(57)【要約】本発明は、ＰＡＩ−１レベルの増大を特徴とする状態または疾患の予防または処置のための、プラスミノーゲン、そのバリアント、またはプラスミノーゲン活性を有するその類似体の使用に関する。ＰＡＩ−１レベルの増大を特徴とする状態及び疾患は、血管または組織のリモデリング能力の低下に関連する疾患と、ＰＡＩ−１レベルの増大に関連する代謝障害及びホルモン障害の２つのカテゴリーに再分類される。
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
対象における疾患または状態を予防するか、進行を遅らせるか、または処置するための医薬の調製のためのプラスミノーゲン、そのバリアントまたはその類似体の使用であって、前記疾患または状態がＰＡＩ−１の過剰発現に関連する、前記使用。
【請求項２】
前記ＰＡＩ−１の過剰発現が、対象の血液または傷害組織で起こる、請求項１に記載の使用。
【請求項３】
前記対象が非プラスミノーゲン欠乏対象である、請求項１または２に記載の使用。
【請求項４】
前記対象が正常なプラスミノーゲン活性レベルの７０％を超える血漿プラスミノーゲン活性を有する、請求項３に記載の使用。
【請求項５】
前記疾患またはＰＡＩ−１の過剰発現に関連する状態が、血管もしくは組織のリモデリング能力の低下に関連する疾患、または代謝障害もしくはホルモン障害である、請求項１〜４のいずれか１項に記載の使用。
【請求項６】
血管または組織のリモデリング能力の低下に関連する前記疾患が、慢性腎疾患、糸球体硬化症、線維症、尿細管間質性線維症、糸球体腎炎、アテローム性動脈硬化症、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、肺線維症、慢性腎疾患（ＣＫＤ）、膜性腎症、または慢性同種移植腎症である、請求項５に記載の使用。
【請求項７】
前記代謝障害またはホルモン障害が肥満、多嚢胞性卵巣疾患、アミロイドーシス、アルツハイマー病、脱毛症、または老化である、請求項５記載の使用。
【請求項８】
前記疾患が肺線維症である、請求項６に記載の使用。
【請求項９】
前記肺線維症が特発性肺線維症である、請求項８に記載の使用。
【請求項１０】
プラスミノーゲン、そのバリアントまたはその類似体が、抗線維化剤と組み合わせて使用される、請求項８または９のいずれか１項に記載の使用。
【請求項１１】
前記抗線維化剤がピルフェニドンである、請求項１０に記載の使用。
【請求項１２】
対象におけるＰＡＩ−１の過剰発現に関連する疾患または状態の予防、進行の遅延、または処置に使用するためのプラスミノーゲン、そのバリアントまたはその類似体。
【請求項１３】
対象の疾患または状態を予防するか、進行を遅らせるか、または処置する方法であって、前記疾患または状態が、ＰＡＩ−１の過剰発現に関連しており、対象へのプラスミノーゲン、そのバリアントまたはその類似体の投与を包含する前記方法。
【請求項１４】
対象の傷害組織におけるＰＡＩ−１過剰発現を下方制御するための医薬の調製のためのプラスミノーゲン、そのバリアントまたはその類似体の使用。
【請求項１５】
対象の傷害組織におけるＰＡＩ−１過剰発現の下方制御に使用するためのプラスミノーゲン、そのバリアントまたはその類似体。
【請求項１６】
対象へのプラスミノーゲン、そのバリアントまたはその類似体の投与を包含する、対象の傷害組織におけるＰＡＩ−１過剰発現を下方制御する方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、医学の分野に関する。本発明の特定の態様は、ＰＡＩ−１レベルが損なわれている状態または治療適応症を予防し、進行を遅らせ、処置するためのプラスミノーゲンの使用、予防、進行の遅延及び処置の関連方法、ならびにＰＡＩ−１モジュレーターとしてのプラスミノーゲンの使用に関する。
【背景技術】
【０００２】
いくつかの状態及び疾患は、傷害組織におけるＰＡＩ−１過剰発現または血液におけるＰＡＩ−１過剰発現によって特徴付けられることが公知である。ＰＡＩ−１の血漿レベルを低下させることが公知である薬物としては、アンジオテンシン変換酵素（ＡＣＥ）阻害剤、インスリン抵抗性改善薬、及び女性のホルモン補充療法で使用されるホルモンが挙げられる。
【０００３】
ＰＡＩ−１が過剰生産される組織では、血管及び組織のリモデリング能力に対する重大な影響が認められる（Ｃａｒｍｅｌｉｅｔ  ｅｔ  ａｌ．１９９７，Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ  ｒｏｌｅ  ｏｆ  ｐｌａｓｍｉｎｏｇｅｎ  ａｃｔｉｖａｔｏｒ  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ−１  ｉｎ  ａｒｔｅｒｉａｌ  ｗｏｕｎｄ  ｈｅａｌｉｎｇ  ａｎｄ  ｎｅｏｉｎｔｉｍａ  ｆｏｒｍａｔｉｏｎ：ａ  ｇｅｎｅ  ｔａｒｇｅｔｉｎｇ  ａｎｄ  ｇｅｎｅ  ｔｒａｎｓｆｅｒ  ｓｔｕｄｙ  ｉｎ  ｍｉｃｅ．Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ  ９６：３１８０−３１９１）。糸球体及び間質における細胞外マトリックス（ＥＣＭ）の進行性の蓄積は、基礎疾患に関係なく、慢性腎疾患でほぼ普遍的に見られる。ＥＣＭ分解の減少がマトリックスの蓄積に寄与し、ＥＣＭ分解がプラスミノーゲン活性化因子／システムによって主に制御されるというかなりの証拠がある。プラスミンは、フィブロネクチン、ラミニン、プロテオグリカン、及びＩＶ型コラーゲン、ならびにフィブリンなどのマトリックスタンパク質を分解することによって直接的に、及び不活性なマトリックスメタロプロテイナーゼを、コラーゲンタンパク質を分解する活性型に変換することによって、間接的にＥＣＭの分解に寄与する。ＰＡＩ−１の影響を受けると思われる最も広く研究されている疾患には、糸球体硬化症及び尿細管間質性線維症（Ｅｄｄｙ  ２００２，Ｐｌａｓｍｉｎｏｇｅｎ  ａｃｔｉｖａｔｏｒ  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ−１  ａｎｄ  ｔｈｅ  ｋｉｄｎｅｙ．Ａｍ．Ｊ．Ｐｈｙｓｉｏｌ．Ｒｅｎａｌ  Ｐｈｙｓｉｏｌ．２８３：Ｆ２０９−２２０）、肺線維症  （Ｏｌｍａｎ  ｅｔ  ａｌ．１９９５，Ｃｈａｎｇｅｓ  ｉｎ  ｐｒｏｃｏａｇｕｌａｎｔ  ａｎｄ  ｆｉｂｒｉｎｏｌｙｔｉｃ  ｇｅｎｅ  ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  ｄｕｒｉｎｇ  ｂｌｅｏｍｙｃｉｎ−ｉｎｄｕｃｅｄ  ｌｕｎｇ  ｉｎｊｕｒｙ  ｉｎ  ｔｈｅ  ｍｏｕｓｅ．Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．  ９６（３）：１６２１−１６３０）、糸球体腎炎（Ｋｅｅｔｏｎ  ｅｔ  ａｌ．１９９５，Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  ｏｆ  ｔｙｐｅ  １  ｐｌａｓｍｉｎｏｇｅｎ  ａｃｔｉｖａｔｏｒ  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ  ｉｎ  ｒｅｎａｌ  ｔｉｓｓｕｅ  ｉｎ  ｍｕｒｉｎｅ  ｌｕｐｕｓ  ｎｅｐｈｒｉｔｉｓ．Ｋｉｄｎｅｙ  Ｉｎｔ．４７（１）：１４８−１５７；ならびにＹａｍａｍｏｔｏ及びＬｏｓｋｕｔｏｆｆ  １９９７，Ｔｈｅ  ｋｉｄｎｅｙｓ  ｏｆ  ｍｉｃｅ  ｗｉｔｈ  ａｕｔｏｉｍｍｕｎｅ  ｄｉｓｅａｓｅ  ａｃｑｕｉｒｅ  ａ  ｈｙｐｏｆｉｂｒｉｎｏｌｙｔｉｃ／ｐｒｏｃｏａｇｕｌａｎｔ  ｓｔａｔｅ  ｔｈａｔ  ｃｏｒｒｅｌａｔｅｓ  ｗｉｔｈ  ｔｈｅ  ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ  ｏｆ  ｇｌｏｍｅｒｕｌｏｎｅｐｈｒｉｔｉｓ  ａｎｄ  ｔｉｓｓｕｅ  ｍｉｃｒｏｔｈｒｏｍｂｏｓｉｓ．Ａｍ．Ｊ．Ｐａｔｈｏｌ．  １５１（３）：７２５−７３４），アテローム性動脈硬化症（Ｓｃｈｎｅｉｄｅｒｍａｎ  ｅｔ  ａｌ．１９９２，Ｉｎｃｒｅａｓｅｄ  ｔｙｐｅ  １  ｐｌａｓｍｉｎｏｇｅｎ  ａｃｔｉｖａｔｏｒ  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ  ｇｅｎｅ  ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  ｉｎ  ａｔｈｅｒｏｓｃｌｅｒｏｔｉｃ  ｈｕｍａｎ  ａｒｔｅｒｉｅｓ．Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ８９（１５）：６９９８−７００２；ならびにＣｈｏｍｉｋｉ  ｅｔ  ａｌ．１９９４，Ｐｌａｓｍｉｎｏｇｅｎ  ａｃｔｉｖａｔｏｒ  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ−１  ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  ｉｎ  ｈｕｍａｎ  ｌｉｖｅｒ  ａｎｄ  ｈｅａｌｔｈｙ  ｏｒ  ａｔｈｅｒｏｓｃｌｅｒｏｔｉｃ  ｖｅｓｓｅｌ  ｗａｌｌｓ．Ｔｈｒｏｍｂ  Ｈａｅｍｏｓｔ．  ７２（１）：４４−５３）、慢性閉塞性肺疾患  （ＣＯＰＤ）  （Ｗａｎｇ  ｅｔ  ａｌ．２０１６，Ｅｌｅｖａｔｅｄ  ｃｉｒｃｕｌａｔｉｎｇ  ＰＡＩ−１  ｌｅｖｅｌｓ  ａｒｅ  ｒｅｌａｔｅｄ  ｔｏ  ｌｕｎｇ  ｆｕｎｃｔｉｏｎ  ｄｅｃｌｉｎｅ，ｓｙｓｔｅｍｉｃ  ｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎ，ａｎｄ  ｓｍａｌｌ  ａｉｒｗａｙ  ｏｂｓｔｒｕｃｔｉｏｎ  ｉｎ  ｃｈｒｏｎｉｃ  ｏｂｓｔｒｕｃｔｉｖｅ  ｐｕｌｍｏｎａｒｙ  ｄｉｓｅａｓｅ．Ｉｎｔ．Ｊ．Ｃｈｒｏｎ．Ｏｂｓｔｒｕｃｔ．Ｐｕｌｍｏｎ．Ｄｉｓ．１１：２３６９−２３７６）、慢性腎疾患（ＣＫＤ）  （Ｅｄｄｙ  ａｎｄ  Ｆｏｇｏ  ２００６，Ｐｌａｓｍｉｎｏｇｅｎ  ａｃｔｉｖａｔｏｒ  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ−１  ｉｎ  ｃｈｒｏｎｉｃ  ｋｉｄｎｅｙ  ｄｉｓｅａｓｅ：ｅｖｉｄｅｎｃｅ  ａｎｄ  ｍｅｃｈａｎｉｓｍｓ  ｏｆ  ａｃｔｉｏｎ．Ｊ．Ａｍ．Ｓｏｃ．Ｎｅｐｈｒｏｌ．１７（１１）：２９９９−３０１２）、膜性腎症（Ｅｄｄｙ  ａｎｄ  Ｆｏｇｏ  ２００６）、ならびに慢性同種移植腎症（Ｅｄｄｙ  ａｎｄ  Ｆｏｇｏ  ２００６）がある。
【０００４】
研究により、線維症の程度は、ＰＡＩ−１発現のパターン及び程度に対応することが確認されている（Ｏｉｋａｗａ  ｅｔ  ａｌ．  １９９７，  Ｍｏｄｕｌａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｐｌａｓｍｉｎｏｇｅｎ  ａｃｔｉｖａｔｏｒ  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ−１  ｉｎ  ｖｉｖｏ：  ａ  ｎｅｗ  ｍｅｃｈａｎｉｓｍ  ｆｏｒ  ｔｈｅ  ａｎｔｉ−ｆｉｂｒｏｔｉｃ  ｅｆｆｅｃｔ  ｏｆ  ｒｅｎｉｎ−ａｎｇｉｏｔｅｎｓｉｎ  ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ．    Ｋｉｄｎｅｙ  Ｉｎｔ．  ５１：  １６４−１７２）。したがって、証拠は、ＰＡＩ−１発現に影響を与えることが、動脈硬化、腎硬化、肺線維症、骨髄線維症（Ｖａｕｇｈａｎ  ２０１１）及び他の線維症を含む線維症に影響することである。ＰＡＩ−１の過剰発現は、特発性肺線維症に患っている患者の肺で観察され、主に傷害組織または炎症組織に集中している。
【０００５】
線維症は、線維増殖性または異常な線維芽細胞活性化関連疾患として定義されている。創傷治癒の脱制御は、線維芽細胞の過剰な活性化及び創傷領域における細胞外マトリックス（ＥＣＭ）タンパク質の過剰な蓄積、線維症の病理学的症状発現につながる。ＥＣＭでの過剰なレベルのコラーゲンの蓄積は、２つの要因に依存する：コラーゲン合成速度の増大及び／または細胞のタンパク質分解活性によるコラーゲン分解速度の低下。ウロキナーゼ／組織型プラスミノーゲン活性化因子（ｕＰＡ／ｔＰＡ）及びプラスミンは、ＥＣＭタンパク質の細胞性タンパク質分解及び組織恒常性の維持に重要な役割を果たす。ｕＰＡ／ｔＰＡ／プラスミン及びプラスミン依存性ＭＭＰの活性は、ｕＰＡ／ｔＰＡの強力な阻害剤であるプラスミノーゲン活性化因子阻害剤−１（ＰＡＩ−１）の活性にほとんど依存している。通常の生理学的条件下では、ＰＡＩ−１は、ｕＰＡ／ｔＰＡ／プラスミン／ＭＭＰタンパク質分解の活性を制御し、これによって組織の恒常性を維持する。創傷治癒中、ＰＡＩ−１のレベルが上昇すると、ｕＰＡ／ｔＰＡ／プラスミン及びプラスミン依存性ＭＭＰ活性が阻害されるため、創傷治癒の促進に役立つ。このシナリオとは対照的に、病理学的条件下では、過剰なＰＡＩ−１は、創傷領域でのコラーゲン及び他のＥＣＭタンパク質の過剰な蓄積に寄与し、したがって瘢痕を保存する。線維性組織ではＰＡＩ−１のレベルが有意に上昇するが、ＰＡＩ−１の欠如は、傷害に関連する線維化促進シグナルに応答してさまざまな器官が線維化しないように保護する。したがって、ＰＡＩ−１は、心臓、肺、腎臓、肝臓、及び皮膚を含むさまざまな臓器の線維症の病理に関係している（Ｇｈｏｓｈ及びＶａｕｇｈａｎ、２０１２）。
【０００６】
上記の状態に加えて、ＰＡＩ−１レベルの障害はまた、肥満、多嚢胞性卵巣疾患などの代謝／ホルモン障害；及び他の疾患、例えばアミロイドーシス（Ｖａｕｇｈａｎ  ２０１１）、アルツハイマー病（Ｏｈ  ｅｔ  ａｌ．２０１４，Ｐｌａｓｍｉｎｏｇｅｎ  ａｃｔｉｖａｔｏｒ  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ−１  ａｓ  ａｎ  ｅａｒｌｙ  ｐｏｔｅｎｔｉａｌ  ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃ  ｍａｒｋｅｒ  ｆｏｒ  Ａｌｚｈｅｉｍｅｒ’ｓ  ｄｉｓｅａｓｅ．Ｅｘｐ．Ｇｅｒｏｎｔｏｌ．６０：８７−９１）、脱毛症（Ｖａｕｇｈａｎ  ２０１１）、及び老化（Ｖａｕｇｈａｎ  ２０１１）にも関連する。おそらく、血漿ＰＡＩ−１産生の増大に関連する最も一般的な臨床症状は肥満である。ＰＡＩ−１遺伝子の上流調節領域の分析的研究により、非常に低密度のリポタンパク質（ＶＬＤＬ）応答部位である、アルドステロン応答性（４）も局在化するグルココルチコイド応答要素（ＧＲＥ）を含む、関連する転写応答部位（Ｅｒｉｋｓｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．１９９８，Ｖｅｒｙ−ｌｏｗ−ｄｅｎｓｉｓｔｙ  ｌｉｐｏｐｒｏｔｅｉｎ  ｒｅｓｐｏｎｓｅ  ｅｌｅｍｅｎｔ  ｉｎ  ｔｈｅ  ｐｒｏｐｏｍｔｅｒ  ｒｅｇｉｏｎ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｈｕｍａｎ  ｐｌａｓｍｉｎｏｇｅｎ  ａｃｔｉｖａｔｏｒ  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ−１  ｇｅｎｅ  ｉｍｐｌｉｃａｔｅｄ  ｉｎ  ｔｈｅ  ｉｍｐａｉｒｅｄ  ｆｉｂｒｉｎｏｌｙｓｉｓ  ｏｆ  ｈｙｐｅｒｔｒｉｇｌｙｃｅｒｉｄｅｍｉａ．  Ａｒｔｅｒｉｏｓｃｌｅｒ．  Ｔｒｏｍｂ．Ｖａｓｃ．  Ｂｉｏｌ．１８：２０−２６）、及びグルコース−グルコサミン応答性を媒介すると思われる２つのＳｐ１部位（Ｃｈｅｎ  ｅｔ  ａｌ．  １９９８，  Ｓｐ１  ｓｉｔｅｓ  ｍｅｄｉａｔｅ  ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｐｌａｓｍｉｎｏｇｅｎ  ａｃｔｉｖａｔｏｒ  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ−１  ｐｒｏｍｏｔｅｒ  ｂｙ  ｇｌｕｃｏｓｅ  ｉｎ  ｖａｓｃｕｌａｒ  ｓｍｏｏｔｈ  ｃｅｌｌｓ．Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７３：８２２５−８２３１）の同定が可能になった。
【０００７】
この分野で、異常なＰＡＩ−１レベルに関連する多数の治療適応症の処置のためのＰＡＩ−１モジュレーター及びそれらの使用を発見する必要性がある。
【０００８】
ＰＡＩ−１のレベルの増大に関連する可能性のあるいくつかの疾患を報告しているが、Ｖａｕｇｈａｎ  ２０１１は、合成経口活性ＰＡＩ−１アンタゴニストの開発に向けて将来の研究を方向付ける。それにもかかわらず、Ｖａｕｇｈａｎ  ２０１１は、ＰＡＩ−１の完全な阻害に対して警告するが、これは、ＰＡＩ−１が、軽度の外傷後の頭蓋内出血及び関節出血、外科的出血の遅延、重度の月経出血、及び頻繁な打撲などの異常出血を引き起こす可能性があるためである。したがって、ＰＡＩ−１を完全に阻害または拮抗しないが、ＰＡ−１の発現を正常レベルまで低下させる化合物が必要である。
【発明の概要】
【０００９】
本発明者らは、ＰＡＩ−１を完全に阻害することなく、ＰＡＩ−１過剰発現を下方制御するＰＡＩ−１モジュレーターを発見した。本発明者らが見出したＰＡＩ−１モジュレーターは合成ではなく、完全に天然のものである。それはプラスミノーゲンである。驚くべきことに、本発明者らは、正常な内因性血漿プラスミノーゲン活性レベルを有する対象への外因性プラスミノーゲンの投与が、ＰＡＩ−１が過剰発現された傷害組織におけるＰＡＩ−１発現を下方制御することに成功したことを見出した。外因性プラスミノーゲンの投与は、特発性肺線維症（ＩＰＦ）を患っている対象の肺におけるＰＡＩ−１の過剰発現を抑制し、細胞外マトリックス（ＥＣＭ）の分解を可能にしていることがわかっている。
【００１０】
本発明の一般的な態様は、ＰＡＩ−１レベルの増大を特徴とする状態または疾患の予防、進行の遅延または処置のためのプラスミノーゲン、そのバリアント、またはプラスミノーゲン活性を有する類似体の薬学的使用に関する。本発明の一般的な態様はまた、プラスミノーゲン、そのバリアント、またはプラスミノーゲン活性を有する類似体の投与を含む、ＰＡＩ−１レベルの上昇を特徴とする状態または疾患の予防、進行の遅延または処置の方法にも関する。本発明の一般的な態様はさらに、ＰＡＩ−１レベルの増大を特徴とする状態または疾患の予防、進行の遅延または処置のための医薬の調製のためのプラスミノーゲン活性を有するプラスミノーゲン、そのバリアント、またはその類似体の使用に関する。ＰＡＩ−１レベルの増大を特徴とする状態及び疾患は、限定するものではないが、血管または組織のリモデリング能力の低下に関連する疾患、ならびにＰＡＩ−１レベルの増大に関連する代謝障害及びホルモン障害という２つのカテゴリーに再分類される。
【００１１】
本発明によって予防もしくは処置され得るか、またはその進行を遅らせ得る血管または組織のリモデリング能力の低下に関連する疾患としては、限定するものではないが、慢性腎疾患、糸球体硬化症、線維症、尿細管間質性線維症、肺線維症、糸球体腎炎、アテローム性動脈硬化症、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、肺線維症、特発性肺線維症、慢性腎疾患（ＣＫＤ）、膜性腎症、または慢性同種移植腎症が挙げられる。
【００１２】
本発明による、予防または治療されるＰＡＩ−１レベルの増大、またはその進行を遅らせ得ることに関連する代謝障害またはホルモン障害としては、限定するものではないが、肥満、多嚢胞性卵巣疾患、アミロイドーシス、アルツハイマー病、脱毛症、及び老化が挙げられる。
【００１３】
本発明は、以下の項目に関する。
１．対象における疾患または状態を予防するか、進行を遅らせるか、または処置するための医薬の調製のためのプラスミノーゲン、そのバリアントまたはその類似体の使用であって、上記疾患または状態がＰＡＩ−１の過剰発現に関連する、上記使用。
２．上記ＰＡＩ−１の過剰発現が、血液または損傷組織で起こる、項目１に記載の使用。
３．上記対象が非プラスミノーゲン欠乏対象である、項目１または２に記載の使用。
４．上記対象が正常なプラスミノーゲン活性レベルの７０％を超える血漿プラスミノーゲン活性を有する、項目１〜３のいずれか１項に記載の使用。
５．上記疾患またはＰＡＩ−１の過剰発現に関連する状態が、血管もしくは組織のリモデリング能力の低下に関連する疾患、または代謝障害もしくはホルモン障害である、項目１〜４のいずれか１項に記載の使用。
６．血管または組織のリモデリング能力の低下に関連する上記疾患が、慢性腎疾患、糸球体硬化症、線維症、尿細管間質性線維症、糸球体腎炎、アテローム性動脈硬化症、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、肺線維症、慢性腎疾患（ＣＫＤ）、膜性腎症、または慢性同種移植腎症である、項目５に記載の使用。
７．上記代謝障害またはホルモン障害が肥満、多嚢胞性卵巣疾患、アミロイドーシス、アルツハイマー病、脱毛症、または老化である、項目５に記載の使用。
８．上記疾患が肺線維症である、項目５に記載の使用。
９．上記肺線維症が特発性肺線維症である、項目８に記載の使用。
１０．プラスミノーゲン、そのバリアントまたはその類似体が、抗線維化剤と組み合わせて使用される、項目８または９のいずれか１項に記載の使用。
１１．上記抗線維化剤がピルフェニドンである、項目１０に記載の使用。
１２．ＰＡＩ−１の過剰発現に関連する、対象における疾患または状態の予防、進行の遅延、または処置に使用するためのプラスミノーゲン、そのバリアントまたはその類似体。
１３．対象の疾患または状態を予防するか、進行を遅らせるか、または処置する方法であって、上記疾患または状態が、ＰＡＩ−１の過剰発現に関連しており、対象へのプラスミノーゲン、そのバリアントまたは類似体の投与を包含する上記方法。
１４．対象の傷害組織におけるＰＡＩ−１過剰発現を下方制御するための医薬の調製のためのプラスミノーゲン、そのバリアントまたはその類似体の使用。
１５．対象の傷害組織におけるＰＡＩ−１過剰発現の下方制御に使用するためのプラスミノーゲン、そのバリアントまたはその類似体。
１６．対象へのプラスミノーゲン、そのバリアントまたはその類似体の投与を含む、対象の傷害組織におけるＰＡＩ−１過剰発現を下方制御する方法。
【００１４】
本発明のさらなる態様は、本明細書の以下の詳細な説明、特許請求の範囲、及び一般化から当業者には明らかであろう。
【図面の簡単な説明】
【００１５】
【図１】ブレオマイシン誘発マウス（Ｂｌｅｏ（ブレオマイシン））及び非傷害マウス（Ｃｏｎｔｒｏｌ（対照））における内因性マウスプラスミノーゲンの血漿濃度を示している。
【図２】ブレオマイシン誘発マウス（Ｂｌｅｏ）及び非傷害マウス（Ｃｏｎｔｒｏｌ）におけるＰＡＩ−１の血漿濃度を示している。
【図３】ブレオマイシン誘発マウス（Ｂｌｅｏ）及び非傷害マウス（Ｃｏｎｔｒｏｌ）の気管支肺胞洗浄液（ＢＡＬＦ）中のＰＡＩ−１の濃度を示す。
【図４】（ｉ）正常マウス（Ｃｏｎｔｒｏｌ）、（ｉｉ）ブレオマイシン誘発マウス（Ｂｌｅｏ）、及び（ｉｉｉ）１０日目及び１４日目に６０ｍｇ／ｋｇのプラスミノーゲンで処理したブレオマイシン誘発マウス（Ｂｌｅｏ＋Ｐｌｇ）、の炎症性病変におけるコラーゲンｍＲＮＡ発現を、ブレオマイシン傷害後２１日目に測定して、示す。
【図５】（ｉ）正常マウス（Ｃｏｎｔｒｏｌ）、（ｉｉ）ブレオマイシン誘発マウス（Ｂｌｅｏ）、及び（ｉｉｉ）１０日目及び１４日目に６、２０または６０ｍｇ／ｋｇのプラスミノーゲンで処置したブレオマイシン誘発マウス（Ｂｌｅｏ＋Ｐｌｇ）、の炎症性病変におけるＣＴＧＦ  ｍＲＮＡ発現を、ブレオマイシン傷害後２１日目に測定して、示す。
【図６】（ｉ）正常マウス（Ｃｏｎｔｒｏｌ）、（ｉｉ）ブレオマイシン誘発マウス（Ｂｌｅｏ）、及び（ｉｉｉ）１０日目及び１４日目に、６、２０または６０ｍｇ／ｋｇのプラスミノーゲンで処置したブレオマイシン誘発マウス（Ｂｌｅｏ＋Ｐｌｇ）、の炎症性病変におけるＩＬ−６  ｍＲＮＡ発現を、ブレオマイシン傷害後２１日目に測定して、示す。
【図７】（ｉ）正常マウス（Ｃｏｎｔｒｏｌ）、（ｉｉ）ブレオマイシン誘発マウス（Ｂｌｅｏ）、及び（ｉｉｉ）１０日目及び１４日目に、６、２０または６０ｍｇ／ｋｇのプラスミノーゲンで処置したブレオマイシン誘発マウス（Ｂｌｅｏ＋Ｐｌｇ）、の炎症性病変におけるＰＡＩ−１のｍＲＮＡ発現を、ブレオマイシン傷害後２１日目に測定して、示す。
【図８】（ｉ）正常マウス（Ｃｏｎｔｒｏｌ）、（ｉｉ）ブレオマイシン誘発マウス（Ｂｌｅｏ）、（ｉｉｉ）６ｍｇ／ｋｇのプラスミノーゲンで処置したブレオマイシン誘発マウス（Ｂｌｅｏ−Ｐｌａｓｍｉｎｏｇｅｎ）、及び（ｉｖ）４００ｍｇ／ｋｇのピルフェニドンで処置したブレオマイシン誘発マウス（Ｂｌｅｏ−Ｐｉｒｆｅｎｉｄｏｎｅ）、及び（ｖ）６ｍｇ／ｋｇのプラスミノーゲン及び４００ｍｇ／ｋｇのピルフェニドンの組み合わせで処置したブレオマイシン誘発マウス（Ｂｌｅｏ−Ｐｌａｓｍｉｎｏｇｅｎ＋Ｐｉｒｆｅｎｉｄｏｎｅ）、の炎症性病変におけるＰＡＩ−１のｍＲＮＡ発現を、ブレオマイシン傷害後２８日目に測定して、示す。
【図９】（ｉ）正常マウス（Ｃｏｎｔｒｏｌ）、（ｉｉ）ブレオマイシン誘発マウス（Ｂｌｅｏ）、（ｉｉｉ）６ｍｇ／ｋｇのプラスミノーゲンで処置したブレオマイシン誘発マウス（Ｂｌｅｏ−Ｐｌａｓｍｉｎｏｇｅｎ）、（ｉｖ）４００ｍｇ／ｋｇのピルフェニドンで処置したブレオマイシン誘発マウス（Ｂｌｅｏ−Ｐｉｒｆｅｎｉｄｏｎｅ）、（ｖ）６ｍｇ／ｋｇのプラスミノーゲン及び４００ｍｇ／ｋｇのピルフェニドンの組み合わせで処置したブレオマイシン誘発マウス（Ｂｌｅｏ−Ｐｌａｓｍｉｎｏｇｅｎ＋Ｐｉｒｆｅｎｉｄｏｎｅ）、の炎症性病変におけるＩＬ−６のｍＲＮＡ発現を、ブレオマイシン傷害後２８日目に測定して、示す。
【発明を実施するための形態】
【００１６】
本開示は、組織または血漿におけるＰＡＩ−１過剰発現を下方制御するため、及び好ましくはＰＡＩ−１過剰発現が疾患または状態に関連する場合に、プラスミノーゲン、そのバリアント、またはその類似体を含む薬剤の使用を開示する。本開示は、組織または血漿におけるＰＡＩ−１過剰発現に関連する疾患または状態の予防、進行の遅延または処置のためのプラスミノーゲン、そのバリアント、またはその類似体の使用を開示する。
【００１７】
プラスミノーゲンの供給源は多様であり、これには、限定するものではないが、血液、血漿もしくはその画分からの精製；合成生産；または組換え調製が挙げられる。バリアントとしては、限定するものではないが、アミノ酸の置換（複数可）、切断または伸長が挙げられる。プラスミノーゲンとしては、Ｇｌｕプラスミノーゲン及びＬｙｓプラスミノーゲンが挙げられる。プラスミノーゲンは、Ｇｌｕ−プラスミノーゲンと呼ばれるその完全な長さ（１−７９１）の形態で見出される場合も；または、Ｌｙｓ−プラスミノーゲンと呼ばれる短いバージョン（７８−７９１）で見出される場合もある。本発明によって指定されるプラスミノーゲンのバリアント及びプラスミノーゲンの類似体としては、プラスミノーゲン活性を有するものが挙げられる。
【００１８】
ＰＡＩ−１過剰発現とは、ＰＡＩ−１レベルの増大または正常なＰＡＩ−１レベルを上回るＰＡＩ−１レベルまたは過剰発現されたＰＡＩ−１レベルと同義である。前記ＰＡＩ−１レベルは、対象の血漿または組織、好ましくは傷害した組織のいずれかに見出されるＰＡＩ−１レベルを指す。血液中のＰＡＩ−１の基準範囲は、２〜１５ＡＵ／ｍＬである。高齢者ではＰＡＩ−１活性の増大が観察される。正常な血漿中濃度は５〜４０ｎｇ／ｍＬであり、５０〜６０ｎｇ／ｍＬという平均ＰＡＩ−１レベルは、中年の男性対象では珍しくない。血漿ＰＡＩ−１にはよく知られた概日変動があり、このＰＡＩ−１活性の変動は、正味の線維素溶解活性の日内変動の原因である。ＰＡＩ−１レベルは、早朝にピークに達し、正味の線維素溶解活性の最下点に相当するが、血漿ＰＡＩ−１の午後の低下は、内因性線維素溶解のピークに相当する。（Ｖａｕｇｈａｎ  ２００５、ＰＡＩ−１  ａｎｄ  ａｔｈｅｒｏｔｈｒｏｍｂｏｓｉｓ．Ｊ．ｏｆ  Ｔｈｒｏｍｂｏｓｉｓ  ａｎｄ  Ｈａｅｍｏｓｔａｓｉｓ，３：１８７９−１８８３）。一実施形態では、血中ＰＡＩ−１過剰発現（またはＰＡＩ−１過剰発現レベル）は、対象の種類（高齢の対象、中年男性の対象など）について知られている正常レベルより少なくとも２５％、５０％、１００％または２００％高いレベルに相当する。一実施形態では、血中ＰＡＩ−１過剰発現は、血液１ｍＬあたり５０ｎｇを超えるＰＡＩ−１のレベルに相当する。一実施形態では、血中ＰＡＩ−１の過剰発現は、血液１ｍＬあたり７０ｎｇ／１ｍＬを超えるレベルのＰＡＩ−１に対応する。一実施形態では、血中ＰＡＩ−１過剰発現は、血液１ｍＬあたり１００ｎｇを超えるＰＡＩ−１のレベルに相当する。一実施形態では、血中ＰＡＩ−１過剰発現は、血液１ｍＬあたり１５０ｎｇを超えるＰＡＩ−１のレベルに相当する。一実施形態では、血中ＰＡＩ−１の過剰発現は、血液１ｍＬあたり２００ｎｇを超えるＰＡＩ−１のレベルに相当する。動脈硬化を患っている対象では、組織１００ｍｇあたりの組織ＰＡＩ−１レベルが、１１例のアテローム性動脈硬化大動脈では９９±５８ｎｇ、５例の正常大動脈で３８±２０ｎｇで検出されている（ｐ＜０．０５）（Ｓｈｉｒｅｍａｎ  ｅｔ  ａｌ．１９９６，Ｅｌｅｖａｔｅｄ  ｌｅｖｅｌｓ  ｏｆ  ｐｌａｓｍｉｎｏｇｅｎ−ａｃｔｉｖａｔｏｒ  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ  ｔｙｐｅ  １  ｉｎ  ａｔｈｅｒｏｓｃｌｅｒｏｔｉｃ  ａｏｒｔａ．Ｊ．ｏｆ  Ｖａｓｃ．Ｓｕｒｇ．，２３：５，８１０−８１８）。一実施形態において、組織ＰＡＩ−１過剰発現は、組織１００ｍｇあたり５０ｎｇを超えるレベルのＰＡＩ−１に対応する。一実施形態では、組織ＰＡＩ−１の過剰発現は、組織１００ｍｇあたり７０ｎｇを超えるＰＡＩ−１のレベルに相当する。一実施形態では、組織ＰＡＩ−１の過剰発現は、組織１００ｍｇあたり１００ｎｇを超えるＰＡＩ−１のレベルに相当する。一実施形態では、組織ＰＡＩ−１の過剰発現は、組織１００ｍｇあたり１５０ｎｇを超えるレベルのＰＡＩ−１に対応する。一実施形態では、組織ＰＡＩ−１の過剰発現は、組織１００ｍｇあたり２００ｎｇを超えるＰＡＩ−１のレベルに相当する。
【００１９】
一実施形態では、本発明は、プラスミノーゲン欠乏であるか；または、血漿プラスミノーゲン活性レベルが低いか；または、非プラスミノーゲン欠乏の正常対象における血漿プラスミノーゲン活性のレベルより低い血漿プラスミノーゲン活性レベル（「正常プラスミノーゲン活性」と呼ばれる）を有する対象の予防もしくは処置を除外する。言い換えれば、本発明は、非プラスミノーゲン欠乏症の対象の予防、進行の遅延、または処置に関する。非プラスミノーゲン欠乏対象は、正常な血漿プラスミノーゲンレベルを有する対象、または正常な対象として指定され得る。正常対象のプラスミノーゲン活性には変動があるため、正常プラスミノーゲン活性は、非プラスミノーゲン欠乏の正常対象または健康な対象から収集された血漿のプールで計算されることが好ましい。前記血漿のプールは、個人に見られる変動を正常化するために十分な量の対象から収集されることが好ましい。好ましくは、血漿の前記プールは、少なくとも２４０人の非プラスミノーゲン欠乏の正常な対象、例えば、２０歳から８０歳までをカバーする１２０人の健常成人男性及び１２０人の健常成人女性から収集される。別の実施形態では、正常なプラスミノーゲン活性は、健常または非プラスミノーゲン欠乏対象の集団で決定された平均または平均プラスミノーゲン活性に対応する。プラスミノーゲン活性を測定するいくつかの方法は、当技術分野で公知である。例えば、プラスミノーゲン活性は、一般的に発色アッセイまたは蛍光発生アッセイによって決定される。正常なプラスミノーゲン活性の決定のための対象のプール、及び本発明に従って好ましくは使用されるプラスミノーゲン活性の測定方法は、ヒト血漿中のプラスミノーゲン特異測定基準（酵素；手順）（Ｃｒｉｔｅｒｉａ  ｆｏｒ  ｓｐｅｃｉｆｉｃ  ｍｅａｓｕｒｅｍｅｎｔ  ｏｆ  ｐｌａｓｍｉｎｏｇｅｎ（ｅｎｚｙｍａｔｉｃ：ｐｒｏｃｅｄｕｒｅ），Ｅｌｅｃｔｒｏｎｉｃ  Ｊｏｕｒｎａｌ  Ｏｆ  Ｔｈｅ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  Ｆｅｄｅｒａｔｉｏｎ  Ｏｆ  Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  Ａｎｄ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，Ｖｏｌ．１２，Ｎｏ．３，２０００：ｗｗｗ．ｉｆｃｃ．ｏｒｇ／ｉｆｃｃｆｉｌｅｓ／ｄｏｃｓ／ｐｌａｓｍｉｎｏｇｅｎ．ｐｄｆ．に記載されている。一実施形態では、低血漿プラスミノーゲン活性レベルは、正常プラスミノーゲン活性の７０％以下、正常プラスミノーゲン活性の６０％以下、正常プラスミノーゲン活性の５０％以下、正常プラスミノーゲン活性の４０％または以下、正常なプラスミノーゲン活性の３５％以下、または正常なプラスミノーゲン活性の３０％以下に相当する。低い血漿プラスミノーゲン活性レベルを有する前記対象には、先天性プラスミノーゲン欠乏症または後天性プラスミノーゲン欠乏症を有する対象が含まれる。
【００２０】
一実施形態では、本発明は、先天性プラスミノーゲン欠乏症または後天性プラスミノーゲン欠乏症を有する対象の予防または処置を除外する。一実施形態では、本発明は、木質結膜炎、播種性血管内凝固症候群（ＤＩＣ）、敗血症、白血病、硝子膜疾患、肝疾患、アルゼンチン出血熱、甲状腺機能亢進症、ポストＬ−アスパラギナーゼ療法（ｐｏｓｔ  Ｌ−ａｓｐａｒａｇｉｎａｓｅ  ｔｈｅｒａｐｙ）、血栓溶解イベント、川崎病、火傷及び重度の火傷、異所性骨化または骨化筋炎、ヒアリン膜症、新生児呼吸器疾患症候群（ＮＲＤＳ）、敗血症、血栓溶解療法、脳卒中、急性肺損傷（ＡＬＩ）、急性呼吸窮迫症候群（ＡＲＤＳ）、糖尿病（１、１．５、２、及び３型）、劇症肝不全、バッド・キアリ症候群、微小血管障害性溶血性貧血（ＭＡＨＡ）、非定型溶血性尿毒症症候群、または創傷治癒のため、任意の対象または先天性プラスミノーゲン欠乏症の対象において、後天性プラスミノーゲン欠乏症、正常プラスミノーゲン活性レベルより低い血漿プラスミノーゲン活性レベル、または正常プラスミノーゲン活性レベルの７０％以下に相当する血漿プラスミノーゲン活性レベルの予防または処置を除外する。一実施形態において、対象は非プラスミノーゲン欠乏の正常な対象であり、正常プラスミノーゲン活性レベルの７０％を超える血漿プラスミノーゲン活性を有する。
【００２１】
「対象」という用語は、本明細書に開示されているような処置を必要とする生物、例えば臓器が損傷している生物を包含する。「対象」という用語には、哺乳類または鳥などの動物を包含する。好ましくは、対象とは、限定するものではないが、ヒト、ウマ、イヌ及びネコを含む哺乳類である。いくつかの実施形態では、哺乳動物はマウスではない。より好ましくは、対象はヒトである。
【００２２】
本発明の一実施形態では、プラスミノーゲンは、静脈内、腹腔内、皮下、鼻腔、肺、または直腸という以下の投与経路のうちの１つによって投与される。一実施形態において、プラスミノーゲンは、徐放性送達、連続送達、複数送達もしくは単一送達に適合したデバイスによって；または、シリンジでの注入によって皮下投与される。一実施形態において、プラスミノーゲンは、ゆっくりした注入、ボーラス、単回または複数回の送達に適合したデバイスによって静脈内投与される。
【００２３】
プラスミノーゲンは、１回投与してもよいし、反復用量で投与してもよい。前記反復用量は、好ましくは、以下の頻度で投与される：毎日、隔日、週に２回、または毎週。所望のレベルに迅速に到達するために、処置の開始時に高頻度の投与を選択することが望ましい場合があり、その後、投与頻度を所望の度合いに下げる。別の実施形態において、投与の頻度は、ある程度の臨床的利益が達成される一定の期間後に減少され得る。反対に、他の実施形態では、所望の臨床的利点がほとんど達成されない一定の期間の後に、投与頻度を増大させてもよい。
【００２４】
一実施形態では、治療上有効な用量は、約０．５〜２０ｍｇ／ｋｇの間であるか；または０．５〜１５ｍｇ／ｋｇ；または０．５〜１０ｍｇ／ｋｇ；または２〜１０ｍｇ／ｋｇ；または３〜１０ｍｇ／ｋｇ；または３〜８ｍｇ／ｋｇ；または４〜８ｍｇ／ｋｇ；または５〜８ｍｇ／ｋｇ；または６〜７ｍｇ／ｋｇ；または約２．０ｍｇ／ｋｇ；または約２．５ｍｇ／ｋｇ；または約３．０ｍｇ／ｋｇ；または約３．５ｍｇ／ｋｇ；または約４．０ｍｇ／ｋｇ；または約４．５ｍｇ／ｋｇ；または約５．０ｍｇ／ｋｇ；または約５．５ｍｇ／ｋｇ；または約６．０ｍｇ／ｋｇ；または約６．５ｍｇ／ｋｇ、または約６．６ｍｇ／ｋｇ；または約７．０ｍｇ／ｋｇ；または約７．５ｍｇ／ｋｇ；または約８．０ｍｇ／ｋｇ；または約８．５ｍｇ／ｋｇ；または約９，０ｍｇ／ｋｇ；または約９．５ｍｇ／ｋｇ；または約１０．０ｍｇ／ｋｇである。所望の期間中に血漿プラスミノーゲンレベルを維持するために、複数回投与が適している場合がある。望ましい期間はさまざまであり、観察された症状の軽減、ＰＡＩ−１過剰発現に関連する障害もしくは状態の処置の達成、またはＰＡＩ−１の過剰発現に関連する状態もしくは障害の予防における効率的な血漿プラスミノーゲンレベルの蓄積に基づいて決定され得る。反復投与は、毎日、隔日、２日ごと、週に２回、毎週、または隔週、好ましくは毎日と毎週の間で投与され得る。一実施形態では、用量は毎日投与され、約０．５〜約５ｍｇ／ｋｇ、または約３〜約４ｍｇ／ｋｇ、または約６〜約７ｍｇ／ｋｇ、または約３．５ｍｇ／ｋｇ、または約５ｍｇ／ｋｇ、または約６ｍｇ／ｋｇ、または約６，６ｍｇ／ｋｇである。一実施形態において、用量は一日おきに投与され、約３〜約７ｍｇ／ｋｇ、または約６〜約７ｍｇ／ｋｇ、または約４〜約６ｍｇ／ｋｇ、または約５ｍｇ／ｋｇ、または約６ｍｇ／ｋｇ、または約６，６ｍｇ／ｋｇである。一実施形態では、用量は週に２回投与され、約４〜約８ｍｇ／ｋｇ、または約５〜約７ｍｇ／ｋｇ、または約６〜約７ｍｇ／ｋｇ、または約６ｍｇ／ｋｇ、または約６，６ｍｇ／ｋｇである。一実施形態において、用量は毎週投与され、約５〜約１０ｍｇ／ｋｇ、または約６．５〜約８．５ｍｇ／ｋｇ、または約６〜約７ｍｇ／ｋｇ、または約６ｍｇ／ｋｇ、または約６．６ｍｇ／ｋｇ、または約７．５ｍｇ／ｋｇである。
【００２５】
一実施形態では、プラスミノーゲン活性のピークのレベルは、正常プラスミノーゲン活性の約５倍（約５００％）、正常プラスミノーゲン活性の約３倍（約３００％）、正常のプラスミノーゲン活性の２．５倍（約２５０％）、正常のプラスミノーゲン活性の約２倍（約２００％）、正常のプラスミノーゲン活性の約１．７５倍（約１７５％）、正常のプラスミノーゲン活性の約１．５倍（約１５０％）、正常のプラスミノーゲン活性の約１．２５倍（約１２５％）、または正常のプラスミノーゲン活性の約１倍（約１００％）以下であることが望ましい。
【００２６】
本明細書で使用される場合、「治療有効量」という用語は、ＰＡＩ−１レベルの低下に関連する特定の障害、疾患もしくは状態を処置、進行遅延もしくは予防するために、または生物学的作用を発揮するために対象に投与される場合の化合物の量であって、その障害、疾患もしくは状態のそのような治療もしくは予防を達成するため、または生物学的効果を発揮するのに十分である量を意味する。本発明によって指定される生物学的効果としては、組織もしくは血漿におけるＰＡＩ−１過剰発現の調節、線維性病変の減少、及び／または線維性器官におけるＥＣＭ分解の刺激が挙げられる。投与量及び治療有効量は、例えば、使用する特定の薬剤の活性、対象の年齢、体重、一般的な健康、性別、及び食事、投与時間、投与経路、排泄速度、及び適用可能な場合、任意の薬物の組み合わせ、施術者が、化合物が対象に対して有することを望む効果、化合物の特性（例えば、生物学的利用能、安定性、効力、毒性など）、及び対象が罹っている特定の障害（複数可）を含む様々な要因に応じて変化し得る。さらに、治療有効量は、対象の血液パラメーター（例えば、カルシウムレベル、脂質プロファイル、インスリンレベル、血糖、凝固因子、線維素溶解因子）、病状の重症度、臓器機能、または基礎疾患もしくは合併症に依存する場合がある。そのような適切な用量は、本明細書に記載のアッセイを含む利用可能なアッセイを使用して決定され得る。プラスミノーゲンをヒトに投与する場合、医師は、例えば、最初は比較的低用量を処方し、その後、適切な応答が得られるまで用量を増やしてもよい。投与される用量は、最終的には医療従事者の裁量になる。しかしながら、一般に、プラスミノーゲンの用量及びその投与頻度は、治療上有効な用量について上記で与えられた範囲内であり得ることが想定される。
【００２７】
本発明の一実施形態では、プラスミノーゲンは放射標識されていない。本発明の一実施形態では、プラスミノーゲンは、追加のタンパク質、すなわちプラスミノーゲン以外のタンパク質を含まないかまたは実質的に含まない、好ましくはアルブミンを含まないかまたは実質的に含まない薬学的組成物に含まれる。本発明の一実施形態では、プラスミノーゲンは、アプロチニンを含まないか、実質的に含まない薬学的組成物に含まれる。本発明の一実施形態では、プラスミノーゲンは、トリプシン阻害剤を実質的に含まない薬学的組成物に含まれる。本発明の一実施形態では、プラスミノーゲンは、セリンプロテアーゼ阻害剤を含まないか、実質的に含まない薬学的組成物に含まれる。本発明の一実施形態では、プラスミノーゲンは、プラスミンを含まないかまたは実質的に含まない薬学的組成物に含まれる。本発明の一実施形態では、プラスミノーゲンは、界面活性剤を含まないか、実質的に含まない、例えば、０．０１ｍＭ未満の界面活性剤の濃度の薬学的組成物に含まれる。「実質的に含まない」という用語は、その含有量が検出レベル未満または定量レベル未満であることを意味するものとする。
【００２８】
本明細書で使用される場合、「薬学的組成物」という用語は、商業化の準備ができているか、または投与の準備ができているプラスミノーゲンの調製物を指す。薬学的組成物は、少なくとも１つの薬学的に許容される担体、希釈剤、ビヒクルまたは賦形剤を含んでもよい。本明細書で使用する場合、「薬学的に許容可能な担体」、「薬学的に許容可能な希釈剤」または「薬学的に許容可能な賦形剤」という用語は、限定するものではないが、アジュバント、担体、賦形剤、流動促進剤、甘味料、希釈剤、防腐剤、染料／着色料、風味増強剤、界面活性剤、湿潤剤、分散剤、懸濁剤、安定剤、等張剤、溶媒、乳化剤、カプセル化剤、リポソーム、シクロデキストリン、カプセル化ポリマー送達系及び／またはポリエチレングリコールマトリックスを意味するものとし、これらは対象での使用に許容され、そして、好ましくは、ヒトでの使用に許容される。「使用に許容される」という用語は、好ましくは、連邦政府または州政府の規制当局によって承認されるかまたは承認可能な化合物、または米国薬局方もしくは他の一般に認められた薬局方に列挙されている化合物を指す。薬学的に許容されるビヒクルは、例えば、水、エタノール、ポリオール（例えば、グリセロール、プロピレングリコール、及び液体ポリエチレングリコール）、それらの適切な混合物、及び／または植物油を含む溶媒または分散媒であってもよい。薬学的に許容されるビヒクルの追加の例としては、限定するものではないが、以下が挙げられる：ＵＳＰ注射用水；水性ビヒクル、例えば、限定するものではないが、塩化ナトリウム注射液、リンゲル注射液、デキストロース注射液、デキストロース及び塩化ナトリウム注射液、ならびに乳酸加リンゲル注射液；水混和性ビヒクル、例えば、限定するものではないが、エチルアルコール、ポリエチレングリコール、ポリプロピレングリコール；ならびに非水性ビヒクル、例えば、限定するものではないが、コーン油、綿実油、落花生油、ゴマ油、オレイン酸エチル、ミリスチン酸イソプロピル、及び安息香酸ベンジル。微生物の作用の防止は、抗菌剤及び抗真菌剤、例えば、パラベン、クロロブタノール、フェノール、アスコルビン酸、チメロサールなどの添加により達成され得る。多くの場合、等張剤、例えば、糖、塩化ナトリウム、またはマンニトール及びソルビトールなどの多価アルコールが組成物に含まれている。注射可能な組成物の長期吸収は、吸収を遅延させる薬剤、例えば、モノステアリン酸アルミニウムまたはゼラチンを組成物に含めることにより、もたらされ得る。薬学的に許容される賦形剤（複数可）の性質及び濃度は、許容されるタンパク質安定性、イオン強度、及びｐＨを提供するように選択される。
【００２９】
本明細書の「約」という用語は、好ましくは関連値の±５％、関連値の±１０％、または関連値の±１５％を定義するものとする。
【実施例】
【００３０】
以下の実施例は、本発明の実施をさらに説明するが、本発明を限定することを意図するものではない。
【００３１】
実施例１：プラスミノーゲンの調製
プラスミノーゲンは、ＦＤＡ／ＥＭＡ認可の米国血漿採取センターから供給されるプールされたヒト血漿から精製される。得られた純度は９５％を超えている。精製されたプラスミノーゲンは、プラスミノーゲンの９５％以上が単量体型であるＧｌｕ−プラスミノーゲンから構成される。Ｇｌｕ−プラスミノーゲンは、ＰＣＴ公開ＷＯ２００６／１２０４２３に以前に記載されているように調製された。
【００３２】
ヒトプラスミノーゲンは、凍結乾燥プラスミノーゲンの１バイアルあたり約７５ミリグラムで構成される。注入する前に、バイアル内の凍結乾燥粉末を、静脈内注射用に水１２．５ｍＬで再構成する。最終的な組成物は、許容されるタンパク質安定性、イオン強度、及びｐＨを提供するために、クエン酸ナトリウム、塩化ナトリウム、グリシン、及びスクロースを含んでいる。
【００３３】
実施例２：肺線維症マウスモデルにおけるプラスミノーゲンの効果
マウスの肺線維症は、マウスへのブレオマイシンの気管内注入によって誘発される。ブレオマイシンは周知の抗がん剤である。第一に、ブレオマイシンによる傷害は、１日目にすぐに急性炎症を引き起こす。その後、約１０日目から１４日目までに、線維性イベントが発生し、慢性線維性状態を引き起こす。ブレオマイシン誘発マウスは、肺線維症の動物モデルとして認識されている。プラスミノーゲンの活性の評価は、適切な時点でのプラスミノーゲンでのマウスの治療によって行われる。本研究では、プラスミノーゲンは１０日目と１４日目に投与された。
【００３４】
雄性Ｃ５７ＢＬ６マウスに、０日目に硫酸ブレオマイシン（０．００７ｍｇ／マウス）の気管内点滴を施す。１０日目及び１４日目にヒトプラスミノーゲンを６ｍｇ／ｋｇ、２０ｍｇ／ｋｇまたは６０ｍｇ／ｋｇのいずれかの用量で皮下投与した。２１日目に動物を屠殺した。コラーゲンを、染色レッドサイラス染色（蛍光）を使用した組織学的分析により定量し、４００Ｘの倍率で分析した。コラーゲンの定量は、Ｉｍａｇｅ  Ｐｒｏ  Ｐｒｅｍｉｅｒソフトウェアを使用してセグメンテーションを行い、肺の炎症性病変にある２０のフィールドのサンプルを使用して行った。炎症性病変を含む領域の全表面のコラーゲン量が報告されている。この定量方法により、組織に正常に含まれるコラーゲンの内因性成分が除外可能になる。対照（Ｃｏｎｔｒｏｌ）マウスには炎症性病変がないので、炎症性病変に含まれるコラーゲンの割合は必然的にゼロである。ＣＴＧＦ、ＩＬ−６、及びＰＡＩ−１のｍＲＮＡの発現は、ＨＰＲＴ１内因性コントロールに正規化されたマウスＴａｑｍａｎ（登録商標）Ｇｅｎｅ−Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎアッセイ（スチューデントのｔ検定）を使用してリアルタイムＰＣＲによって定量した。
【００３５】
ブレオマイシンは、内因性マウスプラスミノーゲンの血漿濃度に有意な影響を及ぼさず（図１）、ＰＡＩ−１の血漿濃度に有意な影響を及ぼさない（図２）ことが観察されている。しかし、ブレオマイシンは、気管支肺胞洗浄液（ＢＡＬＦ）のＰＡＩ−１の濃度を有意に増大させ（図３）、これは、ブレオマイシン傷害によって予想される損傷組織の位置に対応する。
【００３６】
炎症性病変におけるコラーゲン発現を、６０ｍｇ／ｋｇのプラスミノーゲンで処置されたブレオマイシン誘発マウスで測定し、ブレオマイシン誘発マウス（Ｂｌｅｏ）及び正常マウス（Ｃｏｎｔｒｏｌ）と比較した。正常マウス（Ｃｏｎｔｒｏｌ）は肺に炎症性病変がなかったため、図４でゼロパーセントのコラーゲンが報告されている。ブレオマイシン誘発マウス（Ｂｌｅｏ）は、２１日目にコラーゲン発現が上昇する炎症性病変を示した。このコラーゲン発現は、肺の線維性病変の存在の特徴である。炎症性病変におけるコラーゲン発現量は、ブレオマイシン誘発マウス（Ｂｌｅｏ＋Ｐｌｇ）の１０日目と１４日目にプラスミノーゲン６０ｍｇ／ｋｇを投与することにより有意に減少した。
【００３７】
線維化促進マーカーであるＣＴＧＦのｍＲＮＡ発現を測定し、図５に報告した。ブレオマイシン誘発マウス（Ｂｌｅｏ）のＣＴＧＦのｍＲＮＡ発現は、正常マウス（Ｃｏｎｔｒｏｌ）のＣＴＧＦレベルと比較して増大していることが示されている。６、２０、または６０ｍｇ／ｋｇのいずれかでのプラスミノーゲンの投与により、ブレオマイシン誘発マウス（Ｂｌｅｏ＋Ｐｌｇ）でのＣＴＧＦの過剰発現が、正常マウス（Ｃｏｎｔｒｏｌ）のＣＴＧＦレベルに匹敵するレベルまで有意に減少した。この反応は用量依存的ではなく、研究動物の数が少ないために変動が生じ得る。
【００３８】
線維化促進及び炎症促進のマーカーであるＩＬ−６のｍＲＮＡ発現を測定し、図６に報告している。ＩＬ−６は、正常マウス（Ｃｏｎｔｒｏｌ）のＩＬ−６レベルと比較して、ブレオマイシン誘発マウス（Ｂｌｅｏ）で高度に過剰発現していることが示されている。６、２０、または６０ｍｇ／ｋｇのいずれかでのプラスミノーゲンの投与は、プラスミノーゲンで処理されたブレオマイシン誘発マウス（Ｂｌｅｏ＋Ｐｌｇ）のＩＬ−６ｍＲＮＡ発現を有意に減少させた。この反応は用量依存的ではなく、研究動物の数が少ないために変動が生じ得る。
【００３９】
ＰＡＩ−１  ｍＲＮＡ発現に対するプラスミノーゲンの効果は図７で報告されている。本研究では、ＰＡＩ−１の発現が、負傷していない正常なマウス（Ｃｏｎｔｒｏｌ）の肺と比較して、ブレオマイシン誘発マウス（Ｂｌｅｏ）の損傷組織（肺）で増大することが再確認された。この結果は、図３に報告されているブレオマイシン誘発マウス（Ｂｌｅｏ）のＢＡＬＦで観察されたＰＡＩ−１レベルと一致する。ブレオマイシン誘発マウスでのＰＡＩ−１の過剰発現は、全ての用量のプラスミノーゲンの投与（Ｂｌｅｏ＋Ｐｌｇ）によって減少する。用量間に有意差がないことで、プラスミノーゲンが低用量（６ｍｇ／ｍｋｇ）ですでに最大の効果に達していることが示唆される。これらの結果、プラスミノーゲンがＰＡＩ−１の過剰発現を、阻害することなく下方制御することが示される。
【００４０】
これらの結果によって、プラスミノーゲンがブレオマイシン誘発肺線維症モデルの肺線維症の減少に直接影響し、特発性肺線維症（ＩＰＦ）、及びＰＡＩ−１の過剰発現に関連する任意の疾患を含む肺の線維症の予防、進行の遅延及び処置のための新規治療法としての可能性を提供し得ることが示される。これらのデータはまた、ＰＡＩ−１の増大に関連する疾患では、プラスミノーゲンがＰＡＩ−１の調節に効果的であることも示唆している。
【００４１】
実施例３：肺線維症マウスモデルにおける線維化剤と組み合わせたプラスミノーゲンの効果
マウスの肺線維症は、マウスへの抗癌剤ブレオマイシンの気管内点滴によって誘発される。この実験は、マウスプラスミノーゲンが投与されたことを除いて、実施例２に記載されているように実施された。雄性Ｃ５７ＢＬ６マウスに、０日目に硫酸ブレオマイシン（０．００７ｍｇ／マウス）の気管内点滴を施す。マウスプラスミノーゲンを７、１０、１３、１６、１９、２３日目に６ｍｇ／ｋｇの用量で単独で、または４００ｍｇ／ｋｇのピルフェニドンの経口投与との組み合わせで皮下投与した（１日１回、７日目〜２７日目）。２８日目に動物を屠殺した。コラーゲンを、染色レッドサイラス染色（蛍光）を使用した組織学的分析により定量し、実施例２に記載のように分析した。ＩＬ−６のｍＲＮＡ発現は、ＨＰＲＴ１内因性対照（スチューデントのｔ検定）に対して正規化したマウスＴａｑｍａｎ（登録商標）Ｇｅｎｅ−Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎアッセイを使用してリアルタイムＰＣＲにより定量した。
【００４２】
この実験では、プラスミノーゲンと、ピルフェニドン（抗線維化化合物）との組み合わせを試験した。その結果を図８に報告しており、ブレオマイシン誘発肺線維症マウスモデル（Ｂｌｅｏ＋Ｐｌａｓｍｉｎｏｇｅｎ及びＢｌｅｏ＋Ｐｉｒｆｅｎｉｄｏｎｅ）に単独で投与すると、両方の化合物が線維症を軽減するのに効果的であることが示されていることが注目され得る。さらに、図８では、プラスミノーゲンとピルフェニドン（Ｂｌｅｏ＋Ｐｌａｓｍｉｎｏｇｅｎ＋Ｐｉｒｆｅｎｉｄｏｎｅ）を組み合わせることで、肺の炎症性病変のコラーゲン発現の減少に相加効果があることが示されている。
【００４３】
図９によって、プラスミノーゲンがＩＬ−６のｍＲＮＡ発現を阻害することが報告された（Ｂｌｅｏ＋Ｐｌａｓｍｉｎｏｇｅｎ）。ＩＬ−６発現に対するピルフェニドンの効果（Ｂｌｅｏ＋Ｐｉｒｆｅｎｉｄｏｎｅ）は、未処理のブレオマイシン誘発マウス（Ｂｌｅｏ）のＩＬ−６レベルと有意な差はなかった。しかし、図９によって、プラスミノーゲンとピルフェニドンの組み合わせ（Ｂｌｅｏ＋Ｐｌａｓｍｉｎｏｇｅｎ＋Ｐｉｒｆｅｎｉｄｏｎｅ）が、ＩＬ−６発現の有意な増大阻害によって示されるように、相加的な抗線維化効果を有することが実証された。プラスミノーゲンとピルフェニドンの組み合わせ（Ｂｌｅｏ＋Ｐｌａｓｍｉｎｏｇｅｎ＋Ｐｉｒｆｅｎｉｄｏｎｅ）で処置したブレオマイシン誘発マウスのＩＬ−６レベルは、正常マウス（Ｃｏｎｔｒｏｌ）のＩＬ−６レベルに匹敵するレベルまで低下した。
＊  ＊  ＊
【００４４】
特定のセクションを参照して位置付けを補助するために見出しを本明細書に含んでいるが、これらの見出しは、本明細書に記載されている概念の範囲を限定することを意図したものではなく、これらの概念は、明細書全体を通して他のセクションに適用可能であり得る。したがって、本発明は、本明細書に示される実施形態に限定される意図ではなく、本明細書に開示される原理及び新規の特徴と一致する最も広い範囲が与えられるべきである。
【００４５】
単数形「ある、１つの（ａ、ａｎ：不定冠詞）」、及び「この、その（ｔｈｅ：定冠詞）」は、文脈がそうでないことを明確に示さない限り、対応する複数の言及を包含する。
【００４６】
別段示さない限り、本明細書及び特許請求の範囲で使用される成分、反応条件、濃度、特性などの量を表す全ての数字は、「約」という用語によって全ての場合に修飾されると理解されるべきである。少なくとも、報告された有効数字のケタ数を考慮し、通常の四捨五入技術を適用して、各数値パラメーターを少なくとも解釈すべきである。したがって、反対に示されない限り、本明細書及び添付の特許請求の範囲に記載される数値パラメーターは、得ようとする特性に応じて変化し得る近似値である。広範囲の実施形態を示す数値範囲及びパラメーターは、近似値であるにもかかわらず、特定の実施例に示される数値は可能な限り正確に報告されている。ただし、数値には、実験、試験測定、統計分析などの変動に起因する特定の誤差が本質的に含まれている。
【００４７】
本明細書に記載される実施例及び実施形態は、例示のみを目的とするものであること、それを考慮した様々な修正または変更が当業者に示唆され、本発明及び添付の特許請求の範囲に含まれることが理解される。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【国際調査報告】
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