(57)【要約】長期間服用しても安全性が高く、且つ、骨密度が低下気味の人、閉経後女性、歯周病治療のメインテナンス期にある人に対し、１日あたりカルシウム５００ｍｇ〜２０００ｍｇ、大豆イソフラボンアグリコン１０ｍｇ〜４０ｍｇ及びビタミンＤ３を投与することにより、歯槽骨の吸収、歯根膜喪失及び歯肉の退縮を抑制する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
大豆イソフラボンアグリコン、カルシウム及びビタミンＤ３を含有する歯槽骨吸収抑制用及び歯根膜喪失抑制用の内服組成物。
【請求項２】
大豆イソフラボンアグリコン、カルシウム及びビタミンＤ３を含有する歯肉の退縮の予防又は治療剤。
【請求項３】
大豆イソフラボンアグリコン、カルシウム及びビタミンＤ３を含有する歯槽骨吸収及び歯根膜喪失の予防又は治療剤。
【請求項４】
大豆イソフラボンアグリコン含有量が０．００１〜１０重量％であり、カルシウム含有量が０．０１〜５０重量％である請求項１〜３のいずれかに記載の組成物或いは予防又は治療剤。
【請求項５】
骨密度低下者、閉経後女性又は歯周病メインテナンス期にある者用である請求項１〜３のいずれかに記載の組成物或いは予防又は治療剤。
【請求項６】
大豆イソフラボンアグリコンが、全粒大豆から抽出した大豆イソフラボンアグリコンであって、大豆イソフラボンアグリコン中のゲニステインとダイゼインの重量比が１：１〜１．５：１の範囲で、かつゲニステイン及びダイゼインの含有量があわせて大豆イソフラボン中の９０％以上であることを特徴とする請求項１に記載の組成物。
【請求項７】
請求項１〜６のいずれかに記載の組成物を経口的に摂取させることを特徴とする歯槽骨の吸収及び歯根膜の喪失を抑制する方法。
【請求項８】
大豆イソフラボンアグリコン、カルシウム及びビタミンＤ３を経口的に摂取させることを特徴とする歯肉の退縮を予防又は治療する方法。
【請求項９】
大豆イソフラボンアグリコン、カルシウム及びビタミンＤ３を経囗的に摂取させることを特徴とする歯槽骨の吸収及び歯根膜の喪失を予防又は治療する方法。
【請求項１０】
投与対象が、骨密度が低下している者、閉経後女性又は歯周病メインテナンス期にある者である請求項８又は９に記載の方法。
【請求項１１】
一日あたり大豆イソフラボンアグリコン投与量が１０ｍｇ〜４０ｍｇ、カルシウム投与量が５００ｍｇ〜２０００ｍｇであることを特徴とする請求項９又は１０に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】  本発明は、骨密度が低下傾向の者、閉経後女性又は歯周病メインテナンス期にある者の歯槽骨の吸収及び歯根膜の喪失を抑制する方法並びに歯肉の退縮を抑制する方法並びに大豆イソフラボンアグリコン、カルシウム及びビタミンＤ３を含有する、内服組成物、歯肉の退縮の予防又は治療剤、歯槽骨吸収及び歯根膜喪失の予防又は治療剤に関する。
【背景技術】  骨密度の低下の原因には、加齢によるもの、カルシウムの摂取不足など栄養・嗜好によるもの、運動不足によるもの、副腎皮質ホルモン等薬剤によるもの等が挙げられる。特に女性においては、閉経にともなうエストロゲン分泌低下から、急激な骨量の低下が生じやすい。ここで、骨密度が低下している者とは、１９９４年にＷＨＯ研究班から出された診断基準によると、骨密度が成人若年平均値の−１ＳＤ（Ｓｔａｎｄａｒｄ  Ｄｅｖｉａｔｉｏｎｓ）以下の者、１９９６年に日本骨代謝学会から出された診断基準によると、骨密度が若年成人平均値（ＹＡＭ）の８０％以下の者である。
一方、歯周病は、特定の歯周病原菌による感染症であり、そのような歯周病原菌としては、ポリフィロモナス・ジンジバリスに代表されるグラム陰性嫌気性細菌が挙げられる。歯周病原菌は、歯頸部の根面に付着したプラークの中で増殖し、周辺の歯肉や歯根膜、歯槽骨を含む組織領域に慢性的な炎症を惹起することにより、歯周病を発症させる。歯周病は、歯周病原菌の惹起した慢性的な炎症により、歯を支えている歯槽骨の吸収が進行する疾患であり、先進国では歯を失う最大の原因となっている。
これまでに、閉経後女性において、骨密度の低下と歯周病の進行度には、関連性があることが明らかとなっており（黒須康成  他，日歯保誌：１９９８）、骨量の低下は歯周病のリクス因子とされている。
また、骨密度の低下が歯周病の進行に関与していることを手がかりとして、骨吸収抑制剤であるビスホスホネートを用いた動物実験が行われ、ビスホスホネートが実験的歯周炎の歯槽骨吸収抑制に有用であることが報告されている（Ｒｅｄｄｙ  ｅｔ  ａｌ：Ｊ  Ｐｅｒｉｏｄｏｎｔｏｌ  ６６（３）２１１−２１７，１９９５）。しかし、ビスホスホネートは副作用が強く、長期間の服用が望まれる歯周病の治療には適さない。これらのことから、安全性が高い製剤の開発が望まれていた。
さらに、歯周病の治療を受けた後も、歯周組織は完全に回復しないため、治療部位では歯根面が露出した状態となる。そして、治療部位は、治療の過程で炎症部位や汚染組織を物理的に除去していることなどの理由から、歯肉の退縮が起こりやすい。従って、歯周病治療後の病状安定期間（メインテナンス期）は、歯肉の退縮および歯周病再発の可能性が高く、歯肉の退縮の抑制、歯槽骨や歯根膜などの歯周組織の維持のための安全性が高い製剤の開発が望まれる。
又、カルシウムが、成長期の子供、妊娠期の女性などにおいて、歯槽骨の骨カルシウム濃度を維持もしくは強化するために必要な栄養成分であることが周知であることから（文献「ビタミンＤ欠乏による歯槽骨の変化に関するＸ線的，光顕的および走査型電顕的研究」九州歯科学会雑誌４６，ｐｐ６７−８８，１９９２年）、カルシウム補充食品類が多数提供されている。一部の特定のカルシウム塩（例えばパントテン酸カルシウム）は、歯周病に関連する歯槽骨吸収を抑制することが知られている（特開平０８−１３３９６９号公報）。このように、カルシウムおよびカルシウム塩の摂取が歯周病に対し、ある程度の予防的効果を上げることは認められている。
一方、大豆イソフラボンは、抗菌性、天然の骨代謝改善作用を有する成分を豊富に含んでいることが知られており、骨粗鬆症予防、全身の骨強化目的のため内服の栄養補給剤として、カルシウム塩、ビタミンＤとともに配合された実績をもち、米国では、商品名Ｏｓｔｅｏ  Ｓｏｙ（ＦｒｅｅＬｉｆｅ社、米国）、Ｓｏｙｌｉｆｅ（Ｓｃｈｏｕｔｅｎ社、米国）として販売された実績をもつ。これらは一般のカルシウム補給剤と同様に、内服用タブレット、カプセル、パウダー状であり、歯周病予防を目的として設計されたものではない。大豆イソフラボンの中でも特にゲニステインは歯周病原因菌に対し抗菌力を示すことから、抗歯周病剤（特開平０４−２８３５１８号公報）、高溶解性カルシウムを併用した歯周病予防または歯周病進行予防食品組成物（特開平１１−２４３９１０号公報）として、利用されている。しかし、上記の歯周病予防は、大豆イソフラボンの抗菌性によるものであり、歯根膜喪失を抑制したという報告はいまだ無い。
【発明の開示】
本発明は、長期間服用しても安全性が高く、且つ、骨密度が低下気味の人及び閉経後女性に対し、歯槽骨の吸収及び歯根膜の喪失を抑制するため或いは歯肉の退縮の抑制のための方法、内服組成物、予防又は治療剤を提供することを目的とする。
本発明者らは、鋭意検討した結果、大豆イソフラボンアグリコン、カルシウム及びビタミンＤ３を併用することにより、歯槽骨の吸収、歯根膜の喪失及び歯肉の退縮が抑制されることを見出し、本発明を完成させた。
すなわち、本発明は、下記の内服組成物、予防又は治療剤及び方法を提供するものである。
１．  大豆イソフラボンアグリコン、カルシウム及びビタミンＤ３を含有する歯槽骨吸収抑制用及び歯根膜喪失抑制用の内服組成物。
２．  大豆イソフラボンアグリコン、カルシウム及びビタミンＤ３を含有する歯肉の退縮の予防又は治療剤。
３．  大豆イソフラボンアグリコン、カルシウム及びビタミンＤ３を含有する歯槽骨吸収及び歯根膜喪失の予防又は治療剤。
４．  大豆イソフラボンアグリコン含有量が０．００１〜１０重量％であり、カルシウム含有量が０．０１〜５０重量％である項１〜３のいずれかに記載の組成物或いは予防又は治療剤。
５．  骨密度低下者、閉経後女性又は歯周病メインテナンス期にある者用である項１〜３のいずれかに記載の組成物或いは予防又は治療剤。
６．  大豆イソフラボンアグリコンが、全粒大豆から抽出した大豆イソフラボンアグリコンであって、大豆イソフラボンアグリコン中のゲニステインとダイゼインの重量比が１：１〜１．５：１の範囲で、かつゲニステイン及びダイゼインの含有量があわせて大豆イソフラボン中の９０％以上であることを特徴とする項１に記載の組成物。
７．  項１〜６のいずれかに記載の組成物を経口的に摂取させることを特徴とする歯槽骨の吸収及び歯根膜の喪失を抑制する方法。
８．  大豆イソフラボンアグリコン、カルシウム及びビタミンＤ３を経口的に摂取させることを特徴とする歯肉の退縮を予防又は治療する方法。
９．  大豆イソフラボンアグリコン、カルシウム及びビタミンＤ３を経口的に摂取させることを特徴とする歯槽骨の吸収及び歯根膜の喪失を予防又は治療する方法。
１０．  投与対象が、骨密度が低下している者、閉経後女性又は歯周病メインテナンス期にある者である項８又は９に記載の方法。
１１．  一日あたり大豆イソフラボンアグリコン投与量が１０ｍｇ〜４０ｍｇ、カルシウム投与量が５００ｍｇ〜２０００ｍｇであることを特徴とする項９又は１０に記載の方法。
なお、本明細書において、歯肉の退縮とは、歯肉の辺縁が、歯牙のセメント質とエナメルの境、すなわちセメント−エナメル境よりも歯牙の根尖側に下がることにより、歯根部が露出する現象をいい、例えば臨床アタッチメントレベル（ＣＡＬ）から歯周ポケット深さ（ＰＤ）を引いた数値で評価することができる（図１参照）。また、本明細書において、歯周病のメインテナンス期にある者とは、歯周病の治療を終了し、臨床的には回復した状態で、病状は安定しているが、要観察時期にある者を包含する。
本発明に用いる大豆イソフラボンアグリコンは、大豆イソフラボンの非配糖体であり、例えば、ゲニステイン、ダイゼイン、グリシテイン等が挙げられ、通常、大豆イソフラボン配糖体の加水分解物として得られる。このような大豆イソフラボンアグリコンは、例えばマメ科（Ｌｅｇｕｍｉｎｏｓａｅ）の植物であるダイズ（Ｇｌｙｃｉｎｅｍａｘ  Ｍｅｒｒｉｌｌ）の種子（全粒大豆）を用い、特開昭６２−１２６１８６号公報に記載された公知の方法などにより抽出された配糖体を、精製段階で酸加熱もしくはβ−グルクロニダーゼ酵素を用いて加水分解して得られる。
大豆全粒から大豆抽出液、あるいは大豆粉砕物からイソフラボン配糖体を得、またその配糖体からアグリコンを得る方法については、特に限定されるものではない。また、全粒大豆の代わりに杯軸を用いると効率良くイソフラボンが得られるが配糖体であるダイジン、グリシチン等の含有量が多いが、これを加水分解しても非配糖体であるゲニステイン、ダイゼイン等になりにくい傾向がある。このため、全粒大豆の方が、胚軸より、ゲニステイン、ダイゼイン等の大豆イソフラボンアグリコンの製造の原料としては有利である。
本発明に用いる大豆イソフラボンアグリコンとしては、ゲニステイン及びダイゼインからなる群から選択される少なくとも１種のアグリコンが好ましい。さらに、ゲニステインとダイゼインとを重量比で１：１〜１．５：１となるよう併用することが好ましい。また、ゲニステインがダイゼインより多く含有されていることが好ましい。さらにまた、大豆イソフラボンアグリコン全量中のゲニステイン及びダイゼインの重量和が大豆イソフラボンアグリコン全量の９０％以上であることが好ましい。また、大豆イソフラボンアグリコンには他の賦形剤を加えて粉末化し、種々の内服製剤に適した形態としたり、乳化剤、可溶化剤を加えた製剤、サイクロデキストリンで包接させた製剤等の飲料に適した形態として用いることができる。
本発明の組成物或いは予防又は治療剤における、大豆イソフラボンアグリコンの配合量は、本発明の所望の目的を達成できる限り特に限定はされるものではないが、組成物或いは予防又は治療剤全量に対して、通常０．００１〜１０重量％、好ましくは０．００５〜５．０重量％である。また、本発明の歯槽骨の吸収及び歯根膜の喪失を抑制する方法並びに予防又は治療する方法における、大豆イソフラボンアグリコンの投与量は、成人１人１日あたり通常１０〜４０ｍｇ、好ましくは１０〜２０ｍｇであり、１日１回又は２回以上に分けて投与することができる。
本発明に用いられるカルシウムとしては、天然、あるいは合成の何れであってもよい。天然カルシウムとしては、蛎殻、卵殻、珊瑚、牛骨、牛乳由来のカルシウムなどが挙げられるし、カルシウム供給源としてこれらそのもの又はその粉砕物、乾燥物などの粗精製品も使用できる。合成カルシウムとしては、グルコン酸カルシウム、乳酸カルシウム、塩化カルシウム、グリセロリン酸カルシウム、パントテン酸カルシウム、第三リン酸カルシウム、炭酸カルシウム、クエン酸カルシウムが例示できる。これらカルシウムは、単独で用いてもよく、二種以上を組み合わせて使用することもできる。
本発明の組成物或いは予防又は治療剤における、カルシウムの配合量は、本発明の所望の目的を達成できる限り特に限定はされるものではないが、組成物或いは予防又は治療剤全量に対して、カルシウム純分として、通常０．０１〜５０重量％、好ましくは０．１〜２０重量％である。また、本発明の歯槽骨の吸収及び歯根膜の喪失を抑制する方法並びに予防又は治療する方法における、カルシウムの投与量は、成人１人１日あたり通常５００〜２０００ｍｇ、好ましくは５００〜１０００ｍｇであり、１日１回又は２回以上に分けて投与することができる。
本発明において使用されるビタミンＤ３は、コレカルシフェロールとも呼ばれる。本発明の組成物或いは予防又は治療剤に、ビタミンＤ３を配合する場合、結晶のビタミンＤ３であっても良いし、安定化のために製剤化されたビタミンＤ３であってもよい。本発明の組成物或いは予防又は治療剤における、ビタミンＤ３の配合量は、本発明の所望の目的を達成できる限り特に限定はされるものではないが、組成物或いは予防又は治療剤全量において、通常、１０−８〜１０−１重量％、好ましくは１０−７〜１０−２重量％である。また、本発明の歯槽骨の吸収及び歯根膜の喪失を抑制する方法並びに予防又は治療する方法における、ビタミンＤ３の投与量は、成人１人１日あたり通常２００ＩＵ〜８００ＩＵ、好ましくは２００ＩＵ〜４００ＩＵであり、１日１回又は２回以上に分けて投与することができる。
本発明の組成物は、歯槽骨吸収抑制及び歯根膜喪失抑制のための内服組成物である。ここで、内服組成物としては、例えば、食品組成物、医薬組成物などが例示され、好ましくは食品組成物である。本発明の内服組成物の形態は、食品及び医薬の分野で利用される形態を包含するが、特に口腔内に一時的に留める時間が長いもの、例えばトローチ、チューインガム、チュワブルタブレット、グミキャンディー、キャンディーといった剤形は口腔内に留まる時間が長いため望ましい形態である。中でもトローチまたはチュアブルタブレットの形態が好ましい。このようなトローチ及びチュアブルタブレットなどの錠剤は好ましくは下記の方法によって製造される。
すなわち、大豆イソフラボンアグリコンと場合によりカルシウムと糖アルコール及びその他賦形剤を粉体混合し（用いる粉体の粒径は２５０μｍ以下）、アルコールや水、必要に応じて、さらにポリデキストロースや還元デキストリンやマルチトールやマルトトリイトール等の２糖以上の重合還元糖を単独あるいは組合せて粉体を湿潤させ造粒して顆粒とする。最後にこの顆粒に必要に応じて香料やビタミンＤ３製剤、滑沢剤あるいは熱や水分に弱い有用成分などを混合し打錠する。次いで、ロータリー打錠機を用いて、直径１２〜２０ｍｍ以下、厚み３〜６ｍｍ、１錠あたり５００から３０００ｍｇに打錠する。その錠剤の硬度は木屋式硬度計にて直径方向で測定するとき、５〜１５ｋｇ、特に７〜１３ｋｇであることが最も好ましい。
また、本発明の予防又は治療剤は、歯槽骨吸収及び歯根膜喪失の予防又は治療或いは歯肉の退縮の予防又は治療に有用であり、大豆イソフラボンアグリコン、カルシウム及びビタミンＤ３を有効成分とする。予防又は治療剤の形態は経口的な摂取に適用できる限り特に制限されず、例えば、食品、医薬品などにおける経口的な摂取に利用される形態を採用することができる。
本発明の内服組成物及び予防又は治療剤において、本発明の効果を損なわない限り、通常食品に含まれるような添加物、例えば、ｐＨ調整剤、有機酸、糖アルコール、甘味料、香料、歯垢形成抑制素材、口臭抑制素材等、医薬品に利用される可食性の添加物、例えば賦形剤、他の有効成分、担体などを適宜配合することができる。このような添加物の素材の具体例としては、リン酸塩、リンゴ酸、クエン酸、乳酸、パントテン酸、ソルビトール、キシリトール、エリスリトール、パラチニット、パラチノース、マルチトール、還元デンプン糖、還元イソマルトオリゴ糖等の異性化糖乃至糖アルコール、ガムベース、アラビアガム、ゼラチン、セチルメチルセルロース、サッカリンナトリウム、アスパルテーム、ステアリン酸マグネシウム、グラニュー糖、粉糖、水飴、微結晶セルロース、１−メントール、ビタミンＤ３以外のビタミンＤ群、ビタミンＫ等のビタミンＫ群、ビタミンＰ、リジン、マグネシウム塩、カルシトニン、イプリフラボン等が挙げられる。これら添加物の使用量は特に限定されず、使用の目的等に応じて適宜選択することができる。
本発明の歯槽骨の吸収及び歯根膜の喪失を抑制する方法は、前記内服組成物、予防剤及び治療剤からなる群から選択される少なくとも１種を経口的に摂取させることを特徴とする。また、本発明の歯肉の退縮を予防又は治療する方法或いは歯槽骨の吸収及び歯根膜の喪失を予防又は治療する方法は、大豆イソフラボンアグリコン、カルシウム及びビタミンＤ３を経口的に摂取させることを特徴とする。
これらの方法において、投与対象は哺乳類であれば特に制限されないが、好ましくは骨密度低下者、閉経後女性又は歯周病メインテナンス期にある者である。骨密度低下者は、骨密度が成人若年平均値の−１ＳＤ（標準偏差）以下のものである。
投与量、投与形態等については、上記の本発明の内服組成物、予防又は治療剤の説明に記載されている。
【図面の簡単な説明】  図１は、歯冠、歯根及び歯周組織の断面図であり、ＣＡＬ、ＰＤ及び歯肉の退縮の関係を示す。
図２は、試験例１において得られた歯肉溝浸出液（ＧＣＦ）中のＭＭＰ−８レベルの経時変化を示すグラフである。
【発明を実施するための最良の形態】  以下、実施例および試験例を挙げて本発明をより詳細に説明するが、本発明はこれらに限定されるものではない。また特に断らない限り［％］は［重量％］を意味する。
試験例１：歯周病メインテナンス患者を用いた骨吸収及び歯根膜喪失抑制試験
１．被験者
被験者は、閉経後１年以上経過した女性歯周病患者５０名を対象とした。被験者にはその選定にあたり、重篤な全身的基礎疾患がなく、ホルモン補充療法や骨粗鬆症の薬剤による治療、過去３ヶ月以内に外科的な歯周治療や抗生物質の投与を行っていないことを確認した。被験者５０名を、試験群およびプラセボ群の２群に、無作為に割り付けた。
２．試験製剤
試験製剤の処方
貝殻未焼成カルシウム      ６５０ｍｇ（カルシウム分として２５０ｍｇ）
大豆イソフラボン抽出物      １７ｍｇ
（大豆イソフラボンアグリコンを５ｍｇ含有）
（ゲニステイン：ダイゼイン＝１．３：１）
ビタミンＤ３                ２．５μｇ（１００ＩＵ）
糖アルコール                残部
甘味料、香料等            １４０ｍｇ
合計                    ２０００ｍｇ／錠
３．試験方法
被験者は、２４週間にわたり、１日２錠のタブレット状の試験製剤を朝食後に摂取した。製剤配布時（以下ベースラインとする）、製剤摂取開始後１２週目及び２４週目には、問診、口腔内の規格Ｘ線写真撮影、歯周組織診査、生化学的マーカー測定のための歯肉溝浸出液（Ｇｉｎｇｉｖａｌ  Ｃｒｅｖｉｃｕｌａｒ  Ｆｌｕｉｄ、以下ＧＣＦとする）の採取を実施した。被験者の食事等によるＣａと、大豆イソフラボンであるダイゼイン及びゲニステインの摂取量は、食事記録より管理栄養士が算出した。
４．歯周組織診査
１）歯周ポケットの深さ（Ｐｏｃｋｅｔ  Ｄｅｐｔｈ（以下ＰＤとする））及び臨床的アタッチメントレベル（Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ａｔｔａｃｈｍｅｎｔ  Ｌｅｖｅｌ（以下ＣＡＬとする））
１ｍｍ単位の目盛りのついた長さ１５ｍｍのプローブ（ＵＮＣ１５、Ｈｕ−Ｆｒｉｅｄｙ、ＵＳＡ）を使用し、第三大臼歯を除く全歯を６点法にて０．５ｍｍ単位でＰＤとＣＡＬを測定した。なお、ＣＡＬはセメント−エナメル境から歯周ポケット底までの距離を表す（図１参照）。
２）歯肉の退縮
各部位のＣＡＬよりＰＤを引いて算出した値を歯肉の退縮とした。
３）歯槽骨高さ（Ａｌｖｅｏｌａｒ  Ｂｏｎｅ  Ｈｅｉｇｈｔ（以下ＡＣＨとする））
両側臼歯部に対し、咬翼法にて規格Ｘ線写真撮影を行い、同一術者により歯根面に沿ってセメント−エナメル境から歯槽骨骨頂までの距離を測定した。
５．ＧＣＦ中の生化学的マーカーの測定
ＧＣＦは、Ｐｅｒｉｏｐａｐｅｒ（ＰｒｏｆｌｏｗＴＭ  Ｉｎｃｏｒｐｏｒａｔｅｄ、ＵＳＡ）を用いて、上顎右側および下顎左側の第３臼歯の頬側近心部より採取した。Ｐｅｒｉｏｐａｐｅｒはポケット底部まで挿入し、１０秒間放置した後取り出して、Ｐｅｒｉｏｔｒｏｎ  ８０００（Ｈａｒｃｏ  Ｅｌｅｃｔｒｏｎｉｃｓ、ＵＳＡ）でＧＣＦ量を測定した。Ｐｅｒｉｏｐａｐｅｒはマイクロチューブに入れた後、結合組織破壊の指標であるマトリックスメタロプロテアーゼー８（以下ＭＭＰ−８とする）の測定に供した。ＭＭＰ−８は、トリス塩酸緩衝液（ｐＨ７．６）にて抽出処理後、ＭＭＰ−８  Ｈｕｍａｎ  Ｂｉｏｔｒａｋ  ＥＬＩＳＡ  Ｓｙｓｔｅｍ（Ａｍｅｒｓｈａｍ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ、ＵＳＡ）を用いて測定を行った。なお、ＭＭＰ−８量は採取した各部位のＧＣＦ中の総量に含まれる量として計算した。
６．統計解析
被験者の背景因子、ＡＣＨ、ＰＤ、ＣＡＬ及び歯肉の退縮は、全て一元配置分散分析（ＡＮＯＶＡ）とその後の多重比較検定によって解析を行った。ＰＤとＣＡＬは、測定値の小数点以下第１位を切り捨てた後、解析に用いた。群内の経時変化は、ボンフェローニ修正のノンパラメトリック検定で解析を行った。検定における有意水準は、両側５％とした。
７．結果
１）概況
各群の年齢、ＢＭＩ、閉経年齢、閉経後の年数、喫煙者数、現在歯数、試験期間中の食事からの平均Ｃａ摂取量とダイゼイン量、ゲニステイン量の背景因子において、各群間に有意差は認められなかった。
２）歯周組織検査
ＣＡＬ、歯肉の退縮及びＡＣＨのベースライン時の被験者平均値は、各群間に有意差は認められなかった。
２−１）ＣＡＬ
表１にＣＡＬの平均値及び変化率（１２週又は２４週までのＣＡＬ平均値の変化量をベースライン時のＣＡＬ平均値で除した値）の平均値を示す。既に治療を受け、メインテナンス管理されているベースライン時で３ｍｍ以上のＣＡＬが認められた部位については、どちらの群でも１２及び２４週目において有意なベースライン時からの減少が認められた。ベースライン時の群間の差を調整するため、ベースライン時のＣＡＬで、１２週又は２４週までのＣＡＬ変化量を除した変化率について解析を行った結果、試験群ではプラセボ群と比較して２４週目にそれぞれ有意なＣＡＬの改善が認められた。
2005046702.tif 000002
２−２）歯肉の退縮
表２に歯肉の退縮の平均値及び変化率（１２週又は２４週までの歯肉の退縮平均値の変化量をベースライン時の歯肉の退縮平均値で除した値）を示す。試験開始時に既に歯肉の退縮が有った部位は、試験開始時と比較して、１２週目、２４週目の歯肉の退縮が試験群、プラセボ群で有意に改善した。しかし、試験群の歯肉の退縮の変化率は、試験終了時ではプラセボ群と有意な差があった。
2005046702.tif 000003
２−３）ＡＣＨ
表３にＡＣＨの変化率（１２週又は２４週までのＡＣＨ平均値の変化量をベースライン時のＡＣＨ平均値で除した値）を示す。ベースライン時の群間の差を調整するため、ベースライン時のＡＣＨで各週までの変化量を除した変化率について解析を行った結果、試験群はプラセボ群と比較してＡＣＨの抑制傾向が認められ、特に１２週目ではプラセボ群に対し有意差が認められた。
2005046702.tif 000004
２−４）ＧＣＦ中のＭＭＰ−８レベル
図２にベースライン時、１２週目、２４週目のＭＭＰ−８の平均値を示す。プラセボ群では、変化が全く無かったが、試験群では１２週目および２４週目でベースライン時からの有意な減少がそれぞれ認められた。
以上の結果から、下記の点が確認された。
・本試験製剤により、閉経後の歯周病のメインテナンス期にある患者の、ＣＡＬの改善が促進されたことから、歯根膜による結合組織性の付着、すなわち歯根膜が歯槽骨と歯根面（セメント質）の間を介して得られる正常な歯周組織の付着様式を改善する作用が認められた。また、本試験製剤によりＭＭＰ−８のレベルが抑制されたことから、歯根膜を主とする結合組織の喪失を予防する作用が認められ、歯根膜喪失抑制に有用であることが確認された。
・歯槽骨の吸収は閉経後女性において急速に進行しやすいが、本試験においてＡＣＨの増加がプラセボ群よりも抑制されたことから、歯槽骨吸収抑制効果が確認された。
・歯肉の退縮は治療後の部位で特に発生しやすいが、本試験において歯肉の退縮が改善されたことから、歯周病の再発のみならず、歯根の露出による根面う蝕、知覚過敏を予防及び／又は改善し、審美面においても改善されることが確認された。
実施例１  顆粒剤（１日４ｇ摂取）
常法により、下記成分を用いて顆粒剤を製造した。
成分                                      分量（％）
乳清カルシウム                                ５０．００
（カルシウム純度２６％）
大豆イソフラボン抽出物                          １．００
（アグリコン純度３０％）
（ゲニステイン：ダイゼイン＝１．５：１）
油溶性甘草抽出物                                １．００
ビタミンＤ３（ビタミンＤ３純度０．２５％）      ０．０５
キシリトール                                  ４０．００
パラチニット                                    残部
アスパルテーム                                  ０．１０
アラビアガム                                    １．００
香料                                            ２．５０
合計                                  １００．００
実施例２  口腔内溶解錠（１日４ｇ摂取）
常法により、下記成分を用いて口腔内溶解錠を製造した。
成分                                    分量（％）
蛎殻カルシウム                                ３５．００
（カルシウム純度３９％）
大豆イソフラボン抽出物                          ０．５
（アグリコン純度７０％）
（ゲニステイン：ダイゼイン＝１．３：１）
パラチニット                                    残部
マルチトール                                  ３０．００
ビタミンＤ３（ビタミンＤ３純度０．２５％）      ０．０５
ポリデキストロース                              ５．００
蔗糖脂肪酸エステル                              ４．００
ココアパウダー                                  ５．００
スクラロース                                    １．００
香料                                            ２．５０
合計                                  １００．００
実施例３  口腔内溶解錠（１日４ｇ摂取）
常法により、下記成分を用いて口腔内溶解錠を製造した。
成分                                    分量（％）
第三リン酸カルシウム                          ３５．００
（カルシウム純度３９．１％）
大豆イソフラボン抽出物                          １．５０
（アグリコン純度３３％）
（ゲニステイン：ダイゼイン＝１．３：１）
ビタミンＫ                                      ０．０１
ビタミンＤ３製剤（ビタミンＤ３純度０．２５％）  ０．１
キシリトール                                  ３１．００
パラチニット                                    残部
クエン酸                                        ０．５０
アラビアガム                                    １．２０
ステアリン酸マグネシウム                        １．００
香料                                            ３．００
合計                                  １００．００
実施例４  チューインガム（１日２０ｇ摂取。大豆イソフラボンは４０％溶出。カルシウムは８５％溶出、ビタミンＤ３は４０％溶出。）
常法により、下記成分を用いてチューインガムを製造した。
成分                                    分量（％）
グルコン酸カルシウム乳酸カルシウム非晶質体    ３０．００
（カルシウム純度１０％）
茶抽出物                                        ０．０５
大豆イソフラボン抽出物                          ０．２５
（アグリコン純度７０％）
（ゲニステイン：ダイゼイン＝１．３：１）
ガムベース                                    ２７．００
エリスリトール                                １０．００
キシリトール                                  ３８．００
ビタミンＤ３（ビタミンＤ３純度０．２５％）      ０．０００１
還元麦芽糖水飴                                    残部
香料                                            ５．００
合計                                  １００．００
実施例５  キャンディー（１日３０ｇ摂取）
常法により、下記成分を用いてキャンディーを製造した。
蛎殻カルシウム、キシリトール、油溶性甘草抽出物、茶ポリフェノール抽出物、ビタミンＤ３、及び粉末香料は粉体の状態でキャンディーセンターに配合した。
成分                                    分量（％）
蛎殻カルシウム                                  ５．００
（カルシウム純度３９％）
油溶性甘草抽出物                                ０．０５
大豆イソフラボン抽出物                          ０．１
（アグリコン純度７０％）
（ゲニステイン：ダイゼイン＝１．３：１）
キシリトール                                    ５．００
茶ポリフェノール抽出物                          ０．０５
パラチニット                                    残部
マルチトール                                  １０．００
アスパルテーム                                  ０．０４
クエン酸                                        ０．５０
オイル香料                                      ０．２０
粉末香料                                        ０．３０
ビタミンＤ３（ビタミンＤ３純度０．２５％）      ０．０００１
合計                                  １００．００
実施例６  トローチ剤（１日８ｇ摂取）
常法により、下記成分を用いてトローチ剤を製造した。
成分                                    分量（％）
クエン酸カルシウム                            １０．００
（カルシウム純度２１％）
第三リン酸カルシウム                          １５．００
（カルシウム純度３９％）
大豆イソフラボン抽出物                          ０．２５
（アグリコン純度７０％）
（ゲニステイン：ダイゼイン＝１：１）
ビタミンＤ３（ビタミンＤ３純度０．２５％）      ０．０５
パラチニット                                  ３３．００
キシリトール                                    残部
カルボキシメチルセルロースナトリウム            １．００
クエン酸                                        ２．００
リンゴ酸                                        １．００
アスパルテーム                                  ０．５０
蔗糖脂肪酸エステル                              ４．００
香料                                            ２．００
合計                                  １００．００
実施例７  ドリンク剤（１日１００ｍＬ摂取）
常法により、下記成分を用いてドリンク剤を製造した。
成分                                      配合量
発酵乳酸（５０％水溶液）                        ０．９７ｇ
グルコン酸（５０％水溶液）                      ３．８８ｇ
グルコン酸カルシウム乳酸カルシウム非晶質体      ５．００ｇ
（カルシウム純度１０％）
大豆イソフラボンアグリコン−
βサイクロデキストリン包接物                    ０．３５０ｇ
（アグリコン純度３％）
（ゲニステイン：ダイゼイン＝１．５：１）
エリスリトール                                  ７．００ｇ
スクラロース                                    ０．０３ｇ
ステビア                                        ０．０１ｇ
ビタミンＤ３（ビタミンＤ３純度０．２％）        ０．００３ｇ
精製水                                              残部
合計                                          １００ｍｌ
【図１】
2005046702.tif 000005
【図２】
2005046702.tif 000006
【国際調査報告】
2005046702.tif 000007
2005046702.tif 000008
2005046702.tif 000009
2005046702.tif 000010
2005046702.tif 000011
2005046702.tif 000012