(57)【要約】本開示は、部分的には、α−シヌクレイン抗体またはそのα−シヌクレイン結合断片の投与計画、及びシヌクレイノパチーの治療におけるそれらの使用に関する。これらの投与計画は、シヌクレイノパチー、例えば、パーキンソン病（ＰＤ）、パーキンソン病認知症（ＰＤＤ）、レビー小体型認知症（ＤＬＢ）、アルツハイマー病のレビー小体変異型（ＬＢＶＡＤ）、純粋自律神経不全症（ＰＡＦ）、多系統萎縮症（ＭＳＡ）、及び１型脳内鉄沈着神経変性症（ＮＢＩＡ−Ｉ）の治療において用途を見出す。【選択図】図５
2020512368.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
シヌクレイノパチーの治療をそれを必要とするヒト対象において行う方法であって、前記ヒト対象に抗α−シヌクレイン抗体を、前記ヒト対象の体重１ｋｇあたり、３ｍｇ／ｋｇ、５ｍｇ／ｋｇ、１５ｍｇ／ｋｇ、４５ｍｇ／ｋｇ、または９０ｍｇ／ｋｇの用量で静脈内投与することを包含し、ここで前記抗α−シヌクレイン抗体は、免疫グロブリン重鎖可変領域（ＶＨ）及び免疫グロブリン軽鎖可変領域（ＶＬ）を含み、ここで：
（ａ）前記ＶＨは、ＶＨ相補性決定領域（ＶＨ−ＣＤＲ）を含み、ここで：
ＶＨ−ＣＤＲ１は、配列番号１のアミノ酸残基からなり；
ＶＨ−ＣＤＲ２は、配列番号２のアミノ酸残基からなり；そして
ＶＨ−ＣＤＲ３は、配列番号３のアミノ酸残基からなり；そして
（ｂ）前記ＶＬは、ＶＬ−ＣＤＲを含み、ここで：
ＶＬ−ＣＤＲ１は、配列番号４のアミノ酸残基からなり；
ＶＬ−ＣＤＲ２は、配列番号５のアミノ酸残基からなり；そして
ＶＬ−ＣＤＲ３は、配列番号６のアミノ酸残基からなる、前記方法。
【請求項２】
前記シヌクレイノパチーがパーキンソン病（ＰＤ）、パーキンソン病認知症（ＰＤＤ）、レビー小体型認知症（ＤＬＢ）、アルツハイマー病のレビー小体変異型（ＬＢＶＡＤ）、多系統萎縮症（ＭＳＡ）、純粋自律神経不全症（ＰＡＦ）、または１型脳内鉄沈着神経変性症（ＮＢＩＡ−Ｉ）である、請求項１記載の方法。
【請求項３】
前記シヌクレイノパチーがパーキンソン病である、請求項１記載の方法。
【請求項４】
中枢神経系におけるα−シヌクレインの異常な蓄積または沈着の処置をそれを必要とするヒト対象において行う方法であって、抗α−シヌクレイン抗体を、前記ヒト対象の体重１ｋｇあたり、３ｍｇ／ｋｇ、５ｍｇ／ｋｇ、１５ｍｇ／ｋｇ、４５ｍｇ／ｋｇ、または９０ｍｇ／ｋｇという用量で前記ヒト対象に静脈内投与することを包含し、ここで前記抗α−シヌクレイン抗体は、免疫グロブリン重鎖可変領域（ＶＨ）及び免疫グロブリン軽鎖可変領域（ＶＬ）を含み、ここで：
（ａ）前記ＶＨは、ＶＨ相補性決定領域（ＶＨ−ＣＤＲ）を含み、ここで：
ＶＨ−ＣＤＲ１は、配列番号１のアミノ酸残基からなり；
ＶＨ−ＣＤＲ２は、配列番号２のアミノ酸残基からなり；そして
ＶＨ−ＣＤＲ３は、配列番号３のアミノ酸残基からなり；そして
（ｂ）前記ＶＬは、ＶＬ−ＣＤＲを含み、ここで：
ＶＬ−ＣＤＲ１は、配列番号４のアミノ酸残基からなり；
ＶＬ−ＣＤＲ２は、配列番号５のアミノ酸残基からなり；そして
ＶＬ−ＣＤＲ３は、配列番号６のアミノ酸残基からなる、前記方法。
【請求項５】
前記ヒト対象が、中枢神経系におけるα−シヌクレインの異常な蓄積または沈着を有すると特定されている、請求項４に記載の方法。
【請求項６】
前記ＶＨが、配列番号８に記載のアミノ酸配列からなる、請求項１〜５のいずれか１項に記載の方法。
【請求項７】
前記ＶＬが、配列番号９に記載のアミノ酸配列からなる、請求項１〜５のいずれか１項に記載の方法。
【請求項８】
前記ＶＨが配列番号８に記載のアミノ酸配列からなり、前記ＶＬが配列番号９に記載のアミノ酸配列からなる、請求項１〜５のいずれか１項に記載の方法。
【請求項９】
前記抗体がヒトＩｇＧ１重鎖定常領域を含む、請求項１〜８のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１０】
前記抗体がヒトラムダ軽鎖定常領域を含む、請求項１〜８のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１１】
前記抗体が重鎖及び軽鎖を含み、前記重鎖が配列番号１０に記載のアミノ酸配列からなり、かつ前記軽鎖が配列番号１１に記載のアミノ酸配列からなる、請求項１〜５のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１２】
前記抗α−シヌクレイン抗体が、４週間ごと、３週間ごと、２週間ごと、または毎週投与される、請求項１〜１１のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１３】
前記抗α−シヌクレイン抗体の体重１ｋｇあたり３ｍｇが、４週間ごとに投与される、請求項１〜１１のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１４】
前記抗α−シヌクレイン抗体の体重１ｋｇあたり５ｍｇが４週間ごとに投与される、請求項１から１１のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１５】
前記抗α−シヌクレイン抗体の体重１ｋｇあたり１５ｍｇが４週間ごとに投与される、請求項１から１１のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１６】
前記抗α−シヌクレイン抗体の体重１ｋｇあたり４５ｍｇが４週間ごとに投与される、請求項１から１１のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１７】
前記抗α−シヌクレイン抗体の体重１ｋｇあたり９０ｍｇが４週間ごとに投与される、請求項１から１１のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１８】
前記ヒト対象が、少なくとも２用量の前記抗α−シヌクレイン抗体を投与される、請求項１〜１７のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１９】
前記ヒト対象が、少なくとも１２用量の前記抗α−シヌクレイン抗体を投与される、請求項１〜１７のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２０】
薬学的に許容される担体と一緒に、２１０ｍｇ、２２５ｍｇ、２５０ｍｇ、３５０ｍｇ、３７５ｍｇ、１０５０ｍｇ、１１２５ｍｇ、１２５０ｍｇ、３１５０ｍｇ、３３７５ｍｇ、３５００ｍｇ、６３００ｍｇ、または６７５０ｍｇという固定用量の抗α−シヌクレイン抗体を含む滅菌組成物であって、前記抗α−シヌクレイン抗体が、免疫グロブリン重鎖可変領域（ＶＨ）及び免疫グロブリン軽鎖可変領域（ＶＬ）を含み、ここで：
（ａ）前記ＶＨは、ＶＨ相補性決定領域（ＶＨ−ＣＤＲ）を含み、ここで：
ＶＨ−ＣＤＲ１は、配列番号１のアミノ酸残基からなり；
ＶＨ−ＣＤＲ２は、配列番号２のアミノ酸残基からなり；そして
ＶＨ−ＣＤＲ３は、配列番号３のアミノ酸残基からなり；そして
（ｂ）前記ＶＬは、ＶＬ−ＣＤＲを含み、ここで：
ＶＬ−ＣＤＲ１は、配列番号４のアミノ酸残基からなり；
ＶＬ−ＣＤＲ２は、配列番号５のアミノ酸残基からなり；そして
ＶＬ−ＣＤＲ３は、配列番号６のアミノ酸残基からなる、前記滅菌組成物。
【請求項２１】
前記滅菌組成物がバイアルで提供される、請求項２０に記載の滅菌組成物。
【請求項２２】
前記滅菌組成物が、前記抗α−シヌクレイン抗体の静脈内投与に適合したシリンジまたはポンプで提供される、請求項２０記載の滅菌組成物。
【請求項２３】
前記ＶＨが、配列番号８に記載のアミノ酸配列からなる、請求項２０〜２２のいずれか１項に記載の滅菌組成物。
【請求項２４】
前記ＶＬが配列番号９に記載のアミノ酸配列からなる、請求項２０〜２２のいずれか１項に記載の滅菌組成物。
【請求項２５】
前記ＶＨが配列番号８に記載のアミノ酸配列からなり、前記ＶＬが配列番号９に記載のアミノ酸配列からなる、請求項２０〜２２のいずれか１項に記載の滅菌組成物。
【請求項２６】
前記抗体がヒトＩｇＧ１重鎖定常領域を含む、請求項２０〜２５のいずれか１項に記載の滅菌組成物。
【請求項２７】
前記抗体がヒトラムダ軽鎖定常領域を含む、請求項２０〜２５のいずれか１項に記載の滅菌組成物。
【請求項２８】
前記抗体が重鎖及び軽鎖を含み、前記重鎖が配列番号１０に記載のアミノ酸配列からなり、前記軽鎖が配列番号１１に記載のアミノ酸配列からなる、請求項２０〜２２のいずれか１項に記載の滅菌組成物。
【請求項２９】
シヌクレイノパチーの治療をそれを必要とするヒト対象において行う方法であって、請求項２０〜２８のいずれか１項に記載の滅菌組成物からの抗α−シヌクレイン抗体の固定用量を前記ヒト対象に静脈内投与することを包含する、前記方法。
【請求項３０】
前記シヌクレイノパチーが、パーキンソン病（ＰＤ）、パーキンソン病認知症（ＰＤＤ）、レビー小体型認知症（ＤＬＢ）、アルツハイマー病のレビー小体変異型（ＬＢＶＡＤ）、多系統萎縮症（ＭＳＡ）、純粋自律神経不全症（ＰＡＦ）、または１型脳内鉄沈着神経変性症（ＮＢＩＡ−Ｉ）である、請求項２９に記載の方法。
【請求項３１】
前記シヌクレイノパチーがパーキンソン病である、請求項２９に記載の方法。
【請求項３２】
中枢神経系におけるα−シヌクレインの異常な蓄積または沈着の処置をそれを必要とするヒト対象において行う方法であって、請求項２０〜２８のいずれか１項に記載の滅菌組成物から固定用量の前記抗α−シヌクレイン抗体を前記ヒト対象に静脈内投与することを包含する、前記方法。
【請求項３３】
前記ヒト対象が、中枢神経系におけるα−シヌクレインの異常な蓄積または沈着を有すると特定されている、請求項３２に記載の方法。
【請求項３４】
前記抗α−シヌクレイン抗体が４週間ごと、３週間ごと、２週間ごと、または毎週投与される、請求項２９〜３３のいずれか１項に記載の方法。
【請求項３５】
２１０ｍｇ、２２５ｍｇ、２５０ｍｇ、３５０ｍｇ、３７５ｍｇ、１０５０ｍｇ、１１２５ｍｇ、１２５０ｍｇ、３１５０ｍｇ、３３７５ｍｇ、３５００ｍｇ、６３００ｍｇ、または６７５０ｍｇという固定用量が４週間ごとに投与される、請求項２９〜３３のいずれか１項に記載の方法。
【請求項３６】
前記ヒト対象が、少なくとも２用量の前記抗α−シヌクレイン抗体を投与される、請求項２９〜３５のいずれか１項に記載の方法。
【請求項３７】
前記ヒト対象が、少なくとも１２用量の前記抗α−シヌクレイン抗体を投与される、請求項２９〜３５のいずれか１項に記載の方法。
【請求項３８】
シヌクレイノパチーの治療をそれを必要とするヒト対象において行う方法であって、２１０ｍｇ、２２５ｍｇ、２５０ｍｇ、３５０ｍｇ、３７５ｍｇ、１０５０ｍｇ、１１２５ｍｇ、１２５０ｍｇ、３１５０ｍｇ、３３７５ｍｇ、３５００ｍｇ、６３００ｍｇ、または６７５０ｍｇという固定用量の抗α−シヌクレイン抗体を前記ヒト対象に静脈内投与することを包含し、前記抗α−シヌクレイン抗体は免疫グロブリン重鎖可変領域（ＶＨ）及び免疫グロブリン軽鎖可変領域（ＶＬ）を含み、ここで：
（ａ）前記ＶＨは、ＶＨ相補性決定領域（ＶＨ−ＣＤＲ）を含み、ここで：
ＶＨ−ＣＤＲ１は、配列番号１のアミノ酸残基からなり；
ＶＨ−ＣＤＲ２は、配列番号２のアミノ酸残基からなり；そして
ＶＨ−ＣＤＲ３は、配列番号３のアミノ酸残基からなり；そして
（ｂ）前記ＶＬは、ＶＬ−ＣＤＲを含み、ここで：
ＶＬ−ＣＤＲ１は、配列番号４のアミノ酸残基からなり；
ＶＬ−ＣＤＲ２は、配列番号５のアミノ酸残基からなり；そして
ＶＬ−ＣＤＲ３は、配列番号６のアミノ酸残基からなる、前記方法。
【請求項３９】
前記シヌクレイノパチーが、パーキンソン病（ＰＤ）、パーキンソン病認知症（ＰＤＤ）、レビー小体型認知症（ＤＬＢ）、アルツハイマー病のレビー小体変異型（ＬＢＶＡＤ）、多系統萎縮症（ＭＳＡ）、純粋自律神経不全症（ＰＡＦ）、または１型脳内鉄沈着神経変性症（ＮＢＩＡ−Ｉ）である、請求項３８記載の方法。
【請求項４０】
前記シヌクレイノパチーがパーキンソン病である、請求項３８に記載の方法。
【請求項４１】
中枢神経系におけるα−シヌクレインの異常な蓄積または沈着の処置をそれを必要とするヒト対象において行う方法であって、２１０ｍｇ、２２５ｍｇ、２５０ｍｇ、３５０ｍｇ、３７５ｍｇ、１０５０ｍｇ、１１２５ｍｇ、１２５０ｍｇ、３１５０ｍｇ、３３７５ｍｇ、３５００ｍｇ、６３００ｍｇ、または６７５０ｍｇという固定用量の抗α−シヌクレイン抗体を前記ヒト対象に静脈内投与することを包含し、前記抗α−シヌクレイン抗体は、免疫グロブリン重鎖可変領域（ＶＨ）及び免疫グロブリン軽鎖可変領域（ＶＬ）を含み、ここで：
（ａ）前記ＶＨは、ＶＨ相補性決定領域（ＶＨ−ＣＤＲ）を含み、ここで：
ＶＨ−ＣＤＲ１は、配列番号１のアミノ酸残基からなり；
ＶＨ−ＣＤＲ２は、配列番号２のアミノ酸残基からなり；そして
ＶＨ−ＣＤＲ３は、配列番号３のアミノ酸残基からなり；そして
（ｂ）前記ＶＬは、ＶＬ−ＣＤＲを含み、ここで：
ＶＬ−ＣＤＲ１は、配列番号４のアミノ酸残基からなり；
ＶＬ−ＣＤＲ２は、配列番号５のアミノ酸残基からなり；そして
ＶＬ−ＣＤＲ３は、配列番号６のアミノ酸残基からなる、前記方法。
【請求項４２】
前記ヒト対象が、中枢神経系におけるα−シヌクレインの異常な蓄積または沈着を有すると特定されている、請求項４１に記載の方法。
【請求項４３】
前記ＶＨが、配列番号８に記載のアミノ酸配列からなる、請求項３８〜４２のいずれか１項に記載の方法。
【請求項４４】
前記ＶＬが配列番号９に記載のアミノ酸配列からなる、請求項３８〜４２のいずれか１項に記載の方法。
【請求項４５】
前記ＶＨが配列番号８に記載のアミノ酸配列からなり、前記ＶＬが配列番号９に記載のアミノ酸配列からなる、請求項３８〜４２のいずれか１項に記載の方法。
【請求項４６】
前記抗体がヒトＩｇＧ１重鎖定常領域を含む、請求項３８〜４５のいずれか１項に記載の方法。
【請求項４７】
前記抗体がヒトラムダ軽鎖定常領域を含む、請求項３８〜４５のいずれか１項に記載の方法。
【請求項４８】
前記抗体が重鎖及び軽鎖を含み、前記重鎖が配列番号１０に記載のアミノ酸配列からなり、前記軽鎖が配列番号１１に記載のアミノ酸配列からなる、請求項３８〜４２のいずれか１項に記載の方法。
【請求項４９】
前記抗α−シヌクレイン抗体が４週間ごと、３週間ごと、２週間ごと、または毎週投与される、請求項３８〜４８のいずれか１項に記載の方法。
【請求項５０】
２５０ｍｇという固定用量の前記抗α−シヌクレイン抗体の固定用量を含む、請求項２０〜２８のいずれか１項に記載の滅菌組成物。
【請求項５１】
１２５０ｍｇという固定用量の前記抗α−シヌクレイン抗体を含む、請求項２０〜２８のいずれか１項に記載の滅菌組成物。
【請求項５２】
３５００ｍｇという固定用量の前記抗α−シヌクレイン抗体を含む、請求項２０〜２８のいずれか１項に記載の滅菌組成物。
【請求項５３】
前記固定用量が２５０ｍｇの前記抗α−シヌクレイン抗体である、請求項２９〜３７のいずれか１項に記載の方法。
【請求項５４】
前記固定用量が１２５０ｍｇの前記抗α−シヌクレイン抗体である、請求項２９〜３７のいずれか１項に記載の方法。
【請求項５５】
前記固定用量が３５００ｍｇの前記抗α−シヌクレイン抗体である、請求項２９〜３７のいずれか１項に記載の方法。
【請求項５６】
前記方法が、２５０ｍｇという固定用量の前記抗α−シヌクレイン抗体を前記ヒト対象に静脈内投与することを包含する、請求項３８〜４９のいずれか１項に記載の方法。
【請求項５７】
前記方法が、１２５０ｍｇという固定用量の前記抗α−シヌクレイン抗体を前記ヒト対象に静脈内投与することを包含する、請求項３８〜４９のいずれか１項に記載の方法。
【請求項５８】
前記方法が、３５００ｍｇという固定用量の前記抗α−シヌクレイン抗体をヒト対象に静脈内投与することを包含する、請求項３８〜４９のいずれか１項に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願への相互参照
本出願は、２０１７年３月３１日出願の米国仮特許出願第６２／４７９，８１８号、及び２０１７年７月５日出願の米国仮特許出願第６２／５２８，７９０号の優先権の利益を主張しており、その両方の内容は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。
【０００２】
分野
本出願は、一般に、抗α−シヌクレイン抗体の臨床使用のための投与計画に関する。
【背景技術】
【０００３】
背景
タンパク質のミスフォールディング及び凝集は、多くの神経変性疾患（例：シヌクレイノパチー（ｓｙｎｕｃｌｅｉｎｏｐａｔｈｙ））の病理学的側面である。α−シヌクレインの凝集体は、パーキンソン病（ＰＤ）に関連するレビー小体及びレビー神経突起の主要成分である。天然に展開されたタンパク質であるα−シヌクレインは、オリゴマー、プロトフィブリル、フィブリルなど、さまざまな凝集形態をとることができる。小さなオリゴマー凝集体は、特に毒性があることが示されている。
【０００４】
シヌクレイノパチーの患者の増加を処置するために、α−シヌクレインに対する治療抗体及びそのような抗α−シヌクレイン抗体の臨床使用のための適切な投与計画が必要である。
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【０００５】
概要
本開示は、部分的には、α−シヌクレイン抗体またはそのα−シヌクレイン結合断片の投与計画、及びシヌクレイノパチーの治療におけるそれらの使用に関する。
【０００６】
一態様では、シヌクレイノパチーの治療をそれを必要とするヒト対象において行う方法が提供される。この方法は、ヒト対象の体重１ｋｇあたり３ｍｇ／ｋｇ、５ｍｇ／ｋｇ、１５ｍｇ／ｋｇ、４５ｍｇ／ｋｇ、９０ｍｇ／ｋｇ、または１３５ｍｇ／ｋｇという用量で抗α−シヌクレイン抗体をヒト対象に静脈内投与することを包含する。抗α−シヌクレイン抗体は、免疫グロブリン重鎖可変領域（ＶＨ）及び免疫グロブリン軽鎖可変領域（ＶＬ）を含み、ここで：ＶＨはＶＨ相補性決定領域（ＶＨ−ＣＤＲ）を含み、ここで：ＶＨ−ＣＤＲ１は、配列番号１のアミノ酸残基からなり；ＶＨ−ＣＤＲ２は、配列番号２のアミノ酸残基からなり；かつＶＨ−ＣＤＲ３は、配列番号３のアミノ酸残基からなり；かつＶＬはＶＬ−ＣＤＲを含み、ここで：ＶＬ−ＣＤＲ１は、配列番号４のアミノ酸残基からなり；ＶＬ−ＣＤＲ２は、配列番号５のアミノ酸残基からなり；かつＶＬ−ＣＤＲ３は、配列番号６のアミノ酸残基からなる。
【０００７】
この態様のいくつかの実施形態では、シヌクレイノパチーは、パーキンソン病（ＰＤ）、パーキンソン病認知症（ＰＤＤ）、レビー小体型認知症（ＤＬＢ）、アルツハイマー病のレビー小体変異型（ＬＢＶＡＤ）、多系統萎縮症（ＭＳＡ）、純粋自律神経不全症（ＰＡＦ）、または１型脳内鉄沈着神経変性症（ＮＢＩＡ−Ｉ）である。特定の実施形態では、シヌクレイノパチーはパーキンソン病（ＰＤ）である。場合によっては、ＰＤは軽度のＰＤである。他の例では、ＰＤは中程度のＰＤである。
【０００８】
別の態様では、本開示は、中枢神経系におけるα−シヌクレインの異常な蓄積または沈着の処置をそれを必要とするヒト対象において行う方法を特徴とする。この方法は、抗α−シヌクレイン抗体を、ヒト対象の体重１ｋｇあたり３ｍｇ／ｋｇ、５ｍｇ／ｋｇ、１５ｍｇ／ｋｇ、４５ｍｇ／ｋｇ、９０ｍｇ／ｋｇ、または１３５ｍｇ／ｋｇという用量でヒト対象に静脈内投与することを包含する。抗α−シヌクレイン抗体は、免疫グロブリン重鎖可変領域（ＶＨ）及び免疫グロブリン軽鎖可変領域（ＶＬ）を含み、ここで：ＶＨはＶＨ相補性決定領域（ＶＨ−ＣＤＲ）を含み、ここで：ＶＨ−ＣＤＲ１は、配列番号１のアミノ酸残基からなり；ＶＨ−ＣＤＲ２は、配列番号２のアミノ酸残基からなり；かつＶＨ−ＣＤＲ３は、配列番号３のアミノ酸残基からなり；そしてＶＬはＶＬ−ＣＤＲを含み、ここでＶＬ−ＣＤＲ１は、配列番号４のアミノ酸残基からなり；ＶＬ−ＣＤＲ２は、配列番号５のアミノ酸残基からなり；かつＶＬ−ＣＤＲ３は、配列番号６のアミノ酸残基からなる。
【０００９】
この態様のいくつかの実施形態では、ヒト対象は、中枢神経系におけるα−シヌクレインの異常な蓄積または沈着を有すると特定されている。特定の場合、ヒト対象は、ポジトロン放出断層撮影（ＰＥＴ）、単一光子放出断層撮影（ＳＰＥＣＴ）、近赤外（ＮＩＲ）光学イメージング、磁気共鳴画像法（ＭＲＩ）、ドーパミントランスポーターイメージング、または黒質超音波検査を含む方法によるα−シヌクレインのインビボイメージング（例えば、脳内）によって特定される。他の場合、ヒト対象は、抗α−シヌクレイン抗体の対象への末梢投与後に対象から得られた血液、血漿、または脳脊髄液（ＣＳＦ）試料中のα−シヌクレインのレベルをアッセイすること、及び、参照標準に対して対象中のα−シヌクレインのアッセイされたレベルを比較することであって、ここで、血液、血漿、またはＣＳＦ試料中のα−シヌクレインのレベルと参照標準のα−シヌクレインのレベルとの間の差または類似性が、対象の脳におけるα−シヌクレインのレベルと相関することにより特定される。いくつかの実施形態では、ヒト対象は、シヌクレイノパチーの症状を有することにより特定されている。
【００１０】
この態様のいくつかの実施形態では、ヒト対象は、パーキンソン病を発症するリスクがある（例えば、ＳＮＣＡ、ＬＲＲＫ２、Ｐａｒｋｉｎ、ＰＩＮＫ１、ＤＪ１、ＡＴＰ１３Ａ２、ＰＬＡ２Ｇ６、ＦＢＸＯ７、ＵＣＨＬ１、ＧＩＧＹＦ２、ＨＴＲＡ２、またはＥＩＦ４Ｇ１遺伝子の突然変異などの遺伝的危険因子を有する対象に起因して）か、またはヒト対象は、前駆パーキンソン病を有する（例えば、対象は、嗅覚障害、レム行動障害、脂漏性皮膚病などのパーキンソン病の将来の発症に関連する症状もしくは症状のクラスター、及び／または特定の自律神経症状、例としては、限定するものではないが、起立性低血圧、男性のインポテンス、及び／または膀胱制御障害を有する）。
【００１１】
これらの実施形態は、上記の両方の態様に適用される。特定の実施形態では、ＶＨは、配列番号８に記載のアミノ酸配列からなる。特定の実施形態では、ＶＬは、配列番号９に記載のアミノ酸配列からなる。特定の実施形態では、ＶＨは、配列番号８に記載のアミノ酸配列からなり、ＶＬは、配列番号９に記載のアミノ酸配列からなる。特定の実施形態では、この抗体は、ヒトＩｇＧ１重鎖定常領域を含む。いくつかの実施形態では、抗体は、ヒトラムダ軽鎖定常領域を含む。特定の実施形態では、抗体は、ヒトＩｇＧ１重鎖定常領域及びヒトラムダ軽鎖定常領域を含む。さらに他の実施形態では、この抗体は重鎖及び軽鎖を含み、この重鎖は、配列番号１０に記載のアミノ酸配列からなり、この軽鎖は、配列番号１１に記載のアミノ酸配列からなる。いくつかの実施形態では、抗α−シヌクレイン抗体は、４週間ごと、３週間ごと、２週間ごと、または毎週投与される。いくつかの実施形態では、１ｋｇあたり１ｍｇの抗α−シヌクレイン抗体が４週間ごとまたは毎月投与される。いくつかの実施形態では、１ｋｇあたり３ｍｇの抗α−シヌクレイン抗体が４週間ごとまたは毎月投与される。いくつかの実施形態では、１ｋｇあたり５ｍｇの抗α−シヌクレイン抗体が４週間ごとまたは毎月投与される。いくつかの実施形態では、１ｋｇあたり１５ｍｇの抗α−シヌクレイン抗体が４週間ごとまたは毎月投与される。いくつかの実施形態では、１ｋｇあたり４５ｍｇの抗α−シヌクレイン抗体が４週間ごとまたは毎月投与される。いくつかの実施形態では、１ｋｇあたり９０ｍｇの抗α−シヌクレイン抗体が４週間ごとまたは毎月投与される。いくつかの実施形態では、抗α−シヌクレイン抗体を１ｋｇあたり１３５ｍｇが４週間ごとまたは毎月投与される。特定の実施形態では、ヒト対象に少なくとも２用量の抗α−シヌクレイン抗体が投与される。特定の実施形態では、ヒト対象に少なくとも４用量の抗α−シヌクレイン抗体が投与される。特定の実施形態では、ヒト対象には、少なくとも６用量の抗α−シヌクレイン抗体が投与される。特定の実施形態では、ヒト対象には、少なくとも８用量の抗α−シヌクレイン抗体が投与される。特定の実施形態では、ヒト対象には、少なくとも１０用量の抗α−シヌクレイン抗体が投与される。特定の実施形態では、ヒト対象には、少なくとも１２用量の抗α−シヌクレイン抗体が投与される。上記の投薬レジメンの特定の実施形態では、ヒト対象には、少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０年、またはそれ以上、抗α−シヌクレイン抗体が投与される。
【００１２】
第３の態様では、本開示は、２１０ｍｇ、２２５ｍｇ、２５０ｍｇ、３５０ｍｇ、３７５ｍｇ、１０５０ｍｇ、１１２５ｍｇ、１２５０ｍｇ、３１５０ｍｇ、３３７５ｍｇ、３５００ｍｇ、６３００ｍｇ、６７５０ｍｇ、または９４５０ｍｇという固定用量の抗α−シヌクレイン抗体と薬学的に許容される担体とを含む滅菌組成物を提供する。抗α−シヌクレイン抗体は、免疫グロブリン重鎖可変領域（ＶＨ）及び免疫グロブリン軽鎖可変領域（ＶＬ）を含み、ここで：ＶＨはＶＨ相補性決定領域（ＶＨ−ＣＤＲ）を含み、ここで：ＶＨ−ＣＤＲ１は、配列番号１のアミノ酸残基からなり；ＶＨ−ＣＤＲ２は、配列番号２のアミノ酸残基からなり；かつＶＨ−ＣＤＲ３は、配列番号３のアミノ酸残基からなり；そしてＶＬはＶＬ−ＣＤＲ１を含み、ここで：ＶＬ−ＣＤＲ１は、配列番号４のアミノ酸残基からなり；ＶＬ−ＣＤＲ２は、配列番号５のアミノ酸残基からなり；かつＶＬ−ＣＤＲ３は、配列番号６のアミノ酸残基からなる。場合によっては、固定用量は、２５０ｍｇ、１２５０ｍｇ、及び／または３５００ｍｇの抗α−シヌクレイン抗体である。
【００１３】
この態様の特定の実施形態では、滅菌組成物は、バイアルで提供される。他の実施形態では、滅菌組成物は、抗α−シヌクレイン抗体の静脈内投与に適合したシリンジまたはポンプで提供される。特定の実施形態では、ＶＨは、配列番号８に記載のアミノ酸配列からなる。特定の実施形態では、ＶＬは、配列番号９に記載のアミノ酸配列からなる。特定の実施形態では、ＶＨは、配列番号８に記載のアミノ酸配列からなり、ＶＬは、配列番号９に記載のアミノ酸配列からなる。特定の実施形態では、この抗体は、ヒトＩｇＧ１重鎖定常領域を含む。いくつかの実施形態では、抗体は、ヒトラムダ軽鎖定常領域を含む。特定の実施形態では、この抗体は、ヒトＩｇＧ１重鎖定常領域及びヒトラムダ軽鎖定常領域を含む。さらに他の実施形態では、この抗体は重鎖及び軽鎖を含み、この重鎖は、配列番号１０に記載のアミノ酸配列からなり、この軽鎖は、配列番号１１に記載のアミノ酸配列からなる。特定の実施形態では、滅菌組成物は、２５０ｍｇという固定用量の抗α−シヌクレイン抗体を含む。いくつかの実施形態では、この滅菌組成物は、１２５０ｍｇという固定用量の抗α−シヌクレイン抗体を含む。他の実施形態では、滅菌組成物は、３５００ｍｇという固定用量の抗α−シヌクレイン抗体を含む。
【００１４】
第４の態様において、特徴とされるのは、シヌクレイノパチーの治療をそれを必要とするヒト対象において行う方法である。この方法は、上記の第３の態様の滅菌組成物からの抗α−シヌクレイン抗体の固定用量をヒト対象に静脈内投与することを包含する。
【００１５】
この態様の特定の実施形態では、シヌクレイノパチーは、パーキンソン病認知症（ＰＤＤ）、レビー小体型認知症（ＤＬＢ）、アルツハイマー病のレビー小体変異型（ＬＢＶＡＤ）、多系統萎縮症（ＭＳＡ）、純粋自律神経不全症（ＰＡＦ）、または１型脳内鉄沈着神経変性症（ＮＢＩＡ−Ａ）である。特定の実施形態では、シヌクレイノパチーはパーキンソン病である。特定の場合には、ＰＤは軽度のＰＤである。その他の場合、ＰＤは中程度のＰＤである。いくつかの実施形態では、固定用量は、２５０ｍｇの抗α−シヌクレイン抗体である。いくつかの実施形態では、固定用量は１２５０ｍｇの抗α−シヌクレイン抗体である。いくつかの実施形態では、固定用量は３５００ｍｇの抗α−シヌクレイン抗体である。
【００１６】
第５の態様では、本開示は、中枢神経系におけるαシヌクレインの異常な蓄積または沈着の処置をそれを必要とするヒト対象において行う方法に関する。この方法は、上記の第３の態様の滅菌組成物からの抗α−シヌクレイン抗体の固定用量をヒト対象に静脈内投与することを包含する。
【００１７】
特定の実施形態では、ヒト対象は、中枢神経系におけるα−シヌクレインの異常な蓄積または沈着を有すると特定されている。特定の場合、ヒト対象は、ポジトロン放出断層撮影（ＰＥＴ）、単一光子放出断層撮影（ＳＰＥＣＴ）、近赤外（ＮＩＲ）光学イメージング、磁気共鳴画像法（ＭＲＩ）、ドーパミントランスポーターイメージング、または黒質超音波検査を含む方法によるα−シヌクレインのインビボイメージング（例えば、脳内）によって識別される。他の場合には、ヒト対象は、抗α−シヌクレイン抗体の対象への末梢投与後に対象から得られた血液または血漿試料中のα−シヌクレインのレベルをアッセイすること、及び対象中のα−シヌクレインのアッセイされたレベルを参照標準と比較することであって、ここでこの血液または血漿試料中のα−シヌクレインのレベルと参照標準中のα−シヌクレインとの間の差または類似性が、対象の脳内のα−シヌクレインのレベルと相関することにより特定される。いくつかの実施形態では、この固定用量は、２５０ｍｇの抗α−シヌクレイン抗体である。いくつかの態様において、この固定用量は１２５０ｍｇの抗α−シヌクレイン抗体である。いくつかの態様において、この固定用量は３５００ｍｇの抗α−シヌクレイン抗体である。
【００１８】
いくつかの実施形態では、ヒト対象は、パーキンソン病を発症するリスクがある（例えば、ＳＮＣＡ、ＬＲＲＫ２、Ｐａｒｋｉｎ、ＰＩＮＫ１、ＤＪ１、ＡＴＰ１３Ａ２、ＰＬＡ２Ｇ６、ＦＢＸＯ７、ＵＣＨＬ１、ＧＩＧＹＦ２、ＨＴＲＡ２、またはＥＩＦ４Ｇ１遺伝子の突然変異などの遺伝的危険因子を有する対象に起因する）か、またはヒト対象は、前駆パーキンソン病がある（例えば、この対象は、嗅覚障害、レム行動障害、脂漏性皮膚病、及び／または特定の自律神経症状、例としては、限定するものではないが、起立性低血圧、男性のインポテンス、及び／または膀胱制御障害などのパーキンソン病の将来の発症に関連する症状または症状のクラスターを有する）。
【００１９】
これらの実施形態は、上述の第４及び第５の態様に適用される。いくつかの実施形態では、抗α−シヌクレイン抗体は、４週間ごと、３週間ごと、２週間ごと、または毎週投与される。いくつかの実施形態では、２１０ｍｇ、２２５ｍｇ、２５０ｍｇ、３５０ｍｇ、３７５ｍｇ、１０５０ｍｇ、１１２５ｍｇ、１２５０ｍｇ、３１５０ｍｇ、３３７５ｍｇ、３５００ｍｇ、６３００ｍｇ、６７５０ｍｇ、または９４５０ｍｇという固定用量が４週間ごとに投与される。いくつかの実施形態では、２５０ｍｇという固定用量が４週間ごとに投与される。いくつかの実施形態では、１２５０ｍｇという固定用量が４週間ごとに投与される。いくつかの実施形態では、３５００ｍｇという固定用量が４週間ごとに投与される。特定の実施形態では、ヒト対象に少なくとも２用量の抗α−シヌクレイン抗体を投与する。特定の実施形態では、ヒト対象に少なくとも４用量の抗α−シヌクレイン抗体を投与する。特定の実施形態では、ヒト対象に、少なくとも６用量の抗α−シヌクレイン抗体を投与する。特定の実施形態では、ヒト対象に、少なくとも８用量の抗α−シヌクレイン抗体を投与する。特定の実施形態では、ヒト対象に、少なくとも１０用量の抗α−シヌクレイン抗体を投与する。特定の実施形態では、ヒト対象に、少なくとも１２用量の抗α−シヌクレイン抗体を投与する。
【００２０】
第６の態様では、本開示は、シヌクレイノパチーの治療をそれを必要とするヒト対象において行う方法を提供する。この方法は、２１０ｍｇ、２２５ｍｇ、２５０ｍｇ、３５０ｍｇ、３７５ｍｇ、１０５０ｍｇ、１１２５ｍｇ、１２５０ｍｇ、３１５０ｍｇ、３３７５ｍｇ、３５００ｍｇ、６３００ｍｇ、６７５０ｍｇ、または９４５０ｍｇという固定用量の抗α−シヌクレイン抗体をヒト対象に静脈内投与することを包含する。抗α−シヌクレイン抗体は、免疫グロブリン重鎖可変領域（ＶＨ）及び免疫グロブリン軽鎖可変領域（ＶＬ）を含み、ここで：ＶＨはＶＨ相補性決定領域（ＶＨ−ＣＤＲ）を含み、ここで：ＶＨ−ＣＤＲ１は、配列番号１のアミノ酸残基からなり；ＶＨ−ＣＤＲ２は、配列番号２のアミノ酸残基からなり；かつＶＨ−ＣＤＲ３は、配列番号３のアミノ酸残基からなり；そしてＶＬは、ＶＬ−ＣＤＲを含み、ここで：ＶＬ−ＣＤＲ１は、配列番号４のアミノ酸残基からなり；ＶＬ−ＣＤＲ２は、配列番号５のアミノ酸残基からなり；かつＶＬ−ＣＤＲ３は、配列番号６のアミノ酸残基からなる。
【００２１】
特定の実施形態では、シヌクレイノパチーは、パーキンソン病認知症（ＰＤＤ）、レビー小体型認知症（ＤＬＢ）、アルツハイマー病のレビー小体変異型（ＬＢＶＡＤ）、多系統萎縮症（ＭＳＡ）、純粋自律神経不全症（ＰＡＦ）、または１型脳内鉄沈着神経変性症（ＮＢＩＡ−Ｉ）である。特定の実施形態では、シヌクレイノパチーは、パーキンソン病（ＰＤ）である。場合によっては、ＰＤは軽度のＰＤである。その他の場合、ＰＤは中程度のＰＤである。いくつかの実施形態では、この方法は、２５０ｍｇという固定用量の抗α−シヌクレイン抗体をヒト対象に静脈内投与することを包含する。いくつかの実施形態では、この方法は、１２５０ｍｇという固定用量の抗α−シヌクレイン抗体をヒト対象に静脈内投与することを包含する。いくつかの実施形態では、この方法は、３５００ｍｇという固定用量の抗α−シヌクレイン抗体をヒト対象に静脈内投与することを包含する。
【００２２】
第７の態様では、本開示は、中枢神経系におけるαシヌクレインの異常な蓄積または沈着の処置をそれを必要とするヒト対象において行う方法を提供する。この方法は、２１０ｍｇ、２２５ｍｇ、２５０ｍｇ、３５０ｍｇ、３７５ｍｇ、１０５０ｍｇ、１１２５ｍｇ、１２５０ｍｇ、３１５０ｍｇ、３３７５ｍｇ、３５００ｍｇ、６３００ｍｇ、６７５０ｍｇ、または９４５０ｍｇという固定用量の抗α−シヌクレイン抗体をヒト対象に静脈内投与することを包含する。抗α−シヌクレイン抗体は、免疫グロブリン重鎖可変領域（ＶＨ）及び免疫グロブリン軽鎖可変領域（ＶＬ）を含み、ここで：ＶＨはＶＨ相補性決定領域（ＶＨ−ＣＤＲ）を含み、ここで：ＶＨ−ＣＤＲ１は、配列番号１のアミノ酸残基からなり；ＶＨ−ＣＤＲ２は、配列番号２のアミノ酸残基からなり；かつＶＨ−ＣＤＲ３は、配列番号３のアミノ酸残基からなり；そしてＶＬはＶＬ−ＣＤＲを含み、ここで：ＶＬ−ＣＤＲ１は、配列番号４のアミノ酸残基からなり；ＶＬ−ＣＤＲ２は、配列番号５のアミノ酸残基からなり；かつＶＬ−ＣＤＲ３は、配列番号６のアミノ酸残基からなる。
【００２３】
いくつかの実施形態では、ヒト対象は、中枢神経系におけるα−シヌクレインの異常な蓄積または沈着を有するとして特定されるか、または特定されている。特定の場合、ヒト対象は、ポジトロン放出断層撮影（ＰＥＴ）、単一光子放出断層撮影（ＳＰＥＣＴ）、近赤外（ＮＩＲ）光学イメージング、磁気共鳴画像法（ＭＲＩ）、ドーパミントランスポーターイメージング、または黒質超音波検査を含む方法によるα−シヌクレインのインビボイメージング（例えば、脳内）によって特定される。他の場合、ヒト対象は、抗α−シヌクレイン抗体の対象への末梢投与後に対象から得られた血液または血漿試料中のα−シヌクレインのレベルをアッセイすること、及び対象のα−シヌクレインのアッセイされたレベルを参照標準に対して比較することであって、ここで、血液または血漿試料中のα−シヌクレインのレベルと参照標準中のα−シヌクレインのレベルとの差または類似性が、対象の脳のα−シヌクレインのレベルと相関することにより特定されるか、または特定されている。
【００２４】
いくつかの実施形態では、ヒト対象は、パーキンソン病を発症するリスクがある（例えば、ＳＮＣＡ、ＬＲＲＫ２、Ｐａｒｋｉｎ、ＰＩＮＫ１、ＤＪ１、ＡＴＰ１３Ａ２、ＰＬＡ２Ｇ６、ＦＢＸＯ７、ＵＣＨＬ１、ＧＩＧＹＦ２、ＨＴＲＡ２、またはＥＩＦ４Ｇ１遺伝子の突然変異などの遺伝的危険因子を有する対象に起因する）か、またはヒト対象には、前駆パーキンソン病がある（例えば、この対象は、嗅覚障害、レム行動障害、脂漏性皮膚病、及び／または特定の自律神経症状、例としては、限定するものではないが、起立性低血圧、男性のインポテンス、及び／または膀胱制御障害などのパーキンソン病の将来の発症に関連する症状または症状のクラスターを有する）。いくつかの実施形態では、この方法は、２５０ｍｇという固定用量の抗α−シヌクレイン抗体をヒト対象に静脈内投与することを包含する。いくつかの実施形態では、この方法は、１２５０ｍｇという固定用量の抗α−シヌクレイン抗体をヒト対象に静脈内投与することを包含する。いくつかの実施形態では、この方法は、３５００ｍｇという固定用量の抗α−シヌクレイン抗体をヒト対象に静脈内投与することを包含する。
【００２５】
これらの実施形態は、上述の第６及び第７の態様の両方に適用される。特定の実施形態では、ＶＨは、配列番号８に記載のアミノ酸配列からなる。特定の実施形態では、ＶＬは、配列番号９に記載のアミノ酸配列からなる。特定の実施形態では、ＶＨは、配列番号８に記載のアミノ酸配列からなり、ＶＬは、配列番号９に記載のアミノ酸配列からなる。特定の実施形態では、抗体は、ヒトＩｇＧ１重鎖定常領域を含む。いくつかの実施形態では、この抗体は、ヒトラムダ軽鎖定常領域を含む。特定の実施形態では、抗体は、ヒトＩｇＧ１重鎖定常領域及びヒトラムダ軽鎖定常領域を含む。さらに他の実施形態では、抗体は、重鎖及び軽鎖を含み、この重鎖は、配列番号１０に記載のアミノ酸配列からなり、この軽鎖は、配列番号１１に記載のアミノ酸配列からなる。特定の実施形態では、抗α−シヌクレイン抗体は、毎月、４週間ごと、３週間ごと、２週間ごと、または毎週投与される。
【００２６】
特に定義されない限り、本明細書で使用される全ての技術用語及び科学用語は、本発明が属する技術分野の当業者によって一般に理解されるのと同じ意味を有する。本明細書に記載のものと類似または同等の方法及び材料を、本発明の実施または試験に使用してもよいが、例示的な方法及び材料を以下に記載する。本明細書に言及されている全ての刊行物、特許出願、特許、及びその他の参考文献は、参照によりその全体が組み込まれている。矛盾する場合、定義を含む本出願が支配する。材料、方法、及び実施例は説明のみを目的としており、限定することを意図したものではない。
【００２７】
本発明の他の特徴及び利点は、以下の詳細な説明及び特許請求の範囲から明らかになるであろう。
【図面の簡単な説明】
【００２８】
【図１】図１は、個々のヒト対象におけるＢＩＩＢ０５４の血清濃度（ｎｇ／ｍｌ）を示すグラフである。このグラフの各曲線は、異なるヒトの対象に対応している。
【図２】図２は、指定された時間における各用量レベルの患者について計算された平均血清プロファイルを示すグラフである。ｘ軸から最も遠い曲線は１３５ｍｇ／ｋｇに相当する；次が９０ｍｇ／ｋｇ；次が４５ｍｇ／ｋｇ；次が１５ｍｇ／ｋｇ；次が５ｍｇ／ｋｇであり；ｘ軸に最も近い曲線は１ｍｇ／ｋｇに相当する。
【図３】図３は、ＡＵＣの用量依存性（１〜１３５ｍｇ／ｋｇの用量範囲）を示すグラフである。
【図４】図４は、Ｃｍａｘの用量依存性（１〜１３５ｍｇ／ｋｇの用量範囲）を示すグラフである。
【図５】図５は、間質液（ＩＳＦ）中のＢＩＩＢ０５４濃度対α−シヌクレイン標的結合の割合についての用量反応範囲を示すグラフである。
【図６】図６は、３、１５、及び４５ｍｇ／ｋｇ用量のＣＳＦ濃度対時間を示すグラフである。
【図７】図７は、３回の投与についてシミュレーションされたＣＳＦ濃度−時間プロファイルを示すグラフである。
【発明を実施するための形態】
【００２９】
詳細な説明
本開示は、抗α−シヌクレイン抗体及びそのα−シヌクレイン結合断片の投与計画、及びシヌクレイノパチー（例えば、α−シヌクレインの凝集に関連する障害、例えば、パーキンソン病（ＰＤ）、パーキンソン病認知症（ＰＤＤ）、レビー小体型認知症（ＤＬＢ）、アルツハイマー病のレビー小体変異型（ＡＤ）、純粋自律神経不全症（ＰＡＦ）、多系統萎縮症（ＭＳＡ）、及び１型脳内鉄沈着神経変性症（ＮＢＩＡ−Ｉ））の治療におけるそれらの使用を特徴とする。
【００３０】
α−シヌクレイン
シヌクレインは、主に神経組織及び特定の腫瘍で発現する小さな可溶性タンパク質である。このファミリーには、α−シヌクレイン、β−シヌクレイン、及びγ−シヌクレインという３つの公知のタンパク質が含まれている。全てのシヌクレインは、交換可能なアポリポタンパク質のクラスＡ２脂質結合ドメインと類似性のある、高度に保存されたαらせん脂質結合モチーフを共有している。シヌクレインファミリーのメンバーは、脊椎動物の外側には見られないが、植物の「後期胚に豊富な」タンパク質と構造的に類似している場合がある。α−及びβ−シヌクレインタンパク質は、主に脳組織で見られ、主にシナプス前終末で見られる。γ−シヌクレインタンパク質は、主に末梢神経系及び網膜に見られるが、乳房腫瘍での発現は腫瘍進行のマーカーである。シヌクレインタンパク質のいずれについても正常な細胞機能は決定されていないが、一部のデータは膜の安定性及び／または代謝回転の調節における役割を示唆している。α−シヌクレインの突然変異は、早発性パーキンソン病のまれな家族症例に関連しており、タンパク質はパーキンソン病、アルツハイマー病、及び他のいくつかの神経変性疾患で異常に蓄積する。
【００３１】
α−シヌクレインは元々、ヒトの脳でアルツハイマー病（ＡＤ）プラークの非β−アミロイド成分（ＮＡＣ）の前駆体タンパク質として特定された：例えば、Ｕｅｄａ  ｅｔ  ａｌ，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．９０（１９９３）、１２８２−１２８６。ＡＤアミロイドの非Ａβ成分（ＮＡＣＰ）の前駆体とも呼ばれるαシヌクレインは、１４０アミノ酸のタンパク質である。α−シヌクレインは、その本来の形でランダムコイルとして存在する；ただし、ｐＨ、分子密集、重金属含有量、及びドーパミンレベルの変化は全て、タンパク質の立体構造に影響を与える。オリゴマー、プロトフィブリル、原繊維、及び凝集部分への立体構造の変化は、タンパク質の毒性を調節すると考えられている。増大しつつある証拠によって、ドーパミン付加α−シヌクレインが非付加タンパク質と比較して原線維形成までの時間経過が速いことが示されている。さらに、α−シヌクレインの過剰発現の背景にあるドーパミンは有毒である。
【００３２】
本明細書では、「α−シヌクレイン」という用語は、α−シヌクレインの全てのタイプ及び形態（例えば、α−シヌクレインの天然単量体形態、α−シヌクレインの他の配座異性体、例えば、ドーパミンキノン（ＤＡＱ）に結合されたα−シヌクレイン、及びαシヌクレインのオリゴマーまたは凝集体）を総称して指すために使用される。
【００３３】
ヒトα−シヌクレインのタンパク質配列を以下に示す：
ＭＤＶＦＭＫＧＬＳＫＡＫＥＧＶＶＡＡＡＥＫＴＫＱＧＶＡＥＡＡＧＫＴＫＥＧＶＬＹＶＧＳＫＴＫＥＧＶＶＨＧＶＡＴＶＡＥＫＴＫＥＱＶＴＮＶＧＧＡＶＶＴＧＶＴＡＶＡＱＫＴＶＥＧＡＧＳＩＡＡＡＴＧＦＶＫＫＤＱＬＧＫＮＥＥＧＡＰＱＥＧＩＬＥＤＭＰＶＤＰＤＮＥＡＹＥＭＰＳＥＥＧＹＱＤＹＥＰＥＡ（配列番号１２）。例えば、Ｕｅｄａ  ｅｔ  ａｌ．，同上；ＧｅｎＢａｎｋ  ｓｗｉｓｓｐｒｏｔ：遺伝子座ＳＹＵＡ＿ＨＵＭＡＮ、アクセッション番号Ｐ３７８４０を参照のこと。
【００３４】
抗α−シヌクレイン抗体
本明細書に記載の組成物及び方法で使用される、抗α−シヌクレイン抗体またはそのα−シヌクレイン結合断片は、α−シヌクレインに結合するが、β−シヌクレイン及び／またはγ−シヌクレインには結合しない。したがって、α−、β−、及びγ−シヌクレインタンパク質は、非常に相同性の高いタンパク質であるが、本明細書に記載の抗α−シヌクレイン抗体またはα−シヌクレイン結合断片は、α−シヌクレインに特異的である。これらの抗体は、α−シヌクレインのＮ末端領域に結合する。具体的には、これらの抗体は、配列番号１２のアミノ酸４〜１５（すなわち、ＦＭＫＧＬＳＫＡＫＥＧＶ（配列番号１３））内のエピトープに結合し、配列番号１２の位置１０のリジンは、β−及びγシヌクレインタンパク質よりもα−シヌクレインについて本明細書に開示される抗体の特異性に重要な役割を果たす。さらに、本明細書に開示される抗体は、生理学的ヒトα−シヌクレイン単量体よりもヒトα−シヌクレインのオリゴマー及び原線維などのヒトα−シヌクレインの病理学的凝集体に優先的に結合する。ある場合には、これらの抗体は、ヒトα−シヌクレインのＡ３０Ｐ、Ｅ４６Ｋ、及びＡ５３Ｔ変異型に高い親和性で結合し得る。
【００３５】
一部の実施形態では、本明細書に記載の組成物及び方法で使用される、抗α−シヌクレイン抗体またはそのα−シヌクレイン結合断片は、ＢＩＩＢ０５４と呼ばれる抗体の３つの重鎖可変ドメイン相補性決定領域（ＣＤＲ）を含む。
【００３６】
ＢＩＩＢ０５４は、本明細書に記載の組成物及び方法で使用され得る例示的な抗α−シヌクレイン抗体である。ＢＩＩＢ０５４は、神経障害または精神障害に関連する臨床徴候及び症状のない健康な高齢対象のコホートからインフォームドコンセントの下で得られたＢリンパ球から、特定及びクローニングされた完全ヒトＩｇＧ１／λモノクローナル抗体である。ＢＩＩＢ０５４は、α−シヌクレインのＮ末端（配列番号１２のアミノ酸４〜１０：ＦＭＫＧＬＳＫ（配列番号１４））領域にサブナノモルの親和性で結合する。見かけの結合親和性は、多価結合により、オリゴマー／フィブリル種の方がα−シヌクレインのモノマー種よりも高くなっている。重要なことに、ＢＩＩＢ０５４は、シヌクレインファミリーの他の高度に相同なメンバー、例えば、神経保護作用であり得るβ−シヌクレインには結合しない。免疫組織化学は、ヒトパーキンソン病患者及びヒトα−シヌクレイントランスジェニックマウス脳組織の両方で、ＢＩＩＢ０５４のレビー小体及びレビー神経突起への特異的（オフターゲットなし）結合を示している。α−シヌクレインを過剰発現するトランスジェニックマウスでは、ＢＩＩＢ０５４の腹腔内投与により、免疫組織学的及び生化学的方法で評価される脳内の薬物レベルが測定可能になり、ＢＩＩＢ０５４が血液脳関門を通過することが示されている。
【００３７】
いくつかの実施形態では、抗α−シヌクレイン抗体またはそのα−シヌクレイン結合断片は、ＢＩＩＢ０５４の３つの軽鎖可変ドメインＣＤＲを含む。いくつかの実施形態では、抗α−シヌクレイン抗体またはそのα−シヌクレイン結合断片は、ＢＩＩＢ０５４の３つの重鎖可変ドメインＣＤＲを含む。さらに他の実施形態では、抗α−シヌクレイン抗体またはそのα−シヌクレイン結合断片は、ＢＩＩＢ０５４の３つの重鎖可変ドメインＣＤＲ、及び３つの軽鎖可変ドメインＣＤＲを含む。ＣＤＲは、当該技術分野における任意のＣＤＲ定義、例えば、Ｋａｂａｔ、Ｃｈｏｔｈｉａ、ＡｂｙｓｉｓからのＣｈｏｔｈｉａ、強化されたＣｈｏｔｈｉａ／ＡｂＭの定義に基づくか、または接触定義に基づくことができる。ＢＩＩＢ０５４のＣＤＲ配列を以下の表１に示す。
【表１】
2020512368.tif 000003
【００３８】
いくつかの実施形態では、抗α−シヌクレイン抗体またはそのα−シヌクレイン結合断片は、配列番号１または、配列番号７に示されるアミノ酸配列を含むか、またはそれからなるＶＨ  ＣＤＲ１と、配列番号２に記載のアミノ酸配列を含むか、またはそれからなるＶＨ  ＣＤＲ２と；配列番号３に記載のアミノ酸配列を含むか、またはからなるＶＨ  ＣＤＲ３とを含む。いくつかの実施形態では、抗α−シヌクレイン抗体またはそのα−シヌクレイン結合断片は、配列番号４に記載のアミノ酸配列を含むかまたはそれからなるＶＬ  ＣＤＲ１と、配列番号５に記載のアミノ酸配列を含むかまたはそれからなるＶＬ  ＣＤＲ２と、配列番号６に記載のアミノ酸配列を含むかまたはそれからなるＶＬ  ＣＤＲ３とを含む。
【００３９】
いくつかの実施形態では、抗α−シヌクレイン抗体またはそのα−シヌクレイン結合断片は、配列番号１または配列番号７に示されるアミノ酸配列を含むかまたはそれからなるＶＨ  ＣＤＲ１と、配列番号２に記載のアミノ酸配列を含むかまたはそれからなるＶＨ  ＣＤＲ２と；配列番号３に記載のアミノ酸配列を含むかまたはそれからなるＶＨ  ＣＤＲ３と；配列番号４に記載のアミノ酸配列を含むかまたはそれからなるＶＬ  ＣＤＲ１と、配列番号５に記載のアミノ酸配列を含むかまたはそれからなるＶＬ  ＣＤＲ２と、配列番号６に記載のアミノ酸配列を含むかまたはそれからなるＶＬ  ＣＤＲ３と、を含む。
【００４０】
いくつかの実施形態では、抗α−シヌクレイン抗体またはそのα−シヌクレイン結合断片は、ＢＩＩＢ０５４の可変重鎖（ＶＨ）を含むか、またはそれからなる。ＢＩＩＢ０５４のＶＨは以下のアミノ酸配列を有する（ＶＨ−ＣＤＲは下線付き）。
【化１】
2020512368.tif 000004
（配列番号８）
【００４１】
いくつかの実施形態では、抗α−シヌクレイン抗体またはそのα−シヌクレイン結合断片は、ＢＩＩＢ０５４の可変軽鎖（ＶＬ）を含むか、またはそれからなる。ＢＩＩＢ０５４のＶＬは以下のアミノ酸配列を有する（ＶＬ−ＣＤＲは下線付き）：
【化２】
2020512368.tif 000005
（配列番号９）
【００４２】
以下に列挙される成熟重鎖（配列番号：１０）及び成熟軽鎖（配列番号：１１）からなる抗体は、本明細書で使用されるように「ＢＩＩＢ０５４」と呼ばれる。
成熟ＢＩＩＢ０５４重鎖（ＨＣ）：
【化３】
2020512368.tif 000006
（配列番号１０）
成熟ＢＩＩＢ０５４軽鎖（ＬＣ）:
【化４】
2020512368.tif 000007
（配列番号１１）
【００４３】
上記のＶＨ、ＶＬ、ＨＣ、及びＬＣ配列では、Ｋａｂａｔの定義に基づくＣＤＲ１、２、及び３に下線が引かれている。ＶＨ及びＨＣの斜体の太字の配列は、強化されたＣｈｏｔｈｉａ／ＡｂＭ定義に基づいた、ＣＤＲ１に見出される追加のＮ末端配列である。
【００４４】
本明細書に開示される方法及び組成物の特定の実施形態では、抗α−シヌクレイン抗体またはそのα−シヌクレイン結合断片は、配列番号８に記載のアミノ酸配列を有するＶＨを含む。本明細書に開示される方法及び組成物の特定の実施形態では、抗α−シヌクレイン抗体またはそのα−シヌクレイン結合断片は、配列番号９に記載のアミノ酸配列を有するＶＬを含む。本明細書に開示される方法及び組成物の特定の実施形態では、抗α−シヌクレイン抗体またはそのα−シヌクレイン結合断片は、配列番号８に記載のアミノ酸配列を有するＶＨ、及び配列番号９に記載されているアミノ酸配列を有するＶＬを含む。本明細書に開示される方法及び組成物の特定の実施形態では、抗α−シヌクレイン抗体またはそのα−シヌクレイン結合断片は、配列番号１０に記載のアミノ酸配列を有する重鎖を含む。本明細書に開示される方法及び組成物の特定の実施形態では、抗α−シヌクレイン抗体またはそのα−シヌクレイン結合断片は、配列番号１１に記載のアミノ酸配列を有する軽鎖を含む。本明細書に開示される方法及び組成物の他の実施形態では、抗α−シヌクレイン抗体またはそのα−シヌクレイン結合断片は、配列番号１０に記載のアミノ酸配列を有する重鎖、及び配列番号１１に示されるアミノ酸配列を有する軽鎖を含む。
【００４５】
いくつかの実施形態では、抗α−シヌクレイン抗体またはそのα−シヌクレイン結合断片は、α−シヌクレインに選択的に結合し、配列番号１０のアミノ酸配列と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％以上同一であるか、または少なくとも１〜５個のアミノ酸残基が異なるが、配列番号１０よりも４０、３０、２０、１５、または１０残基少ないＨＣを含む。一実施形態では、６つのＣＤＲは、ＢＩＩＢ０５４の６つのＣＤＲと同一であり、フレームワーク領域に対して任意の置換が行われる。
【００４６】
いくつかの実施形態では、抗α−シヌクレイン抗体またはそのα−シヌクレイン結合断片は、α−シヌクレインに選択的に結合し、配列番号１１のアミノ酸配列と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％以上同一であるか、または少なくとも１〜５個のアミノ酸残基が異なるが、配列番号１１よりも４０、３０、２０、１５、または１０残基少ないＬＣを含む。一実施形態では、６つのＣＤＲは、ＢＩＩＢ０５４の６つのＣＤＲと同一であり、フレームワーク領域に対して任意の置換が行われる。
【００４７】
特定の実施形態では、抗α−シヌクレイン抗体はＩｇＧ抗体である。特定の実施形態では、抗α−シヌクレイン抗体は、例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＭ、ＩｇＡ１、ＩｇＡ２、ＩｇＤ、及びＩｇＥから選択される重鎖定常領域を有する。一実施形態では、抗α−シヌクレイン抗体は、ＩｇＧ１アイソタイプのものである。別の実施形態では、抗α−シヌクレイン抗体は、ＩｇＧ２アイソタイプのものである。さらに別の実施形態では、抗α−シヌクレイン抗体は、ＩｇＧ３アイソタイプのものである。さらなる実施形態において、抗α−シヌクレイン抗体は、例えば、ヒトカッパまたはヒトラムダの軽鎖から選択される軽鎖定常領域を有する。特定の実施形態では、抗α−シヌクレイン抗体は、ＩｇＧ１／ヒトラムダ抗体である。
【００４８】
いくつかの実施形態では、抗α−シヌクレイン抗体は、全長（全体）抗体または実質的に全長である。このタンパク質は、少なくとも１つ、及び好ましくは２つの完全な重鎖、及び少なくとも１つ、及び好ましくは２つの完全な軽鎖を含み得る。いくつかの実施形態では、抗α−シヌクレイン抗体は、α−シヌクレイン結合断片である。場合によっては、α−シヌクレイン結合断片は、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆａｃｂ、Ｆｖ、単鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）、ｓｃ（Ｆｖ）２、またはダイアボディである。
【００４９】
本明細書に開示される抗体の重鎖及び軽鎖はまた、シグナル配列を含んでもよい。シグナル配列は、当該技術分野で公知の配列、例えば、ＭＤＭＲＶＰＡＱＬＬＧＬＬＬＬＷＦＰＧＳＲＣ（配列番号１５）またはＭＤＭＲＶＰＡＱＬＬＧＬＬＬＬＷＬＰＧＡＲＣ（配列番号１６）から選択され得る。
【００５０】
ＢＩＩＢ０５４などの抗体、またはそのα−シヌクレイン結合断片は、例えば、列挙されたアミノ酸配列をコードする合成遺伝子を調製及び発現させることによって作製してもよいし、またはヒト生殖細胞系遺伝子を変異させて、列挙されたアミノ酸をコードする遺伝子を提供することによって、作製してもよい。さらに、この抗体及び他の抗α−シヌクレイン抗体は、例えば、以下の方法の１つ以上を使用して産生され得る。
【００５１】
抗体の生産方法
抗α−シヌクレイン抗体またはα−シヌクレイン結合断片は、細菌で産生されてもよいし、または真核細胞で産生されてもよい。一部の抗体、例えば、Ｆａｂは、細菌細胞、例えば、Ｅ．ｃｏｌｉ細胞で産生され得る。抗体は、形質転換された細胞株（例えば、ＣＨＯ、２９３Ｅ、ＣＯＳ）などの真核細胞でも産生される。さらに、抗体（例えば、ｓｃＦｖ）は、Ｐｉｃｈｉａ（例えば、Ｐｏｗｅｒｓ  ｅｔ  ａｌ．、Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  Ｍｅｔｈｏｄｓ．２５１：１２３−３５（２００１）、Ｈａｎｓｅｕｌａ、またはＳａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓなどの酵母細胞で発現されてもよい。目的の抗体を産生するために、抗体をコードするポリヌクレオチド（複数可）を構築し、１つ以上の発現ベクターに導入して、次いで適切な宿主細胞で発現させる。発現を改善するために、軽鎖及び重鎖遺伝子のヌクレオチド配列は、アミノ酸配列を変更せずに（または最小限の変更−重鎖または軽鎖のＣ末端残基の除去など）再コードされ得る。潜在的な再コードの領域には、翻訳開始、コドン使用、及び可能性のある、意図しないｍＲＮＡスプライシングに関連する領域が含まれる。本明細書に記載のα−シヌクレイン抗体のＶＨ及び／またはＶＬ、ＨＣ及び／またはＬＣを含む抗α−シヌクレイン抗体をコードするポリヌクレオチドは、当業者によって容易に想定されるであろう。
【００５２】
ＢＩＩＢ０５４軽鎖をコードする例示的なＤＮＡ配列を以下に示す（小文字のヌクレオチドは、天然の軽鎖シグナルペプチド（核酸構築物に含まれる場合も含まれない場合もある）をコードする；成熟したＮ末端は、６７位置で開始する核酸で始まる。
1    atg  gac  atg  cgg  gtg  ccc  gcc  cag  ctg  ctg  ggc  ctg  ctg  ctg  ctg  tgg  ctc  cct  ggc  gcc  aga  tgt
67  AGC  TAC  GAG  CTG  ACC  CAG  CCC  CCC  AGC  GTC  AGC  GTC  AGC  CCC  GGC  CAG  ACC  GCC  AGG  ATC  ACC  TGC
133  AGC  GGC  GAG  GCC  CTG  CCC  ATG  CAG  TTC  GCC  CAC  TGG  TAC  CAA  CAG  AGG  CCA  GGC  AAG  GCC  CCA  GTG
199  ATC  GTG  GTG  TAC  AAA  GAC  AGT  GAG  AGA  CCC  TCA  GGT  GTC  CCT  GAG  CGA  TTC  TCT  GGC  TCC  TCT  TCC
265  GGG  ACA  ACA  GCC  ACC  TTG  ACC  ATC  ACT  GGA  GTC  CAG  GCA  GAA  GAT  GAG  GCT  GAC  TAT  TAC  TGC  CAG
331  TCT  CCA  GAC  AGC  ACT  AAC  ACT  TAT  GAA  GTC  TTC  GGC  GGA  GGG  ACC  AAG  CTG  ACC  GTC  CTG  AGT  CAG
397  CCC  AAG  GCT  GCC  CCC  TCC  GTC  ACT  CTG  TTC  CCT  CCC  TCC  TCC  GAG  GAA  CTT  CAA  GCC  AAC  AAG  GCC
463  ACA  CTG  GTC  TGT  CTC  ATC  AGT  GAC  TTC  TAC  CCT  GGA  GCC  GTG  ACA  GTG  GCC  TGG  AAG  GCA  GAT  AGC
529  AGC  CCC  GTC  AAG  GCT  GGA  GTG  GAG  ACC  ACC  ACA  CCC  TCC  AAA  CAA  AGC  AAC  AAC  AAA  TAC  GCT  GCC
595  AGC  AGC  TAC  CTG  AGC  CTG  ACA  CCT  GAG  CAG  TGG  AAG  TCC  CAC  AGA  AGC  TAC  AGC  TGC  CAG  GTC  ACC
661  CAT  GAA  GGG  AGC  ACC  GTG  GAG  AAG  ACA  GTG  GCC  CCT  ACA  GAA  TGT  TCA  TAG  (配列番号１７)
【００５３】
ＢＩＩＢ０５４重鎖をコードする例示的なＤＮＡ配列を以下に示す（小文字のヌクレオチドは、天然の軽鎖シグナルペプチド（核酸構築物に含まれていても含まれていなくてもよい）をコードする；成熟したＮ末端は、６７位置で開始する核酸で始まる）：
1    atg  gac  atg  cgg  gtg  ccc  gcc  cag  ctg  ctg  ggc  ctg  ctg  ctg  ctg  tgg  ttc  ccc  ggc  tct  cgg  tgc
67  GAG  GTG  CAG  CTG  GTG  GAG  TCC  GGG  GGA  GGT  CTG  GTC  GAG  CCT  GGG  GGG  TCC  CTG  AGA  CTC  TCC  TGT
133  GCA  GTC  TCC  GGA  TTC  GAT  TTC  GAA  AAA  GCC  TGG  ATG  AGT  TGG  GTC  CGC  CAG  GCT  CCA  GGG  CAG  GGG
199  CTG  CAG  TGG  GTT  GCC  CGG  ATC  AAG  AGC  ACA  GCT  GAT  GGT  GGG  ACA  ACA  AGC  TAC  GCC  GCC  CCC  GTG
265  GAA  GGC  AGA  TTC  ATC  ATC  TCA  AGA  GAT  GAT  TCC  AGA  AAC  ATG  CTT  TAT  CTG  CAA  ATG  AAC  AGT  CTG
331  AAA  ACT  GAA  GAC  ACA  GCC  GTC  TAT  TAT  TGT  ACA  TCA  GCC  CAC  TGG  GGC  CAG  GGA  ACC  CTG  GTC  ACC
397  GTC  TCC  TCT  GCC  TCC  ACC  AAG  GGC  CCA  TCC  GTC  TTC  CCT  CTG  GCA  CCC  TCC  TCC  AAA  AGC  ACC  TCT
463  GGG  GGC  ACA  GCC  GCC  CTG  GGC  TGC  CTG  GTC  AAG  GAC  TAC  TTC  CCC  GAA  CCT  GTG  ACC  GTC  TCC  TGG
529  AAC  TCA  GGC  GCC  CTG  ACC  AGC  GGC  GTG  CAC  ACC  TTC  CCT  GCT  GTC  CTG  CAA  TCC  TCC  GGA  CTC  TAC
595  TCC  CTC  TCT  TCC  GTG  GTG  ACC  GTG  CCC  TCC  AGC  AGC  TTG  GGC  ACC  CAG  ACC  TAC  ATC  TGC  AAC  GTG
661  AAT  CAC  AAG  CCC  AGC  AAC  ACC  AAG  GTG  GAC  AAG  AGA  GTT  GAG  CCC  AAA  TCT  TGT  GAC  AAA  ACT  CAC
727  ACA  TGC  CCA  CCC  TGC  CCA  GCA  CCT  GAA  CTC  CTG  GGG  GGA  CCC  TCA  GTC  TTC  CTC  TTC  CCC  CCA  AAA
793  CCC  AAG  GAC  ACC  CTC  ATG  ATC  TCC  CGG  ACC  CCT  GAG  GTC  ACA  TGC  GTG  GTG  GTG  GAC  GTG  AGC  CAC
859  GAA  GAC  CCT  GAG  GTC  AAG  TTC  AAC  TGG  TAT  GTT  GAC  GGC  GTG  GAG  GTC  CAT  AAT  GCC  AAG  ACA  AAG
925  CCT  CGG  GAG  GAG  CAG  TAC  AAC  AGC  ACC  TAC  CGC  GTG  GTC  AGC  GTC  CTC  ACC  GTC  CTG  CAC  CAA  GAC
991  TGG  CTG  AAT  GGC  AAG  GAG  TAC  AAG  TGC  AAG  GTC  TCC  AAC  AAA  GCC  CTC  CCA  GCC  CCC  ATC  GAG  AAA
1057  ACC  ATC  TCC  AAA  GCC  AAA  GGG  CAG  CCC  CGA  GAA  CCA  CAG  GTG  TAC  ACC  CTG  CCC  CCA  TCC  CGG  GAG
1123  GAG  ATG  ACC  AAG  AAC  CAA  GTC  AGC  CTG  ACC  TGC  CTG  GTC  AAA  GGC  TTC  TAT  CCC  AGC  GAC  ATC  GCC
1189  GTG  GAG  TGG  GAG  AGC  AAT  GGG  CAG  CCT  GAG  AAC  AAC  TAC  AAG  ACC  ACA  CCT  CCC  GTG  CTG  GAC  TCC
1255  GAC  GGC  TCC  TTC  TTC  CTC  TAT  TCC  AAA  CTC  ACC  GTG  GAC  AAG  AGC  AGG  TGG  CAG  CAG  GGG  AAC  GTC
1321  TTC  TCA  TGC  TCC  GTG  ATG  CAT  GAG  GCT  CTG  CAC  AAC  CAC  TAC  ACC  CAG  AAG  AGC  CTC  TCC  CTG  TCC
1387  CCT  GGT  TGA  (配列番号18)
【００５４】
標準的な分子生物学技術を使用して、組換え発現ベクターを調製し、宿主細胞をトランスフェクトし、形質転換体を選択し、宿主細胞を培養し、抗体を回収する。
【００５５】
抗α−シヌクレイン抗体またはα−シヌクレイン結合断片を、細菌細胞（例えば、Ｅ．ｃｏｌｉ）で発現させる場合、発現ベクターは、細菌細胞でベクターの増幅を可能にする特性を持つ必要がある。さらに、ＪＭ１０９、ＤＨ５α、ＨＢ１０１、またはＸＬ１−ＢｌｕｅなどのＥ．ｃｏｌｉを宿主として使用する場合、ベクターには、Ｅ．ｃｏｌｉでの効率的な発現を可能にするプロモーター、例えば、ｌａｃＺプロモーター（Ｗａｒｄ  ｅｔ  ａｌ．，３４１：５４４−５４６（１９８９）、ａｒａＢプロモーター（Ｂｅｔｔｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ，２４０：１０４１−１０４３（１９８８））、またはＴ７プロモーターが必要である。このようなベクターの例としては、例えば、Ｍ１３シリーズのベクター、ｐＵＣ−シリーズベクター、ｐＢＲ３２２、ｐＢｌｕｅｓｃｒｉｐｔ、ｐＣＲ−Ｓｃｒｉｐｔ、ｐＧＥＸ−５Ｘ−１（Ｐｈａｒｍａｃｉａ）、「ＱＩＡｅｘｐｒｅｓｓ  ｓｙｓｔｅｍ」（ＱＩＡＧＥＮ）、ｐＥＧＦＰ、及びｐＥＴ（この発現ベクターを使用する場合、宿主は、好ましくは、Ｔ７  ＲＮＡポリメラーゼを発現するＢＬ２１である）が挙げられる。この発現ベクターは、抗体分泌のためのシグナル配列を含んでもよい。Ｅ．ｃｏｌｉのペリプラズムへの産生のために、ｐｅｌＢシグナル配列（Ｌｅｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｂａｃｔｅｒｉｏｌ．，１６９：４３７９（１９８７））を、抗体分泌のためのシグナル配列として使用してもよい。細菌の発現には、塩化カルシウム法またはエレクトロポレーション法を使用して、発現ベクターを細菌細胞に導入してもよい。
【００５６】
ＣＨＯ、ＣＯＳ、ＮＩＨ３Ｔ３細胞などの動物細胞で抗体を発現させる場合、発現ベクターには、これらの細胞での発現に必要なプロモーター、例えば、ＳＶ４０プロモーター（Ｍｕｌｌｉｇａｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ，２７７：１０８（１９７９））（例えば、初期シミアンウイルス４０プロモーター）、ＭＭＬＶ−ＬＴＲプロモーター、ＥＦ１αプロモーター（Ｍｉｚｕｓｈｉｍａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．，１８：５３２２（１９９０））、またはＣＭＶプロモーター（例えば、ヒトサイトメガロウイルス早初期プロモーター）が挙げられる。免疫グロブリンまたはそのドメインをコードする核酸配列に加えて、組換え発現ベクターは、宿主細胞内のベクターの複製を調節する配列（例えば、複製起点）及び選択可能なマーカー遺伝子などの追加の配列を保持し得る。選択可能マーカー遺伝子は、ベクターが導入された宿主細胞の選択を促進する（例えば、米国特許第４，３９９，２１６号、同第４，６３４，６６５号及び第５，１７９，０１７号を参照のこと）。例えば、典型的には、選択可能なマーカー遺伝子は、ベクターが導入された宿主細胞に、Ｇ４１８、ハイグロマイシン、またはメトトレキサートなどの薬物に対する耐性を付与する。選択可能なマーカーを持つベクターの例としては、ｐＭＡＭ、ｐＤＲ２、ｐＢＫ−ＲＳＶ、ｐＢＫ−ＣＭＶ、ｐＯＰＲＳＶ、及びｐＯＰ１３が挙げられる。
【００５７】
一実施形態では、抗体は哺乳動物細胞で産生される。抗体を発現するための哺乳動物宿主細胞の例としては、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ細胞）（Ｕｒｌａｕｂ及びＣｈａｓｉｎ（１９８０）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ７７：４２１６−４２２０に記載され、例えば、Ｋａｕｆｍａｎ及びＳｈａｒｐ（１９８２）Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１５９：６０１−６２１に記載されているＤＨＦＲ選択マーカーとともに使用されるｄｈｆｒ−ＣＨＯ細胞）、ヒト胎児腎臓２９３細胞（例えば、２９３、２９３Ｅ、２９３Ｔ）、ＣＯＳ細胞、ＮＩＨ３Ｔ３細胞、リンパ球系細胞株、例えば、ＮＳ０骨髄腫細胞及びＳＰ２細胞、ならびにトランスジェニック動物、例えば、トランスジェニック哺乳動物由来の細胞が挙げられる。例えば、細胞は乳腺上皮細胞である。特定の実施形態では、哺乳動物細胞は、ＣＨＯ−ＤＧ４４Ｉ細胞である。
【００５８】
抗体発現の例示的な系では、抗α−シヌクレイン抗体（例えば、ＢＩＩＢ０５４）の抗体重鎖と抗体軽鎖の両方をコードする組換え発現ベクターが、リン酸カルシウム媒介トランスフェクションによりｄｈｆｒ−ＣＨＯ細胞に導入される。組換え発現ベクター内で、抗体の重鎖及び軽鎖遺伝子はそれぞれ、エンハンサー／プロモーター調節エレメント（例えば、ＣＭＶエンハンサー／ＡｄＭＬＰプロモーター調節エレメントまたはＳＶ４０エンハンサー／ＡｄＭＬＰプロモーター調節エレメントなどのＳＶ４０、ＣＭＶ、アデノウイルスなどに由来する）に対して作動可能に連結され、遺伝子の高レベルの転写を駆動する。組換え発現ベクターはまた、メトトレキサート選択／増幅を使用して、ベクターでトランスフェクトされたＣＨＯ細胞の選択を可能にするＤＨＦＲ遺伝子も運ぶ。選択された形質転換体宿主細胞は、抗体の重鎖及び軽鎖の発現を可能にするために培養され、その抗体は培養培地から回収される。
【００５９】
抗体はトランスジェニック動物によっても産生される。例えば、米国特許第５，８４９，９９２号は、トランスジェニック哺乳動物の乳腺で抗体を発現させる方法を記載している。乳特異的プロモーター、目的の抗体をコードする核酸、及び分泌のためのシグナル配列を含む導入遺伝子が構築される。そのようなトランスジェニック哺乳動物の雌によって産生される乳には、そこに分泌された目的の抗体が含まれる。抗体は、乳から精製してもよいし、一部の用途では直接使用されてもよい。本明細書に記載の核酸の１つ以上を含む動物も提供される。
【００６０】
本開示の抗体は、宿主細胞の内側または外側（培地など）から単離されて、実質的に純粋かつ均質な抗体として精製され得る。抗体の精製に一般的に使用される単離及び精製の方法は、抗体の単離及び精製に使用されてもよく、なんら特定の方法に限定されるものではない。抗体は、例えば、カラムクロマトグラフィー、ろ過、限外ろ過、塩析、溶媒沈殿、溶媒抽出、蒸留、免疫沈降、ＳＤＳ−ポリアクリルアミドゲル電気泳動、等電点電気泳動、透析、及び再結晶化を適切に選択して組み合わせることにより、単離及び精製され得る。クロマトグラフィーとしては、例えば、アフィニティークロマトグラフィー、イオン交換クロマトグラフィー、疎水性クロマトグラフィー、ゲル濾過、逆相クロマトグラフィー、及び吸着クロマトグラフィーが挙げられる（Ｓｔｒａｔｅｇｉｅｓ  ｆｏｒ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ  ａｎｄ  Ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｃｏｕｒｓｅ  Ｍａｎｕａｌ．Ｅｄ  Ｄａｎｉｅｌ  Ｒ．Ｍａｒｓｈａｋ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ，１９９６）。クロマトグラフィーは、ＨＰＬＣ及びＦＰＬＣなどの液相クロマトグラフィーを使用して実行され得る。アフィニティークロマトグラフィーに使用されるカラムとしては、プロテインＡカラム及びプロテインＧカラムが挙げられる。プロテインＡカラムを使用するカラムの例としては、Ｈｙｐｅｒ  Ｄ、ＰＯＲＯＳ、及びＳｅｐｈａｒｏｓｅ  ＦＦ（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）が挙げられる。本開示はまた、これらの精製方法を使用して高度に精製された抗体も包含する。
【００６１】
投与量
抗α−シヌクレイン抗体（例えば、ＢＩＩＢ０５４）は、異なる用量で対象、例えば、ヒト対象に投与されてもよい。抗α−シヌクレイン抗体（例えば、ＢＩＩＢ０５４）は、固定用量（すなわち、患者の体重に依存しない）として投与されてもよく、またはｍｇ／ｋｇ用量（すなわち、対象の体重に基づいて変化する用量）で投与されてもよい。本明細書で使用される単位剤形または「固定用量」とは、治療される対象の単位用量として適した物理的に別個の単位を指す；各ユニットには、対象の所望の治療濃度を達成するために計算された抗体の所定量が含まれている。用量の形態（例えば、重量あたりまたは固定）に関係なく、抗α−シヌクレイン抗体は、必要な薬学的担体と組み合わせて、及び必要に応じて別の治療剤と組み合わせて投与される。単回投与または複数回投与を行ってもよい。治療は数日、数週間、数ヶ月、１年、さらには数年続く場合がある。治療は、抗α−シヌクレイン抗体が１つ以上の追加の薬剤と組み合わせて投与される併用療法の一部であってもよい。
【００６２】
一実施形態では、本明細書に記載の適応症を治療するための抗α−シヌクレイン抗体の投与量は、対象の体重あたり１ｍｇ／ｋｇである。別の実施形態では、本明細書に記載の適応症を治療するための抗α−シヌクレイン抗体の投与量は、対象の体重あたり３ｍｇ／ｋｇである。さらに別の実施形態では、本明細書に記載の適応症を治療するための抗α−シヌクレイン抗体の投与量は、対象の体重あたり５ｍｇ／ｋｇである。さらなる実施形態では、本明細書に記載の適応症を治療するための抗α−シヌクレイン抗体の投与量は、対象の体重あたり１５ｍｇ／ｋｇである。別の実施形態では、本明細書に記載の適応症を治療するための抗α−シヌクレイン抗体の投与量は、対象の体重あたり４５ｍｇ／ｋｇである。さらに別の実施形態では、本明細書に記載の適応症を治療するための抗α−シヌクレイン抗体の投与量は、対象の体重あたり９０ｍｇ／ｋｇである。さらに別の実施形態では、本明細書に記載の適応症を治療するための抗α−シヌクレイン抗体の投与量は、対象の体重あたり１３５ｍｇ／ｋｇである。これらの用量は、薬学的に許容される担体及び／または有益な賦形剤（複数可）と一緒に滅菌組成物の形態で投与用に調製され得る。
【００６３】
一実施形態では、本明細書に記載の適応症を治療するために、抗α−シヌクレイン抗体の投与量は２１０ｍｇという固定投与量である。別の実施形態では、抗α−シヌクレイン抗体の投与量は２２５ｍｇという固定投与量である。別の実施形態では、抗α−シヌクレイン抗体の投与量は２５０ｍｇという固定投与量である。さらに別の実施形態では、抗α−シヌクレイン抗体の投与量は３５０ｍｇという固定用量である。別の実施形態では、抗α−シヌクレイン抗体の投与量は３７５ｍｇという固定投与量である。さらに別の実施形態では、抗α−シヌクレイン抗体の投与量は１０５０ｍｇという固定投与量である。さらなる実施形態では、抗α−シヌクレイン抗体の投与量は１１２５ｍｇという固定投与量である。別の実施形態では、抗α−シヌクレイン抗体の投与量は１２５０ｍｇという固定投与量である。別の実施形態では、抗α−シヌクレイン抗体の投与量は３１５０ｍｇという固定投与量である。さらに別の実施形態では、本明細書に記載の適応症を治療するために、抗α−シヌクレイン抗体の投与量は３３７５ｍｇという固定用量である。別の実施形態では、抗α−シヌクレイン抗体の投与量は３５００ｍｇという固定用量である。さらなる実施形態において、抗α−シヌクレイン抗体の投与量は６３００ｍｇという固定投与量である。別の実施形態では、抗α−シヌクレイン抗体の投与量は、６７５０ｍｇという固定投与量である。別の実施形態では、抗α−シヌクレイン抗体の投与量は９４５０ｍｇという固定投与量である。これらの固定投与量は、薬学的に許容される担体及び／または有益な賦形剤（複数可）と一緒に滅菌組成物の形態で製剤化されてもよい。
【００６４】
上記のｍｇ／ｋｇの用量または固定用量は各々、毎日、毎週、１週間半ごと、２週間ごと、２週間半ごと、３週間ごと、４週間、５週間ごと、６週間ごと、７週間ごと、８週間ごと、毎月、隔週、毎週、または毎日、医療提供者によって適切と見なされるように、対象において治療濃度が達成されるか及び／または維持されるように、少なくとも２回投与、３回投与、４回投与、５回投与、６回投与、７回投与、８回投与、９回投与、１０回投与、１２回投与、１４回投与、１６回投与、１８回投与、２０回投与、２２回投与、２４回投与またはそれ以上を含む期間にわたって、対象に対して投与され得る。
【００６５】
用量は静脈内に投与される。
【００６６】
例示的な投与計画を以下の表に示す：
【表Ａ】
2020512368.tif 000008
【００６７】
医薬組成物は、特定の投与計画を使用した投与が脳脊髄液（ＣＳＦ）または脳間質液（ＩＳＦ）中の抗体の治療有効濃度をもたらすように、本明細書に記載の薬剤の「治療有効量」を含んでもよい。そのような有効量は、投与された薬剤の効果に基づいて決定され得る。薬剤の治療有効量はまた、個体の病状、年齢、性別、及び体重、ならびに個体において化合物が所望の応答を誘発する能力などの要因に応じても異なる場合がある。治療上有効な量とはまた、組成物のなんらかの毒性または有害な効果よりも、治療的に有益な効果が上回る量でもある。
【００６８】
一実施形態では、静脈内に投与される抗α−シヌクレイン抗体（例えば、ＢＩＩＢ０５４）は、対象（例えば、ヒト対象）のＣＳＦ及び／またはＩＳＦにおいて抗体の所望の治療濃度が達成されるように投与される。一実施形態では、抗体は、脳に入って、治療効果、例えば、凝集したα−シヌクレインへの結合及びミクログリア依存性または非依存性のクリアランス／不活性化の誘発、α−シヌクレイン凝集の低減、及び／またはα−シヌクレインのプリオン様細胞内拡散の防止によって媒介される治療効果を生み出すのに十分な濃度を達成する。
【００６９】
別の実施形態では、所望の治療濃度は、対象のＩＳＦ及び／またはＣＳＦ中のα−シヌクレイン凝集の少なくとも３０〜５０％の減少を提供及び維持し得る（１回以上の投与後）抗α−シヌクレイン抗体（例えば、ＢＩＩＢ０５４）の濃度に等しくてもよい。
【００７０】
一実施形態では、所望の治療濃度は、対象のＩＳＦにおけるＥＣ５０である抗α−シヌクレイン抗体（例えば、ＢＩＩＢ０５４）濃度を達成する。
【００７１】
別の実施形態では、所望の治療濃度は、対象のＩＳＦ及び／またはＣＳＦにおける凝集α−シヌクレインの５０〜９０％の減少を（１回以上の投与後に）提供及び維持し得る抗α−シヌクレイン抗体（例えば、ＢＩＩＢ０５４）濃度に等しくてもよい。
【００７２】
一実施形態では、所望の治療濃度は、対象のＩＳＦにおけるＥＣ５０より高くＥＣ９０より低い抗α−シヌクレイン抗体（例えば、ＢＩＩＢ０５４）濃度を達成する。
【００７３】
さらに別の実施形態では、所望の治療濃度は、対象のＩＳＦ及び／またはＣＳＦにおける凝集α−シヌクレインの９０％超の減少を提供及び維持し得る（１回以上の投与後）抗α−シヌクレイン抗体（例えば、ＢＩＩＢ０５４）濃度と等しくてもよい。
【００７４】
一実施形態では、所望の治療濃度は、対象のＩＳＦにおけるＥＣ９０を上回る抗α−シヌクレイン抗体（例えば、ＢＩＩＢ０５４）濃度を達成する。
【００７５】
一実施形態では、治療上有効な用量は、所望の治療濃度を（１回以上の投与後）達成及び維持し得る抗α−シヌクレイン抗体（例えば、ＢＩＩＢ０５４）の用量である。
【００７６】
処置の方法
本明細書に記載の抗α−シヌクレイン抗体（例えば、ＢＩＩＢ０５４）は、それを必要とする対象（例えば、ヒト対象）におけるシヌクレイノパチーの予防的処置及び治療的処置に使用され得る。
【００７７】
シヌクレイノパチーとしては、パーキンソン病（ＰＤ）、パーキンソン病認知症（ＰＤＤ）、レビー小体型認知症（ＤＬＢ）、アルツハイマー病のレビー小体変異型（ＡＤ）、純粋自律神経不全症（ＰＡＦ）、多系統萎縮症（ＭＳＡ）、及び１型脳内鉄沈着神経変性症（ＮＢＩＡ−Ｉ））などのαシヌクレインの凝集に関連する障害が挙げられる。
【００７８】
本開示はまた、それぞれ脳及び中枢神経系におけるα−シヌクレインの異常な蓄積及び／または沈着を特徴とする神経障害を治療する方法に関し、この方法は、治療上有効な量の上記α−シヌクレイン抗体のいずれか１つをそれを必要とする対象（例えば、ヒト対象）に対して投与することを包含する。特定の実施形態では、神経障害は、パーキンソン病（ＰＤ）、レビー小体型認知症（ＤＬＢ）、または多系統萎縮症（ＭＳＡ）である。
【００７９】
パーキンソン病とは、運動障害及び認知機能障害などのある範囲の非運動機能を特徴とする臨床症候群である。病理学的には、青斑核、迷走神経の背側運動核、縫線核、黒質緻密部、メイナート基底核及び脚橋核の顕著な細胞喪失があり、対応する神経伝達物質の減少を引き起こす。細胞損失の前には、細胞質内レビー小体（ＬＢ）の形成、及びレビー神経突起（ＬＮ）と呼ばれる肥厚した神経突起プロセスがある。ＬＮは、扁桃体、海馬、新皮質など、古典的なＬＢのない領域に見出され得る。パーキンソン病の単一の原因はない。むしろ、複数の遺伝的及び環境的原因がある。これらの原因は集合的にリスクの大部分を占め、神経変性の共通の重複する経路を指し示している。α−シヌクレインは、ＳＮＣＡ遺伝子によってヒトにコードされる１４ｋＤａのタンパク質である。パーキンソン病の病因におけるα−シヌクレインの中心的な役割を示すいくつかの証拠がある。第一に、神経病理学的研究により、凝集したα−シヌクレインがＬＢ及びＬＮのコア成分であることが示された。遺伝学的研究により、常染色体優位なパーキンソン病に関連する３つの点突然変異（Ａ５３Ｔ、Ａ３０Ｐ、及びＥ６４Ｋ）が特定された。最近、ＳＮＣＡの三重の重複および二重の重複が、パーキンソン病の攻撃的な早期発症型の患者で特定された。プロモーター領域の多型及びエピジェネティックなサイレンシングの減少がパーキンソン病のリスク増加と関連しているという点で、一見散発性のパーキンソン病とＳＮＣＡ遺伝子発現の間にはリンクがある。総合すると、これらの遺伝学的研究によって、パーキンソン病におけるα−シヌクレイン機能の獲得に関する用量反応関係、及び根拠が示唆されている。α−シヌクレインの毒性は、凝集する傾向に関連しているようである。α−シヌクレインは、インビトロで凝集する傾向が高い。常染色体優性パーキンソン病に関連する点突然変異及び増殖により、α−シヌクレインが重合してオリゴマー及び高次の原繊維構造を形成する傾向が高まる。パーキンソン病の病因における中心的な役割のおかげで、α−シヌクレインを修飾するアプローチは、パーキンソン病及びその他のシヌクレイノパチーの重要な潜在的標的である。α−シヌクレインの抗体を介した除去と不活性化は、病状の凝集と拡大を軽減し、それによりパーキンソン病の臨床徴候及び症状の低下を遅らせ得る。パーキンソン病の進行を抑えるには、α−シヌクレインのタンパク質レベルをわずかに下げるだけで十分である。実際、α−シヌクレイン遺伝子の重複は、家族性パーキンソン病の早期発症につながるが、α−シヌクレインタンパク質レベルの増加は１．５倍に過ぎない。
【００８０】
一実施形態では、シヌクレイノパチー、例えば、パーキンソン病の治療をそれを必要とするヒト対象において行う方法が提供される。特定の実施形態では、パーキンソン病は軽度のパーキンソン病である。他の実施形態では、パーキンソン病は中程度のパーキンソン病である。この方法は、本明細書に記載の抗α−シヌクレイン抗体（例えば、ＢＩＩＢ０５４）の治療上有効な量をヒト対象に投与することを包含する。特定の例において、対象は、その対象の体重１ｋｇあたり３ｍｇ／ｋｇ、５ｍｇ／ｋｇ、１５ｍｇ／ｋｇ、４５ｍｇ／ｋｇ、９０ｍｇ／ｋｇまたは１３５ｍｇ／ｋｇという用量で抗α−シヌクレイン抗体を投与される。他の例では、対象は、２１０ｍｇ、２２５ｍｇ、２５０ｍｇ、３５０ｍｇ、３７５ｍｇ、１０５０ｍｇ、１１２５ｍｇ、１２５０ｍｇ、３１５０ｍｇ、３３７５ｍｇ、３５００ｍｇ、６３００ｍｇ、６７５０ｍｇ、または９４５０ｍｇという固定用量で抗α−シヌクレイン抗体を投与される。いくつかの例では、対象に少なくとも２回、少なくとも３回、少なくとも４回、少なくとも５回、少なくとも６回、少なくとも７回、少なくとも８回、少なくとも９回、１０回、少なくとも１１回もしくは少なくとも１２回、または２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１もしくは１２回投与される。静脈内投与された抗α−シヌクレイン抗体（例えば、ＢＩＩＢ０５４）は、脳に入り、α−シヌクレインに結合し、ミクログリア依存性または非依存性のクリアランス／不活性化を引き起こし、α−シヌクレイン凝集を低減し、及び／またはα−シヌクレインのプリオン様細胞内拡散を防ぎ得る。末梢抗α−シヌクレイン抗体（例えば、ＢＩＩＢ０５４）は、ＣＮＳα−シヌクレインの末梢シンクとしても作用し得る。
【００８１】
別の実施形態では、本開示は、α−シヌクレインの凝集及び／または細胞内拡散を特徴とする障害を治療する方法を特徴とする。特定の実施形態では、この障害は多系統萎縮症（ＭＳＡ）である。他の実施形態では、この障害はレビー小体型認知症（ＤＬＢ）である。この方法は、本明細書に記載の抗α−シヌクレイン抗体（例えば、ＢＩＩＢ０５４）の治療上有効な量をヒト対象に投与することを包含する。特定の例では、対象は、対象の体重１ｋｇあたり３ｍｇ／ｋｇ、５ｍｇ／ｋｇ、１５ｍｇ／ｋｇ、４５ｍｇ／ｋｇ、９０ｍｇ／ｋｇ、または１３５ｍｇ／ｋｇという用量で抗α−シヌクレイン抗体を投与される。他の例では、対象は、２１０ｍｇ、２２５ｍｇ、２５０ｍｇ、３５０ｍｇ、３７５ｍｇ、１０５０ｍｇ、１１２５ｍｇ、１２５０ｍｇ、３１５０ｍｇ、３３７５ｍｇ、３５００ｍｇ、６３００ｍｇ、６７５０ｍｇ、または９４５０ｍｇという固定用量で抗α−シヌクレイン抗体を投与される。いくつかの例では、この対象には、少なくとも２回、少なくとも３回、少なくとも４回、少なくとも５回、少なくとも６回、少なくとも７回、少なくとも８回、少なくとも９回、少なくとも９回、少なくとも１０回、少なくとも１１回もしくは少なくとも１２回、または２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１もしくは１２回の投与で投与される。
【００８２】
さらに別の実施形態では、本開示は、中枢神経系（例えば、脳）におけるαシヌクレインの異常な蓄積及び／または沈着を特徴とする状態の治療をそれを必要とするヒト対象において行う方法に関する。この方法は、本明細書に記載の抗α−シヌクレイン抗体（例えば、ＢＩＩＢ０５４）の治療上有効な量をヒト対象に投与することを包含する。特定の例において、この対象は、対象の体重１ｋｇあたり３ｍｇ／ｋｇ、５ｍｇ／ｋｇ、１５ｍｇ／ｋｇ、４５ｍｇ／ｋｇ、９０ｍｇ／ｋｇ、または１３５ｍｇ／ｋｇという用量で抗α−シヌクレイン抗体を投与される。他の例では、この対象は、２１０ｍｇ、２２５ｍｇ、２５０ｍｇ、３５０ｍｇ、３７５ｍｇ、１０５０ｍｇ、１１２５ｍｇ、１２５０ｍｇ、３１５０ｍｇ、３３７５ｍｇ、３５００ｍｇ、６３００ｍｇ、６７５０ｍｇ、または９４５０ｍｇという固定用量で抗α−シヌクレイン抗体を投与される。いくつかの例では、この対象には、少なくとも２回、少なくとも３回、少なくとも４回、少なくとも５回、少なくとも６回、少なくとも７回、少なくとも８回、少なくとも９回、１０回、少なくとも１１回もしくは少なくとも１２回、または２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１もしくは１２回の投与で投与される。
【００８３】
別の実施形態では、本開示は、中枢神経系（例えば、脳）におけるαシヌクレインの異常な蓄積及び／または沈着を低減または防止するための治療を必要とする前症候性ヒト対象を治療する方法を特徴とする。この方法は、本明細書に記載の抗α−シヌクレイン抗体（例えば、ＢＩＩＢ０５４）の治療上有効な量をヒト対象に投与することを包含する。特定の例において、この対象は、対象の体重１ｋｇあたり３ｍｇ／ｋｇ、５ｍｇ／ｋｇ、１５ｍｇ／ｋｇ、４５ｍｇ／ｋｇ、９０ｍｇ／ｋｇ、または１３５ｍｇ／ｋｇという用量で抗α−シヌクレイン抗体を投与される。他の例では、対象は、２１０ｍｇ、２２５ｍｇ、２５０ｍｇ、３５０ｍｇ、３７５ｍｇ、１０５０ｍｇ、１１２５ｍｇ、１２５０ｍｇ、３１５０ｍｇ、３３７５ｍｇ、３５００ｍｇ、６３００ｍｇ、６７５０ｍｇ、または９４５０ｍｇという固定用量で抗α−シヌクレイン抗体を投与される。いくつかの例では、この対象には少なくとも２回、少なくとも３回、少なくとも４回、少なくとも５回、少なくとも６回、少なくとも７回、少なくとも８回、少なくとも９回、少なくとも１０回、少なくとも１１回もしくは少なくとも１２回、または２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１もしくは１２回の用量が投与される。
【００８４】
ヒト対象は、当該技術分野で公知の任意の方法により、中枢神経系（例えば、脳）にα−シヌクレインの異常な蓄積または沈着があると特定され得る。特定の実施形態では、α−シヌクレインのレベルは、α−シヌクレインのインビボイメージング（例えば、脳内）によって評価され、これには陽電子放出断層撮影（ＰＥＴ）、単一光子放出断層撮影（ＳＰＥＣＴ）、近赤外（ＮＩＲ）光学イメージング、磁気共鳴イメージング（ＭＲＩ）、ドーパミントランスポーターイメージング、または黒質超音波検査を含む。これらの実施形態のいくつかでは、標識された抗α−シヌクレイン抗体（例えば、標識されたＢＩＩＢ０５４）またはそのα−シヌクレイン結合断片がヒト対象に投与され、抗体のα−シヌクレインへの結合が評価される。α−シヌクレインのレベルは、例えば、ウエスタンブロット、免疫沈降、酵素結合免疫吸着検定法（ＥＬＩＳＡ）、放射免疫測定法（ＲＩＡ）、蛍光活性化セルソーティング（ＦＡＣＳ）、２次元ゲル電気泳動、質量分析（ＭＳ）、マトリックス支援レーザー脱離／イオン化飛行時間ＭＳ（ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ）、表面増強レーザー脱離イオン化飛行時間（ＳＥＬＤＩ−ＴＯＦ）、高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）、高速タンパク質液体クロマトグラフィー（ＦＰＬＣ）、多次元液体クロマトグラフィー（ＬＣ）、それに続くタンデム質量分析（ＭＳ／ＭＳ）、及びレーザーデンシトメトリーから選択される１つ以上の技術によってα−シヌクレインを分析することを包含する、当該技術分野で公知の他の方法によっても評価され得る。特定の例において、対象の脳内のα−シヌクレインのレベルは、抗α−シヌクレイン抗体（例えば、ＢＩＩＢ０５４）またはそのα−シヌクレイン結合断片の対象への末梢投与後に対象から得られた血液または血漿試料中のα−シヌクレインのレベルをアッセイすること、及び対象のα−シヌクレインのアッセイレベルを参照標準と比較することであって、ここで血液または血漿試料中のα−シヌクレインと参照標準のα−シヌクレインとの間のレベルの差異または類似性が、対象の脳内のα−シヌクレインのレベルと相関しているにより評価され得る。
【００８５】
上記の治療の方法の全てにおけるいくつかの実施形態では、ヒト対象は、パーキンソン病を発症するリスクがある（例えば、ＳＮＣＡ、ＬＲＲＫ２、Ｐａｒｋｉｎ、ＰＩＮＫ１、ＤＪ１、ＡＴＰ１３Ａ２、ＰＬＡ２Ｇ６、ＦＢＸＯ７、ＵＣＨＬ１、ＧＩＧＹＦ２、ＨＴＲＡ２、またはＥＩＦ４Ｇ１遺伝子の突然変異などの遺伝的危険因子を有する対象に起因する）か、またはヒト対象には、前駆パーキンソン病がある（例えば、この対象は、嗅覚障害、レム行動障害、脂漏性皮膚病、及び／または特定の自律神経症状、例としては、限定するものではないが、起立性低血圧、男性のインポテンス、及び／または膀胱制御障害などのパーキンソン病の将来の発症に関連する症状または症状のクラスターを有する）。
【００８６】
上記の治療方法の全てにおけるいくつかの実施形態では、抗α−シヌクレイン抗体またはその抗原結合断片は、α−シヌクレインに選択的に結合し、（ｉ）ＢＩＩＢ０５４のＶＨドメインのアミノ酸配列（配列番号８）と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％もしくはそれ以上同一であるＶＨドメイン、及び／または（ｉｉ）ＢＩＩＢ０５４のＶＬドメインのアミノ酸配列（配列番号９）と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％もしくはそれ以上同一であるＶＬドメインを含むか；あるいは、配列番号８及び／または配列番号９と少なくとも１〜５アミノ酸残基だが、４０、３０、２０、１５、または１０残基未満が異なる。特定の実施形態では、抗α−シヌクレイン抗体またはその抗原結合断片は、ＢＩＩＢ０５４の６つのＣＤＲと同一の６つのＣＤＲを有し、任意の置換がフレームワーク領域に対して行われる。特定の例では、これらの抗α−シヌクレイン抗体またはα−シヌクレイン結合断片は、（ｉ）α−シヌクレインに結合するが、β−もしくはγ−シヌクレインには有意に結合しないか；及び／または（ｉｉ）配列番号１２のアミノ酸４〜１５内のエピトープに選択的に結合する。特定の実施形態では、抗α−シヌクレイン抗体またはその抗原結合断片は、配列番号８に記載のアミノ酸配列からなるＶＨドメイン及び配列番号９に記載のアミノ酸配列からなるＶＬドメインを含む。
【００８７】
上記の治療方法の全てにおける特定の実施形態では、抗α−シヌクレイン抗体またはそのα−シヌクレイン結合断片は、ヒトα−シヌクレインに選択的に結合し、（ｉ）配列番号１０のアミノ酸配列と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％もしくはそれ以上同一である重鎖、及び／または（ｉｉ）配列番号１１のアミノ酸配列と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％もしくはそれ以上同一である軽鎖を含むか、あるいは配列番号１０及び／または配列番号１１から少なくとも１〜５個のアミノ酸残基だが、４０、３０、２０、１５、または１０未満残基が異なる。特定の実施形態では、抗α−シヌクレイン抗体は、配列番号１０に記載のアミノ酸配列からなる重鎖及び配列番号１１に記載のアミノ酸配列からなる軽鎖を含む。
【００８８】
以下の例は、決して本発明の範囲を限定するものと解釈されるべきではない。
【実施例】
【００８９】
実施例１：ＢＩＩＢ０５４の投与計画の理論的根拠
投与計画は、安全性、認容性、血清及び脳脊髄液（ＣＳＦ）の薬物動態（ＰＫ）データ、凝集α−シヌクレインに対するＢＩＩＢ０５４親和性、及び複数回投与後のシミュレートされたＢＩＩＢ０５４  ＣＳＦ濃度に基づいて選択された。
【００９０】
健康な対象における、９０ｍｇ／ｋｇ以下までのＢＩＩＢ０５４の単回静脈内（ＩＶ）投与は、許容できる忍容性を示した。ＢＩＩＢ０５４の血清プロファイルを、対象で測定した。個々の対象の血清濃度（ｎｇ／ｍｌ）を示すグラフを図１に示す。平均血清プロファイルは、指定された時間における各用量レベルの患者について計算して、図２に示している。
【００９１】
ＡＵＣ及びＣｍａｘによって測定されるＰＫパラメーターは、１ｍｇ／ｋｇ〜１３５ｍｇ／ｋｇの用量範囲で用量依存的に変化することが判明した。ＡＵＣの用量依存性を図３に示し、Ｃｍａｘの用量依存性を図４に示す。
【００９２】
複数回投与後のＢＩＩＢ０５４  ＣＳＦ濃度は、単回ＩＶ投与のデータに基づいて開発された集団のＰＫモデルに基づいてシミュレートした。
【００９３】
凝集したα−シヌクレインに対するＢＩＩＢ０５４のＥＣ５０及びＥＣ９０値は、凝集したα−シヌクレインに対する抗体のインビトロ結合定数に由来した。これらの値を使用して、間質液（ＩＳＦ）のＢＩＩＢ０５４濃度対α−シヌクレイン標的結合の割合の用量反応範囲を、プロットし、図５に示す。
【００９４】
４週間ごとにＩＶ点滴として送達される３、１５、及び４５ｍｇ／ｋｇのＢＩＩＢ０５４用量は、単回上行用量（ＳＡＤ）データを使用した以下のモデリングによってサポートされる。図６は、３、１５、及び４５ｍｇ／ｋｇの用量に関するＣＳＦ濃度を時間に対して示している。モデリングに基づいて以下である：
（ｉ）大部分の対象について、ＣＳＦ及び脳間質液（ＩＳＦ）のＥＣ５０以上のＢＩＩＢ０５４濃度を維持するために、４週間ごとに１回という３ｍｇ／ｋｇのＩＶ注入を選択した。
（ｉｉ）ＣＳＦとＩＳＦの目標をＥＣ９０以上に維持するために、４週間に１回１５ｍｇ／ｋｇのＩＶ注入を選択し、曝露と反応の関係を明らかにするために用量を適切に分ける。
（ｉｉｉ）全ての対象について、ＣＳＦ及びＩＳＦの目標をＥＣ９０以上に維持するために、４週間ごとに１回の４５ｍｇ／ｋｇのＩＶ注入を選択した。
【００９５】
実施例２：第２相の用量選択
この第２相試験では、患者は４週間に１回、合計１３回の試験治療（２５０、１２５０、または３５００ｍｇ）の静脈内（ＩＶ）注入を受ける。ＢＩＩＢ０５４の用量レベルは、健康なボランティアにおけるＢＩＩＢ０５４の安全性、忍容性、及び薬物動態（ＰＫ）、非臨床毒性データ、インビトロで凝集したα−シヌクレインに対するＢＩＩＢ０５４親和性、ならびに定常状態でシミュレートされたＢＩＩＢ０５４  ＣＳＦ濃度−時間プロファイルに基づいて選択された。
【００９６】
インビトロの研究により、ＢＩＩＢ０５４は、α−シヌクレインの可溶型と凝集型の両方に結合し、凝集体に対する見かけの結合親和性が高いことが確認された。凝集したα−シヌクレインのＢＩＩＢ０５４の半最大有効濃度（ＥＣ５０）は、約０．２５ｎＭ、ＥＣ９０は約２．１ｎＭ（それぞれ０．０３７５μｇ／ｍｌ及び０．３１５μｇ／ｍｌ）と推定された。
【００９７】
健康なボランティア（ＨＶ）、年齢４０〜６５歳、及びＰＤの対象における、単回の上昇用量を評価する第１相ヒト初回臨床試験が進行中である。ＨＶは、１ｍｇ／ｋｇ〜１３５ｍｇ／ｋｇのＩＶ投与、またはプラセボを投与された。ＨＶの血清及びＣＳＦ濃度は、集団ＰＫモデルを使用して説明された。その後、対象の変動とＨＶからの残留変動の推定との間だけでなく、推定ＰＫパラメーターを使用して、１０００の血清及びＣＳＦの定常状態プロファイルをシミュレートした。ＨＶと標的の第２相集団との間の体重差を明らかにするために、ＰＤＭＩデータベースを、ＰＤ患者の体重分布のソースとして使用した。
【００９８】
ＣＳＦプロファイルのシミュレーションを、１ｍｇ／ｋｇ〜４５ｍｇ／ｋｇの複数の用量レベルで実施し、用量選択を可能にした。ＢＩＩＢ０５４のＣＳＦと脳間質液（ＩＳＦ）濃度は等しいと仮定された。ＢＩＩＢ０５４の良好な安全性プロファイルを考慮して、この研究では固定用量アプローチが実施される予定である。
【００９９】
ヒト初回試験の予備血清及びＣＳＦデータに基づくシミュレーションによって、２５０ｍｇの用量で、定常状態のＣＳＦ及びＩＳＦのＢＩＩＢ０５４濃度が、大多数の対象でＥＣ５０を超えると予測されることが示されている。これらのレベルを、対象の９５％でＥＣ９０を超えて維持するように最高用量（３５００ｍｇ）を選択して、ＢＩＩＢ０５４の有効性を実証する可能性を高めた。１２５０ｍｇの中間用量は、ＣＳＦ及びＩＳＦレベルをＥＣ９０以上に維持し、用量と用量の間の適切な分離を提供して、暴露−反応の関係を解明すると予想される。図７を参照のこと。提案された第２相の用量のシミュレーションされた定常状態トラフＣＳＦ濃度の要約統計量を表２に示す。
【表２】
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【０１００】
非臨床的有効性データによってまた、Ｄ−Ｌｉｎｅシヌクレイントランスジェニックマウスでの研究に基づいて、２５０ｍｇの投与量で最小限の有効性が得られると予想されることが示唆される。マウスの推定有効暴露量は、約１３１７日＊μｇ／ｍＬであった。ＨＶでのＢＩＩＢ０５４のクリアランスは、平均で０．００５２Ｌ／ｈまたは０．１２４８Ｌ／日である。したがって、投与量＝Ｃｌ×ＡＵＣを使用すると、予測される平均の最小薬理学的有効用量は、約１６４ｍｇである。
【０１０１】
全体として、３つの用量は全て、ヒトで安全であり、かつ忍容性が高いと予想される。最高の計画用量（３５００ｍｇ）は、時間０から次の投与時間（ＡＵＣｔａｕ）までの濃度−時間曲線の下で平均定常状態面積をもたらし、最大観測濃度（Ｃｍａｘ）値は、ラットでの２６週間毒性研究で有害作用レベルが観察されなかった場合に観察されたものよりも約２．３〜１１倍低くなると予想される（表３）。
【表３】
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【０１０２】
他の実施形態
本発明をその詳細な説明と併せて説明したが、前述の説明は、添付の特許請求の範囲によって定義される本発明の範囲を例示するものであり、限定するものではない。他の態様、利点、及び修正は、添付の特許請求の範囲内にある。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【配列表】
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【国際調査報告】
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