(57)【要約】  てんかんの治療又はてんかん発作の制御に使用するための、デカン酸をオクタン酸に対する比（重量／重量）７０：３０〜９０：１０で含む組成物。【特許請求の範囲】
【請求項１】
てんかんの治療又はてんかん発作の制御に使用するための、デカン酸をオクタン酸に対する比（重量／重量）７０：３０〜９０：１０で含む組成物。
【請求項２】
てんかんの対象において興奮性シナプス後電流（ＥＰＳＣ）の低減に使用するための、デカン酸をオクタン酸に対する比（重量／重量）７０：３０〜９０：１０で含む組成物。
【請求項３】
α−アミノ−３−ヒドロキシ−５−メチル−４−イソオキサゾールプロピオン酸（ＡＭＰＡ）受容体を阻害するのに、前記阻害を必要とする対象において、好ましくはてんかんに罹患している対象において使用するための、デカン酸をオクタン酸に対する比（重量／重量）７０：３０〜９０：１０で含む組成物。
【請求項４】
対象においててんかんの治療又は発作の制御に使用するための組成物であって、
前記対象はＡＭＰＡ受容体阻害に応答する対象であると確認されている、組成物。
【請求項５】
デカン酸をオクタン酸に対する比（重量／重量）７１：２９〜８９：１１、７２：２８〜８８：１２、７３：２７〜８７：１３、７４：２６〜８６：１４、７５：２５〜８５：１５、７６：２４〜８４：１６、７７：２３〜８３：１７、７８：２２〜８２：１８、７９：２１〜８１：１９、好ましくは約８０：２０で含む、請求項１〜４のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項６】
デカン酸をオクタン酸に対する比（重量／重量）８０：２０で含む、請求項１〜５のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項７】
デカン酸及びオクタン酸が、トリグリセリドの形態である、請求項１〜６のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項８】
前記オクタン酸及びデカン酸が、前記組成物の総脂肪酸含有量の少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、又は９９％を構成する、請求項１〜７のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項９】
モノ又はポリ不飽和脂肪酸を実質的に含まない、請求項１〜８のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１０】
水中油型エマルジョン、粉末、又は食料品の形態である、請求項１〜９のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１１】
前記組成物が液体形態であり、前記デカン酸が５ｇ／Ｌ〜５００ｇ／Ｌで存在する、請求項１〜１０のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１２】
炭水化物及びタンパク質を実質的に含まない、又は脂質の、タンパク質及び炭水化物の合計に対する重量量が、１．５〜５．０対１である、請求項１〜１１のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１３】
医療用食品、チューブフィード、栄養組成物、又は栄養補助食品の形態である、請求項１〜１２のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１４】
飲料、マヨネーズ、サラダドレッシング、マーガリン、低脂肪スプレッド、乳製品、チーズスプレッド、プロセスチーズ、乳製品デザート、フレーバーミルク、クリーム、発酵乳製品、チーズ、バター、コンデンスミルク製品、アイスクリームミックス、大豆製品、低温殺菌液状卵、ベーカリー製品、菓子製品、菓子バー、チョコレートバー、高脂肪バー、ＵＨＴデザート、低温殺菌デザート、ゲル、ジェリー、ヨーグルト、又は脂肪ベースのフィリング若しくは含水フィリングを有する食品の形態である、請求項１〜１３のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１５】
デカン酸の神経細胞酸化を低減又は防止するのに使用するための、好ましくは前記デカン酸が、てんかん発作の制御に使用するためのものである、オクタン酸。
【請求項１６】
前記オクタン酸が、トリグリセリドの形態である、請求項１５に記載の使用のためのオクタン酸。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、全般的に、ＡＭＰＡ受容体が関与する疾患を治療するための、組成物に関する。特に、本発明は、てんかんを治療するための、組成物を提供する。
【背景技術】
【０００２】
てんかんにより、発作によって特徴付けられる広範な神経性疾患が網羅される。発作は、異常な神経活性から生じ、けいれん及び意識喪失をはじめとする、多数の現れ方で症状が出る。多くの場合、てんかんは、抗けいれん薬の使用によって管理することができる。しかし、一定割合のてんかん患者については、従来の薬物による治療によると、発作活性に対する効果は最小限に留まる場合がある。手術は、特定の発作に罹患している患者を治療するための選択肢であるが、多くの個体では、ケトン食により、あまり侵襲的でなくうまく管理することができる。
【０００３】
中鎖トリグリセリド（ＭＣＴ）ケトン食は、難治性てんかんの治療として、１９７１年に初めて確認された。耐薬物性てんかんの小児に対する最も効果的な治療取組みのうちの１つ（Ｌｉｕ，Ｅｐｉｌｅｐｓｉａ  ２００８；４９  Ｓｕｐｐｌ．８：３３〜３６）が提供され、小児てんかんに効果的であることが無作為対照試験にて実証されている（Ｎｅａｌ  ｅｔ  ａｌ．Ｅｐｉｌｅｐｓｉａ  ２００９；５０：１１０９〜１１１７）。しかし、食餌には、下痢、吐き気、膨満感、及びけいれんなどの、有害な胃腸関連副作用がある（Ｌｉｕ，Ｅｐｉｌｅｐｓｉａ  ２００８：４９  Ｓｕｐｐｌ．８：３３〜３６）。更に、多くの患者が食餌は許容困難であると分かることにより、食餌における脱落率が高いことも示されている（Ｌｅｖｙ  ｅｔ  ａｌ．Ｃｏｃｈｒａｎｅ  Ｄａｔａｂａｓｅ  Ｓｙｓｔ  Ｒｅｖ  ２０１２；３：ＣＤ００１９０３）。
【０００４】
ケトン食は、高脂肪及び低炭水化物含有量を、成長及び回復に十分なタンパク質とともに有する。ケトン食は、身体に、そのエネルギー源として炭水化物の代わりに脂肪を代謝させることよって機能する。低食餌炭水化物条件下で、脂肪は肝臓において脂肪酸及びケトン体に分解され、これらの化合物は、アデノシン三リン酸（ＡＴＰ）を生成する更なる代謝経路に、化学的エネルギー源として利用される。
【０００５】
ケトン食から生じるケトン体は、治療的役割を果たすことが前提とされてきたが、発作制御はケトン体濃度とわずかしか相関しない（Ｌｉｋｈｏｄｉｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｅｐｉｌｅｐｓｉａ  ２０００；４１：１４００〜１４１０；Ｔｈａｖｅｎｄｉｒａｎａｔｈａｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｅｘｐ  Ｎｅｕｒｏｌ  ２０００；１６１：６９６〜７０３）。ケトンに加えて、食餌によりまた、ＭＣＴ油にてもたらされる２つの脂肪酸、すなわち、直鎖で炭素１０個のデカン酸及び炭素８個のオクタン酸の血漿中濃度が上昇する（Ｈａｉｄｕｋｅｗｙｃｈ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｌｉｎ  Ｃｈｅｍ  １９８２；２８：６４２〜６４５）。近年、デカン酸については、ｉｎ  ｖｉｔｒｏ及びｉｎ  ｖｉｖｏで、臨床的に適切な濃度で抗発作効果を有するが、オクタン酸についてはそうでないことが定説となっている（Ｃｈａｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎｅｕｒｏｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ  ２０１３；６９：１０５〜１１４；Ｗｌａｚ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｇｒｅｓｓ  ｉｎ  Ｎｅｕｒｏｐｓｙｃｈｏｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ  ＆  Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｐｓｙｃｈｉａｔｒｙ  ２０１４）。
【０００６】
α−アミノ−３−ヒドロキシ−５−メチル−４−イソオキサゾールプロピオン酸受容体（ＡＭＰＡ受容体）は、てんかん活性の生成及び伝播、並びにてんかん発作に関連する長期適応細胞可塑性に重要な役割を果たす（Ｃｈａｐｍａｎ，Ｊ  Ｎｕｔｒ  ２０００；１３０：１０４３ｓ−１０４５ｓ；Ｒｏｇａｗｓｋｉ  ａｎｄ  Ｄｏｎｅｖａｎ，Ａｄｖ  Ｎｅｕｒｏｌ  １９９９；７９：９４７〜９６３）。受容体は、大脳皮質、扁桃体、視床、及び海馬をはじめとする、てんかんに関与する全ての領域に存在する。更に、ＡＭＰＡ受容体拮抗薬は、様々なｉｎ  ｖｉｔｒｏ及びｉｎ  ｖｉｖｏでのてんかんモデルにおける、広範囲の抗けいれん活性を有する（（Ｒｏｇａｗｓｋｉ．，Ｅｐｉｌｅｐｓｙ  Ｃｕｒｒ  ２０１１；１１：５６〜６３）。非競合的なＡＭＰＡ受容体拮抗薬ペランパネルは、部分発作がある成人の治療に承認されている（Ｆｒｅｎｃｈ  ｅｔ  ａｌ．，２０１２  Ｎｅｕｒｏｌｏｇｙ．７９（６）：５８９〜９６）。
【０００７】
近年、本発明者らにより、デカン酸はＡＭＰＡ受容体を阻害すること、及びデカン酸のＡＭＰＡ受容体拮抗作用の程度によりその抗発作効果は十分に説明されることが、示された（Ｃｈａｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｒａｉｎ  ２０１６  Ｆｅｂ；１３９（２）：４３１〜４４３）。対照的に、オクタン酸がＡＭＰＡ受容体電流に影響を及ぼさなかったことにより、オクタン酸は、ＡＭＰＡ受容体阻害による発作制御に直接影響を及ぼす可能性が低いことが、示唆されている。
【０００８】
抗けいれん薬の更なる開発を促進するために、てんかん発作の軽減に対する中鎖脂肪酸の寄与を更に理解する必要性が依然としてある。
【発明の概要】
【０００９】
本発明者らは、デカン酸及びオクタン酸の混合物の、ＡＭＰＡ受容体阻害に対する効果を調査した。以前の検討により、デカン酸及びオクタン酸では、ＡＭＰＡ受容体介在性発作対照に対して直接効果を及ぼす可能性は低いことが示唆されたが、本発明者らは、驚くべきことに、デカン酸及びオクタン酸を本明細書で言及される特定の比で組み合わせたときに、ＡＭＰＡ受容体阻害が最大になることを見出した。
【００１０】
本発明者らは、デカン酸及びオクタン酸が、神経様細胞によって区分されて代謝されることを、更に実証した。更に、オクタン酸は優先的に酸化され得、それによってデカン酸を酸化させずにおいておくことができる。
【００１１】
（発明の記載）
本発明の第１の態様によると、てんかんの治療に使用するための、デカン酸をオクタン酸に対する比（重量／重量）７０：３０〜９０：１０で含む組成物が、提供される。
【００１２】
本発明の別の態様によると、てんかん発作の制御に使用するための、デカン酸をオクタン酸に対する比（重量／重量）７０：３０〜９０：１０で含む組成物が、提供される。
【００１３】
本発明の別の態様によると、てんかんの対象において興奮性シナプス後電流（ＥＰＳＣ）の低減に使用するための、デカン酸をオクタン酸に対する比（重量／重量）７０：３０〜９０：１０で含む組成物が、提供される。
【００１４】
本発明の別の態様によると、ＡＭＰＡ受容体を阻害するのに、その阻害を必要とする対象において使用するための、デカン酸をオクタン酸に対する比（重量／重量）７０：３０〜９０：１０で含む組成物が、提供される。この対象は、てんかんに罹患している場合がある。本発明の別の態様によると、この対象は、虚血、筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）、癌、又はアルツハイマー病に罹患している場合がある。
【００１５】
本発明の別の態様によると、虚血の治療に使用するための、デカン酸をオクタン酸に対する比（重量／重量）７０：３０〜９０：１０で含む組成物が、提供される。
【００１６】
本発明の別の態様によると、筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）の治療に使用するための、デカン酸をオクタン酸に対する比（重量／重量）７０：３０〜９０：１０で含む組成物が、提供される。
【００１７】
本発明の別の態様によると、癌の治療に使用するための、デカン酸をオクタン酸に対する比（重量／重量）７０：３０〜９０：１０で含む組成物が、提供される。
【００１８】
本発明の別の態様によると、アルツハイマー病の治療に使用するための、デカン酸をオクタン酸に対する比（重量／重量）７０：３０〜９０：１０で含む組成物が、提供される。
【００１９】
本発明の別の態様によると、対象においててんかんの治療又は発作の制御に使用するための組成物であって、対象はＡＭＰＡ受容体阻害に応答する対象であると確認されている、組成物が、提供される。
【００２０】
本発明に使用する組成物は、デカン酸をオクタン酸に対する比（重量／重量）７０：３０〜９０：１０、７１：２９〜８９：１１、７２：２８〜８８：１２、７３：２７〜８７：１３、７４：２６〜８６：１４、７５：２５〜８５：１５、７６：２４〜８４：１６、７７：２３〜８３：１７、７８：２２〜８２：１８、又は７９：２１〜８１：１９で含んでもよい。
【００２１】
好ましくは、本発明に使用する組成物は、デカン酸をオクタン酸に対する比（重量／重量）約８０：２０で含む。
【００２２】
本明細書で言及するデカン酸及びオクタン酸は、トリグリセリドの形態であってもよい。
【００２３】
一実施形態では、オクタン酸及びデカン酸は、組成物の総脂肪酸含有量の少なくとも８０重量％、８５重量％、９０重量％、９５重量％若しくは９９重量％、又は１００重量％を構成する。一実施形態では、オクタン酸及びデカン酸は、中鎖トリグリセリドの形態であり、このトリグリセリドが、組成物の総脂肪含有量の少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％若しくは９９％、又は１００％を構成する。好ましくは、ＭＣＴの実質的に全ての脂肪酸部分は、オクタン酸部分又はデカン酸部分である。
【００２４】
別の実施形態では、本発明に使用する組成物は、モノ又はポリ不飽和脂肪酸を実質的に含まない。
【００２５】
別の実施形態では、本発明に使用する組成物は、水中油型エマルジョン、粉末、又は食料品の形態である。
【００２６】
別の実施形態では、本発明に使用する組成物は、液体形態であり、デカン酸が、５ｇ／Ｌ〜５００ｇ／Ｌ、５ｇ／Ｌ〜２００ｇ／Ｌ、５ｇ／Ｌ〜１００ｇ／Ｌ、５ｇ／Ｌ〜５０ｇ／Ｌ、５ｇ／Ｌ〜３０ｇ／Ｌ、５ｇ／Ｌ〜２０ｇ／Ｌ、１０ｇ／Ｌ〜５００ｇ／Ｌ、１０ｇ／Ｌ〜２００ｇ／Ｌ、１０ｇ／Ｌ〜１００ｇ／Ｌ、１０ｇ／Ｌ〜５０ｇ／Ｌ、１０ｇ／Ｌ〜３０ｇ／Ｌ、又は１０ｇ／Ｌ〜２０ｇ／Ｌで存在する。
【００２７】
例えば、デカン酸は、約５ｇ／Ｌ、約１０ｇ／Ｌ、約１５ｇ／Ｌ、約２０ｇ／Ｌ、約３０ｇ／Ｌ、約４０ｇ／Ｌ、約５０ｇ／Ｌ、約６０ｇ／Ｌ、約７０ｇ／Ｌ、約８０ｇ／Ｌ、約９０ｇ／Ｌ、約１００ｇ／Ｌ、約１１０ｇ／Ｌ、約１２０ｇ／Ｌ、約１３０ｇ／Ｌ、約１４０ｇ／Ｌ、約１５０ｇ／Ｌ、約１７５ｇ／Ｌ、約２００ｇ／Ｌ、約２２５ｇ／Ｌ、約２５０ｇ／Ｌ、又は約５００ｇ／Ｌで存在してもよい。
【００２８】
別の実施形態では、本発明に使用する組成物は、炭水化物及びタンパク質を含まず、又は実質的に含まず、例えば、組成物は、２重量％未満、０．５重量％未満、又は０．１重量％未満の炭水化物及びタンパク質を有する。
【００２９】
別の実施形態では、組成物中の脂質の、タンパク質及び炭水化物の合計に対する重量量は、１〜５対１である。例えば、脂質の、タンパク質及び炭水化物の合計に対する重量量は、１対１、２対１、３対１、４対１、５対１、２．４〜４．０対１、又は２．６〜３．８対１であってもよい。
【００３０】
組成物は、水中油型エマルジョンの形態であってよい。一実施形態では、エマルジョンは、中鎖トリグリセリドの形態でオクタン酸及びデカン酸を含み、中鎖トリグリセリドは、組成物の総脂肪含有量の少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％若しくは９９％、又は１００％を構成する。好ましくは、ＭＣＴの、全ての又は実質的に全ての脂肪酸部分は、オクタン酸部分又はデカン酸部分である。エマルジョンは、タンパク質又は炭水化物を実質的に含まなくてもよい。一実施形態では、水中油型エマルジョンの総脂肪含有量は、５〜４０ｇ／１００ｍＬ、例えば５〜３０ｇ／１００ｍＬ、５〜２５ｇ／１００ｍＬ、１０〜２５ｇ／１００ｍＬ若しくは１０〜２０ｇ／１００ｍＬ、又は１５〜２５ｇ／１００ｍＬである。一実施形態では、エマルジョンのエネルギー値は、１００ｍＬ当たり５０〜３００ｋｃａｌ、例えば１００ｍＬ当たり１００〜３００ｋｃａｌ、１００ｍＬ当たり５０〜２００ｋｃａｌ、１００ｍＬ当たり１５０〜２５０ｋｃａｌ、又は１００ｍＬ当たり１７０〜２００ｋｃａｌである。
【００３１】
一実施形態では、本発明に使用される組成物は、粉末形態である。
【００３２】
別の実施形態では、組成物は、噴霧乾燥形態である。
【００３３】
別の実施形態では、組成物は、食品又はドリンクを強化するのに好適な形態である。
【００３４】
別の実施形態では、組成物は、食料品の形態である。
【００３５】
別の実施形態では、組成物は、医療用食品の形態である。
【００３６】
別の実施形態では、組成物は、チューブフィードの形態である。
【００３７】
本発明に使用する組成物は、飲料、マヨネーズ、サラダドレッシング、マーガリン、低脂肪スプレッド、乳製品、チーズスプレッド、プロセスチーズ、乳製品デザート、フレーバーミルク、クリーム、発酵乳製品、チーズ、バター、コンデンスミルク製品、アイスクリームミックス、大豆製品、低温殺菌液状卵、ベーカリー製品、菓子製品、菓子バー、チョコレートバー、高脂肪バー、ＵＨＴデザート（ＵＨＴ  ｐｕｄｄｉｎｇ）、低温殺菌デザート、ゲル、ジェリー、ヨーグルト、又は脂肪ベースのフィリング若しくは含水フィリングを有する食品の形態であってもよい。
【００３８】
本発明の別の態様によると、デカン酸の神経細胞酸化を低減又は防止するための、オクタン酸の使用が提供される。
【００３９】
本発明の別の態様によると、デカン酸の神経細胞酸化を低減又は防止するのに使用するための、オクタン酸が、提供される。
【００４０】
本発明の別の態様によると、デカン酸の神経細胞酸化を低減又は防止するのに使用するための、そのデカン酸がてんかんの治療に使用するためのものである、オクタン酸が、提供される。
【００４１】
本発明の別の態様によると、デカン酸の神経細胞酸化を低減又は防止するのに使用するための、そのデカン酸がてんかん発作の制御に使用するためのものである、オクタン酸が、提供される。
【００４２】
本発明の別の態様によると、デカン酸の神経細胞酸化を低減又は防止するのに使用するための、そのデカン酸がＡＭＰＡ受容体の阻害に、その阻害を必要とする対象において使用するためのものである、オクタン酸が、提供される。この対象は、てんかんに罹患している場合がある。本発明の別の態様によると、この対象は、虚血、筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）、癌、又はアルツハイマー病に罹患している場合がある。
【００４３】
本発明の別の態様によると、デカン酸の神経細胞酸化を低減又は防止するのに使用するための、そのデカン酸が虚血の治療に使用するためのものである、オクタン酸が、提供される。
【００４４】
本発明の別の態様によると、デカン酸の神経細胞酸化を低減又は防止するのに使用するための、そのデカン酸が筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）の治療に使用するためのものである、オクタン酸が、提供される。
【００４５】
本発明の別の態様によると、デカン酸の神経細胞酸化を低減又は防止するのに使用するための、そのデカン酸が癌の治療に使用するためのものである、オクタン酸が、提供される。
【００４６】
本発明の別の態様によると、デカン酸の神経細胞酸化を低減又は防止するのに使用するための、そのデカン酸がアルツハイマー病（ＡＤ）の治療に使用するためのものである、オクタン酸が、提供される。
【００４７】
本発明の別の態様によると、対象においててんかんを治療する方法が、提供され、この方法は、本明細書で定義されるように、組成物を対象に投与するステップ、を含む。
【００４８】
本発明の別の態様によると、対象においててんかん発作を制御する方法が、提供され、この方法は、本明細書で定義されるように、組成物を対象に投与するステップ、を含む。
【００４９】
本発明の別の態様によると、てんかんの対象において興奮性シナプス後電流（ＥＰＳＣ）を低減する方法が、提供され、この方法は、本明細書で定義されるように、組成物を対象に投与するステップ、を含む。
【００５０】
本発明の別の態様によると、対象においてＡＭＰＡ受容体を阻害する方法が、提供され、この方法は、本明細書で定義されるように、組成物を対象に投与するステップ、を含む。この対象は、てんかんに罹患している場合がある。
【図面の簡単な説明】
【００５１】
【図１】ＡＭＰＡ受容体で生成した電流の、ブレンドされたデカン酸及びオクタン酸の適用による直接阻害である。実験では、ＧｌｕＡ２／３ＡＭＰＡ受容体を、卵母細胞モデルにて発現させて使用し、１００μＭのグルタメートを添加した。デカン酸のオクタン酸に対する比を、阻害効果について評価した。８：２の比について４：６の比と比較すると、非常に有意な阻害の増大が示された。＊＊Ｐ＞０．０１、＊＊＊Ｐ＞０．００１、ｎ．ｓ．＝非有意である。
【図２】ＳＨ−ＳＹ５Ｙ細胞における、１３Ｃで標識された３ｍＭのグルコース、２５０μＭのＣ８、及び２５０μＭのＣ１０の、６時間の経過にわたっての酸化である。細胞から培地への１３ＣＯ２放出速度を、経時的にｄ１３Ｃ／１２Ｃの比の変化によって測定したものであり、（ａ）は、３ｍＭの［Ｕ−１３Ｃ］グルコース処理下、並びに（ｂ）は、２５０μＭの［１−１３Ｃ］デカン酸（Ｃ１０）及び［１１３Ｃ］オクタン酸（Ｃ８）処理下である。（ｃ）は、ＳＨ−ＳＹ５Ｙ細胞における、１３Ｃで標識された化合物の絶対酸化速度である。［１−１３Ｃ］Ｃ１０の酸化速度は、［Ｕ−１３Ｃ］グルコース及び［１−１３Ｃ］Ｃ８の両方の酸化速度よりも有意に低い（＊＊＊Ｐ＜０．０００１）ことが見出された。データを、４つの複製ウェルで各々実施される５つの独立した実験（ｎ＝５）の平均±ＳＥＭとして表す。（ｄ）は、Ｃ８の共インキュベーションの、Ｃ１０の酸化に対する効果である。２５０μＭの［１−１３Ｃ］Ｃ１０の酸化速度は、６２．５μＭの非標識Ｃ８の存在下で有意に低下した（＊ｐ＜０．０５）。データを、４つの複製ウェルで各々実施される４つの独立した実験（ｎ＝４）の平均±ＳＥＭとして表す。
【発明を実施するための形態】
【００５２】
組成物
本発明では、デカン酸（Ｃ１０）酸及びオクタン酸（Ｃ８）を含む、組成物を使用する。
【００５３】
オクタン酸（カプリル酸としても知られる）は、式ＣＨ３（ＣＨ２）６ＣＯＯＨの飽和脂肪酸である。
【００５４】
デカン酸（カプリン酸としても知られる）は、式ＣＨ３（ＣＨ２）８ＣＯＯＨの飽和脂肪酸である。
【００５５】
本発明に使用される組成物は、デカン酸をオクタン酸に対する比（重量／重量）７０：３０〜９０：１０で含む。
【００５６】
組成物は、デカン酸をオクタン酸に対する比（重量／重量）７１：２９〜８９：１１、７２：２８〜８８：１２、７３：２７〜８７：１３、７４：２６〜８６：１４、７５：２５〜８５：１５、７６：２４〜８４：１６、７７：２３〜８３：１７、７８：２２〜８２：１８、７９：２１〜８１：１９で含んでもよい。
【００５７】
好ましい実施形態では、組成物は、デカン酸をオクタン酸に対する比（重量／重量）７５：２５〜８５：１５、好ましくは７６：２４〜８４：１６、７７：２３〜８３：１７、７８：２２〜８２：１８、好ましい実施形態では７９：２１〜８１：１９で含んでもよい。
【００５８】
組成物は、デカン酸をオクタン酸に対する比約７０：３０、約７１：２９、約７２：２８、約７３：２７、約７４：２６、約７５：２５、約７６：２４、約７７：２３、約７８：２２、約７９：２１、約８０：２０、約８１：１９、約８２：１８、約８３：１７、約８４：１６、約８５：１５、約８６：１４、約８７：１３、約８８：１２、約８９：１１、又は約９０：１０で含んでもよい。好ましい実施形態では、比（重量／重量）は、約８０：２０である。
【００５９】
好ましくは、オクタン酸及びデカン酸は、組成物の総脂肪酸含有量の少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％若しくは９９％、又は１００％を構成する。
【００６０】
デカン酸及びオクタン酸は、遊離形態（若しくはその塩の形態）であってもよく、又は、例えば、トリグリセリド、ジアシルグリセリド、モノアシルグリセリドの形態であってもよく、トリグリセリドが一般的に好ましいことが、理解される。
【００６１】
中鎖トリグリセリド（ＭＣＴ）は、中の３つの脂肪酸部分全てが中鎖脂肪酸部分であるトリグリセリドである。本明細書で定義するとき、中鎖脂肪酸（ＭＣＦＡ）は、６〜１２個の炭素原子を有する脂肪酸であるが、８個及び１０個の炭素原子を有する脂肪酸（すなわちオクタン酸及びデカン酸）が本発明に特に好ましく、これらは、本明細書でＣ８脂肪酸若しくはＣ８、及びＣ１０脂肪酸若しくはＣ１０と呼ばれる。
【００６２】
用語「脂肪酸部分」とは、グリセロールとのエステル化反応における脂肪酸に由来するＭＣＴの一部を指す。一例では、グリセロールと、オクタン酸のみとのエステル化反応により、オクタン酸部分を有するＭＣＴが生じる。別の例では、グリセロールと、デカン酸のみとのエステル化反応により、デカン酸部分を有するＭＣＴが生じる。
【００６３】
本発明に使用される組成物は、ホモトリグリセリド（すなわち、ＭＣＴの脂肪酸部分の全てが同じものであり、例えば、Ｃ８ホモトリグリセリドは、３つのオクタン酸部分を含んでもよく、Ｃ１０ホモトリグリセリドは、３つのデカン酸部分を含んでもよい）を含んでもよい。組成物は、ヘテロトリグリセリド（すなわち、ＭＣＴの脂肪酸部分は全てが同じものではない）を含んでもよい。
【００６４】
一実施形態では、組成物は、オクタン酸若しくはデカン酸ではない脂肪酸部分を含まない、又は実質的に含まない。一実施形態では、組成物は、オクタン酸若しくはデカン酸ではない脂肪酸部分を含むＭＣＴを、含まない、又は実質的に含まない。しかし、微量（例えば、３重量％未満、２重量％未満、１重量％未満、又は０．５重量％未満）の、このようなＭＣＴが存在してもよい。
【００６５】
ＭＣＴの天然供給源の例としては、ココナッツ、ココナッツ油、パーム核、パーム核油などの植物供給源、及び乳などの動物供給源が挙げられる。デカン酸及びオクタン酸は、それぞれココナツ油の脂肪酸組成の約５〜８％及び４〜１０％を構成する。
【００６６】
ＭＣＴはまた、グリセロールを１つ以上の中鎖脂肪酸（ＭＣＦＡ）とエステル化することによって合成することもできる。例えば、ＭＣＴ−Ｃ８は、グリセロールをオクタン酸とエステル化することによって合成することができ、ＭＣＴ−Ｃ１０は、グリセロールをデカン酸とエステル化することによって合成することができる。
【００６７】
本発明では、長鎖トリグリセリド（ＬＣＴ）を利用してもよい。好ましくは、ＬＣＴは、５重量％、２重量％、１重量％、０．５重量％、又は０．１重量％の濃度である。一実施形態では、ＬＣＴは、組成物中に存在しない。
【００６８】
組成物は更に、ミネラル類、ビタミン類、塩類、例えば、複数の嗜好剤（ｐａｌａｔａｎｔ）、複数の着色剤、複数の乳化剤、複数の抗菌剤、又は複数の他の防腐剤を含む複数の機能性添加剤などの、複数の物質を含むことができる。このような組成物に有用な場合があるミネラル類としては、例えば、カルシウム、リン、カリウム、ナトリウム、鉄、クロリド、ホウ素、銅、亜鉛、マグネシウム、マンガン、ヨウ素、セレン、クロム、モリブデン、フルオリドなどが挙げられる。本明細書に記載される組成物に有用な場合があるビタミン類の例としては、水溶性ビタミン（例えば、チアミン（ビタミンＢ１）、リボフラビン（ビタミンＢ２）、ナイアシン（ビタミンＢ３）、パントテン酸（ビタミンＢ５）、ピリドキシン（ビタミンＢ６）、ビオチン（ビタミンＢ７）、ミオ−イノシトール（ビタミンＢ８）、葉酸（ビタミンＢ９）、コバラミン（ビタミンＢ１２）、及びビタミンＣ）、並びに脂溶性ビタミン類（ビタミンＡ、ビタミンＤ、ビタミンＥ、及びビタミンＫなど）が挙げられ、これらの塩類、エステル類、又は誘導体が挙げられる。イヌリン、タウリン、カルニチン、アミノ酸類、酵素類、補酵素類などは、様々な実施形態に含めると有用な場合がある。
【００６９】
一実施形態では、組成物は、水中油型エマルジョンの形態である。エマルジョンは、タンパク質又は炭水化物を実質的に含まなくてもよい。一実施形態では、水中油型エマルジョンの総脂肪含有量は、５〜４０ｇ／１００ｍＬ、例えば５〜３０ｇ／１００ｍＬ、５〜２５ｇ／１００ｍＬ、１０〜２５ｇ／１００ｍＬ若しくは１０〜２０ｇ／１００ｍＬ、又は１５〜２５ｇ／１００ｍＬである。一実施形態では、エマルジョンのエネルギー値は、１００ｍＬ当たり５０〜３００ｋｃａｌ、例えば１００ｍＬ当たり１００〜３００ｋｃａｌ、１００ｍＬ当たり５０〜２００ｋｃａｌ、１００ｍＬ当たり１５０〜２５０ｋｃａｌ、又は１００ｍＬ当たり１６０〜２００ｋｃａｌである。
【００７０】
別の実施形態では、組成物は、ケトン食の一部として送達される。簡潔に述べると、古典形（ｃｌａｓｓｉｃａｌ  ｖｅｒｓｉｏｎ）のケトン食では、比を使用して、脂肪含有量を決定及び記載する。したがって、ケトン比により、脂肪のグラム数と、タンパク質及び炭水化物の組み合わせのグラム数との間の関係が表される。４：１の比では、１ｇのタンパク質及び炭水化物の組み合わせごとに、４倍多いグラム数の脂肪が存在する。この比により、従来、ケトン症の程度を調節することが意図されており、より高い比率では、理論的にはより重いケトン症が亢進する。ＭＣＴ形のケトン食では、脂肪からのエネルギー百分率（％）を使用して、脂肪含有量を決定及び記載する。他の２つの形態のケトン食は、いわゆる修正Ａｔｋｉｎｓダイエット（食）及び低血糖（ＧＩ）指数食であり、これらにより、人々が多くの脂肪を摂取するよう促す。これらの後者２つでは、脂肪の比率も百分率も式として計算されないが、典型的にはケトン比が約１：１である。ケトン食の４つ全ての形では、脂肪からの総エネルギーの百分率は５０〜９２％の範囲であるが、典型的には７０〜９０％である。
【００７１】
本発明品がケトン食の一部として送達される場合、総脂肪含有量：タンパク質／炭水化物含有量の比は、栄養目標を達成するため、かつ臨床的利点を最適化するために、治療中に変更することができる。比は、例えば、１：１〜７：１、１：１〜５：１の範囲、例えば１：１、１．５：１、２：１、２．５：１、３：１、３．５：１、４：１、４．５：１、又は５：１であってもよい。
【００７２】
一実施形態では、比は、２．２５：１〜３．９：１である。別の実施形態では、比は、２．２６〜３．８：１、又は２．７〜３．４：１である。更なる実施形態では、比は、３．２１：１、３．２３：１、３．２４：１、３．２５：１、３．２６：１、３．２７：１、３．２８：１、又は３．２９：１である。
【００７３】
同じ年齢及び体重の異なる２個体が、同じ比率又は同じ量の脂肪に対して異なるレベルの臨床的利点を受ける場合があることは、念頭に置く必要がある。したがって、臨床医は、比を変更することで、最適な臨床的利点が達成されるよう望む場合がある。したがって、比又は総脂肪含有量を微調整し、治療の開始及び終了時に、並びに例えばコンプライアンスを向上させるために、治療中に、それを変更することは、本発明の範囲内である。
【００７４】
組成物は、経腸投与用又は非経口投与用のものであってもよい。好ましい実施形態では、組成物は、経口投与用のものである。
【００７５】
一実施形態では、本発明の組成物は、錠剤、糖衣錠、カプセル剤、ゲルキャップ、散剤、粒剤、液剤、エマルジョン、懸濁剤、被覆粒子、噴霧乾燥粒子、又は丸薬の形態である。
【００７６】
別の実施形態では、組成物は、散剤の形態であってもよい。散剤は、例えば、噴霧乾燥散剤又は凍結乾燥散剤であってもよい。
【００７７】
組成物は、水に戻して（ｆｏｒ  ｒｅｃｏｎｓｔｉｔｕｔｉｏｎ）使用可能なものであってよい。
【００７８】
組成物は、食品物質に挿入又は混合されてもよい。組成物は、食料品又は飼料の形態であってもよい。一実施形態では、食料品は、ヒトの食料品である。
【００７９】
組成物は、医療用食品の形態であってもよい。本明細書で使用するとき、用語「医療用食品」とは、医学的疾患又は病状の食餌管理のために特に処方された食品製品を指し、例えば、医学的疾患又は病状には、通常の食餌のみによっては満たすことができない、明確な栄養的欠乏がある場合がある。医療用食品は、医学的指揮下で投与される場合がある。医療用食品は、経口摂取又は経管栄養法のためのものであってもよい。
【００８０】
組成物は、チューブフィードの形態であってもよい。用語「チューブフィード」とは、栄養を供給管によって対象の胃腸管（ｇａｓｔｒｏｉｎｔｅｓｔｉｎａｌ  ｔｒａｃｔ）に直接導入することが意図された、製品を指す。チューブフィードは、例えば、対象の鼻を通って配置された供給管（経鼻胃管、経鼻十二指腸管、及び経鼻空腸管など）、又は対象の腹部に直接配置された供給管（胃瘻管（ｇａｓｔｒｏｓｔｏｍｙ  ｔｕｂｅ）、胃空腸瘻管（ｇａｓｔｒｏｊｅｊｕｎｏｓｔｏｍｙ  ｔｕｂｅ）、又は空腸供給管（ｊｅｊｕｎｏｓｔｏｍｙ  ｆｅｅｄｉｎｇ  ｔｕｂｅ）など）によって投与される場合がある。
【００８１】
組成物は、栄養組成物又は栄養補助食品の形態であってもよい。用語「栄養補助食品」とは、対象の普段の食生活を補助することを意図する製品を指す。
【００８２】
組成物は完全栄養製品の形態であってよい。用語「完全栄養製品」とは、対象に対する栄養の唯一の供給源とすることが可能な製品を指す。
【００８３】
様々な実施形態では、組成物は、飲料、マヨネーズ、サラダドレッシング、マーガリン、低脂肪スプレッド、乳製品、チーズスプレッド、プロセスチーズ、乳製品デザート、フレーバーミルク、クリーム、発酵乳製品、チーズ、バター、コンデンスミルク製品、アイスクリームミックス、大豆製品、低温殺菌液状卵、ベーカリー製品、菓子製品、菓子バー、チョコレートバー、高脂肪バー、液体エマルジョン、噴霧乾燥粉末、凍結乾燥粉末、ＵＨＴデザート、低温殺菌デザート、ゲル、ジェリー、ヨーグルト、又は脂肪ベースのフィリング若しくは含水フィリングを有する食品の形態であってもよい。
【００８４】
更に他の実施形態では、本発明の組成物は、食品をコーティングするために使用される場合がある。
【００８５】
組成物は、医薬組成物の形態であってもよく、１つ以上の好適な薬学的に許容される担体、希釈剤、及び／又は賦形剤を含んでもよい。
【００８６】
本明細書に記載される組成物に好適な、このような賦形剤の例は、「Ｈａｎｄｂｏｏｋ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｅｘｃｉｐｉｅｎｔｓ，２ｎｄ  Ｅｄｉｔｉｏｎ，（１９９４），（Ａ  Ｗａｄｅ  ａｎｄ  ＰＪ  Ｗｅｌｌｅｒ編）に見出すことができる。
【００８７】
治療使用に許容可能な担体又は希釈剤は、医薬分野において公知であり、例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏ．（Ａ．Ｒ．Ｇｅｎｎａｒｏ編、１９８５）に記載されている。
【００８８】
好適な担体の例としては、ラクトース、デンプン、グルコース、メチルセルロース、ステアリン酸マグネシウム、マンニトール、ソルビトールなどが挙げられる。好適な希釈剤の例としては、エタノール、グリセロール、及び水が挙げられる。
【００８９】
医薬担体、賦形剤又は希釈剤の選定にあたっては、意図した投与経路及び標準的な薬局業務に関連して選択することができる。医薬組成物は、担体、賦形剤、又は希釈剤として、又はそれに加え、任意の好適な結合剤（複数可）、潤滑剤（複数可）、懸濁化剤（複数可）、コーティング剤（複数可）、及び／又は可溶化剤（複数可）を含んでもよい。
【００９０】
好適な結合剤の例としては、デンプン、ゼラチン、グルコース、無水ラクトース、流動性ラクトース、β−ラクトースなどの天然糖類、コーン甘味料類、アカシア、トラガカントなどの天然及び合成ガム類、又はアルギン酸ナトリウム、カルボキシメチルセルロース、及びポリエチレングリコールが挙げられる。
【００９１】
好適な潤滑剤の例としては、オレイン酸ナトリウム、ステアリン酸ナトリウム、ステアリン酸マグネシウム、安息香酸ナトリウム、酢酸ナトリウム、塩化ナトリウムなどが挙げられる。
【００９２】
複数の防腐剤、複数の安定剤、複数の染料、及び更には複数の香味剤を、組成物中に提供してもよい。複数の防腐剤の例としては、安息香酸ナトリウム、ソルビン酸、及びｐ−ヒドロキシ安息香酸のエステルが挙げられる。複数の酸化防止剤及び複数の懸濁剤もまた、使用されてもよい。
【００９３】
栄養学的に許容可能な担体、希釈剤、及び賦形剤としては、ヒト又は動物による摂取に好適な、食品産業で標準として使用されているものが挙げられる。典型的な栄養学的に許容可能な担体、希釈剤、及び賦形剤は、当業者によく知られている。
【００９４】
ＡＭＰＡ受容体
ＡＭＰＡ受容体は、脳における高速興奮伝達の過半数を媒介する、グルタミン酸依存性カチオンチャネルである。これらは、４つの別個のサブユニット（ＧｌｕＡ１〜４）の組み合わせから構成される、リガンド依存性イオンチャネルである。最も多くのＡＭＰＡ受容体は、ヘテロダイマーであり、ＧｌｕＲ２と、ＧｌｕＲ１、ＧｌｕＲ３、又はＧｌｕＲ４のいずれかとの、対称「ダイマーのダイマー（ｄｉｍｅｒ  ｏｆ  ｄｉｍｅｒｓ）」からなる。ＡＭＰＡ受容体は、構成的及び活性化依存性の移行を経てシナプスを再循環させ、シナプスから除去される、高移動性のタンパク質である（Ｈｅｎｌｅｙ  ｅｔ  ａｌ．，Ｔｒｅｎｄｓ  Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．２０１１；３４：２５８〜２６８；Ａｎｇｇｏｎｏ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｕｒｒ  Ｏｐｉｎ  Ｎｅｕｒｏｂｉｏｌ．２０１２；２２：４６１〜４６９）。全てのサブユニットは、互いに共通の、及びＮＭＤＡＲ及びカイニン酸受容体サブユニットと共通の、膜トポロジーを共有する。
【００９５】
各ＡＭＰＡ受容体には、作動薬（グルタメートなど）が各サブユニットに１つずつ結合することができる、４つの部位がある。結合部位は、Ｎ末端尾部、及び膜貫通ドメイン３と４との間の細胞外ループによって形成されると考えられる。作動薬が結合すると、これらの２つのループは互いに向かって移動し、細孔を開く。チャネルは、２つの部位が占有されるときに開き、より多くの結合部位が占有されるにつれて、その電流が増加する。開くと、チャネルは急速な脱感作を経て、電流を停止することができる。ＡＭＰＡ受容体は素早く（１ｍｓで）開閉して、それにより、中枢神経系における高速興奮性シナプス伝達の大部分を担う。
【００９６】
ＡＭＰＡ受容体の阻害薬により、興奮性シナプス後電流（ＥＰＳＣ）が低減する。デカン酸によりこのような電流は減少すること、及びデカン酸はＡＭＰＡ受容体の阻害薬であることが、示されている（Ｃｈａｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｒａｉｎ．２０１６  Ｆｅｂ；１３９（２）：４３１〜４４３）。
【００９７】
本明細書で言及される組成物の、ＡＭＰＡ受容体を最適に阻害する能力により、組成物は、ＡＭＰＡ受容体を阻害するために、この阻害を必要とする対象に使用することができる。好ましくは、この対象は、てんかんに罹患している。
【００９８】
治療
本明細書で使用するとき、用語「治療」とは、病状に関係する少なくとも１つの症状を防止する、和らげる、低減する、若しくは改善させるために、及び／又は病状の進行を遅らせる、低下させる、若しくは阻止するために、本明細書に記載のような組成物を、病状を有する対象に投与することを意味する。
【００９９】
「防止する」とは、病状に関係する少なくとも１つの症状の発症を低減又は防止するために、本明細書に記載のような組成物を、病状の症状を全く示していない対象に投与することを意味する。
【０１００】
てんかん
てんかんは、脳において神経細胞活性が破壊され、発作、又は異常な行動、感覚、及び時には意識喪失の期間を引き起こす、神経性疾患である。
【０１０１】
ＡＭＰＡ受容体は、てんかん発作の発生及び拡大に重要な役割を果たす（Ｒｏｇａｗｓｋｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ａｃｔａ  Ｎｅｕｒｏｌｍａｒｕ  Ｓｃａｎｄ．Ｓｕｐｐｌ．１２７（１９７）：９〜１８）。受容体は、大脳皮質、扁桃体、視床、及び海馬をはじめとする、てんかんに関与する全ての領域に存在する。更に、ＡＭＰＡ受容体拮抗薬は、様々なｉｎ  ｖｉｔｒｏ及びｉｎ  ｖｉｖｏでのてんかんモデルにおける、広範囲の抗けいれん活性を有する（（Ｒｏｇａｗｓｋｉ．，Ｅｐｉｌｅｐｓｙ  Ｃｕｒｒ  ２０１１；１１：５６〜６３）。非競合的なＡＭＰＡ受容体拮抗薬ペランパネル（Ｆｙｃｏｍｐａ）は、部分的発症発作（ｐａｒｔｉａｌ−ｏｎｓｅｔ  ｓｅｉｚｕｒｅ）及び主要な強直性発作（ｔｏｎｉｃ−ｃｌｏｎｉｃ  ｓｅｉｚｕｒｅ）の補助的治療について承認されている。他のＡＭＰＡ受容体拮抗薬としては、ＮＢＱＸ（２，３−ジヒドロキシ−６−ニトロ−７−スルファモイル−ベンゾ［ｆ］キノキサリン−２，３−ジオン）が挙げられる。
【０１０２】
本明細書で言及される組成物の、ＡＭＰＡ受容体を最適に阻害する能力により、組成物は、てんかんを治療するために、使用することができる。
【０１０３】
筋萎縮性側索硬化症
ルーゲーリック病及び運動ニューロン疾患（ＭＮＤ）としても知られる筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）は、最も一般的な成人発症運動ニューロン疾患であり、上部及び下部運動ニューロンの両方の進行性損失によって特徴付けられ、身体全体にわたって筋力低下及び萎縮をもたらす。ＡＬＳは、遺伝的である場合もあり、散発性である場合もある。典型的には、ＡＬＳの患者は、疾患発症後数年以内に、進行性呼吸筋麻痺により亡くなる。興奮毒性、すなわち、ニューロンがＡＭＰＡ受容体の過剰活性によって損傷及び死滅する病理学的プロセスは、ＡＬＳ病因の根底にあると提唱されている。経口投与されるペランパネル、すなわち、選択的で非競合的なＡＭＰＡ受容体拮抗薬により、ＡＬＳのマウスモデルにおけるＡＬＳ表現型の進行が防止された（Ａｋａｍａｔｓｕ  ｅｔ  ａｌ．，Ｓｃｉ．Ｒｅｐ（２０１７）６：２８６４９）。
【０１０４】
虚血
虚血は、酸素及びグルコース供給の有害な不足、例えば低酸素症及び低血糖症に付随する、組織への血流の制限である。虚血の際、ＡＭＰＡ受容体のＣａ２＋透過性は増加する場合があり、興奮毒性及び関連する神経細胞死につながる場合がある。Ｃａ２＋透過性のＡＭＰＡ受容体は、ＣＡ１錐体神経細胞において高度に発現することが示されており、海馬の領域は、虚血イベントに続く細胞死に対して、他の海馬領域よりも脆弱である。ＮＢＱＸなどのＡＭＰＡ受容体拮抗薬は、虚血の動物モデルにおける神経細胞の損失を防止するのに有益であることが実証されている（Ｃｈａｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，（２０１２）Ｅｕｒｏｐｅａｎ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｎｅｕｒｏｓｃｉｅｎｃｅ，３５，１９０８〜１９１６）。
【０１０５】
癌
ヒト神経膠芽腫細胞により、増加したレベルのＡＭＰＡ受容体が発現することを実証する検討によって、ＭＣＴのケトン食と、ＡＭＰＡ受容体及び癌治療との関係性が確認されており（Ｃｈｏｉ，Ｊ．，ｅｔ  ａｌ．，Ｇｌｉｏｂｌａｓｔｏｍａ  ｃｅｌｌｓ  ｉｎｄｕｓｅ  ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｌ  ｇｌｕｔａｍａｔｅｒｇｉｃ  ｇｅｎｅ  ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｓ  ｉｎ  ｈｕｍａｎ  ｔｕｍｏｒ−ａｓｓｏｓｈｉａｔｅｄ  ｍｉｃｒｏｇｌｉａ／ｍａｃｒｏｐｈａｇｅｓ  ａｎｄ  ｍｏｎｏｃｙｔｅ−ｄｅｒｉｖｅｄ  ｍａｃｒｏｐｈａｇｅｓ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｂｉｏｌ  Ｔｈｅｒ，２０１５．１６（８）：ｐ．１２０５〜１３）、ＡＭＰＡ受容体の阻害により、神経膠芽腫細胞（ＧＢＭ）の遊走及び増殖が抑制され（Ｉｓｈｉｕｃｈｉ，Ｓ．，ｅｔ  ａｌ．，Ｃａ２＋−ｐｅｒｍｅａｂｌｅ  ＡＭＰＡ  ｒｅｃｅｐｔｏｒｓ  ｒｅｇｗａｔｅ  ｇｒｏｗｔｈ  ｏｆ  ｈｕｍａｎ  ｇｌｉｏｂｌａｓｔｏｍａ  ｖｉａ  Ａｋｔ  ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ．Ｊ  Ｎｅｕｒｏｓｃｉ，２００７．２７（３０）：ｐ．７９８７〜８０００，Ｉｓｈｉｕｃｈｉ，Ｓ．，ｅｔ  ａｌ．，Ｂｌｏｃｋａｇｅ  ｏｆ  Ｃａ（２＋）−ｐｅｒｍｅａｂｌｅ  ＡＭＰＡ  ｒｅｃｅｐｔｏｒｓ  ｓｕｐｐｒｅｓｓｅｓ  ｍｉｇｒａｔｉｏｎ  ａｎｄ  ｉｎｄｕｃｅｓ  ａｐｏｐｔｏｓｉｓ  ｉｎ  ｈｕｍａｎ  ｇｌｉｏｂｌａｓｔｏｍａ  ｃｅｌｌｓ．Ｎａｔ  Ｍｅｄ，２００２．８（９）：ｐ．９７１〜８，Ｙｏｓｈｉｄａ，Ｙ．，ｅｔ  ａｌ．，Ｓｅｒｕｍ−ｄｅｐｅｎｄｅｎｃｅ  ｏｆ  ＡＭＰＡ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ−ｍｅｄｉａｔｅｄ  ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ  ｉｎ  ｇｌｉｏｍａ  ｃｅｌｌｓ．Ｐａｔｈｏｌ  Ｉｎｔ，２００６．５６（５）：ｐ．２６２〜７１．）、並びに他の癌細胞の遊走及び増殖が抑制される（ｖｏｎ  Ｒｏｅｍｅｌｉｎｇ，Ｃ．Ａ．，ｅｔ  ａｌ．，Ｎｅｕｒｏｎａｌ  ｐｅｎｔｒａｘｉｎ  ２  ｓｕｐｐｏｒｔｓ  ｃｌｅａｒ  ｃｅｌｌ  ｒｅｎａｌ  ｃｅｌｌ  ｃａｃｉｎｏｍａ  ｂｙ  ａｃｔｉｖａｔｉｎｇ  ｔｈｅ  ＡＭＰＡ−ｓｅｌｅｃｔｉｖｅ  ｇｌｕｔａｍａｔｅ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ−４．Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ，２０１４．７４（１７）：ｐ．４７９６〜８１０）。更に、近年認可されたＡＭＰＡ受容体特異的阻害薬、ペランパネルは、ＧＢＭ治療の単一事例の検討において、場合により化学療法に活性なアジュバントであることが示されている（Ｒｏｓｃｈｅ，Ｊ．，ｅｔ  ａｌ．，［Ｐｅｒａｍｐａｎｅｌ  ｉｎ  ｔｈｅ  ｔｒｅａｔｍｅｎｔ  ｏｆ  ａ  ｐａｔｉｅｎｔ  ｗｉｔｈ  ｇｌｉｏｂｌａｓｔｏｍａ  ｍｕｌｔｉｆｏｒｍｅ  ｗｉｔｈｏｕｔ  ＩＤＨ１  ｍｕｔａｔｉｏｎ  ａｎｄ  ｗｉｔｈｏｕｔ  ＭＧＭＴ  ｐｒｏｍｏｔｏｒ  ｍｅｔｈｙｌａｔｉｏｎ］．Ｆｏｒｔｓｃｈｒ  Ｎｅｕｒｏｌ  Ｐｓｙｃｈｉａｔｒ，２０１５．８３（５）：ｐ．２８６〜９．）。したがって、これらの検討により、デカン酸によるＡＭＰＡ受容体阻害には、補助的癌治療を提供する潜在力があることが、示唆される。
【０１０６】
アルツハイマー病
アミロイドβ（Ａβ）によりＡＭＰＡ受容体電流が増加し、サブユニットの内在化を誘発するという強い証拠が存在し、アルツハイマー病においてグルタミン酸受容体の過剰活性（ｈｙｐｅｒａｃｔｉｖｉｔｙ）を神経毒性及び記憶喪失と直接関係付ける理論が存在する。Ａβにより、ＡＭＰＡ型グルタミン酸受容体をはじめとする様々な受容体の、遺伝子発現及び活性をｃＡＭＰ／ＰＫＡシグナル伝達カスケードにより制限するβアドレナリン受容体が、妨害されることが、示されている（Ｗａｎｇ，Ｄ．，ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｎｄｉｎｇ  ｏｆ  ａｍｙｌｏｉｄ  ｂｅｔａ  ｐｅｐｔｉｄｅ  ｔｏ  ｂｅｔａ２  ａｄｒｅｎｅｒｇｉｃ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ｉｎｄｕｃｅｓ  ＰＫＡ−ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ  ＡＭＰＡ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ｈｙｐｅｒａｃｔｉｖｉｔｙ．ＦＡＳＥＢ  Ｊ，２０１０．２４（９）：ｐ．３５１１〜２１，Ｗｉｓｅｌｙ，Ｅ．Ｖ．Ｙ．Ｋ．Ｘｉａｎｇ，ａｎｄ  Ｓ．Ｏｄｄｏ，Ｇｅｎｅｔｉｃ  ｓｕｐｐｒｅｓｓｉｏｎ  ｏｆ  ｂｅｔａ２−ａｄｒｅｎｅｒｇｉｃ  ｒｅｓｅｐｔｏｒｓ  ａｍｅｌｉｏｒａｔｅｓ  ｔａｕ  ｐａｔｈｏｌｏｇｙ  ｉｎ  ａ  ｍｏｕｓｅ  ｍｏｄｅｌ  ｏｆ  ｔａｕｏｐａｔｈｉｅｓ．Ｈｕｍ  Ｍｏｌ  Ｇｅｎｅｔ，２０１４．２３（１５）：ｐ．４０２４〜３４）。ＰＫＡによるＡＭＰＡ受容体ＧｌｕＡ１サブユニットのリン酸化によって、チャネル開口確率が増加し、細胞へのカルシウム流入は増加する結果となることが示されている（Ｂａｎｋｅ，Ｔ．Ｇ．，ｅｔ  ａｌ．，Ｃｏｎｔｒｏｌ  ｏｆ  ＧｌｕＲ１  ＡＭＰＡ  ｒｅｓｅｐｔｏｒ  ｆｕｎｃｔｉｏｎ  ｂｙ  ｃＡＭＰ−ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ  ｐｒｏｔｅｉｎ  ｋｉｎａｓｅ．Ｊ  Ｎｅｕｒｏｓｃｉ，２０００．２０（１）：ｐ．８９〜１０２）。実際、多数の検討により、Ａβを神経培養物に添加すると、カルシウム依存性ＡＭＰＡ受容体生成電流が強くなることによって、神経毒性が引き起こされることが示されている（Ｗｈｉｔｃｏｍｂ，Ｄ．Ｊ．ｅｔ  ａｌ．，Ｉｎｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒ  ｏｌｉｇｏｍｅｒｉｃ  ａｍｙｌｏｉｄ−ｂｅｔａ  ｒａｐｉｄｌｙ  ｒｅｇｕｌａｔｅｓ  ＧｌｕＡ１  ｓｕｂｕｎｉｔ  ｏｆ  ＡＭＰＡ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ｉｎ  ｔｈｅ  ｈｉｐｐｏｃａｍｐｕｓ．Ｓｃｉ  Ｒｅｐ，２０１５．５：ｐ．１０９３４）。これにより、Ａβ誘発興奮毒性は、アルツハイマー病における広範な神経細胞死に寄与し得ることが、示唆されている。したがって、耐糖性ニューロンにエネルギーをもたらすケトンに加えて、ＭＣＴケトン食により、デカン酸によるＡＭＰＡ受容体の阻害を通してニューロンの生存を改善することができる。加えて、Ａβ治療により、ＧｌｕＡ２サブユニット、すなわち、カルシウム不透過性をもたらすＡＭＰＡ受容体サブユニット型のみの内在化が誘発されるという証拠が存在する。したがって、ＧｌｕＡ２の内在化により、シナプス後の総カルシウム流入が更に増加する場合があり、これによって、炎症及び神経毒性は更に増大する場合があり（Ｂｅｐｐｕ，Ｋ．，ｅｔ  ａｌ．，Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ，ｓｕｂｕｎｉｔ  ｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎ，ａｎｄ  ｆｕｎｃｔｉｏｎ  ｏｆ  ＡＭＰＡ−ｔｙｐｅ  ｇｌｕｔａｍａｔｅ  ｒｅｃｅｐｔｏｒｓ  ａｒｅ  ｃｈａｎｇｅｄ  ｉｎ  ａｃｔｉ��ａｔｅｄ  ｍｉｃｒｏｇｌｉａ；ｐｏｓｓｉｂｌｅ  ｃｏｎｔｒｉｂｕｔｉｏｎ  ｏｆ  ＧｌｕＡ２（ＧｌｕＲ−Ｂ）−ｄｅｆｉｃｉｅｎｃｙ  ｕｎｄｅｒ  ｐａｔｈｏｌｏｇｉｃａｌ  ｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓ．Ｇｌｉａ，２０１３．６１（６）：ｐ．８８１〜９１，Ｎｏｄａ，Ｍ．，Ｄｙｓｆｕｎｃｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｇｌｕｔａｍａｔｅ  Ｒｅｃｅｐｔｏｒｓ  ｉｎ  Ｍｉｃｒｏｇｌｉａ  Ｍａｙ  Ｃａｕｓｅ  Ｎｅｕｒｏｄｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ．ｃｕｒｒ  Ａｌｚｈｅｉｍｅｒ  Ｒｅｓ，２０１６．１３（４）：ｐ．３８１〜６）、これにより、アルツハイマー病の治療におけるＡＭＰＡ受容体拮抗薬の役割が示唆されている。
【０１０７】
投与
本明細書に記載の組成物は、経腸投与されても、非経口投与されてもよい。
【０１０８】
好ましくは、組成物は、経腸投与される。例えば、組成物は、食料品又は栄養補助食品の形態で投与されてもよい。
【０１０９】
経腸投与は、経口、胃から、及び／又は直腸からであってもよい。
【０１１０】
一般論として、本明細書に記載の組成物の投与は、例えば、経口経路又は別の経路により胃腸管に投与するというものであってよく、例えば、投与は経管栄養法によるものであってもよい。
【０１１１】
対象は、ヒト、イヌ、ネコ、ウマ、ヤギ、ウシ、ヒツジ、ブタ、シカ、及び霊長類などの哺乳動物であってもよい。好ましくは、対象は、ヒトである。
【実施例】
【０１１２】
本発明の実施には、別途記載しない限り、化学、分子生物学、微生物学、組換えＤＮＡ及び免疫学の従来技術を用いており、これらの技術は当業者の能力の範囲内である。かかる技術は文献で説明されている。例えば、Ｊ．Ｓａｍｂｒｏｏｋ，Ｅ．Ｆ．Ｆｒｉｔｓｃｈ，ａｎｄ  Ｔ．Ｍａｎｉａｔｉｓ，１９８９，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，Ｓｅｃｏｎｄ  Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｂｏｏｋｓ  １〜３，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ；Ａｕｓｕｂｅｌ，Ｆ．Ｍ．ｅｔ  ａｌ．（１９９５  ａｎｄ  ｐｅｒｉｏｄｉｃ  ｓｕｐｐｌｅｍｅｎｔｓ；Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，ｃｈ．９，１３，ａｎｄ  １６，Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，Ｎ．Ｙ．）；Ｂ．Ｒｏｅ，Ｊ．Ｃｒａｂｔｒｅｅ，ａｎｄ  Ａ．Ｋａｈｎ，１９９６，ＤＮＡ  Ｉｓｏｌａｔｉｏｎ  ａｎｄ  Ｓｅｑｕｅｎｃｉｎｇ：Ｅｓｓｅｎｔｉａｌ  Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ，Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ；Ｊ．Ｍ．Ｐｏｌａｋ  ａｎｄ  Ｊａｍｅｓ  Ｏ’Ｄ．ＭｃＧｅｅ，１９９０，Ｉｎ  Ｓｉｔｕ  Ｈｙｂｒｉｄｉｚａｔｉｏｎ：Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ；Ｏｘｆｏｒｄ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  Ｐｒｅｓｓ；Ｍ．Ｊ．Ｇａｉｔ（Ｅｄｉｔｏｒ），１９８４，Ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ：Ａ  Ｐｒａｃｔｉｃａｌ  Ａｐｐｒｏａｃｈ，Ｉｒｌ  Ｐｒｅｓｓ；Ｄ．Ｍ．Ｊ．Ｌｉｌｌｅｙ  ａｎｄ  Ｊ．Ｅ．Ｄａｈｌｂｅｒｇ，１９９２，Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｏｆ  Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ：ＤＮＡ  Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ  Ｐａｒｔ  Ａ：Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ  ａｎｄ  Ｐｈｙｓｉｃａｌ  Ａｎａｌｙｓｉｓ  ｏｆ  ＤＮＡ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ，Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ；及びＥ．Ｍ．Ｓｈｅｖａｃｈ  ａｎｄ  Ｗ．Ｓｔｒｏｂｅｒ，１９９２  ａｎｄ  ｐｅｒｉｏｄｉｃ  ｓｕｐｐｌｅｍｅｎｔｓ，Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，ＮＹ．を参照されたい。これらの一般的なテキストの各々は、本明細書に参照により組み込まれる。
【０１１３】
実施例１−デカン酸：オクタン酸比による治療の、卵母細胞からの電気生理学的記録に対する効果
方法
ＡＭＰＡ受容体サブユニットの、ｉｎ  ｖｉｔｒｏでのＲＮＡ転写
ＳＰ６ポリメラーゼ発現ベクター（ｐＳＰ６Ｔ）に挿入されたＡＭＰＡ受容体（フリップアイソフォーム）ｃＤＮＡは、Ｐｒｏｆ  Ｒａｌｆ  Ｓｃｈｏｅｐｆｅｒ（ＮＰＰ、ＵＣＬ）からの寄贈品であった。ＳＰ６  Ｐｒｏｍｅｇａ  ＲｉｂｏＭａｘ  ＲＮＡ合成キット（Ｍａｄｉｓｏｎ、ＷＩ）を製造業者のプロトコルによって使用して、ただし、０．７５ｍＭのキャッピングヌクレオチドｍ７Ｇ（５’）ｐｐｍ（５’）Ｇ（Ｐｒｏｍｅｇａ、Ｍａｄｉｓｏｎ、ＷＩ）及び１．６ｍＭのＧＴＰを添加して、Ｍｌｕ  Ｉ線形化転写物（ｌｉｎｅａｒｉｓｅｄ  ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔ）から、ＲＮＡを、ｉｎ  ｖｉｔｒｏで転写した。ｃＲＮＡの濃度及び完全性（ｉｎｔｅｇｒｉｔｙ）を、ＲＮＡ変性ゲルにおける蛍光バンドの強度によって算出した。ＡＭＰＡ受容体ｃＲＮＡを、見掛け上１：１の比で混合し、卵母細胞当たり約５ｎｇを注入した。
【０１１４】
卵母細胞の調製及び注入
アフリカツメガエル（Ｘｅｎｏｐｕｓ  ｌａｅｖｉｓ）の卵母細胞は、Ｅｕｒｏｐｅａｎ  Ｘｅｎｏｐｕｓ  Ｒｅｓｏｕｒｃｅ  Ｃｅｎｔｒｅ，Ｕｎｉｖｅｒｓｈｉｔｙ  ｏｆ  Ｐｏｒｔｓｍｏｕｔｈから購入した。ステージＶ〜ステージＶＩの卵母細胞を、機械的に切除し、次いで、変性Ｂａｒｔｈ溶液（ｍＭ単位）：８８ｍＭのＮａＣｌ、１ｍＭのＫＣｌ、２．４ｍＭのＮａＨＣＯ３、０．８２ｍＭのＭｇＣｌ２、０．７７ｍＭのＣａＣｌ２と、約３０〜５０分間、室温で軽く振盪した。Ｔｒｉｓ−Ｃｌ  １５を、ＮａＯＨ（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ、ＵＫ）でｐＨ７．４まで調整し、５０ＩＵ／ｍＬのペニシリンと５０μｇ／ｍＬのストレプトマイシン（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、ＵＫ）と５０μｇ／ｍＬのテトラサイクリン（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ、ＵＫ）と１％のコラゲナーゼ（タイプ１Ａ）とで補給した。健常な卵母細胞を手作業で濾胞除去し（ｄｅｆｏｌｌｉｃｕｌａｔｅ）、ホモマーサブユニット（ＧｌｕＡ１）のみに対するｃＲＮＡの注入、又は２つのサブユニット（ＧｌｕＡ２／ＧｌｕＡ３）が一緒になったヘテロマー混合物に対するｃＲＮＡの注入を、自動Ｄｒｕｍｍｏｎｄ  Ｎａｎｏｉｎｊｅｃｔ  ＩＩ注入器（Ｂｒｏｏｍａｌｌ、ＰＡ）を使用して行った。次いで、卵母細胞を、電気生理学的記録における使用の少なくとも４８時間前に、変性Ｂａｒｔｈ溶液中にて１７℃でインキュベートした。
【０１１５】
卵母細胞からの電気生理学的記録
実験を、室温（約２１〜２３℃）で行った。卵母細胞を記録チャンバ（０．３〜０．５ｍＬの体積）に入れ、ＮＤ９６溶液（９６ｍＭのＮａＣｌ、２ｍＭのＫＣｌ、１．８ｍＭのＣａＣｌ２、１ｍＭのＭｇＣｌ２、５ｍＭのＨＥＰＥＳ、ｐＨ７．５まで調整済）で灌流した。電流及び電圧電極は、３００ｍＭのＫＣｌで充填され、薄肉ホウケイ酸ガラス（ＧＣ１５０ＴＦ−７．５、Ｈａｒｖａｒｄ  Ａｐｐａｒａｎｔｕｓ（Ｋｅｎｔ、ＵＫ））からＰＣ−１０電極プーラー（ナリシゲ）を使用して作製したものであり、抵抗は０．５〜２ＭΩであった。Ｔｕｒｂｏ  ＴＥＣ−０３増幅器（ｎｐｉ  ｅｌｅｃｔｒｏｎｉｃ（Ｔａｍｉｎ、Ｇｅｒｍａｎｙ））を使用して、卵母細胞を、５０ｍＶまで又は６０ｍＶまでの保持電位に電圧固定した。化合物を蒸留水又はＤＭＳＯに溶解して、浴にする溶液（ｂａｔｈｉｎｇ  ｓｏｌｕｔｉｏｎ）に溶解し、それらの最終濃度を実験中に得て、多弁灌流システム（ＶＣ３−８Ｃ，ＡＬＡ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ（Ｆａｒｍｉｎｇｄａｌｅ、ＮＹ））を使用することによって、実験中に自然流下（ｇｒａｖｉｔｙ  ｆｌｏｗ）で適用した。浴の溶液を、１０ｍＬ／分の速度で灌流した。記録を２０Ｈｚでフィルタリングし、１００Ｈｚでデジタル化（Ｄｉｇｉｄａｔａ  １３２２Ａ，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｄｅｖｉｃｅｓ（Ｓｕｎｎｙｖａｌｅ、ＣＡ）した後、コンピュータのハードディスクに記録した。Ｗｉｎｄｏｗｓ  ＰＣベースのプログラムである、ＷｉｎＥＤＲ  ｖ３．０．６（Ｊｏｈｎ  Ｄｅｍｐｓｔｅｒ、Ｕｎｉｖｅｒｓｈｉｔｙ  ｏｆ  Ｓｔｒａｔｈｃｌｙｄｅ（ＵＫ））を使用して、データ取得を行った。
【０１１６】
結果
本発明者らは、デカン酸には急性的抗発作効果があること、及びデカン酸のＡＭＰＡ受容体拮抗作用はその抗発作効果を説明するのに十分なものであることを、以前に示した（Ｃｈａｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎｅｕｒｏｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ  ２０１３；６９：１０５〜１１４）；Ｗｌａｚ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｇｒｅｓｓ  ｉｎ  Ｎｅｕｒｏｐｓｙｃｈｏｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ  ＆  Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｐｓｙｃｈｉａｔｒｙ  ２０１４）。
【０１１７】
本発明者らの以前の検討により、デカン酸を、ＡＭＰＡ受容体活性の直接阻害薬として確認した（ＧｌｕＡ  ２／３；ＩＣ５０＝０．５２±０．０２ｍＭ、ｎ＝１２）。オクタン酸の効果は、同様であるがあまり強力ではなかった（ＧｌｕＡ  ２／３；ＩＣ５０＝３．８２±０．０３ｍＭ、ｎ＝１０）。本発明者らは、末梢血中のデカン酸の濃度が８７〜５５２μＭまでの前後、平均１５７μＭであり、オクタン酸では１０４〜８５９μＭ前後、平均３０６μＭ前後であることから、この阻害は発作制御につながる可能性が高いことを実証した。更に、動物モデルにおける血漿中のデカン酸の、脳に対する比は約０．７であることにより、デカン酸は、ＡＭＰＡ受容体阻害を生じさせる濃度で脳内に存在する可能性が高いことが、示唆される。興味深いことに、これらの実験におけるオクタン酸は、ＡＭＰＡ受容体阻害による発作制御に直接影響を及ぼす可能性が低い。
【０１１８】
したがって、本発明者らは、ＭＣＴの関連する食餌に提供されるおよその投与を再現するために、両方の脂肪酸の、ＡＭＰＡ受容体阻害に対する効果を、混合物として調査した。これらの実験で、本発明者らは、卵母細胞モデルにおいてＡＭＰＡ受容体（ＧｌｕＡ  ２／３）を発現し、デカン酸のオクタン酸に対する比として、０：１、３：７、４：６、５：５、６：４、７：３、８：２、９：１、及び１：０を使用して、１ｍＭの総中鎖脂肪酸含有量で、グルタミン酸投与後のＡＭＰＡ受容体電流の低下を比較した（図１）。これらの実験により、デカン酸のオクタン酸に対する比を増加させ、ＡＭＰＡ受容体の阻害が、最大８：２（デカン酸：オクタン酸）の比の阻害で、強化されたことを示した。この比（８：２）において、ＡＭＰＡ受容体阻害は、現在のＭＣＴ油において一般的に使用されている、４：６の比よりも有意に増大した。８：２を超える比（すなわち、９：１、及びデカン酸のみ（１：０））では、ＡＭＰＡ受容体阻害の増大は示されなかった。これらのデータにより、デカン酸とオクタン酸とを組み合わせることによる最大ＡＭＰＡ受容体阻害は、８：２の比でもたらされることが、示唆される。
【０１１９】
実施例２−神経細胞デカン酸酸化の、神経細胞デカン酸オクタン酸酸化との比較
方法
細胞培養
ＳＨ−ＳＹ５Ｙ細胞を、継代数の２０〜２４の間で全ての実験手順のために利用した。１７．５μＭのグルコースを含有し、１００ｍＬ／Ｌの加熱不活性化ウシ胎児血清（ＦＢＳ）及び１０ｍＬ／Ｌの２００ｍＭのグルタミンで補給した、１：１のダルベッコ変法イーグル培地（ＤＭＥＭ）／Ｆ１２培地で、細胞を培養した。全ての細胞を、３７℃及び５％のＣＯ２で、加湿雰囲気中に維持した。１０ｍＬ／フラスコのＭｇ２＋／Ｃａ２＋不含のダルベッコリン酸緩衝生理食塩水（ＤＰＢＳ）で洗浄して、２ｍＬの０．２５％のトリプシン−ＥＤＴＡで剥離し、８ｍＬの培養培地に懸濁することにより、細胞を継代培養して、トリプシンを不活性化した。細胞懸濁液を、ファルコンチューブに移し、５００×ｇで４分間遠心分離した。上清を除去し、細胞を、既知の体積の新たな培養培地に懸濁した。生存率についてのＴｒｙｐａｎ  Ｂｌｕｅ排除試験を使用して、細胞を計数した。既知の体積の細胞懸濁液を０．４％のＴｒｙｐａｎ  Ｂｌｕｅ溶液と１：１で混合し、Ｂｉｏ−Ｒａｄ  ＴＣ２０（登録商標）Ａｕｔｏｍａｔｅｄ  Ｃｅｌｌ  Ｃｏｕｎｔｅｒ（Ｈｅｍｅｌ  Ｈｅｍｐｓｔｅａｄ（ＵＫ））で計数した。次いで、細胞を、６ウェルプレートに１×１０４細胞／ｃｍ２の密度で播種し、新たな培地で最終体積２ｍＬの構成とし、全ての実験前に５日間培養した。同じ開始数の細胞を、各調査に使用した。培地を、２日ごとにリフレッシュした。
【０１２０】
グルコース、デカノエート、及びオクタノエートの、ＳＨ−ＳＹ５Ｙ細胞における酸化
全ての実験手順について、最終濃度で１５ｍＭのＨＥＰＥＳ、２．９ｍＭの重炭酸ナトリウム、２ｍＭのＬ−グルタミン、０．５ｍＭのピルビン酸ナトリウム、及び２１．５μＭのフェノールレッドを含有する、特に処方されたＤＭＥＭ培地を使用して実施した。１３４．３ｍＭの［Ｕ−１３Ｃ］グルコースの原液を、グルコースをＤＭＥＭ溶液に溶解することによって調製して、次いでアリコートに分けて−２０℃で凍結した。５０ｍＭの［１−１３Ｃ］デカン酸（［１−１３Ｃ］Ｃ１０）及び５０ｍＭの［１−１３Ｃ］Ｃ８の原液を、ＤＭＳＯ中で調製して、滅菌濾過し、次いでアリコートに分けて−２０℃で保存した。
【０１２１】
培養５日目に、完全増殖培地を取り出し、細胞をＤＰＢＳで１回洗浄した。次いで３７℃及び５％のＣＯ２で２０時間（ｈ）にわたって、細胞を、２ｍＬのＤＭＥＭ処方物でインキュベートし、１０％のＦＢＳ及び３ｍＭのＤ−グルコースで補給した。２０時間後、培地を取り出し、細胞をＤＰＢＳで１回洗浄した。次いで、各ウェルに、３ｍＭの［Ｕ−１３Ｃ］グルコース及びビヒクル対照ＤＭＳＯ又は３ｍＭのＤ−グルコースを含有する、３ｍＬのＤＭＥＭを、２５０μＭの［１−１３Ｃ］Ｃ１０若しくは２５０μＭの［１−１３Ｃ］Ｃ８のいずれかとともに添加した。次いで、培地と大気との間のガス交換を防止するため、及び１３ＣＯ２の損失を防止するために、ウェルを、３ｍＬの重質鉱油の層で封止した。細胞を３７℃で６時間インキュベートして、１００μＬの培地を各ウェルから１時間間隔でサンプリングした。サンプリングした培地を、ゴム封止Ｅｘｅｔａｉｎｅｒ（登録商標）バイアル（Ｌａｂｃｏ  Ｌｔｄ（Ｃｅｒｅｄｉｇｉｏｎ、ＵＫ））に直ちに保存し、分析まで−２０℃で維持した。
【０１２２】
Ｃ１０及びＣ８の共インキュベーション
また、Ｃ１０及びＣ８の共インキュベーションの、Ｃ１０のＳＨ−ＳＹ５Ｙ細胞における酸化に対する効果も探究した。２５ｍＭのＣ８及び１００ｍＭの［１−１３Ｃ］Ｃ１０の更なる原液を、ＤＭＳＯ中で調製して、滅菌濾過し、アリコートに分けて−２０℃で保存した。前述のように、３ｍＭのＤ−グルコースを含有する、１０％のＦＢＳを補給したＤＭＥＭ培地において、２０時間、細胞を培養しインキュベートした。次いで、培地を取り出し、細胞を洗浄した。次いで、３ｍＭの［Ｕ−１３Ｃ］グルコース及びビヒクル対照ＤＭＳＯ又は３ｍＭの非標識Ｄ−グルコースのいずれかを含有する、３ｍＬのＤＭＥＭで、培地を置き換えた。各Ｄ−グルコース補給ウェルにおいて、最終濃度で２５０μＭの［１−１３Ｃ］Ｃ１０、又は２５０μＭの［１−１３Ｃ］Ｃ１０に６２．５μＭのＣ８を足したもののいずれかで、総体積を固定して、細胞を処理した。次いで、ウェルを重質鉱油で封止し、細胞をインキュベートして、培地を前に概説したようにサンプリングした。
【０１２３】
［Ｕ−１３Ｃ］パルミチン酸の調製
［Ｕ−１３Ｃ］パルミチン酸を０．３５ＭのＮａＯＨで中和して、水中で１７．５ｍＭの濃度にした後、完全に溶解するまで、７０℃まで加熱した。次いで、脂肪酸不含ウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）を、水中にて３７℃で３．５ｍＭの濃度まで溶解した。そっと軽く回して、次に［Ｕ−１３Ｃ］パルミテート（［Ｕ−１３Ｃ］Ｃ１６）を、ＢＳＡに対して１：１として３７℃でゆっくりと添加し、８．７５ｍＭの［Ｕ−１３Ｃ］Ｃ１６：ＢＳＡ複合体を形成した（５：１のモル比の脂肪酸：ＢＳＡ）。また、水中で１．７５ｍＭのＢＳＡの更なる原液も調製した。両方の溶液をアリコートに分け、更なる使用まで−２０℃で保存した。
【０１２４】
ＣＰＴ１阻害アッセイ
５０ｍＭのエトモキシルの原液を、滅菌細胞培養グレードの水中で調製し、アリコートに分けて−２０℃で保存した。培養５日目に、３ｍＭのＤ−グルコース及び１０％のＦＢＳを含有する、２ｍＬのＤＭＥＭ処方物で、増殖培地を置き換えた。５０μＭのエトモキシルの存在下で、又はその存在なしで、細胞を、３７℃及び５％のＣＯ２で２０時間インキュベートした。次いで、培地を取り出し、３ｍＭの［Ｕ−１３Ｃ］グルコース及びビヒクル対照ＤＭＳＯ又は３ｍＭのＤ−グルコースを、２５０μＭの［１−１３Ｃ］Ｃ１０、［１−１３Ｃ］Ｃ８、又は［Ｕ−１３Ｃ］Ｃ１６：ＢＳＡのいずれかとともに含有する、３ｍＬのＤＭＥＭで、置き換え、また５０μＭのエトモキシルも、先立ってさらされた細胞に添加された。次いで、ウェルを重質鉱油で封止し、細胞をインキュベートして、培地を前述のようにサンプリングした。
【０１２５】
１３ＣＯ２放出の測定
サンプルを室温で解凍し、１００μＬの１Ｍの塩酸を、隔壁を通して各バイアルに注入して、培地からＣＯ２を放出した。バイアルを、５００×ｇで３０秒間遠心分離した。次いで、Ｔｈｅｒｍｏ  Ｄｅｌｔａ−ＸＰ同位体比質量分析計に連結されたＧａｓＢｅｎｃｈ  ＩＩで、サンプルを分析した。サンプル当たり１０回の繰り返し注入を行い、較正されたＣＯ２参照ガスを使用して、Ｖｉｅｎｎａ  Ｐｅｅ  Ｄｅｅ  Ｂｅｌｅｍｎｉｔｅ（ＶＰＤＢ）に対する、ｄ１３Ｃ／１２Ｃの比を、測定した。１３ＣＯ２／１２ＣＯ２の比を、ＶＰＤＢにおける１３Ｃの１２Ｃに対する絶対モル比（０．０１１１７９６）を使用して、モルパーセント過剰分に換算した。次いで、モルパーセント過剰分の変化を、培地の体積及び重炭酸塩の濃度（２．９ｍＭ）を使用して生成したナノモル（ｎｍｏｌ）のＣＯ２に換算し、次いで、標識された炭素原子の数（Ｃ８及びＣ１０については１、グルコースについては６、パルミテートについては１６）に関して較正して、酸化されたナノモルの基質を得た。
【０１２６】
細胞生存率
１０％のＦＢＳを補給したＤＭＥＭ培地において、５０μＭのエトモキシルで、細胞を、３７℃及び５％のＣＯ２で２０時間インキュベートして、次いで、ＦＢＳなしのＤＭＥＭ培地において、５０μＭのエトモキシルで、更に３７℃で６時間インキュベートした。次いで、細胞を、１ｍＬの０．２５％のトリプシン−ＥＤＴＡでウェルから剥離し、４ｍＬの培養培地に懸濁し、５００×ｇで４分間、遠心分離した。上清を除去し、細胞を、１ｍＬの新たな培養培地に懸濁した。次いで、Ｔｒｙｐａｎ  Ｂｌｕｅ排除試験を使用して、細胞の生存率を試験した。
【０１２７】
統計解析
データを平均±ＳＥＭとして表し、ｎの数は、実施される独立した実験の数を示す。２つの群間の統計解析を、スチューデントのｔ検定を使用して実施し、ｐ＜０．０５であれば統計的に有意とみなした。
【０１２８】
結果
グルコース、Ｃ８、及びＣ１０の、ＳＨＳＹ５Ｙ細胞における酸化速度
１３Ｃ標識化合物により、ピルビン酸デヒドロゲナーゼ活性及び／又はＴＣＡサイクルから発散するＣＯ２放出による、グルコース、Ｃ８、又はＣ１０の細胞酸化速度の測定が可能になる。６時間にわたっての１３ＣＯ２放出を使用して、各化合物の細胞酸化速度を決定及び定量化した。ＭＣＴ  ＫＤ下の患者において観察される生理学的濃度を再現するために、細胞を３ｍＭの１３Ｃ標識グルコースで処理した。ミトコンドリア及び抗酸化剤状態に対する最適な効果のために、１３Ｃ標識Ｃ１０及びＣ８を、本発明者らによって前に決定されたＣ１０の濃度である２５０μＭの最終濃度まで、別々に添加した。更に、これにより、末梢Ｃ１０投与後にもたらされる脳濃度が再現される（Ｈｕｇｈｅｓ  ｅｔ  ａｌ．２０１４；Ｗｌａｚ  ｅｔ  ａｌ．２０１５）。非標識の３ｍＭのグルコースを、１３Ｃ標識Ｃ１０及びＣ８の存在下で使用した。
【０１２９】
１３ＣＯ２放出は、検討した各分子について、６時間のインキュベーションにわたって直線的であった［図２ａ及び図２ｂ］。予想されたように、グルコース濃度の速度は、Ｃ８又はＣ１０のいずれかの速度よりも著しく速かった［図２ｃ］。しかし、Ｃ８及びＣ１０は、これらの細胞において区分されて酸化されることが見出され、Ｃ１０の酸化は、Ｃ８の酸化よりも約８０％、有意に低いことが判明した（図２ｃ）。これにより、Ｃ８はＳＨ−ＳＹ５Ｙ細胞において優先的に酸化され得ることが、示唆される。
【０１３０】
Ｃ８及びＣ１０の共インキュベーションの、酸化に対する効果
ここでのＭＣＴ  ＫＤ処方物は、Ｃ８及びＣ１０の混合物から構成される。これに照らして、本発明者らは、ＳＨ−ＳＹ５Ｙ細胞を６２．５μＭの非標識Ｃ８）で処理したときの、［１−１３Ｃ］Ｃ１０酸化に対する効果を試験した。比較的低い濃度にもかかわらず、Ｃ８添加により、Ｃ１０の酸化速度は２９％有意に損なわれることが判明した（図２ｄ、ｐ＜０．０５）。
【０１３１】
ＣＰＴ１阻害後のＣ１０酸化
Ｃ８及びＣ１０の区分された酸化の背後にある機構を決定するために、カルニチンシャトルの可能な役割を探究した。長鎖脂肪酸についてはこの系が必要とされるが、中鎖脂肪酸については、一般に、カルニチンから独立した様式でミトコンドリアマトリックスに入ることが可能であると考えられる。これはＣ８の場合であってもよいが、Ｃ８とは対照的にＣ１０については、完全なミトコンドリア酸化のためにカルニチン系が必要とされる場合があることを示唆する、報告がある。カルニチンパルミトイルトランスフェラーゼ−１（ＣＰＴ１）は、脂肪アシル基をカルニチンまで移動させるのに関与し、ミトコンドリア内のカルニチン依存性β−酸化における律速段階である。Ｃ８及びＣ１０酸化におけるＣＰＴ１の可能な役割を評価するために、良好に特徴付けられたＣＰＴ１不可逆的阻害薬である、エトモキシルを使用した。［Ｕ−１３Ｃ］パルミチン酸（Ｃ１６）は、ミトコンドリア酸化についてＣＰＴ１に依存することが公知である。［Ｕ−１３Ｃ］パルミチン酸を対照として使用することにより、ＣＰＴ１を阻害するために使用することができるエトモキシルの最大濃度を、細胞生存率に影響を及ぼすことなく決定することが可能になった。使用した条件では、［Ｕ−１３Ｃ］Ｃ１６の酸化はほぼ完全に阻害され、９９％低減され、これにより、ＣＰＴ１の完全な不可逆的阻害が示唆された［表１］。更に、エトモキシルは、使用されるＳＨ−ＳＹ５Ｙ細胞の生存率に影響を及ぼさないことが観察された（データは示さない）。同じ条件下で、Ｃ１０酸化は、エトモキシルの存在下で９５％低減されることが判明した［表１］が、他方、Ｃ８酸化は、３４％阻害されたのみであった。
【０１３２】
結論として、デカン酸及びオクタン酸は、神経様細胞によって区分されて代謝される。Ｃ１０のカルニチン依存性及び遅い代謝により、どのように臨界濃度が発生し得、重要な抗発作標的との相互作用が可能になるかの、説明が与えられる。対照的に、Ｃ８は、優先的に代謝され得るものであり、２つの重要な効果、すなわち、Ｃ１０酸化の阻害によりＣ１０を使わずにおく効果、及び脳エネルギー代謝のための燃料供給源として作用する効果がある。
【０１３３】
【表１】
2020518557.tif 000002
【図１】
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【図２】
2020518557.tif 000004
【国際調査報告】
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2020518557.tif 000006
2020518557.tif 000007