(57)【要約】  本発明は、抗ＬＡＧ３抗体の製剤、および抗ＰＤ１抗体と抗ＬＡＧ３抗体との共製剤、および種々の障害の治療におけるそれらの使用を提供する。【選択図】図１５
2020518587.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
約５〜３００ｍｇ／ｍＬの抗ＬＡＧ３抗体またはその抗原結合性フラグメント、１０〜１０００ｍＭの総濃度の、ヒスチジン、アスパルタート、グルタミン、グリシン、プロリン、メチオニン、アルギニンまたはこれらの薬学的に許容される塩、ＮａＣｌ、ＫＣｌ、ＬｉＣｌ、ＣａＣｌ２、ＭｇＣｌ２、ＺｎＣｌ２およびＦｅＣｌ２からなる群から選択される賦形剤の１以上、ならびにｐＨ約５〜８のバッファーを含む製剤。
【請求項２】
１０〜２５０ｍｇ／ｍＬの抗ＬＡＧ３抗体またはその抗原結合性フラグメントであって、配列番号３９のＣＤＲＬ１、配列番号４０のＣＤＲＬ２、配列番号４１のＣＤＲＬ３を含む可変軽鎖領域および配列番号４２のＣＤＲＨ１、配列番号５９のＣＤＲＨ２、配列番号４４のＣＤＲＨ３を含む可変重鎖領域を含む抗ＬＡＧ３抗体またはその抗原結合性フラグメント、１５〜３００ｍＭの総濃度の、ヒスチジン、アスパルタート、グルタミン、グリシン、プロリン、メチオニン、アルギニンまたはこれらの薬学的に許容される塩、ＮａＣｌ、ＫＣｌ、ＬｉＣｌからなる群から選択される賦形剤の１以上、ならびにｐＨ約５．０〜６．５のバッファーを含む、請求項１記載の製剤。
【請求項３】
賦形剤が１５〜２５０ｍＭの濃度のＬ−アルギニンまたはその薬学的に許容される塩である、請求項１または２記載の製剤。
【請求項４】
賦形剤が４０〜１００ｍＭの濃度のＬ−アルギニンまたはその薬学的に許容される塩である、請求項１または２記載の製剤。
【請求項５】
賦形剤が、２０〜２５０ｍＭの総濃度の、ＮａＣｌとＬ−アルギニンまたはその薬学的に許容される塩との組合せである、請求項１または２記載の製剤。
【請求項６】
賦形剤が約４０〜１５０ｍＭのＮａＣｌ、ＫＣｌまたはＬｉＣｌである、請求項１または２記載の製剤。
【請求項７】
賦形剤が約１５〜２００ｍＭのＬ−ヒスチジン、Ｌ−アスパルタート、Ｌ−グルタミンまたはＬ−グリシンである、請求項１または２記載の製剤。
【請求項８】
賦形剤が約４０〜１００ｍＭのＬ−ヒスチジンである、請求項１または２記載の製剤。
【請求項９】
バッファーがヒスチジンバッファー、アセタートバッファーまたはシトラートバッファーである、請求項１〜８のいずれか１項記載の製剤。
【請求項１０】
バッファーが約１〜３００ｍＭの濃度を有する、請求項９記載の製剤。
【請求項１１】
糖もしくはポリオール、および非イオン性界面活性剤、またはそれらの組合せを更に含む、請求項１〜１０のいずれか１項記載の製剤。
【請求項１２】
糖が非還元二糖である、請求項１１記載の製剤。
【請求項１３】
糖がトレハロースもしくはスクロースまたはその組合せである、請求項１２記載の製剤。
【請求項１４】
ポリオールが、マンニトール、ソルビトール、グリセロールおよびポリエチレングリコールからなる群から選択される、請求項１１記載の製剤。
【請求項１５】
糖またはポリオールが約１０〜２００ｍｇ／ｍｌの濃度で存在する、請求項１１〜１４のいずれか１項記載の製剤。
【請求項１６】
非イオン性界面活性剤がポリソルベートである、請求項１１記載の製剤。
【請求項１７】
ポリソルベート２０およびポリソルベート８０から選択される界面活性剤、ならびにスクロースおよびトレハロースから選択される糖、またはそれらの組合せを更に含む、請求項１〜１０のいずれか１項記載の製剤。
【請求項１８】
約１０〜２５０ｍｇ／ｍＬのスクロース、トレハロース、マンニトール、ソルビトール、ポリエチレングリコールまたはグリセロール、約０．００５〜２．０ｍｇ／ｍＬのポリソルベート８０または２０、およびｐＨ約５．０〜６．５の約３〜３００ｍＭのＬ−ヒスチジン、アセタートまたはシトラートバッファーを更に含む、請求項１〜１０のいずれか１項記載の製剤。
【請求項１９】
約３０〜１２０ｍｇ／ｍＬのスクロースまたはトレハロース、約０．０５〜１．５ｍｇ／ｍＬのポリソルベート８０または２０、およびｐＨ約５．０〜６．５の約３〜１５０ｍＭのＬ−ヒスチジン、アセタートまたはシトラートバッファーを更に含む、請求項１〜１０のいずれか１項記載の製剤。
【請求項２０】
約５０〜９０ｍｇ／ｍＬのスクロースまたはトレハロース、約０．０５〜１．０ｍｇ／ｍＬのポリソルベート８０、およびｐＨ約５．０〜６．５の約５〜３０ｍＭのＬ−ヒスチジン、アセタートまたはシトラートバッファーを更に含む、請求項１〜１０のいずれか１項記載の製剤。
【請求項２１】
約２０〜２２０ｍｇ／ｍＬの抗ＬＡＧ３抗体、約５０〜９０ｍｇ／ｍＬのスクロースまたはトレハロース、約０．０５〜１．０ｍｇ／ｍＬのポリソルベート８０または２０、ｐＨ約５．０〜６．５の約５〜２０ｍＭのＬ−ヒスチジン、アセタートまたはシトラートバッファー、ならびに約４０〜１５０ｍＭのＬ−アルギニンまたはその薬学的に許容される塩を含む、請求項１１記載の製剤。
【請求項２２】
約２０〜２２０ｍｇ／ｍＬの抗ＬＡＧ３抗体、約２０〜２００ｍｇ／ｍＬのグリセロール、ソルビトールまたはＰＥＧ４００、約０．０５〜１．０ｍｇ／ｍＬのポリソルベート８０または２０、ｐＨ約５．０〜６．５の約３〜１５０ｍＭのＬ−ヒスチジン、アセタートまたはシトラートバッファー、ならびに約４０〜１５０ｍＭのＬ−アルギニンまたはその薬学的に許容される塩を含む、請求項１１記載の製剤。
【請求項２３】
約２０〜２２０ｍｇ／ｍＬの抗ＬＡＧ３抗体、約２０〜１５０ｍＭのＬ−グルタミン、Ｌ−グリシン、Ｌ−プロリンまたはＬ−メチオニン、約０．０５〜１．０ｍｇ／ｍＬのポリソルベート８０または２０、ｐＨ約５．０〜６．５の約３〜１５０ｍＭのＬ−ヒスチジン、アセタートまたはシトラートバッファー、ならびに約４０〜１５０ｍＭのＬ−アルギニンまたはその薬学的に許容される塩を含む、請求項１または２記載の製剤。
【請求項２４】
約２０〜２２０ｍｇ／ｍＬの抗ＬＡＧ３抗体、約０．０５〜１．０ｍｇ／ｍＬのポリソルベート８０または２０、ｐＨ約５．０〜６．５の約３〜１５０ｍＭのＬ−ヒスチジン、アセタートまたはシトラートバッファー、ならびに約４０〜１５０ｍＭのＮａＣｌまたはその薬学的に許容される塩を含む、請求項１または２記載の製剤。
【請求項２５】
３〜１５０ｍＭのＬ−メチオニンを更に含む、請求項１〜２４のいずれか１項記載の製剤。
【請求項２６】
５〜７０ｍＭのＬ−メチオニンを更に含む、請求項１〜２４のいずれか１項記載の製剤。
【請求項２７】
約２５ｍｇ／ｍＬの抗ＬＡＧ３抗体、約５０ｍｇ／ｍＬのスクロース、約０．２ｍｇ／ｍＬのポリソルベート８０、ｐＨ約５．８の約１０ｍＭのＬ−ヒスチジンバッファー、約７０ｍＭのＬ−アルギニンまたはその薬学的に許容される塩および約１０ｍＭのＬ−メチオニンを含む、請求項１または２記載の製剤。
【請求項２８】
約２５ｍｇ／ｍＬの抗ＬＡＧ３抗体、約５０ｍｇ／ｍＬのスクロース、約０．２ｍｇ／ｍＬのポリソルベート８０、ｐＨ約５．８〜６．０の約１０ｍＭのＬ−ヒスチジンバッファー、約７０ｍＭのＬ−アルギニンまたはＬ−アルギニン−ＨＣｌを含む、請求項１または２記載の製剤。
【請求項２９】
液体製剤である、請求項１〜２８のいずれか１項記載の製剤。
【請求項３０】
少なくとも−７０℃未満で凍結される、請求項１〜２８のいずれか１項記載の製剤。
【請求項３１】
凍結乾燥製剤からの再構成溶液である、請求項１〜２８のいずれか１項記載の製剤。
【請求項３２】
５℃で、抗ＬＡＧ３抗体の単量体の割合が、サイズ排除クロマトグラフィーによる測定で、３ヶ月後に９５％以上である、請求項２９〜３１のいずれか１項記載の製剤。
【請求項３３】
５℃で、抗ＬＡＧ３抗体の酸性変異体の割合が、イオン交換クロマトグラフィーによる測定で、３ヶ月後に１５％未満である、請求項２９〜３２のいずれか１項記載の製剤。
【請求項３４】
抗ＬＡＧ３抗体または抗原結合性フラグメントが配列番号３７の軽鎖可変領域配列および配列番号５８の重鎖可変領域配列を含む、請求項１〜３３のいずれか１項記載の製剤。
【請求項３５】
抗ＬＡＧ３抗体が配列番号３５の軽鎖配列および配列番号５７の重鎖配列を含む、請求項１〜３３のいずれか１項記載の製剤。
【請求項３６】
抗ＰＤ−１抗体またはその抗原結合性フラグメントを更に含む、請求項１〜３５のいずれか１項記載の製剤。
【請求項３７】
抗ＬＡＧ３抗体と抗ＰＤ−１抗体とのモル比が１：１である、請求項３６記載の製剤。
【請求項３８】
抗ＬＡＧ３抗体と抗ＰＤ−１抗体とのモル比が１：１、２：１、３：１または３．５：１である、請求項３６記載の製剤。
【請求項３９】
抗ＰＤ−１抗体またはその抗原結合性フラグメントが、配列番号１のＣＤＲＬ１、配列番号２のＣＤＲＬ２および配列番号３のＣＤＲＬ３を含む可変軽鎖領域と、配列番号６のＣＤＲＨ１、配列番号７のＣＤＲＨ２および配列番号８のＣＤＲＨ３を含む可変重鎖領域とを含む、請求項３６〜３８のいずれか１項記載の製剤。
【請求項４０】
抗ＰＤ−１抗体またはその抗原結合性フラグメントが配列番号９の重鎖可変領域および配列番号４の軽鎖可変領域を含む、請求項３９記載の製剤。
【請求項４１】
抗ＰＤ−１抗体が配列番号１０の重鎖配列および配列番号５の軽鎖配列を含む、請求項３９記載の製剤。
【請求項４２】
約１０〜１２０ｍｇ／ｍＬの抗ＬＡＧ３抗体またはその抗原結合性フラグメントと約１０〜１２０ｍｇ／ｍＬの抗ＰＤ−１抗体またはその抗原結合性フラグメントとを含む、請求項３６〜４１のいずれか１項記載の製剤。
【請求項４３】
配列番号３９のＣＤＲＬ１、配列番号４０のＣＤＲＬ２、配列番号４１のＣＤＲＬ３を含む可変軽鎖領域と、配列番号４２のＣＤＲＨ１、配列番号５９のＣＤＲＨ２、配列番号４４のＣＤＲＨ３を含む可変重鎖領域とを含む抗ＬＡＧ３抗体またはその抗原結合性フラグメント、配列番号１のＣＤＲＬ１、配列番号２のＣＤＲＬ２、配列番号３のＣＤＲＬ３を含む可変軽鎖領域と、配列番号６のＣＤＲＨ１、配列番号７のＣＤＲＨ２および配列番号８のＣＤＲＨ３を含む可変重鎖領域とを含む抗ＰＤ−１抗体またはその抗原結合性フラグメント、２５〜２５０ｍＭの濃度のＬ−アルギニンまたはその薬学的に許容される塩、ならびにｐＨ約５〜８のバッファーを含む製剤。
【請求項４４】
抗ＬＡＧ３抗体または抗原結合性フラグメントが配列番号３７の軽鎖可変領域配列および配列番号５８の重鎖可変領域配列を含み、抗ＰＤ−１抗体またはその抗原結合性フラグメントが配列番号９の重鎖可変領域および配列番号４の軽鎖可変領域を含む、請求項４３記載の製剤。
【請求項４５】
抗ＬＡＧ３抗体が配列番号３５の軽鎖配列および配列番号５７の重鎖配列を含み、抗ＰＤ−１抗体が配列番号１０の重鎖配列および配列番号５の軽鎖配列を含む、請求項４３記載の製剤。
【請求項４６】
約１０〜１２０ｍｇ／ｍＬの抗ＬＡＧ３抗体、約１０〜１２０ｍｇ／ｍＬの抗ＰＤ−１抗体、約３０〜１２０ｍｇ／ｍＬの非還元二糖、約０．０５〜２．０ｍｇ／ｍＬのポリソルベート８０または２０、ｐＨ約５．０〜６．５のバッファー、および約４０〜１５０ｍＭのＬ−アルギニンまたはその薬学的に許容される塩を含む、請求項４３〜４５のいずれか１項記載の製剤。
【請求項４７】
約２０〜３０ｍｇ／ｍＬの抗ＬＡＧ３抗体、約２０〜３０ｍｇ／ｍＬの抗ＰＤ−１抗体、約５０〜９０ｍｇ／ｍＬのスクロースまたはトレハロース、約０．０５〜１．０ｍｇ／ｍＬのポリソルベート８０または２０、ｐＨ約５．０〜６．５の約３〜３０ｍＭのヒスチジンバッファー、および約４０〜１００ｍＭのＬ−アルギニンまたはその薬学的に許容される塩を含む、請求項４３〜４５のいずれか１項記載の製剤。
【請求項４８】
約３〜１００ｍＭのＬ−メチオニンを更に含む、請求項４３〜４７のいずれか１項記載の製剤。
【請求項４９】
約５〜１５ｍＭのＬ−メチオニンを更に含む、請求項４３〜４７のいずれか１項記載の製剤。
【請求項５０】
約２５ｍｇ／ｍＬの抗ＬＡＧ３抗体、約２５ｍｇ／ｍＬの抗ＰＤ−１抗体、約５０ｍｇ／ｍＬのスクロース、約０．２ｍｇ／ｍＬのポリソルベート８０、ｐＨ約５．８の約１０ｍＭのＬ−ヒスチジンバッファー、約７０ｍＭのＬ−アルギニンまたはその薬学的に許容される塩および約１０ｍＭのＬ−メチオニンを含む、請求項４３〜４７のいずれか１項記載の製剤。
【請求項５１】
５℃で、抗ＬＡＧ３抗体の単量体の割合が、サイズ排除クロマトグラフィーによる測定で、３ヶ月後に９５％以上である、請求項４３〜５０のいずれか１項記載の製剤。
【請求項５２】
５℃で、抗ＬＡＧ３抗体の酸性変異体の割合が、イオン交換クロマトグラフィーによる測定で、３ヶ月後に１５％未満である、請求項４３〜５１のいずれか１項記載の製剤。
【請求項５３】
請求項１〜５２のいずれか１項記載の製剤を含む容器または注射装置。
【請求項５４】
癌または感染症の治療のための、請求項１〜５２のいずれか１項記載の製剤。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、全般的には、治療用抗体の製剤および種々の障害の治療におけるその使用に関する。
【背景技術】
【０００２】
抗体は、それらの定常ドメインのアミノ酸配列において、または可変ドメイン内のそれらのフレームワーク配列において、多少異なりうるが、それらは、典型的には、ＣＤＲ配列において、最も劇的に異なっている。同じタンパク質、同じポリペプチドまたは更には潜在的に同じエピトープに結合する抗体でさえも、全く異なるＣＤＲ配列を含みうる。ヒトにおいて使用される治療用抗体はヒト生殖系列抗体配列または非ヒト（例えば、げっ歯類）生殖系列抗体配列（例えば、ヒト化抗体の場合）からも入手可能であり、これにより潜在的配列における更なる多様性がもたらされる。これらの配列相違は、溶液中の潜在的に異なる安定性および溶液パラメーターに対する異なる応答性をもたらしうる。また、アミノ酸の配置における小さな変化または１個もしくは数個のアミノ酸残基の変化が、劇的に異なる抗体安定性および配列特異的分解経路に対する感受性をもたらしうる。結果として、現在のところ、抗体安定性を最適化するのに必要な溶液条件を予測することは不可能である。最適な溶液製剤を決定するためには、各抗体を個別に研究する必要がある。Ｂｈａｍｂｈａｎｉら（２０１２）Ｊ．Ｐｈａｒｍ．Ｓｃｉ．１０１：１１２０。
【０００３】
また、抗体は、例えば、ホルモンおよびサイトカインのような他の治療用タンパク質と比較して、かなり大きなタンパク質（約１５０，０００Ｄａ）である。抗体医薬は、有効性および一貫した投与を保証するために貯蔵中に安定である必要があり、したがって、選択されるどのような製剤も、例えば高濃度、透明性および許容される粘度のような望ましい特性を支持すること、そしてまた、典型的な貯蔵条件下、許容可能に長い貯蔵寿命にわたって、これらの特性および薬物の有効性を維持することが重要である。
【０００４】
ＬＡＧ３（ＣＤ２２３）は活性化Ｔ細胞（Ｈｕａｒｄら，Ｉｍｍｕｎｏｇｅｎｅｔｉｃｓ  ３９：２１３−２１７，１９９４）、ＮＫ細胞（Ｔｒｉｅｂｅｌら，Ｊ  Ｅｘｐ  Ｍｅｄ  １７１：１３９３−１４０５，１９９０）、Ｂ細胞（Ｋｉｓｉｅｌｏｗら，Ｅｕｒ  Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  ３５：２０８１−２０８８，２００５）および形質細胞様樹状細胞（Ｗｏｒｋｍａｎら，Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  １８２：１８８５−１８９１，２００９）上で発現される細胞表面分子であり、これらのリンパ球サブセットの機能において重要な役割を果たしている。また、ＬＡＧ３とその主要リガンドであるクラスＩＩ  ＭＨＣとの間の相互作用は樹状細胞機能のモジュレーションにおいて或る役割を果たすと考えられている（Ａｎｄｒｅａｅら，Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  １６８：３８７４−３８８０，２００２）。最近の前臨床研究はＣＤ８  Ｔ細胞枯渇におけるＬＡＧ−３の役割を実証している（Ｂｌａｃｋｂｕｒｎら，Ｎａｔ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  １０：２９−３７，２００９）。
【０００５】
慢性ウイルス感染の場合と同様に、腫瘍抗原特異的ＣＤ４＋およびＣＤ８＋  Ｔ細胞はエフェクター機能の低下を示し、また、炎症性サイトカインの産生の低下および抗原再刺激に対する低反応性により特徴づけられる疲弊（ｅｘｈａｕｓｔｅｄ）表現型を示す。これは、細胞外因性メカニズム、例えば調節性Ｔ細胞（Ｔｒｅｇ）および細胞内因性メカニズム、例えば、疲弊腫瘍浸潤性リンパ球（ＴＩＬ）上でアップレギュレーションされる抑制性分子によりもたらされる。これらの抑制性メカニズムは有効な抗腫瘍免疫に対する非常に大きな障壁に相当する。
【０００６】
ＬＡＧ３は寛容化ＴＩＬ上で発現され、このことは、それらが腫瘍媒介性免疫抑制に寄与することを示唆している。ＬＡＧ３の抑制は抗原特異的Ｔ細胞の活性化の増強をもたらすことが可能であり、これにより治療上の利益が得られうる。
【０００７】
ＰＤ−１は、免疫調節おけるおよび末梢性免疫寛容の維持における重要な分子として認識されている。ＰＤ−１は、ナイーブＴ、ＢおよびＮＫＴ細胞上で中等度に発現され、リンパ球、単球および骨髄性細胞上のＴ／Ｂ細胞受容体シグナリングによりアップレギュレーションされる。ＰＤ−１に対する２つの公知リガンドであるＰＤ−Ｌ１（Ｂ７−Ｈ１）およびＰＤ−Ｌ２（Ｂ７−ＤＣ）は、種々の組織において生じるヒトのがん（以下、癌と称される）において発現される。例えば卵巣癌、腎臓癌、結腸直腸癌、膵臓癌、肝臓癌および黒色腫の大きなサンプルセットにおいて、ＰＤ−Ｌ１発現は、後続治療には無関係に、予後不良および全生存期間の短縮と相関することが示された。同様に、腫瘍浸潤性リンパ球上のＰＤ−１発現は乳癌および黒色腫における機能不全Ｔ細胞の指標となること、ならびに腎癌における予後不良と相関することが判明した。したがって、ＰＤ−Ｌ１を発現する腫瘍細胞は、ＰＤ−１を発現するＴ細胞と相互作用して、免疫監視の回避およびＴ細胞活性化の低減をもたらし、それにより腫瘍に対する免疫応答の低下に関与することが提示されている。
【０００８】
ＰＤ−１とそのリガンドであるＰＤ−Ｌ１およびＰＤ−Ｌ２の一方または両方との間の相互作用を抑制する幾つかのモノクローナル抗体が癌治療のために臨床開発中である。そのような抗体の有効性は、他の承認されている又は実験的な癌療法、例えば放射線、手術、化学療法剤、標的化療法、腫瘍において脱調節される他のシグナル伝達経路を抑制する物質および他の免疫増強剤と組合せて投与されると、増強されうることが提示されている。
【０００９】
したがって、ヒトＬＡＧ−３に結合する抗体のような治療用抗体の安定製剤および抗ＬＡＧ３抗体と抗ＰＤ−１抗体との安定共製剤が必要とされている。そのような安定製剤は、好ましくは、自己投与のための薬物の貯蔵に典型的な条件下、すなわち、シリンジにおける冷蔵庫温度で、数ヶ月から数年にわたって安定性を示し、対応医薬品の長い貯蔵寿命をもたらす。
【発明の概要】
【００１０】
発明の概括
本発明は抗ＬＡＧ３抗体または抗原結合性フラグメントの製剤を提供する。出願人は、溶液中の抗ＬＡＧ３の相分離を緩和する或る賦形剤を見出した。１つの態様においては、本発明は、ｐＨ約５〜８のバッファー、ならびに１０〜１０００ｍＭの総濃度の、ヒスチジン、アスパルタート（アスパラギン酸塩）、グルタミン、グリシン、プロリン、メチオニン、アルギニンまたはその薬学的に許容される塩、ＮａＣｌ、ＫＣｌ、ＬｉＣｌ、ＣａＣｌ２、ＭｇＣｌ２、ＺｎＣｌ２およびＦｅＣｌ２からなる群から選択される賦形剤の１以上を提供する。１つの態様においては、本発明は、抗ＬＡＧ３抗体またはその抗原結合性フラグメントおよびｐＨ約５〜８のバッファーおよび１５〜２５０ｍＭの総濃度のアルギニン、ヒスチジンまたはその薬学的に許容される塩、またはＮａＣｌの１以上を含む製剤を提供する。１つの実施形態においては、製剤は、抗ＬＡＧ３抗体またはその抗原結合性フラグメント、糖またはポリオール、非イオン性界面活性剤、ｐＨ約５〜８のバッファー、２５〜２００ｍＭのアルギニンまたはその薬学的に許容される塩を含む。もう１つの実施形態においては、製剤は約２５ｍｇ／ｍＬ  抗ＬＡＧ３抗体、約５０ｍｇ／ｍＬ  スクロース、約０．２ｍｇ／ｍＬ  ポリソルベート８０、約ｐＨ５．８〜６．０の約１０ｍＭ  Ｌ−ヒスチジンバッファー、約７０ｍＭ  Ｌ−アルギニン−ＨＣｌおよび所望により含まれうる約１０ｍＭ  Ｌ−メチオニンを含む。製剤は、所望により、抗ＰＤ−１抗体を含みうる。
【００１１】
他の態様においては、本発明は、１０〜１０００ｍＭの総濃度のアルギニンまたはその薬学的に許容される塩およびｐＨ約５〜８のバッファーおよび所望により含まれうる３〜１００ｍＭのメチオニンを含む抗ＬＡＧ３抗体または抗原結合性フラグメントと抗ＰＤ−１抗体または抗原結合性フラグメントとの共製剤（ｃｏ−ｆｏｒｍｕｌａｔｉｏｎ）を提供する。１つの実施形態においては、製剤は、約２５ｍｇ／ｍＬ  抗ＬＡＧ３抗体および約２５ｍｇ／ｍｌ  抗ＰＤ−１抗体、約５０ｍｇ／ｍＬ  スクロース、約０．２ｍｇ／ｍＬ  ポリソルベート８０、ｐＨ約５．８〜６．０の約１０ｍＭ  Ｌ−ヒスチジンバッファー、約７０ｍＭ  Ｌ−アルギニン−ＨＣｌおよび約１０ｍＭ  Ｌ−メチオニンを含む。驚くべきことに、抗ＬＡＧ３／抗ＰＤ−１共製剤は、個々の抗体製剤より良好な安定性を示す。製剤は再構成用に凍結乾燥されることが可能であり、あるいは液体形態でありうる。
【００１２】
本発明はまた、再構成製剤または液体製剤（溶液製剤）を、癌または感染症の治療を要する対象に投与することを含む、癌または感染症の治療方法を提供する。他の実施形態においては、製剤は慢性感染症の治療に使用される。癌または感染症を治療するための医薬の製造における溶液または凍結乾燥製剤の使用も想定される。
【００１３】
詳細な説明
添付の特許請求の範囲を含む本明細書において用いる単数形の語は、文脈に明らかに矛盾しない限り、その対応複数対象物を含む。特に示されていない限り、本明細書中に言及されているタンパク質および対象はヒトタンパク質およびヒト対象であり、別の種のものではない。
【００１４】
定義
本明細書中で用いる「抗原結合性フラグメント」は、特に示されていない限り、抗体の抗原結合性フラグメント、すなわち、完全長抗体により結合される抗原に特異的に結合する能力を保有する抗体フラグメント、例えば、１以上のＣＤＲ領域を保有するフラグメントを意味する。抗原結合性フラグメントの例には、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２およびＦｖフラグメントが含まれるが、これらに限定されるものではない。
【００１５】
「Ｆａｂフラグメント」は１個の軽鎖ならびに１個の重鎖のＣＨ１および可変領域から構成される。Ｆａｂ分子の重鎖は別の重鎖分子とはジスルフィド結合を形成し得ない。「Ｆａｂフラグメント」は抗体のパパイン切断の産物でありうる。
【００１６】
「Ｆｃ」領域は、抗体のＣＨ１およびＣＨ２ドメインを含む２個の重鎖フラグメントを含有する。それらの２個の重鎖フラグメントは２以上のジスルフィド結合により、およびＣＨ３ドメインの疎水性相互作用により結合している。
【００１７】
「Ｆａｂ’フラグメント」は１個の軽鎖、ならびにＶＨドメインおよびＣＨ１ドメインを含有する１個の重鎖の部分または断片、そしてまた、ＣＨ１およびＣＨ２ドメイン間の領域を含有し、その結果、２個のＦａｂ’フラグメントの、２個の重鎖間で鎖間ジスルフィド結合が形成されてＦ（ａｂ’）２分子を形成しうる。
【００１８】
「Ｆ（ａｂ’）２フラグメント」は、２個の軽鎖、ならびにＣＨ１およびＣＨ２ドメイン間の定常領域の部分を含有する２個の重鎖を含有し、その結果、それらの２個の重鎖の間で鎖間ジスルフィド結合が形成される。したがって、Ｆ（ａｂ’）２フラグメントは、それらの２個の重鎖の間のジスルフィド結合により連結された２個のＦａｂ’フラグメントから構成される。「Ｆ（ａｂ’）２フラグメント」は抗体のペプシン切断の産物でありうる。
【００１９】
「Ｆｖ領域」は重鎖および軽鎖の両方からの可変領域を含むが、定常領域を欠いている。
【００２０】
本明細書中で用いる「超可変領域」なる語は、抗原結合をもたらす、抗体のアミノ酸残基を意味する。超可変領域は「相補性決定領域」もしくは「ＣＤＲ」［例えば、軽鎖可変ドメインにおける残基２４〜３４（ＣＤＲＬ１）、５０〜５６（ＣＤＲＬ２）および８９〜９７（ＣＤＲＬ３）ならびに重鎖可変ドメインにおける残基３１〜３５（ＣＤＲＨ１）、５０〜６５（ＣＤＲＨ２）および９５〜１０２（ＣＤＲＨ３）（Ｋａｂａｔら（１９９１）Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，５ｔｈ  Ｅｄ．Ｐｕｂｌｉｃ  Ｈｅａｌｔｈ  Ｓｅｒｖｉｃｅ，Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，Ｍｄ．）］からのアミノ酸残基、および／または「超可変ループ」［すなわち、軽鎖可変ドメインにおける残基２６〜３２（Ｌ１）、５０〜５２（Ｌ２）および９１〜９６（Ｌ３）ならびに重鎖可変ドメインにおける２６〜３２（Ｈ１）、５３〜５５（Ｈ２）および９６〜１０１（Ｈ３）（ＣｈｏｔｈｉａおよびＬｅｓｋ（１９８７）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１９６：９０１−９１７）］からのアミノ酸残基を含む。本明細書中で用いる「フレームワーク」または「ＦＲ」残基なる語は、ＣＤＲ残基として本明細書中で定義されている超可変領域残基以外の可変ドメイン残基を意味する。前記の残基の番号付けはＫａｂａｔ（カバト）番号付け系に関するものであり、添付の配列表における配列番号付けに詳細には必ずしも対応していない。
【００２１】
「増殖活性」は、例えば正常な細胞分裂ならびに癌、腫瘍、異形成、細胞トランスフォーメーション、転移および血管新生を促進する、それらに必要である、またはそれらに特異的に関連した活性を含む。
【００２２】
「癌」、「腫瘍」、「癌性」および「悪性」なる語は、無制御な細胞増殖により典型的に特徴づけられる哺乳動物における生理学的状態を意味し又は示す。癌の例には、癌腫、例えば腺癌、リンパ腫、芽細胞腫、黒色腫（メラノーマ）、肉腫および白血病が含まれるが、これらに限定されるものではない。そのような癌のより詳細な例には以下のものが含まれる：扁平上皮癌、小細胞肺癌、非小細胞肺癌、胃腸癌、ホジキンリンパ腫および非ホジキンリンパ腫、膵臓癌、神経膠芽細胞腫、神経膠腫、子宮頸癌、卵巣癌、肝臓癌、例えば肝癌および肝細胞癌、膀胱癌、乳癌、結腸癌、結腸直腸癌、子宮内膜癌、骨髄腫（例えば、多発性骨髄腫）、唾液腺癌、腎臓癌、例えば腎細胞癌およびウィルムス腫瘍、基底細胞癌、黒色腫（メラノーマ）、前立腺癌、外陰部癌、甲状腺癌、精巣癌および食道癌、ならびに種々のタイプの頭頸部癌。
【００２３】
癌細胞が成長し増殖するにつれて、それらは癌組織の塊、すなわち腫瘍を形成し、それは正常隣接組織に浸潤し、該組織を破壊する。悪性腫瘍は癌である。悪性腫瘍は、通常、除去されうるが、それは再び成長しうる。悪性腫瘍からの細胞は近傍組織および器官に浸潤し、それらを損傷しうる。また、癌細胞は悪性腫瘍から離れ、血流またはリンパ系に進入し、このようにして、癌細胞は原発腫瘍（すなわち、元の癌）から広がって、他の器官において新たな腫瘍を形成する。体内の癌の広がりは転移と称される（Ｗｈａｔ  Ｙｏｕ  Ｎｅｅｄ  ｔｏ  Ｋｎｏｗ  Ａｂｏｕｔ  Ｃａｎｃｅｒ−ａｎ  Ｏｖｅｒｖｉｅｗ，ＮＩＨ  Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ  Ｎｏ．００−１５６６；２０００年９月２６日付け発行，２００２年９月１６日付け改訂（２００２））。
【００２４】
本明細書中で用いる「固形腫瘍」なる語は、嚢胞または液体領域を通常は含有しない、組織の異常成長または塊を意味する。固形腫瘍は良性（非癌性）または悪性（癌性）でありうる。種々のタイプの固形腫瘍が、それらを形成する細胞のタイプにちなんで命名されている。固形腫瘍の例としては、肉腫、癌腫およびリンパ腫が挙げられる。白血病（血液の癌）は、一般に、固形腫瘍を形成しない（Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ，Ｄｉｃｔｉｏｎａｒｙ  ｏｆ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｔｅｒｍｓ）。
【００２５】
本明細書中で用いる「癌腫」なる語は、身体の表面を覆いホルモンを産生し腺を形成する細胞である上皮細胞の癌を意味する。癌腫の例としては、皮膚、肺、結腸、胃、乳房、前立腺および甲状腺の癌が挙げられる。
【００２６】
本明細書中で用いる「水性」医薬組成物は、医薬用途に適した組成物であり、この場合、水性担体は注射用滅菌水である。医薬用途に適した組成物は無菌、均質および／または等張性でありうる。ある実施形態においては、本発明の水性医薬組成物はヒト対象への非経口投与に適している。特定の実施形態においては、本発明の水性医薬組成物は静脈内投与および／または皮下投与に適している。
【００２７】
「約」なる語は、物質または組成物の量（例えば、ｍＭまたはＭ）、製剤（処方）成分の百分率（ｖ／ｖまたはｗ／ｖ）、溶液／製剤のｐＨ、あるいは方法における工程を特徴づけるパラメータの値などを修飾している場合には、例えば、該物質または組成物の製造、特徴づけおよび／または使用に伴う典型的な測定、取り扱いおよびサンプリング操作により生じるうる数量における変動；これらの操作における器差により生じうる数量における変動；該組成物を製造または使用するために或いは該操作を行うために使用される成分の製造、起源または純度における差異により生じうる数量における変動などを意味する。ある実施形態においては、「約」は±０．１％、０．５％、１％、２％、３％、４％、５％または１０％の変動を意味しうる。
【００２８】
本明細書中で用いる「ｘ％（ｗ／ｖ）」はｘｇ／１００ｍｌと同等である（例えば、５％  ｗ／ｖは５０ｍｇ／ｍｌと同等である）。
【００２９】
「バッファー」なる語は、凍結乾燥前および／または再構成後に、液体製剤における溶液ｐＨを許容範囲内に維持する物質を含み、限定的なものではないが、スクシナート（ナトリウムまたはカリウム）、ヒスチジン、アセタート、ホスファート（ナトリウムまたはカリウム）、トリス（トリス（ヒドロキシメチル）アミノメタン）、ジエタノールアミン、シトラート（ナトリウム）などを包含しうる。
【００３０】
本明細書中で用いる「共製剤化」または「共製剤」は、一緒に製剤化され単一バイアルまたは容器（例えば、注射装置）において組合せ製品として貯蔵される少なくとも２つの異なる抗体またはその抗原結合性フラグメントに関するものであり、別個に製剤化され貯蔵され、ついで投与前に混合され又は別々に投与されるものではない。１つの実施形態においては、共製剤は２つの異なる抗体またはその抗原結合性フラグメントを含有する。
【００３１】
「グリコール」は、２つのヒドロキシル基を有するアルキルを意味する。
【００３２】
「糖アルコール」は、糖から誘導され、一般式一般式ＨＯＣＨ２（ＣＨＯＨ）ｎＣＨ２ＯＨ（ここで、ｎ＝１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０）を有するポリオールを意味する。具体例には、マンニトール、ソルビトール、エリスリトール、キシリトールおよびグリセロールが含まれるが、これらに限定されるものではない。
【００３３】
本明細書中で用いる「ポリオール」には、グリコールおよび糖アルコールが含まれる。
【００３４】
「凍結乾燥」、「凍結乾燥された」および「凍結乾燥した」なる語は、乾燥される物質が、まず、凍結され、ついで真空環境中で昇華により氷または凍結溶媒が除去されるプロセスを意味する。貯蔵時の凍結乾燥製品の安定性を増強するために、凍結乾燥前の製剤中に賦形剤を含有させることが可能である。
【００３５】
「非還元糖」は、遊離アルデヒド基もしくは遊離ケトン基を含有せず又は含有するように変換され得ないため還元剤として作用することができない糖である。非還元糖の例には、二糖類、例えばスクロースおよびトレハロースが含まれるが、これらに限定されるものではない。
【００３６】
「医薬製剤」なる語は、有効成分が有効となることを可能にするような形態の製剤であって、該製剤が投与される対象に対して毒性である追加的成分を含有しない製剤を意味する。
【００３７】
「薬学的に許容される」賦形剤（ビヒクル、添加剤）は、使用される有効成分の有効量を与えるために対象哺乳動物に合理的に投与されうるものである。
【００３８】
「再構成時間」は、凍結乾燥製剤を溶液で再水和させて粒子非含有清澄化溶液にするのに必要な時間である。
【００３９】
「安定」製剤は、それに含まれるタンパク質が、貯蔵に際して、その物理的安定性および／または化学的安定性および／または生物学的活性を本質的に保持する製剤である。タンパク質の安定性を測定するための種々の分析技術が当技術分野で利用可能であり、Ｐｅｐｔｉｄｅ  ａｎｄ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ，２４７−３０１，Ｖｉｎｃｅｎｔ  Ｌｅｅ編，Ｍａｒｃｅｌ  Ｄｅｋｋｅｒ，Ｉｎｃ．，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，Ｎ．Ｙ．，Ｐｕｂｓ．（１９９１）およびＪｏｎｅｓ，Ａ．Ａｄｖ．Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ  Ｒｅｖ．１０：２９−９０（１９９３）に概説されている。安定性は、選択された温度で、選択された期間にわたって測定されうる。例えば、１つの実施形態においては、安定製剤は、冷蔵温度（２〜８℃）で少なくとも１２ヶ月間、有意な変化が観察されない製剤である。もう１つの実施形態においては、安定製剤は、冷蔵温度（２〜８℃）で少なくとも１８ヶ月間、有意な変化が観察されない製剤である。もう１つの実施形態においては、安定製剤は、室温（２３〜２７℃）で少なくとも３ヶ月間、有意な変化が観察されない製剤である。もう１つの実施形態においては、安定製剤は、室温（２３〜２７℃）で少なくとも６ヶ月間、有意な変化が観察されない製剤である。もう１つの実施形態においては、安定製剤は、室温（２３〜２７℃）で少なくとも１２ヶ月間、有意な変化が観察されない製剤である。もう１つの実施形態においては、安定製剤は、室温（２３〜２７℃）で少なくとも１８ヶ月間、有意な変化が観察されない製剤である。抗体製剤の安定性に関する基準は以下のとおりである。典型的には、ＳＥＣ−ＨＰＬＣにより測定した場合、抗体単量体の１０％以下、好ましくは５％以下しか分解されない。典型的には、製剤は、視覚分析によれば、無色または透明ないし僅かに乳白色である。典型的には、製剤の濃度、ｐＨおよび浸透圧は＋／−１０％以下の変化を示すに過ぎない。効力は、典型的には、対照または参照体の６０〜１４０％、好ましくは８０〜１２０％の範囲内である。典型的には、抗体のクリッピング（ｃｌｉｐｐｉｎｇ）、すなわち、低分子量種の割合は、例えばＨＰ−ＳＥＣによる測定で、１０％以下、好ましくは５％以下しか観察されない。典型的には、抗体の凝集、すなわち、高分子量種の割合は、例えばＨＰ−ＳＥＣによる測定で、１０％以下、好ましくは５％以下しか観察されない。
【００４０】
「界面活性剤」は、本質的に両親媒性である界面活性物質である。
【００４１】
医薬製剤において抗体が「その物理的安定性を保持する」と言えるのは、それが、色および／または透明度の目視検査で、あるいはＵＶ光散乱、サイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）および動的光散乱により測定された場合に、凝集、沈殿および／または変性の有意な増加を示さない場合である。タンパク質のコンホメーションの変化は、タンパク質の三次構造を決定する蛍光分光法、およびタンパク質の二次構造を決定するＦＴＩＲ分光法によって評価されうる。
【００４２】
医薬製剤において抗体が「その化学的安定性を保持する」と言えるのは、それが有意な化学的変化を示さない場合である。化学的安定性は、化学的に変化したタンパク質形態を検出および定量することにより評価されうる。タンパク質の化学構造をしばしば変化させる分解プロセスには、加水分解またはクリッピング（サイズ排除クロマトグラフィーおよびＳＤＳ−ＰＡＧＥのような方法により評価される）、酸化（質量分析またはＭＡＬＤＩ／ＴＯＦ／ＭＳと組合されたペプチドマッピングのような方法により評価される）、脱アミド化（イオン交換クロマトグラフィー、キャピラリー等電点電気泳動、ペプチドマッピング、イソアスパラギン酸測定のような方法により評価される）および異性化（イソアスパラギン酸含量、ペプチドマッピングなどを測定することにより評価される）が含まれる。
【００４３】
医薬製剤において抗体が「その生物活性を保持する」と言えるのは、所定の時間枠における抗体の生物活性が、該製剤の調製時に示された生物活性の所定範囲内にある場合である。抗体の生物活性は、例えば、抗原結合アッセイにより決定されうる。１つの実施形態においては、１２ヶ月以内の安定抗体製剤の生物活性は参照体の６０〜１４０％の範囲内である。
【００４４】
「等張」なる語は、関心のある製剤がヒトの血液と本質的に同じ浸透圧を有することを意味する。等張製剤は、一般に、約２７０〜３２８ｍＯｓｍの浸透圧を有する。僅かに低張の圧力は２５０〜２６９ｍＯｓｍであり、僅かに高張の圧力は３２８〜３５０ｍＯｓｍである。浸透圧は、例えば、蒸気圧または氷結型浸透圧計を使用して測定されうる。
【００４５】
「再構成（された）」製剤は、凍結乾燥タンパク質製剤を希釈剤中に溶解させて該タンパク質を該再構成製剤中に分散させることにより調製された製剤である。再構成製剤は投与（例えば、非経口投与）に適しており、皮下投与に適している場合もありうる。
【００４６】
本明細書中で用いる濃度は、医薬製剤の製造におけるそのような濃度に通常関連する範囲内の近似値として解釈されるべきである。特に、濃度は厳密である必要はないが、ＧＭＰ条件下で製造される薬物に関して通常想定される許容範囲内で、記載濃度と異なりうる。同様に、ｐＨ値は、ＧＭＰ条件下で製造され一般的な貯蔵条件下で貯蔵される薬物に関して通常想定される許容範囲内の近似値である。
【００４７】
ｐＨ値の範囲が例えば「ｐＨ５．０〜６．０のｐＨ」と示されている場合、その範囲は、示されている値を含むと意図される。ｐＨは、典型的には、標準的なガラスバルブｐＨメーターを使用して２５℃で測定される。本明細書中で用いる「ｐＨ  Ｘのヒスチジンバッファー」を含む溶液は、ヒスチジンバッファーを含むｐＨ  Ｘの溶液を意味し、すなわち、ｐＨは溶液のｐＨを意味すると意図される。
【００４８】
分析方法
製品安定性の評価に適した分析方法には、サイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）、動的光散乱試験（ＤＬＳ）、示差走査熱量測定（ＤＳＣ）、イソ（ｉｓｏ）−ａｓｐ定量、効力、３５０ｎｍのＵＶ、ＵＶ分光法およびＦＴＩＲが含まれる。ＳＥＣ（Ｊ．Ｐｈａｒｍ．Ｓｃｉｅｎ．，８３：１６４５−１６５０，（１９９４）；Ｐｈａｒｍ．Ｒｅｓ．，１１：４８５（１９９４）；Ｊ．Ｐｈａｒｍ．Ｂｉｏ．Ａｎａｌ．，１５：１９２８（１９９７）；Ｊ．Ｐｈａｒｍ．Ｂｉｏ．Ａｎａｌ．，１４：１１３３−１１４０（１９８６））は製品中の単量体の割合を測定し、可溶性凝集物の量の情報を提供する。ＤＳＣ（Ｐｈａｒｍ．Ｒｅｓ．，１５：２００（１９９８）；Ｐｈａｒｍ．Ｒｅｓ．，９：１０９（１９８２））はタンパク質変性温度およびガラス転移温度の情報を提供する。ＤＬＳ（Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｌａｂ，Ｎｏｖｅｍｂｅｒ（１９９１））は平均拡散係数を測定し、可溶性凝集物および不溶性凝集物の量に関する情報を提供する。３４０ｎｍのＵＶは３４０ｎｍの散乱光強度を測定し、可溶性凝集物および不溶性凝集物の量に関する情報を提供する。ＵＶ分光法は２７８ｎｍの吸光度を測定し、タンパク質濃度の情報を提供する。ＦＴＩＲ（Ｅｕｒ．Ｊ．Ｐｈａｒｍ．Ｂｉｏｐｈａｒｍ．，４５：２３１（１９９８）；Ｐｈａｒｍ．Ｒｅｓ．，１２：１２５０（１９９５）；Ｊ．Ｐｈａｒｍ．Ｓｃｉｅｎ．，８５：１２９０（１９９６）；Ｊ．Ｐｈａｒｍ．Ｓｃｉｅｎ．，８７：１０６９（１９９８））はアミド１領域のＩＲスペクトルを測定し、タンパク質の二次構造の情報を提供する。
【００４９】
サンプルにおけるイソ−ａｓｐ含有量は、イソクワントイソアスパルタート検出系（Ｉｓｏｑｕａｎｔ  Ｉｓｏａｓｐａｒｔａｔｅ  Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ  Ｓｙｓｔｅｍ）（Ｐｒｏｍｅｇａ）を使用して測定される。このキットは、酵素タンパク質イソアスパルチルメチルトランスフェラーゼ（ＰＩＭＴ）を使用して、標的タンパク質中のイソアスパラギン酸残基の存在を特異的に検出する。ＰＩＭＴはアルファ−カルボキシル位におけるＳ−アデノシル−Ｌ−メチオニンからイソアスパラギン酸へのメチル基の転移を触媒して、その過程でＳ−アデノシル−Ｌ−ホモシステイン（ＳＡＨ）を生成する。これは比較的小さな分子であり、通常は、キットで提供されるＳＡＨ  ＨＰＬＣ標準を使用する逆相ＨＰＬＣにより単離および定量されうる。
【００５０】
抗体の効力または生体同一性は、その抗原に結合するその能力により測定されうる。抗体のその抗原への特異的結合は、当業者に公知の任意の方法、例えばＥＬＩＳＡ（酵素結合免疫吸着検定法）のようなイムノアッセイにより定量されうる。
【００５１】
抗ＬＡＧ３抗体
ＣＤＲ残基は、異なる抗体間で高可変性であり、ヒト生殖系列配列（完全ヒト抗体の場合）または非ヒト（例えば、げっ歯類）生殖系列配列に由来しうる。フレームワーク領域も抗体ごとに有意に異なりうる。定常領域は、選択された抗体がラムダ（λ）軽鎖を有するかカッパ（κ）軽鎖を有するかに応じて、および抗体のクラス（またはアイソタイプ）（ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧまたはＩｇＭ）およびサブクラス（例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４）に応じて異なる。
【００５２】
後記に例示されているＬＡＧ３抗体は、非ヒト（この場合はマウス）生殖系列配列またはヒト生殖系列配列に由来するＣＤＲ配列を有する。生殖系列配列は、体細胞超変異に由来する変化は別として、抗体のＣＤＲ配列が由来する配列レパートリーを含み、結果として、マウス生殖系列から得られるＣＤＲは、ヒト生殖系列からのものとは系統的に異なると予想されるであろう。ヒト生殖系列由来のＣＤＲ配列は、他の種に由来するものより低い免疫原性をヒトにおいて示すということに基づいて、ヒト生殖系列配列の使用がしばしば正当化される。これは、ＣＤＲがその起源種によって系統的に異なるという根本的な考えを反映したものである。ＣＤＲの多様性の増加は、高いアフィニティのような所望の特性を有する抗体を見出す可能性を高めるが、それは、得られる抗体の安定溶液製剤の開発の難度を更に高める。
【００５３】
同じ抗原に結合する抗体でさえ、配列において劇的に異なる可能性があり、完全に異なる抗原に対する抗体より、配列において密接に関連しているとは必ずしも言えない。低い配列類似性に基づけば、抗体の化学的特性およびそれによるその分解感受性は、それらの標的が同じだからといって、類似していると推定することはできない。
【００５４】
前記のとおり、抗体は大きな非常に複雑なポリペプチド複合体であり、溶液中で種々の形態の分解および不安定性にさらされる。抗体の配列の多様性、したがって抗体の構造の多様性は、広範な化学的特性をもたらす。抗原結合特異性における明らかな配列特異的差異とは別に、抗体は種々の分解経路、凝集および沈殿に対する種々の感受性を示す。アミノ酸側鎖は、カルボキシ基（Ｄ、Ｅ）、アミノ基（Ｋ）、アミド基（Ｎ、Ｑ）、ヒドロキシル基（Ｓ、Ｔ、Ｙ）、スルフヒドリル基（Ｃ）、チオエーテル（Ｍ）基のような反応性基、ならびにヒスチジン、フェニルアラニンおよびプロリン残基上の潜在的に化学的に反応性である部位の存在または非存在において異なる。抗原結合相互作用に直接関与するアミノ酸側鎖は側鎖修飾による不活性化のための明らかな候補であるが、他の位置における分解も、ＣＤＲの立体的配向（例えば、フレームワーク残基の変化）、エフェクター機能（例えば、Ｆｃ領域の変化；例えば、Ｌｉｕら，（２００８）Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ４７：５０８８を参照されたい）および自己会合／凝集のような要因に影響を及ぼしうる。
【００５５】
抗体は多数の潜在的分解経路の影響を受ける。抗体における、特にＣＤＲにおけるメチオニオン残基の酸化は、それが抗原結合を損なう場合には問題となりうる。Ｐｒｅｓｔａ（２００５）Ｊ．Ａｌｌｅｒｇｙ  Ｃｌｉｎ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１１６：７３１；Ｌａｍら，（１９９７）Ｊ．Ｐｈａｒｍ．Ｓｃｉ．８６：１２５０。他の潜在的分解経路には、アスパラギン脱アミド化（Ｈａｒｒｉｓら（２００１）Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒ．，Ｂ  ７５２：２３３；Ｖｌａｓａｋら（２００９）Ａｎａｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．３９２：１４５）、トリプトファン酸化（Ｗｅｉら（２００７）Ａｎａｌ．Ｃｈｅｍ．７９：２７９７）、システイニル化（Ｂａｎｋｓら（２００８）Ｊ．Ｐｈａｒｍ．Ｓｃｉ．９７：７７５）、グリケーション（Ｂｒａｄｙら（２００７）Ａｎａｌ．Ｃｈｅｍ．７９：９４０３）、ピログルタマート形成（Ｙｕら（２００６）Ｊ．Ｐｈａｒｍ．Ｂｉｏｍｅｄ．Ａｎａｌ．４２：４５５）、ジスルフィドシャッフリング（Ｌｉｕら（２００８）Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２８３：２９２６６）および加水分解（Ｄａｖａｇｎｉｎｏら（１９９５）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ  １８５：１７７）が含まれる。ＩｏｎｅｓｃｕおよびＶｌａｓａｋ（２０１０）Ａｎａｌ．Ｃｈｅｍ．８２：３１９８において考察されている。Ｌｉｕら（２００８）Ｊ．Ｐｈａｒｍ．Ｓｃｉ．９７：２４２６も参照されたい。幾つかの潜在的分解経路は、特定のアミノ酸残基の存在だけでなく、周囲の配列にも左右される。脱アミド化およびイソアスパラギン酸形成は、ＮまたはＤ残基に続く（該残基のＣ末端側の）ペプチド結合の自発的分子内再配列から生じることがあり、Ｎ−ＧおよびＤ−Ｇ配列が特に影響を受けやすい。ＲｅｉｓｓｎｅｒおよびＡｓｗａｄ（２００３）ＣＭＬＳ  Ｃｅｌｌ．Ｍｏｌ．Ｌｉｆｅ  Ｓｃｉ．６０：１２８１。
【００５６】
また、抗体は貯蔵中に配列依存的非酵素的断片化を受ける。ＶｌａｓａｋおよびＩｏｎｅｓｃｕ（２０１１）ｍＡｂｓ  ３：２５３。Ｄ、Ｇ、Ｓ、Ｔ、ＣまたはＮのような反応性側鎖の存在は、ポリペプチド骨格を切断する分子内切断反応を引き起こしうる。そのような配列特異的加水分解反応は典型的にはｐＨ依存的である（前掲誌）。また、例えば、ＣＤＲが多数の疎水性残基を含む場合、抗体は配列依存的凝集を受けうる。Ｐｅｒｃｈｉａｃｃａら（２０１２）Ｐｒｏｔ．Ｅｎｇ．Ｄｅｓ．Ｓｅｌｅｃｔｉｏｎ  ２５：５９１。皮下投与のために高濃度で製剤化される必要がある抗体の場合、凝集は特に問題であり、溶解度を増加させるために荷電残基を付加することにより抗体配列を修飾することさえある（前掲誌）。
【００５７】
抗体の潜在的な配列特異的安定性の問題の多様性を反映して、潜在的な抗体製剤も多様である。抗体の配列可変性は、生じる抗体の化学的不均一性をもたらし、これは広範な潜在的分解経路につながる。製剤は、例えば、抗体濃度、バッファー、ｐＨ、界面活性剤の存在または非存在、等張化剤（イオン性または非イオン性）の存在または非存在、分子クラウディング物質の存在または非存在において様々でありうる。商業的に入手可能な治療用抗体は、リン酸バッファー（例えば、アダリムマブ）、リン酸／グリシンバッファー（例えば、バシリクスマブ）、トリスバッファー（例えば、イピリムマブ）、ヒスチジン（例えば、ウステキヌマブ）、クエン酸ナトリウム（例えば、リツキシマブ）中の、およびｐＨ４．７（例えば、セルトリズマブ）およびｐＨ５．２（例えば、アダリムマブ）からｐＨ７．０〜７．４（例えば、セツキシマブ）までの広範な溶液製剤で販売されている。それらはまた、０．００１％（例えば、アブシキシマブ）〜０．１％（例えば、アダリムマブ）の範囲の、ポリソルベート８０の存在下および非存在下の、エデト酸二ナトリウム（例えば、アレムツズマブ）、マンニトール（例えば、イピリムマブなど）、ソルビトール（例えば、ゴリムマブなど）、スクロース（例えば、ウステキヌマブ）、塩化ナトリウム（例えば、リツキシマブなど）、塩化カリウム（例えば、アレムツズマブ）およびトレハロース（例えば、ラニビズマブ）を所望により含有しうる製剤で入手可能である。
【００５８】
ヒト化抗ＬＡＧ３および抗ＰＤ−１抗体の生物活性
本発明の製剤は抗ＬＡＧ３抗体およびそのフラグメントを含み、そして所望により、抗ＰＤ１抗体およびそのフラグメントを含んでいてもよく、それらは、再構成された場合または液体製剤において生物学的に活性である。
【００５９】
典型的な抗ＬＡＧ３抗体を以下に示す（ＷＯ  ２０１６／０２８６７２；その全体を参照により本明細書に組み入れることとする）。
【化１】
2020518587.tif 000003
2020518587.tif 000004
2020518587.tif 000005
2020518587.tif 000006
2020518587.tif 000007
2020518587.tif 000008
2020518587.tif 000009
2020518587.tif 000010
2020518587.tif 000011
2020518587.tif 000012
2020518587.tif 000013
2020518587.tif 000014
2020518587.tif 000015
2020518587.tif 000016
2020518587.tif 000017
【００６０】
本発明は、配列番号３５の配列を有する２つの同一軽鎖と配列番号３６、４５、４８、５１、５４、５７、６０、６３または６６の配列を有する２つの同一重鎖とを含む抗ＬＡＧ３抗体の製剤を提供する。本発明はまた、配列番号３５の配列を有する２つの同一軽鎖と配列番号５７の配列を有する２つの同一重鎖とを含む抗ＬＡＧ３抗体の製剤を提供する。
【００６１】
本発明は、配列番号３７の軽鎖可変領域配列と配列番号３８、４６、４９、５２、５５、５８、６１、６４または６７の重鎖可変領域配列とを含む抗ＬＡＧ３抗体または抗原結合性フラグメントの製剤を提供する。本発明はまた、配列番号３７の軽鎖可変領域配列と配列番号５８の重鎖可変領域配列とを含む抗ＬＡＧ３抗体または抗原結合性フラグメントの製剤を提供する。本発明はまた、配列番号３９の軽鎖可変領域ＣＤＲＬ１配列、配列番号４０のＣＤＲＬ２配列、配列番号４１のＣＤＲＬ３配列と、配列番号４２の重鎖可変領域ＣＤＲＨ１配列、配列番号４３、４７、５０、５３、５６、５９、６２、６５または６８のＣＤＲＨ２配列および配列番号４４のＣＤＲＨ３配列とを含む抗ＬＡＧ３抗体または抗原結合性フラグメントの製剤を提供する。本発明はまた、配列番号３９の軽鎖可変領域ＣＤＲＬ１配列、配列番号４０のＣＤＲＬ２配列、配列番号４１のＣＤＲＬ３配列と、配列番号４２の重鎖可変領域ＣＤＲＨ１配列、配列番号５９のＣＤＲＨ２配列および配列番号４４のＣＤＲＨ３配列とを含む抗ＬＡＧ３抗体または抗原結合性フラグメントの製剤を提供する。
【００６２】
製剤に配合されうる他の抗ＬＡＧ３抗体には、ＷＯ２０１４００８２１８に開示されているＢＭＳ−９８６０１６、ＩＭＰ７３１およびＩＭＰ７０１が含まれる。したがって、本発明は、配列番号６９の軽鎖可変領域配列と配列番号７０の重鎖可変領域配列とを含む抗ＬＡＧ３抗体または抗原結合性フラグメントの製剤を提供する。本発明はまた、配列番号７１の軽鎖可変領域ＣＤＲＬ１配列、配列番号７２のＣＤＲＬ２配列、配列番号７３のＣＤＲＬ３配列と、配列番号７４の重鎖可変領域ＣＤＲＨ１配列、配列番号７５のＣＤＲＨ２配列および配列番号７６のＣＤＲＨ３配列とを含む抗ＬＡＧ３抗体または抗原結合性フラグメントの製剤を提供する。
【００６３】
製剤は、以下に例示されている抗ＰＤ−１抗体または抗原結合性フラグメントを更に含みうる。
【表１】
2020518587.tif 000018
2020518587.tif 000019
【表２】
2020518587.tif 000020
【００６４】
本発明のもう１つの態様においては、製剤は、配列番号３７の軽鎖可変領域配列および配列番号５８の重鎖可変領域配列を含む抗ＬＡＧ３抗体または抗原結合性フラグメントと、配列番号４の軽鎖可変領域配列および配列番号９の重鎖可変領域配列を含む抗ＰＤ−１抗体または抗原結合性フラグメントとを含む。もう１つの実施形態においては、製剤は、配列番号３５の軽鎖配列および配列番号５７の重鎖配列を含む抗ＬＡＧ３抗体と、配列番号５の軽鎖配列および配列番号１０の重鎖配列を含む抗ＰＤ−１抗体とを含む。本発明はまた、配列番号３９の軽鎖ＣＤＲＬ１配列、配列番号４０のＣＤＲＬ２配列および配列番号４１のＣＤＲＬ３配列ならびに配列番号４２の重鎖ＣＤＲＨ１配列、配列番号５９のＣＤＲＨ２配列および配列番号４４のＣＤＲＨ３配列を含む抗ＬＡＧ３抗体またはその抗原結合性フラグメントと、配列番号１の軽鎖ＣＤＲＬ１配列、配列番号２のＣＤＲＬ２配列、配列番号３のＣＤＲＬ３配列ならびに配列番号６の重鎖ＣＤＲＨ１配列、配列番号７のＣＤＲＨ２配列および配列番号８のＣＤＲＨ３配列を含む抗ＰＤ−１抗体との製剤を提供する。１つの実施形態においては、製剤における抗ＬＡＧ３抗体と抗ＰＤ−１抗体との比は１：１、１：２または１：３である。もう１つの実施形態においては、製剤における抗ＬＡＧ３抗体と抗ＰＤ−１抗体とのモル比は１：１、２：１、３：１または３．５：１である。
【００６５】
本発明のもう１つの態様においては、製剤は、配列番号６９の軽鎖可変領域配列および配列番号７０の重鎖可変領域配列を含む抗ＬＡＧ３抗体または抗原結合性フラグメントと、配列番号１４の軽鎖可変領域配列および配列番号１９の重鎖可変領域配列を含む抗ＰＤ−１抗体または抗原結合性フラグメントとを含む。本発明はまた、配列番号７１の軽鎖可変領域ＣＤＲＬ１配列、配列番号７２のＣＤＲＬ２配列、配列番号７３のＣＤＲＬ３配列ならびに配列番号７４の重鎖可変領域ＣＤＲＨ１配列、配列番号７５のＣＤＲＨ２配列および配列番号７６のＣＤＲＨ３配列を含む抗ＬＡＧ３抗体または抗原結合性フラグメントと、配列番号１１の軽鎖可変領域ＣＤＲＬ１配列、配列番号１２のＣＤＲＬ２配列、配列番号１３のＣＤＲＬ３配列ならびに配列番号１６４の重鎖可変領域ＣＤＲＨ１配列、配列番号１７のＣＤＲＨ２配列および配列番号１８のＣＤＲＨ３配列を含む抗ＰＤ−１抗体または抗原結合性フラグメントとの製剤を提供する。
【００６６】
製剤の抗体または抗原結合性フラグメントは軽鎖可変領域および重鎖可変領域を含みうる。幾つかの実施形態においては、軽鎖可変領域は配列番号４または配列番号４の変異体を含み、重鎖可変領域は配列番号９または配列番号９の変異体を含む。他の実施形態においては、軽鎖可変領域は配列番号１４または配列番号１４の変異体を含み、重鎖可変領域は配列番号１９または配列番号１９の変異体を含む。他の実施形態においては、重鎖可変領域は配列番号２７または配列番号２７の変異体を含み、軽鎖可変領域は配列番号２８または配列番号２８の変異体、配列番号２９または配列番号２９の変異体、あるいは配列番号３０または配列番号３０の変異体を含む。そのような実施形態においては、変異体軽鎖または重鎖可変領域配列は、１、２、３、４または５個のアミノ酸置換を有すること以外は参照配列と同一である。幾つかの実施形態においては、該置換はフレームワーク領域内（すなわち、ＣＤＲの外部）に存在する。幾つかの実施形態においては、アミノ酸置換の１、２、３、４または５個は保存的置換である。
【００６７】
もう１つの実施形態においては、本発明の製剤は、前記のＶＬドメインまたはＶＨドメインの１つに対して少なくとも９５％、９０％、８５％、８０％、７５％または５０％の配列相同性を有するＶＬドメインおよび／またはＶＨドメインを有する、ＰＤ−１またはＬＡＧ３への特異的結合を示す抗体または抗原結合性フラグメントを含む。もう１つの実施形態においては、本発明の製剤の抗体または抗原結合性フラグメントは最大１、２、３、４または５個以上のアミノ酸置換を有するＶＬおよびＶＨドメインを含み、ＰＤ−１またはＬＡＧ３への特異的結合を示す。
【００６８】
本発明の幾つかの実施形態においては、抗体は、配列番号５に記載されているアミノ酸残基の配列を含む又はそれからなる軽鎖と、配列番号１０に記載されているアミノ酸残基の配列を含む又はそれからなる重鎖とを含む抗ＰＤ−１抗体である。他の実施形態においては、抗体は、配列番号１５に記載されているアミノ酸残基の配列を含む又はそれからなる軽鎖と、配列番号２０に記載されているアミノ酸残基の配列を含む又はそれからなる重鎖とを含む抗ＰＤ−１抗体である。他の実施形態においては、抗体は、配列番号３２に記載されているアミノ酸残基の配列を含む又はそれからなる軽鎖と、配列番号３１に記載されているアミノ酸残基の配列を含む又はそれからなる重鎖とを含む抗ＰＤ−１抗体である。追加的な実施形態においては、抗体は、配列番号３３に記載されているアミノ酸残基の配列を含む又はそれからなる軽鎖と、配列番号３１に記載されているアミノ酸残基の配列を含む又はそれからなる重鎖とを含む抗ＰＤ−１抗体である。更に追加的な実施形態においては、抗体は、配列番号３４に記載されているアミノ酸残基の配列を含む又はそれからなる軽鎖と、配列番号３１に記載されているアミノ酸残基の配列を含む又はそれからなる重鎖とを含む抗ＰＤ−１抗体である。本発明の幾つかの製剤においては、抗体はペンブロリズマブまたはペンブロリズマブのバイオシミラーである。本発明の幾つかの製剤においては、抗体はニボルマブまたはニボルマブのバイオシミラーである。
【００６９】
通常、本発明の抗ＰＤ−１抗体または抗ＬＡＧ３抗体および抗原結合性フラグメントのアミノ酸配列変異体は、参照抗体または抗原結合性フラグメント（例えば、重鎖、軽鎖、ＶＨ、ＶＬ、フレームワークまたはヒト化配列）のアミノ酸配列に対して少なくとも７５％、より好ましくは少なくとも８０％、より好ましくは少なくとも８５％、より好ましくは少なくとも９０％、最も好ましくは少なくとも９５、９８または９９％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を有する。配列に関する同一性または相同性は、本明細書においては、配列を整列（アライメント）させ、配列同一性の一部としていずれの保存的置換をも考慮せずに、必要に応じてギャップを導入して、最大の配列同一性の割合を得た後で抗ＰＤ−１または抗ＬＡＧ３残基と同一である候補配列におけるアミノ酸残基の百分率として定義される。抗体配列へのＮ末端、Ｃ末端または内部の伸長、欠失もしくは挿入はいずれも、配列の同一性または相同性に影響を及ぼすと解釈されるものではない。
【００７０】
製剤
本発明の幾つかの態様においては、本発明の製剤は抗体凝集体（高分子量種）および微粒子の形成を最小限に抑え、コロイド安定性を改善し、断片化（低分子量種）を最小限に抑え、または抗体がその生物活性を長期間維持することを保証する。１つの態様においては、製剤は、約５〜３００ｍｇ／ｍＬの抗ＬＡＧ３抗体またはその抗原結合性フラグメント、１０〜１０００ｍＭの総濃度の、ヒスチジン、アスパルタート、グルタミン、グリシン、プロリン、メチオニン、アルギニンまたはその薬学的に許容される塩、ＮａＣｌ、ＫＣｌ、ＬｉＣｌ、ＣａＣｌ２、ＭｇＣｌ２、ＺｎＣｌ２およびＦｅＣｌ２からなる群から選択される１以上の賦形剤、ならびにｐＨ約５〜８のバッファーを含む。もう１つの態様においては、製剤は、配列番号３９のＣＤＲＬ１、配列番号４０のＣＤＲＬ２、配列番号４１のＣＤＲＬ３、配列番号４２のＣＤＲＨ１、配列番号５９のＣＤＲＨ２、配列番号４４のＣＤＲＨ３を含む約１０〜２５０ｍｇ／ｍＬの抗ＬＡＧ３抗体またはその抗原結合性フラグメントを含む。１つの実施形態においては、ヒスチジン、アスパルタート、グルタミン、グリシン、プロリン、メチオニン、アルギニンまたはその薬学的に許容される塩、ＮａＣｌ、ＫＣｌ、ＬｉＣｌ、ＣａＣｌ２、ＭｇＣｌ２、ＺｎＣｌ２およびＦｅＣｌ２からなる群から選択される賦形剤の１以上は２５〜２５０ｍＭの総濃度で存在する。もう１つの実施形態においては、ヒスチジン、アスパルタート、グルタミン、グリシン、プロリン、メチオニン、アルギニンまたはその薬学的に許容される塩、ＮａＣｌ、ＫＣｌ、ＬｉＣｌ、ＣａＣｌ２、ＭｇＣｌ２、ＺｎＣｌ２およびＦｅＣｌ２からなる群から選択される賦形剤の１以上は４０〜２５０ｍＭの総濃度で存在する。
【００７１】
１つの態様においては、賦形剤は１５〜２５０ｍＭの濃度のアルギニンまたはその薬学的に許容される塩である。１つの態様においては、賦形剤は２５〜２５０ｍＭの濃度のアルギニンまたはその薬学的に許容される塩である。別の実施形態においては、賦形剤は、４０〜１５０ｍＭの濃度のアルギニンまたは薬学的に許容されるその塩である。もう１つの実施形態においては、賦形剤は４０〜１００ｍＭの濃度のアルギニンまたはその薬学的に許容される塩である。もう１つの実施形態においては、賦形剤は４０〜１００ｍＭの濃度のアルギニンまたは薬学的に許容されるその塩である。もう１つの実施形態においては、賦形剤は７０ｍＭの濃度のＬ−アルギニンまたはその薬学的に許容される塩である。もう１つの実施形態においては、賦形剤は７０〜１５０ｍＭの濃度のアルギニンまたはその薬学的に許容される塩である。アルギニン（ＬまたはＤ型）の薬学的に許容される塩の例には、Ｌ−アルギニン塩酸塩およびＬ−アルギニンコハク酸塩が含まれるが、これらに限定されるものではない。前記の実施形態の他の態様においては、製剤は、非イオン性界面活性剤、糖もしくはポリオール、またはグルタミン、グリシン、プロリンもしくはメチオニンを更に含む。
【００７２】
もう１つの態様においては、賦形剤はＮａＣｌとアルギニンまたはその薬学的に許容される塩との組合せであり、総濃度は２５〜２５０ｍＭである。もう１つの実施形態においては、賦形剤はＮａＣｌとアルギニンまたはその薬学的に許容される塩との組合せであり、総濃度は７０〜１００ｍＭである。１つの実施形態においては、ＮａＣｌとアルギニンとの濃度比は１：１である。もう１つの実施形態においては、ＮａＣｌ濃度は３５ｍＭであり、アルギニン濃度は３５ｍＭである。もう１つの実施形態においては、ＮａＣｌ濃度は５０ｍＭであり、アルギニン濃度は５０ｍＭである。
【００７３】
もう１つの態様においては、賦形剤は約４０〜１５０ｍＭのＮａＣｌ、ＫＣｌまたはＬｉＣｌである。もう１つの実施形態においては、賦形剤は約４０〜１００ｍＭのＮａＣｌ、ＫＣｌまたはＬｉＣｌである。もう１つの実施形態においては、賦形剤は約７０〜１３０ｍＭのＮａＣｌ、ＫＣｌまたはＬｉＣｌである。もう１つの実施形態においては、賦形剤は約７０〜１００ｍＭのＮａＣｌ、ＫＣｌまたはＬｉＣｌである。もう１つの実施形態においては、賦形剤は約７０ｍＭのＮａＣｌである。前記実施形態の他の態様においては、製剤は非イオン性界面活性剤を更に含む。
【００７４】
もう１つの態様においては、賦形剤は約２５〜２００ｍＭのＬ−ヒスチジンである。もう１つの実施形態においては、Ｌ−ヒスチジンは約５０〜２００ｍＭで存在する。更にもう１つの実施形態においては、Ｌ−ヒスチジンは約４０〜１００ｍＭで存在する。
【００７５】
もう１つの態様においては、賦形剤は約２５〜２００ｍＭのＬ−グルタミン、Ｌ−グリシン、Ｌ−プロリンもしくはＬ−メチオニンまたはそれらの組合せである。もう１つの実施形態においては、賦形剤は約５０〜２００ｍＭで存在する。更にもう１つの実施形態においては、賦形剤は約４０〜１００ｍＭで存在する。更にもう１つの実施形態においては、賦形剤は約７０ｍＭで存在する。
【００７６】
１つの実施形態においては、賦形剤は約２５〜２００ｍＭのＬ−グルタミン、Ｌ−グリシン、Ｌ−アスパルタートまたはそれらの組合せである。もう１つの実施形態においては、賦形剤は約２０〜５０ｍＭで存在する。もう１つの実施形態においては、賦形剤は約２０ｍＭで存在する。更にもう１つの実施形態においては、賦形剤は約４０〜１００ｍＭで存在する。更にもう１つの実施形態においては、賦形剤は約７０ｍＭで存在する。もう１つの実施形態においては、賦形剤は２０ｍＭ  Ｌ−アスパラギン酸および５０ｍＭ  Ｌ−グリシンである。もう１つの実施形態においては、賦形剤は２０ｍＭ  Ｌ−グルタミンおよび５０ｍＭ  Ｌ−グリシンである。
【００７７】
１つの実施形態においては、組成物は、中性または僅かに酸性のｐＨ（ｐＨ５〜８）を有するバッファー中の抗ＬＡＧ３抗体または抗原結合性フラグメントおよびアルギニンまたはその薬学的に許容可能な塩を含有する薬学的に許容される製剤である。１つの実施形態においては、ｐＨ約５．５〜６．５のバッファーが組成物中で使用される。もう１つの実施形態においては、ｐＨ約５．５〜６．０のバッファーが組成物中で使用される。もう１つの実施形態においては、約５．０〜６．０のｐＨのバッファーが組成物中で使用される。バッファーの５〜１０００ｍＭの濃度を有しうる。もう１つの実施形態においては、バッファーは５〜１５０ｍＭの濃度を有しうる。もう１つの実施形態においては、バッファーは５〜３００ｍＭの濃度を有しうる。もう１つの実施形態においては、バッファーは約１〜３００ｍＭの濃度を有する。もう１つの実施形態においては、バッファーは１〜３０ｍＭの濃度を有しうる。更にもう１つの実施形態においては、バッファーは５〜３０ｍＭの濃度を有しうる。更にもう１つの実施形態においては、バッファーは５〜２０ｍＭの濃度を有しうる。１つの実施形態においては、バッファーはヒスチジン、アセタートまたはシトラートである。好ましいバッファーは、約１０ｍＭのヒスチジン、アセタートまたはシトラートを含有する。
【００７８】
１つの実施形態においては、製剤は抗ＬＡＧ３抗体またはその抗原結合性フラグメント、糖またはポリオール、非イオン性界面活性剤、ｐＨ約５〜８のヒスチジンバッファーまたはアセタートバッファー（酢酸バッファー）、１０〜１０００ｍＭのアルギニンまたはその薬学的に許容される塩を含み、そして所望により、メチオニン（ＬまたはＤ型）、ＥＤＴＡ、ＤＴＰＡ、トリプトファン（ＬまたはＤ型）またはピリドキシンを含んでいてもよい。もう１つの実施形態においては、製剤は約１０〜３００ｍｇ／ｍＬの抗ＬＡＧ３抗体またはその抗原結合性フラグメント、糖またはポリオール、非イオン性界面活性剤、ｐＨ約５〜８の５０〜５００ｍＭ  ヒスチジンバッファー、１０〜１０００ｍＭの一価カチオン塩であってＮａＣｌ、ＫＣｌおよびＬｉＣｌから選択されるもの、または多価カチオン塩であってＣａＣｌ２、ＭｇＣｌ２、ＺｎＣｌ２、ＦｅＣｌ２およびＦｅＣｌ３から選択されるものを含み、そして所望により、１０〜１０００ｍＭのアルギニンまたはその薬学的に許容される塩を含んでいてもよく、そして所望により、メチオニン（ＤまたはＬ型）、ＥＤＴＡ、ＤＴＰＡ、トリプトファンおよびピリドキシンを含んでいてもよい。
【００７９】
製剤は１〜１００μＭ、１〜３０μＭ、１〜２０μＭ、１０μＭ〜３０μＭ  ＤＴＰＡまたはＥＤＴＡを含んでいてもよい。製剤はまた、１〜３０ｍＭ  Ｌ−メチオニンを含んでいてもよい。１つの実施形態においては、製剤はまた、１〜２０ｍＭ  Ｌ−メチオニンを含んでいてもよい。製剤はまた、５〜１５ｍＭ  Ｌ−メチオニンを含んでいてもよい。製剤はまた、５〜１０ｍＭ  Ｌ−メチオニンを含んでいてもよい。製剤はまた、１０ｍＭ、または少なくとも１０ｍＭのＬ−メチオニンを含んでいてもよい。時には、酸化に対して抗体を安定化させるために、製造工程中および／またはバイアル閉鎖前に、窒素オーバーレイ（ｏｖｅｒｌａｙ）（窒素オーバーレイで、例えば、僅か５％または１０％の残留Ｏ２を覆う）が用いられる。
【００８０】
本発明のもう１つの態様においては、製剤は、糖、ポリオールまたは非イオン性界面活性剤またはそれらの組合せを更に含む。１つの実施形態においては、糖は、グルコース、スクロース、トレハロースおよびラクトースまたはそれらの組合せからなる群から選択される。１つの実施形態においては、糖は、スクロース、トレハロースおよびマルトースのような二糖である。１つの実施形態においては、糖は非還元糖である。もう１つの実施形態においては、糖は非還元二糖、例えばスクロースまたはトレハロースまたはそれらの組合せである。１つの実施形態においては、糖は１０〜２００ｍｇ／ｍｌの濃度で存在する。もう１つの実施形態においては、糖は３０〜１２０ｍｇ／ｍｌの濃度で存在する。もう１つの実施形態においては、糖は５０〜９０ｍｇ／ｍｌの濃度で存在する。
【００８１】
１つの実施形態においては、ポリオールは、マンニトール、ソルビトール、グリセロールおよびポリエチレングリコールからなる群から選択される。もう１つの実施形態においては、ポリオールは糖アルコールである。１つの実施形態においては、糖およびポリオールは、スクロース、トレハロース、ソルビトール、グリセロールおよびポリエチレングリコールからなる群から選択される。もう１つの実施形態においては、ポリオールはグリコールである。１つの実施形態においては、グリコールは、エチレングリコール、プロピレングリコールおよびポリエチレングリコールからなる群から選択される。１つの実施形態においては、ポリオールは１０〜２００ｍｇ／ｍｌの濃度で存在する。もう１つの実施形態においては、ポリオールは１０〜５０ｍｇ／ｍｌの濃度で存在する。もう１つの実施形態においては、ポリオールは５〜３０ｍｇ／ｍｌの濃度で存在する。
【００８２】
１つの実施形態においては、製剤は約１０〜２５０ｍｇ／ｍｌのスクロースまたはトレハロースを含む。もう１つの実施形態においては、製剤は約２０〜２００ｍｇ／ｍｌのスクロースまたはトレハロースを含む。さもう１つの実施形態においては、製剤は約５０〜８０ｍｇ／ｍｌのスクロースまたはトレハロースを含む。もう１つの実施形態においては、製剤は約５０〜９０ｍｇ／ｍｌのスクロースまたはトレハロースを含む。更にもう１つの実施形態においては、製剤は約７０〜８０ｍｇ／ｍｌのスクロースまたはトレハロースを含む。更にもう１つの実施形態においては、製剤は少なくとも約５０ｍｇ／ｍｌのスクロースまたはトレハロースを含む。もう１つの実施形態においては、製剤は約２０〜２００ｍｇ／ｍｌのソルビトール、ＰＥＧ４００またはグリセロールを含む。もう１つの実施形態においては、製剤は約２０〜５０ｍｇ／ｍｌのソルビトール、ＰＥＧ４００またはグリセロールを含む。
【００８３】
１つの実施形態においては、非イオン性界面活性剤は、ポリソルベートおよびポロキサマーからなる群から選択される。更にもう１つの実施形態においては、界面活性剤は、Ｔｗｅｅｎ８０（登録商標）（ポリソルベート８０）、Ｔｗｅｅｎ２０（登録商標）（ポリソルベート２０）、ＰｌｕｒｏｎｉｃＦ８８（登録商標）、Ｐｌｕｏｒｏｎｉｃ  Ｆ−１２７（登録商標）、ＰｌｕｒｏｎｉｃＦ６８（登録商標）、Ｔｒｉｔｏｎ  Ｘ−１００（登録商標）からなる群から選択される。好ましい実施形態においては、界面活性剤はポリソルベート２０またはポリソルベート８０であり、糖はスクロースまたはトレハロースである。ポリソルベート８０または２０界面活性剤は約０．００５〜約１ｍｇ／ｍｌの量で製剤中に存在しうる。ポリソルベート８０または２０界面活性剤は約０．０５から約１ｍｇ／ｍｌの量で製剤中に存在しうる。ポリソルベート８０または２０界面活性剤は約０．１〜約０．５ｍｇ／ｍｌの量で製剤中に存在しうる。もう１つの実施形態においては、ポリソルベート８０または２０界面活性剤は少なくとも約０．００５ｍｇ／ｍｌの量で製剤中に存在しうる。ポリソルベート８０または２０界面活性剤は少なくとも約０．１ｍｇ／ｍｌの量で製剤中に存在しうる。ポリソルベート８０界面活性剤は約０．２ｍｇ／ｍｌからの量で製剤中に存在しうる。
【００８４】
前記製剤の他の態様においては、５℃で、抗ＬＡＧ３抗体の単量体の割合は、サイズ排除クロマトグラフィーによる測定で、３ヶ月後に９５％以上（＞９５％）である。前記製剤のもう１つの実施形態においては、５℃で、抗ＬＡＧ３抗体の単量体の割合は、サイズ排除クロマトグラフィーによる測定で、３ヶ月後に９８％以上である。前記製剤のもう１つの実施形態においては、５℃で、抗ＬＡＧ３抗体の単量体の割合は、サイズ排除クロマトグラフィーによる測定で、３ヶ月後に９９％以上である。前記製剤のもう１つの実施形態においては、２５℃で、抗ＬＡＧ３抗体の単量体の割合は、サイズ排除クロマトグラフィーによる測定で、３ヶ月後に９８％以上である。
【００８５】
前記製剤の他の態様においては、５℃で、抗ＬＡＧ３抗体の重鎖および軽鎖の割合は、非還元ＣＥ−ＳＤＳによる測定で、３ヶ月後に９０％以上である。１つの実施形態においては、５℃で、抗ＬＡＧ３抗体の重鎖および軽鎖の割合は、非還元ＣＥ−ＳＤＳによる測定で、３ヶ月後に９５％以上である。もう１つの実施形態においては、５℃で、抗ＬＡＧ３抗体の重鎖および軽鎖の割合は、非還元ＣＥ−ＳＤＳによる測定で、３ヶ月後に９７％以上である。
【００８６】
前記製剤の他の態様においては、５℃で、抗ＬＡＧ３抗体の無傷ＩｇＧの割合は、非還元ＣＥ−ＳＤＳによる測定で、３ヶ月後に９０％以上である。１つの実施形態においては、５℃で、抗ＬＡＧ３抗体の無傷ＩｇＧの割合は、非還元ＣＥ−ＳＤＳによる測定で、３ヶ月後に９５％以上である。もう１つの実施形態においては、５℃で、抗ＬＡＧ３抗体の無傷ＩｇＧの割合は、非還元ＣＥ−ＳＤＳによる測定で、３ヶ月後に９７％以上である。
【００８７】
本発明の他の態様においては、５℃で、抗ＬＡＧ３抗体の酸性変異体の割合は、イオン交換クロマトグラフィーによる測定で、３ヶ月後に１５％未満である。
【００８８】
製剤の前記実施形態は、前節に記載されている抗ＬＡＧ３抗体と抗ＰＤ１抗体との共製剤にも適用されうる。
【００８９】
以下の実施形態も本発明の態様である。
【００９０】
１．約５〜３００ｍｇ／ｍＬの抗ＬＡＧ３抗体またはその抗原結合性フラグメント、糖またはポリオール、非イオン性界面活性剤、ｐＨ約５〜８のヒスチジンまたはアセタートバッファー、１０〜１０００ｍＭのアルギニンまたはその薬学的に許容される塩を含み、そして所望により、メチオニン、ＥＤＴＡ、ＤＴＰＡ、トリプトファンおよびピリドキシンを含んでいてもよい液体製剤。
【００９１】
２．約５〜３００ｍｇ／ｍＬの抗ＬＡＧ３抗体またはその抗原結合性フラグメント、約１０〜２５０ｍｇ／ｍＬのスクロース、約０．００５〜２ｍｇ／ｍＬのポリソルベート８０または２０、ｐＨ約５〜８の約５〜３００ｍＭのヒスチジンバッファー、１０〜１０００ｍＭのアルギニンまたはその薬学的に許容される塩を含み、そして所望により、約１〜１００μＭ  ＤＴＰＡまたはＥＤＴＡを含んでいてもよい、実施形態１記載の製剤。
【００９２】
３．約１０〜１００ｍｇ／ｍＬの抗ＬＡＧ３抗体、約２０〜２００ｍｇ／ｍＬのスクロース、約０．１〜２．０ｍｇ／ｍＬのポリソルベート８０または２０、ｐＨ約５．０〜６．５の約５〜１５０ｍＭのヒスチジンバッファー、約３０〜１０００ｍＭのＬ−アルギニンまたはその薬学的に許容される塩を含み、そして所望により、約１〜３０μＭのＤＴＰＡまたはＥＤＴＡを含んでいてもよい、実施形態１記載の製剤。
【００９３】
４．約１０〜１００ｍｇ／ｍＬの抗ＬＡＧ３抗体、約５０〜８０ｍｇ／ｍＬのスクロース、約０．２〜０．５ｍｇ／ｍＬのポリソルベート８０または２０、ｐＨ約５．０〜６．０の約１０〜５０ｍＭのヒスチジンバッファー、約４０〜１５０ｍＭのアルギニンまたはその薬学的に許容される塩を含み、そして所望により、約１〜３０μＭのＤＴＰＡまたはＥＤＴＡを含んでいてもよい、実施形態１記載の製剤。
【００９４】
５．約１０〜５０ｍｇ／ｍＬの抗ＬＡＧ３抗体、約５０ｍｇ／ｍＬのスクロース、約０．２〜０．５ｍｇ／ｍＬのポリソルベート８０または２０、ｐＨ約５．６〜６．２の約１０ｍＭのヒスチジンバッファー、約４０〜１００ｍＭのアルギニンまたはその薬学的に許容される塩を含む、実施形態１記載の製剤。
【００９５】
６．約２５ｍｇ／ｍＬの抗ＬＡＧ３抗体、約５０ｍｇ／ｍＬのスクロース、約０．２ｍｇ／ｍＬのポリソルベート８０、ｐＨ約５．８〜６．０の約１０ｍＭのヒスチジンバッファー、約７０ｍＭのアルギニンまたはアルギニン−ＨＣｌを含む、実施形態１記載の製剤。
【００９６】
７．再構成後に、約１０〜３００ｍｇ／ｍＬの抗ＬＡＧ３抗体またはその抗原結合性フラグメント、糖またはポリオール、非イオン性界面活性剤、ｐＨ約５〜８のヒスチジンまたはアセタートバッファー、１０〜１０００ｍＭのアルギニンまたはその薬学的に許容される塩を含み、そして所望により、メチオニン、ＥＤＴＡ、ＤＴＰＡ、トリプトファンおよびピリドキシンを含んでいてもよい凍結乾燥製剤。
【００９７】
８．再構成後に、製剤が約５〜３００ｍｇ／ｍＬの抗ＬＡＧ３抗体またはその抗原結合性フラグメント、約１０〜２５０ｍｇ／ｍＬのスクロース、約０．００５〜２ｍｇ／ｍＬのポリソルベート８０または２０、ｐＨ約５〜８の約５〜１０００ｍＭのヒスチジンバッファー、約１０〜１０００ｍＭのアルギニンまたはその薬学的に許容される塩を含み、そして所望により、約１〜１００μＭのＤＴＰＡまたはＥＤＴＡを含んでいてもよい、実施形態７記載の製剤。
【００９８】
９．再構成後に、製剤が約１０〜１００ｍｇ／ｍＬの抗ＬＡＧ３抗体、約２０〜２００ｍｇ／ｍＬのスクロース、約０．１〜２．０ｍｇ／ｍＬのポリソルベート８０または２０、ｐＨ約５．０〜６．５の約５〜１５０ｍＭのヒスチジンバッファー、少なくとも３０ｍＭのアルギニンまたはその薬学的に許容される塩を含み、そして所望により、約１〜１００μＭのＤＴＰＡまたはＥＤＴＡを含んでいてもよい、実施形態７記載の製剤。
【００９９】
１０．再構成後に、製剤が約１０〜５０ｍｇ／ｍＬの抗ＬＡＧ３抗体、約５０〜８０ｍｇ／ｍＬのスクロース、約０．２〜０．５ｍｇ／ｍＬのポリソルベート８０または２０、ｐＨ約５．０〜６．０の約１０〜５０ｍＭのヒスチジンバッファー、約４０〜１５０ｍＭのアルギニンまたはその薬学的に許容される塩を含み、そして所望により、約１〜３０μＭのＤＴＰＡまたはＥＤＴＡを含んでいてもよい、実施形態７記載の製剤。
【０１００】
１１．再構成後に、製剤が約１０〜５０ｍｇ／ｍＬの抗ＬＡＧ３抗体、約５０ｍｇ／ｍＬのスクロース、約０．２〜０．５ｍｇ／ｍＬのポリソルベート８０または２０、ｐＨ約５．６〜６．２の約１０ｍＭのヒスチジンバッファーおよび約４０〜１００ｍＭのアルギニンまたはその薬学的に許容される塩を含む、実施形態７記載の製剤。
【０１０１】
１２．再構成後に、製剤が約２５ｍｇ／ｍＬの抗ＬＡＧ３抗体、約５０ｍｇ／ｍＬのスクロース、約０．２ｍｇ／ｍＬのポリソルベート８０、ｐＨ約５．８〜６．０の約１０ｍＭのヒスチジンバッファーおよび約７０ｍＭのアルギニンまたはアルギニン−ＨＣｌを含む、実施形態７記載の製剤。
【０１０２】
１３．約１０〜３００ｍｇ／ｍＬの抗ＬＡＧ３抗体またはその抗原結合性フラグメント、糖またはポリオール、非イオン性界面活性剤、ｐＨ約５〜８の約５０〜５００ｍＭのヒスチジンバッファー、約１０〜１０００ｍＭのＮａＣｌ、ＫＣｌ、ＬｉＣｌ、ＣａＣｌ２、ＭｇＣｌ２、ＺｎＣｌ２またはＦｅＣｌ２を含み、そして所望により、約１０〜１０００ｍＭのアルギニンまたはその薬学的に許容される塩を含んでいてもよく、そして所望により、メチオニン、ＥＤＴＡ、ＤＴＰＡ、トリプトファンおよびピリドキシンを含んでいてもよい液体製剤。
【０１０３】
１４．約１０〜３００ｍｇ／ｍＬの抗ＬＡＧ３抗体またはその抗原結合性フラグメント、糖またはポリオール、非イオン性界面活性剤、ｐＨ約５〜６．５の５０〜１５０ｍＭのヒスチジンバッファー、約３０〜１００ｍＭのＮａＣｌまたはＫＣｌを含み、そして所望により、約４０〜１５０ｍＭのアルギニンまたはその薬学的に許容される塩を含んでいてもよい、そして所望により、約１〜１００μＭのＤＴＰＡまたはＥＤＴＡを含んでいてもよい、実施形態１３記載の製剤。
【０１０４】
１５．再構成後に、製剤が約１０〜３００ｍｇ／ｍＬの抗ＬＡＧ３抗体またはその抗原結合性フラグメント、糖またはポリオール、非イオン性界面活性剤、ｐＨ約５〜８の約５０〜３００ｍＭのヒスチジンバッファー、約１０〜１０００ｍＭのＮａＣｌ、ＫＣｌ、ＬｉＣｌ、ＣａＣｌ２、ＭｇＣｌ２、ＺｎＣｌ２またはＦｅＣｌ２を含み、そして所望により、約１０〜１０００ｍＭのアルギニンまたはその薬学的に許容される塩を含んでいてもよく、そして所望により、メチオニン、ＥＤＴＡ、ＤＴＰＡ、トリプトファンおよびピリドキシンを含んでいてもよい、凍結乾燥製剤。
【０１０５】
１６．再構成後に、製剤が約１０〜３００ｍｇ／ｍＬの抗ＬＡＧ３抗体またはその抗原結合性フラグメント、糖またはポリオール、非イオン性界面活性剤、ｐＨ約５〜６．５の約５０〜１５０ｍＭのヒスチジンバッファー、約３０〜１００ｍＭのＮａＣｌまたはＫＣｌを含み、そして所望により、約４０〜１５０ｍＭのアルギニンまたはその薬学的に許容される塩を含んでいてもよく、そして所望により、約１〜１００μＭのＤＴＰＡまたはＥＤＴＡを含んでいてもよい、実施形態１５記載の製剤。
【０１０６】
１７．糖が、スクロースおよびトレハロースからなる群から選択される、実施形態１、７、１３、１５または１６記載の製剤。
【０１０７】
１８．ポリオールが、マンニトール、ソルビトール、グリセロールおよびポリエチレングリコールからなる群から選択される、実施形態１、７、１３、１５または１６記載の製剤。
【０１０８】
１９．界面活性剤が、ポリソルベートおよびポロキサマーからなる群から選択される、実施形態１、７、１３、１５または１６記載の製剤。
【０１０９】
２０．界面活性剤が、Ｔｗｅｅｎ８０（登録商標）、Ｔｗｅｅｎ２０（登録商標）、ＰｌｕｒｏｎｉｃＦ８８（登録商標）、Ｐｌｕｏｒｏｎｉｃ  Ｆ−１２７（登録商標）、ＰｌｕｒｏｎｉｃＦ６８（登録商標）、Ｔｒｉｔｏｎ  Ｘ−１００（登録商標）からなる群から選択される、実施形態１、７、１３、１５または１６記載の製剤。
【０１１０】
２１．界面活性剤がポリソルベート２０またはポリソルベート８０であり、糖がスクロースまたはトレハロースである、実施形態１、７、１３、１５または１６記載の製剤。
【０１１１】
２２．少なくとも−７０℃未満に凍結される、実施形態１〜２１のいずれか１項記載の製剤。
【０１１２】
２３．５℃で、抗ＬＡＧ３抗体の単量体の割合が、サイズ排除クロマトグラフィーによる測定で、３ヶ月後に９５％以上である、実施形態１〜２２のいずれか１項記載の製剤。
【０１１３】
２４．５℃で、抗ＬＡＧ３抗体の重鎖および軽鎖の割合が、非還元ＣＥ−ＳＤＳによる測定で、３ヶ月後に９０％以上である、実施形態１〜２３のいずれか１項記載の製剤。
【０１１４】
２５．５℃で、抗ＬＡＧ３抗体の無傷ＩｇＧの割合が、非還元ＣＥ−ＳＤＳによる測定で、３ヶ月後に９０％以上である、実施形態１〜２４のいずれか１項記載の製剤。
【０１１５】
２６．５℃で、抗ＬＡＧ３抗体の酸性変異体の割合が、イオン交換クロマトグラフィーによる測定で、３ヶ月後に１５％未満である、実施形態１〜２５のいずれか１項記載の製剤。
【０１１６】
２７．抗体または抗原結合性フラグメントが配列番号３７の軽鎖可変領域配列および配列番号３８、４６、４９、５２、５５、５８、６１、６４または６７の重鎖可変領域配列を含む、実施形態１〜２６のいずれか１項記載製剤。
【０１１７】
２８．抗ＬＡＧ３抗体が配列番号３５の軽鎖配列および配列番号５７の重鎖配列を含む、実施形態１〜２７のいずれか１項記載の製剤。
【０１１８】
２９．抗ＰＤ−１抗体を更に含む、実施形態１〜２８のいずれか１項記載の製剤。
【０１１９】
３０．抗ＰＤ１抗体が配列番号９の重鎖可変領域および配列番号４の軽鎖可変領域を含む、実施形態２９記載の製剤。
【０１２０】
３１．抗ＰＤ１抗体が配列番号１０の重鎖配列および配列番号５の軽鎖配列を含む、実施形態２９記載の製剤。
【０１２１】
３２．抗ＬＡＧ３抗体と抗ＰＤ１抗体との比が１：１、１：２または１：３である、実施形態３１記載の製剤。
【０１２２】
以下の実施形態も本発明の態様である。
【０１２３】
１．約５〜３００ｍｇ／ｍＬの抗ＬＡＧ３抗体またはその抗原結合性フラグメント、１０〜１０００ｍＭの総濃度の、ヒスチジン、アスパルタート、グルタミン、グリシン、プロリン、メチオニン、アルギニンまたはその薬学的に許容される塩、ＮａＣｌ、ＫＣｌ、ＬｉＣｌ、ＣａＣｌ２、ＭｇＣｌ２、ＺｎＣｌ２およびＦｅＣｌ２からなる群から選択される賦形剤の１以上、ならびにｐＨ約５〜８のバッファーを含む製剤。
【０１２４】
２．配列番号３９のＣＤＲＬ１、配列番号４０のＣＤＲＬ２、配列番号４１のＣＤＲＬ３、配列番号４２のＣＤＲＨ１、配列番号５９のＣＤＲＨ２、配列番号４４のＣＤＲＨ３を含む約１０〜２５０ｍｇ／ｍＬの抗ＬＡＧ３抗体またはその抗原結合性フラグメント、２５〜２５０ｍＭの総濃度の、ヒスチジン、アスパルタート、グルタミン、グリシン、プロリン、メチオニン、アルギニンまたはその薬学的に許容される塩、ＮａＣｌ、ＫＣｌ、ＬｉＣｌ、ＣａＣｌ２、ＭｇＣｌ２、ＺｎＣｌ２およびＦｅＣｌ２からなる群から選択される賦形剤の１以上、ならびにｐＨ約５〜８のバッファーを含む、実施形態１記載の製剤。
【０１２５】
３．賦形剤が２５〜２５０ｍＭの濃度のＬ−アルギニンまたはその薬学的に許容される塩である、実施形態１または２記載の製剤。
【０１２６】
４．賦形剤が４０〜１００ｍＭの濃度のＬ−アルギニンまたはその薬学的に許容される塩である、実施形態１または２記載の製剤。
【０１２７】
５．賦形剤が、２５〜２５０ｍＭの総濃度の、ＮａＣｌとＬ−アルギニンまたはその薬学的に許容される塩との組合せである、実施形態１または２記載の製剤。
【０１２８】
６．ＮａＣｌとＬ−アルギニンとの濃度比が１：１である、実施形態５の製剤。
【０１２９】
７．ＮａＣｌ濃度が３５ｍＭであり、Ｌ−アルギニン濃度が３５ｍＭである、実施形態６記載の製剤。
【０１３０】
８．ＮａＣｌ濃度が５０ｍＭであり、Ｌ−アルギニン濃度が５０ｍＭである、実施形態６記載の製剤。
【０１３１】
９．賦形剤が約４０〜１５０ｍＭのＮａＣｌ、ＫＣｌまたはＬｉＣｌである、実施形態１または２記載の製剤。
【０１３２】
１０．賦形剤が約２５〜２００ｍＭのＬ−ヒスチジンである、実施形態１または２記載の製剤。
【０１３３】
１１．Ｌ−ヒスチジンが約４０〜１００ｍＭで存在する、実施形態１０記載の製剤。
【０１３４】
１２．バッファーがＬ−ヒスチジン、アセタートまたはシトラートである、実施形態１〜１１のいずれか１項記載の製剤。
【０１３５】
１３．バッファーが約１〜３００ｍＭの濃度を有する、実施形態１２記載の製剤。
【０１３６】
１４．糖、ポリオールもしくは非イオン性界面活性剤またはそれらの組合せを更に含む、実施形態１〜１３のいずれか１項記載の製剤。
【０１３７】
１５．糖が非還元二糖である、実施形態１４記載の製剤。
【０１３８】
１６．糖がトレハロースもしくはスクロースまたはその組合せである、実施形態１５記載の製剤。
【０１３９】
１７．糖が１０〜２００ｍｇ／ｍｌの濃度で存在する、実施形態１５または１６記載の製剤。
【０１４０】
１８．ポリオールが糖アルコールである、実施形態１４記載の製剤。
【０１４１】
１９．ポリオールが、マンニトール、ソルビトール、グリセロールおよびポリエチレングリコールからなる群から選択される、実施形態１４記載の製剤。
【０１４２】
２０．ポリオールが約１０〜２００ｍｇ／ｍｌの濃度で存在する、実施形態１８または１９記載の製剤。
【０１４３】
２１．非イオン性界面活性剤が、ポリソルベートおよびポロキサマーからなる群から選択される、実施形態１４記載の製剤。
【０１４４】
２２．非イオン性界面活性剤が、Ｔｗｅｅｎ８０（登録商標）、Ｔｗｅｅｎ２０（登録商標）、ＰｌｕｒｏｎｉｃＦ８８（登録商標）、ＰｌｕｏｒｏｎｉｃＦ−１２７（登録商標）、ＰｌｕｒｏｎｉｃＦ６８（登録商標）、ＴｒｉｔｏｎＸ−１００（登録商標）からなる群から選択される、実施形態１４記載の製剤。
【０１４５】
２３．非イオン性界面活性剤がポリソルベート８０または２０である、実施形態１４記載の製剤。
【０１４６】
２４．界面活性剤ポリソルベート２０もしくはポリソルベート８０、および糖スクロースもしくはトレハロース、またはそれらの組合せを更に含む、実施形態１〜１３のいずれか１項記載の製剤。
【０１４７】
２５．約１０〜２５０ｍｇ／ｍＬのスクロース、トレハロース、マンニトール、ソルビトール、ポリエチレングリコールまたはグリセロール、約０．００５〜２．０ｍｇ／ｍＬのポリソルベート８０または２０、ｐＨ約５．０〜６．５の約３〜３００ｍＭのＬ−ヒスチジン、アセタートまたはシトラートバッファーを更に含む、実施形態１〜１３のいずれか１項記載の製剤。
【０１４８】
２６．約３０〜１２０ｍｇ／ｍＬのスクロースまたはトレハロース、約０．０５〜１．５ｍｇ／ｍＬのポリソルベート８０または２０、ｐＨ約５．０〜６．５の約３〜１５０ｍＭのＬ−ヒスチジン、アセタートまたはシトラートバッファーを更に含む、実施形態１〜１３のいずれか１項記載の製剤。
【０１４９】
２７．約５０〜９０ｍｇ／ｍＬのスクロースまたはトレハロース、約０．０５〜１．０ｍｇ／ｍＬのポリソルベート８０、ｐＨ約５．０〜６．５の約５〜３０ｍＭのＬ−ヒスチジン、アセタートまたはシトラートバッファーを更に含む、実施形態１〜１３のいずれか１項記載の製剤。
【０１５０】
２８．約２０〜２２０ｍｇ／ｍＬの抗ＬＡＧ３抗体、約５０〜９０ｍｇ／ｍＬのスクロースまたはトレハロース、約０．０５〜１．０ｍｇ／ｍＬのポリソルベート８０または２０、ｐＨ約５．０〜６．５の約５〜２０ｍＭのＬ−ヒスチジン、アセタートまたはシトラートバッファー、約４０〜１５０ｍＭのＬ−アルギニンまたはその薬学的に許容される塩を含む、実施形態１または２記載の製剤。
【０１５１】
２９．約２０〜２２０ｍｇ／ｍＬの抗ＬＡＧ３抗体、約２０〜２００ｍｇ／ｍＬのグリセロール、ソルビトールまたはＰＥＧ４００、約０．０５〜１．０ｍｇ／ｍＬのポリソルベート８０または２０、ｐＨ約５．０〜６．５の約３〜１５０ｍＭのＬ−ヒスチジン、アセタートまたはシトラートバッファー、約４０〜１５０ｍＭのＬ−アルギニンまたはその薬学的に許容される塩を含む、実施形態１または２記載の製剤。
【０１５２】
３０．約２０〜２２０ｍｇ／ｍＬの抗ＬＡＧ３抗体、約４０〜１５０ｍＭのＬ−グルタミン、Ｌ−グリシン、Ｌ−プロリンまたはＬ−メチオニン、約０．０５〜１．０ｍｇ／ｍＬのポリソルベート８０または２０、ｐＨ約５．０〜６．５の約３〜１５０ｍＭのＬ−ヒスチジン、アセタートまたはシトラートバッファー、約４０〜１５０ｍＭのＬ−アルギニンまたはその薬学的に許容される塩を含む、実施形態１または２記載の製剤。
【０１５３】
３１．約２０〜２２０ｍｇ／ｍＬの抗ＬＡＧ３抗体、約０．０５〜１．０ｍｇ／ｍＬのポリソルベート８０または２０、ｐＨ約５．０〜６．５の約３〜１５０ｍＭのＬ−ヒスチジン、アセタートまたはシトラートバッファー、約４０〜１５０ｍＭのＮａＣｌまたはその薬学的に許容される塩を含む、実施形態１または２記載の製剤。
【０１５４】
３２．３〜１５０ｍＭのＬ−メチオニンを更に含む、実施形態１〜３１のいずれか１項記載の製剤。
【０１５５】
３３．５〜７０ｍＭのＬ−メチオニンを更に含む、実施形態１〜３１のいずれか１項記載の製剤。
【０１５６】
３４．約２５ｍｇ／ｍＬの抗ＬＡＧ３抗体、約５０ｍｇ／ｍＬのスクロース、約０．２ｍｇ／ｍＬのポリソルベート８０、ｐＨ約５．８の約１０ｍＭのＬ−ヒスチジンバッファー、約７０ｍＭのＬ−アルギニンまたはその薬学的に許容される塩および約１０ｍＭのＬ−メチオニンを含む、実施形態１または２記載の製剤。
【０１５７】
３５．約５〜３００ｍｇ／ｍＬの抗ＬＡＧ３抗体またはその抗原結合性フラグメント、糖、ポリオール、非イオン性界面活性剤、ｐＨ約５〜８のヒスチジンまたはアセタートバッファー、１０〜１０００ｍＭのＬ−アルギニンまたはその薬学的に許容される塩を含む、実施形態１または２記載の製剤。
【０１５８】
３６．約２５ｍｇ／ｍＬの抗ＬＡＧ３抗体、約５０ｍｇ／ｍＬのスクロース、約０．２ｍｇ／ｍＬのポリソルベート８０、ｐＨ約５．８〜６．０の約１０ｍＭのＬ−ヒスチジンバッファー、約７０ｍＭのＬ−アルギニンまたはＬ−アルギニン−ＨＣｌを含む、実施形態１または２記載の製剤。
【０１５９】
３７．液体である、実施形態１〜３６のいずれか１項記載の製剤。
【０１６０】
３８．少なくとも−７０℃未満で凍結される、実施形態１〜３６のいずれか１項記載の製剤。
【０１６１】
３９．凍結乾燥製剤からの再構成溶液である、実施形態１〜３６のいずれか１項記載の製剤。
【０１６２】
４０．５℃で、抗ＬＡＧ３抗体の単量体の割合が、サイズ排除クロマトグラフィーによる測定で、３ヶ月後に９５％以上である、実施形態３７〜３９のいずれか１項記載の製剤。
【０１６３】
４１．５℃で、抗ＬＡＧ３抗体の重鎖および軽鎖の割合が、非還元ＣＥ−ＳＤＳによる測定で、３ヶ月後に９０％以上である、実施形態３７〜４０のいずれか１項記載の製剤。
【０１６４】
４２．５℃で、抗ＬＡＧ３抗体の無傷ＩｇＧの割合が、非還元ＣＥ−ＳＤＳによる測定で、３ヶ月後に９０％以上である、実施形態３７〜４１のいずれか１項記載の製剤。
【０１６５】
４３．５℃で、抗ＬＡＧ３抗体の酸性変異体の割合が、イオン交換クロマトグラフィーによる測定で、３ヶ月後に１５％未満である、実施形態３７〜４２のいずれか１項記載の製剤。
【０１６６】
４４．抗ＬＡＧ３抗体が配列番号３７の軽鎖可変領域配列および配列番号５８の重鎖可変領域配列を含む、実施形態１〜４３のいずれか１項記載の製剤。
【０１６７】
４５．抗ＬＡＧ３抗体が配列番号３５の軽鎖配列および配列番号５７の重鎖配列を含む、実施形態１〜４３のいずれか１項記載の製剤。
【０１６８】
４６．抗ＰＤ−１抗体またはその抗原結合性フラグメントを更に含む、実施形態１〜４３のいずれか１項記載の製剤。
【０１６９】
４７．抗ＬＡＧ３抗体と抗ＰＤ−１抗体とのモル比が１：１である、実施形態４６記載の製剤。
【０１７０】
４８．抗ＬＡＧ３抗体と抗ＰＤ−１抗体との比が１：１、２：１、３：１または３．５：１である、実施形態４６記載の製剤。
【０１７１】
４９．抗ＰＤ−１抗体またはその抗原結合性フラグメントが、配列番号１のＣＤＲＬ１、配列番号２のＣＤＲＬ２および配列番号３のＣＤＲＬ３を含む可変軽鎖領域と、配列番号６のＣＤＲＨ１、配列番号７のＣＤＲＨ２および配列番号８のＣＤＲＨ３を含む可変重鎖領域とを含む、実施形態１〜４８のいずれか１項記載の製剤。
【０１７２】
５０．抗ＰＤ−１抗体またはその抗原結合性フラグメントが配列番号９の重鎖可変領域および配列番号４の軽鎖可変領域を含む、実施形態４９記載の製剤。
【０１７３】
５１．抗ＰＤ−１抗体が配列番号１０の重鎖配列および配列番号５の軽鎖配列を含む、実施形態４９記載の製剤。
【０１７４】
５２．約１０〜１２０ｍｇ／ｍＬの抗ＬＡＧ３抗体またはその抗原結合性フラグメントと約１０〜１２０ｍｇ／ｍＬの抗ＰＤ−１抗体またはその抗原結合性フラグメントとを含む、実施形態４６〜５１のいずれか１項記載の製剤。
【０１７５】
５３．配列番号３９のＣＤＲＬ１、配列番号４０のＣＤＲＬ２、配列番号４１のＣＤＲＬ３を含む可変軽鎖領域および配列番号４２のＣＤＲＨ１、配列番号５９のＣＤＲＨ２、配列番号４４のＣＤＲＨ３を含む可変重鎖領域を含む約１０〜１２０ｍｇ／ｍＬの抗ＬＡＧ３抗体またはその抗原結合性フラグメント、配列番号１のＣＤＲＬ１、配列番号２のＣＤＲＬ２、配列番号３のＣＤＲＬ３、配列番号６のＣＤＲＨ１、配列番号７のＣＤＲＨ２および配列番号８のＣＤＲＨ３を含む重鎖可変領域を含む抗ＰＤ−１抗体またはその抗原結合性フラグメント、２５〜２５０ｍＭの濃度のＬ−アルギニンまたはその薬学的に許容される塩、ならびにｐＨ約５〜８のバッファーを含む製剤。
【０１７６】
５４．抗ＬＡＧ３抗体または抗原結合性フラグメントが配列番号３７の軽鎖可変領域配列および配列番号５８の重鎖可変領域配列を含み、抗ＰＤ−１抗体が配列番号９の重鎖可変領域および配列番号４の軽鎖可変領域を含む、実施形態５３記載の製剤。
【０１７７】
５５．抗ＬＡＧ３抗体が配列番号３５の軽鎖配列および配列番号５７の重鎖配列を含み、抗ＰＤ−１抗体が配列番号１０の重鎖配列および配列番号５の軽鎖配列を含む、実施形態５３記載の製剤。
【０１７８】
５６．約１０〜１２０ｍｇ／ｍＬの抗ＬＡＧ３抗体、約１０〜１２０ｍｇ／ｍＬの抗ＰＤ−１抗体、約３０〜１２０ｍｇ／ｍＬの非還元二糖、約０．０５〜２．０ｍｇ／ｍＬのポリソルベート８０または２０、ｐＨ約５．０〜６．５のバッファー、約４０〜１５０ｍＭのＬ−アルギニンまたはその薬学的に許容される塩を含む実施形態５３〜５５のいずれか１項記載の製剤。
【０１７９】
５７．約２０〜３０ｍｇ／ｍＬの抗ＬＡＧ３抗体、約２０〜３０ｍｇ／ｍＬの抗ＰＤ−１抗体、約５０〜９０ｍｇ／ｍＬのスクロース、約０．０５〜１．０ｍｇ／ｍＬのポリソルベート８０または２０、ｐＨ約５．０〜６．０の約３〜３０ｍＭのＬ−ヒスチジンバッファー、約４０〜１００ｍＭのＬ−アルギニンまたはその薬学的に許容される塩を含む、実施形態５３〜５５のいずれか１項記載の製剤。
【０１８０】
５８．約３〜１００ｍＭのＬ−メチオニンを更に含む、実施形態５３〜５７のいずれか１項記載の製剤。
【０１８１】
５９．約５〜１５ｍＭのＬ−メチオニンを更に含む、実施形態５３〜５７のいずれか１項記載の製剤。
【０１８２】
６０．約２５ｍｇ／ｍＬの抗ＬＡＧ３抗体、約２５ｍｇ／ｍＬの抗ＰＤ−１抗体、約５０ｍｇ／ｍＬのスクロース、約０．２ｍｇ／ｍＬのポリソルベート８０、ｐＨ約５．８の約１０ｍＭのＬ−ヒスチジンバッファー、約７０ｍＭのＬ−アルギニンまたはその薬学的に許容される塩および約１０ｍＭのＬ−メチオニンを含む、実施形態５３〜５７のいずれか１項記載の製剤。
【０１８３】
６１．癌または感染症の治療のための、実施形態１〜６０のいずれか１項記載の製剤。
【０１８４】
１つの実施形態においては、製剤は、
配列番号３９のＣＤＲＬ１、配列番号４０のＣＤＲＬ２および配列番号４１のＣＤＲＬ３を含む可変軽鎖領域と配列番号４２のＣＤＲＨ１、配列番号５９のＣＤＲＨ２および配列番号４４のＣＤＲＨ３を含む可変重鎖領域とを含む約２０〜２２０ｍｇ／ｍＬの抗ＬＡＧ３抗体、
約３０〜１２０ｍｇ／ｍＬのスクロースまたはトレハロース、
約０．０５〜２ｍｇ／ｍＬのポリソルベート８０、
ｐＨ約５．０〜６．５の約３〜３０ｍＭのＬ−ヒスチジンバッファー、
約４０〜１５０ｍＭのＬ−アルギニンまたはその薬学的に許容される塩を含み、
そして所望により、約５〜７０ｍＭのＬ−メチオニンを含んでいてもよい。
【０１８５】
もう１つの実施形態においては、製剤は、
約２０〜２２０ｍｇ／ｍＬの抗ＬＡＧ３抗体であって、該抗体または抗原結合性フラグメントが配列番号３７の軽鎖可変領域配列および配列番号５８の重鎖可変領域配列を含むもの、
約３０〜１２０ｍｇ／ｍＬのスクロースまたはトレハロース、
約０．０５〜２ｍｇ／ｍＬのポリソルベート８０、
ｐＨ約５．０〜６．５の約３〜３０ｍＭのＬ−ヒスチジンバッファー、
約４０〜１５０ｍＭのＬ−アルギニンまたはその薬学的に許容される塩を含み、
そして所望により、約５〜７０ｍＭのＬ−メチオニンを含んでいてもよい。
【０１８６】
もう１つの実施形態においては、製剤は、
配列番号３５の軽鎖配列および配列番号５７の重鎖配列を含む約２０〜２２０ｍｇ／ｍＬの抗ＬＡＧ３抗体、
約３０〜１２０ｍｇ／ｍＬのスクロースまたはトレハロース、
約０．０５から２ｍｇ／ｍＬのポリソルベート８０、
ｐＨ約５．０〜６．５の約３〜３０ｍＭのＬ−ヒスチジンバッファー、
約４０〜１５０ｍＭのＬ−アルギニンまたはその薬学的に許容される塩を含み、
そして所望により、約５〜７０ｍＭのＬ−メチオニンを含んでいてもよい。
【０１８７】
１つの実施形態においては、製剤は、
配列番号３９のＣＤＲＬ１、配列番号４０のＣＤＲＬ２、配列番号４１のＣＤＲＬ３を含む可変軽鎖領域と配列番号４２のＣＤＲＨ１、配列番号５９のＣＤＲＨ２、配列番号４４のＣＤＲＨ３を含む可変重鎖領域とを含む約２５ｍｇ／ｍＬの抗ＬＡＧ３抗体、
約５０ｍｇ／ｍＬのスクロース、
約０．２ｍｇ／ｍＬのポリソルベート８０、
ｐＨ約５．８の約１０ｍＭのＬ−ヒスチジンバッファー、
約７０ｍＭのＬ−アルギニンまたはその薬学的に許容される塩を含み、
そして所望により、約１０ｍＭのＬ−メチオニンを含んでいてもよい。
【０１８８】
もう１つの実施形態においては、製剤は、
約２５ｍｇ／ｍＬの抗ＬＡＧ３抗体であって、該抗体または抗原結合性フラグメントが配列番号３７の軽鎖可変領域配列および配列番号５８の重鎖可変領域配列を含むもの、
約５０ｍｇ／ｍＬのスクロース、
約０．２ｍｇ／ｍＬのポリソルベート８０、
ｐＨ約５．８の約１０ｍＭのＬ−ヒスチジンバッファー、
約７０ｍＭのＬ−アルギニンまたはその薬学的に許容される塩、ならびに
約１０ｍＭのＬ−メチオニンを含む。
【０１８９】
もう１つの実施形態においては、製剤は、
配列番号３５の軽鎖配列および配列番号５７の重鎖配列を含む約２５ｍｇ／ｍＬの抗ＬＡＧ３抗体、
約５０ｍｇ／ｍＬスクロース；
約０．２ｍｇ／ｍＬのポリソルベート８０、
ｐＨ約５．８の約１０ｍＭのＬ−ヒスチジンバッファー、
約７０ｍＭのＬ−アルギニンまたはその薬学的に許容される塩、ならびに
約１０ｍＭのＬ−メチオニンを含む。
【０１９０】
１つの態様においては、製剤は、
配列番号３９のＣＤＲＬ１、配列番号４０のＣＤＲＬ２、配列番号４１のＣＤＲＬ３を含む可変軽鎖領域と配列番号４２のＣＤＲＨ１、配列番号５９のＣＤＲＨ２、配列番号４４のＣＤＲＨ３を含む可変重鎖領域とを含む約１０〜１２０ｍｇ／ｍＬの抗ＬＡＧ３抗体またはその抗原結合性フラグメント、
配列番号１のＣＤＲＬ１、配列番号２のＣＤＲＬ２、配列番号３のＣＤＲＬ３を含む可変軽鎖領域と配列番号６のＣＤＲＨ１、配列番号７のＣＤＲＨ２および配列番号８のＣＤＲＨ３を含む可変重鎖領域とを含む約１０〜１２０ｍｇ／ｍＬの抗ＰＤ−１抗体またはその抗原結合性フラグメント、
約３０〜１２０ｍｇ／ｍＬのスクロースまたはトレハロース、
約０．０５〜２ｍｇ／ｍＬのポリソルベート８０、
ｐＨ約５．０〜６．５の約３〜３０ｍＭのＬ−ヒスチジンバッファー、
約４０〜１５０ｍＭのＬ−アルギニンまたはその薬学的に許容される塩を含み、
そして所望により、約５〜７０ｍＭのＬ−メチオニンを含んでいてもよい。
【０１９１】
もう１つの態様においては、製剤は、
約１０〜１２０ｍｇ／ｍＬの抗ＬＡＧ３抗体であって、該抗体または抗原結合性フラグメントが配列番号３７の軽鎖可変領域配列および配列番号５８の重鎖可変領域配列を含むもの、
配列番号９の重鎖可変領域および配列番号４の軽鎖可変領域を含む約１０〜１２０ｍｇ／ｍＬの抗ＰＤ−１抗体またはその抗原結合性フラグメント、
約３０〜１２０ｍｇ／ｍＬのスクロースまたはトレハロース、
約０．０５〜２ｍｇ／ｍＬのポリソルベート８０、
ｐＨ約５．０〜６．５の約３〜３０ｍＭのＬ−ヒスチジンバッファー、
約４０〜１５０ｍＭのＬ−アルギニンまたはその薬学的に許容される塩を含み、
そして所望により、約５〜７０ｍＭのＬ−メチオニンを含んでいてもよい。
【０１９２】
もう１つの態様においては、製剤は、
配列番号３５の軽鎖配列および配列番号５７の重鎖配列を含む約１０〜１２０ｍｇ／ｍＬの抗ＬＡＧ３抗体、
配列番号１０の重鎖配列および配列番号５の軽鎖配列を含む約１０〜１２０ｍｇ／ｍＬの抗ＰＤ−１抗体、
約３０〜１２０ｍｇ／ｍＬのスクロースまたはトレハロース、
約０．０５〜２ｍｇ／ｍＬのポリソルベート８０、
ｐＨ約５．０〜６．５の約３〜３０ｍＭのＬ−ヒスチジンバッファー、
約４０〜１５０ｍＭのＬ−アルギニンまたはその薬学的に許容される塩を含み、
そして所望により、約５〜７０ｍＭのＬ−メチオニンを含んでいてもよい。
【０１９３】
もう１つの実施形態においては、製剤は、
配列番号３９のＣＤＲＬ１、配列番号４０のＣＤＲＬ２および配列番号４１のＣＤＲＬ３を含む可変軽鎖領域と配列番号４２のＣＤＲＨ１、配列番号５９のＣＤＲＨ２および配列番号４４のＣＤＲＨ３を含む可変重鎖領域とを含む約２５ｍｇ／ｍＬの抗ＬＡＧ３抗体またはその抗原結合性フラグメント、
配列番号９の重鎖可変領域および配列番号４の軽鎖可変領域を含む約２５ｍｇ／ｍＬの抗ＰＤ−１抗体またはその抗原結合性フラグメント、
約５０ｍｇ／ｍＬのスクロース、
約０．２ｍｇ／ｍＬのポリソルベート８０、
ｐＨ約５．８の約１０ｍＭのＬ−ヒスチジンバッファー、
約７０ｍＭのＬ−アルギニンまたはその薬学的に許容される塩、ならびに
約１０ｍＭのＬ−メチオニンを含む。
【０１９４】
もう１つの実施形態においては、製剤は、
配列番号３９のＣＤＲＬ１、配列番号４０のＣＤＲＬ２および配列番号４１のＣＤＲＬ３を含む可変軽鎖領域と配列番号４２のＣＤＲＨ１、配列番号５９のＣＤＲＨ２および配列番号４４のＣＤＲＨ３を含む可変重鎖領域とを含む約２５ｍｇ／ｍＬの抗ＬＡＧ３抗体またはその抗原結合性フラグメント、
配列番号１０の重鎖配列および配列番号５の軽鎖配列を含む約２５ｍｇ／ｍＬの抗ＰＤ−１抗体、
約５０ｍｇ／ｍＬのスクロース、
約０．２ｍｇ／ｍＬのポリソルベート８０、
ｐＨ約５．８の約１０ｍＭのＬ−ヒスチジンバッファー、
約７０ｍＭのＬ−アルギニンまたはその薬学的に許容される塩、ならびに
約１０ｍＭのＬ−メチオニンを含む。
【０１９５】
更にもう１つの実施形態においては、製剤は、
配列番号３５の軽鎖配列および配列番号５７の重鎖配列を含む約２５ｍｇ／ｍＬの抗ＬＡＧ３、
配列番号１０の重鎖配列および配列番号５の軽鎖配列を含む約２５ｍｇ／ｍＬの抗ＰＤ−１抗体、
約５０ｍｇ／ｍＬのスクロース、
約０．２ｍｇ／ｍＬのポリソルベート８０、
ｐＨ約５．８の約１０ｍＭのＬ−ヒスチジンバッファー、
約７０ｍＭのＬ−アルギニンまたはその薬学的に許容される塩、ならびに
約１０ｍＭのＬ−メチオニンを含む。
【０１９６】
凍結乾燥製剤
治療用タンパク質の凍結乾燥製剤は幾つかの利点を有する。凍結乾燥製剤は、一般に、溶液製剤より良好な化学的安定性をもたらし、したがって、長い貯蔵寿命をもたらす。また、凍結乾燥製剤は、投与経路または投与量のような臨床的要因に応じて、異なる濃度で再構成されうる。例えば、凍結乾燥製剤は、皮下投与に必要な場合には高濃度（すなわち、小容量）で、あるいは静脈内投与の場合にはより低い濃度で再構成されうる。また、個々の対象に高用量が必要な場合、特に、注射量を最小にしなければならない皮下投与の場合には、高濃度が必要となりうる。抗体医薬の皮下投与は自己投与を可能にする。自己投与は、静脈内投与のような投与のために医療施設を訪れることに伴う時間および費用の浪費を回避する。皮下送達は、１回の注射で注射部位に実際に送達されうる溶液の体積により制限され、それは一般に約１〜１．５ｍＬである。そのような制限は、しばしば、所望の量の薬物を送達するために比較的高い濃度の溶液を必要にする。皮下自己投与は、典型的には、注射前に薬物を患者が再懸濁させる必要性を回避するために、凍結乾燥形態ではなく、薬物の液体溶液製剤で満たされた予め充填されたシリンジまたは自動注射器を使用して達成される。
【０１９７】
典型的には、医薬品（ＤＰ）の高濃度での再構成を予想して、すなわち、少量の液中での再構成を予想して、凍結乾燥製剤は製造される。ついで、より低い濃度へとＤＰを希釈するために、水または等張バッファーでの後続希釈が容易に行われうる。典型的には、例えば皮下投与用に高いＤＰ濃度で再構成された場合にほぼ等張性の製剤を与えるレベルの賦形剤が本発明の凍結乾燥製剤に配合される。より低いＤＰ濃度を得るための、より大きな体積の水での再構成は、再構成溶液の張度を必然的に低下させるが、そのような低下は、非皮下投与、例えば等張溶液（０．９％  塩化ナトリウム，ＵＳＰ、または５％  デキストロース溶液，ＵＳＰ）との混合物としての静脈内投与においてはほとんど意味がないかもしれない。より低いＤＰ濃度において等張性が望ましい場合には、凍結乾燥粉末を標準的な低容量の水で再構成し、ついで等張性希釈剤、例えば０．９％  塩化ナトリウムで更に希釈することが可能である。
【０１９８】
本発明の凍結乾燥製剤は凍結乾燥前溶液の凍結乾燥（冷凍乾燥）により形成される。凍結乾燥は、製剤を凍結し、ついで一次乾燥（初乾）に適した温度で水を昇華させることにより達成される。この条件下、製品温度は製剤の共晶点または崩壊温度より低い。典型的には、一次乾燥の棚温度は、典型的には約５０〜２５０ｍＴｏｒｒの範囲の適切な圧力で約−３０〜−２５℃（ただし、一次乾燥中に製品は凍結したままである）の範囲である。サンプルを収容する容器（例えば、ガラスバイアル）の製剤、サイズおよびタイプならびに凍結乾燥される製剤の体積が、乾燥に要する時間を決定し、これは数時間〜数日間（例えば、４０〜６０時間）の範囲でありうる。主に容器のタイプおよびサイズならびに使用されるタンパク質のタイプに応じて、約０〜４０℃で二次乾燥が行われうる。二次乾燥時間は製品中の望ましい残留水分レベルによって決まり、典型的には、少なくとも約５時間を要する。典型的には、凍結乾燥製剤の水分含有量は約５％未満であり、好ましくは約３％未満である。圧力は、一次乾燥工程中に用いられる圧力と同じでありうる。凍結乾燥条件は製剤およびバイアルサイズによって異なりうる。
【０１９９】
幾つかの場合には、移し替えの工程を回避するために、タンパク質の再構成が行われる容器内でタンパク質製剤を凍結乾燥することが望ましいかもしれない。この場合の容器は、例えば、３、５、１０、２０、５０または１００ｃｃのバイアルでありうる。
【０２００】
本発明の凍結乾燥製剤は投与前に再構成される。タンパク質は、約１０、１５、２０、２５、３０、４０、５０、６０、７５、８０、９０もしくは１００ｍｇ／ｍＬまたはより高い濃度、例えば１５０ｍｇ／ｍＬ、２００ｍｇ／ｍＬ、２５０ｍｇ／ｍＬまたは３００ｍｇ／ｍＬ〜約５００ｍｇ／ｍＬの濃度で再構成されうる。１つの実施形態においては、再構成後のタンパク質濃度は約１０〜３００ｍｇ／ｍｌである。１つの実施形態においては、再構成後のタンパク質濃度は約２０〜２５０ｍｇ／ｍｌである。１つの実施形態においては、再構成後のタンパク質濃度は約１５０〜２５０ｍｇ／ｍｌである。１つの実施形態においては、再構成後のタンパク質濃度は約１８０〜２２０ｍｇ／ｍｌである。１つの実施形態においては、再構成後のタンパク質濃度は約５０〜１５０ｍｇ／ｍｌである。１つの実施形態においては、再構成後のタンパク質濃度は約５０ｍｇ／ｍｌである。１つの実施形態においては、再構成後のタンパク質濃度は約２５ｍｇ／ｍｌである。再構成製剤の皮下送達が意図される場合には、高いタンパク質濃度が特に有用である。しかし、静脈内投与のような他の投与経路では、より低いタンパク質濃度（例えば、約５〜２５ｍｇ／ｍＬ）が望ましいかもしれない。
【０２０１】
再構成は、一般に、完全な水和を確保するために約２５℃の温度で行われるが、所望により他の温度も用いられうる。再構成に要する時間は、例えば、希釈剤のタイプ、賦形剤の量およびタンパク質に左右される。典型的な希釈剤には、滅菌水、静菌性注射水（ＢＷＦＩ）、ｐＨ緩衝溶液（例えば、リン酸緩衝食塩水）、滅菌食塩水、リンゲル液またはデキストロース溶液が含まれる。
【０２０２】
本発明の１つの実施形態においては、抗ＬＡＧ３抗体（またはその抗原結合性フラグメント）は静脈内投与用の凍結乾燥粉末として製剤化される。本発明のもう１つの実施形態においては、抗ＬＡＧ３抗体（またはその抗原結合性フラグメント）は皮下投与用の凍結乾燥粉末として製剤化される。ある実施形態においては、該抗体（またはその抗原結合性フラグメント）は約４０〜３００ｍｇ／バイアルで提供され、使用前に注射用滅菌水で再構成される。他の実施形態においては、該抗体（またはその抗原結合性フラグメント）は約２００ｍｇ／バイアルで提供され、使用前に注射用滅菌水で再構成される。１つの実施形態においては、再構成製剤の目標ｐＨは６．０である。種々の実施形態においては、本発明の凍結乾燥製剤は、高濃度、例えば約２０、２５、３０、４０、５０、６０、７５、１００、１５０、２００、２５０ｍｇ／ｍＬまたはそれ以上の濃度への抗ＬＡＧ３抗体の再構成を可能にする。他の実施形態においては、再構成後の抗ＬＡＧ３抗体濃度は、約１０〜３００、２０〜２５０、１５０〜２５０、１８０〜２２０、２０〜２００、４０〜１００、または５０〜１５０ｍｇ／ｍｌである。他の実施形態においては、凍結乾燥前の抗ＬＡＧ３抗体濃度は約１０〜３００、１５０〜２５０、１８０〜２２０、１０〜１００、１０〜５０、または２５〜５０ｍｇ／ｍｌである。
【０２０３】
他の実施形態においては、抗ＬＡＧ３抗体もしくは抗原結合性フラグメントまたは抗ＰＤ−１抗体もしくは抗原結合性フラグメントの凍結乾燥製剤は、凍結乾燥製剤から得られる再構成溶液に関して定義される。再構成溶液は、約１０、１５、２０、２５、３０、４０、５０、６０、７５、８０、９０もしくは１００ｍｇ／ｍＬ、またはより高い濃度、例えば１５０ｍｇ／ｍＬ、２００ｍｇ／ｍＬ、２５０ｍｇ／ｍＬもしくは最大約３００ｍｇ／ｍＬの抗体またはその抗原結合性フラグメントを含みうる。１つの実施形態においては、再構成製剤は１０〜３００ｍｇ／ｍＬの抗体またはその抗原結合性フラグメントを含みうる。もう１つの実施形態においては、再構成製剤は１０〜２００ｍｇ／ｍＬの抗体またはその抗原結合性フラグメントを含みうる。もう１つの実施形態においては、再構成製剤は１０〜１００ｍｇ／ｍＬの抗体またはその抗原結合性フラグメントを含みうる。もう１つの実施形態においては、再構成製剤は１０〜６０または１５〜５０ｍｇ／ｍＬの抗体またはその抗原結合性フラグメントを含みうる。もう１つの実施形態においては、再構成製剤は１０〜２５ｍｇ／ｍＬの抗体またはその抗原結合性フラグメントを含みうる。好ましい実施形態においては、再構成製剤は２０〜３０または２５ｍｇ／ｍＬの抗体またはその抗原結合性フラグメントを含みうる。
【０２０４】
液体製剤
液体抗体製剤は、例えば水性医薬製剤中の原薬を取り、精製プロセスの最終工程として、それを所望のバッファー中にバッファー交換することにより製造されうる。この実施形態においては凍結乾燥工程は存在しない。最終バッファー中の原薬は所望の濃度に濃縮される。安定剤および界面活性剤のような賦形剤が原薬に添加され、それは、適切なバッファーを使用して最終タンパク質濃度に希釈される。最終的に製剤化された原薬は、０．２２μｍフィルターを使用して濾過され、最終容器（例えば、ガラスバイアル）内に充填される。製剤はバイアル内で貯蔵されることが可能であり、注射装置または容器により送達されうる。
【０２０５】
本発明のもう１つの態様においては、抗ＬＡＧ３抗体は液体製剤であり、約１０〜３００ｍｇ／ｍｌの濃度を有する。もう１つの実施形態においては、抗ＬＡＧ３抗体は液体製剤であり、約２０〜２５０ｍｇ／ｍｌの濃度を有する。もう１つの実施形態においては、抗ＬＡＧ３抗体は液体製剤であり、約４０〜１００ｍｇ／ｍｌの濃度を有する。もう１つの実施形態においては、抗ＬＡＧ３抗体は液体製剤であり、約１０〜６０ｍｇ／ｍｌの濃度を有する。もう１つの実施形態においては、抗ＬＡＧ３抗体は液体製剤であり、約２０〜３０ｍｇ／ｍｌの濃度を有する。もう１つの実施形態においては、抗ＬＡＧ３抗体は液体製剤であり、約１０〜３０ｍｇ／ｍＬの濃度を有する。もう１つの実施形態においては、抗ＬＡＧ３抗体は液体製剤であり、約１５〜５０ｍｇ／ｍｌの濃度を有する。もう１つの実施形態においては、抗ＬＡＧ３抗体は約１０〜１００ｍｇ／ｍＬの濃度で存在する。好ましい態様においては、抗ＬＡＧ３抗体は約２０〜３０または２５ｍｇ／ｍＬの濃度で存在する。
【０２０６】
本発明のもう１つの態様においては、製剤は、約１０〜３００ｍｇ／ｍｌの濃度を有する抗ＰＤ−１抗体を液体製剤中に更に含む。１つの実施形態においては、抗ＰＤ−１抗体は約２０〜２５０ｍｇ／ｍｌの濃度で存在する。もう１つの実施形態においては、抗ＰＤ−１抗体は約４０〜１００ｍｇ／ｍｌの濃度で存在する。もう１つの実施形態においては、抗ＰＤ−１抗体は約１０〜６０ｍｇ／ｍｌの濃度で存在する。もう１つの実施形態においては、抗ＰＤ−１抗体は約２０〜３０ｍｇ／ｍｌの濃度で存在する。もう１つの実施形態においては、抗ＰＤ−１抗体は約１０〜３０ｍｇ／ｍＬの濃度で存在する。もう１つの実施形態においては、抗ＰＤ−１抗体は約１５〜５０ｍｇ／ｍｌの濃度で存在する。もう１つの実施形態においては、抗ＰＤ−１抗体は約１０〜１００ｍｇ／ｍＬの濃度で存在する。好ましい実施形態においては、抗ＰＤ−１抗体は約２０〜３０または２５ｍｇ／ｍＬの濃度で存在する。
【０２０７】
１つの実施形態においては、液体製剤はｐＨ約５〜８、５．０〜６．５、５．５〜６．５、５．５、５．６、５．７、５．８、５．９、６．０、６．１または６．２のバッファーおよびアルギニンおよびその薬学的に許容される塩を含む。１つの実施形態においては、液体製剤はｐＨ約５〜８のバッファーを含む。１つの実施形態においては、液体製剤は約５．０〜６．５のｐＨのバッファーを含む。１つの実施形態においては、液体製剤はｐＨ約５．０〜６．０のバッファーを含む。他の実施形態においては、バッファーはヒスチジンである。もう１つの実施形態においては、バッファーはシトラート（クエン酸塩）またはアセタート（酢酸塩）である。もう１つの実施形態においては、液体製剤はｐＨ約５〜８、５．０〜６．５、５．５〜６．５、５．５、５．６、５．７、５．８、５．９、６．０、６．１または６．２のアセタートバッファーおよびアルギニンおよびその薬学的に許容される塩を含む。
【０２０８】
本発明の液体抗体製剤は、非経口投与、例えば静脈内、筋肉内、腹腔内または皮下注射に適しており、特に皮下注射に適している。
【０２０９】
投薬および投与
毒性は、治療用物質、例えばヒト化抗ＬＡＧ３または抗ＰＤ−１抗体（またはその抗原結合性フラグメント）の適切な投与を選択する際の考慮事項である。単独で又は免疫抑制剤と組合せて投与される抗体組成物の毒性および治療効力は、例えばＬＤ５０（集団の５０％に致死的な用量）およびＥＤ５０（集団の５０％において治療的に有効な用量）を決定するための、細胞培養または実験動物における標準的な薬学的方法により決定されうる。毒性効果と治療効果との用量比は治療係数であり、それはＬＤ５０とＥＤ５０との比として表されうる。高い治療係数を示す抗体が好ましい。これらの細胞培養アッセイおよび動物研究から得られたデータは、ヒトに用いる或る範囲の投与量を決定する際に使用されうる。そのような化合物の投与量は、好ましくは、毒性をほとんど又は全く伴わないＥＤ５０を含む循環濃度の範囲内である。投与量は、使用される剤形および用いられる投与経路に応じて、この範囲内で変動しうる。
【０２１０】
適切な投与経路には、例えば非経口送達、例えば筋肉内、皮内、皮下、髄内注射、および鞘内、直接的心室内、静脈内、腹腔内投与経路が含まれうる。薬物は、種々の通常の方法、例えば腹腔内、非経口、動脈内または静脈内注射により投与されうる。溶液の容量が制限される必要のある投与方法（例えば、皮下投与）は、高濃度での再構成を可能にする凍結乾燥製剤を要する。
【０２１１】
あるいは、例えば、免疫病理により特徴づけられる病原体誘発性病変内への、しばしばデポーまたは徐放製剤での、直接的な該抗体の注射により、全身的ではなく局所的に、該抗体を投与することが可能である。更に、標的化薬物送達系、例えば、免疫病理により特徴づけられる病原体誘発性病変を標的化する、例えば、組織特異的抗体で被覆されたリポソームにより、該抗体を投与することが可能である。該リポソームは、選択的に、罹患組織に標的化され、罹患組織により取り込まれる。
【０２１２】
治療のための投与レジメンの選択は、該物体の血清または組織代謝回転速度、症状の度合、該物体の免疫原性、生物学的マトリックスにおける標的細胞の接近可能性を含む幾つかの要因に左右される。好ましくは、投与レジメンは、副作用の許容レベルに合致して、患者に送達される治療用物質の量を最大にする。したがって、送達される生物学的物質の量は、部分的には、個々の物体および治療される状態の重症度に左右される。抗体、サイトカインおよび小分子の適切な用量を選択する際の指針が利用可能である。例えば、Ｗａｗｒｚｙｎｃｚａｋ（１９９６）Ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ｔｈｅｒａｐｙ，Ｂｉｏｓ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ  Ｐｕｂ．Ｌｔｄ，Ｏｘｆｏｒｄｓｈｉｒｅ，ＵＫ；Ｋｒｅｓｉｎａ（編）（１９９１）Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ，Ｃｙｔｏｋｉｎｅｓ  ａｎｄ  Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ，Ｍａｒｃｅｌ  Ｄｅｋｋｅｒ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，ＮＹ；Ｂａｃｈ（編）（１９９３）Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  ａｎｄ  Ｐｅｐｔｉｄｅ  Ｔｈｅｒａｐｙ  ｉｎ  Ａｕｔｏｉｍｍｕｎｅ  Ｄｉｓｅａｓｅｓ，Ｍａｒｃｅｌ  Ｄｅｋｋｅｒ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，ＮＹ；Ｂａｅｒｔら（２００３）Ｎｅｗ  Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．３４８：６０１−６０８；Ｍｉｌｇｒｏｍら（１９９９）Ｎｅｗ  Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．３４１：１９６６−１９７３；Ｓｌａｍｏｎら（２００１）Ｎｅｗ  Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．３４４：７８３−７９２；Ｂｅｎｉａｍｉｎｏｖｉｔｚら（２０００）Ｎｅｗ  Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．３４２：６１３−６１９；Ｇｈｏｓｈら（２００３）Ｎｅｗ  Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．３４８：２４−３２；Ｌｉｐｓｋｙら（２０００）Ｎｅｗ  Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．３４３：１５９４−１６０２；Ｐｈｙｓｉｃｉａｎｓ’Ｄｅｓｋ  Ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ  ２００３（Ｐｈｙｓｉｃｉａｎｓ’Ｄｅｓｋ  Ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ，５７ｔｈ  Ｅｄ）；Ｍｅｄｉｃａｌ  Ｅｃｏｎｏｍｉｃｓ  Ｃｏｍｐａｎｙ；ＩＳＢＮ：１５６３６３４４５７；５７ｔｈ  ｅｄｉｔｉｏｎ（Ｎｏｖｅｍｂｅｒ  ２００２）を参照されたい。
【０２１３】
適切な用量の決定は、例えば、治療に影響を及ぼすことが当技術分野において知られている若しくは疑われている又は治療に影響を及ぼすと予想されるパラメータまたは因子を用いて、臨床家によりなされる。該タンパク質の適切な投与量（「治療的有効量」）は、例えば、治療されるべき状態、該状態の重症度および経過、該タンパク質が予防目的で投与されるのか又は治療目的で投与されるのか、過去の療法、患者の臨床病歴および該タンパク質に対する応答、使用されるタンパク質のタイプ、ならびに担当医師の判断に左右される。一般に、投与は、最適用量より幾分少ない量から開始し、ついで、いずれかの負の副作用との比較において所望の又は最適な効果が得られるまで、小さな増加量でそれを増加させる。重要な診断尺度には、例えば炎症の症状の尺度、または産生される炎症性サイトカインのレベルが含まれる。該抗体は、適切には、一度に又は反復的に患者に投与される。該タンパク質は、単独で、または他の薬物もしくは療法と組合せて投与されうる。
【０２１４】
抗体または抗体フラグメントは、連続的注入により、または例えば１日、週１〜７回、１週間、２週間、３週間、毎月、隔月などの間隔の投与により投与されうる。好ましい投与法は、有意な望ましくない副作用を回避する最大用量または用量頻度を含むものである。
【０２１５】
ある実施形態においては、本発明の医薬製剤は静脈内（ＩＶ）注入または注射により投与される。
【０２１６】
他の実施形態においては、本発明の医薬製剤は皮下投与により投与される。皮下投与は、シリンジまたは他の注射装置（例えば、Ｉｎｊｅｃｔ−ｅａｓｅ（登録商標）装置）、インジェクターペンまたは無針装置（例えば、ＭｅｄｉＪｅｃｔｏｒおよびＢｉｏＪｅｃｔｏｒ（登録商標））を使用して行われうる。
【０２１７】
皮下投与は、シリンジ、自動注射器、インジェクターペンまたは無針注射装置を使用する注射により行われうる。静脈内注射は、適切な市販希釈剤、例えば生理食塩水または水中の５％  デキストロースで製剤を希釈した後で行われうる。
【０２１８】
本発明の高濃度溶液製剤は、高濃度の抗体を必要とする用途に特に有利であるが、高濃度が要求もされず望ましくもない状況で、より低い濃度で製剤を使用できない理由はない。より低い濃度の抗体は低用量皮下投与に有用である可能性があり、あるいは、送達可能な容量が実質的に１ｍｌを超える他の投与方法（例えば、静脈内投与）に有用でありうる。そのような、より低い濃度には、１５、１０、５、２、１ｍｇ／ｍｌまたはそれ未満が含まれうる。
【０２１９】
用途
本発明は、癌および感染症の治療における使用のための、抗ヒトＬＡＧ３抗体の凍結乾燥または液体製剤を提供する。
【０２２０】
「癌」なる語は、体の細胞が異常になり無制御に分裂する疾患を示す用語であると当業者に理解される。本発明の化合物、組成物および方法により治療されうる癌には以下のものが含まれるが、それらに限定されるものではない：心臓：肉腫（血管肉腫、線維肉腫、横紋筋肉腫、脂肪肉腫）、粘液腫、横紋筋腫、線維腫、脂肪腫および奇形腫；肺：気管支原性癌（扁平上皮細胞、未分化小細胞、未分化大細胞、腺癌）、肺胞（細気管支）癌、気管支腺腫、肉腫、リンパ腫、軟骨腫過誤腫、中皮腫；胃腸：食道（扁平上皮癌、腺癌、平滑筋肉腫、リンパ腫）、胃（癌、リンパ腫、平滑筋肉腫）、膵臓（腺管腺癌、インスリノーマ、グルカゴノーマ、ガストリノーマ、カルチノイド腫瘍、ＶＩＰ産生腫瘍）、小腸（腺癌、リンパ腫、カルチノイド腫瘍、カポジ肉腫、平滑筋腫、血管腫、脂肪腫、神経線維腫、線維腫）、大腸（腺癌、尿細管腺腫、絨毛腺腫、過誤腫、平滑筋腫）  結腸直腸；尿生殖路：腎臓（腺癌、ウィルムス腫瘍［腎芽腫］、リンパ腫、白血病）、膀胱および尿道（扁平上皮癌、移行上皮癌、腺癌）、前立腺（腺癌、肉腫）、精巣（腺癌、奇形腫、胎児性癌、奇形癌、絨毛癌、肉腫、間質細胞癌、線維腫、線維腺腫、腺腫様腫瘍、脂肪腫）；肝臓：肝癌（肝細胞癌）、胆管癌、肝芽腫、血管肉腫、肝細胞腺腫、血管腫；骨：骨原性肉腫（骨肉腫）、線維肉腫、悪性線維性組織球腫、軟骨肉腫、ユーイング肉腫、悪性リンパ腫（細網細胞肉腫）、多発性骨髄腫、悪性巨細胞腫瘍脊索腫、骨軟骨腫（骨軟骨性外骨腫）、良性軟骨腫、軟骨芽細胞腫、軟骨粘液線維腫、類骨骨腫および巨細胞腫瘍；神経系：頭蓋（骨腫、血管腫、肉芽腫、黄色腫、変形性骨炎）、髄膜（髄膜腫、髄膜肉腫、神経膠腫症）、脳（星細胞腫、髄芽腫、神経膠腫、上衣細胞腫、胚細胞腫［松果腫］、多形神経膠芽腫、乏突起膠腫、シュワン細胞腫、網膜芽細胞腫、先天性腫瘍）、脊髄神経線維腫、髄膜腫、神経膠腫、肉腫）；婦人科：子宮（子宮内膜癌）、子宮頸部（子宮頸癌、前腫瘍子宮頸部異形成）、卵巣（卵巣癌［漿液性嚢胞腺癌、粘液性嚢胞腺癌、未分類癌腫］、顆粒膜嚢細胞腫瘍、セルトリライディッヒ細胞腫、未分化胚細胞腫、悪性奇形腫）、外陰部（扁平上皮癌、上皮内癌、腺癌、線維肉腫、黒色腫）、膣（明細胞癌、扁平上皮癌、ブドウ状肉腫（胎児性横紋筋肉腫）、卵管（癌）、乳房；血液学：血液（骨髄性白血病［急性および慢性］、急性リンパ芽球性白血病、慢性リンパ性白血病、骨髄増殖性疾患、多発性骨髄腫、骨髄異形成症候群）、ホジキン病、非ホジキンリンパ腫［悪性リンパ腫］；皮膚：悪性黒色腫、基底細胞癌、扁平上皮癌、カポジ肉腫、奇形腫異形成母斑、脂肪腫、血管腫、皮膚線維腫、ケロイド、乾癬；ならびに副腎：神経芽腫。１つの実施形態においては、癌は、結腸直腸癌、胃癌および頭頸部癌から選択される。
【図面の簡単な説明】
【０２２１】
【図１】−８０℃、−２０℃、５℃、２５℃および４０℃で貯蔵された抗ＬＡＧ３医薬品サンプルに関する、ｍＨＩＡＣにより測定された、容器当たりの１０μｍ以上（＞１０μｍ）の粒子の数。
【図２】−８０℃、−２０℃、５℃、２５℃および４０℃で貯蔵された抗ＬＡＧ３医薬品サンプルに関する、ｍＨＩＡＣにより測定された、容器当たりの２５μｍ以上の粒子の数。
【図３】−８０℃、−２０℃、５℃、２５℃および４０℃で貯蔵された抗ＬＡＧ３医薬品サンプルに関する、ＥＬＩＳＡにより測定された効力。
【図４】−８０℃、−２０℃、５℃、２５℃および４０℃で貯蔵された抗ＬＡＧ３医薬品サンプルに関する、ＵＰ−ＳＥＣによる単量体（％）。
【図５】−８０℃、−２０℃、５℃、２５℃および４０℃で貯蔵された抗ＬＡＧ３医薬品サンプルに関する、ＵＰ−ＳＥＣによる高分子量種（％）。
【図６】−８０℃、−２０℃、５℃、２５℃および４０℃で貯蔵された抗ＬＡＧ３医薬品サンプルに関する、ＨＰ−ＩＥＸによる酸性変異体（％）。
【図７】−８０℃、−２０℃、５℃、２５℃および４０℃で貯蔵された抗ＬＡＧ３医薬品サンプルに関する、ＨＰ−ＩＥＸによる総主要ピーク（％）。
【図８】−８０℃、−２０℃、５℃、２５℃および４０℃で貯蔵された抗ＬＡＧ３医薬品サンプルに関する、ＨＰ−ＩＥＸによる塩基性変異体（％）。
【図９】−８０℃、−２０℃、５℃、２５℃および４０℃で貯蔵された抗ＬＡＧ３医薬品サンプルに関する、還元ＣＥ−ＳＤＳによる重鎖＋軽鎖純度（％）。
【図１０】−８０℃、−２０℃、５℃、２５℃および４０℃で貯蔵された抗ＬＡＧ３医薬品サンプルに関する、非還元ＣＥ−ＳＤＳによる無傷ＩｇＧ純度（％）。
【図１１】トリプトファン表面露出を示す抗ＬＡＧ３抗体Ａｂ６の相同性モデル。Ｔｒｐ１０２は、相動性モデルを用いて計算した露出面積（８５．２５平方オングストローム）により測定された場合、表面露出している。
【図１２】塩（５０ｍＭ  ＮａＣｌ）の存在下および１０ｍＭ  ヒスチジンバッファー（ｐＨ５．６）中のＬ−アルギニン塩酸塩（４０ｍＭ）の存在下の抗ＬＡＧ３抗体の自己相互作用（ＫＤ）の低減ならびにコロイド安定性（ＯＤ３５０）および相対溶解度（％ＰＥＧ中点）の改善。
【図１３】ｐＨ５．８およびｐＨ６．０の１０ｍＭ  ヒスチジンバッファー中の抗ＬＡＧ３抗体の拡散相互作用パラメーター（ＫＤ）および濁度（５０ｍｇ／ｍＬにおけるＯＤ３５０）に対するＬ−アルギニン塩酸塩の効果。
【図１４】抗ＬＡＧ３抗体のｐＨ範囲の研究（５．３〜６．４）。
【図１５】Ｌ−アルギニン、Ｌ−ヒスチジンまたは塩化ナトリウムの存在下の抗ＬＡＧ３［１０ｍＭ  Ｌ−ヒスチジン（ｐＨ５．８）中］の拡散相互作用パラメーター（ｋＤ）。
【図１６】Ｌ−アルギニン、Ｌ−ヒスチジンまたは塩化ナトリウムの存在下の抗ＬＡＧ３［１０ｍＭ  Ｌ−ヒスチジン（ｐＨ  ５．８）中の２５ｍｇ  ／ｍＬ］の相対溶解度。
【図１７】Ｌ−アルギニン、Ｌ−ヒスチジンまたは塩化ナトリウムの存在下の抗ＬＡＧ３［１０ｍＭ  Ｌ−ヒスチジン（ｐＨ５．８）中の２５ｍｇ／ｍＬ］の荷電種の変化率。
【図１８】第２ビリアル係数（Ｂ２２）測定を用いる、Ｌ−アルギニン、塩化ナトリウムまたはその混合物の存在下の１０ｍＭ  Ｌ−ヒスチジン（ｐＨ５．８）バッファー中の２５ｍｇ／ｍＬ  抗ＬＡＧ３製剤の最適化。
【図１９】Ｌ−アルギニン、塩化ナトリウムまたはその混合物の存在下の１０ｍＭ  Ｌ−ヒスチジン（ｐＨ５．８）バッファー中の２５ｍｇ／ｍＬ  抗ＬＡＧ３製剤のコロイド安定性（ＯＤ３５０）。
【図２０】Ｌ−アルギニン、塩化ナトリウムまたはその混合物の存在下の１０ｍＭ  Ｌ−ヒスチジン（ｐＨ５．８）バッファー中の抗ＬＡＧ３（６０ｍｇ／ｍＬ）の粘度。
【図２１】Ｌ−アルギニン、塩化ナトリウムまたはその混合物の存在下の１０ｍＭ  Ｌ−ヒスチジン（ｐＨ５．８）バッファー中の抗ＬＡＧ３（２５ｍｇ／ｍＬ）の浸透圧（重量オスモル濃度）。
【図２２】４０℃および２５℃の貯蔵条件での製剤（Ｆ１〜Ｆ６）の経時的な濁度分析。
【図２３】４０℃の貯蔵条件での製剤（Ｆ１〜Ｆ６）の経時的な混合モードクロマトグラフィー分析。各ｍＡｂ（抗ＬＡＧ３および抗ＰＤ−１）に関する単量体の割合の変化が製剤Ｆ１〜Ｆ６に関して経時的にプロットされている。
【図２４】２．５％〜９％の安定剤を伴う７０ｍＭ  Ｌ−アルギニン塩酸塩または２．５％〜９．０％の安定剤を伴う７０ｍＭ  塩化ナトリウムの存在下の２５ｍｇ／ｍＬ  抗ＬＡＧ３製剤［１０ｍＭ  Ｌ−ヒスチジン（ｐＨ５．８）バッファー］の高分子量（ＨＭＷ）種、単量体および低分子量（ＬＭＷ）種の変化率。
【図２５】２．５％〜９％の安定剤を伴う７０ｍＭ  Ｌ−アルギニン塩酸塩または２．５％〜９．０％の安定剤を伴う７０ｍＭ  塩化ナトリウムの存在下の２５ｍｇ／ｍＬ  抗ＬＡＧ３製剤［１０ｍＭ  Ｌ−ヒスチジン（ｐＨ５．８）バッファー］の荷電種の変化率。
【図２６】２．５％〜９％の安定剤を伴う７０ｍＭ  Ｌ−アルギニンまたは２．５％〜９．０％の安定剤を伴う７０ｍＭ  塩化ナトリウムの存在下の２５ｍｇ／ｍＬ  抗ＬＡＧ３製剤［１０ｍＭ  Ｌ−ヒスチジン（ｐＨ５．８）］のＴｍ１、Ｔｍ２およびＴｏｎｓｅｔ（Ｔ開始）。
【図２７】攪拌ストレス下の種々の濃度のポリソルベート８０の存在下の２５ｍｇ／ｍＬ  抗ＬＡＧ３製剤（１０ｍＭ  Ｌ−ヒスチジン、７０ｍＭ  Ｌ−アルギニン、５％  ｗ／ｖ  スクロース、ｐＨ５．８）のコロイド安定性（ＯＤ３５０）。
【図２８】攪拌ストレス下の種々の濃度のポリソルベート８０の存在下の２５ｍｇ／ｍＬ  抗ＬＡＧ３製剤［１０ｍＭ  Ｌ−ヒスチジン（ｐＨ５．８）バッファー、７０ｍＭ  Ｌ−アルギニン塩酸塩、５％  ｗ／ｖ  スクロース］の高分子量（ＨＭＷ）種、単量体および低分子量（ＬＭＷ）種の変化率。
【図２９】攪拌ストレス下の種々の濃度のポリソルベート８０の存在下の２５ｍｇ／ｍＬ  抗ＬＡＧ３製剤（１０ｍＭ  Ｌ−ヒスチジン、７０ｍＭ  Ｌ−アルギニン、５％  ｗ／ｖ  スクロース、ｐＨ５．８）の荷電種の変化率。
【図３０】２５ｍｇ／ｍＬ  抗ＬＡＧ３製剤（１０ｍＭ  Ｌ−ヒスチジン、７０ｍＭ  Ｌ−アルギニン、５％  ｗ／ｖ  スクロース、ｐＨ５．８）の、単独の場合および漸増濃度のＬ−メチオニンの存在下のコロイド安定性（ＯＤ３５０）。
【図３１】２５ｍｇ／ｍＬ  抗ＬＡＧ３製剤（１０ｍＭ  Ｌ−ヒスチジン、７０ｍＭ  Ｌ−アルギニン、５％  ｗ／ｖ  スクロース、ｐＨ５．８）の、単独の場合および漸増量のＬ−メチオニンの存在下の高分子量（ＨＭＷ）種および単量体の変化率。
【図３２】２５ｍｇ／ｍＬ  抗ＬＡＧ３製剤（１０ｍＭ  Ｌ−ヒスチジン、７０ｍＭ  Ｌ−アルギニン、５％  ｗ／ｖ  スクロース、ｐＨ５．８）の、単独の場合および漸増量のＬ−メチオニンの存在下の荷電種の変化率。
【図３３】２５ｍｇ／ｍＬ  抗ＬＡＧ３製剤（１０ｍＭ  Ｌ−ヒスチジン、７０ｍＭ  Ｌ−アルギニン、５％  ｗ／ｖ  スクロース、ｐＨ５．８）の、単独の場合および漸増量のＬ−メチオニンの存在下の酸化の変化率。
【図３４】７０ｍＭ  Ｌ−アルギニン塩酸塩を含有する１０ｍＭ  バッファー（ｐＨ５．８）の存在下の２００ｍｇ／ｍＬ  抗ＬＡＧ３の、単独の場合および種々の安定剤の存在下の濁度（ＯＤ３５０）の変化率。
【図３５】７０ｍＭ  Ｌ−アルギニン塩酸塩を含有する１０ｍＭ  バッファー（ｐＨ５．８）の存在下の２００ｍｇ／ｍＬ  抗ＬＡＧ３の、単独の場合および種々の安定剤の存在下の高分子量（ＨＭＷ）種、単量体および低分子量（ＬＭＷ）種の変化率。
【図３６】７０ｍＭ  Ｌ−アルギニン塩酸塩を含有する１０ｍＭ  バッファー（ｐＨ５．８）の存在下の２００ｍｇ／ｍＬ  抗ＬＡＧ３の、単独の場合および種々の安定剤の存在下の荷電種の変化率。
【図３７】４０〜７０ｍＭ  塩（塩化ナトリウム）および２０〜７０ｍＭ  アミノ酸（単独または幾つかの組合せ）の存在下の２５ｍｇ／ｍＬ  抗ＬＡＧ３の濁度（ＯＤ３５０）の変化率。
【図３８】４０〜７０ｍＭ  塩（塩化ナトリウム）および２０〜７０ｍＭ  アミノ酸（単独または幾つかの組合せ）の存在下の２５ｍｇ／ｍＬ  抗ＬＡＧ３の高分子量（ＨＭＷ）種、単量体および低分子量（ＬＭＷ）種の変化率。
【図３９】４０〜７０ｍＭ  塩（塩化ナトリウム）および２０〜７０ｍＭ  アミノ酸（単独または幾つかの組合せ）の存在下の２５ｍｇ／ｍＬ  抗ＬＡＧ３の荷電種の変化率。
【図４０】４０〜７０ｍＭ  塩（塩化ナトリウム）および２０〜７０ｍＭ  アミノ酸（単独または幾つかの組合せ）の存在下の２５ｍｇ／ｍＬ  抗ＬＡＧ３の流体力学的直径の変化率。
【０２２２】
実施例
実施例：長期安定性研究
抗ＬＡＧ３抗体（配列番号３５および５７、軽鎖および重鎖）を凍結製剤（−７０℃以下での推奨貯蔵）または冷蔵製剤（２〜８℃での推奨貯蔵）のいずれかとして得、以下の実施例において安定性研究を行った。製剤Ａ：２５ｍｇ／ｍＬ  抗ＬＡＧ３抗体（配列番号３５および５７、軽鎖および重鎖）；５０ｍｇ／ｍＬ  スクロース；０．２ｍｇ／ｍＬ  ポリソルベート８０；ｐＨ５．８の１０ｍＭ  ヒスチジンバッファー；７０ｍＭ  Ｌ−アルギニン−ＨＣｌ。該凍結製剤は注入前に室温で解凍される。該製剤を、１３ｍｍエラストマーストッパーとプラスチックフリップオフキャップ付きアルミニウムシールとを備えた使い捨ての滅菌２ｍＬタイプ１ガラスチューブバイアル内にパッケージした。各バイアルは２５ｍｇ／ｍＬの濃度で５０ｍｇ（２．２ｍＬ充填）のラベル表示を含有する。
【０２２３】
安定性試験を、−８０℃±１０℃（直立）、および−２０℃±５℃の加速貯蔵条件（直立）、および５℃±３℃のストレス条件（逆転）で、ＩＣＨガイドラインに従い、−７０℃以下の推奨長期貯蔵条件で行った。また、データは、補足情報として、２５℃（２５℃±３℃／６０％±５％相対湿度、逆転）および４０℃（４０℃±２℃／７５％±５％相対湿度、逆転）で捕捉される。
【０２２４】
実施例２：粒子状物質の研究
製剤Ａにおける抗ＬＡＧ３抗体に関する粒子状物質データを、ｍＨＩＡＣを用いて集めた。該ｍＨＩＡＣはＨＩＡＣ法の修飾形態であり、サンプル体積が小さくなっている。２ミクロン〜１００ミクロンの非可視性（ｓｕｂ−ｖｉｓｉｂｌｅ）微粒子の検出にはＵＳＰ＜７８７＞ＨＩＡＣ試験方法が用いられている。層流フード下で、溶液サンプルを室温に戻し、ついで５０ｍＬポリプロピレンチューブ内に穏やかにプールして、少なくとも６ｍＬの合計容量を５０ｍＬポリプロピレンチューブ内で得た。プールしたサンプルを穏やかに旋回させ、３０分間静置した。プールする前に、凍結乾燥サンプルを２．２ｍＬの注射用水で再構成した。再構成後、試験前に３０分間、サンプルを、周囲条件下、乱さないで静置した。サンプル分析の前に、５０ｍＬ自立型遠心分離管の底部付近にサンプリングプローブの先端を挿入することにより、０．２２ミクロン濾過水で装置を５回フラッシュした。ＰｈａｒｍＳｐｅｃソフトウェアで、サンプリングポートを５０ｍＬのＭｉｌｌｉ−Ｑ水に浸すことにより、ＵＳＰ ３６ ７８８環境標準手順試験をベースラインとして行った。クリーンな系を保証するＵＳＰ ３６ ７８８ Ｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔで試験に合格した場合にのみ、サンプル分析を行った。ＰｈａｒｍＳｐｅｃソフトウェアのハードウェア設定においては、該方法を以下入力パラメーターで設定した：サンプル体積（１．０ｍＬ）、実行回数（５）、希釈係数（１．００）、風袋体積（０ｍＬ）、初回実施の破棄（有り）；ランカウンター用の１６個のチャネルを実行パラメーターに関して選択した（２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１５、２０、２５、３０、５０、７５および９０ミクロン）。サンプルの実施（ラン）の前、プラセボを使用して１回のシリンジ洗浄を行った（装置内の気流を防ぐために、サンプルプローブがサンプル溶液に確実に浸るようにした）。実施の終了時に、プローブおよびセンサーをプラセボで洗浄した。各サンプルごとにプラセボ洗浄工程を繰り返した。サンプル分析のために、各サンプルで１ｍＬの測定を５回行った。最初の２回の実施を破棄し、残りの３回の実施を平均して最終結果を得た。
【０２２５】
１２ヶ月の時点での容器当たりの１０μｍ以上の非可視性粒子の変化および容器当たりの２５μｍ以上の非可視性粒子の変化は−８０℃、−２０℃および５℃の条件では非有意である（図１および図２）。
【０２２６】
実施例３：結合ＥＬＩＳＡによる効力
効力アッセイは、固定化組換えヒトＬＡＧ−３（ｒｈＬＡＧ−３）への抗ＬＡＧ３の結合により、製剤Ａにおける抗ＬＡＧ３活性を評価する。抗ＬＡＧ３参照物質および試験サンプルの系列希釈を用いて、用量応答曲線を作成した。最大結合の５０％を示す抗ＬＡＧ３参照物質および試験サンプルの濃度であるＥＣ５０値を、４パラメータ・ロジスティック曲線フィッティング解析を用いて決定した。ＳｏｆｔＭａｘ（登録商標）Ｐｒｏ  ６ソフトウェア（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｄｅｖｉｃｅｓ，Ｓｕｎｎｙｖａｌｅ，ＣＡ）おいて用量応答曲線の平行線解析（Ｐａｒａｌｌｅｌ  Ｌｉｎｅ  Ａｎａｌｙｓｉｓ）を適用して、相対効力を計算した。試験サンプルの効力を、幾何標準偏差および９５％  信頼区間と共に参照物質に対する幾何平均効力として表した。
【０２２７】
抗ＬＡＧ３に関する−８０℃、−２０℃、５℃、２５℃および４０℃の貯蔵条件での効力安定性データを図３に示す。これまでに得られた結果においては変化は認められず、データは、参照体に対して６０％〜１４０％の効力の許容基準内である。２５℃においては変化は認められず、一方、４０℃においては、３ヶ月の時点で効力の低下が認められるが、尚も表示許容基準内である。
【０２２８】
実施例４：ＵＰ−ＳＥＣ測定による純度
製剤Ａの抗ＬＡＧ３抗体の純度を超高性能サイズ排除クロマトグラフィー（ＵＰ−ＳＥＣ）により評価した。この場合、単量体の割合ならびに高分子量種（ＨＭＷ）および後期溶出ピーク（ＬＭＷ種）の割合を決定した。サンプルを移動相（１００ｍＭ  ホスファート、１００ｍＭ  塩化ナトリウム、ｐＨ７．０）中で１．０ｍｇ／ｍＬに希釈することにより、超高性能サイズ排除クロマトグラフィー（ＵＰ−ＳＥＣ）を行った。カラム温度を２５±３℃に維持し、アイソクラティック溶出を用いて流量を０．５ｍＬ／分に維持した。希釈サンプル（５μＬ）を、Ｗａｔｅｒｓ  ＢＥＨ２００カラムとＵＶ検出器とを備えたＵＰＬＣ内に注入した。サンプル中のタンパク質をサイズで分離し、２１４ｎｍでのＵＶ吸収により検出した。
【０２２９】
ＵＰ−ＳＥＣによる純度を、モノマーの割合に関しては図４に、高分子量種に関しては図５に示す。−８０℃および−２０℃で１２ヶ月までの貯蔵時間または条件の関数としての単量体の割合または高分子量種の割合の変化は認められない（５℃で高分子量種の割合の僅かな増加のみが認められる）。２５℃では、初期と比較して５ヶ月の時点で、高分子量種における０．３％の増加が認められ、単量体の割合における対応する０．５％の減少および０．２％の低分子量種の出現が認められる。４０℃では、初期と比較して３ヶ月の時点で、高分子量種における１．５％の増加および単量体の割合における１．８％の減少が認められる。−８０℃、−２０℃および５℃では、低分子量種のピークは見られなかった。
【０２３０】
実施例５：還元および非還元ＣＥ−ＳＤＳ
還元条件下のＣＥ−ＳＤＳ試験法を用いて、交換可能なＳＤＳゲルマトリックスを含有するキャピラリーにおいて、軽鎖（ＬＣ）、重鎖（ＨＣ）およびそれらの分解産物をそれらのサイズに従い分離することにより、ＩｇＧモノクローナル抗体の純度を決定した。非還元条件下では、ＣＥ−ＳＤＳ試験法を用いて、交換可能なＳＤＳゲルマトリックスを含有するキャピラリーにおいて、無傷ＩｇＧをその成分からそれらのサイズに従い分離することにより、ＩｇＧモノクローナル抗体の純度を決定する。どちらの場合（還元および非還元）も、結果は、合計補正ピーク面積率から計算された各ピークの補正面積率として示されている。サンプルをＣＥ−ＳＤＳ技術により分析した。この場合、タンパク質を、還元条件下および非還元条件下、ドデシル硫酸ナトリウム（ＳＤＳ）で変性させ、キャピラリー電気泳動（ＣＥ）［Ｂｅｃｋｍａｎ−Ｃｏｕｌｔｅｒ  ＰｒｏｔｅｏｍｅＬａｂ  ＰＡ８００  Ｐｌｕｓ  ＣＥシステムおよびＩｇＧ純度／不均質性アッセイキット（Ｐｕｒｉｔｙ／Ｈｅｔｅｒｏｇｅｎｅｉｔｙ  Ａｓｓａｙ  Ｋｉｔ）］を用いて分離した。還元条件では、ｍＡｂサンプルを１．０％  ＳＤＳの存在下で変性させ、５％  β−メルカプトエタノールを使用して還元した。非還元条件では、ｍＡｂサンプルを１．０％  ＳＤＳの存在下で変性させ、Ｎ−エチルマレイミド（ＮＥＭ）で処理した。非還元条件および還元条件のどちらの場合も、７０℃で１０分間の加熱の後、各サンプルを、ＳＤＳゲルマトリックスが充填されたベア融解シリカキャピラリーに５ｋＶで２０秒間注入し、ついで１５  ｋＶで４０分間分離した。分離されたタンパク質バンドを２２０ｎｍのＵＶ吸収で検出した。それらのタンパク質は見掛け分子量に基づいて分離される。非還元条件下では、主要ＩｇＧピーク以外の全ての種が不純物として分類された。還元条件下では、ＩｇＧは重鎖および軽鎖に分離された。他の全ての種は不純物として分類された。どちらの場合も、結果は、合計補正ピーク面積率から計算された各ピークの補正面積率として示されている。
【０２３１】
製剤Ａにおける抗ＬＡＧ３抗体のＣＥ−ＳＤＳによる純度データを抗ＬＡＧ３抗体に関して図９および図１０に示す。図９は還元ＣＥ−ＳＤＳによる純度（％）（重鎖＋軽鎖）を示し、図１０は非還元ＣＥ−ＳＤＳ条件での純度（％）アッセイ（無傷ＩｇＧ）を示す。−８０℃、−２０℃および５℃では１２ヶ月まで、純度（％）（還元）または無傷ＩｇＧ（％）（非還元）における測定可能な変化は認められない。全体として、全ての結果は、重鎖＋軽鎖＞９０．０％および無傷ＩｇＧ＞９０．０％の許容基準内である。２５℃では重鎖＋軽鎖の割合および無傷ＩｇＧの割合におけるそれぞれ１．５％および１．０％の減少が５ヶ月まで見られ、一方、４０℃では重鎖＋軽鎖の割合および無傷ＩｇＧの割合に関する純度におけるそれぞれ５．４％および５．８％の減少が見られる。
【０２３２】
実施例６：ＨＰ−ＩＥＸによる電荷変異体の測定
高性能イオン交換クロマトグラフィー（ＨＰ−ＩＥＸ）を用いて電荷プロファイルを評価した。２８０ｎｍのＵＶ検出器を備えたＤｉｏｎｅｘＭＡｂＰａｃ（登録商標）ＳＣＸ−１０カラムを使用して、イオン交換ＨＰＬＣ法を行った。注入量を１０μＬに設定し、カラム温度を３５℃に維持した。サンプルを精製水中で５ｇ／Ｌに希釈し、分析のために５０μｇを注入した。サンプルのＩＥＸ分析に使用した移動相は以下の移動相の勾配であった。
【０２３３】
移動相Ａ：２５ｍＭ  ２−（Ｎ−モルホリノ）エタンスルホン酸（ＭＥＳ）、１４ｍＭ  ２−アミノ−２−（ヒドロキシメチル）−１，３−プロパンジオール（Ｔｒｉｓ）、ｐＨ６．２５。
【０２３４】
移動相Ｂ：２５ｍＭ  ＭＥＳ、２２ｍＭ  トリス（Ｔｒｉｓ）、１００ｍＭ  塩化リチウム、ｐＨ６．８５。
【０２３５】
ストリッピングバッファーＣ：１５ｍＭ  エチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ）、４０ｍＭ  トリス、１０ｍＭ  ２−（シクロヘキシルアミノ）エタンスルホン酸（ＣＨＥＳ）、５００ｍＭ  塩化ナトリウム、ｐＨ８．１。
【０２３６】
流量を０．５〜１．０ｍＬ／分に維持した。結果はクロマトグラムの総面積に対する相対的百分率として示されている。酸性３、酸性２および酸性１を合わせたものが「酸性変異体」なる範疇として示されており、塩基性１、塩基性２および塩基性３を合わせたものが「塩基性変異体」なる範疇として示されている。主要物の割合（％）は「主要」なる範疇として示されている。
【０２３７】
製剤Ａにおける抗ＬＡＧ３抗体のＨＰ−ＩＥＸ法による酸性変異体の割合、総主要物の割合および塩基性変異体の割合を、抗ＬＡＧ３抗体に関して、−８０℃、−２０℃、５℃、２５℃および４０℃の温度条件について、それぞれ図６、図７および図８に示す。−８０℃、−２０℃および５℃の貯蔵条件では、１２ヶ月の安定性データのモニタリングの後、いずれの電荷変異体においても変化は何ら認められない。２５℃では、安定性に関して５ヶ月後、初期と比較して、総主要ピークの割合は９．７％減少し、酸性変異体の割合は１１％増加し、一方、塩基性変異体の割合は１．４％の僅かな減少を示した。４０℃では、安定性に関して５ヶ月後、初期と比較して、総主要ピークの割合は３６．２％の有意な減少を示し、酸性変異体の割合は３９．３％も有意に増加し、一方、塩基性変異体の割合は３．１％の僅かな減少を示した。
【０２３８】
実施例７：濁度の研究
製剤Ａにおける抗ＬＡＧ３抗体の濁度を、Ｓｐｅｃｔｒａｍａｘ  Ｍ５リーダーを使用して、３５０ｎｍの吸光度から決定した。−８０℃、−２０℃および５℃での貯蔵に関しては、１２か月の安定状態の後、貯蔵時間または条件の関数としての濁度の大きな変化は認められない。補足情報として用いられる２５℃および４０℃の貯蔵から収集されたデータに関しては、２５℃でステージ分類されたサンプルに関して、初期時点の０．０７４から５ヶ月の時点の０．１００への濁度の増加が認められる。４０℃でステージ分類されたサンプルに関しては、初期時点の０．０７４から３ヶ月の時点の０．１５０への濁度の有意な増加が認められている。
【０２３９】
要約すると、抗ＬＡＧ３抗体に関する１２ヶ月間の安定性データは、−７０℃以下の貯蔵条件での貯蔵の後、実質的な変化を示していない。また、−２０℃の加速条件または５℃のストレス条件では、有意な変化は認められない。
【０２４０】
実施例８：抗ＬＡＧ３抗体のｐＨ範囲の研究
抗ＬＡＧ３抗体製剤Ａを、５．８の目標製剤ｐＨを考慮して、５．３〜６．４のｐＨ範囲でスクリーニングした。図１４において認められるとおり、ｐＨ５．３〜ｐＨ６．４においては、濃度、濁度、高分子量種の割合、低分子量種の割合または単量体の割合における有意な変化は認められなかった。ｐＨ５．３からｐＨ６．４までに、酸性変異体の割合の減少（例えば、ｐＨ５．５における１７．２８％からｐＨ６．０における１４．１０％へ）が主要ピークの割合の増加（例えば、ｐＨ５．５における６４．０％からｐＨ６．０における６６．９％へ）の最中に認められた。ｐＨ５．３からｐＨ６．４までのＺ−ａｖｅ流体力学的直径の変化は最小（１ｎｍ未満）であった。約６．３の等電点に近いｐＨ（すなわち、ｐＨ６．０およびｐＨ６．４）において、１ミリリットル当たりの非可視性微粒子（５μｍ以上、１０μｍ以上および２５μｍ以上のサイズ範囲）の僅かな増加が認められた。全体として、抗ＬＡＧ３抗体はｐＨ５．３〜ｐＨ６．４で安定であることが判明した。このことは、目標製剤ｐＨとしてｐＨ５．８を選択することを裏付けるものである。
【０２４１】
実施例９：抗ＬＡＧ３抗体の自己会合の低減のための条件の研究
拡散相互作用パラメーター（ｋＤ）の測定
１０ｍＭ  ヒスチジン（ｐＨ５．６）中のＢ２２は負であることが判明した。このことは、該分子の固有の特性が自己会合性であることを示している。１０ｍＭ  ヒスチジン（ｐＨ５．６）中のに５０ｍＭ  塩化ナトリウムの存在は、図１２に示されているとおり、拡散相互作用パラメーター（ＫＤ）を増加させ、または自己相互作用を低減し、相対溶解度を改善し、抗ＬＡＧ３抗体の濁度（ＯＤ３５０）を減少させることが判明した。拡散相互作用パラメーター（ＫＤ）、濁度（ＯＤ３５０）および相対溶解度（％ＰＥＧ中点（ｍｉｄ−ｐｏｉｎｔ））アッセイを用いて、４０ｍＭ  Ｌ−アルギニン塩酸塩の存在下、１０ｍＭ  ヒスチジン（ｐＨ５．６）中の抗ＬＡＧ３抗体の安定性を調べた。図１３において認められるとおり、自己相互作用および濁度は劇的に減少することが判明し、一方、抗ＬＡＧ３抗体の相対溶解度は、ｐＨ５．６の１０ｍＭ  ヒスチジンバッファー中の４０ｍＭ  Ｌ−アルギニン塩酸塩の添加に際して、有意に改善されることが判明した。５０ｍｇ／ｍＬ  抗ＬＡＧ３抗体を使用する、Ｌ−アルギニン塩酸塩の範囲試験（４０ｍＭ〜１００ｍＭ）を、ｐＨ５．８およびｐＨ６．０で行った。この場合、７０ｍＭ（１４．７ｍｇ／ｍＬ）のＬ−アルギニン塩酸塩濃度が、自己相互作用を低減するのに、およびコロイド安定性を改善するのに有効であることが判明した（図１３）。
【０２４２】
抗ＬＡＧ３はより低いイオン強度（１０ｍＭ）のバッファーにおいて相分離することが判明している。異なる濃度レベル（ｍＭ）の３つの異なる荷電種［Ｌ−アルギニン、Ｌ−ヒスチジンおよび塩化ナトリウム（ＮａＣｌ）］の存在下、抗ＬＡＧ３の自己会合特性ならびにコロイド的、物理的、化学的および熱的安定性を評価するために、以下の表３に挙げられている９つの異なる製剤を調製した。１０ｍＭ  Ｌ−ヒスチジン  ７０ｍＭ  Ｌ−アルギニン塩酸塩（ｐＨ５．８）中の未製剤化抗ＬＡＧ３（約３７ｍｇ／ｍＬ）を３つの１０ｍＭ  ヒスチジン（ｐＨ５．８）バッファー（各バッファーは１００ｍＭ  Ｌ−アルギニン、１００ｍＭ  塩化ナトリウムまたは１００ｍＭ  Ｌ−ヒスチジンを含有する）に対して透析した。それぞれの製剤の透析液を使用して、抗ＬＡＧ３を２５ｍｇ／ｍＬで製剤化した。４０ｍＭ〜１３０ｍＭのＬ−アルギニンまたは塩化ナトリウムを含有する製剤を、それぞれの抗ＬＡＧ３ストック溶液をｐＨ５．８のＬ−ヒスチジンバッファーで希釈し抗ＬＡＧ３を２５ｍｇ／ｍＬに濃縮することにより、調製した。
【表３】
2020518587.tif 000021
【０２４３】
前記の９つの製剤の拡散相互作用パラメーター（ｋＤ）を、２０℃で動的光散乱（ＤＬＳ）を用いて、５回のデータ取得に関して評価した。相互作用パラメーター（ｋＤ）を、それぞれの製剤の一連の希釈濃度（ｍｇ／ｍＬ）に対する記録された拡散係数値（ｃｍ２／ｓ）のプロットの勾配およびｙ切片から計算した。正の拡散相互作用パラメーター（ｋＤ）は反発相互作用を示唆する。Ｌ−アルギニン、Ｌ−ヒスチジンまたは塩化ナトリウムの濃度が増加するにつれて（＞４０ｍＭ）、抗ＬＡＧ３はｋＤの増加を示している。これは分子自己会合の低減（分子クラウディングの低減）を示唆する。この効果は、Ｌ−アルギニン、それに続いて塩化ナトリウムおよびＬ−ヒスチジンの相対順序で、比較的顕著である（図１５を参照されたい）。
【０２４４】
相対溶解度研究
前記の９つの製剤の自動化相対溶解度スクリーニングを、１０ｍｇ／ｍＬのタンパク質濃度を要するポリエチレングリコール（ＰＥＧ）誘発性沈殿を用いて評価した。４０％（ｗ／ｖ）ＰＥＧ  ６０００を各バッファー中で調製し、ついで、ＪＡＮＵＳ  Ｇ３自動液体処理システムを使用して、種々の増分の２％〜３６％（ｗ／ｖ）のＰＥＧ−６０００の溶液を調製した。１０ｍｇ／ｍＬのタンパク質溶液を９６ウェル・コスター（ｃｏｓｔａｒ）透明プレート内のＰＥＧ溶液に加えて、１ｍｇ／ｍＬの最終アッセイ濃度を得た。プレートを室温で一晩平衡化し、Ａｂｇｅｎｅ  ＰＣＲプレートに移し、４６００ｒｐｍで３０分間遠心させて、各ウェルの底にタンパク質を強制的に沈殿させた。上清を各ウェルから新鮮な９６ウェル・コスター透明プレートに移した。プレートをＳｐｅｃｔｒａＭａｘ  Ｍ５プレートリーダーで２８０および３２０ｎｍで読取って、一晩のインキュベーション中の沈殿によるタンパク質損失を測定した。吸光度（２８０〜３２０）対ＰＥＧ濃度のデータを分析して、％ＰＥＧｍｉｄｐｔを決定した。
【０２４５】
抗ＬＡＧ３は、漸増濃度の荷電種、例えばＬ−アルギニン、Ｌ−ヒスチジンまたは塩化ナトリウム（４０ｍＭから１００ｍＭまで）の存在下、改善された相対溶解度を示し、これは、それらの濃度における抗ＬＡＧ３の分子クラウディングの低減を示唆している。図１６を参照されたい。相対溶解度の改善の大きさは３つの荷電種間で類似していた。
【０２４６】
荷電種の変化の研究
ＰｒｏｔｅｉｎＳｉｍｐｌｅのキャピラリー等電点電気泳動（ｃＩＥＦ）系を使用して、Ｌ−アルギニン、Ｌ−ヒスチジンまたは塩化ナトリウムの存在下の抗ＬＡＧ３の荷電不均一性および等電点（ｐＩ）の変化を評価した。キャピラリー（毛細管）内への注入の前に、サンプルを担体両性電解質と混合した。キャピラリーに電界をかけることにより、キャピラリー内の担体両性電解質によりｐＨ勾配が生成され、タンパク質分子は、局所ｐＨ値が等電点ｐＨ（ｐＩ）値と等しくなるキャピラリー内の位置に移動した。分離されたタンパク質の検出は、ｉＣＥ系（ＰｒｏｔｅｉｎＳｉｍｐｌｅのｉＣＥ３）を使用してキャピラリー全体のフルスキャンを行うことにより達成された。該装置により撮影された最後のイメージをデータ定量に使用した。分離されたピークの面積率は、個々の種の面積をタンパク質の総面積で割り算することにより推定される。タンパク質のｐＩ値は、タンパク質を挟む２つのｐＩマーカーの間の距離を直線的に較正することにより推定される。動作パラメータは１０℃のオートサンプラー温度、フルオロカーボン（ＦＣ）被覆カートリッジ、２８０ｎｍの検出波長および１５００Ｖで１分間の集束時間を含んでいた。前記の９つの製剤を９６ウェルプレートに移し、ｃＩＥＦを使用して、初期時点における荷電種（酸性変異体の割合、主要ピークの割合および塩基性変異体の割合）の変化を評価した。前記の９つの製剤の残りのサンプルを別の９６ウェルプレートに移し、しっかりと密閉して、５０℃で１０日間熱ストレスをかけた。ストレス下で、荷電種の変化を再評価した。図１７におけるデータは、初期と比較した場合の、熱ストレスの際の酸性変異体の割合の変化（差）、主要ピークの変化率および塩基性変異体の変化率を示す。
【０２４７】
塩化ナトリウムは抗ＬＡＧ３製剤に関する酸性変異体の割合および主要ピークの割合における最小の変化を示し、Ｌ−アルギニンおよびＬ−ヒスチジンがこれに続いた。塩化ナトリウムは４０〜１００ｍＭの濃度範囲、特に７０ｍＭ以上の濃度で化学的安定性の改善を示した。Ｌ−アルギニンは７０ｍＭの濃度で、より良好な化学的安定性を示し、一方、Ｌ−ヒスチジンは１００ｍＭまでの濃度で、より良好な化学的安定性を示した。
【０２４８】
Ｌ−アルギニンまたは塩化ナトリウム（ＮａＣｌ）の存在下の抗ＬＡＧ３の自己会合特性とコロイド安定性を評価するために、表４に挙げられている１２個の異なる製剤を調製した。１０ｍＭ  Ｌ−ヒスチジン  ７０ｍＭ  Ｌ−アルギニン塩酸塩（ｐＨ５．８）中の未製剤化抗ＬＡＧ３（約３７ｍｇ／ｍＬ）を４つの１０ｍＭ  ヒスチジン（ｐＨ５．８）バッファー溶液に対して透析した。それらの各バッファー溶液は１５０ｍＭ  Ｌ−アルギニン、１５０ｍＭ塩化ナトリウム、または３５ｍＭ  Ｌ−アルギニンと３５ｍＭ  塩化ナトリウムとの混合物、または５０ｍＭ  Ｌ−アルギニンと５０ｍＭ  塩化ナトリウムとの混合物のいずれかを含有する。それぞれの製剤の透析液を使用して、抗ＬＡＧ３を２５ｍｇ／ｍＬで製剤化した。４０ｍＭ〜１３０ｍＭのＬ−アルギニンまたは塩化ナトリウムを含有する製剤を、それぞれの抗ＬＡＧ３ストック溶液をｐＨ５．８のＬ−ヒスチジンバッファーで希釈し抗ＬＡＧ３を２５ｍｇ／ｍＬに濃縮することにより調製した。
【表４】
2020518587.tif 000022
【０２４９】
第２ビリアル係数（Ｂ２２）測定
動的光散乱（ＤＬＳ）を用いて、前記の１２個の製剤のそれぞれに関する第２ビリアル係数（Ｂ２２）の測定を５ｍｇ／ｍＬで行った。１７３°の後方散乱を用いて、自動測定を２０℃で行った。
【０２５０】
正の第２ビリアル係数（Ｂ２２）は製剤マトリックスにおけるタンパク質分子間の反発相互作用（より低いクラウディング）を示唆している。４０ｍＭを超える濃度のＬ−アルギニンと塩化ナトリウムとの両方が分子クラウディングの低減に有利であるようであった。図１８を参照されたい。
【０２５１】
濁度（ＯＤ３５０）測定
製剤マトリックス中の抗ＬＡＧ３のコロイド安定性を評価するために、紫外線（ＵＶ）吸収分光光度計を使用して、前記の１２個の製剤の濁度（ＯＤ３５０）を評価した。サンプルのＵＶ吸光度を９６ウェル・コスター透明プレート内で３５０ｎｍの波長で測定した。この場合、プレート吸光度に関してパスチェック（ｐａｔｈｃｈｅｃｋ）を補正した。
【０２５２】
抗ＬＡＧ３は漸増濃度のＬ−アルギニンまたは塩化ナトリウムの存在下でコロイド安定性（ＯＤ３５０）の改善を示し、それらの２つの間の値は同等であった。図１９を参照されたい。抗ＬＡＧ３製剤マトリックス中のＬ−アルギニンと塩化ナトリウムとの等しい比（３５：３５または５０：５０）は同等のコロイド安定性をも示している。
【０２５３】
粘度測定
種々の製剤マトリックス中の抗ＬＡＧ３の濃縮性を評価するために、表４に挙げられている１２個の抗ＬＡＧ３製剤を、エッペンドルフ遠心分離機を１５℃、３０００ｒｐｍで使用して６０ｍｇ／ｍＬまで濃縮した。それらの１２個の製剤の粘度を、９６ウェルプレート上でＲｈｅｏＳｅｎｓｅＶＲＯＣ（登録商標）Ｉｎｉｔｉｕｍ粘度計を使用して２０℃で測定した。
【０２５４】
Ｌ−アルギニンまたは塩化ナトリウム混合物の存在下の６０ｍｇ／ｍＬでの抗ＬＡＧ３の粘度は４０〜１５０ｍＭの濃度範囲で同等であった。等しい比（３５：３５または５０：５０）のＬ−アルギニンおよび塩化ナトリウムの存在下の６０ｍｇ／ｍＬでの粘度は類似した粘度値を示した。図２０を参照されたい。
【０２５５】
浸透圧測定
Ｖａｐｒｏ  Ｖａｐｏｒ  Ｐｒｅｓｓｕｒｅ  ５５２０  Ｏｓｍｏｍｅｔｅｒを使用して、抗ＬＡＧ３の浸透圧を測定した。測定前に１００ｍｍｏｌ／ｋｇ、２９０ｍｍｏｌ／ｋｇおよび１０００ｍｍｏｌ／ｋｇの較正標準で単位を較正した。
【０２５６】
表４に挙げられている前記の１２個の抗ＬＡＧ３製剤の浸透圧はＬ−アルギニンまたは塩化ナトリウムのいずれかの存在下で同等であることが判明した。等しい比（５０：５０）のＬ−アルギニンおよび塩化ナトリウムの存在下の浸透圧は類似した粘度値を示し、一方、３５：３５の同等比はより低い浸透圧値を示した。図２１を参照されたい。
【０２５７】
実施例１０：荷電種（塩およびアミノ酸）の存在下の製剤化前スクリーニング
荷電種（塩およびアミノ酸）の存在下の抗ＬＡＧ３の安定性を評価するために、表５に挙げられている１０個の製剤を調製し、ハイスループット分析により抗ＬＡＧ３の物理化学的特性の変化に関してスクリーニングした。それらの製剤を９６ウェルプレート内に適切に密封し、乾熱オーブン内で５０℃で１０日間ストレスをかけた。熱ストレスにさらしたサンプルを抗ＬＡＧ３の物理化学的特性の変化に関しても評価した。溶解度限界に基づいて、Ｌ−アスパラギン酸またはＬ−グルタミン酸の２０ｍＭ濃度を選択した。
【表５】
2020518587.tif 000023
【０２５８】
濁度に関するプロトコル（ＯＤ３５０）
紫外線（ＵＶ）吸収分光光度計を使用して、前記の９個の製剤の濁度（ＯＤ３５０）を評価した。サンプルのＵＶ吸光度を９６ウェル・コスター透明プレート内で３５０ｎｍの波長で測定した。この場合、プレート吸光度に関してパスチェック（ｐａｔｈｃｈｅｃｋ）を補正した。
【０２５９】
図３７において認められるとおり、熱ストレスの際の抗ＬＡＧ３のコロイド安定性（ＯＤ３５０）の変化は４０ｍＭの塩化ナトリウムまたはＬ−アルギニン間で２０ｍＭのＬ−アスパラギン酸またはＬ−グルタミン酸と同等であった。同様に、７０ｍＭの塩化ナトリウムまたはＬ−アルギニン間の抗ＬＡＧ３のコロイド安定性（ＯＤ３５０）の変化は２０ｍＭ  Ｌ−アスパラギン酸またはＬ−グルタミン酸と５０ｍＭ  グリシンとの組合せ（７０ｍＭの総強度）と同等であった。４０ｍＭまたは７０ｍＭ  Ｌ−ヒスチジンの存在下の抗ＬＡＧ３のコロイド安定性（ＯＤ３５０）の変化は比較的高かった。
【０２６０】
ＵＰ−ＳＥＣ
サンプルの純度をＵＰ−ＳＥＣにより評価した。この場合、単量体の割合ならびに高分子量種（ＨＭＷ）および後期溶出ピーク（ＬＭＷ種）の割合を決定した。移動相（１００ｍＭ  ホスファート、１００ｍＭ  塩化ナトリウム、ｐＨ７．０）中でサンプルを１．０ｍｇ／ｍＬに希釈することにより、Ａｃｑｕｉｔｙ  Ｈクラス（ＤＳ）でＵＰ−ＳＥＣを行った。カラム温度を２５±３℃に維持し、アイソクラティック溶出を用いて流量を０．５ｍＬ／分に維持した。希釈サンプル（１μＬ）を、Ｗａｔｅｒｓ  ＢＥＨ２００カラムとＵＶ検出器とを備えたＵＰＬＣ内に注入した。サンプル中のタンパク質をサイズで分離し、２１４ｎｍでのＵＶ吸収により検出した。
【０２６１】
図３８において認められるとおり、熱ストレスの際の抗ＬＡＧ３の可溶性凝集物レベル（高分子量種（ＨＭＷ）の割合）の変化および単量体の割合の変化は４０〜７０ｍＭの塩化ナトリウムおよび２０〜７０ｍＭのアミノ酸の単独体および幾つかの組合せの間で同等であった。低分子量種の変化は、２０ｍＭ  Ｌ−アスパラギン酸またはＬ−グルタミン酸、４０ｍＭ  Ｌ−ヒスチジン、７０ｍＭ  塩化ナトリウムおよび２０ｍＭ  Ｌ−アスパラギン酸と５０ｍＭ  グリシンとの組合せに関して、比較的低かった。
【０２６２】
ｃＩＥＦ
ＰｒｏｔｅｉｎＳｉｍｐｌｅのキャピラリー等電点電気泳動（ｃＩＥＦ）系を使用して、Ｌ−アルギニン、Ｌ−ヒスチジンまたは塩化ナトリウムの存在下の抗ＬＡＧ３の荷電不均一性および等電点（ｐＩ）の変化を評価した。キャピラリー（毛細管）内への注入の前に、サンプルを担体両性電解質と混合した。キャピラリーに電界をかけることにより、キャピラリー内の担体両性電解質によりｐＨ勾配が生成され、タンパク質分子は、局所ｐＨ値が等電点ｐＨ（ｐＩ）値と等しくなるキャピラリー内の位置に移動した。分離されたタンパク質の検出は、ｉＣＥ系（ＰｒｏｔｅｉｎＳｉｍｐｌｅのｉＣＥ３）を使用してキャピラリー全体のフルスキャンを行うことにより達成された。該装置により撮影された最後のイメージをデータ定量に使用した。分離されたピークの面積率は、個々の種の面積をタンパク質の総面積で割り算することにより推定される。タンパク質のｐＩ値は、タンパク質を挟む２つのｐＩマーカーの間の距離を直線的に較正することにより推定される。動作パラメータは１０℃のオートサンプラー温度、フルオロカーボン（ＦＣ）被覆カートリッジ、２８０ｎｍの検出波長および１５００Ｖで１分間の集束時間を含んでいた。図３９におけるデータは、初期と比較した場合の、熱ストレスの際の酸性変異体の割合の変化（差）、主要ピークの変化率および塩基性変異体の変化率を示す。
【０２６３】
図３９において認められるとおり、２０ｍＭ  Ｌ−アスパラギン酸またはＬ−グルタミン酸、４０ｍＭ  Ｌ−ヒスチジンおよび４０ｍＭ  Ｌ−アルギニンの間で、抗ＬＡＧ３の酸性変異体および主要ピークの割合の変化は同等であった。該変化は４０ｍＭ  塩化ナトリウムで最低であった。同様に、７０ｍＭでの酸性変異体および主要ピークの割合の変化はＬ−ヒスチジンおよび２０ｍＭ  Ｌ−アスパラギン酸またはＬ−グルタミン酸と５０ｍＭ  グリシンとの組合せの間で同等であった。該変化は７０ｍＭ  塩化ナトリウムおよび７０ｍＭ  Ｌ−アルギニンで最低であった。塩基性変異体の割合の変化は、表５に挙げられている１０個全ての製剤で最小であった。
【０２６４】
ＤＬＳ
流体力学的直径の測定を、９６ウェルガラス底プレート上でワイアット（Ｗｙａｔｔ）動的光散乱（ＤＬＳ）装置を使用して行った。サンプルを５ｍｇ／ｍＬのタンパク質濃度に希釈し、５回の測定で５秒の持続時間で、２０℃で１５８°の散乱検出を用いる自動モードで測定を行った。
【０２６５】
図４０において認められるとおり、２０ｍＭ  Ｌ−アスパラギン酸またはＬ−グルタミン酸、およびそれと５０ｍＭグリシンとの組合せにおいて、抗ＬＡＧ３の直径の変化率は最小であった。直径の変化は塩化ナトリウム（４０〜７０ｍＭ）、Ｌ−アルギニン（４０〜７０ｍＭ）およびＬ−ヒスチジン（４０〜７０ｍＭ）で６〜１１％であり、アッセイ変動範囲内であった。
【０２６６】
実施例１１：安定剤のスクリーニング
糖およびポリオールのような種々の安定剤の存在下の抗ＬＡＧ３（１０ｍＭ  Ｌ−ヒスチジン  ７０ｍＭ  Ｌ−アルギニン塩酸塩またはｐＨ  ５．８の７０ｍＭ  塩化ナトリウム中の２５ｍｇ／ｍＬ）の安定性を評価するため、表６に挙げられている１１個の製剤を調製した。
【表６】
2020518587.tif 000024
【０２６７】
超高性能サイズ排除クロマトグラフィー（ＵＰ−ＳＥＣ）
サンプルの純度をＵＰ−ＳＥＣにより評価した。この場合、単量体の割合ならびに高分子量種（ＨＭＷ）および後期溶出ピーク（ＬＭＷ種）の割合を決定した。移動相（１００ｍＭ  ホスファート、１００ｍＭ  塩化ナトリウム、ｐＨ７．０）中でサンプルを１．０ｍｇ／ｍＬに希釈することにより、Ｗａｔｅｒｓ  Ａｃｑｕｉｔｙ  ＵＰＬＣ系Ｈクラス  ＢｉｏでＵＰ−ＳＥＣを行った。カラム温度を２５±３℃に維持し、アイソクラティック溶出を用いて流量を０．５ｍＬ／分に維持した。希釈サンプル（５μＬ）を、Ｗａｔｅｒｓ  ＢＥＨ２００カラムとＵＶ検出器とを備えたＵＰＬＣ内に注入した。サンプル中のタンパク質をサイズで分離し、２１４ｎｍでのＵＶ吸収により検出した。
【０２６８】
図２４において認められるとおり、抗ＬＡＧ３（１０ｍＭ  Ｌ−ヒスチジン  ｐＨ５．８、７０ｍＭ  Ｌ−アルギニン中の２５ｍｇ／ｍＬ）の高分子量種および単量体の変化率は、スクロース、トレハロース、ＰＥＧ  ４００およびグリセロールのような安定剤の存在下では、より低いことが判明した。該効果は、抗ＬＡＧ３（１０ｍＭ  Ｌ−ヒスチジン  ｐＨ５．８、７０ｍＭ  Ｌ−アルギニン塩酸塩中の２５ｍｇ／ｍＬ）の単独の場合と比較して、より高いスクロースおよびトレハロース濃度（９％  ｗ／ｖ）で顕著であった。同様に、抗ＬＡＧ３（１０ｍＭ  Ｌ−ヒスチジン  ｐＨ５．８、７０ｍＭ  塩化ナトリウム中の２５ｍｇ／ｍＬ）の高分子量種の変化率および単量体の割合は、抗ＬＡＧ３（１０ｍＭ  Ｌ−ヒスチジン  ｐＨ５．８、７０ｍＭ  塩化ナトリウム中の２５ｍｇ／ｍＬ）の単独の場合と比較して、スクロースの存在下ではより低く、より高いスクロースおよびトレハロース濃度（９％  ｗ／ｖ）において顕著な効果が認められた。
【０２６９】
荷電種の変化（ｃＩＥＦ）
ＰｒｏｔｅｉｎＳｉｍｐｌｅのキャピラリー等電点電気泳動（ｃＩＥＦ）系を使用して、Ｌ−アルギニン、Ｌ−ヒスチジンまたは塩化ナトリウムの存在下の抗ＬＡＧ３の荷電不均一性および等電点（ｐＩ）の変化を評価した。キャピラリー（毛細管）内への注入の前に、サンプルを担体両性電解質と混合した。キャピラリーに電界をかけることにより、キャピラリー内の担体両性電解質によりｐＨ勾配が生成され、タンパク質分子は、局所ｐＨ値が等電点ｐＨ（ｐＩ）値と等しくなるキャピラリー内の位置に移動した。分離されたタンパク質の検出は、ｉＣＥ系（ＰｒｏｔｅｉｎＳｉｍｐｌｅのｉＣＥ３）を使用してキャピラリー全体のフルスキャンを行うことにより達成された。該装置により撮影された最後のイメージをデータ定量に使用した。分離されたピークの面積率は、個々の種の面積をタンパク質の総面積で割り算することにより推定される。タンパク質のｐＩ値は、タンパク質を挟む２つのｐＩマーカーの間の距離を直線的に較正することにより推定される。動作パラメータは１０℃のオートサンプラー温度、フルオロカーボン（ＦＣ）被覆カートリッジ、２８０ｎｍの検出波長および１５００Ｖで１分間の集束時間を含んでいた。
【０２７０】
前記の１１個の製剤を２ｍＬの滅菌バイアル内に充填し（２．０ｍＬ充填）、密封し、蓋をし、目視検査した。初期時点のそれらの１１個の製剤を２〜８℃（光から保護）で貯蔵し、熱ストレスにさらすことを意図したサンプルを、光から保護された容器において反転させて、乾熱オーブン内で５０℃で１０日間配置した。図２５におけるデータは、初期と比較した場合の、熱ストレスの際の酸性変異体の割合の変化（差）、主要ピークの変化率および塩基性変異体の変化率を示す。
【０２７１】
図２５に示されているとおり、抗ＬＡＧ３［１０ｍＭ  Ｌ−ヒスチジン、７０ｍＭ  Ｌ−アルギニン（ｐＨ５．８）中の２５ｍｇ／ｍＬ］は、５％  スクロースの存在下、化学的不安定性の低減を示す。トレハロース（５％  ｗ／ｖおよび１０％  ｗ／ｖ）、ソルビトール、ＰＥＧ  ４００およびグリセロールの安定化効果は同等であった。抗ＬＡＧ３［１０ｍＭ  Ｌ−ヒスチジン、７０ｍＭ  塩化ナトリウム（ｐＨ５．８）中の２５ｍｇ／ｍＬ］は、スクロースの非存在下、より優れた化学的安定性を示した。
【０２７２】
ＤＳＣ
表６に挙げられている１１個の抗ＬＡＧ３製剤の熱容量（ｃｐ）（ｋｃａｌ／℃単位）を、１ｍｇ／ｍＬで示差走査微量熱量測定（ＤＳＣ）を用いて測定した。前記の１１個の製剤のＴｍ１、Ｔｍ２およびＴｏｎｓｅｔを温度（℃）に対するｃｐ（ｃａｌ／ｍｏｌ／℃）のプロットから決定した。
【０２７３】
図２６において認められるとおり、Ｔｍ１、Ｔｍ２およびＴｏｎｓｅｔの値に基づけば、スクロースおよびトレハロース（それぞれ５％  ｗ／ｖ〜９％  ｗ／ｖ）は抗ＬＡＧ３［１０ｍＭ  Ｌ−ヒスチジン、７０ｍＭ  Ｌ−アルギニン塩酸塩（ｐＨ５．８）中の２５ｍｇ／ｍＬ］および抗ＬＡＧ３［１０ｍＭ  Ｌ−ヒスチジン、７０ｍＭ  塩化ナトリウム（ｐＨ５．８）中の２５ｍｇ／ｍＬ］に安定化効果をもたらした。ソルビトール、ＰＥＧ  ４００およびグリセロールの安定化効果は同等であった。
【０２７４】
実施例１２：ポリソルベート濃度範囲の研究
製剤マトリックス［１０ｍＭ  Ｌ−ヒスチジン、７０ｍＭ  Ｌ−アルギニン塩酸塩、５％  ｗ／ｖ  スクロース（ｐＨ５．８）中の２５ｍｇ／ｍＬ  抗ＬＡＧ３］におけるポリソルベート８０の最適濃度を決定するために、表７に示されているとおりに０ｍｇ／ｍＬ〜１．０ｍｇ／ｍＬの範囲のポリソルベートをそれぞれが含有する８つの異なる製剤を調製した。該製剤を３００ｒｐｍの振とう攪拌に最大７日間付した。２つの製剤はプラセボからなるものであった（抗ＬＡＧ３を含有しない同じ製剤マトリックス中の０．１ｍｇ／ｍＬまたは１．０ｍｇ／ｍＬ  ポリソルベート８０、すなわち、表７における製剤番号１）。
【表７】
2020518587.tif 000025
【０２７５】
濁度
種々の濃度のポリソルベート８０を含有する製剤マトリックス中の抗ＬＡＧ３のコロイド安定性を評価するために、紫外線（ＵＶ）吸収分光光度計を使用して、前記の８個の製剤の濁度（ＯＤ３５０）を評価した。サンプルのＵＶ吸光度を９６ウェル・コスター透明プレート内で３５０ｎｍの波長で測定した。この場合、プレート吸光度に関してパスチェック（ｐａｔｈｃｈｅｃｋ）を補正した。
【０２７６】
図２７において認められるとおり、ポリソルベート８０の非存在下、製剤マトリックス中の抗ＬＡＧ３［１０ｍＭ  Ｌ−ヒスチジン、７０ｍＭ  Ｌ−アルギニン塩酸塩、５％  ｗ／ｖ  スクロース（ｐＨ５．８）中の２５ｍｇ／ｍＬ  抗ＬＡＧ３］は攪拌に際して濁度の増加を示した。製剤マトリックス［１０ｍＭ  Ｌ−ヒスチジン、７０ｍＭ  Ｌ−アルギニン塩酸塩、５％  ｗ／ｖ  スクロース（ｐＨ５．８）中の２５ｍｇ／ｍＬ  抗ＬＡＧ３］中の０．１ｍｇ／ｍＬ〜１．０ｍｇ／ｍＬの濃度のポリソルベート８０の存在下、抗ＬＡＧ３は安定であることが判明した。０．１ｍｇ／ｍＬ〜１．０ｍｇ／ｍＬのプラセボのコロイド安定性への影響は認められなかった。
【０２７７】
ＵＰ−ＳＥＣ
サンプルの純度をＵＰ−ＳＥＣにより評価した。この場合、単量体の割合ならびに高分子量種（ＨＭＷ）および後期溶出ピーク（ＬＭＷ種）の割合を決定した。移動相（０．１Ｍ  リン酸ナトリウム一塩基性一水和物、０．１Ｍ  リン酸ナトリウム二塩基性二水和物、０．１Ｍ  Ｌ−アルギニン、ｐＨ７．０）中でサンプルを１．０ｍｇ／ｍＬに希釈することにより、Ｗａｔｅｒｓ  Ａｃｑｕｉｔｙ液体クロマトグラフィー系でＵＰ−ＳＥＣを行った。希釈サンプル（５μＬ）を、Ｐｒｏｔｅｉｎ  ＢＥＨ  ＳＥＣカラムとＵＶ検出器とを備えた液体クロマトグラフィー内に注入した。サンプル中のタンパク質をサイズで分離し、２１４ｎｍでのＵＶ吸収により検出した。
【０２７８】
図２８において認められるとおり、ポリソルベート８０（０．１〜１．０ｍｇ／ｍＬ濃度）の存在下、可溶性凝集物レベル（高分子量種の割合）または断片化（低分子種の割合）の変化も単量体の割合の変化も認められなかった。抗ＬＡＧ３は製剤マトリックス中のポリソルベート８０の存在下でコロイド的に安定であることが判明した。
【０２７９】
ＨＰ−ＩＥＸ
抗ＬＡＧ３製剤中の電荷変異体を決定するために、高性能イオン交換クロマトグラフィー（ＨＰ−ＩＥＸ）を用いた。ＤｉｏｎｅｘＭａｂＰａｃ（登録商標）ＳＣＸ−１０、１０μｍ  ４×２５０ｍｍカラム、および２５ｍＭ  ＭＥＳ、１４ｍＭ  Ｔｒｉｓ（ｐＨ６．２５）から２５ｍＭ  ＭＥＳ、２２ｍＭ  Ｔｒｉｓ、１００ｍＭ  ＬｉＣｌ（ｐＨ６．８５）への移動相勾配を用いて、分析を行う。ＵＶ検出を２８０ｎｍで行う。この方法は、アッセイの信頼性と持続性を改善するために、所望により使用されうるストリッピングバッファー（１５ｍＭ  ＥＤＴＡ  ４０ｍＭ  Ｔｒｉｓ、１０ｍＭ  ＣＨＥＳ、５００ｍＭ  ＮａＣｌ、ｐＨ８．１）をも含む。サンプルを１０μＬの注入量で５ｍｇ／ｍＬで調製した。
【０２８０】
図２９において認められるとおり、ポリソルベート８０（０．１〜１．０ｍｇ／ｍＬ濃度）の存在下、荷電種レベル（酸性変異体の割合、主要ピークの割合、塩基性変異体の割合）の変化は認められなかった。抗ＬＡＧ３は製剤マトリックス中のポリソルベート８０の存在下でコロイド的に安定であることが判明した。
【０２８１】
実施例１３：抗酸化剤のスクリーニング
製剤中の抗ＬＡＧ３［１０ｍＭ  Ｌ−ヒスチジン、７０ｍＭ  Ｌ−アルギニン塩酸塩、５％  ｗ／ｖ  スクロース（ｐＨ５．８）中の２５ｍｇ／ｍＬ  抗ＬＡＧ３］に対する抗酸化剤の効果を判定するために、３つの異なるレベルのＬ−メチオニンを製剤中で評価した。表８に挙げられているとおり、４つの異なる製剤を調製し、２ｍＬタイプ１ガラスバイアル内に充填（２．２ｍＬ）し、適切に密封した。前記の４つの製剤を０．２  ＩＣＨ、０．５  ＩＣＨおよび１ＩＣＨ光ストレス（紫外線および冷白色光または可視光）にさらした。それらの４つの製剤のそれぞれに関する暗い対照（ホイルで覆われたもの）（対照）も１ＩＣＨまでの光ストレスにさらした。
【表８】
2020518587.tif 000026
【０２８２】
濁度
紫外線（ＵＶ）吸収分光光度計を使用して、前記の４つの製剤の濁度（ＯＤ３５０）を評価した。サンプルのＵＶ吸光度を９６ウェル・コスター透明プレート内で３５０ｎｍの波長で測定した。この場合、プレート吸光度に関してパスチェック（ｐａｔｈｃｈｅｃｋ）を補正した。
【０２８３】
図３０において認められるとおり、表８に挙げられている対照と比較して、Ｌ−メチオニン（５ｍＭ〜１０ｍＭ）は抗ＬＡＧ３（２５ｍｇ／ｍＬ  抗ＬＡＧ３、１０ｍＭ  Ｌ−ヒスチジン、７０ｍＭ  Ｌ−アルギニン、５％  ｗ／ｖ  スクロース、ｐＨ５．８）をコロイド的に安定化させ、１０ｍＭ  Ｌ−メチオニンが最適量であることが判明した。１ＩＣＨの光曝露の際に、暗い対照サンプルのコロイド不安定性への影響は認められなかった。
【０２８４】
ＵＰ−ＳＥＣ
サンプルの純度をＵＰ−ＳＥＣにより評価した。この場合、単量体の割合ならびに高分子量種（ＨＭＷ）および後期溶出ピーク（ＬＭＷ種）の割合を決定した。移動相（１００ｍＭ  ホスファートおよび１００ｍＭ  塩化ナトリウム、ｐＨ７．０）中でサンプルを１．０ｍｇ／ｍＬに希釈することにより、ＵＰＬＣアクイティ（ａｃｑｕｉｔｙ）Ｈクラス系でＵＰ−ＳＥＣを行った。希釈サンプル（５μＬ）を、Ｐｒｏｔｅｉｎ  ＢＥＨ  ＳＥＣカラムとＵＶ検出器とを備えた液体クロマトグラフィー内に０．５ｍＬ／分の流量で注入した。サンプル中のタンパク質をサイズで分離し、２１４ｎｍおよび２８０ｎｍでのＵＶ吸収により検出した。
【０２８５】
図３１において認められるとおり、表８に挙げられている対照と比較して、Ｌ−メチオニン（５ｍＭ〜１０ｍＭ）は抗ＬＡＧ３製剤（２５ｍｇ／ｍＬ  抗ＬＡＧ３、１０ｍＭ  Ｌ−ヒスチジン、７０ｍＭ  Ｌ−アルギニン、５％  ｗ／ｖ  スクロース、ｐＨ５．８）の可溶性凝集物形成（ＨＭＷの割合）を低減し、１０ｍＭ  Ｌ−メチオニンが最適量であることが判明した。１ＩＣＨ光曝露の際には暗い対照サンプルで可溶性凝集物の形成は認められなかった。
【０２８６】
ＨＰ−ＩＥＸ
抗ＬＡＧ３製剤中の電荷変異体を決定するために、高性能イオン交換クロマトグラフィー（ＨＰ−ＩＥＸ）を用いた。ＤｉｏｎｅｘＭａｂＰａｃ（登録商標）ＳＣＸ−１０、１０μｍ  ４×２５０ｍｍカラム、および２５ｍＭ  ＭＥＳ、１４ｍＭ  Ｔｒｉｓ（ｐＨ６．２５）から２５ｍＭ  ＭＥＳ、２２ｍＭ  Ｔｒｉｓ、１００ｍＭ  ＬｉＣｌ（ｐＨ６．８５）への移動相勾配を用いて、分析を行う。ＵＶ検出を２８０ｎｍで行う。この方法は、アッセイの信頼性と持続性を改善するために、所望により使用されうるストリッピングバッファー（１５ｍＭ  ＥＤＴＡ  ４０ｍＭ  Ｔｒｉｓ、１０ｍＭ  ＣＨＥＳ、５００ｍＭ  ＮａＣｌ、ｐＨ８．１）をも含む。サンプルを１０μＬの注入量および０．５〜１．０ｍＬ／分の流速で５ｍｇ／ｍＬで調製した。
【０２８７】
図３２において認められるとおり、対照と比較して、５ｍＭ〜１０ｍＭのＬ−メチオニンは、抗ＬＡＧ３（１０ｍＭ  Ｌ−ヒスチジン、７０ｍＭ  Ｌ−アルギニン塩酸塩、５％  ｗ／ｖ  スクロース、０．２ｍｇ／ｍＬ  ポリソルベート８０中の２５ｍｇ／ｍＬ  抗ＬＡＧ３）に関して、１  ＩＣＨまでの光曝露での荷電種（酸性変異体の割合および塩基性変異体の割合）の増加を低減するのに有効であることが判明した。１  ＩＣＨの暗い対照サンプルに関しては、荷電種に対する影響は認められなかった。
【０２８８】
還元ペプチドマッピング
抗ＬＡＧ３の酸化的翻訳後修飾の酸化レベルの変化を、還元ペプチドマッピングを用いて評価した。移動相Ａ（ＬＣ／ＭＳ等級の水中の０．１％  トリフルオロ酢酸）、移動相Ｂ（ＬＣ／ＭＳ等級のアセトニトリル中の０．１％  トリフルオロ酢酸）を使用して、Ｗａｔｅｒｓ  Ａｃｑｕｉｔｙ  Ｈ  Ｂｉｏ  Ｃｌａｓｓ系で還元ペプチドマッピングを行った。注入量は５０μＬであり、ＨＡＬＯ  Ｐｅｐｔｉｄｅ  ＥＳ−Ｃ１８カラムが備わっており、流速は０．２ｍＬ／分であり、検出吸光度は２１４ｎｍである。質量分析は、キャピラリー３．０、３０のサンプルコーン、１２０℃のソース温度、コーンガス３０、脱溶媒和ガス、１００〜２００のｍ／ｚ範囲、２〜１１０分のＭＳ収集からなるものであった。カラム作動の前に、サンプルを適切な試薬で還元し、アルキル化した。関心領域内で溶出する非サンプル関連ピークを特定するために、ブランク（非サンプル）消化を行った。
【０２８９】
図３３において認められるとおり、対照と比較して、５ｍＭ〜１０ｍＭのＬ−メチオニンは、１  ＩＣＨ光曝露の際の抗ＬＡＧ３（１０ｍＭ  Ｌ−ヒスチジン、７０ｍＭ  Ｌ−アルギニン塩酸塩、５％  ｗ／ｖ  スクロース、０．２ｍｇ／ｍＬ  ポリソルベート８０中の２５ｍｇ／ｍＬ  抗ＬＡＧ３）の翻訳後修飾の酸化を低減するのに有効であることが判明した。
【０２９０】
実施例１４：抗ＬＡＧ３の高濃度研究
種々の安定剤の存在下の、Ｌ−ヒスチジン、７０ｍＭ  Ｌ−アルギニン塩酸塩（ｐＨ５．８）を含有する製剤の、およびｐＨ５．８の３つの異なるバッファー（ヒスチジン、アセタートおよびシトラート；それぞれは７０ｍＭ  Ｌ−アルギニン塩酸塩を含有する）中の抗ＬＡＧ３の高濃度（２００ｍｇ／ｍＬ）の実施可能性を評価するために、表９に挙げられている９つの製剤を調製した。それらの９つの製剤のそれぞれを９６ウェルプレート内に満たし、適切に密封した。該製剤を乾熱オーブン内で５０℃で１０日間にわたってストレスにさらした。初期サンプルおよびストレスにさらしたサンプルに関して分析を行った。
【表９】
2020518587.tif 000027
【０２９１】
濁度
紫外線（ＵＶ）吸収分光光度計を使用して、前記の９つの製剤の濁度（ＯＤ３５０）を評価した。サンプルのＵＶ吸光度を９６ウェル・コスター透明プレート内で３５０ｎｍの波長で測定した。この場合、プレート吸光度に関してパスチェック（ｐａｔｈｃｈｅｃｋ）を補正した。
【０２９２】
図３４において認められるとおり、抗ＬＡＧ３［１０ｍＭ  Ｌ−ヒスチジン  ７０ｍＭ  Ｌ−アルギニン（ｐＨ５．８）中の２００ｍｇ／ｍＬ  抗ＬＡＧ３］のコロイド安定性（ＯＤ３５０）は、安定剤としての７０ｍＭ  Ｌ−メチオニンの存在下では、対照［１０ｍＭ  Ｌ−ヒスチジン  ７０ｍＭ  Ｌ−アルギニン（ｐＨ５．８）中の２００ｍｇ／ｍＬ  抗ＬＡＧ３］と比較して低い。２００ｍｇ／ｍＬ  抗ＬＡＧ３製剤中の７０ｍＭ  Ｌ−グルタミンおよび７０ｍＭ  プロリンの安定化効果（コロイド性）は同等である。同様に、２００ｍｇ／ｍＬ  抗ＬＡＧ３製剤中の５％  ｗ／ｖ  グリセロールおよび７０ｍＭ  Ｌ−グリシンの安定化効果（コロイド性）は同等である。２００ｍｇ／ｍＬ  抗ＬＡＧ３のコロイド安定性は５％  ｗ／ｖ  スクロースの存在下では比較的高かった。
【０２９３】
ＵＰ−ＳＥＣ
サンプルの純度をＵＰ−ＳＥＣにより評価した。この場合、単量体の割合ならびに高分子量種（ＨＭＷ）および後期溶出ピーク（ＬＭＷ種）の割合を決定した。移動相（１００ｍＭ  ホスファート、１００ｍＭ  塩化ナトリウム、ｐＨ７．０）中でサンプルを１．０ｍｇ／ｍＬに希釈することにより、Ａｃｑｕｉｔｙ）Ｈクラス（ＤＳ）でＵＰ−ＳＥＣを行った。カラム温度を２５±３℃に維持し、アイソクラティック溶出を用いて流量を０．５ｍＬ／分に維持した。希釈サンプル（５μＬ）を、Ｗａｔｅｒｓ  ＢＥＨ２００カラムとＵＶ検出器とを備えたＵＰＬＣ内に注入した。サンプル中のタンパク質をサイズで分離し、２１４ｎｍでのＵＶ吸収により検出した。
【０２９４】
図３５において認められるとおり、１０ｍＭ  Ｌ−アセタートまたは１０ｍＭ  シトラートバッファーと比較して、７０ｍＭ  Ｌ−アルギニン塩酸塩の存在下の１０ｍＭ  Ｌ−ヒスチジンバッファーは、高濃度の抗ＬＡＧ３製剤（２００ｍｇ／ｍＬ）に関して、可溶性凝集物レベルを低下させるのに有効である。５％（ｗ／ｖ）スクロースは、可溶性凝集物レベルを更に低下させるのに、安定剤として有効であり、５％（ｗ／ｖ）グリセロールがそれに続く。アミノ酸、すなわち、７０ｍＭ  Ｌ−グルタミン、７０ｍＭ  Ｌ−グリシン、７０ｍＭ  プロリンおよび７０ｍＭ  Ｌ−メチオニンの安定化効果は同等である。
【０２９５】
荷電種の変化（ｃＩＥＦ）
ＰｒｏｔｅｉｎＳｉｍｐｌｅのキャピラリー等電点電気泳動（ｃＩＥＦ）系を使用して、Ｌ−アルギニン、Ｌ−ヒスチジンまたは塩化ナトリウムの存在下の抗ＬＡＧ３の荷電不均一性および等電点（ｐＩ）の変化を評価した。キャピラリー（毛細管）内への注入の前に、サンプルを担体両性電解質と混合した。キャピラリーに電界をかけることにより、キャピラリー内の担体両性電解質によりｐＨ勾配が生成され、タンパク質分子は、局所ｐＨ値が等電点ｐＨ（ｐＩ）値と等しくなるキャピラリー内の位置に移動した。分離されたタンパク質の検出は、ｉＣＥ系（ＰｒｏｔｅｉｎＳｉｍｐｌｅのｉＣＥ３）を使用してキャピラリー全体のフルスキャンを行うことにより達成された。該装置により撮影された最後のイメージをデータ定量に使用した。分離されたピークの面積率は、個々の種の面積をタンパク質の総面積で割り算することにより推定される。タンパク質のｐＩ値は、タンパク質を挟む２つのｐＩマーカーの間の距離を直線的に較正することにより推定される。サンプルを５ｍｇ／ｍＬで調製した。動作パラメータは１０℃のオートサンプラー温度、フルオロカーボン（ＦＣ）被覆カートリッジ、２８０ｎｍの検出波長および１５００Ｖで１分間の集束時間を含んでいた。
【０２９６】
２００ｍｇ／ｍＬ  抗ＬＡＧ３の化学的安定性は、ｐＨ５．８の７０ｍＭ  Ｌ−アルギニン塩酸塩の存在下の１０ｍＭ  アセタートバッファーと比較して、１０ｍＭ  Ｌ−ヒスチジンおよび１０ｍＭ  シトラートバッファーにおいて同等であった。５％（ｗ／ｖ）グリセロールは、荷電種（酸性変異体の割合および塩基性変異体の割合）の変化を低減するのに有効であり、５％（ｗ／ｖ）スクロース（塩基性変異体の割合）がそれに続いた。アミノ酸、すなわち、７０ｍＭ  Ｌ−グルタミン、７０ｍＭ  Ｌ−グリシン、７０ｍＭ  プロリンおよび７０ｍＭ  Ｌ−メチオニンの安定化効果は同等であった。
【０２９７】
実施例１５：抗ＰＤ−１抗体と抗ＬＡＧ３抗体との共製剤の安定性研究
抗ＰＤ−１抗体（重鎖配列番号１０および軽鎖配列番号５）と抗ＬＡＧ３抗体（重鎖配列番号５７および軽鎖配列番号３７）との共製剤を表１０のとおりに調製した。
【表１０】
2020518587.tif 000028
【０２９８】
熱安定性研究
５℃（周囲湿度）、２５℃（湿度６０％）および４０℃（相対湿度７５％）の貯蔵条件で最大１２週間にわたり、１３ｍｍのセルムストッパー付きの２ｍＬバイアル内で、Ｆ１〜Ｆ６の１．０ｍＬの液体製剤を使用して、熱安定性の研究を行った。安定性サンプルを濁度および混合モードクロマトグラフィー（ＭＭＣ）により評価した。
【０２９９】
混合モードクロマトグラフィー
混合モードクロマトグラフィーは共製剤中の個々の抗体（抗ＬＡＧ３および抗ＰＤ１）の分離を可能にし、共製剤中の抗ＬＡＧ３凝集物および抗ＰＤ１凝集物ならびに酸化のモニターも可能にした。ＭＭＣにおいて、各ｍＡｂに関する単量体の割合を各ｍＡｂの主要ピーク面積により決定した。抗ＬＡＧ３に関しては、高分子量種（凝集物）および低分子量種（断片）の割合を計算した。抗ＰＤ１に関しては、高分子量種（凝集物）および低分子量種（断片）ならびに酸化種（Ｏｘ１およびＯｘ２）の割合を、各種に対応する個々のピーク面積に基づいて計算した。サンプルを移動相（ＰＢＳ、ｐＨ７．４）中で１．０ｍｇ／ｍＬに希釈することにより、混合モードクロマトグラフィーを行った。カラム温度を２５℃に維持し、流量を、アイソクラティック溶出を用いて、０．５ｍＬ／分に維持した。希釈サンプル（１５μＬ）を、特製Ｓｅｐａｘ  Ｚｅｎｉｘ  ＳＥＣ−３００カラムを備えたＨＰＬＣ内に注入した。サンプルにおける種々の成分をサイズと疎水性との両方により分離し、２８０ｎｍのＵＶ吸収により検出した。
【０３００】
濁度測定
ＳｐｅｃｔｒａＭａｘ  Ｍ５プレートリーダーで３５０ｎｍおよび５００ｎｍの分光光度的吸光度において熱安定性サンプルに関して濁度分析を行った。
【０３０１】
結論
共製剤（Ｆ３、Ｆ５およびＦ６）は、個々の製剤に類似した又はそれらより良好な安定性を示した（図２２および２３）。製剤Ｆ２は４０℃での貯蔵時に経時的に製剤Ｆ４より比較的低い濁度および単量体損失を示した。このことは、抗ＰＤ１が、抗ＬＡＧ３製剤において、より良好な安定性を示したことを示している（図２２および２３）。Ｆ５およびＦ６の共製剤は、個々の製剤と比較して、４０℃で１２週間の貯蔵の後、経時的に単量体の最小変化を示した。Ｌ−メチオニンは、共製剤（Ｆ５、Ｆ６）において、単量体損失を最小にするのを助けた（図２３）。
【図１】
2020518587.tif 000029
【図２】
2020518587.tif 000030
【図３】
2020518587.tif 000031
【図４】
2020518587.tif 000032
【図５】
2020518587.tif 000033
【図６】
2020518587.tif 000034
【図７】
2020518587.tif 000035
【図８】
2020518587.tif 000036
【図９】
2020518587.tif 000037
【図１０】
2020518587.tif 000038
【図１１】
2020518587.tif 000039
【図１２】
2020518587.tif 000040
【図１３】
2020518587.tif 000041
【図１４】
2020518587.tif 000042
【図１５】
2020518587.tif 000043
【図１６】
2020518587.tif 000044
【図１７】
2020518587.tif 000045
【図１８】
2020518587.tif 000046
【図１９】
2020518587.tif 000047
【図２０】
2020518587.tif 000048
【図２１】
2020518587.tif 000049
【図２２】
2020518587.tif 000050
【図２３】
2020518587.tif 000051
【図２４】
2020518587.tif 000052
【図２５】
2020518587.tif 000053
【図２６】
2020518587.tif 000054
【図２７】
2020518587.tif 000055
【図２８】
2020518587.tif 000056
【図２９】
2020518587.tif 000057
【図３０】
2020518587.tif 000058
【図３１】
2020518587.tif 000059
【図３２】
2020518587.tif 000060
【図３３】
2020518587.tif 000061
【図３４】
2020518587.tif 000062
【図３５】
2020518587.tif 000063
【図３６】
2020518587.tif 000064
【図３７】
2020518587.tif 000065
【図３８】
2020518587.tif 000066
【図３９】
2020518587.tif 000067
【図４０】
2020518587.tif 000068
【配列表】
2020518587000001.app
【手続補正書】
【提出日】令和2年1月6日(2020.1.6)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
約５〜３００ｍｇ／ｍＬの抗ＬＡＧ３抗体またはその抗原結合性フラグメント、１０〜１０００ｍＭの総濃度の、ヒスチジン、アスパルタート、グルタミン、グリシン、プロリン、メチオニン、アルギニンまたはこれらの薬学的に許容される塩、ＮａＣｌ、ＫＣｌ、ＬｉＣｌ、ＣａＣｌ２、ＭｇＣｌ２、ＺｎＣｌ２およびＦｅＣｌ２からなる群から選択される賦形剤の１以上、ならびにｐＨ約５〜８のバッファーを含む製剤。
【請求項２】
１０〜２５０ｍｇ／ｍＬの抗ＬＡＧ３抗体またはその抗原結合性フラグメントであって、配列番号３９のＣＤＲＬ１、配列番号４０のＣＤＲＬ２、配列番号４１のＣＤＲＬ３を含む可変軽鎖領域および配列番号４２のＣＤＲＨ１、配列番号５９のＣＤＲＨ２、配列番号４４のＣＤＲＨ３を含む可変重鎖領域を含む抗ＬＡＧ３抗体またはその抗原結合性フラグメント、１５〜３００ｍＭの総濃度の、ヒスチジン、アスパルタート、グルタミン、グリシン、プロリン、メチオニン、アルギニンまたはこれらの薬学的に許容される塩、ＮａＣｌ、ＫＣｌ、ＬｉＣｌからなる群から選択される賦形剤の１以上、ならびにｐＨ約５．０〜６．５のバッファーを含む、請求項１記載の製剤。
【請求項３】
賦形剤が１５〜２５０ｍＭの濃度のＬ−アルギニンまたはその薬学的に許容される塩である、請求項１または２記載の製剤。
【請求項４】
賦形剤が４０〜１００ｍＭの濃度のＬ−アルギニンまたはその薬学的に許容される塩である、請求項１または２記載の製剤。
【請求項５】
賦形剤が、２０〜２５０ｍＭの総濃度の、ＮａＣｌとＬ−アルギニンまたはその薬学的に許容される塩との組合せである、請求項１または２記載の製剤。
【請求項６】
賦形剤が約４０〜１５０ｍＭのＮａＣｌ、ＫＣｌまたはＬｉＣｌである、請求項１または２記載の製剤。
【請求項７】
賦形剤が約１５〜２００ｍＭのＬ−ヒスチジン、Ｌ−アスパルタート、Ｌ−グルタミンまたはＬ−グリシンである、請求項１または２記載の製剤。
【請求項８】
賦形剤が約４０〜１００ｍＭのＬ−ヒスチジンである、請求項１または２記載の製剤。
【請求項９】
バッファーがヒスチジンバッファー、アセタートバッファーまたはシトラートバッファーである、請求項１〜８のいずれか１項記載の製剤。
【請求項１０】
バッファーが約１〜３００ｍＭの濃度を有する、請求項９記載の製剤。
【請求項１１】
糖もしくはポリオール、および非イオン性界面活性剤、またはそれらの組合せを更に含む、請求項１〜１０のいずれか１項記載の製剤。
【請求項１２】
糖が非還元二糖である、請求項１１記載の製剤。
【請求項１３】
糖がトレハロースもしくはスクロースまたはその組合せである、請求項１２記載の製剤。
【請求項１４】
ポリオールが、マンニトール、ソルビトール、グリセロールおよびポリエチレングリコールからなる群から選択される、請求項１１記載の製剤。
【請求項１５】
糖またはポリオールが約１０〜２００ｍｇ／ｍｌの濃度で存在する、請求項１１〜１４のいずれか１項記載の製剤。
【請求項１６】
非イオン性界面活性剤がポリソルベートである、請求項１１記載の製剤。
【請求項１７】
ポリソルベート２０およびポリソルベート８０から選択される界面活性剤、ならびにスクロースおよびトレハロースから選択される糖、またはそれらの組合せを更に含む、請求項１〜１０のいずれか１項記載の製剤。
【請求項１８】
約１０〜２５０ｍｇ／ｍＬのスクロース、トレハロース、マンニトール、ソルビトール、ポリエチレングリコールまたはグリセロール、約０．００５〜２．０ｍｇ／ｍＬのポリソルベート８０または２０、およびｐＨ約５．０〜６．５の約３〜３００ｍＭのＬ−ヒスチジン、アセタートまたはシトラートバッファーを更に含む、請求項１〜１０のいずれか１項記載の製剤。
【請求項１９】
約３０〜１２０ｍｇ／ｍＬのスクロースまたはトレハロース、約０．０５〜１．５ｍｇ／ｍＬのポリソルベート８０または２０、およびｐＨ約５．０〜６．５の約３〜１５０ｍＭのＬ−ヒスチジン、アセタートまたはシトラートバッファーを更に含む、請求項１〜１０のいずれか１項記載の製剤。
【請求項２０】
約５０〜９０ｍｇ／ｍＬのスクロースまたはトレハロース、約０．０５〜１．０ｍｇ／ｍＬのポリソルベート８０、およびｐＨ約５．０〜６．５の約５〜３０ｍＭのＬ−ヒスチジン、アセタートまたはシトラートバッファーを更に含む、請求項１〜１０のいずれか１項記載の製剤。
【請求項２１】
約２０〜２２０ｍｇ／ｍＬの抗ＬＡＧ３抗体、約５０〜９０ｍｇ／ｍＬのスクロースまたはトレハロース、約０．０５〜１．０ｍｇ／ｍＬのポリソルベート８０または２０、ｐＨ約５．０〜６．５の約５〜２０ｍＭのＬ−ヒスチジン、アセタートまたはシトラートバッファー、ならびに約４０〜１５０ｍＭのＬ−アルギニンまたはその薬学的に許容される塩を含む、請求項１１記載の製剤。
【請求項２２】
約２０〜２２０ｍｇ／ｍＬの抗ＬＡＧ３抗体、約２０〜２００ｍｇ／ｍＬのグリセロール、ソルビトールまたはＰＥＧ４００、約０．０５〜１．０ｍｇ／ｍＬのポリソルベート８０または２０、ｐＨ約５．０〜６．５の約３〜１５０ｍＭのＬ−ヒスチジン、アセタートまたはシトラートバッファー、ならびに約４０〜１５０ｍＭのＬ−アルギニンまたはその薬学的に許容される塩を含む、請求項１１記載の製剤。
【請求項２３】
約２０〜２２０ｍｇ／ｍＬの抗ＬＡＧ３抗体、約２０〜１５０ｍＭのＬ−グルタミン、Ｌ−グリシン、Ｌ−プロリンまたはＬ−メチオニン、約０．０５〜１．０ｍｇ／ｍＬのポリソルベート８０または２０、ｐＨ約５．０〜６．５の約３〜１５０ｍＭのＬ−ヒスチジン、アセタートまたはシトラートバッファー、ならびに約４０〜１５０ｍＭのＬ−アルギニンまたはその薬学的に許容される塩を含む、請求項１または２記載の製剤。
【請求項２４】
約２０〜２２０ｍｇ／ｍＬの抗ＬＡＧ３抗体、約０．０５〜１．０ｍｇ／ｍＬのポリソルベート８０または２０、ｐＨ約５．０〜６．５の約３〜１５０ｍＭのＬ−ヒスチジン、アセタートまたはシトラートバッファー、ならびに約４０〜１５０ｍＭのＮａＣｌまたはその薬学的に許容される塩を含む、請求項１または２記載の製剤。
【請求項２５】
３〜１５０ｍＭのＬ−メチオニンを更に含む、請求項１〜２４のいずれか１項記載の製剤。
【請求項２６】
５〜７０ｍＭのＬ−メチオニンを更に含む、請求項１〜２４のいずれか１項記載の製剤。
【請求項２７】
約２５ｍｇ／ｍＬの抗ＬＡＧ３抗体、約５０ｍｇ／ｍＬのスクロース、約０．２ｍｇ／ｍＬのポリソルベート８０、ｐＨ約５．８の約１０ｍＭのＬ−ヒスチジンバッファー、約７０ｍＭのＬ−アルギニンまたはその薬学的に許容される塩および約１０ｍＭのＬ−メチオニンを含む、請求項１または２記載の製剤。
【請求項２８】
約２５ｍｇ／ｍＬの抗ＬＡＧ３抗体、約５０ｍｇ／ｍＬのスクロース、約０．２ｍｇ／ｍＬのポリソルベート８０、ｐＨ約５．８〜６．０の約１０ｍＭのＬ−ヒスチジンバッファー、約７０ｍＭのＬ−アルギニンまたはＬ−アルギニン−ＨＣｌを含む、請求項１または２記載の製剤。
【請求項２９】
液体製剤である、請求項１〜２８のいずれか１項記載の製剤。
【請求項３０】
少なくとも−７０℃未満で凍結される、請求項１〜２８のいずれか１項記載の製剤。
【請求項３１】
凍結乾燥製剤からの再構成溶液である、請求項１〜２８のいずれか１項記載の製剤。
【請求項３２】
５℃で、抗ＬＡＧ３抗体の単量体の割合が、サイズ排除クロマトグラフィーによる測定で、３ヶ月後に９５％以上である、請求項２９〜３１のいずれか１項記載の製剤。
【請求項３３】
５℃で、抗ＬＡＧ３抗体の酸性変異体の割合が、イオン交換クロマトグラフィーによる測定で、３ヶ月後に１５％未満である、請求項２９〜３２のいずれか１項記載の製剤。
【請求項３４】
抗ＬＡＧ３抗体または抗原結合性フラグメントが配列番号３７の軽鎖可変領域配列および配列番号５８の重鎖可変領域配列を含む、請求項１〜３３のいずれか１項記載の製剤。
【請求項３５】
抗ＬＡＧ３抗体が配列番号３５の軽鎖配列および配列番号５７の重鎖配列を含む、請求項１〜３３のいずれか１項記載の製剤。
【請求項３６】
抗ＰＤ−１抗体またはその抗原結合性フラグメントを更に含む、請求項１〜３５のいずれか１項記載の製剤。
【請求項３７】
抗ＬＡＧ３抗体と抗ＰＤ−１抗体とのモル比が１：１である、請求項３６記載の製剤。
【請求項３８】
抗ＬＡＧ３抗体と抗ＰＤ−１抗体とのモル比が１：１、２：１、３：１または３．５：１である、請求項３６記載の製剤。
【請求項３９】
抗ＰＤ−１抗体またはその抗原結合性フラグメントが、配列番号１のＣＤＲＬ１、配列番号２のＣＤＲＬ２および配列番号３のＣＤＲＬ３を含む可変軽鎖領域と、配列番号６のＣＤＲＨ１、配列番号７のＣＤＲＨ２および配列番号８のＣＤＲＨ３を含む可変重鎖領域とを含む、請求項３６〜３８のいずれか１項記載の製剤。
【請求項４０】
抗ＰＤ−１抗体またはその抗原結合性フラグメントが配列番号９の重鎖可変領域および配列番号４の軽鎖可変領域を含む、請求項３９記載の製剤。
【請求項４１】
抗ＰＤ−１抗体が配列番号１０の重鎖配列および配列番号５の軽鎖配列を含む、請求項３９記載の製剤。
【請求項４２】
約１０〜１２０ｍｇ／ｍＬの抗ＬＡＧ３抗体またはその抗原結合性フラグメントと約１０〜１２０ｍｇ／ｍＬの抗ＰＤ−１抗体またはその抗原結合性フラグメントとを含む、請求項３６〜４１のいずれか１項記載の製剤。
【請求項４３】
配列番号３９のＣＤＲＬ１、配列番号４０のＣＤＲＬ２、配列番号４１のＣＤＲＬ３を含む可変軽鎖領域と、配列番号４２のＣＤＲＨ１、配列番号５９のＣＤＲＨ２、配列番号４４のＣＤＲＨ３を含む可変重鎖領域とを含む抗ＬＡＧ３抗体またはその抗原結合性フラグメント、配列番号１のＣＤＲＬ１、配列番号２のＣＤＲＬ２、配列番号３のＣＤＲＬ３を含む可変軽鎖領域と、配列番号６のＣＤＲＨ１、配列番号７のＣＤＲＨ２および配列番号８のＣＤＲＨ３を含む可変重鎖領域とを含む抗ＰＤ−１抗体またはその抗原結合性フラグメント、２５〜２５０ｍＭの濃度のＬ−アルギニンまたはその薬学的に許容される塩、ならびにｐＨ約５〜８のバッファーを含む製剤。
【請求項４４】
抗ＬＡＧ３抗体または抗原結合性フラグメントが配列番号３７の軽鎖可変領域配列および配列番号５８の重鎖可変領域配列を含み、抗ＰＤ−１抗体またはその抗原結合性フラグメントが配列番号９の重鎖可変領域および配列番号４の軽鎖可変領域を含む、請求項４３記載の製剤。
【請求項４５】
抗ＬＡＧ３抗体が配列番号３５の軽鎖配列および配列番号５７の重鎖配列を含み、抗ＰＤ−１抗体が配列番号１０の重鎖配列および配列番号５の軽鎖配列を含む、請求項４３記載の製剤。
【請求項４６】
約１０〜１２０ｍｇ／ｍＬの抗ＬＡＧ３抗体、約１０〜１２０ｍｇ／ｍＬの抗ＰＤ−１抗体、約３０〜１２０ｍｇ／ｍＬの非還元二糖、約０．０５〜２．０ｍｇ／ｍＬのポリソルベート８０または２０、ｐＨ約５．０〜６．５のバッファー、および約４０〜１５０ｍＭのＬ−アルギニンまたはその薬学的に許容される塩を含む、請求項４３〜４５のいずれか１項記載の製剤。
【請求項４７】
約１０〜３０ｍｇ／ｍＬの抗ＬＡＧ３抗体、約１０〜３０ｍｇ／ｍＬの抗ＰＤ−１抗体、約５０〜９０ｍｇ／ｍＬのスクロースまたはトレハロース、約０．０５〜１．０ｍｇ／ｍＬのポリソルベート８０または２０、ｐＨ約５．０〜６．５の約３〜３０ｍＭのヒスチジンバッファー、および約４０〜１００ｍＭのＬ−アルギニンまたはその薬学的に許容される塩を含む、請求項４３〜４５のいずれか１項記載の製剤。
【請求項４８】
約３〜１００ｍＭのＬ−メチオニンを更に含む、請求項４３〜４７のいずれか１項記載の製剤。
【請求項４９】
約５〜１５ｍＭのＬ−メチオニンを更に含む、請求項４３〜４７のいずれか１項記載の製剤。
【請求項５０】
約１０ｍｇ／ｍＬの抗ＬＡＧ３抗体、約１０ｍｇ／ｍＬの抗ＰＤ−１抗体、約５０ｍｇ／ｍＬのスクロース、約０．２ｍｇ／ｍＬのポリソルベート８０、ｐＨ約５．８の約１０ｍＭのＬ−ヒスチジンバッファー、約７０ｍＭのＬ−アルギニンまたはその薬学的に許容される塩および約１０ｍＭのＬ−メチオニンを含む、請求項４３〜４５のいずれか１項記載の製剤。
【請求項５１】
約１０〜３０ｍｇ／ｍＬの抗ＬＡＧ３抗体、約１０〜３０ｍｇ／ｍＬの抗ＰＤ−１抗体、約５０ｍｇ／ｍＬのスクロース、約０．２ｍｇ／ｍＬのポリソルベート８０、ｐＨ約５．８の約１０ｍＭのＬ−ヒスチジンバッファー、約７０ｍＭのＬ−アルギニンまたはその薬学的に許容される塩および約１０ｍＭのＬ−メチオニンを含む、請求項４３〜４５のいずれか１項記載の製剤。
【請求項５２】
５℃で、抗ＬＡＧ３抗体の単量体の割合が、サイズ排除クロマトグラフィーによる測定で、３ヶ月後に９５％以上である、請求項４３〜５１
のいずれか１項記載の製剤。
【請求項５３】
５℃で、抗ＬＡＧ３抗体の酸性変異体の割合が、イオン交換クロマトグラフィーによる測定で、３ヶ月後に１５％未満である、請求項４３〜５２のいずれか１項記載の製剤。
【請求項５４】
請求項１〜５３のいずれか１項記載の製剤を含む容器または注射装置。
【国際調査報告】
2020518587.tif 000069
2020518587.tif 000070