(57)【要約】  本明細書では、特に、そのＣ末端にホスホロチオエート核酸を結合している非細胞透過性タンパク質を含む核酸−ペプチドコンジュゲートが提供される。ホスホロチオエート核酸の非細胞透過性タンパク質への結合は、非細胞透過性ペプチドに安定性を与え、その効率的な細胞内送達を可能にする。実施形態を含む本明細書に提供する核酸−ペプチドコンジュゲートは、特に、がん、炎症性疾患、痛み、及びウイルス感染の処置に有用である。
2020527555.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
（ｉ）非細胞透過性ペプチド；
（ｉｉ）ホスホロチオエート核酸；及び
（ｉｉｉ）ホスホロチオエート核酸を非細胞透過性ペプチドのＣ末端に結合している化学リンカー
を含む核酸−ペプチドコンジュゲートであって、ホスホロチオエート核酸が非細胞透過性ペプチドの細胞内送達を増強する、核酸−ペプチドコンジュゲート。
【請求項２】
非細胞透過性ペプチドが、約５、１０、１５、２０又は２５アミノ酸長である、請求項１に記載のコンジュゲート。
【請求項３】
非細胞透過性ペプチドが、少なくとも５アミノ酸長である、請求項１に記載のコンジュゲート。
【請求項４】
非細胞透過性ペプチドが、約８アミノ酸長である、請求項１に記載のコンジュゲート。
【請求項５】
非細胞透過性ペプチドが、約１０アミノ酸長である、請求項１に記載のコンジュゲート。
【請求項６】
非細胞透過性ペプチドが、約１１アミノ酸長である、請求項１に記載のコンジュゲート。
【請求項７】
非細胞透過性ペプチドが、約１３アミノ酸長である、請求項１に記載のコンジュゲート。
【請求項８】
非細胞透過性ペプチドが、約２２アミノ酸長である、請求項１に記載のコンジュゲート。
【請求項９】
非細胞透過性ペプチドが、約２５ｋＤより小さい分子量を有する、請求項１に記載のコンジュゲート。
【請求項１０】
非細胞透過性ペプチドが、改変アミノ酸を含む、請求項１に記載のコンジュゲート。
【請求項１１】
改変アミノ酸が、アセチル化アミノ酸である、請求項１０に記載のコンジュゲート。
【請求項１２】
非細胞透過性ペプチドが、配列番号１のアミノ酸６８５位に相当する位置にアセチル化アミノ酸を含むＳＴＡＴ３ペプチドである、請求項１又は１１のいずれか一項に記載のコンジュゲート。
【請求項１３】
改変アミノ酸が、リン酸化アミノ酸である、請求項１０に記載のコンジュゲート。
【請求項１４】
非細胞透過性ペプチドが、配列番号２のアミノ酸７６７位に相当する位置にリン酸化アミノ酸を含むｇｐ１３０ペプチドである、請求項１又は１３のいずれか一項に記載のコンジュゲート。
【請求項１５】
非細胞透過性ペプチドが、配列番号２のアミノ酸９０５位に相当する位置にリン酸化アミノ酸を含むｇｐ１３０ペプチドである、請求項１又は１３のいずれか一項に記載のコンジュゲート。
【請求項１６】
非細胞透過性ペプチドが、配列番号２のアミノ酸９１５位に相当する位置にリン酸化アミノ酸を含むｇｐ１３０ペプチドを含む、請求項１又は１３のいずれか一項に記載のコンジュゲート。
【請求項１７】
非細胞透過性ペプチドが、細胞内標的を結合する、請求項１に記載のコンジュゲート。
【請求項１８】
細胞内標的が、シグナル伝達分子又は転写因子である、請求項１７に記載のコンジュゲート。
【請求項１９】
シグナル伝達分子が、ホスファターゼ又はキナーゼである、請求項１８に記載のコンジュゲート。
【請求項２０】
細胞内標的がｃ−ＭＹＣである、請求項１７に記載のコンジュゲート。
【請求項２１】
細胞内標的が、配列番号１１のアミノ酸配列を含むｃ−ＭＹＣタンパク質である、請求項２０に記載のコンジュゲート。
【請求項２２】
細胞内標的がカリオフェリンである、請求項１７に記載のコンジュゲート。
【請求項２３】
カリオフェリンがエキスポーチンである、請求項２２に記載のコンジュゲート。
【請求項２４】
細胞内標的がエキスポーチン７である、請求項２２又は２３に記載のコンジュゲート。
【請求項２５】
細胞内標的が、配列番号５のアミノ酸配列を含むエキスポーチン７タンパク質である、請求項２４に記載のコンジュゲート。
【請求項２６】
非細胞透過性ペプチドがＳＴＡＴ３ペプチドである、請求項１、１６又は２２のいずれか一項に記載のコンジュゲート。
【請求項２７】
非細胞透過性ペプチドがアセチル化ＳＴＡＴ３ペプチドである、請求項１、１６又は２２のいずれか一項に記載のコンジュゲート。
【請求項２８】
非細胞透過性ペプチドが、配列番号３の配列を含む、請求項１、１６又は２２のいずれか一項に記載のコンジュゲート。
【請求項２９】
細胞内標的が転写因子である、請求項１７に記載のコンジュゲート。
【請求項３０】
細胞内標的がＳＴＡＴ３である、請求項１７に記載のコンジュゲート。
【請求項３１】
細胞内標的が、配列番号１のアミノ酸配列を含むＳＴＡＴ３タンパク質である、請求項３０に記載のコンジュゲート。
【請求項３２】
非細胞透過性ペプチドがｇｐ１３０ペプチドである、請求項１、１７又は２９のいずれか一項に記載のコンジュゲート。
【請求項３３】
非細胞透過性ペプチドがリン酸化ｇｐ１３０ペプチドである、請求項１、１７又は２９のいずれか一項に記載のコンジュゲート。
【請求項３４】
非細胞透過性ペプチドがｃ−ＭＹＣ結合ペプチドである、請求項１、１７又は２０のいずれか一項に記載のコンジュゲート。
【請求項３５】
非細胞透過性ペプチドが、配列番号４、配列番号８、配列番号９又は配列番号１０の配列を含む、請求項１に記載のコンジュゲート。
【請求項３６】
非細胞透過性ペプチドが、細胞内標的の結合に関して細胞タンパク質又は細胞ペプチドと競合する、請求項３５に記載のコンジュゲート。
【請求項３７】
細胞タンパク質又は細胞ペプチドが、配列番号１、配列番号２、配列番号３、配列番号４、配列番号６、配列番号７、配列番号８、配列番号９、配列番号１０又は配列番号１２の配列を含む、請求項３６に記載のコンジュゲート。
【請求項３８】
細胞タンパク質又は細胞ペプチドが、ＳＴＡＴ３タンパク質又はこれらの断片である、請求項３６に記載のコンジュゲート。
【請求項３９】
細胞タンパク質又は細胞ペプチドが、ｇｐ１３０タンパク質又はこれらの断片である、請求項３６に記載のコンジュゲート。
【請求項４０】
細胞タンパク質又は細胞ペプチドが、ＭＡＸタンパク質又はこれらの断片である、請求項３６に記載のコンジュゲート。
【請求項４１】
ホスホロチオエート核酸が、約１０、２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００又はそれより大きい核酸残基長である、請求項１に記載のコンジュゲート。
【請求項４２】
ホスホロチオエート核酸が、約１０〜約３０核酸残基長である、請求項１に記載のコンジュゲート。
【請求項４３】
ホスホロチオエート核酸が、約２０核酸残基長である、請求項１に記載のコンジュゲート。
【請求項４４】
ホスホロチオエート核酸が一本鎖核酸である、請求項１に記載のコンジュゲート。
【請求項４５】
ホスホロチオエート核酸がホスホロチオエートデオキシリボ核酸である、請求項１に記載のコンジュゲート。
【請求項４６】
化学リンカーが共有結合リンカーである、請求項１に記載のコンジュゲート。
【請求項４７】
リンカーが、式：
【化１】
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（式中、Ｒ１が水素、ハロゲン、−ＣＦ３、−ＣＮ、−ＣＣｌ３、−ＣＯＯＨ、−ＣＨ２ＣＯＯＨ、−ＣＯＮＨ２、−ＯＨ、−ＳＨ、−ＮＯ２、−ＮＨ２、−ＮＨＮＨ２、−ＯＮＨ２、−ＮＨＣ＝（Ｏ）ＮＨＮＨ２、置換若しくは非置換アルキル、置換若しくは非置換ヘテロアルキル、置換若しくは非置換シクロアルキル、置換若しくは非置換ヘテロシクロアルキル、置換若しくは非置換アリール、又は置換若しくは非置換ヘテロアリールである。）
の構造を含む、請求項４６に記載のコンジュゲート。
【請求項４８】
リンカーが非免疫原性リンカーである、請求項４６に記載のコンジュゲート。
【請求項４９】
コンジュゲートが、検出可能部分を含む、請求項１に記載のコンジュゲート。
【請求項５０】
検出可能部分が、非細胞透過性ペプチドに結合されている、請求項４９に記載のコンジュゲート。
【請求項５１】
検出可能部分が、ホスホロチオエート核酸に結合されている、請求項４９に記載のコンジュゲート。
【請求項５２】
細胞内標的に結合した、請求項１に記載のコンジュゲート。
【請求項５３】
請求項１又は５２のいずれか一項に記載のペプチドコンジュゲートを含む細胞。
【請求項５４】
請求項１に記載のペプチドコンジュゲート及び薬学的に許容される担体を含む医薬組成物。
【請求項５５】
がんの処置を必要とする対象においてがんを処置する方法であって、請求項１に記載の細胞透過性ペプチドコンジュゲートの治療有効量を対象に投与するステップ、それにより対象においてがんを処置するステップを含む、方法。
【請求項５６】
がんが乳がん、前立腺がん、卵巣がん、脳がん、膵臓がん、メラノーマ、結腸がん、胃がん、頭頚部がん、肝臓がん、肺がん、子宮頚がん、肉腫、白血病、リンパ腫、多発性骨髄腫である、請求項５５に記載の方法。
【請求項５７】
第２の治療剤の有効量を対象にさらに投与する、請求項５５に記載の方法。
【請求項５８】
第２の治療剤が、請求項１に記載の細胞透過性ペプチドコンジュゲートである、請求項５７に記載の方法。
【請求項５９】
標準対照と比較して、対象においてＢＩＲＣ５、ＢｃｌＸＬ又はＰＤ−Ｌ１の発現レベルを減少させるステップを含む、請求項５５に記載の方法。
【請求項６０】
がん細胞においてｐ５３の発現を増加させる方法であって、がん細胞を請求項１に記載の細胞透過性ペプチドコンジュゲートの有効量と接触させるステップ、それによりがん細胞においてｐ５３の発現を増加させるステップを含む、方法。
【請求項６１】
腫瘍血管新生の阻害を必要とする対象において腫瘍血管新生を阻害する方法であって、請求項１に記載の細胞透過性ペプチドコンジュゲートの治療有効量を対象に投与するステップ、それにより対象において腫瘍血管新生を阻害するステップを含む、方法。
【請求項６２】
炎症性疾患の処置を必要とする対象において炎症性疾患を処置する方法であって、請求項１に記載の細胞透過性ペプチドコンジュゲートの治療有効量を対象に投与するステップ、それにより対象において炎症性疾患を処置するステップを含む、方法。
【請求項６３】
標準対照と比較して、対象においてＦＧＡ、ＩＬＩＢ又はＳＥＲＰＩＮＡ３の発現レベルを減少させるステップを含む、請求項６２に記載の方法。
【請求項６４】
痛みの処置を必要とする対象において痛みを処置する方法であって、請求項１に記載の細胞透過性ペプチドコンジュゲートの治療有効量を対象に投与するステップ、それにより対象において痛みを処置するステップを含む、方法。
【請求項６５】
標準対照と比較して、対象においてＰＴＧＳ１、ＰＴＧＳ２、ＣＡＬＣＡ又はＳＳＴの発現レベルを減少させるステップを含む、請求項６４に記載の方法。
【請求項６６】
ウイルス感染の処置を必要とする対象においてウイルス感染を処置する方法であって、請求項１に記載の細胞透過性ペプチドコンジュゲートの治療有効量を対象に投与するステップ、それにより対象においてウイルス感染を処置するステップを含む方法。
【請求項６７】
標準対照と比較して、対象においてＣＸＣＲ４、ＣＣＲ５又はＣＤ１５５の発現レベルを減少させるステップを含む、請求項６６に記載の方法。
【請求項６８】
ウイルス感染が、ＨＩＶ感染又はポリオウイルス感染である、請求項６６に記載の方法。
【請求項６９】
細胞へのウイルスの侵入を阻害する方法であって、細胞を請求項１に記載の細胞透過性ペプチドコンジュゲートの有効量と接触させるステップ、それにより細胞へのウイルスの侵入を阻害するステップを含む、方法。
【請求項７０】
標準対照と比較して、細胞においてＣＸＣＲ４、ＣＣＲ５又はＣＤ１５５の発現レベルを減少させるステップを含む、請求項６９に記載の方法。
【請求項７１】
細胞におけるＩＬ６受容体シグナル伝達を阻害する方法であって、細胞を請求項１に記載の細胞透過性ペプチドコンジュゲートの有効量と接触させるステップ、それにより細胞におけるＩＬ６受容体シグナル伝達を阻害するステップを含む、方法。
【請求項７２】
細胞に非細胞透過性ペプチドを送達する方法であって、細胞を請求項１に記載の細胞透過性ペプチドコンジュゲートと接触させるステップ、それにより細胞に非細胞透過性ペプチドを送達するステップを含む、方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本出願は、参照によりその全体が全ての目的のために本明細書に組み込まれる２０１７年７月１３日に出願した米国仮出願第６２／５３２，１４７号の優先権を主張するものである。
【０００２】
ＡＳＣＩＩテキストファイルで提出された配列表、表、又はコンピュータプログラムリスト付録の参照
２０１８年７月１３日に、３１，９２８バイト、機械フォーマットＩＢＭ−ＰＣ、ＭＳ  Ｗｉｎｄｏｗｓ操作システムで作成されたファイル名０４８４４０  ５９２００１ＷＯ＿ＳＴ２５．ＴＸＴに記載された配列表は、参照により本明細書に組み込まれている。
【０００３】
連邦政府による資金提供を受けた研究開発の下になされた発明の権利に関する記載
本発明は、国立衛生研究所により認定された認可番号第ＣＡ１２２９７６の下で政府支援によりなされた。政府は本発明において一定の権利を有する。
【背景技術】
【０００４】
疾患病理に含まれる細胞内分子の操作は、多くの疾患の処置の魅力的な選択肢である。細胞内分子の活性を改変する能力は、細胞内シグナル伝達経路に甚大な効果を有し、好ましい疾患の転帰を促進する遺伝子発現における変化をもたらし得る。しかしながら、治療目的の細胞内分子の標的化は、標的化分子が、細胞膜を透過する及び生理環境において生体内安定性を維持する両方の必要性のため特に挑戦的な課題である。したがって、当技術分野では、疾患病状に含まれる細胞内分子を標的化することができる、生体内安定性の、細胞透過性組成物の需要がある。
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【０００５】
本明細書において、驚くべき生体内安定性を示し、高効率で細胞内に送達され得る、Ｃ末端においてホスホロチオエート核酸にコンジュゲートした標的化ペプチドを含む組成物及び方法を提供する。本明細書において提供するホスホロチオエート核酸−ペプチドコンジュゲートは、特に、がん、炎症及びウイルス感染を含む様々な疾患の処置に有用である。
【０００６】
（発明の要旨）
一態様において：（ｉ）非細胞透過性ペプチド；（ｉｉ）ホスホロチオエート核酸；及び（ｉｉｉ）ホスホロチオエート核酸を非細胞透過性ペプチドのＣ末端に結合している化学リンカーを含む核酸−ペプチドコンジュゲートであって、ホスホロチオエート核酸が非細胞透過性ペプチドの細胞内送達を増強する核酸−ペプチドコンジュゲートが提供される。
【０００７】
一態様において、コンジュゲート二量体が提供される。コンジュゲート二量体は：（ｉ）（ａ）第１の非細胞透過性ペプチドと；（ｂ）ホスホロチオエート核酸と；（ｃ）ホスホロチオエート核酸を第１の非細胞透過性ペプチドのＣ末端に結合している第１の化学リンカーとを含む、第１の核酸−ペプチドコンジュゲート；及び（ｉｉ）（ａ）第２の非細胞透過性ペプチドと；（ｂ）非ホスホロチオエート化核酸と；（ｃ）非ホスホロチオエート化核酸を第２の非細胞透過性ペプチドのＣ末端に結合している第２の化学リンカーとを含む、第２の核酸−ペプチドコンジュゲートを含み、ここでホスホロチオエート核酸及び非ホスホロチオエート化核酸はハイブリダイズされ、第１の核酸−ペプチドコンジュゲートを第２の核酸−ペプチドコンジュゲートに結合し、それによりコンジュゲート二量体を形成している。
【０００８】
一態様において、実施形態を含む本明細書に提供されるペプチドコンジュゲートを含む細胞が提供される。
【０００９】
一態様において、実施形態を含む本明細書に提供されるペプチドコンジュゲート及び薬学的に許容される担体を含む医薬組成物が提供される。
【００１０】
一態様において、がんの処置を必要とする対象においてがんを処置する方法が提供される。本方法は、実施形態を含む本明細書に提供される細胞透過性ペプチドコンジュゲートの治療有効量を対象に投与するステップ、それにより対象においてがんを処置するステップを含む。
【００１１】
一態様において、がん細胞におけるｐ５３の発現を増加させる方法であって、がん細胞を、実施形態を含む本明細書に提供される細胞透過性ペプチドコンジュゲートの有効量と接触させるステップ、それによりがん細胞におけるｐ５３の発現を増加させるステップを含む方法が提供される。
【００１２】
一態様において、腫瘍血管新生の阻害を必要とする対象において腫瘍血管新生を阻害する方法であって、実施形態を含む本明細書に提供される細胞透過性ペプチドコンジュゲートの治療有効量を対象に投与するステップ、それにより対象において腫瘍血管新生を阻害するステップを含む方法が提供される。
【００１３】
一態様において、炎症性疾患の処置を必要とする対象において炎症性疾患を処置する方法であって、実施形態を含む本明細書に提供される細胞透過性ペプチドコンジュゲートの治療有効量を対象に投与するステップ、それにより対象において炎症性疾患を処置するステップを含む方法が提供される。
【００１４】
一態様において、痛みの処置を必要とする対象において痛みを処置する方法であって、実施形態を含む本明細書に提供される細胞透過性ペプチドコンジュゲートの治療有効量を対象に投与するステップ、それにより対象において痛みを処置するステップを含む方法が提供される。
【００１５】
一態様において、ウイルス感染の処置を必要とする対象においてウイルス感染を処置する方法であって、実施形態を含む本明細書に提供される細胞透過性ペプチドコンジュゲートの治療有効量を対象に投与するステップ、それにより対象においてウイルス感染を処置するステップを含む方法が提供される。
【００１６】
一態様において、細胞へのウイルスの侵入を阻害する方法であって、細胞を実施形態を含む本明細書に提供される細胞透過性ペプチドコンジュゲートの有効量と接触させるステップ、それにより細胞へのウイルスの侵入を阻害するステップを含む方法が提供される。
【００１７】
一態様において、細胞におけるＩＬ６受容体シグナル伝達を阻害する方法であって、細胞を実施形態を含む本明細書に提供される細胞透過性ペプチドコンジュゲートの有効量と接触させるステップ、それにより細胞におけるＩＬ６受容体シグナル伝達を阻害するステップを含む方法が提供される。
【００１８】
一態様において、細胞に非細胞透過性ペプチドを送達する方法であって、細胞を実施形態を含む本明細書に提供される細胞透過性ペプチドコンジュゲートと接触させるステップ、それにより細胞に非細胞透過性ペプチドを送達するステップを含む方法が提供される。
【図面の簡単な説明】
【００１９】
【図１】ヒトＳＴＡＴ３タンパク質（ＳＴＡＴ３−ペプチド）由来の改変ペプチド配列の、リンカーを介する、ホスホロチオエートｓｓＤＮＡ（ＰＳ−ｓｓＤＮＡ）への連結を示す図である。
【図２】蛍光タグ（Ｆａｍ  ｄＴ）を含むリンカー（アルデヒドＣ２＋ヒドラジン結合）及びスペーサー（Ｃ３）を介してホスホロチオエートｓｓＤＮＡ（オリゴ）に連結された改変ペプチド配列（ペプチド）の概略図である。
【図３Ａ】１０μｇ／ｍｌのペプチドと２時間インキュベートされたヒトグリオーマＵ２５１細胞を示す図である（すなわち、｛ＳＴＡＴ３｝ｐｅｐｔ−ｗｔ［配列番号６］、｛ＳＴＡＴ３｝ｐｅｐｔ−ＫＲ［配列番号７］、｛ＳＴＡＴ３｝ｐｅｐｔ−ａｃｅｔ．Ｋ［配列番号３］）。ＰＳは、ペプチドがホスホロチオエート核酸によって伸長されたことを意味するが、ＰＯは、ペプチドが非ホスホロチオエート化核酸によって伸長されたことを意味する。固定した細胞は、細胞内ペプチドの局在に関して共焦点顕微鏡によって分析された。スケール２０μｍ。
【図３Ｂ】１μｇ／ｍｌのペプチドと２時間インキュベートされ、フローサイトメトリーによって分析され、改変ペプチドによる細胞の前初期細胞負荷を評価されたヒトグリオーマＵ２５１細胞を示す図である（｛ＳＴＡＴ３｝ｐｅｐｔ−ｗｔ［配列番号６］、｛ＳＴＡＴ３｝ｐｅｐｔ−ＫＲ［配列番号７］、｛ＳＴＡＴ３｝ｐｅｐｔ−ａｃｅｔ．Ｋ［配列番号３］）。
【図４】ホスホロチオエート化（ＰＳ）ｓｓＤＮＡの結合がペプチドの生体内安定性を劇的に改善することを示す図である。表示の通り、２０ｍｇ／用量によって２週間毎日全身ｉ．ｖ．処理されたマウスから単離された血漿は、末梢血流における改変ペプチドに関してウェスタンブロッティングによって分析され、ＰＳ改変によってかなり改善された生体内安定性を示した。ＰＯ−ｍｏｄ．ａｃｅｔ．ＳＴＡＴ２−ｐｅｐｔ．ＦＩＴＣは、非ホスホロチオエート化対照核酸（ＰＯ）によって伸長され、蛍光タグ（ＦＩＴＣ）を含む配列番号３の配列を指す。ＰＳ−ｍｏｄ．ａｃｅｔ．ＳＴＡＴ２−ｐｅｐｔ．ＦＩＴＣは、ホスホロチオエート化核酸（ＰＳ）によって伸長され、蛍光タグ（ＦＩＴＣ）を含む配列番号３の配列を指す。
【図５Ａ】ＳＴＡＴ３競合ペプチドが中央のリジンにおいてアセチル化されていることを示す。図５Ａは、ヒトＳＴＡＴ３タンパク質に由来するペプチド配列及びＰＳ−ｓｓＤＮＡ  ２０ｍｅｒ（配列番号１３）の非特異的配列を示す図である。リジン残基は、腫瘍並びに細胞及び組織の炎症反応においてアセチル化されることが公知である、ＳＴＡＴ３タンパク質のリジン６８５に相当するペプチドの中央に位置する。人工のリジンアセチル化競合ペプチドは抗腫瘍活性を示すが、アルギニンＲへのリジン変異（中央）又は野生型（下）に相当する配列は、腫瘍増殖キネティクスに影響しない又はわずかにしか影響しない。全てのペプチドはホスホロチオエート化ｓｓＤＮＡオリゴに伸長され、細胞内移行を促進した。
【図５Ｂ】ＳＴＡＴ３競合ペプチドが中央のリジンにおいてアセチル化されていることを示す。図５Ｂは、インビトロアッセイから示されたように、アセチル化されたＳＴＡＴ３競合ペプチドが、エキスポーチン７と結合し、ペプチドのリンカー領域に組み込まれたタグとしてＦＩＴＣフルオロフォアを使用して、ペプチドを沈殿させることを示す図である。沈殿物は、ヒトグリオーマＵ２５１細胞内のエキスポーチン７との物理的相互作用に関してウェスタンブロッティングによって分析された。
【図６Ａ】ＰＳ改変ＳＴＡＴ３競合ペプチドは、腫瘍増殖を著しく低減し、エキスポーチン７とのＳＴＡＴ３タンパク質相互作用を減少させる（競合）ことを示す図である。図６Ａは、ヒト結腸がん腫瘍担持マウスが、表示の通り、２０ｍｇのペプチドによって毎日処理され、腫瘍容積が評価された図である。ＳＤが示された。Ｔ検定：＊）Ｐ＜０．０５、＊＊）Ｐ＜０．０１。
【図６Ｂ】ＰＳ改変ＳＴＡＴ３競合ペプチドは、腫瘍増殖を著しく低減し、エキスポーチン７とのＳＴＡＴ３タンパク質相互作用を減少させる（競合）ことを示す図である。図６Ｂは、ウェスタンブロッティングによって分析される共沈殿によって、腫瘍組織ホモジネートから、ＳＴＡＴ３とエキスポーチン７の低下した相互作用が、評価された図である。
【図７Ａ】ＰＳ改変ＳＴＡＴ３競合ペプチド（ＳＴＡＴ３−ａｃｅｔ．Ｋ６８５）は、インビボでヒト結腸がん腫瘍において抗腫瘍反応を誘導した。図７Ａは、誘導されたｐ５３腫瘍抑制因子発現及び切断されたカスパーゼ３によって示された腫瘍細胞死の増加が、腫瘍ホモジネートのウェスタンブロット分析によって評価された図である。
【図７Ｂ】ＰＳ改変ＳＴＡＴ３競合ペプチド（ＳＴＡＴ３−ａｃｅｔ．Ｋ６８５）は、インビボでヒト結腸がん腫瘍において抗腫瘍反応を誘導した。図７Ｂは、Ｋｉ６７＋増殖活性及びＣＤ３１＋腫瘍血管が、共焦点顕微鏡及びその定量によって分析されたように著しく低減されたことを示す図である。スケール、１００μｍ。ＳＤが示された。Ｔ検定：＊＊）Ｐ＜０．０１、＊＊＊）Ｐ＜０．００１。
【図７Ｃ】ＰＳ改変ＳＴＡＴ３競合ペプチド（ＳＴＡＴ３−ａｃｅｔ．Ｋ６８５）は、インビボでヒト結腸がん腫瘍において抗腫瘍反応を誘導した。図７Ｃは、Ｋｉ６７＋増殖活性及びＣＤ３１＋腫瘍血管が、共焦点顕微鏡及びその定量によって分析されたように著しく低減されたことを示す図である。スケール、１００μｍ。ＳＤが示された。Ｔ検定：＊＊）Ｐ＜０．０１、＊＊＊）Ｐ＜０．００１。
【図８】ＳＴＡＴ３ペプチド配列を示す図である。ＳＴＡＴ３タンパク質のストレッチをカバーする１文字記号のアミノ酸配列が示される。さらに、ＰＳ−ｓｓＤＮＡ  ２０ｍｅｒ（配列番号１３）及びＰＯ−ｓｓＤＮＡ  ２０ｍｅｒ（配列番号１３）の非特異的配列も示される。リジンＫ６８５は改変及び人工的にアセチル化された。細胞内移行を達成するため、ペプチドはそのＣ末端において、リンカー、続いて２０ｍｅｒのｓｓＤＮＡストレッチによって伸長された。糖−リン酸主鎖が（＊）によって示されるようにホスホロチオエート化されて細胞内移行を達成することが、重要である（ＰＳ；上）。対照ペプチドはホスホロチオエート化なしで使用された（リン酸ジエステル、ＰＯ；下）。
【図９】細胞透過性、配列特異的、人工的にアセチル化されたＳＴＡＴ３−ペプチドが誘導した、腫瘍内の炎症反応に決定的に含まれる遺伝子の低下を示す図である。ヒト結腸がん腫瘍は、表示の通り、１日量１０μｇのペプチドによって局所的に処理された。処理群：ホスホロチオエート化及び人工的にアセチル化されたＳＴＡＴ３−ペプチド（ＰＳ）、人工的にアセチル化された、非細胞透過性ＳＴＡＴ３−ペプチド（ＰＯ）、又は処理なし（Ｎｏ  Ｔｘ）。腫瘍が切開されると、ｍＲＮＡが回収され、炎症反応に決定的に含まれるヒト遺伝子のレパートリーでのＲＴ−ＰＣＲが分析された。ＳＤが示された；Ｔ検定：＊）Ｐ＜０．０５、＊＊）Ｐ＜０．０１。
【図１０】細胞透過性、配列特異的、人工的にアセチル化されたＳＴＡＴ３−ペプチドが誘導した、痛みの制御に決定的に含まれる遺伝子の低下を示す図である。ヒト結腸がん腫瘍は、表示の通り、１日量１０μｇのペプチドによって局所的に処理された。処理群：ホスホロチオエート化及び人工的にアセチル化されたＳＴＡＴ３−ペプチド（ＰＳ）、人工的にアセチル化された非細胞透過性ＳＴＡＴ３−ペプチド（ＰＯ）、又は処理なし（Ｎｏ  Ｔｘ又はＮｏｎｅ）。腫瘍が切開されると、ｍＲＮＡが回収され、痛みの制御に決定的に含まれるヒト遺伝子のレパートリー（すなわち、ＰＴＧＳ１、ＰＴＧＳ２、ＳＳＴ及びＣＡＬＣＡ）でのＲＴ−ＰＣＲが分析された。ＳＤが示された；Ｔ検定：＊）Ｐ＜０．０５、＊＊）Ｐ＜０．０１。
【図１１】ＳＴＡＴ３−ペプチドが誘導したウイルス受容体の発現の低減を示す図である。ヒト結腸がん腫瘍は、表示の通り、１日量１０μｇのペプチドによって局所的に処理された。処理群：ホスホロチオエート化及び人工的にアセチル化されたＳＴＡＴ３−ペプチド（ＰＳ）、人工的にアセチル化された非細胞透過性ＳＴＡＴ３−ペプチド（ＰＯ）、又は処理なし（Ｎｏ  Ｔｘ）。腫瘍が切開されると、ｍＲＮＡが回収され、細胞へのウイルス粒子の侵入に決定的に含まれるヒト遺伝子のレパートリーでのＲＴ−ＰＣＲが分析された。ＳＤが示された；Ｔ検定：＊）Ｐ＜０．０５、＊＊＊）Ｐ＜０．００１、ＮＳ）有意ではない。
【図１２Ａ】ＰＳ−改変アセチル化ＳＴＡＴ３ペプチドは、生体内安定性及び体内分布力を改善したことを示す図である。ヒト結腸癌腫瘍担持マウスは、表示の通り、毎日の全身投与によってペプチドにより処理された。図１２Ａは、末梢血が採取され、マウス血清がＳＤＳ−ＰＡＧＥにより、電気泳動的なタンパク質分離に供され、ＰＳ−改変ＦＩＴＣ＋−ＳＴＡＴ３−ペプチドのＦＩＴＣ部分を検出することによって、ＰＳ−改変時の劇的に増加した生体内安定性を示した図である。
【図１２Ｂ−１】ＰＳ−改変アセチル化ＳＴＡＴ３ペプチドは、生体内安定性及び体内分布力を改善したことを示す図である。ヒト結腸癌腫瘍担持マウスは、表示の通り、毎日の全身投与によってペプチドにより処理された。図１２Ｂは、表示の臓器を、表示の通りの全身ペプチド処理の際に切除し、ペプチドの蓄積について分析して、保留されるＰＳ−改変ＳＴＡＴ３ペプチドのみを示した図である。ＣＤ３１＋血管を、潜在的な血管損傷を可視化するために含めた。
【図１２Ｂ−２】ＰＳ−改変アセチル化ＳＴＡＴ３ペプチドは、生体内安定性及び体内分布力を改善したことを示す図である。ヒト結腸癌腫瘍担持マウスは、表示の通り、毎日の全身投与によってペプチドにより処理された。図１２Ｂは、表示の臓器を、表示の通りの全身ペプチド処理の際に切除し、ペプチドの蓄積について分析して、保留されるＰＳ−改変ＳＴＡＴ３ペプチドのみを示した図である。ＣＤ３１＋血管を、潜在的な血管損傷を可視化するために含めた。
【図１３Ａ】ＩＬ−６Ｒベータ（ｇｐ１３０）ペプチド配列。図１３Ａは、ｇｐ１３０タンパク質のストレッチをカバーする１文字記号のアミノ酸配列を示す図である。ＳＴＡＴ３ドッキング部位は改変され、人工的にリン酸化された。細胞内移行を達成するため、ペプチドはそのＣ末端において、リンカー、続いて２０ｍｅｒのｓｓＤＮＡストレッチによって伸長された。糖−リン酸主鎖が（＊）によって示されるようにホスホロチオエート化されて、細胞内移行を達成することが、重要である（ＰＳ；上）。ＰＳ−ｓｓＤＮＡ  ２０ｍｅｒの２つの非特異的配列（配列番号１３及び配列番号１４）も示される。
【図１３Ｂ】ＩＬ−６Ｒベータ（ｇｐ１３０）ペプチド配列。図１３Ｂは、ＳＴＡＴ３動員及び非チロシンリン酸化ＳＴＡＴ３に決定的な要因になる受容体による活性化に競合するペプチドモチーフの設計に使用された、ｇｐ１３０におけるＳＴＡＴ３動員部位を強調する概略図である。
【図１４Ａ】腫瘍細胞によるｇｐ１３０−ペプチド内部移行を示す図である。図１４Ａは、ヒト多発性骨髄腫細胞ＭＭ．１Ｓが、表示の通り、０．５μＭのホスホロチオエート伸長されたｇｐ１３０−ペプチド（すなわち、ＰＳ−２２６３１６５はホスホロチオエート伸長された配列番号４であり、ＰＳ−１２０９１９６はホスホロチオエート伸長された配列番号８であり、ＰＳ−２２６３１６３はホスホロチオエート伸長された配列番号９である。）によって、３０又は９０分のいずれかの間処理され、細胞の内部移行がフローサイトメトリーによって評価された図である。
【図１４Ｂ】腫瘍細胞によるｇｐ１３０−ペプチド内部移行を示す図である。図１４Ｂは、ヒト肝癌細胞ＨｅｐＧ２細胞が、表示の通り、１．０μＭのｇｐ１３０−ペプチド（すなわち、ＰＳ−２２６３１６５はホスホロチオエート伸長された配列番号４であり、ＰＳ−１２０９１９６はホスホロチオエート伸長された配列番号８であり、ＰＳ−２２６３１６３はホスホロチオエート伸長された配列番号９である。）によって、６０分又は９０分のいずれかの間処理され、細胞の内部移行が共焦点顕微鏡によって評価された図である。
【図１５】がん細胞のｇｐ１３０−ペプチド処理が、ＩＬ−６／ｇｐ１３０／ＳＴＡＴ３標的遺伝子を著しく低減することを示す図である。ヒト肝癌細胞ＨｅｐＧ２は、表示の通り、１．０μＭのｇｐ１３０−ペプチド（すなわち、ＩＬ６−６５はホスホロチオエート伸長された配列番号４を表し、ＩＬ６−９６はホスホロチオエート伸長された配列番号８を表し、ＩＬ−６３はホスホロチオエート伸長された配列番号９を表す。）によって、２４時間ＩＬ−６刺激により処理された。ｍＲＮＡが単離され、標的遺伝子発現がＲＴ−ＰＣＲによって評価された。ＳＤが示された；Ｔ検定：＊）Ｐ＜０．０５、＊＊）Ｐ＜０．０１、＊＊＊）Ｐ＜０．００１。
【図１６】がん細胞のｇｐ１３０−ペプチド処理が、ｐＹ−ＳＴＡＴ３活性化を阻害することを示す図である。ヒト肝癌細胞ＨｅｐＧ２は、表示の通り、１．０μＭのｇｐ１３０−ペプチド（すなわち、２２６３１６５はホスホロチオエート伸長された配列番号４であり、１２０９１９６はホスホロチオエート伸長された配列番号８であり、２２６３１６３はホスホロチオエート伸長された配列番号９である。）によって、ＩＬ−６刺激前に３０分間処理された。全細胞ライセートは電気泳動的タンパク質分離に供され、ＳＴＡＴ３活性がリン酸化チロシンを検出するウェスタンブロットによって評価された。全ＳＴＡＴ３タンパク質染色がローディング対照として含められた。全部で３つの改変ｇｐ１３０−ペプチドが、がん細胞におけるｐＹ−ＳＴＡＴ３レベルに阻害効果を示す。
【図１７】がん細胞のｇｐ１３０−ペプチド処理が、ＩＬ−６／ｇｐ１３０シグナル伝達を特異的に阻害するが、ＥＧＦＲシグナル伝達は阻害しないことを示す図である。ヒト肝癌細胞ＨｅｐＧ２は、表示の通り、１．０μＭのｇｐ１３０−ペプチド（すなわち、６５はホスホロチオエート伸長された配列番号４であり、９６はホスホロチオエート伸長された配列番号８であり、６３はホスホロチオエート伸長された配列番号９である。）によって、ＩＬ−６又はＥＧＦいずれかの刺激前に３０分間処理された。全細胞ライセートは電気泳動的タンパク質分離に供され、ＳＴＡＴ３並びにＭＡＰＫ（ｐ４２／４４）活性がウェスタンブロットによって評価された。全ＳＴＡＴ３及びＭＡＰＫ（ｐ４２／４４）タンパク質染色がローディング対照として含められた。
【図１８】がん細胞のｇｐ１３０−ペプチド処理が、ＩＬ−６／ｇｐ１３０／ＳＴＡＴ３標的遺伝子を著しく低減することを示す図である。ヒト肝癌細胞ＨｅｐＧ２は、表示の通り、１．０μＭのｇｐ１３０−ペプチド（すなわち、ＩＬ６−６５はホスホロチオエート伸長された配列番号４を表し、ＩＬ６−９６はホスホロチオエート伸長された配列番号８を表し、ＩＬ−６３はホスホロチオエート伸長された配列番号９を表す。）によって、ＩＬ−６刺激時に２４時間処理された。ｍＲＮＡが単離され、標的遺伝子発現がＲＴ−ＰＣＲによって評価された。ＳＤが示された；Ｔ検定：＊＊＊）Ｐ＜０．００１。
【図１９Ａ】改変ＳＴＡＴ３ペプチドによる全身処理は腫瘍増殖を低減する。Ｂ１６マウスメラノーマ細胞系は、Ｃ５７ＢＬ／６マウスに後眼窩注射された。腫瘍注射１日後、マウスは１９μＭ（１９μＭ＝４０μｇ／マウス）の対照−改変ＳＴＡＴ３ペプチド、改変ＳＴＡＴ３ペプチド及び（ＨＢＳＳ）によって、対照マウスが瀕死の状態になるまで毎日処理された。図１９Ａは、上記のように処理されたマウスから切除された代表的な肺組織を示す図である。
【図１９Ｂ】改変ＳＴＡＴ３ペプチドによる全身処理は腫瘍増殖を低減する。Ｂ１６マウスメラノーマ細胞系は、Ｃ５７ＢＬ／６マウスに後眼窩注射された。腫瘍注射１日後、マウスは１９μＭ（１９μＭ＝４０μｇ／マウス）の対照−改変ＳＴＡＴ３ペプチド、改変ＳＴＡＴ３ペプチド及び（ＨＢＳＳ）によって、対照マウスが瀕死の状態になるまで毎日処理された。１９Ｂは、コロニーの平均数（ｎ＝５）を示す図である。
【図１９Ｃ】改変ＳＴＡＴ３ペプチドによる全身処理は腫瘍増殖を低減する。Ｂ１６マウスメラノーマ細胞系は、Ｃ５７ＢＬ／６マウスに後眼窩注射された。腫瘍注射１日後、マウスは１９μＭ（１９μＭ＝４０μｇ／マウス）の対照−改変ＳＴＡＴ３ペプチド、改変ＳＴＡＴ３ペプチド及び（ＨＢＳＳ）によって、対照マウスが瀕死の状態になるまで毎日処理された。１９Ｃは、上記のように処理されたマウスから切除された代表的な肺組織を示す図である。
【図２０Ａ】ホスホロチオエート化ＤＮＡオリゴヌクレオチド（ＰＳ）をコンジュゲートすることは、アセチル−ＳＴＡＴ３ペプチド細胞透過及びＳＴＡＴ３及びエキスポーチン７タンパク質との特異的相互作用、並びにＳＴＡＴ３活性化の下方制御を可能にする。図２０Ａは、フローサイトメトリーによって評価したように、ホスホロチオエート化ＤＮＡオリゴヌクレオチド−改変ＳＴＡＴ３ペプチドが、ヒトグリオーマ細胞系Ｕ２５１及びヒト結腸がん細胞系ＨＣＴ１１６に効率的に透過することを示す図である。
【図２０Ｂ】ホスホロチオエート化ＤＮＡオリゴヌクレオチド（ＰＳ）をコンジュゲートすることは、アセチル−ＳＴＡＴ３ペプチド細胞透過及びＳＴＡＴ３及びエキスポーチン７タンパク質との特異的相互作用、並びにＳＴＡＴ３活性化の下方制御を可能にする。図２０Ｂは、ＰＳ−アセチル−ＳＴＡＴ３ペプチドの、細胞透過及びＵ２５１細胞におけるＳＴＡＴ３タンパク質とのその局在を、共焦点顕微鏡によって示した図である。スケール、５０μｍ。
【図２０Ｃ】ホスホロチオエート化ＤＮＡオリゴヌクレオチド（ＰＳ）をコンジュゲートすることは、アセチル−ＳＴＡＴ３ペプチド細胞透過及びＳＴＡＴ３及びエキスポーチン７タンパク質との特異的相互作用、並びにＳＴＡＴ３活性化の下方制御を可能にする。図２０Ｃは、ＰＳアセチル−ＳＴＡＴ３ペプチドが、プレートがアセチル化−ＳＴＡＴ３タンパク質（アミノ酸１２７〜７２２を含有する）によってコートされ、ｎ＝３であるＥＬＩＳＡによって評価したようにアセチル化ＳＴＡＴ３タンパク質及びエキスポーチン７に特異的に結合することを示す図である。
【図２０Ｄ】ホスホロチオエート化ＤＮＡオリゴヌクレオチド（ＰＳ）をコンジュゲートすることは、アセチル−ＳＴＡＴ３ペプチド細胞透過及びＳＴＡＴ３及びエキスポーチン７タンパク質との特異的相互作用、並びにＳＴＡＴ３活性化の下方制御を可能にする。図２０Ｄは、ＰＳアセチル−ＳＴＡＴ３ペプチドが、プレートがアセチル化−ＳＴＡＴ３タンパク質（アミノ酸１２７〜７２２を含有する）によってコートされ、ｎ＝３であるＥＬＩＳＡによって評価したようにアセチル化ＳＴＡＴ３タンパク質及びエキスポーチン７に特異的に結合することを示す図である。
【図２０Ｅ】ホスホロチオエート化ＤＮＡオリゴヌクレオチド（ＰＳ）をコンジュゲートすることは、アセチル−ＳＴＡＴ３ペプチド細胞透過及びＳＴＡＴ３及びエキスポーチン７タンパク質との特異的相互作用、並びにＳＴＡＴ３活性化の下方制御を可能にする。図２０Ｅは、Ｕ２５１細胞において示した、ＦＩＴＣ−標識ＰＳ−アセチル−ＳＴＡＴ３ペプチドの免疫沈降後、ウェスタンブロッティングによって示されたアセチル−ＳＴＡＴ３ペプチドとＳＴＡＴ３／エキスポーチン７との間の特異的相互作用を示す図である。
【図２０Ｆ】ホスホロチオエート化ＤＮＡオリゴヌクレオチド（ＰＳ）をコンジュゲートすることは、アセチル−ＳＴＡＴ３ペプチド細胞透過及びＳＴＡＴ３及びエキスポーチン７タンパク質との特異的相互作用、並びにＳＴＡＴ３活性化の下方制御を可能にする。図２０Ｆは、Ｕ２５１細胞において示した、ＦＩＴＣ−標識ＰＳ−アセチル−ＳＴＡＴ３ペプチドの免疫沈降後、ウェスタンブロッティングによって示されたアセチル−ＳＴＡＴ３ペプチドとＳＴＡＴ３／エキスポーチン７との間の特異的相互作用を示す図である。
【図２０Ｇ】ホスホロチオエート化ＤＮＡオリゴヌクレオチド（ＰＳ）をコンジュゲートすることは、アセチル−ＳＴＡＴ３ペプチド細胞透過及びＳＴＡＴ３及びエキスポーチン７タンパク質との特異的相互作用、並びにＳＴＡＴ３活性化の下方制御を可能にする。図２０Ｇは、免疫沈降／ウェスタンブロッティングによるＨＣＴ１１６腫瘍において示された、ＳＴＡＴ３リン酸化の下方制御を示す図である。
【図２０Ｈ】ホスホロチオエート化ＤＮＡオリゴヌクレオチド（ＰＳ）をコンジュゲートすることは、アセチル−ＳＴＡＴ３ペプチド細胞透過及びＳＴＡＴ３及びエキスポーチン７タンパク質との特異的相互作用、並びにＳＴＡＴ３活性化の下方制御を可能にする。図２０Ｈは、ＰＳ−アセチル−ＳＴＡＴ３ペプチド処理がＨＣＴ１１６結腸直腸がん細胞のアポトーシスを誘導することを示す図である。
【図２０Ｉ】ホスホロチオエート化ＤＮＡオリゴヌクレオチド（ＰＳ）をコンジュゲートすることは、アセチル−ＳＴＡＴ３ペプチド細胞透過及びＳＴＡＴ３及びエキスポーチン７タンパク質との特異的相互作用、並びにＳＴＡＴ３活性化の下方制御を可能にする。図２０Ｉは、処理の２４時間後に回収されたＣ５７ＢＬ／６マウスの血清において、ＦＩＴＣ標識ペプチドを検出するウェスタンブロッティングによって示した、ホスホロチオエートＤＮＡオリゴヌクレオチドをアセチル−ＳＴＡＴ３ペプチドにコンジュゲートすることが、この生体内安定性を増加することを示す図である。
【図２１Ａ】ＰＳ−アセチル−ＳＴＡＴ３ペプチドによる処理は、ＨＣＴ１１６異種移植片腫瘍の増殖を抑制する。図２１Ａは、１日置きに（ｎ＝５）、ＰＳオリゴヌクレオチドコンジュゲートあり又はなしで、アセチル−ＳＴＡＴ３ペプチド（１８．９４０μＭ）によって全身処理されたＮＳＧマウスにおけるＨＣＴ１１６腫瘍の増殖キネティクスを示す図である。ＳＤが示された；Ｔ検定：＊＊＊；Ｐ＜０．００１、＊＊，Ｐ＜０．０１；＊，Ｐ＜０．０５。
【図２１Ｂ】ＰＳ−アセチル−ＳＴＡＴ３ペプチドによる処理は、ＨＣＴ１１６異種移植片腫瘍の増殖を抑制する。図２１Ｂは、免疫沈降後のウェスタンブロッティングによって示したように、ＰＳ−アセチル−ＳＴＡＴ３ペプチドによる処理時のＳＴＡＴ３活性の下方制御を示す図である。
【図２１Ｃ】ＰＳ−アセチル−ＳＴＡＴ３ペプチドによる処理は、ＨＣＴ１１６異種移植片腫瘍の増殖を抑制する。図２１Ｃは、Ａに示す腫瘍からの腫瘍ホモジネートにおけるｑＲＴ−ＰＣＲによって評価したように、増殖及びアポトーシス関連遺伝子の発現へのＳＴＡＴ３活性の下方制御の効果を示す図である。対照マウスからの腫瘍組織におけるｍＲＮＡ発現レベルは１と設定される。Ｔ検定；＊＊＊；Ｐ＜０．００１；＊＊，Ｐ＜０．０１；＊，Ｐ＜０．０５。
【図２１Ｄ】ＰＳ−アセチル−ＳＴＡＴ３ペプチドによる処理は、ＨＣＴ１１６異種移植片腫瘍の増殖を抑制する。図２１Ｄは、Ｈ＆Ｅ染色後の共焦点画像解析（上のパネル）、及び腫瘍切片におけるＫｉ−６７及びＣＤ−３１タンパク質の免疫染色（下のパネル）によって示したように、ＰＳ−アセチル−ＳＴＡＴ３ペプチドによる処理が、アポトーシスを誘導し、増殖及び腫瘍における血管新生を阻害することを示す図である。画像はＡの実験群当たり３つの腫瘍の代表である。スケールバー：５０μｍ。グラフは、Ｋｉ−６７発現レベル及び平均血管直径の定量を示す（データは群当たり６視野を含む。）。ＳＤが示された。＊＊Ｐ＜０．０１。
【図２２Ａ】ＰＳ−アセチル−ＳＴＡＴ３ペプチドの二量体化はこの抗腫瘍効果を増加する。図２２Ａは、非ホスホロチオエート化（ＰＯ）及びホスホロチオエート化ＤＮＡオリゴヌクレオチド−改変アセチル−ＳＴＡＴ３ペプチドの構造を示す図である。ペプチドの二量体化は、アンチセンス及びセンスＤＮＡオリゴをアニーリングすることによって達成された。
【図２２Ｂ】ＰＳ−アセチル−ＳＴＡＴ３ペプチドの二量体化はこの抗腫瘍効果を増加する。図２２Ｂは、非ホスホロチオエート化及びホスホロチオエート化ＤＮＡオリゴヌクレオチド−改変ペプチドの二量体化がＳＤＳ−ＰＡＧＥによって示された図である。
【図２２Ｃ】ＰＳ−アセチル−ＳＴＡＴ３ペプチドの二量体化はこの抗腫瘍効果を増加する。図２２Ｃは、フローサイトメトリーによって評価された、二量体化がペプチドの細胞透過を増強することを示す図である。
【図２２Ｄ】ＰＳ−アセチル−ＳＴＡＴ３ペプチドの二量体化はこの抗腫瘍効果を増加する。図２２Ｄは、ＮＳＧマウス（ｎ＝５）におけるＨＣＴ１１６腫瘍増殖に示された二量体化ＰＳ−アセチル−ＳＴＡＴ３ペプチドの増強した抗腫瘍効果を示す図である。Ｔ検定；＊＊，Ｐ＜０．０１；＊，Ｐ＜０．０５。
【図２２Ｅ】ＰＳ−アセチル−ＳＴＡＴ３ペプチドの二量体化はこの抗腫瘍効果を増加する。図２２Ｅは、Ｅの腫瘍からの腫瘍ホモジネートによる免疫沈降及びウェスタンブロッティングによって分析したように、二量体化ＰＳ−アセチル−ＳＴＡＴ３ペプチドが、この単量体対応物よりもｐＹ７０５−ＳＴＡＴ３をより効果的に下方制御し（上のパネル）、ｐ５３発現を誘導する（下のパネル）ことを示す図である。
【図２２Ｆ】表示のＳＴＡＴ３ペプチドによって処理されたＨＣＴ１１６腫瘍組織における、ＳＴＡＴ３制御されたアポトーシス促進及び生存促進性の遺伝子のｍＲＮＡレベルを示すｑＲＴ−ＰＣＲを示す図である。対照ビヒクルによって処理された腫瘍組織におけるｍＲＮＡ発現レベルは１と設定された。Ｔ検定；＊＊＊；Ｐ＜０．００１；＊＊，Ｐ＜０．０１；＊，Ｐ＜０．０５。
【図２２Ｇ】ＰＳ−アセチル−ＳＴＡＴ３ペプチドの二量体化はこの抗腫瘍効果を増加する。図２２Ｇは、ｑＲＴ−ＰＣＲによって評価された、二量体化ＰＳ−アセチル−ＳＴＡＴ３ペプチドの標的効果を示す図である。グラフは、ビヒクルと比較して、二量体化ＰＳ−アセチル−ＳＴＡＴ３ペプチドによって処理されたＨＣＴ１１６腫瘍組織におけるＪＡＫ／ＳＴＡＴ３シグナル伝達経路の下流遺伝子の差次的発現を示す。
【図２２Ｈ】ＰＳ−アセチル−ＳＴＡＴ３ペプチドの二量体化はこの抗腫瘍効果を増加する。図２２Ｈは、Ｅに示した腫瘍からの腫瘍切片の免疫組織化学分析後の共焦点顕微鏡画像を示す図である。二量体化ＰＳ−アセチル−ＳＴＡＴ３ペプチドの抗腫瘍効果がこの単量体対応物と比較された。画像は、実験群当たり３つの腫瘍の代表である。スケールバー：５０μＭ（上のパネル）。下のパネルは、定量化したＫｉ−６７タンパク質レベル並びに血管直径の平均を示す（データは群当たり５視野を含む。）を示す。
【図２３Ａ】ＰＳ−アセチル−ＳＴＡＴ３ペプチドによる全身処理は、マウスメラノーマ肺転移を低減し、ＣＤ８＋Ｔ細胞活性を促進する。図２３Ａは、フローサイトメトリーによって評価したように、インビトロでのＰＳ−アセチル−ＳＴＡＴ３ペプチドのＣＤ８＋Ｔ細胞への透過を示す図である。ＣＤ８＋Ｔ細胞は、Ｃ５７ＢＬ／６マウスの脾臓から単離された。
【図２３Ｂ】ＰＳ−アセチル−ＳＴＡＴ３ペプチドによる全身処理は、マウスメラノーマ肺転移を低減し、ＣＤ８＋Ｔ細胞活性を促進する。図２３Ｂは、ＳＴＡＴ３阻害から予測されたように、ＥＬＩＳＡが、ＰＳ−アセチル−ＳＴＡＴ３ペプチドによる脾臓のＣＤ８＋Ｔ細胞の処理がＩＦＮγ及びＩＬ−２発現を上方制御することを示す図である。Ｔ検定；＊＊＊；Ｐ＜０．００１。アッセイは３回行われた。
【図２３Ｃ】ＰＳ−アセチル−ＳＴＡＴ３ペプチドによる全身処理は、マウスメラノーマ肺転移を低減し、ＣＤ８＋Ｔ細胞活性を促進する。図２３Ｃは、ウェスタンブロッティングによって分析されたように、対照と比較して、ＰＳ−アセチル−ＳＴＡＴ３ペプチドによって処理された脾臓のＣＤ８＋Ｔ細胞におけるＩＬ−６誘導性ｐＹ７０５−ＳＴＡＴ３の下方制御を示す図である。
【図２３Ｄ】ＰＳ−アセチル−ＳＴＡＴ３ペプチドによる全身処理は、マウスメラノーマ肺転移を低減し、ＣＤ８＋Ｔ細胞活性を促進する。図２３Ｄは、ＰＳ−アセチル−ＳＴＡＴ３ペプチドが、対照処理と比較して、同系マウスモデルにおけるＢ１６肺小結節を低減する（左のパネル）ことを示す図である。右のパネルは、示したＳＴＡＴ３ペプチド及びビヒクルによって処理されたマウスにおける肺小結節の数を示す（ｎ＝５）。Ｔ検定；＊＊，Ｐ＜０．０１、＊，Ｐ＜０．０５。ｎ．ｓ：有意ではない。
【図２３Ｅ】ＰＳ−アセチル−ＳＴＡＴ３ペプチドによる全身処理は、マウスメラノーマ肺転移を低減し、ＣＤ８＋Ｔ細胞活性を促進する。図２３Ｅは、ビヒクル、ＰＯ−及びＰＳ−アセチル−ＳＴＡＴ３ペプチドによる処理時にＢ１６肺小結節（Ｄと同じ）においてＣＤ８＋Ｔ細胞及びＣＤ４＋ＦｏｘＰ３＋Ｔ細胞集団に浸潤するＣＤ６９＋腫瘍を検出する、免疫化学染色後の共焦点顕微鏡を示す図である。画像は実験群当たり３つの肺の代表である。グラフは、ＣＤ８、ＣＤ６９及びＦｏｘＰ３＋発現レベルの定量を示す（データは群当たり６視野を含む。）。ＳＤが示される。＊＊＊；Ｐ＜０．００１；＊，Ｐ＜０．０５。
【図２３Ｆ】ＰＳ−アセチル−ＳＴＡＴ３ペプチドによる全身処理は、マウスメラノーマ肺転移を低減し、ＣＤ８＋Ｔ細胞活性を促進する。図２３Ｆは、ビヒクル、ＰＯ−及びＰＳ−アセチル−ＳＴＡＴ３ペプチドによる処理時にＢ１６肺小結節（Ｄと同じ）においてＣＤ８＋Ｔ細胞及びＣＤ４＋ＦｏｘＰ３＋Ｔ細胞集団に浸潤するＣＤ６９＋腫瘍を検出する、免疫化学染色後の共焦点顕微鏡を示す図である。画像は実験群当たり３つの肺の代表である。グラフは、ＣＤ８、ＣＤ６９及びＦｏｘＰ３＋発現レベルの定量を示す（データは群当たり６視野を含む。）。ＳＤが示された。＊＊＊；Ｐ＜０．００１；＊，Ｐ＜０．０５。
【図２４Ａ】ＰＳ−アセチル−ＳＴＡＴ３ペプチド透過及び生体内機能性。図２４Ａは、改変ＳＴＡＴ３ペプチドの構造を示す図である。
【図２４Ｂ】ＰＳ−アセチル−ＳＴＡＴ３ペプチド透過及び生体内機能性。図２４Ｂは、免疫蛍光法によって示されたように、ＰＳ−ＳＴＡＴ３ペプチドがＨＣＴ１１６がん細胞に透過することを示す図である。スケールバー：２０μｍ。
【図２４Ｃ】ＰＳ−アセチル−ＳＴＡＴ３ペプチド透過及び生体内機能性。図２４Ｃは、ウェスタンブロッティングによって評価されたように、ＰＳ−アセチル−ＳＴＡＴ３ペプチドによる処理がＨＣＴ１１６結腸がん細胞におけるｐ５３過剰発現を誘導することを示す図である。
【図２５Ａ】ＰＳ−アセチル−ＳＴＡＴ３ペプチド処理は、ＨＣＴ１１６結腸腫瘍の増殖を抑制する。図２５Ａは、マウスが５×１０６個のＨＣＴ１１６細胞により負荷された７日後に開始する、１８．９４０μＭ  ＰＳ−ＳＴＡＴ３−ＷＴ、ＰＳ−ＳＴＡＴ３−Ｋ６８５Ｒ又はＰＳ−ＳＴＡＴ３−ａｃｅｔ．−Ｋ６８５ペプチドによるＮＳＧマウスの皮下（ｓ．ｃ．）ＨＣＴ１１６腫瘍の腫瘍周辺処理を示す図である、ｎ＝４。処理は毎日行われた。ＳＤが示された。＊＊＊；Ｐ＜０．００１；＊＊，Ｐ＜０．０１；＊，Ｐ＜０．０５。
【図２５Ｂ】ＰＳ−アセチル−ＳＴＡＴ３ペプチド処理は、ＨＣＴ１１６結腸腫瘍の増殖を抑制する。図２５Ｂは、ウェスタンブロッティングが、示したアセチル−ＳＴＡＴ３ペプチドによる処理時のＳＴＡＴ３活性レベルを示す図である。
【図２５Ｃ】ＰＳ−アセチル−ＳＴＡＴ３ペプチド処理は、ＨＣＴ１１６結腸腫瘍の増殖を抑制する。図２５Ｃは、Ａに示した腫瘍から調製された腫瘍ホモジネートを使用するｑＲＴ−ＰＣＲによって評価されたように、ＳＴＡＴ３下流の増殖及びアポトーシス関連遺伝子のｍＲＮＡレベルを示す図である。対照ビヒクルによって処理された腫瘍におけるｍＲＮＡ発現レベルは１と設定された。Ｔ検定；＊＊＊；Ｐ＜０．００１；＊＊，Ｐ＜０．０１；＊，Ｐ＜０．０５。
【図２５Ｄ】ＰＳ−アセチル−ＳＴＡＴ３ペプチド処理は、ＨＣＴ１１６結腸腫瘍の増殖を抑制する。図２５Ｄは、ウェスタンブロッティングによって評価された、Ａに示した腫瘍からのＨＣＴ１１６腫瘍ホモジネートにおけるアポトーシス促進タンパク質、ｐ５３及びｃｌ．カスパーゼ３の上方制御を示す図である。
【図２５Ｅ】ＰＳ−アセチル−ＳＴＡＴ３ペプチド処理は、ＨＣＴ１１６結腸腫瘍の増殖を抑制する。図２５Ｅは、ＰＳ−アセチル−ＳＴＡＴ３ペプチドが、Ａに示したＨＣＴ１１６腫瘍に透過し、免疫組織化学染色後に共焦点顕微鏡によって可視化されたように腫瘍Ｋｉ−６７及びＣＤ３１タンパク質を下方制御することを示す図である。スケールバー：１００μｍ。処理した腫瘍におけるＫｉ−６７及びＣＤ３１タンパク質の定量は右のパネルに示された。グラフはＫｉ−６７及びＣＤ３１の定量を示す（データは群当たり６視野を含む。）。ＳＤが示された。＊＊Ｐ＜０．０１；＊＊＊Ｐ＜０．００１。
【図２６Ａ】非ホスホロチオエート化（ＰＯ）アセチル−ＳＴＡＴ３ペプチドは、腫瘍増殖に阻害効果を示さない。図２６Ａは、増殖キネティクスが、１８．９４０μＭ  ＰＯ−又はＰＳ−アセチル−ＳＴＡＴ３ペプチドによって局所的に毎日処理されたＮＳＧマウスにおけるＨＣＴ１１６腫瘍を示す図である（ｎ＝４）。ＳＤはアスタリスクによって示された。Ｔ検定；＊Ｐ＜０．０５。
【図２６Ｂ】非ホスホロチオエート化（ＰＯ）アセチル−ＳＴＡＴ３ペプチドは、腫瘍増殖に阻害効果を示さない。図２６Ｂは、Ａに示した腫瘍から調製された腫瘍ホモジネートを使用する免疫沈降及びウェスタンブロッティングによって示されたように、ＰＳ−アセチル−ＳＴＡＴ３ペプチドがエキスポーチン７に結合することを示す図である。
【図２６Ｃ】非ホスホロチオエート化（ＰＯ）アセチル−ＳＴＡＴ３ペプチドは、腫瘍増殖に阻害効果を示さない。図２６Ｃは、Ｈ＆Ｅ染色（上のパネル）並びにチトクロムＣ及びラミンＢ１タンパク質発現レベル（中央及び下のパネル）によって示されたように、ＰＳ−アセチル−ＳＴＡＴ３ペプチドによる処理が腫瘍アポトーシスを誘導することを示す図である。パネルは、各実験群からの３つの腫瘍からの代表的な画像を示す。スケールバー：２０μｍ。チトクロムＣ及びラミンＢ１の定量は、右のパネルに示された（データは群当たり５視野を含む。）。ＳＤが示された。＊＊Ｐ＜０．０１。
【図２６Ｄ】非ホスホロチオエート化（ＰＯ）アセチル−ＳＴＡＴ３ペプチドは、腫瘍増殖に阻害効果を示さない。図２６Ｄは、共焦点顕微鏡によって分析されたように、ビヒクル、ＰＯ−又はＰＳ−アセチル−ＳＴＡＴ３ペプチドによって処理された腫瘍におけるＫｉ−６７及びＣＤ３１タンパク質発現レベルを示す図である。スケールバー：１００μｍ。右のパネルは、Ｋｉ−６７タンパク質レベルの定量及び血管直径の平均（データは群当たり５視野を含む。）を示す。ＳＤが示された。＊＊＊；Ｐ＜０．００１；＊＊，Ｐ＜０．０１；＊，Ｐ＜０．０５。
【図２６Ｅ】非ホスホロチオエート化（ＰＯ）アセチル−ＳＴＡＴ３ペプチドは、腫瘍増殖に阻害効果を示さない。図２６Ｅは、Ａに示した腫瘍におけるｐ５３及びｃｌ．カスパーゼ３の過剰発現を示すウェスタンブロッティングを示す図である（左のパネル）。ＰＳ−アセチル−ＳＴＡＴ３ペプチドによって処理されたＨＣＴ１１６腫瘍におけるｐ５３タンパク質の発現の増加は、免疫組織化学染色後、共焦点顕微鏡画像解析によって示された。画像は、実験群当たり３つの腫瘍からの腫瘍切片を表す（ｎ＝３）。スケール；２０μｍ。
【図２６Ｆ】非ホスホロチオエート化（ＰＯ）アセチル−ＳＴＡＴ３ペプチドは、腫瘍増殖に阻害効果を示さない。図２６Ｆは、上記の同じ腫瘍組織におけるＣＡＳＰ９、ＢＩＲＣ５及びＢｃｌ２Ｌ１のｍＲＮＡレベルがｑＲＴ−ＰＣＲによって評価された図である。ペプチド処理なしでの腫瘍からの同じ遺伝子のｍＲＮＡレベルは１と設定された。ＳＤが示された。＊＊＊Ｐ＜０．００１。
【図２７】ＪＡＫ−ＳＴＡＴ３シグナル伝達アレイ。図２７は、「ＪＡＫ−ＳＴＡＴ３経路」遺伝子セットにおける遺伝子のヒートマップを示す図である。上から下までの色スペクトルは、ビヒクルと比較して、二量体化ＰＳ−アセチル−ＳＴＡＴ３ペプチドによる処理時にＪＡＫ−ＳＴＡＴ３下流遺伝子の低い発現から高い発現を示す。
【図２８Ａ】ＰＳ−アセチル−ＳＴＡＴ３ペプチドによる全身処理は、パクリタキセル耐性ＴＮＢＣ異種移植片腫瘍増殖を抑制する。図２８Ａは、ＮＳＧマウスにおけるパクリタキセル耐性ＭＤＡ−ＭＢ−２３１  ＴＮＢＣ腫瘍の増殖キネティクスを示す図である。腫瘍は、ビヒクル（ＨＢＳＳ−／−）及びＰＳ−アセチル−ＳＴＡＴ３ペプチドによって１日置きに全身的に処理された。
【図２８Ｂ】ＰＳ−アセチル−ＳＴＡＴ３ペプチドによる全身処理は、パクリタキセル耐性ＴＮＢＣ異種移植片腫瘍増殖を抑制する。図２８Ｂは、Ａに示したＴＮＢＣ腫瘍において、ＰＳ−アセチル−ＳＴＡＴ３ペプチドによるＳＴＡＴ３リン酸化の下方制御を示す図である。
【図２８Ｃ】ＰＳ−アセチル−ＳＴＡＴ３ペプチドによる全身処理は、パクリタキセル耐性ＴＮＢＣ異種移植片腫瘍増殖を抑制する。図２８Ｃは、表示の免疫化学染色の共焦点画像が、Ａに示した腫瘍組織におけるアポトーシス及び増殖程度を示す図である（左のパネル）。画像は、実験群当たり３つの腫瘍からの組織切片を代表的に示す。スケール：５０及び１００μｍ。右のパネルは、Ｋｉ６７発現レベルの定量である（データは、群当たり６視野を含む。）。ＳＤが示される。＊＊＊；Ｐ＜０．００１。
【図２８Ｄ】ＰＳ−アセチル−ＳＴＡＴ３ペプチドによる全身処理は、パクリタキセル耐性ＴＮＢＣ異種移植片腫瘍増殖を抑制する。図２８Ｄは、ｑＲＴ−ＰＣＲが、ＴＮＢＣ腫瘍組織において、示した増殖及びアポトーシス遺伝子のｍＲＮＡレベルを示す図である。マウスからの腫瘍組織におけるペプチド処理なしでのｍＲＮＡ発現レベルは１と設定された。ＳＤが示された。＊＊＊，Ｐ＜０．００１；＊＊，Ｐ＜０．０１；＊，Ｐ＜０．０５。
【図２９Ａ】細胞透過Ｇｐ１３０阻害ペプチド（すなわち、Ｇｐ１３０ペプチド）及びｃ−ＭＹＣ−阻害ペプチド（すなわち、ｃＭＹＣ結合ペプチド）（配列番号１０）の組合せ処理は、膵臓がんの同系マウスモデルにおける腫瘍増殖を抑制する。図２９Ａは、Ｗ７６９６４（マウス膵臓がん細胞系）細胞におけるＦＩＴＣ−ＰＳ−ＧＰ１３０−阻害ペプチド及びＰＳ−ｃＭＹＣ−阻害ペプチドの細胞透過を示す図である。ｃ−ＭＹＣ阻害ペプチドはｃ−ＭＹＣタンパク質に直接結合し、全長ｃ−ＭＹＣのＭａｘとの相互作用を阻害し、したがってｃ−ＭＹＣ−Ｍａｘ二量体化をブロックする。１×１０６個の細胞は１０μｇのＰＳ−ＧＰ１３０−ペプチド又はＰＳ−ｃ−ＭＹＣ−ペプチドと３７℃で２時間インキュベートされた。細胞透過の効率はフローサイトメトリーによって決定された。
【図２９Ｂ】細胞透過Ｇｐ１３０阻害ペプチド（すなわち、Ｇｐ１３０ペプチド）及びｃ−ＭＹＣ−阻害ペプチド（すなわち、ｃＭＹＣ結合ペプチド）（配列番号１０）の組合せ処理は、膵臓がんの同系マウスモデルにおける腫瘍増殖を抑制する。図２９Ｂは、Ｗ７６９６４細胞がＣ５７ＢＬ／６マウスに移植され、腫瘍が生成されたことを示す図である。腫瘍サイズがおよそ８０ｍｍ３に達した後、ＰＯ−Ｇｐ１３０又はＰＳ−Ｇｐ１３０はＰＳ−ｃ−ＭＹＣ阻害ペプチドと混合され（１：１比）、２０μｇで１日置きに全身的に（ｉ．ｖ．）マウスを処理した。腫瘍サイズは、内径によって測定された。腫瘍容積が算出され（Ｖ＝（Ｌ×Ｗ×Ｗ））、ここでＶは腫瘍容積であり、Ｗは腫瘍幅であり、Ｌは腫瘍の長さである。いくつかの腫瘍が６００ｍｍ３に達し始めると、全ての群のマウスは、Ｃｉｔｙ  ｏｆ  ＨｏｐｅのＩＡＣＵＣによって認可されたプロトコールを使用して同時に安楽死させた。表示の通りＮ＝６。
【図３０】細胞透過性Ｇｐ１３０合成ペプチド及びｃ−ＭＹＣ合成ペプチド（すなわち、ｃ−ＭＹＣ結合ペプチド）の組合せ処理が、膵臓がんの同系マウスモデルにおけるＰＤ−Ｌ１発現を減少させることを示す図である。ＰＤ−Ｌ１発現レベルは、示したペプチドによって処理されたマウスからの腫瘍の組織切片における免疫組織化学によって調べられた。ＰＤ−Ｌ１は赤い蛍光として表され、核はＤＡＰＩ染色によって可視化された。白い横棒は２０μｍを表す。
【図３１Ａ】細胞透過性Ｇｐ１３０合成ペプチド及びｃ−ＭＹＣ合成ペプチドの組合せ処理は、膵臓がんの同系マウスモデルにおける腫瘍浸潤ＣＤ８＋Ｔ細胞及びＩＦＮ−γを増加する。図３１Ａは、腫瘍浸潤ＣＤ８＋Ｔ細胞が、示したペプチドによって処理されたマウスから調製された腫瘍組織切片を使用する免疫組織化学によって検出されたことを示す図である。図３１Ａの白い横棒は５０μｍを表す。
【図３１Ｂ】細胞透過性Ｇｐ１３０合成ペプチド及びｃ−ＭＹＣ合成ペプチドの組合せ処理は、膵臓がんの同系マウスモデルにおける腫瘍浸潤ＣＤ８＋Ｔ細胞及びＩＦＮ−γを増加する。図３１Ｂは、ＩＦＮ−γ及びＦＩＴＣ−コンジュゲートペプチドが、示したペプチドによって処理されたマウスから調製された腫瘍組織切片を使用する免疫組織化学によって検出されたことを示す図である。図３１Ｂの白い横棒は２０μｍを表す。
【発明を実施するための形態】
【００２０】
定義
本発明の様々な実施形態及び態様が示され、本明細書に記載されるが、そのような実施形態及び態様は例示のためのみに提供されることが当業者には明らかである。多くのバリエーション、変更、及び置換が、ここで本発明から逸脱することなく当業者に浮上する。本明細書に記載の本発明の実施形態への様々な代替えが本発明の実施に用いられてよいことが理解されるべきである。
【００２１】
限定されることなく、特許、特許出願、記事、本、マニュアル、及び論文を含む、出願に引用した全ての文献、又は文献の部分が、任意の目的のためにその全体が参照により本明細書に明確に組み込まれる。
【００２２】
本明細書で使用した略語は、化学及び生物学分野内のこれらの従来の意味を有する。本明細書に記載の化学構造及び式は、化学分野で公知の化学原子価の標準的な規則に従って構築されている。
【００２３】
本明細書で使用する場合、用語「約」は、当業者が特定の値と適度に類似すると考える特定の値を含む値の範囲を意味する。実施形態において、用語「約」は、当技術分野で通常許容される測定を使用する標準偏差内を意味する。実施形態において、約は特定の値の＋／−１０％まで広がる範囲を意味する。実施形態において、約は特定の値を意味する。
【００２４】
用語「アルキル」は、これ自体によって又は別の置換基の一部として、他に記載しない限り、直鎖（すなわち、非分岐鎖）若しくは分岐炭素鎖（又は炭素）、又はこれらの組合せを意味し、これらは完全飽和、モノ不飽和若しくはポリ不飽和であってよく、指定された炭素原子の数（すなわち、Ｃ１〜Ｃ１０は１〜１０個の炭素を意味する。）を有する二価及び多価の基を含み得る。アルキルは、環化されない。飽和炭化水素基の例としては、限定はされないが、メチル、エチル、ｎ−プロピル、イソプロピル、ｎ−ブチル、ｔ−ブチル、イソブチル、ｓｅｃ−ブチル、（シクロヘキシル）メチル、例えば、ｎ−ペンチル、ｎ−ヘキシル、ｎ−ヘプチル、ｎ−オクチル等の同族体及び異性体などの基が挙げられる。不飽和アルキル基は、１つ以上の二重結合又は三重結合を有するものである（例えば、アルケン、アルキン）。不飽和アルキル基の例としては、限定はされないが、ビニル、２−プロペニル、クロチル、２−イソペンテニル、２−（ブタジエニル）、２，４−ペンタジエニル、３−（１，４−ペンタジエニル）、エチニル、１−及び３−プロピニル、３−ブチニル、及び高級同族体及び異性体が挙げられる。アルコキシは、酸素リンカー（−Ｏ−）を介して分子の残部に結合しているアルキルである。
【００２５】
用語「アルキレン」は、これ自体によって又は別の置換基の一部として、他に記載しない限り、限定はされないが、−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２−によって例示されるように、アルキルから誘導される二価の基を意味する。典型的には、アルキル（又はアルキレン）基は、１〜２４個の炭素原子を有する。「低級アルキル」又は「低級アルキレン」は、通常８個以下の炭素原子を有する、短鎖のアルキル基又はアルキレン基である。用語「アルケニレン」は、それ自体によって又は別の置換基の一部として、他に記載しない限り、アルケンから誘導される二価の基を意味する。
【００２６】
用語「ヘテロアルキル」は、これ自体によって又は別の用語と組み合わせて、他に記載しない限り、安定な直鎖若しくは分枝鎖、又はこれらの組合せを意味し、Ｏ、Ｎ、Ｐ、Ｓｉ、及びＳからなる群から選択される少なくとも１つの炭素原子及び少なくとも１つのヘテロ原子を含み、ここで窒素及び硫黄原子は任意選択的に酸化されていてもよく、窒素ヘテロ原子は任意選択的に四級化されていてもよい。ヘテロアルキルは環化されない。ヘテロ原子Ｏ、Ｎ、Ｐ、Ｓ及びＳｉはヘテロアルキル基の内部の任意の位置又はアルキル基が分子の残部に結合されている位置にあってもよい。例としては、限定はされないが：−ＣＨ２−ＣＨ２−Ｏ−ＣＨ３、−ＣＨ２−ＣＨ２−ＮＨ−ＣＨ３、−ＣＨ２−ＣＨ２−Ｎ（ＣＨ３）−ＣＨ３、−ＣＨ２−Ｓ−ＣＨ２−ＣＨ３、−ＣＨ２−ＣＨ２、−Ｓ（Ｏ）−ＣＨ３、−ＣＨ２−ＣＨ２−Ｓ（Ｏ）２−ＣＨ３、−ＣＨ＝ＣＨ−Ｏ−ＣＨ３、−Ｓｉ（ＣＨ３）３、−ＣＨ２−ＣＨ＝Ｎ−ＯＣＨ３、−ＣＨ＝ＣＨ−Ｎ（ＣＨ３）−ＣＨ３、−Ｏ−ＣＨ３、−Ｏ−ＣＨ２−ＣＨ３、及び−ＣＮが挙げられる。例えば、−ＣＨ２−ＮＨ−ＯＣＨ３及び−ＣＨ２−Ｏ−Ｓｉ（ＣＨ３）３などの２又は３個までのヘテロ原子が隣接していてもよい。
【００２７】
同様に、用語「ヘテロアルキレン」は、これ自体によって又は別の置換基の一部として、他に記載しない限り、限定はされないが、−ＣＨ２−ＣＨ２−Ｓ−ＣＨ２−ＣＨ２−及び−ＣＨ２−Ｓ−ＣＨ２−ＣＨ２−ＮＨ−ＣＨ２−によって例示されるように、ヘテロアルキルから誘導される二価の基を意味する。ヘテロアルキレン基に関して、ヘテロ原子は鎖の末端の一方又は両方を占めてもよい（例えば、アルキレンオキシ、アルキレンジオキシ、アルキレンアミノ、アルキレンジアミノ等）。さらに、アルキレン及びヘテロアルキレンに結合している基に関して、結合基の式が記載される方向によって結合基の方向性は問われない。例えば、式−Ｃ（Ｏ）２Ｒ’−は、−Ｃ（Ｏ）２Ｒ’−と−Ｒ’Ｃ（Ｏ）２−の両方を表す。上記のように、本明細書で使用する場合、ヘテロアルキル基は、−Ｃ（Ｏ）Ｒ’、−Ｃ（Ｏ）ＮＲ’−、−ＮＲ’Ｒ’’、−ＯＲ’、−ＳＲ’、及び／又は−ＳＯ２Ｒ’などのヘテロ原子を介して分子の残部に結合されているこれらの基を含む。「ヘテロアルキル」が詳述され、−ＮＲ’Ｒ’’等の特定のヘテロアルキル基の列挙に続く場合、用語ヘテロアルキル及び−ＮＲ’Ｒ’’は余分ではなく、相互に排他的ではないことが理解される。むしろ、特定のヘテロアルキル基は、明確さを加えるために詳述される。したがって、用語「ヘテロアルキル」は、特定のヘテロアルキル基、例えば−ＮＲ’Ｒ’’等を除外するとして本明細書において解釈されるべきではない。
【００２８】
用語「シクロアルキル」及び「ヘテロシクロアルキル」は、これら自体によって又は他の用語と組み合わせて、他に記載しない限り、それぞれ「アルキル」及び「ヘテロアルキル」の環式型を意味する。さらに、ヘテロシクロアルキルに関して、ヘテロ原子はヘテロ環が分子の残部に結合している位置を占めてよい。シクロアルキル及びヘテロシクロアルキルは非芳香族である。シクロアルキルの例としては、限定はされないが、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロヘキシル、１−シクロへキセニル、３−シクロへキセニル、シクロヘプチル等が挙げられる。ヘテロシクロアルキルの例としては、限定はされないが、１−（１，２，５，６−テトラヒドロピリジル）、１−ピペリジニル、２−ピペリジニル、３−ピペリジニル、４−モルホリニル、３−モルホリニル、テトラヒドロフラン−２−イル、テトラヒドロフラン−３−イル、テトラヒドロチエン−２−イル、テトラヒドロチエン−３−イル、１−ピペラジニル、２−ピペラジニル等が挙げられる。「シクロアルキレン」及び「ヘテロシクロアルキレン」は、単独で又は別の置換基の一部として、それぞれシクロアルキル及びヘテロシクロアルキルから誘導される二価の基を意味する。
【００２９】
用語「ハロ」又は「ハロゲン」は、これら自体によって又は別の置換基の一部として、他に記載しない限り、フッ素、塩素、臭素、又はヨウ素原子を意味する。さらに、「ハロアルキル」などの用語は、モノハロアルキル及びポリハロアルキルを含むことを意味する。例えば、用語「ハロ（Ｃ１〜Ｃ４）アルキル」としては、限定はされないが、フルオロメチル、ジフルオロメチル、トリフルオロメチル、２，２，２−トリフルオロメチル、４−クロロブチル、３−ブロモプロピル等が挙げられる。
【００３０】
用語「アシル」は、他に記載しない限り、−Ｃ（Ｏ）Ｒを意味し、ここでＲは置換若しくは非置換アルキル、置換若しくは非置換シクロアルキル、置換若しくは非置換ヘテロアルキル、置換若しくは非置換ヘテロシクロアルキル、置換若しくは非置換アリール、又は置換若しくは非置換ヘテロアリールである。
【００３１】
用語「アリール」は、他に記載しない限り、１つの環又は縮合している（すなわち、縮合環アリール）若しくは共有結合により結合している複数の環（好ましくは１〜３個の環）であり得るポリ不飽和、芳香族、炭化水素置換基を意味する。縮合環アリールは、少なくとも１つの縮合環がアリール環である、一緒になって縮合した複数の環を指す。用語「ヘテロアリール」は、Ｎ、Ｏ又はＳなどの少なくとも１つのヘテロ原子を含有するアリール基（又は環）を指し、ここで窒素及び硫黄原子は任意選択的に酸化されていてもよく、窒素原子は任意選択的に４級化されていてもよい。したがって、用語「ヘテロアリール」は、縮合環ヘテロアリール基（すなわち、少なくとも１つの縮合環がヘテロ芳香族環である、一緒になって縮合した複数の環）を含む。５，６−縮合環ヘテロアリーレンは、１つの環が５員を有し他の環が６員を有する、少なくとも１つの環がヘテロアリール環である、一緒になって縮合した２つの環を指す。同様に、６，６−縮合環ヘテロアリーレンは、１つの環が６員を有し他の環が６員を有する、少なくとも１つの環がヘテロアリール環である、一緒になって縮合した２つの環を指す。また、６，５−縮合環ヘテロアリーレンは、１つの環が６員を有し他の環が５員を有する、少なくとも１つの環がヘテロアリール環である、一緒になって縮合した２つの環を指す。ヘテロアリール基は、炭素又はヘテロ原子により分子の残部に結合され得る。アリール及びヘテロアリール基の非限定的な例としては、フェニル、１−ナフチル、２−ナフチル、４−ビフェニル、１−ピロリル、２−ピロリル、３−ピロリル、３−ピラゾリル、２−イミダゾリル、４−イミダゾリル、ピラジニル、２−オキサゾリル、４−オキサゾリル、２−フェニル−４−オキサゾリル、５−オキサゾリル、３−イソオキサゾリル、４−イソオキサゾリル、５−イソオキサゾリル、２−チアゾリル、４−チアゾリル、５−チアゾリル、２−フリル、３−フリル、２−チエニル、３−チエニル、２−ピリジル、３−ピリジル、４−ピリジル、２−ピリミジル、４−ピリミジル、５−ベンゾチアゾリル、プリニル、２−ベンゾイミダゾリル、５−インドリル、１−イソキノリル、５−イソキノリル、２−キノキサリニル、５−キノキサリニル、３−キノリル、及び６−キノリルが挙げられる。上記のそれぞれのアリール及びヘテロアリール環系への置換基は、以下に記載の許容される置換基の群から選択される。「アリーレン」及び「ヘテロアリーレン」は、単独で又は別の置換基の一部として、それぞれアリール及びヘテロアリールから誘導される二価の基を意味する。ヘテロアリール基の非限定的な例としては、ピリジニル、ピリミジニル、チオフェニル、チエニル、フラニル、インドリル、ベンゾオキサジアゾリル、ベンゾジオキソリル、ベンゾジオキサニル、チアナフタニル、ピロロピリジニル、インダゾリル、キノリニル、キノキサリニル、ピリドピラジニル、キナゾリノニル、ベンゾイソオキサゾリル、イミダゾピリジニル、ベンゾフラニル、ベンゾチエニル、ベンゾチオフェニル、フェニル、ナフチル、ビフェニル、ピロリル、ピラゾリル、イミダゾリル、ピラジニル、オキサゾリル、イソオキサゾリル、チアゾリル、フリルチエニル、ピリジル、ピリミジル、ベンゾチアゾリル、プリニル、ベンゾイミダゾリル、イソキノリル、チアジアゾリル、オキサジアゾリル、ピロリル、ジアゾリル、トリアゾリル、テトラゾリル、ベンゾチアジアゾリル、イソチアゾリル、ピラゾロピリミジニル、ピロロピリミジニル、ベンゾトリアゾリル、ベンゾオキサゾリル、又はキノリルが挙げられる。上記の例は置換又は非置換であってよく、上記のそれぞれのヘテロアリールの例の二価の基はヘテロアリーレンの非限定的な例である。
【００３２】
縮合環ヘテロシクロアルキル−アリールは、ヘテロシクロアルキルに縮合したアリールである。縮合環ヘテロシクロアルキル−ヘテロアリールは、ヘテロシクロアルキルに縮合したヘテロアリールである。縮合環ヘテロシクロアルキル−シクロアルキルは、シクロアルキルに縮合したヘテロシクロアルキルである。縮合環ヘテロシクロアルキル−ヘテロシクロアルキルは、別のヘテロシクロアルキルに縮合したヘテロシクロアルキルである。縮合環ヘテロシクロアルキル−アリール、縮合環ヘテロシクロアルキル−ヘテロアリール、縮合環ヘテロシクロアルキル−シクロアルキル、又は縮合環ヘテロシクロアルキル−ヘテロシクロアルキルは、それぞれ独立して、非置換又は本明細書に記載の１つ以上の置換基によって置換されてよい。
【００３３】
いくつかの実施形態において、各置換又は非置換アルキルは置換又は非置換Ｃ１〜Ｃ８アルキルであり、各置換又は非置換ヘテロアルキルは置換又は非置換２〜８員ヘテロアルキルであり、各置換又は非置換シクロアルキルは置換又は非置換Ｃ３〜Ｃ７シクロアルキルであり、各置換又は非置換ヘテロシクロアルキルは置換又は非置換３〜７員ヘテロシクロアルキルであり、各置換又は非置換アリールは置換又は非置換Ｃ６〜Ｃ１０アリールであり、及び／又は各置換又は非置換ヘテロアリールは置換又は非置換５〜９員ヘテロアリールである。いくつかの実施形態において、各置換又は非置換アルキレンは置換又は非置換Ｃ１〜Ｃ８アルキレンであり、各置換又は非置換ヘテロアルキレンは置換又は非置換２〜８員ヘテロアルキレンであり、各置換又は非置換シクロアルキレンは置換又は非置換Ｃ３〜Ｃ７シクロアルキレンであり、各置換又は非置換ヘテロシクロアルキレンは置換又は非置換３〜７員ヘテロシクロアルキレンであり、各置換又は非置換アリーレンは置換又は非置換Ｃ６〜Ｃ１０アリーレンであり、及び／又は各置換又は非置換ヘテロアリーレンは置換又は非置換５〜９員ヘテロアリーレンである。いくつかの実施形態において、化合物は、実施例の節又は図面に記載された化学種である。
【００３４】
用語「オキソ」は、本明細書で使用する場合、炭素原子に二重結合されている酸素を意味する。
【００３５】
上記の用語それぞれは（例えば「アルキル」、「ヘテロアルキル」、「アリール」及び「ヘテロアリール」）、示した基の置換形態及び非置換形態の両方を含む。基の各型の好ましい置換基は以下に提供される。
【００３６】
アルキル及びヘテロアルキル基の置換基（アルキレン、アルケニル、ヘテロアルキレン、ヘテロアルケニル、アルキニル、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、シクロアルケニル、及びヘテロシクロアルケニルと呼ばれることが多いこれらの基を含む）は、限定はされないが、−ＯＲ’、＝Ｏ、＝ＮＲ’、＝Ｎ−ＯＲ’、−ＮＲ’Ｒ’’、−ＳＲ’、−ハロゲン、−ＳｉＲ’Ｒ’’Ｒ’’’、−ＯＣ（Ｏ）Ｒ’、−Ｃ（Ｏ）Ｒ’、−ＣＯ２Ｒ’、−ＣＯＮＲ’Ｒ’’、−ＯＣ（Ｏ）ＮＲ’Ｒ’’、−ＮＲ’’Ｃ（Ｏ）Ｒ’、−ＮＲ’−Ｃ（Ｏ）ＮＲ’’Ｒ’’’、−ＮＲ’’Ｃ（Ｏ）２Ｒ’、−ＮＲ−Ｃ（ＮＲ’Ｒ’’Ｒ’’’）＝ＮＲ’’’’、−ＮＲ−Ｃ（ＮＲ’Ｒ’’）＝ＮＲ’’’、−Ｓ（Ｏ）Ｒ’、−Ｓ（Ｏ）２Ｒ’、−Ｓ（Ｏ）２ＮＲ’Ｒ’’、−ＮＲＳＯ２Ｒ’、−ＮＲ’ＮＲ’’Ｒ’’’、−ＯＮＲ’Ｒ’’、−ＮＲ’Ｃ（Ｏ）ＮＲ’’ＮＲ’’’Ｒ’’’’、−ＣＮ、−ＮＯ２、一リン酸（又はこれらの誘導体）、二リン酸（又はこれらの誘導体）、三リン酸（又はこれらの誘導体）から選択される１つ以上の様々な基であってよく、０〜（２ｍ’＋１）の範囲の数で、ｍ’はこのような基中の炭素原子の総数である。Ｒ、Ｒ’、Ｒ’’、Ｒ’’’、及びＲ’’’’はそれぞれ好ましくは独立して、水素、置換若しくは非置換ヘテロアルキル、置換若しくは非置換シクロアルキル、置換若しくは非置換ヘテロシクロアルキル、置換若しくは非置換アリール（例えば、１〜３個のハロゲンによって置換されたアリール）、置換若しくは非置換ヘテロアリール、置換若しくは非置換アルキル、アルコキシ、又はチオアルコキシ基、又はアリールアルキル基を指す。本発明の化合物が１つより多くのＲ基を含む場合、例えば、各Ｒ基は独立して、１つより多くのこれらの基が存在する場合、それぞれＲ’、Ｒ’’、Ｒ’’’及びＲ’’’’基であるとして選択される。Ｒ’及びＲ’’が同じ窒素原子に結合している場合、これらは、窒素原子と組み合わされ、４−、５−、６−、又は７−員環を形成し得る。例えば、−ＮＲ’Ｒ’’としては、限定はされないが、１−ピロリジニル及び４−モルホリニルが挙げられる。置換基の上記の議論から、当業者は、用語「アルキル」は、例えばハロアルキル（例えば、−ＣＦ３及び−ＣＨ２ＣＦ３）及びアシル（例えば、−Ｃ（Ｏ）ＣＨ３、−Ｃ（Ｏ）ＣＦ３、−Ｃ（Ｏ）ＣＨ２ＯＣＨ３等）などの水素基以外の基に結合している炭素原子を含む基を含むことを意味することを理解する。
【００３７】
アルキル基に関して記載した置換基と類似して、アリール及びヘテロアリール基の置換基は多様であり、例えば、−ＯＲ’、−ＮＲ’Ｒ’’、−ＳＲ’、−ハロゲン、−ＳｉＲ’Ｒ’’Ｒ’’’、−ＯＣ（Ｏ）Ｒ’、−Ｃ（Ｏ）Ｒ’、−ＣＯ２Ｒ’、−ＣＯＮＲ’Ｒ’’、−ＯＣ（Ｏ）ＮＲ’Ｒ’’、−ＮＲ’’Ｃ（Ｏ）Ｒ’、−ＮＲ’−Ｃ（Ｏ）ＮＲ’’Ｒ’’’、−ＮＲ’’Ｃ（Ｏ）２Ｒ’、−ＮＲ−Ｃ（ＮＲ’Ｒ’’Ｒ’’’）＝ＮＲ’’’’、−ＮＲ−Ｃ（ＮＲ’Ｒ’’）＝ＮＲ’’’、−Ｓ（Ｏ）Ｒ’、−Ｓ（Ｏ）２Ｒ’、−Ｓ（Ｏ）２ＮＲ’Ｒ’’、−ＮＲＳＯ２Ｒ’、−ＮＲ’ＮＲ’’Ｒ’’’、−ＯＮＲ’Ｒ’’、−ＮＲ’Ｃ（Ｏ）ＮＲ’’ＮＲ’’’Ｒ’’’’、−ＣＮ、−ＮＯ２、−Ｒ’、−Ｎ３、−ＣＨ（Ｐｈ）２、フルオロ（Ｃ１〜Ｃ４）アルコキシ、及びフルオロ（Ｃ１〜Ｃ４）アルキル、一リン酸（又はこれらの誘導体）、二リン酸（又はこれらの誘導体）、三リン酸（又はこれらの誘導体）から選択され、０〜芳香族環系の空の原子価の総数の範囲の数で；Ｒ’、Ｒ’’、Ｒ’’’、Ｒ’’’’は好ましくは独立して水素、置換又は非置換アルキル、置換又は非置換ヘテロアルキル、置換又は非置換シクロアルキル、置換又は非置換ヘテロシクロアルキル、置換又は非置換アリール、及び置換又は非置換ヘテロアリールから選択される。本発明の化合物が１つより多くのＲ基を含む場合、例えば、各Ｒ基は独立して、１つより多くのこれらの基が存在する場合、それぞれＲ’、Ｒ’’、Ｒ’’’及びＲ’’’’基であるとして選択される。
【００３８】
２つ以上の置換基は、任意選択的に結合され、アリール、ヘテロアリール、シクロアルキル、又はヘテロシクロアルキル基を形成してもよい。そのようないわゆる環形成置換基は、典型的には、必ずではないが、環状基構造に結合されることが見出される。
【００３９】
アリール又はヘテロアリール環の隣接する原子における２つの置換基は、任意選択的に式−Ｔ−Ｃ（Ｏ）−（ＣＲＲ’）ｑ−Ｕ−の環を形成してよく、式中Ｔ及びＵは独立して−ＮＲ−、−Ｏ−、−ＣＲＲ’−又は一重結合であり、ｑは０〜３の整数である。代わりに、アリール又はヘテロアリール環の隣接する原子の２つの置換基は、任意選択的に式−Ａ−（ＣＨ２）ｒ−Ｂ−の置換基によって置き換えられてもよく、式中Ａ及びＢは独立して−ＣＲＲ’−、−Ｏ−、−ＮＲ−、−Ｓ−、−Ｓ（Ｏ）−、−Ｓ（Ｏ）２−、−Ｓ（Ｏ）２ＮＲ’−、又は一重結合であり、ｒは１〜４の整数である。そのように形成された新しい環の一重結合の１つは、任意選択的に二重結合によって置き換えられてよい。代わりに、アリール又はヘテロアリール環の隣接する原子の２つの置換基は、任意選択的に式−（ＣＲＲ’）ｓ−Ｘ’−（Ｃ’’Ｒ’’Ｒ’’’）ｄ−の置換基によって置き換えられてよく、ここでｓ及びｄは独立して０〜３の整数であり、Ｘ’は−Ｏ−、−ＮＲ’−、−Ｓ−、−Ｓ（Ｏ）−、−Ｓ（Ｏ）２−、又は−Ｓ（Ｏ）２ＮＲ’−である。置換基Ｒ、Ｒ’、Ｒ’’、及びＲ’’’は好ましくは独立して水素、置換又は非置換アルキル、置換又は非置換ヘテロアルキル、置換又は非置換シクロアルキル、置換又は非置換ヘテロシクロアルキル、置換又は非置換アリール、及び置換又は非置換ヘテロアリールから選択される。
【００４０】
本明細書で使用する場合、用語「ヘテロ原子」又は「環ヘテロ原子」は、酸素（Ｏ）、窒素（Ｎ）、硫黄（Ｓ）、リン（Ｐ）、及びケイ素（Ｓｉ）を含むことを意味する。
【００４１】
本明細書で使用する場合、「置換基」は、以下の部分から選択される基を意味する：
（Ａ）オキソ、ハロゲン、−ＣＦ３、−ＣＮ、−ＯＨ、−ＮＨ２、−ＣＯＯＨ、−ＣＯＮＨ２、−ＮＯ２、−ＳＨ、−ＳＯ２Ｃｌ、−ＳＯ３Ｈ、−ＳＯ４Ｈ、−ＳＯ２ＮＨ２、−ＮＨＮＨ２、−ＯＮＨ２、−ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨＮＨ２、−ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ２、−ＮＨＳＯ２Ｈ、−ＮＨＣ＝（Ｏ）Ｈ、−ＮＨＣ（Ｏ）−ＯＨ、−ＮＨＯＨ、−ＯＣＦ３、−ＯＣＨＦ２、−ＮＨＳＯ２ＣＨ３、−Ｎ３、非置換アルキル、非置換ヘテロアルキル、非置換シクロアルキル、非置換ヘテロシクロアルキル、非置換アリール、非置換ヘテロアリール、一リン酸（又はこれらの誘導体）、二リン酸（又はこれらの誘導体）、又は三リン酸（又はこれらの誘導体）、及び
（Ｂ）（ｉ）オキソ、ハロゲン、−ＣＦ３、−ＣＮ、−ＯＨ、−ＮＨ２、−ＣＯＯＨ、−ＣＯＮＨ２、−ＮＯ２、−ＳＨ、−ＳＯ２Ｃｌ、−ＳＯ３Ｈ、−ＳＯ４Ｈ、−ＳＯ２ＮＨ２、−ＮＨＮＨ２、−ＯＮＨ２、−ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨＮＨ２、−ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ２、−ＮＨＳＯ２Ｈ、−ＮＨＣ＝（Ｏ）Ｈ、−ＮＨＣ（Ｏ）−ＯＨ、−ＮＨＯＨ、−ＯＣＦ３、−ＯＣＨＦ２、−ＮＨＳＯ２ＣＨ３、−Ｎ３、非置換アルキル、非置換ヘテロアルキル、非置換シクロアルキル、非置換ヘテロシクロアルキル、非置換アリール、非置換ヘテロアリール、一リン酸（又はこれらの誘導体）、二リン酸（又はこれらの誘導体）、又は三リン酸（又はこれらの誘導体）、及び
（ｉｉ）（ａ）オキソ、ハロゲン、−ＣＦ３、−ＣＮ、−ＯＨ、−ＮＨ２、−ＣＯＯＨ、−ＣＯＮＨ２、−ＮＯ２、−ＳＨ、−ＳＯ２Ｃｌ、−ＳＯ３Ｈ、−ＳＯ４Ｈ、−ＳＯ２ＮＨ２、−ＮＨＮＨ２、−ＯＮＨ２、−ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨＮＨ２、−ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ２、−ＮＨＳＯ２Ｈ、−ＮＨＣ＝（Ｏ）Ｈ、−ＮＨＣ（Ｏ）−ＯＨ、−ＮＨＯＨ、−ＯＣＦ３、−ＯＣＨＦ２、−ＮＨＳＯ２ＣＨ３、−Ｎ３、非置換アルキル、非置換ヘテロアルキル、非置換シクロアルキル、非置換ヘテロシクロアルキル、非置換アリール、非置換ヘテロアリール、一リン酸（又はこれらの誘導体）、二リン酸（又はこれらの誘導体）、又は三リン酸（又はこれらの誘導体）、及び
（ｂ）オキソ、ハロゲン、−ＣＦ３、−ＣＮ、−ＯＨ、−ＮＨ２、−ＣＯＯＨ、−ＣＯＮＨ２、−ＮＯ２、−ＳＨ、−ＳＯ２Ｃｌ、−ＳＯ３Ｈ、−ＳＯ４Ｈ、−ＳＯ２ＮＨ２、−ＮＨＮＨ２、−ＯＮＨ２、−ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨＮＨ２、−ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ２、−ＮＨＳＯ２Ｈ、−ＮＨＣ＝（Ｏ）Ｈ、−ＮＨＣ（Ｏ）−ＯＨ、−ＮＨＯＨ、−ＯＣＦ３、−ＯＣＨＦ２、−ＮＨＳＯ２ＣＨ３、−Ｎ３、非置換アルキル、非置換ヘテロアルキル、非置換シクロアルキル、非置換ヘテロシクロアルキル、非置換アリール、非置換ヘテロアリール、一リン酸（又はこれらの誘導体）、二リン酸（又はこれらの誘導体）、又は三リン酸（又はこれらの誘導体）から選択される少なくとも１つの置換基によって置換されたアルキル、ヘテロアルキル、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アリール、ヘテロアリール、一リン酸（又はこれらの誘導体）、二リン酸（又はこれらの誘導体）、三リン酸（又はこれらの誘導体）、
から選択される少なくとも１つの置換基によって置換されたアルキル、ヘテロアルキル、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アリール、ヘテロアリール、一リン酸（又はこれらの誘導体）、二リン酸（又はこれらの誘導体）、三リン酸（又はこれらの誘導体）、
から選択される少なくとも１つの置換基によって置換されるアルキル、ヘテロアルキル、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アリール、ヘテロアリール、一リン酸（又はこれらの誘導体）、二リン酸（又はこれらの誘導体）、三リン酸（又はこれらの誘導体）。
【００４２】
「サイズ限定置換基（ｓｉｚｅ−ｌｉｍｉｔｅｄ  ｓｕｂｓｔｉｔｕｅｎｔ）」又は「サイズ限定置換基（ｓｉｚｅ−ｌｉｍｉｔｅｄ  ｓｕｂｓｔｉｔｕｅｎｔ  ｇｒｏｕｐ）」は、本明細書で使用する場合、「置換基」に関して上記に記載した全ての置換基から選択される基を意味し、ここで各置換又は非置換アルキルは置換又は非置換Ｃ１〜Ｃ２０アルキルであり、各置換又は非置換ヘテロアルキルは置換又は非置換２〜２０員ヘテロアルキルであり、各置換又は非置換シクロアルキルは置換又は非置換Ｃ３〜Ｃ８シクロアルキルであり、各置換又は非置換ヘテロシクロアルキルは置換又は非置換３〜８員ヘテロシクロアルキルであり、各置換又は非置換アリールは置換又は非置換Ｃ６〜Ｃ１０アリールであり、各置換又は非置換ヘテロアリールは置換又は非置換５〜１０員ヘテロアリールである。
【００４３】
「低級置換基（ｌｏｗｅｒ  ｓｕｂｓｔｉｔｕｅｎｔ）」又は「低級置換基（ｌｏｗｅｒ  ｓｕｂｓｔｉｔｕｅｎｔ  ｇｒｏｕｐ）」は、本明細書で使用する場合、「置換基」に関して上記に記載した全ての置換基から選択される基を意味し、ここで各置換又は非置換アルキルは置換又は非置換Ｃ１〜Ｃ８アルキルであり、各置換又は非置換ヘテロアルキルは置換又は非置換２〜８員ヘテロアルキルであり、各置換又は非置換シクロアルキルは置換又は非置換Ｃ３〜Ｃ７シクロアルキルであり、各置換又は非置換ヘテロシクロアルキルは置換又は非置換３〜７員ヘテロシクロアルキルであり、各置換又は非置換アリールは置換又は非置換Ｃ６〜Ｃ１０アリールであり、各置換又は非置換ヘテロアリールは置換又は非置換５〜９員ヘテロアリールである。
【００４４】
本明細書で使用する場合、用語「異性体」は、同じ数及び種類の原子、したがって同じ分子量を有するが、原子の立体配置又は配置が異なる化合物を指す。
【００４５】
用語「互変異性体」は、本明細書で使用する場合、平衡状態で存在し、１つの異性体形態から別の異性体形態に簡単に変わる２個以上の構造的異性体のうちの１つを指す。
【００４６】
本発明の特定の化合物が、互変異性体形態で存在することができ、化合物のそのような互変異性体形態の全てが本発明の範囲内にあることは当業者には明らかである。
【００４７】
他に記載しない限り、本明細書に示した構造体は、構造体の全ての立体化学形態、すなわち各不斉中心に関するＲ及びＳ配置を含むことも意味する。したがって、本発明の化合物の単一の立体化学的異性体、並びにエナンチオマー及びジアステレオマー混合物は、本発明の範囲内である。
【００４８】
他に記載しない限り、本明細書に示した構造体は、１個以上の同位体的に豊富な原子の存在においてのみ異なる化合物を含むことも意味する。例えば、重水素又は三重水素による水素の置き換え、又は１３Ｃ−若しくは１４Ｃ−が豊富な炭素による炭素の置き換え以外は、本発明の構造を有する化合物は、本発明の範囲内である。
【００４９】
記号「
【００５０】
【化１】
2020527555.tif 000003
」は、分子又は化学式の残部への化学部分の結合点を示す。
【００５１】
「化学リンカー」又は「リンカー」は、本明細書で提供する場合、共有結合リンカー、非共有結合リンカー、ペプチドリンカー（ペプチド部分を含むリンカー）、開裂可能ペプチドリンカー、置換若しくは非置換アルキレン、置換若しくは非置換ヘテロアルキレン、置換若しくは非置換シクロアルキレン、置換若しくは非置換ヘテロシクロアルキレン、置換若しくは非置換アリーレン又は置換若しくは非置換ヘテロアリーレン又は任意のこれらの組合せである。したがって、本明細書で提供する化学リンカーは、複数の化学部分を含んでよく、複数の部分のそれぞれは化学的に異なり得る。
【００５２】
本明細書において使用する場合、用語「ａ」又は「ａｎ」は、１つ以上を意味する。さらに、句「ａ［ｎ］によって置換された」は、本明細書で使用する場合、特定の基が１つ以上の任意の又は全ての命名された置換基によって置換され得ることを意味する。例えば、アルキル又はヘテロアリール基などの基は、「非置換Ｃ１〜Ｃ２０アルキル、又は非置換２〜２０員ヘテロアルキルによって置換され」、基は１つ以上の非置換Ｃ１〜Ｃ２０アルキル、及び／又は１つ以上の非置換２〜２０員ヘテロアルキルを含有してよい。さらに、部分がＲ置換基によって置換される場合、基は「Ｒ−置換」と呼ばれてよい。部分がＲ−置換である場合、部分は少なくとも１つのＲ置換基によって置換され、各Ｒ置換基は任意選択的に異なる。特定のＲ基が化学属性の記載に存在する場合、ローマ字記号が使用され、その特定のＲ基の各出現を区別してもよい。例えば、複数のＲ１置換基が存在する場合、各Ｒ１置換基はＲ１Ａ、Ｒ１Ｂ、Ｒ１Ｃ、Ｒ１Ｄ等と区別されてよく、Ｒ１Ａ、Ｒ１Ｂ、Ｒ１Ｃ、Ｒ１Ｄ等のそれぞれは、Ｒ１の定義の範囲内に、及び任意選択的に異なって定義される。
【００５３】
本発明の化合物の記載は、当業者に公知の化学結合の原理によって限定される。したがって、基が多くの置換基の１個以上で置換されてもよい場合、そのような置換は、化学結合の原理に適合し、本質的に不安定でない、及び／又は周辺条件下で、例えば水性、中性及びいくつかの公知の生理的条件下で不安定な可能性が高いことが当業者に公知の化合物を与えるように選択される。例えば、ヘテロシクロアルキル又はヘテロアリールは、当業者に公知の化学結合の原理に従って、環ヘテロ原子を介して分子の残部に結合し、それにより、本質的に不安定な化合物を避ける。
【００５４】
他に記載しない限り、本明細書で使用する技術及び科学用語は、当業者に一般に理解されるのと同じ意味を有する。例えば、Ｓｉｎｇｌｅｔｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，  ＤＩＣＴＩＯＮＡＲＹ  ＯＦ  ＭＩＣＲＯＢＩＯＬＯＧＹ  ＡＮＤ  ＭＯＬＥＣＵＬＡＲ  ＢＩＯＬＯＧＹ  ２ｎｄ  ｅｄ．，Ｊ．  Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ  （Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，  ＮＹ  １９９４）；Ｓａｍｂｒｏｏｋ  ｅｔ  ａｌ．，  ＭＯＬＥＣＵＬＡＲ  ＣＬＯＮＩＮＧ，  Ａ  ＬＡＢＯＲＡＴＯＲＹ  ＭＡＮＵＡＬ，  Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇｓ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｐｒｅｓｓ  （Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇｓ  Ｈａｒｂｏｒ，  ＮＹ  １９８９）参照。本明細書に記載のものと類似の又は等価な任意の方法、装置及び材料は、本発明の実施に使用され得る。以下の定義は、本明細書において頻繁に使用される特定の用語の理解を容易にするために提供され、本開示の範囲を限定することを意味しない。
【００５５】
「核酸」は、デオキシリボヌクレオチド又はリボヌクレオチド及びこれらの一本鎖形態又は二本鎖形態いずれかのポリマー、並びにこれらの相補体を指す。用語「ポリヌクレオチド」は、ヌクレオチドの直鎖配列を指す。用語「ヌクレオチド」は、典型的には、ポリヌクレオチドの単一ユニット、すなわちモノマーを指す。ヌクレオチドは、リボヌクレオチド、デオキシリボヌクレオチド、又はこれらの改変型であってよい。本明細書で想定されるポリヌクレオチドの例としては、一本鎖及び二本鎖ＤＮＡ、一本鎖及び二本鎖ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡを含む）、並びに一本鎖及び二本鎖ＤＮＡ及びＲＮＡの混合物を有するハイブリッド分子が挙げられる。本明細書で使用する核酸は、自然発生の核酸と同じ基本的な化学構造を有する核酸も指す。そのような類似体は、改変糖及び／又は改変環置換基を有するが、自然発生の核酸と同じ基本的な化学構造を保持する。核酸模倣物は、核酸の通常の化学構造とは異なる構造を有するが、自然発生の核酸と類似の方法で機能する化学化合物を指す。そのような類似体の例としては、限定はされないが、ホスホロチオエート、ホスホロアミデート、メチルホスホネート、キラル−メチルホスホネート、２−Ｏ−メチルリボヌクレオチド、及びペプチド−核酸（ＰＮＡ）が挙げられる。
【００５６】
用語「ホスホロチオエート核酸」は、１つ以上のヌクレオチド間結合がホスホロチオエート部分（チオホスフェート）部分を介する核酸を指す。ホスホロチオエート部分は、モノチオホスフェート（−Ｐ（Ｏ）３（Ｓ）３−−）又はジチオホスフェート（−Ｐ（Ｏ）２（Ｓ）２３−−）であってよい。本明細書で提供する全ての態様の実施形態において、ホスホロチオエート部分はモノチオホスフェート（−Ｐ（Ｏ）３（Ｓ）３−−）である。すなわち、本明細書で提供する全ての態様の実施形態において、ホスホロチオエート核酸はモノチオホスフェート核酸である。実施形態において、ホスホロチオエート核酸の１つ以上のヌクレオシドは、ホスホロチオエート部分（例えばモノチオホスフェート）部分を介して結合され、残りのヌクレオシドはホスホジエステル部分（−Ｐ（Ｏ）４３−−）を介して結合されている。実施形態において、ホスホロチオエート核酸の１つ以上のヌクレオシドはホスホロチオエート部分（例えば、モノチオホスフェート）部分を介して結合され、残りのヌクレオシドはメチルホスホネート結合を介して結合されている。実施形態において、ホスホロチオエート核酸の全てのヌクレオシドは、ホスホロチオエート部分（例えばモノチオホスフェート）部分を介して結合されている。
【００５７】
ホスホロチオエートオリゴヌクレオチド（ホスホロチオエート核酸）は、典型的には、約５、６、７、８、９、１０、１２、１５、２５、３０、４０、５０以上のヌクレオチオ長から約１００ヌクレオチド長までである。ホスホロチオエート核酸は、より長い長さ、例えば２００、３００、５００、１０００、２０００、３０００、５０００、７０００、１０，０００等であってもよい。上記に記載したように、特定の実施形態において、本明細書のホスホロチオエート核酸は１つ以上のホスホジエステル結合を含有する。他の実施形態において、ホスホロチオエート核酸は、代わりの骨格（例えば、当技術分野で公知のホスホジエステルの模倣物又は類似物、例えばボラノホスフェート、メチルホスフェート、ホスホロアミデート又はＯ−メチルホスホロアミダイト結合（Ｅｃｋｓｔｅｉｎ，  Ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓ  ａｎｄ  Ａｎａｌｏｇｕｅｓ：  Ａ  Ｐｒａｃｔｉｃａｌ  Ａｐｐｒｏａｃｈ，  Ｏｘｆｏｒｄ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  Ｐｒｅｓｓ参照）を含む。ホスホロチオエート核酸は、当技術分野で公知の１つ以上の核酸類似物モノマー、例えばペプチド核酸モノマー若しくはポリマー、ロックド核酸モノマー若しくはポリマー、モルホリノモノマー若しくはポリマー、グリコール核酸モノマー若しくはポリマー、又はトレオース核酸モノマー若しくはポリマーも含んでよい。他の類似物核酸は、陽性骨格、非イオン性骨格及び非リボース骨格を有するものを含み、米国特許第５，２３５，０３３号及び第５，０３４，５０６号、並びにＣｈａｐｔｅｒｓ  ６  ａｎｄ  ７，  ＡＳＣ  Ｓｙｍｐｏｓｉｕｍ  Ｓｅｒｉｅｓ  ５８０，  Ｃａｒｂｏｈｙｄｒａｔｅ  Ｍｏｄｉｆｉｃａｔｉｏｎｓ  ｉｎ  Ａｎｔｉｓｅｎｓｅ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ，  Ｓａｎｇｈｕｉ  ＆  Ｃｏｏｋ，  ｅｄｓ．に記載されたものを含む。１つ以上の炭素環式糖を含有する核酸も核酸の１つの定義内に含まれる。リボース−リン酸骨格の改変は、様々な理由のため、例えば、生理的環境において又はバイオチップ上のプローブとして安定性及びそのような分子の半減期を増加させるために行われてよい。自然発生の核酸及び類似物の混合物が作成され、代わりに、異なる核酸類似物の混合物、及び自然発生の核酸と類似物の混合物が作成されてよい。ホスホロチオエート核酸及びホスホロチオエートポリマー骨格は直鎖又は分枝鎖であり得る。例えば、分岐鎖核酸は、反復して分枝され、高次構造、例えばデンドリマー等を形成する。
【００５８】
本明細書で使用する場合、「ホスホロチオエートポリマー骨格」は、少なくとも２つのホスホロチオエート結合を有する化学ポリマーである（例えば、モノチオホスフェート）（例えば、糖サブユニット、環状サブユニット又はアルキルサブユニットを一緒に結合している）。ホスホロチオエートポリマー骨格はホスホロチオエート糖ポリマーであってよく、これは１つ以上（又は全て）のペントース糖の鎖が通常核酸に存在する塩基（ヌクレオ塩基）を欠損するホスホロチオエート核酸である。ホスホロチオエートポリマー骨格は、２つ以上のホスホロチオエート結合を含み得る。ホスホロチオエートポリマー骨格は、５、６、７、８、９、１０、１２、１５、２５、３０、４０、５０又はそれ以上の結合を含み、最高約１００個のホスホロチオエート結合を含有し得る。ホスホロチオエートポリマー骨格は、たくさんの結合、例えば２００、３００、５００、１０００、２０００、３０００、５０００、７０００、１０，０００等を含有してもよい。
【００５９】
ホスホロチオエート核酸及びホスホロチオエートポリマー骨格は、部分的に又は完全にホスホロチオエート化されてよい。例えば、ホスホロチオエート核酸のヌクレオチド間結合の５０％以上がホスホロチオエート結合であり得る。任意選択的に、ホスホロチオエート核酸のヌクレオチド間結合の５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、又は９９％がホスホロチオエート結合である。任意選択的に、ホスホロチオエート核酸のヌクレオチド間結合の５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、又は９９％がホスホロチオエート結合である。任意選択的に、ホスホロチオエート核酸のヌクレオチド間結合の７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、又は９９％がホスホロチオエート結合である。任意選択的に、ホスホロチオエート核酸のヌクレオチド間結合の９０％、９５％、又は９９％がホスホロチオエート結合である。実施形態において、残りのヌクレオチド間結合はホスホジエステル結合である。実施形態において、残りのヌクレオチド間結合はメチルホスホネート結合である。任意選択的に、ホスホロチオエート核酸のヌクレオチド間結合の１００％がホスホロチオエート結合である。同様に、ホスホロチオエートポリマー骨格における糖間結合の５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、又は９９％がホスホロチオエート結合であってよい。任意選択的に、ホスホロチオエートポリマー骨格における糖間結合の５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、又は９９％がホスホロチオエート結合であってよい。任意選択的に、ホスホロチオエートポリマー骨格における糖間結合の７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、又は９９％がホスホロチオエート結合であってよい。任意選択的に、ホスホロチオエートポリマー骨格における糖間結合の９０％、９５％、又は９９％がホスホロチオエート結合であってよい。実施形態において、残りのヌクレオチド間結合はホスホジエステル結合である。実施形態において、残りのヌクレオチド間結合はメチルホスホネート結合である。任意選択的に、ホスホロチオエートポリマー骨格の糖間結合の１００％がホスホロチオエート結合である。
【００６０】
「標識された核酸又はオリゴヌクレオチド」は、核酸に結合した検出可能な標識の存在を検出することによって核酸の存在が検出できるように、リンカー若しくは化学結合を介した共有結合、又はイオン結合、ファンデルワールス力、静電気的、若しくは水素結合を介した非共有結合のいずれかによって標識に結合されているものである。代わりに、高親和性相互作用を使用する方法は、例えばビオチン、ストレプトアビジンなどの一対の結合パートナーの一方が他方に結合する、同じ結果を達成し得る。実施形態において、ホスホロチオエート核酸又はホスホロチオエートポリマー骨格は、本明細書に開示された、当技術分野において一般に公知のように検出可能な標識を含む。実施形態において、ホスホロチオエート核酸又はホスホロチオエートポリマー骨格は、化学リンカーによって検出可能な標識に結合されている。
【００６１】
「標識」又は「検出可能部分」は、分光学、光化学、生化学、免疫化学、化学又は他の物理的手段によって検出可能な組成物である。例えば、有用な標識は、例えばペプチド又は標的ペプチドと特異的に反応する抗体に放射線標識を導入することによって検出可能に作成され得る、３２Ｐ、蛍光色素、高電子密度試薬、酵素（例えば、ＥＬＩＳＡにおいて一般に使用されるように）、ビオチン、ジゴキシゲニン又はハプテン及びタンパク質又は他の実態を含む。標識に抗体をコンジュゲートするための当技術分野で公知の任意の適切な方法が用いられてよく、例えばＨｅｒｍａｎｓｏｎ，  Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ  Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ  １９９６，  Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ，  Ｉｎｃ．，  Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏに記載の方法を使用する。
【００６２】
本明細書で提供するホスホロチオエート核酸及びホスホロチオエートポリマー骨格は、１つ以上の反応部分、例えば、共有結合反応部分を含み得る。反応部分は、任意の適切なリンカー、例えば当技術分野で公知のポリマーリンカー又は代わりにポリエチレングリコールリンカー又は等価物を使用して、ホスホロチオエート核酸及びホスホロチオエートポリマー骨格の残部に結合され得る。リンカーは、実施形態において、本明細書に記載のように検出可能な標識を含む（すなわち結合されている）。本明細書で使用する場合、用語「共有結合反応部分」は、本明細書に記載のように、非細胞透過性タンパク質のアミノ酸と化学的に反応することができる化学部分を指し、共有結合、したがって本明細書で提供するようにコンジュゲートを形成する。
【００６３】
用語「遺伝子」は、タンパク質の産生に関与するＤＮＡのセグメントを意味する：これは、コード領域の前及び後の領域（リーダー及びトレーラー）並びに個々のコードセグメント（エキソン）間の介在配列（イントロン）を含む。リーダー、トレーラー並びにイントロンは、遺伝子の転写及び翻訳中に必要な制御エレメントを含む。さらに、「タンパク質遺伝子産物」は、特定の遺伝子から発現されるタンパク質である。
【００６４】
単語「発現」又は「発現された」は、遺伝子に関して本明細書で使用する場合、この遺伝子の転写及び／又は翻訳産物を意味する。細胞におけるＤＮＡ分子の発現のレベルは、細胞内に存在する相当するｍＲＮＡの量又は細胞によるこのＤＮＡ産物によってコードされたタンパク質の量のいずれかに基づいて決定されてよい。
【００６５】
用語「外因性」は、所与の細胞又は生物の外部に由来する分子又は物質（例えば、化合物、核酸ペプチド又はタンパク質）を指す。例えば、本明細書で言及する「外因性プロモーター」は、これが発現される植物に由来しないプロモーターである。反対に、用語「内因性」又は「内因性プロモーター」は、所与の細胞又は生物原産の、又は所与の細胞又は生物に由来する分子又は物質（例えば、タンパク質又はペプチド）を指す。
【００６６】
核酸又はタンパク質に適用した場合、用語「単離された」は、核酸又はタンパク質が、自然状態で会合している他の細胞成分を、基本的に有さないことを示す。例えば、これは均一な状態であってよく、乾燥又は水溶液のいずれかであってよい。純度及び均一性は、典型的には、ポリアクリルアミドゲル電気泳動又は高速液体クロマトグラフィーなどの分析化学技術を使用して決定される。製剤中に存在する優勢な種であるタンパク質は、実質的に精製されている。
【００６７】
用語「アミノ酸」は、自然発生のアミノ酸及び合成アミノ酸並びに自然発生のアミノ酸に類似の様式で機能するアミノ酸類似物及びアミノ酸模倣物を指す。自然発生のアミノ酸は、遺伝コードによってコードされたもの、並びに後に改変されるこれらのアミノ酸、例えば、ヒドロキシプロリン、γ−カルボキシグルタミン酸及びＯ−ホスホセリンである。アミノ酸類似物は、自然発生のアミノ酸と同じ基本化学構造、すなわち、水素、カルボキシル基、アミノ基及びＲ基、例えばホモセリン、ノルロイシン、メチオニンスルホキシド、メチオニンメチルスルホニウムに結合したα炭素を有する化合物を指す。このような類似物は、改変されたＲ基（例えばノルロイシン）又は改変されたペプチド骨格を有するが、自然発生のアミノ酸と同じ基本化学構造を保持する。アミノ酸模倣物は、アミノ酸の通常の化学構造とは異なる構造を有するが、自然発生のアミノ酸に類似の様式で機能する化学化合物を指す。
【００６８】
アミノ酸は、ＩＵＰＡＣ−ＩＵＢ  Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｎｏｍｅｎｃｌａｔｕｒｅ  Ｃｏｍｍｉｓｓｉｏｎが推奨する一般に公知の３文字記号又は１文字記号のいずれかによって本明細書で言及されてもよい。ヌクレオチドは、同様に、これらの一般的に許容される一文字記号によって言及されてもよい。
【００６９】
用語「ポリペプチド」、「ペプチド」及び「タンパク質」は、本明細書で交換可能に使用され、アミノ酸残基のポリマーを指す。その用語は、１つ以上のアミノ酸残基が対応する自然発生のアミノ酸の人工的な化学模倣物であるアミノ酸ポリマー、並びに自然発生のアミノ酸ポリマー及び非自然発生のアミノ酸ポリマーに適用される。
【００７０】
「保存的に改変された変異体」は、アミノ酸及び核酸配列の両方に適用される。特定の核酸配列に関して、「保存的に改変された変異体」は、同一の若しくは本質的に同一のアミノ酸配列をコードする核酸を指す。遺伝子コードの縮重のために、多くの核酸配列が任意の所与のタンパク質をコードする。例えば、コドンＧＣＡ，ＧＣＣ、ＧＣＧ及びＧＣＵは全てアミノ酸アラニンをコードする。したがって、アラニンがコドンによって特定される全ての位置において、コードされたポリペプチドを変更することなく、記載した対応するコドンのいずれかにコドンを変更することができる。そのような核酸の変異は、保存的に改変された変異の１種である「サイレント変異」である。ポリペプチドをコードする本明細書の全ての核酸配列は、核酸の全ての可能なサイレント変異も記載する。当業者は、核酸における各コドン（通常メチオニンの唯一のコドンであるＡＵＧ及び通常トリプトファンの唯一のコドンであるＴＧＧを除く）を改変し、機能的に同一の分子を産生し得ることを認識する。したがって、ポリペプチドをコードする核酸の各サイレント変異は記載された各配列に潜在的に含まれる。
【００７１】
アミノ酸配列に関して、当業者は、コードされた配列における単一のアミノ酸又は少ない割合のアミノ酸を変更、付加する又は欠失させる核酸、ペプチド、ポリペプチド又はタンパク質配列に対する個々の置換、欠失又は付加は、変更によりアミノ酸が化学的に類似したアミノ酸へと置換される、「保存的に改変された変異体」であることを認識する。機能的に類似するアミノ酸を提供する保存的置換の表は当技術分野で周知である。このような保存的に改変された変異体は、本発明の多型変異体、種間ホモログ及び対立遺伝子に追加され、除外されない。
【００７２】
以下の８群のそれぞれは互いに保存的な置換であるアミノ酸を含有する：
１）アラニン（Ａ）、グリシン（Ｇ）；
２）アスパラギン酸（Ｄ）、グルタミン酸（Ｅ）；
３）アスパラギン（Ｎ）、グルタミン（Ｑ）；
４）アルギニン（Ｒ）、リジン（Ｋ）；
５）イソロイシン（Ｉ）、ロイシン（Ｌ）、メチオニン（Ｍ）、バリン（Ｖ）；
６）フェニルアラニン（Ｆ）、チロシン（Ｙ）、トリプトファン（Ｗ）；
７）セリン（Ｓ）、スレオニン（Ｔ）；及び
８）システイン（Ｃ）、メチオニン（Ｍ）
（例えば、Ｃｒｅｉｇｈｔｏｎ，  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  （１９８４）参照）。
【００７３】
用語「を参照して番号付けされた」又は「相当する」は、所与のアミノ酸又はポリヌクレオチド配列の番号付けの文脈において使用する場合、所与のアミノ酸又はポリヌクレオチド配列が参照配列と比較される場合の特定の参照配列の残基の番号付けを指す。タンパク質におけるアミノ酸残基は、これが所与の残基とタンパク質内の同じ基本構造位置を占める場合、所与の残基に「相当する」。当業者は、異なる番号付けシステムによる他のタンパク質におけるタンパク質（例えばＳＴＡＴ３又はｇｐ１３０）の特定の位置に相当する残基の同一性及び位置をすぐに認識する。例えば、タンパク質（例えばＳＴＡＴ３又はｇｐ１３０）との簡単な配列アライメントを実施することにより、前記タンパク質の特定の位置に相当する残基の同一性及び位置は、前記タンパク質への他のタンパク質配列のアラインにおいて同定される。例えば、選択された残基が６８５位のリジンと同じ基本空間又は他の構造関係を占める場合、選択されたタンパク質における選択された残基は、６８５位のリジンに相当する。いくつかの実施形態において、選択されたタンパク質がタンパク質と最大の相同性でアラインされる場合、リジン６８５とアラインするアラインされた選択されたタンパク質における位置は、リジン６８５に相当すると言われる。基本の配列アライメントの代わりに、三次元構造アライメントも使用され、その場合、例えば、選択されたタンパク質の構造が６８５位のリジンと最大の一致でアラインされ、全体構造が比較される。この場合、構造モデルにおけるリジン６８５と同じ基本位置を占めるアミノ酸はリジン６８５残基に相当すると言われる。
【００７４】
２つ以上の核酸配列又はポリペプチド配列の文脈での用語「同一の」又はパーセント「同一性」は、以下に記載する初期設定パラメーターのＢＬＡＳＴ若しくはＢＬＡＳＴ２．０配列比較アルゴリズムを使用して、又は手動のアライメント及び視覚検査によって測定した場合と同じ又は同じアミノ酸残基若しくはヌクレオチドの特定のパーセンテージ（すなわち、比較ウインドウ又は指定された領域にわたって最大の一致について比較及びアラインした場合、特定の領域にわたって約６０％の同一性、好ましくは６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又はそれ以上の同一性）を有する２つ以上の配列又はサブ配列を指す（例えばＮＣＢＩ  ｗｅｂ  ｓｉｔｅ  ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｎｃｂｉ．ｎｌｍ．ｎｉｈ．ｇｏｖ／ＢＬＡＳＴ／等を参照）。そのような配列は、このとき「実質的に同一であると言われる。この定義はまた、試験配列の相補鎖も指す又は試験配列の相補鎖に適用されてもよい。この定義は、欠失及び／又は付加を有する配列、並びに置換を有するものも含む。以下に記載するように、好ましいアルゴリズムはギャップ等を明らかにし得る。好ましくは、同一性は、長さが少なくとも約２５のアミノ酸若しくはヌクレオチドである領域、又はよりに好ましくは長さが５０〜１００のアミノ酸若しくはヌクレオチドである領域にわたって存在する。
【００７５】
本明細書で言及する用語「ＳＴＡＴ３」、「ＳＴＡＴ３タンパク質」、「ＳＴＡＴ３ペプチド」は、シグナル伝達兼転写活性化因子３（ＳＴＡＴ３）タンパク質又はＳＴＡＴ３タンパク質活性（例えば、ＳＴＡＴ３と比較して少なくとも５０％、８０％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％以内の活性）を維持するこれらの変異体若しくは相同体の組換え体又は自然発生形態のいずれかを含む。いくつかの態様において、変異体又は相同体は、自然発生のＳＴＡＴ３ポリペプチドと比較して全配列又は配列の一部（例えば、１０、２０、５０、１００、１５０又は２００連続アミノ酸部分）にわたって少なくとも９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％のアミノ酸配列同一性を有する。実施形態において、ＳＴＡＴ３ペプチドは、Ｕｎｉｐｒｏｔ参照番号Ｐ４０７６３によって同定されるタンパク質と実質的に同一である、又はこれと実質的な同一性を有する変異体若しくは相同体である。実施形態において、ＳＴＡＴ３ペプチドは配列番号１の配列を含む。実施形態において、ＳＴＡＴ３ペプチドは配列番号１の配列である。
【００７６】
本明細書で言及する用語「エキスポーチン７」は、エキスポーチン７タンパク質又はエキスポーチン７タンパク質活性（例えば、エキスポーチン７と比較して少なくとも５０％、８０％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％以内の活性）を維持するこれらの変異体若しくは相同体の組換え体又は自然発生形態のいずれかを含む。エキスポーチン７は、積荷を核の中及び外へそれぞれ輸送するのに重要なインポーチン及びエキスポーチンを含む因子からなるカリオフェリンスーパーファミリーの一員である。いくつかの態様において、変異体又は相同体は、自然発生のエキスポーチン７ポリペプチドと比較して全配列又は配列の一部（例えば、５０、１００、１５０又は２００連続アミノ酸部分）にわたって少なくとも９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％のアミノ酸配列同一性を有する。実施形態において、エキスポーチン７タンパク質は、ＵｎｉＰｒｏｔ参照番号Ｑ９ＵＩＡ９によって同定されるタンパク質と実質的に同一である、又はこれらと実質的な同一性を有する変異体若しくは相同体である。実施形態において、エキスポーチン７タンパク質は配列番号５の配列を含む。実施形態において、エキスポーチン７タンパク質は配列番号５の配列である。
【００７７】
本明細書で言及する用語「ＭＡＸ」又は「ＭＡＸタンパク質」は、ｍｙｃ関連因子Ｘ（ＭＡＸ）又はＭＡＸタンパク質活性（例えば、ＭＡＸと比較して少なくとも５０％、８０％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％以内の活性）を維持するこれらの変異体若しくは相同体の組換え体又は自然発生形態のいずれかを含む。ＭＡＸは転写制御因子であり、コア配列５’−ＣＡＣ［ＧＡ］ＴＧ−３’を認識し得るＭＹＣ又はＭＡＤと配列特異的ＤＮＡ結合タンパク質複合体を形成する。いくつかの態様において、変異体又は相同体は、自然発生のＭＡＸポリペプチドと比較して全配列又は配列の一部（例えば、５０、１００、１５０又は２００連続アミノ酸部分）にわたって少なくとも９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％のアミノ酸配列同一性を有する。実施形態において、ＭＡＸタンパク質は、ＵｎｉＰｒｏｔ参照番号Ｐ６１２４４によって同定されるタンパク質と実質的に同一である、又はこれらと実質的な同一性を有する変異体若しくは相同体である。実施形態において、ＭＡＸタンパク質は配列番号１２の配列を含む。実施形態において、ＭＡＸタンパク質は配列番号１０の配列を含む。実施形態において、ＭＡＸタンパク質は配列番号１２の配列である。
【００７８】
本明細書で使用する場合、用語「細胞透過性」又は「細胞透過」は、細胞外環境から細胞へと相当量又は有効量で通過する分子（例えばタンパク質）の能力を指す。したがって、細胞透過性コンジュゲートは、細胞外環境から細胞膜を通過して細胞に入る分子である。
【００７９】
本明細書で使用する場合、用語「非細胞透過性」又は「非細胞透過」は、細胞外環境から細胞へと相当量又は有効量で通過できない分子の能力を指す。したがって、非細胞透過性ペプチド又はタンパク質は通常、細胞、臓器又は生物の集合において相当な生物学的効果を達成するために細胞外環境から細胞膜を通って細胞へと入ることができない。この用語は、１つ以上の少数のペプチド又はタンパク質が細胞に入る可能性を除外しない。しかしながら、この用語は、通常、相当な程度まで細胞外環境から細胞に入ることができない分子を指す。非細胞透過性分子及び物質の例としては、限定はされないが、大きな分子、例えば高分子量タンパク質などが挙げられる。ペプチド又はタンパク質は、当業者に公知の方法を使用して非細胞透過性であると決定され得る。例としては、ペプチド又はタンパク質は蛍光標識され、ペプチド又はタンパク質の細胞外環境から細胞内に通過する能力は、フローサイトメトリー分析又は共焦点顕微鏡によってインビトロで決定され得る。いくつかの実施形態において、「非細胞透過性タンパク質」は、ホスホロチオエート核酸又はホスホロチオエートポリマー骨格に結合した同じタンパク質よりも、少なくとも約２、３、４、５、６、７、８、９、１０、２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００、２００、３００、４００、５００、６００、７００、８００、９００、１０００、１０，０００又は１００，０００分の１少なく細胞に透過するタンパク質を指す。いくつかの実施形態において、「非細胞透過性タンパク質」は、測定可能な程度に細胞を透過しないタンパク質を指す。
【００８０】
本明細書で使用する場合、用語「細胞内」は細胞の内側を意味する。本明細書で使用する場合、「細胞内標的」は、細胞の内側に位置し、本明細書に提供される非細胞透過性タンパク質が結合する標的である標的、例えば核酸、ポリペプチド又は他の分子（例えば炭水化物）である。結合は直接的又は間接的であってよい。任意選択的に、非細胞透過性タンパク質は、選択的に細胞内標的に結合する。選択的に結合する、選択的に結合すること又は特異的に結合することは、１つの薬剤（例えば細胞内標的）に結合している薬剤（例えば非細胞透過性タンパク質）を指し、他の薬剤を部分的又は完全に除外する。結合することは、アッセイ方法のバックグラウンドの少なくとも約１．５倍の検出可能な結合を意味する。選択的又は特異的な結合の場合、そのような検出可能な結合は、所与の薬剤で検出され得るが対照薬剤では検出されない。代わりに、又はさらに、結合の検出は、下流の分子又は事象の存在をアッセイすることによって決定され得る。
【００８１】
本明細書で使用する場合、用語「コンジュゲート」は、原子又は分子間の会合を指す。会合は直接的又は間接的であってよい。例えば、核酸とタンパク質の間のコンジュゲートは、例えば共有結合による直接的又は例えば非共有結合（例えば、静電相互作用（例えば、イオン結合、水素結合、ハロゲン結合）、ファンデルワールス相互作用（例えば、双極子−双極子、双極子によって誘発される双極子、ロンドン分散力）、環のスタッキング（π効果）、疎水性相互作用など）による間接的であってもよい。任意選択的に、コンジュゲートは、限定はされないが求核置換（例えば、アミン及びアルコールとハロゲン化アシル、活性エステルとの反応）、求電子置換（例えば、エナミン反応）及び炭素−炭素及び炭素−ヘテロ原子の多重結合への付加（例えば、マイケル反応、Ｄｉｅｌｓ−Ａｌｄｅｒ付加）を含む、コンジュゲート化学を使用して形成される。これらの反応及び他の有用な反応は、例えば、Ｍａｒｃｈ，  ＡＤＶＡＮＣＥＤ  ＯＲＧＡＮＩＣ  ＣＨＥＭＩＳＴＲＹ，  ３ｒｄ  Ｅｄ．，  Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ，  Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，  １９８５；Ｈｅｒｍａｎｓｏｎ，  ＢＩＯＣＯＮＪＵＧＡＴＥ  ＴＥＣＨＮＩＱＵＥＳ，  Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ，  Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ，  １９９６；及びＦｅｅｎｅｙ  ｅｔ  ａｌ．，  ＭＯＤＩＦＩＣＡＴＩＯＮ  ＯＦ  ＰＲＯＴＥＩＮＳ；Ａｄｖａｎｃｅｓ  ｉｎ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  Ｓｅｒｉｅｓ，  Ｖｏｌ．  １９８，  Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｓｏｃｉｅｔｙ，  Ｗａｓｈｉｎｇｔｏｎ，  Ｄ．Ｃ．，  １９８２において議論される。実施形態において、ホスホロチオエート核酸及びホスホロチオエート骨格ポリマーは、ホスホロチオエート核酸及びホスホロチオエート骨格ポリマー（例えば、モノチオホスフェート）の成分とタンパク質の成分（例えばアミノ酸）の間の非共有化学反応によってタンパク質に非共有結合している。
【００８２】
本明細書で使用する場合、「細胞」は、そのゲノムＤＮＡを保存又は複製するのに十分な代謝又は他の機能を実行する細胞を指す。細胞は、例えば、無傷の細胞膜の存在、特定の色素による染色、子孫細胞を産生する能力、又は配偶子の場合には、第２配偶子と結合し生存可能な子孫を産生する能力を含む、当技術分野で周知の方法によって同定され得る。細胞は、原核細胞及び真核細胞を含んでよい。原核細胞としては、限定はされないが、細菌が挙げられる。真核細胞としては、限定はされないが、酵母細胞及び植物及び動物由来の細胞、例えば哺乳動物、昆虫（例えばスポドプテラ）及びヒト細胞が挙げられる。細胞は、天然では非接着性である、又は例えばトリプシン処理によって表面に結合しないように処理されている場合に有用であり得る。
【００８３】
本明細書で使用する場合、用語「活性化する」は、所与の遺伝子又はタンパク質（例えば、ｐ５３）の発現又は活性を検出可能な程度に増加することができる核酸−ペプチドコンジュゲートを指す。活性化核酸−ペプチドコンジュゲートは、活性化核酸の不在下の対照と比較して１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％以上、発現又は活性を増加し得る。特定の例において、発現又は活性は、活性化核酸−ペプチドコンジュゲートの不在下での発現又は活性の１．５倍、２倍、３倍、４倍、５倍、１０倍以上高い。
【００８４】
本明細書で規定する場合、核酸−ペプチドコンジュゲート相互作用に関して用語「阻害」、「阻害する」、「阻害すること」等は、阻害剤の不在下のタンパク質の活性又は機能と比較してタンパク質（例えば、エキスポーチン７）の活性又は機能にネガティブな影響（例えば、減少）を及ぼすことを意味する。実施形態において、阻害は疾患又は疾患の症状の低減を指す。したがって、実施形態において、阻害は、少なくとも一部、部分的又は全体的なブロッキング刺激、活性化の減少、予防若しくは遅延、又はシグナル伝達若しくは酵素活性若しくはタンパク質の量を不活性化する、脱感作する、若しくは下方制御することを含む。
【００８５】
「接触」は、明白な通常の意味に従って使用され、少なくとも２つの異なる種（例えば、生体分子又は細胞を含む化学化合物）が、反応、相互作用、又は物理的に接触するほど十分に近づくことを可能にする過程を指す。しかしながら、得られた反応産物は、添加された試薬間の反応から、又は反応混合物中で産生され得る１種以上の添加された試薬由来の中間体から直接的に産生することができることが理解される。
【００８６】
用語「接触」は、２つの種を反応させ、相互作用させ、又は物理的に接触させることを含んでよく、２つの種は、例えば本明細書に記載の非細胞透過性ペプチド（例えば、ＳＴＡＴ３）と細胞内標的（例えば、エキスポーチン７）であってよい。
【００８７】
「生物学的試料」又は「試料」は、対象若しくは患者から得られた、又は対象若しくは患者由来の材料を指す。生物学的試料は、組織の切片、例えば生検及び検死試料、並びに組織学的な目的のために採取された凍結切片を含む。そのような試料は、体液、例えば血液及び血液画分又は血液製剤（例えば、血清、血漿、血小板、赤血球等）、唾液、組織、培養細胞（例えば、初代培養、移植片、及び形質転換細胞）、便、尿、滑液、関節組織、滑膜組織、滑膜細胞、線維芽細胞様滑膜細胞、マクロファージ様滑膜細胞、免疫細胞、造血細胞、線維芽細胞、マクロファージ、Ｔ細胞等を含む。生物学的試料は、典型的には、真核生物、例えば、霊長類、例えばチンパンジー又はヒト；ウシ；イヌ；ネコ；げっ歯類、例えばモルモット、ラット、マウス；ウサギなどの哺乳動物；又はトリ；爬虫類；若しくは魚から得られる。
【００８８】
「対照」又は「標準対照」は、試験試料、測定又は値との比較のために、参照、通常は公知の参照として働く試料、測定又は値を指す。例えば、試験試料は、所与の疾患（例えば、自己免疫疾患、炎症性自己免疫疾患、がん、感染症、免疫疾患又は他の疾患）を有すると考えられる患者から採取され、公知の正常な（疾患ではない）個人（例えば、標準対照対象）と比較され得る。標準対照は、所与の疾患を有していない同様の個人（例えば標準対照対象）、例えば同様の医学的背景、同じ年齢、体重等を有する健康な個人の集団（すなわち、標準対照集団）から集めた測定又は値の平均も表すことができる。標準対照値は、同じ個人、例えば、疾患が発症する前の患者からの初期に得られた試料からも得ることができる。当業者は、任意の数のパラメーター（例えば、ＲＮＡレベル、タンパク質レベル、特定の細胞型、特定の体液、特定の組織、滑膜細胞、滑液、滑膜組織、線維芽細胞様滑膜細胞、マクロファージ様滑膜細胞等）の評価のために、標準対照を設計することができることを認識する。
【００８９】
当業者は、所与の状況においてどの標準対照が最も適切であり、標準対照値との比較に基づいてデータを分析することができるかを理解する。標準対照は、データの有意性（例えば、統計的有意性）を決定するのにも役立つ。例えば、所与のパラメーターの値が標準対照において大きく変化している場合、試験試料における変化は有意でないと考えられる。
【００９０】
用語「対象」、「患者」、「個人」等は、限定することを意図せず、通常交換可能であり得る。すなわち、「患者」として記載する個人は所与の疾患を有する必要はなく、単に診察を受けるだけであってよい。
【００９１】
用語「疾患」又は「状態」は、本明細書で提供する化合物、医薬組成物又は方法によって処置することができる患者又は対象の状態又は健康状態を指す。実施形態において、疾患は、がん（例えば、肺がん、卵巣がん、骨肉腫、膀胱がん、子宮頸がん、肝臓がん、腎臓がん、皮膚がん（例えばメルケル細胞癌）、精巣がん、白血病、リンパ腫、頭頚部がん、結腸直腸がん、前立腺がん、膵臓がん、メラノーマ、乳がん、神経芽腫）である。この疾患は、自己免疫性、炎症性、がん性、感染性、代謝性、発達性、心血管性、肝臓、腸、内分泌腺、神経学的又は他の疾患であってよい。
【００９２】
本明細書で使用する場合、用語「がん」は、白血病、リンパ腫、メラノーマ、神経内分泌腫瘍、癌及び肉腫を含む、哺乳動物に見出される全ての種類のがん、新生物又は悪性腫瘍を指す。本明細書で提供する化合物、医薬組成物又は方法によって処置され得る例示的ながんとしては、リンパ腫（皮膚Ｔ細胞リンパ腫）、肉腫、膀胱がん、骨がん、脳腫瘍、子宮頸がん、結腸がん、食道がん、胃がん、頭頚部がん、腎臓がん、骨髄腫、甲状腺がん、白血病、前立腺がん、乳がん（例えばトリプルネガティブ、ＥＲ陽性、ＥＲ陰性、化学療法抵抗性、ハーセプチン抵抗性、ＨＥＲ２陽性、ドキソルビシン抵抗性、タモキシフェン抵抗性、腺管癌、小葉癌、原発性、転移性）、卵巣がん、前立腺がん、肝臓がん（例えば、肝細胞癌）、肺がん（例えば、非小細胞肺癌、扁平上皮細胞肺癌、腺癌、大細胞肺癌、小細胞肺癌、カルチノイド、肉腫）、多型神経膠芽腫、神経膠腫、メラノーマ、前立腺がん、去勢抵抗性前立腺がん、乳がん、トリプルネガティブ乳がん、神経膠芽腫、卵巣がん、肺がん、扁平上皮癌（例えば、頭部、頚部又は食道）、結腸直腸がん、白血病、急性骨髄性白血病、リンパ腫、Ｂ細胞リンパ腫又は多発性骨髄腫が挙げられる。さらなる例としては、甲状腺がん、内分泌系がん、脳がん、乳がん、子宮頸がん、結腸がん、頭頚部がん、食道がん、肝臓がん、腎臓がん、肺がん、非小細胞肺がん、メラノーマ、中皮腫、卵巣がん、肉腫、胃がん、子宮がん又は髄芽腫、ホジキン病、非ホジキンリンパ腫、多発性骨髄腫、神経芽細胞腫、神経膠腫、多型神経膠芽腫、卵巣がん、横紋筋肉腫、原発性血小板増加症、原発性マクログロブリン血症、原発性脳腫瘍、がん、悪性膵臓インスリノーマ、悪性カルチノイド、膀胱がん、前悪性肌病変、精巣がん、リンパ腫、甲状腺がん、神経芽細胞腫、食道がん、尿生殖器官がん、悪性高カルシウム血症、子宮内膜がん、副腎皮質がん、膵臓内分泌又は外分泌の新生物、髄様甲状腺がん、髄様甲状腺癌、メラノーマ、結腸直腸がん、乳頭様甲状腺がん、肝細胞癌、乳頭のパジェット病、葉状腺腫瘍、小葉癌、腺管癌、膵臓星状細胞がん、肝星状細胞がん又は前立腺がんが挙げられる。
【００９３】
用語「白血病」は、広く、血液形成器官の進行性悪性疾患を指し、通常、血液及び骨髄における白血球及びこれらの前駆体の増殖及び発生の歪みを特徴とする。白血病は、通常、（１）急性又は慢性の疾患の期間及び特徴；（２）関与する細胞の種類；骨髄（骨髄性）、リンパ球（リンパ性）又は単球性；及び（３）血液白血病又は無白血病（亜白血性）における異常細胞の数が増加していること、又は増加していないことを基準として臨床的に分類される。本明細書で提供する化合物、医薬組成物又は方法によって処置され得る例示的な白血病としては、例えば、急性非リンパ性白血病、慢性リンパ性白血病、急性顆粒球性白血病、慢性顆粒球性白血病、急性前骨髄球性白血病、成人Ｔ細胞白血病、非白血性白血病、白血球性白血病、好塩基球性白血病、芽球性白血病、ウシ白血病、慢性骨髄性白血病、皮膚白血病、胎生細胞性白血病、好酸球性白血病、グロス白血病、有毛細胞白血病、血芽球性白血病、血芽球細胞性白血病、組織球性白血病、幹細胞性白血病、急性単球性白血病、白血球減少性白血病、リンパ性白血病、リンパ芽球性白血病、リンパ細胞性白血病、リンパ球性白血病、リンパ様白血病、リンパ肉腫細胞性白血病、肥満細胞性白血病、巨核球性白血病、小骨髄芽球性白血病、単球性白血病、骨髄芽球性白血病、骨髄性白血病、骨髄顆粒球性白血病、骨髄単球性白血病、ネーゲリ白血病、形質細胞性白血病、多発性骨髄腫、形質細胞白血病、前骨髄球性白血病、リーダー細胞性白血病、シリング白血病、幹細胞性白血病、亜白血性白血病又は未分化細胞性白血病が挙げられる。
【００９４】
用語「肉腫」は、通常、胎芽の結合組織のような物質で形成され、原線維又は同種の物質に埋め込まれた密に集まった細胞から通常構成される腫瘍を指す。本明細書で提供する化合物、医薬組成物又は方法によって処置され得る肉腫としては、軟骨肉腫、線維肉腫、リンパ肉腫、黒色肉腫、粘液肉腫、骨肉腫、アバーネシー肉腫（Ａｂｅｒｎｅｔｈｙ’ｓ  ｓａｒｃｏｍａ）、脂肪性肉腫、脂肪肉腫、胞状軟部肉腫、エナメル上皮肉腫、ブドウ状肉腫、緑色肉腫、絨毛上皮腫、胎芽性肉腫、ウィルムス腫瘍肉腫、子宮内膜肉腫、間質性肉腫、ユーイング肉腫、筋膜肉腫、線維芽細胞性肉腫、巨細胞肉腫、顆粒球性肉腫、ホジキン肉腫、突発多発性色素出血性肉腫、Ｂ細胞免疫芽球性肉腫、リンパ腫、Ｔ細胞免疫芽球性肉腫、イエンセン肉腫、カポジ肉腫、クップファー細胞肉腫、血管肉腫、白血肉腫、悪性間葉肉腫、傍骨性肉腫、網状赤血球性肉腫、ラウス肉腫、漿液嚢肉腫、滑膜肉腫又は毛細血管拡張性肉腫が挙げられる。
【００９５】
用語「メラノーマ」は、皮膚及び他の器官のメラノサイト系から生じる腫瘍を意味するのに使用される。本明細書で提供する化合物、医薬組成物又は方法によって処置され得るメラノーマとしては、例えば、末端部黒子黒色腫、メラニン欠乏性黒色腫、良性若年性黒色腫、クラウドマン黒色腫、Ｓ９１黒色腫、ハーディングパッセー黒色腫、若年性黒色腫、悪性黒子型黒色腫、悪性黒色腫、結節性黒色腫、爪下黒色腫又は表在拡大型黒色腫が挙げられる。
【００９６】
用語「癌」は、周囲の組織に浸潤し、転移を引き起こしやすい上皮細胞で形成された悪性の新生物を指す。本明細書で提供する化合物、医薬組成物又は方法によって処置され得る例示的な癌としては、例えば、髄様甲状腺癌、家族性髄様甲状腺癌、腺房癌、腺癌、腺嚢胞癌、腺様嚢胞癌、癌腺腫、副腎皮質の癌、肺胞癌、肺胞細胞癌、基底細胞癌、基底細胞性癌、類基底細胞癌、基底扁平上皮癌、細気管支肺胞上皮癌、細気管支癌、気管支原生癌、大脳様癌、胆管細胞性癌、絨毛膜癌、膠様癌、コメド癌、コーパス癌、篩状癌、胴甲性癌、クタノイム癌、円柱状癌、円柱細胞性癌、腺管癌、導管性癌、デュラム癌、胎生期癌、脳様癌、エピエルモイド癌、上皮腺様癌、外方増殖性癌、潰瘍性癌、線維性癌、ゼラチン状癌、ゼラチン様癌、巨細胞癌、巨細胞性癌、腺癌、顆粒膜細胞癌、毛母癌、血液様癌、肝細胞癌、ヒュルトレ細胞癌、硝子様癌、副腎様癌、幼児型胎児性癌、原位置癌、表皮内癌、上皮内癌、クロンペチャー癌、クルチツキー細胞癌、大細胞癌、レンズ状癌、レンズ様癌、脂肪腫性癌、小葉癌、リンパ上皮癌、骨髄癌、髄様癌、黒色癌、モル癌、粘液性癌、ミューシパーラム癌、粘液細胞癌、粘液性類表皮癌、粘膜癌、粘液癌、粘液腫性癌、鼻咽頭癌、燕麦畑細胞癌、骨化癌、類骨癌、乳頭状癌、門脈周囲性癌、転移前癌、有棘細胞癌、髄質様癌、腎臓の腎細胞癌、予備細胞癌、肉腫様癌、シュナイダー癌、硬癌、陰嚢癌、印環細胞癌、単純性癌、小細胞癌、ソラノイド癌、球状細胞癌、紡錘体細胞癌、海綿状癌、鱗状癌、扁平上皮癌、ストリング癌、毛細血管拡張性癌、毛細管拡張様癌、移行上皮癌、結節性癌、管状癌、結節状癌、ゆうぜい癌又は絨毛性癌が挙げられる。
【００９７】
本明細書で使用する場合、用語「転移」、「転移性」及び「転移性がん」は交換可能に使用することができ、ある器官又は別の隣接していない器官又は身体の一部からの増殖性の疾患又は障害、例えばがんの広がりを指す。がんは、原発部位、例えば乳房で起こり、この部位は原発腫瘍、例えば原発性乳がんと呼ばれる。原発腫瘍又は原発部位のいくつかのがん細胞は、局所領域において周囲の正常組織に透過及び浸潤する能力、及び／又はリンパ系若しくは血管系の壁を透過し、これらの系を通って体内の他の部位及び組織に循環する能力を獲得する。原発腫瘍のがん細胞から形成された第２の臨床的に検出可能な腫瘍は、転移性又は二次性腫瘍と呼ばれる。がん細胞が転移すると、転移性腫瘍及びこの細胞は、元の腫瘍のものと類似していると推定される。したがって、肺がんが乳房に転移する場合、乳房の部位の二次性腫瘍は、異常な肺細胞からなり、異常な乳房細胞は含まれない。胸部の二次性腫瘍は、転移性肺がんと呼ばれる。したがって、転移性がんという句は、対象が原発腫瘍を有している又は過去に有しており、１つ以上の二次性腫瘍を有する疾患を指す。非転移性がん又は転移性ではないがんを有する対象という句は、対象が原発腫瘍を有するが、１つ以上の二次性腫瘍を有さない疾患を指す。例えば、転移性肺がんは、原発性肺腫瘍を有する、又は原発性肺腫瘍の病歴を有する対象における疾患、及び例えば乳房における第２の位置又は複数の位置に１つ以上の二次的腫瘍を有する疾患を指す。
【００９８】
本明細書で使用する場合、状態、疾患又は障害、又は状態、疾患若しくは障害に関連する症状を「処置すること」又は「〜の処置」は、臨床結果を含む有益な又は所望の結果を得るための手法を指す。有益な又は所望の臨床結果としては、限定はされないが、部分的か全体的かに関わらず、１つ以上の症状又は状態の緩和又は改善、状態、障害又は疾患の程度の低下、状態、障害又は疾患の状態の安定化、状態、障害又は疾患の発生の予防、状態、障害又は疾患の拡大の予防、状態、障害又は疾患の進行の遅延又は減速、状態、障害又は疾患の発症を遅延又は減速、状態、障害又は疾患の状態の改善又は軽減及び緩解が挙げられる。「処置すること」は、処置していないときに予想される以上に対象の生存を延長することも意味することができる。「処置すること」は、状態、障害又は疾患の進行を阻害すること、状態、障害又は疾患の進行を一時的に減速することを意味することもあるが、いくつかの場合において、状態、障害又は疾患の進行を永久に停止させることを含む。本明細書で使用する場合、用語、処置、処置する又は処置することは、プロテアーゼの発現によって特徴付けられる疾患若しくは状態の１つ以上の症状の効果、又はプロテアーゼの発現によって特徴付けられる疾患若しくは状態の症状を低減する方法を指す。したがって、開示した方法において、処置は、確立された疾患、状態、又はこの疾患若しくは状態の症状の重篤度の１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％又は１００％の低減を指してもよい。例えば、疾患を処置するための方法は、対照と比較して、対象における疾患の１つ以上の症状の１０％の低減がある場合に、処置であると考えられる。したがって、この低減は、天然又は対照レベルと比較して、１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、１００％、又は１０％と１００％の間の任意の割合の低減であってもよい。処置は、疾患、状態又は疾患若しくは状態の症状の治癒又は完全な除去を必ずしも指さないことが理解される。さらに、本明細書で使用する場合、軽減する、低減する又は阻害するとの言及は、対照レベルと比較して、１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％又はより大きな変化を含み、このような用語は、必ずしも完全な排除を含むわけではないこともあり得る。
【００９９】
用語「用量」及び「投与量」は、本明細書で交換可能に使用される。用量は、各投与時に、個人に与えられる活性成分の量を指す。用量は、所与の治療のための通常の用量範囲、投与の頻度；個人のサイズ及び耐性；状態の重篤度；副作用のリスク；及び投与の経路を含む因子の数によって変わる。当業者は、用量が上記の因子によって又は治療進行に基づいて変えられ得ることを認識する。用語「投与剤形」は、医薬又は医薬組成物の特定のフォーマットを指し、投与の経路による。例えば、投与剤形は、噴霧、例えば吸入のための液体形態、例えば経口送達のための錠剤又は液体、又は例えば注射のため生理食塩水溶液であってよい。
【０１００】
本明細書で使用する場合、用語「投与する」は、経口投与、坐剤としての投与、局所的接触、静脈内、非経口、腹腔内、筋肉内、病巣内、髄腔内、鼻腔内若しくは皮下投与、又は徐放装置、例えばミニ浸透圧ポンプを対象に移植することを意味する。投与は、非経口及び経粘膜（例えば、頬側、舌下、口蓋、歯肉、鼻、膣、直腸又は経皮）を含む、任意の経路による。非経口投与は、例えば、静脈内、筋肉内、細動脈内、皮内、皮下、腹腔内、脳室内及び頭蓋内を含む。他の送達様式は、限定はされないが、リポソーム製剤の使用、静脈内注入、経皮パッチ等を含む。
【０１０１】
本明細書で使用する場合、「治療有効用量又は治療有効量」により、これが投与され、効果が産生される用量を意味する（例えば、疾患を処置する又は予防する）。正確な用量及び製剤は処置の目的により、公知の技術を使用して当業者によって確認される（例えば、Ｌｉｅｂｅｒｍａｎ，  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｄｏｓａｇｅ  Ｆｏｒｍｓ  （ｖｏｌｓ．  １−３，  １９９２）；  Ｌｌｏｙｄ，  Ｔｈｅ  Ａｒｔ，  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｃｏｍｐｏｕｎｄｉｎｇ  （１９９９）；  Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：  Ｔｈｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｙ，  ２０ｔｈ  Ｅｄｉｔｉｏｎ，  Ｇｅｎｎａｒｏ，  Ｅｄｉｔｏｒ  （２００３），  ａｎｄ  Ｐｉｃｋａｒ，  Ｄｏｓａｇｅ  Ｃａｌｃｕｌａｔｉｏｎｓ  （１９９９）参照）。例えば、所与のパラメーターに関して、治療有効量は少なくとも５％、１０％、１５％、２０％、２５％、４０％、５０％、６０％、７５％、８０％、９０％又は少なくとも１００％の増加又は減少を示す。治療効果は「−倍」増加又は減少としても表すことができる。例えば、治療有効量は、標準対照よりも少なくとも１．２倍、１．５倍、２倍、５倍又はそれ以上効果を有し得る。治療有効用量又は治療有効量は、１つ以上の疾患の症状を改善し得る。治療有効用量又は治療有効量は、これが投与される効果が疾患を発生するリスクがあるヒトを処置する場合、疾患又は疾患の１つ以上の症状の発症を予防又は遅延し得る。
【０１０２】
本明細書で使用する場合、用語「薬学的に許容される」は、「生理学的に許容される」及び「薬理学的に許容される」と同義的に使用される。医薬組成物は、通常貯蔵中に緩衝及び保存のための薬剤を含み、投与の経路に応じて適切な送達のための緩衝液及び担体を含むことができる。
【０１０３】
核酸−ペプチドコンジュゲート
本明細書で、特に、そのＣ末端にホスホロチオエート核酸を結合している非細胞透過性タンパク質を含む核酸−ペプチドコンジュゲートが提供される。ホスホロチオエート核酸の非細胞透過性タンパク質への結合は、非細胞透過性ペプチドの効率的な細胞内送達に安定性を与え、効率的な細胞内送達を可能にする。細胞への侵入時に、本明細書に提供する非細胞透過性ペプチドは、疾患病状に含まれる細胞内分子の活性を標的化及び改変し、それにより疾患転帰を改善し得る。実施形態を含む本明細書に提供する核酸−ペプチドコンジュゲートは、特に、がん、炎症性疾患、痛み、及びウイルス感染の処置に有用である。
【０１０４】
本明細書に記載の第１の核酸−ペプチドコンジュゲート及び第２の核酸−ペプチドコンジュゲートを含むコンジュゲート二量体が本明細書にさらに提供され、第２の核酸−ペプチドコンジュゲートは本明細書に記載の第２の非細胞透過性ペプチド及び非ホスホロチオエート化核酸を含み；第２の化学リンカーは、非ホスホロチオエート化核酸を第２の非細胞透過性ペプチドのＣ末端に結合している。第１の核酸−ペプチドコンジュゲートのホスホロチオエート核酸の第２の核酸−ペプチドコンジュゲートの非ホスホロチオエート化核酸との塩基対形成により、第１の核酸−ペプチドコンジュゲートは第２の核酸−ペプチドコンジュゲートと二量体を形成する。本明細書で提供するコンジュゲート二量体は、実施形態を含む本明細書に提供する全ての使用及び組成物について熟考される。提供される本発明に有用な例示的なコンジュゲート二量体は、図２２Ａ及び図２４Ａに示される。
【０１０５】
一態様において、コンジュゲート二量体が提供される。コンジュゲート二量体は：（ｉ）（ａ）第１の非細胞透過性ペプチド；（ｂ）ホスホロチオエート核酸；及び（ｃ）ホスホロチオエート核酸を第１の非細胞透過性ペプチドのＣ末端に結合している第１の化学リンカーを含む第１の核酸−ペプチドコンジュゲート；及び（ｉｉ）（ａ）第２の非細胞透過性ペプチド；（ｂ）非ホスホロチオエート化核酸；及び（ｃ）非ホスホロチオエート化核酸を第２の非細胞透過性ペプチドのＣ末端に結合している第２の化学リンカーを含む第２の核酸−ペプチドコンジュゲートを含み、ここでホスホロチオエート核酸及び非ホスホロチオエート化核酸はハイブリダイズされ、第１の核酸−ペプチドコンジュゲートを第２の核酸−ペプチドコンジュゲートに結合し、それによりコンジュゲート二量体を形成している。
【０１０６】
一態様において：（ｉ）非細胞透過性ペプチド；（ｉｉ）ホスホロチオエート核酸；及び（ｉｉｉ）ホスホロチオエート核酸を非細胞透過性ペプチドのＣ末端に結合している化学リンカーを含む核酸−ペプチドコンジュゲートであって、ホスホロチオエート核酸が非細胞透過性ペプチドの細胞内送達を増強する核酸−ペプチドコンジュゲートが提供される。
【０１０７】
本明細書で使用する場合、用語「Ｃ末端」は、カルボキシル末端、カルボキシ末端、Ｃ末端鎖（ｃ−ｔｅｒｍｉｎａｌ  ｔａｉｌ）、Ｃ末端（ｃ−ｔｅｒｍｉｎａｌ  ｅｎｄ）及びＣＯＯＨ末端と同義であり、生物学におけるその通常の意味に従って使用され、アミノ酸配列の終止部分を指す。例えば、Ｃ末端は、アミノ酸配列の最後のアミノ酸、例えば
【０１０８】
【化２】
2020527555.tif 000004
を指してよく、ここで、側鎖はアミノ酸側鎖と呼ばれる）。実施形態において、Ｃ末端はカルボン酸部分を含む。
【０１０９】
実施形態において、非細胞透過性ペプチドは約５、１０、１５、２０又は２５アミノ酸長である。実施形態において、非細胞透過性ペプチドは約５アミノ酸長である。実施形態において、非細胞透過性ペプチドは５アミノ酸長である。実施形態において、非細胞透過性ペプチドは約８アミノ酸長である。実施形態において、非細胞透過性ペプチドは８アミノ酸長である。実施形態において、非細胞透過性ペプチドは約１０アミノ酸長である。実施形態において、非細胞透過性ペプチドは１０アミノ酸長である。実施形態において、非細胞透過性ペプチドは約１１アミノ酸長である。実施形態において、非細胞透過性ペプチドは１１アミノ酸長である。実施形態において、非細胞透過性ペプチドは約１３アミノ酸長である。実施形態において、非細胞透過性ペプチドは１３アミノ酸長である。実施形態において、非細胞透過性ペプチドは約１５アミノ酸長である。実施形態において、非細胞透過性ペプチドは１５アミノ酸長である。実施形態において、非細胞透過性ペプチドは約２２アミノ酸長である。実施形態において、非細胞透過性ペプチドは２２アミノ酸長である。実施形態において、非細胞透過性ペプチドは約２０アミノ酸長である。実施形態において、非細胞透過性ペプチドは２０アミノ酸長である。実施形態において、非細胞透過性ペプチドは約２５アミノ酸長である。実施形態において、非細胞透過性ペプチドは２５アミノ酸長である。
【０１１０】
実施形態において、非細胞透過性ペプチドは少なくとも５（例えば、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２６、２８、２９、３０、３５、４０、４５、５０）アミノ酸長である。実施形態において、非細胞透過性ペプチドは少なくとも６アミノ酸長である。実施形態において、非細胞透過性ペプチドは少なくとも７アミノ酸長である。実施形態において、非細胞透過性ペプチドは少なくとも８アミノ酸長である。実施形態において、非細胞透過性ペプチドは少なくとも９アミノ酸長である。実施形態において、非細胞透過性ペプチドは少なくとも１０アミノ酸長である。実施形態において、非細胞透過性ペプチドは少なくとも１１アミノ酸長である。実施形態において、非細胞透過性ペプチドは少なくとも１２アミノ酸長である。実施形態において、非細胞透過性ペプチドは少なくとも１３アミノ酸長である。実施形態において、非細胞透過性ペプチドは少なくとも１４アミノ酸長である。実施形態において、非細胞透過性ペプチドは少なくとも１５アミノ酸長である。実施形態において、非細胞透過性ペプチドは少なくとも１６アミノ酸長である。実施形態において、非細胞透過性ペプチドは少なくとも１７アミノ酸長である。実施形態において、非細胞透過性ペプチドは少なくとも１８アミノ酸長である。実施形態において、非細胞透過性ペプチドは少なくとも１９アミノ酸長である。実施形態において、非細胞透過性ペプチドは少なくとも２０アミノ酸長である。実施形態において、非細胞透過性ペプチドは少なくとも２１アミノ酸長である。実施形態において、非細胞透過性ペプチドは少なくとも２２アミノ酸長である。実施形態において、非細胞透過性ペプチドは少なくとも２３アミノ酸長である。実施形態において、非細胞透過性ペプチドは少なくとも２４アミノ酸長である。実施形態において、非細胞透過性ペプチドは少なくとも２５アミノ酸長である。実施形態において、非細胞透過性ペプチドは少なくとも２６アミノ酸長である。実施形態において、非細胞透過性ペプチドは少なくとも２７アミノ酸長である。実施形態において、非細胞透過性ペプチドは少なくとも２８アミノ酸長である。実施形態において、非細胞透過性ペプチドは少なくとも２９アミノ酸長である。実施形態において、非細胞透過性ペプチドは少なくとも３０アミノ酸長である。実施形態において、非細胞透過性ペプチドは少なくとも３５アミノ酸長である。実施形態において、非細胞透過性ペプチドは少なくとも４０アミノ酸長である。実施形態において、非細胞透過性ペプチドは少なくとも４５アミノ酸長である。実施形態において、非細胞透過性ペプチドは少なくとも５０アミノ酸長である。
【０１１１】
実施形態において、非細胞透過性ペプチドは、約２５ｋＤより小さい分子量を有する（例えば、２４、２３、２２、２１、２０、１９、１８、１７、１６、１５、１４、１３、１２、１１、１０、５、１ＫＤ）。実施形態において、非細胞透過性ペプチドは、約２４ｋＤより小さい分子量を有する。実施形態において、非細胞透過性ペプチドは、約２３ｋＤより小さい分子量を有する。実施形態において、非細胞透過性ペプチドは、約２２ｋＤより小さい分子量を有する。実施形態において、非細胞透過性ペプチドは、約２１ｋＤより小さい分子量を有する。実施形態において、非細胞透過性ペプチドは、約２０ｋＤより小さい分子量を有する。実施形態において、非細胞透過性ペプチドは、約１９ｋＤより小さい分子量を有する。実施形態において、非細胞透過性ペプチドは、約１８ｋＤより小さい分子量を有する。実施形態において、非細胞透過性ペプチドは、約１７ｋＤより小さい分子量を有する。実施形態において、非細胞透過性ペプチドは、約１６ｋＤより小さい分子量を有する。実施形態において、非細胞透過性ペプチドは、約１５ｋＤより小さい分子量を有する。実施形態において、非細胞透過性ペプチドは、約１４ｋＤより小さい分子量を有する。実施形態において、非細胞透過性ペプチドは、約１３ｋＤより小さい分子量を有する。実施形態において、非細胞透過性ペプチドは、約１２ｋＤより小さい分子量を有する。実施形態において、非細胞透過性ペプチドは、約１１ｋＤより小さい分子量を有する。実施形態において、非細胞透過性ペプチドは、約１０ｋＤより小さい分子量を有する。実施形態において、非細胞透過性ペプチドは、約５ｋＤより小さい分子量を有する。実施形態において、非細胞透過性ペプチドは、約１ｋＤより小さい分子量を有する。実施形態において、非細胞透過性ペプチドは、２５ｋＤより小さい分子量を有する。実施形態において、非細胞透過性ペプチドは、２４ｋＤより小さい分子量を有する。実施形態において、非細胞透過性ペプチドは、２３ｋＤより小さい分子量を有する。実施形態において、非細胞透過性ペプチドは、２２ｋＤより小さい分子量を有する。実施形態において、非細胞透過性ペプチドは、２１ｋＤより小さい分子量を有する。実施形態において、非細胞透過性ペプチドは、２０ｋＤより小さい分子量を有する。実施形態において、非細胞透過性ペプチドは、１９ｋＤより小さい分子量を有する。実施形態において、非細胞透過性ペプチドは、１８ｋＤより小さい分子量を有する。実施形態において、非細胞透過性ペプチドは、１７ｋＤより小さい分子量を有する。実施形態において、非細胞透過性ペプチドは、１６ｋＤより小さい分子量を有する。実施形態において、非細胞透過性ペプチドは、１５ｋＤより小さい分子量を有する。実施形態において、非細胞透過性ペプチドは、１４ｋＤより小さい分子量を有する。実施形態において、非細胞透過性ペプチドは、１３ｋＤより小さい分子量を有する。実施形態において、非細胞透過性ペプチドは、１２ｋＤより小さい分子量を有する。実施形態において、非細胞透過性ペプチドは、１１ｋＤより小さい分子量を有する。実施形態において、非細胞透過性ペプチドは、１０ｋＤより小さい分子量を有する。実施形態において、非細胞透過性ペプチドは、約５ｋＤより小さい分子量を有する。実施形態において、非細胞透過性ペプチドは、１ｋＤより小さい分子量を有する。
【０１１２】
実施形態において、非細胞透過性ペプチドは、抗体又は抗体断片ではない。実施形態において、非細胞透過性ペプチドは約２５アミノ酸長よりも小さい。実施形態において、非細胞透過性ペプチドは、２５アミノ酸長よりも小さい。実施形態において、非細胞透過性ペプチドは約２４アミノ酸長よりも小さい。実施形態において、非細胞透過性ペプチドは、２４アミノ酸長よりも小さい。実施形態において、非細胞透過性ペプチドは約２３アミノ酸長よりも小さい。実施形態において、非細胞透過性ペプチドは、２３アミノ酸長よりも小さい。実施形態において、非細胞透過性ペプチドは約２２アミノ酸長よりも小さい。実施形態において、非細胞透過性ペプチドは、２２アミノ酸長よりも小さい。実施形態において、非細胞透過性ペプチドは約２１アミノ酸長よりも小さい。実施形態において、非細胞透過性ペプチドは、２１アミノ酸長よりも小さい。実施形態において、非細胞透過性ペプチドは約２０アミノ酸長よりも小さい。実施形態において、非細胞透過性ペプチドは、２０アミノ酸長よりも小さい。実施形態において、非細胞透過性ペプチドは約１５アミノ酸長よりも小さい。実施形態において、非細胞透過性ペプチドは、１５アミノ酸長よりも小さい。実施形態において、非細胞透過性ペプチドは約１０アミノ酸長よりも小さい。実施形態において、非細胞透過性ペプチドは、１０アミノ酸長よりも小さい。
【０１１３】
実施形態を含む本明細書で提供する非細胞透過性ペプチドは、改変アミノ酸を含んでよい。改変アミノ酸の例としては、限定はされないが、化学的に改変された自然発生のアミノ酸、化学的に改変された合成アミノ酸、並びに化学的に改変されたアミノ酸類似物及びアミノ酸模倣物を含む。改変された自然発生のアミノ酸は、細胞において翻訳後に又は反応容器において合成的に改変されてよい。改変アミノ酸の存在は、相当する非改変アミノ酸の一部を形成するペプチドに代替えの機能及び／又は構造特徴を与えてよい。
【０１１４】
実施形態において、改変アミノ酸はアセチル化アミノ酸である。改変アミノ酸がアセチル化アミノ酸である場合、非細胞透過性ペプチドは、アセチル（−ＣＨ３Ｃ（Ｏ））部分に結合しているアミノ酸残基を含む。実施形態において、非細胞透過性ペプチドは、配列番号１のアミノ酸６８５位に相当する位置にアセチル化アミノ酸を含むＳＴＡＴ３ペプチドである。
【０１１５】
実施形態において、改変アミノ酸はリン酸化アミノ酸である。改変アミノ酸がリン酸化アミノ酸である場合、非細胞透過性ペプチドはホスホリル（−ＰＯ３）部分に結合しているアミノ酸残基を含む。実施形態において、非細胞透過性ペプチドは、配列番号２のアミノ酸７６７位に相当する位置にリン酸化アミノ酸を含むｇｐ１３０ペプチドである。実施形態において、非細胞透過性ペプチドは、配列番号２のアミノ酸９０５位に相当する位置にリン酸化アミノ酸を含むｇｐ１３０ペプチドである。実施形態において、非細胞透過性ペプチドは、配列番号２のアミノ酸９１５位に相当する位置にリン酸化アミノ酸を含むｇｐ１３０ペプチドを含む。
【０１１６】
実施形態を含む本明細書で提供する非細胞透過性ペプチドは、細胞内分子の活性を改変することにより、がん、炎症性疾患、痛み、及び／又はウイルス感染の処置に有用である。したがって、実施形態において、非細胞透過性ペプチドは細胞内標的に結合している。実施形態において、細胞内標的はシグナル伝達分子又は転写因子である。実施形態において、細胞内標的はシグナル伝達分子である。実施形態において、シグナル伝達分子はホスファターゼ又はキナーゼである。実施形態において、シグナル伝達分子はホスファターゼである。実施形態において、シグナル伝達分子はキナーゼである。
【０１１７】
実施形態において、細胞内標的はカリオフェリンである。実施形態において、カリオフェリンはエキスポーチンである。実施形態において、細胞内標的はエキスポーチン７である。実施形態において、細胞内標的は配列番号５のアミノ酸配列を含むエキスポーチン７タンパク質である。実施形態において、細胞内標的は配列番号５のアミノ酸配列である。実施形態において、細胞内標的は配列番号１１のアミノ酸配列である。
【０１１８】
実施形態において、非細胞透過性ペプチドはＳＴＡＴ３ペプチドである。実施形態において、非細胞透過性ペプチドはアセチル化ＳＴＡＴ３ペプチドである。実施形態において、非細胞透過性ペプチドは配列番号３の配列を含む。実施形態において、非細胞透過性ペプチドは配列番号３の配列である。
【０１１９】
実施形態において、細胞内標的は転写因子である。実施形態において、細胞内標的はＳＴＡＴ３である。実施形態において、細胞内標的は配列番号１のアミノ酸配列を含むＳＴＡＴ３タンパク質である。実施形態において、細胞内標的は配列番号１のアミノ酸配列である。
【０１２０】
実施形態において、非細胞透過性ペプチドはｇｐ１３０ペプチドである。本明細書で使用する場合、用語「ｇｐ１３０」又は「ｇｐ１３０タンパク質」は、ｇｐ１３０タンパク質活性（例えば、ｇｐ１３０と比較して少なくとも５０％、８０％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％以内の活性）を維持する糖タンパク質１３０（ｇｐ１３０）又はこれらの変異体若しくは相同体の組換え体又は自然発生形態のいずれかを指す。いくつかの態様において、変異体又は相同体は、自然発生のｇｐ１３０ポリペプチドと比較して全配列又は配列の一部（例えば、１０、２０、５０、１００、１５０又は２００連続アミノ酸部分）にわたって少なくとも９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％のアミノ酸配列同一性を有する。実施形態において、ｇｐ１３０ポリペプチドは、ＵｎｉＰｒｏｔ参照番号Ｐ４０１８９によって同定されるタンパク質と実質的に同一である、又はこれらと実質的な同一性を有する変異体若しくは相同体である。実施形態において、ｇｐ１３０ポリペプチドは配列番号２の配列を含む。実施形態において、ｇｐ１３０ポリペプチドは配列番号２の配列である。
【０１２１】
実施形態において、非細胞透過性ペプチドは、リン酸化ｇｐ１３０ペプチドである。実施形態において、非細胞透過性ペプチドは配列番号４、配列番号８又は配列番号９の配列を含む。実施形態において、非細胞透過性ペプチドは配列番号４の配列を含む。実施形態において、非細胞透過性ペプチドは配列番号４の配列である。実施形態において、非細胞透過性ペプチドは配列番号８の配列を含む。実施形態において、非細胞透過性ペプチドは配列番号８の配列である。実施形態において、非細胞透過性ペプチドは配列番号９の配列を含む。実施形態において、非細胞透過性ペプチドは配列番号９の配列である。
【０１２２】
実施形態において、非細胞透過性ペプチドはｃ−ＭＹＣ結合ペプチドである。本明細書で提供する「ｃ−ＭＹＣ結合ペプチド」は、ｃ−ＭＹＣタンパク質に共有結合又は非共有結合により結合することができるペプチドを指す。本明細書で使用する場合、用語「ｃ−ＭＹＣ」又は「ｃ−ＭＹＣタンパク質」は、ｃ−ＭＹＣタンパク質活性（例えば、ｃ−ＭＹＣと比較して少なくとも５０％、８０％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％以内の活性）を維持するｃ−ＭＹＣタンパク質又はこれらの変異体若しくは相同体の組換え体又は自然発生形態のいずれかを指す。いくつかの態様において、変異体又は相同体は、自然発生のｃ−ＭＹＣポリペプチドと比較して全配列又は配列の一部（例えば、１０、２０、５０、１００、１５０又は２００連続アミノ酸部分）にわたって少なくとも９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％のアミノ酸配列同一性を有する。実施形態において、ｃＭＹＣタンパク質は、ＵｎｉＰｒｏｔ参照番号Ｐ０１１０６によって同定されるタンパク質と実質的に同一である、又はこれらと実質的な同一性を有する変異体若しくは相同体である。実施形態において、ｃ−ＭＹＣタンパク質は配列番号１１の配列を含む。実施形態において、ｃ−ＭＹＣタンパク質は配列番号１１の配列である。
【０１２３】
実施形態において、非細胞透過性ペプチドは、細胞内標的を結合するための細胞タンパク質又は細胞ペプチドと競合する。「細胞タンパク質又は細胞ペプチド」は、細胞に内在性のタンパク質又はペプチドを指す（すなわち、所与の細胞原産の、又は所与の細胞に由来する）。実施形態において、細胞タンパク質又は細胞ペプチドは配列番号１、配列番号２、配列番号３、配列番号４、配列番号６、配列番号７、配列番号８、配列番号９、配列番号１０又は配列番号１２の配列を含む。実施形態において、細胞タンパク質又は細胞ペプチドは配列番号１の配列を含む。実施形態において、細胞タンパク質又は細胞ペプチドは配列番号２の配列を含む。実施形態において、細胞タンパク質又は細胞ペプチドは配列番号３の配列を含む。実施形態において、細胞タンパク質又は細胞ペプチドは配列番号４の配列を含む。実施形態において、細胞タンパク質又は細胞ペプチドは配列番号６の配列を含む。実施形態において、細胞タンパク質又は細胞ペプチドは配列番号７の配列を含む。実施形態において、細胞タンパク質又は細胞ペプチドは配列番号８の配列を含む。実施形態において、細胞タンパク質又は細胞ペプチドは配列番号９の配列を含む。実施形態において、細胞タンパク質又は細胞ペプチドは配列番号１０の配列を含む。実施形態において、細胞タンパク質又は細胞ペプチドは配列番号１２の配列を含む。実施形態において、細胞タンパク質又は細胞ペプチドは配列番号１、配列番号２、配列番号３、配列番号４、配列番号６、配列番号７、配列番号８、配列番号９、配列番号１０又は配列番号１２の配列である。実施形態において、細胞タンパク質又は細胞ペプチドは配列番号１の配列である。実施形態において、細胞タンパク質又は細胞ペプチドは配列番号２の配列である。実施形態において、細胞タンパク質又は細胞ペプチドは配列番号３の配列である。実施形態において、細胞タンパク質又は細胞ペプチドは配列番号４の配列である。実施形態において、細胞タンパク質又は細胞ペプチドは配列番号６の配列である。実施形態において、細胞タンパク質又は細胞ペプチドは配列番号７の配列である。実施形態において、細胞タンパク質又は細胞ペプチドは配列番号８の配列である。実施形態において、細胞タンパク質又は細胞ペプチドは配列番号９の配列である。実施形態において、細胞タンパク質又は細胞ペプチドは配列番号１０の配列である。実施形態において、細胞タンパク質又は細胞ペプチドは配列番号１２の配列である。
【０１２４】
実施形態において、細胞タンパク質又は細胞ペプチドはＳＴＡＴ３タンパク質又はこれらの断片である。実施形態において、細胞タンパク質又は細胞ペプチドはｇｐ１３０タンパク質又はこれらの断片である。実施形態において、細胞タンパク質又は細胞ペプチドはＭＡＸタンパク質又はこれらの断片である。
【０１２５】
実施形態において、ホスホロチオエート核酸は約１０、２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００以上の核酸残基長である。実施形態において、ホスホロチオエート核酸は約１０核酸残基長である。実施形態において、ホスホロチオエート核酸は約２０核酸残基長である。実施形態において、ホスホロチオエート核酸は約３０核酸残基長である。実施形態において、ホスホロチオエート核酸は約４０核酸残基長である。実施形態において、ホスホロチオエート核酸は約５０核酸残基長である。実施形態において、ホスホロチオエート核酸は約６０核酸残基長である。実施形態において、ホスホロチオエート核酸は約７０核酸残基長である。実施形態において、ホスホロチオエート核酸は約８０核酸残基長である。実施形態において、ホスホロチオエート核酸は約９０核酸残基長である。実施形態において、ホスホロチオエート核酸は約１００核酸残基長である。実施形態において、ホスホロチオエート核酸は約１００超の核酸残基長である。実施形態において、ホスホロチオエート核酸は１０、２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００以上の核酸残基長である。
【０１２６】
実施形態において、ホスホロチオエート核酸は約１０〜約３０核酸残基長である。実施形態において、ホスホロチオエート核酸は約１１〜約３０核酸残基長である。実施形態において、ホスホロチオエート核酸は約１２〜約３０核酸残基長である。実施形態において、ホスホロチオエート核酸は約１３〜約３０核酸残基長である。実施形態において、ホスホロチオエート核酸は約１４〜約３０核酸残基長である。実施形態において、ホスホロチオエート核酸は約１５〜約３０核酸残基長である。実施形態において、ホスホロチオエート核酸は約１６〜約３０核酸残基長である。実施形態において、ホスホロチオエート核酸は約１７〜約３０核酸残基長である。実施形態において、ホスホロチオエート核酸は約１８〜約３０核酸残基長である。実施形態において、ホスホロチオエート核酸は約１９〜約３０核酸残基長である。実施形態において、ホスホロチオエート核酸は約２０〜約３０核酸残基長である。実施形態において、ホスホロチオエート核酸は約２１〜約３０核酸残基長である。実施形態において、ホスホロチオエート核酸は約２２〜約３０核酸残基長である。実施形態において、ホスホロチオエート核酸は約２３〜約３０核酸残基長である。実施形態において、ホスホロチオエート核酸は約２４〜約３０核酸残基長である。実施形態において、ホスホロチオエート核酸は約２５〜約３０核酸残基長である。実施形態において、ホスホロチオエート核酸は約２６〜約３０核酸残基長である。実施形態において、ホスホロチオエート核酸は約２７〜約３０核酸残基長である。実施形態において、ホスホロチオエート核酸は約２８〜約３０核酸残基長である。実施形態において、ホスホロチオエート核酸は約２９〜約３０核酸残基長である。実施形態において、ホスホロチオエート核酸は約３０核酸残基長である。
【０１２７】
実施形態において、ホスホロチオエート核酸は約１０〜約２９核酸残基長である。実施形態において、ホスホロチオエート核酸は約１０〜約２８核酸残基長である。実施形態において、ホスホロチオエート核酸は約１０〜約２７核酸残基長である。実施形態において、ホスホロチオエート核酸は約１０〜約２６核酸残基長である。実施形態において、ホスホロチオエート核酸は約１０〜約２５核酸残基長である。実施形態において、ホスホロチオエート核酸は約１０〜約２４核酸残基長である。実施形態において、ホスホロチオエート核酸は約１０〜約２３核酸残基長である。実施形態において、ホスホロチオエート核酸は約１０〜約２２核酸残基長である。実施形態において、ホスホロチオエート核酸は約１０〜約２１核酸残基長である。実施形態において、ホスホロチオエート核酸は約１０〜約２０核酸残基長である。実施形態において、ホスホロチオエート核酸は約１０〜約１９核酸残基長である。実施形態において、ホスホロチオエート核酸は約１０〜約１８核酸残基長である。実施形態において、ホスホロチオエート核酸は約１０〜約１７核酸残基長である。実施形態において、ホスホロチオエート核酸は約１０〜約１６核酸残基長である。実施形態において、ホスホロチオエート核酸は約１０〜約１５核酸残基長である。実施形態において、ホスホロチオエート核酸は約１０〜約１４核酸残基長である。実施形態において、ホスホロチオエート核酸は約１０〜約１３核酸残基長である。実施形態において、ホスホロチオエート核酸は約１０〜約１２核酸残基長である。実施形態において、ホスホロチオエート核酸は約１０〜約１１核酸残基長である。実施形態において、ホスホロチオエート核酸は約１０核酸残基長である。実施形態において、ホスホロチオエート核酸は１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８，２９又は３０核酸残基長である。
【０１２８】
実施形態において、ホスホロチオエート核酸は約２０核酸残基長である。実施形態において、ホスホロチオエート核酸は２０核酸残基長である。
【０１２９】
実施形態において、ホスホロチオエート核酸は一本鎖核酸である。実施形態において、ホスホロチオエート核酸はホスホロチオエートデオキシリボ核酸である。
【０１３０】
実施形態において、化学リンカーは共有結合リンカーである。実施形態において、リンカーは式：
【０１３１】
【化３】
2020527555.tif 000005
の構造を含む。式（Ｉ）において、Ｒ１は水素、ハロゲン、−ＣＦ３、−ＣＮ、−ＣＣｌ３、−ＣＯＯＨ、−ＣＨ２ＣＯＯＨ、−ＣＯＮＨ２、−ＯＨ、−ＳＨ、−ＮＯ２、−ＮＨ２、−ＮＨＮＨ２、−ＯＮＨ２、−ＮＨＣ＝（Ｏ）ＮＨＮＨ２、置換（例えば、置換基、サイズ限定置換基、又は低級置換基によって置換されている）若しくは非置換アルキル、置換（例えば、置換基、サイズ限定置換基、又は低級置換基によって置換されている）若しくは非置換ヘテロアルキル、置換（例えば、置換基、サイズ限定置換基、又は低級置換基によって置換される）若しくは非置換シクロアルキル、置換（例えば、置換基、サイズ限定置換基、又は低級置換基によって置換されている）若しくは非置換ヘテロシクロアルキル、置換（例えば、置換基、サイズ限定置換基、又は低級置換基によって置換されている）若しくは非置換アリール、又は置換（例えば、置換基、サイズ限定置換基、又は低級置換基によって置換されている）若しくは非置換ヘテロアリールである。
【０１３２】
実施形態において、Ｒ１は水素、ハロゲン、−ＣＦ３、−ＣＮ、−ＣＣｌ３、−ＣＯＯＨ、−ＣＨ２ＣＯＯＨ、−ＣＯＮＨ２、−ＯＨ、−ＳＨ、−ＮＯ２、−ＮＨ２、−ＮＨＮＨ２、−ＯＮＨ２、−ＮＨＣ＝（Ｏ）ＮＨＮＨ２、非置換アルキル、非置換ヘテロアルキル、非置換シクロアルキル、非置換ヘテロシクロアルキル、非置換アリール、又は非置換ヘテロアリールである。
【０１３３】
実施形態において、リンカーは−Ｌ１−Ｌ２−Ｌ３−Ｌ４−Ｌ５−Ｌ６−Ｌ７−である。実施形態において、Ｌ１は結合、−ＮＨ−Ｎ＝ＣＨ−、−Ｓ（Ｏ）２−、−ＮＲ２−、−Ｏ−、−Ｓ−、−Ｃ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）ＮＨ−、−ＮＨＣ（Ｏ）−、−ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ−、−Ｃ（Ｏ）Ｏ−、−ＯＣ（Ｏ）−、置換（例えば、置換基、サイズ限定置換基、又は低級置換基によって置換されている）若しくは非置換アルキレン、置換（例えば、置換基、サイズ限定置換基、又は低級置換基によって置換されている）若しくは非置換ヘテロアルキレン、置換（例えば、置換基、サイズ限定置換基、又は低級置換基によって置換されている）若しくは非置換シクロアルキレン、置換（例えば、置換基、サイズ限定置換基、又は低級置換基によって置換されている）若しくは非置換ヘテロシクロアルキレン、置換（例えば、置換基、サイズ限定置換基、又は低級置換基によって置換される）若しくは非置換アリーレン、又は置換（例えば、置換基、サイズ限定置換基、又は低級置換基によって置換されている）若しくは非置換ヘテロアリーレンである。
【０１３４】
実施形態において、Ｌ２は結合、−ＮＨ−Ｎ＝ＣＨ−、−Ｓ（Ｏ）２−、−ＮＲ２−、−Ｏ−、−Ｓ−、−Ｃ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）ＮＨ−、−ＮＨＣ（Ｏ）−、−ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ−、−Ｃ（Ｏ）Ｏ−、−ＯＣ（Ｏ）−、置換（例えば、置換基、サイズ限定置換基、又は低級置換基によって置換されている）若しくは非置換アルキレン、置換（例えば、置換基、サイズ限定置換基、又は低級置換基によって置換されている）若しくは非置換ヘテロアルキレン、置換（例えば、置換基、サイズ限定置換基、又は低級置換基によって置換されている）若しくは非置換シクロアルキレン、置換（例えば、置換基、サイズ限定置換基、又は低級置換基によって置換されている）若しくは非置換ヘテロシクロアルキレン、置換（例えば、置換基、サイズ限定置換基、又は低級置換基によって置換されている）若しくは非置換アリーレン、又は置換（例えば、置換基、サイズ限定置換基、又は低級置換基によって置換される）若しくは非置換ヘテロアリーレンである。
【０１３５】
実施形態において、Ｌ３は結合、−ＮＨ−Ｎ＝ＣＨ−、−Ｓ（Ｏ）２−、−ＮＲ２−、−Ｏ−、−Ｓ−、−Ｃ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）ＮＨ−、−ＮＨＣ（Ｏ）−、−ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ−、−Ｃ（Ｏ）Ｏ−、−ＯＣ（Ｏ）−、置換（例えば、置換基、サイズ限定置換基、又は低級置換基によって置換されている）若しくは非置換アルキレン、置換（例えば、置換基、サイズ限定置換基、又は低級置換基によって置換されている）若しくは非置換ヘテロアルキレン、置換（例えば、置換基、サイズ限定置換基、又は低級置換基によって置換されている）若しくは非置換シクロアルキレン、置換（例えば、置換基、サイズ限定置換基、又は低級置換基によって置換されている）若しくは非置換ヘテロシクロアルキレン、置換（例えば、置換基、サイズ限定置換基、又は低級置換基によって置換されている）若しくは非置換アリーレン、又は置換（例えば、置換基、サイズ限定置換基、又は低級置換基によって置換される）若しくは非置換ヘテロアリーレンである。
【０１３６】
実施形態において、Ｌ４は結合、−ＮＨ−Ｎ＝ＣＨ−、−Ｓ（Ｏ）２−、−ＮＲ２−、−Ｏ−、−Ｓ−、−Ｃ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）ＮＨ−、−ＮＨＣ（Ｏ）−、−ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ−、−Ｃ（Ｏ）Ｏ−、−ＯＣ（Ｏ）−、置換（例えば、置換基、サイズ限定置換基、又は低級置換基によって置換されている）若しくは非置換アルキレン、置換（例えば、置換基、サイズ限定置換基、又は低級置換基によって置換されている）若しくは非置換ヘテロアルキレン、置換（例えば、置換基、サイズ限定置換基、又は低級置換基によって置換されている）若しくは非置換シクロアルキレン、置換（例えば、置換基、サイズ限定置換基、又は低級置換基によって置換されている）若しくは非置換ヘテロシクロアルキレン、置換（例えば、置換基、サイズ限定置換基、又は低級置換基によって置換されている）若しくは非置換アリーレン、又は置換（例えば、置換基、サイズ限定置換基、又は低級置換基によって置換される）若しくは非置換ヘテロアリーレンである。
【０１３７】
実施形態において、Ｌ５は結合、−ＮＨ−Ｎ＝ＣＨ−、−Ｓ（Ｏ）２−、−ＮＲ２−、−Ｏ−、−Ｓ−、−Ｃ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）ＮＨ−、−ＮＨＣ（Ｏ）−、−ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ−、−Ｃ（Ｏ）Ｏ−、−ＯＣ（Ｏ）−、置換（例えば、置換基、サイズ限定置換基、又は低級置換基によって置換されている）若しくは非置換アルキレン、置換（例えば、置換基、サイズ限定置換基、又は低級置換基によって置換されている）若しくは非置換ヘテロアルキレン、置換（例えば、置換基、サイズ限定置換基、又は低級置換基によって置換されている）若しくは非置換シクロアルキレン、置換（例えば、置換基、サイズ限定置換基、又は低級置換基によって置換されている）若しくは非置換ヘテロシクロアルキレン、置換（例えば、置換基、サイズ限定置換基、又は低級置換基によって置換されている）若しくは非置換アリーレン、又は置換（例えば、置換基、サイズ限定置換基、又は低級置換基によって置換される）若しくは非置換ヘテロアリーレンである。
【０１３８】
実施形態において、Ｌ６は結合、−ＮＨ−Ｎ＝ＣＨ−、−Ｓ（Ｏ）２−、−ＮＲ２−、−Ｏ−、−Ｓ−、−Ｃ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）ＮＨ−、−ＮＨＣ（Ｏ）−、−ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ−、−Ｃ（Ｏ）Ｏ−、−ＯＣ（Ｏ）−、置換（例えば、置換基、サイズ限定置換基、又は低級置換基によって置換されている）若しくは非置換アルキレン、置換（例えば、置換基、サイズ限定置換基、又は低級置換基によって置換されている）若しくは非置換ヘテロアルキレン、置換（例えば、置換基、サイズ限定置換基、又は低級置換基によって置換されている）若しくは非置換シクロアルキレン、置換（例えば、置換基、サイズ限定置換基、又は低級置換基によって置換されている）若しくは非置換ヘテロシクロアルキレン、置換（例えば、置換基、サイズ限定置換基、又は低級置換基によって置換されている）若しくは非置換アリーレン、又は置換（例えば、置換基、サイズ限定置換基、又は低級置換基によって置換される）若しくは非置換ヘテロアリーレンである。
【０１３９】
実施形態において、Ｌ７は結合、−ＮＨ−Ｎ＝ＣＨ−、−Ｓ（Ｏ）２−、−ＮＲ２−、−Ｏ−、−Ｓ−、−Ｃ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）ＮＨ−、−ＮＨＣ（Ｏ）−、−ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ−、−Ｃ（Ｏ）Ｏ−、−ＯＣ（Ｏ）−、置換（例えば、置換基、サイズ限定置換基、又は低級置換基によって置換されている）若しくは非置換アルキレン、置換（例えば、置換基、サイズ限定置換基、又は低級置換基によって置換されている）若しくは非置換ヘテロアルキレン、置換（例えば、置換基、サイズ限定置換基、又は低級置換基によって置換されている）若しくは非置換シクロアルキレン、置換（例えば、置換基、サイズ限定置換基、又は低級置換基によって置換されている）若しくは非置換ヘテロシクロアルキレン、置換（例えば、置換基、サイズ限定置換基、又は低級置換基によって置換されている）若しくは非置換アリーレン、又は置換（例えば、置換基、サイズ限定置換基、又は低級置換基によって置換される）若しくは非置換ヘテロアリーレンである。
【０１４０】
実施形態において、リンカーは非免疫原性リンカーである。実施形態において、リンカーは検出可能部分によって置換される。
【０１４１】
実施形態において、コンジュゲートは検出可能部分を含む。実施形態において、検出可能部分は非細胞透過性ペプチドに結合されている。実施形態において、検出可能部分はホスホロチオエート核酸に結合されている。実施形態において、検出可能部分はリンカーの一部を形成する。実施形態において、検出可能部分はリンカーに共有結合により結合されている。
【０１４２】
実施形態において、実施形態を含む本明細書に提供するコンジュゲートは、細胞内標的に結合されている。
【０１４３】
一態様において、実施形態を含む本明細書に記載のペプチドコンジュゲートを含む細胞が提供される。
【０１４４】
一実施形態において、非細胞透過性ペプチドは配列番号３のペプチドであり、ホスホロチオエート核酸は２０核酸残基長の一本鎖核酸であり、化学リンカーは式（Ｉ）の構造を含む。
【０１４５】
一実施形態において、非細胞透過性ペプチドは配列番号６のペプチドであり、ホスホロチオエート核酸は２０核酸残基長の一本鎖核酸であり、化学リンカーは式（Ｉ）の構造を含む。
【０１４６】
一実施形態において、非細胞透過性ペプチドは配列番号７のペプチドであり、ホスホロチオエート核酸は２０核酸残基長の一本鎖核酸であり、化学リンカーは式（Ｉ）の構造を含む。
【０１４７】
一実施形態において、非細胞透過性ペプチドは配列番号３のアセチル化ペプチドであり、ホスホロチオエート核酸は２０核酸残基長の一本鎖核酸であり、化学リンカーは式（Ｉ）の構造を含む。
【０１４８】
一実施形態において、非細胞透過性ペプチドは配列番号６のアセチル化ペプチドであり、ホスホロチオエート核酸は２０核酸残基長の一本鎖核酸であり、化学リンカーは式（Ｉ）の構造を含む。
【０１４９】
一実施形態において、非細胞透過性ペプチドは配列番号４のペプチドであり、ホスホロチオエート核酸は２０核酸残基長の一本鎖核酸であり、化学リンカーは式（Ｉ）の構造を含む。
【０１５０】
一実施形態において、非細胞透過性ペプチドは配列番号８のペプチドであり、ホスホロチオエート核酸は２０核酸残基長の一本鎖核酸であり、化学リンカーは式（Ｉ）の構造を含む。
【０１５１】
一実施形態において、非細胞透過性ペプチドは配列番号９のペプチドであり、ホスホロチオエート核酸は２０核酸残基長の一本鎖核酸であり、化学リンカーは式（Ｉ）の構造を含む。
【０１５２】
一実施形態において、非細胞透過性ペプチドは配列番号４のリン酸化ペプチドであり、ホスホロチオエート核酸は２０核酸残基長の一本鎖核酸であり、化学リンカーは式（Ｉ）の構造を含む。
【０１５３】
一実施形態において、非細胞透過性ペプチドは配列番号８のリン酸化ペプチドであり、ホスホロチオエート核酸は２０核酸残基長の一本鎖核酸であり、化学リンカーは式（Ｉ）の構造を含む。
【０１５４】
一実施形態において、非細胞透過性ペプチドは配列番号９のリン酸化ペプチドであり、ホスホロチオエート核酸は２０核酸残基長の一本鎖核酸であり、化学リンカーは式（Ｉ）の構造を含む。
【０１５５】
一実施形態において、非細胞透過性ペプチドは配列番号１０のペプチドであり、ホスホロチオエート核酸は２０核酸残基長の一本鎖核酸であり、化学リンカーは式（Ｉ）の構造を含む。
【０１５６】
二量体組成物
実施形態を含む本明細書に提供する核酸−ペプチドコンジュゲートは、第２の核酸−ペプチドコンジュゲートに非共有結合（例えば、ハイブリダイゼーションにより）されてよい。したがって、実施形態において、核酸−ペプチドコンジュゲートは第２の核酸−ペプチドコンジュゲートとコンジュゲート二量体を形成する。第２の核酸−ペプチドコンジュゲートは、（１）第２の非細胞透過性ペプチド、（２）ホスホロチオエート核酸にハイブリダイズされた非ホスホロチオエート化核酸、（３）相補的非ホスホロチオエート化核酸を第２の非細胞透過性ペプチドのＣ末端に結合している第２の化学リンカーを含む。
【０１５７】
一態様において、コンジュゲート二量体が提供される。コンジュゲート二量体は：
（ｉ）（ａ）第１の非細胞透過性ペプチド；
（ｂ）ホスホロチオエート核酸；及び
（ｃ）前記ホスホロチオエート核酸を第１の非細胞透過性ペプチドのＣ末端に結合している第１の化学リンカー
を含む第１の核酸−ペプチドコンジュゲート、
（ｉｉ）（ａ）第２の非細胞透過性ペプチド；
（ｂ）非ホスホロチオエート化核酸；及び
（ｃ）非ホスホロチオエート化核酸を第２の非細胞透過性ペプチドのＣ末端に結合している第２の化学リンカー
を含む第２の核酸−ペプチドコンジュゲートを含み、
ここでホスホロチオエート核酸及び非ホスホロチオエート化核酸はハイブリダイズされ、前記第１の核酸−ペプチドコンジュゲートを前記第２の核酸−ペプチドコンジュゲートに結合し、それによりコンジュゲート二量体を形成する。
【０１５８】
第１の核酸−ペプチドコンジュゲート及び第２の核酸−ペプチドコンジュゲートは、実施形態を含む本明細書に記載の核酸−ペプチドコンジュゲートのいずれか１つであってよい。したがって、第１の非細胞透過性ペプチド及び第２の非細胞透過性ペプチドは、実施形態を含む本明細書に提供する非細胞透過性ペプチドのいずれか１つであってよい（例えば、配列番号３、配列番号４、配列番号６、配列番号７、配列番号８、配列番号９又は配列番号１０のペプチド）。同様に、第１の化学リンカー及び第２の化学リンカーは、実施形態を含む本明細書に記載の化学リンカーのいずれかであってよい（例えば、式（Ｉ）の化学リンカー）。第１の非細胞透過性ペプチド及び第２の非細胞透過性ペプチドは、化学的に同一であってよく又は異なっていてよい。ホスホロチオエート核酸は、実施形態を含む本明細書に提供するホスホロチオエート核酸のいずれか１つであってよい（例えば、２０核酸残基の長さを有する）。本明細書に提供する場合、「非ホスホロチオエート化核酸」は、ホスホロチオエートヌクレオチドを含まない核酸である。本明細書に提供する非ホスホロチオエート化核酸は、約５、６、７、８、９、１０、１２、１５、２５、３０、４０、５０以上のヌクレオチド長から約１００ヌクレオチド長までであってよい。非ホスホロチオエート化核酸は、より長い長さ、例えば２００、３００、５００、１０００、２０００、３０００、５０００、７０００、１０，０００等であってもよい。
【０１５９】
実施形態において、第１の非細胞透過性ペプチドは、配列番号３の配列を有し、第２の非細胞透過性ペプチドは配列番号３の配列を有する。実施形態において、コンジュゲート二量体は図２２Ａに示される二量体である。実施形態において、コンジュゲート二量体は図２４Ａに示される二量体である。
【０１６０】
本明細書に提供するコンジュゲート組成物と同様に、実施形態を含む本明細書に提供するコンジュゲート二量体は、本明細書に提供する医薬組成物の一部を形成し、本明細書に記載の任意の方法に使用されてよい。
【０１６１】
医薬組成物
実施形態を含む本明細書に提供するコンジュゲートは、医薬組成物の一部を形成するようにさらに想定される。したがって、一態様において、実施形態を含む本明細書に記載のペプチドコンジュゲート及び薬学的に許容される担体を含む医薬組成物が提供される。
【０１６２】
本発明によって提供される医薬組成物は、活性成分（例えば、実施形態を含む本明細書に記載の組成物）が治療有効量、すなわちこの意図された目的を達成するのに有効な量で含有される組成物を含む。特定の適用に有効な実際の量は、特に、処置される状態に依存する。疾患を処置するための方法において投与される場合、本明細書に記載のコンジュゲートは、所望の結果、例えば、標的分子の活性を調製し、及び／又は疾患症状の進行を低減する、除去する、又は減速することを達成するために有効な量の活性成分を含有する。本発明のコンジュゲートの治療有効量の決定は、当業者の能力の範囲内である。
【０１６３】
投与のための組成物は、一般に、薬学的に許容される担体、好ましくは水性担体に溶解された本明細書に記載の薬剤を含む。様々な水性担体、例えば緩衝食塩水等が使用され得る。これらの溶液は無菌であり、通常望ましくない物質を含まない。これらの組成物は、従来の周知の滅菌技術によって滅菌されてもよい。組成物は、およそ生理的条件に必要な薬学的に許容される補助物質、例えばｐＨ調整剤及び緩衝剤、毒性調整剤等、例えば酢酸ナトリウム、塩化ナトリウム、塩化カリウム、塩化カルシウム、乳酸ナトリウム等を含有し得る。これらの製剤における活性剤の濃度は広範に変えることができ、選択される特定の投与様式及び対象の必要性に従って、主に液体容積、粘度、体重等に基づいて選択される。
【０１６４】
遊離塩基又は薬理学的に許容される塩としての活性化合物の溶液は、ヒドロキシプロピルセルロースなどの界面活性剤と適切に混合された水中でも調製され得る。分散液は、グリセロール、液体ポリエチレングリコール及びこれらの混合物中並びに油中で調製され得る。保存及び使用の通常の条件下では、これらの製剤は微生物の増殖を防止するための防腐剤を含有してよい。
【０１６５】
医薬組成物は、鼻腔内又は吸入可能な溶液又はスプレー、エアロゾル又は吸入によって送達され得る。鼻用溶液は、点鼻又はスプレーで鼻腔に投与されるように設計された水溶液であってもよい。鼻用溶液は、鼻の分泌物と多くの点で似ているように調製され得る。したがて、鼻用水溶液は、通常等張性であり、５．５〜６．５のｐＨを維持するためにわずかに緩衝化される。さらに、必要に応じて、眼用製剤及び適切な薬物安定剤に使用されるものと同様の抗菌防腐剤が製剤に含まれてよい。様々な市販の鼻用製剤が公知であり、例えば、抗生物質及び抗ヒスタミン剤を含み得る。
【０１６６】
経口製剤は、例えば医薬グレートのマンニトール、ラクトース、デンプン、ステアリン酸マグネシウム、サッカリンナトリウム、セルロース、炭酸マグネシウム等の賦形剤を含み得る。これらの組成物は、溶液、懸濁液、錠剤、丸薬、カプセル、持続放出製剤又は散剤の形態をとる。いくつかの実施形態において、経口医薬組成物は、不活性希釈剤又は同化可能な食用担体を含み、又は硬質若しくは軟質ゼラチンカプセルに封入されてもよく、又は錠剤に圧縮されてもよく、又は食用品に直接組み込まれてもよい。経口治療用投与の場合、活性化合物は賦形剤と組み込まれてよく、接種可能な錠剤、バッカル錠、トローチ、カプセル、エリキシル、懸濁液、シロップ、ウエハース等の形態で使用されてもよい。このような組成物及び製剤は、少なくとも０．１％の活性化合物を含有すべきである。組成物及び製剤の割合はもちろん変えられてよく、便宜的に単位重量の約２〜約７５％の間、又は好ましくは２５〜６０％の間であってもよい。このような組成物中の活性化合物の量は、適切な投与量が得られるような量である。
【０１６７】
水溶液での非経口投与のため、例えば、溶液は適切に緩衝化されるべきであり、液体希釈剤はまず十分な生理食塩水又はグルコースで等張性にされるべきである。水溶液、特に滅菌水性媒体は、静脈内、筋肉内、皮下及び腹腔内の投与に特に好適である。例えば、１回の投与量を１ｍｌの等張性ＮａＣｌ溶液に溶解し、１０００ｍｌの皮下注射液に添加する、又は提案された注入部位に注射することができる。
【０１６８】
滅菌注射用溶液は、必要な量の活性化合物又は構築物を適切な溶媒に組み込み、続いて濾過滅菌することによって調製され得る。通常、分散液は種々の滅菌された活性成分を、基本的な分散媒体を含有する滅菌ビヒクル中に組み込むことによって調製される。活性成分に加え任意のさらなる所望の成分の粉末を得る真空乾燥及び凍結乾燥技術を使用して、滅菌注射溶液を再構築するための滅菌粉末を調整できる。直接注射のために、さらに濃縮された、又は高度に濃縮された溶液の調製も想定されている。ＤＭＳＯは、非常に迅速な透過のための溶媒として使用することができ、高濃度の活性薬剤を小さな面積に送達する。
【０１６９】
化合物の製剤は、アンプル及びバイアルなどの単位用量又は複数用量の密封容器で提供され得る。したがって、組成物は単位投与剤形であり得る。このような形態では、製剤は、適切な量の活性成分を含有する単位用量に細分される。したがって、組成物は、投与方法に応じて種々の単位投与剤形で投与され得る。例えば、経口投与に好適な単位投与剤形としては、限定はされないが、粉末、錠剤、丸薬、カプセル及びロゼンジが挙げられる。
【０１７０】
哺乳動物に投与される投与量及び頻度（単回投与又は複数回投与）は、様々な因子、例えば哺乳動物が別の疾患を患っているかどうか、及びこの投与経路；レシピエントの大きさ、年齢、性別、健康、体重、ボディマス指数及び食餌；処置される疾患の症状の性質及び程度（例えば、がんの症状及びこのような症状の重篤度）；同時処置の種類、処置される疾患からの合併症又は他の健康関連の問題に応じて変わり得る。他の治療レジメン又は薬剤は、本発明の方法及び化合物と併せて使用され得る。確立された投与量（例えば、頻度及び持続時間）の調節及び操作は、十分に当業者の能力の範囲内である。
【０１７１】
本明細書に記載する任意の組成物（例えば、実施形態を含む本明細書に提供するコンジュゲート）について、治療有効量は、細胞培養アッセイから最初に決定され得る。目標濃度は、本明細書に記載の方法、又は当技術分野で公知の方法を用いて測定した場合、本明細書に記載の方法を達成することができる活性化合物の濃度である。当技術分野で周知のように、ヒトにおける使用のための有効量は、動物モデルからも決定され得る。例えば、ヒトのための用量は、動物において有効であることが見出されている濃度を達成するように製剤化され得る。ヒトにおける投与量は、有効性をモニタリングし、上述のように投与量を上方又は下方に調節することによって調整され得る。上述の方法及び他の方法に基づいてヒトにおいて最大の効力を達成するために用量を調節することは、十分に当業者の能力の範囲内である。
【０１７２】
投与量は、患者及び用いられる化合物の要求に応じて変わり得る。本発明の文脈において、患者に投与される用量は、時間の経過により患者における有益な治療反応に影響を及ぼすのに十分な量であるべきである。用量の大きさは、任意の有害な副作用の存在、性質及び程度によっても決定される。特定の状況のための適切な投与量の決定は、医師の技術の範囲内である。通常、処置は、化合物の最適用量よりも低い、より少ない投与量で開始される。その後、状況の下で最適な効果に達するまで、投与量は少しずつ増加される。
【０１７３】
投与量及び間隔は、処置される特定の臨床適応症に有効な投与される化合物のレベルを提供するために、個々に調整され得る。これにより、個体の疾患状態の重篤度に見合った治療レジメンを提供する。
【０１７４】
本明細書に提供する教示を使用して、実質的な毒性を引き起こさず、しかも特定の患者によって実証された臨床症状を処置するのに有効である、有効な予防的又は治療的な処置レジメンが計画され得る。この計画は、化合物の効力、相対的なバイオアベラビリティ、患者の体重、有害な副作用の存在及び重篤度などの要因の考慮による、活性化合物の慎重な選択を含む。
【０１７５】
「薬学的に許容される賦形剤」及び「薬学的に許容される担体」は、対象に対する有効な薬剤の投与及び対象による吸収を助け、患者に重大で有害な毒性作用を引き起こさずに、本発明の組成物に含まれ得る物質を指す。薬学的に許容される賦形剤の非限定的な例としては、水、ＮａＣｌ、通常の生理食塩水、乳酸リンゲル液、通常のショ糖、通常のグルコース、結合剤、充填剤、崩壊剤、滑沢剤、コーティング剤、甘味料、風味剤、塩溶液（例えば、リンゲル液）、アルコール、油、ゼラチン、ラクトース、アミロース又はデンプンなどの炭水化物、脂肪酸エステル、ヒドロキシメチルセルロース、ポリビニルピロリジン及び色素等が挙げられる。このような製剤は、滅菌され、必要に応じて例えば滑沢剤、防腐剤、安定剤、湿潤剤、乳化剤、浸透圧に影響する塩、緩衝液、着色剤及び／又は芳香物質等の本発明の化合物と有害な反応を起こさない補助剤と混合されて得る。当業者は、他の医薬賦形剤が本発明において有用であることを認識する。
【０１７６】
用語「薬学的に許容される塩」は、当技術分野で周知の様々な有機及び無機の対イオンに由来する塩を指し、例示のみとして、ナトリウム、カリウム、カルシウム、マグネシウム、アンモニウム、テトラアルキルアンモニウム等を含み、分子が塩基性官能基を含有する場合、例えば塩酸塩、臭化水素酸塩、酒石酸塩、メシル酸塩、酢酸塩、マレイン酸塩、シュウ酸塩等の有機又は無機酸の塩が挙げられる。
【０１７７】
用語「製剤」は、担体としてカプセル化材料を用い、他の担体を含む又は含まない活性成分が担体に囲まれ、これにより担体と会合するカプセルをもたらす、活性化合物の製剤を含むことを意図する。同様に、カシェ剤及びロゼンジ剤が含まれる。錠剤、散剤、カプセル、丸剤、カシェ剤及びロゼンジ剤は、経口投与に好適な固体剤形として使用され得る。
【０１７８】
がんを処置する方法
実施形態を含む本明細書に提供するコンジュゲートは、特にがんの処置に有用である。したがって、一態様において、がんの処置を必要とする対象においてがんを処置する方法が提供される。方法は、実施形態を含む本明細書に記載の細胞透過性ペプチドコンジュゲートの治療有効量を対象に投与するステップ、それにより対象においてがんを処置するステップを含む。
【０１７９】
実施形態において、がんは、乳がん、前立腺がん、卵巣がん、脳がん、膵臓がん、メラノーマ、結腸がん、胃がん、頭頚部がん、肝臓がん、肺がん、子宮頚がん、肉腫、白血病、リンパ腫、多発性骨髄腫である。実施形態において、がんは転移性肺がんである。
【０１８０】
実施形態において、方法は、第２の治療剤の有効量を対象に投与するステップをさらに含む。
【０１８１】
好適なさらなる治療剤としては、限定はされないが、鎮痛剤、麻酔剤、蘇生剤、コルチコステロイド、抗コリン剤、抗コリンエステラーゼ、抗痙攣剤、抗腫瘍剤、アロステリック阻害剤、同化ステロイド、抗リウマチ剤、精神治療剤、神経ブロック剤、抗炎症剤、駆虫剤、抗生物質、抗凝固剤、抗真菌剤、抗ヒスタミン剤、抗ムスカリン剤、抗ミコバクテリウム剤、抗原虫剤、抗ウイルス剤、ドーパミン作動剤、血液学的薬剤、免疫学的薬剤、ムスカリン、プロテアーゼ阻害剤、ビタミン、成長因子及びホルモンからなる群から選択される治療剤が挙げられる。薬剤及び投与量の選択は、処置される所与の疾患に基づいて当業者によって容易に決定され得る。
【０１８２】
実施形態において、第２の治療剤は、本明細書に提供する核酸−ペプチドコンジュゲートである。したがって、第１の核酸−ペプチドコンジュゲート及び第２の核酸−ペプチドコンジュゲートが投与されてよく、第１及び第２の核酸−ペプチドコンジュゲートは、独立して、実施形態を含む本明細書に提供する核酸−ペプチドコンジュゲートである。第１の核酸−ペプチドコンジュゲート及び第２の核酸−ペプチドコンジュゲートは、化学的に異なってよく、又は化学的に同じでもよい。例えば、第１の核酸−ペプチドコンジュゲートは、第１の非細胞透過性ペプチドを含んでよく、第１の非細胞透過性ペプチドは実施形態を含む本明細書に提供するＳＴＡＴ３ペプチドであり、第２の核酸−ペプチドコンジュゲートは第２の非細胞透過性ペプチドを含んでよく、第２の非細胞透過性ペプチドは実施形態を含む本明細書に提供するｇｐ１３０ペプチドであってよい。他の実施形態において、第１の核酸−ペプチドコンジュゲートは第１の非細胞透過性ペプチドを含み、第１の非細胞透過性ペプチドは実施形態を含む本明細書に提供するｇｐ１３０ペプチドであり、第２の核酸−ペプチドコンジュゲートは第２の非細胞透過性ペプチドを含み、第２の非細胞透過性ペプチドは実施形態を含む本明細書に提供するｃ−ＭＹＣ結合ペプチドである。
【０１８３】
したがって、実施形態において、第２の治療剤は第２の核酸−ペプチドコンジュゲートである。実施形態において、第２の核酸−ペプチドコンジュゲートは第２の非細胞透過性ペプチドを含む。実施形態において、第２の非細胞透過性ペプチドはＳＴＡＴ３ペプチドである。実施形態において、第２の非細胞透過性ペプチドはアセチル化ＳＴＡＴ３ペプチドである。実施形態において、第２の非細胞透過性ペプチドは配列番号３、配列番号６又は配列番号７の配列を含む。実施形態において、第２の非細胞透過性ペプチドは配列番号３の配列を含む。実施形態において、第２の非細胞透過性ペプチドは配列番号３の配列である。実施形態において、第２の非細胞透過性ペプチドは配列番号６の配列を含む。実施形態において、第２の非細胞透過性ペプチドは配列番号６の配列である。実施形態において、第２の非細胞透過性ペプチドは配列番号７の配列を含む。実施形態において、第２の非細胞透過性ペプチドは配列番号７の配列である。
【０１８４】
実施形態において、第２の非細胞透過性ペプチドはｇｐ１３０ペプチドである。実施形態において、第２の非細胞透過性ペプチドは配列番号４の配列を含む。実施形態において、第２の非細胞透過性ペプチドは配列番号４の配列である。
【０１８５】
実施形態において、第２の非細胞透過性ペプチドはリン酸化ｇｐ１３０ペプチドである。実施形態において、第２の非細胞透過性ペプチドは、配列番号４、配列番号８又は配列番号９の配列を含む。実施形態において、第２の非細胞透過性ペプチドは配列番号４の配列を含む。実施形態において、第２の非細胞透過性ペプチドは配列番号４の配列である。実施形態において、第２の非細胞透過性ペプチドは配列番号８の配列を含む。実施形態において、第２の非細胞透過性ペプチドは配列番号８の配列である。実施形態において、第２の非細胞透過性ペプチドは配列番号９の配列を含む。実施形態において、第２の非細胞透過性ペプチドは配列番号９の配列である。
【０１８６】
実施形態において、第２の非細胞透過性ペプチドはｃ−ＭＹＣ結合ペプチドである。実施形態において、第２の非細胞透過性ペプチドは配列番号１０の配列を含む。実施形態において、第２の非細胞透過性ペプチドは配列番号１０の配列である。
【０１８７】
実施形態において、第２の非細胞透過性ペプチドは配列番号１のアミノ酸６８５位に相当する位置にアセチル化アミノ酸を含むＳＴＡＴ３ペプチドである。
【０１８８】
実施形態において、第２の非細胞透過性ペプチドは配列番号２のアミノ酸７６７位に相当する位置にリン酸化アミノ酸を含むｇｐ１３０ペプチドである。実施形態において、第２の非細胞透過性ペプチドは配列番号２のアミノ酸９０５位に相当する位置にリン酸化アミノ酸を含むｇｐ１３０ペプチドである。実施形態において、第２の非細胞透過性ペプチドは配列番号２のアミノ酸９１５位に相当する位置にリン酸化アミノ酸を含むｇｐ１３０ペプチドである。
【０１８９】
薬剤又は組成物の組合せは、併用して（例えば、混合物として）、別々にだが同時に（例えば、別の静脈ラインを介して）、又は逐次的に（例えば、一方の薬剤が最初に投与され、続いて第２の薬剤が投与される。）のいずれかで投与され得る。したがって、用語、組合せは、２種以上の薬剤又は組成物の併用、同時投与又は逐次投与を指すために使用される。処置の経過は、対象の特定の特徴及び選択された処置の種類に応じて、個々の基準で最善に決定される。処置、例えば本明細書に開示するものは、毎日、１日に２回、２週間に１回、１カ月に１回、又は任意の治療に有効な任意の適用可能な基準で対象に投与することができる。処置は、単独で、又は本明細書に開示される、若しくは当技術分野で公知の任意の他の処置と組み合わせて投与され得る。さらなる処置は、第１の処置と同時に、異なる時間に、又は全く異なる治療スケジュールで（例えば、第１の処置は毎日であるが、さらなる処置は週に１回であってもよい。）投与され得る。
【０１９０】
実施形態において、方法は、標準対照に対してＢＩＲＣ５又はＢｃｌＸＬ又はＰＤ−Ｌ１の発現レベルを対象において減少させるステップを含む。実施形態において、方法は、標準対照に対してＢＩＲＣ５の発現レベルを対象において減少させるステップを含む。実施形態において、方法は、標準対照に対してＢｃｌＸＬの発現レベルを対象において減少させるステップを含む。実施形態において、標準対照は、実施形態を含む本明細書に記載の細胞透過性ペプチドコンジュゲートの不在下で検出されるＢＩＲＣ５又はＢｃｌＸＬの発現レベルである。
【０１９１】
本明細書で言及する「サバイビン」としても公知の、用語「ＢＩＲＣ５」は、５を含むバキュロウイルスアポトーシス阻害剤リピート（ＢＩＲＣ５）をコードする遺伝子、ＢＩＲＣ５活性（例えば、ＢＩＲＣ５と比較して少なくとも５０％、８０％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％以内の活性）を維持するこれらの相同体又は変異体の組換え体又は自然発生形態いずれかを含む。いくつかの態様において、自然発生のＢＩＲＣ５ポリペプチドと比較して、変異体は、配列全体にわたって又は配列の一部（例えば、５０、１００、１５０又は２００連続アミノ酸部分）と少なくとも９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％アミノ酸配列同一性を有する。実施形態において、ＢＩＲＣ５遺伝子は、ＥＮＳＥＭＢＬＥ参照番号ＥＮＳＧ００００００８９６８５によって同定される核酸、又はこれらと実質的な同一性を有する変異体と実質的に同一である。ＢＲＩＣ５の発現レベルは、当技術分野で公知の方法を使用してＢＩＲＣ５  ｍＲＮＡ又はタンパク質のレベルを検出することによって決定され得る。実施形態において、ＢＩＲＣ５  ｍＲＮＡは、Ｅｎｓｅｍｂｌ  ＩＤ：ＥＮＳＴ０００００３０１６３３．８によって同定された核酸配列、これらの相同体又は機能性断片である。実施形態において、ＢＩＲＣ５タンパク質は、Ｕｎｉｐｒｏｔ参照番号Ｏ１５３９２によって同定されるアミノ酸配列、これらの相同体又は機能性断片である。
【０１９２】
本明細書で言及するＢＬＣ２Ｌ１としても公知の、用語「ＢｃｌＸＬ」は、Ｂ細胞リンパ腫超（ＢｃｌＸＬ）をコードする遺伝子、ＢｃｌＸＬ活性（例えば、ＢｃｌＸＬと比較して少なくとも５０％、８０％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％以内の活性）を維持するこれらの相同体又は変異体の組換え体又は自然発生形態のいずれかを含む。いくつかの態様において、自然発生のＢｃｌＸＬポリペプチドと比較して、変異体は、配列全体にわたって又は配列の一部（例えば、５０、１００、１５０又は２００連続アミノ酸部分）と少なくとも９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％アミノ酸配列同一性を有する。実施形態において、ＢｃｌＸＬ遺伝子は、ＥＮＳＥＭＢＬＥ参照番号ＥＮＳＧ０００００１７１５５２によって同定される核酸、又はこれらと実質的な同一性を有する変異体と実質的に同一である。ＢｃｌＸＬの発現レベルは、当技術分野で公知の方法を使用してＢｃｌＸＬ  ｍＲＮＡ又はタンパク質のレベルを検出することによって決定され得る。実施形態において、ＢｃｌＸＬ  ｍＲＮＡは、Ｅｎｓｅｍｂｌ  ＩＤ：ＥＮＳＴ０００００３０７６７７．４によって同定された核酸配列、これらの相同体又は機能性断片である。実施形態において、ＢｃｌＸＬタンパク質は、Ｕｎｉｐｒｏｔ参照番号Ｑ０７８１７によって同定されるアミノ酸配列、これらの相同体又は機能性断片である。
【０１９３】
本明細書で言及する、ＣＤ２７４又はＢ７−Ｈ１としても公知の、用語「ＰＤ−Ｌ１」は、プログラム細胞死１リガンド１（ＰＤ−Ｌ１）をコードする遺伝子、ＰＤ−Ｌ１活性（例えば、ＰＤ−Ｌ１と比較して少なくとも５０％、８０％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％以内の活性）を維持するこれらの相同体又は変異体の組換え体又は自然発生形態のいずれかを含む。いくつかの態様において、自然発生のＰＤ−Ｌ１ポリペプチドと比較して、変異体は、配列全体にわたって又は配列の一部（例えば、５０、１００、１５０又は２００連続アミノ酸部分）と少なくとも９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％アミノ酸配列同一性を有する。実施形態において、ＰＤ−Ｌ１遺伝子は、ＥＮＳＥＭＢＬＥ参照番号ＥＮＳＧ０００００１２０２１７によって同定される核酸、又はこれらと実質的な同一性を有する変異体と実質的に同一である。ＰＤ−Ｌ１の発現レベルは、当技術分野で公知の方法を使用してＰＤ−Ｌ１  ｍＲＮＡ又はタンパク質のレベルを検出することによって決定され得る。実施形態において、ＰＤ−Ｌ１  ｍＲＮＡは、Ｅｎｓｅｍｂｌ  ＩＤ：ＥＮＳＧ０００００１２０２１７によって同定された核酸配列、これらの相同体又は機能性断片である。実施形態において、ＰＤ−Ｌ１タンパク質は、Ｕｎｉｐｒｏｔ参照番号Ｑ９ＮＺＱ７によって同定されるアミノ酸配列、これらの相同体又は機能性断片である。
【０１９４】
細胞においてＰ５３を増加する方法
実施形態を含む本明細書に提供するコンジュゲートは、細胞においてｐ５３を増加する手段としてさらに想定される。本明細書で言及する「ｐ５３タンパク質」又は「ｐ５３」は、腫瘍タンパク質ｐ５３（ｐ５３）、又はｐ５３活性（例えば、ｐ５３と比較して少なくとも５０％、８０％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％以内の活性）を維持するこれらの変異体又は相同体の組換え体又は自然発生形態のいずれかを含む。いくつかの態様において、自然発生のｐ５３タンパク質と比較して、変異体又は相同体は、配列全体にわたって又は配列の一部（例えば、５０、１００、１５０又は２００連続アミノ酸部分）と少なくとも９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％アミノ酸配列同一性を有する。実施形態において、ｐ５３タンパク質は、ＵｎｉＰｒｏｔ参照番号Ｐ０４６３７によって同定されるタンパク質、又はこれらと実質的な同一性を有する変異体又は相同体と実質的に同一である。
【０１９５】
一態様において、がん細胞におけるｐ５３の発現を増加する方法が提供され、方法は、がん細胞を、実施形態を含む本明細書に記載の細胞透過性ペプチドコンジュゲートの有効量と接触させるステップ、それによりがん細胞においてｐ５３の発現を増加するステップを含む。
【０１９６】
腫瘍血管新生を阻害する方法
実施形態を含む本明細書に提供するコンジュゲートは、腫瘍血管新生の阻害によるがんの処置に有用である。したがって、別の態様において、腫瘍血管新生の阻害を必要とする対象において腫瘍血管新生を阻害する方法が提供され、方法は、実施形態を含む本明細書に記載の細胞透過性ペプチドコンジュゲートの治療有効量を対象に投与するステップ、それにより対象において腫瘍血管新生を阻害するステップを含む。
【０１９７】
炎症性疾患を処置する方法
実施形態を含む本明細書に提供するコンジュゲートは、炎症性疾患の処置にも有用である。したがって、別の態様において、炎症性疾患の処置を必要とする対象において炎症性疾患を処置する方法が提供され、方法は、実施形態を含む本明細書に記載の細胞透過性ペプチドコンジュゲートの治療有効量を対象に投与するステップ、それにより対象において炎症性疾患を処置するステップを含む。
【０１９８】
本明細書において使用する場合、用語「炎症性疾患」は、異常な炎症（例えば、疾患を患っていない健康なヒトなどの対照と比較してレベルの増加した炎症）によって特徴付けられる疾患又は状態を指す。炎症性疾患の例としては、外傷性脳損傷、関節炎、関節リウマチ、乾癬性関節炎、若年性突発性関節炎、多発性硬化症、全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）、重症筋無力症、若年型糖尿病、１型糖尿病、ギランバレー症候群、橋本脳炎、橋本甲状腺炎、強直性脊椎炎、乾癬、シェーグレン症候群、血管炎、糸球体腎炎、自己免疫性甲状腺炎、ベーチェット病、クローン病、潰瘍性大腸炎、水疱性類天疱瘡、サルコイドーシス、魚鱗癬、グレーブス眼症、炎症性腸疾患、アジソン病、白斑、喘息、アレルギー性喘息、尋常性ざ瘡、セリアック病、慢性前立腺炎、炎症性腸疾患、骨盤内炎症性疾患、再灌流傷害、サルコイドーシス、移植拒絶反応、間質性膀胱炎、アテローム性動脈硬化症及びアトピー性皮膚炎が挙げられる。
【０１９９】
実施形態において、方法は、標準対照に対してＦＧＡ、ＩＬＩＢ又はＳＥＲＰＩＮＡ３の発現レベルを対象において減少させるステップを含む。実施形態において、方法は、標準対照に対してＦＧＡの発現レベルを対象において減少させるステップを含む。実施形態において、方法は、標準対照に対してＩＬＩＢの発現レベルを対象において減少させるステップを含む。実施形態において、方法は、標準対照に対してＳＥＲＰＩＮＡ３の発現レベルを対象において減少させるステップを含む。実施形態において、標準対照は、実施形態を含む本明細書に記載の細胞透過性ペプチドコンジュゲートの不在下で検出されるＦＧＡ、ＩＬＩＢ又はＳＥＲＰＩＮＡ３の発現レベルである。
【０２００】
本明細書で言及する用語「ＦＧＡ」は、フィブリノーゲン（Ｆｉｂｒｉｇｎｏｇｅｎ）アルファ鎖（ＦＧＡ）をコードする遺伝子、ＦＧＡ活性（例えば、ＦＧＡと比較して少なくとも５０％、８０％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％以内の活性）を維持するこれらの相同体又は変異体の組換え体又は自然発生形態のいずれかを含む。いくつかの態様において、自然発生のＦＧＡポリペプチドと比較して、変異体は、配列全体にわたって又は配列の一部（例えば、５０、１００、１５０又は２００連続アミノ酸部分）と少なくとも９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％アミノ酸配列同一性を有する。実施形態において、ＦＧＡ遺伝子は、ＥＮＳＥＭＢＬＥ参照番号ＥＮＳＧ０００００１７１５６０によって同定される核酸、又はこれらと実質的な同一性を有する変異体と実質的に同一である。ＦＧＡの発現レベルは、当技術分野で公知の方法を使用してＦＧＡ  ｍＲＮＡ又はタンパク質のレベルを検出することによって決定され得る。実施形態において、ＦＧＡ  ｍＲＮＡは、Ｅｎｓｅｍｂｌ  ＩＤ：ＥＮＳＴ０００００３０２０５３．７によって同定された核酸配列、これらの相同体又は機能性断片である。実施形態において、ＦＧＡタンパク質は、Ｕｎｉｐｒｏｔ参照番号Ｐ０２６７１によって同定されるアミノ酸配列、これらの相同体又は機能性断片である。
【０２０１】
本明細書で言及する用語「ＩＬＩＢ」は、インターロイキン１ベータ（ＩＬＩＢ）をコードする遺伝子、ＩＬＩＢ活性（例えば、ＩＬＩＢと比較して少なくとも５０％、８０％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％以内の活性）を維持するこれらの相同体又は変異体の組換え体又は自然発生形態のいずれかを含む。いくつかの態様において、自然発生のＩＬＩＢポリペプチドと比較して、変異体は、配列全体にわたって又は配列の一部（例えば、５０、１００、１５０又は２００連続アミノ酸部分）と少なくとも９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％アミノ酸配列同一性を有する。実施形態において、ＩＬＩＢ遺伝子は、ＥＮＳＥＭＢＬＥ参照番号ＥＮＳＧ０００００１２５５３８によって同定される核酸、又はこれらと実質的な同一性を有する変異体と実質的に同一である。ＩＬＩＢの発現レベルは、当技術分野で公知の方法を使用してＩＬＩＢ  ｍＲＮＡ又はタンパク質のレベルを検出することによって決定され得る。実施形態において、ＩＬＩＢ  ｍＲＮＡは、Ｅｎｓｅｍｂｌ  ＩＤ：ＥＮＳＴ０００００２６３３４１．６によって同定された核酸配列、これらの相同体又は機能性断片である。実施形態において、ＩＬＩＢタンパク質は、Ｕｎｉｐｒｏｔ参照番号Ｐ０１５８４によって同定されるアミノ酸配列、これらの相同体又は機能性断片である。
【０２０２】
本明細書で言及する用語「ＳＥＲＰＩＮＡ３」は、アルファ１抗キモトリプシンをコードする遺伝子、アルファ１抗キモトリプシン活性（例えば、アルファ１抗キモトリプシンと比較して少なくとも５０％、８０％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％以内の活性）を維持するこれらの相同体又は変異体の組換え体又は自然発生形態のいずれかを含む。いくつかの態様において、自然発生のアルファ１抗キモトリプシンポリペプチドと比較して、変異体は、配列全体にわたって又は配列の一部（例えば、５０、１００、１５０又は２００連続アミノ酸部分）と少なくとも９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％アミノ酸配列同一性を有する。実施形態において、ＳＥＲＰＩＮＡ３遺伝子は、ＥＮＳＥＭＢＬＥ参照番号ＥＮＳＧ０００００１９６１３６によって同定される核酸、又はこれらと実質的な同一性を有する変異体と実質的に同一である。ＳＥＲＰＩＮＡ３の発現レベルは、当技術分野で公知の方法を使用してＳＥＲＰＩＮＡ３  ｍＲＮＡ又はタンパク質のレベルを検出することによって決定され得る。実施形態において、ＳＥＲＰＩＮＡ３  ｍＲＮＡは、Ｅｎｓｅｍｂｌ  ＩＤ：ＥＮＳＴ０００００４６７１３２．５によって同定された核酸配列、これらの相同体又は機能性断片である。実施形態において、アルファ１抗キモトリプシンタンパク質は、Ｕｎｉｐｒｏｔ参照番号Ｐ０１０１１によって同定されるアミノ酸配列、これらの相同体又は機能性断片である。
【０２０３】
痛みを処置する非オピオイドベースの方法
オピオイドは、痛みの処置に最も広く使用される中の化合物のクラスである。オピオイド薬は、オピオイド受容体との相互作用によって効果を産生する。オピオイドは、これらをオピオイド受容体アゴニストとして作用させるアヘン様特性又はモルヒネ様特性を有する。しかしながら、オピオイドは、眠気、呼吸抑制及び便秘、並びに乱用可能性及び耐性を含む、他の薬理学的効果を有する。オピオイド使用のネガティブな副作用は、非オピオイドベースの痛みの処置の必要性に拍車をかける。特に、痛みの処置を必要とする対象において痛みを処置する非オピオイドベースの方法が本明細書に提供される。
【０２０４】
一態様において、痛みの処置を必要とする対象において痛みを処置する方法が提供される。方法は、実施形態を含む本明細書に記載の細胞透過性ペプチドコンジュゲートの治療有効量を対象に投与するステップ、それにより対象において痛みを処置するステップを含む。
【０２０５】
痛みは、多岐にわたる発生源から発生し、多岐にわたる原因に由来し得る。したがって、痛みは、侵害受容性痛（例えば、外傷、処置、切断、捻挫、骨折、火傷、腫れ、打撲）、神経障害性痛（例えば、ヘルペス後神経痛、反射性交換神経性ジストロフィー／カウザルギー、がん性疼痛、がんの処置によって誘導された痛み、ＨＩＶ／ＡＩＤＳ又は肝炎、糖尿病、幻肢痛、絞扼性神経障害、慢性的なアルコール飲用、他の毒素への暴露、ビタミン欠乏及び特発性）、炎症痛（例えば、関節炎、大腸炎、心炎、肺炎、腎炎、筋炎、血管炎、子宮内膜症、神経炎、皮膚炎及び他の炎症状態と関連する痛み）、慢性的な広範囲の痛み（例えば、線維筋痛症、偏頭痛、過敏性腸症候群、シンドロームＸ、間質性膀胱炎、慢性疲労症候群、外傷後ストレス障害、不安、憂鬱、ストレス関連の痛み症状などの精神病と関連する痛み、及び炎症性又は神経障害性疼痛に続発する）又は混合された病因（すなわち、上記４つのカテゴリーの２つ以上の組合せ）であってよい。
【０２０６】
実施形態において、本明細書に提供する方法において痛みを処置するために有用なペプチドコンジュゲートは、オピオイド受容体によるこの鎮痛作用を媒介しない。実施形態において、本明細書に提供する方法において痛みを処置するために有用なペプチドコンジュゲートは、アヘン様特性又はモルヒネ様特性を持たない。実施形態において、本明細書に提供する方法において痛みを処置するために有用なペプチドコンジュゲートは、オピオイド受容体リガンドではない。実施形態において、本明細書に提供する方法において痛みを処置するために有用なペプチドコンジュゲートは、オピオイド受容体に結合しない。実施形態において、本明細書に提供する方法において痛みを処置するために有用なペプチドコンジュゲートは、オピオイド受容体アゴニストではない。
【０２０７】
実施形態において、方法は、標準対照に対してＰＴＧＳ１、ＰＴＧＳ２、ＣＡＬＣＡ又はＳＳＴの発現レベルを対象において減少させるステップを含む。実施形態において、方法は、標準対照に対してＰＴＧ５１の発現レベルを対象において減少させるステップを含む。実施形態において、方法は、標準対照に対してＰＴＧ５２の発現レベルを対象において減少させるステップを含む。実施形態において、方法は、標準対照に対してＣＡＬＣＡの発現レベルを対象において減少させるステップを含む。実施形態において、方法は、標準対照に対してＳＳＴの発現レベルを対象において減少させるステップを含む。実施形態において、標準対照は、実施形態を含む本明細書に記載の細胞透過性ペプチドコンジュゲートの不在下で検出されるＰＴＧＳ１、ＰＴＧＳ２、ＣＡＬＣＡ又はＳＳＴの発現レベルである。
【０２０８】
本明細書で言及する用語「ＰＴＧＳ１」は、ＣＯＸ−１としても公知の、プロスタグランジンエンドペルオキシドシンターゼ１（ＰＴＧＳ１）をコードする遺伝子、ＰＴＧＳ１活性（例えば、ＰＴＧＳ１と比較して少なくとも５０％、８０％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％以内の活性）を維持するこれらの相同体又は変異体の組換え体又は自然発生形態のいずれかを含む。いくつかの態様において、自然発生のＰＴＧＳ１ポリペプチドと比較して、変異体は、配列全体にわたって又は配列の一部（例えば、５０、１００、１５０又は２００連続アミノ酸部分）と少なくとも９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％アミノ酸配列同一性を有する。実施形態において、ＰＴＧＳ１遺伝子は、ＥＮＳＥＭＢＬＥ参照番号ＥＮＳＧ００００００９５３０３によって同定される核酸、又はこれらと実質的な同一性を有する変異体と実質的に同一である。ＰＴＧＳ１の発現レベルは、当技術分野で公知の方法を使用してＰＴＧＳ１  ｍＲＮＡ又はタンパク質のレベルを検出することによって決定され得る。実施形態において、ＰＴＧＳ１  ｍＲＮＡは、Ｅｎｓｅｍｂｌ  ＩＤ：ＥＮＳＴ０００００５４０７５３．５によって同定された核酸配列、これらの相同体又は機能性断片である。実施形態において、ＰＴＧＳ１タンパク質は、Ｕｎｉｐｒｏｔ参照番号Ｐ２３２１９によって同定されるアミノ酸配列、これらの相同体又は機能性断片である。
【０２０９】
本明細書で言及する用語「ＰＴＧＳ２」は、ＣＯＸ−２としても公知の、プロスタグランジンエンドペルオキシドシンターゼ２（ＰＴＧＳ２）をコードする遺伝子、ＰＴＧＳ２活性（例えば、ＰＴＧＳ２と比較して少なくとも５０％、８０％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％以内の活性）を維持するこれらの相同体又は変異体の組換え体又は自然発生形態のいずれかを含む。いくつかの態様において、自然発生のＰＴＧＳ２ポリペプチドと比較して、変異体は、配列全体にわたって又は配列の一部（例えば、５０、１００、１５０又は２００連続アミノ酸部分）と少なくとも９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％アミノ酸配列同一性を有する。実施形態において、ＰＴＧＳ２遺伝子は、ＥＮＳＥＭＢＬＥ参照番号ＥＮＳＧ００００００７３７５６によって同定される核酸、又はこれらと実質的な同一性を有する変異体と実質的に同一である。ＰＴＧＳ２の発現レベルは、当技術分野で公知の方法を使用してＰＴＧＳ２  ｍＲＮＡ又はタンパク質のレベルを検出することによって決定され得る。実施形態において、ＰＴＧＳ２  ｍＲＮＡは、Ｅｎｓｅｍｂｌ  ＩＤ：ＥＮＳＴ０００００３６７４６８．９によって同定された核酸配列、これらの相同体又は機能性断片である。実施形態において、ＰＴＧＳ２タンパク質は、Ｕｎｉｐｒｏｔ参照番号Ｐ３５３５４によって同定されるアミノ酸配列、これらの相同体又は機能性断片である。
【０２１０】
本明細書で言及する用語「ＳＳＴ」は、ソマトスタチン（ＳＳＴ）をコードする遺伝子、ＳＳＴ活性（例えば、ＳＳＴと比較して少なくとも５０％、８０％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％以内の活性）を維持するこれらの相同体又は変異体の組換え体又は自然発生形態のいずれかを含む。いくつかの態様において、自然発生のＳＳＴポリペプチドと比較して、変異体は、配列全体にわたって又は配列の一部（例えば、５０、１００、１５０又は２００連続アミノ酸部分）と少なくとも９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％アミノ酸配列同一性を有する。実施形態において、ＳＳＴ遺伝子は、ＥＮＳＥＭＢＬＥ参照番号ＥＮＳＧ０００００１５７００５によって同定される核酸、又はこれらと実質的な同一性を有する変異体と実質的に同一である。ＳＳＴの発現レベルは、当技術分野で公知の方法を使用してＳＳＴ  ｍＲＮＡ又はタンパク質のレベルを検出することによって決定され得る。実施形態において、ＳＳＴ  ｍＲＮＡは、Ｅｎｓｅｍｂｌ  ＩＤ：ＥＮＳＴ０００００２８７６４１．３によって同定された核酸配列、これらの相同体又は機能性断片である。実施形態において、ＳＳＴタンパク質は、Ｕｎｉｐｒｏｔ参照番号Ｐ６１２７８によって同定されるアミノ酸配列、これらの相同体又は機能性断片である。
【０２１１】
本明細書で言及する用語「ＣＡＬＣＡ」は、カルシトニン遺伝子関連ペプチド（ＣＧＲＰ）をコードする遺伝子、ＣＡＬＣＡ活性（例えば、ＣＡＬＣＡと比較して少なくとも５０％、８０％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％以内の活性）を維持するこれらの相同体又は変異体の組換え体又は自然発生形態のいずれかを含む。いくつかの態様において、自然発生のＣＡＬＣＡポリペプチドと比較して、変異体は、配列全体にわたって又は配列の一部（例えば、５０、１００、１５０又は２００連続アミノ酸部分）と少なくとも９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％アミノ酸配列同一性を有する。実施形態において、ＣＡＬＣＡ遺伝子は、ＥＮＳＥＭＢＬＥ参照番号ＥＮＳＧ０００００１１０６８０によって同定される核酸、又はこれらと実質的な同一性を有する変異体と実質的に同一である。ＣＡＬＣＡの発現レベルは、当技術分野で公知の方法を使用してＣＡＬＣＡ  ｍＲＮＡ又はタンパク質のレベルを検出することによって決定され得る。実施形態において、ＣＡＬＣＡ  ｍＲＮＡは、Ｅｎｓｅｍｂｌ  ＩＤ：ＥＮＳＴ０００００３６１０１０．７によって同定された核酸配列、これらの相同体又は機能性断片である。実施形態において、ＣＡＬＣＡタンパク質は、Ｕｎｉｐｒｏｔ参照番号Ｐ０１２５８、Ｐ０６８８１によって同定されるアミノ酸配列、これらの相同体又は機能性断片である。
【０２１２】
ウイルス感染及びウイルスの細胞への侵入を処置する方法
実施形態を含む本明細書に提供するコンジュゲートは、ウイルス感染及びウイルスの細胞への侵入を阻害するために有用である。一態様において、ウイルス感染の処置を必要とする対象においてウイルス感染を処置する方法が提供される。方法は、実施形態を含む本明細書に記載の細胞透過性ペプチドコンジュゲートの治療有効量を対象に投与するステップ、それにより対象においてウイルス感染を処置するステップを含む。
【０２１３】
実施形態において、方法は、標準対照に対してＣＸＣＲ４、ＣＣＲ５又はＣＤ１５５の発現レベルを対象において減少させるステップを含む。実施形態において、方法は、標準対照に対してＣＸＣＲ４の発現レベルを対象において減少させるステップを含む。実施形態において、方法は、標準対照に対してＣＣＲ５の発現レベルを対象において減少させるステップを含む。実施形態において、方法は、標準対照に対してＣＤ１５５の発現レベルを対象において減少させるステップを含む。実施形態において、標準対照は、実施形態を含む本明細書に記載の細胞透過性ペプチドコンジュゲートの不在下で検出されるＣＸＣＲ４、ＣＣＲ５又はＣＤ１５５の発現レベルである。
【０２１４】
本明細書で言及する用語「ＣＸＣＲ４」は、Ｃ−Ｘ−Ｃケモカイン受容体４型（ＣＸＣＲ４）をコードする遺伝子、ＣＸＣＲ４活性（例えば、ＣＸＣＲ４と比較して少なくとも５０％、８０％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％以内の活性）を維持するこれらの相同体又は変異体の組換え体又は自然発生形態のいずれかを含む。いくつかの態様において、自然発生のＣＸＣＲ４ポリペプチドと比較して、変異体は、配列全体にわたって又は配列の一部（例えば、５０、１００、１５０又は２００連続アミノ酸部分）と少なくとも９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％アミノ酸配列同一性を有する。実施形態において、ＣＸＣＲ４遺伝子は、ＥＮＳＥＭＢＬＥ参照番号ＥＮＳＧ０００００１２１９６６によって同定される核酸、又はこれらと実質的な同一性を有する変異体と実質的に同一である。ＣＸＣＲ４の発現レベルは、当技術分野で公知の方法を使用してＣＸＣＲ４  ｍＲＮＡ又はタンパク質のレベルを検出することによって決定され得る。実施形態において、ＣＸＣＲ４  ｍＲＮＡは、Ｅｎｓｅｍｂｌ  ＩＤ：ＥＮＳＴ０００００４０９８１７．１によって同定された核酸配列、これらの相同体又は機能性断片である。実施形態において、ＣＸＣＲ４タンパク質は、Ｕｎｉｐｒｏｔ参照番号Ｐ６１０７３によって同定されるアミノ酸配列、これらの相同体又は機能性断片である。
【０２１５】
本明細書で言及する用語「ＣＣＲ５」は、Ｃ−Ｃモチーフケモカイン受容体５（ＣＣＲ５）をコードする遺伝子、ＣＣＲ５活性（例えば、ＣＣＲ５と比較して少なくとも５０％、８０％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％以内の活性）を維持するこれらの相同体又は変異体の組換え体又は自然発生形態のいずれかを含む。いくつかの態様において、自然発生のＣＣＲ５ポリペプチドと比較して、変異体は、配列全体にわたって又は配列の一部（例えば、５０、１００、１５０又は２００連続アミノ酸部分）と少なくとも９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％アミノ酸配列同一性を有する。実施形態において、ＣＣＲ５遺伝子は、ＥＮＳＥＭＢＬＥ参照番号ＥＮＳＧ０００００１６０７９１によって同定される核酸、又はこれらと実質的な同一性を有する変異体と実質的に同一である。ＣＣＲ５の発現レベルは、当技術分野で公知の方法を使用してＣＣＲ５  ｍＲＮＡ又はタンパク質のレベルを検出することによって決定され得る。実施形態において、ＣＣＲ５  ｍＲＮＡは、Ｅｎｓｅｍｂｌ  ＩＤ：ＥＮＳＴ０００００２９２３０３．４によって同定された核酸配列、これらの相同体又は機能性断片である。実施形態において、ＣＣＲ５タンパク質は、Ｕｎｉｐｒｏｔ参照番号Ｐ５１６８１によって同定されるアミノ酸配列、これらの相同体又は機能性断片である。
【０２１６】
本明細書で言及する用語「ＣＤ１５５」は、ポリオウイルス受容体（ＰＶＲ）としても公知の、表面抗原分類１５５（ＣＤ１５５）をコードする遺伝子、ＣＤ１５５活性（例えば、ＣＤ１５５と比較して少なくとも５０％、８０％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％以内の活性）を維持するこれらの相同体又は変異体の組換え体又は自然発生形態のいずれかを含む。いくつかの態様において、自然発生のＣＤ１５５ポリペプチドと比較して、変異体は、配列全体にわたって又は配列の一部（例えば、５０、１００、１５０又は２００連続アミノ酸部分）と少なくとも９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％アミノ酸配列同一性を有する。実施形態において、ＣＤ１５５遺伝子は、ＥＮＳＥＭＢＬＥ参照番号ＥＮＳＧ００００００７３００８によって同定される核酸、又はこれらと実質的な同一性を有する変異体と実質的に同一である。ＣＤ１５５の発現レベルは、当技術分野で公知の方法を使用してＣＤ１５５  ｍＲＮＡ又はタンパク質のレベルを検出することによって決定され得る。実施形態において、ＣＤ１５５  ｍＲＮＡは、Ｅｎｓｅｍｂｌ  ＩＤ：ＥＮＳＴ０００００４２５６９０．７によって同定された核酸配列、これらの相同体又は機能性断片である。実施形態において、ＣＤ１５５タンパク質は、Ｕｎｉｐｒｏｔ参照番号Ｐ１５１５１によって同定されるアミノ酸配列、これらの相同体又は機能性断片である。
【０２１７】
実施形態において、ウイルス感染はＨＩＶ感染又はポリオウイルス感染である。
【０２１８】
一態様において、ウイルスの細胞への侵入を阻害する方法が提供され、方法は、実施形態を含む本明細書に提供する細胞透過性ペプチドコンジュゲートの有効量と細胞を接触させるステップ、それによりウイルスの細胞への侵入を阻害するステップを含む。
【０２１９】
実施形態において、方法は、標準対照に対してＣＸＣＲ４、ＣＣＲ５又はＣＤ１５５の発現レベルを細胞において減少させるステップを含む。実施形態において、標準対照は、実施形態を含む本明細書に記載の細胞透過性ペプチドコンジュゲートの不在下で検出されるＣＸＣＲ４、ＣＣＲ５又はＣＤ１５５の発現レベルである。
【０２２０】
細胞においてＩＬ６受容体シグナル伝達を減少させる方法
実施形態を含む本明細書に提供するコンジュゲートは、細胞においてＩＬ６受容体シグナル伝達を減少させるのに有用である。したがって、一態様において、細胞におけるＩＬ６受容体シグナル伝達を阻害する方法が提供され、方法は、実施形態を含む本明細書に提供する細胞透過性ペプチドコンジュゲートの有効量と細胞を接触させるステップ、それにより細胞においてＩＬ６受容体シグナル伝達を阻害するステップを含む。
【０２２１】
本明細書で言及する「ＩＬ６受容体」は、インターロイキン６受容体、又はＩＬ６受容体活性（例えば、ＩＬ６受容体と比較して少なくとも５０％、８０％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％以内の活性）を維持するこれらの変異体又は相同体の自然発生形態のいずれかを含む。いくつかの態様において、自然発生のＩＬ６受容体タンパク質と比較して、変異体又は相同体は、配列全体にわたって又は配列の一部（例えば、５０、１００、１５０又は２００連続アミノ酸部分）と少なくとも９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％アミノ酸配列同一性を有する。実施形態において、ＩＬ６受容体タンパク質は、ＵｎｉＰｒｏｔ参照番号Ｐ０８８８７によって同定されるタンパク質、又はこれらと実質的な同一性を有する変異体若しくは相同体と実質的に同一である。
【０２２２】
非細胞透過性ペプチドを細胞に送達する方法
実施形態を含む本明細書に提供するコンジュゲートは、非細胞透過性ペプチドを細胞に送達するために有用である。一態様において、非細胞透過性ペプチドを細胞に送達する方法が提供され、方法は、実施形態を含む本明細書に提供する細胞透過性ペプチドコンジュゲートと細胞を接触させるステップ、それにより非細胞透過性ペプチドを細胞に送達するステップを含む。
【実施例】
【０２２３】
出願人らは、初めは、腫瘍促進転写因子ＳＴＡＴ３のリジンＫ６８５におけるリジンアセチル化が、ＳＴＡＴ３をカリオフェリンエキスポーチン７と結合するのに重要であると観察した。エキスポーチン７は、アセチル化ＳＴＡＴ３を認識すると、ＳＴＡＴ３と物理的に相互作用し、この核放出及び続く活性化（核内移行；インポーチンによって促進される）−非活性化（核外移行；エキスポーチンによって促進される）−再活性化（核内移行）の動的循環における細胞膜での再活性化を促進する１。ＳＴＡＴ３動的循環（核・細胞質間輸送）は、持続的なＳＴＡＴ３依存性標的遺伝子活性化の維持に必要とされ、したがって治療障害の有望な点であると考えられる。核・細胞質間輸送の標的化は、細胞質に存在するＳＴＡＴ３活性化キナーゼ又は細胞核の中及び外にＳＴＡＴ３積荷を輸送することが公知のカリオフェリンファミリー（インポーチン、エキスポーチン）のメンバーのいずれかをブロックするように機能し得る。ここで、出願人らは、エキスポーチン７との結合をＳＴＡＴ３タンパク質と競合し、腫瘍増殖を効果的に遅延させる配列特異的ペプチドを記載する。ＳＴＡＴ３競合ペプチドによる異種移植片モデルにおけるヒト腫瘍の処置は、腫瘍抑制因子ｐ５３の発現の獲得及び切断されたカスパーゼ３によって示される腫瘍細胞アポトーシス、並びに著しく減少した増殖活性及び腫瘍血管崩壊をもたらす。
【０２２４】
［実施例１］  ホスホロチオエート化ｓｓＤＮＡオリゴヌクレオチドへの共有結合による細胞内移行ペプチドの産生
全長タンパク質又は「人工」配列のいずれかのストレッチを表すペプチドは、ホスホロチオエート化ｓｓＤＮＡ（ＰＳ）  ２０ｍｅｒのオリゴにヒドラジド結合することによって共有結合的に融合され、それぞれアンタゴニスト又はアゴニストな方法で細胞内分子標的を標的化する細胞内移行を促進する。ペプチドの非ホスホロチオエート化ｓｓＤＮＡオリゴ（ＰＯ）伸長は、非内部移行対照として用いられた。
【０２２５】
出願人らは、ヒト転写因子ＳＴＡＴ３において自然発生するアミノ酸のストレッチを表すペプチドを改変した。出願人らは、２２個のアミノ酸を含む領域を選択し、ここで腫瘍細胞及び炎症反応に参加する細胞においてリジンＫ６８５はアセチル化される。出願人らは、野生型（ＳＴＡＴ３−ｗｔ：ＰＤＩＰＫＥＥＡＦＧＫ６８５ＹＣＲＰＥＳＱＥＨＰＣ；配列番号６）、変異型（ＳＴＡＴ３−Ｋ６８５Ｒ：ＰＤＩＰＫＥＥＡＦＧＲ６８５ＹＣＲＰＥＳＱＥＨＰＣ；配列番号７）及びアセチル化（ＳＴＡＴ３−ａｃｅｔ．Ｋ６８５：ＰＤＩＰＫＥＥＡＦＧ（ａｃｅｔ）Ｋ６８５ＹＣＲＰＥＳＱＥＨＰＣ；配列番号３）ＳＴＡＴ３ペプチドを設計した（図５Ａ）。ＳＴＡＴ３ペプチドは、ホスホロチオエート化ｓｓＤＮＡオリゴヌクレオチドによって伸長された（図１及び図５Ａ）。ペプチドはヒドラジド駆動性伸長によって改変された（図１及び図２）。
【０２２６】
［実施例２］  ホスホロチオエート化ｓｓＤＮＡオリゴヌクレオチドによって伸長された改変ＳＴＡＴ３ペプチドは最初期に細胞内移行される
ペプチドはヒドラジド駆動性伸長によって改変され、改変ペプチドの細胞内追跡を可能にする蛍光標識されると、出願人らは、ネガティブな非内部移行対照としてＰＯ改変ペプチドを含む共焦点顕微鏡及びフローサイトメトリーによってＰＳ改変ペプチドの最初期の細胞内移行を評価した。ヒトグリオーマＵ２５１細胞は、記載したように１０μｇ／ｍｌのペプチドと２時間インキュベートされた（図３Ａ）。固定した細胞は、細胞内ペプチド局在を共焦点顕微鏡によって分析された（図３Ａ）。
【０２２７】
ヒトグリオーマＵ２５１細胞は、表示の通り１μｇ／ｍｌのペプチドと２時間インキュベートされ、フローサイトメトリーによって分析され、改変ペプチドによる細胞の最初期の細胞負荷を評価した（図３Ｂ）。
【０２２８】
［実施例３］  ホスホロチオエート化（ＰＳ）ｓｓＤＮＡの結合はインビボでのペプチドの生体安定性を著しく改善する
表示の通り２０ｍｇ／用量によって２週間毎日全身（ｉ．ｖ．）処理したマウスから単離された血漿は、ＰＳ改変によってかなり改善された生体内安定性を示す末梢血流における改変ペプチドに関してウェスタンブロッティングによって分析された（図４）。
【０２２９】
［実施例４］  ＳＴＡＴ３活性化をブロックする新規のアセチル化−特異的競合ペプチド
出願人らは、初めに、腫瘍促進転写因子ＳＴＡＴ３のリジンＫ６８５におけるリジンアセチル化が、ＳＴＡＴ３をカリオフェリンエキスポーチン７と結合するのに重要であると観察した。エキスポーチン７は、アセチル化ＳＴＡＴ３を認識すると、ＳＴＡＴ３と物理的に相互作用し、この核放出及び続く活性化（核内移行；インポーチンによって促進される）−非活性化（核外移行；エキスポーチンによって促進される）−再活性化（核内移行）の動的循環における細胞膜での再活性化を促進する１。ＳＴＡＴ３動的循環（核・細胞質間輸送）は、持続的なＳＴＡＴ３依存性標的遺伝子活性化の維持に必要とされ、したがって治療障害の有望な点であると考えられる。特定の理論に限定されないが、核・細胞質間輸送の標的化は、細胞質に存在するＳＴＡＴ３活性化キナーゼ又は細胞核の中及び外にＳＴＡＴ３積荷を輸送することが公知のカリオフェリンファミリー（インポーチン、エキスポーチン）のメンバーのいずれかをブロックすることができる。ここで、出願人らは、エキスポーチン７との結合をＳＴＡＴ３タンパク質と競合し、腫瘍増殖を効果的に遅延させる配列特異的ペプチドを記載する。ＳＴＡＴ３競合ペプチドによる異種移植片モデルにおけるヒト腫瘍の処理は、腫瘍抑制因子ｐ５３の発現の獲得及び切断されたカスパーゼ３によって示される腫瘍細胞アポトーシス、並びに著しく減少した増殖活性及び腫瘍血管崩壊をもたらす。
【０２３０】
図５Ａにおいて、ヒトＳＴＡＴ３タンパク質に由来するペプチド配列が示される。リジン残基は、腫瘍並びに細胞及び組織の炎症反応においてアセチル化されることが公知であるＳＴＡＴ３タンパク質のリジン６８５に相当するペプチドの中央に位置する。人工のリジンアセチル化競合ペプチドは抗腫瘍活性を示すが、アルギニンＲへのリジン変異（中央）又は野生型（下）に相当する配列は、腫瘍増殖キネティクスに影響しない又はわずかにしか影響しない。全てのペプチドはホスホロチオエート化ｓｓＤＮＡオリゴに伸長され、細胞内移行を促進した（図５Ａ）。インビトロアッセイから示されるように、アセチル化されたＳＴＡＴ３競合ペプチドはエキスポーチン７と結合し、ペプチドのリンカー領域に組み込まれたタグとしてＦＩＴＣフルオロフォアを使用してペプチドを沈殿させる（図５Ｂ）。沈殿物は、ヒトグリオーマＵ２５１細胞内のエキスポーチン７との物理的相互作用に関してウェスタンブロッティングによって分析された（図５Ｂ）。
【０２３１】
ヒト結腸がん（ＨＣＴ１１６）担持マウスへのＳＴＡＴ３競合ペプチドのインビボでの毎日の投与は、著しい腫瘍増殖遅延をもたらす。腫瘍組織のホモジネートから分析した場合、ＳＴＡＴ３競合ペプチドはＳＴＡＴ３タンパク質とエキスポーチン７の物理的相互作用をかなり低減した（図６Ａ及び６Ｂ）。
【０２３２】
ＳＴＡＴ３競合ペプチドは、腫瘍増殖を著しく低減し、ＳＴＡＴ３タンパク質のエキスポーチン７との相互作用を減少した（競合）。ヒト結腸がん腫瘍担持マウスは、表示の通り２０ｍｇのペプチドによって毎日処理され、腫瘍容積が評価された（図６Ａ）。ＳＴＡＴ３とエキスポーチン７の低下した相互作用が、ウェスタンブロッティングによって分析される共沈殿によって腫瘍組織ホモジネートから評価された（図６Ｂ）。
【０２３３】
重要なことに、ＳＴＡＴ３競合ペプチドのヒト結腸がん（ＨＣＴ１１６）担持マウスへのインビボ投与は、ｐ５３腫瘍抑制因子発現の上方制御による所望の抗腫瘍活性をもたらし、誘導される腫瘍細胞死を示す切断されたカスパーゼ３のレベルを上昇した。さらに、ＳＴＡＴ３競合ペプチドによる腫瘍の処理は、腫瘍細胞増殖を著しく減少し、腫瘍血管形成を減らし、血管崩壊を誘導した（図７Ａ〜７Ｃ）。
【０２３４】
ＳＴＡＴ３競合ペプチドは、インビボにおいてヒト結腸がん腫瘍に抗腫瘍反応を誘導した。図７Ａは、誘導されたｐ５３腫瘍抑制因子発現及び腫瘍ホモジネートのウェスタンブロット分析によって評価された、切断されたカスパーゼ３によって示される腫瘍細胞死の上昇を示す。Ｋｉ６７＋増殖活性及びＣＤ３１＋腫瘍血管は、共焦点顕微鏡（図７Ｂ）及びその定量（図７Ｃ）によって分析されたように著しく低減された
【０２３５】
［実施例５］  炎症反応を低減するペプチド
出願人らは、ホスホロチオエート化ｓｓＤＮＡ伸長によって改変された配列特異的、人工的にアセチル化されたＳＴＡＴ３−ペプチド（図８）が、炎症の分子制御に含まれる分子のレパートリーを著しく低減することを観察した（図９）。
【０２３６】
図８に、ＳＴＡＴ３タンパク質のストレッチをカバーする１文字記号のアミノ酸配列が示される。（Ａｃ）によって示されるように、リジンＫ６８５は改変され、人工的にアセチル化された。細胞内移行を達成するため、ペプチドはそのＣ末端において、リンカー、続いて２０ｍｅｒのｓｓＤＮＡストレッチによって伸長された。糖−リン酸主鎖が（＊）によって示されるようにホスホロチオエート化され、細胞内移行を達成する（図８  ＰＳ；上）ことが重要である。対照ペプチドはホスホロチオエート化無しで使用された（図８；リン酸ジエステル、ＰＯ；下）。
【０２３７】
出願人らは、人工的にアセチル化された細胞透過性ホスホロチオエート化ＳＴＡＴ３−ペプチドの、腫瘍内の炎症反応に決定的に含まれる遺伝子の発現への影響を決定した。ヒト結腸がん腫瘍は、人工的にアセチル化され、ホスホロチオエート化されたＳＴＡＴ３−ペプチド（ＰＳ）、人工的にアセチル化された非細胞透過性ＳＴＡＴ３−ペプチド（ＰＯ）、又は処理無し（Ｎｏ  Ｔｘ）のいずれかによって処理された。処理されたヒト結腸がん腫瘍は１日量１０μｇのペプチドを局所的に受けた。腫瘍が切開されると、ｍＲＮＡが回収され、炎症反応に決定的に含まれるヒト遺伝子のレパートリーでのＲＴ−ＰＣＲが分析された。図９には、ＩＬＩＢ遺伝子によってコードされるＩＬ−１、ＦＢＡ遺伝子によってコードされるフィブリノーゲン、及びＳＥＲＰＩＮＡ３遺伝子によってコードされるα１−抗キモトリプシンに関して、ＲＰ−ＩＩによってノーマライズされたｍＲＮＡ発現レベルが示される。ＰＳによる処理は、これらの遺伝子の発現の著しい低減をもたらしたが、ＰＯではもたらさなかった（図９）。
【０２３８】
［実施例６］  非オピオイドの痛みを低減するペプチドコンジュゲート
出願人らは、ホスホロチオエート化ｓｓＤＮＡ伸長によって改変された配列特異的、人工的にアセチル化されたＳＴＡＴ３−ペプチド（図８）が、痛みの分子制御に含まれる分子のレパートリーを著しく低減することを観察した（図１０）。
【０２３９】
人工的にアセチル化された、細胞透過性ホスホロチオエート化ＳＴＡＴ３−ペプチドの痛みの制御に決定的に含まれる遺伝子の発現への影響を決定するため、ヒト結腸がん腫瘍は、人工的にアセチル化され、ホスホロチオエート化されたＳＴＡＴ３−ペプチド（ＰＳ）、人工的にアセチル化された非細胞透過性ＳＴＡＴ３−ペプチド（ＰＯ）、又は処理無し（Ｎｏ  Ｔｘ又はＮｏｎｅ）のいずれかによって処理された。処理されたヒト結腸がん腫瘍は１日量１０μｇのペプチドを局所的に受けた。腫瘍が切開されると、ｍＲＮＡが回収され、痛みの制御に決定的に含まれるヒト遺伝子のレパートリーでのＲＴ−ＰＣＲが分析された。図１０は、ＣＯＸ１をコードするＰＴＧＳ１、ＣＯＸ２をコードするＰＴＧＳ２、ソマトスタチンをコードするＳＳＴ、及びＣＧＲＰをコードするＣＡＬＣＡに関して、ＲＰ−ＩＩ又はＡＣＴＢのいずれかによってノーマライズされたｍＲＮＡ発現レベルを示す。ＰＳによる処理は、これらの遺伝子の発現の著しい低減をもたらしたが、ＰＯではもたらさなかった（図１０）。
【０２４０】
［実施例７］  ウイルス感染感受性を低減する細胞透過性ペプチド
出願人らは、ホスホロチオエート化ｓｓＤＮＡ伸長によって改変された配列特異的、人工的にアセチル化されたＳＴＡＴ３−ペプチド（図８）が、ウイルス侵入に含まれるウイルス表面受容体の発現を著しく低減することを観察した（図１１）。特に、影響を受けるウイルス受容体はＣＣＲ５及びＣＸＣＲ４である；ＣＣＲ５（ＣＤ１９５）及びＣＸＣＲ４（ＣＤ１８４）は、最初にＨＩＶ粒子を結合し、細胞への侵入を促進する受容体である。さらに、ポリオウイルス受容体ＰＶＲ（ＣＤ１５５）は、細胞が細胞透過性ペプチドによって処理されると転写発現が著しく低減された。ＳＣＡＲＢ２遺伝子によってコードされる一般的なエンドサイトーシス分子は影響されず、分析の対照遺伝子として寄与する。
【０２４１】
［実施例８］  急性期炎症反応を低減する改変ＧＰ１３０−ペプチド
インターロイキン−６（ＩＬ−６）シグナル伝達は、シグナル伝達共受容体ＩＬ−６Ｒベータ（ｇｐ１３０）を動員するＩＬ−６Ｒアルファ（ｇｐ８０）の細胞外ドメインに結合することによって細胞内ＳＴＡＴ３活性を供給する。これらの受容体へのＩＬ−６の結合は、ｇｐ１３０の細胞質側末端における６個のチロシン残基のリン酸化をもたらし；これらのリン酸化チロシン（ｐＹ７６７、ｐＹ９０５及びｐＹ９１５）の３つは、ＳＴＡＴ３細胞内シグナル伝達を開始するＳＴＡＴ３  ＳＨ２ドメインによって認識される主な結合部位として寄与する。出願人らは、ホスホロチオエート化ｓｓＤＮＡ伸長によって改変されたこれら３つのｇｐ１３０−ペプチド（図１３）は、これらが細胞内移行すると（図１４）、急性期炎症反応を編成するＩＬ−６／ｇｐ１３０／ＳＴＡＴ３標的遺伝子のレパートリーの発現をかなり低減することを開示する（図１５）。
【０２４２】
［実施例９］  がん細胞においてインターロイキン−６シグナル伝達を低減するＧＰ１３０−ペプチド
インターロイキン−６（ＩＬ−６）シグナル伝達は、シグナル伝達共受容体ＩＬ−６Ｒベータ（ｇｐ１３０）を動員するＩＬ−６Ｒアルファ（ｇｐ８０）の細胞外ドメインに結合することによって細胞内ＳＴＡＴ３活性を供給する。これらの受容体へのＩＬ−６の結合は、ｇｐ１３０の細胞質側末端における６個のチロシン残基のリン酸化をもたらし；これらのリン酸化チロシン（ｐＹ７６７［配列番号４］、ｐＹ９０５［配列番号８］及びｐＹ９１５［配列番号９］）の３つは、ＳＴＡＴ３細胞内シグナル伝達を開始するＳＴＡＴ３  ＳＨ２ドメインによって認識される主な結合部位として寄与する。出願人らは、ホスホロチオエート化ｓｓＤＮＡ伸長によって改変されたこれら３つのｇｐ１３０−ペプチド（図１３）は、これらが細胞内移行すると（図１４）、ＳＴＡＴ３活性を著しく低減することを開示する（図１５）。
【０２４３】
ヒト肝癌細胞ＨｅｐＧ２は、表示の通り１．０μＭのｇｐ１３０−ペプチドによって、ＩＬ−６刺激前に３０分間処理された。全細胞ライセートは電気泳動的タンパク質分離に供され、ＳＴＡＴ３活性がリン酸化チロシンを検出するウェスタンブロットによって評価された。全ＳＴＡＴ３タンパク質染色がローディング対照として含まれた。全部で３つの改変ｇｐ１３０−ペプチドががん細胞におけるｐＹ−ＳＴＡＴ３レベルに阻害効果を示す（図１６）。
【０２４４】
さらなる実験において、出願人らは、３つの改変ｇｐ１３０ペプチドが、ｇｐ１３０を用いるＩＬ−６サイトカインシグナル伝達に特異的に制限され、ＥＧＦがＥＧＦ受容体（ＥＧＦＲ）への細胞外リガンドとして寄与するＥＧＦシグナル伝達ではないことを示すことができた（図１７）。
【０２４５】
さらに、改変ｇｐ１３０ペプチドによるがん細胞の処理は、表示の通り、ペプチドによるヒト肝癌細胞ＨｅｐＧ２細胞の処理時に、ＲＴ−ＰＣＲによって評価された場合、サバイビン（ＢＩＲＣ５）及びＢｃｌＸＬ（ＢＣＬ２Ｌ１）などのがん細胞サバイバル遺伝子の発現を著しく低減する（図１８）。
【０２４６】
［実施例１０］  アセチル−ＳＴＡＴ３ペプチド細胞透過、ＳＴＡＴ３及びエキスポーチン７タンパク質との特異的相互作用並びにＳＴＡＴ３活性化の下方制御を可能にする、ホスホロチオエート化ＤＮＡオリゴヌクレオチド（ＰＳ）のコンジュゲート
ホスホロチオエート化ＤＮＡオリゴヌクレオチド−改変ＳＴＡＴ３ペプチドは、フローサイトメトリーによって評価されたように、ヒトグリオーマ細胞系Ｕ２５１及びヒト結腸がん細胞系ＨＣＴ１１６に効率的に透過する（図２０Ａ）。出願人らは、共焦点顕微鏡によって、ＰＳ−アセチル−ＳＴＡＴ３ペプチドの細胞透過及びＵ２５１細胞におけるＳＴＡＴ３タンパク質とのその局在を開示する（図２０Ｂ）（スケールバー：５０μｍ）。
【０２４７】
ＰＳアセチル−ＳＴＡＴ３ペプチドは、プレートがアセチル化−ＳＴＡＴ３タンパク質（アミノ酸１２７〜７２２を含有する）によってコートされ、ｎ＝３であるＥＬＩＳＡによって評価されたように、アセチル化ＳＴＡＴ３タンパク質及びエキスポーチン７に特異的に結合する（図２０Ｃ及び図２０Ｄ）。出願人らは、Ｕ２５１細胞において示された、ＦＩＴＣ−標識ＰＳ−アセチル−ＳＴＡＴ３ペプチドの免疫沈降後、ウェスタンブロッティングによるアセチル−ＳＴＡＴ３ペプチドとＳＴＡＴ３／エキスポーチン７との間の特異的相互作用を開示する（図２０Ｅ及び図２０Ｆ）。
【０２４８】
出願人らは、免疫沈降／ウェスタンブロッティングによりＨＣＴ１１６腫瘍において示された、ＳＴＡＴ３リン酸化の下方制御も開示する（図２０Ｇ）。ＰＳ−アセチル−ＳＴＡＴ３ペプチド処理は、ＨＣＴ１１６結腸直腸がん細胞のアポトーシスを誘導する（図２０Ｈ）。ホスホロチオエートＤＮＡオリゴヌクレオチドをアセチル−ＳＴＡＴ３ペプチドにコンジュゲートすることは、処理の２４時間後に回収されたＣ５７ＢＬ／６マウスの血清においてＦＩＴＣ標識ペプチドを検出するウェスタンブロッティングによって示したように、この生体内安定性を増加する。（図２０Ｉ）。
【０２４９】
［実施例１１］  ＨＣＴ１１６異種移植片腫瘍の増殖を抑制するＰＳ−アセチル−ＳＴＡＴ３ペプチドによる処理
１日置きに（ｎ＝５）、ＰＳオリゴヌクレオチドコンジュゲートあり又はなしで、アセチル−ＳＴＡＴ３ペプチド（１８．９４０μＭ）によって全身処理されたＮＳＧマウスにおけるＨＣＴ１１６腫瘍の増殖キネティクス（図２１Ａ）。ＳＤはアスタリスクによって示される。Ｔ検定；＊＊＊；Ｐ＜０．００１、＊＊，Ｐ＜０．０１；＊，Ｐ＜０．０５。出願人らは、免疫沈降後のウェスタンブロッティングによって示されたように、ＰＳ−アセチル−ＳＴＡＴ３ペプチドによる処理時のＳＴＡＴ３活性の下方制御を開示する（図２１Ｂ）。Ａに示される腫瘍からの腫瘍ホモジネートにおけるｑＲＴ−ＰＣＲによって評価されたように、増殖及びアポトーシス関連遺伝子の発現へのＳＴＡＴ３活性の下方制御の効果（図２１Ｃ）。対照マウスからの腫瘍組織におけるｍＲＮＡ発現レベルは１と設定される。Ｔ検定；＊＊＊；Ｐ＜０．００１；＊＊，Ｐ＜０．０１；＊，Ｐ＜０．０５。
【０２５０】
Ｈ＆Ｅ染色後の共焦点画像解析（上のパネル）、及び腫瘍切片におけるＫｉ−６７及びＣＤ−３１タンパク質の免疫染色（下のパネル）によって示されるように、ＰＳ−アセチル−ＳＴＡＴ３ペプチドによる処理は、アポトーシスを誘導し、増殖及び腫瘍における血管新生を阻害する（図２１Ｄ）。画像はＡの実験群当たり３つの腫瘍の代表である。スケールバー：５０μｍ。グラフは、Ｋｉ−６７発現レベル及び平均血管直径の定量を示す（データは群当たり６視野を含む。）。ＳＤが示される。＊＊Ｐ＜０．０１。
【０２５１】
［実施例１２］  その抗腫瘍効果を増加するＰＳ−アセチル−ＳＴＡＴ３ペプチドの二量体化
出願人らは、非ホスホロチオエート化（ＰＯ）及びホスホロチオエート化ＤＮＡオリゴヌクレオチド−改変アセチル−Ｓｔａｔ３ペプチドの構造を開示する（図２２Ａ）。ペプチドの二量体化は、アンチセンス及びセンスＤＮＡオリゴをアニーリングすることによって達成される。出願人らは、ＳＤＳ−ＰＡＧＥにより、非ホスホロチオエート化及びホスホロチオエート化ＤＮＡオリゴヌクレオチド−改変ペプチドの二量体化を開示する（図２２Ｂ）。二量体化はペプチドの細胞増加を増強し、フローサイトメトリーによって評価される（図２２Ｃ）。二量体化ＰＳ−アセチル−ＳＴＡＴ３ペプチドの増強した抗腫瘍効果は、ＮＳＧマウス（ｎ＝５）でのＨＣＴ１１６腫瘍増殖において示される（図２２Ｄ）。Ｔ検定；＊＊，Ｐ＜０．０１；＊，Ｐ＜０．０５。
【０２５２】
Ｅの腫瘍からの腫瘍ホモジネートによる免疫沈降及びウェスタンブロッティングによって分析されたように、二量体化ＰＳ−アセチル−ＳＴＡＴ３ペプチドは、この単量体対応物よりもｐＹ７０５−ＳＴＡＴ３をより効果的に下方制御し（上のパネル）、ｐ５３発現を誘導する（下のパネル）（図２２Ｅ）。出願人らは、示したＳＴＡＴ３ペプチドによって処理されたＨＣＴ１１６腫瘍組織における、ＳＴＡＴ３制御されたアポトーシス促進及び生存促進性の遺伝子のｍＲＮＡレベルを示すｑＲＴ−ＰＣＲを開示する（図２２Ｆ）。対照ビヒクルによって処理された腫瘍組織におけるｍＲＮＡ発現レベルは１と設定される。Ｔ検定；＊＊＊；Ｐ＜０．００１；＊＊，Ｐ＜０．０１；＊，Ｐ＜０．０５。
【０２５３】
出願人らは、ｑＲＴ−ＰＣＲによって評価された、二量体化ＰＳ−アセチル−ＳＴＡＴ３ペプチドの標的効果を開示する（図２２Ｇ）。グラフは、ビヒクルと比較して、二量体化ＰＳ−アセチル−ＳＴＡＴ３ペプチドによって処理されたＨＣＴ１１６腫瘍組織におけるＪＡＫ／ＳＴＡＴ３シグナル伝達経路の下流遺伝子の差次的発現を示す。出願人らは、Ｅに示した腫瘍からの腫瘍切片の免疫組織化学分析後の共焦点顕微鏡画像を開示する（図２２Ｈ）。二量体化ＰＳ−アセチル−ＳＴＡＴ３ペプチドの抗腫瘍効果は、この単量体対応物と比較される。画像は、実験群当たり３つの腫瘍の代表である。スケールバー：５０μＭ（上のパネル）。下のパネルは、定量化したＫｉ−６７タンパク質レベル並びに血管直径の平均を示す（データは群当たり５視野を含む。）。
【０２５４】
［実施例１３］  マウスメラノーマ肺転移を低減し、ＣＤ８＋Ｔ細胞活性を促進するＰＳ−アセチル−ＳＴＡＴ３ペプチドによる全身処理
出願人らは、フローサイトメトリーによって評価されたように、インビトロでのＰＳ−アセチル−ＳＴＡＴ３ペプチドのＣＤ８＋Ｔ細胞への透過を開示する（図２３Ａ）。ＣＤ８＋Ｔ細胞は、Ｃ５７ＢＬ／６マウス脾臓から単離された。ＳＴＡＴ３阻害から予測されたように、ＥＬＩＳＡはＰＳ−アセチル−ＳＴＡＴ３ペプチドによる脾臓のＣＤ８＋Ｔ細胞の処理がＩＦＮγ及びＩＬ−２発現を上方制御することを示す（図２３Ｂ）。Ｔ検定；＊＊＊；Ｐ＜０．００１。アッセイは３回行われた。
【０２５５】
出願人らは、ウェスタンブロッティングによって分析されたように、対照と比較して、ＰＳ−アセチル−ＳＴＡＴ３ペプチドによって処理された脾臓のＣＤ８＋Ｔ細胞におけるＩＬ−６誘導性ｐＹ７０５−ＳＴＡＴ３の下方制御を開示する（図２３Ｃ）。ＰＳ−アセチル−ＳＴＡＴ３ペプチドは、対照処理と比較して、同系マウスモデルにおけるＢ１６肺小結節を低減する（図２３Ｄ、左のパネル）。右のパネルは、示したＳＴＡＴ３ペプチド及びビヒクルによって処理されたマウスにおける肺小結節の数を示す（ｎ＝５）。Ｔ検定；＊＊，Ｐ＜０．０１；＊，Ｐ＜０．０５。ｎ．ｓ：有意ではない。
【０２５６】
出願人らは、ビヒクル、ＰＯ−及びＰＳ−アセチル−ＳＴＡＴ３ペプチドによる処理時に、Ｂ１６肺小結節（Ｄと同じ）においてＣＤ８＋Ｔ細胞及びＣＤ４＋ＦｏｘＰ３＋Ｔ細胞集団に浸潤するＣＤ６９＋腫瘍を検出する、免疫化学染色、続いて共焦点顕微鏡を開示する（図２３Ｅ及び図２３Ｆ）。画像は実験群当たり３つの肺の代表である。グラフは、ＣＤ８、ＣＤ６９及びＦｏｘＰ３＋発現レベルの定量を示す（データは群当たり６視野を含む。）。ＳＤが示される。＊＊＊；Ｐ＜０．００１；＊，Ｐ＜０．０５。
【０２５７】
［実施例１４］  ＰＳ−アセチル−ＳＴＡＴ３ペプチド透過及び生体内機能性
出願人らは、改変ＳＴＡＴ３ペプチドの構造を開示する（図２４Ａ）。免疫蛍光法によって示されたように、ＰＳ−ＳＴＡＴ３ペプチドはＨＣＴ１１６がん細胞に透過する（図２４Ｂ）。スケールバー：２０μｍ。ウェスタンブロッティングによって評価されたように、ＰＳ−アセチル−ＳＴＡＴ３ペプチドによる処理はＨＣＴ１１６結腸がん細胞におけるｐ５３過剰発現を誘導する（図２４Ｃ）。
【０２５８】
［実施例１５］  ＨＣＴ１１６結腸腫瘍の増殖を抑制するＰＳ−アセチル−ＳＴＡＴ３ペプチド処理
出願人らは、マウスが５×１０６個のＨＣＴ１１６細胞により負荷された７日後に開始する、１８．９４０μＭ  ＰＳ−ＳＴＡＴ３−ＷＴ、ＰＳ−ＳＴＡＴ３−Ｋ６８５Ｒ又はＰＳ−ＳＴＡＴ３−ａｃｅｔ．−Ｋ６８５ペプチドによるＮＳＧマウスの皮下（ｓ．ｃ．）ＨＣＴ１１６腫瘍の腫瘍周辺処理を開示する、ｎ＝４。処理は毎日行われた。ＳＤが示される。＊＊＊；Ｐ＜０．００１；＊＊，Ｐ＜０．０１；＊，Ｐ＜０．０５。ウェスタンブロッティングは、示したアセチル−ＳＴＡＴ３ペプチドによる処理時のＳＴＡＴ３活性レベルを示す（図２５Ｂ）。Ａに示した腫瘍から調製された腫瘍ホモジネートを使用するｑＲＴ−ＰＣＲによって評価された、ＳＴＡＴ３下流の増殖及びアポトーシス関連遺伝子のｍＲＮＡレベル（図２５Ｃ）。対照ビヒクルによって処理された腫瘍におけるｍＲＮＡ発現レベルは１と設定される。Ｔ検定；＊＊＊；Ｐ＜０．００１；＊＊，Ｐ＜０．０１；＊，Ｐ＜０．０５。
【０２５９】
出願人らは、ウェスタンブロッティングによって評価される、Ａに示した腫瘍からのＨＣＴ１１６腫瘍ホモジネートにおけるアポトーシス促進タンパク質、ｐ５３及びｃｌ．カスパーゼ３の上方制御を開示する（図２５Ｄ）。ＰＳ−アセチル−ＳＴＡＴ３ペプチドはＡに示されるＨＣＴ１１６腫瘍に透過し、免疫組織化学染色後に共焦点顕微鏡によって可視化されたように腫瘍Ｋｉ−６７及びＣＤ３１タンパク質を下方制御する（図２５Ｅ）。スケールバー：１００μｍ。処理した腫瘍におけるＫｉ−６７及びＣＤ３１タンパク質の定量は右のパネルに示される。グラフはＫｉ６７及びＣＤ３１の定量を示す（データは群当たり６視野を含む。）。ＳＤが示される。＊＊Ｐ＜０．０１；＊＊＊Ｐ＜０．００１。
【０２６０】
［実施例１６］  腫瘍増殖に阻害効果を示さない非ホスホロチオエート化（ＰＯ）アセチル−ＳＴＡＴ３ペプチド
増殖キネティクスは、１８．９４０μＭ  ＰＯ−又はＰＳ−アセチル−ＳＴＡＴ３ペプチドによって局所的に毎日処理されたＮＳＧマウスにおけるＨＣＴ１１６腫瘍を示す（ｎ＝４）（図２６Ａ）。ＳＤはアスタリスクによって示される。Ｔ検定；＊Ｐ＜０．０５。Ａに示した腫瘍から調製された腫瘍ホモジネートを使用する免疫沈降及びウェスタンブロッティングによって示されるように、ＰＳ−アセチル−ＳＴＡＴ３ペプチドはエキスポーチン７に結合する（図２６Ｂ）。Ｈ＆Ｅ染色（図２６Ｃ、上のパネル）並びにチトクロムＣ及びラミンＢ１タンパク質発現レベル（図２６Ｃ、中央及び下のパネル）によって示されるように、ＰＳ−アセチル−ＳＴＡＴ３ペプチドによる処理は腫瘍アポトーシスを誘導する。パネルは、各実験群からの３つの腫瘍の代表的な画像を示す。スケールバー：２０μｍ。チトクロムＣ及びラミンＢ１の定量は、右のパネルに示される（データは群当たり５視野を含む。）。ＳＤが示される。＊＊Ｐ＜０．０１。
【０２６１】
出願人らは、共焦点顕微鏡によって分析されたように、ビヒクル、ＰＯ−又はＰＳ−アセチル−ＳＴＡＴ３ペプチドによって処理された腫瘍におけるＫｉ−６７及びＣＤ３１タンパク質発現レベルを開示する（図２６Ｄ）。スケールバー：１００μｍ。右のパネルは、Ｋｉ−６７タンパク質レベルの定量及び血管直径の平均（データは群当たり５視野を含む。）を示す。ＳＤが示される。＊＊＊；Ｐ＜０．００１；＊＊，Ｐ＜０．０１；＊，Ｐ＜０．０５。
【０２６２】
出願人らは、Ａに示される腫瘍におけるｐ５３及びｃｌ．カスパーゼ３の過剰発現を示すウェスタンブロッティングを開示する（図２６Ｅ、左のパネル）。ＰＳ−アセチル−ＳＴＡＴ３ペプチドによって処理されたＨＣＴ１１６腫瘍におけるｐ５３タンパク質の発現の増加は、免疫組織化学染色に続く共焦点顕微鏡画像解析によって示される。画像は、実験群当たり３つの腫瘍からの腫瘍切片を表す（ｎ＝３）。スケール；２０μｍ。上記の同じ腫瘍組織におけるＣＡＳＰ９、ＢＩＲＣ５及びＢｃｌ２Ｌ１のｍＲＮＡレベルはｑＲＴ−ＰＣＲによって評価される（図２６Ｆ）。ペプチド処理なしでの腫瘍からの同じ遺伝子のｍＲＮＡレベルは１と設定される。ＳＤが示される。＊＊＊Ｐ＜０．００１。
【０２６３】
［実施例１７］  ＪＡＫ−ＳＴＡＴ３シグナル伝達アレイ
出願人らは、「ＪＡＫ−ＳＴＡＴ３経路」遺伝子セットにおける遺伝子のヒートマップを開示する（図２７）。上から下までの色スペクトルは、ビヒクルと比較して、二量体化ＰＳ−アセチル−ＳＴＡＴ３ペプチドによる処理時にＪＡＫ−ＳＴＡＴ３下流遺伝子の低い発現から高い発現を示す。
【０２６４】
［実施例１８］  パクリタキセル耐性ＴＮＢＣ異種移植片腫瘍増殖を抑制するＰＳ  アセチル−ＳＴＡＴ３ペプチドによる全身処理
出願人らは、ＮＳＧマウスにおけるパクリタキセル耐性ＭＤＡ−ＭＢ−２３１  ＴＮＢＣ腫瘍の増殖キネティクスを開示する（図２８Ａ）。腫瘍は、ビヒクル（ＨＢＳＳ−／−）及びＰＳ−アセチル−ＳＴＡＴ３ペプチドによって１日置きに全身的に処理された。出願人らは、Ａに示されるＴＮＢＣ腫瘍において、ＰＳ−アセチル−ＳＴＡＴ３ペプチドによるＳＴＡＴ３リン酸化の下方制御も開示する（図２８Ｂ）。
【０２６５】
示した免疫化学染色の共焦点画像が、Ａに示される腫瘍組織におけるアポトーシス及び増殖程度を示す（図２８Ｃ、左のパネル）。画像は、実験群当たり３つの腫瘍からの組織切片を代表的に示す。スケール：５０及び１００μｍ。右のパネルは、Ｋｉ６７発現レベルの定量である（データは、群当たり６視野を含む。）。ＳＤが示される。＊＊＊；Ｐ＜０．００１。ｑＲＴ−ＰＣＲは、ＴＮＢＣ腫瘍組織において、示した増殖及びアポトーシス遺伝子のｍＲＮＡレベルを示す（図２８Ｄ）。ペプチド処理なしでのマウスからの腫瘍組織におけるｍＲＮＡ発現レベルは１と設定される。ＳＤが示される。＊＊＊，Ｐ＜０．００１；＊＊，Ｐ＜０．０１；＊，Ｐ＜０．０５。
【０２６６】
［実施例１９］  膵臓がんの同系マウスモデルにおいて腫瘍増殖を抑制する、細胞透過性ＧＰ１３０阻害ペプチド及びｃ−ＭＹＣ−阻害ペプチドの組合せ処理
出願人らは、Ｗ７６９６４（マウス膵臓がん細胞系）細胞におけるＦＩＴＣ−ＰＳ−ＧＰ１３０−阻害ペプチド及びＰＳ−ｃＭＹＣ−阻害ペプチド（配列番号１０）の細胞透過を開示する（図２９Ａ）。ｃ−Ｍｙｃ阻害ペプチドはｃ−ＭＹＣタンパク質に直接結合し、全長ｃ−ＭＹＣのＭａｘとの相互作用を防ぎ、したがってＭＹＣ−ＭＡＸ二量体化をブロックする。１×１０６個の細胞は１０μｇのＰＳ−ＧＰ１３０−又はＰＳ−ｃ−ＭＹＣ−ペプチドと３７℃で２時間インキュベートされた。細胞透過の効率はフローサイトメトリーによって決定された。Ｗ７６９６４細胞がＣ５７ＢＬ／６マウスに移植され、腫瘍が生成された（図２９Ｂ）。腫瘍サイズがおよそ８０ｍｍ３に達した後、ＰＯ−Ｇｐ１３０又はＰＳ−ＧＰ１３０はＰＳ−ｃ−ＭＹＣ阻害ペプチドと混合され（１：１比）、２０μｇで１日置きに全身的に（ｉ．ｖ．）マウスを処理した。腫瘍サイズは、内径によって測定された。腫瘍容積が算出され（Ｖ＝（Ｌ×Ｗ×Ｗ））、ここでＶは腫瘍容積であり、Ｗは腫瘍幅であり、Ｌは腫瘍の長さである。いくつかの腫瘍が６００ｍｍ３に達し始めると、全ての群のマウスは、Ｃｉｔｙ  ｏｆ  ＨｏｐｅのＩＡＣＵＣによって認可されたプロトコールを使用して同時に安楽死させた。表示の通りＮ＝６。
【０２６７】
［実施例２０］  膵臓がんの同系マウスモデルにおけるＰＤ−Ｌ１発現を減少させる細胞透過性ＧＰ１３０及びｃ−ＭＹＣ合成ペプチドの組合せ処理
ＰＤ−Ｌ１は赤い蛍光として表され、核はＤＡＰＩ染色によって可視化された（図３０）。白い横棒は２０μｍを表す。
【０２６８】
［実施例２１］  膵臓がんの同系マウスモデルにおける腫瘍浸潤ＣＤ８＋Ｔ細胞及びＩＦＮ−γを増加する細胞透過性ＧＰ１３０及びｃ−ＭＹＣ合成ペプチドの組合せ処理
腫瘍浸潤ＣＤ８＋Ｔ細胞（図３１Ａ）、ＩＦＮ−γ及びＦＩＴＣ−コンジュゲートペプチド（図３１Ｂ）は、示したペプチドによって処理されたマウスから調製された腫瘍組織切片を使用する免疫組織化学によって検出された。（図３１Ａ）の白い横棒は５０μｍを表し、（図３１Ｂ）では２０μｍを表す。
【０２６９】
参考文献
【０２７０】
【表１】
2020527555.tif 000006
【０２７１】
非公式の配列表
ＳＴＡＴ３ポリペプチド（配列番号１）：
【０２７２】
【化４】
2020527555.tif 000007
【０２７３】
ｇｐ１３０ポリペプチド（配列番号２）：
【０２７４】
【化５】
2020527555.tif 000008
【０２７５】
リジン６８５においてアセチル化されたＳＴＡＴ３ポリペプチド（配列番号３）：
ＰＤＩＰＫＥＥＡＦＧ（ａｃｅｔ）Ｋ６８５ＹＣＲＰＥＳＱＥＨＰＣ
【０２７６】
チロシン７６７においてリン酸化されたｇｐ１３０ポリペプチド（配列番号４）：
ＶＨＳＧｐＹＲＨＱＶＰＳ（小文字のｐは、隣のチロシンのリン酸化を示す。）
【０２７７】
エキスポーチン７ポリペプチド（配列番号５）：
【０２７８】
【化６】
2020527555.tif 000009
【０２７９】
野生型ＳＴＡＴ３ポリペプチド（配列番号６）：ＰＤＩＰＫＥＥＡＦＧＫ６８５ＹＣＲＰＥＳＱＥＨＰＣ
【０２８０】
６８５位にアルギニン変異を有するＳＴＡＴ３ポリペプチド（配列番号７）：ＰＤＩＰＫＥＥＡＦＧＲ６８５ＹＣＲＰＥＳＱＥＨＰＣ
【０２８１】
チロシン９０５にリン酸化されたｇｐ１３０ポリペプチド（配列番号８）：ＭＰＫＳｐＹＬＰＱＴＶ（小文字のｐは、隣のチロシンのリン酸化を示す。）
【０２８２】
チロシン９１５にリン酸化されたｇｐ１３０ポリペプチド（配列番号９）：ＲＱＧＧｐＹＭＰＱ（小文字のｐは、隣のチロシンのリン酸化を示す。）
【０２８３】
ｃ−ＭＹＣ結合ポリペプチド（配列番号１０）：ＫＮＤＴＨＱＱＤＩＤＤＬＫ
【０２８４】
ｃ−ＭＹＣポリペプチド（配列番号１１）：
【０２８５】
【化７】
2020527555.tif 000010
【０２８６】
ＭＡＸポリペプチド（配列番号１２）：
【０２８７】
【化８】
2020527555.tif 000011
【０２８８】
ｓｓＤＮＡ  ２０ｍｅｒ  １（配列番号１３）：
ＴＣＣＡＴＧＡＧＣＴＴＣＣＴＧＡＴＧＣＴ
【０２８９】
ｓｓＤＮＡ  ２０ｍｅｒ  ２（配列番号１４）：
ＡＧＣＡＴＣＡＧＧＡＡＧＣＴＣＡＴＧＧＡ
【０２９０】
Ｐ実施形態
Ｐ実施形態１。（ｉ）非細胞透過性ペプチド；
（ｉｉ）ホスホロチオエート核酸；及び
（ｉｉｉ）前記ホスホロチオエート核酸を前記非細胞透過性ペプチドのＣ末端に結合している化学リンカー
を含む核酸−ペプチドコンジュゲートであって、前記ホスホロチオエート核酸が前記非細胞透過性ペプチドの細胞内送達を増強する、核酸−ペプチドコンジュゲート。
【０２９１】
Ｐ実施形態２。前記非細胞透過性ペプチドが、約５、１０、１５、２０又は２５アミノ酸長である、Ｐ実施形態１に記載のコンジュゲート。
【０２９２】
Ｐ実施形態３。前記非細胞透過性ペプチドが、少なくとも５アミノ酸長である、Ｐ実施形態１〜２の一つに記載のコンジュゲート。
【０２９３】
Ｐ実施形態４。前記非細胞透過性ペプチドが、約８アミノ酸長である、Ｐ実施形態１〜３の一つに記載のコンジュゲート。
【０２９４】
Ｐ実施形態５。前記非細胞透過性ペプチドが、約１０アミノ酸長である、Ｐ実施形態１〜３の一つに記載のコンジュゲート。
【０２９５】
Ｐ実施形態６。前記非細胞透過性ペプチドが、約１１アミノ酸長である、Ｐ実施形態１〜３の一つに記載のコンジュゲート。
【０２９６】
Ｐ実施形態７。前記非細胞透過性ペプチドが、約２２アミノ酸長である、Ｐ実施形態１〜６の一つに記載のコンジュゲート。
【０２９７】
Ｐ実施形態８。前記非細胞透過性ペプチドが、約２５ｋＤより小さい分子量を有する、Ｐ実施形態１〜８の一つに記載のコンジュゲート。
【０２９８】
Ｐ実施形態９。前記非細胞透過性ペプチドが、改変アミノ酸を含む、Ｐ実施形態１〜９の一つに記載のコンジュゲート。
【０２９９】
Ｐ実施形態１０。前記改変アミノ酸が、アセチル化アミノ酸である、Ｐ実施形態９に記載のコンジュゲート。
【０３００】
Ｐ実施形態１１。前記非細胞透過性ペプチドが、配列番号１のアミノ酸６８５位に相当する位置にアセチル化アミノ酸を含むＳＴＡＴ３ペプチドである、Ｐ実施形態１〜１０の一つに記載のコンジュゲート。
【０３０１】
Ｐ実施形態１２。前記改変アミノ酸が、リン酸化アミノ酸である、Ｐ実施形態９に記載のコンジュゲート。
【０３０２】
Ｐ実施形態１３。前記非細胞透過性ペプチドが、配列番号２のアミノ酸７６７位に相当する位置にリン酸化アミノ酸を含むｇｐ１３０ペプチドである、Ｐ実施形態１〜９又は１２の一つに記載のコンジュゲート。
【０３０３】
Ｐ実施形態１４。前記非細胞透過性ペプチドが、配列番号２のアミノ酸９０５位に相当する位置にリン酸化アミノ酸を含むｇｐ１３０ペプチドである、Ｐ実施形態１〜９又は１２の一つに記載のコンジュゲート。
【０３０４】
Ｐ実施形態１５。前記非細胞透過性ペプチドが、配列番号２のアミノ酸９１５位に相当する位置にリン酸化アミノ酸を含むｇｐ１３０ペプチドを含む、Ｐ実施形態１〜９又は１２の一つに記載のコンジュゲート。
【０３０５】
Ｐ実施形態１６。前記非細胞透過性ペプチドが、細胞内標的を結合する、Ｐ実施形態１〜１５の一つに記載のコンジュゲート。
【０３０６】
Ｐ実施形態１７。前記細胞内標的が、シグナル伝達分子又は転写因子である、Ｐ実施形態１６に記載のコンジュゲート。
【０３０７】
Ｐ実施形態１８。前記シグナル伝達分子が、ホスファターゼ又はキナーゼである、Ｐ実施形態１７に記載のコンジュゲート。
【０３０８】
Ｐ実施形態１９。前記細胞内標的がカリオフェリンである、Ｐ実施形態１６〜１８の一つに記載のコンジュゲート。
【０３０９】
Ｐ実施形態２０。前記カリオフェリンがエキスポーチンである、Ｐ実施形態１９に記載のコンジュゲート。
【０３１０】
Ｐ実施形態２１。前記細胞内標的がエキスポーチン７である、Ｐ実施形態１９又は２０に記載のコンジュゲート。
【０３１１】
Ｐ実施形態２２。前記細胞内標的が、配列番号５のアミノ酸配列を含むエキスポーチン７タンパク質である、Ｐ実施形態２１に記載のコンジュゲート。
【０３１２】
Ｐ実施形態２３。前記非細胞透過性ペプチドがＳＴＡＴ３ペプチドである、Ｐ実施形態１〜１０又は１５〜２２の一つに記載のコンジュゲート。
【０３１３】
Ｐ実施形態２４。前記非細胞透過性ペプチドがアセチル化ＳＴＡＴ３ペプチドである、Ｐ実施形態１〜１０又は１５〜２３の一つに記載のコンジュゲート。
【０３１４】
Ｐ実施形態２５。前記非細胞透過性ペプチドが、配列番号３の配列を含む、Ｐ実施形態１〜１０又は１５〜２４の一つに記載のコンジュゲート。
【０３１５】
Ｐ実施形態２６。前記細胞内標的が転写因子である、Ｐ実施形態１６に記載のコンジュゲート。
【０３１６】
Ｐ実施形態２７。前記細胞内標的がＳＴＡＴ３である、Ｐ実施形態１６又は２６に記載のコンジュゲート。
【０３１７】
Ｐ実施形態２８。前記細胞内標的が、配列番号１のアミノ酸配列を含むＳＴＡＴ３タンパク質である、Ｐ実施形態２７に記載のコンジュゲート。
【０３１８】
Ｐ実施形態２９。前記非細胞透過性ペプチドがｇｐ１３０ペプチドである、Ｐ実施形態１〜１６又は２６〜２８の一つに記載のコンジュゲート。
【０３１９】
Ｐ実施形態３０。前記非細胞透過性ペプチドがリン酸化ｇｐ１３０ペプチドである、Ｐ実施形態１〜１６又は２６〜２９の一つに記載のコンジュゲート。
【０３２０】
Ｐ実施形態３１。前記非細胞透過性ペプチドが、配列番号４、配列番号８又は配列番号９の配列を含む、Ｐ実施形態１〜１６又は２６〜３０のいずれか一つに記載のコンジュゲート。
【０３２１】
Ｐ実施形態３２。前記非細胞透過性ペプチドが、細胞内標的の結合に関してタンパク質又はペプチドと競合するペプチドである、Ｐ実施形態１〜３１のいずれか一つに記載のコンジュゲート。
【０３２２】
Ｐ実施形態３３。前記タンパク質又はペプチドが、配列番号１、配列番号２、配列番号３、配列番号４、配列番号６、配列番号７、配列番号８又は配列番号９の配列を含む、Ｐ実施形態３２に記載のコンジュゲート。
【０３２３】
Ｐ実施形態３４。前記タンパク質又はペプチドが、ＳＴＡＴ３タンパク質又はこれらの断片である、Ｐ実施形態３２又は３３に記載のコンジュゲート。
【０３２４】
Ｐ実施形態３５。前記タンパク質又はペプチドが、ｇｐ１３０タンパク質又はこれらの断片である、Ｐ実施形態３２又は３３に記載のコンジュゲート。
【０３２５】
Ｐ実施形態３６。前記ホスホロチオエート核酸が、約１０、２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００以上の核酸残基長である、Ｐ実施形態１〜３５の一つに記載のコンジュゲート。
【０３２６】
Ｐ実施形態３７。前記ホスホロチオエート核酸が、約１０〜約３０核酸残基長である、Ｐ実施形態１〜３６の一つに記載のコンジュゲート。
【０３２７】
Ｐ実施形態３８。前記ホスホロチオエート核酸が、約２０核酸残基長である、Ｐ実施形態１〜３７の一つに記載のコンジュゲート。
【０３２８】
Ｐ実施形態３９。前記ホスホロチオエート核酸が一本鎖核酸である、Ｐ実施形態１〜３８の一つに記載のコンジュゲート。
【０３２９】
Ｐ実施形態４０。前記ホスホロチオエート核酸がホスホロチオエートデオキシリボ核酸である、Ｐ実施形態１〜３９の一つに記載のコンジュゲート。
【０３３０】
Ｐ実施形態４１。前記化学リンカーが共有結合リンカーである、Ｐ実施形態１〜４０の一つに記載のコンジュゲート。
【０３３１】
Ｐ実施形態４２。前記リンカーが、式：
【０３３２】
【化９】
2020527555.tif 000012
（式中、Ｒ１が水素、ハロゲン、−ＣＦ３、−ＣＮ、−ＣＣｌ３、−ＣＯＯＨ、−ＣＨ２ＣＯＯＨ、−ＣＯＮＨ２、−ＯＨ、−ＳＨ、−ＮＯ２、−ＮＨ２、−ＮＨＮＨ２、−ＯＮＨ２、−ＮＨＣ＝（Ｏ）ＮＨＮＨ２、置換若しくは非置換アルキル、置換若しくは非置換ヘテロアルキル、置換若しくは非置換シクロアルキル、置換若しくは非置換ヘテロシクロアルキル、置換若しくは非置換アリール、又は置換若しくは非置換ヘテロアリールである。）
の構造を含む、Ｐ実施形態１〜４１の一つに記載のコンジュゲート。
【０３３３】
Ｐ実施形態４３。前記リンカーが非免疫原性リンカーである、Ｐ実施形態１〜４２の一つに記載のコンジュゲート。
【０３３４】
Ｐ実施形態４４。前記コンジュゲートが、検出可能部分を含む、Ｐ実施形態１〜４２の一つに記載のコンジュゲート。
【０３３５】
Ｐ実施形態４５。前記検出可能部分が、前記非細胞透過性ペプチドに結合されている、Ｐ実施形態４４に記載のコンジュゲート。
【０３３６】
Ｐ実施形態４６。前記検出可能部分が、前記ホスホロチオエート核酸に結合されている、Ｐ実施形態４４に記載のコンジュゲート。
【０３３７】
Ｐ実施形態４７。細胞内標的に結合した、Ｐ実施形態１〜４６のいずれか一つに記載のコンジュゲート。
【０３３８】
Ｐ実施形態４８。Ｐ実施形態１〜４６のいずれか一つに記載のペプチドコンジュゲートを含む細胞。
【０３３９】
Ｐ実施形態４９。Ｐ実施形態１〜４６のいずれか一つに記載のペプチドコンジュゲート及び薬学的に許容される担体を含む医薬組成物。
【０３４０】
Ｐ実施形態５０。がんの処置を必要とする対象においてがんを処置する方法であって、Ｐ実施形態１〜４６の一つに記載の細胞透過性ペプチドコンジュゲートの治療有効量を前記対象に投与するステップ、それにより前記対象において前記がんを処置するステップを含む、方法。
【０３４１】
Ｐ実施形態５１。前記がんが乳がん、前立腺がん、卵巣がん、脳がん、膵臓がん、メラノーマ、結腸がん、胃がん、頭頚部がん、肝臓がん、肺がん、子宮頚がん、肉腫、白血病、リンパ腫、多発性骨髄腫である、Ｐ実施形態５０に記載の方法。
【０３４２】
Ｐ実施形態５２。方法が、標準対照と比較して、前記対象においてＢＩＲＣ５又はＢｃｌＸＬの発現レベルを減少させるステップを含む、Ｐ実施形態５０又は５１に記載の方法。
【０３４３】
Ｐ実施形態５３。がん細胞においてｐ５３の発現を増加させる方法であって、がん細胞をＰ実施形態１〜４６の一つに記載の細胞透過性ペプチドコンジュゲートの有効量と接触させるステップ、それにより前記がん細胞においてｐ５３の発現を増加させるステップを含む、方法。
【０３４４】
Ｐ実施形態５４。腫瘍血管新生の阻害を必要とする対象において腫瘍血管新生を阻害する方法であって、Ｐ実施形態１〜４６の一つに記載の細胞透過性ペプチドコンジュゲートの治療有効量を前記対象に投与するステップ、それにより前記対象において腫瘍血管新生を阻害するステップを含む、方法。
【０３４５】
Ｐ実施形態５５。炎症性疾患の処置を必要とする対象において炎症性疾患を処置する方法であって、Ｐ実施形態１〜４６の一つに記載の細胞透過性ペプチドコンジュゲートの治療有効量を前記対象に投与するステップ、それにより前記対象において炎症性疾患を処置するステップを含む、方法。
【０３４６】
Ｐ実施形態５６。方法が、標準対照と比較して、前記対象においてＦＧＡ、ＩＬＩＢ又はＳＥＲＰＩＮＡ３の発現レベルを減少させるステップを含む、Ｐ実施形態５５に記載の方法。
【０３４７】
Ｐ実施形態５７。痛みの処置を必要とする対象において痛みを処置する方法であって、Ｐ実施形態１〜４６の一つに記載の細胞透過性ペプチドコンジュゲートの治療有効量を前記対象に投与するステップ、それにより前記対象において痛みを処置するステップを含む、方法。
【０３４８】
Ｐ実施形態５８。方法が、標準対照と比較して、前記対象においてＰＴＧＳ１、ＰＴＧＳ２、ＣＡＬＣＡ又はＳＳＴの発現レベルを減少させるステップを含む、Ｐ実施形態５７に記載の方法。
【０３４９】
Ｐ実施形態５９。ウイルス感染の処置を必要とする対象においてウイルス感染を処置する方法であって、Ｐ実施形態１〜４６の一つに記載の細胞透過性ペプチドコンジュゲートの治療有効量を前記対象に投与するステップ、それにより前記対象において前記ウイルス感染を処置するステップを含む方法。
【０３５０】
Ｐ実施形態６０。方法が、標準対照と比較して、前記対象においてＣＸＣＲ４、ＣＣＲ５又はＣＤ１５５の発現レベルを減少させるステップを含む、Ｐ実施形態５９に記載の方法。
【０３５１】
Ｐ実施形態６１。前記ウイルス感染が、ＨＩＶ感染又はポリオウイルス感染である、Ｐ実施形態５９又は６０に記載の方法。
【０３５２】
Ｐ実施形態６２。細胞へのウイルスの侵入を阻害する方法であって、細胞をＰ実施形態１〜４６の一つに記載の細胞透過性ペプチドコンジュゲートの有効量と接触させるステップ、それにより前記細胞へのウイルスの侵入を阻害するステップを含む、方法。
【０３５３】
Ｐ実施形態６３。方法が、標準対照と比較して、前記細胞においてＣＸＣＲ４、ＣＣＲ５又はＣＤ１５５の発現レベルを減少させるステップを含む、Ｐ実施形態６２に記載の方法。
【０３５４】
Ｐ実施形態６４。細胞におけるＩＬ６受容体シグナル伝達を阻害する方法であって、細胞をＰ実施形態１〜４６の一つに記載の細胞透過性ペプチドコンジュゲートの有効量と接触させるステップ、それにより前記細胞におけるＩＬ６受容体シグナル伝達を阻害するステップを含む、方法。
【０３５５】
Ｐ実施形態６５。細胞に非細胞透過性ペプチドを送達する方法であって、細胞をＰ実施形態１〜４６のいずれか一つに記載の細胞透過性ペプチドコンジュゲートと接触させるステップ、それにより前記細胞に前記非細胞透過性ペプチドを送達するステップを含む、方法。
【０３５６】
実施形態
実施形態１。（ｉ）非細胞透過性ペプチド；
（ｉｉ）ホスホロチオエート核酸；及び
（ｉｉｉ）前記ホスホロチオエート核酸を前記非細胞透過性ペプチドのＣ末端に結合している化学リンカー
を含む核酸−ペプチドコンジュゲートであって、前記ホスホロチオエート核酸が前記非細胞透過性ペプチドの細胞内送達を増強する、核酸−ペプチドコンジュゲート。
【０３５７】
実施形態２。前記非細胞透過性ペプチドが、約５、１０、１５、２０又は２５アミノ酸長である、実施形態１に記載のコンジュゲート。
【０３５８】
実施形態３。前記非細胞透過性ペプチドが、少なくとも５アミノ酸長である、実施形態１〜２の一つに記載のコンジュゲート。
【０３５９】
実施形態４。前記非細胞透過性ペプチドが、約８アミノ酸長である、実施形態１〜３の一つに記載のコンジュゲート。
【０３６０】
実施形態５。前記非細胞透過性ペプチドが、約１０アミノ酸長である、実施形態１〜３の一つに記載のコンジュゲート。
【０３６１】
実施形態６。前記非細胞透過性ペプチドが、約１１アミノ酸長である、実施形態１〜３の一つに記載のコンジュゲート。
【０３６２】
実施形態７。前記非細胞透過性ペプチドが、約２２アミノ酸長である、実施形態１〜６の一つに記載のコンジュゲート。
【０３６３】
実施形態８。前記非細胞透過性ペプチドが、約１３アミノ酸長である、実施形態１〜６の一つに記載のコンジュゲート。
【０３６４】
実施形態９。前記非細胞透過性ペプチドが、約２５ｋＤより小さい分子量を有する、実施形態１〜８の一つに記載のコンジュゲート。
【０３６５】
実施形態１０。前記非細胞透過性ペプチドが、改変アミノ酸を含む、実施形態１〜９の一つに記載のコンジュゲート。
【０３６６】
実施形態１１。前記改変アミノ酸が、アセチル化アミノ酸である、実施形態１０に記載のコンジュゲート。
【０３６７】
実施形態１２。前記非細胞透過性ペプチドが、配列番号１のアミノ酸６８５位に相当する位置にアセチル化アミノ酸を含むＳＴＡＴ３ペプチドである、実施形態１〜１１の一つに記載のコンジュゲート。
【０３６８】
実施形態１３。前記改変アミノ酸が、リン酸化アミノ酸である、実施形態１０に記載のコンジュゲート。
【０３６９】
実施形態１４。前記非細胞透過性ペプチドが、配列番号２のアミノ酸７６７位に相当する位置にリン酸化アミノ酸を含むｇｐ１３０ペプチドである、実施形態１〜１０又は１３の一つに記載のコンジュゲート。
【０３７０】
実施形態１５。前記非細胞透過性ペプチドが、配列番号２のアミノ酸９０５位に相当する位置にリン酸化アミノ酸を含むｇｐ１３０ペプチドである、実施形態１〜１０又は１３の一つに記載のコンジュゲート。
【０３７１】
実施形態１６。前記非細胞透過性ペプチドが、配列番号２のアミノ酸９１５位に相当する位置にリン酸化アミノ酸を含むｇｐ１３０ペプチドを含む、実施形態１〜１０又は１３の一つに記載のコンジュゲート。
【０３７２】
実施形態１７。前記非細胞透過性ペプチドが、細胞内標的を結合する、実施形態１〜１６の一つに記載のコンジュゲート。
【０３７３】
実施形態１８。前記細胞内標的が、シグナル伝達分子又は転写因子である、実施形態１７に記載のコンジュゲート。
【０３７４】
実施形態１９。前記シグナル伝達分子が、ホスファターゼ又はキナーゼである、実施形態１８に記載のコンジュゲート。
【０３７５】
実施形態２０。前記細胞内標的がｃ−ＭＹＣである、実施形態１７〜１９の一つに記載のコンジュゲート。
【０３７６】
実施形態２１。前記細胞内標的が、配列番号１１のアミノ酸配列を含むｃ−ＭＹＣタンパク質である、実施形態２０に記載のコンジュゲート。
【０３７７】
実施形態２２。前記細胞内標的がカリオフェリンである、実施形態１７〜１９の一つに記載のコンジュゲート。
【０３７８】
実施形態２３。前記カリオフェリンがエキスポーチンである、実施形態２２に記載のコンジュゲート。
【０３７９】
実施形態２４。前記細胞内標的がエキスポーチン７である、実施形態２２又は２３に記載のコンジュゲート。
【０３８０】
実施形態２５。前記細胞内標的が、配列番号５のアミノ酸配列を含むエキスポーチン７タンパク質である、実施形態２４に記載のコンジュゲート。
【０３８１】
実施形態２６。前記非細胞透過性ペプチドがＳＴＡＴ３ペプチドである、実施形態１〜１３又は１７〜２５の一つに記載のコンジュゲート。
【０３８２】
実施形態２７。前記非細胞透過性ペプチドがアセチル化ＳＴＡＴ３ペプチドである、実施形態１〜１３又は１７〜２６の一つに記載のコンジュゲート。
【０３８３】
実施形態２８。前記非細胞透過性ペプチドが、配列番号３の配列を含む、実施形態１〜１３又は１７〜２７の一つに記載のコンジュゲート。
【０３８４】
実施形態２９。前記細胞内標的が転写因子である、実施形態１７に記載のコンジュゲート。
【０３８５】
実施形態３０。前記細胞内標的がＳＴＡＴ３である、実施形態１７又は２９に記載のコンジュゲート。
【０３８６】
実施形態３１。前記細胞内標的が、配列番号１のアミノ酸配列を含むＳＴＡＴ３タンパク質である、実施形態３０に記載のコンジュゲート。
【０３８７】
実施形態３２。前記非細胞透過性ペプチドがｇｐ１３０ペプチドである、実施形態１〜１９又は２９〜３１の一つに記載のコンジュゲート。
【０３８８】
実施形態３３。前記非細胞透過性ペプチドがリン酸化ｇｐ１３０ペプチドである、実施形態１〜１９又は２９〜３２の一つに記載のコンジュゲート。
【０３８９】
実施形態３４。前記非細胞透過性ペプチドがｃ−ＭＹＣ結合ペプチドである、実施形態１〜１１、１３、１７〜２１又は２９の一つに記載のコンジュゲート。
【０３９０】
実施形態３５。前記非細胞透過性ペプチドが、配列番号４、配列番号８、配列番号９又は配列番号１０の配列を含む、実施形態１〜２１又は２９〜３４の一つに記載のコンジュゲート。
【０３９１】
実施形態３６。前記非細胞透過性ペプチドが、細胞内標的の結合に関して細胞タンパク質又は細胞ペプチドと競合する、実施形態１〜３５の一つに記載のコンジュゲート。
【０３９２】
実施形態３７。前記細胞タンパク質又は細胞ペプチドが、配列番号１、配列番号２、配列番号３、配列番号４、配列番号６、配列番号７、配列番号８、配列番号９、配列番号１０又は配列番号１２の配列を含む、実施形態３６に記載のコンジュゲート。
【０３９３】
実施形態３８。前記細胞タンパク質又は細胞ペプチドが、ＳＴＡＴ３タンパク質又はこれらの断片である、実施形態３６又は３７に記載のコンジュゲート。
【０３９４】
実施形態３９。前記細胞タンパク質又は細胞ペプチドが、ｇｐ１３０タンパク質又はこれらの断片である、実施形態３６又は３７に記載のコンジュゲート。
【０３９５】
実施形態４０。前記細胞タンパク質又は細胞ペプチドが、ＭＡＸタンパク質又はこれらの断片である、実施形態３６又は３７に記載のコンジュゲート。
【０３９６】
実施形態４１。前記ホスホロチオエート核酸が、約１０、２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００以上の核酸残基長である、実施形態１〜３９の一つに記載のコンジュゲート。
【０３９７】
実施形態４２。前記ホスホロチオエート核酸が、約１０〜約３０核酸残基長である、実施形態１〜４１の一つに記載のコンジュゲート。
【０３９８】
実施形態４３。前記ホスホロチオエート核酸が、約２０核酸残基長である、実施形態１〜４２の一つに記載のコンジュゲート。
【０３９９】
実施形態４４。前記ホスホロチオエート核酸が一本鎖核酸である、実施形態１〜４３の一つに記載のコンジュゲート。
【０４００】
実施形態４５。前記ホスホロチオエート核酸がホスホロチオエートデオキシリボ核酸である、実施形態１〜４４の一つに記載のコンジュゲート。
【０４０１】
実施形態４６。前記化学リンカーが共有結合リンカーである、実施形態１〜４５の一つに記載のコンジュゲート。
【０４０２】
実施形態４７。前記リンカーが、式：
【０４０３】
【化１０】
2020527555.tif 000013
（式中、Ｒ１が水素、ハロゲン、−ＣＦ３、−ＣＮ、−ＣＣｌ３、−ＣＯＯＨ、−ＣＨ２ＣＯＯＨ、−ＣＯＮＨ２、−ＯＨ、−ＳＨ、−ＮＯ２、−ＮＨ２、−ＮＨＮＨ２、−ＯＮＨ２、−ＮＨＣ＝（Ｏ）ＮＨＮＨ２、置換若しくは非置換アルキル、置換若しくは非置換ヘテロアルキル、置換若しくは非置換シクロアルキル、置換若しくは非置換ヘテロシクロアルキル、置換若しくは非置換アリール、又は置換若しくは非置換ヘテロアリールである。）
の構造を含む、実施形態１〜４６の一つに記載のコンジュゲート。
【０４０４】
実施形態４８。前記リンカーが非免疫原性リンカーである、実施形態１〜４７の一つに記載のコンジュゲート。
【０４０５】
実施形態４９。前記コンジュゲートが、検出可能部分を含む、実施形態１〜４７の一つに記載のコンジュゲート。
【０４０６】
実施形態５０。前記検出可能部分が、前記非細胞透過性ペプチドに結合されている、実施形態４９に記載のコンジュゲート。
【０４０７】
実施形態５１。前記検出可能部分が、前記ホスホロチオエート核酸に結合されている、実施形態４９に記載のコンジュゲート。
【０４０８】
実施形態５２。細胞内標的に結合した、実施形態１〜５１のいずれか一つに記載のコンジュゲート。
【０４０９】
実施形態５３。実施形態１〜５２に記載のいずれか１つ及び非ホスホロチオエート化核酸−ペプチドコンジュゲートを含むホスホロチオエート核酸−ペプチドコンジュゲートを含む核酸−ペプチドコンジュゲート二量体であって、前記非ホスホロチオエート化核酸−ペプチドコンジュゲートが、第２の非細胞透過性ペプチド、非ホスホロチオエート化核酸及び前記非ホスホロチオエート核酸を前記第２の非細胞透過性ペプチドのＣ末端に結合している化学リンカーを含む、核酸−ペプチドコンジュゲート二量体。
【０４１０】
実施形態５４。前記第２の非細胞透過性ペプチドが、ＳＴＡＴ３ペプチド、アセチル化ＳＴＡＴ３ペプチド、ｇｐ１３０ペプチド、リン酸化ｇｐ１３０ペプチド、又はｃ−ＭＹＣ結合ペプチドである、５３に記載のコンジュゲート二量体。
【０４１１】
実施形態５５。前記第２の非細胞浸透性ペプチドが、配列番号３、配列番号４、配列番号６、配列番号７、配列番号８、配列番号９又は配列番号１０の配列を含む、５３又は５４に記載のコンジュゲート二量体。
【０４１２】
実施形態５６。実施形態１〜５５のいずれか一つに記載のペプチドコンジュゲートを含む細胞。
【０４１３】
実施形態５７。実施形態１〜５５のいずれか一つに記載のペプチドコンジュゲート及び薬学的に許容される担体を含む医薬組成物。
【０４１４】
実施形態５８。がんの処置を必要とする対象においてがんを処置する方法であって、実施形態１〜５５の一つに記載の細胞透過性ペプチドコンジュゲートの治療有効量を前記対象に投与するステップ、それにより前記対象において前記がんを処置するステップを含む、方法。
【０４１５】
実施形態５９。前記がんが乳がん、前立腺がん、卵巣がん、脳がん、膵臓がん、メラノーマ、結腸がん、胃がん、頭頚部がん、肝臓がん、肺がん、子宮頚がん、肉腫、白血病、リンパ腫、多発性骨髄腫である、実施形態５８に記載の方法。
【０４１６】
実施形態６０。第２の治療剤の有効量を対象にさらに投与する、実施形態５８又は５９に記載の方法。
【０４１７】
実施形態６１。前記第２の治療剤が、実施形態１〜５５の一つに記載の細胞透過性ペプチドコンジュゲートである、実施形態６０に記載の方法。
【０４１８】
実施形態６２。方法が、標準対照と比較して、前記対象においてＢＩＲＣ５、ＢｃｌＸＬ又はＰＤ−Ｌ１の発現レベルを減少させるステップを含む、実施形態５８又は５９に記載の方法。
【０４１９】
実施形態６３。がん細胞においてｐ５３の発現を増加させる方法であって、がん細胞を実施形態１〜５５の一つに記載の細胞透過性ペプチドコンジュゲートの有効量と接触させるステップ、それにより前記がん細胞においてｐ５３の発現を増加させるステップを含む、方法。
【０４２０】
実施形態６４。腫瘍血管新生の阻害を必要とする対象において腫瘍血管新生を阻害する方法であって、実施形態１〜５５の一つに記載の細胞透過性ペプチドコンジュゲートの治療有効量を前記対象に投与するステップ、それにより前記対象において腫瘍血管新生を阻害するステップを含む、方法。
【０４２１】
実施形態６５。炎症性疾患の処置を必要とする対象において炎症性疾患を処置する方法であって、実施形態１〜５５の一つに記載の細胞透過性ペプチドコンジュゲートの治療有効量を前記対象に投与するステップ、それにより前記対象において炎症性疾患を処置するステップを含む、方法。
【０４２２】
実施形態６６。方法が、標準対照と比較して、前記対象においてＦＧＡ、ＩＬＩＢ又はＳＥＲＰＩＮＡ３の発現レベルを減少させるステップを含む、実施形態６５に記載の方法。
【０４２３】
実施形態６７。痛みの処置を必要とする対象において痛みを処置する方法であって、実施形態１〜５５の一つに記載の細胞透過性ペプチドコンジュゲートの治療有効量を前記対象に投与するステップ、それにより前記対象において痛みを処置するステップを含む、方法。
【０４２４】
実施形態６８。方法が、標準対照と比較して、前記対象においてＰＴＧＳ１、ＰＴＧＳ２、ＣＡＬＣＡ又はＳＳＴの発現レベルを減少させるステップを含む、実施形態６７に記載の方法。
【０４２５】
実施形態６９。ウイルス感染の処置を必要とする対象においてウイルス感染を処置する方法であって、実施形態１〜５５の一つに記載の細胞透過性ペプチドコンジュゲートの治療有効量を前記対象に投与するステップ、それにより前記対象において前記ウイルス感染を処置するステップを含む方法。
【０４２６】
実施形態７０。方法が、標準対照と比較して、前記対象においてＣＸＣＲ４、ＣＣＲ５又はＣＤ１５５の発現レベルを減少させるステップを含む、実施形態６９に記載の方法。
【０４２７】
実施形態７１。前記ウイルス感染が、ＨＩＶ感染又はポリオウイルス感染である、実施形態６９又は７０に記載の方法。
【０４２８】
実施形態７２。細胞へのウイルスの侵入を阻害する方法であって、細胞を実施形態１〜５５の一つに記載の細胞透過性ペプチドコンジュゲートの有効量と接触させるステップ、それにより前記細胞へのウイルスの侵入を阻害するステップを含む、方法。
【０４２９】
実施形態７３。方法が、標準対照と比較して、前記細胞においてＣＸＣＲ４、ＣＣＲ５又はＣＤ１５５の発現レベルを減少させるステップを含む、実施形態７２に記載の方法。
【０４３０】
実施形態７４。細胞におけるＩＬ６受容体シグナル伝達を阻害する方法であって、細胞を実施形態１〜５５の一つに記載の細胞透過性ペプチドコンジュゲートの有効量と接触させるステップ、それにより前記細胞におけるＩＬ６受容体シグナル伝達を阻害するステップを含む、方法。
【０４３１】
実施形態７５。細胞に非細胞透過性ペプチドを送達する方法であって、細胞を実施形態１〜５５のいずれか一つに記載の細胞透過性ペプチドコンジュゲートと接触させるステップ、それにより前記細胞に前記非細胞透過性ペプチドを送達するステップを含む、方法。
【図１】
2020527555.tif 000015
【図２】
2020527555.tif 000016
【図３Ａ】
2020527555.tif 000017
【図３Ｂ】
2020527555.tif 000018
【図４】
2020527555.tif 000019
【図５Ａ】
2020527555.tif 000020
【図５Ｂ】
2020527555.tif 000021
【図６Ａ】
2020527555.tif 000022
【図６Ｂ】
2020527555.tif 000023
【図７Ａ】
2020527555.tif 000024
【図７Ｂ】
2020527555.tif 000025
【図７Ｃ】
2020527555.tif 000026
【図８】
2020527555.tif 000027
【図９】
2020527555.tif 000028
【図１０】
2020527555.tif 000029
【図１１】
2020527555.tif 000030
【図１２Ａ】
2020527555.tif 000031
【図１２Ｂ−１】
2020527555.tif 000032
【図１２Ｂ−２】
2020527555.tif 000033
【図１３Ａ】
2020527555.tif 000034
【図１３Ｂ】
2020527555.tif 000035
【図１４Ａ】
2020527555.tif 000036
【図１４Ｂ】
2020527555.tif 000037
【図１５】
2020527555.tif 000038
【図１６】
2020527555.tif 000039
【図１７】
2020527555.tif 000040
【図１８】
2020527555.tif 000041
【図１９Ａ】
2020527555.tif 000042
【図１９Ｂ】
2020527555.tif 000043
【図１９Ｃ】
2020527555.tif 000044
【図２０Ａ】
2020527555.tif 000045
【図２０Ｂ】
2020527555.tif 000046
【図２０Ｃ】
2020527555.tif 000047
【図２０Ｄ】
2020527555.tif 000048
【図２０Ｅ】
2020527555.tif 000049
【図２０Ｆ】
2020527555.tif 000050
【図２０Ｇ】
2020527555.tif 000051
【図２０Ｈ】
2020527555.tif 000052
【図２０Ｉ】
2020527555.tif 000053
【図２１Ａ】
2020527555.tif 000054
【図２１Ｂ】
2020527555.tif 000055
【図２１Ｃ】
2020527555.tif 000056
【図２１Ｄ】
2020527555.tif 000057
【図２２Ａ】
2020527555.tif 000058
【図２２Ｂ】
2020527555.tif 000059
【図２２Ｃ】
2020527555.tif 000060
【図２２Ｄ】
2020527555.tif 000061
【図２２Ｅ】
2020527555.tif 000062
【図２２Ｆ】
2020527555.tif 000063
【図２２Ｇ】
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【図２２Ｈ】
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【図２３Ａ】
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【図２３Ｂ】
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【図２３Ｃ】
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【図２３Ｄ】
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【図２３Ｅ】
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【図２３Ｆ】
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【図２４Ａ】
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【図２４Ｂ】
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【図２４Ｃ】
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【図２５Ａ】
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【図２５Ｂ】
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【図２５Ｃ】
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【図２５Ｄ】
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【図２５Ｅ】
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【図２６Ａ】
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【図２６Ｂ】
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【図２６Ｃ】
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【図２６Ｄ】
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【図２６Ｅ】
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【図２６Ｆ】
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【図２７】
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【図２８Ａ】
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【図２８Ｂ】
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【図２８Ｃ】
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【図２８Ｄ】
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【図２９Ａ】
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【図２９Ｂ】
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【図３０】
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【図３１Ａ】
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【図３１Ｂ】
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【配列表】
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【国際調査報告】
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