(57)【要約】  本発明は、２−オキソ−１，３−オキサゾリジニルイミダゾチアジアゾール誘導体、これらを調製する方法、これらを含有する医薬組成物、および医薬品としてのこれらの使用に関する。2020526532.tif 000054
2020526532.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
式（Ｉ）による２−オキソ−１，３−オキサゾリジニルイミダゾチアジアゾール誘導体、その幾何異性体、エナンチオマー、ジアステレオマー、同位体および混合物、またはこれらの薬学的に許容される塩
【化１】
2020526532.tif 000053
（式中、
Ｒ１は場合により１つまたは複数のハロゲン置換基によって置換されたＣ１〜４アルキルであり；
Ｒ２はハロゲン原子または場合により１つもしくは複数のハロゲン原子によって置換されたＣ１〜４アルキルであり；
Ｒ３はアルコキシ置換基によって置換されたＣ１〜４アルキルである）。
【請求項２】
Ｒ１がｉ−ブチル、ｎ−プロピル、２，２−ジフルオロプロピル、２−クロロ−２，２−ジフルオロエチル、２，２−ジフルオロエチル、２，２，２−トリフルオロエチルまたは２−フルオロエチル部分である、請求項１に記載の化合物。
【請求項３】
Ｒ１がｎ−プロピル、２，２−ジフルオロプロピルまたは２，２，２−トリフルオロエチル部分である、請求項１に記載の化合物。
【請求項４】
Ｒ２が塩素原子、ジフルオロメチル部分またはトリフルオロメチル部分である、請求項１に記載の化合物。
【請求項５】
Ｒ２がジフルオロメチル部分またはトリフルオロメチル部分である、請求項１に記載の化合物。
【請求項６】
Ｒ３がメトキシメチル、［（２Ｈ３）メチルオキシ］メチル、メトキシ（２Ｈ２）メチルまたは［（２Ｈ３）メチルオキシ］（２Ｈ２）メチル部分である、請求項１から５のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項７】
Ｒ１がｎ−プロピル、２，２−ジフルオロプロピルまたは２，２，２−トリフルオロエチル部分であり；
Ｒ２がジフルオロメチルまたはトリフルオロメチル部分であり；
Ｒ３がメトキシメチル、［（２Ｈ３）メトキシ］メチル、［（２Ｈ３）メトキシ］（２Ｈ２）メチルまたはメトキシ（２Ｈ２）メチル部分である、
請求項１から６のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項８】
・（＋）−３−［［２−（メトキシメチル）−６−（トリフルオロメチル）イミダゾ［２，１−ｂ］［１，３，４］チアジアゾール−５−イル］メチル］−５−プロピル−オキサゾリジン−２−オン；
・（−）−３−［［２−（メトキシメチル）−６−（トリフルオロメチル）イミダゾ［２，１−ｂ］［１，３，４］チアジアゾール−５−イル］メチル］−５−プロピル−オキサゾリジン−２−オン；
・（＋）−３−［［６−（ジフルオロメチル）−２−（メトキシメチル）イミダゾ［２，１−ｂ］［１，３，４］チアジアゾール−５−イル］メチル］−５−プロピル−オキサゾリジン−２−オン；
・（−）−３−［［６−（ジフルオロメチル）−２−（メトキシメチル）イミダゾ［２，１−ｂ］［１，３，４］チアジアゾール−５−イル］メチル］−５−プロピル−オキサゾリジン−２−オン．
・（＋）−３−［［２−［ジジュウテリオ（メトキシ）メチル］−６−（トリフルオロメチル）イミダゾ［２，１−ｂ］［１，３，４］チアジアゾール−５−イル］メチル］−５−プロピル−オキサゾリジン−２−オン
・（−）−３−［［２−［ジジュウテリオ（メトキシ）メチル］−６−（トリフルオロメチル）イミダゾ［２，１−ｂ］［１，３，４］チアジアゾール−５−イル］メチル］−５−プロピル−オキサゾリジン−２−オン
・（＋）−３−［［２−［ジジュウテリオ（トリジュウテリオメトキシ）メチル］−６−（トリフルオロメチル）イミダゾ［２，１−ｂ］［１，３，４］チアジアゾール−５−イル］メチル］−５−プロピル−オキサゾリジン−２−オン
・（−）−３−［［２−［ジジュウテリオ（トリジュウテリオメトキシ）メチル］−６−（トリフルオロメチル）イミダゾ［２，１−ｂ］［１，３，４］チアジアゾール−５−イル］メチル］−５−プロピル−オキサゾリジン−２−オン
・（＋）−３−［［２−（メトキシメチル）−６−（トリフルオロメチル）イミダゾ［２，１−ｂ］［１，３，４］チアジアゾール−５−イル］メチル］−５−（２，２，２−トリフルオロエチル）オキサゾリジン−２−オン
・（−）−３−［［２−（メトキシメチル）−６−（トリフルオロメチル）イミダゾ［２，１−ｂ］［１，３，４］チアジアゾール−５−イル］メチル］−５−（２，２，２−トリフルオロエチル）オキサゾリジン−２−オン
・（＋）−３−［［６−（ジフルオロメチル）−２−（メトキシメチル）イミダゾ［２，１−ｂ］［１，３，４］チアジアゾール−５−イル］メチル］−５−（２，２，２−トリフルオロエチル）オキサゾリジン−２−オン
・（−）−３−［［６−（ジフルオロメチル）−２−（メトキシメチル）イミダゾ［２，１−ｂ］［１，３，４］チアジアゾール−５−イル］メチル］−５−（２，２，２−トリフルオロエチル）オキサゾリジン−２−オン
・（−）−５−（２，２−ジフルオロプロピル）−３−［［２−（メトキシメチル）−６−（トリフルオロメチル）イミダゾ［２，１−ｂ］［１，３，４］チアジアゾール−５−イル］メチル］オキサゾリジン−２−オン
・（＋）−５−（２，２−ジフルオロプロピル）−３−［［２−（メトキシメチル）−６−（トリフルオロメチル）イミダゾ［２，１−ｂ］［１，３，４］チアジアゾール−５−イル］メチル］オキサゾリジン−２−オン
・３−［［６−（ジフルオロメチル）−２−（メトキシメチル）イミダゾ［２，１−ｂ］［１，３，４］チアジアゾール−５−イル］メチル］−５−（２，２−ジフルオロプロピル）オキサゾリジン−２−オン、エナンチオマー１
・３−［［６−（ジフルオロメチル）−２−（メトキシメチル）イミダゾ［２，１−ｂ］［１，３，４］チアジアゾール−５−イル］メチル］−５−（２，２−ジフルオロプロピル）オキサゾリジン−２−オン、エナンチオマー２
を含む群から選択される請求項１から７のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項９】
医薬品として使用するための請求項１から８のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項１０】
有効量の請求項１から８のいずれか一項に記載の化合物を薬学的に許容される希釈剤または担体と組み合わせて含む医薬組成物。
【請求項１１】
てんかん、てんかん発生、発作障害、痙攣、特に難治性発作の治療に使用するための請求項１から８のいずれか一項に記載の化合物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、２−オキソ−１，３−オキサゾリジニルイミダゾチアジアゾール誘導体、これらを調製する方法、これらを含有する医薬組成物、および医薬品としてのこれらの使用に関する。
【背景技術】
【０００２】
発作制御における永続的な問題は、現在利用可能な治療に全く反応しない、または不十分にしか反応しない患者で生じる。これらの患者は治療に対して難治性とみなされており、医学界にとって大きな課題となっている。てんかん患者の約３０％が難治性として分類されると推定されている。このため、特にこの患者集団を標的とする新たな医薬品を開発する必要がある。
【０００３】
式（Ａ）の抗てんかん化合物は、国際公開第２００８／１３２１３９号パンフレットに開示されている：
【化１】
2020526532.tif 000003
（式中、
ＹはＯまたはＳであり；
Ｒ１は水素またはＣ１〜６アルキルであり；
Ｒ２は水素であり；
Ｒ３は−ＣＯＮＲ５Ｒ６、−ＣＯＲ７、イミダゾリル、イミダゾピリジニル、イミダゾピリダジニルであり；
Ｒ５、Ｒ６は同じであるかまたは異なり、水素およびＣ１〜６アルキルから独立に選択され；
Ｒ７はＣ１〜６アルキルであり；
Ｚはイミダゾリジン−１−イル、１，３−オキサゾリジン−３−イル、２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル、１，３−チアゾール−３（２Ｈ）−イル、１，３−チアゾリジン−３−イル、ピペリジン−１−イル、アゼパン−１−イル、５，６−ジヒドロ−４Ｈ−チエノ［３，２−ｂ］ピロール−４−イル、ヘキサヒドロ−４Ｈ−チエノ［３，２−ｂ］ピロール−４−イル、２，３−ジヒドロ−１Ｈ−チエノ［３，４−ｂ］ピロール−１−イル、１，３−ベンゾチアゾール−３（２Ｈ）−イル、１，３−ベンゾオキサゾール−３（２Ｈ）−イル、ピラゾロ［１，５−ａ］ピリジン−１（２Ｈ）−イル、３，４−ジヒドロイソキノリン−２（１Ｈ）−イル、３，４−ジヒドロキノリン−１（２Ｈ）−イル、１，３，４，５−テトラヒドロ−２Ｈ−２−ベンザゼピン−２−イル、１，２，４，５−テトラヒドロ−３Ｈ−３−ベンザゼピン−３−イルからなる群から選択される単環式または二環式複素環式部分である）。
【０００４】
国際公開第２００８／１３２１３９号パンフレットの具体的な実施形態では、式（Ａ）のＺ＝Ｙ部分が：
【化２】
2020526532.tif 000004
（式中、ＸはＯまたはＳである）
であり得る。
【０００５】
式（Ｉ）の抗てんかん化合物は、国際公開第２０１１／０４７８６０号パンフレットに開示されている：式（Ｉ）による２−オキソ−１−ピロリジニルイミダゾチアジアゾール誘導体
【化３】
2020526532.tif 000005
（式中、
Ｒ１は少なくとも１つのハロゲン置換基を含有するＣ１〜４アルキルであり；
Ｒ２はハロゲン（塩素、臭素、ヨウ素）または少なくとも１つのハロゲン置換基を含有するＣ１〜４アルキルのいずれかであり；
Ｒ３は少なくとも１つのヒドロキシ（ＯＨ）またはアルコキシ（例えば、メトキシもしくはエトキシもしくはプロポキシ）置換基を含有するＣ１〜４アルキル（例えば、メチルもしくはエチル）である）。
【０００６】
式（Ｉ）の抗てんかん化合物は、国際公開第２０１２／１４３１１６号パンフレットに開示されている：式（Ｉ）による４−オキソ−１−イミダゾリジニルイミダゾチアジアゾール誘導体
【化４】
2020526532.tif 000006
（式中、
Ｒ１は、場合により１つもしくは複数（１〜６、好ましくは２、３もしくは５つ）のハロゲン、置換もしくは非置換フェニル、または置換もしくは非置換Ｃ１〜４シクロアルキルによって置換されたＣ１〜４アルキルであり；
Ｒ２は、ハロゲン（塩素、臭素、ヨウ素）、または１つもしくは複数（すなわち、１、２、または３つ）のハロゲン置換基を含有するＣ１〜４アルキルのいずれかであり；
Ｒ３は、少なくとも１つのヒドロキシ（ＯＨ）またはアルコキシ（例えば、メトキシもしくはエトキシもしくはプロポキシ）置換基を含有するＣ１〜４アルキル（例えば、メチルもしくはエチル）である）。
【発明の概要】
【０００７】
本発明は、式（Ｉ）を有する新たな２−オキソ−１，３−オキサゾリジニルイミダゾチアジアゾール誘導体、その幾何異性体、エナンチオマー、ジアステレオ異性体および混合物、またはこれらの薬学的に許容される塩
【化５】
2020526532.tif 000007
を提供する。
【０００８】
本発明のさらなる態様は、詳細な説明から明らかになるであろう。
【発明を実施するための形態】
【０００９】
本発明は、式（Ｉ）による２−オキソ−１，３−オキサゾリジニルイミダゾチアジアゾール誘導体
【化６】
2020526532.tif 000008
（式中、
Ｒ１は場合により１つまたは複数のハロゲン置換基によって置換されたＣ１〜４アルキルであり；
Ｒ２はハロゲン原子または場合により１つもしくは複数のハロゲン原子によって置換されたＣ１〜４アルキルであり；
Ｒ３はアルコキシ置換基によって置換されたＣ１〜４アルキルである）
に関する。
【００１０】
式（Ｉ）の化合物の互変異性体、幾何異性体、エナンチオマー、ジアステレオマー、同位体および混合物、または薬学的に許容される塩ならびに任意の重水素化変異体も含まれる。
【００１１】
具体的な実施形態では、Ｒ１がｉ−ブチル、ｎ−プロピル、２，２−ジフルオロプロピル、２−クロロ−２，２−ジフルオロエチル、２，２−ジフルオロエチル、２，２，２−トリフルオロエチルまたは２−フルオロエチル部分である。
【００１２】
より具体的な実施形態では、Ｒ１がｎ−プロピル、２−クロロ−２，２−ジフルオロエチル、２，２−ジフルオロプロピルまたは２，２，２−トリフルオロエチル部分である。
【００１３】
好ましくは、Ｒ１が２，２−ジフルオロプロピル、２，２，２−トリフルオロエチルまたはｎ−プロピル部分である。
【００１４】
さらなる具体的な実施形態では、Ｒ２が塩素原子、ジフルオロメチル部分またはトリフルオロメチル部分である。
【００１５】
好ましい実施形態では、Ｒ２がジフルオロメチル部分またはトリフルオロメチル部分である。
【００１６】
さらなる具体的な実施形態では、Ｒ３がメトキシメチル、［（２Ｈ３）メチルオキシ］メチル、メトキシ（２Ｈ２）メチルまたは［（２Ｈ３）メチルオキシ］（２Ｈ２）メチル部分である。
【００１７】
好ましい実施形態では、Ｒ３がメトキシメチル部分である。
【００１８】
さらなる具体的な実施形態では、式（Ｉ）の化合物が、
・Ｒ１がｎ−プロピル部分、２−クロロ−２，２−ジフルオロエチル、２，２−ジフルオロプロピルまたは２，２，２−トリフルオロエチル部分であり；
・Ｒ２が塩素原子、ジフルオロメチルまたはトリフルオロメチル部分であり；
・Ｒ３がメトキシメチル、［（２Ｈ３）メチルオキシ］メチル、メトキシ（２Ｈ２）メチルまたは［（２Ｈ３）メチルオキシ］（２Ｈ２）メチル部分である
化合物である。
【００１９】
さらなる具体的な実施形態では、式（Ｉ）の化合物が、
・Ｒ１がｎ−プロピル部分；２，２−ジフルオロプロピルまたは２，２，２−トリフルオロエチル部分であり；
・Ｒ２がジフルオロメチルまたはトリフルオロメチル部分であり；
・Ｒ３がメトキシメチル、［（２Ｈ３）メチルオキシ］メチル、メトキシ（２Ｈ２）メチルまたは［（２Ｈ３）メチルオキシ］（２Ｈ２）メチル部分である
化合物である。
【００２０】
好ましい実施形態では、式（Ｉ）の化合物が、
・Ｒ１がｎ−プロピル部分；２，２−ジフルオロプロピルまたは２，２，２−トリフルオロエチル部分であり；
・Ｒ２がジフルオロメチルまたはトリフルオロメチル部分であり；
・Ｒ３がメトキシメチル部分である
化合物である。
【００２１】
本発明の具体的な化合物は、以下からなる群から選択されるものである：
・（＋）−３−［［２−（メトキシメチル）−６−（トリフルオロメチル）イミダゾ［２，１−ｂ］［１，３，４］チアジアゾール−５−イル］メチル］−５−プロピル−オキサゾリジン−２−オン；
・（−）−３−［［２−（メトキシメチル）−６−（トリフルオロメチル）イミダゾ［２，１−ｂ］［１，３，４］チアジアゾール−５−イル］メチル］−５−プロピル−オキサゾリジン−２−オン；
・（＋）−３−［［６−（ジフルオロメチル）−２−（メトキシメチル）イミダゾ［２，１−ｂ］［１，３，４］チアジアゾール−５−イル］メチル］−５−プロピル−オキサゾリジン−２−オン；
・（−）−３−［［６−（ジフルオロメチル）−２−（メトキシメチル）イミダゾ［２，１−ｂ］［１，３，４］チアジアゾール−５−イル］メチル］−５−プロピル−オキサゾリジン−２−オン；
・（＋）−３−［［２−［ジジュウテリオ（メトキシ）メチル］−６−（トリフルオロメチル）イミダゾ［２，１−ｂ］［１，３，４］チアジアゾール−５−イル］メチル］−５−プロピル−オキサゾリジン−２−オン；
・（−）−３−［［２−［ジジュウテリオ（メトキシ）メチル］−６−（トリフルオロメチル）イミダゾ［２，１−ｂ］［１，３，４］チアジアゾール−５−イル］メチル］−５−プロピル−オキサゾリジン−２−オン；
・（＋）−３−［［２−［ジジュウテリオ（トリジュウテリオメトキシ）メチル］−６−（トリフルオロメチル）イミダゾ［２，１−ｂ］［１，３，４］チアジアゾール−５−イル］メチル］−５−プロピル−オキサゾリジン−２−オン；
・（−）−３−［［２−［ジジュウテリオ（トリジュウテリオメトキシ）メチル］−６−（トリフルオロメチル）イミダゾ［２，１−ｂ］［１，３，４］チアジアゾール−５−イル］メチル］−５−プロピル−オキサゾリジン−２−オン；
・（＋）−３−［［２−（メトキシメチル）−６−（トリフルオロメチル）イミダゾ［２，１−ｂ］［１，３，４］チアジアゾール−５−イル］メチル］−５−（２，２，２−トリフルオロエチル）オキサゾリジン−２−オン；
・（−）−３−［［２−（メトキシメチル）−６−（トリフルオロメチル）イミダゾ［２，１−ｂ］［１，３，４］チアジアゾール−５−イル］メチル］−５−（２，２，２−トリフルオロエチル）オキサゾリジン−２−オン；
・（＋）−３−［［６−（ジフルオロメチル）−２−（メトキシメチル）イミダゾ［２，１−ｂ］［１，３，４］チアジアゾール−５−イル］メチル］−５−（２，２，２−トリフルオロエチル）オキサゾリジン−２−オン；
・（−）−３−［［６−（ジフルオロメチル）−２−（メトキシメチル）イミダゾ［２，１−ｂ］［１，３，４］チアジアゾール−５−イル］メチル］−５−（２，２，２−トリフルオロエチル）オキサゾリジン−２−オン；
・（−）−５−（２，２−ジフルオロプロピル）−３−［［２−（メトキシメチル）−６−（トリフルオロメチル）イミダゾ［２，１−ｂ］［１，３，４］チアジアゾール−５−イル］メチル］オキサゾリジン−２−オン；
・（＋）−５−（２，２−ジフルオロプロピル）−３−［［２−（メトキシメチル）−６−（トリフルオロメチル）イミダゾ［２，１−ｂ］［１，３，４］チアジアゾール−５−イル］メチル］オキサゾリジン−２−オン；
・３−［［６−（ジフルオロメチル）−２−（メトキシメチル）イミダゾ［２，１−ｂ］［１，３，４］チアジアゾール−５−イル］メチル］−５−（２，２−ジフルオロプロピル）オキサゾリジン−２−オン、エナンチオマー１；
・３−［［６−（ジフルオロメチル）−２−（メトキシメチル）イミダゾ［２，１−ｂ］［１，３，４］チアジアゾール−５−イル］メチル］−５−（２，２−ジフルオロプロピル）オキサゾリジン−２−オン、エナンチオマー２。
【００２２】
本発明の化合物は、てんかん、てんかん発生、発作障害、痙攣、特に難治性発作の治療における医薬品として使用するためのものである。
【００２３】
以下の段落は、本発明による化合物を構成する種々の化学部分の定義を提供し、特に明示的に述べられる定義がより広い定義を提供しない限り、明細書および特許請求の全体を通して均一に適用されることを意図している。
【００２４】
「Ｃ１〜４アルキル」は、１〜４個の炭素原子を有するアルキル基を指す。この用語は、メチル、エチル、ｎ−プロピル、イソプロピル、ｎ−ブチル、イソブチル、ｔｅｒｔ−ブチルなどの基によって例示される。「Ｃ１〜４アルキル」基は、ハロゲンまたはアルコキシから選択される１つまたは複数の置換基によって置換されていてもよい。
【００２５】
式（Ｉ）の任意の部分「Ｈ」は、同位体水素、重水素またはトリチウムであり得る。
【００２６】
「アルコキシ」は、基−Ｏ−Ｒ（式中、Ｒは「Ｃ１〜４アルキル」を含む）を指す。
【００２７】
「ハロゲン」は、フルオロ、クロロ、ブロモおよびヨード原子、好ましくはフルオロおよびクロロを指す。
【００２８】
本発明による「薬学的に許容される塩」には、式（Ｉ）の化合物が形成することができる治療活性で非毒性の酸または塩基の塩形態が含まれる。
【００２９】
塩基として遊離形態で生じる式（Ｉ）の化合物の酸付加塩形態は、遊離塩基を無機酸、例えば、塩酸もしくは臭化水素酸塩などのハロゲン化水素酸、硫酸、硝酸、リン酸など；または、例えば酢酸、トリフルオロ酢酸、ヒドロキシ酢酸、プロパン酸、乳酸、ピルビン酸、マロン酸、コハク酸、マレイン酸、フマル酸、リンゴ酸、酒石酸、クエン酸、メタンスルホン酸、エタンスルホン酸、ベンゼンスルホン酸、ｐ−トルエンスルホン酸、サイクラミン酸、サリチル酸、ｐ−アミノサリチル酸、パモ酸などの有機酸などの適切な酸で処理することによって得ることができる。
【００３０】
酸性プロトンを含有する式（Ｉ）の化合物を、適切な有機および無機塩基で処理することによって、治療活性で非毒性の塩基付加塩形態、例えば金属またはアミン塩に変換することができる。適切な塩基塩形態には、例えば、アンモニウム塩、アルカリおよびアルカリ土類金属塩、例えばリチウム、ナトリウム、カリウム、マグネシウム、カルシウム塩など、有機塩基との塩、例えばＮ−メチル−Ｄ−グルカミン、ヒドラバミン塩、ならびに例えばアルギニン、リジンなどのアミノ酸との塩が含まれる。
【００３１】
逆に、前記塩形態を、適切な塩基または酸で処理することによって、遊離形態に変換することができる。
【００３２】
式（Ｉ）の化合物およびその塩は、溶媒和物の形態であり得、これは本発明の範囲内に含まれる。このような溶媒和物には、例えば、水和物、アルコラートなどが含まれる。
【００３３】
式（Ｉ）の化合物および／またはその中間体は、その構造中に少なくとも１つの立体中心を有し得る。この立体中心は、ＲまたはＳ配置で存在し得、前記ＲおよびＳ表記は、Ｐｕｒｅ  Ａｐｐｌ．Ｃｈｅｍ．、４５（１９７６）１１〜３０に記載されるルールに対応して使用される。よって、本発明はまた、式（Ｉ）の化合物のエナンチオマーおよびジアステレオ異性体形態またはこれらの混合物（立体異性体の全ての可能な混合物を含む）などの全ての立体異性体形態に関する。本発明に関して、１つまたは複数の化合物への言及は、特定の異性体形態が具体的に言及されない限り、その可能な異性体形態の各々の化合物およびその混合物を包含することを意図している。本明細書で使用される「エナンチオマー的に純粋」という表現は、９５％超のエナンチオマー過剰率（ｅｅ）を有する化合物を指す。
【００３４】
本発明による化合物は、様々な多形形態で存在し得る。上記式では明示的に示されていないが、このような形態は本発明の範囲内に含まれることが意図されている。
【００３５】
本発明による式（Ｉ）の化合物は、合成有機化学の当業者によって理解される従来の方法と同様に調製することができる。
【００３６】
一実施形態によると、一般式（Ｉ）を有する化合物は、式：
【化７】
2020526532.tif 000009
（式中、Ｒ１、Ｒ２およびＲ３は、式（Ｉ）の化合物について上に定義されるのと同じ定義を有する）
に従って、式（ＩＩ）の化合物と式（ＩＩＩ）の尿素の反応によって調製することができる。
【００３７】
この反応は、高温で、スルホランなどの非プロトン性溶媒中、ｐ−トルエンスルホン酸などの酸を使用して実施することができる。
【００３８】
式（ＩＩ）の化合物は、式：
【化８】
2020526532.tif 000010
（式中、Ｒ２およびＲ３は、式（Ｉ）の化合物について上に定義されるのと同じ定義を有する）
に従って、式（ＩＶ）の化合物のヒドロキシメチル化によって調製することができる。
【００３９】
この反応は、１００℃で、ジオキサンなどの極性溶媒中、酸性条件下で、パラホルムアルデヒドなどのホルミル化剤を使用して、または当業者に知られている他の方法に従って、実施することができる。
【００４０】
式（ＩＶ）の化合物は、式：
【化９】
2020526532.tif 000011
（式中、Ｒ２およびＲ３は、式（Ｉ）の化合物について上に記載されるのと同じ定義を有する）
に従って、式（Ｖ）の化合物と式（ＶＩ）のブロモ誘導体の反応によって合成することができる。
【００４１】
この反応は、文献に記載される手順または当業者に知られている手順を使用して実施することができる。
【００４２】
式（Ｖ）の化合物および式（ＶＩ）の化合物は、市販されている、または当業者に知られている任意の方法に従って合成することができる。
【００４３】
一実施形態によると、式（ＩＩＩ）の化合物は、式：
【化１０】
2020526532.tif 000012
に従って、式（ＶＩＩ）の化合物の環化によって調製することができる。
【００４４】
この反応は、室温で、水素化ナトリウムなどの塩基の存在下、テトラヒドロフランなどの極性溶媒中、１，１’−カルボニルジイミダゾールを使用して、または当業者に知られている手順を使用して実施することができる。
【００４５】
式（ＶＩＩ）の化合物は、式
【化１１】
2020526532.tif 000013
（式中、Ｒ１は上に定義されるのと同じ定義を有する）
に従って、式（ＶＩＩＩ）の化合物の還元によって調製することができる。
【００４６】
この反応は、それだけに限らないが、エタノールなどの極性溶媒中、パラジウム炭などの触媒の存在下、水素などの還元剤を使用して、または当業者に知られている他の手順によって実施することができる。
【００４７】
式（ＶＩＩＩ）の化合物は、当業者に知られている任意の反応順序に従って、市販のアルデヒドまたはアルコール（式中、Ｒ１は、上に定義されるのと同じ定義を有する）から出発して調製することができる。
【００４８】
本発明の化合物は、てんかん、てんかん発生、発作障害、痙攣、特に難治性発作の治療における医薬品として使用するためのものである。
【００４９】
患者が１２ヶ月以上の最大耐量の２つ以上の抗てんかん薬物による先行技術の治療で発作からの解放を達成できない場合、発作は難治性として分類され得る。国際抗てんかん連盟（ＩＬＡＥ）は、薬剤耐性てんかんを、「持続的な発作からの解放を達成するための２つの耐容性があり、適切に選択および使用されたＡＥＤスケジュール（単剤療法または併用）の十分な試験の失敗」と定義している。
【００５０】
本発明の方法は、障害または状態を緩和または予防するのに十分な量の本発明による化合物を上記の状態または障害を患っている哺乳動物（好ましくは、ヒト）に投与することを含む。
【００５１】
化合物は、それだけに限らないが、１単位剤形当たり１〜２０００ｍｇ、好ましくは１〜１０００ｍｇ、より好ましくは１〜５００ｍｇの有効成分を含有するものを含む、任意の適切な単位剤形で都合よく投与される。
【００５２】
本明細書で使用される「治療」という用語は、治癒的治療および予防的治療を含む。
【００５３】
「治癒的」とは、障害または状態の現在の症候性エピソードの治療における有効性を意味する。
【００５４】
「予防的」とは、障害または状態の発生または再発の予防を意味する。
【００５５】
本明細書で使用される「てんかん」という用語は、非誘発性再発性てんかん発作を特徴とする慢性神経学的状態を指す。てんかん発作は、一連の脳ニューロンの異常で過剰な同期化放電の発現であり；その臨床症状は突然で一過性である。本明細書で使用される「てんかん」という用語はまた、発作の周期的な発生を特徴とする脳機能の障害も指し得る。発作は、高熱もしくは毒素への曝露などの条件によって正常な脳で誘発されると「非てんかん性」になり得る、または明らかな誘発なしに誘発されると「てんかん性」になり得る。
【００５６】
本明細書で使用される「発作」という用語は、脳ニューロンの集団の不規則な、同期的、および律動的な発火による挙動の一過的変化を指す。
【００５７】
本発明のさらなる態様は、有効量の式（Ｉ）の化合物を薬学的に許容される希釈剤または担体と組み合わせて含む医薬組成物に関する。
【００５８】
上記の適応症のいずれかにおける活性は、当然、一般に特定の適応症についておよび／または臨床試験の設計において当業者に知られている方法で適切な臨床試験を実施することによって決定することができる。
【００５９】
疾患を治療するために、式（Ｉ）の化合物またはその薬学的に許容される塩は、有効な１日投与量で使用され、医薬組成物の形態で投与され得る。
【００６０】
したがって、本発明の別の実施形態は、有効量の式（Ｉ）の化合物またはその薬学的に許容される塩を薬学的に許容される希釈剤または担体と組み合わせて含む医薬組成物に関する。
【００６１】
本発明による医薬組成物を調製するために、式（Ｉ）の化合物またはその薬学的に許容される塩の１つまたは複数を、当業者に知られている従来の医薬配合技術に従って医薬希釈剤または担体と密接に混和する。
【００６２】
適切な希釈剤および担体は、所望の投与経路、例えば、経口、直腸、非経口または鼻腔内に応じて多種多様な形態をとることができる。
【００６３】
本発明による化合物を含む医薬組成物は、例えば、経口、非経口、すなわち、静脈内、筋肉内または皮下、くも膜下腔内、経皮（パッチ）、吸入または鼻腔内投与することができる。
【００６４】
経口投与に適した医薬組成物は、固体または液体であり得、例えば、錠剤、丸剤、糖衣錠、ゼラチンカプセル、液剤、シロップ、チューインガムなどの形態であり得る。
【００６５】
この目的のために、有効成分を、デンプンまたはラクトースなどの不活性希釈剤または非毒性の薬学的に許容される担体と混合してもよい。場合により、これらの医薬組成物は、微結晶セルロース、トラガカントゴムもしくはゼラチンなどの結合剤、アルギン酸などの崩壊剤、ステアリン酸マグネシウムなどの潤滑剤、コロイド状二酸化ケイ素などの滑剤、スクロースもしくはサッカリンなどの甘味剤、または着色剤、またはペパーミントもしくはサリチル酸メチルなどの香味剤を含有することもできる。
【００６６】
本発明は、制御された方法で活性物質を放出することができる組成物も企図する。
【００６７】
非経口投与に使用することができる医薬組成物は、アンプル、使い捨て注射器、ガラスもしくはプラスチックのバイアルまたは注入容器に一般的に含有される水性または油性の溶液または懸濁液などの従来の形態である。
【００６８】
有効成分に加えて、これらの溶液または懸濁液は、場合により注射用水、生理食塩水、油、ポリエチレングリコール、グリセリン、プロピレングリコールまたは他の合成溶媒などの滅菌希釈剤、ベンジルアルコールなどの抗菌剤、アスコルビン酸または重亜硫酸ナトリウムなどの抗酸化剤、エチレンジアミン四酢酸などのキレート剤、酢酸塩、クエン酸塩またはリン酸塩などの緩衝剤、および塩化ナトリウムまたはデキストロースなどの浸透圧調整剤も含有することができる。
【００６９】
これらの医薬形態は、薬剤師が日常的に使用している方法を使用して調製される。
【００７０】
医薬組成物中の有効成分の量は、広範囲の濃度内に入ることができ、患者の性別、年齢、体重および病状、ならびに投与方法などの種々の因子に依存する。したがって、経口投与用の組成物中の式（Ｉ）の化合物の量は、組成物の総重量に対して少なくとも０．５重量％であり、最大８０重量％となり得る。
【００７１】
本発明によると、式（Ｉ）の化合物またはその薬学的に許容される塩を、単独でまたは他の医薬有効成分と組み合わせて投与することができることも見出された。本発明による化合物と組み合わせて使用するために挙げることができるこのような追加の化合物の非限定的な例には、抗ウイルス薬、鎮痙薬（例えば、バクロフェン）、制吐薬、抗躁気分安定剤、鎮痛薬（例えば、アスピリン、イブプロフェン、パラセタモール）、麻薬性鎮痛薬、局所麻酔薬、オピオイド鎮痛薬、リチウム塩、抗うつ薬（例えば、ミアンセリン、フルオキセチン、トラゾドン）、三環系抗うつ薬（例えば、イミプラミン、デシプラミン）、抗痙攣薬（例えば、バルプロ酸、カルバマゼピン、フェニトイン）、統合失調症治療薬（例えば、リスペリドン、ハロペリドール）、神経遮断薬、ベンゾジアゼピン（例えば、ジアゼパム、クロナゼパム）、フェノチアジン（例えば、クロルプロマジン）、カルシウムチャネル遮断薬、アンフェタミン、クロニジン、リドカイン、メキシレチン、カプサイシン、カフェイン、クエチアピン、セロトニン拮抗薬、β遮断薬、抗不整脈薬、トリプタン、麦角誘導体およびアマンタジンがある。
【００７２】
経口組成物の場合、１日投与量は１ｍｇ〜２０００ｍｇの式（Ｉ）の化合物の範囲である。好ましくは、１ｍｇ〜１０００ｍｇの式（Ｉ）の化合物、最も好ましくは１ｍｇ〜５００ｍｇの範囲である。
【００７３】
非経口投与用の組成物では、存在する式（Ｉ）の化合物の量は、組成物の総重量に対して少なくとも０．５重量％であり、最大３３重量％となり得る。好ましい非経口組成物の場合、投与単位は、１ｍｇ〜２０００ｍｇの式（Ｉ）の化合物の範囲である。
【００７４】
１日用量は、式（Ｉ）の化合物の広範な投与単位の範囲内に入ることができ、一般に１〜２０００ｍｇ、好ましくは１〜１０００ｍｇの範囲である。しかしながら、具体的な用量は、医師の裁量で、個々の要件に応じて特定の症例に適合させることができることを理解すべきである。
【００７５】
本発明によって提供されるＳＶ２タンパク質結合化合物およびその標識化誘導体は、試験化合物（例えば、潜在的な医薬品）がＳＶ２タンパク質に結合する能力を決定する際の標準および試薬として有用となり得る。
【００７６】
本発明によって提供されるＳＶ２タンパク質のリガンドの標識化誘導体は、ポジトロン放射断層撮影（ＰＥＴ）画像化または単一光子放出コンピュータ断層撮影（ＳＰＥＣＴ）用の放射性トレーサーとしても有用となり得る。
【００７７】
したがって、本発明は、ＳＶ２タンパク質へのより強力な結合に基づいて、潜在的医薬品を発見するため、特に本明細書に示される状態を治療および予防するため、組織のＳＶ２タンパク質を局在化するため、ならびに精製ＳＶ２タンパク質を特徴付けるための化学ライブラリーをスクリーニングするためのツールとしての標識化リガンドをさらに提供する。ＳＶ２タンパク質にはＳＶ２Ａ、ＳＶ２ＢおよびＳＶ２Ｃが含まれ、ＳＶ２Ａは抗発作薬レベチラセタムおよびその類似体の結合部位である。ＳＶ２アイソフォームＳＶ２Ａ、ＳＶ２ＢまたはＳＶ２Ｃは、ヒト、ラットまたはマウスを含むいずれかの哺乳動物種の組織、特に脳に由来し得る。あるいは、アイソフォームは、異種的に発現され、アッセイに使用される、ヒト、ラットおよびマウスを含むいずれかの哺乳動物種のクローン化バージョンであり得る。スクリーニング方法は、哺乳動物またはヒトの脳膜などの脳膜、またはＳＶ２タンパク質もしくはその断片、特にＳＶ２ＡおよびＳＶ２Ｃを発現するがＳＶ２Ｂを含む細胞株を、推定薬剤に曝露し、膜またはタンパク質もしくは断片および薬剤を式（Ｉ）の標識化合物とインキュベートすることを含む。この方法は、式（Ｉ）の化合物とタンパク質の結合が推定薬剤によって阻害されるかどうかを決定し、それによってタンパク質の結合パートナーを特定することをさらに含む。したがって、スクリーニングアッセイにより、ＳＶ２タンパク質と相互作用する新たな薬物または化合物の特定が可能になる。本発明はまた、ＳＶ２タンパク質の光活性化可能なリガンドを提供する。
【００７８】
標識化リガンドを、可溶化、精製およびクロマトグラフィー後のＳＶ２タンパク質の立体構造状態を評価するためのツールとして使用することもできる。標識化リガンドは、直接的または間接的に標識化され得る。適切な標識の例としては、３Ｈなどの放射性標識、蛍光標識、酵素、ユーロピウム、ビオチン、およびこの種のアッセイのための他の従来の標識が含まれる。
【００７９】
式（Ｉ）の標識化合物は、ＳＶ２タンパク質（ＳＶ２Ａ、ＳＶ２ＢおよびＳＶ２Ｃ）に結合する新たな化合物または薬剤をスクリーニングするためのアッセイのプローブとして、この方法で有用である。このようなアッセイの実施形態では、リガンドを修飾なしで使用することができる、または種々の方法で；例えば、検出可能なシグナルを直接的もしくは間接的に提供する部分を共有結合的もしくは非共有結合的に結合するなどの標識化によって修飾することができる。これらのアッセイのいずれにおいても、材料を直接的または間接的に標識化することができる。直接的標識化の可能性には、それだけに限らないが、［３Ｈ］、［１４Ｃ］、［３２Ｐ］、［３５Ｓ］または［１２５Ｉ］を含む放射標識、ペルオキシダーゼおよびアルカリホスファターゼなどの酵素、ならびにそれだけに限らないが、フルオレセインまたはローダミンを含む蛍光強度、波長シフトまたは蛍光偏光の変化を監視することができる蛍光標識などの標識群が含まれる。間接的標識化の可能性には、１つの成分のビオチン化と、それに続く上記の標識群の１つに結合したアビジンとの結合、または抗リガンド抗体の使用が含まれる。化合物はまた、化合物が固体支持体に付着される場合のスペーサーまたはリンカーを含んでもよい。ＳＶ２タンパク質（特にＳＶ２ＡおよびＳＶ２Ｃ）への結合に関して本発明による標識化リガンドと競合または相互作用する薬剤または化合物を特定するために、ＳＶ２ＡもしくはＳＶ２ＣまたはＳＶ２タンパク質全体もしくはその断片を含有するインタクトな細胞、細胞または膜断片を使用することができる。薬剤または化合物を、標識化レベチラセタムまたはその類似体もしくは誘導体とのインキュベーションの前、これと同時、またはこの後に、細胞、膜、ＳＶ２タンパク質または断片とインキュベートすることができる。アッセイは、レベチラセタムの結合またはその誘導体もしくは類似体とＳＶ２タンパク質またはその断片の結合を監視するハイスループットスクリーニング（ＨＴＳ）アッセイを含む、いずれかの利用可能な形式で修飾または調製することができる。化合物のライブラリーを試験する多くの薬物スクリーニングプログラムでは、所与の期間に調査する化合物の数を最大化するために、ハイスループットアッセイが望ましい。このようなスクリーニングアッセイは、ＳＶ２を含有するインタクトな細胞、細胞または膜断片、ならびに精製または半精製タンパク質から誘導され得るような無細胞または無膜系を使用してもよい。ＳＶ２または精製ＳＶ２タンパク質およびペプチドを含有する膜断片を用いたアッセイの利点は、試験化合物の細胞毒性および／または生物学的利用能の効果を一般に無視することができ、代わりに、アッセイが主に、例えば、２つの分子間の結合の阻害に現れ得るような分子標的に対する薬物の効果に焦点を合わせることができることである。アッセイを、試験薬剤または化合物が、本発明による標識化リガンドとＳＶ２もしくはＳＶ２の断片の結合、または標識化レベチラセタムもしくはその誘導体もしくは類似体とＳＶ２もしくはＳＶ２タンパク質の断片の結合を阻害する能力を検出するように組み立てることができる。複合体形成の阻害は、濾過アッセイ、Ｆｌａｓｈｐｌａｔｅｓ（Ｐｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ）、シンチレーション近接アッセイ（ＳＰＡ、ＧＥ）などの種々の技術によって検出することができる。ハイスループットスクリーニング（ＨＴＳ）の場合、生体膜でコーティングされたマイクロスフェアまたは生体膜でコーティングされたフラッシュプレートを使用するシンチレーション近接アッセイが、分離または洗浄ステップを必要としない強力な方法である。
【００８０】
治療に使用するための化合物を開発する際に直面する可能性のある課題は、本発明の化合物（犠牲薬物）と一緒に同時投与され得る一定の化合物（加害薬物）が、ＣＹＰ４５０酵素、特にＣＹＰ３Ａ４／５を誘導する能力である。加害薬物によるこのような酵素の誘導は、犠牲薬物の曝露に影響を及ぼし、主にＣＹＰ４５０酵素、特にＣＹＰ３Ａ４／５によって代謝されると、それによってその有効性プロファイルを潜在的に変化させ得る。したがって、ＣＹＰ３Ａ４／５酵素による代謝の可能性が限られている化合物を開発することが望ましい。
【００８１】
本発明による化合物の総代謝に対するＣＹＰ３Ａ４／５の寄与は、アザムリンなどの選択的ＣＹＰ３Ａ４／５阻害剤の非存在下と存在下でのヒト肝細胞クリアランス間の比を計算することによって評価された。
【００８２】
本特許出願に記載されるプロトコルに従ってこのアッセイで試験すると、本発明による化合物は、典型的には４０％未満のＣＹＰ３Ａ４／５によって代謝される画分（Ｆｍ，ＣＹＰ３Ａ４／５）を示し、したがってＣＹＰ４５０誘導剤と同時投与した場合の薬物−薬物相互作用のリスクを最小限に抑える。
【００８３】
実験節
略語／再現試薬
Ａｃ：アセチル
ＡＣＮ：アセトニトリル
食塩水：飽和塩化ナトリウム水溶液
ｎＢｕ：ｎ−ブチル
ｔＢｕ：ｔｅｒｔ−ブチル
Ｂｚ：ベンゾイル
ＣＶ：カラム体積
ＤＣＭ：ジクロロメタン
ＤＭＦ：Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド
ＤＭＳＯ：ジメチルスルホキシド
Ｅｔ：エチル
ＥｔＯＨ：エタノール
Ｅｔ２Ｏ：ジエチルエーテル
ＥｔＯＡｃ：酢酸エチル
ｈ：時間
ＨＰＬＣ：高圧液体クロマトグラフィー
ＬＣ：液体クロマトグラフィー
ＬＣＭＳ：液体クロマトグラフィー質量分析
ＭｅＯＨ：メタノール
ｍｉｎ．：分
ＮＭＲ：核磁気共鳴
ｉＰｒＯＨ：イソプロパノール
ＰＴＳＡ：ｐ−トルエンスルホン酸
ＲＴ：室温
ＳＦＣ：超臨界流体クロマトグラフィー
ＴＨＦ：テトラヒドロフラン
ＴＬＣ：薄層クロマトグラフィー
【００８４】
本出願では、化合物のＩＵＰＡＣ名（またはＡｃｃｅｌｅｒｙｓ  Ｄｒａｗ  ４．０から生成された名称）が言及されている。
【００８５】
分析方法
空気または水分に敏感な試薬を含む全ての反応は、乾燥溶媒およびガラス器具を使用して、窒素またはアルゴン雰囲気下で実施した。マイクロ波照射を必要とする実験は、オペレーティングソフトウェアのバージョン２．０でアップグレードされたＢｉｏｔａｇｅ  Ｉｎｉｔｉａｔｏｒ  Ｓｉｘｔｙ電子レンジで実施する。実験は可能な限り速く必要な温度に到達するよう実行する（最大照射電力：４００Ｗ、外部冷却なし）。市販の溶媒および試薬は一般に、さらに精製することなく使用し、適切な場合は無水溶媒（一般的にはＡｌｄｒｉｃｈ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｃｏｍｐａｎｙ製のＳｕｒｅ−Ｓｅａｌ（商標）製品またはＡＣＲＯＳ  Ｏｒｇａｎｉｃｓ製のＡｃｒｏＳｅａｌ（商標））を含む。一般に、反応に引き続いて薄層クロマトグラフィー、ＨＰＬＣまたは質量分析を行った。
【００８６】
ＨＰＬＣ分析は、Ｗａｔｅｒｓ  ＸＢｒｉｄｇｅ  ＭＳ  Ｃ１８、５ｐｍ、１５０×４．６ｍｍカラムを取り付けたＡｇｉｌｅｎｔ  １１００シリーズＨＰＬＣシステムを使用して実施する。勾配は、６分間で１００％溶媒Ａ（水／ＡＣＮ／ギ酸アンモニウム溶液８５／５／１０（ｖ／ｖ／ｖ））から１００％溶媒Ｂ（水／ＡＣＮ／ギ酸アンモニウム溶液５／８５／１０（ｖ／ｖ／ｖ）、１００％Ｂで５分間保持して実行する。流量は６分間８ｍＬ／分に設定し、次いで、２分間３ｍＬ／分に増加させ、３分間３ｍＬ／分で保持する。ＡＰＩソースの直前に１／２５の分割を使用する。クロマトグラフィーは４５℃で実施する。ギ酸アンモニウム溶液（ｐＨ約８．５）は、ギ酸アンモニウム（６３０ｍｇ）を水（１Ｌ）に溶解し、水酸化アンモニウム３０％（５００μＬ）を添加して調製する。
【００８７】
異なる分析条件を使用する場合、ＬＣデータについて異なる保持時間が得られる可能性があることは、当業者に明らかであるだろう。
【００８８】
ＬＣＭＳモードでの質量分析測定は以下の通り実施する：
−塩基性溶出の場合、以下を使用して分析を実施する：
ＱＤＡ  Ｗａｔｅｒｓの単純な四重極質量分析計をＬＣＭＳ分析に使用する。この分光計は、ＥＳＩ源およびダイオードアレイ検出器（２００〜４００ｎｍ）を備えたＵＰＬＣ  Ａｃｑｕｉｔｙ  Ｈｃｌａｓｓを装備している。データは、塩基性溶出のポジティブモードでｍ／ｚ７０〜８００のフルＭＳスキャンで取得する。塩基性溶出については、Ｗａｔｅｒｓ  Ａｃｑｕｉｔｙ  ＵＰＬＣ  ＢＥＨＣ１８  １．７μｍ（２．１×５０ｍｍ）カラムで逆相分離を４５℃で実施する。勾配溶出は、水／ＡＣＮ／ギ酸アンモニウム（９５／５／６３ｍｇ／Ｌ）（溶媒Ａ）およびＡＣＮ／水／ギ酸アンモニウム（９５／５／６３ｍｇ／Ｌ）（溶媒Ｂ）を使用して行う。注入量：１μＬ。ＭＳの全流量。
塩基性プログラム「４分」
【表１】
2020526532.tif 000014
塩基性プログラム「１０分」
【表２】
2020526532.tif 000015
【００８９】
−酸性溶出の場合、以下を使用して分析を実施する：
ＱＤＡ  Ｗａｔｅｒｓの単純な四重極質量分析計をＬＣＭＳ分析に使用する。この分光計は、ＥＳＩ源およびダイオードアレイ検出器（２００〜４００ｎｍ）を備えたＵＰＬＣ  Ａｃｑｕｉｔｙ  Ｈｃｌａｓｓを装備している。データは、酸性溶出のポジティブモードでｍ／ｚ７０〜８００のフルＭＳスキャンで取得する。酸性溶出については、Ｗａｔｅｒｓ  Ａｃｑｕｉｔｙ  ＵＰＬＣ  ＨＳＳ  Ｔ３  １．８μｍ（２．１×５０ｍｍ）カラムで逆相分離を４５℃で実施する。勾配溶出は、水／ＡＣＮ／ＴＦＡ（９５／５／０．５ｍＬ／Ｌ）（溶媒Ａ）およびＡＣＮ（溶媒Ｂ）を使用して行う。注入量：１μＬ。ＭＳの全流量。
酸性プログラム「４分」
【表３】
2020526532.tif 000016
酸性プログラム「１０分」
【表４】
2020526532.tif 000017
【００９０】
粗物質は、順相クロマトグラフィー（酸性もしくは塩基性）逆相クロマトグラフィー、キラル分離または再結晶によって精製することができた。
【００９１】
通常の逆相クロマトグラフィーは、シリカゲルカラム（１００：２００メッシュシリカゲルまたはＩｎｔｅｒｃｈｉｍ製のＰｕｒｉｆｌａｓｈ（登録商標）−５０ＳＩＨＣ−ＪＰカラム）を使用して実施する。
【００９２】
分取逆相クロマトグラフィーは以下の通り実施する：
−ＳＱＤまたはＱＭ  Ｗａｔｅｒｓトリプル四重極質量分析計を使用したＬＣＭＳ精製（塩基性モード、ＬＣＭＳ  ｐｒｅｐ）をＬＣＭＳ精製に使用する。この分光計は、ＥＳＩ源およびダイオードアレイ検出器（２１０〜４００ｎｍ）を備えたＰｒｅｐ  ＬＣコントローラーＷａｔｅｒｓクォータナリポンプを装備している。
【００９３】
ＭＳパラメータ：ＥＳＩキャピラリー電圧３ｋＶ。コーンおよび抽出器電圧１０。ソースブロック温度１２０℃。脱溶媒和温度３００℃。コーンガス流３０Ｌ／時間（窒素）、脱溶媒ガス流６５０Ｌ／時間。データは、酸性または塩基性溶出のポジティブモードでｍ／ｚ１００〜７００のフルＭＳスキャンで取得する。
【００９４】
ＬＣパラメータ：逆相分離は、ＸＢｒｉｄｇｅ  ｐｒｅｐ  ＯＢＤ  Ｃ１８カラム（５μｍ、３０×５０ｍｍ）（塩基性溶出）でｒｔで実施する。勾配溶出は、水（溶媒Ａ）、ＡＣＮ（溶媒Ｂ）、水中重炭酸アンモニウム８ｇ／Ｌ＋５００μＬ／Ｌ  ＮＨ４ＯＨ３０％（溶媒Ｃ）（ｐＨ約８．５）を使用して行う。ＨＰＬＣ流量：３５ｍＬ／分〜６０ｍＬ／分、注入量：１ｍＬ。分割比をＭＳに対して＋／−１／６０００に設定する。
【表５】
2020526532.tif 000018
【００９５】
３６０ｍＬ／分で低級アルコールとＣ５〜Ｃ８の直鎖、分岐または環状アルカンの種々の混合物により液相クロマトグラフィーまたは超臨界流体クロマトグラフィー（ＳＦＣ）機器を使用して、分取キラルクロマトグラフィー分離を実施する。溶媒混合物ならびにカラムについては、個々の手順で記載する。
【００９６】
生成物は一般的に、最終分析および生物学的試験を受けさせる前に真空下で乾燥させた。
【００９７】
ＮＭＲスペクトルは、Ｔｏｐｓｐｉｎ  ３．２ソフトウェアを実行するＷｉｎｄｏｗｓ  ７  Ｐｒｏｆｅｓｓｉｏｎａｌワークステーションおよび５ｍｍ  Ｄｏｕｂｌｅ  Ｒｅｓｏｎａｎｃｅ  Ｂｒｏａｄｂａｎｄ  Ｐｒｏｂｅ（ＰＡＢＢＩ  １Ｈ／１９Ｆ−ＢＢ  Ｚ−ＧＲＤ  Ｚ８２０２１／００７５）または１ｍｍ  Ｔｒｉｐｌｅ  Ｒｅｓｏｎａｎｃｅ  Ｐｒｏｂｅ（ＰＡＴＸＩ  １Ｈ／Ｄ−１３Ｃ／１５Ｎ  Ｚ−ＧＲＤ  Ｚ８６８３０１／００４）を搭載したＢＲＵＫＥＲ  ＡＶＡＮＣＥＩＩＩ  ４００ＭＨｚ−Ｕｌｔｒａｓｈｉｅｌｄ  ＮＭＲ分光計で記録する。化合物を、プローブ温度３００Ｋおよび濃度１０ｍｇ／ｍＬで、ＤＭＳＯ−ｄ６またはＣＤＣｌ３溶液で試験した。機器をＤＭＳＯ−ｄ６またはＣＤＣｌ３の重水素シグナルでロックする。化学シフトを、内部標準として使用されるＴＭＳ（テトラメチルシラン）からのｐｐｍ低磁場で示す。
【００９８】
旋光度（［α］Ｄ）は、キュベット（ｌ＝１ｄｍ）内でＰＥＲＫＩＮ−ＥＬＭＥＲ偏光計３４１で、１０ｍｇ／ｍＬの濃度で、具体例に記載される温度で、５８９ｎｍ（ナトリウムランプ）で測定した。
【００９９】
以下の例は、式（Ｉ）によって網羅される化合物をどのように合成できるかを示す。これらは、例示の目的のためだけに提供されており、いかなる形でも本発明を限定するものとして意図されておらず、また解釈されるべきではない。当業者は、本発明の精神または範囲を超えることなく、以下の例の日常的な変更および修正を行うことができることを理解するであろう。
【０１００】
例１．（＋）−３−［［２−（メトキシメチル）−６−（トリフルオロメチル）イミダゾ［２，１−ｂ］［１，３，４］チアジアゾール−５−イル］メチル］−５−プロピル−オキサゾリジン−２−オン１および（−）−３−［［２−（メトキシメチル）−６−（トリフルオロメチル）イミダゾ［２，１−ｂ］［１，３，４］チアジアゾール−５−イル］メチル］−５−プロピル−オキサゾリジン−２−オン２の合成
【化１２】
2020526532.tif 000019
１．１  １−ニトロペンタン−２−オールＩの合成
ニトロメタン（９５ｍＬ）中ブチルアルデヒド（ＣＡＳ：１２３−７２−８、１当量、５．０ｇ、６９．３ｍｍｏｌ）と炭酸カリウム（１当量、９．６８ｇ、６９．３ｍｍｏｌ）の混合物を５０℃で５時間撹拌した。混合物を室温に冷却し、酢酸エチルを添加した（１００ｍＬ）。有機層を水で洗浄し（２回）、ＭｇＳＯ４上で乾燥させ、濾過し、蒸発乾固して褐色油を得た。粗混合物をフラッシュクロマトグラフィーＢｉｏｔａｇｅ  Ｉｓｏｌｅｒａ  Ｆｏｕｒ（１２ＣＶで１００％ジクロロメタンを使用する１００ｇ  ＫＰ−ＳＮＡＰシリカゲルカラム）によって精製し、純粋な画分を蒸発乾固すると、１−ニトロペンタン−２−オールＩ（４．７ｇ、３５．０ｍｍｏｌ）が無色油として得られた。
収率：５１％
【数１】
2020526532.tif 000020
【０１０１】
１．２  １−アミノペンタン−２−オールＩＩの合成
１−ニトロペンタン−２−オールＩ（１当量、２００ｍｇ、１．５ｍｍｏｌ）のエタノール（８ｍＬ）中溶液を、Ｈ−Ｃｕｂｅ反応器内Ｈ２圧力（５０ｂａｒ）下、５０℃で、１０％Ｐｄ／Ｃカートリッジで、１時間水素化した（流量：１ｍＬ／分、７．５サイクル）。粗混合物を蒸発乾固し、高真空下で乾燥さると、１−アミノペンタン−２−オールＩＩ（１４０ｍｇ、１．２２ｍｍｏｌ）が無色油として得られた。得られた粗化合物をさらに精製することなく次のステップに直接使用した。
収率：８１％
【数２】
2020526532.tif 000021
【０１０２】
１．３  ５−プロピルオキサゾリジン−２−オンＩＩＩの合成
１−アミノペンタン−２−オールＩＩ（１当量、１．０ｇ、９．２ｍｍｏｌ）および１，１’−カルボニルジイミダゾール（１当量、１．６ｇ、９．７ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（２０ｍＬ）中溶液に、水素化ナトリウム（０．１当量、２３ｍｇ、０．９２ｍｍｏｌ）を添加し、混合物を２５℃で２４時間撹拌した。酢酸エチルおよび水を反応混合物に添加し、水層を酢酸エチルで抽出し（２回）、水および食塩水で洗浄し、ＭｇＳＯ４上で乾燥させ、濾過し、蒸発乾固して黄色油を得た。粗生成物をフラッシュクロマトグラフィーＢｉｏｔａｇｅ  Ｉｓｏｌｅｒａ  Ｆｏｕｒ（１０ＣＶでジクロロメタン中０％〜１０％メタノールの勾配の５０ｇ  ＫＰ−ＳＮＡＰシリカゲルカラム）によって精製し、純粋な画分を蒸発乾固すると、５−プロピルオキサゾリジン−２−オンＩＩＩ（９９０ｍｇ、７．５９ｍｍｏｌ）が白色固体として得られた。
収率：８２％
【数３】
2020526532.tif 000022
【０１０３】
１．４  ［２−（メトキシメチル）−６−（トリフルオロメチル）イミダゾ［２，１−ｂ］［１，３，４］チアジアゾール−５−イル］メタノールＶの合成
密封管内で、２−（メトキシメチル）−６−（トリフルオロメチル）イミダゾ［２，１−ｂ］［１，３，４］チアジアゾールＩＶ（ＣＡＳ：１２９４００１−１６−３、特許出願、国際公開第２０１２／１４３１１７号パンフレット、１当量、２．０ｇ、８．４ｍｍｏｌ）、パラホルムアルデヒド（６．０当量、１．５２ｇ、５０．６ｍｍｏｌ）および塩酸の水溶液（２Ｎ）（１．０当量、４．２ｍＬ、８．４ｍｍｏｌ）を１，４−ジオキサン（４ｍＬ）中で混合した。混合物を１００℃で１８時間撹拌し、反応をＬＣ／ＭＳによって確認した。粗混合物をＲＴに冷却し、ＮａＨＣＯ３の飽和水溶液をｐＨ＝６〜７になるまで添加した。水層を酢酸エチルで抽出し（３回）、合わせた有機層を食塩水で洗浄し、ＭｇＳＯ４上で乾燥させ、濾過し、蒸発乾固した。粗生成物をフラッシュクロマトグラフィーＢｉｏｔａｇｅ  Ｉｓｏｌｅｒａ  Ｆｏｕｒ（１５ＣＶでジクロロメタン中０％〜１０％メタノールの勾配の１００ｇ  ＫＰ−ＳＮＡＰシリカゲルカラム）によって精製すると、［２−（メトキシメチル）−６−（トリフルオロメチル）イミダゾ［２，１−ｂ］［１，３，４］チアジアゾール−５−イル］メタノール（１．０６ｇ、３．５ｍｍｏｌ）Ｖがベージュ色固体として得られた。化合物をさらに精製することなく次のステップに直接使用した。
収率：４１％
【数４】
2020526532.tif 000023
【０１０４】
１．５  （＋）−３−［［２−（メトキシメチル）−６−（トリフルオロメチル）イミダゾ［２，１−ｂ］［１，３，４］チアジアゾール−５−イル］メチル］−５−プロピル−オキサゾリジン−２−オン１および（−）−３−［［２−（メトキシメチル）−６−（トリフルオロメチル）イミダゾ［２，１−ｂ］［１，３，４］チアジアゾール−５−イル］メチル］−５−プロピル−オキサゾリジン−２−オン２の合成
スルホラン（３ｍＬ）中［２−（メトキシメチル）−６−（トリフルオロメチル）イミダゾ［２，１−ｂ］［１，３，４］チアジアゾール−５−イル］メタノールＶ（１当量、２００ｍｇ、０．７４ｍｍｏｌ）と５−プロピルオキサゾリジン−２−オンＩＩＩ（２当量、１９０ｍｇ、１．４８ｍｍｏｌ）の混合物に、ｐ−トルエンスルホン酸一水和物（１当量、１５２ｍｇ、０．７４ｍｍｏｌ）を添加し、混合物を１１０℃で１６時間撹拌した。粗混合物を逆相分取ＨＰＬＣ（塩基性条件）によって直接精製してベージュ色固体（ラセミ体１５５ｍｇ）を得て、これをキラルＳＦＣ（Ｐｈａｓｅ  ＷｈｅｌｋＯ１（Ｒ，Ｒ）、５０ｘ２２７ｍｍ／ＣＯ２／ＥｔＯＨ共溶媒２０％／３０℃／３６０ｍＬ／分）によって精製した。最も純粋な画分を蒸発乾固すると、（＋）−３−［［２−（メトキシメチル）−６−（トリフルオロメチル）イミダゾ［２，１−ｂ］［１，３，４］チアジアゾール−５−イル］メチル］−５−プロピル−オキサゾリジン−２−オン１（最初に溶出、５６ｍｇ、０．１５ｍｍｏｌ）および（−）−３−［［２−（メトキシメチル）−６−（トリフルオロメチル）イミダゾ［２，１−ｂ］［１，３，４］チアジアゾール−５−イル］メチル］−５−プロピル−オキサゾリジン−２−オン２（２番目に溶出、５６ｍｇ、０．１５ｍｍｏｌ）が無色油として得られた。
収率：２０％
【数５】
2020526532.tif 000024
α−Ｄ（１、ＭｅＯＨ、１０ｍｇ／ｍＬ、２６．５℃）＝＋２７．０
α−Ｄ（２、ＭｅＯＨ、１０ｍｇ／ｍＬ、２６．５℃）＝−２６．２
【０１０５】
例２．（＋）−３−［［６−（ジフルオロメチル）−２−（メトキシメチル）イミダゾ［２，１−ｂ］［１，３，４］チアジアゾール−５−イル］メチル］−５−プロピル−オキサゾリジン−２−オン３および（−）−３−［［６−（ジフルオロメチル）−２−（メトキシメチル）イミダゾ［２，１−ｂ］［１，３，４］チアジアゾール−５−イル］メチル］−５−プロピル−オキサゾリジン−２−オン４
【化１３】
2020526532.tif 000025
１．５  ６−（ジフルオロメチル）−２−（メトキシメチル）イミダゾ［２，１ｂ］［１，３，４］チアジアゾールＶＩＩの合成
５−（メトキシメチル）−１，３，４−チアジアゾール−２−アミンＶＩ（ＣＡＳ：１５８８４−８６−３、１．０当量、６．５ｇ、４５ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（１００ｍＬ）中溶液、１００℃に、３−ブロモ−１，１−ジフルオロ−プロパン−２−オン（ＣＡＳ：８８３２３３−８５−０、１．０５当量、８．１ｇ、４７ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（５ｍＬ）中溶液を滴加した。反応混合物を１００℃で３時間加熱し、完了をＬＣ／ＭＳによって確認した。飽和ＮａＨＣＯ３水溶液を添加し、有機層を酢酸エチルで抽出した（３回）。合わせた有機層を水で洗浄し（５回）、ＭｇＳＯ４上で乾燥させ、濾過し、蒸発乾固して茶色固体（７．６ｇ）を得た。粗生成物をフラッシュクロマトグラフィーＢｉｏｔａｇｅ  Ｉｓｏｌｅｒａ  Ｆｏｕｒ（１２ＣＶでジクロロメタン中０％〜５％メタノールの勾配の１００ｇ  ＫＰ−ＳＮＡＰシリカゲルカラム）によって精製し、純粋な画分を高真空下で蒸発させると、６−（ジフルオロメチル）−２−（メトキシメチル）イミダゾ［２，１−ｂ］［１，３，４］チアジアゾールＶＩＩ（３．９５ｇ、１７．８ｍｍｏｌ）がオレンジ色固体として得られた。
収率：４０％
【数６】
2020526532.tif 000026
【０１０６】
１．６  ［６−（ジフルオロメチル）−２−（メトキシメチル）イミダゾ［２，１−ｂ］［１，３，４］チアジアゾール−５−イル］メタノールＶＩＩＩの合成
密封管内で、６−（ジフルオロメチル）−２−（メトキシメチル）イミダゾ［２，１−ｂ］［１，３，４］チアジアゾールＶＩＩ（１．０当量、３．９５ｇ、１８．０ｍｍｏｌ）、パラホルムアルデヒド（６．０当量、３．２４ｇ、１０８ｍｍｏｌ）および塩酸水溶液（２Ｎ）（０．９当量、８．１ｍＬ、１６．２ｍｍｏｌ）を１，４−ジオキサン（８ｍＬ）中で混合した。混合物を１００℃で３．５時間撹拌し、反応をＬＣ／ＭＳによって確認した。粗混合物をＲＴに冷却し、ＮａＨＣＯ３の飽和水溶液をｐＨ＝６〜７になるまで添加した。水層を酢酸エチルで抽出し（３回）、合わせた有機層を食塩水で洗浄し、ＭｇＳＯ４上で乾燥させ、濾過し、蒸発乾固した。粗生成物をフラッシュクロマトグラフィーＢｉｏｔａｇｅ  Ｉｓｏｌｅｒａ  Ｆｏｕｒ（１５ＣＶでジクロロメタン中０％〜１０％メタノールの勾配の１００ｇ  ＫＰ−ＳＮＡＰシリカゲルカラム）によって精製して黄色油（３ｇ）を得て、これを逆相ＨＰＬＣ（ＫＲＯＭＡＳＩＬ−Ｅｔｅｒｎｉｔｙ  ＸＴ  Ｃ１８  １０μｍ／２０／８０／０．１〜５０／５０／０．１のＡＣＮ／Ｈ２Ｏ／ＮＨ４ＯＨ勾配）によって再度精製した。最も純粋な画分を蒸発乾固すると、［６−（ジフルオロメチル）−２−（メトキシメチル）イミダゾ［２，１−ｂ］［１，３，４］チアジアゾール−５−イル］メタノールＶＩＩＩ（２ｇ、８．０２ｍｍｏｌ）が白色固体として得られた。
収率：４５％
【数７】
2020526532.tif 000027
【０１０７】
１．７．（＋）−３−［［６−（ジフルオロメチル）−２−（メトキシメチル）イミダゾ［２，１−ｂ］［１，３，４］チアジアゾール−５−イル］メチル］−５−プロピル−オキサゾリジン−２−オン３および（−）−３−［［６−（ジフルオロメチル）−２−（メトキシメチル）イミダゾ［２，１−ｂ］［１，３，４］チアジアゾール−５−イル］メチル］−５−プロピル−オキサゾリジン−２−オン４の合成
スルホラン（３ｍＬ）中［６−（ジフルオロメチル）−２−（メトキシメチル）イミダゾ［２，１−ｂ］［１，３，４］チアジアゾール−５−イル］メタノールＶＩＩＩ（１当量、２００ｍｇ、０．８ｍｍｏｌ）と５−プロピルオキサゾリジン−２−オンＩＩＩ（２当量、２０６ｍｇ、１．６ｍｍｏｌ）の混合物に、ｐ−トルエンスルホン酸一水和物（１当量、１５２ｍｇ、０．８ｍｍｏｌ）を添加し、混合物を１１０℃で３．５時間撹拌した。粗混合物を逆相分取ＨＰＬＣ（塩基性条件）によって直接精製してベージュ色固体（ラセミ体２１６ｍｇ）を得て、これをキラルＳＦＣ（Ｐｈａｓｅ  ＷｈｅｌｋＯ１（Ｒ，Ｒ）、５０×２２７ｍｍ／ＣＯ２／ＥｔＯＨ共溶媒２０％／３０℃／３６０ｍＬ／分）によって精製した。最も純粋な画分を蒸発乾固すると、（＋）−３−［［６−（ジフルオロメチル）−２−（メトキシメチル）イミダゾ［２，１−ｂ］［１，３，４］チアジアゾール−５−イル］メチル］−５−プロピル−オキサゾリジン−２−オン３（最初に溶出、５４ｍｇ、０．１５ｍｍｏｌ、収率１９％）および（−）−３−［［６−（ジフルオロメチル）−２−（メトキシメチル）イミダゾ［２，１−ｂ］［１，３，４］チアジアゾール−５−イル］メチル］−５−プロピル−オキサゾリジン−２−オン４（２番目に溶出、５２ｍｇ、０．１４ｍｍｏｌ、収率１８％）が無色油として得られた。
収率：１９％（３）および１８％（４）
【数８】
2020526532.tif 000028
α−Ｄ（３、ＭｅＯＨ、１０ｍｇ／ｍＬ、２７．７℃）＝＋１７．２
【０１０８】
例３．（＋）−３−［［２−［ジジュウテリオ（メトキシ）メチル］−６−（トリフルオロメチル）イミダゾ［２，１−ｂ］［１，３，４］チアジアゾール−５−イル］メチル］−５−プロピル−オキサゾリジン−２−オン５および（−）−３−［［２−［ジジュウテリオ（メトキシ）メチル］−６−（トリフルオロメチル）イミダゾ［２，１−ｂ］［１，３，４］チアジアゾール−５−イル］メチル］−５−プロピル−オキサゾリジン−２−オン６の合成
【化１４】
2020526532.tif 000029
３．１  ［２−［ジジュウテリオ（メトキシ）メチル］−６−（トリフルオロメチル）イミダゾ［２，１−ｂ］［１，３，４］チアジアゾール−５−イル］メタノールＸの合成
２−［ジジュウテリオ（メトキシ）メチル］−６−（トリフルオロメチル）イミダゾ［２，１−ｂ］［１，３，４］チアジアゾールＩＸ（国際公開第２０１１０４７８６０号パンフレット、１．０当量、１．２５ｇ、５．２４ｍｍｏｌ）、パラホルムアルデヒド（６．０当量、９４３ｍｇ、３１．４５ｍｍｏｌ）および塩酸（１．０当量、２．６ｍＬ、５．２４ｍｍｏｌ）の１，４−ジオキサン（２．６ｍＬ）中溶液を１００℃で１８時間撹拌した。飽和ＮａＨＣＯ３水溶液を添加し、水層を酢酸エチルで抽出した（３回）。合わせた有機層を食塩水で洗浄し、ＭｇＳＯ４上で乾燥させ、濾過し、蒸発乾固して黄色油を得た。得られた粗生成物をフラッシュクロマトグラフィーＢｉｏｔａｇｅ  Ｉｓｏｌｅｒａ  Ｆｏｕｒ（１５ＣＶで１００％ジクロロメタンからジクロロメタン中１０％メタノールの５０ｇ  ＫＰ−ＳＮＡＰシリカゲルカラム）によって精製して褐色固体を得て、これを塩基性モードの逆相クロマトグラフィーを介して精製した。最も純粋な画分を蒸発乾固すると、［２−［ジジュウテリオ（メトキシ）メチル］−６−（トリフルオロメチル）イミダゾ［２，１−ｂ］［１，３，４］チアジアゾール−５−イル］メタノールＸ（４７５ｍｇ、１．７３ｍｍｏｌ）が白色固体として得られた。
収率：３３％
【数９】
2020526532.tif 000030
【０１０９】
３．２  （＋）−３−［［２−［ジジュウテリオ（メトキシ）メチル］−６−（トリフルオロメチル）イミダゾ［２，１−ｂ］［１，３，４］チアジアゾール−５−イル］メチル］−５−プロピル−オキサゾリジン−２−オン５および（−）−３−［［２−［ジジュウテリオ（メトキシ）メチル］−６−（トリフルオロメチル）イミダゾ［２，１−ｂ］［１，３，４］チアジアゾール−５−イル］メチル］−５−プロピル−オキサゾリジン−２−オン６の合成
スルホラン（０．２Ｍ、３．５ｍＬ）中［２−［ジジュウテリオ（メトキシ）メチル］−６−（トリフルオロメチル）イミダゾ［２，１−ｂ］［１，３，４］チアジアゾール−５−イル］メタノールＸ（１．０当量、２００ｍｇ、０．７４ｍｍｏｌ）と５−プロピルオキサゾリジン−２−オンＩＩＩ（２．０当量、１９０ｍｇ、１．４７ｍｍｏｌ）の混合物に、ｐ−トルエンスルホン酸一水和物（１．０当量、１４０ｍｇ、０．７３ｍｍｏｌ）を添加し、混合物を１１０℃で１６時間撹拌した。粗生成物を塩基性条件下で逆相クロマトグラフィーによって直接精製して黄色油（１７２ｍｇ）を得た。エナンチオマーの混合物をキラルＳＦＣ（Ｗ（３μｍ）＊ＥｔＯＨ５０％−ヘプタン５０％−ＤＥＡ０．１％）を介して精製すると、（＋）−３−［［２−［ジジュウテリオ（メトキシ）メチル］−６−（トリフルオロメチル）イミダゾ［２，１−ｂ］［１，３，４］チアジアゾール−５−イル］メチル］−５−プロピル−オキサゾリジン−２−オン５（７５ｍｇ、０．２０ｍｍｏｌ）および（−）−３−［［２−［ジジュウテリオ（メトキシ）メチル］−６−（トリフルオロメチル）イミダゾ［２，１−ｂ］［１，３，４］チアジアゾール−５−イル］メチル］−５−プロピル−オキサゾリジン−２−オン６（７２ｍｇ、０．１９ｍｍｏｌ）が無色油として得られた。
全体収率：５２％（２６．５％＋２５．５％）
【数１０】
2020526532.tif 000031
α−Ｄ（５、ＭｅＯＨ、１０ｍｇ／ｍＬ、２５℃）＝＋１７．６
【０１１０】
例４．（＋）−３−［［２−［ジジュウテリオ（トリジュウテリオメトキシ）メチル］−６−（トリフルオロメチル）イミダゾ［２，１−ｂ］［１，３，４］チアジアゾール−５−イル］メチル］−５−プロピル−オキサゾリジン−２−オン７および（−）−３−［［２−［ジジュウテリオ（トリジュウテリオメトキシ）メチル］−６−（トリフルオロメチル）イミダゾ［２，１−ｂ］［１，３，４］チアジアゾール−５−イル］メチル］−５−プロピル−オキサゾリジン−２−オン８の合成
【化１５】
2020526532.tif 000032
４．１  −［ジジュウテリオ（トリジュウテリオメトキシ）メチル］−６−（トリフルオロメチル）イミダゾ［２，１−ｂ］［１，３，４］チアジアゾールＸＩＩの合成
ジジュウテリオ−［６−（トリフルオロメチル）イミダゾ［２，１−ｂ］［１，３，４］チアジアゾール−２−イル］メタノールＸＩ（国際公開第２０１１０４７８６０号パンフレット、１．０当量、３．２５ｇ、１３．０ｍｍｏｌ）のメタノール（１００ｍＬ）中溶液に、室温で酸化銀（１．３当量、３．９ｇ、１６．９ｍｍｏｌ）およびヨードメタン−ｄ３（４．０当量、３．２３ｍＬ、５２．０ｍｍｏｌ）を添加した。反応混合物を４０℃で２０時間撹拌した。次いで、混合物をＣｅｌｉｔｅパッドを通して濾過し、蒸発乾固した。飽和ＮａＨＣＯ３水溶液を添加し、水層を酢酸エチルで抽出した（３回）。合わせた有機層をＭｇＳＯ４上で乾燥させ、濾過し、蒸発乾固して黄色油を得て、これをフラッシュクロマトグラフィーＢｉｏｔａｇｅ  Ｉｓｏｌｅｒａ  Ｆｏｕｒ（１５ＣＶで１００％ジクロロメタンからジクロロメタン中５％メタノールの１００ｇ  ＫＰ−ＳＮＡＰシリカゲルカラム）によって精製すると、２−［ジジュウテリオ（トリジュウテリオメトキシ）メチル］−６−（トリフルオロメチル）イミダゾ［２，１−ｂ］［１，３，４］チアジアゾールＸＩＩ（２．１１ｇ、７．４ｍｍｏｌ）が白色固体として得られた。
収率：５７％
【数１１】
2020526532.tif 000033
【０１１１】
４．２  ［２−［ジジュウテリオ（トリジュウテリオメトキシ）メチル］−６−（トリフルオロメチル）イミダゾ［２，１−ｂ］［１，３，４］チアジアゾール−５−イル］メタノールＸＩＩＩの合成
２−［ジジュウテリオ（トリジュウテリオメトキシ）メチル］−６−（トリフルオロメチル）イミダゾ［２，１−ｂ］［１，３，４］チアジアゾールＸＩＩ（１．０当量、１．０ｇ、４．１ｍｍｏｌ）、パラホルムアルデヒド（６．０当量、７４３ｍｇ、２４．７ｍｍｏｌ）および塩酸（１．０当量、４．１ｍｍｏｌ、２．０ｍＬ）の１，４−ジオキサン（２ｍＬ）中溶液を１００℃で１８時間撹拌した。飽和ＮａＨＣＯ３水溶液を添加し、水層を酢酸エチルで抽出した（３回）。合わせた有機層を食塩水で洗浄し、ＭｇＳＯ４上で乾燥させ、濾過し、蒸発乾固して黄色油を得て、これを塩基性モードの逆相クロマトグラフィーを介して精製した。最も純粋な画分を蒸発乾固すると、［２−［ジジュウテリオ（トリジュウテリオメトキシ）メチル］−６−（トリフルオロメチル）イミダゾ［２，１−ｂ］［１，３，４］チアジアゾール−５−イル］メタノールＸＩＩＩ（５６０ｍｇ、１．９７ｍｍｏｌ）が白色固体として得られた。
収率：４８％
【数１２】
2020526532.tif 000034
【０１１２】
４．３  （＋）−３−［［２−［ジジュウテリオ（トリジュウテリオメトキシ）メチル］−６−（トリフルオロメチル）イミダゾ［２，１−ｂ］［１，３，４］チアジアゾール−５−イル］メチル］−５−プロピル−オキサゾリジン−２−オン７および（−）−３−［［２−［ジジュウテリオ（トリジュウテリオメトキシ）メチル］−６−（トリフルオロメチル）イミダゾ［２，１−ｂ］［１，３，４］チアジアゾール−５−イル］メチル］−５−プロピル−オキサゾリジン−２−オン８の合成
スルホラン（０．２Ｍ、３．５ｍＬ）中［２−［ジジュウテリオ（トリジュウテリオメトキシ）メチル］−６−（トリフルオロメチル）イミダゾ［２，１−ｂ］［１，３，４］チアジアゾール−５−イル］メタノールＸＩＩＩ（１．０当量、２００ｍｇ、０．７３ｍｍｏｌ）と５−プロピルオキサゾリジン−２−オンＩＩＩ（２．０当量、１９０ｍｇ、１．４７ｍｍｏｌ）の混合物に、ｐ−トルエンスルホン酸一水和物（１．０当量、１０１ｍｇ、０．５３ｍｍｏｌ）を添加し、混合物を１１０℃で１６時間撹拌した。粗生成物を塩基性条件下で逆相クロマトグラフィーによって精製して黄色油（１７５ｍｇ）を得た。エナンチオマーの混合物をキラルＳＦＣ（Ｗ（３μｍ）＊ＥｔＯＨ５０％−ヘプタン５０％−ＤＥＡ０．１％）によって精製すると、（＋）−３−［［２−［ジジュウテリオ（トリジュウテリオメトキシ）メチル］−６−（トリフルオロメチル）イミダゾ［２，１−ｂ］［１，３，４］チアジアゾール−５−イル］メチル］−５−プロピル−オキサゾリジン−２−オン７（４７ｍｇ、０．１２ｍｍｏｌ）および（−）−３−［［２−［ジジュウテリオ（トリジュウテリオメトキシ）メチル］−６−（トリフルオロメチル）イミダゾ［２，１−ｂ］［１，３，４］チアジアゾール−５−イル］メチル］−５−プロピル−オキサゾリジン−２−オン８（５１ｍｇ、０．１３ｍｍｏｌ）が透明な油として得られた。
全体収率：３５％（１７％＋１８％）
【数１３】
2020526532.tif 000035
α−Ｄ（７、ＭｅＯＨ、１０ｍｇ／ｍＬ、２５℃）＝＋２６．９
【０１１３】
例５．（＋）−３−［［２−（メトキシメチル）−６−（トリフルオロメチル）イミダゾ［２，１−ｂ］［１，３，４］チアジアゾール−５−イル］メチル］−５−（２，２，２−トリフルオロエチル）オキサゾリジン−２−オン９および（−）−３−［［２−（メトキシメチル）−６−（トリフルオロメチル）イミダゾ［２，１−ｂ］［１，３，４］チアジアゾール−５−イル］メチル］−５−（２，２，２−トリフルオロエチル）オキサゾリジン−２−オン１０の合成
【化１６】
2020526532.tif 000036
５．１  ４，４，４−トリフルオロ−１−ニトロ−ブタン−２−オールＸＩＶの合成
３，３，３−トリフルオロプロパナール（１．０当量、５．０ｇ、４４．６２ｍｍｏｌ）、炭酸カリウム（１．０当量、６．２ｇ、４４ｍｍｏｌ）およびニトロメタン（３０当量、６０．２ｍＬ、１３４０ｍｍｏｌ）の混合物を５０℃で５時間撹拌した。混合物を室温に冷却し、水および酢酸エチルで希釈した。水層を酢酸エチルで抽出し（３回）、合わせた有機層を水で洗浄し（２回）、ＭｇＳＯ４上で乾燥させ、濾過し、蒸発乾固した。粗生成物をフラッシュクロマトグラフィーＢｉｏｔａｇｅ  Ｉｓｏｌｅｒａ  Ｆｏｕｒ（１００ｇ  ＫＰ−ＳＮＡＰシリカゲルカラム勾配：１０ＣＶで１００％ジクロロメタン）によって精製した。最も純粋な画分を蒸発乾固すると、４，４，４−トリフルオロ−１−ニトロ−ブタン−２−オールＸＩＶ（３．８ｇ、２２ｍｍｏｌ）が無色油として得られた。
収率：４９％
【数１４】
2020526532.tif 000037
【０１１４】
５．２  １−アミノ−４，４，４−トリフルオロ−ブタン−２−オールＸＶの合成
エタノール（１４０ｍＬ）中４，４，４−トリフルオロ−１−ニトロ−ブタン−２−オールＸＩＶ（１．０当量、４．８ｇ、２８ｍｍｏｌ）の混合物を、ラネーＮｉカートリッジを備えたＨキューブ反応器を使用して水素化した（流量１ｍＬ／分、５０℃、５０ｂａｒ）。混合物を蒸発乾固すると、１−アミノ−４，４，４−トリフルオロ−ブタン−２−オールＸＶ（２．５ｇ、１７ｍｍｏｌ）が無色油として得られた。
収率：６３％
【数１５】
2020526532.tif 000038
【０１１５】
５．３  ５−（２，２，２−トリフルオロエチル）オキサゾリジン−２−オンＸＶＩの合成
ＴＨＦ（３５ｍＬ）中１−アミノ−４，４，４−トリフルオロ−ブタン−２−オールＸＶ（１．０当量、２．５ｇ、１７ｍｍｏｌ）と１，１’−カルボニルジイミダゾール（１．０当量、２．９ｇ、１８ｍｍｏｌ）の混合物に水素化ナトリウム（０．１当量、４２ｍｇ、１．７５ｍｍｏｌ）を添加し、混合物を２５℃で１６時間撹拌した。水数滴を添加し（ＮａＨ中和）、混合物を直接蒸発乾固し、塩基性モードの逆相クロマトグラフィーによって精製すると、５−（２，２，２−トリフルオロエチル）オキサゾリジン−２−オンＸＶＩ（２．２５ｇ、１３．２ｍｍｏｌ）が白色固体として得られた。
収率：７５％
【数１６】
2020526532.tif 000039
【０１１６】
５．４  （＋）−３−［［２−（メトキシメチル）−６−（トリフルオロメチル）イミダゾ［２，１−ｂ］［１，３，４］チアジアゾール−５−イル］メチル］−５−（２，２，２−トリフルオロエチル）オキサゾリジン−２−オン９および（−）−３−［［２−（メトキシメチル）−６−（トリフルオロメチル）イミダゾ［２，１−ｂ］［１，３，４］チアジアゾール−５−イル］メチル］−５−（２，２，２−トリフルオロエチル）オキサゾリジン−２−オン１０の合成
スルホラン（０．５Ｍ、３．７ｍＬ）中［２−（メトキシメチル）−６−（トリフルオロメチル）イミダゾ［２，１−ｂ］［１，３，４］チアジアゾール−５−イル］メタノールＶ（１．０当量、２００ｍｇ、０．７５ｍｍｏｌ）と５−（２，２，２−トリフルオロエチル）オキサゾリジン−２−オンＸＶＩ（１．８当量、２２７ｍｇ、１．３４ｍｍｏｌ）の混合物に、ｐ−トルエンスルホン酸一水和物（１．０当量、１４２ｍｇ、０．７５ｍｍｏｌ）を添加し、混合物を１１０℃で３時間３０分間撹拌した。混合物を塩基性条件下で逆相クロマトグラフィーを介して直接精製して黄色油（２５０ｍｇ）を得た。得られたエナンチオマーの混合物をキラル分取ＨＰＬＣ（ＡＳ＊ＥｔＯＨ５０％−ヘプタン５０％−ＤＥＡ０．１％）によって精製すると、（＋）−３−［［２−（メトキシメチル）−６−（トリフルオロメチル）イミダゾ［２，１−ｂ］［１，３，４］チアジアゾール−５−イル］メチル］−５−（２，２，２−トリフルオロエチル）オキサゾリジン−２−オン９（２９ｍｇ、０．０７ｍｍｏｌ）および（−）−３−［［２−（メトキシメチル）−６−（トリフルオロメチル）イミダゾ［２，１−ｂ］［１，３，４］チアジアゾール−５−イル］メチル］−５−（２，２，２−トリフルオロエチル）オキサゾリジン−２−オン１０（３０ｍｇ、０．０７ｍｍｏｌ）が得られた。
全体収率：１９％（９．３％＋９．６％）
【数１７】
2020526532.tif 000040
α−Ｄ（９、ＭｅＯＨ、１０ｍｇ／ｍＬ、２５℃）＝＋１３．０
【０１１７】
（＋）−３−［［６−（ジフルオロメチル）−２−（メトキシメチル）イミダゾ［２，１−ｂ］［１，３，４］チアジアゾール−５−イル］メチル］−５−（２，２，２−トリフルオロエチル）オキサゾリジン−２−オン１１および（−）−３−［［６−（ジフルオロメチル）−２−（メトキシメチル）イミダゾ［２，１−ｂ］［１，３，４］チアジアゾール−５−イル］メチル］−５−（２，２，２−トリフルオロエチル）オキサゾリジン−２−オン１２を、５−（２，２，２−トリフルオロエチル）オキサゾリジン−２−オンＸＶＩおよび［６−（ジフルオロメチル）−２−（メトキシメチル）イミダゾ［２，１−ｂ］［１，３，４］チアジアゾール−５−イル］メタノールＶＩＩＩから出発して同じ手順に従って合成する。
全体収率：１４％（７．８％＋６．２％）
【数１８】
2020526532.tif 000041
α−Ｄ（１１、ＭｅＯＨ、１０ｍｇ／ｍＬ、２５℃）＝＋３．６
【０１１８】
例６．（−）−３−［［２−（メトキシメチル）−６−（トリフルオロメチル）イミダゾ［２，１−ｂ］［１，３，４］チアジアゾール−５−イル］メチル］−５−（２，２，２−トリフルオロエチル）オキサゾリジン−２−オン１３および（＋）−３−［［２−（メトキシメチル）−６−（トリフルオロメチル）イミダゾ［２，１−ｂ］［１，３，４］チアジアゾール−５−イル］メチル］−５−（２，２，２−トリフルオロエチル）オキサゾリジン−２−オン１４の合成
【化１７】
2020526532.tif 000042
６．１  ４，４−ジフルオロ−１−ニトロ−ペンタン−２−オールＸＶＩＩの合成
３，３−ジフルオロブタン−１−オール（１．０当量、１．５ｇ、９．８ｍｍｏｌ）のジクロロメタン（５０ｍＬ）中溶液に、０℃でデスマーチンペルヨージナン（１．２当量、５．１ｇ、１２ｍｍｏｌ）を添加し、反応混合物を０℃で２時間撹拌した。次いで、粗混合物を−７８℃に冷却し、濾過し、得られた固体を冷ジクロロメタン（−７８℃）で洗浄した。室温で加温した得られた濾液に、炭酸カリウム（１５．０当量、２１ｇ、１５０ｍｍｏｌ）およびニトロメタン（３０．０当量、１８ｇ、２９０ｍｍｏｌ）を添加し、混合物を４５℃で２時間撹拌した。粗混合物をＣｅｌｉｔｅで濾過し、得られた濾液を真空下３０℃で濃縮して、黄色ガムを得た。得られたガムをフラッシュクロマトグラフィーＢｉｏｔａｇｅ  Ｉｓｏｌｅｒａ  Ｆｏｕｒ（勾配６ＣＶで１００％ジクロロメタン、次いで１０ＣＶでジクロロメタン中０％〜１０％メタノールの１００ｇ  ＫＰ−ＳＮＡＰシリカゲルカラム）によって精製すると、４，４−ジフルオロ−１−ニトロ−ペンタン−２−オールＸＶＩＩ（６７８ｍｇ、４．０ｍｍｏｌ）が黄色油として得られた。
収率：４１％
【数１９】
2020526532.tif 000043
【０１１９】
６．２  １−アミノ−４，４−ジフルオロ−ペンタン−２−オールＸＶＩＩＩの合成
４，４−ジフルオロ−１−ニトロ−ペンタン−２−オールＸＶＩＩ（１．０当量、１ｇ、５．９１ｍｍｏｌ）のエタノール（４０ｍＬ）中溶液を、１０％／Ｐｄカートリッジを備えたＨ−Ｃｕｂｅで水素化した（流量１ｍＬ／分、５０℃、５０ｂａｒ）。粗混合物を蒸発乾固すると、１−アミノ−４，４−ジフルオロ−ペンタン−２−オールＸＶＩＩＩ（７６０ｍｇ、４．９ｍｍｏｌ）が無色油として得られた。
収率：８３％
【数２０】
2020526532.tif 000044
【０１２０】
６．３  ５−（２，２−ジフルオロプロピル）オキサゾリジン−２−オンＸＩＸの合成
１−アミノ−４，４−ジフルオロペンタン−２−オールＸＶＩＩＩ（１．０当量、７６０ｍｇ、５．４６ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（１８ｍＬ）中溶液に、室温で１，１’−カルボニルジイミダゾール（１．０当量、８７６ｍｇ、５．３０ｍｍｏｌ）および水素化ナトリウム（０．１当量、２１ｍｇ、０．５３ｍｍｏｌ）を添加した。反応物を室温で１６時間撹拌した。数滴の水を溶液に添加し（ＮａＨ中和）、混合物を蒸発乾固した。粗生成物を、フラッシュクロマトグラフィーＢｉｏｔａｇｅ  Ｉｓｏｌｅｒａ  Ｆｏｕｒ（１０ＣＶでジクロロメタン中０％〜１０％メタノール、次いで４ＣＶで１０％メタノールの勾配の１００ｇ  ＫＰ−ＳＮＡＰシリカゲルカラム）によって直接精製すると、５−（２，２−ジフルオロプロピル）オキサゾリジン−２−オンＸＩＸ（６７５ｍｇ、４．０８ｍｍｏｌ）がベージュ色固体として得られた。
収率：７５％
【数２１】
2020526532.tif 000045
【０１２１】
６．４  （−）−５−（２，２−ジフルオロプロピル）−３−［［２−（メトキシメチル）−６−（トリフルオロメチル）イミダゾ［２，１−ｂ］［１，３，４］チアジアゾール−５−イル］メチル］オキサゾリジン−２−オン１３および（＋）−５−（２，２−ジフルオロプロピル）−３−［［２−（メトキシメチル）−６−（トリフルオロメチル）イミダゾ［２，１−ｂ］［１，３，４］チアジアゾール−５−イル］メチル］オキサゾリジン−２−オン１４の合成
スルホラン（３ｍＬ）中［２−（メトキシメチル）−６−（トリフルオロメチル）イミダゾ［２，１−ｂ］［１，３，４］チアジアゾール−５−イル］メタノールＶ（１．０当量、１５０ｍｇ、０．５６ｍｍｏｌ）と５−（２，２−ジフルオロプロピル）オキサゾリジン−２−オンＸＩＸ（１．５当量、１３９ｍｇ、０．８４ｍｍｏｌ）の混合物に、ｐ−トルエンスルホン酸一水和物（１．０当量、１０６ｍｇ、０．５６ｍｍｏｌ）を添加した。混合物を１００℃で１６時間撹拌した。混合物を塩基性モードの逆相クロマトグラフィーによって直接精製して、黄色油を得た。エナンチオマーの混合物をキラルＳＦＣ（ＡＳ＊ＥｔＯＨ５０％−ヘプタン５０％−ＤＥＡ０．１％）によって精製すると、（−）−５−（２，２−ジフルオロプロピル）−３−［［２−（メトキシメチル）−６−（トリフルオロメチル）イミダゾ［２，１−ｂ］［１，３，４］チアジアゾール−５−イル］メチル］オキサゾリジン−２−オン１３（１９．１ｍｇ、０．０５ｍｍｏｌ）および（＋）−５−（２，２−ジフルオロプロピル）−３−［［２−（メトキシメチル）−６−（トリフルオロメチル）イミダゾ［２，１−ｂ］［１，３，４］チアジアゾール−５−イル］メチル］オキサゾリジン−２−オン１４（１９．９ｍｇ、０．０５ｍｍｏｌ）が白色固体として得られた。
全体収率：１６．７％（８．２％＋８．５％）
【数２２】
2020526532.tif 000046
α−Ｄ（１３、ＭｅＯＨ、１０ｍｇ／ｍＬ、２８．６℃）＝−１３．３
【０１２２】
３−［［６−（ジフルオロメチル）−２−（メトキシメチル）イミダゾ［２，１−ｂ］［１，３，４］チアジアゾール−５−イル］メチル］−５−（２，２−ジフルオロプロピル）オキサゾリジン−２−オン１５および３−［［６−（ジフルオロメチル）−２−（メトキシメチル）イミダゾ［２，１−ｂ］［１，３，４］チアジアゾール−５−イル］メチル］−５−（２，２−ジフルオロプロピル）オキサゾリジン−２−オン１６を、５−（２，２−ジフルオロプロピル）オキサゾリジン−２−オンＸＩＸおよび［６−（ジフルオロメチル）−２−（メトキシメチル）イミダゾ［２，１−ｂ］［１，３，４］チアジアゾール−５−イル］メタノールＶＩＩＩから出発して同じ手順に従って合成する。
全体収率：８％（４％＋４％）
【数２３】
2020526532.tif 000047
【０１２３】
キラルクロマトグラフィー（ＳＦＣ、相Ｗ、ＣＯ２−ＭｅＯＨ１５％、３ｍｌ／分）：ピーク１（１５）：６．６４分およびピーク２（１６）：７．７２分。
【０１２４】
表（Ｉ）は、化合物のＩＵＰＡＣ名（またはＡｃｃｅｌｅｒｙｓ  Ｄｒａｗ  ４．０から生成された名称）、質量分析で観察されたイオンピークおよび１Ｈ  ＮＭＲの説明を示している。
【表６−１】
2020526532.tif 000048
【表６−２】
2020526532.tif 000049
【表６−３】
2020526532.tif 000050
【表６−４】
2020526532.tif 000051
【０１２５】
例７．ＳＶ２ＡおよびＳＶ２Ｃへの結合アッセイ。
ヒトＳＶ２ＡおよびＳＶ２Ｃタンパク質を、ヒト胎児腎（ＨＥＫ）細胞で発現した。ＨＥＫ  ＳＶ２ＡおよびＨＥＫ  ＳＶ２Ｃ膜調製物を、Ｇｉｌｌａｒｄら（Ｅｕｒ．Ｊ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．２００６、５３６、１０２〜１０８）に記載されるように調製した。非標識化合物の親和性を測定するために、競合実験を以下の通り実施した：ＳＶ２タンパク質を発現する膜（１アッセイあたりタンパク質５〜１５μｇ）を、２ｍＭ  ＭｇＣｌ２、０．１％ジメチルスルホキシドおよび１０の増加する濃度の非標識試験化合物（０．１ｎＭ〜１０μＭ）を含有する０．２ｍｌの５０ｍＭ  Ｔｒｉｓ−ＨＣｌバッファー（ｐＨ７．４）中［３Ｈ］−２−［４−（３−アジドフェニル）−２−オキソ−１−ピロリジニル］ブタンアミド（５ｎＭ）および／または［３Ｈ］−４Ｒ−（２−クロロ−２，２−ジフルオロエチル）−１−｛［２−（メトキシメチル）−６−（トリフルオロメチル）イミダゾ［２，１−ｂ］［１，３，４］チアジアゾール−５−イル］メチル｝ピロリジン−２−オン（２５ｎＭ）と３７℃で６０分間インキュベートした。インキュベーション期間の最後に、膜結合放射性リガンドを、０．１％ポリエチレンイミンに予め浸漬したＧＦ／Ｃガラス繊維フィルターを通した迅速な濾過によって回収した。膜をアッセイ体積の少なくとも４倍の氷冷５０ｍＭ  Ｔｒｉｓ  ＨＣｌバッファー（ｐＨ７．４）で洗浄した。フィルターを乾燥させ、液体シンチレーションによって放射能を測定した。濾過ステップ全体が１０秒を超えなかった。測定された親和性ｐＩＣ５０値を、ＣｈｅｎｇおよびＰｒｕｓｏｆｆ（Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．１９７３、２２（２３）、３０９９〜３１０８）に従ってｐＫｉに補正した。
【０１２６】
本発明による式（Ｉ）の化合物は、典型的には少なくとも６．５のｐＫｉ  ＳＶ２Ａ値および少なくとも６．０のｐＫｉ  ＳＶ２Ｃ値を示す。
【０１２７】
例８．発作モデル．
全ての実験で、体重２２〜３２ｇの雄ＮＭＲＩマウス（Ｃｈａｒｌｅｓ  Ｒｉｖｅｒ、ドイツ）を使用する。動物を、午前６：００に点灯する１２／１２時間の明暗サイクルで維持し、２０〜２１℃に維持された温度および湿度約４０％で飼育する。マウスを、１ケージあたり１０匹の群で飼育する（タイプＩＩＩ）。全ての動物は、それぞれ１０匹のマウスからなる実験群にランダムに割り当てる前に、標準ペレット食餌および水に自由にアクセスできる。全ての動物実験は、動物実験に関する国内規則に従って行い、欧州共同体理事会指令２０１０／６３／ＥＵのガイドラインに従って実施する。地元の倫理委員会が実験プロトコルを承認した。
【０１２８】
８．１  ６Ｈｚ発作モデル
６Ｈｚモデルを、以前記載されたプロトコル（Ｋａｍｉｎｓｋｉら、Ｅｐｉｌｅｐｓｉａ（２００４）、４５、８６４〜８６７）に従って実行する。手短に言えば、角膜刺激（４４ｍＡ、０．２ｍｓ持続時間、６Ｈｚで３秒間の単極矩形波）を、定電流装置（ＥＣＴ  Ｕｎｉｔ  ５７８００；Ｕｇｏ  Ｂａｓｉｌｅ、Ｃｏｍｅｒｉｏ、イタリア）によって供給する。１滴の０．４％塩酸オキシブプロカイン（Ｕｎｉｃａｉｎｅ、Ｔｈｅａ、フランス）を電気刺激の前に眼にのせる。刺激中、マウスを手動で拘束し、通電直後に、観察ケージ（３８×２６×１４ｃｍ）に解放する。発作の前には、しばしば短期間（約２〜３秒）の激しい自発運動興奮がある（激しい走行および跳躍）。その後、動物は、立ち上がり、前肢の自動運動およびクローヌス、感覚毛の単収縮、および挙尾を伴う「気絶した」姿勢を示す。発作の最後に、動物は正常な探索行動を再開する。実験的エンドポイントは、発作からの保護である。刺激から７秒以内に正常な探索行動を再開した場合、動物を保護されているとみなす。
【０１２９】
試験化合物について決定されたインビボ活性は、典型的には、単回ＩＰ投与後０．０５ｍｇ／ｋｇ〜２０ｍｇ／ｋｇで構成される。
【０１３０】
８．２  ペンチレンテトラゾール（ＰＴＺ）発作モデル
ペンチレンテトラゾールを、以前に確立された８９ｍｇ／ｋｇのＣＤ９７用量；マウスの９７％で４肢全ての間代性痙攣を誘発する痙攣性用量で使用する（Ｋｌｉｔｇａａｒｄら、Ｅｕｒ．Ｊ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．（１９９８）、３５３、１９１〜２０６）。ペンチレンテトラゾール注射の直後に、マウスを個別にＰｅｒｓｐｅｘケージに入れ、６０分間、４つ全ての四肢の間代性痙攣および緊張性後肢伸張の存在について観察する。
【０１３１】
試験化合物について決定されたインビボ活性は、典型的には、単回ＩＰ投与後０．５ｍｇ／ｋｇ〜３０ｍｇ／ｋｇの間で構成される。
【０１３２】
例９．アザムリンアッセイ
凍結保存したヒト肝細胞（２０人のドナーのプール、Ｃｅｌｓｉｓ／ＩＶＴ／Ｂｉｏｒｅｃｌａｍａｔｉｏｎ製のＢＳＵバッチ）を、供給者の情報に従って解凍した。生存率（トリパンブルー排除）は７５％超であった。プレインキュベーション（２ｘ１０６個肝細胞／ｍＬの肝細胞懸濁液２５０μＬ）を、穏やかな撹拌（振動撹拌機、Ｔｉｔｒａｍａｘ１００、約３００ｒｐｍ）下で３０分間、インキュベーター（５％ＣＯ２）中、＋３７℃の４８ウェルプレートで、２ｍＭのグルタミンおよび１５ｍＭのＨｅｐｅｓを含有するウィリアム培地で行った。プレインキュベーション後、アザムリン（６μＭ−特異的ＣＹＰ３Ａ４／５阻害剤）を含むまたは含まない、ＵＣＢ化合物（１μＭ）またはミダゾラム（陽性対照）を含有する２５０μＬの培養培地（上記組成参照）を肝細胞に添加することによって、インキュベーションを開始した。培養物中のＵＣＢ化合物およびアザムリンの最終濃度は、それぞれ０．５μＭおよび３μＭである。細胞懸濁液を、２回のピペット出し入れ操作によって急速に再均質化した。インキュベーションの０、３０、６０、１２０、１８０および２４０分後、ケトコナゾール１μＭを内部標準として含む５０μＬの氷冷アセトニトリルを含有する９６ウェルプレートから適切なウェルに５０μｌの培養物を移すことによって、反応を停止した。各サンプリングの前に、細胞培養物を２回のピペット出し入れ操作によって再均質化する。
【０１３３】
インキュベーションが終了したら、９６ウェルプレートを約３７００ｒｐｍ、＋４℃で１５分間遠心分離する。５０μＬの上清を、１５０μＬのＨ２Ｏ  Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅが添加された他のディープウェルプレートのウェルに移す。これらの試料を、親消失および代謝産物形成のモニタリングのために、マイクロＵＰＬＣ／ＨＲ−ＭＳによって分析した。
【０１３４】
ＣＹＰ３Ａ４／５によって代謝される画分（ｆｍ，ＣＹＰ３Ａ４／５）として知られるＣＹＰ３Ａ４／５の寄与を、以下の式を使用することによって、アザムリンの非存在下および存在下で、ＣＬｉｎｔ（親親薬物消失に基づく）の比から各化合物について計算した：
【数２４】
2020526532.tif 000052
【０１３５】
試験化合物のＣＹＰ３Ａ４／５によって代謝される画分（ｆｍ，ＣＹＰ３Ａ４／５）は、典型的には０〜４０％で構成される。
【国際調査報告】
2020526532.tif 000055
2020526532.tif 000056
2020526532.tif 000057