(57)【要約】  本願発明は、Ｃ５ａ活性のインヒビターおよび対象において皮膚、好中球性、炎症性疾患の処置におけるそれらの使用に関する。
2020524696.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
対象において皮膚、好中球性、炎症性疾患の処置における使用のための化合物であって、化合物は、Ｃ５ａ活性のインヒビターであり、皮膚、好中球性、炎症性疾患は、汗腺膿瘍（ＨＳ）；壊疽性膿皮症（ＰＧ）；ＰＡＰＡ（化膿性関節炎、ＰＧおよびアクネ）；ＰＡＳＨ（ＰＧ、アクネおよび汗腺膿瘍）；ＰＡＰＡＳＨ（化膿性関節炎、アクネ、ＰＧおよび汗腺膿瘍）；スイート症候群（ＳＳ）；角層下膿疱症（ＳＰＤ）；後天性表皮水疱症、持久性隆起性紅斑（ＥＥＤ）；好中球性脂肪織炎；腸関連皮膚病−関節炎症候群（bowel-associated dermatosis-arthritis syndrome）（ＢＡＤＡＳ）；ＳＡＰＨＯ（滑膜炎、アクネ、膿疱症、骨化過剰症、および骨炎）症候群；リウマチ性好中球性皮膚症；家族性地中海熱、クリオピリン関連障害、痛風、およびシュニッツラー症候群からなる群から選択される、化合物。
【請求項２】
Ｃ５ａ活性のインヒビターが、
−Ｃ５の濃度を低下させる；
−Ｃ５のＣ５ａおよびＣ５ｂへの開裂を阻害する；
−Ｃ５ａの濃度を低下させる；
−Ｃ５ａおよびＣ５ａ受容体間の結合を阻害する；
−Ｃ５ａ受容体の濃度を低下させる；および／または
−Ｃ５ａ受容体の活性を阻害する
請求項１に記載の使用のための化合物。
【請求項３】
Ｃ５ａ活性のインヒビターが、Ｃ５、またはＣ５ａ、またはＣ５ａ受容体に特異的に結合するタンパク質リガンドである、請求項１または２に記載の使用のための化合物。
【請求項４】
タンパク質リガンドが、
（ｉ）抗体、
（ｉｉ）抗体の抗原結合フラグメント、
（ｉｉｉ）抗体様タンパク質、
（ｉｖ）Ｃ５ａの阻害変異体、
（ｖ）Ｃ５ａ受容体の阻害変異体、
（ｖｉ）補体経路に作用するタンパク質；および
（ｖｉｉ）ペプチド
からなる群から選択される、請求項３に記載の使用のための化合物。
【請求項５】
Ｃ５ａ活性のインヒビターが、Ｃ５、またはＣ５ａ、またはＣ５ａ受容体に特異的に結合するオリゴヌクレオチドである、請求項１または２に記載の使用のための化合物。
【請求項６】
オリゴヌクレオチドが、ＤＮＡ−アプタマー、Ｄ−ＲＮＡアプタマー、およびＬ−ＲＮＡアプタマーからなる群から選択される、請求項５に記載の使用のための化合物。
【請求項７】
Ｃ５ａ活性のインヒビターが、Ｃ５タンパク質またはＣ５ａ受容体タンパク質の発現を減少させる、請求項１または２に記載の使用のための化合物。
【請求項８】
該Ｃ５ａ活性のインヒビターが、アンチセンスＤＮＡ、アンチセンスＲＮＡ、ｓｉＲＮＡ、およびｍｉＲＮＡからなる群から選択されるオリゴヌクレオチドである、請求項７に記載の使用のための化合物。
【請求項９】
Ｃ５ａ受容体が、Ｃ５ａＲおよび／またはＣ５Ｌ２である、請求項２から８のいずれかに記載の使用のための化合物。
【請求項１０】
Ｃ５ａ活性のインヒビターが、
（ａ）ＩＦＸ−１、ＩＮａｂ７０８、ＭＥＤＩ−７８１４、ＡＬＸＮ−１００７、またはＮＯＸ−Ｄ２１、またはそれらの抗原結合フラグメント；
（ｂ）Ｃ５ａへの結合について（ａ）の下に示される抗体の１つと競合する、抗体またはその抗原結合フラグメント；
（ｃ）エクリズマブ、ＡＬＸＮ１２１０、ＡＬＸＮ５５００、またはＬＦＧ３１６、またはそれらの抗原結合フラグメント；
（ｄ）Ｃ５への結合について（ｃ）の下に示される抗体の１つと競合する、抗体またはその抗原結合フラグメント；
（ｅ）ＣｏｖｅｒｓｉｎまたはＲＡ１０１４９５；
（ｆ）Ｃ５への結合について（ｅ）の下に示されるタンパク質またはペプチドの１つと競合する、抗体またはその抗原結合フラグメントまたはタンパク質または大環状ペプチド；
（ｇ）Ｚｉｍｕｒａ；
（ｈ）Ｃ５への結合についてＺｉｍｕｒａと競合する、抗体またはその抗原結合フラグメントまたはアプタマー；
（ｉ）ＡＭＹ−２０１またはＭｉｒｏｃｏｃｅｐｔ；
（ｊ）Ｃ３ｂへの結合について（ｉ）の下に示されるタンパク質の１つと競合する、抗体またはその抗原結合フラグメントまたはタンパク質；
（ｋ）Ｂｉｋａｃｉｏｍａｂ；
（ｌ）Ｆａｃｔｏｒ  Ｂへの結合についてＢｉｋａｃｉｏｍａｂと競合する、抗体またはその抗原結合フラグメント；
（ｍ）Ｌａｍｐａｌｉｚｕｍａｂ；
（ｎ）Ｆａｃｔｏｒ  Ｄへの結合についてＬａｍｐａｌｉｚｕｍａｂと競合する、抗体またはその抗原結合フラグメント；
（ｏ）ＡＬＮ−ＣＣ５；
（ｐ）Ａｖａｃｏｐａｎまたは式ＩＩまたは式ＩＩＩに記載の化合物；またはＰＭＸ−５３または式ＩＶに記載の化合物；
（ｑ）Ｃ５ａＲへの結合についてａｖａｃｏｐａｎまたはＰＭＸ−５３と競合する、抗体またはその抗原結合フラグメント；
（ｒ）クローン  Ｓ５／１またはクローン  ７Ｈ１１０、またはその抗原結合フラグメント；および
（ｓ）Ｃ５ａＲへの結合について（ｒ）の下に示される抗体の１つと競合する、抗体またはその抗原結合フラグメント
からなる群から選択される、請求項１から９のいずれかに記載の使用のための化合物。
【請求項１１】
皮膚、好中球性、炎症性疾患が、汗腺膿瘍（ＨＳ）；壊疽性膿皮症（ＰＧ）；ＰＡＰＡ（化膿性関節炎、ＰＧおよびアクネ）；ＰＡＳＨ（ＰＧ、アクネおよび汗腺膿瘍）；ＰＡＰＡＳＨ（化膿性関節炎、アクネ、ＰＧおよび汗腺膿瘍）；スイート症候群（ＳＳ）；角層下膿疱症（ＳＰＤ）；後天性表皮水疱症、持久性隆起性紅斑（ＥＥＤ）；好中球性脂肪織炎；腸関連皮膚病−関節炎症候群（ＢＡＤＡＳ）；およびＳＡＰＨＯ（滑膜炎、アクネ、膿疱症、骨化過剰症、および骨炎）症候群からなる群から選択される自己炎症性疾患である、請求項１から１０のいずれかに記載の使用のための化合物。
【請求項１２】
皮膚、好中球性、炎症性疾患が、壊疽性膿皮症（ＰＧ）；ＰＡＰＡ（化膿性関節炎、ＰＧおよびアクネ）；ＰＡＳＨ（ＰＧ、アクネおよび汗腺膿瘍）；ＰＡＰＡＳＨ（化膿性関節炎、アクネ、ＰＧおよび汗腺膿瘍）；スイート症候群（ＳＳ）；および角層下膿疱症（ＳＰＤ）からなる群から選択されるＨＳまたはＨＳ関連疾患である、請求項１から１０のいずれかに記載の使用のための化合物。
【請求項１３】
皮膚、好中球性、炎症性疾患が、リウマチ性好中球性皮膚症；家族性地中海熱、クリオピリン関連障害、痛風、およびシュニッツラー症候群からなる群から選択される皮膚炎症を伴う自己免疫疾患である、請求項１から１０のいずれかに記載の使用のための化合物。
【請求項１４】
化合物が、１週間に１回８００ｍｇの用量でまたは１週間に２回８００ｍｇの用量で投与される、請求項１から１３のいずれかに記載の使用のための化合物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
技術分野
本願発明は、Ｃ５ａ活性のインヒビターおよび対象において皮膚、好中球性、炎症性疾患の処置におけるそれらの使用に関する。
【背景技術】
【０００２】
発明の背景
炎症における標的Ｃ５ａ
Ｃ５ａは、その「マザー分子」Ｃ５の７４アミノ酸にわたる分解産物であり、補体活性化カスケードの１つのエンドポイントを示す。それは、少なくとも３つのよく説明される経路（代替、古典およびＭＢＬ経路）の活性化を介して生成することできる。全ての経路は、Ｃ３のレベルで統合し、Ｃ５または代替Ｃ５転換酵素を形成し、Ｃ５のＣ５ａおよびＣ５ｂへの開裂をもたらす。後者は、Ｃ６、Ｃ７、Ｃ８および複数のＣ９分子と結合し、例えば細菌膜において孔の形成を最後にもたらす（末端膜侵襲複合体＝ＭＡＣ）。補体系が炎症および他の免疫学的および炎症性障害／疾患の状況において活性化されるとき、Ｃ５ａは生成される。
【０００３】
補体活性化産物の中で、Ｃ５ａは、最も強力な炎症性ペプチドの１つであり、広範囲の機能を有する（Guo and Ward, 2005）。Ｃ５ａは、高親和性Ｃ５ａ受容体（Ｃ５ａＲおよびＣ５Ｌ２）を介してその効果を発揮する（Ward, 2009）。Ｃ５ａＲは、７回膜貫通セグメントを有するＧ−タンパク質−共役受容体のロドプシンファミリーに属する；Ｃ５Ｌ２は、同様の構造を有するが、Ｇ−タンパク質−共役ではないようである。現在、生物学的応答がほとんどＣ５ａ−Ｃ５Ｌ２相互作用に対して見られないため、Ｃ５ａはＣ５ａ−Ｃ５ａＲ相互作用を主に介してその生物学的機能を発揮すると考えられている。しかしながら、最新のレポートは、Ｃ５Ｌ２活性化も介するシグナル伝達を証明している（Rittirsch and others, 2008）。
【０００４】
Ｃ５ａＲは、好中球、好酸球、好塩基球、および単球を含む骨髄細胞、および多くの臓器、とりわけ肺および肝臓における非骨髄細胞上に広範に発現され、Ｃ５ａ／Ｃ５ａＲシグナル伝達の重要性を示す。Ｃ５ａＲ発現の広範囲にわたる上方制御は、敗血症の発症中に起こり、抗−Ｃ５ａ、または抗−Ｃ５ａＲ抗体、またはＣ５ａＲアンタゴニストによるＣ５ａ／Ｃ５ａＲ相互作用の遮断は、敗血症の齧歯動物モデルにおいて保護効果を高度に与える（Czermak and others, 1999; Huber-Lang and others, 2001; Riedemann and others, 2002）。
【０００５】
Ｃ５ａは、種々の生物学的機能を有する（Guo and Ward, 2005）。Ｃ５ａは、好中球に対する強力な化学誘引物質であり、また単球およびマクロファージに対する走化性活性を有する。Ｃ５ａは、好中球において酸化的破壊（Ｏ２消費）を引き起こし、食作用および粒状酵素の放出を増強する。Ｃ５ａはまた、血管拡張薬であることが見いだされている。Ｃ５ａは、種々の細胞型からのサイトカイン発現の調節に関与すること、および好中球における接着分子発現の発現を増強することが示されている。高用量のＣ５ａは、好中球の非特異的走化性「脱感作」を引き起こし、それにより広範な機能障害を引き起こすことができる。敗血症、急性肺損傷、炎症性腸疾患、リウマチ性関節炎などを含む多くの炎症性疾患は、Ｃ５ａの効果に起因する。敗血症の実験的状況において、好中球のＣ５ａへの暴露は、好中球機能障害およびシグナル伝達経路のまひを引き起こし、ＮＡＤＰＨオキシダーゼの集合欠損、ＭＡＰＫシグナル伝達カスケードのまひ、酸化的破壊の重大な鬱病、食作用および走化性を引き起こすことができる（Guo and others, 2006; Huber-Lang and others, 2002）。胸腺細胞のアポトーシスおよび遅延性好中球アポトーシスは、敗血症発症のための２つの重要な病原性事象であり、これらはＣ５ａの存在に依存する。実験的敗血症中、Ｃ５ａは、好中球におけるβ２−インテグリン発現を上方制御し、臓器への細胞遊走を促進し、これは多臓器機能不全（ＭＯＦ）の主な原因の１つである。Ｃ５ａが実験的敗血症において起こる凝固経路の活性化に起因することも見いだされる。Ｃ５ａは、ヒト白血球からの、炎症性サイトカイン、例えばＴＮＦ−α、ＩＬ−１β、ＩＬ−６、ＩＬ−８、およびマクロファージ遊走阻止因子（ＭＩＦ）の合成および放出を刺激する。補体活性化が急性炎症の発症中に発生する事象であるため、Ｃ５ａはほとんどの炎症性「サイトカイン・ストーム」の出現前に作用し始める可能性がある。Ｃ５ａが、サイトカインネットワークの能力および全身性炎症反応症候群（ＳＩＲＳ）の形成を調整することおよび増幅することにおいて重要な役割を果たすようである。
【０００６】
適応免疫につながる免疫学的調節ネットワークにおいて、Ｃ５ａは樹状細胞（ＤＣ）およびδεＴ細胞間のクロストークに影響し、これが炎症性メディエーター、例えばＩＬ−１７の大量生産をもたらし得る（Xu and others, 2010）。Ｃ５ａに対して重要な役割は、全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）における病原性Ｔｈ１７応答の生成において確立および定義されている（Pawaria and others, 2014）。加えて、Ｃ５ａが、Ｔｒｅｇ増殖および誘導の強力な抑制効果を提供するＴｒｅｇ細胞に対する重要な調節因子であることが報告されている（Strainic and others, 2013）。ＴｒｅｇおよびＴＨ１７が自己免疫疾患状況において重要なプレーヤーであるという事実を考慮すると、Ｃ５ａシグナル伝達の阻害は、自己免疫疾患において過活動免疫状態を有意に低下させることが期待される。
【０００７】
ＩＦＸ−１
ＩＦＸ−１は、可溶性ヒト補体分解産物Ｃ５ａに特異的に結合するキメラモノクローナルＩｇＧ４抗体である。ＩＦＸ−１は、１３２８アミノ酸から構成され、およそ１４８，４７２ダルトンの分子量を有する。ＩＦＸ−１のＣＤＲおよびＦＲ配列は、以下の表３に記載されている。
【０００８】
ＩＦＸ−１は、組換えタンパク質として哺乳動物ＣＨＯ細胞系において発現され、静脈内投与のためにリン酸緩衝生理食塩水溶液において最後に製剤化される。ヒトＣ５ａへのこの抗体の結合は、その対応する細胞結合受容体へのＣ５ａ結合および該受容体との反応を無効にすることによって、Ｃ５ａ誘導生物学的効果の非常に効果的な遮断を促進する。
【０００９】
（ＩＦＸ−１を使用する）インビトロ／エキソビボ試験およびカニクイザルにおけるＧＬＰ毒物学テストを含むインビボ試験に分類することができる様々な非臨床試験が実施され、ＩＦＸ−１の薬理学的および毒物学的局面を評価した。実施された非臨床テストおよび試験は、ＩＦＸ−１に対して毒物学的または安全性の懸念を示さなかった。ヒト第Ｉ相試験は、安全性実験室パラメーター、バイタルサインおよびＥＣＧパラメーターが、臨床的に関連する時間または用量依存的変化を示さなかったことを示した。
【００１０】
ＩＦＸ−１のインビトロ分析は、可溶性ヒトＣ５ａへの強い結合能力ならびにＣ５ａ誘導生物学的効果、例えば、ヒト好中球からのリゾチーム放出またはヒト全血における好中球においてＣＤ１１ｂ上方制御の高い遮断活性を証明する。１つのＩＦＸ−１抗体は、実験的インビトロ状況においてほぼ１００％効率で２分子Ｃ５ａの効果を中和する能力に達する。ＩＦＸ−１での臨床試験は、敗血症性臓器機能障害を含むいくつかの炎症性疾患および複雑な心臓手術におけるその臨床的有効性を試験するために継続している。
【００１１】
好中球
循環中に短い寿命を有する最終分化細胞である好中球は、人体において最も豊富な白血球である。侵入微生物に対する防御の最前線として、好中球は、食細胞として作用し、顆粒から溶菌酵素を放出し、および刺激時に活性酸素種を生成する能力により特徴付けられる。微生物産物に加えて、免疫複合体などの他の刺激もまた、好中球において呼吸バーストを誘導し、増強した炎症および炎症性細胞の補充をもたらすことができる（Kaplan, 2013）。
【００１２】
炎症組織に浸潤した後、好中球は、多数の他の細胞型、例えばマクロファージ、樹状細胞（ＤＣ）、ナチュラルキラー細胞、リンパ球および間葉性幹細胞に関与し、自然および適応免疫応答を制御する。例えば、好中球はＤＣ成熟およびＴ細胞の増殖および極性化を調節することができ、そしてそれらはまた抗原特異的Ｔヘルパー１型およびＴヘルパー１７型細胞を直接的にプライミングすることもできる（Abi Abdallah and others, 2011）。Ｃ５ａ、ホルミル−メチオニル−ロイシル−フェニルアラニン（ＦＭＬＰ）、リポ多糖類、血小板活性化因子、および腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）を含む種々の刺激が、好中球脱顆粒を誘導する（Kaplan, 2013）。好中球活性化から生じるサイトカインおよびケモカインと共に脱顆粒および酸化種から放出される内容物は、組織損傷を引き起こす主要な炎症性メディエーターであり、このメカニズムは、多くのタイプの炎症性組織傷害に起因すると考えられている。
【００１３】
汗腺膿瘍（ＨＳ）
ＨＳは、アポクリン腺が豊富な領域に影響を与える慢性的な壊滅的な皮膚障害であり、好中球関連皮膚炎症性疾患の１つと考えられている。小節が影響された領域に出現し、膿の放出により腫脹および破裂が進行する。このプロセスは、繰り返し起こり、洞管の形成および瘢痕に至る（Jemec, 2004）。この疾患の経過は、患者だけでなく、医師にとっても苛立たしい状況を作り出す。点有病率は、１％および４％間の範囲であると報告される（Jemec and others, 1996）。
【００１４】
ＨＳの正確な病態生理学は、明確に定義されていない。喫煙、食習慣および遺伝的素因は、ＨＳと全て関連している（Kurzen and others, 2008; Slade and others, 2003）。健常コントロールと比較して、ＮＫ細胞のパーセントは増加し、ＣＤ４−リンパ球のパーセントは減少しており、障害に対する自己免疫性の好みの存在を恐らく意味する。ＩＬ−１βおよびＩＬ−１７は、インフラマソームの活性化と関連するＨＳの病変において上方調節されることが見いだされている（Lima and others, 2016）。汗腺膿瘍（ＨＳ）は、炎症を起こした皮膚、とりわけ疾患の後期において多数の好中球浸潤物でみられる（Lima and others, 2016; Marzano, 2016）。活性化された好中球は、この疾患状況において活動性Ｔ細胞およびＴＨ１７などの他の効果細胞に対する直接的な有害効果または間接的な調節効果を介する組織損傷を引き起こす重要なエフェクター細胞型であり得る。
【００１５】
ＨＳの病因におけるいくつかの自己免疫性または自己炎症性メカニズムの関連に関する仮説は、過去数年にわたって作成されている。仮説は、中等度から重度のＨＳを有する患者においてアダリムマブ（腫瘍壊死因子αに対する抗体）の承認をもたらす、前向きプラセボ対照試験においてＴＮＦアンタゴニストの投与からの肯定的な結果によってさらに強化される。１つの主ないまだ解明されていない疑問は、好中球が罹患皮膚損傷にどのように動員されるか、および、活性化された好中球が疾患の発症にどの程度寄与するかである。
【００１６】
様々な試験によって示唆される広範な起こりうる病原性メカニズムは、ＨＳが外因性因子よりもむしろ宿主メカニズムと関連することを意味し得る。抗感染性（抗生物質）および前感染性（抗−ＴＮＦ、コルチコステロイド、免疫抑制剤）治療の両方が役立つ可能性があるというパラドックスを考慮すると、ＨＳは毛包先天免疫の欠陥に基づく自己炎症性疾患として現れることがあり（Revuz, 2009）、前炎症性サイトカイン、例えばインターロイキン（ＩＬ）−１β、および腫瘍壊死因子−α（ＴＮＦ−α）が病変および病変周囲の皮膚において著しく増加しているという事実によって支持される（Wollina and others, 2013）。
【００１７】
好中球性皮膚症
好中球性皮膚症（ＮＤ）は、組織学的実験が感染の証拠がない好中球から主に構成される激しい炎症性浸潤物を表す、皮膚損傷により特徴付けられる障害のグループである。ＮＤは、スイート症候群（ＳＳ）、壊疽性膿皮症（ＰＧ）、角層下膿疱症（ＳＰＤ）、他の明確な実体(entities)、およびこれらの非典型的または移行形態を主に含む（Prat and others, 2014）。汗腺膿瘍（ＨＳ）は、最近、炎症を起こした皮膚において観察される多数の好中球浸潤物に基づいてＮＤのファミリーに割り当てられた（Lima and others, 2016; Marzano, 2016）。
【００１８】
壊疽性膿皮症（ＰＧ）および汗腺膿瘍（ＨＳ）は、皮膚における好中球の蓄積の特徴で本来、自己炎症性疾患と見なされる原型の好中球性皮膚症である（Braun-Falco and others, 2012; Marzano and others, 2014）。自己炎症性症候群は、自己免疫性、アレルギー性、および感染症と異なる炎症状態の新たなグループを示す。病態生理学的観点から、全ての自己炎症性症候群、例えばＰＡＰＡ（化膿性関節炎、ＰＧおよびアクネ）、ＰＡＳＨ（ＰＧ、アクネおよび汗腺膿瘍）またはＰＡＰＡＳＨ（化膿性関節炎、アクネ、ＰＧおよび汗腺膿瘍）は、先天性免疫系の過剰活性化および「無菌」好中球が富む皮膚炎症からなる共通のメカニズムを共有する（Cugno and others, 2017）。
【００１９】
ＢＡＤＡＳ（腸関連皮膚病−関節炎症候群（bowel-associated dermatosis-arthritis syndrome））は、発熱、インフルエンザ様症状、関節炎および炎症性皮膚関与により特徴付けられる。後者は、丘疹およびプラーク（スイート症候群）、膿疱および潰瘍（壊疽性膿皮症）または結節、膿瘍または瘻（汗腺膿瘍）などの様々な好中球性皮膚病を想起する病変により特徴付けられる。加えて、アクネおよび好中球性脂肪織炎は関連する可能性がある。患者は、通常、主に小さな関節と関与する対称性非びらん性多発性関節炎を経験する（Cugno and others, 2018）。
【００２０】
滑膜炎、アクネ、膿疱症、骨化過剰症および骨炎（ＳＡＰＨＯ）症候群は、１９８７に最初に記載された。ＳＡＰＨＯ症候群は、恐らく誤診による、稀な状態である。その病因はまだとらえどころのないものであるが、ＳＡＰＨＯは他の自己炎症性疾患と類似性を共有するという理解が高まっている（Cugno and others, 2018）。
【００２１】
好中球および自己免疫疾患
自己免疫疾患は、自己および非自己分子の不完全な区別により定義され、外来構造としての自己分子および組織の不適当な認識、および宿主器官に対する同時免疫攻撃をもたらす。自己免疫疾患の病因は、一般的に、免疫化相およびエフェクター相の２つの相に分類することができる。免疫化相は、自己反応性Ｔリンパ球の出現により特徴付けられる。次に、これらのＴ細胞は、種々の他の細胞型（Ｂ細胞、細胞毒性Ｔ細胞、ＮＫ細胞、好中球、マクロファージ、破骨細胞、繊維芽細胞など）を活性化することによって、組織損傷相に至る二次応答を引き起こす。自己反応性Ｔ細胞によるこれらのエフェクター細胞の活性化は、自己抗体生産、サイトカインネットワークまたは直接的な細胞−細胞接触を含む複数のレベルによって介在することができるエフェクター相として考慮することができる（Nemeth and Mocsai, 2012）。
【００２２】
自己免疫疾患の病態生理学的発症における好中球の役割は、限定的に定義されているが、ますます認識されている。好中球は、抗原提示、他の免疫細胞型の活性の制御、および直接的な組織損傷を含む、自己免疫疾患プロセスの複数の工程に参加することができる。好中球は、活性化されるとき、またはアポトーシスで死ぬとき、または好中球細胞外トラップ（ＮＥＴ）の形成中に、自己抗原を暴露／放出することができる。それらはまた、自己抗体の組織沈着に寄与することができるか、またはエフェクター細胞型として、組織損傷自体を誘導することができる。累積試験により、好中球が、自己免疫疾患、例えば、リウマチ性関節炎（ＲＡ）、全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）、水疱性類天疱瘡、後天性表皮水疱症、ＡＮＣＡ関連脈管炎、家族性地中海熱、クリオピリン関連周期性障害（ＣＡＰＳ）および痛風などの発症において積極的な役割を果たすことを証明されている（Nemeth and Mocsai, 2012; Nemeth and others, 2016）。皮膚が免疫応答に対する容易な標的であるため、皮膚炎症はこれらの自己免疫疾患によって示される最も頻繁な症候群の１つである。しかしながら、リウマチ性好中球性皮膚症は、重度のリウマチ性関節炎を有する患者において稀な皮膚兆候である。それは、主に重度の血清反応陽性リウマチ性関節炎を有する患者、主に女性（比率２：１）に影響を及ぼすが、血清反応陰性リウマチ性関節炎においても観察されている（Cugno and others, 2018）．
【発明の概要】
【００２３】
本願発明の根底にある技術的問題
上記で説明されたように、先行技術において、好中球性皮膚症、例えば汗腺膿瘍（ＨＳ）、および皮膚好中球性自己免疫疾患の処置のための効果的な治療のための必要性が存在した。
【００２４】
本願発明者らは、今回、驚くべきことに、Ｃ５ａシグナル伝達を阻害する分子、例えば抗−Ｃ５ａ抗体が、汗腺膿瘍の処置に非常によく適していることを見出した。本願発明者らは、さらに、好中球活性化に至る生理学的メカニズムを研究し、Ｃ５ａが好中球活性化の重要な原動力(driver)であることを見出した。
【００２５】
したがって、本願発明者らは、Ｃ５ａ活性を阻害することが、種々の好中球性障害、とりわけ皮膚、好中球性、炎症性疾患の処置のための適当な治療アプローチであろうことを予期する。
【００２６】
発明の概要
第１の局面において、本願発明は、対象において皮膚、好中球性、炎症性疾患の処置における使用のための化合物であって、化合物は、Ｃ５ａ活性のインヒビターであり、皮膚、好中球性、炎症性疾患は、汗腺膿瘍（ＨＳ）；壊疽性膿皮症（ＰＧ）；ＰＡＰＡ（化膿性関節炎、ＰＧおよびアクネ）；ＰＡＳＨ（ＰＧ、アクネおよび汗腺膿瘍）；ＰＡＰＡＳＨ（化膿性関節炎、アクネ、ＰＧおよび汗腺膿瘍）；スイート症候群（ＳＳ）；角層下膿疱症（ＳＰＤ）；後天性表皮水疱症、持久性隆起性紅斑（ＥＥＤ）；好中球性脂肪織炎；腸関連皮膚病−関節炎症候群（ＢＡＤＡＳ）；ＳＡＰＨＯ（滑膜炎、アクネ、膿疱症、骨化過剰症、および骨炎）症候群；リウマチ性好中球性皮膚症；家族性地中海熱、クリオピリン関連障害、痛風、およびシュニッツラー症候群からなる群から選択される、化合物に関する。
【００２７】
第２の局面において、本願発明は、対象において皮膚、好中球性、炎症性疾患の処置のための方法であって、それを必要とする対象に治療量の化合物を投与する工程を含み、化合物は、Ｃ５ａ活性のインヒビターであり、皮膚、好中球性、炎症性疾患は、汗腺膿瘍（ＨＳ）；壊疽性膿皮症（ＰＧ）；ＰＡＰＡ（化膿性関節炎、ＰＧおよびアクネ）；ＰＡＳＨ（ＰＧ、アクネおよび汗腺膿瘍）；ＰＡＰＡＳＨ（化膿性関節炎、アクネ、ＰＧおよび汗腺膿瘍）；スイート症候群（ＳＳ）；角層下膿疱症（ＳＰＤ）；後天性表皮水疱症、持久性隆起性紅斑（ＥＥＤ）；好中球性脂肪織炎；腸関連皮膚病−関節炎症候群（ＢＡＤＡＳ）；ＳＡＰＨＯ（滑膜炎、アクネ、膿疱症、骨化過剰症、および骨炎）症候群；リウマチ性好中球性皮膚症；家族性地中海熱、クリオピリン関連障害、痛風、およびシュニッツラー症候群からなる群から選択される、方法に関する。
【００２８】
第３の局面において、本願発明は、皮膚、好中球性、炎症性疾患の処置のための医薬組成物の製造のための化合物の使用であって、化合物は、Ｃ５ａ活性のインヒビターであり、皮膚、好中球性、炎症性疾患は、汗腺膿瘍（ＨＳ）；壊疽性膿皮症（ＰＧ）；ＰＡＰＡ（化膿性関節炎、ＰＧおよびアクネ）；ＰＡＳＨ（ＰＧ、アクネおよび汗腺膿瘍）；ＰＡＰＡＳＨ（化膿性関節炎、アクネ、ＰＧおよび汗腺膿瘍）；スイート症候群（ＳＳ）；角層下膿疱症（ＳＰＤ）；後天性表皮水疱症、持久性隆起性紅斑（ＥＥＤ）；好中球性脂肪織炎；腸関連皮膚病−関節炎症候群（ＢＡＤＡＳ）；ＳＡＰＨＯ（滑膜炎、アクネ、膿疱症、骨化過剰症、および骨炎）症候群；リウマチ性好中球性皮膚症；家族性地中海熱、クリオピリン関連障害、痛風、およびシュニッツラー症候群からなる群から選択される、使用に関する。
【００２９】
この発明の概要は、本願発明の全ての特徴を必ずしも説明しない。他の態様は、次の詳細な説明の説明から明らかになるであろう。
【図面の簡単な説明】
【００３０】
【図１】血中好中球における組換えヒトＣ５ａ（ｒｈＣ５ａ）誘導ＣＤ１１ｂ上方調節に対するＩＦＸ−１の遮断活性。ＩＦＸ−１−００４およびＩＦＸ−１−０１２は、２つの異なる生産バッチを示す。ヒト全血を、バッファー、抗体単独、ｒｈＣ５ａ単独、または異なる抗体濃度およびｒｈＣ５ａの組合せとインキュベートした。インキュベーション後、細胞を抗−マウスＣＤ１１ｂ：ＦＩＴＣで染色し、ＣＤ１１ｂ  ＭＦＩをフローサイトメトリーによって分析した。結果は平均±ＳＤとして示される。Ｃ５ａ誘導ＣＤ１１ｂ発現のＩＦＸ−１遮断活性のパーセントはマークされている（矢印）。統計的差異は一元配置分散分析によって計算され、ｐ＜０．０５のｐ値は統計的に有意であった。
【００３１】
【図２】好中球における内因性Ｃ５ａ（ｅＣ５ａ）駆動ＣＤ１１ｂ上方調節に対するＩＦＸ−１の遮断活性。ザイモサン活性化ヒト血漿（ＺＡＰ）をｅＣ５ａの供給源として使用した。全血を、バッファー、ＩＦＸ−１単独、ＺＡＰ単独、またはＩＦＸ−１およびＺＡＰの組合せとインキュベートした。インキュベーション後、細胞を抗−マウスＣＤ１１ｂ：ＦＩＴＣで染色し、フローサイトメトリーによって分析した。結果は平均±ＳＤとして示される。ｅＣ５ａ誘導ＣＤ１１ｂ発現のＩＦＸ−１遮断活性のパーセントはマークされている（矢印）。統計的差異は一元配置分散分析によって計算され、ｐ＜０．０５のｐ値は統計的に有意であった。
【００３２】
【図３】ザイモサンによる血中好中球の活性化およびＩＦＸ−１遮断活性。全血を、ＨＢＳＳ、ｒｈＣ５ａおよびザイモサンＡ単独、または異なるＩＦＸ−１濃度およびｒｈＣ５ａまたはザイモサンＡの組合せとインキュベートした。インキュベーション後、細胞を抗−マウスＣＤ１１ｂ：ＦＩＴＣで染色し、ＣＤ１１ｂ  ＭＦＩをフローサイトメトリーによって分析した。結果は平均±ＳＤとして示される。Ｃ５ａ誘導ＣＤ１１ｂ発現のＩＦＸ−１遮断活性のパーセントはマークされている（矢印）。統計的差異は一元配置分散分析によって計算され、ｐ＜０．０５のｐ値は統計的に有意であった。
【００３３】
【図４】ＩＦＸ−１は、ヒト全血においてＩＬ−８のザイモサン誘導産生を阻害する。ＩＬ−８濃度を、ＩＦＸ−１の存在（白丸）または非存在（黒丸）下において、ヒト全血とｘ軸にて示されるとおりのザイモサンＡの異なる濃度とのインキュベーション後にＥＬＩＳＡによって得た。結果は平均±ＳＤとして示された。
【００３４】
【図５】１４人の健常コントロールおよび５４人の汗腺膿瘍（ＨＳ）を有する患者の血漿におけるＣ３ａ（Ａ）、Ｃ５ａ（Ｂ）およびＣ５ｂ−９（Ｃ）の濃度。円は外れ値を示し、アステリスクは極値を示す。Ｐ値は、患者およびコントロール間の有意な差異を表す。
【００３５】
【図６】血中好中球活性化に対するＨＳ血漿の効果およびＣ５ａの起こりうる役割。ＨＳ血漿サンプルをＩＦＸ−１の存在および非存在下においてヒト全血とインキュベートし、血中好中球におけるＣＤ１１ｂ発現をフローサイトメトリー分析によって決定した。コントロールおよびＨＳサンプルにおいてＣ５ａレベルは、組み込まれた表において表示されている。
【００３６】
【図７】ＨＳ患者におけるＩＦＸ−１処置後のＨｉＳＣＲ応答。ＨｉＳＣＲ応答者は、ベースラインと比較して、炎症病変数（膿瘍＋炎症性小結節）の＞５０％減少、および膿瘍または排液性瘻孔の増加なしとして定義される。
【００３７】
【図８】様々な抗−Ｃ５ａＲ抗体を介するＣ５ａ誘導ＣＤ１１ｂ上方調節の遮断。好中球の供給源としての全血を、それぞれの抗−Ｃ５ａＲ抗体の非存在または存在において（スパイクされた−）血漿サンプルとインキュベートした。それぞれのインヒビターの遮断活性を、対応するサンプルに対してパーセンテージとして示した。
【００３８】
【図９】Ｃ５ａＲアンタゴニストＰＭＸ−５３を介するＣ５ａ誘導ＣＤ１１ｂ上方調節の遮断。好中球の供給源としての全血を、低濃度（Ａ）または過剰濃度（Ｂ）Ｃ５ａＲアンタゴニストＰＭＸ−５３の非存在または存在において（スパイクされた−）血漿サンプルとインキュベートした。ＰＭＸ−５３の遮断活性を、対応するサンプルに対してパーセンテージとして示した。
【００３９】
【図１０】Ｃ５ａ遮断抗体ＩＦＸ−１を介するＣ５ａ誘導ＣＤ１１ｂ上方調節の遮断。好中球の供給源としての全血を、ＩＦＸ−１の非存在または存在において（スパイクされた−）血漿サンプルとインキュベートした。ＩＦＸ−１の遮断活性を、対応するサンプルに対してパーセンテージとして示した。
【００４０】
【図１１】Ｃ５ａＲインヒビターＡｖａｃｏｐａｎを介するＣ５ａ誘導ＣＤ１１ｂ上方調節の遮断。好中球の供給源としての全血を、Ａｖａｃｏｐａｎの非存在または存在において（スパイクされた−）血漿サンプルとインキュベートした。Ａｖａｃｏｐａｎの遮断活性を、対応するサンプルに対してパーセンテージとして示した。
【発明を実施するための形態】
【００４１】
発明の詳細な説明
定義
本願発明を以下に詳細に説明する前に、本願発明が、変化できるとき本願明細書に記載されている特定の方法論、プロトコールおよび試薬に限定されないことを理解されたい。本願明細書において使用される用語が、特定の態様のみを説明する目的のためであり、添付の特許請求の範囲のみによって限定される本願発明の範囲を限定することを意図しないことも理解されたい。他に定義されていない限り、本願明細書において使用される全ての専門および科学用語は、本願発明が属する当業者によって一般的に理解されるのと同じ意味を有する。
【００４２】
好ましくは、本願明細書において使用される用語は、“A multilingual glossary of biotechnological terms: (IUPAC Recommendations)”, Leuenberger, H.G.W, Nagel, B. and Kolbl, H. eds. (1995), Helvetica Chimica Acta, CH-4010 Basel, Switzerland)に記載されているとおりに定義される。本願明細書および添付の特許請求の範囲を通して、文脈上他の意味に解すべき場合を除き、用語「含む」、および「含み」および「含むこと」などの変形は、記載されている整数もしくは工程または整数もしくは工程の群の包含を意味するが、あらゆる他の整数もしくは工程または整数もしくは工程の群の除外をされないと理解される。
【００４３】
いくつかの文書（例えば：特許、特許出願、科学刊行物、製造業者の説明書、指示書、GenBank受入番号配列寄託など）は、本願明細書の本文を通して引用されている。本願明細書において、本願発明が以前の発明の理由でかかる記載に先立つ権利がないという承認として解釈されるべきでない。本願明細書に引用される文書のいくつかは、「出典明示により包含させる」として特徴付けられる。かかる組み込まれた文献の定義または教示と本願明細書に引用される定義または教示間で矛盾がある場合、本願明細書の本文が優先される。
【００４４】
配列：本願明細書において言及される全ての配列は、添付の配列表に記載されており、その全体の内容および記載と共に、本願明細書の一部である。
【００４５】
本願発明の文脈において、Ｃ５ａは、特にヒトＣ５ａを指す。ヒトＣ５ａは、以下のアミノ酸配列を有する７４個のアミノ酸ペプチドである：
【化１】
2020524696.tif 000003
（配列番号：１）
【００４６】
ヒトＣ５のアミノ酸配列は、受入番号ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ  Ｐ０１０３１（ＣＯ５＿ヒト）の下に見ることができる。
【００４７】
本願明細書において使用されるとき、「Ｃ５ａ活性のインヒビター」なる用語は、Ｃ５ａの活性を何らかの形で減少させるあらゆる化合物を指す。この活性減少は、Ｃ５ａの濃度を直接的または間接的に低下させることによって、またはＣ５ａの活性を減少させることによって、またはその受容体の１つ以上に対する（例えばＣ５ａＲまたはＣ５Ｌ２に対する）その効果を発揮することからＣ５ａを防止することによって、またはＣ５ａの１つ以上の受容体の濃度または活性を減少させることによって、なし遂げることができる。
【００４８】
本願発明の文脈において、「Ｃ５ａ受容体」なる表現は、細胞表面上のあらゆる可能性のあるＣ５ａ結合リガンド、とりわけＣ５ａが該受容体に結合し、反応（例えば受容体の活性化または阻害）を引き起こす可能性があるあらゆる受容体タンパク質を指す。「Ｃ５ａ受容体」なる用語は、特に、２つの受容体Ｃ５ａＲおよびＣ５Ｌ２を含む。Ｃ５ａＲの代替名は、Ｃ５ａＲ１およびＣＤ８８である。Ｃ５Ｌ２の代替名は、Ｃ５ａＲ２である。
【００４９】
本願発明の特定の態様は、（例えばＣ５ａ受容体に結合することによって、またはＣ５ａ受容体の発現を遮断することによって）Ｃ５ａ受容体を妨げるＣ５ａのインヒビターを指す。これらの文脈において、「Ｃ５ａ受容体」なる用語は、（ｉ）Ｃ５ａＲまたは（ｉｉ）Ｃ５Ｌ２または（ｉｉｉ）Ｃ５ａＲおよびＣ５Ｌ２の両方を指すことができる。これは、Ｃ５ａのいくつかのインヒビターはＣ５ａ受容体の１つのみ（すなわちＣ５ａＲまたはＣ５Ｌ２のいずれか）を妨げるが、一方、Ｃ５ａの他のインヒビターはＣ５ａ受容体の両方（すなわちＣ５ａＲおよびＣ５Ｌ２の両方）を妨げるということを意味する。
【００５０】
本願発明の文脈において、「タンパク質リガンド」なる表現は、別の分子に特異的に結合することができる、分子の総サイズにかかわりなく、ペプチド結合によって連結されるアミノ酸から構成されるあらゆる分子を指す。したがって、「タンパク質リガンド」なる表現は、オリゴペプチド（＜１００アミノ酸）およびポリペプチド（＞１００アミノ酸）を含む。「タンパク質リガンド」なる表現はまた、それらのサイズにかかわりなく、環状ペプチドを含む。「タンパク質リガンド」なる表現は、特に、抗体、抗体の抗原結合フラグメント、抗体様タンパク質、およびペプチド模倣物を含む。
【００５１】
本願明細書において使用されるとき、第１の化合物（例えばタンパク質リガンドまたは核酸アプタマー）は、１ｍＭ以下、好ましくは１００μＭ以下、好ましくは５０μＭ以下、好ましくは３０μＭ以下、好ましくは２０μＭ以下、好ましくは１０μＭ以下、好ましくは５μＭ以下、さらに好ましくは１μＭ以下、さらに好ましくは９００ｎＭ以下、さらに好ましくは８００ｎＭ以下、さらに好ましくは７００ｎＭ以下、さらに好ましくは６００ｎＭ以下、さらに好ましくは５００ｎＭ以下、さらに好ましくは４００ｎＭ以下、さらに好ましくは３００ｎＭ以下、さらに好ましくは２００ｎＭ以下、よりさらに好ましくは１００ｎＭ以下、よりさらに好ましくは９０ｎＭ以下、よりさらに好ましくは８０ｎＭ以下、よりさらに好ましくは７０ｎＭ以下、よりさらに好ましくは６０ｎＭ以下、よりさらに好ましくは５０ｎＭ以下、よりさらに好ましくは４０ｎＭ以下、よりさらに好ましくは３０ｎＭ以下、よりさらに好ましくは２０ｎＭ以下、およびよりさらに好ましくは１０ｎＭ以下の第２の化合物への解離定数Ｋｄを有するとき、第２の化合物（例えば標的タンパク質）に「結合する」と考えられる。
【００５２】
本願発明による「結合」なる用語は、好ましくは、特異的結合に関する。「特異的結合」は、化合物（例えばタンパク質リガンドまたは核酸アプタマー）が、別の標的への結合と比較して特異的である標的、例えばエピトープにより強く結合することを意味する。化合物は、第２の標的に対する解離定数よりも低い解離定数（Ｋｄ）を有する第１の標的に結合するとき、第２の標的と比較して第１の標的により強く結合する。好ましくは、化合物が特異的に結合する標的に対する解離定数（Ｋｄ）は、化合物が特異的に結合しない標的に対する解離定数（Ｋｄ）よりも、１０倍以上、好ましくは２０倍以上、さらに好ましくは５０倍以上、よりさらに好ましくは１００倍、２００倍、５００倍または１０００倍以上低い。
【００５３】
本願明細書において使用されるとき、「Ｋｄ」（通常「ｍｏｌ／Ｌ」において測定される、ときどき「Ｍ」として略される）なる用語は、化合物（例えばタンパク質リガンド）と標的分子間の特定の相互作用の解離平衡定数を指すことを意図される。
【００５４】
化合物の結合親和性を決定するための、すなわち解離定数Ｋｄを決定するための方法は、当業者に知られており、例えば当分野で知られている以下の方法から選択することができる：表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）ベースの技術、バイオレイヤー干渉法（ＢＬＩ）、酵素免疫吸着法アッセイ（ＥＬＩＳＡ）、フローサイトメトリー、等温滴定熱量計（ＩＴＣ）、分析超遠心分離、放射免疫測定法（ＲＩＡまたはＩＲＭＡ）および増強化学発光（ＥＣＬ）。典型的に、解離定数Ｋｄは、２０℃、２５℃、３０℃、または３７℃で決定される。他に具体的に示されていないとき、本願明細書に記載されるＫｄ値は、ＥＬＩＳＡによって２０℃で決定される。
【００５５】
抗原性決定因子としても知られている「エピトープ」は、免疫系により、具体的には抗体、Ｂ細胞、またはＴ細胞により認識される高分子の一部である。本願明細書において使用されるとき、「エピトープ」は、本願明細書に記載されている化合物（例えば抗体またはその抗原結合フラグメント）に結合することができる高分子の一部である。この文脈において、「結合」なる用語は、好ましくは特異的結合に関する。エピトープは、通常、分子、例えばアミノ酸または糖側鎖の化学的に活性な表面グループからなり、通常、特定の三次元構造的特性、ならびに特定の電荷特性を有する。立体および非立体構造エピトープは、後者ではなく前者への結合は変性溶媒の存在下で喪失されることにおいて区別することができる。
【００５６】
「パラトープ」は、エピトープに結合する抗体の一部である。本願発明の文脈において、「パラトープ」は、エピトープに結合する本願明細書に記載されている化合物（例えばタンパク質リガンド）の一部である。
【００５７】
「抗体」なる用語は、一般的に、ジスルフィド結合によって相互連結された少なくとも２つの重（Ｈ）鎖および２つの軽（Ｌ）鎖を含む糖タンパク質、またはその抗原結合部分を指す。「抗体」なる用語はまた、抗体の、特に本願明細書に記載されている抗体、例えば原核生物において発現される抗体、非グリコシル化抗体、真核生物（例えばＣＨＯ細胞）において発現される抗体、グリコシル化抗体、および以下に記載されるあらゆる抗原結合抗体フラグメントおよび誘導体の全ての組換え形態を含む。それぞれの重鎖は、重鎖可変領域（本願明細書においてＶＨまたはＶＨと省略される）および重鎖定常領域で構成される。それぞれの軽鎖は、軽鎖可変領域（本願明細書においてＶＬまたはＶＬと省略される）および軽鎖定常領域で構成される。ＶＨおよびＶＬ領域は、フレームワーク領域（ＦＲ）と称されるより保存されている領域で散在される相補性決定領域（ＣＤＲ）と称される超可変性の領域にさらに細分化することができる。それぞれのＶＨおよびＶＬは、３つのＣＤＲおよび４つのＦＲで構成され、アミノ−末端からカルボキシ−末端に以下の順番において配置される：ＦＲ１、ＣＤＲ１、ＦＲ２、ＣＤＲ２、ＦＲ３、ＣＤＲ３、ＦＲ４。重鎖および軽鎖の可変領域は、抗原と相互作用する結合ドメインを含む。抗体の定常領域は、免疫系の種々の細胞（例えば、エフェクター細胞）および古典的補体系の最初の成分（Ｃ１ｑ）を含む宿主組織または因子への免疫グロブリンの結合を媒介し得る。
【００５８】
本願明細書において使用されるとき、抗体の「抗原結合フラグメント」なる用語（または単に「結合部分」）は、抗原に特異的に結合する能力を保持する抗体の１つ以上のフラグメントを指す。抗体の抗原結合機能は、完全長抗体のフラグメントによって行うことができることが示されている。抗体の「抗原結合部分」なる用語内に包含される結合フラグメントの例は、（ｉ）ＶＬ、ＶＨ、ＣＬおよびＣＨドメインからなる一価のフラグメントであるＦａｂフラグメント；（ｉｉ）ヒンジ領域でジスルフィド架橋によって連結される２つのＦａｂフラグメントを含む二価のフラグメントであるＦ（ａｂ’）２フラグメント；（ｉｉｉ）ＶＨおよびＣＨドメインからなるＦｄフラグメント；（ｉｖ）抗体の単一アームのＶＬおよびＶＨドメインからなるＦｖフラグメント、（ｖ）ＶＨドメインからなるｄＡｂフラグメント（Ward et al., (1989) Nature 341: 544-546）；（ｖｉ）単離された相補性決定領域（ＣＤＲ）、および（ｖｉｉ）所望により合成リンカーによって連結されてもよい２つまたはそれ以上の単離されたＣＤＲの組合せを含む。さらに、Ｆｖフラグメントの２つのドメインであるＶＬおよびＶＨが別々の遺伝子によってコードされるが、それらは、組換え方法を使用して、ＶＬおよびＶＨ領域が対になって一価の分子を形成する単一のタンパク質鎖として作ることが可能である合成リンカーによって連結することができる（一本鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）として知られる；例えば、Bird et al. (1988) Science 242: 423-426;およびHuston et al. (1988) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 85: 5879-5883参照）。かかる一本鎖抗体はまた、抗体の「抗原結合フラグメント」なる用語内に包含されることを意図される。さらなる例は、（ｉ）免疫グロブリンヒンジ領域ポリペプチドに融合される結合ドメインポリペプチド、（ｉｉ）ヒンジ領域に融合される免疫グロブリン重鎖ＣＨ２定常領域、および（ｉｉｉ）ＣＨ２定常領域に融合される免疫グロブリン重鎖ＣＨ３定常領域、を含む結合ドメイン免疫グロブリン融合タンパク質である。結合ドメインポリペプチドは、重鎖可変領域または軽鎖可変領域であってよい。結合ドメイン免疫グロブリン融合タンパク質は、ＵＳ  ２００３／０１１８５９２およびＵＳ  ２００３／０１３３９３９にさらに記載されている。これらの抗体フラグメントは、当業者に知られている慣用の技術を使用して得られ、フラグメントは、無傷な抗体と同じ様式において有用性についてスクリーニングされる。「抗原結合フラグメント」のさらなる例は、単一のＣＤＲに由来する、いわゆるマイクロ抗体である。例えば、Heap et al., 2005は、ＨＩＶ−１のｇｐ１２０エンベロープ糖タンパク質に対する抗体の重鎖ＣＤＲ３に由来する１７アミノ酸残基マイクロ抗体を記載している（Heap C.J. et al. (2005) Analysis of a 17-amino acid residue, virus-neutralizing microantibody. J. Gen. Virol. 86:1791-1800）。他の例は、好ましくはコグネイトフレームワーク領域によって、互いに融合される２つまたはそれ以上のＣＤＲ領域を含む小さい抗体模倣物を含む。コグネイトＶＨ  ＦＲ２によって連結されるＶＨ  ＣＤＲ１およびＶＬ  ＣＤＲ３を含むかかる小さい抗体模倣物は、Qiu et al., 2007によって記載されている（Qiu X.-Q. et al. (2007) Small antibody mimetics comprising two complementary-determining regions and a framework region for tumor targeting. Nature biotechnology 25(8):921-929）。
【００５９】
したがって、本願明細書において使用されるとき、「抗体またはその抗原結合フラグメント」なる用語は、免疫グロブリン分子および免疫グロブリン分子の免疫学的に活性な部分、すなわち抗原に免疫特異的に結合する抗原結合部位を含む分子を指す。例えば、標的分子または標的エピトープに特異的に結合するファージディスプレイを含む、技術を介して選択される免疫グロブリン様タンパク質も包含される。本願発明の免疫グロブリン分子は、免疫グロブリン分子のあらゆるタイプ（例えば、ＩｇＧ、ＩｇＥ、ＩｇＭ、ＩｇＤ、ＩｇＡおよびＩｇＹ）、クラス（例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、好ましくはＩｇＧ２ａおよびＩｇＧ２ｂ、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１およびＩｇＡ２）またはサブクラスであってよい。
【００６０】
本願発明において使用可能な抗体およびその抗原結合フラグメントは、鳥および哺乳動物を含むあらゆる動物起源由来であってよい。好ましくは、抗体またはフラグメントは、ヒト、チンパンジー、齧歯動物（例えばマウス、ラット、モルモット、またはウサギ）、ニワトリ、シチメンチョウ、ブタ、ヒツジ、ヤギ、ラクダ、ウシ、ウマ、ロバ、ネコ、またはイヌ起源からのものである。抗体がヒトまたはマウス起源であることが特に好ましい。本願発明の抗体はまた、１つの種、好ましくはヒトに由来する抗体定常領域が、別の種、例えばマウスに由来する抗原結合部位と組み合わせられているキメラ分子を含む。さらに、本願発明の抗体は、非ヒト種に由来する（例えばマウスに由来する）抗体の抗原結合部位が、ヒト起源の定常およびフレームワーク領域と組み合わせられているヒト化分子を含む。
【００６１】
本願明細書に例示されるとき、本願発明の抗体は、抗体を発現するハイブリドーマから直接的に得ることができるか、または宿主細胞（例えば、ＣＨＯ細胞、またはリンパ球細胞）においてクローニングさせるおよび組換え的に発現させることができる。宿主細胞のさらなる例は、微生物、例えば大腸菌、および真菌、例えば酵母である。あるいは、それらは、トランスジェニック非ヒト動物または植物において組換え的に生産することができる。
【００６２】
「キメラ抗体」なる用語は、重鎖および軽鎖のアミノ酸配列のそれぞれの１つの部分が特定の種に由来するかまたは特定のクラスに属する抗体において対応する配列と同種であるが、鎖の残りのセグメントが別の種またはクラスにおいて対応する配列と同種である抗体を指す。一般的には、軽鎖および重鎖の両方の可変領域は哺乳動物の１つの種に由来する抗体の可変領域を模倣するが、定常部分は別の種に由来する抗体の配列と同種である。かかるキメラ形態の１つの明確な利点は、例えばヒト細胞調製物に由来する定常領域と組み合わせて、非ヒト宿主生物からの容易に利用できるＢ細胞またはハイブリドーマを使用して、可変領域が現在知られている供給源に便利に由来することができることである。可変領域が調製の容易さの利点を有し、特異性が供給源によって影響されないが、ヒトである定常領域は、非ヒト供給源からの定常領域よりも、抗体が注射されるときヒト対象から免疫応答を引き起こす可能性が低い。しかしながら、定義は、この特定の例に限定されない。
【００６３】
「ヒト化抗体」なる用語は、非ヒト種からの免疫グロブリンに実質的に由来する抗原結合部位を有し、分子の残りの免疫グロブリン構造がヒト免疫グロブリンの構造および／または配列に基づく、分子を指す。抗原結合部位は、定常ドメイン上に融合される完全な可変ドメインまたは可変ドメインにおいて適当なフレームワーク領域上にグラフトされる相補性決定領域（ＣＤＲ）のみのいずれかを含んでよい。抗原結合部位は、野生型であってもよく、または１つ以上のアミノ酸置換によって修飾されてもよく、例えばより密接にヒト免疫グロブリンに似るように修飾されてもよい。ヒト化抗体のいくつかの形態は、全てのＣＤＲ配列（例えばマウス抗体からの全ての６つのＣＤＲを含むヒト化マウス抗体）を保存している。他の形態は、起源抗体に対して変化されている１つ以上のＣＤＲを有する。
【００６４】
抗体をヒト化するための種々の方法は、Almagro & Fransson, 2008, Frontiers in Bioscience, 13:1619-1633（その内容を出典明示によりその全体において本願明細書に包含させる）により説明されるとおり、当業者に知られている。Ａｌｍａｇｒｏ  ＆  Ｆｒａｎｓｓｏｎによるレビュー記事は、国際特許出願ＷＯ  ２０１１／０６３９８０  Ａ１の国内段階事項であるＵＳ  ２０１２／０２３１００８  Ａ１において簡潔に要約される。ＵＳ  ２０１２／０２３１００８  Ａ１およびＷＯ  ２０１１／０６３９８０  Ａ１の内容を出典明示によりそれら全体において本願明細書に包含させる。
【００６５】
本願明細書において使用されるとき、「ヒト抗体」は、ヒト生殖細胞系列免疫グロブリン配列に由来する可変および定常領域を有する抗体を含む。本願発明のヒト抗体は、ヒト生殖細胞系列免疫グロブリン配列によってコードされないアミノ酸残基（例えば、インビトロでランダムまたは部位特異的突然変異誘発またはインビボで体細胞突然変異によって導入される突然変異）を含んでよい。本願発明のヒト抗体は、例えばＫｕｃｈｅｒｌａｐａｔｉ  ＆  Ｊａｋｏｂｏｖｉｔｓによる米国特許第５，９３９，５９８号に記載されているとおりの、ヒト免疫グロブリンライブラリーまたは１つ以上のヒト免疫グロブリンに対してトランスジェニック動物から単離され、内因性免疫グロブリンを発現しない、抗体を含む。
【００６６】
本願明細書において使用される「モノクローナル抗体」なる用語は、単一の分子組成物の抗体分子の調製物を指す。モノクローナル抗体は、特定のエピトープに対する単一の結合特異性および親和性を示す。１つの態様において、モノクローナル抗体は、不死化細胞に融合された非ヒト動物、例えばマウスから得られるＢ細胞を含むハイブリドーマにより生産される。
【００６７】
本願明細書において使用されるとき、「組換え抗体」なる用語は、組換え手段によって調製、発現、作成または単離される全ての抗体、例えば、（ａ）免疫グロブリン遺伝子に対してトランスジェニックまたはトランス染色体である動物（例えば、マウス）またはそこから調製されるハイブリドーマから単離される抗体、（ｂ）例えばトランスフェクトーマから、抗体を発現するように形質転換された宿主細胞から単離される抗体、（ｃ）組み換えコンビナトリアル抗体ライブラリーから単離される抗体、および（ｄ）免疫グロブリン遺伝子配列の他のＤＮＡ配列へのスプライシングを含む他の手段によって調製、発現、作成または単離される抗体を含む。
【００６８】
本願明細書において使用されるとき、「トランスフェクトーマ」なる用語は、抗体を発現する組換え真核宿主細胞、例えばＣＨＯ細胞、ＮＳ／０細胞、ＨＥＫ２９３細胞、ＨＥＫ２９３Ｔ細胞、植物細胞、または酵母細胞を含む真菌を含む。
【００６９】
本願明細書において使用されるとき、「異種抗体」は、かかる抗体を生産するトランスジェニック生物に関して定義される。この用語は、トランスジェニック生物からならない生物体において見いだされたものに対応し、一般的にトランスジェニック生物以外の種に由来するアミノ酸配列を有する抗体またはコードする核酸配列を指す。
【００７０】
本願明細書において使用されるとき、「ヘテロハイブリッド抗体」は、異なる生物起源の軽鎖および重鎖を有する抗体を指す。例えば、マウス軽鎖を伴うヒト重鎖を有する抗体は、ヘテロハイブリッド抗体である。
【００７１】
したがって、本願発明における使用のための適当な「抗体およびその抗原結合フラグメント」は、限定はしないが、ポリクローナル、モノクローナル、一価、二重特異性、ヘテロコンジュゲート、多特異的、組換え、異種、ヘテロハイブリッド、キメラ、ヒト化（特にＣＤＲグラフト化）、脱免疫化、またはヒト抗体、Ｆａｂフラグメント、Ｆａｂ’フラグメント、Ｆ（ａｂ’）２フラグメント、Ｆａｂ発現ライブラリーによって生産されるフラグメント、Ｆｄ、Ｆｖ、ジスルフィド連結Ｆｖ（ｄｓＦｖ）、一本鎖抗体（例えばｓｃＦｖ）、ダイアボディまたはテトラボディ（Holliger P. et al. (1993) Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 90(14), 6444-6448）、ナノボディ（単一ドメイン抗体としても知られている）、抗−イディオタイプ（抗−Ｉｄ）抗体（例えば、本願明細書に記載されている抗体に対する抗−Ｉｄ抗体を含む）、および上記のいずれかのエピトープ結合フラグメントを含む。
【００７２】
本願明細書に記載されている抗体は、好ましくは、単離されている。本願明細書において使用される「単離された抗体」は、異なる抗原特異性を有する他の抗体を実質的に含まない（例えば、Ｃ５ａに特異的に結合する単離された抗体は、Ｃ５ａ以外の抗原に特異的に結合する抗体を実質的に含まない）抗体を指すことを意図する。しかしながら、ヒトＣ５ａのエピトープ、アイソフォームまたは変異体に特異的に結合する単離された抗体は、他の関連抗原、例えば他の種からの抗原（例えばＣ５ａ種ホモログ、例えばラットＣ５ａ）に対して交差反応性を有してもよい。さらに、単離された抗体は、他の細胞物質および／または化学物質を実質的に含まなくてもよい。本願発明の１つの態様において、「単離された」モノクローナル抗体の組合せは、異なる特異性を有し、明確な組成物において組み合わせられている抗体に関する。
【００７３】
物体に適用されるとき、本願明細書において使用されるとき、「天然」なる用語は、物体が自然界で見つけることができるという事実を指す。例えば、自然界で供給源から単離することができる生物体（ウイルスを含む）において存在する、および研究室においてヒトによって意図的に修飾されていない、ポリペプチドまたはポリヌクレオチド配列は、天然である。
【００７４】
本願明細書において使用されるとき、「核酸アプタマー」なる用語は、標的分子に結合するように、インビトロ選択またはＳＥＬＥＸ（指数関数的増加によるリガンドの系統的展開）の繰り返し処理を介して操作されている核酸分子を指す（説明のために、参照：Brody E.N. and Gold L. (2000), Aptamers as therapeutic and diagnostic agents. J. Biotechnol. 74(1):5-13）。核酸アプタマーは、ＤＮＡまたはＲＮＡ分子であってよい。アプタマーは、修飾、例えば修飾ヌクレオチド、例えば２’−フッ素−置換ピリミジンを含んでよく、および／または標準Ｄ−リボース単位（またはＤ−デオキシリボース単位）の代わりにＬ−リボース単位（またはＬ−デオキシリボース）を有する１つ以上のヌクレオチドを含んでよい。
【００７５】
本願明細書において使用されるとき、「抗体様タンパク質」なる用語は、標的分子に特異的に結合するように、（例えばループの突然変異誘発により）操作されているタンパク質を指す。一般的に、かかる抗体様タンパク質は、タンパク質スカフォールドに両末端で付着された少なくとも１つの可変ペプチドループを含む。この二重構造の制限は、抗体に匹敵するレベルに抗体様タンパク質の結合親和性を顕著に増加させる。可変ペプチドループの長さは、一般的に、１０から２０アミノ酸からなる。スカフォールドタンパク質は、良い溶解度特性を有するあらゆるタンパク質であってよい。好ましくは、スカフォールドタンパク質は、小さい球状のタンパク質である。抗体様タンパク質は、限定されないが、アフィボディ、アフィリン、アフィマー、アフィチン、アルファボディ、アンチカリン、アビマー、ＤＡＲＰｉｎｓ（設計されたアンキリン反復タンパク質）、ファイノマー、クニッツドメインペプチド、およびモノボディを含む（説明のために、参照：Binz H.K. et al. (2005) Engineering novel binding proteins from nonimmunoglobulin domains. Nat. Biotechnol. 23(10):1257-1268）。抗体様タンパク質は、突然変異体の大型ライブラリーから得ることができ、例えば大型ファージディスプレイライブラリーからパニングすることができ、および、通常の抗体と同様に単離することができる。また、抗体様結合タンパク質は、球状のタンパク質における表面に暴露された残基のコンビナトリアル突然変異誘発により得ることができる。抗体様タンパク質は、ときどき、「ペプチドアプタマー」または「抗体模倣物」として称される。
【００７６】
本願明細書において使用されるとき、「ペプチド模倣物」は、ペプチドを模倣するように設計された小さいタンパク質様鎖である。ペプチド模倣物は、一般的に、分子の特性を変更するために既存のペプチドの修飾から生じる。例えば、それらは、分子の安定性または生物学的活性を変化させるように修飾から生じ得る。これは、既存のペプチドからの薬物様化合物の開発において役割を有することができる。これらの修飾は、天然に起こらないペプチドへの変化を含む（例えば変更された骨格および非天然アミノ酸の取り込み）。
【００７７】
本願発明の文脈において、「小分子」なる用語は、２ｋＤａ以下の分子量、好ましくは１ｋＤａ以下の分子量を有する分子を指す。「小分子」なる用語は、特に、オリゴペプチドでもオリゴヌクレオチドでもない分子を指す。
【００７８】
本願発明の文脈において、（例えば、「該抗体またはその抗原結合フラグメントは、Ｃ５ａへの結合について（ａ）の下に示される抗体の１つと競合する」なる表現において）、「Ａは、Ｃへの結合についてＢと競合する」なる一般的な表現は、位置Ａに列挙された化合物の結合特性を定義するために使用される。該化合物ＡはＣに結合し、化合物ＢもまたＣに結合するが、化合物Ａおよび化合物Ｂは同時にＣに結合することができない；すなわち、ＡおよびＢはＣ上の同じエピトープに（または少なくとも重複エピトープに）結合する。結合においてかかる競合は、競合ＥＬＩＳＡまたは表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）ベースの技術または結合親和性の決定の文脈において上記他の技術のいずれかによって決定することができる。他に明記しない限り、化合物の競合結合特性は、２つの競合する化合物の等モル濃度を使用して２０℃でＥＬＩＳＡによって決定される。
【００７９】
本願明細書において使用されるとき、「皮膚、好中球性、炎症性疾患」は、該疾患を患っている個体の皮膚の炎症とおよび皮膚への（例えば表皮への）好中球浸潤と関連するあらゆる疾患を指す。「皮膚、好中球性、炎症性疾患」なる用語は、特に、汗腺膿瘍（ＨＳ）；壊疽性膿皮症（ＰＧ）；ＰＡＰＡ（化膿性関節炎、ＰＧおよびアクネ）；ＰＡＳＨ（ＰＧ、アクネおよび汗腺膿瘍）；ＰＡＰＡＳＨ（化膿性関節炎、アクネ、ＰＧおよび汗腺膿瘍）；スイート症候群（ＳＳ）；角層下膿疱症（ＳＰＤ）；後天性表皮水疱症、持久性隆起性紅斑（ＥＥＤ）；好中球性脂肪織炎；腸関連皮膚病−関節炎症候群（ＢＡＤＡＳ）；ＳＡＰＨＯ（滑膜炎、アクネ、膿疱症、骨化過剰症、および骨炎）症候群；リウマチ性好中球性皮膚症；家族性地中海熱、クリオピリン関連障害、痛風、およびシュニッツラー症候群を指す。
【００８０】
本願明細書において使用されるとき、「ＨＳ関連疾患」なる表現は、限定はしないが、壊疽性膿皮症（ＰＧ）；ＰＡＰＡ（化膿性関節炎、ＰＧおよびアクネ）；ＰＡＳＨ（ＰＧ、アクネおよび汗腺膿瘍）；ＰＡＰＡＳＨ（化膿性関節炎、アクネ、ＰＧおよび汗腺膿瘍）；スイート症候群（ＳＳ）；および角層下膿疱症（ＳＰＤ）を含む。
【００８１】
ＩＦＸ−１（代替名：ＣａＣＰ２９；  ＩｎｆｌａＲｘ  ＧｍｂＨ、Ｇｅｒｍａｎｙ）は、Ｃ５ａに特異的に結合する抗体である。ＩＦＸ−１のＣＤＲ配列およびＦＲ配列は、ＷＯ  ２０１５／１４０３０４  Ａ１（表３）に記載されており、この内容をその全体において出典明示により本願明細書に包含させる。
【００８２】
ＩＮａｂ７０８（ＩｎｆｌａＲｘ  ＧｍｂＨ、Ｇｅｒｍａｎｙ）は、Ｃ５ａに特異的に結合する別の抗体である。ＩＮａｂ７０８のＣＤＲ配列およびＦＲ配列はまた、ＷＯ  ２０１５／１４０３０４  Ａ１（表３）に記載されており、この内容をその全体において出典明示により包含させる。
【００８３】
ＭＥＤＩ−７８１４（ＭｅｄＩｍｍｕｎｅ）は、組換えヒト化抗−Ｃ５ａ抗体である。ＭＥＤＩ７８１４との複合体におけるヒトＣ５ａの結晶構造は、４ＵＵ９の下にＲＣＳＢ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｄａｔａ  Ｂａｎｋ(DOI: 10.2210/pdb4uu9/pdb)で利用できる。
【００８４】
ＡＬＸＮ−１００７（Ａｌｅｘｉｏｎ）は、ヒト化抗−Ｃ５ａ抗体である。
【００８５】
ＮＯＸ−Ｄ２１（Ｎｏｘｘｏｎ）は、配列４０ｋＤａＰＥＧ−アミノヘキシル−ＧＣＧ  ＡＵＧ  （ｄＵ）ＧＧ  ＵＧＧ  ＵＧＡ  ＡＧＧ  ＧＵＵ  ＧＵＵ  ＧＧＧ  （ｄＵ）ＧＵ  ＣＧＡ  ＣＧＣ  Ａ（ｄＣ）Ｇ  Ｃ（配列番号：３４）を有するペグ化混合Ｌ−ＲＮＡ／ＤＮＡ−アプタマー（Ｓｐｉｅｇｅｌｍｅｒ  ＴＭ）である。ＮＯＸ−Ｄ２１は、Ｃ５ａを標的とする（Hyzewicz J, Tanihata J, Kuraoka M, Nitahara-Kasahara Y, Beylier T, Ruegg UT, Vater A, and Takeda S. 2017. Low-Intensity Training and the C5a Complement Antagonist NOX-D21 Rescue the mdx Phenotype through Modulation of Inflammation. Am. J. Pathol., 187(5):1147-1161;印刷物の前に電子的に発行された: March 18, 2017）。
【００８６】
エクリズマブ（代替名：Ｓｏｌｉｒｉｓ  ＴＭ、５Ｇ１−１；  ｈ５Ｇ１．１；  Ａｌｅｘｉｏｎ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ）は、マウス骨髄腫細胞培養によって生産され、標準バイオプロセス技術によって精製される組換えヒト化モノクローナルＩｇＧ２／４κ抗体である。エクリズマブは、ヒトＣ５に特異的に結合する。エクリズマブは、ヒトＩｇＧ２配列およびヒトＩｇＧ４配列からのヒト定常領域およびヒトフレームワーク軽鎖および重鎖可変領域上にグラフトされたマウス相補性決定領域を含む。エクリズマブは、２つの４４８アミノ酸重鎖および２つの２１４アミノ酸軽鎖から構成され、約１４８ｋＤａの分子量を有する。エクリズマブの重鎖および軽鎖は、例えばＷＯ  ２０１６／０６１０６６  Ａ１においてそれぞれ配列番号：１および配列番号：３４として、記載されている。エクリズマブの重鎖および軽鎖をコードする核酸は、例えば米国特許第６，３５５，２４５号において、記載されている。
【００８７】
ＡＬＸＮ１２１０（代替名：ＢＮＪ４４１；  Ａｌｅｘｉｏｎ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ）は、抗−Ｃ５抗体である。ＡＬＸＮ１２１０の重鎖および軽鎖は、ＷＯ  ２０１６／２０９９５６  Ａ１においてそれぞれ配列番号：１４および１１として記載されている。
【００８８】
ＡＬＸＮ５５００（Ａｌｅｘｉｏｎ）は、ヒト化抗−Ｃ５抗体である。それは、次世代のエクリズマブ候補物である。
【００８９】
ＬＦＧ３１６（代替名：Ｔｅｓｉｄｏｌｕｍａｂ、ＮＯＶ−４；  Ｍｏｒｐｈｏｓｙｓ、Ｎｏｖａｒｔｉｓ）は、抗−Ｃ５抗体である。
【００９０】
ＣｏｖｅｒｓｉｎＴＭ（代替名：ＥＶ  ５７６；  ＰＡＳ−ｃｏｖｅｒｓｉｎ；  ｒＥＶ  ５７６；  Ｔｉｓｓｕｅ  ｔａｒｇｅｔｅｄ  ＣｏｖｅｒｓｉｎＴＭ  −  Ａｋａｒｉ；  Ａｋａｒｉ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ、Ｅｖｏｌｕｔｅｃ）は、宿主免疫学的応答を引き起こすことなく寄生生物の給餌を手助けする、Ｏｒｎｉｔｈｏｄｒｏｓ  ｍｏｕｂａｔａダニからの唾液分子に由来する組換えタンパク質分子（１６．７ｋＤａ）である。ＥＶ５７６タンパク質（すなわちＣｏｖｅｒｓｉｎ）のアミノ酸配列ならびにそのコードヌクレオチド配列は、ＷＯ  ２００８／０２９１６７の図２に示されている。ＣｏｖｅｒｓｉｎＴＭは、Ｃ５に結合する。
【００９１】
ＲＡ１０１４９５（Ｒａ  Ｐｈａｒｍａ）は、Ｃ５の大環状合成ペプチドインヒビターである（Ricardo A, Arata M, DeMarco S, Dhamnaskar K, Hammer R, Fridkis-Hareli M, Rajagopal V, Seyb K, Tang G-Q, Tobe S and Treco D. 2015. Preclinical Evaluation of RA101495, a Potent Cyclic Peptide Inhibitor of C5 for the Treatment of Paroxysmal Nocturnal Hemoglobinuria. Blood 126:939）。
【００９２】
Ｚｉｍｕｒａ（登録商標）（代替名：抗−Ｃ５アプタマー；  ＡＲＣ−１８７；  ＡＲＣ−１９０５；  Ａｖａｃｉｎｃａｐｔａｄ  ｐｅｇｏｌ  ｓｏｄｉｕｍ；  ＯｐｈｔｈｏＴｅｃｈ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ、Ａｒｃｈｅｍｉｘ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ）は、補体因子Ｃ５を阻害するペグ化ＲＮＡアプタマーである。ＡＲＣ１９０５（すなわちＺｉｍｕｒａ）のヌクレオチド配列は、例えばＷＯ  ２００５／０７９３６３  Ａ２において配列番号：６７として、示されており、その構造は、ＷＯ  ２００５／０７９３６３  Ａ２の図２２において示されている。
【００９３】
ＡＭＹ−２０１（Ａｍｙｎｄａｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ）は、調節および表面認識ドメインに直接的に連結するＨ因子の操作された形態である；したがって、それは、ミニＦＨ分子の一種である。
【００９４】
Ｍｉｒｏｃｏｃｅｐｔ（代替名：ＡＰＴ０７０およびＡＰＴ  ０７０Ｃ；発案者：Ａｄｐｒｏｔｅｃｈ；開発者：Ｉｎｆｌａｚｙｍｅ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ）は、組換え細菌において製造され、天然膜結合ミリストイル静電スイッチペプチドに基づく膜標的両親媒性ペプチドで修飾される、ヒト補体受容体１の最初の３つの短いコンセンサスドメインからなる（Souza DG, Esser D, Bradford R, Vieira AT, and Teixeira MM. 2005. APT070 (Mirococept), a membrane-localised complement inhibitor, inhibits inflammatory responses that follow intestinal ischaemia and reperfusion injury. Br J Pharmacol 145(8):1027-1034）。
【００９５】
ＢｉｋａｃｉｏＭａｂ（Ｎｏｖｅｌｍｅｄ）は、ＮＭ００１と称される抗−Ｂｂ因子抗体のＦ（ａｂ）２フラグメントである。抗体ＮＭ００１は、ＡＴＣＣ受入番号ＰＴＡ−８５４３の下に寄託されたハイブリドーマ細胞系１Ｄ３によって生産される。
【００９６】
Ｌａｍｐａｌｉｚｕｍａｂ（代替名：抗−Ｄ因子Ｆａｂ；  ＦＣＦＤ４５１４Ｓ；  ＲＧ７４１７；  ＴＮＸ−２３４；発案者：Ｔａｎｏｘ、開発者：Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ）は、Ｄ因子上のエキソサイトへの結合を介して、Ｄ因子および代替補体経路を阻害するヒト化抗−Ｄ因子Ｆａｂフラグメントである。
【００９７】
ＡＬＮ−ＣＣ５（Ａｌｎｙｌａｍ）は、ヒト、霊長類および齧歯動物Ｃ５を標的とするＲＮＡｉ治療物である。Ｃ５遺伝子を標的とする例示的なｉＲＮＡ組成物は、ＷＯ  ２０１６／０４４４１９に記載されている。
【００９８】
Ａｖａｃｏｐａｎ（名前ＣＣＸ１６８；  Ｃｈｅｍｏｃｅｎｔｒｙｘによっても知られる）は、式Ｉ：
【化２】
2020524696.tif 000004
による構造を有する小分子（ＭＷ＝５８１．６６ｇ／ｍｏｌ）である。ａｖａｃｏｐａｎのＩＵＰＡＣ／化学名は、（２Ｒ，３Ｓ）−２−［４−（シクロペンチルアミノ）フェニル］−１−（２−フルオロ−６−メチルベンゾイル）−Ｎ−［４−メチル−３−（トリフルオロメチル）フェニル］ピペリジン−３−カルボキサミドである。Ａｖａｃｏｐａｎは、Ｃ５ａＲの選択的インヒビターである。本願発明の文脈において、「ａｖａｃｏｐａｎ」なる用語は、式Ｉによる化合物ならびにその生理学的に許容される塩を指す。
【００９９】
本願発明を実施するために適当でもあるＡｖａｃｏｐａｎと類似の化合物は、国際特許出願ＷＯ  ２０１０／０７５２５７  Ａ１およびＷＯ  ２０１１／１６３６４０  Ａ１に記載されており、これらの内容をそれら全体において出典明示により本願明細書に包含させる。したがって、いくつかの態様において、Ｃ５ａ活性のインヒビターは、式ＩＩ
【化３】
2020524696.tif 000005
［式中、
Ｃ１は、アリールおよびヘテロアリールからなる群から選択され、ヘテロアリール基は、Ｎ、ＯおよびＳから選択される環員として１−３つのヘテロ原子を有し；該アリールおよびヘテロアリール基は、所望により１から３つのＲ１置換基で置換されており；
Ｃ２は、アリールおよびヘテロアリールからなる群から選択され、ヘテロアリール基は、Ｎ、ＯおよびＳから選択される環員として１−３つのヘテロ原子を有し；該アリールおよびヘテロアリール基は、所望により１から３つのＲ２置換基で置換されており；
Ｃ３は、Ｃ１−８アルキルまたはヘテロアルキル、Ｃ３−８シクロアルキル、Ｃ３−８シクロアルキル−Ｃ１−４アルキル、アリール、アリール−Ｃ１−４アルキル、ヘテロアリール、ヘテロアリール−Ｃ１−４アルキル、ヘテロシクロアルキルまたはヘテロシクロアルキル−Ｃ１−４アルキルからなる群から選択され、ヘテロシクロアルキル基または部分は、Ｎ、ＯおよびＳから選択される１−３つのヘテロ原子を有し、ヘテロアリール基は、Ｎ、ＯおよびＳから選択される環員として１−３つのヘテロ原子を有し、それぞれのＣ３は、所望により１−３つのＲ３置換基で置換されており；
それぞれのＲ１は、独立して、ハロゲン、−ＣＮ、−Ｒｃ、−ＣＯ２Ｒａ、−ＣＯＮＲａＲｂ、−Ｃ（Ｏ）Ｒａ、−ＯＣ（Ｏ）ＮＲａＲｂ、−ＮＲｂＣ（Ｏ）Ｒａ、−ＮＲｂＣ（Ｏ）２Ｒｃ、−ＮＲａ−Ｃ（Ｏ）ＮＲａＲｂ、−ＮＲａＣ（Ｏ）ＮＲａＲｂ、−ＮＲａＲｂ、−ＯＲａ、および−Ｓ（Ｏ）２ＮＲａＲｂからなる群から選択され；それぞれのＲａおよびＲｂは、独立して、水素、Ｃ１−８アルキル、およびＣ１−８ハロアルキルから選択され、または同じ窒素原子に結合されるとき、Ｎ、ＯまたはＳから選択される環員として０から２つのさらなるヘテロ原子を有する５または６−員環を形成するように窒素原子と結合されてよく、所望により１または２つのオキソで置換されており；それぞれのＲｃは、独立して、Ｃ１−８アルキルまたはヘテロアルキル、Ｃ１−８ハロアルキル、Ｃ３−６シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アリールおよびヘテロアリールからなる群から選択され、Ｒａ、ＲｂおよびＲｃの脂肪族および環状部分は、所望により１から３つのハロゲン、ヒドロキシ、メチル、アミノ、アルキルアミノおよびジアルキルアミノ基でさらに置換されており；所望により２つのＲ１置換基が隣接する原子であるとき、融合５または６−員炭素環式またはヘテロ環式環を形成するように結合され；
それぞれのＲ２は、独立して、ハロゲン、−ＣＮ、−ＮＯ２、−Ｒｆ、−ＣＯ２Ｒｄ、−ＣＯＮＲｄＲｅ、−Ｃ（Ｏ）Ｒｄ、−ＯＣ（Ｏ）ＮＲｄＲｅ、−ＮＲｅＣ（Ｏ）Ｒｄ、−ＮＲｅＣ（Ｏ）２Ｒｆ、−ＮＲｄＣ（Ｏ）ＮＲｄＲｅ、−ＮＲｄＣ（Ｏ）ＮＲｄＲｅ、−ＮＲｄＲｅ、−ＯＲｄ、および−Ｓ（Ｏ）２ＮＲｄＲｅからなる群から選択され；それぞれのＲｄおよびＲｅは、独立して、水素、Ｃ１−８アルキル、およびＣ１−８ハロアルキルから選択され、または同じ窒素原子に結合されるとき、Ｎ、ＯまたはＳから選択される環員として０から２つのさらなるヘテロ原子を有する５または６−員環を形成するように窒素原子と結合されてよく、所望により１または２つのオキソで置換されており；それぞれのＲは、独立して、Ｃ１−８アルキルまたはヘテロアルキル、Ｃ１−８ハロアルキル、Ｃ３−６シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アリールおよびヘテロアリールからなる群から選択され、Ｒｄ、ＲｅおよびＲｆの脂肪族および環状部分は、所望により１から３つのハロゲン、ヒドロキシ、メチル、アミノ、アルキルアミノおよびジアルキルアミノ基でさらに置換されており、所望により２つのＲ２基が隣接する原子であるとき、５または６−員環を形成するように結合され；
それぞれのＲ３は、独立して、ハロゲン、−ＣＮ、−Ｒｉ、−ＣＯ２Ｒｇ、−ＣＯＮＲｇＲｈ、−Ｃ（Ｏ）Ｒｇ、−Ｃ（Ｏ）Ｒｉ、−ＯＣ（Ｏ）ＮＲｇＲｈ、−ＮＲｈＣ（Ｏ）Ｒｇ、−ＮＲｈＣＯ２Ｒｉ、−ＮＲｇＣ（Ｏ）ＮＲｇＲｈ、−ＮＲｇＲｈ、−ＯＲｇ、−ＯＲｊ、−Ｓ（Ｏ）２ＮＲｇＲｈ、−Ｘ４−Ｒｊ、−ＮＨ−Ｘ４−Ｒｊ、−Ｏ−Ｘ４−Ｒｊ、−Ｘ４−ＮＲｇＲｈ、−Ｘ４−ＮＨＲｊ、−Ｘ４−ＣＯＮＲｇＲｈ、−Ｘ４−ＮＲｈＣ（Ｏ）Ｒｇ、−Ｘ４−ＣＯ２Ｒｇ、−Ｏ−Ｘ４−ＣＯ２Ｒｇ、−ＮＨ−Ｘ４−ＣＯ２Ｒｇ、−Ｘ４−ＮＲｈＣＯ２Ｒｉ、−Ｏ−Ｘ４−ＮＲｈＣＯ２Ｒｉ、−ＮＨＲｊおよび−ＮＨＣＨ２Ｒｊからなる群から選択され、Ｘ４はＣ１−４アルキレンであり；それぞれのＲｇおよびＲｈは、独立して、水素、Ｃ１−８アルキルまたはヘテロアルキル、Ｃ３−６シクロアルキルおよびＣ１−８ハロアルキルから選択され、または同じ窒素原子に結合されるとき、Ｎ、ＯまたはＳから選択される環員として０から２つのさらなるヘテロ原子を有する４−、５−または６−員環を形成するように窒素原子と結合されてよく、所望により１または２つのオキソで置換されており；それぞれのＲｉは、独立して、Ｃ１−８アルキルまたはヘテロアルキル、Ｃ１−８ハロアルキル、Ｃ３−６シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アリールおよびヘテロアリールからなる群から選択され；それぞれのＲｊは、Ｃ３−６シクロアルキル、イミダゾリル、ピリミジニル、ピロリニル、ピペリジニル、モルホリニル、テトラヒドロフラニル、テトラヒドロピラニル、およびＳ，Ｓ−ジオキソ−テトラヒドロチオピラニルからなる群から選択され、Ｒｇ、Ｒｈ、ＲｉおよびＲｊの脂肪族および環状部分は、所望により１から３つのハロゲン、メチル、ＣＦ３、ヒドロキシ、Ｃ１−４アルコキシ、Ｃ１−４アルコキシ−Ｃ１−４アルキル、−Ｃ（Ｏ）Ｏ−Ｃ１−８アルキル、アミノ、アルキルアミノおよびジアルキルアミノ基でさらに置換されており、所望により２つのＲ３基が隣接する原子であるとき、５−または６−員環を形成するように結合され；そして
Ｘは、水素またはＣＨ３である］
を有する化合物およびその薬学的に許容される塩、水和物および回転異性体(rotomer)である。
【０１００】
Ａｖａｃｏｐａｎと類似の化合物は、改善された溶解度プロフィールを有するが、ＷＯ  ２０１７／１７６６２０  Ａ２に記載されており、これらの内容をその全体において出典明示により本願明細書に包含させる。したがって、いくつかの他の態様において、Ｃ５ａ活性のインヒビターは、以下の式ＩＩＩ：
【化４】
2020524696.tif 000006
［式中、
Ｒ１は、Ｈ、−Ｏ−ＣＨ２−Ｏ−Ｐ（Ｏ）ＯＲａＯＲｂ、−Ｏ−Ｃ（Ｏ）−Ｃ１−６アルキレン−Ｌ２−Ｘ１、Ｏ−Ｐ（Ｏ）ＯＲａＯＲｂ、および−Ｏ−Ｃ（Ｏ）−Ａ１−（Ｃ１−３アルキレン）ｎ−Ｃ４−７ヘテロシクリルからなる群から選択され、Ｃ４−７ヘテロシクリルは、所望により１から６つのＲｃ基で置換されており；
Ａ１は、Ｃ６−１０アリール、Ｃ３−１０シクロアルキル、Ｃ５−１０ヘテロアリールおよびＣ５−１０ヘテロシクリルからなる群から選択され、これらのそれぞれは、所望により同じか、または異なっていてよい１から５つのＲｘで置換されており；
ｎ＝０または１；
Ｌ２は、独立して、結合、−Ｏ−Ｃ（Ｏ）−Ｃ１−６アルキレン−、および−ＮＲｄ−Ｃ（Ｏ）−Ｃ１−６アルキレン−からなる群から選択され；
Ｘ１は、独立して、−ＮＲｅＲｆ、−Ｐ（Ｏ）ＯＲａＯＲｂ、−Ｏ−Ｐ（Ｏ）ＯＲａＯＲｂ、および−ＣＯ２Ｈからなる群から選択され；
Ｒ２は、Ｈ、−Ｌ３−Ｃ１−６アルキレン−Ｌ４−Ｘ２、−Ｌ３−（Ｃ１−６アルキレン）ｍ−Ａ２−Ｘ２、−Ｐ（Ｏ）ＯＲａＯＣ（Ｏ）−Ｃ１−６アルキル、−Ｐ（Ｏ）ＯＲａＮＲｇＲｈおよび−Ｐ（Ｏ）ＯＲａＯＲｂからなる群から選択され；
Ｌ３は、独立して、−Ｃ（Ｏ）−Ｏ−、および−Ｃ（Ｏ）−からなる群から選択され；
Ｌ４は、独立して、結合、−Ｏ−Ｃ（Ｏ）−Ｃ２−６アルケニレン−、−Ｏ−Ｃ（Ｏ）−Ｃ１−６アルキレン−、および−ＮＲｄ−Ｃ（Ｏ）−Ｃ１−６アルキレン−からなる群から選択され、−ＮＲｄ−Ｃ（Ｏ）−Ｃ１−６アルキレン−および−Ｏ−Ｃ（Ｏ）−Ｃ１−６アルキレン−におけるＣ１−６アルキレンは、所望によりＮＲｅＲｆで置換されており；
Ｘ２は、独立して、−ＮＲｋＲｌ、−Ｐ（Ｏ）ＯＲａＯＲｂ、−Ｏ−Ｐ（Ｏ）ＯＲａＯＲｂ、および−ＣＯ２Ｈからなる群から選択され；
ｍ＝０または１；
Ａ２は、Ｃ６−１０アリール、Ｃ３−１０シクロアルキル、Ｃ５−１０ヘテロアリールおよびＣ５−１０ヘテロシクリルからなる群から選択され、これらのそれぞれは、所望により同じか、または異なっていてよい１から５つのＲｘで置換されており；
Ｒ３は、Ｈまたは−Ｌ５−Ｐ（Ｏ）ＯＲａＯＲｂであり、Ｌ５は、独立して、結合および−ＣＨ２−Ｏ−からなる群から選択され；
それぞれのＲｘは、独立して、ハロゲン、Ｃ１−６アルキル、Ｃ１−６ハロアルキル、Ｃ１−６ヘテロアルキル、ＣＮ、ＮＲｙＲｚ、ＳＲｙおよびＯＲｙからなる群から選択され；
それぞれのＲｃは、独立して、ハロゲン、Ｃ１−６アルキル、Ｃ１−６ハロアルキル、Ｃ１−６ヘテロアルキル、ＣＮ、ＮＲｙＲｚ、ＳＲｙおよびＯＲｙからなる群から選択され；
それぞれのＲａ、Ｒｂ、Ｒｄ、Ｒｅ、Ｒｆ、Ｒｇ、Ｒｋ、Ｒｌ、ＲｙおよびＲｚは、独立して、ＨおよびＣ１−６アルキルからなる群から選択され；
それぞれのＲｈは、独立して、ＨおよびＣ１−６アルキルからなる群から選択され、Ｃ１−６アルキルは、所望により、独立してＣＯ２Ｈ、ＮＲｉＲｊ、Ｃ６−１０アリール、Ｃ３−１０シクロアルキル、Ｃ５−１０ヘテロアリールおよびＣ５−１０ヘテロシクリルから選択される１から５つの置換基で置換されており、それぞれのＲｉおよびＲｊは、独立して、ＨまたはＣ１−６アルキルであり；
Ｒ１、Ｒ２およびＲ３の２つはＨであり、そしてＲ１、Ｒ２およびＲ３の１つはＨ以外である］
の化合物またはその薬学的に許容される塩である。
【０１０１】
ＰＭＸ−５３は、Ｃ５ａＲ（ＣＤ８８）の強力なアンタゴニストである。それは、以下の配列：Ｏｒｎ−２およびＡｒｇ−６間でラクタム橋を有するＡｃ−Ｐｈｅ−環化（Ｏｒｎ−Ｐｒｏ−Ｄ−Ｃｈａ−Ｔｒｐ−Ａｒｇ）を有する、６つのアミノ酸から構成される環状ペプチドである。ＰＭＸ−５３が少なくとも１つのＤ−アミノ酸（すなわちＤ−Ｃｈａ）を含むため、それは、本願の包含される配列表に含まれていない。ＰＭＸ−５３は、bio-techne GmbH (Wiesbaden-Nordenstadt, Germany), Cat. No. 5473によって市販されている。
【０１０２】
本願発明を実施するために適当でもあるＰＭＸ−５３と類似の化合物は、国際特許出願ＷＯ  ９９／００４０６  Ａ１、ＷＯ  ０３／０３３５２８  Ａ１、およびＷＯ  ２００８／００９０６２  Ａ１に記載されており、これらをそれら全体において出典明示により本願明細書に包含させる。したがって、いくつかの態様において、Ｃ５ａ活性のインヒビターは、式ＩＶ
【化５】
2020524696.tif 000007
［式中、
Ａは、Ｈ、アルキル、アリール、ＮＨ２、ＮＨ−アルキル、Ｎ（アルキル）２、ＮＨ−アリール、ＮＨ−アシル、ＮＨ−ベンゾイル、ＮＨＳＯ３、ＮＨＳＯ２−アルキル、ＮＨＳＯ２−アリール、ＯＨ、Ｏ−アルキル、またはＯ−アリールであり；
Ｂは、アルキル、アリール、フェニル、ベンジル、ナフチルまたはインドール基、またはＤ−またはＬ−アミノ酸の側鎖であるが、グリシン、Ｄ−フェニルアラニン、Ｌ−ホモフェニルアラニン、Ｌ−トリプトファン、Ｌ−ホモトリプトファン、Ｌ−チロシン、またはＬ−ホモチロシンの側鎖ではなく；
Ｃは、Ｄ−、Ｌ−またはホモ−アミノ酸の側鎖であるが、イソロイシン、フェニルアラニン、またはシクロヘキシルアラニンの側鎖ではなく；
Ｄは、中性Ｄ−アミノ酸の側鎖であるが、グリシンまたはＤ−アラニンの側鎖、大きな平面的(bulky planar)側鎖、または大きな荷電性(bulky charged)側鎖ではなく；
Ｅは、大きな(bulky)置換基であるが、Ｄ−トリプトファン、Ｌ−Ｎ−メチルトリプトファン、Ｌ−ホモフェニルアラニン、Ｌ−２−ナフチル  Ｌ−テトラヒドロイソキノリン、Ｌ−シクロヘキシルアラニン、Ｄ−ロイシン、Ｌ−フルオレニルアラニン、またはＬ−ヒスチジンの側鎖ではなく；
Ｆは、Ｌ−アルギニン、Ｌ−ホモアルギニン、Ｌ−シトルリン、またはＬ−カナバニンの側鎖、またはその生物学的等価体(bioisostere)であり；そして
Ｘ１は、−（ＣＨ２）ｎＮＨ−または（ＣＨ２）ｎＳ−（ここでｎは１から４の整数である）；−（ＣＨ２）２Ｏ−；−（ＣＨ２）３Ｏ；−（ＣＨ２）３−；−（ＣＨ２）４−、−ＣＨ２−ＣＯＣＨＲＮＨ−：または−ＣＨ２−ＣＨＣＯＣＨＲＮＨ−（ここでＲは任意の一般的なまたは非一般的なアミノ酸の側鎖である）である］
の環状ペプチドまたはペプチド模倣物化合物である。
【０１０３】
この文脈において、「一般的なアミノ酸」なる用語は、標準遺伝子コードにより定義される２０のタンパク質構成アミノ酸を指す。「非一般的なアミノ酸」なる用語は、限定はしないが、Ｄ−アミノ酸、ホモ−アミノ酸、Ｎ−アルキルアミノ酸、デヒドロアミノ酸、フェニルアラニン、チロシンおよびトリプトファン以外の芳香族性アミノ酸、オルト−、メタ−またはパラ−アミノ安息香酸、オルニチン、シトルリン、カナバニン、ノルロイシン、δ−グルタミン酸、アミノ酪酸、Ｌ−フルオレニルアラニン、Ｌ−３−ベンゾチエニルアラニン、およびα，α−二置換アミノ酸を含む。
【０１０４】
本願発明を実施するために適当なＣ５ａＲ（ＣＤ８８）の特定のアンタゴニストは、ＷＯ  ２００８／００９０６２  Ａ１に記載されている、ＰＭＸ９５、ＰＭＸ２１８、ＰＭＸ２００、ＰＭＸ２７３、ＰＭＸ２０５、およびＰＭＸ２０１を含む。
【０１０５】
クローン(clone)Ｓ５／１は、Ｃ５ａに対するヒト受容体（ＣＤ８８）を認識するモノクローナル抗体である。クローンＳ５／１は、Ｃ５ａＲのＮ−末端ドメイン（Ｍｅｔ１−Ａｓｎ３１）を含む合成ペプチドに対して生じた。抗体は、その受容体へのＣ５ａの結合を阻害することが示されている。それは、Hycult Biotech (Uden, The Netherlands), Cat. No. HM2094を介して市販されている。
【０１０６】
クローン７Ｈ１１０は、Ｃ５ａに対するヒト受容体（ＣＤ８８）を認識するモノクローナルマウス抗体である。それは、Biomol GmbH (Hamburg, Germany); Cat. No. C2439-60Nを介して市販されている。
【０１０７】
本願明細書において使用されるとき、「患者」は、本願明細書に記載されている化合物での（すなわち本願明細書に記載されているＣ５ａ活性のインヒビターでの）処置から利益を得ることができるあらゆる哺乳動物または鳥を意味する。好ましくは、「患者」は、実験動物（例えばマウスまたはラット）、家畜動物（例えばモルモット、ウサギ、ニワトリ、シチメンチョウ、ブタ、ヒツジ、ヤギ、ラクダ、ウシ、ウマ、ロバ、ネコ、またはイヌを含む）、またはチンパンジーおよびヒトを含む霊長類からなる群から選択される。「患者」がヒトであることが特に好ましい。
【０１０８】
本願明細書において使用されるとき、疾患または障害の「処置する」、「処置すること」または「処置」は、以下のものの１つ以上を達成することを意味する：（ａ）障害の重症度および／または期間を減少させること；（ｂ）処置される障害の症状特性の発現を限定または防止すること；（ｃ）処置される障害の症状特性の悪化を阻害すること；（ｄ）以前に障害を有していた患者において障害の再発を限定または防止すること；および（ｅ）障害に対して以前に症候的であった患者において症状の再発を限定または防止すること。
【０１０９】
本願明細書において使用されるとき、疾患または障害の「防止する」、「防止すること」、「防止」、または「予防」は、障害が対象において起こることを防止することを意味する。
【０１１０】
「有効量」は、意図される目的をなし遂げるために十分な治療剤の量である。所定の治療剤の有効量は、薬剤の性質、投与経路、治療剤を受ける動物のサイズおよび種、および投与の目的などの要因で変化する。それぞれの個々の場合において有効量は、当分野で確立された方法によって当業者により経験的に決定することができる。
【０１１１】
「薬学的に許容される」は、連邦政府または州政府の監督官庁によって承認されているか、または動物、さらに特にヒトにおける使用のための米国薬局方または他の一般的に認識された薬局方に列挙されていることを意味する。
【０１１２】
本願発明の態様
本願発明は、ここにさらに説明される。以下の段落において、本願発明の異なる局面は、さらに詳細に定義される。以下に定義されるそれぞれの局面は、明確に反対の指示がない限り、あらゆる他の１つの局面または複数の局面と組み合わせてよい。特に、好ましいまたは有利であると示されているあらゆる特徴は、好ましいまたは有利であると示されているあらゆる他の１つの特徴または複数の特徴と組み合わせてよい。
【０１１３】
第１の局面において、本願発明は、対象において皮膚、好中球性、炎症性疾患の処置における使用のための化合物であって、化合物は、Ｃ５ａ活性のインヒビターであり、皮膚、好中球性、炎症性疾患は、汗腺膿瘍（ＨＳ）；壊疽性膿皮症（ＰＧ）；ＰＡＰＡ（化膿性関節炎、ＰＧおよびアクネ）；ＰＡＳＨ（ＰＧ、アクネおよび汗腺膿瘍）；ＰＡＰＡＳＨ（化膿性関節炎、アクネ、ＰＧおよび汗腺膿瘍）；スイート症候群（ＳＳ）；角層下膿疱症（ＳＰＤ）；後天性表皮水疱症、持久性隆起性紅斑（ＥＥＤ）；好中球性脂肪織炎；腸関連皮膚病−関節炎症候群（ＢＡＤＡＳ）；ＳＡＰＨＯ（滑膜炎、アクネ、膿疱症、骨化過剰症、および骨炎）症候群；リウマチ性好中球性皮膚症；家族性地中海熱、クリオピリン関連障害、痛風、およびシュニッツラー症候群からなる群から選択される、化合物に関する。
【０１１４】
第２の局面において、本願発明は、対象において皮膚、好中球性、炎症性疾患の処置のための方法であって、それを必要とする対象に治療量の化合物を投与する工程を含み、化合物は、Ｃ５ａ活性のインヒビターであり、皮膚、好中球性、炎症性疾患は、汗腺膿瘍（ＨＳ）；壊疽性膿皮症（ＰＧ）；ＰＡＰＡ（化膿性関節炎、ＰＧおよびアクネ）；ＰＡＳＨ（ＰＧ、アクネおよび汗腺膿瘍）；ＰＡＰＡＳＨ（化膿性関節炎、アクネ、ＰＧおよび汗腺膿瘍）；スイート症候群（ＳＳ）；角層下膿疱症（ＳＰＤ）；後天性表皮水疱症、持久性隆起性紅斑（ＥＥＤ）；好中球性脂肪織炎；腸関連皮膚病−関節炎症候群（ＢＡＤＡＳ）；ＳＡＰＨＯ（滑膜炎、アクネ、膿疱症、骨化過剰症、および骨炎）症候群；リウマチ性好中球性皮膚症；家族性地中海熱、クリオピリン関連障害、痛風、およびシュニッツラー症候群からなる群から選択される、方法に関する。
【０１１５】
第３の局面において、本願発明は、皮膚、好中球性、炎症性疾患の処置のための医薬組成物の製造のための化合物の使用であって、化合物は、Ｃ５ａ活性のインヒビターであり、皮膚、好中球性、炎症性疾患は、汗腺膿瘍（ＨＳ）；壊疽性膿皮症（ＰＧ）；ＰＡＰＡ（化膿性関節炎、ＰＧおよびアクネ）；ＰＡＳＨ（ＰＧ、アクネおよび汗腺膿瘍）；ＰＡＰＡＳＨ（化膿性関節炎、アクネ、ＰＧおよび汗腺膿瘍）；スイート症候群（ＳＳ）；角層下膿疱症（ＳＰＤ）；後天性表皮水疱症、持久性隆起性紅斑（ＥＥＤ）；好中球性脂肪織炎；腸関連皮膚病−関節炎症候群（ＢＡＤＡＳ）；ＳＡＰＨＯ（滑膜炎、アクネ、膿疱症、骨化過剰症、および骨炎）症候群；リウマチ性好中球性皮膚症；家族性地中海熱、クリオピリン関連障害、痛風、およびシュニッツラー症候群からなる群から選択される、使用に関する。
【０１１６】
本願発明の任意の局面のいくつかの態様において、Ｃ５ａ活性のインヒビターは、
−Ｃ５の濃度を低下させる（例えば、Ｃ３転換酵素の形成および／または活性を阻害することにより；Ｃ５転換酵素の形成および／または活性を阻害することにより；Ｃ５遺伝子の転写を阻害することにより；Ｃ５  ｍＲＮＡの翻訳を遮断することにより；Ｃ５  ｍＲＮＡの分解を増加させることにより；Ｃ５タンパク質の分解を増加させることにより；または肝臓からのＣ５の分泌を防止することにより）；
−Ｃ５のＣ５ａおよびＣ５ｂへの開裂を阻害する（例えば、Ｃ５転換酵素を阻害することにより、またはＣ５上の切断部位に結合し、それにより開裂を遮断することにより）；
−Ｃ５ａの濃度を低下させる（例えば、Ｃ５ａタンパク質の分解を増加させることにより）；
−Ｃ５ａおよびＣ５ａ受容体間の結合を阻害する（例えば、Ｃ５ａに結合することにより、またはＣ５ａ受容体に結合することにより）；
−Ｃ５ａ受容体の濃度を低下させる（例えば、Ｃ５ａ受容体遺伝子の転写を阻害することにより；Ｃ５ａ受容体  ｍＲＮＡの翻訳を遮断することにより；Ｃ５ａ受容体  ｍＲＮＡの分解を増加させることにより；Ｃ５ａ受容体タンパク質の分解を増加させることにより）；および／または
−Ｃ５ａ受容体の活性を阻害する。
【０１１７】
本願発明の任意の局面のいくつかの態様において、Ｃ５ａ活性のインヒビターは、タンパク質リガンド（上記定義のとおりの）；オリゴヌクレオチド；および小分子（上記定義のとおりの）からなる群から選択される。Ｃ５ａ活性のインヒビターとして作用するオリゴヌクレオチドは、例えば核酸分子に結合することにより（それにより転写および／または翻訳を阻害する）またはタンパク質に結合することにより（例えばオリゴヌクレオチドが核酸アプタマーであるとき）、阻害効果をなし遂げることができる。
【０１１８】
本願発明の任意の局面のいくつかの態様において、Ｃ５ａ活性のインヒビターは、Ｃ５タンパク質、またはＣ５ａタンパク質、またはＣ５ａ受容体タンパク質に特異的に結合するタンパク質リガンドである。さらなる態様において、タンパク質リガンドは、
（ｉ）抗体（例えば抗−Ｃ５抗体、抗−Ｃ５ａ抗体、抗−Ｃ５ａＲ抗体、または抗−Ｃ５Ｌ２抗体）、
（ｉｉ）抗体の抗原結合フラグメント、
（ｉｉｉ）抗体様タンパク質、
（ｉｖ）Ｃ５ａの阻害変異体、
（ｖ）Ｃ５ａ受容体の阻害変異体（例えばデコイ受容体）、
（ｖｉ）補体経路に作用するタンパク質（例えばＣｏｖｅｒｓｉｎ）；および
（ｖｉｉ）ペプチド（例えばＲＡ１０１４９５（Ｒａ  Ｐｈａｒｍａ、Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ、ＭＡ））；ＰＭＸ−５３（ｂｉｏ−ｔｅｃｈｎｅ  ＧｍｂＨ  （Ｗｉｅｓｂａｄｅｎ−Ｎｏｒｄｅｎｓｔａｄｔ、Ｇｅｒｍａｎｙ））
からなる群から選択される。
【０１１９】
本願発明の任意の局面のいくつかの態様において、Ｃ５ａ活性のインヒビターは、ヒトＣ５ａのアミノ酸配列ＮＤＥＴＣＥＱＲＡ（配列番号：２）およびＳＨＫＤＭＱＬ（配列番号：３）によって形成される立体構造エピトープに特異的に結合する、タンパク質リガンドまたはオリゴヌクレオチド、好ましくはタンパク質リガンドである。配列番号：２および３によるアミノ酸配列によって形成される立体構造への結合は、タンパク質リガンドまたはオリゴヌクレオチドが、配列番号：２によるアミノ酸配列内の少なくとも１つのアミノ酸および配列番号：３によるアミノ酸配列内の少なくとも１つのアミノ酸に結合することを意味する。配列番号：２は、ヒトＣ５ａのアミノ酸３０−３８に対応する。配列番号：３は、ヒトＣ５ａのアミノ酸６６−７２に対応する。
【０１２０】
本願発明の任意の局面のいくつかの態様において、タンパク質リガンドまたはオリゴヌクレオチド、好ましくはタンパク質リガンドは、ＤＥＴＣＥＱＲ（配列番号：４）によるアミノ酸配列内の少なくとも１つのアミノ酸に結合する。配列番号：４は、ヒトＣ５ａのアミノ酸３１−３７に対応する。
【０１２１】
本願発明の任意の局面のいくつかの態様において、タンパク質リガンドまたはオリゴヌクレオチド、好ましくはタンパク質リガンドは、ＨＫＤＭＱ（配列番号：５）によるアミノ酸配列内の少なくとも１つのアミノ酸、さらに好ましくはアミノ酸配列ＫＤＭ内の少なくとも１つのアミノ酸に結合する。配列番号：５は、ヒトＣ５ａのアミノ酸６７−７１に対応する；配列ＫＤＭは、ヒトＣ５ａのアミノ酸６８−７０に対応する。
【０１２２】
本願発明の任意の局面のいくつかの態様において、タンパク質リガンドまたはオリゴヌクレオチド、好ましくはタンパク質リガンドは、アミノ酸配列ＤＥＴＣＥＱＲ（配列番号：４）内の少なくとも１つのアミノ酸およびアミノ酸配列ＨＫＤＭＱ（配列番号：５）内の少なくとも１つのアミノ酸に結合する。
【０１２３】
本願発明の任意の局面のいくつかの態様において、タンパク質リガンドまたはオリゴヌクレオチド、好ましくはタンパク質リガンドは、アミノ酸配列ＤＥＴＣＥＱＲ（配列番号：４）内の少なくとも１つのアミノ酸およびアミノ酸配列ＫＤＭ内の少なくとも１つのアミノ酸に結合する。
【０１２４】
本願発明の任意の局面のいくつかの態様において、Ｃ５ａの立体構造エピトープを形成する２つの配列（例えば配列番号：２および３；配列番号：４および５；または配列番号：４および配列ＫＤＭによる配列対）は、本願発明の結合部分への結合において参加しない１−５０個の隣接するアミノ酸によって分離される。以下において、本願発明の結合部分への結合において参加しないかかるアミノ酸は、「結合しないアミノ酸」と称される。立体構造エピトープを形成する２つの配列は、好ましくは６−４５個の隣接する結合しないアミノ酸、さらに好ましくは１２−４０個の隣接する結合しないアミノ酸、さらに好ましくは１８−３５個の隣接する結合しないアミノ酸、さらに好ましくは２４−３０個の隣接する結合しないアミノ酸、さらに好ましくは２５−２９個の隣接する結合しないアミノ酸、よりさらに好ましくは２６−２８個の隣接する結合しないアミノ酸、およびより好ましくは２７個の隣接する結合しないアミノ酸によって分離される。
【０１２５】
本願発明の任意の局面のいくつかの態様において、Ｃ５ａの立体構造エピトープに特異的に結合する、タンパク質リガンドまたはオリゴヌクレオチド、好ましくはタンパク質リガンドは、１０ｎＭ以下、好ましくは９ｎＭ以下、さらに好ましくは８ｎＭ以下、さらに好ましくは７ｎＭ以下、さらに好ましくは６ｎＭ以下、さらに好ましくは５ｎＭ以下、さらに好ましくは４ｎＭ以下、さらに好ましくは３ｎＭ以下、さらに好ましくは２ｎＭ以下、およびよりさらに好ましくは１ｎＭ以下のＫｄ値でのヒトＣ５ａへの結合定数を有する。本願発明の任意の局面のいくつかの態様において、結合部分およびヒトＣ５ａ間の解離定数Ｋｄは、１ｐＭ（ピコモル）および５ｎＭ（ナノモル）間、さらに好ましくは２ｐＭおよび４ｎＭ間、さらに好ましくは５ｐＭおよび３ｎＭ間、さらに好ましくは１０ｐＭおよび２ｎＭ間、さらに好ましくは５０ｐＭおよび１ｎＭ間、さらに好ましくは１００ｐＭおよび９００ｐＭ間、さらに好ましくは２００ｐＭおよび８００ｐＭ間、さらに好ましくは３００ｐＭおよび７００ｐＭ間、およびよりさらに好ましくは４００ｐＭおよび６００ｐＭ間である。
【０１２６】
本願発明の任意の局面のいくつかの態様において、Ｃ５ａに特異的に結合する、タンパク質リガンドまたはオリゴヌクレオチド、好ましくはタンパク質リガンドは、１つの分子Ｃ５ａ、特にヒトＣ５ａによって誘導される生物学的効果に対して少なくとも７５％遮断活性、好ましくは少なくとも８０％遮断活性、さらに好ましくは少なくとも８５％遮断活性、さらに好ましくは少なくとも９０％遮断活性、さらに好ましくは少なくとも９５％遮断活性を示す。これらの特定の遮断活性は、結合部分がＣ５ａ、好ましくはヒトＣ５ａに結合する単一のパラトープを含むこれらの態様に言及する。結合部分が２つまたはそれ以上のＣ５ａ特異的パラトープを含む態様において、少なくとも７５％、好ましくは少なくとも８０％、さらに好ましくは少なくとも８５％などの該遮断活性は、１つの結合部分分子が結合部分に存在するＣ５ａ特異的パラトープの数と等しい多くのＣ５ａ分子と接触されるとき、なし遂げられる。言い換えれば、本願明細書に記載されている結合部分のパラトープおよびＣ５ａが当モル濃度で存在するとき、結合部分は、Ｃ５ａによって誘導される生物学的効果に対して少なくとも７５％遮断活性、好ましくは少なくとも８０％遮断活性、さらに好ましくは少なくとも８５％遮断活性、さらに好ましくは少なくとも９０％遮断活性、およびさらに好ましくは少なくとも９５％遮断活性を示す。遮断される好ましい生物学的効果は、ヒト全血細胞からのＣ５ａ誘導リゾチーム放出である。このＣ５ａ誘導リゾチーム放出およびその遮断を決定するためのアッセイは、例えばＷＯ  ２０１１／０６３９８０  Ａ１および対応するＵＳ国内段階出願ＵＳ  ２０１２／０２３１００８  Ａ１において記載されている。
【０１２７】
本願発明の任意の局面のいくつかの態様において、タンパク質リガンドは、抗体またはその抗原結合フラグメントであり、該抗体またはその抗原結合フラグメントは、
（ｉ）配列番号：６に示されている重鎖ＣＤＲ３配列；または
（ｉｉ）配列番号：７に示されている重鎖ＣＤＲ３配列；
を含み、重鎖ＣＤＲ３配列は、所望により、１、２、または３つのアミノ酸交換、好ましくは保存的アミノ酸交換、１、２、または３つのアミノ酸欠失、および／または１、２、または３つのアミノ酸付加を含む。
【０１２８】
本願発明の任意の局面のいくつかの態様において、タンパク質リガンドは、抗体またはその抗原結合フラグメントであり、該抗体またはその抗原結合フラグメントは、
（ｉｉｉ）配列番号：８に示されている軽鎖ＣＤＲ３配列；または
（ｉｖ）配列番号：９に示されている軽鎖ＣＤＲ３配列；
を含み、軽鎖ＣＤＲ３配列は、所望により、１、２、または３つのアミノ酸交換、好ましくは保存的アミノ酸交換、１、２、または３つのアミノ酸欠失、および／または１、２、または３つのアミノ酸付加を含む。
【０１２９】
本願発明の任意の局面のいくつかの態様において、タンパク質リガンドは、抗体またはその抗原結合フラグメントであり、該抗体またはその抗原結合フラグメントは、
（ｉ）配列番号：６に示されている重鎖ＣＤＲ３配列および配列番号：８に示されている軽鎖ＣＤＲ３配列；または
（ｉｉ）配列番号：７に示されている重鎖ＣＤＲ３配列および配列番号：９に示されている軽鎖ＣＤＲ３配列；
を含み、重鎖ＣＤＲ３配列は、所望により、１、２、または３つのアミノ酸交換、好ましくは保存的アミノ酸交換、１、２、または３つのアミノ酸欠失、および／または１、２、または３つのアミノ酸付加を含み；および
軽鎖ＣＤＲ３配列は、所望により、１、２、または３つのアミノ酸交換、好ましくは保存的アミノ酸交換、１、２、または３つのアミノ酸欠失、および／または１、２、または３つのアミノ酸付加を含む。
【０１３０】
本願発明の任意の局面のいくつかの態様において、タンパク質リガンドは、抗体またはその抗原結合フラグメントであり、該抗体またはその抗原結合フラグメントは、少なくとも１つの以下の配列：
（ｖ）配列番号：１０による重鎖ＣＤＲ２配列；
（ｖｉ）配列番号：１１による重鎖ＣＤＲ２配列；
（ｖｉｉ）配列番号：１２による軽鎖ＣＤＲ２配列；
（ｖｉｉｉ）配列番号：１３による軽鎖ＣＤＲ２配列；
（ｉｘ）配列番号：１４による重鎖ＣＤＲ１配列；
（ｘ）配列番号：１５による重鎖ＣＤＲ１配列；
（ｘｉ）配列番号：１６による軽鎖ＣＤＲ１配列；または
（ｘｉｉ）配列番号：１７による軽鎖ＣＤＲ１配列；
を含み、重鎖ＣＤＲ２配列は、所望により、１、２、または３つのアミノ酸交換、好ましくは保存的アミノ酸交換、１、２、または３つのアミノ酸欠失、および／または１、２、または３つのアミノ酸付加を含み；
軽鎖ＣＤＲ２配列は、所望により、１、２、または３つのアミノ酸交換、好ましくは保存的アミノ酸交換、１、２、または３つのアミノ酸欠失、および／または１、２、または３つのアミノ酸付加を含み；
重鎖ＣＤＲ１配列は、所望により、１、２または３つのアミノ酸交換、好ましくは保存的アミノ酸交換、１、２、または３つのアミノ酸欠失、および／または１、２、または３つのアミノ酸付加を含み；および
軽鎖ＣＤＲ１配列は、所望により、１、２、または３つのアミノ酸交換、好ましくは保存的アミノ酸交換、１、２、または３つのアミノ酸欠失、および／または１、２、または３つのアミノ酸付加を含む。
【０１３１】
特定の態様において、配列番号：６、配列番号：７、配列番号：８、配列番号：９、配列番号：１０、配列番号：１１、配列番号：１３、配列番号：１４、配列番号：１５、配列番号：１６、および配列番号：１７によるアミノ酸配列のそれぞれ１つにおいて上記列挙されたこれらの所望の変化の総数、すなわちそれぞれの配列において交換、欠失および付加の総数は、１または２である。
【０１３２】
特定の態様において、抗体またはその抗原結合フラグメントにおいて存在する全てのＣＤＲについて合計された交換、欠失および付加の総数は、１から５つの間（例えば１、２、３、４、または５つ）である。
【０１３３】
本願発明の任意の局面のいくつかの態様において、タンパク質リガンドは、抗体またはその抗原結合フラグメントであり、以下の表１に列挙された重鎖ＣＤＲ３、重鎖ＣＤＲ２、および重鎖ＣＤＲ１配列のセットＡからＨの１つを含み、
それぞれの重鎖ＣＤＲ３配列は、所望により、１、２、または３つのアミノ酸交換、好ましくは保存的アミノ酸交換、１、２、または３つのアミノ酸欠失、および／または１、２、または３つのアミノ酸付加を含み；
それぞれの重鎖ＣＤＲ２配列は、所望により、１、２、または３つのアミノ酸交換、好ましくは保存的アミノ酸交換、１、２、または３つのアミノ酸欠失、および／または１、２、または３つのアミノ酸付加を含み；および
それぞれの重鎖ＣＤＲ１配列は、所望により、１、２、または３つのアミノ酸交換、好ましくは保存的アミノ酸交換、１、２、または３つのアミノ酸欠失、および／または１、２、または３つのアミノ酸付加を含む。
表１：本願発明の抗体またはそれらのフラグメントにおける使用のために適当な重鎖ＣＤＲ配列のセット
【表１】
2020524696.tif 000008
【０１３４】
本願発明の任意の局面のいくつかの態様において、タンパク質リガンドは、抗体またはその抗原結合フラグメントであり、表２に列挙された軽鎖ＣＤＲ３、軽鎖ＣＤＲ２、および軽鎖ＣＤＲ１配列の以下のセットＩからＩＶの１つを含み、
それぞれの軽鎖ＣＤＲ３配列は、所望により、１、２、または３つのアミノ酸交換、好ましくは保存的アミノ酸交換、１、２、または３つのアミノ酸欠失、および／または１、２、または３つのアミノ酸付加を含み；
それぞれの軽鎖ＣＤＲ２配列は、所望により、１、２、または３つのアミノ酸交換、好ましくは保存的アミノ酸交換、１、２、または３つのアミノ酸欠失、および／または１、２、または３つのアミノ酸付加を含み；および
それぞれの軽鎖ＣＤＲ１配列は、所望により、１、２、または３つのアミノ酸交換、好ましくは保存的アミノ酸交換、１、２、または３つのアミノ酸欠失、および／または１、２、または３つのアミノ酸付加を含む。
表２：本願発明の抗体またはそれらのフラグメントにおける使用のために適当な軽鎖ＣＤＲ配列のセット
抗体ＩＦＸ−１のＣＤＲ２軽鎖配列（配列番号：１２）が抗体ＩＮａｂ７０８のＣＤＲ２軽鎖配列（配列番号：１３）と同一であるため、配列番号：１３を含むセットは、配列番号：１２を含むセットと冗長であるはずである。したがって、表は、軽鎖ＣＤＲ配列の４つのセットのみを列挙する。
【表２】
2020524696.tif 000009
【０１３５】
本願発明の任意の局面のいくつかの態様において、タンパク質リガンドは、抗体またはその抗原結合フラグメントであり、上記表１に列挙された重鎖ＣＤＲセットＡ−Ｈの１つおよび上記表２に列挙された軽鎖ＣＤＲセットＩ−ＩＶの１つ、すなわちセットの以下の組合せの１つ：Ａ−Ｉ、Ａ−ＩＩ、Ａ−ＩＩＩ、Ａ−ＩＶ、Ｂ−Ｉ、Ｂ−ＩＩ、Ｂ−ＩＩＩ、Ｂ−ＩＶ、Ｃ−Ｉ、Ｃ−ＩＩ、Ｃ−ＩＩＩ、Ｃ−ＩＶ、Ｄ−Ｉ、Ｄ−ＩＩ、Ｄ−ＩＩＩ、Ｄ−ＩＶ、Ｅ−Ｉ、Ｅ−ＩＩ、Ｅ−ＩＩＩ、Ｅ−ＩＶ、Ｆ−Ｉ、Ｆ−ＩＩ、Ｆ−ＩＩＩ、Ｆ−ＩＶ、Ｇ−Ｉ、Ｇ−ＩＩ、Ｇ−ＩＩＩ、Ｇ−ＩＶ、Ｈ−Ｉ、Ｈ−ＩＩ、Ｈ−ＩＩＩ、またはＨ−ＩＶ（ここで、組合せＡ−ＩおよびＨ−ＩＶがとりわけ好ましい）を含み、
それぞれの重鎖ＣＤＲ３配列は、所望により、１、２、または３つのアミノ酸交換、好ましくは保存的アミノ酸交換、１、２、または３つのアミノ酸欠失、および／または１、２、または３つのアミノ酸付加を含み；
それぞれの重鎖ＣＤＲ２配列は、所望により、１、２、または３つのアミノ酸交換、好ましくは保存的アミノ酸交換、１、２、または３つのアミノ酸欠失、および／または１、２、または３つのアミノ酸付加を含み；
それぞれの重鎖ＣＤＲ１配列は、所望により、１、２、または３つのアミノ酸交換、好ましくは保存的アミノ酸交換、１、２、または３つのアミノ酸欠失および／または１、２、または３つのアミノ酸付加を含み；
それぞれの軽鎖ＣＤＲ３配列は、所望により、１、２、または３つのアミノ酸交換、特に保存的アミノ酸交換、１、２、または３つのアミノ酸欠失、および／または１、２、または３つのアミノ酸付加を含み；
それぞれの軽鎖ＣＤＲ２配列は、所望により、１、２、または３つのアミノ酸交換、好ましくは保存的アミノ酸交換、１、２、または３つのアミノ酸欠失、および／または１、２、または３つのアミノ酸付加を含み；および
それぞれの軽鎖ＣＤＲ１配列は、所望により、１、２、または３つのアミノ酸交換、好ましくは保存的アミノ酸交換、１、２、または３つのアミノ酸欠失および／または１、２、または３つのアミノ酸付加を含む。
【０１３６】
本願発明の任意の局面のいくつかの態様において、タンパク質リガンドは、抗体またはその抗原結合フラグメントであり、（ｉ）ＩＦＸ−１のＶＨドメインまたは（ｉｉ）ＩＮａｂ７０８のＶＨドメインを含む、本質的にからなる、またはからなるＶＨドメインを含む。
【０１３７】
ＩＦＸ−１およびＩＮａｂ７０８のＶＨドメインを定義するＦＲ１、ＣＤＲ１、ＦＲ２、ＣＤＲ２、ＦＲ３、ＣＤＲ３、およびＦＲ４配列は、以下の表３に示される。
【０１３８】
本願発明の任意の局面のいくつかの態様において、タンパク質リガンドは、抗体またはその抗原結合フラグメントであり、（ｉ）ＩＦＸ−１のＶＬドメインまたは（ｉｉ）ＩＮａｂ７０８のＶＬドメインを含む、本質的にからなる、またはからなるＶＬドメインを含む。
【０１３９】
ＩＦＸ−１およびＩＮａｂ７０８のＶＬドメインを定義するＦＲ１、ＣＤＲ１、ＦＲ２、ＣＤＲ２、ＦＲ３、ＣＤＲ３、およびＦＲ４配列は、以下の表３に示される。
表３：抗体ＩＦＸ−１およびＩＮａｂ７０８のＣＤＲおよびＦＲ配列（Ｃｈｏｔｈｉａ分類モード）
【表３】
2020524696.tif 000010
【０１４０】
本願発明の任意の局面のいくつかの態様において、Ｃ５ａ活性のインヒビターは、Ｃ５、またはＣ５ａ、またはＣ５ａ受容体に特異的に結合するオリゴヌクレオチドである。さらなる態様において、オリゴヌクレオチドは、核酸アプタマーである。核酸アプタマーは、ＤＮＡ−アプタマー、Ｄ−ＲＮＡアプタマー、およびＬ−ＲＮＡアプタマー（例えば、ＳｐｉｅｇｅｌｍｅｒｓＴＭ）からなる群から選択されてよい。
【０１４１】
本願発明の任意の局面のいくつかの態様において、Ｃ５ａ活性のインヒビターは、Ｃ５タンパク質またはＣ５ａ受容体タンパク質の発現を減少させる。さらなる態様において、Ｃ５タンパク質またはＣ５ａ受容体タンパク質の発現を減少させる該Ｃ５ａ活性のインヒビターは、アンチセンスＤＮＡ、アンチセンスＲＮＡ、ｓｉＲＮＡ、およびｍｉＲＮＡからなる群から選択されるオリゴヌクレオチドである。
【０１４２】
本願発明の任意の局面のいくつかの態様において、Ｃ５ａ受容体は、Ｃ５ａＲおよび／またはＣ５Ｌ２である。本願発明の任意の局面の好ましい態様において、Ｃ５ａ受容体は、Ｃ５ａＲ（ＣＤ８８またはＣ５ａＲ１としても知られている）である。
【０１４３】
本願発明の任意の局面のいくつかの態様において、Ｃ５ａ活性のインヒビターは、
（ａ）ＩＦＸ−１、ＩＮａｂ７０８、ＭＥＤＩ−７８１４、ＡＬＸＮ−１００７、またはＮＯＸ−Ｄ２１、またはそれらの抗原結合フラグメント；
（ｂ）Ｃ５ａへの結合について（ａ）の下に示される抗体の１つと競合する、抗体またはその抗原結合フラグメント；
（ｃ）エクリズマブ、ＡＬＸＮ１２１０、ＡＬＸＮ５５００、またはＬＦＧ３１６、またはそれらの抗原結合フラグメント；
（ｄ）Ｃ５への結合について（ｃ）の下に示される抗体の１つと競合する、抗体またはその抗原結合フラグメント；
（ｅ）ＣｏｖｅｒｓｉｎまたはＲＡ１０１４９５；
（ｆ）Ｃ５への結合について（ｅ）の下に示されるタンパク質またはペプチドの１つと競合する、抗体またはその抗原結合フラグメントまたはタンパク質または大環状ペプチド；
（ｇ）Ｚｉｍｕｒａ；
（ｈ）Ｃ５への結合についてＺｉｍｕｒａと競合する、抗体またはその抗原結合フラグメントまたはアプタマー；
（ｉ）ＡＭＹ−２０１またはＭｉｒｏｃｏｃｅｐｔ；
（ｊ）Ｃ３ｂへの結合について（ｉ）の下に示されるタンパク質の１つと競合する、抗体またはその抗原結合フラグメントまたはタンパク質；
（ｋ）Ｂｉｋａｃｉｏｍａｂ；
（ｌ）Ｆａｃｔｏｒ  Ｂへの結合についてＢｉｋａｃｉｏｍａｂと競合する、抗体またはその抗原結合フラグメント；
（ｍ）Ｌａｍｐａｌｉｚｕｍａｂ；
（ｎ）Ｆａｃｔｏｒ  Ｄへの結合についてＬａｍｐａｌｉｚｕｍａｂと競合する、抗体またはその抗原結合フラグメント；
（ｏ）ＡＬＮ−ＣＣ５；
（ｐ）Ａｖａｃｏｐａｎまたは式ＩＩまたは式ＩＩＩに記載の化合物またはＰＭＸ−５３または式ＩＶに記載の化合物；
（ｑ）Ｃ５ａＲへの結合についてａｖａｃｏｐａｎまたはＰＭＸ−５３と競合する、抗体またはその抗原結合フラグメント；
（ｒ）クローン  Ｓ５／１またはクローン  ７Ｈ１１０、またはその抗原結合フラグメント；および
（ｓ）Ｃ５ａＲへの結合について（ｒ）の下に示される抗体の１つと競合する、抗体またはその抗原結合フラグメント
からなる群から選択される。
【０１４４】
本願発明の任意の局面のいくつかの態様において、皮膚、好中球性、炎症性疾患は、
−自己炎症性疾患（より正確には：皮膚、好中球性、自己炎症性疾患）；または
−皮膚炎症を伴う自己免疫疾患（より正確には：皮膚、好中球炎症を伴う自己免疫疾患）
である。
【０１４５】
本願発明の任意の局面のいくつかの態様において、皮膚、好中球性、炎症性疾患は、汗腺膿瘍（ＨＳ）；壊疽性膿皮症（ＰＧ）；ＰＡＰＡ（化膿性関節炎、ＰＧおよびアクネ）；ＰＡＳＨ（ＰＧ、アクネおよび汗腺膿瘍）；ＰＡＰＡＳＨ（化膿性関節炎、アクネ、ＰＧおよび汗腺膿瘍）；スイート症候群（ＳＳ）；角層下膿疱症（ＳＰＤ）；後天性表皮水疱症、持久性隆起性紅斑（ＥＥＤ）；好中球性脂肪織炎；腸関連皮膚病−関節炎症候群（ＢＡＤＡＳ）；およびＳＡＰＨＯ（滑膜炎、アクネ、膿疱症、骨化過剰症、および骨炎）症候群からなる群から選択される自己炎症性疾患である。
【０１４６】
本願発明の任意の局面のいくつかの態様において、皮膚、好中球性、炎症性疾患は、壊疽性膿皮症（ＰＧ）；ＰＡＰＡ（化膿性関節炎、ＰＧおよびアクネ）；ＰＡＳＨ（ＰＧ、アクネおよび汗腺膿瘍）；ＰＡＰＡＳＨ（化膿性関節炎、アクネ、ＰＧおよび汗腺膿瘍）；スイート症候群（ＳＳ）；および角層下膿疱症（ＳＰＤ）からなる群から選択されるＨＳまたはＨＳ関連疾患である。
【０１４７】
本願発明の任意の局面のいくつかの態様において、皮膚、好中球性、炎症性疾患は、リウマチ性好中球性皮膚症；家族性地中海熱、クリオピリン関連障害、痛風、およびシュニッツラー症候群からなる群から選択される皮膚炎症を伴う自己免疫疾患である。
【０１４８】
本願発明の第１または第３の局面のいくつかの態様において、化合物は、１週間に１回８００ｍｇの用量でまたは１週間に２回８００ｍｇの用量で投与される。第１または第３の局面のさらなる態様において、
−Ｃ５ａ活性のインヒビターは、Ｃ５ａに特異的に結合する化合物である（好ましくは、ＩＦＸ−１、ＩＮａｂ７０８、ＭＥＤＩ−７８１４、ＡＬＸＮ−１００７、ＮＯＸ−Ｄ２１、およびそれらの抗原結合フラグメントからなる群から選択される；さらに好ましくは、Ｃ５ａ活性のインヒビターは、ＩＦＸ−１、ＩＮａｂ７０８、ＭＥＤＩ−７８１４、ＡＬＸＮ−１００７およびそれらの抗原結合フラグメントからなる群から選択される；よりさらに好ましくは、Ｃ５ａ活性のインヒビターは、ＩＦＸ−１およびその抗原結合フラグメントからなる群から選択される；より好ましくは、Ｃ５ａ活性のインヒビターは、ＩＦＸ−１である）；および
−皮膚、好中球性、炎症性疾患は、汗腺膿瘍（ＨＳ）である；および
−化合物は、１週間に１回８００ｍｇの用量でまたは１週間に２回８００ｍｇの用量で投与される。
【０１４９】
第１または第３の局面のさらなる態様において、Ｃ５ａ活性のインヒビターは、静脈内に投与される。第１または第３の局面のさらなる態様において、Ｃ５ａ活性のインヒビターは、処置の第１の週において８００ｍｇの用量で１週間に２回および処置の第２および後の週において８００ｍｇの用量で１週間に１回投与される。第１または第３の局面のさらなる態様において、処置の総期間は、５から１２週間（例えば５週間、６週間、７週間、８週間、９週間、１０週間、１１週間、または１２週間）である。
【０１５０】
本願発明の第２の局面のいくつかの態様において、化合物は、１週間に１回８００ｍｇの用量でまたは１週間に２回８００ｍｇの用量で投与される。第２の局面のさらなる態様において、
−Ｃ５ａ活性のインヒビターは、Ｃ５ａに特異的に結合する化合物である（好ましくは、ＩＦＸ−１、ＩＮａｂ７０８、ＭＥＤＩ−７８１４、ＡＬＸＮ−１００７、ＮＯＸ−Ｄ２１、およびそれらの抗原結合フラグメントからなる群から選択される；さらに好ましくは、Ｃ５ａ活性のインヒビターは、ＩＦＸ−１、ＩＮａｂ７０８、ＭＥＤＩ−７８１４、ＡＬＸＮ−１００７およびそれらの抗原結合フラグメントからなる群から選択される；よりさらに好ましくは、Ｃ５ａ活性のインヒビターは、ＩＦＸ−１およびその抗原結合フラグメントからなる群から選択される；より好ましくは、Ｃ５ａ活性のインヒビターは、ＩＦＸ−１である）；および
−皮膚、好中球性、炎症性疾患は、汗腺膿瘍（ＨＳ）である；および
−化合物は、１週間に１回８００ｍｇの用量でまたは１週間に２回８００ｍｇの用量で投与される。
【０１５１】
第２の局面のさらなる態様において、Ｃ５ａ活性のインヒビターは、静脈内に投与される。第２の局面のさらなる態様において、化合物は、処置の第１の週において８００ｍｇの用量で１週間に２回および処置の第２および後の週において８００ｍｇの用量で１週間に１回投与される。第２の局面のさらなる態様において、処置の総期間は、５から１２週間（例えば５週間、６週間、７週間、８週間、９週間、１０週間、１１週間、または１２週間）である。
【０１５２】
医薬組成物および投与様式
本願発明の任意の局面の実施において、化合物（例えば本願明細書に記載されているＣ５ａ活性のインヒビター）または該化合物を含む医薬組成物は、患者において化合物の十分なレベルを提供する当分野で確立されたあらゆる経路によって、患者に投与されてよい。全身的または局所的に投与することができる。かかる投与は、非経腸的、経粘膜的、例えば、経口、経鼻、経直腸、膣内、舌下、粘膜下的、経皮、または吸入的であってよい。好ましくは、投与は、例えば、静脈内または腹腔内注射を介する、限定はしないが、動脈内、筋肉内、皮内および皮下投与も含む、非経口である。本願明細書に記載されている化合物（例えば本願明細書に記載されているＣ５ａ活性のインヒビター）または該化合物を含む医薬組成物が局所的に投与されるとき、処置される臓器または組織に直接的に注射することができる。
【０１５３】
経口投与のために適合される医薬組成物は、カプセルまたは錠剤；粉末または顆粒；溶液、シロップまたは懸濁液（水性または非水性液体中）；食用のフォーム（foam）またはホイップ；またはエマルジョンとして提供されてよい。錠剤または硬ゼラチンカプセルは、ラクトース、デンプンまたはその誘導体、ステアリン酸マグネシウム、サッカリン酸ナトリウム、セルロース、炭酸マグネシウム、ステアリン酸またはその塩を含んでよい。軟ゼラチンカプセルは、植物油、ワックス、脂肪、半固体、または液体ポリオールなどを含んでよい。溶液およびシロップ剤は、水、ポリオールおよび糖を含んでよい。
【０１５４】
経口投与のために意図される活性剤は、胃腸管において活性剤の分解および／または吸収を遅延させる物質（例えば、モノステアリン酸グリセリルまたはジステアリン酸グリセリルが使用され得る）でコーティングまたはと混合されてよい。したがって、活性剤の持続放出は、数時間にわたってなし遂げられることができ、必要な時、活性剤は、胃内で破壊されることから保護されることができる。経口投与のための医薬組成物は、特定のｐＨまたは酵素条件によって特定の消化器位置で活性剤の放出を容易にするように製剤化されてもよい。
【０１５５】
経皮投与のために適合される医薬組成物は、長期間、レシピエントの表皮との密接な接触でとどまることを意図される別々のパッチとして提供されてよい。局所投与のために適合される医薬組成物は、軟膏、クリーム、懸濁液、ローション、粉末、溶液、ペースト、ゲル、スプレー、エアロゾルまたはオイルとして提供されてよい。皮膚、口、眼または他の外部組織への局所投与のために、局所軟膏またはクリームが好ましくは使用される。軟膏において製剤化されるとき、活性成分は、パラフィンまたは水混和性軟膏ベースのいずれかで使用されてよい。あるいは、活性成分は、水中油型ベースまたは油中水型ベースでクリームにおいて製剤化されてもよい。眼への局所投与のために適合される医薬組成物は、点眼薬を含む。これらの組成物において、活性成分は、適当な担体、例えば、水性溶媒において溶解または懸濁させることができる。口において局所投与のために適合される医薬組成物は、ドロップ、トローチおよび口内洗浄液を含む。
【０１５６】
経鼻投与のために適合される医薬組成物は、固体担体、例えば粉末（好ましくは２０から５００ミクロンの範囲の粒径を有する）を含んでよい。粉末は、嗅ぎ薬を取る様式において、すなわち、鼻の近くに保持された粉末の容器から鼻を介する迅速な吸入により、投与することができる。あるいは、経鼻投与のために採用される組成物は、液体担体、例えば、鼻腔用スプレーまたは点鼻薬を含んでよい。これらの組成物は、活性成分の水性または油性溶液を含んでよい。吸入による投与のための組成物は、活性成分のあらかじめ決められた用量を提供するように構築することができる、限定はしないが、加圧エアロゾル、噴霧器または吸入器を含む、特別に適合されるデバイスにおいて供給されてよい。医薬組成物はまた、鼻腔を介して肺へ投与されてよい。
【０１５７】
経直腸投与のために適合される医薬組成物は、坐薬またはかん腸剤として提供されてよい。膣内投与のために適合される医薬組成物は、ペッサリー、タンポン、クリーム、ゲル、ペースト、フォームまたはスプレー製剤として提供されてよい。
【０１５８】
非経口投与のために適合される医薬組成物は、抗酸化剤、バッファー、静菌剤および組成物を意図されるレシピエントの血液と実質的に等張にさせる溶質を含んでよい、水性および非水性滅菌注射可能な溶液または懸濁液を含む。このような組成物において存在してもよい他の成分は、例えば、水、アルコール、ポリオール、グリセリンおよび植物油を含む。非経口投与のために適合される組成物は、単位用量または複数用量の容器、例えば密封アンプルおよびバイアルにおいて提供されてよく、および使用の直前に、注射のための滅菌液体担体、例えば滅菌塩水の付加のみを必要とするフリーズドライされた（凍結乾燥された）状態において保存されてよい。即時注射溶液および懸濁液は、滅菌粉末、顆粒および錠剤から調製されてよい。
【０１５９】
好ましい態様において、本願明細書に記載されている化合物（例えば本願明細書に記載されているＣ５ａ活性のインヒビター）は、ヒトへの静脈内投与のために適合される医薬組成物として日常的な処理にしたがって製剤化される。一般的には、静脈内投与のための組成物は、滅菌等張水性バッファーの溶液である。必要なとき、組成物はまた、注射の部位に痛みを和らげるために、可溶化剤および局所麻酔、例えばリドカインを含んでよい。一般的には、成分は、例えば、活性剤の量を示すアンプルまたは小袋(sachette)などの密封容器において凍結乾燥粉末または無水濃縮物として、単位投与形態において別々にまたは互いに混合されてのいずれかで提供される。組成物が注入により投与される場合、滅菌医薬品グレード水または塩水を含む注入ボトルで分配することができる。組成物が注入により投与される場合、投与前に成分を混合することができるように、滅菌塩水のアンプルが提供されてもよい。
【０１６０】
他の態様において、例えば、化合物（例えば本願明細書に記載されているＣ５ａ活性のインヒビター）または該化合物を含む医薬組成物は、制御放出システムで送達することができる。例えば、化合物は、静脈内注入、移植可能な浸透圧ポンプ、経皮パッチ、リポソーム、または他の投与様式を使用して、投与されてもよい。１つの態様において、ポンプを使用してもよい（Sefton (1987) CRC Crit. Ref. Biomed. Eng. 14: 201; Buchwald et al. (1980) Surgery 88:507; Saudek et al. (1989) N. Eng. J. Med. 321: 574参照）。他の態様において、化合物は、小胞、特にリポソームにおいて送達することができる（Langer (1990) Science 249:1527-1533; Treat et al. (1989) in Liposomes in the Therapy of Infectious Disease and Cancer, Lopez-Berestein and Fidler (eds.), Liss, N.Y., 353-365; WO 91/04014; U.S. 4,704,355参照）。他の態様において、ポリマー物質を使用することができる（Medical Applications of Controlled Release (1974) Langer and Wise (eds.), CRC Press: Boca Raton, Fla.; Controlled Drug Bioavailability, Drug Product Design and Performance, (1984) Smolen and Ball (eds.), Wiley: N.Y.; Ranger and Peppas (1953) J. Macromol. Sci. Rev. Macromol. Chem. 23: 61参照; Levy et al. (1985) Science 228:190; During et al. (1989) Ann. Neurol. 25: 351; Howard et al. (1989) J. Neurosurg. 71: 105も参照）。
【０１６１】
さらに他の態様において、制御放出システムは、治療標的、すなわち、標的細胞、組織または臓器の近接に置くことができ、したがって全身用量の一部のみを必要とする（例えば、Goodson (1984) 115-138 in Medical Applications of Controlled Release, vol. 2参照）。他の制御放出システムは、Langer （1990, Science 249: 1527-1533）によるレビューにおいて説明される。
【０１６２】
特定の態様において、処置を必要とする領域に局所的に、本願明細書に記載されている化合物（例えば本願明細書に記載されているＣ５ａ活性のインヒビター）または該化合物を含む医薬組成物を投与することが望ましい可能性がある。このことは、例えば、限定ではなく、手術中の局所注入、例えば、手術後の創傷被覆材と共に、局所適用、注射により、カテーテルの手段により、坐薬の手段により、またはインプラントの手段によりによってなし遂げられてよく、該インプラントは、シラスティック膜などの膜、または繊維を含む、多孔性、非多孔性、またはゼラチン状物質である。
【０１６３】
好ましい有効用量の選択は、当業者に知られるいくつかの因子を考慮することに基づいて当業者によって決定される。かかる因子は、医薬組成物の特定の形態、例えばポリペプチドまたはベクター、およびその薬物動態パラメーター、例えばバイオアベイラビリティ、代謝、半減期などを含み、医薬化合物について規制当局の承認を得ることにおいて一般的に使用される通常の開発処理中に確立される。用量を考慮することにおけるさらなる因子は、防止およびまたは処置される状態または疾患または正常個体においてなし遂げられる利益、患者の体重、投与経路、投与が急性または慢性であるか、併用投薬、および投与される医薬品の有効性に影響することがよく知られている他の因子を含む。したがって、正確な用量は、標準臨床技術によって、例えば個々の患者の状態および免疫状態に依存して、開業医の判断およびそれぞれの患者の状況にしたがって決定されるべきである。
【実施例】
【０１６４】
実施例
以下の実施例は、本願発明のさらなる説明のために提供される。しかしながら、本願発明は、これらに限定されず、以下の実施例は、上記記載に基づいて本願発明の実施可能性を単に示す。
【０１６５】
１．  方法
１．１  ザイモサンＡ貯蔵溶液およびザイモサンＡ活性化血漿（ＺＡＰ）の調製
ザイモサンＡを５０ｍｌ滅菌塩水において２ｍｇ／ｍｌに溶解し、１００℃で１時間沸騰させた。遠心分離後、上清を廃棄し、ペレットを５０ｍｌ滅菌塩水に再懸濁した。第２の遠心分離工程後、ペレットを５ｍｌ滅菌塩水に再懸濁し、２０ｍｇ／ｍｌ貯蔵溶液を得た。貯蔵溶液をアリコートし、使用まで−２０℃で貯蔵した。血漿を活性化するために、ザイモサンＡ貯蔵溶液および１００μｌ血漿を混合し、３７℃で３０分間インキュベートした。インキュベーション後、チューブを遠心し、上清をアリコートし、使用まで−２０℃で貯蔵した。
【０１６６】
１．２  刺激物としてｒｈＣ５ａまたはＺＡＰを使用するＣＤ１１ｂアッセイ
ヒト全血をｒｈＣ５ａまたはＺＡＰで刺激した。ｒｈＣ５ａに対するＩＦＸ−１および関連のないコントロールＩｇＧ４の遮断活性を試験するために、抗体を１：１および０．５：１の最終Ａｂ／Ａｇモル比に希釈した。ｅＣ５ａに対するＩＦＸ−１の遮断活性を試験するために、ＩＦＸ−１を希釈し、約４：１／３：１／２：１／１：１／０．５：１の最終Ａｂ／Ａｇモル比に到達させた。バッファーのみを有する血液が非刺激コントロールとして役割を担い、ベースラインＣＤ１１ｂ発現を評価した。抗体単独を有する血液を使用し、非刺激条件下で抗体のＣＤ１１ｂ発現の効果を決定した。完全な混合物（Ａｂ／Ａｇ／血液）を３７℃で２０分間インキュベートし、ＣＤ１１ｂのＣ５ａ誘導上方制御を評価した。抗−マウスＣＤ１１ｂ：ＦＩＴＣの付加後、サンプルを氷上で３０分間インキュベートし、背景染色を最小限にした。顆粒球をゲートし(gated)、ＦＩＴＣ標識（ＣＤ１１ｂ発現）顆粒球の平均蛍光強度（ＭＦＩ）をフローサイトメーターにより試験した。
【０１６７】
１．３  全血においてｒｈＣ５ａまたはザイモサンＡを使用するＣＤ１１ｂアッセイ
ヒト血液をｒｈＣ５ａまたはザイモサンＡで刺激し、完全な混合物（Ａｂ／Ａｇ／血液）を３７℃で２０分間インキュベートし、ＣＤ１１ｂのＣ５ａ誘導上方制御を刺激した。インキュベーション後、２μｌの抗−マウスＣＤ１１ｂ：ＦＩＴＣまたはアイソタイプ：ＦＩＴＣコントロールを加え、サンプルを氷上で３０分間インキュベートし、背景染色を最小限にした。溶解後、フローサイトメーターを使用して細胞を分析した。ＦＳＣ／ＳＳＣ  ドット−プロット(dot-plot)に関して、顆粒球をゲートし(gated)、ＦＩＴＣ標識（ＣＤ１１ｂ発現）顆粒球の平均蛍光強度（ＭＦＩ）を全サンプルセットについて試験した。
【０１６８】
１．４  サイトカインＩＬ−８  ＥＬＩＳＡ
取扱説明書において「Assay procedure」(eBioscience Inc., San Diego, CA)の下に推奨されるとおりに、ヒトＩＬ−８  ＥＬＩＳＡを行った。簡潔には、１００μｌ  １ｘ  捕捉抗体を使用して一晩４℃で被覆を行った。２００μｌ  １ｘ  アッセイ希釈剤を使用してＲＴで１時間プレートをブロックした。標準貯蔵溶液を１ｘ  アッセイ希釈剤で所望の濃度に希釈し、次に６連続１：２希釈した。必要に応じて１ｘ  アッセイ希釈剤においてサンプル上清を希釈した。「Assay procedure」によると、１００μｌの標準希釈物およびサンプル希釈物を被覆プレートに加え、ＲＴで１時間インキュベートし、次に、１００μｌ  １ｘ  検出抗体（ＲＴ、１時間）および１００μｌ  １ｘ  アビジン−ＨＲＰ（ＲＴ、３０分）とインキュベーションした。暗所でＲＴで１０分間１００μｌＴＭＢ基質溶液で発色を行い、１００μｌ停止溶液で終了させた。４５０ｎｍでプレートリーダーを使用して、吸光度を３０分以内に読み出した。全ての標準およびサンプルからゼロ標準値（ブランク）を引いた。サンプルのサイトカイン濃度を、含まれる標準サンプルのｌｏｇ（ｘ）／ｌｏｇ（ｙ）標準曲線を使用して計算した。
【０１６９】
１．５  Ｃ５ａ  ＥＬＩＳＡ
精製された抗−ヒトＣ５ａモノクローナル抗体（InflaRx GmbH, Jena, Germany）を、ＥＬＩＳＡプレート上で０．５μｇ／ｍＬの最終濃度で一晩被覆した。アッセイ希釈剤（０．０５％  Ｔｗｅｅｎ  ２０および２％  加熱不活性化ＦＢＳを有する１ｘ  ＰＢＳ）での遮断後、アッセイ希釈剤において希釈されたキャリブレーションサンプル（組換えヒトＣ５ａ、Sigma, Taufkirchen, Germany）およびサンプルを室温で９０分インキュベートした。アッセイ希釈剤において２μｇ／ｍＬに希釈されたマウス抗−ヒトＣ５／Ｃ５ａ抗体  クローン５６１（Hycult Biotech, Uden, The Netherlands）を、室温で６０分間インキュベーションに関して一次検出抗体として適用し、次にアッセイ希釈剤において０．０５μｇ／ｍＬに希釈された二次セイヨウワサビペルオキシダーゼ標識抗体（ヤギ抗−マウスＩｇＧ２ａポリクローナル抗体、SouthernBiotech, Birmingham, USA）と３０分インキュベーションした。テトラメチルベンジジン基質溶液（TMB, Biozol, Eching, Germany）で発色を行い、３．７Ｎ硫酸で停止させた。Ｔｅｃａｎ  ＭａｇｅｌｌａｎＴＭを備えたＴｅｃａｎ  Ｉｎｆｉｎｉｔｅ（登録商標）  ２００  ｒｅａｄｅｒ（Tecan Group, Maennedorf, Switzerland）により４５０ｎｍの吸光度としてＯＤを読んだ。社内で開発されたＣ５ａ  ＥＬＩＳＡを、生物学的分析方法検証に関するＥＭＡガイドラインにしたがって検証した。
【０１７０】
５つの異なる濃度で試験されたアッセイ内およびアッセイ間精度は、それぞれ６および１８回の繰り返しに対して０．６５％から４．９６％および１．５０％から４．８８％の変動係数（ＣＶ）を示した。バッファーにおけるスパイクされた組換えヒトＣ５ａの回収分析は、定量化の下限で８６．９８±１．２０％（平均±ＳＤ）および定量化の上限で９１．５０±３．２９％の回収をもたらした。Ｃ３、Ｃ３ａおよびＣ４についての交差反応性は無いことが検出され、Ｃ５ｂ−６について＜０．０１％の交差反応性が検出された。ヒトＩｇＧ４抗体は、アッセイを妨げなかった。２０人のヒトボランティアからのクエン酸血漿中の平均Ｃ５ａレベルは、７．５２ｎｇ／ｍＬから３０．１７ｎｇ／ｍＬの範囲で１７．０８ｎｇ／ｍＬ±６．９６ｎｇ／ｍＬである。
【０１７１】
１．６  補体活性化産物の測定
補体活性化産物Ｃ３ａ、Ｃ５ａおよび膜侵襲複合体Ｃ５ｂ−９の濃度を、ＥＬＩＳＡにより測定した。Ｃ３ａ  ＥＬＩＳＡ（ＢＤ  ＯｐｔＥＩＡＴＭ  Ｈｕｍａｎ  Ｃ３ａ  ＥＬＩＳＡ  Ｋｉｔ、BD Bioscience, Germany）を、製造業者の指示にしたがって行った。ＢＤ  ＯｐｔＥＩＡＴＭ  Ｈｕｍａｎ  Ｃ５ｂ−９  ＥＬＩＳＡ  Ｓｅｔ（BD Bioscience）に基づくＩｎｆｌａＲｘにより検証されたＣ５ｂ−９  ＥＬＩＳＡを使用して、Ｃ５ｂ−９濃度を決定した。上記ＩｎｆｌａＲｘにより確立および検証されたＣ５ａ  ＥＬＩＳＡを使用して、Ｃ５ａ濃度を測定した。
【０１７２】
１．７  統計分析
全ての結果を平均±標準偏差として示した。グループ間の統計的差異を、ベースライン補正後、Ｔｕｋｅｙの多重比較試験を含む一元配置分散分析により、または２グループについてスチューデントのｔ検定により計算した。０．０５のｐ値を計算において使用して、任意の２グループ間の有意な差異があるか否かを決定した。グラフの作成および統計分析を、ＧｒａｐｈＰａｄ  ＰＲＩＳＭ（登録商標）  Ｖ６．０５  （CA, USA）で行った。
【０１７３】
２．  前臨床関連データ
２．１  Ｃ５ａによる好中球活性化およびＩＦＸ−１の遮断効果
ＣＤ１１ｂ上方制御が好中球活性化について感受性特徴であるため、好中球におけるＣＤ１１ｂレベルを使用して、好中球活性化を評価した。この試験において、ヒト全血モデルを使用して、組換えヒトＣ５ａ（ｒｈＣ５ａ）に対するＩＦＸ−１の遮断活性を評価した。ヒト全血をバッファー、抗体単独、ｒｈＣ５ａ単独、または異なる抗体濃度およびｒｈＣ５ａの組合せとインキュベートした。インキュベーション後、細胞を抗−マウスＣＤ１１ｂ：ＦＩＴＣで染色し、ＣＤ１１ｂ  ＭＦＩを血中好中球の活性化レベルについて確認するフローサイトメトリーにより分析した。図１に示されるとおり、組換えヒトＣ５ａは、ヒト好中球におけるＣＤ１１ｂ上方制御を強く刺激する。この効果は、抗−ヒトＣ５ａ抗体  ＩＦＸ−１の存在下で完全に遮断することができる。この阻害は強く特異的であり、不適切なヒトＩｇＧ４抗体は遮断活性を示さなかった。
【０１７４】
内因性Ｃ５ａ（ｅＣ５ａ）の供給源として、ザイモサン活性化血漿（ＺＡＰ）を使用して、血中好中球を刺激した。ＺＡＰにおけるｅＣ５ａの量を、市販のＣ５ａ  ＥＬＩＳＡ  Ｋｉｔを使用して測定した。ここに提示されたデータ（図２）は、ＺＡＰにおけるｅＣ５ａがｒｈＣ５ａに匹敵するレベルのＣＤ１１ｂ上方制御を誘導したことを指摘する。ＩＦＸ−１の存在は、０．５：１のＡｂ：Ａｇモル比であっても、ヒト好中球におけるＣＤ１１ｂ発現を有意に減少させた。ＺＡＰ誘導ＣＤ１１ｂ上方制御に対するＩＦＸ−１の総遮断活性は、Ａｂ：Ａｇ比率に依存して、１００％から８２％の範囲であった。ＺＡＰにおいて高レベルのｅＣ３ａおよび他の補体活性化産物の存在にもかかわらず、ＩＦＸ−１は、ＣＤ１１ｂ上方調節を最大１００％特異的に遮断することができる。したがって、ｅＣ５ａはＺＡＰ刺激時の好中球活性化の唯一の原動力であり、ＩＦＸ−１はそれを完全に遮断することができると結論付けることができる。
【０１７５】
２．２  Ｃ５ａ遮断は、ヒト全血においてザイモサン誘導炎症性応答を弱力させる
活性な真菌壁構成成分としてのザイモサンＡは、高められたサイトカインおよびケモカインのレベルでの好中球の活性化により特徴付けられるように、ヒト全血において強い炎症性応答を誘導することができる。この試験において、ヒト全血をＩＦＸ−１の存在または非存在下でザイモサンＡとスパイクし、血中好中球におけるＣＤ１１ｂ発現をフローサイトメトリー分析により測定した。図３に示されるとおり、血中好中球におけるＣＤ１１ｂは、ザイモサンの存在でヒト全血において強く上方制御された。ザイモサン刺激によるＣＤ１１ｂ上方調節は、加えられたＩＦＸ−１の濃度に依存して７９％−９３％に抑制することができる。ポジティブコントロールとして、ｒｈＣ５ａによって刺激されたＣＤ１１ｂ上方制御は、ＩＦＸ−１によって１００％遮断された。したがって、ザイモサンＡ刺激時の血中好中球におけるＣＤ１１ｂ上方制御はｅＣ５ａによって主に引き起こされることが肯定される。加えて、ｅＣ５ａは、ザイモサンＡによって全血において生成されると、最初にＩＦＸ−１に結合し、それによりその天然受容体へのその接近を遮断すると結論付けることができる。
【０１７６】
同じ実験設定において、ＩＬ−８レベルを測定し、使用して、炎症性応答を評価した。種々の用量のザイモサンＡ刺激後のＩＬ−８濃度は、ＩＦＸ−１の非存在下で４５８ｐｇ／ｍｌから３２１８ｐｇ／ｍｌの範囲であった。図４に示されるとおり、ＩＦＸ−１の存在は、種々の濃度のザイモサンＡでの刺激時にＩＬ−８生成を有意に低下させ、最大５４％の減少率が観察された。したがって、炎症の全血環境において、ザイモサン誘導炎症性応答はＣ５ａの存在に大きく依存する。
【０１７７】
３．  臨床関連データ
３．１  臨床サンプルから得られるデータ
３．１．１  ＨＳ患者における補体活性化
ＨＳを有する合計５４人の患者および１４人の健常者を、試験において登録した。患者をギリシャのＡＴＴＩＫＯＮ大学病院の感染症の免疫の外来部門において追跡下である。試験は、病院の倫理委員会によって承認された。書面によるインフォームドコンセントが全ての患者によって提供された。ＨＳの診断は、以下の基準：ａ）思春期後の早期発症；ｂ）アポクリン腺にて豊富な皮膚の領域における皮下結節の存在；およびｃ）患部からの膿の反復性排膿の適合履歴、に基づいた。
【０１７８】
補体因子Ｃ３ａおよびＣ５ａならびに膜侵襲複合体ｓＣ５ｂ−９の循環濃度を、５４人の患者および１４人の健常コントロールの血漿において、ならびに７人の患者の膿において決定した。図５に示されるとおり、循環Ｃ５ａは、コントロール血漿よりも患者血漿において有意に大きく（Ｐ＜０．０１）、患者およびコントロール間のＣ３ａおよびＣ５ｂ−９の違いは、同様の有意性であった。したがって、全身補体活性化がＨＳにおいて起こると結論付けることができる。自然免疫および適応免疫における補体活性化の本質的な役割を考慮すると、本願発明者らは、補体活性化の標的化がＨＳの処置のための新規な治療戦略となる可能性があると想定した。
【０１７９】
しかしながら、上記結果から、Ｃ３ａ、Ｃ５ａまたはＣ５−９ｂまたは他の補体活性化産物のどの１つがこの新規な治療戦略のための最も有望な標的であるか、およびこれらの因子の１つのみを標的化することが十分であるか否か、または補体活性化に関与する２つまたはそれ以上の因子が標的化されるべきであるか否かは、不明であった。
【０１８０】
３．１．２  ＨＳ血漿によって誘導される血中好中球におけるＣＤ１１ｂ上方調節の遮断
好中球活性化にてＨＳ血漿サンプルにおいてＣ５ａの役割を決定するために、高レベルのＣ５ａを有するＨＳ血漿サンプルを選択し、ヒト全血モデルを使用することによって評価した。図６に示されるとおり、低いＣ５ａレベルを有するコントロール血漿サンプル（Ｃｔｒｌ  ００８およびＣｔｒｌ  ０１２）と対照的に、高レベルのＣ５ａを有するＨＳ血漿サンプル（Ｐａｔ．０８８およびＰａｔ．０９２）は、血中好中球におけるＣＤ１１ｂ発現を強く上方調節した。組換えヒトＣ５ａをポジティブコントロールとして使用し、一方、健常者からの血漿をネガティブコントロールとして使用した。ＨＳ血漿によって誘導されるＣＤ１１ｂ上方調節は、ＩＦＸ−１によって１００％抑制することができ、Ｃ５ａが好中球活性化を開始するためのＨＳ血漿において最も重要な活性化因子であることを示す。これらの新規な結果から、本願発明者らは、ＨＳ患者においてＣ５ａの遮断が、好中球活性化の強い抑制をなし遂げるために十分であると結論付けた。
【０１８１】
３．２  臨床試験から得られるデータ
３．２．１  試験設計
中程度から重度の汗腺膿瘍を有する１１人の患者においてオープンラベル第ＩＩ相試験を、ギリシャのＡＴＴＩＫＯＮ大学病院の内科で実施した。
【０１８２】
試験の一次的な目的は、８週間にわたって投与されるＩＦＸ−１の安全性および忍容性を調査することであった。試験の二次的な目的は、ＩＦＸ−１の薬物動態学および薬力学を評価すること、ならびにさらなる仮説を生成するために臨床エンドポイントにおけるＩＦＸ−１の有効性の予備データを生成すること（例えば、ＨｉＳＣＲ、ＤＬＱＩ、疾患状態についてＶＡＳ、疼痛についてＶＡＳ、ＨＳ−ＰＧＡ、修飾されたＳａｒｔｏｒｉｕｓ  Ｓｃｏｒｅ）であった。登録された患者を、最初の週に８００ｍｇ  ＩＦＸ−１で２回および合計８週間処置のためにその後１週間に１回で処置した；すなわち、ＩＦＸ−１を１、４、８、１５、２２、２９、３６、４３、および５０日目に８００ｍｇ  ＩＦＸ−１の９回静脈内用量において投与した。全ての患者を、さらに１２週間追跡した。
【０１８３】
スクリーニングでの包含基準：
１．男性または女性患者＞１８歳
２．書面によるインフォームドコンセント
３．少なくとも１年間のＨＳの診断
４．１つがＨｕｒｌｅｙ  Ｓｔａｇｅ  ＩＩまたはＩＩＩである少なくとも２つの異なる解剖学的領域のＨＳ病変
５．総ＡＮ（膿瘍および小節）数＞３
６．生物学的処置の一次的または二次的機能不全のいずれかを有する、または他の生物学的処置に適していない患者
注意：一次的機能不全は、効果なしの生物学的化合物での少なくとも１２週処置として、二次的機能不全は、生物学的化合物での少なくとも１２週処置後の最初の反応を成し遂げ、次に再発として定義される
７．以前の抗菌剤処置の失敗
【０１８４】
スクリーニングでの除外基準：
１．１５０ｋｇを超える体重または６０ｋｇ未満の体重
２．ベースラインでの３０以上の排液性瘻孔数を有する
３．次の２４週以内に計画される外科的操作
４．過去１４日間以内に静脈内抗菌剤処置に至るＨＳの再燃の発生
５．試験製品の評価、結果評価、または試験の満足な実施を妨げる可能性のある他の疾患および状態
ａ）活動性感染
ｂ）重度の鬱血性心不全（すなわち、ＮＹＨＡクラスＩＶ）
ｃ）鬱病
ｄ）全身性エリテマトーデスまたはリウマチ性関節炎の病歴
ｅ）免疫不全疾患
ｆ）活動性血液または固形悪性腫瘍
ｇ）患者は、ＨＳの評価を妨げる可能性のある他の活動性皮膚疾患または状態（例えば、細菌、真菌、またはウイルス感染）を有していてはならない
６．次の異常な検査結果の１つ
ａ）白血球数＜２，５００／ｍｍ３
ｂ）好中球数＜１０００／ｍｍ３
ｃ）血清クレアチニン＞３ｘ正常上限（ＵＮＬ）
ｄ）総ビリルビン＞２ｘＵＮＬ
ｅ）アラニン−アミノトランスフェラーゼ（ＡＬＡＴ）＞２ｘＵＮＬ
ｆ）Ｂ型肝炎、Ｃ型肝炎、またはＨＩＶ  １／２について陽性スクリーニング試験
７．過去３月において生物学的化合物の事前投与
８．過去３週間の１ｍｇ／ｋｇ以上のプレドニゾンまたは同等物の１日摂取として定義されるコルチコステロイドの摂取；
９．過去３０日間以内の免疫抑制剤の摂取（例えば、シクロスポリン、タクロリムス）
１０．一般的な除外基準
ａ）妊娠中（妊娠可能性のある女性において、尿妊娠検査が実施されるべきである）または授乳中の女性
ｂ）試験に参加している間、適当な避妊手段を実践する意思がない（例えば、インプラノン、注射、経口避妊薬、子宮内避妊具、精管切除術パートナー、自制）妊娠可能性のある女性（最後の月経から２年以内と定義される）
ｃ）過去３か月以内の介入臨床試験への参加
ｄ）既知の静脈内薬物乱用
ｅ）治験実施施設の従業員、治験スタッフ（例えば、治験担当医、治験分担医師、または治験看護師）の配偶者／パートナーまたは親族、またはスポンサーとの血縁関係
【０１８５】
３．２．２  臨床試験結果
ＩＦＸ−１は、ＨＳ患者によって良好な忍容性である。処置期間にわたって報告された薬物関連の重篤な有害事象はなかった。
【０１８６】
汗腺膿瘍臨床反応（ＨｉＳＣＲ）において一般的に使用される有効性パラメーター。ＨｉＳＣＲは、（基準を定義する）病変の３種の状態：膿瘍（流動性、排膿の有無にかかわらず、圧痛または疼痛）、炎症性小結節（圧痛、紅斑、化膿性肉芽腫病変）および排液性瘻孔（洞管、皮膚表面への伝達あり、排液性膿性液）により定義される。処置に対する応答者（ＨｉＳＣＲ達成者）の提案される定義は、（ｉ）ＡＮにおいて少なくとも５０％減少、（ｉｉ）膿瘍の数において増加なし、および（ｉｉｉ）ベースラインから排液性瘻孔の数の増加なしである。ＨｉＳＣＲは、ＨＳの炎症性兆候の応答性のおよび臨床的に意味のあるエンドポイントとして、最近、検証されている（Kimball and others, 2014）。
【０１８７】
８週間の処置期間にわたるＨｉＳＣＲ応答がこの試験において調査され、最大５６日まですでに処置された１１人の患者のうち８人が応答し、これは７２．７％の応答率および４３％から９１％の９５％信頼区間を示す。これらの結果を病歴データと比較するために、有効性パラメーターとしてＨｉＳＣＲを使用したプラセボ対照臨床試験を検出するために文献検索を行った。以下の表４は、最近完了された５つの試験を要約する：
表４．有効性パラメーターとしてＨｉＳＣＲを使用する完了された臨床試験
【表４】
2020524696.tif 000011
１  Ｈｕｍｉｒａ  ＥＭＡ  評価レポート：
http://www.ema.europa.eu/docs/en_GB/document_library/EPAR_-_Assessment_Report_-_Variation/human/000481/WC500195564.pdf
２  アナキンラ試験（Tzanetakou and others, 2016）
３  プレスリリース  ＸＢｉｏｔｅｃｈ（http://investors.xbiotech.com/phoenix.zhtml?c=253990&p=irol-newsArticle&ID=2246777）
【０１８８】
合計で１７９人の患者が、これらの試験のプラセボグループにおいて１９．０％の応答率で１４％から２５％の９５％信頼区間で処置されている。両方の信頼区間（例えば、病歴プラセボ患者およびＩＦＸ−１で処置された患者）が重複しないため、ＩＦＸ−１の有意な処置効果を結論付けることができる。
【０１８９】
患部の写真記録は、処置後の炎症肥大および発赤の視覚的減少によって証明されるとおり、皮膚において高度に低下した炎症によりこれらの見出したことを確認した。
【０１９０】
したがって、抗Ｃ５ａは、ＨＳの疾患環境における強力な抗炎症剤を示す。この臨床的所見は、Ｃ５ａの遮断が、好中球の活性化を低下させるために高度に有効であり、それにより皮膚好中球炎症性疾患を効果的に緩和するということを証明する。
【０１９１】
４．  Ｃ５Ａ−Ｃ５ＡＲ軸阻害を介する汗腺膿瘍患者における活性化された補体因子によって誘導されるＣＤ１１Ｂ上方調節の遮断
４．１  目的
以下の試験の目的は、抗−ヒトＣ５ａモノクローナル抗体ＩＦＸ−１、抗−ヒトＣ５ａ受容体Ｃ５ａＲ（ＣＤ８８）抗体、およびＣ５ａＲアンタゴニストならびにＣ５ａＲインヒビターによる、好中球の表面における汗腺膿瘍（ＨＳ）患者血漿誘導ＣＤ１１ｂ上方調節の遮断を証明することであった。
【０１９２】
４．２  アッセイ原理
炎症の部位での好中球の蓄積は、ＣＤ１１ｂ（インテグリンアルファＭとしても知られている）を含む接着分子の発現に依存する（Larson and Springer, 1990; Carlos and Harlan, 1990）。細胞内プールから好中球の表面へのＣＤ１１ｂ／ＣＤ１８の上方調節および動員は、ヒト好中球のローリング作用および移動に不可欠である（Smith et al., 1989）。したがって、ＣＤ１１ｂ／ＣＤ１８の発現の増強は、炎症を引き起こす事象を反映する。ヒトＣＤ１１ｂアッセイは、好中球の表面上のＦＩＴＣ−コンジュゲートされた抗−ＣＤ１１ｂ抗体を検出するために、フローサイトメトリーを使用して行われる。ＨＳ患者血漿サンプルにおいて活性化された補体産物、とりわけ上昇した内因性Ｃ５ａ（ｅＣ５ａ）は、好中球における受容体Ｃ５ａＲ（ＣＤ８８）へのＣ５ａの結合を介するＣＤ１１ｂ発現を強く上方制御することができる。結果として、Ｃ５ａ−Ｃ５ａＲ軸の遮断は、好中球の表面上のＣＤ１１ｂ上方調節を廃止または減衰すると予期される。
【０１９３】
臨床開発に導入される最初の抗−ヒトＣ５ａモノクローナル抗体としてのＩＦＸ−１は、組織および臓器の損傷を引き起こす炎症性応答を制御することを証明されている。この抗体は、現在、中等度または重度の汗腺膿瘍を有する患者についてフェーズＩＩｂ試験において評価されている。それは、末端補体アナフィラトキシンＣ５ａを特異的および直接的に中和し、急性および慢性炎症性疾患の両方において重要な炎症性メディエーターとしてのその有害な効果を遮断する（Klos et al., 2009; Guo and Ward, 2005; Riedemann et al., 2017）。
【０１９４】
Ｃ５ａは、高アフィニティーＣ５ａ受容体（Ｃ５ａＲおよびＣ５Ｌ２）との相互作用を介してその効果を発揮する（Guo and Ward, 2005）。Ｃ５ａＲは、７つの膜貫通セグメントを有するＧ−タンパク質−共役受容体のロドプシンファミリーに属し、Ｃ５Ｌ２は、Ｇ−タンパク質共役ではない。Ｃ５ａ−Ｃ５ａＲシグナル伝達は、炎症結果の病因において非常に重要であると一般的に理解される（Ward, 2009）。したがって、Ｃ５ａＲを標的とすることは、補体依存性炎症性疾患を阻害するための別の戦略である。Ｃ５ａのＣ−末端に由来する一連の小分子は、Ｃ５ａＲアンタゴニストとして開発された。その中で、リード化合物の環状ヘキサペプチドＰＭＸ−５３（ＡｃＦ−［ＯＰ（Ｄ−Ｃｈａ）ＷＲ］）（Finch et al., 1999）は、静脈内、皮下、腹腔内、および経口投与後の炎症の多くの動物モデルにおいて損傷を軽減することが示された（Proctor et al. 2006）。Ｃ５ａと構造的類似性で、かかるアンタゴニストは、好中球におけるＣ５ａ受容体に対してＣ５ａと競合する（March et al., 2004）。加えて、抗−Ｃ５ａＲ抗体は、Ｃ５ａＲへのＣ５ａの結合をブロックし、それにより骨髄由来サプレッサー細胞および好中球の蓄積および活性化を低下させることができた（Markiewski et al., 2008）。２つの市販されているモノクローナル抗−Ｃ５ａＲ抗体であるクローンＳ５／１および７Ｈ１１０をこの試験において試験した。それらは、Ｃ５ａＲのＮ−末端細胞外ドメイン（Ｍｅｔ１−Ａｓｎ３１）および組換えヒトＣ５ａＲ（Ｍｅｔ１−Ｖａｌ３５０）をそれぞれ含む合成ペプチドに対してマウスにおいて産生され、両方の抗体が中和抗体として記載された。Ａｖａｃｏｐａｎ（ＣＣＸ１６８）は、補体Ｃ５ａ受容体（Ｃ５ａＲ）を選択的に阻害する経口的に投与される小分子薬物候補物であり、炎症性疾患および自己免疫疾患のために開発されている（Bekker et al., 2008; Jayne et al., 2017）。
【０１９５】
Ｃ５ａ−Ｃ５ａＲ軸を標的とするこれらの遮断薬の阻害効果を、好中球におけるＣＤ１１ｂ上方調節の遮断についてフローサイトメトリーを介してモニターした。
【０１９６】
４．３  実験の詳細
４．３．１  サンプル
Ｈｉｄｒａｄｅｎｉｔｉｓ  Ｓｕｐｐｕｒａｔｉｖａ  Ｆｏｕｎｄａｔｉｏｎ  ２００９のコンセンサス定義および診断基準によると、２人のＨＳ患者（Ｐａｔ．  ０８８  ＆  Ｐａｔ．  ０９２）および２人の健常コントロール（Ｃｔｒｌ  ００９  ＆  Ｃｔｒｌ  ０１０）の血漿サンプルをこの試験に含んだ。補体系は、Ｃ３ａ、Ｃ５ａおよびＣ５ｂ−９の上昇したレベルに現れるように、ＨＳの病因において活性化された（以下の表５参照）。患者０８８および０９２（それぞれ９３．７７ｎｇ／ｍＬおよび７０．０１ｎｇ／ｍＬ）のＣ５ａレベルは、健常コントロールのもの（２１．０２ｎｇ／ｍＬおよび１１．７７ｎｇ／ｍＬ）よりも優位に高い。
表５．試験対象の血漿サンプルにおいて測定された補体因子の濃度
【表５】
2020524696.tif 000012
【０１９７】
４．３．２  試薬
・ＡｎａｌａＲ水、ＶＷＲ  （Ｄａｒｍｓｔａｄｔ、Ｇｅｒｍａｎｙ）、Ｃａｔ．  Ｎｏ．  １０２９２３Ｃ、ＮＯＲＭＡＰＵＲ  分析用、滅菌フィルター済
・ＡＣＤ、Ｓｉｇｍａ  Ａｌｄｒｉｃｈ  （Ｔａｕｆｋｉｒｃｈｅｎ、Ｇｅｒｍａｎｙ）、Ｃａｔ．  Ｎｏ．  Ｃ３８２１−５０ＭＬ
・フローサイトメーターのための試薬
○  ＦＡＣＳ  Ｆｌｏｗ  Ｓｈｅａｔ  Ｆｌｕｉｄ、ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ  （ＮＪ、ＵＳＡ）、Ｃａｔ．  Ｎｏ．  ３４２００３
○  ＦＡＣＳ  Ｓｈｕｔｄｏｗｎ溶液、ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ  （ＮＪ、ＵＳＡ）、Ｃａｔ．  Ｎｏ．  ３３４２２４
○  ＦＡＣＳ  Ｃｌｅａｎ溶液、ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ  （ＮＪ、ＵＳＡ）、Ｃａｔ．  Ｎｏ．  ３４０３４５
○  ラット抗マウスＣＤ１１ｂ：ＦＩＴＣ、ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ  （ＮＪ、ＵＳＡ）  Ｃａｔ．  Ｎｏ．  ５５３３１０、０．５ｍｇ／ｍＬ
○  １０×ＦＡＣＳ  Ｌｙｓｉｎｇ  溶液、ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ  （ＮＪ、ＵＳＡ）、Ｃａｔ．  Ｎｏ．  ３４９２０２  →  希釈標準溶液：  １×  ＦＡＣＳ  Ｌｙｓｉｎｇ溶液  （ＡｎａｌａＲ水において１：１０希釈された）
○  Ｓｔａｉｎｉｎｇバッファー：１×ＰＢＳ溶液における  １％  加熱不活性化ＦＢＳ  ＋  ０．１％  アジ化ナトリウム
・ＦＢＳ、Ｔｈｅｒｍｏ  Ｆｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ  （Ｄａｒｍｓｔａｄｔ、Ｇｅｒｍａｎｙ）、Ｃａｔ．  Ｎｏ．  １００９９１３３  熱不活性化：  ５６℃、３０分
・ＰＢＳ粉末、Ｓｉｇｍａ  Ａｌｄｒｉｃｈ  （Ｔａｕｆｋｉｒｃｈｅｎ、Ｇｅｒｍａｎｙ）、Ｃａｔ．  Ｎｏ．  Ｐ３８１３−１０ＰＡＫ
・アジ化ナトリウム、ＶＷＲ  （Ｄａｒｍｓｔａｄｔ、Ｇｅｒｍａｎｙ）、Ｃａｔ．  Ｎｏ．  １．０６６８８．０２５０
・組換えヒトＣ５ａ（ｒｈＣ５ａ）、Ｈｙｃｕｌｔ  Ｂｉｏｔｅｃｈ  （Ｕｄｅｎ、Ｎｅｔｈｅｒｌａｎｄｓ）、Ｃａｔ．  Ｎｏ．  ＨＣ２１０１、滅菌ＡｎａｌａＲ水に溶解された大腸菌において発現された
・０．９％  滅菌塩化ナトリウム  （塩水）、Ｂ．Ｂｒａｕｎ  （Ｍｅｌｓｕｎｇｅｎ、Ｇｅｒｍａｎｙ）、Ｃａｔ．  Ｎｏ．  ３２００９５０
・ＩＦＸ−１、コントロールとして適用される抗−ヒトＣ５ａ抗体、ＩｎｆｌａＲｘ  （Ｊｅｎａ、Ｇｅｒｍａｎｙ）、ＰＢＳ  ＋  ０．０５％  Ｔｗｅｅｎ８０中１０ｍｇ／ｍＬ
・ＰＭＸ−５３、ｂｉｏ−ｔｅｃｈｎｅ  （Ｗｉｅｓｂａｄｅｎ−Ｎｏｒｄｅｎｓｔａｄｔ、Ｇｅｒｍａｎｙ）、Ｃａｔ．  Ｎｏ．  ５４７３
・抗−Ｃ５ａＲ（ＣＤ８８）抗体  クローン  Ｓ５／１、Ｈｙｃｕｌｔ  Ｂｉｏｔｅｃｈ  （Ｕｄｅｎ、Ｎｅｔｈｅｒｌａｎｄｓ）、Ｃａｔ．  Ｎｏ．  ＨＭ２０９４
・抗−Ｃ５ａＲ（ＣＤ８８）抗体  クローン  ７Ｈ１１０、ｂｉｏｍｏｌ  （Ｈａｍｂｕｒｇ、Ｇｅｒｍａｎｙ）、Ｃａｔ．  Ｎｏ．  Ｃ２４３９−６０Ｎ
・Ａｖａｃｏｐａｎ、ＭｅｄＫｏｏ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ  Ｉｎｃ．  （Ｍｏｒｒｉｓｖｉｌｌｅ、ＵＳＡ）、Ｃａｔ．  Ｎｏ．  ３１９５７５
・１２％  ＡＣＤを含む健常ドナーからのヒト血液（即時使用）
・Ｊｅｎａ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  Ｈｏｓｐｉｔａｌからのヒト血漿プール（クエン酸血漿）
【０１９８】
４．３．３  装置
フローサイトメーター（ＤＩＶＡ  ソフトウェア  Ｖ６．１．２を備えたＦＡＣＳ  Ｃａｎｔｏ  ＩＩ）
【０１９９】
４．３．４  手順
ａ）ヒトＣＤ１１ｂ効力アッセイ（フローサイトメトリーアッセイ）
２人の患者血漿サンプルＰａｔ．  ０８８およびＰａｔ．  ０９２（５μＬ）を、１００μＬの全容量においてＣ５ａ−Ｃ５ａＲ軸ブロッカー（抗−Ｃ５ａ抗体ＩＦＸ−１、抗−Ｃ５ａＲ抗体クローン  Ｓ５／１およびクローン  ７Ｈ１１０、Ｃ５ａＲ  アンタゴニスト  ＰＭＸ−５３、およびＣ５ａＲインヒビター  Ａｖａｃｏｐａｎ；  １０μＬ）の非存在または存在において、新鮮なヒト血液（６０μＬ、好中球の供給源として）とインキュベートした。患者サンプルに適用される手順にしたがって調製される２つのコントロール血漿サンプル（Ｃｔｒｌ  ００９およびＣｔｒｌ  ０１０、５μＬ）は、非特異的活性化のためのコントロールとして機能した。塩水のみ（４０μＬ）または正常ヒト血漿プール（ｈｕＰＰ  ５μＬ  ＋  塩水  ３５μＬ）を有する血液は、ＣＤ１１ｂのベースライン発現を定義するために非刺激コントロールとして機能した。正常ヒト血漿プールを有し、組換えヒトＣ５ａ（ｒｈＣ５ａ）でスパイクされた血液サンプルは、刺激する条件を模倣した。全てのサンプルを、ＣＤ１１ｂ上方調節を活性化するために、３７℃で２０分間インキュベートした。氷上で冷却後、２μＬのＦＩＴＣ−コンジュゲートされた抗−マウスＣＤ１１ｂ抗体をサンプルに加えた。バックグラウンドシグナルを最小限にするために、標識されたサンプルを暗所でさらに３０分間氷上に放置した。次に、赤血球を室温で１０分間で１×  ＦＡＣＳ  Ｌｙｓｉｎｇ  溶液で溶解した。２ｍＬ  Ｓｔａｉｎｉｎｇバッファーを使用して、残りの細胞を２回洗浄した。２５００ｒｐｍで３分間遠心分離後、細胞を０．５ｍＬ  Ｓｔａｉｎｉｎｇバッファーに再懸濁し、ＦＡＣＳ分析の準備をした。ＦＳＣ対ＳＳＣプロットにゲートを設定して、好中球のサイズを有する細胞のみを分析できるようにした。
【０２００】
Ｃ５ａ−Ｃ５ａＲ軸遮断試験物質の遮断活性（ＢＡ）のパーセントを以下の式を使用して計算した。ここで、ＭＦＩは、好中球におけるＣＤ１１ｂ結合ＦＩＴＣから放出される平均蛍光強度である。
ＢＡ（％）＝（ＭＦＩ患者血漿−ＭＦＩ試験物質スパイク患者血漿）÷（ＭＦＩ患者血漿−ＭＦＩｈｕＰＰ）×１００
【０２０１】
ｂ）統計分析
グラフは、ＧｒａｐｈＰａｄ  Ｐｒｉｓｍ  ７  （ＣＡ、ＵＳＡ）で作成された。
【０２０２】
４．４  結果および考察
好中球におけるインテグリンＣＤ１１ｂの発現
好中球におけるＣＤ１１ｂ発現を、２人の健常血液ドナー（Ｃｔｒｌ  ００９およびＣｔｒｌ  ０１０）および２人の診断されたＨＳ患者（Ｐａｔ．  ０８８およびＰａｔ．  ０９２）からの血漿サンプルで評価した。Ｃｔｒｌ−サンプルの平均蛍光強度（ＭＦＩ）は２１５６．９±１１４．３であり、これは非刺激ＣＤ１１ｂベースライン発現範囲内にある（ＭＦＩ＜３５００）。対照的に、ＣＤ１１ｂ発現の２．３から３．９倍の上昇が、ＨＳ患者サンプル（Ｐａｔ．  ０８８、Ｐａｔ．  ０９２）または２０ｎＭ  組換えヒトＣ５ａ（ｒｈＣ５ａ）のいずれかによって誘導された（図８、９、１０および１１；表６、７および８）。これらのデータは、有意に上方調節されたＣＤ１１ｂ発現がＨＳ患者において炎症性因子によって介在されたことを示唆する。補体活性化産物、とりわけＣ５ａは、ＣＤ１１ｂ上方調節において主な役割を果たすと仮定される（表５）。
表６．補体因子誘導ＣＤ１１ｂ上方調節に対する抗Ｃ５ａＲ抗体  クローン  Ｓ５／１および７Ｈ１１０、およびＣ５ａＲアンタゴニストＰＭＸ−５３の遮断活性
【表６】
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【０２０３】
表７．補体因子誘導ＣＤ１１ｂ上方調節に対する抗Ｃ５ａ抗体  ＩＦＸ−１およびＣ５ａＲアンタゴニストＰＭＸ−５３の遮断活性
【表７】
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【０２０４】
抗ヒトＣ５ａＲモノクローナル抗体、Ｃ５ａＲアンタゴニストおよびＣ５ａＲインヒビターによるＣＤ１１ｂ上方調節の阻害
図８に示されるとおり、ｒｈＣ５ａ（２０ｎＭ）および高レベルのｅＣ５ａを有する２つのＨＳ患者血漿サンプル（Ｐａｔ．  ０８８およびＰａｔ．  ０９２）は、血液好中球におけるＣＤ１１ｂ発現を強く上方調節したが、５０ｎＭの最終濃度でのＣ５ａＲを標的とする遮断抗体の存在は、ｒｈＣ５ａまたはＨＳ患者血漿サンプルのいずれかによって駆動されるＣＤ１１ｂ発現を有意に弱めることができた。７１％から７９％の範囲である高い遮断活性が抗−Ｃ５ａＲ抗体、クローン  ７Ｈ１１０およびクローン  Ｓ５／１を使用することによって成し遂げられた（図８、表９および６）。対照的に、小さなヘキサペプチドであるＣ５ａＲアンタゴニストＰＭＸ−５３は、Ｃ５ａＲ特異的モノクローナル抗体ほど効果的ではなかった。同じ濃度のＰＭＸ−５３（５０ｎＭ）によって得られた遮断活性は、５０％から５７％内であった（図９Ａ、表９および６）。Ｃ５ａＲ阻害を介してＣＤ１１ｂ上方調節の廃止がなし遂げることができるか否かを試験するために、高濃度のＰＭＸ５３（２０μＭ）を同じ実験セットアップで遮断活性についてさらに評価した。結果として、ＨＳ患者血漿サンプルならびにｒｈＣ５ａによって誘導されるＣＤ１１ｂ上方調節は、高レベルのＰＭＸ−５３の存在において完全に無効にされた（図９Ｂ、表９および７）。同様のデータが、Ｃ５ａＲインヒビターであるＡｖａｃｏｐａｎの存在下でなし遂げられた（図１１、表８および９）。１００μＭ  Ａｖａｃｏｐａｎの存在下での遮断活性が７７％から８０％内であり、ＨＳ患者血漿によって誘導されるＣＤ１１ｂ上方調節は５００μＭ  Ａｖａｃｏｐａｎの存在下で完全に遮断された（図１１、表８および９）。
【０２０５】
これらの結果は、Ｃ５ａ／Ｃ５ａＲ軸が血液好中球におけるＣＤ１１ｂ上方調節に主に関与すること、およびＣ５ａＲがＣ５ａ活性を遮断するための可能性のある標的として役割を果たすことができることを示唆した。
表８．補体因子誘導ＣＤ１１ｂ上方調節に対するＣ５ａＲインヒビターであるＡｖａｃｏｐａｎの遮断活性
【表８】
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【０２０６】
表９．ＨＳ患者血漿またはｒｈＣ５ａスパイクされた健常ヒト血漿によって誘導されるＣＤ１１ｂ上方調節における全てのＣ５ａ−Ｃ５ａＲ軸遮断試験分子の要約された遮断活性（％）
【表９】
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【０２０７】
抗ヒトＣ５ａモノクローナル抗体であるＩＦＸ−１は、ＨＳ誘導ＣＤ１１ｂ上方調節を完全に遮断した
上記と同じ実験設定を使用することによって、予期されるとおり、ｒｈＣ５ａおよびＨＳ患者血漿サンプル（Ｐａｔ．  ０８８およびＰａｔ．  ０９２）は血液好中球におけるＣＤ１１ｂ発現を強く活性化し、２０ｎＭという低濃度でのＩＦＸ−１の付加はＣＤ１１ｂ上方調節を完全に無効にすることができた（図１０）。これらの結果は、ＩＦＸ−１がＣ５ａ／Ｃ５ａＲ駆動炎症性応答を阻害することにおいてより効率的であることを示す。
【０２０８】
４．５  結論
総合すれば、我々の結果は、Ｃ５ａ標的アプローチ、すなわち抗Ｃ５ａモノクローナル抗体であるＩＦＸ−１の適用がＣ５ａ介在ＣＤ１１ｂ上方調節を効果的に無効にすることを示す。さらに、抗Ｃ５ａＲ抗体、Ｃ５ａＲアンタゴニストならびにＣ５ａＲインヒビターはまた、同じ実験条件下で強い遮断活性を示した。したがって、遮断抗体またはアンタゴニストでのＣ５ａＲの標的化は、炎症状態、例えばＨＳ下でＣ５ａ／Ｃ５ａＲ軸を遮断する代替戦略を示す。
【０２０９】
参考文献
【表１０】
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【表１１】
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【表１２】
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【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５−１】
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【図５−２】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９Ａ】
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【図９Ｂ】
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【図１０】
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【図１１】
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【配列表】
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【国際調査報告】
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