(57)【要約】本発明は、標識、キレート剤、およびカンナビノイド類似体コンジュゲートを含有する組成物、ならびにこれらの組成物を用いて癌または神経障害の進行を診断、治療、またはモニターする方法を提供する。また、これらの組成物を合成する方法、およびこれらの組成物をイメージング剤および治療剤として送達するためのキットを提供する。【選択図】図１
2020527589.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
標識、キレート剤、およびカンナビノイド類似体コンジュゲートを含む組成物。
【請求項２】
標識が放射性核種である、請求項１に記載の組成物。
【請求項３】
前記標識が、テクネチウム−９９、ガリウム−６８、銅−６０、銅−６４、インジウム−１１１、ホルミウム−１６６、レニウム−１８６、レニウム−１８８、イットリウム−９０、ルテチウム−１７７、ラジウム−２２３、またはアクチニウム−２２５のうちの１以上である、前記請求項のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項４】
前記組成物が使用中に哺乳動物に投与される場合に、前記標識がコントラスト増強イメージングを促進するように構成される、前記請求項のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項５】
前記カンナビノイド類似体が免疫チェックポイントカンナビノイド受容体リガンドである、前記請求項のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項６】
前記カンナビノイド類似体が合成カンナビノイド受容体アゴニストである、前記請求項のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項７】
前記カンナビノイド類似体が天然カンナビノイド受容体アゴニストである、前記請求項のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項８】
前記カンナビノイド類似体がアミノアルキルインドールである、前記請求項のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項９】
前記カンナビノイド類似体がカンナビノイド受容体インバースアゴニストである、前記請求項のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項１０】
前記カンナビノイド類似体が、アナンダミド（ＡＥＡ）、２−アラキドノイルグリセロール（２−ＡＧ）、ノラジンエーテル、ビロダミンおよびＮ−アラキドニルドーパミン（ＮＡＤＡ）からなる群に属する、前記請求項のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項１１】
カンナビノイド類似体がジアリールピラゾールである、前記請求項のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項１２】
前記キレート剤がアミノ化または酸キレート剤である、前記請求項のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項１３】
前記キレート剤がシクラムである、前記請求項のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項１４】
前記カンナビノイド類似体がシクラム−１′−アセチル−［Ｎ−（ピペリジン−１−イル）−５−（４−クロロフェニル）−１−（２，４−ジクロロフェニル）−４−メチル−１Ｈ−ピラゾール−３−カルボキサミド］である、前記請求項のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項１５】
前記カンナビノイド類似体がシクラム−１′−プロピル−［Ｎ−（ピペリジン−１−イル）−５−（４−クロロフェニル）−１−（２，４−ジクロロフェニル）−４−メチル−１Ｈ−ピラゾール−３−カルボキサミド］である、前記請求項のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項１６】
ヒト被験体における病状を診断するための方法であって、前記方法は、前記請求項のいずれか１項に記載の組成物の有効量をヒト被験体に投与することを含むことを特徴とする方法。
【請求項１７】
複数の癌細胞をイメージングする方法であって、前記方法は、請求項１〜１５のいずれか一項に記載の組成物の有効量をヒト患者に投与することを含むことを特徴とする方法。
【請求項１８】
カンナビノイドによる治療を受けやすい癌を治療する方法であって、前記方法は、請求項１〜１５のいずれか１項に記載の組成物の有効量を、それを必要とするヒト被験体に投与することを含むことを特徴とする方法。
【請求項１９】
カンナビノイドによる治療を受けやすい神経障害を治療する方法であって、前記方法は、請求項１〜１５のいずれか１項に記載の組成物の有効量を、それを必要とするヒト被験体に投与することを含むことを特徴とする方法。
【請求項２０】
ヒト被験体の痛みを緩和する方法であって、前記方法は、請求項１〜１５のいずれか１項に記載の組成物の有効量を、それを必要とするヒト被験体に投与することを含むことを特徴とする方法。
【請求項２１】
細胞をイメージングするためのキットであって、
所定量のキレート剤および医療用カンナビノイド類似体コンジュゲートと、
所定量のイメージング剤と、を含むことを特徴とするキット。
【請求項２２】
スズ含有還元剤をさらに含む、請求項２１に記載のキット。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
（関連出願への相互参照）
本出願は、２０１７年７月１８日に出願された米国仮出願第６２／５３３，８９４号の優先権及び利益を主張するものであり、その内容全体が参照により援用される。
【０００２】
本開示は、合成カンナビノイド組成物、ならびに一般的に診断、治療、および予後適用のためにそのような組成物を使用することに対する方法に関する。
【背景技術】
【０００３】
医療用カンナビノイドはセラノスティック用途のためには十分に開発されてこなかった。戦略的な臨床試験は、公共の非難と法定の犯罪により、未だ遅れている。しかし、医療提供者、患者および活動家の擁護者から医療用カンナビノイドを治療に適用したいという請願は、指数関数的に増加している。カンナビノイド受容体（ＣＢ１およびＣＢ２）、一過性受容体電位サブファミリーＶメンバー１（ＴＲＰＶｌ）、一過性受容体電位サブファミリーＡメンバー１（ＴＲＰＡ１）、およびオーファン受容体ＧＰＲ５５は、多数の生理学的および病態生理学的プロセスの制御または調節のための様々なタンパク質を含む複合脂質シグナル伝達ネットワークである内在性カンナビノイド系（ＥＣＳ）の一部である。これらの受容体とともに、ＥＣＳはアラキドン酸由来リガンド、アナンダミドおよび２‐アラキドノイルグリセロール、ならびに脂肪酸アミドヒドロラーゼ（ＦＡＡＨ）およびモノアシルグリセロールリパーゼ（ＭＡＧＬ）のようなこれらの内在性カンナビノイドを分解する酵素を含む。ＣＢ１受容体の発現は広くに見られ、特に脳に多く、その中でも特に基底核、海馬、小脳および皮質に広く存在するが、一方でＣＢ２受容体は免疫系を構成する組織（特にＢ細胞が豊富な区画内）に選択的に存在する。広く分布しているため、ＣＢ１は末梢神経内および神経区画以外、すなわち精巣、子宮、血管内皮、眼、脾臓、回腸および脂肪細胞でも同様に検出できる。ＣＢ１およびＣＢ２受容体は、膜貫通ドメインにおいて６８％のアミノ酸配列同一性を共有しているため、カンナビノイドのリガンド／受容体経路は、アルツハイマー病、パーキンソン病、ハンチントン病における神経変性や緑内障や多発性硬化症によくみられる無痛性の痛み、様々な心血管疾患や癌に対する合理的な治療標的として一貫して評価されている。
【発明の概要】
【０００４】
いくつかの欠点が本発明者らによって認識され、本開示の種々の実施形態は、当技術分野におけるこれらの欠点に対処するために開発された。本明細書において開示および記載される特定の実施形態は、標識、キレート剤、およびカンナビノイド類似体コンジュゲートを含有する組成物を含む。標識は放射性核種であり得る。標識は、テクネチウム−９９、ガリウム−６８、銅−６０、銅−６４、インジウム−１１１、ホルミウム−１６６、レニウム−１８６、レニウム−１８８、イットリウム−９０、ルテチウム−１７７、ラジウム−２２３またはアクチニウム−２２５のうちの１以上であり得る。特定の実施形態において、標識は、使用中に組成物が哺乳動物に投与される場合、コントラスト強調イメージングを促進するように構成される。カンナビノイド類似体は、免疫チェックポイントカンナビノイド受容体リガンドであり得る。カンナビノイド類似体は、合成カンナビノイド受容体アゴニストまたは天然カンナビノイド受容体アゴニストであり得る。カンナビノイド類似体は、アミノアルキルインドールであり得る。カンナビノイド類似体は、カンナビノイド受容体インバースアゴニストであり得る。カンナビノイド類似体は、アナンダミド（ＡＥＡ）、２−アラキドノイルグリセロール（２−ＡＧ）、ノラジンエーテル、ビロダミンおよびＮ−アラキドニルドーパミン（ＮＡＤＡ）からなる群のメンバーであり得る。カンナビノイド類似体はジアリールピラゾールであり得る。キレート剤は、アミノ化または酸キレート剤であり得る。ある態様において、キレート剤は、シクラムである。カンナビノイド類似体は、シクラム−１′−アセチル−［Ｎ−（ピペリジン−１−イル）−５−（４−クロロフェニル）−１−（２，４−ジクロロフェニル）−４−メチル−１Ｈ−ピラゾール−３−カルボキサミド］であり得る。カンナビノイド類似体は、シクラム−１′−プロピル−［Ｎ−（ピペリジン−１−イル）−５−（４−クロロフェニル）−１−（２，４−ジクロロフェニル）−４−メチル−１Ｈ−ピラゾール−３−カルボキサミド］であり得る。
【０００５】
実施形態はまた、本明細書に記載されるいずれかの組成物の有効量を、それを必要とするヒト被験体に投与することによって、ヒト被験体の医学的状態を診断する方法を含む。複数の癌細胞をイメージングする方法であって、当該方法は、本明細書に記載される組成物のいずれかの有効量をヒト患者に投与することを含む。実施形態はまた、カンナビノイドによる治療を受けやすい癌を治療する方法を含み、該方法は、それを必要とするヒト被験体に、本明細書に記載されるいずれかの組成物の有効量を投与することを含む。実施形態はまた、カンナビノイドでの治療を受けやすい神経障害を治療する方法を含み、該方法は、それを必要とするヒト被験体に、本明細書に記載されるいずれかの組成物の有効量を投与することを含む。実施形態はまた、ヒト被験体における痛みを軽減する方法を含み、該方法は、それを必要とするヒト被験体に本明細書に記載されるいずれかの組成物の有効量を投与することを含む。実施形態はまた、所定量のキレート剤および医療用カンナビノイド類似体コンジュゲートと所定量のイメージング剤とを含む、細胞をイメージングするためのキットを含む。キレート剤および医療用カンナビノイド類似体コンジュゲートは、適切な反応条件が提供された場合、それに続きイメージング剤と相互作用する前駆体としてキット中に存在することができる。このキットは、スズ含有還元剤を含むことができる。キットを用いてイメージングすることができる細胞、器官、および組織は、心臓血管系のもの、前癌性細胞および組織、癌性細胞および組織、ならびに脳および脊髄を含む神経系の細胞および組織を含む。
【０００６】
本開示の多くの他の態様、特徴および利点は、図面とあわせて以下の詳細な説明から明らかにすることができる。本願のシステムは、所望の分析目標に応じて、より少ない構成要素、より多くの構成要素、または異なる構成要素を含むことができる。
【図面の簡単な説明】
【０００７】
本開示は、様々な修正および代替形態に影響されやすいが、特定の実施形態は、図面に例示され、ここで詳細に説明される。図面は縮尺通りでないことがある。しかし、図面およびその詳細な説明は、開示された特定の形態に本開示を限定することを意図するものではなく、反対に、添付の特許請求の範囲によって定義されるように、本開示の範囲内にあるすべての修正物、均等物、および代替物を含むことを意図するものであることを理解されたい。
【０００８】
【図１】図１は、一実施形態による、ＮＭＲ分光法を用いた出発物質ＳＲ１４１７１６（リモナバント）の代表的な分析である。
【０００９】
【図２】図２は、一実施形態による、高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）分析を用いた出発物質ＳＲ１４１７１６の代表的な分析である。
【００１０】
【図３】図３は、一実施形態による、ＮＭＲを用いたＶＹＲ２０６の代表的な分析である。
【００１１】
【図４】図４は、一実施形態による、質量分析を用いたＶＹＲ２０６の代表的な分析である。
【００１２】
【図５】図５は、一実施形態による、ＨＰＬＣ分析を用いたＶＹＲ２０６の代表的な分析である。
【００１３】
図６Ａ〜６Ｃは、ウェスタンブロット分析を用いたＣＢ１受容体のタンパク質発現を示す。
【図６Ａ】図６Ａパネルは、種々のＤＬＢＣＬからの細胞溶解物におけるＣＢ１受容体の発現を示す。
【図６Ｂ】図６Ｂは、サンプル負荷に対するコントロールとしてのβ−アクチンの発現を示す。
【図６Ｃ】図６Ｃは、種々のＤＬＢＣＬ癌細胞株におけるＣＢ１およびＣＢ２のｍＲＮＡ発現分析のグラフである。
【００１４】
【図７】図７は、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫（ＤＬＢＣＬ）細胞株の生存率に対するカンナビノイド受容体リガンドＳＲ１４１７１６（リモナバント）の効力のグラフ表示である。
【００１５】
【図８】図８は、ＤＬＢＣＬ細胞株の生存率に対するカンナビノイド受容体リガンドＣＰ９４５，５９８（オテナバント）の効力のグラフ表示である。
【００１６】
【図９】図９は、ＤＬＢＣＬ細胞株の生存率に対するカンナビノイド受容体リガンドＡＭ１２４１の効力のグラフである。
【００１７】
【図１０】図１０は、ＤＬＢＣＬ細胞株の生存率に対するカンナビノイド受容体リガンドＡＭ２５１の効力のグラフである。
【００１８】
【図１１Ａ−Ｄ】図１１Ａ〜１１Ｄは、ＤＬＢＣＬ（図１１、ＡおよびＢ）およびマントル細胞リンパ腫（ＭＣＬ）細胞株（図１１、パネルＣおよびＤ）を用いた、二つのＣＢ１インバースアゴニストＳＲ１４１７１６およびＶＹＲ２０６の阻害効力のグラフである。
【００１９】
【図１２Ａ−Ｄ】図１２Ａ〜１２Ｄは、ＤＬＢＣＬ癌細胞であるＬＲ、ＭＳ、ＲＣおよびＤＯＨＨ２に対する細胞生存率アッセイを用いた、二つの選択性ＣＢ１インバースアゴニストであるＳＲ１４１７１６およびＶＹＲ２０６ならびにＮ４の阻害効力応答グラフである。
【００２０】
【図１３Ａ−Ｄ】図１３Ａ〜１３Ｄは、ＭＣＬ癌細胞であるＪｅｋｏ、Ｍｉｎｏ、Ｒｅｃ−１およびＪＭＰ１に対する細胞生存率を用いた、二つの選択性ＣＢ１インバースアゴニストであるＳＲ１４１７１６およびＶＹＲ２０６ならびにＮ４の阻害効力応答のグラフである。
【００２１】
【図１４Ａ−Ｃ】図１４Ａ〜１４Ｃは、ココナッツ油抽出物中においてＣＢＤとして得られたカンナビジオールを用いた、１６のＤＬＢＣＬ（図１４ＡおよびＢ）および８のＭＣＬ（図１４Ｃ）癌細胞株における細胞生存率の高スループットスクリーニング評価のグラフである。
【００２２】
図１５Ａ〜１５Ｄは、免疫ブロット分析を用いて、ＶＹＲ２０６およびＣＢＤで処理されたＭＣＬおよびＤＬＢＣＬ癌細胞株におけるＣＢ１およびＣＢ２ＲＮＡの発現を示す。
【図１５Ａ】図１５Ａパネルは、ＶＹＲ２０６で処理したＣＢ１の発現を示す。
【図１５Ｂ】図１５Ｂパネルは、ＶＹＲ２０６で処理したＣＢ２の発現を示す。
【図１５Ｃ】図１５Ｃパネルは、ＣＢＤで処理したＣＢ２の発現を示す。
【図１５Ｄ】図１５Ｄパネルは、サンプル負荷に対するコントロールとしてのβ−アクチンの発現を示す。
【００２３】
図１６Ａ〜１６Ｂは、ＭＣＬおよびＤＬＢＣＬ細胞株の生存率に対するカンナビジオール（ＣＢＤ−９９）の効力のグラフである。
【図１６Ａ】図１６Ａは、ＭＣＬ細胞株におけるＣＢＤの効力のグラフである。
【図１６Ｂ】図１６Ｂは、ＤＬＢＣＬ細胞株におけるＣＢＤの効力のグラフである。
【００２４】
【図１７】図１７は、様々なＤＬＢＣＬ細胞株における、ブルトン型チロシンキナーゼ阻害剤−イブルチニブ（Π３Ｎ）に対するリモナバント（ｒｉｍｏｎａｂａｎｔ）（リモ（Ｒｉｍｏ）として識別される）のＩＣ５０のグラフである。
【００２５】
図１８Ａ〜１８Ｄは、カンナビノイド受容体リガンド−リモナバント（リモとして識別される）およびブルトン型チロシンキナーゼ阻害剤−イブルチニブ（ＩＢＮとして識別される）の、ＭＣＬ細胞株（Ｊｅｋｏ、Ｊｅｋｏ−Ｒ、Ｍｉｎｏ、Ｍｉｎｏ−Ｒ、ＰＦ−４、ＰＦ−５）の生存率に対する効果のグラフである。
【図１８Ａ】図１８Ａは、ＪｅｋｏおよびＪｅｋｏ−Ｒ細胞株に対する２５μＭのリモナバントおよびイブルチニブの効果のグラフである。
【図１８Ｂ】図１８Ｂは、ＭｉｎｏおよびＭｉｎｏ−Ｒに対する２５μＭのリモナバントおよびイブルチニブの効果のグラフである。
【図１８Ｃ】図１８Ｃは、ＰＦ−４およびＰＦ−５細胞株に対するイブルチニブの効力のグラフである。
【図１８Ｄ】図１８Ｄは、ＰＦ−４およびＰＦ−５に対する２５μＭのリモナバントおよびイブルチニブの効果のグラフである。
【００２６】
図１９Ａ〜１９Ｈは、ＤＬＣＢＬ細胞株（ＬＲ、ＭＳ、ＲＣおよびＤＯＨＨ２）およびＭＣＬ細胞株（Ｊｅｋｏ、Ｒｅｃ−１、Ｍｉｎｏ、ＪＭＰ−１）の生存率に対する、リモナバントおよびそのシクラムコンジュゲート、ＶＹＲ２０６の効力のグラフである。
【図１９Ａ】図１９Ａは、コントロールとしてシクラムを用いたＬＲ細胞株の生存率に対するリモナバントおよびＶＹＲ２０６の効力のグラフである。
【図１９Ｂ】図１９Ｂは、コントロールとしてシクラムを用いたＭＳ細胞株の生存率に対するリモナバントおよびＶＹＲ２０６の効力のグラフである。
【図１９Ｃ】図１９Ｃは、コントロールとしてシクラムを用いたＲＣ細胞株の生存率に対するリモナバントおよびＶＹＲ２０６の効力のグラフである。
【図１９Ｄ】図１９Ｄは、コントロールとしてシクラムを用いたＤＯＨＨ２細胞株の生存率に対するリモナバントおよびＶＹＲ２０６の効力のグラフである。
【図１９Ｅ】図１９Ｅは、コントロールとしてシクラムを用いたＪｅｋｏ細胞株の生存率に対するリモナバントおよびＶＹＲ２０６の効力のグラフである。
【図１９Ｆ】図１９Ｆは、コントロールとしてシクラムを用いたＲｅｃ−１細胞株の生存率に対するリモナバントおよびＶＹＲ２０６の効力のグラフである。
【図１９Ｇ】図１９Ｇは、コントロールとしてシクラムを用いたＭｉｎｏ細胞株の生存率に対するリモナバントおよびＶＹＲ２０６の効力のグラフである。
【図１９Ｈ】図１９Ｈは、コントロールとしてシクラムを用いたＪＭＰ−１細胞株の生存率に対するリモナバントおよびＶＹＲ２０６の効力のグラフである。
【００２７】
図２０Ａ〜２０Ｄは、４つの化学療法である、ブルトン型チロシンキナーゼ阻害剤−イブルチニブ（ＩＢＮ）、ザヌブルチニブ（ＢＧＢ）、プロテアソーム阻害薬−カーフィルゾミブ（ＣＦＺ）及び化学療法剤−テューモレックス（ＴＭＸ）を個々におよび組み合わせて、ＤＬＢＣＬ（ＲＣ）およびＭＣＬ（Ｍｉｎｏ）細胞株の生存率に対するカンナビジオール（ＣＢＤ−９９）の効果を、グラフで表したものである。
【図２０Ａ】図２０Ａは、Ｍｉｎｏ細胞およびＲＣ細胞の生存率に対する、ＣＢＤ−９９およびＩＢＮの２５μＭの個々および組み合わせの効果のグラフである。
【図２０Ｂ】図２０Ｂは、Ｍｉｎｏ細胞およびＲＣ細胞の生存率に対する、ＣＢＤ−９９の６μＭおよびＣＦＺの１０ｎＭの個々および組み合わせの効果のグラフである。
【図２０Ｃ】図２０Ｃは、Ｍｉｎｏ細胞およびＲＣ細胞の生存率に対する、ＣＢＤおよびＢＧＢの２５μＭの個々および組み合わせの効果のグラフである。
【図２０Ｄ】図２０Ｄは、Ｍｉｎｏ細胞およびＲＣ細胞の生存率に対する、ＣＢＤの１２．５μＭおよびＴＭＸの２５０ｎＭの個々および組み合わせの効果のグラフである。
【００２８】
図２１Ａ〜２１Ｅは、カンナビジオールおよびＶＹＲ２０６の処理の増加に伴う切断ＰＡＲＰ（ｃＰＡＲＰ）の発現および切断カスパーゼ３の発現を示し、免疫ブロット分析を用いてアポトーシスの活性を示す。
【図２１Ａ】図２１Ａパネルは、カンナビジオールおよびＶＹＲ２０６のレベルの増加に伴うｃＰＡＲＰの発現を示す。
【図２１Ｂ】図２１Ｂパネルは、サンプル負荷に対するコントロールとしてのβ−アクチンの発現を示す。
【図２１Ｃ】図２１Ｃパネルは、カンナビジオールの濃度の増加に伴うｃＰＡＲＰの発現を示す。
【図２１Ｄ】図２１Ｄパネルは、カンナビジオールの濃度の増加に伴う切断カスパーゼ−３の発現を示す。
【図２１Ｅ】図２１Ｅパネルは、サンプル負荷に対するコントロールとしてのβ−アクチンの発現を示す。
【００２９】
図２２Ａ〜２２Ｂは、ＤＬＣＢＬ細胞株の生存率に対するカンナビジオール、ＶＹＲ２０６（Ｎ４−Ｒｉｍｏとして識別される）、およびカンナビジオールとＶＹＲ２０６との組合せの効力のグラフである。
【図２２Ａ】図２２Ａは、ＤＬＣＢＬ細胞株−ＬＹ１９の生存率に対する、カンナビジオール、ＶＹＲ２０６、およびカンナビジオールとＶＹＲ２０６の組合せの効力のグラフである。
【図２２Ｂ】図２２Ｂは、ＤＬＣＢＬ細胞株−ＬＲの生存率に対する、カンナビジオール、ＶＹＲ２０６（Ｎ４−Ｒｉｍｏとして識別される）およびカンナビジオールとＶＹＲ２０６との組合せの効力のグラフである。
【００３０】
【図２３】図２３は、リモナバントによる処理後のＲＣ細胞株における遺伝子発現変化のヒートマップである。
【発明を実施するための形態】
【００３１】
以下の説明では、本願の様々な実施形態の完全な理解を提供するために、多数の特定の詳細が示される。他の例では、周知のプロセスおよび方法は、ここに記載される実施形態を不必要に不明瞭にしないために、特に詳細に記載されないことがある。さらに、ここでの実施形態の説明は、ここで説明する実施形態を不明瞭にしないために、特定の特徴または詳細を省略することができる。
【００３２】
以下では、明細書の一部を構成する添付図面を参照する。他の実施形態を利用することができ、開示の範囲から逸脱することなく論理的変更を行うことができる。したがって、以下の詳細な説明は限定的なものではない。
【００３３】
説明では、「いくつかの実施形態では」、「様々な実施形態では」、「ある実施形態では」、または「実施形態では」という語句を使用することができ、これらの語句は、それぞれ同一または異なる実施形態のうちの１以上を指すことができる。さらに、本開示の実施形態に関して使用される「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」、「含む（ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ）」、「有する（ｈａｖｉｎｇ）」などの用語は同義である。
【００３４】
実施形態は、標識−キレート剤−医療用カンナビノイド類似体コンジュゲートを含有するセラノスティック組成物を含む。標識は、キレート剤を介して医療用カンナビノイド類似体を標識するために使用される放射性核種であり得る。特定の実施形態は、キレート剤としてシクラム（Ｎ４）を含む。
【００３５】
本明細書中で使用される、用語「セラノスティック（ｔｈｅｒａｎｏｓｔｉｃ）」とは、診断および治療様式の両方において機能し得る薬剤または用途を指す。
【００３６】
本明細書中で使用される場合、用語「キレート剤（ｃｈｅｌａｔｏｒｓ）」とは、金属イオンまたは他の基質と結合する際に、配位錯体を形成する化合物を指す。キレート配位子およびそれらにキレート化される金属の構造は、所望の用途に応じて変化させることができる。放射性核種金属に結合する多くのリガンドは四座配位子であり、四つの窒素および／または硫黄金属配位原子の組み合わせを含む（すなわち、Ｎ４、Ｎ３Ｓ、ＮＺＳ２等）。ここで使用できるキレート剤の例としては、シクラム化合物（Ｎ４）、ジエチレントリアミン五酢酸（ＤＴＰＡ）、テトラアザシクロドデカン−Ｎ，Ｎ′，Ｎ′′，Ｎ′′′−四酢酸（ＤＯＴＡ）、エチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ）、ジメルカプトコハク酸（ＤＭＳＡ）、硫黄コロイド、及びＭＡＭＡ（モノアミドモノアミンジチオール誘導体）、ＤＡＤＳ（ＮＺＳジアミンジチオール誘導体）、ＣＯＤＡＤＳ等のＮ２Ｓ２系を含めることができる。これらのキレート剤系および他の種々のものは、ＬｉｕおよびＥｄｗａｒｄｓ，Ｃｈｅｍ  Ｒｅｖ．１９９９、９９（９），２２３５〜２２６８に記載されており、Ｎ２Ｓ２もまた、米国特許第４，８９７，２２５号、第５，１６４，１７６号、または第５，１２０，５２６号に記載されている。
特定のＮ４化合物の合成方法は、米国特許第５，８８０，２８１号に記載されているが、Ｓｉｇｍａ  Ａｌｄｒｉｃｈ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ（ミルウォーキー、Ｗｉｓ．）やＴＣＩ  Ａｍｅｒｉｃａ（ポートランド、ＯＲ）のような市販の供給源からも入手することもできる。キレート剤として使用することができる特定のＮ４化合物としては、１，４，７，１０−テトラアザシクロドデカン（シクレン）、１，４，７，１０−テトラアザシクロトリデカン（シクラム１３）、１，４，７，１１−テトラアザシクロテトラデカン（イソシクラム）、１，５，９，１３−テトラアザシクロヘキサデカン、１，５，９，１３−テトラアザシクロヘプタデカン、１，５，９，１４−テトラアザシクロオクタデカン、１，５，１０，１４−テトラアザシクロオクタデカン、１，５，１０，１５−テトラアザシクロドノナデカンを含めることができるが、これらに限定されず、また、これらは米国特許第８，７５８，７２３号，ＵＳ２０１２／０２７６００５，６，０９３，３８２、５，６０８，１１０、５，６６５，３２９、５，６８８，４８７、ＰＣＴ／ＧＢ２００５／００２８０７に記載されている。キレート剤部分の他の例としては、テトラアザシクロドデカン−Ｎ，Ｎ′，Ｎ′′，Ｎ′′′−四酢酸、モノアミド（ＤＯＴＡ−ＭＡ）、１０−（２−ヒドロキシプロピル）−１，４，７，１０−テトラアザシクロドデカン−１，４，７−三酢酸（ＨＰ−ＤＯ３Ａ）を含むが、これらに限定されない。Ｎ４は医療用カンナビノイド化合物に結合され、さらに金属にキレート化される。Ｎ４は放射性核種の安定化を助ける閉環構造を持つ。Ｎ４のような親油性の高いキレート剤は、腎毒性および肝毒性も低下させるが、これは標的細胞によるより多くの取り込みの結果、これらの臓器への蓄積が減少することを示しているためである。ガリウム（Ｇａ）、テクネチウム（Ｔｃ）、銅（Ｃｕ）、またはガドリニウム（Ｇｄ）、ユーロピウム（Ｅｒ）、テルビウム（Ｔｂ）などのランタニド系のキレート化に続くＤＯＴＡの高度に選択的なＣＢ２受容体インバースアゴニストＳＲ１４４５２８への結合は、米国特許第８，３６７，７１４号に記載されている。種々の放射性トレーサーを用いたＣＢ１受容体のイメージングは、ＰＣＴ／ＵＳ２００９／０４３４９１に記載されている。３，４−ジアリールピラゾリン誘導体のようなＣＢｉ受容体に対する高い親和性および選択性を有する放射性リガンドを、ＰＥＴまたはＳＰＥＣＴによるイメージングのために、２Ｈ、１４Ｃ、１３Ｎ、１８Ｆ、７５Ｂｒ、７６Ｂｒ、ｌ２３Ｉからなる群より選択される放射性同位体で標識した。米国特許第２００５−００７０５９６号、８，８４０，８６５号、９，６１７，２１５号、８，３２３，６２１号およびＷＯ２００７−１３０３６１は、例えば、炎症性疾患、癌、神経障害治療および医学的イメージングを処置することを目的とした、医学および治療のためのカンナビノイド系のイメージングを記載している。
【００３７】
本明細書中で使用される、用語「標識（ｌａｂｅｌ）」とは、標識が結合される組成物の位置を同定するために使用される原子、分子、または化合物を指す。標識は、蛍光、燐光、発光、電子発光、化学発光または他の分光学的特性のうちの１以上を有することができる。これらの特性は、可視光、紫外線および赤外分光法、ラマン分光法、核磁気共鳴、ポジトロン放射断層撮影、および当技術分野で公知の他の方法を含む、標識を検出および同定することができる任意の技術を用いて、標識−キレート剤−医療用カンナビノイド類似体コンジュゲートの検出および同定を可能にする。
【００３８】
本明細書中で使用する場合、用語「イメージング」とは、本組成物を使用することができる電磁波技術を使用するすべての組織可視化プロセスをいい、神経系の細胞、血液細胞、癌性細胞、および前癌性細胞を含むが、これらに限定されない。ここで神経細胞をイメージングするためのキットが提供される。一実施形態によると、キットは、所定量のキレート剤および医療用カンナビノイド類似体コンジュゲートと所定量のイメージング剤とを含む。キレート剤および医療用カンナビノイド類似体コンジュゲートは、適切な反応条件が与えられた場合、それに続いてイメージング剤と相互作用する前駆体としてキット中に存在することができる。このキットは、スズ含有還元剤も含むことができる。所定量のキレート剤および医療用カンナビノイド類似体コンジュゲートと所定量のイメージング剤とを含有するゲノムまたは他のオミックアッセイのためのキットもまた、本明細書で提供される。
【００３９】
本明細書中で使用される、用語「放射性核種（ｒａｄｉｏｎｕｃｌｉｄｅ）」、「放射性核種（ｒａｄｉｏａｃｔｉｖｅ  ｎｕｃｌｉｄｅ）」、「放射性同位体（ｒａｄｉｏｉｓｏｔｏｐｅ）」、または「放射性同位体（ｒａｄｉｏａｃｔｉｖｅ  ｉｓｏｔｏｐｅ）」は同義である。１以上の異なる放射性同位体を標識として用いることができる。放射性核種の非限定的な例としては、９９ｍＴｃ、１１７ｍＳｎ、１７７Ｌｕ、１８８Ｒｅ、１８６Ｒｅ、１５３Ｓｍ、１６６Ｈｏ、９０Ｙ、８９Ｓｒ、６７Ｇａ、６８Ｇａ、１１１Ｉｎ、１８３Ｇｄ、５９Ｆｅ、２２５Ａｃ、２１２Ｂｉ、２１１Ａｔ、４５Ｔｉ、６０Ｃｕ、６１Ｃｕ、６７Ｃｕ、６４Ｃｕおよび６２Ｃｕが挙げられる。他の態様では、金属イオンは、１８７Ｒｅ、６９Ｇａ、１９３Ｐｔなどの非放射性金属である。
【００４０】
本明細書中で用いるように、用語「カンナビノイド類似体（ｃａｎｎａｂｉｎｏｉｄ  ａｎａｌｏｇ）」とは、被験体においてカンナビノイド受容体と相互作用するか、またはカンナビノイドと化学的類似性を共有するか、またはその両方が可能な化合物を指す。カンナビノイド類似体は、アゴニストまたはアンタゴニストとして機能し得る合成または天然カンナビノイド化合物を含む。カンナビノイド類似体の実施形態には、カンナビジオール（ＣＢＤ）、カンナビジオール酸（ＣＢＤＡ）、カンナビジオールモノメチルエステル（ＣＢＤＭ）、カンナビジオール−Ｃ４（ＣＢＤ−Ｃ４）、カンナビジバリン酸（ＣＢＤＡ）、カンナビジバリン（ＣＢＶ）、カンナビジオールコール（ＣＢＤ−Ｃ１）、テトラヒドロカンナビノール（ＴＨＣ）、Ｎ−アラキドノイルエタノールアミン（ＡＥＡ）またはアナンダミド、２−アラキドノイルグリセロール（２−ＡＧ）、リモナバント、ＡＭ６５３８、タラナバント、オテナバント、カンナビゲロール酸モノメチルエーテル（ＣＢＧＡＭ）、カンナビゲロールモノメチルエーテル（ＣＢＧＭ）、カンナビゲロバリン（ＣＢＧＶ）、カンナビゲロバリン酸（ＣＢＧＶＡ）、カンナビクロメン酸（ＣＢＣＡ）、カンナビクロメン（ＣＢＣ）、カンナビクロメバリン酸（ＣＢＣＶＡ）、カンナビクロメバリン（ＣＢＣＶ）、Δ９−テトラヒドロカンナビノール酸Ａ（ＴＨＣＡ−Ａ）、Δ９−テトラヒドロカンナビノール酸Ｂ（ＴＨＣＡ−Ｂ）、Δ９−テトラヒドロカンナビジオール（ＴＨＣ）、Δ９−テトラヒドロカンナビノール酸−Ｃ４（ＴＨＣ−Ｃ４）、Δ９−テトラヒドロカンナビバリン酸（ＴＨＣＶＡ）、Δ９−テトラヒドロカンナビバリン（ＴＨＣＶ）、Δ９−テトラヒドロカンナビオールコール酸（ＴＨＣＡ−Ｃ１）、Δ９−テトラヒドロカンナビオールコール（ＴＨＣ−Ｃ１）、Δ７−ｃｉｓ−イソテトラヒドロカンナビバリン（ＴＨＣＶ）、Δ８−テトラヒドロカンナビノール酸（Δ８−ＴＨＣＡ）、Δ８−テトラヒドロカンナビジオール（Δ８−ＴＨＣ）、カンナビシクロ酸（ＣＢＬＡ）、カンナビシクロール（ＣＢＬ）、カンナビシクロバリン（ＣＢＬＶ）、カンナビエルソン酸Ａ（ＣＢＥＡ−Ａ）、カンナビエルソン酸Ｂ（ＣＢＥＡ−Ａ）、カンナビエルソイン（ＣＢＥＡ−Ａ）、カンナビノール酸（ＣＢＮＡ）、カンナビノール（ＣＢＮ）、カンナビノールメチルエーテル（ＣＢＮＭ）、カンナビノール−Ｃ４（ＣＢＮ−Ｃ４）、カンナビノール−Ｃ２（ＣＢＮ−Ｃ２）、カンナビオールコール（ＣＢＮ−Ｃ１）、カンナビノジオール（ＣＢＮＤ）、カンナビノジバリン（ＣＢＶＤ）、カンナビトリオール（ＣＢＴ）、１０−エトキシ−９−ヒドロキシ−Δ６ａ−テトラヒドロカンナビノール、８，９−ジヒドロキシ−Δ６ａ−テトラヒドロカンナビノール、カンナビトリオールバリン（ＣＢＴＶ）、およびエトキシ−カンナビトリオールバリン（ＣＢＴＶＥ）が含まれるが、これらに限定されない。
【００４１】
本開示は、精密医療のための新規薬剤の生成および使用を提供する。実施形態は、神経障害および癌の病因に関与する内因性カンナビノイド系（ＥＣＳ）を標的とするセラノスティクスアプローチを提供する組成物を含む。この個別化された医療プラットフォームは、個々の遺伝子構成、生化学、分子イメージング、分子ブループリント、および各患者の疾患に関連する臨床観察と測定に基づいて設計された個別化医療を提供することを可能にする。
【００４２】
本明細書に記載する実施形態は、疾患細胞のイメージングまたは治療のためにこれらの組成物を使用する新規組成物および方法を含む。特定の実施形態は、カンナビノイド類似体および化学療法剤を含有する組成物を含む。特定の実施形態は、化学療法剤およびキレート剤にコンジュゲートしたカンナビノイド類似体を含有する組成物を含む。特定の実施形態では、キレート剤はシクラムである。ある態様において、カンナビノイド類似体は、カンナビジオールである。特定の実施形態は、化学療法剤と、キレート剤および標識にコンジュゲートしたカンナビノイド類似体との組み合わせを含む組成物を含む。ある態様において、化学療法剤は、イブルチニブ（ＩＢＮ）およびザヌブルチニブ（ＢＧＢ）などのブルトン型チロシンキナーゼ阻害剤である。ある態様において、化学療法剤は、カーフィルゾミブ（ＣＦＺ）などのプロテアソーム阻害剤である。ある態様において、化学療法剤はテューモレックス（ＴＭＸ）である。
【００４３】
本明細書に記載する実施形態は、疾患細胞をイメージングするためにこれらの組成物を使用する新規組成物および方法を含む。これらの方法は、医薬品、医療用カンナビノイド、およびそれらの組み合わせを用いた任意の医学的障害の診断、評価、および治療に適用することができる。この病気には様々な神経疾患や癌が含まれる。特に、癌は、１以上のカルチノイド、神経内分泌癌、乳癌、肺癌、前立腺癌、卵巣癌、脳腫瘍、肝臓癌、子宮頸癌、結腸癌、腎臓癌、皮膚癌、頭頸部癌、骨癌、食道癌、膀胱癌、子宮癌、リンパ癌、胃癌、膵臓癌、精巣癌、結腸直腸癌、およびリンパ腫または白血病などの造血系の癌を含み得る。神経疾患には、アルツハイマー病（ＡＤ）、パーキンソン病（ＰＤ）、ハンチントン病（ＨＤ）、筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）、多発性硬化症、心的外傷後ストレス障害（ＰＴＳＤ）、てんかん、発作、トゥレット症候群、統合失調症、不安障害、自閉症、うつ病、認知症、および神経系に関係する他の疾患および障害が含まれ得る。
【００４４】
これらの方法は、既存のイメージング診断法を向上させる利点があり、それには感度および特異度の改善、患者の利便性の改善、ならびに副作用、時間および費用の低減を含めることができる。被験体の患部組織または臓器の部位における患部細胞または細胞群をイメージングするこれらの方法は、特に被験体が医療用カンナビノイドで治療されているかまたは処置中である場合に、医療専門家が被験体を診断することを可能にする。特定の実施形態は、処置前または処置後の評価を行い、かつ被験体が医療用カンナビノイドで治療されているかまたは処置中である限り、その被験体をモニターすることができるように、所与の被験体における疾患部位でイメージングする方法を含む。特定の態様において、本方法は、イメージング剤で標識されたキレート剤−医療用カンナビノイド類似体組成物によって生成されたシグナルを被験体の疾患部位において検出することを含み、そこでは、罹患細胞は、もしそれが存在する場合、周囲組織中の細胞よりも強力なシグナルを生成する。
【００４５】
本明細書中で使用される場合、用語「被験体（ｓｕｂｊｅｃｔ）」とは、ヒト、齧歯類、他の哺乳動物、または鳥類種を含む全ての種類の動物を指す。イメージング剤で標識されたキレート剤−医療用カンナビノイド類似体コンジュゲートの投与は、診断剤、予後剤、又は被験体における疾患を軽減又は治療するための薬剤として役立てることができる。標的部位は、被験体の任意の組織であってよく、脳、心臓、肺、食道、腸、乳房、子宮、卵巣、前立腺、精巣、胃、膀胱、または肝臓を含むがこれらに限定されない。また、本明細書に提供される実施形態は、癌または神経疾患、胃腸疾患、代謝性疾患、および神経内分泌疾患などの疾患を標的とする薬剤として使用することができる。本明細書中で使用される、用語「投与（ａｄｍｉｎｉｓｔｒａｔｉｏｎ）」とは、適切な方法によって、本明細書中に記載される組成物を被験体に導入する活動を指し、組成物は、それらが標的組織に同じものを送達することができる限りにおいて、静脈内、経口、筋肉内、経皮、腹腔内、局所、舌下、頬、吸入、鼻、または眼の種々の経路を介して投与され得る。本明細書中に記載される組成物は、医薬製剤として送達することができる。「医薬製剤（ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  ｆｏｒｍｕｌａｔｉｏｎ）」は、本明細書に記載される化合物の１以上、または活性成分として薬学的に許容される誘導体、および少なくとも１の薬学的に許容される担体または賦形剤の混合物を指す。医薬組成物の目的は、被験体への化合物の投与を促進することである。別の態様において、医薬組成物は、本明細書に記載される式のうちの１の化合物、または薬学的に許容可能な誘導体、および薬学的に許容可能な担体または賦形剤を含むことができる。ある態様において、医薬組成物は、２以上の薬学的に許容される塩、酸、エステル、賦形剤、担体、希釈剤、およびそれらの組合せを含む。
【００４６】
本明細書中で使用される場合、用語「薬学的に許容される誘導体（ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｌｙ  ａｃｃｅｐｔａｂｌｅ  ｄｅｒｉｖａｔｉｖｅ）」とは、被験体への投与に際して、活性成分を（直接的または間接的に）提供することができる、本明細書中に記載された化合物の任意の薬学的に許容される塩、プロドラッグ、代謝産物、エステル、エーテル、水和物、多型、溶媒和物、複合体、および付加物をいい、それらを含む。例えば、本明細書に記載される化合物の用語「薬学的に許容される誘導体」は、本明細書に記載される化合物の全ての誘導体（例えば、塩、プロドラッグ、代謝産物、エステル、エーテル、水和物、多形、溶媒和物、錯体、および付加物など）を含み、被験体に投与されると、本明細書に記載される化合物を（直接的または間接的に）提供することができる。
【００４７】
本明細書中で使用する場合、用語  「薬学的に許容される塩（ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｌｙ  ａｃｃｅｐｔａｂｌｅ  ｓａｌｔ）」  とは、親化合物の生物学的有効性および特性を保持するそれらの塩を指す。また、他に示されない限り、薬学的に許容される塩は、本明細書に開示される式の化合物中に存在し得る酸性基または塩基性基の塩を含む。本開示はまた、例として、上記の薬学的に許容される塩、それらの誘導体、それらの類似体、それらの互変異性体、それらの立体異性体、それらの多型、およびそれらを含有する薬学的組成物の調製のための特定のプロセスを提供する。
【００４８】
特定の実施形態は、本明細書に記載の化合物によって形成される薬学的に許容される塩、それらの誘導体、それらの類似体、それらの互変異性体、それらの立体異性体、それらの多型、およびそれらを含有する薬学的に許容される組成物に関する。このような塩を形成するために使用される典型的な無機酸には、塩酸、臭化水素酸、ヨウ化水素酸、硝酸、硫酸、リン酸、次亜リン酸などを含む。脂肪族モノおよびジカルボン酸、フェニル置換アルカン酸、ヒドロキシアルカンおよびヒドロキシアルカン二酸、芳香族酸、脂肪族および芳香族スルホン酸などの有機酸に由来する塩も使用することができる。このような薬学的に許容される塩としては、酢酸塩、フェニル酢酸塩、トリフルオロ酢酸塩、アクリレート、アスコルビン酸塩、安息香酸塩、クロロ安息香酸塩、ジニトロ安息香酸塩、ヒドロキシ安息香酸塩、メトキシ安息香酸塩、メチル安息香酸塩、ｏ−アセトキシ安息香酸塩、ナフタレン−２−安息香酸塩、臭化物、イソ酪酸塩、フェニル酪酸塩、β−ヒドロキシ酪酸塩、塩化物、ケイ皮酸塩、クエン酸塩、ギ酸塩、フマル酸塩、グリコール酸塩、ヘプタン酸塩、乳酸塩、マレイン酸塩、ヒドロキシマレイン酸塩、マロン酸塩、メシル酸塩、硝酸塩、シュウ酸塩、フタル酸塩、リン酸塩、モノヒドロゲンリン酸塩、二水素リン酸塩、メタリン酸塩、ピロリン酸塩、プロピオン酸塩、フェニルプロピオン酸塩、サリチル酸塩、コハク酸塩、硫酸塩、ビス硫酸塩、ピロ硫酸塩、亜硫酸塩、亜硫酸水素塩、スルホン酸塩、ベンゼンスルホン酸塩、ｐ−ブロモフェニルスルホン酸塩、クロロベンゼンスルホン酸塩、エタンスルホン酸塩、２−ヒドロキシエタンスルホン酸塩、メタンスルホン酸塩、ナフタレン−１−スルホン酸塩、ナフタレン−２−スルホン酸塩、ｐ−トルエンスルホン酸塩、キシレンスルホン酸塩、および酒石酸塩等を含む。
【００４９】
ある態様は、キレート剤および標的リガンドのコンジュゲートである剤を合成するための新規な方法を含む。そのような薬剤は、イメージング、診断および／または治療目的に使用され得る。従って、一実施形態は、Ｎ４および医療用カンナビノイド類似体を含有するキレート剤標的化リガンドコンジュゲートを合成する方法を含む。この方法はさらに、有機金属または光子源の形態の金属を用いた合成を含むことができる。いくつかの態様において、金属イオンは、本明細書に記載されるような放射性核種である。
【００５０】
実施形態は、イメージングプローブ、診断薬、または医薬組成物を調製するためのキットも含む。特定の具体的な実施形態は、医学的カンナビノイドを用いて生理学的障害を治療するための医薬組成物のイメージング、診断、または送達の方法を含む。したがって、一実施形態では、任意のイメージング診断法を使用して、１以上の標識からの信号を検出することができる。標識からの信号を検出するために使用されるイメージング方法の非限定的な例としては、ＰＥＴ、ＰＥＴ／ＣＴ、ＣＴ、ＳＰＥＣＴ、ＳＰＥＣＴ／ＣＴ、ＭＲＩ、近赤外線（ＮＩＲ）、光学イメージング、光音響イメージング、および超音波を含む。ここに記載された方法は、医療用カンナビノイドを用いた分子イメージングによって決定された正確な評価に基づいて、個別化された有効な用量および投与計画を評価するために使用することができる。
【００５１】
標識−キレート剤−医療用カンナビノイド類似体コンジュゲートの実施形態は、天然に存在する植物由来カンナビノイドである植物カンナビノイドを含むことができる。医療用マリファナ品種Ｃａｎｎａｂｉｓ  ｓａｔｉｖａおよびＣａｎｎａｂｉｓ  ｉｎｄｉｃａの活性成分は、６０種類以上の類似型を含む医療用カンナビノイドと、フラボノイドおよびテルペノイドとして知られる生物活性分子の二つのクラスであり、これらはすべて植物から抽出および単離された天然化合物である。セラノスティクス剤として機能する組成物の実施形態はまた、標識−キレート−テルペノイド類似体コンジュゲート、標識−キレート−フラボノイドコンジュゲート、および標識−キレート−フィトステロールコンジュゲートを含む。天然医療用フィトカンナビノイドの中で、Δ９‐テトラヒドロカンナビノール（Δ９−ＴＨＣ）、カンナビジオール（ＣＢＤ）およびカンナビノール（ＣＢＮ）は最も豊富であるが、他のフィトカンナビノイドは精密医療において非常に重要な役割を果たすことができる。構造、結合特性およびシグナル伝達／機能特性に基づき、医療用カンナビノイドは異なるクラスに分類される。（ｉ）Δ９‐ＴＨＣのような天然植物抽出物およびマリノールのような化学合成化合物の両方から成る古典的医療用カンナビノイド。（ｉｉ）主に合成カンナビノイド受容体（ＣＢ）アゴニストＣＰ‐５５，９４０により例示される非古典的医療カンナビノイド。（ｉｉｉ）ＡＭ１２４１のような化学的に合成されたカンナビノイドからなるアミノアルキルインドール類。（ｉｖ）リモナバントとしても知られるＳＲ１４１７１６ＡのようなＣＢインバースアゴニスト（またはアンタゴニスト）を主に含むジアリールピラゾール類。（ｖ）内因性エンドカンナビノイドであって、動物細胞及びヒト細胞により天然に産生され、Ｎ−アラキドノイルエタノールアミン（ＡＥＡ）又はアナンダミド、２−アラキドノイルグリセロール（２−ＡＧ）、ノラジンエーテル、ビロダミン及びＮ−アラキドニルドーパミン（ＮＡＤＡ）を含む。
【００５２】
標識−キレート剤−医療用カンナビノイド類似体コンジュゲートの実施形態には、ドロナビノール、ナビロン、ナビキシモール、カンナドール、カンナビジオール、カンナビノール、カンナビゲロール、テトラヒドロカンナビバリン、およびカンナビクロメンとして、世界中で臨床研究用に承認されている医療用カンナビノイドを含めることができる。標識−キレート剤−医療用カンナビノイド類似体コンジュゲートの実施形態は、いずれの受容体に対しても明確な特異性を有さず、ＣＢ１／ＣＢ２受容体アゴニストとして認識される、ＨＵ−２１０、Δ９−ＴＨＣ、Δ８−ＴＨＣおよびデスアセチル−Ｌ−ナントラドールなどの医療用カンナビノイドを含めることができる。Δ９‐ＴＨＣはＣ．ｓａｔｉｖａカンナビノイドとして際立っており、ＣＢ１／ＣＢ２親和性と最も高い向精神作用を示す。Δ８−ＴＨＣ側鎖のペンチル置換により、ＨＵ−２１０類似体への変換が起こり、受容体親和性が増大する。ＴＨＣ骨格の他の構造的修飾は、新規で選択的なＣＢ２アゴニストＪＷＨ‐１３３、ＪＷＨ‐１３９およびＨＵ‐３０８およびＬ‐７５９６３３、ならびにＬ‐７５９６５６をもたらし、これらはナノモル範囲で親和性を示す。
【００５３】
標識−キレート剤−医療用カンナビノイド類似体コンジュゲートの実施形態は、二環式（ＡＣ）および三環式ＡＣＤ医療用カンナビノイドのファミリーである非古典的医療用カンナビノイドを含むことができる。それらは、ＣＰ５５２４４およびＣＰ４７４９７類似体と共に、ＣＰ５５９４０によって顕著に表される。注目すべきことに、ＣＰ５５９４０は最もよく知られた医療用カンナビノイドアゴニストであり、共有されたＣＢ１およびＣＢ２シグナル伝達を介して強力なｉｎ  ｖｉｖｏ効果を示す。
【００５４】
標識−キレート剤−医療用カンナビノイド類似体コンジュゲートの実施形態は、アミノアルキルインドールを含むことができる。Ｒ−（＋）−ＷＩＮ５５２１２は、医療用カンナビノイド様特徴を有するこのファミリーのプロトタイプであり、ＣＢ１とＣＢ２受容体の両方に結合できるが、ＣＢ２に対しより高い特異性を示し、ｉｎ  ｖｉｖｏＴＨＣ仲介効果を模倣できる。ＪＷＨ−０１５およびＬ−７６８２４２のような他の類似体もまた、Ｒ−（＋）−ＷＩＮ５５２１２と同様のＣＢ２親和性を示す。
【００５５】
標識−キレート剤−医療用カンナビノイド類似体コンジュゲートの実施形態は、医療用ジアリールピラゾールを含むことができるが、これらは医療用カンナビノイド類似体のクラスであり、その特徴的な機能はＣＢ１またはＣＢ２依存性細胞内シグナル伝達経路を阻害することであり、アンタゴニストとして作用する（インバースアゴニスト）。例えば、実施形態は、ＣＢ１受容体媒介作用を阻害するＳＲ１４１７１６Ａ、ＡＭ２５１およびＡＭ２８１を含むことができる。
【００５６】
標識−キレート剤−医療用カンナビノイド類似体コンジュゲートの実施形態は、特定の内因性カンナビノイドを含むことができる。Ｎ‐アラキドノイルエタノールアミン（ＡＥＡ）またはアナンダミドは、オメガ‐３（ω−３）およびオメガ‐６（ω−６）生合成脂肪酸経路を介してその活性型に変換されるエイコサノイドの一例であり、哺乳類におけるＣＢ受容体を特異的に標的とする。したがって、これらの実施形態において機能し得る他のエイコサノイドには、ＣＢ１およびＣＢ２に対する結合親和性を示す、メタナンダミド（Ｒ異性体およびＳ異性体）、アラキドニル−２−クロロエチルアミド（ＡＣＥＡ）、アラキドニルシクロプロピルアミド（ＡＣＰＡ）および２−アラキドノイルグリセロール（２−ＡＧ）が含まれる。
【００５７】
標識−キレート剤−医療用カンナビノイド類似体コンジュゲートの実施形態は、心血管、神経、精神、免疫、内分泌および腫瘍性障害などの重篤な病理を標的とするセラノスティック剤として使用することができる。例えば、カンナビノイド化合物の特定の製剤は、増殖を低下させ、腫瘍細胞死を誘導することができる。さらに、抗増殖性細胞殺傷効果（最大７０％）の背後にある機構は、ＥＣＳの特定のＧＰＣＲｓ、ＣＢ１およびＣＢ２へカンナビノイド剤が結合することにより駆動される細胞内シグナルに起因することが知られている。
【００５８】
ＥＣＳは病的状態または疾患に対する迅速な局所反応を促進する。例えば、ニューロンのＣａ２＋チャネルや細胞ストレスカスケードの活性化が亢進した結果生じるシグナルが伝達されると、速やかに膜リン脂質の生合成変換が行われ、アナンダミドが産生され分泌される。次に、内因性カンナビノイド伝達物質は標的ＣＢ受容体に結合して活性化し、続いてアデニル酸シクラーゼの触媒機能を調節してホメオスタシスを維持し、環状アデノシン一リン酸（ｃＡＭＰ）レベルとプロテインキナーゼＡ活性を低下させ、Ｃａ２＋フラックスの平衡に達し、同時にカリウム（Ｋ＋）チャネルを修正する。それらの調節機能の完了時に、アナンダミドおよびまたは２‐ＡＧは脂肪酸アシルヒドロラーゼ（ＦＡＡＨ）活性または類似体酵素経路を介して生理的分解を受ける。特に、ＥＣＳは、特に細胞ストレスシグナル伝達に応答して、その標的ＣＢ１またはＣＢ２受容体のレベルを調節することができる。この機能は神経障害性疼痛や多発性硬化症のような特定の病的状態におけるシグナル伝達の程度を調節する正のフィードバック機構として解釈できる。ＥＣＳシステムは、肝線維症や結腸直腸癌などの疾患に逆に作用する。前者ではＣＢ１レベルは上方調節され、従ってシグナル伝達は肝硬変への有害な進行をもたらす可能性があるが、後者では低いＣＢ１発現は鎮痛効果に影響を及ぼすであろう。一方、エンドおよびエキソ医療カンナビノイドは、オピオイド、セロトニン、およびＮ‐メチル‐ｄ‐アスパラギン酸（ＮＭＤＡ）侵害受容（疼痛）回路ネットワークとクロストークする。
【００５９】
標識−キレート剤−医療用カンナビノイド類似体コンジュゲートの実施形態は、健康および疾患時における医療用カンナビノイドの影響を評価し、特定の用途に対する早期の成功または失敗を決定するために使用することができる。この標識は、慢性疼痛の管理における特定の医療用カンナビノイド類似体の効果をモニターするために使用することができる。これは、髄質中脳水道周囲灰白質および吻側腹内側領域をイメージングして鎮痛効果をモニタリングすることによって達成できる。さらに、後根神経節、脊髄および脳領域における感覚ニューロンによって選択的に発現されるＣＢ２を標的とする特定の医療用カンナビノイド類似体を利用して、医療用カンナビノイドによる鎮痛のメカニズムを研究およびモニターすることができる。
【００６０】
標識−キレート剤−医療用カンナビノイド類似体コンジュゲートの実施形態は、被験体のホメオスタシスを保護および維持することを目的とする並行機能を調節するＥＣＳおよび他の経路を分析し、よりよく理解するために使用することができる。ＣＢ１は主に中枢および末梢神経系で発現するが、他の組織では不連続な分布が観察されている。従って、ＣＢ１シグナル伝達に対して標識−キレート剤−医療用カンナビノイド類似体コンジュゲートを利用することで、広範で多面的な作用をもたらすことができる。ＣＢ１受容体は、主に認知、記憶、知覚、気分、行動および向精神性活動に関連する機能を調節することが知られているが、鎮痛、心血管、呼吸、生殖機能、また全体的なホメオスタシスの維持において役割を果たし得るという証拠が増えている。ＣＢ２受容体は、細胞が抗原依存性の成熟および選択プログラムを受ける免疫担当器官において主に発現し、病原体および異常に発達した細胞に対して調査し、強力な応答を増強することを可能にする。ＣＢ２は中枢神経系（ＣＮＳ）において比較的限られた分布を示す。ＣＢ２依存性活性には、炎症部位への免疫細胞の移動を支持し、サイトカインを放出する調節機構が関与している。医療カンナビノイド剤がサイトカイン仲介神経炎症を低下させることができることにより示されるように、ＣＢ２の発現は、ＣＮＳミクログリアにとって特に重要である。Ｏ−３２２３（合成ＣＢ２特異的アゴニスト）のような特定のＣＢ２リガンドを含む標識−キレート剤−医療用カンナビノイド類似体コンジュゲートの実施形態は、明らかなＣＢ１様媒介効果なしに、抗炎症および抗侵害受容への適用のために使用することができる。
【００６１】
本開示はまた、中枢神経、心臓血管および癌の疾患を診断、病期分類、病期再分類および治療するために使用することができる革新的な放射性医薬品イメージング類似体を提供する。放射性標識された生理学的物質によるイメージングは、リアルタイムの核イメージングプロトコルを統合することにより、分子経路の正確な測定を提供する核分子物質を用いて実施することができる。このアプローチは、患者選定のための臨床能力を強化し、薬物動態評価を改善し、投与量処方を最適化し、治療結果を予測するように設計される。セラノスティックス（診断／治療／予後診断）技術の医療大麻プラットフォームへの包括的な適用における全体的な影響は、核イメージング類似体の発展する汎用性およびハイブリッド装置の新たな能力に由来し、個々の患者の診断と治療に合わせた精度、感度、特異性およびリアルタイムデータを提供する。
【００６２】
標識‐キレート剤‐テルペノイドコンジュゲートを含む組成物は、テルペノイド化合物の強力な抗酸化、抗炎症、鎮痛、抗癌、抗生物質、および抗精神薬（不安と抑うつ）の利点を研究、モニター、および提供するために使用できる。
【００６３】
標識‐キレート剤‐フラボノイドコンジュゲートを含む組成物は、ポリフェノールカンナビスフラボノイドを含むフラボノイド化合物の有する抗酸化、抗炎症および抗癌特性を研究、モニター、および提供するために使用できる。カンナビスフラボノイドは、有意な心血管保護、特に恒常性血圧の維持、血栓形成の予防、およびアテローム性動脈硬化症リスクの減少によって冠動脈および末梢循環を改善することができる。カンナビスフラボノイドが仲介する抗酸化および抗炎症効果の機構は、ＴＮＦ‐αのアピゲニン（４′，５，７−トリヒドロキシフラボン）依存性阻害を含み、これはまた多発性硬化症および関節リウマチで治療効果を示すことが示されている。
【００６４】
標識−キレート剤−フィトステロールコンジュゲートを含む組成物を使用して、医療用大麻フィトステロールを含むフィトステロール化合物の心血管保護、抗炎症、および抗全身性浮腫特性を研究、モニター、および提供することができる。
【００６５】
標識−キレート剤−医療用カンナビノイドコンジュゲートの実施形態は、Ｎ４技術としても知られるテトラ−アザサイクリック（Ｎ４）コンジュゲートに基づく技術を利用することができ、これはまた、被験体の連続的なマルチイメージング／治療に適合させることができる。ここで、疎水性キレート剤に基づくＮ４技術は、金属を配位して、疎水性／親水性分子にコンジュゲートされ得る複合体を形成し、その複合体は、新規化合物を生成するため、または生体内分布範囲および既存化合物の標的化能力をよりよく理解するための医療用カンナビノイド類似体を含む。新規または既存の化合物のＮ４コンジュゲーションは、医用カンナビノイドを用いて、イメージング、寒冷療法、および特定の細胞受容体、経路、組織または器官を標的とする放射線療法を含む目的のために使用することができる。さらに、ある種のＮ４化合物は、米国特許第８，７５８，７２３号に記載されている他の商業的供給源から得ることができる。さらに、金属同位体は、９９ｍＴｃ、１８８Ｒｅおよび６８Ｇａのような発生器から得られるか、または入手可能でありかつ費用効果が高い６４Ｃｕおよび１１１Ｉｎのような市販の供給源から得られる。Ｎ４−コンジュゲートは、エンドカンナビノイド系の標的成分に対する高純度で効率的な処方を有する小分子、ペプチドまたは抗体のための単純なプラットフォームを提供する。さらに、放射性標識Ｎ４コンジュゲートは、異常な細胞周期およびエピジェネティックな微小環境の領域における分子標的評価を提供する。同様に、Ｎ−４セラノスティクスの適用は、治療後の評価を提供し、コンジュゲートが、同時ＳＥＥおよびＴＲＥＡＴアプローチのために、１８８Ｒｅまたは１７７Ｌｕ（ベータおよびガンマ放射体）または２２５Ａｃ、２２３Ｒａ（アルファ放射体）で標識される場合、内部放射線治療のために調整され得る。さらに、Ｎ４技術は、低温白金金属を含むかまたは含まないコンジュゲートを調製するための柔軟性を提供し、従って、Ｎ４化学がセラノスティックス剤としての細胞療法および免疫療法のための最適濃度まで医療カンナビノイドの低温ペイロードを増加させることを可能にする。放射性標識Ｎ４コンジュゲートは、カンナビノイド受容体／輸送体仲介機構を介した免疫調節機能のイメージングと腫瘍学的および神経学的疾患の治療において注目される。この医療カンナビノイドの精密に基づく技術プラットフォームは、患者の診断、治療および予後診断を改善するために、組織変性、炎症および増殖性疾患につながる経路活性化細胞受容体の動的変化を理解するための革新的なツールと診断イメージング（分子イメージング）を統合する。この技術により、医療用カンナビノイドは、カンナビノイド単独または放射性医薬品、免疫医薬品、および他の化合物との併用に適した治療薬として利用することができる。
【００６６】
いくつかの合成アンタゴニストであるタラナバント、オテナバント、およびＡＭ６５３８、ならびにインバースアゴニスト／アンタゴニストであるリモナバントは、治療薬として非常に有望である。例えば、肥満を標的とした場合、ＢＭＩが２７ｋｇ／ｍ２を超える患者において、高血圧または２型糖尿病などの危険因子を少なくとも一つ伴う場合に、体重減少、体重維持を促進し、体重再増加を予防することが示された。しかし、リモナバントは大うつ病、気分変調、発作および自殺を含む精神医学的有害事象の頻度を増加させた。これらの有害効果は、他の疾患状態に対する承認された治療的介入としての開発を妨げた。有害事象の原因はＣＢ１受容体活性のインバースアゴニスト機構に起因すると推測されているが、多くの要因が考慮されておらず、この技術プラットフォームが他の医学的状態を解決できる可能性がある。同様に、天然の医療用カンナビノイドＴＨＣのようなアゴニストは、治療的介入に大いに有望であることが示されている。例えば、医療ＴＨＣは、神経障害性疼痛および痙縮の緩和とともに化学療法を受けている患者に対して難治性の吐き気および嘔吐に関する有益性を示している。しかしながら、医療ＴＨＣは精神賦活性であり、過剰投与の場合、嗜眠、起立性低血圧、および運動調整の低下につながることもある。逆に、適切な患者、疾患および用量の場合には、病理バイオマーカーに誘導されたＮ４‐ＴＨＣセラノスティックイメージングによる疾患に対する効果は、実際に良好な臨床結果となり得ることが考えられる。
【００６７】
標識‐キレート剤‐医療カンナビノイド類似体コンジュゲートを含む組合せは、イメージングを治療介入と組み合わせ、医療カンナビノイドとコンジュゲートしたＮ４の取り込みと活性をリアルタイムでイメージングできるが、これは標的となる機能不全経路（適正な疾患）を有する個々の患者を選定し、最適用量（適正な投与量）を評価するために不可欠である。このアプローチにより、組織部位に位置する組成物を視覚的に見て、その患者のその部位への実際の取り込み量を決定することができる。このプラットフォームにより、（ａ）投与が有害事象の原因であるかどうか、（ｂ）生物学的利用能が原因であるかどうか、または（ｃ）限られた取り込み、および／または生体内分布があるかどうかを評価することができる。これらのパラメーターに合わせて、実施形態は、特に、患者に依存する効果のうちの１が遺伝的、エピジェネティック、または個体のＥＣＳに関連する対立遺伝子変異を示す場合に、それらの効果を分析するのに役立つ。
【００６８】
化合物の有効量は、患者の年齢および体重、疾患の重症度、他の共存する因子などのいくつかの因子に基づいて決定される。化合物の有効量は、１日当たり活性化合物の体重の約０．１から１００ｍｇ／ｋｇである成人に対する例示的な投与量を含み、これは単回投与または個々の分割投与の形態、例えば１日当たり１から４回投与することができる。特定の被験体に対する特定の投与量レベルおよび投与の頻度は、使用される特定の化合物の活性、その化合物の代謝安定性および作用の長さ、被験体の種、年齢、体重、一般的な健康状態、性別および食事、投与の様式および時間、排泄速度、薬物の組合せ、および特定の状態の重症度を含む種々の因子に依存し得ることが理解されるであろう。
【００６９】
さらに、いくつかの医療用カンナビノイドはいまだ調査されておらず、このプラットフォームは、精密医学的アプローチを通じて、多様な生理的疾患における効果を調査するために、いくつかの医療用カンナビノイドをコンジュゲートする基礎となる。Ｎ４技術は、標的化の有効性、取り込み、および分布を決定できるようにする。ここで、コンジュゲートは、イメージングされ、さらに有効性を評価できるようになる。実施形態は、医薬製剤、キット調製、ならびに経路指向分子薬剤が水性または有機条件下で調製される場合に、非金属／金属標識および金属／低温治療のためのそのような経路指向分子薬剤の使用および投与の方法を含む。有機溶媒中での合成および精製は、所望の組成を達成するために、保護および脱保護化学物質の使用を必要とする。
【００７０】
実施形態はまた、標識、キレート剤、およびカンナビノイド類似体コンジュゲートを有するイメージングプローブを調製するための成分を含むキットも含む。実施形態は、標識、キレート剤、およびカンナビノイド類似体コンジュゲートに基づく診断薬を調製するための成分を含むキットも含む。キットは、標識、キレート剤、およびカンナビノイド類似体コンジュゲートを含有する有効量の医薬組成物を送達するための成分を含有するように構築することもできる。特定の実施形態は、神経障害および癌の部位の診断イメージング用キット、ならびに被験体への二重治療介入剤の送達を含む。キレート剤およびカンナビノイド類似体コンジュゲートは、適切な反応条件が提供された場合、その後イメージング剤と相互作用する前駆体としてキット中に存在することができる。例えば、キットは、所定量のキレート剤−医療用カンナビノイド類似体コンジュゲートを含有する１以上の密封容器と、被験体の脳をイメージングする際に適用することができる所定量の第２のイメージング剤を含有する１以上の密封容器とを含むことができる。いくつかの態様において、キットは、放射性核種を含有する密封容器をさらに含む。特定の実施形態では、キットは、さらに、所定量のキレート剤−医療用カンナビノイド類似体コンジュゲート、およびコンジュゲート化合物を放射性核種金属イオンで標識するのに十分な量の還元剤を含む。特定の実施形態では、キットは、緩衝液と共に所定量のキレート剤−医療用カンナビノイド類似体コンジュゲートおよび還元剤をさらに含み、還元剤は、塩化スズ（ＩＩ）を含むが、これに限定されない。キットはまた、薬学的に許容される塩、緩衝液、抗酸化剤、および保存剤などの他の成分を含んでもよい。特定の実施形態では、緩衝溶液は、キレート剤−医療用カンナビノイド類似体コンジュゲートを安定化するためのリン酸緩衝溶液である。リン酸緩衝液は、水に溶解したリン酸一ナトリウム、リン酸二ナトリウム、またはそれらの組み合わせを含むことができる。ある態様において、抗酸化剤が、キレート剤部分の酸化を防止するために、キレート剤−医療用カンナビノイド類似体コンジュゲート組成物に含まれる。ある態様において、抗酸化剤は、ビタミンＣ（アスコルビン酸）である。使用することができる他の酸化防止剤としては、トコフェロール、ピリドキシン、チアミン、ブチル化ヒドロキシトルエン、エデト酸ナトリウム、またはルチンを含む。特定の態様において、安定剤は、分解を防止し、キレート部分の貯蔵寿命または保管寿命を高めるために、キレート剤−医療用カンナビノイド類似体コンジュゲート組成物に含まれる。ある態様において、安定剤はマンニトールである。しかし、糖または増量剤のような他の成分も使用することができ、ここで糖は単糖、複合鎖糖、糖アルコールまたはその塩である。安定化剤は、グルコース、ラクトース、マルトース、キシロース、ソルビトール、セルロース、またはカルボキシメチルセルロースナトリウムを含めることができるが、これらに限定されない。特定の実施形態において、所定量のキレート剤−医療用カンナビノイド類似体コンジュゲートは、治療的介入として神経障害または癌を治療するための投薬量で存在し得る。キットは、液体、凍結、乾燥形態、または凍結乾燥形態の成分を含むことができる。
【実施例】
【００７１】
実施例１．１，４，８，１１‐テトラアザシクロテトラデカン‐１′‐プロピル‐［Ｎ−（ピペリジン−１−イル）−５−（４−クロロフェニル）−１−（２，４−ジクロロフェニル）−４−メチル−１Ｈ−ピラゾール−３−カルボキサミド］（ＶＹＲ２０７としても知られる）の合成
【００７２】
【化１】
2020527589.tif 000003
【００７３】
ＶＹＲ２０７は、いくつかの方法で合成することができる。下記は、１，４，８−トリス（トリフルオロアセチル）−１，４，８，１１−テトラアザシクロテトラデカン（Ｎ４−ＴＦＡ３；ＴＦＡ３−シクラム）の合成のためのスキーム１である。
（スキーム１）
2020527589.tif 000004
【００７４】
シクラム（Ｎ４；１，４，８，１１−テトラアザシクロテトラデカン；Ｎ４；７．５３ｇ、３７．５８ｍｍｏｌ）をメタノール３０ｍＬに溶解した。この透明な溶液に、ＮＥｔ３（５．２０ｍＬ、３７．５８ｍｍｏｌ）を一度に加えた。次いで、撹拌しながら、トリフルオロ酢酸エチル（１８．０ｍＬ、１５０．３ｍｍｏｌ）を５分間かけて滴下した。均一な反応混合物を温和な発熱反応を制御するために氷水浴で冷却し、Ｎ２雰囲気下において２５°Ｃで５時間撹拌した。次いで、揮発性物質を真空下で除去した。残渣を最小量のＣＨ２Ｃ１２（２．０ｍＬ）に溶解し、短いシリカゲルパッド（２５ｇ）を通過させ、１００％  ＥｔＯＡｃで溶出した。溶離液を濃縮し、生成物を白色の半固体形態（１７．１  ｇ、９２．５％）にした。得られた化合物をプロトン核磁気共鳴（ｌＨ  ＮＭＲ）、炭素−１３核磁気共鳴（１３Ｃ  ＮＭＲ）およびエレクトロスプレーイオン化（ＥＳＩ）による高分解能質量分析（ＨＲＭＳ）により分析した。ＶＹＲ２０７のｌＨＮＭＲデータ、１３ＣＮＭＲデータ、および質量のＨＲＭＳ−ＥＳＩ測定は以下の通りである。
【００７５】
ｌＨ  ＮＭＲデータ（２００ＭＨｚ、ＣＤＣ１３）：δ３．８５−３．２５（マルチプレット、１２Ｈ）、２．８０（ブロードシングレット、２Ｈ）、２．７４−２．５０（ブロードシングレット、２Ｈ）、２．３０−１．９０（マルチプレット、２Ｈ）、１．８５−１．６３（マルチプレット、２Ｈ）、１．２５−０．６０（マルチプレット、１Ｈ）、および１３Ｃ  ＮＭＲデータ（７５．５ＭＨｚ、ＣＤＣＩ３）：δ１５８．７４−１５７．３１（マルチプレット、Ｃ＝Ｏ、コンフォーマーの存在によるマルチプレット）、１２２．８４−１１．３２（クウォーテット、ＣＦ３、Ｃ−Ｆカップリングによる、ＪＣ−Ｆ〜２６４Ｈｚ、さらに配座異性体の存在による分裂）、５１．２−４６．２（マルチプレット、Ｎに隣接するＣＨ２）、２９．４−２７．８（マルチプレット、ＣＨ２）；Ｃ１６Ｈ２１Ｆ９Ｎ４Ｏ３について計算したＨＲＭＳ‐ＥＳＩ質量はＣ  ３９．３５；Ｈ  ４．３３；Ｎ  １１．４７；Ｏ  ９．８３であった；また、見出された質量はＣ  ３９．１９；Ｈ  ４．３６；Ｎ  １１．３３；Ｏ  １０．０４であった。
【００７６】
下記はスキーム２である。ブロモプロピル−［Ｎ−（ピペリジン−１−イル）−５−（４−クロロフェニル）−１−（２，４−ジクロロフェニル）−４−メチル−１Ｈ−ピラゾール−３−カルボキサミド］の合成（スキーム２の工程１）である。
（スキーム２）
2020527589.tif 000005
【００７７】
Ｎ−（ピペリジン−１−イル）−５−（４−クロロフェニル）−１−（２，４−ジクロロフェニル）−４−メチル−１Ｈ−ピラゾール−３−カルボキサミド（ＳＲ１４１７１６、リモナバント；３．７０ｇ、７．５７ｍｍｏｌ）を、磁気撹拌無水ＣＨ３ＣＮ（３０ｍＬ）に添加した。混合物を、溶液が得られるまで室温で撹拌した（〜１０分）。次いで、この溶液にＫ２ＣＯ３（１．５７ｇ、１１．４３ｍｍｏｌ）および１，３−ジブロモプロパン（２．２９ｇ、１１．３５ｍｍｏｌ）を加えた。混合物をＮ２雰囲気下で１６時間還流した。反応の進行をＴＬＣ（１：１ＥｔＯＡｃ／ヘキサン）でモニターした。混合物を室温に冷却し、焼結ガラスフィルターを通して濾過して不溶性塩（２０ｍＬのＣＨ３ＣＮで洗浄する）を除去した。次いで、溶媒を濃縮して黄色油（６．３ｇ、７０％）を得た。出発物質ＳＲ１４１７１６の構造をＮＭＲ（図１）およびＨＰＬＣ（図２）により決定した。表１において示されるように、ピークおよび保持時間は、ピーク６での有意な純度を有するＳＲ１４１７１６の溶出を示し（７．９９４分）、これは面積％がそのデータ点に対して９９％より大きいことにより証明される。
【００７８】
【表１】
2020527589.tif 000006
【００７９】
ＨＰＬＣの条件は以下の通りであった。粒径３マイクロメートル（μｍ）、物理的寸法が直径２．１ミリメートル（ｍｍ）、長さ１００ｍｍのアテナ（登録商標）Ｃ１８カラム。使用した二つの溶媒は１００％アセトニトリル中０．１％リン酸（溶剤Ａ）と１００％アセトニトリル中０．１％リン酸（溶剤Ｂ）であった。２つの溶媒を用いて、表２に示すような勾配を作製した。ＨＰＬＣシステムを０．５ミリリットル／分（ｍＬ／ｍｉｎ）の流速で操作し、２１０ナノメートル（ｎｍ）で検出した。
【００８０】
【表２】
2020527589.tif 000007
【００８１】
次にこの化合物ＳＲ１４１７１６をコンジュゲーションおよび脱保護して、１，４，８，１１‐テトラアザシクロテトラデカン‐１′‐プロピル‐［Ｎ−（ピペリジン−１−イル）−５−（４−クロロフェニル）−１−（２，４−ジクロロフェニル）−４−メチル−１Ｈ−ピラゾール−３−カルボキサミド］（ＶＹＲ２０７）を得た（スキーム２の工程２〜３）。
【００８２】
無水ＣＨ３ＣＮ（２０ｍＬ）中のブロモプロピル−［Ｎ−（ピペリジン‐１‐イル）−５−（４−クロロフェニル）−１−（２，４−ジクロロフェニル）−４−メチル−１Ｈ−ピラゾール−３−カルボキサミド］（４．４ｇ、７．５７ｍｍｏｌ）の混合物を室温で磁気撹拌した。反応混合物に、ＫＯＨ粉末（ｇ、１１．３５ｍｍｏｌ）およびＴＦＡ３−シクラム（１１．３５ｍｍｏｌ）を加え、混合物を室温で１時間撹拌した。溶媒を減圧下においてロータリーエバポレータ上で蒸発させた。残渣を、溶離液としてヘキサン：ＥｔＯＡｃ（６：４）を使用するフラッシュクロマトグラフィーで精製して、白色固体としてＴＦＡ３−シクラム−コンジュゲート（１６ｇ、４５％）を得た。ＭｅＯＨ（６．０ｍＬ）中のＴＦＡ３−シクラム−コンジュゲート（３．０ｇ、３．０５ｍｍｏｌ）溶液に、Ｋ２ＣＯ３（１．２６ｇ、９．１ｍｍｏｌ）を一度に添加した。懸濁液を還流下で３時間加熱した。次いで、トルエン（３０ｍＬ）を冷却した混合物に添加した。トルエンと共沸混合物を形成することによりＭｅＯＨを除去した。ＭｅＯＨ溶媒を完全に除去した後、無機塩を含む熱トルエン懸濁液を濾過し、濃縮して、所望の遊離塩基（６．２ｇ、８６％）を白色固体として得た。
【００８３】
（実施例２）１，４，８，１１−テトラアザシクロテトラデカン−１′−アセチル−［Ｎ−（ピペリジン−イル）−５−（４−クロロフェニル）−１−（２，４−ジクロロフェニル）−４−メチル−１Ｈ−ピラゾール−３−カルボキサミド］（ＶＹＲ２０６）の合成。
【００８４】
標的化合物ＶＹＲ２０６（カルボニル基を有する脂肪族鎖）の構造を式ＩＩとして示し、ＶＹＲ２０６の完全合成をスキーム３に示す。
【００８５】
【化２】
2020527589.tif 000008
【００８６】
ＶＹＲ２０６はいくつかの方法で合成することができる。以下に代表的なスキームである、スキーム３を示す。
（スキーム３）
2020527589.tif 000009
【００８７】
スキーム３の工程１：１′−エチルアセチル−［Ｎ−（ピペリジニル−１−イル）−５−（４−クロロフェニル）−１−（２，４−ジクロロフェニル）−４−メチル−１Ｈ−ピラゾール−３−カルボキサミド］の合成
【００８８】
Ｎ−（ピペリジニル−１−イル）−５−（４−クロロフェニル）−１−（２，４−ジクロロフェニル）−４−メチル−１Ｈ−ピラゾール−３−カルボキサミド；ＳＲ１４１７１６；２００ｍｇ、０．４３ｍｍｏｌ）を、磁気撹拌した無水ＣＨ３ＣＮ（１０ｍＬ）に添加した。混合物を、溶液が得られるまで室温で撹拌した（１０分）。次いで、この溶液にＫ２ＣＯ３（２００ｍｇ、１．４４ｍｍｏｌ）および酢酸ブロモエチル（４００ｍｇ、２．４ｍｍｏｌ）を加えた。混合物をＮ２雰囲気下で４８時間還流した。ＴＬＣ（ＣＨ２Ｃｌ２／ＭｅＯＨ、１００：７）を用いて反応の進行をモニターし、反応は４−８時間後に完了した。混合物を室温に冷却し、焼結ガラスフィルターを通して濾過して不溶性塩（２０ｍＬのＣＨ３ＣＮで２回洗浄する）を除去した。次いで、残渣をカラムクロマトグラフィーにより単離し、塩化メチレン、次いで塩化メチレン／メタノール（１００：６）で溶出して所望の化合物を白色粉末（４２８ｍｇ、５５％）として得た。
【００８９】
スキーム３の工程２：１′−酢酸−［Ｎ−（ピペリジン−１−イル）−５−（４−クロロフェニル）−１−（２，４−ジクロロフェニル）−４−メチル−１Ｈ−ピラゾール−３−カルボキサミド］の合成
【００９０】
工程１からのエチルアセチル化化合物の脱エステル化を以下のように行った：１′−エチルアセチル−［Ｎ−（ピペリジン−１−イル）−５−（４−クロロフェニル）−１−（２，４−ジクロロフェニル）−４−メチル−ｌＨ−ピラゾール−３−カルボキサミド］（２００ｍｇ、０．３６ｍｍｏｌ）をジオキサン（９ｍＬ）に溶解した。反応混合物に、３ｍＬの水と共にＮａＯＨ（２５０μＬ、１０Ｎ）を添加した。反応混合物を５０°Ｃで４時間加熱した。反応混合物中のジオキサンを蒸発させ、次いで、水を添加した。ＨＣｌ（５Ｎ）をゆっくりと混合物に加え、ｐＨ４〜５に達した。次いで、反応混合物をＣＨ２Ｃｌ２で抽出し、生成物を白色固体として得た（１９７ｍｇ、９５％）。
【００９１】
スキーム３の工程３〜４：１，４，８，１１−テトラアザシクロテトラデカン−１′−アセチル−［Ｎ−（ピペリジン−１−イル）−５−（４−クロロフェニル）−１−（２，４−ジクロロフェニル）−４−メチル−１Ｈ−ピラゾール−３−カルボキサミド］（ＶＹＲ２０６）のコンジュゲーションおよび脱保護：
【００９２】
無水ＣＨ２Ｃｌ２（２５ｍＬ）中の１′−酢酸−［Ｎ−（ピペリジニ−ル−１−イル）−５−（４−クロロフェニル）−１−（２，４−ジクロロフェニル）−４−メチル−１Ｈ−ピラゾール−３−カルボキサミド］（１７０ｍｇ、０．３２ｍｍｏｌ）の溶液に対して、１−エチル−３−（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド（ＥＤＣ）（９１ｍｇ、０．４８ｍｍｏｌ）、ヒドロキシベンゾトリアゾール（ＨＯＢｔ）（６５ｍｇ、０．４５ｍｍｏｌ）、ジエチルアミン（ＤＥＡ）（３００μＬ）及び１，４，８−トリ−Ｂｏｃ−１，４，８，１１−テトラアザシクロテトラデカン（ＢＯＣ−シクラム；１６３ｍｇ、０．３２ｍｍｏｌ）を加えた。混合物を室温で４８時間撹拌した。保護されたＢＯＣ３−シクラム−コンジュゲートを、勾配ＣＨ２Ｃｌ２／ＭｅＯＨ（１００：１から１００：１０）を用いるフラッシュカラムクロマトグラフィーによって単離し、（３００ｍｇ，９５％）を得た。シクラムコンジュゲートを脱保護するために、ＢＯＣ３保護コンジュゲート（１７５ｍｇ、０．１７ｍｍｏｌ）をＴＦＡ／ＣＨ２Ｃｌ２（８ｍＬ；２：１）に溶解した。反応混合物を室温で６時間撹拌した。次いで、溶媒を濃縮し、ＣＨ２Ｃｌ２／ＭｅＯＨ（１００：１から１００：２５）で溶出するフラッシュクロマトグラフィーによって所望の生成物を精製して、最終化合物を白色粉末（１５０ｍｇ，８１％）として得た。ＶＹＲ２０６の構造は、ＮＭＲ，ＭＳおよびＨＰＬＣ技術（図３、図４、および図５）により決定した。
【００９３】
実施例３
【００９４】
【化３】
2020527589.tif 000010
【００９５】
実施例１のＶＹＲ２０７化合物について記載したものと同様のＮ４戦略アプローチに従って、天然カンナビノイド化合物に基づく２つの組成物、Ｎ４−カンナビジオール（ＶＹＣ２０３）およびＮ４−テトラヒドロカンナビジオール（ＶＹＴ２０５）を合成した。
【００９６】
【化４】
2020527589.tif 000011
【００９７】
ＶＹＲ２０３およびＶＹＲ２０５は、いくつかの方法で合成することができる。以下に示すのは代表的なスキームであるスキーム４である。
（スキーム４）
2020527589.tif 000012
【００９８】
簡潔には、テトラヒドロカンナビノール（ＴＨＣ）（３５０ｍｇ、１．１１ｍｍｏｌ）を、磁気撹拌した無水ＣＨ３ＣＮ（１２ｍＬ）に添加した。混合物を、溶液が得られるまで室温で撹拌した（〜１０分）。次いで、この溶液に、ブロモプロピル−［１，４，８−トリス（トリフルオロアセチル）−１，４，８，１１−テトラアザシクロテトラデカン］（ブロモプロピル−Ｎ４−ＴＦＡ３；ブロモプロピル−ＴＦＡ３；２８０ｍｇ、０．３ｍｍｏｌ）およびＫＯＨ（１５７ｍｇ、２．８ｍｍｏｌ）を加えた。混合物を室温で１時間撹拌した。反応の進行をＴＬＣ（３：１ＥｔＯＡｃ／ヘキサン）でモニターした。残渣を、溶離液としてヘキサン：ＥｔＯＡｃ（６：４）を使用するフラッシュクロマトグラフィーで精製して、白色固体（５１０ｍｇ，５１％）としてＴＦＡ３−シクラム−ＴＨＣを得た。ＭｅＯＨ（４．０ｍＬ）中のＴＦＡ３−シクラム−ＴＨＣコンジュゲートの溶液に、Ｋ２ＣＯ３（４２０ｍｇ、７．２ｍｍｏｌ）を一度に添加した。懸濁液を還流下で３時間加熱した。次いで、トルエン（２０ｍＬ）を冷却した混合物に添加した。トルエンと共沸混合物を形成することによりＭｅＯＨを除去した。ＭｅＯＨ溶媒を完全に除去した後、無機塩を含む熱トルエン懸濁液を濾過し、濃縮して、所望の遊離塩基（５７５ｍｇ，７６％）を白色固体ＶＹＴ２０５として得た。同じ合成経路をＶＹＣ２０３化合物に適用した。
【００９９】
実施例４
【０１００】
様々なＤＬＢＣＬ細胞株からの細胞溶解物の免疫ブロット分析を行い、サンプル負荷に対するコントロールとしてβ‐アクチンの発現（図６Ｂ）を伴うＣＢ１受容体の発現（図６Ａ）を評価し、各細胞株はそれぞれの頭文字で識別した。ウェスタンブロッティングは、Ｔｏｌｅ、ＴＭＤ、ＥＪ、ＬＰ、ＬＹ３およびＣＪ細胞株と比較してＲＣ細胞株でＣＢ１の非常に高いタンパク質発現レベルを示したが、ＦＮ、ＨＦ、ＤＯＨＨ２およびＤＢＲ細胞株では発現は検出されなかった。
【０１０１】
２４のＤＬＢＣＬ細胞株からの細胞溶解物を、ＣＢ１およびＣＢ２ｍＲＮＡの相対発現について分析した。ＴＪ、ＬＹ−１９、ＣＪ、およびＢＪＡＢなどの特定の細胞株では、ＣＢ１ｍＲＮＡはＣＢ２ｍＲＮＡよりも約１０〜１５％多く発現した。ＳＦ、ＭＺ、Ｔｏｌｅｄｏ、ＤＢｒ、ＳＵＤＨＬ−４、およびＭＣＡなどの特定の細胞株では、ＣＢ１ｍＲＮＡはＣＢ２ｍＲＮＡよりも約１００〜２００％多く発現した。ＳＦ、ＭＺ、Ｔｏｌｅｄｏ、ＤＢｒ、ＳＵＤＨＬ−４、およびＭＣＡなどの特定の細胞株では、ＣＢ１ｍＲＮＡはＣＢ２ｍＲＮＡよりも約１００〜２００％多く発現した。また、Ｕ２３９２やＥＪなどの細胞株では、ＣＢ１ｍＲＮＡはＣＢ２ｍＲＮＡよりも約３００〜６００％多く発現し、ＬＹ−３やＰｈｅｉｆｆｅｒなどの特定の細胞株では、ＣＢ２ｍＲＮＡはＣＢ１ｍＲＮＡよりも約２〜１０％多く発現していた。これらの結果から、主に関連していることが知られているＣＢ２とともに、ＣＢ１は悪性免疫細胞における実行可能な標的であることが示された。さらに、ＣＢ１は、リンパ芽球細胞において、治療感受性または耐性の決定を含む中心的な役割を果たす可能性がある。
【０１０２】
実施例５
【０１０３】
代謝活性細胞におけるＮＡＤ（Ｐ）Ｈ依存性デヒドロゲナーゼ酵素による着色ホルマザン色素へのＭＴＳテトラゾリウム化合物の還元に基づく生存細胞の高感度定量のための比色法であるＭＴＳアッセイを用いて、細胞生存率を評価した。ホルマザン色素は、４９０〜５００ｎｍにおける吸光度を測定することによって定量される。細胞生存率アッセイ（ＭＴＳ）を行い、４つのＣＢ１／ＣＢ２カンナビノイド受容体リガンド、すなわちＣＢ１選択的アンタゴニストＣＰ９４５，５９８（オテナバント）、ＣＢ１選択的インバースアゴニストＳＲ１４１７１６（リモナバント）およびＡＭ２５１、ならびにＣＢ２特異的アゴニストＡＭ１２４１の存在下で、４つのＤＬＢＣＬ癌細胞株、ＥＪ、Ｕ２９３２、ＣＪおよびＬＹ１９の生存率をｉｎ  ｖｉｔｒｏ（７２時間培養）で測定した。ＤＬＢＣＬ癌細胞株−ＥＪ、Ｕ２９３２、ＣＪおよびＬＹ１９の生存率に対するカンナビノイド受容体リガンドＳＲ１４１７１６の効果を図７に示す。ＤＬＢＣＬ癌細胞株−ＥＪ、Ｕ２９３２、ＣＪおよびＬＹ１９の生存率に対するカンナビノイド受容体リガンドＣＰ９４５，５９８（オテナバント）の効果を図８に示す。ＤＬＢＣＬ癌細胞株−ＥＪ、Ｕ２９３２、ＣＪおよびＬＹ１９の生存率に対するカンナビノイド受容体リガンドＡＭ１２４１の効果を図９に示す。ＤＬＢＣＬ癌細胞株−ＥＪ、Ｕ２９３２、ＣＪおよびＬＹ１９の生存率に対するカンナビノイド受容体リガンドＡＭ２５１の効果を図１０に示す。図７〜１０に示される全ての化合物は、非コンジュゲート（Ｎ４キレート剤フリー）剤に対応する。予期されるように、ＣＢ２アゴニストＡＭ１２４１は有意な効果を示したが、ＣＢ１選択的アンタゴニストおよびインバースアゴニスト（ＣＰ９４５，５９８、ＳＲ１４１７１６およびＡＭ２５１）もまた、特異的細胞株に依存し有意な結果を示した。例えば、ＳＲ１４１７１６およびＡＭ２５１はＬＹ１９に対してより強力な効果を有するようであり、ＡＭ２５１はＵ２９３２に対して最も強力であるようである。全体として、化合物はＣＢ１が治療介入の標的であることを示す。ＣＢ２はこれまでに、免疫細胞と関連することが知られている。
【０１０４】
実施例６
【０１０５】
実施例６〜８において、Ｎ４−コンジュゲート化合物を分析した。ＣＢ１インバースアゴニストＳＲ１４１７１６とそのコンジュゲート型ＶＹＲ２０６の効果を、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫（ＤＬＢＣＬ；１６の癌細胞株；図１１Ａおよび１１Ｂ）とマントル細胞リンパ腫（ＭＣＬ；８の細胞株；図１１Ｃおよび１１Ｄ）癌細胞を用いて分析した。ＳＲ１４１７１６のＤＬＢＣＬ（図１１Ａ）への曝露はＶＹＲ２０６より著しく生存率を低下させた（図１１Ｂ）。びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫癌細胞は、より低いＶＹＲ２０６濃度（＜５０μＭ）（図１１Ｂ）に対して抵抗性があった。ＶＹＲ２０６と比較して、ＳＲ１４１７１６薬剤の低用量（１０〜４０μＭ）は、ＭＣＬ細胞株における細胞生存率（特にＲｅｃ−１とＳＰ−５３で比較的急な初期勾配）の低下を示した（図１１Ｃ）。結果は、ＭＣＬ癌細胞のＶＹＲ２０６への曝露（図１１Ｄ）が、全てのＤＬＢＣＬ細胞株と比較した場合（図１１Ｂ）、細胞生存率の大幅な低下を生じることを示した。５０μＭのＶＹＲ２０６薬剤への曝露は、ＭＣＬ細胞株ＪｅｋｏおよびＭｉｎｏにおける細胞死（９０％）の誘導に有意な効果を示した（図１１Ｄ）。あまり効果的でないＶＹＲ２０６が、投薬量を制御するために有益であることを証明している可能性がある。リモナバント単独では、高用量または長期投与患者に重度の有害作用がある。効力を抑制または改変することにより、癌細胞に対する治療効果を提供しながら、有害作用を低減するのに役立てることができる。
【０１０６】
実施例７
【０１０７】
ＳＲ１４１７１６とＶＹＲ２０６の効果を分析した。細胞生存率（７２時間培養）のＭＴＳアッセイを、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫（ＤＬＢＣＬ）細胞−ＬＲ、ＭＳ、ＲＣおよびＤＯＨＨ２（図１２Ａ〜１２Ｄ）およびマントル細胞リンパ腫（ＭＣＬ）細胞−Ｊｅｋｏ、Ｍｉｎｏ、Ｒｅｃ‐１およびＪＭＰ１（図１３Ａ〜１３Ｄ）で実施した。図１２Ｂ、１２Ｃおよび１３Ｂから、予備データは、ＤＬＢＣＬ癌細胞株ＭＳ、ＤＯＨＨ２およびマントル細胞リンパ腫細胞株ＲＥＣ−１が、他の細胞株と比較して、薬剤ＶＹＲ２０６に対してより耐性があることを示す。結果は、ＬＲ、ＭＳおよびＲＣ細胞株（図１２Ａ、１２Ｂ、１２Ｄ；青線）において、ＤＬＢＣＬのＳＲ１４１７１６への曝露が、ＤＯＨＨ２細胞株と比較して、薬剤濃度５０μＭで細胞死（＜９０％）の誘導をもたらすことを示しており、阻害が＞５０％であり、ＳＲ１４１７１６は、ＶＹＲ２０６よりＤＬＢＣＬに対してより効果的であった。ＶＹＲ２０６による完全なＤＬＢＣＬ阻害は、ＬＲ、ＭＳおよびＤＯＨＨ２（図１２Ａ、１２Ｂ、１２Ｃ）については２００μＭ、ＲＣ（図１２Ｄ）については１００μＭの薬物濃度で達成された。マントル細胞リンパ腫細胞株ＪＥＫＯ、ＪＭＰ−１およびＭｉｎｏ（図１３Ａ、１３Ｂ、１３Ｄ、赤線）は、ＤＬＢＣＬよりもＶＹＲ２０６に対する抵抗性が低かった。図１２および図１３から、Ｎ４（シクラム）は試験したすべてのリンパ腫細胞株において細胞生存率に影響を及ぼさないことが証明されたことも観察された。
【０１０８】
実施例８
【０１０９】
１６種のＤＬＢＣＬ（図１４Ａおよび１４Ｂ）および８種のＭＣＬ（図１４Ｃ）細胞株における細胞生存率のハイスループットスクリーニング（ＴＨＳ）評価を、ココナッツ油抽出物中でＣＢＤとして得たカンナビジオールにより７２時間培養細胞株を処理後に評価した。
細胞生存率について、試験した全細胞の９０％が、０〜５μＭのＣＢＤの濃度範囲で生存していた。ＨＴおよびＥＪの二つの癌細胞株についてのみ、２５μＭのＣＢＤ濃度において、完全な細胞死が得られた（図１４Ｂ）。５０μＭのＣＢＤ濃度では、７つの細胞株ＭＺ、ＨＦ、ＨＢ、ＣＪ、ＭＳ、ＴｏｌｅｄｏおよびＥＪにおいて完全な細胞死生存率を与えた（図１４Ａおよび１４Ｂ）。癌細胞株ＤＯＨＨ２はより低いＣＢＤ濃度（０〜２５μＭ）に対して感受性が低かった（図１４Ｂ）。ＣＢＤ濃度範囲１５〜２０μＭに暴露した後では、８つの細胞株（ＭＺ、ＨＢ、ＣＪ、ＬＰ、ＭＣＡ、ＭＴ、ＥＪ）において５０％の細胞生存率に達した（図１４Ａおよび図１４Ｂ）。スクリーニングしたすべてのマントル細胞リンパ腫癌細胞（Ｍｉｎｏ、Ｊｅｋｏ、ＳＰ５３、Ｍａｖｅｒ−ｌＺ１３８、ＪＭＰ−１、Ｒｅｃ−１、ＰＦ−１）は、１５μＭ〜２５μＭのＣＢＤ濃度範囲では感度が低かった（図１４Ｃ）。
【０１１０】
実施例９
（スキーム５）
2020527589.tif 000013
【０１１１】
６８Ｇａ−Ｎ４−化合物標識プロセス（スキーム５、６、および７の経路Ａ）は一般にバイアル中の６８Ｇａ塩化物（０．１Ｎ  ＨＣｌ中の２０ｍＣｉ）の添加により開始された。反応を７０°Ｃで１５分間加熱し、生成物のｐＨを炭酸水素ナトリウムで５〜６に調整した。二つの分析ツール（逆相ＨＰＬＣおよび放射性ＴＬＣ）を用いてトレーサー生成物を検証し、活性医薬品成分（ＡＰＩ）純度、ＡＰＩ収率、放射化学的純度と収率、および特異的６８Ｇａ−Ｎ４化合物活性を測定した。ある種の化合物では、Ｃ−１８カラムを使用して未反応の６８Ｇａ塩化物または６８Ｇａ酸化物を除去し、次いでエタノールで溶出する必要があった。９９ｍＴｃ−Ｎ４−化合物標識プロセス（スキーム５、６、および７の経路Ｂ）は一般にバイアル中の塩化スズ（ＩＩ）（０．ｌｇ）と９９ｍＴｃ過テクネチウム酸塩（生理食塩水０．１ｍＬ中の２０ｍＣｉ）の添加により開始された。反応を直ちにキレート化し、生成物のｐＨを生理食塩水で５〜６に調整した。二つの分析ツール（逆相ＨＰＬＣおよび放射性ＴＬＣ）を用いてトレーサー生成物を検証し、活性医薬品成分（ＡＰＩ）純度、ＡＰＩ収率、放射化学的純度と収率および特異的９９ｍＴｃ‐Ｎ４−化合物活性を測定した。９９ｍＴｃ−Ｎ４−化合物の放射化学的純度を、ＮａＩ及びＵＶ検出器（２７４ｎｍ）を備えた高速液体クロマトグラフィ（ＨＰＬＣ）により評価し、アセトニトリル：水（７：３）の移動相を有するＣ−１８逆カラムを用いて０．５ｍＬ／分の流速で行った。
【０１１２】
放射化学的純度もまた、酢酸アンモニウム（水中に１Ｍ）：メタノール（６：１）で溶出したラジオＴＬＣ（ＩＴＬＣＳＧ、Ｇｅｌｍａｎ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ、Ａｎｎ  Ａｒｂｏｒ、ＭＩ）により測定した。ＮａＩ検出器とＵＶ検出器（２５４ｎｍ）を備えた高速液体クロマトグラフィ（ＨＰＬＣ）を１．０ｍＬ／分の流速においてゲル浸透カラム（Ｂｉｏｓｅｐ  ＳＥＣ−Ｓ３０００、７．８  ３００ｍｍ、Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ、Ｔｏｒｒａｎｃｅ、ＣＡ）で実施した。溶離液はリン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）（１０ｍＭ、ｐＨ７．４）中０．１％ＬｉＢｒであった。
（スキーム６）
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（スキーム７）
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【０１１３】
実施例１１
様々なＤＬＢＣＬおよびＭＣＬ細胞株に対するＶＹＲ２０６とＣＢＤの組み合わせの異なる量の効果を、免疫ブロット分析により評価した。様々なＤＬＢＣＬおよびＭＣＬ細胞株からの細胞溶解物の免疫ブロット分析を行い、サンプル負荷に対するコントロールとしてのβ−アクチンの発現を伴うＣＢ１およびＣＢ２受容体の発現に対する効果を示し（図１５Ａ〜１５Ｄ）、各細胞株はそれぞれの頭文字によって識別した。ノーザンブロット法は、ＣＢ１のＲＮＡ発現レベルの減少とコンジュゲートＣＢ１インバースアゴニストＶＹＲ２０６の量の増加と主にＣＢ２発現の変化がないことを示した。さらに、図１５Ｂおよび１５Ｃは、ＶＹＲ２０６およびＣＢＤ投与によるＣＢ２ｍＲＮＡ発現レベルの調節を示す。
【０１１４】
実施例１２
【０１１５】
細胞生存率アッセイ（ＭＴＳ）を、ｉｎ  ｖｉｔｒｏ（７２時間培養）で、カンナビノイド受容体リガンドであり、カナダのバンクーバーに本社を置くＩｓｏｄｉｏｌ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  Ｉｎｃ．からの麻由来のカンナビジオールであり、純度は９９％であるカンナビジオールＣＢＤ−９９の存在下で実施し、ＭＣＬ（Ｍｉｎｏ、Ｊｅｋｏ、Ｓｐ−５３、Ｍａｖｅｒ、Ｚ−１３８、ＪＭＰ−１、Ｒｅｃ−１、ＰＦ−１）およびＤＬＢＣＬ（ＣＪ、ＬＰ、ＲＣ、ＴＭＤ−８、ＷＰ、ＬＹ−３、ＬＹ−１９、およびＭＺ）癌細胞株の生存率を測定した。様々なＭＣＬおよびＤＬＢＣＬ細胞株の生存率に対するカンナビジオールＣＢＤ−９９の効力を、それぞれ図１６Ａおよび１６Ｂに示す。実施例１２で使用されるカンナビジオール化合物ＣＢＤ−９９は、非コンジュゲート（Ｎ４キレート剤フリー）剤である。
【０１１６】
実施例１３
【０１１７】
ＣＢ１‐選択的インバースアゴニストであるリモナバント（リモとして識別される）とブルトン型チロシンキナーゼ阻害剤であるイブルチニブ（ＩＢＮとして識別される）の存在下において、ｉｎ  ｖｉｔｒｏ（７２時間培養）でＤＬＢＣＬとＭＣＬ癌細胞株の生存率を決定するために細胞生存率アッセイ（ＭＴＳ）を実施した。様々なＤＬＢＣＬ細胞株の生存率に対するリモナバントおよびイブルチニブのＩＣ５０値が図１７に示され、様々なＭＣＬ細胞株（Ｊｅｋｏ、Ｍｉｎｏ、ＰＦ−４、ＰＦ−５）のＩＣ５０値が図１８Ａ〜１８Ｄに示されている。図１７および１８Ａ〜１８Ｄに示された全ての化合物は、非コンジュゲート（Ｎ４キレート剤フリー）剤に対応する。図１８Ａ〜１８Ｄは、ＭＣＬ細胞株（Ｊｅｋｏ、Ｊｅｋｏ−Ｒ、Ｍｉｎｏ、Ｍｉｎｏ−Ｒ、ＰＦ−４、ＰＦ−５）の生存率に対するリモナバントおよびイブルチニブの効果を示すグラフである。図１８Ａは、ＪｅｋｏおよびＪｅｋｏ−Ｒ細胞株に対する２５μＭのリモナバントおよびイブルチニブの効果を示すグラフである。図１８Ｂは、ＭｉｎｏおよびＭｉｎｏ−Ｒに対する２５μＭのリモナバントおよびイブルチニブの効果を示すグラフである。図１８Ｃは、ＰＦ−４およびＰＦ−５細胞株に対するイブルチニブの効力を示すグラフである。図１８Ｄは、ＰＦ−４およびＰＦ−５に対する２５μＭのリモナバントおよびイブルチニブの効果を示すグラフである。
【０１１８】
【表３】
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【０１１９】
実施例１４
【０１２０】
細胞生存率アッセイ（ＭＴＳ）はまた、コンジュゲートＣＢ１選択的インバースアゴニストであるＶＹＲ２０６の存在下において、ｉｎ  ｖｉｔｒｏ（７２時間培養）でＤＬＢＣＬおよびＭＣＬ癌細胞株の生存率を決定するために実施された。ＤＬＢＣＬ細胞株の生存率に関するＩＣ５０値を表３に示す。
【０１２１】
【表３】
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【０１２２】
実施例１５
【０１２３】
ＤＬＣＢＬ細胞株（ＬＲ、ＭＳ、ＲＣおよびＤＯＨＨ２）およびＭＣＬ細胞株（Ｊｅｋｏ、Ｒｅｃ−１、Ｍｉｎｏ、ＪＭＰ−１）の生存率に対するリモナバントおよびそのシクラムコンジュゲート形態であるＶＹＲ２０６の有効性を、コントロールとしてシクラムを用いて評価した。図１９Ａ〜１９Ｈは、ＤＬＣＢＬ細胞株（ＬＲ、ＭＳ、ＲＣおよびＤＯＨＨ２）およびＭＣＬ細胞株（Ｊｅｋｏ、Ｒｅｃ−１、Ｍｉｎｏ、ＪＭＰ−１）の生存率に対する、リモナバントおよびそのシクラムコンジュゲート形態であるＶＹＲ２０６の効力を示すグラフである。図１９Ａは、コントロールとしてシクラムを用いたＬＲ細胞株の生存率に対するリモナバントおよびＶＹＲ２０６の効力を示すグラフである。図１９Ｂは、コントロールとしてシクラムを用いたＭＳ細胞株の生存率に対するリモナバントおよびＶＹＲ２０６の効力を示すグラフである。図１９Ｃは、コントロールとしてシクラムを用いたＲＣ細胞株の生存率に対するリモナバントおよびＶＹＲ２０６の効力を示すグラフである。図１９Ｄは、コントロールとしてシクラムを用いたＤＯＨＨ２細胞株の生存率に対するリモナバントおよびＶＹＲ２０６の効力を示すグラフである。図１９Ｅは、コントロールとしてシクラムを用いたＪｅｋｏ細胞株の生存率に対するリモナバントおよびＶＹＲ２０６の効力を示すグラフである。図１９Ｆは、コントロールとしてシクラムを用いたＲｅｃ−１細胞株の生存率に対するリモナバントおよびＶＹＲ２０６の効力を示すグラフである。図１９Ｇは、コントロールとしてシクラムを用いたＭｉｎｏ細胞株の生存率に対するリモナバントおよびＶＹＲ２０６の効力を示すグラフである。図１９Ｈは、コントロールとしてシクラムを用いたＪＭＰ−１細胞株の生存率に対するリモナバントおよびＶＹＲ２０６の効力を示すグラフである。ＶＹＲ２０６は非コンジュゲート型リモナバントと同じ用量反応パターンに従うが、効力は低下する。この効力の低下は、リモナバントに関連する毒性および他の副作用を減少させるのに役立てることができる。提示した細胞株のほとんどは、ＶＹＲ２０６に対してある程度の感受性を持っており、Ｒｅｃ−１が耐性を有していると思われる。これは、ＶＹＲ２０６が特定の細胞株に対して選択的であり得ることを証明している可能性がある。
【０１２４】
実施例１６
【０１２５】
ＣＢ２アゴニストであるＣＢＤ単独およびイブルチニブとの併用下において、ｉｎ  ｖｉｔｒｏ（７２時間培養）でＤＬＢＣＬ（ＲＣ）およびＭＣＬ（Ｍｉｎｏ）癌細胞株の生存率を決定するために、細胞生存率アッセイ（ＭＴＳ）を実施した。結果を図２０Ａに示す。ＣＢＤ単独の存在下およびザヌブルチニブ（ＢＧＢ）との併用下において、ｉｎ  ｖｉｔｒｏ（７２時間培養）でＤＬＢＣＬ（ＲＣ）およびＭＣＬ（Ｍｉｎｏ）癌細胞株の生存率を測定するために、細胞生存率アッセイ（ＭＴＳ）を実施した。結果を図２０Ｂに示す。ＣＢＤ単独およびカーフィルゾミブ（ＣＦＺ）との併用下において、ｉｎ  ｖｉｔｒｏ（７２時間培養）でＤＬＢＣＬ（ＲＣ）およびＭＣＬ（Ｍｉｎｏ）癌細胞株の生存率を決定するために、細胞生存率アッセイ（ＭＴＳ）を行った。結果を図２０Ｃに示す。ＣＢＤ単独およびテューモレックス（ＴＭＸ）との併用下において、ｉｎ  ｖｉｔｒｏ（７２時間培養）でＤＬＢＣＬ（ＲＣ）およびＭＣＬ（Ｍｉｎｏ）癌細胞株の生存率を測定するために、細胞生存率アッセイ（ＭＴＳ）を実施した。結果を図２０Ｄに示す。ＣＢＤと化学療法剤を比較した生存率の減少が、図２０Ａ〜２０Ｄにおいて示され、ここでは、各組合せは、両方の細胞株において顕著な減少を示しており、それは相乗効果であると思われる。ＣＢＤおよび個々に選択された化学療法剤の所定量では、生存率において中程度の低下があったが、各例での併用では、ＭＣＬ（Ｍｉｎｏ）およびＤＬＢＣＬ（ＲＣ）細胞株に対し相乗効果が生じた。これは、カンナビノイドリガンドと化学療法剤との組み合わせが、化学療法化合物の治療効果を増強し得ることを示す。
【０１２６】
実施例１７
【０１２７】
様々な濃度のシクラムコンジュゲートＣＢ２アゴニストＣＢＤおよびシクラムコンジュゲートＣＢ１インバースアゴニストＶＹＲ２０６がアポトーシスを誘導するかどうかを決定するために、シクラムがコンジュゲートしたコンジュゲートＣＢＤまたはＶＹＲ２０６の濃度を増加させてＲＣ細胞を２４時間処理した。未処理細胞におけるアポトーシスの活性化は観察されなかった（表示されていないコントロール）。濃度依存的な増加が、シクラムがコンジュゲートしたコンジュゲートＣＢＤおよびＶＹＲ２０６での処理後に切断ＰＡＲＰで検出された。１２．５μＭのＣＢＤおよび５０μＭのＶＹＲ２０６では、切断ＰＡＲＰ発現において有意なアポトーシス誘導があった。ｃＰＡＲＰ発現に対する効果によるアポトーシスの誘導を示す免疫ブロット分析が、図２１Ｂにおけるサンプル負荷に対するコントロールとしてのβアクチンの発現と共に、６．２５、１２．５、２５、および５０μＭのシクラムコンジュゲートＣＢ２アゴニストＣＢＤおよびシクラムコンジュゲートＣＢ１インバースアゴニストＶＹＲ２０６で処理された細胞に対して、図２１Ａにおいて示される。ウェスタンブロッティングは、シクラムがコンジュゲートしたコンジュゲートＣＢＤおよびＶＹＲ２０６の量の増加と共にｃＰＡＲＰのタンパク質発現レベルの増加を示した。
【０１２８】
異なるＣＢＤ濃度がアポトーシスを誘導するかどうかを決定するために、ＢＪＡＢ細胞を、ＣＢＤ濃度を増加させて２４時間処理した。未処理細胞においてはアポトーシスの活性化はなかった（表示されていないコントロール）。ＣＢＤ処理後に切断カスパーゼ３と切断ＰＡＲＰの濃度依存的増加が観察された。１２．５μＭのＣＢＤでは、切断ＰＡＲＰ発現において有意なアポトーシス誘導があった。切断カスパーゼ３（図２１Ｃ）および切断ＰＡＲＰの発現（図２１Ｄ）の両方に対するＣＢＤの効果を、ウェスタン分析を用いて分析した。βアクチンの発現（図２１Ｅ）を等負荷のコントロールとして用いた。
【０１２９】
実施例１８
【０１３０】
細胞生存率アッセイ（ＭＴＳ）を実施して、コンジュゲートＣＢ１インバースアゴニスト、ＶＹＲ２０６と比較および組み合わせたＣＢ２−アゴニスト、ＣＢＤの存在下で、ｉｎ  ｖｉｔｒｏ（７２時間培養）でＤＬＢＣＬ（ＬＹ１９およびＬＲ）癌細胞株の生存率を決定した。結果を図２２Ａおよび２２Ｂに示す。ＣＢＤは、ＣＢ１およびＣＢ２受容体の両方に対して混合親和性を有し、ＶＹＲ２０６単独および組み合わせと概ね同じ応答を示した。
【０１３１】
実施例１９
【０１３２】
標的に基づく分子署名をするための潜在的分子マーカーの探索のためのＤＬＢＣＬ（ＲＣ）細胞株の遺伝的プロファイル分析。未処理およびリモナバント処理細胞における遺伝子の発現は、図２７に示すように、発現不足（緑）から過剰発現（赤）までを示す。未処理対処理細胞における有意な発現の変化を伴う遺伝子およびそれらの機能的な関連性を、表４にさらに示す。
【０１３３】
【表４】
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【０１３４】
ＤＬＢＣＬ（ＲＣ）細胞株のプロテオミクスプロファイル解析を行い、最も重要なタンパク質間の相関を明らかにしたのが表６である。これらのタンパク質は、細胞接着から細胞成長、及び増殖からアポトーシスに至る様々な細胞機能を調節する。例えば、アポトーシスの引き金と関連することが知られているＦｏｘＯ３ａは、それぞれ細胞接着および複製と関連するＮ−カドヘリンおよびＲＰＡ３２と正の直線関係を有することが示されている。これらの相関により、ＤＬＢＣＬ細胞株（ＲＣ）において発生している細胞シグナル伝達のメカニズム、およびカンナビノイド受容体活性化が関与している可能性のある場所を理解する可能性に対してさらなる洞察が提供される。
【０１３５】
【表６】
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【０１３６】
本明細書に開示された組成物および方法の様々な態様のさらなる改変および代替実施形態は、この説明に照らして明らかであろう。したがって、この説明は、例示的なものとしてのみ解釈されるべきであり、当業者に実施形態を実施する一般的な方法を教示することを目的とする。ここで示され説明される実施形態の形は、実施形態の例として捉えられることを理解されたい。実施形態のこの説明の利益を得た後に明らかであるように、要素および材料は、ここに図示および説明されたものに置き換えられてもよく、部品およびプロセスは、逆にされてもまたは省略されてもよく、実施形態の特定の特徴は、独立して利用されてもよい。特許請求の範囲に記載される実施形態の範囲から逸脱することなく、ここに記載される要素を変更することができる。
【０１３７】
これらを使用して得られた方法、組成物、および結果に関する前述の説明は、例示的な例としてのみ提供される。方法の説明は、様々な実施形態の工程が、提示された順序で実行されなければならないことを要求または暗示することを意図するものではない。前述の実施形態における工程は、任意の順序で実行することができる。「それから（ｔｈｅｎ）」などの語は、工程の順序を制限することを意図していない。これらの用語は、単に読者が方法の説明を理解するために用いられる。操作の多くは、並行してまたは同時に実行することができる。また、操作の順序を変更してもよい。これらの実施形態に対する種々の変更は、本明細書に提供される説明に基づいて容易に明らかであり、本明細書で定義される一般的な原理は、開示の範囲から逸脱することなく、他の実施形態に適用され得る。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６ＡＢ】
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【図６Ｃ】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１Ａ】
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【図１１Ｂ】
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【図１１Ｃ】
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【図１１Ｄ】
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【図１２Ａ】
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【図１２Ｂ】
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【図１２Ｃ】
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【図１２Ｄ】
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【図１３Ａ】
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【図１３Ｂ】
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【図１３Ｃ】
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【図１３Ｄ】
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【図１４Ａ】
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【図１４Ｂ】
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【図１４Ｃ】
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【図１５Ａ−１５Ｄ】
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【図１６Ａ】
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【図１６Ｂ】
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【図１７】
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【図１８Ａ】
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【図１８Ｂ】
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【図１８Ｃ】
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【図１８Ｄ】
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【図１９Ａ】
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【図１９Ｂ】
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【図１９Ｃ】
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【図１９Ｄ】
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【図１９Ｅ】
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【図１９Ｆ】
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【図１９Ｇ】
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【図１９Ｈ】
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【図２０Ａ】
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【図２０Ｂ】
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【図２０Ｃ】
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【図２０Ｄ】
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【図２１Ａ−２１Ｂ】
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【図２１Ｃ−２１Ｅ】
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【図２２Ａ】
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【図２２Ｂ】
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【図２３】
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【手続補正書】
【提出日】令和2年5月26日(2020.5.26)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
標識、キレート剤、およびカンナビノイド類似体コンジュゲートを含む組成物。
【請求項２】
標識が放射性核種である、請求項１に記載の組成物。
【請求項３】
前記標識が、テクネチウム−９９、ガリウム−６８、銅−６０、銅−６４、インジウム−１１１、ホルミウム−１６６、レニウム−１８６、レニウム−１８８、イットリウム−９０、ルテチウム−１７７、ラジウム−２２３、またはアクチニウム−２２５のうちの１以上である、前記請求項のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項４】
前記組成物が使用中に哺乳動物に投与される場合に、前記標識がコントラスト増強イメージングを促進するように構成される、前記請求項のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項５】
前記カンナビノイド類似体が免疫チェックポイントカンナビノイド受容体リガンドである、前記請求項のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項６】
前記カンナビノイド類似体が合成カンナビノイド受容体アゴニストである、前記請求項のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項７】
前記カンナビノイド類似体が天然カンナビノイド受容体アゴニストである、前記請求項のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項８】
前記カンナビノイド類似体がアミノアルキルインドールである、前記請求項のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項９】
前記カンナビノイド類似体がカンナビノイド受容体インバースアゴニストである、前記請求項のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項１０】
前記カンナビノイド類似体が、アナンダミド（ＡＥＡ）、２−アラキドノイルグリセロール（２−ＡＧ）、ノラジンエーテル、ビロダミンおよびＮ−アラキドニルドーパミン（ＮＡＤＡ）からなる群に属する、前記請求項のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項１１】
カンナビノイド類似体がジアリールピラゾールである、前記請求項のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項１２】
前記キレート剤がアミノ化または酸キレート剤である、前記請求項のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項１３】
前記キレート剤がシクラムである、前記請求項のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項１４】
前記カンナビノイド類似体がシクラム−１′−アセチル−［Ｎ−（ピペリジン−１−イル）−５−（４−クロロフェニル）−１−（２，４−ジクロロフェニル）−４−メチル−１Ｈ−ピラゾール−３−カルボキサミド］である、前記請求項のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項１５】
前記カンナビノイド類似体がシクラム−１′−プロピル−［Ｎ−（ピペリジン−１−イル）−５−（４−クロロフェニル）−１−（２，４−ジクロロフェニル）−４−メチル−１Ｈ−ピラゾール−３−カルボキサミド］である、前記請求項のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項１６】
細胞をイメージングするためのキットであって、
所定量のキレート剤および医療用カンナビノイド類似体コンジュゲートと、
所定量のイメージング剤と、を含むことを特徴とするキット。
【請求項１７】
スズ含有還元剤をさらに含む、請求項１６に記載のキット。
【国際調査報告】
2020527589.tif 000071
2020527589.tif 000072