(57)【要約】  本発明は、複雑な損傷を治療し、真菌および皮膚糸状菌の皮膚感染を制御するための皮膚用殺菌バイオプロダクトであって、前記皮膚用殺菌バイオプロダクトはセレンナノ粒子を含み、前記セレンナノ粒子は天然蜂蜜マトリックス中で生成される、皮膚用殺菌バイオプロダクトに関する。前記バイオプロダクトは、ゲル、クリームまたは包帯の形態で塗布される。【特許請求の範囲】
【請求項１】
皮膚における、複雑な損傷の治療、真菌感染および皮膚糸状菌感染の制御のための、皮膚用殺菌バイオプロダクトであって、
１）約７０％の蜂蜜を含む抗菌活性を有する殺菌マトリックス、および、
２）セレンナノ粒子
を含み、前記セレンナノ粒子が、天然蜂蜜マトリックス中で生成されることを特徴とする皮膚用殺菌バイオプロダクト。
【請求項２】
前記セレンナノ粒子の、粒径が３０〜６０ｎｍであり、好ましくは平均直径が３３ｎｍであることを特徴とする、請求項１に記載の皮膚用バイオプロダクト。
【請求項３】
２０％〜８０％の水を含む前記蜂蜜マトリックス内で安定化された金属ナノ粒子が、少なくとも０．０１％〜１５重量％含まれることを特徴とする、請求項１に記載の皮膚用バイオプロダクト。
【請求項４】
前記バイオプロダクト、蜂蜜マトリックス中のセレンナノ粒子によるＣａｎｄｉｄａ  ｓｐｐ．に対する阻害活性が、市販のプロダクトよりも少なくとも４倍高いことを特徴とする、請求項１に記載の皮膚用バイオプロダクト。
【請求項５】
Ｃａｎｄｉｄａ  ｓｐｐ．の培養物中で、蜂蜜マトリックス中の前記セレンナノ粒子バイオプロダクトが、銅ナノ粒子、銀ナノ粒子および市販のプロダクトＫｏｌｏｒｅｘによって生成される阻止円の少なくとも２倍の阻止円を生成することを特徴とする、請求項１に記載の皮膚用バイオプロダクト。
【請求項６】
前記バイオプロダクトが、組織再生特性を含むことを特徴とする、請求項１に記載の皮膚用バイオプロダクト。
【請求項７】
前記殺菌製剤が、主に真菌、酵母および細菌の皮膚用治療のために使用され、好ましくはヒトおよび動物におけるＣａｎｄｉｄａ  ｓｐｐ．による感染を治療するために使用されることを特徴とする、請求項１に記載の皮膚用バイオプロダクト。
【請求項８】
前記バイオプロダクトの投与形態が、ゲル、クリームおよび／または包帯であることを特徴とする、請求項１に記載の皮膚用バイオプロダクト。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、微生物または慢性疾患によって引き起こされる複雑な損傷および皮膚感染の治療のために、健康の分野で使用される。
【背景技術】
【０００２】
真菌感染と表在性真菌症は、皮膚疾患において、蔓延している病理であり、２つの大きなグループの真菌：酵母および皮膚糸状菌によって引き起こされる。１つ目の真菌感染は、微生物相の変化により真菌の増殖を引き起こされることで発生し、２つ目の表在性真菌症は皮膚外因性感染によるものである。
【０００３】
皮膚病理学において最も重要な真菌は、Ｃａｎｄｉｄａ  ｓｐｐ．およびＭａｌａｓｅｚｚｉａ  ｓｐｐ．である。カンジダ症は表面レベルまたは非常に限られた領域で症状が現れる病気であり、通常、局所的および／または全身を攻撃され、後者は医薬品の摂取によるものである。
【０００４】
抗カンジダプロダクトは、アゾール、ケトコナゾール、フルコナゾール、クロトリマゾールなどの合成プロダクトであり、これらのうち、いずれも天然物の特徴を有さない。
【０００５】
ナノ医薬物は、潜在的で新しく進歩している医療技術の中で最も有望な態様の１つである。現在、この分野は、特に薬物放出システムの制御といった医薬技術のような、生物医学の応用において大きく発展している。これらのシステムは、特定の細胞または組織を標的化するために薬物、ペプチド、遺伝子などをベクター化するという特性で特徴付けられる。
【０００６】
ナノ材料は、少なくとも１つの寸法において１００ｎｍ未満であり、グレイン、繊維、粒子、または他の成分などの基本構造単位を含む材料である。これらのナノ材料は、より大きな接触表面を有するため、優れた物理化学的な特性（機械的、電気的、磁気的、光学的、触媒的など）をもたらし、生物医学、電子工学、情報技術などの多様な分野における応用の開発に有利に働く。
【０００７】
ナノ粒子合成は、化粧品、産業、特に医学といった分野における数々の応用によって、ここ数十年で大きな進歩を遂げてきた。
【０００８】
ナノ粒子の特性は、粒子の光学的、磁気的および電気的なサイズに依存し、ナノ粒子が、検出、触媒作用、治療および標的細胞のようなin vivo応用における有望な候補であることが示されている。近年、ナノテクノロジーを用いた薬物の使用、またはナノ粒子を用いた疾患の検出は、痛みを伴わず、ほとんどのタンパク質およびポリペプチドのように腸管内で機能停止しないメカニズムのため、強い魅力を持ち、一般的な人々にとって害のない代替物に相当する。多くの研究により、ナノ粒子の輸送は、酵素分解に対する治療薬の安定性を改善し、目的を達成して標的（特定の組織または細胞）に直接到達できることが示されている。
【０００９】
ナノ粒子を製造するための方法は、大きく２つのグループに分類される。材料を連続的に破壊するトップダウン法、およびナノ材料の構成要素から構築するボトムアップ法である。一方で、ナノ粒子の製造は、物理的、化学的または生物学的合成方法に分類することができる。これらの方法は、以下の通りである。
【００１０】
物理的方法：不活性ガス凝縮、電気アーク放電、レーザ切断、熱分解および噴霧熱分解。
【００１１】
化学的方法：金属還元、ソルボサーマル合成、光化学合成、電気化学合成、熱分解経路、音響化学的経路、ミセルおよびマイクロエマルジョン、液−液界面。
【００１２】
生物学的方法：微生物は、反応器であり、ナノ粒子合成を行う。
【００１３】
ハイブリッド法：レーザ合成、合成後サイズ選択処理および溶媒和金属原子分散（ＳＭＡＤ）など、上述の方法の混合である。
【００１４】
合成方法および合成経路の大部分におけるナノ粒子の形態は、合成時に起こる核形成、および形成時にナノメトリック粒子に付与される安定性に依存する。従って、化学的方法がナノ粒子のサイズ、サイズ分布および形状を適切に制御することが可能であるために、化学的方法が最も広く使用される。伝統的な化学的方法は、合成の間に、幾分か有毒かつ汚染物質である還元剤および安定化剤を使用する。長年、無毒で環境にやさしい化学物質を使用する「グリーンケミストリー」をコンセプトに合成法の開発に注力してきた。
【００１５】
金属ナノ粒子の抗菌活性は、微生物に接触する表面積の関数であることが知られている。微粒子からナノ粒子への移行は、接触領域／体積比（アスペクト比）の増加を伴う。ここで、接触領域が劇的に増加することで、有機分子、無機分子および細菌とのより多くの相互作用が可能となる。
【００１６】
金、銀、銅、チタンおよび亜鉛などの様々な金属ナノ粒子の抗菌活性が報告されている。それにもかかわらず、これらの殺菌メカニズムはまだ完全には理解されていない。
【００１７】
工業所有権の状態に関連して、本出願の技術主題に関連する以下の文書を発見した。
【００１８】
米国特許ＵＳ２０１３／０２７３０２０は、蜂蜜またはその活性画分およびラクトフェリンを含む製剤を記載している。この相乗的な製剤は、成分を別々に用いるよりも酵母の増殖を阻害する。
【００１９】
一方、中国特許ＣＮ１０３７０４５５２は、蜂蜜、花粉、プロポリス、ローヤルゼリー、漢方薬に使用される異なる植物からの抽出物、および微量のセレンを含む栄養組成物を記載している。この組成物は、健康に良い食用ペーストを形成することができる。
【００２０】
加えて、蜂蜜の抗真菌特性および抗菌特性、さらに他の特性に関連する、保護が望まれる技術に関する論文および／または出版物などの文書は存在する。しかし、これらの文書は蜂蜜の特性に関するものであり、これらの技術は本明細書で保護が望まれる主題とは全く異なるものである。
【図面の簡単な説明】
【００２１】
【図１】この図は、直径約３３ｎｍの蜂蜜マトリックス中のセレンのナノ粒子を可視化した図である。
【図２】現在市販されている医薬品である蜂蜜マトリックス中のセレンのナノ粒子と他の天然プロダクトとの比較グラフ。以下の物質におけるＭＩＣ（Ｃａｎｄｉｄａ  ａｌｂｉｃａｎｓに対する最小阻害濃度）；１、クロトリマゾール；２、テルビナフィン；３、硝酸ミコナゾール；４、市販の植物薬用Ｋｏｌｏｒｅｘ；５、チリの植物の天然活性成分＋ウルモ蜂蜜；６、蜂蜜；７、蜂蜜マトリックス中のセレンナノ粒子バイオプロダクト；８、マヌカ；９、茶；１０、ニオイヒバおよび茶；  １１、キンセンカおよびトクサ。
【図３】Ｃａｎｄｉｄａ  ａｌｂｉｃａｎｓに対するナノ粒子の抗真菌活性。３Ａは、銀ナノ粒子（２５）；銅ナノ粒子（２６）；市販の抗カンジダプロダクトＫｏｌｏｒｅｘ（２７）におけるＣａｎｄｉｄａ  ｓｐｐ．株増殖に対する阻害効果を示す。３Ｂは、蜂蜜マトリックス中のセレンナノ粒子バイオプロダクト（ＭＣＳＩＩ）；市販の抗カンジダプロダクトＫｏｌｏｒｅｘ（２錠）（ＭＫ３０）におけるＣａｎｄｉｄａ  ｓｐｐ．株増殖に対する阻害効果を示す。
【図４】この図は、セレンナノ粒子を有する蜂蜜プロダクトを塗布した後の損傷の経過を示す。４Ａ：最初の損傷、上記プロダクトの塗布なし。４Ｂ：プロダクト塗布から３日後の損傷。４Ｃ：２ヶ月目の損傷、週２回、プロダクトを塗布。４Ｄ：損傷経過、ウルモ蜂蜜中のセレンナノ粒子治療による組織再構成が、観察される。
【発明を実施するための形態】
【００２２】
本技術は、皮膚における真菌および皮膚糸状菌の制御ならびに損傷の治療に使用される殺菌剤に該当するバイオプロダクトについて記載し、当該バイオプロダクトは、１）約７０％の蜂蜜を含む抗菌活性を有し得る殺菌マトリックス、および２）Ｓｅ゜の形態のセレンナノ粒子を含み、前記粒子は天然蜂蜜マトリックスによって安定化される。
【００２３】
セレンナノ粒子を有する抗菌組成物の、サイズは３０〜６０ｎｍであり、好ましくは、平均直径は３３ｎｍである（図１）。安定化された前記抗菌組成物の重量は、２０％〜８０％の水を含む蜂蜜マトリックス内で、約０．０１％〜１５重量％である。
【００２４】
前記バイオプロダクトは主として、糖尿病の足などの複雑な損傷を含む皮膚用治療のため；ならびに真菌感染、酵母乾癬および細菌感染の治療のため、好ましくは特にヒトおよび動物における、Ｃａｎｄｉｄａ  ｓｐｐ．、Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｕｓ  Ａｕｒｅｕｓによる感染の治療のために、殺菌製剤として使用される。
【００２５】
この提案は、蜂蜜マトリックス中のセレンナノ粒子が有する固有の特性を強化することから構成される。得られたバイオプロダクトは高い抗真菌特性、抗菌特性および組織再生特性を有する。これは、グリーン合成（sintesis verde）による蜂蜜マトリックス中の亜セレン酸ナトリウム塩からのセレンナノ粒子の形成によって得られる。
【００２６】
ナノ粒子のサイズと抗菌活性との間には反比例の関係があることが実証されており、１〜１０ｎｍのサイズを有するナノ粒子が最も高い抗菌活性を有することが示されている。
【００２７】
バイオプロダクトを、免疫系が損なわれた患者にコロニーを形成する病原体であるＣａｎｄｉｄａ  ａｌｂｉｃａｎｓの制御における、天然プロダクト、合成プロダクト、およびセレン蜂蜜マトリックス中のナノ粒子間の比較研究（図２）を含む、様々な試験に供した。
【００２８】
グラフには、製剤化天然プロダクト、蜂蜜マトリックス中のセレンナノ粒子のＣａｎｄｉｄａ  ｓｐｐ．に対する阻害活性が、市販のプロダクトよりも少なくとも４倍高いことが示されている（図２の７）。
【００２９】
また、図３に示す試験結果では、試験した化合物の各々の阻止円が観察される；図３Ａは、蜂蜜およびＣａｎｄｉｄａを制御するために使用される国際的に市販されている天然プロダクトによるＣａｎｄｉｄａ  ｓｐｐ．増殖阻害円を示す（Ｋｏｌｏｒｅｘ（０２）；蜂蜜（０６）およびマヌカ蜂蜜（３０））。図３Ｂは、銀ナノ粒子（２５）；銅ナノ粒子（２６）；市販の抗カンジダプロダクトＫｏｌｏｒｅｘ（２７）による阻止円を示す。最後に、図３Ｃは、蜂蜜マトリックス）中のセレンナノ粒子バイオプロダクト（ＭＣＳ１１）および抗カンジダ市販のプロダクトＫｏｌｏｒｅｘ（ＭＫ３０）（２錠による阻止円を示す。前記バイオプロダクトは、図３Ｃで示すように、銅、銀ナノ粒子および市販のプロダクトＫｏｌｏｒｅｘによって生成される阻止円の少なくとも２倍の阻止円を示す。これは、他の微生物よりも大きいか、または異なる。
【００３０】
このバイオプロダクトのヒトに対する有効性を検証するため、臨床試験を行った。８０歳の重症閉塞性動脈疾患、糖尿病、高血圧、下肢切断歴のある患者の損傷に直接塗布した。皮膚に初期段階のブドウ球菌のコロニーが形成されていたため、損傷は開放型足根中足切断であった。前記プロダクトを塗布し、次いで非合成ガーゼおよび一般的な包帯で覆った。週３回前記プロダクトを塗布することで治療を行い、最も深刻な段階（すなわち滲出する段階）で前記プロダクトを２日間放置した。損傷の経過が良好であったため、次いで、製品の塗布を週２回の間隔とし、加えて、低強度圧迫包帯を使用した。
【００３１】
図４は、前記プロダクトが塗布されたときの外科的損傷の経過を示す。図４Ａは、最初の感染した損傷を示す。図４Ｂは、前記プロダクトの塗布から３日後の損傷を示し、患者が到着した状態と比較して、損傷部がより清潔であることを示す。
【００３２】
図４Ｃは、治療の２ヶ月後の損傷を示し、図４Ｄは、損傷における組織再構成を明確に示す。このことは、このプロダクトが複雑な損傷において、感染の回復および組織の再構成に役立つことを実証している。
【００３３】
このバイオプロダクトの投与形態は、損傷、好ましくは複雑な損傷；真菌感染および／または細菌感染の治療のための、ゲル；クリーム；包帯である。
【実施例】
【００３４】
〔実施例１：プロダクト製造方法〕
蜂蜜およびセレンナノ粒子由来のバイオプロダクトの製造を、以下の工程によって行った。最初に必要な亜セレン酸ナトリウム溶液（１Ｍ）を作製し、これを蜂蜜と混合して、蜂蜜中、マイクロモーラーの濃度でセレンを含む非常に粘稠な溶液を得た。当該溶液は、最終的に２５％の水を含んでいた。最初に温度を４５℃に上げて維持することによって、蜂蜜の流動性を増加させて混合した。混合物の温度を６０℃に上げて維持することによって、セレンナノ粒子が形成され始めた。この工程は、回転蒸発器上で行われた。単糖類、主にグルコースの存在と、約４．０〜４．５の酸ｐＨによる、蜂蜜の強い還元力によって、セレンナノ粒子の形成が達成された。これらの条件下で、亜セレン酸ナトリウムはゆっくりと赤色Ｓｅに還元され始め、約２０ｎｍ〜３３ｎｍのセレンナノ粒子を形成する。この粘稠な溶液から、より粘度の低い蜂蜜溶液を形成することができ、または９４０カルボマーを使用して、より低い粘性のゲルを形成するか、もしくはアルギネートマトリックス中に固体包帯を形成し、蜂蜜を層状に組み込むことができる。
【００３５】
〔実施例２：Ｃａｎｄｉｄａ  ａｌｂｉｃａｎｓを用いて実施した研究〕
免疫系が損なわれた患者にコロニー形成する病原体である、Ｃａｎｄｉｄａ  ａｌｂｉｃａｎｓを制御するための天然プロダクト、合成プロダクト、および金属のナノ粒子間で比較研究を行った。
【００３６】
Ｃａｎｄｉｄａ  ａｌｂｉｃａｎｓを、Ｓａｂｏｕｒａｕｄ培地中、３７℃で２４〜４８時間、異なるプロダクトと共に増殖させて、最小阻害濃度（ＭＩＣ）を測定する。０．０２５ｍｇ／ｍｌのクロトリマゾール；０．０２５ｍｇ／ｍｌのテルビナフィン；０．０２５ｍｇ／ｍｌの硝酸ミコナゾール；市販の植物薬用Ｋｏｌｏｒｅｘ（２錠）；天然植物の植物プロダクト＋蜂蜜；蜂蜜；蜂蜜マトリックス中、０．００６２５ｍｇ／ｍｌのセレンナノ粒子バイオプロダクト；ニオイヒバおよび茶；キンセンカおよびトクサを使用した。
【００３７】
この研究は、蜂蜜マトリックス中のセレンバイオプロダクトのＣａｎｄｉｄａ  ｓｐｐ．に対する成長阻害効果が、市販の薬物および天然プロダクトの両方の成分の成長阻害効果よりも有意に大きいことを示す。
【００３８】
この研究の結果はまた、図３Ａ、ＢおよびＣによって示される。ここで、試験された化合物の各々の阻止円が観察される。この試験は、蜂蜜マトリックス中のセレンバイオプロダクトが、銀ナノ粒子および銅ナノ粒子、さらに市販の抗カンジダプロダクトＫｏｌｏｒｅｘなどの従来のプロダクトの阻止円の、２〜３倍の大きさの阻止円を生成することを示す。
【００３９】
〔実施例３：蜂蜜マトリックス中のナノ粒子バイオプロダクトの試験〕
前記バイオプロダクトを、生理学的血清で洗浄した後、滅菌器具で損傷に直接塗布し、次いで、非合成ガーゼおよび一般的な包帯で覆った。前記プロダクトを最も深刻な段階（すなわち、より滲出する段階）で、２日間放置した。週３回包帯を作り、損傷の経過が良好であったため、次いで、週２回の間隔とし、加えて低強度圧迫包帯を使用した。前記プロダクトを、重症閉塞性動脈疾患、糖尿病、高血圧、他の下肢切断歴のある８０歳患者に塗布した。皮膚上に初期段階のブドウ球菌コロニーがあったため、損傷は開放性足根中足切断であった。また、１ｇのビタミンＣおよび亜鉛を糖尿病の処方薬に添加した。その他示すべきこととしては、脚を上げていたこと、および循環を刺激するためのいくつかの運動を行ったことである。
【図１】
2020512403.tif 000002
【図２】
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【図３Ａ】
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【図３Ｂ】
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【図３Ｃ】
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【図４Ａ】
2020512403.tif 000007
【図４Ｂ】
2020512403.tif 000008
【図４Ｃ】
2020512403.tif 000009
【図４Ｄ】
2020512403.tif 000010
【国際調査報告】
2020512403.tif 000011
2020512403.tif 000012
2020512403.tif 000013
2020512403.tif 000014
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