(57)【要約】  ＴＣＲ（例えば、ＮＹ−ＥＳＯ−１に結合するＴＣＲ）、これらのＴＣＲを含む細胞および薬学的組成物、これらのＴＣＲをコードする核酸、これらのＴＣＲを作製するための発現ベクターおよび宿主細胞、ならびにこれらのＴＣＲを使用して対象を治療する方法が提供される。
2020503883.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
配列番号１または２に記載のアミノ酸配列からなるペプチドに結合する単離されたＴ細胞受容体（ＴＣＲ）であって、前記ＴＣＲが、相補性決定領域ＣＤＲ３αを含むα鎖可変領域（Ｖα）を含み、前記ＣＤＲ３αが、配列番号６１、６２、６３、６４、または６５に記載のアミノ酸配列を含む、単離されたＴ細胞受容体。
【請求項２】
前記ＣＤＲ３αが、配列番号６４または６５に記載のアミノ酸配列を含む、請求項１に記載の単離されたＴＣＲ。
【請求項３】
前記ＣＤＲ３αが、配列番号７および３９〜６０からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む、請求項１または２に記載の単離されたＴＣＲ。
【請求項４】
前記ＣＤＲ３αが、配列番号７、３９、４０、４３、４５、４７、４９、および５４からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む、請求項１〜３のいずれか一項に記載の単離されたＴＣＲ。
【請求項５】
前記Ｖαが、それぞれ配列番号５および６に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１αおよびＣＤＲ２αを含む、請求項１〜４のいずれか一項に記載の単離されたＴＣＲ。
【請求項６】
前記Ｖαが、それぞれ配列番号５、６、および７；５、６、および３９；５、６、および４０；５、６、および４１；５、６、および４２；５、６、および４３；５、６、および４４；５、６、および４５；５、６、および４６；５、６、および４７；５、６、および４８；５、６、および４９；５、６、および５０；５、６、および５１；５、６、および５２；５、６、および５３；５、６、および５４；５、６、および５５；５、６、および５６；５、６、および５７；５、６、および５８；５、６、および５９；または５、６、および６０に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１α、ＣＤＲ２α、およびＣＤＲ３αを含む、請求項１〜５のいずれか一項に記載の単離されたＴＣＲ。
【請求項７】
前記Ｖαが、配列番号８７〜９１からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む、請求項１〜６のいずれか一項に記載の単離されたＴＣＲ。
【請求項８】
前記Ｖαが、配列番号３および６６〜８６からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む、請求項１〜７のいずれか一項に記載の単離されたＴＣＲ。
【請求項９】
前記Ｖαが、配列番号３、６６、６９、７１、７３、７５、および８０からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む、請求項１〜８のいずれか一項に記載の単離されたＴＣＲ。
【請求項１０】
配列番号１３、９３〜９６、１０５〜１１８、１２０〜１２３、１２５〜１２８、および４０８〜４１５からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むα鎖を含む、請求項１〜９のいずれか一項に記載の単離されたＴＣＲ。
【請求項１１】
配列番号１３、１０５、１１０、１１５、１２０、１２５、４０８、および４１２からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むα鎖を含む、請求項１〜１０のいずれか一項に記載の単離されたＴＣＲ。
【請求項１２】
前記ＴＣＲが、ＣＤＲ３βを含むβ鎖可変領域（Ｖβ）を含み、前記ＣＤＲ３βが、配列番号１０に記載のアミノ酸配列を含む、請求項１〜１１のいずれか一項に記載の単離されたＴＣＲ。
【請求項１３】
前記Ｖβが、それぞれ配列番号８および９に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１βおよびＣＤＲ２βを含む、請求項１２に記載の単離されたＴＣＲ。
【請求項１４】
前記Ｖβが、配列番号４に記載のアミノ酸配列を含む、請求項１２または１３に記載の単離されたＴＣＲ。
【請求項１５】
配列番号１４、２５、および９７〜１０４からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むβ鎖を含む、請求項１２〜１４のいずれか一項に記載の単離されたＴＣＲ。
【請求項１６】
配列番号１または２に記載のアミノ酸配列からなるペプチドに結合する単離されたＴ細胞受容体（ＴＣＲ）であって、前記ＴＣＲが、相補性決定領域ＣＤＲ３βを含むβ鎖可変領域（Ｖβ）を含み、前記ＣＤＲ３βが、配列番号１０に記載のアミノ酸配列を含む、単離されたＴ細胞受容体。
【請求項１７】
前記Ｖβが、それぞれ配列番号８および９に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１βおよびＣＤＲ２βを含む、請求項１６に記載の単離されたＴＣＲ。
【請求項１８】
前記Ｖβが、配列番号４に記載のアミノ酸配列を含む、請求項１６または１７に記載の単離されたＴＣＲ。
【請求項１９】
配列番号１４、２５、および９７〜１０４からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むβ鎖を含む、請求項１６〜１８のいずれか一項に記載の単離されたＴＣＲ。
【請求項２０】
配列番号１または２に記載のアミノ酸配列からなるペプチドに結合する単離されたＴ細胞受容体（ＴＣＲ）であって、前記ＴＣＲが、配列番号１８に記載のアミノ酸配列に対して少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９９％、または１００％同一であるアミノ酸配列を含むα鎖可変領域（Ｖα）を含む、単離されたＴ細胞受容体。
【請求項２１】
前記Ｖαが、配列番号１８に記載のアミノ酸配列を含む、請求項２０に記載の単離されたＴＣＲ。
【請求項２２】
前記ＴＣＲが、配列番号１９に記載のアミノ酸配列に対して少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９９％、または１００％同一であるアミノ酸配列を含むβ鎖可変領域（Ｖβ）を含む、請求項２０または２１に記載の単離されたＴＣＲ。
【請求項２３】
前記Ｖβが、配列番号１９に記載のアミノ酸配列を含む、請求項２２に記載の単離されたＴＣＲ。
【請求項２４】
配列番号１または２に記載のアミノ酸配列からなるペプチドに結合する単離されたＴ細胞受容体（ＴＣＲ）であって、前記ＴＣＲが、配列番号１９に記載のアミノ酸配列に対して少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９９％、または１００％同一であるアミノ酸配列を含むβ鎖可変領域（Ｖβ）を含む、単離されたＴ細胞受容体。
【請求項２５】
前記Ｖβが、配列番号１９に記載のアミノ酸配列を含む、請求項２４に記載の単離されたＴＣＲ。
【請求項２６】
前記ＴＣＲが、ＣＤＲ１α、ＣＤＲ２α、およびＣＤＲ３αを含むα鎖可変領域（Ｖα）と、ＣＤＲ１β、ＣＤＲ２β、およびＣＤＲ３βを含むβ鎖可変領域（Ｖβ）と、を含み、前記ＣＤＲ１α、ＣＤＲ２α、ＣＤＲ３α、ＣＤＲ１β、ＣＤＲ２β、およびＣＤＲ３βが、それぞれ配列番号５、６、７、８、９、および１０；５、６、３９、８、９、および１０；５、６、４０、８、９、および１０；５、６、４１、８、９、および１０；５、６、４２、８、９、および１０；５、６、４３、８、９、および１０；５、６、４４、８、９、および１０；５、６、４５、８、９、および１０；５、６、４６、８、９、および１０；５、６、４７、８、９、および１０；５、６、４８、８、９、および１０；５、６、４９、８、９、および１０；５、６、５０、８、９、および１０；５、６、５１、８、９、および１０；５、６、５２、８、９、および１０；５、６、５３、８、９、および１０；５、６、５４、８、９、および１０；５、６、５５、８、９、および１０；５、６、５６、８、９、および１０；５、６、５７、８、９、および１０；５、６、５８、８、９、および１０；５、６、５９、８、９、および１０；または５、６、６０、８、９、および１０に記載のアミノ酸配列を含む、請求項１〜２５のいずれか一項に記載の単離されたＴＣＲ。
【請求項２７】
相補性決定領域ＣＤＲ１α、ＣＤＲ２α、およびＣＤＲ３αを含むα鎖可変領域（Ｖα）と、ＣＤＲ１β、ＣＤＲ２β、およびＣＤＲ３βを含むβ鎖可変領域（Ｖβ）と、を含む、単離されたＴＣＲであって、前記ＣＤＲ１α、ＣＤＲ２α、ＣＤＲ３α、ＣＤＲ１β、ＣＤＲ２β、およびＣＤＲ３βが、それぞれ配列番号５、６、７、８、９、および１０；５、６、３９、８、９、および１０；５、６、４０、８、９、および１０；５、６、４１、８、９、および１０；５、６、４２、８、９、および１０；５、６、４３、８、９、および１０；５、６、４４、８、９、および１０；５、６、４５、８、９、および１０；５、６、４６、８、９、および１０；５、６、４７、８、９、および１０；５、６、４８、８、９、および１０；５、６、４９、８、９、および１０；５、６、５０、８、９、および１０；５、６、５１、８、９、および１０；５、６、５２、８、９、および１０；５、６、５３、８、９、および１０；５、６、５４、８、９、および１０；５、６、５５、８、９、および１０；５、６、５６、８、９、および１０；５、６、５７、８、９、および１０；５、６、５８、８、９、および１０；５、６、５９、８、９、および１０；または５、６、６０、８、９、および１０に記載のアミノ酸配列を含む、単離されたＴＣＲ。
【請求項２８】
前記ＶαおよびＶβが、それぞれ配列番号３および４、６６および４、６７および４、６８および４、６９および４、７０および４、７１および４、７２および４、７３および４、７４および４、７５および４、７６および４、７７および４、７８および４、７９および４、８０および４、８１および４、８２および４、８３および４、８４および４、８５および４、または８６および４に記載のアミノ酸配列を含む、請求項２７に記載の単離されたＴＣＲ。
【請求項２９】
前記ＴＣＲが、配列番号１５、２６、または９２に記載のアミノ酸配列を含むα鎖定常領域を含むα鎖を含む、請求項１〜９および１２〜２８のいずれか一項に記載の単離されたＴＣＲ。
【請求項３０】
前記ＴＣＲが、配列番号１６または１７に記載のアミノ酸配列を含むβ鎖定常領域を含むβ鎖を含む、請求項１〜１４、１６〜１８、および２０〜２９のいずれか一項に記載の単離されたＴＣＲ。
【請求項３１】
α鎖およびβ鎖を含む単離されたＴＣＲであって、前記α鎖が、配列番号１３、９３〜９６、１０５〜１１８、１２０〜１２３、１２５〜１２８、および４０８〜４１５からなる群から選択されるアミノ酸配列を含み、前記β鎖が、配列番号１４、２５、および９７〜１０４からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む、単離されたＴＣＲ。
【請求項３２】
前記α鎖が、配列番号１３、１０５、１１０、１１５、１２０、１２５、４０８、および４１２からなる群から選択されるアミノ酸配列を含み、前記β鎖が、配列番号１４、２５、および９７〜１０４からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む、請求項３１に記載の単離されたＴＣＲ。
【請求項３３】
前記α鎖および前記β鎖が、それぞれ配列番号１３および１４；１３および２５；１３および９７；１３および９８；１３および９９；１３および１００；１３および１０１；１３および１０２；１３および１０３；１３および１０４；９３および１４；９３および２５；９３および９７；９３および９８；９３および９９；９３および１００；９３および１０１；９３および１０２；９３および１０３；９３および１０４；９４および１４；９４および２５；９４および９７；９４および９８；９４および９９；９４および１００；９４および１０１；９４および１０２；９４および１０３；９４および１０４；９５および１４；９５および２５；９５および９７；９５および９８；９５および９９；９５および１００；９５および１０１；９５および１０２；９５および１０３；９５および１０４；９６および１４；９６および２５；９６および９７；９６および９８；９６および９９；９６および１００；９６および１０１；９６および１０２；９６および１０３；９６および１０４；１０５および１４；１０５および２５；１０５および９７；１０５および９８；１０５および９９；１０５および１００；１０５および１０１；１０５および１０２；１０５および１０３；１０５および１０４；１０６および１４；１０６および２５；１０６および９７；１０６および９８；１０６および９９；１０６および１００；１０６および１０１；１０６および１０２；１０６および１０３；１０６および１０４；１０７および１４；１０７および２５；１０７および９７；１０７および９８；１０７および９９；１０７および１００；１０７および１０１；１０７および１０２；１０７および１０３；１０７および１０４；１０８および１４；１０８および２５；１０８および９７；１０８および９８；１０８および９９；１０８および１００；１０８および１０１；１０８および１０２；１０８および１０３；１０８および１０４；１０９および１４；１０９および２５；１０９および９７；１０９および９８；１０９および９９；１０９および１００；１０９および１０１；１０９および１０２；１０９および１０３；１０９および１０４；１１０および１４；１１０および２５；１１０および９７；１１０および９８；１１０および９９；１１０および１００；１１０および１０１；１１０および１０２；１１０および１０３；１１０および１０４；１１１および１４；１１１および２５；１１１および９７；１１１および９８；１１１および９９；１１１および１００；１１１および１０１；１１１および１０２；１１１および１０３；１１１および１０４；１１２および１４；１１２および２５；１１２および９７；１１２および９８；１１２および９９；１１２および１００；１１２および１０１；１１２および１０２；１１２および１０３；１１２および１０４；１１３および１４；１１３および２５；１１３および９７；１１３および９８；１１３および９９；１１３および１００；１１３および１０１；１１３および１０２；１１３および１０３；１１３および１０４；１１４および１４；１１４および２５；１１４および９７；１１４および９８；１１４および９９；１１４および１００；１１４および１０１��１１４および１０２；１１４および１０３；１１４および１０４；１１５および１４；１１５および２５；１１５および９７；１１５および９８；１１５および９９；１１５および１００；１１５および１０１；１１５および１０２；１１５および１０３；１１５および１０４；１１６および１４；１１６および２５；１１６および９７；１１６および９８；１１６および９９；１１６および１００；１１６および１０１；１１６および１０２；１１６および１０３；１１６および１０４；１１７および１４；１１７および２５；１１７および９７；１１７および９８；１１７および９９；１１７および１００；１１７および１０１；１１７および１０２；１１７および１０３；１１７および１０４；１１８および１４；１１８および２５；１１８および９７；１１８および９８；１１８および９９；１１８および１００；１１８および１０１；１１８および１０２；１１８および１０３；１１８および１０４；１２０および１４；１２０および２５；１２０および９７；１２０および９８；１２０および９９；１２０および１００；１２０および１０１；１２０および１０２；１２０および１０３；１２０および１０４；１２１および１４；１２１および２５；１２１および９７；１２１および９８；１２１および９９；１２１および１００；１２１および１０１；１２１および１０２；１２１および１０３；１２１および１０４；１２２および１４；１２２および２５；１２２および９７；１２２および９８；１２２および９９；１２２および１００；１２２および１０１；１２２および１０２；１２２および１０３；１２２および１０４；１２３および１４；１２３および２５；１２３および９７；１２３および９８；１２３および９９；１２３および１００；１２３および１０１；１２３および１０２；１２３および１０３；１２３および１０４；１２５および１４；１２５および２５；１２５および９７；１２５および９８；１２５および９９；１２５および１００；１２５および１０１；１２５および１０２；１２５および１０３；１２５および１０４；１２６および１４；１２６および２５；１２６および９７；１２６および９８；１２６および９９；１２６および１００；１２６および１０１；１２６および１０２；１２６および１０３；１２６および１０４；１２７および１４；１２７および２５；１２７および９７；１２７および９８；１２７および９９；１２７および１００；１２７および１０１；１２７および１０２；１２７および１０３；１２７および１０４；１２８および１４；１２８および２５；１２８および９７；１２８および９８；１２８および９９；１２８および１００；１２８および１０１；１２８および１０２；１２８および１０３；１２８および１０４；４０８および１４；４０８および２５；４０８および９７；４０８および９８；４０８および９９；４０８および１００；４０８および１０１；４０８および１０２；４０８および１０３；４０８および１０４；４０９および１４；４０９および２５；４０９および９７；４０９および９８；４０９および９９；４０９および１００；４０９および１０１；４０９および１０２；４０９および１０３；４０９および１０４；４１０お��び１４；４１０および２５；４１０および９７；４１０および９８；４１０および９９；４１０および１００；４１０および１０１；４１０および１０２；４１０および１０３；４１０および１０４；４１１および１４；４１１および２５；４１１および９７；４１１および９８；４１１および９９；４１１および１００；４１１および１０１；４１１および１０２；４１１および１０３；４１１および１０４；４１２および１４；４１２および２５；４１２および９７；４１２および９８；４１２および９９；４１２および１００；４１２および１０１；４１２および１０２；４１２および１０３；４１２および１０４；４１３および１４；４１３および２５；４１３および９７；４１３および９８；４１３および９９；４１３および１００；４１３および１０１；４１３および１０２；４１３および１０３；４１３および１０４；４１４および１４；４１４および２５；４１４および９７；４１４および９８；４１４および９９；４１４および１００；４１４および１０１；４１４および１０２；４１４および１０３；４１４および１０４；４１５および１４；４１５および２５；４１５および９７；４１５および９８；４１５および９９；４１５および１００；４１５および１０１；４１５および１０２；４１５および１０３；または４１５および１０４に記載のアミノ酸配列を含む、請求項３１または３２に記載の単離されたＴＣＲ。
【請求項３４】
前記α鎖および前記β鎖が、それぞれ配列番号１３および１４；１３および２５；１０５および１４；１０５および２５；１１０および１４；１１０および２５；１１５および１４；１１５および２５；１２０および１４；１２０および２５；１２５および１４；１２５および２５；４０８および１４；４０８および２５；４１２および１４；または４１２および２５に記載のアミノ酸配列を含む、請求項３３に記載の単離されたＴＣＲ。
【請求項３５】
前記α鎖および前記β鎖が、それぞれ配列番号１３および１４；１０５および１４；１１０および１４；１１５および１４；１２０および１４；１２５および１４；４０８および１４；または４１２および１４に記載のアミノ酸配列を含む、請求項３３に記載の単離されたＴＣＲ。
【請求項３６】
前記ＴＣＲが、配列番号１または２に記載のアミノ酸配列からなるペプチドに結合する、請求項３１〜３５のいずれか一項に記載の単離されたＴＣＲ。
【請求項３７】
配列番号１または２に記載のアミノ酸配列からなるペプチドに結合するＴ細胞受容体（ＴＣＲ）のα鎖可変領域（Ｖα）およびβ鎖可変領域（Ｖβ）を含むポリペプチドであって、前記Ｖαが、相補性決定領域ＣＤＲ３αを含み、前記ＣＤＲ３αが、配列番号６１、６２、６３、６４、または６５に記載のアミノ酸配列を含む、ポリペプチド。
【請求項３８】
前記ＣＤＲ３αが、配列番号６４または６５に記載のアミノ酸配列を含む、請求項３７に記載のポリペプチド。
【請求項３９】
前記ＣＤＲ３αが、配列番号７および３９〜６０からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む、請求項３７または３８に記載のポリペプチド。
【請求項４０】
前記ＣＤＲ３αが、配列番号７、３９、４０、４３、４５、４７、４９、および５４からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む、請求項３７〜３９のいずれか一項に記載のポリペプチド。
【請求項４１】
前記Ｖαが、それぞれ配列番号５および６に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１αおよびＣＤＲ２αを含む、請求項３７〜４０のいずれか一項に記載のポリペプチド。
【請求項４２】
前記Ｖαが、それぞれ配列番号５、６、および７；５、６、および３９；５、６、および４０；５、６、および４１；５、６、および４２；５、６、および４３；５、６、および４４；５、６、および４５；５、６、および４６；５、６、および４７；５、６、および４８；５、６、および４９；５、６、および５０；５、６、および５１；５、６、および５２；５、６、および５３；５、６、および５４；５、６、および５５；５、６、および５６；５、６、および５７；５、６、および５８；５、６、および５９；または５、６、および６０に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１α、ＣＤＲ２α、およびＣＤＲ３αを含む、請求項３７〜４１のいずれか一項に記載のポリペプチド。
【請求項４３】
前記Ｖαが、配列番号８７〜９１からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む、請求項３７〜４２のいずれか一項に記載のポリペプチド。
【請求項４４】
前記Ｖαが、配列番号３および６６〜８６からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む、請求項３７〜４３のいずれか一項に記載のポリペプチド。
【請求項４５】
前記Ｖαが、配列番号３、６６、６９、７１、７３、７５、および８０からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む、請求項４４に記載のポリペプチド。
【請求項４６】
配列番号１３、９３〜９６、１０５〜１１８、１２０〜１２３、１２５〜１２８、および４０８〜４１５からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むα鎖を含む、請求項３７〜４５のいずれか一項に記載のポリペプチド。
【請求項４７】
配列番号１３、１０５、１１０、１１５、１２０、１２５、４０８、および４１２からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むα鎖を含む、請求項４６に記載のポリペプチド。
【請求項４８】
前記Ｖβが、ＣＤＲ３βを含み、前記ＣＤＲ３βが、配列番号１０に記載のアミノ酸配列を含む、請求項３７〜４７のいずれか一項に記載のポリペプチド。
【請求項４９】
前記Ｖβが、それぞれ配列番号８および９に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１βおよびＣＤＲ２βを含む、請求項４８に記載のポリペプチド。
【請求項５０】
前記Ｖβが、配列番号４に記載のアミノ酸配列を含む、請求項４８または４９に記載のポリペプチド。
【請求項５１】
配列番号１４、２５、および９７〜１０４からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むβ鎖を含む、請求項４８〜５０のいずれか一項に記載のポリペプチド。
【請求項５２】
配列番号１または２に記載のアミノ酸配列からなるペプチドに結合するＴＣＲのＶαおよびＶβを含むポリペプチドであって、前記Ｖβが、相補性決定領域ＣＤＲ３βを含み、前記ＣＤＲ３βが、配列番号１０に記載のアミノ酸配列を含む、ポリペプチド。
【請求項５３】
前記Ｖβが、それぞれ配列番号８および９に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１βおよびＣＤＲ２βを含む、請求項５２に記載のポリペプチド。
【請求項５４】
前記Ｖβが、配列番号４に記載のアミノ酸配列を含む、請求項５２または５３に記載のポリペプチド。
【請求項５５】
配列番号１４、２５、および９７〜１０４からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むβ鎖を含む、請求項５２〜５４のいずれか一項に記載のポリペプチド。
【請求項５６】
配列番号１または２に記載のアミノ酸配列からなるペプチドに結合するＴＣＲのＶαおよびＶβを含むポリペプチドであって、前記Ｖαが、配列番号１８に記載のアミノ酸配列に対して少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９９％、または１００％同一であるアミノ酸配列を含む、ポリペプチド。
【請求項５７】
前記Ｖαが、配列番号１８に記載のアミノ酸配列を含む、請求項５６に記載のポリペプチド。
【請求項５８】
前記Ｖβが、配列番号１９に記載のアミノ酸配列に対して少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９９％、または１００％同一であるアミノ酸配列を含む、請求項５６または５７に記載のポリペプチド。
【請求項５９】
前記Ｖβが、配列番号１９に記載のアミノ酸配列を含む、請求項５８に記載のポリペプチド。
【請求項６０】
配列番号１または２に記載のアミノ酸配列からなるペプチドに結合するＴＣＲのＶαおよびＶβを含むポリペプチドであって、前記Ｖβが、配列番号１９に記載のアミノ酸配列に対して少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９９％、または１００％同一であるアミノ酸配列を含む、ポリペプチド。
【請求項６１】
前記Ｖβが、配列番号１９に記載のアミノ酸配列を含む、請求項６０に記載のポリペプチド。
【請求項６２】
前記Ｖαが、ＣＤＲ１α、ＣＤＲ２α、およびＣＤＲ３αを含み、前記Ｖβが、ＣＤＲ１β、ＣＤＲ２β、およびＣＤＲ３βを含み、前記ＣＤＲ１α、ＣＤＲ２α、ＣＤＲ３α、ＣＤＲ１β、ＣＤＲ２β、およびＣＤＲ３βが、それぞれ配列番号５、６、７、８、９、および１０；５、６、３９、８、９、および１０；５、６、４０、８、９、および１０；５、６、４１、８、９、および１０；５、６、４２、８、９、および１０；５、６、４３、８、９、および１０；５、６、４４、８、９、および１０；５、６、４５、８、９、および１０；５、６、４６、８、９、および１０；５、６、４７、８、９、および１０；５、６、４８、８、９、および１０；５、６、４９、８、９、および１０；５、６、５０、８、９、および１０；５、６、５１、８、９、および１０；５、６、５２、８、９、および１０；５、６、５３、８、９、および１０；５、６、５４、８、９、および１０；５、６、５５、８、９、および１０；５、６、５６、８、９、および１０；５、６、５７、８、９、および１０；５、６、５８、８、９、および１０；５、６、５９、８、９、および１０；または５、６、６０、８、９、および１０に記載のアミノ酸配列を含む、請求項３７〜６１のいずれか一項に記載のポリペプチド。
【請求項６３】
ＴＣＲのＶαおよびＶβを含むポリペプチドであって、前記Ｖαが、相補性決定領域ＣＤＲ１α、ＣＤＲ２α、およびＣＤＲ３αを含み、前記Ｖβが、ＣＤＲ１β、ＣＤＲ２β、およびＣＤＲ３βを含み、前記ＣＤＲ１α、ＣＤＲ２α、ＣＤＲ３α、ＣＤＲ１β、ＣＤＲ２β、およびＣＤＲ３βが、それぞれ配列番号５、６、７、８、９、および１０；５、６、３９、８、９、および１０；５、６、４０、８、９、および１０；５、６、４１、８、９、および１０；５、６、４２、８、９、および１０；５、６、４３、８、９、および１０；５、６、４４、８、９、および１０；５、６、４５、８、９、および１０；５、６、４６、８、９、および１０；５、６、４７、８、９、および１０；５、６、４８、８、９、および１０；５、６、４９、８、９、および１０；５、６、５０、８、９、および１０；５、６、５１、８、９、および１０；５、６、５２、８、９、および１０；５、６、５３、８、９、および１０；５、６、５４、８、９、および１０；５、６、５５、８、９、および１０；５、６、５６、８、９、および１０；５、６、５７、８、９、および１０；５、６、５８、８、９、および１０；５、６、５９、８、９、および１０；または５、６、６０、８、９、および１０に記載のアミノ酸配列を含む、ポリペプチド。
【請求項６４】
前記ＶαおよびＶβが、それぞれ配列番号３および４、６６および４、６７および４、６８および４、６９および４、７０および４、７１および４、７２および４、７３および４、７４および４、７５および４、７６および４、７７および４、７８および４、７９および４、８０および４、８１および４、８２および４、８３および４、８４および４、８５および４、または８６および４に記載のアミノ酸配列を含む、請求項６３に記載のポリペプチド。
【請求項６５】
配列番号１５、２６、または９２に記載のアミノ酸配列を含むα鎖定常領域を含むα鎖を含む、請求項３７〜４５および４８〜６２のいずれか一項に記載のポリペプチド。
【請求項６６】
配列番号１６または１７に記載のアミノ酸配列を含むβ鎖定常領域を含むβ鎖を含む、請求項３７〜５０、５２〜５４、および５６〜６４のいずれか一項に記載のポリペプチド。
【請求項６７】
ＴＣＲのα鎖およびβ鎖を含むポリペプチドであって、前記α鎖が、配列番号１３、９３〜９６、１０５〜１１８、１２０〜１２３、１２５〜１２８、および４０８〜４１５からなる群から選択されるアミノ酸配列を含み、前記β鎖が、配列番号１４、２５、および９７〜１０４からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む、ポリペプチド。
【請求項６８】
前記α鎖が、配列番号１３、１０５、１１０、１１５、１２０、１２５、４０８、および４１２からなる群から選択されるアミノ酸配列を含み、前記β鎖が、配列番号１４、２５、および９７〜１０４からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む、請求項６７に記載のポリペプチド。
【請求項６９】
前記α鎖が、配列番号１３、１０５、１１０、１１５、１２０、１２５、４０８、および４１２からなる群から選択されるアミノ酸配列を含み、前記β鎖が、配列番号１４、９７、９９、１０１、および１０３からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む、請求項６７または６８に記載のポリペプチド。
【請求項７０】
前記α鎖および前記β鎖が、それぞれ配列番号１３および１４；１３および２５；１３および９７；１３および９８；１３および９９；１３および１００；１３および１０１；１３および１０２；１３および１０３；１３および１０４；９３および１４；９３および２５；９３および９７；９３および９８；９３および９９；９３および１００；９３および１０１；９３および１０２；９３および１０３；９３および１０４；９４および１４；９４および２５；９４および９７；９４および９８；９４および９９；９４および１００；９４および１０１；９４および１０２；９４および１０３；９４および１０４；９５および１４；９５および２５；９５および９７；９５および９８；９５および９９；９５および１００；９５および１０１；９５および１０２；９５および１０３；９５および１０４；９６および１４；９６および２５；９６および９７；９６および９８；９６および９９；９６および１００；９６および１０１；９６および１０２；９６および１０３；９６および１０４；１０５および１４；１０５および２５；１０５および９７；１０５および９８；１０５および９９；１０５および１００；１０５および１０１；１０５および１０２；１０５および１０３；１０５および１０４；１０６および１４；１０６および２５；１０６および９７；１０６および９８；１０６および９９；１０６および１００；１０６および１０１；１０６および１０２；１０６および１０３；１０６および１０４；１０７および１４；１０７および２５；１０７および９７；１０７および９８；１０７および９９；１０７および１００；１０７および１０１；１０７および１０２；１０７および１０３；１０７および１０４；１０８および１４；１０８および２５；１０８および９７；１０８および９８；１０８および９９；１０８および１００；１０８および１０１；１０８および１０２；１０８および１０３；１０８および１０４；１０９および１４；１０９および２５；１０９および９７；１０９および９８；１０９および９９；１０９および１００；１０９および１０１；１０９および１０２；１０９および１０３；１０９および１０４；１１０および１４；１１０および２５；１１０および９７；１１０および９８；１１０および９９；１１０および１００；１１０および１０１；１１０および１０２；１１０および１０３；１１０および１０４；１１１および１４；１１１および２５；１１１および９７；１１１および９８；１１１および９９；１１１および１００；１１１および１０１；１１１および１０２；１１１および１０３；１１１および１０４；１１２および１４；１１２および２５；１１２および９７；１１２および９８；１１２および９９；１１２および１００；１１２および１０１；１１２および１０２；１１２および１０３；１１２および１０４；１１３および１４；１１３および２５；１１３および９７；１１３および９８；１１３および９９；１１３および１００；１１３および１０１；１１３および１０２；１１３および１０３；１１３および１０４；１１４および１４；１１４および２５；１１４および９７；１１４および９８；１１４および９９；１１４および１００；１１４および１０１��１１４および１０２；１１４および１０３；１１４および１０４；１１５および１４；１１５および２５；１１５および９７；１１５および９８；１１５および９９；１１５および１００；１１５および１０１；１１５および１０２；１１５および１０３；１１５および１０４；１１６および１４；１１６および２５；１１６および９７；１１６および９８；１１６および９９；１１６および１００；１１６および１０１；１１６および１０２；１１６および１０３；１１６および１０４；１１７および１４；１１７および２５；１１７および９７；１１７および９８；１１７および９９；１１７および１００；１１７および１０１；１１７および１０２；１１７および１０３；１１７および１０４；１１８および１４；１１８および２５；１１８および９７；１１８および９８；１１８および９９；１１８および１００；１１８および１０１；１１８および１０２；１１８および１０３；１１８および１０４；１２０および１４；１２０および２５；１２０および９７；１２０および９８；１２０および９９；１２０および１００；１２０および１０１；１２０および１０２；１２０および１０３；１２０および１０４；１２１および１４；１２１および２５；１２１および９７；１２１および９８；１２１および９９；１２１および１００；１２１および１０１；１２１および１０２；１２１および１０３；１２１および１０４；１２２および１４；１２２および２５；１２２および９７；１２２および９８；１２２および９９；１２２および１００；１２２および１０１；１２２および１０２；１２２および１０３；１２２および１０４；１２３および１４；１２３および２５；１２３および９７；１２３および９８；１２３および９９；１２３および１００；１２３および１０１；１２３および１０２；１２３および１０３；１２３および１０４；１２５および１４；１２５および２５；１２５および９７；１２５および９８；１２５および９９；１２５および１００；１２５および１０１；１２５および１０２；１２５および１０３；１２５および１０４；１２６および１４；１２６および２５；１２６および９７；１２６および９８；１２６および９９；１２６および１００；１２６および１０１；１２６および１０２；１２６および１０３；１２６および１０４；１２７および１４；１２７および２５；１２７および９７；１２７および９８；１２７および９９；１２７および１００；１２７および１０１；１２７および１０２；１２７および１０３；１２７および１０４；１２８および１４；１２８および２５；１２８および９７；１２８および９８；１２８および９９；１２８および１００；１２８および１０１；１２８および１０２；１２８および１０３；１２８および１０４；４０８および１４；４０８および２５；４０８および９７；４０８および９８；４０８および９９；４０８および１００；４０８および１０１；４０８および１０２；４０８および１０３；４０８および１０４；４０９および１４；４０９および２５；４０９および９７；４０９および９８；４０９および９９；４０９および１００；４０９および１０１；４０９および１０２；４０９および１０３；４０９および１０４；４１０お��び１４；４１０および２５；４１０および９７；４１０および９８；４１０および９９；４１０および１００；４１０および１０１；４１０および１０２；４１０および１０３；４１０および１０４；４１１および１４；４１１および２５；４１１および９７；４１１および９８；４１１および９９；４１１および１００；４１１および１０１；４１１および１０２；４１１および１０３；４１１および１０４；４１２および１４；４１２および２５；４１２および９７；４１２および９８；４１２および９９；４１２および１００；４１２および１０１；４１２および１０２；４１２および１０３；４１２および１０４；４１３および１４；４１３および２５；４１３および９７；４１３および９８；４１３および９９；４１３および１００；４１３および１０１；４１３および１０２；４１３および１０３；４１３および１０４；４１４および１４；４１４および２５；４１４および９７；４１４および９８；４１４および９９；４１４および１００；４１４および１０１；４１４および１０２；４１４および１０３；４１４および１０４；４１５および１４；４１５および２５；４１５および９７；４１５および９８；４１５および９９；４１５および１００；４１５および１０１；４１５および１０２；４１５および１０３；または４１５および１０４に記載のアミノ酸配列を含む、請求項３７〜６９のいずれか一項に記載のポリペプチド。
【請求項７１】
前記α鎖および前記β鎖が、それぞれ配列番号１３および１４；１３および２５；１０５および１４；１０５および２５；１１０および１４；１１０および２５；１１５および１４；１１５および２５；１２０および１４；１２０および２５；１２５および１４；１２５および２５；４０８および１４；４０８および２５；４１２および１４；または４１２および２５に記載のアミノ酸配列を含む、請求項７０に記載のポリペプチド。
【請求項７２】
前記α鎖および前記β鎖が、それぞれ配列番号１３および１４；１０５および１４；１１０および１４；１１５および１４；１２０および１４；１２５および１４；４０８および１４；または４１２および１４に記載のアミノ酸配列を含む、請求項３７〜７１のいずれか一項に記載のポリペプチド。
【請求項７３】
前記ＴＣＲが、配列番号１または２に記載のアミノ酸配列からなるペプチドに結合する、請求項６１〜７２に記載のポリペプチド。
【請求項７４】
１つのα鎖および１つのβ鎖のみを含む、請求項３７〜７３のいずれか一項に記載のポリペプチド。
【請求項７５】
前記α鎖が、前記β鎖のＮ末端である、請求項７４に記載のポリペプチド。
【請求項７６】
前記α鎖が、前記β鎖のＣ末端である、請求項７４に記載のポリペプチド。
【請求項７７】
前記α鎖と前記β鎖との間にペプチドリンカーを更に含む、請求項３７〜７６のいずれか一項に記載のポリペプチド。
【請求項７８】
前記リンカーが、タンパク質分解切断部位を含む、請求項７７に記載のポリペプチド。
【請求項７９】
前記タンパク質分解切断部位が、フーリン切断部位および／または２Ａ切断部位を含む、請求項７８に記載のポリペプチド。
【請求項８０】
前記フーリン切断部位が、配列番号２９〜３１および１３１〜１３３からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む、請求項７９に記載のポリペプチド。
【請求項８１】
前記フーリン切断部位が、配列番号１３２に記載のアミノ酸配列を含む、請求項８０に記載のポリペプチド。
【請求項８２】
前記２Ａ切断部位が、配列番号３２〜３８、１３０、および１３４〜１４０からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む、請求項７９に記載のポリペプチド。
【請求項８３】
前記２Ａ切断部位が、豚テシオウイルス−１  ２Ａ（Ｐ２Ａ）切断部位を含む、請求項７９に記載のポリペプチド。
【請求項８４】
前記Ｐ２Ａ切断部位が、配列番号３３または１３４に記載のアミノ酸配列を含む、請求項８３に記載のポリペプチド。
【請求項８５】
前記タンパク質分解切断部位が、フーリン切断部位および２Ａ切断部位を含む、請求項７８〜８４のいずれか一項に記載のポリペプチド。
【請求項８６】
前記フーリン切断部位が、配列番号１３２に記載のアミノ酸配列を含み、前記２Ａ切断部位が、配列番号３３または１３４に記載のアミノ酸配列を含む、請求項８５に記載のポリペプチド。
【請求項８７】
前記ポリペプチドのＣ末端にＧｌｙ−Ｓｅｒを更に含む、請求項３７〜８６のいずれか一項に記載のポリペプチド。
【請求項８８】
配列番号２８、１４１〜１４３、１５８〜１６１、１７６〜１７９、１９４、１９６、２１２、２１４、２３０、２３２、２４８、２５０、４１６、および４１７からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む、請求項３７〜７５および７７〜８７のいずれか一項に記載のポリペプチド。
【請求項８９】
ｉ）配列番号２８、１５８、１７６、１９４、２１２、２３０、２４８、および４１６；
ｉｉ）配列番号１４１、１５９、および１７７；または
ｉｉｉ）配列番号１４２、１６０、１７８、１９６、２１４、２３２、２５０、および４１７からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む、請求項８８に記載のポリペプチド。
【請求項９０】
配列番号１４６〜１４９、１５２〜１５５、１６４〜１６７、１７０〜１７３、１８２〜１８５、１８８〜１９１、２００、２０２、２０６、２０８、２１８、２２０、２２４、２２６、２３６、２３８、２４２、２４４、２５４、２５６、２６０、２６２、および４１８〜４２１からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む、請求項３７〜７６および７８〜８７のいずれか一項に記載のポリペプチド。
【請求項９１】
ｉ）配列番号１４６、１６４、１８２、２００、２１８、２３６、２５４、および４１８；
ｉｉ）配列番号１４７、１６５、および１８３；
ｉｉｉ）配列番号１４８、１６６、１８４、２０２、２２０、２３８、２５６、および４１９；
ｉｖ）配列番号１４９、１６７、および１８５；
ｖ）配列番号１５２、１７０、１８８、２０６、２２４、２４２、２６０、および４２０；
ｖｉ）配列番号１５３、１７１、および１８９；
ｖｉｉ）配列番号１５４、１７２、１９０、２０８、２２６、２４４、２６２、および４２１；または
ｖｉｉｉ）配列番号１５５、１７３、および１９１からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む、請求項９０に記載のポリペプチド。
【請求項９２】
前記ＴＣＲがヒトＴＣＲである、請求項１〜９１のいずれか一項に記載の単離されたＴＣＲまたはポリペプチド。
【請求項９３】
前記ＴＣＲが完全長ＴＣＲ、可溶性ＴＣＲ、または単鎖ＴＣＲである、請求項１〜９２のいずれか一項に記載の単離されたＴＣＲまたはポリペプチド。
【請求項９４】
前記ペプチドが、ＨＬＡ−Ａ＊０２０１との関連において呈される、請求項１〜９３のいずれか一項に記載の単離されたＴＣＲまたはポリペプチド。
【請求項９５】
前記ＴＣＲが、Ｔ細胞の表面上で発現され、前記Ｔ細胞が、ＨＬＡ−Ａ＊０２０１との関連において呈される前記ペプチドを提示する第２の細胞と共培養されると活性化される、請求項１〜９４のいずれか一項に記載の単離されたＴＣＲまたはポリペプチド。
【請求項９６】
前記Ｔ細胞が、ＨＬＡ−Ａ＊０２０１との関連において呈される前記ペプチドを提示する前記第２の細胞と共培養されると、（ａ）増加したＣＤ６９表面発現、（ｂ）増加したＣＤ２５表面発現、（ｃ）増加したＣＤ１０７ａ表面発現、（ｄ）増加したＩＦＮγ分泌、または（ｅ）増加した活性化Ｔ細胞核内因子（ＮＦＡＴ）活性化を示す、請求項９５に記載の単離されたＴＣＲまたはポリペプチド。
【請求項９７】
前記Ｔ細胞が、ＨＬＡ−Ａ＊０２０１との関連において呈される前記ペプチドを提示する前記第２の細胞のアポトーシスまたは死を誘導する、請求項９５または９６に記載の単離されたＴＣＲまたはポリペプチド。
【請求項９８】
前記ＴＣＲまたは前記ポリペプチドが、エフェクター部分にコンジュゲートされている、請求項１〜９７のいずれか一項に記載の単離されたＴＣＲまたはポリペプチド。
【請求項９９】
前記エフェクター部分が、細胞毒性剤、細胞増殖抑制剤、毒素、放射性核種、検出可能な標識、または結合部分である、請求項９８に記載の単離されたＴＣＲまたはポリペプチド。
【請求項１００】
前記結合部分が抗体である、請求項９９に記載の単離されたＴＣＲまたはポリペプチド。
【請求項１０１】
前記結合部分が抗体Ｆｃ領域である、請求項９９に記載の単離されたＴＣＲまたはポリペプチド。
【請求項１０２】
単離されたポリヌクレオチドであって、請求項１〜３６および９２〜１０１のいずれか一項に記載のＴＣＲの
（ａ）Ｖαをコードする第１の核酸配列および／もしくはＶβをコードする第２の核酸配列、または
（ｂ）α鎖をコードする第１の核酸配列および／もしくはβ鎖をコードする第２の核酸配列を含み、
任意選択で、前記第１および第２の核酸配列がフレーム内にある、単離されたポリヌクレオチド。
【請求項１０３】
前記第１の核酸配列が、前記第２の核酸配列の５’である、請求項１０２に記載のポリヌクレオチド。
【請求項１０４】
前記第１の核酸配列が、前記第２の核酸配列の３’である、請求項１０２に記載のポリヌクレオチド。
【請求項１０５】
前記第１と第２の核酸配列との間にペプチドリンカーをコードする第３の核酸配列を更に含み、前記第１、第２、および第３の核酸配列がフレーム内にある、請求項１０２〜１０４のいずれか一項に記載のポリヌクレオチド。
【請求項１０６】
前記リンカーが、タンパク質分解切断部位を含む、請求項１０５に記載のポリヌクレオチド。
【請求項１０７】
前記タンパク質分解切断部位が、フーリン切断部位および／または２Ａ切断部位を含む、請求項１０６に記載のポリヌクレオチド。
【請求項１０８】
前記フーリン切断部位が、配列番号２９〜３１および１３１〜１３３からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む、請求項１０７に記載のポリヌクレオチド。
【請求項１０９】
前記フーリン切断部位が、配列番号１３２に記載のアミノ酸配列を含む、請求項１０８に記載のポリヌクレオチド。
【請求項１１０】
前記２Ａ切断部位が、配列番号３２〜３８、１３０、および１３４〜１４０からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む、請求項１０７に記載のポリヌクレオチド。
【請求項１１１】
前記２Ａ切断部位が、豚テシオウイルス−１  ２Ａ（Ｐ２Ａ）切断部位を含む、請求項１１０に記載のポリヌクレオチド。
【請求項１１２】
前記Ｐ２Ａ切断部位が、配列番号３３または１３４に記載のアミノ酸配列を含む、請求項１１１に記載のポリヌクレオチド。
【請求項１１３】
前記タンパク質分解切断部位が、フーリン切断部位および２Ａ切断部位を含む、請求項１０７〜１１２のいずれか一項に記載のポリヌクレオチド。
【請求項１１４】
前記フーリン切断部位が、配列番号１３２に記載のアミノ酸配列を含み、前記２Ａ切断部位が、配列番号３３または１３４に記載のアミノ酸配列を含む、請求項１１３に記載のポリヌクレオチド。
【請求項１１５】
前記第１および第２の核酸配列のＧｌｙ−Ｓｅｒ  ３’をコードする核酸配列を更に含む、請求項１０２〜１１４のいずれか一項に記載のポリヌクレオチド。
【請求項１１６】
配列番号２８、１４１〜１４３、１５８〜１６１、１７６〜１７９、１９４、１９６、２１２、２１４、２３０、２３２、２４８、２５０、４１６、および４１７からなる群から選択されるアミノ酸配列をコードする、請求項１０２、１０３、および１０５〜１１５のいずれか一項に記載のポリヌクレオチド。
【請求項１１７】
ｉ）配列番号２８、１５８、１７６、１９４、２１２、２３０、２４８、および４１６；
ｉｉ）配列番号１４１、１５９、および１７７；または
ｉｉｉ）配列番号１４２、１６０、１７８、１９６、２１４、２３２、２５０、および４１７からなる群から選択されるアミノ酸配列をコードする、請求項１１６に記載のポリヌクレオチド。
【請求項１１８】
配列番号１４６〜１４９、１５２〜１５５、１６４〜１６７、１７０〜１７３、１８２〜１８５、１８８〜１９１、２００、２０２、２０６、２０８、２１８、２２０、２２４、２２６、２３６、２３８、２４２、２４４、２５４、２５６、２６０、２６２、および４１８〜４２１からなる群から選択されるアミノ酸配列をコードする、請求項１０２および１０４〜１１５のいずれか一項に記載のポリヌクレオチド。
【請求項１１９】
ｉ）配列番号１４６、１６４、１８２、２００、２１８、２３６、２５４、および４１８；
ｉｉ）配列番号１４７、１６５、および１８３
ｉｉｉ）配列番号１４８、１６６、１８４、２０２、２２０、２３８、２５６、および４１９；
ｉｖ）配列番号１４９、１６７、および１８５；
ｖ）配列番号１５２、１７０、１８８、２０６、２２４、２４２、２６０、および４２０；
ｖｉ）配列番号１５３、１７１、および１８９；
ｖｉｉ）配列番号１５４、１７２、１９０、２０８、２２６、２４４、２６２、および４２１；または
ｖｉｉｉ）配列番号１５５、１７３、および１９１からなる群から選択されるアミノ酸配列をコードする、請求項１１８に記載のポリヌクレオチド。
【請求項１２０】
請求項３７〜１０１のいずれか一項に記載のポリペプチドをコードする、単離されたポリヌクレオチド。
【請求項１２１】
請求項１０２〜１２０のいずれか一項に記載のポリヌクレオチドを含む、単離されたベクター。
【請求項１２２】
前記ベクターが、レンチウイルスベクター、レトロウイルスベクター、アデノウイルスベクター、アデノ関連ウイルスベクター、およびバキュロウイルスベクターからなる群から選択されるウイルスベクターである、請求項１２１に記載の単離されたベクター。
【請求項１２３】
請求項１０２〜１２０のいずれか一項に記載のポリヌクレオチド、または請求項１２１もしくは１２２に記載のベクターを含む、操作された細胞。
【請求項１２４】
請求項１〜３６および９２〜１０１のいずれか一項に記載のＴＣＲを、前記細胞表面上に提示する、操作された細胞。
【請求項１２５】
前記細胞が前記ＴＣＲを発現する、請求項１２４に記載の操作された細胞。
【請求項１２６】
前記細胞がヒトリンパ球である、請求項１２３〜１２５のいずれか一項に記載の操作された細胞。
【請求項１２７】
前記細胞が、Ｔ細胞、ＣＤ８＋Ｔ細胞、ＣＤ４＋Ｔ細胞、ナチュラルキラーＴ（ＮＫＴ）細胞、インバリアントナチュラルキラーＴ（ｉＮＫＴ）細胞、粘膜関連インバリアントＴ（ＭＡｉＴ）細胞、およびナチュラルキラー（ＮＫ）細胞からなる群から選択される、請求項１２３〜１２６のいずれか一項に記載の操作された細胞。
【請求項１２８】
請求項１〜３６および９２〜１０１のいずれか一項に記載の単離されたＴＣＲ、請求項３７〜１０１のいずれか一項に記載のポリペプチド、請求項１０２〜１２０のいずれか一項に記載のポリヌクレオチド、請求項１２１もしくは１２２に記載のベクター、または請求項１２３〜１２７のいずれか一項に記載の操作された細胞と、薬学的に許容される担体と、を含む、薬学的組成物。
【請求項１２９】
配列番号１または２に記載のアミノ酸配列からなるペプチドに結合するＴＣＲを産生する方法であって、前記ポリヌクレオチドが発現され、かつ前記ＴＣＲが産生されるように、請求項１２３〜１２７のいずれか一項に記載の操作された細胞を培養することを含む、方法。
【請求項１３０】
請求項１２９に記載の方法により産生される、単離されたＴＣＲ。
【請求項１３１】
配列番号１または２に記載のアミノ酸配列からなるペプチドに結合するＴＣＲを発現する操作された細胞を産生する方法であって、細胞を、請求項１２１または１２２に記載のベクターと、前記ベクターの前記細胞内への導入を可能にする条件下で接触させることを含む、方法。
【請求項１３２】
前記細胞がヒトリンパ球である、請求項１３１に記載の方法。
【請求項１３３】
前記細胞が、Ｔ細胞、ＣＤ８＋Ｔ細胞、ＣＤ４＋Ｔ細胞、ナチュラルキラーＴ（ＮＫＴ）細胞、インバリアントナチュラルキラーＴ（ｉＮＫＴ）細胞、粘膜関連インバリアントＴ（ＭＡｉＴ）細胞、およびナチュラルキラー（ＮＫ）細胞からなる群から選択される、請求項１３１または１３２に記載の方法。
【請求項１３４】
対象において、配列番号１または２に記載のアミノ酸配列からなるペプチドを提示する細胞に対して免疫応答を誘導する方法であって、有効量の、請求項１〜３６および９２〜１０１のいずれか一項に記載の単離されたＴＣＲ、請求項３７〜１０１のいずれか一項に記載のポリペプチド、請求項１０２〜１２０のいずれか一項に記載のポリヌクレオチド、請求項１２１もしくは１２２に記載のベクター、請求項１２３〜１２７のいずれか一項に記載の操作された細胞、または請求項１２８に記載の薬学的組成物を前記対象に投与することを含む、方法。
【請求項１３５】
対象における癌を治療する方法であって、有効量の、請求項１〜３６および９２〜１０１のいずれか一項に記載の単離されたＴＣＲ、請求項３７〜１０１のいずれか一項に記載のポリペプチド、請求項１０２〜１２０のいずれか一項に記載のポリヌクレオチド、請求項１２１もしくは１２２に記載のベクター、請求項１２３〜１２７のいずれか一項に記載の操作された細胞、または請求項１２８に記載の薬学的組成物を前記対象に投与することを含む、方法。
【請求項１３６】
前記ＴＣＲ、ポリヌクレオチド、ベクター、操作された細胞、または薬学的組成物が、静脈内投与される、請求項１３４または１３５に記載の方法。
【請求項１３７】
追加の治療薬を前記対象に投与することを更に含む、請求項１３４〜１３６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１３８】
前記追加の治療薬が、化学療法薬、放射線療法薬、またはチェックポイント標的薬である、請求項１３７に記載の方法。
【請求項１３９】
前記チェックポイント標的薬が、アンタゴニスト抗ＰＤ−１抗体、アンタゴニスト抗ＰＤ−Ｌ１抗体、アンタゴニスト抗ＰＤ−Ｌ２抗体、アンタゴニスト抗ＣＴＬＡ−４抗体、アンタゴニスト抗ＴＩＭ−３抗体、アンタゴニスト抗ＬＡＧ−３抗体、アンタゴニスト抗ＣＥＡＣＡＭ１抗体、アンタゴニスト抗ＴＩＧＩＴ抗体、アゴニスト抗ＣＤ１３７抗体、アゴニスト抗ＧＩＴＲ抗体、およびアゴニスト抗ＯＸ４０抗体からなる群から選択される、請求項１３８に記載の方法。
【請求項１４０】
前記追加の治療薬が、抗ＰＤ−１抗体であり、任意選択で、前記抗ＰＤ−１抗体が、ペムブロリズマブまたはニボルマブである、請求項１３７に記載の方法。
【請求項１４１】
前記追加の治療薬が、インドールアミン−２，３−ジオキシゲナーゼ（ＩＤＯ）の阻害剤である、請求項１３７に記載の方法。
【請求項１４２】
前記阻害剤が、エパカドスタット、Ｆ００１２８７、インドキシモド、およびＮＬＧ９１９からなる群から選択される、請求項１４１に記載の方法。
【請求項１４３】
前記阻害剤がエパカドスタットである、請求項１４２に記載の方法。
【請求項１４４】
前記追加の治療薬がワクチンである、請求項１３７に記載の方法。
【請求項１４５】
前記ワクチンが、抗原ペプチドと複合体形成された熱ショックタンパク質を含む熱ショックタンパク質ペプチド複合体（ＨＳＰＰＣ）を含む、請求項１４４に記載の方法。
【請求項１４６】
前記熱ショックタンパク質が、ｈｓｃ７０であり、腫瘍関連抗原ペプチドと複合体形成されている、請求項１４５に記載の方法。
【請求項１４７】
前記熱ショックタンパク質が、ｇｐ９６であり、腫瘍関連抗原ペプチドと複合体形成され、前記ＨＳＰＰＣが、対象から得られた腫瘍に由来する、請求項１４６に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願
本出願は、２０１７年１月１３日に出願された米国仮出願第６２／４４６，０８４号の利益を主張し、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。
【０００２】
本開示は、ＮＹ−ＥＳＯ−１ペプチドに結合するＴ細胞受容体（ＴＣＲ）およびその使用方法に関する。
【背景技術】
【０００３】
ＮＹ−ＥＳＯ−１は、癌／精巣抗原１Ａまたは１Ｂ（ＣＴＡＧ１ＡまたはＣＴＡＧ１Ｂ）遺伝子によりコードされる腫瘍関連抗原である。それは、グリシン豊富Ｎ末端領域および疎水性Ｃ末端領域を有する細胞質タンパク質である。ＮＹ−ＥＳＯ−１は、生殖細胞において発現されるが、正常な体細胞組織においては発現されない。ＮＹ−ＥＳＯ−１の異常発現は、黒色腫、前立腺癌、多発性骨髄腫、乳癌、および肺癌などの多くの種類の腫瘍において特定されている。その腫瘍特異的発現プロファイルを考慮して、ＮＹ−ＥＳＯ−１は、癌療法の標的として非常に有望である。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００４】
したがって、当該技術分野において、ＮＹ−ＥＳＯ−１を発現する癌細胞を認識し、これらの細胞に対して免疫応答を指向することができる新規組成物の必要性が存在する。
【課題を解決するための手段】
【０００５】
本開示は、ＴＣＲ（例えば、ＮＹ−ＥＳＯ−１に結合するＴＣＲ）、これらのＴＣＲを含む細胞および薬学的組成物、これらのＴＣＲをコードする核酸、これらのＴＣＲを作製するための発現ベクターおよび宿主細胞、ならびにこれらのＴＣＲを使用して対象を治療する方法を提供する。本明細書に開示されるＴＣＲは、ＮＹ−ＥＳＯ−１を発現する癌細胞に対して免疫応答を指向し、したがって、対象におけるＮＹ−ＥＳＯ−１発現癌を治療するのに特に有用である。
【０００６】
したがって、一態様では、本開示は、配列番号１または２に記載のアミノ酸配列からなるペプチドに結合する単離されたＴ細胞受容体（ＴＣＲ）を提供し、このＴＣＲは、相補性決定領域ＣＤＲ３αを含むα鎖可変領域（Ｖα）を含み、ＣＤＲ３αは、配列番号６１、６２、６３、６４、または６５に記載のアミノ酸配列を含む。ある特定の実施形態では、ＣＤＲ３αは、配列番号６４または６５に記載のアミノ酸配列を含む。ある特定の実施形態では、ＣＤＲ３αは、配列番号７および３９〜６０からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む。ある特定の実施形態では、ＣＤＲ３αは、配列番号７、３９、４０、４３、４５、４７、４９、および５４からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む。
【０００７】
ある特定の実施形態では、Ｖαは、それぞれ配列番号５および６に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１αおよびＣＤＲ２αを含む。ある特定の実施形態では、Ｖαは、それぞれ配列番号５、６、および７；５、６、および３９；５、６、および４０；５、６、および４１；５、６、および４２；５、６、および４３；５、６、および４４；５、６、および４５；５、６、および４６；５、６、および４７；５、６、および４８；５、６、および４９；５、６、および５０；５、６、および５１；５、６、および５２；５、６、および５３；５、６、および５４；５、６、および５５；５、６、および５６；５、６、および５７；５、６、および５８；５、６、および５９；または５、６、および６０に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１α、ＣＤＲ２α、およびＣＤＲ３αを含む。ある特定の実施形態では、Ｖαは、配列番号８７〜９１からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む。ある特定の実施形態では、Ｖαは、配列番号３および６６〜８６からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む。ある特定の実施形態では、Ｖαは、配列番号３、６６、６９、７１、７３、７５、および８０からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む。ある特定の実施形態では、単離されたＴＣＲは、配列番号１３、９３〜９６、１０５〜１１８、１２０〜１２３、１２５〜１２８、および４０８〜４１５からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むα鎖を含む。ある特定の実施形態では、単離されたＴＣＲは、配列番号１３、１０５、１１０、１１５、１２０、１２５、４０８、および４１２からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むα鎖を含む。
【０００８】
ある特定の実施形態では、ＴＣＲは、ＣＤＲ３βを含むβ鎖可変領域（Ｖβ）を含み、ＣＤＲ３βは、配列番号１０に記載のアミノ酸配列を含む。ある特定の実施形態では、Ｖβは、それぞれ配列番号８および９に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１βおよびＣＤＲ２βを含む。ある特定の実施形態では、Ｖβは、配列番号４に記載のアミノ酸配列を含む。ある特定の実施形態では、単離されたＴＣＲは、配列番号１４、２５、および９７〜１０４からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むβ鎖を含む。
【０００９】
別の態様では、本開示は、配列番号１または２に記載のアミノ酸配列からなるペプチドに結合する単離されたＴ細胞受容体（ＴＣＲ）を提供し、このＴＣＲは、相補性決定領域ＣＤＲ３βを含むβ鎖可変領域（Ｖβ）を含み、ＣＤＲ３βは、配列番号１０に記載のアミノ酸配列を含む。ある特定の実施形態では、Ｖβは、それぞれ配列番号８および９に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１βおよびＣＤＲ２βを含む。ある特定の実施形態では、Ｖβは、配列番号４に記載のアミノ酸配列を含む。ある特定の実施形態では、単離されたＴＣＲは、配列番号１４、２５、および９７〜１０４からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むβ鎖を含む。
【００１０】
別の態様では、本開示は、配列番号１または２に記載のアミノ酸配列からなるペプチドに結合する単離されたＴ細胞受容体（ＴＣＲ）を提供し、このＴＣＲは、配列番号１８に記載のアミノ酸配列に対して少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９９％、または１００％同一であるアミノ酸配列を含むα鎖可変領域（Ｖα）を含む。ある特定の実施形態では、Ｖαは、配列番号１８に記載のアミノ酸配列を含む。ある特定の実施形態では、ＴＣＲは、配列番号１９に記載のアミノ酸配列に対して少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９９％、または１００％同一であるアミノ酸配列を含むβ鎖可変領域（Ｖβ）を含む。ある特定の実施形態では、Ｖβは、配列番号１９に記載のアミノ酸配列を含む。
【００１１】
別の態様では、本開示は、配列番号１または２に記載のアミノ酸配列からなるペプチドに結合する単離されたＴ細胞受容体（ＴＣＲ）を提供し、このＴＣＲは、配列番号１９に記載のアミノ酸配列に対して少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９９％、または１００％同一であるアミノ酸配列を含むβ鎖可変領域（Ｖβ）を含む。ある特定の実施形態では、Ｖβは、配列番号１９に記載のアミノ酸配列を含む。
【００１２】
本明細書に開示されるＴＣＲの任意の態様のある特定の実施形態では、ＴＣＲは、ＣＤＲ１α、ＣＤＲ２α、およびＣＤＲ３αを含むα鎖可変領域（Ｖα）と、ＣＤＲ１β、ＣＤＲ２β、およびＣＤＲ３βを含むβ鎖可変領域（Ｖβ）と、を含み、ＣＤＲ１α、ＣＤＲ２α、ＣＤＲ３α、ＣＤＲ１β、ＣＤＲ２β、およびＣＤＲ３βは、それぞれ配列番号５、６、７、８、９、および１０；５、６、３９、８、９、および１０；５、６、４０、８、９、および１０；５、６、４１、８、９、および１０；５、６、４２、８、９、および１０；５、６、４３、８、９、および１０；５、６、４４、８、９、および１０；５、６、４５、８、９、および１０；５、６、４６、８、９、および１０；５、６、４７、８、９、および１０；５、６、４８、８、９、および１０；５、６、４９、８、９、および１０；５、６、５０、８、９、および１０；５、６、５１、８、９、および１０；５、６、５２、８、９、および１０；５、６、５３、８、９、および１０；５、６、５４、８、９、および１０；５、６、５５、８、９、および１０；５、６、５６、８、９、および１０；５、６、５７、８、９、および１０；５、６、５８、８、９、および１０；５、６、５９、８、９、および１０；または５、６、６０、８、９、および１０に記載のアミノ酸配列を含む。
【００１３】
別の態様では、本開示は、相補性決定領域ＣＤＲ１α、ＣＤＲ２α、およびＣＤＲ３αを含むα鎖可変領域（Ｖα）と、ＣＤＲ１β、ＣＤＲ２β、およびＣＤＲ３βを含むβ鎖可変領域（Ｖβ）と、を含む、単離されたＴＣＲを提供し、ＣＤＲ１α、ＣＤＲ２α、ＣＤＲ３α、ＣＤＲ１β、ＣＤＲ２β、およびＣＤＲ３βは、それぞれ配列番号５、６、７、８、９、および１０；５、６、３９、８、９、および１０；５、６、４０、８、９、および１０；５、６、４１、８、９、および１０；５、６、４２、８、９、および１０；５、６、４３、８、９、および１０；５、６、４４、８、９、および１０；５、６、４５、８、９、および１０；５、６、４６、８、９、および１０；５、６、４７、８、９、および１０；５、６、４８、８、９、および１０；５、６、４９、８、９、および１０；５、６、５０、８、９、および１０；５、６、５１、８、９、および１０；５、６、５２、８、９、および１０；５、６、５３、８、９、および１０；５、６、５４、８、９、および１０；５、６、５５、８、９、および１０；５、６、５６、８、９、および１０；５、６、５７、８、９、および１０；５、６、５８、８、９、および１０；５、６、５９、８、９、および１０；または５、６、６０、８、９、および１０に記載のアミノ酸配列を含む。ある特定の実施形態では、ＶαおよびＶβは、それぞれ配列番号３および４、６６および４、６７および４、６８および４、６９および４、７０および４、７１および４、７２および４、７３および４、７４および４、７５および４、７６および４、７７および４、７８および４、７９および４、８０および４、８１および４、８２および４、８３および４、８４および４、８５および４、または８６および４に記載のアミノ酸配列を含む。
【００１４】
ある特定の実施形態では、ＴＣＲは、配列番号１５、２６、または９２に記載のアミノ酸配列を含むα鎖定常領域を含むα鎖を含む。ある特定の実施形態では、α鎖定常領域は、配列番号２６に記載のアミノ酸配列を含む。ある特定の実施形態では、ＴＣＲは、配列番号１６または１７に記載のアミノ酸配列を含むβ鎖定常領域を含むβ鎖を含む。ある特定の実施形態では、β鎖定常領域は、配列番号１６に記載のアミノ酸配列を含む。
【００１５】
別の態様では、本開示は、α鎖およびβ鎖を含む単離されたＴＣＲを提供し、α鎖は、配列番号１３、９３〜９６、１０５〜１１８、１２０〜１２３、１２５〜１２８、および４０８〜４１５からなる群から選択されるアミノ酸配列を含み、β鎖は、配列番号１４、２５、および９７〜１０４からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む。ある特定の実施形態では、α鎖は、配列番号１３、１０５、１１０、１１５、１２０、１２５、４０８、および４１２からなる群から選択されるアミノ酸配列を含み、β鎖は、配列番号１４、２５、および９７〜１０４からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む。
【００１６】
本明細書に開示されるＴＣＲの任意の態様のある特定の実施形態では、α鎖およびβ鎖は、それぞれ配列番号１３および１４；１３および２５；１３および９７；１３および９８；１３および９９；１３および１００；１３および１０１；１３および１０２；１３および１０３；１３および１０４；９３および１４；９３および２５；９３および９７；９３および９８；９３および９９；９３および１００；９３および１０１；９３および１０２；９３および１０３；９３および１０４；９４および１４；９４および２５；９４および９７；９４および９８；９４および９９；９４および１００；９４および１０１；９４および１０２；９４および１０３；９４および１０４；９５および１４；９５および２５；９５および９７；９５および９８；９５および９９；９５および１００；９５および１０１；９５および１０２；９５および１０３；９５および１０４；９６および１４；９６および２５；９６および９７；９６および９８；９６および９９；９６および１００；９６および１０１；９６および１０２；９６および１０３；９６および１０４；１０５および１４；１０５および２５；１０５および９７；１０５および９８；１０５および９９；１０５および１００；１０５および１０１；１０５および１０２；１０５および１０３；１０５および１０４；１０６および１４；１０６および２５；１０６および９７；１０６および９８；１０６および９９；１０６および１００；１０６および１０１；１０６および１０２；１０６および１０３；１０６および１０４；１０７および１４；１０７および２５；１０７および９７；１０７および９８；１０７および９９；１０７および１００；１０７および１０１；１０７および１０２；１０７および１０３；１０７および１０４；１０８および１４；１０８および２５；１０８および９７；１０８および９８；１０８および９９；１０８および１００；１０８および１０１；１０８および１０２；１０８および１０３；１０８および１０４；１０９および１４；１０９および２５；１０９および９７；１０９および９８；１０９および９９；１０９および１００；１０９および１０１；１０９および１０２；１０９および１０３；１０９および１０４；１１０および１４；１１０および２５；１１０および９７；１１０および９８；１１０および９９；１１０および１００；１１０および１０１；１１０および１０２；１１０および１０３；１１０および１０４；１１１および１４；１１１および２５；１１１および９７；１１１および９８；１１１および９９；１１１および１００；１１１および１０１；１１１および１０２；１１１および１０３；１１１および１０４；１１２および１４；１１２および２５；１１２および９７；１１２および９８；１１２および９９；１１２および１００；１１２および１０１；１１２および１０２；１１２および１０３；１１２および１０４；１１３および１４；１１３および２５；１１３および９７；１１３および９８；１１３および９９；１１３および１００；１１３および１０１；１１３および１０２；１１３および１０３；１１３および１０４；１１４および１４；１１４および２５；１１４および９７；１１４および９８；��１４および９９；１１４および１００；１１４および１０１；１１４および１０２；１１４および１０３；１１４および１０４；１１５および１４；１１５および２５；１１５および９７；１１５および９８；１１５および９９；１１５および１００；１１５および１０１；１１５および１０２；１１５および１０３；１１５および１０４；１１６および１４；１１６および２５；１１６および９７；１１６および９８；１１６および９９；１１６および１００；１１６および１０１；１１６および１０２；１１６および１０３；１１６および１０４；１１７および１４；１１７および２５；１１７および９７；１１７および９８；１１７および９９；１１７および１００；１１７および１０１；１１７および１０２；１１７および１０３；１１７および１０４；１１８および１４；１１８および２５；１１８および９７；１１８および９８；１１８および９９；１１８および１００；１１８および１０１；１１８および１０２；１１８および１０３；１１８および１０４；１２０および１４；１２０および２５；１２０および９７；１２０および９８；１２０および９９；１２０および１００；１２０および１０１；１２０および１０２；１２０および１０３；１２０および１０４；１２１および１４；１２１および２５；１２１および９７；１２１および９８；１２１および９９；１２１および１００；１２１および１０１；１２１および１０２；１２１および１０３；１２１および１０４；１２２および１４；１２２および２５；１２２および９７；１２２および９８；１２２および９９；１２２および１００；１２２および１０１；１２２および１０２；１２２および１０３；１２２および１０４；１２３および１４；１２３および２５；１２３および９７；１２３および９８；１２３および９９；１２３および１００；１２３および１０１；１２３および１０２；１２３および１０３；１２３および１０４；１２５および１４；１２５および２５；１２５および９７；１２５および９８；１２５および９９；１２５および１００；１２５および１０１；１２５および１０２；１２５および１０３；１２５および１０４；１２６および１４；１２６および２５；１２６および９７；１２６および９８；１２６および９９；１２６および１００；１２６および１０１；１２６および１０２；１２６および１０３；１２６および１０４；１２７および１４；１２７および２５；１２７および９７；１２７および９８；１２７および９９；１２７および１００；１２７および１０１；１２７および１０２；１２７および１０３；１２７および１０４；１２８および１４；１２８および２５；１２８および９７；１２８および９８；１２８および９９；１２８および１００；１２８および１０１；１２８および１０２；１２８および１０３；１２８および１０４；４０８および１４；４０８および２５；４０８および９７；４０８および９８；４０８および９９；４０８および１００；４０８および１０１；４０８および１０２；４０８および１０３；４０８および１０４；４０９および１４；４０９および２５；４０９および９７；４０９および９８；４０９および９９；４０９および１００；４０９および１０１；４０９および��０２；４０９および１０３；４０９および１０４；４１０および１４；４１０および２５；４１０および９７；４１０および９８；４１０および９９；４１０および１００；４１０および１０１；４１０および１０２；４１０および１０３；４１０および１０４；４１１および１４；４１１および２５；４１１および９７；４１１および９８；４１１および９９；４１１および１００；４１１および１０１；４１１および１０２；４１１および１０３；４１１および１０４；４１２および１４；４１２および２５；４１２および９７；４１２および９８；４１２および９９；４１２および１００；４１２および１０１；４１２および１０２；４１２および１０３；４１２および１０４；４１３および１４；４１３および２５；４１３および９７；４１３および９８；４１３および９９；４１３および１００；４１３および１０１；４１３および１０２；４１３および１０３；４１３および１０４；４１４および１４；４１４および２５；４１４および９７；４１４および９８；４１４および９９；４１４および１００；４１４および１０１；４１４および１０２；４１４および１０３；４１４および１０４；４１５および１４；４１５および２５；４１５および９７；４１５および９８；４１５および９９；４１５および１００；４１５および１０１；４１５および１０２；４１５および１０３；または４１５および１０４に記載のアミノ酸配列を含む。ある特定の実施形態では、α鎖およびβ鎖は、それぞれ配列番号１３および１４；１３および２５；１０５および１４；１０５および２５；１１０および１４；１１０および２５；１１５および１４；１１５および２５；１２０および１４；１２０および２５；１２５および１４；１２５および２５；４０８および１４；４０８および２５；４１２および１４；または４１２および２５に記載のアミノ酸配列を含む。ある特定の実施形態では、α鎖およびβ鎖は、それぞれ配列番号１３および１４；１０５および１４；１１０および１４；１１５および１４；１２０および１４；１２５および１４；４０８および１４；または４１２および１４に記載のアミノ酸配列を含む。ある特定の実施形態では、ＴＣＲは、配列番号１または２に記載のアミノ酸配列からなるペプチドに結合する。
【００１７】
別の態様では、本開示は、配列番号１または２に記載のアミノ酸配列からなるペプチドに結合するＴ細胞受容体（ＴＣＲ）のα鎖可変領域（Ｖα）およびβ鎖可変領域（Ｖβ）を含むポリペプチドを提供し、Ｖαは、相補性決定領域ＣＤＲ３αを含み、ＣＤＲ３αは、配列番号６１、６２、６３、６４、または６５に記載のアミノ酸配列を含む。ある特定の実施形態では、ＣＤＲ３αは、配列番号６４または６５に記載のアミノ酸配列を含む。ある特定の実施形態では、ＣＤＲ３αは、配列番号７および３９〜６０からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む。ある特定の実施形態では、ＣＤＲ３αは、配列番号７、３９、４０、４３、４５、４７、４９、および５４からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む。
【００１８】
ある特定の実施形態では、Ｖαは、それぞれ配列番号５および６に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１αおよびＣＤＲ２αを含む。ある特定の実施形態では、Ｖαは、それぞれ配列番号５、６、および７；５、６、および３９；５、６、および４０；５、６、および４１；５、６、および４２；５、６、および４３；５、６、および４４；５、６、および４５；５、６、および４６；５、６、および４７；５、６、および４８；５、６、および４９；５、６、および５０；５、６、および５１；５、６、および５２；５、６、および５３；５、６、および５４；５、６、および５５；５、６、および５６；５、６、および５７；５、６、および５８；５、６、および５９；または５、６、および６０に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１α、ＣＤＲ２α、およびＣＤＲ３αを含む。ある特定の実施形態では、Ｖαは、配列番号８７〜９１からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む。ある特定の実施形態では、Ｖαは、配列番号３および６６〜８６からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む。ある特定の実施形態では、Ｖαは、配列番号３、６６、６９、７１、７３、７５、および８０からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む。ある特定の実施形態では、ポリペプチドは、配列番号１３、９３〜９６、１０５〜１１８、１２０〜１２３、１２５〜１２８、および４０８〜４１５からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むα鎖を含む。ある特定の実施形態では、ポリペプチドは、配列番号１３、１０５、１１０、１１５、１２０、１２５、４０８、および４１２からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むα鎖を含む。
【００１９】
ある特定の実施形態では、Ｖβは、ＣＤＲ３βを含み、ＣＤＲ３βは、配列番号１０に記載のアミノ酸配列を含む。ある特定の実施形態では、Ｖβは、それぞれ配列番号８および９に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１βおよびＣＤＲ２βを含む。ある特定の実施形態では、Ｖβは、配列番号４に記載のアミノ酸配列を含む。ある特定の実施形態では、ポリペプチドは、配列番号１４、２５、および９７〜１０４からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むβ鎖を含む。
【００２０】
別の態様では、本開示は、配列番号１または２に記載のアミノ酸配列からなるペプチドに結合するＴＣＲのＶαおよびＶβを含むポリペプチドを提供し、Ｖβは、相補性決定領域ＣＤＲ３βを含み、ＣＤＲ３βは、配列番号１０に記載のアミノ酸配列を含む。ある特定の実施形態では、Ｖβは、それぞれ配列番号８および９に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１βおよびＣＤＲ２βを含む。ある特定の実施形態では、Ｖβは、配列番号４に記載のアミノ酸配列を含む。ある特定の実施形態では、ポリペプチドは、配列番号１４、２５、および９７〜１０４からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むβ鎖を含む。
【００２１】
別の態様では、本開示は、配列番号１または２に記載のアミノ酸配列からなるペプチドに結合するＴＣＲのＶαおよびＶβを含むポリペプチドを提供し、Ｖαは、配列番号１８に記載のアミノ酸配列に対して少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９９％、または１００％同一であるアミノ酸配列を含む。ある特定の実施形態では、Ｖαは、配列番号１８に記載のアミノ酸配列を含む。ある特定の実施形態では、Ｖβは、配列番号１９に記載のアミノ酸配列に対して少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９９％、または１００％同一であるアミノ酸配列を含む。ある特定の実施形態では、Ｖβは、配列番号１９に記載のアミノ酸配列を含む。
【００２２】
別の態様では、本開示は、配列番号１または２に記載のアミノ酸配列からなるペプチドに結合するＴＣＲのＶαおよびＶβを含むポリペプチドを提供し、Ｖβは、配列番号１９に記載のアミノ酸配列に対して少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９９％、または１００％同一であるアミノ酸配列を含む。ある特定の実施形態では、Ｖβは、配列番号１９に記載のアミノ酸配列を含む。
【００２３】
本明細書に開示されるポリペプチドの任意の態様のある特定の実施形態では、Ｖαは、ＣＤＲ１α、ＣＤＲ２α、およびＣＤＲ３αを含み、Ｖβは、ＣＤＲ１β、ＣＤＲ２β、およびＣＤＲ３βを含み、ＣＤＲ１α、ＣＤＲ２α、ＣＤＲ３α、ＣＤＲ１β、ＣＤＲ２β、およびＣＤＲ３βは、それぞれ配列番号５、６、７、８、９、および１０；５、６、３９、８、９、および１０；５、６、４０、８、９、および１０；５、６、４１、８、９、および１０；５、６、４２、８、９、および１０；５、６、４３、８、９、および１０；５、６、４４、８、９、および１０；５、６、４５、８、９、および１０；５、６、４６、８、９、および１０；５、６、４７、８、９、および１０；５、６、４８、８、９、および１０；５、６、４９、８、９、および１０；５、６、５０、８、９、および１０；５、６、５１、８、９、および１０；５、６、５２、８、９、および１０；５、６、５３、８、９、および１０；５、６、５４、８、９、および１０；５、６、５５、８、９、および１０；５、６、５６、８、９、および１０；５、６、５７、８、９、および１０；５、６、５８、８、９、および１０；５、６、５９、８、９、および１０；または５、６、６０、８、９、および１０に記載のアミノ酸配列を含む。
【００２４】
別の態様では、本開示は、ＴＣＲのＶαおよびＶβを含むポリペプチドを提供し、Ｖαは、相補性決定領域ＣＤＲ１α、ＣＤＲ２α、およびＣＤＲ３αを含み、Ｖβは、ＣＤＲ１β、ＣＤＲ２β、およびＣＤＲ３βを含み、ＣＤＲ１α、ＣＤＲ２α、ＣＤＲ３α、ＣＤＲ１β、ＣＤＲ２β、およびＣＤＲ３βは、それぞれ配列番号５、６、７、８、９、および１０；５、６、３９、８、９、および１０；５、６、４０、８、９、および１０；５、６、４１、８、９、および１０；５、６、４２、８、９、および１０；５、６、４３、８、９、および１０；５、６、４４、８、９、および１０；５、６、４５、８、９、および１０；５、６、４６、８、９、および１０；５、６、４７、８、９、および１０；５、６、４８、８、９、および１０；５、６、４９、８、９、および１０；５、６、５０、８、９、および１０；５、６、５１、８、９、および１０；５、６、５２、８、９、および１０；５、６、５３、８、９、および１０；５、６、５４、８、９、および１０；５、６、５５、８、９、および１０；５、６、５６、８、９、および１０；５、６、５７、８、９、および１０；５、６、５８、８、９、および１０；５、６、５９、８、９、および１０；または５、６、６０、８、９、および１０に記載のアミノ酸配列を含む。ある特定の実施形態では、ＶαおよびＶβは、それぞれ配列番号３および４、６６および４、６７および４、６８および４、６９および４、７０および４、７１および４、７２および４、７３および４、７４および４、７５および４、７６および４、７７および４、７８および４、７９および４、８０および４、８１および４、８２および４、８３および４、８４および４、８５および４、または８６および４に記載のアミノ酸配列を含む。ある特定の実施形態では、配列番号１５、２６、または９２に記載のアミノ酸配列を含むα鎖定常領域を含むα鎖。ある特定の実施形態では、α鎖定常領域は、配列番号２６に記載のアミノ酸配列を含む。ある特定の実施形態では、ポリペプチドは、配列番号１６または１７に記載のアミノ酸配列を含むβ鎖定常領域を含むβ鎖を含む。ある特定の実施形態では、β鎖定常領域は、配列番号１６に記載のアミノ酸配列を含む。
【００２５】
前述の態様のある特定の実施形態では、α鎖は、配列番号１３、９３〜９６、１０５〜１１８、１２０〜１２３、１２５〜１２８、および４０８〜４１５からなる群から選択されるアミノ酸配列を含み、β鎖は、配列番号１４、２５、および９７〜１０４からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む。ある特定の実施形態では、α鎖は、配列番号１３、１０５、１１０、１１５、１２０、１２５、４０８、および４１２からなる群から選択されるアミノ酸配列を含み、β鎖は、配列番号１４、２５、および９７〜１０４からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む。ある特定の実施形態では、α鎖は、配列番号１３、１０５、１１０、１１５、１２０、１２５、４０８、および４１２からなる群から選択されるアミノ酸配列を含み、β鎖は、配列番号１４、９７、９９、１０１、および１０３からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む。
【００２６】
別の態様では、本開示は、ＴＣＲのα鎖およびβ鎖を含むポリペプチドを提供し、α鎖は、配列番号１３、９３〜９６、１０５〜１１８、１２０〜１２３、１２５〜１２８、および４０８〜４１５からなる群から選択されるアミノ酸配列を含み、β鎖は、配列番号１４、２５、および９７〜１０４からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む。ある特定の実施形態では、α鎖は、配列番号１３、１０５、１１０、１１５、１２０、１２５、４０８、および４１２からなる群から選択されるアミノ酸配列を含み、β鎖は、配列番号１４、２５、および９７〜１０４からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む。ある特定の実施形態では、α鎖は、配列番号１３、１０５、１１０、１１５、１２０、１２５、４０８、および４１２からなる群から選択されるアミノ酸配列を含み、β鎖は、配列番号１４、９７、９９、１０１、および１０３からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む。
【００２７】
本明細書に開示されるポリペプチドの任意の態様のある特定の実施形態では、α鎖およびβ鎖は、それぞれ配列番号１３および１４；１３および２５；１３および９７；１３および９８；１３および９９；１３および１００；１３および１０１；１３および１０２；１３および１０３；１３および１０４；９３および１４；９３および２５；９３および９７；９３および９８；９３および９９；９３および１００；９３および１０１；９３および１０２；９３および１０３；９３および１０４；９４および１４；９４および２５；９４および９７；９４および９８；９４および９９；９４および１００；９４および１０１；９４および１０２；９４および１０３；９４および１０４；９５および１４；９５および２５；９５および９７；９５および９８；９５および９９；９５および１００；９５および１０１；９５および１０２；９５および１０３；９５および１０４；９６および１４；９６および２５；９６および９７；９６および９８；９６および９９；９６および１００；９６および１０１；９６および１０２；９６および１０３；９６および１０４；１０５および１４；１０５および２５；１０５および９７；１０５および９８；１０５および９９；１０５および１００；１０５および１０１；１０５および１０２；１０５および１０３；１０５および１０４；１０６および１４；１０６および２５；１０６および９７；１０６および９８；１０６および９９；１０６および１００；１０６および１０１；１０６および１０２；１０６および１０３；１０６および１０４；１０７および１４；１０７および２５；１０７および９７；１０７および９８；１０７および９９；１０７および１００；１０７および１０１；１０７および１０２；１０７および１０３；１０７および１０４；１０８および１４；１０８および２５；１０８および９７；１０８および９８；１０８および９９；１０８および１００；１０８および１０１；１０８および１０２；１０８および１０３；１０８および１０４；１０９および１４；１０９および２５；１０９および９７；１０９および９８；１０９および９９；１０９および１００；１０９および１０１；１０９および１０２；１０９および１０３；１０９および１０４；１１０および１４；１１０および２５；１１０および９７；１１０および９８；１１０および９９；１１０および１００；１１０および１０１；１１０および１０２；１１０および１０３；１１０および１０４；１１１および１４；１１１および２５；１１１および９７；１１１および９８；１１１および９９；１１１および１００；１１１および１０１；１１１および１０２；１１１および１０３；１１１および１０４；１１２および１４；１１２および２５；１１２および９７；１１２および９８；１１２および９９；１１２および１００；１１２および１０１；１１２および１０２；１１２および１０３；１１２および１０４；１１３および１４；１１３および２５；１１３および９７；１１３および９８；１１３および９９；１１３および１００；１１３および１０１；１１３および１０２；１１３および１０３；１１３および１０４；１１４および１４；１１４および２５；１１４および９７；１１４および��８；１１４および９９；１１４および１００；１１４および１０１；１１４および１０２；１１４および１０３；１１４および１０４；１１５および１４；１１５および２５；１１５および９７；１１５および９８；１１５および９９；１１５および１００；１１５および１０１；１１５および１０２；１１５および１０３；１１５および１０４；１１６および１４；１１６および２５；１１６および９７；１１６および９８；１１６および９９；１１６および１００；１１６および１０１；１１６および１０２；１１６および１０３；１１６および１０４；１１７および１４；１１７および２５；１１７および９７；１１７および９８；１１７および９９；１１７および１００；１１７および１０１；１１７および１０２；１１７および１０３；１１７および１０４；１１８および１４；１１８および２５；１１８および９７；１１８および９８；１１８および９９；１１８および１００；１１８および１０１；１１８および１０２；１１８および１０３；１１８および１０４；１２０および１４；１２０および２５；１２０および９７；１２０および９８；１２０および９９；１２０および１００；１２０および１０１；１２０および１０２；１２０および１０３；１２０および１０４；１２１および１４；１２１および２５；１２１および９７；１２１および９８；１２１および９９；１２１および１００；１２１および１０１；１２１および１０２；１２１および１０３；１２１および１０４；１２２および１４；１２２および２５；１２２および９７；１２２および９８；１２２および９９；１２２および１００；１２２および１０１；１２２および１０２；１２２および１０３；１２２および１０４；１２３および１４；１２３および２５；１２３および９７；１２３および９８；１２３および９９；１２３および１００；１２３および１０１；１２３および１０２；１２３および１０３；１２３および１０４；１２５および１４；１２５および２５；１２５および９７；１２５および９８；１２５および９９；１２５および１００；１２５および１０１；１２５および１０２；１２５および１０３；１２５および１０４；１２６および１４；１２６および２５；１２６および９７；１２６および９８；１２６および９９；１２６および１００；１２６および１０１；１２６および１０２；１２６および１０３；１２６および１０４；１２７および１４；１２７および２５；１２７および９７；１２７および９８；１２７および９９；１２７および１００；１２７および１０１；１２７および１０２；１２７および１０３；１２７および１０４；１２８および１４；１２８および２５；１２８および９７；１２８および９８；１２８および９９；１２８および１００；１２８および１０１；１２８および１０２；１２８および１０３；１２８および１０４；４０８および１４；４０８および２５；４０８および９７；４０８および９８；４０８および９９；４０８および１００；４０８および１０１；４０８および１０２；４０８および１０３；４０８および１０４；４０９および１４；４０９および２５；４０９および９７；４０９および９８；４０９および９９；４０９および１００；４０９および１０１；４０９��よび１０２；４０９および１０３；４０９および１０４；４１０および１４；４１０および２５；４１０および９７；４１０および９８；４１０および９９；４１０および１００；４１０および１０１；４１０および１０２；４１０および１０３；４１０および１０４；４１１および１４；４１１および２５；４１１および９７；４１１および９８；４１１および９９；４１１および１００；４１１および１０１；４１１および１０２；４１１および１０３；４１１および１０４；４１２および１４；４１２および２５；４１２および９７；４１２および９８；４１２および９９；４１２および１００；４１２および１０１；４１２および１０２；４１２および１０３；４１２および１０４；４１３および１４；４１３および２５；４１３および９７；４１３および９８；４１３および９９；４１３および１００；４１３および１０１；４１３および１０２；４１３および１０３；４１３および１０４；４１４および１４；４１４および２５；４１４および９７；４１４および９８；４１４および９９；４１４および１００；４１４および１０１；４１４および１０２；４１４および１０３；４１４および１０４；４１５および１４；４１５および２５；４１５および９７；４１５および９８；４１５および９９；４１５および１００；４１５および１０１；４１５および１０２；４１５および１０３；または４１５および１０４に記載のアミノ酸配列を含む。ある特定の実施形態では、α鎖およびβ鎖は、それぞれ配列番号１３および１４；１３および２５；１０５および１４；１０５および２５；１１０および１４；１１０および２５；１１５および１４；１１５および２５；１２０および１４；１２０および２５；１２５および１４；１２５および２５；４０８および１４；４０８および２５；４１２および１４；または４１２および２５に記載のアミノ酸配列を含む。ある特定の実施形態では、α鎖およびβ鎖は、それぞれ配列番号１３および１４；１０５および１４；１１０および１４；１１５および１４；１２０および１４；１２５および１４；４０８および１４；または４１２および１４に記載のアミノ酸配列を含む。
【００２８】
本明細書に開示される任意のポリペプチドのある特定の実施形態では、ＴＣＲは、配列番号１または２に記載のアミノ酸配列からなるペプチドに結合する。
【００２９】
本明細書に開示される任意のポリペプチドのある特定の実施形態では、ポリペプチドは、１つのα鎖および１つのβ鎖のみを含む。ある特定の実施形態では、α鎖は、β鎖のＮ末端である。ある特定の実施形態では、α鎖は、β鎖のＣ末端である。ある特定の実施形態では、ポリペプチドは、α鎖とβ鎖との間にペプチドリンカーを更に含む。ある特定の実施形態では、リンカーは、タンパク質分解切断部位を含む。ある特定の実施形態では、タンパク質分解切断部位は、フーリン切断部位および／または２Ａ切断部位を含む。ある特定の実施形態では、フーリン切断部位は、配列番号２９〜３１および１３１〜１３３からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む。ある特定の実施形態では、フーリン切断部位は、配列番号１３２に記載のアミノ酸配列を含む。ある特定の実施形態では、２Ａ切断部位は、配列番号３２〜３８、１３０、および１３４〜１４０からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む。ある特定の実施形態では、２Ａ切断部位は、豚テシオウイルス−１  ２Ａ（Ｐ２Ａ）切断部位を含む。ある特定の実施形態では、Ｐ２Ａ切断部位は、配列番号３３または１３４に記載のアミノ酸配列を含む。ある特定の実施形態では、タンパク質分解切断部位は、フーリン切断部位および２Ａ切断部位を含む。ある特定の実施形態では、フーリン切断部位は、配列番号１３２に記載のアミノ酸配列を含み、２Ａ切断部位は、配列番号３３または１３４に記載のアミノ酸配列を含む。
【００３０】
前述の態様のある特定の実施形態では、ポリペプチドは、ポリペプチドのＣ末端にＧｌｙ−Ｓｅｒを更に含む。本開示の範囲を限定することを意図することなく、単離されたＴＣＲまたはポリペプチドへのそのようなＧｌｙ−Ｓｅｒ伸長は、前のクローニング工程からのクローニング痕（ｃｌｏｎｉｎｇ  ｓｃａｒ）に起因し得る。
【００３１】
ある特定の実施形態では、ポリペプチドは、配列番号２８、１４１〜１４３、１５８〜１６１、１７６〜１７９、１９４、１９６、２１２、２１４、２３０、２３２、２４８、２５０、４１６、および４１７からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む。ある特定の実施形態では、ポリペプチドは、
（ｉ）配列番号２８、１５８、１７６、１９４、２１２、２３０、２４８、および４１６；
（ｉｉ）配列番号１４１、１５９、および１７７；または
（ｉｉｉ）配列番号１４２、１６０、１７８、１９６、２１４、２３２、２５０、および４１７からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む。
【００３２】
ある特定の実施形態では、ポリペプチドは、配列番号１４６〜１４９、１５２〜１５５、１６４〜１６７、１７０〜１７３、１８２〜１８５、１８８〜１９１、２００、２０２、２０６、２０８、２１８、２２０、２２４、２２６、２３６、２３８、２４２、２４４、２５４、２５６、２６０、２６２、および４１８〜４２１からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む。ある特定の実施形態では、ポリペプチドは、
（ｉ）配列番号１４６、１６４、１８２、２００、２１８、２３６、２５４、および４１８；
（ｉｉ）配列番号１４７、１６５、および１８３；
（ｉｉｉ）配列番号１４８、１６６、１８４、２０２、２２０、２３８、２５６、および４１９；
（ｉｖ）配列番号１４９、１６７、および１８５；
（ｖ）配列番号１５２、１７０、１８８、２０６、２２４、２４２、２６０、および４２０；
（ｖｉ）配列番号１５３、１７１、および１８９；
（ｖｉｉ）配列番号１５４、１７２、１９０、２０８、２２６、２４４、２６２、および４２１；または
（ｖｉｉｉ）配列番号１５５、１７３、および１９１からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む。
【００３３】
本明細書に開示されるＴＣＲまたはポリペプチドの任意の態様のある特定の実施形態では、ＴＣＲは、ヒトＴＣＲ（例えば、完全長ヒトＴＣＲ）である。ある特定の実施形態では、ＴＣＲは、完全長ＴＣＲ、可溶性ＴＣＲ、または単鎖ＴＣＲである。
【００３４】
ある特定の実施形態では、ペプチドは、ＨＬＡ−Ａ＊０２０１との関連において呈される。ある特定の実施形態では、ＴＣＲは、Ｔ細胞の表面上で発現され、Ｔ細胞は、ＨＬＡ−Ａ＊０２０１との関連において呈されるペプチドを提示する第２の細胞と共培養されると活性化される。ある特定の実施形態では、Ｔ細胞は、ＨＬＡ−Ａ＊０２０１との関連において呈されるペプチドを提示する第２の細胞と共培養されると、（ａ）増加したＣＤ６９表面発現、（ｂ）増加したＣＤ２５表面発現、（ｃ）増加したＣＤ１０７ａ表面発現、（ｄ）増加したＩＦＮγ分泌、または（ｅ）増加した活性化Ｔ細胞核内因子（ＮＦＡＴ）活性化を示す。ある特定の実施形態では、Ｔ細胞は、ＨＬＡ−Ａ＊０２０１との関連において呈されるペプチドを提示する第２の細胞のアポトーシスまたは死を誘導する。
【００３５】
ある特定の実施形態では、ＴＣＲまたはポリペプチドは、エフェクター部分にコンジュゲートされている。ある特定の実施形態では、エフェクター部分は、細胞毒性剤、細胞増殖抑制剤、毒素、放射性核種、検出可能な標識、または結合部分である。ある特定の実施形態では、結合部分は抗体である。ある特定の実施形態では、結合部分は、抗体Ｆｃ領域である。
【００３６】
別の態様では、本開示は、本明細書に開示されるＴＣＲの
（ａ）Ｖαをコードする第１の核酸配列および／もしくはＶβをコードする第２の核酸配列、または
（ｂ）α鎖をコードする第１の核酸配列および／もしくはβ鎖をコードする第２の核酸配列を含む
単離されたポリヌクレオチドを提供する。ある特定の実施形態では、第１および第２の核酸配列はフレーム内にある。
【００３７】
ある特定の実施形態では、第１の核酸配列は、第２の核酸配列の５’である。ある特定の実施形態では、第１の核酸配列は、第２の核酸配列の３’である。ある特定の実施形態では、ポリヌクレオチドは、第１と第２の核酸配列との間にペプチドリンカーをコードする第３の核酸配列を更に含み、第１、第２、および第３の核酸配列はフレーム内にある。ある特定の実施形態では、リンカーは、タンパク質分解切断部位を含む。ある特定の実施形態では、タンパク質分解切断部位は、フーリン切断部位および／または２Ａ切断部位を含む。ある特定の実施形態では、フーリン切断部位は、配列番号２９〜３１および１３１〜１３３からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む。ある特定の実施形態では、フーリン切断部位は、配列番号１３２に記載のアミノ酸配列を含む。ある特定の実施形態では、２Ａ切断部位は、配列番号３２〜３８、１３０、および１３４〜１４０からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む。ある特定の実施形態では、２Ａ切断部位は、豚テシオウイルス−１  ２Ａ（Ｐ２Ａ）切断部位を含む。ある特定の実施形態では、Ｐ２Ａ切断部位は、配列番号３３または１３４に記載のアミノ酸配列を含む。ある特定の実施形態では、タンパク質分解切断部位は、フーリン切断部位および２Ａ切断部位を含む。ある特定の実施形態では、フーリン切断部位は、配列番号１３２に記載のアミノ酸配列を含み、２Ａ切断部位は、配列番号３３または１３４に記載のアミノ酸配列を含む。ある特定の実施形態では、ポリヌクレオチドは、第１および第２の核酸配列のＧｌｙ−Ｓｅｒ  ３’をコードする核酸配列を更に含む。
【００３８】
ある特定の実施形態では、ポリヌクレオチドは、配列番号２８、１４１〜１４３、１５８〜１６１、１７６〜１７９、１９４、１９６、２１２、２１４、２３０、２３２、２４８、２５０、４１６、および４１７からなる群から選択されるアミノ酸配列をコードする。ある特定の実施形態では、ポリヌクレオチドは、
（ｉ）配列番号２８、１５８、１７６、１９４、２１２、２３０、２４８、および４１６；
（ｉｉ）配列番号１４１、１５９、および１７７；または
（ｉｉｉ）配列番号１４２、１６０、１７８、１９６、２１４、２３２、２５０、および４１７からなる群から選択されるアミノ酸配列をコードする。
【００３９】
ある特定の実施形態では、ポリヌクレオチドは、配列番号１４６〜１４９、１５２〜１５５、１６４〜１６７、１７０〜１７３、１８２〜１８５、１８８〜１９１、２００、２０２、２０６、２０８、２１８、２２０、２２４、２２６、２３６、２３８、２４２、２４４、２５４、２５６、２６０、２６２、および４１８〜４２１からなる群から選択されるアミノ酸配列をコードする。ある特定の実施形態では、ポリヌクレオチドは、
（ｉ）配列番号１４６、１６４、１８２、２００、２１８、２３６、２５４、および４１８；
（ｉｉ）配列番号１４７、１６５、および１８３；
（ｉｉｉ）配列番号１４８、１６６、１８４、２０２、２２０、２３８、２５６、および４１９；
（ｉｖ）配列番号１４９、１６７、および１８５；
（ｖ）配列番号１５２、１７０、１８８、２０６、２２４、２４２、２６０、および４２０；
（ｖｉ）配列番号１５３、１７１、および１８９；
（ｖｉｉ）配列番号１５４、１７２、１９０、２０８、２２６、２４４、２６２、および４２１；または
（ｖｉｉｉ）配列番号１５５、１７３、および１９１からなる群から選択されるアミノ酸配列をコードする。
【００４０】
別の態様では、本開示は、本明細書に開示されるポリペプチドのポリペプチドをコードする単離されたポリヌクレオチドを提供する。
【００４１】
別の態様では、本開示は、本明細書に開示されるポリヌクレオチドを含む単離されたベクターを提供する。ある特定の実施形態では、ベクターは、レンチウイルスベクター、レトロウイルスベクター、アデノウイルスベクター、アデノ関連ウイルスベクター、およびバキュロウイルスベクターからなる群から選択されるウイルスベクターである。
【００４２】
別の態様では、本開示は、本明細書に開示されるポリヌクレオチドまたはベクターを含む操作された細胞を提供する。別の態様では、本開示は、細胞表面上に本明細書に開示されるＴＣＲを呈する操作された細胞を提供する。ある特定の実施形態では、細胞はＴＣＲを発現する。ある特定の実施形態では、細胞はヒトリンパ球である。ある特定の実施形態では、細胞は、Ｔ細胞、ＣＤ８＋Ｔ細胞、ＣＤ４＋Ｔ細胞、ナチュラルキラーＴ（ＮＫＴ）細胞、インバリアントナチュラルキラーＴ（ｉＮＫＴ）細胞、粘膜関連インバリアントＴ（ＭＡｉＴ）細胞、およびナチュラルキラー（ＮＫ）細胞からなる群から選択される。
【００４３】
別の態様では、本開示は、本明細書に開示される単離されたＴＣＲ、ポリペプチド、ポリヌクレオチド、ベクター、または操作された細胞と、薬学的に許容される担体と、を含む薬学的組成物を提供する。
【００４４】
別の態様では、本開示は、配列番号１または２に記載のアミノ酸配列からなるペプチドに結合するＴＣＲを産生する方法を提供し、この方法は、ポリヌクレオチドが発現され、かつＴＣＲが産生されるように、本明細書に開示される操作された細胞を培養することを含む。別の態様では、本開示は、そのような方法によって産生された、単離されたＴＣＲを提供する。
【００４５】
別の態様では、本開示は、配列番号１または２に記載のアミノ酸配列からなるペプチドに結合するＴＣＲを発現する操作された細胞を産生する方法を提供し、この方法は、ベクターの細胞内への導入を可能にする条件下で、細胞を、本明細書に開示されるポリヌクレオチド（例えば、本明細書に開示されるα鎖可変領域および／もしくはβ鎖可変領域をコードするポリヌクレオチド、本明細書に開示されるＴＣＲのα鎖および／もしくはβ鎖をコードするポリヌクレオチド、またはそのようなポリヌクレオチド（複数可）を含むベクター）と接触させることを含む。ある特定の実施形態では、細胞はヒトリンパ球である。ある特定の実施形態では、細胞は、Ｔ細胞、ＣＤ８＋Ｔ細胞、ＣＤ４＋Ｔ細胞、ナチュラルキラーＴ（ＮＫＴ）細胞、インバリアントナチュラルキラーＴ（ｉＮＫＴ）細胞、粘膜関連インバリアントＴ（ＭＡｉＴ）細胞、およびナチュラルキラー（ＮＫ）細胞からなる群から選択される。
【００４６】
別の態様では、本開示は、対象において、配列番号１または２に記載のアミノ酸配列からなるペプチドを提示する細胞に対して免疫応答を誘導する方法を提供し、この方法は、有効量の、本明細書に開示される単離されたＴＣＲ、ポリペプチド、ポリヌクレオチド、ベクター、操作された細胞、または薬学的組成物を対象に投与することを含む。
【００４７】
別の態様では、本開示は、対象における癌を治療する方法を提供し、この方法は、有効量の、本明細書に開示される単離されたＴＣＲ、ポリペプチド、ポリヌクレオチド、ベクター、操作された細胞、または薬学的組成物を対象に投与することを含む。
【００４８】
本明細書に開示される免疫応答を誘導する方法または癌を治療する方法のある特定の実施形態では、ＴＣＲ、ポリヌクレオチド、ベクター、操作された細胞、または薬学的組成物は、静脈内投与される。ある特定の実施形態では、本方法は、対象に追加の治療薬を投与することを更に含む。ある特定の実施形態では、追加の治療薬は、化学療法薬、放射線療法薬、またはチェックポイント標的薬である。ある特定の実施形態では、チェックポイント標的薬は、アンタゴニスト抗ＰＤ−１抗体、アンタゴニスト抗ＰＤ−Ｌ１抗体、アンタゴニスト抗ＰＤ−Ｌ２抗体、アンタゴニスト抗ＣＴＬＡ−４抗体、アンタゴニスト抗ＴＩＭ−３抗体、アンタゴニスト抗ＬＡＧ−３抗体、アンタゴニスト抗ＣＥＡＣＡＭ１抗体、アンタゴニスト抗ＴＩＧＩＴ抗体、アゴニスト抗ＣＤ１３７抗体、アゴニスト抗ＧＩＴＲ抗体、およびアゴニスト抗ＯＸ４０抗体からなる群から選択される。ある特定の実施形態では、追加の治療薬は、抗ＰＤ−１抗体であり、任意選択で、抗ＰＤ−１抗体は、ペムブロリズマブまたはニボルマブである。ある特定の実施形態では、追加の治療薬は、インドールアミン−２，３−ジオキシゲナーゼ（ＩＤＯ）の阻害剤である。ある特定の実施形態では、阻害剤は、エパカドスタット、Ｆ００１２８７、インドキシモド、およびＮＬＧ９１９からなる群から選択される。一実施形態では、阻害剤は、エパカドスタットである。ある特定の実施形態では、追加の治療薬は、ワクチンである。ある特定の実施形態では、ワクチンは、抗原ペプチドと複合体形成された熱ショックタンパク質を含む熱ショックタンパク質ペプチド複合体（ＨＳＰＰＣ）を含む。ある特定の実施形態では、熱ショックタンパク質が、ｈｓｃ７０であり、腫瘍関連抗原ペプチドと複合体形成されている。ある特定の実施形態では、熱ショックタンパク質が、ｇｐ９６であり、腫瘍関連抗原ペプチドと複合体形成され、ＨＳＰＰＣは、対象から得られた腫瘍に由来する。
【００４９】
ある特定の実施形態では、癌は、急性リンパ球性癌、急性骨髄性白血病、胞巣状横紋筋肉腫、骨癌、脳癌、乳癌、肛門、肛門管、もしくは肛門直腸の癌、眼の癌、肝内胆管の癌、関節の癌、頸部、胆嚢、もしくは胸膜の癌、鼻部、鼻腔、もしくは中耳の癌、口腔の癌、外陰部の癌、慢性リンパ球性白血病、慢性骨髄性白血病、骨髄腫（例えば、慢性骨髄癌）、結腸癌、食道癌、子宮頸癌、消化管カルチノイド腫瘍である。ホジキンリンパ腫、下咽頭癌、腎臓癌、咽頭癌、肝臓癌、肺癌（例えば、非小細胞肺癌）、悪性中皮腫、黒色腫、多発性骨髄腫、上咽頭癌、非ホジキンリンパ腫、卵巣癌、膵臓癌、腹膜、網、および腸間膜の癌、咽頭癌、前立腺癌、直腸癌、腎癌（例えば、腎細胞癌腫（ＲＣＣ））、胃癌（ｇａｓｔｒｉｃ  ｃａｎｃｅｒ）、小腸癌、軟部組織癌、胃癌（ｓｔｏｍａｃｈ  ｃａｎｃｅｒ）、癌腫、肉腫（例えば、滑膜肉腫、横紋筋肉腫）、精巣癌、甲状腺癌、頭頸部癌、尿管癌、および膀胱癌。ある特定の実施形態では、癌は、黒色腫、乳癌、肺癌、前立腺癌、甲状腺癌、卵巣癌、または滑膜肉腫である。一実施形態では、癌は、滑膜肉腫または脂肪肉腫（例えば、粘液様／円形細胞脂肪肉腫）である。一実施形態では、癌は、多発性骨髄腫である。一実施形態では、癌は、腎細胞癌腫である。一実施形態では、癌は、子宮頸癌である。一実施形態では、癌は、卵巣癌である。
【図面の簡単な説明】
【００５０】
【図１】野生型ＮＹ−ＥＳＯ−１ペプチドＳＬＬＭＷＩＴＱＣ（配列番号１）、ＭＨＣアンカー最適化ＮＹ−ＥＳＯ−１ペプチドＳＬＬＭＷＩＴＱＶ（配列番号２）、または陰性対照ペプチドで充填されたＡＰＣ標識抗マウスＴＣＲ  β鎖抗体およびＰＥ標識ＨＬＡ−Ａ＊０２０１四量体を使用した、ＴＣＲ１８１６８ｃを発現するＡＫ−Ｄ１０Ｒ３細胞またはＡＫ−Ｄ１０Ｒ３細胞の染色を示す一連のフローサイトメトリーのプロットである。四量体＋ＴＣＲ＋細胞の割合を各プロットに示す。
【図２】５０μｇ／ｍｌの野生型ＮＹ−ＥＳＯ−１ペプチドＳＬＬＭＷＩＴＱＣ（配列番号１）、アンカー最適化ＮＹ−ＥＳＯ−１ペプチドＳＬＬＭＷＩＴＱＶ（配列番号２）、または陰性対照ペプチドでパルス処理したＴ２細胞と共培養した後の、ＴＣＲ１８１６８ｃを発現するＡＫ−Ｄ１０Ｒ３細胞の活性化を試験するアッセイからの結果を示す一連のフローサイトメトリーのプロットである。フローサイトメトリーのプロットにおいて、ｙ軸は表面ＴＣＲ染色を示し、ｘ軸は、ＩＬ−２−（ＮＦＡＴ）３−ＥＧＦＰレポーター構築物の活性化から生じた高感度緑色蛍光タンパク質（ＥＧＦＰ）発現またはＣＤ６９活性化マーカー発現を示す。ＴＣＲ発現を伴わないＡＫ−Ｄ１０Ｒ３細胞は陰性対照として使用された。ＴＣＲ＋ＥＧＦＰ＋細胞およびＴＣＲ＋ＣＤ６９＋細胞の割合は、各プロットの右上のパネルに示される。
【図３Ａ】完全ヒトＮＹ−ＥＳＯ−１  ＴＣＲ、ＴＣＲ１８１６８、またはＭＡＲＴ−１  ＴＣＲ  ＤＭＦ４を発現するようにトランスフェクトされた健常なドナーからの一次ヒトＴ細胞を分析する研究からの結果を示すグラフである。トランスフェクトされたＴ細胞を、１６時間、ＨＬＡ−Ａ２またはＨＬＡ−Ｂ７のいずれかを発現するペプチドでパルス処理されたＫ５６２細胞と共培養した。次いで、エフェクター細胞の活性化（ＣＤ２５発現およびＩＦＮγ分泌）および標的細胞の死滅（カスパーゼ−３／７活性）を測定した。図３Ａは、ＮＹ−ＥＳＯ−１ペプチドＳＬＬＭＷＩＴＱＣ（配列番号１）またはＭＡＲＴ−１ペプチドＥＬＡＧＩＧＩＬＴＶ（配列番号２２）で充填されたＨＬＡ−Ａ＊０２０１四量体を使用した、ＴＣＲ１８１６８発現またはＤＭＦ４発現Ｔ細胞の染色を示す一対のフローサイトメトリーのプロットである。ＮＹ−ＥＳＯ−１四量体陽性／ＭＡＲＴ−１四量体陰性細胞の割合は、各プロットの右下のパネルに示される。ＮＹ−ＥＳＯ−１四量体陰性／ＭＡＲＴ−１四量体陽性細胞の割合は、各プロットの左上のパネルに示される。
【図３Ｂ】図３Ｂは、Ｋ５６２標的細胞と共培養した後にフローサイトメトリーにより測定した、ＣＤ２５＋Ｔ細胞の割合を示す棒グラフである。図に示されるように、ＨＬＡ−Ａ２発現（「Ｋ５６２−ＨＬＡ−Ａ２」）またはＨＬＡ−Ｂ７発現（「Ｋ５６２−ＨＬＡ−Ｂ７」）Ｋ５６２標的細胞を、ＤＭＳＯビヒクル、０．０１、０．１、もしくは１μＭのＮＹ−ＥＳＯ−１ペプチド、または１μＭのＭＡＲＴ−１ペプチドでパルス処理した。Ｋ５６２標的細胞の不在下で、いずれの刺激もしない（基底活性化レベル）、または抗ＣＤ３／抗ＣＤ２８抗体（最大活性化レベル）で刺激した、ＣＤ２５＋Ｔ細胞の割合も示す。
【図３Ｃ】図３Ｃは、Ｋ５６２標的細胞と共培養した後にフローサイトメトリーにより測定した、ＣＤ２５＋Ｔ細胞の割合を示す棒グラフである。図に示されるように、ＨＬＡ−Ａ２発現（「Ｋ５６２−ＨＬＡ−Ａ２」）またはＨＬＡ−Ｂ７発現（「Ｋ５６２−ＨＬＡ−Ｂ７」）Ｋ５６２標的細胞を、ＤＭＳＯビヒクル、０．０１、０．１、もしくは１μＭのＮＹ−ＥＳＯ−１ペプチド、または１μＭのＭＡＲＴ−１ペプチドでパルス処理した。Ｋ５６２標的細胞の不在下で、いずれの刺激もしない（基底活性化レベル）、または抗ＣＤ３／抗ＣＤ２８抗体（最大活性化レベル）で刺激した、ＣＤ２５＋Ｔ細胞の割合も示す。
【図３Ｄ】図３Ｄは、アッセイの完了時に共培養物から採取した培地における、ＥＬＩＳＡにより測定したＩＦＮγの濃度を示す棒グラフである。
【図３Ｅ】図３Ｅは、アッセイの完了時に共培養物から採取した培地における、ＥＬＩＳＡにより測定したＩＦＮγの濃度を示す棒グラフである。
【図４Ａ】図３Ａ〜３Ｅに示される研究と同様の共培養研究からの結果を示すグラフである。異なる健常なドナーからの一次Ｔ細胞を、ＴＣＲ１８１６８またはＭＡＲＴ−１  ＴＣＲ  ＤＭＦ４を発現するようにトランスフェクトした。トランスフェクトされたＴ細胞を、１６時間、ＣｅｌｌＴｒａｃｅ（商標）の紫色色素標識した、ペプチドパルス処理されたＴ２細胞と共培養した。表面ＣＤ２５発現により測定したＴ細胞活性化、および標的細胞の消失により測定した標的細胞死滅を検査した。図４Ａは、ＤＭＳＯビヒクル、１μＭのＮＹ−ＥＳＯ−１ペプチドＳＬＬＭＷＩＴＱＣ（配列番号１）、または１μＭのＭＡＲＴ−１ペプチドＥＬＡＧＩＧＩＬＴＶ（配列番号２２）でパルス処理されたＴ２標的細胞と共培養した後にフローサイトメトリーにより測定した、ＣＤ２５＋Ｔ細胞の割合を示す棒グラフである。Ｔ２標的細胞の不在下で、いずれの刺激もしない（基底活性化レベル）、または抗ＣＤ３／抗ＣＤ２８抗体（最大活性化レベル）で刺激した、ＣＤ２５＋Ｔ細胞の割合も示す。
【図４Ｂ】図４Ｂは、ＤＭＳＯビヒクル、１μＭのＮＹ−ＥＳＯ−１ペプチドＳＬＬＭＷＩＴＱＣ（配列番号１）、または１μＭのＭＡＲＴ−１ペプチドＥＬＡＧＩＧＩＬＴＶ（配列番号２２）でパルス処理されたＴ２標的細胞と共培養した後にフローサイトメトリーにより測定した、ＣＤ２５＋Ｔ細胞の割合を示す棒グラフである。Ｔ２標的細胞の不在下で、いずれの刺激もしない（基底活性化レベル）、または抗ＣＤ３／抗ＣＤ２８抗体（最大活性化レベル）で刺激した、ＣＤ２５＋Ｔ細胞の割合も示す。
【図４Ｃ】図４Ｃは、Ｔ細胞の不在下またはＴＣＲ１８１６８もしくはＤＭＦ４を発現するＴ細胞の存在下での、生存Ｔ２細胞の総数を示す棒グラフである。図に示されるように、Ｔ２細胞は、共培養研究前に、ＤＭＳＯ、ＮＹ−ＥＳＯ−１ペプチド、またはＭＡＲＴ−１ペプチドでパルス処理された。
【図５Ａ】ＴＣＲ１８１６８を発現するようにレンチウイルスによりトランスフェクトされたＴＣＲβ陰性ジャーカット−ＮＦＡＴ−ルシフェラーゼレポーター細胞株が、分析前に１６時間、ＡＡＤ発現ペプチドパルス処理されたＢ１６細胞と共培養された研究からの結果を示すグラフである。ＡＡＤは、ＨＬＡ−Ａ＊０２０１分子のα１およびα２ドメイン、マウスＨ−２Ｄｂ分子のα３ドメイン、ならびにヒトβ２ミクログロブリンを含むキメラ分子である。図５Ａは、ホルボール１２−ミリステート１３−アセテート（ＰＭＡ）およびイオノマイシン（最大ＮＦＡＴ−ルシフェラーゼ発現を表す）で刺激されたＴＣＲ１８１６８発現ジャーカットレポーター細胞、またはＤＭＳＯ、陰性対照ＭＡＲＴ−１ペプチド、もしくはＮＹ−ＥＳＯ−１ペプチド（標的ペプチド）でパルス処理されたＡＡＤ発現Ｂ１６細胞により産生された相対光単位を示す棒グラフである。
【図５Ｂ】図５Ｂは、ＰＭＡおよびイオノマイシン対照群により産生された平均相対光単位に正規化された、様々な濃度のＮＹ−ＥＳＯ−１標的ペプチドでパルス処理されたＡＡＤ発現Ｂ１６細胞と共培養されたＴＣＲ１８１６８発現ジャーカットレポーター細胞により産生された相対光単位を示す線グラフである。ｘ軸は、ＡＡＤ発現Ｂ１６細胞をパルス処理するために使用されたペプチドの濃度を示す。
【図６】野生型ＮＹ−ＥＳＯ−１ペプチドＳＬＬＭＷＩＴＱＣ（配列番号１）で充填されたＡＰＣ標識抗マウスＴＣＲ  β鎖抗体およびＰＥ標識ＨＬＡ−Ａ＊０２０１四量体を使用した、キメラＴＣＲ：ＴＣＲ１８１６８ｃ、ＴＣＲ０００１、ＴＣＲ０００９、ＴＣＲ００１１、ＴＣＲ００１３、ＴＣＲ００１５、ＴＣＲ００１７、ＴＣＲ００１９、ＴＣＲ００２１、ＴＣＲ００２３、ＴＣＲ００２７、ＴＣＲ００２９、ＴＣＲ００３１、ＴＣＲ００３３、ＴＣＲ００３５、ＴＣＲ００３７、ＴＣＲ００４９、ＴＣＲ００５９、ＴＣＲ００６１、ＴＣＲ００６５、ＴＣＲ００６７、ＴＣＲ００６９、ＳＳＸ−２に結合する参照ＴＣＲを発現するＡＫ−Ｄ１０Ｒ３細胞、またはＴＣＲ陰性ＡＫ−Ｄ１０Ｒ３細胞の染色を示す一連のフローサイトメトリーのプロットである。四量体＋ＴＣＲ＋細胞の割合を各プロットに示す。
【図７】５０μｇ／ｍｌの野生型ＮＹ−ＥＳＯ−１ペプチドＳＬＬＭＷＩＴＱＣ（配列番号１）でパルス処理されたＴ２細胞と共培養した後の、キメラＴＣＲのＴＣＲ１８１６８ｃ、ＴＣＲ０００１、ＴＣＲ０００９、ＴＣＲ００１１、ＴＣＲ００１３、ＴＣＲ００１５、ＴＣＲ００１７、ＴＣＲ００１９、ＴＣＲ００２１、ＴＣＲ００２３、ＴＣＲ００２７、ＴＣＲ００２９、ＴＣＲ００３１、ＴＣＲ００３３、ＴＣＲ００３５、ＴＣＲ００３７、ＴＣＲ００４９、ＴＣＲ００５９、ＴＣＲ００６１、ＴＣＲ００６５、ＴＣＲ００６７、またはＴＣＲ００６９を発現するＡＫ−Ｄ１０Ｒ３細胞の活性化を試験するアッセイからの結果を示す一連のフローサイトメトリーのプロットである。対照ＳＸＸ−２ペプチドでパルス処理されたまたはペプチドなしのＴ２細胞と共培養したＴＣＲ１８１６８ｃを発現するＡＫ−Ｄ１０Ｒ３細胞を、対照として使用した。フローサイトメトリーのプロットにおいて、ｙ軸は表面ＴＣＲ染色を示し、ｘ軸は、ＡＫ−Ｄ１０Ｒ３細胞におけるＩＬ−２−（ＮＦＡＴ）３−ＥＧＦＰレポーター構築物の活性化から生じたＥＧＦＰ発現を示す。ＴＣＲ＋ＥＧＦＰ＋細胞の割合は、各プロットの右上のパネルに示される。
【図８Ａ】ＡＰＣ標識抗ヒトＴＣＲ抗体、野生型ＮＹ−ＥＳＯ−１ペプチドＳＬＬＭＷＩＴＱＣ（配列番号１）で充填されたＰＥ標識ＨＬＡ−Ａ＊０２０１四量体、または対照ＳＳＸ−２ペプチドＫＡＳＥＫＩＦＹＶ（配列番号２７４）で充填されたＰＥ標識ＨＬＡ−Ａ＊０２０１四量体を使用した、完全ヒトＴＣＲ：ＴＣＲ１８１６８、ＴＣＲ０００２、ＴＣＲ００１０、ＴＣＲ００１２、ＴＣＲ００１４、ＴＣＲ００１６、ＴＣＲ００１８、ＴＣＲ００２０、ＴＣＲ００２２、ＴＣＲ００２４、ＴＣＲ００２８、ＴＣＲ００３２、ＴＣＲ００３８、ＴＣＲ００５０、ＴＣＲ００６０、ＴＣＲ００６２、ＴＣＲ００６６、ＴＣＲ００６８、もしくはＴＣＲ００７０、またはＴＣＲ陰性ジャーカット細胞を発現するジャーカット細胞の染色を示す一連のフローサイトメトリーのプロットである。ＴＣＲ＋または四量体＋細胞の割合を各プロットに示す。
【図８Ｂ】図８Ａの続きである。
【図９Ａ】ＴＣＲトランスフェクトされたＴ細胞を様々な濃度のＮＹ−ＥＳＯ−１標的ペプチドでパルス処理されたＴ２細胞と共培養した後の、活性化マーカーのＣＤ２５発現の割合を示す一連のグラフである。実験は、１：１のエフェクター：標的比で設定され、平板培養の１６時間後に読み取った。示されるＴＣＲ候補のそれぞれの活性化パーセント値（図９Ａ：参照ＴＣＲ）は、様々なペプチド用量でプロットされた。
【図９Ｂ】示されるＴＣＲ候補のそれぞれの活性化パーセント値（図９Ｂ：ＴＣＲ０００２）は、様々なペプチド用量でプロットされた。
【図９Ｃ】示されるＴＣＲ候補のそれぞれの活性化パーセント値（図９Ｃ：ＴＣＲ００１４）は、様々なペプチド用量でプロットされた。
【図９Ｄ】示されるＴＣＲ候補のそれぞれの活性化パーセント値（図９Ｄ：ＴＣＲ００１８）は、様々なペプチド用量でプロットされた。
【図９Ｅ】示されるＴＣＲ候補のそれぞれの活性化パーセント値（図９Ｅ：ＴＣＲ００２２）は、様々なペプチド用量でプロットされた。
【図９Ｆ】示されるＴＣＲ候補のそれぞれの活性化パーセント値（図９Ｆ：ＴＣＲ００２８）は、様々なペプチド用量でプロットされた。
【図９Ｇ】示されるＴＣＲ候補のそれぞれの活性化パーセント値（図９Ｇ：ＴＣＲ００３８）は、様々なペプチド用量でプロットされた。
【図９Ｈ】示されるＴＣＲ候補のそれぞれの活性化パーセント値（図９Ｈ：ＴＣＲ００７０）は、様々なペプチド用量でプロットされた。
【図１０Ａ】ＴＣＲトランスフェクトされたＴ細胞を様々な濃度のＮＹ−ＥＳＯ−１標的ペプチドでパルス処理されたＴ２細胞と共培養した後の、細胞溶解能および脱顆粒マーカーのＣＤ１０７ａ発現の割合を示す一連のグラフである。実験は、１：１のエフェクター：標的比で設定され、平板培養の１６時間後に読み取った。示されるＴＣＲ候補のそれぞれの活性化パーセント値（図１０Ａ：参照ＴＣＲ）は、様々なペプチド用量でプロットされた。
【図１０Ｂ】示されるＴＣＲ候補のそれぞれの活性化パーセント値（図１０Ｂ：ＴＣＲ０００２）は、様々なペプチド用量でプロットされた。
【図１０Ｃ】示されるＴＣＲ候補のそれぞれの活性化パーセント値（図１０Ｃ：ＴＣＲ００１４）は、様々なペプチド用量でプロットされた。
【図１０Ｄ】示されるＴＣＲ候補のそれぞれの活性化パーセント値（図１０Ｄ：ＴＣＲ００１８）は、様々なペプチド用量でプロットされた。
【図１０Ｅ】示されるＴＣＲ候補のそれぞれの活性化パーセント値（図１０Ｅ：ＴＣＲ００２２）は、様々なペプチド用量でプロットされた。
【図１０Ｆ】示されるＴＣＲ候補のそれぞれの活性化パーセント値（図１０Ｆ：ＴＣＲ００２８）は、様々なペプチド用量でプロットされた。
【図１０Ｇ】示されるＴＣＲ候補のそれぞれの活性化パーセント値（図１０Ｇ：ＴＣＲ００３８）は、様々なペプチド用量でプロットされた。
【図１０Ｈ】示されるＴＣＲ候補のそれぞれの活性化パーセント値（図１０Ｈ：ＴＣＲ００７０）は、様々なペプチド用量でプロットされた。
【図１１Ａ】ＴＣＲトランスフェクトされたＴ細胞によるペプチドパルス処理されたＴ２細胞の死滅の割合を示す一連のグラフである。実験は、１：１のエフェクター：標的比で設定され、平板培養の１６時間後に読み取った。値は、試料ウェル中の対照標的細胞の数と特定の標的細胞の数の差を、対照標的細胞の数で除して（１００を乗じる）計算された。示されるＴＣＲ候補のそれぞれの死滅パーセント値（図１１Ａ：参照ＴＣＲ；図１１Ｂ：ＴＣＲ０００２；図１１Ｃ：ＴＣＲ００１４；図１１Ｄ：ＴＣＲ００１８；図１１Ｅ：ＴＣＲ００２２；図１１Ｆ：ＴＣＲ００２８；図１１Ｇ：ＴＣＲ００３８；および図１１Ｈ：ＴＣＲ００７０）は、様々なペプチド用量でプロットされた。
【図１１Ｂ】示されるＴＣＲ候補のそれぞれの死滅パーセント値（図１１Ｂ：ＴＣＲ０００２）は、様々なペプチド用量でプロットされた。
【図１１Ｃ】示されるＴＣＲ候補のそれぞれの死滅パーセント値（図１１Ｃ：ＴＣＲ００１４）は、様々なペプチド用量でプロットされた。
【図１１Ｄ】示されるＴＣＲ候補のそれぞれの死滅パーセント値（図１１Ｄ：ＴＣＲ００１８）は、様々なペプチド用量でプロットされた。
【図１１Ｅ】示されるＴＣＲ候補のそれぞれの死滅パーセント値（図１１Ｅ：ＴＣＲ００２２）は、様々なペプチド用量でプロットされた。
【図１１Ｆ】示されるＴＣＲ候補のそれぞれの死滅パーセント値（図１１Ｆ：ＴＣＲ００２８）は、様々なペプチド用量でプロットされた。
【図１１Ｇ】示されるＴＣＲ候補のそれぞれの死滅パーセント値（図１１Ｇ：ＴＣＲ００３８）は、様々なペプチド用量でプロットされた。
【図１１Ｈ】示されるＴＣＲ候補のそれぞれの死滅パーセント値（図１１Ｈ：ＴＣＲ００７０）は、様々なペプチド用量でプロットされた。
【図１２Ａ】示される比率で培養された、固定数のＨＬＡ−Ａ＊０２０１−およびＮＹ−ＥＳＯ−１形質導入されたＫ５６２標的細胞で１６時間刺激した後のトランスフェクトされたＴ細胞による、活性化のマーカーのＣＤ２５発現の割合を示す一連のグラフである。示されるＴＣＲ候補のそれぞれの活性化パーセント値（図１２Ａ：参照ＴＣＲ）は、一定数の標的細胞を維持しながら、トランスフェクトされたＴ細胞の数を変えて、様々なエフェクター対標的比でプロットされた。
【図１２Ｂ】示されるＴＣＲ候補のそれぞれの活性化パーセント値（図１２Ｂ：ＴＣＲ０００２）は、一定数の標的細胞を維持しながら、トランスフェクトされたＴ細胞の数を変えて、様々なエフェクター対標的比でプロットされた。
【図１２Ｃ】示されるＴＣＲ候補のそれぞれの活性化パーセント値（図１２Ｃ：ＴＣＲ００１４）は、一定数の標的細胞を維持しながら、トランスフェクトされたＴ細胞の数を変えて、様々なエフェクター対標的比でプロットされた。
【図１２Ｄ】示されるＴＣＲ候補のそれぞれの活性化パーセント値（図１２Ｄ：ＴＣＲ００１８）は、一定数の標的細胞を維持しながら、トランスフェクトされたＴ細胞の数を変えて、様々なエフェクター対標的比でプロットされた。
【図１２Ｅ】示されるＴＣＲ候補のそれぞれの活性化パーセント値（図１２Ｅ：ＴＣＲ００２２）は、一定数の標的細胞を維持しながら、トランスフェクトされたＴ細胞の数を変えて、様々なエフェクター対標的比でプロットされた。
【図１２Ｆ】示されるＴＣＲ候補のそれぞれの活性化パーセント値（図１２Ｆ：ＴＣＲ００２８）は、一定数の標的細胞を維持しながら、トランスフェクトされたＴ細胞の数を変えて、様々なエフェクター対標的比でプロットされた。
【図１２Ｇ】示されるＴＣＲ候補のそれぞれの活性化パーセント値（図１２Ｇ：ＴＣＲ００３８）は、一定数の標的細胞を維持しながら、トランスフェクトされたＴ細胞の数を変えて、様々なエフェクター対標的比でプロットされた。
【図１２Ｈ】示されるＴＣＲ候補のそれぞれの活性化パーセント値（図１２Ｈ：ＴＣＲ００７０）は、一定数の標的細胞を維持しながら、トランスフェクトされたＴ細胞の数を変えて、様々なエフェクター対標的比でプロットされた。
【図１３Ａ】ＴＣＲトランスフェクトされたＴ細胞を、示される比率で固定数のＨＬＡ−Ａ＊０２０１−およびＮＹ−ＥＳＯ−１形質導入されたＫ５６２標的細胞と共培養した後の、細胞溶解能および脱顆粒マーカーのＣＤ１０７ａ発現の割合を示す一連のグラフである。示されるＴＣＲ候補のそれぞれの活性化パーセント値（図１３Ａ：参照ＴＣＲ）は、一定数の標的細胞を維持しながら、トランスフェクトされたＴ細胞の数を変えて、様々なエフェクター対標的比でプロットされた。
【図１３Ｂ】示されるＴＣＲ候補のそれぞれの活性化パーセント値（図１３Ｂ：ＴＣＲ０００２）は、一定数の標的細胞を維持しながら、トランスフェクトされたＴ細胞の数を変えて、様々なエフェクター対標的比でプロットされた。
【図１３Ｃ】示されるＴＣＲ候補のそれぞれの活性化パーセント値（図１３Ｃ：ＴＣＲ００１４）は、一定数の標的細胞を維持しながら、トランスフェクトされたＴ細胞の数を変えて、様々なエフェクター対標的比でプロットされた。
【図１３Ｄ】示されるＴＣＲ候補のそれぞれの活性化パーセント値（図１３Ｄ：ＴＣＲ００１８）は、一定数の標的細胞を維持しながら、トランスフェクトされたＴ細胞の数を変えて、様々なエフェクター対標的比でプロットされた。
【図１３Ｅ】示されるＴＣＲ候補のそれぞれの活性化パーセント値（図１３Ｅ：ＴＣＲ００２２）は、一定数の標的細胞を維持しながら、トランスフェクトされたＴ細胞の数を変えて、様々なエフェクター対標的比でプロットされた。
【図１３Ｆ】示されるＴＣＲ候補のそれぞれの活性化パーセント値（図１３Ｆ：ＴＣＲ００２８）は、一定数の標的細胞を維持しながら、トランスフェクトされたＴ細胞の数を変えて、様々なエフェクター対標的比でプロットされた。
【図１３Ｇ】示されるＴＣＲ候補のそれぞれの活性化パーセント値（図１３Ｇ：ＴＣＲ００３８）は、一定数の標的細胞を維持しながら、トランスフェクトされたＴ細胞の数を変えて、様々なエフェクター対標的比でプロットされた。
【図１３Ｈ】示されるＴＣＲ候補のそれぞれの活性化パーセント値（図１３Ｈ：ＴＣＲ００７０）は、一定数の標的細胞を維持しながら、トランスフェクトされたＴ細胞の数を変えて、様々なエフェクター対標的比でプロットされた。
【図１４Ａ】示される比率での、ＨＬＡ−Ａ＊０２０１およびＮＹ−ＥＳＯ−１を発現するように形質導入されたＫ５６２細胞の死滅の割合を示す一連のグラフである。死滅の割合は、試料ウェル中の対照標的細胞の数と特定の標的細胞の数の差を、対照標的細胞の数で除して（１００を乗じる）計算された。示されるＴＣＲ候補のそれぞれの死滅パーセント値（図１４Ａ：参照ＴＣＲ）は、一定数の標的細胞を維持しながら、トランスフェクトされたＴ細胞の数を変えて、様々なエフェクター対標的比でプロットされた。
【図１４Ｂ】示されるＴＣＲ候補のそれぞれの死滅パーセント値（図１４Ｂ：ＴＣＲ０００２）は、一定数の標的細胞を維持しながら、トランスフェクトされたＴ細胞の数を変えて、様々なエフェクター対標的比でプロットされた。
【図１４Ｃ】示されるＴＣＲ候補のそれぞれの死滅パーセント値（図１４Ｃ：ＴＣＲ００１４）は、一定数の標的細胞を維持しながら、トランスフェクトされたＴ細胞の数を変えて、様々なエフェクター対標的比でプロットされた。
【図１４Ｄ】示されるＴＣＲ候補のそれぞれの死滅パーセント値（図１４Ｄ：ＴＣＲ００１８）は、一定数の標的細胞を維持しながら、トランスフェクトされたＴ細胞の数を変えて、様々なエフェクター対標的比でプロットされた。
【図１４Ｅ】示されるＴＣＲ候補のそれぞれの死滅パーセント値（図１４Ｅ：ＴＣＲ００２２）は、一定数の標的細胞を維持しながら、トランスフェクトされたＴ細胞の数を変えて、様々なエフェクター対標的比でプロットされた。
【図１４Ｆ】示されるＴＣＲ候補のそれぞれの死滅パーセント値（図１４Ｆ：ＴＣＲ００２８）は、一定数の標的細胞を維持しながら、トランスフェクトされたＴ細胞の数を変えて、様々なエフェクター対標的比でプロットされた。
【図１４Ｇ】示されるＴＣＲ候補のそれぞれの死滅パーセント値（図１４Ｇ：ＴＣＲ００３８）は、一定数の標的細胞を維持しながら、トランスフェクトされたＴ細胞の数を変えて、様々なエフェクター対標的比でプロットされた。
【図１４Ｈ】示されるＴＣＲ候補のそれぞれの死滅パーセント値（図１４Ｈ：ＴＣＲ００７０）は、一定数の標的細胞を維持しながら、トランスフェクトされたＴ細胞の数を変えて、様々なエフェクター対標的比でプロットされた。
【図１５】５：１のエフェクター：標的比でＴＣＲトランスフェクトされたＴ細胞と共培養した後の、ＨＬＡ−Ｂ＊０７０２形質導入されたＫ５６２細胞に対するＨＬＡ−Ａ＊０２０１−およびＮＹ−ＥＳＯ−１形質導入されたＫ５６２細胞の優先的死滅パーセントを示すグラフである。
【図１６Ａ】様々な比率でＨＬＡ−Ａ＊０２０１およびＮＹ−ＥＳＯ−１の内因性レベルを表すＳＬＭ２−ｍｅｌ黒色腫細胞とＴＣＲトランスフェクトされたＴ細胞を共培養した後の、活性化マーカーのＣＤ２５発現の割合を示す一連のグラフである。示されるＴＣＲ候補のそれぞれの活性化パーセント値（図１６Ａ：参照ＴＣＲ）は、一定数の標的細胞を維持しながら、トランスフェクトされたＴ細胞の数を変えて、様々なエフェクター対標的比でプロットされた。
【図１６Ｂ】示されるＴＣＲ候補のそれぞれの活性化パーセント値（図１６Ｂ：ＴＣＲ０００２）は、一定数の標的細胞を維持しながら、トランスフェクトされたＴ細胞の数を変えて、様々なエフェクター対標的比でプロットされた。
【図１６Ｃ】示されるＴＣＲ候補のそれぞれの活性化パーセント値（図１６Ｃ：ＴＣＲ００１４）は、一定数の標的細胞を維持しながら、トランスフェクトされたＴ細胞の数を変えて、様々なエフェクター対標的比でプロットされた。
【図１６Ｄ】示されるＴＣＲ候補のそれぞれの活性化パーセント値（図１６Ｄ：ＴＣＲ００１８）は、一定数の標的細胞を維持しながら、トランスフェクトされたＴ細胞の数を変えて、様々なエフェクター対標的比でプロットされた。
【図１６Ｅ】示されるＴＣＲ候補のそれぞれの活性化パーセント値（図１６Ｅ：ＴＣＲ００２２）は、一定数の標的細胞を維持しながら、トランスフェクトされたＴ細胞の数を変えて、様々なエフェクター対標的比でプロットされた。
【図１６Ｆ】示されるＴＣＲ候補のそれぞれの活性化パーセント値（図１６Ｆ：ＴＣＲ００２８）は、一定数の標的細胞を維持しながら、トランスフェクトされたＴ細胞の数を変えて、様々なエフェクター対標的比でプロットされた。
【図１７Ａ】トランスフェクトされたＴ細胞が様々な比率でＳＬＭ２−ｍｅｌ細胞と共培養されたときの、細胞溶解能および脱顆粒マーカーのＣＤ１０７ａ発現の割合を示す一連のグラフである。示されるＴＣＲ候補のそれぞれの活性化パーセント値（図１７Ａ）は、一定数の標的細胞を維持しながら、トランスフェクトされたＴ細胞の数を変えて、様々なエフェクター対標的比でプロットされた。
【図１７Ｂ】示されるＴＣＲ候補のそれぞれの活性化パーセント値（図１７Ｂ：ＴＣＲ０００２）は、一定数の標的細胞を維持しながら、トランスフェクトされたＴ細胞の数を変えて、様々なエフェクター対標的比でプロットされた。
【図１７Ｃ】示されるＴＣＲ候補のそれぞれの活性化パーセント値（図１７Ｃ：ＴＣＲ００１４）は、一定数の標的細胞を維持しながら、トランスフェクトされたＴ細胞の数を変えて、様々なエフェクター対標的比でプロットされた。
【図１７Ｄ】示されるＴＣＲ候補のそれぞれの活性化パーセント値（図１７Ｄ：ＴＣＲ００１８）は、一定数の標的細胞を維持しながら、トランスフェクトされたＴ細胞の数を変えて、様々なエフェクター対標的比でプロットされた。
【図１７Ｅ】示されるＴＣＲ候補のそれぞれの活性化パーセント値（図１７Ｅ：ＴＣＲ００２２）は、一定数の標的細胞を維持しながら、トランスフェクトされたＴ細胞の数を変えて、様々なエフェクター対標的比でプロットされた。
【図１７Ｆ】示されるＴＣＲ候補のそれぞれの活性化パーセント値（図１７Ｆ：ＴＣＲ００２８）は、一定数の標的細胞を維持しながら、トランスフェクトされたＴ細胞の数を変えて、様々なエフェクター対標的比でプロットされた。
【図１８Ａ】ＨＬＡ−Ａ＊０２０１およびＮＹ−ＥＳＯ−１ペプチドの内因性レベルを表すＳＬＭ２−ｍｅｌ黒色腫細胞の死滅の割合を示す一連のグラフである。示されるＴＣＲ候補のそれぞれの細胞傷害性値（図１８Ａ：参照ＴＣＲ）は、一定数の標的細胞を維持しながら、トランスフェクトされたＴ細胞の数を変えて、様々なエフェクター対標的比でプロットされた。
【図１８Ｂ】示されるＴＣＲ候補のそれぞれの細胞傷害性値（図１８Ｂ：ＴＣＲ０００２）は、一定数の標的細胞を維持しながら、トランスフェクトされたＴ細胞の数を変えて、様々なエフェクター対標的比でプロットされた。
【図１８Ｃ】示されるＴＣＲ候補のそれぞれの細胞傷害性値（図１８Ｃ：ＴＣＲ００１４）は、一定数の標的細胞を維持しながら、トランスフェクトされたＴ細胞の数を変えて、様々なエフェクター対標的比でプロットされた。
【図１８Ｄ】示されるＴＣＲ候補のそれぞれの細胞傷害性値（図１８Ｄ：ＴＣＲ００１８）は、一定数の標的細胞を維持しながら、トランスフェクトされたＴ細胞の数を変えて、様々なエフェクター対標的比でプロットされた。
【図１８Ｅ】示されるＴＣＲ候補のそれぞれの細胞傷害性値（図１８Ｅ：ＴＣＲ００２２）は、一定数の標的細胞を維持しながら、トランスフェクトされたＴ細胞の数を変えて、様々なエフェクター対標的比でプロットされた。
【図１８Ｆ】示されるＴＣＲ候補のそれぞれの細胞傷害性値（図１８Ｆ：ＴＣＲ００２８）は、一定数の標的細胞を維持しながら、トランスフェクトされたＴ細胞の数を変えて、様々なエフェクター対標的比でプロットされた。
【図１９Ａ】示されるＴＣＲの特異性（図１９Ａ：参照ＴＣＲ）を、アンカー最適化ＮＹ−ＥＳＯ−１ペプチドＳＬＬＭＷＩＴＱＶ（配列番号２）の単一点変異である９−ｍｅｒペプチド群と比較した一連のヒートマップである。９−ｍｅｒペプチドの各位置（Ｐ２およびＰ９を除く）は、１９の異なるアミノ酸残基のうちの１つで置換された。各得られたペプチドを使用してＴ２標的細胞をパルス処理し、これはＴＣＲ発現エフェクター細胞（ＮＹ−ＥＳＯ  ＡＫ−Ｄ１０Ｒ３細胞）と共培養された。得られた変異ペプチドへのＴＣＲの結合時に、エフェクター細胞は、ＥＧＦＰレポーターを発現するように活性化され、これはＦＡＣＳにより検出された。結果は、垂直軸上に示される残基の代わりに、水平軸上のアンカー最適化ＮＹ−ＥＳＯ−１ペプチドＳＬＬＭＷＩＴＱＶ（配列番号２）における天然残基のアミノ酸残基置換を表す各ブロックが正規化された平均活性化（正規化された値は最小０．０および最大１．０に刈り込まれた）に対するスケールで陰影が付けられるヒートマップとして示される。「Ｘ」は未試験の変異体を表す。背景活性化（ペプチドが充填されない）は、全てのペプチド充填試料から差し引かれた（変更されたおよび天然の配列）。
【図１９Ｂ】示されるＴＣＲの特異性（図１９Ｂ：ＴＣＲ０００１）を、アンカー最適化ＮＹ−ＥＳＯ−１ペプチドＳＬＬＭＷＩＴＱＶ（配列番号２）の単一点変異である９−ｍｅｒペプチド群と比較した一連のヒートマップである。
【図１９Ｃ】示されるＴＣＲの特異性（図１９Ｃ：ＴＣＲ００１７）を、アンカー最適化ＮＹ−ＥＳＯ−１ペプチドＳＬＬＭＷＩＴＱＶ（配列番号２）の単一点変異である９−ｍｅｒペプチド群と比較した一連のヒートマップである。
【図１９Ｄ】示されるＴＣＲの特異性（図１９Ｄ：ＴＣＲ００２１）を、アンカー最適化ＮＹ−ＥＳＯ−１ペプチドＳＬＬＭＷＩＴＱＶ（配列番号２）の単一点変異である９−ｍｅｒペプチド群と比較した一連のヒートマップである。
【図１９Ｅ】示されるＴＣＲの特異性（図１９Ｅ：ＴＣＲ００３７）を、アンカー最適化ＮＹ−ＥＳＯ−１ペプチドＳＬＬＭＷＩＴＱＶ（配列番号２）の単一点変異である９−ｍｅｒペプチド群と比較した一連のヒートマップである。
【図２０Ａ】示されるＴＣＲの特異性プロファイル（図２０Ａ：参照ＴＣＲ）（図１９Ａ〜１９Ｅについて記載される各変異体ＮＹ−ＥＳＯ−１ペプチド（黒色のダイヤモンド、「変更された」）、ならびに同族のアンカー最適化ＮＹ−ＥＳＯ−１ペプチドＳＬＬＭＷＩＴＱＶ（配列番号２）（白四角、「エピトープ」）の正規化された平均活性化値を示す）を比較する一連の棒グラフである。各図の右端に示されるアンカー最適化ＮＹ−ＥＳＯ−１ペプチドＳＬＬＭＷＩＴＱＶ（配列番号２）に対応する「エピトープ」ペプチド値を除き、配列番号２７５〜４０７のペプチドに対応する正規化された平均活性化値（最大１．０に刈り込まれた）は、配列番号の昇順で左から右に表される。誤差棒（黒色）は、平均値の標準誤差（ＳＥＭ）を表す。
【図２０Ｂ】示されるＴＣＲの特異性プロファイル（図２０Ｂ：ＴＣＲ０００１）（図１９Ａ〜１９Ｅについて記載される各変異体ＮＹ−ＥＳＯ−１ペプチド（黒色のダイヤモンド、「変更された」）、ならびに同族のアンカー最適化ＮＹ−ＥＳＯ−１ペプチドＳＬＬＭＷＩＴＱＶ（配列番号２）（白四角、「エピトープ」）の正規化された平均活性化値を示す）を比較する一連の棒グラフである。
【図２０Ｃ】示されるＴＣＲの特異性プロファイル（図２０Ｃ：ＴＣＲ００１７）（図１９Ａ〜１９Ｅについて記載される各変異体ＮＹ−ＥＳＯ−１ペプチド（黒色のダイヤモンド、「変更された」）、ならびに同族のアンカー最適化ＮＹ−ＥＳＯ−１ペプチドＳＬＬＭＷＩＴＱＶ（配列番号２）（白四角、「エピトープ」）の正規化された平均活性化値を示す）を比較する一連の棒グラフである。
【図２０Ｄ】示されるＴＣＲの特異性プロファイル（図２０Ｄ：ＴＣＲ００２１）（図１９Ａ〜１９Ｅについて記載される各変異体ＮＹ−ＥＳＯ−１ペプチド（黒色のダイヤモンド、「変更された」）、ならびに同族のアンカー最適化ＮＹ−ＥＳＯ−１ペプチドＳＬＬＭＷＩＴＱＶ（配列番号２）（白四角、「エピトープ」）の正規化された平均活性化値を示す）を比較する一連の棒グラフである。
【図２０Ｅ】示されるＴＣＲの特異性プロファイル（図２０Ｅ：ＴＣＲ００３７）（図１９Ａ〜１９Ｅについて記載される各変異体ＮＹ−ＥＳＯ−１ペプチド（黒色のダイヤモンド、「変更された」）、ならびに同族のアンカー最適化ＮＹ−ＥＳＯ−１ペプチドＳＬＬＭＷＩＴＱＶ（配列番号２）（白四角、「エピトープ」）の正規化された平均活性化値を示す）を比較する一連の棒グラフである。
【発明を実施するための形態】
【００５１】
ＴＣＲ（例えば、ＮＹ−ＥＳＯ−１に結合するＴＣＲ）、これらのＴＣＲを含む細胞および薬学的組成物、これらのＴＣＲをコードする核酸、これらのＴＣＲを作製するための発現ベクターおよび宿主細胞、ならびにこれらのＴＣＲを使用して対象を治療する方法が提供される。本明細書に開示されるＴＣＲは、ＮＹ−ＥＳＯ−１を発現する癌細胞に対して免疫応答を指向し、したがって、対象におけるＮＹ−ＥＳＯ−１発現癌を治療するのに特に有用である。
【００５２】
５．１定義
本明細書で使用される場合、「約」および「およそ」という用語は、数値または数値範囲を修飾するために使用されるとき、５％〜１０％上回り（例えば、最大５％〜１０％上回る）、かつ５％〜１０％下回る（例えば、最大５％〜１０％下回る）その値または範囲の偏差が、列挙される値または範囲の意図される意味に留まることを示す。
【００５３】
本明細書で使用される場合、「ＮＹ−ＥＳＯ−１」という用語は、ＣＴＡＧ１ＡまたはＣＴＡＧ１Ｂ遺伝子によってコードされたヒト癌／精巣抗原を指す。
【００５４】
本明細書で使用される場合、「Ｔ細胞受容体」および「ＴＣＲ」という用語は、互換的に使用され、αβまたはγδ  Ｔ細胞受容体からのＣＤＲまたは可変領域を含む分子を指す。ＴＣＲの例としては、完全長ＴＣＲ、ＴＣＲの抗原結合断片、膜貫通および細胞質領域を欠いている可溶性ＴＣＲ、可動性リンカーによって結合されたＴＣＲの可変領域を含有する単鎖ＴＣＲ、操作されたジスルフィド結合によって連結されたＴＣＲ鎖、単一のＴＣＲ可変ドメイン、単一のペプチド−ＭＨＣ特異的ＴＣＲ、多特異的ＴＣＲ（二重特異的ＴＣＲを含む）、ＴＣＲ融合物、共刺激領域を含むＴＣＲ、ヒトＴＣＲ、ヒト化ＴＣＲ、キメラＴＣＲ、組換えにより産生されたＴＣＲ、ならびに合成ＴＣＲが挙げられるが、これらに限定されない。ある特定の実施形態では、ＴＣＲは、完全長α鎖および完全長β鎖を含む完全長ＴＣＲである。ある特定の実施形態では、ＴＣＲは、膜貫通および／または細胞質領域（複数可）を欠く可溶性ＴＣＲである。ある特定の実施形態では、ＴＣＲは、ＰＣＴ公開第ＷＯ２００３／０２０７６３号、同第ＷＯ２００４／０３３６８５号、または同第ＷＯ２０１１／０４４１８６号（それらの各々は参照によりそれらの全体が本明細書に組み込まれる）に記載される構造を有するｓｃＴＣＲなど、ペプチドリンカーによって連結されたＶαおよびＶβを含む単鎖ＴＣＲ（ｓｃＴＣＲ）である。ある特定の実施形態では、ＴＣＲは、膜貫通領域を含む。ある特定の実施形態では、ＴＣＲは、共刺激シグナル伝達領域を含む。
【００５５】
本明細書で使用される場合、「完全長ＴＣＲ」という用語は、第１および第２のポリペプチド鎖の二量体を含むＴＣＲを指し、それらの各々は、ＴＣＲ膜貫通領域およびＴＣＲ細胞質領域を含むＴＣＲ可変領域およびＴＣＲ定常領域を含む。ある特定の実施形態では、完全長ＴＣＲは、１つまたは２つの未修飾ＴＣＲ鎖、例えば、未修飾のα、β、γ、またはδ  ＴＣＲ鎖を含む。ある特定の実施形態では、完全長ＴＣＲは、キメラＴＣＲ鎖および／または未修飾ＴＣＲ鎖に対して１つ以上のアミノ酸置換、挿入、もしくは欠失を含むＴＣＲ鎖など、１つまたは２つの変更されたＴＣＲ鎖を含む。ある特定の実施形態では、完全長ＴＣＲは、成熟完全長ＴＣＲ  α鎖および成熟完全長ＴＣＲ  β鎖を含む。ある特定の実施形態では、完全長ＴＣＲは、成熟完全長ＴＣＲ  γ鎖および成熟完全長ＴＣＲ  δ鎖を含む。
【００５６】
本明細書で使用される場合、「ＴＣＲ可変領域」という用語は、ＴＣＲ  α鎖のＴＲＡＣ遺伝子、ＴＣＲ  β鎖のＴＲＢＣ１もしくはＴＲＢＣ２遺伝子のいずれか、ＴＣＲ  δ鎖のＴＲＤＣ遺伝子、またはＴＣＲ  γ鎖のＴＲＧＣ１もしくはＴＲＧＣ２遺伝子のいずれかによってコードされない成熟ＴＣＲポリペプチド鎖（例えば、ＴＣＲ  α鎖またはβ鎖）の部分を指す。いくつかの実施形態では、ＴＣＲ  α鎖のＴＣＲ可変領域は、ＴＲＡＶおよび／またはＴＲＡＪ遺伝子によってコードされる成熟ＴＣＲ  α鎖ポリペプチドの全てのアミノ酸を包含し、ＴＣＲ  β鎖のＴＣＲ可変領域は、ＴＲＢＶ、ＴＲＢＤ、および／またはＴＲＢＪ遺伝子によってコードされる成熟ＴＣＲ  β鎖ポリペプチドの全てのアミノ酸を包含する（例えば、Ｔ  ｃｅｌｌ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  Ｆａｃｔｓｂｏｏｋ，（２００１）ＬｅＦｒａｎｃ  ａｎｄ  ＬｅＦｒａｎｃ，Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ，ＩＳＢＮ  ０−１２−４４１３５２−８（参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）を参照されたい）。ＴＣＲ可変領域は、一般に、フレームワーク領域（ＦＲ）１、２、３、および４、ならびに相補性決定領域（ＣＤＲ）１、２、および３を含む。
【００５７】
本明細書で使用される場合、「α鎖可変領域」および「Ｖα」という用語は、互換的に使用され、ＴＣＲ  α鎖の可変領域を指す。
【００５８】
本明細書で使用される場合、「β鎖可変領域」および「Ｖβ」という用語は、互換的に使用され、ＴＣＲ  β鎖の可変領域を指す。
【００５９】
ＴＣＲとの関連において本明細書で使用される場合、「ＣＤＲ」または「相補性決定領域」という用語は、ＴＣＲ鎖（例えば、α鎖またはβ鎖）の可変領域内に見られる非隣接抗原結合部位を意味する。これらの領域は、Ｌｅｆｒａｎｃ，（１９９９）Ｔｈｅ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｓｔ  ７：１３２−１３６、Ｌｅｆｒａｎｃ  ｅｔ  ａｌ．，（１９９９）Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ  ２７：２０９−２１２、ＬｅＦｒａｎｃ（２００１）Ｔ  ｃｅｌｌ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  Ｆａｃｔｓｂｏｏｋ，Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ，ＩＳＢＮ  ０−１２−４４１３５２−８、Ｌｅｆｒａｎｃ  ｅｔ  ａｌ．，（２００３）Ｄｅｖ  Ｃｏｍｐ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．２７（１）：５５−７７、およびＫａｂａｔ  ｅｔ  ａｌ．，（１９９１）Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  ｐｒｏｔｅｉｎ  ｏｆ  ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  ｉｎｔｅｒｅｓｔに記載されており、それらの各々は参照によりそれらの全体が本明細書に組み込まれる。ある特定の実施形態では、ＣＤＲは、Ｌｅｆｒａｎｃ（１９９９）（上掲）に記載されるＩＭＧＴ番号付けシステムに従い決定される。ある特定の実施形態では、ＣＤＲは、Ｋａｂａｔ（上掲）に記載されるＫａｂａｔ番号付けシステムに従い定義される。ある特定の実施形態では、ＣＤＲは、例えば、ＴＣＲの同族抗原（例えば、ペプチドまたはペプチド−ＭＨＣ複合体）との相互作用の構造分析に基づいて経験的に定義される。ある特定の実施形態では、ＴＣＲのα鎖およびβ鎖ＣＤＲは、異なる規則に従い（例えば、ＫａｂａｔもしくはＩＭＧＴ番号付けシステムに従う、または構造分析に基づいて経験的に）定義される。
【００６０】
本明細書で使用される場合、「フレームワークアミノ酸残基」という用語は、ＴＣＲ鎖（例えば、α鎖またはβ鎖）のフレームワーク領域におけるこれらのアミノ酸を指す。本明細書で使用される場合、「フレームワーク領域」または「ＦＲ」という用語は、ＴＣＲ可変領域の一部であるが、ＣＤＲの一部ではないアミノ酸残基を含む。
【００６１】
本明細書で使用される場合、ＴＣＲに関して「定常領域」という用語は、任意選択で膜貫通領域の全てもしくは一部、および／または細胞質領域の全てもしくは一部を欠いている、ＴＲＡＣ遺伝子（ＴＣＲ  α鎖の）、ＴＲＢＣ１もしくはＴＲＢＣ２遺伝子（ＴＣＲ  β鎖の）のいずれか、ＴＲＤＣ遺伝子（ＴＣＲ  δ鎖の）、またはＴＲＧＣ１もしくはＴＲＧＣ２遺伝子（ＴＣＲ  γ鎖の）のいずれかによってコードされるＴＣＲの部分を指す。ある特定の実施形態では、ＴＣＲ定常領域は、膜貫通領域および細胞質領域を欠いている。ＴＣＲ定常領域は、ＴＲＡＶ、ＴＲＡＪ、ＴＲＢＶ、ＴＲＢＤ、ＴＲＢＪ、ＴＲＤＶ、ＴＲＤＤ、ＴＲＤＪ、ＴＲＧＶ、またはＴＲＧＪ遺伝子によってコードされるアミノ酸を含まない（例えば、Ｔ  ｃｅｌｌ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  Ｆａｃｔｓｂｏｏｋ，（２００１）ＬｅＦｒａｎｃ  ａｎｄ  ＬｅＦｒａｎｃ，Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ，ＩＳＢＮ  ０−１２−４４１３５２−８（参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）を参照されたい）。
【００６２】
本明細書で使用される場合、「主要組織適合遺伝子複合体」および「ＭＨＣ」という用語は、互換的に使用され、ＭＨＣクラスＩ分子および／またはＭＨＣクラスＩＩ分子を指す。
【００６３】
本明細書で使用される場合、「ＭＨＣクラスＩ」という用語は、ＭＨＣクラスＩ  α鎖およびβ２ミクログロブリン鎖の二量体を指し、「ＭＨＣクラスＩＩ」という用語は、ＭＨＣクラスＩＩ  α鎖およびＭＨＣクラスＩＩ  β鎖の二量体を指す。
【００６４】
本明細書で使用される場合、「ペプチド−ＭＨＣ複合体」という用語は、当該技術分野で認識されるＭＨＣのペプチド結合ポケットにおいて結合されるペプチドを有するＭＨＣ分子（ＭＨＣクラスＩまたはＭＨＣクラスＩＩ）を指す。いくつかの実施形態では、ＭＨＣ分子は、細胞表面上に発現される膜結合タンパク質である。いくつかの実施形態では、ＭＨＣ分子は、膜貫通または細胞質領域を欠いている可溶性タンパク質である。
【００６５】
本明細書で使用される場合、ＴＣＲに関して「細胞外」という用語は、細胞の外側に位置する組換え膜貫通タンパク質の部分（複数可）を指す。
【００６６】
本明細書で使用される場合、ＴＣＲ鎖に関して「膜貫通」という用語は、細胞の形質膜に包埋されるＴＣＲ鎖の部分（複数可）を指す。
【００６７】
本明細書で使用される場合、ＴＣＲ鎖に関して「細胞質」という用語は、細胞の細胞質に位置するＴＣＲ鎖の部分（複数可）を指す。
【００６８】
本明細書で使用される場合、共刺激シグナル伝達領域」という用語は、細胞内シグナル伝達事象の媒介に関与する共刺激分子の細胞内部分を指す。
【００６９】
「結合親和性」は、一般に、分子の単一の結合部位（例えば、ＴＣＲ）とその結合パートナー（例えば、ペプチド−ＭＨＣ複合体）との間の非共有相互作用の合計強度を指す。別途示されない限り、本明細書で使用される場合、「結合親和性」は、結合対（例えば、ＴＣＲおよびペプチド−ＭＨＣ複合体）のメンバー間の１：１の相互作用を反映する内因性の結合親和性を指す。分子ＸのそのパートナーＹに対する親和性は、一般に、解離定数（ＫＤ）によって表すことができる。親和性は、平衡解離定数（ＫＤ）および平衡会合定数（ＫＡ）を含むが、これらに限定されない当該技術分野で既知のいくつかの方法で測定および／または表すことができる。ＫＤはｋｏｆｆ／ｋｏｎの商から計算され、一方でＫＡはｋｏｎ／ｋｏｆｆの商から計算される。ｋｏｎは、例えば、ＴＣＲのペプチド−ＭＨＣ複合体への会合速度定数を指し、ｋｏｆｆは、例えば、ＴＣＲのペプチド−ＭＨＣ複合体への解離速度定数を指す。ｋｏｎおよびｋｏｆｆは、ＢＩＡｃｏｒｅ（登録商標）またはＫｉｎＥｘＡの使用など、当業者に既知の技法によって決定することができる。本明細書で使用される場合、「より低い親和性」は、より大きいＫＤを指す。
【００７０】
本明細書で使用される場合、「〜に特異的に結合する」という用語は、そのような結合が当業者に理解されるように、ＴＣＲが特定の抗原（例えば、特定のペプチドまたは特定のペプチド−ＭＨＣ複合体）に優先的に結合する能力を指す。例えば、ある抗原に特異的に結合するＴＣＲは、ＢＩＡｃｏｒｅ（登録商標）または当該技術分野で既知の他のイムノアッセイにより決定されるとき、一般に、より低い親和性で他の抗原に結合することができる（例えば、Ｓａｖａｇｅ  ｅｔ  ａｌ．，Ｉｍｍｕｎｉｔｙ．１９９９，１０（４）：４８５−９２（参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）を参照されたい）。具体的な実施形態では、ある抗原に特異的に結合するＴＣＲは、ＴＣＲが別の抗原に結合するときのＫａより少なくとも２倍、５倍、１０倍、５０倍、１００倍、５００倍、１，０００倍、５，０００倍、または１０，０００倍大きい会合定数（Ｋａ）でその抗原に結合する。ある特定の実施形態では、本明細書に開示されるＴＣＲは、配列番号１または２に記載のアミノ酸配列からなるペプチドに特異的に結合する。
【００７１】
本明細書で使用される場合、「エピトープ」は、当該技術分野における用語であり、ＴＣＲが結合することができる抗原（例えば、ペプチドまたはペプチド−ＭＨＣ複合体）の局在化領域を指す。ある特定の実施形態では、ＴＣＲが結合するエピトープは、例えば、ＮＭＲ分光法、Ｘ線回折結晶学研究、ＥＬＩＳＡアッセイ、質量分析を伴う水素／重水素交換（例えば、液体クロマトグラフィーエレクトロスプレー質量分析）、フローサイトメトリー分析、変異誘発マッピング（例えば、部位特異的変異誘発マッピング）、および／または構造モデル化によって決定することができる。Ｘ線結晶学について、結晶化は、当該技術分野で既知の方法のうちのいずれかを使用して達成することができる（例えば、Ｇｉｅｇｅ  Ｒ  ｅｔ  ａｌ．，（１９９４）Ａｃｔａ  Ｃｒｙｓｔａｌｌｏｇｒ  Ｄ  Ｂｉｏｌ  Ｃｒｙｓｔａｌｌｏｇｒ  ５０（Ｐｔ  ４）：３３９−３５０、ＭｃＰｈｅｒｓｏｎ  Ａ（１９９０）Ｅｕｒ  Ｊ  Ｂｉｏｃｈｅｍ  １８９：１−２３、Ｃｈａｙｅｎ  ＮＥ（１９９７）Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ  ５：１２６９−１２７４、ＭｃＰｈｅｒｓｏｎ  Ａ（１９７６）Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ  ２５１：６３００−６３０３、それらの各々は参照によりそれらの全体が本明細書に組み込まれる）。ＴＣＲ：抗原結晶は、周知のＸ線回折技法を使用して研究することができ、Ｘ−ＰＬＯＲ（Ｙａｌｅ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，１９９２、販売元Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｓｉｍｕｌａｔｉｏｎｓ，Ｉｎｃ．、例えば、Ｍｅｔｈ  Ｅｎｚｙｍｏｌ（１９８５）ｖｏｌｕｍｅｓ  １１４  ＆  １１５，ｅｄｓ  Ｗｙｃｋｏｆｆ  ＨＷ  ｅｔ  ａｌ．，；Ｕ．Ｓ．２００４／００１４１９４号を参照されたい）、およびＢＵＳＴＥＲ（Ｂｒｉｃｏｇｎｅ  Ｇ（１９９３）Ａｃｔａ  Ｃｒｙｓｔａｌｌｏｇｒ  Ｄ  Ｂｉｏｌ  Ｃｒｙｓｔａｌｌｏｇｒ  ４９（Ｐｔ  １）：３７−６０、Ｂｒｉｃｏｇｎｅ  Ｇ（１９９７）Ｍｅｔｈ  Ｅｎｚｙｍｏｌ  ２７６Ａ：３６１−４２３，ｅｄ  Ｃａｒｔｅｒ  ＣＷ、Ｒｏｖｅｒｓｉ  Ｐ  ｅｔ  ａｌ．，（２０００）Ａｃｔａ  Ｃｒｙｓｔａｌｌｏｇｒ  Ｄ  Ｂｉｏｌ  Ｃｒｙｓｔａｌｌｏｇｒ  ５６（Ｐｔ  １０）：１３１６−１３２３）（それらの各々は参照によりそれらの全体が本明細書に組み込まれる）などのコンピュータソフトウェアを使用して精密化することができる。変異誘発マッピング研究は、当業者に既知の任意の方法を使用して達成することができる。アラニン走査変異誘発技法を含む変異誘発技法の説明については、例えば、Ｃｈａｍｐｅ  Ｍ  ｅｔ  ａｌ．（１９９５）Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ  ２７０：１３８８−１３９４およびＣｕｎｎｉｎｇｈａｍ  ＢＣ  ＆  Ｗｅｌｌｓ  ＪＡ（１９８９）Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２４４：１０８１−１０８５（それらの各々は参照によりそれらの全体が本明細書に組み込まれる）を参照されたい。具体的な実施形態では、抗原のエピトープは、アラニン走査変異誘発研究を使用して決定される。具体的な実施形態では、抗原のエピトープは、質量分析を伴う水素／重水素交換を使用して決定される。ある特定の実施形態では、抗原はペプチド−ＭＨＣ複合体である。ある特定の実施形態では、抗原は、ＭＨＣ分子により呈されるペプチドである。
【００７２】
本明細書で使用される場合、「治療する」、「治療すること」、および「治療」は、本明細書に記載の治療または予防手段を指す。いくつかの実施形態では、「治療」の方法は、疾患もしくは障害の１つ以上の症状、または再発疾患もしくは障害を予防、治癒、遅延、その重症度を低減、もしくは緩和するために、またはそのような治療の不在下で予想される対象の生存を超えてその生存を延長させるために、疾患もしくは障害を有する、またはそのような疾患もしくは障害を有する素因がある対象への、ＴＣＲまたはＴＣＲを発現する細胞の投与を用いる。
【００７３】
本明細書で使用される場合、「有効量」という用語は、対象への治療の投与との関連において、所望の予防または治療効果を達成する治療の量を指す。
【００７４】
本明細書で使用される場合、「対象」という用語は、あらゆるヒトまたは非ヒト動物を含む。一実施形態では、対象は、ヒトまたは非ヒト哺乳動物である。一実施形態では、対象は、ヒトである。
【００７５】
２つの配列（例えば、アミノ酸配列または核酸配列）間の「同一性パーセント」の決定は、数学アルゴリズムを使用して達成され得る。２つの配列の比較に利用される数学アルゴリズムの具体的な非限定的な例は、Ｋａｒｌｉｎ  Ｓ  ＆  Ａｌｔｓｃｈｕｌ  ＳＦ（１９９３）ＰＮＡＳ  ９０：５８７３−５８７７にあるように修正されたＫａｒｌｉｎ  Ｓ  ＆  Ａｌｔｓｃｈｕｌ  ＳＦ（１９９０）ＰＮＡＳ  ８７：２２６４−２２６８（それらの各々は参照によりそれらの全体が本明細書に組み込まれる）のアルゴリズムである。そのようなアルゴリズムは、Ａｌｔｓｃｈｕｌ  ＳＦ  ｅｔ  ａｌ．，（１９９０）Ｊ  Ｍｏｌ  Ｂｉｏｌ  ２１５：４０３（参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）のＮＢＬＡＳＴおよびＸＢＬＡＳＴプログラムに組み込まれる。ＢＬＡＳＴヌクレオチド検索は、本明細書に記載の核酸分子と相同なヌクレオチド配列を得るために、例えば、スコア＝１００、文字長＝１２のＮＢＬＡＳＴヌクレオチドプログラムパラメータセットで行うことができる。ＢＬＡＳＴタンパク質検索は、本明細書に記載のタンパク質分子と相同なアミノ酸配列を得るために、例えば、スコア＝５０、文字長＝３のＸＢＬＡＳＴプログラムパラメータセットで行うことができる。比較目的のためにギャップ有りのアラインメントを得るには、ギャップ有りのＢＬＡＳＴを、Ａｌｔｓｃｈｕｌ  ＳＦ  ｅｔ  ａｌ．，（１９９７）Ｎｕｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ  ２５：３３８９  ３４０２（参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）に記載されるように利用することができる。あるいは、ＰＳＩ  ＢＬＡＳＴを使用して、分子間の距離関係を検出する反復検索を行うことができる。（同上）ＢＬＡＳＴ、ギャップ有りのＢＬＡＳＴ、およびＰＳＩ  Ｂｌａｓｔプログラムを利用する場合、それぞれのプログラムの（例えばＸＢＬＡＳＴおよびＮＢＬＡＳＴの）デフォルトパラメータを使用することができる（例えば、ワールドウェブｎｃｂｉ．ｎｌｍ．ｎｉｈ．ｇｏｖにあるＮａｔｉｏｎａｌ  Ｃｅｎｔｅｒ  ｆｏｒ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ（ＮＣＢＩ）を参照されたい）。配列比較のために利用される数学アルゴリズムの別の具体的な非限定的な例は、Ｍｙｅｒｓ  ａｎｄ  Ｍｉｌｌｅｒ，  １９８８，  ＣＡＢＩＯＳ  ４：１１−１７（参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）のアルゴリズムである。そのようなアルゴリズムは、ＧＣＧ配列アライメントソフトウェアパッケージの一部であるＡＬＩＧＮプログラム（バージョン２．０）に組み込まれている。アミノ酸配列を比較するためにＡＬＩＧＮプログラムを利用する場合、ＰＡＭ１２０重量残基表、１２のギャップ長ペナルティ、および４のギャップペナルティを使用することができる。
【００７６】
２つの配列間の同一性パーセントは、ギャップを許容して、または許容することなく、上述のものと同様の技法を使用して決定することができる。同一性パーセントの計算では、典型的には、正確な一致のみを計数する。
【００７７】
本明細書で使用される場合、「エフェクター部分」という用語は、分子の自然な活性を増加もしくは減少させる、または分子に新たな活性を付与する分子の構成要素または官能基を指す。ある特定の実施形態では、エフェクター部分は結合部分である。ある実施形態では、結合部分は細胞表面タンパク質に結合する。ある特定の実施形態では、結合部分は抗体である。
【００７８】
本明細書で使用される場合、「抗体（複数可）」という用語は、完全長抗体、完全長抗体の抗原結合断片、抗体ＣＤＲ、ＶＨ領域、またはＶＬ領域を含む分子を含む。抗体の例としては、モノクローナル抗体、組換え産生された抗体、単一特異的抗体、多特異的抗体（二重特異的抗体を含む）、ヒト抗体、ヒト化抗体、キメラ抗体、免疫グロブリン、合成抗体、２つの重鎖および２つの軽鎖分子を含む四量体抗体、抗体軽鎖単量体、抗体重鎖単量体、抗体軽鎖二量体、抗体重鎖二量体、抗体軽鎖−抗体重鎖対、細胞内抗体、ヘテロコンジュゲート抗体、抗体−薬物コンジュゲート、単一ドメイン抗体、一価抗体、単鎖抗体または単鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）、ラクダ化抗体、アフィボディ、Ｆａｂ断片、Ｆ（ａｂ’）２断片、ジスルフィド結合Ｆｖ（ｓｄＦｖ）、抗イディオタイプ（抗Ｉｄ）抗体（例えば、抗抗Ｉｄ抗体を含む）、および上記のうちのいずれかの抗原結合断片が挙げられ得る。ある特定の実施形態では、本明細書に記載の抗体は、ポリクローナル抗体集団を指す。抗体は、免疫グロブリン分子の任意の種類（例えば、ＩｇＧ、ＩｇＥ、ＩｇＭ、ＩｇＤ、ＩｇＡ、もしくはＩｇＹ）、任意のクラス（例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１、もしくはＩｇＡ２）、または任意のサブクラス（例えば、ＩｇＧ２ａもしくはＩｇＧ２ｂ）のものであり得る。ある特定の実施形態では、本明細書に記載の抗体は、ＩｇＧ抗体、またはそのクラス（例えば、ヒトＩｇＧ１もしくはＩｇＧ４）もしくはサブクラスである。具体的な実施形態では、抗体は、ヒト化モノクローナル抗体である。別の具体的な実施形態では、抗体は、ヒトモノクローナル抗体である。
【００７９】
５．２  Ｔ細胞受容体
一態様では、本開示は、ＳＬＬＭＷＩＴＱＣ（配列番号１）のアミノ酸配列またはそのアンカー最適化変異型ＳＬＬＭＷＩＴＱＶ（配列番号２）からなるペプチドに結合するＴＣＲを提供する。ある特定の実施形態では、ＴＣＲは、ＳＬＬＭＷＩＴＱＣ（配列番号１）のアミノ酸配列またはそのアンカー最適化変異型ＳＬＬＭＷＩＴＱＶ（配列番号２）からなるペプチドに特異的に結合する。ある特定の実施形態では、ＴＣＲは、ＳＬＬＭＷＩＴＱＣ（配列番号１）のアミノ酸配列またはそのアンカー最適化変異型ＳＬＬＭＷＩＴＱＶ（配列番号２）からなるペプチドを含むペプチド−ＭＨＣ複合体に結合する。ある特定の実施形態では、ＴＣＲは、配列番号１または２に記載のアミノ酸配列からなるペプチドを含むペプチド−ＭＨＣ複合体に特異的に結合する。一態様では、本開示は、主要組織適合遺伝子複合体（ＭＨＣ）分子によって呈されるＳＬＬＭＷＩＴＱＣ（配列番号１）またはＳＬＬＭＷＩＴＱＶ（配列番号２）に結合するＴＣＲを提供する。一態様では、本開示は、ＳＬＬＭＷＩＴＱＣ（配列番号１）−ＨＬＡ−Ａ＊０２０１複合体またはＳＬＬＭＷＩＴＱＶ（配列番号２）−ＨＬＡ−Ａ＊０２０１複合体に結合するＴＣＲを提供する。本明細書において例示的なＴＣＲのアミノ酸配列を表１に記載する。
【表１−１】
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【表１−２】
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【表１−３】
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【表１−４】
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【表１−５】
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【表１−６】
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【表１−７】
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【表１−８】
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【表１−９】
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【表１−１０】
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【表１−１１】
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【表１−１２】
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【表１−１３】
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【表１−１４】
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【表１−１５】
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【表１−１６】
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【表１−１７】
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【表１−１８】
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【表１−１９】
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【表１−２０】
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【表１−２１】
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【表１−２２】
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【表１−２３】
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【表１−２４】
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【表１−２５】
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【表１−２６】
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【表１−２７】
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【表１−２８】
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【表１−２９】
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【表１−３０】
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【表１−３１】
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【表１−３２】
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【表１−３３】
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【表１−３４】
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【表１−３５】
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【表１−３６】
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【表１−３７】
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【表１−３８】
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【表１−３９】
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【表１−４０】
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【表１−４１】
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【表１−４２】
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【表１−４３】
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【表１−４４】
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【表１−４５】
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【表１−４６】
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【表１−４７】
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【表１−４８】
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【表１−４９】
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【表１−５０】
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【表２】
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【表３】
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【表４】
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【表５】
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【００８０】
一態様では、本開示は、アミノ酸からなるペプチドに結合するＴＣＲを提供する  本明細書に開示されるＴＣＲのＣＤＲは、任意の当該技術分野で認識される番号付け規則を使用して定義され得る。加えてまたはあるいは、ＣＤＲは、例えば、ＴＣＲの同族抗原（例えば、ペプチドまたはペプチド−ＭＨＣ複合体）との相互作用の構造分析に基づいて経験的に定義され得る。
【００８１】
ある特定の実施形態では、本開示は、配列番号１または２に記載のアミノ酸配列からなるペプチドに結合するＴＣＲ（例えば、ＳＬＬＭＷＩＴＱＣ（配列番号１）またはＳＬＬＭＷＩＴＱＶ（配列番号２）−ＨＬＡ−Ａ＊０２０１複合体に結合するＴＣＲ）を提供し、このＴＣＲは、本明細書の表１に開示されるＶαまたはＶβのＣＤＲのうちの１つ、２つ、または３つ全てを含み、ＣＤＲは、例えば、Ｌｅｆｒａｎｃ  Ｍ−Ｐ（１９９９）（上掲）およびＬｅｆｒａｎｃ  Ｍ−Ｐ  ｅｔ  ａｌ．，（１９９９）（上掲）に記載される、ＩＭＧＴ番号付けシステムに従い定義される。
【００８２】
ある特定の実施形態では、本開示は、配列番号１または２に記載のアミノ酸配列からなるペプチドに結合するＴＣＲ（例えば、ＳＬＬＭＷＩＴＱＣ（配列番号１）またはＳＬＬＭＷＩＴＱＶ（配列番号２）−ＨＬＡ−Ａ＊０２０１複合体に結合するＴＣＲ）を提供し、このＴＣＲは、本明細書の表１に開示されるＶαまたはＶβのＣＤＲのうちの１つ、２つ、または３つ全てを含み、ＣＤＲは、Ｋａｂａｔ（上掲）に記載される、Ｋａｂａｔ番号付けシステムに従い定義される。
【００８３】
ある特定の実施形態では、本開示は、配列番号１または２に記載のアミノ酸配列からなるペプチドに結合するＴＣＲ（例えば、ＳＬＬＭＷＩＴＱＣ（配列番号１）またはＳＬＬＭＷＩＴＱＶ（配列番号２）−ＨＬＡ−Ａ＊０２０１複合体に結合するＴＣＲ）を提供し、このＴＣＲは、本明細書の表１に開示されるＶαまたはＶβのＣＤＲのうちの１つ、２つ、または３つ全てを含み、ＣＤＲは、例えば、ＴＣＲの同族抗原（例えば、ペプチド−ＭＨＣ複合体）との相互作用の構造分析に基づいて経験的に決定される。
【００８４】
ある特定の実施形態では、本開示は、配列番号１または２に記載のアミノ酸配列からなるペプチドに結合するＴＣＲ（例えば、ＳＬＬＭＷＩＴＱＣ（配列番号１）またはＳＬＬＭＷＩＴＱＶ（配列番号２）−ＨＬＡ−Ａ＊０２０１複合体に結合するＴＣＲ）を提供し、このＴＣＲは、本明細書の表１に開示されるＶαまたはＶβのＣＤＲのうちの１つ、２つ、または３つ全てを含み、各ＣＤＲは、ＩＭＧＴもしくはＫａｂａｔ番号付けシステムに従い定義されるか、または例えば、ＴＣＲの同族抗原（例えば、ペプチドまたはペプチド−ＭＨＣ複合体）との相互作用の構造分析に基づいて経験的に決定される。
【００８５】
ある特定の実施形態では、本開示は、配列番号１または２に記載のアミノ酸配列からなるペプチドに結合するＴＣＲ（例えば、単離されたＴＣＲ）（例えば、ＳＬＬＭＷＩＴＱＣ（配列番号１）またはＳＬＬＭＷＩＴＱＶ（配列番号２）−ＨＬＡ−Ａ＊０２０１複合体に結合するＴＣＲ）を提供し、このＴＣＲは、ＣＤＲ１α、ＣＤＲ２α、およびＣＤＲ３αを含むＶαと、ＣＤＲ１β、ＣＤＲ２β、およびＣＤＲ３βを含むＶβとを含み、ＣＤＲ１α、ＣＤＲ２α、およびＣＤＲ３αは、それぞれ配列番号５、６、および６１；５、６、および６２；５、６、および６３；５、６、および６４；または５、６、および６５、好ましくはそれぞれ５、６、および７；５、６、および３９；５、６、および４０；５、６、および４１；５、６、および４２；５、６、および４３；５、６、および４４；５、６、および４５；５、６、および４６；５、６、および４７；５、６、および４８；５、６、および４９；５、６、および５０；５、６、および５１；５、６、および５２；５、６、および５３；５、６、および５４；５、６、および５５；５、６、および５６；５、６、および５７；５、６、および５８；５、６、および５９；または５、６、および６０に記載のＣＤＲ１α、ＣＤＲ２α、およびＣＤＲ３αアミノ酸配列を含み、ＣＤＲ１β、ＣＤＲ２β、およびＣＤＲ３βは、それぞれ配列番号８、９、および１０に記載のＣＤＲ１β、ＣＤＲ２β、およびＣＤＲ３βアミノ酸配列を含む。一実施形態では、各ＣＤＲは、ＩＭＧＴ番号付けシステムに従い定義される。一実施形態では、各ＣＤＲは、Ｋａｂａｔ番号付けシステムに従い定義される。一実施形態では、各ＣＤＲは、例えば、ＴＣＲの同族抗原（例えば、ペプチドまたはペプチド−ＭＨＣ複合体）との相互作用の構造分析に基づいて経験的に定義される。一実施形態では、各ＣＤＲは、ＩＭＧＴもしくはＫａｂａｔ番号付けシステムに従い独立して定義されるか、または例えば、ＴＣＲの同族抗原（例えば、ペプチド−ＭＨＣ複合体）との相互作用の構造分析に基づいて経験的に決定される。
【００８６】
ある特定の実施形態では、本開示は、配列番号１または２に記載のアミノ酸配列からなるペプチドに結合するＴＣＲ（例えば、単離されたＴＣＲ）（例えば、ＳＬＬＭＷＩＴＱＣ（配列番号１）またはＳＬＬＭＷＩＴＱＶ（配列番号２）−ＨＬＡ−Ａ＊０２０１複合体に結合するＴＣＲ）を提供し、このＴＣＲは、
（ａ）配列番号５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１α、および／または
（ｂ）配列番号６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２α、および／または
（ｃ）配列番号６１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３α、および／または
（ｄ）配列番号８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１β、および／または
（ｅ）配列番号９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２β、および／または
（ｆ）配列番号１０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３βを含む。
【００８７】
ある特定の実施形態では、本開示は、配列番号１または２に記載のアミノ酸配列からなるペプチドに結合するＴＣＲ（例えば、単離されたＴＣＲ）（例えば、ＳＬＬＭＷＩＴＱＣ（配列番号１）またはＳＬＬＭＷＩＴＱＶ（配列番号２）−ＨＬＡ−Ａ＊０２０１複合体に結合するＴＣＲ）を提供し、このＴＣＲは、
（ａ）配列番号５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１α、および／または
（ｂ）配列番号６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２α、および／または
（ｃ）配列番号６２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３α、および／または
（ｄ）配列番号８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１β、および／または
（ｅ）配列番号９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２β、および／または
（ｆ）配列番号１０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３βを含む。
【００８８】
ある特定の実施形態では、本開示は、配列番号１または２に記載のアミノ酸配列からなるペプチドに結合するＴＣＲ（例えば、単離されたＴＣＲ）（例えば、ＳＬＬＭＷＩＴＱＣ（配列番号１）またはＳＬＬＭＷＩＴＱＶ（配列番号２）−ＨＬＡ−Ａ＊０２０１複合体に結合するＴＣＲ）を提供し、このＴＣＲは、
（ａ）配列番号５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１α、および／または
（ｂ）配列番号６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２α、および／または
（ｃ）配列番号６３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３α、および／または
（ｄ）配列番号８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１β、および／または
（ｅ）配列番号９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２β、および／または
（ｆ）配列番号１０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３βを含む。
【００８９】
ある特定の実施形態では、本開示は、配列番号１または２に記載のアミノ酸配列からなるペプチドに結合するＴＣＲ（例えば、単離されたＴＣＲ）（例えば、ＳＬＬＭＷＩＴＱＣ（配列番号１）またはＳＬＬＭＷＩＴＱＶ（配列番号２）−ＨＬＡ−Ａ＊０２０１複合体に結合するＴＣＲ）を提供し、このＴＣＲは、
（ａ）配列番号５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１α、および／または
（ｂ）配列番号６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２α、および／または
（ｃ）配列番号６４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３α、および／または
（ｄ）配列番号８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１β、および／または
（ｅ）配列番号９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２β、および／または
（ｆ）配列番号１０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３βを含む。
【００９０】
ある特定の実施形態では、本開示は、配列番号１または２に記載のアミノ酸配列からなるペプチドに結合するＴＣＲ（例えば、単離されたＴＣＲ）（例えば、ＳＬＬＭＷＩＴＱＣ（配列番号１）またはＳＬＬＭＷＩＴＱＶ（配列番号２）−ＨＬＡ−Ａ＊０２０１複合体に結合するＴＣＲ）を提供し、このＴＣＲは、
（ａ）配列番号５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１α、および／または
（ｂ）配列番号６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２α、および／または
（ｃ）配列番号６５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３α、および／または
（ｄ）配列番号８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１β、および／または
（ｅ）配列番号９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２β、および／または
（ｆ）配列番号１０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３βを含む。
【００９１】
ある特定の実施形態では、本開示は、配列番号１または２に記載のアミノ酸配列からなるペプチドに結合するＴＣＲ（例えば、単離されたＴＣＲ）（例えば、ＳＬＬＭＷＩＴＱＣ（配列番号１）またはＳＬＬＭＷＩＴＱＶ（配列番号２）−ＨＬＡ−Ａ＊０２０１複合体に結合するＴＣＲ）を提供し、このＴＣＲは、配列番号７、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、および６０からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ３αを含む。
【００９２】
ある特定の実施形態では、本開示は、配列番号１または２に記載のアミノ酸配列からなるペプチドに結合するＴＣＲ（例えば、単離されたＴＣＲ）（例えば、ＳＬＬＭＷＩＴＱＣ（配列番号１）またはＳＬＬＭＷＩＴＱＶ（配列番号２）−ＨＬＡ−Ａ＊０２０１複合体に結合するＴＣＲ）を提供し、このＴＣＲは、配列番号１０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３βを含む。
【００９３】
ある特定の実施形態では、本開示は、配列番号１または２に記載のアミノ酸配列からなるペプチドに結合するＴＣＲ（例えば、単離されたＴＣＲ）（例えば、ＳＬＬＭＷＩＴＱＣ（配列番号１）またはＳＬＬＭＷＩＴＱＶ（配列番号２）−ＨＬＡ−Ａ＊０２０１複合体に結合するＴＣＲ）を提供し、このＴＣＲは、それぞれ配列番号５、６、および７；５、６、および３９；５、６、および４０；５、６、および４１；５、６、および４２；５、６、および４３；５、６、および４４；５、６、および４５；５、６、および４６；５、６、および４７；５、６、および４８；５、６、および４９；５、６、および５０；５、６、および５１；５、６、および５２；５、６、および５３；５、６、および５４；５、６、および５５；５、６、および５６；５、６、および５７；５、６、および５８；５、６、および５９；または５、６、および６０に記載のＣＤＲ１α、ＣＤＲ２α、およびＣＤＲ３αアミノ酸配列を有するＶαを含む。
【００９４】
ある特定の実施形態では、本開示は、配列番号１または２に記載のアミノ酸配列からなるペプチドに結合するＴＣＲ（例えば、単離されたＴＣＲ）（例えば、ＳＬＬＭＷＩＴＱＣ（配列番号１）またはＳＬＬＭＷＩＴＱＶ（配列番号２）−ＨＬＡ−Ａ＊０２０１複合体に結合するＴＣＲ）を提供し、このＴＣＲは、それぞれ配列番号８、９、および１０に記載のＣＤＲ１β、ＣＤＲ２β、およびＣＤＲ３βアミノ酸配列を有するＶβを含む。
【００９５】
ある特定の実施形態では、本開示は、配列番号１または２に記載のアミノ酸配列からなるペプチドに結合するＴＣＲ（例えば、単離されたＴＣＲ）（例えば、ＳＬＬＭＷＩＴＱＣ（配列番号１）またはＳＬＬＭＷＩＴＱＶ（配列番号２）−ＨＬＡ−Ａ＊０２０１複合体に結合するＴＣＲ）を提供し、このＴＣＲは、ＣＤＲ１α、ＣＤＲ２α、およびＣＤＲ３αを有するＶαと、ＣＤＲ１β、ＣＤＲ２β、およびＣＤＲ３βを有するＶβとを含み、ＣＤＲ１α、ＣＤＲ２α、ＣＤＲ３α、ＣＤＲ１β、ＣＤＲ２β、およびＣＤＲ３βは、それぞれ配列番号５、６、７、８、９、および１０；５、６、３９、８、９、および１０；５、６、４０、８、９、および１０；５、６、４１、８、９、および１０；５、６、４２、８、９、および１０；５、６、４３、８、９、および１０；５、６、４４、８、９、および１０；５、６、４５、８、９、および１０；５、６、４６、８、９、および１０；５、６、４７、８、９、および１０；５、６、４８、８、９、および１０；５、６、４９、８、９、および１０；５、６、５０、８、９、および１０；５、６、５１、８、９、および１０；５、６、５２、８、９、および１０；５、６、５３、８、９、および１０；５、６、５４、８、９、および１０；５、６、５５、８、９、および１０；５、６、５６、８、９、および１０；５、６、５７、８、９、および１０；５、６、５８、８、９、および１０；５、６、５９、８、９、および１０；または５、６、６０、８、９、および１０に記載のアミノ酸配列を含む。
【００９６】
ある特定の実施形態では、本開示は、配列番号１または２に記載のアミノ酸配列からなるペプチドに結合するＴＣＲ（例えば、単離されたＴＣＲ）（例えば、ＳＬＬＭＷＩＴＱＣ（配列番号１）またはＳＬＬＭＷＩＴＱＶ（配列番号２）−ＨＬＡ−Ａ＊０２０１複合体に結合するＴＣＲ）を提供し、このＴＣＲは、配列番号３、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、または８６に記載のアミノ酸配列に対して少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、または１００％（例えば、少なくとも８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、または９９％）同一であるアミノ酸配列を有するＶαを含む。ある特定の実施形態では、ＴＣＲは、配列番号３、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、または８６に記載のアミノ酸配列を有するＶαを含む。
【００９７】
ある特定の実施形態では、本開示は、配列番号１または２に記載のアミノ酸配列からなるペプチドに結合するＴＣＲ（例えば、単離されたＴＣＲ）（例えば、ＳＬＬＭＷＩＴＱＣ（配列番号１）またはＳＬＬＭＷＩＴＱＶ（配列番号２）−ＨＬＡ−Ａ＊０２０１複合体に結合するＴＣＲ）を提供し、このＴＣＲは、配列番号４に記載のアミノ酸配列に対して少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、または１００％（例えば、少なくとも８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、または９９％）同一であるアミノ酸配列を有するＶβを含む。ある特定の実施形態では、ＴＣＲは、配列番号４に記載のアミノ酸配列を有するＶβを含む。
【００９８】
ある特定の実施形態では、本開示は、配列番号１または２に記載のアミノ酸配列からなるペプチドに結合するＴＣＲ（例えば、単離されたＴＣＲ）（例えば、ＳＬＬＭＷＩＴＱＣ（配列番号１）またはＳＬＬＭＷＩＴＱＶ（配列番号２）−ＨＬＡ−Ａ＊０２０１複合体に結合するＴＣＲ）を提供し、このＴＣＲは、配列番号３、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、または８６に記載のアミノ酸配列に対して少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、または１００％（例えば、少なくとも８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、または９９％）同一であるアミノ酸配列を有するＶαと、配列番号４に記載のアミノ酸配列に対して少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、または１００％（例えば、少なくとも８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、または９９％）同一であるアミノ酸配列を有するＶβとを含む。ある特定の実施形態では、ＴＣＲは、それぞれ配列番号３および４、６６および４、６７および４、６８および４、６９および４、７０および４、７１および４、７２および４、７３および４、７４および４、７５および４、７６および４、７７および４、７８および４、７９および４、８０および４、８１および４、８２および４、８３および４、８４および４、８５および４、または８６および４に記載のアミノ酸配列を含むＶαおよびＶβを含む。
【００９９】
ある特定の実施形態では、本開示は、配列番号１または２に記載のアミノ酸配列からなるペプチドに結合するＴＣＲ（例えば、単離されたＴＣＲ）（例えば、ＳＬＬＭＷＩＴＱＣ（配列番号１）またはＳＬＬＭＷＩＴＱＶ（配列番号２）−ＨＬＡ−Ａ＊０２０１複合体に結合するＴＣＲ）を提供し、このＴＣＲは、
（ａ）配列番号５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１α、および／または
（ｂ）配列番号６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２α、および／または
（ｃ）配列番号７および３９〜６０からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ３α、および／または
（ｄ）配列番号８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１β、および／または
（ｅ）配列番号９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２β、および／または
（ｆ）配列番号１０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３βを含む。
【０１００】
ある特定の実施形態では、本開示は、配列番号１または２に記載のアミノ酸配列からなるペプチドに結合するＴＣＲ（例えば、単離されたＴＣＲ）（例えば、ＳＬＬＭＷＩＴＱＣ（配列番号１）またはＳＬＬＭＷＩＴＱＶ（配列番号２）−ＨＬＡ−Ａ＊０２０１複合体に結合するＴＣＲ）を提供し、このＴＣＲは、配列番号７および３９〜６０からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ３αを含む。
【０１０１】
ある特定の実施形態では、本開示は、配列番号１または２に記載のアミノ酸配列からなるペプチドに結合するＴＣＲ（例えば、単離されたＴＣＲ）（例えば、ＳＬＬＭＷＩＴＱＣ（配列番号１）またはＳＬＬＭＷＩＴＱＶ（配列番号２）−ＨＬＡ−Ａ＊０２０１複合体に結合するＴＣＲ）を提供し、このＴＣＲは、配列番号１０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３βを含む。
【０１０２】
ある特定の実施形態では、本開示は、配列番号１または２に記載のアミノ酸配列からなるペプチドに結合するＴＣＲ（例えば、単離されたＴＣＲ）（例えば、ＳＬＬＭＷＩＴＱＣ（配列番号１）またはＳＬＬＭＷＩＴＱＶ（配列番号２）−ＨＬＡ−Ａ＊０２０１複合体に結合するＴＣＲ）を提供し、このＴＣＲは、配列番号７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３αと、配列番号１０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３βと、を含む。ある特定の実施形態では、本開示は、配列番号１または２に記載のアミノ酸配列からなるペプチドに結合するＴＣＲ（例えば、単離されたＴＣＲ）（例えば、ＳＬＬＭＷＩＴＱＣ（配列番号１）またはＳＬＬＭＷＩＴＱＶ（配列番号２）−ＨＬＡ−Ａ＊０２０１複合体に結合するＴＣＲ）を提供し、このＴＣＲは、それぞれ配列番号３９および１０；４０および１０；４１および１０；４２および１０；４３および１０；４４および１０；４５および１０；４６および１０；４７および１０；４８および１０；４９および１０；５０および１０；５１および１０；５２および１０；５３および１０；５４および１０；５５および１０；５６および１０；５７および１０；４８および１０；５９および１０；または６０および１０に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３αおよびＣＤＲ３βを含む。
【０１０３】
ある特定の実施形態では、本開示は、配列番号１または２に記載のアミノ酸配列からなるペプチドに結合するＴＣＲ（例えば、単離されたＴＣＲ）（例えば、ＳＬＬＭＷＩＴＱＣ（配列番号１）またはＳＬＬＭＷＩＴＱＶ（配列番号２）−ＨＬＡ−Ａ＊０２０１複合体に結合するＴＣＲ）を提供し、このＴＣＲは、それぞれ配列番号５、６、および７；５、６、および３９；５、６、および４０；５、６、および４１；５、６、および４２；５、６、および４３；５、６、および４４；５、６、および４５；５、６、および４６；５、６、および４７；５、６、および４８；５、６、および４９；５、６、および５０；５、６、および５１；５、６、および５２；５、６、および５３；５、６、および５４；５、６、および５５；５、６、および５６；５、６、および５７；５、６、および５８；５、６、および５９；または５、６、および６０に記載のＣＤＲ１α、ＣＤＲ２α、およびＣＤＲ３αアミノ酸配列を有するＶαを含む。
【０１０４】
ある特定の実施形態では、本開示は、配列番号１または２に記載のアミノ酸配列からなるペプチドに結合するＴＣＲ（例えば、単離されたＴＣＲ）（例えば、ＳＬＬＭＷＩＴＱＣ（配列番号１）またはＳＬＬＭＷＩＴＱＶ（配列番号２）−ＨＬＡ−Ａ＊０２０１複合体に結合するＴＣＲ）を提供し、このＴＣＲは、それぞれ配列番号８、９、および１０に記載のＣＤＲ１β、ＣＤＲ２β、およびＣＤＲ３βアミノ酸配列を有するＶβを含む。
【０１０５】
ある特定の実施形態では、本開示は、配列番号１または２に記載のアミノ酸配列からなるペプチドに結合するＴＣＲ（例えば、単離されたＴＣＲ）（例えば、ＳＬＬＭＷＩＴＱＣ（配列番号１）またはＳＬＬＭＷＩＴＱＶ（配列番号２）−ＨＬＡ−Ａ＊０２０１複合体に結合するＴＣＲ）を提供し、このＴＣＲは、ＣＤＲ１α、ＣＤＲ２α、およびＣＤＲ３αを有するＶαと、ＣＤＲ１β、ＣＤＲ２β、およびＣＤＲ３βを有するＶβとを含み、ＣＤＲ１α、ＣＤＲ２α、ＣＤＲ３α、ＣＤＲ１β、ＣＤＲ２β、およびＣＤＲ３βは、それぞれ配列番号５、６、７、８、９、および１０；５、６、３９、８、９、および１０；５、６、４０、８、９、および１０；５、６、４１、８、９、および１０；５、６、４２、８、９、および１０；５、６、４３、８、９、および１０；５、６、４４、８、９、および１０；５、６、４５、８、９、および１０；５、６、４６、８、９、および１０；５、６、４７、８、９、および１０；５、６、４８、８、９、および１０；５、６、４９、８、９、および１０；５、６、５０、８、９、および１０；５、６、５１、８、９、および１０；５、６、５２、８、９、および１０；５、６、５３、８、９、および１０；５、６、５４、８、９、および１０；５、６、５５、８、９、および１０；５、６、５６、８、９、および１０；５、６、５７、８、９、および１０；５、６、５８、８、９、および１０；５、６、５９、８、９、および１０；または５、６、６０、８、９、および１０に記載のアミノ酸配列を含む。
【０１０６】
ある特定の実施形態では、本開示は、配列番号１または２に記載のアミノ酸配列からなるペプチドに結合するＴＣＲ（例えば、単離されたＴＣＲ）（例えば、ＳＬＬＭＷＩＴＱＣ（配列番号１）またはＳＬＬＭＷＩＴＱＶ（配列番号２）−ＨＬＡ−Ａ＊０２０１複合体に結合するＴＣＲ）を提供し、このＴＣＲは、配列番号３および６６〜８６からなる群から選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、または１００％（例えば、少なくとも８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、または９９％）同一であるアミノ酸配列を有するＶαを含む。ある特定の実施形態では、ＴＣＲは、配列番号３に記載のアミノ酸配列を有するＶαを含む。ある特定の実施形態では、ＴＣＲは、配列番号６６に記載のアミノ酸配列を有するＶαを含む。ある特定の実施形態では、ＴＣＲは、配列番号６７に記載のアミノ酸配列を有するＶαを含む。ある特定の実施形態では、ＴＣＲは、配列番号６８に記載のアミノ酸配列を有するＶαを含む。ある特定の実施形態では、ＴＣＲは、配列番号６９に記載のアミノ酸配列を有するＶαを含む。ある特定の実施形態では、ＴＣＲは、配列番号７０に記載のアミノ酸配列を有するＶαを含む。ある特定の実施形態では、ＴＣＲは、配列番号７１に記載のアミノ酸配列を有するＶαを含む。ある特定の実施形態では、ＴＣＲは、配列番号７２に記載のアミノ酸配列を有するＶαを含む。ある特定の実施形態では、ＴＣＲは、配列番号７３に記載のアミノ酸配列を有するＶαを含む。ある特定の実施形態では、ＴＣＲは、配列番号７４に記載のアミノ酸配列を有するＶαを含む。ある特定の実施形態では、ＴＣＲは、配列番号７５に記載のアミノ酸配列を有するＶαを含む。ある特定の実施形態では、ＴＣＲは、配列番号７６に記載のアミノ酸配列を有するＶαを含む。ある特定の実施形態では、ＴＣＲは、配列番号７７に記載のアミノ酸配列を有するＶαを含む。ある特定の実施形態では、ＴＣＲは、配列番号７８に記載のアミノ酸配列を有するＶαを含む。ある特定の実施形態では、ＴＣＲは、配列番号７９に記載のアミノ酸配列を有するＶαを含む。ある特定の実施形態では、ＴＣＲは、配列番号８０に記載のアミノ酸配列を有するＶαを含む。ある特定の実施形態では、ＴＣＲは、配列番号８１に記載のアミノ酸配列を有するＶαを含む。ある特定の実施形態では、ＴＣＲは、配列番号８２に記載のアミノ酸配列を有するＶαを含む。ある特定の実施形態では、ＴＣＲは、配列番号８３に記載のアミノ酸配列を有するＶαを含む。ある特定の実施形態では、ＴＣＲは、配列番号８４に記載のアミノ酸配列を有するＶαを含む。ある特定の実施形態では、ＴＣＲは、配列番号８５に記載のアミノ酸配列を有するＶαを含む。ある特定の実施形態では、ＴＣＲは、配列番号８６に記載のアミノ酸配列を有するＶαを含む。
【０１０７】
ある特定の実施形態では、本開示は、配列番号１または２に記載のアミノ酸配列からなるペプチドに結合するＴＣＲ（例えば、単離されたＴＣＲ）（例えば、ＳＬＬＭＷＩＴＱＣ（配列番号１）またはＳＬＬＭＷＩＴＱＶ（配列番号２）−ＨＬＡ−Ａ＊０２０１複合体に結合するＴＣＲ）を提供し、このＴＣＲは、配列番号４に記載のアミノ酸配列に対して少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、または１００％（例えば、少なくとも８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、または９９％）同一であるアミノ酸配列を有するＶβを含む。ある特定の実施形態では、ＴＣＲは、配列番号４に記載のアミノ酸配列を有するＶβを含む。
【０１０８】
ある特定の実施形態では、本開示は、配列番号１に記載のアミノ酸配列からなるペプチドに結合するＴＣＲ（例えば、単離されたＴＣＲ）（例えば、ＳＬＬＭＷＩＴＱＣ（配列番号１）−ＨＬＡ−Ａ＊０２０１複合体に結合するＴＣＲ）を提供し、このＴＣＲは、配列番号３および６６〜８６からなる群から選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、または１００％（例えば、少なくとも８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、または９９％）同一であるアミノ酸配列を有するＶαと、配列番号４に記載のアミノ酸配列に対して少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、または１００％（例えば、少なくとも８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、または９９％）同一であるアミノ酸配列を有するＶβと、を含む。ある特定の実施形態では、ＴＣＲは、配列番号３、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、または８６に記載のアミノ酸配列を有するＶαと、配列番号４に記載のアミノ酸配列を有するＶβと、を含む。
【０１０９】
ある特定の実施形態では、本開示は、配列番号１または２に記載のアミノ酸配列からなるペプチドに結合するＴＣＲ（例えば、単離されたＴＣＲ）（例えば、ＳＬＬＭＷＩＴＱＣ（配列番号１）ＳＬＬＭＷＩＴＱＶ（配列番号２）−ＨＬＡ−Ａ＊０２０１複合体に結合するＴＣＲ）を提供し、このＴＣＲは、ヒトＴＲＡＶ３生殖系列配列（例えば、配列番号１８のアミノ酸配列を含む、例えば、ＴＲＡＶ３＊０１）に由来のアミノ酸配列を有するＶαを含む。ある特定の実施形態では、ＴＲＡＶ３＊０１生殖系列配列は、Ｎ末端アラニン残基および／またはＣ末端にアミノ酸配列ＲＤを更に含む。フレームワーク１、フレームワーク２、フレームワーク３、ＣＤＲ１α、およびＣＤＲ２αから選択される１つ以上の領域（例えば、これらの領域のうちの２つ、３つ、４つ、または５つ）が、ヒトＴＲＡＶ３生殖系列配列（例えば、配列番号１８のアミノ酸配列を含む、例えば、ＴＲＡＶ３＊０１）に由来し得る。ある特定の実施形態では、フレームワーク１、フレームワーク２、フレームワーク３、ＣＤＲ１α、およびＣＤＲ２αは全て、ヒトＴＲＡＶ３生殖系列配列（例えば、配列番号１８のアミノ酸配列を含む、例えば、ＴＲＡＶ３＊０１）に由来する。ある特定の実施形態では、ＴＣＲは、ヒトＴＲＡＶ３生殖系列配列（例えば、配列番号１８のアミノ酸配列を含む、例えば、ＴＲＡＶ３＊０１）に由来するアミノ酸配列を有するＶαと、配列番号７、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、または６０に記載のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３αと、を含む。
【０１１０】
ある特定の実施形態では、本開示は、配列番号１または２に記載のアミノ酸配列からなるペプチドに結合するＴＣＲ（例えば、単離されたＴＣＲ）（例えば、ＳＬＬＭＷＩＴＱＣ（配列番号１）またはＳＬＬＭＷＩＴＱＶ（配列番号２）−ＨＬＡ−Ａ＊０２０１複合体に結合するＴＣＲ）を提供し、このＴＣＲは、ヒトＴＲＢＶ２９−１生殖系列配列（例えば、配列番号１９のアミノ酸配列を含む、例えば、ＴＲＢＶ２９−１＊０１）に由来のアミノ酸配列を有するＶβを含む。ある特定の実施形態では、ＴＲＢＶ２９−１＊０１生殖系列配列は、Ｎ末端にアミノ酸配列ＳＡＶＩＳ（配列番号２７）および／またはＣ末端にアミノ酸配列ＳＶＥを更に含む。フレームワーク１、フレームワーク２、フレームワーク３、ＣＤＲ１β、およびＣＤＲ２βから選択される１つ以上の領域（例えば、これらの領域のうちの２つ、３つ、４つ、または５つ）が、ヒトＴＲＢＶ２９−１生殖系列配列（例えば、配列番号１９のアミノ酸配列を含む、例えば、ＴＲＢＶ２９−１＊０１）に由来し得る。ある特定の実施形態では、フレームワーク１、フレームワーク２、フレームワーク３、ＣＤＲ１β、およびＣＤＲ２βは全て、ヒトＴＲＢＶ２９−１生殖系列配列（例えば、配列番号１９のアミノ酸配列を含む、例えば、ＴＲＢＶ２９−１＊０１）に由来する。ある特定の実施形態では、ＴＣＲは、ヒトＴＲＢＶ２９−１生殖系列配列（例えば、配列番号１９のアミノ酸配列を含む、例えば、ＴＲＢＶ２９−１＊０１）に由来するアミノ酸配列を有するＶβと、配列番号１０に記載のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３βと、を含む。
【０１１１】
ある特定の実施形態では、本開示は、配列番号１または２に記載のアミノ酸配列からなるペプチドに結合するＴＣＲ（例えば、単離されたＴＣＲ）（例えば、ＳＬＬＭＷＩＴＱＣ（配列番号１）またはＳＬＬＭＷＩＴＱＶ（配列番号２）−ＨＬＡ−Ａ＊０２０１複合体に結合するＴＣＲ）を提供し、このＴＣＲは、配列番号１１、１３、９３〜９６、１０５〜１１８、１２０〜１２３、１２５〜１２８、および４０８〜４１５からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むα鎖を含む。本明細書に開示されるα鎖のうちのいずれか１つ（例えば、表１に開示される配列を有するα鎖）は、そのＣ末端に、ＧＳのアミノ酸配列（例えば、クローニング痕）、切断部位のＮ末端のフーリン認識配列の部分、および／または切断部位のＮ末端の２Ａ認識配列の部分を含み得る。ある特定の実施形態では、α鎖は、切断部位のＮ末端のフーリン認識配列の部分を更に含み、フーリン認識配列の部分はα鎖のＣ末端にある。ある特定の実施形態では、フーリン認識配列の部分は、ＲＡＫＲ（配列番号３０）またはＲＡＫＲＳ（配列番号１３２）のアミノ酸配列を含む。ある特定の実施形態では、フーリン認識配列の部分は、ＲＡのアミノ酸配列を含む。ある特定の実施形態では、α鎖は、ＧＳのアミノ酸配列（例えば、Ｃ末端におけるクローニングからの痕残基として）を更に含む。ある特定の実施形態では、α鎖は、切断部位のＮ末端の２Ａ認識配列の部分を更に含み、２Ａ認識配列の部分はα鎖のＣ末端にある。ある特定の実施形態では、２Ａ認識配列は、表７の配列からなる群から選択され、任意選択で、切断部位は、Ｃ末端で、隣接してＰｒｏのＮ末端のペプチド結合である。ある特定の実施形態では、２Ａ認識配列は、Ｐ２Ａ（ＧＳＧＡＴＮＦＳＬＬＫＱＡＧＤＶＥＥＮＰＧＰ（配列番号１３４））からであり、任意選択で、切断部位は、Ｃ末端で、隣接してＰｒｏのＮ末端のペプチド結合である。
【０１１２】
ある特定の実施形態では、本開示は、配列番号１または２に記載のアミノ酸配列からなるペプチドに結合するＴＣＲ（例えば、単離されたＴＣＲ）（例えば、ＳＬＬＭＷＩＴＱＣ（配列番号１）またはＳＬＬＭＷＩＴＱＶ（配列番号２）−ＨＬＡ−Ａ＊０２０１複合体に結合するＴＣＲ）を提供し、このＴＣＲは、配列番号１２、１４、２５、または９７〜１０４に記載のアミノ酸配列を含むβ鎖を含む。本明細書に開示されるα鎖のうちのいずれか１つ（例えば、表１に開示される配列を有するβ鎖）は、β鎖のＣ末端に、ＧＳのアミノ酸配列（例えば、クローニング痕）、切断部位のＮ末端のフーリン認識配列の部分、または切断部位のＮ末端の２Ａ認識配列の部分を含み得る。ある特定の実施形態では、β鎖は、切断部位のＮ末端のフーリン認識配列の部分を更に含み、フーリン認識配列の部分はβ鎖のＣ末端にある。ある特定の実施形態では、フーリン認識配列の部分は、ＲＡＫＲ（配列番号３０）またはＲＡＫＲＳ（配列番号１３２）のアミノ酸配列を含む。ある特定の実施形態では、フーリン認識配列の部分は、ＲＡのアミノ酸配列を含む。ある特定の実施形態では、β鎖は、ＧＳのアミノ酸配列（例えば、Ｃ末端におけるクローニングからの痕残基として）を更に含む。ある特定の実施形態では、β鎖は、切断部位のＮ末端の２Ａ認識配列の部分を更に含み、２Ａ認識配列の部分はα鎖のＣ末端にある。ある特定の実施形態では、２Ａ認識配列は、表７の配列からなる群から選択され、任意選択で、切断部位は、Ｃ末端で、隣接してＰｒｏのＮ末端のペプチド結合である。ある特定の実施形態では、２Ａ認識配列は、Ｐ２Ａ（ＧＳＧＡＴＮＦＳＬＬＫＱＡＧＤＶＥＥＮＰＧＰ（配列番号１３４））であり、任意選択で、切断部位は、Ｃ末端で、隣接してＰｒｏのＮ末端のペプチド結合である。
【０１１３】
ある特定の実施形態では、本開示は、配列番号１または２に記載のアミノ酸配列からなるペプチドに結合するＴＣＲ（例えば、単離されたＴＣＲ）（例えば、ＳＬＬＭＷＩＴＱＣ（配列番号１）またはＳＬＬＭＷＩＴＱＶ（配列番号２）−ＨＬＡ−Ａ＊０２０１複合体に結合するＴＣＲ）を提供し、このＴＣＲは、それぞれ配列番号１３および１４に記載のアミノ酸配列を含むα鎖と、β鎖と、を含む。ある特定の実施形態では、本開示は、配列番号１または２に記載のアミノ酸配列からなるペプチドに結合するＴＣＲ（例えば、単離されたＴＣＲ）（例えば、ＳＬＬＭＷＩＴＱＣ（配列番号１）またはＳＬＬＭＷＩＴＱＶ（配列番号２）−ＨＬＡ−Ａ＊０２０１複合体に結合するＴＣＲ）を提供し、このＴＣＲは、それぞれ配列番号１３および２５に記載のアミノ酸配列を含むα鎖と、β鎖と、を含む。ある特定の実施形態では、本開示は、配列番号１または２に記載のアミノ酸配列からなるペプチドに結合するＴＣＲ（例えば、単離されたＴＣＲ）（例えば、ＳＬＬＭＷＩＴＱＣ（配列番号１）またはＳＬＬＭＷＩＴＱＶ（配列番号２）−ＨＬＡ−Ａ＊０２０１複合体に結合するＴＣＲ）を提供し、このＴＣＲは、それぞれ配列番号１１および１２に記載のアミノ酸配列を含むα鎖と、β鎖と、を含む。ある特定の実施形態では、α鎖は、Ｃ末端にＲＡ、ＲＡＫＲ（配列番号３０）、またはＲＡＫＲＳ（配列番号１３２）のアミノ酸配列を更に含むか、またはβ鎖は、Ｃ末端にＲＡ、ＲＡＫＲ（配列番号３０）、またはＲＡＫＲＳ（配列番号１３２）のアミノ酸配列を更に含む。
【０１１４】
ある特定の実施形態では、本開示は、α鎖およびβ鎖を含む単離されたＴＣＲを提供し、α鎖は、配列番号１３、９３〜９６、１０５〜１１８、１２０〜１２３、１２５〜１２８、および４０８〜４１５からなる群から選択されるアミノ酸配列を含み、β鎖は、配列番号１４、２５、および９７〜１０４からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む。α鎖および／またはβ鎖の成熟配列に加えて、追加のアミノ酸残基が少なくとも１つの鎖のＣ末端に付加され得る。例えば、Ｇｌｙ−Ｓｅｒがクローニング痕から付加され得る。フーリン切断または２Ａ切断からの残基（表７に示される）は、鎖が融合タンパク質から切断されたときに付加され得る。
【０１１５】
任意の種からの任意のＴＣＲ定常領域は、本明細書に開示されるＴＣＲにおいて使用され得る。ある特定の実施形態では、ＴＣＲは、ヒトα、β、γ、またはδ  ＴＣＲ定常領域を含む。ある特定の実施形態では、ＴＣＲは、野生型定常領域を含む。ある特定の実施形態では、ＴＣＲは、キメラ定常領域、または野生型定常領域に対して１つ以上のアミノ酸置換、挿入、もしくは欠失を含む定常領域などの、変更された定常領域を含む。いくつかの実施形態では、ＴＣＲは、配列番号１５のα鎖定常領域を含むα鎖を含む。いくつかの実施形態では、ＴＣＲは、配列番号２６のα鎖定常領域を含むα鎖を含む。いくつかの実施形態では、ＴＣＲは、配列番号９２のα鎖定常領域を含むα鎖を含む。いくつかの実施形態では、ＴＣＲは、配列番号１６または１７のβ鎖定常領域を含むβ鎖を含む。
【０１１６】
ある特定の実施形態では、本開示は、α鎖およびβ鎖を含む単離されたＴＣＲを提供し、α鎖は、配列番号１３、９３〜９６、１０５〜１１８、１２０〜１２３、１２５〜１２８、および４０８〜４１５からなる群から選択されるアミノ酸配列を含み、かつ／またはβ鎖は、配列番号１４、２５、９７、９８、９９、１００、１０１、１０２、１０３、および１０４からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む。ある特定の実施形態では、本開示は、配列番号１または２に記載のアミノ酸配列からなるペプチドに結合する単離されたＴＣＲを提供し、このＴＣＲは、α鎖およびβ鎖を含み、α鎖は、配列番号１３、９３〜９６、１０５〜１１８、１２０〜１２３、１２５〜１２８、および４０８〜４１５からなる群から選択されるアミノ酸配列を含み、かつ／またはβ鎖は、配列番号１４、２５、９７、９８、９９、１００、１０１、１０２、１０３、および１０４からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む。ある特定の実施形態では、α鎖は、配列番号１３、１０５、１１０、１１５、１２０、１２５、４０８、または４１２からなる群から選択されるアミノ酸配列を含み、β鎖は、配列番号１４、２５、９７、９８、９９、１００、１０１、１０２、１０３、および１０４からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む。ある特定の実施形態では、α鎖およびβ鎖は、それぞれ配列番号１３および１４；１３および２５；１３および９７；１３および９８；１３および９９；１３および１００；１３および１０１；１３および１０２；１３および１０３；１３および１０４；９３および１４；９３および２５；９３および９７；９３および９８；９３および９９；９３および１００；９３および１０１；９３および１０２；９３および１０３；９３および１０４；９４および１４；９４および２５；９４および９７；９４および９８；９４および９９；９４および１００；９４および１０１；９４および１０２；９４および１０３；９４および１０４；９５および１４；９５および２５；９５および９７；９５および９８；９５および９９；９５および１００；９５および１０１；９５および１０２；９５および１０３；９５および１０４；９６および１４；９６および２５；９６および９７；９６および９８；９６および９９；９６および１００；９６および１０１；９６および１０２；９６および１０３；９６および１０４；１０５および１４；１０５および２５；１０５および９７；１０５および９８；１０５および９９；１０５および１００；１０５および１０１；１０５および１０２；１０５および１０３；１０５および１０４；１０６および１４；１０６および２５；１０６および９７；１０６および９８；１０６および９９；１０６および１００；１０６および１０１；１０６および１０２；１０６および１０３；１０６および１０４；１０７および１４；１０７および２５；１０７および９７；１０７および９８；１０７および９９；１０７および１００；１０７および１０１；１０７および１０２；１０７および１０３；１０７および１０４；１０８および１４；１０８および２５；１０８および９７；１０８および９８；１０８および９９；１０８および１００；１０８および１０１；１０８および１０２；１０８および１０３；１０８および１０４；１０９および１４；１０９および２５；１０９および９７；１０９および９８；１０９および９９；１０９および１００；１０９および１０１；１０９および１０２；１０９および１０３；１０９および１０４；１１０および１４；１１０および２５；１１０および９７；１１０および９８；１１０および９９；１１０および１００；１１０および１０１；１１０および１０２；１１０および１０３；１１０および１０４；１１１および１４；１１１および２５；１１１および９７；１１１および９８；１１１および９９；１１１および１００；１１１および１０１；１１１および１０２；１１１および１０３；１１１および１０４；１１２および１４；１１２および２５；１１２および９７；１１２および９８；１１２および９９；１１２および１００；１１２および１０１；１１２および１０２；１１２および１０３；１１２および１０４；１１３および１４；１１３および２５；１１３および９７；１１３および９８；１１３および９９；１１３および１００；１１３および１０１；１１３および１０２；１１３および１０３；１１３および１０４；１１４および１４；１１４および２５；１１４および９７；１１４および９８；１１４および９９；１１４および１００；１１４および１０１；１１４および１０２；１１４および１０３；１１４および１０４；１１５および１４；１１５および２５；１１５および９７；１１５および９８；１１５および９９；１１５および１００；１１５および１０１；１１５および１０２；１１５および１０３；１１５および１０４；１１６および１４；１１６および２５；１１６および９７；１１６および９８；１１６および９９；１１６および１００；１１６および１０１；１１６および１０２；１１６および１０３；１１６および１０４；１１７および１４；１１７および２５；１１７および９７；１１７および９８；１１７および９９；１１７および１００；１１７および１０１；１１７および１０２；１１７および１０３；１１７および１０４；１１８および１４；１１８および２５；１１８および９７；１１８および９８；１１８および９９；１１８および１００；１１８および１０１；１１８および１０２；１１８および１０３；１１８および１０４；１２０および１４；１２０および２５；１２０および９７；１２０および９８；１２０および９９；１２０および１００；１２０および１０１；１２０および１０２；１２０および１０３；１２０および１０４；１２１および１４；１２１および２５；１２１および９７；１２１および９８；１２１および９９；１２１および１００；１２１および１０１；１２１および１０２；１２１および１０３；１２１および１０４；１２２および１４；１２２および２５；１２２および９７；１２２および９８；１２２および９９；１２２および１００；１２２および１０１；１２２および１０２；１２２および１０３；１２２および１０４；１２３および１４；１２３および２５；１２３および９７；１２３および９８；１２３および９９；１２３および１００；１２３および１０１；１２３および１０２；１２３および１０３；１２３および１０４；１２５および１４；１２５および２５；１２５および９７；１２５および９８；１２５および９９；１２５および１００；１２５および１０１；１２５および１０２；１２５および１０３；１２５および１０４；１２６および１４；１２６および２５；１２６および９７；１２６および９８；１２６および９９；１２６および１００；１２６および１０１；１２６および１０２；１２６および１０３；１２６および１０４；１２７および１４；１２７および２５；１２７および９７；１２７および９８；１２７および９９；１２７および１００；１２７および１０１；１２７および１０２；１２７および１０３；１２７および１０４；１２８および１４；１２８および２５；１２８および９７；１２８および９８；１２８および９９；１２８および１００；１２８および１０１；１２８および１０２；１２８および１０３；１２８および１０４；４０８および１４；４０８および２５；４０８および９７；４０８および９８；４０８および９９；４０８および１００；４０８および１０１；４０８および１０２；４０８および１０３；４０８および１０４；４０９および１４；４０９および２５；４０９および９７；４０９および９８；４０９および９９；４０９および１００；４０９および１０１；４０９および１０２；４０９および１０３；４０９および１０４；４１０および１４；４１０および２５；４１０および９７；４１０および９８；４１０および９９；４１０および１００；４１０および１０１；４１０および１０２；４１０および１０３；４１０および１０４；４１１および１４；４１１および２５；４１１および９７；４１１および９８；４１１および９９；４１１および１００；４１１および１０１；４１１および１０２；４１１および１０３；４１１および１０４；４１２および１４；４１２および２５；４１２および９７；４１２および９８；４１２および９９；４１２および１００；４１２および１０１；４１２および１０２；４１２および１０３；４１２および１０４；４１３および１４；４１３および２５；４１３および９７；４１３および９８；４１３および９９；４１３および１００；４１３および１０１；４１３および１０２；４１３および１０３；４１３および１０４；４１４および１４；４１４および２５；４１４および９７；４１４および９８；４１４および９９；４１４および１００；４１４および１０１；４１４および１０２；４１４および１０３；４１４および１０４；４１５および１４；４１５および２５；４１５および９７；４１５および９８；４１５および９９；４１５および１００；４１５および１０１；４１５および１０２；４１５および１０３；または４１５および１０４に記載のアミノ酸配列を含む。ある特定の実施形態では、α鎖およびβ鎖は、それぞれ配列番号１３および１４；１３および２５；１０５および１４；１０５および２５；１１０および１４；１１０および２５；１１５および１４；１１５および２５；１２０および１４；１２０および２５；１２５および１４；１２５および２５；４０８および１４；４０８および２５；４１２および１４；または４１２および２５に記載のアミノ酸配列を含む。ある特定の実施形態では、α鎖およびβ鎖は、それぞれ配列番号１３および１４；１０���および１４；１１０および１４；１１５および１４；１２０および１４；１２５および１４；４０８および１４；または４１２および１４に記載のアミノ酸配列を含む。ある特定の実施形態では、α鎖およびβ鎖は、それぞれ配列番号１３および１４に記載のアミノ酸配列を含む。ある特定の実施形態では、α鎖およびβ鎖は、それぞれ配列番号１０５および１４に記載のアミノ酸配列を含む。ある特定の実施形態では、α鎖およびβ鎖は、それぞれ配列番号１１０および１４に記載のアミノ酸配列を含む。ある特定の実施形態では、α鎖およびβ鎖は、それぞれ配列番号１１５および１４に記載のアミノ酸配列を含む。ある特定の実施形態では、α鎖およびβ鎖は、それぞれ配列番号１２０および１４に記載のアミノ酸配列を含む。ある特定の実施形態では、α鎖およびβ鎖は、それぞれ配列番号１２５および１４に記載のアミノ酸配列を含む。ある特定の実施形態では、α鎖およびβ鎖は、それぞれ配列番号４０８および１４に記載のアミノ酸配列を含む。ある特定の実施形態では、α鎖およびβ鎖は、それぞれ配列番号４１２および１４に記載のアミノ酸配列を含む。
【０１１７】
本明細書に開示されるＴＣＲは、任意のＴＣＲ構造様式で使用され得る。例えば、ある特定の実施形態では、ＴＣＲは、完全長α鎖および完全長β鎖を含む完全長ＴＣＲである。膜貫通領域（および任意選択で細胞質領域も）は、可溶性ＴＣＲを産生するために完全長ＴＣＲから除去され得る。したがって、ある特定の実施形態では、ＴＣＲは、膜貫通および／または細胞質領域（複数可）を欠いている可溶性ＴＣＲである。可溶性ＴＣＲを産生する方法は当該技術分野で周知である。いくつかの実施形態では、可溶性ＴＣＲは、二量体化を容易にする操作されたジスルフィド結合を含み、例えば、米国特許第７，３２９，７３１号（参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）を参照されたい。いくつかの実施形態では、可溶性ＴＣＲは、本明細書に記載のＴＣＲの細胞外ドメインを他のタンパク質ドメイン、例えば、マルトース結合タンパク質、チオレドキシン、ヒト定常カッパドメイン、またはロイシンジッパーに融合させることによって生成され、例えば、Ｌｏｓｅｔ  ｅｔ  ａｌ．，Ｆｒｏｎｔ  Ｏｎｃｏｌ．２０１４；４：３７８（参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）を参照されたい。ペプチドリンカーによって連結されるＶαおよびＶβを含む単鎖ＴＣＲ（ｓｃＴＣＲ）も生成することができる。そのようなｓｃＴＣＲは、ＶαおよびＶβを含み得、それぞれＴＣＲ定常領域に連結される。あるいは、ｓｃＴＣＲは、ＶαおよびＶβのいずれか、またはＶαおよびＶβの両方がＴＣＲ定常領域に連結されないＶαおよびＶβを含み得る。例示的なｓｃＴＣＲは、ＰＣＴ公開第ＷＯ２００３／０２０７６３号、同第ＷＯ２００４／０３３６８５号、および同第ＷＯ２０１１／０４４１８６号（それらの各々は参照によりそれらの全体が本明細書に組み込まれる）に記載される。更に、本明細書に開示されるＴＣＲは、鎖がそれぞれ鎖間ジスルフィド結合を形成することができるシステイン残基を有するように操作されている２つのポリペプチド鎖（例えば、α鎖およびβ鎖）を含み得る。したがって、ある特定の実施形態では、本明細書に開示されるＴＣＲは、操作されたジスルフィド結合によって連結された２つのポリペプチド鎖を含む。操作されたジスルフィド結合を有する例示的なＴＣＲは、米国特許第８，３６１，７９４号および同第８，９０６，３８３号（それらの各々は参照によりそれらの全体が本明細書に組み込まれる）に記載される。
【０１１８】
ある特定の実施形態では、本明細書に開示されるＴＣＲは、膜貫通領域を有する１つ以上の鎖（例えば、α鎖および／またはβ鎖）を含む。ある特定の実施形態では、本明細書に開示されるＴＣＲは、膜貫通領域を有する２つの鎖（例えば、α鎖およびβ鎖）を含む。膜貫通領域は、そのＴＣＲ鎖の内因性膜貫通領域、内因性膜貫通領域の変異型、または異種膜貫通領域であり得る。ある特定の実施形態では、本明細書に開示されるＴＣＲは、膜貫通領域を有するα鎖およびβ鎖を含む。
【０１１９】
ある特定の実施形態では、本明細書に開示されるＴＣＲは、細胞質領域を有する１つ以上の鎖（例えば、α鎖および／またはβ鎖）を含む。ある特定の実施形態では、本明細書に開示されるＴＣＲは、それぞれ細胞質領域を有する２つの鎖（例えば、α鎖およびβ鎖）を含む。細胞質領域は、そのＴＣＲ鎖の内因性細胞質領域、内因性細胞質領域の変異型、または異種細胞質領域であり得る。ある特定の実施形態では、本明細書に開示されるＴＣＲは、両方の鎖が膜貫通領域を有するが、１つの鎖が細胞質領域を欠いている２つの鎖（例えば、α鎖およびβ鎖）を含む。ある特定の実施形態では、本明細書に開示されるＴＣＲは、両方の鎖が内因性膜貫通領域を有するが、内因性細胞質領域を欠いている２つの鎖（例えば、α鎖およびβ鎖）を含む。ある特定の実施形態では、本明細書に開示されるＴＣＲは、両方の鎖が内因性膜貫通領域を有するが、内因性細胞質領域を欠いているα鎖およびβ鎖を含む。ある特定の実施形態では、本明細書に開示されるＴＣＲは、共刺激分子からの共刺激シグナル伝達領域を含み、例えば、ＰＣＴ公開第ＷＯ１９９６／０１８１０５、ＷＯ１９９９／０５７２６８、およびＷＯ２０００／０３１２３９、ならびに米国特許第７，０５２，９０６号（それらの各々は参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）を参照されたい。
【０１２０】
ある特定の実施形態では、本明細書に記載のＴＣＲは、配列番号１または２に記載のアミノ酸配列を有するペプチドを含むペプチド−ＭＨＣ複合体に結合し、ＭＨＣは任意のＭＨＣであり得る。ある特定の実施形態では、ＭＨＣは、ヒトＭＨＣである。ある特定の実施形態では、ＭＨＣは、ＭＨＣクラスＩ重鎖（例えば、ＨＬＡ−Ａ、ＨＬＡ−Ｂ、またはＨＬＡ−Ｃ、任意の多形体の任意のサブタイプを含む）およびβ２−ミクログロブリン軽鎖を含むＭＨＣクラスＩ分子である。ある特定の実施形態では、ＭＨＣはＨＬＡ−Ａ＊０２０１である。ある特定の実施形態では、ペプチド−ＭＨＣ複合体は、ＳＬＬＭＷＩＴＱＣ（配列番号１）−ＨＬＡ−Ａ＊０２０１である。ある特定の実施形態では、ＭＨＣは、ＭＨＣクラスＩＩ  α鎖（例えば、ＨＬＡ−ＤＲ、ＨＬＡ−ＤＱ、またはＨＬＡ−ＤＰのα鎖、任意の多形体の任意のサブタイプを含む）およびＭＨＣクラスＩＩ  β鎖（例えば、ＨＬＡ−ＤＲ、ＨＬＡ−ＤＱ、またはＨＬＡ−ＤＰのβ鎖、任意の多形体の任意のサブタイプを含む）を含むＭＨＣクラスＩＩ分子である。ある特定の実施形態では、ＭＨＣクラスＩＩ  α鎖およびＭＨＣクラスＩＩ  β鎖は、同じタイプ（例えば、ＨＬＡ−ＤＲ、ＨＬＡ−ＤＱ、またはＨＬＡ−ＤＰ）に由来する。
【０１２１】
ある特定の実施形態では、本開示は、一緒に融合したＴＣＲのα鎖可変領域（Ｖα）およびβ鎖可変領域（Ｖβ）を含むポリペプチドを提供する。例えば、そのようなポリペプチドは、ＶβのＮ末端またはＣ末端のＶαを含み得、任意選択で２つの鎖間にリンカー（例えば、ペプチドリンカー）を有する。例えば、フーリンおよび／もしくは２Ａ切断部位（表７の配列のうちのいずれか１つから選択される）、またはそれらの組み合わせがＶα／Ｖβ融合ポリペプチドのリンカーに使用され得る。
【０１２２】
ある特定の実施形態では、本開示は、一緒に融合したＴＣＲのα鎖およびβ鎖を含むポリペプチドを提供する。例えば、そのようなポリペプチドは、β鎖のＮ末端またはＣ末端のα鎖を含み得、任意選択で２つの鎖間にリンカー（例えば、ペプチドリンカー）を有する。例えば、フーリンおよび／もしくは２Ａ切断部位（表７の配列のうちのいずれか１つから選択される）、またはそれらの組み合わせがα／β融合ポリペプチドのリンカーに使用され得る。例えば、融合ポリペプチドは、Ｎ末端からＣ末端に、ＴＣＲのα鎖、フーリン切断部位、２Ａ切断部位、およびＴＣＲのβ鎖を含み得る。ある特定の実施形態では、ポリペプチドは、Ｎ末端からＣ末端に、ＴＣＲのβ鎖、フーリン切断部位、２Ａ要素、およびＴＣＲのα鎖を含む。ある特定の実施形態では、ポリペプチドは、Ｎ末端からＣ末端に、ＴＣＲのα鎖、２Ａ切断部位、およびＴＣＲのβ鎖を含む。ある特定の実施形態では、ポリペプチドは、Ｎ末端からＣ末端に、ＴＣＲのβ鎖、２Ａ要素、およびＴＣＲのα鎖を含む。ある特定の実施形態では、ポリペプチドは、Ｎ末端からＣ末端に、ＴＣＲのα鎖、フーリン切断部位、およびＴＣＲのβ鎖を含む。ある特定の実施形態では、ポリペプチドは、Ｎ末端からＣ末端に、ＴＣＲのβ鎖、フーリン要素、およびＴＣＲのα鎖を含む。例示的な融合ＴＣＲ配列を表８に示す。
【０１２３】
別の態様では、上述のＴＣＲまたはポリペプチドと同じ、配列番号１または２に記載のアミノ酸配列を含むペプチドのエピトープ（例えば、同じアミノ酸残基）に結合するＴＣＲが本明細書において提供される。ある特定の実施形態では、ペプチドは、上述のＭＨＣ（例えば、ＨＬＡ−Ａ＊０２０１）と複合体を形成する。ある特定の実施形態では、ＴＣＲは、インビボで動物または哺乳動物（例えば、ヒト）のＴＣＲ生殖系列レパートリー内に天然に存在しない配列を含む。
【０１２４】
５．３  Ｔ細胞レポーターを呈する細胞
別の態様では、本開示は、細胞表面上に本明細書に開示されるＴＣＲを呈する哺乳類細胞（例えば、操作された哺乳類細胞）またはその集団を提供する。任意の哺乳類細胞を使用して、本明細書に開示されるＴＣＲを呈することができる。ある特定の実施形態では、哺乳類細胞は、ＣＤ３（例えば、ＣＤ３γ鎖、ＣＤ３δ鎖、および２つのＣＤ３ε鎖）を発現する。ある特定の実施形態では、哺乳類細胞は、ヒト細胞である。細胞性免疫系のエフェクター細胞は、細胞表面ＴＣＲがこれらのエフェクター細胞をＮＹ−ＥＳＯ−１ポリペプチドを発現する腫瘍細胞に標的化し、それにより腫瘍細胞の死滅を容易にすることができるため、本明細書に開示されるＴＣＲを呈するのに特に有用である。したがって、ある特定の実施形態では、哺乳類細胞は、Ｔ細胞またはナチュラルキラー（ＮＫ）細胞などのリンパ球（例えば、ヒトリンパ球）である。ある特定の実施形態では、リンパ球は、Ｔ細胞である。任意の発達段階の任意のＴ細胞は、本明細書に開示されるＴＣＲを呈するために使用することができる。例えば、ある特定の実施形態では、Ｔ細胞は、ＣＤ８＋細胞傷害性Ｔ細胞、ＣＤ４＋細胞傷害性Ｔ細胞、ＣＤ４＋ヘルパーＴ細胞（例えば、Ｔｈ１またはＴｈ２細胞）、ＣＤ４／ＣＤ８二重陽性Ｔ細胞、腫瘍浸潤Ｔ細胞、胸腺細胞、メモリーＴ細胞、ナイーブＴ細胞、およびナチュラルキラーＴ細胞、例えば、インバリアントナチュラルキラーＴ細胞からなる群から選択される。細胞性免疫系の前駆細胞（例えば、Ｔリンパ球の前駆体）も、これらの細胞がエフェクター細胞に分化、発達、または成熟し得るため、本明細書に開示されるＴＣＲを呈するのに有用である。したがって、ある特定の実施形態では、哺乳類細胞は、多能性幹細胞（例えば、胚性幹細胞、人工多能性幹細胞）、造血幹細胞、またはリンパ球系前駆細胞である。ある特定の実施形態では、造血幹細胞またはリンパ球系前駆細胞は、例えば、骨髄、臍帯血、または末梢血から単離され、かつ／または濃縮される。
【０１２５】
腫瘍、血液、骨髄、リンパ節、胸腺、または別の組織もしくは体液、またはアスレーシス産物を含むが、これらに限定されない多くの源から細胞を得ることができる。ある特定の実施形態では、細胞は、対象に機能性Ｔ細胞を残す治療後に直接患者から得られる。この点に関して、ある特定の癌治療、特に免疫系に損傷を与える薬物での治療後の、患者が治療から通常回復するであろう期間中の治療直後に、得られたＴ細胞の質がエクスビボで拡大するそれらの能力に最適であるか、または改善され得ることが観察された。同様に、本明細書に記載の方法を使用してエクスビボで操作した後、これらの細胞は、移植の増強およびインビボ拡大に好ましい状態であり得る。したがって、ある特定の実形態では、細胞は、この回復期中の血液、骨髄、リンパ節、胸腺、または別の組織もしくは体液、またはアスレーシス産物から回収される。
【０１２６】
ある特定の実施形態では、哺乳類細胞は、細胞表面上に本明細書に開示されるＴＣＲを呈する細胞集団である。細胞集団は異種または同種であり得る。ある特定の実施形態では、集団の少なくとも５０％（例えば、少なくとも６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、９９％、９９．５％、または９９．９％）が本明細書に記載の細胞である。ある特定の実施形態では、集団は実質的に純粋であり、集団の少なくとも５０％（例えば、少なくとも６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、９９％、９９．５％、または９９．９％）が同種である。ある特定の実施形態では、集団は異種であり、混合細胞集団を含む（例えば、細胞は異なる細胞型、発達期、起源を有する、異なる方法によって単離、精製、もしくは濃縮される、異なる薬剤で刺激される、かつ／または異なる方法で操作される）。ある特定の実施形態では、細胞は、末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）（例えば、ヒトＰＢＭＣ）の集団である。
【０１２７】
細胞集団は、必要に応じて濃縮または精製され得る。ある特定の実施形態では、調節性Ｔ細胞（例えば、ＣＤ２５＋Ｔ細胞）は、例えば、ビーズ、粒子、または細胞などの表面にコンジュゲートされている抗ＣＤ２５抗体を使用することによって、集団から除去される。ある特定の実施形態では、抗ＣＤ２５抗体は、蛍光色素（例えば、蛍光活性化細胞選別に使用するため）にコンジュゲートされている。ある特定の実施形態では、チェックポイント受容体（例えば、ＣＴＬＡ−４、ＰＤ−１、ＴＩＭ−３、ＬＡＧ−３、ＴＩＧＩＴ、ＶＩＳＴＡ、ＢＴＬＡ、ＴＩＧＩＴ、ＣＤ１３７、またはＣＥＡＣＡＭ１）を発現する細胞は、例えば、ビーズ、粒子、または細胞などの表面にコンジュゲートされているチェックポイント受容体に特異的に結合する抗体を使用することによって、集団から除去される。ある特定の実施形態では、Ｔ細胞集団は、ＩＦＮγ、ＴＮＦα、ＩＬ−１７Ａ、ＩＬ−２、ＩＬ−３、ＩＬ−４、ＧＭ−ＣＳＦ、ＩＬ−１３、グランザイム（例えば、グランザイムＢ）、およびパーフォリン、または他の適切な分子、例えば、他のサイトカインのうちの１つ以上を発現するように選択され得る。そのような発現を決定するための方法は、例えば、ＰＣＴ公開第ＷＯ  ２０１３／１２６７１２号（参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）に記載されている。
【０１２８】
細胞は、生存、増殖、および／または活性を増加させるためにエクスビボで刺激され得る。いくつかの実施形態では、誘導は、任意の定義された抗原を含まず、したがって、抗原反応性に関してポリクローナルである細胞集団を提供し得る。ある特定の実施形態では、細胞は、ＴＣＲ／ＣＤ３複合体関連シグナルを誘導または活性化する第１の薬剤（例えば、抗ＣＤ３抗体）と接触させられる。ある特定の実施形態では、細胞は、Ｔ細胞表面上のアクセサリー分子を刺激する第２の薬剤（例えば、ＣＤ２８のリガンドまたは抗ＣＤ２８抗体）と接触させられる。ある特定の実施形態では、細胞は、ＣＤ３およびＣＤ２８の両方と相互作用する分子または複合体と接触させられ、分子または複合体は表面（例えば、ビーズ、粒子、または細胞）上に呈され得る。ある特定の実施形態では、細胞は、抗ＣＤ３抗体および抗ＣＤ２８抗体を呈する表面（例えば、ビーズ、粒子、または細胞）と接触させられる。ある特定の実施形態では、細胞は、Ｔ細胞の生存、増殖、および／または活性を増加させるために、細胞表面受容体に結合する１つ以上の薬剤（例えば、ＩＬ−２またはＩＬ−７）と接触させられる。ある特定の実施形態では、細胞は、フィトヘマグルチニンと接触させられる。ある特定の実施形態では、細胞は、Ｃａ２＋放出などの１つ以上の細胞内シグナルを刺激する薬剤（例えば、ホルボール１２−ミリステート１３−アセテートおよび／またはイオノマイシン）と接触させられる。あるいは、誘導は、細胞表面上に呈されるＴＣＲに結合するペプチド（例えば、ＮＹ−ＥＳＯ−１ペプチド）を含む抗原を含み、したがって、抗原反応性に関して濃縮される細胞集団（例えば、モノクローナル）を提供し得る。抗原は、ペプチドと複合体形成するＭＨＣ分子（例えば、ＨＬＡ分子）を更に含み得る。抗原は、膜に結合された、または表面上に呈される可溶性形態として呈され得る。上述の抗原は、任意の組み合わせで使用することができ、同時にまたは順次のいずれかで、エフェクター細胞またはその前駆体と接触させられ得る。接触は、細胞が生存、増殖、および／または活性の状態にあり得る間に停止され得る。長期間にわたるＴ細胞の持続性増殖は、元のＴ細胞集団に対して何倍もの細胞数の増加をもたらし得る。いくつかの実施形態では、活性化は、最適な生物学的活性および生存のためのＴ細胞の調整を可能にする生体エネルギー燃料源の提供を通して代謝フィットネスを促進するために行われ得る。
【０１２９】
ある特定の実施形態では、哺乳類細胞（例えば、リンパ球）は、細胞に導入された導入遺伝子からの本明細書に開示されるＴＣＲを発現し、細胞表面上にＴＣＲを呈する。ＴＣＲは、細胞表面上に構成的に提示され得る。あるいは、細胞は、条件付き発現および／またはＴＣＲの提示を可能にし得る。例えば、ＴＣＲの発現または提示は、外因性刺激により、または細胞分化により誘導され得る。ある特定の実施形態では、導入遺伝子は、ＴＣＲ  α鎖および／もしくはβ鎖、またはそれらの断片（例えば、Ｖα、Ｖβ、ＣＤＲ３αおよび／またはＣＤＲ３β）をコードする。ある特定の実施形態では、導入遺伝子は、外因性転写および／または翻訳制御配列（例えば、プロモーター、エンハンサー、および／またはコザック配列）に作動可能に連結される。ある特定の実施形態では、導入遺伝子は、その天然のゲノム遺伝子座ではない（例えば、ベクターによって導入される）内因性転写および／または翻訳制御配列（例えば、プロモーター、エンハンサー、および／またはコザック配列）に作動可能に連結される。ある特定の実施形態では、導入遺伝子は、その天然のゲノム遺伝子座において（例えば、導入遺伝子を天然のゲノム遺伝子座に挿入することによって）内因性転写および／または翻訳制御配列（例えば、プロモーター、エンハンサー、および／またはコザック配列）に作動可能に連結される。
【０１３０】
ある特定の実施形態では、導入遺伝子は、宿主細胞ゲノムに組み込まれるＤＮＡであり、組み込みは、ＤＮＡの部位特異的組み込み（例えば、相同組換え）またはランダム挿入を通して生じる。ある特定の実施形態では、導入遺伝子は、宿主細胞ゲノムに組み込まれないＤＮＡである（例えば、非組み込みウイルスゲノムとして、またはエピソームＤＮＡとして維持される）。ある特定の実施形態では、導入遺伝子は、本明細書に開示されるＴＣＲを発現するように転写および／または翻訳され得るポリヌクレオチド（ＤＮＡ、ＲＮＡ、修飾されたＤＮＡ、および修飾されたＲＮＡを含むがこれらに限定されない）である。ある特定の実施形態では、導入遺伝子は、５’端にキャップおよび／または３’端にポリ（Ａ）テールを有するＲＮＡであり、キャップおよびポリ（Ａ）テールは、細胞におけるリボソーム結合、翻訳の開始、およびＲＮＡの安定性を調節し得る。
【０１３１】
ある特定の実施形態では、導入遺伝子は、第１および第２の配列を含み、第１の配列は、ＴＣＲ  α鎖またはその断片（例えば、ＶαまたはＣＤＲ３α）を含むポリペプチドをコードし、第２の配列は、ＴＣＲ  β鎖またはその断片（例えば、ＶβまたはＣＤＲ３β）を含むポリペプチドをコードする。ある特定の実施形態では、第１および第２の配列は、各々、転写および／または翻訳制御配列（例えば、プロモーター、エンハンサー、および／またはコザック配列）に作動可能に連結される。ある特定の実施形態では、第１および第２の配列は、異なるポリヌクレオチド（例えば、ＤＮＡ、ＲＮＡ、修飾されたＤＮＡ、または修飾されたＲＮＡ）分子に存在する。ある特定の実施形態では、導入遺伝子の第１および第２の配列は、同じポリヌクレオチド（例えば、ＤＮＡ、ＲＮＡ、修飾されたＤＮＡ、または修飾されたＲＮＡ）分子に存在する。ある特定の実施形態では、第１および第２の配列は、２つの別個のポリペプチド（例えば、内部リボソーム侵入部位（ＩＲＥＳ）、自己切断ペプチド（例えば、２Ａペプチド）、または細胞内もしくは細胞外プロテアーゼによって認識されるペプチド配列）の産生を促進するリンカー配列によって作動可能に連結される。ある特定の実施形態では、第１および第２の配列は、独立して転写および／または翻訳され得る。ある特定の実施形態では、第１および第２の配列は、各々、宿主細胞ゲノムに組み込まれる。ある特定の実施形態では、第１および第２の配列は、各々、宿主細胞ゲノムの異なる領域に組み込まれる。
【０１３２】
あるいは、ある特定の実施形態では、細胞はＴＣＲを発現しないが、代わりにＴＣＲは、化学手段により、またはＴＣＲの細胞表面抗原への結合により細胞の外側表面に結合される。したがって、ある特定の実施形態では、ＴＣＲは、細胞表面抗原に結合する結合部分に連結される。任意の種類の結合部分が本明細書に開示されるＴＣＲに連結（共有結合または非共有結合）され得る。ある特定の実施形態では、ＴＣＲは、細胞（例えば、リンパ球）の細胞表面抗原に特異的に結合する抗体またはその抗原結合断片に（化学的または遺伝的に）融合される。
【０１３３】
ある特定の実施形態では、細胞は、細胞死を誘導することができるポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを更に含む。ある特定の実施形態では、ポリペプチドは、多量体化（例えば、二量体化またはオリゴマー化）領域および細胞死誘導領域を含むキメラポリペプチドであり、細胞死誘導領域は多量体化により活性化される。ある特定の実施形態では、細胞死誘導領域は、プロテアーゼ活性を有するカスパーゼ（例えば、カスパーゼ−９）の配列を含む。ある特定の実施形態では、細胞死誘導領域は、完全長ヒトカスパーゼ−９ポリペプチドを含む。ある特定の実施形態では、細胞死誘導領域は、切り詰められたヒトカスパーゼ−９ポリペプチド（例えば、カスパーゼ−９のＣＡＲＤドメインは削除される）を含む。
【０１３４】
ある特定の実施形態では、細胞は、Ｔ細胞活性化を誘導することができるポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを更に含む。ある特定の実施形態では、ポリペプチドは、例えば、ＰＣＴ公開第ＷＯ２０１５／１２３５２７号（参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）に記載の誘導型キメラ刺激分子である。ある特定の実施形態では、ポリペプチドは、多量体化（例えば、二量体化またはオリゴマー化）領域を含み、ポリペプチドは、多量体化の際にＴ細胞活性化を誘導する。
【０１３５】
例えば、細胞死を誘導することができるポリペプチドまたはＴ細胞活性化を誘導することができるポリペプチドに存在する多量体化領域は、リガンド（例えば、合成リガンド）に結合する際に多量体化するリガンド結合ドメインを含み得る。リガンドは２つ以上の結合部位を有し得、各結合部位はキメラポリペプチドのリガンド結合ドメインに結合することができる。ある特定の実施形態では、リガンドは２つの結合部位を有し、キメラポリペプチドの二量体化を誘導することができる。様々な合成リガンドおよび対応するリガンド結合ドメインを用いることができる。例えば、多量体（例えば、二量体）ＦＫ５０６を使用して、ＦＫ５０６結合タンパク質（ＦＫＢＰ；例えば、ＦＫＢＰ１２またはその変異型）を多量体化することができ、多量体（例えば、二量体）シクロスポリンＡを使用して、シクロスポリン受容体を多量体化することができ、多量体（例えば、二量体）エストロゲンを使用して、エストロゲン受容体を多量体化することができ、、多量体（例えば、二量体）グルココルチコイドを使用して、グルココルチコイド受容体を多量体化することができ、多量体（例えば、二量体）テトラサイクリンを使用して、テトラサイクリン受容体を多量体化することができ、多量体（例えば、二量体）ビタミンＤを使用して、ビタミンＤ受容体を多量体化することができる。リガンド結合ドメインは、構築物の性質およびリガンドの選択に応じて、細胞膜の内部または外部にあってよい。リガンドおよび対応するリガンド結合ドメインの非限定的な例は、米国特許第９，０８９，５２０号、Ｋｏｐｙｔｅｋ，Ｓ．Ｊ．，ｅｔ  ａｌ．，Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ＆Ｂｉｏｌｏｇｙ  ７：３１３−３２１（２０００）、Ｇｅｓｔｗｉｃｋｉ，Ｊ．Ｅ．，ｅｔ  ａｌ．，ＣｏｍｂｉｎａｔｏｒｉａｌＣｈｅｍ．＆Ｈｉｇｈ  Ｔｈｒｏｕｇｈｐｕｔ  Ｓｃｒｅｅｎｉｎｇ  １０：６６７−６７５（２００７）、Ｃｌａｃｋｓｏｎ  Ｔ  Ｃｈｅｍ  Ｂｉｏｌ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｓ  ６７：４４０−２（２００６）、およびＳｃｈｒｅｉｂｅｒ，ｅｔ  ａｌ．，Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｂｉｏｌｏｇｙ  Ｆｒｏｍ  Ｓｍａｌｌ  Ｍｏｌｅｃｕｌｅｓ  ｔｏ  Ｓｙｓｔｅｍｓ  Ｂｉｏｌｏｇｙ  ａｎｄ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｓｉｇｎ（Ｗｉｌｅｙ，２００７）（それらの内容は、参照によりそれらの全体が本明細書に組み込まれる）に記載される。
【０１３６】
ある特定の実施形態では、細胞死を誘導することができるポリペプチドは、ＦＫＢＰ１２ポリペプチドおよび完全長または切り詰められたカスパーゼ−９（例えば、ヒトカスパーゼ−９）ポリペプチドを含むキメラポリペプチドである。ある特定の実施形態では、ＦＫＢＰ１２ポリペプチドは、３６位にバリンを含む。ある特定の実施形態では、ＦＫＢＰ１２ポリペプチドは、配列番号２３に記載のアミノ酸配列を含む。ある特定の実施形態では、ＦＫＢＰ１２多量体化を誘導することができるリガンドは、ＡＰ１９０３（ＣＡＳ登録番号：１９５５１４−６３−７；Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｆｏｒｍｕｌａ：Ｃ７８Ｈ９８Ｎ４Ｏ２０；Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｗｅｉｇｈｔ：１４１１．６５）である。ある特定の実施形態では、リガンドは、ＡＰ２０１８７またはＡＰ２０１８７類似体（例えば、ＡＰ１５１０）である。ある特定の実施形態では、カスパーゼ−９ポリペプチドは、配列番号２４に記載のアミノ酸配列を含む。
【表６】
2020503883.tif 000057
【０１３７】
ある特定の実施形態では、細胞死を誘導することができるポリペプチドをコードするポリヌクレオチドは、転写および／または翻訳制御配列（例えば、プロモーター、エンハンサー、および／またはコザック配列）に作動可能に連結される。ポリヌクレオチドは、宿主細胞ゲノムに組み込まれる。あるいは、ポリヌクレオチドは、非組み込みウイルスゲノムとして、またはエピソームＤＮＡとして維持され得る。ある特定の実施形態では、ポリヌクレオチドは、２つの別個のポリペプチド（例えば、内部リボソーム侵入部位（ＩＲＥＳ）、自己切断ペプチド（例えば、２Ａペプチド）、または細胞内もしくは細胞外プロテアーゼによって認識されるペプチド配列）の産生を促進するリンカー配列によってＴＣＲをコードする第１および／または第２の配列に作動可能に連結される。ある特定の実施形態では、ポリヌクレオチドは、第１および／または第２の配列から独立して転写および／または翻訳される。
【０１３８】
ある特定の実施形態では、細胞は、溶液において提供される。ある特定の実施形態では、細胞は、約−８０℃で、またはそれより低い温度で（例えば、液体窒素保存タンクで）凍結保存される。凍結保存の方法は、例えば、米国特許第５，５８０，７１４号および同第６，７４０，４８４号（参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）に記載されるように、当該技術分野で周知である。凍結保存された細胞は解凍により回収することができ、上述のＴＣＲの単離、精製、濃縮、刺激、および提示のいずれかを凍結保存前または回収後に行うことができる。
【０１３９】
５．４  使用方法
別の態様では、本開示は、本明細書に開示されるＴＣＲ、ポリヌクレオチド、ベクター、操作された細胞（例えば、異種および／または組換え核酸を含む細胞）、または薬学的組成物を使用して対象を治療する方法を提供する。ＴＣＲのＮＹ−ＥＳＯ−１ペプチドへの標的化から利益を受けるであろう対象における任意の疾患または障害は、本明細書に開示されるＴＣＲを使用して治療することができる。本明細書に開示されるＴＣＲ、ポリヌクレオチド、ベクター、操作された細胞、および薬学的組成物は、ＮＹ−ＥＳＯ−１ペプチド（例えば、ＮＹ−ＥＳＯ−１ペプチドを含むペプチド−ＭＨＣ複合体）を提示する腫瘍に対する免疫を誘導するのに特に有用であり、したがって、ＮＹ−ＥＳＯ−１陽性癌を有する対象の免疫療法として使用することができる。例えば、ある特定の実施形態では、本開示は、対象におけるＮＹ−ＥＳＯ−１ペプチドに応答して細胞媒介性免疫を誘導する方法を提供し、この方法は、有効量の、本明細書に開示されるＴＣＲ、ポリヌクレオチド、ベクター、操作された細胞、または薬学的組成物を対象に投与することを含む。ある特定の実施形態では、本開示は、対象における癌を治療する方法を提供し、この方法は、有効量の、本明細書に開示されるＴＣＲ、ポリヌクレオチド、ベクター、操作された細胞、または薬学的組成物を対象に投与することを含む。
【０１４０】
ある特定の実施形態では、本方法は、有効量の、本明細書に記載の細胞またはその集団を対象に投与することを含む。ある特定の実施形態では、細胞は、細胞表面上に本明細書に開示されるＴＣＲを構成的に提示するように操作される。ある特定の実施形態では、細胞は、誘導事象に応答して細胞表面上に本明細書に開示されるＴＣＲを条件付きで提示するように操作される。この誘導事象は、細胞の投与前、投与と同時に、または投与後に投与される外因性の薬剤による刺激のいずれかであり得る。加えて、またはあるいは、誘導事象は、対象の細胞、組織、または病変による刺激であり得る。
【０１４１】
ある特定の実施形態では、細胞は、リガンド結合多量体化（例えば、二量体化またはオリゴマー化）領域および細胞死誘導領域を含むキメラポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを更に含み、本方法は、多量体化領域のリガンドを投与する工程を更に含む。ある特定の実施形態では、キメラポリペプチドは、ＦＫＢＰ１２ポリペプチドおよびカスパーゼ−９（例えば、ヒトカスパーゼ−９）ポリペプチドを含み、本方法は、ＦＫＢＰ１２リガンド（例えば、ＡＰ１９０３）を投与する工程を更に含む。ある特定の実施形態では、ＦＫＢＰ１２リガンドは、疾患の改善の指標（例えば、癌の収縮、癌マーカーの低減、および／または癌の症状の改善）が観察された後、または耐えられない副作用（例えば、高レベルの炎症サイトカインおよび／または宿主による投与された細胞の拒絶）を特定した後に投与される。
【０１４２】
上記に開示されるように、対照に投与される細胞は、自家性または同種であり得る。ある特定の実施形態では、自家性細胞は、癌治療後に患者から直接得られる。この点に関して、ある特定の癌治療、特に免疫系に損傷を与える薬物での治療後の、患者が治療から通常回復するであろう期間中の治療直後に、得られたＴ細胞の質がエクスビボで拡大するそれらの能力に最適であるか、または改善され得ることが観察された。同様に、本明細書に記載の方法を使用してエクスビボで操作した後、これらの細胞は、移植の増強およびインビボ拡大において好ましい状態であり得る。したがって、ある特定の実形態では、細胞は、この回復期中の血液、骨髄、リンパ節、胸腺、または別の組織もしくは体液、またはアスレーシス産物から回収される。更に、ある特定の態様では、動員および条件調整レジメンは、対象における状態を創出するために使用され得、特に療法後の定義された時間窓の間での、特定の細胞型の再増殖、再循環、再生、および／または拡大が好ましい。動員剤は、ＣＸＣＬ１２相互作用ヘパリノイド、ＧＭ−ＣＳＦ、Ｇ−ＣＳＦ（例えば、未修飾、グリコシル化、またはＰＥＧ化）、ＩＬ−２（例えば、未修飾、グリコシル化、またはＰＥＧ化）、ＣＸＣＲ４アンタゴニスト（例えば、プレリキサホル）、インテグリンα４β１アンタゴニスト（例えば、ＢＩＯ５１９２）、シクロホスファミド、５−フルオロウラシル、シスプラチン、エトポシド、イホスファミド、シタラビン、およびこれらの組み合わせからなる群から選択され得る。
【０１４３】
用いられる細胞の数は、細胞の寿命、使用されるプロトコル（例えば、投与の回数）、細胞の増殖能力、組換え構築物の安定性を含むいくつかの状況に依存する。ある特定の実施形態では、細胞は分散液として適用され、一般に、関心の部位に、またはその付近に注射される。細胞は、任意の生理学的に許容される媒体において投与され得る。
【０１４４】
本明細書に開示されるＴＣＲ、ポリヌクレオチド、ベクター、操作された細胞、または薬学的組成物で治療することができる癌は、ＮＹ−ＥＳＯ−１を発現する任意の腫瘍であり得る。ＮＹ−ＥＳＯ−１を発現する腫瘍の例としては、Ｊａｇｅｒら（上掲）に開示されている。Ｃｈｅｎ，  ｅｔ  ａｌ．，（上掲）、Ｓｔｏｃｋｅｒｔ，  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１８７：１３４９（１９９８）、Ｗａｎｇ，ｅｔ  ａｌ，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ  １６１：３５９８−３６０６（１９９８）、Ｊｕｎｇｂｌｕｔｈ，ｅｔ  ａｌ．Ｉｎｔ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ  ９２：８５６−８６０（２００１）、Ｊｕｎｇｂｌｕｔｈ，ｅｔ  ａｌ，ｈｉｔ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ  ９４：２５２−２５６（２００１）、Ｇｎｊａｔｉｃ，Ｓ．ｅｔ  ａｌ（２００４）Ａｄｏ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ  ９５：１−３０、ＷＯ２００４０７８７７６、ＷＯ２０１３１７７２４７、ＷＯ２０１４１６００３０、およびＷＯ２０１０１０６４３１（それらの各々は参照によりそれらの全体が本明細書に組み込まれる）も参照されたい。
【０１４５】
ある特定の実施形態では、癌は、急性リンパ球性癌、急性骨髄性白血病、胞巣状横紋筋肉腫、骨癌、脳癌、乳癌、肛門、肛門管、もしくは肛門直腸の癌、眼の癌、肝内胆管の癌、関節の癌、頸部、胆嚢、もしくは胸膜の癌、鼻部、鼻腔、もしくは中耳の癌、口腔の癌、外陰部の癌、慢性リンパ球性白血病、慢性骨髄性白血病、骨髄腫（例えば、慢性骨髄癌）、結腸癌、食道癌、子宮頸癌、消化管カルチノイド腫瘍である。ホジキンリンパ腫、下咽頭癌、腎臓癌、咽頭癌、肝臓癌、肺癌（例えば、非小細胞肺癌）、悪性中皮腫、黒色腫、多発性骨髄腫、上咽頭癌、非ホジキンリンパ腫、卵巣癌、膵臓癌、腹膜、網、および腸間膜の癌、咽頭癌、前立腺癌、直腸癌、腎癌（例えば、腎細胞癌腫（ＲＣＣ））、胃癌（ｇａｓｔｒｉｃ  ｃａｎｃｅｒ）、小腸癌、軟部組織癌、胃癌（ｓｔｏｍａｃｈ  ｃａｎｃｅｒ）、癌腫、肉腫（例えば、滑膜肉腫、横紋筋肉腫）、精巣癌、甲状腺癌、頭頸部癌、尿管癌、および膀胱癌。ある特定の実施形態では、癌は、黒色腫、乳癌、肺癌、前立腺癌、甲状腺癌、卵巣癌、または滑膜肉腫である。一実施形態では、癌は、滑膜肉腫または脂肪肉腫（例えば、粘液様／円形細胞脂肪肉腫）である。ある特定の実施形態では、癌は、多発性骨髄腫、滑膜肉腫、脂肪肉腫、腎細胞癌腫、子宮頸癌、および卵巣癌からなる群から選択される。
【０１４６】
ある特定の実施形態では、これらの方法は、対象に追加の治療薬を投与することを更に含む。ある特定の実施形態では、追加の治療薬は、化学療法薬、放射線療法薬、またはチェックポイント標的薬である。ある特定の実施形態では、化学療法薬は、低メチル化剤（例えば、アザシチジン）である。ある特定の実施形態では、チェックポイント標的薬は、アンタゴニスト抗ＣＴＬＡ−４抗体、アンタゴニスト抗ＰＤ−Ｌ１抗体、アンタゴニスト抗ＰＤ−Ｌ２抗体、アンタゴニスト抗ＰＤ−１抗体、アンタゴニスト抗ＴＩＭ−３抗体、アンタゴニスト抗ＬＡＧ−３抗体、アンタゴニスト抗ＣＥＡＣＡＭ１抗体、アゴニスト抗ＧＩＴＲ抗体、およびアゴニスト抗ＯＸ４０抗体からなる群から選択される。
【０１４７】
ある特定の実施形態では、抗ＰＤ−１抗体は、本明細書に開示される方法において使用される。ある特定の実施形態では、抗ＰＤ−１抗体は、ニボルマブ（ＢＭＳ−９３６５５８またはＭＤＸ１１０６としても知られる、Ｂｒｉｓｔｏｌ−Ｍｙｅｒｓ  Ｓｑｕｉｂｂにより開発された）である。ある特定の実施形態では、抗ＰＤ−１抗体は、ペムブロリズマブ（ランブロリズマブまたはＭＫ−３４７５としても知られる、Ｍｅｒｃｋ  ＆  Ｃｏ．により開発された）である。ある特定の実施形態では、抗ＰＤ−１抗体は、ピディリズマブ（ＣＴ−０１１としても知られる、，ＣｕｒｅＴｅｃｈにより開発された）である。ある特定の実施形態では、抗ＰＤ−１抗体は、ＭＥＤＩ０６８０（ＡＭＰ−５１４としても知られる、Ｍｅｄｉｍｍｕｎｅにより開発された）である。ある特定の実施形態では、抗ＰＤ−１抗体は、Ｎｏｖａｒｔｉｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓにより開発されたＰＤＲ００１である。ある特定の実施形態では、抗ＰＤ−１抗体は、Ｒｅｇｅｎｅｒｏｎ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓにより開発されたＲＥＧＮ２８１０である。ある特定の実施形態では、抗ＰＤ−１抗体は、Ｐｆｉｚｅｒにより開発されたＰＦ−０６８０１５９１である。ある特定の実施形態では、抗ＰＤ−１抗体は、ＢｅｉＧｅｎｅにより開発されたＢＧＢ−Ａ３１７である。ある特定の実施形態では、抗ＰＤ−１抗体は、ＡｎａｐｔｙｓＢｉｏ  ａｎｄ  Ｔｅｓａｒｏにより開発されたＴＳＲ−０４２である。ある特定の実施形態では、抗ＰＤ−１抗体は、Ｈｅｎｇｒｕｉにより開発されたＳＨＲ−１２１０である。
【０１４８】
本明細書に開示される治療方法に使用され得る抗ＰＤ−１抗体の更なる非限定的な例は、全ての目的のために参照によりそれらの全体が本明細書に組み込まれる、以下の特許および特許出願に開示されている：米国特許第６，８０８，７１０号、米国特許第７，３３２，５８２号、米国特許第７，４８８，８０２号、米国特許第８，００８，４４９号、米国特許第８，１１４，８４５号、米国特許第８，１６８，７５７号、米国特許第８，３５４，５０９号、米国特許第８，６８６，１１９号、米国特許第８，７３５，５５３号、米国特許第８，７４７，８４７号、米国特許第８，７７９，１０５号、米国特許第８，９２７，６９７号、米国特許第８，９９３，７３１号、米国特許第９，１０２，７２７号、米国特許第９，２０５，１４８号、米国公開第ＵＳ２０１３／０２０２６２３  Ａ１号、米国公開第ＵＳ２０１３／０２９１１３６  Ａ１号、米国公開第ＵＳ２０１４／００４４７３８  Ａ１号、米国公開第ＵＳ２０１４／０３５６３６３  Ａ１号、米国公開第ＵＳ２０１６／００７５７８３  Ａ１号、ならびにＰＣＴ公開第ＷＯ２０１３／０３３０９１  Ａ１号、ＰＣＴ公開第ＷＯ２０１５／０３６３９４  Ａ１号、ＰＣＴ公開第ＷＯ２０１４／１７９６６４  Ａ２号、ＰＣＴ公開第ＷＯ２０１４／２０９８０４  Ａ１号、ＰＣＴ公開第ＷＯ２０１４／２０６１０７  Ａ１号、ＰＣＴ公開第ＷＯ２０１５／０５８５７３  Ａ１号、ＰＣＴ公開第ＷＯ２０１５／０８５８４７  Ａ１号、ＰＣＴ公開第ＷＯ２０１５／２００１１９  Ａ１号、ＰＣＴ公開第ＷＯ２０１６／０１５６８５  Ａ１号、およびＰＣＴ公開第ＷＯ２０１６／０２０８５６  Ａ１号。
【０１４９】
ある特定の実施形態では、抗ＰＤ−Ｌ１抗体は、本明細書に開示される方法において使用される。ある特定の実施形態では、抗ＰＤ−Ｌ１抗体は、Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈにより開発されたアテゾリズマブである。ある特定の実施形態では、抗ＰＤ−Ｌ１抗体は、ＡｓｔｒａＺｅｎｅｃａ、Ｃｅｌｇｅｎｅ、およびＭｅｄｉｍｍｕｎｅに開発されたデュルバルマブである。ある特定の実施形態では、抗ＰＤ−Ｌ１抗体は、アベルマブ（ＭＳＢ００１０７１８Ｃとしても知られる、Ｍｅｒｃｋ  ＳｅｒｏｎｏおよびＰｆｉｚｅｒにより開発された）である。ある特定の実施形態では、抗ＰＤ−Ｌ１抗体は、Ｂｒｉｓｔｏｌ−Ｍｙｅｒｓ  Ｓｑｕｉｂｂにより開発されたＭＤＸ−１１０５である。ある特定の実施形態では、抗ＰＤ−Ｌ１抗体は、ＡｍｐｌｉｍｍｕｎｅおよびＧＳＫにより開発されたＡＭＰ−２２４である。
【０１５０】
本明細書に開示される治療方法に使用され得る抗ＰＤ−Ｌ１抗体の非限定的な例は、全ての目的のために参照によりそれらの全体が本明細書に組み込まれる、以下の特許および特許出願に開示されている：米国特許第７，９４３，７４３号、米国特許第８，１６８，１７９号、米国特許第．８，２１７，１４９号、米国特許第８，５５２，１５４号、米国特許第８，７７９，１０８号、米国特許第８，９８１，０６３号、米国特許第９，１７５，０８２号、米国公開第ＵＳ  ２０１０／０２０３０５６  Ａ１号、米国公開第ＵＳ２００３／０２３２３２３  Ａ１号、米国公開第ＵＳ２０１３／０３２３２４９  Ａ１号、米国公開第ＵＳ２０１４／０３４１９１７  Ａ１号、米国公開第ＵＳ２０１４／００４４７３８  Ａ１号、米国公開第ＵＳ２０１５／０２０３５８０  Ａ１号、米国公開第ＵＳ２０１５／０２２５４８３  Ａ１号、米国公開第ＵＳ２０１５／０３４６２０８  Ａ１号、米国公開第ＵＳ２０１５／０３５５１８４  Ａ１号、ならびにＰＣＴ公開第ＷＯ２０１４／１０００７９  Ａ１号、ＰＣＴ公開第ＷＯ２０１４／０２２７５８  Ａ１号、ＰＣＴ公開第ＷＯ２０１４／０５５８９７  Ａ２号、ＰＣＴ公開第ＷＯ２０１５／０６１６６８  Ａ１号、ＰＣＴ公開第ＷＯ２０１５／１０９１２４  Ａ１号、ＰＣＴ公開第ＷＯ２０１５／１９５１６３  Ａ１号、ＰＣＴ公開第ＷＯ２０１６／０００６１９  Ａ１号、およびＰＣＴ公開第ＷＯ２０１６／０３０３５０  Ａ１号。
【０１５１】
ある特定の実施形態では、本明細書に開示されるＴＣＲ、細胞、または薬学的組成物は、ＩＤＯ（インドールアミン−（２，３）−ジオキシゲナーゼ）および／またはＴＤＯ（トリプトファン２，３−ジオキシゲナーゼ）などの免疫調節酵素（複数可）を標的とする化合物と組み合わせて対象に投与される。ある特定の実施形態では、そのような化合物は、エパカドスタット（Ｉｎｃｙｔｅ  Ｃｏｒｐ；例えば、ＰＣＴ公開第ＷＯ２０１０／００５９５８号、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）、Ｆ００１２８７（Ｆｌｅｘｕｓ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ／Ｂｒｉｓｔｏｌ−Ｍｙｅｒｓ  Ｓｑｕｉｂｂ）、インドキシモド（ＮｅｗＬｉｎｋ  Ｇｅｎｅｔｉｃｓ）、およびＮＬＧ９１９（ＮｅｗＬｉｎｋ  Ｇｅｎｅｔｉｃｓ）からなる群から選択される。一実施形態では、化合物は、エパカドスタットである。別の実施形態では、化合物は、Ｆ００１２８７である。別の実施形態では、化合物は、インドキシモドである。別の実施形態では、この化合物は、ＮＬＧ９１９である。具体的な実施形態では、本明細書に開示されるＴＣＲ、細胞、または薬学的組成物は、癌を治療するためのＩＤＯ阻害剤と組み合わせて対象に投与される。癌治療において使用するための本明細書に記載のＩＤＯ阻害剤は、錠剤、丸剤、またはカプセル剤などの薬学的組成物の固体剤形で存在し、この薬学的組成物は、ＩＤＯ阻害剤および薬学的に許容される賦形剤を含む。したがって、本明細書に記載のＴＣＲ、細胞、または薬学的組成物および本明細書に記載のＩＤＯ阻害剤は、別個の剤形として別個に、順次、または同時に投与され得る。一実施形態では、細胞または薬学的組成物は、非経口投与され、ＩＤＯ阻害剤は、経口投与される。特定の実施形態では、阻害剤は、エパカドスタット（Ｉｎｃｙｔｅ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ）、Ｆ００１２８７（Ｆｌｅｘｕｓ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ／Ｂｒｉｓｔｏｌ−Ｍｙｅｒｓ  Ｓｑｕｉｂｂ）、インドキシモド（ＮｅｗＬｉｎｋ  Ｇｅｎｅｔｉｃｓ）、およびＮＬＧ９１９（ＮｅｗＬｉｎｋ  Ｇｅｎｅｔｉｃｓ）からなる群から選択される。エパカドスタットは、全ての目的のために参照によりその全体が本明細書に組み込まれる、ＰＣＴ公開第ＷＯ２０１０／００５９５８号に記載されている。一実施形態では、阻害剤は、エパカドスタットである。別の実施形態では、阻害剤は、Ｆ００１２８７である。別の実施形態では、阻害剤は、インドキシモドである。別の実施形態では、阻害剤は、ＮＬＧ９１９である。
【０１５２】
ある特定の実施形態では、本明細書に開示されるＴＣＲ、細胞、または薬学的組成物は、ワクチンと組み合わせて対象に投与される。ワクチンは、例えば、ペプチドワクチン、ＤＮＡワクチン、またはＲＮＡワクチンであり得る。ある特定の実施形態では、ワクチンは、熱ショックタンパク質ベースの腫瘍ワクチンまたは熱ショックタンパク質ベースの病原体ワクチンである。具体的な実施形態では、本明細書に開示されるＴＣＲ、細胞、または薬学的組成物は、熱ショックタンパク質ベースの腫瘍−ワクチンと組み合わせて対象に投与される。熱ショックタンパク質（ＨＳＰ）は、全ての種にわたって遍在的に見出される高度に保存されたタンパク質のファミリーである。それらの発現は、熱ショック、または毒素への曝露、酸化的ストレス、もしくはグルコース除去を含む、他のストレス形態の結果としてさらに高いレベルまで強力に誘導され得る。分子量により５つのファミリー：ＨＳＰ−１１０、−９０、−７０、−６０、および−２８に分類されている。ＨＳＰは、Ｔ細胞の活性化を引き起こす、マクロファージおよび樹状細胞（ＤＣ）などの抗原を呈する細胞（ＡＰＣ）における交差呈示経路を通して、免疫原性ペプチドを送達する。ＨＳＰは、腫瘍特異的免疫を誘導することが可能な複合体を形成する腫瘍関連抗原ペプチドのシャペロン担体としての機能を果たす。瀕死の状態である腫瘍細胞からの放出時、ＨＳＰ抗原複合体は、抗原が抗腫瘍ＣＤ８＋およびＣＤ４＋Ｔ細胞の活性化を引き起こすＭＨＣクラスＩおよびクラスＩＩ分子に結合するペプチドへと処理される、抗原提示細胞（ＡＰＣ）によって取り込まれる。腫瘍調製物由来のＨＳＰ複合体によって誘発される免疫は、各対象の癌によって発現される独自の抗原ペプチドレパートリーに対して特異的に指向される。
【０１５３】
熱ショックタンパク質ペプチド複合体（ＨＳＰＰＣ）は、抗原ペプチドと非共有結合的に複合体形成された熱ショックタンパク質からなるタンパク質ペプチド複合体である。ＨＳＰＰＣは、先天性免疫応答および適応性免疫応答の両方を誘発する。具体的な実施形態では、抗原ペプチド（複数可）は、治療される癌に対して抗原性を示す。ＨＳＰＰＣは、膜受容体（主にＣＤ９１）を介するＡＰＣによってまたはＴｏｌｌ様受容体への結合によって効率よく獲得される。ＨＳＰＰＣの内在性は、ナチュラルキラー細胞（ＮＫ）、単球、ならびにＴｈ１およびＴｈ２媒介性免疫応答の活性化を引き起こすケモカインおよびサイトカイン産生によるＡＰＣの機能的成熟をもたらす。ある特定の実施形態では、本明細書に開示される方法で使用されるＨＳＰＰＣは、抗原ペプチドと複合体形成されたストレスタンパク質のｈｓｐ６０、ｈｓｐ７０、またはｈｓｐ９０ファミリーからの１つ以上の熱ショックタンパク質を含む。ある特定の実施形態では、ＨＳＰＰＣは、ｈｓｃ７０、ｈｓｐ７０、ｈｓｐ９０、ｈｓｐ１１０、ｇｒｐ１７０、ｇｐ９６、カルレティキュリン、またはそれらの２つ以上の組み合わせを含む。
【０１５４】
具体的な実施形態では、熱ショックタンパク質ペプチド複合体（ＨＳＰＰＣ）は、組換え熱ショックタンパク質（例えば、ｈｓｐ７０またはｈｓｃ７０）または組換え抗原ペプチドと複合体形成されたそのペプチド結合ドメインを含む。組換え熱ショックタンパク質は、例えば、Ｄｗｏｒｎｉｃｚａｋ  ａｎｄ  Ｍｉｒａｕｌｔ，Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．１５：５１８１−５１９７（１９８７）およびＧｅｎＢａｎｋ受入番号Ｐ１１１４２および／またはＹ００３７１（それらの各々は参照によりそれらの全体が本明細書に組み込まれる）に記載のヒトｈｓｃ７０配列を使用して、組換えＤＮＡ技術により産生され得る。ある特定の実施形態では、Ｈｓｐ７０配列は、Ｈｕｎｔ  ａｎｄ  Ｍｏｒｉｍｏｔｏ  Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．８２（１９），６４５５−６４５９（１９８５）およびＧｅｎＢａｎｋ受入番号Ｐ０ＤＭＶ８および／またはＭ１１７１７（それらの各々は参照によりそれらの全体が本明細書に組み込まれる）に記載される通りである。抗原ペプチドも当該技術分野で既知の組換えＤＮＡ方法により調製され得る。
【０１５５】
ある特定の実施形態では、抗原ペプチドは修飾されたアミノ酸を含む。ある特定の実施形態では、修飾されたアミノ酸は、翻訳後修飾を含む。ある特定の実施形態では、修飾されたアミノ酸は、翻訳後修飾の模倣物を含む。ある特定の実施形態では、修飾されたアミノ酸は、側鎖ヒドロキシルまたはアミンでリン酸化されたＴｙｒ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ａｒｇ、Ｌｙｓ、またはＨｉｓである。ある特定の実施形態では、修飾されたアミノ酸は、側鎖ヒドロキシルまたはアミンでリン酸化されたＴｙｒ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ａｒｇ、Ｌｙｓ、またはＨｉｓアミノ酸の模倣物である。
【０１５６】
具体的な実施形態では、本明細書に開示されるＴＣＲ、細胞、または薬学的組成物は、癌を治療するために、熱ショックタンパク質ペプチド複合体（ＨＳＰＰＣ）、例えば、熱ショックタンパク質ペプチド複合体−９６（ＨＳＰＰＣ−９６）と組み合わせて対象に投与される。ＨＳＰＰＣ−９６は、抗原ペプチドと複合体形成された９６ｋＤａ熱ショックタンパク質（Ｈｓｐ）、ｇｐ９６を含む。ＨＳＰＰＣ−９６は、対象の腫瘍から制作された癌免疫療法剤であり、癌の抗原性の「はっきりした特徴」を含む。ある特定の実施形態では、このはっきりした特徴は、その特定の対象の特異的癌細胞にのみ存在する独自の抗原を含有し、ワクチンの注射は、特異的な癌のはっきりした特徴を有するあらゆる細胞を認識し、攻撃するために、対象の免疫系を刺激するよう意図されている。
【０１５７】
ある特定の実施形態では、ＨＳＰＰＣ、例えば、ＨＳＰＰＣ−９６は、対象の腫瘍組織から産生される。具体的な実施形態では、ＨＳＰＰＣ（例えば、ＨＳＰＰＣ−９６）は、治療される癌の種類の腫瘍またはその転移から産生される。別の具体的な実施形態では、ＨＳＰＰＣ（例えば、ＨＳＰＰＣ−９６）は、治療される対象に対して自家性である。ある特定の実施形態では、腫瘍組織は、非壊死腫瘍組織である。ある特定の実施形態では、少なくとも１グラム（例えば、少なくとも１、少なくとも２、少なくとも３、少なくとも４、少なくとも５、少なくとも６、少なくとも７、少なくとも８、少なくとも９、または少なくとも１０グラム）の非壊死腫瘍組織が、ワクチンレジメンを産生するために使用される。ある特定の実施形態では、外科的切除後、非壊死腫瘍組織は、ワクチン調製物で使用する前に冷凍される。いくつかの実施形態では、ＨＳＰＰＣ、例えば、ＨＳＰＰＣ−９６は、精製技法によって腫瘍組織から単離され、濾過され、注射可能なワクチン用に調製される。ある特定の実施形態では、対象は、６〜１２用量のＨＳＰＰＣ、例えば、ＨＳＰＣＣ−９６を投与される。そのような実施形態では、ＨＳＰＰＣ、例えば、ＨＳＰＰＣ−９６用量は、最初の４回の用量が週１回投与され得、次いで、２〜８回の追加用量が週２回投与され得る。
【０１５８】
本明細書に記載の方法に従って使用され得るＨＳＰＰＣの更なる例は、本明細書において参照によりそれらの全体が本明細書に組み込まれる、以下の特許および特許出願：米国特許第６，３９１，３０６号、同第６，３８３，４９２号、同第６，４０３，０９５号、同第６，４１０，０２６号、同第６，４３６，４０４号、同第６，４４７，７８０号、同第６，４４７，７８１号、同第６，６１０，６５９号に開示されている。
【０１５９】
ある特定の実施形態では、本明細書に開示されるＴＣＲ、細胞、または薬学的組成物は、アジュバントと組み合わせて対象に投与される。様々なアジュバントを、治療状況に応じて使用することができる。適切なアジュバントの非限定的な例としては、完全フロイントアジュバント（ＣＦＡ）、不完全フロインドアジュバント（ＩＦＡ）、モンタニドＩＳＡ（不完全セピックアジュバント）、Ｒｉｂｉアジュバント系（ＲＡＳ）、Ｔｉｔｅｒ  Ｍａｘ、ムラミルペプチド、シンテックスアジュバント製剤（ＳＡＦ）、ミョウバン（水酸化アルミニウムおよび／またはリン酸アルミニウム）、アルミニウム塩アジュバント、Ｇｅｒｂｕ（登録商標）アジュバント、ニトロセルロース吸着抗原、被包性または封入抗原、３  Ｄｅ−Ｏ−アシル化モノホスホリル脂質Ａ（３  Ｄ−ＭＰＬ）、疫刺激性オリゴデオキシヌクレオチド、ｔｏｌｌ様受容体（ＴＬＲ）リガンド、マンナン結合レクチン（ＭＢＬ）リガンド、ＳＴＩＮＧアゴニスト、サポリンなどの免疫刺激複合体、Ｑｕｉｌ  Ａ、ＱＳ−２１、ＱＳ−７、ＩＳＣＯＭＡＴＲＩＸなどが挙げられるが、これらに限定されない。他のアジュバントとしては、ＣｐＧオリゴヌクレオチドおよび二本鎖ＲＮＡ分子、例えば、ポリ（Ａ）およびポリ（Ｕ）が挙げられる。また、上記のアジュバントの組み合わせも使用してもよい。例えば、米国特許第６，６４５，４９５号、同第７，０２９，６７８号、および同第７，８５８，５８９号（それらの全ては参照によりそれらの全体が本明細書に組み込まれる）を参照されたい。一実施形態では、本明細書で使用されるアジュバントはＱＳ−２１  ＳＴＩＭＵＬＯＮである。
【０１６０】
ある特定の実施形態では、本明細書に開示されるＴＣＲ、ポリヌクレオチド、ベクター、操作された細胞、または薬学的組成物は、腫瘍微小環境（ＴＭＥ）条件調整剤と組み合わせて対象に投与される。ある特定の実施形態では、ＴＭＥ条件調整剤は、サイトカイン（例えば、インターロイキン−２、インターフェロン−α、インターフェロン−β、インターフェロン−γ、腫瘍壊死因子スーパーファミリーメンバー１４（ＴＮＦＳＦ１４））である。ある特定の実施形態では、サイトカインは、ケモカイン（例えば、（Ｃ−Ｃモチーフ）リガンド２１（ＣＣＬ２１）およびＣ−Ｘ−Ｃモチーフケモカイン１０（ＣＸＣＬ１０））である。ある特定の実施形態では、ＴＭＥ条件調整剤は、パターン認識受容体（ＰＲＲ）のアゴニストである。ある特定の実施形態では、アゴニストは、ＴＬＲ９（例えば、ＣｐＧ）の合成アゴニストである。ある特定の実施形態では、アゴニストは、ＳＴＩＮＧ（例えば、ｃＧＡＭＰ）の合成アゴニストである。
【０１６１】
ＴＣＲ、ポリヌクレオチド、ベクター、操作された細胞、または薬学的組成物、および追加の治療薬（例えば、化学療法薬、放射線療法薬、チェックポイント標的薬、ＩＤＯ阻害剤、ワクチン、アジュバント、および／またはＴＭＥ条件調整剤）は、別個の剤形として別個に、順次、または同時に投与され得る。一実施形態では、ＴＣＲ、ポリヌクレオチド、ベクター、操作された細胞、または薬学的組成物は、非経口投与され、ＩＤＯ阻害剤は、経口投与される。
【０１６２】
本明細書に記載のＴＣＲ、ポリヌクレオチド、ベクター、操作された細胞、または薬学的組成物は、様々な経路によって対象に送達され得る。これらには、非経口、鼻腔内、気管内、経口、皮内、局所、筋肉内、腹腔内、経皮、静脈内、腫瘍内、結膜、くも膜下腔内、および皮下経路が含まれるが、これらに限定されない。肺内投与は、例えば、吸入器または噴霧器、およびスプレー用としてエアロゾル化剤を含む製剤の使用によっても用いられ得る。ある特定の実施形態では、本明細書に記載のＴＣＲ、ポリヌクレオチド、ベクター、操作された細胞、または薬学的組成物は、静脈内送達される。ある特定の実施形態では、本明細書に記載のＴＣＲ、ポリヌクレオチド、ベクター、操作された細胞、または薬学的組成物は、皮下送達される。ある特定の実施形態では、本明細書に記載のＴＣＲ、ポリヌクレオチド、ベクター、操作された細胞、または薬学的組成物は、腫瘍内送達される。ある特定の実施形態では、本明細書に記載のＴＣＲ、ポリヌクレオチド、ベクター、操作された細胞、または薬学的組成物は、腫瘍流入領域リンパ節内に送達される。
【０１６３】
状態の治療および／または予防に有効であろうＴＣＲ、ポリヌクレオチド、ベクター、操作された細胞、または薬学的組成物の量は、疾患の性質に依存し、標準の臨床技法によって決定され得る。
【０１６４】
組成物中で用いられるべき正確な用量は、投与経路、およびそれによって引き起こされる感染症または疾患の重症度にも依存し、臨床医の判断および各対象の状況に従って決定されるべきである。例えば、有効量はまた、投与手段、標的部位、患者の生理学的状態（年齢、体重、および健康を含む）、患者がヒトであるかまたは動物であるか、投与される他の医薬品、または治療が予防的であるかまたは治療的であるかということによって異なってもよい。通常、患者は、ヒトであるが、トランスジェニック哺乳動物を含む非ヒト哺乳動物を治療することもできる。治療投与量は、安全性および有効性を最適化するために最適に滴定される。
【０１６５】
本明細書に記載のＴＣＲは、酵素結合免疫吸着測定法（ＥＬＩＳＡ）、免疫沈降、またはウエスタンブロット法などのイムノアッセイを含む、当業者に既知の古典的な免疫組織学的方法を使用して、生物学的試料中のＮＹ−ＥＳＯ−１ペプチドを含むペプチド−ＭＨＣ複合体のレベルおよび／またはＮＹ−ＥＳＯ−１ペプチドを含むペプチド−ＭＨＣ複合体を提示する細胞の数をアッセイするためにも使用され得る。好適なＴＣＲアッセイ標識は、当該技術分野で既知であり、グルコース酸化酵素などの酵素標識；ヨウ素（１２５Ｉ、１２１Ｉ）、炭素（１４Ｃ）、硫黄（３５Ｓ）、トリチウム（３Ｈ）、インジウム（１２１Ｉｎ）、およびテクネチウム（９９Ｔｃ）などの放射性同位体；ルミノールなどの発光標識；ならびにフルオレセインおよびローダミンなどの蛍光標識、ならびにビオチンを含む。そのような標識を使用して、本明細書に記載のＴＣＲを標識することができる。あるいは、本明細書に記載のＴＣＲを認識する分子を、本明細書に記載のＴＣＲと組み合わせて標識し、使用して、生物学的試料中のＮＹ−ＥＳＯ−１ペプチドを含むペプチド−ＭＨＣ複合体および／またはＮＹ−ＥＳＯ−１ペプチドを含むペプチド−ＭＨＣ複合体を提示する細胞の数を検出することができる。
【０１６６】
ＮＹ−ＥＳＯ−１ペプチドを含むペプチド−ＭＨＣ複合体のレベルについてのアッセイは、直接（例えば、絶対タンパク質レベルを決定または推定することによって）または相対的に（例えば、第２の生物学的試料中の疾患関連タンパク質レベルと比較することによって）のいずれかで第１の生物学的試料中のＮＹ−ＥＳＯ−１ペプチドを含むペプチド−ＭＨＣ複合体のレベルを定性的または定量的に測定または推定することを含むことが意図されている。第１の生物学的試料中のＮＹ−ＥＳＯ−１ペプチドを含むペプチド−ＭＨＣ複合体のレベルは、測定または推定することができ、標準レベルと比較することができ、この標準物は、疾患を有さない個体から得た第２の生物学的試料から採取されるか、または疾患を有さない個体集団からのレベルを平均することによって決定される。当該技術分野で理解されているように、「標準の」レベルが知られると、それを比較のための標準物として繰り返し使用することができる。
【０１６７】
本明細書で使用される場合、「生物学的試料」という用語は、対象から得た任意の生物学的試料、細胞株、組織、またはＮＹ−ＥＳＯ−１ペプチドを含むペプチド−ＭＨＣ複合体を潜在的に提示する細胞の他の源を指す。動物（例えば、ヒト）からの組織生検および体液を得るための方法は、当該技術分野で周知である。生物試料は、末梢血単核細胞を含む。
【０１６８】
本明細書に記載のＴＣＲは、当業者に周知のおよび標準の、本説明に基づいたインビトロでおよびインビボでの適用を含む、予後、診断的、モニタリング、およびスクリーニング適用のために使用することができる。ＮＹ−ＥＳＯ−１ペプチドを含むペプチド−ＭＨＣ複合体を提示する細胞に関連する障害（例えば、ＮＹ−ＥＳＯ−１陽性癌）を有することが知られているか、または有する疑いがあるものを含む、患者試料を評価するために、免疫系状態および／または免疫応答のインビトロ査定および評価のための予後、診断的、モニタリング、およびスクリーニングアッセイならびにキットを使用して、予測、診断、およびモニタリングすることができる。インビボ適用としては、ＮＹ−ＥＳＯ−１ペプチドを含むペプチド−ＭＨＣ複合体を提示する細胞、組織、または臓器（例えば、ＮＹ−ＥＳＯ−１陽性癌）の指向細胞療法、および免疫系調節、ならびに放射性イメージングが挙げられる。
【０１６９】
一実施形態では、本明細書に記載のＴＣＲは、生検試料の免疫組織化学におけるＮＹ−ＥＳＯ−１ペプチドを含むペプチド−ＭＨＣ複合体および／またはＮＹ−ＥＳＯ−１ペプチドを含むペプチド−ＭＨＣ複合体を提示する細胞の数を検出するために使用され得る。本明細書に記載のＴＣＲは、検出可能または機能性標識を有し得る。蛍光標識が使用される場合、現在入手可能な顕微鏡および蛍光活性化細胞選別装置分析（ＦＡＣＳ）または当該技術分野で既知の方法の両方の組み合わせを、特異的結合メンバーを特定および定量化するために利用してもよい。本明細書に記載のＴＣＲは、蛍光標識を有し得る。例示的な蛍光標識は、例えば、反応性およびコンジュゲートプローブ、例えば、アミノクマリン、フルオレセイン、およびテキサスレッド、Ａｌｅｘａ  Ｆｌｕｏｒ色素、Ｃｙ色素およびＤｙＬｉｇｈｔ色素を含む。本明細書に記載のＴＣＲは、同位体３Ｈ、１４Ｃ、３２Ｐ、３５Ｓ、３６Ｃｌ、５１Ｃｒ、５７Ｃｏ、５８Ｃｏ、５９Ｆｅ、６７Ｃｕ、９０Ｙ、９９Ｔｃ、１１１Ｉｎ、１１７Ｌｕ、１２１Ｉ、１２４Ｉ、１２５Ｉ、１３１Ｉ、１９８Ａｕ、２１１Ａｔ、２１３Ｂｉ、２２５Ａｃ、および１８６Ｒｅなどの放射性標識を有し得る。放射性標識が使用される場合、当該技術分野で既知の現在入手可能な計数手順は、ＴＣＲの、ＮＹ−ＥＳＯ−１ペプチドを含むペプチド−ＭＨＣ複合体への特異的結合を特定および定量化するために利用され得る。標識が酵素である場合では、標識は、当該技術分野で既知の現在利用される比色分析法、分光光度法、蛍光分光法、電流測定、または気体定量技法のうちのいずれかによって達成され得る。これは、ＴＣＲとＮＹ−ＥＳＯ−１ペプチドを含むペプチド−ＭＨＣ複合体との間の複合体の形成を可能にする条件下で試料または対照試料を本明細書に記載のＴＣＲと接触させることにより達成され得る。ＴＣＲとペプチド−ＭＨＣ複合体との間で形成された任意の複合体が、試料および対照において検出され、比較される。ＮＹ−ＥＳＯ−１ペプチドを含むペプチド−ＭＨＣ複合体に対する本明細書に記載のＴＣＲの特異的結合に照らして、ＴＣＲは、ＮＹ−ＥＳＯ−１ペプチドを含むペプチド−ＭＨＣ複合体を提示する細胞を検出するために使用され得る。本明細書に記載のＴＣＲは、免疫親和性精製を介してそのような複合体または細胞を精製するために
も使用され得る。例えば、ＮＹ−ＥＳＯ−１ペプチドを含むペプチド−ＭＨＣ複合体またはペプチド−ＭＨＣ複合体を含む複合体の存在の程度の半定量的または定量的分析のための試験キットの形態で調製され得るアッセイシステムも本明細書に含まれる。このシステムまたは試験キットは、標識構成要素、例えば、標識ＴＣＲ、および１つ以上の追加の免疫化学的試薬を含み得る。
【０１７０】
５．５  ＴＣＲを産生するポリヌクレオチド、ベクター、および方法
別の態様では、ＮＹ−ＥＳＯ−１ペプチドに結合する本明細書に記載のＴＣＲ（例えば、α鎖、β鎖、Ｖαドメイン、および／またはＶβドメイン）をコードするヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチド、ならびにベクター、例えば、宿主細胞（例えば、Ｅ．ｃｏｌｉおよび哺乳類細胞）において組換え発現のためのそのようなポリヌクレオチドを含むベクターが本明細書に提供される。本明細書に提供されるＴＣＲのうちのいずれかのα鎖および／またはβ鎖をコードするヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチド、ならびにそのようなポリヌクレオチド配列を含むベクター、例えば、宿主細胞、例えば、哺乳類細胞においてそれらの効率的な発現のための発現ベクターが本明細書に提供される。
【０１７１】
本明細書で使用される場合、「単離された」ポリヌクレオチドまたは核酸分子は、核酸分子の天然源（例えば、マウスまたはヒト）に存在する他の核酸分子から分離されたものである。更に、ｃＤＮＡ分子などの「単離された」核酸分子は、組換え技法によって産生されるとき、他の細胞材料または培養培地を実質的に含み得ないか、または化学的に合成されるとき、化学的前駆体もしくは他の化学物質を実質的に含み得ない。例えば、「実質的に含まない」という用語は、他の材料、例えば、細胞材料、培養培地、他の核酸分子、化学的前駆体、および／または他の化学物質の約１５％、１０％、５％、２％、１％、０．５％、または０．１％未満（特に約１０％未満）を有するポリヌクレオチドまたは核酸分子の調製を含む。具体的な実施形態では、本明細書に記載のＴＣＲをコードする核酸分子（複数可）は、単離されるか、または精製される。
【０１７２】
具体的な態様では、上述のＴＣＲと同じ、配列番号１に記載のアミノ酸配列を含むペプチドのエピトープに結合するＴＣＲをコードするヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチドが本明細書に提供される。ある特定の実施形態では、ペプチドは、上述のＭＨＣ（例えば、ＨＬＡ−Ａ＊０２０１）と複合体形成する。ある特定の実施形態では、ＴＣＲは、インビボで動物または哺乳動物（例えば、ヒト）のＴＣＲ生殖系列レパートリー内に天然に存在しない配列を含む。ある特定の実施形態では、ポリヌクレオチドは、インビボで動物または哺乳動物（例えば、ヒト）のＴＣＲコードＤＮＡ生殖系列レパートリー内に天然に存在しない配列を含む。
【０１７３】
ある特定の態様では、本明細書に記載のＴＣＲのα鎖および／またはβ鎖をコードするヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチドが本明細書に提供される。ポリヌクレオチドは、本明細書に記載のＴＣＲのα鎖ＦＲおよびＣＤＲを含むα鎖をコードするヌクレオチド配列（例えば、表１）、または本明細書に記載のＴＣＲのβ鎖ＦＲおよびＣＤＲを含むβ鎖をコードするヌクレオチド配列（例えば、表１）を含み得る。
【０１７４】
ある特定の実施形態では、ポリヌクレオチドは、本明細書に記載のＴＣＲのα鎖をコードする第１の核酸配列と、β鎖をコードする第２の核酸と、を含む。ある特定の実施形態では、ポリヌクレオチドは、本明細書に記載のＴＣＲのＶαをコードする第１の核酸配列と、Ｖβをコードする第２の核酸と、を含む。ある特定の実施形態では、第１および第２の核酸配列はフレーム内にある。第１の核酸配列は、第２の核酸配列の５’または３’のいずれかであり得る。ある特定の実施形態では、ポリヌクレオチドは、第１と第２の核酸配列との間にペプチドリンカーをコードする第３の核酸配列を更に含み、第１、第２、および第３の核酸配列はフレーム内にある。リンカーは任意のタンパク質分解切断部位を含み得る。例示的なタンパク質分解切断部位には、フーリン切断部位、２Ａ切断部位（表７の配列のうちのいずれか１つから選択される）、またはこれらの組み合わせが含まれるが、これらに限定されない。ある特定の実施形態では、リンカーは、フーリン切断部位（例えば、配列番号１３２に記載のアミノ酸配列を含む）および２Ａ切断部位（例えば、配列番号３３または１３４に記載のアミノ酸配列を含む）を含む。
【０１７５】
ある特定の実施形態では、ポリヌクレオチドは、５’から３’に、第１、第３、および第２の核酸配列を含み、第３の核酸配列は、Ｎ末端からＣ末端に、フーリン切断部位および２Ａ切断部位をコードする。ある特定の実施形態では、ポリヌクレオチドは、５’から３’に、第２、第３、および第１の核酸配列を含み、第３の核酸配列は、Ｎ末端からＣ末端に、フーリン切断部位および２Ａ要素をコードする。ある特定の実施形態では、ポリヌクレオチドは、５’から３’に、第１、第３、および第２の核酸配列を含み、第３の核酸配列は、２Ａ切断部位をコードする。ある特定の実施形態では、ポリヌクレオチドは、５’から３’に、第２、第３、および第１の核酸配列を含み、第３の核酸配列は、２Ａ要素をコードする。ある特定の実施形態では、ポリヌクレオチドは、５’から３’に、第１、第３、および第２の核酸を含み、第３の核酸配列は、フーリン切断部位をコードする。ある特定の実施形態では、ポリヌクレオチドは、５’から３’に、第２、第３、および第１の核酸配列を含み、第３の核酸配列は、フーリン切断部位をコードする。ある特定の実施形態では、ポリヌクレオチドは、表８に提供されるアミノ酸配列のうちのいずれか１つをコードする。フーリン切断部位は、一般に、ＲＸ１Ｘ２Ｒ（配列番号２９）のコンセンサス配列（配列中、Ｘ１は、任意のアミノ酸であり得、Ｘ２は、ＫまたはＲである）を有する。ある特定の実施形態では、Ｘ１は、ＫまたはＲである。ある特定の実施形態では、フーリン切断部位は、ＲＡＫＲ（配列番号３０）の配列を有する。ある特定の実施形態では、フーリン切断部位は、ＲＸ１Ｘ２ＲＳ（配列番号１３１）のコンセンサス配列（配列中、Ｘ１は、任意のアミノ酸であり得、Ｘ２は、ＫまたはＲである）を有する。ある特定の実施形態では、フーリン切断部位は、ＲＡＫＲＳ（配列番号１３２）の配列を有する。ある特定の実施形態では、フーリン切断部位は、ＲＸ１Ｘ２ＲＳ（配列番号１３３）のコンセンサス配列（配列中、Ｘ１は、ＫまたはＲであり、Ｘ２は、ＫまたはＲである）を有する。ある特定の実施形態では、フーリン切断部位は、第２のアルギニン残基の後で切断される。２Ａ切断部位は、一般に、Ｘ１Ｘ２ＥＸ３ＮＰＧＰ（配列番号３２）のコンセンサス配列（配列中、Ｘ１は、ＤまたはＧであり、Ｘ２は、ＶまたはＩであり、Ｘ３は、アミノ酸である）を含む。ある特定の実施形態では、２Ａ切断部位は、Ｃ末端プロリン残基と前のグリシン残基との間で切断される。ある特定の実施形態では、２Ａ切断部位は、配列番号３３〜３８、１３０、および１３４〜１４０から選択されるアミノ酸配列（表７）を含む。ある特定の実施形態では、２Ａ切断部位は、配列番号３３に記載のアミノ酸配列を有する豚テシオウイルス−１  ２Ａ（Ｐ２Ａ）切断部位である。ある特定の実施形態では、２Ａ切断部位は、配列番号１３４に記載のアミノ酸配列を有する豚テシオウイルス−１  ２Ａ（Ｐ２Ａ）切断部位である。ある特定の実施形態では、ポリヌクレオチドは、配列番号２８をコードする核酸配列を含む。
【表７】
2020503883.tif 000058
【表８−１】
2020503883.tif 000059
【表８−２】
2020503883.tif 000060
【０１７６】
また、例えば、コドン／ＲＮＡ最適化、異種シグナル配列での置換、およびｍＲＮＡ不安定性要素の排除によって最適化された本明細書に記載のＴＣＲをコードするポリヌクレオチドも本明細書に提供される。ｍＲＮＡにおいてコドン変化を導入することおよび／または阻害領域を排除することによって、組換え発現のためのＴＣＲ（例えば、α鎖、β鎖、Ｖαドメイン、および／またはＶβドメイン）をコードする最適化された核酸を生成する方法は、例えば、米国特許第５，９６５，７２６号、同第６，１７４，６６６号、同第６，２９１，６６４号、同第６，４１４，１３２号、および同第６，７９４，４９８号に記載される最適化方法を相応に適応させることによって行うことができる。例えば、ＲＮＡ内の潜在的なスプライス部位および不安定性要素（例えば、Ａ／ＴまたはＡ／Ｕの豊富な要素）は、組換え発現のためのＲＮＡの安定性を増加させるために核酸配列によってコードされるアミノ酸を変化させずに変異することができる。変化は、例えば、同一のアミノ酸についての代替的なコドンを使用して、遺伝子コードの縮重を利用する。いくつかの実施形態では、１つ以上のコドンを変化させて、例えば、元のアミノ酸と同様のアミノ酸と同様の化学構造および特性ならびに／または機能との保存的変異をコードすることが望ましくあり得る。そのような方法は、ＴＣＲの発現を、最適化されていないポリヌクレオチドによってコードされるＴＣＲの発現に対して、少なくとも１倍、２倍、３倍、４倍、５倍、１０倍、２０倍、３０倍、４０倍、５０倍、６０倍、７０倍、８０倍、９０倍、または１００倍以上増加させることができる。
【０１７７】
ある特定の実施形態では、本明細書に記載のＴＣＲ（例えば、α鎖、β鎖、Ｖαドメイン、および／またはＶβドメイン）をコードする最適化されたポリヌクレオチド配列は、本明細書に記載のＴＣＲ（例えば、α鎖、β鎖、Ｖαドメイン、および／またはＶβドメイン）をコードする最適化されていないポリヌクレオチド配列のアンチセンス（例えば、相補的）ポリヌクレオチドとハイブリダイズすることができる。具体的な実施形態では、本明細書に記載のＴＣＲをコードする最適化されていないポリヌクレオチド配列のアンチセンスポリヌクレオチドと高ストリンジェンシー条件下で本明細書に記載のＴＣＲをコードする最適化されたヌクレオチド配列。具体的な実施形態では、本明細書に記載のＴＣＲをコードする最適化されたヌクレオチド配列は、本明細書に記載のＴＣＲをコードする最適化されていないヌクレオチド配列のアンチセンスポリヌクレオチドと高ストリンジェンシー、中間、または低ストリンジェンシーハイブリダイゼーション条件下でハイブリダイズする。ハイブリダイゼーション条件に関する情報が記載されており、例えば、参照により本明細書に組み込まれる米国特許出願公開第ＵＳ２００５／００４８５４９号（例えば、段落７２〜７３）を参照されたい。
【０１７８】
当該技術分野で既知の任意の方法によって、ポリヌクレオチドが得られ、ポリヌクレオチドのヌクレオチド配列が決定され得る。本明細書に記載のＴＣＲ、例えば、表１〜４に記載のＴＣＲおよびこれらのＴＣＲの修飾バージョンをコードするヌクレオチド配列は、当該技術分野で周知の方法を使用して決定され得る、すなわち、特定のアミノ酸をコードすることが知られているヌクレオチドコドンは、ＴＣＲをコードする核酸を生成するような方法で組み立てられる。ＴＣＲをコードするそのようなポリヌクレオチドは、化学的に合成されたオリゴヌクレオチドから組み立てることができ（例えば、Ｋｕｔｍｅｉｅｒ  Ｇ  ｅｔ  ａｌ．，（１９９４），ＢｉｏＴｅｃｈｎｉｑｕｅｓ  １７：２４２−６に記載される）、これは、簡潔に言えば、ＴＣＲをコードする配列の一部を含有する重複ポリヌクレオチドの合成、これらのオリゴヌクレオチドのアニーリングおよびライゲーション、次いで、ＰＣＲによるライゲーションされたオリゴヌクレオチドの増幅を伴う。
【０１７９】
あるいは、本明細書に記載のＴＣＲをコードするポリヌクレオチドは、当該技術分野で周知の方法（例えば、ＰＣＲおよび他の分子クローニング方法）を使用して好適な源（例えば、Ｔリンパ球）からの核酸から生成され得る。例えば、既知の配列の３’および５’末端にハイブリダイズ可能な合成プライマーを使用したＰＣＲ増幅は、関心のＴＣＲを発現するＴ細胞から得られたゲノムＤＮＡを使用して行われ得る。そのようなＰＣＲ増幅方法は、ＴＣＲのα鎖および／またはβ鎖をコードする配列を含む核酸を得るために使用することができる。そのようなＰＣＲ増幅方法は、ＴＣＲのＶαドメインおよび／またはＶβドメインをコードする配列を含む核酸を得るために使用することができる。増幅核酸は、例えば、キメラおよびヒト化ＴＣＲを生成するために、宿主細胞における発現のためにおよび更なるクローニングのためにベクターにクローニングされ得る。
【０１８０】
特定のＴＣＲをコードする核酸を含有するクローンは入手不可能であるが、ＴＣＲ分子の配列が既知である場合、ＴＣＲをコードする核酸は、化学的に合成され得るか、あるいは好適な供給源（例えば、ＴＣＲ  ｃＤＮＡライブラリ、またはＴＣＲを発現する任意の組織もしくは細胞（例えば、本明細書に記載のＴＣＲを発現するように選択されたＴリンパ球）から生成されたｃＤＮＡライブラリ、またはそれから単離された核酸、例えば、ポリＡ＋ＲＮＡ）から、例えば、ＴＣＲをコードするｃＤＮＡライブラリからのｃＤＮＡクローンを特定するために、配列の３’および５’末端にハイブリダイズ可能な合成プライマーを使用したＰＣＲ増幅によって、または特定の遺伝子配列に特異的なオリゴヌクレオチドプローブを使用したクローニングによって得ることができる。次いで、ＰＣＲによって生成された増幅核酸は、当該技術分野で周知の任意の方法を使用して、複製可能なクローニングベクターにクリーニングされ得る。
【０１８１】
本明細書に記載のＴＣＲをコードするＤＮＡは、従来の手順を使用して、例えば、ＴＣＲのα鎖および／またはβ鎖をコードする遺伝子に特異的に結合することができるオリゴヌクレオチドプローブを使用することによって容易に単離および配列決定され得る。Ｔリンパ球は、そのようなＤＮＡの供給源としての機能を果たし得る。単離されると、ＤＮＡは、発現ベクター中に配置され、次いで、これを、Ｅ．ｃｏｌｉ細胞、サルＣＯＳ細胞、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞（例えば、ＣＨＯ  ＧＳ  Ｓｙｓｔｅｍ（商標）（Ｌｏｎｚａ）のＣＨＯ細胞）、またはＴＣＲタンパク質を産生しない骨髄腫細胞などの宿主細胞にトランスフェクトし、組換え宿主細胞中でＴＣＲの合成を得ることができる。
【０１８２】
全ＴＣＲを生成するために、ＶαまたはＶβヌクレオチド配列、制限部位、および制限部位を保護するための近傍配列を含むＰＣＲプライマーを使用して、ＶαまたはＶβ配列をクローン、例えば、個々のＶαもしくはＶβヌクレオチド配列のクローンまたは可動性リンカーによって結合されたＴＣＲの可変領域を含有する単鎖ＴＣＲのクローンに増幅することができる。当業者に既知のクローニング技法を利用して、ＰＣＲ増幅されたＶαドメインは、α鎖定常領域を発現するベクターにクローニングすることができ、ＰＣＲ増幅されたＶβドメインは、β鎖定常領域を発現するベクターにクローニングすることができる。ある特定の実施形態では、ＶαまたはＶβドメインを発現するためのベクターは、ＥＦ−１αプロモーター、分泌シグナル、可変領域に対するクローニング部位、定常ドメイン、およびネオマイシンなどの選択マーカーを含む。次いで、α鎖およびβ鎖ベクターは、当業者に既知の技法を使用して、全ＴＣＲを発現する安定したまたは一過性の細胞株を生成するために、同時にまたは順次のいずれかで細胞株に同時トランスフェクトされる。ＶαまたはＶβドメインはまた、必要な定常領域を発現する１つのベクターにクローニングすることができる。次いで、ベクターは、当業者に既知の技法を使用して、全ＴＣＲを発現する安定したまたは一過性の細胞株を生成するために細胞株にトランスフェクトされる。
【０１８３】
また、このＤＮＡを、例えば、マウス配列の代わりにヒトα鎖およびβ鎖定常ドメインのコード配列で置換することによって、またはＴＣＲコード配列に、非ＴＣＲポリペプチドのコード配列の全てまたは一部を共有結合させることによって修飾することもできる。
【０１８４】
本明細書に記載のＴＣＲをコードするポリヌクレオチドに高、中間、または低ストリンジェンシーハイブリダイゼーション条件下でハイブリダイズするポリヌクレオチドも提供される。具体的な実施形態では、本明細書に記載のポリヌクレオチドは、本明細書に記載のＶαドメインおよび／またはＶβドメインをコードするポリヌクレオチドと高、中間、または低ストリンジェンシーハイブリダイゼーション条件下でハイブリダイズする。
【０１８５】
ハイブリダイゼーション条件は、当該技術分野に記載されており、当業者に既知である。例えば、ストリンジェント条件下でのハイブリダイゼーションは、約４５℃で６×塩化ナトリウム／クエン酸ナトリウム（ＳＳＣ）中でのフィルター結合ＤＮＡとのハイブリダイゼーション、続いて、約５０〜６５℃で０．２×ＳＳＣ／０．１％ＳＤＳ中の１回以上の洗浄を伴い得、高ストリンジェント条件下でのハイブリダイゼーションは、約４５℃で６×ＳＳＣ中でのフィルター結合核酸とのハイブリダイゼーション、続いて、約６８℃で０．１×ＳＳＣ／０．２％ＳＤＳ中の１回以上の洗浄を伴い得る。他のストリンジェントハイブリダイゼーション条件下でのハイブリダイゼーションは、当業者に既知であり、記載されており、例えば、Ａｕｓｕｂｅｌ  ＦＭ  ｅｔ  ａｌ．，ｅｄｓ．，（１９８９）Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｖｏｌ．Ｉ，Ｇｒｅｅｎ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ａｓｓｏｃｉａｔｅｓ，Ｉｎｃ．ａｎｄ  Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ＆Ｓｏｎｓ，Ｉｎｃ．，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ  ａｔ  ｐａｇｅｓ  ６．３．１−６．３．６  ａｎｄ  ２．１０．３を参照されたい。
【０１８６】
ある特定の態様では、ＮＹ−ＥＳＯ−１ペプチドに結合する本明細書に記載のＴＣＲ、ならびに関連ポリヌクレオチドおよび発現ベクターを（例えば、組換えによって）発現する細胞（例えば、宿主細胞）が本明細書に提供される。宿主細胞、例えば、哺乳類細胞における組換え発現のためのそのようなＴＣＲをコードするヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチドを含むベクター（例えば、発現ベクター）が本明細書に提供される。また、本明細書に記載のＴＣＲ（例えば、ヒトまたはヒト化ＴＣＲ）を組換えによって発現するためのそのようなベクターを含む宿主細胞も本明細書に提供される。特定の態様では、宿主細胞からそのようなＴＣＲを発現することを含む、本明細書に記載のＴＣＲを産生するための方法が本明細書に提供される。
【０１８７】
別の態様では、本明細書に記載の操作された細胞（例えば、異種および／または組換え核酸を含む細胞）を産生するための方法が本明細書に提供される。ある特定の実施形態では、本方法は、ベクターの細胞への導入を可能にする条件下で、細胞を本明細書に記載のベクターと接触させることを含む。ある特定の実施形態では、条件は、細胞にベクターを（例えば、リポソームまたは電気穿孔により）トランスフェクトすることを可能にする。一実施形態では、条件は、電気穿孔により細胞にｍＲＮＡベクターをトランスフェクトすることを可能にする。ある特定の実施形態では、ベクターはウイルスベクターであり、条件は細胞にウイルスベクターをトランスフェクトすることを可能にする。ある特定の実施形態では、ベクターは、インビトロまたはエクスビボで細胞に導入される。ある特定の実施形態では、ベクターは、インビボで細胞に導入される。
【０１８８】
ＮＹ−ＥＳＯ−１ペプチドに結合する本明細書に記載のＴＣＲ（例えば、本明細書に記載の完全長ＴＣＲ、ＴＣＲのα鎖および／もしくはβ鎖、または単鎖ＴＣＲ）の組換え発現は、ＴＣＲをコードするポリヌクレオチドを含有する発現ベクターの構築を伴う。本明細書に記載のＴＣＲをコードするポリヌクレオチドが得られると、ＴＣＲ分子の産生のためのベクターは、当該技術分野で周知の技法を使用した組換えＤＮＡ技術により産生され得る。したがって、ヌクレオチド配列をコードするＴＣＲを含有するポリヌクレオチドを発現することによりタンパク質を調製するための方法が本明細書に記載される。当業者に周知の方法は、配列をコードするＴＣＲならびに適切な転写および翻訳制御シグナルを含有する発現ベクターを構築するために使用することができる。これらの方法としては、例えば、インビトロ組換えＤＮＡ技法、合成技法、およびインビボ遺伝子組換えが挙げられる。プロモーターに作動可能に連結される、本明細書に記載のＴＣＲ分子（例えば、完全長ＴＣＲ、ＴＣＲのα鎖もしくはβ鎖、ＴＣＲのＶαもしくはＶβ、またはαもしくはβ鎖ＣＤＲ）をコードするヌクレオチド配列を含む複製可能なベクターも提供される。
【０１８９】
ベクターは、一本鎖もしくは二本鎖であり得、合成されるかもしくは一部天然源から得ることができ、かつ天然、天然ではない、もしくは変更されたヌクレオチドを含有し得る、あらゆる種類のヌクレオチド（ＤＮＡおよびＲＮＡを含むが、これらに限定されない）を含み得る。組換え発現ベクターは、天然に生じるもしくは天然に生じないヌクレオチド間連結、または両種類の連結を含み得る。一実施形態では、天然に生じないもしくは変更されたヌクレオチド、またはヌクレオチド間連結は、ベクターの転写または複製を妨げない。発現ベクターは、ウイルスベクター（例えば、レトロウイルスベクター、アデノウイルスベクター、アデノ関連ウイルスベクター、またはバキュロウイルスベクター）であり得る。ある特定の実施形態では、レトロウイルスベクターは、レンチウイルスベクター（例えば、ＨＩＶ−１ゲノムの遺伝要素を含むベクター）またはウマ伝染性貧血ウイルスベクターである。ある特定の実施形態では、ベクターは、１つ以上のウイルスカプシドタンパク質でパッケージされて、ウイルス粒子を提供する。
【０１９０】
発現ベクターは従来の技法により細胞（例えば、宿主細胞）に移行することができ、次いで、得られた細胞は、従来の技法により培養されて、本明細書に記載のＴＣＲを産生することができる。したがって、宿主細胞中でそのような配列の発現のためのプロモーターに作動可能に連結される、本明細書に記載のＴＣＲ分子（例えば、完全長ＴＣＲ、ＴＣＲのα鎖もしくはβ鎖、ＴＣＲのＶαもしくはＶβ、またはαもしくはβ鎖ＣＤＲ）をコードするポリヌクレオチドを含有する宿主細胞が提供される。ある特定の実施形態では、二重鎖ＴＣＲの発現のために、αおよびβ鎖の両方をコードするベクターは、個別に、以下に詳述されるように、全ＴＣＲ分子の発現のために宿主細胞において同時発現され得る。ある特定の態様では、宿主細胞は、本明細書に記載のＴＣＲのα鎖およびβ鎖の両方をコードするポリヌクレオチドを含むベクターを含有する。具体的な実施形態では、宿主細胞は２つの異なるベクターを含有し、第１のベクターは、本明細書に記載のＴＣＲのα鎖またはα鎖可変領域をコードするポリヌクレオチドを含み、第２のベクターは、本明細書に記載のＴＣＲのβ鎖またはβ鎖可変領域をコードするポリヌクレオチドを含む。他の実施形態では、第１の宿主細胞は、本明細書に記載のＴＣＲのα鎖またはα鎖可変領域をコードするポリヌクレオチドを含む第１のベクターを含み、第２の宿主細胞は、本明細書に記載のＴＣＲのβ鎖またはβ鎖可変領域をコードするポリヌクレオチドを含む第２のベクターを含む。具体的な実施形態では、第１の細胞によって発現されるα鎖またはα鎖可変領域は、第２の細胞によって発現されるβ鎖またはβ鎖可変領域と会合して、本明細書に記載のＴＣＲを形成する。ある特定の実施形態では、そのような第１の宿主細胞およびそのような第２の宿主細胞を含む宿主細胞の集団が本明細書に提供される。
【０１９１】
特定の実施形態では、本明細書に記載のＴＣＲのα鎖またはα鎖可変領域をコードするポリヌクレオチドを含む第１のベクターと、本明細書に記載のＴＣＲのβ鎖またはβ鎖可変領域をコードするポリヌクレオチドを含む第２のベクターと、を含むベクターの集団が本明細書に提供される。
【０１９２】
様々な宿主−発現ベクター系を利用して、本明細書に記載のＴＣＲ分子を発現することができる（例えば、米国特許第５，８０７，７１５号を参照されたい）。そのような宿主−発現系は関心のコード配列が産生され、続いて、精製することができるビヒクルを表すが、適切なヌクレオチドコード配列で形質転換するか、またはそれをトランスフェクトされた場合に、原位置で本明細書に記載のＴＣＲ分子を発現し得る細胞も表す。これらには、ＴＣＲコード配列を含有する組換えバクテリオファージＤＮＡ、プラスミドＤＮＡ、またはコスミドＤＮＡ発現ベクターで形質転換された細菌などの微生物（例えば、Ｅ．ｃｏｌｉおよびＢ．ｓｕｂｔｉｌｉｓ）、ＴＣＲコード配列を含有する組換え酵母発現ベクターで形質転換された酵母（例えば、Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ  Ｐｉｃｈｉａ）、ＴＣＲコード配列を含有する組換えウイルス発現ベクター（例えば、バキュロウイルス）に感染した昆虫細胞系、ＴＣＲコード配列を含有する組換えウイルス発現ベクター（例えば、カリフラワーモザイクウイルス、ＣａＭＶ、タバコモザイクウイルス、ＴＭＶ）に感染したまたは組換えプラスミド発現ベクター（例えば、Ｔｉプラスミド）で形質転換された植物細胞株（例えば、Ｃｈｌａｍｙｄｏｍｏｎａｓ  ｒｅｉｎｈａｒｄｔｉｉなどの緑藻類）、あるいは哺乳類細胞のゲノム由来のプロモーター（例えば、メタロチオネインプロモーター）または哺乳類ウイルス由来のプロモーター（例えば、アデノウイルス後期プロモーター、ワクシニアウイルス７．５Ｋプロモーター）を含有する組換え発現構築物を有する哺乳類細胞株（例えば、ＣＯＳ（例えば、ＣＯＳ１もしくはＣＯＳ）、ＣＨＯ、ＢＨＫ、ＭＤＣＫ、ＨＥＫ２９３、ＮＳ０、ＰＥＲ．Ｃ６、ＶＥＲＯ、ＣＲＬ７Ｏ３Ｏ、ＨｓＳ７８Ｂｓｔ、ＨｅＬａ、およびＮＩＨ  ３Ｔ３、ＨＥＫ−２９３Ｔ、ＨｅｐＧ２、ＳＰ２１０、Ｒ１．１、Ｂ−Ｗ、Ｌ−Ｍ、ＢＳＣ１、ＢＳＣ４０、ＹＢ／２０、およびＢＭＴ１０細胞）が含まれるが、これらに限定されない。具体的な実施形態では、本明細書に記載のＴＣＲを発現するための細胞は、ＣＨＯ細胞、例えば、ＣＨＯ  ＧＳ  Ｓｙｓｔｅｍ（商標）（Ｌｏｎｚａ）のＣＨＯ細胞である。特定の実施形態では、本明細書に記載のＴＣＲを発現するための細胞は、ヒト細胞、例えば、ヒト細胞株である。具体的な実施形態では、哺乳類発現ベクターは、ｐＯｐｔｉＶＥＣ（商標）またはｐｃＤＮＡ３．３である。特定の実施形態では、Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ  ｃｏｌｉなどの細菌細胞、または特に全組換えＴＣＲ分子の発現のための真核細胞（例えば、哺乳類細胞）は、組換えＴＣＲ分子の発現に使用される。例えば、ヒトサイトメガロウイルスからの主要中間初期遺伝子プロモーター要素などのベクターと組み合わせたチャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞などの哺乳類細胞は、ＴＣＲの効果的な発現系である（Ｆｏｅｃｋｉｎｇ  ＭＫ  ＆  Ｈｏｆｓｔｅｔｔｅｒ  Ｈ（１９８６）Ｇｅｎｅ  ４５：１０１−５、およびＣｏｃｋｅｔｔ  ＭＩ  ｅｔ  ａｌ．，（１９９０）Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  ８（７）：６６２−７）。ある特定の実施形態では、本明細書に記載のＴＣＲは、ＣＨＯ細胞またはＮＳ０細胞によって産生される。具体的な実施形態では、本明細書に記載のＴＣＲをコードするヌクレオチド配列の発現は、構成的プロモーター、誘導性プロモーター、または組織特異的プロモーターにより調節される。
【０１９３】
ある特定の実施形態では、哺乳類宿主細胞は、Ｔ細胞またはナチュラルキラー（ＮＫ）細胞などのリンパ球（例えば、ヒトリンパ球）である。ある特定の実施形態では、リンパ球は、Ｔ細胞である。任意の発達期の任意のＴ細胞を使用して、本明細書に開示されるＴＣＲを発現することができる。例えば、ある特定の実施形態では、Ｔ細胞は、ＣＤ８＋細胞傷害性Ｔ細胞、ＣＤ４＋細胞傷害性Ｔ細胞、ＣＤ４＋ヘルパーＴ細胞（例えば、Ｔｈ１またはＴｈ２細胞）、ＣＤ４／ＣＤ８二重陽性Ｔ細胞、腫瘍浸潤Ｔ細胞、胸腺細胞、メモリーＴ細胞、ナイーブＴ細胞、およびナチュラルキラーＴ細胞（例えば、インバリアントナチュラルキラーＴ細胞）からなる群から選択される。細胞性免疫系の前駆細胞（例えば、Ｔリンパ球の前駆体）も、これらの細胞がエフェクター細胞に分化、発達、または成熟し得るため、本明細書に開示されるＴＣＲを提示するのに有用である。したがって、ある特定の実施形態では、哺乳類宿主細胞は、多能性幹細胞（例えば、胚性幹細胞、人工多能性幹細胞）、リンパ球系前駆細胞、または造血幹細胞（例えば、骨髄、臍帯血、または末梢血から単離および／または濃縮される）である。
【０１９４】
腫瘍、血液、骨髄、リンパ節、胸腺、または別の組織もしくは体液、またはアスレーシス産物を含むが、これらに限定されない多くの源から細胞を得ることができる。ある特定の実施形態では、細胞は、対象に機能性Ｔ細胞を残す治療後に直接患者から得られる。この点に関して、ある特定の癌治療、特に免疫系に損傷を与える薬物での治療後の、患者が治療から通常回復するであろう期間中の治療直後に、得られたＴ細胞の質がエクスビボで拡大するそれらの能力に最適であるか、または改善され得ることが観察された。同様に、本明細書に記載の方法を使用してエクスビボで操作した後、これらの細胞は、移植の増強およびインビボ拡大に好ましい状態であり得る。したがって、ある特定の実形態では、細胞は、この回復期中の血液、骨髄、リンパ節、胸腺、または別の組織もしくは体液、またはアスレーシス産物から回収される。
【０１９５】
ある特定の実施形態では、哺乳類宿主細胞は、細胞表面上に本明細書に開示されるＴＣＲを呈する細胞集団である。細胞集団は異種または同種であり得る。ある特定の実施形態では、集団の少なくとも５０％（例えば、少なくとも６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、９９％、９９．５％、または９９．９％）が本明細書に記載の細胞である。ある特定の実施形態では、集団は実質的に純粋であり、集団の少なくとも５０％（例えば、少なくとも６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、９９％、９９．５％、または９９．９％）が同種である。ある特定の実施形態では、集団は異種であり、混合細胞集団を含む（例えば、細胞は異なる細胞型、発達期、起源を有する、異なる方法によって単離、精製、もしくは濃縮される、異なる薬剤で刺激される、かつ／または異なる方法で操作される）。ある特定の実施形態では、細胞は、末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）（例えば、ヒトＰＢＭＣ）の集団である。
【０１９６】
細菌系では、ＴＣＲ分子を発現させることを目的とした使用に応じて、いくつかの発現ベクターが有利に選択され得る。例えば、ＴＣＲ分子の薬学的組成物の生成のために、大量のそのようなＴＣＲが産生される場合、容易に精製される高レベルの融合タンパク質産物の発現を誘導するベクターが望ましい場合がある。そのようなベクターは、融合タンパク質が産生されるようにＴＣＲコード配列がｌａｃ  Ｚコード領域とインフレームでベクターに個々にライゲーションされ得る、Ｅ．ｃｏｌｉ発現ベクターｐＵＲ２７８（Ｒｕｅｔｈｅｒ  Ｕ＆Ｍｕｅｌｌｅｒ−Ｈｉｌｌ  Ｂ（１９８３）ＥＭＢＯ  Ｊ  ２：１７９１−１７９４）、ｐＩＮベクター（Ｉｎｏｕｙｅ  Ｓ＆Ｉｎｏｕｙｅ  Ｍ（１９８５）Ｎｕｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ  １３：３１０１−３１０９、Ｖａｎ  Ｈｅｅｋｅ  Ｇ＆Ｓｃｈｕｓｔｅｒ  ＳＭ（１９８９）Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ  ２４：５５０３−５５０９）等を含むが、これらに限定されない。例えば、ｐＧＥＸベクターはまた、グルタチオン５−トランスフェラーゼ（ＧＳＴ）との融合タンパク質として外来性ポリペプチドを発現するために使用することもできる。一般に、そのような融合タンパク質は、可溶性であり、マトリックスグルタチオンアガロースビーズへの吸着および結合、続いて遊離グルタチオンの存在下での溶出により、溶解した細胞から容易に精製することができる。ｐＧＥＸベクターは、クローニングされた標的遺伝子産物がＧＳＴ部分から放出され得るように、トロンビンまたはＸａ因子プロテアーゼ切断部位を含むように設計されている。
【０１９７】
昆虫系では、例えば、Ａｕｔｏｇｒａｐｈａ  ｃａｌｉｆｏｒｎｉｃａ核多角体病ウイルス（ＡｃＮＰＶ）が、外来遺伝子を発現するためのベクターとして使用することができる。ウイルスは、Ｓｐｏｄｏｐｔｅｒａ  ｆｒｕｇｉｐｅｒｄａ細胞中で成長する。ＴＣＲコード配列は、ウイルスの非必須領域（例えばポリヘドリン遺伝子）に個々にクローニングされ、ＡｃＮＰＶプロモーター（例えばポリヘドリンプロモーター）の制御下に置かれ得る。
【０１９８】
哺乳類宿主細胞では、いくつかのウイルスベースの発現系を利用することができる。アデノウイルスが発現ベクターとして使用される場合には、関心のＴＣＲコード配列は、アデノウイルス転写／翻訳制御複合体、例えば、後期プロモーターおよび三分裂（ｔｒｉｐａｒｔｉｔｅ）リーダー配列にライゲーションされ得る。次いで、このキメラ遺伝子は、インビトロまたはインビボ組換えによってアデノウイルスゲノムに挿入され得る。ウイルスゲノムの非必須領域（例えば、領域ＥｌまたはＥ３）への挿入により、感染した宿主で生存可能であり、ＴＣＲ分子を発現することができる組換えウイルスが得られるであろう（例えば、Ｌｏｇａｎ  Ｊ＆Ｓｈｅｎｋ  Ｔ（１９８４）ＰＮＡＳ  ８１（１２）：３６５５−９を参照されたい）。特異的開始シグナルはまた、挿入したＴＣＲコード配列の効率的な翻訳にも必要とされ得る。これらのシグナルは、ＡＴＧ開始コドンおよび隣接配列を含む。更に、開始コドンは、全挿入の翻訳を確実にするように、所望のコード配列のリーディングフレームと一致しなければならない。これらの外因性の翻訳制御シグナルおよび開始コドンは、天然および合成の両方の、様々な起源のものであり得る。発現の効率は、適切な転写エンハンサー要素、転写ターミネーター等の包含により増強され得る（例えば、Ｂｉｔｔｅｒ  Ｇ  ｅｔ  ａｌ．，（１９８７）Ｍｅｔｈｏｄｓ  Ｅｎｚｙｍｏｌ．１５３：５１６−５４４）。
【０１９９】
加えて、挿入された配列の発現を調節するか、または所望の特異的な形で遺伝子産物を修飾およびプロセシングする宿主細胞株を選択することができる。タンパク質産物のそのような修飾（例えば、グリコシル化）およびプロセシング（例えば、切断）は、タンパク質の機能に重要であり得る。異なる宿主細胞は、タンパク質および遺伝子産物の翻訳後のプロセシングおよび修飾に対する独特かつ特異的な機構を有する。適切な細胞株または宿主系を、発現した外来タンパク質の正しい修飾およびプロセシングを確実にするために選択することができる。この目的を達成するために、遺伝子産物の一次転写物の適当なプロセシング、グリコシル化、およびリン酸化のための細胞の機構を有する真核生物の宿主細胞を使用することができる。そのような哺乳類宿主細胞としては、ＣＨＯ、ＶＥＲＯ、ＢＨＫ、Ｈｅｌａ、ＭＤＣＫ、ＨＥＫ２９３、ＮＩＨ３Ｔ３、Ｗ１３８、ＢＴ４８３、Ｈｓ５７８Ｔ、ＨＴＢ２、ＢＴ２Ｏ、およびＴ４７Ｄ、ＮＳ０（任意の免疫グロブリン鎖を内因的に産生しないマウス骨髄腫細胞株）、ＣＲＬ７Ｏ３Ｏ、ＣＯＳ（例えば、ＣＯＳ１またはＣＯＳ）、ＰＥＲ．Ｃ６、ＶＥＲＯ、ＨｓＳ７８Ｂｓｔ、ＨＥＫ−２９３Ｔ、ＨｅｐＧ２、ＳＰ２１０、Ｒ１．１、Ｂ−Ｗ、Ｌ−Ｍ、ＢＳＣ１、ＢＳＣ４０、ＹＢ／２０、ＢＭＴ１０、およびＨｓＳ７８Ｂｓｔ細胞が挙げられるが、これらに限定されない。ある特定の実施形態では、本明細書に記載のＴＣＲ分子は、ＣＨＯ細胞などの哺乳類細胞中で産生される。
【０２００】
組換えＴＣＲの長期間発現のため、安定した発現細胞が生成され得る。例えば、本明細書に記載のＴＣＲを安定して発現する細胞株が操作され得る。具体的な実施形態では、本明細書に提供される細胞は、会合して本明細書に記載のＴＣＲを形成するα鎖またはα鎖可変領域およびβ鎖またはβ鎖可変領域を安定して発現する。
【０２０１】
ある特定の態様では、宿主細胞を、適切な発現制御要素（例えば、プロモーター、エンハンサー、配列、転写ターミネーター、ポリアデニル化部位等）により制御されたＤＮＡ、および選択可能なマーカーで形質転換することができる。外来ＤＮＡ／ポリヌクレオチドの導入後、操作された細胞は、濃縮養培地中で１〜２日間成長させることができ、次いで選択培地に交換される。組換えプラスミド内の選択可能なマーカーは、選択への耐性を付与し、細胞が、その染色体中にプラスミドを安定して組み込み、焦点（これは、次にクローニングし、細胞株に拡大することができる）を形成するように成長することを可能にする。この方法は、本明細書に記載のＴＣＲを発現する細胞株を操作するのに有利に使用することができる。そのような操作された細胞株は、ＴＣＲ分子と直接または間接的に相互作用する組成物のスクリーニングおよび評価に特に有用であり得る。
【０２０２】
それぞれ、ｔｋ−、ｈｇｐｒｔ−、またはａｐｒｔ−細胞において、単純ヘルペスウイルスチミジンキナーゼ（Ｗｉｇｌｅｒ  Ｍ  ｅｔ  ａｌ．，（１９７７）Ｃｅｌｌ  １１（１）：２２３−３２）、ヒポキサンチングアニンホスホリボシルトランスフェラーゼ（Ｓｚｙｂａｌｓｋａ  ＥＨ＆Ｓｚｙｂａｌｓｋｉ  Ｗ（１９６２）ＰＮＡＳ  ４８（１２）：２０２６−２０３４）、およびアデニンホスホリボシルトランスフェラーゼ（Ｌｏｗｙ  Ｉ  ｅｔ  ａｌ．，（１９８０）Ｃｅｌｌ  ２２（３）：８１７−２３）（それらの各々は参照によりそれらの全体が本明細書に組み込まれる）遺伝子を含むが、これらに限定されない、いくつかの選択系を使用することができる。また、以下の遺伝子に対する選択に基づいて代謝拮抗剤耐性を使用することができる：メトレキサートへの耐性を付与するｄｈｆｒ（Ｗｉｇｌｅｒ  Ｍ  ｅｔ  ａｌ．，（１９８０）ＰＮＡＳ  ７７（６）：３５６７−７０、Ｏ’Ｈａｒｅ  Ｋ  ｅｔ  ａｌ．，（１９８１）ＰＮＡＳ  ７８：１５２７−３１）；ミコフェノール酸への耐性を付与するｇｐｔ（Ｍｕｌｌｉｇａｎ  ＲＣ  ＆  Ｂｅｒｇ  Ｐ（１９８１）ＰＮＡＳ  ７８（４）：２０７２−６）；アミノグリコシドＧ−４１８への耐性を付与するｎｅｏ（Ｗｕ  ＧＹ＆Ｗｕ  ＣＨ（１９９１）Ｂｉｏｔｈｅｒａｐｙ  ３：８７−９５、Ｔｏｌｓｔｏｓｈｅｖ  Ｐ（１９９３）Ａｎｎ  Ｒｅｖ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌ  Ｔｏｘｉｃｏｌ  ３２：５７３−５９６、Ｍｕｌｌｉｇａｎ  ＲＣ（１９９３）Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２６０：９２６−９３２、およびＭｏｒｇａｎ  ＲＡ＆Ａｎｄｅｒｓｏｎ  ＷＦ（１９９３）Ａｎｎ  Ｒｅｖ  Ｂｉｏｃｈｅｍ  ６２：１９１−２１７、Ｎａｂｅｌ  ＧＪ  ＆  Ｆｅｌｇｎｅｒ  ＰＬ（１９９３）Ｔｒｅｎｄｓ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ  １１（５）：２１１−５）、およびハイグロマイシンへの耐性を付与するｈｙｇｒｏ（Ｓａｎｔｅｒｒｅ  ＲＦ  ｅｔ  ａｌ．，（１９８４）Ｇｅｎｅ  ３０（１−３）：１４７−５６）（それらの各々は参照によりそれらの全体が本明細書に組み込まれる）。組換えＤＮＡ技術の当該技術分野で一般に知られている方法は、所望の組換えクローンを選択するために日常的に適用することができ、そのような方法は、例えば、Ａｕｓｕｂｅｌ  ＦＭ  ｅｔ  ａｌ．，（ｅｄｓ．），Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，  Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ＆Ｓｏｎｓ，  ＮＹ（１９９３）、Ｋｒｉｅｇｌｅｒ  Ｍ，  Ｇｅｎｅ  Ｔｒａｎｓｆｅｒ  ａｎｄ  Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ，Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，Ｓｔｏｃｋｔｏｎ  Ｐｒｅｓｓ，ＮＹ（１９９０）、ならびにＤｒａｃｏｐｏｌｉ  ＮＣ  ｅｔ  ａｌ．，（ｅｄｓ．），Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｈｕｍａｎ  Ｇｅｎｅｔｉｃｓ，Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ＆Ｓｏｎｓ，ＮＹ（１９９４）の第１２章および第１３章、Ｃｏｌｂｅｒｅ−Ｇａｒａｐｉｎ  Ｆ  ｅｔ  ａｌ．，（１９８１）Ｊ  Ｍｏｌ  Ｂｉｏｌ  １５０：１−１４（参照によりそれらの全体が本明細書に組み込まれる）に記載されている。
【０２０３】
ＴＣＲ分子の発現レベルは、ベクター増幅により増加させることができる（概説としては、Ｂｅｂｂｉｎｇｔｏｎ  ＣＲ＆Ｈｅｎｔｓｃｈｅｌ  ＣＣＧ，Ｔｈｅ  ｕｓｅ  ｏｆ  ｖｅｃｔｏｒｓ  ｂａｓｅｄ  ｏｎ  ｇｅｎｅ  ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ  ｆｏｒ  ｔｈｅ  ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  ｏｆ  ｃｌｏｎｅｄ  ｇｅｎｅｓ  ｉｎ  ｍａｍｍａｌｉａｎ  ｃｅｌｌｓ  ｉｎ  ＤＮＡ  ｃｌｏｎｉｎｇ，  Ｖｏｌ．Ｖｏｌ．３（Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，１９８７）（参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）を参照されたい）。ＴＣＲを発現するベクター系のマーカーが増幅可能である場合、宿主細胞の培養中に存在する阻害剤のレベルの増加は、マーカー遺伝子のコピーの数が増加した宿主細胞の選択をもたらす。増幅された領域がＴＣＲ遺伝子と会合するため、抗体の産生も増加するであろう（Ｃｒｏｕｓｅ  ＧＦ  ｅｔ  ａｌ．，（１９８３）Ｍｏｌ  Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌ  ３：２５７−６６、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）。
【０２０４】
他の態様では、宿主細胞は、本明細書に記載のＴＣＲをコードする配列を含むウイルスベクター（例えば、レトロウイルスベクター、アデノウイルスベクター、アデノ関連ウイルスベクター、またはバキュロウイルスベクター）で形質導入され得る。ある特定の実施形態では、レトロウイルスベクターは、レンチウイルスベクター（例えば、ＨＩＶ−１ゲノムの遺伝要素を含むベクター）またはウマ伝染性貧血ウイルスベクターである。ある特定の実施形態では、ベクターは、１つ以上のウイルスカプシドタンパク質でパッケージされて、ウイルス粒子を提供する。
【０２０５】
ある特定の実施形態では、ベクターは、本明細書に記載のＴＣＲをコードする配列に作動可能に連結される転写および／または翻訳制御配列（例えば、プロモーター、エンハンサー、および／またはコザック配列）を更に含む。あるいは、ＴＣＲをコードする配列は、転写および／または翻訳制御配列（例えば、プロモーター、エンハンサー、および／またはコザック配列）に作動可能に連結されなくてもよいが、宿主細胞ゲノムの遺伝子座に近傍する配列に相同な配列に近傍しており、ＴＣＲコード配列の組み込みは、ゲノム遺伝子座のまたはその付近の転写および／または翻訳制御配列からのコードされたＴＣＲの発現を可能にする。
【０２０６】
宿主細胞に、本明細書に記載の２つ以上の発現ベクター、α鎖由来ポリペプチドをコードする第１のベクター、およびβ鎖由来ポリペプチドをコードする第２のベクターを同時移行する（例えば、同時トランスフェクトまたは同時導入する）ことができる。２つのベクターは、α鎖およびβ鎖ポリペプチドの等しい発現を可能にする同一の選択可能なマーカーを含有し得る。宿主細胞は、異なる量の２つ以上の発現ベクターを同時移行することができる。例えば、宿主細胞は、第１の発現ベクターと第２の発現ベクターの比率が１：１、１：２、１：３、１：４、１：５、１：６、１：７、１：８、１：９、１：１０、１：１２、１：１５、１：２０、１：２５、１：３０、１：３５、１：４０、１：４５、または１：５０のうちのいずれか１つで同時移行され得る。いくつかの実施形態では、αおよびβ鎖のコード配列はＤＮＡである。いくつかの実施形態では、αおよびβ鎖のコード配列はＲＮＡである。
【０２０７】
あるいは、α鎖およびβ鎖ポリペプチドの両方をコードし、発現することができる単一ベクターを使用することができる。α鎖およびβ鎖のコード配列は、ｃＤＮＡまたはゲノムＤＮＡを含み得る。発現ベクターは、モノシストロン性またはマルチシストロン性であり得る。マルチシストロン性核酸構築物は、２、３、４、５、６、７、８、９、１０個以上、または２〜５、５〜１０、もしくは１０〜２０個の遺伝子／ヌクレオチド配列の範囲内でコードすることができる。例えば、２シストロン性核酸構築物は、以下の順序で、プロモーター、第１の遺伝子（例えば、本明細書に記載のＴＣＲのβ鎖）、および第２の遺伝子（例えば、本明細書に記載のＴＣＲのα鎖）を含むことができる。そのような発現ベクターでは、両方の遺伝子の転写がプロモーターによって駆動され得る一方で、第１の遺伝子からのｍＲＮＡの翻訳は、キャップ依存的走査機構によって開始され得、第２の遺伝子からのｍＲＮＡの翻訳は、例えば、ＩＲＥＳによるキャップ非依存的機構によるものであり得る。あるいは、２つの遺伝子は、自己切断ペプチド（例えば、２Ａペプチド）、または細胞内もしくは細胞外プロテアーゼにより認識されるペプチド配列によって作動可能に連結され得る。
【０２０８】
本明細書に記載のＴＣＲ分子が組換え発現によって産生されると、免疫グロブリン分子の精製のために当該技術分野で既知の任意の方法によって、例えば、クロマトグラフィー（例えば、イオン交換、親和性、およびサイズ排除カラムクロマトグラフィー）、遠心分離、吸収率較差溶解度によって、またはタンパク質の精製のための任意の他の標準の技法によって精製することができる。更に、本明細書に記載のＴＣＲは、精製を容易にするために、本明細書に記載のまたはさもなければ当該技術分野で既知の異種ポリペプチド配列に融合し得る。
【０２０９】
具体的な実施形態では、本明細書に記載のＴＣＲは、単離されるか、または精製される。一般に、単離されたＴＣＲは、単離されたＴＣＲよりも異なる抗原特異性を有する他のＴＣＲを実質的に含まないものである。例えば、特定の実施形態では、本明細書に記載のＴＣＲの調製物は、細胞材料および／または化学的前駆体を実質的に含まない。「細胞材料を実質的に含まない」という用語は、ＴＣＲが、単離されるか、または組換えにより産生される細胞の細胞構成要素から分離されるＴＣＲの調製物を含む。したがって、細胞材料を実質的に含まないＴＣＲは、約３０％、２０％、１０％、５％、２％、１％、０．５％、または０．１％未満（乾燥重量で）の異種タンパク質（本明細書では「汚染タンパク質」とも称される）および／またはＴＣＲの変異型、例えば、ＴＣＲの異なる翻訳後の修飾型またはＴＣＲの他の異なるバージョン（例えば、その断片）を有するＴＣＲの調製物を含む。ＴＣＲが組換えにより産生される場合、それはまた、一般に、培養培地を実質的に含まない、すなわち、培養培地は、タンパク質調製物の体積の約２０％、１０％、２％、１％、０．５％、または０．１％未満を表す。ＴＣＲが化学的合成によって産生される場合、それは、一般に、化学的前駆体または他の化学物質を実質的に含まない、すなわち、それは、ＴＣＲの合成を伴う化学的前駆体または他の化学物質から分離される。したがって、ＴＣＲのそのような調製物は、約３０％、２０％、１０％、または５％（乾燥重量で）未満の化学的前駆体または関心のＴＣＲ以外の化合物を有する。具体的な実施形態では、本明細書に記載のＴＣＲは、単離されるか、または精製される。
【０２１０】
ＮＹ−ＥＳＯ−１ペプチドに結合するＴＣＲは、ＴＣＲの合成のための当該技術分野で既知の任意の方法によって、例えば、化学合成によってまたは組換え発現技法によって産生することができる。本明細書に記載の方法は、特に明記しない限り、分子生物学、微生物学、遺伝分析、組換えＤＮＡ、有機化学、生化学、ＰＣＲ、オリゴヌクレオチド合成および修飾、核酸ハイブリダイゼーション、ならびに当該技術分野の範囲内である関連分野における従来の技法を用いる。これらの技法は、本明細書で引用される参考文献に記載され、その文献で詳細に説明されている。例えば、Ｍａｎｉａｔｉｓ  Ｔ  ｅｔ  ａｌ．，（１９８２）Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ、Ｓａｍｂｒｏｏｋ  Ｊ  ｅｔ  ａｌ．，（１９８９），Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，Ｓｅｃｏｎｄ  Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ、Ｓａｍｂｒｏｏｋ  Ｊ  ｅｔ  ａｌ．，（２００１）Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ，  ＮＹ、Ａｕｓｕｂｅｌ  ＦＭ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ（１９８７および年次更新）、Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ＆Ｓｏｎｓ（１９８７および年次更新）Ｇａｉｔ（ｅｄ．）（１９８４）Ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ：Ａ  Ｐｒａｃｔｉｃａｌ  Ａｐｐｒｏａｃｈ，  ＩＲＬ  Ｐｒｅｓｓ、Ｅｃｋｓｔｅｉｎ（ｅｄ．）（１９９１）Ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓ  ａｎｄ  Ａｎａｌｏｇｕｅｓ：Ａ  Ｐｒａｃｔｉｃａｌ  Ａｐｐｒｏａｃｈ，ＩＲＬ  Ｐｒｅｓｓ、Ｂｉｒｒｅｎ  Ｂ  ｅｔ  ａｌ．，（ｅｄｓ．）（１９９９）Ｇｅｎｏｍｅ  Ａｎａｌｙｓｉｓ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ（それらの各々は参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）を参照されたい。
【０２１１】
具体的な実施形態では、本明細書に記載のＴＣＲは、例えば、合成を介した作製、ＤＮＡ配列の遺伝子操作を伴う任意の手段によって調製されるか、発現されるか、作製されるか、または単離されたＴＣＲ（例えば、組換えＴＣＲ）である。ある特定の実施形態では、そのようなＴＣＲは、インビボで動物または哺乳動物（例えば、ヒト）のＴＣＲ生殖系列レパートリー内で天然に存在しない配列（例えば、ＤＮＡ配列、ＲＮＡ配列、またはアミノ酸配列）を含む。
【０２１２】
一態様では、ＮＹ−ＥＳＯ−１ペプチドに結合するＴＣＲを作製する方法が本明細書に提供され、本方法は、本明細書に記載の細胞または宿主細胞を培養することを含む。ある特定の態様では、ＮＹ−ＥＳＯ−１ペプチドに結合するＴＣＲを作製する方法が本明細書に提供され、本方法は、本明細書に記載の細胞または宿主細胞（例えば、本明細書に記載のＴＣＲをコードするポリヌクレオチドを含む細胞または宿主細胞）を使用してＴＣＲを発現すること（例えば、組換えによって発現すること）を含む。特定の実施形態では、細胞は、単離された細胞である。特定の実施形態では、外因性ポリヌクレオチドは、細胞に導入されている。特定の実施形態では、本方法は、細胞または宿主細胞から得られたＴＣＲを精製する工程を更に含む。
【０２１３】
本明細書に記載のＴＣＲは、当該技術分野で既知の様々なファージ提示方法を使用して生成され得る。ファージ提示方法では、機能的ＴＣＲドメインは、それらをコードするポリヌクレオチド配列を有するファージ粒子の表面上に提示される。特に、ＶαおよびＶβドメインをコードするＤＮＡ配列は、動物ｃＤＮＡライブラリ（例えば、罹患組織のヒトまたはマウスｃＤＮＡライブラリ）から増幅される。ＶαおよびＶβドメインをコードするＤＮＡは、ＰＣＲによりペプチドリンカーと接続され、ファージミドベクターにクローニングされる。ベクターは、Ｅ．ｃｏｌｉに電気穿孔処理され、Ｅ．ｃｏｌｉはヘルパーファージに感染する。これらの方法で使用されるファージは、典型的には、ｆｄおよびＭ１３を含む繊維状ファージであり、ＶαおよびＶβドメインは、通常、ファージ遺伝子ＩＩＩまたは遺伝子ＶＩＩＩのいずれかに組換えにより融合される。特定の抗原に結合する抗原結合ドメインを発現しているファージは、ペプチドまたはペプチド−ＭＨＣ複合体で、例えば、細胞の表面上に提示されたまたは固体表面もしくはビーズに捕捉されたそのような複合体を使用して、選択または特定することができる。本明細書に記載のＴＣＲを作製するために使用され得るファージ提示方法の例は、Ｚｈａｏ  Ｙ  ｅｔ  ａｌ．，（２００７）Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  １７９：５８４５−５４（参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）に開示されるものを含む。
【０２１４】
上記参考文献に記載されているように、ファージ選択後、ファージからのＴＣＲコード領域は、単離され、ヒトＴＣＲを含む全ＴＣＲを生成するために使用され、例えば、以下に記載の、哺乳類細胞、昆虫細胞、植物細胞、酵母、および細菌を含む任意の所望の宿主で発現され得る。
【０２１５】
ある特定の実施形態では、全ＴＣＲを生成するために、ＶαまたはＶβヌクレオチド配列、制限部位、および制限部位を保護するための近傍配列を含むＰＣＲプライマーを使用して、ＶαまたはＶβ配列をテンプレート、例えば、ペプチドリンカーによって接続されたＴＣＲの可変領域を含有する単鎖ＴＣＲのクローンから増幅することができる。当業者に既知のクローニング技法を利用して、ＰＣＲ増幅されたＶαドメインは、Ｖα定常領域を発現するベクターにクローニングすることができ、ＰＣＲ増幅されたＶβドメインは、Ｖβ定常領域を発現するベクターにクローニングすることができる。次いで、α鎖およびβ鎖ベクターは、当業者に既知の技法を使用して、全ＴＣＲを発現する安定したまたは一過性の細胞株を生成するために、同時にまたは順次のいずれかで細胞株に同時トランスフェクトされる。ＶαまたはＶβドメインはまた、必要な定常領域を発現する１つのベクターにクローニングすることができる。次いで、ベクターは、当業者に既知の技法を使用して、全ＴＣＲを発現する安定したまたは一過性の細胞株を生成するために細胞株にトランスフェクトされる。
【０２１６】
ある特定の実施形態では、本明細書に記載のＴＣＲのα鎖およびβ鎖をコードするポリヌクレオチドから、またはそれを含むベクターから全ＴＣＲを生成するために、ＴＣＲのα鎖およびβ鎖を含むポリペプチドは、ポリヌクレオチドまたはベクターから発現される。ポリペプチドは、任意選択で単離および／または精製される。ポリペプチドは、フーリン酵素と接触させられる。ある特定の実施形態では、フーリン切断部位がＲＸ１Ｘ２Ｒ（式中、Ｘ１は、ＫまたはＲであり、Ｘ２は、ＫまたはＲである）のアミノ酸配列（配列番号３１）を有する場合、ポリペプチドは、同時にまたは順次のいずれかで、カルボキシペプチダーゼと更に接触させられ、カルボキシペプチダーゼは、ポリペプチドのＣ末端から塩基性アミノ酸ＫまたはＲを除去する。
【０２１７】
キメラＴＣＲは、ＴＣＲの異なる部分が異なるＴＣＲ分子、例えば、異なる種からのＴＣＲに由来する分子である。
【０２１８】
特定の実施形態では、本明細書に記載のＴＣＲと同じ、配列番号１または２に記載のアミノ酸配列を含むペプチドのエピトープに結合する本明細書に記載のＴＣＲは、ヒトＴＣＲである。ヒトＴＣＲは、当該技術分野で既知の任意の方法を使用して産生することができる。例えば、機能的な内因性ＴＣＲを発現することができないが、ヒトＴＣＲ遺伝子を発現することができるトランスジェニックマウスを使用することができる。具体的には、ヒトαおよびβ鎖ＴＣＲ遺伝子は、ランダムに、または相同組換えによりマウス胚幹細胞に導入することができる。マウスαおよびβ鎖ＴＣＲ遺伝子は、相同組換えによって、ヒトＴＣＲ遺伝子座の導入で別個にまたは同時に非機能性を付与され得る。特に、ＪＨ領域のホモ接合性欠失は、内因性ＴＣＲの産生を妨げる。修飾した胚幹細胞を拡大し、胚盤胞内に微量注入し、キメラマウスを産生する。次いで、キメラマウスを繁殖させて、ヒトＴＣＲを発現するホモ接合性子孫を作出する。トランスジェニックマウスは、選択された抗原、例えば、抗原（例えば、ＮＹ−ＥＳＯ−１ペプチド）の全てまたは一部で通常の様式で免疫化される。抗原に対して指向されるＴＣＲを含むＴリンパ球は、免疫化したトランスジェニックマウスから得ることができる。トランスジェニックマウスにより保有されるＴヒトＴＣＲ導入遺伝子は、Ｔ細胞分化中に再配置される。したがって、そのような技法を使用して、インビボ免疫化から生じる治療に有用なＴＣＲを産生することが可能である。
【０２１９】
ＮＹ−ＥＳＯ−１ペプチドに結合するヒトＴＣＲは、ヒトＴＣＲ配列に由来するＴＣＲライブラリを使用したファージ提示方法または哺乳類提示を含む当該技術分野で既知の様々な方法によって作製することができる。
【０２２０】
５．６  キット
本明細書に記載の１つ以上のＴＣＲ、薬学的組成物もしくはそのコンジュゲート、本明細書に記載の１つ以上のＴＣＲをコードするポリヌクレオチド（例えば、発現ベクター）、または本明細書に記載の１つ以上のＴＣＲを発現する細胞を含むキットも提供される。具体的な実施形態では、本明細書に提供される１つ以上のＴＣＲ、ポリヌクレオチド、または細胞などの本明細書に記載の薬学的組成物の成分のうちの１つ以上で充填された１つ以上の容器を含む薬学的パックまたはキットが本明細書に提供される。いくつかの実施形態では、キットは、本明細書に記載の薬学的組成物および本明細書に記載のものなどの任意の予防または治療薬を含有する。ある特定の実施形態では、キットは、例えば、フィトヘマアグルチニン（ＰＨＡ）および／もしくはホルボール１２−ミリステート１３−アセテート（ＰＭＡ）、または抗ＣＤ３抗体および抗ＣＤ２８抗体などのＴＣＲ複合体刺激抗体などのＴ細胞マイトジェンを含有し得る。任意選択で、そのような容器（複数可）とともに、調合薬または生物学的製剤の製造、使用、または販売を規制する行政機関によって規定された様式の注意書きを含むことができ、この注意書きは、ヒトへの投与のための製造、使用、または販売の機関による承認を反映する。
【０２２１】
上記の方法で使用され得るキットも提供される。一実施形態では、キットは、１つ以上の容器中に、本明細書に記載のＴＣＲ、例えば、精製されたＴＣＲを含む。具体的な実施形態では、本明細書に記載のキットは、対照抗原として、ＮＹ−ＥＳＯ−１ペプチドを含む、実質的に単離されたペプチド−ＭＨＣ複合体を含有する。別の具体的な実施形態では、本明細書に記載のキットは、ＮＹ−ＥＳＯ−１ペプチドを含むペプチド−ＭＨＣ複合体と反応しない対照ＴＣＲを更に含む。別の具体的な実施形態では、本明細書に記載のキットは、ＴＣＲのＮＹ−ＥＳＯ−１ペプチドを含むペプチド−ＭＨＣ複合体への結合を検出するための１つ以上の要素を含有する（例えば、ＴＣＲは、蛍光化合物、酵素基質、放射性化合物、もしくは発光化合物などの検出可能な基質とコンジュゲートされ得るか、またはＴＣＲを認識する結合分子は、検出可能な基質とコンジュゲートされ得る）。具体的な実施形態では、本明細書に提供されるキットは、組換えにより産生されたまたは化学的に合成したＮＹ−ＥＳＯ−１ペプチドを含むペプチド−ＭＨＣ複合体を含むことができる。キットに提供されるＮＹ−ＥＳＯ−１ペプチドを含むペプチド−ＭＨＣ複合体は、固体支持体（例えば、固体表面またはビーズ）に結合されるか、または脂質膜（例えば、リポソームまたは固定細胞）に組み込まれ得る。より具体的な実施形態では、上述のキットの検出手段は、ＮＹ−ＥＳＯ−１ペプチドを含むペプチド−ＭＨＣ複合体が結合される固体支持体を含む。そのようなキットは、ＴＣＲを認識する非結合レポーター標識結合分子も含み得る。この実施形態では、ＴＣＲのペプチド−ＭＨＣ複合体への結合は、該レポーター標識結合分子の結合によって検出され得る。
【実施例】
【０２２２】
この項（すなわち、項６）における実施例は、例証として提供されており、限定するものではない。
【０２２３】
６．１  実施例１：マウス細胞における新規ＮＹ−ＥＳＯ−１  ＴＣＲ、ＴＣＲ１８１６８ｃの特徴付け。
ＳＬＬＭＷＩＴＱＣ（配列番号１）−ＨＬＡ−Ａ＊０２０１に結合する新規ＴＣＲは、専有哺乳類細胞ＴＣＲ提示プラットホームを使用して開発された。本明細書においてＴＣＲ１８１６８ｃと称されるＴＣＲは、それぞれ配列番号３および４に記載のアミノ酸配列を含むα鎖可変領域（Ｖα）およびβ鎖可変領域（Ｖβ）を含む。ＴＣＲ１８１６８ｃは、マウス細胞株ＡＫ−Ｄ１０Ｒ３の表面上にマウス定常領域に融合されたヒト可変領域を有する、キメラタンパク質として発現された。マウス定常領域は、マウスＣＤ３との適当なアンカーおよび相互作用、ならびにマウスシグナル伝達経路の適当な起動を確実にする。ＡＫ−Ｄ１０Ｒ３は、キメラＣＤ８（対応するマウスＣＤ８  αおよびβ膜貫通および細胞内領域に融合したヒトＣＤ８  αおよびβ細胞外領域）、およびＥＧＦＰに作動可能に連結された、３つのＮＦＡＴ結合部位を含む最小ＩＬ−２プロモーターを含むＴ細胞活性化レポーター構築物を発現する、マウス胸腺腫由来マウスＴＣＲ陰性マウスＣＤ８陰性細胞株である。ＴＣＲ１８１６８ｃは、それぞれ配列番号１１および１２に記載のアミノ酸配列を含むα鎖およびβ鎖を含む。
【０２２４】
６．１．１  ＴＣＲ１８１６８ｃを発現する細胞のペプチド−ＭＨＣ四量体への結合
最初に、フローサイトメトリーを使用して、ＴＣＲ１８１６８ｃを発現するＡＫ−Ｄ１０Ｒ３細胞を、同族ペプチド−ＭＨＣ四量体または陰性対照ペプチド−ＭＨＣ四量体への結合について試験した。簡潔に言えば、ＴＣＲ１８１６８ｃを発現するＡＫ−Ｄ１０Ｒ３細胞を、９６ウェルアッセイプレートで平板培養し、ＡＰＣ標識抗マウスＴＣＲ  β鎖抗体（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ、カタログ番号：５５３１７４、クローンＨ５７−５９７）、および野生型ＮＹ−ＥＳＯ−１ペプチドＳＬＬＭＷＩＴＱＣ（配列番号１）（ＭＢＬ、カタログ番号：Ｔ０１０６４）、アンカー最適化ＮＹ−ＥＳＯ−１ペプチドＳＬＬＭＷＩＴＱＶ（配列番号２）（ＭＢＬ、カタログ番号：ＴＳ−Ｍ１０５−１）、または陰性対照ペプチドで充填されたＰＥ標識ＨＬＡ−Ａ＊０２０１四量体とともにインキュベートした。ＴＣＲ陰性ＡＫ−Ｄ１０Ｒ３細胞も対照として試験した。室温で３０分間インキュベートした後、細胞を２回洗浄し、ＢＤ  ＦＡＣＳＣａｎｔｏ  ＩＩサイトメーターを使用して、フローサイトメトリーにより分析した。ＴＣＲ発現（ＡＰＣ＋）およびペプチド−ＭＨＣ結合（ＰＥ＋）について細胞を分析した。
【０２２５】
図１に示されるように、細胞表面上で発現されると、ＴＣＲ１８１６８ｃは、野生型ＮＹ−ＥＳＯ−１ペプチドＳＬＬＭＷＩＴＱＣ（配列番号１）またはアンカー最適化ペプチドＳＬＬＭＷＩＴＱＶ（配列番号２）で充填されたＨＬＡ−Ａ＊０２０１四量体に結合したが、陰性対照四量体には結合しなかった。
【０２２６】
６．１．２  ペプチドパルス処理されたＴ２細胞を使用したＴＣＲ発現ＡＫ−Ｄ１０Ｒ３細胞の活性化
次に、ＴＣＲ１８１６８ｃを発現するＡＫ−Ｄ１０Ｒ３細胞を、同族ＮＹ−ＥＳＯ−１ペプチドまたは同族対照ペプチドでパルス処理されたＴ２細胞によって活性化されるそれらの能力について試験した。簡潔に言えば、Ｔ２細胞（Ｓａｌｔｅｒ，ＥＭＢＯＪ．１９８６；５（５）：９４３−９（参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）に記載のヒトリンパ芽球細胞）を、３７℃で３時間、５０μｇ／ｍｌの野生型ＮＹ−ＥＳＯ−１ペプチドＳＬＬＭＷＩＴＱＣ（配列番号１）（Ｐ＆Ｅ、特注）、アンカー最適化ＮＹ−ＥＳＯ−１ペプチドＳＬＬＭＷＩＴＱＶ（配列番号２）（ＩＢＡ、カタログ番号．：６−７０１３−９０１）、または陰性対照ペプチドでパルス処理した。次いで、ＴＣＲ１８１６８ｃを発現する合計５．０×１０４のＡＫ−Ｄ１０Ｒ３細胞を、３７℃および１０％ＣＯ２で１８時間、９６ウェルアッセイプレート中で、５．０×１０４ペプチドパルス処理されたＴ２細胞とともにインキュベートした。ＴＣＲ陰性ＡＫ−Ｄ１０Ｒ３細胞を陰性対照として使用した。次いで、細胞を、室温で３０分間、ＡＰＣ標識抗マウスＴＣＲ  β鎖抗体（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ、カタログ番号：５５３１７４、クローンＨ５７−５９７）およびＢＶ４１２標識抗マウスＣＤ６９抗体（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ、カタログ番号：１０４５２８、クローンＨ１．２Ｆ）で染色した。その後、細胞を２回洗浄し、ＢＤ  ＦＡＣＳＣａｎｔｏ  ＩＩサイトメーターを使用して、フローサイトメトリーにより分析した。ＴＣＲ発現（ＡＰＣ＋）およびＴ細胞活性化（ＥＧＦＰ＋またはＢＶ４１２＋）について細胞を分析した。
【０２２７】
野生型またはアンカー最適化ＮＹ−ＥＳＯ−１ペプチドでパルス処理されたＴ２細胞との相互作用の際に、ＴＣＲ１８１６８ｃを発現するＡＫ−Ｄ１０Ｒ３細胞は、ＩＬ−２−ＮＦＡＴレポーター構築物の活性化およびＴ細胞活性化マーカーＣＤ６９の上方制御を示した（図２）。ＡＫ−Ｄ１０Ｒ３細胞の活性化は、ＴＣＲ陰性ＡＫ−Ｄ１０Ｒ３細胞が試験されたとき、またはＴＣＲ１８１６８ｃを発現するＡＫ−Ｄ１０Ｒ３細胞が陰性対照ペプチドでパルス処理されたＴ２細胞とともにインキュベートされたとき、そのような活性化は観察されないか、または最小限しか観察されないため、ＮＹ−ＥＳＯ−１  ＴＣＲとその同族ペプチド−ＭＨＣ複合体との間の相互作用に依存する（図２）。
【０２２８】
６．２  実施例２：ヒトＴ細胞における新規ＮＹ−ＥＳＯ−１  ＴＣＲ、ＴＣＲ１８１６８の特徴付け
この実施例では、ＴＣＲ１８１６８と命名されたＴＣＲ１８１６８ｃの完全ヒトバージョンを、一次ヒトＴ細胞またはヒトＴ細胞レポーター細胞株において発現させ、以下に記載するいくつかの機能的アッセイにおいて特徴付けした。ＴＣＲ１８１６８は、ヒト定常領域に融合されたＴＣＲ１８１６８ｃのＶαおよびＶβを含む。具体的には、ＴＣＲ１８１６８は、それぞれ配列番号１３および１４に記載のアミノ酸配列を含むα鎖およびβ鎖を含む。ＨＬＡ−Ａ＊０２０１との関連において、ＭＡＲＴ−１ペプチドと反応性であるＴＣＲ  ＤＭＦ４を対照として使用した。ＤＭＦ４は、米国特許第７，９１５，０３６号（参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）に記載されている。完全長ＴＣＲ  ＤＭＦ４は、それぞれ配列番号２０および２１に記載のアミノ酸配列を含むα鎖およびβ鎖を含む。
【０２２９】
６．２．１  ペプチドパルス処理されたＨＬＡ発現Ｋ５６２標的細胞と共培養されたＴＣＲ１８１６８を発現する一次ヒトＴ細胞の特徴付け
完全長ヒトＴＣＲ、ＴＣＲ１８１６８およびＤＭＦ４のメッセンジャーＲＮＡ（ｍＲＮＡ）を、ｍＭＥＳＳＡＧＥ  ｍＭＡＣＨＩＮＥ  Ｔ７  Ｕｌｔｒａキット（Ａｍｂｉｏｎ、カタログ番号：ＡＭＢ１３４５５）を使用して、インビトロ転写を介して生成した。ＴＣＲ１８１６８  ｍＲＮＡを、順番に、ＴＣＲ１８１６８  α鎖、フーリン切断部位、Ｐ２Ａ切断部位、およびＴＣＲ１８１６８  β鎖をコードするベクターから発現させた。得られたＴＣＲ１８１６８  ｍＲＮＡは、配列番号２８のアミノ酸配列をコードするポリヌクレオチド配列を含む。ＤＭＦ４  ｍＲＮＡを、ＤＭＦ４  β鎖、Ｐ２Ａ切断部位、およびＤＭＦ４  α鎖をコードするベクターから発現させた。健常なドナーから単離され、ＩｍｍｕｎｏＣｕｌｔ（商標）ヒトＣＤ３／２８  Ｔ細胞活性化因子（Ｓｔｅｍｃｅｌｌ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）で前に拡大された一次ヒトＴ細胞を、７．５μｇのＴＣＲ  ｍＲＮＡと混合し、ＭａｘＣｙｔｅ  ＧＴ（ＭａｘＣｙｔｅ）電気穿孔装置を使用して電気穿孔した。電気穿孔のおよそ２０時間後、標的ＴＣＲ発現を、ＮＹ−ＥＳＯ−１ペプチドＳＬＬＭＷＩＴＱＣ（配列番号１）（ＭＢＬ、カタログ番号：Ｔ０１０６４Ｂ）またはＭＡＲＴ−１ペプチドＥＬＡＧＩＧＩＬＴＶ（配列番号２２）（ＭＢＬ、カタログ番号：Ｔ０１０２２）のいずれかを含有するＨＬＡ−Ａ＊０２０１四量体でＴ細胞を染色することによって評価し、ＢＤ  ＬＳＲ  Ｆｏｒｔｅｓｓａを使用してフローサイトメトリーにより分析した。平行して、ＨＬＡ−Ａ２またはＨＬＡ−Ｂ７を発現するようにレンチウイルスにより形質導入されたＫ５６２細胞（ＡＴＣＣ、カタログ番号：ＣＣＬ−２４３）を、０．０１、０．１、または１μＭのＮＹ−ＥＳＯ−１ペプチドＳＬＬＭＷＩＴＱＣ（配列番号１）（Ｇｅｎｓｃｒｉｐｔ、特注）、１μＭのＭＡＲＴ−１ペプチドＥＬＡＧＩＧＩＬＴＶ（配列番号２２）（Ｇｅｎｓｃｒｉｐｔ、特注）、またはＤＭＳＯ単独（ビヒクル対照）（Ｆｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、カタログ番号：ＢＰ２３１−１００）でパルス処理した。ＴＣＲ１８１６８発現またはＤＭＦ４発現Ｔ細胞を、１６時間、Ｋ５６２標的細胞と共培養し、抗ヒトＣＤ２５抗体（ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ、カタログ：１７−０２５９−４２）を使用してフローサイトメトリーにより活性化マーカーＣＤ２５の発現について、およびヒトＩＦＮガンマＥＬＩＳＡ  Ｒｅａｄｙ−Ｓｅｔ−Ｇｏキット（ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ、カタログ番号：８８−７３１６−８８）を使用してＥＬＩＳＡによりＩＦＮγの分泌について分析した。陽性対照として、ＴＣＲ１８１６８発現またはＤＭＦ４発現Ｔ細胞も、ＩｍｍｕｎｏＣｕｌｔ（商標）ヒトＣＤ３／２８  Ｔ細胞活性化因子（Ｓｔｅｍｃｅｌｌ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）を使用して、標的細胞の不在化で１６時間活性化し、次いで、フローサイトメトリーを使用して表面ＣＤ２５発現について検査した。
【０２３０】
ＴＣＲ１８１６８を発現するヒトＴ細胞の四量体染色は、ＮＹ−ＥＳＯ−１ペプチドＳＬＬＭＷＩＴＱＣ（配列番号１）を含有するＨＬＡ−Ａ＊０２０１四量体への特異的結合、および陰性対照ＭＡＲＴ−１ペプチドを含有するＨＬＡ−Ａ＊０２０１四量体への最小結合を示す（図３Ａ）。対照的に、ＴＣＲ  ＤＭＦ４を発現するＴ細胞は、ＭＡＲＴ−１ペプチドを含有するＨＬＡ−Ａ＊０２０１四量体にのみ結合した（図３Ａ）。
【０２３１】
ＮＹ−ＥＳＯ−１ペプチドＳＬＬＭＷＩＴＱＣ（配列番号１）でパルス処理されたＨＬＡ−Ａ２発現Ｋ５６２細胞との共培養の１６時間後、ＴＣＲ１８１６８を発現するＴ細胞は、ＣＤ２５表面発現（図３Ｂ）およびＩＦＮγ分泌（図３Ｄ）の用量依存的上方制御を示した。ＮＹ−ＥＳＯ−１ペプチドで充填されたＨＬＡ−Ｂ７発現Ｋ５６２細胞、またはＮＹ−ＥＳＯ−１ペプチドの不在化のＨＬＡ発現Ｋ５６２細胞と共培養したとき、ＴＣＲ１８１６８発現Ｔ細胞は、ＣＤ２５（図３Ｂ）またはＩＦＮγ（図３Ｄ）の上方制御を示さなかった。比較すると、特異的対照として、ＴＣＲ  ＤＭＦ４を発現するＴ細胞は、同族ＭＡＲＴ−１ペプチドとパルス処理されたＨＬＡ−Ａ２発現Ｋ５６２細胞と共培養された後にのみ増加したＣＤ２５発現（図３Ｃ）およびＩＦＮγ分泌（図３Ｅ）を示した。
【０２３２】
６．２．２  ペプチドパルス処理されたＴ２標的細胞と共培養されたＴＣＲ１８１６８を発現する一次ヒトＴ細胞の特徴付け
次に、健常なドナーから単離され（６．２．１項で利用したドナー細胞とは異なる）、ＩｍｍｕｎｏＣｕｌｔ（商標）ヒトＣＤ３／２８  Ｔ細胞活性化因子（Ｓｔｅｍｃｅｌｌ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）で前に拡大された一次ヒトＴ細胞を、上述の電気穿孔を使用してヒトＴＣＲ１８１６８またはＤＭＦ４を発現するようにトランスフェクトし、内因的にＨＬＡ−Ａ＊０２０１を発現するＴ２細胞を標的細胞として使用して同様の共培養研究において分析した。簡潔に言えは、Ｔ２細胞（ＡＴＣＣ、カタログ番号．：１７４ｘＣＥＭ．Ｔ２）をＣｅｌｌＴｒａｃｅ（商標）紫色色素（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｆｉｓｈｅｒ、カタログ番号：Ｃ３４５５７）で標識し、１μＭのＮＹ−ＥＳＯ−１ペプチドＳＬＬＭＷＩＴＱＣ（配列番号１）（Ｇｅｎｓｃｒｉｐｔ、特注）、１μＭのＭＡＲＴ−１ペプチドＥＬＡＧＩＧＩＬＴＶ（配列番号２２）（Ｇｅｎｓｃｒｉｐｔ、特注）、またはＤＭＳＯ単独（ビヒクル対照）（Ｆｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、カタログ番号：ＢＰ２３１−１００）でパルス処理した。ＴＣＲ１８１６８発現またはＤＭＦ４発現Ｔ細胞を、１６時間、Ｔ２標的細胞と共培養し、次いで、抗ヒトＣＤ２５抗体（ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ、カタログ番号：１７−０２５９−４２）を使用してフローサイトメトリーによりＣＤ２５表面発現について分析した。陽性対照として、ＴＣＲ１８１６８発現またはＤＭＦ４発現Ｔ細胞も、ＩｍｍｕｎｏＣｕｌｔ（商標）ヒトＣＤ３／２８  Ｔ細胞活性化因子（Ｓｔｅｍｃｅｌｌ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）を使用して、標的細胞の不在化で１６時間活性化し、次いで、フローサイトメトリーを使用して表面ＣＤ２５発現について検査した。Ｚｏｍｂｉｅ  ＮＩＲ  Ｌｉｖｅ／Ｄｅａｄ色素（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ、カタログ番号．：４２３１０５）を使用して生存Ｔ２細胞の消失（すなわち、ＣｅｌｌＴｒａｃｅ（商標）紫色色素陽性細胞の消失）を分析することにより、Ｔ２標的細胞死滅を測定した。
【０２３３】
ＴＣＲ１８１６８を発現するヒトＴ細胞は、同族ＮＹ−ＥＳＯ−１ペプチドでパルス処理されたＴ２細胞と共培養された後、または抗ＣＤ３／ＣＤ２８抗体により刺激された後にのみ、ＣＤ２５表面発現の上方制御を示した（図４Ａ）。加えて、ＣｅｌｌＴｒａｃｅ（商標）紫色色素陽性細胞の消失により測定されたとき、ＴＣＲ１８１６８発現Ｔ細胞は、同族ＮＹ−ＥＳＯ−１ペプチドでパルス処理されたＴ２細胞のみを死滅させ、ＤＭＳＯビヒクルまたはＭＡＲＴ−１ペプチドでパルス処理されたＴ２細胞を死滅させなかった（図４Ｃ）。比較として、ＴＣＲ  ＤＭＦ４を発現するＴ細胞は、同族ＭＡＲＴ−１ペプチドで充填されたＴ２細胞によってのみ活性化され（図４Ｂ）、同族ＭＡＲＴ−１ペプチドで充填されたＴ２細胞のみを死滅させた（図４Ｃ）。
【０２３４】
６．２．３  ＮＦＡＴ−ルシフェラーゼレポーターＴ細胞株を使用したＴＣＲ１８１６８の特徴付け
ＴＣＲβ−陰性ジャーカット細胞（ＡＴＣＣ、カタログ番号：ＴＩＢ−１５３）を、（ｉ）ＮＦＡＴ応答要素および短ＣＭＶ最小プロモーターの制御下のルシフェラーゼレポーター、ならびに（ｉｉ）ＴＣＲ１８１６８でレンチウイルスにより形質導入した。Ｂ１６−Ｆ１０細胞（ＡＴＣＣ、カタログ番号：ＣＲＬ−６４７５）を、ＨＬＡ−Ａ＊０２０１分子のα１およびα２ドメイン、マウスＨ−２Ｄｂ分子のα３ドメイン、およびヒトβ２ミクログロブリンを含むＡＡＤを発現するようにレンチウイルスにより形質導入し、１ｎＭ〜１μＭのＮＹ−ＥＳＯ−１ペプチドＳＬＬＭＷＩＴＱＣ（配列番号１）（Ｇｅｎｓｃｒｉｐｔ、特注）、１μＭのＭＡＲＴ−１ペプチドＥＬＡＧＩＧＩＬＴＶ（配列番号２２）（Ｇｅｎｓｃｒｉｐｔ、特注）、またはＤＭＳＯ（ビヒクル対照）（Ｆｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、カタログ番号：ＢＰ２３１−１００）でパルス処理した。ＴＣＲ発現ジャーカットレポーター細胞を、１６時間、ペプチドパルス処理されたＡＡＤ発現Ｂ１６細胞と共培養した。最大ＮＦＡＴレポーター活性の陽性対照として、ＴＣＲ発現ジャーカットレポーター細胞も、１６時間、ＰＭＡおよびイオノマイシン（ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ、カタログ番号：００−４９７０）を含有する細胞刺激カクテルで刺激した。ルシフェラーゼレポーター活性は、Ｎａｎｏ−Ｇｌｏ  Ｌｕｃｉｆｅｒａｓｅ  Ａｓｓａｙ  Ｋｉｔ（Ｐｒｏｍｅｇａ、カタログ番号：Ｎ１１２０）およびＥｎＶｉｓｉｏｎ  Ｍｕｌｔｉｍｏｄｅ  Ｐｌａｔｅ  Ｒｅａｄｅｒ（Ｐｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ）を使用して測定した。
【０２３５】
ＴＣＲ１８１６８を発現するジャーカットレポーター細胞は、ＤＭＳＯまたはＭＡＲＴ−１ペプチドでパルス処理されたＡＡＤ発現Ｂ１６細胞の存在下で最小のルシフェラーゼレポーター活性を示した（図５Ａ）。しかしながら、同族ＮＹ−ＥＳＯ−１ペプチドでパルス処理されたＡＡＤ発現Ｂ１６細胞と共培養したとき、ＴＣＲ１８１６８を発現するジャーカットレポーター細胞は、ペプチド特異的（図５Ａ）および用量依存的（図５Ｂ）活性応答を示した。
【０２３６】
６．３  実施例３：ＴＣＲ１８１６８変異体の産生および特徴付け
この実施例では、ＴＣＲ１８１６８の変異体が生成され、結合およびＴ細胞活性化について特徴付けされた。これらの変異体は、マウス定常領域に融合されたヒト可変領域を含むキメラＴＣＲ、または完全ヒトＴＣＲのいずれかとして試験された。
【０２３７】
６．３．１  ＴＣＲ  β鎖ガイド選択および／またはＮＮＫ  ＣＤＲ３グラフトを使用したＴＣＲスクリーニング
簡潔に言えば、ガイド選択スクリーニングにおいて、ＴＣＲ１８１６８ｃのβ鎖は、ナイーブ臍帯血由来α鎖ライブラリ、またはＣＤＲ３αにランダム化変異を有するＴＣＲ１８１６８ｃのα鎖を含む２つのα鎖ライブラリ（以下に記載のα−ＮＮＫ１およびα−ＮＮＫ２ライブラリ）のいずれかに対してするクリーニングするためのガイドとして使用された。ＴＣＲ１８１６８ｃ  β鎖およびα鎖ライブラリの発現構築物は、Ｔ２／ｐＭＨＣ＋細胞の存在下でｐＭＨＣ四量体結合およびＡＫ−Ｄ１０Ｒ３  Ｔ細胞活性化を査定するために、ＡＫ−Ｄ１０Ｒ３細胞にレトロウイルスにより形質導入された。
【０２３８】
ＴＣＲ１８１６８ｃ  αおよびβ鎖のＣＤＲ３領域は、ＮＮＫ  ＣＤＲ３グラフトによりランダム化された。ＮＮＫトリプレットコドンは、Ｎ：Ａ／Ｃ／Ｇ／ＴおよびＫ：Ｇ／Ｔヌクレオチドから構成され、３２のコドンで２０全ての標準アミノ酸を網羅することができる。
【０２３９】
二組の一本鎖ＮＮＫオリゴマーをα鎖ＣＤＲ３およびβ鎖ＣＤＲ３グラフトに使用した。オリゴマーライブラリα−ＮＮＫ１およびα−ＮＮＫ２（Ｍｉｃｒｏｓｙｎｔｈ、特注）を使用して、それぞれＴＣＲ１８１６８ｃ  α鎖ＣＤＲ３の残基ＲＥＬＹＳ（配列番号２６６）およびＧＡＧＳＹ（配列番号２６７）をランダム化した。オリゴマーライブラリβ−ＮＮＫ１およびβ−ＮＮＫ２（Ｍｉｃｒｏｓｙｎｔｈ、特注）を使用して、それぞれＴＣＲ１８１６８ｃ  β鎖ＣＤＲ３の残基ＧＡＧＶＴ（配列番号２６８）およびＡＧＶＴＤ（配列番号２６９）をランダム化した。表９は、ＣＤＲ３αおよびＣＤＲ３β配列をランダム化するために使用されたＣＤＲ３  ＮＮＫヌクレオチドオリゴマーの配列を提供する。一本鎖ＮＮＫ  ＣＤＲ３ライブラリオリゴマーを逆プライミングＰＣＲ増幅に供して逆鎖を合成し、二本鎖オリゴマーを生成した。
【表９】
2020503883.tif 000061
【０２４０】
αおよびβ  ＣＤＲ３領域がスタッファー配列によって置換されていることを除き、完全長αおよびβ鎖配列を含有するレトロウイルス発現ベクターは、スタッファー配列を切除するように消化され、後にゲル精製された。次いで、二本鎖ＣＤＲ３αおよびＣＤＲ３βライブラリオリゴマーを消化し、精製され直線化されたベクターのフレームワーク３とフレームワーク４との間にライゲーションして、完全長ＴＣＲ  αおよびβ鎖配列を得た。
【０２４１】
再構成されたＣＤＲ３のランダム化ＴＣＲ１８１６８ｃ発現構築物は、Ｔ２／ｐＭＨＣ＋細胞の存在下でｐＭＨＣ四量体結合および細胞活性化を査定するために、ＡＫ−Ｄ１０Ｒ３細胞にレトロウイルスにより形質導入された。
【０２４２】
ガイド選択および／またはＮＮＫ変異誘発を使用して、合計２１のＴＣＲ１８１６８ｃ変異体：ＴＣＲ０００１、ＴＣＲ０００９、ＴＣＲ００１１、ＴＣＲ００１３、ＴＣＲ００１５、ＴＣＲ００１７、ＴＣＲ００１９、ＴＣＲ００２１、ＴＣＲ００２３、ＴＣＲ００２７、ＴＣＲ００２９、ＴＣＲ００３１、ＴＣＲ００３３、ＴＣＲ００３５、ＴＣＲ００３７、ＴＣＲ００４９、ＴＣＲ００５９、ＴＣＲ００６１、ＴＣＲ００６５、ＴＣＲ００６７、およびＴＣＲ００６９を特定した。表４は、これらのキメラＴＣＲおよびそれらのヒト対応物の可変領域の配列情報を提供する。
【０２４３】
６．３．２  ＮＹ−ＥＳＯ−１  ｐＭＨＣ四量体のＴＣＲ発現ＡＫ−Ｄ１０Ｒ３細胞への結合
ＮＹ−ＥＳＯ−１標的化キメラＴＣＲ：ＴＣＲ１８１６８ｃ、ＴＣＲ０００１、ＴＣＲ０００９、ＴＣＲ００１１、ＴＣＲ００１３、ＴＣＲ００１５、ＴＣＲ００１７、ＴＣＲ００１９、ＴＣＲ００２１、ＴＣＲ００２３、ＴＣＲ００２７、ＴＣＲ００２９、ＴＣＲ００３１、ＴＣＲ００３３、ＴＣＲ００３５、ＴＣＲ００３７、ＴＣＲ００４９、ＴＣＲ００５９、ＴＣＲ００６１、ＴＣＲ００６５、ＴＣＲ００６７、またはＴＣＲ００６９を発現するＡＫ−Ｄ１０Ｒ３細胞は、ＳＦ−ＩＭＤＭ培地（ＢｉｏＣｏｎｃｅｐｔカタログ番号：１−２８Ｓ０７−１）を使用して、１０％ＣＯ２雰囲気下で、３７℃で３日間拡大された。ＳＳＸ−２またはＴＣＲ陰性ＡＫ−Ｄ１０Ｒ３細胞に結合する参照ＴＣＲを発現するＡＫ−Ｄ１０Ｒ３細胞は、対照として使用された。１．０×１０５細胞を９６ウェルアッセイプレートの各ウェルで平板培養し、３００×ｇおよび４℃で５分間遠心分離し、２００μＬのアッセイ緩衝液（２％ＦＣＳで補足された１×ＰＢＳ）を使用して２回洗浄し、１．０×１０５細胞／１００μＬの濃度でアッセイ緩衝液に再懸濁した。染色に関して、２０μＬの抗マウスＴＣＲ  β鎖−ＡＰＣ抗体（ＢＤ、カタログ番号：５５３１７４、クローンＨ５７−５９７）（１：５００）の原液および野生型ＮＹ−ＥＳＯ−１ペプチドＳＬＬＭＷＩＴＱＣ（配列番号１、社内で産生）（１：２５０）で充填されたＰＥ標識ＨＬＡ−Ａ＊０２０１四量体を各ウェルに添加した。室温で３０分間インキュベートした後、上述のように細胞を２回洗浄し、ＢＤ  ＦＡＣＳＣａｎｔｏ  ＩＩサイトメーターを使用して、フローサイトメトリーにより分析した。ＴＣＲ発現（ＡＰＣ＋）対ｐＭＨＣ結合（ＰＥ＋）について細胞をゲート設定した。ＦｌｏｗＪｏソフトウェアを使用してドットプロットを生成し、ＴＣＲ＋ｐＭＨＣ＋細胞の割合（％）を決定した。
【０２４４】
図６に示されるように、試験したＴＣＲ１８１６８ｃおよびＴＣＲ１８１６８ｃ変異体の各々は、野生型ＮＹ−ＥＳＯ−１ペプチドＳＬＬＭＷＩＴＱＣ（配列番号１）で充填されたＨＬＡ−Ａ＊０２０１四量体に結合した。
【０２４５】
６．３．３  ＮＹ−ＥＳＯ−１＋Ｔ２細胞によるＴＣＲ発現ＡＫ−Ｄ１０Ｒ３細胞の活性化
ＩＬ−２−（ＮＦＡＴ）３−ＥＧＦＰレポーター構築物およびＮＹ−ＥＳＯ−１標的化キメラＴＣＲ：ＴＣＲ１８１６８ｃ、ＴＣＲ０００１、ＴＣＲ０００９、ＴＣＲ００１１、ＴＣＲ００１３、ＴＣＲ００１５、ＴＣＲ００１７、ＴＣＲ００１９、ＴＣＲ００２１、ＴＣＲ００２３、ＴＣＲ００２７、ＴＣＲ００２９、ＴＣＲ００３１、ＴＣＲ００３３、ＴＣＲ００３５、ＴＣＲ００３７、ＴＣＲ００４９、ＴＣＲ００５９、ＴＣＲ００６１、ＴＣＲ００６５、ＴＣＲ００６７、またはＴＣＲ００６９を発現するＡＫ−Ｄ１０Ｒ３細胞は、上述のようにＳＦ−ＩＭＤＭ培地において培養された。平行して、Ｔ２標的細胞（Ｓａｌｔｅｒ  ＲＤ，ＥＭＢＯ  Ｊ，１９８６  Ｍａｙ  ５  （５）：９４３−９  ＰＭＩＤ  ３５２２２２３により記載されるヒトリンパ芽球細胞）をＮＹ−ＥＳＯ−１抗原ペプチドでパルス処理した。Ｔ２細胞を、３００×ｇおよび４℃で５分間遠心分離し、１×ＰＢＳを使用して洗浄し、１．０×１０６細胞／２５０μＬの最終濃度で、５０μｇ／ｍＬのＮＹ−ＥＳＯ−１野生型抗原ＳＬＬＭＷＩＴＱＣ（配列番号１、社内で産生）で補足した１×ＰＢＳに再懸濁した。Ｔ２細胞をＳＸＸ−２ペプチドＫＡＳＥＫＩＦＹＶ（配列番号２７４）（Ｐｅｐｔｉｄｅｓ＆Ｅｌｅｐｈａｎｔｓ、ロットＥＰ０７００５／３００９Ｐ０４）でパルス処理するか、またはペプチドなしは対照として機能した。ペプチド滴定に関して、Ｔ２細胞を、１．０×１０６細胞当たり２４、２．４、０．２４、２．４×１０−２、２．４×１０−３、２．４×１０−４、２．４×１０−５、２．４×１０−６、２．４×１０−７、２．４×１０−８、２．４×１０−９、２．４×１０−１０、２．４×１０−１１、２．４×１０−１２、または２．４×１０−１３μｇのペプチドを使用して、ＮＹ−ＥＳＯ−１抗原の用量範囲でパルス処理した。細胞を３７℃で３時間インキュベートし、上述のように１×ＰＢＳを使用して２回洗浄し、ＳＦ−ＩＭＤＭ培地を使用して、５．０×１０６細胞／２０ｍＬの最終濃度で再懸濁した。
【０２４６】
２００μＬ（５．０×１０４細胞）のＴＣＲ発現ＡＫ−Ｄ１０Ｒ３細胞を９６ウェルアッセイプレートの各ウェルに添加し、３００×ｇで５分間遠心分離し、上清を破棄した。次に、２００μＬ（５．０×１０４細胞）のＴ２標的細胞懸濁液を各ウェルに添加した。ＡＫ−Ｄ１０Ｒ３細胞を慎重に再懸濁し、１０％ＣＯ２雰囲気下で、３７℃で１８時間、Ｔ２細胞とともに共インキュベートした。共染色に関して、細胞懸濁液を３００×ｇで１０分間沈降させ、アッセイ緩衝液を使用して２回洗浄し、２０μＬ／ウェルの染色溶液（１：５００ＡＰＣ標識抗マウスＴＣＲ  β鎖抗体で補足された１×ＰＢＳ）を使用して再懸濁し、室温で３０分間インキュベートした。後に、上述のようにアッセイ緩衝液を使用して細胞を２回洗浄し、８０μＬのアッセイ緩衝液に再懸濁し、ＢＤ  ＦＡＣＳＣａｎｔｏ  ＩＩサイトメーターを使用してフローサイトメトリーにより分析した。ＴＣＲ発現（ＡＰＣ＋）対Ｔ細胞活性化（ＥＧＦＰ＋）について細胞をゲート設定した。ＦｌｏｗＪｏソフトウェアを使用してドットプロットを生成し、ＡＰＣ＋ＥＧＦＰ＋細胞の割合（％）を決定した。このアッセイを三つ組で行った。
【０２４７】
図７に示されるように、試験したＴＣＲ１８１６８ｃおよびＴＣＲ１８１６８ｃ変異体の各々は、野生型ＮＹ−ＥＳＯ−１ペプチドＳＬＬＭＷＩＴＱＣ（配列番号１）でパルス処理されたＴ２細胞の存在下で、ＡＫ−Ｄ１０Ｒ３細胞におけるＩＬ−２−ＮＦＡＴレポーター構築物の活性化を媒介することができた（図７）。
【０２４８】
６．３．４  ＮＹ−ＥＳＯ−１  ｐＭＨＣ四量体のＴＣＲ発現ジャーカット細胞への結合
ＮＹ−ＥＳＯ−１標的化キメラＴＣＲ：ＴＣＲ１８１６８ｃ、ＴＣＲ０００１、ＴＣＲ０００９、ＴＣＲ００１１、ＴＣＲ００１３、ＴＣＲ００１５、ＴＣＲ００１７、ＴＣＲ００１９、ＴＣＲ００２１、ＴＣＲ００２３、ＴＣＲ００２７、ＴＣＲ００３１、ＴＣＲ００３７、ＴＣＲ００４９、ＴＣＲ００５９、ＴＣＲ００６１、ＴＣＲ００６５、ＴＣＲ００６７、またはＴＣＲ００６９を完全ヒトＴＣＲに変換し、ヒトジャーカット細胞において発現させた。各キメラＴＣＲに対応する完全ヒトＴＣＲの名称は、表４に列挙される。発現構築物において、各ＴＣＲのαおよびβ鎖は、Ｐ２Ａ−フーリン部位を介して連結された。
【０２４９】
ＴＣＲ発現ジャーカット細胞を、Ｌ−グルタミン（ＢｉｏＣｏｎｃｅｐｔカタログ番号．：１−４１Ｆ０３−Ｉ、ロットＬＡ０３４８５Ｐ）で補足したＲＰＭＩ培地を使用して、１０％ＣＯ２雰囲気下で、３７℃で３日間拡大させた。ＴＣＲ陰性ジャーカット細胞を対照として使用した。１．０×１０５細胞を９６ウェルアッセイプレートの各ウェルで平板培養し、３００×ｇおよび４℃で５分間遠心分離し、２００μＬのアッセイ緩衝液（２％ＦＣＳで補足された１×ＰＢＳ）を使用して２回洗浄し、１．０×１０５細胞／１００μＬの濃度でアッセイ緩衝液に再懸濁した。ＴＣＲ発現およびｐＭＨＣ結合について細胞を独立して染色した。染色に関して、２０μＬの抗ヒトＴＣＲ−ＡＰＣ抗体（ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ、カタログ番号１７−９９８５−４２、クローンＩＰ２６）（１：２００）の原液または野生型ＮＹ−ＥＳＯ−１ペプチドＳＬＬＭＷＩＴＱＣ（配列番号１）（ＭＢＬ、カタログ番号：Ｔ０１０６４、ロットＴ１６０６０１１）（１：２５０）で充填されたＰＥ標識ＨＬＡ−Ａ＊０２０１四量体を各ウェルに添加した。室温で３０分間インキュベートした後、上述のように細胞を２回洗浄し、ＢＤ  ＦＡＣＳＣａｎｔｏ  ＩＩサイトメーターを使用して、フローサイトメトリーにより分析した。対照群において、細胞を、対照ＳＸＸ−２抗原ペプチドＫＡＳＥＫＩＦＹＶ（配列番号２７４）（ＭＢＬ、カタログ番号ＴＳＭ０７９−１、ロット００１）（１：２５０）で充填されたＰＥ標識ＨＬＡ−Ａ＊０２０１四量体で染色した。ＴＣＲ発現（ＡＰＣ＋）対ＦＳＣまたはｐＭＨＣ結合（ＰＥ＋）対ＦＳＣについて細胞をゲート設定した。ＦｌｏｗＪｏソフトウェアを使用してドットプロットを生成し、ＴＣＲ＋またはｐＭＨＣ＋細胞の割合（％）を決定した。
【０２５０】
図８Ａおよび８Ｂに示されるように、試験したＴＣＲ１８１６８およびＴＣＲ１８１６８変異体の各々は、完全ヒトＴＣＲとしてジャーカット細胞の表面上に発現されたとき、野生型ＮＹ−ＥＳＯ−１ペプチドＳＬＬＭＷＩＴＱＣ（配列番号１）で充填されたＨＬＡ−Ａ＊０２０１四量体に結合した。
【０２５１】
６．３．５  ペプチドパルス処理されたＴ２標的細胞と共培養されたＴＣＲ１８１６８変異体を発現する一次ヒトＴ細胞の特徴付け
ＴＣＲ０００２、ＴＣＲ００１４、ＴＣＲ００１８、ＴＣＲ００２２、ＴＣＲ００２８、ＴＣＲ００３８、ＴＣＲ００７０、またはＨＬＡ−Ａ＊０２０１四量体結合ＮＹ−ＥＳＯ−１ペプチドＳＬＬＭＷＩＴＱＣ（配列番号１）に特異的な参照ＴＣＲのαおよびβ鎖の融合構築物をコードするｍＲＮＡ分子は、ｍＭＥＳＳＡＧＥ  ｍＭＡＣＨＩＮＥ  Ｔ７  Ｕｌｔｒａキット（Ａｍｂｉｏｎ、カタログ番号：ＡＭＢ１３４５５）を使用して、インビトロ転写により生成された。各ｍＲＮＡを、５’から３’の順番に、ＴＣＲ  β鎖、フーリン切断部位、Ｐ２Ａ切断部位、およびＴＣＲ  α鎖をコードするベクターから発現させた。次いで、ヒト一次Ｔ細胞を、ＭａｘＣｙｔｅ  ＧＴ電気穿孔装置を使用して電気穿孔することによりこれらのｍＲＮＡの各々でトランスフェクトした。トランスフェクション効率は、ＡＰＣ  ＳＬＬＭＷＩＴＱＣ（配列番号１）四量体ＨＬＡ−Ａ＊０２０１  （ＭＢＬカタログ番号Ｔ１０６０５）を使用して、電気穿孔１６時間後に評価された。９６ウェル丸底プレートを使用して、Ｃｅｌｌ  Ｔｒａｃｅ  Ｖｉｏｌｅｔ（ＣＴＶ）で標識されたトランスフェクトされた一次Ｔ細胞を、１：１のエフェクター対標的比で、１０００ｎＭの高用量〜１２．８ｐＭの低濃度（５ｘ系列希釈）の様々な濃度のＳＬＬＭＷＩＴＱＣ（配列番号１）ペプチドでパルス処理されているカルボキシフルオレセインスクシンイミジルエステル（ＣＦＳＥ）で標識されたＴ２標的細胞と共培養した。３７℃および５％ＣＯ２下での１６時間の共培養後、試料ウェルをＢＤ  ＬＳＲＦｏｒｔｅｓｓａ（商標）細胞分析装置で分析して、細胞活性化（ＣＤ２５、図９Ａ〜９Ｈ）、脱顆粒（ＣＤ１０７ａ、図１０Ａ〜１０Ｈ）、および生存細胞（図１１Ａ〜１１Ｈ）のバイオマーカーを査定した。ＦｌｏｗＪｏ（登録商標）、Ｍｉｃｒｏｓｏｆｔ（登録商標）Ｅｘｃｅｌ（登録商標）、およびＧｒａｐｈＰａｄ  Ｐｒｉｓｍを使用して分析を行った。
【０２５２】
図９Ａ〜９Ｈに示されるように、試験した全てのＮＹ−ＥＳＯ−１特異的ＴＣＲ（ＴＣＲ０００２、ＴＣＲ００１４、ＴＣＲ００１８、ＴＣＲ００２２、ＴＣＲ００２８、ＴＣＲ００３８、およびＴＣＲ００７０、ならびに参照ＴＣＲ）が、細胞表面ＣＤ２５発現によって示されるように、細胞活性化を誘導した。ＣＤ２５発現の割合は、高レベルのＮＹ−ＥＳＯ−１ペプチドがパルス処理に使用されたときに増加した。同様に、これらのＴＣＲは全て、陰性対照に対して増加した細胞傷害能力および細胞脱顆粒（細胞表面上のＣＤ１０７ａ発現により図１０Ａ〜１０Ｈに示される）を示した。図９Ａ〜９Ｈおよび１０Ａ〜１０Ｈに示される実験の陰性対照は、Ｍａｒｔ−１ペプチド標的化ＴＣＲ、ＤＭＦ４でトランスフェクトされたヒト一次Ｔ細胞であり、１μＭのＮＹ−ＥＳＯ−１でパルス処理されたＴ２細胞と共培養された。加えて、試験したＮＹ−ＥＳＯ−１特異的ＴＣＲの各１つを発現する一次Ｔ細胞は、陰性対照に対して増加した細胞傷害性（生存標的Ｔ２細胞の数の減少により図１１Ａ〜１１Ｈに示される）を示した。１μＭのＭａｒｔ−１ペプチドを、Ｔ２細胞をパルス処理するために陰性対照として使用した。
【０２５３】
６．３．６  ペプチド発現腫瘍細胞株と共培養されたＴＣＲ１８１６８変異体を発現する一次ヒトＴ細胞の特徴付け
６．３．５項に記載のｍＲＮＡ分子を調製し、６．３．５項と同じ方法を使用して、電気穿孔により一次Ｔ細胞にトランスフェクトした。次いで、ＴＣＲ発現Ｔ細胞を、様々なエフェクター対標的比で、内因性ＮＹ−ＥＳＯ−１を発現する慢性骨髄性白血病細胞株Ｋ５６２と共培養した。具体的には、Ｋ５６２細胞をＣＦＳＥで標識し、ヒトＨＬＡ−Ａ＊０２０１およびＮＹ−ＥＳＯ−１（タンパク質を過剰発現するために）で形質導入した。固定数の標的Ｋ５６２細胞を９６ウェル丸底組織培養プレートで平板培養し、三つ組で様々な量のトランスフェクトされたＴ細胞と共培養した。共培養物を３７℃、５％ＣＯ２で１６時間インキュベートし、６．３．５項に記載されるように、活性化（ＣＤ２５）、脱顆粒（ＣＤ１０７ａ）、および標的細胞生存のバイオマーカーを測定した。
【０２５４】
図１２Ａ〜１２Ｈに示されるように、試験した全てのＮＹ−ＥＳＯ−１特異的ＴＣＲ（ＴＣＲ０００２、ＴＣＲ００１４、ＴＣＲ００１８、ＴＣＲ００２２、ＴＣＲ００２８、ＴＣＲ００３８、およびＴＣＲ００７０、ならびに参照ＴＣＲ）が、細胞表面ＣＤ２５発現によって示されるように、様々なエフェクター対標的比下で、細胞活性化を誘導した。同様に、これらのＴＣＲは全て、増加した細胞傷害能力および細胞脱顆粒（細胞表面上のＣＤ１０７ａ発現により図１３Ａ〜１３Ｈに示される）を示した。ＣＤ２５およびＣＤ１０７ａの両方の発現を検出するために、ＤＭＦ４でトランスフェクトされたヒト一次Ｔ細胞を陰性対照として使用した。加えて、試験したＮＹ−ＥＳＯ−１特異的ＴＣＲのいずれか１つを発現する一次Ｔ細胞は、５：１および１０：１のエフェクター：標的比で、陰性対照に対して増加した細胞傷害性（生存標的Ｋ５６２細胞の数の減少により図１４Ａ〜１４Ｈに示される）を示した。細胞傷害性アッセイに関して、ＤＭＦ４でトランスフェクトされたＴ細胞を、標的細胞と共培養し、陰性対照として試験した。
【０２５５】
別の実験では、上述の参照ＴＣＲ：ＴＣＲ０００２、ＴＣＲ００１４、ＴＣＲ００１８、ＴＣＲ００２２、ＴＣＲ００２８、ＴＣＲ００３８、ＴＣＲ００７０をコードするｍＲＮＡ、または陰性対照ＴＣＲ  ＤＭＦ４をコードするｍＲＮＡでトランスフェクトされたＴ細胞を、各々、５：１のエフェクター−標的比で、２つの群の等しい数のＫ５６２標的細胞の混合物と共培養した。最初のＫ５６２細胞群（群１）は、試験ＴＣＲにより認識される同族ＨＬＡ−ペプチド複合体を提示するために、ヒトＨＬＡ−Ａ＊０２０１およびＮＹ−ＥＳＯ−１タンパク質で形質導入され、４μＭ  ＣＦＳＥで標識された。第２のＫ５６２細胞群（群２）は、ヒトＨＬＡ−Ｂ＊０７０２で形質導入され、０．２０μＭ  ＣＦＳＥで標識された。平行して、同一のＫ５６２細胞の混合物を調製したが、Ｔ細胞と共培養しなかった。各場合において、各組の残存する生存Ｋ５６２標的細胞の数をフローサイトメトリーにより決定し、そしてＴ細胞共培養混合物中の残存する生存群１細胞対残存する生存群２細胞の比率を決定し、非Ｔ細胞共培養した混合物中の残存する生存群１細胞対残存する生存群２細胞の比率を決定し、これらの２つの比の比率を計算し、１から差し引き、１００％を乗じることにより、試験した各ＴＣＲについて「死滅パーセント」値を決定した。正の値は、群２の細胞と比較した群１の細胞の優先的死滅を示す。図１５に示されるように、陰性対照を除く試験した全てのＴＣＲは、ヒトＨＬＡ−Ａ＊０２０１およびＮＹ−ＥＳＯ−１タンパク質で形質導入されたＫ５６２細胞の実質的な優先的死滅をもたらした。陰性対照試料は、検出可能な優先的死滅を示さなかった。
【０２５６】
別の実験では、標的腫瘍細胞を、ＮＹ−ＥＳＯ−１またはＨＬＡ−Ａ＊０２０１のいずれかを過剰発現することなく、ＴＣＲ発現一次Ｔ細胞と共培養した。具体的には、内因性ＮＹ−ＥＳＯ−１およびＨＬＡ−Ａ＊０２０１を発現する黒色腫細胞ＳＬＭ２−ｍｅｌを標的細胞として使用し、ＣＴＶで標識した。固定数の標的細胞を、三つ組で、９６丸底組織培養プレートにおいて、様々な数のＴＣＲを発現するトランスフェクトされた一次Ｔ細胞と共培養した。共培養プレートを３７℃、５％ＣＯ２で１６時間インキュベートし、本項および前項に記載の同じフローサイトメトリーを使用して、生存細胞の数を査定した。試験した全てのＮＹ−ＥＳＯ−１特異的ＴＣＲ２は、陰性対照に対して表面ＣＤ２５（図１６Ａ〜１６Ｆ）およびＣＤ１０７ａ（図１７Ａ〜１７Ｆ）の発現の割合を増加させた。図１８Ａ〜１８Ｆに示されるように、試験した全てのＮＹ−ＥＳＯ−１特異的ＴＣＲは、陰性対照に対して増加した細胞傷害性を示した。図１６Ａ〜１６Ｆ、１７Ａ〜１７Ｆ、および１８Ａ〜１８Ｆの陰性対照のように、ＰＢＳでトランスフェクトされたＴ細胞は、対応するエフェクター対標的比で標的細胞と共培養された。
【０２５７】
６．３．７  ＮＹ−ＥＳＯ−１  ＴＣＲ特異性プロファイルの特徴付け
この実施例は、本明細書に記載のいくつかのＮＹ−ＥＳＯ−１特異的ＴＣＲの標的特異性を査定するためのスクリーニング方法の使用を例証する。
【０２５８】
簡潔に言えば、ＳＬＬＭＷＩＴＱＣ（配列番号１）のＮＹ−ＥＳＯ−１ペプチド配列と非常に類似した短ポリペプチド群を調製した。Ｃ末端にバリンを有するアンカー最適化変異型（ＳＬＬＭＷＩＴＱＶ、配列番号２）を、変異誘発の親配列として使用した。アンカー位置Ｐ２（Ｌ）およびＰ９（Ｖ）を除き、配列番号２の各位置は、個々に、１９全ての他の可能性のある天然に生じるアミノ酸で置換され、合計１３３組の変更されたペプチド（表１０に示される配列番号２７５〜４０７）をもたらした。各ＴＣＲの特異性プロファイルは、１３３のペプチドのうちの１つまたは親配列番号２で充填されたＴ２標的細胞と共培養された後に、ＴＣＲ発現エフェクター細胞の活性化を測定することにより評価された。
【０２５９】
エフェクター細胞（ＮＹ−ＥＳＯ  ＡＫ−Ｄ１０Ｒ３細胞）は、６．１項に記載のようにマウスＴＣＲ陰性胸腺腫細胞から生成され、キメラＴＣＲ：ＴＣＲ０００１、ＴＣＲ００１７、ＴＣＲ００２１、ＴＣＲ００３７、またはＮＹ−ＥＳＯ−１ペプチドＳＬＬＭＷＩＴＱＣ（配列番号１）に特異的な参照ＴＣＲ、キメラマウス／ヒトＣＤ８、および３つのＮＦＡＴ結合部位（３ｘＮＦＡＴ）を含む最小ＩＬ−２プロモーターに連結されたＥＧＦＰ−レポーター構築物で安定して形質導入された。細胞は、３７℃および１０％ＣＯ２で、３％ウシ胎児血清（ＦＣＳ；Ａｍｉｍｅｄ）、１％ペニシリン／ストレプトマイシン（ＳＩＧＭＡ−ＡＬＤＲＩＣＨ，Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，ＭＯ）、および５０μＭ  β−メルカプトエタノール（Ｇｉｂｃｏ，Ｆｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ，ＵＫ）で補足されたＳＦ−ＩＭＤＭ（Ａｍｉｍｅｄ，ＵＫ）において培養された。ＡＴＣＣからのＴａｐ欠損Ｔ２（１７４ｘＣＥＭ．Ｔ２）細胞を呈する抗原は、３７℃および５％ＣＯ２で、１０％ＦＣＳおよび１％ペニシリン／ストレプトマイシンで補足されたＲＰＭＩ１６４０（ＳＩＧＭＡ−ＡＬＤＲＩＣＨ）において維持された。
【０２６０】
ペプチド（Ｐｅｐｔｉｄｅｓ  ａｎｄ  Ｅｌｅｐｈａｎｔｓ，Ｇｅｒｍａｎｙから購入または社内で産生）はＤＭＳＯに懸濁され、濃度は４ｍｇ／ｍｌに調整された。簡潔に言えば、Ｔ２細胞をＰＢＳ（Ｇｉｂｃｏ）中で洗浄し、３７℃および５％ＣＯ２で２時間、１×１０６細胞当たり８０μｇのペプチドとともにインキュベートした。インキュベーション後、Ｔ２細胞をＰＢＳ／２％ＦＣＳ中で洗浄し、次いで、ＳＦ−ＩＭＤＭ培地に再懸濁した。関心のＴＣＲを発現するエフェクター細胞を、２：１の比率で（９６ウェルプレートのウェル当たり合計１５０，０００細胞）、３７℃および１０％ＣＯ２で、ＳＦ−ＩＭＤＭ培地において１６時間、ペプチドパルス処理されたＴ２細胞と共培養した。細胞を、２％ＦＢＳ／ＰＢＳ中で２回洗浄し、室温で３０分間、抗マウスＴＣＲ−β鎖クローンＨ５７−５９７（ＢＤ  Ｐｈａｒｍｉｎｇｅｎ，Ｓａｎ  Ｊｏｓｅ，ＣＡ、１：５００）で染色した。細胞を２回洗浄し、続いてＢＤ  ＦＡＣＳ  Ｃａｎｔｏ  ＩＩを使用してＦＡＣＳ分析を行った。
【０２６１】
データ分析はＦｌｏｗＪｏ  Ｖ１０ソフトウェアを使用して行った。活性化は、ＮＹ−ＥＳＯ  ＡＫ−Ｄ１０Ｒ３集団におけるＥＧＦＰ発現細胞の割合として計算された（ＡＫ−Ｄ１０Ｒ３細胞は、ＴＣＲ発現に基づいて特定された）。背景活性化（ペプチドは充填されていない）は、全てのペプチド充填試料から差し引かれた（変更されたおよび天然の配列）。背景が差し引かれた値の平均および平均値の標準誤差（ＳＥＭ）は、全ての複写物（各ＴＣＲについて少なくとも３つの複写物）から計算され、値は天然配列ペプチドの値に正規化され、正規化された値は、表示目的のため最小０．０（ヒートマップのみ）および最大１．０（ヒートマップおよび棒チャートの両方）に刈り込まれた。正規化された値は、図１９Ａ（参照ＴＣＲ）、１９Ｂ（ＴＣＲ０００１）、１９Ｃ（ＴＣＲ００１７）、１９Ｄ（ＴＣＲ００２１）、および１９Ｅ（ＴＣＲ００３７）のヒートマップ形式、ならびに図２０Ａ（参照ＴＣＲ）、２０Ｂ（ＴＣＲ０００１）、２０Ｃ（ＴＣＲ００１７）、２０Ｄ（ＴＣＲ００２１）、および２０Ｅ（ＴＣＲ００３７）の棒チャート形式で示される。
【０２６２】
ヒートマップおよび棒チャートは、試験した各ＴＣＲの明確な特異性プロファイルを明らかにする。一般に、より大きい白の割合（低正規化値）は、ＮＹ−ＥＳＯ−１同族ペプチドにおける変異に対する耐性が低いことを示し、上述のアッセイとの関連において、ＮＹ−ＥＳＯ−１同族ペプチドに対して高い特異性度を示す。図１９Ａ〜１９Ｅに示されるように、ＴＣＲ０００１、ＴＣＲ００１７、ＴＣＲ００２１、およびＴＣＲ００３７は全て、評価された変異ペプチドの参照ＴＣＲよりもＮＹ−ＥＳＯ−１同族ペプチドに対して実質的に高い特異性度を示した。同様に、図２０Ａ〜２０Ｅの棒チャートは、参照ＴＣＲと比較して、ＴＣＲ０００１、ＴＣＲ００１７、ＴＣＲ００２１、およびＴＣＲ００３７の各々の変異ペプチドに対してより大きい低正規化活性化値の割合を明らかにする。
【表１０−１】
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【表１０−２】
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【表１０−３】
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【０２６３】
本発明の範囲は、本明細書に記載の具体的な実施形態に限定されるものではない。実際には、記載される修正に加えて本発明の様々な修正が、前述の説明および添付の図面から当業者に明らかになるであろう。そのような修正は、添付の特許請求の範囲内に収まるよう意図されている。
【０２６４】
本明細書に引用される全ての参考文献（例えば、出版物または特許または特許出願）は、各々の個別の参考文献（例えば、出版物または特許または特許出願）が全ての目的のために参照によりその全体が組み込まれると具体的かつ個別に示される場合と同じ程度に、参照によりそれらの全体がおよび全ての目的のために本明細書に組み込まれる。
【０２６５】
他の実施形態は、以下の特許請求の範囲内である。
【図１】
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【図２】
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【図３Ａ】
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【図３Ｂ】
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【図３Ｃ】
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【図３Ｄ】
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【図３Ｅ】
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【図４Ａ】
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【図４Ｂ】
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【図４Ｃ】
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【図５Ａ】
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【図５Ｂ】
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【図６】
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【図７】
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【図８Ａ】
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【図８Ｂ】
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【図９Ａ】
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【図９Ｂ】
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【図９Ｃ】
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【図９Ｄ】
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【図９Ｅ】
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【図９Ｆ】
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【図９Ｇ】
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【図９Ｈ】
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【図１０Ａ】
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【図１０Ｂ】
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【図１０Ｃ】
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【図１０Ｄ】
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【図１０Ｅ】
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【図１０Ｆ】
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【図１０Ｇ】
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【図１０Ｈ】
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【図１１Ａ】
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【図１１Ｂ】
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【図１１Ｃ】
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【図１１Ｄ】
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【図１１Ｅ】
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【図１１Ｆ】
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【図１１Ｇ】
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【図１１Ｈ】
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【図１２Ａ】
2020503883.tif 000105
【図１２Ｂ】
2020503883.tif 000106
【図１２Ｃ】
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【図１２Ｄ】
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【図１２Ｅ】
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【図１２Ｆ】
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【図１２Ｇ】
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【図１２Ｈ】
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【図１３Ａ】
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【図１３Ｂ】
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【図１３Ｃ】
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【図１３Ｄ】
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【図１３Ｅ】
2020503883.tif 000117
【図１３Ｆ】
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【図１３Ｇ】
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【図１３Ｈ】
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【図１４Ａ】
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【図１４Ｂ】
2020503883.tif 000122
【図１４Ｃ】
2020503883.tif 000123
【図１４Ｄ】
2020503883.tif 000124
【図１４Ｅ】
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【図１４Ｆ】
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【図１４Ｇ】
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【図１４Ｈ】
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【図１５】
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【図１６Ａ】
2020503883.tif 000130
【図１６Ｂ】
2020503883.tif 000131
【図１６Ｃ】
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【図１６Ｄ】
2020503883.tif 000133
【図１６Ｅ】
2020503883.tif 000134
【図１６Ｆ】
2020503883.tif 000135
【図１７Ａ】
2020503883.tif 000136
【図１７Ｂ】
2020503883.tif 000137
【図１７Ｃ】
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【図１７Ｄ】
2020503883.tif 000139
【図１７Ｅ】
2020503883.tif 000140
【図１７Ｆ】
2020503883.tif 000141
【図１８Ａ】
2020503883.tif 000142
【図１８Ｂ】
2020503883.tif 000143
【図１８Ｃ】
2020503883.tif 000144
【図１８Ｄ】
2020503883.tif 000145
【図１８Ｅ】
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【図１８Ｆ】
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【図１９Ａ】
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【図１９Ｂ】
2020503883.tif 000149
【図１９Ｃ】
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【図１９Ｄ】
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【図１９Ｅ】
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【図２０Ａ】
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【図２０Ｂ】
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【図２０Ｃ】
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【図２０Ｄ】
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【図２０Ｅ】
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【配列表】
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【国際調査報告】
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