(57)【要約】本発明は、抗ＩＬ−３６Ｒ結合化合物、特に新たな抗ＩＬ−３６Ｒ抗体、そして同を使用するための治療的及び診断的方法ならびに組成物に関する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
強皮症、掌蹠膿疱症、全身性膿疱性乾癬、糖尿病性腎症、ループス腎炎、強皮症、強直性脊椎炎、又はＩＢＤを伴う患者の処置のための方法であって、該方法が、ＴＮＦ阻害剤、循環受容体融合タンパク質、インテグリン阻害剤、又はＩＬ−２３阻害剤との併用において抗ＩＬ−３６Ｒ抗体を患者に投与することを含む方法。
【請求項２】
ＴＮＦ阻害剤がインフリキシマブ、アダリムマブ、セルトリズマブペゴルを含み、循環受容体融合タンパク質がエタネルセプトを含み、インテグリン阻害剤がベドリズマブを含む、請求項１記載の方法。
【請求項３】
抗ＩＬ−３６Ｒ抗体が：ａ）配列番号２６のアミノ酸配列（Ｌ−ＣＤＲ１）；配列番号３５、１０２、１０３、１０４、１０５、１０６、又は１４０のアミノ酸配列（Ｌ−ＣＤＲ２）；配列番号４４のアミノ酸配列（Ｌ−ＣＤＲ３）を含む軽鎖可変領域；及びｂ）配列番号５３のアミノ酸配列（Ｈ−ＣＤＲ１）；配列番号６２、１０８、１０９、１１０、又は１１１のアミノ酸配列（Ｈ−ＣＤＲ２）；配列番号７２のアミノ酸配列（Ｈ−ＣＤＲ３）を含む重鎖可変領域を含む、請求項１〜２のいずれかに記載の方法。
【請求項４】
抗ＩＬ−３６Ｒ抗体が以下を含む、請求項１〜３のいずれかに記載の方法：
Ｉ．ａ）配列番号２６のアミノ酸配列（Ｌ−ＣＤＲ１）；配列番号１０２のアミノ酸配列（Ｌ−ＣＤＲ２）；配列番号４４のアミノ酸配列（Ｌ−ＣＤＲ３）を含む軽鎖可変領域；及びｂ）配列番号５３のアミノ酸配列（Ｈ−ＣＤＲ１）；配列番号６２、１０８、１０９、１１０、又は１１１のアミノ酸配列（Ｈ−ＣＤＲ２）；配列番号７２のアミノ酸配列（Ｈ−ＣＤＲ３）を含む重鎖可変領域。
ＩＩ．ａ）配列番号２６のアミノ酸配列（Ｌ−ＣＤＲ１）；配列番号１０３のアミノ酸配列（Ｌ−ＣＤＲ２）；配列番号４４のアミノ酸配列（Ｌ−ＣＤＲ３）を含む軽鎖可変領域；及びｂ）配列番号５３のアミノ酸配列（Ｈ−ＣＤＲ１）；配列番号６２、１０８、１０９、１１０、又は１１１のアミノ酸配列（Ｈ−ＣＤＲ２）；配列番号７２のアミノ酸配列（Ｈ−ＣＤＲ３）を含む重鎖可変領域。
ＩＩＩ．ａ）配列番号２６のアミノ酸配列（Ｌ−ＣＤＲ１）；配列番号１０４のアミノ酸配列（Ｌ−ＣＤＲ２）；配列番号４４のアミノ酸配列（Ｌ−ＣＤＲ３）を含む軽鎖可変領域；及びｂ）配列番号５３のアミノ酸配列（Ｈ−ＣＤＲ１）；配列番号６２、１０８、１０９、１１０、又は１１１のアミノ酸配列（Ｈ−ＣＤＲ２）；配列番号７２のアミノ酸配列（Ｈ−ＣＤＲ３）を含む重鎖可変領域。
ＩＶ．ａ）配列番号２６のアミノ酸配列（Ｌ−ＣＤＲ１）；配列番号１０５のアミノ酸配列（Ｌ−ＣＤＲ２）；配列番号４４のアミノ酸配列（Ｌ−ＣＤＲ３）を含む軽鎖可変領域；及びｂ）配列番号５３のアミノ酸配列（Ｈ−ＣＤＲ１）；配列番号６２、１０８、１０９、１１０、又は１１１のアミノ酸配列（Ｈ−ＣＤＲ２）；配列番号７２のアミノ酸配列（Ｈ−ＣＤＲ３）を含む重鎖可変領域。
Ｖ．ａ）配列番号２６のアミノ酸配列（Ｌ−ＣＤＲ１）；配列番号１０６のアミノ酸配列（Ｌ−ＣＤＲ２）；配列番号４４のアミノ酸配列（Ｌ−ＣＤＲ３）を含む軽鎖可変領域；及びｂ）配列番号５３のアミノ酸配列（Ｈ−ＣＤＲ１）；配列番号６２、１０８、１０９、１１０、又は１１１のアミノ酸配列（Ｈ−ＣＤＲ２）；配列番号７２のアミノ酸配列（Ｈ−ＣＤＲ３）を含む重鎖可変領域。
ＶＩ．ａ）配列番号２６のアミノ酸配列（Ｌ−ＣＤＲ１）；配列番号１４０のアミノ酸配列（Ｌ−ＣＤＲ２）；配列番号４４のアミノ酸配列（Ｌ−ＣＤＲ３）を含む軽鎖可変領域；及びｂ）配列番号５３のアミノ酸配列（Ｈ−ＣＤＲ１）；配列番号６２、１０８、１０９、１１０、又は１１１のアミノ酸配列（Ｈ−ＣＤＲ２）；配列番号７２のアミノ酸配列（Ｈ−ＣＤＲ３）を含む重鎖可変領域。
【請求項５】
抗ＩＬ−３６Ｒ抗体が以下を含む、請求項１〜４のいずれかに記載の方法：
（ｉ）配列番号７７のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域；及び配列番号８７のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；又は
（ｉｉ）配列番号７７のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域；及び  配列番号８８のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；又は
（ｉｉｉ）配列番号７７のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域；及び  配列番号８９のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；又は
（ｉｖ）配列番号８０のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域；及び配列番号８７のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；又は
（ｖ）配列番号８０のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域；及び配列番号８８のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；又は
（ｖｉ）配列番号８０のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域；及び配列番号８９のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；又は
（ｖｉｉ）配列番号８５のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域；及び配列番号１００のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；又は
（ｖｉｉｉ）配列番号８５のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域；及び配列番号１０１のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；又は
（ｉｘ）配列番号８６のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域；及び配列番号１００のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；又は
（ｘ）配列番号８６のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域；及び配列番号１０１のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域。
【請求項６】
抗ＩＬ−３６Ｒ抗体が以下を含む、請求項１〜５のいずれかに記載の方法：
ｉ．配列番号１１５のアミノ酸配列を含む軽鎖；及び配列番号１２５のアミノ酸配列を含む重鎖；又は
ｉｉ．配列番号１１５のアミノ酸配列を含む軽鎖；及び配列番号１２６のアミノ酸配列を含む重鎖；又は
ｉｉｉ．配列番号１１５のアミノ酸配列を含む軽鎖；及び配列番号１２７のアミノ酸配列を含む重鎖；又は
ｉｖ．配列番号１１８のアミノ酸配列を含む軽鎖；及び配列番号１２５のアミノ酸配列を含む重鎖；又は
ｖ．配列番号１１８のアミノ酸配列を含む軽鎖；及び配列番号１２６のアミノ酸配列を含む重鎖；又は
ｖｉ．配列番号１１８のアミノ酸配列を含む軽鎖；及び配列番号１２７のアミノ酸配列を含む重鎖；又は
ｖｉｉ．配列番号１２３のアミノ酸配列を含む軽鎖；及び配列番号１３８のアミノ酸配列を含む重鎖；又は
ｖｉｉｉ．配列番号１２３のアミノ酸配列を含む軽鎖；及び配列番号１３９のアミノ酸配列を含む重鎖；又は
ｉｘ．配列番号１２４のアミノ酸配列を含む軽鎖；及び配列番号１３８のアミノ酸配列を含む重鎖。
【請求項７】
抗ＩＬ−３６Ｒ抗体を、静脈内負荷用量、それに続く１回以上の皮下注射により投与する、請求項１〜６のいずれかに記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
発明の技術分野
本発明は一般的に、診断的及び治療的な使用のための抗ＩＬ−３６Ｒ抗体に関する。抗体は、そのような化合物を含む医薬組成物及びキットにおいて使用することができる。抗体は、種々の疾患又は障害、例えば、ヒトにおける免疫学的疾患、炎症性疾患、自己免疫疾患、線維性疾患、及び呼吸器疾患の処置のための方法において有用である。
【０００２】
発明の背景
サイトカインのＩＬ−１ファミリーは、１１異なるリガンド、即ち、ＩＬ−１α（ＩＬ−１Ｆ１とも呼ばれる）、ＩＬ−１β（ＩＬ−１Ｆ２）、ＩＬ−１受容体アンタゴニスト（ＩＬ−１Ｒａ又はＩＬ−１Ｆ３）、ＩＬ−１８（ＩＬ−１Ｆ４）、ＩＬ−１Ｆ５〜ＩＬ−１Ｆ１０、及びＩＬ−１Ｆ１１（又はＩＬ−３３）で構成される。ＩＬ−１α及びＩＬ−１βは、Ｉ型ＩＬ−１受容体（ＩＬ−１ＲＩ）への結合及び共通の共受容体ＩＬ−１受容体アクセサリータンパク質（ＩＬ−１ＲＡｃＰ）の動員に対して炎症誘発性活性を誘導することが公知であるのに対し、ＩＬ−１Ｒａは、ＩＬ−１ＲＩへのＩＬ−１結合の競合的阻害剤として作用し、このように、抗炎症活性を発揮する。多数の試験で、ＩＬ−１８がＩＦＮ−γの誘導因子である炎症誘発性サイトカインであるとして報告されたのに対し、ＩＬ−３３はＴｈ２応答の制御に特に含まれる免疫調節性サイトカインとして記載された。ＩＬ−１ファミリーの新たなメンバー（ＩＬ−１Ｆ５、ＩＬ−１Ｆ６、ＩＬ−１Ｆ８、及びＩＬ−１Ｆ９を含む）は、ＩＬ−１のホモログについてのＤＮＡデータベースの検索を通じて同定された。ヒト及びマウスでは、これらのサイトカインをコードする全ての遺伝子が、染色体２ｑの３００kb未満にマップされ、ここではそれらは、ＩＬ１Ａ、ＩＬ１Ｂ、及びＩＬ１ＲＮ遺伝子により隣接されている。ＩＬ−１Ｆ６、ＩＬ−１Ｆ８、及びＩＬ−１Ｆ９は、ＩＬ−１及びＩＬ−１Ｒａと２１%〜３７%のアミノ酸配列相同性を共有するのに対し、ＩＬ−１Ｆ５はＩＬ−１Ｒａと５２%のアミノ酸配列相同性を呈し、ＩＬ−１Ｆ５が内因性受容体アンタゴニストを表しうることを示唆する。
【０００３】
ＩＬ−１Ｆ６、ＩＬ−１Ｆ８、及びＩＬ−１Ｆ９は、ＩＬ−１Ｒｒｐ２（ＩＬ−１Ｒファミリーの受容体）に結合し、ＩＬ−１ＲＡｃＰを共受容体として使用し、ＩＬ−１により誘導されるシグナルと同様の細胞内シグナルを刺激するのに対し、ＩＬ−１Ｆ５は、ＩＬ−１Ｒｒｐ２を過剰発現するＪｕｒｋａｔ  Ｔ細胞においてＩＬ−１Ｆ９誘導性ＮＦ−κＢ活性化を阻害することが示された。ＩＬ−１βと同様に、全てのこれらのＩＬ−１ホモログがリーダーペプチドを欠き、従来の分泌経路を通じて放出されることはできないが、試験では、ＩＬ−１Ｒｒｐ２アゴニストの放出がＩＬ−１β分泌を調節する機構とは異なる機構により制御されうることが示唆されている。これらのサイトカインの特定の生物学的効果を認識し、それらが全て同じ受容体に結合することを認識するために、ＩＬ−１ホモログの命名法を修正することが最近提案された。このように、ＩＬ−１Ｒｒｐ２は現在ＩＬ−３６Ｒと呼ばれ、そのリガンドはＩＬ−３６α（ＩＬ−１Ｆ６）、ＩＬ−３６β（ＩＬ−１Ｆ８）、及びＩＬ−３６γ（ＩＬ−１Ｆ９）と命名されている。また、ＩＬ−１Ｆ５は、受容体アンタゴニスト活性を発揮することが示されており、ＩＬ−３６Ｒａに改名されている。
【０００４】
ＩＬ−３６α、ＩＬ−３６β、及びＩＬ−３６γのメッセンジャーＲＮＡは、病原体に曝露されているいくつかの組織、特に内部上皮組織中及び皮膚中で高度に発現されている。興味深いことに、ＩＬ−ＩＬ−３６Ｒａ及びＩＬ−３６αの発現が１β／ＴＮＦ−α刺激ヒトケラチノサイトにおいて有意に上方調節されており、ＩＬ−３６Ｒａ及びＩＬ−３６γ  ｍＲＮＡが病変性乾癬皮膚において高度に増加している。さらに、ＩＬ−３６γタンパク質産生が、ＴＮＦ−α及びＩＦＮ−γ刺激後のヒトケラチノサイトにおいて増強されている。ＩＬ−３６α  ｍＲＮＡ及びタンパク質発現の上昇が、慢性腎疾患においても報告されている。
【０００５】
ケラチノサイトにおいてＩＬ−３６αを過剰発現するトランスジェニックマウスは、乾癬といくつかの特色を共有する炎症性皮膚病変を示す。この表現型は、トランスジェニックマウスをＩＬ−３６Ｒａ欠損マウスと交配した場合により重度になり、インビボでのＩＬ−３６Ｒａの調節機能を裏付けている。ケラチノサイト特異的ＩＬ−３６αトランスジェニックの炎症性皮膚状態は、マウスを１２−Ｏ−テトラデカノイルホルボール１３−アセテートで処置した場合にヒト乾癬にさらに類似し、組織学的、分子的、及び治療への応答においてヒト疾患に似ている。さらに、免疫不全マウスに移植されたヒト乾癬病変皮膚は、マウスを抗ＩＬ−３６Ｒ抗体で処置する場合に正常化され、ＩＬ−３６軸がヒト乾癬皮膚における病変表現型を維持するために要求されることを立証している。まとめると、これらのデータは、ＩＬ−３６Ｒリガンド（ＩＬ−３６α、ＩＬ−３６β、及びＩＬ−３６γを含む）がインビトロ及びインビボで炎症誘発性効果を発揮し、ＩＬ−３６Ｒａが天然アンタゴニストとして作用し、このようにＩＬ−１／ＩＬ−１Ｒａシステムを模倣することを示す。
【０００６】
従って、ＩＬ−３６Ｒリガンドが多数の疾患状態に含まれるとの証拠があり、特に炎症性疾患の処置における使用のために、この経路を標的化する新たな治療用薬剤についての必要性がある。
【０００７】
発明の概要
本発明は、ＩＬ−３６Ｒに結合する生物治療薬、特に抗体を提供することにより、上記の必要性に対処する。一態様では、本発明の抗体は、ＩＬ３６リガンド媒介性シグナル伝達（α、β、及び／又はγ）を遮断する。一態様では、本発明の抗体は、例えば、疾患（例えば乾癬、炎症性腸疾患、強皮症、ＣＯＰＤ、及び慢性腎臓病など）における上皮媒介性炎症／線維症の処置のために有用である。
【０００８】
一態様では、本発明は、強皮症、掌蹠膿疱症、全身性膿疱性乾癬、糖尿病性腎症、ループス腎炎、強皮症、強直性脊椎炎、又はＩＢＤを伴う患者の処置のための方法に関し、前記方法は、ＴＮＦ阻害剤、循環受容体融合タンパク質、インテグリン阻害剤、又はＩＬ−２３阻害剤との併用において抗ＩＬ−３６Ｒ抗体を患者に投与することを含む。
【０００９】
上記の態様に関する実施形態では、ＴＮＦ阻害剤はインフリキシマブ、アダリムマブ、セルトリズマブペゴルを含み、循環受容体融合タンパク質はエタネルセプトを含み、インテグリン阻害剤はベドリズマブを含む。上記の態様に関する別の実施形態では、抗ＩＬ−３６Ｒ抗体は以下を含む：ａ）配列番号２６のアミノ酸配列（Ｌ−ＣＤＲ１）；配列番号３５、１０２、１０３、１０４、１０５、１０６、又は１４０のアミノ酸配列（Ｌ−ＣＤＲ２）；配列番号４４のアミノ酸配列（Ｌ−ＣＤＲ３）を含む軽鎖可変領域；及びｂ）配列番号５３のアミノ酸配列（Ｈ−ＣＤＲ１）；配列番号６２、１０８、１０９、１１０、又は１１１のアミノ酸配列（Ｈ−ＣＤＲ２）；配列番号７２のアミノ酸配列（Ｈ−ＣＤＲ３）を含む重鎖可変領域。上記の態様に関する別の実施形態では、抗ＩＬ−３６Ｒ抗体は以下を含む：
Ｉ．ａ）配列番号２６のアミノ酸配列（Ｌ−ＣＤＲ１）；配列番号１０２のアミノ酸配列（Ｌ−ＣＤＲ２）；配列番号４４のアミノ酸配列（Ｌ−ＣＤＲ３）を含む軽鎖可変領域；及びｂ）配列番号５３のアミノ酸配列（Ｈ−ＣＤＲ１）；配列番号６２、１０８、１０９、１１０、又は１１１のアミノ酸配列（Ｈ−ＣＤＲ２）；配列番号７２のアミノ酸配列（Ｈ−ＣＤＲ３）を含む重鎖可変領域。
ＩＩ．ａ）配列番号２６のアミノ酸配列（Ｌ−ＣＤＲ１）；配列番号１０３のアミノ酸配列（Ｌ−ＣＤＲ２）；配列番号４４のアミノ酸配列（Ｌ−ＣＤＲ３）を含む軽鎖可変領域；及びｂ）配列番号５３のアミノ酸配列（Ｈ−ＣＤＲ１）；配列番号６２、１０８、１０９、１１０、又は１１１のアミノ酸配列（Ｈ−ＣＤＲ２）；配列番号７２のアミノ酸配列（Ｈ−ＣＤＲ３）を含む重鎖可変領域。
ＩＩＩ．ａ）配列番号２６のアミノ酸配列（Ｌ−ＣＤＲ１）；配列番号１０４のアミノ酸配列（Ｌ−ＣＤＲ２）；配列番号４４のアミノ酸配列（Ｌ−ＣＤＲ３）を含む軽鎖可変領域；及びｂ）配列番号５３のアミノ酸配列（Ｈ−ＣＤＲ１）；配列番号６２、１０８、１０９、１１０、又は１１１のアミノ酸配列（Ｈ−ＣＤＲ２）；配列番号７２のアミノ酸配列（Ｈ−ＣＤＲ３）を含む重鎖可変領域。
ＩＶ．ａ）配列番号２６のアミノ酸配列（Ｌ−ＣＤＲ１）；配列番号１０５のアミノ酸配列（Ｌ−ＣＤＲ２）；配列番号４４のアミノ酸配列（Ｌ−ＣＤＲ３）を含む軽鎖可変領域；及びｂ）配列番号５３のアミノ酸配列（Ｈ−ＣＤＲ１）；配列番号６２、１０８、１０９、１１０、又は１１１のアミノ酸配列（Ｈ−ＣＤＲ２）；配列番号７２のアミノ酸配列（Ｈ−ＣＤＲ３）を含む重鎖可変領域。
Ｖ．ａ）配列番号２６のアミノ酸配列（Ｌ−ＣＤＲ１）；配列番号１０６のアミノ酸配列（Ｌ−ＣＤＲ２）；配列番号４４のアミノ酸配列（Ｌ−ＣＤＲ３）を含む軽鎖可変領域；及びｂ）配列番号５３のアミノ酸配列（Ｈ−ＣＤＲ１）；配列番号６２、１０８、１０９、１１０、又は１１１のアミノ酸配列（Ｈ−ＣＤＲ２）；配列番号７２のアミノ酸配列（Ｈ−ＣＤＲ３）を含む重鎖可変領域。
ＶＩ．ａ）配列番号２６のアミノ酸配列（Ｌ−ＣＤＲ１）；配列番号１４０のアミノ酸配列（Ｌ−ＣＤＲ２）；配列番号４４のアミノ酸配列（Ｌ−ＣＤＲ３）を含む軽鎖可変領域；及びｂ）配列番号５３のアミノ酸配列（Ｈ−ＣＤＲ１）；配列番号６２、１０８、１０９、１１０、又は１１１のアミノ酸配列（Ｈ−ＣＤＲ２）；配列番号７２のアミノ酸配列（Ｈ−ＣＤＲ３）を含む重鎖可変領域。
【００１０】
上記の態様に関する別の実施形態では、抗ＩＬ−３６Ｒ抗体は以下を含む：
（ｉ）配列番号７７のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域；及び配列番号８７のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；又は
（ｉｉ）配列番号７７のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域；及び配列番号８８のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；又は
（ｉｉｉ）配列番号７７のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域；及び  配列番号８９のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；又は
（ｉｖ）配列番号８０のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域；及び配列番号８７のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；又は
（ｖ）配列番号８０のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域；及び配列番号８８のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；又は
（ｖｉ）配列番号８０のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域；及び配列番号８９のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；又は
（ｖｉｉ）配列番号８５のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域；及び配列番号１００のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；又は
（ｖｉｉｉ）配列番号８５のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域；及び配列番号１０１のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；又は
（ｉｘ）配列番号８６のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域；及び配列番号１００のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；又は
（ｘ）配列番号８６のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域；及び配列番号１０１のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域。
【００１１】
上記の態様に関する別の実施形態では、抗ＩＬ−３６Ｒ抗体は以下を含む：
ｉ．配列番号１１５のアミノ酸配列を含む軽鎖；及び配列番号１２５のアミノ酸配列を含む重鎖；又は
ｉｉ．配列番号１１５のアミノ酸配列を含む軽鎖；及び配列番号１２６のアミノ酸配列を含む重鎖；又は
ｉｉｉ．配列番号１１５のアミノ酸配列を含む軽鎖；及び配列番号１２７のアミノ酸配列を含む重鎖；又は
ｉｖ．配列番号１１８のアミノ酸配列を含む軽鎖；及び配列番号１２５のアミノ酸配列を含む重鎖；又は
ｖ．配列番号１１８のアミノ酸配列を含む軽鎖；及び配列番号１２６のアミノ酸配列を含む重鎖；又は
ｖｉ．配列番号１１８のアミノ酸配列を含む軽鎖；及び配列番号１２７のアミノ酸配列を含む重鎖；又は
ｖｉｉ．配列番号１２３のアミノ酸配列を含む軽鎖；及び配列番号１３８のアミノ酸配列を含む重鎖；又は
ｖｉｉｉ．配列番号１２３のアミノ酸配列を含む軽鎖；及び配列番号１３９のアミノ酸配列を含む重鎖；又は
ｉｘ．配列番号１２４のアミノ酸配列を含む軽鎖；及び配列番号１３８のアミノ酸配列を含む重鎖。
【００１２】
上記の態様に関する別の実施形態では、抗ＩＬ−３６Ｒ抗体は、静脈内負荷用量、それに続く１回以上の皮下注射により投与する。
【００１３】
一態様では、本発明は、以下の特性の１つ以上を有する抗ＩＬ−３６Ｒ抗体を提供する。
【００１４】
一態様では、本発明の抗ＩＬ−３６Ｒ抗体は、高い分子／細胞結合効力を有する。一態様では、本発明の抗ＩＬ−３６Ｒ抗体はＫＤ＜０．１nMでヒトＩＬ−３６Ｒに結合する。さらなる態様では、本発明の抗ＩＬ−３６Ｒ抗体、特にヒト化抗ＩＬ−３６Ｒ抗体は、ＫＤ＜５０pMでヒトＩＬ−３６Ｒに結合する。一態様では、本発明の抗ＩＬ−３６Ｒ抗体はＥＣ９０＜５ｎＭでＩＬ−３６Ｒ発現細胞に結合する。
【００１５】
別の態様では、本発明の抗ＩＬ−３６Ｒ抗体は高い細胞ベースの機能的遮断効力を有する。一態様では、本発明の抗ＩＬ−３６Ｒ抗体は、疾患関連細胞株及び初代細胞において、ＩＣ９０＜５nMで全ての３つのＩＬ−３６Ｒアゴニストリガンド（α、β、γ）を遮断する。
【００１６】
一態様では、本発明の抗ＩＬ−３６Ｒ抗体は、上に示す分子／細胞結合効力及び細胞ベースの機能的遮断効力を有する。
【００１７】
さらなる態様では、本発明の抗ＩＬ−３６Ｒ抗体は、例えば、ヒトＩＬ−１Ｒ１又はＩＬ−３６Ｒ陰性細胞株に対して１０００倍を超える高い選択性を有する。さらなる態様では、本発明の抗ＩＬ−３６Ｒ抗体は、ヒトＩＬ−１Ｒ１又はＩＬ−３６Ｒ陰性細胞株に結合しない。
【００１８】
実施形態１では、本発明は抗ＩＬ−３６Ｒ抗体又はその抗原結合フラグメントを提供し、それは０．１nMと等しい又はそれ未満のＫＤでヒトＩＬ−３６Ｒに結合する。
【００１９】
実施形態２では、本発明は、実施形態１に従った抗ＩＬ−３６Ｒ抗体又はその抗原結合フラグメントを提供し、それにおいて前記抗体又は抗原結合フラグメントはモノクローナル抗体又はその抗原結合フラグメントである。
【００２０】
実施形態３では、本発明は、実施形態１又は２に従った抗ＩＬ−３６Ｒ抗体又はその抗原結合フラグメントを提供し、それにおいて前記抗体又は抗原結合フラグメントはヒト化抗体又はその抗原結合フラグメントである。
【００２１】
実施形態４では、本発明は、実施形態３に従った抗ＩＬ−３６Ｒ抗体又はその抗原結合フラグメントを提供し、それは５０pMと等しい又はそれ未満のＫＤでヒトＩＬ−３６Ｒに結合する。
【００２２】
実施形態５では、本発明は、実施形態１〜４のいずれか１つに従った抗ＩＬ−３６Ｒ抗体又はその抗原結合フラグメントを提供し、それはヒトＩＬ−１Ｒ１に結合しない。
【００２３】
実施形態６では、本発明は、実施形態１に従った抗ＩＬ−３６Ｒ抗体又はその抗原結合フラグメントを提供し、それにおいて抗体又はその抗原結合フラグメントは以下を含む：
ａ）配列番号２６のアミノ酸配列（Ｌ−ＣＤＲ１）；配列番号３５、１０２、１０３、１０４、１０５、１０６、又は１４０のアミノ酸配列（Ｌ−ＣＤＲ２）；配列番号４４のアミノ酸配列（Ｌ−ＣＤＲ３）を含む軽鎖可変領域；及び
ｂ）配列番号５３のアミノ酸配列（Ｈ−ＣＤＲ１）；配列番号６２、１０８、１０９、１１０、又は１１１のアミノ酸配列（Ｈ−ＣＤＲ２）；配列番号７２のアミノ酸配列（Ｈ−ＣＤＲ３）を含む重鎖可変領域。
【００２４】
実施形態７では、本発明は、実施形態６に従った抗ＩＬ−３６Ｒ抗体又はその抗原結合フラグメントを提供し、それにおいて抗体又はその抗原結合フラグメントは以下を含む：
ａ）配列番号２６のアミノ酸配列（Ｌ−ＣＤＲ１）；配列番号１０２のアミノ酸配列（Ｌ−ＣＤＲ２）；配列番号４４のアミノ酸配列（Ｌ−ＣＤＲ３）を含む軽鎖可変領域；及び
ｂ）配列番号５３のアミノ酸配列（Ｈ−ＣＤＲ１）；配列番号６２、１０８、１０９、１１０、又は１１１のアミノ酸配列（Ｈ−ＣＤＲ２）；配列番号７２のアミノ酸配列（Ｈ−ＣＤＲ３）を含む重鎖可変領域。
【００２５】
実施形態８では、本発明は、実施形態６に従った抗ＩＬ−３６Ｒ抗体又はその抗原結合フラグメントを提供し、それにおいて抗体又はその抗原結合フラグメントは以下を含む：
ａ）配列番号２６のアミノ酸配列（Ｌ−ＣＤＲ１）；配列番号１０３のアミノ酸配列（Ｌ−ＣＤＲ２）；配列番号４４のアミノ酸配列（Ｌ−ＣＤＲ３）を含む軽鎖可変領域；及び
ｂ）配列番号５３のアミノ酸配列（Ｈ−ＣＤＲ１）；配列番号６２、１０８、１０９、１１０、又は１１１のアミノ酸配列（Ｈ−ＣＤＲ２）；配列番号７２のアミノ酸配列（Ｈ−ＣＤＲ３）を含む重鎖可変領域。
【００２６】
実施形態９では、本発明は、実施形態６に従った抗ＩＬ−３６Ｒ抗体又はその抗原結合フラグメントを提供し、それにおいて抗体又はその抗原結合フラグメントは以下を含む：
ａ）配列番号２６のアミノ酸配列（Ｌ−ＣＤＲ１）；配列番号１０４のアミノ酸配列（Ｌ−ＣＤＲ２）；配列番号４４のアミノ酸配列（Ｌ−ＣＤＲ３）を含む軽鎖可変領域；及び
ｂ）配列番号５３のアミノ酸配列（Ｈ−ＣＤＲ１）；配列番号６２、１０８、１０９、１１０、又は１１１のアミノ酸配列（Ｈ−ＣＤＲ２）；配列番号７２のアミノ酸配列（Ｈ−ＣＤＲ３）を含む重鎖可変領域。
【００２７】
実施形態１０では、本発明は、実施形態６に従った抗ＩＬ−３６Ｒ抗体又はその抗原結合フラグメントを提供し、それにおいて抗体又はその抗原結合フラグメントは以下を含む：
ａ）配列番号２６のアミノ酸配列（Ｌ−ＣＤＲ１）；配列番号１０５のアミノ酸配列（Ｌ−ＣＤＲ２）；配列番号４４のアミノ酸配列（Ｌ−ＣＤＲ３）を含む軽鎖可変領域；及び
ｂ）配列番号５３のアミノ酸配列（Ｈ−ＣＤＲ１）；配列番号６２、１０８、１０９、１１０、又は１１１のアミノ酸配列（Ｈ−ＣＤＲ２）；配列番号７２のアミノ酸配列（Ｈ−ＣＤＲ３）を含む重鎖可変領域。
【００２８】
実施形態１１では、本発明は、実施形態６に従った抗ＩＬ−３６Ｒ抗体又はその抗原結合フラグメントを提供し、それにおいて抗体又はその抗原結合フラグメントは以下を含む：
ａ）配列番号２６のアミノ酸配列（Ｌ−ＣＤＲ１）；配列番号１０６のアミノ酸配列（Ｌ−ＣＤＲ２）；配列番号４４のアミノ酸配列（Ｌ−ＣＤＲ３）を含む軽鎖可変領域；及び
ｂ）配列番号５３のアミノ酸配列（Ｈ−ＣＤＲ１）；配列番号６２、１０８、１０９、１１０、又は１１１のアミノ酸配列（Ｈ−ＣＤＲ２）；配列番号７２のアミノ酸配列（Ｈ−ＣＤＲ３）を含む重鎖可変領域。
【００２９】
実施形態１２では、本発明は、実施形態６に従った抗ＩＬ−３６Ｒ抗体又はその抗原結合フラグメントを提供し、それにおいて抗体又はその抗原結合フラグメントは以下を含む：
ａ）配列番号２６のアミノ酸配列（Ｌ−ＣＤＲ１）；配列番号１４０のアミノ酸配列（Ｌ−ＣＤＲ２）；配列番号４４のアミノ酸配列（Ｌ−ＣＤＲ３）を含む軽鎖可変領域；及び
ｂ）配列番号５３のアミノ酸配列（Ｈ−ＣＤＲ１）；配列番号６２、１０８、１０９、１１０又は１１１のアミノ酸配列（Ｈ−ＣＤＲ２）；配列番号７２のアミノ酸配列（Ｈ−ＣＤＲ３）を含む重鎖可変領域。
【００３０】
実施形態１３では、本発明は、実施形態１に従った抗ＩＬ−３６Ｒ抗体又はその抗原結合フラグメントを提供し、それにおいて抗体又はその抗原結合フラグメントは、配列番号７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、又は８３のいずれか１つのアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域；及び配列番号８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、又は９５のいずれか１つのアミノ酸配列を含む重鎖可変領域を含む。
【００３１】
実施形態１４では、本発明は、実施形態１３に従った抗ＩＬ−３６Ｒ抗体又はその抗原結合フラグメントを提供し、それにおいて抗体又はその抗原結合フラグメントは、配列番号７７のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域；及び配列番号８７のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；又は
配列番号７７のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域；及び配列番号８８のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；又は
配列番号７７のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域；及び配列番号８９のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域を含む。
【００３２】
実施形態１５では、本発明は、配列番号８０のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域；及び配列番号８７のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；又は
配列番号８０のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域；及び配列番号８８のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；又は
配列番号８０のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域；及び配列番号８９のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域を含む抗体又はその抗原結合フラグメントを提供する。
【００３３】
実施形態１６では、本発明は、実施形態１に従った抗ＩＬ−３６Ｒ抗体又はその抗原結合フラグメントを提供し、それにおいて抗体又はその抗原結合フラグメントは以下を含む：
配列番号２７のアミノ酸配列（Ｌ−ＣＤＲ１）；配列番号３６のアミノ酸配列（Ｌ−ＣＤＲ２）；配列番号４５のアミノ酸配列（Ｌ−ＣＤＲ３）を含む軽鎖可変領域；及び配列番号１０７のアミノ酸配列（Ｈ−ＣＤＲ１）；配列番号６３のアミノ酸配列（Ｈ−ＣＤＲ２）；配列番号７３のアミノ酸配列（Ｈ−ＣＤＲ３）を含む重鎖可変領域；又は配列番号２７のアミノ酸配列（Ｌ−ＣＤＲ１）；配列番号３６のアミノ酸配列（Ｌ−ＣＤＲ２）；配列番号４５のアミノ酸配列（Ｌ−ＣＤＲ３）を含む軽鎖可変領域；及び配列番号１０７のアミノ酸配列（Ｈ−ＣＤＲ１）；配列番号６４のアミノ酸配列（Ｈ−ＣＤＲ２）；配列番号７３のアミノ酸配列（Ｈ−ＣＤＲ３）を含む重鎖可変領域；又は配列番号２７のアミノ酸配列（Ｌ−ＣＤＲ１）；配列番号３６のアミノ酸配列（Ｌ−ＣＤＲ２）；配列番号４５のアミノ酸配列（Ｌ−ＣＤＲ３）を含む軽鎖可変領域；及び配列番号５４のアミノ酸配列（Ｈ−ＣＤＲ１）；配列番号６３又は６４のアミノ酸配列（Ｈ−ＣＤＲ２）；配列番号７３のアミノ酸配列（Ｈ−ＣＤＲ３）を含む重鎖可変領域。
【００３４】
実施形態１７では、本発明は、実施形態１に従った抗ＩＬ−３６Ｒ抗体又はその抗原結合フラグメントを提供し、それにおいて抗体又はその抗原結合フラグメントは、配列番号８４、８５、又は８６のいずれか１つのアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域；配列番号９６、９７、９８、９９、１００、又は１０１のいずれか１つのアミノ酸配列を含む重鎖可変領域を含む。
【００３５】
実施形態１８では、本発明は、実施形態１７に従った抗ＩＬ−３６Ｒ抗体又はその抗原結合フラグメントを提供し、それにおいて抗体又はその抗原結合フラグメントは、配列番号８５のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域；及び配列番号１００のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；又は
配列番号８５のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域；及び配列番号１０１のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域を含む。
【００３６】
実施形態１９では、本発明は、実施形態１７に従った抗ＩＬ−３６Ｒ抗体又はその抗原結合フラグメントを提供し、それにおいて抗体又はその抗原結合フラグメントは、配列番号８６のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域；配列番号１００のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；又は
配列番号８６のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域；及び配列番号１０１のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域を含む。
【００３７】
実施形態２０では、本発明は抗ＩＬ−３６Ｒ抗体を提供し、それにおいて抗体は、配列番号１１４、１１５、１１６、１１７、１１８、１１９、１２０、又は１２１のいずれか１つのアミノ酸配列を含む軽鎖；及び配列番号１２５、１２６、１２７、１２８、１２９、１３０、１３１、１３２、又は１３３のいずれか１つのアミノ酸配列を含む重鎖を含む。
【００３８】
実施形態２１では、本発明は、実施形態２０に従った抗ＩＬ−３６Ｒ抗体を提供し、それにおいて抗体は、配列番号１１５のアミノ酸配列を含む軽鎖；及び配列番号１２５のアミノ酸配列を含む重鎖を含む。
【００３９】
実施形態２２では、本発明は、実施形態２０に従った抗ＩＬ−３６Ｒ抗体を提供し、それにおいて抗体は、配列番号１１５のアミノ酸配列を含む軽鎖；及び配列番号１２６のアミノ酸配列を含む重鎖を含む。
【００４０】
実施形態２３では、本発明は、実施形態２０に従った抗ＩＬ−３６Ｒ抗体を提供し、それにおいて抗体は、配列番号１１５のアミノ酸配列を含む軽鎖；及び配列番号１２７のアミノ酸配列を含む重鎖を含む。
【００４１】
実施形態２４では、本発明は、実施形態２０に従った抗ＩＬ−３６Ｒ抗体を提供し、それにおいて抗体は、配列番号１１８のアミノ酸配列を含む軽鎖；及び配列番号１２５のアミノ酸配列を含む重鎖を含む。
【００４２】
実施形態２５では、本発明は、実施形態２０に従った抗ＩＬ−３６Ｒ抗体を提供し、それにおいて抗体は、配列番号１１８のアミノ酸配列を含む軽鎖；及び配列番号１２６のアミノ酸配列を含む重鎖を含む。
【００４３】
実施形態２６では、本発明は、実施形態２０に従った抗ＩＬ−３６Ｒ抗体を提供し、それにおいて抗体は、配列番号１１８のアミノ酸配列を含む軽鎖；及び配列番号１２７のアミノ酸配列を含む重鎖を含む。
【００４４】
実施形態２７では、本発明は抗ＩＬ−３６Ｒ抗体を提供し、それにおいて抗体は、配列番号１２２、１２３、又は１２４のいずれか１つのアミノ酸配列を含む軽鎖；及び配列番号１３４、１３５、１３６、１３７、１３８、又は１３９のいずれか１つのアミノ酸配列を含む重鎖を含む。
【００４５】
実施形態２８では、本発明は、実施形態２７に従った抗ＩＬ−３６Ｒ抗体を提供し、それにおいて抗体は、配列番号１２３のアミノ酸配列を含む軽鎖；及び配列番号１３８のアミノ酸配列を含む重鎖を含む。
【００４６】
実施形態２９では、本発明は、実施形態２７に従った抗ＩＬ−３６Ｒ抗体を提供し、それにおいて抗体は、配列番号１２３のアミノ酸配列を含む軽鎖；及び配列番号１３９のアミノ酸配列を含む重鎖を含む。
【００４７】
実施形態３０では、本発明は、２７に従った抗ＩＬ−３６Ｒ抗体を提供し、それにおいて抗体は、配列番号１２４のアミノ酸配列を含む軽鎖；及び配列番号１３８のアミノ酸配列を含む重鎖を含む。
【００４８】
実施形態３１では、本発明は、実施形態１に従った抗ＩＬ−３６Ｒ抗体又はその抗原結合フラグメントを提供し、それにおいて抗体又はその抗原結合フラグメントは以下を含む：
ａ）配列番号２６のアミノ酸配列（Ｌ−ＣＤＲ１）；配列番号１０３のアミノ酸配列（Ｌ−ＣＤＲ２）；配列番号４４のアミノ酸配列（Ｌ−ＣＤＲ３）を含む軽鎖可変領域；及び
ｂ）配列番号５３のアミノ酸配列（Ｈ−ＣＤＲ１）；配列番号６２のアミノ酸配列（Ｈ−ＣＤＲ２）；配列番号７２のアミノ酸配列（Ｈ−ＣＤＲ３）を含む重鎖可変領域。
【００４９】
実施形態３２では、本発明は、実施形態１に従った抗ＩＬ−３６Ｒ抗体又はその抗原結合フラグメントを提供し、それにおいて抗体又はその抗原結合フラグメントは以下を含む：
ａ）配列番号２６のアミノ酸配列（Ｌ−ＣＤＲ１）；配列番号１０４のアミノ酸配列（Ｌ−ＣＤＲ２）；配列番号４４のアミノ酸配列（Ｌ−ＣＤＲ３）を含む軽鎖可変領域；及び
ｂ）配列番号５３のアミノ酸配列（Ｈ−ＣＤＲ１）；配列番号６２のアミノ酸配列（Ｈ−ＣＤＲ２）；配列番号７２のアミノ酸配列（Ｈ−ＣＤＲ３）を含む重鎖可変領域。
【００５０】
実施形態３３では、本発明は、実施形態１に従った抗ＩＬ−３６Ｒ抗体又はその抗原結合フラグメントを提供し、それにおいて抗体又はその抗原結合フラグメントは以下を含む：
ａ）配列番号２７のアミノ酸配列（Ｌ−ＣＤＲ１）；配列番号３６のアミノ酸配列（Ｌ−ＣＤＲ２）；配列番号４５のアミノ酸配列（Ｌ−ＣＤＲ３）を含む軽鎖可変領域；及び
ｂ）配列番号１０７のアミノ酸配列（Ｈ−ＣＤＲ１）；配列番号６３のアミノ酸配列（Ｈ−ＣＤＲ２）；配列番号７３のアミノ酸配列（Ｈ−ＣＤＲ３）を含む重鎖可変領域。
【００５１】
実施形態３４では、本発明は、実施形態１に従った抗ＩＬ−３６Ｒ抗体又はその抗原結合フラグメントを提供し、それにおいて抗体又はその抗原結合フラグメントは以下を含む：
ａ）配列番号２７のアミノ酸配列（Ｌ−ＣＤＲ１）；配列番号３６のアミノ酸配列（Ｌ−ＣＤＲ２）；配列番号４５のアミノ酸配列（Ｌ−ＣＤＲ３）を含む軽鎖可変領域；及び
ｂ）配列番号１０７のアミノ酸配列（Ｈ−ＣＤＲ１）；配列番号６４のアミノ酸配列（Ｈ−ＣＤＲ２）；配列番号７３のアミノ酸配列（Ｈ−ＣＤＲ３）を含む重鎖可変領域。
【００５２】
一実施形態では、実施形態１〜３４のいずれか１つに従った抗体又はその抗原結合フラグメントはモノクローナル抗体である。一実施形態では、実施形態１〜３４のいずれか１つに従った抗体又はその抗原結合フラグメントはヒト化抗体である。一実施形態では、実施形態１〜３４のいずれか１つに従った抗体又はその抗原結合フラグメントはモノクローナルヒト化抗体である。
【００５３】
実施形態３５では、本発明は、抗ＩＬ−３６Ｒ抗体又はその抗原結合フラグメントを提供し、それにおいて抗体又はその抗原結合フラグメントは以下を含む：
配列番号２１のアミノ酸配列（Ｌ−ＣＤＲ１）；配列番号３０のアミノ酸配列（Ｌ−ＣＤＲ２）；配列番号３９のアミノ酸配列（Ｌ−ＣＤＲ３）を含む軽鎖可変領域；及び配列番号４８のアミノ酸配列（Ｈ−ＣＤＲ１）；配列番号５７のアミノ酸配列（Ｈ−ＣＤＲ２）；配列番号６７のアミノ酸配列（Ｈ−ＣＤＲ３）を含む重鎖可変領域；又は配列番号２２のアミノ酸配列（Ｌ−ＣＤＲ１）；配列番号３１のアミノ酸配列（Ｌ−ＣＤＲ２）；配列番号４０のアミノ酸配列（Ｌ−ＣＤＲ３）を含む軽鎖可変領域；及び配列番号４９のアミノ酸配列（Ｈ−ＣＤＲ１）；配列番号５８のアミノ酸配列（Ｈ−ＣＤＲ２）；配列番号６８のアミノ酸配列（Ｈ−ＣＤＲ３）を含む重鎖可変領域；又は配列番号２３のアミノ酸配列（Ｌ−ＣＤＲ１）；配列番号３２のアミノ酸配列（Ｌ−ＣＤＲ２）；配列番号４１のアミノ酸配列（Ｌ−ＣＤＲ３）を含む軽鎖可変領域；及び配列番号５０のアミノ酸配列（Ｈ−ＣＤＲ１）；配列番号５９のアミノ酸配列（Ｈ−ＣＤＲ２）；配列番号６９のアミノ酸配列（Ｈ−ＣＤＲ３）を含む重鎖可変領域；又は配列番号２４のアミノ酸配列（Ｌ−ＣＤＲ１）；配列番号３３のアミノ酸配列（Ｌ−ＣＤＲ２）；配列番号４２のアミノ酸配列（Ｌ−ＣＤＲ３）を含む軽鎖可変領域；及び配列番号５１のアミノ酸配列（Ｈ−ＣＤＲ１）；配列番号６０のアミノ酸配列（Ｈ−ＣＤＲ２）；配列番号７０のアミノ酸配列（Ｈ−ＣＤＲ３）を含む重鎖可変領域；又は配列番号２５のアミノ酸配列（Ｌ−ＣＤＲ１）；配列番号３４のアミノ酸配列（Ｌ−ＣＤＲ２）；配列番号４３のアミノ酸配列（Ｌ−ＣＤＲ３）を含む軽鎖可変領域；及び配列番号５２のアミノ酸配列（Ｈ−ＣＤＲ１）；配列番号６１のアミノ酸配列（Ｈ−ＣＤＲ２）；配列番号７１のアミノ酸配列（Ｈ−ＣＤＲ３）を含む重鎖可変領域；又は配列番号２６のアミノ酸配列（Ｌ−ＣＤＲ１）；配列番号３５のアミノ酸配列（Ｌ−ＣＤＲ２）；配列番号４４のアミノ酸配列（Ｌ−ＣＤＲ３）を含む軽鎖可変領域；及び配列番号５３のアミノ酸配列（Ｈ−ＣＤＲ１）；配列番号６２のアミノ酸配列（Ｈ−ＣＤＲ２）；配列番号７２のアミノ酸配列（Ｈ−ＣＤＲ３）を含む重鎖可変領域；又は配列番号２７のアミノ酸配列（Ｌ−ＣＤＲ１）；配列番号３６のアミノ酸配列（Ｌ−ＣＤＲ２）；配列番号４５のアミノ酸配列（Ｌ−ＣＤＲ３）を含む軽鎖可変領域；及び配列番号５４のアミノ酸配列（Ｈ−ＣＤＲ１）；配列番号６３のアミノ酸配列（Ｈ−ＣＤＲ２）；配列番号７３のアミノ酸配列（Ｈ−ＣＤＲ３）を含む重鎖可変領域；又は配列番号２７のアミノ酸配列（Ｌ−ＣＤＲ１）；配列番号３６のアミノ酸配列（Ｌ−ＣＤＲ２）；配列番号４５のアミノ酸配列（Ｌ−ＣＤＲ３）を含む軽鎖可変領域；及び配列番号５４のアミノ酸配列（Ｈ−ＣＤＲ１）；配列番号６４のアミノ酸配列（Ｈ−ＣＤＲ２）；配列番号７３のアミノ酸配列（Ｈ−ＣＤＲ３）を含む重鎖可変領域；又は配列番号２８のアミノ酸配列（Ｌ−ＣＤＲ１）；配列番号３７のアミノ酸配列（Ｌ−ＣＤＲ２）；配列番号４６のアミノ酸配列（Ｌ−ＣＤＲ３）を含む軽鎖可変領域；及び配列番号５５のアミノ酸配列（Ｈ−ＣＤＲ１）；配列番号６５のアミノ酸配列（Ｈ−ＣＤＲ２）；配列番号７４のアミノ酸配列（Ｈ−ＣＤＲ３）を含む重鎖可変領域；又は配列番号２９のアミノ酸配列（Ｌ−ＣＤＲ１）；配列番号３８のアミノ酸配列（Ｌ−ＣＤＲ２）；配列番号４７のアミノ酸配列（Ｌ−ＣＤＲ３）を含む軽鎖可変領域；及び配列番号５６のアミノ酸配列（Ｈ−ＣＤＲ１）；配列番号６６のアミノ酸配列（Ｈ−ＣＤＲ２）；配列番号７５のアミノ酸配列（Ｈ−ＣＤＲ３）を含む重鎖可変領域。
【００５４】
実施形態３６では、本発明は抗ＩＬ−３６Ｒ抗体又はその抗原結合フラグメントを提供し、それにおいて抗体又はその抗原結合フラグメントは、配列番号１のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域；及び配列番号１１のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；又は
配列番号２のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域；及び配列番号１２のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；又は
配列番号３のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域；及び配列番号１３のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；又は
配列番号４のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域；及び配列番号１４のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；又は
配列番号５のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域；及び配列番号１５のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；又は
配列番号６のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域；及び配列番号１６のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；又は
配列番号７のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域；及び配列番号１７のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；又は
配列番号８のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域；及び配列番号１８のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；又は
配列番号９のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域；及び配列番号１９のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；又は
配列番号１０のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域；及び配列番号２０のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域。
【００５５】
さらなる実施形態３７では、本発明は、前述の実施形態のいずれか１つに従った抗体又は抗原結合フラグメント及び医薬的に許容可能な担体を含む医薬組成物を提供する。
【００５６】
さらなる実施形態３８では、本発明は、医薬における使用のための、前述の実施形態のいずれか１つに従った抗体又は抗原結合フラグメント又は医薬組成物を提供する。
【００５７】
さらなる実施形態３９では、本発明は、実施形態１〜３７のいずれか１つに従った抗体又は抗原結合フラグメント又は医薬組成物を提供し、それにおいてその使用は炎症性疾患の、自己免疫疾患の、呼吸器疾患の、代謝障害の、上皮介在炎症性障害の、線維症、又は癌の処置である。
【００５８】
さらなる実施形態４０では、本発明は、実施形態１〜３７のいずれか１つに従った抗体又は抗原結合フラグメント又は医薬組成物を提供し、それにおいてその使用は乾癬、炎症性腸疾患、乾癬性関節炎、多発性硬化症、関節リウマチ、ＣＯＰＤ、慢性喘息、又は強直性脊椎炎の処置のためである。
【００５９】
さらなる実施形態４１では、本発明は、実施形態１〜３７のいずれか１つに従った抗体又は抗原結合フラグメント又は医薬組成物を提供し、それにおいてその使用は炎症性腸疾患の処置のためである。
【００６０】
さらなる実施形態４２では、本発明は、実施形態４１に従った抗体又は抗原結合フラグメント又は医薬組成物を提供し、それにおいて疾患はクローン病である。
【００６１】
別の実施形態４３では、本発明は、実施形態１〜３７のいずれか１つに従った抗体又は抗原結合フラグメント又は医薬組成物を、それを必要とする患者に投与することを含む、疾患を処置する方法を提供し、それにおいて疾患は炎症性疾患、自己免疫疾患、呼吸器疾患、代謝障害、上皮介在炎症性障害、線維症、及び癌より選択する。
【００６２】
別の実施形態４４では、本発明は、疾患が乾癬、炎症性腸疾患、乾癬性関節炎、多発性硬化症、関節リウマチ、ＣＯＰＤ、慢性喘息、及び強直性脊椎炎より選択する、実施形態４３に従った方法を提供する。
【００６３】
さらなる実施形態４５では、本発明は、クローン病を処置するための方法を提供する。
【００６４】
本発明のさらなる実施形態は以下を包含する：
−  本発明に従った抗ＩＬ−３６Ｒ抗体又は抗原結合フラグメントをコードする配列、好ましくはＤＮＡ又はＲＮＡ配列を含む単離ポリヌクレオチド；
−  配列番号１〜１４０の１つ以上により定義される配列をコードする、本発明に従った単離ポリヌクレオチド；
−  本発明に従ったポリヌクレオチドを含むベクター、好ましくは発現ベクター、より好ましくは発現制御配列と機能的に関連する本発明に従ったポリヌクレオチドを含むベクター；
−  本発明に従ったポリヌクレオチド及び／又は本発明に従ったベクターを含む宿主細胞；
−  本発明に従った抗ＩＬ−３６Ｒ抗体又は抗原結合フラグメントの産生のための方法、好ましくは本発明に従ったポリヌクレオチド、及び／又は本発明に従ったベクター、及び／又は本発明に従った宿主細胞の使用を含む組換え産生方法；
−  そのような方法は、好ましくは、（ａ）抗ＩＬ−３６Ｒ抗体又は抗原結合フラグメントの発現を可能にする条件下で宿主細胞を培養する、及び（ｂ）抗ＩＬ−３６Ｒ抗体又は抗原結合フラグメントを回収する工程を含む；
−  本発明に従った抗ＩＬ−３６Ｒ抗体又は抗原結合フラグメントを含む診断キットもしくは診断方法、又はその使用；
−  炎症性疾患、自己免疫疾患、呼吸器疾患、代謝障害、上皮介在炎症性障害、線維症、癌、乾癬、炎症性腸疾患、乾癬性関節炎、多発性硬化症、関節リウマチ、ＣＯＰＤ、慢性喘息、強直性脊椎炎、又はクローン病の診断のための、本発明に従った診断キット又は診断方法。
【図面の簡単な説明】
【００６５】
【図１】図１：ＩＬ−３６アンタゴニストリガンド（ＩＬ−３６ＲＡ／ＩＬ１Ｆ５、ＩＬ−３８／ＩＬＦ１０）はシグナル伝達カスケードを阻害する。
【図２】図２：遺伝子チップ分析によって、乾癬皮膚においてＩＬ−３６Ｒリガンド（ＩＬ−３６  ＲＡ、ＩＬ−３６α、及びＩＬ−３６γ）が上方調節されることが実証される。
【図３】図３：ヒトの皮膚切片を使用した発現プロファイル。抗体３３Ｄ１０を使用した抗体滴定が包埋されたホルマリン固定パラフィン。
【図４】図４：ヒトの皮膚切片の表皮の厚さを評価するための方法。
【００６６】
発明の説明
本発明は抗ＩＬ−３６Ｒ抗体に関する。一態様では、本発明の抗体は、例えばヒトにおける診断的及び治療的な使用のためである。
【００６７】
本発明は、ＩＬ−３６Ｒ、特にヒトＩＬ−３６Ｒに結合する抗体を提供する。本発明はまた、ＩＬ−３６Ｒに結合するヒト化抗体に関する。特定の実施形態では、これらのヒト化抗体の配列は、特定のリードマウス抗体の配列に基づいて同定されている。
【００６８】
この理論により束縛されることを望まないが、抗ＩＬ−３６Ｒ抗体又はその抗原結合フラグメントはヒトＩＬ−３６Ｒに結合し、このように、ＩＬ−３６アゴニストの結合を妨げ、そのようにする際にＩＬ−３６Ｒから炎症性メディエーターへのシグナル伝達カスケードを少なくとも部分的に遮断すると考えられている。これを図１により例証する。
【００６９】
一態様では、本発明の抗体は、ヒト疾患のモデルにおける使用のためである。ＩＬ−３６ＲはＩＬ−１ＲＬ２及びＩＬ−１Ｒｒｐ２としても公知である。アゴニストＩＬ−３６リガンド（α、β、又はγ）は、次にＩＬ−１受容体アクセサリータンパク質（ＩＬ−１ＲＡｃＰ）とヘテロ二量体を形成するＩＬ−３６受容体と会合することによりシグナル伝達カスケードを開始することが報告されている。ＩＬ−３６アンタゴニストリガンド（ＩＬ−３６ＲＡ／ＩＬ１Ｆ５、ＩＬ−３８／ＩＬＦ１０）はシグナル伝達カスケードを阻害する（図１を参照のこと）。
【００７０】
一態様では、本発明は、以下の特性の１つ以上を有する抗ＩＬ−３６Ｒ抗体を提供する。
【００７１】
一態様では、本発明の抗ＩＬ−３６Ｒ抗体は、高い分子／細胞結合効力を有する。一態様では、本発明の抗ＩＬ−３６Ｒ抗体は、ＫＤ＜０．１nMでヒトＩＬ−３６Ｒに結合する。さらなる態様では、本発明の抗ＩＬ−３６Ｒ抗体、特にヒト化抗ＩＬ−３６Ｒ抗体は、ＫＤ＜５０pMでヒトＩＬ−３６Ｒに結合する。一態様では、本発明の抗ＩＬ−３６Ｒ抗体は、ＥＣ９０＜５nMでＩＬ−３６Ｒ発現細胞に結合する。
【００７２】
別の態様では、本発明の抗ＩＬ−３６Ｒ抗体は、高い細胞ベースの機能的遮断効力を有する。一態様では、本発明の抗ＩＬ−３６Ｒ抗体は、疾患関連細胞株及び初代細胞において、ＩＣ９０＜５nMで全ての３つのＩＬ−３６Ｒアゴニストリガンドを遮断する。
【００７３】
一態様では、本発明の抗ＩＬ−３６Ｒ抗体は、上に示す分子／細胞結合効力及び細胞ベースの機能的遮断効力を有する。
【００７４】
一態様では、本発明の抗ＩＬ−３６Ｒ抗体はヒト化抗体である。一態様では、本発明の抗ＩＬ−３６Ｒ抗体はモノクローナル抗体である。一態様では、本発明の抗ＩＬ−３６Ｒ抗体は全長抗体である。一態様では、本発明の抗ＩＬ−３６Ｒ抗体はヒト化モノクローナル抗体、例えば、全長ヒト化モノクローナル抗体である。
【００７５】
本発明の抗体又はその抗原結合フラグメントは、特定の「ＩＬ−３６Ｒ抗原エピトープ」又は「ＩＬ−３６Ｒエピトープ」を認識する。本明細書中で使用するように、これらの用語は、抗ＩＬ−３６Ｒ抗体と免疫活性化することが可能である分子（例、ペプチド）又は分子のフラグメントを指す。
【００７６】
エピトープは最も一般にはタンパク質、短いオリゴペプチド、オリゴペプチド模倣物（即ち、ＩＬ−３６Ｒ抗原の抗体結合特色を模倣する有機化合物）、又はそれらの組み合わせである。抗体についてのペプチド又はポリペプチドエピトープの最小サイズは約４〜５アミノ酸と考えられている。ペプチド又はポリペプチドエピトープは、例えば少なくとも７つのアミノ酸又は例えば少なくとも９つのアミノ酸又は例えば約１５〜約２０のアミノ酸を含む。抗体は抗原性ペプチド又はポリペプチドをその三次形態において認識することができるため、エピトープを含むアミノ酸は連続している必要はなく、一部の場合において、同じペプチド鎖上になくてもよい。エピトープは、当技術分野において公知の技術、例えばＸ線結晶学、水素／重水素交換質量分析（ＨＸＭＳ）、部位特異的変異誘発、アラニンスキャニング変異誘発、及びペプチドスクリーニング方法などにより決定してもよい。
【００７７】
抗体又は免疫グロブリンの一般化された構造は、当業者に周知である。これらの分子は、２つの同一の軽（Ｌ）鎖及び２つの同一の重（Ｈ）鎖で構成される、典型的には約１５０，０００ダルトンのヘテロ四量体糖タンパク質であり、典型的には全長抗体として言及される。各々の軽鎖は、１つのジスルフィド結合により重鎖に共有結合的に連結されてヘテロ二量体を形成し、ヘテロ二量体分子が、ヘテロ二量体の２つの同一の重鎖間での共有結合的なジスルフィド結合により形成される。軽鎖及び重鎖は１つのジスルフィド結合により一緒に連結されているが、２つの重鎖間のジスルフィド連結の数は免疫グロブリンのアイソタイプにより変動する。各々の重鎖及び軽鎖はまた、一定の間隔を置いた鎖内ジスルフィド架橋を有する。各々の重鎖は、アミノ末端に可変ドメイン（ＶＨ）を有し、３つ又は４つの定常ドメイン（ＣＨ１、ＣＨ２、ＣＨ３、及びＣＨ４）、ならびにＣＨ１とＣＨ２の間のヒンジ領域が続く。各々の軽鎖は、２つのドメイン、アミノ末端可変ドメイン（ＶＬ）及びカルボキシ末端定常ドメイン（ＣＬ）を有する。ＶＬドメインはＶＨドメインと非共有結合的に会合するのに対し、ＣＬドメインは一般にジスルフィド結合を介してＣＨ１ドメインに共有結合的に連結される。特定のアミノ酸残基は、軽鎖可変ドメインと重鎖可変ドメインの間に界面を形成すると考えられている（Chothia et al., 1985, J. Mol. Biol. 186:651-663）。可変ドメインはまた、本明細書中で可変領域として言及する。
【００７８】
可変ドメイン内の特定のドメインは、異なる抗体間で広範囲に異なり、即ち、「超可変」である。これらの超可変ドメインは、その特定の抗原決定基についての各々の特定の抗体の結合及び特異性に直接的に含まれる残基を含む。軽鎖及び重鎖の両方の可変ドメインにおける超可変性は、相補性決定領域（ＣＤＲ）又は超可変ループ（ＨＶＬ）として公知である３つのセグメント中に集中している。ＣＤＲは、Kabat et al., 1991, In: Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5th Ed. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, Md.における配列比較により定義されるのに対し、ＨＶＬ（本明細書中でＣＤＲとしても言及する）は、可変ドメインの三次元構造に従って構造的に定義される（Chothia and Lesk, 1987, J. Mol. Biol. 196: 901-917により記載される通り）。これら２つの方法は、ＣＤＲのわずかに異なる同定をもたらす。Ｋａｂａｔにより定義されるように、ＣＤＲ−Ｌ１は軽鎖可変ドメイン中の約２４〜３４残基に、ＣＤＲ−Ｌ２は約５０〜５６残基に、及びＣＤＲ−Ｌ３は約８９〜９７残基に位置付けられる；ＣＤＲ−Ｈ１は重鎖可変ドメイン中の約３１〜３５残基に、ＣＤＲ−Ｈ２は約５０〜６５残基に、ＣＤＲ−Ｈ３は約９５〜１０２残基に位置付けられる。特定のＣＤＲを包含する正確な残基番号は、ＣＤＲの配列及びサイズに依存して変動する。当業者は、抗体の可変領域アミノ酸配列が与えられれば、いずれの残基が特定のＣＤＲを含むかをルーチン的に決定することができる。重鎖及び軽鎖のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、ＣＤＲ３により、従って、所与の抗体について特異的なユニークかつ機能的な特性が定義される。
【００７９】
重鎖及び軽鎖の各々の内の３つのＣＤＲは、フレームワーク領域（ＦＲ）により分離され、それには変動が少ない傾向がある配列が含まれる。重鎖及び軽鎖可変ドメインのアミノ末端からカルボキシ末端まで、ＦＲ及びＣＤＲは以下の順番で配置されている：ＦＲ１、ＣＤＲ１、ＦＲ２、ＣＤＲ２、ＦＲ３、ＣＤＲ３、及びＦＲ４。ＦＲの大部分のβシート構成により、各々の鎖内のＣＤＲが互いに、ならびに他の鎖のＣＤＲに近接する。結果として生じる立体構造は抗原結合部位に寄与するが（Kabat et al., 1991, NIH Publ. No. 91-3242, Vol. I, pages 647-669を参照）、全てのＣＤＲ残基が必ずしも抗原結合に直接的に含まれるわけではない。
【００８０】
ＦＲ残基及びＩｇ定常ドメインは、抗原結合に直接的には含まれないが、しかし、抗原結合に寄与する及び／又は抗体エフェクター機能を媒介する。一部のＦＲ残基は、少なくとも３つの方法において抗原結合に対して有意な効果を有すると考えられている：直接的なエピトープへの非共有結合的な結合による、１つ以上のＣＤＲ残基との相互作用による、ならびに重鎖及び軽鎖の間の界面に影響することによる。定常ドメインは、抗原結合に直接的に含まれないが、しかし、種々のＩｇエフェクター機能、例えば抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）、補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）、及び抗体依存性細胞貪食（ＡＤＣＰ）における抗体の関与などを媒介する。
【００８１】
脊椎動物の免疫グロブリンの軽鎖は、定常ドメインのアミノ酸配列に基づき、２つの明らかに異なるクラス、カッパ（κ）及びラムダ（λ）の１つに割り当てられる。比較により、哺乳動物免疫グロブリンの重鎖は、定常ドメインの配列に従って、５つの主要なクラスの１つに割り当てる：ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ、及びＩｇＭ。ＩｇＧ及びＩｇＡは、サブクラス（アイソタイプ）、例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１、及びＩｇＡ２にさらに分ける。免疫グロブリンの異なるクラスに対応する重鎖定常ドメインは、それぞれα、δ、ε、γ、及びμと呼ぶ。天然免疫グロブリンのクラスのサブユニット構造及び三次元配置は周知である。
【００８２】
用語「抗体」、「抗ＩＬ−３６Ｒ抗体」、「ヒト化抗ＩＬ−３６Ｒ抗体」、「ヒト化抗ＩＬ−３６Ｒエピトープ抗体」、及び「変異体ヒト化抗ＩＬ−３６Ｒエピトープ抗体」は、モノクローナル抗体（全長モノクローナル抗体を含む）、ポリクローナル抗体、多特異性抗体（例、二重特異性抗体）、及び抗体（例えばフラグメント可変ドメインなど）、及び所望の生物学的活性（例、ＩＬ−３６Ｒ結合）を示す抗体の他の部分を包含する。用語「モノクローナル抗体」（ｍＡｂ）は、単一の抗原決定基「エピトープ」に対して向けられた高度に特異的な抗体を指す。従って、修飾語「モノクローナル」は、同一のエピトープに向けられた抗体を示しており、任意の特定の方法による抗体の産生を要求するとして解釈すべきではない。モノクローナル抗体は、当技術分野において公知の任意の技術又は方法論（例、ハイブリドーマ方法（Kohler et al., 1975, Nature 256:495）、又は当技術分野において公知の組換えＤＮＡ方法（例、米国特許第４，８１６，５６７号を参照のこと）、又はファージ抗体ライブラリーを使用して組換え的に産生されたモノクローナル抗体の単離の方法を含む）により、Clackson et al., 1991, Nature 352: 624-628、及びMarks et al., 1991, J. Mol. Biol. 222: 581-597において記載される技術を使用して作製することができることを理解すべきである。
【００８３】
用語「単量体」は、抗体の均一な形態を指す。例えば、全長抗体については、単量体は、２つの同一の重鎖及び２つの同一の軽鎖を有する単量体抗体を意味する。
【００８４】
キメラ抗体は、１つの種（非ヒト哺乳動物、例えばマウスなど）の抗体の重鎖及び軽鎖可変領域と、別の種（例、ヒト）の抗体の重鎖及び軽鎖定常領域からなり、第１種（例、マウス）からの抗体の可変領域をコードするＤＮＡ配列を、第２種（例、ヒト）からの抗体の定常領域のＤＮＡ配列に連結し、連結された配列を含む発現ベクターで宿主を形質転換して、それがキメラ抗体を産生することを可能にすることにより得ることができる。あるいは、キメラ抗体はまた、重鎖及び／又は軽鎖の１つ以上の領域又はドメインが、別の免疫グロブリンクラスもしくはアイソタイプからの、又はコンセンサスもしくは生殖系列配列からのモノクローナル抗体中の対応する配列と同一、相同、又はその変異体であるものでありうる。キメラ抗体は、抗体フラグメントがその親抗体の所望の生物学的活性、例えば同じエピトープへの結合を示すとの条件で、そのような抗体のフラグメントを含むことができる（例、米国特許第４，８１６，５６７号；及びMorrison et al., 1984、Proc. Natl. Acad. Sci. USA 81: 6851-6855を参照のこと）。
【００８５】
用語「抗体フラグメント」、「抗ＩＬ−３６Ｒ抗体フラグメント」、「抗ＩＬ−３６Ｒエピトープ抗体フラグメント」、「ヒト化抗ＩＬ−３６Ｒ抗体フラグメント」、「ヒト化抗ＩＬ−３６Ｒエピトープ抗体フラグメント」、「変異体ヒト化抗ＩＬ−３６Ｒエピトープ抗体フラグメント」は、可変領域又は機能的能力（例えば、特異的なＩＬ−３６Ｒエピトープ結合）が保持されている全長抗ＩＬ−３６Ｒ抗体の一部を指す。抗体フラグメントの例は、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｄ、Ｆｖ、ｓｃＦｖ、及びｓｃＦｖ−Ｆｃフラグメント、ダイアボディ、線形抗体、単鎖抗体、ミニボディ、抗体フラグメントから形成されたダイアボディ、及び抗体フラグメントから形成された多特異性抗体を含むが、これらに限定しない。
【００８６】
全長抗体を酵素（例えばパパイン又はペプシンなど）で処理し、有用な抗体フラグメントを生成することができる。パパイン消化を使用して「Ｆａｂ」フラグメントと呼ばれる２つの同一の抗原結合抗体フラグメントを産生し、各々が単一の抗原結合部位、及び残りの「Ｆｃ」フラグメントを伴う。Ｆａｂフラグメントはまた、軽鎖の定常ドメイン及び重鎖のＣＨ１ドメインを含む。ペプシン処理によって、２つの抗原結合部位を有し、依然として抗原を架橋することが可能なＦ（ａｂ’）２フラグメントがもたらされる。
【００８７】
Ｆａｂ’フラグメントは、ＣＨ１ドメインのＣ末端の抗体ヒンジ領域からの１つ以上のシステインを含む追加の残基の存在によりＦａｂフラグメントとは異なる。Ｆ（ａｂ’）２抗体フラグメントは、ヒンジ領域中のシステイン残基により連結されたＦａｂ’フラグメントの対である。抗体フラグメントの他の化学的共役も公知である。
【００８８】
「Ｆｖ」フラグメントは、密着した非共有結合的な会合における１つの重鎖可変ドメイン及び１つの軽鎖可変ドメインの二量体からなる完全な抗原認識及び結合部位を含む。この立体配置では、各々の可変ドメインの３つのＣＤＲが相互作用し、ＶＨ−ＶＬ二量体の表面上に抗原結合部位を定義する。集合的に、６つのＣＤＲは抗体に抗原結合特異性を付与する。
【００８９】
「単鎖Ｆｖ」又は「ｓｃＦｖ」抗体フラグメントは、ドメインが単一のポリペプチド鎖中に存在する抗体のＶＨ及びＶＬドメインを含む単鎖Ｆｖ変異体である。単鎖Ｆｖは、抗原を認識して結合することが可能である。ｓｃＦｖポリペプチドはまた、場合により、ｓｃＦｖによる抗原結合のための所望の三次元構造の形成を促進するために、ＶＨドメインとＶＬドメインの間に位置するポリペプチドリンカーを含みうる（例、Pluckthun, 1994, In The Pharmacology of monoclonal Antibodies, Vol. 113, Rosenburg and Moore eds., Springer-Verlag, New York, pp. 269-315を参照のこと）。
【００９０】
「ダイアボディ」は２つの抗原結合部位を伴う小さな抗体フラグメントを指し、そのフラグメントは、同じポリペプチド鎖（Ｖ．ｓｕｂ．Ｈ−Ｖ．ｓｕｂ．Ｌ又はＶ．ｓｕｂ．Ｌ−Ｖ．ｓｕｂ．Ｈ）中の軽鎖可変ドメイン（Ｖ．ｓｕｂ．Ｌ）に接続された重鎖可変ドメイン（Ｖ．ｓｕｂ．Ｈ）を含む。ダイアボディは、例えば、Holliger et al. (1993) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 90: 6444-6448により完全に記載されている。
【００９１】
他の認識された抗体フラグメントは、一対のタンデムＦｄセグメント（ＶＨ−ＣＨ１−ＶＨ−ＣＨ１）を含み、一対の抗原結合領域を形成する抗体フラグメントを含む。これらの「線形抗体」は、例えば、Zapata et al. 1995, Protein Eng. 8(10):1057-1062に記載されているように、二重特異性又は単一特異性でありうる。
【００９２】
「ヒト化抗体」又は「ヒト化抗体フラグメント」は、免疫グロブリンアミノ酸配列変異体、又はそのフラグメントを含む特定の型のキメラ抗体であり、それは所定の抗原に結合することが可能であり、ヒト免疫グロブリンのアミノ酸配列を実質的に有する１つ以上のＦＲ及び非ヒト免疫グロブリンのアミノ酸配列を実質的に有する１つ以上のＣＤＲを含む。しばしば「インポート」配列として言及されるこの非ヒトアミノ酸配列は、典型的には、「インポート」抗体ドメイン、特に可変ドメインから取得される。一般的に、ヒト化抗体は、ヒト重鎖ドメイン又は軽鎖可変ドメインのＦＲの間に挿入された非ヒト抗体の少なくともＣＤＲ又はＨＶＬを含む。本発明には、マウスモノクローナル抗体から由来するＣＤＲ又はヒト生殖系列配列の重鎖及び軽鎖可変ドメインのＦＲ間に挿入されたヒト化ＣＤＲを含む特定のヒト化抗ＩＬ−３６Ｒ抗体を記載する。特定のマウスＦＲ残基はヒト化抗体の機能に重要であり、従って特定のヒト生殖系列配列の重鎖及び軽鎖可変ドメイン残基は対応するマウス配列のものと同じになるように改変されることが理解されるであろう。
【００９３】
別の態様では、ヒト化抗ＩＬ−３６Ｒ抗体は、少なくとも１つ、典型的には２つの可変ドメイン（例えば、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆａｂｃ、及びＦｖフラグメント中に含まれる）の実質的に全てを含み、それにおいてＣＤＲの全て又は実質的に全てが非ヒト免疫グロブリンのものに対応し、特に本明細書中では、ＣＤＲの全てが本明細書中で以下に詳述するマウス又はヒト化配列であり、ＦＲの全て又は実質的に全てが、ヒト免疫グロブリンコンセンサス配列又は生殖系列配列のものである。別の態様では、ヒト化抗ＩＬ−３６Ｒ抗体はまた、免疫グロブリンＦｃ領域の少なくとも一部、典型的にはヒト免疫グロブリンのものも含む。通常、抗体は軽鎖ならびに重鎖の少なくとも可変ドメインの両方を含む。抗体はまた、適当な場合、重鎖のＣＨ１、ヒンジ、ＣＨ２、ＣＨ３、及び／又はＣＨ４領域の１つ以上を含みうる。
【００９４】
ヒト化抗ＩＬ−３６ｒ抗体は、免疫グロブリンの任意のクラス（ＩｇＭ、ＩｇＧ、ＩｇＤ、ＩｇＡ、及びＩｇＥを含む）及び任意のアイソタイプ（ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１、及びＩｇＡ２など）より選択することができる。例えば、定常ドメインは、ヒト化抗体が細胞傷害活性を示すことが望まれる補体固定定常ドメインでありうるが、アイソタイプは典型的にはＩｇＧ１である。そのような細胞傷害活性が望ましくない場合、定常ドメインは別のアイソタイプ（例、ＩｇＧ２）であってもよい。代わりのヒト化抗ＩＬ−３６Ｒ抗体は、１つを上回る免疫グロブリンクラス又はアイソタイプからの配列を含むことができ、特定の定常ドメインを選択して所望のエフェクター機能を最適化することは、当技術分野の通常のスキルの範囲内である。特定の実施形態では、本発明は、ＩｇＧ１抗体であり、特にエフェクター機能のノックアウトが存在するＩｇＧ１抗体である抗体を提供する。
【００９５】
ヒト化抗ＩＬ−３６Ｒ抗体のＦＲ及びＣＤＲ、又はＨＶＬは、親配列に正確に対応する必要はない。例えば、インポートＣＤＲ、又はＨＶＬ、又はコンセンサスもしくは生殖細胞系ＦＲ配列の１つ以上の残基は、結果として生じるアミノ酸残基がもはやいずれかの親配列の対応する位置における本来の残基と同一ではないが、しかし、抗体がそれでもＩＬ−３６Ｒへの結合の機能を保持するように、置換、挿入、又は欠失により変更（例、変異誘発）されうる。そのような変化は、典型的には広範囲ではなく、保存的な変更になる。通常、ヒト化抗体残基の少なくとも７５%が、親のコンセンサス又は生殖細胞系ＦＲ及びインポートＣＤＲ配列の残基に対応し、よりしばしば、少なくとも９０%、最も頻繁には９５%を上回る、又は９８%を上回る、又は９９%を上回る。
【００９６】
重鎖と軽鎖の可変領域間の界面に影響を及ぼす免疫グロブリン残基（「ＶＬ−ＶＨ界面」）は、２つの鎖の互いの近接又は方向に影響を及ぼすものである。鎖間相互作用に含まれうる特定の残基には、ＶＬ残基３４、３６、３８、４４、４６、８７、８９、９１、９６、及び９８ならびにＶＨ残基３５、３７、３９、４５、４７、９１、９３、９５、１００、及び１０３を含む（Kabat et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest (National Institutes of Health, Bethesda, Md., 1987）において示されるナンバリングシステムを利用）。米国特許第６，４０７，２１３号にはまた、残基、例えばＶＬ残基４３及び８５、ならびにＶＨ残基４３及び６０などもこの相互作用において含まれうることが考察されている。これらの残基はヒトＩｇＧだけについて示されているが、それらは種を渡り適用可能である。鎖間相互作用において含まれることが合理的に予想される重要な抗体残基は、コンセンサス配列中への置換のために選択される。
【００９７】
用語「コンセンサス配列」及び「コンセンサス抗体」は、任意の特定のクラス、アイソタイプ、又はサブユニット構造の全ての免疫グロブリン、例えばヒト免疫グロブリン可変ドメイン中の各々の位置で最も頻繁に生じるアミノ酸残基を含むアミノ酸配列を指す。コンセンサス配列は、特定の種の又は多くの種の免疫グロブリンに基づいてもよい。「コンセンサス」配列、構造、又は抗体は、特定の実施形態において記載されているコンセンサスヒト配列を包含し、任意の特定のクラス、アイソタイプ、又はサブユニット構造の全てのヒト免疫グロブリン中の各々の位置で最も頻繁に生じるアミノ酸残基を含むアミノ酸配列を指すと理解される。このように、コンセンサス配列は、各々の位置に１つ以上の公知の免疫グロブリン中に存在するアミノ酸を有するアミノ酸配列を含むが、しかし、それは任意の単一の免疫グロブリンのアミノ酸配列全体を正確に複製しないことがある。可変領域コンセンサス配列は、天然に産生された抗体又は免疫グロブリン（Kabat et al., 1991, Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5th Ed. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, Md.）、及びそれらの変異体からは得られない。
【００９８】
ヒト生殖細胞系列配列は、ヒト集団において天然に見出される。これらの生殖細胞系遺伝子の組み合わせによって、抗体の多様性が生成される。抗体の軽鎖についての生殖系列抗体配列は、保存されたヒト生殖系列カッパ又はラムダｖ遺伝子及びｊ遺伝子から由来する。同様に、重鎖配列は生殖細胞系のｖ、ｄ、及びｊ遺伝子から由来する（LeFranc, M-P, and LeFranc, G, “The Immunoglobulin Facts Book” Academic Press, 2001）。
【００９９】
本明細書中で使用する「変異体」、「抗ＩＬ−３６Ｒ変異体」、「ヒト化抗ＩＬ−３６Ｒ変異体」、又は「変異体ヒト化抗ＩＬ−３６Ｒ」は各々、少なくとも軽鎖可変マウスＣＤＲを有するヒト化抗ＩＬ−３６Ｒ抗体を指す。変異体は、アミノ酸変化がＩＬ−３６Ｒへの抗体の結合を実質的に損なわないとの条件で、１つ又は両方の軽鎖又は重鎖可変ドメイン中の１つ以上のアミノ酸変化を有する変異体を含む。
【０１００】
「単離」抗体は、その天然環境の成分から同定ならびに分離及び／又は回収されたものである。抗体の天然環境の混入成分は、抗体の診断的又は治療的な使用を妨げうる物質であり、酵素、ホルモン、又は他のタンパク質性もしくは非タンパク質性溶質でありうる。一態様では、抗体は、抗体の重量により少なくとも９５%を上回る単離まで精製する。
【０１０１】
単離抗体には、抗体の天然環境の少なくとも１つの成分が存在しないため、それが産生される組換え細胞内のインサイツの抗体が含まれる。通常、しかし、単離抗体は、組換え細胞物質が除去される少なくとも１つの精製工程により精製される。
【０１０２】
用語「抗体性能」は、抗原の抗体認識又はインビボでの抗体の有効性に寄与する因子を指す。抗体のアミノ酸配列中での変化は、抗体特性（例えば折り畳みなど）に影響を及ぼしうるが、物理的因子、例えば抗原への抗体結合の初期速度（ｋａ）、抗原からの抗体の解離定数（ｋｄ）、抗原についての抗体の親和定数（Ｋｄ）、抗体の立体構造、タンパク質の安定性、及び抗体の半減期などに影響しうる。
【０１０３】
用語「エピトープタグ」は、本明細書中で使用する場合、「エピトープタグ」に融合された抗ＩＬ−３６Ｒ抗体を指す。「エピトープタグ」は、抗体産生のためのエピトープを提供するための十分な数のアミノ酸を有するポリペプチドであるが、しかし、ヒト化抗ＩＬ−３６Ｒ抗体の所望の活性を妨げないように設計されている。エピトープタグは通常、エピトープタグに対して産生された抗体が他のエピトープと実質的に交差反応しないように十分にユニークである。適切なタグポリペプチドは一般的に少なくとも６つのアミノ酸残基を含み、通常は約８〜５０のアミノ酸残基、又は約９〜３０の残基を含む。エピトープタグ及びエピトープに結合する抗体の例は、ｆｌｕ  ＨＡタグポリペプチド及びその抗体１２ＣＡ５（Field et al., 1988 Mol. Cell. Biol. 8: 2159-2165）、ｃ−ｍｙｃ  ｔａｇならびにそれへの８Ｆ９、３Ｃ７、６Ｅ１０、Ｇ４、Ｂ７及び９Ｅ１０抗体（Evan et al., 1985, Mol. Cell. Biol. 5(12):3610-3616）、ならびに単純ヘルペスウイルス糖タンパク質Ｄ（ｇＤ）タグ及びその抗体（Paborsky et al. 1990, Protein Engineering 3(6): 547-553）を含む。特定の実施形態では、エピトープタグは「サルベージ受容体結合エピトープ」である。本明細書で使用する用語「サルベージ受容体結合エピトープ」は、ＩｇＧ分子のインビボでの血清半減期の増加に関与するＩｇＧ分子（例えばＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、又はＩｇＧ４など）のＦｃ領域のエピトープを指す。
【０１０４】
一部の実施形態では、本発明の抗体は細胞傷害性薬剤に結合させてもよい。これは、細胞の機能を阻害もしくは防止する、及び／又は細胞の破壊を起こす任意の物質である。この用語は、放射性同位体（例えばＩ１３１、Ｉ１２５、Ｙ９０、及びＲｅ１８６など）、化学療法薬剤、毒素（例えば細菌、真菌、植物、動物由来の酵素活性毒素など）、及びそのフラグメントを含む。そのような細胞傷害性薬剤は、標準的な手順を使用して本発明のヒト化抗体に共役することができ、例えば、抗体を用いた治療が適応される患者を処置するために使用することができる。
【０１０５】
「化学療法薬剤」は、癌の処置において有用な化学的な化合物である。本発明の治療用抗体と結合させることができる化学療法薬剤の多数の例がある。そのような化学療法剤の例は、アルキル化剤（例えばチオテパ及びシクロホスファミドなど）；アルキルスルホン酸塩（例えばブスルファン、インプロスルファン、及びピポスルファンなど）；アジリジン（例えばベンゾドパ、カルボコン、メツレドーパ、及びウレドーパなど）；エチレンイミン及びメチルアメラミン（アルトレタミン、トリエチレンメラミン、トリエチレンホスホラミド、トリエチレンチオホスホラミド、及びトリメチルオロメラミンを含む）；アセトゲニン（特にブラタシン及びブラタシノン）；カンプトテシン（合成類似体トポテカンを含む）；ブリオスタチン；カリスタチン；ＣＣ−１０６５（そのアドゼレシン、カルゼレシン、及びビゼレシン合成類似体を含む）；クリプトフィシン（特にクリプトフィシン１及びクリプトフィシン８）；ドラスタチン、アウリスタチン（類似体モノメチルアウリスタチンＥ及びモノメチルアウリスタチンＦを含む）；デュオカルマイシン（合成類似体、ＫＷ−２１８９及びＣＢＩ−ＴＭＩを含む）；エリューセロビン；パンクラチスタチン；サルコジクチン；スポンギスタチン；窒素マスタード（例えばクロラムブシル、クロマファジン、クロロホスファミド、エストラムスチン、イホスファミド、メクロレタミン、メクロレタミンオキシド塩酸塩、メルファラン、ノベムビチン、フェネステリン、プレドニムスチンなど）；トロホスファミド、ウラシルマスタード；ニトロソ尿素（例えばカルムスチン、クロロゾトシン、フォテムスチン、ロムスチン、ニムスチン、ラニムスチンなど）；抗生物質（例えばエンジイン抗生物質など）（例：カリケアミシン、特にカリケアミシンガンマ１Ｉ及びカリケアミシンｐｈｉＩ１）（例えば、Agnew, Chem. Intl. Ed. Engl., 33:183-186を参照のこと）；ダイネミシン（ダイネミシンＡを含む）；ビスホスホネート（例えばクロドロネートなど）；エスペラミシン；ならびにネオカルジノスタチン発色団及び関連する発色タンパク質エンジイン抗生物質発色団）、アクラシノマイシン、アクチノマイシン、オートラマイシン、アザセリン、ブレオマイシン、カクチノマイシン、カラビシン、カミノマイシン、カルジノフィリン、クロモマイシン、ダクチノマイシン、ダウノルビシン、デトルビシン、６−ジアゾ−５−オキソ−Ｌ−ノルロイシン、ドキソルビシン（Adriamycin（商標））（モルホリノ−ドキソルビシン、シアノモルホリノ−ドキソルビシン、２−ピロリノ−ドキソルビシン、及びデオキシドキソルビシンを含む）、エピルブシン、エソルビシン、イダルビシン、マルセロマイシン、マイトマイシン（例えばマイトマイシンＣなど）、ミコフェノール酸、ノガラマイシン、オリボマイシン、ペプロマイシン、ポトフィロマイシン、ピューロマイシン、ケラマイシン、ロドルビシン、ストレプトニグリン、ストレプトゾシン、ツベルシジン、ウベニメクス、ジノスタチン、ゾルビシン；代謝拮抗剤（例えばメトトレキサート及び５−フルオロウラシル（５−ＦＵ）など）；葉酸類似体（例えばデノプテリン、メトトレキサート、プテロプテリン、トリメトレキサートなど）；プリン類���体（例えばフルダラビン、６−メルカプトプリン、チアミプリン、チオグアニンなど）；ピリミジン類似体（例えばアンシタビン、アザシチジン、６−アザウリジン、カルモフール、シタラビン、ジデオキシウリジン、ドキシフルリジン、エノシタビン、フロクスウリジンなど）；アンドロゲン（例えばカルステロン、プロピオン酸ドロモスタノロン、エピチオスタノール、メピチオスタン、テストラクトンなど）；抗副腎剤（ａｎｔｉ−ａｄｒａｎａｌｓ）（例えばアミノグルテチミド、ミトタン、トリロスタンなど）；葉酸補充剤（例えばフォロリン酸（frolinic acid）など）；アセグラトン；アルドホスファミドグリコシド；アミノレブリン酸；エニルウラシル；アムサクリン；ベストラブシル；ビサントレン；エダトレキサート（ｅｄａｔｒａｘａｔｅ）；デフォファミン；デモコルシン；ジアジコン；エルフォミチン；酢酸エリプチニウム；エポチロン；エトグルシド；硝酸ガリウム；ヒドロキシ尿素；レンチナン；ロニダミン；メイタンシノイド（例えばメイタンシン及びアンサミトシンなど）；ミトグアゾン、ミトキサントロン；モピダモール；ニトラクリン；ペントスタチン；フェナメット；ピラルビシン；ロソキサントロン；ポドフィリン酸；２−エチルヒドラジド；プロカルバジン；ＰＳＫ（登録商標）；ラゾキサン；リゾキシン；シゾフラン；スピロゲルマニウム；テヌアゾン酸；トリアジコン；２，２’，２’’−トリクロロトリエチルアミン；トリコテセン（特にＴ−２毒素、ベラクリンＡ、ロリジンＡ、及びアンギジン）；ウレタン；ビンデシン；ダカルバジン；マンノムスチン；ミタブロニトール；ミトラクトール；ピポブロマン；ガシトシン；アラビノシド（「Ａｒａ−Ｃ」）；シクロホスファミド；チオテパ；タキソイド、例、パクリタキセル（TAXOL（登録商標）、Bristol-Myers Squibb Oncology、ニュージャージー州プリンストン）及びドキセタキセル（TAXOTERE（登録商標）、Rhone-Poulenc Rorer、フランス、アントニー）；クロラムブシル；ゲムシタビン（Gemzar（商標））；６−チオグアニン；メルカプトプリン；メトトレキサート；白金類似体（例えばシスプラチン及びカルボプラチンなど）；ビンブラスチン；白金；エトポシド（ＶＰ−１６）；イホスファミド；ミトキサントロン；ビンクリスチン；ビノレルビン（Ｎａｖｅｌｂｉｎｅ（商標））；ノバントロン；テニポシド；エダトレキサート；ダウノマイシン；アミノプテリン；ゼローダ；イバンドロナート；ＣＰＴ−１１；トポイソメラーゼ阻害剤ＲＦＳ  ２０００；ジフルオロメチルオルニチン（ＤＭＦＯ）；レチノイド（例えばレチノイン酸など）；カペシタビン；及び上記のいずれかの医薬的に許容可能な塩、酸、又は誘導体を含む。また、この定義において含むのは、腫瘍に対するホルモン作用を調節又は阻害する抗ホルモン剤、例えば抗エストロゲン及び選択的エストロゲン受容体修飾薬（ＳＥＲＭ）などであり、例えば、タモキシフェン（Nolvadex（商標）を含む）、ラロキシフェン、ドロロキシフェン、４−ヒドロキシタモキシフェン、トリオキシフェン、ケオキシフェン、ＬＹ１１７０１８、オナプリストン、及びトレミフェン（Fareston（商標））；副腎におけるエストロゲン産生を調節する、酵素アロマターゼを阻害するアロマター��阻害剤、例えば、４（５）−イミダゾール、アミノグルテチミド、酢酸メゲストロール（Megace（商標））、エキセメスタン、フォルメスタン、ファドロゾール、ボロゾール（Rivisor（商標））、レトロゾール（Femara（商標））、及びアナストロゾール（Arimidex（商標））；及び抗アンドロゲン剤（例えばフルタミド、ニルタミド、ビカルタミド、ロイプロリド、及びゴセレリンなど）；及び上記のいずれかの医薬的に許容可能な塩、酸、又は誘導体を含む。これらの薬剤の任意の１つ以上を本発明のヒト化抗体に結合させて、種々の障害の処置のために有用な治療薬剤を提供してもよい。
【０１０６】
抗体はまた、プロドラッグに結合させてもよい。「プロドラッグ」は、親薬物と比較して腫瘍細胞への細胞傷害性が低く、酵素的に活性化される、又はより活性な形態に変換されることが可能な医薬活性物質の前駆体又は誘導体の形態である。例えば、Wilman, 1986, “Prodrugs in Cancer Chemotherapy”, In Biochemical Society Transactions, 14, pp. 375-382, 615th Meeting Belfast and Stella et al., 1985, “Prodrugs: A Chemical Approach to Targeted Drug Delivery, In: ”Directed Drug Delivery, Borchardt et al., (ed.), pp. 247-267, Humana Pressを参照のこと。有用なプロドラッグは、リン酸含有プロドラッグ、チオリン酸含有プロドラッグ、硫酸含有プロドラッグ、ペプチド含有プロドラッグ、Ｄ−アミノ酸修飾プロドラッグ、グリコシル化プロドラッグ、β−ラクタム含有プロドラッグ、場合により置換されたフェノキシアセトアミド含有プロドラッグ、及び場合により置換されたフェニルアセトアミド含有プロドラッグ、５−フルオロシトシン、及びより活性な細胞傷害性のない薬物に変換することができる他の５−フルオロウリジンプロドラッグを含むが、これらに限定しない。プロドラッグ形態に誘導体化することができる細胞傷害性薬物の例は、上に記載する化学療法薬剤を含むが、これらに限定しない。
【０１０７】
診断ならびに治療モニタリング目的のために、本発明の抗体はまた、標識、標識単独又は標識及び追加の第２薬剤（プロドラッグ、化学療法薬剤など）のいずれかに結合させてもよい。他の第２薬剤と区別される標識は、検出可能な化合物又は組成物である薬剤を指し、本発明のヒト化抗体に直接的又は間接的に結合させてもよい。標識自体が検出可能でありうる（例、放射性同位体標識又は蛍光標識）又は、酵素標識の場合では、検出可能である基質化合物又は組成物の化学的変化を触媒しうる。標識されたヒト化抗ＩＬ−３６Ｒ抗体は、インビトロ及びインビボ診断を含む種々の適用において調製及び使用することができる。
【０１０８】
本発明の抗体は、インビボでのその送達に影響を及ぼすために、リポソーム調製物の一部として処方化してもよい。「リポソーム」は、種々の型の脂質、リン脂質、及び／又は界面活性剤で構成される小さな小胞である。リポソームは、場合により１つ以上の医薬的に活性な薬剤及び／又は標識と共役させた又はそれとの併用における、化合物又は製剤（例えば本明細書中に開示するヒト化抗ＩＬ−３６Ｒ抗体など）の哺乳動物への送達のために有用である。リポソームの成分は一般に、生体膜の脂質配置と同様に、二重層構造中に配置される。
【０１０９】
本発明の特定の態様は、本発明のヒト化抗体の１つ以上のドメインをコードする単離核酸に関する。「単離」核酸分子は、それが抗体核酸の天然供給源において通常関連付けられる少なくとも１つの混入核酸分子から同定され分離された核酸分子である。単離核酸分子は、それが天然細胞中に存在するため、核酸分子から区別される。
【０１１０】
本発明の種々の態様では、ヒト化抗体の１つ以上のドメインを組換え発現させる。そのような組換え発現には、１つ以上の制御配列、即ち、特定の宿主生物中の作動可能に連結されたコード配列の発現のために必要なポリヌクレオチド配列を用いてもよい。原核細胞における使用のために適切な制御配列には、例えば、プロモーター、オペレーター、及びリボソーム結合部位配列を含む。真核生物の制御配列は、プロモーター、ポリアデニル化シグナル、及びエンハンサーを含むが、これらに限定しない。これらの制御配列は、原核生物及び真核生物の宿主細胞におけるヒト化抗ＩＬ−３６Ｒ抗体の発現及び産生のために利用することができる。
【０１１１】
核酸配列は、別の核酸配列と機能的な関係に置かれた場合に「作動可能に連結」されている。例えば、核酸プレ配列又は分泌リーダーは、それがポリペプチドの分泌に関与するプレタンパク質として発現される場合、ポリペプチドをコードする核酸に作動可能に連結されている；プロモーター又はエンハンサーは、それが配列の転写に影響を及ぼす場合、コード配列に作動可能に連結されている；又は、リボソーム結合部位は、それが翻訳を促進するように位置付けられている場合、コード配列に作動可能に連結されている。一般的に、「作動可能に連結されている」は、連結されているＤＮＡ配列が連続的であること、及び分泌リーダーの場合では、連続的でリーディングフレーム中にあることを意味する。しかし、エンハンサーは場合により連続的である。連結は、便利な制限サイトでのライゲーションにより達成することができる。そのような部位が存在しない場合、合成オリゴヌクレオチドアダプター又はリンカーを使用することができる。
【０１１２】
本明細書中で使用する表現「細胞」、「細胞株」、及び「細胞培養」は互換的に使用し、全てのそのような命名がその後代を含む。このように、「形質転換体」及び「形質転換細胞」は、移入の回数に関係なく、初代対象細胞及びそれから由来する培養物を含む。
【０１１３】
処置の目的のための用語「哺乳動物」は、哺乳動物（ヒト、家畜及び農場動物、及び動物園、スポーツ、又はペットの動物（例えばイヌ、ウマ、ネコ、ウシなど）を含む）として分類される任意の動物を指す。好ましくは、哺乳動物はヒトである。
【０１１４】
「障害」は、本明細書中で使用するように、本明細書において記載するヒト化抗ＩＬ−３６Ｒ抗体を用いた処置から利益を得うる任意の状態である。これは、哺乳動物を問題の疾患に罹りやすくするような病的状態を含む慢性及び急性の障害又は疾患を含む。本明細書において処置される非限定的な例又は障害は、炎症性、血管新生、自己免疫性、及び免疫学的障害、呼吸器障害、癌、血液学的悪性腫瘍、良性及び悪性腫瘍、白血病及びリンパ性悪性腫瘍を含む。
【０１１５】
用語「癌」及び「癌性」は、典型的には未制御の細胞成長により特徴付けられる哺乳動物の生理学的状態を指す、又は記載する。癌の例は、癌腫、リンパ腫、芽細胞腫、肉腫、及び白血病を含むが、これらに限定しない。
【０１１６】
ＩＬ−３６Ｒ関連障害は免疫系の疾患及び障害（例えば自己免疫障害及び炎症性障害など）を含む。そのような状態は、関節リウマチ（ＲＡ）、全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）、強皮症、シェーグレン症候群、多発性硬化症、乾癬、乾癬性関節炎、炎症性腸疾患（例、潰瘍性大腸炎及びクローン病）、肺炎症、喘息、特発性血小板減少性紫斑病（ＩＴＰ）、上皮性炎症性疾患、線維症、及び強直性脊椎炎を含むが、これらに限定しない。
【０１１７】
用語「静脈内注入」は、約１５分より長い時間、一般的には約３０〜９０分の間にわたる動物又はヒト患者の静脈中への薬剤の導入を指す。
【０１１８】
用語「静脈内ボーラス」又は「静脈内プッシュ」は、身体が約１５分又はそれ以下、一般的には５分又はそれ以下で薬物を受けるような、動物又はヒトの静脈中への薬物投与を指す。
【０１１９】
用語「皮下投与」は、薬物容器からの比較的ゆっくりとした持続的送達による、動物又はヒト患者の皮膚下、好ましくは皮膚と下層組織の間のポケット内での薬剤の導入を指す。下層組織から皮膚をつまむ、又は引っ張ることによってポケットを作製してもよい。
【０１２０】
用語「皮下注入」は、一定時間（３０分又はそれ以下、あるいは９０分又はそれ以下を含むが、これらに限定しない）にわたる薬物容器からの比較的ゆっくりとした持続的送達による、動物又はヒト患者の皮膚下、好ましくは皮膚と下層組織の間のポケット内での薬剤の導入を指す。場合により、注入は、動物又はヒト患者の皮膚下に埋め込まれた薬物送達ポンプの皮下移植により行ってもよく、それにおいてポンプによって、所定の時間（例えば３０分、９０分、又は処置レジメンの長さにわたる期間など）にわたり所定量の薬物が送達される。
【０１２１】
用語「皮下ボーラス」は、ボーラス薬物送達が約１５分未満である、動物又はヒト患者の皮膚下への薬物投与を指す；別の態様では、５分未満、さらに別の態様では６０秒未満である。さらに別の態様では、投与は皮膚と下層組織の間のポケット内であり、ポケットは、下層組織から皮膚をつまむ、又は引っ張ることにより作製してもよい。
【０１２２】
用語「治療有効量」は、処置されている障害の症状の１つ以上を緩和又は寛解する活性薬剤の量を指すために使用する。別の態様では、治療有効量は、例えば疾患進行を遅らせる際に有効であることが示されている標的血清濃度を指す。効力は、処置する状態に依存して、従来の方法において測定することができる。
【０１２３】
用語「処置」及び「治療」などは、本明細書中で使用するように、任意の臨床的に望ましい又は有益な効果（１つ以上の症状の軽減又は緩和、退行、疾患又は障害の進行の緩徐化又は休止を含むが、これらに限定しない）に導く、疾患又は障害のための治療的ならびに予防的、又は抑制的措置を含むことを意味する。このように、例えば、用語「処置」は、疾患又は障害の症状の発症に先立つ又はそれに続く薬剤の投与を含み、それにより疾患又は障害の１つ以上の徴候を予防又は除去する。別の例として、この用語は、疾患の症状と闘うための、疾患の臨床症状発現後の薬剤の投与を含む。さらに、発症後及び臨床症状発現後の薬剤の投与が開発されており、そこでは投与は、処置が疾患の寛解に導くか否かにかかわらず、疾患又は障害の臨床パラメーター（組織損傷の程度又は転移の量もしくは程度など）に影響を及ぼし、本明細書中で使用する「処置」又は「治療」を含む。さらに、本発明の組成物が単独で又は別の治療用薬剤との併用において、ヒト化抗ＩＬ−３６Ｒ抗体組成物の使用の非存在における症状と比較し、処置されている障害の少なくとも１つの症状を緩和又は寛解する限り、結果は、障害の全ての症状が緩和されるか否かにかかわらず、基礎となる障害の有効な処置とみなすべきである。
【０１２４】
用語「添付文書」は、治療用産物の市販パッケージ中に習慣的に含まれる指示書を指すために使用し、それには、そのような治療用産物の使用に関する適応、使用法、投与、禁忌、及び／又は警告に関する情報が含まれる。
【０１２５】
抗体
一態様では、本明細書中に記載及び開示するのは、抗ＩＬ−３６Ｒ抗体、特にヒト化抗ＩＬ−３６Ｒ抗体、ならびに１つ以上の抗ＩＬ−３６Ｒ抗体、特に本発明の１つ以上のヒト化抗ＩＬ−３６Ｒ抗体を含む組成物及び製造品である。また記載するのは、抗ＩＬ−３６抗体、特にヒト化抗ＩＬ−３６Ｒ抗体の抗原結合フラグメントを含む結合薬剤である。
【０１２６】
本発明の代表的な抗体の可変領域及びＣＤＲを以下に開示する：
【０１２７】
抗ＩＬ−３６Ｒマウス抗体配列
本発明の代表的なマウスリード抗体（マウスリード）の可変領域及びＣＤＲを以下に示す：
【０１２８】
【表１】
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2020512344.tif 000003
2020512344.tif 000004
【０１２９】
【表２】
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【０１３０】
【表３】
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【０１３１】
【表４】
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【０１３２】
【表５】
2020512344.tif 000010
【０１３３】
【表６】
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【０１３４】
【表７】
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【０１３５】
【表８】
2020512344.tif 000013
【０１３６】
【表９】
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【０１３７】
抗ＩＬ−３６Ｒヒト化抗体配列
ヒトフレームワーク配列を、フレームワークの相同性、ＣＤＲ構造、保存された基準残基、保存された界面充填残基、及びヒト化可変領域を産生するための他のパラメーターに基づきマウスリードについて選択した（実施例５を参照のこと）。
【０１３８】
抗体８１Ｂ４及び７３Ｃ５から由来する代表的なヒト化可変領域を以下に示す。
【０１３９】
【表１０】
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【０１４０】
【表１１】
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【０１４１】
上に示す抗体８１Ｂ４及び７３Ｃ５から由来するヒト化可変領域のＣＤＲ配列を下に描写する。
【０１４２】
【表１２】
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【０１４３】
【表１３】
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【０１４４】
【表１４】
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【０１４５】
【表１５】
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【０１４６】
【表１６】
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【０１４７】
【表１７】
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【０１４８】
一態様では、本発明の可変領域を定常領域に連結させる。例えば、本発明の可変領域は、下に示す定常領域に連結し、抗体の重鎖又は軽鎖を形成する。
【表１８】
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【０１４９】
本発明の代表的な軽鎖及び重鎖配列を以下に示す（定常領域に連結された抗体８１Ｂ４及び７３Ｃ５から由来するヒト化可変領域）。
【０１５０】
【表１９】
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【０１５１】
【表２０】
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【０１５２】
上に列挙するＣＤＲは、Ｃｏｔｈｉａナンバリングシステムを使用して定義する（Al-Lazikani et al., (1997) JMB 273, 927-948）。
【０１５３】
一態様では、本発明の抗体は、例えば上に示すような３つの軽鎖ＣＤＲ及び３つの重鎖ＣＤＲを含む。
【０１５４】
一態様では、本発明の抗体は、上に示す軽鎖及び重鎖可変領域を含む。一態様では、本発明の軽鎖可変領域は、軽鎖定常領域、例えばカッパ又はラムダ定常領域に融合させる。一態様では、本発明の重鎖可変領域は、重鎖定常領域、例えばＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ、又はＩｇＭ、特にＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、又はＩｇＧ４に融合させる。
【０１５５】
本発明は、配列番号１１５のアミノ酸配列を含む軽鎖；及び配列番号１２５のアミノ酸配列を含む重鎖を含む抗ＩＬ−３６Ｒ抗体を提供する（抗体Ｂ１）。
【０１５６】
本発明は、配列番号１１５のアミノ酸配列を含む軽鎖；及び配列番号１２６のアミノ酸配列を含む重鎖を含む抗ＩＬ−３６Ｒ抗体を提供する（抗体Ｂ２）。
【０１５７】
本発明は、配列番号１１５のアミノ酸配列を含む軽鎖；及び配列番号１２７のアミノ酸配列を含む重鎖を含む抗ＩＬ−３６Ｒ抗体を提供する（抗体Ｂ３）。
【０１５８】
本発明は、配列番号１１８のアミノ酸配列を含む軽鎖；及び配列番号１２５のアミノ酸配列を含む重鎖を含む抗ＩＬ−３６Ｒ抗体を提供する（抗体Ｂ４）。
【０１５９】
本発明は、配列番号１１８のアミノ酸配列を含む軽鎖；及び配列番号１２６のアミノ酸配列を含む重鎖を含む抗ＩＬ−３６Ｒ抗体を提供する（抗体Ｂ５）。
【０１６０】
本発明は、配列番号１１８のアミノ酸配列を含む軽鎖；及び配列番号１２７のアミノ酸配列を含む重鎖を含む抗ＩＬ−３６Ｒ抗体を提供する（抗体Ｂ６）。
【０１６１】
本発明は、配列番号１２３のアミノ酸配列を含む軽鎖；及び配列番号１３８のアミノ酸配列を含む重鎖を含む抗ＩＬ−３６Ｒ抗体を提供する（抗体Ｃ３）。
【０１６２】
本発明は、配列番号１２３のアミノ酸配列を含む軽鎖；及び配列番号１３９のアミノ酸配列を含む重鎖を含む抗ＩＬ−３６Ｒ抗体を提供する（抗体Ｃ２）。
【０１６３】
本発明は、配列番号１２４のアミノ酸配列を含む軽鎖；及び配列番号１３８のアミノ酸配列を含む重鎖を含む抗ＩＬ−３６Ｒ抗体を提供する（抗体Ｃ１）。
【０１６４】
本発明の代表的な抗体を下に示す。
【表２１】
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【表２２】
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【０１６５】
本発明の抗体は、種々の疾患又は障害、例えばヒトにおける免疫学的疾患、炎症性疾患、自己免疫疾患、及び呼吸器疾患の処置のための方法において有用である。例えば、本発明の抗体は、乾癬、関節リウマチ、炎症性腸疾患、又は乾癬性関節炎の処置のための方法において有用である。例えば、本発明の抗体は、慢性閉塞性肺障害（ＣＯＰＤ）又は喘息の処置のための方法において有用である。例えば、本発明の抗体は、強皮症、掌蹠膿疱症、全身性膿疱性乾癬、糖尿病性腎症、ループス腎炎、強皮症、強直性脊椎炎、ＩＬ−３６受容体アンタゴニスト欠損自己免疫疾患（ＤＩＴＲＡ）、ＩＬ−１受容体アンタゴニスト欠損自己免疫疾患（ＤＩＲＡ）、又はクリオピリン関連周期性症候群（ＣＡＰＳ）の処置のための方法において有用である。
【０１６６】
一部の態様では、ヒト化抗体は遮断活性を呈し、それによりＩＬ−３６受容体へのＩＬ−３６リガンドの結合を少なくとも４５%だけ、少なくとも５０%だけ、少なくとも５５%だけ、少なくとも６０%だけ、少なくとも６５%だけ、少なくとも７０%だけ、少なくとも７５%だけ、少なくとも８０%だけ、少なくとも８５%だけ、少なくとも９０%だけ、又は少なくとも９５%だけ減少させる。ＩＬ−３６受容体へのＩＬ−３６リガンドの結合を遮断する抗体の能力は、当技術分野において公知の競合的結合アッセイを使用して測定することができる。あるいは、抗体の遮断活性は、ＩＬ−３６受容体により媒介されるシグナル伝達が阻害されるか否かを決定するためにＩＬ−３６の生物学的効果（例えばＩＬ−８、ＩＬ−６、及びＧＭ−ＣＳＦの産生など）を評価することにより測定することができる。
【０１６７】
さらなる態様では、本発明は、好ましい生物物理学的特性を有するヒト化抗ＩＬ−３６Ｒ抗体を提供する。一態様では、本発明のヒト化抗ＩＬ−３６Ｒ抗体は、緩衝液中で少なくとも９０%の単量体形態、又は少なくとも９２%の単量体形態、又は少なくとも９５%の単量体形態で存在する。さらなる態様では、本発明のヒト化抗ＩＬ−３６Ｒ抗体は、緩衝液中で少なくとも９０%の単量体形態、又は少なくとも９２%の単量体形態、又は少なくとも９５%の単量体形態で１ヶ月間にわたり又は４ヶ月間にわたり残る。
【０１６８】
一態様では、本発明のヒト化抗体は、抗体Ｂ１、抗体Ｂ２、抗体Ｂ３、抗体Ｂ４、抗体Ｂ５、抗体Ｂ６、抗体Ｃ１、抗体Ｃ２、又は抗体Ｃ３である。したがって、一実施形態では、本発明のヒト化抗体は、配列番号１１５の軽鎖配列及び配列番号１２５の重鎖配列を含む（抗体Ｂ１）。別の実施形態では、本発明のヒト化抗体は、配列番号１１５の軽鎖配列及び配列番号１２６の重鎖配列を含む（抗体Ｂ２）。別の実施形態では、本発明のヒト化抗体は、配列番号１１５の軽鎖配列及び配列番号１２７の重鎖配列を含む（抗体Ｂ３）。別の実施形態では、本発明のヒト化抗体は、配列番号１１８の軽鎖配列及び配列番号１２５の重鎖配列を含む（抗体Ｂ４）。別の実施形態では、本発明のヒト化抗体は、配列番号１１８の軽鎖配列及び配列番号１２６の重鎖配列を含む（抗体Ｂ５）。別の実施形態では、本発明のヒト化抗体は、配列番号１１８の軽鎖配列及び配列番号１２７の重鎖配列を含む（抗体Ｂ６）。別の実施形態では、本発明のヒト化抗体は、配列番号１２４の軽鎖配列及び配列番号１３８の重鎖配列を含む（抗体Ｃ１）。別の実施形態では、本発明のヒト化抗体は、配列番号１２３の軽鎖配列及び配列番号１３９の重鎖配列を含む（抗体Ｃ２）。別の実施形態では、本発明のヒト化抗体は、配列番号１２３の軽鎖配列及び配列番号１３８の重鎖配列を含む（抗体Ｃ３）。
【０１６９】
さらなる実施形態では、本発明のヒト化抗体は、配列番号１１５の軽鎖配列及び配列番号１２５の重鎖配列からなる（抗体Ｂ１）。別の実施形態では、本発明のヒト化抗体は、配列番号１１５の軽鎖配列及び配列番号１２６の重鎖配列からなる（抗体Ｂ２）。別の実施形態では、本発明のヒト化抗体は、配列番号１１５の軽鎖配列及び配列番号１２７の重鎖配列からなる（抗体Ｂ３）。別の実施形態では、本発明のヒト化抗体は、配列番号１１８の軽鎖配列及び配列番号１２５の重鎖配列からなる（抗体Ｂ４）。別の実施形態では、本発明のヒト化抗体は、配列番号１１８の軽鎖配列及び配列番号１２６の重鎖配列からなる（抗体Ｂ５）。別の実施形態では、本発明のヒト化抗体は、配列番号１１８の軽鎖配列及び配列番号１２７の重鎖配列からなる（抗体Ｂ６）。別の実施形態では、本発明のヒト化抗体は、配列番号１２４の軽鎖配列及び配列番号１３８の重鎖配列からなる（抗体Ｃ１）。別の実施形態では、本発明のヒト化抗体は、配列番号１２３の軽鎖配列及び配列番号１３９の重鎖配列からなる（抗体Ｃ２）。別の実施形態では、本発明のヒト化抗体は、配列番号１２３の軽鎖配列及び配列番号１３８の重鎖配列からなる（抗体Ｃ３）。
【０１７０】
一部の実施形態では、その抗原結合フラグメント（例えば重鎖及び軽鎖可変領域など）を含むヒト化抗ＩＬ−３６Ｒ抗体は、抗体Ｂ１、抗体Ｂ２、抗体Ｂ３、抗体Ｂ４、抗体Ｂ５、抗体Ｂ６、抗体Ｃ１、抗体Ｃ２、又は抗体Ｃ３から由来する残基のアミノ酸配列を含む。
【０１７１】
さらなる実施形態では、本発明は、本発明の抗体、例えば本明細書中に記載する抗体Ｂ１、抗体Ｂ２、抗体Ｂ３、抗体Ｂ４、抗体Ｂ５、抗体Ｂ６、抗体Ｃ１、抗体Ｃ２、又は抗体Ｃ３とヒトＩＬ−３６Ｒに競合的に結合する抗ＩＬ−３６Ｒ抗体又はその抗原結合フラグメントを提供する。ＩＬ−３６Ｒに競合的に結合する抗体又は抗原結合フラグメントの能力は、当技術分野において公知の競合的結合アッセイを使用して測定することができる。
【０１７２】
ヒト化抗ＩＬ−３６Ｒ抗体は、場合により、コンセンサス又は生殖細胞系フレームワーク領域中に特定のアミノ酸置換を含む。これらのフレームワーク位置におけるアミノ酸残基の特定の置換は、抗体性能（結合親和性及び／又は安定性を含む）の種々の態様を、ヒト生殖細胞系フレームワーク領域中へのＣＤＲ又はＨＶＬの「直接的スワップ」により形成されるヒト化抗体において実証されるものを上回り改善することができる。
【０１７３】
一部の実施形態では、本発明は、配列番号１〜１０のいずれか１つに示すアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域を伴う他のモノクローナル抗体を記載する。一部の実施形態では、本発明は、配列番号１１〜２０のいずれか１つに示すアミノ酸配列を有する重鎖可変領域を伴う他のモノクローナル抗体を記載する。そのようなＣＤＲをヒトコンセンサス重鎖及び軽鎖可変ドメインのＦＲ中に配置することによって、本発明の有用なヒト化抗体がもたらされるであろう。
【０１７４】
特に、本発明は、配列番号１／１１、２／１２、３／１３、４／１４、５／１５、６／１６、７／１７、８／１８、９／１９、１０／２０の軽鎖可変領域及び重鎖可変領域の併用を伴うモノクローナル抗体を提供する。そのような可変領域は、ヒト定常領域と併用することができる。
【０１７５】
一部の実施形態では、本発明は、配列番号７６〜８６のいずれか１つに示すアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域配列を伴う他のヒト化抗体を記載する。一部の実施形態では、本発明は、配列番号８７〜１０１のいずれか１つに示すアミノ酸配列を有する重鎖可変領域配列を伴う他のヒト化抗体を記載する。特に、本発明は、配列番号７７／８９、８０／８８、８０／８９、７７／８７、７７／８８、８０／８７、８６／１００、８５／１０１、８５／１００の軽鎖可変領域及び重鎖可変領域の併用を伴うモノクローナル抗体を提供する。そのような可変領域は、ヒト定常領域と併用することができる。
【０１７６】
さらなる実施形態では、本発明は、配列番号７７のＣＤＲを含むヒト化軽鎖可変ドメイン及び配列番号７７の可変ドメイン軽鎖アミノ酸配列のフレームワーク領域のアミノ酸配列と少なくとも９０%同一である、少なくとも９３%同一である、又は少なくとも９５%同一であるアミノ酸配列を有するフレームワーク領域ならびに配列番号８９のＣＤＲを含むヒト化重鎖可変ドメイン及び配列番号８９の可変ドメイン重鎖アミノ酸配列のフレームワーク領域のアミノ酸配列と少なくとも９０%同一である、少なくとも９３%同一である、又は少なくとも９５%同一であるアミノ酸配列を有するフレームワーク領域を含む抗ＩＬ−３６Ｒ抗体又はその抗原結合フラグメントに関する。一実施形態では、抗ＩＬ−３６Ｒ抗体はヒト化モノクローナル抗体である。
【０１７７】
さらなる実施形態では、本発明は、配列番号８０のＣＤＲを含むヒト化軽鎖可変ドメイン及び配列番号８０の可変ドメイン軽鎖アミノ酸配列のフレームワーク領域のアミノ酸配列と少なくとも９０%同一である、少なくとも９３%同一である、又は少なくとも９５%同一であるアミノ酸配列を有するフレームワーク領域ならびに配列番号８８のＣＤＲを含むヒト化重鎖可変ドメイン及び配列番号８８の可変ドメイン重鎖アミノ酸配列のフレームワーク領域のアミノ酸配列と少なくとも９０%同一である、少なくとも９３%同一である、又は少なくとも９５%同一であるアミノ酸配列を有するフレームワーク領域を含む抗ＩＬ−３６Ｒ抗体又はその抗原結合フラグメントに関する。一実施形態では、抗ＩＬ−３６Ｒ抗体はヒト化モノクローナル抗体である。
【０１７８】
さらなる実施形態では、本発明は、配列番号８０のＣＤＲを含むヒト化軽鎖可変ドメイン及び配列番号８０の可変ドメイン軽鎖アミノ酸配列のフレームワーク領域のアミノ酸配列と少なくとも９０%同一である、少なくとも９３%同一である、又は少なくとも９５%同一であるアミノ酸配列を有するフレームワーク領域ならびに配列番号８９のＣＤＲを含むヒト化重鎖可変ドメイン及び配列番号８９の可変ドメイン重鎖アミノ酸配列のフレームワーク領域のアミノ酸配列と少なくとも９０%同一である、少なくとも９３%同一である、又は少なくとも９５%同一であるアミノ酸配列を有するフレームワーク領域を含む抗ＩＬ−３６Ｒ抗体又はその抗原結合フラグメントに関する。一実施形態では、抗ＩＬ−３６Ｒ抗体はヒト化モノクローナル抗体である。
【０１７９】
さらなる実施形態では、本発明は、配列番号７７のＣＤＲを含むヒト化軽鎖可変ドメイン及び配列番号７７の可変ドメイン軽鎖アミノ酸配列のフレームワーク領域のアミノ酸配列と少なくとも９０%同一である、少なくとも９３%同一である、又は少なくとも９５%同一であるアミノ酸配列を有するフレームワーク領域ならびに配列番号８７のＣＤＲを含むヒト化重鎖可変ドメイン及び配列番号８７の可変ドメイン重鎖アミノ酸配列のフレームワーク領域のアミノ酸配列と少なくとも９０%同一である、少なくとも９３%同一である、又は少なくとも９５%同一であるアミノ酸配列を有するフレームワーク領域を含む抗ＩＬ−３６Ｒ抗体又はその抗原結合フラグメントに関する。一実施形態では、抗ＩＬ−３６Ｒ抗体はヒト化モノクローナル抗体である。
【０１８０】
さらなる実施形態では、本発明は、配列番号７７のＣＤＲを含むヒト化軽鎖可変ドメイン及び配列番号７７の可変ドメイン軽鎖アミノ酸配列のフレームワーク領域のアミノ酸配列と少なくとも９０%同一である、少なくとも９３%同一である、又は少なくとも９５%同一であるアミノ酸配列を有するフレームワーク領域ならびに配列番号８８のＣＤＲを含むヒト化重鎖可変ドメイン及び配列番号８８の可変ドメイン重鎖アミノ酸配列のフレームワーク領域のアミノ酸配列と少なくとも９０%同一である、少なくとも９３%同一である、又は少なくとも９５%同一であるアミノ酸配列を有するフレームワーク領域を含む抗ＩＬ−３６Ｒ抗体又はその抗原結合フラグメントに関する。一実施形態では、抗ＩＬ−３６Ｒ抗体はヒト化モノクローナル抗体である。
【０１８１】
さらなる実施形態では、本発明は、配列番号８０のＣＤＲを含むヒト化軽鎖可変ドメイン及び配列番号８０の可変ドメイン軽鎖アミノ酸配列のフレームワーク領域のアミノ酸配列と少なくとも９０%同一である、少なくとも９３%同一である、又は少なくとも９５%同一であるアミノ酸配列を有するフレームワーク領域ならびに配列番号８７のＣＤＲを含むヒト化重鎖可変ドメイン及び配列番号８７の可変ドメイン重鎖アミノ酸配列のフレームワーク領域のアミノ酸配列と少なくとも９０%同一である、少なくとも９３%同一である、又は少なくとも９５%同一であるアミノ酸配列を有するフレームワーク領域を含む抗ＩＬ−３６Ｒ抗体又はその抗原結合フラグメントに関する。一実施形態では、抗ＩＬ−３６Ｒ抗体はヒト化モノクローナル抗体である。
【０１８２】
さらなる実施形態では、本発明は、配列番号８６のＣＤＲを含むヒト化軽鎖可変ドメイン及び配列番号８６の可変ドメイン軽鎖アミノ酸配列のフレームワーク領域のアミノ酸配列と少なくとも９０%同一である、少なくとも９３%同一である、又は少なくとも９５%同一であるアミノ酸配列を有するフレームワーク領域ならびに配列番号１００のＣＤＲを含むヒト化重鎖可変ドメイン及び配列番号１００の可変ドメイン重鎖アミノ酸配列のフレームワーク領域のアミノ酸配列と少なくとも９０%同一である、少なくとも９３%同一である、又は少なくとも９５%同一であるアミノ酸配列を有するフレームワーク領域を含む抗ＩＬ−３６Ｒ抗体又はその抗原結合フラグメントに関する。一実施形態では、抗ＩＬ−３６Ｒ抗体はヒト化モノクローナル抗体である。
【０１８３】
さらなる実施形態では、本発明は、配列番号８５のＣＤＲを含むヒト化軽鎖可変ドメイン及び配列番号８５の可変ドメイン軽鎖アミノ酸配列のフレームワーク領域のアミノ酸配列と少なくとも９０%同一である、少なくとも９３%同一である、又は少なくとも９５%同一であるアミノ酸配列を有するフレームワーク領域ならびに配列番号１０１のＣＤＲを含むヒト化重鎖可変ドメイン及び配列番号１０１の可変ドメイン重鎖アミノ酸配列のフレームワーク領域のアミノ酸配列と少なくとも９０%同一である、少なくとも９３%同一である、又は少なくとも９５%同一であるアミノ酸配列を有するフレームワーク領域を含む抗ＩＬ−３６Ｒ抗体又はその抗原結合フラグメントに関する。一実施形態では、抗ＩＬ−３６Ｒ抗体はヒト化モノクローナル抗体である。
【０１８４】
さらなる実施形態では、本発明は、配列番号８５のＣＤＲを含むヒト化軽鎖可変ドメイン及び配列番号８５の可変ドメイン軽鎖アミノ酸配列のフレームワーク領域のアミノ酸配列と少なくとも９０%同一である、少なくとも９３%同一である、又は少なくとも９５%同一であるアミノ酸配列を有するフレームワーク領域ならびに配列番号１００のＣＤＲを含むヒト化重鎖可変ドメイン及び配列番号１００の可変ドメイン重鎖アミノ酸配列のフレームワーク領域のアミノ酸配列と少なくとも９０%同一である、少なくとも９３%同一である、又は少なくとも９５%同一であるアミノ酸配列を有するフレームワーク領域を含む抗ＩＬ−３６Ｒ抗体又はその抗原結合フラグメントに関する。一実施形態では、抗ＩＬ−３６Ｒ抗体はヒト化モノクローナル抗体である。
【０１８５】
一部の特定の実施形態では、本明細書中に開示するヒト化抗ＩＬ−３６Ｒ抗体は、本明細書中に開示するマウスモノクローナル抗体又はヒト化抗体のＣＤＲ又はＨＶＬ及びヒト生殖細胞系重鎖及び軽鎖可変ドメインのＦＲを含む重鎖又は軽鎖可変ドメインを少なくとも含む。
【０１８６】
さらなる一態様では、本発明は、配列番号２１〜２９のいずれか１つの軽鎖ＣＤＲ１（Ｌ−ＣＤＲ１）配列；配列番号３０〜３８のいずれか１つの軽鎖ＣＤＲ２（Ｌ−ＣＤＲ２）配列；配列番号３９〜４７のいずれか１つの軽鎖ＣＤＲ３（Ｌ−ＣＤＲ３）配列；配列番号４８〜５６のいずれか１つの重鎖ＣＤＲ１（Ｈ−ＣＤＲ１）配列；配列番号５７〜６６のいずれか１つの重鎖ＣＤＲ２（Ｈ−ＣＤＲ２）配列；及び配列番号６７〜７５のいずれか１つの重鎖ＣＤＲ３（Ｈ−ＣＤＲ３）配列を含む抗ＩＬ−３６Ｒ抗体又はその抗原結合フラグメントを提供する。一態様では、抗ＩＬ−３６Ｒ抗体又はその抗原結合フラグメントは、上に列挙するＬ−ＣＤＲ１、上に列挙するＬ−ＣＤＲ２、及び上に列挙するＬ−ＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域、ならびに上に列挙するＨ−ＣＤＲ１、上に列挙するＨ−ＣＤＲ２、及び上に列挙するＨ−ＣＤＲ３を含む重鎖可変領域を含む。
【０１８７】
さらなる態様では、本発明は、以下を含む抗ＩＬ−３６Ｒ抗体又はその抗原結合フラグメントを提供する：
ａ）それぞれ配列番号２１、３０、３９、４８、５７、及び６７のＬ−ＣＤＲ１、Ｌ−ＣＤＲ２、Ｌ−ＣＤＲ３、Ｈ−ＣＤＲ１、Ｈ−ＣＤＲ２、及びＨ−ＣＤＲ３配列；又は
ｂ）それぞれ配列番号２２、３１、４０、４９、５８、及び６８のＬ−ＣＤＲ１、Ｌ−ＣＤＲ２、Ｌ−ＣＤＲ３、Ｈ−ＣＤＲ１、Ｈ−ＣＤＲ２、及びＨ−ＣＤＲ３配列；又は
ｃ）それぞれ配列番号２３、３２、４１、５０、５９、及び６９のＬ−ＣＤＲ１、Ｌ−ＣＤＲ２、Ｌ−ＣＤＲ３、Ｈ−ＣＤＲ１、Ｈ−ＣＤＲ２、及びＨ−ＣＤＲ３配列；又は
ｄ）それぞれ配列番号２４、３３、４２、５１、６０、及び７０のＬ−ＣＤＲ１、Ｌ−ＣＤＲ２、Ｌ−ＣＤＲ３、Ｈ−ＣＤＲ１、Ｈ−ＣＤＲ２、及びＨ−ＣＤＲ３配列；又は
ｅ）それぞれ配列番号２５、３４、４３、５２、６１、及び７１のＬ−ＣＤＲ１、Ｌ−ＣＤＲ２、Ｌ−ＣＤＲ３、Ｈ−ＣＤＲ１、Ｈ−ＣＤＲ２、及びＨ−ＣＤＲ３配列；又は
ｆ）それぞれ配列番号２６、３５、４４、５３、６２、及び７２のＬ−ＣＤＲ１、Ｌ−ＣＤＲ２、Ｌ−ＣＤＲ３、Ｈ−ＣＤＲ１、Ｈ−ＣＤＲ２、及びＨ−ＣＤＲ３配列；又は
ｇ）それぞれ配列番号２７、３６、４５、５４、６３、及び７３のＬ−ＣＤＲ１、Ｌ−ＣＤＲ２、Ｌ−ＣＤＲ３、Ｈ−ＣＤＲ１、Ｈ−ＣＤＲ２、及びＨ−ＣＤＲ３配列；又は
ｈ）それぞれ配列番号２７、３６、４５、５４、６４、及び７４のＬ−ＣＤＲ１、Ｌ−ＣＤＲ２、Ｌ−ＣＤＲ３、Ｈ−ＣＤＲ１、Ｈ−ＣＤＲ２、及びＨ−ＣＤＲ３配列；又は
ｉ）それぞれ配列番号２７、３６、４５、５４、６４、及び７３のＬ−ＣＤＲ１、Ｌ−ＣＤＲ２、Ｌ−ＣＤＲ３、Ｈ−ＣＤＲ１、Ｈ−ＣＤＲ２、及びＨ−ＣＤＲ３配列；又は
ｊ）それぞれ配列番号２８、３７、４６、５５、６５、及び７４のＬ−ＣＤＲ１、Ｌ−ＣＤＲ２、Ｌ−ＣＤＲ３、Ｈ−ＣＤＲ１、Ｈ−ＣＤＲ２、及びＨ−ＣＤＲ３配列；又は
ｋ）それぞれ配列番号２９、３８、４７、５６、６６、及び７５のＬ−ＣＤＲ１、Ｌ−ＣＤＲ２、Ｌ−ＣＤＲ３、Ｈ−ＣＤＲ１、Ｈ−ＣＤＲ２、及びＨ−ＣＤＲ３配列。
【０１８８】
さらなる態様では、本発明は、以下を含む抗ＩＬ−３６Ｒ抗体又はその抗原結合フラグメントを提供する：
ａ）それぞれ配列番号２６、１０３、４４、５３、６２、及び７２のＬ−ＣＤＲ１、Ｌ−ＣＤＲ２、Ｌ−ＣＤＲ３、Ｈ−ＣＤＲ１、Ｈ−ＣＤＲ２、及びＨ−ＣＤＲ３配列；又は
ｂ）それぞれ配列番号２６、１０４、４４、５３、６２、及び７２のＬ−ＣＤＲ１、Ｌ−ＣＤＲ２、Ｌ−ＣＤＲ３、Ｈ−ＣＤＲ１、Ｈ−ＣＤＲ２、及びＨ−ＣＤＲ３配列；又は
ｃ）それぞれ配列番号２７、３６、４５、１０７、６３、及び７３のＬ−ＣＤＲ１、Ｌ−ＣＤＲ２、Ｌ−ＣＤＲ３、Ｈ−ＣＤＲ１、Ｈ−ＣＤＲ２、及びＨ−ＣＤＲ３配列；又は
ｄ）配列番号２７、３６、４５、１０７、６４、又は７３のＬ−ＣＤＲ１、Ｌ−ＣＤＲ２、Ｌ−ＣＤＲ３、Ｈ−ＣＤＲ１、Ｈ−ＣＤＲ２、及びＨ−ＣＤＲ３配列。
【０１８９】
一態様では、抗ＩＬ−３６Ｒ抗体又はその抗原結合フラグメントは、上に列挙するＬ−ＣＤＲ１、Ｌ−ＣＤＲ２、及びＬ−ＣＤＲ３の併用を含む軽鎖可変領域、ならびに上に列挙するＨ−ＣＤＲ１、Ｈ−ＣＤＲ２、及びＨ−ＣＤＲ３の併用を含む重鎖可変領域を含む。
【０１９０】
特定の実施形態では、これらの例示的な免疫グロブリンの間の切り換えられたＣＤＲ領域（即ち、例えば、マウス抗体又はそれから由来するヒト化抗体の１つの１つ又は２つのＣＤＲを、別のマウス抗体又はそれから由来するヒト化抗体からの類似のＣＤＲで切り換える）を伴うキメラ抗体によって有用な抗体がもたらされうることが期待される。
【０１９１】
特定の実施形態では、ヒト化抗ＩＬ−３６Ｒ抗体は抗体フラグメントである。種々の抗体フラグメントが上で一般的に考察されており、抗体フラグメントの産生のために開発された技術がある。フラグメントは、インタクトな抗体のタンパク質分解消化を介して由来することができる（例、Morimoto et al., 1992, Journal of Biochemical and Biophysical Methods 24:107-117；及びBrennan et al., 1985, Science 229:81を参照のこと）。あるいは、フラグメントは、組換え宿主細胞中で直接的に産生されうる。例えば、Ｆａｂ’−ＳＨフラグメントを大腸菌から直接的に回収し、化学的に共役してＦ（ａｂ’）２フラグメントを形成することができる（例、Carter et al., 1992, Bio/Technology 10:163-167を参照のこと）。別のアプローチにより、Ｆ（ａｂ’）２フラグメントを組換え宿主細胞培養から直接的に単離することができる。抗体フラグメントの産生のための他の技術は、当業者には明らかであろう。したがって、一態様では、本発明は、本明細書中に記載するＣＤＲ、特に本明細書中に記載するＬ−ＣＤＲ１、Ｌ−ＣＤＲ２、Ｌ−ＣＤＲ３、Ｈ−ＣＤＲ１、Ｈ−ＣＤＲ２、及びＨ−ＣＤＲ３の併用の１つを含む抗体フラグメントを提供する。さらなる態様では、本発明は、本明細書中に記載する可変領域、例えば本明細書中に記載する軽鎖可変領域及び重鎖可変領域の併用の１つを含む抗体フラグメントを提供する。
【０１９２】
特定の実施形態は、配列番号１２５、１２６、又は１２７の重鎖配列との併用において配列番号１１５又は１１８のいずれかの軽鎖配列を含むヒト化抗ＩＬ−３６Ｒ抗体のＦ（ａｂ’）２フラグメントを含む。そのような実施形態は、そのようなＦ（ａｂ’）２を含むインタクトな抗体を含むことができる。
【０１９３】
特定の実施形態は、配列番号１３８又は１３９の重鎖配列との併用において配列番号１２３又は１２４のいずれかの軽鎖配列を含むヒト化抗ＩＬ−３６Ｒ抗体のＦ（ａｂ’）２フラグメントを含む。そのような実施形態は、そのようなＦ（ａｂ’）２を含むインタクトな抗体を含むことができる。
【０１９４】
一部の実施形態では、抗体又は抗体フラグメントは、エフェクター機能を媒介する定常領域を含む。定常領域は、ＩＬ−３６Ｒ発現標的細胞に対する抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）、抗体依存性細胞貪食（ＡＤＣＰ）、及び／又は補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）応答を提供する。エフェクタードメインは、例えば、Ｉｇ分子のＦｃ領域でありうる。
【０１９５】
抗体のエフェクタードメインは、任意の適切な脊椎動物種及びアイソタイプからでありうる。異なる動物種のアイソタイプは、エフェクター機能を媒介する能力において異なる。例えば、ＣＤＣ及びＡＤＣＣ／ＡＤＣＰを媒介するヒト免疫グロブリンの能力は、一般的にそれぞれＩｇＭ≒ＩｇＧ１≒ＩｇＧ３＞ＩｇＧ２＞ＩｇＧ４及びＩｇＧ１≒ＩｇＧ３＞ＩｇＧ２／ＩｇＭ／ＩｇＧ４の順番にある。マウス免疫グロブリンは、一般的にそれぞれマウスＩｇＭ≒ＩｇＧ３＞＞ＩｇＧ２ｂ＞ＩｇＧ２ａ＞＞ＩｇＧ１及びＩｇＧ２ｂ＞ＩｇＧ２ａ＞ＩｇＧ１＞＞ＩｇＧ３の順番においてＣＤＣ及びＡＤＣＣ／ＡＤＣＰを媒介する。別の例では、マウスＩｇＧ２ａがＡＤＣＣを媒介し、マウスＩｇＧ２ａ及びＩｇＭの両方がＣＤＣを媒介する。
【０１９６】
抗体改変
ヒト化抗ＩＬ−３６Ｒ抗体及び薬剤は、ヒト化抗ＩＬ−３６Ｒ抗体又はその抗原結合フラグメントの改変を含むことができる。例えば、癌を処置する際での抗体の有効性を増強するために、エフェクター機能に関して抗体を改変することが望ましいであろう。１つのそのような改変は、Ｆｃ領域中へのシステイン残基の導入であり、それによりこの領域中での鎖間ジスルフィド結合形成が可能になる。このようにして生成されたホモ二量体抗体は、改善された内在化能力及び／又は増加した補体媒介性細胞死滅及び／又は抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）を有しうる。例えば、Caron et al., 1992, J. Exp Med. 176:1191-1195；及びShopes, 1992, J. Immunol. 148:2918-2922を参照のこと。増強した抗腫瘍活性を有するホモ二量体抗体を、Wolff et al., 1993, Cancer Research 53: 2560-2565に記載されているようなヘテロ二機能性架橋剤を使用して調製することもできる。あるいは、抗体は、二重Ｆｃ領域を含むように操作することができ、抗体の補体溶解及びＡＤＣＣ能力を増強する。Stevenson et al., 1989, Anti-Cancer Drug Design 3: 219-230を参照のこと。
【０１９７】
ＡＤＣＣを支持する改善した能力を伴う抗体は、Ｆｃ領域のグリコシル化パターンを修飾することにより生成されてきた。これは、ＣＨ２ドメイン中のアスパラギン残基Ｎ２９７での抗体グリコシル化が、ＡＤＣＣの前提条件であるＩｇＧ受容体とＦｃγ受容体の相互作用において含まれるため可能である。宿主細胞株は、変化したグリコシル化（例えばＮ−アセチルグルコサミンの二分枝の増加又はフコースの低下など）を伴う抗体を発現するように操作されてきた。フコースの低下によって、二分枝Ｎ−アセチルグルコサミンの存在を増加させるよりも、ＡＤＣＣ活性により大きな増強が提供される。さらに、低フコース抗体によるＡＤＣＣの増強は、ＦｃγＲＩＩＩａＶ／Ｆ多型に非依存的である。
【０１９８】
抗体のＦｃ領域のアミノ酸配列を改変することは、ＡＤＣＣを強化するためのグリコシル化操作の代替法である。Ｆｃγ受容体についてのヒトＩｇＧ１上の結合部位は、広範な変異分析により決定されている。これによって、ＦｃγＲＩＩＩａについての結合親和性を増加させ、インビトロでＡＤＣＣを増強するＦｃ変異を伴うヒト化ＩｇＧ１抗体の生成に導かれた。加えて、結合特性の多くの異なる順列、例えば、他のＦｃγＲ受容体への未変化又は減弱した結合を伴う特定のＦｃγＲ受容体への結合の改善を伴うＦｃ変異体が得られた。
【０１９９】
別の態様は、細胞傷害性薬剤、例えば化学療法剤、毒素（例、細菌、真菌、植物、もしくは動物起源の酵素的に活性な毒素、又はそのフラグメント）など、又は放射性同位体（即ち、放射性複合体）に結合したヒト化抗体又はそのフラグメントを含む免疫複合体を含む。
【０２００】
そのような免疫複合体の生成において有用な化学療法剤が上に記載されている。有用な免疫複合体を形成するために使用することができる酵素活性毒素及びそのフラグメントは、ジフテリアＡ鎖、ジフテリア毒素の非結合活性フラグメント、外毒素Ａ鎖（緑膿菌由来）、リシンＡ鎖、アブリンＡ鎖、モデシンＡ鎖、アルファサルシン、シナアブラギリ（Ａｌｅｕｒｉｔｅｓ  ｆｏｒｄｉｉ）タンパク質、ジアンチン（ｄｉａｎｔｈｉｎ）タンパク質、ヨウシュヤマゴボウ（Ｐｈｙｔｏｌａｃａ  ａｍｅｒｉｃａｎａ）タンパク質（ＰＡＰＩ、ＰＡＰＩＩ、及びＰＡＰ−Ｓ）、ツルレイシ（Ｍｏｍｏｒｄｉｃａ  ｃｈａｒａｎｔｉａ）阻害剤、クルシン、クロチン、サボンソウ（Ｓａｐａｏｎａｒｉａ  ｏｆｆｉｃｉｎａｌｉｓ）阻害剤、ゲロニン、ミトゲリン、レストリクトシン、フェノマイシン、エノマイシン、トリコテセンなどを含む。多様な放射性核種が放射性複合体ヒト化抗ＩＬ−３６Ｒ抗体の産生のために利用可能である。例は、２１２Ｂｉ、１３１Ｉ、１３１Ｉｎ、９０Ｙ、及び１８６Ｒｅを含む。
【０２０１】
ヒト化抗ＩＬ−３６Ｒ抗体及び細胞傷害剤又は化学療法剤の複合体は、多様な二機能性タンパク質カップリング剤、例えばＮ−スクシンイミジル−３−（２−ピリジルジチオール）プロピオネート（ＳＰＤＰ）、イミノチオラン（ＩＴ）、イミドエステルの二機能性誘導体（例えばジメチルアジピミデートＨＣＬなど）、活性エステル（例えばジスクシンイミジルスベレートなど）、アルデヒド（例えばグルタルアルデヒド（ｇｌｕｔａｒｅｌｄｅｈｙｄｅ）など）、ビス−アジド化合物（例えばビス（ｐ−アジドベンゾイル）ヘキサンジアミンなど）、ビス−ジアゾニウム誘導体（例えばビス−（ｐ−ジアゾニウムベンゾイル）−エチレンジアミンなど）、ジイソシアネート（例えばトルエン２，６−ジイソシアネートなど）、及びビス活性フッ素化合物（例えば１，５−ジフルオロ−２，４−ジニトロベンゼンなど）などを使用し、公知の方法により作製することができる。例えば、リシン免疫毒素は、Vitetta et al., 1987, Science 238:1098に記載されているように調製することができる。炭素−１４標識１−イソチオシアナトベンジル−３−メチルジエチレントリアミン五酢酸（ＭＸ−ＤＴＰＡ）は、抗体への放射性ヌクレオチドの結合のための例示的なキレート剤である。複合体はまた、切断可能なリンカーを用いて形成することもできる。
【０２０２】
本明細書中に開示するヒト化抗ＩＬ−３６Ｒ抗体はまた、免疫リポソームとして製剤化することもできる。抗体を含むリポソームは、当技術分野において公知の、例えばEpstein et al., 1985, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 82:3688；Hwang et al., 1980, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 77:4030；ならびに米国特許第４，４８５，０４５号及び第４，５４４，５４５号において記載される方法により調製する。増強された循環時間を伴うリポソームは、例えば、米国特許第５，０１３，５５６号に開示されている。
【０２０３】
特に有用なリポソームは、ホスファチジルコリン、コレステロール、及びＰＥＧ誘導体化ホスファチジルエタノールアミン（ＰＥＧ−ＰＥ）を含む脂質組成物を用いた逆相蒸発方法により生成することができる。リポソームは、定義された孔径のフィルターを通して押し出され、所望の直径を伴うリポソームをもたらす。本明細書中に開示する抗体のＦａｂ’フラグメントは、Martin et al., 1982, J. Biol. Chem. 257:286-2888に記載されているように、ジスルフィド交換反応を介してリポソームに結合させることができる。化学療法剤（例えばドキソルビシンなど）は、場合により、リポソーム内に含まれる。例えば、Gabizon et al., 1989, J. National Cancer Inst. 81(19):1484を参照のこと。
【０２０４】
本明細書中に記載及び開示する抗体はまた、プロドラッグ（例、ペプチジル化学療法剤）を活性な抗癌薬物に変換するプロドラッグ活性化酵素に抗体を結合させることにより、ＡＤＥＰＴ（抗体指向酵素プロドラッグ治療）手順において使用することもできる。例えば、ＷＯ８１／０１１４５、ＷＯ８８／０７３７８、及び米国特許第４，９７５，２７８号を参照のこと。ＡＤＥＰＴのために有用な免疫複合体の酵素成分は、プロドラッグをそのより活性な細胞毒性形態に変換するような方法においてプロドラッグに作用することが可能な酵素である。ＡＤＥＰＴにおいて有用である特定の酵素は、リン酸含有プロドラッグを遊離薬物に変換するためのアルカリホスファターゼ；硫酸含有プロドラッグを遊離薬物に変換するためのアリールスルファターゼ；非毒性５−フルオロシトシンを抗癌薬物５−フルオロウラシルに変換するためのシトシンデアミナーゼ；ペプチド含有プロドラッグを遊離薬物に変換するためのプロテアーゼ、例えばセラチアプロテアーゼ、サーモリシン、スブチリシン、カルボキシペプチダーゼ、及びカテプシン（例えばカテプシンＢ及びＬなど）など；Ｄ−アミノ酸置換基を含むプロドラッグを変換するためのＤ−アラニルカルボキシペプチダーゼ；グリコシル化プロドラッグを遊離薬物に変換するための糖切断酵素（例えばβ−ガラクトシダーゼ及びノイラミニダーゼなど）；β−ラクタムで誘導体化された薬物を遊離薬物に変換するためのβ−ラクタマーゼ；及びフェノキシアセチル基又はフェニルアセチル基をそれぞれ伴うそれらのアミン窒素で誘導体化された薬物を遊離薬物に変換するためのペニシリンアミダーゼ（例えばペニシリンＶアミダーゼ又はペニシリンＧアミダーゼなど）を含むが、これらに限定しない。あるいは、酵素活性を有する抗体（「アブザイム」）を使用し、プロドラッグを遊離活性薬物に変換することができる（例えば、Massey, 1987, Nature 328: 457-458を参照のこと）。抗体−アブザイム複合体は、例えば、酵素を、上で考察するヒト化抗ＩＬ−３６Ｒ抗体／ヘテロ二機能性架橋試薬に共有結合的に結合させることにより、腫瘍細胞集団へのアブザイムの送達のために既知の方法により調製することができる。あるいは、上で考察するように、少なくとも酵素の機能的に活性な部分に連結された本明細書中に開示する抗体の抗原結合領域を少なくとも含む融合タンパク質は、組換えＤＮＡ技術を使用して構築することができる（例えば、Neuberger et al., 1984, Nature 312:604-608を参照のこと）。
【０２０５】
特定の実施形態では、例えば、組織浸透を増加させるために、インタクトな抗体ではなく、ヒト化抗ＩＬ−３６Ｒ抗体フラグメントを使用することが望ましいことがある。血清半減期を増加させるために、抗体フラグメントを改変することが望ましいことがある。これは、例えば、抗体フラグメント中へのサルベージ受容体結合エピトープの組み入れにより達成することができる。１つの方法では、抗体フラグメントの適当な領域を変更（例、変異）させることができる、又はエピトープをペプチドタグ中に組み入れることができ、次に、例えば、ＤＮＡ又はペプチド合成によりいずれかの末端又は中央で抗体フラグメントに融合させる。例えば、ＷＯ９６／３２４７８を参照のこと。
【０２０６】
他の実施形態では、ヒト化抗ＩＬ−３６Ｒ抗体の共有結合的な修飾も含む。共有結合的な修飾は、システイニル残基、ヒスチジル残基、リジニル残基及びアミノ末端残基、アルギニル残基、チロシル残基、カルボキシル側基（アスパルチル又はグルタミル）、グルタミニル残基及びアスパラギニル残基、又はセリル残基もしくはトレオニル残基の修飾を含む。別の型の共有結合的な修飾は、グリコシドを抗体に化学的又は酵素的に共役することを含む。そのような修飾は、適当な場合、化学合成により、又は抗体の酵素的もしくは化学的切断により作製しうる。抗体の他の型の共有結合的な修飾を、抗体の標的アミノ酸残基を、選択された側鎖又はアミノ末端残基もしくはカルボキシ末端残基と反応することが可能である有機誘導体化剤と反応させることにより分子中に導入することができる。
【０２０７】
抗体上に存在する糖部分の除去は、化学的又は酵素的に達成することができる。化学的脱グリコシル化は、Hakimuddin et al., 1987, Arch. Biochem. Biophys. 259:52により、及びEdge et al., 1981, Anal. Biochem., 118:131により記載されている。抗体上の糖部分の酵素的切断は、Thotakura et al., 1987, Meth. Enzymol 138:350により記載されているように、多様なエンドグリコシダーゼ及びエキソグリコシダーゼの使用により達成することができる。
【０２０８】
別の型の有用な共有結合的な修飾は、米国特許第４，６４０，８３５号、米国特許第４，４９６，６８９号、米国特許第４，３０１，１４４号、米国特許第４，６７０，４１７号、米国特許第４，７９１，１９２号、及び米国特許第４，１７９，３３７号の１つ以上において示す様式において、抗体を多様な非タンパク質性ポリマー（例、ポリエチレングリコール、ポリプロピレングリコール、又はポリオキシアルキレン）の１つに連結することを含む。
【０２０９】
ヒト化及びアミノ酸配列変異体
抗ＩＬ−３６Ｒ抗体のアミノ酸配列変異体は、適当なヌクレオチド変化を抗ＩＬ−３６Ｒ抗体ＤＮＡ中に導入することにより、又はペプチド合成により調製することができる。そのような変異体は、例えば、本明細書中の実施例の抗ＩＬ−３６Ｒ抗体のアミノ酸配列内の残基からの欠失、及び／又はその中への挿入、及び／又はその置換を含む。欠失、挿入、及び置換の任意の組み合わせを行い、最終的な構築物が所望の特徴を持つとの条件で、最終的な構築物に到達する。アミノ酸の変化はまた、ヒト化又は変異型抗ＩＬ−３６Ｒ抗体の翻訳後プロセスを変更させうる（例えばグリコシル化部位の数又は位置の変化など）。
【０２１０】
変異誘発のための好ましい位置である抗ＩＬ−３６Ｒ抗体の特定の残基又は領域の同定のための有用な方法は、「アラニンスキャニング突然変異誘発」と呼ばれ、Cunningham and Wells（Science、244:1081-1085(1989)）に記載されている通りである。ここでは、残基又は標的残基のグループが同定され（例、荷電残基、例えばａｒｇ、ａｓｐ、ｈｉｓ、ｌｙｓ、及びｇｌｕなど）、中性又は負に荷電したアミノ酸（典型的にはアラニン）により置き換え、アミノ酸とＩＬ−３６Ｒ抗原との相互作用に影響を及ぼす。置換への機能的感受性を実証するこれらのアミノ酸位置は、置換の部位で、又は置換部位についてさらなる又は他の変異体を導入することにより洗練する。このように、アミノ酸配列変異を導入するための部位は事前に決定されているが、変異自体の性質は事前に決定される必要はない。例えば、所与の部位での変異の性能を分析するために、アラニンスキャニング又はランダム変異誘発を標的コドン又は領域で行い、発現された抗ＩＬ−３６Ｒ抗体変異体を所望の活性についてスクリーニングする。
【０２１１】
アミノ酸配列の挿入は、１残基から１００又はそれ以上の残基を含むポリペプチドまでの長さの範囲のアミノ及び／又はカルボキシル末端融合、ならびに単一又は複数のアミノ酸残基の配列内挿入を含む。末端挿入の例は、エピトープタグに融合された抗ＩＬ−３６Ｒ抗体を含む。抗ＩＬ−３６Ｒ抗体分子の他の挿入変異体は、抗体の血清半減期を増加させる酵素又はポリペプチドの抗ＩＬ−３６Ｒ抗体のＮ又はＣ末端への融合を含む。
【０２１２】
別の型の変異体はアミノ酸置換変異体である。これらの変異体は、抗ＩＬ−３６Ｒ抗体分子中の少なくとも１つのアミノ酸残基が除去され、その場所に異なる残基が挿入されている。置換変異誘発のために最も目的となる部位は、超可変領域を含むが、ＦＲ変化も熟慮する。保存的置換を表５において「好ましい置換」の見出しの下に示す。そのような置換が生物学的活性において変化をもたらす場合、次により実質的な変化（「例示的置換」と命名する、又はアミノ酸クラスを参照して以下にさらに記載する）を導入し、産物をスクリーニングしてもよい。
【表２３】
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【０２１３】
タンパク質化学では、抗体の生物学的特性は、（ａ）置換の領域におけるポリペプチド骨格の構造（例えば、シート又はらせん構造）、（ｂ）標的部位での分子の電荷もしくは疎水性、又は（ｃ）側鎖の大部分の維持に対するそれらの効果において有意に異なる置換を選択することにより達成することができることが一般的に受け入れられている。天然に生じる残基は、一般の側鎖特性に基づいてグループに分けられる：
（１）疎水性：ノルロイシン、ｍｅｔ、ａｌａ、ｖａｌ、ｌｅｕ、ｉｌｅ；
（２）中性親水性：ｃｙｓ、ｓｅｒ、ｔｈｒ；
（３）酸性：ａｓｐ、ｇｌｕ；
（４）塩基性：ａｓｎ、ｇｉｎ、ｈｉｓ、ｌｙｓ、ａｒｇ；
（５）鎖の方向に影響を及ぼす残基：ｇｌｙ、ｐｒｏ；及び
（６）芳香族：ｔｒｐ、ｔｙｒ、ｐｈｅ。
【０２１４】
非保守的な置換は、これらのクラスの１つのメンバーを別のクラスについて交換することを伴う。
【０２１５】
ヒト化又は変異体抗ＩＬ−３６Ｒ抗体の適切なコンフォメーションを維持することに含まれるシステイン残基も一般的にセリンで置換し、分子の酸化安定性を改善し、異常な架橋を防止し、確立された結合点を細胞傷害性又は細胞増殖抑制性化合物に提供する。逆に、システイン結合を抗体に加えて、安定性を改善することができる（特に抗体が抗体フラグメント、例えばＦｖフラグメントなどである場合）。
【０２１６】
置換変異体の型は、親抗体（例、ヒト化抗体又はヒト抗体）の１つ以上の超可変領域残基を置換することを含む。一般的に、さらなる開発のために選択された、結果として得られる変異体は、それらが生成される親抗体と比べて改善された生物学的特性を有する。そのような置換変異体を生成するための便利な方法は、ファージディスプレイを使用した親和性成熟である。簡単には、いくつかの超可変領域部位（例、６〜７部位）が変異されて、各々の部位で全ての可能なアミノ置換が生成される。このように生成された抗体変異体は、各々の粒子内にパッケージされたＭ１３の遺伝子ＩＩＩ産物への融合物として糸状ファージ粒子から一価の様式で呈示される。ファージディスプレイされた変異体を次に、それらの生物学的活性（例、結合親和性）についてスクリーニングする。改変のための候補超可変領域部位を同定するために、アラニンスキャニング変異誘発を実施し、抗原結合に有意に寄与する超可変領域残基を同定することができる。あるいは、又はまた、抗原−抗体複合体の結晶構造を分析し、抗体とヒトＩＬ−３６Ｒの間の接触点を同定することが有益でありうる。そのような接触残基及び隣接残基は、本明細書中で詳述する技術に従った置換のための候補である。一度そのような変異体が生成されると、変異体のパネルは本明細書中に記載するようにスクリーニングに供し、１つ以上の関連アッセイにおいて優れた特性を伴う抗体をさらなる開発のために選択しうる。
【０２１７】
抗体の別の型のアミノ酸変異体によって、抗体の本来のグリコシル化パターンが変更される。「変更」により、抗体中に見出される１つ以上の糖部分を欠失させること、及び／又は抗体中に存在しない１つ以上のグリコシル化部位を加えることを意味する。
【０２１８】
一部の実施形態では、グリコシル化部位を加えるために本発明の抗体を修飾することが望ましいであろう。抗体のグリコシル化は典型的には、Ｎ連結又はＯ連結のいずれかである。Ｎ連結は、アスパラギン残基の側鎖への糖部分の付着を指す。トリペプチド配列アスパラギン−Ｘ−セリン及びアスパラギン−Ｘ−スレオニン（ここでＸはプロリンを除く任意のアミノ酸である）は、アスパラギン側鎖への糖部分の酵素的付着のための認識配列である。このように、ポリペプチド中でのこれらのトリペプチド配列のいずれかの存在によって、潜在的なグリコシル化部位が作製される。Ｏ連結グリコシル化は、Ｎ−アセチルガラクトサミン、ガラクトース、キシロースの糖の１つの、ヒドロキシアミノ酸、最も一般にはセリン又はスレオニンへの付着を指すが、５−ヒドロキシプロリン又は５−ヒドロキシリジンを使用してもよい。このように、所与のタンパク質（例、抗体）をグリコシル化するために、タンパク質のアミノ酸配列を、上に記載するトリペプチド配列の１つ以上を含むように操作する（Ｎ連結グリコシル化部位について）。変化はまた、本来の抗体の配列への１つ以上のセリン又はスレオニン残基の付加、又はそれによる置換により作製してもよい（Ｏ連結グリコシル化部位について）。
【０２１９】
抗ＩＬ−３６Ｒ抗体のアミノ酸配列変異体をコードする核酸分子は、当技術分野において公知である多様な方法により調製される。これらの方法は、天然供給源からの単離（天然に生じるアミノ酸配列変異体の場合において）又はオリゴヌクレオチド媒介性（又は部位特異的）変異誘発、ＰＣＲ変異誘発、及び抗ＩＬ−３６Ｒ抗体の以前に調製された変異体又は非変異体バージョンのカセット変異誘発による調製を含むが、これらに限定しない。
【０２２０】
ポリヌクレオチド、ベクター、宿主細胞、及び組換え方法
他の実施形態は、ヒト化抗ＩＬ−３６Ｒ抗体をコードする配列を含む単離ポリヌクレオチド、ベクター、及びポリヌクレオチドを含む宿主細胞、ならびにヒト化抗体の産生のための組換え技術を包含する。単離ポリヌクレオチドは、抗ＩＬ−３６Ｒ抗体の任意の所望の形態（例えば、全長モノクローナル抗体、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、及びＦｖフラグメント、ダイアボディ、線形抗体、単鎖抗体分子、ならびに抗体フラグメントから形成された多特異性抗体を含む）をコードすることができる。
【０２２１】
一部の実施形態は、配列番号：配列番号：１〜１０のいずれかのアミノ酸配列を有する抗体又は抗体フラグメントの軽鎖可変領域をコードする配列を含む単離ポリヌクレオチドを含む。一部の実施形態は、配列番号１１〜２０のアミノ酸配列を有する抗体又は抗体フラグメントの重鎖可変領域をコードする配列を含む単離ポリヌクレオチドを含む。
【０２２２】
一部の実施形態は、配列番号７６〜８６のいずれかのアミノ酸配列を有する抗体又は抗体フラグメントの軽鎖可変領域をコードする配列を含む単離ポリヌクレオチドを含む。一部の実施形態は、配列番号８７〜１０１のアミノ酸配列を有する抗体又は抗体フラグメントの重鎖可変領域をコードする配列を含む単離ポリヌクレオチドを含む。
【０２２３】
一部の実施形態は、配列番号１１４〜１２４のいずれかのアミノ酸配列を有する抗体の軽鎖をコードする配列を含む単離ポリヌクレオチドを含む。一部の実施形態は、配列番号１２５〜１３９のアミノ酸配列を有する抗体の重鎖をコードする配列を含む単離ポリヌクレオチドを含む。
【０２２４】
一態様では、単離ポリヌクレオチド配列は、それぞれ配列番号１１５及び配列番号１２７；それぞれ配列番号１１８及び配列番号１２６；それぞれ配列番号１１８及び配列番号１２７；それぞれ配列番号１１５及び配列番号１２５；それぞれ配列番号１１５及び配列番号１２６；それぞれ配列番号１１８及び配列番号１２５；それぞれ配列番号１２４及び配列番号１３８；それぞれ配列番号１２３及び配列番号１３９；それぞれ配列番号１２３及び配列番号１３８のアミノ酸配列を含む軽鎖及び重鎖可変領域を有する抗体又は抗体フラグメントをコードする。
【０２２５】
ヒト化抗ＩＬ−３６Ｒ抗体又はそのフラグメントもしくは鎖をコードする配列を含むポリヌクレオチドは、当技術分野において公知であるように、１つ以上の調節配列又は制御配列に融合することができ、当技術分野において公知であるように、適切な発現ベクター又は宿主細胞中に含めることができる。重鎖又は軽鎖可変ドメインをコードするポリヌクレオチド分子の各々を、定常ドメイン（例えばヒト定常ドメインなど）をコードするポリヌクレオチド配列に非依存的に融合させ、インタクトな抗体の産生を可能にすることができる。あるいは、ポリヌクレオチド又はその部分を一緒に融合させて、一本鎖抗体の産生のための鋳型を提供することができる。
【０２２６】
組換え生産のために、抗体をコードするポリヌクレオチドを、クローニング（ＤＮＡの増幅）又は発現のために複製可能なベクター中に挿入する。組換え抗体を発現させるための適切な多くのベクターが利用可能である。ベクター成分は一般的に、以下の１つ以上を含むが、これらに限定しない：シグナル配列、複製起点、１つ以上のマーカー遺伝子、エンハンサーエレメント、プロモーター、及び転写終結配列。
【０２２７】
ヒト化抗ＩＬ−３６Ｒ抗体はまた、融合ポリペプチドとして産生することもでき、それにおいて、抗体は、異種ポリペプチド、例えば成熟タンパク質又はポリペプチドのアミノ末端に特定の切断部位を有するシグナル配列又は他のポリペプチドなどと融合させる。選択される異種シグナル配列は、典型的には、宿主細胞により認識され処理される（即ち、シグナルペプチダーゼにより切断される）ものである。ヒト化抗ＩＬ−３６Ｒ抗体シグナル配列を認識及び処理しない原核生物宿主細胞については、シグナル配列を原核生物のシグナル配列に置換することができる。シグナル配列は、例えば、アルカリホスファターゼ、ペニシリナーゼ、リポタンパク質、熱安定性エンテロトキシンＩＩリーダーなどでありうる。酵母分泌のために、天然シグナル配列は、例えば、酵母インベルターゼアルファ因子（サッカロミセス及びクルイベロミセスα因子リーダーを含む）、酸性ホスファターゼ、Ｃアルビカンスグルコアミラーゼ、又は  ＷＯ９０／１３６４６において記載されるシグナルから得られるリーダー配列で置換することができる。哺乳動物細胞では、哺乳動物のシグナル配列ならびにウイルス分泌リーダー、例えば、単純ヘルペスｇＤシグナルを使用することができる。そのような前駆体領域についてのＤＮＡは、ヒト化抗ＩＬ−３６Ｒ抗体をコードするＤＮＡにリーディングフレームで連結する。
【０２２８】
発現ベクター及びクローニングベクターは、ベクターが１つ以上の選択された宿主細胞中で複製することを可能にする核酸配列を含む。一般的に、クローニングベクター中では、この配列はベクターが宿主染色体ＤＮＡに非依存的に複製することを可能にするものであり、複製起点又は自律複製配列を含む。そのような配列は、多様な細菌、酵母、及びウイルスについて周知である。プラスミドｐＢＲ３２２からの複製起点は大半のグラム陰性細菌について適切であり、２−υプラスミド起点は酵母について適切であり、種々のウイルス起点（ＳＶ４０、ポリオーマ、アデノウイルス、ＶＳＶ、及びＢＰＶ）が哺乳動物細胞中のクローニングベクターのために有用である。一般的に、複製起点成分は哺乳動物発現ベクターについては必要とされない（ＳＶ４０起点だけが典型的には使用されうる。なぜなら、それは初期プロモーターを含むからである）。
【０２２９】
発現ベクター及びクローニングベクターは、発現の同定を容易にするための選択マーカーをコードする遺伝子を含みうる。典型的な選択可能なマーカー遺伝子は、抗生物質又は他の毒素（例、アンピシリン、ネオマイシン、メトトレキサート、又はテトラサイクリン）への耐性を付与するタンパク質をコードする、あるいは補体栄養要求性欠損であるか、又は他の代替法において、複合培地中には存在しない特定の栄養素が供給される（例、桿菌についてのＤ−アラニンラセマーゼをコードする遺伝子）。
【０２３０】
選択スキームの一例では、宿主細胞の成長を停止させるために薬物を利用する。異種遺伝子で成功裏に形質転換された細胞は、薬剤耐性を付与するタンパク質を産生し、このように、選択レジメンで生存する。そのような優勢選択の例では、ネオマイシン、ミコフェノール酸、及びハイグロマイシンの薬物が使用される。哺乳動物細胞のための一般の選択マーカーは、ヒト化抗ＩＬ−３６Ｒ抗体をコードする核酸を取り込む能力のある細胞の同定を可能にするものであり、例えばＤＨＦＲ（ジヒドロ葉酸レダクターゼ）、チミジンキナーゼ、メタロチオネイン−Ｉ及びＩＩ（例えば霊長類のメタロチオネイン遺伝子など）、アデノシンデアミナーゼ、オルニチンデカルボキシラーゼなどである。ＤＨＦＲ選択遺伝子で形質転換された細胞は、ＤＨＦＲの競合的アンタゴニストであるメトトレキサート（Ｍｔｘ）を含む培養培地中で形質転換体の全てを培養することにより最初に同定される。野生型ＤＨＦＲを用いた場合での適当な宿主細胞は、ＤＨＦＲ活性（例、ＤＧ４４）が欠損したチャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞株である。
【０２３１】
あるいは、抗ＩＬ−３６Ｒ抗体、野生型ＤＨＦＲタンパク質、及び別の選択マーカー、例えばアミノグリコシド３’−ホスホトランスフェラーゼ（ＡＰＨ）などをコードするＤＮＡ配列で形質転換又は同時形質転換された宿主細胞（特に内因性ＤＨＦＲを含む野生型宿主）は、選択マーカー用の選択薬剤（例えばアミノグリコシド系抗生物質、例、カナマイシン、ネオマイシン、又はＧ４１８など）を含む培地中での細胞成長により選択することができる。例えば、米国特許第４，９６５，１９９号を参照のこと。
【０２３２】
組換え生産を宿主細胞としての酵母細胞中で実施する場合、酵母プラスミドＹＲｐ７中に存在するＴＲＰ１遺伝子（Stinchcomb et al., 1979, Nature 282: 39）を選択マーカーとして使用することができる。ＴＲＰ１遺伝子は、トリプトファン中で成長する能力を欠く酵母の変異株用の選択マーカー、例えば、ＡＴＣＣ  Ｎｏ．４４０７６又はＰＥＰ４−１（Jones, 1977, Genetics 85:12）などを提供する。酵母宿主細胞ゲノムにおけるｔｒｐ１領域の存在は、トリプトファンの非存在における成長による形質転換を検出するための有効な環境を提供する。同様に、Ｌｅｕ２ｐ欠損酵母株（例えばＡＴＣＣ  ２０，６２２及び３８，６２６など）は、ＬＥＵ２遺伝子を持つ公知のプラスミドにより補完される。
【０２３３】
また、１．６μm環状プラスミドｐＫＤ１から由来するベクターは、クルイベロミセス酵母の形質転換用に使用することができる。あるいは、組換え子牛キモシンの大規模生産用の発現系がＫ．ラクティスについて報告された（Van den Berg, 1990, Bio/Technology 8:135）。クルイベロミセスの工業株による成熟組換えヒト血清アルブミンの分泌用の安定マルチコピー発現ベクターも開示されている（Fleer et al., 1991, Bio/Technology 9:968-975）。
【０２３４】
発現ベクター及びクローニングベクターは、通常は、宿主生物により認識され、抗ＩＬ−３６Ｒ抗体又はそのポリペプチド鎖をコードする核酸分子に機能的に連結されたプロモーターを含む。原核生物宿主での使用のために適切なプロモーターは、ｐｈｏＡプロモーター系、β−ラクタマーゼ系、及びラクトースプロモーター系、アルカリホスファターゼ、トリプトファン（ｔｒｐ）プロモーター系、ならびにハイブリッドプロモーター（例えばｔａｃプロモーターなど）を含む。他の公知の細菌プロモーターも適切である。細菌系での使用のためのプロモーターはまた、ヒト化抗ＩＬ−３６Ｒ抗体をコードするＤＮＡに機能的に連結されたシャインダルガルノ（Ｓ．Ｄ．）配列を含む。
【０２３５】
多くの真核生物プロモーター配列が公知である。実際に、全ての真核生物遺伝子が、転写が開始される部位の約２５〜３０塩基上流にＡＴリッチ領域を有する。多くの遺伝子の転写の開始から７０〜８０塩基上流にある別の配列は、ＣＮＣＡＡＴ領域であり、ここでＮは任意のヌクレオチドでありうる。大半の真核生物遺伝子の３’末端には、コード配列の３’末端へのポリＡテールの付加のためのシグナルとなりうるＡＡＴＡＡＡ配列がある。これらの配列の全てが、真核生物の発現ベクター中に適切に挿入される。
【０２３６】
酵母宿主での使用のための適切なプロモーター配列の例は、３−ホスホグリセリン酸キナーゼ又は他の解糖酵素、例えばエノラーゼ、グリセルアルデヒド−３−リン酸デヒドロゲナーゼ、ヘキソキナーゼ、ピルビン酸デカルボキシラーゼ、ホスホフルクトキナーゼ、グルコース−６−リン酸イソメラーゼ、３−ホスホグリセリン酸ムターゼ、ピルビン酸キナーゼ、トリオースリン酸イソメラーゼ、ホスホグルコースイソメラーゼ、及びグルコキナーゼなどのためのプロモーターを含む。
【０２３７】
誘導性プロモーターには、成長条件により制御される転写という追加の利点がある。これらは、アルコールデヒドロゲナーゼ２、イソシトクロムＣ、酸性ホスファターゼ、窒素代謝に関連付けられる誘導体酵素、メタロチオネイン、グリセルアルデヒド−３−リン酸デヒドロゲナーゼ、ならびにマルトース及びガラクトースの利用に関与する酵素のための酵母プロモーター領域を含む。酵母発現での使用のための適切なベクター及びプロモーターが、ＥＰ  ７３，６５７にさらに記載されている。酵母エンハンサーはまた、酵母プロモーターと有利に使用される。
【０２３８】
哺乳動物宿主細胞におけるベクターからのヒト化抗ＩＬ−３６Ｒ抗体の転写は、例えば、ウイルス、例えばポリオーマウイルス、鶏痘ウイルス、アデノウイルス（例えばアデノウイルス２など）、ウシパピローマウイルス、鳥肉腫ウイルス、サイトメガロウイルス、レトロウイルス、Ｂ型肝炎ウイルス、及びサルウイルス４０（ＳＶ４０）のゲノムから、異種哺乳動物プロモーター（例、アクチンプロモーター又は免疫グロブリンプロモーター）から、又は熱ショックプロモーターから得られるプロモーターにより制御される（そのようなプロモーターが宿主細胞系に適合している場合）。
【０２３９】
ＳＶ４０ウイルスの初期及び後期プロモーターは、ＳＶ４０ウイルスの複製起点も含むＳＶ４０制限フラグメントとして便利に得られる。ヒトサイトメガロウイルスの初期プロモーターは、ＨｉｎｄＩＩＩ  Ｅ制限フラグメントとして便利に得られる。ウシパピローマウイルスをベクターとして使用して哺乳動物宿主においてＤＮＡを発現させる系が、米国特許第４，４１９，４４６号に開示されている。この系の改変が米国特許第４，６０１，９７８号に記載されている。Reyes et al., 1982, Nature 297:598-601も参照のこと。単純ヘルペスウイルスからのチミジンキナーゼプロモーターの制御下でのマウス細胞におけるヒトｐ−インターフェロンｃＤＮＡの発現が開示されている。あるいは、ラウス肉腫ウイルスの末端反復配列をプロモーターとして使用することができる。
【０２４０】
組換え発現ベクターにおいて使用することができる別の有用なエレメントは、エンハンサー配列であり、これは、より高等な真核生物によるヒト化抗ＩＬ−３６Ｒ抗体をコードするＤＮＡの転写を増加させるために使用される。多くのエンハンサー配列が現在、哺乳動物遺伝子（例、グロビン、エラスターゼ、アルブミン、α−フェトプロテイン、及びインスリン）から公知である。典型的には、しかし、真核細胞ウイルスからのエンハンサーが使用される。例は、複製開始点の後期側のＳＶ４０エンハンサー（ｂｐ  １００−２７０）、サイトメガロウイルス初期プロモーターエンハンサー、複製開始点の後期側のポリオーマエンハンサー、及びアデノウイルスエンハンサーを含む。真核生物プロモーターの活性化のためのエンハンサーエレメントの記載については、Yaniv, 1982, Nature 297:17-18も参照のこと。エンハンサーは、ヒト化抗ＩＬ−３６Ｒ抗体をコードする配列の５’又は３’の位置でベクター中にスプライシングされうるが、しかし、好ましくはプロモーターから５’部位に位置する。
【０２４１】
真核生物の宿主細胞（酵母、真菌、昆虫、植物、動物、ヒト、又は他の多細胞生物からの有核細胞）で使用される発現ベクターは、転写の終結のため及びｍＲＮＡを安定化するために要求される配列も含むことができる。そのような配列は一般に、真核生物又はウイルスのＤＮＡ又はｃＤＮＡの５’及び場合によっては３’非翻訳領域から入手可能である。これらの領域は、抗ＩＬ−３６Ｒ抗体をコードするｍＲＮＡの非翻訳部分においてポリアデニル化フラグメントとして転写されるヌクレオチドセグメントを含む。１つの有用な転写終結成分はウシ成長ホルモンのポリアデニル化領域である。ＷＯ９４／１１０２６及びそこに開示されている発現ベクターを参照のこと。一部の実施形態では、ヒト化抗ＩＬ−３６Ｒ抗体を、ＣＨＥＦ系を使用して発現させることができる（例えば、米国特許第５，８８８，８０９号を参照のこと；その開示を参照により本明細書中に組み入れる）。
【０２４２】
本明細書中のベクター中でのＤＮＡのクローニング又は発現のための適切な宿主細胞は、上に記載する原核生物、酵母、又は高等真核生物細胞である。この目的のための適切な原核生物は、真正細菌（例えばグラム陰性又はグラム陽性生物など）、例えば、腸内細菌科、例えば大腸菌など（例、大腸菌）、エンテロバクター、エルウィニア、クレブシエラ、プロテウス、サルモネラ（例、サルモネラ・ティフィムリウム（Salmonella typhimurium））、セラチア（例、セラチア・マルセッセンス（Serratia marcescans）など）、及びシゲラ、ならびにバチルス、例えばＢサブティリス及びＢリケニフォルミス（例、１９８９年４月１２日に公開されたＤＤ２６６，７１０に開示されているＢリケニフォルミス４１Ｐ）、シュードモナス、例えば緑膿菌など、及びストレプトマイセスを含む。１つの好ましい大腸菌クローニング宿主は大腸菌２９４（ＡＴＣＣ  ３１，４４６）であるが、他の株、例えば大腸菌Ｂ、大腸菌Ｘ１７７６（ＡＴＣＣ  ３１，５３７）、及び大腸菌Ｗ３１１０（ＡＴＣＣ  ２７，３２５）などが適切である。これらの例は、限定ではなく例示的である。
【０２４３】
原核生物に加えて、真核微生物、例えば糸状菌又は酵母などは、ヒト化抗ＩＬ−３６Ｒ抗体をコードするベクターのための適切なクローニング宿主又は発現宿主である。サッカロマイセス・セレビシエ、又は一般のパン酵母は、下等真核宿主微生物の中で最も一般に使用されている。しかし、多数の他の属、種、及び株が一般に入手可能で、本明細書中で有用であり、例えばシゾサッカロミセス・ポンベ；クルイベロミセス宿主、例えば、例、Ｋラクティス、Ｋフラジリス（ＡＴＣＣ  １２，４２４）、Ｋブルガリクス（ＡＴＣＣ  １６，０４５）、Ｋウィッケルハミイ（ｗｉｃｋｅｒａｍｉｉ）（ＡＴＣＣ  ２４，１７８）、Ｋワルティイ（ＡＴＣＣ  ５６，５００）、Ｋドロソフィラルム（ＡＴＣＣ  ３６，９０６）、Ｋサーモトレランス、及びＫマルシアヌス；ヤロウィア（ＥＰ  ４０２，２２６）；ピチア・パストリス（Ｐｉｃｈｉａ  ｐａｓｔｏｒｓ）（ＥＰ  １８３，０７０）；カンジダ；トリコデルマ・リーシア（ＥＰ  ２４４，２３４）；ニューロスポラ・クラッサ；シュワンニオミセス、例えばシュワンニオミセス・オクシデンタリスなど；及び糸状菌、例えば、例、ニューロスポラ、ペニシリウム、トリポクラジウム、ならびにアスペルギルス宿主、例えばＡニジュランス及びＡニガーなどである。
【０２４４】
グリコシル化ヒト化抗ＩＬ−３６Ｒ抗体の発現のための適切な宿主細胞は、多細胞生物から由来する。無脊椎動物細胞の例は、植物細胞及び昆虫細胞（例、多数のバキュロウイルス株及び変異体、ならびに宿主、例えばスポドプテラ・フルギペルダ（イモムシ）、ネッタイシマカ（蚊）、ヒトスジシマカ（蚊）、キイロショウジョウバエ（ショウジョウバエ）、及びボンビックス・モリ（カイコ）などからの対応する許容昆虫宿主細胞を含む）を含む。トランスフェクション用の多様なウイルス株が公に入手可能であり（例、オートグラファ・カリフォルニカＮＰＶのＬ−１変異体及びボンビックス・モリＮＰＶのＢｍ−５株）、そのようなウイルスは、特にスポドプテラ・フルギペルダ細胞のトランスフェクションのために使用してもよい。
【０２４５】
綿、トウモロコシ、ジャガイモ、大豆、ペチュニア、トマト、タバコの植物細胞培養物も宿主として利用することができる。
【０２４６】
別の態様では、ヒト化抗ＩＬ−３６Ｒの発現を脊椎動物細胞中で行う。培養（組織培養）における脊椎動物細胞の増殖は、ルーチンの手順になっており、技術は広く利用可能である。有用な哺乳動物宿主細胞株の例は、ＳＶ４０で形質転換されたサル腎臓ＣＶ１株（ＣＯＳ−７、ＡＴＣＣ  ＣＲＬ  １６５１）、ヒト胚腎臓株（浮遊培養中での成長のためにサブクローン化された２９３又は２９３細胞）（Graham et al., 1977, J. Gen Virol. 36: 59）、ベビーハムスター腎細胞（ＢＨＫ、ＡＴＣＣ  ＣＣＬ  １０）、チャイニーズハムスター卵巣細胞／−ＤＨＦＲ１（CHO, Urlaub et al., 1980, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 77: 4216；例、ＤＧ４４）、マウスセルトリ細胞（ＴＭ４、Mather, 1980, Biol. Reprod. 23:243-251）、サル腎細胞（ＣＶ１  ＡＴＣＣ  ＣＣＬ  ７０）、アフリカミドリザル腎細胞（ＶＥＲＯ−７６、ＡＴＣＣ  ＣＲＬ−１５８７）、ヒト子宮頸癌細胞（ＨＥＬＡ、ＡＴＣＣ  ＣＣＬ  ２）、イヌ腎細胞（ＭＤＣＫ、ＡＴＣＣ  ＣＣＬ  ３４）、バッファローラット肝細胞（ＢＲＬ  ３Ａ、ＡＴＣＣ  ＣＲＬ  １４４２）、ヒト肺細胞（Ｗ１３８、ＡＴＣＣ  ＣＣＬ  ７５）、ヒト肝細胞（Ｈｅｐ  Ｇ２、ＨＢ  ８０６５）、マウス乳腺腫瘍（ＭＭＴ  ０６０５６２、ＡＴＣＣ  ＣＣＬ５１）、ＴＲ１細胞（Mather et al., 1982, Annals N.Y. Acad. Sci. 383: 44-68）、ＭＲＣ  ５細胞、ＦＳ４細胞、及びヒト肝癌株（Ｈｅｐ  Ｇ２）である。
【０２４７】
宿主細胞は、ヒト化抗ＩＬ−３６Ｒ抗体産生用の上に記載する発現ベクター又はクローニングベクターで形質転換し、プロモーターの誘導、形質転換体の選択、又は所望の配列をコードする遺伝子の増幅のために適宜改変された従来の栄養培地中で培養する。
【０２４８】
本明細書中に記載するヒト化抗ＩＬ−３６Ｒ抗体を産生するために使用される宿主細胞は、多様な培地中で培養してもよい。商業的に入手可能な培地、例えばＨａｍ’ｓ  Ｆ１０（Sigma-Aldrich Co．、ミズーリ州セントルイス）、最小必須培地（（ＭＥＭ）、（Sigma-Aldrich Co．）、ＲＰＭＩ−１６４０（Sigma-Aldrich Co．）、及びダルベッコ改変イーグル培地（（ＤＭＥＭ）、Sigma-Aldrich Co．）などが宿主細胞を培養するために適切である。また、Ham et al., 1979, Meth. Enz. 58: 44、Barnes et al., 1980, Anal. Biochem. 102: 255、米国特許第４，７６７，７０４号、米国特許第４，６５７，８６６号、米国特許第４，９２７，７６２号、米国特許第４，５６０，６５５号、米国特許第５，１２２，４６９号、ＷＯ９０／１０３４３０、及びＷＯ８７／００１９５の１つ以上において記載されている培地のいずれかが、宿主細胞用の培養培地として使用されうる。これらの培地のいずれかには、必要に応じて、ホルモン及び／又は他の成長因子（例えばインスリン、トランスフェリン、又は表皮成長因子など）、塩（例えば塩化ナトリウム、カルシウム、マグネシウム、リン酸塩など）、緩衝剤（例えばＨＥＰＥＳなど）、ヌクレオチド（例えばアデノシン及びチミジンなど）、抗生物質（例えばゲンタマイシンなど）、微量元素（通常、マイクロモル範囲の最終濃度で存在する無機化合物として定義する）、及びグルコース又は等価のエネルギー源を補充してもよい。他のサプリメントも、当業者に公知でありうる適当な濃度で含まれてもよい。培養条件、例えば温度、ｐＨなどは、発現のために選択された宿主細胞で以前に使用されたものであり、当業者には明らかであろう。
【０２４９】
組換え技術を使用する場合、抗体は細胞内、細胞膜周辺腔において産生される、又は培地中に直接分泌されることができる。抗体が細胞内で産生される場合、最初の工程として細胞が破壊されてタンパク質が放出されうる。粒子状破片は、宿主細胞又は溶解フラグメントのいずれかであり、例えば遠心分離又は限外濾過により除去することができる。Carter et al., 1992, Bio/Technology 10:163-167には、大腸菌の細胞膜周辺腔に分泌される抗体を単離するための手順が記載されている。簡単には、細胞ペーストを、酢酸ナトリウム（ｐＨ  ３．５）、ＥＤＴＡ、及びフェニルメチルスルホニルフルオリド（ＰＭＳＦ）の存在において約３０分間にわたり解凍する。細胞破片は遠心分離により除去することができる。抗体が培地中に分泌される場合、そのような発現系からの上清は一般的に、商業的に入手可能なタンパク質濃縮フィルター、例えばAmicon又はMillipore Pellicon限外濾過ユニットを使用して最初に濃縮する。プロテアーゼ阻害剤（例えばＰＭＳＦなど）を前述の工程のいずれかに含めてタンパク質分解を阻害してもよく、抗生物質を含めて外来性混入物の成長を防止してもよい。多様な方法を使用して、抗体を宿主細胞から単離することができる。
【０２５０】
細胞から調製された抗体組成物は、例えば、ヒドロキシアパタイトクロマトグラフィー、ゲル電気泳動、透析、及び親和性クロマトグラフィーを使用して精製することができ、親和性クロマトグラフィーは典型的な精製技術である。親和性リガンドとしてのプロテインＡの適合性は、抗体中に存在する任意の免疫グロブリンＦｃドメインの種及びアイソタイプに依存する。プロテインＡは、ヒトガンマ１、ガンマ２、又はガンマ４重鎖に基づく抗体を精製するために使用することができる（例、Lindmark et al., 1983 J. Immunol. Meth. 62:1-13を参照のこと）。プロテインＧは、全てのマウスアイソタイプ及びヒトガンマ３について推奨される（Guss et al., 1986 EMBO J. 5:1567-1575を参照のこと）。親和性リガンドが付着しているマトリックスはほとんどの場合アガロースであるが、しかし、他のマトリックスも利用可能である。機械的に安定したマトリックス、例えば制御された細孔ガラス又はポリ（スチレンジビニル）ベンゼンなどによって、アガロースで達成することができるよりも速い流速及び短い処理時間が可能になる。抗体がＣＨ３ドメインを含む場合、Bakerbond ABX（商標）樹脂（J. T. Baker、ニュージャージー州フィリップスバーグ）が精製のために有用である。タンパク質精製のための他の技術、例えばイオン交換カラムでの分画、エタノール沈殿、逆相ＨＰＬＣ、シリカでのクロマトグラフィー、陰イオン又は陽イオン交換樹脂（例えばポリアスパラギン酸カラムなど）でのヘパリンSEPHAROSE（商標）クロマトグラフィーでのクロマトグラフィー、クロマトフォーカシング、ＳＤＳ−ＰＡＧＥ、及び硫酸アンモニウム沈殿なども回収する抗体に依存して利用可能である。
【０２５１】
任意の予備精製工程に続き、目的とする抗体及び混入物を含む混合物を、約２．５〜４．５の間のｐＨで溶出緩衝液を使用し、典型的には低塩濃度（例、約０〜０．２５M塩から）で実施する低ｐＨ疎水性相互作用クロマトグラフィーに供してもよい。
【０２５２】
また含まれるのは、本明細書中で定義する低、中程度、及び高ストリンジェンシー条件下で、本発明の抗体又は抗体フラグメントをコードする単離ポリヌクレオチド配列により表されるヌクレオチド配列の全部又は一部（例、可変領域をコードする部分）にハイブリダイズする核酸である。ハイブリダイズする核酸のハイブリダイズ部分は、典型的には少なくとも１５（例、２０、２５、３０、又は５０）ヌクレオチド長である。ハイブリダイズする核酸のハイブリダイズ部分は、抗ＩＬ−３６Ｒポリペプチド（例、重鎖又は軽鎖可変領域）、又はその補体をコードする核酸の一部又は全部の配列と少なくとも８０%、例えば少なくとも９０%、少なくとも９５%、又は少なくとも９８%同一である。本明細書中に記載する型のハイブリダイズする核酸は、例えば、クローニングプローブ、プライマー、例えばＰＣＲプライマー、又は診断プローブとして使用することができる。
【０２５３】
非治療的使用
本明細書中に記載する抗体は、親和性精製薬剤として有用である。このプロセスでは、抗体を、当技術分野で周知の方法を使用して、固相（例えばプロテインＡ樹脂など）に固定化する。固定化された抗体を、精製されるＩＬ−３６Ｒタンパク質（又はそのフラグメント）を含むサンプルと接触させ、その後、支持体を、ＩＬ−３６Ｒタンパク質（固定化抗体に結合する）を除くサンプル中の実質的に全ての物質を除去する適切な溶媒で洗浄する。最後に、支持体を、抗体からＩＬ−３６Ｒタンパク質を放出する別の適切な溶媒で洗浄する。
【０２５４】
抗ＩＬ−３６Ｒ抗体、例えばヒト化抗ＩＬ−３６Ｒ抗体は、ＩＬ−３６Ｒタンパク質を検出及び／又は定量する診断アッセイ、例えば特定の細胞、組織、又は血清中でのＩＬ−３６Ｒ発現を検出する際に有用である。抗ＩＬ−３６Ｒ抗体は、例えば、臨床検査手順の一部として疾患の発症又は進行をモニターし、例えば、所与の処置及び／又は予防レジメンの有効性を決定するために診断的に使用することができる。検出は、抗ＩＬ−３６Ｒ抗体を共役することにより促進することができる。検出可能な物質の例は、種々の酵素、補欠分子族、蛍光物質、発光物質、生物発光物質、放射性物質、種々の陽電子放射断層撮影を使用した陽電子放射金属、及び非放射性常磁性金属イオンを含む。例えば、本発明に従った診断薬としての使用のための抗体に結合させることができる金属イオンについては、米国特許第４，７４１，９００号を参照のこと。
【０２５５】
抗ＩＬ−３６Ｒ抗体を、ＩＬ−３６Ｒ関連障害（例、ＩＬ−３６Ｒの異常発現により特徴付けられる障害）を診断するための方法において、又は被験体がＩＬ−３６Ｒ関連障害を発症する増加リスクを有するか否かを決定するために使用することができる。そのような方法は、被験体からの生物学的サンプルをＩＬ−３６Ｒ抗体と接触させること、及びＩＬ−３６Ｒへの抗体の結合を検出することを含む。「生物学的サンプル」により、ＩＬ−３６Ｒを潜在的に発現する個体、細胞株、組織培養物、又は他の細胞の供給源から得られた任意の生物学的サンプルを意味する。哺乳動物から組織生検及び体液を得るための方法は、当技術分野において周知である。
【０２５６】
一部の実施形態では、方法は、患者サンプル中のＩＬ−３６Ｒのレベルをコントロールサンプル（例、ＩＬ−３６Ｒ関連障害を有していない被験体）と比較し、患者がＩＬ−３６Ｒ関連障害を有するか、又はＩＬ−３６Ｒ関連障害を発症するリスクがあるかを決定する。
【０２５７】
一部の実施形態では、例えば、診断目的のために、抗体を検出可能な部分で標識することが有利であろう。多数の検出可能な標識が利用可能であり、放射性同位元素、蛍光標識、酵素基質標識などを含む。標識は、種々の公知の技術を使用して抗体と間接的に結合させてもよい。例えば、抗体をビオチンと結合させてもよく、上に言及する３つの広範なカテゴリーの標識のいずれかをアビジンと結合させる（又はその逆）ことができる。ビオチンはアビジンに選択的に結合し、このように、標識を、この間接的な様式において抗体と結合させることができる。あるいは、標識と抗体との間接的な結合を達成するために、抗体を小さなハプテン（例えばジゴキシンなど）と結合させることができ、上に言及する異なる型の標識の１つを抗ハプテン抗体（例、抗ジゴキシン抗体）と結合させる。このように、標識と抗体との間接的な結合を達成することができる。
【０２５８】
例示的な放射性同位体標識は、３５Ｓ、１４Ｃ、１２５Ｉ、３Ｈ、及び１３１Ｉを含む。抗体は、例えば、Current Protocols in Immunology, Volumes 1 and 2, 1991, Coligen et al., Ed. Wiley-Interscience, New York, N.Y., Pubsに記載されている技術を使用し、放射性同位体で標識することができる。放射活性は、例えば、シンチレーションカウントにより測定することができる。
【０２５９】
例示的な蛍光標識は、希土類キレート（ユーロピウムキレート）から由来する標識を含み、又はフルオレセイン及びその誘導体、ローダミン及びその誘導体、ダンシル、リサミン、フィコエリトリン、ならびにテキサスレッドが利用可能である。蛍光標識は、公知の技術、例えばCurrent Protocols in Immunologyに開示されているようなものを介して抗体に結合させることができる。蛍光は、蛍光光度計を使用して定量することができる。
【０２６０】
当技術分野において公知の種々の十分に特徴付けられた酵素基質標識がある（例、総説については米国特許第４，２７５，１４９号を参照のこと）。酵素は一般的に、種々の技術を使用して測定することができる発色基質の化学的変化を触媒する。例えば、変化は、分光光度的に測定することができる基質における色の変化でありうる。あるいは、酵素は基質の蛍光又は化学発光を変化させうる。蛍光における変化を定量するための技術を上に記載している。化学発光基質は化学反応により電子的に励起され、次に、例えば化学発光計を使用して測定することができる光を放出しうる、又は蛍光アクセプターにエネルギーを供与する。
【０２６１】
酵素標識の例は、ルシフェラーゼ、例えばホタルルシフェラーゼ及び細菌ルシフェラーゼなど（米国特許第４，７３７，４５６号）、ルシフェリン、２，３−ジヒドロフタラジンジオン、リンゴ酸デヒドロゲナーゼ、ウレアーゼ、ペルオキシダーゼ、例えばホースラディッシュペルオキシダーゼ（ＨＲＰＯ）など、アルカリホスファターゼ、βガラクトシダーゼ、グルコアミラーゼ、リゾチーム、サッカライドオキシダーゼ（例えばグルコースオキシダーゼ、ガラクトースオキシダーゼ、グルコース−６−リン酸デヒドロゲナーゼなど）、ヘテロサイディック（ｈｅｔｅｒｏｃｙｄｉｃ）オキシダーゼ（例えばウリカーゼ及びキサンチンオキシダーゼなど）、ラクトペルオキシダーゼ、マイクロペルオキシダーゼなどを含む。酵素を抗体に結合させる技術は、例えば、O’Sullivan et al., 1981, Methods for the Preparation of Enzyme-Antibody Conjugates for use in Enzyme Immunoassay, in Methods in Enzym. (J. Langone & H. Van Vunakis, eds.), Academic press, N.Y., 73: 147-166において記載されている。
【０２６２】
酵素−基質の併用の例は、例えば、以下を含む：基質として水素ペルオキシダーゼを伴う西洋ワサビペルオキシダーゼ（ＨＲＰＯ）、ここで水素ペルオキシダーゼは、色素前駆体、例えばオルトフェニレンジアミン（ＯＰＤ）又は３，３’、５，５’−テトラメチルベンジジン塩酸塩（ＴＭＢ）などを酸化する；発色基質としてパラニトロフェニルホスフェートを伴うアルカリホスファターゼ（ＡＰ）；及び発色性基質、例えばｐ−ニトロフェニル−β−Ｄ−ガラクトシダーゼなど又は蛍光基質４−メチルウンベリフェリル−β−Ｄ−ガラクトシダーゼを伴うβ−Ｄ−ガラクトシダーゼ（β−Ｄ−Ｇａｌ）。
【０２６３】
多数の他の酵素基質の併用が当業者に利用可能である。これらの全般的な総説については、米国特許第４，２７５，１４９号及び米国特許  ４，３１８，９８０を参照のこと。
【０２６４】
別の実施形態では、ヒト化抗ＩＬ−３６Ｒ抗体を非標識で使用し、ヒト化抗ＩＬ−３６Ｒ抗体に結合する標識抗体で検出する。
【０２６５】
本明細書中に記載する抗体は、任意の公知のアッセイ方法、例えば競合結合アッセイ、直接及び間接サンドイッチアッセイ、及び免疫沈降アッセイなどにおいて用いることができる。例えば、Zola, Monoclonal Antibodies: A Manual of Techniques, pp. 147-158 (CRC Press, Inc. 1987)を参照のこと。
【０２６６】
抗ＩＬ−３６Ｒ抗体又はその抗原結合フラグメントを使用し、ＩＬ−３６受容体へのリガンドの結合を阻害することができる。そのような方法は、抗ＩＬ−３６Ｒ抗体又はその抗原結合フラグメントを細胞（例、哺乳動物細胞）又は細胞環境に投与することを含み、それによりＩＬ−３６受容体により媒介されるシグナル伝達を阻害する。これらの方法はインビトロ又はインビボで実施することができる。「細胞環境」により、細胞を取り囲む組織、培地、又は細胞外マトリックスを意図する。抗ＩＬ−３６Ｒ抗体又はその抗原結合フラグメントは、抗体又はフラグメントが細胞の外側及び周囲のＩＬ−３６Ｒ分子に結合することが可能であるような様式において細胞の細胞環境に投与され、従って、ＩＬ−３６リガンドのその受容体への結合を防止する。
【０２６７】
診断キット
抗ＩＬ−３６Ｒ抗体は、診断キット、即ち、所定量の試薬と診断アッセイを実施するための指示書とのパッケージされた併用で使用することができる。抗体を酵素で標識する場合、キットは、酵素により要求される基質及び補因子、例えば検出可能な発色団又は発蛍光団を提供する基質前駆体などを含んでもよい。また、他の添加物を含んでもよく、例えば安定剤、緩衝液（例えば、ブロック緩衝液又は溶解緩衝液）などである。種々の試薬の相対量は、アッセイの感度を実質的に最適化する試薬の溶液中での濃度を提供するために広く変動しうる。試薬は、溶解時に適当な濃度を有する試薬溶液を提供する賦形剤を含む乾燥粉末（通常は凍結乾燥）として提供してもよい。
【０２６８】
治療的使用
別の実施形態では、本明細書中に開示するヒト化抗ＩＬ−３６Ｒ抗体は、本明細書中に記載するＩＬ−３６Ｒの発現に関連付けられる種々の障害の処置において有用である。ＩＬ−３６Ｒ関連障害を処置するための方法は、治療有効量のヒト化抗ＩＬ−３６Ｒ抗体を、それを必要とする被験体に投与することを含む。
【０２６９】
ヒト化抗ＩＬ−３６Ｒ抗体又は薬剤は、非経口、皮下、腹腔内、肺内、及び鼻腔内、ならびに、局所免疫抑制処置のために望ましい場合、病変内投与（移植片の灌流又はそうでなければ移植前での抗体との接触を含む）を含む任意の適切な手段により投与する。ヒト化抗ＩＬ−３６Ｒ抗体又は薬剤は、例えば、注入として又はボーラスとして投与することができる。非経口注入は筋肉内、静脈内、動脈内、腹腔内、又は皮下投与を含む。また、ヒト化抗ＩＬ−３６Ｒ抗体は、特に抗体の減量を伴い、パルス注入により適切に投与する。一態様では、投薬は、投与が短期か長期かに部分的に依存して、注射、最も好ましくは静脈内注射又は皮下注射により与える。一態様では、ヒト化抗ＩＬ−３６Ｒ抗体又は薬剤は、静脈内負荷用量、それに続く１回以上の皮下注射により投与する。一態様では、皮下注射は、本明細書中に開示する投与間隔のいずれか１つで投与する。
【０２７０】
疾患の予防又は処置のために、抗体の適当な投与量は、多様な因子、例えば上に定義する処置される疾患の型、疾患の重症度及び経過、抗体を予防又は治療の目的のために投与するのか否か、以前の治療、患者の病歴及び抗体への応答、及び担当医の判断などに依存する。抗体は、一回で又は一連の処置にわたって患者に適切に投与する。
【０２７１】
疾患の型及び重症度に依存して、約１μg/kg〜２０mg/kg（例、０．１〜１５mg/kg）の抗体が、例えば、１回以上の別々の投与による、又は持続注入による患者への投与のための初期候補投与量である。典型的な１日投与量は、上に言及した因子に依存して、約１μg/kg〜１００mg/kg又はそれ以上の範囲でありうる。数日又はそれ以上の反復投与については、条件に依存して、処置を、疾患症状の望ましい抑制が起こるまで持続する。しかし、他の投与レジメンが有用でありうる。この治療の進歩は、従来の技術及びアッセイにより簡単にモニターされる。例示的な投薬レジメンは、ＷＯ９４／０４１８８に開示されているものである。
【０２７２】
用語「抑制」は、本明細書中では「寛解」及び「軽減」と同じ文脈で使用し、疾患の１つ以上の特徴の緩和を意味する。
【０２７３】
抗体組成物は、良好な医療行為と一致する様式で製剤化、投薬、及び投与されるであろう。この文脈における考慮のための因子は、治療中の特定の障害、治療中の特定の哺乳動物、個々の患者の臨床状態、障害の原因、薬剤の送達部位、投与の方法、投与のスケジュール、及び医療従事者に公知である他の因子を含む。投与される抗体の「治療有効量」はそのような考慮事項により支配され、ＩＬ−３６Ｒ発現に関連付けられる障害を予防、寛解、又は処置するために必要な最小量である。
【０２７４】
抗体は、必要ではないが、しかし、場合により、問題の障害を予防又は処置するために現在使用されている１つ以上の薬剤を用いて製剤化する。そのような他の薬剤の有効量は、製剤中に存在するヒト化抗ＩＬ−３６Ｒ抗体の量、障害又は処置の型、及び上で考察した他の因子に依存する。これらは一般的に同じ投与量で、上記で使用した投与経路、又はこれまでに用いた投与量の約１〜９９%で使用する。
【０２７５】
医薬組成物及びその投与
ＩＬ−３６Ｒ結合薬剤（例、抗ＩＬ−３６Ｒ抗体）を含む組成物は、免疫学的障害、呼吸器障害、又は癌を有するか、又は有するリスクがある被験体に投与することができる。本発明はさらに、癌、呼吸器疾患、又は免疫学的障害の予防又は処置のための医薬品の製造におけるＩＬ−３６Ｒ結合薬剤（例、抗ＩＬ−３６Ｒ抗体）の使用を提供する。本明細書中で使用する用語「被験体」は、ＩＬ−３６Ｒ結合薬剤を投与することができる任意の哺乳動物患者を意味し、例えば、ヒト及び非ヒト哺乳動物、例えば霊長類、げっ歯類、及びイヌなどを含む。本明細書中に記載する方法を使用した処置を特に意図した被験体はヒトを含む。抗体又は薬剤を単独で又は他の組成物との併用において、免疫学的障害、呼吸器障害、又は癌の予防又は処置において投与することができる。抗体又は薬剤との併用において投与することができるそのような組成物は、メトトレキサート（ＭＴＸ）及び免疫調節剤（例、抗体又は低分子）を含む。
【０２７６】
一実施形態では、抗体又は薬剤を単独で又は他の組成物との併用において、免疫学的障害、呼吸器障害、又は癌の予防又は処置において投与することができる。抗体又は薬剤との併用において投与することができるそのような組成物は、免疫調節剤（例えばアザチオプリン及び６−ＭＰなど）を含む。
【０２７７】
本発明の別の実施形態では、抗体又は薬剤を単独で又は他の組成物との併用において、免疫学的障害、呼吸器障害、又は癌の予防又は処置において投与することができる。抗体又は薬剤との併用において投与することができるそのような組成物は、種々のクラスの生物製剤、例えばＴＮＦ阻害剤（例えば、インフリキシマブ、アダリムマブ、セルトリズマブペゴル）、又は循環受容体融合タンパク質（例えばエタネルセプトなど）、インテグリン阻害剤（例えば、ベドリズマブ）、又はＩＬ−２３阻害剤などを含む。
【０２７８】
本発明のさらなる実施形態は、ＩＬ−３６Ｒ結合薬剤（例、抗ＩＬ−３６Ｒ抗体）を含む組成物を単独で又は他の組成物との併用において、免疫障害、呼吸器障害、又は癌の予防又は処置において投与することを包含する。抗体又は薬剤との併用において投与することができるそのような組成物は、種々のクラスの生物製剤、例えばＴＮＦ阻害剤（例えば、インフリキシマブ、アダリムマブ、セルトリズマブペゴル）又は循環受容体融合タンパク質（例えばエタネルセプトなど）、インテグリン阻害剤（例えば、ベドリズマブ）、又はＩＬ−２３阻害剤などを含む。
【０２７９】
例えば、ＴＮＦ阻害剤（例えば、インフリキシマブ、アダリムマブ、セルトリズマブペゴル）又は循環受容体融合タンパク質（例えばエタネルセプトなど）、インテグリン阻害剤（例えば、ベドリズマブ）、又はＩＬ−２３阻害剤との併用における本発明の抗体は、強皮症、掌蹠膿疱症、全身性膿疱性乾癬、糖尿病性腎症、ループス腎炎、強皮症、強直性脊椎炎、ＩＢＤ（潰瘍性大腸炎−軽度、中等度、重度ならびにクローン病−軽度、中等度、及び重度）の処置のために有用である。
【０２８０】
別の実施形態では、ＴＮＦ阻害剤（例えば、インフリキシマブ、アダリムマブ、セルトリズマブペゴル）又は循環受容体融合タンパク質（例えばエタネルセプトなど）、インテグリン阻害剤（例えば、ベドリズマブ）、又はＩＬ−２３阻害剤との併用における本発明の抗体を、強皮症、掌蹠膿疱症、全身性膿疱性乾癬、糖尿病性腎症、ループス腎炎、強皮症、強直性脊椎炎、ＩＢＤ（潰瘍性大腸炎−軽度、中等度、重度ならびにクローン病−軽度、中等度、及び重度）の処置のために患者に投与する。
【０２８１】
本発明のさらなる実施形態は、軽度、中等度に活動性、重度の潰瘍性大腸炎を処置するための方法を提供する。
【０２８２】
本発明のさらなる実施形態は、軽度、中程度に活動性、重度のクローン病を処置するための方法を提供する。
【０２８３】
さらなる実施形態では、本発明の抗体は、ＴＮＦ阻害剤（例えば、インフリキシマブ、アダリムマブ、セルトリズマブペゴル）又は循環受容体融合タンパク質（例えばエタネルセプトなど）、インテグリン阻害剤（例えば、ベドリズマブ）、又はＩＬ−２３阻害剤の前、後、又は同時に投与してもよい。
【０２８４】
別の実施形態では、本発明の抗体は、ＴＮＦ阻害剤（例えば、インフリキシマブ、アダリムマブ、セルトリズマブペゴル）又は循環受容体融合タンパク質（例えばエタネルセプトなど）、インテグリン阻害剤（例えば、ベドリズマブ）、又はＩＬ−２３阻害剤を用いた処置への追加治療として投与してもよい。
【０２８５】
そのような医薬組成物中での使用のための抗体の例は、配列番号１〜１０のいずれかの軽鎖可変領域アミノ酸配列を有する抗体又は抗体フラグメントを含むものである。そのような医薬組成物中での使用のための抗体の例はまた、配列番号１１〜２０のいずれかの重鎖可変領域アミノ酸配列を有するヒト化抗体又は抗体フラグメントを含むものである。
【０２８６】
そのような医薬組成物中での使用のための抗体のさらなる例はまた、配列番号７６〜８６のいずれかの軽鎖可変領域アミノ酸配列を有するヒト化抗体又は抗体フラグメントを含むものである。そのような医薬組成物中での使用のための好ましい抗体はまた、配列番号８７〜１０１のいずれかの重鎖可変領域アミノ酸配列を有するヒト化抗体又は抗体フラグメントを含むものである。
【０２８７】
そのような医薬組成物中での使用のための抗体のさらなる例はまた、配列番号７７及び８９、配列番号８０及び８８、配列番号８０及び８９、配列番号７７及び８７、配列番号７７及び８８、配列番号８０及び８７、配列番号８６及び１００、配列番号８５及び１０１、又は配列番号８５及び１０のいずれかの軽鎖可変領域及び重鎖可変領域を有するヒト化抗体又は抗体フラグメントを含むものである。
【０２８８】
そのような医薬組成物中での使用のための抗体のさらなる例はまた、配列番号１１５、１１８、１２３、又は１２４のいずれかの軽鎖領域アミノ酸配列を有するヒト化抗体を含むものである。そのような医薬組成物中での使用のための好ましい抗体はまた、配列番号１２５、１２６、１２７、１３８、又は１３９のいずれかの重鎖可変領域アミノ酸配列を有するヒト化抗体を含むものである。
【０２８９】
そのような医薬組成物中での使用のための抗体のさらなる例はまた、抗体Ｂ１、抗体Ｂ２、抗体Ｂ３、抗体Ｂ４、抗体Ｂ５、抗体Ｂ６、抗体Ｃ１、抗体Ｃ２、又は抗体Ｃ３を含むものである。
【０２９０】
種々の送達系が公知であり、ＩＬ−３６Ｒ結合薬剤を投与するために使用することができる。導入の方法は、皮内、筋肉内、腹腔内、静脈内、皮下、鼻腔内、硬膜外、及び経口経路を含むが、これらに限定しない。ＩＬ−３６Ｒ結合薬剤は、例えば、注入、ボーラス、又は注射により投与することができ、他の生物学的に活性な薬剤（例えば化学療法剤など）と一緒に投与することができる。投与は全身的又は局所的でありうる。好ましい実施形態では、投与は皮下注射による。そのような注射用の製剤は、例えば、隔週で１回投与してもよい予め充填されたシリンジ中で調製してもよい。
【０２９１】
特定の実施形態では、ＩＬ−３６Ｒ結合薬剤の組成物は、注射により、カテーテルを用いて、坐剤を用いて、又はインプラントを用いて投与し、インプラントは多孔性、非多孔性、又はゼラチン状の物質であり、膜（例えばシラスティック（ｓｉａｌａｓｔｉｃ）膜など）、又は繊維を含む。典型的には、組成物を投与する場合、抗ＩＬ−３６Ｒ抗体又は薬剤が吸収しない物質を使用する。
【０２９２】
他の実施形態では、抗ＩＬ−３６Ｒ抗体又は薬剤は制御放出系で送達する。一実施形態では、ポンプを使用してもよい（例、Langer, 1990, Science 249:1527-1533；Sefton, 1989, CRC Crit. Ref. Biomed. Eng. 14:201；Buchwald et al., 1980, Surgery 88:507；Saudek et al., 1989, N. Engl. J. Med. 321:574）。別の実施形態では、ポリマー物質を使用することができる（例、Medical Applications of Controlled Release(Langer and Wise eds., CRC Press, Boca Raton, Fla., 1974)；Controlled Drug Bioavailability, Drug Product Design and Performance(Smolen and Ball eds., Wiley, New York, 1984)；Ranger and Peppas, 1983, Macromol. Sci. Rev. Macromol. Chem. 23:61. また、Levy et al., 1985, Science 228:190；During et al., 1989, Ann. Neurol. 25:351；Howard et al., 1989, J. Neurosurg. 71:105を参照のこと）。他の制御放出系は、例えば、Langer（上記）において考察されている。
【０２９３】
ＩＬ−３６Ｒ結合薬剤（例、抗ＩＬ−３６Ｒ抗体）は、治療有効量の結合薬剤及び１つ以上の医薬的に適合する成分を含む医薬組成物として投与することができる。
【０２９４】
典型的な実施形態では、医薬組成物は、ヒトへの静脈内投与又は皮下投与のために適合した医薬組成物としてルーチンの手順に従って製剤化する。典型的には、注射による投与のための組成物は、滅菌等張水性緩衝液中の溶液である。必要な場合、医薬品はまた、可溶化剤及び局所麻酔薬（例えば注射部位での疼痛を和らげるためのリグノカインなど）を含めることができる。一般的に、成分は個別に、又は例えば、活性薬剤の量を示す密閉容器（例えばアンプル又はサシェなど）中に入れた乾燥した凍結乾燥粉末又は無水濃縮物としての単位剤形で一緒に混合して供給する。医薬品が注入により投与される場合、医薬品グレードの滅菌水又は生理食塩水を含む注入ボトルで調剤することができる。医薬品を注射により投与する場合、成分を投与前に混合することができるように、注射用滅菌水又は生理食塩水のアンプルを提供することができる。
【０２９５】
さらに、医薬組成物は、（ａ）凍結乾燥形態中のＩＬ−３６Ｒ結合薬剤（例、抗ＩＬ−３６Ｒ抗体）を含む容器、（ｂ）医薬的に許容可能な注射用の希釈剤（例、滅菌水）を含む第２の容器を含む医薬キットとして提供することができる。医薬的に許容可能な希釈剤は、凍結乾燥抗ＩＬ−３６Ｒ抗体又は薬剤の再構成又は希釈のために使用することができる。場合によりそのような容器に関連付けられるのは、医薬品又は生物学的産物の製造、使用、又は販売を規制する政府機関により規定された形態での通知であり、その通知は、機関による、ヒト投与のための製造、使用、又は販売の承認を反映する。
【０２９６】
免疫学的障害又は癌の処置又は予防において有効であるＩＬ−３６Ｒ結合薬剤（例、抗ＩＬ−３６Ｒ抗体）の量は、標準的な臨床技術により決定することができる。また、インビトロアッセイを場合により使用し、最適な投与量範囲を特定することを助けることができる。製剤において用いる正確な用量はまた、投与経路、及び免疫障害又は癌の段階に依存し、医師の判断及び各々の患者の状況に従って決定すべきである。有効用量は、インビトロ又は動物モデル検査系から由来する用量反応曲線から推定してもよい。
【０２９７】
一般的に、免疫学的疾患又はＩＬ−３６Ｒを発現する癌を伴う患者に投与される抗ＩＬ−３６Ｒ抗体又はＩＬ−３６Ｒ結合薬剤の投与量は、典型的には約０．１mg/kg〜約１００mg/kg被験体の体重である。被験体に投与される投与量は、被験体の体重の約０．１mg/kg〜約５０mg/kg、約１mg/kg〜約３０mg/kg、約１mg/kg〜約２０mg/kg、約１mg/kg〜約１５mg/kg、又は約１mg/kg〜約１０mg/kgである。
【０２９８】
例示的な用量は１ｎｇ／ｋｇ〜１００mg/kgを含むが、これらに限定しない。一部の実施形態では、用量は約０．５mg/kg、約１mg/kg、約２mg/kg、約３mg/kg、約４mg/kg、約５mg/kg、約６mg/kg、約７mg/kg、約８mg/kg、約９mg/kg、約１０mg/kg、約１１mg/kg、約１２mg/kg、約１３mg/kg、約14mg/kg、約１５mg/kg、又は約１６mg/kgである。用量は、例えば、毎日、週１回（毎週）、週２回、週３回、週４回、週５回、週６回、隔週もしくは毎月、８週間毎もしくは２ヵ月毎、又は３ヵ月毎に投与することができる。特定の実施形態では、用量は約０．５mg/kg/週、約１mg/kg/週、約２mg/kg/週、約３mg/kg/週、約４mg/kg/週、約５mg/kg/週、約６mg/kg/週、約７mg/kg/週、約８mg/kg/週、約９mg/kg/週、約１０mg/kg/週、約１１mg/kg/週、約１２mg/kg/週、約１３mg/kg/週、約１４mg/kg/週、約１５mg/kg/週、又は約１６mg/kg/週である。一部の実施形態では、用量は約１mg/kg/週〜約１５mg/kg/週の範囲である。
【０２９９】
一部の実施形態では、ＩＬ−３６Ｒ結合薬剤を含む医薬組成物は、結合薬剤に結合した又は結合していない治療用薬剤をさらに含むことができる。抗ＩＬ−３６Ｒ抗体又はＩＬ−３６Ｒ結合薬剤は、免疫学的障害又は癌の処置又は予防のための１つ以上の治療用薬剤との併用において同時投与することができる。
【０３００】
そのような併用治療の投与は、疾患パラメーター（例、症状の重症度、症状の数、又は再発の頻度）に対して相加的又は相乗的な効果を有しうる。
【０３０１】
併用投与の治療レジメンに関して、特定の実施形態では、抗ＩＬ−３６Ｒ抗体又はＩＬ−３６Ｒ結合薬剤を治療用薬剤と同時に投与する。別の特定の実施形態では、治療用薬剤は、抗ＩＬ−３６Ｒ抗体又はＩＬ−３６Ｒ結合薬剤の投与の前又はそれに続いて、抗ＩＬ−３６Ｒ抗体又はＩＬ−３６Ｒ結合薬剤の投与の前又はそれに続く少なくとも１時間から数ヶ月まで、例えば、少なくとも１時間、５時間、１２時間、１日、１週間、１ヵ月、又は３ヵ月に投与する。
【０３０２】
製造品
別の態様では、上に記載する障害の処置のために有用な物質を含む製造品が含まれる。製造品は容器及びラベルを含む。適切な容器は、例えば、ボトル、バイアル、シリンジ、及び試験管を含む。容器は、多様な物質（例えばガラス又はプラスチックなど）から形成してもよい。容器は、状態を処置するために有効な組成物を保持し、滅菌アクセスポートを有しうる。例えば、容器は、静脈内溶液バッグ又は皮下注射針で貫通可能なストッパーを有するバイアルでありうる。組成物中の活性薬剤はヒト化抗ＩＬ−３６Ｒ抗体である。容器上の又は容器に関連付けられるラベルは、組成物が、選んだ状態を処置するために使用されることを示す。製造品はさらに、医薬的に許容可能な緩衝液、例えばリン酸緩衝生理食塩水、リンゲル液、及びデキストロース溶液などを含む第２の容器を含んでもよい。それはさらに、他の緩衝液、希釈剤、フィルター、針、シリンジ、及び使用のための説明書を伴う添付文書を含む、商業的及びユーザーの観点から望ましい他の物質を含んでもよい。
【０３０３】
本発明を以下の実施例においてさらに記載するが、それらは、本発明の範囲を限定することを意図しない。
【０３０４】
本発明の抗体を、以下の実施例においてさらに記載する。
【０３０５】
実施例
実施例１：抗ヒトＩＬ−３６Ｒ抗体の同定
複数のマウス系統を、組換え産生されたヒトＩＬ−３６Ｒ（ＥＣＤ−細胞外ドメイン：Ｇｅｎｂａｎｋ  Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ＃ＮＰ＿００３８４５のアミノ酸２０〜３３２）タンパク質及び従来のハイブリドーマ世代中に取り入れられた強い力価応答を生成するもので免疫した。ヒトＩＬ−３６Ｒ（ＥＣＤ）への強い結合を誘発するが、ヒトＩＬ−１Ｒ１（最も関連するＩＬ−１Ｒファミリーメンバー）への結合を誘発しない融合産物をサブクローニングし、再スクリーニングした。複数のハイブリドーマを同定し、ＩＬ−３６Ｒからのシグナル伝達に結合し中和するモノクローナル抗体をもたらした（実施例２、３、及び４を参照のこと）。可変ドメインを、標準的なＰＣＲプライマーセットを使用してハイブリドーマからクローニングした。代表的なモノクローナル抗体の可変ドメイン及び特定のＣＤＲは上に記載する通りである。マウス抗体の全てを、ヒト定常ドメイン（ｈｕ  ＩｇＧ１ＫＯ／カッパ）上のマウス可変ドメインからなるキメラ抗体に変換した。ｈｕ  ＩｇＧ１ＫＯ（ノックアウト）は、エフェクター機能（例えばＦｃγＲ及び補体結合など）を低下させることによりＡＤＣＣ及びＣＤＣ活性を排除する２つの置換変異（Ｌｅｕ２３４Ａｌａ及びＬｅｕ２３５Ａｌａ）を有する。マウス抗体及びキメラ抗体の可変ドメインは同一である。キメラ抗体を生成し、抗体の機能を確認し、正しい可変ドメイン配列が得られたことを確実にする。
【０３０６】
実施例２：同定されたマウス抗ヒトＩＬ−３６Ｒ抗体の分子結合親和性
Ａ）組換えヒトＩＬ−３６Ｒに結合する抗ＩＬ−３６Ｒ抗体の動態及び結合親和性を、単一カラム精製後にハイブリドーマから生成された物質を使用し、Proteon（Bio-Rad、カリフォルニア州ハーキュリーズ）を使用して測定した。単一のＩＬ−３６Ｒ表面コート濃度で実行された、ヒトＩＬ−３６Ｒへの全てのマウスリードの結合親和性を＜１００pMであると推定した。７つの異なる表面密度で実行されるヒトＩＬ−３６Ｒへのマウス抗体の結合親和性（全体的適合）を表１に示す。キメラ抗ＩＬ３６Ｒ  ＩｇＧの結合は、それぞれのマウスリードと等価である。
【表２４】
2020512344.tif 000043
【０３０７】
Ｂ）マウスＩＬ−３６Ｒ及びヒトＩＬ−１Ｒ１にわたる分子選択性
マウス及びキメラ抗ＩＬ−３６Ｒ抗体をまた、マウスＩＬ−３６Ｒ又はヒトＩＬ−１Ｒ１表面のいずれかに１００nMの濃度で注射した。Fortebio Octet（Fortebio、カリフォルニア州メンロパーク）を使用して測定したこれらの抗体についてのマウスＩＬ−３６Ｒ及びヒトＩＬ−１Ｒ１への結合シグナルはゼロであり、これらの抗体がヒトＩＬ−３６Ｒに選択的に結合することを示す。ヒトＩＬ−３６Ｒへの抗ＩＬ−３６Ｒ抗体の結合も５０%ヒト血清の存在において分析し、結合率に対する血清の有意な効果は観察されず、高い特異性が実証された。
【０３０８】
実施例３：機能的ヒト及びカニクイザルアッセイにおけるマウス及びキメラ抗ヒトＩＬ−３６Ｒ抗体の効力。
プロトコール：ヒトＮＣＩ／ＡＤＲ−ＲＥＳ細胞ｐＮＦκＢ／サイトカイン放出アッセイ
試薬：
R&D Systems：切断型ｒｈ  ＩＬ３６β  
R&D Systems：切断型ｒｈ  ＩＬ３６γ  
R&D Systems：切断型ｒｈ  ＩＬ３６α：  
MA6000 Phospho- NFκB (Ser536) Whole Cell Lysate Kit
Meso Scale Diagnostics, LLC    
MSD ELISAカスタムヒト９６ウェル  ４スポットアッセイ
Meso Scale Diagnostics, LLC
【０３０９】
ＮＣＩ／ＡＤＲ−ＲＥＳ細胞を、９６ウェルプレートにおいて０．２５%血清を伴うＲＰＭＩ培地中に４５０００個細胞／ウェルで播種した。１つのプレートはｐＮＦκＢの分析のために、別のプレートはサイトカイン放出のために利用した。プレートを次に、３７℃、５%ＣＯ２で一晩インキュベートした。リガンド（ＩＬ３６α、β、又はγ）及び抗体を、血清飢餓（ＳＳ）培地中で４×の所望の濃度に希釈した。アンタゴニスト（抗体）を、リガンドの前に細胞に加えた。ｐＮＦκＢについて：ＮＣＩ細胞＋／−リガンド及びアンタゴニストを、３７℃、５%ＣＯ２で１時間にわたりインキュベートした。培地を次に吸引し、細胞を氷上で１００μl/ウェルの完全溶解緩衝液中で３０分間溶解した。溶解物を次に、２５００ＲＰＭ、２０分間、４℃で遠心分離し、ＭＳＤ  ＥＬＩＳＡプレートに移し、製造業者のプロトコールに従ってｐＮＦκＢについてアッセイした。サイトカイン放出について：刺激後１８〜２４時間、上清をＭＳＤ  ＥＬＩＳＡプレートに移し、製造者のプロトコールに従ってサイトカインについてアッセイした。
【０３１０】
プロトコール：ＢａＦ／３カニクイザルＩＬ−３６Ｒ細胞についてのｐＮＦκＢ（Ｓ５３６）ＭＳＤ  ＥＬＩＳＡ
ＢａＦ／３カニクイザルＩＬ−３６Ｒ細胞を９６ウェルプレートにおけるＳＳ培地中に９０，０００個細胞／ウェルで播種した。１００μlの培地をコントロールウェルに加えた。アンタゴニスト（抗体）を４×の所望の濃度に希釈し、５０μlを各々のウェルに加えた。リガンド（ＩＬ３６α、β、又はγ）をＳＳ培地中で４倍の所望の濃度に希釈し、５０μlを各々のウェルに加えた（最終容量２００μl）。プレートを３７℃、５%ＣＯ２で１５分間にわたりインキュベートした。プレートを短時間遠心分離し、培地を吸引し、細胞を１００μl/ウェルの完全溶解緩衝液中で溶解し（ＭＳＤｐＮＦκＢプロトコールを参照のこと）、氷上で３０分間にわたりインキュベートした。溶解物を次に、２５００ＲＰＭ、２０分間、４℃で遠心分離し、MSD ELISAプレートに移した。溶解物を次に、上に記載するＭＳＤキットを使用してｐＮＦκＢ活性について評価した。
【０３１１】
結果：ヒトＩＬ−３６リガンドを用いたヒト機能アッセイ（ｐＮＦκＢ及びサイトカイン放出）及びカニクイザル機能アッセイ（ｐＮＦκＢ）におけるマウス抗ヒトＩＬ−３６Ｒ抗体についてのＩＣ９０結果を表２に示す。ヒトＩＬ−３６リガンドを用いたヒト機能アッセイ（ｐＮＦκＢ及びサイトカイン放出）及びカニクイザル機能アッセイ（ｐＮＦκＢ）におけるキメラ抗ヒトＩＬ−３６Ｒ抗体についてのＩＣ９０結果を表３に示す。
【表２５】
2020512344.tif 000044
【表２６】
2020512344.tif 000045
【０３１２】
実施例４：ヒトＩＬ−３６Ｒ発現細胞へのマウス抗ヒトＩＬ−３６Ｒ抗体の結合
フローサイトメトリーによる抗体の結合についてのプロトコール
全長ヒトＩＬ−３６Ｒ又はＮＣＩ／ＡＤＲ−ＲＥＳ細胞でトランスフェクトされたＨＥＫ２９３細胞を、染色前の２４時間にわたり継代した。細胞を、ＰＢＳ中の１０mlの５mM  ＥＤＴＡでリンスすることによりフラスコから除去し、次に、追加の１０mlの５mM  ＥＤＴＡ及び２．５mlのAccumaxと３７℃で１０分間にわたりインキュベートし、細胞を脱凝集／分散させた。抗体を次に、ＰＢＳ＋２%ＢＳＡ中で指定濃度に希釈し、細胞を室温で２０分間にわたりインキュベートした。過剰の抗体を次に、２００μlのＰＢＳを加えることにより洗浄し、次に遠心分離した。二次試薬を次に、ウェル当たり５０μlで加えて、細胞を室温で１５分間にわたりインキュベートし、上に記載するように洗浄する。細胞を２００μlのＰＢＳ中に再懸濁し、フローサイトメトリーにより分析した。ヒトＩＬ−３６Ｒ  ＨＥＫ形質移入体に結合するマウス抗ヒトＩＬ−３６Ｒ抗体についての結合ＥＣ５０を表４に示す。
【表２７】
2020512344.tif 000046
【０３１３】
実施例５：ヒト化ＩＬ−３６Ｒ抗体の産生
ヒトにおいて投与後の潜在的な免疫原性を低下させるために、マウス抗ヒトＩＬ−３６Ｒモノクローナル抗体８１Ｂ４及び７３Ｃ５を、設計及びスクリーニングプロセスを通じて「ヒト化」した。ヒトフレームワーク配列を、フレームワークの相同性、ＣＤＲ構造、保存された標準残基、保存された界面充填残基、及び他のパラメーターに基づいて、マウスリードについて選択した。これらのフレームワーク位置におけるアミノ酸残基の特定の置換によって、結合親和性及び／又は安定性を含む抗体性能の種々の側面を、ヒト生殖細胞系フレームワーク領域中へのＣＤＲ又はＨＶＬの「直接スワップ」により形成されるヒト化抗体において実証されるものを上回り改善することができる。キメラ親Ｆａｂと比較してより良好又は等価の結合及び改善された発現を示したＦａｂを、さらなる特徴付けのために選択した。抗体８１Ｂ４及び７３Ｃ５についての代表的なヒト化可変領域を明細書のセクションに示している。この様式では、抗体Ｂ１から抗体Ｂ６は、マウス抗体８１Ｂ４（ヒトＩｇＧ１  ＫＯ（ＫＯ＝ノックアウト）／カッパ骨格中にクローン化）から由来するヒト化抗体であった。抗体Ｂ１からＢ６を表Ａに示す。抗体Ｃ１からＣ３は、マウス抗体７３Ｃ５（ヒトＩｇＧ１−ＫＯ（ＫＯ＝ノックアウト）／カッパ骨格中にクローン化）から由来するヒト化抗体であった。抗体Ｃ１からＣ３を表Ｃに示す。
【０３１４】
実施例６：ヒト化ＩＬ−３６Ｒ抗体の結合
組換えヒトＩＬ−３６Ｒに結合するヒト化抗ＩＬ−３６Ｒ抗体の動態及び結合親和性を、Proteon（Bio-Rad、カリフォルニア州ハーキュリーズ）を使用して測定した。ヒトＩＬ−３６Ｒを５つの異なる表面密度で固定化し、全体的適合を使用して結果を分析した（３つの実験の結果を示す表５を参照のこと）。フローサイトメトリーを介したＮＣＩ／ＡＤＲ−ＲＥＳ細胞へのヒト化抗体の結合を、実施例４に記載するプロトコールを使用して測定した（ＥＣ９０値については表５を参照のこと）。
【表２８】
2020512344.tif 000047
【０３１５】
実施例７：機能的ヒトアッセイにおけるヒト化抗ヒトＩＬ−３６Ｒ抗体の効力
ヒトＮＣＩ／ＡＤＲ−ＲＥＳ細胞からのヒト化ＩＬ−３６Ｒ変異体を用いたシグナル伝達の機能的遮断を、実施例３に記載するようにテストした。ヒトＩＬ−３６リガンドを用いたヒト機能アッセイ（ｐＮＦκＢ及びサイトカイン放出）におけるヒト化抗ヒトＩＬ−３６Ｒ抗体についてのＩＣ９０結果を表６に示す。
【表２９】
2020512344.tif 000048
【０３１６】
実施例８：機能的ヒト初代ケラチノサイトアッセイにおける抗ＩＬ−３６Ｒ抗体の効力。
プロトコール：ヒト初代表皮ケラチノサイトｐＮＦｋＢ／サイトカイン放出アッセイ
細胞を９６ウェルプレートにおける培養培地中に３０，０００個細胞／ウェルで播種し、３７℃、５%ＣＯ２で一晩インキュベートした。アッセイを次に、実施例３に記載するように実施した。
結果：ヒトＩＬ−３６リガンドで刺激したヒト初代ケラチノサイトアッセイ（ｐＮＦｋＢ及びＩＬ−８放出）におけるマウス、キメラ、及びヒト化抗ＩＬ−３６Ｒ抗体についてのＩＣ９０結果をそれぞれ表７、表８、及び表９に示す。
【表３０】
2020512344.tif 000049
【表３１】
2020512344.tif 000050
【表３２】
2020512344.tif 000051
【０３１７】
実施例９：機能的ヒト初代腸上皮細胞アッセイにおける抗ＩＬ−３６Ｒ抗体の効力
プロトコール：ヒト初代腸上皮細胞ｐＮＦκＢ／サイトカイン放出アッセイ
細胞を９６ウェルプレートにおける培養培地中に３０，０００個細胞／ウェルで播種し、３７℃、５%ＣＯ２で一晩インキュベートした。アッセイを次に、実施例３に記載するように実施した。
結果：ヒトＩＬ−３６リガンドで刺激したヒト初代腸上皮細胞アッセイ（ｐＮＦｋＢ及びＩＬ−８放出）におけるマウス抗ＩＬ−３６Ｒ抗体についてのＩＣ９０結果を表１０に示す。
【表３３】
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【０３１８】
実施例１０：機能的ヒト初代腸筋線維芽細胞アッセイにおける抗ＩＬ−３６Ｒ抗体の効力
プロトコール：ヒト初代腸筋線維芽細胞ｐＮＦκＢ／サイトカイン放出アッセイ
細胞を９６ウェルプレートにおける培養培地中に３０，０００細胞／ウェルで播種し、３７℃、５%ＣＯ２でインキュベートした。アッセイを次に、実施例３に記載するように実施した。
結果：ヒトＩＬ−３６リガンドで刺激したヒト初代腸筋線維芽細胞アッセイ（ｐＮＦｋＢ及びＩＬ−８放出）における抗ＩＬ−３６Ｒ抗体についてのＩＣ９０結果を表１１及び表１２に示す。
【表３４】
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【表３５】
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【０３１９】
実施例１１：機能的ヒト初代皮膚線維芽細胞アッセイにおける抗ＩＬ−３６Ｒ抗体の効力
プロトコール：ヒト初代皮膚線維芽細胞ｐＮＦκＢ／サイトカイン放出アッセイ
細胞を９６ウェルプレートにおける培養培地中に３０，０００個細胞／ウェルで播種し、３７℃、５%ＣＯ２で一晩インキュベートした。アッセイを次に、実施例３に記載するように実施した。
結果：ヒトＩＬ−３６リガンドで刺激したヒト初代皮膚線維芽細胞アッセイ（ｐＮＦｋＢ及びＩＬ−８放出）における抗ＩＬ−３６Ｒ抗体についてのＩＣ９０結果を表１３及び表１４に示す。
【表３６】
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【表３７】
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【０３２０】
実施例１２：機能的ヒト初代近位尿細管細胞アッセイにおけるマウス抗ＩＬ−３６Ｒ抗体の効力
プロトコール：ヒト初代近位尿細管細胞ｐＮＦκＢ／サイトカイン放出アッセイ。
細胞を９６ウェルプレートにおける培養培地中に５，０００個細胞／ウェルで播種し、３７℃、５%ＣＯ２で一晩インキュベートした。アッセイを実施例３に記載するように実施した。
【０３２１】
結果：ヒトＩＬ−３６リガンドで刺激したヒト初代近位尿細管細胞アッセイ（ＩＬ−８放出）におけるマウス、キメラ、及びヒト化抗ＩＬ−３６Ｒ抗体についてのＩＣ９０結果を表１５に示す。
【表３８】
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【０３２２】
実施例１３：ＩＬ−３６γ刺激再構築ヒト表皮からのＩＬ−８産生の阻害。
プロトコール再構成表皮
抗ＩＬ−３６Ｒ抗体（１．５μg/ml）を再構築したヒト表皮とプレインキュベートし、ヒト組換えＩＬ−３６γ（２０ng/ml）で刺激した。組換えヒトＩＬ−１β（２０ng/ml；R&D Systems）を陽性コントロールとして使用した。培養中での２４時間後、細胞上清を収集し、ＩＬ−８についてアッセイした（ＩＬ−８についてのアッセイは実施例３に記載している）。サンプルを３通りにテストし、平均pg/ml±標準誤差を下の表に示す（表１６）。
【表３９】
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【０３２３】
実施例１４：再構成ヒト表皮におけるＩＬ−３６リガンド誘導性Ｓ１００Ａ７及びＳ１００Ａ１２遺伝子発現の阻害。
アゴニスト（ａｇｏｎｓｉｔｉｃ）ＩＬ−３６リガンドを用いた再構成ヒト表皮の刺激によって、Ｓ１００Ａ７及びＳ１００Ａ１２遺伝子発現が誘導される。Ｓ１００Ａ７及びＳ１００Ａ１２は、表皮分化複合体内に位置する遺伝子である。
【０３２４】
プロトコール：再構成ヒト表皮を抗ＩＬ−３６Ｒ抗体（１．５μg/ml）とインキュベートし、ヒト組換えＩＬ−３６γ（２０ng/ml）で刺激した。組換えヒトＩＬ−１β（２０ng/mL；R&D Systems）を陽性コントロールとして使用した。５%ＣＯ２及び３７℃での培養中での２４時間後、ＲＮＡを再構築ヒト表皮から単離し、リアルタイム逆転写酵素ポリメラーゼ連鎖反応により遺伝子発現についてアッセイした。相対発現を、２−ΔΔＣｔ方法を使用して算出した。サンプルを３通りにテストし、平均発現±標準誤差を下の表に示す（表１７）。
【表４０】
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【０３２５】
実施例１５：乾癬の異種移植モデルにおける抗ＩＬ−３６Ｒ抗体の有効性
プロトコール：血液及び非病変皮膚生検を、皮膚科医により臨床的に診断された乾癬患者２４名から得た。皮膚生検を免疫不全ＮＩＨ−ＩＩＩマウスに移植し、４〜５週間にわたり生着させた。
【０３２６】
末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）を、移植皮膚中への皮内注射のために生検時に各々のドナーから収集された血液から単離した。注射の前に、ＰＢＭＣを１μg/mlのブドウ球菌エンテロトキシンＢ（Toxin Technologies、米国フロリダ州）及び８０U/mlのヒト組換えＩＬ−２（Peprotech Inc.、オランダ、オーステルハウト）で刺激した。自己ＰＢＭＣを、ＰＢＳ中の７．５×１０＾５個の細胞と皮内注射し、皮膚炎症の誘導及び乾癬の表現型を同期化させた。細胞の注射後３週間に、生検をマウスから回収し、組織学的検査により分析した。
【０３２７】
組織学的染色を全ての群の凍結保存された皮膚組織で実施した。全ての皮膚層を覆う対角切片（８μm）を図４に記載するように調製した。表皮の厚さの評価のために、２つの非連続切片を生検の中心から無作為に選び、ヘマトキシリン−エオシンで染色した。その後、切片を１００倍の倍率で評価した。生検の全長にわたり、堤の長さを、Olympus DP71カメラ及びＣｅｌｌ＾Ｄイメージングソフトウェア（V2.7、ドイツ、ミュンスター）を使用して両方の切片で測定した。
【０３２８】
堤の長さを以下ように定義する：顆粒層の上縁と堤の底の間の距離。生検は無作為に盲検様式で採点した。
【０３２９】
各々の処置群についての平均表皮厚及び最大表皮厚についての結果を表１８に示す。各々の処置群での表皮厚における正味の変化についての結果を表１９に示す。
【表４１】
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【表４２】
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【０３３０】
実施例１６：野生型マウス及びインターロイキン１受容体様２ホモ接合性ノックアウトマウスにおける３週間のタバコ煙曝露後の亜慢性肺炎症。
プロトコール：野生型マウス又はインターロイキン１受容体様２マウスを肺の苦痛を誘導するために３週間にわたりタバコ煙に曝露させた。１週目及び２週目は連続５日間の曝露から成ったが、マウスには３週目の間には４日間連続で曝露させた。マウスを各日５本のタバコに曝露させ、タバコ曝露（１６分間）及び新鮮な空気（８分間）の２４分間の間隔を伴った。最終曝露後１８時間に、マウスを２×０．８mlのハンクス塩溶液（０．６mM  ＥＤＴＡ）で洗浄した。上清及び細胞ペレットを、１０分間にわたる遠心分離後、気管支肺胞洗浄液から収集した。各々の曝露群の気管支肺胞洗浄液中の総マクロファージ及び好中球細胞数を表２０に示す。
【表４３】
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【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【配列表】
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【国際調査報告】
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