(57)【要約】  本発明は、少なくとも5種のインフルエンザウイルス株に由来するインフルエンザウイルス抗原、及び1種以上の式(I)の化合物[式中、R1が、水素又はC1-6アルキルを示し、R2が、C1-6アルキルを示し、R3が、C1-6アルキルを示す]又はその生理学的に許容される塩若しくはエステルを含む、免疫原性組成物に関する。本発明はまた、この免疫原性組成物を調製する方法、この免疫原性組成物を含む医薬組成物及びワクチン組成物、並びにインフルエンザウイルス感染を予防するための、この免疫原性組成物、医薬組成物、及びワクチン組成物の使用にも関する。【選択図】図１
2020518646.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
少なくとも5種のインフルエンザウイルス株に由来するインフルエンザウイルス抗原及び1種以上の式(I):
【化１】
2020518646.tif 000005
[式中、
R1は、水素又はC1-6アルキルを示し、
R2は、C1-6アルキルを示し、
R3は、C1-6アルキルを示す]の化合物又はその生理学的に許容される塩若しくはエステルを含む、免疫原性組成物。
【請求項２】
20種以下のインフルエンザウイルス株に由来するインフルエンザウイルス抗原を含む、請求項1に記載の免疫原性組成物。
【請求項３】
少なくとも6種のインフルエンザウイルス株に由来するインフルエンザウイルス抗原を含む、請求項1又は2に記載の免疫原性組成物。
【請求項４】
8〜18種のインフルエンザウイルス株に由来するインフルエンザウイルス抗原を含む、請求項1から3のいずれか一項に記載の免疫原性組成物。
【請求項５】
14〜18種のインフルエンザウイルス株に由来するインフルエンザウイルス抗原を含む、請求項1から4のいずれか一項に記載の免疫原性組成物。
【請求項６】
15種のインフルエンザウイルス株に由来するインフルエンザウイルス抗原を含む、請求項1から5のいずれか一項に記載の免疫原性組成物。
【請求項７】
少なくとも2種のインフルエンザウイルス型に由来するインフルエンザウイルス抗原を含む、請求項1から6のいずれか一項に記載の免疫原性組成物。
【請求項８】
A型インフルエンザウイルス株に由来する少なくとも1種のインフルエンザウイルス抗原及びB型インフルエンザウイルス株に由来する少なくとも1種のインフルエンザウイルス抗原を含む、請求項1から7のいずれか一項に記載の免疫原性組成物。
【請求項９】
A型インフルエンザウイルスの少なくとも2種の亜型に由来するインフルエンザウイルス抗原を含む、請求項1から8のいずれか一項に記載の免疫原性組成物。
【請求項１０】
A型インフルエンザウイルス株のH1N1亜型に由来する少なくとも1種のインフルエンザウイルス抗原及びA型インフルエンザウイルス株のH3N2亜型に由来する少なくとも1種のインフルエンザウイルス抗原を含む、請求項1から9のいずれか一項に記載の免疫原性組成物。
【請求項１１】
以下のインフルエンザウイルス株:
- 07/102 A/ソロモン諸島/3/2006(H1N1)(IVR-145)、
- 02/336 A/ニューカレドニア、
- 08/100 A/ブリスベン/59/2007(IVR-148)(H1N1)、
- 08/140 B/フロリダ/4/2006、
- 08/184 B/マレーシア/2506/2004、
- 09/174 A/カリフォルニア/7/09(H1N1)(NYMCX-179A)、
- 09/310 A/ウィスコンシン/15/2009(H3N2)(NYMCX-183)、
- 12/110 B/ウィスコンシン/1/2010(細胞由来)、
- 12/112 A/ビクトリア/210/2009(H3N2)(NYMCX-187)、
- 12/114 A/ビクトリア/361/2011(H3N2)(IVR-165)、
- 13/134 B/マサチューセッツ/02/2012、
- 13/162 A/テキサス/50/2012(H3N2)(NYMCX-223A)、
- 13/234 B/ブリスベン/60/08、
- 14/252 B/プーケット/3073/2013、及び
- 14/254 A/スイス/9715293/2013(NIB88)
のうちの1種以上に由来するインフルエンザウイルス抗原を含む、請求項1から10のいずれか一項に記載の免疫原性組成物。
【請求項１２】
1種又は2種の式(I)の化合物又はその生理学的に許容される塩若しくはエステルを含む、請求項1から11のいずれか一項に記載の免疫原性組成物。
【請求項１３】
ジメチルグリシン又はその薬学的に許容される塩若しくはエステルを含む、請求項1から12のいずれか一項に記載の免疫原性組成物。
【請求項１４】
ジメチルグリシン及びトリメチルグリシン、又はそれらの一方若しくは両方の薬学的に許容される塩若しくはエステルを含む、請求項13に記載の免疫原性組成物。
【請求項１５】
インフルエンザウイルス抗原が、前記化合物又は各化合物をさらに含む水性組成物中に存在する場合、事前に(a)凍結、(b)熱処理、及び/又は(c)凍結乾燥に供されている、請求項1から14のいずれか一項に記載の免疫原性組成物。
【請求項１６】
1種以上の糖をさらに含む、請求項1から15のいずれか一項に記載の免疫原性組成物。
【請求項１７】
マンニトールである1種の糖を含む、請求項1から16のいずれか一項に記載の免疫原性組成物。
【請求項１８】
アジュバントをさらに含む、請求項1から17のいずれか一項に記載の免疫原性組成物。
【請求項１９】
前記アジュバントが、アルミニウム塩アジュバントである、請求項18に記載の免疫原性組成物。
【請求項２０】
請求項1から19のいずれか一項に記載の免疫原性組成物を調製する方法であって、(i)インフルエンザウイルス抗原及び化合物を含む単一の水性組成物を(a)凍結、(b)熱処理、及び/又は(c)凍結乾燥するステップ、又は(ii)それぞれが少なくとも1種のインフルエンザウイルス抗原及び少なくとも1種の化合物を含む2種以上の水性組成物を(a)凍結、(b)熱処理、及び/又は(c)凍結乾燥し、その後、得られた処理された組成物を組み合わせるステップを含む方法。
【請求項２１】
前記水性組成物を熱処理するステップを含む、請求項20に記載の方法。
【請求項２２】
請求項20又は21に記載の方法によって得られる、又は得ることができる、免疫原性組成物。
【請求項２３】
請求項20又は21に記載の方法によって調製される、請求項1から19のいずれか一項に記載の免疫原性組成物。
【請求項２４】
請求項1から19、22、又は23のいずれか一項に記載の免疫原性組成物、及び場合により、薬学的に許容される賦形剤、担体、又は希釈剤を含む、医薬組成物。
【請求項２５】
請求項1から19、22、又は23のいずれか一項に記載の免疫原性組成物、及び場合により、薬学的に許容される賦形剤、担体、又は希釈剤を含む、ワクチン組成物。
【請求項２６】
対象においてインフルエンザウイルスに対する免疫応答を誘導する方法であって、請求項1から19、22、若しくは23のいずれか一項に記載の免疫原性組成物、請求項24に記載の医薬組成物、又は請求項25に記載のワクチン組成物を前記対象に投与するステップを含む方法。
【請求項２７】
対象においてインフルエンザウイルスを予防する方法であって、請求項1から19、22、若しくは23のいずれか一項に記載の免疫原性組成物、請求項24に記載の医薬組成物、又は請求項25に記載のワクチン組成物を前記対象に投与するステップを含む方法。
【請求項２８】
対象におけるインフルエンザウイルスに対する免疫応答の誘導において使用するための、請求項1から19、22、若しくは23のいずれか一項に記載の免疫原性組成物、請求項24に記載の医薬組成物、又は請求項25に記載のワクチン組成物。
【請求項２９】
対象におけるインフルエンザウイルス感染の予防において使用するための、請求項1から19、22、若しくは23のいずれか一項に記載の免疫原性組成物、請求項24に記載の医薬組成物、又は請求項25に記載のワクチン組成物。
【請求項３０】
対象においてインフルエンザウイルスに対する免疫応答を誘導するための医薬の製造における、請求項1から18、22、若しくは23のいずれかに記載の免疫原性組成物、請求項24に記載の医薬組成物、又は請求項25に記載のワクチン組成物の使用。
【請求項３１】
対象においてインフルエンザウイルス感染を予防するための医薬の製造における、請求項1から19、22、若しくは23のいずれか一項に記載の免疫原性組成物、請求項24に記載の医薬組成物、又は請求項25に記載のワクチン組成物の使用。
【請求項３２】
請求項1から18、21、若しくは22のいずれか一項に記載の免疫原性組成物、請求項23に記載の医薬組成物、又は請求項24に記載のワクチン組成物を含む、単位剤形。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、少なくとも5種のインフルエンザウイルス株に由来するインフルエンザウイルス抗原、並びに特定のジアルキルグリシン化合物及びトリアルキルグリシン化合物を含む免疫原性組成物に関する。本発明はまた、この免疫原性組成物を調製する方法、この免疫原性組成物を含む医薬組成物及びワクチン組成物、並びにインフルエンザウイルス感染を予防するための、免疫原性組成物、医薬組成物、及びワクチン組成物の使用にも関する。
【背景技術】
【０００２】
インフルエンザウイルスは、オルソミクソウイルス(Orthomyxoviridae)科のメンバーである。A型、B型、C型、及びD型に命名された4つの型のインフルエンザウイルスが存在する。A型、B型、及びC型は、ヒトに感染する。
【０００３】
インフルエンザの季節性流行は、急速に世界中に広がり、病院その他の医療費及び生産性の損失という意味で、著しい経済的負担を課し得る。世界保健機関は、例年のインフルエンザの流行において、世界中での毎年の重症例が300万〜500万件、死亡例がおよそ25万〜50万件存在すると推定している。
【０００４】
現在の季節性インフルエンザワクチンは、三価又は四価である。ワクチンの費用は、2015年には31億米ドルであり、2025年までには43億ドルとなることが予想されている。毎年、どのインフルエンザ株が優勢に流行するかの予測に基づき、新しい季節性インフルエンザワクチンが開発される。
【０００５】
インフルエンザ・パンデミックは、集団内で高い病原性及び抗原新規性を有する新型のインフルエンザ株が出現した場合に発生する。世界規模のパンデミックでは、たった1年の間に、世界人口の20%〜40%が罹患する可能性がある。例えば、1918年〜1919年のパンデミックでは、世界中で2億人の人々が発症し、死者は3千万人を超えている。それ以降、ワクチン及び抗ウイルス療法の発展により、医療は劇的に改善されたものの、現在パンデミックが発生すれば、世界全体で200万〜700万人の死亡をもたらすと予測されている。
【０００６】
ワクチンが含むことができる抗原の数は、免疫干渉のため限られると考えられていた(J Exp Med. 1969年10月1日、130(4)、821〜832頁)。組成物中により多くの抗原が含まれる場合、それぞれの抗原に対する応答が低下するため、ワクチンに含めることができる抗原の数は限られる。インフルエンザワクチンは、典型的には、三価であり、より最近では四価である。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【０００７】
【非特許文献１】J Exp Med. 1969年10月1日、130(4)、821〜832頁
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００８】
驚くべきことに、本発明者らは、5種以上のインフルエンザウイルス株に由来する抗原を含む多価免疫原性組成物を調製できることを発見した。免疫原性組成物は、ジアルキルグリシン及びトリアルキルグリシン、例えば、ジメチルグリシン(DMG)及び/又はトリメチルグリシン(TMG)の存在下で、インフルエンザウイルス抗原を凍結、凍結乾燥、又は熱処理することによって調製される。
【０００９】
少なくとも5種のインフルエンザウイルス株に由来する抗原を含む免疫原性組成物の開発は、免疫干渉により予想外のことであった。単一のワクチンにより多くのインフルエンザウイルス株を組み込むこれまでの試みは、必要とされる抗原の量が理由で失敗してきた。本発明者らは、驚くべきことに、15種のインフルエンザウイルス株に由来するインフルエンザウイルス抗原を含む免疫原性組成物を、該インフルエンザウイルス抗原をDMG及びTMGの存在下で熱処理することによって開発した。開発された組成物は、驚くべきことに、この組成物中のインフルエンザウイルス抗原が由来するインフルエンザ株すべてに対する防御をもたらすと予想される。
【００１０】
現在のインフルエンザワクチンは、三価又は四価であり、すなわち、3種又は4種のインフルエンザ株に由来する抗原を含有するものに限られる。季節性インフルエンザワクチンは、毎年、そのシーズンにどのインフルエンザ株が優勢に流行するかの予測に基づき設計し直さなければならないが、これは、12年(2003/2004年から2014/2015年の間)のうち6年につき、株の選択がミスマッチである、不正確な科学であることが証明されている。最近の例では、北半球における2014/2015年のH3N2株の選択がA/テキサス/50/2012であったが、A/スイス/9715293/2013が最終的には優勢となり、その結果、ワクチン有効性はわずか3.4%であった(Pebody RGら、(2015) LOW EFFECTIVENESS OF SEASONAL INFLUENZA VACCINE IN PREVENTING LABORATORY-CONFIRMED INFLUENZA IN PRIMARY CARE IN THE UNITED KINGDOM: 2014/15 MID-SEASON RESULTS. Eurosurveillance、第20巻、第5号、http://www.eurosurveillance.org/ViewArticle.aspx?ArticleId=21025)。5種以上のインフルエンザ株に由来する抗原を含むワクチンを提供すれば、対象株を増やし、それにより、株が選択される時点では最も流行してはいないが、優勢となる可能性がある株が含められるというだけでなく、季節性インフルエンザワクチンを設計し直さなければならない頻度も減る可能性がある。さらに、このことは、すべての亜型並びに抗原連続変異による変異型を含め、A型、B型、C型、及びD型のすべての株に対するインフルエンザワクチンをもたらす可能性がある。これにより、季節性インフルエンザワクチンを毎年設計する必要を排除し得る。
【課題を解決するための手段】
【００１１】
したがって、本発明は、少なくとも5種のインフルエンザウイルス株に由来するインフルエンザウイルス抗原、及び1種以上の式(I):
【００１２】
【化１】
2020518646.tif 000003
[式中、
R1は、水素又はC1-6アルキルを示し、
R2は、C1-6アルキルを示し、
R3は、C1-6アルキルを示す]の化合物又はその生理学的に許容される塩若しくはエステルを含む免疫原性組成物を提供する。
【００１３】
本発明はまた、本発明による免疫原性組成物を調製する方法であって、(i)インフルエンザウイルス抗原及び化合物を含む単一の水性組成物を(a)凍結、(b)熱処理、及び/又は(c)凍結乾燥するステップ、又は(ii)それぞれが少なくとも1種のインフルエンザウイルス抗原及び少なくとも1種の化合物を含む2種以上の水性組成物を(a)凍結、(b)熱処理、及び/又は(c)凍結乾燥し、その後得られた処理された組成物を組み合わせるステップを含む方法も提供する。
【００１４】
本発明はまた、本発明の方法によって得られる、又は得ることができる免疫原性組成物も提供する。
【００１５】
本発明はまた、本発明の免疫原性組成物、及び場合により、薬学的に許容される賦形剤、担体、又は希釈剤を含む医薬組成物も提供する。
【００１６】
本発明はまた、本発明の免疫原性組成物、及び場合により、薬学的に許容される賦形剤、担体、又は希釈剤を含むワクチン組成物も提供する。
【００１７】
本発明はまた、対象においてインフルエンザウイルスに対する免疫応答を誘導する方法であって、本発明の免疫原性組成物、本発明の医薬組成物、又は本発明のワクチン組成物を対象に投与するステップを含む方法も提供する。
【００１８】
本発明はまた、対象においてインフルエンザウイルスを予防する方法であって、本発明の免疫原性組成物、本発明の医薬組成物、又は本発明のワクチン組成物を対象に投与するステップを含む方法も提供する。
【００１９】
本発明はまた、対象におけるインフルエンザウイルスに対する免疫応答の誘導において使用するための、本発明の免疫原性組成物、本発明の医薬組成物、又は本発明のワクチン組成物も提供する。
【００２０】
本発明はまた、対象におけるインフルエンザウイルス感染の予防において使用するための、本発明の免疫原性組成物、本発明の医薬組成物、又は本発明のワクチン組成物も提供する。
【００２１】
本発明はまた、対象においてインフルエンザウイルスに対する免疫応答を誘導するための医薬の製造における、本発明の免疫原性組成物、本発明の医薬組成物、又は本発明のワクチン組成物の使用も提供する。
【００２２】
本発明はまた、対象においてインフルエンザウイルス感染を予防するための医薬の製造における、本発明の免疫原性組成物、本発明の医薬組成物、又は本発明のワクチン組成物の使用も提供する。
【００２３】
本発明はまた、本発明の免疫原性組成物、本発明の医薬組成物、又は本発明のワクチン組成物を含む、単位剤形も提供する。
【図面の簡単な説明】
【００２４】
【図１】BALB-cマウスに0日目及び28日目に投与した、15種のインフルエンザ株に由来する抗原を含む多価組成物の赤血球凝集素阻害アッセイ(HAI)の結果を示す図である。-7日目(すなわち、最初の投与の7日前)、並びに11日目、25日目、35日目、及び45日目にマウスから採取した血清においてHAI力価を測定した。11日目、25日目、35日目、及び45日目それぞれから-7日目の測定値を差し引いて、血清中に本質的に存在するバックグラウンドの免疫化前非特異的HAI活性を補正した。それぞれの時点についての棒グラフは、左から右に向かって、凡例の上から下に向かって記載したインフルエンザ株に対応する。
【発明を実施するための形態】
【００２５】
開示される製品及び方法のさまざまな適用例は、当該技術分野における特定のニーズに合わせることができることを理解されたい。また、本明細書において使用する用語は、本発明の特定の実施形態を説明する目的のために過ぎず、限定することを意図するものではないことも理解されたい。別段に明示しない限り、本明細書において使用される技術用語及び科学用語は、本発明が属する技術分野の専門家が一般に理解するものと同じ意味を有する。
【００２６】
さらに、本明細書及び添付の特許請求の範囲において使用する際、単数形(「a」、「an」、及び「the」)は、内容が明確にそうでないことを要求する場合を除き、複数の指示対象を含む。したがって、例えば、「化合物」への言及は、そのような化合物の2種以上の例若しくは変形例を含み、又は「株」への言及は、2種以上のそのような株を含むなどである。
【００２７】
一般に、「含む」という用語は、含むがそれに限定されないことを意味することが意図され、例えば、「インフルエンザ抗原を含む」組成物とは、その組成物がそのインフルエンザ抗原を有するが、追加のインフルエンザ抗原を含んでもよいことを示す。本発明の一部の実施形態では、「〜を含む」という用語は、「〜から本質的になる」という用語に置き換えることができる。
【００２８】
本明細書において引用する上記又は下記のすべての刊行物、特許、及び特許出願は、参照によりそれらの内容全体が本明細書に組み込まれる。
【００２９】
免疫原性組成物、医薬組成物、及びワクチン組成物
本発明の免疫原性組成物は、少なくとも5種のインフルエンザウイルス株に由来するインフルエンザウイルス抗原を含む。本発明の医薬組成物は、本発明の免疫原性組成物を含む。この医薬組成物は、場合により、薬学的に許容される賦形剤、担体、又は希釈剤を含んでもよい。本発明のワクチン組成物は、本発明の免疫原性組成物を含む。このワクチン組成物は、場合により、薬学的に許容される賦形剤、担体、又は希釈剤を含んでもよい。
【００３０】
組成物を「免疫原性」と記載することは、その組成物が免疫応答を誘導することができなければならないことを意味する。例えば、免疫原性組成物、医薬組成物、又はワクチン組成物は、ヒト患者などの患者に投与した場合、免疫応答の発生をもたらし得る組成物である。好ましくは、免疫応答は、インフルエンザウイルスを対象とする。より好ましくは、免疫応答は、組成物中の抗原のうちの1種が由来するインフルエンザウイルス株のうちの少なくとも1種を対象とする。さらに好ましくは、免疫応答は、組成物中のインフルエンザウイルス抗原が由来するインフルエンザウイルス株すべてを対象とする。一実施形態では、免疫原性組成物、医薬組成物、又はワクチン組成物は、有効量のインフルエンザウイルス抗原を含む。インフルエンザウイルス抗原の有効量とは、これを免疫原性組成物の一部として患者に投与した場合に、免疫応答を誘導するのに十分な量である。有効量は、患者の大きさ、その年齢、及びその患者が免疫不全であるかどうかを含め、複数の要因によって異なり得る。防御免疫を誘導するために、複数回(例えば、2回、3回、又はそれ以上)の投与が必要な場合もある。
【００３１】
免疫応答は、T細胞応答であってもよい。免疫応答は、B細胞応答であってもよい。免疫応答は、T細胞応答及びB細胞応答の双方であってもよい。例えば、免疫応答には、分化したBリンパ球によりインフルエンザウイルス抗原に対して特異的な抗体が産生されるB細胞(液性)応答、及び/又はさまざまなタイプのTリンパ球がインフルエンザウイルス抗原に応答するT細胞(細胞性)応答が含まれる。免疫原性組成物、医薬組成物、又はワクチン組成物が対象に投与された場合、対象は、抗体を産生し得る。抗体は、好ましくは、インフルエンザウイルス抗原が由来するインフルエンザウイルス株のうちの1種以上又はすべてに対して特異的である。免疫応答は、対象におけるセロコンバージョンもたらし得る。すなわち、対象において、将来、例えば、投与から2日〜20年、例えば1か月、3か月、若しくは6か月、又は1年、2年、5年、若しくは10年の時点で、インフルエンザウイルス抗原への曝露に応答して抗体を産生するレベルをもたらし得る。当業者は、例えば、対象から血液サンプルを採取し、抗体レベルをテストするなど、当該技術分野で既知の技法を用いて、対象がセロコンバージョンしているかどうかを決定することができる。
【００３２】
組成物が免疫応答を誘導することができるかどうかを決定する方法は、当業者に周知である。例えば、HAIアッセイを使用する(例えば、実施例を参照)。液性免疫及び細胞性免疫を測定する方法には、ELISA、細胞傷害性Tリンパ球(CTL)アッセイ、CTL前駆体頻度アッセイ、T細胞増殖アッセイ、カルボキシフルオレセイン二酢酸サクシニミジルエステルアッセイ、ELISA又はマルチプレックス及びフローサイトメトリーを用いた培養細胞による細胞内又は細胞外のサイトカイン又は抗体産生、多機能T細胞アッセイ、サイトカインリコール及びASC(抗原特異的抗体分泌細胞)双方のエリスポット、MHCクラスI/IIテトラマー結合、HAI、NAI、ウイルス中和、及びDTHが含まれる。
【００３３】
好ましくは、免疫応答は防御的であり、すなわち、免疫原性組成物、医薬組成物、又はワクチン組成物が宿主に投与された場合に、その宿主は、インフルエンザウイルスに対する防御免疫応答を生じる。典型的には、防御免疫応答は、組成物中の抗原のうちの少なくとも1種が由来するインフルエンザウイルス株のうちの少なくとも1種に対するものであり、好ましくは、免疫原性組成物中の抗原が由来するインフルエンザウイルス株すべてに対するものである。免疫原性組成物、医薬組成物、又はワクチン組成物が防御的であるかどうかは、負荷アッセイによって決定することができる。例えば、免疫原性組成物、医薬組成物、又はワクチン組成物をマウスなどの試験動物に投与してもよく、その後そのマウスをインフルエンザウイルス、好ましくは、組成物中の抗原が由来する株のうちの1種に曝露してもよい。マウスがインフルエンザによる感染で少なくとも2日間、少なくとも3日間、少なくとも5日間、少なくとも7日間、少なくとも14日間、又は少なくとも21日間生存すれば、その免疫原性組成物、医薬組成物、又はワクチン組成物は、防御免疫応答を誘導することができるとみなされる。或いは、赤血球凝集素阻害(HAI)アッセイは、組成物が防御免疫応答を誘導することができるかどうかを示すために使用することができる標準的な技法である。このアッセイの例示的プロトコルは、本明細書中の実施例に記載されている。バックグラウンド補正後40以上のHAI力価は、防御免疫応答レベルを示すとみなされる(Skountzou, Ioannaら、「Influenza Virus-Specific Neutralizing IgM Antibodies Persist for a Lifetime」、S. A. Plotkin編、Clinical and Vaccine Immunology、CVI 21.11 (2014)、1481〜1489頁、PMC)。バックグラウンドは、投与前HAI力価を差し引くことによって、例えば、投与7日前に記録されたHAI力価を差し引くことによって、補正することができる。したがって、一部の実施形態では、インフルエンザ抗原の有効量は、インフルエンザウイルス抗原が由来するインフルエンザウイルス株のうちの1種以上に対し、バックグラウンド補正後40以上のHAI力価をもたらす量であってもよい。
【００３４】
本明細書に記載するように、免疫原性組成物は、免疫原性組成物中のインフルエンザウイルス抗原が由来しないインフルエンザウイルス株に対して免疫応答をもたらしてもよい。そのような免疫応答は、好ましくは、インフルエンザウイルス抗原が由来するインフルエンザ株のうちの1種以上、好ましくはすべてに対する免疫応答をもたらすことに加えてもたらされる。この交差反応性は、これが、免疫原性組成物中のインフルエンザウイルス抗原が由来しないインフルエンザ株に対して防御することができることから有益である。その結果、抗原連続変異によって変異したインフルエンザウイルス株に対する防御を得ることができる。免疫原性組成物、医薬組成物、又はワクチン組成物の投与後にもたらされる免疫応答は、組成物中に存在する抗原が由来しない1種以上の株及び/又は1種以上の亜型に対するものであってもよい。一部の実施形態では、インフルエンザウイルス抗原の有効量は、免疫原性組成物中のインフルエンザウイルス抗原が由来しない1種以上のインフルエンザウイルス株に対し、バックグラウンド補正後40以上のHAI力価をもたらす量であってもよい。そのような実施形態では、好ましくは、有効量はまた、免疫原性組成物中のインフルエンザウイルス抗原が由来するインフルエンザウイルス株のうちの1種以上、好ましくはすべてに対し、バックグラウンド補正後40以上のHAI力価をもたらす。免疫原性組成物、医薬組成物、又はワクチン組成物は、本明細書に記載のものなど、任意のインフルエンザウイルス株に対する免疫応答を生じてもよい。インフルエンザウイルス株は、季節株であっても、又はパンデミック株であってもよい。免疫原性組成物、医薬組成物、又はワクチン組成物は、すべての亜型並びに抗原連続変異による変異型を含め、A型、B型、C型、及びD型のすべての株に対する免疫応答をもたらしてもよい。免疫原性組成物、医薬組成物、又はワクチン組成物は、A型インフルエンザのすべての亜型及び/又はB型インフルエンザのすべての亜型に対する免疫応答をもたらしてもよい。免疫原性組成物、医薬組成物、又はワクチン組成物は、A型インフルエンザのすべての株及び/又はB型インフルエンザのすべての株に対する免疫応答をもたらしてもよい。毎年季節性インフルエンザワクチンを設計し直す必要は、排除され得る。
【００３５】
本明細書に記載する免疫応答は、本発明の免疫原性組成物、医薬組成物、又はワクチン組成物が対象に投与された場合に生じてもよい。例えば、本発明の免疫原性組成物、医薬組成物、又はワクチン組成物は、対象に投与された場合、少なくとも5種のインフルエンザウイルス抗原のうちの少なくとも1種に対する免疫応答を誘導してもよい。好ましくは、免疫応答は、5種すべてのインフルエンザウイルス抗原に対するものである。免疫応答は、好ましくは、免疫原性組成物中に存在するすべてのインフルエンザウイルス抗原、例えば15種のインフルエンザウイルス抗原に対するものである。免疫応答は、好ましくは、防御的である。本明細書に記載するように、バックグラウンド補正後40以上のHAI力価は、防御免疫応答レベルを示すとみなされる。したがって、一部の実施形態では、本発明の免疫原性組成物、医薬組成物、又はワクチン組成物は、対象に投与された場合、インフルエンザウイルス抗原が由来するインフルエンザウイルス株のうちの1種以上又はそれぞれに対し、バックグラウンド補正後40以上のHAI力価をもたらしてもよい。一部の実施形態では、本発明の免疫原性組成物、医薬組成物、又はワクチン組成物は、対象に投与した場合、免疫原性組成物中のインフルエンザウイルス抗原が由来しない1種以上のインフルエンザウイルス株に対し、バックグラウンド補正後40以上のHAI力価をもたらしてもよい。
【００３６】
本発明の免疫原性組成物、医薬組成物、又はワクチン組成物は、対象に投与した場合、少なくとも5種のインフルエンザウイルス抗原のうちの少なくとも1種に対するセロコンバージョンを誘導してもよい。好ましくは、セロコンバージョンは、5種すべてのインフルエンザウイルス抗原に対するものである。セロコンバージョンは、好ましくは、免疫原性組成物中に存在するすべてのインフルエンザウイルス抗原、例えば15種のインフルエンザウイルス抗原に対するものである。当業者は、既知の方法によって、ヒトなどの対象がセロコンバージョンされるかどうかを決定することができる。一部の実施形態では、本発明の免疫原性組成物、医薬組成物、又はワクチン組成物は、インフルエンザウイルス抗原が由来するインフルエンザウイルス株のうちの1種以上又はそれぞれに対するセロコンバージョンを誘導することができる。一部の実施形態では、本発明の免疫原性組成物、医薬組成物、又はワクチン組成物は、免疫原性組成物中のインフルエンザウイルス抗原が由来しない1種以上のインフルエンザウイルス株に対するセロコンバージョンを誘導することができる。
【００３７】
一部の実施形態では、本発明の免疫原性組成物は、少なくとも5種の株に由来するインフルエンザ抗原及び1種以上の式(I)の化合物又は生理学的に許容される塩若しくはエステルから本質的になってもよい。一部の実施形態では、本発明の免疫原性組成物は、少なくとも5種の株に由来するインフルエンザ抗原、1種以上の式(I)の化合物又は生理学的に許容される塩若しくはエステル、及びアジュバントから本質的になってもよい。そのような実施形態では、免疫原性組成物は、免疫原性組成物の本質的な特性に実質的に影響を与えない他の成分を含んでもよい。
【００３８】
薬学的に許容される賦形剤、担体、又は希釈剤を決定することは、当該技術分野では標準的である。多数の薬学的に許容される賦形剤、担体、又は希釈剤が、当業者に周知であり、当業者は、これらを本発明における使用に容易に適応させることができる。例えば、適切な薬学的に許容される賦形剤としては、炭水化物、多価アルコール、アミノ酸、水酸化アルミニウム、水酸化マグネシウム、ヒドロキシアパタイト、タルク、酸化チタン、水酸化鉄、ステアリン酸マグネシウム、カルボキシメチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、微結晶セルロース、ゼラチン、植物性ペプトン、キサンタン、アラビアガム、又はシクロデキストリンが挙げられる。医薬組成物又はワクチン組成物は、クリーム、エマルジョン、ゲルリポソーム、ナノ粒子、又は軟膏を含んでもよく、又はこれらであってもよい。場合により、薬学的に許容される賦形剤、担体、又は希釈剤は、動物由来成分を含まない。
【００３９】
凍結、凍結乾燥、又は熱処理後、得られた組成物は、それぞれ解凍、再構成、又は冷却し、その後免疫原性組成物、医薬組成物、又はワクチン組成物として使用してもよい。一実施形態では、本明細書に記載の水性組成物は、薬学的に許容される賦形剤、担体、又は希釈剤を含んでもよい。そのような実施形態では、典型的には、処理は、凍結又は熱処理である。処理が凍結乾燥である場合、得られた組成物は、薬学的に許容される賦形剤、担体、又は希釈剤を用いて再構成してもよい。免疫原性組成物、医薬組成物、又はワクチン組成物は、使用前に、例えば、注射のためのリン酸緩衝食塩水又は水で、必要に応じて希釈してもよい。
【００４０】
インフルエンザウイルス抗原のうちの少なくとも1種は、本発明の調製方法によって、すなわち、本発明のインフルエンザウイルス抗原及び化合物を含む水性組成物の凍結、熱処理、及び/又は凍結乾燥によって処理される。好ましくは、免疫原性組成物、医薬組成物、又はワクチン組成物中のすべてのインフルエンザウイルス抗原は、本発明の調製方法によって処理される。インフルエンザウイルス抗原のうちの1種以上は、1種以上の他のインフルエンザウイルス抗原とは異なる処理を用いて処理されていてもよい。例えば、インフルエンザウイルス抗原のうちの1種以上は、熱処理されていてもよく、1種以上の他のインフルエンザウイルス抗原は、凍結されていてもよい。
【００４１】
本発明の免疫原性組成物、医薬組成物、又はワクチン組成物は、凍結乾燥されていてもよい。そのような凍結乾燥実施形態では、本発明の免疫原性組成物、医薬組成物、又はワクチン組成物は、トレハロース、ラクトース、又はマルトースなどの安定剤を含んでもよい。
【００４２】
免疫原性組成物、医薬組成物、又はワクチン組成物は、アジュバントをさらに含んでもよい。アジュバントは、免疫賦活剤として使用される、すなわち、宿主のインフルエンザウイルスに対する免疫応答を高める化合物である。適切なアジュバントとしては、アルミニウム塩水酸化物を含め、本明細書に記載するものが挙げられる。
【００４３】
一部の実施形態では、本発明の免疫原性組成物、医薬組成物、又はワクチン組成物は、患者に投与され、これが患者における免疫応答を誘導してもよい。免疫応答のタイプは、本明細書に記載のいずれかの免疫応答であってもよい。好ましくは、免疫応答は、組成物中の抗原が由来するインフルエンザウイルス株のうちの少なくとも1種を対象とする。より好ましくは、免疫応答は、組成物中の抗原が由来するすべてのインフルエンザ株を対象とする。好ましくは、免疫応答は、防御的である。組成物が免疫応答を誘導することができるかどうかを決定する方法は、当業者に周知であり、その例は、本明細書に記載されている。
【００４４】
本発明は、対象におけるインフルエンザウイルス感染の予防において使用するための、本発明の免疫原性組成物、医薬組成物、又はワクチン組成物を提供する。本発明はまた、本発明の免疫原性組成物、医薬組成物、又はワクチン組成物を対象に投与するステップを含む、インフルエンザウイルス感染を予防する方法も提供する。インフルエンザウイルス感染を予防する方法は、本発明の免疫原性組成物、医薬組成物、又はワクチン組成物の有効量を対象に投与するステップを含んでもよい。本発明はまた、対象においてインフルエンザウイルス感染を予防するための医薬の製造における、本発明の免疫原性組成物、医薬組成物、又はワクチン組成物の使用も提供する。予防されるインフルエンザウイルス感染は、典型的には、組成物中の抗原のうちの少なくとも1種が由来するインフルエンザウイルス株のうちの少なくとも1種であり、好ましくは、組成物中の抗原が由来するインフルエンザウイルス株すべてである。予防されるインフルエンザウイルス感染は、本明細書に記載のものなど、任意のインフルエンザ株であってよい。インフルエンザウイルス株は、季節株であっても、又はパンデミック株であってもよい。免疫原性組成物、医薬組成物、又はワクチン組成物は、2用量で投与してもよい。そのような実施形態では、有効量は、第2の用量の投与後に、免疫応答を誘導するのに十分な量である。同様に、3用量レジメン、又はさらに多数の用量を使用するレジメンを利用してもよい。
【００４５】
本発明は、インフルエンザウイルス感染に対する対象のワクチン接種に使用するための、免疫原性組成物、医薬組成物、又はワクチン組成物を提供する。本発明はまた、本発明の免疫原性組成物、医薬組成物、又はワクチン組成物を対象に投与するステップを含む、インフルエンザウイルス感染に対するワクチン接種の方法も提供する。ワクチン接種の方法は、本発明の免疫原性組成物、医薬組成物、又はワクチン組成物の有効量を対象に投与するステップを含んでもよい。本発明はまた、対象におけるインフルエンザウイルス感染に対するワクチン接種用の医薬の製造における、本発明の免疫原性組成物、医薬組成物、又はワクチン組成物の使用も提供する。ワクチン接種の対象となるインフルエンザウイルスは、典型的には、組成物中の抗原のうちの少なくとも1種が由来するインフルエンザウイルス株のうちの少なくとも1種であり、好ましくは、組成物中の抗原が由来するインフルエンザウイルス株すべてである。ワクチン接種の対象となるインフルエンザウイルス感染は、本明細書に記載のものなど、任意のインフルエンザ株であってよい。インフルエンザウイルス株は、季節株であっても、又はパンデミック株であってもよい。
【００４６】
当業者は、既知の技法を用いて、対象に投与する医薬組成物又はワクチン組成物の適当な量を容易に決定することができる。
【００４７】
本発明はまた、本発明の免疫原性組成物、医薬組成物、又はワクチン組成物を含む単位剤形も提供する。単位剤形は、免疫原性組成物、医薬組成物、又はワクチン組成物の1用量を形成する、規定量のインフルエンザウイルス抗原及び化合物を含む。当業者は、当該技術分野で既知の技法を用いて、規定量を容易に決定することができる。規定量は、本明細書に記載の有効量など、所望の免疫応答を生じる量である。免疫応答は、本明細書に記載のもののいずれかであってもよい。免疫応答は、好ましくは、防御的である。本明細書に記載のように、1より多い用量が存在してもよい。したがって、投薬レジメンの用量数と同じ数の単位剤形が、好ましくは防御的な、免疫応答をもたらしてもよい。組成物が免疫応答を誘導することができるかどうかを決定する方法は、当業者に周知であり、その例は、本明細書に記載されている。
【００４８】
免疫原性組成物、医薬組成物、又はワクチン組成物は、例えば、注射によって、ヒト又は動物患者に投与することができる。患者は、ワクチン接種を必要としていてもよい。典型的には、患者は、ヒトである。免疫原性組成物、医薬組成物、又はワクチン組成物は、非経口投与、経腸投与、又は局所投与によって投与してもよい。免疫原性組成物、医薬組成物、又はワクチン組成物は、スプレー剤(鼻腔、肺)として、経口/坐薬製剤として、又は経皮的に投与してもよい。免疫原性組成物、医薬組成物、又はワクチン組成物は、皮下投与してもよい。
【００４９】
患者は、「リスク」集団の一部のヒトであってもよい。そのような患者には、子供、高齢患者、及び/又は肺疾患、糖尿病、がん、腎臓障害、若しくは心臓障害を患っている患者が含まれる。この患者群は、本発明の免疫原性組成物、医薬組成物、又はワクチン組成物での処置に特に好適であるが、その理由は、本ワクチンによって実現される免疫が、標準的ワクチンと比較して急速であり、このことにより、ワクチン接種から免疫発現までの期間に、患者が感染するリスクが減るからである。
【００５０】
「患者」及び「対象」という用語は、本明細書において、同義で使用される。これらの用語は、特定の年齢を示さず、したがって、成人及び新生児の両個人を含むことが意図される。「患者」及び「対象」という用語には、ヒト及びその他の霊長類が含まれ、これには、チンパンジー及びその他の類人猿、並びにサル種などのヒト以外の霊長類が含まれる。「患者」及び「対象」という用語はまた、飼育鳥、野鳥、及び狩猟鳥を含むトリ、例えば、ニワトリ、シチメンチョウ、及びその他の家禽、アヒル、並びにガチョウなども含む。「患者」及び「対象」という用語はまた、ウシ、ヒツジ、ブタ、ヤギ、及びウマなどの家畜も含む。「患者」及び「対象」という用語はまた、イヌ及びネコなどの飼育哺乳動物も含む。「患者」及び「対象」という用語はまた、マウス、ラット、及びモルモットなどのげっ歯動物を含めた実験動物も含む。好ましくは、患者又は対象は、ヒトである。
【００５１】
インフルエンザウイルス抗原
本発明の免疫原性組成物は、少なくとも5種のインフルエンザ株に由来するインフルエンザウイルス抗原を含む。免疫原性組成物は、5種を超えるインフルエンザウイルス株に由来するインフルエンザウイルス抗原を含んでもよい。免疫原性組成物は、少なくとも6種、少なくとも7種、少なくとも8種、少なくとも9種、少なくとも10種、少なくとも11種、少なくとも12種、少なくとも13種、少なくとも14種、又は少なくとも15種のインフルエンザウイルス株に由来するインフルエンザウイルス抗原を含んでもよい。免疫原性組成物は、好ましくは、少なくとも6種又は少なくとも7種のインフルエンザウイルス株に由来するインフルエンザウイルス抗原を含む。免疫原性組成物は、20種以下のインフルエンザウイルス株に由来するインフルエンザウイルス抗原を含んでもよい。したがって、免疫原性組成物は、5〜20種、5〜19種、5〜18種、5〜17種、5〜16種、又は5〜15種のインフルエンザウイルス株に由来するインフルエンザウイルス抗原を含んでもよい。免疫原性組成物は、6〜20種、6〜19種、6〜18種、6〜17種、6〜16種、又は6〜15種のインフルエンザウイルス株に由来するインフルエンザウイルス抗原を含んでもよい。免疫原性組成物は、7〜15種、8〜15種、8〜15種、10〜15種、11〜15種、12〜15種、又は13〜15種のインフルエンザウイルス株に由来するインフルエンザウイルス抗原を含んでもよい。免疫原性組成物は、7〜19種、9〜18種、11〜17種、13〜16種、14〜16種、又は15〜18種のインフルエンザウイルス株に由来するインフルエンザウイルス抗原を含んでもよい。
【００５２】
免疫原性組成物は、好ましくは、15種のインフルエンザウイルス株に由来するインフルエンザウイルス抗原を含む。
【００５３】
抗原は、少なくとも1つの免疫原性エピトープを含む。抗原は、1つ以上のB細胞エピトープを含んでもよい。抗原は、1つ以上のT細胞エピトープを含んでもよい。抗原は、1つ以上のB細胞エピトープ及び1つ以上のT細胞エピトープを含んでもよい。当業者は、当該技術分野で既知の方法を用いて、免疫原性エピトープの存在を決定することができる。本明細書に記載の免疫応答を測定する方法を使用することができる。例えば、免疫原性エピトープの存在は、HAIアッセイを用いて決定してもよい(例えば、実施例を参照)。抗原は、好ましくは動物、例えばヒトにおいて、免疫応答を誘導することができる。例えば、抗原ペプチド配列は、そのような免疫応答を誘導することができる配列である。そのような免疫応答が誘導できるかどうかを決定する方法は、当業者に周知であり、具体的な例は、本明細書に記載されている。
【００５４】
インフルエンザウイルス株に由来するインフルエンザウイルス抗原は、そのインフルエンザウイルス株のすべてであっても一部であってもよい。インフルエンザウイルス株は、本明細書に記載のものなど、任意のインフルエンザウイルス株であってよい。インフルエンザ株は、本明細書に記載のいずれかの型又は亜型であってもよい。「全インフルエンザウイルス」とは、野生型インフルエンザウイルスの実質的にすべての成分を含むインフルエンザウイルスである。
【００５５】
インフルエンザウイルス株に由来するインフルエンザウイルス抗原は、そのインフルエンザウイルス株の不活化全インフルエンザウイルス、スプリットインフルエンザウイルス、インフルエンザウイルスサブユニット、インフルエンザビロソーム、又は弱毒生インフルエンザウイルスであってもよい。インフルエンザウイルス抗原は、すべて同じ技法によって調製されていてもよい。例えば、インフルエンザ抗原は、すべて不活化全インフルエンザウイルス、スプリットインフルエンザウイルス、インフルエンザウイルスサブユニット、インフルエンザビロソーム、又は弱毒生インフルエンザウイルスであってもよい。インフルエンザウイルス抗原は、1より多い技法によって調製されていてもよい。例えば、インフルエンザウイルス抗原のうちの1種以上は、不活化全インフルエンザウイルスであってもよく、インフルエンザウイルス抗原のうちの1種以上は、サブユニットインフルエンザウイルスであってもよい。インフルエンザウイルス株に由来するインフルエンザウイルス抗原は、細胞培養物を用いて調製してもよく(例えば、インフルエンザウイルスサブユニットの場合)、又は卵由来であってもよい(例えば、不活化全インフルエンザウイルスの場合)。インフルエンザウイルス抗原のうちの1種以上は、細胞培養物を用いて調製されてもよく、インフルエンザウイルス抗原のうちの1種以上は、卵由来であってもよい。インフルエンザウイルス株に由来するインフルエンザウイルス抗原は、タバコの葉、昆虫細胞、又はウイルス様粒子(VLP)技術を用いて調製されていてもよい(Pilletら、Vaccine、「Plant-derived H7 VLP vaccine elicits protective immune response against H7N9 influenza virus in mice and ferrets」、2015年11月17日、33(46)、6282〜6289頁)。細胞培養物を使用することは、(i)鶏卵の使用を必要とせず、それによりインフルエンザウイルス抗原を卵アレルギーを有する者に投与するのをより安全にできること、また(ii)このプロセスが卵の供給能力により制限されないため、インフルエンザワクチン製造プロセスをより迅速に開始できる可能性があることから、有利である。本発明は、卵由来及び細胞ベースのワクチン製造と適合するという利点がある。
【００５６】
「弱毒生ウイルス」とは、野生型ウイルスよりもその宿主に疾患を引き起こしにくいウイルスである。したがって、「弱毒生インフルエンザウイルス」は、野生型インフルエンザウイルスよりもその宿主に対する病原性が低い。インフルエンザウイルスは、組織培養物又は卵などの異種宿主でインフルエンザウイルスを継代することによって、弱毒化することができる。ウイルスは、5〜50回、例えば、20回又は30回継代してもよい。インフルエンザウイルス株に由来するインフルエンザウイルス抗原は、そのインフルエンザウイルス株の弱毒生インフルエンザウイルスであってもよい。
【００５７】
ウイルス感染性は、プラークアッセイを用いて測定することができる。適切なプラーク形成アッセイでは、宿主細胞、好適には、H9由来神経幹細胞若しくはその他の初代未分化神経細胞培養物、又はU251などの神経膠芽腫細胞のコンフルエントな単層をさまざまな希釈度で感染させる。ウイルスプラークは、固定細胞単層中でウイルスが細胞に感染した場合に形成される。ウイルス感染細胞は、溶解し、感染を隣接細胞などに広げる。感染細胞部分は、目視により又は顕微鏡を用いて観察することができるプラークを形成し、これらのプラークは数えることができる。形成されたプラークの数が参照ウイルスよりも多ければ、試験ウイルスは、参照ウイルスより感染性が高い。
【００５８】
全弱毒生ウイルスは、天然ウイルスの成分をすべて含むことから、ワクチン組成物の成分として有用であり得る。これらは、天然ウイルスの成分をすべて含むため、対象が全ウイルスで免疫された場合、対象はそれに対して免疫を獲得し得る多数の抗原に曝露される。インフルエンザウイルス株に由来するインフルエンザウイルス抗原は、そのインフルエンザウイルス株の全弱毒生インフルエンザウイルスであってもよい。
【００５９】
「不活化ウイルス」とは、例えば、ウイルス外殻を破壊することができる薬剤にウイルスを曝露することによって、不活化されたウイルスを指す。そのような不活化ウイルスは、ウイルス抗原を含有していながら、通常、宿主に感染することができないことから、ワクチンにおいて有用である。しかしながら、場合により、不活化ウイルスは、完全には不活化されない場合があり、すなわち、不活化後に、宿主に感染することが可能なウイルスの一部の粒子が残存することがある。インフルエンザウイルス株に由来するインフルエンザウイルス抗原は、そのインフルエンザウイルス株の不活化インフルエンザウイルスであってもよい。
【００６０】
「ウイルスサブユニット」とは、ウイルスの一部を含む粒子を指す。例えば、「ウイルスサブユニット」は、少なくとも1種のウイルス外殻タンパク質(必ずしもすべてのウイルス外殻タンパク質ではない)と複合体を形成したポリヌクレオチドを含んでもよい。ウイルスサブユニットは、典型的には、細胞培養物を用いて調製される。細胞培養物中の細胞は、昆虫細胞であってもよい。ウイルスサブユニットは、組み換え体であってもよく、及び/又は精製されていてもよい。ウイルスサブユニットは、組み換え及び/又は精製HA及びNAであってもよい。インフルエンザウイルス株に由来するインフルエンザウイルス抗原は、そのインフルエンザウイルス株のウイルスサブユニット、例えば、そのインフルエンザウイルス株のHA及びNAであってもよい。
【００６１】
「スプリットウイルス」は、典型的には、脂質エンベロープを可溶化するための界面活性剤又はその他の試薬によって破壊された不活化ウイルスである。インフルエンザウイルス株に由来するインフルエンザウイルス抗原は、そのインフルエンザウイルス株のスプリットウイルスであってもよい。
【００６２】
インフルエンザウイルス株に由来するインフルエンザウイルス抗原は、インフルエンザタンパク質であってもよく、例えば、表面タンパク質など、本明細書に記載のいずれのインフルエンザウイルスタンパク質であってもよい。具体的には、インフルエンザウイルス株に由来するインフルエンザウイルス抗原は、ヘマグルチニン(HA)、ノイラミニダーゼ(NA)、核タンパク質/ヌクレオカプシドタンパク質(NP)、M1、M2、NS1、NS2(NEP)、PA、PB1、PB1-F2、又はPB2タンパク質であってもよい。例えば、インフルエンザウイルス株に由来するインフルエンザウイルス抗原は、HA1、HA2、HA3、HA4、HA5、HA6、HA7、HA8、HA9、HA10、HA11、HA12、HA13、HA14、HA15、HA16、HA17、又はHA18であってもよい。インフルエンザウイルス株に由来するインフルエンザウイルス抗原は、NA1、NA2、NA3、NA4、NA5、NA6、NA7、NA8、又はNA9であってもよい。例えば、インフルエンザ株に由来するインフルエンザウイルス抗原は、そのインフルエンザウイルス株のHA又はNAと同一のHA又はNAであってもよい。インフルエンザウイルス株に由来するインフルエンザウイルス抗原は、そのインフルエンザウイルス株中に存在する抗原の配列と同一の配列であってもよい。インフルエンザウイルス株に由来するインフルエンザウイルス抗原は、同じ数のNAタンパク質及びHAタンパク質を含んでもよい。
【００６３】
インフルエンザウイルス株に由来するインフルエンザウイルス抗原がタンパク質である場合、インフルエンザウイルス抗原は、インフルエンザウイルス抗原の配列が、そのインフルエンザウイルス株の抗原の配列と少なくとも90%同一であれば、そのインフルエンザウイルス株「に由来する」。例えば、インフルエンザウイルス株に由来するインフルエンザウイルス抗原は、亜型HA1であるA型インフルエンザ株、例えば、A型インフルエンザのH1N1亜型、例えば、07/102 A/ソロモン諸島/3/2006(H1N1)(IVR-145)中に存在するHA1タンパク質の配列と少なくとも90%同一であるHA1タンパク質配列であってもよい。さらなる例では、インフルエンザウイルス株に由来するインフルエンザウイルス抗原は、亜型NA2であるA型インフルエンザ株、例えば、A型インフルエンザのH3N2亜型、例えば、09/310 A/ウィスコンシン/15/2009(H3N2)(NYMCX-183)中に存在するNA2タンパク質の配列と少なくとも90%同一であるNA2タンパク質配列であってもよい。インフルエンザウイルス株に由来するインフルエンザウイルス抗原の配列は、そのインフルエンザウイルス株中に存在する抗原の配列と少なくとも95%、少なくとも97%、少なくとも98%、少なくとも99%、又は100%同一であってもよい。
【００６４】
本発明の免疫原性組成物のインフルエンザウイルス抗原が由来するインフルエンザウイルス株中の抗原は、そのインフルエンザウイルス株中に存在するタンパク質などのより大きい成分の断片であってもよい。例えば、断片は、HAの一部であってもよい。断片は、対象において、免疫応答、好ましくは防御免疫応答を誘導することができる。したがって、断片は、少なくとも1つの免疫原性エピトープを含む。断片は、1つ以上のB細胞エピトープを含んでもよい。断片は、1つ以上のT細胞エピトープを含んでもよい。断片は、1つ以上のB細胞エピトープ及び1つ以上のT細胞エピトープを含んでもよい。当業者は、当該技術分野で既知の方法を用いて、免疫原性エピトープの存在を決定することができる。本明細書に記載の免疫応答を測定する方法を使用することができる。例えば、免疫原性エピトープの存在は、HAIアッセイを用いて決定してもよい(例えば、実施例を参照)。断片がタンパク質、例えば、インフルエンザ表面タンパク質である場合、断片は、典型的には、少なくとも50アミノ酸長である。例えば、断片は、少なくとも75、100、150、200、300、400、又は500アミノ酸長である。断片は、本明細書に記載のいずれかのインフルエンザタンパク質の断片であってもよい。例えば、断片は、NA又はHAの断片であってもよい。インフルエンザウイルス株に由来するインフルエンザウイルス抗原がタンパク質断片である場合、インフルエンザウイルス抗原は、インフルエンザウイルス抗原の配列が、そのインフルエンザウイルス株中に存在するタンパク質の断片の配列と少なくとも90%同一であれば、そのインフルエンザウイルス株に由来する。例えば、インフルエンザウイルス株に由来するインフルエンザウイルス抗原は、亜型NA1であるA型インフルエンザ株、例えば、A型インフルエンザのH1N1亜型、例えば、08/100 A/ブリスベン/59/2007(IVR-148)(H1N1)中に存在するNA1タンパク質の配列と少なくとも90%同一であるNA1タンパク質配列の断片であってもよい。インフルエンザウイルス株に由来するインフルエンザウイルス抗原の配列は、そのインフルエンザウイルス株中に存在するタンパク質の断片の配列と少なくとも95%、少なくとも97%、少なくとも98%、少なくとも99%、又は100%同一であってもよい。
【００６５】
配列同一性を測定する方法は、当該技術分野で周知である。インフルエンザウイルス抗原配列(「参照」配列)が、特定のインフルエンザウイルス株中に存在する配列(「試験」配列)と90%同一であるかどうかを決定する場合、試験配列を参照配列の完全長と比較する。例えば、本発明のインフルエンザウイルス抗原が特定のインフルエンザウイルス株「に由来する」かどうかを決定する場合、「参照」配列は、免疫原性組成物に含まれる本発明のインフルエンザウイルス抗原であり、「試験」配列は、その感染のインフルエンザウイルス抗原が由来し得る特定のインフルエンザウイルス株中に存在する配列である。例えば、試験配列、例えば、HA1は、参照配列、例えば、免疫原性組成物中に含まれるHA1の断片と比較することができる。参照配列の完全長を試験配列とアライメントする。参照配列の全長が、試験配列の一部又は完全長と90%同一である場合、その参照配列は、その試験配列を含む株に由来するとみなされる。配列は、アミノ酸配列であってもよい。試験配列が融合タンパク質である場合、融合タンパク質の一部は、インフルエンザウイルス株に由来してもよく、タンパク質のその部分(参照配列)が試験配列と比較される。
【００６６】
配列は、BLASTを用いて比較することができる。BLAST解析を実行するためのソフトウェアは、国立バイオテクノロジー情報センター(National Center for Biotechnology Information)より公的に入手可能である(http://www.ncbi.nlm.nih.gov/)。
【００６７】
インフルエンザ株
本発明の免疫原性組成物は、少なくとも5種のインフルエンザ株に由来するインフルエンザ抗原を含む。インフルエンザ株は、起源宿主の種、単離年、地理的起源、及びシリアル番号によって分類される。また、A型インフルエンザの場合、インフルエンザ株は、HA及びNA亜型の血清学的性質によっても分類される。
【００６８】
少なくとも5種のインフルエンザ株は、すべて同じ型のインフルエンザであってもよく、又は1より多い型のインフルエンザであってもよい。各インフルエンザ株は、独立して、A型、B型、C型、又はD型であってもよい。好ましくは、インフルエンザ株のうちの1種以上又はすべては、現在流行している、及び/又は過去10年間に流行したことがあるインフルエンザ株である。好ましくは、インフルエンザ株のうちの少なくとも1種は、A型インフルエンザである。好ましくは、インフルエンザ株のうちの少なくとも1種は、B型インフルエンザである。より好ましくは、インフルエンザ株のうちの少なくとも1種は、A型インフルエンザであり、インフルエンザ株のうちの少なくとも1種は、B型インフルエンザである。インフルエンザ株のうちの1種以上は、HA亜型のいずれか、例えば、HA1、HA2、HA3、HA4、HA5、HA6、HA7、HA8、HA9、HA10、HA11、HA12、HA13、HA14、HA15、HA16、HA17、若しくはHA18、及び/又はNA亜型のいずれか、例えば、NA1、NA2、NA3、NA4、NA5、NA6、NA7、NA8、若しくはNA9のA型インフルエンザ株であってもよい。A型インフルエンザ株は、H1N1、H5N1、H3N2、H7N7、H7N9、H1N2、H2N2、H7N3、H5N2、H1N7、H9N2、H7N2、又はH10N7であってもよい。好ましくは、A型インフルエンザ株は、H1N1又はH3N2である。少なくとも5種のインフルエンザ株のうち、同じ亜型の1より多いA型インフルエンザ株が存在してもよい。少なくとも5種のインフルエンザ株のうち、A型インフルエンザの1より多い亜型が存在してもよい。好ましくは、株のうちの少なくとも1種は、H1N1であり、株のうちの少なくとも1種は、H3N2である。免疫原性組成物に含めることができるインフルエンザ株の例としては、07/102 A/ソロモン諸島/3/2006(H1N1)(IVR-145)、02/336 A/ニューカレドニア、08/100 A/ブリスベン/59/2007(IVR-148)(H1N1)、08/140 B/フロリダ/4/2006、08/184 B/マレーシア/2506/2004、09/174 A/カリフォルニア/7/09(H1N1)(NYMCX-179A)、09/310 A/ウィスコンシン/15/2009(H3N2)(NYMCX-183)、12/110 B/ウィスコンシン/1/2010(細胞由来)、12/112 A/ビクトリア/210/2009(H3N2)(NYMCX-187)、12/114 A/ビクトリア/361/2011(H3N2)(IVR-165)、13/134 B/マサチューセッツ/02/2012、13/162 A/テキサス/50/2012(H3N2)(NYMCX-223A)、13/234 B/ブリスベン/60/08、14/252 B/プーケット/3073/2013、及び14/254 A/スイス/9715293/2013(NIB88)が挙げられ、これらすべてが免疫原性組成物に含まれてもよい(下線部=NIBSCのInfluenza Resource Centre(IRC)による識別番号)。免疫原性組成物に含めることができるインフルエンザ株の亜型の例としては、H1N1、H3N2、H5N1、H5N6、H7N7、H7N9、及びH9N2が挙げられ、これらすべてが免疫原性組成物に含まれてもよい。インフルエンザウイルス株は、それぞれ季節性株若しくはパンデミック株であってもよく、又は季節性株とパンデミック株の組み合わせであってもよい。
【００６９】
免疫原性組成物の調製
本発明は、免疫原性組成物を調製する方法を提供する。免疫原性組成物は、インフルエンザ抗原を1種以上の化合物も含む水性組成物中で凍結、熱処理、及び/又は凍結乾燥することによって調製される。典型的には、インフルエンザ抗原を化合物と混合して1種以上の水性組成物を得、次に、その水性組成物を凍結、熱処理、及び/又は凍結乾燥などの処理に付すが、この処理は、インフルエンザ抗原の免疫原性を向上させる。化合物の存在下でインフルエンザ抗原を凍結、熱処理、及び/又は凍結乾燥すると、抗原の免疫原性は、凍結、熱処理、及び/又は凍結乾燥をせずにインフルエンザ抗原を化合物と単に混合した場合に見られる免疫原性と比較して向上する。
【００７０】
免疫原性組成物は、インフルエンザウイルス抗原を含む単一の水性組成物を用いて調製してもよい。免疫原性組成物は、代替的に、それぞれが少なくとも1種のインフルエンザウイルス抗原及び1種以上の化合物のうちの少なくとも1種を含む水性組成物2種以上を用い、その後、得られた処理済された組成物を合わせることによって調製してもよい。「得られた処理された組成物」とは、凍結、熱処理、及び/又は凍結乾燥によりもたらされる組成物である。水性組成物又は各水性組成物は、1種類以上の処理に供してもよい。1種以上の水性組成物は、1種以上の他の水性組成物と異なる処理又は処理の組み合わせに供してもよい。
【００７１】
インフルエンザウイルス抗原と化合物とは、処理中に相互作用し、それによって、インフルエンザウイルス抗原の免疫原性が、処理前のインフルエンザウイルス抗原の免疫原性と比較して向上する。したがって、抗原の免疫原性は、典型的には、処理ステップ中に向上する。
【００７２】
典型的には、処理は、凍結、又は熱処理、又は凍結乾燥であり、好ましくは熱処理である。代替的に、凍結とその後の熱処理、又は凍結乾燥とその後の熱処理など、処理の組み合わせを使用してもよい。後者の場合、凍結乾燥組成物は、典型的には、熱処理前に再構成する。
【００７３】
凍結、凍結乾燥、又は熱処理後、得られた組成物は、それぞれ解凍、再構成、又は冷却し、免疫原性組成物、医薬組成物、又はワクチン組成物として投与してもよい。
【００７４】
本明細書に記載のように、水性組成物は、凍結、熱処理、及び/又は凍結乾燥前に、すべてのインフルエンザウイルス抗原を含んでもよく、又は代替的に、インフルエンザウイルス抗原のうちの1種以上を別々の水性組成物中で凍結、熱処理、及び/又は凍結乾燥に供し、その後、それらを組み合わせて免疫原性組成物を形成してもよい。したがって、1種以上のインフルエンザ抗原は、別々に処理に供し、その後組み合わせてもよい。
【００７５】
免疫原性組成物は、当業者の方法(例えば、本明細書の実施例に例示する方法)により、それぞれのインフルエンザ抗原を個別にアルハイドロゲル(Alhydrogel)に吸着させ、その後化学成分のマンニトール、DMG、及びTMGを添加してもよいバルクの多価プールブレンドを作成することによって調製することができる。
【００７６】
水性組成物
1より多い水性組成物が存在してもよい。1種の水性組成物が存在する場合、単一の水性組成物は、化合物及びインフルエンザウイルス抗原を含む。単一の水性組成物は、凍結、熱処理、及び/又は凍結乾燥前に、すべてのインフルエンザ抗原を含んでもよい。水性組成物が2種以上ある場合、2種以上の水性組成物は、それぞれインフルエンザウイルス抗原のうちの少なくとも1種及び化合物のうちの少なくとも1種を含む。したがって、インフルエンザ抗原のうちの1種以上は、別々の水性組成物中で凍結、熱処理、及び/又は凍結乾燥に供され、その後組み合わせて免疫原性組成物を形成してもよい。インフルエンザウイルス抗原と同じ数の水性組成物が存在してもよい。個々の水性組成物中に1より多いインフルエンザウイルス抗原が含まれてもよいことから、インフルエンザウイルス抗原よりも少ない数の水性組成物が存在してもよい。本明細書中の水性組成物についての説明は、独立して、それぞれの水性組成物に当てはめることができる。
【００７７】
水性組成物は、典型的には、懸濁液又は溶液である。水性組成物は、化合物及びインフルエンザウイルス抗原を水性溶媒中で混合することによって調製することができる。任意の適切な水性溶媒系を使用することができる。水性溶媒は、緩衝液であってもよい。水性溶媒は、典型的には、HEPES緩衝液、トリス緩衝液、リン酸緩衝液、又は純水である。
【００７８】
場合により、1種以上の糖が、化合物及びインフルエンザウイルス抗原との混合前に、水性溶媒と混合される。代替的に、1種以上の糖は、化合物及びインフルエンザウイルス抗原の後に、水性溶媒と混合してもよい。
【００７９】
場合により、アジュバントが、化合物及びインフルエンザウイルス抗原との混合前に、水性溶媒と混合される。代替的に、アジュバントは、化合物及びインフルエンザウイルス抗原の後に、水性溶媒と混合してもよい。
【００８０】
典型的には、アジュバントが存在する場合、1種以上の糖も存在するが、これは、1種以上の糖が、通常、特に処理ステップ中に、アジュバントを安定化するためである。
また、他の成分が水性組成物中に存在してもよい。例えば、式(II):
【００８１】
【化２】
2020518646.tif 000004
(式中、Xは、-S(O)2-を示し、Ra及びRbは、独立して、C1-6アルキルを示す)の化合物が存在してもよい。好適な式(II)の化合物は、Ra及びRbがどちらもメチルを示す、メチルスルホニルメタン(MSM)である。1種以上の化合物と式(II)の化合物との組み合わせは一緒に相互作用し、それによって、処理ステップ中に、インフルエンザ抗原の免疫原性をさらに向上させ得る。
【００８２】
水性組成物中の1種以上の化合物の濃度は、典型的には、0.001M以上の範囲、好ましくは0.01M以上の範囲、より好ましくは0.1M以上の範囲、例えば、0.1M〜5.0M、又は約0.5Mである。好ましくは、免疫原性組成物は、本発明の1種の化合物0.3M〜0.5M及び本発明の別の化合物0.3M〜0.5Mを含む。より好ましくは、免疫原性組成物は、本発明の1種の化合物約0.4M及び本発明の別の化合物約0.4Mを含む。
【００８３】
1種以上の糖が使用される場合、水性組成物中の糖の濃度又は糖の総濃度は、典型的には、1M以下、好ましくは0.7M以下、例えば、0.5M以下、又は0.3M以下である。糖の濃度又は総濃度は、最小0.1mM又は最小0.5mMであってもよい。糖の濃度又は総濃度は、0.5M〜0.7M、好ましくは約0.6Mであってもよい。
【００８４】
使用される各成分の特定の濃度は、インフルエンザウイルス抗原の性質、使用する化合物、1種以上の糖が使用されるかどうか、糖が使用される場合その糖が何であるか、アジュバントが存在するかどうか、及び採用される特定の凍結、凍結乾燥、又は熱処理法を含め、いくつかの要因に依存する。
【００８５】
化合物
本発明の免疫原性組成物は、1種以上の式(I)の化合物又はその生理学的に許容される塩若しくはエステルを含む。本明細書中の化合物についての説明は、独立して、それぞれの化合物に当てはめることができる。2種、3種、4種、又はそれ以上の化合物が存在してもよい。1〜3種の化合物が存在してもよい。好ましくは、2種の化合物が存在する。
【００８６】
生理学的に許容される塩は、典型的には、生理学的に許容される酸との塩であり、したがって、塩酸若しくは硫酸などの無機酸、又はクエン酸、酒石酸、リンゴ酸、マレイン酸、マンデル酸、フマル酸、若しくはメタンスルホン酸などの有機酸と形成される塩が含まれる。塩酸塩が好適である。
【００８７】
エステルは、典型的には、C1-6アルキルエステル、好ましくはC1-4アルキルエステルである。したがって、エステルは、メチルエステル、エチルエステル、プロピルエステル、イソプロピルエステル、ブチルエステル、イソブチルエステル、又はtert-ブチルエステルである。エチルエステルが好適である。
【００８８】
本明細書において使用する際、C1-6アルキル基は、好ましくはC1-4アルキル基である。好適なアルキル基は、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ブチル、イソブチル、及びtert-ブチルから選択される。メチル及びエチルが、特に好適である。
【００８９】
疑義を回避するために、式(I)の化合物の定義は、カルボキシレートアニオンがプロトン化されて-COOHを生じ、アンモニウムカチオンが薬学的に許容されるアニオンと結合した化合物も含む。さらに、疑義を回避するために、上記に定義した化合物は、任意の鏡像異性形態として使用することができる。
【００９０】
典型的には、R1は、水素又はC1-4アルキル、好ましくは、水素又はC1-3アルキル、より好ましくは、水素、エチル、又はメチル、最も好ましくは、水素又はメチルを示す。
【００９１】
典型的には、R2は、C1-4アルキル、好ましくは、C1-3アルキル、より好ましくは、エチル又はメチル、最も好ましくは、メチルを示す。
【００９２】
典型的には、R3は、C1-4アルキル、好ましくは、C1-3アルキル、より好ましくは、エチル又はメチル、最も好ましくは、メチルを示す。
【００９３】
R2及びR3は、同じであっても異なってもよいが、好ましくは、同じである。R1がC1-6アルキルを示す場合、R1、R2、及びR3は、同じであっても異なってもよいが、好ましくは、同じである。
【００９４】
好適な実施形態では、R1は、水素を示し、R2及びR3は、上記に定義したとおりである。したがって、R1が水素を示し、R2及びR3がメチルを示して、式(I)の化合物がジメチルグリシンとなることは、特に好適である。
【００９５】
代替的な好適な実施形態では、R1は、C1-6アルキルを示し、R2及びR3は、上記に定義するとおりである。したがって、R1、R2、及びR3がすべてメチルを示して、式(I)の化合物がトリメチルグリシンとなることは、特に好適である。
【００９６】
好適な実施形態では、免疫原性組成物は、ジメチルグリシン(DMG)及びトリメチルグリシン(TMG)の双方を含む。より好ましくは、免疫原性組成物は、約0.4MのDMG及び約0.4MのTMGを含む。
【００９７】
糖
場合により、1種以上の糖が水性組成物又は各水性組成物中に存在する。1より多い水性組成物が存在する場合、各水性組成物中に存在する糖は、異なっても同じであってもよい。2種以上の糖、例えば、2種、3種、又は4種の糖が存在してもよい。1種又は2種の糖が存在するのが好適であり、最も好ましくは、2種の糖が存在する。化合物と糖との組み合わせは一緒に相互作用し、それによって、処理ステップ中に、インフルエンザ抗原の免疫原性をさらに向上させ得る。糖はまた、アジュバント、特にアルミニウム塩アジュバントが存在する場合、処理ステップ中に、そのアジュバントを安定化するのにも役立つ。
【００９８】
糖は、典型的には、単糖、二糖、三糖、四糖、糖アルコール、又は他のオリゴ糖である。
【００９９】
典型的には、単糖は、グルコース、フルクトース、アラビノース、グリセルアルデヒド、ガラクトース、又はマンノースである。典型的には、二糖は、ショ糖、トレハロース、ラクトース、セロビオース、ツラノース、マルツロース、メリビオース、イソマルトース、又はマルトースである。典型的には、三糖は、ラフィノース、メレジトース、又はウンベリフェロースである。典型的には、四糖は、スタキオースである。典型的には、糖アルコールは、マンニトールである。オリゴ糖の他の例としては、五糖ベルバスコースが挙げられる。
【０１００】
典型的には、糖は、非還元糖、例えば、ショ糖又はラフィノースである。
【０１０１】
水溶液中に糖が1種存在する場合、その糖は、好ましくは、マンニトール又はショ糖、好ましくは、マンニトールである。
【０１０２】
水性懸濁液中に糖が2種存在する場合、それらの糖は、好ましくは、ショ糖及びラフィノースである。
【０１０３】
アジュバント
場合により、水性組成物若しくは各水性組成物中、及び/又は免疫原性組成物、医薬組成物、若しくはワクチン組成物中に、アジュバントが存在する。任意の適切なアジュバントを使用してもよいが、アルミニウム塩アジュバントが好適である。アルミニウム塩アジュバントを使用する場合、処理ステップ中にアジュバントを安定化するように、水性組成物又は各水性組成物中に1種以上の糖も存在するのが好適である。
【０１０４】
典型的には、アルミニウム塩アジュバントは、水酸化アルミニウム(Al(OH)3)、リン酸アルミニウム(AlPO4)、塩酸アルミニウム、硫酸アルミニウム、アンモニウムミョウバン、カリウムミョウバン、又はケイ酸アルミニウムである。好ましくは、使用されるアルミニウム塩アジュバントは、水酸化アルミニウム又はリン酸アルミニウムである。最も好ましくは、アルミニウム塩アジュバントは、水酸化アルミニウム(Al(OH)3)である。
【０１０５】
典型的には、アルミニウム塩アジュバントは、アルミニウム塩で作製された水和ゲルの形態をとり、この水和ゲルは、水性媒体中の粒子懸濁液である。アルミニウム塩アジュバントの調製は、当業者に周知である。例えば、水酸化アルミニウム及びリン酸アルミニウムアジュバントは、通常、アルミニウムイオン(典型的には、硫酸塩又は塩化物として)の水溶液を、当業者に既知のように、十分に定義及び制御された化学的環境で、アルカリ条件に曝露することによって調製される。そのような方法は、例えば、水酸化アルミニウム又はリン酸アルミニウム水和ゲルを調製するために用いることができる。
【０１０６】
凍結
水性組成物又は各水性組成物の凍結は、任意の適切な方法で実施することができる。したがって、凍結は、液体窒素若しくは液体窒素蒸気に曝すこと、冷凍庫に入れること、又はドライアイス及びアルコール凍結浴を用いることによって実施することができる。
【０１０７】
典型的には、水性組成物又は各水性組成物は、-4℃以下、好ましくは、-10℃以下、より好ましくは、-20℃以下、より好ましくは、-30℃に凍結される。水性組成物又は各水性組成物は、典型的には、-100℃未満には凍結されない。水性組成物又は各水性組成物は、例えば、約-80℃に凍結してもよい。
【０１０８】
水性組成物又は各水性組成物は、典型的には、30分間以上、好ましくは、1時間以上、例えば、2〜24時間、所望の温度で凍結を維持される。
【０１０９】
凍結された水性組成物又は各水性組成物は、典型的には、室温で放置して解凍してから、免疫原性組成物、医薬組成物、又はワクチンとして使用する。
【０１１０】
凍結条件及び解凍条件は、常套的実験法により、適切に最適化することができる。
【０１１１】
凍結乾燥
凍結乾燥は、標準的方法によって実施することができる。主に、凍結、一次乾燥、及び二次乾燥の3つの段階がある。凍結は、典型的には、凍結乾燥機を用いて実施される。このステップでは、生体物質を共融点、すなわち、その生体物質の固相及び液相が共存できる最低温度未満に冷却することが重要である。これにより、次のステップで、融解ではなく昇華が生じることを確実にする。或いは、非晶質物質は、共融点を有さないが、臨界点を有し、一次乾燥及び二次乾燥中のメルトバック又はコラプスを回避するために、生成物をこの臨界点未満に維持しなければならない。
【０１１２】
一次乾燥中、適当なレベルの真空を加えることによって圧力を制御しながら、水が昇華できるように、十分な熱を供給する。生体物質中の水の少なくとも50%、典型的には60〜70%は、この段階で昇華する。過剰な熱によって生体物質の構造が劣化又は変化し得るため、一次乾燥はゆっくりであってもよい。冷却コンデンサーチャンバー及び/又はコンデンサープレートは、再凝固により水蒸気が捕捉される表面を提供する。
【０１１３】
二次乾燥プロセスでは、さらに加熱することによって、水和水が除去される。典型的には、圧力も低下させて、さらなる乾燥を促進する。凍結乾燥プロセスの完了後、窒素などの不活性ガスにより真空を解除してから密封を行なってもよく、又は真空下で生体物質を密封してもよい。
【０１１４】
凍結乾燥組成物は、例えば、水又は水性緩衝液を用いて、水性組成物として再構成してから、ワクチンとして使用する。
【０１１５】
凍結乾燥条件は、常套的実験法により、適切に最適化することができる。
【０１１６】
熱処理
水性組成物又は各水性組成物の熱処理は、任意の適切な方法で実施することができる。
【０１１７】
典型的には、水性組成物又は各水性組成物は、30℃超、好ましくは、40℃超に加熱する。より好ましくは、水性組成物又は各水性組成物は、30℃〜80℃、例えば、35℃〜60℃、又は40℃〜50℃の温度に加熱する。好適な温度は、約45℃である。
【０１１８】
水性組成物又は各水性組成物を所望の温度に加熱した後、水性組成物又は各水性組成物は、好ましくは、30分間以上、好ましくは1時間以上、例えば、2時間〜2週間、又は4時間〜24時間、その温度で維持する。
【０１１９】
典型的な熱処理では、約45℃に加熱して、その温度で約7日間維持する。
【０１２０】
熱処理された水性組成物又は各水性組成物は、典型的には、室温に戻してからワクチンとして使用する。
【０１２１】
熱処理条件は、常套的実験法により、適切に最適化することができる。
【０１２２】
免疫原性の向上
インフルエンザウイルス抗原の免疫原性とは、その抗原がヒトなどの動物の身体において免疫応答を誘発する能力である。免疫原性の変化は、免疫応答のレベルを予測するための標準的アッセイを用いて、未処理(対照)インフルエンザ抗原の免疫原性を本発明に従って処理されたインフルエンザウイルス抗原の免疫原性と比較することにより測定することができる。インフルエンザウイルス抗原の免疫原性は、本明細書に記載のものなど、当業者に既知の任意の適切な技法を用いて測定することができる。好適な標準的技法は、赤血球凝集素阻害アッセイである。このアッセイの例示的プロトコルは、下記の実施例に記載する。
【０１２３】
熱処理、凍結、又は凍結乾燥を利用することにより、本発明の化合物及びインフルエンザウイルス抗原を含む水性組成物のインフルエンザウイルス抗原の免疫原性が向上する。本発明のインフルエンザウイルス抗原の免疫原性が向上するということは、より少量のインフルエンザウイルス抗原で同じ免疫応答が得られることを意味する。したがって、患者に用量Dの未処理インフルエンザウイルス抗原を投与し、用量Dがあるレベルの免疫原性を達成した場合、典型的には、0.5D以下、好ましくは0.1D以下、より好ましくは0.01D以下の用量の処理されたインフルエンザウイルス抗原が、同じレベルの免疫原性を達成する。免疫原性は、典型的には、患者への投与の少なくとも10日後、例えば、10日後、15日後、又は20日後に測定される。
【０１２４】
本発明の処理されたインフルエンザウイルス抗原の免疫原性が向上するということは、免疫発現が、未処理のインフルエンザウイルス抗原を用いた場合よりも迅速に生じることを意味する。したがって、所定の用量の未処理抗原の投与後、患者が免疫を獲得するまでに時間Tがかかった場合、典型的には、同じ用量の処理された抗原を投与された患者が免疫を獲得するまでに、0.75T以下の時間、好ましくは、0.5T以下の時間、最も好ましくは、0.2T以下の時間がかかる。
【０１２５】
以下の実施例は、本発明を説明する。
【実施例】
【０１２６】
以下の15種のインフルエンザ抗原株:07/102 A/ソロモン諸島/3/2006(H1N1)(IVR-145)、02/336 A/ニューカレドニア、08/100 A/ブリスベン/59/2007(IVR-148)(H1N1)、08/140 B/フロリダ/4/2006、08/184 B/マレーシア/2506/2004、09/174 A/カリフォルニア/7/09(H1N1)v(NYMCX-179A)、09/310 A/ウィスコンシン/15/2009(H3N2)(NYMCX-183)、12/110 B/ウィスコンシン/1/2010(細胞由来)、12/112 A/ビクトリア/210/2009(H3N2)(NYMCX-187)、12/114 A/ビクトリア/361/2011(H3N2)(IVR-165)、13/134 B/マサチューセッツ/02/2012、13/162 A/テキサス/50/2012(H3N2)(NYMCX-223A)、13/234 B/ブリスベン/60/08、14/252 B/プーケット/3073/2013、14/254 A/スイス/9715293/2013(NIB88)から構成される多価インフルエンザ組成物を調製した(下線部=NIBSCのInfluenza Resource Centre(IRC)による識別番号)。
【０１２７】
材料及び方法
以下のようにHEPES緩衝液を調製した。20mlの滅菌水をシリンダーに計り分けた。0.0437gのNaC1を較正チェック済みの秤で量り分け、マグネチックスターラー及びバーを用いて滅菌水に溶解させた。1.2mlの1M HEPESを加えて攪拌した。完全に溶解されてから、pH計及び水酸化ナトリウムを使用して、pHを7.9に変更した。滅菌水で、最終容積を30mlにした。次に、バイオセーフティキャビネット内の0.2μmの濾過装置を通して、この最終HEPES緩衝液ミックスを濾過した。
【０１２８】
成分(本実施例では、「賦形剤成分」と称する)のDMG(1.237g)、TMG(1.406g)、及びマンニトール(3.276g)を量り分けてから、50mlの滅菌フラスコに入れた。次に、このフラスコに、およそ6mlのHEPES緩衝液を加え、旋回により、内容物を混合した。次に、このフラスコと内容物を+60℃の水浴で溶解するまで加熱した。溶解後、混合物の容積を測定し、さらなるHEPES緩衝液で最終容積を10mlにした。バイオセーフティキャビネット内の0.2μmの濾過装置を通して、この賦形剤配合物を濾過した。
【０１２９】
凍結乾燥されたインフルエンザウイルス抗原株07/102 A/ソロモン諸島/3/2006(H1N1)(IVR-145)、02/336 A/ニューカレドニア、08/100 A/ブリスベン/59/2007(IVR-148)(H1N1)、08/140 B/フロリダ/4/2006、08/184 B/マレーシア/2506/2004、09/174 A/カリフォルニア/7/09(H1N1)(NYMCX-179A)、09/310 A/ウィスコンシン/15/2009(H3N2)(NYMCX-183)、12/110 B/ウィスコンシン/1/2010(細胞由来)、12/112 A/ビクトリア/210/2009(H3N2)(NYMCX-187)、12/114 A/ビクトリア/361/2011(H3N2)(IVR-165)、13/134 B/マサチューセッツ/02/2012、13/162 A/テキサス/50/2012(H3N2)(NYMCX-223A)、13/234 B/ブリスベン/60/08、14/252 B/プーケット/3073/2013、14/254 A/スイス/9715293/2013(NIB88)のバイアルを-20℃から室温まで戻し、滅菌水中の抗原のワーキングストックを調製した。個々のインフルエンザウイルス抗原成分それぞれにつき、インフルエンザウイルス抗原1容積部を吸着のためのアルハイドロゲル1.292容積部に加えたが(初期濃度2%)、これは、ロッカープレート(50rpm)上で、室温で1時間かけて実施し(50rpm)、4℃で一晩静置した。吸収後、ねじ蓋付きバイアルに個々のインフルエンザウイルス抗原成分をプールして多価組成物を作製し、これに、賦形剤成分及び追加のHEPES緩衝液を加え、ここで容積部は、インフルエンザウイルス抗原プール一部、賦形剤成分1.162部、及びHEPES緩衝液1.382部とし、総容積3mlを得た。次に、名目上の熱処理プロセスとして、この総容積を45℃で5日間保管した。最終ワクチン組成物調製物は、0.32%のアルハイドロゲル、0.6Mのマンニトール、0.4MのDMG、0.4MのTMGを含有し、個々のインフルエンザウイルス抗原成分の濃度は1.252μg/mlであり、総抗原濃度は18.78μg/mlであった。
【０１３０】
熱処理後、このワクチン組成物調製物を冷蔵保存に戻してから、BALB-cマウスに、0日目及び28日目に皮下投与した(用量0.1ml)。この組成物のインフルエンザ株に対する防御作用を、-7日目(ワクチン投与前)、11日目、25日目、35日目、及び45日目に、BALB-cマウスから採取した血清のHAI力価を測定することによって、さまざまな時点で決定した。
【０１３１】
WO2015/155527 A1の19頁に従い、11行目(ステップ1)に以下の修正を加えてHAIアッセイを実施した。WO2015/155527の19頁のステップ1では、血清を56℃で30分間不活化した。しかしながら、本件では、ステップ1で、受容体破壊酵素処理、及びその後56℃で30分間加熱することによって、血清を不活化した。
【０１３２】
結果
HAI結果は、テストしたA/B株すべてに対して40を超えるHAI力価を生じる15価インフルエンザ皮下ワクチンを例証した(マウスにおいて)(図1を参照)。15株のうちの14株の免疫反応を測定した。15番目の株(A/ビクトリア/361/2011)は、同様の結果を示すと予想される。バックグラウンド補正後40以上のHAI力価は、防御免疫応答レベルを示すとみなされる(Skountzou, Ioannaら、「Influenza Virus-Specific Neutralizing IgM Antibodies Persist for a Lifetime」、S. A. Plotkin編、Clinical and Vaccine Immunology、CVI 21.11(2014)、1481〜1489頁、PMC)。このワクチンは、細胞培養物及び卵由来の原料に由来するインフルエンザ抗原が含んでいた。このワクチンは、同じ亜型の他のインフルエンザ株に対する交差防御をもたらし得ることが見込まれる。このワクチンは、すべての亜型並びに抗原連続変異による変異型を含め、A型、B型、C型、及びD型のすべての株に対するインフルエンザワクチンをもたらす可能性がある。これにより、季節性インフルエンザワクチンを毎年設計し直す必要を排除し得る。
【図１】
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【国際調査報告】
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