(57)【要約】  本発明は、バイオマス、特に藻類バイオマスの品質向上の分野に関し、より具体的には、本発明は、微細藻類および／またはシアノバクテリアから水溶性化合物を抽出する方法、ならびにこの方法によって得られる製品、および特に食品産業におけるまたは食品サプリメントとしてのその使用に関する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
真核または原核（シアノバクテリア）微細藻類から水溶性化合物を得るための方法であって、水溶液と混合された前記微細藻類またはシアノバクテリアに１〜１０００Ｗ／Ｌの範囲の超音波出力（Ｐｕｓ）、同時に１〜２ｂａｒの圧力（Ｐ）、５〜７０℃の温度（Ｔ）および１〜１０００Ｌ／ｈの流量（Ｄ）を適用する超音波処理により、前記水溶性化合物を抽出する少なくとも１つの工程を含む、方法。
【請求項２】
前記超音波出力、圧力、温度および流量を調整して、前記真核微細藻類またはシアノバクテリアから抽出された水溶性化合物を調節する、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記工程の期間が３０秒〜９０分である、請求項１または２に記載の方法。
【請求項４】
前記超音波出力、圧力、温度および流量を調整して、前記方法により得られた抽出物の色を調節する、請求項１〜３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５】
前記真核微細藻類またはシアノバクテリアと水溶液の混合物に前記工程を、好ましくは閉回路または開回路での前記混合物の循環を確実にするポンプを使用して連続的に適用する、請求項１〜４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６】
前記抽出された水溶性化合物が、タンパク質およびペプチド、水溶性ビタミン、好ましくはＢ群のビタミン、ミネラル、好ましくはナトリウム、カルシウム、カリウム、マグネシウムおよび鉄、Ｃ−フィコシアニン、ならびにクロロフィルの中から選択される、請求項１〜５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項７】
前記真核微細藻類が、クロレラ、ナンノクロロプシス、ドゥナリエラおよびユーグレナの中から選択され、前記シアノバクテリアが、スピルリナ（アルスロスピラ・プラテンシスまたはスピルリナ・マキシマ）およびＡＦＡ（アファニゾメノン・フロス・アクエ）の中から選択される、請求項１〜６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項８】
好ましくは遠心分離による、前記得られた抽出物の追加の固液分離工程を含む、請求項１〜７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項９】
前記抽出物からの分離により得られた液体部分をろ過する追加工程を含む、請求項８に記載の方法。
【請求項１０】
前記微細藻類またはシアノバクテリア／水溶液の比が１／５〜１／５０である、請求項１〜９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１１】
前記微細藻類またはシアノバクテリアの脂溶性分画から分離された、前記微細藻類またはシアノバクテリアに存在する水溶性化合物を含む、請求項１〜１０のいずれか一項に記載の方法により得られる製品。
【請求項１２】
化学組成物、食品組成物、化粧品組成物または医薬組成物における、請求項１１に記載の製品の使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、バイオマス、特に藻類バイオマスの品質向上の分野に関し、より具体的には、本発明は、微細藻類および／またはシアノバクテリアから水溶性化合物を抽出する方法、ならびにこの方法によって得られる製品、および特に食品産業におけるまたは食品サプリメントとしてのその使用に関する。
【背景技術】
【０００２】
世界的な食料需要の増加に対処するために、多くの製造業者は微細藻類などの代替資源を志向している。生物多様性の大きなこれらの微生物は、ユニークなバイオマス源である。その生産は、その非常に高い表面収量により、耕地で栽培された園芸植物および穀物の生産とは区別される。
【０００３】
３０年以上にわたって成長してきた微細藻類は、自然食品である。人間および動物の栄養には、２つの品質向上アプローチがある。１つ目は、微細藻類全体の消費を目的とするもので、２つ目は、これらから生じる生物活性分子の抽出、形質転換および調整に関するものである。フランスでは、形質転換なしで人間が消費することが認められているのは、スピルリナまたはアルスロスピラ・プラテンシス（Ａｒｔｈｒｏｓｐｉｒａ  ｐｌａｔｅｎｓｉｓ）、微小緑藻類クロレラ（Ｃｈｌｏｒｅｌｌａ）、および珪藻オドンテラ・アウリタ（Ｏｄｏｎｔｅｌｌａ  ａｕｒｉｔａ）の３種の微細藻類のみであり、これらは優れた栄養特性を保持している。これらの微生物は、タンパク質におけるそのユニークな含有量とその生産による環境への影響が少ない（水やエネルギーの消費が少ない）ことから、世界の食料供給の課題における主要な要素であると言われている。
【０００４】
特に、スピルリナは、ここ数年間、多くの研究者や製造業者の注目を集めている。食品サプリメントとしての消費のために、乾燥した非形質転換形態にて、市場で既に非常に一般的である。
【０００５】
スピルリナは付加価値の高い多数の化合物を含んでいるため、多くの研究者および製造業者は、このシアノバクテリアから目的の化合物を抽出することに関心を持っている。通常、スピルリナから抽出される生体分子はフィコシアニン（ＰＣ）で、抗酸化性の青い色素タンパク質であり、その乾燥重量の２０％を占めている（Ｖｏｎｓｈａｋ，１９９７）。フィコシアニンに対するこの関心の高まりは、特にその着色力によって説明される。現在、パテントブルーＶおよびシャイニーブルーといったフランスで使用されている青色の食品着色料は合成である。それらは菓子類および飲料などの成分にしばしば含有されている。パテントブルーＶは、子供の多動性の増幅の原因であり、潜在的なアレルゲンを構成する可能性があるため、最近、米国、カナダおよびオーストラリアで禁止されている。このため、天然着色料、特にフィコシアニンの使用が特に注目されている。したがって、多くの研究は、スピルリナからのこのタンパク質の抽出に基づいている。様々な溶媒での浸軟、酵素溶解、超音波などの方法の実験室規模で使用される。したがって、書誌研究では、スピルリナからＰＣを抽出するためのいくつかのプロトコルについて詳述しているが、これらとして、０．１ＭおよびｐＨ６．８のリン酸緩衝液での超音波（２０ｋＨｚ、２００Ｗ）の使用（Ｆｕｒｕｋｉら，２００３）、連続攪拌下、周囲温度で４時間のリン酸緩衝液での浸軟（Ｃｈａｉｋｌａｈａｎら，２０１１）、リゾチームを含むＴｒｉｓ−ＨＣｌ緩衝液の使用（Ｗｅｎｊｕｎら，２０１３）、蒸留水での２４時間の低温浸軟（Ｋａｍｂｌｅら，２０１３）、３０℃で２４時間の酢酸ナトリウム緩衝液での浸漬（Ｓｉｌｖｅｉｒａら，２００７）が挙げられる。
【０００６】
ＰＣ抽出物を大量に生産するために、スピルリナから抽出する方法が開発されているか、または、工業規模に適合されている。したがって、抽出方法を保護する特許が見出されている。例えば、Ｅｃｏｓｙｓｔｅｍが２０１３年に出願した特許文献１は、スピルリナバイオマスをグリセロールで１５日間浸軟し、その後デッドエンドろ過を使用して濃縮ＰＣを含むろ液を回収する抽出方法を保護している。しかしながら、浸軟によるこの抽出方法には、抽出期間と低収量という２つの欠点がある。この問題を克服するために、ここ数年で、マイクロ波、超音波、超臨界流体（ＣＯ２）、酵素溶解などを使用する「強化法」と呼ばれる他の方法が登場した。超臨界流体は主に、カロテノイド、トコフェロール、脂肪酸などの疎水性の脂溶性化合物を抽出するために使用される（非特許文献１）。更に、複数の著者は、微細藻類、特にスピルリナを抽出するための超音波の使用を報告している（非特許文献２）。「強化技術」と呼ばれるこれらの技術には、浸軟などの従来の方法と比較して、より迅速かつ効果的であるという利点がある。しかしながら、従来の超音波抽出技術では、水溶性化合物の組成が各水溶性化合物に望まれる性質および品質に応じて調節可能な抽出物を得ることができない。
【０００７】
上記の方法は、天然の食品着色料の使用のため、または単位バイアルの形の食品サプリメントとして、フィコシアニンの「結合」スピルリナ抽出物を得ることを目的としている。現在まで、食品配合物への配合を意図されているのは、ごく少数の希少なスピルリナ抽出物のみであり、これらの抽出物は食品を着色するためにのみ使用されている。
【０００８】
セルロースで構成され、機械的ストレスに直面する藻類の抵抗力を高める強い剛性を有するクロレラなどの、特定の他の微細藻類において、これらの方法では、クロロフィルなどの水溶性化合物を効果的に抽出することはできない。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００９】
【特許文献１】ＷＯ２０１４０４５１７７Ａ１
【非特許文献】
【００１０】
【非特許文献１】Ｓｕｐｅｒｃｒｉｔｉｃａｌ  Ｃａｒｂｏｎ  Ｄｉｏｘｉｄｅ  ａｎｄ  Ｍｉｃｒｏｗａｖｅ−Ａｓｓｉｓｔｅｄ  Ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ  Ｌｉｐｏｐｈｉｌｉｃ  Ｃｏｍｐｏｕｎｄｓ  ｆｒｏｍ  Ａｒｔｈｒｏｓｐｉｒａ  ｐｌａｔｅｎｓｉｓ，Ｅｓｑｕｉｖｅｌ−Ｈｅｒｎａｎｄｅｚ  ｅｔ  ａｌ，２０１６
【非特許文献２】Ｕｌｔｒａｓｏｕｎｄ  ａｓｓｉｓｔｅｄ  ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ  ｏｆ  ｂｅｔａ−ｃａｒｏｔｅｎｅ  ｆｒｏｍ  Ｓｐｉｒｕｌｉｎａ  ｐｌａｔｅｎｓｉｓ，Ｄｅｙ  ａｎｄ  Ｒａｔｈｏｄ，２０１３＿Ｐｈｙｃｏｃｙａｎｉｎ  ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ  ｆｒｏｍ  ｍｉｃｒｏａｌｇａｅ  Ｓｐｉｒｕｌｉｎａ  ｐｌａｔｅｎｓｉｓ  ａｓｓｉｓｔｅｄ  ｂｙ  ｕｌｔｒａｓｏｕｎｄ  ｉｒｒａｄｉａｔｉｏｎ：ｅｆｆｅｃｔ  ｏｆ  ｔｉｍｅ  ａｎｄ  ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ，Ｈａｄｉｙａｎｔｏ  ｅｔ  ａｌ，２０１６
【発明の概要】
【００１１】
今日、出願人は、圧力、温度、流量などの、微細藻類の超音波処理中に適用される他のパラメータによって、抽出の有効性の起源となる、超音波によって生成されたキャビテーション気泡を調節することを可能にする方法を開発した。この方法により、抽出物において望まれる水溶性化合物の性質および量に応じて、水溶性化合物の抽出方法の強化および調整が可能になる。
【００１２】
既に市場に存在するものとは逆に、本発明による方法は、水溶液および方法の出発微細藻類バイオマスから、最適化された方法で、工業規模で、栄養価が高く、水溶性化合物、特にタンパク質、水溶性ビタミン、クロロフィル、フィコシアニンおよびミネラルが豊富で、人間用の食品を対象とする様々な抽出物を生成することを可能にするものであり、この抽出物は水溶性化合物において調整可能な組成を有する。開始時に選択された超音波出力（Ｐｕｓ）、温度、圧力および流量のパラメータに従って、抽出物からの栄養組成だけでなくその色も変えることができる。
【００１３】
したがって、本発明の第１の目的は、真核微細藻類（微細藻類）または原核生物（シアノバクテリア）から水溶性化合物を得るための方法に関し、その方法は、水溶液と混合された前記微細藻類またはシアノバクテリアに１０〜１０００Ｗ／Ｌの超音波出力（Ｐｕｓ）、好ましくは同時に１〜２ｂａｒの圧力（Ｐ）、５〜７０℃の温度（Ｔ）および１〜１０００Ｌ／ｈの流量（Ｄ）を使用する超音波処理により、前記水溶性化合物を抽出する少なくとも１つの工程を含む。
【００１４】
微細藻類とは、本発明によれば、細胞壁および核を特徴とする真核微細藻類を示すことを意味し、緑藻類、黄金色藻類および炎色植物（ｐｙｒｒｏｐｈｙｔｅｓ）を含み、真核微細藻類は一般に「微細藻類」と呼ばれ、原核微細藻類は核も細胞壁も持たず、藍藻類を含み、以下では特に「シアノバクテリア」と呼ばれる。
【００１５】
好ましくは、本発明によれば、真核生物微細藻類は、緑藻類、好ましくはクロレラ、ナンノクロロプシス（Ｎａｎｎｏｃｌｏｒｏｐｓｉｓ）、ドゥナリエラ（Ｄｕｎａｌｉｅｌｌａ）およびユーグレナ（Ｅｕｇｌｅｎａ）の中から選択される。
【００１６】
好ましくは、本発明によれば、シアノバクテリアは、スピルリナ（アルスロスピラ・プラテンシス（Ａｒｔｈｒｏｓｐｉｒａ  ｐｌａｔｅｎｓｉｓ）またはスピルリナ・マキシマ（Ｓｐｉｒｕｌｉｎａ  ｍａｘｉｍａ））およびＡＦＡ（アファニゾメノン・フロス・アクエ（Ａｐｈａｎｉｚｅｍｅｎｏｎ  Ｆｌｏｅｓ−ａｑｕａｅ）から選択される。
【００１７】
特に好ましくは、本発明によれば、本発明による微細藻類はスピルリナである。
【００１８】
水溶性化合物とは、本発明によれば、タンパク質およびペプチド、水溶性ビタミン、好ましくはビタミンＢ群（特に、チアミン（Ｂ１）、リボフラビン（Ｂ２）、ナイアシン（Ｂ３）、パントテン酸（Ｂ５）、ピリドキシン（Ｂ６）、ビオチン（Ｂ８）、葉酸（Ｂ９）、コバラミン（Ｂ１２））、ミネラル、好ましくはナトリウム、カルシウム、カリウム、マグネシウムおよび鉄、Ｃ−フィコシアニン（またはフィコシアニン）、ならびにクロロフィルの中から好ましくは選択される、水溶性であり、微細藻類および／またはシアノバクテリアに含まれる化合物を示すことを意味する。
【００１９】
特に好ましくは、本発明によれば、本発明による微細藻類はスピルリナであり、水溶性化合物はＣ−フィコシアニンである。
【００２０】
超音波出力（Ｐｕｓ）を使用した超音波処理とは、本発明によれば、超音波反応器を実装する物理的処理を示すことを意味する。好ましくは、本発明によれば、超音波出力は、微細藻類またはシアノバクテリアと混合された水溶液に対して１０〜１０００Ｗ／Ｌ、好ましくは３０〜１００Ｗ／Ｌ、更に好ましくは５０〜８０Ｗ／Ｌである。好ましくは、超音波反応器によって採用されるエネルギーは５００〜５０００Ｊの間で変化し、超音波反応器の供給流量は１Ｌ／ｈ〜１０００Ｌ／ｈの間で変化し、好ましくは１Ｌ／ｈであり、超音波処理は３０秒〜９０分の間で変化する期間、実施される。
【００２１】
水溶液とは、本発明によれば、食品用途に適合する水溶液を示すことを意味する。好ましくは、これは、緩衝水、好ましくはｐＨ７のリン酸緩衝液を示すことを意味し、使用される緩衝剤はリン酸ナトリウムである。特に、本発明による水溶液は、化学的防腐剤、または本発明の方法により得られた水溶性化合物の食品用途に適合しない毒性を有する有機溶媒若しくは石油化学起源（メタノール、クロロホルム、ヘキサン、エタノール）を含まないことが好ましい。フィコシアニンなどの特定の水溶性化合物はｐＨに対して非常に敏感であり、ｐＨ５未満およびｐＨ７．５を超えるｐＨの有意な変動はその沈殿を引き起こすため、酸性溶媒を使用することも望ましくない。フィコシアニンなどの特定の水溶性化合物はその抗酸化特性の大部分を失うため、アルコール溶媒は好ましくない。
【００２２】
好ましくは、本発明によれば、微細藻類またはシアノバクテリア／水溶液の比は、１／５〜１／５０である。
【００２３】
この超音波処理およびこの流量と同時に、１〜２ｂａｒの圧力（Ｐ）および５〜７０℃、好ましくは２０〜３０℃の温度（Ｔ）が適用される。特に好ましくは、水溶性化合物を抽出する方法の全期間にわたって、温度は２０〜３０℃で一定に維持する。
【００２４】
好ましくは、本発明によれば、微細藻類／水溶液混合物は二重壁容器に収集される。容器は、所望の温度の調整を可能にする水循環およびサーモスタットにより、サーモスタット制御できる。次いで、ポンプおよびバルブを使用して、超音波発生器に接続された超音波プローブを含む超音波反応器に混合物が送られる。超音波反応器自体も好ましくは２つの壁を備えることができ、これにより、所望の温度の調整を可能にする水循環およびサーモスタットにより、サーモスタット制御が可能になる。バルブは、混合物の循環に抵抗を加えることを可能にし、したがって、混合物が受ける圧力を増加させる。好ましくは、圧力計は、超音波反応器の上流で混合物に及ぼされる圧力を監視し、バルブの開度を調整して混合物に所望の圧力を加えることを可能にする。
【００２５】
したがって、好ましくは、本発明によれば、温度（Ｔ）は、サーモスタットを使用して、好ましくは微細藻類／水溶液混合物を含む反応器の２つの壁でサーモスタット制御された水循環によって制御され、混合物は望ましい温度に維持される。超音波処理工程中に、おそらく１ｂａｒを超える圧力をかけると、混合物の温度が上昇する傾向があるため、サーモスタットは混合物の温度を一定に維持する役割を果たすことに留意すべきである。温度を制御することにより、熱不安定性と呼ばれる、熱に敏感な水溶性化合物を損傷するリスクがある、過度な温度上昇を回避することができる。出願人は、温度が４０℃を超えると、フィコシアニンなどの特定の目的分子が（例えば、クロロフィルによって）マスクされる可能性があることを強調している。更に、目的の水溶性化合物の抽出に最適な温度は約２５℃である。したがって、２０℃の温度調節と超音波の加熱効果を組み合わせることにより、２５〜３０℃に近い（最適な抽出温度に近い）温度が得られる。しかしながら、温度を調整すると、様々な種類の化合物を抽出することができる。低温では、熱に不安定な化合物の抽出が優先され、高温では、熱に敏感な化合物はマスクされるが、（無極性のもので、通常の時間で有機溶媒に溶解する）クロロフィルなどの低温で抽出するのがより難しい他の分子が、溶液中に見られる。
【００２６】
好ましくは、本発明によれば、圧力（Ｐ）は、Ｐｕｓが適用される反応器に供給することができるシステムのバルブを使用して適用され、システム内で微細藻類／水溶液混合物の循環に抵抗を加えることを可能にする。バルブが閉位置に近ければ近いほど、オリフィスが狭くなってシステム内の微細藻類／水溶液混合物の循環が減速するため、流れることが困難になる。しかし、ポンプは一定の流量を送り出すため、これにより圧力が上昇する。
【００２７】
本発明の好ましい態様によれば、超音波出力、圧力、温度および流量を調節することにより、真核微細藻類またはシアノバクテリアから抽出される水溶性化合物を変化させる。
【００２８】
したがって、Ｐｕｓ、Ｔ、Ｐおよび／またはＤを調整することにより、所与の水溶液を使用して、同じ出発微細藻類またはシアノバクテリアバイオマスから異なる抽出物を生成することができる。
【００２９】
したがって、好ましくは、本発明によれば、環境に送られる超音波出力、圧力および温度が高ければ高いほど、抽出物のタンパク質およびクロロフィル濃度は高くなる。逆に、超音波出力および温度が低くなるほど、抽出物の水溶性化合物濃度は低くなる。
【００３０】
したがって、例えば、スピルリナとリン酸緩衝液の混合物７に、２０℃の制御された温度で１０分間、２ｂａｒの圧力で、１００Ｗ／Ｌの超音波出力を適用することにより、クロロフィルがより豊富な抽出物を得ることができる。故に、青色となる、２０℃の制御された温度で１０分間、１ｂａｒの圧力で、３０Ｗ／Ｌの超音波出力を使用する方法よりも緑色が濃くなる。
【００３１】
好ましくは、本発明によれば、超音波処理工程の持続時間は１〜９０分である。持続時間の調整により、水溶性化合物の組成、したがって濃度も変化させることができる。これは、微細藻類／水溶液混合物が超音波反応器を通過する頻度が多いほど、超音波によりさらされて水溶性化合物が放出されるという事実によって説明される。
【００３２】
本発明の好ましい態様によれば、超音波出力、圧力、温度および流量を調整して、この方法により、得られた抽出物の色を変化させる。
【００３３】
したがって、好ましくは、本発明によれば、環境に送られる超音波出力、圧力および温度が高いほど、抽出物はタンパク質およびクロロフィルが豊富になり、したがってより強い緑色になる。反対に、超音波出力と温度が低いほど、抽出物の水溶性化合物の濃度は低くなり、生成された抽出物の色は青くなる（クロロフィルが存在しないため）。
【００３４】
本発明の好ましい態様によれば、好ましくは閉回路または開回路での混合物の循環を保証するポンプを使用して、真核微細藻類またはシアノバクテリアと水溶液との混合物に当該工程を連続的に適用する。
【００３５】
本発明の好ましい態様によれば、本発明による水溶性化合物を得るため方法は、抽出工程中に得られた抽出物の固液分離、好ましくは遠心分離による固液分離の追加工程を更に含む。
【００３６】
本発明の好ましい態様によれば、本発明による水溶性化合物を得るための方法は、抽出物から固体部分（細胞破片）を分離することにより得られた液体部分をろ過する追加工程を更に含む。
【００３７】
好ましくは、本発明によれば、ろ過は、デッドエンド方式で、有利には、２〜５０ミクロン、好ましくは２５ミクロン未満の繊度を有する、例えば、ポリアミド製、特にナイロン製の食品フィルタで行われる。
【００３８】
第２の抽出物によれば、本発明は、微細藻類またはシアノバクテリアに存在する水溶性化合物を含む、本発明による方法によって得られるような製品に関する。
【００３９】
より具体的には、この方法は、微細藻類またはシアノバクテリアの脂溶性分画から分離された微細藻類およびシアノバクテリアから水溶性化合物を抽出することを可能にする。好ましくは、生成された抽出物は、感覚受容性の質、および最適な栄養組成を有するであろう。
【００４０】
第３の態様によれば、本発明は、本発明の方法により得られるような製品の、化学組成物、食品組成物、化粧品組成物または医薬組成物における使用に関する。
【００４１】
これらのろ液／抽出物によって示される上記の利点を考えると、栄養補助食品を含む、食品、医療または化粧品産業でのその使用が特に有用であることが証明されている。本発明はまた、新規製品として、ろ過工程から得られた保持液を対象とする。これらの保持液は、食品、医療、化粧品業界で、または栄養補助食品としても使用できる。
【００４２】
次に、添付の概略図を参照して、非限定的な例として、本発明の実施形態を説明する。
【図面の簡単な説明】
【００４３】
【図１】本発明の方法を実施するための圧力−サーモ−超音波処理（ＭＴＳ）搭載装置の図である。この装置は、Ｐｕｓを発生させるためのプローブおよび超音波反応器、Ｔを調整するためのサーモスタット、Ｐを調整するためのバルブおよび圧力計、ならびにＤを調整するためのポンプを含む。
【発明を実施するための形態】
【００４４】
次に、本発明による方法のシーケンスを、非限定的な例として説明する。
【００４５】
方法は、（選択されたサイクル数に応じて）閉回路または開回路の形で提示され、微細藻類溶液（ＭＳ中５％）の連続処理を可能にする。
【００４６】
ＭＴＳ搭載装置の様々な要素の説明
１）容器は、処理対象の微細藻類／水溶液混合物を受容することができる。これは、水循環によりサーモスタット制御できる二重壁容器である。
２）ポンプは、システム内の混合物の循環を一定流量に調整する。
３）超音波プローブは発電機に接続されており、所望の超音波出力を固定することができる。プローブは２／３が処理される液体に浸漬され、それ自体特定の固定周波数（約２０ｋＨｚ）を放射する。
４）超音波反応器には２つの壁が装備されており、サーモスタット制御された水の循環により、混合物をサーモスタット制御できる。環境に超音波を送るために、超音波プローブを反応器に入れる。
５）バルブは、混合物の循環に抵抗を加えることにより、システム内での圧力を増大させることができる。超音波反応器の上流にある圧力計の圧力のこの変動を視覚的に監視することができる。
【００４７】
混合物が連続装置内で超音波処理されると、システムを空にして、混合物を遠心分離モジュール内に導入することにより、固体バイオマス残留物と水可溶性分画との間の固液分離が可能になる。ろ過工程により、澄んだ透明な抽出物を得ることができる。
【００４８】
実施例：
【００４９】
例１：超音波低出力、圧力なし−＞青色の抽出物
バイオマス（アルスロスピラ・プラテンシス）を、１／２０の比率（つまり、２０ｇの水溶液に対して１ｇのバイオマス）に従って抽出水溶液（リン酸緩衝液、ｐＨ７）と混合する。この場合、４ｇのスピルリナを８０ｍＬの水溶液に導入する。２０℃に温度調節して、１０分間、混合物を低超音波出力の超音波（３０Ｗ）にさらす。システムに圧力は加えられていない。次に、抽出物を８０００ｒｐｍで１０分間遠心分離し、ブフナー（気孔率８μｍ）でデッドエンドろ過を行い、存在する可能性のある懸濁粒子を除去する。
【００５０】
得られた抽出物は、フィコシアニン（８．３４ｇ／１００ｇ乾物（ＭＳ））の存在により青色であり、３３．３６ｇ／１００ｇＭＳのタンパク質を含んでいる。
【００５１】
例２：超音波高出力＋圧力−＞緑色のタンパク質が豊富な抽出物
バイオマス（アルスロスピラ・プラテンシス）を、１／２０の比率（つまり、２０ｇの水溶液に対して１ｇのバイオマス）に従って抽出水溶液（リン酸緩衝液、ｐＨ７）と混合する。この場合、４ｇのスピルリナを８０ｍＬの水溶液に導入する。２０℃に温度調節して、２ｂａｒに近い圧力で、１０分間、混合物を超音波出力の超音波（１００Ｗ／Ｌ、振幅の８０％前後）にさらす。次に、抽出物を８０００ｒｐｍで１０分間遠心分離し、ブフナー（気孔率８μｍ）でデッドエンドろ過を行い、存在する可能性のある懸濁粒子を除去する。
【００５２】
得られた抽出物は、方法の強度に起因して抽出されたクロロフィルが存在するため、濃い緑色である。フィコシアニンは抽出物中に依然として存在しており（１１．４７ｇ／１００ｇＭＳ）、タンパク質含有量は４６．１９％である。
【図１】
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【国際調査報告】
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