択される。
【００５９】
一実施形態では、本発明のナノエマルジョンが、酢酸、ホウ酸、ソルビン酸、クエン酸、リン酸、リン酸ナトリウム、第二リン酸ナトリウム、第一リン酸ナトリウム、リン酸二水素カリウムおよびこれらの塩、塩酸、水酸化ナトリウム、チオ硫酸ナトリウム、亜硫酸ナトリウム、硫酸ナトリウム、トリス（ヒドロキシメチル）アミノメタン、トリス（ヒドロキシメチル）アミノメタン塩酸塩、炭酸水素ナトリウム、ホウ酸ナトリウム、酢酸ナトリウム、重硫酸ナトリウム、安息香酸ナトリウム、クエン酸ナトリウムおよびこれらの混合物からなる群から選択されるｐＨ調整剤をさらに含む。
【００６０】
好ましい実施形態では、ｐＨ調整剤がトリス（ヒドロキシメチル）アミノメタンおよびその塩である。本発明のナノエマルジョン中のｐＨ調整剤の量は、０．０１重量％〜３重量％で構成される。
【００６１】
一実施形態では、本発明のナノエマルジョンが１種または複数の安定剤をさらに含む。「安定剤」という用語は、ナノエマルジョンおよび／または有効成分の安定性を強化した化合物を指す。一実施形態では、安定剤が水溶性ポリマー、例えばポリビニルピロリドン、ポリビニルアルコール、ヒドロキシエチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、メチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、カルボキシメチルセルロース、これらの塩、およびこれらの混合物；好ましくはポリビニルピロリドンである。一実施形態では、安定剤がトリス（ヒドロキシメチル）アミノメタンおよび／またはトリス（ヒドロキシメチル）アミノメタン塩酸塩である。トリス（ヒドロキシメチル）アミノメタンおよびその塩の使用は、分解生成物の総量の減少を可能し、これは本発明のナノエマルジョン中の有効成分の安定性が先行技術に開示されるエマルジョンよりも高いことを意味するため、特に有利である。本発明のナノエマルジョン中の安定剤の量は、０．０１重量％〜１５重量％で構成される。
【００６２】
一実施形態では、本発明のナノエマルジョンが１種または複数の生体接着性ポリマーをさらに含む。「生体接着性ポリマー」という用語は、本発明の組成物の滞留時間を増加させることができる物質を指す。本発明に適した生体接着性ポリマーの例としては、ポビドンＫ１７、ポビドンＫ２５、ポビドンＫ３０およびポビドンＫ９０Ｆなどのポリビニルピロリドン；ポリビニルアルコール；キサンタンガム；グアーガム；ウェランガム；ジェランガム；トラガントガム；セラトニアガム；寒天；メチルセルロース；エチルセルロース；ヒドロキシエチルセルロース；ヒドロキシエチルメチルセルロース；ヒドロキシプロピルセルロース；ヒドロキシプロピルメチルセルロース；ヒドロキシプロピルメチルセルロースフタレート；ヒドロキシプロピルメチルセルロースアセテートスクシネート；カルボキシメチルセルロースナトリウム；カルボキシメチルセルロースカルシウム；ポリエチレングリコール；グリセリン；カラギーナン；アルギン酸；アルギン酸ナトリウム；アルギン酸カリウム；プロピレングリコールアルギネート；ヒアルロン酸；ヒアルロン酸ナトリウム；カルボマーおよびポリカルボール（ｐｏｌｙｃａｒｂｏｌ）などのポリ（アクリル酸）誘導体；ポロキサマー；キトサンおよびキトサン誘導体；ビニルメチルエーテル／無水マレイン酸コポリマー；マルトデキストリン；ならびにこれらの混合物が挙げられる。一実施形態では、本発明の組成物が、生体接着性ポリマーとしてポリビニルピロリドンを含む。一実施形態では、生体接着性ポリマーが、組成物の総重量に対して０．０１重量％〜１５重量％の量で存在する。
【００６３】
一実施形態では、本発明のナノエマルジョンが、１種または複数の保存剤をさらに含む。「保存剤」という用語は、微生物および／または真菌汚染から保護する化合物を指す。本発明に適した保存剤の例としては、それだけに限らないが、塩化ベンザルコニウム、塩化セタルコニウム、塩化ベンゼトニウム、クロルヘキシジン、ベンジルアルコール、クロロブタノール、２−フェニルエタノール、プロピルパラベン、メチルパラベン、酢酸フェニル水銀、ホウ酸フェニル水銀、デヒドロ酢酸ナトリウム、ソルビン酸硝酸フェニル水銀、塩化セチルピリジニウム、臭化セトリモニウム、臭化ベンジル、過ホウ酸ナトリウム、チメロサールおよびこれらの混合物が挙げられる。本発明のナノエマルジョン中の保存剤の量は、０重量％〜１重量％で構成される。
【００６４】
一実施形態では、本発明のナノエマルジョンが、１種または複数の等張化剤をさらに含む。「等張化剤」という用語は、ナノエマルジョンの重量オスモル濃度を調整するために使用することができる化合物を指す。一実施形態では、等張化剤が、塩化ナトリウム、塩化カリウム、塩化カルシウム、リン酸ナトリウム、リン酸カリウム、炭酸水素ナトリウム、炭酸カルシウム、乳酸ナトリウム、ソルビトール、マンニトール、キシリトール、デキストロース、ポリエチレングリコール、プロピレングリコール、デキストランおよびこれらの混合物；好ましくはグリセリンからなる群から選択される。本発明のナノエマルジョン中の等張化剤の量は、０重量％〜１５重量％で構成される。
【００６５】
一実施形態では、本発明のナノエマルジョンが、１種または複数のキレート化剤をさらに含む。「キレート化剤」および「キレート剤」という用語は同じ意味を有し、互換的に使用される。これらは、イオンを錯化することができる化合物を指す。キレート化剤の例は、クエン酸、特にクエン酸一水和物、ＥＤＴＡ（エチレンジアミン四酢酸）およびその塩、例えばＥＤＴＡ二カリウム、ＥＤＴＡ二ナトリウム、ＥＤＴＡ二ナトリウムカルシウム、ＥＤＴＡナトリウムおよびＥＤＴＡ三ナトリウム、フマル酸、リンゴ酸およびマルトールである。一実施形態では、キレート化剤が、エデト酸ナトリウム、クエン酸およびこれらの塩および混合物からなる群から選択される。本発明のナノエマルジョン中のキレート化剤の量は、０重量％〜２重量％で構成される。
【００６６】
本明細書で使用される「浸透促進剤」という用語は、薬物浸透を強化する物質を指す。浸透促進剤の例は、ソルビタンモノラウレート、ソルビタンモノパルミテート、ソルビタントリオレエート、ポリオキシエチレン２０ソルビタンモノラウレート、ポリオキシエチレン２０ソルビタンモノパルミテート、ポリオキシエチレン５ソルビタンモノオレエート、ポリオキシエチレン２０ソルビタントリオレエート、ポリオキシエチレン９ラウリルエーテル、ポリオキシエチレン２３ラウリルエーテル、ポリオキシエチレン２０セチルエーテル、ポリオキシエチレン２０オレイルエーテル、ポリエチレングリコールオクタデシルエーテル、ポリオキシエチレン４０ステアレート、ポリオキシエチレン５０ステアレート、パルミトイルカルニチン、カプリン酸ナトリウム、ドデシル硫酸ナトリウム、デオキシコール酸、タウロコール酸、タウロデオキシコール酸、ウロデオキシコール酸およびタウロウルソデオキシコール酸などの胆汁酸、カプリン酸、カプリル酸およびオレイン酸などの脂肪酸、塩化ラウラルコニウム、塩化ベンザルコニウム、塩化セタルコニウム、臭化セトリモニウム、二グルコン酸クロルヘキシジン、ベンジルアルコール、クロルブタノール、２−フェニルエタノール、パラベン、プロピルパラベンおよびメチルパラベン、ＥＤＴＡ、１−ドデシルアザシクロヘプタン−２−オン（アゾン）、ヘキサメチレンラウラミド、ヘキサメチレンオクタンアミド、デシルメチルスルホキシド、サポニン、シクロデキストリン、ｐｚ−ペプチド、α−アミノ酸、塩化セチルピリジニウム、サイトカラシン、イオノフォアまたはこれらの混合物などの界面活性剤である。本発明のナノエマルジョン中の浸透促進剤の量は、０．０１重量％〜１０重量％で構成される。
【００６７】
一実施形態では、本発明のナノエマルジョンが、０．００１重量％〜０．１重量％のクロベタゾールまたはその薬学的に許容される塩もしくはエステル；好ましくはプロピオン酸クロベタゾールと；０．００１重量％〜２０重量％の１種または複数の油成分と；０．００２重量％〜２０重量％の１種または複数の界面活性剤と；１００％に十分な量の水と；場合により、４．０〜８．０で構成されるｐＨを有するのに十分な量のｐＨ調整剤と；場合により、１００ｍＯｓｍ／ｋｇ〜５００ｍＯｓｍ／Ｋｇで構成される重量オスモル濃度を有するのに十分な量の等張化剤とを含む。
【００６８】
一実施形態では、本発明のナノエマルジョンが、０．０１重量％〜０．０５重量％のクロベタゾール、その薬学的に許容される塩もしくはエステル；プロピオン酸クロベタゾールと；０．０１重量％〜１０重量％の１種または複数の油成分と；０．０２重量％〜１０重量％の１種または複数の界面活性剤と；１００％に十分な量の水と；場合により、４．０〜８．０で構成されるｐＨを有するのに十分な量のｐＨ調整剤と；場合により、１００ｍＯｓｍ／Ｋｇ〜５００ｍＯｓｍ／Ｋｇで構成される重量オスモル濃度を有するのに十分な量の等張化剤とを含む。
【００６９】
一実施形態では、本発明のナノエマルジョンが、０．００１重量％〜０．１重量％のクロベタゾールまたはその薬学的に許容される塩もしくはエステル；好ましくはプロピオン酸クロベタゾールと；０．００１重量％〜２０重量％の中鎖脂肪酸トリグリセリドと；０．００２重量％〜２０重量％のポリオキシエチレン２０ソルビタンモノオレエートと；１００ｍＬに十分な量の水と；場合により、４．０〜８．０で構成されるｐＨを有するのに十分な量のトリス（ヒドロキシメチル）アミノメタンと；場合により、１００ｍＯｓｍ／Ｋｇ〜５００ｍＯｓｍ／Ｋｇで構成される重量オスモル濃度に十分な量のグリセリンとを含む。
【００７０】
一実施形態では、本発明のナノエマルジョンが、０．０１重量％〜０．０５重量％のクロベタゾールまたはその薬学的に許容される塩もしくはエステル；好ましくはプロピオン酸クロベタゾールと；０．０１重量％〜１０重量％の中鎖脂肪酸トリグリセリドと；０．０２重量％〜１０重量％のポリオキシエチレン２０ソルビタンモノオレエートと；１００ｍＬに十分な量の水と；場合により、４．０〜８．０で構成されるｐＨを有するのに十分な量のトリス（ヒドロキシメチル）アミノメタンと；場合により、１００ｍＯｓｍ／Ｋｇ〜５００ｍＯｓｍ／Ｋｇで構成される重量オスモル濃度に十分な量のグリセリンとを含む。
【００７１】
一実施形態では、本発明のナノエマルジョン組成物が、眼科用組成物、耳用組成物、鼻用組成物または頬側組成物である。一実施形態では、本発明のナノエマルジョン組成物が、点眼薬、点耳薬、点鼻薬または経口スプレーの形態である。
【００７２】
一実施形態では、ナノエマルジョン組成物が、点眼薬の形態である眼科用組成物である。本発明のナノエマルジョンは透明であり、使用後の霧視および灼熱感などの不快感を回避するので有利である。ナノエマルジョンが眼科用組成物である場合、これは無菌であるべきである。「無菌」という用語は、無菌処理されており、生細菌、真菌または他の微生物を含まないナノエマルジョン組成物を指す。一実施形態では、ナノエマルジョン組成物が無菌眼科用組成物である。
【００７３】
一実施形態では、ナノエマルジョン組成物が多用量眼科用組成物であり、組成物が上に定義される保存剤をさらに含む。一実施形態では、ナノエマルジョン組成物が単一用量眼科用組成物である。これらのナノエマルジョンは保存剤を組成物に含める必要がないためこの組成物は有利である。
【００７４】
本発明の第２の態様は、上に定義されるナノエマルジョンを調製する方法に関する。本発明のナノエマルジョン組成物は、ナノエマルジョン、特に水中油型ナノエマルジョンを調製するための先行技術で周知の方法に従って調製することができる。適切な賦形剤および／または担体、ならびにこれらの量は、調製される製剤の種類に従って当業者によって容易に決定され得る。
【００７５】
一実施形態では、本発明のナノエマルジョンを調製する方法が、転相構成（ＰＩＣ）によって実施される。一実施形態では、上に定義される水中油型ナノエマルジョン組成物を調製する方法が、（ａ）クロベタゾールを油成分および界面活性剤と混合することによって、油相を調製するステップと；（ｂ）水相を調製するステップと；（ｃ）ステップ（ｂ）で得られた水相でステップ（ａ）で得られた油相を乳化するステップと；（ｄ）場合により、ステップ（ａ）、ステップ（ｂ）またはステップ（ｃ）の後でｐＨ；重量オスモル濃度；ｐＨと重量オスモル濃度を調整するステップと；（ｅ）場合により、ステップ（ａ）、ステップ（ｂ）またはステップ（ｃ）で１種または複数の追加の薬学的に許容される賦形剤または担体を添加するステップとを含む。
【００７６】
一実施形態では、ステップ（ａ）が、均質な混合物が得られるまで適切な容器で混合することによって実施される。
【００７７】
一実施形態では、ステップ（ｂ）が、水相の成分を溶解または分散させることによって実施される。一実施形態では、ステップ（ｂ）が、均質なブレンドを有するための適切な期間実施される。
【００７８】
一実施形態では、ステップ（ｃ）が、１０℃〜６０℃の温度で連続混合手順を維持しながら、水相で油相を乳化することによって実施される。一実施形態では、ステップ（ｃ）が、ステップ（ａ）で得られた油相の温度がステップ（ｂ）で得られた水相の温度に近い場合に実施される。「油相の温度が水相の温度に近い」という表現は、測定誤差のために温度値が「近似」であることを意味する。「近い」とは、所与の温度値±１０℃に相当することを理解すべきである。値の変動性は、方法の固有の感度によるものである。
【００７９】
本発明のナノエマルジョンは、温和な条件下で、高圧での均質化ステップを必要とせずに、単純な方法によって実施することができる。高エネルギー手順に関連する方法（例えば、高圧および超音波）は、有効成分の有効期間および最終剤形の安定性に悪影響を及ぼし得る。したがって、本発明のナノエマルジョンを調製する方法は、有効成分の安定性に有利である。
【００８０】
一実施形態では、ナノエマルジョン組成物が無菌組成物である場合、上に定義される方法が滅菌ステップをさらに含む。一実施形態では、滅菌ステップがステップ（ａ）；ステップ（ｂ）；ステップ（ｃ）；ステップ（ｄ）またはステップ（ｅ）の後に実施される。一実施形態では、滅菌工程がステップ（ｅ）の後に実施される。滅菌ステップは、先行技術で周知の方法に従って実施することができる。一実施形態では、滅菌ステップが、濾過、オートクレーブ、加熱、照射およびこれらの組み合わせからなる群から選択される方法によって実施され；好ましくは、滅菌ステップが濾過によって実施される。一実施形態では、本発明の方法が、滅菌濾過をさらに含む。液滴アベレージサイズおよびその柔軟性により、ナノエマルジョンを濾過によって滅菌することができ、これは、温和な条件を使用し、有効成分の安定性に悪影響を及ぼし得る高温も放射線手順も必要としないので有利である。したがって、滅菌濾過を含む本発明のナノエマルジョンを調製する方法は、有効成分およびナノエマルジョンの安定性に有利である。
【００８１】
本発明のナノエマルジョン組成物について上に開示される全ての実施形態が、その調製方法にも適用される。
【００８２】
本発明のナノエマルジョン組成物は、上に定義されるその調製方法によって定義されてもよく、したがって、本発明の方法によって得ることができる本発明のナノエマルジョン組成物は、本発明の一部とみなされる。本発明の目的のために、「得ることができる」、「得られる」という表現および同等の表現は互換的に使用され、いずれにしても、「得ることができる」という表現は「得られる」という表現を包含する。
【００８３】
本発明のナノエマルジョン組成物について、ならびにその調製方法について上に開示される全ての実施形態が、調製方法によって得ることができるナノエマルジョンにも適用される。
【００８４】
本発明の第３の態様は、医薬品として使用するための上に定義されるナノエマルジョン組成物に関する。
【００８５】
上述のように、本発明の第４の態様は、炎症性疾患または状態の予防および／または治療に使用するための上に定義されるナノエマルジョン組成物に関する。この態様はまた、炎症性疾患または状態を予防および／または治療するための医薬品を調製するための上に定義されるナノエマルジョン組成物の使用として明確に述べられ得る。これはまた、炎症性疾患または状態に罹患している、または罹患しやすい哺乳動物を予防および／または治する方法であって、治療上有効量のクロベタゾールまたはその薬学的に許容される塩もしくはエステルを、１種または複数の薬学的に許容される賦形剤または担体と共に含む上に定義されるナノエマルジョン組成物を前記哺乳動物に投与するステップを含む方法に関する。
【００８６】
一実施形態では、炎症性疾患または状態が、眼科炎症性疾患または状態、耳科炎症性疾患または状態、および中咽頭炎症性疾患または状態からなる群から選択される。
【００８７】
一実施形態では、炎症性疾患または状態が、眼科炎症性疾患または状態である。一実施形態では、眼科炎症性疾患または状態が、眼手術後の炎症および疼痛；ブドウ膜炎、例えば前部ブドウ膜炎（虹彩炎および虹彩毛様体炎）または中部ブドウ膜炎（毛様体炎）；中毒性前眼部症候群；緑内障毛様体炎発症または高血圧前部ブドウ膜炎、例えばポスナーシュロスマン症候群；交感性眼炎、例えば眼内手術または穿通創に続発する両側性肉芽腫性ブドウ膜炎；眼合併症を伴う自己免疫疾患、例えばコーガン症候群またはライター症候群；アレルギー性結膜炎、例えば季節性アレルギー性結膜炎、通年性アレルギー性結膜炎、春季角結膜炎およびアトピー性角結膜炎；眼瞼炎；角膜実質炎；辺縁角膜炎（カタル性角膜潰瘍）；細菌性、ウイルス性または真菌性結膜炎；ならびに重度のドライアイからなる群から選択される。
【００８８】
一実施形態では、炎症性疾患または状態が耳科炎症性疾患または状態である。一実施形態では、耳科炎症性疾患または状態が、外耳炎、例えばびまん性、限局性または湿疹性耳炎；中耳炎、例えば急性または慢性中耳炎；外耳道合併症を伴うアトピー性皮膚炎からなる群から選択される。
【００８９】
一実施形態では、炎症性疾患または状態が中咽頭炎症性疾患または状態である。一実施形態では、中咽頭炎症性疾患または状態が、咽頭炎；急性喉頭蓋炎；アレルギー性喉頭炎；非感染性急性喉頭炎；扁平苔癬；アフタ性口内炎および類天疱瘡からなる群から選択される。
【００９０】
本発明のナノエマルジョン組成物について上に開示される全ての実施形態が、その使用によって制限されるナノエマルジョン組成物にも適用される。
【００９１】
明細書および特許請求の範囲を通して、「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅ）」という単語およびその変形は、他の技術的特徴、添加剤、構成要素またはステップを排除することを意図しない。さらに、「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅ）」という単語は、「からなる（ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇ  ｏｆ）」の場合を包含する。本発明のさらなる目的、利点および特徴は、説明を調査すれば当業者に明らかとなる、または本発明の実施によって習得され得る。以下の実施例は例示として提供され、本発明を限定するものではない。さらに、本発明は、本明細書に記載される特定の実施形態および好ましい実施形態の全ての可能な組み合わせを網羅する。
【実施例】
【００９２】
１．水中油型ナノエマルジョン
１．１．組成物
Ａ．本発明の組成物
実施例１〜２２は、式（Ｉ）のプロピオン酸クロベタゾールを含有する本発明のナノエマルジョンを例示している。
【００９３】
表１Ａ〜表１Ｃは、本発明の範囲内にある実施例１〜２２のナノエマルジョンの定量的組成を示し、成分の量は、組成物の総重量に対する各成分の重量百分率（％）で表される。さらに、実施例１〜２２のナノエマルジョンの重量オスモル濃度は１００ｍＯｓｍ／Ｋｇ〜５００ｍＯｓｍ／Ｋｇで構成され、動的光散乱によって測定される液滴アベレージサイズは１ｎｍ〜５００ｎｍで構成され、ｐＨは４．０〜８．０で構成される。
【００９４】
【表１Ａ】
2020524672.tif 000004
【００９５】
【表１Ｂ】
2020524672.tif 000005
【００９６】
【表１Ｃ】
2020524672.tif 000006
【００９７】
Ｂ．比較組成物
実施例（比較例）２３〜３３は、式（Ｉ）のプロピオン酸クロベタゾールを含有する本発明の範囲外の組成物を例示している。
【００９８】
表１Ｄ及び表１Ｅは、実施例２３〜３３の比較組成物の定量的組成を示し、成分の量は、組成物の総重量に対する各成分の重量百分率（％）で表される。
【００９９】
特に、油成分と、油成分と界面活性剤の和との間の重量比が０．７であり、提案された限界である０．５を超えているため、比較組成物２４、２５、２６および２９は本発明の範囲外である。さらに、油および界面活性剤の割合が、本発明のナノエマルジョンに対応するものよりも高い。比較組成物３０および３１は、界面活性剤とクロベタゾールまたはその薬学的に許容される塩もしくはエステルとの間の重量比が２００：１を超えるナノエマルジョンである。比較組成物２３および２７は、ナノエマルジョンではないため、本発明の範囲外である。組成物２３および２７は、油性成分の正の活性を有さないミセル溶液であり、組成物２３はまたクロベタゾール製剤の先行技術に記載されているように高い割合のアルコールを含有する。組成物２８は懸濁液であるので、プロピオン酸クロベタゾールは適切に溶解しない。組成物３２および３３は、薬理学的試験のプラセボである。
【０１００】
【表１Ｄ】
2020524672.tif 000007
【０１０１】
【表１Ｅ】
2020524672.tif 000008
【０１０２】
Ｃ．比較緩衝液
比較緩衝液は、式（Ｉ）のプロピオン酸クロベタゾールを含有する本発明の範囲外の組成物を例示している。これらの比較緩衝液を、安定性試験（後記第１．３節参照）に使用する。
【０１０３】
表２は、ｐＨ６．０、ｐＨ６．８およびｐＨ７．４の比較緩衝液の定量的組成を示し、成分の量は溶液の最終体積に対するグラムで表される。
【０１０４】
【表２】
2020524672.tif 000009
【０１０５】
１．２．調製方法
Ａ．本発明の組成物
本発明の実施例１〜２２の組成物を、以下に定義される方法に従って調製した：
ステップ１（油相）：均質な混合物を得るために、適切な反応器で、プロピオン酸クロベタゾール、油および界面活性剤をブレンドした。
ステップ２（水相）：別の反応器に水を配置した。
ステップ３：ナノエマルジョンが得られるまで、攪拌しながら水相を油相に段階的に添加した。水相と油相の温度を約２５℃で一定に保った。
ステップ４：溶解度に応じて、水相、油相またはナノエマルジョンに他の賦形剤または担体を添加した。
【０１０６】
Ｂ．比較組成物
本発明の実施例２３の比較組成物を、以下に定義される方法に従って調製した：
ステップ１．適切な反応器で、クロベタゾールとエタノールを完全に溶解するまで攪拌した。
ステップ２．適切な容器で、ＰＶＡｃ−ＰＶＣａｐ−ＰＥＧを水に溶解した。
ステップ３．クロベタゾール溶液を、均質な組成物が得られるまで連続的に攪拌しながらポリマー溶液に段階的に添加した。
【０１０７】
本発明の実施例２４〜２６および２９〜３３の比較組成物を、本明細書に記載される方法に従って調製した。
ステップ１（油相）：均質な相を得るために、適切な反応器で、プロピオン酸クロベタゾール、油および界面活性剤をブレンドした。
ステップ２（水相）：油相に含まれていない賦形剤を水に溶解した。
ステップ３：ナノエマルジョンが得られるまで、攪拌しながら水相を油相に段階的に添加した。
【０１０８】
本発明の実施例２７の比較組成物を、本明細書に記載される方法に従って調製した：
ステップ１．適切な反応器で、クロベタゾールとＤ−α−トコフェロールポリエチレングリコール１０００スクシネート（ＴＰＧＳ）を、均質な混合物が得られるまで攪拌した。
ステップ２．適切な容器で、ジェランガムを水に溶かした。
ステップ３．水溶液を、均質な組成物が得られるまで連続的に攪拌しながら界面活性剤およびクロベタゾール混合物に段階的に添加した。
ステップ４．グリセリンを添加し、均質になるまで製剤を攪拌した。
【０１０９】
本発明の実施例２８の比較組成物を、本明細書に記載される方法に従って調製した：
ステップ１．適切な反応器で、クロベタゾールとワセリンを、均質な混合物が得られるまで攪拌した。
【０１１０】
Ｃ．比較緩衝液
比較緩衝組成物を、本明細書に記載される方法に従って調製した：
リン酸二水素ナトリウム一水和物およびリン酸水素二ナトリウム二水和物をアセトニトリル／水（体積比１：１）に溶解し、直後にプロピオン酸クロベタゾールを得られた媒体に溶解した。
【０１１１】
１．３．安定性試験
ナノエマルジョン組成物中のプロピオン酸クロベタゾールの化学的安定性を同じｐＨの緩衝液と比較して、ナノエマルジョンの保護効果を評価した。
【０１１２】
Ａ．試料
試験試料：実施例１１の本発明のナノエマルジョン組成物を、ｐＨ６．０、６．８および７．４に調整した。
第１．２節に開示されている比較緩衝液試料。
【０１１３】
Ｂ．方法
第Ａ節に言及されている試料は、薬局方のウェブサイト（２０１７年６月のｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｐｈａｒｍａｃｏｐｅｉａ．ｃｎ／ｖ２９２４０／ｕｓｐ２９ｎｆ２４ｓ０＿ｍ１８３３４．ｈｔｍｌ＃ｕｓｐ２９ｎｆ２４ｓ０＿ｍ１８３３４）で入手可能なＵＳＰ＜１８３３４＞ｍｏｎｏｇｒａｐｈ  Ｃｌｏｂｅｔａｓｏｌ  Ｐｒｏｐｉｏｎａｔｅに記載されている有機不純物の分析方法に従って個別に分析した。
【０１１４】
使用したクロマトグラフィーシステムは、２４０ｎｍの紫外線検出を備えたＡｇｉｌｅｎｔ１２９０高速液体クロマトグラフィーで構成されていた。Ｋｒｏｍａｓｉｌ  Ｃ１８（１５０×４．６ｍｍ、５μｍ）カラムを不純物の分離に使用した。
【０１１５】
各組成物約１ｇを水／アセトニトリル（１：１）体積：体積で最終体積５ｍｌまで希釈することによって試料を調製した。
【０１１６】
Ｃ．条件
試料を、それぞれｐＨ６．０、６．８および７．４で、７０℃で２４時間維持した。その後、試料を分析した。
【０１１７】
Ｄ．結果
表３は、第Ｂ節で言及した条件下で試料を維持した後に検出された分解生成物の総量および個々の分解生成物の百分率を示している。特に、重量パーセント（％）で表される個々の分解生成物の量と分解生成物の総量が以下の表に示される。
【０１１８】
【表３】
2020524672.tif 000010
【０１１９】
表３の結果に示されるように、本発明のナノエマルジョン中に存在するプロピオン酸クロベタゾールは、全ての試験ｐＨで、比較リン酸緩衝液に含まれるプロピオン酸クロベタゾールよりもはるかに安定である。
【０１２０】
特に、ｐＨ６．０では、本発明のナノエマルジョン中よりも７倍多い分解生成物が比較溶液中に存在する。加えて、ｐＨ６．８では、比較溶液中に１４倍多い分解生成物が存在し、ｐＨ７．４では、本発明のナノエマルジョンよりも５３倍多い分解生成物が存在する。
【０１２１】
したがって、本発明のナノエマルジョン組成物は、溶液と比較した場合、プロピオン酸クロベタゾールの安定性を改善し、さらに、本発明の組成物は、ＩＣＨ  Ｈａｒｍｏｎｉｓｅｄ  Ｔｒｉｐａｒｔｉｔｅ  Ｇｕｉｄｅｌｉｎｅ  Ｉｍｐｕｒｉｔｉｅｓ  ｉｎ  Ｎｅｗ  Ｄｒｕｇ  Ｐｒｏｄｕｃｔｓ  Ｑ３Ｂ（Ｒ２）の仕様の厳格な規制事項要件にも適合する。
【０１２２】
１．４．インビトロ薬物放出性能試験
局所組成物の性能試験の目的は、剤形からの薬物放出の測定である。縦型拡散セル（ＶＤＣまたはフランツセル）システムは、コロイド剤形からの薬物放出を測定するための単純で、信頼性が高く、再現性のある手段である。
【０１２３】
薬物放出は、しばしば使用される、Ｈｉｇｕｃｈｉによって公開されたモデルのような拡散方程式に基づく数学的モデルによって記載することができる。このモデルは、シンク条件が維持される場合、時間の平方根（勾配μｇ／ｈ１／２）の関数としての薬物の放出を記載する。勾配を、試験した組成物からの有効成分の放出速度とみなすことができる。
【０１２４】
Ａ．試料
試験試料：実施例７、１１および２２の本発明のナノエマルジョン組成物。
比較試料：実施例２６、２８および２９の比較組成物。
【０１２５】
Ｂ．方法
送達システムとリザーバーとの間の拡散連通は、不活性で透過性の高い支持膜（ポリスルファンＴｕｆｆｒｙｎ膜０．４５μｍ）を介して行われる。膜は、製品とアクセプター媒体を別々に離れて維持する。膜は、拡散抵抗が最小限に抑えられ、速度制御されないように選択した。
【０１２６】
Ｃ．条件
放出速度実験を、３２℃±１℃で行った。シンク条件を達成するために、アクセプター培地を５％ＴＰＧＳ水溶液とした。試験試料および比較試料を、直径１５ｍｍオリフィスフランツセルに配置された膜の上に配置した。サンプリングを４時間実施し、回収した体積を新しいアクセプター培地に置き換えた。アクセプター中のプロピオン酸クロベタゾールの量を、薬局方のウェブサイト（２０１７年６月のｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｐｈａｒｍａｃｏｐｅｉａ．ｃｎ／ｖ２９２４０／ｕｓｐ２９ｎｆ２４ｓ０＿ｍ１８３３４．ｈｔｍｌ＃ｕｓｐ２９ｎｆ２４ｓ０＿ｍ１８３３４）で入手可能なＣｌｏｂｅｔａｓｏｌ  Ｐｒｏｐｉｏｎａｔｅ  ＵＳＰ  ｍｏｎｏｇｒａｐｈに記載されている有機不純物の分析方法に従ってすべてのサンプリング時にすべての放出セルについて決定した。
【０１２７】
放出された平均累積量（μｇ）を、試験したさまざまな製剤について計算し、独立変数として時間の平方根を使用して線形関数を確立した。勾配は、様々な組成物からの薬物放出率を評価する主因子であった。
【０１２８】
Ｄ．結果
本発明に開示される本発明の組成物および比較組成物からのプロピオン酸クロベタゾールの放出は、線形数学的拡散モデルに対する良好な調整を示した。以下の表４に示されるように、係数（Ｒ２）の値が１に近いことが実証される。
【０１２９】
表４は、μｇ／ｈ１／２で表される勾配値と係数Ｒ２値を示している。
【０１３０】
【表４】
2020524672.tif 000011
【０１３１】
しかしながら、本発明の組成物のみが有効成分の迅速な送達を示す一方、比較組成物は組成物からのクロベタゾールの不完全な低い送達を有している。高い勾配値は、本発明の組成物におけるクロベタゾールの迅速な送達を確認する（実施例７、１１および２２参照）一方、比較組成物（実施例２６、２８および２９）は、低い不完全な送達と相関する低い勾配値を示している。
【０１３２】
特に、本発明のナノエマルジョンに含まれる有効成分は、比較試料と比較して、より高い量および速度でレセプター培地に放出される。しかしながら、クロベタゾールは標的生体組織へのアクセスが制限されているため、比較組成物の有効性は損なわれる一方、ナノエマルジョンは有効成分の正しい放出を可能にする。この挙動は、限られた滞留時間が課題であり、有効成分をより速く有効に送達しなければならない眼、鼻または頬側投与に特に適している。
【０１３３】
２．薬理学的有効性試験
Ａ．耐容性
Ａ．１．インビトロ耐容性
Ａ．１．１．角膜細胞インビトロ耐容性試験（ＳＴＥ法）
試料
試験試料：実施例２、４、８、１１、１４、１６、１９および２０のナノエマルジョン。
比較試料：比較実施例２４、２５、２６、３０および３１のナノエマルジョン。
【０１３４】
材料および方法
ＳＴＥ試験法（ＯＥＣＤ  ＴＧ４９１）は、細胞傷害性を誘発する能力に基づいて、試験化学物質（物質および混合物）の眼に対する危険可能性を評価するインビトロ方法である。この実験の目的は、眼科用ナノエマルジョン中のプロピオン酸クロベタゾールの細胞傷害効果を特徴付けることである。
【０１３５】
ＳＩＲＣ（Ｓｔａｔｅｎｓ  Ｓｅｒｕｍ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔウサギ角膜）細胞を滅菌９６ウェルマイクロフィルタープレートに播種し、コンフルエントになるまで培養液に維持した。試験製剤を、決定された濃度で生理食塩水（ＰＢＳ）に希釈し、５分間培養培地をクロベタゾールナノエマルジョンに置き換えた。その後、細胞生存率をＭＴＴアッセイによって決定した。細胞死亡率を百分率で表し、生理食塩水対照に対する各試験濃度について計算した。
【０１３６】
結果
本発明の試験されたナノエマルジョンは、試験された濃度で細胞傷害性を示さなかったため、眼の損傷の可能性がないことを示す、ＳＴＥスコアによる最小刺激性として分類された。しかしながら、上述の比較実施例の組成物のインキュベーションは細胞傷害性効果を示した。
【０１３７】
したがって、本発明のナノエマルジョンは眼の危険可能性を示さず、眼レベルで十分に耐容性であるとみなされなければならない一方、比較組成物は刺激性であり、眼科投与経路には適さない。
【０１３８】
Ａ．１．２．内耳細胞インビトロ耐容性試験
試料
試験試料：実施例２、４、８、１１、１４、１６および２０のナノエマルジョン。
比較試料：比較実施例２４、３０および３１のナノエマルジョン。
【０１３９】
材料および方法
ＨＥＩ−ＯＣ１（Ｈｏｕｓｅ  Ｅａｒ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ−コルチ器−１）細胞株は、研究目的で入手可能な最も使用されている聴覚細胞株の１つである。ＨＥＩ−ＯＣ１細胞は、コルチ器感覚細胞のいくつかの特徴的な分子マーカーを発現する（Ｋａｌｉｎｅｃ  ＧＭら、「Ａ  ｃｏｃｈｌｅａｒ  ｃｅｌｌ  ｌｉｎｅ  ａｓ  ａｎ  ｉｎ  ｖｉｔｒｏ  ｓｙｓｔｅｍ  ｆｏｒ  ｄｒｕｇ  ｏｔｏｔｏｘｉｃｉｔｙ  ｓｃｒｅｅｎｉｎｇ」．Ａｕｄｉｏｌ．Ｎｅｕｒｏｏｔｏｌ．２００３；第８巻、１７７〜８９頁参照）。
【０１４０】
このアッセイの目的は、耳投与のためのプロピオン酸クロベタゾールナノエマルジョンの耳毒性可能性を試験することである。
【０１４１】
ＨＥＩ−ＯＣ１細胞を滅菌９６ウェルマイクロフィルタープレートに播種し、２４時間後、生理食塩水（ＰＢＳ）に５％および０．０５％に希釈したクロベタゾールナノエマルジョンで５分間処置した。その後、細胞生存率をＭＴＴアッセイによって決定した。細胞死亡率を百分率で表し、生理食塩水対照に対する各試験濃度について計算した。
【０１４２】
結果
本発明の試験されたナノエマルジョンについて細胞傷害性は観察されなかった。しかしながら、比較組成物のインキュベーションは、５％の濃度で高い細胞死亡率を示した。
【０１４３】
したがって、本発明のナノエマルジョンは、耳刺激の可能性が低い一方、比較製剤は耳投与には適していない。
【０１４４】
Ａ．２．インビボ眼耐容性試験
試料
試験試料：本発明の実施例１１のナノエマルジョン。
比較試料：実施例２７の比較組成物。
対照試料：実施例３２のビヒクル。
【０１４５】
材料および方法
−この試験の目的は、プロピオン酸クロベタゾールの様々な製剤の眼刺激可能性を評価することである。
−試験には雄ニュージーランドウサギを使用した。
−使用したプロトコルは、ＴＧ４０５：ＯＣＤＥ  Ｇｕｉｄｅｌｉｎｅ  ｆｏｒ  ｔｅｓｔｉｎｇ  ｏｆ  ｃｈｅｍｉｃａｌｓ：Ａｃｕｔｅ  Ｅｙｅ  Ｉｒｒｉｔａｔｉｏｎ／Ｃｏｒｒｏｓｉｏｎ（２０１２）に基づいていた。
−ウサギを対照群と試験群を含む異なる群に分離した。処置は、上に定義される対照試料、試験試料および比較試料を各動物の両眼に１日７回投与することを含んでいた。したがって、眼球から下眼瞼を穏やかに引き離した後、各試料を結膜下嚢に入れた。施用後、物質の損失を防ぐために、眼瞼を閉じて穏やかに保持した。結膜、角膜、眼瞼および虹彩を、各日、投薬前および最後の投薬の３０分後に、化学物質を試験するためのＴＧ４０５：ＯＣＤＥ  Ｇｕｉｄｅｌｉｎｅ  ｆｏｒ  ｔｅｓｔｉｎｇ  ｏｆ  ｃｈｅｍｉｃａｌｓ：Ａｃｕｔｅ  Ｅｙｅ  Ｉｒｒｉｔａｔｉｏｎ／Ｃｏｒｒｏｓｉｏｎ（２０１２）からの眼病変の等級付けに従って細隙灯を使用して検査した。対照の非処置動物を参照として使用した。
【０１４６】
結果
本発明のナノエマルジョンの投与後に処置された動物の眼の角膜、眼瞼、虹彩または結膜において、眼の異常（混濁、発赤または腫脹）は観察されなかった。したがって、本発明のナノエマルジョンは、眼レベルで刺激性でないとみなされなければならない。しかしながら、上述のように、比較試料で得られた結果は刺激性であり、眼投与に適さないことを示した。
【０１４７】
Ｂ．眼圧（ＩＯＰ）に対する効果の試験
試料
試験試料：実施例７および１０のナノエマルジョン。
対照試料：陽性対照：デキサメタゾン０．１％。
陰性対照：０．９％塩化ナトリウム生理食塩水
【０１４８】
材料および方法
−使用した実験動物は、正常血圧アルビノニュージーランドウサギであった。ウサギを、眼圧（ＩＯＰ）の日内周期を調整し、安定に維持するために必要な明／暗の期間（１２／１２時間）に適応させた。
−ウサギは異なる群に分けた：陽性対照群（陽性対照試料）、陰性対照群（陰性対照試料）および２つの試験群（２つの試験試料）。
−処置は、デキサメタゾンの前房への注入を伴い、一方、残りの群については；各動物に、各眼に１５日間、１日４回、対照試料または試験組成物を局所点滴注入した。
−群のＩＯＰの測定を、１日２回行った。各動物への点滴注入後、眼表面に対するそれぞれの化合物の有害効果の可能性を観察した。
【０１４９】
結果
本発明のナノエマルジョンの試験（実施例７および１０）は、１５日間隔試験中に眼圧の有意な変化を示さなかった。特に、実施例７のナノエマルジョンの投与後、眼圧の統計学的に有意な上昇は観察されなかった。一方、実施例１０のナノエマルジョンの投与では変化が観察されなかった。
【０１５０】
他方、デキサメタゾンの前房内投与で処置された動物（陽性対照群）は、眼圧値の統計学的に有意な上昇を示した。
【０１５１】
さらに、試験した試料の眼科検査のいずれにおいても、言及に値する変化も所見もほとんど示さず眼表面の有害効果は観察されなかった。
【０１５２】
したがって、本発明のナノエマルジョンは、処置中（すなわち、１５日間の点滴注入期間中）安全であるとみなされるべきである。比較試料は、インビトロ耐容性試験で得られた負の結果のため、動物モデルでの試験には適していなかった。
【０１５３】
Ｃ．抗炎症有効性試験
Ｃ．１．インビトロ抗炎症有効性試験
試料
試験試料：実施例２、６、７、１０、１１、１６、２１および２２のナノエマルジョン。
【０１５４】
材料および方法
ＴＨＰ−１細胞株は、急性単球性白血病患者に由来する不死ヒト単球細胞株である。ＴＨＰ−１細胞を播種し、ＬＰＳおよびＩＦＮγで炎症を誘発し、細胞を２４時間インキュベートした。その後、細胞を試験試料で処置した。試験する製剤を培養培地で希釈し、さらに２４時間培養した。タンパク質濃度を、（ＢＤ５５５２１２）によるＢＤＯｐｔＥＩＡ  Ｈｕｍａｎ  ＴＮＦα  Ｅｌｉｓａ  Ｓｅｔを使用して、ＥＬＩＳＡによって測定した。サイトカインレベルの阻害割合を、１００％発現レベルに設定した刺激群に対して計算した。
【０１５５】
結果
本発明のナノエマルジョン組成物は、ＴＮＦαのタンパク質発現を低下させる抗炎症活性を示し、１００％に近い阻害の割合を示した。これらの結果は、培養培地への有効成分の放出と正しい抗炎症活性を確認している。
【０１５６】
Ｃ．２．インビボ抗炎症有効性試験
Ｃ．２．１．ｉ）術後炎症のウサギモデル（穿刺）
試料
試験試料：実施例１０および１８
比較試料：実施例２３
対照試料：陰性対照１：生理食塩水、及び、陰性対照２：ビヒクル実施例３３
【０１５７】
材料および方法
抗炎症有効性試験を、前房穿刺によって作成された術後炎症のウサギ急性モデルで実施する。
【０１５８】
穿刺を受けた動物を、陰性対照群（陰性対照試料）、比較試験群（比較試料）および２つの試験群（試験試料）の異なる群に割り当てた。注射器に取り付けた針で前房穿刺を実施し、房水の試料を採取した。最初の穿刺から２時間後、２回目の穿刺を実施して、生化学的評価のために房水を収集した。房水のプロスタグランジンＥ２（ＰＧＥ２）のレベルを、ＥＬＩＳＡ（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ  ＳＫＧＥ００４Ｂ）によって評価した。
【０１５９】
結果
この試験の目的は、本発明のナノエマルジョンのプロピオン酸クロベタゾールの抗炎症有効性を評価することである。
【０１６０】
本発明のナノエマルジョンは、対照と比較してＰＧＥ２の房水濃度を有意に低下させた。しかしながら、比較組成物の投与は、ＰＧＥ２バイオマーカーに対する効果を示さず、有効性の明らかな欠如を示した。
【０１６１】
したがって、本発明のナノエマルジョンを、眼炎症性疾患または状態の治療に効率的であるとみなすべきである。
【０１６２】
３．比較実施例
以下に開示される比較組成物３４および３５は、Ｍｏｈａｍｍａｄ  Ｓａｊｉｄ  Ａｌｉら（「ｍｏｈａｍｍａｄ  Ｓａｊｉｄ  Ａｌｉ  ｅｔ  ａｌ．」ａｃｃｅｌｅｒａｔｅｄ  Ｓｔａｂｉｌｉｔｙ  Ｔｅｓｔｉｎｇ  ｏｆ  ａ  Ｃｌｏｂｅｔａｓｏｌ  ｐｒｏｐｉｏｎａｔｅ  Ｌｏａｄｅｄ  ｎａｎｏｅｍｕｌｓｉｏｎ  ａｓ  ｐｅｒ  ＩＣＨ  ｇｕｉｄｅｌｉｎｅ．」Ｓｃｉｅｎｔｉａ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａ、２０１３、第８１巻、第４号、１０８９〜１１００頁参照）に記載されるプロピオン酸クロベタゾールエマルジョンの再現である。
【０１６３】
３．１．比較組成物
表５は、実施例３４および３５の比較組成物の定量的組成を示し、プロピオン酸クロベタゾールの量は、組成物の総体積に対する質量濃度（ｗ／ｖ）で表される一方、組成物の残りの成分の量は、組成物の総体積に対する体積百分率（％）（ｖ／ｖ）で表される。
【０１６４】
【表５】
2020524672.tif 000012
【０１６５】
３．２．調製方法
３．２．１．比較実施例３４
Ｔｗｅｅｎ２０とエチルアルコールとの間の比Ｓｍｉｘ  １：１を有する比較クロベタゾール実施例３４を、１０９２頁の「プロピオン酸クロベタゾールナノエマルジョンの調製」の節でＭｏｈａｍｅｄ  Ｓａｊｉｄ  Ａｌｉによって開示される方法に従って調製した。この節を本明細書で以下に含める：
【０１６６】
「［…］０．０５％（ｗ／ｖ）のプロピオン酸クロベタゾール（ＣＰ）を１５％（ｖ／ｖ）ユーカリ油に溶解し、次いで、３５％（ｖ／ｖ）のＴｗｅｅｎ２０とエチルアルコールの混合物（１：１ｖ／ｖ）を油相にゆっくり添加することによって、最適化されたナノエマルジョンを調製した。次いで、残りの量の蒸留水をゆっくり添加して、１００％（ｖ／ｖ）の最終調製物を得た。混合物（油、Ｓｍｉｘ、水）を激しく振盪するために、ボルテックスミキサーを使用した［…］」
【０１６７】
３．２．２．比較実施例３５
Ｔｗｅｅｎ２０とエチルアルコールとの間の比Ｓｍｉｘ  １：２を有する比較クロベタゾール実施例３５（１０９２頁１６行参照）を、上に開示される１０９２頁の「プロピオン酸クロベタゾールナノエマルジョンの調製」の節でＭｏｈａｍｅｄ  Ｓａｊｉｄによって開示される方法に従って調製したが、Ｔｗｅｅｎ２０とエチルアルコールの比を１：１から１：２に変更した。
【０１６８】
３．３．外観および液滴アベレージサイズの測定
３．３．１．肉眼による評価
比較実施例３４および３５を肉眼で観察（それらの調製直後）した後、これらの組成物は低粘度の外観を有する不透明（透明でない）液体組成物であると結論付けられた。
【０１６９】
３．３．２．動的光散乱（ＤＬＳ）による液滴アベレージサイズの測定
比較実施例３４および３５のアベレージ液滴サイズを、動的光散乱（ＤＬＳ）によって分析した。装置は、６０００ｎｍを超える液滴アベレージサイズの値を示唆する、試料の高い多分散性を決定した。
【０１７０】
３．３．３．結論
比較実施例３４および３５の透明性の欠如は、Ｍｏｈａｍｍａｄ  Ｓａｊｉｄ  Ａｌｉらで開示された比較組成物３４および３５の液滴サイズがナノエマルジョン（半透明）よりもはるかに大きいことを示している。さらに、ＤＬＳによって測定された液滴サイズは高い分散および６０００ｎｍを超える液滴サイズ値を示したため、比較組成物の液滴サイズがナノエマルジョン液滴アベレージサイズ範囲（１〜５００ｎｍ）に対応しないことを意味している。
【０１７１】
したがって、上に開示される全てから、比較実施例３４および３５の液滴サイズが、特許請求される範囲外である６０００ｎｍ（これは、ＤＬＳの高検出点である）よりも大きく、そのため、これらをナノエマルジョンの代わりにエマルジョンと見なさなければならないことが理解された。
【０１７２】
３．４．安定性試験
比較組成物３４および３５は、均質で均一な外観を維持する代わりに、不安定化されて３つの区別された相になった。試験を２５±２℃／６０±５％相対湿度（ＲＨ）で実施したところ、１週間の貯蔵時間の前に変化が観察された。
そのため、比較組成物３４および３５はコロイド安定性を有さない。
【０１７３】
３．５．オスモル濃度試験（オスモラリティ・テスト）
３．５．１．試料
試験試料：比較組成物３４および３５
【０１７４】
３．５．２．材料および方法
重量オスモル濃度は、浸透圧計を使用して試料の凝固点降下を測定することによって決定される。
【０１７５】
３．５．３．結果
比較組成物３４および３５の重量オスモル濃度は、本発明の特許請求される範囲（すなわち、１００ｍＯｓｍ／Ｋｇ〜５００ｍＯｓｍ／Ｋｇ）よりも高かった。特に、両比較組成物は、２５００ｍＯｓｍ／Ｋｇよりも高い重量オスモル濃度を有していた。比較組成物３４が重量オスモル濃度２７１６ｍＯｓｍ／Ｋｇを有することは特に注目に値する。（ＵＳＰ  Ｇｅｎｅｒａｌ  Ｃｈａｐｔｅｒ＜７７１＞Ｏｐｈｔｈａｌｍｉｃ  Ｐｒｏｄｕｃｔｓ、ｏｓｍｏｌａｌｉｔｙ  ａｎｄ  ｏｓｍｏｌａｒｉｔｙ＜７８５＞参照：眼科用製品は１７１ｍＯｓｍ／ｋｇ〜約１７１１ｍＯｓｍ／ｋｇまで許容され得る）。比較組成物の重量オスモル濃度値は、１７１ｍＯｓｍ／ｋｇ〜１７１１ｍＯｓｍ／ｋｇである眼施用について許容される重量オスモル濃度よりもはるかに高かった。
【０１７６】
したがって、比較組成物３４および３５は、眼施用には適切ではなかった。鼻用および耳用組成物も同様に、鼻および耳組織の感受性のために、等張性またはわずかに高張性またはわずかに低張性の組成物を必要とする。したがって、組成物３４および３５は、鼻または耳投与送達経路に適していなかった。
【０１７７】
３．６．角膜細胞インビトロ耐容性試験（ＳＴＥ法）
３．６．１．試料、材料および方法
このアッセイは上の第Ａ．１．１．節に開示されるように実施したが、試験試料として比較組成物３４および３５を使用した。
【０１７８】
３．６．２．結果
試験した比較組成物３４および３５は、試験した濃度で細胞傷害性を示したため、ＳＴＥスコアにより毒性として分類された。
したがって、比較組成物３４および３５は、眼投与には適切ではなかった。
【０１７９】
３．７．内耳細胞インビトロ耐容性試験
３．７．１．試料、材料および方法
このアッセイは上の第Ａ．１．２．節に開示されるように実施したが、試験試料として比較組成物３４および３５を使用した。
【０１８０】
３．７．２．結果
試験した比較組成物３４および３５について細胞傷害性が観察された。特に、比較組成物３４および３５のインキュベーションは、５％の試験濃度で高い細胞死亡率を示した。
したがって、比較組成物３４および３５は、耳投与には適切ではなかった。
【０１８１】
３．８．眼刺激性アッセイ（ＨＥＴ−ＣＡＭ）
３．８．１．材料および方法
ＨＥＴ−ＣＡＭは、眼結膜の類似体である絨毛尿膜の血管変化を模倣する方法であり、これを使用して試験物質の潜在的刺激性を決定することができる。この方法は、
ＩＣＣＶＡＭ−Ｒｅｃｏｍｍｅｎｄｅｄ  Ｔｅｓｔ  Ｍｅｔｈｏｄ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌ：Ｈｅｎ’ｓ  Ｅｇｇ  Ｔｅｓｔ−Ｃｈｏｒｉｏａｌｌａｎｔｏｉｃ  Ｍｅｍｂｒａｎｅ（ＨＥＴ−ＣＡＭ）Ｔｅｓｔ  Ｍｅｔｈｏｄ．ＮＩＨ  Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ  Ｎｏ．１０−７５３３−Ｐｕｂｌｉｓｈｅｄ２０１０に記載されているものに基づく。
【０１８２】
受精白色ＳＰＦ（特定病原体除去）ホワイトレグホン鶏卵を３７℃、湿度６０％で１０日目までインキュベートした。胚の生存率を測定した後、気室のすぐ上の殻から長方形窓を取り除き、卵膜を２〜３ｍｌの０．９％生理食塩水で慎重に湿らせた。３０分間インキュベーターに戻した後、内膜を除去し、試験物質をピペットでＣＡＭ膜に施用した。卵を、溶解、出血および／または凝固の出現について５分間連続して観察し、ＩＣＣＶＡＭ−Ｒｅｃｏｍｍｅｎｄｅｄ  Ｔｅｓｔ  Ｍｅｔｈｏｄ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌ（ＮＩＨ  Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ  Ｎｏ．１０−７５５３−Ｐｕｂｌｉｓｈｅｄ２０１０）ガイドラインに従って刺激スコア（ＩＳ）を決定した。
【０１８３】
刺激スコア（ＩＳ）は以下の通りである：
−非刺激性：０≦ＩＳ≦０．９
−わずかに刺激性：１≦ＩＳ≦４．９
−中程度の刺激性：５≦ＩＳ≦９．９
−重度の刺激性：１０≦ＩＳ≦２１
【０１８４】
３．８．２．結果
上に開示されるＨＥＴ−ＣＡＭ眼刺激アッセイを実施し、試験試料の対応する代表的な画像を作成した（図１参照）。
【０１８５】
特に、代表的な画像は、本発明のナノエマルジョンが溶解も、出血も、凝固過程も誘発しなかったことを反映した一方、代表的な画像は、比較組成物３４が刺激性であることを反映した。
【０１８６】
さらに、実施例７および１１の組成物ならびに比較組成物３４の刺激スコア（ＩＳ）も決定した。ＩＳの値を、以下の表に開示する。
【０１８７】
【表６】
2020524672.tif 000013
【０１８８】
したがって、上述の結果から、本発明の組成物は非刺激性である一方、Ｍｏｈａｍｍａｄ  Ｓａｊｉｄ  Ａｌｉらに開示される比較組成物は刺激性であるとみなされ、したがって、本発明の提案される使用による医薬品としての使用には適していないことが理解された。
【０１８９】
３．９．結論
Ｍｏｈａｍｍａｄ  Ｓａｊｉｄ  Ａｌｉらに開示される組成物は、６０００ｎｍよりも大きい液滴アベレージサイズおよび２５００ｍＯｓｍ／ｋｇより高い重量オスモル濃度を有する不透明なエマルジョンであった。さらに、油／クロベタゾールの比が２７２であり、界面活性剤／クロベタゾールの比が３８５であり、共に本発明の組成物における特許請求される範囲よりも高い。
【０１９０】
その上、Ｍｏｈａｍｍａｄ  Ｓａｊｉｄ  Ａｌｉらに開示される組成物はコロイド安定性を有さず、またこれらの組成物は刺激性であり、したがって医薬品として使用するのに適していない。
【０１９１】
［引用リスト］
１．491 OECD Guideline for the testing of chemicals. Short Time Exposure in vitro test method for identifying i)Chemical inducing serious eye damage and ii)Chemicals not requiring classification for eye irritation or serious eye damage(2015).ウェブサイト２０１５年７月のhttp://www.oecd-ilibrary.org/docserver/download/9715201e.pdf?expires=1515680383&id=id&accname=guest&checksum=623490053F1D25E26DB7B437B0669A4Bで入手可能。
２．Ｈａｓｓａｎ，Ｐ．ら、「Making sense of Brownian motion:colloid characterization by dynamic light scattering」、Ｌａｎｇｍｕｉｒ，２０１５、第３１巻、第３〜１２頁。
３．ICH Harmonised Tripartite Guideline Impurities in New Drug Products Q3B(R2).ウェブサイト２０１７年６月のhttp://www.ich.org/products/guidelines/quality/quality-single/article/impurities-in-new-drug-products.htmlで入手可能。
４．Kalinec GM,Webster P,Lim DJ,Kalinec F:A cochlear cell line as an in vitro system for drug ototoxicity screening.Audiol. Neurootol.2003；8:177-89.
５．TG405: OCDE Guideline for testing of chemicals: Acute Eye Irritation/Corrosion (2012)．
ウェブサイト2012年10月のhttp://www.oecd-ilibrary.org/docserver/download/9712201e.pdf?expires=1515680005&id=id&accname=guest&checksum=E0DCF0095196C8D17EBEBE86CAF3D3DAで入手可能。
６．USP<18334> monograph Clobetasol Propionate.ウェブサイト２０１７年６月のhttp://www.pharmacopeia.cn/v29240/usp29nf24s0_m18334.html#usp29nf24s0_m18334で入手可能。
７．欧州特許番号、欧州特許第０８４４００１号。
８．ＰＣＴ特許出願、国際公開第２０１７０３７６６３号。
９．ICCVAM-Recommended Test Method Protocol: Hen’s Egg Test - Chorioallantoic Membrane (HET-CAM) Test Method (NIH Publication No. 10-7553-Published 2010) guideline.ウェブサイト２０１７年１２月のhttps://ntp.niehs.nih.gov/iccvam/docs/protocols/ivocular-hetcam.pdfで入手可能。
１０． Mohammad Sajid Aliら「Accelerated Stability Testing of a Clobetasol propionate Loaded nanoemulsion as per ICH guideline」Scientia Pharmaceutica、2013、第８１巻、第４号、第１０８９〜１１００頁)。
【図１】
2020524672.tif 000014
【国際調査報告】
2020524672.tif 000015
2020524672.tif 000016