(57)【要約】本明細書に開示されるのは、免疫アゴニスト抗体を含む液体薬剤の使用であり、その結果、前記免疫アゴニストの生物活性の少なくとも同じレベルを維持しながら、忍容性／有害事象プロファイルが改善される。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
がん又は感染症の治療における使用のための、免疫アゴニストを含む液体薬剤であって、皮下に投与される液体薬剤。
【請求項２】
（ａ）  約１〜１００ｍｇ／ｍｌの前記免疫アゴニスト；
（ｂ）  約１０〜３０ｍＭの、５〜６のｐＨを提供する少なくとも１種の緩衝剤；及び
（ｃ）  約０．０１〜０．１％（ｗ／ｖ）の非イオン性界面活性剤
を含む水溶液を含むことを特徴とする、請求項１に記載の使用のための液体薬剤。
【請求項３】
（ａ）  約１０〜８０ｍｇ／ｍｌの前記免疫アゴニスト；
（ｂ）  約２０ｍＭの、約５．５のｐＨを提供する、少なくとも１種の緩衝剤；及び
（ｃ）  約０．０２％（ｗ／ｖ））の非イオン性界面活性剤
を含む水溶液を含むことを特徴とする、請求項１又は２に記載の使用のための液体薬剤。
【請求項４】
約１８０〜３００ｍＭのスクスロースと約０〜２０ｍＭのメチオニンとをさらに含む、請求項１から３のいずれか一項に記載の使用のための液体薬剤。
【請求項５】
約２４０ｍＭのスクロースと約０〜１０ｍＭのメチオニンとをさらに含む、請求項４に記載の使用のための液体薬剤。
【請求項６】
前記緩衝剤が酢酸又はコハク酸緩衝剤、例えば酢酸ナトリウム又はコハク酸ナトリウム、又はそれらの組み合わせであり、任意選択的に約１４０ｍＭの塩化ナトリウムをさらに含む、請求項２から５のいずれか一項に記載の使用のための液体薬剤。
【請求項７】
前記非イオン性界面活性剤がポロキサマー１８８又はポリソルベート２０又はポリソルベート８０である、請求項２から６のいずれか一項に記載の使用のための液体薬剤。
【請求項８】
免疫アゴニストがアゴニストＣＤ４０抗体である、請求項１から７のいずれか一項に記載の使用のための液体薬剤。
【請求項９】
約１０ｍｇ／ｍｌのアゴニスト抗ＣＤ４０抗体と、約２０ｍＭのコハク酸ナトリウムと、ポリソルベート２０、ポリソルベート８０又はポロキサマー１８８から選択される、約０．０２％（ｗ／ｖ）の界面活性剤とを含有するｐＨ約５．５の水溶液であることを特徴とする、請求項１から８のいずれか一項に記載の使用のための液体薬剤。
【請求項１０】
免疫アゴニストが、配列番号２の軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）と配列番号３の重鎖可変ドメイン（ＶＨ）とを含むアゴニスト抗ＣＤ４０抗体である、請求項１から９のいずれか一項に記載の使用のための液体薬剤。
【請求項１１】
アゴニスト抗ＣＤ４０抗体がＡＴＣＣ寄託番号ＰＴＡ−３６０５を有する抗体、又は国際一般名セリクレルマブを有する抗体である、請求項１０に記載の使用のための液体薬剤。
【請求項１２】
請求項１から１１のいずれか一項に記載の使用のための液体薬剤であって、前記使用ががん、具体的には固形腫瘍、より具体的には結腸及び直腸の腺癌、非小細胞肺がん、頭頚部の扁平上皮癌の治療であることを特徴とする、液体薬剤。
【請求項１３】
請求項１から１１のいずれか一項に記載の使用のための液体薬剤であって、前記使用が感染症、特にＢ型肝炎ウイルス（ＨＢＶ）、Ｃ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）及び／又はヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）の治療であることを特徴とする、液体薬剤。
【請求項１４】
請求項１から１３のいずれか一項に記載の使用のための液体薬剤を投与するための注射装置。
【請求項１５】
請求項１から１３のいずれか一項に記載の使用のための液体製剤が入った１つ以上のバイアルと、前記製剤の患者への皮下投与のための、請求項１４に記載の注射装置とを含む、キット。
【請求項１６】
がん又は感染症に罹患している患者の治療のための、請求項１から１１のいずれか一項に記載の液体薬剤の使用であって、前記液体薬剤が皮下に投与されることを特徴とする、使用。
【請求項１７】
がん又は感染症の治療のための医薬の製造のための、請求項１から１１のいずれか１項に記載の液体薬剤の使用であって、前記液体薬剤が皮下に投与されることを特徴とする、使用。
【請求項１８】
請求項１７に記載の液体薬剤の使用であって、前記液体薬剤を使用して、１４、１５、１６、１７又は１８ｍｇ用量の前記免疫アゴニストを、好ましくは国際一般名セリクレルマブを有する抗体を皮下投与することを特徴とする、使用。
【請求項１９】
がんの治療のための医薬の製造のための、請求項１７又は１８に記載の液体薬剤の使用。
【請求項２０】
セリクレルマブと組み合わせて同時に又は逐次に投与するための、アテゾリズマブ又はベバシズマブから選択される抗体を含む医薬を第２の成分としてさらに含む、請求項１９に記載の使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、非経口抗体製剤、特に、免疫アゴニストとして作用する抗体又は抗体断片の皮下（ｓｃ）投与薬剤の分野に関する。
【背景技術】
【０００２】
免疫調節抗体は、治療アプローチを提供し、抗腫瘍免疫応答を直接的に増強するために使用するか、又は抗がんワクチンのアジュバントとして使用することもできる(Melero, I., et al. Nat Rev Cancer 7, 2007, 95-106)。免疫アゴニスト、特にアゴニスト抗ＣＤ４０抗体は、これらの試薬の最も効果的なクラスの１つを構成する。ＣＤ４０は、樹状細胞、Ｂ細胞、及びマクロファージ等の抗原提示細胞（ＡＰＣ）上に発現する腫瘍壊死因子スーパーファミリーの細胞表面メンバーである。抗ＣＤ４０アゴニストを用いた前臨床試験は、抗原提示細胞（ＡＰＣ）上の架橋抗体を用いてＣＤ４０の誘発することは、通常はＣＤ４０リガンドを介して提供されるＣＤ４  Ｔ細胞ヘルプの代わりになり得、ＣＤ８エフェクターＴ細胞の活性化及び増殖を促進することを示唆している(Li, F. et al, Science 333, 2011, 1030-1034)。さらに、ＣＤ４０で活性化されたマクロファージは、直接殺腫瘍作用も発揮し得る(Beatty, G. L., et al. Science 331, 2011, 1612-1616; Vonderheide, R. H., et al., Oncoimmunology 2, 2013, e23033)。ＣＤ４０アゴニストは、国際公開第２００３／０４０１７０号に開示されている。
【０００３】
免疫アゴニストの従来の静脈内（ｉｖ）投与は、好ましくない有害事象又は忍容性プロファイルを伴うことが多く、その結果、前記免疫アゴニストの最適な治療効果が得られなかったり、又は治療が中断されたりすることがある（例えば、Vonderheide R. H., et al., Clin Cancer Res 19(5), 2013, 1035-1043を参照）。静脈内抗体製剤で見られる効果のいくつかを克服するために、抗体の皮下（ｓｃ）投与が使用される場合がある。抗体のいくつかのｓ．ｃ製剤は知られており(Lundin J., et al., Blood 100 (3), 2002, 2001, 768-773; Davies A. et al., Lancet Oncol 15(3), 2014, 343-352)、いくつかの市販品が入手可能である。しかしながら、これらの製剤の大部分はアンタゴニスト抗体を含み、且つ、所望の効果を達成するために大抵は特定の添加剤（例えばヒアルロニダーゼなど）が必要である。免疫アゴニストのｓｃ投与に適用可能な新しい代替の薬学的製剤を探索する必要性が残っている。
【０００４】
本明細書に開示の特異的ＣＤ４０アゴニストの薬学的組成物は、例えば国際公開第２００３／０４０１７０号に開示されている。
【発明の概要】
【０００５】
本発明は、がん又は感染症に罹患している患者の治療のための、免疫アゴニストを含む液体薬剤の使用を含み、前記液体薬剤は皮下投与され、前記皮下投与は、同じ薬剤の他の非経口投与経路と比較して改善された忍容性及び少なくとも同等の効力を提供する。
【０００６】
本発明は、免疫アゴニストが、ヒトＣＤ４０に特異的に結合し活性化する抗体又はその抗原結合部分である上記のような使用をさらに含む。
【０００７】
本発明は、皮下に投与されることを特徴とする、がん又は感染症の治療における使用のための免疫アゴニストを含む液体薬剤をさらに含む。
【０００８】
本発明は、本明細書で定義した液体薬剤を含む注射装置をさらに含む。
【０００９】
本発明はさらに、液体薬剤のバイアルを含むキットを、本発明に従って患者に皮下投与するための注射装置と場合により一緒に、含む。
【００１０】
本発明はさらに、感染症又はがんなどの増殖性疾患に罹患している患者を治療する方法を含み、前記方法は、免疫調節剤、特に抗ＣＤ４０抗体を含む液体薬剤の皮下投与を含む。
【図面の簡単な説明】
【００１１】
【図１】サルにおける本発明によるｉｖ及びｓｃ投与のＰＫデータ（Ｃｍａｘ）の比較。
【図２ａ】静脈内投与と比較した皮下投与後のＢ細胞の活性化によって実証された、静脈内投与と比較して少なくとも同じである、皮下投与による生物活性の維持。
【図２ｂ】静脈内投与と比較した皮下投与後のＴ細胞の活性化によって実証された、静脈内投与と比較して少なくとも同じである、皮下投与による生物活性の維持。
【図３】ＣＤ６９を発現するＴ細胞の活性化に及ぼすセリクレルマブ用量の影響。
【００１２】
配列表
配列番号１：  ヒトＣＤ４０
配列番号２：  本発明のＣＤ４０抗体の軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）
配列番号３：  本発明のＣＤ４０抗体の重鎖可変ドメイン（ＶＨ）
【発明を実施するための形態】
【００１３】
ＣＤ３(Topp M.S., et al,  Lancet Oncol. 16(1), 2015, 57-66）、ＣＤ２８(Suntharalingam, G., et al, N Engl J Med. 355(10), 2006, 1018-28)などの免疫細胞の活性化分子に対するアゴニスト作用を持つモノクローナル抗体は、静脈内投与後にサイトカインの放出を引き起こす可能性があり、これは用量を制限する可能性がある。
【００１４】
腫瘍壊死因子受容体（ＴＮＦＲ）スーパーファミリーのメンバーであるＣＤ４０は、Ｂリンパ球、樹状細胞（ＤＣ）、及び単球を含む抗原提示細胞（ＡＰＣ）上でのその発現を介した抗腫瘍免疫応答の決定的な調節因子である（例えば、Grewal IS et al, Ann Rev Immunol, 1998;16:111-35; Van Kooten C et al, J Leukoc. Biol , 2000;67:2-17; or O’Sullivan B et al, Crit Rev Immunol. 2003;23(1 2):83-107を参照）。ＣＤ４０刺激ＤＣは、抗原プロセシング及び提示経路を増加させ、リンパ節に移動してナイーブＴ細胞を活性化する。アゴニストＣＤ４０抗体は、ＣＤ４＋リンパ球の機能を代替し、その結果、マウスモデルで確立されたリンパ腫を除去できる細胞傷害性Ｔリンパ球（ＣＴＬ）の拡大をもたらすことが示された（例えば、Sotomayor EM et al, Nature Medicine, 1999;5(7):780-7;  Gladue RP et al, Cancer Immunol Immunother, 2011;60(7):1009-17参照）。ＣＤ４０アゴニストは、宿主ＡＰＣを活性化することによって免疫刺激を引き起こし、それが腫瘍に対するＴ細胞応答を促進する（例えば、Vonderheide RH, Clin Cancer Res, 2007;13:1083-8参照）。
【００１５】
本発明の発明者らは、既にｉ．ｖ．投与のために使用されている、使用準備済みの薬剤がｓ．ｃ．投与用に変更なしで使用できることを見出した。前記薬剤の皮下使用は、患者における忍容性及び／又は有害事象プロファイルの改善をもたらすと同時に、免疫アゴニストの完全な生物活性が少なくとも維持されるか、さらには改善さえされることにつながる（ＮＣＴ０２６６５４１６、ＮＣＴ０２３０４３９３）。前記免疫アゴニストの完全な生物活性の維持は、例えば免疫細胞を活性化する能力によって実証され、増殖及び活性化（これらの細胞、例えばＣＤ８  Ｔ細胞においては、それぞれＫｉ６７及びＣＤ６９発現に基づいて決定される）、並びに／又はこれらの細胞（例：ＣＤ２０又はＣＤ１９発現Ｂ細胞）の末梢血から体内の他の区画への移動を導く。さらに、本発明による皮下使用は、１つの治療サイクル内で投与される前記免疫アゴニストのより高い用量をもたらし、したがって、改善された忍容性とともに治療サイクル当たりのより高い効力をもたらす。したがって、本発明の別の態様では、本発明者らは、本発明によるＣＤ４０抗体の投与のための特定の用量又は用量範囲も特定した。
【００１６】
したがって、一実施態様では、本発明は、がん又は感染症を患う患者への皮下（ｓｃ）投与における使用のための、免疫アゴニスト及び薬学的に許容される担体を含む液体薬剤を含み、前記使用は、同じ薬学的に許容される担体中の同じ免疫アゴニストの他の非経口投与経路、特に静脈内（ｉｖ）注射と比較して有害事象プロファイルを改善することを特徴とする。前記免疫アゴニストを含む前記液体薬剤の皮下投与は、あたかも前記免疫アゴニストを含む前記液体薬剤が静脈内注射されるかのように、少なくとも同じ、又は実質的に同じ生物活性を維持する。本発明の特定の実施態様において、前記免疫アゴニストの生物活性は、同じ薬剤のｉｖ投与と比較した場合、本発明によるｓｃ投与後にさらに改善される。
【００１７】
本明細書で使用される「免疫アゴニスト」は、細胞上の受容体と結合し、受容体の天然リガンドによって開始される反応又は活性と類似若しくは同一の反応又は活性を開始する。
【００１８】
本明細書で使用される「ＣＤ４０アゴニスト」は、次の応答のいずれか又はすべてを誘導する：Ｂ細胞の増殖及び／又は分化；ＩＣＡＭ−１、Ｅ−セレクチン、ＶＣ  ＡＭ等の分子を介する細胞間接着の亢進；ＩＬ−１、ＩＬ−６、ＩＬ−８、ＩＬ−１２、ＴＮＦ等の炎症誘発性サイトカインの分泌；ＴＲＡＦ（例えばＴＲＡＦ２及び／又はＴＲＡＦ３）、ＮＩＫ（ＮＦ−ｋＢ誘発キナーゼ）などのＭＡＰキナーゼ、Ｉ−カッパＢキナーゼ（ＩＫＫ／．ｂｅｔａ．）、転写因子ＮＦ−ｋＢ、Ｒａｓ、及びＭＥＫ／ＥＲＫ経路、ＰＩ３Ｋ  ＡＫＴ経路、Ｐ３８  ＭＡＰＫ経路等の経路によるＣＤ４０受容体を介するシグナル伝達；ＸＩＡＰ、ｍｃｌ−１、ｂｃｌ−ｘ等の分子による抗アポトーシスシグナルの伝達；Ｂ及び／又はＴ細胞のメモリー生成；Ｂ細胞抗体産生；Ｂ細胞アイソタイプスイッチ、ＭＨＣクラスＩＩ及びＣＤ８０／８６等の細胞表面発現の増加（但しこれらに限定されない）。
【００１９】
アゴニスト活性とは、アゴニスト活性（細胞増殖又はＢリンパ球などのＣＤ４０発現細胞上のＣＤ８０又はＣＤ８６などの共刺激分子の誘導といったパラメーターによって読み出される）であって、同じ読み出しを用いて無関係なアイソタイプ対照抗体によって誘導される平均効果よりも少なくとも３標準偏差高いものを意図する。
【００２０】
本明細書で使用する「ＣＤ４０アゴニスト」（又は「ＣＤ４０抗体」）には、ＣＤ４０／ＣＤ４０Ｌ相互作用を刺激する任意の部分が含まれる。典型的には、このような部分は、アゴニストＣＤ４０抗体又はアゴニストＣＤ４０Ｌポリペプチドであろう。このような抗体には、例として、ＣＤ４０／ＣＤ４０Ｌ結合相互作用を特異的に刺激するヒト抗体、キメラ抗体、ヒト化抗体、二重特異性抗体、ｓｃＦｖ及び抗体断片が含まれる。一実施態様において、アゴニストＣＤ４０抗体は、キメラ、完全ヒト又はヒト化ＣＤ４０抗体を含む。別の好ましい実施態様において、アゴニストＣＤ４０抗体は、完全ヒトＣＤ４０抗体を含む。
【００２１】
別の実施態様において、上記の免疫アゴニストは、ＣＤ４０アゴニスト又はＣＤ４０アゴニストの断片である。本発明によるＣＤ４０アゴニストによって標的化されるヒトＣＤ４０抗原は、腫瘍壊死因子受容体（ＴＮＦ−Ｒ）ファミリーに属する５０ｋＤａの細胞表面糖タンパク質である（Stamenkovic et al., EMBO J. 8:1403-10 (1989)）。ヒトＣＤ４０抗原は、「腫瘍壊死因子受容体スーパーファミリーメンバー５」としても知られている。別の名称には、Ｂ細胞表面抗原４０、Ｂｐ５０、ＣＤ４０Ｌ受容体、ＣＤｗ４０、ＣＤＷ４０、ＭＧＣ９０１３、ｐ５０又はＴＮＦＲＳＦ５が含まれる。例えば、ヒトＣＤ４０抗原は、ＵｎｉＰｒｏｔ受託番号Ｐ２５９４２で登録されている。一実施態様において、ヒトＣＤ４０抗原は、配列番号１の配列を有する（表１参照）。
2020521788.tif 000002
【００２２】
一実施態様において、ヒトＣＤ４０は、配列番号１の配列を有する。本明細書で使用される「ヒトＣＤ４０への結合」又は「ヒトＣＤ４０への特異的結合」又は「ヒトＣＤ４０に結合する」又は「抗ＣＤ４０抗体」は、ＫＤ値１．０ｘ１０−８ｍｏｌ／ｌ以下、一実施態様では、ＫＤ値１．０ｘ１０−９ｍｏｌ／ｌ以下の結合親和性でヒトＣＤ４０抗原に特異的に結合する抗体を指す。結合親和性は、例えば表面プラズモン共鳴法（スウェーデン、ウプサラのＧＥ−ＨｅａｌｔｈｃａｒｅのＢＩＡｃｏｒｅ（登録商標））などの標準的な結合アッセイで決定される。したがって、本明細書で使用する「ヒトＣＤ４０に結合し、それを活性化する抗体」は、ＫＤ１．０ｘ１０−８ｍｏｌ／ｌ以下（一実施態様では１．０ｘ１０−８ｍｏｌ／ｌ〜１．０ｘ１０−１３ｍｏｌ／ｌ）、一実施態様ではＫＤ１．０ｘ１０−９ｍｏｌ／ｌ以下（一実施態様では１．０ｘ１０−９ｍｏｌ／ｌ〜１．０ｘ１０−１３ｍｏｌ／ｌ）の結合親和性で、ヒトＣＤ４０抗原に特異的に結合する抗体を指す。別の実施態様では、本発明による抗ＣＤ４０抗体は、４×１０−１０Ｍ以下のＫＤでヒトＣＤ４０に結合する。
【００２３】
本発明の一実施態様では、ヒトＣＤ４０に結合する抗体は、アゴニスト（「ＣＤ４０アゴニスト」）である。
【００２４】
一実施態様において、前記ＣＤ４０抗体は、ＩｇＧ２サブクラスの完全ヒト抗体である。さらに別の実施態様では、前記抗体は、国際公開第２００３／０４０１７０号に具体的に開示されている抗ＣＤ４０抗体のいずれかである。さらに別の実施態様では、本発明のＣＤ４０アゴニストは、国際公開第２００３／０４０１７０号によると３．１．１、７．１．２、１０．８．３、１５．１．１、２１．４．１、２１．２．１、２２．１．１、２３．５．１、２３．２５．１、２３．２９．１、及び２４．２．１と呼ばれる抗体の群から選択される。これらの抗体を分泌するハイブリドーマは、ブダペスト条約に従って寄託されている。寄託番号は、国際公開第２００３／０４０１７０号の段落［０２５０］に記載されている。別の実施態様では、本発明のＣＤ４０抗体は、抗体２１．４．１（ＡＴＣＣ寄託番号ＰＴＡ−３６０５）の重鎖及び軽鎖可変ドメインアミノ配列を含む。さらに別の実施態様では、本発明のＣＤ４０抗体は、抗体２１．４．１（ＡＴＣＣ寄託番号ＰＴＡ−３６０５）の重鎖及び軽鎖アミノ配列からなる。
【００２５】
一実施態様では、本発明によるヒトアゴニスト抗ＣＤ４０抗体は、アミノ酸配列番号２の軽鎖可変ドメイン及びアミノ酸配列番号３の重鎖可変ドメインを含む（表２）。
2020521788.tif 000003
【００２６】
別の実施態様では、ＣＤ４０アゴニストは、ヒトＣＤ４０に４ｘ１０−１０Ｍ以下のＫＤで結合する、ＩｇＧ２サブクラスの完全ヒト抗体；又は
配列番号３のＶＬ及び配列番号４のＶＨを含む抗体；又は
抗体２１．４．１（ＡＴＣＣ寄託番号ＰＴＡ−３６０５）の重鎖及び軽鎖可変ドメインアミノ配列を含む抗体である。
【００２７】
別の実施態様において、本発明によるＣＤ４０抗体又はＣＤ４０アゴニストは、国際一般名セリクレルマブ（ｓｅｌｉｃｒｅｌｕｍａｂ）を有する抗体である。
【００２８】
本明細書で使用する「改善された忍容性」という用語は、例えば静脈内投与などの同じ液体薬剤の他の非経口投与経路と比較して、患者における有害事象が少ないことを意味する。「有害事象」又は「有害事象プロファイル」という用語は、典型的にはＣＤ４０発現免疫細胞によるサイトカインの放出を介して見られるがそれに限らない、細胞に対するＣＤ４０のアゴニズムによって引き起こされる直接的又は間接的な効果を意味する。このプロファイルには、臨床症状（例：悪寒、発熱、低血圧等）に加えて、肝機能検査などの臓器機能や凝固パラメーターの監視に使用される血清パラメーターの変化が含まれる。
【００２９】
本明細書で使用される「皮下投与（ｓｃ）」という用語は、再吸収を促進する成分（例えばヒアルロニダーゼ）の添加の有無にかかわらず、皮下組織への注射によるＣＤ４０アゴニストの投与を意味する。ＳＣ投与には、用量を分割して、同じ投与日に複数の解剖学的部位に投与するオプションが含まれ、単回投与と反復投与（３〜４週間間隔）の両方が含まれる。
【００３０】
本明細書で使用される「液体薬剤」は、所望の純度を有する前記免疫アゴニストを、１以上の任意選択の薬学的に許容される担体と混合することによって、水溶液又は凍結乾燥製剤の形態に調製される（Remington’s Pharmaceutical Sciences 16th edition, Osol, A. Ed. (1980)）。本明細書で使用される「薬学的に許容される担体」は、一般に、用いられる用量及び濃度で受容者に対して非毒性であり、限定されるものではないが、リン酸、クエン酸及び他の有機酸等の緩衝液；アスコルビン酸及びメチオニンを含む酸化防止剤；防腐剤（例えばオクタデシルジメチオルベンジルアンモニウムクロリド、ヘキサメトニウムクロリド、ベンザルコニウムクロリド、ベンゼトニウムクロリド、フェノール、ブチル又はベンジルアルコール、メチル又はプロピルパラベンなどのアルキルパラベン類、カテコール、レゾルシノール、シクロヘキサノール、３−ペンタノール、及びｍ−クレゾール）；低分子量（約１０残基未満）のポリペプチド；血清アルブミン、ゼラチン又は免疫グロブリン等のタンパク質；ポリビニルピロリドンなどの親水性ポリマー；グリシン、グルタミン、アスパラギン、ヒスチジン、アルギニン又はリジン等のアミノ酸；グルコース、マンノース又はデキストリンを含む単糖類、二糖類、及びその他の糖質；ＥＤＴＡなどのキレート剤；スクロース、マンニトール、トレハロース又はソルビトール等の糖；ナトリウムなどの塩形成対イオン；金属錯体（例えばＺｎ−タンパク質錯体）；及び／又はポリエチレングリコール（ＰＥＧ）などの非イオン性界面活性剤を含む。本明細書における例示的な薬学的に許容可能な担体は、可溶性中性活性ヒアルロニダーゼ糖タンパク質（ｓＨＡＳＥＧＰ）などの間質（insterstitial）薬物分散剤、例えばｒｈｕＰＨ２０（ＨＹＬＥＮＥＸ（登録商標）、Ｂａｘｔｅｒ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ社）などのヒト可溶性ＰＨ−２０ヒアルロニダーゼ糖タンパク質をさらに含む。ｒＨｕＰＨ２０を含むいくつかの例示的なｓＨＡＳＥＧＰと使用方法は、米国特許出願公開第２００５／０２６０１８６号及び同第２００６／０１０４９６８号に記載されている。一態様において、ｓＨＡＳＥＧＰは、コンドロイチナーゼなど、１種以上のさらなるグリコサミノグリカナーゼと組み合わされる。
【００３１】
例示的な凍結乾燥抗体製剤は、米国特許第６２６７９５８号に記載されている。水性抗体製剤には、米国特許第６１７１５８６号及び国際公開第２００６／０４４９０８号に記載されているものが含まれ、後者の製剤にはヒスチジン−酢酸塩緩衝液が含まれる。
【００３２】
ｓ．ｃ．投与に使用される製剤は、一般に無菌である。無菌状態は、例えば、無菌濾過膜を通して濾過することにより、達成することができる。
【００３３】
一実施態様において、本発明は、２０ｍＭ酢酸ナトリウム、１４０ｍＭ塩化ナトリウム、０．０２％ポリソルベート８０（ｐＨ５．５）からなる緩衝液中１０ｍｇ／ｍｌの濃度で調製された、国際公開第２００３／０４０１７０号に開示されているＣＤ４０抗体２１．４．１（ＡＴＣＣ寄託番号ＰＴＡ−３６０５）を免疫アゴニストとして提供する。液体製剤は、２ｍＬバイアルの中に入れて提供されるため、２０ｍｇ／バイアルの量のＣＤ４０抗体を含有する。この製剤も、本明細書の実施例１に開示されている。
【００３４】
本発明の薬学的組成物中の免疫アゴニスト、特にＣＤ４０アゴニストの実際の用量レベルは、患者に対して有毒ではなく、特定の患者、組成物及び投与様式についての所望の治療的応答を達成するのに効果的な有効成分の量（有効量）を得るように変化し得る。選択される用量レベルは、使用される本発明の特定の免疫アゴニストの活性、又は治療される患者の年齢、性別、体重、状態、一般的な健康及び以前の病歴、並びに医学分野でよく知られている同様の因子を含む様々な薬物動態因子に依存する。一実施態様では、本発明によるＣＤ４０アゴニストの用量は、約１〜１００ｍｇ／ｍｌ、又は約１０〜８０ｍｇ／ｍｌ、又は約１０〜４０ｍｇ／ｍｌ、又は約１０〜３０ｍｇ／ｍｌ、又は約５〜５５ｍｇ／ｍｌである。別の実施態様では、本発明によるＣＤ４０アゴニストの用量は、約５ｍｇ／ｍｌ、又は約１０ｍｇ／ｍｌ、又は約１５ｍｇ／ｍｌ、又は約２０ｍｇ／ｍｌ、又は約２５ｍｇ／ｍｌ、又は約３０ｍｇ／ｍｌ、又は約３５ｍｇ／ｍｌ、又は約４０ｍｇ／ｍｌ、又は約４５ｍｇ／ｍｌ、又は約５０ｍｇ／ｍｌ、又は約５５ｍｇ／ｍｌである。
【００３５】
別の実施態様では、ＣＤ４０抗体は、治療サイクル当たり約８ｍｇ〜４８ｍｇ、好ましくは約１２ｍｇ〜約３２ｍｇから選択されるフラット用量で、又は治療サイクル当たり１４、１５、１６、１７又は１８ｍｇから選択される用量で投与される。
【００３６】
別の実施態様では、ＣＤ４０抗体は、国際一般名セリクレルマブを有する抗体であり、治療サイクル当たり１６ｍｇのフラット用量で投与される。
【００３７】
本発明による組成物のｐＨは、５．０〜６．０の間で変動し得る。そのようなｐＨを得るための生理学的に許容される任意の緩衝液が使用され得る。一実施態様では、緩衝液は、塩化ナトリウムを伴う又は伴わないコハク酸ナトリウム又は酢酸ナトリウムから選択される。別の態様において、選択された緩衝液は、約１０〜３０ｍＭ、特に約２０ｍＭの量で存在し、ｐＨは約５．５である。
【００３８】
本発明による組成物は、界面活性剤を含有してもよい。一実施態様では、界面活性剤は非イオン性界面活性剤である。別の実施態様では、ポロキサマー類又はポリソルベート類の群から選択される。別の実施態様において、界面活性剤は、ポロキサマー１８８又はポリソルベート２０又はポリソルベート８０である。本発明によれば、界面活性剤は、約０．０２〜０．１％（ｗ／ｖ）の濃度で存在する。一実施態様において、界面活性剤は、０．０２、０．０３、０．０４、０．０５、０．０６、０．０７、０．０８、０．０９又は０．１％（ｗ／ｖ）の濃度で存在する。
【００３９】
本発明のさらに別の実施態様では、本発明による組成物は、場合によって、凍結保護物質及び／又は抗酸化剤を含有してもよい。一実施態様において、凍結保護物質は糖、特にスクロースであり、抗酸化剤はメチオニンである。凍結保護物質は、約１８０〜３００ｎＭ又は約２４０ｎＭの量で存在する。抗酸化剤は、約０〜２０ｍＭ、又は約０〜１０ｍＭ、又は約１０ｍＭの量で存在する。
【００４０】
本明細書で使用される用語「がん」は、好ましくは固形がん、例えば肺がん、非小細胞肺（ＮＳＣＬ）がん、細気管支肺胞上皮細胞肺がん（bronchioloalviolar cell lung cancer）、骨がん、膵臓がん、皮膚がん、頭頸部がん、皮膚黒色腫又は眼球内黒色腫、子宮がん、卵巣がん、直腸がん、肛門領域のがん、胃がん（stomach cancer）、胃がん（gastric cancer）、結腸がん、乳がん、子宮がん、卵管癌、子宮内膜癌、子宮頸癌、膣癌、外陰癌、ホジキン病、食道がん、小腸がん、内分泌系のがん、甲状腺がん、副甲状腺がん、副腎がん、軟組織の肉腫、尿道がん、陰茎がん、前立腺がん、膀胱がん、腎臓又は尿管のがん、腎細胞癌、腎盂癌、中皮腫、肝細胞がん、胆道がん、中枢神経系（ＣＮＳ）の新生物、脊椎腫瘍、脳幹神経膠腫、多形神経膠芽腫、星状細胞腫、シュワン腫、上衣腫、髄芽腫、髄膜腫、扁平上皮癌、下垂体腺腫、リンパ腫、リンパ性白血病（上記いずれかのがんの難治性型、又は１つ以上の上記がんの組み合わせを含む）を意味する。好ましい一実施態様では、そのようながんは、乳がん、結腸直腸がん、黒色腫、頭頚部がん、肺がん又は前立腺がんである。一実施態様では、そのようながんは、乳がん、肺がん、結腸がん、卵巣がん、黒色腫がん、膀胱がん、腎がん、腎臓がん、肝臓がん、頭頚部がん、結腸直腸がん、膵臓がん、胃がん、食道がん、中皮腫又は前立腺がんから選択される固形腫瘍である。別の実施態様において、そのようながんは、白血病（例えばＡＭＬ、ＣＬＬ）、リンパ腫、骨髄腫等の血液腫瘍である。さらに別の実施態様において、がんは、乳がん、肺がん、結腸がん、結腸直腸がん、膵臓がん、胃がん又は前立腺がんである。
【００４１】
「感染症」という用語は、本明細書で使用される場合、細菌、ウイルス、真菌又は寄生虫等の生物によって引き起こされる障害を意味する。感染症の具体例には、Ｂ型肝炎ウイルス（ＨＢＶ）、Ｃ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）及び／又はヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）が含まれるがこれらに限定されない。
【００４２】
一実施態様では、本発明によるｓ．ｃ．投与は、転移の予防又は治療における使用のためのものである。
【００４３】
一実施態様では、本発明によるｓ．ｃ．投与は、腫瘍免疫などの免疫関連疾患の治療又は進行遅延における使用のためのものである。
【００４４】
一実施態様では、本発明によるｓ．ｃ．投与は、Ｔ細胞活性などの免疫応答又は機能の刺激における使用のためのものである。
【００４５】
本明細書で使用される場合、「可変ドメイン」（軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）、重鎖可変ドメイン（ＶＨ））という用語は、抗原への抗体の結合に直接関与する軽鎖ドメインと重鎖ドメインの対の各々を意味する。可変軽鎖ドメイン及び可変重鎖ドメインは、同じ一般構造を有し、各ドメインは、３つの「超可変領域」（又は相補性決定領域、ＣＤＲ）によって接続され、配列が広範囲に保存されている４つのフレームワーク（ＦＲ）領域を含む。フレームワーク領域は、ベータ−シートコンフォメーションを採り、ＣＤＲは、ベータ−シート構造を接続するループを形成し得る。各鎖のＣＤＲは、フレームワーク領域によって三次元構造で保持され、もう一方の鎖のＣＤＲと共に抗原結合部位を形成する。抗体の重鎖及び軽鎖のＣＤＲ３領域は、本発明による抗体の結合特異性／親和性において特に重要な役割を果たし、それ故、本発明のさらなる目的を提供する。
【００４６】
本明細書において使用される場合、「抗体の抗原結合部分」という用語は、抗原結合に関与する、抗体のアミノ酸残基を指す。抗体の抗原結合部分は、「相補性決定領域」すなわち「ＣＤＲ」のアミノ酸残基を含む。「フレームワーク」すなわち「ＦＲ」領域は、本明細書で定義した超可変可変領域残基以外の可変ドメイン領域である。したがって、抗体の軽鎖及び重鎖可変ドメインは、Ｎ末端からＣ末端までのドメインＦＲ１、ＣＤＲ１、ＦＲ２、ＣＤＲ２、ＦＲ３、ＣＤＲ３、及びＦＲ４を含む。特に、重鎖のＣＤＲ３は、抗原結合に最も寄与し、抗体の特性を定義する領域である。ＣＤＲ及びＦＲ領域は、Ｋａｂａｔら，Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，第５版，Ｐｕｂｌｉｃ  Ｈｅａｌｔｈ  Ｓｅｒｖｉｃｅ，Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，ＭＤ（１９９１）及び／又は「超可変ループ」の残基の標準定義に従って決定される。
【００４７】
本発明の一実施態様では、ヒトＣＤ４０に特異的に結合してそれを活性化する抗体の「抗原結合部分」は、抗体２１．４．１（ＡＴＣＣ寄託番号ＰＴＡ−３６０５）の重鎖及び軽鎖可変ドメインのＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３を含む。
【００４８】
本明細書で使用する場合、用語「核酸」又は「核酸分子」は、ＤＮＡ分子及びＲＮＡ分子を含むことが意図される。核酸分子は、一本鎖でも二本鎖でもよいが、好ましくは二本鎖ＤＮＡである。
【００４９】
本願内で使用される場合、用語「アミノ酸」は、アラニン（３文字コード：ａｌａ、１文字コード：Ａ）、アルギニン（ａｒｇ、Ｒ）、アスパラギン（ａｓｎ、Ｎ）、アスパラギン酸（ａｓｐ、Ｄ）、システイン（ｃｙｓ、Ｃ）、グルタミン（ｇｌｎ、Ｑ）、グルタミン酸（ｇｌｕ、Ｅ）、グリシン（ｇｌｙ、Ｇ）、ヒスチジン（ｈｉｓ、Ｈ）、イソロイシン（ｉｌｅ、Ｉ）、ロイシン（ｌｅｕ、Ｌ）、リジン（ｌｙｓ、Ｋ）、メチオニン（ｍｅｔ、Ｍ）、フェニルアラニン（ｐｈｅ、Ｆ）、プロリン（ｐｒｏ、Ｐ）、セリン（ｓｅｒ、Ｓ）、スレオニン（ｔｈｒ、Ｔ）、トリプトファン（ｔｒｐ、Ｗ）、チロシン（ｔｙｒ、Ｙ）、及びバリン（ｖａｌ、Ｖ）を含む天然に存在するカルボキシアルファ−アミノ酸の群を意味する。
【００５０】
抗体の「Ｆｃ部分」は、抗体の抗原への結合には直接関与しないが、様々なエフェクター機能を発揮する。「抗体のＦｃ部分」は、当業者に周知の用語であり、抗体のパパイン切断に基づいて定義される。抗体又は免疫グロブリンは、その重鎖定常領域のアミノ酸配列に応じて、ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ、及びＩｇＭのクラスに分類され、これらのうちいくつかは、サブクラス（アイソタイプ）、例えばＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、及びＩｇＧ４、ＩｇＡ１及びＩｇＡ２にさらに分類される。重鎖定常領域に応じて、免疫グロブリンの異なるクラスは、それぞれα、δ、ε、γ、及びμと呼ばれる。抗体のＦｃ部分は、補体活性化、Ｃ１ｑ結合及びＦｃ受容体結合に基づいて、ＡＤＣＣ（抗体依存性細胞媒介性細胞傷害性）並びにＣＤＣ（補体依存性細胞傷害性）に直接関与する。補体活性化（ＣＤＣ）は、補体因子Ｃ１ｑがほとんどのＩｇＧ抗体サブクラスのＦｃ部分に結合することにより開始される。補体系に対する抗体の影響は特定の条件に依存するが、Ｃ１ｑへの結合は、Ｆｃ部分の決まった結合部位によって起こる。そのような結合部位は当該技術分野で既知であり、例えばＢｏａｃｋｌｅ，Ｒ．Ｊ．ら，Ｎａｔｕｒｅ  ２８２（１９７９）７４２−７４３，Ｌｕｋａｓ，Ｔ．Ｊ．ら，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１２７（１９８１）２５５５−２５６０，Ｂｒｕｎｈｏｕｓｅ，Ｒ．，  ａｎｄ  Ｃｅｂｒａ，Ｊ．Ｊ．，Ｍｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６（１９７９）９０７−９１７，Ｂｕｒｔｏｎ，Ｄ．Ｒ．ら，Ｎａｔｕｒｅ  ２８８（１９８０）３３８−３４４，Ｔｈｏｍｍｅｓｅｎ，Ｊ．Ｅ．ら，Ｍｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．３７（２０００）９９５−１００４，Ｉｄｕｓｏｇｉｅ，Ｅ．Ｅ．ら，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６４（２０００）４１７８−４１８４，Ｈｅｚａｒｅｈ，Ｍ．ら，Ｊ．Ｖｉｒｏｌｏｇｙ  ７５（２００１）１２１６１−１２１６８，Ｍｏｒｇａｎ，Ａ．ら，Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  ８６（１９９５）３１９−３２４，ＥＰ第０３０７４３４号により記載されている。そのような結合部位は、例えばＬ２３４、Ｌ２３５、Ｄ２７０、Ｎ２９７、Ｅ３１８、Ｋ３２０、Ｋ３２２、Ｐ３３１、及びＰ３２９（Ｋａｂａｔ，Ｅ．ＡのＥＵインデックスに従い番号付け、下記参照）である。サブクラスＩｇＧ１、ＩｇＧ２、及びＩｇＧ３の抗体は通常、補体活性化、並びにＣ１ｑ及びＣ３結合を示すが、ＩｇＧ４は補体系を活性化せず、Ｃ１ｑ及びＣ３に結合しない。
【００５１】
一実施態様では、本発明による免疫アゴニスト、好ましくはＣＤ４０アゴニストは、モノクローナル抗体である。別の実施態様では、本発明による免疫アゴニスト、好ましくはＣＤ４０アゴニストは、ヒトＩｇＧクラスの（すなわちＩｇＧ１又はＩｇＧ２又はＩｇＧ３又はＩｇＧ４サブクラスのものである。
【００５２】
一実施態様において、本明細書に記載の免疫アゴニスト、好ましくはＣＤ４０アゴニストは、定常鎖がヒト起源であることを特徴とする。そのような定常鎖は、当該技術分野でよく知られており、例えばＫａｂａｔ，Ｅ．Ａ．により記載されている（例えばJohnson, G. and Wu,T.T., Nucleic Acids Res. 28 (2000) 214-218参照）。
【００５３】
本明細書に記載の免疫アゴニスト、好ましくはＣＤ４０アゴニストは、好ましくは組換え手段により産生される。そのような方法は当該技術分野において広く知られており、原核細胞及び真核細胞におけるタンパク質の発現、それに続く抗体ポリペプチドの単離、及び通常は薬学的に許容される純度への精製を含む。タンパク質発現のために、軽鎖及び重鎖又はその断片をコードする核酸が、標準的な方法により発現ベクターに挿入される。発現は、適切な原核宿主細胞又は真核宿主細胞、例えばＣＨＯ細胞、ＮＳ０細胞、ＳＰ２／０細胞、ＨＥＫ２９３細胞、ＣＯＳ細胞、酵母、又は大腸菌細胞において実施され、抗体が細胞から回収される（上清から又は細胞溶解後）。
【００５４】
抗体の組換え生産は、当該技術分野で周知であり、例えばＭａｋｒｉｄｅｓ，Ｓ．Ｃ．，Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｅｘｐｒ．Ｐｕｒｉｆ．１７（１９９９）１８３−２０２；Ｇｅｉｓｓｅ，Ｓ．ら．，Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｅｘｐｒ．Ｐｕｒｉｆ．８（１９９６）２７１−２８２；Ｋａｕｆｍａｎ，Ｒ．Ｊ．，Ｍｏｌ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．１６（２０００）１５１−１６１；Ｗｅｒｎｅｒ，Ｒ．Ｇ．，ＤｒｕｇＲｅｓ．４８（１９９８）８７０−８８０の総説に記載されている。
【００５５】
抗体は、全細胞中、細胞ライセート中、又は部分的に精製された形態若しくは実質的に純粋な形態中に存在し得る。精製は、他の細胞成分又は他の混入物、例えば他の細胞核酸又はタンパク質を、アルカリ／ＳＤＳ処理、ＣｓＣｌバンディング、カラムクロマトグラフィー、アガロースゲル電気泳動、及び当該技術分野で周知のその他の技術を含む標準的な技術により除去するために実施される。Ａｕｓｕｂｅｌ，Ｆ．ら編．Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｇｒｅｅｎｅ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  ａｎｄ  Ｗｉｌｅｙ  Ｉｎｔｅｒｓｃｉｅｎｃｅ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ（１９８７）参照。
【００５６】
ＮＳ０細胞における発現は、例えばＢａｒｎｅｓ，Ｌ．Ｍ．ら，Ｃｙｔｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  ３２（２０００）１０９−１２３；Ｂａｒｎｅｓ，Ｌ．Ｍ．ら．，Ｂｉｏｔｅｃｈ．Ｂｉｏｅｎｇ．７３（２００１）２６１−２７０に記載されている。一過性発現は、例えばＤｕｒｏｃｈｅｒ，Ｙ．ら，Ｎｕｃｌ．Ａｃｉｄｓ．Ｒｅｓ．３０（２００２）Ｅ９に記載されている。可変ドメインのクローニングは、Ｏｒｌａｎｄｉ，Ｒ．ら，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ８６（１９８９）３８３３−３８３７；Ｃａｒｔｅｒ，Ｐ．ら，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ８９（１９９２）４２８５−４２８９；Ｎｏｒｄｅｒｈａｕｇ，Ｌ．ら，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ  ２０４（１９９７）７７−８７に記載されている。好ましい一過性発現系（ＨＥＫ  ２９３）は、Ｓｃｈｌａｅｇｅｒ，Ｅ．−Ｊ．  ａｎｄ  Ｃｈｒｉｓｔｅｎｓｅｎ，Ｋ．，Ｃｙｔｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  ３０（１９９９）７１−８３、及びＳｃｈｌａｅｇｅｒ，Ｅ．−Ｊ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ  １９４（１９９６）１９１−１９９に記載されている。
【００５７】
本発明による重鎖可変ドメイン及び軽鎖可変ドメインは、プロモーター、翻訳開始、定常領域、３’非翻訳領域、ポリアデニル化及び転写終結の配列と組み合わされて、発現ベクターコンストラクトを形成する。重鎖及び軽鎖発現コンストラクトを組み合わせて単一のベクターにし、宿主細胞にコトランスフェクト、連続的にトランスフェクシト又は別々にトランスフェクトして融合させ、両方の鎖を発現する単一の宿主細胞を形成することができる。
【００５８】
原核生物に適した制御配列には、例えばプロモーター、任意選択的にオペレーター配列、及びリボソーム結合部位が含まれる。真核細胞は、プロモーター、エンハンサー、及びポリアデニル化シグナルを利用することが知られている。
【００５９】
核酸は、別の核酸配列と機能的関係に置かれる場合、その核酸は「作用可能に連結され」ている。例えば、プレ配列又は分泌リーダーのＤＮＡは、それがポリペプチドの分泌に関与するプレタンパク質として発現される場合、ポリペプチドのＤＮＡに作動可能に連結されており、プロモーター又はエンハンサーは、それが配列の転写に影響を与える場合、コード配列に作用可能に連結されており、又は、リボソーム結合部位は、それが翻訳を容易にするように配置されている場合、コード配列に作用可能に連結されている。一般に、「作用可能に連結された」とは、連結されているＤＮＡ配列が連続していること、及び、分泌リーダーの場合には、連続し、且つ、リーディングフレーム内にあることを意味する。しかしながら、エンハンサーは必ずしも連続している必要はない。連結は、都合のよい制限部位におけるライゲーションによって達成される。そのような部位が存在しない場合は、慣行に従って、合成オリゴヌクレオチドアダプター又はリンカーが使用される。
【００６０】
モノクローナル抗体は、例えばプロテインＡ−セファロース、ヒドロキシルアパタイトクロマトグラフィー、ゲル電気泳動、透析又はアフィニティークロマトグラフィー等の一般的な免疫グロブリン精製手順により、培地から適切に分離される。モノクローナル抗体をコードするＤＮＡ及びＲＮＡは、一般的な手順を使用し、容易に単離及び配列決定される。ハイブリドーマ細胞は、そのようなＤＮＡ及びＲＮＡの供給源としての機能を果たし得る。ＤＮＡを単離したら、それを発現ベクター内に挿入し、次いでこの発現ベクターを、そうしなければ免疫グロブリンタンパク質を産生しない宿主細胞、例えばＨＥＫ２９３細胞、ＣＨＯ細胞又は骨髄腫細胞にトランスフェトし、宿主細胞内で組換えモノクローナル抗体の合成を得る。
【００６１】
本明細書で使用される場合、「細胞」、「細胞株」及び「細胞培養物」という表現は互換的に用いられ、すべてのこのような名称には子孫も含まれる。したがって、「形質転換体」及び「形質転換細胞」という語は、初代の対象細胞と、導入回数に関係なく、これに由来する培養物とを含む。また、計画的な又は意図しない突然変異の影響で、すべての子孫のＤＮＡ含有量が正確に同一であるわけではない。元々の形質転換細胞においてスクリーニングしたものと同じ機能又は生物活性を有する変異体子孫が含まれる。
【００６２】
本発明に従って使用される特異的ＣＤ４０アゴニスト抗体を生産する方法は、国際公開第２００３／０４０１７０号にも開示されている。
【００６３】
本発明は、がんを有する患者の治療のための方法であって、免疫アゴニスト、好ましくはＣＤ４０アゴニストを含む本発明による液体薬剤の治療的有効量を患者に投与することを特徴とする方法をさらに含む。
【００６４】
本発明は、本明細書に開示される液体製剤のいずれかが入った１つ以上のバイアルと、患者への該製剤の皮下投与のための注射装置とを含むキットをさらに含む。この実施態様内では、実施例１による液体製剤が好ましい。
【００６５】
本発明は、別の治療剤、好ましくは抗がん剤と同時に又は逐次に組み合わせて、本明細書で定義したＣＤ４０抗体又はアゴニストの皮下（ｓ．ｃ）投与のための薬剤及び用量をさらに含む。一実施態様において、前記さらなる治療剤は、国際一般名アテゾリズマブ又はベバシズマブを有する抗体から選択される。これらの抗体は、当業者に周知の方法に従って、例えば製品テセントリク（登録商標）及びアバスチン（登録商標）の製品情報に記載されているように投与することができる。
【００６６】
したがって、本発明は、以下のより具体的な実施態様によって要約することができ、すべての変数及び用語は、本明細書で前述した範囲及び／又は定義を有する。
１．  がん又は感染症の治療における使用のための、免疫アゴニストを含む液体薬剤であって、皮下に投与される液体薬剤。
２．
（ａ）  約１〜１００ｍｇ／ｍｌの前記免疫アゴニスト；
（ｂ）  約１０〜３０ｍＭの、５〜６のｐＨを提供する少なくとも１種の緩衝剤；及び
（ｃ）  約０．０１〜０．１％（ｗ／ｖ）の非イオン性界面活性剤
を含む水溶液を含むことを特徴とする、実施態様１に記載の使用のための液体薬剤。
３．
（ａ）  約１０〜８０ｍｇ／ｍｌの前記免疫アゴニスト；
（ｂ）  約２０ｍＭの、約５．５のｐＨを提供する少なくとも１種の緩衝剤；及び
（ｃ）  約０．０２％（ｗ／ｖ））の非イオン性界面活性剤
を含む水溶液を含むことを特徴とする、実施態様１又は２に記載の使用のための液体薬剤。
４．  約１８０〜３００ｍＭのスクスロースと約０〜２０ｍＭのメチオニンとをさらに含む、実施態様１から３のいずれか１つに記載の使用のための液体薬剤。
５．  約２４０ｍＭのスクロースと約０〜１０ｍＭのメチオニンとをさらに含む、実施態様４に記載の使用のための液体薬剤。
６．  前記緩衝剤が酢酸塩又はコハク酸塩緩衝剤、例えば酢酸ナトリウム又はコハク酸ナトリウム、又はそれらの組み合わせであり、任意選択的に約１４０ｍＭの塩化ナトリウムをさらに含む、実施態様２から５のいずれか１つに記載の使用のための液体薬剤。
７．  前記非イオン性界面活性剤がポロキサマー１８８又はポリソルベート２０又はポリソルベート８０である、実施態様２から６のいずれか１つに記載の使用のための液体薬剤。
８．  免疫アゴニストがアゴニストＣＤ４０抗体である、実施態様１から７のいずれか１つに記載の使用のための液体薬剤。
９．  約１０ｍｇ／ｍｌのアゴニスト抗ＣＤ４０抗体と、約２０ｍＭのコハク酸ナトリウムと、ポリソルベート２０、ポリソルベート８０又はポロキサマー１８８から選択される、ｐＨ約５．５で約０．０２％（ｗ／ｖ）の界面活性剤とを含有する水溶液であることを特徴とする、実施態様１から８のいずれか１つに記載の使用のための液体薬剤。
１０．  免疫アゴニストが、配列番号２の軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）と配列番号３の重鎖可変ドメイン（ＶＨ）とを含むアゴニスト抗ＣＤ４０抗体である、実施態様１から９のいずれか１つに記載の使用のための液体薬剤。
１１．  アゴニスト抗ＣＤ４０抗体がＡＴＣＣ寄託番号ＰＴＡ−３６０５を有する抗体、又は国際一般名セリクレルマブを有する抗体である、実施態様１０に記載の使用のための液体薬剤。
１２．  実施態様１から１１のいずれか１つに記載の使用のための液体薬剤であって、前記使用ががん、具体的には固形腫瘍、より具体的には結腸及び直腸の腺癌、非小細胞肺がん、頭頚部の扁平上皮癌の治療を含むことを特徴とする、液体薬剤。
１３．  実施態様１から１１のいずれか１つに記載の使用のための液体薬剤であって、前記使用が感染症、特にＢ型肝炎ウイルス（ＨＢＶ）、Ｃ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）及び／又はヒト免疫不全ウイルスＨＩＶ）の治療を含むことを特徴とする、液体薬剤。
１４．  実施態様１から１３のいずれか１つに記載の使用のための液体薬剤を投与するための注射装置。
１５．  実施態様１から１３のいずれか１つに記載の使用のための液体製剤が入った１つ以上のバイアルと、前記製剤の患者への皮下投与のための、実施態様１４に記載の注射装置とを含む、キット。
１６．  がん又は感染症に罹患している患者の治療のための、実施態様１から１１のいずれか１つに記載の液体薬剤の使用であって、前記液体薬剤が皮下投与されることを特徴とする、使用。
１７．  がん又は感染症の治療のための医薬の製造のための、実施態様１から１１のいずれか１つに記載の液体薬剤の使用であって、前記液体薬剤が皮下に投与されることを特徴とする、使用。
１８．  実施態様１７に記載の液体薬剤の使用であって、１４、１５、１６、１７又は１８ｍｇ用量の前記免疫アゴニスト、好ましくは国際一般名セリクレルマブを有する抗体を皮下投与するために前記液体薬剤が使用されることを特徴とする、使用。
１９．  がんの治療のための医薬の製造のための、実施態様１７又は１８に記載の液体薬剤の使用。
２０．  セリクレルマブと組み合わせて同時に又は逐次に投与するための、アテゾリズマブ又はベバシズマブから選択される抗体を含む医薬を第２の成分としてさらに含む、実施態様１９に記載の使用。
【実施例】
【００６７】
実施例１
以下の実施例は、本発明による液体薬剤の調製を例示する。この例では、免疫アゴニストは、国際公開第２００３／０４０１７０号に開示されているように、国際一般名セリクレルマブを有するＣＤ４０抗体、又は抗体２１．４．１（ＡＴＣＣ寄託番号ＰＴＡ−３６０５）である。以下の調製工程を、無菌条件下で適用した。
１．
−  ２０ｍＭ酢酸ナトリウム
−  １４０ｍＭ塩化ナトリウム
を含有する緩衝液（ｐＨ５．５）を調製する工程
２．  接線流濾過を用いて、ＣＤ４０抗体を濃縮し、工程１の緩衝液に緩衝液交換する工程
３．  ０．０２％（ｗ／ｖ）ポリソルベート８０及び最終生成物濃度１０ｍｇ／ｍｌになるように、ポリソルベート８０の原液を用いて緩衝液交換生成物を調整する工程。
【００６８】
実施例２：
以下の例では、静脈内（ｉｖ）及び皮下（ｓｃ）の単独投与後のカニクイザルにおける実施例１によるＣＤ４０アゴニスト製剤の最大血漿濃度（Ｃｍａｘ）などの薬物動態（ＰＫ）データの評価を示す。
２．１  カニクイザルに、静脈内又は皮下経路で０．１、１．０及び５．０ｍｇ／ｋｇの用量レベルで１回投与した。全身曝露のための試料を、投与前及び投与後５８日間の予定時間にすべての動物から採取した。
−  ＩＶ投与：投与前、投与後０．０８、０．５、１、２、４、６、１０、２４時間、その後３、４、５、７、９、１６、２２、２９、４３、及び５８日目
−  ＳＣ投与：投与前、投与後０．５、１、２、４、６、１０、２４時間、その後３、４、５、７、９、１６、２２、２９、４３、及び５８日目
薬物動態評価のための血液試料を、室温で６０分間、血清調製のためにチューブ内で凝固させた。凝血塊を遠心分離（少なくとも１０分、１２００ｇ、＋４℃）により遠心沈殿させ、出荷までの間−８０℃のフリーザーで保存した。カニクイザル血清中のＣＤ４０アゴニスト抗体の濃度は、ＥＬＥＣＳＹＳ（登録商標）２０１０／ｅ４１１イムノアナライザープラットフォーム（ロッシュ・ダイアグノスティックス、ドイツ）に基づいた適格な電気化学発光イムノアッセイ（ＥＣＬＩＡ）法を詞硫黄して決定された。アッセイ緩衝液で事前希釈した試料を、３７ドで９分間、捕捉及び検出分子とインキュベートした。ビオチン化ｍＡｂ＜Ｈ−Ｆａｂ（カッパ）＞Ｍ−ＩｇＧ−Ｂｉを捕捉分子として使用し、ルテニウム（ＩＩ）トリス（ビピリジル）３２＋［Ｒｕ（ｂｐｙ）３２＋］標識ｍＡｂ＜Ｈ−Ｆｃ−ｐａｎ＞Ｍ−Ｒ１０Ｚ８Ｅ９−Ｆ（ａｂ‘）２−ＢＰ−Ｒｕマウスモノクローナル抗体を検出に使用した。ストレプトアビジンでコーティングされた磁性微粒子を追加し、３７℃でさらに９分間インキュベートして、ビオチン‐ストレプトアビジンの相互作用による複合体形成を可能にした。複合体を電極上で磁気的に捕捉し、共反応物質であるトリプロピルアミン（ＴＰＡ）を使用して生成した化学発光シグナルを光電子増倍管検出器で測定した。すべての試験試料、及び陽性又は陰性対照試料を繰り返し分析し、ＣＤ４０アゴニスト抗体から調製した対応する投与溶液物質（dosing solution material）に対して較正した。
２．２  ｓ．ｃ．投与の結果、ｓｃ経路により吸収が長期化したため、Ｃｍａｘ値が大幅に低下した（図１参照）。皮下のバイオアベイラビリティが低（０．１ｍｇ／ｋｇ）及び中（１．０ｍｇ／ｋｇ）用量群で２７％〜４９％だが高（５．０ｍｇ／ｋｇ）用量で１００％を示す、非線形性バイオアベイラビリティが明らかであった。この非線形性バイオアベイラビリティは、皮下組織及び／又は排出リンパ系における飽和性の初回通過効果を示唆している。
したがって、皮下投与は、ｉｖよりも高いＣＤ４０用量を投与することができ、それによって注射関連反応（ＩＲＲ）を誘発することなく効果的な用量を達成することができる。これは、ｉｖ投与が非常に高いＣｍａｘをもたらし、その結果、高いサイトカイン放出が誘発されるためである。同様に、皮下投与により、ＰＫ曲線がよりフラットになり、Ｃｍａｘがより低くなり、ＩＲＲがなくなる。
【００６９】
実施例３：    
この例は、臨床試験で観察された静脈内（ｉｖ）注射と比較した皮下（ｓｃ）投与の忍容性／有害事象プロファイルの改善を示している（表３）。
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【００７０】
実施例４：
この実施例は、同じ組成物をｉ．ｖ．投与経路からｓ．ｃ．投与経路に切り替えると、ＣＤ４０アゴニストの生物活性が少なくとも維持されるか、さらには改善されることを示している。薬力学的比較は、関連するＴ細胞マーカーのｉｖ投与後よりもｓｃ投与後の薬力が類似又はより強いことを示唆している（図２参照）。
【００７１】
４．１  患者
全血試料は、ベースライン並びにベースラインから４日目及び９日目の試験中に、ＣＤ４０試験ＮＣＴ０２６６５４１６及びＮＣＴ０２７６０７９７に登録された患者から採取された。ＣＤ３＋、ＣＤ８＋  Ｔ細胞及び活性化Ｔ細胞（ＣＤ３＋、ＣＤ８＋、ＣＤ６９＋）分析のために、全血試料を５ｍＬのＣｙｔｏ−Ｃｈｅｘ採血管（Ｓｔｒｅｃｋ）に入れた。増殖（ＣＤ３＋、ＣＤ８＋、Ｋｉ６７＋）  Ｔ細胞分析のために、全血試料を４ｍＬのヘパリンナトリウム管（ＢＤバキュテイナ）に入れた。
【００７２】
４．２  組成物及び投与レジメン
本実施例で使用した組成物は、実施例１に従って得られたものである。
【００７３】
４．３  フローサイトメトリー分析
サイクルの１日目（ｉ．ｖ．）又は２日目（ｓ．ｃ．）に１、２、４、８、１０、１２、１４、１８、２４、３２、４０、４８又は７２ｍｇのＣＤ４０注射を受けた患者から、示した分析日に試料を回収した。リンパ球中のＣＤ１９＋細胞の出現頻度、並びにＣＤ３＋、ＣＤ８＋  Ｔ細胞、増殖中のＣＤ３＋、ＣＤ８＋、Ｋｉ６７＋  Ｔ細胞、及び活性化ＣＤ３＋、ＣＤ８＋、ＣＤ６９＋  Ｔ細胞の出現頻度を、ＢＤ  ＦＡＣＳＣａｎｔｏ  ＩＩ（８色、３レーザー、米国ニュージャージー州フランクリンレイクスのベクトン・ディッキンソン（ＢＤ）社）を使用して、異なるパネルで測定した。
【００７４】
次の抗ヒト抗体（Ａｂ）：抗ＣＤ４５＿ＰｅｒＣＰ−Ｃｙ５．５（クローン２Ｄ１  カタログ＃３３２７８４）、抗ＣＤ３＿ＦＩＴＣ（クローンＳＫ７  カタログ＃３４５７６４）、抗ＣＤ１９＿ＢＶ４２１（クローンＨＩＢ１９  カタログ＃５６２４４０）、及び抗ＣＤ８＿ＡＰＣ（クローンＳＫ１  カタログ＃３４５７７５）を使用して、ＣＤ１９  Ｂ細胞集団とＣＤ３＋、ＣＤ８＋  Ｔ細胞集団を同定した（Ｔ、Ｂ、ＮＫ＆単球アッセイ）。次の抗ヒトＡｂ：抗ＣＤ４５＿Ｖ５００（クローン  ＨＩ３０  カタログ＃５６０７７７）、抗ＣＤ３＿ＡＰＣ（クローン  ＵＣＨＴ１  カタログ＃５５５３３５）、抗ＣＤ８＿ＰＥ（クローン  ＨＩＴ８ａ  カタログ＃５５５６３５）、及び抗Ｋｉ６７  ＡＦ−４８８（クローン  Ｂ５６  カタログ＃５５８６１６）を異なるパネルで使用して、増殖中のＣＤ８＋、Ｋｉ６７＋  Ｔ細胞集団を同定した。以下の抗ヒトＡｂを異なるパネルで使用して、活性化ＣＤ３＋、ＣＤ８＋及びＣＤ６９＋  Ｔ細胞集団、すなわち抗ＣＤ３＿ＡＦ７００（クローン  ＳＫ７  カタログ＃３４４８２２）、抗ＣＤ８＿ＢＶ６０５（クローン  ＳＫ１  カタログ＃５６４１１６）、及び抗ＣＤ６９＿ＡＰＣ（クローン  Ｌ７８  カタログ＃３４０５６０）を同定した。これらの抗体はすべて、ＢＤバイオサイエンス事業部（米ｆｒｅｅ国カリフォルニア州サンノゼ）によって提供された。絶対細胞数の結果を得るために、デュアルプラットフォーム法を適用した（計算は後述する）。白血球集団からＣＤ４５＋リンパ球を同定し、その後ＣＤ３＋  Ｔ細胞に対してゲーティングするというゲーティング戦略によって特定の細胞集団を分析した。この工程に続いて、ＣＤ４＋及びＣＤ８＋  Ｔ細胞集団を象限ゲーティング（quadrant gating）によって同定し、ＣＤ８＋をＫｉ６７＋及びＣＤ６９＋に対してゲーティングした。白血球集団からのＣＤ１９＋  細胞については、ＣＤ４５＋リンパ球を同定し、その後それをＣＤ１９＋  Ｂ細胞に対してゲーティングした。ＦＡＣＳＤｉｖａＴＭソフトウェア（ＢＤバイオサイエンス事業部）を使用してデータを分析した。
【００７５】
４．４  結果
以下の計算を適用することによって、デュアルプラットフォームを使用した各報告可能なパラメーターに対して絶対細胞数を算出した。
絶対細胞数＝捕捉イベントの割合（％リンパ球）ｘリンパ球：白血球比ｘＷＢＣ
−  捕捉イベントの割合（％リンパ球）；リンパ球ゲートで捕捉されたイベント、すなわち絶対数を計算することを目的とした報告可能な分析物の割合（％）
−  リンパ球／白血球比；白血球に対するリンパ球の比は、リンパ球イベント数を総白血球数（リンパ球イベント及びＣＤ１４＋イベント）で除して算出する。
−  ＷＢＣ：血液分析装置からの白血球数
【００７６】
増殖中のＣＤ３＋、ＣＤ８＋、Ｋｉ６７＋  −、並びに活性化ＣＤ３＋、ＣＤ８＋及びＣＤ６９＋  Ｔ細胞については、このデュアルプラットフォーム法を用いて、絶対（細胞／μｌ）値を間接的に算出した。リンパ球のゲーティングを前方散乱（細胞サイズ）及び側方散乱（細胞粒度）によって決定し、ＦＡＣＳＤｉｖａＴＭソフトウェア（ＢＤバイオサイエンス事業部）を使用してデータを分析した。
【００７７】
皮下及び静脈内ＣＤ４０投与は、治療前の値と比較した、４／５日目及び８／９日目の末梢Ｂ細胞の割合の減少によって測定されるように、同様の用量依存的Ｂ細胞活性化を誘導した（図２ａ）。
皮下及び静脈内ＣＤ４０投与はＴ細胞の活性化を誘導するが、これは、２日目、５日目及び８日目、９日目の、治療前の値と比較した増殖中の末梢ＣＤ８＋  Ｔ細胞の割合の増加によって測定されるように、サイクル１の９日目にｓｃで用量依存的である（図２ｂ）。
【００７８】
皮下投与経路におけるＴ細胞活性化の誘導は、非線形の用量依存性に従う。Ｔ細胞活性化の最も効果的な誘導は、１６ｍｇ用量の皮下投与で達成される（図３）。
【００７９】
実施例５
この実施例は、本発明に従って調製及び使用することが実施例１に開示された方法と同様に、以下の液体薬剤は、滅菌条件下で本発明に従って調製することができる。免疫アゴニストは、実施例１と同様であり、１〜１００ｍｇ／ｍｌからの量で存在し得る。
１．
−  １０〜３０ｍＭコハク酸ナトリウム、及び任意選択的に
−  １４０ｍＭ塩化ナトリウム
を含有する緩衝液（ｐＨ５〜６）を調製する工程
２．  接線流濾過を用いて、ＣＤ４０抗体を濃縮し、工程１の緩衝液に緩衝液交換する工程
３．最終生成物濃度１〜１００ｍｇ／ｍｌになるように、１８０〜３００ｍＭスクロース、０．０２〜０．１％（ｗ／ｖ）ポロキサマー１８８又はポリソルベート２０、及び０〜２０ｍＭメチオニンを用いて緩衝液交換生成物を調整する工程（表４参照）。
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【図１】
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【図２ａ】
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【図２ｂ】
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【図３】
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【配列表】
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【国際調査報告】
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