(57)【要約】  本明細書で提供するのは、ｍｉＲ−２１を標的化した修飾オリゴヌクレオチドを使用する、アルポート症候群を治療するための方法である。特定の実施形態では、ｍｉＲ−２１を標的化した修飾オリゴヌクレオチドが、アルポート症候群を有する対象において腎機能を改善する、および／または線維症を低減する。特定の実施形態では、ｍｉＲ−２１を標的化した修飾オリゴヌクレオチドの投与が、アルポート症候群を有する対象において末期腎疾患の発症を遅延させる。特定の実施形態では、ｍｉＲ−２１を標的化した修飾オリゴヌクレオチドが、アルポート症候群を有する対象において透析または腎移植の必要を遅延させる。【特許請求の範囲】
【請求項１】
アルポート症候群を有する対象に２つまたはそれ以上の用量の修飾オリゴヌクレオチドを投与する工程を含む、アルポート症候群を治療するための方法であって、修飾オリゴヌクレオチドは、１９の結合ヌクレオシドからなり、構造５’−ＡＥＣＳＡＴＣＳＡＧＴＣＳＴＧＡＵＳＡＡＧＣＳＴＡＥ−３’（配列番号３）を有し、下付き文字の前にないヌクレオシドは、β−Ｄ−デオキシリボヌクレオシドであり、下付き文字「Ｅ」の前のヌクレオシドは、２’−ＭＯＥヌクレオシドであり、下付き文字「Ｓ」の前のヌクレオシドは、Ｓ−ｃＥｔヌクレオシドであり、各ヌクレオシド間結合は、ホスホロチオエートヌクレオシド間結合であり、投薬間に２週間の頻度で１．５ｍｇ／ｋｇの用量が投与される、前記方法。
【請求項２】
用量は、薬学的に許容される希釈剤中で送達される、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
薬学的に許容される希釈剤は、生理食塩水溶液である、請求項２に記載の方法。
【請求項４】
生理食塩水溶液は、０．３％塩化ナトリウム溶液である、請求項３に記載の方法。
【請求項５】
薬学的に許容される希釈剤中の修飾オリゴヌクレオチドの濃度は、少なくとも１１０ｍｇ／ｍＬである、請求項２〜４のいずれか１項に記載の方法。
【請求項６】
用量は、修飾オリゴヌクレオチド１１０ｍｇ／ｍＬの１回のボーラス注射である、請求項１〜５のいずれか１項に記載の方法。
【請求項７】
医薬組成物は、皮下注射液として投与される、請求項１〜６のいずれか１項に記載の方法。
【請求項８】
皮下注射液は、対象の前方腹壁に投与される、請求項７に記載の方法。
【請求項９】
臨床的、組織病理学的、および／または遺伝学的基準によりアルポート症候群と診断された対象を選択する工程を含む、請求項１〜８のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１０】
第１の用量の修飾オリゴヌクレオチドを得る前に、対象は、３０ｍｌ／分／１．７３ｍ２の推算糸球体濾過量を有する、請求項１〜９のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１１】
第１の用量の修飾オリゴヌクレオチドを得る前に、対象は、４５ｍｌ／分／１．７３ｍ２〜９０ｍｌ／分／１．７３ｍ２の推算糸球体濾過量（ｅＧＦＲ）を有する、請求項１５に記載の方法。
【請求項１２】
第１の用量の修飾オリゴヌクレオチドを得る前に、対象の推算糸球体濾過量は、５ｍｌ／分／１．７３ｍ２／年以上の量で減少している、請求項１〜１１のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１３】
対象は、男性であり、Ｘ連鎖性アルポート症候群と診断されており、１８歳〜３０歳の年齢である、請求項１〜１２のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１４】
第１の用量の修飾オリゴヌクレオチドを得る前に、対象は、クレアチニン１グラムあたり３００ミリグラムを超えるタンパク質のタンパク尿を有する、請求項１〜１３のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１５】
修飾オリゴヌクレオチドの投与後、対象は：
ａ．推算糸球体濾過量；
ｂ．推算糸球体濾過量の減少の速度；および
ｃ．Ｓｈｏｒｔ  Ｆｏｒｍ  ３６  Ｈｅａｌｔｈ  Ｓｕｒｖｅｙ（登録商標）を使用した生活の質
からなる群から選択される１つまたはそれ以上のアルポート症候群関連パラメーターの改善を経験する、請求項１〜１４のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１６】
修飾オリゴヌクレオチドの投与後、対象は：
ａ．生検組織中のｍｉＲ−２１；
ｂ．血液中尿素窒素；
ｃ．尿中タンパク質／アルブミン比；
ｄ．尿中アルブミン／クレアチン比；
ｅ．クレアチニン；
ｆ．尿中足細胞；
ｇ．腎損傷分子−１；
ｈ．β−２マイクログロブリン；
ｉ．クラステリン；
ｊ．シスタチンＣ；
ｋ．非対称性ジメチルアルギニン；
ｌ．形質転換増殖因子−β；
ｍ．結合組織増殖因子；および
ｎ．好中球ゼラチナーゼ結合性リポカリン
からなる群から選択される１つまたはそれ以上の腎臓バイオマーカーの改善を示す、請求項１〜１５のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１７】
クレアチニン、シスタチンＣ、腎損傷分子−１、β−２マイクログロブリン、および／またはクラステリンの１つまたはそれ以上が対象の血液試料中で測定される、請求項１〜１６のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１８】
クレアチニン、シスタチンＣ、腎損傷分子−１、β−２マイクログロブリン、および／またはクラステリンの１つまたはそれ以上が対象の尿試料中で測定される、請求項１〜１６のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１９】
第１の用量のオリゴヌクレオチドを得る前に、対象は、少なくとも３０日間アンギオテンシンＩＩ変換酵素（ＡＣＥ）阻害剤で治療されている、請求項１〜１８のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２０】
第１の用量のオリゴヌクレオチドを得る前に、対象は、少なくとも３０日間アンギオテンシンＩＩ受容体遮断薬（ＡＲＢ）で治療されている、請求項１〜１９のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２１】
アンギオテンシンＩＩ変換酵素（ＡＣＥ）阻害剤は、カプトプリル、エナラプリル、リシノプリル、ベナゼプリル、クイナプリル、フォシノプリル、およびラミプリルから選択される、請求項１９に記載の方法。
【請求項２２】
アンギオテンシンＩＩ受容体遮断薬（ＡＲＢ）は、カンデサルタン、イルベサルタン、オルメサルタン、ロサルタン、バルサルタン、テルミサルタン、およびエプロサルタンから選択される、請求項２０に記載の方法。
【請求項２３】
少なくとも２４用量が対象に投与される、請求項１〜２２のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２４】
対象におけるアルポート症候群を治療するための方法であって、
ａ．臨床的、組織病理学的、および／または遺伝学的基準を使用してアルポート症候群と診断された対象を選択する工程；
ｂ．２つまたはそれ以上の用量の修飾オリゴヌクレオチドを含む医薬組成物を対象に投与する工程であって、修飾オリゴヌクレオチドは、１９の結合ヌクレオシドからなり、構造５’−ＡＥＣＳＡＴＣＳＡＧＴＣＳＴＧＡＵＳＡＡＧＣＳＴＡＥ−３’（配列番号３）を有し、下付き文字の前にないヌクレオシドは、β−Ｄ−デオキシリボヌクレオシドであり、下付き文字「Ｅ」の前のヌクレオシドは、２’−ＭＯＥヌクレオシドであり、下付き文字「Ｓ」の前のヌクレオシドは、Ｓ−ｃＥｔヌクレオシドであり、各ヌクレオシド間結合は、ホスホロチオエートヌクレオシド間結合であり、修飾オリゴヌクレオチドの用量が１．５ｍｇ／ｋｇであり、投薬間に２週間の頻度で用量が投与される、工程
を含み、
ｃ．医薬組成物の投与後、対象は：
ｉ．推算糸球体濾過量（ｅＧＦＲ）；
ｉｉ．ｅＧＦＲの減少の速度；および
ｉｉｉ．Ｓｈｏｒｔ  Ｆｏｒｍ  ３６  Ｈｅａｌｔｈ  Ｓｕｒｖｅｙ（登録商標）により測定した生活の質（ＱＯＬ）
から選択される１つまたはそれ以上のＡＳ関連パラメーターの改善を示す、前記方法。
【請求項２５】
対象におけるアルポート症候群を治療するための方法であって、
ａ．臨床的、組織病理学的、および／または遺伝学的基準を使用してアルポート症候群と診断された対象を選択する工程であって、対象が：
ｉ．少なくとも３０ｍｌ／分／１．７３ｍ２の推算糸球体濾過量；
ｉｉ．５ｍｌ／分／１．７３ｍ２／年以上の推算糸球体濾過量の量の減少；
ｉｉｉ．クレアチニン１グラムあたり３００ｍｇ以上のタンパク質のタンパク尿を有し；
ｉｖ．少なくとも３０日間ＡＣＥ阻害剤および／またはＡＲＢの安定的投薬レジメンで治療されている工程、
ｂ．２つまたはそれ以上の用量の修飾オリゴヌクレオチドを含む医薬組成物を対象に投与する工程であって、修飾オリゴヌクレオチドは、１９の結合ヌクレオシドからなり、構造５’−ＡＥＣＳＡＴＣＳＡＧＴＣＳＴＧＡＵＳＡＡＧＣＳＴＡＥ−３’（配列番号３）を有し、下付き文字の前にないヌクレオシドは、β−Ｄ−デオキシリボヌクレオシドであり、下付き文字「Ｅ」の前のヌクレオシドは、２’−ＭＯＥヌクレオシドであり、下付き文字「Ｓ」の前のヌクレオシドは、Ｓ−ｃＥｔヌクレオシドであり、各ヌクレオシド間結合は、ホスホロチオエートヌクレオシド間結合であり、修飾オリゴヌクレオチドの用量が１．５ｍｇ／ｋｇであり、投薬間に２週間の頻度で用量が投与される、工程
を含み、
ｃ．医薬組成物の投与後、対象は：
ｉ．推算糸球体濾過量（ｅＧＦＲ）；
ｉｉ．ｅＧＦＲの減少の速度；および
ｉｉｉ．Ｓｈｏｒｔ  Ｆｏｒｍ  ３６  Ｈｅａｌｔｈ  Ｓｕｒｖｅｙ（登録商標）により測定した生活の質（ＱＯＬ）
から選択される１つまたはそれ以上のアルポート症候群関連パラメーターの改善を示す、前記方法。
【請求項２６】
アルポート症候群を有する対象における経時的な腎機能の低下を減らすための方法であって、
ａ．臨床的、組織病理学的、および／または遺伝学的基準によって確認しアルポート症候群と診断された対象を選択する工程であって、対象が：
ｉ．少なくとも３０ｍｌ／分／１．７３ｍ２の推算糸球体濾過量；
ｉｉ．５ｍｌ／分／１．７３ｍ２／年以上の推算糸球体濾過量の量の減少；
ｉｉｉ．クレアチニン１グラムあたり３００ｍｇ以上のタンパク質のタンパク尿を有し；
ｉｖ．少なくとも３０日間ＡＣＥ阻害剤および／またはＡＲＢの安定的投薬レジメンで治療されている工程、
ｂ．２つまたはそれ以上の用量の修飾オリゴヌクレオチドを含む医薬組成物を対象に投与する工程であって、修飾オリゴヌクレオチドは、１９の結合ヌクレオシドからなり、構造５’−ＡＥＣＳＡＴＣＳＡＧＴＣＳＴＧＡＵＳＡＡＧＣＳＴＡＥ−３’（配列番号３）を有し、下付き文字の前にないヌクレオシドは、β−Ｄ−デオキシリボヌクレオシドであり、下付き文字「Ｅ」の前のヌクレオシドは、２’−ＭＯＥヌクレオシドであり、下付き文字「Ｓ」の前のヌクレオシドは、Ｓ−ｃＥｔヌクレオシドであり、各ヌクレオシド間結合は、ホスホロチオエートヌクレオシド間結合であり、修飾オリゴヌクレオチドの用量が１．５ｍｇ／ｋｇであり、投薬間に２週間の頻度で用量が投与される、工程
を含み、
ｃ．医薬組成物の投与後、対象は：
ｉ．推算糸球体濾過量（ｅＧＦＲ）；
ｉｉ．ｅＧＦＲの減少の速度；および
ｉｉｉ．Ｓｈｏｒｔ  Ｆｏｒｍ  ３６  Ｈｅａｌｔｈ  Ｓｕｒｖｅｙ（登録商標）により測定した生活の質（ＱＯＬ）
から選択される１つまたはそれ以上のアルポート症候群関連パラメーターの改善を示す、前記方法。
【請求項２７】
修飾オリゴヌクレオチドは、構造：
【化１】
2020518633.tif 000010
（配列番号３）；またはその薬学的に許容される塩を有する、請求項１〜２６のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２８】
修飾オリゴヌクレオチドは、薬学的に許容される塩の構造として存在する、請求項２７に記載の方法。
【請求項２９】
修飾オリゴヌクレオチドは、ナトリウム塩の構造として存在する、請求項２８に記載の方法。
【請求項３０】
修飾オリゴヌクレオチドは、構造：
【化２】
2020518633.tif 000011
（配列番号３）を有する、請求項１〜２９のいずれか１項に記載の方法。
【請求項３１】
慢性腎臓病疫学共同研究（ＣＫＤ−ＥＰＩ）のクレアチニン式を使用して推算糸球体濾過量を計算する、請求項１０〜３０のいずれか１項に記載の方法。
【請求項３２】
慢性腎臓病疫学共同研究（ＣＫＤ−ＥＰＩ）のクレアチニン−シスタチンＣ式を使用して推算糸球体濾過量を計算する、請求項１０〜３０のいずれか１項に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願の相互参照
本出願は、あらゆる目的でその全容を参照によって本明細書に組み入れる、２０１８年５月４日に出願された米国仮出願第６２／５０１，６９９号の優先権を主張するものである。
【０００２】
本明細書で提供するのは、アルポート症候群を治療するための方法および組成物である。
【背景技術】
【０００３】
ＩＶ型コラーゲン、基底膜の主成分は、６つのα鎖、α−１コラーゲン（ＩＶ型）、α−２コラーゲン（ＩＶ型）、α−３コラーゲン（ＩＶ型）、α−４コラーゲン（ＩＶ型）、α−５コラーゲン（ＩＶ型）、およびα−６コラーゲン（ＩＶ型）のファミリーである。コラーゲンＩＶのα−３、α−４およびα−６鎖は、腎臓による血液濾過の重要な機能を果たす、糸球体基底膜（ＧＢＭ）のコラーゲンネットワークの基本成分である。
【０００４】
アルポート症候群は、異常なタイプの糸球体基底膜（ＧＢＭ）が生成され、間質性線維症、糸球体硬化症、および最終的な腎機能消失につながる遺伝型の腎疾患である。この疾患は、聴覚障害および眼球異常によって特徴付けられることも多い。アルポート症候群は、それぞれＩＶ型コラーゲンのα３（ＩＶ）、α４（ＩＶ）、およびα５（ＩＶ）鎖をコードするＣｏｌ４ａ３、Ｃｏｌ４ａ４、またはＣｏｌ４ａ５における突然変異によって引き起こされる。Ｘ染色体上のＣｏｌ４ａ５遺伝子における突然変異は、この疾患の全症例の８５％を占めるＸ連鎖性のアルポート症候群を引き起こす。常染色体劣性は、その各々が第２染色体上に位置するＣｏｌ４ａ３またはＣｏｌ４ａ４のいずれかの、各コピーにおける突然変異の遺伝によるものである。稀な常染色体優性は、Ｃｏｌ４ａ３またはＣｏｌ４ａ４遺伝子のいずれかにおけるドミナントネガティブ突然変異の遺伝によるものである。Ｘ連鎖性は女性より男性においてより重篤であり、男性における大部分の症例は末期腎疾患（ＥＳＲＤ）に進行する。常染色体性は男性と女性で同様の重症度である。この疾患の大部分の症例は遺伝性突然変異によるものであるが、幾つかの症例はＣｏｌ４ａＡ遺伝子の１つにおけるｄｅ  ｎｏｖｏ突然変異によるものである。
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【０００５】
実施形態１．アルポート症候群を有する対象に２つまたはそれ以上の用量の修飾オリゴヌクレオチドを投与する工程を含む、アルポート症候群を治療するための方法であって、修飾オリゴヌクレオチドは、１９の結合ヌクレオシドからなり、構造５’−ＡＥＣＳＡＴＣＳＡＧＴＣＳＴＧＡＵＳＡＡＧＣＳＴＡＥ−３’（配列番号３）を有し、下付き文字の前にないヌクレオシドは、β−Ｄ−デオキシリボヌクレオシドであり、下付き文字「Ｅ」の前のヌクレオシドは、２’−ＭＯＥヌクレオシドであり、下付き文字「Ｓ」の前のヌクレオシドは、Ｓ−ｃＥｔヌクレオシドであり、各ヌクレオシド間結合は、ホスホロチオエートヌクレオシド間結合であり、投薬間に２週間の頻度で１．５ｍｇ／ｋｇの用量が投与される、方法。
【０００６】
実施形態２．用量は、薬学的に許容される希釈剤中で送達される、実施形態１に記載の方法。
【０００７】
実施形態３．薬学的に許容される希釈剤は、生理食塩水溶液である、実施形態２に記載の方法。
【０００８】
実施形態４．生理食塩水溶液は、０．３％塩化ナトリウム溶液である、実施形態３に記載の方法。
【０００９】
実施形態５．薬学的に許容される希釈剤中の修飾オリゴヌクレオチドの濃度は、少なくとも１１０ｍｇ／ｍＬである、実施形態２〜４のいずれか１つに記載の方法。
【００１０】
実施形態６．用量は、修飾オリゴヌクレオチド１１０ｍｇ／ｍＬの１回のボーラス注射である、実施形態１〜５のいずれか１つに記載の方法。
【００１１】
実施形態７．医薬組成物は、皮下注射液として投与される、実施形態１〜６のいずれか１つに記載の方法。
【００１２】
実施形態８．皮下注射液は、対象の前方腹壁に投与される、実施形態７に記載の方法。
【００１３】
実施形態９．臨床的、組織病理学的、および／または遺伝学的基準によりアルポート症候群と診断された対象を選択する工程を含む、実施形態１〜８のいずれか１つに記載の方法。
【００１４】
実施形態１０．第１の用量の修飾オリゴヌクレオチドを得る前に、対象は、３０ｍｌ／分／１．７３ｍ２の推算糸球体濾過量を有する、実施形態１〜９のいずれか１つに記載の方法。
【００１５】
実施形態１１．第１の用量の修飾オリゴヌクレオチドを得る前に、対象は、４５ｍｌ／分／１．７３ｍ２〜９０ｍｌ／分／１．７３ｍ２の推算糸球体濾過量（ｅＧＦＲ）を有する、実施形態１５に記載の方法。
【００１６】
実施形態１２．第１の用量の修飾オリゴヌクレオチドを得る前に、対象の推算糸球体濾過量は、５ｍｌ／分／１．７３ｍ２／年以上の量で減少している、実施形態１〜１１のいずれか１つに記載の方法。
【００１７】
実施形態１３．対象は、男性であり、Ｘ連鎖性アルポート症候群と診断されており、１８歳〜３０歳の年齢である、実施形態１〜１２のいずれか１つに記載の方法。
【００１８】
実施形態１４．第１の用量の修飾オリゴヌクレオチドを得る前に、対象は、クレアチニン１グラムあたり３００ミリグラムを超えるタンパク質のタンパク尿を有する、実施形態１〜１３のいずれか１つに記載の方法。
【００１９】
実施形態１５．修飾オリゴヌクレオチドの投与後、対象は：
ａ．推算糸球体濾過量；
ｂ．推算糸球体濾過量の減少の速度；および
ｃ．Ｓｈｏｒｔ  Ｆｏｒｍ  ３６  Ｈｅａｌｔｈ  Ｓｕｒｖｅｙ（登録商標）を使用した生活の質
からなる群から選択される１つまたはそれ以上のアルポート症候群関連パラメーターの改善を経験する、実施形態１〜１４のいずれか１つに記載の方法。
【００２０】
実施形態１６．修飾オリゴヌクレオチドの投与後、対象は：
ａ．生検組織中のｍｉＲ−２１；
ｂ．血液中尿素窒素；
ｃ．尿中タンパク質／アルブミン比；
ｄ．尿中アルブミン／クレアチン比；
ｅ．クレアチニン；
ｆ．尿中足細胞（urine podocyturia）；
ｇ．腎損傷分子−１；
ｈ．β−２マイクログロブリン；
ｉ．クラステリン；
ｊ．シスタチンＣ；
ｋ．非対称性ジメチルアルギニン；
ｌ．形質転換増殖因子−β；
ｍ．結合組織増殖因子；および
ｎ．好中球ゼラチナーゼ結合性リポカリン
からなる群から選択される１つまたはそれ以上の腎臓バイオマーカーの改善を示す、実施形態１〜１５のいずれか１つに記載の方法。
【００２１】
実施形態１７．クレアチニン、シスタチンＣ、腎損傷分子−１、β−２マイクログロブリン、および／またはクラステリンの１つまたはそれ以上が対象の血液試料中で測定される、実施形態１〜１６のいずれか１つに記載の方法。
【００２２】
実施形態１８．クレアチニン、シスタチンＣ、腎損傷分子−１、β−２マイクログロブリン、および／またはクラステリンの１つまたはそれ以上が対象の尿試料中で測定される、実施形態１〜１６のいずれか１つに記載の方法。
【００２３】
実施形態１９．第１の用量のオリゴヌクレオチドを得る前に、対象は、少なくとも３０日間アンギオテンシンＩＩ変換酵素（ＡＣＥ）阻害剤で治療されている、実施形態１〜１８のいずれか１つに記載の方法。
【００２４】
実施形態２０．第１の用量のオリゴヌクレオチドを得る前に、対象は、少なくとも３０日間アンギオテンシンＩＩ受容体遮断薬（ＡＲＢ）で治療されている、実施形態１〜１９のいずれか１つに記載の方法。
【００２５】
実施形態２１．アンギオテンシンＩＩ変換酵素（ＡＣＥ）阻害剤は、カプトプリル、エナラプリル、リシノプリル、ベナゼプリル、クイナプリル、フォシノプリル、およびラミプリルから選択される、実施形態１９に記載の方法。
【００２６】
実施形態２２．アンギオテンシンＩＩ受容体遮断薬（ＡＲＢ）は、カンデサルタン、イルベサルタン、オルメサルタン、ロサルタン、バルサルタン、テルミサルタン、およびエプロサルタンから選択される、実施形態２０に記載の方法。
【００２７】
実施形態２３．少なくとも２４用量が対象に投与される、実施形態１〜２２のいずれか１つに記載の方法。
【００２８】
実施形態２４．対象におけるアルポート症候群を治療するための方法であって、
ａ．臨床的、組織病理学的、および／または遺伝学的基準を使用してアルポート症候群と診断された対象を選択する工程；
ｂ．２つまたはそれ以上の用量の修飾オリゴヌクレオチドを含む医薬組成物を対象に投与する工程であって、修飾オリゴヌクレオチドは、１９の結合ヌクレオシドからなり、構造５’−ＡＥＣＳＡＴＣＳＡＧＴＣＳＴＧＡＵＳＡＡＧＣＳＴＡＥ−３’（配列番号３）を有し、下付き文字の前にないヌクレオシドは、β−Ｄ−デオキシリボヌクレオシドであり、下付き文字「Ｅ」の前のヌクレオシドは、２’−ＭＯＥヌクレオシドであり、下付き文字「Ｓ」の前のヌクレオシドは、Ｓ−ｃＥｔヌクレオシドであり、各ヌクレオシド間結合は、ホスホロチオエートヌクレオシド間結合であり、修飾オリゴヌクレオチドの用量が１．５ｍｇ／ｋｇであり、投薬間に２週間の頻度で用量が投与される、工程
を含み、
ｃ．医薬組成物の投与後、対象は：
ｉ．推算糸球体濾過量（ｅＧＦＲ）；
ｉｉ．ｅＧＦＲの減少の速度；および
ｉｉｉ．Ｓｈｏｒｔ  Ｆｏｒｍ  ３６  Ｈｅａｌｔｈ  Ｓｕｒｖｅｙ（登録商標）により測定した生活の質（ＱＯＬ）
から選択される１つまたはそれ以上のＡＳ関連パラメーターの改善を示す方法。
【００２９】
実施形態２５．対象におけるアルポート症候群を治療するための方法であって、
ａ．臨床的、組織病理学的、および／または遺伝学的基準を使用してアルポート症候群と診断された対象を選択する工程であって、対象が：
ｉ．少なくとも３０ｍｌ／分／１．７３ｍ２の推算糸球体濾過量；
ｉｉ．５ｍｌ／分／１．７３ｍ２／年以上の推算糸球体濾過量の量の減少；
ｉｉｉ．クレアチニン１グラムあたり３００ｍｇ以上のタンパク質のタンパク尿を有し；
ｉｖ．少なくとも３０日間ＡＣＥ阻害剤および／またはＡＲＢの安定的投薬レジメンで治療されている工程、
ｂ．２つまたはそれ以上の用量の修飾オリゴヌクレオチドを含む医薬組成物を対象に投与する工程であって、修飾オリゴヌクレオチドは、１９の結合ヌクレオシドからなり、構造５’−ＡＥＣＳＡＴＣＳＡＧＴＣＳＴＧＡＵＳＡＡＧＣＳＴＡＥ−３’（配列番号３）を有し、下付き文字の前にないヌクレオシドは、β−Ｄ−デオキシリボヌクレオシドであり、下付き文字「Ｅ」の前のヌクレオシドは、２’−ＭＯＥヌクレオシドであり、下付き文字「Ｓ」の前のヌクレオシドは、Ｓ−ｃＥｔヌクレオシドであり、各ヌクレオシド間結合は、ホスホロチオエートヌクレオシド間結合であり、修飾オリゴヌクレオチドの用量が１．５ｍｇ／ｋｇであり、投薬間に２週間の頻度で用量が投与される、工程
を含み、
ｃ．医薬組成物の投与後、対象は：
ｉ．推算糸球体濾過量（ｅＧＦＲ）；
ｉｉ．ｅＧＦＲの減少の速度；および
ｉｉｉ．Ｓｈｏｒｔ  Ｆｏｒｍ  ３６  Ｈｅａｌｔｈ  Ｓｕｒｖｅｙ（登録商標）により測定した生活の質（ＱＯＬ）
から選択される１つまたはそれ以上のアルポート症候群関連パラメーターの改善を示す方法。
【００３０】
実施形態２６．アルポート症候群を有する対象における経時的な腎機能の低下を減らすための方法であって、
ａ．臨床的、組織病理学的、および／または遺伝学的基準によって確認しアルポート症候群と診断された対象を選択する工程であって、対象が：
ｉ．少なくとも３０ｍｌ／分／１．７３ｍ２の推算糸球体濾過量；
ｉｉ．５ｍｌ／分／１．７３ｍ２／年以上の推算糸球体濾過量の量の減少；
ｉｉｉ．クレアチニン１グラムあたり３００ｍｇ以上のタンパク質のタンパク尿を有し；
ｉｖ．少なくとも３０日間ＡＣＥ阻害剤および／またはＡＲＢの安定的投薬レジメンで治療されている工程、
ｂ．２つまたはそれ以上の用量の修飾オリゴヌクレオチドを含む医薬組成物を対象に投与する工程であって、修飾オリゴヌクレオチドは、１９の結合ヌクレオシドからなり、構造５’−ＡＥＣＳＡＴＣＳＡＧＴＣＳＴＧＡＵＳＡＡＧＣＳＴＡＥ−３’（配列番号３）を有し、下付き文字の前にないヌクレオシドは、β−Ｄ−デオキシリボヌクレオシドであり、下付き文字「Ｅ」の前のヌクレオシドは、２’−ＭＯＥヌクレオシドであり、下付き文字「Ｓ」の前のヌクレオシドは、Ｓ−ｃＥｔヌクレオシドであり、各ヌクレオシド間結合は、ホスホロチオエートヌクレオシド間結合であり、修飾オリゴヌクレオチドの用量が１．５ｍｇ／ｋｇであり、投薬間に２週間の頻度で用量が投与される、工程
を含み、
ｃ．医薬組成物の投与後、対象は：
ｉ．推算糸球体濾過量（ｅＧＦＲ）；
ｉｉ．ｅＧＦＲの減少の速度；および
ｉｉｉ．Ｓｈｏｒｔ  Ｆｏｒｍ  ３６  Ｈｅａｌｔｈ  Ｓｕｒｖｅｙ（登録商標）により測定した生活の質（ＱＯＬ）
から選択される１つまたはそれ以上のアルポート症候群関連パラメーターの改善を示す方法。
【００３１】
実施形態２７．修飾オリゴヌクレオチドは、構造：
【化１】
2020518633.tif 000002
（配列番号３）；またはその薬学的に許容される塩を有する、実施形態１〜２６のいずれか１つに記載の方法。
【００３２】
実施形態２８．修飾オリゴヌクレオチドは、薬学的に許容される塩の構造として存在する、実施形態２７に記載の方法。
【００３３】
実施形態２９．修飾オリゴヌクレオチドは、ナトリウム塩の構造として存在する、実施形態２８に記載の方法。
【００３４】
実施形態３０．修飾オリゴヌクレオチドは、構造：
【化２】
2020518633.tif 000003
（配列番号３）を有する、実施形態１〜２９のいずれか１つに記載の方法。
【００３５】
実施形態３１．慢性腎臓病疫学共同研究（ＣＫＤ−ＥＰＩ）のクレアチニン式を使用して推算糸球体濾過量を計算する、実施形態１０〜３０のいずれか１つに記載の方法。
【００３６】
実施形態３２．慢性腎臓病疫学共同研究（ＣＫＤ−ＥＰＩ）のクレアチニン−シスタチンＣ式を使用して推算糸球体濾過量を計算する、実施形態１０〜３０のいずれか１つに記載の方法。
【発明を実施するための形態】
【００３７】
他に定義しない限り、本明細書中で使用する全ての技術および科学用語は、本発明が属する技術分野の当業者によって一般に理解されているものと同じ意味を有する。具体的な定義を与えない限り、本明細書中に記載する関連して利用する命名法、ならびに分析化学、合成有機化学、および医薬および製薬化学の手順と技法は、当技術分野でよく知られており一般に使用されるものである。本明細書中の用語に関して複数の定義が存在する場合、本セクション中の定義が優勢である。標準的技法を、化学合成、化学分析、医薬品調製、製剤化および送達、および対象の治療に使用することができる。特定のこのような技法および手順は、あらゆる目的で参照によって本明細書に組み入れる、例えばＳａｎｇｖｉ  ａｎｄ  Ｃｏｏｋ、Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｓｏｃｉｅｔｙ、Ｗａｓｈｉｎｇｔｏｎ  Ｄ．Ｃ．１９９４年によって編集された「Ｃａｒｂｏｈｙｄｒａｔｅ  Ｍｏｄｉｆｉｃａｔｉｏｎｓ  ｉｎ  Ａｎｔｉｓｅｎｓｅ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ」、および「Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ」、Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏ．、Ｅａｓｔｏｎ、Ｐａ、第１８版、１９９０年中に見ることができる。許容される場合、他に記さない限り、本明細書中の開示全体を通じて言及する全ての特許、特許出願、公開出願および刊行物、ＧＥＮＢＡＮＫ配列、ウエブサイトおよび他の公開材料は、その全容を参照によって本明細書に組み入れる。ＵＲＬまたは他のこのような識別子もしくはアドレスを言及する場合、このような識別子は変わる可能性があり、インターネット上の個別の情報は変わる可能性があるが、同等の情報をインターネット検索により見つけることができることは理解される。それに関する言及は、このような情報の可用性および一般的拡散を示す。
【００３８】
本発明の組成物および方法を開示し記載する前に、本明細書中で使用する用語は、単に個別の実施形態を記載する目的のものであり、限定することを意図するものではないことを理解されたい。本明細書および添付の特許請求の範囲内で使用するように、文脈が明らかに他のことを示さない限り、単数形「１つの（ａ）」、「１つの（ａｎ）」および「その（ｔｈｅ）」は複数形の言及を含むことを記さなければならない。
【００３９】
定義
「アルポート症候群」は、異常なレベルの糸球体基底膜（ＧＢＭ）が生成され、間質性線維症、糸球体硬化症、および最終的な腎機能消失につながる遺伝型の腎疾患である。この疾患は、聴覚障害および眼球異常によって特徴付けられることも多い。
【００４０】
「血尿」は尿中の赤血球細胞の存在を意味する。
【００４１】
「アルブミン尿」は尿中の過剰なアルブミンの存在を意味し、正常アルブミン尿、顕性アルブミン尿、ミクロアルブミン尿およびマクロアルブミン尿を非制限的に含む。通常、足細胞、糸球体基底膜および内皮細胞で構成される糸球体濾過透過制御壁が、尿中に血清タンパク質が漏出するのを妨げる。
【００４２】
アルブミン尿は糸球体濾過透過制御壁の損傷を反映し得る。アルブミン尿は、２４時間尿試料、一晩尿試料または少量尿試料から計算することができる。
【００４３】
「顕性アルブミン尿」は、（ｉ）２４時間あたりの尿中への１５ｍｇから＜３０ｍｇのアルブミンの排出、および／または（ｉｉ）男性において１．２５ｍｇ／ｍｍｏｌから＜２．５ｍｇ／ｍｍｏｌ（または１０ｍｇ／ｇから＜２０ｍｇ／ｇ）または女性において１．７５ｍｇ／ｍｍｏｌから＜３．５ｍｇ／ｍｍｏｌ（または１５ｍｇ／ｇから＜３０ｍｇ／ｇ）のアルブミン／クレアチニン比によって特徴付けられる増大アルブミン尿を意味する。
【００４４】
「ミクロアルブミン尿」は、（ｉ）２４時間あたりの尿中への３０〜３００ｍｇのアルブミンの排出、および／または（ｉｉ）男性において２．５ｍｇ／ｍｍｏｌから＜２５ｍｇ／ｍｍｏｌ（または２０ｍｇ／ｇから＜２００ｍｇ／ｇ）または女性において３．５ｍｇ／ｍｍｏｌから＜３５ｍｇ／ｍｍｏｌ（または３０ｍｇ／ｇから＜３００ｍｇ／ｇ）のアルブミン／クレアチニン比によって特徴付けられる増大アルブミン尿を意味する。
【００４５】
「マクロアルブミン尿」は、２４時間あたりの尿中への３００ｍｇを超えるアルブミンの排出、および／または（ｉｉ）男性において＞２５ｍｇ／ｍｍｏｌ（または＞２００ｍｇ／ｇ）または女性において＞３５ｍｇ／ｍｍｏｌ（または＞３００ｍｇ／ｇ）のアルブミン／クレアチニン比によって特徴付けられる増大アルブミン尿を意味する。
【００４６】
「アルブミン／クレアチニン比」は尿中クレアチニン（ｇ／ｄＬ）あたりの尿中アルブミン（ｍｇ／ｄＬ）の比であり、ｍｇ／ｇとして表す。特定の実施形態では、少量尿試料からアルブミン／クレアチニン比を計算することができ、２４時間の間にわたるアルブミン排出の推定値として使用することができる。
【００４７】
「糸球体濾過量（ＧＦＲ）」は腎臓からの濾過流体の流量を意味し、対象における腎機能の指標として使用する。特定の実施形態では、推算糸球体濾過量を計算することによって対象のＧＦＲを決定する。特定の実施形態では、対象においてイヌリン方法を使用して、対象のＧＦＲを直接測定する。
【００４８】
「推算糸球体濾過量（ｅＧＦＲ）」は、腎臓がどの程度上手くクレアチニンを濾過しているかの測定値を意味し、これを使用して糸球体濾過量を見積もる。ＧＦＲの実測は複雑なので、臨床試験ではｅＧＦＲが使用されることが多い。正常な結果は９０〜１２０ｍＬ／分／１．７３ｍ２の範囲であり得る。３カ月以上で６０ｍＬ／分／１．７３ｍ２未満のレベルは慢性腎疾患の指標であり得る。１５ｍＬ／分／１．７３ｍ２未満のレベルは腎不全の指標であり得る。
【００４９】
「タンパク尿」は尿中の過剰な血清タンパク質の存在を意味する。タンパク尿は、２４時間あたりの尿中への＞２５０ｍｇのタンパク質の排出、および／または≧０．２０ｍｇ／ｍｇの尿中タンパク質とクレアチニンの比によって特徴付けることができる。タンパク尿と関連して増大する血清タンパク質には、非制限的にアルブミンがある。
【００５０】
「血液中尿素窒素」または「ＢＵＮ」は、尿素の型での血液中の窒素量の測定値を意味する。肝臓は尿素回路においてタンパク質消化の老廃物として尿素を生成し、尿素は腎臓によって血液から除去される。正常なヒト成人の血液は、血液１００ｍｌあたり７ｍｇ〜２１ｍｇ（７ｍｇ〜２１ｍｇ／ｄＬ）の尿素窒素を含有し得る。血液中尿素窒素の測定値は、腎臓の健康状態の指標として使用される。腎臓が正常に血液から尿素を除去できない場合、対象のＢＵＮは増大する。
【００５１】
「末期腎疾患（ＥＳＲＤ）」は、完全またはほぼ完全な腎機能不全を意味する。
【００５２】
「腎機能障害」は、正常な腎機能と比較して低下した腎機能を意味する。
【００５３】
「線維症」は、臓器または組織中の過剰な線維結合組織の形成または発達を意味する。特定の実施形態では、修復または反応プロセスとして線維症が生じる。特定の実施形態では、障害または損傷に応答して線維症が生じる。用語「線維症」は、臓器または組織の正常成分としての線維組織の形成とは対照的な、修復または反応プロセスとしての、臓器または組織中の過剰な線維結合組織の形成または発達として理解されたい。
【００５４】
「ベースライン」は、治療開始直前の対象における臨床パラメーターの測定値を意味する。ベースライン測定値を使用して、対象が１つまたはそれ以上の選択医薬品を用いた治療に適していることを確認することができる。特定の実施形態では、ベースラインｅＧＲＦを、アルポート症候群を有する対象から得て、本明細書中に記載する１つまたはそれ以上の選択医薬品を用いた治療に対象が適していることを確認する。
【００５５】
「Ｓｈｏｒｔ  Ｆｏｒｍ  ３６  Ｈｅａｌｔｈ  Ｓｕｒｖｅｙ（登録商標）」または「ＳＦ−３６」は、対象の健康状態および生活の質を評価する際に使用される、対象健康状態の３６項目の対象報告型調査を意味する。ＳＦ−３６を使用して、疾患または状態の治療を施した対象の疾患負荷をモニタリングし比較することができる。ＳＦ−３６は８個の個別ドメイン：身体機能、身体役割機能、身体の痛み、一般的健康知覚、活力、社会的役割機能、感情的役割機能、およびメンタルヘルスを含む。ＳＦ−３６は、例えばＭｃＨｏｒｎｅｙら（Ｍｅｄ  Ｃａｒｅ．１９９３年３月３１日（３）：２４７〜６３頁）によって記載されている。
【００５６】
「生活の質」は、疾患および／または疾患の治療によって対象の身体、生理、および社会機能が損なわれる程度を意味する。生活の質は、アルポート症候群を含めた慢性疾患がある対象において損なわれる可能性がある。
【００５７】
「安定的投薬レジメン」は、対象における医薬品の治療レベルを維持する、対象に投与される医薬品の量を意味する。例えば、初回用量の医薬品を対象に与えることができ、対象が初回用量にどの程度応答するかに応じて、この用量をさらに多くまたは少なく調整することができる。所望の治療レベルをもたらす用量が確定した後、対象は安定的投薬レジメンを得ると考えられる。所望の治療レベルは、（血液などの）対象の組織中で望ましい医薬品のレベル、または１つまたはそれ以上の疾患症状の改善などの望ましい薬理学的効果であり得る。
【００５８】
「さらなる進行の遅延」は、医学的状態が進行状態に移行する速度の低減を意味する。
【００５９】
「さらなる進行の休止」は、医学的状態が進行状態に進行するのが止まることを意味する。
【００６０】
「透析時間の延引」は、透析治療の必要が遅れるほど充分な腎機能の維持を意味する。
【００６１】
「腎移植時間の延引」は、腎移植の必要が遅れるほど充分な腎機能の維持を意味する。
【００６２】
「平均余命の改善」は、対象における１つまたはそれ以上の疾患症状の治療による、対象の寿命の延長を意味する。
【００６３】
「アンチｍｉＲ」は、マイクロＲＮＡと相補的な核酸塩基配列を有するオリゴヌクレオチドを意味する。特定の実施形態では、アンチｍｉＲは修飾オリゴヌクレオチドである。
【００６４】
「ｍｉＲ−Ｘ」が特定マイクロＲＮＡを指定する「アンチｍｉＲ−Ｘ」は、ｍｉＲ−Ｘと相補的な核酸塩基配列を有するオリゴヌクレオチドを意味する。特定の実施形態では、アンチｍｉＲ−ＸはｍｉＲ−Ｘと完全に相補的（すなわち１００％相補的）である。特定の実施形態では、アンチｍｉＲ−ＸはｍｉＲ−Ｘと少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、または少なくとも９５％相補的である。特定の実施形態では、アンチｍｉＲ−Ｘは修飾オリゴヌクレオチドである。
【００６５】
「ｍｉＲ−２１」は、核酸塩基配列ＵＡＧＣＵＵＡＵＣＡＧＡＣＵＧＡＵＧＵＵＧＡ（配列番号１）を有する成熟ｍｉＲＮＡを意味する。
【００６６】
「ｍｉＲ−２１ステムループ配列」は、核酸塩基配列ＵＧＵＣＧＧＧＵＡＧＣＵＵＡＵＣＡＧＡＣＵＧＡＵＧＵＵＧＡＣＵＧＵＵＧＡＡＵＣＵＣＡＵＧＧＣＡＡＣＡＣＣＡＧＵＣＧＡＵＧＧＧＣＵＧＵＣＵＧＡＣＡ（配列番号２）を有するステムループ配列を意味する。
【００６７】
「標的核酸」は、オリゴマー化合物がハイブリダイズするように設計された核酸を意味する。
【００６８】
「標的化」は、標的核酸とハイブリダイズする核酸塩基配列の設計および選択の方法を意味する。
【００６９】
「〜を標的化する」は、標的核酸とハイブリダイゼーション可能な核酸塩基配列があることを意味する。
【００７０】
「調節」は、機能、量、または活性の変動を意味する。特定の実施形態では、調節は機能、量、または活性の増大を意味する。特定の実施形態では、調節は機能、量、または活性の低下を意味する。
【００７１】
「発現」は、遺伝子のコード情報が既存の構造に変換され細胞内で作用する、任意の機能および工程を意味する。
【００７２】
「核酸塩基配列」は、何らかの糖、結合、および／または核酸塩基修飾とは無関係に、典型的には５’から３’方向に並んだ、オリゴマー化合物または核酸中の隣接核酸塩基の配列を意味する。
【００７３】
「隣接核酸塩基」は、核酸中の互いにすぐ隣の核酸塩基を意味する。
【００７４】
「核酸塩基相補性」は、水素結合を介して非共有結合対を形成する２つの核酸塩基の能力を意味する。
【００７５】
「相補的」は、１つの核酸が別の核酸またはオリゴヌクレオチドとハイブリダイズ可能であることを意味する。特定の実施形態では、相補的は標的核酸とハイブリダイズ可能であるオリゴヌクレオチドを指す。
【００７６】
「１００％相補的」とも言う「完全に相補的」は、オリゴヌクレオチドの各核酸塩基が、標的核酸中のそれぞれの対応する位置で核酸塩基と塩基対形成することができることを意味する。特定の実施形態では、オリゴヌクレオチドはマイクロＲＮＡと完全に相補的である、すなわちオリゴヌクレオチドの各核酸塩基は、マイクロＲＮＡ中の対応する位置で核酸塩基と相補的である。特定の実施形態では、各核酸塩基がマイクロＲＮＡステムループ配列の領域内の核酸塩基と相補性を有するオリゴヌクレオチドは、マイクロＲＮＡステムループ配列と完全に相補的である。
【００７７】
「相補率」は、標的核酸の等しい長さ部分と相補的である、オリゴヌクレオチドの核酸塩基の割合を意味する。相補率は、標的核酸中の対応する位置で核酸塩基と相補的であるオリゴヌクレオチドの核酸塩基の数を、オリゴヌクレオチド中の核酸塩基の合計数で割ることによって計算する。
【００７８】
「同一率」は、第１の核酸中の核酸塩基の合計数で割った、第２の核酸中の対応する位置における核酸塩基と同一である第１の核酸中の核酸塩基の数を意味する。特定の実施形態では、第１の核酸はマイクロＲＮＡであり、第２の核酸はマイクロＲＮＡである。特定の実施形態では、第１の核酸はオリゴヌクレオチドであり、第２の核酸はオリゴヌクレオチドである。
【００７９】
「ハイブリダイズ」は、核酸塩基の相補性によって起こる相補的核酸のアニーリングを意味する。
【００８０】
「ミスマッチ」は、第２の核酸の対応する位置における核酸塩基とワトソン−クリック塩基対形成できない第１の核酸の核酸塩基を意味する。
【００８１】
核酸塩基配列の文脈における「同一」は、糖、結合、および／または核酸塩基修飾とは無関係に、任意の既存のピリミジンのメチル状態とは無関係に、同じ核酸塩基配列を有することを意味する。
【００８２】
「マイクロＲＮＡ」は、酵素ダイサーによるプレ−マイクロＲＮＡの切断産物である、１８〜２５核酸塩基長の内在非コードＲＮＡを意味する。成熟マイクロＲＮＡの例は、ｍｉＲＢａｓｅとして知られるマイクロＲＮＡのデータベースにおいて見られる（ｈｔｔｐ：／／ｍｉｃｒｏｍａ．ｓａｎｇｅｒ．ａｃ．ｕｋ／）。特定の実施形態では、マイクロＲＮＡは「マイクロＲＮＡ」または「ｍｉＲ」と略す。
【００８３】
「マイクロＲＮＡ制御転写産物」は、マイクロＲＮＡによって制御される転写産物を意味する。
【００８４】
「シード配列」は、成熟マイクロＲＮＡ配列の５’末端の核酸塩基６〜８または１〜９の隣接核酸塩基を含む核酸塩基配列を意味する。
【００８５】
「シードマッチ配列」は、シード配列と相補的であり、シード配列と同じ長さである核酸塩基配列を意味する。
【００８６】
「オリゴマー化合物」は、複数の結合モノマーサブユニットを含む化合物を意味する。オリゴマー化合物はオリゴヌクレオチドを含む。
【００８７】
「オリゴヌクレオチド」は、その各々が互いに無関係に修飾または非修飾状態であり得る、複数の結合ヌクレオシドを含む化合物を意味する。
【００８８】
「天然ヌクレオシド間結合」はヌクレオシド間の３’〜５’ホスホジエステル結合を意味する。
【００８９】
「天然糖」はＤＮＡ（２’−Ｈ）またはＲＮＡ（２’−ＯＨ）において見られる糖を意味する。
【００９０】
「ヌクレオシド間結合」は、隣接ヌクレオシド間の共有結合を意味する。
【００９１】
「結合ヌクレオシド」は、共有結合によって接合したヌクレオシドを意味する。
【００９２】
「核酸塩基」は、別の核酸塩基と共有結合対形成できる複素環部分を意味する。
【００９３】
「ヌクレオシド」は、糖部分と結合した核酸塩基を意味する。
【００９４】
「ヌクレオチド」は、ヌクレオシドの糖部分と共有結合したリン酸基を有するヌクレオシドを意味する。
【００９５】
幾つかの結合ヌクレオシド「からなる修飾オリゴヌクレオチドを含む化合物」は、規定数の結合ヌクレオシドを有する修飾オリゴヌクレオチドを含む化合物を意味する。したがって、この化合物は追加的置換またはコンジュゲートを含み得る。他に示さない限り、修飾オリゴヌクレオチドは、その修飾オリゴヌクレオチドにハイブリダイズする相補鎖にハイブリダイズせず、その修飾オリゴヌクレオチドのもの以外は如何なる追加的ヌクレオシドも含まない。
【００９６】
「修飾オリゴヌクレオチド」は、天然末端、糖、核酸塩基、および／またはヌクレオシド間結合と比較して、１つまたはそれ以上の修飾を有する一本鎖オリゴヌクレオチドを意味する。修飾オリゴヌクレオチドは非修飾ヌクレオシドを含み得る。
【００９７】
「修飾ヌクレオシド」は、天然ヌクレオシドから何らかの変化があるヌクレオシドを意味する。修飾ヌクレオシドは、修飾糖および非修飾核酸塩基を有し得る。修飾ヌクレオシドは、修飾糖および修飾核酸塩基を有し得る。修飾ヌクレオシドは、天然糖および修飾核酸塩基を有し得る。特定の実施形態では、修飾ヌクレオシドは二環式ヌクレオシドである。特定の実施形態では、修飾ヌクレオシドは非二環式ヌクレオシドである。
【００９８】
「修飾ヌクレオシド間結合」は、天然ヌクレオシド間結合からの何らかの変化を意味する。
【００９９】
「ホスホロチオエートヌクレオシド間結合」は、非架橋原子の１つが硫黄原子であるヌクレオシド間の結合を意味する。
【０１００】
「修飾糖部分」は、天然糖からの置換および／または何らかの変化を意味する。
【０１０１】
「非修飾核酸塩基」は、ＲＮＡまたはＤＮＡの天然複素環塩基：プリン塩基アデニン（Ａ）とグアニン（Ｇ）、およびピリミジン塩基チミン（Ｔ）、シトシン（Ｃ）（５−メチルシトシン含む）、およびウラシル（Ｕ）を意味する。
【０１０２】
「５−メチルシトシン」は、５位置に結合したメチル基を含むシトシンを意味する。
【０１０３】
「非メチル化シトシン」は、５位置に結合したメチル基を有していないシトシンを意味する。
【０１０４】
「修飾核酸塩基」は、非修飾核酸塩基ではない任意の核酸塩基を意味する。
【０１０５】
「糖部分」は、天然フラノシルまたは修飾糖部分を意味する。
【０１０６】
「修飾糖部分」は、置換糖部分または糖代替を意味する。
【０１０７】
「２’−Ｏ−メチル糖」または「２’−ＯＭｅ糖」は、２’位置にＯ−メチル修飾がある糖を意味する。
【０１０８】
「２’−Ｏ−メトキシエチル糖」または「２’−ＭＯＥ糖」は、２’位置にＯ−メトキシエチル修飾がある糖を意味する。
【０１０９】
「２’−フルオロ」または「２’−Ｆ」は、２’位置のフルオロ修飾がある糖を意味する。
【０１１０】
「二環式糖部分」は、４〜７員環の２原子を結び第２の環を形成し二環式構造をもたらす架橋を含む、（フラノシルを非制限的に含めた）４〜７員環を含む修飾糖部分を意味する。特定の実施形態では、４〜７員環は糖環である。特定の実施形態では、４〜７員環はフラノシルである。このような特定の実施形態では、架橋がフラノシルの２’−炭素と４’−炭素を結ぶ。二環式糖部分の非制限的かつ例示的な例には、ＬＮＡ、ＥＮＡ、ｃＥｔ、Ｓ−ｃＥｔ、およびＲ−ｃＥｔがある。
【０１１１】
「ロックド核酸（ＬＮＡ）糖部分」は、４’フラノース環原子と２’フラノース環原子の間に（ＣＨ２）−Ｏ架橋を含む置換糖部分を意味する。
【０１１２】
「ＥＮＡ糖部分」は、４’フラノース環原子と２’フラノース環原子の間に（ＣＨ２）２−Ｏ架橋を含む置換糖部分を意味する。
【０１１３】
「制約型エチル（ｃＥｔ）糖部分」は、４’フラノース環原子と２’フラノース環原子の間にＣＨ（ＣＨ３）−Ｏ架橋を含む置換糖部分を意味する。特定の実施形態では、ＣＨ（ＣＨ３）−Ｏ架橋はＳ方向で制約されている。特定の実施形態では、（ＣＨ２）２−ＯはＲ方向で制約されている。
【０１１４】
「Ｓ−ｃＥｔ糖部分」は、４’フラノース環原子と２’フラノース環原子の間にＳ−制約型ＣＨ（ＣＨ３）−Ｏ架橋を含む置換糖部分を意味する。
【０１１５】
「Ｒ−ｃＥｔ糖部分」は、４’フラノース環原子と２’フラノース環原子の間にＲ−制約型ＣＨ（ＣＨ３）−Ｏ架橋を含む置換糖部分を意味する。
【０１１６】
「２’−Ｏ−メチルヌクレオシド」は、２’−Ｏ−メチル糖修飾がある２’−修飾ヌクレオシドを意味する。
【０１１７】
「２’−Ｏ−メトキシエチルヌクレオシド」は、２’−Ｏ−メトキシエチル糖修飾がある２’−修飾ヌクレオシドを意味する。２’−Ｏ−メトキシエチルヌクレオシドは、修飾または非修飾核酸塩基を含み得る。
【０１１８】
「２’−フルオロヌクレオシド」は、２’−フルオロ糖修飾がある２’−修飾ヌクレオシドを意味する。２’−フルオロヌクレオシドは、修飾または非修飾核酸塩基を含み得る。
【０１１９】
「二環式ヌクレオシド」は、二環式糖部分を有する２’−修飾ヌクレオシドを意味する。二環式ヌクレオシドは、修飾または非修飾核酸塩基を有し得る。
【０１２０】
「ｃＥｔヌクレオシド」は、ｃＥｔ糖部分を含むヌクレオシドを意味する。ｃＥｔヌクレオシドは、修飾または非修飾核酸塩基を含み得る。
【０１２１】
「Ｓ−ｃＥｔヌクレオシド」は、Ｓ−ｃＥｔ糖部分を含むヌクレオシドを意味する。
【０１２２】
「Ｒ−ｃＥｔヌクレオシド」は、Ｒ−ｃＥｔ糖部分を含むヌクレオシドを意味する。
【０１２３】
「β−Ｄ−デオキシリボヌクレオシド」は天然ＤＮＡヌクレオシドを意味する。
【０１２４】
「β−Ｄ−リボヌクレオシド」は天然ＲＮＡヌクレオシドを意味する。
【０１２５】
「ＬＮＡヌクレオシド」は、ＬＮＡ糖部分を含むヌクレオシドを意味する。
【０１２６】
「ＥＮＡヌクレオシド」は、ＥＮＡ糖部分を含むヌクレオシドを意味する。
【０１２７】
「対象」は、治療または療法用に選択されるヒトまたは非ヒト動物を意味する。
【０１２８】
「それを必要とする対象」は、療法または治療の必要があると確認された対象を意味する。
【０１２９】
「〜を有する疑いがある対象」は、１つまたはそれ以上の疾患の臨床指標を示す対象を意味する。
【０１３０】
「投与」は医薬品または組成物を対象に与えることを意味し、医療専門家による投与および自己投与を非制限的に含む。
【０１３１】
「非経口投与」は注射または注入による投与を意味する。非経口投与は、皮下投与、静脈内投与、および筋肉内投与を非制限的に含む。
【０１３２】
「皮下投与」は皮膚直下の投与を意味する。
【０１３３】
「静脈内投与」は静脈中への投与を意味する。
【０１３４】
「同時に投与」は、両方の薬理学的効果が対象において同時に表れる任意の形式での、２つ以上の作用物質の同時投与を指す。同時投与は、両方の作用物質を同じ剤形で、または同じ投与経路によって、１つの医薬組成物で投与することを必要としない。両方の作用物質の効果はそれ自体が同時に表れる必要はない。その効果は単に一定時間期間重複することが必要で、同時に広がる必要はない。
【０１３５】
「持続時間」は、その間に活性または事象が継続する時間期間を意味する。特定の実施形態では、治療の持続期間は、その間に医薬品または医薬組成物の投薬を施す時間期間である。
【０１３６】
「療法」は疾患の治療方法を意味する。特定の実施形態では、療法は、化学療法、放射線療法、または医薬品の投与を非制限的に含む。
【０１３７】
「治療」は、疾患の治癒または軽減のために使用する、１つまたはそれ以上の具体的手順の施用を意味する。特定の実施形態では、具体的手順は１つまたはそれ以上の医薬品の投与である。
【０１３８】
「軽減」は、状態または疾患の少なくとも１つの指標の重症度の低下を意味する。特定の実施形態では、軽減は、状態または疾患の１つまたはそれ以上の指標の進行における遅延または鈍化を含む。指標の重症度は、当業者に知られている主観的または客観的測定によって決定することができる。
【０１３９】
「発症のリスクがある」は、対象にある状態または疾患を発症する素因がある状況を意味する。特定の実施形態では、ある状態または疾患を発症するリスクがある対象は、その状態または疾患の１つまたはそれ以上の症状を示すが、その状態または疾患があると診断するのに充分な数の症状は示さない。特定の実施形態では、ある状態または疾患を発症するリスクがある対象は、その状態または疾患の１つまたはそれ以上の症状を示すが、その状態または疾患があると診断する要求基準の程度は低い。
【０１４０】
「〜の発症の予防」は、疾患または状態を発症するリスクがある対象において、その状態または疾患の発症を予防することを意味する。特定の実施形態では、疾患または状態を発症するリスクがある対象は、既にその疾患または状態がある対象が受ける治療と同様の治療を受ける。
【０１４１】
「〜の発症の遅延」は、疾患または状態を発症するリスクがある対象において、その状態または疾患の発症を遅延させることを意味する。特定の実施形態では、疾患または状態を発症するリスクがある対象は、既にその疾患または状態がある対象が受ける治療と同様の治療を受ける。
【０１４２】
「治療剤」は、疾患の治癒、軽減または予防に使用する医薬品を意味する。
【０１４３】
「用量」は、１回の投与で与えられる医薬品の指定量を意味する。特定の実施形態では、２つまたはそれ以上のボーラス、錠剤、または注射薬で用量を投与する。例えば、皮下投与が望ましい特定の実施形態では、所望用量には１回注射によって容易に収容されない体積が必要である。このような実施形態では、２回またはそれ以上の注射を使用して所望用量を得ることができる。特定の実施形態では、２回またはそれ以上の注射で用量を投与して、個体における注射部位反応を最少にすることができる。特定の実施形態では、徐放性注入薬として用量を投与する。
【０１４４】
「剤形単位」は医薬品が与えられる形を意味する。特定の実施形態では、剤形単位は、凍結乾燥オリゴヌクレオチドを含有するバイアルである。特定の実施形態では、剤形単位は、復元したオリゴヌクレオチドを含有するバイアルである。
【０１４５】
「治療有効量」は、動物に治療利益をもたらす医薬品の量を指す。
【０１４６】
「医薬組成物」は、医薬品を含む個体への投与に適した物質の混合物を意味する。例えば、医薬組成物は滅菌水溶液を含むことができる。
【０１４７】
「医薬品」は、対象に投与したとき治療効果をもたらす物質を意味する。
【０１４８】
「活性医薬成分」は、所望の効果をもたらす医薬組成物中の物質を意味する。
【０１４９】
「臓器機能の改善」は、正常限界に対する臓器機能の変化を意味する。特定の実施形態では、対象の血液または尿中に見られる分子の測定によって臓器機能を評価する。例えば、特定の実施形態では、血液中尿素窒素の減少、タンパク尿の減少、アルブミン尿の減少などによって腎機能の改善を測定する。
【０１５０】
「許容される安全性プロファイル」は、臨床的に許容される限界内にある副作用のパターンを意味する。
【０１５１】
「副作用」は、治療に起因する所望の効果以外の生理的応答を意味する。特定の実施形態では、副作用は、注射部位反応、肝機能試験の異常、腎機能の異常、肝毒性、腎毒性、中枢神経系の異常、およびミオパチーを非制限的に含む。このような副作用は、直接的または間接的に検出することができる。例えば、血清中の高いアミノトランスフェラーゼレベルは肝毒性または肝機能異常を示し得る。例えば、多量のビリルビンは肝毒性または肝機能異常を示し得る。
【０１５２】
「対象のコンプライアンス」は、対象による推奨または処方療法の順守を意味する。
【０１５３】
「準拠」は、対象による推奨療法の順守を意味する。
【０１５４】
「推奨療法」は、疾患の治療、軽減、または予防に関する医療専門家によって推奨される治療を意味する。
【０１５５】
本明細書中で使用する用語「血液」は、全血、および血清と血漿などの血液分画を包含する。
【０１５６】
概要
アルポート症候群は、異常なレベルの糸球体基底膜（ＧＢＭ）が生成され、間質性線維症、糸球体硬化症につながり、典型的には末期腎疾患につながる遺伝型の腎疾患である。アルポート症候群の管理において、治療の主な目的は、腎機能を維持し末期腎疾患（ＥＳＲＤ）の発症を予防することであり、したがってこれによってアルポート症候群を有する対象の平均余命が改善する。
【０１５７】
アルポート症候群はＧＢＭ組成の欠陥が原因である進行性線維症によって特徴付けられ、したがってＧＢＭ形態および腎機能の改善が望ましい。
【０１５８】
以前、臨床試験記録によって開示されたＲＧ−０１２に関する投薬レジメンは、１週間あたり１１０ｍｇ、および１週間あたり２２０ｍｇの固定用量であった。前臨床モデルにおいて多種から、および多数回漸増用量試験における健常ボランティアからの薬物動態データの解析によって、２週毎に１回の低頻度間隔で投与した１．５ｍｇ／ｋｇの重量ベース用量が、有効かつ適切に安全な用量レジメンであり得ることを示唆した。
【０１５９】
特定修飾オリゴヌクレオチド
特定の実施形態では、修飾オリゴヌクレオチドは構造５’−ＡＥＣＳＡＴＣＳＡＧＴＣＳＴＧＡＵＳＡＡＧＣＳＴＡＥ−３’（配列番号３）を有し、下付き文字の前にないヌクレオシドは、β−Ｄ−デオキシリボヌクレオシドであり、下付き文字「Ｅ」の前のヌクレオシドは、２’−ＭＯＥヌクレオシドであり、下付き文字「Ｓ」の前のヌクレオシドは、Ｓ−ｃＥｔヌクレオシドであり、各ヌクレオシド間結合はホスホロチオエートヌクレオシド間結合である。
【０１６０】
特定の実施形態では、修飾オリゴヌクレオチドは構造：
【化３】
2020518633.tif 000004
（配列番号３）を有する。
【０１６１】
本明細書中では、修飾オリゴヌクレオチドの薬学的に許容される塩も提供する。したがって幾つかの実施形態では、修飾オリゴヌクレオチドは：
【化４】
2020518633.tif 000005
（配列番号３）またはその薬学的に許容される塩の構造を有する。非制限的かつ例示的な修飾オリゴヌクレオチドの薬学的に許容される塩は構造：
【化５】
2020518633.tif 000006
（配列番号３）を有する。
【０１６２】
幾つかの実施形態では、修飾オリゴヌクレオチドの薬学的に許容される塩は、分子あたりにホスホロチオエート結合が存在する（すなわち、幾つかのホスホロチオエートがプロトン化されている）場合より少ない陽イオン性対イオン（Ｎａ＋など）を含む。幾つかの実施形態では、修飾オリゴヌクレオチドの薬学的に許容される塩は、修飾オリゴヌクレオチドの分子あたりに１８個より少ない陽イオン性対イオン（Ｎａ＋など）を含む。すなわち幾つかの実施形態では、修飾オリゴヌクレオチドの薬学的に許容される塩は、修飾オリゴヌクレオチドの分子あたりに平均して１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、または１７個の陽イオン性対イオンを含む可能性があり、残りのホスホロチオエートはプロトン化されている。
【０１６３】
本発明の特定の使用
本明細書で提供するのは、アルポート症候群を有するかまたは有する疑いがある対象に本明細書で提供する修飾オリゴヌクレオチドを投与する工程を含む、アルポート症候群を治療するための方法である。
【０１６４】
特定の実施形態では、修飾オリゴヌクレオチドの投与前に、対象はアルポート症候群を有すると診断されている。アルポート症候群の診断は、対象の家族歴、（タンパク尿、アルブミン尿、血尿、例えばｅＧＦＲの測定によって決定するＧＦＲの悪化、難聴および／または眼部変化を非制限的に含む）臨床的特徴、および組織生検の結果を非制限的に含むパラメーターの評価によって実施することができる。腎生検は、ＩＶ型コラーゲンα−３、α−４、およびα−５鎖の有無に関して試験することができる。さらに、糸球体の構造変化は腎生検材料の電子顕微鏡検査によって検出することができる。皮膚生検は、通常皮膚内に存在しＸ連鎖性アルポート症候群である男性対象にはほぼ常に存在しない、ＩＶ型コラーゲンα−５鎖の存在に関して試験することができる。アルポート症候群の診断は、Ｃｏｌ４ａ３、Ｃｏｌ４ａ４、またはＣｏｌ４ａ５遺伝子の１つまたはそれ以上における突然変異に関するスクリーニングも含み得る。
【０１６５】
特定の実施形態では、アルポート症候群を有する対象は少なくとも３０ｍｌ／分／１．７３ｍ２のｅＧＦＲを有する。特定の実施形態では、アルポート症候群を有する対象は４５〜９０ｍｌ／分／１．７３ｍ２のｅＧＦＲを有する。特定の実施形態では、アルポート症候群を有する対象はクレアチニン１グラムあたり３００ｍｇ以上のタンパク質のタンパク尿を有する。
【０１６６】
特定の実施形態では、アルポート症候群を有する対象の腎臓中でｍｉＲ−２１のレベルが増大する。特定の実施形態では、対象は投与前に、腎臓中に高レベルのｍｉＲ−２１を有すると決定される。ｍｉＲ−２１のレベルは腎生検材料から測定することができる。特定の実施形態では、対象は投与前に、対象の尿または血液中に高レベルのｍｉＲ−２１を有すると決定される。
【０１６７】
特定の実施形態では、ｍｉＲ−２１と相補的な修飾オリゴヌクレオチドの投与は、１つまたはそれ以上のアルポート症候群関連パラメーターの改善をもたらす。特定の実施形態では、投与は推算糸球体濾過量を改善する。特定の実施形態では、投与は実測糸球体濾過量を改善する。特定の実施形態では、投与は糸球体濾過量の減少の速度を遅らせる。特定の実施形態では、投与は対象の生活の質を改善する。
【０１６８】
特定の実施形態では、投与は腎機能を改善する。特定の実施形態では、投与は末期腎疾患の発症を遅延させる。特定の実施形態では、投与は透析時間を延引する。特定の実施形態では、投与は腎移植時間を延引する。特定の実施形態では、投与は対象の平均余命を改善する。
【０１６９】
特定の実施形態では、投与は腎臓線維症を低減する。特定の実施形態では、投与は腎臓線維症のさらなる進行を遅らせる。特定の実施形態では、投与は腎臓線維症のさらなる進行を休止させる。特定の実施形態では、投与は血尿を低減する。特定の実施形態では、投与は血尿の発症を遅延させる。特定の実施形態では、投与はタンパク尿を低減する。特定の実施形態では、投与はタンパク尿の発症を遅延させる。
【０１７０】
アルポート症候群を有するかまたは有する疑いがある対象は、ＩＶ型コラーゲンのα３鎖をコードする遺伝子（Ｃｏｌ４ａ３）における突然変異、ＩＶ型コラーゲンのα４鎖をコードする遺伝子（Ｃｏｌ４ａ４）における突然変異、またはＩＶ型コラーゲンのα５鎖をコードする遺伝子（Ｃｏｌ４ａ５）における突然変異を有し得る。特定の実施形態では、対象は男性である。特定の実施形態では、対象は女性である。
【０１７１】
特定の実施形態では、対象には腎機能の悪化がある。特定の実施形態では、対象は腎機能の改善の必要がある。特定の実施形態では、対象には腎機能の悪化があると確認される。特定の実施形態では、対象は血尿を有すると確認される。特定の実施形態では、対象はタンパク尿を有すると確認される。
【０１７２】
本明細書中で提供するいずれかの実施形態では、対象に特定試験を施して腎機能を評価することができる。このような試験は、対象における血液中尿素窒素の測定、対象の尿中のクレアチニンの測定、対象の血液中のクレアチニンクリアランスの測定、対象におけるタンパク尿の測定、対象におけるアルブミン：クレアチン比の測定、対象における推算糸球体濾過量の測定、および対象における尿量の測定を非制限的に含む。
【０１７３】
特定の実施形態では、対象における足細胞尿を、対象の尿中の足細胞数および足細胞特異的ｍＲＮＡの解析によって評価する。
【０１７４】
本明細書中で提供するいずれかの実施形態では、尿または血液中に存在するタンパク質を使用して腎機能を評価することができる。このような腎機能の試験は、対象の尿中のＮ−アセチル−β−Ｄ−グルコースアミニダーゼ（ＮＡＧ）タンパク質の測定、対象の尿中の好中球ゼラチナーゼ結合性リポカリン（ＮＧＡＬ）タンパク質の測定、対象の尿中の腎損傷分子−１（ＫＩＭ−１）タンパク質の測定、対象の尿中のインターロイキン−１８（ＩＬ−１８）タンパク質の測定、対象の尿中の結合組織増殖因子（ＣＴＧＦ）レベルの測定、対象の尿中の単球走化性タンパク質１（ＭＣＰ１）レベルの測定、対象の尿中のコラーゲンＩＶ（ＣｏｌＩＶ）断片の測定、対象の尿中のコラーゲンＩＩＩ（ＣｏｌＩＩＩ）断片レベルの測定、対象の血液中のシスタチンＣタンパク質の測定、対象の血液中のβ−トレースタンパク質（ＢＴＰ）の測定、および対象の血液中の２−マイクログロブリン（Ｂ２Ｍ）の測定を非制限的に含む。本明細書中で提供するいずれかの実施形態では、足細胞損傷のマーカーを尿中で測定することができる。このようなタンパク質にはネフリンとポドシンがある。タンパク質は、例えば市販のキットを使用して、酵素結合免疫吸着アッセイ（ＥＬＩＳＡ）、またはラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ）によって定量化することができる。
【０１７５】
本明細書中で提供するいずれかの実施形態では、ｍｉＲ−２１を標的化した修飾オリゴヌクレオチドの投与は、対象において１つまたはそれ以上の腎臓機能のマーカーを改善する。腎機能のマーカーの改善は、対象における血液中尿素窒素の低減、対象の血液中のクレアチニンの低減、対象におけるクレアチニンクリアランスの改善、対象におけるタンパク尿の低減、対象におけるアルブミン：クレアチン比の低減、対象における推算糸球体濾過量の改善、および／または対象における尿量の増大を非制限的に含む。
【０１７６】
特定医薬組成物
本明細書中で提供するのは、１９の結合ヌクレオシドからなり、構造５’−ＡＥＣＳＡＴＣＳＡＧＴＣＳＴＧＡＵＳＡＡＧＣＳＴＡＥ−３’（配列番号３）を有し、下付き文字の前にないヌクレオシドは、β−Ｄ−デオキシリボヌクレオシドであり、下付き文字「Ｅ」の前のヌクレオシドは、２’−ＭＯＥヌクレオシドであり、下付き文字「Ｓ」の前のヌクレオシドは、Ｓ−ｃＥｔヌクレオシドであり、各ヌクレオシド間結合がホスホロチオエートヌクレオシド間結合である修飾オリゴヌクレオチドを含む医薬組成物、またはその薬学的に許容される塩である。
【０１７７】
幾つかのこのような実施形態では、修飾オリゴヌクレオチドはそのオクタデカナトリウム塩型で医薬組成物中に存在する。他に示さない限り、修飾オリゴヌクレオチド５’−ＡＥＣＳＡＴＣＳＡＧＴＣＳＴＧＡＵＳＡＡＧＣＳＴＡＥ−３’（配列番号３）の重量および用量は、オクタデカナトリウム塩型の修飾オリゴヌクレオチドの重量に基づく。非制限的な一例として、オクタデカナトリウム塩型の修飾オリゴヌクレオチド１１０ｍｇは、遊離酸型の修飾オリゴヌクレオチド１０３．６ｍｇと同等である。
【０１７８】
特定の実施形態では、注射用に医薬組成物を調製する。特定の実施形態では、注射用に調製された医薬組成物は、滅菌水溶液中に１１０ｍｇ／ｍＬの濃度で修飾オリゴヌクレオチドを含む。注射による適切な投与経路には、皮下注射および静脈内注射がある。
【０１７９】
特定の実施形態では、本明細書中で提供する医薬組成物はボーラス剤形単位の形態で投与される。幾つかの実施形態では、ボーラス剤形単位は滅菌水溶液中に１１０ｍｇ／ｍｌの濃度で修飾オリゴヌクレオチドを含む。幾つかの実施形態では、ボーラス剤形単位は、滅菌０．３％塩化ナトリウム水溶液中に１１０ｍｇ／ｍｌの濃度で修飾オリゴヌクレオチドを含む。幾つかの実施形態では、１１０ｍｇの修飾オリゴヌクレオチドの投薬に、１１０ｍｇ／ｍｌの修飾オリゴヌクレオチドを含む１ｍＬボーラス剤形単位を対象に投与する。特定の実施形態では、投与は皮下注射による投与である。
【０１８０】
特定の実施形態では、適切な希釈剤、例えば水溶液、水または生理的に適合したバッファーなど、生理食塩水溶液、ハンクス液、およびリンガー液などで復元した滅菌凍結乾燥修飾オリゴヌクレオチドとして修飾オリゴヌクレオチドを提供する。復元した生成物は、皮下注射薬として、または静脈内注入薬として投与することができる。凍結乾燥薬品は、調製中酸または塩基でｐＨ７．０〜９．０に調整した注射用滅菌水溶液中で調製され、次いで凍結乾燥状態にした修飾オリゴヌクレオチドからなる。凍結乾燥薬品は、ゴムファスナーで栓をしてアルミ箔で密封した２ｍＬのタイプＩ、透明ガラスバイアル中にパッケージ化することができる。
【０１８１】
特定の実施形態では、本明細書中で提供する医薬組成物は、当技術分野で確立したその使用レベルで医薬組成物中に通常見られる、他の補助成分を追加的に含有し得る。したがって、例えば組成物は、例えば止痒薬、収斂薬、局所麻酔薬または抗炎症剤などの、追加的で、適合性があり、薬学的に活性がある物質を含有し得る。
【０１８２】
特定の実施形態では、本明細書中で提供する医薬組成物は、１つまたはそれ以上の賦形剤を含有する。このような特定の実施形態では、賦形剤は水、塩溶液、アルコール、ポリエチレングリコール、ゼラチン、ラクトース、アミラーゼ、ステアリン酸マグネシウム、タルク、ケイ酸、流動パラフィン、ヒドロキシメチルセルロースおよびポリビニルピロリドンから選択される。
【０１８３】
特定追加療法
アルポート症候群の治療は、本明細書中で提供するアンチｍｉＲ−２１修飾オリゴヌクレオチド、および少なくとも１つの追加療法の投与を含み得る。特定の実施形態では、少なくとも１つの追加療法は医薬品を含む。
【０１８４】
特定の実施形態では、第１の用量の修飾オリゴヌクレオチドの投与前に、アルポート症候群を有する対象は、追加療法の安定的投薬レジメンで少なくとも３０日間治療されている。特定の実施形態では、対象はアンギオテンシンＩＩ受容体遮断薬の安定的投薬レジメンを施されている。特定の実施形態では、対象はアンギオテンシンＩＩ変換酵素阻害剤の安定的投薬レジメンを施されている。
【０１８５】
特定の実施形態では、少なくとも１つの追加療法は医薬品を含む。
【０１８６】
特定の実施形態では、医薬品はアンギオテンシンＩＩ受容体遮断薬（ＡＲＢ）を含む。特定の実施形態では、アンギオテンシンＩＩ受容体遮断薬は、カンデサルタン、イルベサルタン、オルメサルタン、ロサルタン、バルサルタン、テルミサルタン、またはエプロサルタンである。
【０１８７】
特定の実施形態では、医薬品はアンギオテンシンＩＩ変換酵素（ＡＣＥ）阻害剤を含む。特定の実施形態では、ＡＣＥ阻害剤は、カプトプリル、エナラプリル、リシノプリル、ベナゼプリル、クイナプリル、フォシノプリル、またはラミプリルである。
【０１８８】
特定の実施形態では、医薬品は降圧剤である。降圧剤を使用して対象の血圧を調整する。
【０１８９】
特定の実施形態では、医薬品はビタミンＤアナログである。ビタミンＤアナログを使用して、対象における副甲状腺ホルモンの生成を制限することができる。
【０１９０】
特定の実施形態では、医薬品は、食品中リン酸の吸収を低減する経口リン酸結合剤である。
【０１９１】
特定の実施形態では、医薬品は免疫抑制剤を含む。特定の実施形態では、免疫抑制剤はコルチコステロイド、シクロホスファミド、またはマイコフェノレートモフェチルである。
【０１９２】
特定の実施形態では、医薬品はシクロスポリン、ＨＭＧ−コエンザイムＡ阻害剤、バソペプチダーゼ阻害剤、またはＴＧＦ−β−アンタゴニストである。
【０１９３】
特定の実施形態では、追加療法は遺伝子療法である。特定の実施形態では、遺伝子療法は正常Ｃｏｌ４ａ３遺伝子をもたらす。特定の実施形態では、遺伝子療法は正常Ｃｏｌ４ａ４遺伝子をもたらす。特定の実施形態では、遺伝子療法は正常Ｃｏｌ４ａ５遺伝子をもたらす。
【０１９４】
特定の実施形態では、追加療法は透析である。特定の実施形態では、追加療法は腎移植である。
【０１９５】
特定の実施形態では、医薬品はアルドステロンアンタゴニストである。特定の実施形態では、アルドステロンアンタゴニストはスピロノラクトンである。
【０１９６】
特定の実施形態では、医薬品は抗炎症剤を含む。特定の実施形態では、抗炎症剤はステロイド系抗炎症剤である。特定の実施形態では、ステロイド系抗炎症剤はコルチコステロイドである。特定の実施形態では、コルチコステロイドはプレドニソンである。特定の実施形態では、抗炎症剤は非ステロイド系抗炎症剤である。特定の実施形態では、非ステロイド系抗炎症剤はイブプロフェン、ＣＯＸ−１阻害剤、またはＣＯＸ−２阻害剤である。
【０１９７】
特定の実施形態では、医薬品は、線維形成シグナルに対する１つまたはそれ以上の応答を遮断する医薬品である。
【０１９８】
特定の実施形態では、医薬品は抗糖尿病剤を含む。抗糖尿病剤には、非制限的に、ビグアニド、グルコシダーゼ阻害剤、インスリン、スルホニルウレア、およびチアゾリデンジオンがある。
【０１９９】
特定修飾
本明細書中で提供する修飾オリゴヌクレオチドは、糖修飾ヌクレオシドおよび修飾ヌクレオシド間結合を含む。
【０２００】
例えば細胞内取り込みの向上、他のオリゴヌクレオチドまたは核酸標的に対するアフィニティーの向上、およびヌクレアーゼの存在下での安定性の増大などの望ましい性質のため、修飾核酸塩基、糖、および／またはヌクレオシド間結合を非修飾型より選択することができる。
【０２０１】
糖修飾ヌクレオシドは二環式糖部分を含む。特定の実施形態では、二環式糖部分はα立体配座のＤ糖である。特定の実施形態では、二環式糖部分はβ立体配座のＤ糖である。特定の実施形態では、二環式糖部分はα立体配座のＬ糖である。特定の実施形態では、二環式糖部分はβ立体配座のＬ糖である。
【０２０２】
このような二環式糖部分を含むヌクレオシドは、二環式ヌクレオシドまたはＢＮＡと呼ばれる。特定の実施形態では、二環式ヌクレオシドは、以下に示すような（Ａ）α−Ｌ−メチレンオキシ（４’−ＣＨ２−Ｏ−２’）ＢＮＡ；（Ｂ）β−Ｄ−メチレンオキシ（４’−ＣＨ２−Ｏ−２’）ＢＮＡ；（Ｃ）エチレンオキシ（４’−（ＣＨ２）２−Ｏ−２’）ＢＮＡ；（Ｄ）アミノオキシ（４’−ＣＨ２−Ｏ−Ｎ（Ｒ）−２’）ＢＮＡ；（Ｅ）オキシアミノ（４’−ＣＨ２−Ｎ（Ｒ）−Ｏ−２’）ＢＮＡ；（Ｆ）メチル（メチレンオキシ）（４’−ＣＨ（ＣＨ３）−Ｏ−２’）ＢＮＡ（制約型エチルまたはｃＥｔとも呼ばれる）；（Ｇ）メチレン−チオ（４’−ＣＨ２−Ｓ−２’）ＢＮＡ；（Ｈ）メチレン−アミノ（４’−ＣＨ２−Ｎ（Ｒ）−２’）ＢＮＡ；（Ｉ）炭素環式メチル（４’−ＣＨ２−ＣＨ（ＣＨ３）−２’）ＢＮＡ；（Ｊ）ｃ−ＭＯＥ（４’−ＣＨ２−ＯＭｅ−２’）ＢＮＡおよび（Ｋ）炭素環式プロピレン（４’−（ＣＨ２）３−２’）ＢＮＡを非制限的に含む。
【０２０３】
【化６】
2020518633.tif 000007
上式でＢｘは核酸塩基部分であり、Ｒは独立にＨ、保護基、またはＣ１〜Ｃ１２アルキルである。
【０２０４】
特定の実施形態では、２’−修飾ヌクレオシドはＦ、ＯＣＦ３、Ｏ−ＣＨ３、ＯＣＨ２ＣＨ２ＯＣＨ３、２’−Ｏ（ＣＨ２）２ＳＣＨ３、Ｏ−（ＣＨ２）２−Ｏ−Ｎ（ＣＨ３）２、−Ｏ（ＣＨ２）２Ｏ（ＣＨ２）２Ｎ−（ＣＨ３）２、およびＯ−ＣＨ２−Ｃ（＝Ｏ）−Ｎ（Ｈ）ＣＨ３から選択される２’−置換基を含む。
【０２０５】
特定の実施形態では、２’−修飾ヌクレオシドはＦ、Ｏ−ＣＨ３、およびＯＣＨ２ＣＨ２ＯＣＨ３から選択される２’−置換基を含む。
【０２０６】
特定の実施形態では、糖修飾ヌクレオシドは４’−チオ修飾ヌクレオシドである。特定の実施形態では、糖修飾ヌクレオシドは４’−チオ−２’−修飾ヌクレオシドである。４’−チオ修飾ヌクレオシドは、４’−Ｏが４’−Ｓに置換されたβ−Ｄ−デオキシリボヌクレオシドを有する。４’−チオ−２’−修飾ヌクレオシドは、２’−置換基で置換された２’−ＯＨを有する４’−チオ修飾ヌクレオシドである。適切な２’−置換基には、２’−ＯＣＨ３、２’−Ｏ−（ＣＨ２）２−ＯＣＨ３、および２’−Ｆがある。
【０２０７】
特定の実施形態では、修飾オリゴヌクレオチドは１つまたはそれ以上のヌクレオシド間修飾を含む。このような特定の実施形態では、修飾オリゴヌクレオチドの各ヌクレオシド間結合は修飾ヌクレオシド間結合である。特定の実施形態では、修飾ヌクレオシド間結合はリン原子を含む。
【０２０８】
特定の実施形態では、修飾オリゴヌクレオチドは少なくとも１つのホスホロチオエートヌクレオシド間結合を含む。特定の実施形態では、修飾オリゴヌクレオチドの各ヌクレオシド間結合はホスホロチオエートヌクレオシド間結合である。
【０２０９】
特定キット
本発明は、さらにキットを提供する。幾つかの実施形態では、キットは、本明細書中で提供するアンチｍｉＲ−２１修飾オリゴヌクレオチドを含む。幾つかの実施形態では、修飾オリゴヌクレオチドはバイアル内に存在し得る。複数、例えば１０個のバイアルが、例えば分配パック中に存在し得る。幾つかの実施形態では、シリンジにアクセス可能であるようにバイアルが製造される。キットは、修飾オリゴヌクレオチドの使用に関する説明書も含有し得る。
【０２１０】
幾つかの実施形態では、修飾オリゴヌクレオチドを投与するためキットを使用することができる。このような場合、修飾オリゴヌクレオチド以外に、キットは以下の：シリンジ、アルコールスワブ、コットンボール、および／またはガーゼパッドの１つまたはそれ以上をさらに含むことができる。幾つかの実施形態では、修飾オリゴヌクレオチドは、バイアル中ではなく、（例えばニードルガードがある２７ゲージ、１／２インチニードルを有する１回用量シリンジなどの）予め充填したシリンジ中に存在し得る。複数、例えば１０個の予め充填したシリンジが、例えば分配パック中に存在し得る。キットは、修飾オリゴヌクレオチドの投与に関する説明書も含有し得る。
【０２１１】
特定実験モデル
特定の実施形態では、本発明は、実験モデルにおいて本発明の修飾オリゴヌクレオチドを使用および／または試験する方法を提供する。当業者は、このような実験モデルに関するプロトコールを選択および修正して、本発明の医薬品を評価することができる。
【０２１２】
一般に、培養細胞において修飾オリゴヌクレオチドを最初に試験する。適切な細胞型は、ｉｎ  ｖｉｖｏでの修飾オリゴヌクレオチド送達が望ましい細胞型と関連があるものを含む。例えば、本明細書中に記載する方法の試験に適した細胞型には、初代細胞または培養細胞がある。
【０２１３】
特定の実施形態では、修飾オリゴヌクレオチドが、ｍｉＲ−２１の活性に干渉する程度を培養細胞において評価する。特定の実施形態では、細胞または組織中のｍｉＲ−２１レベルを測定することによって、ｍｉＲ−２１活性の阻害を評価することができる。あるいは、予想または実測マイクロＲＮＡ制御転写産物のレベルを測定することができる。ｍｉＲ−２１活性の阻害は、ｍｉＲ−２１制御転写産物、および／またはｍｉＲ−２１制御転写産物によってコードされるタンパク質の増大をもたらす可能性がある。さらに特定の実施形態では、特定の表現型結果を測定することができる。
【０２１４】
ヒト疾患モデルにおけるｍｉＲ−２１の試験用に、当業者は幾つかの動物モデルが利用可能である。例えば、アルポート症候群の実験モデル、例えばＣｏｌ４ａ３ノックアウトマウス（Ｃｏｌ４ａ３−／−マウス）においてｍｉＲ−２１の阻害剤を試験することができる。マウスモデルにおける疾患の重症度は、Ｃｏｌ４ａ３突然変異があるマウスの遺伝的背景に依存する。例えば、一般に疾患の発症と進行は、Ｃ５７ＢＬ／６Ｊ背景と比較して１２９ＸＩ／ＳｖＪにおいてより速い。したがって、Ｃｏｌ４ａ３−／−マウスの遺伝的背景を選択して疾患の発症と進行を変えることができる。他のモデルには、イヌのＸ連鎖性、常染色体劣性または常染色体ドミナントアルポート症候群モデルがある。例えば、Ｋａｓｈｔａｎ、Ｎｅｐｈｒｏｌ．Ｄｉａｌ．Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔ、２００２年、１７：１３５９〜１３６１頁参照。
【０２１５】
特定定量アッセイ
修飾オリゴヌクレオチドの投与後、ｍｉＲ−２１のアンチセンス阻害の効果を当技術分野で知られている様々な方法によって評価することができる。特定の実施形態では、これらの方法を使用してｉｎ  ｖｉｔｒｏまたはｉｎ  ｖｉｖｏで細胞または組織中のマイクロＲＮＡレベルを定量化する。特定の実施形態では、マイクロＲＮＡレベルの変化をマイクロアレイ解析によって測定する。特定の実施形態では、マイクロＲＮＡレベルの変化を、幾つかの市販のＰＣＲアッセイの１つ、ＴａｑＭａｎ（登録商標）ＭｉｃｒｏＲＮＡアッセイ（Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ）などによって測定する。特定の実施形態では、ｍｉＲ−２１のアンチセンス阻害を、ｍｉＲ−２１の標的のｍＲＮＡおよび／またはタンパク質レベルの測定によって評価する。一般にｍｉＲ−２１のアンチセンス阻害は、マイクロＲＮＡの標的のｍＲＮＡおよび／またはタンパク質レベルの増大をもたらす。
【０２１６】
標的関与アッセイ
アンチｍｉＲまたはマイクロＲＮＡ模倣体を用いたマイクロＲＮＡ活性の調節は、標的関与の測定によって評価することができる。特定の実施形態では、ｍＲＮＡのマイクロアレイプロファイリングによって標的関与を測定する。アンチｍｉＲまたはマイクロＲＮＡ模倣体によって（増大または減少のいずれかに）調節されるｍＲＮＡの配列を、マイクロＲＮＡシード配列に関して検索して、マイクロＲＮＡの標的であるｍＲＮＡの調節とマイクロＲＮＡの標的でないｍＲＮＡの調節を比較する。このようにして、アンチｍｉＲとｍｉＲ−２１、またはｍｉＲ−２１模倣体とその標的の相互作用を評価することができる。アンチｍｉＲの場合、その発現レベルが増大したｍＲＮＡを、アンチｍｉＲと相補的であるマイクロＲＮＡとのシードマッチを含むｍＲＮＡ配列に関してスクリーニングする。
【実施例】
【０２１７】
以下の実施例は、本発明の幾つかの実施形態をより完全に例証するために表す。しかしながら、それらは決して本発明の広範囲を制限するものとして解釈すべきではない。
【０２１８】
当業者は本発見の根本原理を容易に採り入れて、本発明の精神から逸脱せずに様々な化合物を設計する。
【実施例１】
【０２１９】
アルポート症候群を有する対象におけるフェーズ２試験
この試験は、多数の研究センターでアルポート症候群を有する対象に実施した、ランダムな、二重盲検、プラセボ対照の、マルチセンターでのフェーズ２試験である。アルポート症候群は、毛細血管基底膜コラーゲンＩＶをコードする遺伝子の突然変異によって引き起こされる遺伝型の腎疾患である。経時的に、アルポート症候群は腎臓に対する損傷を引き起こす。
【０２２０】
試験薬はＲＧ−０１２であった。以前、臨床試験記録によって開示されたＲＧ−０１２に関する投薬レジメンは、１週間あたり１１０ｍｇ、および１週間あたり２２０ｍｇの固定用量であった。前臨床モデルにおいて多種から、および多数回漸増用量試験における健常ボランティアからの薬物動態データの解析によって、２週毎に１回の低頻度間隔で投与した１．５ｍｇ／ｋｇの重量ベース用量が、有効かつ適切に安全な用量レジメンであり得ることを示唆した。
【０２２１】
ＲＧ−０１２中の活性成分（ＡＩ）は、下付き文字の前にないヌクレオシドは、β−Ｄ−デオキシリボヌクレオシドであり、下付き文字「Ｅ」の前のヌクレオシドは、２’−ＭＯＥヌクレオシドであり、下付き文字「Ｓ」の前のヌクレオシドは、Ｓ−ｃＥｔヌクレオシドであり、各ヌクレオシド間結合がホスホロチオエートヌクレオシド間結合である、構造５’−ＡＥＣＳＡＴＣＳＡＧＴＣＳＴＧＡＵＳＡＡＧＣＳＴＡＥ−３’（配列番号３）の１９塩基、一本鎖、化学修飾オリゴヌクレオチドのオクタデカナトリウム塩である。
【０２２２】
０．３％塩化ナトリウムを含有するＡＩの水溶液としてＲＧ−０１２を製剤化し、２週間毎に１回皮下（ＳＣ）経路によって投与した。
【０２２３】
幾つかの場合、主要活性代謝物（ＡＭ）は、３’−末端２’−ＭＯＥ修飾「Ａ」ヌクレオシド：下付き文字の前にないヌクレオシドは、β−Ｄ−デオキシリボヌクレオシドであり、下付き文字「Ｅ」の前のヌクレオシドは、２’−ＭＯＥヌクレオシドであり、下付き文字「Ｓ」の前のヌクレオシドは、Ｓ−ｃＥｔヌクレオシドであり、各ヌクレオシド間結合がホスホロチオエートヌクレオシド間結合である、５’−ＡＥＣＳＡＴＣＳＡＧＴＣＳＴＧＡＵＳＡＡＧＣＳＴ−３’（配列番号４）を欠いている。
【０２２４】
主要評価項目は、４８週間の間週１回投与したときの、ＲＧ−０１２の安全性と許容性の評価であった。安全性と許容性は、有害事象、実験パラメーター、バイタルサイン、ＥＣＧ、および注射部位反応などの変数によって評価した。
【０２２５】
副次評価項目は以下を含む：
・他の選択した血液、尿、および腎臓バイオマーカーに対するＲＧ−０１２の効果の評価；
・ＲＧ−０１２投与後の親化合物（ＡＩ）およびその主要活性代謝物（ＡＭ）の薬物動態（ＰＫ）パラメーターの評価；
・ＲＧ−０１２投与後の抗薬物抗体（ＡＤＡ）の形成可能性の評価；
・経時的に腎機能の低下を低減するＲＧ−０１２の予備効能の評価；
・Ｓｈｏｒｔ  Ｆｏｒｍ  ３６  Ｈｅａｌｔｈ  Ｓｕｒｖｅｙ（登録商標）を使用したＲＧ−０１２投与後の生活の質（ＱＯＬ）の評価。
【０２２６】
【表１】
2020518633.tif 000008
【０２２７】
二重盲検、プラセボ対照治療期間−適格な対象を１：１：１の比で無作為に分けて、２週間に１回（２週間毎に）１．５ｍｇ／ｋｇのＲＧ−０１２、またはプラセボの皮下（ＳＣ）注射を４８週間施した。
【０２２８】
試験者は、許容性に基づいて、個々の対象の２週間に１回のＲＧ−０１２用量を０．７５ｍｇ／ｋｇまで滴定することができた。２週間に１回のＲＧ−０１２用量を０．７５ｍｇ／ｋｇまで低減した対象は、試験者の判断に基づいて、その用量を１．５ｍｇ／ｋｇに再調整することもできた。
【０２２９】
アンギオテンシンＩＩ変換酵素（ＡＣＥ）阻害剤またはアンギオテンシンＩＩ受容体遮断薬（ＡＲＢ）を得た対象は、安定的投薬レジメンで能動的治療期間の持続時間これらの作用物質を保持した。全ての他の同時与薬も安定的投薬レジメンで試験中保持された。
【０２３０】
オープンラベル延長期間−４８週間の治療を終了した対象は、全ての対象が能動的治療を受ける４８週間の延長試験における登録のスクリーニングに適していた。
【０２３１】
フォローアップ期間−試験治療の終了時に、全ての対象は、フォローアップ第２週に一時的家庭訪問、フォローアップ第４週に家庭訪問、およびフォローアップ第１２週に現場訪問を含む１２週間の治療後フォローアップ期間に入った。二重盲検、プラセボ対照治療期間は終了したがオープンラベル治療延長期間に入っていない対象は、治療後フォローアップ期間に直接入った。
【０２３２】
組み入れ基準：
１．１８〜６５歳（含む）の年齢の男性対象
２．アルポート症候群の確かな診断（臨床的、組織病理学的、および／または遺伝学的診断）
３．慢性腎臓病疫学共同研究（ＣＫＤ−ＥＰＩ）のクレアチニンまたはクレアチニン−シスタチンＣ式を用いて推算、以下のｅＧＦＲ基準を満たさなければならない：
ａ．初期スクリーニング測定で４０ｍｌ／分／１．７３ｍ２〜９０ｍｌ／分／１．７３ｍ２のｅＧＦＲ；
ｂ．前の５２週から４回以上のｅＧＦＲ測定の線形回帰勾配解析に基づく５ｍｌ／分／１．７３ｍ２／年以上のｅＧＦＲの減少。５ｍｌ／分／１．７３ｍ２／年以上のｅＧＦＲの減少は、−５ｍｌ／分／１．７３ｍ２／年以下のｅＧＦＲ勾配と同等である。ｅＧＦＲ勾配、または経時的な対象のｅＧＦＲの変化は線形回帰を使用して計算する。
４．初期スクリーニングおよびベースライン往診時のクレアチニン１ｇあたり３００ｍｇ以上のタンパク質のタンパク尿。
【０２３３】
ｅＧＦＲ勾配の計算を可能にするのに充分な数の事前ｅＧＦＲ測定を受けていない対象が、対象が男性であり、ＸＬＡＳと診断されており、１８〜３０歳（含む）の年齢である場合、試験に適格であり得る。
【０２３４】
ＡＣＥ阻害剤および／またはＡＲＢを得た対象は、スクリーニング前に３０日以上のＡＣＥ阻害剤および／またはＡＲＢの安定的投薬レジメン上になければならない。
【０２３５】
除外基準：
１．アルポート症候群とは別の慢性腎疾患の原因（糖尿病性ニューロパチー、高血圧性ニューロパチー、ループス、ＩｇＡニューロパチーを非制限的に含む）。
２．進行中の透析療法または腎移植の病歴によって証明されるＥＳＲＤ。
３．担当臨床試験者の意見で、対象が試験を終了できないもしくは試験の手順と要件を順守できない可能性がある、または対象の安全性と健康状態にリスクをもたらす可能性がある、任意の他の状態または状況。
【０２３６】
薬力学的エンドポイントは、以下のものを含めた薬理学的およびバイオマーカーエンドポイントの経時的変化を含む：
・血液中尿素窒素［ＢＵＮ］；
・尿中タンパク質／アルブミン比および尿中アルブミン／クレアチン比；
・血清中と尿中両方のクレアチニン、シスタチンＣ、腎損傷分子−１［ＫＩＭ−１］、β−２マイクログロブリン、およびクラステリン；
・血清中と尿中両方の非対称性ジメチルアルギニン（ＡＤＭＡ）、形質転換増殖因子−β（ＴＧＦβ）、結合組織増殖因子（ＣＴＧＦ）、および好中球ゼラチナーゼ結合性リポカリン（ＮＧＡＬ）；
・尿中の顆粒球マクロファージコロニー刺激因子（ＧＭ−ＣＳＦ）、単球走化性タンパク質−１（ＭＣＰ−１）、カルビンジン、インターロイキン−１８（ＩＬ−１８）、および上皮増殖因子（ＥＧＦ）；
・ならびに尿中の足細胞数および足細胞特異的ｍＲＮＡの分析によって測定される足細胞尿。
【０２３７】
薬物動態学的エンドポイントは、親化合物（ＡＩ）とその主要活性代謝物（ＡＭ）の血漿中濃度および実測ＰＫパラメーターを含む。
【０２３８】
効能のエンドポイントは以下のものを含む：
・ベースラインから第２４、４８、および９６週の推算糸球体濾過量（ｅＧＦＲ）の線形回帰勾配；
・ベースラインから第２４、４８、および９６週のｅＧＦＲ値の絶対的および割合変化；
・以下の定義に基づきベースラインから第２４、４８、および９６週の治療に応答する対象の割合：
○ｅＧＦＲ勾配＞−２ｍＬ／分／１．７３ｍ２／年
○ｅＧＦＲ勾配＞−５ｍＬ／分／１．７３ｍ２／年
○ｅＧＦＲ勾配＞−１０ｍＬ／分／１．７３ｍ２／年
○ｅＧＦＲ勾配＞−１５ｍＬ／分／１．７３ｍ２／年；
・以下の定義に基づきベースラインから第２４、４８、および９６週の治療に応答する対象の割合：
○ベースラインと比較したｅＧＦＲ値の＜５％の低減
○ベースラインと比較したｅＧＦＲ値の＜１０％の低減
○ベースラインと比較したｅＧＦＲ値の＜２０％の低減
○ベースラインと比較したｅＧＦＲ値の＜３０％の低減；
・スクリーニング期間と治療期間の間のｅＧＦＲ勾配の差；
・１５ｍＬ／分／１．７３ｍ２以下のｅＧＦＲまたは血液透析もしくは腎移植の開始により定義して末期腎疾患（ＥＳＲＤ）に達した対象の数と割合、および
・Ｓｈｏｒｔ  Ｆｏｒｍ  ３６  Ｈｅａｌｔｈ  Ｓｕｒｖｅｙ（登録商標）（ＳＦ−３６）を使用して測定するＱｏＬの経時的変化。
【０２３９】
アルポート症候群を有する対象に２週間毎に１回投与する１．５ｍｇ／ｋｇ用量のＲＧ−０１２は適切なセーフティーマージンを与え、効能のエンドポイントの改善、例えば腎機能の維持または改善をもたらすことが予想された。
【実施例２】
【０２４０】
糸球体濾過量の計算
米国腎臓財団は、対象における推算糸球体濾過量（ｅＧＦＲ）を計算するため慢性腎臓病疫学共同研究（ＣＫＤ−ＥＰＩ）によって開発された幾つかの式を与えた。１つまたはそれ以上のこれらの式を使用して、本明細書に記載するフェーズ２試験の関与に関してスクリーニングした対象におけるｅＧＦＲを測定した。
【０２４１】
ＣＫＤ−ＥＰＩのクレアチニン式（２００９年）
単一方程式：ｅＧＦＲ＝１４１×ｍｉｎ（ＳＣｒ／κ、１）α×ｍａｘ（ＳＣｒ／κ、１）−１．２０９×０．９９３年齢×１．０１８［女性の場合］×１．１５９［アフリカン−アメリカンの場合］として表す
【０２４２】
略語／単位
ｅＧＦＲ（推算糸球体濾過量）＝ｍＬ／分／１．７３ｍ２
ＳＣｒ（血清中クレアチニン）＝ｍｇ／ｄＬ
Ｓｃｙｓ（標準血清中シスタチンＣ）＝ｍｇ／ｌ
κ＝０．７（女性）または０．９（男性）
α＝−０．２４８（女性）または−０．２０７（男性）
ｍｉｎ（ＳＣｒ／κまたは１）＝ＳＣｒ／κまたは１の最小値を示す
ｍａｘ（ＳＣｒ／κまたは１）＝ＳＣｒ／κまたは１の最大値を示す
ｍｉｎ（Ｓｃｙｓ／０．８，１）＝Ｓｃｙｓ／０．８，１の最小値を示す
ｍａｘ（Ｓｃｙｓ／０．８，１）＝Ｓｃｙｓ／０．８，１の最大値を示す
年齢＝歳
【０２４３】
ＣＫＤ−ＥＰＩのクレアチニン−シスタチン式（２０１２年）
単一方程式：ｅＧＦＲ＝１３５×ｍｉｎ（ＳＣｒ／κ、１）α×ｍａｘ（ＳＣｒ／κ、１）−０．６０１×ｍｉｎ（Ｓｃｙｓ／０．８，１）−０．３７５ｍａｘ（Ｓｃｙｓ／０．８，１）−０．７１１×０．９９５年齢×０．９６９［女性の場合］×１．０８［アフリカン−アメリカンの場合］として表す
【０２４４】
略語／単位
ｅＧＦＲ（推算糸球体濾過量）＝ｍＬ／１／１．７３ｍ２
ＳＣｒ（標準血清中クレアチニン）＝ｍｇ／ｄＬ
κ＝０．７（女性）または０．９（男性）
α＝−０．３２９（女性）または−０．４１１（男性）
ｍｉｎ＝ＳＣｒ／κまたは１の最小値を示す
ｍａｘ＝ＳＣｒ／κまたは１の最大値を示す
年齢＝歳
【実施例３】
【０２４５】
生検によるフェーズ１試験
この試験は、アルポート症候群を有する対象に投与するＲＧ−０１２の安全性、薬力学的性質、および薬物動態のフェーズ１試験である。このオープンラベル試験中に、全ての適格対象にＲＧ−０１２を与えた。この試験は２パート（パートＡとパートＢ）からなる。パートＡ中、関係者の半分には１回用量のＲＧ−０１２を与え、半分には４回用量のＲＧ−０１２を与えた（６週間にわたり１週間毎に１回用量）。全ての対象に２回の腎生検、１回はＲＧ−０１２投与前および１回はＲＧ−０１２投与後を施して、腎臓に対するＲＧ−０１２の効果を評価した。パートＡの終了後、対象は試験のパートＢに入ることができた。パートＢの間、全ての対象に４８週間にわたり１週間毎にＲＧ−０１２を与えた。
【０２４６】
【表２】
2020518633.tif 000009
【０２４７】
主要評価項目の測定は以下を含む：
・有害事象の発生率と重症度、および
・腎臓ｍｉＲ−２１に対するＲＧ−０１２の効果。
【０２４８】
副次評価項目の測定は以下を含む：
・薬物動態（ＰＫ）パラメーター  Ｃｍａｘ（最大実測血漿濃度）
・薬物動態（ＰＫ）パラメーター  Ｔｍａｘ（最大実測血漿濃度までの時間）
・薬物動態（ＰＫ）パラメーター  ＡＵＣ（血漿濃度と時間の曲線下面積）
【０２４９】
組み入れ基準：
１．１８〜６５歳の年齢の男性または女性
２．アルポート症候群の確かな診断
３．４０ｍｌ／分／１．７３ｍ２〜９０ｍｌ／分／１．７３ｍ２のｅＧＦＲ
４．クレアチニン１ｇあたり少なくとも３００ｍｇのタンパク質のタンパク尿
５．ＡＣＥ阻害剤またはＡＲＢを与えた対象に関して、投薬レジメンはスクリーニング前に少なくとも３０日間安定状態でなければならなかった。
６．避妊要件を順守する意思があること。
【０２５０】
除外基準：
１．アルポート症候群とは別の慢性腎疾患の原因（糖尿病性ニューロパチー、高血圧性ニューロパチー、ループス腎炎、またはＩｇＡニューロパチーなど）
２．進行中の透析療法または腎移植の病歴によって証明される末期腎疾患（ＥＳＲＤ）
３．対象の安全性と健康状態にリスクをもたらす可能性がある任意の他の状態
４．妊娠期または授乳期にある女性対象
【０２５１】
主要評価項目の測定は以下を含む：
・有害事象の発生率と重症度、および
・腎臓ｍｉＲ−２１に対するＲＧ−０１２の効果。
【０２５２】
副次評価項目の測定は以下を含む：
・薬物動態（ＰＫ）パラメーター  Ｃｍａｘ（最大実測血漿濃度）
・薬物動態（ＰＫ）パラメーター  Ｔｍａｘ（最大実測血漿濃度までの時間）
・薬物動態（ＰＫ）パラメーター  ＡＵＣ（血漿濃度と時間の曲線下面積）
【０２５３】
この試験では、第１回目のＲＧ−０１２の投与前、および第１回目のＲＧ−０１２の投与後に対象に腎生検を施した。血液試料を回収した。ＲＮＡを腎臓から単離し、ｍｉＲ−２１レベルを測定した。血液中および腎臓組織中のＲＧ−０１２レベルを測定した。ｍｉＲ−２１制御ｍＲＮＡ転写産物を測定することができた。
【０２５４】
２週間毎に１回の１．５ｍｇ／ｋｇ用量は、腎臓中でｍｉＲ−２１に関与する（すなわち阻害する）のに充分なレベルのＲＧ−０１２を与えることが予想された。
【配列表】
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【国際調査報告】
2020518633.tif 000012
2020518633.tif 000013
2020518633.tif 000014
2020518633.tif 000015