(57)【要約】骨髄細胞上に発現する抗トリガー受容体１（ＴＲＥＭ１）抗体を使用して骨髄細胞を無能化することを含む、個体における免疫応答を増強するためのおよび／または免疫関連状態の治療のための方法および組成物が、本明細書に提供される。【選択図】図１
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
骨髄細胞上に発現するトリガー受容体１（ＴＲＥＭ１）を細胞表面上に発現する骨髄細胞を死滅、無能化、または枯渇させる方法であって、
前記骨髄細胞を抗ＴＲＥＭ１抗体またはその抗原結合断片と接触させることを含み、
前記抗体が、活性Ｆｃ領域を含み、かつ抗体依存性細胞媒介性細胞傷害（ＡＤＣＣ）活性、補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）活性、および抗体媒介性食作用（ＡＤＣＰ）活性のうちの少なくとも１つを含む、
方法。
【請求項２】
前記活性Ｆｃ領域が、
免疫細胞上の活性化Ｆｃγ受容体（ＦｃγＲ）に結合して、ＡＤＣＣ、ＣＤＣ、およびＡＤＣＰのうちの少なくとも１つによって前記骨髄細胞を死滅、無能化、または枯渇させる、野生型非フコシル化ヒトＩｇＧ１  Ｆｃ
であり、
前記抗体が、ＴＲＥＭ１の細胞外ドメインに結合する、
請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記活性Ｆｃ領域が、ヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、またはＩｇＧ４  Ｆｃを含む、請求項１に記載の方法。
【請求項４】
前記活性Ｆｃ領域が、野生型ヒトＩｇＧ１  Ｆｃを含む、請求項１に記載の方法。
【請求項５】
前記Ｆｃ領域が、ＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩａ、ＦｃγＲＩＩｂ、ＦｃγＲＩＩｃ、ＦｃγＲＩＩＩａ、およびＦｃγＲＩＩＩｂからなる群から選択されるＦｃγ受容体に結合する、前記請求項のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６】
前記免疫細胞が、プロフェッショナル抗原提示細胞、マクロファージ、単球、ナチュラルキラー細胞、好中球、樹状細胞、またはＢ細胞である、請求項５に記載の方法。
【請求項７】
前記抗体が、ＡＤＣＣ、ＣＤＣ、およびＡＤＣＰのうちの少なくとも１つによって前記骨髄細胞を死滅、無能化、または枯渇させ、任意選択的に、前記抗体が、ＡＤＣＣによって前記骨髄細胞を死滅、無能化、または枯渇させ、任意選択的に、前記抗体が、ＣＤＣによって前記骨髄細胞を死滅、無能化、または枯渇させ、任意選択的に、前記抗体が、ＡＤＣＰによって前記骨髄細胞を死滅、無能化、または枯渇させる、前記請求項のいずれか一項に記載の方法。
【請求項８】
前記抗体が、ＡＤＣＣ、ＣＤＣ、およびＡＤＣＰのうちの少なくとも１つによって前記骨髄細胞を死滅させる、前記請求項のいずれか一項に記載の方法。
【請求項９】
前記抗体が、ＡＤＣＣ、ＣＤＣ、およびＡＤＣＰのうちの少なくとも１つによって前記骨髄細胞を無能化する、前記請求項のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１０】
前記抗体が、ＡＤＣＣ、ＣＤＣ、およびＡＤＣＰのうちの少なくとも１つによって前記骨髄細胞を枯渇させる、前記請求項のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１１】
前記抗体がフコシル化されていない、前記請求項のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１２】
前記非フコシル化抗体が、操作された細胞内で安定に発現し、前記操作された細胞が、シュードモナス酵素ＧＤＰ−６−デオキシ−Ｄ−リキソ−４−ヘキシロース還元酵素（ＲＭＤ）を過剰発現する、請求項７に記載の方法。
【請求項１３】
前記活性Ｆｃ領域が、前記Ｆｃ領域内に１つ以上のアミノ酸置換を含む、前記請求項のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１４】
前記抗体が、中和抗体、モノクローナル抗体、アンタゴニスト抗体、アゴニスト抗体、ポリクローナル抗体、ＩｇＧ１抗体、ＩｇＧ２抗体、ＩｇＧ３抗体、二重特異性抗体、ヒト抗体、ヒト化抗体、キメラ抗体、完全長抗体、および抗原結合断片のうちの少なくとも１つである、前記請求項のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１５】
前記抗体が、抗体依存性細胞媒介性細胞傷害（ＡＤＣＣ）活性を有する、前記請求項のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１６】
前記抗体が、補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）活性を有する、前記請求項のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１７】
前記抗体が、抗体媒介性食作用（ＡＤＣＰ）活性を有する、前記請求項のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１８】
前記抗体が、受容体−リガンド遮断、アゴニズム、またはアンタゴニズム活性を有する、前記請求項のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１９】
前記抗体が、前記ＴＲＥＭ１の細胞外ドメインに結合する、前記請求項のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２０】
前記抗体が、０．２ｎＭ以下のＫＤでＴＲＥＭ１に結合する、前記請求項のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２１】
前記抗体が、０．０９ｎＭ、０．１１ｎＭ、または０．１５ｎＭ以下のＫＤでＴＲＥＭ１に結合する、請求項２０に記載の方法。
【請求項２２】
前記骨髄細胞が刺激性骨髄細胞である、前記請求項のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２３】
前記骨髄細胞が非刺激性骨髄細胞である、前記請求項のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２４】
前記骨髄細胞が、樹状細胞、腫瘍関連マクロファージ（ＴＡＭ）、好中球、または単球のうちの少なくとも１つを含む、前記請求項のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２５】
前記骨髄細胞が好中球である、請求項２４記載の方法。
【請求項２６】
前記骨髄細胞が腫瘍関連マクロファージである、請求項２５に記載の方法。
【請求項２７】
前記骨髄細胞が腫瘍内にある、前記請求項のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２８】
前記骨髄細胞が、刺激性骨髄細胞および非刺激性骨髄細胞を含む免疫細胞の集団内にある、前記請求項のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２９】
前記骨髄細胞が、（ｉ）ＣＤ４５＋、ＨＬＡ−ＤＲ−、ＣＤ１５＋、（ｉｉ）ＣＤ４５＋、ＨＬＡ−ＤＲ−、ＣＤ１６＋、ＣＤ５６−、ＮＫｐ４４−、ＮＫｐ３０−、ＮＫｐ４６−、ＮＫｐ８０−、（ｉｉｉ）ＣＤ４５＋、ＨＬＡ−ＤＲ−、ＣＤ１４＋、（ｉｖ）ＣＤ４５＋、ＨＬＡ−ＤＲ＋、およびＣＤ１４＋、（ｖ）ＣＤ４５＋ＨＬＡ−ＤＲ＋、ＣＤ１６＋、ＣＤ５６−、ＮＫｐ４４−、ＮＫｐ３０−、ＮＫｐ４６−、ＮＫｐ８０−、（ｖｉ）ＣＤ４５＋ＨＬＡ−ＤＲ＋ＣＤ１４＋、ＣＤ１６＋、（ｖｉｉ）ＣＤ４５＋、ＨＬＡ−ＤＲ−、ＣＤ６６ｂ＋、（ｖｉｉｉ）ＣＤ４５＋、ＨＬＡ−ＤＲ＋、ＣＤ１４＋、ＢＤＣＡ３−、ＣＤ１１ｂ＋、およびＣＤ１１ｃ＋、（ｉｘ）ＣＤ４５＋、ＣＤ１４＋、ＨＬＡ−ＤＲ＋、ＣＤ６８高、ＣＤ２０−、ならびに（ｘ）ＣＤ４５＋、ＨＬＡ−ＤＲ＋、ＣＤ１４−、ＣＤ１１ｃ＋、およびＢＤＣＡ１＋のうちの少なくとも１つである細胞を含む、前記請求項のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３０】
前記接触させることが、前記骨髄細胞のアポトーシス、溶解、または成長停止を誘発する、前記請求項のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３１】
前記接触させることが、それを必要とする対象においてインビボで起こり、任意選択的に、前記対象が癌を有する、前記請求項のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３２】
前記癌が固形癌である、前記請求項のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３３】
前記癌が液状癌である、前記請求項のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３４】
前記癌が、黒色腫、腎臓、肝胆道、頭頸部扁平上皮癌（ＨＮＳＣ）、膵臓、結腸、膀胱、膠芽腫、前立腺、肺、乳房、卵巣、胃、腎臓、膀胱、食道、腎、黒色腫、および中皮腫からなる群から選択される、請求項３２に記載の方法。
【請求項３５】
前記癌が結腸癌または乳癌である、請求項３４に記載の方法。
【請求項３６】
前記接触させることが、前記対象における免疫応答を増強する、請求項３１に記載の方法。
【請求項３７】
前記増強された免疫応答が適応免疫応答である、請求項３６に記載の方法。
【請求項３８】
前記増強された免疫応答が自然免疫応答である、請求項３６に記載の方法。
【請求項３９】
前記対象が、免疫療法を以前に受けたことがあるか、同時に受けているか、またはその後受けることになる、請求項３１〜３８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４０】
前記免疫療法が、チェックポイント阻害剤、Ｔ細胞のチェックポイント阻害剤、抗ＰＤ１、抗ＰＤＬ１、抗ＣＴＬＡ４、養子Ｔ細胞療法、ＣＡＲ−Ｔ細胞療法、樹状細胞ワクチン、単球ワクチン、Ｔ細胞および抗原提示細胞の両方に結合する抗原結合タンパク質、ＢｉＴＥ二重抗原結合タンパク質、トール様受容体リガンド、サイトカイン、細胞毒性療法、化学療法、放射線療法、低分子阻害剤、低分子アゴニスト、免疫調節薬、およびエピジェネティック調節薬のうちの少なくとも１つである、請求項３９に記載の方法。
【請求項４１】
前記免疫療法が抗ＰＤ１である、請求項４０に記載の方法。
【請求項４２】
前記接触させることが、インビトロまたはインビボである、前記請求項のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４３】
前記対象がヒトである、請求項３１〜４２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４４】
前記抗体が、放射性核種、細胞毒、化学療法剤、薬品、プロドラッグ、毒素、酵素、免疫調節剤、抗血管新生剤、アポトーシス促進剤、サイトカイン、ホルモン、オリゴヌクレオチド、アンチセンス分子、ｓｉＲＮＡ、二次抗体、および二次抗体断片からなる群から選択される少なくとも１つの治療剤にコンジュゲートされる、前記請求項のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４５】
前記対象において実質的な末梢好中球減少を誘発しない、請求項３１〜４４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４６】
前記抗ＴＲＥＭ１抗体との接触前と比較して、前記抗ＴＲＥＭ１抗体との接触後の前記末梢における前記対象の好中球レベルが実質的に同じままである、請求項４５に記載の方法。
【請求項４７】
非刺激性骨髄細胞を死滅させる方法であって、
前記非刺激性骨髄細胞を、骨髄細胞上に発現する抗トリガー受容体１（ＴＲＥＭ１）抗体またはその抗原結合断片と接触させ、それにより前記非刺激性骨髄細胞を死滅させることを含み、
任意選択的に、前記非刺激性骨髄細胞が、腫瘍形成促進性骨髄細胞である、
方法。
【請求項４８】
非刺激性骨髄細胞を無能化させる方法であって、
前記非刺激性骨髄細胞を抗ＴＲＥＭ１抗体と接触させ、それにより前記非刺激性骨髄細胞を無能化させることを含み、
任意選択的に、前記非刺激性骨髄細胞が、腫瘍形成促進性骨髄細胞である、
方法。
【請求項４９】
刺激性骨髄細胞および非刺激性骨髄細胞を含む免疫細胞の集団において、刺激性骨髄細胞の非刺激性骨髄細胞に対する比率を増加させる方法であって、
前記免疫細胞の集団を抗ＴＲＥＭ１抗体と接触させ、それにより刺激性骨髄細胞の非刺激性骨髄細胞に対する比率を増加させることを含み、
任意選択的に、前記非刺激性骨髄細胞が、腫瘍形成促進性骨髄細胞である、
方法。
【請求項５０】
刺激性骨髄細胞および非刺激性骨髄細胞を含む免疫細胞の集団において、非刺激性骨髄細胞の数を減少させる方法であって、
前記免疫細胞の集団を抗ＴＲＥＭ１抗体と接触させ、それにより非刺激性骨髄細胞の数を減少させることを含み、
任意選択的に、前記非刺激性骨髄細胞が、腫瘍形成促進性骨髄細胞である、
方法。
【請求項５１】
非刺激性骨髄細胞が、刺激性骨髄細胞および非刺激性骨髄細胞を含む免疫細胞の集団内にある、請求項４７〜４８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５２】
前記免疫細胞の集団から前記非刺激性骨髄細胞を除去することをさらに含む、請求項５０に記載の方法。
【請求項５３】
前記非刺激性骨髄細胞が、腫瘍関連マクロファージまたはウイルス感染マクロファージであり、任意選択的に、前記ウイルスがＨＩＶである、請求項４７〜５２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５４】
前記非刺激性骨髄細胞が樹状細胞である、請求項４７〜５２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５５】
前記非刺激性骨髄細胞が、ＣＤ４５＋、ＨＬＡ−ＤＲ＋、およびＣＤ１４＋である、請求項４７〜５２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５６】
前記非刺激性骨髄細胞が、ＣＤ４５＋、ＨＬＡ−ＤＲ＋、ＣＤ１４＋、ＢＤＣＡ３−、ＣＤ１１ｂ＋、およびＣＤ１１ｃ＋である、請求項４７〜５２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５７】
前記非刺激性骨髄細胞が、ＣＤ４５＋、ＨＬＡ−ＤＲ＋、ＣＤ１４−、ＣＤ１１ｃ＋、およびＢＤＣＡ１＋である、請求項４７〜５２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５８】
前記非刺激性骨髄細胞が、ＣＤ４５＋、ＨＬＡ−ＤＲ＋、ＣＤ１４−、ＣＤ１１ｃ＋、およびＢＤＣＡ３＋ではない、請求項４７〜５２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５９】
前記抗体が、抗体依存性細胞媒介性細胞傷害（ＡＤＣＣ）活性を有する、請求項４７〜５８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６０】
前記抗体が、補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）活性を有する、請求項４７〜５８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６１】
前記抗体が、抗体媒介食作用活性を有する、請求項４７〜５８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６２】
前記抗体がモノクローナル抗体である、請求項４７〜６１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６３】
前記抗体がポリクローナル抗体である、請求項４７〜６１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６４】
前記抗体がＩｇＧ１抗体である、請求項４７〜６３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６５】
前記抗体がＩｇＧ３抗体である、請求項４７〜６３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６６】
前記抗体がＩｇＧ２抗体ではない、請求項４７〜６３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６７】
前記抗体がＩｇＧ４抗体ではない、請求項４７〜６３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６８】
前記抗体が二重特異性抗体である、請求項４７〜６７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６９】
前記抗体がヒト抗体である、請求項４７〜６８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項７０】
前記抗体がヒト化抗体である、請求項４７〜６８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項７１】
前記抗体が完全長である、請求項４７〜７０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項７２】
前記抗体が断片である、請求項４７〜７０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項７３】
前記抗体がコンジュゲートされる、請求項４７〜７２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項７４】
前記抗体が、放射性核種、細胞毒、化学療法剤、薬品、プロドラッグ、毒素、酵素、免疫調節剤、抗血管新生剤、アポトーシス促進剤、サイトカイン、ホルモン、オリゴヌクレオチド、アンチセンス分子、ｓｉＲＮＡ、二次抗体、および二次抗体断片からなる群から選択される少なくとも１つの治療剤にコンジュゲートされる、請求項７３に記載の方法。
【請求項７５】
前記抗体がＴＲＥＭ１に対して選択的である、請求項４７〜７４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項７６】
前記抗体がアンタゴニスト抗体である、請求項４７〜７５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項７７】
前記接触させることが、前記非刺激性骨髄細胞のアポトーシスを誘発する、請求項４７〜７５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項７８】
前記接触させることが、前記非刺激性骨髄細胞の溶解を誘発する、請求項４７〜７５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項７９】
前記接触させることが、前記非刺激性骨髄細胞における成長停止を誘発する、請求項４８または５３〜７５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項８０】
前記刺激性骨髄細胞が、ＣＤ４５＋、ＨＬＡ−ＤＲ＋、ＣＤ１４−、ＣＤ１１ｃ＋、およびＢＤＣＡ３＋である細胞を含む、請求項４９〜７９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項８１】
前記非刺激性骨髄細胞が癌組織内にある、請求項４７〜８０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項８２】
前記免疫細胞の集団が癌組織内にある、請求項４７〜８１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項８３】
前記癌が固形癌である、請求項８１または８２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項８４】
前記癌が液状癌である、請求項８１または８２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項８５】
前記癌が、黒色腫、腎臓、肝胆道、頭頸部扁平上皮癌（ＨＮＳＣ）、膵臓、結腸、膀胱、膠芽腫、前立腺、肺、および乳房からなる群から選択される、請求項８１または８２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項８６】
前記接触させることが、インビトロである、請求項４７〜８５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項８７】
前記接触させることが、インビボである、請求項４７〜８５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項８８】
前記インビボが、ヒト内であり、前記接触させることが、前記抗体を投与することによってもたらされる、請求項８７に記載の方法。
【請求項８９】
個体内の癌を治療する方法であって、抗ＴＲＥＭ１抗体を含む有効量の組成物を前記個体に投与することを含む、方法。
【請求項９０】
個体の免疫応答を増強する方法であって、抗ＴＲＥＭ１抗体を含む有効量の組成物を前記個体に投与することを含む、方法。
【請求項９１】
前記抗体が、抗体依存性細胞媒介性細胞傷害（ＡＤＣＣ）活性を有する、請求項８９〜９０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項９２】
前記抗体が、補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）活性を有する、請求項８９〜９０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項９３】
前記抗体が、抗体媒介性食作用活性を有する、請求項８９〜９０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項９４】
前記抗体がモノクローナル抗体である、請求項８９〜９３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項９５】
前記抗体がポリクローナル抗体である、請求項８９〜９３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項９６】
前記抗体がＩｇＧ１抗体である、請求項８９〜９５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項９７】
前記抗体がＩｇＧ３抗体である、請求項８９〜９５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項９８】
前記抗体がＩｇＧ２抗体ではない、請求項８９〜９５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項９９】
前記抗体がＩｇＧ４抗体ではない、請求項８９〜９５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１００】
前記抗体が二重特異性抗体である、請求項８９〜９９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１０１】
前記抗体がヒト抗体である、請求項８９〜１００のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１０２】
前記抗体がヒト化抗体である、請求項８９〜１００のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１０３】
前記抗体が完全長である、請求項８９〜１０２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１０４】
前記抗体が断片である、請求項８９〜１０２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１０５】
前記抗体がコンジュゲートされる、請求項８９〜１０４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１０６】
前記抗体が、放射性核種、細胞毒、化学療法剤、薬品、プロドラッグ、毒素、酵素、免疫調節剤、抗血管新生剤、アポトーシス促進剤、サイトカイン、ホルモン、オリゴヌクレオチド、アンチセンス分子、ｓｉＲＮＡ、二次抗体、および二次抗体断片からなる群から選択される少なくとも１つの治療剤にコンジュゲートされる、請求項１０５に記載の方法。
【請求項１０７】
前記抗体がＴＲＥＭ１に対して選択的である、請求項８９〜１０６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１０８】
前記抗体がアンタゴニスト抗体である、請求項８９〜１０７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１０９】
前記抗体の前記投与が、前記個体における非刺激性骨髄細胞の死滅、前記個体における非刺激性骨髄細胞の無能化、または前記個体における刺激性骨髄細胞の非刺激性骨髄細胞に対する比率の増加をもたらす、請求項９１または９２〜１０７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１１０】
前記非刺激性細胞および刺激性骨髄細胞が、癌組織内にある、請求項１０９に記載の方法。
【請求項１１１】
生体試料が癌組織に由来する、請求項９０に記載の方法。
【請求項１１２】
前記癌が固形癌である、請求項９０、９２〜１０８、１１１、または１１２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１１３】
前記癌が液状癌である、請求項９０、９２〜１０８、１１１、または１１２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１１４】
前記癌が、黒色腫、腎臓、肝胆道、頭頸部扁平上皮癌（ＨＮＳＣ）、膵臓、結腸、膀胱、膠芽腫、前立腺、肺、および乳房からなる群から選択される、請求項９０、９２〜１０８、１１１、または１１２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１１５】
前記抗体の前記投与が、前記個体における非刺激性骨髄細胞の死滅をもたらす、請求項９０〜１１４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１１６】
前記非刺激性骨髄細胞が、ＣＤ４５＋、ＨＬＡ−ＤＲ＋、およびＣＤ１４＋である、請求項１１５に記載の方法。
【請求項１１７】
前記非刺激性骨髄細胞が、ＣＤ４５＋、ＨＬＡ−ＤＲ＋、ＣＤ１４＋、ＢＤＣＡ３−、ＣＤ１１ｂ＋、およびＣＤ１１ｃ＋である、請求項１１５に記載の方法。
【請求項１１８】
前記非刺激性骨髄細胞が、ＣＤ４５＋、ＨＬＡ−ＤＲ＋、ＣＤ１４−、ＣＤ１１ｃ＋、およびＢＤＣＡ１＋である、請求項１１５に記載の方法。
【請求項１１９】
非刺激性骨髄細胞が、ＣＤ４５＋、ＨＬＡ−ＤＲ＋、ＣＤ１４−、ＣＤ１１ｃ＋、およびＢＤＣＡ３＋ではない、請求項１１５に記載の方法。
【請求項１２０】
前記個体からの生体試料中のＴＲＥＭ１の発現レベルを決定することをさらに含む、請求項１１８または１１９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１２１】
前記ＴＲＥＭ１の発現レベルが、ＴＲＥＭ１のｍＲＮＡ発現レベルを含む、請求項１２０に記載の方法。
【請求項１２２】
前記ＴＲＥＭ１の発現レベルが、ＴＲＥＭ１のタンパク質発現レベルを含む、請求項１２０に記載の方法。
【請求項１２３】
ＴＲＥＭ１タンパク質に結合し、非刺激性骨髄細胞を無能化することができる、抗体。
【請求項１２４】
前記無能化が、
（ａ）前記非刺激性骨髄細胞の死滅、
（ｂ）前記非刺激性骨髄細胞の磁気ビーズ枯渇、または
（ｃ）前記非刺激性骨髄細胞のＦＡＣＳ選別
によるものである、請求項１２３に記載の抗体。
【請求項１２５】
ＴＲＥＭ１の生物活性を中和する、請求項１２３に記載の抗体。
【請求項１２６】
前記ＴＲＥＭ１が、非刺激性骨髄細胞の表面上に発現する、請求項１２４に記載の抗体。
【請求項１２７】
前記非刺激性骨髄細胞が腫瘍関連マクロファージである、請求項１２３〜１２６のいずれか一項に記載の抗体。
【請求項１２８】
前記非刺激性骨髄細胞が樹状細胞である、請求項１２３〜１２６のいずれか一項に記載の抗体。
【請求項１２９】
前記非刺激性骨髄細胞が、ＣＤ４５＋、ＨＬＡ−ＤＲ＋、およびＣＤ１４＋である、請求項１２３〜１２８のいずれか一項に記載の抗体。
【請求項１３０】
前記非刺激性骨髄細胞が、ＣＤ４５＋、ＨＬＡ−ＤＲ＋、ＣＤ１４＋、ＢＤＣＡ３−、ＣＤ１１ｂ＋、およびＣＤ１１ｃ＋である、請求項１２３〜１２８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１３１】
前記非刺激性骨髄細胞が、ＣＤ４５＋、ＨＬＡ−ＤＲ＋、ＣＤ１４−、ＣＤ１１ｃ＋、およびＢＤＣＡ１＋である、請求項１２３〜１２８のいずれか一項に記載の抗体。
【請求項１３２】
前記非刺激性骨髄細胞が、ＣＤ４５＋、ＨＬＡ−ＤＲ＋、ＣＤ１４−、ＣＤ１１ｃ＋、およびＢＤＣＡ３＋ではない、請求項１２３〜１２８のいずれか一項に記載の抗体。
【請求項１３３】
抗体依存性細胞媒介性細胞傷害（ＡＤＣＣ）活性を有する、請求項１２３〜１３２のいずれか一項に記載の抗体。
【請求項１３４】
補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）活性を有する、請求項１２３〜１３２のいずれか一項に記載の抗体。
【請求項１３５】
抗体媒介性食作用活性を有する、請求項１２３〜１３２のいずれか一項に記載の抗体。
【請求項１３６】
モノクローナル抗体である、請求項１２３〜１３５のいずれか一項に記載の抗体。
【請求項１３７】
ポリクローナル抗体である、請求項１２３〜１３５のいずれか一項に記載の抗体。
【請求項１３８】
ＩｇＧ１抗体である、請求項１２３〜１３７のいずれか一項に記載の抗体。
【請求項１３９】
ＩｇＧ３抗体である、請求項１２３〜１３７のいずれか一項に記載の抗体。
【請求項１４０】
ＩｇＧ２抗体ではない、請求項１２３〜１３７のいずれか一項に記載の抗体。
【請求項１４１】
ＩｇＧ４抗体ではない、請求項１２３〜１３７のいずれか一項に記載の抗体。
【請求項１４２】
二重特異性抗体である、請求項１２３〜１４１のいずれか一項に記載の抗体。
【請求項１４３】
ヒト抗体である、請求項１２３〜１４１のいずれか一項に記載の抗体。
【請求項１４４】
ヒト化抗体である、請求項１２３〜１４１のいずれか一項に記載の抗体。
【請求項１４５】
完全長である、請求項１２３〜１４４のいずれか一項に記載の抗体。
【請求項１４６】
断片である、請求項１２３〜１４４のいずれか一項に記載の抗体。
【請求項１４７】
コンジュゲートされる、請求項１２３〜１４４のいずれか一項に記載の抗体。
【請求項１４８】
放射性核種、細胞毒、化学療法剤、薬品、プロドラッグ、毒素、酵素、免疫調節剤、抗血管新生剤、アポトーシス促進剤、サイトカイン、ホルモン、オリゴヌクレオチド、アンチセンス分子、ｓｉＲＮＡ、二次抗体、および二次抗体断片からなる群から選択される少なくとも１つの治療剤にコンジュゲートされる、請求項１４７に記載の抗体。
【請求項１４９】
ＴＲＥＭ１に対して選択的である、請求項１２３〜１４８のいずれか一項に記載の抗体。
【請求項１５０】
アンタゴニスト抗体である、請求項１２３〜１４８のいずれか一項に記載の抗体。
【請求項１５１】
請求項１２３〜１５０のいずれか一項に記載の抗体および薬学的に許容可能な賦形剤を含む、医薬組成物。
【請求項１５２】
無菌である、請求項１５１に記載の組成物。
【請求項１５３】
請求項１２３〜１５２のいずれか一項に記載の抗体を含み、さらに使用説明書を含む、キット。
【請求項１５４】
二次抗体、免疫組織化学分析のための試薬、薬学的に許容可能な賦形剤および取扱説明書、ならびにそれらの任意の組み合わせを含む群から選択される構成要素をさらに含む、請求項１５３に記載のキット。
【請求項１５５】
請求項１２３〜１５４のいずれか一項に記載の組成物を含む、製造物品。
【請求項１５６】
非刺激性骨髄細胞の存在または非存在を決定する方法であって、
ａ．非刺激性骨髄細胞および刺激性骨髄細胞を含む免疫細胞の集団を抗ＴＲＥＭ１抗体と接触させることと、
ｂ．前記抗体の非刺激性骨髄細胞への結合を示す複合体の存在を決定することと、
ｃ．任意選択的に、前記集団中の非刺激性骨髄細胞の数を定量化することと
を含む、方法。
【請求項１５７】
癌の治療のための免疫療法に応答し得る個体を特定する方法であって、
ａ．前記個体からの生体試料中のＴＲＥＭ１の発現レベルを検出することと、
ｂ．前記ＴＲＥＭ１の発現レベルに基づいて、前記個体が免疫療法に応答するかどうかを決定することであって、健康な個体のレベルと比べて前記個体のＴＲＥＭ１のレベルが高い場合は、前記個体が免疫療法に応答し得ることを示す、決定することと
を含む、方法。
【請求項１５８】
前記免疫療法が抗ＴＲＥＭ１抗体による治療を含む、請求項１５７に記載の方法。
【請求項１５９】
前記ＴＲＥＭ１の発現レベルが、ＴＲＥＭ１のｍＲＮＡ発現レベルを含む、請求項１５７に記載の方法。
【請求項１６０】
前記ＴＲＥＭ１の発現レベルが、ＴＲＥＭ１のタンパク質発現レベルを含む、請求項１５７に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
１．関連出願の相互参照
本出願は、あらゆる目的のために参照によりその全体が本明細書に組み込まれる、２０１７年８月８日に出願された米国仮特許出願第６２／５４２，５６３号の利益を主張するものである。
【０００２】
２．配列表
本出願には、ＥＦＳ−Ｗｅｂ経由で提出されたものであり、かつ参照によりその全体が本明細書に組み込まれる配列表が含まれる。２０ＸＸ年ＸＸ月に作成された前述のＡＳＣＩＩコピーは、ＸＸＸＸＸＵＳ＿ｓｅｑｕｅｎｃｅｌｉｓｔｉｎｇ．ｔｘｔという名前であり、サイズは、Ｘ，ＸＸＸ，ＸＸＸバイトである。
【背景技術】
【０００３】
３．背景
免疫は、腫瘍の増殖を防ぐ上で重要な役割を果たす。病変内に複雑な微小環境が発生し得、Ｔ細胞の動員にもかかわらず、多くの場合、発達中の腫瘤の効果的な制御ができない。腫瘍の排除と腫瘍の逃避との均衡を理解することは、骨髄細胞が腫瘍微小環境で果たす異なる役割の理解に依存し得る。
【０００４】
腫瘍微小環境の骨髄集団としては、単球および好中球（時に、骨髄由来免疫制御細胞として大まかに分類される）、マクロファージ、および樹状細胞が顕著に挙げられる。腫瘍内骨髄性集団は、全体として、非刺激性または抑制性と長い間考えられていたが、ごく最近、腫瘍浸潤性骨髄細胞のすべてが機能的に同等ではないことが認識された。
【０００５】
正常組織では、これらの骨髄細胞の多くは、自然免疫および適応免疫の両方が適切に機能するため、特に創傷修復のために不可欠である。しかしながら、癌の状況では、著しく過剰な、これらの細胞型および他の細胞型のマクロファージおよび機能不全または歪んだ集団が、一般的に記載されている。ＣＤ６８またはＣＤ１６３などの単一のマーカーによって定義される集合集団とみなされると、「マクロファージ」浸潤は、複数の腫瘍タイプにわたる患者の予後不良と相関する（（ｄｅ  Ｖｉｓｓｅｒ，Ｃａｎｃｅｒ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ，２００８；５７：１５３１−９（非特許文献１）），（Ｈａｎａｄａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｉｎｔ  Ｊ  Ｕｒｏｌ  ２０００；７：２６３−９（非特許文献２）），（Ｙａｏ  ｅｔ  ａｌ．Ｃｌｉｎ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ，５２０，２００１；７：４０２１−６（非特許文献３）），（Ｒｕｆｆｅｌｌ  ｅｔ  ａｌ．，ＰＮＡＳ，５２３  ２０１２；１０９：２７９６−８０１（非特許文献４）））。しかし、腫瘍微小環境からのマクロファージの表現型および機能的サブセットは、マクロファージと樹状細胞との類似性によって複雑になり、腫瘍生物学では問題がある。形態学的基準が多くの場合この問題に適用されており、樹状細胞をマクロファージから区別することを試みる１つのアプローチは、樹状細胞はよりスパイク状または樹状の形態、マクロファージはよりベール状または球状の形態に基づいていた（Ｂｅｌｌ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ  Ｅｘｐ  Ｍｅｄ  ５５５，１９９９；１９０：１４１７−２６（非特許文献５））。他の群は、遺伝マーカーと細胞表面マーカーに基づいて区別することを試みている。
【０００６】
腫瘍内の抗原提示区画には多様性があり、Ｔ細胞は抗原提示細胞（ＡＰＣ）の特徴を区別することができる。Ｔ細胞は腫瘍免疫の主要なドライバーであるため、同種のＡＰＣの正確な特徴を理解することが重要であろう。骨髄細胞は、腫瘍由来抗原をＴ細胞に提示し、それによりＴ細胞を活性化状態に維持することができる細胞の中でも顕著である。抗原提示は、腫瘍自体の内部で発生し、腫瘍細胞傷害性Ｔリンパ球（ＣＴＬ）の機能に影響を与える可能性がある。抗原提示細胞（ＡＰＣ）によるＴ細胞の活性化は、抗原特異性免疫応答および腫瘍細胞死滅の重要な構成要素である。これらの骨髄細胞集団は、入ってくる腫瘍反応性細胞傷害性Ｔリンパ球の主要なＴ細胞相互作用パートナーおよび抗原提示細胞を表すため、それらの違いを理解することが治療の道筋を導き得る。
【０００７】
骨髄細胞上に発現するトリガー受容体１（ＴＲＥＭ１であるが、ＣＤ３５４、ＨＧＮＣ：１７７６０、Ｅｎｔｒｅｚ  Ｇｅｎｅ：５４２１０、ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ：Ｑ９ＮＰ９９としても知られている）は、受容体の免疫グロブリンスーパーファミリーに属しており、好中球、単球、およびマクロファージを含む骨髄細胞のサブセット上に高度に発現する。ＴＲＥＭ１は、シグナル伝達モチーフを欠いており、代わりに、受容体の活性化は、炎症応答の増幅をもたらすアダプターＤＡＰ１２（ＤＮＡＸ活性化タンパク質１２）を介して媒介される（Ｂｏｕｃｈｏｎ，ｅｔ  ａｌ（２０００）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６４（１０）：４９９１−４９９５（非特許文献６））。具体的には、ＴＲＥＭ１の架橋は、ＩＬ−８、ミエロペルオキシダーゼ、ＴＮＦα、およびＭＣＰ−１の発現を誘発する。ＴＲＥＭ１発現は、Ｔｏｌｌ様受容体刺激（細菌および真菌刺激）に応答して骨髄細胞上で上方制御され、敗血症性ショックおよび感染中の急性炎症応答に寄与し、増幅することが示されている（Ｃｏｈｅｎ，（２００１）Ｌａｎｃｅｔ．３５８：７７６−７７８（非特許文献７））。ＴＲＥＭ１のリガンドはとらえどころのないままであるが、最近、ＰＧＬＹＲＰ１（ペプチドグリカン認識タンパク質１）は、ＴＲＥＭ１の強力なリガンドとして同定された（Ｒｅａｄ  ｅｔ  ａｌ，（２０１５）Ｊ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．１９４：１４１７−１４２１（非特許文献８））。マウスには、ＴＲＥＭ１、２、３、４、および５を含むＴＲＥＭ受容体の５つの活性化型があり、感染中にＴＲＥＭ１の可溶型（ｓＴＲＥＭ１）が放出される。マウスＴＲＥＭ１およびヒトホモログＴＲＥＭ１は、４６％という比較的低い配列同一性を共有する（Ｒａｄａｅｖ、ｅｔ  ａｌ．（２００３）Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ１１：１５２７−１５３５（非特許文献９））。構造的に、ＴＲＥＭ１は、約１３０のアミノ酸（その後に７０のアミノ酸のネック領域が続く）の単一Ｖ型免疫グロブリン（Ｉｇ）様ドメイン（Ｉｇ−Ｖ）からなる。敗血症でＴＲＥＭ１が果たす役割に加えて、それは、炎症性腸疾患にも関連している。しかしながら、腫瘍の微小環境におけるＴＲＥＭ１の役割についてはほとんど知られていない。（Ｓｃｈｅｎｋ，ｅｔ  ａｌ（２００７）ＪＣＩ．１１７：３０９７−３１０６（非特許文献１０））。
【０００８】
Ｔ細胞応答を刺激するのに効果のない細胞の負荷を選択的に減少させ、それにより腫瘍微小環境内の免疫応答を増強することを伴う、新規の癌治療アプローチに対する満たされていない必要性が存在する。
【０００９】
本明細書に引用されているすべての特許、特許出願、出版物、文書、および記事は、参照によりそれらの全体が本明細書に組み込まれる。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【００１０】
【非特許文献１】ｄｅ  Ｖｉｓｓｅｒ，Ｃａｎｃｅｒ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ，２００８；５７：１５３１−９
【非特許文献２】Ｈａｎａｄａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｉｎｔ  Ｊ  Ｕｒｏｌ  ２０００；７：２６３−９
【非特許文献３】Ｙａｏ  ｅｔ  ａｌ．Ｃｌｉｎ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ，５２０，２００１；７：４０２１−６
【非特許文献４】Ｒｕｆｆｅｌｌ  ｅｔ  ａｌ．，ＰＮＡＳ，５２３  ２０１２；１０９：２７９６−８０１
【非特許文献５】Ｂｅｌｌ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ  Ｅｘｐ  Ｍｅｄ  ５５５，１９９９；１９０：１４１７−２６
【非特許文献６】Ｂｏｕｃｈｏｎ，ｅｔ  ａｌ（２０００）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６４（１０）：４９９１−４９９５
【非特許文献７】Ｃｏｈｅｎ，（２００１）Ｌａｎｃｅｔ．３５８：７７６−７７８
【非特許文献８】Ｒｅａｄ  ｅｔ  ａｌ，（２０１５）Ｊ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．１９４：１４１７−１４２１
【非特許文献９】Ｒａｄａｅｖ、ｅｔ  ａｌ．（２００３）Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ１１：１５２７−１５３５
【非特許文献１０】Ｓｃｈｅｎｋ，ｅｔ  ａｌ（２００７）ＪＣＩ．１１７：３０９７−３１０６
【発明の概要】
【００１１】
４．概要
一態様では、骨髄細胞上に発現するトリガー受容体１（ＴＲＥＭ１）を細胞表面上に発現する骨髄細胞を死滅、無能化、または枯渇させる方法であって、骨髄細胞を抗ＴＲＥＭ１抗体またはその抗原結合断片と接触させることを含み、抗体が、活性Ｆｃ領域を含み、抗体依存性細胞媒介性細胞傷害（ＡＤＣＣ）活性、補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）活性、および抗体媒介性食作用（ＡＤＣＰ）活性のうちの少なくとも１つを含む、方法が本明細書に提供される。
【００１２】
本明細書の実施形態のいずれか１つでは、活性Ｆｃ領域は、免疫細胞上の活性化Ｆｃγ受容体（ＦｃγＲ）に結合し、ＡＤＣＣ、ＣＤＣ、およびＡＤＣＰのうちの少なくとも１つによって骨髄細胞を死滅、無能化、または枯渇させる野生型非フコシル化ヒトＩｇＧ１  Ｆｃであり、抗体は、ＴＲＥＭ１の細胞外ドメインに結合する。
【００１３】
本明細書の実施形態のいずれか１つでは、活性Ｆｃ領域は、ヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、またはＩｇＧ４  Ｆｃを含む。いくつかの実施形態では、活性Ｆｃ領域は、野生型ヒトＩｇＧ１  Ｆｃを含む。本明細書の実施形態のいずれか１つでは、Ｆｃ領域は、ＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩａ、ＦｃγＲＩＩｂ、ＦｃγＲＩＩｃ、ＦｃγＲＩＩＩａ、およびＦｃγＲＩＩＩｂからなる群から選択されるＦｃγ受容体に結合する。
【００１４】
本明細書の実施形態のいずれか１つでは、免疫細胞は、プロフェッショナル抗原提示細胞、マクロファージ、単球、ナチュラルキラー細胞、好中球、樹状細胞、またはＢ細胞である。
【００１５】
本明細書の実施形態のいずれか１つでは、抗体は、ＡＤＣＣ、ＣＤＣ、およびＡＤＣＰのうちの少なくとも１つによって骨髄細胞を死滅、無能化、または枯渇させ、任意選択的に、抗体は、ＡＤＣＣによって骨髄細胞を死滅、無能化、または枯渇させ、任意選択的に、抗体は、ＣＤＣによって骨髄細胞を死滅、無能化、または枯渇させ、任意選択的に、抗体は、ＡＤＣＰによって骨髄細胞を死滅、無能化、または枯渇させる。本明細書の実施形態のいずれか１つでは、抗体は、ＡＤＣＣ、ＣＤＣ、およびＡＤＣＰのうちの少なくとも１つにより骨髄細胞を死滅させる。本明細書の実施形態のいずれか１つでは、抗体は、ＡＤＣＣ、ＣＤＣ、およびＡＤＣＰのうちの少なくとも１つにより骨髄細胞を無能化させる。本明細書の実施形態のいずれか１つでは、抗体は、ＡＤＣＣ、ＣＤＣ、およびＡＤＣＰのうちの少なくとも１つにより骨髄細胞を枯渇させる。
【００１６】
本明細書の実施形態のいずれか１つでは、抗体はフコシル化されていない。本明細書の実施形態のいずれか１つでは、非フコシル化抗体は、操作された細胞内で安定に発現し、操作された細胞は、シュードモナス酵素ＧＤＰ−６−デオキシ−Ｄ−リキソ−４−ヘキシロース還元酵素（ＲＭＤ）を過剰発現する。本明細書の実施形態のいずれか１つでは、活性Ｆｃ領域は、Ｆｃ領域内に１つ以上のアミノ酸置換を含む。
【００１７】
本明細書の実施形態のいずれか１つでは、抗体は、中和抗体、モノクローナル抗体、アンタゴニスト抗体、アゴニスト抗体、ポリクローナル抗体、ＩｇＧ１抗体、ＩｇＧ２抗体、ＩｇＧ３抗体、二重特異性抗体、ヒト抗体、ヒト化抗体、キメラ抗体、完全長抗体、および抗原結合断片のうちの少なくとも１つである。
【００１８】
本明細書の実施形態のいずれか１つでは、抗体は、抗体依存性細胞媒介性細胞傷害（ＡＤＣＣ）活性を有する。本明細書の実施形態のいずれか１つでは、抗体は、補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）活性を有する。本明細書の実施形態のいずれか１つでは、抗体は、抗体媒介性食作用（ＡＤＣＰ）活性を有する。本明細書の実施形態のいずれか１つでは、抗体は、受容体−リガンド遮断、アゴニズム、またはアンタゴニズム活性を有する。
【００１９】
本明細書の実施形態のいずれか１つでは、抗体はＴＲＥＭ１の細胞外ドメインに結合する。本明細書の実施形態のいずれか１つでは、抗体は、０．２ｎＭ以下のＫＤでＴＲＥＭ１に結合する。本明細書の実施形態のいずれか１つでは、抗体は、０．０９ｎＭ、０．１１ｎＭ、または０．１５ｎＭ以下のＫＤでＴＲＥＭ１に結合する。
【００２０】
本明細書の実施形態のいずれか１つでは、骨髄細胞は刺激性骨髄細胞である。本明細書の実施形態のいずれか１つでは、骨髄細胞は非刺激性骨髄細胞である。本明細書の実施形態のいずれか１つでは、骨髄細胞は、樹状細胞、腫瘍関連マクロファージ（ＴＡＭ）、好中球、または単球のうちの少なくとも１つを含む。本明細書の実施形態のいずれか１つでは、骨髄細胞は好中球である。本明細書の実施形態のいずれか１つでは、骨髄細胞は腫瘍関連マクロファージである。
【００２１】
本明細書の実施形態のいずれか１つでは、骨髄細胞は腫瘍内にある。本明細書の実施形態のいずれか１つでは、骨髄細胞は、刺激性骨髄細胞および非刺激性骨髄細胞を含む免疫細胞の集団内にある。
【００２２】
本明細書の実施形態のいずれか１つでは、骨髄細胞は、（ｉ）ＣＤ４５＋、ＨＬＡ−ＤＲ−、ＣＤ１５＋、（ｉｉ）ＣＤ４５＋、ＨＬＡ−ＤＲ−、ＣＤ１６＋、ＣＤ５６−、ＮＫｐ４４−、ＮＫｐ３０−、ＮＫｐ４６−、ＮＫｐ８０−、（ｉｉｉ）ＣＤ４５＋、ＨＬＡ−ＤＲ−、ＣＤ１４＋、（ｉｖ）ＣＤ４５＋、ＨＬＡ−ＤＲ＋、およびＣＤ１４＋、（ｖ）ＣＤ４５＋ＨＬＡ−ＤＲ＋、ＣＤ１６＋、ＣＤ５６−、ＮＫｐ４４−、ＮＫｐ３０−、ＮＫｐ４６−、ＮＫｐ８０−、（ｖｉ）ＣＤ４５＋ＨＬＡ−ＤＲ＋ＣＤ１４＋、ＣＤ１６＋、（ｖｉｉ）ＣＤ４５＋、ＨＬＡ−ＤＲ−、ＣＤ６６ｂ＋、（ｖｉｉｉ）ＣＤ４５＋、ＨＬＡ−ＤＲ＋、ＣＤ１４＋、ＢＤＣＡ３−、ＣＤ１１ｂ＋、およびＣＤ１１ｃ＋、（ｉｘ）ＣＤ４５＋、ＣＤ１４＋、ＨＬＡ−ＤＲ＋、ＣＤ６８高、ＣＤ２０−、ならびに（ｘ）ＣＤ４５＋、ＨＬＡ−ＤＲ＋、ＣＤ１４−、ＣＤ１１ｃ＋、およびＢＤＣＡ１＋のうちの少なくとも１つである細胞を含む。
【００２３】
本明細書の実施形態のいずれか１つでは、接触させることは、骨髄細胞のアポトーシス、溶解、または成長停止を誘発する。本明細書の実施形態のいずれか１つでは、接触させることは、それを必要とする対象においてインビボで起こり、任意選択的に、対象は癌を有する。
【００２４】
本明細書の実施形態のいずれか１つでは、癌は固形癌である。本明細書の実施形態のいずれか１つでは、癌は液状癌である。本明細書の実施形態のいずれか１つでは、癌は、黒色腫、腎臓、肝胆道、頭頸部扁平上皮癌（ＨＮＳＣ）、膵臓、結腸、膀胱、膠芽腫、前立腺、肺、乳房、卵巣、胃、腎臓、膀胱、食道、腎、黒色腫、および中皮腫からなる群から選択される。本明細書の実施形態のいずれか１つでは、癌は結腸癌または乳癌である。
【００２５】
本明細書の実施形態のいずれか１つでは、接触させることは、対象における免疫応答を増強する。本明細書の実施形態のいずれか１つでは、増強された免疫応答は適応免疫応答である。本明細書の実施形態のいずれか１つでは、増強された免疫応答は自然免疫応答である。
【００２６】
本明細書の実施形態のいずれか１つでは、対象は、免疫療法を以前に受けたことがあるか、同時に受けているか、またはその後受けることになる。本明細書の実施形態のいずれか１つでは、免疫療法は、チェックポイント阻害剤、Ｔ細胞のチェックポイント阻害剤、抗ＰＤ１、抗ＰＤＬ１、抗ＣＴＬＡ４、養子Ｔ細胞療法、ＣＡＲ−Ｔ細胞療法、樹状細胞ワクチン、単球ワクチン、Ｔ細胞および抗原提示細胞の両方に結合する抗原結合タンパク質、ＢｉＴＥ二重抗原結合タンパク質、トール様受容体リガンド、サイトカイン、細胞毒性療法、化学療法、放射線療法、低分子阻害剤、低分子アゴニスト、免疫調節薬、およびエピジェネティック調節薬のうちの少なくとも１つである。本明細書の実施形態のいずれか１つでは、免疫療法は抗ＰＤ１である。
【００２７】
本明細書の実施形態のいずれか１つでは、接触させることはインビトロまたはインビボである。本明細書の実施形態のいずれか１つでは、対象はヒトである。
【００２８】
本明細書の実施形態のいずれか１つでは、抗体は、放射性核種、細胞毒、化学療法剤、薬品、プロドラッグ、毒素、酵素、免疫調節剤、抗血管新生剤、アポトーシス促進剤、サイトカイン、ホルモン、オリゴヌクレオチド、アンチセンス分子、ｓｉＲＮＡ、二次抗体、および二次抗体断片からなる群から選択される少なくとも１つの治療剤にコンジュゲートされる。
【００２９】
本明細書の実施形態のいずれか１つでは、方法は、対象において実質的な末梢好中球減少を誘発しない。本明細書の実施形態のいずれか１つでは、抗ＴＲＥＭ１抗体との接触前と比較して、抗ＴＲＥＭ１抗体との接触後の末梢における対象の好中球レベルが実質的に同じままである。
【００３０】
別の態様では、非刺激性骨髄細胞を死滅させる方法であって、非刺激性骨髄細胞を、骨髄細胞上に発現する抗トリガー受容体１（ＴＲＥＭ１）抗体と接触させ、それにより非刺激性骨髄細胞を死滅させることを含む方法が本明細書に提供される。
【００３１】
別の態様では、非刺激性骨髄細胞を無能化させる方法であって、非刺激性骨髄細胞を抗ＴＲＥＭ１抗体と接触させ、それにより非刺激性骨髄細胞を無能化させることを含む方法が本明細書に提供される。
【００３２】
別の態様では、刺激性骨髄細胞および非刺激性骨髄細胞を含む免疫細胞の集団において、刺激性骨髄細胞の非刺激性骨髄細胞に対する比率を増加させる方法であって、免疫細胞の集団を抗ＴＲＥＭ１抗体と接触させ、それにより刺激性骨髄細胞の非刺激性骨髄細胞に対する比率を増加させる方法が本明細書に提供される。
【００３３】
別の態様では、刺激性骨髄細胞および非刺激性骨髄細胞を含む免疫細胞の集団において、非刺激性骨髄細胞の数を減少させる方法であって、免疫細胞の集団を抗ＴＲＥＭ１抗体と接触させ、それにより非刺激性骨髄細胞の数を減少させることを含む方法が本明細書に提供される。
【００３４】
本明細書の実施形態のいずれか１つでは、非刺激性骨髄細胞は、刺激性骨髄細胞および非刺激性骨髄細胞を含む免疫細胞の集団内にある。
【００３５】
本明細書の実施形態のいずれか１つでは、方法は、免疫細胞の集団から非刺激性骨髄細胞を除去することをさらに含む。
【００３６】
本明細書の実施形態のいずれか１つでは、非刺激性骨髄細胞は腫瘍関連マクロファージである。
【００３７】
本明細書の実施形態のいずれか１つでは、非刺激性骨髄細胞は樹状細胞である。
【００３８】
本明細書の実施形態のいずれか１つでは、非刺激性骨髄細胞は、ＣＤ４５＋、ＨＬＡ−ＤＲ＋、およびＣＤ１４＋である。本明細書の実施形態のいずれか１つでは、非刺激性骨髄細胞は、ＣＤ４５＋、ＨＬＡ−ＤＲ＋、ＣＤ１４＋、ＢＤＣＡ３−、ＣＤ１１ｂ＋、およびＣＤ１１ｃ＋である。本明細書の実施形態のいずれか１つでは、非刺激性骨髄細胞は、ＣＤ４５＋、ＨＬＡ−ＤＲ＋、ＣＤ１４−、ＣＤ１１ｃ＋、およびＢＤＣＡ１＋である。本明細書の実施形態のいずれか１つでは、非刺激性骨髄細胞は、ＣＤ４５＋、ＨＬＡ−ＤＲ＋、ＣＤ１４−、ＣＤ１１ｃ＋、およびＢＤＣＡ３＋ではない。
【００３９】
本明細書の実施形態のいずれか１つでは、抗体は、抗体依存性細胞媒介性細胞傷害（ＡＤＣＣ）活性を有する。本明細書の実施形態のいずれか１つでは、抗体は、補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）活性を有する。本明細書の実施形態のいずれか１つでは、抗体は、抗体媒介性食作用活性を有する。
【００４０】
本明細書の実施形態のいずれか１つでは、抗体はモノクローナル抗体である。本明細書の実施形態のいずれか１つでは、抗体はポリクローナル抗体である。本明細書の実施形態のいずれか１つでは、抗体はＩｇＧ１抗体である。本明細書の実施形態のいずれか１つでは、抗体はＩｇＧ３抗体である。本明細書の実施形態のいずれか１つでは、抗体はＩｇＧ２抗体ではない。本明細書の実施形態のいずれか１つでは、抗体はＩｇＧ４抗体ではない。本明細書の実施形態のいずれか１つでは、抗体は二重特異性抗体である。本明細書の実施形態のいずれか１つでは、抗体はヒト抗体である。本明細書の実施形態のいずれか１つでは、抗体はヒト化抗体である。本明細書の実施形態のいずれか１つでは、抗体は完全長である。本明細書の実施形態のいずれか１つでは、抗体は断片である。本明細書の実施形態のいずれか１つでは、抗体はコンジュゲートされる。
【００４１】
本明細書の実施形態のいずれか１つでは、抗体は、放射性核種、細胞毒、化学療法剤、薬品、プロドラッグ、毒素、酵素、免疫調節剤、抗血管新生剤、アポトーシス促進剤、サイトカイン、ホルモン、オリゴヌクレオチド、アンチセンス分子、ｓｉＲＮＡ、二次抗体、および二次抗体断片からなる群から選択される少なくとも１つの治療剤にコンジュゲートされる。
【００４２】
本明細書の実施形態のいずれか１つでは、抗体はＴＲＥＭ１に対して選択的である。
【００４３】
本明細書の実施形態のいずれか１つでは、抗体はアンタゴニスト抗体である。
【００４４】
本明細書の実施形態のいずれか１つでは、接触させることは、非刺激性骨髄細胞のアポトーシスを誘発する。本明細書の実施形態のいずれか１つでは、接触させることは、非刺激性骨髄細胞の溶解を誘発する。本明細書の実施形態のいずれか１つでは、接触させることは、非刺激性骨髄細胞における成長停止を誘発する。
【００４５】
本明細書の実施形態のいずれか１つでは、刺激性骨髄細胞は、ＣＤ４５＋、ＨＬＡ−ＤＲ＋、ＣＤ１４−、ＣＤ１１ｃ＋、およびＢＤＣＡ３＋である細胞を含む。
【００４６】
本明細書の実施形態のいずれか１つでは、非刺激性骨髄細胞は癌組織内にある。本明細書の実施形態のいずれか１つでは、免疫細胞の集団は癌組織内にある。本明細書の実施形態のいずれか１つでは、癌は固形癌である。本明細書の実施形態のいずれか１つでは、癌は液状癌である。
【００４７】
本明細書の実施形態のいずれか１つでは、癌は、黒色腫、腎臓、肝胆道、頭頸部扁平上皮癌（ＨＮＳＣ）、膵臓、結腸、膀胱、膠芽腫、前立腺、肺、および乳房からなる群から選択される。
【００４８】
本明細書の実施形態のいずれか１つでは、接触させることはインビトロである。本明細書の実施形態のいずれか１つでは、接触させることはインビボである。本明細書の実施形態のいずれか１つでは、インビボは、ヒト内にあり、接触させることは、抗体を投与することによってもたらされる。
【００４９】
別の態様では、個体内の癌を治療する方法であって、抗ＴＲＥＭ１抗体を含む有効量の組成物を個体に投与することを含む方法が、本明細書で提供される。
【００５０】
別の態様では、個体の免疫応答を増強する方法であって、抗ＴＲＥＭ１抗体を含む有効量の組成物を個体に投与することを含む方法が、本明細書に提供される。本明細書の実施形態のいずれか１つでは、抗体は、抗体依存性細胞媒介性細胞傷害（ＡＤＣＣ）活性を有する。本明細書の実施形態のいずれか１つでは、抗体は、補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）活性を有する。本明細書の実施形態のいずれか１つでは、抗体は、抗体媒介性食作用活性を有する。
【００５１】
本明細書の実施形態のいずれか１つでは、抗体はモノクローナル抗体である。本明細書の実施形態のいずれか１つでは、抗体はポリクローナル抗体である。本明細書の実施形態のいずれか１つでは、抗体はＩｇＧ１抗体である。本明細書の実施形態のいずれか１つでは、抗体はＩｇＧ３抗体である。本明細書の実施形態のいずれか１つでは、抗体はＩｇＧ２抗体ではない。本明細書の実施形態のいずれか１つでは、抗体はＩｇＧ４抗体ではない。本明細書の実施形態のいずれか１つでは、抗体は二重特異性抗体である。本明細書の実施形態のいずれか１つでは、抗体はヒト抗体である。本明細書の実施形態のいずれか１つでは、抗体はヒト化抗体である。本明細書の実施形態のいずれか１つでは、抗体は完全長である。本明細書の実施形態のいずれか１つでは、抗体は断片である。本明細書の実施形態のいずれか１つでは、抗体はコンジュゲートされる。
【００５２】
本明細書の実施形態のいずれか１つでは、抗体は、放射性核種、細胞毒、化学療法剤、薬品、プロドラッグ、毒素、酵素、免疫調節剤、抗血管新生剤、アポトーシス促進剤、サイトカイン、ホルモン、オリゴヌクレオチド、アンチセンス分子、ｓｉＲＮＡ、二次抗体、および二次抗体断片からなる群から選択される少なくとも１つの治療剤にコンジュゲートされる。
【００５３】
本明細書の実施形態のいずれか１つでは、抗体はＴＲＥＭ１に対して選択的である。
【００５４】
本明細書の実施形態のいずれか１つでは、抗体はアンタゴニスト抗体である。
【００５５】
本明細書の実施形態のいずれか１つでは、抗体の投与は、個体における非刺激性骨髄細胞の死滅、個体における非刺激性骨髄細胞を無能化、または個体における刺激性骨髄細胞の非刺激性骨髄細胞に対する比率の増加をもたらす。
【００５６】
本明細書の実施形態のいずれか１つでは、非刺激性細胞および刺激性骨髄細胞は、癌組織内にある。
【００５７】
本明細書の実施形態のいずれか１つでは、生体試料は癌組織に由来する。
【００５８】
本明細書の実施形態のいずれか１つでは、癌は固形癌である。
【００５９】
本明細書の実施形態のいずれか１つでは、癌は液状癌である。
【００６０】
本明細書の実施形態のいずれか１つでは、癌は、黒色腫、腎臓、肝胆道、頭頸部扁平上皮癌（ＨＮＳＣ）、膵臓、結腸、膀胱、膠芽腫、前立腺、肺、および乳房からなる群から選択される。
【００６１】
本明細書の実施形態のいずれか１つでは、抗体の投与は、個体における非刺激性骨髄細胞の死滅をもたらす。
【００６２】
本明細書の実施形態のいずれか１つでは、非刺激性骨髄細胞は、ＣＤ４５＋、ＨＬＡ−ＤＲ＋、およびＣＤ１４＋である。本明細書の実施形態のいずれか１つでは、非刺激性骨髄細胞は、ＣＤ４５＋、ＨＬＡ−ＤＲ＋、ＣＤ１４＋、ＢＤＣＡ３−、ＣＤ１１ｂ＋、およびＣＤ１１ｃ＋である。本明細書の実施形態のいずれか１つでは、非刺激性骨髄細胞は、ＣＤ４５＋、ＨＬＡ−ＤＲ＋、ＣＤ１４−、ＣＤ１１ｃ＋、およびＢＤＣＡ１＋である。本明細書の実施形態のいずれか１つでは、非刺激性骨髄細胞は、ＣＤ４５＋、ＨＬＡ−ＤＲ＋、ＣＤ１４−、ＣＤ１１ｃ＋、およびＢＤＣＡ３＋ではない。
【００６３】
本明細書の実施形態のいずれか１つでは、個体からの生体試料中のＴＲＥＭ１の発現レベルを決定することをさらに含む。本明細書の実施形態のいずれか１つでは、ＴＲＥＭ１の発現レベルは、ＴＲＥＭ１のｍＲＮＡ発現レベルを含む。本明細書の実施形態のいずれか１つでは、ＴＲＥＭ１の発現レベルは、ＴＲＥＭ１のタンパク質発現レベルを含む。
【００６４】
別の態様では、ＴＲＥＭ１タンパク質に結合し、非刺激性骨髄細胞を無能化することができる抗体が本明細書で提供される。
【００６５】
本明細書の実施形態のいずれか１つでは、無能化は、ａ）非刺激性骨髄細胞の死滅、ｂ）非刺激性骨髄細胞の磁気ビーズ枯渇、またはｃ）非刺激性骨髄細胞のＦＡＣＳ選別によるものである。
【００６６】
本明細書の実施形態のいずれか１つでは、抗体はＴＲＥＭ１の生物活性を中和する。
【００６７】
本明細書の実施形態のいずれか１つでは、ＴＲＥＭ１は、非刺激性骨髄細胞の表面上に発現する。本明細書の実施形態のいずれか１つでは、非刺激性骨髄細胞は腫瘍関連マクロファージである。本明細書の実施形態のいずれか１つでは、非刺激性骨髄細胞は樹状細胞である。
【００６８】
本明細書の実施形態のいずれか１つでは、非刺激性骨髄細胞は、ＣＤ４５＋、ＨＬＡ−ＤＲ＋、およびＣＤ１４＋である。本明細書の実施形態のいずれか１つでは、非刺激性骨髄細胞は、ＣＤ４５＋、ＨＬＡ−ＤＲ＋、ＣＤ１４＋、ＢＤＣＡ３−、ＣＤ１１ｂ＋、およびＣＤ１１ｃ＋である。本明細書の実施形態のいずれか１つでは、非刺激性骨髄細胞は、ＣＤ４５＋、ＨＬＡ−ＤＲ＋、ＣＤ１４−、ＣＤ１１ｃ＋、およびＢＤＣＡ１＋である。本明細書の実施形態のいずれか１つでは、非刺激性骨髄細胞は、ＣＤ４５＋、ＨＬＡ−ＤＲ＋、ＣＤ１４−、ＣＤ１１ｃ＋、およびＢＤＣＡ３＋ではない。
【００６９】
本明細書の実施形態のいずれか１つでは、抗体は、抗体依存性細胞媒介性細胞傷害（ＡＤＣＣ）活性を有する。本明細書の実施形態のいずれか１つでは、抗体は、補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）活性を有する。本明細書の実施形態のいずれか１つでは、抗体は、抗体媒介性食作用活性を有する。
【００７０】
本明細書の実施形態のいずれか１つでは、抗体はモノクローナル抗体である。本明細書の実施形態のいずれか１つでは、抗体はポリクローナル抗体である。本明細書の実施形態のいずれか１つでは、抗体はＩｇＧ１抗体である。本明細書の実施形態のいずれか１つでは、抗体はＩｇＧ３抗体である。本明細書の実施形態のいずれか１つでは、抗体はＩｇＧ２抗体ではない。本明細書の実施形態のいずれか１つでは、抗体はＩｇＧ４抗体ではない。本明細書の実施形態のいずれか１つでは、抗体は二重特異性抗体である。本明細書の実施形態のいずれか１つでは、抗体はヒト抗体である。本明細書の実施形態のいずれか１つでは、抗体はヒト化抗体である。本明細書の実施形態のいずれか１つでは、抗体は完全長である。本明細書の実施形態のいずれか１つでは、抗体は断片である。本明細書の実施形態のいずれか１つでは、抗体はコンジュゲートされる。
【００７１】
本明細書の実施形態のいずれか１つでは、抗体は、放射性核種、細胞毒、化学療法剤、薬品、プロドラッグ、毒素、酵素、免疫調節剤、抗血管新生剤、アポトーシス促進剤、サイトカイン、ホルモン、オリゴヌクレオチド、アンチセンス分子、ｓｉＲＮＡ、二次抗体、および二次抗体断片からなる群から選択される少なくとも１つの治療剤にコンジュゲートされる。
【００７２】
本明細書の実施形態のいずれか１つでは、抗体はＴＲＥＭ１に対して選択的である。
【００７３】
本明細書の実施形態のいずれか１つでは、抗体はアンタゴニスト抗体である。
【００７４】
別の態様では、本明細書で提供される抗体のうちのいずれか１つおよび薬学的に許容可能な賦形剤を含む医薬組成物が本明細書で提供される。一実施形態では、組成物は無菌である。
【００７５】
別の態様では、本明細書に記載の抗体のうちのいずれか１つを含み、さらに使用説明書を含むキットが本明細書で提供される。本明細書の実施形態のいずれか１つでは、キットは、二次抗体、免疫組織化学分析のための試薬、薬学的に許容可能な賦形剤、および取扱説明書、ならびにそれらの任意の組み合わせを含む群から選択される構成要素をさらに含む。
【００７６】
別の態様では、本明細書に記載される組成物のうちのいずれか１つを含む製造物品が本明細書に提供される。
【００７７】
別の態様では、本発明は、非刺激性骨髄細胞の存在または非存在を決定する方法であって、非刺激性骨髄細胞および刺激性骨髄細胞を含む免疫細胞の集団を抗ＴＲＥＭ１抗体と接触させることと、抗体の非刺激性骨髄細胞への結合を示す複合体の存在を決定することと、任意選択的に、集団中の非刺激性骨髄細胞の数を定量化することと、を含む、方法を提供する。
【００７８】
別の態様では、本発明は、癌の治療のための免疫療法に応答し得る個体を特定する方法であって、個体からの生体試料中のＴＲＥＭ１の発現レベルを検出することと、ＴＲＥＭ１の発現レベルに基づいて、個体が免疫療法に応答するかどうかを決定することであって、健康な個体のレベルに比べて個体のＴＲＥＭ１のレベルが高い場合は、個体が免疫療法に応答し得ることを示す、決定することと、を含む、方法を提供する。
【００７９】
本明細書の実施形態のいずれか１つでは、免疫療法は、抗ＴＲＥＭ１抗体による治療を含む。本明細書の実施形態のいずれか１つでは、ＴＲＥＭ１の発現レベルは、ＴＲＥＭ１のｍＲＮＡ発現レベルを含む。本明細書の実施形態のいずれか１つでは、ＴＲＥＭ１の発現レベルは、ＴＲＥＭ１のタンパク質発現レベルを含む。
【図面の簡単な説明】
【００８０】
【図１】抗ｍＴＲＥＭ１抗体を用いた、組み換えおよび細胞ベースの特異性ＴＲＥＭ１結合、エピトープビニング、ＡＤＣＣ／ＡＤＣＰ機能実験の結果を示す。
【図２】アイソタイプ対照およびＰＩ−９０６７ｓと比較したＭＣ３８モデルの単剤療法としてのＰＩ−９０６９Ｓ治療の抗腫瘍活性を示す。
【図３】アイソタイプ、ＰＩ−９０６７ｓ、およびＰＩ−９０６９ｓの単剤治療に対する個々のＭＣ３８担腫瘍マウスの応答を示す。
【図４】対照と比較したＣＴ２６モデルにおけるＰＩ−９０６９Ｌと抗ＰＤ１の併用治療の抗腫瘍活性を示す。
【図５】ＰＩ−９０６９Ｌおよび抗ＰＤ１の併用治療に対する個々のＣＴ２６担腫瘍マウスの応答を示す。
【図６】４つの別個の同系腫瘍モデルにおけるＰＩ−９０６９ｓまたはＬを用いた腫瘍内受容体占有および薬力学研究の実験計画の概略図を示す。
【図７】ＰＩ−９０６９ｓまたはＰＩ−９０６９Ｌは腫瘍内ＴＡＭおよび単球枯渇スコアを増加させることを示す。
【図８】ＰＩ−９０６９ｓまたはＰＩ−９０６９Ｌが４つの別個の同系腫瘍モデルでは腫瘍内骨髄特異性ＲＯ活性を示すことを示す。
【図９】ＰＩ−９０６９ｓまたはＰＩ−９０６９Ｌが４つの別個の同系腫瘍モデルでは腫瘍内骨髄特異性ＰＤ活性を示すことを示す。
【図１０】ＭＣ３８モデルにおけるＰＩ−９０６９Ｌの用量増加効果実験を示しており、その効果は腫瘍内単球の枯渇と相関している。
【図１１】ＰＩ−９０６９Ｌがナイーブマウスの血液および骨髄中の単球を有意に減少させるが、好中球を減少させず、単球前駆細胞を枯渇させている可能性があることを示す。
【図１２】抗ｈＴＲＥＭ１抗体を用いた、細胞ベースの特異性ＴＲＥＭ１結合、エピトープビニング、ＡＤＣＣ／ＡＤＣＰ機能実験の結果を示す。
【図１３】一次ヒト腫瘍試料のＤＣおよびリンパ球と比較して、ＴＲＥＭ１がＴＡＭ上に高度に発現していることを示す。
【図１４】は、抗ｈＴＲＥＭ１抗体を用いたビニング実験の結果を示す。
【図１５】ＰＩ−８４２１がｈＴＲＥＭ１に結合するがｃＴＲＥＭ１には結合しないことを示す。
【図１６】ＰＩ−８４２１および０１７０がレポーターアッセイシステムにおいて同様のＡＤＣＣおよびＡＤＣＰ活性を有することを示す。
【図１７】ＰＩ−８４２１が一次マクロファージ設定においてＡＤＣＣおよびＡＤＣＰ活性を誘発することを示す。ＨＥＫ（ｈＴＲＥＭ１）ｘＰＩ−８４２１は一番左である。ＨＥＫ（ｈＴＲＥＭ１）ｘアイソタイプは中央左である。ＨＥＫ（対照）ｘＰＩ−８４２１は中央右である。ＨＥＫ（対照）ｘアイソタイプは一番右である。
【図１８】様々なマウスモノクローナル抗体（ｍＡｂ）の特性化を示す。図１８Ａは、抗マウスＴＲＥＭ１ｍＡｂのフローサイトメトリーに基づくエピトープビニングを示す。（＋）はクロスブロッキングを示し、（−）は非クロスブロッキングを示す。図１８Ｂは、抗マウスＴＲＥＭ１ｍＡｂ結合のドメインマッピングを示す。「はい」は結合を示し、「いいえ」は結合がないことを示す。図１８Ｃは、３つのｍＡｂの生化学的特性化の概要を示す。
【図１９】抗マウスＴＲＥＭ１ｍＡｂの結合、およびＢＡＬＢ／ｃ脾細胞製剤中の好中球に対する特異性を示す。
【図２０】細胞結合アッセイおよびＡＤＣＣ／ＡＤＣＰレポーターアッセイにおける野生型または非フコシル化抗マウスＴＲＥＭ１ｍＡｂの結合および機能特性の比較を示す。
【図２１】マウス同系マウス腫瘍研究計画の概略図を示す。
【図２２】ＰＩ−９０６７Ｌ（図２２Ａおよび２２Ｂ）およびＰＩ−４９２８（図２２Ｃおよび２２Ｄ）のＣＴ２６およびＭＣ３８モデルにおける好中球の腫瘍内受容体占有を示す。
【図２３】ＰＩ−９０６７Ｌのインビボ治療結果を示す。ＰＩ−９０６７Ｌは、ＣＴ２６腫瘍のＴＭＥにおいて、好中球数および従来の単球数（図２３Ａおよび２３Ｂ）を減少させるが、ＴおよびＮＫ細胞数（図２３Ｃ）は減少させない。示された免疫集団の絶対数が示される。各群は、少なくとも５匹のマウスを表す。
【図２４】ＣＴ２６同系マウス腫瘍モデルにおける抗ＰＤ−１と組み合わせたＰＩ−９０６７Ｌ媒介性抗腫瘍活性を示す。ＰＩ−９０６７Ｌの非フコシル化は、抗ＰＤ−１と組み合わせて抗腫瘍活性を改善する（図２４Ａ）。平均腫瘍体積が示されている（１０匹のマウス／群）。図２４Ｂおよび２４Ｃは、それぞれ抗ＰＤ−１と組み合わせたＰＩ−９０６７ＬおよびＡｆｕｃ−ＰＩ−９０６７Ｌの個々の腫瘍体積を示す。
【図２５】ＣＴ２６同系マウス腫瘍モデルにおける抗ＰＤ−１と組み合わせたＡｆｕｃ−ＰＩ−４９２８媒介性抗腫瘍活性を示す。図２５Ａは、ＰＩ−４９２８の非フコシル化が、対照群と比較して抗ＰＤ−１と組み合わせて抗腫瘍活性を改善することを示す。平均腫瘍体積が示されている（１０匹のマウス／群）。図２５Ｂは、研究終了時の各群の個々の腫瘍体積を示す。
【図２６】ＭＣ３８腫瘍細胞を移植し、示されたｍＡｂで処理したＣ５７ＢＬ／６マウスの経時的な腫瘍体積を示す。Ａｆｕｃ−ＰＩ−９０６７Ｌは、ＰＩ−９０６７Ｌと比較して治療効果の増強を示さない（図２６Ａ）。各曲線は、群ごとに１０匹のマウスを表す。研究の終了時に各群の個々の腫瘍体積が示されている（図２６Ｂ）。
【図２７】Ｐｙ８１１９細胞を移植し、アイソタイプ（図２７Ａ）、抗ＰＤ−１（図２７Ｂ）、Ａｆｕｃ−ＰＩ−４９２８（図２７Ｃ）、またはＡｆｕｃ−ＰＩ−４９２８＋抗ＰＤ−１（図２７Ｄ）で処理したＣ５７ＢＬ／６マウスの経時的な腫瘍体積を示す。各群における各マウスの個々の成長曲線が示される。図２７Ｅは、２８日目の各群のエンドポイント腫瘍体積を示す。
【図２８】示された抗体またはアイソタイプ対照で投薬した後の、ＣＴ２６（図２８Ａ）およびＭＣ３８（図２８Ｂ）担腫瘍マウスのＰＩ−９０６７ＬおよびＰＩ−４９２８のインビボ血漿レベルを示す。図２８Ｃは、ＣＴ２６担腫瘍マウスにおける野生型および非フコシル化ＰＩ−９０６７ＬおよびＰＩ−４９２８のインビボ血漿レベルを示す。
【図２９】ＣＴ２６（図２９Ａ）およびＭＣ３８モデル（図２９Ｂ）における研究からの示された時点からの、ＰＩ−９０６７ＬもしくはＡｆｕｃ−ＰＩ−９０６７Ｌ、または抗ＰＤ−１との組み合わせで治療されたマウスの平均体重測定値（群あたり１０匹のマウスの平均＋／−ＳＤ）を示す。図２９Ｃは、Ｐｙ８１１９モデルで示された時点からの、Ａｆｕｃ−ＰＩ−４９２８単独または抗ＰＤ−１との組み合わせで治療されたマウスの平均体重測定値を示す。
【図３０】ナイーブマウス（図３０Ａ）、または示されたｍＡｂの２用量で処置されたＣＴ２６（図３０Ｂ）またはＭＣ３８（図３０Ｃ）担腫瘍マウスの好中球レベルを示す。好中球数は、Ｌｙ６ＧおよびＣＤ１１ｂゲーティングに基づいたフローサイトメトリーによって列挙された。ｎ．ｓ．は有意ではないことを意味する。
【発明を実施するための形態】
【００８１】
本発明のこれらおよび他の態様および利点は、以下の詳細な説明および特許請求の範囲から明らかになるであろう。本明細書に記載の様々な実施形態の特性の１つ、いくつか、またはすべてを組み合わせて、本発明の他の実施形態を形成し得ることを理解されたい。
【００８２】
６．詳細な説明
ＴＲＥＭ１抗体を使用して骨髄細胞を無能化させる（死滅させる）ことを含む、個体の免疫応答を増強するためのおよび／または個体の癌の治療のための方法および組成物が、本明細書で提供される。また、本明細書では、抗ＴＲＥＭ１抗体を使用して、刺激性骨髄細胞の非刺激性骨髄細胞に対する比率を増加させるための方法および組成物も提供される。本明細書では、抗ＴＲＥＭ１抗体を使用して骨髄細胞を検出するための方法および組成物も提供される。本明細書では、非刺激性骨髄細胞の存在または非存在を決定するための方法であって、非刺激性骨髄細胞および刺激性骨髄細胞を含む免疫細胞の集団を抗ＴＲＥＭ１抗体と接触させることと、抗体の細胞への結合を示す複合体または部分を検出することと、任意選択的に、集団中の非刺激性骨髄細胞の数を定量化することと、を含む、方法が提供される。また、本明細書では、抗ＴＲＥＭ１抗体を使用して、免疫応答を増強する療法に応答し得る個体を特定するための方法および組成物も提供される。
【００８３】
別途定義されない限り、本明細書で使用される技術用語および科学用語はすべて、当業者によって通常理解される意味と同一の意味を有する。
【００８４】
本発明の実施は、特に明記しない限り、当技術分野の範囲内の一般化学、無機化学、有機化学、医薬化学、タンパク質生物学、タンパク質化学、薬理学、分子生物学、微生物学、細胞生物学、生化学、および免疫学の従来の技術を使用することになる。
【００８５】
６．１．定義
他に定義されない限り、本明細書で使用されるすべての技術用語、表記法および他の科学用語は、当業者によって一般的に理解される意味を有することを意図する。いくつかの場合では、一般的に理解されている意味を持つ用語は、明確化および／またはすぐに参照することができるように本明細書で定義されており、本明細書でそのような定義を含めることは、当該技術分野で一般的に理解されているものとの違いを表すと必ずしも解釈されるべきではない。本明細書に記載または参照される技法および手順は、例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ  ４ｔｈ  ｅｄ．（２０１２）Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ，ＮＹに記載される広く利用される分子クローニング方法論などの当業者による従来の方法論を利用して、一般的によく理解され、かつ通常用いられる。必要に応じて、市販のキットおよび試薬の使用を伴う手順は、特に明記しない限り、一般的に製造業者定義のプロトコルおよび条件に従って実施される。
【００８６】
本明細書で使用される場合、単数形「ａ」、「ａｎ」、および「ｔｈｅ」は、特に示されない限り、複数の参照を含む。
【００８７】
本明細書に記載される本発明の態様および実施形態は、「含む」、「からなる」、および「から本質的になる」態様および実施形態を含むことが理解される。
【００８８】
「約」という用語は、示された値およびその値の上下の範囲を示し、包含する。特定の実施形態では、「約」という用語は、指定値±１０％、±５％、または±１％を示す。特定の実施形態では、適用可能な場合、「約」という用語は、指定値±その値（複数可）の１標準偏差を示す。
【００８９】
「免疫グロブリン」という用語は、一般に２対のポリペプチド鎖（１対の軽（Ｌ）鎖および１対の重（Ｈ）鎖）を含む構造的に関連するタンパク質のクラスを指す。「完全な免疫グロブリン」では、これらの鎖の４つすべてがジスルフィド結合によって相互接続されている。免疫グロブリンの構造は十分に特徴付けられている。例えば、Ｐａｕｌ，Ｆｕｎｄａｍｅｎｔａｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  ７ｔｈ  ｅｄ．，Ｃｈ．５（２０１３）Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ  Ｗｉｌｌｉａｍｓ＆Ｗｉｌｋｉｎｓ，Ｐｈｉｌａｄｅｌｐｈｉａ，ＰＡを参照されたい。簡単に説明すると、各重鎖は、典型的には、重鎖可変領域（ＶＨ）および重鎖定常領域（ＣＨ）を含む。重鎖定常領域は、典型的には、ＣＨ１、ＣＨ２、およびＣＨ３と略される３つのドメインを含む。各軽鎖は、典型的には、軽鎖可変領域（ＶＬ）および軽鎖定常領域を含む。軽鎖定常領域は、典型的には、ＣＬと略される１つのドメインを含む。
【００９０】
「抗体」という用語は、本明細書ではその最も広い意味で使用され、抗原またはエピトープに特異的に結合する１つ以上の抗原結合ドメインを含む特定のタイプの免疫グロブリン分子を含む。抗体としては、特に、完全な抗体（例えば、完全な免疫グロブリン）、抗体断片、および多重特異性抗体が挙げられる。いくつかの実施形態では、抗体は代替の足場を含む。いくつかの実施形態では、抗体は代替の足場からなる。いくつかの態様では、抗体は代替の足場から本質的になる。いくつかの態様では、抗体は抗体断片を含む。いくつかの態様では、抗体は抗体断片からなる。いくつかの態様では、抗体は抗体断片から本質的になる。「ＴＲＥＭ１抗体」、「抗ＴＲＥＭ１抗体」または「ＴＲＥＭ１特異性抗体」は、本明細書で提供されるように、抗原ＴＲＥＭ１に特異的に結合する抗体である。いくつかの実施形態では、抗体はＴＲＥＭ１の細胞外ドメインに結合する。特定の実施形態では、本明細書で提供されるＴＲＥＭ１抗体は、異なる種由来のＴＲＥＭ１タンパク質の間またはそれらのうちで保存されているＴＲＥＭ１のエピトープに結合する。
【００９１】
「抗原結合ドメイン」という用語は、抗原またはエピトープに特異的に結合することができる抗体の部分を意味する。抗原結合ドメインの一例は、抗体のＶＨ−ＶＬ二量体によって形成される抗原結合ドメインである。抗原結合ドメインの別の例は、アドネクチンの１０番目のフィブロネクチンＩＩＩ型ドメインからの特定のループの多様化によって形成される抗原結合ドメインである。抗原結合ドメインには、重鎖からのＣＤＲ１、２、および３がこの順序で含まれ、軽鎖からのＣＤＲ１、２、および３がこの順序で含まれ得る。
【００９２】
「完全長抗体」、「完全な抗体」、および「全抗体」という用語は、自然に発生する抗体構造と実質的に類似の構造を有し、Ｆｃ領域を含む重鎖を有する抗体を指すために、本明細書で互換的に使用される。例えば、ＩｇＧ分子を指すために使用される場合、「完全長抗体」とは、２つの重鎖および２つの軽鎖を含む抗体である。
【００９３】
「Ｆｃ領域」または「Ｆｃ」という用語は、自然に発生する抗体では、Ｆｃ受容体および補体系の特定のタンパク質と相互作用する免疫グロブリン重鎖のＣ末端領域を意味する。様々な免疫グロブリンのＦｃ領域の構造、およびそこに含まれるグリコシル化部位は、当技術分野において知られている。参照によりその全体が組み込まれるＳｃｈｒｏｅｄｅｒ  ａｎｄ  Ｃａｖａｃｉｎｉ，Ｊ．Ａｌｌｅｒｇｙ  Ｃｌｉｎ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，２０１０，１２５：Ｓ４１−５２を参照されたい。Ｆｃ領域は、自然に発生するＦｃ領域、または当技術分野または本開示の他の箇所に記載されているように改変されたＦｃ領域であり得る。
【００９４】
ＶＨおよびＶＬ領域は、さらに保存された領域が散在する超可変性の領域（「超可変領域（ＨＶＲ）」、「相補性決定領域」（ＣＤＲ）とも呼ばれる）にさらに細分され得る。より保存された領域は、フレームワーク領域（ＦＲ）と呼ばれる。各ＶＨおよびＶＬは、一般的に、以下の順序で（Ｎ末端からＣ末端に）配置された３つのＣＤＲおよび４つのＦＲを含む：ＦＲ１−ＣＤＲ１−ＦＲ２−ＣＤＲ２−ＦＲ３−ＣＤＲ３−ＦＲ４。ＣＤＲは、抗原結合に関与し、抗体の抗原特異性および結合親和性に影響する。参照によりその全体が組み込まれるＫａｂａｔ  ｅｔ  ａｌ．，Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ  ５ｔｈ  ｅｄ．（１９９１）Ｐｕｂｌｉｃ  Ｈｅａｌｔｈ  Ｓｅｒｖｉｃｅ，Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，ＭＤを参照されたい。
【００９５】
任意の脊椎動物種からの軽鎖は、その定常ドメインの配列に基づいて、カッパ（κ）およびラムダ（λ）と呼ばれる２つのタイプのうちの１つに割り当てることができる。
【００９６】
脊椎動物種の重鎖は、ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ、およびＩｇＭの５つの異なるクラス（またはアイソタイプ）のうちの１つに割り当てることができる。これらのクラスは、それぞれα、δ、ε、γ、およびμとも称される。ＩｇＧおよびＩｇＡクラスは、配列および機能の違いに基づいてサブクラスにさらに分けられる。ヒトは、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１、およびＩｇＡ２のサブクラスを発現する。
【００９７】
ＣＤＲのアミノ酸配列境界は、その各々は参照によりその全体が組み込まれる、Ｋａｂａｔ  ｅｔ  ａｌ．の上記（「Ｋａｂａｔ」番号付けスキーム）、Ａｌ−Ｌａｚｉｋａｎｉ  ｅｔ  ａｌ．，１９９７，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，２７３：９２７−９４８（「Ｃｈｏｔｈｉａ」番号付けスキーム）、ＭａｃＣａｌｌｕｍ  ｅｔ  ａｌ．，１９９６，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２６２：７３２−７４５（「Ｃｏｎｔａｃｔ」番号付けスキーム）、Ｌｅｆｒａｎｃ  ｅｔ  ａｌ．，Ｄｅｖ．Ｃｏｍｐ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，２００３，２７：５５−７７（「ＩＭＧＴ」番号付けスキーム）、およびＨｏｎｅｇｇｅ  ａｎｄ  Ｐｌｕｃｋｔｈｕｎ，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，２００１，３０９：６５７−７０（「ＡＨｏ」番号付けスキーム）によって記載されたものを含む、いくつかの既知の番号付けスキームのいずれかを使用して、当業者によって決定され得る。
【００９８】
表１は、ＫａｂａｔおよびＣｈｏｔｈｉａスキームによって特定されたＣＤＲ−Ｌ１、ＣＤＲ−Ｌ２、ＣＤＲ−Ｌ３、ＣＤＲ−Ｈ１、ＣＤＲ−Ｈ２、およびＣＤＲ−Ｈ３の位置を提供する。ＣＤＲ−Ｈ１の場合、ＫａｂａｔおよびＣｈｏｔｈｉａの両方の番号付けスキームを使用して、残基の番号付けが提供される。
【００９９】
ＣＤＲは、例えば、ｗｗｗ．ｂｉｏｉｎｆ．ｏｒｇ．ｕｋ／ａｂｓ／ａｂｎｕｍ／で入手可能で、かつ参照によりその全体が組み込まれるＡｂｈｉｎａｎｄａｎ  ａｎｄ  Ｍａｒｔｉｎ，Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，２００８，４５：３８３２−３８３９に記載されているＡｂｎｕｍなどの抗体番号付けソフトウェアを使用して割り当てることができる。
【０１００】
（表１）ＫａｂａｔおよびＣｈｏｔｈｉａの番号付けスキームによるＣＤＲの残基。
2020530495.tif 000003
＊ＣＤＲ−Ｈ１のＣ末端は、Ｋａｂａｔ番号付け規則を使用して番号付けされた場合、ＣＤＲの長さに応じてＨ３２とＨ３４との間で異なる。
【０１０１】
「ＥＵ番号付けスキーム」は、一般的に、抗体重鎖定常領域内の残基を指す場合に（例えば、上記のＫａｂａｔ  ｅｔ  ａｌで報告されているように）使用される。特に明記しない限り、ＥＵ番号付けスキームは、本明細書に記載の抗体重鎖定常領域の残基を指すために使用される。
【０１０２】
「抗体断片」は、完全な抗体の抗原結合領域または可変領域などの完全な抗体の一部を含む。抗体断片としては、例えば、Ｆｖ断片、Ｆａｂ断片、Ｆ（ａｂ’）２断片、Ｆａｂ’断片、ｓｃＦｖ（ｓＦｖ）断片、およびｓｃＦｖ−Ｆｃ断片が挙げられる。
【０１０３】
「Ｆｖ」断片は、１つの重鎖可変ドメインおよび１つの軽鎖可変ドメインの非共有結合した二量体を含む。
【０１０４】
「Ｆａｂ」断片としては、重鎖および軽鎖可変ドメインに加えて、軽鎖の定常ドメインおよび重鎖の第１の定常ドメイン（ＣＨ１）が挙げられる。Ｆａｂ断片は、例えば、組み換え方法により、または完全長抗体のパパイン消化によって生成され得る。
【０１０５】
「Ｆ（ａｂ’）２」断片は、ヒンジ領域付近でジスルフィド結合によって結合された２つのＦａｂ’断片を含有する。Ｆ（ａｂ’）２断片は、例えば、組み換え方法により、または完全な抗体のペプシン消化によって生成され得る。Ｆ（ａｂ’）断片は、例えば、β−メルカプトエタノールによる処理によって解離することができる。
【０１０６】
「単鎖Ｆｖ」または「ｓＦｖ」または「ｓｃＦｖ」抗体断片は、単一のポリペプチド鎖内にＶＨドメインおよびＶＬドメインを含む。ＶＨおよびＶＬは、一般的に、ペプチドリンカーによって連結される。Ｐｌｕｃｋｔｈｕｎ  Ａ．（１９９４）を参照されたい。任意の好適なリンカーを使用することができる。いくつかの実施形態では、リンカーは（ＧＧＧＧＳ）ｎ（配列番号１２７）である。いくつかの実施形態では、ｎ＝１、２、３、４、５、または６である。参照によりその全体が組み込まれるＡｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  ｆｒｏｍ  Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ  ｃｏｌｉ．Ｒｏｓｅｎｂｅｒｇ  Ｍ．＆  Ｍｏｏｒｅ  Ｇ．Ｐ．（Ｅｄｓ．），Ｔｈｅ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ  ｏｆ  Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  ｖｏｌ．１１３（ｐｐ．２６９−３１５）．Ｓｐｒｉｎｇｅｒ−Ｖｅｒｌａｇ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋを参照されたい。
【０１０７】
「ｓｃＦｖ−Ｆｃ」断片は、Ｆｃドメインに付着したｓｃＦｖを含む。例えば、Ｆｃドメインは、ｓｃＦｖのＣ末端に結合し得る。Ｆｃドメインは、ｓｃＦｖ内の可変ドメインの向きに応じて、ＶＨまたはＶＬに続き得る（すなわち、ＶＨ−ＶＬまたはＶＬ−ＶＨ）。当該技術分野で既知のまたは本明細書に記載される任意の好適なＦｃドメインが使用され得る。いくつかの場合では、ＦｃドメインはＩｇＧ４  Ｆｃドメインを含む。
【０１０８】
「単一ドメイン抗体」という用語は、抗体の１つの可変ドメインが他の可変ドメインの存在なしに抗原に特異的に結合する分子を指す。単一ドメイン抗体およびその断片は、その各々は参照によりその全体が組み込まれるＡｒａｂｉ  Ｇｈａｈｒｏｕｄｉ  ｅｔ  ａｌ．，ＦＥＢＳ  Ｌｅｔｔｅｒｓ，１９９８，４１４：５２１−５２６  ａｎｄ  Ｍｕｙｌｄｅｒｍａｎｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｔｒｅｎｄｓ  ｉｎ  Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｓｃｉ．，２００１，２６：２３０−２４５に記載されている。単一ドメイン抗体は、ｓｄＡｂまたはナノボディとしても知られている。
【０１０９】
「多重特異性抗体」は、２つ以上の異なるエピトープに集合的に特異的に結合する２つ以上の異なる抗原結合ドメインを含む抗体である。２つ以上の異なるエピトープは、同じ抗原（例えば、細胞によって発現する単一のＴＲＥＭ１分子）または異なる抗原（例えば、同じ細胞によって発現する異なるＴＲＥＭ１分子、またはＴＲＥＭ１分子および非ＴＲＥＭ１分子）上のエピトープであり得る。いくつかの態様では、多重特異性抗体は、２つの異なるエピトープ（すなわち、「二重特異性抗体」）に結合する。いくつかの態様では、多重特異性抗体は、３つの異なるエピトープ（すなわち、「三重特異性抗体」）に結合する。
【０１１０】
「単一特異性抗体」は、単一のエピトープに特異的に結合する１つ以上の結合部位を含む抗体である。単一特異性抗体の例は、二価（すなわち、２つの抗原結合ドメインを有する）であるが、２つの抗原結合ドメインの各々で同じエピトープを認識する自然に発生するＩｇＧ分子である。結合特異性は、任意の好適な価数で存在し得る。
【０１１１】
「モノクローナル抗体」という用語は、実質的に均一な抗体の集団からの抗体を指す。実質的に均質な抗体の集団は、モノクローナル抗体の産生中に通常生じ得る変異体を除いて、実質的に類似し、同じエピトープ（複数可）に結合する抗体を含む。そのような変異体は、一般にほんの少量で存在する。モノクローナル抗体は、典型的には、複数の抗体から単一の抗体を選択することを含むプロセスによって得られる。例えば、選択プロセスは、ハイブリドーマクローン、ファージクローン、酵母クローン、細菌クローン、または他の組み換えＤＮＡクローンのプールなど、複数のクローンからの固有のクローンの選択であり得る。選択された抗体をさらに変更して、例えば、標的に対する親和性（「親和性成熟」）を改善し、抗体をヒト化し、細胞培養でのその産生を改善し、および／または対象の免疫原性を低下させることができる。
【０１１２】
「キメラ抗体」という用語は、重鎖および／または軽鎖の一部が特定の供給源または種に由来し、重鎖および／または軽鎖の残りが異なる供給源または種に由来する抗体を指す。
【０１１３】
「ヒト抗体」は、ヒトまたはヒト細胞によって産生される抗体のアミノ酸配列に対応するアミノ酸配列、またはヒト抗体レパートリーまたはヒト抗体コード配列（ヒトの供給源から得られるか、または新たに設計された）を利用する非ヒト供給源に由来するアミノ酸配列を有するものである。ヒト抗体は、特にヒト化抗体を除外する。
【０１１４】
「親和性」とは、分子の単一結合部位（例えば、抗体）とその結合パートナー（例えば、抗原またはエピトープ）との間の非共有相互作用の合計の強度を指す。特に明記しない限り、本明細書で使用する「親和性」とは、結合対のメンバー（例えば、抗体および抗原またはエピトープ）の間の１：１相互作用を反映する固有の結合親和性を指す。パートナーＹに対する分子Ｘの親和性は、解離平衡定数（ＫＤ）によって表すことができる。解離平衡定数に寄与する運動成分については、以下でより詳細に説明する。親和性は、表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）技法（例えば、ＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標））または生体層干渉法（例えば、ＦＯＲＴＥＢＩＯ（登録商標））などの本明細書に記載の方法を含む、当該技術分野で既知の一般的な方法によって測定することができる。
【０１１５】
抗体の標的分子への結合に関して、特定の抗原（例えば、ポリペプチド標的）または特定の抗原上のエピトープに「結合する」、「特異的結合」、「特異的に結合する」、「特異的に結合する」、「選択的に結合する」、および「に対して選択的に」という用語は、非特異的または非選択的相互作用（例えば、非標的分子との）とは多少は異なる結合を意味する。特異的結合は、例えば、標的分子への結合を測定し、それを非標的分子への結合と比較することによって測定することができる。特異的結合は、標的分子上で認識されるエピトープを模倣する制御分子との競合によっても決定することができる。その場合、標的分子への抗体の結合が対照分子によって競合的に阻害される場合、特異的結合が示される。いくつかの態様では、非標的分子に対するＴＲＥＭ１抗体の親和性は、ＴＲＥＭ１に対する親和性の約５０％未満である。いくつかの態様では、非標的分子に対するＴＲＥＭ１抗体の親和性は、ＴＲＥＭ１に対する親和性の約４０％未満である。いくつかの態様では、非標的分子に対するＴＲＥＭ１抗体の親和性は、ＴＲＥＭ１に対する親和性の約３０％未満である。いくつかの態様では、非標的分子に対するＴＲＥＭ１抗体の親和性は、ＴＲＥＭ１に対する親和性の約２０％未満である。いくつかの態様では、非標的分子に対するＴＲＥＭ１抗体の親和性は、ＴＲＥＭ１に対する親和性の約１０％未満である。いくつかの態様では、非標的分子に対するＴＲＥＭ１抗体の親和性は、ＴＲＥＭ１に対する親和性の約１％未満である。いくつかの態様では、非標的分子に対するＴＲＥＭ１抗体の親和性は、ＴＲＥＭ１に対する親和性の約０．１％未満である。
【０１１６】
本明細書で使用される「ｋｄ」（秒−１）という用語は、特定の抗体−抗原相互作用の解離速度定数を指す。この値は、ｋｏｆｆ値とも称される。
【０１１７】
本明細書で使用される「ｋａ」（Ｍ−１×秒−１）という用語は、特定の抗体−抗原相互作用の会合速度定数を指す。この値は、ｋｏｎ値とも称される。
【０１１８】
本明細書で使用される「ＫＤ」（Ｍ）という用語は、特定の抗体−抗原相互作用の解離平衡定数を指す。ＫＤ＝ｋｄ／ｋａ。いくつかの実施形態では、抗体の親和性は、そのような抗体とその抗原との間の相互作用に対するＫＤの観点から説明される。明確にするために、当技術分野で知られているように、より小さなＫＤ値はより高い親和性相互作用を示し、より大きなＫＤ値はより低い親和性相互作用を示す。
【０１１９】
本明細書で使用される「ＫＡ」（Ｍ−１）という用語は、特定の抗体−抗原相互作用の会合平衡定数を指す。ＫＡ＝ｋａ／ｋｄ。
【０１２０】
「免疫複合体」は、治療薬（例えば、サイトカイン）または診断薬などの１つ以上の異種分子（複数可）にコンジュゲートされた抗体である。
【０１２１】
「エフェクタ機能」とは、抗体のＦｃ領域によって媒介される生物活性を指し、その活性は抗体アイソタイプに応じて異なり得る。抗体エフェクタ機能の例としては、補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）を活性化するＣ１ｑ結合、抗体依存性細胞細胞傷害（ＡＤＣＣ）を活性化するＦｃ受容体結合、抗体依存性細胞食作用（ＡＤＣＰ）、受容体リガンド遮断、アゴニズム、またはアンタゴニズムが挙げられる。
【０１２２】
本明細書では２つ以上の抗体の文脈で使用される場合、「と競合する」または「交差競合する」という用語は、２つ以上の抗体が抗原（例えば、ＴＲＥＭ１）への結合について競合することを示す。１つの例示的なアッセイでは、ＴＲＥＭ１は、表面上にコーティングされ、第１のＴＲＥＭ１抗体と接触し、その後、第２のＴＲＥＭ１抗体が添加される。別の例示的なアッセイでは、第１のＴＲＥＭ１抗体が表面上にコーティングされ、ＴＲＥＭ１と接触され、次いで第２のＴＲＥＭ１抗体が添加される。いずれかのアッセイで、第１のＴＲＥＭ１抗体の存在が第２のＴＲＥＭ１抗体の結合を低下させる場合、抗体は互いに競合する。「と競合する」という用語には、１つの抗体が別の抗体の結合を減少させるが、抗体が逆の順序で添加されるときに競合が観察されない抗体の組み合わせも含まれる。しかしながら、いくつかの実施形態では、第１および第２の抗体は、それらが添加される順序に関係なく、互いの結合を阻害する。いくつかの実施形態では、１つの抗体は、別の抗体のその抗原への結合を少なくとも２５％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、または少なくとも９５％だけ減少させる。当業者は、ＴＲＥＭ１に対する抗体の親和性および抗体の価数に基づいて、競合アッセイで使用される抗体の濃度を選択することができる。この定義に記載されているアッセイは例示であり、当業者は、抗体が互いに競合するかどうかを決定するために任意の好適なアッセイを利用することができる。好適なアッセイは、例えば、その各々は参照によりその全体が組み込まれるＣｏｘ  ｅｔ  ａｌ．，“Ｉｍｍｕｎｏａｓｓａｙ  Ｍｅｔｈｏｄｓ，”Ａｓｓａｙ  Ｇｕｉｄａｎｃｅ  Ｍａｎｕａｌ［Ｉｎｔｅｒｎｅｔ］，Ｕｐｄａｔｅｄ  Ｄｅｃｅｍｂｅｒ  ２４，２０１４（ｗｗｗ．ｎｃｂｉ．ｎｌｍ．ｎｉｈ．ｇｏｖ／ｂｏｏｋｓ／ＮＢＫ９２４３４／；ａｃｃｅｓｓｅｄ  Ｓｅｐｔｅｍｂｅｒ  ２９，２０１５）、Ｓｉｌｍａｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｙｔｏｍｅｔｒｙ，２００１，４４：３０−３７、およびＦｉｎｃｏ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｐｈａｒｍ．Ｂｉｏｍｅｄ．Ａｎａｌ．，２０１１，５４：３５１−３５８に記載されている。
【０１２３】
「エピトープ」という用語は、抗体に特異的に結合する抗原の一部を意味する。エピトープは、多くの場合、表面にアクセス可能なアミノ酸残基および／または糖側鎖からなり、特定の３次元構造特性ならびに特定の電荷特性を有し得る。立体配座エピトープおよび非立体配座エピトープは、変性溶媒の存在下で前者への結合が失われるが後者は失われない可能性があるという点で区別される。エピトープは、結合に直接関与するアミノ酸残基、および結合に直接関与しない他のアミノ酸残基を含み得る。抗体が結合するエピトープは、例えば、異なる点突然変異を有するＴＲＥＭ１変異体またはキメラＴＲＥＭ１変異体への抗体結合の試験などのエピトープ決定のための既知の技法を使用して決定することができる。
【０１２４】
ポリペプチド配列と参照配列との間のパーセントの「同一性」は、配列を整列させ、必要に応じてギャップを導入して、最大パーセント配列の同一性を達成した後の、参照配列のアミノ酸残基と同一であるポリペプチド配列のアミノ酸残基の割合として定義される。パーセントアミノ酸配列同一性を決定するためのアラインメントは、例えば、ＢＬＡＳＴ、ＢＬＡＳＴ−２、ＡＬＩＧＮ、ＭＥＧＡＬＩＧＮ（ＤＮＡＳＴＡＲ）、ＣＬＵＳＴＡＬＷ、ＣＬＵＳＴＡＬ  ＯＭＥＧＡ、またはＭＵＳＣＬＥソフトウェアなどの一般公開されているコンピュータソフトウェアを使用して、当業者の技術範囲内の様々な方法において、達成することができる。当業者は、比較される配列の完全長にわたって最大の整列を達成するために必要とされる任意のアルゴリズムを含む、配列を整列させるための適切なパラメーターを決定することができる。
【０１２５】
「アミノ酸」という用語は、２０種類の一般的な自然に発生するアミノ酸を指す。自然に発生するアミノ酸としては、アラニン（Ａｌａ、Ａ）、アルギニン（Ａｒｇ、Ｒ）、アスパラギン（Ａｓｎ、Ｎ）、アスパラギン酸（Ａｓｐ、Ｄ）、システイン（Ｃｙｓ、Ｃ）、グルタミン酸（Ｇｌｕ、Ｅ）、グルタミン（Ｇｌｎ、Ｑ）、グリシン（Ｇｌｙ、Ｇ）、ヒスチジン（Ｈｉｓ、Ｈ）、イソロイシン（Ｉｌｅ、Ｉ）、ロイシン（Ｌｅｕ、Ｌ）、リジン（Ｌｙｓ、Ｋ）、メチオニン（Ｍｅｔ、Ｍ）、フェニルアラニン（Ｐｈｅ、Ｆ）、プロリン（Ｐｒｏ、Ｐ）、セリン（Ｓｅｒ、Ｓ）、スレオニン（Ｔｈｒ、Ｔ）、トリプトファン（Ｔｒｐ、Ｗ）、チロシン（Ｔｙｒ、Ｙ）、およびバリン（Ｖａｌ、Ｖ）が挙げられる。
【０１２６】
本明細書で使用される「ベクター」という用語は、それが連結されている別の核酸を伝播することができる核酸分子を指す。この用語には、自己複製核酸構造としてのベクター、およびそれが導入されている宿主細胞のゲノムに組み込まれたベクターが含まれる。特定のベクターは、それらが動作可能に連結されている核酸の発現を指示することができる。そのようなベクターは、本明細書では「発現ベクター」と称される。
【０１２７】
「宿主細胞」、「宿主細胞株」、および「宿主細胞培養」という用語は、互換的に使用され、外因性核酸が導入されている細胞、およびそのような細胞の子孫を指す。宿主細胞としては、「形質転換体」（または「形質転換細胞」）および「形質移入体」（または「トランスフェクト細胞」）が挙げられ、各々、一次形質転換またはトランスフェクト細胞およびそれに由来する子孫が含まれる。そのような子孫は、親細胞と核酸含量が完全に同一ではなく、変異を含む場合がある。
【０１２８】
本明細書に記載のすべての組成物、および本明細書に記載の組成物を使用するすべての方法について、組成物は、列挙した成分または工程を含むか、列挙した成分または工程から「本質的になる」。組成物が、列挙された成分から「本質的になる」ものとして記載されている場合、当該組成物は、列挙された成分を含有し、治療されている状態に実質的に影響を与えない他の成分を含有し得るが、明示的に列挙されたもの以外の治療されている状態に実質的に影響を与えるいずれの他の成分も含有しない。あるいは、組成物が、治療されている状態に実質的に影響を与える列挙されたもの以外の余分な成分を含有する場合、当該組成物は、治療されている状態に実質的に影響を与えるのに十分な濃度または量の余分な成分を含有しない。方法が、列挙された工程「から本質的になる」ものとして記載されている場合、当該方法は、列挙された工程を含み、治療されている状態に実質的に影響を与えない他の工程を含み得るが、当該方法は、明示的に列挙されている工程以外で治療されている状態に実質的に影響するいずれの他の工程も含まない。非限定的な特定の例として、組成物が成分から「本質的になる」と記載される場合、組成物は、任意の量の薬学的に許容可能な担体、ビヒクル、または希釈剤、および処理される状態に実質的に影響を及ぼさない他のそのような成分をさらに含有し得る。
【０１２９】
本明細書で使用される「有効量」または「治療有効量」は、単回投与または一連の投与の一部のどちらかとして個体に投与される抗ＴＲＥＭ１抗体などの治療化合物の量を指し、それは、単独で、または別の治療法と組み合わせて、所望の治療効果を産生するまたはそれに寄与するのに有効である。所望の治療効果の例は、免疫応答を増強すること、腫瘍の発達を遅らせることまたは遅延させること、病気の安定化、１つ以上の症状の改善である。有効量は、１回以上の投与量で与えられ得る。
【０１３０】
「治療すること」（および「治療する」または「治療」などのその変形）という用語は、それを必要とする対象の疾患または状態の自然経過を変更しようとする試みにおける臨床的介入を指す。治療は、予防および臨床病理学の過程の両方のために実行することができる。治療の望ましい効果としては、疾患の発生または再発を予防すること、症状の緩和、疾患の任意の直接的または間接的な病理学的結果の減少、転移を予防すること、疾患の進行速度を低下させること、疾患状態の改善または緩和、および寛解または改善された予後が挙げられる。
【０１３１】
本明細書で使用される「対象」または「個体」という用語は、哺乳類の対象を意味する。例示的な対象としてが、ヒト、サル、イヌ、ネコ、マウス、ラット、ウシ、ウマ、ラクダ、ヤギ、ウサギ、およびヒツジが挙げられる。ある特定の実施形態では、対象はヒトである。いくつかの実施形態では、対象は、本明細書で提供される抗体で治療することができる疾患または状態を有する。いくつかの態様では、疾患または状態は癌である。いくつかの態様では、疾患または状態はウイルス感染である。
【０１３２】
「添付文書」という用語は、治療薬または診断薬の市販のパッケージ（キットなど）（そのような治療または診断製品の使用に関する指示、利用能、投与量、管理、併用療法、禁忌、および／またはや警告に関する情報を含む）に慣習上含まれている使用説明書を指すために使用される。
【０１３３】
本明細書で使用される「細胞傷害剤」という用語は、細胞機能を阻害または防止し、かつ／または細胞死または破壊を引き起こす物質を指す。
【０１３４】
「化学療法剤」とは、癌の治療に有用な化合物を指す。化学療法剤としては、癌の成長を促進することができるホルモンの効果を調節、低減、阻害（ｂｌｏｃｋ）、または阻害（ｉｎｈｉｂｉｔ）する「抗ホルモン剤」または「内分泌治療薬」が挙げられる。
【０１３５】
「細胞増殖抑制剤」という用語は、インビトロまたはインビボのいずれかで細胞の成長を停止させる化合物または組成物を指す。いくつかの実施形態では、細胞増殖抑制剤は、Ｓ期の細胞の割合を減少させる薬剤である。いくつかの実施形態では、細胞増殖抑制剤は、Ｓ期の細胞の割合を少なくとも約２０％、少なくとも約４０％、少なくとも約６０％、または少なくとも約８０％だけ減少させる。
【０１３６】
「腫瘍」という用語は、悪性または良性にかかわらず、すべての新生細胞の成長および増殖、ならびにすべての前癌性および癌性の細胞および組織を指す。「癌」、「癌性」、「細胞増殖性障害」、「増殖性障害」および「腫瘍」という用語は、本明細書で言及されるように相互に排他的ではない。「細胞増殖性障害」および「増殖性障害」という用語は、ある程度の異常な細胞増殖に関連する障害を指す。いくつかの実施形態では、細胞増殖性障害は癌である。いくつかの態様では、腫瘍は固形腫瘍である。いくつかの態様では、腫瘍は血液悪性腫瘍である。
【０１３７】
「医薬組成物」という用語は、その中に含有される活性成分の生物活性が対象を治療するのに有効であることを可能にするような形態であり、かつ医薬組成物で提供される量で対象に許容できないほど毒性である追加成分を含有しない製剤を指す。
【０１３８】
「同時投与」、「同時投与する」、および「と組み合わせて」という用語は、特定の時間制限なしで同時に、平行して、または連続して２つ以上の治療薬を投与することを含む。一実施形態では、薬剤は、細胞または対象の体内に同時に存在するか、またはそれらの生物学的または治療的効果を同時に発揮する。一実施形態では、治療薬は、同じ組成物または単位剤形である。他の実施形態では、治療薬は、別個の組成物または単位剤形である。特定の実施形態では、第１の薬剤は、第２の治療薬の投与の前（例えば、分、１５分、３０分、４５分、１時間、２時間、４時間、６時間、１２時間、２４時間、４８時間、７２時間、９６時間、１週間、２週間、３週間、４週間、５週間、６週間、８週間、または１２週間前）、それと同時、またはそれの後（例えば、５分、１５分、３０分、４５分、１時間、２時間、４時間、６時間、１２時間、２４時間、４８時間、７２時間、９６時間、１週間、２週間、３週間、４週間、５週間、６週間、８週間、または１２週間後）に投与することができる。
【０１３９】
「調節する」および「調節」という用語は、列挙された変数を減少または阻害するか、あるいは活性化または増加することを指す。
【０１４０】
「増加する」および「活性化する」という用語は、列挙された変数の１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、１００％、２倍、３倍、４倍、５倍、１０倍、２０倍、５０倍、１００倍、またはそれ以上の増加を指す。
【０１４１】
「減少する」および「阻害する」という用語は、列挙された変数の１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、２倍、３倍、４倍、５倍、１０倍、２０倍、５０倍、１００倍、またはそれ以上の減少を指す。
【０１４２】
「刺激する」という用語は、受容体の活性化に関連する生物学的応答を誘発する受容体シグナル伝達の活性化を指す。「アゴニスト」とは、受容体に結合してそれを刺激する実体である。
【０１４３】
「拮抗する」という用語は、受容体の活性化に関連する生物学的応答を阻害する受容体シグナル伝達の阻害を指す。「アンタゴニスト」は、受容体に結合して拮抗する実体である。
【０１４４】
本明細書に記載の構造的および機能的特性のいずれについても、これらの特性を決定する方法は当技術分野で知られている。
【０１４５】
６．２．骨髄細胞
本明細書では、抗ＴＲＥＭ１抗体の使用を含む、骨髄細胞を無能化、死滅、枯渇、および／または検出するための方法および組成物が提供される。本明細書では、ＴＲＥＭ１タンパク質を発現する骨髄細胞を標的化および／または検出するための方法および組成物も提供される。いくつかの実施形態では、骨髄細胞は非刺激性骨髄細胞である。他の実施形態では、骨髄細胞は刺激性骨髄細胞である。
【０１４６】
本明細書で使用されるように、非刺激性骨髄細胞は、免疫応答の刺激では十分に効果的ではない骨髄細胞である（例えば、刺激性骨髄細胞と比較して腫瘍微小環境における抗腫瘍応答を刺激する上では効果的ではない）。いくつかの実施形態では、非刺激性骨髄細胞は、刺激性骨髄細胞と比較して、Ｔ細胞に抗原（例えば、腫瘍抗原）を提示するほど効果的ではなく、腫瘍特異性Ｔ細胞応答を刺激するほど効果的ではない。いくつかの実施形態では、非刺激性骨髄細胞は、刺激性骨髄細胞と比較して、腫瘍関連抗原のＴ細胞への取り込み、処理、および／または提示能力の低下を表示し得る。非刺激性骨髄細胞は、細胞傷害性Ｔリンパ球を再プライミングする低下した能力を含むか、その能力をまったく含まない可能性があり、いくつかの場合では、効果的な腫瘍細胞死を刺激できない。非刺激性骨髄細胞は、刺激性骨髄細胞と比較して、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＭＨＣＩ、およびＭＨＣＩＩを含むがこれらに限定されない、抗原処理、抗原提示、および／または抗原共刺激に関与する遺伝子および細胞表面マーカーのより低い発現を表示し得る。
【０１４７】
非刺激性骨髄細胞は、刺激性骨髄細胞と比較した場合、交差提示、共刺激、および／または刺激性サイトカインに関連する遺伝子（ＴＡＰ１、ＴＡＰ２、ＰＳＭＢ８、ＰＳＭＢ９、ＴＡＰＢＰ、ＰＳＭＥ２、ＣＤ２４ａ、ＣＤ２７４、ＢＴＬＡ、ＣＤ４０、ＣＤ２４４、ＩＣＯＳＬ、ＩＣＡＭ１、ＴＩＭ３、ＰＤＬ２、ＲＡＮＫ、ＦＬＴ３、ＣＳＦ２ＲＢ、ＣＳＦ２ＲＢ２、ＣＳＦ２ＲＡ、ＩＬ１２ｂ、ＸＣＲ１、ＣＣＲ７、ＣＣＲ２、ＣＣＬ２２、ＣＸＣＬ９、およびＣＣＬ５のうちの任意の１つ以上を含むが、これらに限定されない）のより低い発現を表示し、抗炎症性サイトカインＩＬ−１０の増加した発現を表示し得る。いくつかの実施形態では、非刺激性骨髄細胞は、分化および生存のために転写因子ＩＲＦ４およびサイトカインＧＭ−ＣＳＦまたはＣＳＦ−１に依存している。いくつかの実施形態では、非刺激性骨髄細胞は、血管内皮成長因子（ＶＥＧＦ）および一酸化窒素シンターゼ（ＮＯＳ）を分泌することによって腫瘍血管新生に寄与し、表皮成長因子（ＥＧＦ）を分泌することによって腫瘍成長を支援することができる。
【０１４８】
いくつかの実施形態では、骨髄細胞は腫瘍内にある。いくつかの実施形態では、骨髄細胞は、刺激性骨髄細胞および非刺激性骨髄細胞を含む免疫細胞の集団内にある。
【０１４９】
いくつかの実施形態では、骨髄細胞は、腫瘍関連マクロファージ（ＴＡＭ）、好中球、単球、または樹状細胞（ＤＣ）のサブセットである。いくつかの実施形態では、骨髄細胞は樹状細胞（ＤＣ）ではない。
【０１５０】
いくつかの実施形態では、骨髄細胞は腫瘍関連マクロファージ（ＴＡＭ）である。ＴＡＭは、癌性腫瘍の近くまたは内部に存在するマクロファージであり、循環単球または常在組織マクロファージに由来する。
【０１５１】
いくつかの実施形態では、非刺激性骨髄細胞および刺激性骨髄細胞は、それらが発現するマーカー、またはそれらが選択的に発現するマーカーに基づいて区別される。細胞表面マーカーの発現は、「＋」または「陽性」と説明することができる。細胞表面マーカーの不在は、「−」または「陰性」と説明することができる。細胞表面マーカーの発現は、細胞表面上の各マーカーの相対的発現を示す「高」（高レベルのマーカーを発現する細胞）または「低」（低レベルのマーカーを発現する細胞）としてさらに説明することができる。マーカーのレベルは、当該技術分野で既知の様々な方法、例えば、免疫染色およびＦＡＣＳ分析、遺伝子分析、またはゲル電気泳動およびウエスタンブロッティングによって決定され得る。
【０１５２】
いくつかの実施形態では、骨髄細胞は好中球である。
【０１５３】
いくつかの実施形態では、骨髄細胞は樹状細胞（ＤＣ）である。いくつかの実施形態では、樹状細胞は、スパイク状または樹状の形態によって区別することができる。一実施形態では、樹状細胞は、少なくともＣＤ４５＋、ＨＬＡ−ＤＲ＋、ＣＤ１４−、ＣＤ１１ｃ＋、およびＢＤＣＡ１＋である（ＤＣ１細胞とも称される）。一実施形態では、樹状細胞は、ＣＤ４５＋、ＨＬＡ−ＤＲ＋、ＣＤ１４−、ＣＤ１１ｃ＋、およびＢＤＣＡ３＋ではない（ＤＣ２細胞とも称される）。一実施形態では、ＣＤ４５＋、ＨＬＡ−ＤＲ＋、ＣＤ１４−、ＣＤ１１ｃ＋、およびＢＤＣＡ３＋である樹状細胞は骨髄細胞である。
【０１５４】
いくつかの実施形態では、骨髄細胞は腫瘍関連マクロファージである。いくつかの実施形態では、例えばヒトでは、腫瘍関連マクロファージは、少なくともＣＤ４５＋、ＨＬＡ−ＤＲ＋、ＣＤ１４＋である。いくつかの態様では、腫瘍関連マクロファージは、少なくともＣＤ４５＋、ＨＬＡ−ＤＲ＋、ＣＤ１４＋、ＣＤ１１ｂ＋である。いくつかの態様では、腫瘍関連マクロファージは、少なくともＣＤ４５＋、ＨＬＡ−ＤＲ＋、ＣＤ１４＋、ＣＤ１１ｃ＋である。いくつかの態様では、腫瘍関連マクロファージは、少なくともＣＤ４５＋、ＨＬＡ−ＤＲ＋、ＣＤ１４＋、ＢＤＣＡ３−である。いくつかの態様では、腫瘍関連マクロファージは、少なくともＣＤ４５＋、ＨＬＡ−ＤＲ＋、ＣＤ１４＋、ＢＤＣＡ３−、ＣＤ１１ｂ＋である。いくつかの態様では、腫瘍関連マクロファージは、少なくともＣＤ４５＋、ＨＬＡ−ＤＲ＋、ＣＤ１４＋、ＢＤＣＡ３−、ＣＤ１１ｃ＋である。いくつかの態様では、腫瘍関連マクロファージは、少なくともＣＤ４５＋、ＨＬＡ−ＤＲ＋、ＣＤ１４＋、ＣＤ１１ｂ＋、およびＣＤ１１ｃ＋である。いくつかの態様では、腫瘍関連マクロファージは、少なくともＣＤ４５＋、ＨＬＡ−ＤＲ＋、ＣＤ１４＋、ＢＤＣＡ３−、ＣＤ１１ｂ＋、およびＣＤ１１ｃ＋である。
【０１５５】
いくつかの実施形態では、本発明の方法および組成物は、他の哺乳動物、例えばマウスのＴＡＭおよびＤＣを標的化するのに有用である。一実施形態では、例えばマウスでは、腫瘍関連マクロファージは、少なくともＣＤ４５＋、ＨＬＡ−ＤＲ＋、ＣＤ１４＋、ＣＤ１１ｂ高、およびＣＤ１１ｃ低（ＴＡＭ１とも称される）である。一実施形態では、例えばマウスでは、腫瘍関連マクロファージは、少なくともＣＤ４５＋、ＨＬＡ−ＤＲ＋、ＣＤ１４＋、ＣＤ１１ｂ低、およびＣＤ１１ｃ高（ＴＡＭ２とも称される）である。本明細書で使用される「ＣＤ１１ｂ高マクロファージ」という用語は、高レベルのＣＤ１１ｂを発現するマクロファージを指す。本明細書で使用される「ＣＤ１１ｂ低マクロファージ」という用語は、ＣＤ１１ｂ高マクロファージのレベルよりも実質的に低いＣＤ１１ｂのレベルを表面上で発現するマクロファージに関する。本明細書で使用される「ＣＤ１１ｃ高」という用語は、高レベルのＣＤ１１ｃを発現するマクロファージに関する。本明細書で使用される「ＣＤ１１ｃ低マクロファージ」という用語は、ＣＤ１１ｃ高マクロファージのレベルよりも実質的に低いＣＤ１１ｃのレベルをその表面上に発現するマクロファージに関する。
【０１５６】
いくつかの実施形態では、本発明の骨髄細胞は、ＴＡＭおよびＤＣ１細胞のうちの１つ以上を含む。
【０１５７】
いくつかの実施形態では、例えばマウスでは、本発明の骨髄細胞は、ＴＡＭ１、ＴＡＭ２、およびＤＣ１細胞のうちの１つ以上を含む。
【０１５８】
いくつかの実施形態では、骨髄細胞は、腫瘍病変の縁部内または形質転換された腫瘍管内に局在し、同系のＴ細胞と接触する。一実施形態では、骨髄細胞の局在化が改変され、その結果、細胞は、もはや腫瘍縁部に局在化されないか、またはもはやＴ細胞と接触しない。
【０１５９】
いくつかの実施形態では、骨髄細胞は、刺激性骨髄細胞および非刺激性骨髄細胞を含む免疫細胞の集団内にある。いくつかの実施形態では、非刺激性骨髄細胞は、非刺激性骨髄細胞のみを含む免疫細胞の集団内にある。本発明の免疫細胞の集団は、純粋、均質、不均質で、様々な供給源（例えば、疾患組織、腫瘍組織、健康組織、細胞バンク）に由来し、一次細胞培養で維持、不死化培養で維持、および／またはエキソビボ培養で維持され得る。
【０１６０】
いくつかの実施形態では、非刺激性骨髄細胞は、ＣＤ４５＋、ＨＬＡ−ＤＲ＋、ＣＤ１４−、ＣＤ１１ｃ＋、およびＢＤＣＡ１＋である。いくつかの実施形態では、非刺激性骨髄細胞は、ＣＤ４５＋、ＨＬＡ−ＤＲ＋、ＣＤ１４−、ＣＤ１１ｃ＋、およびＢＤＣＡ１＋である細胞を含む。いくつかの実施形態では、非刺激性骨髄細胞は、ＣＤ４５＋、ＨＬＡ−ＤＲ＋、ＣＤ１４−、ＣＤ１１ｃ＋、およびＢＤＣＡ１＋からなる。いくつかの実施形態では、非刺激性骨髄細胞は、ＣＤ４５＋、ＨＬＡ−ＤＲ＋、ＣＤ１４−、ＣＤ１１ｃ＋、およびＢＤＣＡ１＋である細胞から本質的になる。
【０１６１】
いくつかの実施形態では、非刺激性骨髄細胞は、ＣＤ４５＋、ＨＬＡ−ＤＲ＋、ＣＤ１４＋、ＢＤＣＡ３−である。いくつかの実施形態では、非刺激性骨髄細胞は、ＣＤ４５＋、ＨＬＡ−ＤＲ＋、ＣＤ１４＋、およびＢＤＣＡ３−である細胞を含む。いくつかの実施形態では、非刺激性骨髄細胞は、ＣＤ４５＋、ＨＬＡ−ＤＲ＋、ＣＤ１４＋、およびＢＤＣＡ３−である細胞からなる。いくつかの実施形態では、非刺激性骨髄細胞は、ＣＤ４５＋、ＨＬＡ−ＤＲ＋、ＣＤ１４＋、およびＢＤＣＡ３−である細胞から本質的になる。
【０１６２】
いくつかの実施形態では、非刺激性骨髄細胞は、ＣＤ４５＋、ＨＬＡ−ＤＲ＋、ＣＤ１４＋、ＣＤ１１ｂ＋である。いくつかの実施形態では、非刺激性骨髄細胞は、ＣＤ４５＋、ＨＬＡ−ＤＲ＋、ＣＤ１４＋、およびＣＤ１１ｂ＋である細胞を含む。いくつかの実施形態では、非刺激性骨髄細胞は、ＣＤ４５＋、ＨＬＡ−ＤＲ＋、ＣＤ１４＋、およびＣＤ１１ｂ＋である細胞からなる。いくつかの実施形態では、非刺激性骨髄細胞は、ＣＤ４５＋、ＨＬＡ−ＤＲ＋、ＣＤ１４＋、およびＣＤ１１ｂ＋である細胞から本質的になる。
【０１６３】
いくつかの実施形態では、非刺激性骨髄細胞は、ＣＤ４５＋、ＨＬＡ−ＤＲ＋、ＣＤ１４＋、ＣＤ１１ｃ＋である。いくつかの実施形態では、非刺激性骨髄細胞は、ＣＤ４５＋、ＨＬＡ−ＤＲ＋、ＣＤ１４＋、およびＣＤ１１ｃ＋である細胞を含む。いくつかの実施形態では、非刺激性骨髄細胞は、ＣＤ４５＋、ＨＬＡ−ＤＲ＋、ＣＤ１４＋、およびＣＤ１１ｃ＋である細胞からなる。いくつかの実施形態では、非刺激性骨髄細胞は、ＣＤ４５＋、ＨＬＡ−ＤＲ＋、ＣＤ１４＋、およびＣＤ１１ｃ＋である細胞から本質的になる。
【０１６４】
いくつかの実施形態では、非刺激性骨髄細胞は、ＣＤ４５＋、ＨＬＡ−ＤＲ＋、ＣＤ１４＋、ＢＤＣＡ３−、およびＣＤ１１ｃ＋である。いくつかの実施形態では、非刺激性骨髄細胞は、ＣＤ４５＋、ＨＬＡ−ＤＲ＋、ＣＤ１４＋、ＢＤＣＡ３−、およびＣＤ１１ｃ＋である細胞を含む。いくつかの実施形態では、非刺激性骨髄細胞は、ＣＤ４５＋、ＨＬＡ−ＤＲ＋、ＣＤ１４＋、ＢＤＣＡ３−、およびＣＤ１１ｃ＋からなる。いくつかの実施形態では、非刺激性骨髄細胞は、ＣＤ４５＋、ＨＬＡ−ＤＲ＋、ＣＤ１４＋、ＢＤＣＡ３−、およびＣＤ１１ｃ＋である細胞から本質的になる。
【０１６５】
いくつかの実施形態では、非刺激性骨髄細胞は、ＣＤ４５＋、ＨＬＡ−ＤＲ＋、ＣＤ１４＋、ＢＤＣＡ３−、ＣＤ１１ｂ＋である。いくつかの実施形態では、非刺激性骨髄細胞は、ＣＤ４５＋、ＨＬＡ−ＤＲ＋、ＣＤ１４＋、ＢＤＣＡ３−、ＣＤ１１ｂ＋である細胞を含む。いくつかの実施形態では、非刺激性骨髄細胞は、ＣＤ４５＋、ＨＬＡ−ＤＲ＋、ＣＤ１４＋、ＢＤＣＡ３−、ＣＤ１１ｂ＋からなる。いくつかの実施形態では、非刺激性骨髄細胞は、ＣＤ４５＋、ＨＬＡ−ＤＲ＋、ＣＤ１４＋、ＢＤＣＡ３−、ＣＤ１１ｂ＋である細胞から本質的になる。
【０１６６】
いくつかの実施形態では、非刺激性骨髄細胞は、ＣＤ４５＋、ＨＬＡ−ＤＲ＋、ＣＤ１４＋、ＣＤ１１ｂ＋、およびＣＤ１１ｃ＋である。いくつかの実施形態では、非刺激性骨髄細胞は、ＣＤ４５＋、ＨＬＡ−ＤＲ＋、ＣＤ１４＋、ＣＤ１１ｂ＋、およびＣＤ１１ｃ＋である細胞を含む。いくつかの実施形態では、非刺激性骨髄細胞は、ＣＤ４５＋、ＨＬＡ−ＤＲ＋、ＣＤ１４＋、ＣＤ１１ｂ＋、およびＣＤ１１ｃ＋からなる。いくつかの実施形態では、非刺激性骨髄細胞は、ＣＤ４５＋、ＨＬＡ−ＤＲ＋、ＣＤ１４＋、ＣＤ１１ｂ＋、およびＣＤ１１ｃ＋である細胞から本質的になる。
【０１６７】
いくつかの実施形態では、非刺激性骨髄細胞は、ＣＤ４５＋、ＨＬＡ−ＤＲ＋、ＣＤ１４＋、ＢＤＣＡ３−、ＣＤ１１ｂ＋、およびＣＤ１１ｃ＋である。いくつかの実施形態では、非刺激性骨髄細胞は、ＣＤ４５＋、ＨＬＡ−ＤＲ＋、ＣＤ１４＋、ＢＤＣＡ３−、ＣＤ１１ｂ＋、およびＣＤ１１ｃ＋である細胞を含む。いくつかの実施形態では、非刺激性骨髄細胞は、ＣＤ４５＋、ＨＬＡ−ＤＲ＋、ＣＤ１４＋、ＢＤＣＡ３−、ＣＤ１１ｂ＋、およびＣＤ１１ｃ＋である細胞からなる。いくつかの実施形態では、非刺激性骨髄細胞は、ＣＤ４５＋、ＨＬＡ−ＤＲ＋、ＣＤ１４＋、ＢＤＣＡ３−、ＣＤ１１ｂ＋、およびＣＤ１１ｃ＋である細胞から本質的になる。
【０１６８】
いくつかの実施形態では、非刺激性骨髄細胞は、ＣＤ４５＋、ＨＬＡ−ＤＲ＋、ＣＤ１４−、ＣＤ１１ｃ＋、およびＢＤＣＡ３＋ではない。いくつかの実施形態では、非刺激性骨髄細胞は、ＣＤ４５＋、ＨＬＡ−ＤＲ＋、ＣＤ１４−、ＣＤ１１ｃ＋、およびＢＤＣＡ３＋ではない細胞を含む。
【０１６９】
いくつかの実施形態では、例えばマウスでは、非刺激性骨髄細胞は、ＣＤ４５＋、ＨＬＡ−ＤＲ＋、ＣＤ１４＋、ＣＤ１１ｂ高、およびＣＤ１１ｃ低である。いくつかの実施形態では、例えばマウスでは、非刺激性骨髄細胞は、ＣＤ４５＋、ＨＬＡ−ＤＲ＋、ＣＤ１４＋、ＣＤ１１ｂ高、およびＣＤ１１ｃ低である細胞を含む。いくつかの実施形態では、例えばマウスでは、非刺激性骨髄細胞は、ＣＤ４５＋、ＨＬＡ−ＤＲ＋、ＣＤ１４＋、ＣＤ１１ｂ高、およびＣＤ１１ｃ低である細胞からなる。いくつかの実施形態では、例えばマウスでは、非刺激性骨髄細胞は、ＣＤ４５＋、ＨＬＡ−ＤＲ＋、ＣＤ１４＋、ＣＤ１１ｂ高、およびＣＤ１１ｃ低である細胞から本質的になる。
【０１７０】
いくつかの実施形態では、例えばマウスでは、非刺激性骨髄細胞は、ＣＤ４５＋、ＨＬＡ−ＤＲ＋、ＣＤ１４＋、ＣＤ１１ｂ低、およびＣＤ１１ｃ高である。いくつかの実施形態では、例えばマウスでは、非刺激性骨髄細胞は、ＣＤ４５＋、ＨＬＡ−ＤＲ＋、ＣＤ１４＋、ＣＤ１１ｂ低、およびＣＤ１１ｃ高である細胞を含む。いくつかの実施形態では、例えばマウスでは、非刺激性骨髄細胞は、ＣＤ４５＋、ＨＬＡ−ＤＲ＋、ＣＤ１４＋、ＣＤ１１ｂ低、およびＣＤ１１ｃ高である細胞からなる。いくつかの実施形態では、例えばマウスでは、非刺激性骨髄細胞は、ＣＤ４５＋、ＨＬＡ−ＤＲ＋、ＣＤ１４＋、ＣＤ１１ｂ低、およびＣＤ１１ｃ高である細胞から本質的になる。
【０１７１】
いくつかの実施形態では、骨髄細胞は、ＣＤ４５＋、ＨＬＡ−ＤＲ−、およびＣＤ１５＋である。いくつかの実施形態では、骨髄細胞は、ＣＤ４５＋、ＨＬＡ−ＤＲ−、およびＣＤ１５＋である細胞を含む。いくつかの実施形態では、骨髄細胞は、ＣＤ４５＋、ＨＬＡ−ＤＲ−、およびＣＤ１５＋である細胞からなる。いくつかの実施形態では、骨髄細胞は、ＣＤ４５＋、ＨＬＡ−ＤＲ−、およびＣＤ１５＋である細胞から本質的になる。
【０１７２】
いくつかの実施形態では、骨髄細胞は、ＣＤ４５＋、ＨＬＡ−ＤＲ−、ＣＤ１６＋、ＣＤ５６−、ＮＫｐ４４−、ＮＫｐ３０−、ＮＫｐ４６−、ＮＫｐ８０−である。いくつかの実施形態では、骨髄細胞は、ＣＤ４５＋、ＨＬＡ−ＤＲ−、ＣＤ１６＋、ＣＤ５６−、ＮＫｐ４４−、ＮＫｐ３０−、ＮＫｐ４６−、ＮＫｐ８０−である細胞を含む。いくつかの実施形態では、骨髄細胞は、ＣＤ４５＋、ＨＬＡ−ＤＲ−、ＣＤ１６＋、ＣＤ５６−、ＮＫｐ４４−、ＮＫｐ３０−、ＮＫｐ４６−、ＮＫｐ８０−である細胞からなる。いくつかの実施形態では、骨髄細胞は、ＣＤ４５＋、ＨＬＡ−ＤＲ−、ＣＤ１６＋、ＣＤ５６−、ＮＫｐ４４−、ＮＫｐ３０−、ＮＫｐ４６−、ＮＫｐ８０−である細胞から本質的になる。
【０１７３】
いくつかの実施形態では、骨髄細胞は、ＣＤ４５＋、ＨＬＡ−ＤＲ−、ＣＤ１４＋である。いくつかの実施形態では、骨髄細胞は、ＣＤ４５＋、ＨＬＡ−ＤＲ−、ＣＤ１４＋である細胞を含む。いくつかの実施形態では、骨髄細胞は、ＣＤ４５＋、ＨＬＡ−ＤＲ−、ＣＤ１４＋である細胞からなる。いくつかの実施形態では、骨髄細胞は、ＣＤ４５＋、ＨＬＡ−ＤＲ−、ＣＤ１４＋である細胞から本質的になる。
【０１７４】
いくつかの実施形態では、骨髄細胞は、ＣＤ４５＋、ＨＬＡ−ＤＲ＋、ＣＤ１４＋である。いくつかの実施形態では、骨髄細胞は、ＣＤ４５＋、ＨＬＡ−ＤＲ＋、ＣＤ１４＋である細胞を含む。いくつかの実施形態では、骨髄細胞は、ＣＤ４５＋、ＨＬＡ−ＤＲ＋、ＣＤ１４＋である細胞からなる。いくつかの実施形態では、骨髄細胞は、ＣＤ４５＋、ＨＬＡ−ＤＲ＋、ＣＤ１４＋である細胞から本質的になる。
【０１７５】
いくつかの実施形態では、骨髄細胞は、ＣＤ４５＋、ＨＬＡ−ＤＲ＋、ＣＤ１６＋、ＣＤ５６−、ＮＫｐ４４−、ＮＫｐ３０−、ＮＫｐ４６−、ＮＫｐ８０−である。いくつかの実施形態では、骨髄細胞は、ＣＤ４５＋、ＨＬＡ−ＤＲ＋、ＣＤ１６＋、ＣＤ５６−、ＮＫｐ４４−、ＮＫｐ３０−、ＮＫｐ４６−、ＮＫｐ８０−である細胞を含む。いくつかの実施形態では、骨髄細胞は、ＣＤ４５＋、ＨＬＡ−ＤＲ＋、ＣＤ１６＋、ＣＤ５６−、ＮＫｐ４４−、ＮＫｐ３０−、ＮＫｐ４６−、ＮＫｐ８０−である細胞からなる。いくつかの実施形態では、骨髄細胞は、ＣＤ４５＋、ＨＬＡ−ＤＲ＋、ＣＤ１６＋、ＣＤ５６−、ＮＫｐ４４−、ＮＫｐ３０−、ＮＫｐ４６−、ＮＫｐ８０−である細胞から本質的になる。
【０１７６】
いくつかの実施形態では、骨髄細胞は、ＣＤ４５＋、ＨＬＡ−ＤＲ＋、ＣＤ１４＋、ＣＤ１６＋である。いくつかの実施形態では、骨髄細胞は、ＣＤ４５＋、ＨＬＡ−ＤＲ＋、ＣＤ１４＋、ＣＤ１６＋である細胞を含む。いくつかの実施形態では、骨髄細胞は、ＣＤ４５＋、ＨＬＡ−ＤＲ＋、ＣＤ１４＋、およびＣＤ１６＋である細胞からなる。いくつかの実施形態では、骨髄細胞は、ＣＤ４５＋、ＨＬＡ−ＤＲ＋、ＣＤ１４＋、およびＣＤ１６＋である細胞から本質的になる。
【０１７７】
いくつかの実施形態では、骨髄細胞ＣＤ４５＋、ＨＬＡ−ＤＲ−、ＣＤ６６ｂ＋。いくつかの実施形態では、骨髄細胞は、ＣＤ４５＋、ＨＬＡ−ＤＲ−、ＣＤ６６ｂ＋である細胞を含む。いくつかの実施形態では、骨髄細胞は、ＣＤ４５＋、ＨＬＡ−ＤＲ−、ＣＤ６６ｂ＋である細胞からなる。いくつかの実施形態では、骨髄細胞は、ＣＤ４５＋、ＨＬＡ−ＤＲ−、ＣＤ６６ｂ＋である細胞から本質的になる。
【０１７８】
いくつかの実施形態では、骨髄細胞は、ＣＤ４５＋、ＨＬＡ−ＤＲ＋、ＣＤ１４＋、ＢＤＣＡ３−、ＣＤ１１ｂ＋、ＣＤ１１ｃ＋である。いくつかの実施形態では、骨髄細胞は、ＣＤ４５＋、ＨＬＡ−ＤＲ＋、ＣＤ１４＋、ＢＤＣＡ３−、ＣＤ１１ｂ＋、ＣＤ１１ｃ＋である細胞を含む。いくつかの実施形態では、骨髄細胞は、ＣＤ４５＋、ＨＬＡ−ＤＲ＋、ＣＤ１４＋、ＢＤＣＡ３−、ＣＤ１１ｂ＋、ＣＤ１１ｃ＋である細胞からなる。いくつかの実施形態では、骨髄細胞は、ＣＤ４５＋、ＨＬＡ−ＤＲ＋、ＣＤ１４＋、ＢＤＣＡ３−、ＣＤ１１ｂ＋、ＣＤ１１ｃ＋である細胞から本質的になる。
【０１７９】
いくつかの実施形態では、骨髄細胞は、ＣＤ４５＋、ＣＤ１４＋、ＨＬＡ−ＤＲ＋、ＣＤ６８高、ＣＤ２０−である。いくつかの実施形態では、骨髄細胞は、ＣＤ４５＋、ＣＤ１４＋、ＨＬＡ−ＤＲ＋、ＣＤ６８高、ＣＤ２０−である細胞を含む。いくつかの実施形態では、骨髄細胞は、ＣＤ４５＋、ＣＤ１４＋、ＨＬＡ−ＤＲ＋、ＣＤ６８高、ＣＤ２０−である細胞からなる。いくつかの実施形態では、骨髄細胞は、ＣＤ４５＋、ＣＤ１４＋、ＨＬＡ−ＤＲ＋、ＣＤ６８高、ＣＤ２０−である細胞から本質的になる。
【０１８０】
いくつかの実施形態では、骨髄細胞は、ＣＤ４５＋、ＨＬＡ−ＤＲ＋、ＣＤ１４−、ＣＤ１１ｃ＋、ＢＤＣＡ１＋である。いくつかの実施形態では、骨髄細胞は、ＣＤ４５＋、ＨＬＡ−ＤＲ＋、ＣＤ１４−、ＣＤ１１ｃ＋、ＢＤＣＡ１＋である細胞を含む。いくつかの実施形態では、骨髄細胞は、ＣＤ４５＋、ＨＬＡ−ＤＲ＋、ＣＤ１４−、ＣＤ１１ｃ＋、ＢＤＣＡ１＋である細胞からなる。いくつかの実施形態では、骨髄細胞は、ＣＤ４５＋、ＨＬＡ−ＤＲ＋、ＣＤ１４−、ＣＤ１１ｃ＋、ＢＤＣＡ１＋である細胞から本質的になる。
【０１８１】
いくつかの実施形態では、骨髄細胞は癌組織内にある。いくつかの実施形態では、免疫細胞の集団は癌組織内にある。いくつかの実施形態では、非刺激性細胞および刺激性骨髄細胞は、癌組織内にある。いくつかの実施形態では、生体試料は、非刺激性骨髄細胞および刺激性骨髄細胞を含む免疫細胞の集団を含む。
【０１８２】
６．３．ＴＲＥＭ１抗体で骨髄細胞を死滅、無能化、または枯渇させる方法
いくつかの実施形態では、抗体は、抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）活性を有する。ＡＤＣＣは、抗体が病原性または腫瘍形成性の標的細胞の表面上の抗原に結合するときに発生することができる。細胞傷害性Ｔ細胞、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、マクロファージ、好中球、好酸球、樹状細胞、単球など、それらの細胞表面上にＦｃガンマ受容体（ＦｃγＲまたはＦＣＧＲ）を有するエフェクタ細胞は、標的細胞に結合した抗体のＦｃ領域を認識し、それに結合する。そのような結合は、細胞死につながる細胞内シグナル伝達経路の活性化をトリガーすることができる。特定の実施形態では、抗体の免疫グロブリンＦｃ領域サブタイプ（アイソタイプ）としては、ヒトＩｇＧ１およびＩｇＧ３が挙げられる。本明細書で使用される場合、ＡＤＣＣは、Ｆｃ受容体（ＦｃＲ）（例えば、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、好中球、およびマクロファージ）を発現する非特異性細胞傷害性細胞が、標的細胞上の結合抗体を認識し、その後、標的細胞の細胞溶解を引き起こす細胞媒介性反応を指す。ＡＤＣＣを媒介するための一次細胞であるＮＫ細胞はＦｃγＲＩＩＩのみを発現するが、単球はＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩ、およびＦｃγＲＩＩＩを発現する。要約すると、造血細胞でのＦｃＲ発現は、Ｒａｖｅｔｃｈ  ａｎｄ  Ｋｉｎｅｔ，Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ  ９：４５７−９２（１９９１）の４６４ページの表３である。対象の分子のＡＤＣＣ活性を評価するために、米国特許第５，５００，３６２号または同第５，８２１，３３７号に記載されているようなインビトロＡＤＣＣアッセイが実行され得る。そのようなアッセイに有用なエフェクタ細胞としては、末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）およびナチュラルキラー（ＮＫ）細胞が挙げられる。あるいは、またはさらに、対象の分子のＡＤＣＣ活性は、例えば、Ｃｌｙｎｅｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．（ＵＳＡ）９５：６５２−６５６（１９９８）に開示されているような動物モデルでは、インビボで評価され得る。
【０１８３】
いくつかの実施形態では、抗体は、補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）活性を有する。抗体誘発ＣＤＣは、古典的な補体カスケードのタンパク質を介して媒介され、補体タンパク質Ｃｌｑの抗体への結合によってトリガーされる。Ｃｌｑに結合する抗体Ｆｃ領域は、補体カスケードの活性化を誘発することができる。特定の実施形態では、抗体の免疫グロブリンＦｃ領域サブタイプ（アイソタイプ）としては、ヒトＩｇＧ１およびＩｇＧ３が挙げられる。本明細書で使用される場合、ＣＤＣは、補体の存在下で標的を溶解する分子の能力を指す。補体活性化経路は、補体系の最初の成分（Ｃ１ｑ）が、同族抗原と複合体を形成した分子（例えば、ポリペプチド（例えば、抗体））に結合することによって開始される。補体活性化を評価するために、ＣＤＣアッセイ、例えば、Ｇａｚｚａｎｏ−Ｓａｎｔｏｒｏ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ  ２０２：１６３（１９９６）に記載されるものが実行され得る。
【０１８４】
いくつかの実施形態では、抗体は抗体依存性細胞食作用（ＡＤＣＰ）活性を有する。ＡＤＣＰは、抗体が病原性または腫瘍形成性の標的細胞の表面上の抗原に結合するときに発生することができる。単球やマクロファージを含む、細胞表面上にＦｃ受容体を持つ貪食細胞は、標的細胞に結合した抗体のＦｃ領域を認識して、それに結合する。Ｆｃ受容体が抗体結合標的細胞に結合すると、標的細胞の食作用を開始することができる。
【０１８５】
いくつかの実施形態では、抗体は受容体リガンド遮断活性を有する。同族リガンドまたはアゴニストが受容体に結合してそれを活性化できないように、抗体が受容体に結合するときに、受容体リガンド遮断活性が生じる。抗体は、受容体上の活性部位または受容体上のアロステリック部位に結合することによって、受容体を遮断し得る。
【０１８６】
いくつかの実施形態では、抗体は免疫複合体を形成することができる。例えば、免疫複合体は、抗体で覆われた腫瘍細胞であり得る。
【０１８７】
一態様では、本出願は、非刺激性骨髄細胞を、骨髄細胞上に発現する抗トリガー受容体１（ＴＲＥＭ１）抗体と接触させ、それにより非刺激性骨髄細胞の無能化をもたらす方法を提供する。
【０１８８】
いくつかの実施形態では、非刺激細胞は、ＤＣ１細胞およびＴＡＭ細胞のうちの１つ以上である。
【０１８９】
いくつかの実施形態では、本出願は、非刺激性骨髄細胞を無能化させる方法であって、非刺激性骨髄細胞をＴＲＥＭ１抗体と接触させ、それにより非刺激性骨髄細胞を死滅させることを含む方法を提供する。無能化とは、細胞を部分的または完全に機能しないようにすることである。いくつかの実施形態では、非刺激性骨髄細胞の無能化は、細胞における成長停止を誘発することをもたらす。いくつかの実施形態では、非刺激性骨髄細胞の無能化は、細胞におけるアポトーシスをもたらす。いくつかの実施形態では、非補体細胞の無能化は、例えば、補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）または抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）による細胞の溶解をもたらす。いくつかの実施形態では、非刺激性骨髄細胞の無能化は、細胞のネクローシスをもたらす。いくつかの実施形態では、非刺激性骨髄細胞の無能化は、細胞における成長停止を誘発することをもたらす。いくつかの実施形態では、非刺激性骨髄細胞の無能化は、細胞を不活性化することをもたらす。いくつかの実施形態では、非刺激性骨髄細胞の無能化は、細胞内のＴＲＥＭ１の活性を中和することをもたらす。いくつかの実施形態では、非刺激性骨髄細胞の無能化は、細胞の増殖の減少をもたらす。いくつかの実施形態では、非刺激性骨髄細胞の無能化は、細胞の分化をもたらす。いくつかの実施形態では、非刺激性骨髄細胞の無能化は、阻害性抗原提示細胞として作用する細胞の能力の低下をもたらし、または活性化抗原提示細胞として作用する細胞の能力の増大をもたらす。いくつかの実施形態では、非刺激性骨髄細胞の無能化は、腫瘍組織または腫瘍微小環境（ＴＭＥ）内の細胞の誤局在化をもたらす。いくつかの実施形態では、非刺激性骨髄細胞の無能化は、腫瘍組織または腫瘍微小環境内の細胞の空間的構成の変化をもたらす。いくつかの実施形態では、非刺激性骨髄細胞の無能化は、腫瘍組織またはＴＭＥ内の細胞の経時的発現の変化をもたらす。いくつかの実施形態では、この方法は、非刺激性骨髄細胞を除去することをさらに含む。
【０１９０】
本明細書に記載の非刺激性骨髄細胞を無能化させることのありとあらゆる態様では、特性（複数可）または機能（複数可）の態様のいずれの増加または減少または変更も、抗ＴＲＥＭ１抗体と接触していない細胞と比較したものである。
【０１９１】
別の態様では、本出願は、非刺激性骨髄細胞を、骨髄細胞上に発現する抗トリガー受容体１（ＴＲＥＭ１）抗体と接触させ、それにより非刺激性骨髄細胞の機能の調節をもたらす方法を提供する。調節は、次のうちのいずれか１つ以上であり得る。いくつかの実施形態では、非刺激細胞は、ＤＣ１細胞、ＴＡＭ１細胞、およびＴＡＭ２細胞のうちの１つ以上である。いくつかの実施形態では、機能の調節は、非刺激性骨髄細胞の無能化をもたらす。いくつかの実施形態では、非刺激性骨髄細胞の機能の調節は、例えば、非刺激性細胞が交差して、ＭＨＣＩ分子上の腫瘍抗原をナイーブＣＤ８＋Ｔ細胞に提示する能力を増加させることによって、天然および活性化ＣＤ８＋Ｔ細胞の両方を刺激する細胞の能力の増加をもたらす。いくつかの実施形態では、調節は、例えば、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）シグナル伝達、Ｔ細胞増殖、またはＴ細胞サイトカイン産生をトリガーする細胞の能力を含む、非刺激性骨髄細胞のＴ細胞刺激機能を増加させる。一実施形態では、非刺激性細胞の生存が減少するか、または非刺激性細胞の増殖が減少する。一実施形態では、刺激性骨髄細胞の非刺激性骨髄細胞に対する比率が増加する。
【０１９２】
本明細書に記載の非刺激性骨髄細胞の機能を減少させることのありとあらゆる態様では、特性（複数可）または機能（複数可）の態様のいずれの増加または減少または変更も、抗ＴＲＥＭ１抗体と接触していない細胞と比較したものである。
【０１９３】
いくつかの実施形態では、本出願は、非刺激性骨髄細胞を死滅（細胞死の誘発とも称される）させる方法であって、非刺激性骨髄細胞を、骨髄細胞上に発現する抗トリガー受容体１（ＴＲＥＭ１）抗体と接触させ、それにより非刺激性骨髄細胞を死滅させることを含む、方法を提供する。いくつかの態様では、死滅は、抗ＴＲＥＭ１抗体と接触していない非刺激性骨髄細胞と比較して増加している。いくつかの実施形態では、接触させることは、非刺激性骨髄細胞のアポトーシスを誘発する。いくつかの実施形態では、接触させることは、非刺激性骨髄細胞のアポトーシスを誘発する。いくつかの実施形態では、非刺激性骨髄細胞は、非刺激性骨髄細胞および刺激性骨髄細胞を含む免疫細胞の集団内にある。いくつかの実施形態では、この方法は、非刺激性骨髄細胞を除去することをさらに含む。いくつかの実施形態では、細胞の１０％〜８０％が死滅する。いくつかの実施形態では、細胞の少なくとも１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、または８０％が死滅する。
【０１９４】
いくつかの実施形態では、本出願は、刺激性骨髄細胞および非刺激性骨髄細胞を含む免疫細胞の集団において、刺激性骨髄細胞の非刺激性骨髄細胞に対する比率を増加させる方法であって、免疫細胞の集団を抗ＴＲＥＭ１抗体と接触させることを含む、方法を提供する。いくつかの実施形態では、比率は、抗ＴＲＥＭ１抗体と接触していない細胞の集団と比較して増加している。いくつかの実施形態では、ＤＣ２細胞のＤＣ１細胞に対する比率が増加する。いくつかの実施形態では、ＤＣ２細胞のＴＡＭ１細胞に対する比率が増加する。いくつかの実施形態では、ＤＣ２細胞のＴＡＭ２細胞に対する比率が増加する。いくつかの実施形態では、ＤＣ２細胞のＴＡＭ１＋ＴＡＭ２細胞に対する比率が増加する。いくつかの実施形態では、ＤＣ２細胞のＴＡＭ１＋ＤＣ１細胞に対する比率が増加する。いくつかの実施形態では、ＤＣ２細胞のＤＣ１＋ＴＡＭ２細胞に対する比率が増加する。いくつかの実施形態では、ＤＣ２細胞のＤＣ１＋ＴＡＭ１＋ＴＡＭ２細胞に対する比率が増加する。いくつかの実施形態では、少なくとも比率は１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、または１００％だけ増加する。
【０１９５】
いくつかの実施形態では、接触前の刺激性骨髄細胞と非刺激性骨髄細胞との比率は、０．００１：１〜０．１：１の範囲である。いくつかの実施形態では、接触後の刺激性骨髄細胞と非刺激性骨髄細胞との比率は、０．１：１〜１００：１の範囲である。
【０１９６】
いくつかの実施形態では、非刺激性骨髄細胞の数が減る。いくつかの実施形態では、刺激性骨髄細胞はＤＣ２細胞である。いくつかの実施形態では、非刺激性骨髄細胞は、例えばネクローシスまたはアポトーシスによって死滅する。いくつかの実施形態では、非刺激性骨髄細胞は、成長停止を受けるように誘発される。いくつかの実施形態では、非刺激性骨髄細胞はもはや増殖しない。いくつかの実施形態では、非刺激性骨髄細胞の空間的局在化が変更され、ＴＭＥの特定の領域で比率が増加する。いくつかの実施形態では、非刺激性骨髄細胞の経時的発現が変化し、腫瘍の発達中の特定の時間中に比率が増加する。
【０１９７】
いくつかの実施形態では、接触させることはインビトロである。いくつかの実施形態では、接触させることはインビボである。いくつかの特定の実施形態では、接触させることはヒトのインビボである。いくつかの態様では、接触させることは、抗ＴＲＥＭ１抗体を投与することによってもたらされる。いくつかの実施形態では、抗体を受け取る個体（ヒトなど）は癌を有する。
【０１９８】
別の態様では、本発明は、個体内の免疫関連状態（例えば、癌）を治療する方法であって、抗ＴＲＥＭ１抗体を含む有効量の組成物を個体に投与することを含む方法を提供する。別の態様では、本発明は、個体内の免疫応答を増強する方法であって、抗ＴＲＥＭ１抗体を含む有効量の組成物を個体に投与することを含む方法を提供する。いくつかの実施形態では、これらの方法は、ＰＤＬ阻害療法、ＣＴＬＡ４阻害療法、Ｔ細胞上の阻害性分子が阻害される一般的なチェックポイント阻害療法、養子Ｔ細胞療法、ＣＡＲ  Ｔ細胞療法、樹状細胞または他の細胞療法、ならびに従来の化学療法などの他の共療法と組み合わせて、さらに提供される。
【０１９９】
いくつかの実施形態では、この方法は、個体からの生体試料中のＴＲＥＭ１の発現レベルを決定することをさらに含む。いくつかの実施形態では、生体試料としては、体液、組織試料、臓器試料、尿、糞便、血液、唾液、ＣＳＦ、およびそれらの任意の組み合わせが挙げられるが、これらに限定されない。いくつかの実施形態では、生体試料は腫瘍組織に由来する。いくつかの実施形態では、ＴＲＥＭ１の発現レベルは、ＴＲＥＭ１のｍＲＮＡ発現レベルを含む。いくつかの実施形態では、ＴＲＥＭ１の発現レベルは、ＴＲＥＭ１のタンパク質発現レベルを含む。いくつかの実施形態では、ＴＲＥＭ１の発現レベルは、ＦＡＣＳ、ウエスタンブロット、ＥＬＩＳＡ、免疫沈降、免疫組織化学、免疫蛍光、ラジオイムノアッセイ、ドットブロッティング、免疫検出方法、ＨＰＬＣ、表面プラズモン共鳴、光学分光法、質量分析法、ＨＰＬＣ、ｑＰＣＲ、ＲＴ−ｑＰＣＲ、マルチプレックスｑＰＣＲまたはＲＴ−ｑＰＣＲ、ＲＮＡ−ｓｅｑ、マイクロアレイ分析、ＳＡＧＥ、ＭａｓｓＡＲＲＡＹ技法、およびＦＩＳＨ、およびそれらの組み合わせからなる群から選択される方法を使用して、試料において検出される。
【０２００】
別の態様では、本出願は、概して、非刺激性骨髄細胞の存在または非存在を決定するための方法、または特定の非刺激性骨髄細胞（例えば、ＤＣ１細胞、ＴＡＭ１細胞、および／またはＴＡＭ２細胞）の存在または非存在を決定するための方法であって、非刺激性骨髄細胞を含む細胞の集団を抗ＴＲＥＭ１抗体と接触させることと、非刺激性骨髄細胞の数を定量化することとを含む、方法を提供する。別の態様では、本出願は、非刺激性骨髄細胞の存在または非存在を決定するための方法であって、非刺激性骨髄細胞および刺激性骨髄細胞を含む免疫細胞の集団を抗ＴＲＥＭ１抗体と接触させることと、抗体の細胞への結合を示す複合体または部分を検出することと、任意選択的に、集団中の非刺激性骨髄細胞の数を定量化することと、を含む、方法を提供する。別の態様では、非刺激性骨髄細胞と刺激性骨髄細胞との相対比率を決定する方法であって、非刺激性骨髄細胞および刺激性骨髄細胞を含む免疫細胞の集団を抗ＴＲＥＭ１抗体と接触させることと、刺激性骨髄細胞および非刺激性骨髄細胞の数を定量化することと、非刺激性骨髄細胞と刺激性骨髄細胞との相対比率を決定することと、を含む、方法が提供される。
【０２０１】
検出および／または定量化のために本明細書に記載される実施形態では、抗ＴＲＥＭ１抗体はＴＲＥＭ１タンパク質に結合するが、必ずしもＡＤＣＣなどの生物学的応答をもたらす必要はないが、生物学的応答に影響を及ぼし得る。
【０２０２】
別の態様では、本発明は、免疫関連状態（例えば、癌）の治療のための免疫療法（例えば、抗ＴＲＥＭ１抗体による）に応答し得る個体を同定するための方法であって、個体から生体試料中のＴＲＥＭ１の発現レベルを検出することと、ＴＲＥＭ１の発現レベルに基づいて、個体が免疫療法に応答するかどうかを決定することと、を含み、健康な個体と比較した個体のＴＲＥＭ１のレベルの上昇が、個体が免疫療法に応答し得ることを示す、方法を提供する。いくつかの実施形態では、これらの方法はまた、個体の免疫関連状態（例えば、癌）を診断するために使用され得、ＴＲＥＭ１の発現レベルに基づいており、健康な個体のレベルと比較した個体のＴＲＥＭ１のレベルの上昇は、個体が癌に罹患していることを示す。いくつかの実施形態では、ＴＲＥＭ１の発現レベルは、ＴＲＥＭ１のｍＲＮＡ発現レベルを含む。他の実施形態では、ＴＲＥＭ１の発現レベルは、ＴＲＥＭ１のタンパク質発現レベルを含む。いくつかの実施形態では、ＴＲＥＭ１の発現レベルは、ＦＡＣＳ、ウエスタンブロット、ＥＬＩＳＡ、免疫沈降、免疫組織化学、免疫蛍光、ラジオイムノアッセイ、ドットブロッティング、免疫検出方法、ＨＰＬＣ、表面プラズモン共鳴、光学分光法、質量分析法、ＨＰＬＣ、ｑＰＣＲ、ＲＴ−ｑＰＣＲ、マルチプレックスｑＰＣＲまたはＲＴ−ｑＰＣＲ、ＲＮＡ−ｓｅｑ、マイクロアレイ分析、ＳＡＧＥ、ＭａｓｓＡＲＲＡＹ技法、およびＦＩＳＨ、およびそれらの組み合わせからなる群から選択される方法を使用して、試料において検出される。これらの実施形態では、抗ＴＲＥＭ１抗体は、ＴＲＥＭ１タンパク質に結合するが、必ずしもＡＤＣＣなどの生物学的応答をもたらす必要はない。いくつかの実施形態では、生体試料は腫瘍組織に由来する。いくつかの実施形態では、生体試料としては、体液、組織試料、臓器試料、尿、糞便、血液、唾液、ＣＳＦ、およびそれらの任意の組み合わせが挙げられるが、これらに限定されない。
【０２０３】
いくつかの実施形態では、非刺激性骨髄細胞の無能化はインビトロで行われ、次のように達成される。ａ）非刺激性骨髄細胞の死滅により、ｂ）非刺激性骨髄細胞の磁気ビーズ枯渇、またはｃ）非刺激性骨髄細胞の蛍光活性化細胞選別（ＦＡＣＳ）選別。
【０２０４】
特定の実施形態では、本明細書で提供される抗体は、０．０００１ｎＭ〜１μＭの範囲の解離定数（Ｋｄ）を有する。例えば、抗体のＫｄは、約１μＭ、約１００ｎＭ、約５０ｎＭ、約１０ｎＭ、約１ｎＭ、約５００ｐＭ、約１００ｐＭ、または約５０ｐＭから、約２ｐＭ、約５ｐＭ、約１０ｐＭ、約１５ｐＭ、約２０ｐＭ、または約４０ｐＭのいずれかであり得る。
【０２０５】
６．４．ＴＲＥＭ１抗体組成物
本出願は、非刺激性骨髄細胞を無能化させる抗体を含むＴＲＥＭ１タンパク質に結合する抗体を含む、抗体および組成物を提供する。
【０２０６】
本明細書における「抗体」という用語は、最も広義の意味で使用され、モノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、少なくとも２つの完全な抗体から形成される多重特異性抗体（例えば二重特異性抗体）、抗原結合抗体断片、およびそれらが所望の生物活性を呈する限り、他の抗体断片を特に含む。「免疫グロブリン」（Ｉｇ）という用語は、本明細書の抗体と交換可能に使用される。本明細書における「抗体」という用語への言及は、抗体断片ならびに上記で言及した抗体形態を含み、かつそれらを指す。本明細書における様々な抗体特性の説明および議論は、「抗体」という用語を使用し、記載された抗体のすべての形態を指す。いくつかの実施形態では、本発明はまた、ＴＲＥＭ１および／または本明細書に記載の非刺激性骨髄細胞などのＴＲＥＭ１を発現する細胞に結合したそのような抗体の複合体も提供する。
【０２０７】
本明細書では、ＴＲＥＭ１に特異的に結合する抗体が提供される。いくつかの態様では、ＴＲＥＭ１はヒトＴＲＥＭ１である。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される抗体は、ＴＲＥＭ１の細胞外ドメインに特異的に結合する。ＴＲＥＭ１は、任意の好適な標的細胞の表面上に発現し得る。いくつかの実施形態では、標的細胞はプロフェッショナル抗原提示細胞である。いくつかの実施形態では、標的細胞はマクロファージである。抗体は、ヒトＴＲＥＭ１アイソタイプに汎特異的であり得る。抗体は、ヒトＴＲＥＭ１アイソタイプに特異的であり得る。
【０２０８】
特定の実施形態では、抗体は野生型抗ＴＲＥＭ１抗体である。特定の実施形態では、抗体は非フコシル化抗ＴＲＥＭ１抗体である。いくつかの実施形態では、抗体はマウス抗ＴＲＥＭ１抗体である。いくつかの態様では、抗体はヒト抗ＴＲＥＭ１抗体である。いくつかの実施形態では、抗体はヒト化抗ＴＲＥＭ１抗体である。
【０２０９】
いくつかの実施形態では、抗体はモノクローナル抗体である。いくつかの実施形態では、抗体はポリクローナル抗体である。いくつかの実施形態では、抗体はハイブリドーマによって産生される。他の実施形態では、抗体は、所望の可変ドメインおよび定常ドメインを発現するように操作された組み換え細胞によって産生される。いくつかの実施形態では、抗体は、抗原特異性および下部ヒンジ領域またはその変異体を保持する単鎖抗体または他の抗体誘導体であり得る。
【０２１０】
いくつかの実施形態では、抗体は、多機能抗体、組み換え抗体、ヒト抗体、ヒト化抗体、その断片または変異体であり得る。特定の実施形態では、抗体断片またはその誘導体は、Ｆａｂ断片、Ｆａｂ’２断片、ＣＤＲ、およびＳｃＦｖから選択される。
【０２１１】
いくつかの態様では、抗体は、ＴＲＥＭ１などの表面抗原に特異的である。いくつかの実施形態では、治療用抗体は、腫瘍抗原（例えば、腫瘍細胞によって特異的に発現する分子）に特異的である。特定の実施形態では、治療用抗体は、ヒトまたは非ヒト霊長類ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、またはＩｇＧ３  Ｆｃ部分を有し得る。
【０２１２】
いくつかの実施形態では、抗体はエフェクタ分子に結合またはコンジュゲートしている。特定の実施形態では、抗体は、放射性核種、細胞毒、化学療法剤、薬品、プロドラッグ、毒素、酵素、免疫調節剤、抗血管新生剤、アポトーシス促進剤、サイトカイン、ホルモン、オリゴヌクレオチド、アンチセンス分子、ｓｉＲＮＡ、二次抗体、および二次抗体断片からなる群から選択される少なくとも１つの治療剤にコンジュゲートされる。
【０２１３】
いくつかの実施形態では、抗体はアゴニスト抗体である。アゴニスト抗体は、抗体が細胞上に発現したＴＲＥＭ１受容体に結合した後、ＴＲＥＭ１の１つ以上の活性または機能を誘発（例えば、増加）させることができる。アゴニスト抗体は、ＴＲＥＭ１に結合して、ＴＲＥＭ１を活性化し、細胞の増殖の変化を引き起こすか、または抗原提示能力を改変し得る。アゴニスト抗体は、ＴＲＥＭ１に結合して、ＴＲＥＭ１を活性化し、細胞内シグナル伝達経路をトリガーして、細胞の成長またはアポトーシスを改変する。
【０２１４】
いくつかの実施形態では、抗体はアンタゴニスト抗体である。アンタゴニスト抗体は、抗体が細胞上に発現したＴＲＥＭ１受容体に結合した後、ＴＲＥＭ１の１つ以上の活性または機能を遮断（例えば、減少）させることができる。例えば、アンタゴニスト抗体は、ＴＲＥＭ１に結合し、ＴＲＥＭ１へのリガンド結合を遮断し、細胞の分化および増殖を防止するか、または抗原提示能力を改変し得る。アンタゴニスト抗体は、そのリガンドによるＴＲＥＭ１の活性化に結合し、それを防ぐことができ、細胞の成長および生存に寄与する細胞内シグナル伝達経路を改変する。
【０２１５】
いくつかの実施形態では、抗体は枯渇抗体である。枯渇抗体は、抗体が分子の他の免疫細胞と相互作用することによって、接触すると骨髄細胞を死滅させることになる抗体である。例えば、ＴＲＥＭ１を持つ細胞に結合すると、抗体は、補体タンパク質と結合し、補体依存性の細胞溶解を誘発し得る。抗体は、ＴＲＥＭ１を持つ細胞に結合すると、Ｆｃ受容体を持つ隣接する細胞をトリガーして、抗体依存性細胞傷害性（ＡＤＣＣ）によってそれらを死滅させることができる。
【０２１６】
いくつかの実施形態では、抗体は中和抗体であり、抗体はＴＲＥＭ１の１つ以上の生物活性を中和する。いくつかの態様では、ＴＲＥＭ１は骨髄細胞の表面上で発現し、抗体はＴＲＥＭ１の細胞外ドメインを認識する。
【０２１７】
いくつかの実施形態では、抗体はＴＲＥＭ１に対して選択的である（ＴＲＥＭ１に優先的に結合する）。特定の実施形態では、ＴＲＥＭ１に対して選択的に結合する抗体は、０．０００１ｎＭ〜１μＭの範囲の解離定数（Ｋｄ）を有する。特定の実施形態では、抗体は、異なる種由来のタンパク質間で保存されているＴＲＥＭ１タンパク質上のエピトープに特異的に結合する。別の実施形態では、選択的結合は、排他的結合を含むが、これを必要としない。
【０２１８】
一実施形態では、その標的に結合した抗ＴＲＥＭ１抗体は、それが結合している非刺激性骨髄細胞のインビボ枯渇を引き起こす原因となる。いくつかの実施形態では、クラスター化抗体によって誘発されるエフェクタタンパク質は、炎症性サイトカインの放出、抗原産生の調節、エンドサイトーシス、または細胞死滅を含む様々な応答をトリガーし得る。一実施形態では、抗体は、補体を動員および活性化するか、インビボで抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）を媒介するか、またはインビボでＦｃ受容体に結合することによって食作用を媒介することができる。抗体はまた、結合すると非刺激性骨髄細胞のアポトーシスまたはネクローシスを誘発することによって、非刺激性骨髄細胞を枯渇させ得る。
【０２１９】
いくつかの実施形態では、抗体は、骨髄細胞のアポトーシス、溶解、または成長停止を誘発し得る。
【０２２０】
いくつかの実施形態では、Ｆｃ領域は、免疫細胞上のＦｃγ受容体に結合する。いくつかの態様では、Ｆｃγ受容体は、ＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩａ、ＦｃγＲＩＩｂ、ＦｃγＲＩＩｃ、ＦｃγＲＩＩＩａ、またはＦｃγＲＩＩＩｂである。いくつかの実施形態では、免疫細胞は、プロフェッショナル抗原提示細胞、マクロファージ、単球、ナチュラルキラー細胞、好中球、樹状細胞、またはＢ細胞である。
【０２２１】
いくつかの実施形態では、抗体は、ビアコアアッセイにより測定されるように、０．０５〜０．２ｎＭ以下のＫＤでＴＲＥＭ１に結合する。いくつかの態様では、抗体は、０．０１ｎＭ、０．０２ｎＭ、０．０３ｎＭ、０．０４ｎＭ、０．０５ｎＭ、０．０６ｎＭ、０．０７ｎＭ、０．０８ｎＭ、０．０９ｎＭ、０．１０ｎＭ、０．１１ｎＭ、０．１２ｎＭ、０．１３ｎＭ、０．１４ｎＭ、０．１５ｎＭ、０．１６ｎＭ、０．１７ｎＭ、０．１８ｎＭ、０．１９ｎＭ、または０．２ｎＭ以下のＫＤでＴＲＥＭ１に結合する。いくつかの態様では、抗体は、０．０１〜０．０５ｎＭ、０．０５〜０．０９ｎＭ、０．０８〜０．１２ｎＭ、０．１１〜０．１６ｎＭ、または０．１５〜０．２ｎＭのＫＤでＴＲＥＭ１に結合する。いくつかの態様では、抗体は、０．０９ｎＭ、０．１１ｎＭ、または０．１５ｎＭ以下のＫＤでＴＲＥＭ１に結合する。
【０２２２】
いくつかの実施形態では、本明細書で提供される抗体は、活性Ｆｃ領域を含む。
【０２２３】
いくつかの態様では、本明細書で提供される抗体は、自然に発生するＩｇＧ１ドメインと比較してＡｓｎ２９７の位置にフコース含量が減少したＩｇＧ１ドメインを含む。そのようなＦｃドメインは、改善したＡＤＣＣを有することが知られている。参照によりその全体が組み込まれるＳｈｉｅｌｄｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，２００２，２７７：２６７３３−２６７４０を参照されたい。いくつかの態様では、そのような抗体はＡｓｎ２９７の位置にフコースをまったく含まない。フコースの量は、例えば、参照によりその全体が組み込まれるＷＯ２００８／０７７５４６に記載されているような、任意の好適な方法を使用して測定され得る。
【０２２４】
脱フコシル化抗体を産生することができる細胞株の例としては、細菌の酸化還元酵素ＧＤＰ−６−デオキシ−Ｄ−リキソ−４−ヘキシロース還元酵素（ＲＭＤ）の安定した過剰発現を伴うＣＨＯ−ＤＧ４４（Ｈｅｎｎｉｎｇ  ｖｏｎ  Ｈｏｒｓｔｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｇｌｙｃｏｂｉｏｌ  ２０１０，２０：１６０７−１６１８を参照されたい）、またはタンパク質フコシル化において欠損しているＬｅｃ１３ＣＨＯ細胞（その各々は参照によりその全体が組み込まれる、Ｒｉｐｋａ  ｅｔ  ａｌ．，Ａｒｃｈ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．，１９８６，２４９：５３３−５４５、米国特許公開２００３／０１５７１０８号、ＷＯ２００４／０５６３１２を参照されたい）、ならびにアルファ−１，６−フコシルトランスフェラーゼ遺伝子もしくはＦＵＴ８ノックアウトＣＨＯ細胞（その各々は参照によりその全体が組み込まれる、Ｙａｍａｎｅ−Ｏｈｎｕｋｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏｔｅｃｈ．Ｂｉｏｅｎｇ．，２００４，８７：６１４−６２２、Ｋａｎｄａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．Ｂｉｏｅｎｇ．，２００６，９４：６８０−６８８、およびＷＯ２００３／０８５１０７を参照されたい）が挙げられる。
【０２２５】
特定の実施形態では、本明細書で提供される抗体は、Ｆｃ領域の位置２９８、３３３、および３３４のうちの１つ以上での置換など、ＡＤＣＣを改善する１つ以上のアミノ酸置換を有するＦｃ領域を含む。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される抗体は、参照によりその全体が組み込まれるＬａｚａｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，２００６，１０３：４００５−４０１０に記載されているように、位置２３９、３３２、および３３０に１つ以上のアミノ酸置換を有するＦｃ領域を含む。
【０２２６】
いくつかの実施形態では、本明細書で提供される抗体は、Ｃ１ｑ結合および／またはＣＤＣを改善または減少させる１つ以上の変化を含む。その各々は参照によりその全体が組み込まれる、米国特許第６，１９４，５５１号、ＷＯ９９／５１６４２、およびＩｄｕｓｏｇｉｅ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，２０００，１６４：４１７８−４１８４を参照されたい。
【０２２７】
いくつかの態様では、抗体はＩｇＧ１抗体である。いくつかの態様では、抗体はＩｇＧ３抗体である。いくつかの態様では、抗体はＩｇＧ２抗体である。いくつかの態様では、抗体はＩｇＧ４抗体である。
【０２２８】
いくつかの実施形態では、本明細書で提供される抗体は軽鎖を含む。いくつかの態様では、軽鎖はカッパ軽鎖である。いくつかの態様では、軽鎖はラムダ軽鎖である。
【０２２９】
いくつかの実施形態では、本明細書で提供される抗体は重鎖を含む。いくつかの態様では、重鎖はＩｇＡである。いくつかの態様では、重鎖はＩｇＤである。いくつかの態様では、重鎖はＩｇＥである。いくつかの態様では、重鎖はＩｇＧである。いくつかの態様では、重鎖はＩｇＭである。いくつかの態様では、重鎖はＩｇＧ１である。いくつかの態様では、重鎖はＩｇＧ２である。いくつかの態様では、重鎖はＩｇＧ３である。いくつかの態様では、重鎖はＩｇＧ４である。いくつかの態様では、重鎖はＩｇＡ１である。いくつかの態様では、重鎖はＩｇＡ２である。
【０２３０】
モノクローナル抗体の作製方法
モノクローナル抗体は、例えば、Ｋｏｈｌｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ，１９７５，２５６：４９５−４９７（参照によりその全体が組み込まれる）によって最初に記載されたハイブリドーマ法、および／または組み換えＤＮＡ法（例えば、参照によりその全体が組み込まれる米国特許第４，８１６，５６７号を参照されたい）を使用して得られる可能性がある。モノクローナル抗体は、例えば、ファージまたは酵母ベースのライブラリーを使用しても得られる可能性がある。例えば、その各々は参照によりその全体が組み込まれる米国特許第８，２５８，０８２号および同第８，６９１，７３０号を参照されたい。
【０２３１】
ハイブリドーマ法では、マウスまたは他の適切な宿主動物を免疫して、免疫に使用されるタンパク質に特異的に結合する抗体を産生するまたは産生することができるリンパ球を誘発する。あるいは、リンパ球はインビトロで免疫され得る。次いで、リンパ球を、ポリエチレングリコールなどの好適な融合剤を使用して骨髄腫細胞と融合させて、ハイブリドーマ細胞を形成する。参照によりその全体が組み込まれるＧｏｄｉｎｇ  Ｊ．Ｗ．，Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ  ３ｒｄ  ｅｄ．（１９８６）Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ，Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ，ＣＡを参照されたい。
【０２３２】
ハイブリドーマ細胞は、融合されていない親骨髄腫細胞の成長または生存を阻害する１つ以上の物質を含有する好適な培養地に播種および成長される。例えば、親骨髄腫細胞に酵素ヒポキサンチングアニンホスホリボシルトランスフェラーゼ（ＨＧＰＲＴまたはＨＰＲＴ）がない場合、ハイブリドーマの培養地は、典型的には、ＨＧＰＲＴ欠損細胞の成長を防ぐ物質であるヒポキサンチン、アミノプテリン、およびチミジン（ＨＡＴ培地）を含む。
【０２３３】
有用な骨髄腫細胞は、効率的に融合し、選択された抗体産生細胞による安定した高レベルの抗体産生を支援し、ＨＡＴ培地の存在または非存在などの感受性培地条件である。これらのうち、好ましい骨髄腫細胞株は、ＭＯＰ−２１およびＭＣ−１１マウス腫瘍（Ｓａｌｋ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ  Ｃｅｌｌ  Ｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎ  Ｃｅｎｔｅｒ（サンディエゴ、カリフォルニア州）から入手可能）およびＳＰ−２またはＸ６３−Ａｇ８−６５３細胞（Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｔｙｐｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ（ロックビル、メリーランド州）から入手可能）などのネズミ科骨髄腫株である。ヒト骨髄腫およびマウス−ヒトヘテロミエローマ細胞株は、ヒトモノクローナル抗体の産生についても記載されている。例えば、参照によりその全体が組み込まれる、Ｋｏｚｂｏｒ，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１９８４，１３３：３００１を参照されたい。
【０２３４】
所望の特異性、親和性、および／または生物活性の抗体を産生するハイブリドーマ細胞の同定後、選択されたクローンは、限界希釈手法によってサブクローン化され、標準的な方法によって成長され得る。上記のＧｏｄｉｎｇを参照されたい。この目的に好適な培地としては、例えば、Ｄ−ＭＥＭまたはＲＰＭＩ−１６４０培地が挙げられる。加えて、ハイブリドーマ細胞は、動物の腹水腫瘍としてインビボで成長し得る。
【０２３５】
モノクローナル抗体をコード化するＤＮＡは、従来の手法を使用して（例えば、モノクローナル抗体の重鎖および軽鎖をコード化する遺伝子に特異的に結合することができるオリゴヌクレオチドプローブを使用することによって）容易に単離および配列され得る。したがって、ハイブリドーマ細胞は、所望の特性を備えた抗体をコード化するＤＮＡの有用な供給源として役立ち得る。いったん単離されると、ＤＮＡは、発現ベクターに入れられ得、次いで、バクテリア（例、大腸菌）、酵母（例、サッカロミセスまたはピキア種）、ＣＯＳ細胞、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞、または抗体を産生しない骨髄腫細胞などの宿主細胞にトランスフェクトされて、モノクローナル抗体を産生する。
【０２３６】
キメラ抗体の作製方法
キメラ抗体を作製する例示的な方法は、例えば、その各々は参照によりその全体が組み込まれる、米国特許第４，８１６，５６７号、およびＭｏｒｒｉｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，１９８４，８１：６８５１−６８５５に記載されている。いくつかの実施形態では、キメラ抗体は、組み換え技法を使用して、非ヒト可変領域（例えば、マウス、ラット、ハムスター、ウサギ、またはサルなどの非ヒト霊長類に由来する可変領域）をヒトの定常領域と組み合わせることによって作製される。
【０２３７】
ヒト抗体の作製方法
ヒト抗体は、例えば、トランスジェニック動物（例えば、ヒト化マウス）を使用することによって、当該技術分野で既知の様々な技法によって生成することができる。例えば、その各々は参照によりその全体が組み込まれる、Ｊａｋｏｂｏｖｉｔｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．，１９９３，９０：２５５１、Ｊａｋｏｂｏｖｉｔｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ，１９９３，３６２：２５５−２５８、Ｂｒｕｇｇｅｒｍａｎｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｙｅａｒ  ｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏ．，１９９３，７：３３、ならびに米国特許第５，５９１，６６９号、同第５，５８９，３６９号、および同第５，５４５，８０７号を参照されたい。ヒト抗体はまた、ファージディスプレイライブラリーに由来し得る（例えば、その各々は参照によりその全体が組み込まれる、Ｈｏｏｇｅｎｂｏｏｍ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，１９９１，２２７：３８１−３８８、Ｍａｒｋｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，１９９１，２２２：５８１−５９７、ならびに米国特許第５，５６５，３３２号および同第５，５７３，９０５号を参照されたい）。ヒト抗体は、インビトロで活性化されたＢ細胞によっても生成され得る（例えば、その各々は参照によりその全体が組み込まれる、米国特許第５，５６７，６１０号および同第５，２２９，２７５号を参照されたい）。ヒト抗体はまた、酵母ベースのライブラリーに由来し得る（例えば、参照によりその全体が組み込まれる米国特許第８，６９１，７３０号を参照されたい）。
【０２３８】
抗体断片の作製方法
本明細書で提供される抗体断片は、本明細書に記載の例示的方法または当技術分野で既知の方法を含む、任意の好適な方法により作製され得る。好適な方法としては、組み換え技法および抗体全体のタンパク質分解が挙げられる。抗体断片を作製する例示的な方法は、例えば、参照によりその全体が組み込まれる、Ｈｕｄｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔ．Ｍｅｄ．，２００３，９：１２９−１３４に記載されている。ｓｃＦｖ抗体を作製する方法は、例えば、その各々は参照によりその全体が組み込まれる、Ｐｌｕｃｋｔｈｕｎ，Ｔｈｅ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ  ｏｆ  Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ，ｖｏｌ．１１３，Ｒｏｓｅｎｂｕｒｇ  ａｎｄ  Ｍｏｏｒｅ  ｅｄｓ．，Ｓｐｒｉｎｇｅｒ−Ｖｅｒｌａｇ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，ｐｐ．２６９−３１５（１９９４）、ＷＯ９３／１６１８５、ならびに米国特許番号５，５７１，８９４および同第５，５８７，４５８号に記載されている。
【０２３９】
多重特異性抗体の作製方法
本明細書で提供される多重特異性抗体は、本明細書に記載の例示的方法または当技術分野で既知の方法を含む、任意の好適な方法により作製され得る。一般的な軽鎖抗体を作製する方法は、参照によりその全体が組み込まれるＭｅｒｃｈａｎｔ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．，１９９８，１６：６７７−６８１に記載されている。四価二重特異性抗体を作製する方法は、参照によりその全体が組み込まれるＣｏｌｏｍａ  ａｎｄ  Ｍｏｒｒｉｓｏｎ，Ｎａｔｕｒｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．，１９９７，１５：１５９−１６３に記載されている。ハイブリッド免疫グロブリンを作製する方法は、その各々は参照によりその全体が組み込まれる、Ｍｉｌｓｔｅｉｎ  ａｎｄ  Ｃｕｅｌｌｏ，Ｎａｔｕｒｅ，１９８３，３０５：５３７−５４０、およびＳｔａｅｒｚ  ａｎｄ  Ｂｅｖａｎ，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，１９８６，８３：１４５３−１４５７に記載されている。ノブ・イン・ホール修飾を備えた免疫グロブリンを作製する方法は、参照によりその全体が組み込まれる米国特許第５，７３１，１６８号に記載されている。静電的修飾を伴う免疫グロブリンを作製する方法は、参照によりその全体が組み込まれるＷＯ２００９／０８９００４に提供されている。二重特異性単鎖抗体を作製する方法は、その各々は参照によりその全体が組み込まれる、Ｔｒａｕｎｅｃｋｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，ＥＭＢＯ  Ｊ．，１９９１，１０：３６５５−３６５９、およびＧｒｕｂｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１９９４，１５２：５３６８−５３７４に記載されている。リンカーの長さが変化し得る単鎖抗体を作製する方法は、その各々は参照によりその全体が組み込まれる、米国特許第４，９４６，７７８号および同第５，１３２，４０５号に記載されている。ダイアボディを作製する方法は、参照によりその全体が組み込まれるＨｏｌｌｉｎｇｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，１９９３，９０：６４４４−６４４８に記載されている。トリアボディおよびテトラボディを作製する方法は、参照によりその全体が組み込まれるＴｏｄｏｒｏｖｓｋａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ，２００１，２４８：４７−６６に記載されている。三重特異性Ｆ（ａｂ’）３誘導体を作製する方法は、参照によりその全体が組み込まれるＴｕｔｔ  ｅｔ  ａｌ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１９９１，１４７：６０−６９に記載されている。架橋抗体を作製する方法は、米国特許第４，６７６，９８０号、Ｂｒｅｎｎａｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ，１９８５，２２９：８１−８３、Ｓｔａｅｒｚ，ｅｔ  ａｌ．Ｎａｔｕｒｅ，１９８５，３１４：６２８−６３１、およびＥＰ０４５３０８２に記載されており、その各々は参照によりその全体が組み込まれる。ロイシンジッパーによって組み立てられた抗原結合ドメインを作製する方法は、参照によりその全体が組み込まれるＫｏｓｔｅｌｎｙ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１９９２，１４８：１５４７−１５５３に記載されている。ＤＮＬアプローチを介して抗体を作製する方法は、その各々は参照によりその全体が組み込まれる、米国特許第７，５２１，０５６号、同第７，５��０，１４３号、同第７，５３４，８６６号、および同第７，５２７，７８７号に記載されている。抗体および非抗体分子のハイブリッドを作製する方法は、そのような抗体の例について、参照によりその全体が組み込まれるＷＯ９３／０８８２９に記載されている。ＤＡＦ抗体を作製する方法は、参照によりその全体が組み込まれる米国特許公開第２００８／００６９８２０号に記載されている。還元および酸化を介して抗体を作製する方法は、参照によりその全体が組み込まれるＣａｒｌｒｉｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，ＰＬｏＳ  Ｏｎｅ，２０１１，６：ｅ２２５３３に記載されている。ＤＶＤ−Ｉｇｓ（商標）を作製する方法は、参照によりその全体が組み込まれる米国特許第７，６１２，１８１号に記載されている。ＤＡＲＴｓ（商標）を作製する方法は、参照によりその全体が組み込まれるＭｏｏｒｅ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｌｏｏｄ，２０１１，１１７：４５４−４５１に記載されている。ＤｕｏＢｏｄｉｅｓ（登録商標）を製造する方法は、その各々は参照によりその全体が組み込まれる、Ｌａｂｒｉｊｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，２０１３，１１０：５１４５−５１５０、Ｇｒａｍｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，ｍＡｂｓ，２０１３，５：９６２−９７２、およびＬａｂｒｉｊｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ，２０１４，９：２４５０−２４６３に記載されている。ＩｇＧからＣＨ３のＣ末端に融合されたｓｃＦｖを含む抗体を作製する方法は、参照によりその全体が組み込まれるＣｏｌｏｍａ  ａｎｄ  Ｍｏｒｒｉｓｏｎ，Ｎａｔｕｒｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．，１９９７，１５：１５９−１６３に記載されている。Ｆａｂ分子が免疫グロブリンの定常領域に付着している抗体を作製する方法は、参照によりその全体が組み込まれるＭｉｌｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，２００３，１７０：４８５４−４８６１に記載されている。ＣｏｖＸ−ボディを作製する方法は、参照によりその全体が組み込まれるＤｏｐｐａｌａｐｕｄｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，２０１０，１０７：２２６１１−２２６１６に記載されている。Ｆｃａｂ抗体を作製する方法は、参照によりその全体が組み込まれるＷｏｚｎｉａｋ−Ｋｎｏｐｐ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｅｎｇ．Ｄｅｓ．Ｓｅｌ．，２０１０，２３：２８９−２９７に記載されている。ＴａｎｄＡｂ（登録商標）抗体を作製する方法は、その各々は参照によりその全体が組み込まれる、Ｋｉｐｒｉｙａｎｏｖ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，１９９９，２９３：４１−５６およびＺｈｕｋｏｖｓｋｙ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｌｏｏｄ，２０１３，１２２：５１１６に記載されている。タンデムＦａｂを作製する方法は、参照によりその全体が組み込まれるＷＯ２０１５／１０３０７２に記載されている。Ｚｙｂｏｄｉｅｓ（商標）を作製する方法は、参照によりその全体が組み込まれるＬａＦｌｅｕｒ  ｅｔ  ａｌ．，ｍＡｂｓ，２０１３，５：２０８−２１８に記載されている。
【０２４０】
変異体の作製方法
任意の好適な方法を使用して、エラーを起こしやすいＰＣＲ、チェーンシャッフリング、およびトリヌクレオチド特異性突然変異誘発（ＴＲＩＭ）などのオリゴヌクレオチド特異的突然変異誘発を含む、抗体をコード化するポリヌクレオチド配列（複数可）に変動性を導入することができる。いくつかの態様では、いくつかのＣＤＲ残基（例えば、一度に４〜６残基）が無作為化される。抗原結合に関与するＣＤＲ残基は、例えば、アラニンスキャニング突然変異誘発またはモデリングを使用して、特異的に同定され得る。特にＣＤＲ−Ｈ３およびＣＤＲ−Ｌ３は、多くの場合、突然変異の標的になる。
【０２４１】
可変領域および／またはＣＤＲへの多様性の導入は、二次ライブラリーを産生するために使用することができる。次に、二次ライブラリーをスクリーニングして、親和性が改善された抗体変異体を同定する。二次ライブラリーを構築および再選択することによる親和性成熟は、例えば、参照によりその全体が組み込まれるＨｏｏｇｅｎｂｏｏｍ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，２００１，１７８：１−３７に記載されている。
【０２４２】
６．５．個体
いくつかの実施形態では、本明細書で提供される方法は、個体の免疫関連状態の治療に有用である。一実施形態では、個体はヒトである。
【０２４３】
いくつかの実施形態では、本明細書で提供される方法（免疫応答を増強する方法または非刺激性骨髄細胞の無能化をもたらす方法など）は、癌の治療に有用であり、したがって、抗ＴＲＥＭ１抗体を受けている個体は癌を有する。いくつかの実施形態では、癌は固形癌である。いくつかの実施形態では、癌は液状癌である。いくつかの実施形態では、癌は免疫回避性である。いくつかの実施形態では、癌は免疫応答性である。特定の実施形態では、癌は、黒色腫、腎臓、肝胆道、頭頸部扁平上皮癌（ＨＮＳＣ）、膵臓、結腸、膀胱、前立腺、肺、膠芽腫、および乳房からなる群から選択される。
【０２４４】
いくつかの実施形態では、免疫関連状態は、非刺激性骨髄細胞上のＴＲＥＭ１の発現に関連する免疫関連状態である。いくつかの実施形態では、免疫関連状態は、刺激性骨髄細胞と比較した、非刺激性骨髄細胞上のＴＲＥＭ１の過剰発現に関連する免疫関連状態である。いくつかの実施形態では、ＴＲＥＭ１  ｍＲＮＡまたはＴＲＥＭ１タンパク質の過剰発現は、刺激性骨髄細胞と比較して約少なくとも２倍、５倍、１０倍、２５倍、５０倍、または１００倍高い。
【０２４５】
６．６．投与方法
いくつかの実施形態では、抗ＴＲＥＭ１抗体は、静脈内、筋肉内、皮下、局所、経口、経皮、腹腔内、眼窩内、移植で、吸入で、髄膜下、脳室内、または鼻腔内に投与される。有効量の抗ＴＲＥＭ１抗体を癌の治療のために投与してもよい。抗ＴＲＥＭ１抗体の適切な投与量は、治療する癌のタイプ、抗ＴＲＥＭ１抗体のタイプ、癌の重症度および経過、個体の臨床状態、治療への個体の臨床歴および応答、ならびに担当医の裁量に基づいて決定され得る。
【０２４６】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の抗ＴＲＥＭ１抗体のインビボ投与について、通常の投与量は、投与経路に応じて、１日あたり約１０ｎｇ／ｋｇ〜約１００ｍｇ／ｋｇの個体の体重以上、好ましくは約１ｍｇ／ｋｇ／日〜１０ｍｇ／ｋｇ／日に変動し得る。治療する疾患または障害の重症度に応じて、数日間以上にわたって繰り返し投与する場合、症状の所望の抑制が達成されるまで治療を継続する。例示的な投薬計画は、約２ｍｇ／ｋｇの抗ＴＲＥＭ１抗体の初期用量を投与し、その後隔週で約１ｍｇ／ｋｇの毎週維持用量を投与することを含む。医師が達成したい薬物動態の減衰のパターンに応じて、他の投与計画が有用であり得る。例えば、本明細書では、個体に週に１回〜２１回投薬することが企図されている。特定の実施形態では、約３μｇ／ｋｇ〜約２ｍｇ／ｋｇ（約３μｇ／ｋｇ、約１０μｇ／ｋｇ、約３０μｇ／ｋｇ、約１００μｇ／ｋｇ、約３００μｇ／ｋｇ、約１ｍｇ／ｋｇ、および約２／ｍｇ／ｋｇなど）の範囲の投薬を使用し得る。特定の実施形態では、投薬頻度は、１日３回、１日２回、１日１回、隔日１回、毎週１回、２週間に１回、４週間に１回、５週間に１回、６週間に１回、７週間に１回、８週間に１回、９週間に１回、１０週間に１回、または毎月１回、２か月に１回、３か月に１回、またはそれ以上である。治療の進行は、従来の技術およびアッセイによって容易に監視される。投与される抗ＴＲＥＭ１抗体を含む投薬計画は、使用される用量とは無関係に経時的に変化し得る。
【０２４７】
６．７．治療用途
治療用途の場合、抗体は、当技術分野で既知のものおよび上記で考察したものなどの薬学的に許容可能な剤形で哺乳動物、一般的にはヒトに投与される。例えば、抗体は、筋肉内、腹腔内、脳脊髄内、皮下、関節内、滑液嚢内、髄腔内、または腫瘍内経路によって、ボーラスとして、または一定期間の連続注入によって、ヒトに静脈内投与され得る。抗体はまた、局所的および全身的治療効果を発揮するために、腫瘍周囲、病変内、または病変周辺経路によって好適に投与される。腹腔内経路は、例えば、卵巣腫瘍の治療では特に有用であり得る。
【０２４８】
いくつかの実施形態では、本明細書で提供される有効量の抗体を対象に投与することによって、それを必要とする対象の疾患または状態を治療する方法が、本明細書で提供される。いくつかの態様では、疾患または状態は癌である。
【０２４９】
いくつかの実施形態では、本明細書で提供される有効量の抗体を対象に投与することによって、それを必要とする対象の疾患または状態を治療する方法が、本明細書で提供され、疾患または状態は癌であり、癌は固形腫瘍と血液腫瘍から選択される。
【０２５０】
いくつかの実施形態では、それを必要とする対象の食作用を増加させる方法であって、有効量の本明細書に開示される抗体または医薬組成物を対象に投与することを含む方法が、本明細書で提供される。
【０２５１】
いくつかの実施形態では、それを必要とする対象における免疫応答を調節する方法であって、本明細書に開示される有効量の抗体または医薬組成物を対象に投与することを含む方法が、本明細書に提供される。いくつかの実施形態では、免疫応答が強化される。いくつかの実施形態では、適応免疫応答における増強された免疫応答。いくつかの実施形態では、増強された免疫応答は自然免疫応答である。
【０２５２】
任意の好適な癌は、本明細書で提供される抗体で治療され得る。
【０２５３】
癌腫は上皮組織に由来する悪性腫瘍である。上皮細胞は、体の外表面を覆い、内部空洞を裏打ちし、腺組織の裏打ちを形成する。癌腫の例としては、腺癌（腺（分泌）細胞で始まる癌）（例えば、乳房、膵臓、肺、前立腺、および結腸の癌は腺癌であり得る）、副腎皮質癌、肝細胞癌、腎細胞癌、卵巣癌、上皮内癌、腺管癌、乳房の癌、基底細胞癌、扁平上皮癌、移行上皮癌、結腸癌、上咽頭癌、多房性嚢胞腎細胞癌、燕麦細胞癌、大細胞肺癌、小細胞肺癌、非小細胞肺癌、などが挙げられるが、これらに限定されない。癌腫は、ほふく性、膵臓、結腸、脳（通常は二次転移として）、肺、乳房、皮膚などに見られ得る。
【０２５４】
軟部組織腫瘍は、結合組織に由来するまれな腫瘍の非常に多様な群である。軟部組織腫瘍の例としては、肺胞軟部肉腫、血管腫様線維性組織球腫、軟骨粘液様線維腫、骨格軟骨肉腫、骨格外粘液性軟骨肉腫、明細胞肉腫、線維形成性小円形細胞腫瘍、隆起性皮膚線維肉腫、子宮内膜間質腫瘍、ユーイング肉腫、線維腫症（デスモイド）、線維肉腫（乳児）、消化管間質腫瘍、骨巨細胞腫、腱滑膜巨細胞腫瘍、炎症性筋線維芽細胞腫瘍、子宮平滑筋腫、平滑筋肉腫、脂肪肉腫、典型的な脂肪腫、紡錘細胞または多形性脂肪腫、異型性脂肪腫、軟骨様脂肪腫、高分化型脂肪肉腫、粘液様／円形細胞脂肪肉腫、多形性脂肪肉腫、粘液性悪性線維性組織球腫、高悪性度の悪性線維性組織球腫、粘液線維肉腫、悪性末梢神経鞘腫瘍、中皮腫、神経芽細胞腫、骨軟骨腫、骨肉腫、原始神経外胚葉性腫瘍、肺胞横紋筋肉腫、胎児型横紋筋肉腫、良性または悪性の神経鞘腫、滑膜肉腫、エヴァンズ腫瘍、結節性筋膜炎、デスモイド型線維腫症、孤立性線維性腫瘍、隆起性皮膚線維肉腫（ＤＦＳＰ）、血管肉腫、類上皮血管内皮腫、腱滑膜巨細胞腫瘍（ＴＧＣＴ）、色素性絨毛結節性滑膜炎（ＰＶＮＳ）、線維性形成異常、粘液線維肉腫、線維肉腫、滑膜肉腫、悪性末梢神経鞘腫瘍、神経線維腫、軟部組織の多形性腺腫、ならびに線維芽細胞、筋線維芽細胞、組織球、血管細胞／内皮細胞、および神経鞘細胞に由来する腫瘍形成が挙げられるが、これらに限定されない。
【０２５５】
肉腫は、間葉由来の細胞、例えば、骨、または軟骨、脂肪、筋肉、血管、線維組織、または他の結合組織もしくは支持組織を含む身体の軟部組織に発生するまれなタイプの癌である。肉腫の異なるタイプは、癌が形成される場所に基づく。例えば、骨に骨肉腫が、脂肪に脂肪肉腫が、筋肉に横紋筋肉腫が形成される。肉腫の例としては、アスキン腫瘍、肉腫ボトリイド、軟骨肉腫、ユーイング肉腫、悪性血管内皮腫、悪性神経鞘腫、骨肉腫、軟部肉腫（例えば、肺胞軟部肉腫、血管肉腫、嚢腫肉腫葉状隆起性皮膚線維肉腫（ＤＦＳＰ）、デスモイド腫瘍、線維形成性小円形細胞腫瘍、類上皮肉腫、骨外性軟骨肉腫、骨外性骨肉腫、線維肉腫、消化管間質腫瘍（ＧＩＳＴ）、血管外皮細胞腫、血管内皮腫（より一般的に「血管肉腫」と称される）、カポジ肉腫、平滑筋肉腫、脂肪肉腫、リンパ管肉腫、悪性末梢神経鞘腫瘍（ＭＰＮＳＴ）、神経線維肉腫、滑膜肉腫、未分化多形肉腫など）が挙げられるが、これらに限定されない。
【０２５６】
奇形腫は、例えば、毛髪、筋肉、および骨を含む、いくつかの異なるタイプの組織を含有し得るあるタイプの胚細胞腫瘍である（例えば、３胚葉の内胚葉、中胚葉、外胚葉のいずれかおよび／またはすべてに由来する組織を含むことができる）。奇形腫は、女性の卵巣、男性の精巣、および子供の尾骨で最も頻繁に発生する。
【０２５７】
黒色腫は、メラニン細胞（色素メラニンを作製する細胞）で始まる癌の一形態である。それは、ほくろ（皮膚黒色腫）で始まり得るが、目または腸内など他の色素沈着した組織でも始まり得る。
【０２５８】
白血病は、骨髄などの血液形成組織で始まり、大量の異常な血液細胞が産生されて血流に入る癌である。例えば、白血病は、通常血流で成熟する骨髄由来細胞で発生し得る。白血病は、病気の発症と進行の速さ（例：急性対慢性）およびもたらされる白血球のタイプ（例、骨髄対リンパ系）にちなんで命名される。骨髄性白血病は、骨髄性または骨髄芽球性白血病とも呼ばれる。リンパ性白血病は、リンパ芽球性またはリンパ球性白血病とも呼ばれる。リンパ性白血病細胞は、膨張することができるリンパ節に集まり得る。白血病の例としては、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、および慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）が挙げられるが、これらに限定されない。
【０２５９】
リンパ腫は、免疫系の細胞で始まる癌である。例えば、リンパ腫は、通常リンパ系で成熟する骨髄由来細胞で発生し得る。リンパ腫には２つの基本的なカテゴリーが存在する。１つはホジキンリンパ腫（ＨＬ）であり、これはリードスターンバーグ細胞と呼ばれる細胞のタイプの存在によって特徴付けられる。現在、ＨＬには６つの認識されたタイプが存在する。ホジキンリンパ腫の例としては、結節性硬化症、古典的ホジキンリンパ腫（ＣＨＬ）、混合細胞性ＣＨＬ、リンパ球除去ＣＨＬ、リンパ球リッチＣＨＬ、結節性リンパ球優性ＨＬが挙げられる。
【０２６０】
リンパ腫の他のカテゴリーは、非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）であり、免疫系細胞の大規模で多様な癌の群が含まれる。非ホジキンリンパ腫は、緩慢な（成長の遅い）経過を有する癌と、攻撃的な（成長の速い）経過を有する癌にさらに分けることができる。現在、ＮＨＬには６１の認識されたタイプが存在する。非ホジキンリンパ腫の例としては、エイズ関連リンパ腫、未分化大細胞リンパ腫、血管免疫芽細胞性リンパ腫、芽細胞性ＮＫ細胞リンパ腫、バーキットリンパ腫、バーキット様リンパ腫（非小切れ細胞リンパ腫）、慢性リンパ性白血病／小リンパ球性リンパ腫、皮膚Ｔ細胞リンパ腫、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、腸疾患型Ｔ細胞リンパ腫、濾胞性リンパ腫、肝脾ガンマデルタＴ細胞リンパ腫、Ｔ細胞白血病、リンパ芽球性リンパ腫、マントル細胞リンパ腫、辺縁帯リンパ腫、鼻Ｔ細胞リンパ腫、小児リンパ腫、末梢Ｔ細胞リンパ腫、一次中枢神経系リンパ腫、形質転換リンパ腫、治療関連Ｔ細胞リンパ腫、およびワルデンストレームのマクログロブリン血症が挙げられるが、これらに限定されない。
【０２６１】
脳癌としては、脳組織の任意の癌が挙げられる。脳癌の例としては、グリオーマ（例えば、膠芽腫、星状細胞腫、希突起膠腫、上衣細胞腫など）、髄膜腫、下垂体腺腫、前庭神経鞘腫、原始神経外胚葉性腫瘍（髄芽腫）などが挙げられるが、これらに限定されない。
【０２６２】
６．８．併用療法
いくつかの実施形態では、本明細書で提供される抗体は、少なくとも１つの追加の治療薬とともに投与される。本明細書で提供される抗体とともに、任意の好適な追加の治療薬を投与することができる。いくつかの態様では、追加の治療薬は、放射線、細胞毒性薬、化学療法薬、細胞増殖抑制薬、抗ホルモン薬、ＥＧＦＲ阻害薬、免疫刺激薬、抗血管新生薬、およびそれらの組み合わせから選択される。
【０２６３】
いくつかの実施形態では、追加の治療薬は免疫刺激薬を含む。いくつかの実施形態では、追加の治療薬は抗体である。いくつかの実施形態では、追加の治療薬は、腫瘍細胞表面上の１つ以上のタンパク質に結合する抗体である。
【０２６４】
癌の治療のために、抗ＴＲＥＭ１抗体は、腫瘍抗原に特異的な１つ以上の抗体と組み合わせられ得る。これらのうち、腫瘍関連抗原（ＴＡＡ）は腫瘍細胞に比較的限定されているが、腫瘍特異性抗原（ＴＳＡ）は腫瘍細胞に特有である。ＴＳＡおよびＴＡＡは、典型的には、主要組織適合性複合体の一部として細胞表面上に発現した細胞内分子の部分である。
【０２６５】
組織特異性分化抗原は、腫瘍細胞およびそれらの正常細胞対応物上に存在する分子である。治療用ｍＡｂによって認識されることが知られている腫瘍関連抗原は、いくつかの異なるカテゴリーに分類される。造血分化抗原は、通常、分化クラスター（ＣＤ）群に関連付けられている糖タンパク質であり、ＣＤ２０、ＣＤ３０、ＣＤ３３、およびＣＤ５２を含む。細胞表面分化抗原は、正常細胞および腫瘍細胞の両方の表面に見られる糖タンパク質および炭水化物の多様な群である。成長および分化のシグナル伝達に関与する抗原は、多くの場合、成長因子および成長因子受容体である。癌患者の抗体の標的である成長因子としては、ＣＥＡ、上皮成長因子受容体（ＥＧＦＲ；ＥＲＢＢ１としても知られている）、ＥＲＢＢ２（ＨＥＲ２としても知られている）、ＥＲＢＢ３、ＭＥＴ（ＨＧＦＲとしても知られている）、インスリン様成長因子１受容体（ＩＧＦ１Ｒ）、エフリン受容体Ａ３（ＥＰＨＡ３）、腫瘍ネクローシス因子（ＴＮＦ）関連アポトーシス誘発リガンド受容体１（ＴＲＡＩＬＲ１；ＴＮＦＲＳＦ１０Ａとしても知られている）、ＴＲＡＩＬＲ２（ＴＮＦＲＳＦ１０Ｂとしても知られている）、および核因子κＢリガンドの受容体活性化因子（ＲＡＮＫＬ；ＴＮＦＳＦ１１としても知られている）が挙げられる。血管新生に関与する抗原は、通常、血管内皮成長因子（ＶＥＧＦ）、ＶＥＧＦ受容体（ＶＥＧＦＲ）、インテグリンαＶβ３およびインテグリンα５β１を含む新しい微小血管系の形成を支援するタンパク質または成長因子である。腫瘍間質および細胞外マトリックスは、腫瘍にとって不可欠な支持構造である。治療標的である間質および細胞外マトリックス抗原としては、線維芽細胞活性化タンパク質（ＦＡＰ）およびテネイシンが挙げられる。
【０２６６】
二重特異性構成または併用療法として有用な治療用抗体の例としては、リツキシマブ、イブリツモマブ、チウキセタン、トシツモマブ、ブレンツキシマブ、ベドチン、ゲムツズマブ、オゾガマイシン、アレムツズマブ、ＩＧＮ１０１、アデカツムマブ、ラベツズマブ、ｈｕＡ３３、ペムツモマブ、オレゴボマブ、ＣＣ４９（ミンレツモマブ）、ｃＧ２５０、Ｊ５９１、ＭＯｖ１８、ＭＯＲＡｂ−００３（ファルレツズマブ）、３Ｆ８、ｃｈ１４．１８、ＫＷ−２８７１、ｈｕ３Ｓ１９３、ＩｇＮ３１１、ベバシズマブ、ＩＭ−２Ｃ６、ＣＤＰ７９１、エタラシズマブ、ボロシキシマブ、セツキシマブ、パニツムマブ、ニモツズマブ、８０６、トラスツズマブ、パーツズマブ、ＭＭ−１２１、ＡＭＧ１０２、ＭＥＴＭＡＢ、ＳＣＨ９００１０５、ＡＶＥ１６４２、ＩＭＣ−Ａ１２、ＭＫ−０６４６、Ｒ１５０７、ＣＰ７５１８７１、ＫＢ００４、ＩＩＩＡ４、マパツムマブ（ＨＧＳ−ＥＴＲ１）、ＨＧＳ−ＥＴＲ２、ＣＳ−１００８、デノスマブ、シブロツズマブ、Ｆ１９、および８１Ｃ６が含まれるが、これらに限定されない。二重特異性抗体は、Ｆｃγ受容体を活性化するＦｃ領域を使用し得る。
【０２６７】
癌の治療のために、抗ＴＲＥＭ−１抗体は、免疫チェックポイントタンパク質を阻害する１つ以上の抗体と組み合わせられ得る。特に興味深いのは、腫瘍細胞の表面上に表示される免疫チェックポイントタンパク質である。臨床癌免疫療法、細胞傷害性Ｔリンパ球関連抗原４（ＣＴＬＡ４；ＣＤ１５２とも呼ばれる）およびプログラム細胞死タンパク質１（ＰＤ１；ＣＤ２７９とも呼ばれる）の文脈で最も活発に研究されている免疫チェックポイント受容体は、両方とも阻害性受容体である。これらの受容体のうちのいずれかを遮断する抗体の臨床活性は、抗腫瘍免疫が複数のレベルで増強され、組み合わせ戦略が機械的考察および前臨床モデルによって理知的に設計、導かれることができることを含意する。
【０２６８】
ＰＤ１の２つのリガンドは、ＰＤ１リガンド１（ＰＤＬ１、またＢ７−Ｈ１およびＣＤ２７４としても知られている）およびＰＤＬ２（Ｂ７−ＤＣおよびＣＤ２７３としても知られている）である。ＰＤＬ１は、癌細胞上で発現し、Ｔ細胞上のその受容体ＰＤ１に結合することにより、それはＴ細胞の活性化／機能を阻害する。例えば、治療用抗体としてのアベルマブを参照されたい。
【０２６９】
免疫共刺激分子を刺激する薬剤も、本明細書に開示された方法では有用である。そのような薬剤としては、アゴニストまたはＣＤ４０およびＯＸ４０が挙げられる。ＣＤ４０は、抗原提示細胞（ＡＰＣ）上に見られる共刺激タンパク質であり、それらの活性化に必要である。これらのＡＰＣとしては、食細胞（マクロファージおよび樹状細胞）およびＢ細胞が挙げられる。ＣＤ４０はＴＮＦ受容体ファミリーの一部である。ＣＤ４０の一次活性化シグナル伝達分子は、ＩＦＮγおよびＣＤ４０リガンド（ＣＤ４０Ｌ）である。ＣＤ４０を介した刺激はマクロファージを活性化する。
【０２７０】
対象の抗ＣＣＲ４（ＣＤ１９４）抗体としては、潜在的な抗炎症および抗腫瘍活性を有するＣ−Ｃケモカイン受容体４（ＣＣＲ４）に向けられたヒト化モノクローナル抗体が挙げられる。
【０２７１】
いくつかの実施形態では、追加の治療薬は、ＨＥＲ２（ＥＲＢＢ２／ｎｅｕ）、ＣＤ５２、ＰＤ−Ｌ１、ＶＥＧＦ、ＣＤ３０、ＥＧＦＲ、ＣＤ３８、ＲＡＮＫＬ（ＣＤ２５４）、ＧＤ２（ガングリオシド）、ＳＬＡＭＦ７（ＣＤ３１９）、ＣＤ２０、ＥＧＦＲ、ＰＤＧＦＲａ、ＶＥＧＦＲ２、ＣＤ３３、ＣＤ４４、ＣＤ９９、ＣＤ９６、ＣＤ９０、ＣＤ１３３、ＣＫＩＴ（ＣＫＩＴ陽性腫瘍の場合はＣＤ１１７）、ＣＴＬＡ−４、ＰＤ−１、ＰＤ−Ｌ１、ＣＤ４０（アゴニスト）、ＬＡＧ３（ＣＤ２２３）、４１ＢＢ（ＣＤ１３７アゴニスト）、ＯＸ４０（ＣＤ１３４、アゴニスト）および／またはＣＫＩＴ（ＣＤ１１７）に結合して、移植療法のために造血幹細胞を枯渇させる抗体である。
【０２７２】
いくつかの実施形態では、追加の治療薬は、リツキシマブ、セツキシマブ、アレムツズマブ（ＣＤ５２）、アテゾリズマブ（ＰＤ−Ｌ１）、アベルマブ（ＰＤ−Ｌ１）、ベバシズマブ（ＶＥＧＦ）、ブレンツキシマブ（ＣＤ３０）、ダラツムマブ（ＣＤ３８）、デノスマブ（ＲＡＮＫＬ）、ジヌツキシマブ（ＧＤ２）、エロツズマブ（ＳＬＡＭＦ７）、イブリツモマブ（ＣＤ２０）、イピリムマブ（ＣＴＬＡ−４）、ネシツムマブ（ＥＧＦＲ）、ニボルマブ（ＰＤ−１）、オビヌツズマブ（ＣＤ２０）、オファツムマブ（ＣＤ２０））、オララツマブ（ＰＤＧＦＲａ）、パニツムマブ（ＥＧＦＲ）、ペンブロリズマブ（ＰＤ−１）、ペルツズマブ（ＨＥＲ２）、ラムシルマブ（ＶＥＧＦＲ２）、トシツモマブ（ＣＤ２０）、およびゲムツズマブ（ＣＤ３３）のうちの少なくとも１つである。
【０２７３】
追加の治療薬は、任意の好適な手段によって投与することができる。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される抗体および追加の治療薬は、同じ医薬組成物に含まれる。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される抗体および追加の治療薬は、異なる医薬組成物に含まれる。
【０２７４】
本明細書で提供される抗体および追加の治療薬が異なる医薬組成物中に含まれる実施形態では、抗体の投与は、追加の治療薬の投与前、投与と同時、および／または投与後に起こり得る。いくつかの態様では、本明細書で提供される抗体および追加の治療薬の投与は、互いに約１か月以内に起こる。いくつかの態様では、本明細書で提供される抗体および追加の治療薬の投与は、互いに約１週間以内に起こる。いくつかの態様では、本明細書で提供される抗体および追加の治療薬の投与は、互いに約１日以内に起こる。いくつかの態様では、本明細書で提供される抗体および追加の治療薬の投与は、互いに約１２時間以内に起こる。いくつかの態様では、本明細書で提供される抗体および追加の治療薬の投与は、互いに約１時間以内に起こる。
【０２７５】
６．９．医薬組成物
本明細書で提供される抗体は、任意の適切な医薬組成物に製剤化され、任意の好適な投与経路によって投与され得る。好適な投与経路としては、動脈内、皮内、筋肉内、腹腔内、静脈内、経鼻、非経口、肺、および皮下経路が挙げられるが、これらに限定されない。
【０２７６】
医薬組成物は、１つ以上の医薬賦形剤を含み得る。任意の好適な医薬賦形剤を使用し得、当業者は好適な医薬賦形剤を選択することができる。したがって、以下に提供される医薬賦形剤は、例示を目的とするものであり、限定するものではない。追加の医薬賦形剤には、例えば、参照によりその全体が組み込まれるＨａｎｄｂｏｏｋ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｅｘｃｉｐｉｅｎｔｓ，Ｒｏｗｅ  ｅｔ  ａｌ．（Ｅｄｓ．）６ｔｈ  Ｅｄ．（２００９）に記載されているものが含まれる。
【０２７７】
いくつかの実施形態では、医薬組成物は消泡剤を含む。任意の好適な消泡剤を使用してもよい。いくつかの態様では、消泡剤は、アルコール、エーテル、油、ワックス、シリコーン、界面活性剤、およびそれらの組み合わせから選択される。いくつかの態様では、消泡剤は、鉱油、植物油、エチレンビスステアラミド、パラフィンワックス、エステルワックス、脂肪アルコールワックス、長鎖脂肪アルコール、脂肪酸石鹸、脂肪酸エステル、シリコングリコール、フルオロシリコーン、ポリエチレングリコール−ポリプロピレングリコール共重合体、ポリジメチルシロキサン−二酸化ケイ素、エーテル、オクチルアルコール、カプリルアルコール、ソルビタントリオレエート、エチルアルコール、２−エチル−ヘキサノール、ジメチコン、オレイルアルコール、シメチコン、およびそれらの組み合わせから選択される。
【０２７８】
いくつかの実施形態では、医薬組成物は共溶媒を含む。共溶媒の実例としては、エタノール、ポリ（エチレン）グリコール、ブチレングリコール、ジメチルアセトアミド、グリセリン、プロピレングリコール、およびそれらの組み合わせが挙げられる。
【０２７９】
いくつかの実施形態では、医薬組成物は緩衝液を含む。緩衝剤の実例としては、アセテート、ボラート、炭酸塩、乳酸塩、りんご酸塩、リン酸塩、シトラート、水酸化物、ジエタノールアミン、モノエタノールアミン、グリシン、メチオニン、ガーゴム、グルタミン酸ナトリウム、およびそれらの組み合わせが挙げられる。
【０２８０】
いくつかの実施形態では、医薬組成物は、担体または充填剤を含む。担体または充填剤の実例としては、ラクトース、マルトデキストリン、マンニトール、ソルビトール、キトサン、ステアリン酸、キサンタンガム、グアーガム、およびそれらの組み合わせが挙げられる。
【０２８１】
いくつかの実施形態では、医薬組成物は界面活性剤を含む。界面活性剤の実例としては、ｄ−アルファトコフェロール、塩化ベンザルコニウム、塩化ベンゼトニウム、セトリミド、塩化セチルピリジニウム、ドキュセートナトリウム、ベヘン酸グリセリル、モノオレイン酸グリセリル、ラウリン酸、マクロゴール１５ヒドロキシステアレート、ミリスチルアルコール、リン脂質、ポリオキシエチレンアルキルエーテル、ポリオキシエチレンソルビタン脂肪酸エステル、ステアリン酸ポリオキシエチレン、ポリオキシルグリセリド、ラウリル硫酸ナトリウム、ソルビタンエステル、ビタミンＥポリエチレン（グリコール）コハク酸塩、およびそれらの組み合わせが挙げられる。
【０２８２】
いくつかの実施形態では、医薬組成物は固化防止剤を含む。固化防止剤の実例としては、リン酸カルシウム（三塩基性）、ヒドロキシメチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、酸化マグネシウム、およびそれらの組み合わせが挙げられる。
【０２８３】
医薬組成物とともに使用され得る他の賦形剤としては、例えば、アルブミン、抗酸化剤、抗菌剤、抗真菌剤、生体吸収性ポリマー、キレート剤、制御放出剤、希釈剤、分散剤、溶解促進剤、乳化剤、ゲル化剤、軟膏基剤、浸透促進剤、防腐剤、可溶化剤、溶媒、安定化剤、糖、およびそれらの組み合わせが挙げられる。これらの薬剤の各々の特定例は、例えば、参照によりその全体が組み込まれるＨａｎｄｂｏｏｋ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｅｘｃｉｐｉｅｎｔｓ，Ｒｏｗｅ  ｅｔ  ａｌ．（Ｅｄｓ．）６ｔｈ  Ｅｄ．（２００９），Ｔｈｅ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｐｒｅｓｓに記載されている。
【０２８４】
いくつかの実施形態では、医薬組成物は溶媒を含む。いくつかの態様では、溶媒は、無菌等張食塩水またはデキストロース溶液などの生理食塩水である。いくつかの態様では、溶媒は注射用水である。
【０２８５】
いくつかの実施形態では、医薬組成物は、微粒子またはナノ粒子などの粒子形態である。微粒子およびナノ粒子は、ポリマーまたは脂質などの任意の好適な材料から形成され得る。いくつかの態様では、微粒子またはナノ粒子は、ミセル、リポソーム、またはポリマーソームである。
【０２８６】
本明細書では、水がいくつかの抗体の分解を促進することができるため、抗体を含む無水医薬組成物および剤形がさらに提供される。
【０２８７】
本明細書で提供される無水医薬組成物および剤形は、無水または低水分含有成分および低水分または低湿度条件を使用して調製することができる。製造、包装、および／または保管中に水分および／または湿度との実質的な接触が予想される場合、ラクトース、および第１級または第２級アミンを含む少なくとも１つの活性成分を含む、医薬組成物および剤形は無水であり得る。
【０２８８】
無水の医薬組成物は、その無水の性質が維持されるように調製および保存されるべきである。したがって、無水組成物は、好適な処方キットに含めることができるように、水への暴露を防ぐことが知られている材料を使用して包装することができる。好適な包装の例としては、密閉ホイル、プラスチック、単位用量容器（例えば、小瓶）、ブリスターパック、およびストリップパックが挙げられるが、これらに限定されない。
【０２８９】
特定の実施形態では、本明細書で提供される抗体は、非経口剤形として製剤化される。非経口剤形は、皮下、静脈内（注入およびボーラス注射を含む）、筋肉内、および動脈内を含むがこれらに限定されない様々な経路によって対象に投与することができる。それらの投与は、典型的には、汚染物質に対する対象の自然な防御を回避するため、非経口剤形は、典型的には、無菌であるか、対象への投与前に滅菌することができる。非経口剤形の例としては、注射の準備ができている溶液、注射用の薬学的に許容可能なビヒクルに溶解または懸濁する準備ができている乾燥（例えば、凍結乾燥）製品、注射の準備ができている懸濁液、およびエマルジョンが挙げられるが、これらに限定されない。
【０２９０】
非経口剤形を提供するために使用することができる好適なビヒクルは、当業者に周知である。例としては、注射液ＵＳＰのための水；塩化ナトリウム注射液、リンガー注射液、デキストロース注射液、デキストロースおよび塩化ナトリウム注射液、乳酸加リンガー注射液が挙げられるが、これらに限定されない水性ビヒクル；エチルアルコール、ポリエチレングリコール、およびポリプロピレングリコールが挙げられるが、これらに限定されない水混和性ビヒクル；ならびにコーン油、綿実油、落花生油、ゴマ油、オレイン酸エチル、ミリスチン酸イソプロピル、および安息香酸ベンジルが挙げられるが、これらに限定されない非水性ビヒクルが挙げられるが、これらに限定されない。
【０２９１】
本明細書で開示される抗体のうちの１つ以上の溶解度を増加させる賦形剤も、非経口剤形に組み込むことができる。
【０２９２】
いくつかの実施形態では、非経口剤形は凍結乾燥されている。例示的な凍結乾燥製剤は、例えば、その各々は参照によりその全体が組み込まれる、米国特許第６，２６７，９５８号および同第６，１７１，５８６号、ならびにＷＯ２００６／０４４９０８に記載されている。
【０２９３】
ヒトの治療では、医師は予防的または治療的治療に応じて、ならびに治療対象に特有の年齢、体重、状態、および他の要因に応じて、医師が最も適切と考える薬量を決定する。
【０２９４】
特定の実施形態では、本明細書で提供される組成物は、医薬組成物または単一単位剤形である。本明細書で提供される医薬組成物および単一単位剤形は、予防的または治療的有効量の１つ以上の予防的または治療的抗体を含む。
【０２９５】
障害またはその１つ以上の症状の予防または治療に有効となる抗体または組成物の量は、疾患または状態の性質および重症度、ならびに抗体が投与される経路によって異なる。頻度および投与量は、投与される特定の治療法（治療薬または予防薬など）、障害、疾患、または状態の重症度、投与経路、ならびに対象の年齢、身体、体重、応答、および過去の病歴に応じて、各対象に固有の要因によっても異なる。有効用量は、インビトロまたは動物モデルの試験システムから得られた用量反応曲線から推定され得る。
【０２９６】
当業者によって容易に知られるように、異なる疾患および状態に対して異なる治療有効量が適用可能であり得る。同様に、そのような障害を予防、管理、治療または改善するのに十分であるが、本明細書で提供される抗体に関連する有害作用を引き起こすには不十分であるか、または低減するのに十分な量も、本明細書で提供される投与量および投与頻度スケジュールに包含される。さらに、本明細書で提供される組成物の複数の投与量を対象に投与する場合、投与量のすべてが同じである必要はない。例えば、対象に投与される投与量は、組成物の予防または治療効果を改善するために増加され得、または特定の対象が経験している１つ以上の副作用を減少させるために低減され得る。
【０２９７】
特定の実施形態では、治療または予防は、１回以上の維持用量に続いて、本明細書で提供される抗体または組成物の１回以上の負荷用量で開始することができる。
【０２９８】
特定の実施形態では、本明細書で提供される抗体または組成物の用量を投与して、対象の血液または血清中の抗体の定常状態濃度を達成することができる。定常状態濃度は、当業者が利用可能な技術に従って測定することにより決定することができ、または身長、体重、年齢などの対象の身体的特性に基づくことができる。
【０２９９】
本開示の他の箇所でより詳細に考察されるように、本明細書で提供される抗体は、疾患または障害を予防または治療するのに有用な１つ以上の追加の薬剤とともに任意選択的に投与され得る。そのような追加の薬剤の有効量は、製剤中に存在する抗体の量、障害または治療のタイプ、および当技術分野で知られているかまたは本明細書に記載されている他の要因に依存し得る。
【０３００】
６．１０．キットおよび製造物品
本出願は、本明細書に記載の抗体組成物のいずれか１つ以上を含むキットを提供する。いくつかの実施形態では、キットは、二次抗体、免疫組織化学分析のための試薬、薬学的に許容可能な賦形剤および取扱説明書、ならびにそれらの任意の組み合わせのうちのいずれかから選択される構成要素をさらに含む。特定の一実施形態では、キットは、本明細書に記載の抗体組成物のいずれか１つ以上と、１つ以上の薬学的に許容可能な賦形剤とを含む医薬組成物を含む。
【０３０１】
いくつかの実施形態では、キットは、容器と、容器上または容器に関連付けられたラベルまたは添付文書とを含む。好適な容器としては、例えば、ボトル、小瓶、注射器、およびＩＶ溶液バッグが挙げられる。容器は、ガラスまたはプラスチックなどの様々な材料から形成され得る。容器は、それ自体で、または別の組成物と組み合わせたときに、疾患または障害を治療、予防、および／または診断するのに効果的な組成物を保持する。容器は無菌のアクセスポートを有し得る。例えば、容器が静脈注射用の溶液バッグまたは小瓶の場合、容器は、針で刺すことができるポートを有し得る。組成物中の少なくとも１つの活性剤は、本明細書で提供される抗体である。ラベルまたは添付文書は、選択した状態を治療するために組成物が使用されることを示す。
【０３０２】
いくつかの実施形態では、キットは、（ａ）その中に含まれる第１の組成物を有する第１の容器であって、第１の組成物が、本明細書で提供される抗体を含む、第１の容器と、（ｂ）その中に含まれる第２の組成物を有する第２の容器であって、第２の組成物が、さらなる治療薬を含む、第２の容器と、を含む。この実施形態のキットは、組成物を使用して特定の状態を治療することができることを示す添付文書をさらに含むことができる。
【０３０３】
あるいは、またはさらに、キットは、薬学的に許容可能な賦形剤を含む第２（または第３）の容器をさらに含み得る。いくつかの態様では、賦形剤は緩衝剤である。キットはさらに、フィルター、針、および注射器を含む、商業的なおよび使用者の観点から望ましい他の材料を含み得る。
【０３０４】
本出願はまた、本明細書に記載の抗体組成物またはキットのうちのいずれか１つを含む製造物品を提供する。製造物品の例としては、小瓶（密閉小瓶を含む）が挙げられる。
【０３０５】
６．１１．アッセイ
当該技術分野で既知の様々なアッセイを使用して、本明細書中に提供されるＴＲＥＭ１抗体を同定および特徴付けし得る。
【０３０６】
結合、競合、およびエピトープマッピングアッセイ
本明細書で提供される抗体の特異性抗原結合活性は、本開示の他の箇所で説明されるように、ＳＰＲ、ＢＬＩ、ＲＩＡおよびＭＳＤ−ＳＥＴを使用することを含む任意の好適な方法によって評価され得る。さらに、抗原結合活性は、ＥＬＩＳＡアッセイおよびウエスタンブロットアッセイによって評価され得る。
【０３０７】
２つの抗体、または抗体および別の分子（例えば、ＴＲＥＭ１の１つ以上のリガンド）の間の競合を測定するためのアッセイは、本開示の他の箇所、および例えば、参照によりその全体が組み込まれるＨａｒｌｏｗ  ａｎｄ  Ｌａｎｅ，Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ  ｃｈ．１４，１９８８，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ，Ｎ．Ｙに記載されている。
【０３０８】
本明細書で提供される抗体が結合するエピトープをマッピングするためのアッセイは、例えば、参照によりその全体が組み込まれるＭｏｒｒｉｓ“Ｅｐｉｔｏｐｅ  Ｍａｐｐｉｎｇ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ，”Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ  ｖｏｌ．６６，１９９６，Ｈｕｍａｎａ  Ｐｒｅｓｓ，Ｔｏｔｏｗａ，Ｎ．Ｊ．に記載されている。いくつかの実施形態では、エピトープはペプチド競合によって決定される。いくつかの実施形態では、エピトープは質量分析によって決定される。いくつかの実施形態では、エピトープは結晶学によって決定される。
【０３０９】
エフェクタ機能のアッセイ
本明細書で提供される抗体による治療後のエフェクタ機能は、その各々は参照によりその全体が組み込まれる、Ｒａｖｅｔｃｈ  ａｎｄ  Ｋｉｎｅｔ，Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１９９１，９：４５７−４９２、米国特許第５，５００，３６２号、同第５，８２１，３３７号、Ｈｅｌｌｓｔｒｏｍ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ’ｌ  Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，１９８６，８３：７０５９−７０６３、Ｈｅｌｌｓｔｒｏｍ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ’ｌ  Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，１９８５，８２：１４９９−１５０２、Ｂｒｕｇｇｅｍａｎｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．，１９８７，１６６：１３５１−１３６１、Ｃｌｙｎｅｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ’ｌ  Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，１９９８，９５：６５２−６５６、ＷＯ２００６／０２９８７９、ＷＯ２００５／１００４０２、Ｇａｚｚａｎｏ−Ｓａｎｔｏｒｏ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ，１９９６，２０２：１６３−１７１、Ｃｒａｇｇ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｌｏｏｄ，２００３，１０１：１０４５−１０５２、Ｃｒａｇｇ  ｅｔ  ａｌ．Ｂｌｏｏｄ，２００４，１０３：２７３８−２７４３、およびＰｅｔｋｏｖａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｉｎｔ’ｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，２００６，１８：１７５９−１７６９に記載されているものを含む、当技術分野で既知の様々なインビトロおよびインビボアッセイを使用して評価することができる。
【０３１０】
抗体依存性細胞媒介性細胞傷害（ＡＤＣＣ）の例示的なアッセイは、ｈＣＤ１６を発現する標的細胞を使用することである。抗体媒介食作用（ＡＤＣＰ）の例示的なアッセイは、ｈＣＤ３２を発現する標的細胞を使用することである。両方のアッセイについて、ＨＥＫ２９３親または過剰発現ヒトＴＲＥＭ−１を、白色の平底９６ウェルプレート（Ｃｏｓｔａｒ）中で培養する。示された抗体の滴定は、室温で１０分間、８点にわたって１：４または１：５の希釈範囲で０ｕｇ／ｍｌ〜１０ｕｇ／ｍｌの範囲内でこれらの細胞とともにインキュベートされる。抗体とのインキュベーション後、ｈＣＤ１６（ＢＰＳ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）またはｈＣＤ３２（ＢＰＳ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）およびＮＦＡＴ応答性ルシフェラーゼのいずれかを過剰発現する７５，０００個のＪｕｒｋａｔレポーター細胞を、エフェクタ対標的比率３：１で標識細胞に添加する。共培養は、５％ＣＯ２雰囲気中、３７℃で６時間インキュベートする。ＮＦＡＴ（ルシフェラーゼ）活性は、ルシフェラーゼアッセイの基質および試薬をすべてのウェル（ＢＰＳ  ＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓまたはＰｒｏｍｅｇａ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ）に添加することによって測定される。発光は、Ｓｐｅｃｔｒａｍａｘプレートリーダー（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｄｅｖｉｃｅｓ）を使用して読み取られる。ＥＣ５０値は、Ｇｒａｐｈｐａｄ  Ｐｒｉｓｍ（Ｇｒａｐｈｐａｄ  Ｓｏｆｔｗａｒｅ）のＨＥＫ２９３親細胞から生成されたバックグラウンド発光よりも過剰発現細胞に結合する抗体から生成されたルシフェラーゼシグナルをカーブフィッティングすることによって計算される。
【０３１１】
ＡＤＣＣは、抗体濃度の関数としてＧＦＰ陽性標的細胞の損失として決定される。抗体自体の能力は、マクロファージ非依存性ＡＤＣＣを誘発するそれらの能力についても評価することができる。ＡＤＣＰは、抗体濃度の関数として、シングレットにゲートされたＣｅｌｌ−Ｔｒａｃｅ  Ｖｉｏｌｅｔ／ＧＦＰ二重陽性細胞の形成として決定される。ＥＣ５０値は、Ｇｒａｐｈｐａｄ  Ｐｒｉｓｍ（Ｇｒａｐｈｐａｄ  Ｓｏｆｔｗａｒｅ）のＨＥＫ２９３親細胞から生成されたバックグラウンドよりも過剰発現細胞に結合する抗体から生成されたＡＤＣＣ／ＡＤＣＰをカーブフィッティングすることによって計算される。
【０３１２】
ＡＤＣＣおよびＡＤＣＰのための追加の例示的なアッセイとしては、マクロファージなどの一次細胞を使用するアッセイが挙げられる。マクロファージは、骨髄由来マクロファージ（ＢＭＤＭ）または単球由来マクロファージ（ＭＤＭ）であり得る。マクロファージＡＤＣＣおよびＡＤＣＰアッセイの場合、５０，０００個のＧＦＰ陽性親ＢＷまたはヒトＴＲＥＭ１を過剰発現するＢＷ、またはＧＦＰ陽性親ＨＥＫ２９３またはヒトＴＲＥＭ１を過剰発現するＨＥＫ２９３を９６ウェルプレート中で培養する。示された非コンジュゲート抗体の滴定は、室温で１５分間、８点までの１：４または１：５の希釈範囲で０ｕｇ／ｍｌ〜１０ｕｇ／ｍｌの範囲内でこれらの細胞とともにインキュベートされる。抗体とのインキュベーション後、ＩＦＮ−γ（Ｐｅｐｒｏｔｅｃｈ）またはＬＰＳ（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ）／ＩＦＮ−γで処理されたマクロファージを含む５０，０００個のＣｅｌｌ  Ｔｒａｃｅ  Ｖｉｏｌｅｔ（Ｌｉｆｅ  ＴｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓによるＭｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｐｒｏｂｅｓ）を、エフェクタ対標的比率１対１で標識標的細胞に添加される。マクロファージは、回収の前日にＩＦＮ−γで処理され、回収の１時間前にＬＰＳで処理される。共培養は、共培養は、５％ＣＯ２雰囲気中、３７℃で１８時間インキュベートし、その後、培養物を回収し、フローサイトメトリー（ＢＤ  Ｆｏｒｔｅｓｓａ  Ｘ−１４、ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）によってＡＤＣＣおよびＡＤＣＰについて分析される。
【０３１３】
補体依存性細胞毒性（ＣＤＣ）の例示的なアッセイは、ヒトＴＲＥＭ１を発現する標的細胞を使用することである。細胞を対数期の培養物から回収し、５×１０４−２×１０５の細胞を９６枚のウェルＵ底プレート中で培養する。培養後、血清と抗ヒトＴＲＥＭ１ｍＡｂ（ｈＩｇＧ１アイソタイプ）とを含有するヒト補体の１：１の混合物を添加し、３７℃で２〜３時間、標的細胞とインキュベートする。インキュベーション後、フローサイトメトリーまたは発光ベースの方法（Ｃｅｌｌ  Ｔｉｔｅｒ  Ｇｌｏ（Ｐｒｏｍｅｇａ、Ｍａｄｉｓｏｎ、ＷＩ）など）によって標的細胞死を測定することによって、抗体媒介性ＣＤＣ活性を評価する。
【実施例】
【０３１４】
以下は、本発明を実施するための特定の実施形態の実施例である。実施例は、例示の目的のみのために提供され、本発明の範囲を決して限定することを意図するものではない。使用された数値（例えば、量、温度など）に関して正確さを確保するための努力がなされたが、もちろん、いくらかの実験誤差および偏差は許容されるべきである。
【０３１５】
本発明の実施は、特に明記しない限り、当技術分野の範囲内のタンパク質化学、生化学、組み換えＤＮＡ技法、および薬理学の従来の方法を使用することになる。そのような技法は、文献で完全に説明されている。例えば、Ｔ．Ｅ．Ｃｒｅｉｇｈｔｏｎ，Ｐｒｏｔｅｉｎｓ：Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅｓ  ａｎｄ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ（Ｗ．Ｈ．Ｆｒｅｅｍａｎ  ａｎｄ  Ｃｏｍｐａｎｙ，１９９３）、Ａ．Ｌ．Ｌｅｈｎｉｎｇｅｒ，Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ（Ｗｏｒｔｈ  Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ，Ｉｎｃ．，ｃｕｒｒｅｎｔ  ａｄｄｉｔｉｏｎ）、Ｓａｍｂｒｏｏｋ，ｅｔ  ａｌ．，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ（２ｎｄ  Ｅｄｉｔｉｏｎ，１９８９）、Ｍｅｔｈｏｄｓ  Ｉｎ  Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ（Ｓ．Ｃｏｌｏｗｉｃｋ  ａｎｄ  Ｎ．Ｋａｐｌａｎ  ｅｄｓ．，Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ，Ｉｎｃ．）、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，１８ｔｈ  Ｅｄｉｔｉｏｎ（Ｅａｓｔｏｎ，Ｐｅｎｎｓｙｌｖａｎｉａ：Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏｍｐａｎｙ，１９９０）、Ｃａｒｅｙ  ａｎｄ  Ｓｕｎｄｂｅｒｇ  Ａｄｖａｎｃｅｄ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ３ｒｄ  Ｅｄ．（Ｐｌｅｎｕｍ  Ｐｒｅｓｓ）Ｖｏｌｓ  Ａ  ａｎｄ  Ｂ（１９９２）を参照されたい。
【０３１６】
７．１．実施例１：抗ｍＴＲＥＭ１抗体の特性化
エピトープビニング実験：
マウスＴＲＥＭ−１を過剰発現する１００，０００個のＨＥＫ２９３細胞を９６ウェルプレート中で培養し、死細胞をＺｏｍｂｉｅ  Ｎｅａｒ  Ｉｎｆｒａｒｅｄ（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ、サンディエゴ、カリフォルニア州）で染色した。続いて、これらの細胞を、示された非コンジュゲート抗マウスＴＲＥＭ−１抗体とともに、飽和濃度で、氷上で１５分間インキュベートした。これらの抗体とのインキュベーション後、細胞を氷上で３０分間、示されたＡｌｅｘａ  Ｆｌｕｏｒ６４７コンジュゲート抗体で染色した。非コンジュゲート抗体の存在下で結合するコンジュゲート抗体の能力は、フローサイトメトリー（ＢＤ  Ｆｏｒｔｅｓｓａ  Ｘ−１４、ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ、サンホゼ、カリフォルニア州）によって測定されたＡｌｅｘａ６４７シグナルによって評価された。各抗体は、内部実験対照のためにそれ自体を遮断するために検証された。
【０３１７】
抗体源：
ＰＩ−９０６７ｓ、ＰＩ−９０６７Ｌ、ＰＩ−９０６８、ＰＩ−９０６９ｓ、およびＰＩ−９０６９Ｌは、Ｐｉｏｎｙｒ  Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓによって製造された。ＶＬ、ＶＨ、ＣＬ、ＣＨ、およびＣＤＲの配列を表２に示す。抗ＴＲＥＭ１クローンＬ５−Ｂ８．２Ａ１２．３Ａ１２は、Ｔｈｅｒｍｏ（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、ウォルサム、マサチューセッツ州）から購入した。抗ＴＲＥＭ１クローン１７４０３１は、Ｒ＆Ｄ（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ、ミネアポリス、ミネソタ州）から購入した。。抗ＴＲＥＭ１クローンＴＲ３ＭＢＬ１は、ｅＢｉｏ（ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ、カールズバッド、カリフォルニア州）から購入した。
【０３１８】
ＰＩ−９０６７ｓおよびＰＩ−９０６９ｓは、完全にヒトのカッパ軽鎖および完全にヒトの重鎖（ヒンジ領域の末端までの）を有する。この直後、Ｆｃの残りのＣＨ２およびＣＨ３ドメインはマウスである。ＰＩ−９０６７ＬおよびＰＩ−９０６９Ｌは、重鎖および軽鎖の両方のヒト可変領域の直後に開始する完全なマウス定常配列を有する。抗体を「ｓ」配列から「Ｌ」配列に再操作して、抗体の薬物動態特性を改善し、完全にマウスのヒンジとＦｃ領域を持つことでｍＡｂのＦｃ部分の幾何学および柔軟性を改善した。
【０３１９】
タンパク質結合（Ｋｄ測定）：
結合動態は、ＧＬＣまたはシリーズＳ  ＣＭ５チップ上に固定化または捕捉されたマウスＴＲＥＭ−１Ｈｉｓ（Ｃｒｅａｔｉｖｅ  Ｂｉｏｍａｒｔ、シャーリー、ニューヨーク州）を備えたＰＲＯＴＥＯＮ  ＸＰＲ３６（ＢｉｏＲａｄ、ハーキュリーズ、カリフォルニア州）またはＢｉａｃｏｒｅ  Ｔ２００（ＧＥ  ヘルスケア、英国）を使用する表面プラズモン共鳴によって決定された。示された抗体の連続希釈液を５０〜１００ｕｌ／分で２分間注入した。次いで、ＰＢＳまたはシステム緩衝液を１００ｕｌ／分で１０分間注入して、解離を観察した。結合応答は、ブランクフローセルの応答を差し引くことにより修正された。動態解析では、ｋｏｎ値とｋｏｆｆ値のグローバルフィッティングの１：１ラングミュアモデルを使用した。Ｋｄ値は、ｋｏｎとｋｏｆｆとの比率から決定された。
【０３２０】
細胞結合（ＥＣ５０測定）：
１００，０００ＨＥＫ個の２９３親または過剰発現するマウスＴＲＥＭ−１を９６ウェルプレート中で培養し、死細胞をＺｏｍｂｉｅ  Ｎｅａｒ  Ｉｎｆｒａｒｅｄ（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ、サンディエゴ、カリフォルニア州）で染色した。示された非コンジュゲート抗体の滴定は、８点にわたって１：４または１：５の希釈範囲で０ｕｇ／ｍｌ〜３０ｕｇ／ｍｌの範囲内でこれらの細胞とともにインキュベートされる。アイソタイプ（ｈＩｇＧ１またはｍＩｇＧ２ａ）に応じて、これらの一次非コンジュゲート抗体は、Ａｌｅｘａ  Ｆｌｕｏｒ６４７コンジュゲート抗ヒトＦｃγまたは抗マウスＦｃγ二次抗体（Ｊａｃｋｓｏｎ  Ｉｍｍｕｎｏｒｅｓｅａｒｃｈ、ウェストグローブ、ペンシルヴェニア州）で検出された。Ａｌｅｘａ  Ｆｌｕｏｒ６４７シグナルをフローサイトメトリー（ＢＤ  Ｆｏｒｔｅｓｓａ  Ｘ−１４、ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ、サンホゼ、カリフォルニア州）によって測定した。ＥＣ５０値は、Ｇｒａｐｈｐａｄ  Ｐｒｉｓｍ（Ｇｒａｐｈｐａｄ  Ｓｏｆｔｗａｒｅ、ラ・ホーヤ、カリフォルニア州）のＨＥＫ２９３親細胞から生成されたバックグラウンド蛍光よりも過剰発現細胞に結合する抗体から生成されたシグナルをカーブフィッティングすることによって計算された。
【０３２１】
ＡＤＣＣおよびＡＤＣＰレポーターアッセイ（ＥＣ５０測定）：
２５，０００ＨＥＫ２９３親または過剰発現マウスＴＲＥＭ−１を、白色の平底９６ウェルプレート（Ｃｏｓｔａｒ、Ｃｏｒｎｉｎｇ、ニューヨーク州）中で培養した。示された非コンジュゲート抗体（ｈＩｇＧ１またはｍＩｇＧ２ａ）の滴定は、室温で１０分間、８点にわたって１：４または１：５の希釈範囲で０ｕｇ／ｍｌ〜１０ｕｇ／ｍｌの範囲内でこれらの細胞とともにインキュベートされた。抗体とのインキュベーション後、ｈＣＤ３２（ｈＩｇＧ１アイソタイプについて、ＢＰＳ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ、サンディエゴ、カリフォルニア州）またはｍＦｃγＲＩＶ（ｍＩｇＧ２ａアイソタイプについて、Ｐｒｏｍｅｇａ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ、マディソン、ウィスコンシン州）およびＮＦＡＴ応答性ルシフェラーゼのいずれかを過剰発現する７５，０００個のＪｕｒｋａｔレポーター細胞を、エフェクタ対標的比率３：１で標識細胞に添加した。共培養は、５％ＣＯ２雰囲気中、３７℃で６時間インキュベートした。ＮＦＡＴ（ルシフェラーゼ）活性は、ルシフェラーゼアッセイの基質および試薬をすべてのウェル（ＢＰＳ  ＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓまたはＰｒｏｍｅｇａ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ）に添加することによって測定された。発光は、Ｓｐｅｃｔｒａｍａｘプレートリーダー（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｄｅｖｉｃｅｓ、サニーベール、カリフォルニア州）を使用して読み取られた。ＥＣ５０値は、Ｇｒａｐｈｐａｄ  Ｐｒｉｓｍ（Ｇｒａｐｈｐａｄ  Ｓｏｆｔｗａｒｅ）のＨＥＫ２９３親細胞から生成されたバックグラウンド発光よりも過剰発現細胞に結合する抗体から生成されたルシフェラーゼシグナルをカーブフィッティングすることによって計算された。
【０３２２】
図１は、抗ｍＴＲＥＭ１抗体を用いた、組み換えおよび細胞ベースの特異性ＴＲＥＭ１結合、エピトープビニング、ＡＤＣＣ／ＡＤＣＰ機能実験の結果を示す。このデータは、ＡＤＣＣおよびＡＤＣＰ活性を引き出すことができるエピトープの範囲からの高親和性抗マウスＴＲＥＭ１抗体の生成を示す。
【０３２３】
７．２．実施例２：ＭＣ３８インビボ効果実験：
ＭＣ３８（結腸腺癌細胞）をＳｔｅｍＰｒｏ  Ａｃｃｕｔａｓｅ  Ｃｅｌｌ  Ｄｉｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ試薬（Ｇｉｂｃｏ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ、ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、ウォルサム、マサチューセッツ州）を使用して回収し、ＰＢＳで洗浄し、右腹側腹部に８×１０５個の細胞の容量で、雌のＣ５７ＢＬ／６マウス（Ｊａｃｋｓｏｎ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ、バーハーバー、メイン州）に皮下注射した。腫瘍の平均サイズが７５〜１３０ｍｍ３になるまで、腫瘍成長を監視し、その後、マウスを、アイソタイプ対照（ｍＩｇＧ２ａ）、ならびにＰｉ−９０６７ｓおよびＰｉ−９０６９ｓと称される２つの抗マウスＴＲＥＭ１クローンを表す３つの治療群に無作為化した。抗体治療はすべて１５ｍｇ／ｋｇであり、治療は腫瘍接種後９日目、１４日目、１８日目、および２３日目であった。腫瘍サイズは、式Ｖ（ｍｍ３）＝（ＬｘＷｘＷ）÷２（式中、Ｗ＝幅、Ｌ＝長さ、Ｖ＝体積）を使用して評価された。キャリパーを使用して腫瘍を週に２〜３回測定し、腫瘍体積が２０００ｍｍ３に到達したときにマウスを安楽死させた。
【０３２４】
抗体源：
ｍＩｇＧ２ａアイソタイプ対照クローンＣ１．１８．４は、ＢｉｏＸＣｅｌｌ（ＢｉｏＸＣｅｌｌ、ウェストレバノン、ニューハンプシャー州）から購入した。Ｐｉ−９０６７ｓおよびＰｉ−９０６９ｓは、Ｐｉｏｎｙｒ  Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓによって製造された。配列を表２に示す。
【０３２５】
図２は、アイソタイプ対照および９０６７ｓと比較したＭＣ３８モデルの単剤療法としての９０６９ｓ治療の抗腫瘍活性を示す。図３は、アイソタイプ、９０６７ｓ、および９０６９ｓの単剤治療に対する個々のＭＣ３８担腫瘍マウスの応答を示す。ＰＩ−９０６９ｓは、ＭＣ３８腫瘍モデルでＰＩ−９０６７ｓよりも強い抗腫瘍活性を示した。
【０３２６】
７．３．実施例３：ＣＴ２６インビボ効果実験：
ＣＴ２６（結腸腺癌細胞）をＳｔｅｍＰｒｏ  Ａｃｃｕｔａｓｅ  Ｄｉｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ試薬（Ｇｉｂｃｏ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ）を使用して回収し、ＰＢＳで洗浄し、右腹側腹部に１×１０６個の細胞の用量で、雌のＢＡＬＢ／ｃマウス（Ｔａｃｏｎｉｃ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ、ハドソン、ニューヨーク州）に皮下注射した。腫瘍の平均サイズが７５〜１３０ｍｍ３になるまで、腫瘍成長を監視し、その後、マウスを、アイソタイプ治療（ｍＩｇＧ２ａおよびｍＩｇＧ１）、単剤抗マウスＴＲＥＭ−１（Ｐｉ−９０６９ＬおよびｍＩｇＧ１）、単剤抗マウスＰＤ−１（ｍＩｇＧ２ａおよびＰｉ−７１１４）、および併用療法（Ｐｉ−９０６９ＬおよびＰｉ−７１１４）を表す４つの治療群に無作為化した。ｍＩｇＧ２ａおよびＰｉ−９０６９Ｌの抗体処理は１５ｍｇ／ｋｇであり、ｍＩｇＧ１およびＰｉ−７１１４の抗体処理は５ｍｇ／ｋｇであった。治療は、腫瘍接種後７日目、１２日目、１７日目、および２２日目であった。腫瘍サイズは、式Ｖ（ｍｍ３）＝（ＬｘＷｘＷ）÷２（式中、Ｗ＝幅、Ｌ＝長さ、Ｖ＝体積）を使用して評価された。キャリパーを使用して腫瘍を週に２〜３回測定し、腫瘍体積が２０００ｍｍ３に到達したときにマウスを安楽死させた。
【０３２７】
抗体源：
ｍＩｇＧ１アイソタイプ対照クローンＭＯＰＣ−２１は、ＢｉｏＸＣｅｌｌ（ＢｉｏＸＣｅｌｌ、ウェストレバノン、ニューハンプシャー州）から購入した。ｍＩｇＧ２ａアイソタイプ対照クローンＣ１．１８．４は、ＢｉｏＸＣｅｌｌ（ＢｉｏＸＣｅｌｌ、ウェストレバノン、ニューハンプシャー州）から購入した。Ｐｉ−９０６９ＬおよびＰｉ−７１１４は、Ｐｉｏｎｙｒ  Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓによって作製された。Ｐｉ−７１１４は、ｒＩｇＧ２ａからｍＩｇＧ１に切り替えられたクローンＲＭＰ１−１４（ＢｉｏＸＣｅｌｌ、ウェストレバノン、ニューハンプシャー州）アイソタイプである。
【０３２８】
図４は、対照と比較したＣＴ２６モデルにおける９０６９Ｌと抗ＰＤ１の併用治療の抗腫瘍活性を示す。図５は、９０６９Ｌおよび抗ＰＤ１の併用治療に対する個々のＣＴ２６担腫瘍マウスの応答を示す。
【０３２９】
９０６９Ｌおよび抗ＰＤ−１の組み合わせは、９０６９Ｌ単独、抗ＰＤ−１単独、およびアイソタイプ処理マウスよりも強い抗腫瘍効果を示した。この効果は、個々のマウスの成長曲線を分析するときに、より詳細に見ることができる。併用群では、単一の薬剤対照群には存在しなかった強力な応答者のサブセットがあった。
【０３３０】
７．４．実施例４：受容体占有（ＲＯ）および薬力学的（ＰＤ）研究：
ＣＴ２６（結腸腺癌細胞）、ＬＬ／２（肺腺癌）、ＭＣ３８（結腸腺癌）、およびＲＥＮＣＡ（腎細胞癌）をＳｔｅｍＰｒｏ  Ａｃｃｕｔａｓｅ  Ｄｉｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ試薬（Ｇｉｂｃｏ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ）を使用して回収し、ＰＢＳで洗浄し、右腹側腹部に８×１０５−１×１０６個の細胞の用量で、雌のＣ５７ＢＬ／６（Ｊａｃｋｓｏｎ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ）またはＢＡＬＢ／ｃ（Ｔａｃｏｎｉｃ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）に皮下注射した。腫瘍の平均サイズが７５〜１３０ｍｍ３になるまで、腫瘍成長を監視し、その後、マウスを、アイソタイプ治療（ｍＩｇＧ２ａ）、および抗マウスＴＲＥＭ１（Ｐｉ−９０６９ｓまたはＬ）を表す２つの治療群に無作為化した。抗体治療は両方の腕で１５ｍｇ／ｋｇであり、マウスは示された時点で２回治療された。２回目の投与の４８時間後、マウスを安楽死させ、免疫集団分析およびＴＲＥＭ１の発現のために、腫瘍および血液を回収した。免疫集団および発現分析は、フローサイトメトリー（ＢＤ  Ｆｏｒｔｅｓｓａ  Ｘ−１４、ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）によって実行された。
【０３３１】
単球およびＴＡＭ枯渇スコアは、９０６９ｓまたはＬ処理群における単球またはＴＡＭとＣＤ１０３＋ＤＣとの比率と比較して、単型またはＴＡＭとＣＤ１０３＋ＤＣとの比率として計算された。枯渇スコアが高いほど、ＣＤ１０３＋ＤＣと比較してＴＡＭまたは単球の枯渇が多いことを示す。
【０３３２】
図６は、４つの別個の同系腫瘍モデルにおける９０６９ｓまたはＬを用いた腫瘍内受容体占有および薬力学研究の実験計画の概略図を示す。
【０３３３】
図７は、４つの別個の同系腫瘍モデルにおける９０６９ｓまたはＬが腫瘍内ＴＡＭおよび単球枯渇スコアを増加させることを示す。特に、ＲｅｎＣａおよびＬＬ／２は、抗ＴＲＥＭ１の効果を試験するのに良好な腫瘍モデルであった。
【０３３４】
図８は、９０６９ｓまたはＬが４つの別個の同系腫瘍モデルでは腫瘍内骨髄特異性ＲＯ活性を示すことを示す。
【０３３５】
図９は、９０６９ｓまたはＬが４つの別個の同系腫瘍モデルでは腫瘍内骨髄特異性ＰＤ活性を示すことを示す。
【０３３６】
図１０は、ＭＣ３８モデルにおける９０６９Ｌの用量増加効果実験を示しており、その効果は腫瘍内単球の枯渇と相関している。
【０３３７】
ナイーブマウスＣ５７ＢＬ／６マウス（Ｊａｃｋｓｏｎ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ）に、２用量のｍＩｇＧ２ａアイソタイプ対照または９０６９Ｌを用量あたり１５ｍｇ／ｋｇで投与した。２回目の投与の４８時間後、マウスを安楽死させ、単球および好中球の分析、ならびにＴＲＥＭ１の発現のために、血液および骨髄を回収した。免疫集団および発現分析は、フローサイトメトリー（ＢＤ  Ｆｏｒｔｅｓｓａ  Ｘ−１４、ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）によって実行された。
【０３３８】
図１１は、９０６９Ｌがナイーブマウスの血液および骨髄中の単球を有意に減少させるが、好中球を減少させず、単球前駆細胞を枯渇させている可能性があることを示す。
【０３３９】
要約すると、図６〜１１は、ＰＩ−９０６９ｓまたはＬが４つの別個のモデルで腫瘍微小環境に適切に入り、ＴＲＥＭ１発現骨髄集団に結合することができることを示す。さらにまた、ＰＩ−９０６９ｓまたはＬは、用量に依存した様式で抗腫瘍活性と相関する腫瘍微小環境内のＴＲＥＭ１発現細胞集団、特に単球の数を減少させた。
【０３４０】
７．５．実施例５：一次ヒト腫瘍試料における抗ｈＴＲＥＭ１ｍＡｂおよびＴＲＥＭ１発現の特性化
エピトープビニング実験：
ヒトＴＲＥＭ−１を過剰発現する１００，０００個のＨＥＫ２９３細胞を９６ウェルプレートで培養し、死細胞をＺｏｍｂｉｅ  Ｎｅａｒ  Ｉｎｆｒａｒｅｄ（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ）で染色した。続いて、これらの細胞を、示された非コンジュゲート抗ヒトＴＲＥＭ−１抗体とともに、飽和濃度で、氷上で１５分間インキュベートした。これらの抗体とのインキュベーション後、細胞を氷上で３０分間、示されたＡｌｅｘａ  Ｆｌｕｏｒ６４７コンジュゲート抗体で染色した。非コンジュゲート抗体の存在下で結合するコンジュゲート抗体の能力は、フローサイトメトリー（ＢＤ  Ｆｏｒｔｅｓｓａ  Ｘ−１４、ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）によって測定されたＡｌｅｘａ６４７シグナルによって評価された。各抗体は、内部実験対照のためにそれ自体を遮断するために検証された。
【０３４１】
抗体源：
Ｐｉ−８４１９およびＰｉ−８４２１は、Ｐｉｏｎｙｒ  Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓによって作製された。ＶＬ、ＶＨ、およびＣＤＲの配列を表２に示す。ｍＡｂ０１７０：米国特許第ＵＳ２０１３／０２１１０５０Ａ１号から得られ、Ｐｉｏｎｙｒ  Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓによって操作された配列。ＶＬ、ＶＨ、およびＣＤＲの配列を表２に示す。
【０３４２】
細胞結合（ＥＣ５０測定）：
１００，０００個のＨＥＫ２９３親または過剰発現ヒトまたはカニクイザルＴＲＥＭ−１を９６ウェルプレート中で培養し、死細胞をＺｏｍｂｉｅ  Ｎｅａｒ  Ｉｎｆｒａｒｅｄ（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ）で染色した。示された非コンジュゲート抗体の滴定は、８点にわたって１：４または１：５の希釈範囲で０ｕｇ／ｍｌ〜３０ｕｇ／ｍｌの範囲内でこれらの細胞とともにインキュベートされる。アイソタイプ（ｈＩｇＧ１またはｍＩｇＧ２ａ）に応じて、これらの一次非コンジュゲート抗体は、Ａｌｅｘａ  Ｆｌｕｏｒ６４７コンジュゲート抗ヒトＦｃγまたは抗マウスＦｃγ二次抗体（Ｊａｃｋｓｏｎ  Ｉｍｍｕｎｏｒｅｓｅａｒｃｈ）で検出された。Ａｌｅｘａ  Ｆｌｕｏｒ６４７シグナルは、フローサイトメトリー（ＢＤ  Ｆｏｒｔｅｓｓａ  Ｘ−１４、ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）によって測定した。ＥＣ５０値は、Ｇｒａｐｈｐａｄ  Ｐｒｉｓｍ（Ｇｒａｐｈｐａｄ  Ｓｏｆｔｗａｒｅ）のＨＥＫ２９３親細胞から生成されたバックグラウンド蛍光よりも過剰発現細胞に結合する抗体から生成されたシグナルをカーブフィッティングすることによって計算された。
【０３４３】
ＡＤＣＣおよびＡＤＣＰレポーターアッセイ（ＥＣ５０測定）：
２５，０００ＨＥＫ２９３親または過剰発現ヒトＴＲＥＭ−１を、白色の平底９６ウェルプレート（Ｃｏｓｔａｒ）中で培養した。示された非コンジュゲート抗体（ｈＩｇＧ１）の滴定は、室温で１０分間、８点にわたって１：４または１：５の希釈範囲で０ｕｇ／ｍｌ〜１０ｕｇ／ｍｌの範囲内でこれらの細胞とともにインキュベートされた。抗体とのインキュベーション後、ｈＣＤ３２（ＢＰＳ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）またはｈＣＤ１６（ＢＰＳ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）およびＮＦＡＴ応答性ルシフェラーゼのいずれかを過剰発現する７５，０００個のＪｕｒｋａｔレポーター細胞を、エフェクタ対標的比率３：１で標識細胞に添加した。共培養は、５％ＣＯ２雰囲気中、３７℃で６時間インキュベートした。ＮＦＡＴ（ルシフェラーゼ）活性は、ルシフェラーゼアッセイの基質および試薬をすべてのウェル（ＢＰＳ  ＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓまたはＰｒｏｍｅｇａ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ）に添加することによって測定された。発光は、Ｓｐｅｃｔｒａｍａｘプレートリーダー（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｄｅｖｉｃｅｓ）を使用して読み取られた。ＥＣ５０値は、Ｇｒａｐｈｐａｄ  Ｐｒｉｓｍ（Ｇｒａｐｈｐａｄ  Ｓｏｆｔｗａｒｅ）のＨＥＫ２９３親細胞から生成されたバックグラウンド発光よりも過剰発現細胞に結合する抗体から生成されたルシフェラーゼシグナルをカーブフィッティングすることによって計算された。
【０３４４】
ＡＤＣＣ／ＡＤＣＰ（一次単球由来マクロファージ／ＭＤＭアッセイ）：
単球は、健康なドナー（Ｓｔａｎｆｏｒｄ  Ｂｌｏｏｄ  Ｃｅｎｔｒｅ、パロアルト、カリフォルニア州）からの末梢血からフィコール（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）単離を受けたＰＢＭＣからＣＤ１４＋細胞（ＳｔｅｍＣｅｌｌ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ、バンクーバー、カナダ）のネガティブ選択を使用して単離された。単球を、マクロファージ培地中の５０ｎｇ／ｍｌのヒトＭ−ＣＳＦ（Ｒ＆Ｄシステム、ミネアポリス、ミネソタ州）を有する非ＴＣ処理１５ｃｍ皿または６ウェルプレート中で培養した。マクロファージ培地は、ＲＰＭＩ（Ｇｉｂｃｏ）、１０％ＦＣＳ（Ｈｙｃｌｏｎｅ、ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）、Ｇｌｕｔａｍａｘ（Ｇｉｂｃｏ）、非必須アミノ酸（Ｇｉｂｃｏ）、ピルビン酸ナトリウム（Ｇｉｂｃｏ）、２−ベータメルカプトエタノール（Ｇｉｂｃｏ）、およびペニシリン／ストレプトマイシン（カリフォルニア大学、サンフランシスコ）からなっていた。培地は３日目に補充され、単球はマクロファージに分化し、単球単離後６〜８日の間使用する準備が整った。
【０３４５】
ＭＤＭアッセイの場合、５０，０００個のＧＦＰ陽性親ＢＷまたはヒトＴＲＥＭ１を過剰発現するＢＷ、またはＧＦＰ陽性親ＨＥＫ２９３またはヒトＴＲＥＭ１を過剰発現するＨＥＫ２９３を９６ウェルプレート中で培養した。示された非コンジュゲート抗体の滴定は、室温で１５分間、８点までの１：４または１：５の希釈範囲で０ｕｇ／ｍｌ〜１０ｕｇ／ｍｌの範囲内でこれらの細胞とともにインキュベートされた。抗体とのインキュベート後、ＩＦＮ−γ（Ｐｅｐｒｏｔｅｃｈ、ロッキーヒル、ニュージャージー州）またはＬＰＳ（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ、セントルイス、ミズーリ州）／ＩＦＮ−γ処理マクロファージで標識された５０，０００個のＣｅｌｌ  Ｔｒａｃｅ  Ｖｉｏｌｅｔ（Ｌｉｆｅ  ＴｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓによるＭｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｐｒｏｂｅｓ、ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）を、エフェクタ対標的比率１対１で標識標的細胞に添加された。マクロファージは、回収の前日にＩＦＮ−γで処理され、回収の１時間前にＬＰＳで処理された。共培養は、共培養は、５％ＣＯ２雰囲気中、３７℃で１８時間インキュベートし、その後、培養物を回収し、フローサイトメトリー（ＢＤ  Ｆｏｒｔｅｓｓａ  Ｘ−１４、ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）によってＡＤＣＣおよびＡＤＣＰについて分析された。
【０３４６】
ＡＤＣＣは、抗体濃度の関数としてＧＦＰ陽性標的細胞の損失として決定された。抗体自体の能力は、マクロファージ非依存性ＡＤＣＣを誘発するそれらの能力についても評価した。ＡＤＣＰは、抗体濃度の関数として、シングレットにゲートされたＣｅｌｌ−Ｔｒａｃｅ  Ｖｉｏｌｅｔ／ＧＦＰ二重陽性細胞の形成として決定された。ＥＣ５０値は、Ｇｒａｐｈｐａｄ  Ｐｒｉｓｍ（Ｇｒａｐｈｐａｄ  Ｓｏｆｔｗａｒｅ）のＨＥＫ２９３親細胞から生成されたバックグラウンドよりも過剰発現細胞に結合する抗体から生成されたＡＤＣＣ／ＡＤＣＰをカーブフィッティングすることによって計算された。
【０３４７】
図１２は、抗ｈＴＲＥＭ１抗体を用いた、細胞ベースの特異性ＴＲＥＭ１結合、エピトープビニング、ＡＤＣＣ／ＡＤＣＰ機能実験の結果を示す。このデータは、ＡＤＣＣおよびＡＤＣＰ活性を引き出すことができるエピトープの範囲を標的とする高親和性抗ヒトＴＲＥＭ１抗体の生成を示す。
【０３４８】
ヒト腫瘍試料および正常な隣接組織は、Ｃｏｏｐｅｒａｔｉｖｅ  Ｈｕｍａｎ  Ｔｉｓｓｕｅ  Ｎｅｔｗｏｒｋ（ＣＨＴＮ）から調達された。Ｍｉｌｔｅｎｙｉ  Ｈｕｍａｎ  Ｔｕｍｏｒ  Ｄｉｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ  Ｋｉｔ（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ  Ｂｉｏｔｅｃ、ケルン、ドイツ）を使用して、試料を消化して単細胞懸濁液にした。単細胞懸濁液を９６ウェルプレート中で培養し、浸潤免疫集団ならびにＴＲＥＭ１およびＴＲＥＭ２の発現をフローサイトメトリー（ＢＤ  Ｆｏｒｔｅｓｓａ  Ｘ−１４、ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）によって分析した。数字は、個々の腫瘍の特定の免疫集団のアイソタイプを超える特定のＴＲＥＭ１およびＴＲＥＭ２染色のレベルを示す。
【０３４９】
図１３は、一次ヒト腫瘍試料のＤＣおよびリンパ球と比較して、ＴＲＥＭ１がＴＡＭ上に高度に発現していることを示す。このデータは、ＴＲＥＭ１が癌のヒト患者から腫瘍微小環境で発現し、ＴＲＥＭ１が骨髄集団、特にＴＡＭ上で高度に発現していることを示す。
【０３５０】
７．６．実施例６：抗ＴＲＥＭ１抗体のエピトープ特性化
エピトープビニング実験：
ヒトＴＲＥＭ−１を過剰発現する１００，０００個のＨＥＫ２９３細胞を９６ウェルプレートで培養し、死細胞をＺｏｍｂｉｅ  Ｎｅａｒ  Ｉｎｆｒａｒｅｄ（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ）で染色した。続いて、これらの細胞を、示された非コンジュゲート抗ヒトＴＲＥＭ−１抗体とともに、飽和濃度で、氷上で１５分間インキュベートした。これらの抗体とのインキュベーション後、細胞を氷上で３０分間、示されたＡｌｅｘａ  Ｆｌｕｏｒ６４７コンジュゲート抗体で染色した。非コンジュゲート抗体の存在下で結合するコンジュゲート抗体の能力は、フローサイトメトリー（ＢＤ  Ｆｏｒｔｅｓｓａ  Ｘ−１４、ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）によって測定されたＡｌｅｘａ６４７シグナルによって評価された。各抗体は、内部実験対照のためにそれ自体を遮断するために検証された。
【０３５１】
抗体源：
ｍＡｂ０１７０：米国特許第ＵＳ２０１３／０２１１０５０Ａ１号から得られ、Ｐｉｏｎｙｒ  Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓによって操作された配列。Ｐｉ−８４１９およびＰｉ−８４２１は、Ｐｉｏｎｙｒ  Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓによって作製された。ＶＬ、ＶＨ、およびＣＤＲの配列を表２に示す。抗ＴＲＥＭ１クローン１９３０１５は、Ｒ＆Ｄ（Ｒ＆Ｄシステム、ミネアポリス、ミネソタ州）から購入した。
【０３５２】
図１４は、抗ｈＴＲＥＭ１抗体を用いたビニング実験の結果を示す。ＰＩ−８４２１は、ｍＡｂ０１７０および１９３０１５の両方に対して異なる結合競合を表示した。これは、ヒトＴＲＥＭ１の異なるエピトープに結合することを示す。
【０３５３】
７．７．実施例７：Ｐｉ８４２１の特性化
細胞結合（ＥＣ５０測定）：
１００，０００個のＨＥＫ２９３親または過剰発現ヒトまたはカニクイザルＴＲＥＭ−１を９６ウェルプレート中で培養し、死細胞をＺｏｍｂｉｅ  Ｎｅａｒ  Ｉｎｆｒａｒｅｄ（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ）で染色した。示された非コンジュゲート抗体の滴定は、８点にわたって１：４または１：５の希釈範囲で０ｕｇ／ｍｌ〜３０ｕｇ／ｍｌの範囲内でこれらの細胞とともにインキュベートされた。アイソタイプ（ｈＩｇＧ１またはｍＩｇＧ２ａ）に応じて、これらの一次非コンジュゲート抗体は、Ａｌｅｘａ  Ｆｌｕｏｒ６４７コンジュゲート抗ヒトＦｃγまたは抗マウスＦｃγ二次抗体（Ｊａｃｋｓｏｎ  Ｉｍｍｕｎｏｒｅｓｅａｒｃｈ）で検出された。Ａｌｅｘａ  Ｆｌｕｏｒ６４７シグナルは、フローサイトメトリー（ＢＤ  Ｆｏｒｔｅｓｓａ  Ｘ−１４、ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）によって測定された。ＥＣ５０値は、Ｇｒａｐｈｐａｄ  Ｐｒｉｓｍ（Ｇｒａｐｈｐａｄ  Ｓｏｆｔｗａｒｅ）のＨＥＫ２９３親細胞から生成されたバックグラウンド蛍光よりも過剰発現細胞に結合する抗体から生成されたシグナルをカーブフィッティングすることによって計算された。
【０３５４】
図１５は、８４２１がｈＴＲＥＭ１に結合するがｃＴＲＥＭ１には結合しないことを示す。
【０３５５】
７．８．実施例８：Ｐｉ８４２１およびｍＡｂ０１７０のＡＤＣＣおよびＡＤＣＰ活性
ＡＤＣＣおよびＡＤＣＰレポーターアッセイ（ＥＣ５０測定）：
２５，０００ＨＥＫ２９３親または過剰発現ヒトＴＲＥＭ−１を、白色の平底９６ウェルプレート（Ｃｏｓｔａｒ）中で培養した。示された非コンジュゲート抗体（ｈＩｇＧ１）の滴定は、室温で１０分間、８点にわたって１：４または１：５の希釈範囲で０ｕｇ／ｍｌ〜１０ｕｇ／ｍｌの範囲内でこれらの細胞とともにインキュベートされた。抗体とのインキュベーション後、ｈＣＤ３２（ＢＰＳ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）またはｈＣＤ１６（ＢＰＳ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）およびＮＦＡＴ応答性ルシフェラーゼのいずれかを過剰発現する７５，０００個のＪｕｒｋａｔレポーター細胞を、エフェクタ対標的比率３：１で標識細胞に添加した。共培養は、５％ＣＯ２雰囲気中、３７℃で６時間インキュベートした。ＮＦＡＴ（ルシフェラーゼ）活性は、ルシフェラーゼアッセイの基質および試薬をすべてのウェル（ＢＰＳ  ＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓまたはＰｒｏｍｅｇａ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ）に添加することによって測定された。発光は、Ｓｐｅｃｔｒａｍａｘプレートリーダー（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｄｅｖｉｃｅｓ）を使用して読み取られた。ＥＣ５０値は、Ｇｒａｐｈｐａｄ  Ｐｒｉｓｍ（Ｇｒａｐｈｐａｄ  Ｓｏｆｔｗａｒｅ）のＨＥＫ２９３親細胞から生成されたバックグラウンド発光よりも過剰発現細胞に結合する抗体から生成されたルシフェラーゼシグナルをカーブフィッティングすることによって計算された。
【０３５６】
図１６は、８４２１および０１７０が、試験されたレポーターアッセイシステムにおいて同様のＡＤＣＣおよびＡＤＣＰ活性を有することを示す。このデータは、ＰＩ−８４２１がＴＲＥＭ−１に依存した様式で、ＡＤＣＣおよびＡＤＣＰを誘発する能力を有することを示す。
【０３５７】
７．９．実施例９：一次マクロファージを有する８４２１のＡＤＣＣおよびＡＤＣＰ活性
ＡＤＣＣ／ＡＤＣＰ（一次単球由来マクロファージ／ＭＤＭアッセイ）：
単球は、健康なドナー（Ｓｔａｎｆｏｒｄ  Ｂｌｏｏｄ  Ｃｅｎｔｒｅ、パロアルト、カリフォルニア州）からの末梢血からフィコール（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）単離を受けたＰＢＭＣからＣＤ１４＋細胞（ＳｔｅｍＣｅｌｌ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ、バンクーバー、カナダ）のネガティブ選択を使用して単離された。単球を、マクロファージ培地中の５０ｎｇ／ｍｌのヒトＭ−ＣＳＦ（Ｒ＆Ｄシステム）を有する非ＴＣ処理１５ｃｍ皿または６ウェルプレート中で培養した。マクロファージ培地は、ＲＰＭＩ（Ｇｉｂｃｏ）、１０％ＦＣＳ（Ｈｙｃｌｏｎｅ、ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）、Ｇｌｕｔａｍａｘ（Ｇｉｂｃｏ）、非必須アミノ酸（Ｇｉｂｃｏ）、ピルビン酸ナトリウム（Ｇｉｂｃｏ）、２−ベータメルカプトエタノール（Ｇｉｂｃｏ）、およびペニシリン／ストレプトマイシン（カリフォルニア大学、サンフランシスコ）からなっていた。培地は３日目に補充され、単球はマクロファージに分化し、単球単離後６〜８日間使用する準備が整った。
【０３５８】
ＭＤＭアッセイの場合、５０，０００個のＧＦＰ陽性親ＢＷまたはヒトＴＲＥＭ１を過剰発現するＢＷ、またはＧＦＰ陽性親ＨＥＫ２９３またはヒトＴＲＥＭ１を過剰発現するＨＥＫ２９３を９６ウェルプレート中で培養した。示された非コンジュゲート抗体の滴定は、室温で１５分間、８点までの１：４または１：５の希釈範囲で０ｕｇ／ｍｌ〜１０ｕｇ／ｍｌの範囲内でこれらの細胞とともにインキュベートされた。抗体とのインキュベーション後、ＩＦＮ−γ（Ｐｅｐｒｏｔｅｃｈ）またはＬＰＳ（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ）／ＩＦＮ−γで処理されたマクロファージを含む５０，０００個のＣｅｌｌ  Ｔｒａｃｅ  Ｖｉｏｌｅｔ（Ｌｉｆｅ  ＴｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓによるＭｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｐｒｏｂｅｓ）を、エフェクタ対標的比率１対１で標識標的細胞に添加された。マクロファージは、回収の前日にＩＦＮ−γで処理され、回収の１時間前にＬＰＳで処理された。共培養は、共培養は、５％ＣＯ２雰囲気中、３７℃で１８時間インキュベートし、その後、培養物を回収し、フローサイトメトリー（ＢＤ  Ｆｏｒｔｅｓｓａ  Ｘ−１４、ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）によってＡＤＣＣおよびＡＤＣＰについて分析された。
【０３５９】
ＡＤＣＣは、抗体濃度の関数としてＧＦＰ陽性標的細胞の損失として決定された。抗体自体の能力は、マクロファージ非依存性ＡＤＣＣを誘発するそれらの能力についても評価した。ＡＤＣＰは、抗体濃度の関数として、シングレットにゲートされたＣｅｌｌ−Ｔｒａｃｅ  Ｖｉｏｌｅｔ／ＧＦＰ二重陽性細胞の形成として決定された。ＥＣ５０値は、Ｇｒａｐｈｐａｄ  Ｐｒｉｓｍ（Ｇｒａｐｈｐａｄ  Ｓｏｆｔｗａｒｅ）のＨＥＫ２９３親細胞から生成されたバックグラウンドよりも過剰発現細胞に結合する抗体から生成されたＡＤＣＣ／ＡＤＣＰをカーブフィッティングすることによって計算された。
【０３６０】
図１７は、８４２１が一次マクロファージ設定においてＡＤＣＣおよびＡＤＣＰ活性を誘発することを示す。要約すると、ＰＩ−８４２１は、ＴＲＥＭ１に依存した様式で、一次マクロファージによってＡＤＣＣおよびＡＤＣＰの両方を誘発することができた。
【０３６１】
７．１０．実施例１０：抗ｍＴＲＥＭ１抗体９０６７Ｌ、４９２８、および９７７２の特性化
エピトープビニング実験：
マウスＴＲＥＭ−１を過剰発現する１００，０００個のＨＥＫ２９３細胞を９６ウェルプレート中で培養し、死細胞をＺｏｍｂｉｅ  Ｎｅａｒ  Ｉｎｆｒａｒｅｄ（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ、サンディエゴ、カリフォルニア州）で染色した。続いて、これらの細胞を、示された非コンジュゲート抗マウスＴＲＥＭ−１抗体とともに、飽和濃度で、氷上で１５分間インキュベートした。これらの抗体とのインキュベーション後、細胞を氷上で３０分間、示されたＡｌｅｘａ  Ｆｌｕｏｒ６４７コンジュゲート抗体で染色した。非コンジュゲート抗体の存在下で結合するコンジュゲート抗体の能力は、フローサイトメトリー（ＢＤ  Ｆｏｒｔｅｓｓａ  Ｘ−１４、ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ、サンホゼ、カリフォルニア州）によって測定されたＡｌｅｘａ６４７シグナルによって評価された。各抗体は、内部実験対照のためにそれ自体を遮断するために検証された。
【０３６２】
抗体源
Ｐｉ−９０６７Ｌ、Ｐｉ−４９２８、およびＰｉ−９７７２は、Ｐｉｏｎｙｒ  Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓによって作製された。Ｐｉ−９０６７Ｌ、Ｐｉ−４９２８、およびＰｉ−９７７２の配列を表２に示す。
【０３６３】
エピトープマッピング
抗マウスＴＲＥＭ１  ｍＡｂ、Ｐｉ−９０６７Ｌ、Ｐｉ−４９２８、およびＰｉ−９７７２のエピトープマッピングは、フローサイトメトリーによるｍＡｂクロスブロッキング実験を使用して実施された。図１８Ａに示されるように、３つの抗ＴＲＥＭ１ｍＡｂは、様々な内部および市販のｍＡｂに対して評価した場合、明確な遮断特性を有し、ｍＴＲＥＭ１の個別のエピトープに結合することを示す。マウスＩｇＶドメイン１、２、および３の配列を表２に示す。配列は、各ドメインを含む線形アミノ酸ストレッチを意味し、番号付けは、マウスＴＲＥＭ１のＵｎｉＰｒｏｔ配列分析および３Ｄモデリングに基づく。
【０３６４】
フローサイトメトリーに基づく遮断実験に加えて、ヒトおよびマウスＴＲＥＭ１のキメラコンストラクトは、完全なヒトＩｇＶおよびＩｇＶの別個のドメインをマウスＴＲＥＭ１に、またはその逆に置換したことによって作製された。これにより、各ｍＡｂの野生型配列への結合に重要なドメインの決定が可能になった。図１８Ｂに示されるように、この直交アプローチは、Ｐｉ−９０６７Ｌ、Ｐｉ−４９２８、およびＰｉ−９７７２がマウスＴＲＥＭ１上の別個のエピトープに結合することも示した。
【０３６５】
生化学的特性化
タンパク質結合（Ｋｄ測定）：
示された抗マウスＴＲＥＭ１抗体の結合動態は、マウスＴＲＥＭ１−ｈＩｇＧ１Ｆｃ融合タンパク質に対して評価された。プロットは、示された各抗体の異なる濃度に関連する結合曲線上に重ねられた１：１結合ラングミュアモデルを適用することによって生成された。示された各抗体を、捕捉されたマウスＴＲＥＭ１−ｈＩｇＧ１Ｆｃ融合タンパク質の上に、Ｂｉａｃｏｒｅ  Ｔ２００機器を使用して、Ｔｗｅｅｎ−２０を含むＰＢＳで３０〜５０ｕＬ／ｍｉｎの流量で１２０〜１８０秒、９００秒の解離時間で注入した。
【０３６６】
抗マウスＴＲＥＭ１ｍＡｂ、ＰＩ−９０６７Ｌ、ＰＩ−４９２８、およびＰＩ−９７７２の生化学的特徴は、結合動態、生産力価、およびＳＥＣを含むいくつかの標準的な生化学的手法を使用して決定された。図１８Ｃは、３つのｍＡｂの生化学的特性化の概要を示す。生化学的特性化に基づいて、３つのｍＡｂはすべてインビボ特性化に好適な特性を有する。
【０３６７】
好中球結合
マウスｍＡｂが内因的に発現したマウスＴＲＥＭ１に特異的に結合することができるかどうかを決定するために、Ｐｉ−９０６７Ｌ、Ｐｉ−４９２８、およびＰｉ−９７７２をＢＡＬＢ／ｃ脾細胞上で滴定した。脾臓をＢＡＬＢ／ｃマウスから回収し、単細胞脾細胞懸濁液に処理した。示された抗マウスＴＲＥＭ１抗体は、滴定に依存した様式でＦＡＣＳ解析によって脾細胞集団に結合するそれらの能力について評価された。簡単に説明すると、脾細胞を、Ｆｃ受容体を遮断する生／死生存性マーカーおよび試薬で標識した。次いで、主要な骨髄球およびリンパ球集団をサブセット化することができる抗体を含有するバックボーンカクテルを使用して、好中球を画成した。好中球（ＣＤ２４＋Ｌｙ６Ｇ＋Ｌｙ６Ｃ＋ＣＤ１１ｂ＋）およびリンパ球（ＣＤ３＋ＮＫ１．１＋Ｂ２２０＋ＣＤ１９＋ＮＫｐ４６＋）の特定のゲーティングを使用して、各抗体による特定のマウスＴＲＥＭ１染色を評価した。図１９は、Ｐｉ−９０６７ＬおよびＰｉ−４９２８が、最も強いＥＣ５０値で好中球上に特異的な染色を示したことを示す。これらのｍＡｂは、リンパ球に結合するバックグラウンドを示さなかった。対照的に、Ｐｉ−９７７２はリンパ球へのバックグラウンド結合を示し、好中球上で最も弱いＥＣ５０値を有した。要約すると、このデータは、ＰＩ−９０６７ＬおよびＰＩ−４９２８が優れた結合および生物物理学的特性を有し、内因性マウスＴＲＥＭ１を高い親和性および特異性で認識することを示す。さらにまた、それらはマウスＴＲＥＭ１上の別個のエピトープに各々結合し、インビボでの抗ＴＲＥＭ１抗体の抗腫瘍効果を評価するために使用することができる。
【０３６８】
７．１１．実施例１１：Ｐｉ−９０６７Ｌ、Ｐｉ−９７７２、およびＰｉ−４９２８ｍＡｂの結合およびＡＤＣＣ特性
細胞結合（ＥＣ５０測定）：
１００，０００ＨＥＫ個の２９３親または過剰発現するマウスＴＲＥＭ−１を９６ウェルプレート中で培養し、死細胞をＺｏｍｂｉｅ  Ｎｅａｒ  Ｉｎｆｒａｒｅｄ（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ、サンディエゴ、カリフォルニア州）で染色した。示された非コンジュゲートフコシル化抗体または非フコシル化抗体（Ｐｉ−９０６７Ｌ、Ｐｉ−９７７２、およびＰｉ−４９２８の）の滴定は、８点にわたって１：４または１：５の希釈範囲で０ｕｇ／ｍｌ〜３０ｕｇ／ｍｌの範囲内でこれらの細胞とともにインキュベートされた。これらの一次非コンジュゲート抗体は、Ａｌｅｘａ  Ｆｌｕｏｒ６４７コンジュゲート抗マウスＦｃγ二次抗体（Ｊａｃｋｓｏｎ  Ｉｍｍｕｎｏｒｅｓｅａｒｃｈ、ウェストグローブ、ペンシルヴェニア州）で検出された。Ａｌｅｘａ  Ｆｌｕｏｒ６４７シグナルをフローサイトメトリー（ＢＤ  Ｆｏｒｔｅｓｓａ  Ｘ−１４、ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ、サンホゼ、カリフォルニア州）によって測定した。ＥＣ５０値は、Ｇｒａｐｈｐａｄ  Ｐｒｉｓｍ（Ｇｒａｐｈｐａｄ  Ｓｏｆｔｗａｒｅ、ラ・ホーヤ、カリフォルニア州）のＨＥＫ２９３親細胞から生成されたバックグラウンド蛍光よりも過剰発現細胞に結合する抗体から生成されたシグナルをカーブフィッティングすることによって計算された。
【０３６９】
ＡＤＣＣレポーターアッセイ（ＥＣ５０測定）：
野生型または非フコシル化抗体（Ｐｉ−９０６７Ｌ、Ｐｉ−９７７２、およびＰｉ−４９２８）の、ＡＤＣＣと、およびマウスＴＲＥＭ−１を過剰発現する細胞に対する活性とをアッセイした。
【０３７０】
２５，０００ＨＥＫ２９３親または過剰発現マウスＴＲＥＭ−１を、白色の平底９６ウェルプレート（Ｃｏｓｔａｒ）中で培養した。示された非コンジュゲート抗体の滴定は、室温で１０分間、８点にわたって１：４または１：５の希釈範囲で０ｕｇ／ｍｌ〜１０ｕｇ／ｍｌの範囲内でこれらの細胞とともにインキュベートされた。抗体とのインキュベーション後、ｍＦｃγＲＩＶおよびＮＦＡＴ応答性ルシフェラーゼ（Ｐｒｏｍｅｇａ、マディソン、ウィスコンシン州）を過剰発現する７５，０００個のＪｕｒｋａｔレポーター細胞を、エフェクタ対標的比率３：１で標識細胞に添加した。共培養は、５％ＣＯ２雰囲気中、３７℃で６時間インキュベートした。ＮＦＡＴ（ルシフェラーゼ）活性は、ルシフェラーゼアッセイの基質および試薬をすべてのウェル（プロメガ、マディソン、ウィスコンシン州）に添加することによって測定された。発光は、Ｓｐｅｃｔｒａｍａｘプレートリーダー（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｄｅｖｉｃｅｓ）を使用して読み取られた。ＥＣ５０値は、Ｇｒａｐｈｐａｄ  Ｐｒｉｓｍ（Ｇｒａｐｈｐａｄ  Ｓｏｆｔｗａｒｅ）でＨＥＫ２９３親細胞から生成されたバックグラウンド発光を超える過剰発現細胞に結合する抗体から生成されたルシフェラーゼシグナルをカーブフィッティングすることによって計算された。
【０３７１】
細胞結合およびＡＤＣＣアッセイの結果を図２０に示す。Ｐｉ−９０６７Ｌ、Ｐｉ−９７７２、およびＰｉ−４９２８  ＴＲＥＭ１  ｍＡｂはすべて、マウスＴＲＥＭ１を過剰発現する細胞で滴定すると、１桁の低いナノモルＥＣ５０値を示した。非フコシル化は、ｍＡｂのＥＣ５０値に有意に影響を与えなかったが、ＡＤＣＣの代理であるマウスＦｃγＲＩＶを介したシグナル伝達を誘発する能力を増強した。要約すると、このデータは、Ｐｉ−９０６７Ｌ、Ｐｉ−９７７２、およびＰｉ−４９２８の非フコシル化が、これらの抗体がマウスＴＲＥＭ１に結合する能力に影響を与えないが、ＦｃγＲに結合してＡＤＣＣシグナル伝達を誘発する能力を著しく増強することを示す。
【０３７２】
７．１２．実施例１２．受容体占有（ＲＯ）および薬力学的（ＰＤ）研究
受容体占有
ＣＴ２６およびＭＣ３８同系腫瘍モデルで、Ｐｉ−９０６７ＬおよびＰｉ−４９２８を使用してインビボ研究を実施した。マウス腫瘍研究の例示的な研究計画を図２１に示す。
【０３７３】
ＣＴ２６（結腸腺癌細胞）をＳｔｅｍＰｒｏ  Ａｃｃｕｔａｓｅ  Ｄｉｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ試薬（Ｇｉｂｃｏ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ）を使用して回収し、ＰＢＳで洗浄し、右腹側腹部に１×１０６個の細胞の用量で、雌のＢＡＬＢ／ｃマウス（Ｔａｃｏｎｉｃ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ、ハドソン、ニューヨーク州）に皮下注射した。腫瘍の平均サイズが７５〜１３０ｍｍ３になるまで、腫瘍成長を監視した。ＭＣ３８（結腸腺癌細胞）をＳｔｅｍＰｒｏ  Ａｃｃｕｔａｓｅ  Ｃｅｌｌ  Ｄｉｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ試薬（Ｇｉｂｃｏ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ、ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、ウォルサム、マサチューセッツ州）を使用して回収し、ＰＢＳで洗浄し、右腹側腹部に８×１０５個の細胞の容量で、雌のＣ５７ＢＬ／６マウス（Ｊａｃｋｓｏｎ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ、バーハーバー、メイン州）に皮下注射した。腫瘍の平均サイズが７５〜１３０ｍｍ３になるまで、腫瘍成長を監視した。続いて、マウスをアイソタイプ対照（ｍＩｇＧ２ａ）を表す３つの治療群と、Ｐｉ−９０６７ＬおよびＰｉ−４９２８と称される２つの抗マウスＴＲＥＭ１クローンに無作為化した。マウスの１つのコホートを薬力学的および受容体占有に使用し（群あたり５マウス）、第２のコホートをＰｉ９０６７ＬおよびＰｉ−４９２８の効果の評価に使用した（群あたり１０マウス）。抗体治療は１５ｍｇ／ｋｇであった。薬力学的および受容体占有の研究は、２回目のｍＡｂ投与の１〜２日後に実行され（５日ごとにｍＡｂが投与された）、腫瘍および末梢血が収集され、フローサイトメトリー用に処理された。効果の治療も５日ごとに行われ、最大５回の投与が行われた。腫瘍サイズは、式Ｖ（ｍｍ３）＝（ＬｘＷｘＷ）÷２（式中、Ｗ＝幅、Ｌ＝長さ、Ｖ＝体積）を使用して評価された。キャリパーを使用して腫瘍を週に２〜３回測定し、腫瘍体積が２０００ｍｍ３に到達したときにマウスを安楽死させた。ＣＴ２６およびＭＣ３８モデルの両方におけるＰｉ−９０６７ＬおよびＰｉ４９２８の受容体占有率は、実施例４で前述したように評価された。
【０３７４】
図２２に示すように、ＣＴ２６（図２２Ａおよび２２Ｃ）ならびにＭＣ３８モデル（図２２Ｂおよび２２Ｄ）においてＰＩ−９０６７ＬとＰＩ−４９２８との両方の治療を行った腫瘍内好中球でＲＯが観察され、両方のｍＡｂが腫瘍微小環境に適切に入り、ＴＲＥＭ１発現免疫集団に結合することを示した。ＲＯは、ＴＡＭ、単球、ＤＣサブセットなどの他の腫瘍内骨髄集団でも観察されたが、リンパ球集団では観察されなかった（データは示していない）。これは、ＴＲＥＭ１発現が末梢血中の循環好中球でのみ観察されたナイーブマウスとは対照的である。これは、ＴＲＥＭ１が腫瘍微小環境内の骨髄集団の範囲で上方制御されていることを示す。
【０３７５】
薬力学
ＰＤ分析のために、ＴＲＥＭ１発現細胞の枯渇を測定した。図２３は、ＣＴ２６モデルでのＰｉ−９０６７Ｌによる単球および好中球の腫瘍内枯渇を示す。単球および好中球の絶対数は、それぞれ２倍および２．３倍減少した。ＲＯデータと一致して、ＴおよびＮＫ細胞は影響を受けなかった。ＣＴ２６データとは対照的に、ＭＣ３８モデルではＴＲＥＭ１発現集団の有意な枯渇は観察されなかった（データは示していない）。まとめると、このデータは、Ｐｉ−９０６７ＬがＣＴ２６腫瘍微小環境内のＴＲＥＭ１発現細胞を特異的に枯渇させることができることを示す。
【０３７６】
７．１３．実施例１３：ＣＴ２６インビボ併用療法の効果
Ｐｉ−９０６７Ｌおよび非フコシル化Ｐｉ−９０６７Ｌ（Ａｆｕｃ−Ｐｉ−９０６７Ｌ）は、ＣＴ２６腫瘍モデルで抗ＰＤ−１と組み合わせて試験された。ＣＴ２６（結腸腺癌細胞）をＳｔｅｍＰｒｏ  Ａｃｃｕｔａｓｅ  Ｄｉｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ試薬（Ｇｉｂｃｏ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ）を使用して回収し、ＰＢＳで洗浄し、右腹側腹部に１×１０６個の細胞の用量で、雌のＢＡＬＢ／ｃマウス（Ｔａｃｏｎｉｃ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ、ハドソン、ニューヨーク州）に皮下注射した。腫瘍の平均サイズが７５〜１３０ｍｍ３になるまで、腫瘍成長を監視し、その後、マウスを、アイソタイプ治療（ｍＩｇＧ２ａおよびｍＩｇＧ１）、単剤抗マウスＴＲＥＭ−１（Ｐｉ−９０６７Ｌおよび非フコシル化Ｐｉ−９０６７Ｌ（アイソタイプ対照を有する））、単剤抗マウスＰＤ−１（アイソタイプ対照を有する抗ＰＤ−１）、および併用療法（Ｐｉ−９０６７Ｌおよび非フコシル化Ｐｉ−９０６７Ｌ（抗ＰＤ−１を有する））を表す６つの治療群に無作為化した。ｍＩｇＧ２ａ、Ｐｉ−９０６７Ｌ、およびＡｆｕｃ−Ｐｉ−９０６７Ｌの抗体用量は１５ｍｇ／ｋｇであり、ｍＩｇＧ１および抗ＰＤ−１の抗体用量は５ｍｇ／ｋｇであった。治療は、腫瘍接種後９日目、１４日目、および１９日目であった。腫瘍サイズは、式Ｖ（ｍｍ３）＝（ＬｘＷｘＷ）÷２（式中、Ｗ＝幅、Ｌ＝長さ、Ｖ＝体積）を使用して評価された。キャリパーを使用して腫瘍を週に２〜３回測定し、腫瘍体積が２０００ｍｍ３に到達したときにマウスを安楽死させた。
【０３７７】
図２４に見られるように、Ａｆｕｃ−ＰＩ−９０６７Ｌは、ＰＩ−９０６７Ｌよりも抗ＰＤ−１と併用した場合によりよい抗腫瘍活性を有した（図２４Ａ）。抗腫瘍活性に対するＰＩ−９０６７Ｌの非フコシル化の影響は、個々のマウス腫瘍体積の分析においてより明確に見られた。図２４Ｂは、抗ＰＤ−１と組み合わせたＰｉ−９０６７Ｌの個々の腫瘍体積を示す。図２４Ｃは、抗ＰＤ−１と組み合わせたＡｆｕｃ−Ｐｉ−９０６７Ｌの個々の腫瘍体積を示す。Ｐｉ−９０６７Ｌ併用コホートと比較して、Ａｆｕｃ−ＰＩ−９０６７Ｌ併用コホートでは応答者として分類されたより多くのマウスが存在し（それぞれ５／１０と比較して３／１０）、各マウスの平均総腫瘍体積はより低かった（Ａｆｕｃ−Ｐｉ−９０６７＝７９６．８±５２５．１ｍｍ３およびＰｉ−９０６７＝１３３０±７７２．８ｍｍ３）。このデータは、おそらく非フコシル化バージョンがＦｃγＲに結合する能力が増強されているため、ＰＩ−９０６７Ｌの非フコシル化がフコシル化ＰＩ−９０６７ＬよりもＣＴ２６モデルでよりよい抗腫瘍効果をもたらすことを示している。
【０３７８】
Ａｆｕｃ−ＰＩ−９０６７Ｌは、抗ＰＤ−１と組み合わせたＷＴ  ＰＩ−９０６７ＬよりもＣＴ２６モデルでより強力な抗腫瘍効果を誘発したため、抗ＰＤ−１と組み合わせたＡｆｕｃ−ＰＩ−４９２８の治療効果もこのモデルで評価された。図２５Ａに示されるように、対照群と比較して、Ａｆｕｃ−Ｐｉ−４９２８および抗ＰＤ−１の組み合わせも組み合わせ治療効果を示した。エンドポイント腫瘍体積を評価したとき、Ａｆｕｃ−Ｐｉ−４９２８＋抗ＰＤ−１の組み合わせにおける平均腫瘍サイズは、すべての対照群に対して有意に異なっていた（図２５Ｂ）。
【０３７９】
７．１４．実施例１４：Ｐｉ−９０６７および非フコシル化Ｐｉ−９０６７を使用したＭＣ３８のインビボ効果
図２６Ａおよび２６Ｂに示されるように、Ｐｉ−９０６７Ｌはまた、ＭＣ３８結腸腫瘍モデルの単剤療法として有意な抗腫瘍活性を誘発することも観察された。ＭＣ３８（結腸腺癌細胞）をＳｔｅｍＰｒｏ  Ａｃｃｕｔａｓｅ  Ｃｅｌｌ  Ｄｉｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ試薬（Ｇｉｂｃｏ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ、ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、ウォルサム、マサチューセッツ州）を使用して回収し、ＰＢＳで洗浄し、右腹側腹部に８×１０５個の細胞の容量で、雌のＣ５７ＢＬ／６マウス（Ｊａｃｋｓｏｎ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ、バーハーバー、メイン州）に皮下注射した。腫瘍の平均サイズが７５〜１３０ｍｍ３になるまで、腫瘍成長を監視し、その後、マウスを、アイソタイプ対照（ｍＩｇＧ２ａ）、ならびにフコシル化および非フコシル化抗マウスＴＲＥＭ１  Ｐｉ−９０６７Ｌを表す３つの治療群に無作為化した。抗体治療はすべて１５ｍｇ／ｋｇであり、治療は腫瘍接種後１２日目、１７日目、２２日目、および２６日目であった。腫瘍サイズは、式Ｖ（ｍｍ３）＝（ＬｘＷｘＷ）÷２（式中、Ｗ＝幅、Ｌ＝長さ、Ｖ＝体積）を使用して評価された。キャリパーを使用して腫瘍を週に２〜３回測定し、腫瘍体積が２０００ｍｍ３に到達したときにマウスを安楽死させた。
【０３８０】
図２６に示すように、Ａｆｕｃ−Ｐｉ−９０６７Ｌは、ＷＴ  Ｐｉ−９０６７Ｌと比較して治療上の利点の増加を示さなかった。ＰＩ−９０６７Ｌによる治療では、ＭＣ３８モデルでＴＲＥＭ１＋細胞の枯渇が観察されなかったため、非フコシル化によるさらなる治療上の利点の欠如は、この観察と一致している。
【０３８１】
７．１５．実施例１５：Ｐｙ８１１９インビボ併用療法の効果
トリプルネガティブ乳癌のＰｙ８１１９モデルにおける抗ＰＤ−１と組み合わせたＡｆｕｃ−ＰＩ−４９２８の治療効果も評価された。
【０３８２】
Ｐｙ８１１９乳癌腫系（ＡＴＣＣ、マナッサス、バージニア州）を対数期で回収し、等量のマトリゲルで混合した雌のＣ５７ＢＬ／６マウス（Ｊａｃｋｓｏｎ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ）の右腹側腹部に２×１０６細胞／マウスの用量で皮下注射した。大部分のマウスの腫瘍が７０〜１３０ｍｍ３に到達した後、マウスを無作為化し、示された抗体の投薬を開始した。抗体は、Ａｆｕｃ−ＰＩ−４９２８およびｍＩｇＧ２ａアイソタイプでは１５ｍｇ／ｋｇ、抗ＰＤ１およびｍＩｇＧ１アイソタイプでは５ｍｇ／ｋｇで、５日ごとに４回までの頻度で腹腔内に投与された。腫瘍の成長は、式（体積（ｍｍ３）＝［長さ（ｍｍ）×幅（ｍｍ）×幅（ｍｍ）］／２）を使用するキャリパー測定によって経時的に測定された。
【０３８３】
各群の個々の腫瘍曲線を図２７に示す。図２７Ａはアイソタイプ対照を示し、図２７Ｂは抗ＰＤ−１治療を示し、図２７ＣはＡｆｕｃ−Ｐｉ−４９２８治療を示し、図２７ＤはＡｆｕｃ−Ｐｉ−４９２８＋抗ＰＤ−１治療を示す。各治療のエンドポイント腫瘍体積を図２７Ｅに示す。併用腕のエンドポイント腫瘍体積は、アイソタイプ対照およびＡｆｕｃ−ＰＩ−４９２８対照コホートよりも有意に低かった。対照的に、抗ＰＤ−１のみの対照コホートは、他の群と有意な差はなかった。したがって、Ａｆｕｃ−ＰＩ−４９２８と抗ＰＤ−１との組み合わせは、抗ＰＤ−１またはＡｆｕｃ−ＰＩ−４９２８単独と比較して、Ｐｙ８１１９モデルでより強い抗腫瘍活性を示した。
【０３８４】
７．１６．実施例１６：Ｐｉ−９０６７ＬおよびＰｉ−４９２８の薬物動態（ＰＫ）
ＣＴ２６またはＭＣ３８担腫瘍マウスにＰｉ−９０６７Ｌ、Ｐｉ−４９２８、またはそれらの非フコシル化対応物を２回投与した。ＣＴ２６またはＭＣ３８担腫瘍マウスの血漿中のＰｉ−９０６７ＬおよびＰｉ−４９２８ｍＡｂレベルを、ｍＡｂの２回目の投与の４８時間後に評価した。抗マウスＴＲＥＭ１ｍＡｂの血清レベルは、標準のリガンド結合ＥＬＩＳＡ形式を使用して決定された。マウスＴＲＥＭ１  Ｈｉｓタグ付き融合コンストラクトをＮｕｎｃ  ＭａｘｉＳｏｒｐ平底プレート上にコーティングした後、非結合部位をＢＳＡで遮断した。Ｐｉ−９０６７ＬおよびＰｉ−４９２８（フコシル化または非フコシル化）ｍＡｂ標準またはマウス血漿試料を、Ｔｗｅｅｎ界面活性剤を含有するアッセイ緩衝液内で希釈し、抗原コーティングプレートに添加した。結合したｍＡｂを、光学密度吸収による比色定量化のために、ＨＲＰにコンジュゲートした抗マウスＩｇＧ２ａ二次ｍＡｂを用いて、検出した。
【０３８５】
インビボ血漿濃度
図２８Ａは、ＣＴ２６担腫瘍マウスにおけるＰｉ−９０６７ＬおよびＰｉ−４９２８の平均血漿レベルを示す。Ｐｉ−９０６７ＬおよびＰｉ−４９２８の血漿濃度に有意な差はなかった。ＭＣ３８モデルでも同様の結果が見られた（図２８Ｂ）。次に、フコシル化抗体の対応物と比較して、非フコシル化ｍＡｂのＰＫ特性も評価した。図２８Ｃに見られるように、ＣＴ２６担腫瘍マウスでは、親Ｐｉ−９０６７ＬとＡｆｕｃ−Ｐｉ−９０６７Ｌとの間で血漿濃度に有意な差はなかった。しかしながら、親Ｐｉ−４９２８とＡｆｕｃ−Ｐｉ−４９２８との血漿濃度の間には有意な差があった。Ｐｉ−４９２８とＡｆｕｃ−Ｐｉ−４９２８との血漿濃度には差があったが、抗ＰＤ−１によるＡｆｕｃ−Ｐｉ−４９２８の治療効果は、ＣＴ２６モデルおよびＰｙ８１１９モデルの両方で観察された（実施例１３および１５）。さらにまた、ＴＲＥＭ１の完全な受容体占有が、Ａｆｕｃ−ＰＩ−４９２８をマウスに投与した受容体占有研究において観察された（データは示していない）。これは、野生型Ｐｉ−４９２８と比較してＡｆｕｃ−Ｐｉ−４９２８の血漿濃度がより低いにもかかわらず、ＴＭＥのＴＲＥＭ１に結合して治療効果を誘発するのに十分な循環抗体が依然として存在することを示す。
【０３８６】
毒性学
ＰＩ−９０６７Ｌ単独、Ａｆｕｃ−ＰＩ−９０６７Ｌ単独、または抗ＰＤ−１と組み合わせて最大２６日間、マウスに４回投与し、２６日間体重減少を監視した。治療は、対照治療マウスと比較して、またはＣＴ２６およびＭＣ３８モデルで経時的に同じ群内で、抗ＴＲＥＭ１抗体治療マウス（図２９Ａおよび２９Ｂ）で体重減少をもたらさなかった。同様に、Ａｆｕｃ−ＰＩ−４９２８単独、または抗ＰＤ−１と組み合わせて２２日間３回投与したマウスは、Ｐｙ８１１９モデルで体重減少を示さなかった（図２９Ｃ）。実験中のどの治療群のマウスも、観察可能な異常な行動や外観を表示しなかった。
【０３８７】
末梢好中球減少
ＴＲＥＭ１は、腫瘍微小環境および末梢中の好中球上に発現しているため、Ｐｉ−９０６７ＬまたはＰｉ−４９２８によって誘発される末梢好中球減少が評価された。
【０３８８】
ナイーブＢＡＬＢ／ｃ（Ｔａｃｏｎｉｃ）またはＣ５７ＢＬ／６マウス（Ｊａｃｋｓｏｎ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ）は、０日目および５日目に１５ｍｇ／ｋｇのｍＩｇＧ２ａまたはＰＩ−９０６７Ｌで処理された。７日目（２回目の投与の４８時間後）に、血液を採取し、好中球の割合は、フローサイトメトリーによるＬｙ６ＧおよびＣＤ１１ｂ二重陽性イベントの特定のゲーティングによって評価された。
【０３８９】
ＣＴ２６結腸癌腫系（ＡＴＣＣ、マナッサス、バージニア州）を対数期で回収し、雌のＢＡＬＢ／ｃマウス（Ｔａｃｏｎｉｃ）の右腹側腹部に１×１０６細胞／マウスの用量で皮下注射した。大部分のマウスの腫瘍が７５〜１３５ｍｍ３に到達した後、マウスを無作為化し、示された抗体（非フコシル化または野生型Ｐｉ−９０６７ＬまたはＰｉ−４９２８またはアイソタイプ対照）の投薬を開始した。抗体は５日ごとに１５ｍｇ／ｋｇで腹腔内に投与され、血液は２回目の投与の４８時間後に採取された。好中球の割合は、フローサイトメトリーによるＬｙ６ＧおよびＣＤ１１ｂ二重陽性イベントの特定のゲーティングによって評価された。
【０３９０】
ＭＣ３８結腸癌腫系（ＡＴＣＣ、マナッサス、バージニア州）を対数期で回収し、雌のＣ５７ＢＬ／６マウス（Ｊａｃｋｓｏｎ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ）の右腹側腹部に８×１０５細胞／マウスの用量で皮下注射した。大部分のマウスの腫瘍が７５〜１３５ｍｍ３に到達した後、マウスを無作為化し、示された抗体（非フコシル化または野生型Ｐｉ−９０６７ＬまたはＰｉ−４９２８またはアイソタイプ対照）の投薬を開始した。抗体は５日ごとに１５ｍｇ／ｋｇで腹腔内に投与され、血液は２回目の投与の４８時間後に採取された。好中球の割合は、フローサイトメトリーによるＬｙ６ＧおよびＣＤ１１ｂ二重陽性イベントの特定のゲーティングによって評価された。
【０３９１】
Ｐｉ−９０６７Ｌは、非腫瘍性Ｃ５７ＢＬ／６およびＢＡＬＢ／ｃマウスにおいて末梢好中球減少を誘発しなかった（図３０Ａ）。ＰＩ−９０６７ＬおよびＰＩ−４９２８ならびにそれらの非フコシル化変異体はまた、ＣＴ２６担腫瘍マウス（図３０Ｂ）またはＭＣ３８担腫瘍マウス（図３０Ｃ）では末梢好中球減少を生じなかった。ｎ．ｓ．は有意ではないことを意味する。要約すると、このデータは、フコシル化および非フコシル化ＰＩ−９０６７ＬおよびＰＩ−４９２８が優れた前臨床安全特性を有することを示す。さらにまた、フコシル化および非フコシル化ＰＩ−９０６７ＬおよびＰＩ−４９２８は、血漿中の循環抗体が抗体の２回目の投与から少なくとも４８時間後に検出され、同時に完全な腫瘍内ＲＯを達成することができるため、良好な薬物動態特性を示す。
【０３９２】
７．１７．実施例１７：抗ｍＴＲＥＭ１および抗ｈＴＲＥＭ１抗体のＣＤＣ活性
ヒトＴＲＥＭ１を発現する標的細胞を対数期の培養物から回収し、５×１０４−２×１０５の細胞を９６枚のウェルＵ底プレート中で培養する。培養後、血清と抗ヒトおよび抗マウスＴＲＥＭ１ｍＡｂ（ｈＩｇＧ１アイソタイプ）とを含有するヒト補体の１：１の混合物を添加し、３７℃で２〜３時間、標的細胞とインキュベートする。インキュベーション後、フローサイトメトリーまたは発光ベースの方法（Ｃｅｌｌ  Ｔｉｔｅｒ  Ｇｌｏ（Ｐｒｏｍｅｇａ、Ｍａｄｉｓｏｎ、ＷＩ）など）によって標的細胞死を評価することによって、抗体媒介性ＣＤＣ活性について細胞を評価する。
【０３９３】
(表２)配列
2020530495.tif 000004
2020530495.tif 000005
2020530495.tif 000006
2020530495.tif 000007
2020530495.tif 000008
【図１】
2020530495.tif 000009
【図２】
2020530495.tif 000010
【図３】
2020530495.tif 000011
【図４】
2020530495.tif 000012
【図５】
2020530495.tif 000013
【図６】
2020530495.tif 000014
【図７】
2020530495.tif 000015
【図８】
2020530495.tif 000016
【図９】
2020530495.tif 000017
【図１０】
2020530495.tif 000018
【図１１】
2020530495.tif 000019
【図１２】
2020530495.tif 000020
【図１３】
2020530495.tif 000021
【図１４】
2020530495.tif 000022
【図１５】
2020530495.tif 000023
【図１６】
2020530495.tif 000024
【図１７】
2020530495.tif 000025
【図１８】
2020530495.tif 000026
【図１９】
2020530495.tif 000027
【図２０】
2020530495.tif 000028
【図２１】
2020530495.tif 000029
【図２２】
2020530495.tif 000030
【図２３】
2020530495.tif 000031
【図２４】
2020530495.tif 000032
【図２５】
2020530495.tif 000033
【図２６】
2020530495.tif 000034
【図２７】
2020530495.tif 000035
【図２８】
2020530495.tif 000036
【図２９】
2020530495.tif 000037
【図３０】
2020530495.tif 000038
【手続補正書】
【提出日】令和2年4月8日(2020.4.8)
【手続補正１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００７９
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００７９】
本明細書の実施形態のいずれか１つでは、免疫療法は、抗ＴＲＥＭ１抗体による治療を含む。本明細書の実施形態のいずれか１つでは、ＴＲＥＭ１の発現レベルは、ＴＲＥＭ１のｍＲＮＡ発現レベルを含む。本明細書の実施形態のいずれか１つでは、ＴＲＥＭ１の発現レベルは、ＴＲＥＭ１のタンパク質発現レベルを含む。
[本発明1001]
骨髄細胞上に発現するトリガー受容体1（ＴＲＥＭ1）を細胞表面上に発現する骨髄細胞を死滅、無能化、または枯渇させる方法であって、
前記骨髄細胞を抗ＴＲＥＭ1抗体またはその抗原結合断片と接触させることを含み、
前記抗体が、活性Ｆｃ領域を含み、かつ抗体依存性細胞媒介性細胞傷害（ＡＤＣＣ）活性、補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）活性、および抗体媒介性食作用（ＡＤＣＰ）活性のうちの少なくとも1つを含む、
方法。
[本発明1002]
前記活性Ｆｃ領域が、
免疫細胞上の活性化Ｆｃγ受容体（ＦｃγＲ）に結合して、ＡＤＣＣ、ＣＤＣ、およびＡＤＣＰのうちの少なくとも1つによって前記骨髄細胞を死滅、無能化、または枯渇させる、野生型非フコシル化ヒトＩｇＧ1  Ｆｃ
であり、
前記抗体が、ＴＲＥＭ1の細胞外ドメインに結合する、
本発明1001の方法。
[本発明1003]
前記活性Ｆｃ領域が、ヒトＩｇＧ1、ＩｇＧ2、ＩｇＧ3、またはＩｇＧ4  Ｆｃを含む、本発明1001の方法。
[本発明1004]
前記活性Ｆｃ領域が、野生型ヒトＩｇＧ1  Ｆｃを含む、本発明1001の方法。
[本発明1005]
前記Ｆｃ領域が、ＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩａ、ＦｃγＲＩＩｂ、ＦｃγＲＩＩｃ、ＦｃγＲＩＩＩａ、およびＦｃγＲＩＩＩｂからなる群から選択されるＦｃγ受容体に結合する、前記本発明のいずれかの方法。
[本発明1006]
前記免疫細胞が、プロフェッショナル抗原提示細胞、マクロファージ、単球、ナチュラルキラー細胞、好中球、樹状細胞、またはＢ細胞である、本発明1005の方法。
[本発明1007]
前記抗体が、ＡＤＣＣ、ＣＤＣ、およびＡＤＣＰのうちの少なくとも1つによって前記骨髄細胞を死滅、無能化、または枯渇させ、任意選択的に、前記抗体が、ＡＤＣＣによって前記骨髄細胞を死滅、無能化、または枯渇させ、任意選択的に、前記抗体が、ＣＤＣによって前記骨髄細胞を死滅、無能化、または枯渇させ、任意選択的に、前記抗体が、ＡＤＣＰによって前記骨髄細胞を死滅、無能化、または枯渇させる、前記本発明のいずれかの方法。
[本発明1008]
前記抗体が、ＡＤＣＣ、ＣＤＣ、およびＡＤＣＰのうちの少なくとも1つによって前記骨髄細胞を死滅させる、前記本発明のいずれかの方法。
[本発明1009]
前記抗体が、ＡＤＣＣ、ＣＤＣ、およびＡＤＣＰのうちの少なくとも1つによって前記骨髄細胞を無能化する、前記本発明のいずれかの方法。
[本発明1010]
前記抗体が、ＡＤＣＣ、ＣＤＣ、およびＡＤＣＰのうちの少なくとも1つによって前記骨髄細胞を枯渇させる、前記本発明のいずれかの方法。
[本発明1011]
前記抗体がフコシル化されていない、前記本発明のいずれかの方法。
[本発明1012]
前記非フコシル化抗体が、操作された細胞内で安定に発現し、前記操作された細胞が、シュードモナス酵素ＧＤＰ−6−デオキシ−Ｄ−リキソ−4−ヘキシロース還元酵素（ＲＭＤ）を過剰発現する、本発明1007の方法。
[本発明1013]
前記活性Ｆｃ領域が、前記Ｆｃ領域内に1つ以上のアミノ酸置換を含む、前記本発明のいずれかの方法。
[本発明1014]
前記抗体が、中和抗体、モノクローナル抗体、アンタゴニスト抗体、アゴニスト抗体、ポリクローナル抗体、ＩｇＧ1抗体、ＩｇＧ2抗体、ＩｇＧ3抗体、二重特異性抗体、ヒト抗体、ヒト化抗体、キメラ抗体、完全長抗体、および抗原結合断片のうちの少なくとも1つである、前記本発明のいずれかの方法。
[本発明1015]
前記抗体が、抗体依存性細胞媒介性細胞傷害（ＡＤＣＣ）活性を有する、前記本発明のいずれかの方法。
[本発明1016]
前記抗体が、補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）活性を有する、前記本発明のいずれかの方法。
[本発明1017]
前記抗体が、抗体媒介性食作用（ＡＤＣＰ）活性を有する、前記本発明のいずれかの方法。
[本発明1018]
前記抗体が、受容体−リガンド遮断、アゴニズム、またはアンタゴニズム活性を有する、前記本発明のいずれかの方法。
[本発明1019]
前記抗体が、前記ＴＲＥＭ1の細胞外ドメインに結合する、前記本発明のいずれかの方法。
[本発明1020]
前記抗体が、0．2ｎＭ以下のＫＤでＴＲＥＭ1に結合する、前記本発明のいずれかの方法。
[本発明1021]
前記抗体が、0．09ｎＭ、0．11ｎＭ、または0．15ｎＭ以下のＫＤでＴＲＥＭ1に結合する、本発明1020の方法。
[本発明1022]
前記骨髄細胞が刺激性骨髄細胞である、前記本発明のいずれかの方法。
[本発明1023]
前記骨髄細胞が非刺激性骨髄細胞である、前記本発明のいずれかの方法。
[本発明1024]
前記骨髄細胞が、樹状細胞、腫瘍関連マクロファージ（ＴＡＭ）、好中球、または単球のうちの少なくとも1つを含む、前記本発明のいずれかの方法。
[本発明1025]
前記骨髄細胞が好中球である、本発明1024の方法。
[本発明1026]
前記骨髄細胞が腫瘍関連マクロファージである、本発明1025の方法。
[本発明1027]
前記骨髄細胞が腫瘍内にある、前記本発明のいずれかの方法。
[本発明1028]
前記骨髄細胞が、刺激性骨髄細胞および非刺激性骨髄細胞を含む免疫細胞の集団内にある、前記本発明のいずれかの方法。
[本発明1029]
前記骨髄細胞が、（ｉ）ＣＤ45＋、ＨＬＡ−ＤＲ−、ＣＤ15＋、（ｉｉ）ＣＤ45＋、ＨＬＡ−ＤＲ−、ＣＤ16＋、ＣＤ56−、ＮＫｐ44−、ＮＫｐ30−、ＮＫｐ46−、ＮＫｐ80−、（ｉｉｉ）ＣＤ45＋、ＨＬＡ−ＤＲ−、ＣＤ14＋、（ｉｖ）ＣＤ45＋、ＨＬＡ−ＤＲ＋、およびＣＤ14＋、（ｖ）ＣＤ45＋ＨＬＡ−ＤＲ＋、ＣＤ16＋、ＣＤ56−、ＮＫｐ44−、ＮＫｐ30−、ＮＫｐ46−、ＮＫｐ80−、（ｖｉ）ＣＤ45＋ＨＬＡ−ＤＲ＋ＣＤ14＋、ＣＤ16＋、（ｖｉｉ）ＣＤ45＋、ＨＬＡ−ＤＲ−、ＣＤ66ｂ＋、（ｖｉｉｉ）ＣＤ45＋、ＨＬＡ−ＤＲ＋、ＣＤ14＋、ＢＤＣＡ3−、ＣＤ11ｂ＋、およびＣＤ11ｃ＋、（ｉｘ）ＣＤ45＋、ＣＤ14＋、ＨＬＡ−ＤＲ＋、ＣＤ68高、ＣＤ20−、ならびに（ｘ）ＣＤ45＋、ＨＬＡ−ＤＲ＋、ＣＤ14−、ＣＤ11ｃ＋、およびＢＤＣＡ1＋のうちの少なくとも1つである細胞を含む、前記本発明のいずれかの方法。
[本発明1030]
前記接触させることが、前記骨髄細胞のアポトーシス、溶解、または成長停止を誘発する、前記本発明のいずれかの方法。
[本発明1031]
前記接触させることが、それを必要とする対象においてインビボで起こり、任意選択的に、前記対象が癌を有する、前記本発明のいずれかの方法。
[本発明1032]
前記癌が固形癌である、前記本発明のいずれかの方法。
[本発明1033]
前記癌が液状癌である、前記本発明のいずれかの方法。
[本発明1034]
前記癌が、黒色腫、腎臓、肝胆道、頭頸部扁平上皮癌（ＨＮＳＣ）、膵臓、結腸、膀胱、膠芽腫、前立腺、肺、乳房、卵巣、胃、腎臓、膀胱、食道、腎、黒色腫、および中皮腫からなる群から選択される、本発明1032の方法。
[本発明1035]
前記癌が結腸癌または乳癌である、本発明1034の方法。
[本発明1036]
前記接触させることが、前記対象における免疫応答を増強する、本発明1031の方法。
[本発明1037]
前記増強された免疫応答が適応免疫応答である、本発明1036の方法。
[本発明1038]
前記増強された免疫応答が自然免疫応答である、本発明1036の方法。
[本発明1039]
前記対象が、免疫療法を以前に受けたことがあるか、同時に受けているか、またはその後受けることになる、本発明1031〜1038のいずれかの方法。
[本発明1040]
前記免疫療法が、チェックポイント阻害剤、Ｔ細胞のチェックポイント阻害剤、抗ＰＤ1、抗ＰＤＬ1、抗ＣＴＬＡ4、養子Ｔ細胞療法、ＣＡＲ−Ｔ細胞療法、樹状細胞ワクチン、単球ワクチン、Ｔ細胞および抗原提示細胞の両方に結合する抗原結合タンパク質、ＢｉＴＥ二重抗原結合タンパク質、トール様受容体リガンド、サイトカイン、細胞毒性療法、化学療法、放射線療法、低分子阻害剤、低分子アゴニスト、免疫調節薬、およびエピジェネティック調節薬のうちの少なくとも1つである、本発明1039の方法。
[本発明1041]
前記免疫療法が抗ＰＤ1である、本発明1040の方法。
[本発明1042]
前記接触させることが、インビトロまたはインビボである、前記本発明のいずれかの方法。
[本発明1043]
前記対象がヒトである、本発明1031〜1042のいずれかの方法。
[本発明1044]
前記抗体が、放射性核種、細胞毒、化学療法剤、薬品、プロドラッグ、毒素、酵素、免疫調節剤、抗血管新生剤、アポトーシス促進剤、サイトカイン、ホルモン、オリゴヌクレオチド、アンチセンス分子、ｓｉＲＮＡ、二次抗体、および二次抗体断片からなる群から選択される少なくとも1つの治療剤にコンジュゲートされる、前記本発明のいずれかの方法。
[本発明1045]
前記対象において実質的な末梢好中球減少を誘発しない、本発明1031〜1044のいずれかの方法。
[本発明1046]
前記抗ＴＲＥＭ1抗体との接触前と比較して、前記抗ＴＲＥＭ1抗体との接触後の前記末梢における前記対象の好中球レベルが実質的に同じままである、本発明1045の方法。
[本発明1047]
非刺激性骨髄細胞を死滅させる方法であって、
前記非刺激性骨髄細胞を、骨髄細胞上に発現する抗トリガー受容体1（ＴＲＥＭ1）抗体またはその抗原結合断片と接触させ、それにより前記非刺激性骨髄細胞を死滅させることを含み、
任意選択的に、前記非刺激性骨髄細胞が、腫瘍形成促進性骨髄細胞である、
方法。
[本発明1048]
非刺激性骨髄細胞を無能化させる方法であって、
前記非刺激性骨髄細胞を抗ＴＲＥＭ1抗体と接触させ、それにより前記非刺激性骨髄細胞を無能化させることを含み、
任意選択的に、前記非刺激性骨髄細胞が、腫瘍形成促進性骨髄細胞である、
方法。
[本発明1049]
刺激性骨髄細胞および非刺激性骨髄細胞を含む免疫細胞の集団において、刺激性骨髄細胞の非刺激性骨髄細胞に対する比率を増加させる方法であって、
前記免疫細胞の集団を抗ＴＲＥＭ1抗体と接触させ、それにより刺激性骨髄細胞の非刺激性骨髄細胞に対する比率を増加させることを含み、
任意選択的に、前記非刺激性骨髄細胞が、腫瘍形成促進性骨髄細胞である、
方法。
[本発明1050]
刺激性骨髄細胞および非刺激性骨髄細胞を含む免疫細胞の集団において、非刺激性骨髄細胞の数を減少させる方法であって、
前記免疫細胞の集団を抗ＴＲＥＭ1抗体と接触させ、それにより非刺激性骨髄細胞の数を減少させることを含み、
任意選択的に、前記非刺激性骨髄細胞が、腫瘍形成促進性骨髄細胞である、
方法。
[本発明1051]
非刺激性骨髄細胞が、刺激性骨髄細胞および非刺激性骨髄細胞を含む免疫細胞の集団内にある、本発明1047〜1048のいずれかの方法。
[本発明1052]
前記免疫細胞の集団から前記非刺激性骨髄細胞を除去することをさらに含む、本発明1050の方法。
[本発明1053]
前記非刺激性骨髄細胞が、腫瘍関連マクロファージまたはウイルス感染マクロファージであり、任意選択的に、前記ウイルスがＨＩＶである、本発明1047〜1052のいずれかの方法。
[本発明1054]
前記非刺激性骨髄細胞が樹状細胞である、本発明1047〜1052のいずれかの方法。
[本発明1055]
前記非刺激性骨髄細胞が、ＣＤ45＋、ＨＬＡ−ＤＲ＋、およびＣＤ14＋である、本発明1047〜1052のいずれかの方法。
[本発明1056]
前記非刺激性骨髄細胞が、ＣＤ45＋、ＨＬＡ−ＤＲ＋、ＣＤ14＋、ＢＤＣＡ3−、ＣＤ11ｂ＋、およびＣＤ11ｃ＋である、本発明1047〜1052のいずれかの方法。
[本発明1057]
前記非刺激性骨髄細胞が、ＣＤ45＋、ＨＬＡ−ＤＲ＋、ＣＤ14−、ＣＤ11ｃ＋、およびＢＤＣＡ1＋である、本発明1047〜1052のいずれかの方法。
[本発明1058]
前記非刺激性骨髄細胞が、ＣＤ45＋、ＨＬＡ−ＤＲ＋、ＣＤ14−、ＣＤ11ｃ＋、およびＢＤＣＡ3＋ではない、本発明1047〜1052のいずれかの方法。
[本発明1059]
前記抗体が、抗体依存性細胞媒介性細胞傷害（ＡＤＣＣ）活性を有する、本発明1047〜1058のいずれかの方法。
[本発明1060]
前記抗体が、補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）活性を有する、本発明1047〜1058のいずれかの方法。
[本発明1061]
前記抗体が、抗体媒介食作用活性を有する、本発明1047〜1058のいずれかの方法。
[本発明1062]
前記抗体がモノクローナル抗体である、本発明1047〜1061のいずれかの方法。
[本発明1063]
前記抗体がポリクローナル抗体である、本発明1047〜1061のいずれかの方法。
[本発明1064]
前記抗体がＩｇＧ1抗体である、本発明1047〜1063のいずれかの方法。
[本発明1065]
前記抗体がＩｇＧ3抗体である、本発明1047〜1063のいずれかの方法。
[本発明1066]
前記抗体がＩｇＧ2抗体ではない、本発明1047〜1063のいずれかの方法。
[本発明1067]
前記抗体がＩｇＧ4抗体ではない、本発明1047〜1063のいずれかの方法。
[本発明1068]
前記抗体が二重特異性抗体である、本発明1047〜1067のいずれかの方法。
[本発明1069]
前記抗体がヒト抗体である、本発明1047〜1068のいずれかの方法。
[本発明1070]
前記抗体がヒト化抗体である、本発明1047〜1068のいずれかの方法。
[本発明1071]
前記抗体が完全長である、本発明1047〜1070のいずれかの方法。
[本発明1072]
前記抗体が断片である、本発明1047〜1070のいずれかの方法。
[本発明1073]
前記抗体がコンジュゲートされる、本発明1047〜1072のいずれかの方法。
[本発明1074]
前記抗体が、放射性核種、細胞毒、化学療法剤、薬品、プロドラッグ、毒素、酵素、免疫調節剤、抗血管新生剤、アポトーシス促進剤、サイトカイン、ホルモン、オリゴヌクレオチド、アンチセンス分子、ｓｉＲＮＡ、二次抗体、および二次抗体断片からなる群から選択される少なくとも1つの治療剤にコンジュゲートされる、本発明1073の方法。
[本発明1075]
前記抗体がＴＲＥＭ1に対して選択的である、本発明1047〜1074のいずれかの方法。
[本発明1076]
前記抗体がアンタゴニスト抗体である、本発明1047〜1075のいずれかの方法。
[本発明1077]
前記接触させることが、前記非刺激性骨髄細胞のアポトーシスを誘発する、本発明1047〜1075のいずれかの方法。
[本発明1078]
前記接触させることが、前記非刺激性骨髄細胞の溶解を誘発する、本発明1047〜1075のいずれかの方法。
[本発明1079]
前記接触させることが、前記非刺激性骨髄細胞における成長停止を誘発する、本発明1048または1053〜1075のいずれかの方法。
[本発明1080]
前記刺激性骨髄細胞が、ＣＤ45＋、ＨＬＡ−ＤＲ＋、ＣＤ14−、ＣＤ11ｃ＋、およびＢＤＣＡ3＋である細胞を含む、本発明1049〜1079のいずれかの方法。
[本発明1081]
前記非刺激性骨髄細胞が癌組織内にある、本発明1047〜1080のいずれかの方法。
[本発明1082]
前記免疫細胞の集団が癌組織内にある、本発明1047〜1081のいずれかの方法。
[本発明1083]
前記癌が固形癌である、本発明1081または1082のいずれかの方法。
[本発明1084]
前記癌が液状癌である、本発明1081または1082のいずれかの方法。
[本発明1085]
前記癌が、黒色腫、腎臓、肝胆道、頭頸部扁平上皮癌（ＨＮＳＣ）、膵臓、結腸、膀胱、膠芽腫、前立腺、肺、および乳房からなる群から選択される、本発明1081または1082のいずれかの方法。
[本発明1086]
前記接触させることが、インビトロである、本発明1047〜1085のいずれかの方法。
[本発明1087]
前記接触させることが、インビボである、本発明1047〜1085のいずれかの方法。
[本発明1088]
前記インビボが、ヒト内であり、前記接触させることが、前記抗体を投与することによってもたらされる、本発明1087の方法。
[本発明1089]
個体内の癌を治療する方法であって、抗ＴＲＥＭ1抗体を含む有効量の組成物を前記個体に投与することを含む、方法。
[本発明1090]
個体の免疫応答を増強する方法であって、抗ＴＲＥＭ1抗体を含む有効量の組成物を前記個体に投与することを含む、方法。
[本発明1091]
前記抗体が、抗体依存性細胞媒介性細胞傷害（ＡＤＣＣ）活性を有する、本発明1089〜1090のいずれかの方法。
[本発明1092]
前記抗体が、補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）活性を有する、本発明1089〜1090のいずれかの方法。
[本発明1093]
前記抗体が、抗体媒介性食作用活性を有する、本発明1089〜1090のいずれかの方法。
[本発明1094]
前記抗体がモノクローナル抗体である、本発明1089〜1093のいずれかの方法。
[本発明1095]
前記抗体がポリクローナル抗体である、本発明1089〜1093のいずれかの方法。
[本発明1096]
前記抗体がＩｇＧ1抗体である、本発明1089〜1095のいずれかの方法。
[本発明1097]
前記抗体がＩｇＧ3抗体である、本発明1089〜1095のいずれかの方法。
[本発明1098]
前記抗体がＩｇＧ2抗体ではない、本発明1089〜1095のいずれかの方法。
[本発明1099]
前記抗体がＩｇＧ4抗体ではない、本発明1089〜1095のいずれかの方法。
[本発明1100]
前記抗体が二重特異性抗体である、本発明1089〜1099のいずれかの方法。
[本発明1101]
前記抗体がヒト抗体である、本発明1089〜1100のいずれかの方法。
[本発明1102]
前記抗体がヒト化抗体である、本発明1089〜1100のいずれかの方法。
[本発明1103]
前記抗体が完全長である、本発明1089〜1102のいずれかの方法。
[本発明1104]
前記抗体が断片である、本発明1089〜1102のいずれかの方法。
[本発明1105]
前記抗体がコンジュゲートされる、本発明1089〜1104のいずれかの方法。
[本発明1106]
前記抗体が、放射性核種、細胞毒、化学療法剤、薬品、プロドラッグ、毒素、酵素、免疫調節剤、抗血管新生剤、アポトーシス促進剤、サイトカイン、ホルモン、オリゴヌクレオチド、アンチセンス分子、ｓｉＲＮＡ、二次抗体、および二次抗体断片からなる群から選択される少なくとも1つの治療剤にコンジュゲートされる、本発明1105の方法。
[本発明1107]
前記抗体がＴＲＥＭ1に対して選択的である、本発明1089〜1106のいずれかの方法。
[本発明1108]
前記抗体がアンタゴニスト抗体である、本発明1089〜1107のいずれかの方法。
[本発明1109]
前記抗体の前記投与が、前記個体における非刺激性骨髄細胞の死滅、前記個体における非刺激性骨髄細胞の無能化、または前記個体における刺激性骨髄細胞の非刺激性骨髄細胞に対する比率の増加をもたらす、本発明1091または1092〜1107のいずれかの方法。
[本発明1110]
前記非刺激性細胞および刺激性骨髄細胞が、癌組織内にある、本発明1109の方法。
[本発明1111]
生体試料が癌組織に由来する、本発明1090の方法。
[本発明1112]
前記癌が固形癌である、本発明1090、1092〜1108、1111、または1112のいずれかの方法。
[本発明1113]
前記癌が液状癌である、本発明1090、1092〜1108、1111、または1112のいずれかの方法。
[本発明1114]
前記癌が、黒色腫、腎臓、肝胆道、頭頸部扁平上皮癌（ＨＮＳＣ）、膵臓、結腸、膀胱、膠芽腫、前立腺、肺、および乳房からなる群から選択される、本発明1090、1092〜1108、1111、または1112のいずれかの方法。
[本発明1115]
前記抗体の前記投与が、前記個体における非刺激性骨髄細胞の死滅をもたらす、本発明1090〜1114のいずれかの方法。
[本発明1116]
前記非刺激性骨髄細胞が、ＣＤ45＋、ＨＬＡ−ＤＲ＋、およびＣＤ14＋である、本発明1115の方法。
[本発明1117]
前記非刺激性骨髄細胞が、ＣＤ45＋、ＨＬＡ−ＤＲ＋、ＣＤ14＋、ＢＤＣＡ3−、ＣＤ11ｂ＋、およびＣＤ11ｃ＋である、本発明1115の方法。
[本発明1118]
前記非刺激性骨髄細胞が、ＣＤ45＋、ＨＬＡ−ＤＲ＋、ＣＤ14−、ＣＤ11ｃ＋、およびＢＤＣＡ1＋である、本発明1115の方法。
[本発明1119]
非刺激性骨髄細胞が、ＣＤ45＋、ＨＬＡ−ＤＲ＋、ＣＤ14−、ＣＤ11ｃ＋、およびＢＤＣＡ3＋ではない、本発明1115の方法。
[本発明1120]
前記個体からの生体試料中のＴＲＥＭ1の発現レベルを決定することをさらに含む、本発明1118または1119のいずれかの方法。
[本発明1121]
前記ＴＲＥＭ1の発現レベルが、ＴＲＥＭ1のｍＲＮＡ発現レベルを含む、本発明1120の方法。
[本発明1122]
前記ＴＲＥＭ1の発現レベルが、ＴＲＥＭ1のタンパク質発現レベルを含む、本発明1120の方法。
[本発明1123]
ＴＲＥＭ1タンパク質に結合し、非刺激性骨髄細胞を無能化することができる、抗体。
[本発明1124]
前記無能化が、
（ａ）前記非刺激性骨髄細胞の死滅、
（ｂ）前記非刺激性骨髄細胞の磁気ビーズ枯渇、または
（ｃ）前記非刺激性骨髄細胞のＦＡＣＳ選別
によるものである、本発明1123の抗体。
[本発明1125]
ＴＲＥＭ1の生物活性を中和する、本発明1123の抗体。
[本発明1126]
前記ＴＲＥＭ1が、非刺激性骨髄細胞の表面上に発現する、本発明1124の抗体。
[本発明1127]
前記非刺激性骨髄細胞が腫瘍関連マクロファージである、本発明1123〜1126のいずれかの抗体。
[本発明1128]
前記非刺激性骨髄細胞が樹状細胞である、本発明1123〜1126のいずれかの抗体。
[本発明1129]
前記非刺激性骨髄細胞が、ＣＤ45＋、ＨＬＡ−ＤＲ＋、およびＣＤ14＋である、本発明1123〜1128のいずれかの抗体。
[本発明1130]
前記非刺激性骨髄細胞が、ＣＤ45＋、ＨＬＡ−ＤＲ＋、ＣＤ14＋、ＢＤＣＡ3−、ＣＤ11ｂ＋、およびＣＤ11ｃ＋である、本発明1123〜1128のいずれかの方法。
[本発明1131]
前記非刺激性骨髄細胞が、ＣＤ45＋、ＨＬＡ−ＤＲ＋、ＣＤ14−、ＣＤ11ｃ＋、およびＢＤＣＡ1＋である、本発明1123〜1128のいずれかの抗体。
[本発明1132]
前記非刺激性骨髄細胞が、ＣＤ45＋、ＨＬＡ−ＤＲ＋、ＣＤ14−、ＣＤ11ｃ＋、およびＢＤＣＡ3＋ではない、本発明1123〜1128のいずれかの抗体。
[本発明1133]
抗体依存性細胞媒介性細胞傷害（ＡＤＣＣ）活性を有する、本発明1123〜1132のいずれかの抗体。
[本発明1134]
補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）活性を有する、本発明1123〜1132のいずれかの抗体。
[本発明1135]
抗体媒介性食作用活性を有する、本発明1123〜1132のいずれかの抗体。
[本発明1136]
モノクローナル抗体である、本発明1123〜1135のいずれかの抗体。
[本発明1137]
ポリクローナル抗体である、本発明1123〜1135のいずれかの抗体。
[本発明1138]
ＩｇＧ1抗体である、本発明1123〜1137のいずれかの抗体。
[本発明1139]
ＩｇＧ3抗体である、本発明1123〜1137のいずれかの抗体。
[本発明1140]
ＩｇＧ2抗体ではない、本発明1123〜1137のいずれかの抗体。
[本発明1141]
ＩｇＧ4抗体ではない、本発明1123〜1137のいずれかの抗体。
[本発明1142]
二重特異性抗体である、本発明1123〜1141のいずれかの抗体。
[本発明1143]
ヒト抗体である、本発明1123〜1141のいずれかの抗体。
[本発明1144]
ヒト化抗体である、本発明1123〜1141のいずれかの抗体。
[本発明1145]
完全長である、本発明1123〜1144のいずれかの抗体。
[本発明1146]
断片である、本発明1123〜1144のいずれかの抗体。
[本発明1147]
コンジュゲートされる、本発明1123〜1144のいずれかの抗体。
[本発明1148]
放射性核種、細胞毒、化学療法剤、薬品、プロドラッグ、毒素、酵素、免疫調節剤、抗血管新生剤、アポトーシス促進剤、サイトカイン、ホルモン、オリゴヌクレオチド、アンチセンス分子、ｓｉＲＮＡ、二次抗体、および二次抗体断片からなる群から選択される少なくとも1つの治療剤にコンジュゲートされる、本発明1147の抗体。
[本発明1149]
ＴＲＥＭ1に対して選択的である、本発明1123〜1148のいずれかの抗体。
[本発明1150]
アンタゴニスト抗体である、本発明1123〜1148のいずれかの抗体。
[本発明1151]
本発明1123〜1150のいずれかの抗体および薬学的に許容可能な賦形剤を含む、医薬組成物。
[本発明1152]
無菌である、本発明1151の組成物。
[本発明1153]
本発明1123〜1152のいずれかの抗体を含み、さらに使用説明書を含む、キット。
[本発明1154]
二次抗体、免疫組織化学分析のための試薬、薬学的に許容可能な賦形剤および取扱説明書、ならびにそれらの任意の組み合わせを含む群から選択される構成要素をさらに含む、本発明1153のキット。
[本発明1155]
本発明1123〜1154のいずれかの組成物を含む、製造物品。
[本発明1156]
非刺激性骨髄細胞の存在または非存在を決定する方法であって、
ａ．非刺激性骨髄細胞および刺激性骨髄細胞を含む免疫細胞の集団を抗ＴＲＥＭ1抗体と接触させることと、
ｂ．前記抗体の非刺激性骨髄細胞への結合を示す複合体の存在を決定することと、
ｃ．任意選択的に、前記集団中の非刺激性骨髄細胞の数を定量化することと
を含む、方法。
[本発明1157]
癌の治療のための免疫療法に応答し得る個体を特定する方法であって、
ａ．前記個体からの生体試料中のＴＲＥＭ1の発現レベルを検出することと、
ｂ．前記ＴＲＥＭ1の発現レベルに基づいて、前記個体が免疫療法に応答するかどうかを決定することであって、健康な個体のレベルと比べて前記個体のＴＲＥＭ1のレベルが高い場合は、前記個体が免疫療法に応答し得ることを示す、決定することと
を含む、方法。
[本発明1158]
前記免疫療法が抗ＴＲＥＭ1抗体による治療を含む、本発明1157の方法。
[本発明1159]
前記ＴＲＥＭ1の発現レベルが、ＴＲＥＭ1のｍＲＮＡ発現レベルを含む、本発明1157の方法。
[本発明1160]
前記ＴＲＥＭ1の発現レベルが、ＴＲＥＭ1のタンパク質発現レベルを含む、本発明1157の方法。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０１０６
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０１０６】
「単鎖Ｆｖ」または「ｓＦｖ」または「ｓｃＦｖ」抗体断片は、単一のポリペプチド鎖内にＶＨドメインおよびＶＬドメインを含む。ＶＨおよびＶＬは、一般的に、ペプチドリンカーによって連結される。Ｐｌｕｃｋｔｈｕｎ  Ａ．（１９９４）を参照されたい。任意の好適なリンカーを使用することができる。いくつかの実施形態では、リンカーは（ＧＧＧＧＳ）ｎ（配列番号７３）である。いくつかの実施形態では、ｎ＝１、２、３、４、５、または６である。参照によりその全体が組み込まれるＡｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  ｆｒｏｍ  Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ  ｃｏｌｉ．Ｒｏｓｅｎｂｅｒｇ  Ｍ．＆  Ｍｏｏｒｅ  Ｇ．Ｐ．（Ｅｄｓ．），Ｔｈｅ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ  ｏｆ  Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  ｖｏｌ．１１３（ｐｐ．２６９−３１５）．Ｓｐｒｉｎｇｅｒ−Ｖｅｒｌａｇ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋを参照されたい。
【手続補正３】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０３９３
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０３９３】
(表２)配列
2020530495.tif 000039
2020530495.tif 000040
2020530495.tif 000041
2020530495.tif 000042
2020530495.tif 000043
【手続補正４】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】配列表
【補正方法】追加
【補正の内容】
【配列表】
2020530495000001.app
【国際調査報告】
2020530495.tif 000044
2020530495.tif 000045