(57)【要約】  本発明は、結腸癌、肝臓癌、肝細胞癌、精巣癌、甲状腺癌、胃癌、胃腸癌、膀胱癌、膵癌、頭頸部癌、腎臓癌、脂肪肉腫、線維肉腫、胸膜中皮腫、メラノーマ、肉腫、脳癌、骨癌、乳癌、前立腺癌、及び白血病を含む癌の群から選択される癌を予防又は処置する為の方法で使用する為のヒトＡＭＨＲＩＩ結合性剤に関する。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
非婦人科癌を予防又は処置する為の方法で使用する為のヒトＡＭＨＲＩＩ結合性剤。
【請求項２】
前記非婦人科癌が、結腸癌、肝臓癌、肝細胞癌、精巣癌、甲状腺癌、胃癌、胃腸癌、膀胱癌、膵癌、頭頸部癌、腎臓癌、脂肪肉腫、線維肉腫、胸膜中皮腫、メラノーマ、肉腫、脳癌、骨癌、乳癌、前立腺癌、及び白血病を含む群から選択される、請求項１に記載の方法で使用する為のヒトＡＭＨＲＩＩ結合性剤。
【請求項３】
モノクロナール抗ＡＭＨＲＩＩ抗体及びそのＡＭＨＲＩＩ結合性フラグメントからなる群から選択される、請求項１又は２に記載の方法で使用する為のヒトＡＭＨＲＩＩ結合性剤。
【請求項４】
下記の抗体からなる群から選択されるモノクロナール抗体である、請求項１〜３のいずれか１項に記載の方法で使用する為のヒトＡＭＨＲＩＩ結合性剤：
ａ）配列番号２を含む軽鎖及び配列番号４を含む重鎖（リーダーを有さない３Ｃ２３  ＶＬ及びＶＨ配列）；
ｂ）配列番号６を含む軽鎖及び配列番号８を含む重鎖（リーダーを有さない３Ｃ２３Ｋ  ＶＬ及びＶＨ配列）；
ｃ）配列番号１０を含む軽鎖及び配列番号１２を含む重鎖（リーダーを有さない３Ｃ２３軽鎖及び重鎖）；
ｄ）配列番号１４を含む軽鎖及び配列番号１６を含む重鎖（リーダーを有さない３Ｃ２３Ｋ軽鎖及び重鎖）。
【請求項５】
下記の配列を含む複数のＣＤＲを含むモノクロナール抗体である、請求項１に記載の方法で使用する為のヒトＡＭＨＲＩＩ結合性剤：
ＣＤＲＬ−１：ＲＡＳＸ１Ｘ２ＶＸ３Ｘ４Ｘ５Ａ（配列番号６５）、ここで、Ｘ１及びＸ２は独立してＳ又はＰであり、Ｘ３はＲ又はＷ又はＧであり、Ｘ４はＴ又はＤであり、及びＸ５はＩ又はＴである；
ＣＤＲＬ−２は、ＰＴＳＳＬＸ６Ｓ（配列番号６６）であり、ここで、Ｘ６はＫ又はＥである；並びに
ＣＤＲＬ−３は、ＬＱＷＳＳＹＰＷＴ（配列番号６７）である；
ＣＤＲＨ−１は、ＫＡＳＧＹＸ７ＦＴＸ８Ｘ９ＨＩＨ（配列番号６８）であり、ここで、Ｘ７はＳ又はＴであり、Ｘ８はＳ又はＧであり、及びＸ９はＹ又はＮである；
ＣＤＲＨ−２は、ＷＩＹＰＸ１０ＤＤＳＴＫＹＳＱＫＦＱＧ（配列番号６９）であり、ここで、Ｘ１０はＧ又はＥである、並びに
ＣＤＲＨ−３は、ＧＤＲＦＡＹ（配列番号７０）である。
【請求項６】
上記結合性剤が、抗体薬物コンジュゲートからなる、請求項１〜５のいずれか１項に記載の方法で使用する為のヒトＡＭＨＲＩＩ結合性剤。
【請求項７】
ＡＭＨＲＩＩ結合性の操作された受容体である、請求項１に記載の方法で使用する為のヒトＡＭＨＲＩＩ結合性剤。
【請求項８】
ＡＭＨＲＩＩ結合性の操作された受容体を発現する細胞である、請求項１に記載の方法で使用する為のヒトＡＭＨＲＩＩ結合性剤。
【請求項９】
ＡＭＨＲＩＩ結合性の操作された受容体を発現するＣＡＲ  Ｔ細胞又はＮＫ  Ｔ細胞である、請求項８に記載の方法で使用する為のヒトＡＭＨＲＩＩ結合性剤。
【請求項１０】
別の抗癌処置と組み合わせられる、請求項１〜９のいずれか１項に記載の方法で使用する為のヒトＡＭＨＲＩＩ結合性剤。
【請求項１１】
個体が、請求項１〜１０のいずれか１項に記載のＡＭＨＲＩＩ結合性剤での癌処置に応答性であるかを判断する方法であって、上記個体から予め得られた腫瘍組織サンプルが、細胞表面においてＡＭＨＲＩＩタンパク質を発現するかを決定する工程を含む上記方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、癌処置の分野に関する。
【背景技術】
【０００２】
世界人口における主要な死亡原因の１つは、癌又は悪性腫瘍であり、その死亡率ランキングは、肺癌、胃癌、肝臓癌、結腸直腸癌、乳癌、及び子宮頸癌の順である。米国単独でも、全個体の三分の一が癌を発症する。早期の診断及び療法が進歩した結果、５年生存率が劇的にほぼ５０％上昇したものの、米国では、癌は死因として心疾患に次いで２番目になおも留まっている。米国人の２０％が癌により死亡し、その半分が肺、乳房、及び結腸直腸の癌に起因する。更に、皮膚癌が、依然として健康を脅かしている。
【０００３】
癌患者に対する有効な処置の設計には重大な課題があった。外科切除、体外ビーム放射線療法、及び／又は全身化学療法といった現在のレジメンは、ある種の悪性腫瘍において部分的に奏功したが、その他の腫瘍では満足のいく結果を生み出さなかった。更に、このようなアプローチは、多くの場合許容されない毒性を有する。
【０００４】
放射線及び手術のいずれも、同じ理論的欠点がある。たった一つのクローン原性悪性細胞であっても、宿主を殺傷するのに十分な子孫を生み出すことができることから、新生細胞の集団全体が根絶されなければならないことが認識されている。一般的には、Goodman  and  Gilman  The  Pharmacological  Basis  of  Therapeutics  (Pergamon  Press,  8th  Edition)  (pp.  1202-1204)を参照。この「全細胞殺傷」の概念は、治癒を実現したければ、腫瘍の全体的な切除が外科学的アプローチにとって必要であること、及び全ての癌細胞の完全な破壊が放射線アプローチにおいて必要とされることを示唆する。現実的には、これはほとんど不可能であり、実際、転移が認められれば不可能である。
【０００５】
更に、従来の化学療法的癌処置もまた腫瘍の完全寛解をもたらすことはほとんどなく、せいぜい中程度の応答を生成するのに必要とされる意味のある投与レベルは、多くの場合許容されない毒性を伴う。抗癌剤は、不良な血液学的効果（例えば、有糸分裂の停止、及び骨髄、リンパ系組織における形成された要素の分解）、及び免疫抑制作用（例えば、細胞数の抑制）、並びに上皮組織（例えば、腸粘膜）、生殖組織（例えば、精子形成障害）、及び神経系に対する重篤な影響を一般的に有する。P.  Calabresi  and  B.  A.  Chabner,  In:  Goodman  and  Gilman  The  Pharmacological  Basis  of  Therapeutics  (Pergamon  Press,  8th  Edition)  (pp.  1209-1216)。用量レベルが高いこととその結果もたらされる毒性は、抗癌剤それ自体が標的特異性を欠くことに大部分起因する。薬物は、癌性の宿主細胞と癌性ではない宿主細胞との間を区別する必要がある。大部分の抗癌剤は、このレベルにおいて無差別的であり、また重大な固有毒性を有する。チェックポイント阻害剤として知られている免疫療法を用いた抗癌手段が、最近注目されている。それらの製品（抗ＰＤ１、抗ＰＤＬ１、抗ＣＴＬＡ４）は、癌細胞が免疫監視機構及び細胞殺傷から逃れる機構を妨害することにより、免疫系をロック解除することができる。このような製品は、幾つかの癌（メラノーマ及び肺癌等）において顕著な長期結果をもたらしたという事実にもかかわらず、応答例のパーセント（％）は低〜中程度のままであり、またその適応スペクトルは比較的限定されたままである（DM.  Pardoll,  Nature  Review  2012年）。
【０００６】
従来の外科療法、放射線療法、及び化学療法に対する代替的又は補完的な抗癌療法について、必要性が認められる。そのような有望な代替療法又は補完療法の１つは、腫瘍細胞により発現される抗原の処置剤による認識を通じて、癌細胞を特異的に標的とすることにある。２０１７年には、そのような腫瘍細胞特異的処置戦略が、抗体に基づく療法である二重特異性抗体、及び免疫細胞の関与、例えばＮＫ及びマクロファージ（糖鎖工学によって操作された抗体（glyco-engineered  antibodies）等）、又は例えばキラーＴリンパ球（ＣＤ３二重特異性フォーマット等）を増加させる為に操作されることができるＣＡＲ−Ｔ細胞に基づく療法により主に例証されている。抗体は、抗体薬物コンジュゲート（ＡＤＣ：Antibody  Drug  Conjugate）のフォーマットに基づく様々な細胞毒性剤によりやはり武装化されることができる。最終的に、Ｔ細胞それ自体が腫瘍細胞を直接認識し、ＴＣＲシグナリング（ＣＡＲ−Ｔ細胞）を活性化させる為に遺伝子操作されることができる。薬剤が強力であればあるほど、腫瘍選択的な標的に対する要求も高まる。
【０００７】
癌に対する抗体に基づく療法は、過去１５年において確立されることとなったが、今日では、血液学的悪性疾患及び固形腫瘍を有する患者を処置する為の最も成功した重要な戦略の１つである。重要な課題は、抗体に基づく処置薬に好適な抗原を識別することであった。そのような処置薬は、抗原又は受容体機能（例えば作動薬又はアンタゴニスト機能）における変化への関与、免疫系の調節（例えば、Ｆｃ機能及びＴ細胞活性化の変更）、又は特異抗原を標的とする抗体にコンジュゲートした特異的薬物の送達を通じて機能することができる（Van  den  Eynde,  B.  J.  &  Scott,  A.  M.  Encyclopedia  of  Immunology  (eds  Roitt,  D.  P.  J.  &  Roitt,  I.  M.)  2424-2431  (Academic  Press,  London,  1998年).,  Scott,  A.  M.  et  al.  A  Phase  I  clinical  trial  with  monoclonal  antibody  ch806  targeting  transitional  state  and  mutant  epidermal  growth  factor  receptor.  Proc.  Natl  Acad.  Sci.  USA  104,  4071-4076  (2007年).,  Hughes,  B.  Antibody-drug  conjugates  for  cancer:  poised  to  deliver?  Nature  Rev.  Drug  Discov.  9,  665-667  (2010年).,  Weiner,  L.  M.,  Surana,  R.  &  Wang,  S.  Monoclonal  antibodies:  versatile  platforms  for  cancer  immunotherapy.  Nature  Rev.  Immunol.  10,  317-327  (2010年））。抗体薬物動態、エフェクター機能、サイズ、及び免疫原性を変化させることができる分子技術が、新たな抗体に基づく療法の開発における重要な要素として登場した。癌患者を対象とした抗体の臨床トライアルから得られたエビデンスは、抗体の親和性及びアビディティー、抗体コンストラクト、処置アプローチの選択（例えば、シグナリング抑止又は免疫エフェクター機能）を含む、抗原標的及び最適な抗体を選択する為の反復アプローチの重要性、並びに初期の臨床トライアルにおいて抗体の薬物動態及び薬力学的特性を入念に調べることの必要性を明らかにした。このレビューは、モノクロナール抗体（ｍＡｂ）をヒト用の試薬に変換するのに必要な工程、癌患者の処置における抗体の成功例、標的及びコンストラクトの選択における課題、並びに抗体療法における免疫系の重要な役割について要約する。１９８６年に、処置用モノクロナール抗体が初めて市販されて以降、このクラスのバイオ医薬製品は飛躍的に増加し、その結果、２０１４年の終わりまでに、４７個ものモノクロナール抗体が、特に癌を処置する為に米国内又は欧州において承認されている。２０２０年までに約７０個のモノクロナール抗体が上市されるものと期待される。
【０００８】
ＣＡＲ−Ｔ細胞療法は、キメラ抗原Ｔ細胞受容体（ＣＡＲ）の製造に基づく。キメラ抗原受容体は、免疫エフェクター細胞上に新たな特異性を付与する、遺伝子操作された受容体である。これは、Ｔ細胞上にモノクロナール抗体の特異性を付与するのに一般的に使用される。ＣＡＲ−Ｔ細胞は、癌を目的とする療法として検討されている。一般的に、ＣＡＲ−Ｔ療法は、Ｔ細胞の細胞膜上でキメラ抗原受容体を発現させる、操作されたＴ細胞の輸液と関係する。この受容体は、特定の腫瘍抗原を認識するように設計される外部標的結合性ドメインと、ＣＡＲ−Ｔが抗原標的と結合した際にＴ細胞の活性化に関与する内部活性化ドメインとを含む。癌の処置を目的としたＣＡＲ−Ｔ臨床トライアルは、重症形態の癌において最大９４％の顕著な寛解率を示したが、トライアル応募患者のほとんどが、そのような形態の癌について、その他の利用可能な処置すべてに対して応答しなかったことを考慮すれば、特に印象深い。２０１７年までに、約３００件のＣＡＲ−Ｔ臨床トライアルが実施された。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００９】
特定の種類の癌を処置する為の既存療法の代替でありうる又はそれを補完しうる、癌の療法の為の更なるツールに対する必要性が、当技術分野においてなおも認められる。
【課題を解決するための手段】
【００１０】
本発明は、非婦人科癌を予防又は処置する為の方法で使用する為のヒトＡＭＨＲＩＩ結合性剤に関する。
【００１１】
特に、本発明は、結腸癌、肝臓癌、肝細胞癌、精巣癌、甲状腺癌、胃癌、胃腸癌、膀胱癌、膵癌、頭頸部癌、腎臓癌、脂肪肉腫、線維肉腫、胸膜中皮腫（pleuramesothelioma）、メラノーマ、肉腫、脳癌、骨癌、乳癌、前立腺癌、及び白血病を含む癌の群から選択される、非婦人科癌を予防又は処置する方法で使用する為のヒトＡＭＨＲＩＩ結合性剤に関する。結腸癌は結腸直腸癌を含む。腎臓癌は腎細胞癌を含む。
【００１２】
幾つかの実施態様において、上記ヒトＡＭＨＲＩＩ結合性剤は、抗ＡＭＨＲＩＩモノクロナール抗体からなる。
【００１３】
幾つかの実施態様において、上記ヒトＡＭＨＲＩＩ結合性剤は、抗体薬物コンジュゲート（ＡＤＣ：Antibody  Drug  Conjugate）からなる。
【００１４】
幾つかの実施態様において、上記ヒトＡＭＨＲＩＩ結合性剤は、ＡＭＨＲＩＩ結合性の操作された受容体からなる。
【００１５】
幾つかの実施態様において、上記ヒトＡＭＨＲＩＩ結合性剤は、ＡＭＨＲＩＩ結合性の操作された受容体を発現する細胞、例えば、ＡＭＨＲＩＩ結合性の操作された受容体を発現するＣＡＲ  Ｔ細胞又はＮＫ  Ｔ細胞、からなる。
【００１６】
本発明はまた、個体が、上記で定義されたＡＭＨＲＩＩ結合性剤での癌処置に対して適格性を有するかどうか、すなわち個体が、上記で定義されたＡＭＨＲＩＩ結合性剤での癌処置に応答性であるかを判断する方法であって、上記個体から予め得られた腫瘍組織サンプルが、細胞表面においてＡＭＨＲＩＩタンパク質を発現するか決定する工程を含む上記方法に関する。
【００１７】
従って、本発明は、個体が上記で定義されたＡＭＨＲＩＩ結合性剤での癌処置に対して応答性であるかを判断する方法であって、上記個体から予め得られた腫瘍組織サンプルが、細胞表面においてＡＭＨＲＩＩタンパク質を発現するか決定する工程を含む上記方法に関する。
【図面の簡単な説明】
【００１８】
【図１Ａ】図１Ａ及び図１Ｂは、３Ｃ２３モノクロナール抗体の複数の変異体（variants）について、そのＶＨ及びＶＬドメインのアミノ酸配列を例証する図である。図１Ａは、各抗体変異体のＶＨドメインを例証する。
【図１Ｂ】図１Ａ及び図１Ｂは、３Ｃ２３モノクロナール抗体の複数の変異体について、そのＶＨ及びＶＬドメインのアミノ酸配列を例証する図である。図１Ｂは、各抗体変異体のＶＬドメインを例証する。
【図２Ａ】図２Ａ〜図２Ｆは、様々な癌細胞株によるＡＭＨＲＩＩ発現を例証する図である。図２Ａは、癌細胞株によるＡＭＨＲＩＩ  ｍＲＮＡ発現を例証する。横座標：図２Ａの左側から右側：ＨＣＴ１１６（結腸直腸癌）、ＣＯＶ４３４−ＷＴ（ヒト卵巣の顆粒膜腫瘍）、Ｋ５６２（ヒト骨髄性白血病）、及びＯＶ９０（ヒト悪性乳頭状漿液性腺癌）。縦座標：ＲＴ−ｑＰＣＲ（ＲＱ）によりアッセイされたＡＭＨＲＩＩ  ｍＲＮＡ発現レベル（任意単位表示）。
【図２Ｂ】図２Ａ〜図２Ｆは、様々な癌細胞株によるＡＭＨＲＩＩ発現を例証する図である。図２Ａと同一の癌細胞株によるＡＭＨＲＩＩタンパク質膜発現：ＨＣＴ１１６（図２Ｂ）。横座標：蛍光シグナル強度（ＦＬ２−Ａ色素）（任意単位表示）。縦座標：細胞数。
【図２Ｃ】図２Ｃは、様々な癌細胞株によるＡＭＨＲＩＩ発現を例証する図である。図２Ａと同一の癌細胞株によるＡＭＨＲＩＩタンパク質膜発現：ＣＯＶ４３４−ＷＴ（図２Ｃ）。横座標：蛍光シグナル強度（ＦＬ２−Ａ色素）（任意単位表示）。縦座標：細胞数。
【図２Ｄ】図２Ａ〜図２Ｆは、様々な癌細胞株によるＡＭＨＲＩＩ発現を例証する図である。図２Ａと同一の癌細胞株によるＡＭＨＲＩＩタンパク質膜発現：Ｋ５６２（図２Ｄ）。横座標：蛍光シグナル強度（ＦＬ２−Ａ色素）（任意単位表示）。縦座標：細胞数。
【図２Ｅ】図２Ａ〜図２Ｆは、様々な癌細胞株によるＡＭＨＲＩＩ発現を例証する図である。図２Ａと同一の癌細胞株によるＡＭＨＲＩＩタンパク質膜発現：ＮＣＩ−Ｈ２９５Ｒ（図２Ｅ）。横座標：蛍光シグナル強度（ＦＬ２−Ａ色素）（任意単位表示）。縦座標：細胞数。
【図２Ｆ】図２Ａ〜図２Ｆは、様々な癌細胞株によるＡＭＨＲＩＩ発現を例証する図である。図２Ａと同一の癌細胞株によるＡＭＨＲＩＩタンパク質膜発現：ＯＶ９０（図２Ｆ）。横座標：蛍光シグナル強度（ＦＬ２−Ａ色素）（任意単位表示）。縦座標：細胞数。
【図３】図３は、様々なヒト腫瘍一次組織サンプルにおけるＡＭＨＲＩＩ表面発現を例証する図である。横座標：癌の種類；図３の左側から右側：結腸癌、肝臓癌、精巣癌、甲状腺癌、胃癌、膀胱癌、膵癌、頭頸部癌。縦座標：ＡＭＨＲＩＩグローバルスコアが≧１．５であることにより定義されたＡＭＨＲＩＩ陽性インデックス。このグローバル組織学的スコアは、細胞質スコア＋細胞膜スコアの平均により規定された。これらのスコアのそれぞれは、頻度×平均強度スコア（０〜３）を使用している。頻度は、ＡＭＨＲＩＩを発現する細胞のパーセント（％）として定義され、また強度は下記のスコアリングシステムを通じて腫瘍細胞膜又は細胞質の明白な褐色標識として分類された：陰性の場合、標識の強度は０、弱い場合は１、中程度の場合は２、及びＣＯＶ４３４陽性対照で示されるように強い場合には３として定義される；各バーの上に位置する数字：試験されたヒト集団内の対応する癌におけるＡＭＨＲＩＩ発現の頻度。
【図４】図４は、様々なヒト腫瘍異種移植によるＡＭＨＲＩＩ表面発現を例証する図である。横座標、図４の左側から右側：白血病、骨肉腫、胃腸癌、脳癌、肉腫、メラノーマ、胸膜中皮腫、脂肪肉腫、精巣癌、結腸癌、腎臓癌。縦座標：ＡＭＨＲ２グローバルスコア（任意単位表示）。
【図５】図５は、ヒト肝臓癌（ＨＣＣ）のＰＤＸモデルに対する３Ｃ２３Ｋ抗体のイン・ビボ（ｉｎ  ｖｉｖｏ）での抗腫瘍活性を例証する図である。横座標：処置開始後の期間（日数）。縦座標：腫瘍体積（ｍｍ３）。●：ビヒクル（ｖｅｈｉｃｌｅ）；▲２０ｍｇ／ｋｇの用量での３Ｃ２３Ｋ抗体；■：５０ｍｇ／ｋｇの用量での３Ｃ２３Ｋ抗体；▼：５０ｍｇ／ｋｇの用量でのソラフェニブによる比較処置。縦座標：腫瘍体積（ｍｍ３）。横座標：●ビヒクル；▲２０ｍｇ／ｋｇの用量での３Ｃ２３Ｋ抗体；■５０ｍｇ／ｋｇの用量での３Ｃ２３Ｋ抗体；▼５０ｍｇ／ｋｇの用量でのソラフェニブ。
【図６】図６は、ＰＣＴ出願番号  国際公開第２０１７／０２５４５８号で開示される、３Ｃ２３Ｋ抗体細胞毒性コンジュゲート（ＧＭ１０３と呼ばれる）からなる抗体薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）の、ヒト肝臓癌（ＨＣＣ）のＰＤＸモデルに対するイン・ビボ（ｉｎ  ｖｉｖｏ）での抗腫瘍活性を例証する図である。横座標：処置開始後の期間（日数）。縦座標：腫瘍体積（ｍｍ３）。●：ビヒクル；▼１ｍｇ／ｋｇの用量でのＧＭ１０３  ＡＤＣ；▲：５ｍｇ／ｋｇの用量でのＧＭ１０３  ＡＤＣ；■１０ｍｇ／ｋｇの用量でのＧＭ１０３  ＡＤＣ；
【図７Ａ】図７Ａ〜図７Ｄは、フローサイトメトリー（ＦＡＣＳ）により測定された、結腸直腸癌に作用された患者４例（図７Ａ；図７Ｂ、図７Ｃ、図７Ｄ）から得られた腫瘍サンプルに由来する腫瘍細胞によるＡＭＨＲＩＩ膜発現を例証する図である。横座標：蛍光シグナル強度（ＦＬ２−Ａ色素）（任意表示）。縦座標：細胞数。図７Ａ、図７Ｂ、図７Ｃ、図７Ｄにおいて：（ｉ）左側のピーク：無関係のアイソタイプ抗体と共にインキュベートした細胞；（ｉｉ）右側のピーク：３Ｃ２３Ｋ抗ＡＭＨＲＩＩ抗体と共にインキュベートした細胞。
【図７Ｂ】図７Ａ〜図７Ｄは、フローサイトメトリー（ＦＡＣＳ）により測定された、結腸直腸癌に作用された患者４例（図７Ａ；図７Ｂ、図７Ｃ、図７Ｄ）から得られた腫瘍サンプルに由来する腫瘍細胞によるＡＭＨＲＩＩ膜発現を例証する図である。横座標：蛍光シグナル強度（ＦＬ２−Ａ色素）（任意表示）。縦座標：細胞数。図７Ａ、図７Ｂ、図７Ｃ、図７Ｄにおいて：（ｉ）左側のピーク：無関係のアイソタイプ抗体と共にインキュベートした細胞；（ｉｉ）右側のピーク：３Ｃ２３Ｋ抗ＡＭＨＲＩＩ抗体と共にインキュベートした細胞。
【図７Ｃ】図７Ａ〜図７Ｄは、フローサイトメトリー（ＦＡＣＳ）により測定された、結腸直腸癌に作用された患者４例（図７Ａ；図７Ｂ、図７Ｃ、図７Ｄ）から得られた腫瘍サンプルに由来する腫瘍細胞によるＡＭＨＲＩＩ膜発現を例証する図である。横座標：蛍光シグナル強度（ＦＬ２−Ａ色素）（任意表示）。縦座標：細胞数。図７Ａ、図７Ｂ、図７Ｃ、図７Ｄにおいて：（ｉ）左側のピーク：無関係のアイソタイプ抗体と共にインキュベートした細胞；（ｉｉ）右側のピーク：３Ｃ２３Ｋ抗ＡＭＨＲＩＩ抗体と共にインキュベートした細胞。
【図７Ｄ】図７Ａ〜図７Ｄは、フローサイトメトリー（ＦＡＣＳ）により測定された、結腸直腸癌に作用された患者４例（図７Ａ；図７Ｂ、図７Ｃ、図７Ｄ）から得られた腫瘍サンプルに由来する腫瘍細胞によるＡＭＨＲＩＩ膜発現を例証する図である。横座標：蛍光シグナル強度（ＦＬ２−Ａ色素）（任意表示）。縦座標：細胞数。図７Ａ、図７Ｂ、図７Ｃ、図７Ｄにおいて：（ｉ）左側のピーク：無関係のアイソタイプ抗体と共にインキュベートした細胞；（ｉｉ）右側のピーク：３Ｃ２３Ｋ抗ＡＭＨＲＩＩ抗体と共にインキュベートした細胞。
【図８Ａ】図８Ａ〜図８Ｄは、マウスを対象として、フローサイトメトリー（ＦＡＣＳ）により測定された、４つの異なる結腸直腸癌ヒト異種移植（図８Ａ、図８Ｂ、図８Ｃ、図８Ｄ）によるＡＭＨＲＩＩ膜発現を例証する図である。横座標：蛍光シグナル強度（ＦＬ２−Ａ色素）（任意表示）。縦座標：細胞数。図８Ａ、図８Ｂ、図８Ｃ、図８Ｄにおいて：（ｉ）左側のピーク：無関係のアイソタイプ抗体と共にインキュベートした細胞；（ｉｉ）右側のピーク：３Ｃ２３Ｋ抗ＡＭＨＲＩＩ抗体と共にインキュベートした細胞。
【図８Ｂ】図８Ａ〜図８Ｄは、マウスを対象として、フローサイトメトリー（ＦＡＣＳ）により測定された、４つの異なる結腸直腸癌ヒト異種移植（図８Ａ、図８Ｂ、図８Ｃ、図８Ｄ）によるＡＭＨＲＩＩ膜発現を例証する図である。横座標：蛍光シグナル強度（ＦＬ２−Ａ色素）（任意表示）。縦座標：細胞数。図８Ａ、図８Ｂ、図８Ｃ、図８Ｄにおいて：（ｉ）左側のピーク：無関係のアイソタイプ抗体と共にインキュベートした細胞；（ｉｉ）右側のピーク：３Ｃ２３Ｋ抗ＡＭＨＲＩＩ抗体と共にインキュベートした細胞。
【図８Ｃ】図８Ａ〜図８Ｄは、マウスを対象として、フローサイトメトリー（ＦＡＣＳ）により測定された、４つの異なる結腸直腸癌ヒト異種移植（図８Ａ、図８Ｂ、図８Ｃ、図８Ｄ）によるＡＭＨＲＩＩ膜発現を例証する図である。横座標：蛍光シグナル強度（ＦＬ２−Ａ色素）（任意表示）。縦座標：細胞数。図８Ａ、図８Ｂ、図８Ｃ、図８Ｄにおいて：（ｉ）左側のピーク：無関係のアイソタイプ抗体と共にインキュベートした細胞；（ｉｉ）右側のピーク：３Ｃ２３Ｋ抗ＡＭＨＲＩＩ抗体と共にインキュベートした細胞。
【図８Ｄ】図８Ａ〜図８Ｄは、マウスを対象として、フローサイトメトリー（ＦＡＣＳ）により測定された、４つの異なる結腸直腸癌ヒト異種移植（図８Ａ、図８Ｂ、図８Ｃ、図８Ｄ）によるＡＭＨＲＩＩ膜発現を例証する図である。横座標：蛍光シグナル強度（ＦＬ２−Ａ色素）（任意表示）。縦座標：細胞数。図８Ａ、図８Ｂ、図８Ｃ、図８Ｄにおいて：（ｉ）左側のピーク：無関係のアイソタイプ抗体と共にインキュベートした細胞；（ｉｉ）右側のピーク：３Ｃ２３Ｋ抗ＡＭＨＲＩＩ抗体と共にインキュベートした細胞。
【図９Ａ】図９Ａ及び図９Ｂは、フローサイトメトリー（ＦＡＣＳ）により測定された、腎細胞癌に作用された患者２例（図９Ａ；図９Ｂ）から得られた腫瘍サンプルに由来する腫瘍細胞によるＡＭＨＲＩＩ膜発現を例証する図である。横座標：蛍光シグナル強度（ＦＬ２−Ａ色素）（任意単位）。縦座標：細胞数。図９Ａ、９Ｂにおいて：（ｉ）左側のピーク：無関係のアイソタイプ抗体と共にインキュベートした細胞；（ｉｉ）右側のピーク：３Ｃ２３Ｋ抗ＡＭＨＲＩＩ抗体と共にインキュベートした細胞。
【図９Ｂ】図９Ａ及び図９Ｂは、フローサイトメトリー（ＦＡＣＳ）により測定された、腎細胞癌に作用された患者２例（図９Ａ；図９Ｂ）から得られた腫瘍サンプルに由来する腫瘍細胞によるＡＭＨＲＩＩ膜発現を例証する図である。横座標：蛍光シグナル強度（ＦＬ２−Ａ色素）（任意単位）。縦座標：細胞数。図９Ａ、９Ｂにおいて：（ｉ）左側のピーク：無関係のアイソタイプ抗体と共にインキュベートした細胞；（ｉｉ）右側のピーク：３Ｃ２３Ｋ抗ＡＭＨＲＩＩ抗体と共にインキュベートした細胞。
【図１０】図１０は、ヒト結腸直腸癌（ＣＲＣ）のＰＤＸモデルに対する抗ＡＭＨＲＩＩ抗体ＧＭ１０２のイン・ビボ（ｉｎ  ｖｉｖｏ）での抗腫瘍活性を例証する図である。横座標：処置開始後の期間（日数）。縦座標：腫瘍体積（ｍｍ３）。●：ビヒクル；■２０ｍｇ／ｋｇの用量でのＧＭ１０２；▲：１００ｍｇ／ｋｇの用量でのイリノテカン。
【発明を実施するための形態】
【００１９】
本発明者等は、ＡＭＨＲＩＩ、ＡＭＨ受容体が、複数の様々な非婦人科癌組織の細胞膜において発現していることを思いがけずに明らかにした。
【００２０】
語「ＡＭＨＲ−ＩＩ」は、ヒト抗ミュラー管ホルモンＩＩ型受容体を表す。ヒトＡＭＨＲ−ＩＩの配列は、本明細書では配列番号（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ．）１８として記載されている（シグナルペプチドＭＬＧＳＬＧＬＷＡＬＬＰＴＡＶＥＡ（配列番号１７）を欠いている）。
【００２１】
本明細書で使用される場合、「非婦人科」癌は、語「婦人科」癌に含まれないあらゆる癌を含む。
【００２２】
本明細書で使用される場合、「婦人科」癌は、卵巣癌、子宮頸癌、子宮内膜癌、妊娠性絨毛性疾患の癌（絨毛癌）、子宮肉腫、腟癌、外陰部の癌、及び卵管癌からなる群から選択される。
【００２３】
次に、本明細書で使用される場合、「非婦人科」癌は、卵巣癌、子宮頸癌、子宮内膜癌、妊娠性絨毛性疾患の癌、子宮肉腫、腟癌、外陰部の癌、及び卵管癌からなる群から選択される癌から構成されない癌からなる。
【００２４】
本明細書で使用される場合、語「ＰＤＸ」は、「患者由来の異種移植（Patient-Derived  Xenograft）」という表現に対する頭文字である。患者由来の異種移植は、癌のイン・ビボ（ｉｎ  ｖｉｖｏ）モデルにおいて、特にヒト癌のイン・ビボ（ｉｎ  ｖｉｖｏ）モデルにおいて、高頻度で使用され、患者の腫瘍に由来する組織又は細胞が移植される、すなわち免疫不全のヒト以外の哺乳動物、例えば免疫不全マウス、に「グラフトされる」。
【００２５】
本明細書の実施例に示されるように、本発明者等は、ＡＭＨＲＩＩは、非婦人科癌組織の細胞膜において発現しており、その頻度は検討される非婦人科の癌型に応じて変化することを見出した。実例として、本明細書の実施例に示されるように、ＡＭＨＲＩＩは、頭頸部癌に作用された患者を起源とする腫瘍組織に由来する癌細胞によるよりも、副腎皮質癌に作用された患者を起源とする腫瘍組織に由来する癌細胞によって、頻繁に発現されている。これは、これら２種類の癌はＡＭＨＲＩＩを標的とする抗癌処置に対して適格性を有するが、しかしそのような抗癌処置は、頭頸部癌に作用された患者の処置に関係する頻度はより低くなることを意味する。
【００２６】
本明細書の実施例に示されるように、任意の婦人科癌、例えば肝臓癌、結腸直腸癌又は腎臓癌、は、ＡＭＨＲＩＩ結合性剤によって処置され得、但し、上記非婦人科腫瘍に由来する腫瘍細胞がその膜でＡＭＨＲＩＩを発現し、従って腫瘍細胞の膜でのＡＭＨＲＩＩタンパク質の存在が、任意の方法に従い検出又は決定できる。
【００２７】
従って、本明細書の実施例に提供される実験データは、ＡＭＨＲＩＩ結合性剤、ここでは抗ＡＭＨＲＩＩモノクロナール抗体が同一であっても、ＡＭＨＲＩＩ標的タンパク質が腫瘍細胞膜において発現していれば、複数の異なる種類の癌を処置する為に有効であることを示す。
【００２８】
ところで、標的結合性分子、例えば標的結合性抗体、からなる抗癌有効成分の分野において、同一の有効成分が異なる複数の癌を処置する為に有効である状況は前例がない。実例として、ペンブロリズマブと命名された抗ＰＤ１抗体は、異なる様々な種類の癌（但し、上記癌は同一の生理学的特性を共有する）の処置において有用な有効成分として、米国食品医薬品局（ＦＤＡ）により承認された。
【００２９】
従って、非婦人科癌に作用された個体は、上記個体から予め集められた腫瘍細胞によるＡＭＨＲＩＩ膜発現が適切な方法により検出される、さもなければ決定されるとき、本明細書に記載されているＡＭＨＲＩＩ結合性剤を用いて上記癌について処置されうる。
【００３０】
幾つかの実施態様において、癌細胞の細胞膜におけるＡＭＨＲＩＩの発現は、上記癌細胞がＡＭＨＲＩＩを、所定の定量可能なレベルで、又は上記定量可能なレベルよりも高いレベルで発現することを含む。
【００３１】
従って、幾つかの実施態様に従うと、非婦人科癌に作用された個体のＡＭＨＲＩＩ結合分子での処置に対する応答性は、上記個体から予め集められたサンプルに由来する非婦人科癌細胞がその膜でＡＭＨＲＩＩを発現するかを判断することにより評価されうる。
【００３２】
幾つかの実施態様に従うと、非婦人科癌に作用された個体のＡＭＨＲＩＩ結合性分子での処置に対する応答性は、上記個体から予め集められたサンプルに由来する非婦人科癌細胞が、ＡＭＨＲＩＩを、その膜において決定済みの閾値を上回り発現するか判断することにより評価されうる。
【００３３】
非婦人科癌に作用された患者のＡＭＨＲＩＩ結合性剤、例えば抗ＡＭＨＲＩＩ抗体、での処置に対する応答性を判断する為の幾つかの実施態様で使用されうるＡＭＨＲＩＩ膜発現レベルは、様々な技法を用いて評価され得、そのような技法は、（ｉ）腫瘍細胞膜でＡＭＨＲＩＩを発現する、腫瘍サンプルに含まれる腫瘍細胞のパーセント（％）、（ｉｉ）腫瘍細胞膜に位置するＡＭＨＲＩＩタンパク質の平均数、及び（ｉｉｉ）試験される腫瘍細胞サンプルに含まれる腫瘍細胞のＦＡＣＳ  ＡＭＨＲＩＩシグナルプロファイルを含む。
【００３４】
幾つかの実施態様に従うと、非婦人科癌に作用された個体において予め集められた腫瘍サンプルに含まれる癌細胞は、膜性ＡＭＨＲＩＩが上記腫瘍サンプルに含まれる腫瘍細胞の５％又はそれ超において検出されるとき、膜性ＡＭＨＲＩＩを発現するものとして評価されうる。
【００３５】
従って、幾つかの実施態様において、非婦人科癌に作用された個体は、上記個体から予め集められた腫瘍サンプルに含まれる腫瘍細胞の５％又はそれ超が、その膜でＡＭＨＲＩＩを発現するとき、ＡＭＨＲＩＩ結合性剤での処置に応答しているものと判断される。
【００３６】
膜ＡＭＨＲＩＩタンパク質を発現する腫瘍細胞の頻度（例えば、パーセント（％））を決定する為の方法は、本明細書の実施例を含め、本明細書において別途で開示される。
【００３７】
幾つかの実施態様に従うと、非婦人科癌に作用された患者のＡＭＨＲＩＩ結合性剤、例えば抗ＡＭＨＲＩＩ抗体、での癌処置に対する応答性は、上記患者から予め集められた腫瘍サンプルに含まれる腫瘍細胞の膜に存在するＡＭＨＲＩＩタンパク質の平均数を決定することにより評価されうる。
【００３８】
幾つかの実施態様において、非婦人科癌に作用された患者は、上記患者から予め集められた腫瘍サンプルに含まれる腫瘍細胞により発現される膜ＡＭＨＲＩＩタンパク質の平均数が、ＡＭＨＲＩＩタンパク質１００００個又はそれ超であるとき、ＡＭＨＲＩＩ結合性剤での処置に対して応答性である、例えば抗ＡＭＨＲＩＩ抗体での処置に対して応答性であるものとして分類されうる。
【００３９】
腫瘍細胞膜において発現されるＡＭＨＲＩＩタンパク質の数の評価は、（ａ）患者から予め集められた腫瘍組織サンプルに由来する細胞を含有するサンプルを、ＡＭＨＲＩＩタンパク質と特異的に結合する検出可能な化合物、例えば蛍光標識された抗ＡＭＨＲＩＩ抗体、と共にインキュベートする工程、及び更に（ｂ）上記サンプルに由来する各試験対象細胞に結合した上記検出可能な化合物の数、例えば蛍光標識された抗ＡＭＨＲＩＩ抗体の数を決定する工程を含む従来法を使用することにより実施されうる。腫瘍細胞膜において発現されるＡＭＨＲＩＩタンパク質の数の評価は、本明細書の実施例に示されるように、例えば、周知の蛍光活性化セルソーティング（ＦＡＣＳ：fluorescence  activated  cell  sorting）技術を使用することにより実施されうる。
【００４０】
なおも別の実施態様において、非婦人科癌に作用された患者は、上記患者から予め集められた腫瘍サンプルに含まれる腫瘍細胞のＡＭＨＲＩＩ  ＦＡＣＳプロファイルの分析により、ＡＭＨＲＩＩ結合性剤での処置に対して応答性であるとして分類されうる、例えば抗ＡＭＨＲＩＩ抗体での処置に対して応答性であるとして分類されうる。
【００４１】
これらのなおもその他の実施態様に従うと、非婦人科癌に作用された患者は、蛍光活性化セルソーティング（ＦＡＣＳ：fluorescence  activated  cell  sorting）の方法において、（ｉ）抗ＡＭＨＲＩＩ蛍光標識抗体と共にインキュベートされた腫瘍細胞の平均蛍光強度と、（ｉｉ）アイソタイプ蛍光標識抗体と共にインキュベートされた腫瘍細胞から得られた平均蛍光強度（ＭＦＩ：mean  fluorescence  intensity）値との比が１．５又はそれ超であるとき、ＡＭＨＲＩＩ結合性剤での処置に対して応答性であるとして分類されうる、例えば抗ＡＭＨＲＩＩ抗体での処置に対して応答性であるとして分類されうる。
【００４２】
上記平均蛍光強度比を判断するには、アイソタイプ抗体及び抗ＡＭＨＲＩＩ抗体の両方が、本明細書の実施例に示されるように、同一の蛍光剤、例えばＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ社により商品化されているＡｌｅｘａ  Ｆｌｕｏｒ４８８色素、で標識される。
【００４３】
幾つかの更なる実施態様において、非婦人科癌の個体のＡＭＨＲＩＩ結合性剤での処置に対する応答性は、（ｉ）ＡＭＨＲＩＩ結合性剤で処置されうる、癌由来の膜ＡＭＨＲＩＩ発現癌細胞と、（ｉｉ）ＡＭＨＲＩＩ結合性剤で処置されえない、癌由来の膜ＡＭＨＲＩＩ発現癌細胞との間を区別することを可能にするＡＭＨＲＩＩ発現スコアを計算することにより決定されうる。
【００４４】
従って、本発明者等は、本明細書に記載されている非婦人科癌に作用された患者、特に本明細書に記載されているＡＭＨＲＩＩ結合性剤での癌処置に対して適格性を有する患者、すなわち本明細書に記載されているＡＭＨＲＩＩ結合性剤での癌処置に対して特に応答性である患者は、細胞膜でＡＭＨＲＩＩを、関連する細胞標的の破壊を構成するのに十分高いレベルで発現する癌腫瘍を有する患者を包含することを明確にした。
【００４５】
次に、このような更なる実施態様に従うと、本発明者等は、非婦人科癌患者から得られた癌細胞サンプル中で測定されたＡＭＨＲＩＩの発現が最低限度のレベルにあれば、それは、上記患者がＡＭＨＲＩＩ結合性剤での処置に対して応答性であること、従って上記患者は本明細書に記載されているＡＭＨＲＩＩ結合性剤で処置されうることを確認しうることを明確にした。
【００４６】
従って、上記個体から予め集められたサンプルに含まれる癌細胞によるＡＭＨＲＩＩ発現レベルが、（ｉ）膜性ＡＭＨＲＩＩを発現する腫瘍細胞の頻度、例えばその膜でＡＭＨＲＩＩを発現する腫瘍細胞のパーセント（％）、及び（ｉｉ）上記腫瘍細胞によるＡＭＨＲＩＩ膜発現のレベル、例えば細胞１個当たりの膜性ＡＭＨＲＩＩタンパク質の平均数の両方について判断することにより評価されるときにも、非婦人科癌に作用された個体のＡＭＨＲＩＩ結合性剤での処置に対する応答性がやはり判断されうる。
【００４７】
従って、このような更なる実施態様の幾つかにおいて、非婦人科癌に作用された患者の、上記患者から予め集められた腫瘍細胞のサンプルにおけるヒトＡＭＨＲＩＩ結合性剤、例えば抗ヒトＡＭＨＲＩＩ抗体に対する応答性は、（ｉ）上記サンプルに含まれる腫瘍細胞がその膜におけるヒトＡＭＨＲＩＩタンパク質について最低限度の平均数を示すこと、及び（ｉｉ）その膜においてヒトＡＭＨＲＩＩを発現する細胞の頻度、例えばその膜においてヒトＡＭＨＲＩＩを発現する細胞のパーセント（％）が少なくとも閾値にあるかどうかを決定することにより評価されうる。
【００４８】
従って、（ｉ）ＡＭＨＲＩＩ結合性剤での癌処置に対して適格性を有さない非婦人科癌患者、すなわちＡＭＨＲＩＩ結合性剤での癌処置に対して非応答性である非婦人科癌患者と、（ｉｉ）ＡＭＨＲＩＩ結合性剤での癌処置に対して適格性を有する非婦人科癌患者、すなわちＡＭＨＲＩＩ結合性剤での癌処置に対して応答性である非婦人科癌患者との間の区別を可能にする特別なＡＭＨＲＩＩ発現スコア値を決定する為にも使用されうる、更なる方法についても本明細書において記載される。
【００４９】
より正確には、上記方法の実施態様に従うと、本明細書に記載されている非婦人科癌に作用された患者で、本明細書に記載されているＡＭＨＲＩＩ結合性剤で抗癌処置されうる患者は、好ましくはＡＭＨＲＩＩ発現スコアが１．０又はそれ超であることが確認された患者であり得、ＡＭＨＲＩＩ発現スコアが１．５又はそれ超であることが確認された患者を含む。
【００５０】
膜性ＡＭＨＲＩＩ発現スコアは、試験対象の癌細胞によるＡＭＨＲＩＩ発現の免疫組織化学的評価に基づきうるが、その場合、所与の癌細胞サンプルに対する個々の膜性ＡＭＨＲＩＩスコアには、（ｉ）ＡＭＨＲＩＩ発現が検出不能な場合には「０」が割り振られ、（ｉｉ）有意なＡＭＨＲＩＩ発現が検出される場合には「１」が割り振られ、及び（ｉｉｉ）高いＡＭＨＲＩＩ発現が検出される場合には「２」が割り振られ、及び（ｉｖ）ＡＭＨＲＩＩの過剰発現が検出される場合には「３」が割り振られる。
【００５１】
実際、（ｉ）上記免疫組織化学的評価を通じて膜性ＡＭＨＲＩＩ発現レベルに割り振られたスコアと（ｉｉ）癌細胞１個について発現されるＡＭＨＲＩＩタンパク質の平均数との間には関連性が存在する。個々の膜性ＡＭＨＲＩＩスコアの割り振りを可能にする膜性ＡＭＨＲＩＩ発現レベルは、非婦人科癌に作用された患者から予め集められた腫瘍細胞のサンプルから開始して、細胞１個当たりの膜性ＡＭＨＲＩＩタンパク質の平均数を決定することによりやはり評価されうることも本明細書の実施例において明らかにされる。
【００５２】
非婦人科癌に作用された個体のＡＭＨＲＩＩ結合性剤での処置に対する、すなわち抗ＡＭＨＲＩＩ抗体での処置に対する応答性を判断する上記実施態様に従うと、膜性ＡＭＨＲＩＩ発現スコアは、所与の癌細胞サンプルについて、（ｉ）上記癌細胞サンプル内のＡＭＨＲＩＩ発現細胞の頻度、及び（ｉｉ）上記ＡＭＨＲＩＩ発現細胞によるＡＭＨＲＩＩ発現のレベルの両方を考慮することによって決定される。一般的に、所与の癌細胞サンプルのＡＭＨＲＩＩ発現スコアは、下記の式（Ｉ）：
Ｅスコア＝ＦＲＥＱ×ＡＭＨＲＩＩ＿ＬＥＶＥＬ、
によって決定される。ここで、式中
Ｅスコアは、所与の癌細胞サンプルに対するＡＭＨＲＩＩ発現スコア値を意味し、
ＦＲＥＱは、膜性ＡＭＨＲＩＩ発現が検出される上記癌細胞サンプルに含まれる細胞の頻度を意味し、
ＡＭＨＲＩＩ＿ＬＥＶＥＬは、上記所与の癌細胞サンプルに含まれるＡＭＨＲＩＩ発現細胞によるＡＭＨＲＩＩの発現レベルを意味する。
【００５３】
実例として、（ｉ）細胞の５０％がＡＭＨＲＩＩを発現し（ＦＲＥＱ値＝０．５）、及び（ｉｉ）ＡＭＨＲＩＩ発現レベル（ＡＭＨＲＩＩ＿ＬＥＶＥＬ）＝２であるときに、Ｅスコア＝１．０が所与の癌細胞サンプルについて決定される。
【００５４】
好ましい実施態様において、ＡＭＨＲＩＩ発現スコア（すなわちＥスコア）は、本明細書の実施例に示されるように免疫組織学的方法によって決定される。これらの好ましい実施態様に従うと、ＡＭＨＲＩＩ膜発現は、ＡＭＨＲＩＩに対して特異的な検出可能抗体を使用すること、並びに（ｉ）細胞に結合した上記抗ＡＭＨＲＩＩ抗体を有する上記細胞の頻度を決定すること、及び（ｉｉ）上記検出可能抗ＡＭＨＲＩＩ抗体が膜発現したＡＭＨＲＩＩに結合した後に、その抗体により生み出されるシグナルの強度を決定することにより評価される。
【００５５】
本明細書の実施例に示されるように、頻度が異なるにもかかわらず、１．５又はそれ超のＡＭＨＲＩＩ発現スコアを有するＡＭＨＲＩＩ発現癌細胞が、様々な癌について確認された。実例として、結腸腫瘍に由来する癌細胞は、ＡＭＨＲＩＩ陽性（すなわち、１．５又はそれ超のＡＭＨＲＩＩスコアを有する）として分類され、頭頸部癌に由来する癌細胞よりも高い頻度を有することを、本発明者等は本明細書に示した。
【００５６】
ＡＭＨＲＩＩ膜発現のレベルを決定する場合、細胞膜におけるＡＭＨＲＩＩの検出は、ＡＭＨＲＩＩに対して高い親和性及び高い特異性を有する抗ＡＭＨＲＩＩモノクロナール抗体を使用することにより最も好ましく実施されるはずであり、それは３Ｃ２３Ｋ抗ＡＭＨＲＩＩモノクロナール抗体による実施例において例証される。
【００５７】
更に、ＡＭＨＲＩＩスコアを決定するという観点から免疫組織化学的方法によりＡＭＨＲＩＩ発現を決定することは、最も好ましくは、上記サンプルを適切な検出試薬（例えば、高親和性抗ＡＭＨＲＩＩモノクロナール抗体、例えばＡＭＨＲＩＩへの結合について５５．３ｐＭのＫｄ値を有するモノクロナール３Ｃ２３Ｋ抗体）と接触させる前に、組織サンプルを慎重に事前処理することと関係する。サンプルを事前処理すれば、細胞表面において発現されるＡＭＨＲＩＩ分子の検出試薬に対する利用能を高めることができるはずである。実例として、本明細書の実施例において示されるように、染色法は、特別な工程、例えば（ｉ）マイクロウェーブ発生源への曝露により高温で脱蝋する工程、と、（ｉｉ）ＡＭＨＲＩＩ結合性の試薬、例えばストレプトアビジンコンジュゲート検出可能試薬とその後複合体化しうるビオチン化された抗ＡＭＨＲＩＩ抗体、の結合により生み出されるシグナルを増幅する為のシステムとの適切な組み合わせを含む。脱蝋する事前処理工程は、事前の組織固定工程に起因する検出シグナル消衰効果を逆転させるのに重要と思われる。本発明者等は、ＡＭＨＲＩＩ検出可能性は、組織固定工程で使用されるホルマリンの作用に対して特に敏感であることを明らかにした。
【００５８】
本発明の文脈において、これは、ＡＭＨＲＩＩ結合性剤、例えば抗ＡＭＨＲＩＩ抗体は、頭頸部癌に作用された患者を処置することよりも、結腸癌に作用された患者を処置することの方がより高頻度で有用な処置剤となることを意味する。これは、ＡＭＨＲＩＩ結合性剤は、頭頸部癌に作用された患者の処置において意義のある処置剤でありうるものの、特定の患者が本明細書に記載されているＡＭＨＲＩＩ結合性剤による投与を受けることを判断する際には、腫瘍由来の癌細胞のＡＭＨＲＩＩ発現について予め試験するのが好ましいことも意味する。
【００５９】
更に、本発明者等は、抗ＡＭＨＲＩＩ抗体が、非婦人科癌を処置する為に有利に使用されうることを明らかにした。
【００６０】
従って、本発明者等は、ＡＭＨＲＩＩを標的とする医薬品が、非婦人科癌を予防又は処置する為の新規な処置ツールとして有用であることを、本明細書において明らかにした。
【００６１】
本発明に従うと、「を含む（comprising）」という表現、例えば「の工程を含む」、は、「からなる（consisting  of）」、例えば「の工程からなる」、としても理解され、「からなる（consisting  of）」、例えば「の工程からなる」、としても理解される。
【００６２】
ＡＭＨ受容体（ＡＭＨＲ又はＡＭＨＲ２又はＡＭＨＲＩＩ）は、ＴＧＦ−ベータ関連タンパク質に対するＩＩ型受容体のファミリーに属する単一の膜貫通ドメインを有するセリン／トレオニンキナーゼである。ＩＩ型受容体はそれ自体リガンドと結合するが、しかしシグナル伝達にはＩ型受容体の存在を必要とする。Ｉｍｂｅａｕｄら（1995年,  Nature  Genet,  Vol.  11:  382-388）は、ヒトＡＭＨＩＩ型受容体遺伝子をクローン化した。ヒトＡＭＨ受容体タンパク質は、５７３個のアミノ酸からなる：５７３個のアミノ酸のうちの１７、１２７、２６、及び４０３個が、シグナル配列、細胞外ドメイン（ＥＣＤ：extracellular  domain）、膜貫通ドメイン、及びセリン／トレオニンキナーゼドメインを含有する細胞内ドメインをそれぞれ形成する。
【００６３】
本明細書で使用される場合、語「ＡＭＨＲＩＩ」は、配列番号１７のアミノ酸配列を有するヒト抗ミュラー管ホルモンＩＩ型受容体を云う。
【００６４】
抗ミュラー管ホルモンホルモン受容体（ＡＭＨＲＩＩ）の発現は、免疫骨髄細胞の大規模な浸潤を受ける腫瘍である婦人科癌の技術分野においてすでに記載されている。ＡＭＨＲＩＩは、婦人科癌を処置する為の標的分子として識別されている。ＡＭＨＲＩＩを標的とする抗体が、このような癌を処置する為の処置ツールとして製造されている。卵巣癌を処置する為の、ＰＣＴ出願番号  国際公開第２００８／０５３３３０号、及び同第２０１１／１４１６５３号に記載されている１２Ｇ４抗ＡＭＨＲＩＩ抗体及びその変異体、並びにＰＣＴ出願に記載されている３Ｃ２３Ｋ抗ＡＭＨＲＩＩ抗体が特に引用されうる。抗ＡＭＨＲＩＩ抗体薬物コンジュゲートの使用による卵巣癌に対する特異的処置戦略について開示したＰＣＴ出願番号  国際公開第２０１７／０２５４５８号がまた言及されうる。
【００６５】
本発明者等は、ＡＭＨＲＩＩが、結腸癌、肝臓癌、肝細胞癌、精巣癌、甲状腺癌、胃癌、胃腸癌、膀胱癌、膵癌、頭頸部癌、腎臓癌、脂肪肉腫、線維肉腫、胸膜中皮腫、メラノーマ、肉腫、脳癌、骨癌、乳癌、前立腺癌、及び白血病を含む様々なヒト癌細胞の表面において発現していることを、このたび思いがけず見出した。本発明者等は、（ｉ）癌細胞によるＡＭＨＲＩＩ遺伝子発現と、（ｉｉ）同じ癌細胞による細胞膜ＡＭＨＲＩＩタンパク質発現との間に関連性が認められないことをまた見出した。
【００６６】
ヒト癌細胞によるＡＭＨＲＩＩ表面発現に関する本発明者等の知見は、癌患者から予め得られたヒト固形腫瘍組織サンプルを使用して実施された、抗ＡＭＨＲＩＩ抗体による免疫組織化学アッセイに特に由来する。また、ヒト癌細胞によるＡＭＨＲＩＩ表面発現に関係する本発明者等の知見は、マウスを対象として、ヒト一次癌細胞の異種移植に由来する腫瘍組織サンプルにおいて実施された、抗ＡＭＨＲＩＩ抗体による免疫組織化学アッセイからも得られた。
【００６７】
本発明者等は、抗ＡＭＨＲＩＩ抗体は、腫瘍細胞表面においてＡＭＨＲＩＩを発現する非婦人科ヒト癌、特に本明細書で開示されるＡＭＨＲＩＩ発現癌を処置する為に有用であることも明らかにした。特に、良好な抗癌活性が、細胞毒性分子にコンジュゲートした抗ＡＭＨＲＩＩ抗体を含むイムノコンジュゲートにより明らかにされている。
【００６８】
本発明者等は、当技術分野においてＡＭＨＲＩＩ発現性の婦人科癌に対して証明済みの抗腫瘍能力を有した抗ＡＭＨＲＩＩ抗体は、ＡＭＨＲＩＩ発現性の非婦人科癌、特に本明細書で開示されるＡＭＨＲＩＩ発現癌の予防又は処置にも有用であることを明らかにした。
【００６９】
より正確には、３Ｃ２３Ｋと命名された抗ＡＭＨＲＩＩ抗体は、ヒト肝臓癌に対してイン・ビボ（ｉｎ  ｖｉｖｏ）で抗腫瘍活性を発揮することが、本明細書の実施例において明らかにされる。重要なこととして、ヒト肝臓癌に対する抗ＡＭＨＲＩＩ３Ｃ２３Ｋ抗体のイン・ビボ（ｉｎ  ｖｉｖｏ）の抗腫瘍活性は、肝臓癌、特に肝細胞癌を処置する為の周知である抗癌剤であるソラフェニブと同程度の活性である。
【００７０】
なお更に、本明細書の実施例はまた、抗ＡＭＨＲＩＩ  ３Ｃ２３Ｋ抗体は、イン・ビボ（ｉｎ  ｖｉｖｏ）で検出可能な毒性イベントを誘発しないが、同じイン・ビボ（ｉｎ  ｖｉｖｏ）条件でソラフェニブで処置すると、有意な体重減少を引き起こしたことを明らかにした。
【００７１】
また更に、本明細書に開示されている通り、抗ＡＭＨＲＩＩ  ３Ｃ２３Ｋ抗体の毒性のイムノコンジュゲート誘導体（ＡＤＣは抗体薬物コンジュゲートを表す）は、細胞表面においてＡＭＨＲＩＩタンパク質を発現する癌に対する良好な抗癌活性を発揮する。
【００７２】
従って、本発明は、結腸癌、肝臓癌、肝細胞癌、精巣癌、甲状腺癌、胃癌、胃腸癌、膀胱癌、膵癌、頭頸部癌、腎臓癌、脂肪肉腫、線維肉腫、胸膜中皮腫、メラノーマ、肉腫、脳癌、骨癌、乳癌、前立腺癌、及び白血病を含む癌の群から選択される癌の予防又は処置に使用する為のヒトＡＭＨＲＩＩ結合性剤に関する。
【００７３】
本発明はまた、結腸癌、肝臓癌、肝細胞癌、精巣癌、甲状腺癌、胃癌、胃腸癌、膀胱癌、膵癌、頭頸部癌、腎臓癌、脂肪肉腫、線維肉腫，胸膜中皮腫、メラノーマ、肉腫、脳癌、骨癌、乳癌、前立腺癌、及び白血病含む癌の群から選択される癌の予防又は処置を目的とする医薬を調製する為のヒトＡＭＨＲＩＩ結合性剤の使用に関する。
【００７４】
本発明はまた、結腸癌、肝臓癌、肝細胞癌、精巣癌、甲状腺癌、胃癌、胃腸癌、膀胱癌、膵癌、頭頸部癌、腎臓癌、脂肪肉腫、線維肉腫、胸膜中皮腫、メラノーマ、肉腫、脳癌、骨癌、乳癌、前立腺癌、及び白血病を含む癌の群から選択される癌を予防又は処置する為の方法であって、それを必要としている個体に本明細書で開示されるＡＭＨＲＩＩ結合性剤を投与する工程を含む上記方法に関する。
【００７５】
本発明に従い使用されうるＡＭＨＲＩＩ結合性剤は、ＭＩＳ天然リガンド活性の模倣を必要としない。従って、本発明に従い使用されうるＡＭＨＲＩＩ結合性剤は、それがＡＭＨＲＩＩに結合する際に、何らかの細胞シグナル伝達経路を活性化させるという必要性は認められない。むしろ、上記薬剤は、抗ＡＭＨＲＩＩ細胞毒性免疫コンジュゲート、ＡＤＣＣ誘発性若しくはＡＤＣ誘発性の抗ＡＭＨＲＩＩ抗体、又はＡＭＨＲＩＩ結合性の操作された受容体を発現するＣＡＲ  Ｔ細胞を含む、細胞毒性誘発活性、例えば細胞毒性誘発物、をもっぱら目的として使用されるので、上記薬剤がＡＭＨＲＩＩに結合する能力が唯一必要とされる。
【００７６】
ＡＭＨＲＩＩ結合性剤
本明細書で使用される場合、ＡＭＨＲＩＩ結合性剤は、ＡＭＨＲＩＩに特異的に結合する任意の薬剤を含み、適切に提示された場合、上記薬剤が細胞膜発現型ＡＭＨＲＩＩに結合した後に、細胞表面においてＡＭＨＲＩＩを発現する標的細胞の死を引き起こす。
【００７７】
本明細書に記載されている癌の処置で使用されるＡＭＨＲＩＩ結合性剤は、本明細書において「処置用ＡＭＨＲＩＩ結合性剤」とも呼ばれうる。
【００７８】
一般的に、ＡＭＨＲＩＩ結合性剤は、ＡＭＨＲＩＩに特異的に結合するタンパク質又は核酸を包含する。
【００７９】
ＡＭＨＲＩＩ結合性タンパク質は、抗ＡＭＨＲＩＩ抗体、又は抗ＡＭＨＲＩＩ抗体のＡＭＨＲＩＩ結合性フラグメントに由来する１以上の相補性決定領域（ＣＤＲ：Complementary  Determining  Region）を含むタンパク質を主に包含し、上記ＡＭＨＲＩＩ結合性タンパク質は、操作された細胞、例えばＣＡＲ−Ｔ細胞、ＣＡＲ  ＮＫ  Ｔ細胞又はＣＡＲマクロファージ、により、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ：Chimeric  Antigen  Receptor）として発現されうるものと理解される。
【００８０】
ＡＭＨＲＩＩ結合性核酸は、ＡＭＨＲＩＩに対するその特異的結合特性について特に選択された核酸アプタマーを主に包含する。
【００８１】
幾つかの好ましい実施態様において、ＡＭＨＲＩＩ結合性剤は、抗ＡＭＨＲＩＩ抗体又はそのＡＭＨＲＩＩ結合性フラグメントである。
【００８２】
最も好ましい実施態様において、ＡＭＨＲＩＩ結合性剤は、抗ＡＭＨＲＩＩモノクロナール抗体又はそのＡＭＨＲＩＩ結合性フラグメントである。
【００８３】
これらの好ましい実施態様に従うと、抗ＡＭＨＲＩＩモノクロナール抗体は、キメラ抗ＡＭＨＲＩＩ抗体、ヒト化抗ＡＭＨＲＩＩ抗体、及びヒトＡＭＨＲＩＩ抗体、並びにＡＭＨＲＩＩ結合性フラグメント、及びそのＡＭＨＲＩＩ結合性誘導体を包含する。
【００８４】
様々なＡＭＨＲＩＩ抗体が、当技術分野において公知であり、且つＡＭＨＲＩＩ結合性剤として本発明に従い使用されうる。本発明を実施する為に、当業者は、例証的には、Ｃｒｅａｔｉｖｅ  Ｂｉｏｌａｂｓ社によって参照番号ＭＨＨ−５７として上市されている組換えヒト抗ＡＭＨＲＩＩを使用しうる。
【００８５】
幾つかの実施態様において、本発明に従い使用されうる抗ＡＭＨＲＩＩ抗体は、ＰＣＴ出願番号  国際公開第２００８／０５３３３０号で開示されるヒト化１２Ｇ４抗体である。
【００８６】
幾つかのその他の実施態様において、上記抗ＡＭＨＲＩＩ抗体は、ＰＣＴ出願番号  国際公開第２０１１／１４１６５３号に記載されているヒト化抗体であり、そのヒト化抗体は３Ｃ２３抗体並びにその変異体を含み、その変異体は３Ｃ２３Ｋヒト化抗体を含む。
【００８７】
なお更なる実施態様において、上記抗ＡＭＨＲＩＩ抗体は、ＰＣＴ出願番号  国際公開第２０１７／０２５４５８号に記載されている抗体である。これらの更なる実施態様に従うと、ＰＣＴ出願番号  国際公開第２０１７／０２５４５８号は、上記抗ＡＭＨＲＩＩ抗体が細胞毒性剤とリンクしている抗体薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）の形態にあるＡＭＨＲＩＩ結合性剤を開示した。
【００８８】
ミュラー管ホルモンＩＩ型受容体に対するモノクロナール抗体（及びそのヒト化誘導体）が、卵巣癌の処置を目的として当技術分野において開発されている（本明細書により参考としてそのまま援用されている欧州特許第２０９７４５３Ｂ１号明細書及び米国特許第８，２７８，４２３号明細書を参照）。
【００８９】
本発明に従い使用されうるＡＭＨＲＩＩ結合性剤の中でも、当業者は、モノクロナール抗体１２Ｇ４（ｍＡｂ  １２Ｇ４）、又はＡＤＣを形成する為に薬物若しくは検出可能な標識と共に誘導体化されたそのような抗体を含む、そのキメラ若しくはヒト化変異体を使用しうる。ｍＡｂ１２Ｇ４を産生するハイブリドーマは、２００６年９月２６日付けのブダペスト条約の合意に基づき、Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ  Ｎａｔｉｏｎａｌｅ  ｄｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅｓ  ｄｅ  Ｍｉｃｒｏｏｒｇａｎｉｓｍｅｓ（ＣＮＣＭ、パスツール研究所、２５  ｒｕｅ  ｄｕ  Ｄｏｃｔｅｕｒ  Ｒｏｕｘ、７５７２４  Ｐａｒｉｓ  Ｃｅｄｅｘ  １５、フランス）に保管されており、ＣＮＣＭ寄託番号１−３６７３を有する。ｍＡｂ１２Ｇ４の軽鎖及び重鎖の可変ドメインは、ｍＡｂ  １２Ｇ４の相補性決定領域（ＣＤＲ）と同様に配列決定されている（本明細書により参考としてそのまま援用されている欧州特許第２０９７４５３Ｂ１号明細書及び米国特許第８，２７８，４２３号明細書を参照）。ｍＡｂ  １２Ｇ４及びそのキメラ又はヒト化変異体は、本明細書に開示されている通り、ＡＤＣの製造で使用可能である。
【００９０】
ＰＣＴ出願番号  ＰＣＴ／ＦＲ２０１１／０５０７４５号（国際公開番号  国際公開第２０１１／１４１６５３号）、及び米国特許第９，０１２，６０７号明細書は、そのそれぞれが本明細書により参照によってそのまま組み込まれており、マウス１２Ｇ４抗体に由来する新規のヒト化抗体について開示する。このようなヒト化抗体は、本発明の目的に照らし、ＡＭＨＲＩＩ結合性剤として使用されうる。ＰＣＴ出願番号  国際公開第２０１１／１４１６５３号で開示される特別な実施態様において、抗体は、３Ｃ２３及び３Ｃ２３Ｋとして識別される抗体である。このような抗体の核酸配列及びポリペプチド配列は、本明細書において配列番号１〜１６として提供される。本発明の幾つかの観点において、目的とする抗ＡＭＨＲＩＩ抗体は、「配列番号〜を含む軽鎖、及び配列番号〜を含む重鎖を含む」と呼ばれうる。従って、様々な実施態様において、特に好ましい抗体は、ＡＤＣの生成用を含め、
ａ）配列番号２を含む軽鎖及び配列番号４を含む重鎖（リーダーを有さない３Ｃ２３  ＶＬ及びＶＨ配列）；
ｂ）配列番号６を含む軽鎖及び配列番号８を含む重鎖（リーダーを有さない３Ｃ２３Ｋ  ＶＬ及びＶＨ配列）；
ｃ）配列番号１０を含む軽鎖及び配列番号１２を含む重鎖（リーダーを有さない３Ｃ２３軽鎖及び重鎖）；
ｄ）配列番号１４を含む軽鎖及び配列番号１６を含む重鎖（リーダーを有さない３Ｃ２３Ｋ軽鎖及び重鎖）
を含む。
【００９１】
その他の抗体（例えば、ヒト化又はキメラ抗体）は、図１Ａ及び図１Ｂに提示される重鎖及び軽鎖配列（例えば、抗体、例えば図内に開示されるＣＤＲ配列を含有するヒト化又はキメラ抗体）に基づくことができ、ＡＤＣの形成を含め、それを目的として抗ＭＡＨＲＩＩ結合性剤として使用されることができる。従って、本発明はまた、下記の配列を含む（又はそれからなる）複数のＣＤＲを含む／含有する抗ＡＭＨＲＩＩ抗体の使用に関する：
ＣＤＲＬ−１：ＲＡＳＸ１Ｘ２ＶＸ３Ｘ４Ｘ５Ａ（配列番号６５）、ここで、Ｘ１及びＸ２は独立してＳ又はＰであり、Ｘ３はＲ又はＷ又はＧであり、Ｘ４はＴ又はＤであり、及びＸ５はＩ又はＴである；
ＣＤＲＬ−２は、ＰＴＳＳＬＸ６Ｓ（配列番号６６）であり、ここで、Ｘ６はＫ又はＥである；並びに、
ＣＤＲＬ−３は、ＬＱＷＳＳＹＰＷＴ（配列番号６７）である；
ＣＤＲＨ−１は、ＫＡＳＧＹＸ７ＦＴＸ８Ｘ９ＨＩＨ（配列番号６８）であり、ここで、Ｘ７はＳ又はＴであり、Ｘ８はＳ又はＧであり、及びＸ９はＹ又はＮである；
ＣＤＲＨ−２は、ＷＩＹＰＸ１０ＤＤＳＴＫＹＳＱＫＦＱＧ（配列番号６９）であり、ここで、Ｘ１０はＧ又はＥである、並びに、
ＣＤＲＨ−３は、ＧＤＲＦＡＹ（配列番号７０）である。
【００９２】
本発明はまた、本明細書において特定されている非婦人科癌を処置する為の、そのような抗ＡＭＨＲＩＩ抗体を使用して生成されるＡＤＣの使用に関する。
【００９３】
本出願の範囲内にある抗体（例えば、キメラ又はヒト化の抗体）は、下記の表に開示される抗体を含む：代替的には、ＡＭＨＲ−ＩＩに特異的に結合するヒトモノクロナール抗体が、ＡＤＣを調製する為に使用されることができる。３Ｃ２３Ｋ抗体は、
ＶＨアミノ酸配列について配列番号１９
ＶＬアミノ酸配列について配列番号３６
によって定義される。
【００９４】
下記の表１は、本発明に従い使用されうる抗ＡＭＨＲＩＩヒト化抗体をリストする。
【００９５】
【表１】
2020516668.tif 000002
2020516668.tif 000003
2020516668.tif 000004
【００９６】
抗ＡＭＨＲＩＩ抗体、抗ＡＭＨＲＩＩ抗体のＡＭＨＲＩＩ結合性フラグメント又はＡＭＨＲＩＩ結合性誘導体
語「抗体」は、最も広い意味で使用され、モノクロナール抗体（完全長又は天然のモノクロナール抗体を含む）、ポリクロナール抗体、多価抗体、多重特異性抗体（例えば、二重特異性抗体）、及び所望の生物学的活性を示す限り、抗体フラグメント（下記参照）を含む。
【００９７】
従って、本明細書で使用される場合、語「抗体」は、例として、限定されることなく、任意の脊椎動物、例えば哺乳動物、例えばヒト、ヤギ、ウサギ、及びマウス、において免疫応答期間中に産生されるＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ、及びＩｇＭ、その組み合わせ、及び類似した分子、並びに非哺乳動物の種、例えばサメ免疫グロブリン、を含む、免疫グロブリン又は免疫グロブリン様の分子を全体として指す。別途特に指摘されない限り、語「抗体」は、ＡＭＨＲＩＩに特異的に結合し、その他の分子（すなわち、ＡＭＨＲＩＩとは無関係である分子）との結合を実質的に排除する天然の免疫グロブリン及び「抗体フラグメント」又は「抗原結合性フラグメント」を含む。語「抗体」はまた、遺伝子操作された形態、例えばキメラ抗体（例えば、ヒト化マウス抗体）、ヘテロコンジュゲート抗体（例えば、二重特異性抗体）、を含む。Ｐｉｅｒｃｅ社のカタログ及びハンドブック、１９９４−１９９５（Ｐｉｅｒｃｅ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｃｏ．社、Ｒｏｃｋｆｏｒｄ、１１１）；Kuby,  J.,  Immunology,  7th  Ed.,  W.H.  Freeman  &  Co.,  New  York,  2013年をまた参照。
【００９８】
本明細書で使用される場合、語「モノクロナール抗体」は、実質的に均質な抗体の集団から得られる抗体を意味し、すなわち、集団を構成する個々の抗体は、微量に存在しうる自然に生じる突然変異の可能性はあるものの、それを除き同一である。モノクロナール抗体は、きわめて特異的であり、単一の抗原を標的とする。更に、異なる決定要素（エピトープ）を標的とする異なる抗体を一般的に含むポリクロナール抗体調製物とは対照的に、各モノクロナール抗体は、抗原上の単一の決定要素を標的とする。修飾語「モノクロナール」は、任意の特別な方法による抗体の製造を必要とするとは解釈されない。例えば、本発明に従って使用されるモノクロナール抗体は、Kohler  et  al,  Nature  256:495  (1975年)により最初に記載されたハイブリドーマ法により作成されうる、又は組換えＤＮＡ法により作成されうる（例えば、米国特許第４，８１６，５６７号明細書を参照）。「モノクロナール抗体」は、例えば、Clackson  et  al,  Nature  352:624-628  (1991年)  or  Marks  et  al,  J.  MoI  Biol.  222:581-597  (1991年)に記載されている技術を使用してファージ抗体ライブラリーからも単離されうる。
【００９９】
語「抗体フラグメント」は、天然の抗体の一部分を云い、また天然の抗体の抗原決定可変領域を云う。抗体フラグメントの例は、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、及びＦｖフラグメント、直鎖抗体、ｓｃＦｖ抗体、及び抗体フラグメントから形成された多重特異性抗体を含むが、これらに限定されない。
【０１００】
本明細書で使用される場合、「抗体重鎖」は、抗体が自然に生じる立体構造を有するとき、その全抗体分子中に存在する２種類のポリペプチド鎖のうちのより大きな方を云う。
【０１０１】
本明細書で使用される場合、「抗体軽鎖」は、抗体が自然に生じる立体構造を有するとき、その全抗体分子中に存在する２種類のポリペプチド鎖のうちのより小さい方を云い、κ及びλ軽鎖は２つの主要な抗体軽鎖アイソタイプを云う。
【０１０２】
本明細書で使用される場合、語「相補性決定領域」又は「ＣＤＲ」は、特定の抗原を認識し、それに結合する抗体の２つの可変性の鎖（重鎖及び軽鎖）の部分を云う。ＣＤＲは、可変性の鎖の最も可変性の部分であり、抗体にその特異性を付与する。可変性の重鎖（ＶＨ）及び可変性の軽鎖（ＶＬ）のそれぞれには３つのＣＤＲが存在し、従って抗体分子１個当たり合計６つのＣＤＲが存在する。ＣＤＲは、抗原のエピトープと結合する役割を主に有する。各鎖のＣＤＲは、ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３と一般的に呼ばれ、Ｎ末端から開始し連続して番号付けされ、また所定のＣＤＲが位置する鎖によっても識別されるのが一般的である。従って、ＶＨＣＤＲ３は、それが見出される抗体の重鎖の可変ドメインに位置する一方、ＶＬＣＤＲ１は、それが見出される抗体の軽鎖の可変ドメインに由来するＣＤＲ１である。ＬＨＲと結合する抗体は、特定のＶＨ領域及びＶＬ領域の配列、従って特定のＣＤＲ配列を有する。異なる特異性（すなわち、異なる抗原に対する異なる結合性部位）を有する抗体は、異なるＣＤＲを有する。抗体間で異なるのはＣＤＲであるが、ＣＤＲ内の限定された数のアミノ酸位置のみが抗原結合に直接関与する。ＣＤＲ内のこのような位置は、特異性決定残基（ＳＤＲ：specificity  determining  residue）と呼ばれる。
【０１０３】
「フレームワーク領域」（以下、ＦＲ）は、ＣＤＲ残基以外の可変ドメイン残基である。各可変ドメインは、ＦＲｌ、ＦＲ２、ＦＲ３、及びＦＲ４として識別される４つのＦＲを一般的に有する。ＣＤＲが、Ｋａｂａｔに従い定義される場合、軽鎖ＦＲ残基は残基１〜２３（ＬＣＦＲ１）、３５〜４９（ＬＣＦＲ２）、５７〜８８（ＬＣＦＲ３）、及び９８〜１０７（ＬＣＦＲ４）あたりに配置され、また重鎖ＦＲ残基は、重鎖残基内の残基１〜３０（ＨＣＦＲ１）、３６〜４９（ＨＣＦＲ２）、６６〜９４（ＨＣＦＲ３）、及び１０３〜１１３（ＨＣＦＲ４）あたりに配置される。
【０１０４】
「単鎖Ｆｖ」又は「ｓｃＦｖ」抗体フラグメントは、抗体のＶＨ及びＶＬドメインを含み、これらのドメインは、単一のポリペプチド鎖中に存在する。一般的に、Ｆｖポリペプチドは、ＶＨドメインとＶＬドメインとの間にポリペプチドリンカーを更に含み、同リンカーはｓｃＦｖが抗原と結合する為の所望の構造を形成するのを可能にする。ｓｃＦｖをレビューするには、Pluckthun  in  The  Pharmacology  of  Monoclonal  Antibodies,  VoI  113,  Rosenburg  and  Moore  eds.  Springer-  Verlag,  New  York,  pp.  269-315  (1994年)を参照すること。
【０１０５】
語「ダイアボディ」は、２つの抗原結合性部位を有する小さな抗体フラグメントを云い、そのフラグメントは、同一のポリペプチド鎖（ＶＨ及びＶＬ）内で、軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）と繋がった重鎖可変ドメイン（ＶＨ）を含む。同一の鎖上において２つのドメイン間で対形成可能となるには短すぎるリンカーを使用することにより、それらのドメインは、別の鎖の相補的なドメインと対形成することを強いられ、２つの抗原結合性部位を創出する。ダイアボディは、例えば、欧州特許第４０４，０９７号明細書；国際公開第９３／１１１６１号；及びHollinger  et  al,  Proc.  Natl.  Acad.  Sci.  USA,  90:6444-6448  (1993年)により十分に記載されている。
【０１０６】
ダイアボディ又は二重特異性抗体は、免疫グロブリンＧ（ＩｇＧ）様分子と非ＩｇＧ様分子の２つの分類に概ね分割されることができる。ＩｇＧ様ｂｓＡｂは、Ｆｃ媒介式のエフェクター機能、例えば抗体依存性細胞媒介性細胞毒性（ＡＤＣＣ：antibody-dependent  cell-mediated  cytotoxicity）、補体依存性細胞毒性（ＣＤＣ：complement-dependent  cytotoxicity）、及び抗体依存性細胞食作用（ＡＤＣＰ：antibody-dependent  cellular  phagocytosis）、を保持する（Spiess  et  al.,  2015年,  Mol  Immunol.,  Vol.  67(2)  :  95-106）。ｂｓＡｂのＦｃ領域は、精製を容易にし、また溶解度及び安定性を改善する。ＩｇＧ様フォーマットの二重特異性抗体は、そのより大きなサイズ及びＦｃＲｎ媒介式のリサイクリングに起因してより長い血清半減期を通常有する（Kontermann  et  al.,  2015年,  Bispecific  antibodies.  Drug  Discov  Today  Vol.  20(7)  :  838-47）。非ＩｇＧ様のｂｓＡｂは、サイズがより小型であり、組織貫通性が強化されている（Kontermann  et  al.,  2015年,  Bispecific  antibodies.  Drug  Discov  Today  Vol.  20(7)  :  838-47）。
【０１０７】
幾つかの好ましい実施態様に従うと、本発明に従う二重特異性抗体は、（ｉ）ＡＭＨＲＩＩと結合する第１の抗原結合性部位、及び（ｉｉ）ＡＭＨＲＩＩとは異なる標的抗原、特に癌細胞又は腫瘍微環境の免疫細胞、例えばＴ細胞、ＮＫ又はマクロファージ、により発現されうる標的抗原と結合する第２の抗原結合性部位を備える。幾つかの実施態様において、そのような二重特異性抗体では、上記第２の抗原結合性部位は、ＣＤ３である標的抗原と結合し、Ｔ細胞の関与を可能にする。この標的抗原は、ＰＤＬ１がＴ細胞又はＣＤ１６をロック解除してＮＫ又はマクロファージを活性化させることも可能にする。
【０１０８】
本明細書で定義されるモノクロナール抗体は、重鎖及び／又は軽鎖の部分が、特定の種に由来する、又は特定の抗体クラス若しくはサブクラスに属する抗体内の対応する配列と同一又は相同である一方、鎖（複数可）の残りの部分は、別の種に由来する、又は別の抗体クラス若しくはサブクラスに属する抗体内の対応する配列と同一又は相同である「キメラ」抗ＡＭＨＲＩＩ抗体（免疫グロブリン）、並びに所望の生物学的活性を示す限り、そのような抗体のフラグメントを特に含む（米国特許第４，８１６，５６７号明細書；及びMorrison  et  al.,  Proc.  Natl.  Acad.  Sci.  USA  81  :6851-6855  (1984年））。
【０１０９】
本明細書で定義されるモノクロナール抗体は、ヒト化抗ＡＭＨＲＩＩ抗体も含む。ヒト以外（例えば、マウス）の抗体の「ヒト化」形態は、ヒト以外の免疫グロブリンに由来する最低限度の配列を含有するキメラ抗体である。大部分において、ヒト化抗体は、レシピエントの高度可変領域に由来する残基が、所望の特異性、親和性、及び能力を有するヒト以外の種（ドナー抗体）、例えばマウス、ラット、ウサギ又は非ヒト霊長類、の高度可変領域に由来する残基に置き換わっているヒト免疫グロブリン（レシピエント抗体）である。幾つかの事例では、ヒト免疫グロブリンのＦｖフレームワーク領域（ＦＲ）残基は、対応するヒト以外の残基に置き換わっている。更に、ヒト化抗体は、レシピエント抗体又はドナー抗体において見出されない残基を含みうる。このような改変は、抗体性能を更に精緻化する為になされる。一般的に、ヒト化抗体は、高度可変ループのすべて又は実質的にすべてが、ヒト以外の免疫グロブリンの高度可変ループに対応し、ＦＲ領域のすべて又は実質的にすべてが、ヒト免疫グロブリン配列のＦＲ領域である、少なくとも１つ、一般的には２つの可変ドメインの実質的にすべてを含む。ヒト化抗体は、免疫グロブリン定常領域（Ｆｃ）、一般的にはヒト免疫グロブリンのＦｃの少なくとも一部分も任意選択で含む。更なる詳細については、Jones  et  al.,  Nature  321:522-525  (1986年);  Riechmann  et  al.,  Nature  332:323-329  (1988年);  and  Presta,  Curr.  Op.  Struct.  Biol.  2:593-596  (1992年)を参照すること。
【０１１０】
本明細書で定義されるモノクロナール抗ＡＭＨＲＩＩ抗体は、抗ＡＭＨＲＩＩヒト抗体を更に含む。「ヒト抗体」は、ヒトにより産生される抗体のアミノ酸配列に対応するアミノ酸配列を有し、及び／又は本明細書に開示されるヒト抗体を作成する為の任意の技術を使用して作成された抗体である。ヒト抗体のこの定義は、ヒト以外の抗原結合性残基を含むヒト化抗体を特に除外する。ヒト抗体は、当技術分野において公知の様々な技術を使用して製造されることができる。１つの実施態様において、ヒト抗体はファージライブラリーから選択され、その場合、ファージライブラリーがヒト抗体を発現する（Vaughan  et  al  Nature  Biotechnology  14:309-314  (1996年):  Sheets  et  al  Proc.  Natl.  Acad.  Sci.  95:6157-6162  (1998年））;  Hoogenboom  and  Winter,  J.  MoI.  Biol,  227:381  (1991年);  Marks  et  al,  J.  MoI.  Biol,  222:581  (1991年））。ヒト抗体は、ヒト免疫グロブリン遺伝子座を遺伝子導入動物、例えば内因性の免疫グロブリン遺伝子が部分的又は完全に不活性化されているマウスに導入することによっても作成されることができる。免疫を誘発すると、遺伝子の再配列、アセンブリ、及び抗体レパートリーを含むあらゆる点で、ヒトに認められるものに酷似しているヒト抗体生成が観察される。このアプローチは、例えば、米国特許第５，５４５，８０７号明細書；同第５，５４５，８０６号明細書；同第５，５６９，８２５号明細書；同第５，６２５，１２６号明細書；同第５，６３３，４２５号明細書；同第５，６６１，０１６号明細書、及び下記の科学出版物：Marks  et  al.,  Bio/Technology  10:  779-783  (1992年);  Lonberg  et  al.,  Nature  368:  856-859  (1994年);  Morrison,  Nature  368:812-13  (1994年);  Fishwild  et  al.,  Nature  Biotechnology  14:  845-51  (1996年);  Neuberger,  Nature  Biotechnology  14:  826  (1996年);  Lonberg  and  Huszar,  Intern.  Rev.  Immunol.  13:65-93  (1995年)に記載されている。或いは、ヒト抗体は、標的抗原を標的とする抗体を産生するヒトＢリンパ球の不死化により調製されうる（そのようなＢリンパ球は個体から回収されうる、又はｉｎ  ｖｉｔｒｏで免疫化される場合もある）。例えば、Cole  et  al,  Monoclonal  Antibodies  and  Cancer  Therapy,  Alan  R.  Liss,  p.  77  (1985年);  Boerner  et  al.,  J.  Immunol,  147  (l):86-95  (1991年)；及び米国特許第５，７５０，３７３号明細書を参照すること。
【０１１１】
本明細書で使用される場合、「抗体突然変異体」又は「抗体変異体」は、種依存性抗体のアミノ酸残基のうちの１以上が改変されている、種依存性抗体のアミノ酸配列変異体を云う。そのような突然変異体は、種依存性抗体と１００％に欠ける配列同一性又は類似性を必然的に有する。１つの実施態様において、抗体突然変異体は、種依存性抗体の重鎖又は軽鎖可変ドメインのアミノ酸配列と少なくとも７５％、より好ましくは少なくとも８０％、より好ましくは少なくとも８５％、より好ましくは少なくとも９０％、及び最も好ましくは少なくとも９５％、のアミノ酸配列同一性又は類似性を有するアミノ酸配列を有する。この配列に関する同一性又は類似性は、配列をアライメントし、配列同一性のパーセント（％）が最大となるように、必要な場合にはギャップを導入した後の、種依存性抗体残基と同一である（すなわち、同一残基）、又は類似している（すなわち、一般的な側鎖特性に基づき同一の群に属するアミノ酸残基、下記参照）候補配列内のアミノ酸残基のパーセント（％）として本明細書において定義される。可変ドメイン外の抗体配列のＮ末端、Ｃ末端、又は内部において延長、欠損、又は挿入があっても、いずれも配列同一性又は類似性に影響を及ぼすとはみなされない。
【０１１２】
ヒト化抗体は、当技術分野において公知の技術に従い、ＣＤＲドメインをコードする核酸配列を取得し、ヒト化抗体を構築すること製造されうる。従来の組換えＤＮＡ及び遺伝子トランスフェクション技術に基づくヒト化抗体を製造する為の方法は当技術分野において周知である（例えば、Riechmann  L.  et  al.  1988年;  Neuberger  M  S.  et  al.  1985を参照）。抗体は、例えば、ＣＤＲ−グラフティング（欧州特許第２３９，４００号明細書；ＰＣＴ公報  国際公開第９１／０９９６７号；米国特許第５，２２５，５３９号明細書；同第５，５３０，１０１明細書；及び同第５，５８５，０８９明細書）、ベニヤリング又はリサーフェイシング（欧州特許第５９２，１０６号明細書；同第５１９，５９６号明細書；Padlan  E  A  (1991);  Studnicka  G  M  et  al.  (1994年);  Roguska  M  A.  et  al.  (1994年））、及びチェインシャフリング（米国特許第５，５６５，３３２号明細書）を含む、当技術分野において公知の様々な技術を使用してヒト化されることができる。そのような抗体を調製する為の一般的な組換えＤＮＡ技術も公知である（欧州特許出願  欧州特許第１２５０２３号明細書及び国際特許出願  国際公開第９６／０２５７６号を参照）。
【０１１３】
例えば、抗体の抗原依存性細胞媒介性細胞毒性（ＡＤＣＣ）及び／又は補体依存性細胞毒性（ＣＤＣ）を増強する為に、本明細書で定義される抗ＡＭＨＲＩＩ抗体をエフェクター機能に関して改変するのが望ましい場合もある。これは、抗体のＦｃ領域内に１以上のアミノ酸置換を導入することにより達成されうる。代替的又は付加的に、システイン残基（複数可）がＦｃ領域に導入され得、これによりこの領域における鎖間ジスルフィド結合形成が可能となる。そのように生成されるホモ二量体抗体は、改善した内部移行能力、並びに／又は増加した補体媒介式の細胞殺傷及び抗体依存性細胞性細胞毒性活性（ＡＤＣＣ）を有しうる。Caron  et  al,  J.  Exp  Med.  176:1191-1195  (1992年)  and  Shopes,  B.  J.  Immunol.  148:2918-2922  (1992)を参照。抗腫瘍活性が強化されたホモ二量体抗体は、Wolff  et  al.  Cancer  Research  53:2560-2565  (1993年)に記載されるように、ヘテロ二機能性架橋剤を使用しても調製されうる。或いは、デュアルＦｃ領域を有し、これにより強化された補体溶解及びＡＤＣＣ能力を有しうる抗体が操作されることができる。Stevenson  et  al.  Anti-  Cancer  Drug  Design  3:219-230  (1989年)を参照。国際公開第００／４２０７２号（Ｐｒｅｓｔａ，Ｌ．）は、ヒトエフェクター細胞の存在下でＡＤＣＣ機能が改善している抗体で、そのＦｃ領域内にアミノ酸置換を含む抗体について記載する。好ましくは、ＡＤＣＣが改善している抗体は、Ｆｃ領域の位置２９８、３３３、及び／又は３３４において置換を含む（Ｅｕの残基ナンバリング）。好ましくは、変化したＦｃ領域は、これらの位置の１、２、又は３箇所において置換を含む又はそれからなるヒトＩｇＧ１  Ｆｃ領域である。そのような置換は、ＣＩｑ結合及び／又はＣＤＣを増加させる置換（複数可）と組み合わせられる。
【０１１４】
ＣＩｑ結合性及び／又は補体依存性細胞毒性（ＣＤＣ）が変化している抗体は、国際公開第９９／５１６４２号、米国特許第６，１９４，５５１Ｂ１号、同第６，２４２，１９５Ｂ１号、同第６，５２８，６２４Ｂ１号、及び同第６，５３８，１２４号（Ｉｄｕｓｏｇｉｅら）に記載されている。抗体は、そのＦｃ領域のアミノ酸位置２７０、３２２、３２６、３２７、３２９、３１３、３３３、及び／又は３３４のうちの１以上においてアミノ酸置換を含む（Ｅｕの残基ナンバリング）。
【０１１５】
幾つかの実施態様において、ＡＭＨＲＩＩ結合性剤は、糖鎖工学によって操作された（glyco-engineered）抗ＡＭＨＲＩＩ抗体を含む。
【０１１６】
本明細書で使用される場合、語「糖鎖工学によって操作する（glycoengineering）」は、結合性タンパク質組成物のグリコフォームプロファイルを変化させる為の当該技術分野において承認されている任意の方法を云う。そのような方法は、宿主細胞（例えば、ＣＨＯ細胞）が異種のグリコシルトランスフェラーゼ又はグリコシダーゼを発現するように遺伝子操作され、その遺伝子操作された宿主細胞内で結合性タンパク質組成物を発現させることを含む。その他の実施態様において、糖鎖工学法は、特定のグリコフォームプロファイルに偏った条件下で宿主細胞を培養することを含む。
【０１１７】
本明細書で使用される場合、「糖鎖工学によって操作された抗体」は、（ｉ）ハイパーガラクトシル化Ｆｃフラグメントを含む抗体、（ｉｉ）アマンノシル化Ｆｃフラグメント含む、ハイポマンノシル化Ｆｃフラグメントを含む抗体、及び（ｉｉｉ）アフコシル化Ｆｃフラグメントを含む、ハイポフコシル化Ｆｃフラグメントを含む抗体を含む。本明細書で使用される場合、糖鎖工学によって操作されたフラグメンは、下記の変化したグリコシル化：（ｉ）ハイパーガラクトシレーション、（ｉｉ）ハイポマンノシレーション、及び（ｉｉｉ）ハイポフコシレーションのうちの１以上を含む群内から選択される変化したグリコシル化を有するＦｃフラグメントを含む。従って、本発明に従い使用される抗ＡＭＨＲＩＩ抗体に由来する、糖鎖工学によって操作されたＦｃフラグメンは、ハイパーガラクトシル化、ハイポマンノシル化、及びハイポフコシル化Ｆｃフラグメントの例を含む。
【０１１８】
当業者は、非改変型Ｆｃフラグメントよりも高い親和性を伴いながらＦｃ受容体に結合することが公知である、ハイパーガラクトシル化Ｆｃフラグメント、ハイポマンノシル化Ｆｃフラグメント、及びハイポフコシル化Ｆｃフラグメントを含む抗ＡＭＨＲＩＩ抗体を取得する為の周知技術を参照しうる。
【０１１９】
糖鎖工学によって操作された抗ＡＭＨＲＩＩ抗体は、「低フコース」Ｆｃフラグメントとも呼ばれるハイポフコシル化Ｆｃフラグメントを含む抗ＡＭＨＲＩＩ抗体を含む。
【０１２０】
イムノコンジュゲート、特に抗体薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）
本発明の為に使用されうるＡＭＨＲＩＩ結合性剤は、細胞毒性剤、例えば化学療法剤、毒素（例えば、細菌、真菌、植物、若しくは動物起源の酵素的に活性な毒素又はその断片）、又は放射性同位体（すなわち、ラジオコンジュゲート）、にコンジュゲートした、本明細書で定義される抗体を含む。そのような抗体コンジュゲートは、ＰＣＴ出願番号  国際公開第２０１７／０２５４５８号に記載されているコンジュゲートを含む。ＰＣＴ出願番号  国際公開第２０１７／０２５４５８号は、抗ＡＭＨＲＩＩ３Ｃ２３Ｋ抗体、並びに３Ｃ２３Ｋ  ＡＤＣコンジュゲートについて特に開示したが、それらについて、非婦人科ヒト癌に対するイン・ビボ（ｉｎ  ｖｉｖｏ）での抗癌活性が本明細書において明らかにされる。
【０１２１】
細胞毒性剤は、酵素的に活性な毒素を含む。使用されることができる酵素的に活性な毒素及びその断片は、ジフテリアＡ鎖、ジフテリア毒素の非結合性の活性な断片、エキソトキシンＡ鎖（緑膿菌（Pseudomonas  aeruginosa）由来）、リシンＡ鎖、アブリンＡ鎖、モデシンＡ鎖、α−サルシン、シナアブラギリ（Aleurites  fordii）タンパク質、ダイアンシンタンパク質、アメリカヤマゴボウ（Phytolacca  americana）タンパク質（ＰＡＰＩ、ＰＡＰＩＩ、及びＰＡＰ−Ｓ）、ニガウリ（momordica  charantia）阻害剤、クルシン、クロチン、サボンソウ（saponaria  officinalis）阻害剤、ゲロニン、ミトゲリン、レストリクトシン、フェノマイシン、エノマイシン、及びトリコセセンスを含む。
【０１２２】
様々な放射性核種が、ラジオコンジュゲート抗体を製造する為に利用可能である。
【０１２３】
抗体と細胞毒性剤とのコンジュゲートは、様々な二官能性タンパク質カップリング剤、例えばＰＣＴ出願番号  国際公開第２０１７／０２５４５８号において開示されているカップリング剤、を使用して作成される。
【０１２４】
抗ＡＭＨＲＩＩ  ＡＤＣ抗体コンジュゲートの好ましいイムノコンジュゲートは、ＰＣＴ出願番号  国際公開第２０１７／０２５４５８号に記載されているコンジュゲートである。
【０１２５】
ＣＡＲ  Ｔ細胞、ＣＡＲ  ＮＫ細胞、及びＣＡＲマクロファージを含むＣＡＲ細胞
幾つかの実施態様において、ヒトＡＭＨＲＩＩ結合性剤は、ＡＭＨＲＩＩ結合性受容体、又はＡＭＨＲＩＩ結合性受容体を発現する細胞、特にＡＭＨＲＩＩ結合性受容体を発現する、ＣＡＲ  Ｔ細胞、ＡＭＨＲＩＩ結合性受容体ＣＡＲ  ＮＫ細胞又はＡＭＨＲＩＩ結合性受容体を発現するＣＡＲマクロファージ、である。
【０１２６】
従って、幾つかの実施態様において、ヒトＡＭＨＲＩＩ結合性剤は、ＡＭＨＲＩＩ結合性の操作された受容体、最も好ましくは、そのＡＭＨＲＩＩ結合性領域が本明細書で開示されるモノクロナール抗ＡＭＨＲＩＩ抗体に由来する、ＡＭＨＲＩＩ結合性の操作された受容体、である。
【０１２７】
一般的に、ＡＭＨＲＩＩ結合性の操作された受容体は、（ｉ）細胞外ドメイン、（ｉｉ）膜貫通ドメイン、及び（ｉｉｉ）細胞内ドメインを含むキメラ抗原受容体（ＣＡＲ：Chimeric  Antigen  Receptor）から構成され、その場合、細胞外ドメインは、本明細書で開示される抗ＡＭＨＲＩＩモノクロナール抗体に由来するＡＭＨＲＩＩ結合性部分である。幾つかの実施態様において、上記ＡＭＨＲＩＩ結合性の操作された受容体の細胞外ドメインは、（ｉ）本明細書で開示される抗ＡＭＨＲＩＩモノクロナール抗体に由来するＣＤＲを含む抗体ＶＨ鎖、及び（ｉｉ）本明細書で開示される抗ＡＭＨＲＩＩモノクロナール抗体に由来するＣＤＲを含む抗体ＶＬ鎖を含む。幾つかの実施態様において、上記ＡＭＨＲＩＩ結合性の操作された受容体の細胞外ドメインは、本明細書で開示される抗ＡＭＨＲＩＩモノクロナール抗体のＶＨ鎖及びＶＬ鎖を含む。幾つかの実施態様において、上記ＡＭＨＲＩＩ結合性の操作された受容体の細胞外ドメインは、本明細書で開示される抗ＡＭＨＲＩＩモノクロナール抗体のＶＨ鎖及びＣＨ鎖に由来するＣＤＲをそれぞれ含むＳｃＦｖである。幾つかの実施態様において、上記ＡＭＨＲＩＩ結合性の操作された受容体の細胞外ドメインは、本明細書で開示される抗ＡＭＨＲＩＩモノクロナール抗体のＶＨ鎖及びＣＨ鎖をそれぞれ含むＳｃＦｖである。
【０１２８】
そのようなＡＭＨＲＩＩ結合性受容体を発現する細胞、特にそのようなＡＭＨＲＩＩ結合性受容体を発現する、ＣＡＲ  Ｔ細胞、ＣＡＲ  ＮＫ細胞又はＣＡＲマクロファージからなるＡＭＨＲＩＩ結合性剤、がまた本明細書に包含される。
【０１２９】
本明細書で使用される場合、語「キメラ抗原受容体」（ＣＡＲ）は、抗原に結合する能力を有する細胞外ドメイン、細胞外ドメインの起源であるポリペプチドとは異なるポリペプチドに由来する膜貫通ドメイン、及び少なくとも１つの細胞内ドメインを含む融合タンパク質を云う。「キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）」は、時に「キメラ受容体」、「Ｔ−ボディ」、又は「キメラ免疫受容体（ＣＩＲ：chimeric  immune  receptor）」と呼ばれる。「ＡＭＨＲＩＩに結合する能力を有する細胞外ドメイン」は、ＡＭＨＲＩＩに結合することができる任意のオリゴペプチド又はポリペプチドを意味する。「細胞内ドメイン」は、細胞内でシグナルを伝達して生物学的プロセスの活性化又は阻害を引き起こすドメインとして機能することが知られている任意のオリゴペプチド又はポリペプチドを意味する。「膜貫通ドメイン」は、細胞膜に分布することが知られており、また細胞外ドメインとシグナリングドメインとをリンクさせるように機能することができる任意のオリゴペプチド又はポリペプチドを意味する。キメラ抗原受容体は、細胞外ドメインと膜貫通ドメインとの間のリンカーとして機能する「ヒンジドメイン」を任意選択で含みうる。
【０１３０】
ＣＡＲ  Ｔ細胞は、単鎖抗体フラグメント（ｓｃＦｖ）又はリガンドがＴ細胞の活性化を促進する能力を有するＴ細胞シグナリングドメインに連結している、遺伝子操作された自系のＴ細胞である（Maher,  J.  (2012年)  ISRN  Oncol.2012:278093;  Curran,  K.J.  et  al.  (2012年)  J.  Gene  Med.14:405-415;  Fedorov,  V.D.  et  al.  (2014年)  Cancer  J.20:160-165;  Barrett,  D.M.  et  al.  (2014年)  Annu.  Rev.  Med.65:333-347）。
【０１３１】
「細胞内シグナリングドメイン」は、Ｔ細胞内部に見出される、又は見出されるように操作されたＣＡＲの部分を意味する。「細胞内シグナリングドメイン」は、Ｔ細胞の原形質膜内でＣＡＲを繋ぎ止める「膜貫通ドメイン」を含有する場合もあれば、含有しない場合もある。１つの実施態様において、「膜貫通ドメイン」及び「細胞内シグナリングドメイン」は、同一のタンパク質（例えば、ＣＤ３ζ）に由来するが、その他の実施態様において、細胞内シグナリングドメイン及び膜貫通ドメインは、異なるタンパク質に由来する（例えば、ＣＤ３ζの膜貫通ドメイン及びＣＤ２８分子の細胞内シグナリングドメイン、又はその逆）。
【０１３２】
「同時刺激エンドドメイン」は、Ｔ細胞同時刺激分子に由来する細胞内シグナリングドメイン又はそのフラグメントを意味する。Ｔ細胞同時刺激分子の非限定的なリストは、ＣＤ３、ＣＤ２８、ＯＸ−４０、４−１ＢＢ、ＣＤ２７、ＣＤ２７０、ＣＤ３０、及びＩＣＯＳを含む。同時刺激エンドドメインは、同一の又は異なる同時刺激エンドドメインに由来する膜貫通ドメインを含む場合もあれば、含まない場合もある。
【０１３３】
「細胞外抗原結合性ドメイン」は、ＡＭＨＲＩＩを特異的に認識し、それと結合するＣＡＲの部分を意味する。
【０１３４】
好ましい実施態様において、「細胞外結合性ドメイン」は、抗ＡＭＨＲＩＩモノクロナール抗体に由来する。例えば、「細胞外結合性ドメイン」は、モノクロナール抗体に由来するＦａｂドメインの全部又は一部を含みうる。特定の実施態様において、「細胞外結合性ドメイン」は、特定の抗ＡＭＨＲＩＩモノクロナール抗体の相補性決定領域を含む。なおも別の実施態様において、「細胞外結合性ドメイン」は、本明細書で定義される抗ＡＭＨＲＩＩモノクロナール抗体から得られる単鎖可変性フラグメント（ｓｃＦｖ）である。
【０１３５】
好ましい実施態様において、細胞外結合性ドメインは、本明細書に記載されている抗ＡＭＨＲＩＩモノクロナール抗体のうちの任意の１つ、特に３Ｃ２３Ｋ抗ＡＭＨＲＩＩモノクロナール抗体に由来する。
【０１３６】
Ｉ．細胞外抗原結合性ドメイン
１つの実施態様において、本発明のＣＡＲは、本明細書に記載されている抗ＡＭＨＲＩＩモノクロナール抗体のうちの１つに由来する細胞外抗原結合性ドメインを含む。
【０１３７】
１つの実施態様において、細胞外結合性ドメインは、下記のＣＤＲ配列を含む：
ＣＤＲＬ−１は、ＲＡＳＸ１Ｘ２ＶＸ３Ｘ４Ｘ５Ａ（配列番号６５）であり、ここで、Ｘ１及びＸ２は独立にＳ又はＰであり、Ｘ３はＲ又はＷ又はＧであり、Ｘ４はＴ又はＤであり、及びＸ５はＩ又はＴであり；
ＣＤＲＬ−２は、ＰＴＳＳＬＸ６Ｓ（配列番号６６）であり、ここで、Ｘ６は、Ｋ又はＥであり；
ＣＤＲＬ−３は、ＬＱＷＳＳＹＰＷＴ（配列番号６７）であり；
ＣＤＲＨ−１は、ＫＡＳＧＹＸ７ＦＴＸ８Ｘ９ＨＩＨ（配列番号６８）であり、ここで、Ｘ７はＳ又はＴであり、Ｘ８はＳ又はＧであり、Ｘ９はＹ又はＮであり、
ＣＤＲＨ−２は、ＷＩＹＰＸ１０ＤＤＳＴＫＹＳＱＫＦＱＧ（配列番号６９）であり、ここで、Ｘ１０はＧ又はＥであり、
ＣＤＲＨ−３は、ＧＤＲＦＡＹ（配列番号７０）である。
【０１３８】
ＩＩ．κＭａｂ  ｓｃＦｖのＶＬドメインとＶＨドメインとの間のリンカー
更なる実施態様において、抗ＡＭＨＲＩＩ  ＶＬは、可撓性リンカーを介して抗ＡＭＨＲＩＩ  ＶＨとリンクしている。特に、可撓性リンカーは、約１０〜３０個のアミノ酸（例えば、３０、２５、２０、１９、１８、１７、１６、１５、１４、１３、１２、１１、１０、９、８、７、６、又は５個のアミノ酸）からなるグリシン／セリンリンカーであり、構造（Ｇｌｙ４Ｓｅｒ）３を含む。
【０１３９】
ＩＩＩ．細胞外抗原結合性ドメインと細胞内シグナリングドメインとの間のスペーサー
細胞外抗原結合性ドメインは、「スペーサー」の使用により、細胞内シグナリングドメインとリンクしている。スペーサーは、抗原の認識及びそれとの結合が容易となるように抗原結合性ドメインが配向可能となるのに十分可撓性であるように設計される。スペーサーは、抗ＡＭＨＲＩＩ免疫グロブリンそれ自体に由来しうるが、またＩｇＧ１ヒンジ領域、又はＩｇＧのＣＨ２及び／若しくはＣＨ３領域を含みうる。
【０１４０】
ＩＶ．細胞内シグナリングドメイン
細胞内シグナリングドメインは、ＣＤ３鎖の全部又は一部を含む。ＣＤは、ＣＤ２４７としても知られているが、ＣＤ４又はＣＤ８のＴ細胞コレセプターと共に、細胞外抗原認識を細胞内シグナルカスケードに結びつける役割を有する。
【０１４１】
ＣＤ３ζシグナリングドメインを含めることに付加して、同時刺激分子を組み込むことにより、マウスモデル及び臨床トライアルにおいてＣＡＲ  Ｔ細胞活性が増強することが明らかにされている。ＣＤ２８、４−ＩＢＢ、ＩＣＯＳ、ＣＤ２７、ＣＤ２７０、ＣＤ３０、及びＯＸ−４０を含むいくつかが検討されている。
【０１４２】
特定の実施態様において、（ｉ）単離された細胞の集団にＣＡＲをコードする核酸配列を形質導入する工程と、（ｉｉ）工程（ｉ）の上記核酸配列が瑕疵なく形質導入された細胞の部分集団を選択する工程とを含む、或いはそれらの工程から実質的になるＣＡＲ発現細胞を生み出す方法が開示される。幾つかの実施態様において、単離された細胞は、Ｔ細胞、動物のＴ細胞、哺乳動物のＴ細胞、ネコのＴ細胞、イヌのＴ細胞、又はヒトのＴ細胞であり、これによりＣＡＲ  Ｔ細胞が生成する。特定の実施態様において、単離された細胞は、ＮＫ細胞、例えば動物のＮＫ細胞、哺乳動物のＮＫ細胞、ネコのＮＫ細胞、イヌのＮＫ細胞、又はヒトのＮＫ細胞であり、これによりＣＡＲ  ＮＫ細胞が生成する。
【０１４３】
ＣＡＲ  Ｔ細胞、ＣＡＲ  Ｎ細胞、及びＣＡＲマクロファージの療法への応用
本明細書に記載されているＣＡＲ  Ｔ細胞、ＣＡＲ  ＮＫ細胞、及びＣＡＲマクロファージを含むＣＡＲ細胞は、非婦人科のＡＭＨＲＩＩ発現腫瘍を処置する為に使用されうる。本発明のＣＡＲ細胞は、好ましくは本明細書に記載されている１つの癌に作用された患者内のＡＭＨＲＩＩ発現腫瘍を処置する為に使用される。好ましい実施態様において、本発明のＣＡＲ細胞は、好ましくは結腸癌、肝臓癌、肝細胞癌、精巣癌、甲状腺癌、胃癌、胃腸癌、膀胱癌、膵癌、頭頸部癌、腎臓癌、脂肪肉腫、線維肉腫、胸膜中皮腫、メラノーマ、肉腫、脳癌、骨癌、乳癌、前立腺癌、及び白血病を含む群から選択される癌を処置する為に使用される。
【０１４４】
本発明のＣＡＲ細胞は、単独で、或いは賦形剤、公知の抗癌処置薬、及び／又はその他のコンポーネント、例えばサイトカイン若しくは免疫賦活性であるその他の細胞集団、と組み合わせて投与されうる。
【０１４５】
本開示の方法の観点は、それを必要としている対象において腫瘍の増殖を阻害し、及び／又はそれを必要としている癌患者を処置する為の方法と関連する。幾つかの実施態様において、腫瘍は、固形腫瘍である。幾つかの実施態様において、腫瘍／癌は、甲状腺、乳房、卵巣、又は前立腺の腫瘍／癌である。
【０１４６】
本明細書に開示されるＣＡＲ細胞は、単独で、或いは賦形剤、公知の抗癌処置薬、及び／又はその他のコンポーネント、例えばサイトカイン若しくは免疫賦活性であるその他の細胞集団、と組み合わせて投与されうる。ＣＡＲ細胞は、第１ライン、第２ライン、第３ライン、第４ライン、又は更なる療法でありうる。ＣＡＲ細胞は、その他の療法と組み合わせられることができる。そのような療法の非限定的な例は、化学療法剤又は生物学的製剤を含む。適切な処置レジメンは、処置担当医師又は獣医師によって決定される。
【０１４７】
本発明のＣＡＲを含む医薬組成物は、処置される又は阻止される疾患に適する方式で投与されうる。適切な用量は臨床トライアルにより決定され得、投与の量及び頻度は、患者の状態、並びに患者の疾患の型及び重症度等の因子によって決定されるだろう。
【０１４８】
療法への応用
本明細書で別途すでに開示されているように、（ｉ）本明細書で開示される抗ＡＭＨＲＩＩ抗体、（ｉｉ）本明細書で開示される抗体薬物コンジュゲート、及び（ｉｉｉ）本明細書で開示されるＣＡＲ細胞（ＣＡＲ  Ｔ細胞、ＣＡＲ  ＮＫ細胞、及びＣＡＲマクロファージを含む）を含む、本明細書で開示されるＡＭＨＲＩＩ結合性剤は、非婦人科のＡＭＨＲＩＩ発現癌、特に結腸癌、肝臓癌、肝細胞癌、精巣癌、甲状腺癌、胃癌、胃腸癌、膀胱癌、膵癌、頭頸部癌、腎臓癌、脂肪肉腫、線維肉腫、胸膜中皮腫、メラノーマ、肉腫、脳癌、骨癌、乳癌、前立腺癌、及び白血病を含む群から選択される癌を予防又は処置する為に使用されうる有効成分からなる。
【０１４９】
抗腫瘍抗原抗体又は抗腫瘍抗原ＣＡＲ細胞を利用する癌処置法は、当業者に周知である。
【０１５０】
幾つかの実施態様において、癌患者は、ＡＭＨＲＩＩ結合性剤、例えば抗ＡＭＨＲＩＩ抗体、抗ＡＭＨＲＩＩ  ＡＤＣ、抗ＡＭＨＲＩＩ  ＣＡＲ  Ｔ細胞、抗ＡＭＨＲＩＩ  ＣＡＲ  ＮＬ細胞、又は抗ＡＭＨＲＩＩ  ＣＡＲマクロファージ、での処置を実施する前に、患者の腫瘍細胞がＡＭＨＲＩＩをその表面において発現しているか判断する為に試験される。
【０１５１】
ＡＭＨＲＩＩの膜発現を検出する為のそのような予備的なテストは、低頻度でＡＭＨＲＩＩを発現する癌の処置にとって好ましい。対照的に、ＡＭＨＲＩＩの膜発現を検出する為のそのような予備的なテストは、高頻度でＡＭＨＲＩＩを発現する癌の処置では実施されない場合もある。
【０１５２】
従って、幾つかの実施態様において、本発明は、結腸癌、肝臓癌、肝細胞癌、精巣癌、甲状腺癌、胃癌、胃腸癌、膀胱癌、膵癌、頭頸部癌、腎臓癌、脂肪肉腫、線維肉腫、胸膜中皮腫、メラノーマ、肉腫、脳癌、骨癌、乳癌、前立腺癌、及び白血病を含む群から選択されるＡＭＨＲＩＩ陽性癌に作用された個体の予防又は処置に使用する為の本明細書で定義されるＡＭＨＲＩＩ結合性剤に関する。
【０１５３】
本発明は、結腸癌、肝臓癌、肝細胞癌、精巣癌、甲状腺癌、胃癌、胃腸癌、膀胱癌、膵癌、頭頸部癌、腎臓癌、脂肪肉腫、線維肉腫、胸膜中皮腫、メラノーマ、肉腫、脳癌、骨癌、乳癌、前立腺癌、及び白血病を含む群から選択されるＡＭＨＲＩＩ陽性癌に作用された個体の予防又は処置用の医薬を調製する為のＡＭＨＲＩＩ結合性剤の使用に関する。
【０１５４】
本発明はまた、結腸癌、肝臓癌、肝細胞癌、精巣癌、甲状腺癌、胃癌、胃腸癌、膀胱癌、膵癌、頭頸部癌、腎臓癌、脂肪肉腫、線維肉腫、胸膜中皮腫、メラノーマ、肉腫、脳癌、骨癌、乳癌、前立腺癌、及び白血病を含む群から選択されるＡＭＨＲＩＩ陽性癌に作用された個体を予防又は処置する為の方法であって、上記個体に抗ＡＭＨＲＩＩ結合性剤を投与する工程を含む上記方法に関する。
【０１５５】
個体から予め得られた癌組織サンプル上で細胞表面ＡＭＨＲＩＩタンパク質発現を検出する方法を実施することにより、上記個体は、ＡＭＨＲＩＩ陽性癌に作用された個体として指定されうる。細胞表面ＡＭＨＲＩＩタンパク質発現の検出は、当業者に周知である様々な方法に従い実施されうる。細胞表面ＡＭＨＲＩＩタンパク質発現の検出法は、特に本明細書の実施例において例証される免疫組織化学法並びに蛍光活性化セルソーティング法を含む。
【０１５６】
本発明はまた、個体が、ＡＭＨＲＩＩ結合性剤での癌処置に対して適格性を有する（すなわち、反応性である）かを判断する為の方法であって、上記個体から予め得られた腫瘍組織サンプルが細胞表面においてＡＭＨＲＩＩタンパク質を発現するか決定する工程を含む上記方法に関する。
【０１５７】
従って、本発明はまた、結腸癌、肝臓癌、肝細胞癌、精巣癌、甲状腺癌、胃癌、胃腸癌、膀胱癌、膵癌、頭頸部癌、腎臓癌、脂肪肉腫、線維肉腫、胸膜中皮腫、メラノーマ、肉腫、脳癌、骨癌、乳癌、前立腺癌、及び白血病を含む群から選択される癌に作用された個体が、ＡＭＨＲＩＩ結合性剤での癌処置に対して適格性を有する、すなわちＡＭＨＲＩＩ結合性剤での癌処置に対して応答性であるか判断する為の方法であって、
ａ）上記患者から得られた癌細胞がその膜でＡＭＨＲＩＩを発現しているか決定する工程と、
ｂ）上記癌細胞によるＡＭＨＲＩＩの膜発現が工程ａ）において確認された場合には、上記患者は、ＡＭＨＲＩＩ結合性剤での癌処置に対して適格性を有する、すなわちＡＭＨＲＩＩ結合性剤での癌処置に対して応答性であると結論付ける工程と
を含む上記方法に関する。
【０１５８】
上記方法の好ましい実施態様において、（ｉ）ＡＭＨＲＩＩ発現スコア値が工程ａ）において決定されるとき、及び（ｉｉ）上記ＡＭＨＲＩＩ発現スコア値が閾値スコア値又はそれ超であるとき、上記患者は、ＡＭＨＲＩＩ結合性剤での癌処置に対して適格性を有する（すなわち、反応性である）と、工程ｂ）において結論される。ＡＭＨＲＩＩスコア値は、最も好ましくは、本明細書で別途記載されている式（Ｉ）を使用することにより計算される。
【０１５９】
従って、好ましい実施態様に従うと、方法の工程ａ）は、免疫組織化学法、例えば本明細書の実施例において示される方法、により実施される。
【０１６０】
工程ａ）において使用される癌細胞は、上記癌患者から予め集められた生検組織サンプルに由来するのが一般的である。
【０１６１】
好ましくは、工程ａ）は、本明細書に特に記載されているもののなかから選択された抗ＡＭＨＲＩＩ抗体、特に３Ｃ２３Ｋ抗体を使用することにより実施され、そのＡＭＨＲＩＩ結合性は、周知の抗体検出技術、例えば本明細書の実施例において開示される技術、に従い、二次標識抗体を使用することにより検出されうる。
【０１６２】
好ましくは、
下記の式（Ｉ）：
Ｅスコア＝ＦＲＥＱ×ＡＭＨＲＩＩ＿ＬＥＶＥＬ
（式中、
Ｅスコアは、所与の癌細胞サンプルに対するＡＭＨＲＩＩ発現スコア値を意味し、
ＦＲＥＱは、膜ＡＭＨＲＩＩ発現が検出される上記癌細胞サンプルに含まれる細胞の頻度を意味し、
ＡＭＨＲＩＩ＿ＬＥＶＥＬは、上記所与の癌細胞サンプルに含まれるＡＭＨＲＩＩ発現細胞によるＡＭＨＲＩＩの発現レベルを意味する）
に従い、Ｅスコア値の決定を可能にするスコアリング法を実施したときに、上記癌患者に由来する癌細胞サンプルにおいて、ＡＭＨＲＩＩ発現スコア値１．０又はそれ超、最も好ましくはＡＭＨＲＩＩ発現スコア値１．５又はそれ超、と決定されたとき、上記癌の群に含まれる癌に作用された患者は、ＡＭＨＲＩＩ結合性剤での癌処置に対して適格性を有するものとして判断される、すなわちＡＭＨＲＩＩ結合性剤での癌処置に対して応答性であるものと判断される。
【０１６３】
本発明は更に、結腸癌、肝臓癌、肝細胞癌、精巣癌、甲状腺癌、胃癌、胃腸癌、膀胱癌、膵癌、頭頸部癌、腎臓癌、脂肪肉腫、線維肉腫、胸膜中皮腫、メラノーマ、肉腫、脳癌、骨癌、乳癌、前立腺癌、及び白血病を含む群から選択される癌に作用された患者を処置する為の方法であって、
ａ）上記個体から予め得られた腫瘍組織サンプルが、細胞表面においてＡＭＨＲＩＩタンパク質を発現するか決定する工程と、
ｂ）ＡＭＨＲＩＩの細胞表面発現が工程ａ）において確認された場合には、上記個体を、ＡＭＨＲＩＩ結合性剤で処置する工程と
を含む上記方法に関する。
【０１６４】
幾つかの好ましい実施態様において、上記腫瘍サンプルが、上記式（Ｉ）に従い計算されたＡＭＨＲＩＩ発現スコア値（Ｅスコア）について、１．０又はそれ超（１．５又はそれ超のＥスコア値を含む）を有するとき、ＡＭＨＲＩＩ発現が工程ａ）において確認される。
【０１６５】
上記方法の最も好ましい実施態様において、上記ＡＭＨＲＩＩ結合性剤は、本明細書で定義される抗ＡＭＨＲＩＩ抗体若しくはそのフラグメント、又は本明細書で定義されるＣＡＲ細胞（例えば、ＣＡＲ  Ｔ細胞若しくはＣＡＲ  ＮＫ細胞）からなる。
【０１６６】
幾つかの実施態様において、上記ＡＭＨＲＩＩ結合性剤は、唯一の抗癌有効成分として使用される。
【０１６７】
幾つかのその他の実施態様において、上記ＡＭＨＲＩＩ結合性剤による抗癌処置は、上記個体に、放射線療法処置及び化学療法処置を含む１以上の更なる抗癌処置を実施することも含む。
【０１６８】
従って、そのようなその他の実施態様に従うと、上記ＡＭＨＲＩＩ結合性剤による抗癌処置は、上記個体に１以上の更なる抗癌有効成分を投与することも含む。
【０１６９】
従って、本明細書に記載されている使用の為のＡＭＨＲＩＩ結合性剤の幾つかの実施態様に従うと、上記ＡＭＨＲＩＩ結合性剤は、別の抗癌処置と組み合わせられており、例えば１以上の他の抗癌活性剤と組み合わせられている。
【０１７０】
「抗癌剤」は、例えば、高分子（ＤＮＡ、ＲＮＡ、タンパク質等）の生合成を妨害する、又は細胞の増殖を阻害する、又はアポトーシス又は細胞毒性により細胞死をもたらすことができる任意の分子として定義される。抗癌剤のなかでも、アルキル化剤、トポイソメラーゼ阻害剤、及び挿入剤、代謝抵抗物質、切断試薬、チューブリンを妨害する薬剤、モノクロナール抗体が言及されうる。
【０１７１】
特別な観点に従うと、本発明は、薬学的に許容されるビヒクルと組み合わせて、有効成分として、抗癌剤、及びＡＭＨＲ−ＩＩに結合する抗体、特に本明細書に記載されている抗ＡＭＨＲＩＩ抗体、を含む医薬組成物に関する。
【０１７２】
「薬学的に許容されるビヒクル」は、生体系、例えば細胞、細胞培養物、組織、又は微生物、と適合性である無毒性の物質を云う。
【０１７３】
幾つかの実施態様において、本発明は、薬学的に許容されるビヒクルと組み合わせて、有効成分として、抗癌剤、及びＡＭＨＲ−ＩＩに結合する抗体、特に本明細書に記載されている抗ＡＭＨＲＩＩ抗体、を含む医薬組成物に関する。
【０１７４】
幾つかの実施態様において、本発明は、薬学的に許容されるビヒクルと組み合わせて、有効成分として、抗癌剤、及びＡＭＨＲ−ＩＩに結合する抗体を含む医薬組成物であって、該抗癌剤が、ドセタキセル、シスプラチン、ゲムシタビン、及びシスプラチンとゲムシタビンの組み合わせを含む群から選択される、上記医薬組成物に関する。
【０１７５】
抗ＡＭＨＲＩＩ抗体と組み合わせて使用されうる他の抗癌剤は、パクリタキセル、又は白金塩、例えばオキサリプラチン、シスプラチン、及びカルボプラチン、を包含する。
【０１７６】
抗癌剤はまた、白金塩、小分子、モノクロナール抗体、さもなければ抗血管新生ペプチボディ以外の化学療法剤から選択されうる。
【０１７７】
白金塩以外の化学療法剤は、挿入剤（ＤＮＡの複製及び転写を遮断する）、例えばアントラサイクリン（ドキソルビシン、ペグ化されたリポソームドキソルビシン）、トポイソメラーゼ阻害剤（カンプトテシン及び誘導体：カレニテシン、トポテカン、イリノテカン）、さもなければＳＪＧ−１３６、ヒストンデアセチラーゼの阻害剤（ボリノスタット、ベリノスタット、バルプロ酸）、アルキル化剤（ベンダムスチン、グルホスファミド、テモゾロミド）、抗有糸分裂性植物アルカロイド、例えばタキサン（ドセタキセル、パクリタキセル）、ビンカアルカロイド（ビノレルビン）、エポチロン（ＺＫ−エポチロン、イクサベピロン）、代謝抵抗物質（ゲムシタビン、エラシタラビン、カペシタビン）、キネシンスピンドルタンパク質（ＫＳＰ）阻害剤（イスピネシブ）、トラベクテジン、さもなければオンブラブリン（コンブレタスタチンＡ−４誘導体）を含む。
【０１７８】
小分子の中では、ポリ（ＡＤＰ−リボース）ポリメラーゼ（ＰＡＲＰ）阻害剤：オラパリブ、イニパリブ、ベリパリブ、ルカパリブ、ＣＥＰ−９７２２、ＭＫ−４８２７、ＢＭＮ−６７３、キナーゼ阻害剤、例えばチロシンキナーゼ阻害剤（ＴＫＩ）が挙げられ、そのなかでも、抗ＶＥＧＦＲ分子（ソラフェニブ、スニチニブ、セジラニブ、バンデタニブ、パゾパニブ、ＢＩＢＦ１１２０、セマクサニブ、カボザンチニブ、モテサニブ）、抗ＨＥＲ２／ＥＧＦＲ分子（エルロチニブ、ゲフィチニブ、ラパチニブ）、抗ＰＤＧＦＲ分子（イマチニブ、ＢＩＢＦ１１２０）、抗ＦＧＦＲ分子（ＢＩＢＦ１１２０）、オーロラキナーゼ／チロシンキナーゼ阻害剤（ＥＮＭＤ−２０７６）、Ｓｒｃ／Ａｂｌキナーゼ阻害剤（サラカチニブ）、又はペリホシン、テムシロリムス（ｍＴＯＲ阻害剤）、アルボシジブ（サイクリン依存性キナーゼ阻害剤）、ボラセルチブ（ＰＬＫ１（ｐｏｌｏ様キナーゼ１）タンパク質の阻害剤）、ＬＹ２６０６３６８（チェックポイントキナーゼ１（ｃｈｋ１）の阻害剤）、ＧＤＣ−０４４９（ヘッジホッグ経路阻害剤）、ジボテンタン（ＥＴＡ受容体のアンタゴニスト）、ボルテゾミブ、カルフィルゾミブ（プロテアソーム阻害剤）、サイトカイン、例えばＩＬ−１２、ＩＬ−１８、ＩＬ−２１、ＩＮＦ−α、ＩＮＦ−γ、が言及されうる。
【０１７９】
抗体のなかでも、抗ＶＥＧＦ：ベバシズマブ、抗ＶＥＧＦＲ：ラムシルマブ、抗ＨＥＲ２／ＥＧＦＲ：トラスツズマブ、ペルツズマブ、セツキシマブ、パニツムマブ、ＭＧＡＨ２２、マツズマブ、抗ＰＤＧＦＲα：ＩＭＣ−３Ｇ３、抗葉酸受容体：ファーレツズマブ、抗ＣＤ２７：ＣＤＸ−１１２７、抗ＣＤ５６：ＢＢ−１０９０１、抗ＣＤ１０５：ＴＲＣ１０５、抗ＣＤ２７６：ＭＧＡ２７１、抗ＡＧＳ−８：ＡＧＳ−８Ｍ４、抗ＤＲＳ：ＴＲＡ−８、抗ＨＢ−ＥＧＦ：ＫＨＫ２８６６、抗メソテリン：アマツキシマブ、ＢＡＹ９４−９３４３（免疫毒素複合体）、カツマキソマブ（ＥｐＣＡＭ／ＣＤ３二重特異性抗体）、抗ＩＬ２Ｒ：ダクリズマブ、抗ＩＧＦ−１Ｒ：ガニツマブ、抗ＣＴＬＡ−４：イピリムマブ、抗ＰＤ１：ニボルマブ及びペンブロリズマブ、抗ＣＤ４７：Ｗｅｉｓｓｍａｎ社Ｂ６Ｈ１２及びＨｕ５Ｆ９、Ｎｏｖｉｍｍｕｎｅ社５Ａ３Ｍ３、ＩＮＨＩＢＲＸ２Ａ１、Ｆｒａｚｉｅｒ社ＶｘＰ０３７−０１ＬＣ１抗体、抗Ｌｅｗｉｓ  Ｙ：Ｈｕ３Ｓ１９３、ＳＧＮ−１５（免疫毒素複合体）、抗ＣＡ１２５：オレゴボマブ、抗ＨＧＦ：リロツムマブ、抗ＩＬ６：シルツキシマブ、抗ＴＲ２：ティガツズマブ、抗α５β１インテグリン：ボロシキシマブ、抗ＨＢ−ＥＧＦ：ＫＨＫ２８６６が言及されうる。抗血管新生ペプチボディは、ＡＭＧ３８６及びＣＶＸ−２４１より選択される。
【０１８０】
より具体的には、薬学的に許容されるビヒクル、抗癌剤、及びＡＭＨＲ−ＩＩに結合する抗体と組み合わせて、有効成分として含む医薬組成物が、本明細書において記載され、その場合、該抗癌剤は、ドセタキセル、シスプラチン、ゲムシタビン、及びシスプラチンとゲムシタビンとの組み合わせを含む群から選択される。
【０１８１】
よりいっそう具体的には、本明細書では、薬学的に許容されるビヒクルと組み合わせて、有効成分として、抗癌剤、及びＡＭＨＲ−ＩＩに結合する抗体を含む医薬組成物であって、突然変異したヒト化モノクロナール抗体が本明細書において３Ｃ２３Ｋと呼ばれ、該抗癌剤が、ドセタキセル、シスプラチン、ゲムシタビン、及びシスプラチンとゲムシタビンの組み合わせを含む群から選択される、上記医薬組成物が記載される。
【０１８２】
本明細書に開示されるＡＭＨＲＩＩ結合性剤、特に本明細書に開示される抗ＡＭＨＲＩＩ抗体、は、経口投与、皮下投与、及び静脈内投与を含む様々な方法で投与されうる。
【０１８３】
語「処置有効量」は、哺乳動物において疾患又は障害を処置する為に有効な薬剤の量を云う。癌の場合、薬物の処置有効量は、癌細胞の数を低下させ；腫瘍サイズを低下させ；癌細胞が末梢臓器に浸潤するのを阻害し（すなわち、ある程度低速化させ、好ましくは停止させ）；腫瘍転移を阻害し（すなわち、ある程度低速化させ、好ましくは停止させ）；腫瘍増殖をある程度阻害し；及び／又は障害と関連した症状のうちの１以上をある程度緩和しうる。薬物が増殖を阻止し、及び／又は既存の癌細胞を殺傷しうる範囲で、薬物は、細胞増殖抑制性及び／又は細胞毒性でありうる。癌療法では、イン・ビボ（ｉｎ  ｖｉｖｏ）での有効性は、例えば、生存期間、無増悪生存（ＰＦＳ：progression  free  survival）期間、応答率（ＲＲ：response  rate）、応答期間、及び／又は生活の質、を評価することにより測定されることができる。
【０１８４】
本発明に従って使用される薬剤の処置用製剤（例えば、抗体）は、任意選択的な薬学的に許容される担体、添加物、又は安定剤{Remington's  Pharmaceutical  Sciences  16th  edition,  Osol,  A.  Ed.  (1980年)}と共に、所望の純度を有する抗体を混合することにより、凍結乾燥された製剤又は水溶液の形態で保管用として調製される。許容される担体、添加物、又は安定剤は、レシピエントに対して採用された用量及び濃度において非毒性であり、バッファー、例えばホスフェート、シトレート、及びその他の有機酸；アスコルビン酸及びメチオニンを含む酸化防止剤；防腐剤（例えば、オクタデシルジメチルベンジルアンモニウムクロリド；塩化ヘキサメトニウム；塩化ベンザルコニウム、塩化ベンゼトニウム；フェノール、ブチル又はベンジルアルコール；アルキルパラベン、例えばメチル又はプロピルパラベン；カテコール；レゾルシノール；シクロヘキサノール；３−ペンタノール；及びｍ−クレゾール）；低分子量（約１０残基未満）ポリペプチド；タンパク質、例えば血清アルブミン、ゼラチン、又は免疫グロブリン；親水性ポリマー、例えばポリビニルピロリドン；アミノ酸、例えばグリシン、グルタミン、アスパラギン、ヒスチジン、アルギニン、又はリジン；単糖類、二糖類、及びグルコース、マンノース、又はデキストリンを含むその他の炭水化物；キレート剤、例えばＥＤＴＡ；糖、例えばスクロース、マンニトール、トレハロース、又はソルビトール；造塩性対イオン、例えばナトリウム；金属錯体｛例えば、Ｚｎ−タンパク質複合体）；及び／又は非イオン性界面活性剤、例えばツイーン（TWEEN）（商標）、プルロニック（PLURONICS）（商標）、又はポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、を含む。
【０１８５】
有効成分は、例えばコアセルベーション技術により、又は界面重合により調製されたマイクロカプセル、例えばそれぞれヒドロキシメチルセルロース又はゼラチンマイクロカプセル及びポリ（メチルメタクリレート）マイクロカプセル中、コロイド薬物送達システム（例えば、リポソーム、アルブミンミクロスフェア、マイクロエマルジョン、ナノ粒子、及びナノカプセル）中、或いはマクロエマルジョン中に封入されうる。そのような技術は、Remington's  Pharmaceutical  Sciences  16th  edition,  Osol,  A.  Ed.  (1980年)に開示されている。
【０１８６】
イン・ビボ（ｉｎ  ｖｉｖｏ）での投与で使用される製剤は無菌でありうる。これは、滅菌濾過膜を通じた濾過により容易に実現される。
【０１８７】
別の特別な観点において、本発明は、抗癌剤、及びＡＭＨＲ−ＩＩに結合する抗体を含む、本明細書に記載されている非婦人科癌を予防又は処置する際に医薬品として使用される組成物であって、静脈内又は腹腔内経路により投与することを目的とする製剤としての上記組成物に関する。
【０１８８】
別の特別な観点において、本発明は、抗癌剤及びＡＭＨＲ−ＩＩに結合する抗体を含む、本明細書に記載されている非婦人科癌を予防又は処置する際に医薬品として使用される組成物であって、モノクロナール抗体及び該抗癌剤が、分離、同時、又は連続して投与することを目的とする、上記組成物に関する。
【０１８９】
抗体及び抗癌剤は、１つの同じ医薬組成物内で組み合わせられうる、又は同時若しくは連続して投与されうる、分離した医薬組成物の形態で使用されうる。特に、製品は分離して、すなわち同時に、又は例えば時間間隔を設けて独立に投与されうる。
【０１９０】
より具体的には、本発明は、抗癌剤及びＡＭＨＲ−ＩＩに結合する抗体を含む、本明細書に記載されている非婦人科癌を予防又は処置する際に医薬品として使用される組成物であって、上記抗体及び該抗癌剤が、同一の医薬組成物内で組み合わされている、上記組成物に関する。
【０１９１】
別の特別な観点に従うと、本発明は、抗癌剤及びＡＭＨＲ−ＩＩに結合する抗体を含む、本明細書に記載されている非婦人科癌を予防又は処置する際に医薬品として使用される組成物であって、患者に投与される抗ＡＭＨＲＩＩ抗体の処置有効量が、約０．０７ｍｇ〜約３５０００ｍｇ、好ましくは約０．７ｍｇ〜約７０００ｍｇ、好ましくは約０．７ｍｇ〜約１４００ｍｇ、好ましくは約０．７ｍｇ〜約７００ｍｇ、より好ましくは約０．７ｍｇ〜約７０ｍｇ、の範囲内にある上記組成物に関する。
【０１９２】
別の特別な観点に従うと、本発明は、抗癌剤及びＡＭＨＲ−ＩＩに結合する抗体を含む、本明細書に記載されている非婦人科癌を予防又は処置する際に医薬品として使用される組成物であって、患者に投与される抗癌剤の処置有効量が、約１０ｍｇ〜約７００ｍｇの範囲内、好ましくは約２０ｍｇ〜約３５０ｍｇ、の範囲内にあり、好ましくは約１１０ｍｇである、上記組成物に関する。
【０１９３】
別の特別な観点に従うと、本発明は、抗癌剤及びＡＭＨＲ−ＩＩに結合する抗体を含む、本明細書に記載されている非婦人科癌を予防又は処置する際に医薬品として使用される組成物であって、患者に投与される抗体の処置有効量が約７０ｍｇであり、患者に投与される抗癌剤の用量が約１１０ｍｇである、上記組成物に関する。
【０１９４】
本発明は、下記の実施例により更に例示されるが、いかなる場合においてもそれに限定されない。
【実施例１】
【０１９５】
実施例１：差次的なＡＭＨＲＩＩ遺伝子発現及びＡＭＨＲＩＩタンパク質発現
Ａ．材料及び方法
Ａ．１．細胞株及び培養
ＣＯＶ４３４  ＷＴ細胞株（ＥＣＡＣＣ番号０７０７１９０９）が、１０％のＦＢＳ、ペニシリン（１００Ｕ／ｍｌ）、及びストレプトマイシン（１００μｇ／ｍｌ）で補充されたＤＭＥＭ／ＧｌｕｔａＭａｘ（Ｇｉｂｃｏ社）内で維持された。４００μｇ／ｍｌのジェネテシン（Ｇｉｂｃｏ社）が、ＣＯＶ４３４  ＭＩＳＲＩＩトランスフェクト細胞株に添加された。赤白血病Ｋ５６２細胞株（ＡＴＣＣ（登録商標）ＣＣＬ−２４３（商標）が、１０％のＦＢＳ及びペニシリン／ストレプトマイシンで補充されたＩＭＤＭ培地（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ社）内、懸濁状態で培養され、Ｔ７５フラスコ内、細胞１×１０５〜１×１０６個／ｍｌの間の密度において維持された。ＯＶ９０細胞株（ＡＴＣＣ（登録商標）ＣＲＬ−１１７３２（商標）、卵巣漿液性腺癌）が、最終濃度１．５ｇ／ｌの重炭酸ナトリウムを含有するＭＣＤＢ１０５培地（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ社）と、１５％のＦＢＳ及びペニシリン／ストレプトマイシンで補充された、最終濃度２．２ｇ／ｌの重炭酸ナトリウムを含有する培地１９９（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ社）との１：１混合物中で培養された。ＮＣＩ−Ｈ２９５Ｒ細胞株（副腎皮質癌、ＡＴＣＣ（登録商標）ＣＲＬ−２１２８（商標））が、ｉＴＳ＋Ｐｒｅｍｉｘ（Ｃｏｒｎｉｎｇ社）、２．５％のＮｕ−Ｓｅｒｕｍ（Ｆａｌｃｏｎ社）、及びペニシリン／ストレプトマイシンで補充されたＤＭＥＭ：Ｆ１２培地（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ社）内で維持された。細胞は、８％のＣＯ２を含む加湿雰囲気で、３７℃において増殖され、そして培地は、細胞株に応じて１週間に１回又は２回交換された。
【０１９６】
Ａ．２．ＲＴ−ｑＰＣＲによるＡＭＨＲ２  ｍＲＮＡの相対的定量
ＲＮＡの抽出。１〜５×１０６個の細胞ペレットから得られた全ＲＮＡが、製造業者の指示に従い、Ｔｒｉｚｏｌ（登録商標）Ｐｌｕｓ  ＲＮＡ  Ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ  Ｋｉｔ（Ａｍｂｉｏｎ社）を使用して調製された。要するに、フェノール／クロロホルム抽出後、溶解した細胞のＲＮＡがシリカマトリックスに吸着され、ＤＮＡｓｅ処理され、次に３０μｌのＲＮＡｓｅフリーの水で洗浄及び溶出された。ＲＮＡ濃度及び品質は、分光光度計（ＮａｎｏＤｒｏｐ、ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ社）を用いて評価された。
【０１９７】
ｃＤＮＡ合成。Ｍａｘｉｍａ  Ｈ  Ｍｉｎｕｓ  Ｆｉｒｓｔ  Ｓｔｒａｎｄ  ｃＤＮＡ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ  Ｋｉｔ（Ａｍｂｉｏｎ社）、及びオリゴｄＴプライマーを使用して、プライミングについて２５℃で１０分間、及び逆転写について５０℃で１５分間、その後に逆転写酵素の不活性化について８５℃で５分間インキュベーションすることにより、ＲＮＡ（１μｇ）が逆転写された。
【０１９８】
定量的ＰＣＲ。最終体積が２０μｌのＬｕｍｉｎａｒｉｓ  Ｃｏｌｏｒ  ＨｉＧｒｅｅｎ  ｑＰＣＲ  Ｍａｓｔｅｒ  Ｍｉｘ（Ａｍｂｉｏｎ社）を使用して、９６ウェルマイクロプレート内、Ｌｉｇｈｔ  Ｃｙｃｌｅｒ４８０（Ｒｏｃｈｅ社）において定量的ＰＣＲが実施された。下記のプライマーが使用された：ＡＭＨＲ２の場合、フォアワード５’−ＴＣＴＧＧＡＴＧＧＣＡＣＴＧＧＴＧＣＴＧ−３’（配列番号７１）、及びリバース５’−ＡＧＣＡＧＧＧＣＣＡＡＧＡＴＧＡＴＧＣＴ−３’（配列番号７２）；ＴＢＰの場合、フォアワード５’−ＴＧＣＡＣＡＧＧＡＧＣＣＡＡＧＡＧＴＧＡＡ−３’（配列番号７３）、及びリバース５’−ＣＡＣＡＴＣＡＣＡＧＣＴＣＣＣＣＡＣＣＡ−３’（配列番号７４）。ｃＤＮＡテンプレート（ＲＮＡ１００ｎｇに相当）及び下記のプロトコール：ＵＤＧ事前処理、５０℃で２分間；変性、９５℃で１０分間；その後に、９５℃で１５秒間／６０℃で３０秒間／７０℃で３０秒間からなる４０回のサイクル、を使用して増幅が実施された。ゲノムＤＮＡ及び二量体プライマーの存在しないことを管理する為に、各実験の終了時に融解曲線分析が実施された。ｃＤＮＡサンプル及び対照（「無テンプレートサンプル」及び「無逆転写産物ＲＮＡ」）のそれぞれが二重で試験された。サイクル閾値（Ｃｔ）の平均値が計算され、ＡＭＨＲ２の相対的定量（ＲＱ）が、２−ΔΔＣｔ（式中、ΔΔＣｔ＝ΔＣｔｓａｍｐｌｅ−ΔＣｔｃａｌｉｂｒａｔｏｒ、及びΔＣｔ＝ＣｔＡＭＨＲ２−ＣｔＴＢＰ）として表された。ＨＣＴ１１６サンプルが、キャリブレータとして、ＴＢＰが標準化用のハウスキーピング遺伝子として使用された。
【０１９９】
下記の表２は、上記Ｑ−ＰＣＲ法を使用した試験細胞株内のＡＭＨＲＩＩ発現レベルを表す。
【０２００】
【表２】
2020516668.tif 000005
【０２０１】
Ａ．３．フローサイトメトリー分析による膜ＡＭＨＲ２発現の評価
蛍光活性化セルソーティング（ＦＡＣＳ）分析では、細胞４×１０５個を、２５μｇ／ｍｌの３Ｃ２３Ｋと共に４℃で３０分間インキュベートした。ＰＢＳ−ＢＳＡ（２％）を用いて洗浄した後、蛍光物質にコンジュゲートした抗種二次抗体により一次抗体が検出された。３Ｃ２３Ｋが、フィコエリトリンにコンジュゲートした抗ヒトＦ（ａｂ’）２により検出された（１：１０００、Ｂｅｃｋｍａｎ−Ｃｏｕｌｔｅｒ社、ＩＭ０５５０）。ＰＢＳで洗浄した後、再懸濁された細胞のＦＡＣＳ分析が、ＢＤ  Ａｃｃｕｒｉ（商標）Ｃ６フローサイトメーター（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ社）のＦＬ２チャンネルにおいて実現された。
【０２０２】
Ｂ．結果
結果は図２に示される。結果は、ＣＯＶ４３４−ＷＴ細胞株はヒトＡＭＨＲＩＩタンパク質について明白な膜発現レベルを有するものの、組換え細胞株ＣＯＶ４３４−ＷＴのＡＭＨＲＩＩ遺伝子発現レベルは、細胞株ＮＣＩ−Ｈ２９５Ｒについて測定されたＡＭＨＲＩＩ遺伝子発現レベルの約３％に過ぎないことを示した。
【０２０３】
このような結果は、ＡＭＨＲＩＩ遺伝子発現と膜ＡＭＨＲＩＩタンパク質発現との間において、厳密には相関関係が認められないことを示した。
【０２０４】
実施例２：非婦人科癌（ヒト腫瘍サンプル）におけるＡＭＨＲＩＩ発現
Ａ．材料及び方法
Ａ．１．目的
ビオチン化された３Ｃ２３Ｋモノクロナール抗体を使用して抗ミュラー管ホルモン受容体２型（ＡＭＨＲ２）の発現を検出する為の、マウス（ＰＤＸ）を対象としたヒト癌細胞異種移植の免疫組織化学試験。
【０２０５】
Ａ．２．プロトコール及び試験法
細胞株：ホルムアルデヒド酢酸アルコール（ＡＦＡ）中において、セルブロックの構成で固定化された。
ヒト腫瘍：外部サンプルについてホルマリン中で固定、及びキュリー研究所（Ｃｕｒｉｅ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ）から入手したスライドについてＡＦＡ中で固定
免疫組織化学（ＩＨＣ：Immunohistochemistry）技術は、サンプルを脱蝋し、ｐＨ９でアンマスキングした後に可能であった（ＥＺ  Ｒｅｔｒｉｅｖｅｒマイクロウェーブ中、９０℃で１５分間、その後に２０分間冷却）。
免疫ペルオキシダーゼ技術、及びＤＡＢ発色基質の顕在化による抗ミュラー管ホルモン受容体ＩＩ型の検出。
内因性ペルオキシダーゼ活性をブロックした後、スライドは、希釈されたビオチン化一次抗体（１／８００、８μｇ／ｍＬ）と共に室温で９０分間インキュベートされた。組織切片は、次にＰＢＳで洗浄され、アビジン／ビオチンＡＢＣ［Ｖｅｃｔｏｒ社］複合体と共に３０分間インキュベートされた。免疫反応シグナルがＤＡＢ基質溶液を使用して検出された（ＤＡＢ＋基質バッファー／液体ＤＡＢ＋クロモゲン、１０分間インキュベーション）。最終的に、切片は、Ｍａｙｅｒのヘマトキシリン（Ｌｉｌｌｉｅの変法）を用いて軽度に対比染色された。
免疫組織化学染色手順において、陰性対照が、一次抗体をアイソタイプの対照免疫グロブリン（Ｒ５６５）又は抗体希釈剤単独（陰性バッファー対照）と置換することにより取得された。
陽性対照が、ＡＭＨＲ２トランスフェクトＣＯＶ４３４細胞及びヒト顆粒膜腫瘍サンプルを使用することにより取得された。
処理後、Ｐｈｉｌｉｐｓ  ＩＭＳによるデジタル化により、切片が観察された。全ての試料は、病理学者２名により独立にスコア化された。
標識の局在化が詳記された：細胞質及び／又は膜。
強度が、下記のスコアリングシステムを通じて腫瘍細胞膜及び／又は細胞質の明白な褐色標識として分類された：標識の強度は、陰性の場合０、弱い場合１、中程度の場合２、及びＣＯＶ４３４陽性対照で示されるように強い場合には３として定義された。
頻度は、ＡＭＨＲＩＩを発現する細胞のパーセント（％）として定義された。壊死性のエリアは分析から除外された。グローバル組織学的スコアが、頻度×膜発現と細胞質発現とを足し合わせた強度スコアの平均値（０〜３）を使用することにより規定された。
全てのスライドが遅滞なく保管された。
【０２０６】
Ｂ．結果
様々な一次ヒト癌細胞によるＡＭＨＲＩＩ膜発現の結果が図３にも表され、ＡＭＨＲＩＩ発現スコアが、異なる癌細胞型のパネルについて提示されている。
【０２０７】
結果が、図３に表されている。結果は、結腸癌、肝臓癌、精巣癌、甲状腺癌、胃癌、膀胱癌、膵癌、並びに頭頸部癌を含む、複数の様々な非婦人科ヒト癌において、ＡＭＨＲＩＩが細胞表面で発現していることを示した。
【０２０８】
実施例３：非婦人科癌（ヒト腫瘍異種移植）におけるＡＭＨＲＩＩ発現
Ａ．材料及び方法
Ａ．１．目的
ビオチン化された３Ｃ２３Ｋモノクロナール抗体を使用して、抗ミュラー管ホルモン受容体２型（ＡＭＨＲ２）の発現を検出する為の、マウス（ＰＤＸ）を対象としたヒト癌細胞異種移植の免疫組織化学試験
【０２０９】
Ａ．２．プロトコール及び試験法
細胞株：ホルムアルデヒド酢酸アルコール（ＡＦＡ）中において、セルブロックの構成で固定化された
ヒト腫瘍：外部サンプルについてホルマリン中で固定、及びキュリー研究所から入手したライドについてＡＦＡ中で固定
免疫組織化学（ＩＨＣ）技術は、サンプルを脱蝋し、ｐＨ９でアンマスキングした後に可能であった（ＥＺ  Ｒｅｔｒｉｅｖｅｒマイクロウェーブ中、９０℃で１５分間、その後に２０分間冷却）。
免疫ペルオキシダーゼ技術、及びＤＡＢ発色基質の顕在化による抗ミュラー管ホルモン受容体ＩＩ型の検出。
内因性ペルオキシダーゼ活性をブロックした後、スライドは、希釈されたビオチン化一次抗体（１／８００、８μｇ／ｍＬ）と共に室温で９０分間インキュベートされた。組織切片は、次にＰＢＳで洗浄され、アビジン／ビオチンＡＢＣ［Ｖｅｃｔｏｒ社］複合体と共に３０分間インキュベートされた。免疫反応シグナルがＤＡＢ基質溶液を使用して検出された（ＤＡＢ＋基質バッファー／液体ＤＡＢ＋クロモゲン、１０分間インキュベーション）。最終的に、切片は、Ｍａｙｅｒのヘマトキシリン（Ｌｉｌｌｉｅの変法）を用いて軽度に対比染色された。
免疫組織化学染色手順において、陰性対照が、一次抗体をアイソタイプの対照免疫グロブリン（Ｒ５６５）又は抗体希釈剤単独（陰性バッファー対照）と置換することにより取得された。
陽性対照が、ＡＭＨＲ２トランスフェクトＣＯＶ４３４細胞及びヒト顆粒膜腫瘍サンプルを使用することにより取得された。
処理後、Ｐｈｉｌｉｐｓ  ＩＭＳによるデジタル化により、切片が観察された。全ての試料は、病理学者２名により独立にスコア化された。
標識の局在化が詳記された：細胞質及び／又は膜。
強度が、下記のスコアリングシステムを通じて腫瘍細胞膜及び／又は細胞質の明白な褐色標識として分類された：標識の強度は、陰性の場合０、弱い場合１、中程度の場合２、及びＣＯＶ４３４陽性対照で示されるように強い場合には３として定義された。
頻度は、ＡＭＨＲＩＩを発現する細胞のパーセント（％）として定義された。壊死性のエリアは分析から除外された。グローバル組織学的スコアが、頻度×膜発現と細胞質発現とを足し合わせた強度スコアの平均値（０〜３）を使用することにより規定された。
全てのスライドが遅滞なく保管された。
【０２１０】
Ｂ．結果
ａ）対照
陰性対照及びアイソタイプ対照は、腫瘍細胞上で反応性が欠損していた。
陽性対照サンプル（増幅されたＣＯＶ４３４  ＡＭＨＲＩＩ）は、拡散性の細胞免疫染色を示した（強度スコア：３）。標識は均質であり（頻度スコア：１００％）、細胞質及び膜の局在化が認められた。
陽性の顆粒膜対照サンプルは、強い腫瘍細胞の免疫染色を示した（強度スコア３）。標識は均質であり（頻度スコア：１００％）、細胞質及び膜の局在化が認められた。
【０２１１】
ｂ）患者由来の異種移植（ＰＤＸ）サンプルのスクリーニング。
指摘すべき重要事項は、ＡＦＡ中で処理されたサンプルと比較して、サンプルがホルマリン中で固定化されたとき、ＡＭＨＲ２の膜発現が過小評価されるように思われることを含む。
【０２１２】
マウス内の様々なヒト腫瘍異種移植によるＡＭＨＲＩＩ膜発現の結果が、図４に表され、ＡＭＨＲＩＩ発現スコアが、異なる癌細胞型のパネルについて提示されている。
【０２１３】
ヒト腫瘍異種移植によるＡＭＨＲＩＩ発現の結果の一部が、下記の表３にまとめられている。
【０２１４】
【表３】
2020516668.tif 000006
【０２１５】
ｃ）結論
ＡＭＨＲ２タンパク質発現が、ＡＭＨＲ２転写について陽性のＰＤＸモデル６例のうち４において確認された。これらのＰＤＸは、神経膠腫（ＯＤＡ１４−ＲＡＶ）及び結腸（ＴＣ３０６−ＢＡＵ）癌から調製された。発現のレベルは中程度であったが、しかし有意であり、グローバルスコア１〜１．５により特徴付けられた。このようなデータは、婦人科癌以外の癌がＡＭＨＲ２を発現した可能性があることを示唆する。
【０２１６】
このようなモデルは、抗ＡＭＨＲ２療法を特徴付ける為に将来使用されることができると考えられる。
【０２１７】
実施例４：ＡＭＨＲＩＩ発現性の非婦人科癌に対する抗ＡＭＨＲＩＩ抗体のイン・ビボ（ｉｎ  ｖｉｖｏ）での有効性
Ａ．材料及び方法
Ａ．１．略号
このプロトコールで一般的に使用される略号が、表４及び表５の両方に示されている。
【０２１８】
【表４】
2020516668.tif 000007
【０２１９】
【表５】
2020516668.tif 000008
【０２２０】
Ａ．２．試験の目的
Ｂａｌｂ／Ｃヌードマウスを対象として行われるＨｕｐｒｉｍｅ（登録商標）ＨＣＣ異種移植モデルＬＩ１０９７の処置において、ＧＭ１０２と命名されるＧａｍａＭａｂｓ社の抗ＡＭＨＲ２モノクロナール抗体のイン・ビボ（ｉｎ  ｖｉｖｏ）での有効性を前臨床的に評価すること。ＲＮＡｓｅｑ（トランスクリプトーム配列決定法）を使用して、ＣｒｏｗｎＢｉｏ社により処理されたＡＭＨＲ２転写についてスクリーニングを行った後に、モデルＬＩ１０９７が選択された。更に、このモデルのＡＭＨＲ２膜タンパク質発現が、キュリー研究所（Ｉｎｓｔｉｔｕｔ  Ｃｕｒｉｅ）、フランス、によりＩＨＣを使用して確認された。
【０２２１】
Ａ．３．実験設計
【０２２２】
【表６】
2020516668.tif 000009
【０２２３】
Ａ．４．動物
系統：ＢＡＬＢ／ｃヌード
年齢：７〜８週齢（処置開始時）
性別：メス
総数：マウス３２匹＋スペア
【０２２４】
Ａ．５．動物収容具
マウスは、換気された個別ケージ（１ケージ当たり４匹）内、下記の条件で収容される：
温度：２０〜２６℃
湿度：３０〜７０％
照光時間：明光１２時間及び暗光１２時間
ポリスルホンケージ（サイズ３２５ｍｍ×２１０ｍｍ×１８０ｍｍ）
寝床材は、トウモロコシの穂軸であり、毎週交換される。
飼料：動物は、全試験期間を通じて照射滅菌された乾燥顆粒飼料に自由にアクセスできる。
水：動物は滅菌飲料水に自由にアクセスできる。
ケージ識別ラベル：動物の数、性別、系統、受け入れ日、処置、試験番号、群番号、及び処置開始日
動物の識別：動物は耳タグによりマークされた。
【０２２５】
Ａ．６．ＨｕＰｒｉｍｅ（登録商標）モデルプロファイル
男性ＨＣＣ患者に由来するＨｕＰｒｉｍｅ（登録商標）肝臓癌モデルＬＩ１０９７が、この有効性試験の為に選択された。このモデルは、イノキュレーション後、２０〜２５日のうちに１０００ｍｍ３に達した。
【０２２６】
Ａ．７．テスト品及び陽性対照品
製品識別情報：ＧａｍａＭａｂｓ社のＡｂ（３Ｃ２３Ｋ）
製造業者：ＧａｍａＭａｂｓ  Ｐｈａｒｍａ社
ロット番号：Ｒ１８Ｈ２−ＬＰ０１
バッチ：０４ＧＡＭ１４０５１３ＡＰＩ
必要とされる量：動物ＢＷ２５ｇに基づき２５５ｍｇ、５０％のスペアを含む
パッケージ及び保管条件：［３０ｍｌ／チューブ］、３０ｍｌ、［２〜８℃］
濃度：１０．１ｇ／Ｌ
製品識別情報：ソラフェニブ
製造業者：Ｍｅｌｏｎｅｐｈａｒｍａ社
ロット番号：Ｄ１１１１Ａ
必要とされる量：動物ＢＷ２５ｇに基づき３００ｍｇ、５０％のスペアを含む
パッケージ及び保管条件：４００ｍｇ、［ＲＴ］
【０２２７】
Ａ．８．実験方法及び手順
Ａ．８．１．腫瘍のイノキュレーション及び群の分配
選択された一次ヒト癌組織でイノキュレーションされたストックマウスに由来する腫瘍断片が採取され、ＢＡＬＢ／ｃヌードマウスにイノキュレーションするのに使用された。２０１５年６月９日に、各マウスは、腫瘍を発現させる為に、一次ヒトＨＣＣモデルＬＩ１０９７断片（Ｒ１２Ｐ４、直径２〜４ｍｍ）を右脇腹の皮下にイノキュレーションされた。親マウス番号は、＃８０１５０、＃８０１５１、及び＃８０１５３であった。２０１５年６月２４日、平均腫瘍サイズが約１４５ｍｍ３に達したときにマウスが群に分けられた。マウスは、その腫瘍サイズに基づき、４つの実験群に無作為に割り振られた。各群は、１ケージ当たりマウス４匹で、マウス８匹から構成された。その日付は０日目として表された。セクション１．１実験設計に示される事前に決定されたレジメンに従い、試験品が、０日目（２０１５年６月２４日）〜２７日目（２０１５年７月２１日）まで担腫瘍マウスに投与された。
【０２２８】
Ａ．８．２．投与停止レジメン
個々のマウスの体重が２０％以上減少したとき、マウスには、その体重がベースラインまで回復するまで投与中断日（複数可）が設けられる。この試験では、いずれの投与も中止されなかった。
【０２２９】
Ａ．８．３．観察所見
この試験における動物の取り扱い、飼育、及び処置と関連する全ての手順は、実験動物の飼育に関する評価認証協会（ＡＡＡＬＡＣ：Association  for  Assessment  and  Accreditation  of  Laboratory  Animal  Care）のガイダンスを順守して、ＣｒｏｗｎＢｉｏ社の施設内動物の飼育・使用委員会（ＩＡＣＵＣ：Institutional  Animal  Care  and  Use  Committee）により承認されたガイドラインに従い実施された。ルーチンモニタリングの時に、動物は、腫瘍増殖が正常な挙動に及ぼすあらゆる効果、例えば運動性、飼料及び水の消費（目視のみ）、体重増加／減少、眼／毛のつやびけ、及び任意のその他の異常な効果、についてチェックされた。各サブセット内の動物数に基づき、死亡及び観察された臨床徴候が記録された。
【０２３０】
Ａ．８．４．腫瘍測定及びエンドポイント
腫瘍サイズが、カリパスを使用して二次元で１週間に２回測定され、体積は式：ＴＶ＝０．５ａ×ｂ２（式中、ａ及びｂは、それぞれ腫瘍の長径及び短径である）を使用してｍｍ３で表される。腫瘍サイズは、次に略号の表２内の説明に従い、ＴＧＩ、Ｔ／Ｃ、及びＴ−Ｃ値の計算で使用される。
【０２３１】
Ａ．８．５．終了
試験は、２８日間の処置後に終了し、マウスは殺された。
【０２３２】
下記の条件に基づき、個々の動物又は群全体の存命実験が、死亡前又は昏睡状態に到達する前に人道的安楽死により終了する。
重度の苦痛及び／又は疼痛の重度の臨床徴候を伴う継続的悪化状態にあり、飼料又は水を適切に摂取できない；
有意な体重（衰弱）（＞２０％）；
個々のマウスについて、３０００ｍｍ３を上回る腫瘍サイズ、又はＭＴＶ＞２０００ｍｍ３が認められる。
【０２３３】
Ａ．８．６．統計分析
平均値及び平均値の標準誤差（ＳＥＭ）を含む要約統計量が、各時点における各群の腫瘍体積について提供される。群間の腫瘍体積の差異の統計分析が、一元ＡＮＯＶＡとその後のＧａｍｅｓ−Ｈｏｗｅｌｌを使用する多重比較を使用して評価された。全てのデータがＳＰＳＳ１６．０を使用して分析された。Ｐ＜０．０５は統計的に有意とみなされた。
【０２３４】
Ｂ．結果
Ｂ．１．体重
担腫瘍マウスにおける体重及び体重変化の結果が測定された。全てのマウスが、投与中断日が設けられることなくその処置を完了した。ＧａｍａＭａｂｓ社のＡｂで処置されたマウスでは、動物の死亡又は有意な体重減少は認められなかったが、しかしソラフェニブで処置されたマウスにおいて、７％の体重減少が認められた。
【０２３５】
Ｂ．２．腫瘍体積
異なる時点における異なる群の腫瘍サイズが表７に示されている。
【０２３６】
【表７】
2020516668.tif 000010
【０２３７】
Ｂ．２．腫瘍増殖阻害
腫瘍増殖阻害が表８に要約されている。
【０２３８】
【表８】
2020516668.tif 000011
【０２３９】
Ｂ．３．腫瘍増殖曲線
異なる群の腫瘍増殖曲線が図５に示されている。
【０２４０】
図５は、ＨｕＰｒｉｍｅ（登録商標）肝臓異種移植モデルＬＩ１０９７を対象としたテスト化合物、ＧａｍａＭａｂｓ社のＡｂ及びソラフェニブでの処置中の、異なる群内のマウスの腫瘍体積を表す。
【０２４１】
Ｂ．４．結果の要約及び考察
この試験では、テスト化合物、ＧａｍａＭａｂｓ社のＡｂ及び陽性対照薬物ソラフェニブの有効性が、メスＢＡＬＢ／ｃヌードマウスを対象として、ＨｕＰｒｉｍｅ（登録商標）ＨＣＣ異種移植モデルＬＩ１０９７の処置において評価された。
【０２４２】
群１（ビヒクル、ＢＩＷ×２週間、ｉ．ｖ．）、群２（ＧａｍａＭａｂｓ社のＡｂ、２０ｍｇ／ｋｇ、ＢＩＷ×４週間、ｉ．ｖ．）、群３（ＧａｍａＭａｂｓ社のＡｂ、５０ｍｇ／ｋｇ、ＢＩＷ×４週間、ｉ．ｖ．）、及び群４（ソラフェニブ、５０ｍｇ／ｋｇ、ＱＤ×４週間、ｐ．ｏ．）では、試験終了時の体重変化は、それぞれ０．６７％、２．６８％、−０．３８％、及び−７．６３％であった。２０ｍｇ／ｋｇ及び５０ｍｇ／ｋｇでのテスト化合物、ＧａｍａＭａｂｓ社のＡｂは、ＬＩ１０９７担腫瘍マウスにおいて良好な忍容性を示した。ソラフェニブ、５０ｍｇ／ｋｇ処置群のマウスは、処置２７日目に平均最大７．６３％の体重減少を示した。
【０２４３】
ビヒクル処置されたマウスの平均腫瘍サイズは、１３日目に２２６９．４６ｍｍ３に達した。群２（ＧａｍａＭａｂｓ社のＡｂ、２０ｍｇ／ｋｇ）及び群３（ＧａｍａＭａｂｓ社のＡｂ、５０ｍｇ／ｋｇ）は、ビヒクル処置に対して５０％の抗腫瘍応答を生み出し、ＴＧＩはそれぞれ５１．３％及び５４．３％であった（Ｐ＝０．１００及び０．１１１）。群４（ソラフェニブ、５０ｍｇ／ｋｇ）は有意な抗腫瘍活性を生み出し、処置１３日目のＴＧＩは６４．９％であった（Ｐ＝０．０２４）。表８及び図５に提示されている処置後の異なる時点、異なる群における腫瘍サイズの結果は、群２及び群３（ＧａｍａＭａｂ社のＡＢ、それぞれ２０ｍｇ／ｋｇ及び５０ｍｇ／ｋｇ）の処置に対する応答は、ソラフェニブと同様に、少なくとも２７日間維持されることを示している。しかし、群２及び群３の腫瘍応答は、より良好な統計的有意性を得るにはばらつきが大き過ぎた可能性がある。
【０２４４】
まとめとして、この試験では、テスト化合物ＧａｍａＭａｂｓ社のＡｂは、一次ＨｕＰｒｉｍｅ（登録商標）ＨＣＣ異種移植モデルＬＩ１０９７に対して、この病理学に対する標準的な医療であるソラフェニブにより誘発された活性とほぼ同様の抗腫瘍活性を生み出した。更に、ソラフェニブ処置が最大平均７％の体重減少を誘発した一方、ＧＭ１０２の抗腫瘍活性には、毒性イベントは一切付随しなかった。
【０２４５】
実施例５：ＡＭＨＲＩＩ発現性の非婦人科癌に対する抗ＡＭＨＲＩＩイムノコンジュゲートのイン・ビボ（ｉｎ  ｖｉｖｏ）での有効性
Ａ．材料及び方法
Ａ．１．略号
この実施例で一般的に使用される略号は、実施例４の表３及び表４のものと同じである。
【０２４６】
Ａ．２．目的
メスＢＡＬＢ／ｃヌードマウスを対象として行われるＰＤＸモデルＬＩ１０９７の処置において、ＧａｍａＭａｂｓ社の化合物ＧＭ１０３のイン・ビボ（ｉｎ  ｖｉｖｏ）での有効性を前臨床的に評価すること。
【０２４７】
Ａ．３．実験設計
【０２４８】
【表９】
2020516668.tif 000012
【０２４９】
Ａ．４．材料
Ａ．４．１．動物
系統：ＢＡＬＢ／ｃヌード
年齢：６〜８週齢
性別：メス
総数：マウス３２匹＋スペア
【０２５０】
Ａ．４．２．動物収容具
マウスは、換気された個別ケージ（１ケージ当たり４〜５匹）内、下記の条件で収容される：
温度：２０〜２６℃
湿度：３０〜７０％
照光時間：明光１２時間及び暗光１２時間
ポリスルホンケージ（サイズ３２５ｍｍ×２１０ｍｍ×１８０ｍｍ）
寝床材は、トウモロコシの穂軸であり、毎週交換される。
飼料：動物は、全試験期間を通じて照射滅菌された乾燥顆粒飼料に自由にアクセスできる。
水：動物は滅菌飲料水に自由にアクセスできる。
ケージ識別ラベル：動物の数、性別、系統、受け入れ日、処置、プロジェクトＩＤ、群番号、動物ＩＤ、及び処置開始日
動物の識別：動物は耳タグによりマークされた。
【０２５１】
Ａ．４．３．モデル情報
ＨｕＰｒｉｍｅ（登録商標）肝臓癌異種移植モデルＬＩ１０９７が、この有効性試験の為に選択された。
【０２５２】
Ａ．４．４．テスト品及び対照品
製品識別情報：ＧＭ１０３
製造業者：ＧａｍａＭａｂｓ  Ｐｈａｒｍａ社
物理的説明：溶液
バッチ番号：ＧＡＭ１００−ＮＣ００５−４
必要とされる量：動物のＢＷ２５ｇに基づき４．４８ｍｇ、４０％のスペアを含む。
パッケージ及び保管条件：４．３ｍｇ／１．３ｍｌ／バイアル、４ｏＣで保管される。
【０２５３】
Ａ．５．実験方法
Ａ．５．１．腫瘍イノキュレーション
各マウスは、腫瘍を発現させる為に、一次ヒト肝臓癌異種移植モデルＬＩ１０９７断片（直径２〜３ｍｍ）を用いて右脇腹の皮下にイノキュレーションされる。
【０２５４】
Ａ．５．２．群の割り振り
平均腫瘍サイズがおよそ２００ｍｍ３に達したとき、マウスは、表３に示す４つの群に無作為に割り振られる。各群はマウス８匹を含有する。
【０２５５】
Ａ．５．３．試験品投与溶液の調製
容量タイプ：体重に応じて投与容量を調整する（投与容量＝１０μＬ／ｇ）
【０２５６】
【表１０】
2020516668.tif 000013
【０２５７】
Ａ．５．４．観察所見
腫瘍をイノキュレーションした後、動物は疾病及び死亡について毎日チェックされる。ルーチンモニタリング時に、動物は、正常な挙動、例えば運動性、飼料及び水の消費、体重の増減、眼／毛のつやびけ、に対する腫瘍増殖及び処置のあらゆる効果並びに任意のその他の異常な効果についてチェックされる。死亡及び観測された臨床徴候は、各サブセット内の動物の数に基づき記録される。
【０２５８】
腫瘍サイズは、カリパスにより二次元で週２回測定される。腫瘍体積は、式：ＴＶ＝０．５ａ×ｂ２（式中、ａ及びｂは、それぞれ腫瘍の長径及び短径である）を使用してｍｍ３で表される。
【０２５９】
体重は、週２回測定される。
【０２６０】
Ａ．５．５．エンドポイント
次の分析が終了時に適用される：ＴＧＩ（腫瘍増殖インデックス）及びＴＣ。
【０２６１】
Ａ．５．６．終了
下記の条件に基づき、個々の動物又は群全体の存命実験が、死亡前又は昏睡状態に達する前に人道的安楽死により終了する。
重度の苦痛及び／又は疼痛の重度の臨床徴候を伴う継続的悪化状態にあり、飼料又は水を適切に摂取できない；
有意な体重減少（衰弱）（＞２０％）；
個々のマウスについて３０００ｍｍ３を上回る腫瘍サイズ、又は群全体のマウスについてＭＴＶ＞２０００ｍｍ３が認められる。
【０２６２】
Ａ．５．７．統計分析
３群又はそれ超の群についてそれらを比較する場合、一元ＡＮＯＶＡが実施され、多重比較がそれに後続する。全てのデータがＳＰＳＳ１６．０を使用して分析される。Ｐ＜０．０５は統計的に有意とみなされる。
【０２６３】
Ａ．６．コンプライアンス
この試験内の動物の飼育及び使用と関係するプロトコール及びあらゆる修正（複数可）又は手順は、実施前にＣｒｏｗｎＢｉｏ社の動物の飼育・使用委員会（ＩＡＣＵＣ）によりレビュー及び承認される。試験期間中、動物の飼育及び使用が、実験動物の飼育に関する評価認証協会（ＡＡＡＬＡＣ）の規定に基づき実施される。
【０２６４】
Ｂ．結果
図６の結果は、５ｍｇ／ｋｇ又はそれ超の用量におけるＧＭ１０３  ＡＤＣイムノコンジュゲートのイン・ビボ（ｉｎ  ｖｉｖｏ）での抗癌活性を示す。
【０２６５】
実施例６：更なる非婦人科癌におけるＡＭＨＲＩＩ発現
Ａ．材料及び方法
Ａ．１．フローサイトメトリーによるＡＭＨＲＩＩ膜発現分析
分析用の細胞の調製
組織は、手術１時間内に切除され、１〜ｍｍ２の断片に細分化され、ペニシリン（１０％）、ストレプトマイシン（１０％）、及びゲンタマイシン（０．１ｍｇ／ｍＬ；Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ社）を含有するＲＰＭＩ内で洗浄された。
組織断片は、コラゲナーゼ及びＤＮＡｓｅ（２ｍｇ／ｍＬ；Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ社）を用いて、３７℃において高速振盪させながら２〜４時間消化された。
粘液及び大きなデブリは、４０−ｌｍ細胞ストレーナーを通じた濾過により除去された。
生存細胞が、フィコールグラジエント遠心分離により取得された。
【０２６６】
再懸濁腫瘍細胞上のＡＭＨＲＩＩ結合性部位の定量は、ＱｕａｎｔｕｍＴＭ  Ｓｉｍｐｌｙ  Ｃｅｌｌｕｌａｒ（Ｂａｎｇｓ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ社）を使用して、製造業者の指示に従い実施された：
要するに、ヒトＩｇＧ抗体のＦｃ部分に対して特異的なマウス抗ヒトＩｇＧを用いて、その異なる校正済みの量で標識された４つのミクロビーズ集団が、ＡｌｅｘａＦｌｕｏｒ４８８コンジュゲート抗ＡＭＨＲＩＩ３Ｃ２３Ｋで染色された。ＦＡＣＳチューブにおいて、キットに含まれる各バイアルの一滴が、ＰＢＳ１×（５０μｌ）に添加される：
１−ビーズＢ（ブランク）
２−ビーズ１＋３Ｃ２３Ｋ−ＡＦ、１０μｇ／ｍＬ
３−ビーズ２＋３Ｃ２３Ｋ−ＡＦ、１０μｇ／ｍＬ
４−ビーズ３＋３Ｃ２３Ｋ−ＡＦ、１０μｇ／ｍＬ
５−ビーズ４＋３Ｃ２３Ｋ−ＡＦ、１０μｇ／ｍＬ（必要な場合には、濃度は２５μｇ／ｍｌまで高めることができた）
各ビーズ集団は、異なる量のＡｌｅｘａＦｌｕｏｒ４８８コンジュゲート抗ＡＭＨＲＩＩ３Ｃ２３Ｋと結合して、対応する蛍光強度を生成し、その強度はＦＡＣＳ  Ｃａｎｔｏ  ＩＩサイトメーター（ＢＤ社）上で分析される。
校正曲線は、その割り振られた抗体結合能（ＡＢＣ：Antibody  Binding  Capacity）に対して各ビーズ集団の平均蛍光強度をプロッティングすることにより生成された。
【０２６７】
細胞は、エッペンドルフチューブ（１．５ｍｌ）内で通常染色された。
全ての遠心分離工程は、４℃において実施された。
全てのインキュベーション工程は、抗体の内部移行を回避する為に４℃で実施された。
細胞３．５百万個（トリプシン処理されたＣＯＶ４３４−ＭＩＳＲＩＩ又は新たに解離させた腫瘍細胞）が、２００〜３００ｇで５分間遠心分離され、ＰＢＳ（１チューブ当たり５００μｌ）で１回洗浄された。
氷冷ＰＢＳ／２％ＦＢＳを用いて洗浄され（２００〜３００ｇで３分間）、７００μｌのＰＢＳ１×中に再懸濁され、下記の表１１に記載されている条件の為にＦＡＣＳチューブにより１００μｌ分配する：
【０２６８】
【表１１】
2020516668.tif 000014
【０２６９】
ＰＢＳ／１％ＦＢＳ中の抗体３Ｃ２３Ｋ−ＡＦ４８８と共に、４℃で３０分間インキュベーションする
ＰＢＳ／２％ＢＳＡ中で２回洗浄する（２００〜３００ｇで３分間）
ＰＢＳ中で２回洗浄する（２００〜３００ｇで３分間）
ＰＢＳ（３００〜４００μｌ）を添加し、できる限り速やかにＦＡＣＳ上で分析する。
このプロトコールは、膜の完全性を維持する為に、細胞外染色する為の固定工程を一切含まない。従って、膜ＡＭＨＲＩＩのみが検出される。
【０２７０】
Ａ．２．免疫蛍光によるＡＭＨＲＩＩ膜発現
間接的免疫蛍光検査法が、従ってＡｌｅｘａ  Ｆｌｕｏｒ（登録商標）４８８にコンジュゲートした抗ＡＭＨＲＩＩ３Ｃ２３Ｋ抗体を用いて開発された。次にウサギ抗ＡＦ４８８抗体、及びＡｌｅｘａ  Ｆｌｕｏｒ（登録商標）６４７にコンジュゲートしたヤギ抗ウサギ抗体を用いて、シグナル増幅が２工程で実施された。
【０２７１】
凍結組織切片が、クリオスタットＬｅｉｃａ  ＣＭＤ１９５０を用いて−２０℃に保つことにより作成される。凍結された組織は、ＯＣＴ化合物と共に金属ディスク上に取り付けられ、凝固したら、ディスクホルダー上に取り付けられた。７μｍの切片が実現し、Ｓｕｐｅｒｆｒｏｓｔ  Ｐｌｕｓスライド（Ｍｅｎｚｅｌ  Ｇｌａｓｅｒ社）上に配置され、−２０℃で速やかに保管された。
【０２７２】
凍結切片スライドがＰＢＳ１×で再水和され、次に３００μｌの冷却アセトン（ＶＷＲ  Ｐｒｏｌａｂｏ社）を用いてそれを覆うことにより、−２０℃で１０分間固定化され、全ての組織が溶液により全部回収されることを保証する為にパラフィルムを用いて回収された。ＰＢＳでリンスした後、スライドは、抗体と組織コンポーネントとの間の非特異的な相互作用をブロックする為に、３００μｌのブロッキングバッファー（ＰＢＳ１×−ＢＳＡ（２％）−ヤギ血清（１０％）−トリトンＸ１００（０．１％））を用いて、加湿ボックス内、ＲＴにおいて１時間処理された。ブロッキングバッファー中で１０μｇ／ｍｌに希釈された３Ｃ２３Ｋ−ＡＦ４８８又はアイソタイプ対照Ｒ５６５−ＡＦ４８８が、加湿ボックス内、ＲＴにおいて３０分間適用された。ＰＢＳ１×−トリトンＸ１００（０．１％）で３回洗浄（３×１０分間）後、ブロッキングバッファー中で１／５００に希釈された抗ＡＦ４８８抗体（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ社）が、ＲＴで３０分間インキュベーションする為に（３００μｌ）添加された。ＰＢＳ１×−トリトンＸ１００（０．１％）で３回洗浄（３×１０分間）後、ブロッキングバッファー中で１／５００に希釈されたＡＦ６４７コンジュゲート抗ウサギ抗体（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ社）が、ＲＴで３０分間インキュベーションする為に（３００μｌ）添加された。ＰＢＳ１×−トリトンＸ１００（０．１％）による洗浄（３×１０分間）が行われ、次に０．５μｇ／ｍｌのＤＡＰＩ（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ社）が１０分間適用された。ＰＢＳ及びＨ２Ｏでリンスした後、スライド切片が、気泡を回避しながらＤＡＫＯ社蛍光封入剤１滴（５０μｌ）と共にカバースリップ（２４×５０ｍｍ、Ｋｎｉｔｔｅｌ  Ｇｌａｓｓ社）の下に取り付けられ、画像化されるまで暗光、４℃で保管された。
【０２７３】
画像取得が、Ｍｅｔａｖｕｅ  ｓｏｆｔｗａｒｅ（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｄｅｖｉｃｅｓ社）により制御されたＣｏｏｌＳｎａｐ  ＥＺ  ＣＣＤカメラが装備された蛍光顕微鏡Ｌｅｉｃａ  ＤＭ５０００Ｂを使用して実施された。画像の後処理が、ＩｍａｇｅＪフリーソフトウェア（ｈｔｔｐ：／／ｉｍａｇｅｊ．ｎｉｈ．ｇｏｖ／ｉｊ／）を使用して実施される。
【０２７４】
Ｂ．結果
Ｂ．１．新鮮なヒト結腸直腸サンプルにおけるＡＭＨＲＩＩ発現
結腸直腸癌に作用された異なる個体４例から予め集められた腫瘍サンプルからのＡＭＨＲＩＩ膜発現のＦＡＣＳ分析が、図に７Ａ、７Ｂ、７Ｃ、及び７Ｄに示されている。結果は、腫瘍サンプル中に含まれる腫瘍細胞（ＣＤ３−Ｅｐｃａｍ＋）が、その膜でＡＭＨＲＩＩを発現することを示している。
【０２７５】
結腸直腸癌に作用された異なる個体２０例から予め集められた腫瘍サンプルの結果が、表１２に提示されている。
【０２７６】
表１２では、（ｉ）腫瘍細胞膜に存在するＡＭＨＲＩＩタンパク質の平均数を決定すること、及び（ｉｉ）腫瘍サンプル内の膜性ＡＭＨＲＩＩ陽性細胞のパーセント（％）を決定することにより、各腫瘍サンプル中のＡＭＨＲＩＩ発現が評価された。対応する腫瘍サンプルが「陽性」又は「陰性」のどちらに設定されるかの表示は、表１２の左カラムに提示されている。「陽性」の表示は、ＡＭＨＲＩＩが腫瘍細胞膜において有意に発現されていることを意味する。「陰性」の表示は、細胞膜におけるＡＭＨＲＩＩ発現は有意に検出されないことを意味する。
【０２７７】
表１２の結果は、腫瘍サンプル２０例のうち１５例が、発現レベルこそ様々ではあるが、膜性ＡＭＨＲＩＩを発現したことを示している。
【０２７８】
腫瘍サンプルに応じて、腫瘍細胞１個当たりの膜性ＡＭＨＲＩＩタンパク質の平均数（表１２では「細胞（腫瘍）１個当たりの受容体の数」と呼ばれる）は、５４０〜１５５０００以上変化した。
【０２７９】
腫瘍サンプルに応じて、膜性ＡＭＨＲＩＩタンパク質を発現する細胞の頻度（表１２では「ＡＭＨＲＩＩ陽性細胞（Ｅｐｃａｍ＋）のパーセント（％）」と呼ばれる）は、２０％〜１００％まで変化した。
【０２８０】
表１２の結果は、腫瘍細胞１個当たりの膜性ＡＭＨＲＩＩの平均数と膜性ＡＭＨＲＩＩを発現する腫瘍細胞の頻度との間において相関関係を示さなかった。
【０２８１】
Ｂ．２．ヒト結腸直腸腫瘍異種移植（患者由来の異種移植）におけるＡＭＨＲＩＩ発現
ヒト腫瘍異種移植サンプルが実施例３で開示されるように取得され、腫瘍細胞によるＡＭＨＲＩＩ発現が、材料及び方法のセクションで開示されている方法を使用して評価された。
【０２８２】
結腸直腸癌に作用された異なる個体４例から予め収集され、次にマウスに異種移植された腫瘍サンプルからのＡＭＨＲＩＩ膜発現のＦＡＣＳ分析が、図８Ａ、８Ｂ、８Ｃ、及び８Ｄに示されている。結果は、異種移植された腫瘍サンプルに含まれる腫瘍細胞（ＣＤ３−Ｅｐｃａｍ＋）はその膜でＡＭＨＲＩＩを発現することを示している。
【０２８３】
結腸直腸癌に作用された異なる個体１２例から予め収集され、次にマウスに異種移植された腫瘍サンプルの結果が、表１３に提示されている。
【０２８４】
表１３では、（ｉ）腫瘍細胞膜に存在するＡＭＨＲＩＩタンパク質の平均数を決定すること、及び（ｉｉ）異種移植腫瘍サンプル内の膜性ＡＭＨＲＩＩ陽性細胞のパーセント（％）を決定することにより、各異種移植腫瘍サンプルにおけるＡＭＨＲＩＩ発現が評価された。
【０２８５】
表１３の結果は、異種移植腫瘍サンプル１２例のうち６例が、発現レベルこそ様々ではあるが、膜性ＡＭＨＲＩＩを発現したことを示している。
【０２８６】
異種移植腫瘍サンプルに応じて、細胞１個当たりの膜性ＡＭＨＲＩＩタンパク質の平均数（表１３では「細胞（Ｅｐｃａｍ＋）１個当たりの受容体の数」と呼ばれる）は、１６０００以上〜約１０００００まで変化した。
【０２８７】
腫瘍サンプルに応じて、膜性ＡＭＨＲＩＩタンパク質を発現する細胞の頻度（表１３では「ＡＭＨＲＩＩ陽性細胞（Ｅｐｃａｍ＋）のパーセント（％）」と呼ばれる）は、０．５％〜８７％まで変化した。
【０２８８】
表１３の結果は、腫瘍細胞１個当たりの膜性ＡＭＨＲＩＩの平均数と膜性ＡＭＨＲＩＩを発現する腫瘍細胞の頻度との間において明確な相関関係を示さなかった。
【０２８９】
対応する腫瘍サンプルが「陽性」又は「陰性」のどちらに設定されるかの表示は、表１３の左カラムに提示されている。「陽性」の表示は、ＡＭＨＲＩＩが腫瘍細胞膜において有意に発現されないことを意味する。「陰性」の表示は、腫瘍細胞による膜ＡＭＨＲＩＩ発現は有意に検出されないことを意味する。
【０２９０】
Ｂ．３．新鮮な腎細胞癌サンプルにおけるＡＭＨＲＩＩ膜発現
材料及び方法のセクションで開示される方法を用いてヒト腎細胞癌腫瘍サンプルが取得され、腫瘍細胞（ＥｐＣａｍ＋）による膜ＡＭＨＲＩＩ発現がＦＡＣＳ分析により評価された。
【０２９１】
結果は、図９Ａ及び９Ｂに示されている。
【０２９２】
腎細胞癌に作用された異なる個体２例から予め集められた腫瘍サンプルからのＡＭＨＲＩＩ膜発現のＦＡＣＳ分析は、図９Ａ及び９Ｂに示されている。結果は、腎細胞癌腫瘍サンプルに含まれる腫瘍細胞（ＣＤ３−Ｅｐｃａｍ＋）が、その膜でＡＭＨＲＩＩを発現していることを示す。
【０２９３】
実施例７：ＡＭＨＲＩＩ発現性の婦人科癌に対する抗ＡＭＨＲＩＩ抗体のイン・ビボ（ｉｎ  ｖｉｖｏ）での有効性
Ａ．材料及び方法
ストックマウス（Ｅｎｖｉｇｏ社から入手した胸腺欠損のヌード−Ｆｏｘｎ１ｎｕ）に、Ｃｈａｍｐｉｏｎｓ  ＴｕｍｏｒＧｒａｆｔ（登録商標）モデルＣＴＧ−０４０１に由来する腫瘍断片が移植された。腫瘍が１０００〜１５００ｍｍ３に達した後、該腫瘍が採取され、腫瘍断片がメス試験マウスの左側腹部内にＳＣ移植された。各動物は、ＣＴＧ−０４０１について特定のパッセージロット：パッセージ６を用いて移植された。腫瘍増殖は、デジタルカリパスを使用して１週間に２回モニタリングされ、式（０．５２×［長さ×幅２］）を使用して腫瘍体積（ＴＶ）が計算された。腫瘍体積が１７５±７ｍｍ３に達した後、その腫瘍サイズに基づきマウスが選択され、１群当たり動物１２匹からなる４つの群に無作為に割り振られた（０日目）。０日目に投与が開始された後、動物は、デジタルスケールを使用して１週間に２回秤量され、ＴＶが１週間に２回、及び試験の最終日にも測定された。ビヒクル対照群内の平均腫瘍体積が１５００ｍｍ３に達したとき、又は最長６０日に達したときのうち、いずれかが最初に到来したときに試験は終了した。治験設計は下記の表１３に要約されている。
【０２９４】
【表１２】
2020516668.tif 000015
【０２９５】
Ｂ  結果
この実験の結果が、図１０に示されている。
【０２９６】
図１０の結果は、抗ＡＭＨＲＩＩ抗体ＧＭ１０２は、ＡＭＨＲＩＩ発現性のヒト結腸直腸腫瘍に対して有効なイン・ビボ（ｉｎ  ｖｉｖｏ）での抗腫瘍効果を有することを示す。
【０２９７】
とりわけ、抗ＡＭＨＲＩＩ抗体ＧＭ１０２は、主に使用される抗結腸癌分子イリノテカン（ＣＡＳ番号：１００２８６−９０−６）とは区別できない抗腫瘍効果を発揮する。
【０２９８】
【表１３】
2020516668.tif 000016
2020516668.tif 000017
【０２９９】
【表１４】
2020516668.tif 000018
2020516668.tif 000019
【図１Ａ】
2020516668.tif 000020
【図１Ｂ】
2020516668.tif 000021
【図２Ａ】
2020516668.tif 000022
【図２Ｂ】
2020516668.tif 000023
【図２Ｃ】
2020516668.tif 000024
【図２Ｄ】
2020516668.tif 000025
【図２Ｅ】
2020516668.tif 000026
【図２Ｆ】
2020516668.tif 000027
【図３】
2020516668.tif 000028
【図４】
2020516668.tif 000029
【図５】
2020516668.tif 000030
【図６】
2020516668.tif 000031
【図７Ａ】
2020516668.tif 000032
【図７Ｂ】
2020516668.tif 000033
【図７Ｃ】
2020516668.tif 000034
【図７Ｄ】
2020516668.tif 000035
【図８Ａ】
2020516668.tif 000036
【図８Ｂ】
2020516668.tif 000037
【図８Ｃ】
2020516668.tif 000038
【図８Ｄ】
2020516668.tif 000039
【図９Ａ】
2020516668.tif 000040
【図９Ｂ】
2020516668.tif 000041
【図１０】
2020516668.tif 000042
【配列表】
2020516668000001.app
【国際調査報告】
2020516668.tif 000043
2020516668.tif 000044
2020516668.tif 000045