(57)【要約】  本開示は、ＣＤ１３７（例えば、ヒトＣＤ１３７）抗体に特異的に結合し、ＣＤ１３７機能を増加させる、抗体を提供する。これらの抗体を含む薬学的組成物、これらの抗体をコードする核酸、これらの抗体を作製するための発現ベクターおよび宿主細胞、ならびにこれらの抗体を使用して対象を治療する方法もまた提供される。【特許請求の範囲】
【請求項１】
ヒトＣＤ１３７に特異的に結合する単離された抗体であって、前記抗体が、相補性決定領域（ＣＤＲ）を含む重鎖可変領域（ＶＨ）であるＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、およびＣＤＲＨ３と、ＣＤＲを含む軽鎖可変領域（ＶＬ）であるＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、およびＣＤＲＬ３と、を含み、
（ａ）ＣＤＲＨ１が、Ｘ１Ｘ２Ｘ３Ｘ４Ｈ（配列番号８２）のアミノ酸配列を含み、式中、
Ｘ１が、Ｇ、Ａ、Ｄ、Ｅ、Ｌ、Ｎ、Ｑ、Ｒ、Ｓ、またはＷであり、
Ｘ２が、Ｙ、Ｆ、Ｈ、Ｎ、Ｒ、またはＳであり、
Ｘ３が、ＹまたはＨであり、
Ｘ４が、Ｍ、Ｉ、Ｔ、またはＶであり、
（ｂ）ＣＤＲＨ２が、ＷＩＮＰＮＳＧＧＴＮＹＡＱＫＦＱＧ（配列番号２）のアミノ酸配列を含み、
（ｃ）ＣＤＲＨ３が、Ｘ１ＰＸ２ＹＸ３ＧＸ４ＧＬＸ５Ｘ６（配列番号８３）のアミノ酸配列を含み、式中、
Ｘ１が、ＥまたはＧであり、
Ｘ２が、Ｇ、Ａ、Ｒ、またはＳであり、
Ｘ３が、Ｙ、Ｆ、Ｈ、またはＳであり、
Ｘ４が、Ｓ、Ａ、またはＴであり、
Ｘ５が、ＤまたはＧであり、
Ｘ６が、ＹまたはＨであり、
（ｄ）ＣＤＲＬ１が、ＧＧＤＤＩＧＤＫＲＶＨ（配列番号４）のアミノ酸配列を含み、
（ｅ）ＣＤＲＬ２が、ＥＤＲＹＲＰＳ（配列番号５）のアミノ酸配列を含み、かつ／あるいは
（ｆ）ＣＤＲＬ３が、ＱＸ１ＷＸ２Ｘ３Ｘ４Ｘ５Ｘ６Ｘ７ＰＧＶ（配列番号８４）のアミノ酸配列を含み、式中、
Ｘ１が、ＶまたはＩであり、
Ｘ２が、Ｄ、Ａ、Ｅ、Ｇ、Ｈ、Ｎ、またはＹであり、
Ｘ３が、Ｓ、Ａ、Ｅ、Ｆ、Ｌ、Ｐ、Ｒ、Ｔ、Ｗ、またはＹであり、
Ｘ４が、Ｓ、Ａ、Ｌ、Ｍ、またはＲであり、
Ｘ５が、Ｓ、Ａ、Ｆ、Ｇ、Ｌ、Ｐ、Ｑ、Ｒ、またはＴであり、
Ｘ６が、Ｄ、Ｅ、Ｈ、Ｖ、またはＹであり、
Ｘ７が、ＨまたはＹである、単離された抗体。
【請求項２】
（ａ）ＣＤＲＨ１が、Ｘ１Ｘ２ＹＸ３Ｈ（配列番号８５）のアミノ酸配列を含み、式中、
Ｘ１が、Ｇ、Ａ、Ｄ、Ｌ、Ｒ、Ｓ、またはＷであり、
Ｘ２が、Ｙ、Ｆ、Ｈ、またはＮであり、
Ｘ３が、ＭまたはＶであり、
（ｂ）ＣＤＲＨ３が、ＥＰＧＹＸ１ＧＸ２ＧＬＤＸ３（配列番号８６）のアミノ酸配列を含み、式中、
Ｘ１は、ＹまたはＦであり、
Ｘ２は、ＳまたはＴであり、
Ｘ３が、ＹまたはＨであり、かつ／あるいは
（ｃ）ＣＤＲＬ３が、ＱＶＷＸ１Ｘ２Ｘ３Ｘ４Ｘ５Ｘ６ＰＧＶ（配列番号８７）のアミノ酸配列を含み、式中、
Ｘ１が、Ｄ、Ａ、Ｅ、Ｈ、Ｎ、またはＹであり、
Ｘ２が、Ｓ、Ａ、Ｅ、Ｌ、Ｒ、またはＴであり、
Ｘ３が、Ｓ、Ａ、Ｌ、またはＲであり、
Ｘ４が、Ｓ、Ａ、Ｆ、Ｇ、Ｌ、Ｐ、Ｑ、またはＲであり、
Ｘ５が、Ｄ、Ｅ、またはＶであり、
Ｘ６が、ＨまたはＹである、請求項１に記載の単離された抗体。
【請求項３】
（ａ）ＣＤＲＨ１が、ＧＹＹＭＨ（配列番号１）のアミノ酸配列を含み、
（ｂ）ＣＤＲＨ３が、ＥＰＧＹＹＧＳＧＬＤＹ（配列番号３）またはＥＰＧＹＹＧＴＧＬＤＹ（配列番号５９）のアミノ酸配列を含み、かつ／あるいは
（ｃ）ＣＤＲＬ３が、ＱＶＷＤＳＳＳＤＨＰＧＶ（配列番号６）、ＱＶＷＮＳＳＳＤＨＰＧＶ（配列番号６０）、ＱＶＷＤＳＳＳＤＹＰＧＶ（配列番号６１）、またはＱＶＷＹＳＳＰＤＨＰＧＶ（配列番号６２）のアミノ酸配列を含む、請求項１または２に記載の単離された抗体。
【請求項４】
ＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、ＣＤＲＨ３、ＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、およびＣＤＲＬ３が、それぞれ列配列番号１、２、３、４、５、および６；１、２、５９、４、５、および６；１、２、３、４、５、および６０；１、２、３、４、５、および６１；または１、２、３、４、５、および６２に記載のアミノ酸配列を含む、請求項１に記載の単離された抗体。
【請求項５】
前記抗体が、配列番号７のアミノ酸配列と少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９９％、または１００％同一であるアミノ酸配列を含むＶＨを含む、請求項１〜４のいずれか一項に記載の単離された抗体。
【請求項６】
前記ＶＨが、配列番号７、６３、６４、または６５のアミノ酸配列を含む、請求項５に記載の単離された抗体。
【請求項７】
前記ＶＨが、配列番号７のアミノ酸配列を含む、請求項５または６に記載の単離された抗体。
【請求項８】
Ｘが、グルタミン（Ｑ）である、請求項６または７に記載の単離された抗体。
【請求項９】
Ｘが、ピログルタミン酸（ｐＥ）である、請求項６または７に記載の単離された抗体。
【請求項１０】
前記抗体が、配列番号８のアミノ酸配列と少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９９％、または１００％同一であるアミノ酸配列を含むＶＨを含む、請求項１〜９のいずれか一項に記載の単離された抗体。
【請求項１１】
前記ＶＬが、配列番号８、６６、６７、または６８のアミノ酸配列を含む、請求項１０に記載の単離された抗体
【請求項１２】
前記ＶＬが、配列番号８のアミノ酸配列を含む、請求項１０または１１に記載の単離された抗体。
【請求項１３】
ヒトＣＤ１３７に特異的に結合する単離された抗体であって、前記抗体が、配列番号７、６３、６４、または６５のアミノ酸配列を含むＶＨを含む、単離された抗体。
【請求項１４】
前記ＶＨが、配列番号７のアミノ酸配列を含む、請求項１３に記載の単離された抗体。
【請求項１５】
Ｘが、グルタミン（Ｑ）である、請求項１３または１４に記載の単離された抗体。
【請求項１６】
Ｘが、ピログルタミン酸（ｐＥ）である、請求項１３または１４に記載の単離された抗体。
【請求項１７】
ヒトＣＤ１３７に特異的に結合する単離された抗体であって、前記抗体が、配列番号８、６６、６７、または６８のアミノ酸配列を含むＶＬを含む、単離された抗体。
【請求項１８】
前記ＶＬが、配列番号８のアミノ酸配列を含む、請求項１７に記載の単離された抗体。
【請求項１９】
ヒトＣＤ１３７に特異的に結合する単離された抗体であって、前記抗体が、それぞれ配列番号７および８、６３および８、６４および６６、７および６７、または６５および６８のアミノ酸配列を含むＶＨならびにＶＬを含む、単離された抗体。
【請求項２０】
前記ＶＨおよびＶＬが、それぞれ配列番号７および８のアミノ酸配列を含む、請求項１９に記載の単離された抗体。
【請求項２１】
配列番号７、６３、６４、または６５のＸが、グルタミン（Ｑ）である、請求項１９または２０に記載の単離された抗体。
【請求項２２】
配列番号７、６３、６４、または６５のＸが、ピログルタミン酸（ｐＥ）である、請求項１９または２０に記載の単離された抗体。
【請求項２３】
ヒトＣＤ１３７に特異的に結合する単離された抗体であって、前記抗体が、ヒトＩＧＨＶ１−２＊０２生殖系列配列由来のアミノ酸配列を有するＶＨを含む、単離された抗体。
【請求項２４】
前記ＶＨが、配列番号３または５９に記載のアミノ酸配列を含む、請求項２３に記載の単離された抗体。
【請求項２５】
前記抗体が、ヒトＩＧＬＶ３−２１＊０２生殖系列配列由来のアミノ酸配列を有するＶＬを含む、請求項２３または２４に記載の単離された抗体。
【請求項２６】
前記ＶＬが、配列番号６、６０、６１、または６２に記載のアミノ酸配列を含む、請求項２５に記載の単離された抗体。
【請求項２７】
ヒトＣＤ１３７に特異的に結合する単離された抗体であって、前記抗体が、ヒトＩＧＬＶ３−２１＊０２生殖系列配列由来のアミノ酸配列を有するＶＬを含む、単離された抗体。
【請求項２８】
前記ＶＬが、配列番号６、６０、６１、または６２に記載のアミノ酸配列を含む、請求項２７に記載の単離された抗体。
【請求項２９】
前記抗体が、ヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１、およびＩｇＡ２からなる群から選択される重鎖定常領域を含む、請求項１〜２８のいずれか一項に記載の単離された抗体。
【請求項３０】
前記抗体が、ＩｇＧ１重鎖定常領域を含む、請求項２９に記載の単離された抗体。
【請求項３１】
前記抗体が、配列番号１５のアミノ酸配列を含む重鎖定常領域を含む、請求項３０に記載の単離された抗体。
【請求項３２】
前記ＩｇＧ１重鎖定常領域のアミノ酸配列が、ＥＵ番号付けシステムに従って番号付けされたＮ２９７Ａ変異体を含む、請求項３０に記載の単離された抗体。
【請求項３３】
前記抗体が、配列番号１６のアミノ酸配列を含む重鎖定常領域を含む、請求項３２に記載の単離された抗体。
【請求項３４】
前記ＩｇＧ１重鎖定常領域のアミノ酸配列が、ＥＵ番号付けシステムに従って番号付けされたＳ２６７ＥおよびＬ３２８Ｆ変異体を含む、請求項３０に記載の単離された抗体。
【請求項３５】
前記抗体が、配列番号１７のアミノ酸配列を含む重鎖定常領域を含む、請求項３４に記載の単離された抗体。
【請求項３６】
前記抗体が、ＩｇＧ２重鎖定常領域を含む、請求項２９に記載の単離された抗体。
【請求項３７】
前記抗体が、配列番号１８のアミノ酸配列を含む重鎖定常領域を含む、請求項３６に記載の単離された抗体。
【請求項３８】
前記ＩｇＧ２重鎖定常領域のアミノ酸配列が、ＥＵ番号付けシステムに従って番号付けされたＮ２９７Ａ変異体を含む、請求項３６に記載の単離された抗体。
【請求項３９】
前記抗体が、配列番号１９のアミノ酸配列を含む重鎖定常領域を含む、請求項３７に記載の単離された抗体。
【請求項４０】
前記抗体が、ＩｇＧ４重鎖定常領域を含む、請求項２９に記載の単離された抗体。
【請求項４１】
前記ＩｇＧ４重鎖定常領域のアミノ酸配列が、ＥＵ番号付けシステムに従って番号付けされたＳ２２８Ｐ変異体を含む、請求項４０に記載の単離された抗体。
【請求項４２】
前記抗体が、配列番号２０のアミノ酸配列を含む重鎖定常領域を含む、請求項４１に記載の単離された抗体。
【請求項４３】
前記抗体が、野生型重鎖定常領域の多様体である重鎖定常領域を含み、前記多様体重鎖定常領域が、前記野生型重鎖定常領域がＦｃγＲに結合するよりも高い親和性で前記ＦｃγＲに結合する、請求項１〜２９のいずれか一項に記載の単離された抗体。
【請求項４４】
前記ＦｃγＲが、ＦｃγＲＩＩＢである、請求項４３に記載の単離された抗体。
【請求項４５】
前記抗体が、配列番号２２のアミノ酸配列を含む軽鎖定常領域を含む、請求項１〜４４のいずれか一項に記載の単離された抗体。
【請求項４６】
ヒトＣＤ１３７に特異的に結合する単離された抗体であって、前記抗体が、
（ａ）配列番号９〜１４、４９〜５４、および７３〜７８からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む重鎖、ならびに／または
（ｂ）配列番号２１および７９〜８１からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む軽鎖、を含む、単離された抗体。
【請求項４７】
前記重鎖および軽鎖が、それぞれ配列番号９および２１、１０および２１、１１および２１、１２および２１、１３および２１、１４および２１、４９および２１、５０および２１、５１および２１、５２および２１、５３および２１、５４および２１、７３および２１、７４および２１、７５および７９、７６および７９、９および８０、４９および８０、７７および８１、または７８および８１のアミノ酸配列を含む、請求項４６に記載の単離された抗体。
【請求項４８】
前記重鎖および軽鎖が、それぞれ配列番号９および２１、１０および２１、１１および２１、１２および２１、１３および２１、１４および２１、４９および２１、５０および２１、５１および２１、５２および２１、５３および２１、５４および２１、７３および２１、７４および２１、７５および７９、７６および７９、９および８０、４９および８０、７７および８１、または７８および８１、のアミノ酸配列からなる、請求項４７に記載の単離された抗体。
【請求項４９】
前記重鎖および軽鎖が、それぞれ配列番号９および２１、または４９および２１のアミノ酸配列を含む、請求項４７に記載の単離された抗体。
【請求項５０】
前記重鎖および軽鎖のアミノ酸配列が、それぞれ配列番号９および２１、または４９および２１のアミノ酸配からなる、請求項４９に記載の単離された抗体。
【請求項５１】
Ｘが、グルタミン（Ｑ）である、請求項４６〜５０のいずれか一項に記載の単離された抗体。
【請求項５２】
Ｘが、ピログルタミン酸（ｐＥ）である、請求項４６〜５０のいずれか一項に記載の単離された抗体。
【請求項５３】
ヒトＣＤ１３７に特異的に結合する単離された抗体であって、前記ＣＤ１３７への前記抗体の結合が、前記抗体不在下での二量体化のレベルと比較して、前記ＣＤ１３７と第２のヒトＣＤ１３７分子との間の前記二量体化のレベルを増加させる、単離された抗体。
【請求項５４】
前記ＣＤ１３７への前記抗体の結合が、前記抗体不在下での２つのＣＤ１３７分子のＰＬＡＤドメイン間での一対ごとの結合レベルと比較して、２つのＣＤ１３７分子のＰＬＡＤドメイン間での一対ごとの結合レベルを増加させる、請求項５３に記載の単離された抗体。
【請求項５５】
前記ＣＤ１３７への前記抗体の結合が、前記抗体不在下での前記ＣＤ１３７分子の第１の領域と前記第２のヒトＣＤ１３７分子の第２の領域との間の一対ごとの結合レベルと比較して、前記第１の領域と前記第２の領域との間の前記一対ごとの結合レベルを増加させ、前記第１の領域および／または第２の領域が、配列番号３４のアミノ酸配列を含む、請求項５３に記載の単離された抗体。
【請求項５６】
前記抗体が、多価抗体であり、ＣＤ１３７の２つ以上の分子に同時に結合することが可能である、請求項５３〜５５のいずれか一項に記載の単離された抗体。
【請求項５７】
（ａ）前記抗体が、ヒトＣＤ１３７のヒトＣＤ１３７Ｌへの結合を実質的に阻害せず、
（ｂ）前記抗体が、ヒトＣＤ１３７の可溶性断片の、ヒトＣＤ１３７Ｌの可溶性断片への結合を実質的に阻害せず、
（ｃ）前記抗体が、ＣＤ１３７発現細胞の、ヒトＣＤ１３７Ｌの可溶性断片への結合を実質的に阻害せず、かつ／または、
（ｄ）前記抗体が、ＣＤ１３７発現細胞の、ＣＤ１３７Ｌ発現細胞への結合を実質的に阻害しない、請求項１〜５６のいずれか一項に記載の単離された抗体。
【請求項５８】
前記抗体が、ヒトＣＤ１３７に拮抗性である、請求項１〜５７のいずれか一項に記載の単離された抗体。
【請求項５９】
前記抗体が、ヒトＣＤ１３７の活性を増加または促進する、請求項１〜５８のいずれか一項に記載の単離された抗体。
【請求項６０】
ヒトＣＤ１３７の活性を増加または促進する前記抗体の能力が、前記抗体の架橋に依存する、請求項５９に記載の単離された抗体。
【請求項６１】
ヒトＣＤ１３７に特異的に結合する単離された抗体であって、前記抗体が、ヒトＣＤ１３７の活性を増加または促進し、ヒトＣＤ１３７の活性を増加または促進する前記抗体の能力が、前記抗体の架橋に依存する、単離された抗体。
【請求項６２】
前記抗体が、架橋不在下でヒトＣＤ１３７の活性を実質的に増加も促進もしない、請求項１〜６１のいずれか一項に記載の単離された抗体。
【請求項６３】
ヒトＣＤ１３７の活性を増加または促進する前記抗体の前記能力が、ＣＤ１３７Ｌの存在に依存する、請求項６０〜６２のいずれか一項に記載の単離された抗体。
【請求項６４】
ヒトＣＤ１３７に特異的に結合する単離された抗体であって、前記抗体が、ヒトＣＤ１３７の活性を増加または促進し、ヒトＣＤ１３７の活性を増加または促進する前記抗体の能力が、ＣＤ１３７Ｌの存在に依存する、単離された抗体。
【請求項６５】
ヒトＣＤ１３７の活性を増加または促進する前記抗体の前記能力が、ＣＤ１３７Ｌの濃度と正相関する、請求項６３または６４に記載の単離された抗体。
【請求項６６】
前記抗体が、ＣＤ１３７Ｌ不在下でヒトＣＤ１３７の活性を実質的に増加も促進もしない、請求項１〜６５のいずれか一項に記載の単離された抗体。
【請求項６７】
ヒトＣＤ１３７の前記活性が、前記ヒトＣＤ１３７を発現するＴ細胞を活性化することを含む、請求項５９〜６６のいずれか一項に記載の単離された抗体。
【請求項６８】
ヒトＣＤ１３７の前記活性が、ブドウ球菌エンテロトキシンＡ（ＳＥＡ）で刺激された末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）によるＩＬ−２産生を誘導することを含む、請求項５９〜６７のいずれか一項に記載の単離された抗体。
【請求項６９】
ヒトＣＤ１３７の前記活性が、前記ヒトＣＤ１３７を発現するナチュラルキラー（ＮＫ）細胞を活性化することを含む、請求項５９〜６８のいずれか一項に記載の単離された抗体。
【請求項７０】
ヒトＣＤ１３７の前記活性が、ＣＤ１３７Ｌを発現する抗原提示細胞（ＡＰＣ）を活性化することを含む、請求項５９〜６９のいずれか一項に記載の単離された抗体。
【請求項７１】
ヒトＣＤ１３７の活性を増加または促進する前記抗体の前記能力が、前記ＣＤ１３７Ｌの前記濃度の実質的増加関数である、請求項５９〜７０のいずれか一項に記載の単離された抗体。
【請求項７２】
前記抗体が、配列番号７のアミノ酸配列を含むＶＨおよび配列番号８のアミノ酸配列を含むＶＬを含む抗体と同じヒトＣＤ１３７のエピトープに結合する、請求項１〜７１のいずれか一項に記載の単離された抗体。
【請求項７３】
ヒトＣＤ１３７に特異的に結合する単離された抗体であって、前記抗体が、配列番号７のアミノ酸配列を含むＶＨおよび配列番号８のアミノ酸配列を含むＶＬを含む抗体と同じヒトＣＤ１３７のエピトープに結合する、単離された抗体。
【請求項７４】
前記抗体が、ヒトＣＤ１３７のＣＲＤ４ドメイン内に位置するエピトープに結合する、請求項１〜７３のいずれか一項に記載の単離された抗体。
【請求項７５】
ヒトＣＤ１３７の前記ＣＲＤ４ドメインが、配列番号４２に記載のアミノ酸配列を含む、請求項７４に記載の単離された抗体。
【請求項７６】
前記抗体が、配列番号２６〜３１、および４３のうちのいずれか１つのアミノ酸配列からなる、ヒトＣＤ１３７の領域内に位置するエピトープに結合する、請求項１〜７５のいずれか一項に記載の単離された抗体。
【請求項７７】
ヒトＣＤ１３７に特異的に結合する単離された抗体であって、前記抗体が、配列番号２６〜３１、および４３のうちのいずれか１つのアミノ酸配列からなるヒトＣＤ１３７の領域内に位置するエピトープに結合する、単離された抗体。
【請求項７８】
前記抗体が、配列番号４３のアミノ酸配列からなる、ヒトＣＤ１３７の領域内に位置するエピトープに結合する、請求項１〜７７のいずれか一項に記載の単離された抗体。
【請求項７９】
前記抗体が、配列番号４５のアミノ酸配列を含むタンパク質に実質的に結合しない、請求項７８に記載の単離された抗体。
【請求項８０】
前記抗体が、配列番号４６のアミノ酸配列を含むタンパク質に特異的に結合する、請求項７９に記載の単離された抗体。
【請求項８１】
前記抗体が、ＶＨおよびＶＬを含み、
（ａ）前記ＶＨおよび前記ＶＬの各々２つを含むＦ（ａｂ’）２が、配列番号２７のアミノ酸配列からなるヒトＣＤ１３７の領域内に位置するエピトープに結合し、かつ／あるいは、
（ｂ）前記ＶＨおよび前記ＶＬを含むＦａｂが、配列番号２６のアミノ酸配列からなるヒトＣＤ１３７の領域内に位置するエピトープ、ならびに任意選択的に、配列番号２８または２９のアミノ酸配列からなるヒトＣＤ１３７の領域内に位置するエピトープに結合する、請求項１〜８０のいずれか一項に記載の単離された抗体。
【請求項８２】
前記抗体が、ＶＨおよびＶＬを含み、
（ａ）前記ＶＨおよび前記ＶＬの各々２つを含むＦ（ａｂ’）２が、水素／重水素交換アッセイにより測定した場合、前記Ｆ（ａｂ’）２不在下での同じ領域における水素と重水素との交換と比較して、配列番号３４のアミノ酸配列からなるＣＤ１３７の領域における水素と重水素との交換を実質的に低減し、
（ｂ）前記ＶＨおよび前記ＶＬを含むＦａｂが、水素／重水素交換アッセイにより測定した場合、前記Ｆａｂ不在下での同じ領域における水素と重水素との交換と比較して、配列番号３４のアミノ酸配列からなるＣＤ１３７の領域における水素と重水素との交換を実質的に低減しない、請求項１〜８１のいずれか一項に記載の単離された抗体。
【請求項８３】
（ａ）前記抗体が、配列番号３７のアミノ酸配列を含むタンパク質に特異的に結合し、
（ｂ）前記抗体が、列配列番号３８のアミノ酸配を含むタンパク質に特異的に結合しない、請求項１〜８２のいずれか一項に記載の単離された抗体。
【請求項８４】
ヒトＣＤ１３７に特異的に結合する単離された抗体であって、
（ａ）前記抗体が、配列番号３７のアミノ酸配列を含むタンパク質に特異的に結合し、
（ｂ）前記抗体が、列配列番号３８のアミノ酸配を含むタンパク質に特異的に結合しない、単離された抗体。
【請求項８５】
前記抗体が、ヒト抗体である、請求項１〜８４のいずれか一項に記載の単離された抗体。
【請求項８６】
前記抗体が、多重特異性抗体である、請求項１〜８５のいずれか一項に記載の単離された抗体。
【請求項８７】
前記抗体が、細胞傷害性剤、細胞分裂阻害剤、毒素、放射性核種、または検出可能な標識に共役している、請求項１〜８６のいずれか一項に記載の単離された抗体。
【請求項８８】
前記抗体が、第２の抗体に共役している、請求項１〜８７のいずれか一項に記載の単離された抗体。
【請求項８９】
請求項１〜８８のいずれか一項に記載の抗体の、ＶＨおよび／もしくはＶＬまたは重鎖および／もしくは軽鎖をコードする単離されたポリヌクレオチド。
【請求項９０】
請求項８９に記載のポリヌクレオチドを含む、ベクター。
【請求項９１】
請求項８９に記載のポリヌクレオチドまたは請求項８９に記載のベクターを含む、組み換え宿主細胞。
【請求項９２】
請求項１〜８８のいずれか一項に記載の抗体、請求項８９に記載のポリヌクレオチド、請求項９０に記載のベクター、または請求項９１に記載の宿主細胞と、薬学的に許容される担体もしくは賦形剤と、を含む、薬学的組成物。
【請求項９３】
ヒトＣＤ１３７に特異的に結合する抗体を産生する方法であって、前記ポリヌクレオチドが発現され、かつ前記抗体が産生されるのに好適な条件下で、請求項９１に記載の宿主細胞を培養することを含む、方法。
【請求項９４】
対象の免疫応答を増加させる方法であって、有効量の、請求項１〜８８のいずれか一項に記載の抗体、請求項８９に記載のポリヌクレオチド、請求項９０に記載のベクター、請求項９１に記載の宿主細胞、または請求項９２に記載の薬学的組成物を前記対象に投与することを含む、方法。
【請求項９５】
対象の癌を治療する方法であって、有効量の、請求項１〜８８のいずれか一項に記載の抗体、請求項８９に記載のポリヌクレオチド、請求項９０に記載のベクター、請求項９１に記載の宿主細胞、または請求項９２に記載の薬学的組成物を前記対象に投与することを含む、方法。
【請求項９６】
前記抗体、ポリヌクレオチド、ベクター、宿主細胞、または薬学的組成物が、全身投与される、請求項９４または９５に記載の方法。
【請求項９７】
前記抗体、ポリヌクレオチド、ベクター、宿主細胞、または薬学的組成物が、静脈内に投与される、請求項９６に記載の方法。
【請求項９８】
前記抗体、ポリヌクレオチド、ベクター、宿主細胞、もしくは薬学的組成物を、皮下、腫瘍内に投与されるか、または腫瘍流入領域リンパ節に送達される、請求項９４または９５に記載の方法。
【請求項９９】
追加の治療薬を前記対象に投与することをさらに含む、請求項９４〜９８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１００】
前記追加の治療薬が、化学療法薬である、請求項９９に記載の方法。
【請求項１０１】
前記追加の治療薬が、チェックポイント標的薬である、請求項９９に記載の方法。
【請求項１０２】
前記チェックポイント標的薬が、アンタゴニスト抗ＰＤ−１抗体、アンタゴニスト抗ＰＤ−Ｌ１抗体、アンタゴニスト抗ＰＤ−Ｌ２抗体、アンタゴニスト抗ＣＴＬＡ−４抗体、アンタゴニスト抗ＴＩＭ−３抗体、アンタゴニスト抗ＬＡＧ−３抗体、アンタゴニスト抗ＶＩＳＴＡ抗体、アンタゴニスト抗ＣＤ９６抗体、アンタゴニスト抗ＣＥＡＣＡＭ１抗体、アンタゴニスト抗ＴＩＧＩＴ抗体、アゴニスト抗ＧＩＴＲ抗体、およびアゴニスト抗ＯＸ４０抗体からなる群から選択される、請求項１０１に記載の方法。
【請求項１０３】
前記追加の治療薬が、抗ＰＤ−１抗体であり、任意選択的に、前記抗ＰＤ−１抗体が、ペムブロリズマブまたはニボルマブである、請求項１０２に記載の方法。
【請求項１０４】
前記追加の治療薬が、インドールアミン−２，３−ジオキシゲナーゼ（ＩＤＯ）の阻害剤である、請求項９９に記載の方法。
【請求項１０５】
前記阻害剤が、エパカドスタット、Ｆ００１２８７、インドキシモド、およびＮＬＧ９１９からなる群から選択される、請求項１０４に記載の方法。
【請求項１０６】
前記追加の治療薬がワクチンである、請求項９９に記載の方法。
【請求項１０７】
前記ワクチンが、抗原ペプチドと複合体形成された熱ショックタンパク質を含む熱ショックタンパク質ペプチド複合体（ＨＳＰＰＣ）を含む、請求項１０６に記載の方法。
【請求項１０８】
前記熱ショックタンパク質が、ｈｓｃ７０であり、腫瘍関連抗原ペプチドと複合体形成されている、請求項１０７に記載の方法。
【請求項１０９】
前記熱ショックタンパク質が、ｇｐ９６タンパク質であり、腫瘍関連抗原ペプチドと複合体形成されており、前記ＨＳＰＰＣが、対象から得られた腫瘍に由来する、請求項１０７に記載の方法。
【請求項１１０】
対象の感染症を治療する方法であって、有効量の、請求項１〜８８のいずれか一項に記載の抗体、請求項８９に記載のポリヌクレオチド、請求項９０に記載のベクター、請求項９１に記載の宿主細胞、または請求項９２に記載の薬学的組成物を前記対象に投与することを含む、方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願
本出願は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる、２０１７年４月１３日出願の米国仮特許出願第６２／４８５，３６５号の利益を主張する。
【０００２】
本開示は、ＣＤ１３７（例えば、ヒトＣＤ１３７）に特異的に結合する抗体およびそれを使用する方法に関する。
【背景技術】
【０００３】
ＴＮＦＲＳＦ９または４−１ＢＢとしても知られるＣＤ１３７は、腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）受容体スーパーファミリーの膜貫通タンパク質である。それは、システインリッチモチーフを含有するＮ−末端細胞外ドメイン（膜貫通ドメイン）、および潜在的なリン酸化部位を含有する短いＣ−末端細胞質内ドメインを有する。ＣＤ１３７は、活性化ＣＤ４＋Ｔリンパ球、活性化ＣＤ８＋Ｔリンパ球、活性化ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、単球、樹状細胞、Ｂ細胞、好中球、およびｍａｓｔ細胞上で発現する（Ｖｉｎａｙ  ｅｔ  ａｌ．（２０１１）Ｃｅｌｌｕｌａｒ＆Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  ８：２８１−８４）。ＴＮＦＳＦ９または４−１ＢＢＬとしても知られるＣＤ１３７Ｌは、ＣＤ１３７のリガンドである。ＣＤ１３７Ｌが結合すると、ＣＤ１３７は、細胞の生存、増殖、サイトカイン産生、およびエフェクター機能の活性化を促進する共刺激シグナルを変換する。ＣＤ１３７ＬのＣＤ１３７への結合はまた、ＣＤ４＋Ｔ細胞よりも高い度合でＣＤ８＋Ｔ細胞を共刺激することが示されている。
【０００４】
動物モデルでの研究では、ＣＤ１３７Ｌまたはアゴニスト抗体のいずれかを使用するＣＤ１３７のライゲーションは、Ｔ細胞活性化を促進することにより腫瘍の成長を抑制することが示されている（Ｖｉｎａｙ  ｅｔ  ａｌ．（２０１２）Ｍｏｌ．Ｃａｎｃｅｒ．Ｔｈｅｒ．１１：１０６２−７０）。ＣＤ１３７はまた、ワクチン接種後のヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）およびＣ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）に対するＴ細胞免疫を向上させることが示されている（Ｍｕｎｋｓ  ｅｔ  ａｌ．（２００４）Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  １１２：５５９−６６、Ａｒｒｉｂｉｌｌａｇａ  ｅｔ  ａｌ．（２００５）Ｖａｃｃｉｎｅ２３：３４９３−９９）。加えて、ＣＤ１３７アゴニストは、狼瘡、コラーゲン誘導関節炎、および実験的自己免疫性脳脊髄炎の動物モデルにおいて、自己免疫を改善することが示されている。
【０００５】
免疫応答調節におけるヒトＣＤ１３７の明らかな役割を考慮すると、ＣＤ１３７シグナル伝達を促進するように設計された治療薬は、免疫抑制に関与する疾患の治療にかなり有望である。
【発明の概要】
【０００６】
本開示は、ＣＤ１３７（例えば、ヒトＣＤ１３７またはカニクイザルＣＤ１３７）へ特異的に結合し、ＣＤ１３７機能、例えば、ＣＤ１３７媒介性免疫活性化を増加または促進する抗体を提供する。これらの抗体を含む薬学的組成物、これらの抗体をコードする核酸、これらの抗体を作製するための発現ベクターおよび宿主細胞、ならびにこれらの抗体を使用して対象を治療する方法もまた提供される。本明細書に開示の抗体は、抗原（例えば、腫瘍抗原または感染症抗原）に対するＴ細胞活性化を増加させるのに、および／またはＴｒｅｇ媒介性免疫抑制を減少させるのに特に有用であり、それ故に、対象における癌の治療または対象における感染症の治療もしくは予防に特に有用である。
【０００７】
したがって、一態様では、本開示は、相補性決定領域（ＣＤＲ）ＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、およびＣＤＲＨ３を含む重鎖可変領域（ＶＨ）と、相補性決定領域ＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、およびＣＤＲＬ３を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）と、を含む、抗体または単離された抗体であって、
（ａ）ＣＤＲＨ１が、Ｘ１Ｘ２Ｘ３Ｘ４Ｈ（配列番号８２）のアミノ酸配列を含み、式中、
Ｘ１が、Ｇ、Ａ、Ｄ、Ｅ、Ｌ、Ｎ、Ｑ、Ｒ、Ｓ、またはＷであり、
Ｘ２が、Ｙ、Ｆ、Ｈ、Ｎ、Ｒ、またはＳであり、
Ｘ３が、ＹまたはＨであり、
Ｘ４が、Ｍ、Ｉ、Ｔ、またはＶであり、
（ｂ）ＣＤＲＨ２が、ＷＩＮＰＮＳＧＧＴＮＹＡＱＫＦＱＧ（配列番号２）のアミノ酸配列を含み、
（ｃ）ＣＤＲＨ３が、Ｘ１ＰＸ２ＹＸ３ＧＸ４ＧＬＸ５Ｘ６（配列番号８３）のアミノ酸配列を含み、式中、
Ｘ１が、ＥまたはＧであり、
Ｘ２が、Ｇ、Ａ、Ｒ、またはＳであり、
Ｘ３が、Ｙ、Ｆ、Ｈ、またはＳであり、
Ｘ４が、Ｓ、Ａ、またはＴであり、
Ｘ５が、ＤまたはＧであり、
Ｘ６が、ＹまたはＨであり、
（ｄ）ＣＤＲＬ１が、ＧＧＤＤＩＧＤＫＲＶＨ（配列番号４）のアミノ酸配列を含み、
（ｅ）ＣＤＲＬ２が、ＥＤＲＹＲＰＳ（配列番号５）のアミノ酸配列を含み、かつ／あるいは
（ｆ）ＣＤＲＬ３が、ＱＸ１ＷＸ２Ｘ３Ｘ４Ｘ５Ｘ６Ｘ７ＰＧＶ（配列番号８４）のアミノ酸配列を含み、式中、
Ｘ１が、ＶまたはＩであり、
Ｘ２が、Ｄ、Ａ、Ｅ、Ｇ、Ｈ、Ｎ、またはＹであり、
Ｘ３が、Ｓ、Ａ、Ｅ、Ｆ、Ｌ、Ｐ、Ｒ、Ｔ、Ｗ、またはＹであり、
Ｘ４が、Ｓ、Ａ、Ｌ、Ｍ、またはＲであり、
Ｘ５が、Ｓ、Ａ、Ｆ、Ｇ、Ｌ、Ｐ、Ｑ、Ｒ、またはＴであり、
Ｘ６が、Ｄ、Ｅ、Ｈ、Ｖ、またはＹであり、
Ｘ７が、ＨまたはＹである、抗体または単離された抗体を提供する。
【０００８】
ある特定の実施形態では、
（ａ）ＣＤＲＨ１が、Ｘ１Ｘ２ＹＸ３Ｈ（配列番号８５）のアミノ酸配列を含み、式中、
Ｘ１が、Ｇ、Ａ、Ｄ、Ｌ、Ｒ、Ｓ、またはＷであり、
Ｘ２が、Ｙ、Ｆ、Ｈ、またはＮであり、
Ｘ３が、ＭまたはＶであり、
（ｂ）ＣＤＲＨ３が、ＥＰＧＹＸ１ＧＸ２ＧＬＤＸ３（配列番号８６）のアミノ酸配列を含み、式中、
Ｘ１は、ＹまたはＦであり、
Ｘ２は、ＳまたはＴであり、
Ｘ３が、ＹまたはＨであり、かつ／あるいは
（ｃ）ＣＤＲＬ３が、ＱＶＷＸ１Ｘ２Ｘ３Ｘ４Ｘ５Ｘ６ＰＧＶ（配列番号８７）のアミノ酸配列を含み、式中、
Ｘ１が、Ｄ、Ａ、Ｅ、Ｈ、Ｎ、またはＹであり、
Ｘ２が、Ｓ、Ａ、Ｅ、Ｌ、Ｒ、またはＴであり、
Ｘ３が、Ｓ、Ａ、Ｌ、またはＲであり、
Ｘ４が、Ｓ、Ａ、Ｆ、Ｇ、Ｌ、Ｐ、Ｑ、またはＲであり、
Ｘ５が、Ｄ、Ｅ、またはＶであり、
Ｘ６が、ＨまたはＹである。
【０００９】
ある特定の実施形態では、
（ａ）ＣＤＲＨ１が、ＧＹＹＭＨ（配列番号１）のアミノ酸配列を含み、
（ｂ）ＣＤＲＨ３が、ＥＰＧＹＹＧＳＧＬＤＹ（配列番号３）またはＥＰＧＹＹＧＴＧＬＤＹ（配列番号５９）のアミノ酸配列を含み、かつ／あるいは
（ｃ）ＣＤＲＬ３が、ＱＶＷＤＳＳＳＤＨＰＧＶ（配列番号６）、ＱＶＷＮＳＳＳＤＨＰＧＶ（配列番号６０）、ＱＶＷＤＳＳＳＤＹＰＧＶ（配列番号６１）、またはＱＶＷＹＳＳＰＤＨＰＧＶ（配列番号６２）のアミノ酸配列を含む。
【００１０】
ある特定の実施形態では、ＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、ＣＤＲＨ３、ＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、およびＣＤＲＬ３は、それぞれ配列番号１、２、３、４、５、および６；１、２、５９、４、５、および６；１、２、３、４、５、および６０；１、２、３、４、５、および６１；または１、２、３、４、５、および６２に記載のアミノ酸配列を含む。
【００１１】
ある特定の実施形態では、抗体は、配列番号７のアミノ酸配列と少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９９％、または１００％同一であるアミノ酸配列を含むＶＨを含む。ある特定の実施形態では、ＶＨは、配列番号７、６３、６４、または６５のアミノ酸配列を含む。ある特定の実施形態では、ＶＨは、配列番号７のアミノ酸配列を含む。ある特定の実施形態では、ＶＨのアミノ酸配列は、配列番号７、６３、６４、または６５のアミノ酸配列からなる。ある特定の実施形態では、ＶＨのアミノ酸配列は、配列番号７のアミノ酸配列からなる。ある特定の実施形態では、Ｘは、グルタミン（Ｑ）である。ある特定の実施形態では、Ｘは、ピログルタミン酸（ｐＥ）である。ある特定の実施形態では、抗体は、配列番号８のアミノ酸配列と少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９９％、または１００％同一であるアミノ酸配列を含むＶＬを含む。ある特定の実施形態では、ＶＬは、配列番号８、６６、６７、または６８のアミノ酸配列を含む。ある特定の実施形態では、ＶＬは、配列番号８のアミノ酸配列を含む。ある特定の実施形態では、ＶＬのアミノ酸配列は、配列番号８、６６、６７、または６８のアミノ酸配列からなる。ある特定の実施形態では、ＶＬのアミノ酸配列は、配列番号８のアミノ酸配列からなる。
【００１２】
別の態様では、本開示は、ＣＤ１３７（例えば、ヒトＣＤ１３７またはカニクイザルＣＤ１３７）に特異的に結合する単離された抗体であって、抗体が、配列番号７、６３、６４、または６５のアミノ酸配列を含むＶＨを含む、単離された抗体を提供する。ある特定の実施形態では、ＶＨは、配列番号７のアミノ酸配列を含む。ある特定の実施形態では、ＶＨのアミノ酸配列は、配列番号７、６３、６４、または６５のアミノ酸配列からなる。ある特定の実施形態では、ＶＨのアミノ酸配列は、配列番号７のアミノ酸配列からなる。ある特定の実施形態では、Ｘは、グルタミン（Ｑ）である。ある特定の実施形態では、Ｘは、ピログルタミン酸（ｐＥ）である。
【００１３】
別の態様では、本開示は、ＣＤ１３７（例えば、ヒトＣＤ１３７またはカニクイザルＣＤ１３７）に特異的に結合する単離された抗体であって、抗体が、配列番号８、６６、６７、または６８のアミノ酸配列を含むＶＬを含む、単離された抗体を提供する。ある特定の実施形態では、ＶＬは、配列番号８のアミノ酸配列を含む。ある特定の実施形態では、ＶＬのアミノ酸配列は、配列番号８、６６、６７、または６８のアミノ酸配列からなる。ある特定の実施形態では、ＶＬのアミノ酸配列は、配列番号８のアミノ酸配列からなる。
【００１４】
別の態様では、本開示は、ＣＤ１３７（例えば、ヒトＣＤ１３７またはカニクイザルＣＤ１３７）に特異的に結合する単離された抗体であって、抗体が、それぞれ配列番号７および８、６３および８、６４および６６、７および６７、または６５および６８のアミノ酸配列を含むＶＨならびにＶＬを含む、単離された抗体を提供する。ある特定の実施形態では、ＶＨおよびＶＬのアミノ酸配列は、それぞれ配列番号７および８、６３および８、６４および６６、７および６７、または６５および６８のアミノ酸配列からなる。ある特定の実施形態では、配列番号７、６３、６４、または６５のＸは、グルタミン（Ｑ）である。ある特定の実施形態では、配列番号７、６３、６４、または６５のＸは、ピログルタミン酸（ｐＥ）である。
【００１５】
別の態様では、本開示は、ＣＤ１３７（例えば、ヒトＣＤ１３７またはカニクイザルＣＤ１３７）に特異的に結合する単離された抗体であって、抗体が、ヒトＩＧＨＶ１−２＊０２生殖系列配列由来のアミノ酸配列を有するＶＨを含む、単離された抗体を提供する。ある特定の実施形態では、ＶＨは、配列番号３または５９に記載のアミノ酸配列を含む。
【００１６】
別の態様では、本開示は、ＣＤ１３７（例えば、ヒトＣＤ１３７またはカニクイザルＣＤ１３７）に特異的に結合する単離された抗体であって、抗体が、ヒトＩＧＬＶ３−２１＊０２生殖系列配列由来のアミノ酸配列を有するＶＬを含む、単離された抗体を提供する。ある特定の実施形態では、ＶＬは、配列番号６、６０、６１または６２に記載のアミノ酸配列を含む。
【００１７】
別の態様では、本開示は、ＣＤ１３７（例えば、ヒトＣＤ１３７またはカニクイザルＣＤ１３７）に特異的に結合する単離された抗体であって、抗体が、ヒトＩＧＨＶ１−２＊０２生殖系列配列由来のアミノ酸配列を有するＶＨを含み、ＶＬが、ヒトＩＧＬＶ３−２１＊０２生殖系列配列由来のアミノ酸配列を有する、単離された抗体を提供する。ある特定の実施形態では、ＶＨは、配列番号３に記載のアミノ酸配列を含み、ＶＬは、配列番号６、６０、６１、または６２に記載のアミノ酸配列を含む。
【００１８】
ある特定の実施形態では、抗体は、ヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１、およびＩｇＡ２からなる群から選択される重鎖定常領域を含む。
【００１９】
ある特定の実施形態では、抗体は、ＩｇＧ１重鎖定常領域を含む。ある特定の実施形態では、配列番号１５のアミノ酸配列を含む重鎖定常領域を含む。ある特定の実施形態では、ＩｇＧ１重鎖定常領域のアミノ酸配列は、ＥＵ番号付けシステムに従って番号付けされた、Ｎ２９７Ａ変異体を含む。ある特定の実施形態では、配列番号１６のアミノ酸配列を含む重鎖定常領域を含む。ある特定の実施形態では、ＩｇＧ１重鎖定常領域のアミノ酸配列は、ＥＵ番号付けシステムに従って番号付けされたＳ２６７ＥおよびＬ３２８Ｆ変異体を含む。ある特定の実施形態では、配列番号１７のアミノ酸配列を含む重鎖定常領域を含む。
【００２０】
ある特定の実施形態では、抗体は、ＩｇＧ２重鎖定常領域を含む。ある特定の実施形態では、配列番号１８のアミノ酸配列を含む重鎖定常領域を含む。ある特定の実施形態では、ＩｇＧ２重鎖定常領域のアミノ酸配列は、ＥＵ番号付けシステムに従って番号付けされた、Ｎ２９７Ａ変異体を含む。ある特定の実施形態では、配列番号１９のアミノ酸配列を含む重鎖定常領域を含む。
【００２１】
ある特定の実施形態では、抗体は、ＩｇＧ４重鎖定常領域を含む。ある特定の実施形態では、ＩｇＧ４重鎖定常領域のアミノ酸配列は、ＥＵ番号付けシステムに従って番号付けされた、Ｓ２２８Ｐ変異体を含む。ある特定の実施形態では、配列番号２０のアミノ酸配列を含む重鎖定常領域を含む。
【００２２】
ある特定の実施形態では、抗体が、野生型重鎖定常領域の多様体である重鎖定常領域を含み、野生型重鎖定常領域がＦｃγＲに結合するよりも高い親和性で、多様体重鎖定常領域がＦｃγＲに結合する。ある特定の実施形態では、ＦｃγＲは、ＦｃγＲＩＩＢである。
【００２３】
ある特定の実施形態では、本抗体は、配列番号２２のアミノ酸配列を含む軽鎖定常領域を含む。
【００２４】
別の態様では、本開示は、ＣＤ１３７（例えば、ヒトＣＤ１３７またはカニクイザルＣＤ１３７）に特異的に結合する単離された抗体であって、抗体が、（ａ）配列番号９〜１４、４９〜５４、および７３〜７８からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む重鎖、ならびに／あるいは（ｂ）配列番号２１および７９〜８１のアミノ酸配列を含む軽鎖、を含む、単離された抗体を提供する。ある特定の実施形態では、重鎖および軽鎖は、それぞれ配列番号９および２１、１０および２１、１１および２１、１２および２１、１３および２１、１４および２１、４９および２１、５０および２１、５１および２１、５２および２１、５３および２１、５４および２１、７３および２１、７４および２１、７５および７９、７６および７９、９および８０、４９および８０、７７および８１、または７８および８１のアミノ酸配列を含む。ある特定の実施形態では、重鎖および軽鎖は、それぞれ配列番号９および２１、または４９および２１のアミノ酸配列を含む。ある特定の実施形態では、重鎖および軽鎖のアミノ酸配列は、それぞれ配列番号９および２１、１０および２１、１１および２１、１２および２１、１３および２１、１４および２１、４９および２１、５０および２１、５１および２１、５２および２１、５３および２１、５４および２１、７３および２１、７４および２１、７５および７９、７６および７９、９および８０、４９および８０、７７および８１、または７８および８１のアミノ酸配列からなる。ある特定の実施形態では、重鎖および軽鎖のアミノ酸配列は、それぞれ配列番号９および２１、または４９および２１のアミノ酸配からなる。ある特定の実施形態では、Ｘは、グルタミン（Ｑ）である。ある特定の実施形態では、Ｘは、ピログルタミン酸（ｐＥ）である。
【００２５】
別の態様では、本開示は、ＣＤ１３７（例えば、ヒトＣＤ１３７またはカニクイザルＣＤ１３７）に特異的に結合する単離された抗体を提供し、ＣＤ１３７への抗体の結合が、抗体不在下での二量体化のレベルと比較して、ＣＤ１３７と第２のヒトＣＤ１３７分子との間の二量体化のレベルを増加させる。ある特定の実施形態では、ＣＤ１３７への抗体の結合が、抗体不在下での２つのＣＤ１３７分子のＰＬＡＤドメイン間での一対ごとの結合レベルと比較して、２つのＣＤ１３７分子のＰＬＡＤドメイン間での一対ごとの結合レベルを増加させる。ある特定の実施形態では、ＣＤ１３７への抗体の結合は、抗体不在下でのＣＤ１３７分子の第１の領域と第２のヒトＣＤ１３７分子の第２の領域との間の一対ごとの結合レベルと比較して、第１の領域と第２の領域との間の一対ごとの結合レベルを増加させ、第１の領域および／または第２の領域が、配列番号３４のアミノ酸配列を含む。
【００２６】
別の態様では、本開示は、ＣＤ１３７（例えば、ヒトＣＤ１３７またはカニクイザルＣＤ１３７）に特異的に結合する単離された抗体を提供し、ＣＤ１３７への抗体の結合が、抗体不在下でのＣＤ１３７多量体化（例えば、二量体化）のレベルと比較して、ＣＤ１３７多量体化（例えば、二量体化）のレベルを増加させる。ある特定の実施形態では、ＣＤ１３７多量体化（例えば、二量体化）のレベルの増加は、２つのＣＤ１３７分子のＰＬＡＤドメイン間での一対ごとの結合レベルの増加を含む。ある特定の実施形態では、ＣＤ１３７多量体化（例えば、二量体化）のレベルの増加は、第１のＣＤ１３７分子の第１の領域と第２の分子の第２の領域との間の一対ごとの結合レベルの増加を含み、第１および／または第２の領域が、配列番号３４のアミノ酸配列を含む。
【００２７】
ある特定の実施形態では、抗体は、多価抗体であり、ＣＤ１３７の２つ以上の分子に同時に結合することが可能である。
【００２８】
ある特定の実施形態では、本明細書に開示の抗体は、ヒトＣＤ１３７のヒトＣＤ１３７Ｌへの結合を実質的に阻害しない。
【００２９】
別の態様では、本開示は、ヒトＣＤ１３７に特異的に結合し、ヒトＣＤ１３７のヒトＣＤ１３７Ｌへの結合を実質的に阻害しない、単離された抗体を提供する。
【００３０】
ある特定の実施形態では、抗体は、ヒトＣＤ１３７の可溶性断片の、ヒトＣＤ１３７Ｌの可溶性断片への結合を実質的に阻害しない。ある特定の実施形態では、抗体は、ＣＤ１３７発現細胞の、ヒトＣＤ１３７Ｌの可溶性断片への結合を実質的に阻害しない。ある特定の実施形態では、抗体は、ＣＤ１３７発現細胞の、ＣＤ１３７Ｌ発現細胞への結合を実質的に阻害しない。
【００３１】
ある特定の実施形態では、抗体は、ヒトＣＤ１３７の可溶性断片の、ヒトＣＤ１３７Ｌの可溶性断片への結合を阻害しない。ある特定の実施形態では、抗体は、ＣＤ１３７発現細胞のヒトＣＤ１３７Ｌの可溶性断片への結合を阻害しない。ある特定の実施形態では、抗体は、ＣＤ１３７発現細胞のＣＤ１３７Ｌ発現細胞への結合を阻害しない。
【００３２】
ある特定の実施形態では、本明細書に開示の抗体は、ヒトＣＤ１３７に拮抗性である。ある特定の実施形態では、抗体は、ヒトＣＤ１３７の活性を増加または促進する。ある特定の実施形態では、ヒトＣＤ１３７の活性を増加または促進する抗体の能力は、抗体の架橋に依存する。ある特定の実施形態では、抗体は、架橋不在下でのヒトＣＤ１３７の活性化を実質的に増加も促進もしない。
【００３３】
別の態様では、本開示は、ヒトＣＤ１３７の活性を増加または促進する抗体の能力が、抗体の架橋に依存する、ＣＤ１３７（例えば、ヒトＣＤ１３７）に特異的に結合し、ヒトＣＤ１３７の活性を増加又は促進する単離された抗体を提供する。ある特定の実施形態では、抗体は、架橋不在下でのヒトＣＤ１３７の活性化を実質的に増加も促進もしない。
【００３４】
ある特定の実施形態では、ヒトＣＤ１３７の活性を増加または促進する抗体の能力は、ＣＤ１３７Ｌの存在に依存する。
【００３５】
別の態様では、本開示は、ヒトＣＤ１３７の活性を増加または促進する抗体の能力が、ＣＤ１３７Ｌの存在に依存する、ＣＤ１３７（例えば、ヒトＣＤ１３７）に特異的に結合し、ヒトＣＤ１３７の活性を増加または促進する単離された抗体を提供する。
【００３６】
ある特定の実施形態では、ヒトＣＤ１３７の活性を増加または促進する抗体の能力は、ＣＤ１３７Ｌの濃度と正相関する。ある特定の実施形態では、ヒトＣＤ１３７の活性を増加または促進する抗体の能力は、ＣＤ１３７Ｌの濃度の実質的増加関数である。ある特定の実施形態では、抗体は、ＣＤ１３７Ｌ不在下でのヒトＣＤ１３７の活性を実質的に増加も促進もしない。ある特定の実施形態では、抗体は、ＣＤ１３７Ｌ不在下でのヒトＣＤ１３７の活性を増加または促進しない。
【００３７】
ある特定の実施形態では、ヒトＣＤ１３７の活性は、ヒトＣＤ１３７を発現するＴ細胞を活性化することを含む。ある特定の実施形態では、ヒトＣＤ１３７の活性は、ブドウ球菌エンテロトキシンＡ（ＳＥＡ）で刺激した末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）によって、ＩＬ−２産生を誘導することを含む。ある特定の実施形態では、ヒトＣＤ１３７の活性は、ヒトＣＤ１３７を発現するナチュラルキラー細胞（ＮＫ）を活性化することを含む。ある特定の実施形態では、ヒトＣＤ１３７の活性は、ＣＤ１３７Ｌを発現する抗原提示細胞（ＡＰＣ）を活性化することを含む。
【００３８】
ある特定の実施形態では、抗体は、配列番号７のアミノ酸配列を含むＶＨおよび配列番号８のアミノ酸配列を含むＶＬを含む抗体と同じ、ヒトＣＤ１３７のエピトープに結合する。
【００３９】
別の態様では、本開示は、抗体が、配列番号７のアミノ酸配列を含むＶＨおよび配列番号８のアミノ酸配列を含むＶＬを含む抗体と同じ、ヒトＣＤ１３７のエピトープに結合する、ヒトＣＤ１３７に特異的に結合する単離された抗体を提供する。ある特定の実施形態では、抗体は、ヒトＣＤ１３７のＣＲＤ４ドメイン内に位置するエピトープに結合する。ある特定の実施形態では、ヒトＣＤ１３７のＣＲＤ４ドメインは、配列番号４２に記載のアミノ酸配列を含む。
【００４０】
ある特定の実施形態では、本明細書に開示の抗体は、配列番号２６〜３１および４３のうちのいずれか１つのアミノ酸配列からなるヒトＣＤ１３７の領域内に位置するエピトープに結合する。ある特定の実施形態では、本抗体は、配列番号４３のアミノ酸配列からなるヒトＣＤ１３７の領域内に位置するエピトープに結合する。
【００４１】
別の態様では、本開示は、抗体が、配列番号２６〜３１および４３のうちのいずれか１つのアミノ酸配列からなるヒトＣＤ１３７の領域内に位置するエピトープに結合する、ヒトＣＤ１３７に特異的に結合する単離された抗体を提供する。ある特定の実施形態では、本抗体は、配列番号４３のアミノ酸配列からなるヒトＣＤ１３７の領域内に位置するエピトープに結合する。
【００４２】
ある特定の実施形態では、抗体は、列配列番号４５のアミノ酸配を含むタンパク質に実質的に結合しない。ある特定の実施形態では、抗体は、配列番号４６のアミノ酸配列を含むタンパク質に特異的に結合する。ある特定の実施形態では、抗体は、列配列番号４６のアミノ酸配を含むタンパク質に特異的に結合し、配列番号４５のアミノ酸配列を含むタンパク質には実質的に結合しない。ある特定の実施形態では、抗体は、配列番号４５のアミノ酸配列からなるか、または本質的にそれからなるタンパク質に実質的に結合しない。ある特定の実施形態では、抗体は、配列番号４６のアミノ酸配列からなるか、または本質的にそれからなるタンパク質に特異的に結合する。ある特定の実施形態では、抗体は、配列番号４６のアミノ酸配列からなるか、または本質的にそれからなるタンパク質に特異的に結合し、配列番号４５のアミノ酸配列からなるか、または本質的にそれからなるタンパク質に実質的に結合しない。
【００４３】
ある特定の実施形態では、抗体は、ＶＨおよびＶＬを含み、（ａ）ＶＨおよびＶＬの各々２つを含むＦ（ａｂ’）２が、配列番号２７のアミノ酸配列からなるヒトＣＤ１３７の領域内に位置するエピトープに結合し、かつ／あるいは、（ｂ）ＶＨおよびＶＬを含むＦａｂが、配列番号２６のアミノ酸配列からなるヒトＣＤ１３７の領域内に位置するエピトープ、ならびに任意選択的に、配列番号２８または２９のアミノ酸配列からなるヒトＣＤ１３７の領域内に位置するエピトープに結合する。
【００４４】
ある特定の実施形態では、抗体は、ＶＨおよびＶＬを含み、（ａ）ＶＨおよびＶＬの各々２つを含むＦ（ａｂ’）２として抗体がフォーマットされている場合、Ｆ（ａｂ’）２が、配列番号２７のアミノ酸配列からなるヒトＣＤ１３７の領域内に位置するエピトープに結合し、かつ／あるいは、（ｂ）ＶＨおよびＶＬを含むＦａｂとして抗体がフォーマットされている場合、Ｆａｂが、配列番号２６のアミノ酸配列からなるヒトＣＤ１３７の領域内に位置するエピトープ、ならびに任意選択的に、配列番号２８または２９のアミノ酸配列からなるヒトＣＤ１３７の領域内に位置するエピトープに結合する。
【００４５】
ある特定の実施形態では、抗体は、ＶＨおよびＶＬを含み、（ａ）ＶＨおよびＶＬの各々２つを含むＦ（ａｂ’）２が、水素／重水素交換アッセイにより測定した場合、Ｆ（ａｂ’）２不在下での同じ領域における水素と重水素との交換と比較して、配列番号３４のアミノ酸配列からなるＣＤ１３７の領域における水素と重水素との交換を実質的に低減し、（ｂ）ＶＨおよびＶＬを含むＦａｂが、水素／重水素交換アッセイにより測定した場合、Ｆａｂ不在下での同じ領域における水素と重水素の交換と比較して、配列番号３４のアミノ酸配列からなるＣＤ１３７の領域における水素と重水素との交換を実質的に低減しない。
【００４６】
ある特定の実施形態では、抗体は、ＶＨおよびＶＬを含み、（ａ）ＶＨおよびＶＬの各々２つを含むＦ（ａｂ’）２として抗体がフォーマットされている場合、Ｆ（ａｂ’）２が、水素／重水素交換アッセイにより測定した場合、Ｆ（ａｂ’）２不在下での同じ領域における水素と重水素との交換と比較して、配列番号３４のアミノ酸配列からなるＣＤ１３７の領域における水素と重水素との交換を実質的に低減し、（ｂ）ＶＨおよびＶＬを含むＦａｂとして抗体がフォーマットされている場合、Ｆａｂが、水素／重水素交換アッセイにより測定した場合、Ｆａｂ不在下での同じ領域における水素と重水素の交換と比較して、配列番号３４のアミノ酸配列からなるＣＤ１３７の領域における水素と重水素との交換を実質的に低減しない。
【００４７】
ある特定の実施形態では、抗体は、列配列番号３７のアミノ酸配を含むタンパク質に特異的に結合し、抗体は、配列番号３８のアミノ酸配列を含むタンパク質には特異的に結合しない。
【００４８】
別の態様では、本開示は、ヒトＣＤ１３７に特異的に結合する単離された抗体を提供し、抗体が、配列番号３７のアミノ酸配列を含むタンパク質に特異的に結合し、抗体が、配列番号３８のアミノ酸配列を含むタンパク質に特異的に結合しない。
【００４９】
ある特定の実施形態では、本明細書に開示の抗体は、ヒト抗体である。ある特定の実施形態では、本明細書に開示の抗体は、多重特異性抗体である。
【００５０】
ある特定の実施形態では、本明細書に開示の抗体は、細胞傷害性剤、細胞分裂阻害剤、毒素、放射性核種、または検出可能な標識に共役している。ある特定の実施形態では、抗体は、第２の抗体に共役している。
【００５１】
別の態様では、本開示は、本明細書に開示の抗体のＶＨおよび／もしくはＶＬまたは重鎖および／もしくは軽鎖をコードする単離されたポリヌクレオチドを提供する。別の態様では、本開示は、本明細書に開示のポリヌクレオチドを含むベクターを提供する。別の態様では、本開示は、本明細書に開示のポリヌクレオチドまたはベクターを含む、組み換え宿主細胞を提供する。
【００５２】
別の態様では、本開示は、本明細書に開示の、抗体、ポリヌクレオチド、ベクター、または宿主細胞と、薬学的に許容される担体または賦形剤と、を含む薬学的組成物を提供する。
【００５３】
別の態様では、本開示は、ヒトＣＤ１３７に特異的に結合する抗体を産生する方法であって、ポリヌクレオチドが発現され、かつ抗体が産生されるような好適な条件下で、本明細書に開示の宿主細胞を培養することを含む、方法を提供する。
【００５４】
別の態様では、本開示は、対照の免疫応答を増加させる方法であって、有効量の本明細書に開示の抗体、ポリヌクレオチド、ベクター、宿主細胞、または薬学的組成物を対象に投与することを含む、方法を提供する。
【００５５】
別の態様では、本開示は、対象の抗原に応答するＴ細胞活性化および／またはＮＫ細胞活性化を増加させる方法であって、有効量の本明細書に開示の、抗体、ポリヌクレオチド、ベクター、宿主細胞、または薬学的組成物を対象に投与することを含む、方法を提供する。
【００５６】
別の態様では、本開示は、対象の癌を治療する方法であって、有効量の本明細書に開示の、抗体、ポリヌクレオチド、ベクター、宿主細胞、または薬学的組成物を対象に投与することを含む、方法を提供する。
【００５７】
ある特定の実施形態では、抗体、ポリヌクレオチド、ベクター、宿主細胞、または薬学的組成物は、全身投与される。ある特定の実施形態では、抗体、ポリヌクレオチド、ベクター、宿主細胞、または薬学的組成物は、静脈内投与される。ある特定の実施形態では、抗体、ポリヌクレオチド、ベクター、宿主細胞、または薬学的組成物は、皮下、腫瘍内投与されるか、または腫瘍流入領域リンパ節に送達される。
【００５８】
ある特定の実施形態では、本明細書に開示の、対象の免疫応答を増加させる方法、対象の抗原に応答するＴ細胞活性化および／もしくはＮＫ細胞活性化を増加させる方法、または対象の癌を治療する方法は、追加の治療薬を対象に投与することをさらに含む。ある特定の実施形態では、追加の治療薬は、化学療法薬である。ある特定の実施形態では、追加の治療薬は、チェックポイント標的薬である。ある特定の実施形態では、チェックポイント標的薬は、アンタゴニスト抗ＰＤ−１抗体、アンタゴニスト抗ＰＤ−Ｌ１抗体、アンタゴニスト抗ＰＤ−Ｌ２抗体、アンタゴニスト抗ＣＴＬＡ−４抗体、アンタゴニスト抗ＴＩＭ−３抗体、アンタゴニスト抗ＬＡＧ−３抗体、アンタゴニスト抗ＶＩＳＴＡ抗体、アンタゴニスト抗ＣＤ９６抗体、アンタゴニスト抗ＣＥＡＣＡＭ１抗体、アンタゴニスト抗ＴＩＧＩＴ抗体、アゴニスト抗ＧＩＴＲ抗体、およびアゴニスト抗ＯＸ４０抗体からなる群から選択される。ある特定の実施形態では、追加の治療薬は、抗ＰＤ−１抗体であり、任意選択的に、抗ＰＤ−１抗体は、ペムブロリズマブまたはニボルマブである。ある特定の実施形態では、追加の治療薬は、インドールアミン−２，３−ジオキシゲナーゼ（ＩＤＯ）の阻害剤である。ある特定の実施形態では、阻害剤は、エパカドスタット、Ｆ００１２８７、インドキシモド、およびＮＬＧ９１９からなる群から選択される。ある特定の実施形態では、追加の治療薬は、ワクチンである。ある特定の実施形態では、ワクチンは、抗原ペプチドと複合体形成された熱ショックタンパク質を含む熱ショックタンパク質ペプチド複合体（ＨＳＰＰＣ）を含む。ある特定の実施形態では、熱ショックタンパク質は、ｈｓｃ７０であり、腫瘍関連抗原ペプチドと複合体形成されている。ある特定の実施形態では、熱ショックタンパク質は、ｇｐ９６タンパク質であり、腫瘍関連抗原ペプチドと複合体形成されており、ＨＳＰＰＣが、対象から得られた腫瘍に由来する。
【００５９】
別の態様では、本開示は、対象の感染症を治療する方法であって、有効量の本明細書に開示の、抗体、ポリヌクレオチド、ベクター、宿主細胞、または薬学的組成物を対象に投与することを含む、方法を提供する。
【図面の簡単な説明】
【００６０】
【図１】抗ＣＤ１３７抗体Ｂａ００１またはＩｇＧ１アイソタイプ対照抗体の、ヒトＣＤ１３７（図１Ａ）またはカニクイザルＣＤ１３７（図１Ｂ）をそれらの細胞表面上に発現している細胞への結合を示す、一連のフローサイトメトリーのグラフである。図１Ａでは、それらの表面上にヒトＣＤ１３７を発現するように操作されたＪｕｒｋａｔ細胞（左側パネル）、内在性ＣＤ１３７を発現している活性化ヒトＣＥＭ／Ｃ１  Ｔ細胞（中央パネル）、または活性化ヒト初代ＣＤ８＋Ｔ細胞（右側パネル）で、ヒトＣＤ１３７への結合を評価した。図１Ｂでは、それらの表面上にカニクイザルＣＤ１３７発現するように操作されたＪｕｒｋａｔ細胞（左側パネル）または活性化カニクイザル初代ＣＤ８＋Ｔ細胞（右側パネル）で、カニクイザルＣＤ１３７への結合を評価した。
【図２】ＣＤ１３７／ＢＡ００１−Ｆ（ａｂ’）２複合体の状況下で、ヒトＣＤ１３７へのヒトＣＤ１３７Ｌの結合を示す、表面プラズモン共鳴のグラフである。図２Ａでは、ＢＡ００１−Ｆ（ａｂ’）２をフローセルに結合し、次いでＣＤ１３７をフローセル上に泳動させ、それによりＣＤ１３７／ＢＡ００１−Ｆ（ａｂ’）２複合体を形成する。次いで、ＣＤ１３７Ｌをフローセル上に泳動させ、複合体への結合を示した。図２Ｂでは、まず、事前に形成したＣＤ１３７／ＢＡ００１−Ｆ（ａｂ’）２複合体をフローセルに結合した。次いで、ＣＤ１３７Ｌをフローセル上に泳動させ、複合体への結合を示した。
【図３】抗ヒトＣＤ１３７抗体Ｂａ００１が、ＣＤ１３７へのＣＤ１３７Ｌの結合を遮断しないことを示すグラフである。図３Ａは、ＢＡ００１が、それらの細胞上にＣＤ１３７Ｌを発現している細胞の、それらの表面上にＣＤ１３７を発現している細胞への結合を遮断しないことを示す、一連のフローサイトメトリープロットである。プロットの上段は、各抗体の側方散乱（ＳＳＣ）シグナルおよび前方散乱（ＦＳＣ）シグナルを示し、プロットの下段は、各抗体のＪｕｒｋａｔ−ＣＤ１３７（ＰＥ）シグナルおよびＪｕｒｋａｔ−ＣＤ１３７Ｌ（ＦＩＴＣ）シグナルを示している。図３Ｂおよび３Ｃは、２種の細胞を混合培養に組み合わせる前（図３Ｂ）または後（図３Ｃ）で抗ＣＤ１３７抗体またはアイソタイプ対照抗体を添加した、抗ＣＤ１３７Ｌ発現細胞およびＣＤ１３７発現細胞の共培養、細胞全数中の共役細胞のパーセンテージを示すグラフである。
【図４】抗ＣＤ１３７抗体Ｂａ００１の架橋依存性を示すグラフである。図４Ａは、１μｇ／ｍＬのＣＤ１３７Ｌ不在下で、２μｇ／ｍＬの架橋させたＢＡ００１、アイソタイプ対照、または参照抗ＣＤ１３７抗体＃２と培養した、ヒトＣＤ１３７を発現しているＪｕｒｋａｔ細胞中のＮＦκＢ−ルシフェラーゼレポーター活性を示している。レポーター活性は、発光レベルによって表され、架橋剤（ＡｆｆｉｎｉＰｕｒｅ  Ｆ（ａｂ’）２断片ヤギ抗ヒトＩｇＧ）対抗体のモルでの対数比に対してプロットしている。図４Ｂは、ＣＤ１６発現ＣＨＯ細胞と共培養したヒトＣＤ１３７を発現しているＪｕｒｋａｔ細胞のＮＦκＢ−ルシフェラーゼレポーター活性を示している。
【図５】ブドウ球菌エンテロトキシンＡ（ＳＥＡ）で刺激した際のヒト末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）中の、抗ＣＤ１３７抗体（すなわち、ＢＡ００１および２つの参照抗ＣＤ１３７抗体）または対応するアイソタイプ対照抗体（すなわち、それぞれＩｇＧ１、ＩｇＧ２、およびＩｇＧ４アイソタイプ対照抗体）によって誘導されたＩＬ−２の産生を示すグラフである。
【図６】抗ＣＤ３抗体（図６Ａおよび６Ｂ）で刺激された、精製されたヒトＴ細胞中の抗ＣＤ１３７抗体によって誘導されたＩＬ−２の産生を示すグラフである。これらの実験で使用された精製されたヒトＴ細胞中のＣＤ１３７Ｌ発現を、フローサイトメトリーによって評価した。これらの細胞上には、検出可能なＣＤ１３７Ｌの発現は観察されなかった（図６Ｃ）。
【図７Ａ】１μｇ／ｍＬのＣＤ１３７Ｌ存在下または不在下で測定した、Ｊｕｒｋａｔレポーター細胞中の抗ＣＤ１３７抗体Ｂａ００１の、架橋依存性およびリガンド依存性を示すグラフである。
【図７Ｂ】Ｊｕｒｋａｔレポーター細胞の表面上のＣＤ１３７およびＣＤ１３７Ｌの発現（または発現の欠如）を示すヒストグラムである。新たに解凍した細胞（「０時間」）、解凍後４時間培養した細胞（「４時間」）、および解凍後２４時間培養した細胞（「２４時間」）からの発現を分析した。
【図８】ヒトＣＤ１３７（図８Ａおよび８Ｂ）またはカニクイザルＣＤ１３７（図８Ｃおよび８Ｄ）のいずれかを発現している、段階希釈した抗ＣＤ１３７抗体Ｂａ００１またはアイソタイプ対照抗体と培養したＪｕｒｋａｔ細胞におけるＮＦκＢ−ルシフェラーゼレポーター活性を示すグラフである。一組の試料ではまた、ヒトＣＤ１３７Ｌの存在下（図８Ｂおよび８Ｄ）または不在下（図８Ａおよび８Ｃ）で細胞を培養した。
【図９】ヒトＣＤ１３７を発現している、（ｉ）２μｇ／ｍＬの抗ＣＤ１３７抗体（ＢＡ００１または２つの参照抗ＣＤ１３７抗体のうちの１つ）または適切なアイソタイプ対照抗体、および（ｉｉ）段階希釈したヒトＣＤ１３７Ｌ（リガンド）と培養したＪｕｒｋａｔ細胞におけるＮＦκＢ−ルシフェラーゼレポーター活性を示す一連のグラフである。第１の組の試料では、抗ＣＤ１３７抗体またはアイソタイプ対照抗体をＣＤ１３７Ｌの前に添加した（図９Ａ）。第２の組の試料では、抗ＣＤ１３７抗体またはアイソタイプ対照抗体をＣＤ１３７Ｌと同時に添加した（図９Ｂ）。第３の組の試料では、抗ＣＤ１３７抗体またはアイソタイプ対照抗体の前にＣＤ１３７Ｌを添加した（図９Ｃ）。
【図１０Ａ】ブドウ球菌エンテロトキシンＡ（ＳＥＡ）で刺激した際のヒト末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）中のＢＡ００１または対応するアイソタイプ対照抗体のＦｃ多様体によって誘導された、ＩＬ−２の産生を示すグラフである。
【図１０Ｂ】ブドウ球菌エンテロトキシンＡ（ＳＥＡ）で刺激した際のヒト末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）中のＢＡ００１または対応するアイソタイプ対照抗体の段階希釈したＦｃ多様体によって誘導された、ＩＬ−２の産生を示すグラフである。
【図１１】ヒトまたはカニクイザルＣＤ１３７のいずれかを発現している、段階希釈したＢＡ００１または適切なアイソタイプ対照抗体のＦｃ多様体と培養したＪｕｒｋａｔ細胞における、一連のＮＦκＢ−ルシフェラーゼレポーター活性である。一組の試料ではまた、ヒトＣＤ１３７Ｌ存在下（右段）または不在下（左段）で細胞を培養した。
【図１２】ブドウ球菌エンテロトキシンＡ（ＳＥＡ）で刺激した際のヒト末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）中の抗体によって誘導された、ＩＬ−２の産生を示すグラフである。図１２Ａで試験された抗体は、抗ＣＤ１３７抗体Ｂａ００１、アイソタイプ対照抗体、抗ＰＤ−１抗体、およびＢＡ００１と抗ＰＤ−１抗体との組み合わせを含む。図１２Ｂで試験された抗体は、抗ＣＤ１３７抗体Ｂａ００１、アイソタイプ対照抗体、抗ＯＸ４０抗体、およびＢＡ００１と抗ＯＸ４０抗体との組み合わせを含む。
【図１３】ヒトＣＤ１３７およびカニクイザルＣＤ１３７の配列アライメントである。「＊」（アスタリスク）は、単一の完全保存残基を有する位置を示す。「：」（コロン）は、強く類似した特性の群間の保存を示す。「．」（ピリオド）は、弱く類似した特性の群間の保存を示す。点線で囲まれた領域（ＤＰＣＳＮＣＰＡＧＴＦＣＤＮＮＲＮＱＩＣＳＰＣＰＰＮＳＦＳＳＡＧＧＱＲＴＣＤ、配列番号３４）は、ヒトＣＤ１３７がＢＡ００１−Ｆ（ａｂ’）２に結合され、この領域にＣＤ１３７ホモ二量体化を有し得るとき、重水素取り込みの緩やかな減少を呈した。実線で囲まれた領域（ＦＮＤＱＫＲＧＩＣＲＰＷＴＮＣＳＬ、配列番号２６）は、ヒトＣＤ１３７がＢＡ００１−Ｆａｂに結合されると、重水素取り込みの強い減少を呈した。
【図１４】ＦＡＣＳによるＢＡ００１のエピトープマッピングを示す一連の図である。図１４Ａでは、示された領域の各々（すなわち、５０１４、５０１５、５０１６、５０１７、および５０１８、以下の表５参照）の、ヒトからマウスへ配列を切り替えた一連のＣＤ１３７の変異体を生成した。次いで、抗ＣＤ１３７抗体結合をＦＡＣＳによって分析するために、これらの変異構造体をＪｕｒｋａｔ細胞にトランスフェクトした。図１４Ｂは、ＢＡ００１、参照抗ＣＤ１３７抗体＃１および＃２（それぞれ「参照＃１」および「参照＃２」）、ならびにアイソタイプ対照抗体の、上述の切り替えた変異体の各々を発現するように操作されたＪｕｒｋａｔ細胞への、細胞結合データを示している。
【図１５】表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）アッセイによるＣＤ１３７エピトープのファインマッピングを示している。図１５Ａは、ヒトＣＤ１３７およびマウスＣＤ１３７の配列アライメントである。「＊」（アスタリスク）は、単一の完全保存残基を有する位置を示す。「：」（コロン）は、強く類似した特性の群間の保存を示す。「．」（ピリオド）は、弱く類似した特性の群間の保存を示す。実線で囲まれた領域（ＦＮＤＱＫＲＧＩＣＲＰＷＴＮＣＳＬ、配列番号２６）は、図１３に示される水素／重水素交換アッセイによって特定されたエピトープ領域である。点線で囲まれた領域（ＬＴＫＫＧＣＫＤＣＣＦＧＴＦＮＤＱＫＲＧＩＣＲＰＷＴＮＣ、配列番号３０）は、図１４Ａおよび１４Ｂに示されるヒト−マウス融合構造体を使用した結合アッセイから特定された５０１７領域である。実線によって強調されている領域（ＫＲＧＩ、配列番号４３）は、ヒトＣＤ１３７とマウスＣＤ１３７との間で切り替えられてキメラタンパク質が生成されたアミノ酸配列を示している。図１５Ｂは、ＢＡ００１の、ヒトＣＤ１３７、ならびに「ヒトからマウス」および「マウスからヒト」のキメラタンパク質への結合を示す、ＳＰＲアッセイによるセンサーグラムである。図１５Ｃは、参照抗ＣＤ１３７抗体＃１（「参照＃１」）の、同じＣＤ１３７タンパク質への結合を示す、同様のＳＰＲアッセイによるセンサーグラムである。
【図１６】蛍光標識を使用して読み出した酵素結合免疫吸着法アッセイ（ＥＬＩＳＡ）により測定した場合の、４つのＢＡ００１多様体、ＢＡ０４９、ＢＡ０５０、ＢＡ０５１、およびＢＡ０５２の、ヒトＣＤ１３７（図１６Ａ）、カニクイザルＣＤ１３７（図１６Ｂ）、マウス−ヒト融合構造体５０１７（「ｍＣＤ１３７−ヒト１１２−１３９」）（図１６Ｃ）、およびマウス−ヒト融合構造体５０１５（「ｍＣＤ１３７−ヒト５３−８０」）（図１６Ｄ）の細胞外ドメインへの結合を示す一連のグラフである。中央値蛍光強度レベルを、抗ＣＤ１３７抗体の濃度に対してプロットした。
【発明を実施するための形態】
【００６１】
本開示は、ＣＤ１３７（例えば、ヒトＣＤ１３７またはカニクイザルＣＤ１３７）へ特異的に結合し、ＣＤ１３７機能、例えば、ＣＤ１３７媒介性免疫活性化を増加または促進する抗体を提供する。これらの抗体を含む薬学的組成物、これらの抗体をコードする核酸、これらの抗体を作製するための発現ベクターおよび宿主細胞、ならびにこれらの抗体を使用して対象を治療する方法もまた提供される。本明細書に開示の抗体は、抗原（例えば、腫瘍抗原または感染症抗原）に応答してＴ細胞活性化を増加させるため、それ故に対象の癌を治療する、または対象の感染症を治療もしくは予防するために特に有用である。本明細書に記載の「単離された抗体」の全ての例が、単離することができるが、単離される必要はない抗体として、追加的に企図される。本明細書に記載の「単離されたポリヌクレオチド」の全ての例が、単離することができるが、単離される必要はないポリヌクレオチドとして、追加的に企図される。本明細書に記載の「抗体」の全ての例が、単離することができるが、単離される必要はない抗体として、追加的に企図される。本明細書に記載の「ポリヌクレオチド」の全ての例が、単離することができるが、単離される必要はないポリヌクレオチドとして、追加的に企図される。
【００６２】
５．１定義
本明細書で使用される場合、「約」および「およそ」という用語は、数値または数値範囲を修飾するために使用されるとき、５％〜１０％上回り（例えば、最大５％〜１０％上回る）、かつ５％〜１０％下回る（例えば、最大５％〜１０％下回る）その値または範囲の偏差が、列挙される値または範囲の意図される意味に留まることを示す。
【００６３】
本明細書で使用される場合、「ＣＤ１３７」という用語は、ＴＮＦＲＳＦ９遺伝子によってコードされるヒトのＴＮＦ受容体スーパーファミリーメンバー９（４−１ＢＢとしても知られる）を指す。本明細書で使用される場合、「ヒトＣＤ１３７」という用語は、野生型ヒトＣＤ１３７遺伝子（例えば、ＧｅｎＢａｎｋ（商標）受入番号ＮＭ＿００１５６１．５）またはそのようなタンパク質の細胞外ドメインによってコードされるＣＤ１３７タンパク質を指す。未成熟ヒトＣＤ１３７タンパク質の例示的なアミノ酸配列が、配列番号２５として提供されている。成熟ヒトＣＤ１３７タンパク質の例示的なアミノ酸配列が、配列番号３３として提供されている。成熟ヒトＣＤ１３７タンパク質の細胞外ドメインの例示的なアミノ酸配列が、配列番号２４として提供されている。
【００６４】
本明細書で使用される場合、「抗体」および「抗体（複数）」という用語は、完全長抗体、完全長抗体の抗原結合断片、ならびに抗体ＣＤＲ、ＶＨ領域および／またはＶＬ領域を含む分子を含む。抗体の例としては、限定されないが、モノクローナル抗体、組み換え産生された抗体、単一特異性抗体、多特異性抗体（二重特異性抗体を含む）、ヒト抗体、ヒト化抗体、キメラ抗体、免疫グロブリン、合成抗体、２つの重鎖および２つの軽鎖分子を含む四量体抗体、抗体軽鎖単量体、抗体重鎖単量体、抗体軽鎖二量体、抗体重鎖二量体、抗体軽鎖−抗体重鎖対、細胞内抗体、ヘテロコンジュゲート抗体、抗体−薬物コンジュゲート、単一ドメイン抗体、一価抗体、一本鎖抗体または一本鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）、ラクダ化抗体、アフィボディ、Ｆａｂ断片、Ｆ（ａｂ’）２断片、ジスルフィド結合Ｆｖ（ｓｄＦｖ）、抗イディオタイプ（抗Ｉｄ）抗体（例えば、抗抗Ｉｄ抗体を含む）、および上記のうちのいずれかの抗原結合断片が挙げられ得る。ある特定の実施形態では、本明細書に記載の抗体は、ポリクローナル抗体集団を指す。抗体は、免疫グロブリン分子の任意の種類（例えば、ＩｇＧ、ＩｇＥ、ＩｇＭ、ＩｇＤ、ＩｇＡ、もしくはＩｇＹ）、任意のクラス（例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１、もしくはＩｇＡ２）、または任意のサブクラス（例えば、ＩｇＧ２ａもしくはＩｇＧ２ｂ）のものであり得る。ある特定の実施形態では、本明細書に記載の抗体は、ＩｇＧ抗体、またはそのクラス（例えば、ヒトＩｇＧ１もしくはＩｇＧ４）もしくはサブクラスである。具体的な実施形態では、抗体は、ヒト化モノクローナル抗体である。別の具体的な実施形態では、抗体は、ヒトモノクローナル抗体である。
【００６５】
本明細書で使用される場合、「ＶＨ領域」および「ＶＬ領域」という用語はそれぞれ、ＦＲ（フレームワーク領域）１、２、３、および４、ならびにＣＤＲ（相補性決定領域）１、２、および３を含む、単一の抗体重鎖および軽鎖可変領域を指す（その全体が参照により本明細書に組み込まれる、Ｋａｂａｔ  ｅｔ  ａｌ．，（１９９１）Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ（ＮＩＨ  Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ  Ｎｏ．９１−３２４２，Ｂｅｔｈｅｓｄａ）を参照されたい）。
【００６６】
本明細書で使用される場合、「ＣＤＲ」または「相補性決定領域」という用語は、重鎖および軽鎖ポリペプチドの両方の可変領域内に見出される不連続な抗原結合部位を意味する。これらの特定の領域は、Ｋａｂａｔ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２５２，６６０９−６６１６（１９７７）およびＫａｂａｔ  ｅｔ  ａｌ．，Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  ｐｒｏｔｅｉｎ  ｏｆ  ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  ｉｎｔｅｒｅｓｔ．（１９９１）、Ｃｈｏｔｈｉａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１９６：９０１−９１７（１９８７）、ならびにＭａｃＣａｌｌｕｍ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２６２：７３２−７４５（１９９６）（それらの全ては参照によりそれらの全体が本明細書に組み込まれる）に記載されており、定義は、互いに比較したときに、重複するアミノ酸残基またはそれらのサブセットを含む。ある特定の実施形態では、「ＣＤＲ」という用語は、Ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ，Ｋｏｎｔｅｒｍａｎｎ  ａｎｄ  Ｄｕｂｅｌ，ｅｄｓ．，Ｃｈａｐｔｅｒ３１，ｐｐ．４２２−４３９，Ｓｐｒｉｎｇｅｒ−Ｖｅｒｌａｇ，Ｂｅｒｌｉｎ（２００１）の、ＭａｃＣａｌｌｕｍ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２６２：７３２−７４５（１９９６）、およびＭａｒｔｉｎ  Ａ．“Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｓｅｑｕｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ  Ａｎａｌｙｓｉｓ  ｏｆ  Ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ｖａｒｉａｂｌｅ  Ｄｏｍａｉｎｓ”によって定義されるＣＤＲである。ある特定の実施形態では、「ＣＤＲ」という用語は、Ｋａｂａｔ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２５２，６６０９−６６１６（１９７７）およびＫａｂａｔ  ｅｔ  ａｌ．，Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  ｐｒｏｔｅｉｎ  ｏｆ  ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  ｉｎｔｅｒｅｓｔ．（１９９１）によって定義されるＣＤＲである。ある特定の実施形態では、抗体の重鎖ＣＤＲおよび軽鎖ＣＤＲは、異なる規約を使用して定義される。例えば、ある特定の実施形態では、重鎖ＣＤＲは、ＭａｃＣａｌｌｕｍ（上記）に従って定義され、軽鎖ＣＤＲは、Ｋａｂａｔ（上記）に従って定義される。ＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、およびＣＤＲＨ３は、重鎖ＣＤＲを表し、ＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、およびＣＤＲＬ３は、軽鎖ＣＤＲを表す。
【００６７】
本明細書で使用される場合、「フレームワーク（ＦＲ）アミノ酸残基」という用語は、免疫グロブリン鎖のフレームワーク領域内のアミノ酸のものを指す。本明細書で使用される場合、「フレームワーク領域」または「ＦＲ領域」という用語は、可変領域の一部であるが、ＣＤＲの一部ではない（例えば、ＣＤＲのＫａｂａｔ定義またはＭａｃＣａｌｌｕｍ定義を使用する）アミノ酸残基を含む。
【００６８】
本明細書で使用される場合、「可変領域」および「可変ドメイン」という用語は、交換可能に使用され、当該技術分野において共通のものである。可変領域は、典型的には、抗体の一部分、一般に、軽鎖または重鎖の一部分、典型的には、抗体間の配列が広範に異なり、かつその特定の抗原に対する特定の抗体の結合および特異性において使用される、成熟重鎖のアミノ末端から約１１０〜１２０アミノ酸または１１０〜１２５アミノ酸、および成熟軽鎖の約９０〜１１５アミノ酸を指す。配列の可変性が相補性決定領域（ＣＤＲ）と呼ばれる領域内で凝縮されている一方で、可変ドメイン内のより高度に保存された領域は、フレームワーク領域（ＦＲ）と呼ばれる。いかなる特定の機構または理論に束縛されることを望むものではないが、軽鎖および重鎖のＣＤＲが、抗原に対する抗体の相互作用および特異性に主に関与すると考えられる。ある特定の実施形態では、可変領域は、ヒト可変領域である。ある特定の実施形態では、可変領域は、齧歯類またはマウスＣＤＲおよびヒトフレームワーク領域（ＦＲ）を含む。特定の実施形態では、可変領域は、霊長類（例えば、非ヒト霊長類）可変領域である。ある特定の実施形態では、可変領域は、齧歯類またはマウスＣＤＲおよび霊長類（例えば、非ヒト霊長類）フレームワーク領域（ＦＲ）を含む。
【００６９】
「ＶＬ」および「ＶＬドメイン」という用語は、抗体の軽鎖可変領域を指すために交換可能に使用される。
【００７０】
「ＶＨ」および「ＶＨドメイン」という用語は、抗体の重鎖可変領域を指すために交換可能に使用される。
【００７１】
本明細書で使用される場合、「定常領域」および「定常ドメイン」という用語は、交換可能であり、当該技術分野において共通のものである。定常領域は、抗体部分、例えば、抗体の抗原への結合には直接関与しないが、Ｆｃ受容体（例えば、Ｆｃガンマ受容体）との相互作用などの様々なエフェクター機能を呈することができる、軽鎖および／または重鎖のカルボキシル末端部分である。免疫グロブリン分子の定常領域は一般に、免疫グロブリンの可変ドメインと比較して、より保存されたアミノ酸配列を有する。
【００７２】
本明細書で使用される場合、「重鎖」という用語は、抗体に関して使用されるとき、定常ドメインのアミノ酸配列に基づいて、任意の別個の種類、それぞれＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ、およびＩｇＭクラスの抗体（ＩｇＧのサブクラス、例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、およびＩｇＧ４を含む）をもたらす、例えばアルファ（ａ）、デルタ（δ）、エプシロン（ε）、ガンマ（γ）、およびミュー（μ）を指し得る。
【００７３】
本明細書で使用される場合、「軽鎖」という用語は、抗体に関して使用されるとき、定常ドメインのアミノ酸配列に基づいて、任意の別個の種類、例えば、カッパ（κ）またはラムダ（λ）を指し得る。軽鎖アミノ酸配列は、当該技術分野において周知である。具体的な実施形態では、この軽鎖は、ヒト軽鎖である。
【００７４】
本明細書で使用される場合、「ＥＵ番号付けシステム」という用語は、Ｅｄｅｌｍａｎ，Ｇ．Ｍ．ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．ＵＳＡ，６３，７８−８５（１９６９）およびＫａｂａｔ  ｅｔ  ａｌ，Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，Ｕ．Ｓ．Ｄｅｐｔ．Ｈｅａｌｔｈ  ａｎｄ  Ｈｕｍａｎ  Ｓｅｒｖｉｃｅｓ，５ｔｈ  ｅｄｉｔｉｏｎ，１９９１に記載の抗体の定常領域のＥＵ番号付けの規約を指し、その各々は、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。
【００７５】
「結合親和性」とは、一般に、分子の単一の結合部位（例えば、抗体）とその結合パートナー（例えば、抗原）との間の非共有相互作用の合計強度を指す。別途示されない限り、本明細書で使用される場合、「結合親和性」とは、結合対（例えば、抗体および抗原）のメンバー間の１：１の相互作用を反映する内因性の結合親和性を指す。分子ＸのそのパートナーＹに対する親和性は、一般に、解離定数（ＫＤ）によって表すことができる。親和性は、平衡解離定数（ＫＤ）および平衡会合定数（ＫＡ）を含むが、これらに限定されない当該技術分野で既知のいくつかの方法で測定および／または表現することができる。ＫＤは、ｋｏｆｆ／ｋｏｎの商から計算される一方で、ＫＡは、ｋｏｎ／ｋｏｆｆの商から計算される。ｋｏｎは、例えば、抗原に対する抗体の会合速度定数を指し、ｋｏｆｆは、例えば、抗原に対する抗体の解離速度定数を指す。ｋｏｎおよびｋｏｆｆは、ＢＩＡｃｏｒｅ（登録商標）またはＫｉｎＥｘＡなどの当業者に既知の技法によって決定することができる。本明細書で使用される場合、「より低い親和性」は、より大きいＫＤを指す。
【００７６】
本明細書で使用される場合、「特異的に結合する」、「特異的認識する」、「免疫特異的に結合する」、および「免疫特異的に認識する」という用語は、抗体の文脈において類似の用語であり、かかる結合が当業者に理解されるように、抗原（例えば、エピトープまたは免疫複合体）に結合する分子を指す。例えば、抗原に特異的に結合する分子は、例えば、免疫アッセイ、ＢＩＡｃｏｒｅ（登録商標）、ＫｉｎＥｘＡ  ３０００機器（Ｓａｐｉｄｙｎｅ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ，Ｂｏｉｓｅ，ＩＤ）、または当該技術分野で既知の他のアッセイによって決定された場合、一般により低い親和性で他のペプチドまたはポリペプチドに結合することができる。具体的な一実施形態では、抗原に特異的に結合する分子は、少なくともｌｏｇ２（例えば、係数１０）ｌｏｇ２．５、ｌｏｇ３、ｌｏｇ４であるか、または分子が別の抗原に非特異的に結合するときのＫＡを超えるＫＡで抗原に結合する。
【００７７】
別の具体的な実施形態では、抗原に特異的に結合する分子は、同様の結合条件下で他のタンパク質と交差反応しない。別の具体的な実施形態では、ＣＤ１３７に特異的に結合する分子は、他の非ＣＤ１３７タンパク質とは交差反応しない。具体的な一実施形態では、別の非関連抗原に対するよりも高い親和性で、ＣＤ１３７（例えば、ヒトＣＤ１３７またはカニクイザルＣＤ１３７）に結合する抗体が本明細書に提供される。ある特定の実施形態では、例えば、放射免疫アッセイ、表面プラズモン共鳴、または動態排除アッセイにより測定した場合、別の非関連抗原に対するよりも２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％高い、またはより高い親和性で、ＣＤ１３７（例えば、ヒトＣＤ１３７またはカニクイザルＣＤ１３７）に結合する抗体が本明細書に提供される。特定の実施形態では、本明細書に記載の抗ＣＤ１３７抗体の、非関連非ＣＤ１３７タンパク質への結合の程度は、例えば、放射免疫アッセイによって測定して、この抗体の、ＣＤ１３７タンパク質への結合の１０％、１５％、または２０％未満である。
【００７８】
本明細書で使用される場合、Ａは「実質的にＢを阻害しない」とは、Ａが不在下でのＢと比較して、Ａの存在下でＢが、１％、２％、３％、４％、５％、１０％、１５％、２０％、２５％、または３０％超低減されないことを意味する。
【００７９】
本明細書で使用される場合、例えば、所与の実験、または複数の実験からの平均値を使用して、Ａが特定のドメインを上回って増加するにつれてＢが実質的に増加する場合、ＢはＡの値の特定のドメインを上回るＡの「実質的増加関数」である。この定義では、Ａの特定の値に対応するＢの値が、Ａの任意のより低い値に対応するＢの値と比較して、最大で１％、２％、３％、４％、５％、１０％、１５％）、または２０％）低いことを考慮する。
【００８０】
本明細書で使用される場合、「エピトープ」は、当該技術分野における用語であり、抗体が特異的に結合し得る抗原の局在化領域を指す。エピトープは、例えば、ポリペプチドの隣接アミノ酸（線形もしくは隣接エピトープ）であり得るか、またはエピトープは、例えば、１つのポリペプチドもしくは複数のポリペプチドの２つ以上の非隣接領域由来（立体構造、非線形、非連続、もしくは非隣接エピトープ）であり得る。ある特定の実施形態では、抗体が結合するエピトープは、例えば、ＮＭＲ分光法、Ｘ線回折結晶学研究、ＥＬＩＳＡアッセイ、質量分析（例えば、液体クロマトグラフィーエレクトロスプレー質量分析）と組み合わせた水素／重水素交換、アレイに基づくオリゴ−ペプチド走査アッセイ（例えば、ＣＬＩＰＳ（足場上へのペプチドの化学結合）を使用してペプチドを拘束して、非連続もしくは立体構造エピトープをマッピングすること）、および／または変異誘発マッピング（例えば、部位特異的変異誘発マッピング）によって決定することができる。Ｘ線結晶学の場合、結晶化は、当該技術分野で既知の方法のうちのいずれかを使用して達成され得る（例えば、Ｇｉｅｇｅ  Ｒ  ｅｔ  ａｌ．，（１９９４）Ａｃｔａ  Ｃｒｙｓｔａｌｌｏｇｒ  Ｄ  Ｂｉｏｌ  Ｃｒｙｓｔａｌｌｏｇｒ  ５０（Ｐｔ  ４）：３３９−３５０、ＭｃＰｈｅｒｓｏｎ  Ａ（１９９０）Ｅｕｒ  Ｊ  Ｂｉｏｃｈｅｍ  １８９：１−２３、Ｃｈａｙｅｎ  ＮＥ（１９９７）Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ  ５：１２６９−１２７４、ＭｃＰｈｅｒｓｏｎ  Ａ（１９７６）Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ  ２５１：６３００−６３０３、その各々は参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）。抗体：抗原結晶は、周知のＸ線回折技法を使用して研究することができ、Ｘ−ＰＬＯＲ（Ｙａｌｅ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，１９９２、販売元Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｓｉｍｕｌａｔｉｏｎｓ，Ｉｎｃ．、例えば、Ｍｅｔｈ  Ｅｎｚｙｍｏｌ（１９８５）ｖｏｌｕｍｅｓ  １１４＆１１５，ｅｄｓ  Ｗｙｃｋｏｆｆ  ＨＷ  ｅｔ  ａｌ．，、ＵＳ２００４／００１４１９４を参照）、およびＢＵＳＴＥＲ（Ｂｒｉｃｏｇｎｅ  Ｇ（１９９３）Ａｃｔａ  Ｃｒｙｓｔａｌｌｏｇｒ  Ｄ  Ｂｉｏｌ  Ｃｒｙｓｔａｌｌｏｇｒ  ４９（Ｐｔ  １）：３７−６０、Ｂｒｉｃｏｇｎｅ  Ｇ（１９９７）Ｍｅｔｈ  Ｅｎｚｙｍｏｌ  ２７６Ａ：３６１−４２３，ｅｄ  Ｃａｒｔｅｒ  ＣＷ、Ｒｏｖｅｒｓｉ  Ｐ  ｅｔ  ａｌ．，（２０００）Ａｃｔａ  Ｃｒｙｓｔａｌｌｏｇｒ  Ｄ  Ｂｉｏｌ  Ｃｒｙｓｔａｌｌｏｇｒ  ５６（Ｐｔ  １０）：１３１６−１３２３（その各々は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる））などのコンピュータソフトウェアを使用して細かく区別され得る。変異誘発マッピング研究は、当業者に既知の任意の方法を使用して達成することができる。例えば、アラニン走査変異誘発技法を含む、変異誘発技法の説明については、Ｃｈａｍｐｅ  Ｍ  ｅｔ  ａｌ．，（１９９５）Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ  ２７０：１３８８−１３９４およびＣｕｎｎｉｎｇｈａｍ  ＢＣ＆Ｗｅｌｌｓ  ＪＡ（１９８９）Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２４４：１０８１−１０８５を参照されたい（その各々は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）。ＣＬＩＰＳ（ペプチドの足場上への化学結合）は、構造的に拘束された立体配置にある１つ以上のペプチドを、複合タンパク質ドメインの機能的な模倣物として挙動するように提示する技術である。例えば、米国公開第２００８／０１３９４０７Ａ１号および同第２００７／０９９２４０Ａ１号、ならびに米国特許第９７２，９９３号を参照されたい（その各々は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）。特定の実施形態では、抗体のエピトープは、アラニン走査変異誘発研究を使用して決定される。具体的な一実施形態では、抗体のエピトープは、質量分析と組み合わせた水素／重水素交換を使用して決定される。具体的な一実施形態では、抗体のエピトープは、Ｐｅｐｓｃａｎ  ＴｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓのＣＬＩＰＳエピトープマッピング技術を使用して決定される。具体的な一実施形態では、抗体のエピトープは、タンパク質変異誘発によって、例えば、別の種からのそのオーソログの部分を用いて抗原の切り替え変異体を生成し、次いで切り替え変異体の抗原結合の損失を試験することによって、（例えば、本明細書に記載のＦＡＣＳに基づく細胞結合アッセイによって）決定される。
【００８１】
本明細書で使用される場合、ヒトＣＤ１３７の領域「内に位置するエピトープ」という用語は、特定の領域のアミノ酸残基のうちの１つ以上を含むエピトープを指す。ある特定の実施形態では、エピトープは、特定の領域内に位置するアミノ酸残基の１つ１つを含む。ある特定の実施形態では、エピトープは、特定の領域内に位置するアミノ酸残基のうちの各１つからなる。ある特定の実施形態では、特定の領域外のヒトＣＤ１３７の１つ以上の追加のアミノ酸残基は、特定の領域内に位置するエピトープと一緒に抗体に結合する。
【００８２】
本明細書で使用される場合、「Ｔ細胞受容体」および「ＴＣＲ」という用語は、互換的に使用され、完全長ヘテロ二量体αβまたはγδＴＣＲ、完全長ＴＣＲの抗原結合断片、およびＴＣＲ  ＣＤＲまたは可変領域を含む分子を指す。ＴＣＲの例としては、完全長ＴＣＲ、完全長ＴＣＲの抗原結合断片、膜貫通領域および細胞質領域を欠如する可溶性ＴＣＲ、可動性リンカーによって結合したＴＣＲの可変領域を含有する一本鎖ＴＣＲ、操作されたジスルフィド結合によって結合したＴＣＲ鎖、単一特異性抗体ＴＣＲ、多重特異性ＴＣＲ（二重特異ＴＣＲを含む）、ＴＣＲ融合体、ヒトＴＣＲ、ヒト化ＴＣＲ、キメラＴＣＲ、組み換え産生されたＴＣＲ、ならびに合成ＴＣＲが挙げられるが、これらに限定されない。この用語は、野生型ＴＣＲおよび遺伝子操作されたＴＣＲ（例えば、第１の種のＴＣＲ由来の第１の部分および第２の種のＴＣＲ由来の第２の部分を含むキメラＴＣＲ鎖を含む、キメラＴＣＲ）を包含する。
【００８３】
本明細書で使用される場合、「ＣＤ１３７多量体化のレベル」という用語は、ＣＤ１３７分子の集団（例えば、１つ以上の細胞の表面上に発現されるＣＤ１３７分子の集団）中の単量体ＣＤ１３７と比較した、多量体（例えば、二量体）ＣＤ１３７の相対的な量を指す。
【００８４】
本明細書で使用される場合、「主要組織適合遺伝子複合体」および「ＭＨＣ」という用語は、互換的に使用され、ＭＨＣクラスＩ分子および／またはＭＨＣクラスＩＩ分子を指す。
【００８５】
本明細書で使用される場合、「ペプチド−ＭＨＣ複合体」という用語は、当該技術分野で認識されるＭＨＣのペプチド結合ポケットにおいて結合されるペプチドを有するＭＨＣ分子（ＭＨＣクラスＩまたはＭＨＣクラスＩＩ）を指す。
【００８６】
本明細書で使用される場合、「治療する」、「治療すること」、および「治療」は、本明細書に記載の治療手段または予防手段を指す。「治療」方法は、疾患もしくは障害を有するか、またはそのような疾患もしくは障害に罹りやすい対象に対する抗体の投与を用いて、疾患もしくは障害または疾患もしくは障害の再発を予防、治癒、遅延、その重症度を低減、またはその１つ以上の症状を寛解させるか、あるいはそのような治療の不在下で予想される生存期間を超えて対象の生存期間を延長させる。
【００８７】
本明細書で使用される場合、「有効量」という用語は、対象への治療の投与との関連において、所望の予防または治療効果を達成する治療の量を指す。
【００８８】
本明細書で使用される場合、「対象」という用語は、あらゆるヒトまたは非ヒト動物を含む。一実施形態では、対象は、ヒトまたは非ヒト哺乳動物である。一実施形態では、対象は、ヒトである。
【００８９】
２つの配列（例えば、アミノ酸配列または核酸配列）間の「同一性パーセント」の決定は、数学アルゴリズムを使用して達成され得る。２つの配列の比較に利用される数学アルゴリズムの特定の非限定例は、Ｋａｒｌｉｎ  Ｓ＆Ａｌｔｓｃｈｕｌ  ＳＦ（１９９３）ＰＮＡＳ  ９０：５８７３−５８７７にあるように修正されたＫａｒｌｉｎ  Ｓ＆Ａｌｔｓｃｈｕｌ  ＳＦ（１９９０）ＰＮＡＳ  ８７：２２６４−２２６８のアルゴリズムである５８７３−５８７７に記載される、ＩＭＧＴ番号付けシステムに従って決定することができ、その各々は参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。かかるアルゴリズムは、Ａｌｔｓｃｈｕｌ  ＳＦ  ｅｔ  ａｌ．，（１９９０）Ｊ  Ｍｏｌ  Ｂｉｏｌ  ２１５：４０３のＮＢＬＡＳＴプログラムおよびＸＢＬＡＳＴプログラムに組み込まれる（これは、その全体が参照により本明細書に組み込まれる）。ＢＬＡＳＴヌクレオチド検索は、本明細書に記載の核酸分子と相同なヌクレオチド配列を得るために、例えば、スコア＝１００、文字長＝１２のＮＢＬＡＳＴヌクレオチドプログラムパラメータセットで行うことができる。ＢＬＡＳＴタンパク質検索は、本明細書に記載のタンパク質分子と相同なアミノ酸配列を得るために、例えば、スコア＝５０、文字長＝３のＸＢＬＡＳＴプログラムパラメータセットで行うことができる。比較目的のためにギャップありの（ｇａｐｐｅｄ）アラインメントを得るには、Ｇａｐｐｅｄ  ＢＬＡＳＴを、Ａｌｔｓｃｈｕｌ  ＳＦ  ｅｔ  ａｌ．，（１９９７）Ｎｕｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ  ２５：３３８９−３４０２（その全体が参照により本明細書に組み込まれる）に記載のように利用してもよい。あるいは、ＰＳＩ  ＢＬＡＳＴを使用して、分子間の距離関係（Ｉｄ．）を検出する反復サーチを行うことができる。ＢＬＡＳＴ、ギャップ有りのＢＬＡＳＴ、およびＰＳＩ  Ｂｌａｓｔプログラムを利用する場合、それぞれのプログラムの（例えばＸＢＬＡＳＴおよびＮＢＬＡＳＴの）デフォルトパラメータを使用することができる（例えば、ワールドウェブｎｃｂｉ．ｎｌｍ．ｎｉｈ．ｇｏｖにあるＮａｔｉｏｎａｌ  Ｃｅｎｔｅｒ  ｆｏｒ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ（ＮＣＢＩ）を参照されたい）。配列比較のために利用される数学アルゴリズムの別の具体的な非限定的な例は、Ｍｙｅｒｓ  ａｎｄ  Ｍｉｌｌｅｒ，１９８８，ＣＡＢＩＯＳ  ４：１１−１７（参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）のアルゴリズムである。そのようなアルゴリズムは、ＧＣＧ配列アライメントソフトウェアパッケージの一部であるＡＬＩＧＮプログラム（バージョン２．０）に組み込まれている。アミノ酸配列を比較するためにＡＬＩＧＮプログラムを利用する場合、ＰＡＭ１２０重量残基表、１２のギャップ長ペナルティ、および４のギャップペナルティを使用することができる。
【００９０】
２つの配列間の同一性パーセントは、ギャップを許容して、または許容することなく、上述のものと同様の技法を使用して決定することができる。同一性パーセントの計算では、典型的には、正確な一致のみを計数する。
【００９１】
５．２  抗ＣＤ１３７抗体
一態様では、本開示は、ＣＤ１３７（例えば、ヒトＣＤ１３７またはカニクイザルＣＤ１３７）に特異的に結合し、ＣＤ１３７機能を増加または促進する抗体を提供する。例示的な抗体のアミノ酸配列は、本明細書の表１に記載されている。
【表１】
2020516240.tif 000002
2020516240.tif 000003
2020516240.tif 000004
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2020516240.tif 000018
【表２】
2020516240.tif 000019
【表３】
2020516240.tif 000020
【表４】
2020516240.tif 000021
2020516240.tif 000022
【００９２】
ある特定の実施形態では、本開示は、ＣＤ１３７（例えば、ヒトＣＤ１３７またはカニクイザルＣＤ１３７）に特異的に結合する単離された抗体であって、抗体が、本明細書の表１に記載のＶＨドメインのＣＤＲのうちの１つ、２つ、または３つ全てを含むＶＨドメインを含む、単離された抗体を提供する。ある特定の実施形態では、本抗体は、表１に記載のＶＨドメインのうちの１つのＣＤＲＨ１を含む。ある特定の実施形態では、本抗体は、表１に記載のＶＨドメインのうちの１つのＣＤＲＨ２を含む。ある特定の実施形態では、本抗体は、表１に記載のＶＨドメインのうちの１つのＣＤＲＨ３を含む。
【００９３】
ある特定の実施形態では、本開示は、ＣＤ１３７（（例えば、ヒトＣＤ１３７またはカニクイザルＣＤ１３７）に特異的に結合する単離された抗体であって、抗体が、本明細書の表１に開示のＶＬドメインのＣＤＲのうちの１つ、２つ、または３つ全てを含むＶＬドメインを含む、単離された抗体を提供する。ある特定の実施形態では、本抗体は、表１に記載のＶＬドメインのうちの１つのＣＤＲＬ１を含む。ある特定の実施形態では、本抗体は、表１に記載のＶＬドメインのうちの１つのＣＤＲＬ２を含む。ある特定の実施形態では、本抗体は、表１に記載のＶＬドメインのうちの１つのＣＤＲＬ３を含む。
【００９４】
ある特定の実施形態では、抗体のＣＤＲは、Ｋａｂａｔ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２５２，６６０９−６６１６（１９７７）およびＫａｂａｔ  ｅｔ  ａｌ．，Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  ｐｒｏｔｅｉｎ  ｏｆ  ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  ｉｎｔｅｒｅｓｔ（１９９１）に従って決定することができ、その各々は参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。ある特定の実施形態では、抗体の軽鎖ＣＤＲは、Ｋａｂａｔに従って決定され、抗体の重鎖ＣＤＲは、ＭａｃＣａｌｌｕｍ（上記）に従って決定される。
【００９５】
ある特定の実施形態では、抗体のＣＤＲは、免疫グロブリン構造ループの位置を指すＣｈｏｔｈｉａ番号付けスキームに従って決定することができる（例えば、Ｃｈｏｔｈｉａ  Ｃ＆Ｌｅｓｋ  ＡＭ，（１９８７），Ｊ  Ｍｏｌ  Ｂｉｏｌ  １９６：９０１−９１７、Ａｌ−Ｌａｚｉｋａｎｉ  Ｂ  ｅｔ  ａｌ．，（１９９７）Ｊ  Ｍｏｌ  Ｂｉｏｌ  ２７３：９２７−９４８、Ｃｈｏｔｈｉａ  Ｃ  ｅｔ  ａｌ．，（１９９２）Ｊ  Ｍｏｌ  Ｂｉｏｌ  ２２７：７９９−８１７、Ｔｒａｍｏｎｔａｎｏ  Ａ  ｅｔ  ａｌ．，（１９９０）Ｊ  Ｍｏｌ  Ｂｉｏｌ  ２１５（１）：１７５−８２、および米国特許第７，７０９，２２６号を参照。その全ては参照によりそれらの全体が本明細書に組み込まれる）。典型的には、Ｋａｂａｔ番号付け規約を使用する場合、Ｃｈｏｔｈｉａ  ＣＤＲＨ１ループは、重鎖アミノ酸２６〜３２、３３、または３４に存在し、Ｃｈｏｔｈｉａ  ＣＤＲＨ２ループは、重鎖アミノ酸５２〜５６に存在し、Ｃｈｏｔｈｉａ  ＣＤＲＨ３ループは、重鎖アミノ酸９５〜１０２に存在するが、Ｃｈｏｔｈｉａ  ＣＤＲＬ１ループは、軽鎖アミノ酸２４〜３４に存在し、Ｃｈｏｔｈｉａ  ＣＤＲＬ２ループは、軽鎖アミノ酸５０〜５６に存在し、Ｃｈｏｔｈｉａ  ＣＤＲＬ３ループは、軽鎖アミノ酸８９〜９７に存在する。Ｃｈｏｔｈｉａ  ＣＤＲＨ１ループの末端は、Ｋａｂａｔ番号付け規約を使用して番号付けされる場合、ループの長さに応じてＨ３２とＨ３４との間で異なる（これは、Ｋａｂａｔ番号付けスキームがＨ３５ＡおよびＨ３５Ｂに挿入を置くためであり、３５Ａも３５Ｂも存在しない場合、ループは３２で終わり、３５Ａのみが存在する場合、ループは３３で終わり、３５Ａおよび３５Ｂの両方が存在する場合、ループは３４で終わる）。
【００９６】
ある特定の実施形態では、本開示は、ＣＤ１３７（例えば、ヒトＣＤ１３７またはカニクイザルＣＤ１３７）に特異的に結合する単離された抗体であって、抗体が、本明細書の表１に開示のＶＨのＣｈｏｔｈｉａ  ＶＨ  ＣＤＲを含む、単離された抗体を提供する。ある特定の実施形態では、本開示は、ＣＤ１３７（例えば、ヒトＣＤ１３７またはカニクイザルＣＤ１３７）に特異的に結合する単離された抗体であって、抗体が、本明細書の表１に開示のＶＬのＣｈｏｔｈｉａ  ＶＬ  ＣＤＲを含む、単離された抗体を提供する。ある特定の実施形態では、本開示は、ＣＤ１３７（例えば、ヒトＣＤ１３７またはカニクイザルＣＤ１３７）に特異的に結合する単離された抗体であって、抗体が、本明細書の表１に開示の抗体のＣｈｏｔｈｉａ  ＶＬ  ＣＤＲおよびＣｈｏｔｈｉａ  ＶＬ  ＣＤＲを含む、単離された抗体を提供する。ある特定の実施形態では、ＣＤ１３７（例えば、ヒトＣＤ１３７またはカニクイザルＣＤ１３７）に特異的に結合する抗体は、ＣｈｏｔｈｉａおよびＫａｂａｔ  ＣＤＲが、同じアミノ酸配列を有する、１つ以上のＣＤＲを含む。ある特定の実施形態では、本開示は、ＣＤ１３７（例えば、ヒトＣＤ１３７またはカニクイザルＣＤ１３７）に特異的に結合し、Ｋａｂａｔ  ＣＤＲとＣｈｏｔｈｉａ  ＣＤＲとの組み合わせを含む、単離された抗体を提供する。
【００９７】
ある特定の実施形態では、抗体のＣＤＲは、ＭａｃＣａｌｌｕｍ  ＲＭ  ｅｔ  ａｌ．，（１９９６）Ｊ  Ｍｏｌ  Ｂｉｏｌ  ２６２：７３２−７４５に従って決定され得、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。また例えば、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる、Ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ，Ｋｏｎｔｅｒｍａｎｎ  ａｎｄ  Ｄｕｂｅｌ，ｅｄｓ．，Ｃｈａｐｔｅｒ  ３１，ｐｐ．４２２−４３９，Ｓｐｒｉｎｇｅｒ−Ｖｅｒｌａｇ，Ｂｅｒｌｉｎ（２００１）中の、Ｍａｒｔｉｎ  Ａ．″Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｓｅｑｕｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ  Ａｎａｌｙｓｉｓ  ｏｆ  Ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ｖａｒｉａｂｌｅ  Ｄｏｍａｉｎｓ″を参照されたい。
【００９８】
ある特定の実施形態では、抗体のＣＤＲは、Ｌｅｆｒａｎｃ  Ｍ−Ｐ，（１９９９）Ｔｈｅ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｓｔ  ７：１３２−１３６およびＬｅｆｒａｎｃ  Ｍ−Ｐ  ｅｔ  ａｌ．，（１９９９）Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ  ２７：２０９−２１２に記載される、ＩＭＧＴ番号付けシステムに従って決定することができ、その各々は参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。ＩＭＧＴ番号付けスキームに従って、ＣＤＲＨ１は、位置２６〜３５にあり、ＣＤＲＨ２は、位置５１〜５７にあり、ＣＤＲＨ３は、位置９３〜１０２にあり、ＣＤＲＬ１は、位置２７〜３２にあり、ＣＤＲＬ２は、位置５０〜５２にあり、ＣＤＲＬ３は、位置８９〜９７にある。
【００９９】
ある特定の実施形態では、本開示は、ＣＤ１３７（例えば、ヒトＣＤ１３７またはカニクイザルＣＤ１３７）に特異的に結合し、例えば、上記のＬｅｆｒａｎｃ  Ｍ−Ｐ（１９９９）および上記のＬｅｆｒａｎｃ  Ｍ−Ｐ  ｅｔ  ａｌ．，（１９９９）に記載の、ＩＭＧＴ番号付けシステムによって決定される、本明細書の表１に開示の抗体のＣＤＲを含む抗体を提供する。
【０１００】
ある特定の実施形態では、抗体のＣＤＲは、Ｋａｂａｔ  ＣＤＲとＣｈｏｔｈｉａ構造ループとの間の折衷案を表し、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる、Ｏｘｆｏｒｄ  ＭｏｌｅｃｕｌａｒのＡｂＭ抗体モデリングソフトウェア（Ｏｘｆｏｒｄ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｇｒｏｕｐ，Ｉｎｃ．）によって使用されているＡｂＭ超可変領域を指す、ＡｂＭ番号付けスキームに従って決定され得る。特定の実施形態では、本開示は、ＣＤ１３７（例えば、ヒトＣＤ１３７またはカニクイザルＣＤ１３７）に特異的に結合し、ＡｂＭ番号付けスキームによって決定される、本明細書の表１に開示の抗体のＣＤＲを含む抗体を提供する。
【０１０１】
ある特定の実施形態では、本開示は、ＣＤ１３７（例えば、ヒトＣＤ１３７またはカニクイザルＣＤ１３７）に特異的に結合する単離された抗体を提供し、抗体が、ＶＨのＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、およびＣＤＲＨ３領域アミノ酸配列を含む重鎖可変領域と、ＶＬのＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、およびＣＤＲＬ３領域アミノ酸配列を含む軽鎖可変領域と、を含み、ＶＨおよびＶＬのアミノ酸配列が、それぞれ配列番号７および８、６３および８、６４および６６、７および６７、または６５および６８に記載されており、各ＣＤＲが、ＣＤＲのＭａｃＣａｌｌｕｍ定義、Ｋａｂａｔ定義、Ｃｈｏｔｈｉａ定義、Ｋａｂａｔ定義とＣｈｏｔｈｉａ定義との組み合わせ、ＩＭＧＴ番号付けシステム、またはＡｂＭ定義に従って決定される。ある特定の実施形態では、本開示は、ＣＤ１３７（例えば、ヒトＣＤ１３７またはカニクイザルＣＤ１３７）に特異的に結合する単離された抗体を提供し、抗体が、列配列番号７に記載のＶＨドメインのＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、およびＣＤＲＨ３領域アミノ酸配を含む重鎖可変領域と、配列番号８に記載のＶＬドメインのＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、およびＣＤＲＬ３領域アミノ酸配列を含む軽鎖可変領域と、を含み、各ＣＤＲが、ＣＤＲのＭａｃＣａｌｌｕｍ定義、Ｋａｂａｔ定義、Ｃｈｏｔｈｉａ定義、Ｋａｂａｔ定義とＣｈｏｔｈｉａ定義との組み合わせ、ＩＭＧＴ番号付けシステム、またはＡｂＭ定義に従って決定される。
【０１０２】
別の態様では、本開示は、ＣＤ１３７（例えば、ヒトＣＤ１３７またはカニクイザルＣＤ１３７）に特異的に結合する単離された抗体であって、抗体が、相補性決定領域（ＣＤＲ）ＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、およびＣＤＲＨ３を含む重鎖可変領域（ＶＨ）と、ＣＤＲ  ＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、およびＣＤＲＬ３を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）と、を含み、
（ａ）ＣＤＲＨ１が、Ｘ１Ｘ２Ｘ３Ｘ４Ｈ（配列番号８２）のアミノ酸配列を含み、式中、
Ｘ１が、Ｇ、Ａ、Ｄ、Ｅ、Ｌ、Ｎ、Ｑ、Ｒ、Ｓ、またはＷであり、
Ｘ２が、Ｙ、Ｆ、Ｈ、Ｎ、Ｒ、またはＳであり、
Ｘ３が、ＹまたはＨであり、
Ｘ４が、Ｍ、Ｉ、Ｔ、またはＶであり、
（ｂ）ＣＤＲＨ２が、ＷＩＮＰＮＳＧＧＴＮＹＡＱＫＦＱＧ（配列番号２）のアミノ酸配列を含み、
（ｃ）ＣＤＲＨ３が、Ｘ１ＰＸ２ＹＸ３ＧＸ４ＧＬＸ５Ｘ６（配列番号８３）のアミノ酸配列を含み、式中、
Ｘ１が、ＥまたはＧであり、
Ｘ２が、Ｇ、Ａ、Ｒ、またはＳであり、
Ｘ３が、Ｙ、Ｆ、Ｈ、またはＳであり、
Ｘ４が、Ｓ、Ａ、またはＴであり、
Ｘ５が、ＤまたはＧであり、
Ｘ６が、ＹまたはＨであり、
（ｄ）ＣＤＲＬ１が、ＧＧＤＤＩＧＤＫＲＶＨ（配列番号４）のアミノ酸配列を含み、
（ｅ）ＣＤＲＬ２が、ＥＤＲＹＲＰＳ（配列番号５）のアミノ酸配列を含み、かつ／あるいは
（ｆ）ＣＤＲＬ３が、ＱＸ１ＷＸ２Ｘ３Ｘ４Ｘ５Ｘ６Ｘ７ＰＧＶ（配列番号８４）のアミノ酸配列を含み、式中、
Ｘ１が、ＶまたはＩであり、
Ｘ２が、Ｄ、Ａ、Ｅ、Ｇ、Ｈ、Ｎ、またはＹであり、
Ｘ３が、Ｓ、Ａ、Ｅ、Ｆ、Ｌ、Ｐ、Ｒ、Ｔ、Ｗ、またはＹであり、
Ｘ４が、Ｓ、Ａ、Ｌ、Ｍ、またはＲであり、
Ｘ５が、Ｓ、Ａ、Ｆ、Ｇ、Ｌ、Ｐ、Ｑ、Ｒ、またはＴであり、
Ｘ６が、Ｄ、Ｅ、Ｈ、Ｖ、またはＹであり、
Ｘ７が、ＨまたはＹである、単離された抗体を提供する。
【０１０３】
ある特定の実施形態では、ＣＤＲＨ１は、Ｘ１Ｘ２Ｘ３Ｘ４Ｈ（配列番号８２）のアミノ酸配列を含み、式中、Ｘ１が、Ｇ、Ａ、Ｄ、Ｅ、Ｌ、Ｎ、Ｑ、Ｒ、Ｓ、またはＷであり、Ｘ２が、Ｙ、Ｆ、Ｈ、Ｎ、Ｒ、またはＳであり、Ｘ３が、ＹまたはＨであり、Ｘ４が、Ｍ、Ｉ、Ｔ、またはＶである。ある特定の実施形態では、ＣＤＲＨ３は、Ｘ１ＰＸ２ＹＸ３ＧＸ４ＧＬＸ５Ｘ６（配列番号８３）のアミノ酸配列を含み、式中、Ｘ１が、ＥまたはＧであり、Ｘ２が、Ｇ、Ａ、Ｒ、またはＳであり、Ｘ３が、Ｙ、Ｆ、Ｈ、またはＳであり、Ｘ４が、Ｓ、Ａ、またはＴであり、Ｘ５が、ＤまたはＧであり、Ｘ６が、ＹまたはＨである。ある特定の実施形態では、ＣＤＲＬ３は、ＱＸ１ＷＸ２Ｘ３Ｘ４Ｘ５Ｘ６Ｘ７ＰＧＶ（配列番号８４）のアミノ酸配列を含み、式中、Ｘ１が、ＶまたはＩであり、Ｘ２が、Ｄ、Ａ、Ｅ、Ｇ、Ｈ、Ｎ、またはＹであり、Ｘ３が、Ｓ、Ａ、Ｅ、Ｆ、Ｌ、Ｐ、Ｒ、Ｔ、Ｗ、またはＹであり、Ｘ４が、Ｓ、Ａ、Ｌ、Ｍ、またはＲであり、Ｘ５が、Ｓ、Ａ、Ｆ、Ｇ、Ｌ、Ｐ、Ｑ、Ｒ、またはＴであり、Ｘ６が、Ｄ、Ｅ、Ｈ、Ｖ、またはＹであり、Ｘ７が、ＨまたはＹである。ある特定の実施形態では、
（ａ）ＣＤＲＨ１が、Ｘ１Ｘ２Ｘ３Ｘ４Ｈ（配列番号８２）のアミノ酸配列を含み、式中、
Ｘ１が、Ｇ、Ａ、Ｄ、Ｅ、Ｌ、Ｎ、Ｑ、Ｒ、Ｓ、またはＷであり、
Ｘ２が、Ｙ、Ｆ、Ｈ、Ｎ、Ｒ、またはＳであり、
Ｘ３が、ＹまたはＨであり、
Ｘ４が、Ｍ、Ｉ、Ｔ、またはＶであり、
（ｂ）ＣＤＲＨ２が、ＷＩＮＰＮＳＧＧＴＮＹＡＱＫＦＱＧ（配列番号２）のアミノ酸配列を含み、
（ｃ）ＣＤＲＨ３が、Ｘ１ＰＸ２ＹＸ３ＧＸ４ＧＬＸ５Ｘ６（配列番号８３）のアミノ酸配列を含み、式中、
Ｘ１が、ＥまたはＧであり、
Ｘ２が、Ｇ、Ａ、Ｒ、またはＳであり、
Ｘ３が、Ｙ、Ｆ、Ｈ、またはＳであり、
Ｘ４が、Ｓ、Ａ、またはＴであり、
Ｘ５が、ＤまたはＧであり、
Ｘ６が、ＹまたはＨであり、
（ｄ）ＣＤＲＬ１が、ＧＧＤＤＩＧＤＫＲＶＨ（配列番号４）のアミノ酸配列を含み、
（ｅ）ＣＤＲＬ２が、ＥＤＲＹＲＰＳ（配列番号５）のアミノ酸配列を含み、
（ｆ）ＣＤＲＬ３が、ＱＸ１ＷＸ２Ｘ３Ｘ４Ｘ５Ｘ６Ｘ７ＰＧＶ（配列番号８４）のアミノ酸配列を含み、式中、
Ｘ１が、ＶまたはＩであり、
Ｘ２が、Ｄ、Ａ、Ｅ、Ｇ、Ｈ、Ｎ、またはＹであり、
Ｘ３が、Ｓ、Ａ、Ｅ、Ｆ、Ｌ、Ｐ、Ｒ、Ｔ、Ｗ、またはＹであり、
Ｘ４が、Ｓ、Ａ、Ｌ、Ｍ、またはＲであり、
Ｘ５が、Ｓ、Ａ、Ｆ、Ｇ、Ｌ、Ｐ、Ｑ、Ｒ、またはＴであり、
Ｘ６が、Ｄ、Ｅ、Ｈ、Ｖ、またはＹであり、
Ｘ７が、ＨまたはＹである。
【０１０４】
ある特定の実施形態では、
（ａ）ＣＤＲＨ１が、Ｘ１Ｘ２ＹＸ３Ｈ（配列番号８５）のアミノ酸配列を含み、式中、
Ｘ１が、Ｇ、Ａ、Ｄ、Ｌ、Ｒ、Ｓ、またはＷであり、
Ｘ２が、Ｙ、Ｆ、Ｈ、またはＮであり、
Ｘ３が、ＭまたはＶであり、
（ｂ）ＣＤＲＨ３が、ＥＰＧＹＸ１ＧＸ２ＧＬＤＸ３（配列番号８６）のアミノ酸配列を含み、式中、
Ｘ１は、ＹまたはＦであり、
Ｘ２は、ＳまたはＴであり、
Ｘ３が、ＹまたはＨであり、かつ／あるいは
（ｃ）ＣＤＲＬ３が、ＱＶＷＸ１Ｘ２Ｘ３Ｘ４Ｘ５Ｘ６ＰＧＶ（配列番号８７）のアミノ酸配列を含み、式中、
Ｘ１が、Ｄ、Ａ、Ｅ、Ｈ、Ｎ、またはＹであり、
Ｘ２が、Ｓ、Ａ、Ｅ、Ｌ、Ｒ、またはＴであり、
Ｘ３が、Ｓ、Ａ、Ｌ、またはＲであり、
Ｘ４が、Ｓ、Ａ、Ｆ、Ｇ、Ｌ、Ｐ、Ｑ、またはＲであり、
Ｘ５が、Ｄ、Ｅ、またはＶであり、
Ｘ６が、ＨまたはＹである。
【０１０５】
ある特定の実施形態では、ＣＤＲＨ１は、Ｘ１Ｘ２ＹＸ３Ｈ（配列番号８５）のアミノ酸配列を含み、式中、Ｘ１が、Ｇ、Ａ、Ｄ、Ｌ、Ｒ、Ｓ、またはＷであり、Ｘ２が、Ｙ、Ｆ、Ｈ、またはＮであり、Ｘ３が、ＭまたはＶである。ある特定の実施形態では、ＣＤＲＨ３は、ＥＰＧＹＸ１ＧＸ２ＧＬＤＸ３（配列番号８６）のアミノ酸配列を含み、式中、Ｘ１が、ＹまたはＦであり、Ｘ２が、ＳまたはＴであり、Ｘ３が、ＹまたはＨである。ある特定の実施形態では、ＣＤＲＬ３は、ＱＶＷＸ１Ｘ２Ｘ３Ｘ４Ｘ５Ｘ６ＰＧＶ（配列番号８７）のアミノ酸配列を含み、式中、Ｘ１が、Ｄ、Ａ、Ｅ、Ｈ、Ｎ、またはＹであり、Ｘ２が、Ｓ、Ａ、Ｅ、Ｌ、Ｒ、またはＴであり、Ｘ３が、Ｓ、Ａ、Ｌ、またはＲであり、Ｘ４が、Ｓ、Ａ、Ｆ、Ｇ、Ｌ、Ｐ、Ｑ、またはＲであり、Ｘ５が、Ｄ、Ｅ、またはＶであり、Ｘ６が、ＨまたはＹである。ある特定の実施形態では、
（ａ）ＣＤＲＨ１が、Ｘ１Ｘ２ＹＸ３Ｈ（配列番号８５）のアミノ酸配列を含み、式中、
Ｘ１が、Ｇ、Ａ、Ｄ、Ｌ、Ｒ、Ｓ、またはＷであり、
Ｘ２が、Ｙ、Ｆ、Ｈ、またはＮであり、
Ｘ３が、ＭまたはＶであり、
（ｂ）ＣＤＲＨ３が、ＥＰＧＹＸ１ＧＸ２ＧＬＤＸ３（配列番号８６）のアミノ酸配列を含み、式中、
Ｘ１は、ＹまたはＦであり、
Ｘ２は、ＳまたはＴであり、
Ｘ３が、ＹまたはＨであり、
（ｃ）ＣＤＲＬ３が、ＱＶＷＸ１Ｘ２Ｘ３Ｘ４Ｘ５Ｘ６ＰＧＶ（配列番号８７）のアミノ酸配列を含み、式中、
Ｘ１が、Ｄ、Ａ、Ｅ、Ｈ、Ｎ、またはＹであり、
Ｘ２が、Ｓ、Ａ、Ｅ、Ｌ、Ｒ、またはＴであり、
Ｘ３が、Ｓ、Ａ、Ｌ、またはＲであり、
Ｘ４が、Ｓ、Ａ、Ｆ、Ｇ、Ｌ、Ｐ、Ｑ、またはＲであり、
Ｘ５が、Ｄ、Ｅ、またはＶであり、
Ｘ６が、ＨまたはＹである。
【０１０６】
ある特定の実施形態では、ＣＤＲＨ１は、配列番号１のアミノ酸配列を含む。ある特定の実施形態では、ＣＤＲＨ３は、配列番号３または５９のアミノ酸配列を含む。ある特定の実施形態では、ＣＤＲＬ３は、配列番号６、６１、６２、または６３のアミノ酸配列。
【０１０７】
ある特定の実施形態では、本開示は、ＣＤ１３７（例えば、ヒトＣＤ１３７またはカニクイザルＣＤ１３７）に特異的に結合する単離された抗体であって、抗体が、それぞれ配列番号１、２、および３；または１、２、および５９に記載のＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、およびＣＤＲＨ３アミノ酸配列を含むＶＨドメインを含む、単離された抗体を提供する。ある特定の実施形態では、本開示は、ＣＤ１３７（例えば、ヒトＣＤ１３７またはカニクイザルＣＤ１３７）に特異的に結合する単離された抗体を提供し、抗体が、それぞれ配列番号４、５、および６；４、５、および６０；４、５、および６１；または４、５、および６２に記載のＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、およびＣＤＲＬ３アミノ酸配列を含むＶＬドメインを含む。ある特定の実施形態では、本開示は、ＣＤ１３７（例えば、ヒトＣＤ１３７またはカニクイザルＣＤ１３７）に特異的に結合する単離された抗体を提供し、抗体が、ＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、およびＣＤＲＨ３領域を含む重鎖可変領域と、ＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、およびＣＤＲＬ３領域を含む軽鎖可変領域と、を含み、ＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、ＣＤＲＨ３、ＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、およびＣＤＲＬ３領域が、それぞれ配列番号１、２、３、４、５、および６；１、２、５９、４、５、および６；１、２、３、４、５、および６０；１、２、３、４、５、および６１；または１、２、３、４、５、および６２に記載のアミノ酸配列を含む。
【０１０８】
ある特定の実施形態では、本開示は、ＣＤ１３７（例えば、ヒトＣＤ１３７またはカニクイザルＣＤ１３７）に特異的に結合する単離された抗体であって、抗体が、
（ａ）ＣＤＲＨ１が、ＧＹＹＭＨ（配列番号１）のアミノ酸配列を含み、
（ｂ）ＣＤＲＨ２が、ＷＩＮＰＮＳＧＧＴＮＹＡＱＫＦＱＧ（配列番号２）のアミノ酸配列を含み、
（ｃ）ＣＤＲＨ３が、ＥＰＧＹＹＧＳＧＬＤＹ（配列番号３）のアミノ酸配列を含み、
（ｄ）ＣＤＲＬ１が、ＧＧＤＤＩＧＤＫＲＶＨ（配列番号４）のアミノ酸配列を含み、
（ｅ）ＣＤＲＬ２が、ＥＤＲＹＲＰＳ（配列番号５）のアミノ酸配列を含み、かつ／あるいは
（ｆ）ＣＤＲＬ３が、ＱＶＷＤＳＳＳＤＨＰＧＶ（配列番号６）のアミノ酸配列を含む、抗体を提供する。
【０１０９】
ある特定の実施形態では、本開示は、ＣＤ１３７（例えば、ヒトＣＤ１３７またはカニクイザルＣＤ１３７）に特異的に結合する単離された抗体を提供し、抗体が、それぞれ配列番号１、２、および３に記載のＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、およびＣＤＲＨ３アミノ酸配列を含むＶＨドメインを含む。ある特定の実施形態では、本開示は、ＣＤ１３７（例えば、ヒトＣＤ１３７またはカニクイザルＣＤ１３７）に特異的に結合する単離された抗体を提供し、抗体が、それぞれ配列番号４、５、および６に記載のＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、およびＣＤＲＬ３アミノ酸配列を含むＶＬドメインを含む。ある特定の実施形態では、本開示は、ＣＤ１３７（例えば、ヒトＣＤ１３７またはカニクイザルＣＤ１３７）に特異的に結合する単離された抗体を提供し、抗体が、ＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、およびＣＤＲＨ３領域を含む重鎖可変領域と、ＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、およびＣＤＲＬ３領域を含む軽鎖可変領域と、を含み、ＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、ＣＤＲＨ３、ＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、およびＣＤＲＬ３領域が、それぞれ配列番号１、２、３、４、５、および６に記載のアミノ酸配列を含む。
【０１１０】
ある特定の実施形態では、本開示は、配列番号７のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域を含む、ＣＤ１３７（例えば、ヒトＣＤ１３７またはカニクイザルＣＤ１３７）に特異的に結合する単離された抗体を提供する。ある特定の実施形態では、本開示は、配列番号７に記載のアミノ酸配列と少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９９％、または１００％（例えば、少なくとも８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、または９９％）同一であるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域を含む、ＣＤ１３７（例えば、ヒトＣＤ１３７またはカニクイザルＣＤ１３７）に特異的に結合する単離された抗体を提供する。ある特定の実施形態では、重鎖可変領域は、配列番号６３、６４、または６５のアミノ酸配列を含む。
【０１１１】
ある特定の実施形態では、本開示は、配列番号８のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む、ＣＤ１３７（例えば、ヒトＣＤ１３７またはカニクイザルＣＤ１３７）に特異的に結合する単離された抗体を提供する。ある特定の実施形態では、本開示は、配列番号８に記載のアミノ酸配列と少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９９％、または１００％（例えば、少なくとも８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、または９９％）同一であるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む、ＣＤ１３７（例えば、ヒトＣＤ１３７またはカニクイザルＣＤ１３７）に特異的に結合する単離された抗体を提供する。ある特定の実施形態では、軽鎖可変領域は、配列番号６６、６７、または６８のアミノ酸配列を含む。
【０１１２】
ある特定の実施形態では、本開示は、ＣＤ１３７（例えば、ヒトＣＤ１３７またはカニクイザルＣＤ１３７）に特異的に結合し、配列番号７のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域と、配列番号８のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域と、を含む、単離された抗体を提供する。ある特定の実施形態では、本開示は、配列番号７に記載のアミノ酸配列と少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、または１００％（例えば、少なくとも８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、または９９％）同一であるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域と、配列番号８に記載のアミノ酸配列と少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、または１００％（例えば、少なくとも８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、または９９％）同一であるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域と、を含む、ＣＤ１３７（例えば、ヒトＣＤ１３７またはカニクイザルＣＤ１３７）に特異的に結合する単離された抗体を提供する。ある特定の実施形態では、重鎖可変領域および軽鎖可変領域は、それぞれ配列番号６３および８、６４および６６、７および６７、または６５および６８のアミノ酸配列を含む。
【０１１３】
ある特定の実施形態では、本開示は、ヒトＩＧＨＶ１−２生殖系列配列（例えば配列番号４０のアミノ酸配列を有する、例えば、ＩＧＨＶ１−２＊０２）由来のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域を含む、ＣＤ１３７（例えば、ヒトＣＤ１３７またはカニクイザルＣＤ１３７）に特異的に結合する単離された抗体を提供する。フレームワーク１、フレームワーク２、フレームワーク３、ＣＤＲＨ１、およびＣＤＲＨ２から選択される１つ以上の領域（例えば、これらの領域のうちの２つ、３つ、４つ、または５つ）は、ヒトＩＧＨＶ１−２生殖系列配列（例えば、配列番号４０のアミノ酸配列を有する、例えば、ＩＧＨＶ１−２＊０２）に由来し得る。一実施形態では、フレームワーク１、フレームワーク２、フレームワーク３、ＣＤＲＨ１、およびＣＤＲＨ２は全て、ヒトＩＧＨＶ１−２生殖系列配列（例えば、配列番号４０のアミノ酸配列を有する、例えば、ＩＧＨＶ１−２＊０２）に由来する。ある特定の実施形態では、重鎖可変領域は、配列番号３に記載のアミノ酸配列を含む。
【０１１４】
ある特定の実施形態では、本開示は、ヒトＩＧＬＶ３−２１生殖系列配列（例えば、配列番号４１のアミノ酸配列を有する例えばＩＧＬＶ３−２１＊０２、またはＩＧＬＶ３−２１０３）由来のアミノ酸配列を有する軽可変領域を含む、ＣＤ１３７（例えば、ヒトＣＤ１３７またはカニクイザルＣＤ１３７）に特異的に結合する、単離抗体を提供する。フレームワーク１、フレームワーク２、フレームワーク３、ＣＤＲＬ１、およびＣＤＲＬ２から選択される１つ以上の領域（例えば、これらの領域のうちの２つ、３つ、４つ、または５つ）は、ヒトＩＧＬＶ３−２１生殖系列配列（例えば、配列番号４１のアミノ酸配列を有する例えばＩＧＬＶ３−２１＊０２、またはＩＧＬＶ３−２１＊０３）に由来し得る。一実施形態では、フレームワーク１、フレームワーク２、フレームワーク３、ＣＤＲＬ１、およびＣＤＲＬ２は全て、ヒトＩＧＬＶ３−２１生殖系列配列（例えば、配列番号４１のアミノ酸配列を有する例えばＩＧＬＶ３−２１＊０２、またはＩＧＬＶ３−２１＊０３）に由来する。ある特定の実施形態では、軽鎖可変領域は、配列番号６に記載のアミノ酸配列を含む。
【０１１５】
ある特定の実施形態では、本開示は、ヒトＩＧＨＶ１−２生殖系列配列（例えば、配列番号４０のアミノ酸配列を有する、例えばＩＧＨＶ１−２＊０２）由来のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域と、ヒトＩＧＬＶ３−２１生殖系列配列（例えば、配列番号４１のアミノ酸配列を有する例えばＩＧＬＶ３−２１＊０２、またはＩＧＬＶ３−２１＊０３）由来のアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域と、を含む、ＣＤ１３７（例えば、ヒトＣＤ１３７またはカニクイザルＣＤ１３７）に特異的に結合する単離抗体を提供する。ある特定の実施形態では、重鎖可変領域は、配列番号３に記載のアミノ酸配列を含み、軽鎖可変領域は、配列番号６に記載のアミノ酸配列を含む。
【０１１６】
ある特定の実施形態では、本開示は、ＣＤ１３７（例えば、ヒトＣＤ１３７またはカニクイザルＣＤ１３７）に結合するために、それぞれ配列番号７および８に記載の重鎖および軽鎖可変領域アミノ酸配列を含む抗体と交差競合する、単離された抗体を提供する。
【０１１７】
ある特定の実施形態では、本開示は、本明細書に記載の抗体、例えば、それぞれ配列番号７および８に記載の重鎖および軽鎖可変領域アミノ酸配列を含む抗体と同じか、または重複するＣＤ１３７のエピトープ（例えば、ヒトＣＤ１３７のエピトープまたはカニクイザルＣＤ１３７のエピトープ）に結合する、単離された抗体を提供する。ある特定の実施形態では、抗体のエピトープは、例えば、ＮＭＲ分光法、表面プラズモン共鳴（ＢＩＡｃｏｒｅ（登録商標））、Ｘ線回折結晶学研究、ＥＬＩＳＡアッセイ、質量分析（例えば、液体クロマトグラフィーエレクトロスプレー質量分析）と組み合わせた水素／重水素交換、アレイに基づくオリゴ−ペプチド走査アッセイ、および／または変異誘発マッピング（例えば、部位特異的変異誘発マッピング）によって決定することができる。Ｘ線結晶学の場合、結晶化は、当該技術分野で既知の方法のうちのいずれかを使用して達成され得る（例えば、Ｇｉｅｇｅ  Ｒ  ｅｔ  ａｌ．，（１９９４）Ａｃｔａ  Ｃｒｙｓｔａｌｌｏｇｒ  Ｄ  Ｂｉｏｌ  Ｃｒｙｓｔａｌｌｏｇｒ  ５０（Ｐｔ  ４）：３３９−３５０、ＭｃＰｈｅｒｓｏｎ  Ａ（１９９０）Ｅｕｒ  Ｊ  Ｂｉｏｃｈｅｍ  １８９：１−２３、Ｃｈａｙｅｎ  ＮＥ（１９９７）Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ  ５：１２６９−１２７４、ＭｃＰｈｅｒｓｏｎ  Ａ（１９７６）Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ  ２５１：６３００−６３０３（それらの全てが、参照によりそれらの全体が本明細書に組み込まれる）。抗体：抗原結晶は、周知のＸ線回折技法を使用して研究することができ、Ｘ−ＰＬＯＲ（Ｙａｌｅ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，１９９２、販売元Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｓｉｍｕｌａｔｉｏｎｓ，Ｉｎｃ．、例えば、Ｍｅｔｈ  Ｅｎｚｙｍｏｌ（１９８５）ｖｏｌｕｍｅｓ  １１４＆１１５，ｅｄｓ  Ｗｙｃｋｏｆｆ  ＨＷ  ｅｔ  ａｌ．，、米国特許出願第２００４／００１４１９４号参照）、およびＢＵＳＴＥＲ（Ｂｒｉｃｏｇｎｅ  Ｇ（１９９３）Ａｃｔａ  Ｃｒｙｓｔａｌｌｏｇｒ  Ｄ  Ｂｉｏｌ  Ｃｒｙｓｔａｌｌｏｇｒ  ４９（Ｐｔ  １）：３７−６０、Ｂｒｉｃｏｇｎｅ  Ｇ（１９９７）Ｍｅｔｈ  Ｅｎｚｙｍｏｌ  ２７６Ａ：３６１−４２３，ｅｄ  Ｃａｒｔｅｒ  ＣＷ、Ｒｏｖｅｒｓｉ  Ｐ  ｅｔ  ａｌ．，（２０００）Ａｃｔａ  Ｃｒｙｓｔａｌｌｏｇｒ  Ｄ  Ｂｉｏｌ  Ｃｒｙｓｔａｌｌｏｇｒ  ５６（Ｐｔ  １０）：１３１６−１３２３（それらの全てが、参照によりそれらの全体が本明細書に組み込まれる）などのコンピュータソフトウェアを使用して細かく区別され得る。変異誘発マッピング研究は、当業者に既知の任意の方法を使用して達成することができる。アラニン走査変異誘発技法を含む変異誘発技法の説明については、例えば、Ｃｈａｍｐｅ  Ｍら（１９９５）（上記）およびＣｕｎｎｉｎｇｈａｍ  ＢＣ＆Ｗｅｌｌｓ  ＪＡ（１９８９）（上記）を参照されたい。特定の実施形態では、抗体のエピトープは、アラニン走査変異誘発研究を使用して決定される。加えて、ＣＤ１３７（例えば、ヒトＣＤ１３７またはカニクイザルＣＤ１３７）と同じか、または重複するエピトープを認識および結合する抗体は、例えば、１つの抗体が別の抗体の標的抗原への結合を遮断する能力を示すことによる免疫アッセイ、すなわち、競合的結合アッセイなどの通例の技法を使用して特定することができる。競合結合アッセイを使用して、２つの抗体があるエピトープに対して類似した結合特異性を有するかを決定することもできる。競合的結合は、試験用の免疫グロブリンがＣＤ１３７（例えば、ヒトＣＤ１３７またはカニクイザルＣＤ１３７）などの共通の抗原への参照抗体の特異的結合を阻害するアッセイにおいて決定することができる。多数の種類の競合的結合アッセイ、例えば、固相直接または間接放射免疫アッセイ（ＲＩＡ）、固相直接または間接酵素免疫アッセイ（ＥＩＡ）、サンドイッチ法競合アッセイ（Ｓｔａｈｌｉ  Ｃ  ｅｔ  ａｌ．，（１９８３）Ｍｅｔｈｏｄｓ  Ｅｎｚｙｍｏｌ  ９：  ２４２−２５３参照）、固相直接ビオチン−アビジンＥＩＡ（Ｋｉｒｋｌａｎｄ  ＴＮ  ｅｔ  ａｌ．，（１９８６）Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  １３７：  ３６１４−９参照）、固相直接標識アッセイ、固相直接標識サンドイッチアッセイ（Ｈａｒｌｏｗ  Ｅ＆Ｌａｎｅ  Ｄ，（１９８８）Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：  Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｐｒｅｓｓ参照）、１〜１２５個の標識を使用する固相直接標識ＲＩＡ（Ｍｏｒｅｌ  ＧＡ  ｅｔ  ａｌ．，（１９８８）Ｍｏｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  ２５（１）：  ７−１５参照）、固相直接ビオチン−アビジンＥＩＡ（Ｃｈｅｕｎｇ  ＲＣ  ｅｔ  ａｌ．，（１９９０）Ｖｉｒｏｌｏｇｙ  １７６：  ５４６−５２参照）、および直接標識ＲＩＡ（Ｍｏｌｄｅｎｈａｕｅｒ  Ｇ  ｅｔ  ａｌ．，（１９９０）Ｓｃａｎｄ  Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  ３２：  ７７−８２参照）が知られている（それらの全てが、参照によりそれらの全体が本明細書に組み込まれる）。典型的には、そのようなアッセイは、これらの未標識試験免疫グロブリンおよび標識参照免疫グロブリンのうちのいずれかを担持する固体表面または細胞に結合している精製された抗原（例えば、ヒトＣＤ１３７またはカニクイザルＣＤ１３７などのＣＤ１３７）の使用に関与する。競合的阻害は、試験免疫グロブリンの存在下で、固体表面または細胞に結合した標識の量を決定することによって測定することができる。通常、試験免疫グロブリンは、過剰に存在している。通常、競合抗体が過剰に存在している場合、それは、基準抗体の共通抗原への特異的結合を少なくとも５０〜５５％、５５〜６０％、６０〜６５％、６５〜７０％、７０〜７５％、またはそれ以上阻害するであろう。競合結合アッセイは、標識抗原または標識抗体のいずれかを使用して多数の異なる形式で構成することができる。このアッセイの一般的なバージョンでは、抗原を９６ウェルプレート上に固定する。その後、非標識抗体が標識抗体の抗原への結合を遮断する能力を、放射性標識または酵素標識を使用して測定する。さらなる詳細については、例えば、それらの全てが、参照によりそれらの全体が本明細書に組み込まれる、Ｗａｇｅｎｅｒ  Ｃ  ｅｔ  ａｌ．，（１９８３）Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  １３０：  ２３０８−２３１５、Ｗａｇｅｎｅｒ  Ｃ  ｅｔ  ａｌ．，（１９８４）Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ６８：  ２６９−２７４、Ｋｕｒｏｋｉ  Ｍ  ｅｔ  ａｌ．，（１９９０）Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ  ５０：  ４８７２−４８７９、Ｋｕｒｏｋｉ  Ｍ  ｅｔ  ａｌ．，（１９９２）Ｉｍｍｕｎｏｌ  Ｉｎｖｅｓｔ  ２１：  ５２３−５３８、Ｋｕｒｏｋｉ  Ｍ  ｅｔ  ａｌ．，（１９９２）Ｈｙｂｒｉｄｏｍａ  １１：  ３９１−４０７  ａｎｄ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：  Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ、Ｅｄ  Ｈａｒｌｏｗ  Ｅ＆Ｌａｎｅ  Ｄ  ｅｄｉｔｏｒｓ上記、ｐｐ．３８６−３８９を参照されたい。
【０１１８】
別の態様では、本開示は、ヒトＣＤ１３７に特異的に結合する抗体または単離された抗体を提供し、（ａ）抗体が、配列番号３７のアミノ酸配列を含むタンパク質に特異的に結合し、（ｂ）抗体が、配列番号３８のアミノ酸配列を含むタンパク質に特異的に結合しない。
【０１１９】
別の態様では、本開示は、ヒトＣＤ１３７に特異的に結合する抗体または単離された抗体を提供し、抗体が、配列番号３７のアミノ酸配列を有するタンパク質に対するよりも低い親和性で、配列番号３８のアミノ酸配列を有するタンパク質に特異的に結合する。
【０１２０】
別の態様では、本開示は、ヒトＣＤ１３７に特異的に結合する抗体または単離された抗体を提供し、抗体が、配列番号３８のアミノ酸配列を有するタンパク質に特異的に結合しない。
【０１２１】
別の態様では、本開示は、ヒトＣＤ１３７に特異的に結合する抗体または単離された抗体を提供し、抗体と配列番号３８のアミノ酸配列を有するタンパク質との間の結合が、抗体と配列番号３７のアミノ酸配列を有するタンパク質との間の結合と比較して、実質的に弱められている。
【０１２２】
別の態様では、本開示は、ヒトＣＤ１３７に特異的に結合する抗体または単離された抗体を提供し、抗体が、配列番号３７のアミノ酸配列を有するタンパク質への結合と比較して、配列番号３８のアミノ酸配列を有するタンパク質への結合の低減または不在を呈する。
【０１２３】
別の態様では、本開示は、本発明の任意の抗体と同じヒトＣＤ１３７のエピトープに特異的に結合する、抗体または単離された抗体を提供する。ある特定の実施形態では、抗体は、配列番号３７のアミノ酸配列を有するタンパク質に対するよりも低い親和性で、配列番号３８のアミノ酸配列を有するタンパク質に特異的に結合する。ある特定の実施形態では、抗体は、配列番号配列３８のアミノ酸を有するタンパク質に特異的に結合しない。ある特定の実施形態では、抗体と配列番号３８のアミノ酸配列を有するタンパク質との間の結合が、抗体と配列番号３７のアミノ酸配列を有するタンパク質との間の結合と比較して、実質的に弱められている。一実施形態では、抗体は、配列番号３７のアミノ酸配列を有するタンパク質への結合と比較して、配列番号３８のアミノ酸配列を有するタンパク質への結合の低減または不在を呈する。
【０１２４】
ある特定の実施形態では、単離された抗体は、配列番号２６〜３１および４３のうちのいずれか１つのアミノ酸配列を含むヒトＣＤ１３７の領域内に位置するエピトープに結合する。ある特定の実施形態では、単離された抗体は、配列番号２６〜３１および４３のうちのいずれか１つのアミノ酸配列から実質的になるヒトＣＤ１３７の領域内に位置するエピトープに結合する。ある特定の実施形態では、単離された抗体は、配列番号２６〜３１および４３のうちのいずれか１つのアミノ酸配列からなるヒトＣＤ１３７の領域内に位置するエピトープに結合する。ある特定の実施形態では、単離された抗体は、複数のアミノ酸配列を含むヒトＣＤ１３７の領域内に位置する不連続なエピトープに結合し、複数のアミノ酸配列の各々が、配列番号２６〜３１および４３のうちのいずれか１つのアミノ酸配列からなるか、本質的にそれからなるか、またはそれを含む。
【０１２５】
ある特定の実施形態では、単離抗体は、配列番号２６に記載のアミノ酸配列を含むか、本質的にそれからなるか、またはそれからなるヒトＣＤ１３７の領域内に位置するエピトープに結合する。別の態様では、本開示は、ヒトＣＤ１３７タンパク質またはその断片に結合すると、水素／重水素交換アッセイによって決定した場合、抗体の不在下での配列番号２６に記載のアミノ酸配列からなる領域における水素／重水素交換と比較して、配列番号２６に記載のアミノ酸配列からなる領域における水素／重水素交換を低減する、抗体を提供する。ある特定の実施形態では、水素／重水素交換の低減は、例えば本明細書の実施例に記載の水素−重水素交換（ＨＤＸ）を使用して測定される。
【０１２６】
ある特定の実施形態では、単離抗体は、配列番号２７に記載のアミノ酸配列を含むか、本質的にそれからなるか、またはそれからなるヒトＣＤ１３７の領域内に位置するエピトープに結合する。別の態様では、本開示は、ヒトＣＤ１３７タンパク質またはその断片に結合すると、水素／重水素交換アッセイによって決定した場合、抗体の不在下での配列番号２７に記載のアミノ酸配列からなる領域における水素／重水素交換と比較して、配列番号２７に記載のアミノ酸配列からなる領域における水素／重水素交換を低減する、抗体を提供する。ある特定の実施形態では、水素／重水素交換の低減は、例えば本明細書の実施例に記載の水素−重水素交換（ＨＤＸ）を使用して測定される。
【０１２７】
ある特定の実施形態では、単離抗体は、配列番号２８に記載のアミノ酸配列を含むか、本質的にそれからなるか、またはそれからなるヒトＣＤ１３７の領域内に位置するエピトープに結合する。別の態様では、本開示は、ヒトＣＤ１３７タンパク質またはその断片に結合すると、水素／重水素交換アッセイによって決定した場合、抗体の不在下での配列番号２８に記載のアミノ酸配列からなる領域における水素／重水素交換と比較して、配列番号２８に記載のアミノ酸配列からなる領域における水素／重水素交換を低減する、抗体を提供する。ある特定の実施形態では、水素／重水素交換の低減は、例えば本明細書の実施例に記載の水素−重水素交換（ＨＤＸ）を使用して測定される。
【０１２８】
ある特定の実施形態では、単離抗体は、配列番号２９に記載のアミノ酸配列を含むか、本質的にそれからなるか、またはそれからなるヒトＣＤ１３７の領域内に位置するエピトープに結合する。別の態様では、本開示は、ヒトＣＤ１３７タンパク質またはその断片に結合すると、水素／重水素交換アッセイによって決定した場合、抗体の不在下での配列番号２９に記載のアミノ酸配列からなる領域における水素／重水素交換と比較して、配列番号２９に記載のアミノ酸配列からなる領域における水素／重水素交換を低減する、抗体を提供する。ある特定の実施形態では、水素／重水素交換の低減は、例えば本明細書の実施例に記載の水素−重水素交換（ＨＤＸ）を使用して測定される。
【０１２９】
ある特定の実施形態では、単離抗体は、配列番号３０に記載のアミノ酸配列を含むか、本質的にそれからなるか、またはそれからなるヒトＣＤ１３７の領域内に位置するエピトープに結合する。別の態様では、本開示は、ヒトＣＤ１３７タンパク質またはその断片に結合すると、水素／重水素交換アッセイによって決定した場合、抗体の不在下での配列番号３０に記載のアミノ酸配列からなる領域における水素／重水素交換と比較して、配列番号３０に記載のアミノ酸配列からなる領域における水素／重水素交換を低減する、抗体を提供する。ある特定の実施形態では、水素／重水素交換の低減は、例えば本明細書の実施例に記載の水素−重水素交換（ＨＤＸ）を使用して測定される。
【０１３０】
ある特定の実施形態では、単離抗体は、配列番号３１に記載のアミノ酸配列を含むか、本質的にそれからなるか、またはそれからなるヒトＣＤ１３７の領域内に位置するエピトープに結合する。別の態様では、本開示は、ヒトＣＤ１３７タンパク質またはその断片に結合すると、水素／重水素交換アッセイによって決定した場合、抗体の不在下での配列番号３１に記載のアミノ酸配列からなる領域における水素／重水素交換と比較して、配列番号３１に記載のアミノ酸配列からなる領域における水素／重水素交換を低減する、抗体を提供する。ある特定の実施形態では、水素／重水素交換の低減は、例えば本明細書の実施例に記載の水素−重水素交換（ＨＤＸ）を使用して測定される。
【０１３１】
ある特定の実施形態では、単離された抗体は、ＫＲＧＩ（配列番号４３）のアミノ酸配列を含むか、本質的にそれからなるか、またはそれからなるヒトＣＤ１３７の領域内に位置するエピトープに結合する。ある特定の実施形態では、抗体は、少なくとも１つ、少なくとも２つ、または少なくとも３つのＫＲＧＩのアミノ酸残基に結合する。ある特定の実施形態では、抗体は、４つ全てのＫＲＧＩのアミノ酸残基に結合する。別の態様では、本開示は、ヒトＣＤ１３７タンパク質またはその断片に結合すると、水素／重水素交換アッセイによって決定した場合、抗体の不在下での配列番号４３に記載のアミノ酸配列からなる領域における水素／重水素交換と比較して、配列番号４３に記載のアミノ酸配列からなる領域における水素／重水素交換を低減する、抗体を提供する。ある特定の実施形態では、水素／重水素交換の低減は、例えば本明細書の実施例に記載の水素−重水素交換（ＨＤＸ）を使用して測定される。別の態様では、本開示は、ヒトＣＤ１３７に特異的に結合し、マウスＣＤ１３７に実質的に結合しない抗体を提供する。ある特定の実施形態では、抗体は、列配列番号４６のアミノ酸配を含むタンパク質に特異的に結合し、かつ／あるいは配列番号４５のアミノ酸配列を含むタンパク質には実質的に結合しない。ある特定の実施形態では、抗体は、配列番号４６のアミノ酸配列からなるか、または本質的にそれからなるタンパク質に特異的に結合し、かつ／あるいは配列番号４５のアミノ酸配列からなるか、または本質的にそれからなるタンパク質には実質的に結合しない。ある特定の実施形態では、抗体は、配列番号４６のアミノ酸配列からなるか、または本質的にそれからなるタンパク質に特異的に結合し、配列番号４５のアミノ酸配列からなるか、または本質的にそれからなるタンパク質に実質的に結合しない。
【０１３２】
別の態様では、本開示は、本発明の抗体と同じヒトＣＤ１３７のエピトープに結合する、例えば特異的に結合する、抗体または単離された抗体を提供する。ある特定の実施形態では、エピトープは、例えば実施例に記載の水素−重水素交換（ＨＤＸ）によって、または例えば実施例に記載のタンパク質変異誘発によって決定される。
【０１３３】
ある特定の実施形態では、抗体は、ＶＨおよびＶＬを含み、抗体が、ＶＨおよびＶＬの各々２つを含むＦ（ａｂ’）２としてフォーマットされている場合、Ｆ（ａｂ’）２は、配列番号２７のアミノ酸配列からなるヒトＣＤ１３７の領域内に位置するエピトープに結合する。ある特定の実施形態では、抗体は、ＶＨおよびＶＬを含み、抗体が、ＶＨおよびＶＬの各々２つを含むＦ（ａｂ’）２としてフォーマットされている場合、水素／重水素交換アッセイにより測定した場合、Ｆ（ａｂ’）２不在下での同じ領域における水素と重水素との交換と比較して、Ｆ（ａｂ’）２は、配列番号２７のアミノ酸配列からなるＣＤ１３７の領域における水素と重水素との交換を、実質的に（例えば、少なくとも５０％、６０％、７０％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％）低減する。
【０１３４】
ある特定の実施形態では、抗体は、ＶＨおよびＶＬを含み、抗体が、ＶＨおよびＶＬ含むＦａｂとしてフォーマットされている場合、Ｆａｂは、配列番号２６のアミノ酸配列からなるヒトＣＤ１３７の領域内に位置するエピトープ、ならびに任意選択的に、配列番号２８および／または２９のアミノ酸配列からなるヒトＣＤ１３７の領域内に位置するエピトープに結合する。ある特定の実施形態では、抗体は、ＶＨおよびＶＬを含み、抗体が、ＶＨおよびＶＬ含むＦａｂとしてフォーマットされている場合、水素／重水素交換アッセイにより測定した場合、Ｆａｂ不在下での同じ領域における水素と重水素との交換と比較して、Ｆａｂは、配列番号２６のアミノ酸配列からなるＣＤ１３７の領域における水素と重水素との交換を、実質的に（例えば、少なくとも５０％、６０％、７０％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％）低減し、かつ任意選択的に、Ｆａｂ不在下での同じ領域における水素と重水素との交換と比較して、配列番号２８および／または配列番号２９のアミノ酸配列からなるＣＤ１３７の領域における水素と重水素との交換を、実質的に（例えば、少なくとも５０％、６０％、７０％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％）低減する。
【０１３５】
ある特定の実施形態では、抗体はＶＨおよびＶＬを含み、２つの鎖を含み、各鎖がＶＨおよびＶＬを含むＦ（ａｂ’）２として抗体がフォーマットされている場合、水素／重水素交換アッセイにより測定した場合、Ｆ（ａｂ’）２不在下での同じ領域における水素と重水素との交換と比較して、Ｆ（ａｂ’）２は、配列番号３４のアミノ酸配列からなるＣＤ１３７の領域における水素と重水素との交換を、実質的に（例えば、少なくとも５０％、６０％、７０％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％）低減する。ある特定の実施形態では、抗体は、ＶＨおよびＶＬを含み、抗体が、ＶＨおよびＶＬ含むＦａｂとしてフォーマットされている場合、Ｆａｂは、水素／重水素交換アッセイにより測定した場合、Ｆａｂ不在下での同じ領域における水素と重水素との交換と比較して、配列番号３４のアミノ酸配列からなるＣＤ１３７の領域における水素と重水素との交換を、実質的に低減しない（例えば、１％、２％、３％、４％、５％、１０％、１５％、２０％、２５％、または３０％超低減しない）。
【０１３６】
ある特定の実施形態では、本開示は、ＣＤ１３７（例えば、ヒトＣＤ１３７またはカニクイザルＣＤ１３７）に特異的に結合し、ヒトＣＤ１３７がヒトＣＤ１３７Ｌに結合することを阻害しない、単離された抗体を提供する。ある特定の実施形態では、ヒトＣＤ１３７のヒトＣＤ１３７Ｌへの結合は、抗体不在下でのヒトＣＤ１３７のヒトＣＤ１３７Ｌへの結合と比較して、抗体存在下で１％、２％、３％、４％、５％、１０％、１５％、２０％、２５％、または３０％超低減されない。ある特定の実施形態では、抗体は、ヒトＣＤ１３７の可溶性断片の、ヒトＣＤ１３７Ｌの可溶性断片への結合を阻害しない。ある特定の実施形態では、ヒトＣＤ１３７の可溶性断片のヒトＣＤ１３７Ｌの可溶性断片への結合は、抗体不在下でのヒトＣＤ１３７の可溶性断片のヒトＣＤ１３７Ｌの可溶性断片への結合と比較して、抗体存在下で１％、２％、３％、４％、５％、１０％、１５％、２０％、２５％、または３０％超低減されない。ある特定の実施形態では、抗体は、ＣＤ１３７発現細胞のヒトＣＤ１３７Ｌの可溶性断片への結合を阻害しない。ある特定の実施形態では、ヒトＣＤ１３７発現細胞のヒトＣＤ１３７Ｌの可溶性断片への結合は、抗体不在下でのＣＤ１３７発現細胞のヒトＣＤ１３７Ｌの可溶性断片への結合と比較して、抗体存在下で１％、２％、３％、４％、５％、１０％、１５％、２０％、２５％、または３０％超低減されない。ある特定の実施形態では、抗体は、ＣＤ１３７発現細胞のＣＤ１３７Ｌ発現細胞への結合を阻害しない。ある特定の実施形態では、ＣＤ１３７発現細胞のＣＤ１３７Ｌ発現細胞への結合は、抗体不在下でのＣＤ１３７発現細胞のＣＤ１３７Ｌ発現細胞への結合と比較して、抗体存在下で１％、２％、３％、４％、５％、１０％、１５％、２０％、２５％、または３０％超低減されない。
【０１３７】
ある特定の実施形態では、本明細書に開示の抗体は、抗体不在下でのＣＤ１３７多量体化のレベルと比較して、ＣＤ１３７多量体化（例えば、二量体化または三量体化）のレベルを少なくとも約１．１倍、１．２倍、１．３倍、１．４倍、１．５倍、２倍、２．５倍、３倍、３．５倍、４倍、４．５倍、５倍、６倍、７倍、８倍、９倍、１０倍、１５倍、２０倍、３０倍、４０倍、５０倍、６０倍、７０倍、８０倍、９０倍、１００倍以上増加させる。ある特定の実施形態では、多量体ＣＤ１３７は、ＣＤ１３７およびＣＤ１３７Ｌ分子を含む複合体（例えば、３つのＣＤ１３７Ｌ分子および２つのＣＤ１３７分子を含む複合体、または３つのＣＤ１３７Ｌ分子および３つのＣＤ１３７分子を含む複合体）で存在する。ある特定の実施形態では、ＣＤ１３７多量体化（例えば、二量体化または三量体化）のレベルは、ＣＤ１３７およびＣＤ１３７Ｌ分子を平衡に含むインビトロ系で測定され、任意選択的にＣＤ１３７分子が、脂質二重層にある。ある特定の実施形態では、ＣＤ１３７多量体化（例えば、二量体化または三量体化）のレベルは、細胞中または細胞の形質膜上で測定される。ある特定の実施形態では、ＣＤ１３７多量体化（例えば、二量体化または三量体化）のレベルは、ＣＤ１３７の可溶性断片を使用して測定される。
【０１３８】
ある特定の実施形態では、本開示は、ＣＤ１３７（例えば、ヒトＣＤ１３７またはカニクイザルＣＤ１３７）に特異的に結合する単離された抗体であって、抗体が、配列番号９、１０、１１、１２、１３、１４、４９、５０、５１、５２、５３、５４、７３、７４、７５、７６、７７、または７８に記載のアミノ酸配列を含む重鎖を含む、単離された抗体を提供する。ある特定の実施形態では、本抗体は、配列番号９に記載のアミノ酸配列を含む重鎖を含む。ある特定の実施形態では、本抗体は、配列番号１０に記載のアミノ酸配列を含む重鎖を含む。ある特定の実施形態では、本抗体は、配列番号１１に記載のアミノ酸配列を含む重鎖を含む。ある特定の実施形態では、本抗体は、配列番号１２に記載のアミノ酸配列を含む重鎖を含む。ある特定の実施形態では、本抗体は、配列番号１３に記載のアミノ酸配列を含む重鎖を含む。ある特定の実施形態では、本抗体は、配列番号１４に記載のアミノ酸配列を含む重鎖を含む。ある特定の実施形態では、本抗体は、配列番号４９に記載のアミノ酸配列を含む重鎖を含む。ある特定の実施形態では、本抗体は、配列番号５０に記載のアミノ酸配列を含む重鎖を含む。ある特定の実施形態では、本抗体は、配列番号５１に記載のアミノ酸配列を含む重鎖を含む。ある特定の実施形態では、本抗体は、配列番号５２に記載のアミノ酸配列を含む重鎖を含む。ある特定の実施形態では、本抗体は、配列番号５３に記載のアミノ酸配列を含む重鎖を含む。ある特定の実施形態では、本抗体は、配列番号５４に記載のアミノ酸配列を含む重鎖を含む。ある特定の実施形態では、本抗体は、配列番号７３に記載のアミノ酸配列を含む重鎖を含む。ある特定の実施形態では、本抗体は、配列番号７４に記載のアミノ酸配列を含む重鎖を含む。ある特定の実施形態では、本抗体は、配列番号７５に記載のアミノ酸配列を含む重鎖を含む。ある特定の実施形態では、本抗体は、配列番号７６に記載のアミノ酸配列を含む重鎖を含む。ある特定の実施形態では、本抗体は、配列番号７７に記載のアミノ酸配列を含む重鎖を含む。ある特定の実施形態では、本抗体は、配列番号７８に記載のアミノ酸配列を含む重鎖を含む。
【０１３９】
ある特定の実施形態では、本開示は、ＣＤ１３７（例えば、ヒトＣＤ１３７またはカニクイザルＣＤ１３７）に特異的に結合する単離された抗体であって、抗体が、配列番号２１、７９、８０、または８１に記載のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む、単離された抗体を提供する。ある特定の実施形態では、本抗体は、配列番号２１に記載のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。ある特定の実施形態では、本抗体は、配列番号７９に記載のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。ある特定の実施形態では、本抗体は、配列番号８０に記載のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。ある特定の実施形態では、本抗体は、配列番号８１に記載のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。
【０１４０】
ある特定の実施形態では、本開示は、ＣＤ１３７（例えば、ヒトＣＤ１３７またはカニクイザルＣＤ１３７）に特異的に結合する単離された抗体であって、抗体が、配列番号９、１０、１１、１２、１３、１４、４９、５０、５１、５２、５３、５４、７３、７４、７５、７６、７７、または７８のアミノ酸配列を含む重鎖と、配列番号２１、７９、８０、または８１のアミノ酸配列を含む軽鎖と、を含む、単離された抗体を提供する。ある特定の実施形態では、本開示は、ＣＤ１３７（例えば、ヒトＣＤ１３７またはカニクイザルＣＤ１３７）に特異的に結合する単離された抗体であって、抗体が、配列番号９のアミノ酸配列を含む重鎖と、配列番号２１のアミノ酸配列を含む軽鎖と、を含む、単離された抗体を提供する。ある特定の実施形態では、本開示は、ＣＤ１３７（例えば、ヒトＣＤ１３７またはカニクイザルＣＤ１３７）に特異的に結合する単離された抗体であって、抗体が、配列番号１０のアミノ酸配列を含む重鎖と、配列番号２１のアミノ酸配列を含む軽鎖と、を含む、単離された抗体を提供する。ある特定の実施形態では、本開示は、ＣＤ１３７（例えば、ヒトＣＤ１３７またはカニクイザルＣＤ１３７）に特異的に結合する単離された抗体であって、抗体が、配列番号１１のアミノ酸配列を含む重鎖と、配列番号２１のアミノ酸配列を含む軽鎖と、を含む、単離された抗体を提供する。ある特定の実施形態では、本開示は、ＣＤ１３７（例えば、ヒトＣＤ１３７またはカニクイザルＣＤ１３７）に特異的に結合する単離された抗体であって、抗体が、配列番号１２のアミノ酸配列を含む重鎖と、配列番号２１のアミノ酸配列を含む軽鎖と、を含む、単離された抗体を提供する。ある特定の実施形態では、本開示は、ＣＤ１３７（例えば、ヒトＣＤ１３７またはカニクイザルＣＤ１３７）に特異的に結合する単離された抗体であって、抗体が、配列番号１３のアミノ酸配列を含む重鎖と、配列番号２１のアミノ酸配列を含む軽鎖と、を含む、単離された抗体を提供する。ある特定の実施形態では、本開示は、ＣＤ１３７（例えば、ヒトＣＤ１３７またはカニクイザルＣＤ１３７）に特異的に結合する単離された抗体であって、抗体が、配列番号１４のアミノ酸配列を含む重鎖と、配列番号２１のアミノ酸配列を含む軽鎖と、を含む、単離された抗体を提供する。ある特定の実施形態では、本開示は、ＣＤ１３７（例えば、ヒトＣＤ１３７またはカニクイザルＣＤ１３７）に特異的に結合する単離された抗体であって、抗体が、配列番号４９のアミノ酸配列を含む重鎖と、配列番号２１のアミノ酸配列を含む軽鎖と、を含む、単離された抗体を提供する。ある特定の実施形態では、本開示は、ＣＤ１３７（例えば、ヒトＣＤ１３７またはカニクイザルＣＤ１３７）に特異的に結合する単離された抗体であって、抗体が、配列番号５０のアミノ酸配列を含む重鎖と、配列番号２１のアミノ酸配列を含む軽鎖と、を含む、単離された抗体を提供する。ある特定の実施形態では、本開示は、ＣＤ１３７（例えば、ヒトＣＤ１３７またはカニクイザルＣＤ１３７）に特異的に結合する単離された抗体であって、抗体が、配列番号５１のアミノ酸配列を含む重鎖と、配列番号２１のアミノ酸配列を含む軽鎖と、を含む、単離された抗体を提供する。ある特定の実施形態では、本開示は、ＣＤ１３７（例えば、ヒトＣＤ１３７またはカニクイザルＣＤ１３７）に特異的に結合する単離された抗体であって、抗体が、配列番号５２のアミノ酸配列を含む重鎖と、配列番号２１のアミノ酸配列を含む軽鎖と、を含む、単離された抗体を提供する。ある特定の実施形態では、本開示は、ＣＤ１３７（例えば、ヒトＣＤ１３７またはカニクイザルＣＤ１３７）に特異的に結合する単離された抗体であって、抗体が、配列番号５３のアミノ酸配列を含む重鎖と、配列番号２１のアミノ酸配列を含む軽鎖と、を含む、単離された抗体を提供する。ある特定の実施形態では、本開示は、ＣＤ１３７（例えば、ヒトＣＤ１３７またはカニクイザルＣＤ１３７）に特異的に結合する単離された抗体であって、抗体が、配列番号５４のアミノ酸配列を含む重鎖と、配列番号２１のアミノ酸配列を含む軽鎖と、を含む、単離された抗体を提供する。ある特定の実施形態では、本開示は、ＣＤ１３７（例えば、ヒトＣＤ１３７またはカニクイザルＣＤ１３７）に特異的に結合する単離された抗体であって、抗体が、配列番号７３のアミノ酸配列を含む重鎖と、配列番号２１のアミノ酸配列を含む軽鎖と、を含む、単離された抗体を提供する。ある特定の実施形態では、本開示は、ＣＤ１３７（例えば、ヒトＣＤ１３７またはカニクイザルＣＤ１３７）に特異的に結合する単離された抗体であって、抗体が、配列番号７４のアミノ酸配列を含む重鎖と、配列番号２１のアミノ酸配列を含む軽鎖と、を含む、単離された抗体を提供する。ある特定の実施形態では、本開示は、ＣＤ１３７（例えば、ヒトＣＤ１３７またはカニクイザルＣＤ１３７）に特異的に結合する単離された抗体であって、抗体が、配列番号７５のアミノ酸配列を含む重鎖と、配列番号７９のアミノ酸配列を含む軽鎖と、を含む、単離された抗体を提供する。ある特定の実施形態では、本開示は、ＣＤ１３７（例えば、ヒトＣＤ１３７またはカニクイザルＣＤ１３７）に特異的に結合する単離された抗体であって、抗体が、配列番号７６のアミノ酸配列を含む重鎖と、配列番号７９のアミノ酸配列を含む軽鎖と、を含む、単離された抗体を提供する。ある特定の実施形態では、本開示は、ＣＤ１３７（例えば、ヒトＣＤ１３７またはカニクイザルＣＤ１３７）に特異的に結合する単離された抗体であって、抗体が、配列番号９のアミノ酸配列を含む重鎖と、配列番号８０のアミノ酸配列を含む軽鎖と、を含む、単離された抗体を提供する。ある特定の実施形態では、本開示は、ＣＤ１３７（例えば、ヒトＣＤ１３７またはカニクイザルＣＤ１３７）に特異的に結合する単離された抗体であって、抗体が、配列番号４９のアミノ酸配列を含む重鎖と、配列番号８０のアミノ酸配列を含む軽鎖と、を含む、単離された抗体を提供する。ある特定の実施形態では、本開示は、ＣＤ１３７（例えば、ヒトＣＤ１３７またはカニクイザルＣＤ１３７）に特異的に結合する単離された抗体であって、抗体が、配列番号７７のアミノ酸配列を含む重鎖と、配列番号８１のアミノ酸配列を含む軽鎖と、を含む、単離された抗体を提供する。ある特定の実施形態では、本開示は、ＣＤ１３７（例えば、ヒトＣＤ１３７またはカニクイザルＣＤ１３７）に特異的に結合する単離された抗体であって、抗体が、配列番号７８のアミノ酸配列を含む重鎖と、配列番号８１のアミノ酸配列を含む軽鎖と、を含む、単離された抗体を提供する。
【０１４１】
ある特定の実施形態では、抗体は、配列番号９、１０、１１、１２、１３、１４、４９、５０、５１、５２、５３、５４、７３、７４、７５、７６、７７、または７８のアミノ酸配列からなる重鎖と、配列番号２１、７９、８０、または８１のアミノ酸配列からなる軽鎖と、を含む。ある特定の実施形態では、抗体は、配列番号９のアミノ酸配列からなる重鎖と、配列番号２１のアミノ酸配列からなる軽鎖と、を含む。ある特定の実施形態では、抗体は、配列番号１０のアミノ酸配列からなる重鎖と、配列番号２１のアミノ酸配列からなる軽鎖と、を含む。ある特定の実施形態では、抗体は、配列番号１１のアミノ酸配列からなる重鎖と、配列番号２１のアミノ酸配列からなる軽鎖と、を含む。ある特定の実施形態では、抗体は、配列番号１２のアミノ酸配列からなる重鎖と、配列番号２１のアミノ酸配列からなる軽鎖と、を含む。ある特定の実施形態では、抗体は、配列番号１３のアミノ酸配列からなる重鎖と、配列番号２１のアミノ酸配列からなる軽鎖と、を含む。ある特定の実施形態では、抗体は、配列番号１４のアミノ酸配列からなる重鎖と、配列番号２１のアミノ酸配列からなる軽鎖と、を含む。ある特定の実施形態では、抗体は、配列番号４９のアミノ酸配列からなる重鎖と、配列番号２１のアミノ酸配列からなる軽鎖と、を含む。ある特定の実施形態では、抗体は、配列番号５０のアミノ酸配列からなる重鎖と、配列番号２１のアミノ酸配列からなる軽鎖と、を含む。ある特定の実施形態では、抗体は、配列番号５１のアミノ酸配列からなる重鎖と、配列番号２１のアミノ酸配列からなる軽鎖と、を含む。ある特定の実施形態では、抗体は、配列番号５２のアミノ酸配列からなる重鎖と、配列番号２１のアミノ酸配列からなる軽鎖と、を含む。ある特定の実施形態では、抗体は、配列番号５３のアミノ酸配列からなる重鎖と、配列番号２１のアミノ酸配列からなる軽鎖と、を含む。ある特定の実施形態では、抗体は、配列番号５４のアミノ酸配列からなる重鎖と、配列番号２１のアミノ酸配列からなる軽鎖と、を含む。ある特定の実施形態では、抗体は、配列番号７３のアミノ酸配列からなる重鎖と、配列番号２１のアミノ酸配列からなる軽鎖と、を含む。ある特定の実施形態では、抗体は、配列番号７４のアミノ酸配列からなる重鎖と、配列番号２１のアミノ酸配列からなる軽鎖と、を含む。ある特定の実施形態では、抗体は、配列番号７５のアミノ酸配列からなる重鎖と、配列番号７９のアミノ酸配列からなる軽鎖と、を含む。ある特定の実施形態では、抗体は、配列番号７６のアミノ酸配列からなる重鎖と、配列番号７９のアミノ酸配列からなる軽鎖と、を含む。ある特定の実施形態では、抗体は、配列番号９のアミノ酸配列からなる重鎖と、配列番号８０のアミノ酸配列からなる軽鎖と、を含む。ある特定の実施形態では、抗体は、配列番号４９のアミノ酸配列からなる重鎖と、配列番号８０のアミノ酸配列からなる軽鎖と、を含む。ある特定の実施形態では、抗体は、配列番号７７のアミノ酸配列からなる重鎖と、配列番号８１のアミノ酸配列からなる軽鎖と、を含む。ある特定の実施形態では、抗体は、配列番号７８のアミノ酸配列からなる重鎖と、配列番号８１のアミノ酸配列からなる軽鎖と、を含む。
【０１４２】
任意の抗体フォーマットを、本明細書に開示の抗体に使用することができる。ある特定の実施形態では、抗体は、一本鎖抗体または一本鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）である。ある特定の実施形態では、抗体は、Ｆｃ領域と融合させたｓｃＦｖである（ｓｃＦｖ−Ｆｃ）。ある特定の実施形態では、抗体は、Ｆａｂ断片である。ある特定の実施形態では、抗体は、Ｆ（ａｂ’）２断片である。
【０１４３】
ある特定の実施形態では、本明細書に開示の抗体は、ＣＤ１３７（例えば、ヒトＣＤ１３７またはカニクイザルＣＤ１３７）および第２の抗原に特異的に結合する、多重特異性抗体（例えば、二重特異性抗体）である。
【０１４４】
ある特定の実施形態では、本明細書に開示の抗体は、第２の抗原に特異的に結合する第２の抗体に共役している。ある特定の実施形態では、本明細書に開示の抗体は、第２の抗体に共有結合的に共役している。ある特定の実施形態では、本明細書に開示の抗体は、第２の抗体に非共有結合的に共役している。ある特定の実施形態では、本明細書に開示の抗体は、第２の抗体に架橋している。ある特定の実施形態では、第２の抗原は、腫瘍関連抗原（例えば、腫瘍中で過剰発現したポリペプチド、腫瘍ウイルス由来のポリペプチド、腫瘍に特異的な翻訳後修飾を含むポリペプチド、腫瘍中で特異的に変異したポリペプチド）である。ある特定の実施形態では、腫瘍関連抗原は、ＥＧＦＲ（例えば、ヒトＥＧＦＲ）、Ｈｅｒ２（例えば、ヒトＨｅｒ２）、またはＣＤ２０（例えば、ヒトＣＤ２０）である。
【０１４５】
ある特定の実施形態では、本明細書に開示の抗体は、細胞傷害性剤、細胞分裂阻害剤、毒素、放射性核種、または検出可能な標識に共役している。ある特定の実施形態では、細胞傷害性剤は、それと接触した細胞の死または破壊を誘導することが可能である。ある特定の実施形態では、細胞分裂阻害剤は、それと接触した細胞の、増殖を防止または実質的に低減することが可能であり、かつ／あるいは活性または機能を阻害することが可能である。ある特定の実施形態では、細胞傷害性剤または細胞分裂阻害剤は、化学療法薬である。ある特定の実施形態では、放射性核種は、３Ｈ、１４Ｃ、３２Ｐ、３５Ｓ、３６Ｃｌ、５１Ｃｒ、５７Ｃｏ、５８Ｃｏ、５９Ｆｅ、６７Ｃｕ、９０Ｙ、９９Ｔｃ、１１１Ｉｎ、１１７Ｌｕ、１２１Ｉ、１２４Ｉ、１２５Ｉ、１３１Ｉ、１９８Ａｕ、２１１Ａｔ、２１３Ｂｉ、２２５Ａｃおよび１８６Ｒｅのアイソトープからなる群から選択される。ある特定の実施形態では、検出可能な標識は、蛍光部分またはクリックケミストリーハンドルを含む。
【０１４６】
任意の免疫グロブリン（Ｉｇ）定常領域は、本明細書に開示の抗体に使用することができる。ある特定の実施形態では、Ｉｇ領域は、ヒトＩｇＧ、ＩｇＥ、ＩｇＭ、ＩｇＤ、ＩｇＡ、またはＩｇＹ免疫グロブリン分子、免疫グロブリン分子の任意のクラス（例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１、およびＩｇＡ２）、または任意のサブクラス（例えば、ＩｇＧ２ａおよびＩｇＧ２ｂ）である。
【０１４７】
ある特定の実施形態では、本開示は、ＣＤ１３７（例えば、ヒトＣＤ１３７またはカニクイザルＣＤ１３７）に特異的に結合する単離された抗体であって、抗体が、配列番号１５、１６、１７、１８、１９、または２０のアミノ酸配列を含む重鎖定常領域を含む、単離された抗体を提供する。ある特定の実施形態では、本開示は、ＣＤ１３７（例えば、ヒトＣＤ１３７またはカニクイザルＣＤ１３７）に特異的に結合する単離された抗体であって、抗体が、配列番号２２のアミノ酸配列を含む軽鎖定常領域を含む、単離された抗体を提供する。
【０１４８】
ある特定の実施形態では、１つ、２つ、またはそれ以上の変異（例えば、アミノ酸置換）を、ＥＵ番号付けシステムに従って番号付けされた本明細書に記載の抗体のＦｃ領域（例えば、ＣＨ２ドメイン（ヒトＩｇＧ１の残基２３１〜３４０）、および／またはＣＨ３ドメイン（ヒトＩｇＧ１の残基３４１〜４４７）、および／またはヒンジ領域に導入して、血清半減期、補体結合、Ｆｃ受容体結合、および／または抗原依存性細胞障害性などの、抗体の１つ以上の機能的特性を改変する。
【０１４９】
ある特定の実施形態では、１つ、２つ、またはそれ以上の変異（例えば、アミノ酸置換）は、例えば、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる、米国特許第５，６７７，４２５号に記載のように、ヒンジ領域内のシステイン残基の数を改変する（例えば、増加または減少させる）ように、Ｆｃ領域（ＣＨ１ドメイン）のヒンジ領域に導入される。ＣＨ１ドメインのヒンジ領域内のシステイン残基の数を改変して、例えば、軽鎖および重鎖のアセンブリを促進しても、または抗体の安定性を改変しても（例えば、増加もしくは減少させても）よい。
【０１５０】
具体的な一実施形態では、１つ、２つ、またはそれ以上のアミノ酸変異（例えば、置換、挿入、または欠失）をＩｇＧ定常ドメイン、またはそのＦｃＲｎ−結合断片（好ましくは、Ｆｃまたはヒンジ−Ｆｃドメイン断片）に導入して、インビボで抗体の半減期を改変する（例えば、減少または増加させる）。例えばインビボで抗体の半減期を改変する（例えば減少または増加させる）であろう変異についての、例えば、それらの全てが、参照によりそれらの全体が本明細書に組み込まれる、国際公開第ＷＯ０２／０６０９１９号、同第ＷＯ９８／２３２８９号、および同第ＷＯ９７／３４６３１号、ならびに米国特許第５，８６９，０４６号、同第６，１２１，０２２号、同第６，２７７，３７５号、および同第６，１６５，７４５号を参照されたい。ある特定の実施形態では、１つ、２つ、またはそれ以上のアミノ酸変異（例えば、置換、挿入、または欠失）を、ＩｇＧ定常ドメインまたはそのＦｃＲｎ結合断片（好ましくはＦｃまたはヒンジ−Ｆｃドメイン断片）に導入して、インビボでの抗体の半減期を減少させる。他の実施形態では、１つ、２つ、またはそれ以上のアミノ酸変異（例えば、置換、挿入、または欠失）を、ＩｇＧ定常ドメインまたはそのＦｃＲｎ結合断片（好ましくはＦｃまたはヒンジ−Ｆｃドメイン断片）に導入して、インビボで抗体の半減期を増加させてもよい。具体的な一実施形態では、抗体は、ＥＵ番号付けシステムに従って番号付けされた、第２の定常（ＣＨ２）ドメイン（ヒトＩｇＧ１の残基２３１〜３４０）および／または第３の定常（ＣＨ３）ドメイン（ヒトＩｇＧ１の残基３４１〜４４７）の１つ以上のアミノ酸変異（例えば、置換）を有してもよい。具体的な一実施形態では、本明細書に記載の抗体のＩｇＧ１の定常領域は、ＥＵ番号付けシステムに従って番号付けされた、２５２位のメチオニン（Ｍ）からチロシン（Ｙ）への置換、２５４位のセリン（Ｓ）からトレオニン（Ｔ）への置換、および２５６位のトレオニン（Ｔ）からグルタミン酸（Ｅ）への置換を含む。参照によりその全体が本明細書に組み込まれる、米国特許第７，６５８，９２１号を参照されたい。この種類の変異体ＩｇＧは、同じ抗体の野生型バージョンと比較して、４倍増加した半減期を示すことが知られている「ＹＴＥ変異体」と称される（Ｄａｌｌ′Ａｃｑｕａ  ＷＦ  ｅｔ  ａｌ．，（２００６）Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ  ２８１：２３５１４−２４（参照によりその全体が本明細書に組み込まれる））。ある特定の実施形態では、抗体は、ＥＵ番号付けシステムに従って番号付けされた、２５１〜２５７、２８５〜２９０、３０８〜３１４、３８５〜３８９、および４２８〜４３６位のアミノ酸残基の１つ、２つ、３つ、またはそれ以上のアミノ酸置換を含むＩｇＧ定常ドメインを含む。
【０１５１】
ある特定の実施形態では、１つ、２つ、またはそれ以上の変異（例えば、アミノ酸置換）を、本明細書に記載の抗体のＦｃ領域（例えば、ＥＵ番号付けシステムに従って番号付けされた、ＣＨ２ドメイン（ヒトＩｇＧ１の残基２３１〜３４０）および／またはＣＨ３ドメイン（ヒトＩｇＧ１の残基３４１〜４４７））、および／またはヒンジ領域に導入して、エフェクター細胞の表面上のＦｃ受容体（例えば、活性化Ｆｃ受容体）に対する抗体の親和性を増加または減少させる。Ｆｃ受容体に対する抗体の親和性を増加または減少させる抗体のＦｃ領域内の変異、およびそのような変異をＦｃ受容体またはその断片に導入するための技法は、当業者にとって既知である。Ｆｃ受容体に対する抗体の親和性を改変するように行われ得る、抗体のＦｃ受容体の変異の例は、例えば、それらの全ては、参照によりそれらの全体が本明細書に組み込まれる、Ｓｍｉｔｈ  Ｐ  ｅｔ  ａｌ．，（２０１２）ＰＮＡＳ１０９：  ６１８１−６１８６、米国特許第６，７３７，０５６号、ならびに国際公開第ＷＯ０２／０６０９１９号、同第ＷＯ９８／２３２８９号、および同第ＷＯ９７／３４６３１に記載されている。
【０１５２】
ある特定の実施形態では、抗体が、野生型重鎖定常領域の多様体である重鎖定常領域を含み、野生型重鎖定常領域がＦｃγＲＩＩＢに結合するよりも高い親和性で、多様体重鎖定常領域がＦｃγＲＩＩＢに結合する。ある特定の実施形態では、多様体重鎖定常領域は、多様体ヒト重鎖定常領域、例えば、多様体ヒトＩｇＧ１、多様体ヒトＩｇＧ２、または多様体ヒトＩｇＧ４重鎖定常領域である。ある特定の実施形態では、多様体ヒトＩｇＧ重鎖定常領域は、ＥＵ番号付けシステムに従って、以下のうちの１つ以上のアミノ酸変異を含む：Ｇ２３６Ｄ、Ｐ２３８Ｄ、Ｓ２３９Ｄ、Ｓ２６７Ｅ、Ｌ３２８Ｆ、およびＬ３２８Ｅ。ある特定の実施形態では、変異形ヒトＩｇＧ重鎖定常領域は、ＥＵ番号付けシステムに従って番号付けされた、以下からなる群から選択されるアミノ酸変異のセットを含む。ＥＵ番号付けシステムに従って、Ｓ２６７ＥおよびＬ３２８Ｆ、Ｐ２３８ＤおよびＬ３２８Ｅ、Ｐ２３８Ｄ、ならびにＥ２３３Ｄ、Ｇ２３７Ｄ、Ｈ２６８Ｄ、Ｐ２７１Ｇ、およびＡ３３０Ｒ；Ｐ２３８Ｄ、Ｅ２３３Ｄ、Ｇ２３７Ｄ、Ｈ２６８Ｄ、Ｐ２７１Ｇ、およびＡ３３０Ｒ；Ｇ２３６ＤおよびＳ２６７Ｅ；Ｓ２３９ＤおよびＳ２６７Ｅ；Ｖ２６２Ｅ、Ｓ２６７Ｅ、およびＬ３２８Ｆ；およびＶ２６４Ｅ、Ｓ２６７Ｅ、およびＬ３２８Ｆからなる群から選択される１つ以上の置換。ある特定の実施形態では、ＦｃγＲＩＩＢは、マクロファージ、単球、Ｂ細胞、樹状細胞、内皮細胞、および活性化Ｔ細胞からなる群から選択される細胞上に発現される。
【０１５３】
さらなる一実施形態では、１つ、２つ、またはそれ以上のアミノ酸置換をＩｇＧ定常ドメインＦｃ領域に導入して、抗体のエフェクター機能（複数可）を改変する。例えば、ＥＵ番号付けシステムに従って番号付けされた、アミノ酸残基２３４、２３５、２３６、２３７、２９７、３１８、３２０、および３２２から選択される１つ以上のアミノ酸を異なるアミノ酸残基で置換して、エフェクターリガンドに対する抗体の親和性は改変されるが、親抗体の抗原結合能は保持するようにすることができる。親和性を改変させるエフェクターリガンドは、例えば、Ｆｃ受容体または補体のＣ１成分であり得る。このアプローチは、その各々は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる、米国特許第５，６２４，８２１号および同第５，６４８，２６０号にさらに詳細に記載されている。ある特定の実施形態では、（点変異または他の手段を通した）定常領域ドメインの欠失または不活性化は、循環抗体のＦｃ受容体結合を低減させ、それにより腫瘍の局在化を増加させ得る。定常ドメインを欠失または不活性化させ、それにより腫瘍の局在化を増加させる変異についての記載については、例えば、その各々は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる米国特許第５，５８５，０９７号および同第８，５９１，８８６号を参照されたい。ある特定の実施形態では、１つ以上のアミノ酸置換を、本明細書に記載の抗体のＦｃ領域に導入して、Ｆｃ受容体結合を減少させ得るＦｃ領域上の潜在的なグリコシル化部位を除去してもよい（例えば、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる、Ｓｈｉｅｌｄｓ  ＲＬ  ｅｔ  ａｌ．，（２００１）Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ  ２７６：  ６５９１−６０４を参照されたい）。様々な実施形態では、本明細書に記載の抗体の定常領域内で、ＥＵ番号付けシステムに従って番号付けされた、次の変異：Ｎ２９７Ａの置換、Ｎ２９７Ｑの置換、Ｌ２３５Ａの置換およびＬ２３７Ａの置換、Ｌ２３４Ａの置換およびＬ２３５Ａの置換、Ｅ２３３Ｐの置換、Ｌ２３４Ｖの置換、Ｌ２３５Ａの置換、Ｃ２３６の欠失、Ｐ２３８Ａの置換、Ｄ２６５Ａの置換、Ｓ２６７Ｅの置換およびＬ３２８Ｆの置換、Ａ３２７Ｑの置換、またはＰ３２９Ａの置換のうちの１つ以上が行われ得る。ある特定の実施形態では、ＥＵ番号付けシステムに従って番号付けされた、Ｄ２６５Ａ、Ｐ３２９Ａ、およびそれらの組み合わせからなる群から選択される変異が、本明細書に記載の抗体の定常領域内で行われ得る。
【０１５４】
具体的な一実施形態では、本明細書に記載の抗体は、ＥＵ番号付けシステムに従って番号付けされたＮ２９７ＱまたはＮ２９７Ａのアミノ酸置換を有するＩｇＧ１の定常ドメインを含む。一実施形態では、本明細書に記載の抗体は、ＥＵ番号付けシステムに従って番号付けされた、Ｄ２６５Ａ、Ｐ３２９Ａ、およびそれらの組み合わせからなる群から選択される変異を有するＩｇＧ１の定常ドメインを含む。別の実施形態では、本明細書に記載の抗体は、ＥＵ番号付けシステムに従って番号付けされた、Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、およびそれらの組み合わせからなる群から選択される変異を有するＩｇＧ１の定常ドメインを含む。ある特定の実施形態では、ＥＵ番号付けシステムに従って番号付けされた、ヒトＩｇＧ１重鎖のＬ２３４位、Ｌ２３５位、およびＤ２６５位に対応する位置における、本明細書に記載の抗体の定常領域内のアミノ酸残基はそれぞれ、Ｌ、Ｌ、およびＤではない。このアプローチは、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる、国際公開第ＷＯ１４／１０８４８３号に詳細に記載されている。特定の一実施形態では、ＥＵ番号付けシステムに従って番号付けされた、ヒトＩｇＧ１重鎖のＬ２３４位、Ｌ２３５位、およびＤ２６５位に対応するアミノ酸はそれぞれ、Ｆ、Ｅ、およびＡ；またはＡ、Ａ、およびＡである。
【０１５５】
ある特定の実施形態では、抗体が改変されたＣ１ｑ結合および／または低減もしくは停止された補体依存性細胞傷害性（ＣＤＣ）を有するように、ＥＵ番号付けシステムに従って番号付けされた本明細書に記載の抗体の定常領域内のアミノ酸残基３２９、３３１、および３２２から選択される１つ以上のアミノ酸を異なるアミノ酸残基で置換してもよい。このアプローチは、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる、米国特許第６，１９４，５５１号（Ｉｄｕｓｏｇｉｅ  ｅｔ  ａｌ．）にさらに詳細に記載されている。ある特定の実施形態では、ＥＵ番号付けシステムに従って番号付けされた、本明細書に記載の抗体のＣＨ２ドメインのＮ末端領域内のアミノ酸位置２３１〜２３８内の１つ以上のアミノ酸残基を改変して、それにより抗体が補体を固定する能力を改変する。このアプローチは、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる、国際公開第ＷＯ９４／２９３５１号にさらに記載されている。ある特定の実施形態では、本明細書に記載の抗体のＦｃ領域は、ＥＵ番号付けシステムに従って番号付けされた、以下の位置で１つ以上のアミノ酸を変異させる（例えば、アミノ酸置換を導入する）ことによって、抗体依存性細胞障害性（ＡＤＣＣ）を媒介する、および／またはＦｃγ受容体への抗体の親和性を増加させる抗体の能力を増加させるように修飾される。２３８、２３９、２４８、２４９、２５２、２５４、２５５、２５６、２５８、２６５、２６７、２６８、２６９、２７０、２７２、２７６、２７８、２８０、２８３、２８５、２８６、２８９、２９０、２９２、２９３、２９４、２９５、２９６、２９８、３０１、３０３、３０５、３０７、３０９、３１２、３１５、３２０、３２２、３２４、３２６、３２７、３２８、３２９、３３０、３３１、３３３、３３４、３３５、３３７、３３８、３４０、３６０、３７３、３７６、３７８、３８２、３８８、３８９、３９８、４１４、４１６、４１９、４３０、４３４、４３５、４３７、４３８、または４３９。このアプローチは、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる、国際公開第ＷＯ００／４２０７２号にさらに記載されている。
【０１５６】
ある特定の実施形態では、本明細書に記載の抗体は、ＩｇＧ４抗体の定常領域を含み、ＥＵ番号付けシステムに従って番号付けされた、重鎖のアミノ酸残基２２８のセリンが、プロリンに置換される。ある特定の実施形態では、本開示は、ＣＤ１３７（例えば、ヒトＣＤ１３７またはカニクイザルＣＤ１３７）に特異的に結合する単離された抗体であって、抗体が、配列番号２０のアミノ酸配列を含む重鎖定常領域を含む、単離された抗体を提供する。
【０１５７】
ある特定の実施形態では、本明細書に記載の定常領域変異または修飾のいずれかが、２つの重鎖定常領域を有する本明細書に記載の抗体の一方または両方の重鎖定常領域に導入されてもよい。
【０１５８】
配列番号７、９、１０、１１、１２、１３、１４、４９、５０、５１、５２、５３、５４、６３、６４、６５、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、または７８が列挙される本明細書に開示の態様のうちのいずれかのある特定の実施形態では、配列番号７、９、１０、１１、１２、１３、１４、４９、５０、５１、５２、５３、５４、６３、６４、６５、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、または７８のＸは、グルタミン（Ｑ）である。配列番号７、９、１０、１１、１２、１３、１４、４９、５０、５１、５２、５３、５４、６３、６４、６５、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、または７８が列挙される本明細書に開示の態様のうちのいずれかのある特定の実施形態では、配列番号７、９、１０、１１、１２、１３、１４、４９、５０、５１、５２、５３、５４、６３、６４、６５、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、または７８のＸは、ピログルタミン酸（ｐＥ）である。
【０１５９】
ある特定の実施形態では、本開示は、ＣＤ１３７（例えば、ヒトＣＤ１３７またはカニクイザルＣＤ１３７）に特異的に結合し、アゴニストとして機能する、単離された抗体を提供する。
【０１６０】
ある特定の実施形態では、本開示は、ＣＤ１３７（例えば、ヒトＣＤ１３７またはカニクイザルＣＤ１３７）に特異的に結合し、本明細書に記載のおよび／または当業者に既知の方法によって評価した場合、いかなる抗体にもよらないか、または非関連抗体（例えば、ＣＤ１３７（例えば、ヒトＣＤ１３７またはカニクイザルＣＤ１３７）に特異的に結合しない抗体）によるＣＤ１３７（例えば、ヒトＣＤ１３７またはカニクイザルＣＤ１３７）活性と比較して、ＣＤ１３７（例えば、ヒトＣＤ１３７またはカニクイザルＣＤ１３７）活性を少なくとも５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９８％、または９９％増加または促進する、単離された抗体を提供する。ある特定の実施形態では、本開示は、ＣＤ１３７（例えば、ヒトＣＤ１３７またはカニクイザルＣＤ１３７）に特異的に結合し、本明細書に記載のおよび／または当業者に既知の方法によって評価した場合、いかなる抗体にもよらないか、または非関連抗体（例えば、ＣＤ１３７（例えば、ヒトＣＤ１３７）に特異的に結合しない抗体）によるＣＤ１３７（例えば、ヒトＣＤ１３７またはカニクイザルＣＤ１３７）活性と比較して、ＣＤ１３７（例えば、ヒトＣＤ１３７またはカニクイザルＣＤ１３７）活性を少なくとも約１．２倍、１．３倍、１．４倍、１．５倍、２倍、２．５倍、３倍、３．５倍、４倍、４．５倍、５倍、６倍、７倍、８倍、９倍、１０倍、１５倍、２０倍、３０倍、４０倍、５０倍、６０倍、７０倍、８０倍、９０倍、または１００倍以上増加または促進する、単離された抗体を提供する。ＣＤ１３７（例えば、ヒトＣＤ１３７またはカニクイザルＣＤ１３７）活性の非限定的な例としては、ＣＤ１３７（例えば、ヒトＣＤ１３７またはカニクイザルＣＤ１３７）シグナル伝達、ＣＤ１３７（例えば、ヒトＣＤ１３７またはカニクイザルＣＤ１３７）のＣＤ１３７（例えば、ヒトＣＤ１３７またはカニクイザルＣＤ１３７）リガンド（例えば、ＣＤ１３７Ｌ（例えば、ヒトＣＤ１３７またはカニクイザルＣＤ１３７）もしくはその断片、および／またはその融合タンパク質）への結合、Ｔ細胞（例えば、ヒトＣＤ１３７を発現するＴ細胞）活性化、サイトカイン（例えば、ＩＬ−２、ＩＦＮ−γ、および／またはＴＮＦ−α）産生の増加、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞の活性化、ＣＤ１３７Ｌ活性の増加、およびＣＤ１３７Ｌを発現する抗原提示細胞（ＡＰＣ）の活性化を挙げることができる。具体的な実施形態では、ＣＤ１３７（例えば、ヒトＣＤ１３７またはカニクイザルＣＤ１３７）活性の増加は、以下の実施例に記載のように評価される。ある特定の実施形態では、抗体は、ＣＤ１３７のリガンド（例えば、ＣＤ１３７Ｌ（例えば、ヒトＣＤ１３７またはカニクイザルＣＤ１３７）もしくはその断片、および／またはその融合タンパク質）の存在下で、ＣＤ１３７（例えば、ヒトＣＤ１３７またはカニクイザルＣＤ１３７）活性を増加または促進する。
【０１６１】
ある特定の実施形態では、ＣＤ１３７（例えば、ヒトＣＤ１３７またはカニクイザルＣＤ１３７）の活性を活性化、増加、または促進する抗体の能力は、抗体の架橋の存在に依存する。ある特定の実施形態では、抗体は、抗体の架橋の不在下で、ＣＤ１３７（例えば、ヒトＣＤ１３７またはカニクイザルＣＤ１３７）の活性を最小限に増加または促進する。ある特定の実施形態では、抗体は、抗体の架橋の不在下で、ＣＤ１３７（例えば、ヒトＣＤ１３７またはカニクイザルＣＤ１３７）の活性を実質的に増加も促進もしない。一実施形態では、例えば、抗体の架橋の不在下で本明細書に記載の実施例で測定した場合、抗体は、ＮＦ−κΒレポーター細胞株におけるＮＦ−κΒシグナル伝達を最小限に誘導する。一実施形態では、例えば、抗体の架橋の不在下で本明細書に記載の実施例で測定した場合、抗体は、抗ＣＤ３抗体刺激下で精製されたＴ細胞からのＩＬ−２および／またはＩＦＮγ産生を最小限に誘導する。本明細書で企図される抗体の架橋は、抗体のクラスタリングを含む。当該技術分野で既知である架橋する方法が、本明細書で使用される。ある特定の実施形態では、抗体は、抗体のＦｃ領域、例えば、本明細書に記載の実施例で使用される抗ヒトＩｇＧ（Ｆａｂ’）２を二量体化する薬剤によって架橋される。ある特定の実施形態では、抗体は、抗体のＦｃ領域（例えば、ＦｃγＲＩＩＩａ、ＦｃγＲＩＩＩｂ、ＦｃγＲＩＩａ、ＦｃγＲＩＩｂ、またはＦｃγＲＩ）に結合するＦｃ受容体を発現する細胞との接触によって架橋される。ある特定の実施形態では、Ｆｃ受容体は、細胞表面上のクラスターで発現される。ある特定の実施形態では、抗体が結合する抗原のリガンドもまた、細胞上に発現される。ある特定の実施形態では、細胞は、抗原提示細胞（例えば、マクロファージ、単球、樹状細胞、またはＢリンパ球）である。
【０１６２】
ある特定の実施形態では、ＣＤ１３７（例えば、ヒトＣＤ１３７またはカニクイザルＣＤ１３７）の活性を活性化、増加、または促進する抗体の能力は、ＣＤ１３７のリガンド（例えば、ＣＤ１３７Ｌ（例えば、ヒトＣＤ１３７またはカニクイザルＣＤ１３７）もしくはその断片および／またはその融合タンパク質）の存在に依存する。ある特定の実施形態では、抗体は、ＣＤ１３７のリガンド（例えば、ＣＤ１３７Ｌ（例えば、ヒトＣＤ１３７またはカニクイザルＣＤ１３７）Ｌもしくはその断片および／またはその融合タンパク質）の不在下で、ＣＤ１３７（例えば、ヒトＣＤ１３７またはカニクイザルＣＤ１３７）の活性を最小限に増加または促進する。ある特定の実施形態では、抗体は、ＣＤ１３７のリガンド（例えば、ＣＤ１３７Ｌ（例えば、ヒトＣＤ１３７またはカニクイザルＣＤ１３７）もしくはその断片および／またはその融合タンパク質）の不在下で、ＣＤ１３７（例えば、ヒトＣＤ１３７またはカニクイザルＣＤ１３７）の活性を実質的に増加も促進もしない。一実施形態では、例えば、本明細書に記載の実施例で測定した場合、抗体は、抗ＣＤ３抗体刺激下で精製されたＴ細胞からのＩＬ−２および／またはＩＦＮγ産生を最小限に誘導する。一実施形態では、例えば、本明細書に記載の実施例で測定した場合、抗体は、ＮＦ−κΒレポーター細胞株におけるＮＦ−κΒシグナル伝達を最小限に誘導する。ある特定の実施形態では、ヒトＣＤ１３７の活性を活性化、増加、または促進する抗体の能力は、ＣＤ１３７Ｌの濃度と正相関する。ある特定の実施形態では、ＣＤ１３７Ｌ依存性は、抗体が、例えば、約１：１〜１：１０（例えば、約１：１、１：２、１：３、１：４、１：５、またはそれ以下）の架橋剤対抗体の比で、抗ヒトＩｇＧ（Ｆａｂ’）２と架橋されると観察される。
【０１６３】
具体的な実施形態では、本開示は、ＣＤ１３７（例えば、ヒトＣＤ１３７またはカニクイザルＣＤ１３７）に特異的に結合し、Ｔ細胞（例えばヒトＣＤ１３７を発現するＴ細胞）を活性化する、単離された抗体を提供する。ある特定の実施形態では、活性化Ｔ細胞は、１つ以上のマーカー（例えば、パーフォリン、グランザイムＡ、グランザイムＢ、Ｂｃｌ−ＸＬ）の、増加されたレベル（例えば、少なくとも約１．１倍、１．２倍、１．３倍、１．４倍、１．５倍、２倍、２．５倍、３倍、３．５倍、４倍、４．５倍、５倍、６倍、７倍、８倍、９倍、１０倍、１５倍、２０倍、３０倍、４０倍、５０倍、６０倍、７０倍、８０倍、９０倍、または１００倍の増加）で発現し、任意選択的にマーカーのレベルは、フローサイトメトリーによって測定してもよい。ある特定の実施形態では、抗体は、ＣＤ１３７のリガンド（例えば、ＣＤ１３７Ｌ（例えば、ヒトＣＤ１３７またはカニクイザルＣＤ１３７）もしくはその断片、および／またはその融合タンパク質）の存在下で、Ｔ細胞（例えば、ヒトＣＤ１３７を発現するＴ細胞）を活性化する。ある特定の実施形態では、抗体は、ＣＤ１３７のリガンド（例えば、ＣＤ１３７Ｌ（例えば、ヒトＣＤ１３７またはカニクイザルＣＤ１３７）もしくはその断片、および／またはその融合タンパク質）の不在下で、Ｔ細胞（例えば、ヒトＣＤ１３７を発現するＴ細胞）を活性化しない。
【０１６４】
具体的な実施形態では、本開示は、ＣＤ１３７（例えば、ヒトＣＤ１３７またはカニクイザルＣＤ１３７）に特異的に結合し、本明細書に記載の方法（以下の実施例を参照されたい）または当業者に既知の方法によって評価した場合、いかなる抗体にもよらないか、または非関連抗体（例えば、ＣＤ１３７（例えば、ヒトＣＤ１３７またはカニクイザルＣＤ１３７）に特異的に結合しない抗体）によるサイトカイン産生と比較して、サイトカイン（例えば、ＩＬ−２、ＩＦＮ−γ、またはＴＮＦ−α）産生を少なくとも約５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９８％、または９９％増加させる、単離された抗体を提供する。具体的な実施形態では、本開示は、ＣＤ１３７（例えば、ヒトＣＤ１３７またはカニクイザルＣＤ１３７）に特異的に結合し、かつ本明細書に記載の方法（以下の実施例を参照されたい）または当業者に既知の方法によって評価した場合、いかなる抗体も用いないか、または非関連抗体（例えば、ＣＤ１３７（例えば、ヒトＣＤ１３７またはカニクイザルＣＤ１３７）に特異的に結合しない抗体）を用いたサイトカイン産生と比較して、サイトカイン（例えば、ＩＬ−２、ＩＦＮ−γ、および／またはＴＮＦ−α）産生を少なくとも約１．２倍、１．３倍、１．４倍、１．５倍、２倍、２．５倍、３倍、３．５倍、４倍、４．５倍、５倍、６倍、７倍、８倍、９倍、１０倍、１５倍、２０倍、３０倍、４０倍、５０倍、６０倍、７０倍、８０倍、９０倍、または１００倍増加させる、単離された抗体を提供する。ある特定の実施形態では、抗体は、ＣＤ１３７のリガンド（例えば、ＣＤ１３７Ｌ（例えば、ヒトＣＤ１３７またはカニクイザルＣＤ１３７）、またはその断片および／もしくは融合タンパク質）の存在下で、サイトカイン（例えば、ＩＬ−２、ＩＦＮ−γ、および／またはＴＮＦ−α）産生を増加させる。ある特定の実施形態では、ＣＤ１３７のリガンド（例えば、ＣＤ１３７Ｌ（例えば、ヒトＣＤ１３７またはカニクイザルＣＤ１３７）またはその断片および／もしくは融合タンパク質）不在下で、いかなる抗体も用いないか、または非関連抗体（例えば、ＣＤ１３７（例えば、ヒトＣＤ１３７またはカニクイザルＣＤ１３７）に特異的に結合しない抗体）を用いたサイトカイン産生と比較して、抗体は、サイトカイン（例えば、ＩＬ−２、ＩＦＮ−γ、および／またはＴＮＦ−α）産生を１％、２％、３％、４％、５％、１０％、１５％、２０％、２５％、または３０％超増加させない。
【０１６５】
具体的な実施形態では、本開示は、ＣＤ１３７（例えば、ヒトＣＤ１３７またはカニクイザルＣＤ１３７）に特異的に結合し、単独でまたは抗ＰＤ−１抗体（例えば、ペムブロリズマブまたはニボルマブ）と組み合わせてのいずれかが、ブドウ球菌エンテロトキシンＡ（ＳＥＡ）刺激に応答したヒト末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）で、いかなる抗体にもよらないか、または非関連抗体（例えば、ＣＤ１３７（例えば、ヒトＣＤ１３７またはカニクイザルＣＤ１３７）に特異的に結合しない抗体）によるＩＬ−２および／またはＩＦＮγ産生と比較して、本明細書に記載の方法（以下の実施例参照）または当業者に既知の方法によって評価した場合、ＩＬ−２および／またはＩＦＮγ産生を少なくとも約１．２倍、１．３倍、１．４倍、１．５倍、２倍、２．５倍、３倍、３．５倍、４倍、４．５倍、５倍、６倍、７倍、８倍、９倍、１０倍、１５倍、２０倍、３０倍、４０倍、５０倍、６０倍、７０倍、８０倍、９０倍、または１００倍増加させる、単離された抗体を提供する。ある特定の実施形態では、ＣＤ１３７（例えば、ヒトＣＤ１３７またはカニクイザルＣＤ１３７）に特異的に結合する、本明細書に記載の抗体の存在下で、ブドウ球菌エンテロトキシンＡ（ＳＥＡ）で刺激したヒト末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）は、本明細書に記載の方法（以下の実施例を参照されたい）または当業者に既知の方法によって評価した場合、いかなる抗体にもよらないか、または非関連抗体（例えば、ＣＤ１３７（例えば、ヒトＣＤ１３７またはカニクイザルＣＤ１３７）に特異的に結合しない抗体）によるＳＥＡで刺激したのみＰＢＭＣからのＩＬ−２および／またはＩＦＮγ産生と比較して、ＩＬ−２および／またはＩＦＮγ産生を少なくとも約１．２倍、１．３倍、１．４倍、１．５倍、２倍、２．５倍、３倍、３．５倍、４倍、４．５倍、５倍、６倍、７倍、８倍、９倍、１０倍、１５倍、２０倍、３０倍、４０倍、５０倍、６０倍、７０倍、８０倍、９０倍、または１００倍増加させた。ある特定の実施形態では、抗体は、ＣＤ１３７のリガンド（例えば、ＣＤ１３７Ｌ（例えば、ヒトＣＤ１３７またはカニクイザルＣＤ１３７）もしくはその断片、および／またはその融合タンパク質）の存在下で、ＳＥＡ刺激に応答したヒトＰＢＭＣでのＩＬ−２および／またはＩＦＮγ産生を増加させる。ある特定の実施形態では、ＣＤ１３７のリガンド（例えば、ＣＤ１３７Ｌ（例えば、ヒトＣＤ１３７またはカニクイザルＣＤ１３７）もしくはその断片、および／またはその融合タンパク質）不在下で、いかなる抗体にもよらないか、または非関連抗体（例えば、ＣＤ１３７（例えば、ヒトＣＤ１３７またはカニクイザルＣＤ１３７）に特異的に結合しない抗体）によるサイトカイン産生と比較して、抗体は、ＳＥＡ刺激に応答したヒトＰＢＭＣでのＩＬ−２および／またはＩＦＮ−γ産生を１％、２％、３％、４％、５％、１０％、１５％、２０％、２５％、または３０％超増加させない。
【０１６６】
５．３  薬学的組成物
生理学的に許容される担体、賦形剤、または安定剤中で所望の純度を有する本明細書に開示の抗ＣＤ１３７（例えば、ヒトＣＤ１３７またはカニクイザルＣＤ１３７）抗体を含む組成物が本明細書に提供される（例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ（１９９０）Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏ．，Ｅａｓｔｏｎ，ＰＡを参照されたい）。許容される担体、賦形剤、または安定剤は、用いられる投与量および濃度で受容者に対して非毒性であり、これらには、リン酸塩、クエン酸塩、および他の有機酸などの緩衝液；アスコルビン酸およびメチオニンを含む抗酸化剤；保存剤（例えば、オクタデシルジメチルベンジルアンモニウムクロリド；塩化ヘキサメトニウム；塩化ベンザルコニウム、塩化ベンゼトニウム；フェノール、ブチル、もしくはベンジルアルコール；メチルもしくはプロピルパラベンなどのアルキルパラベン；カテコール；レゾルシノール；シクロヘキサノール；３−ペンタノール；およびｍ−クレゾール）；低分子量（約１０未満の残基）ポリペプチド；血清アルブミン、ゼラチン、もしくは免疫グロブリンなどのタンパク質；ポリビニルピロリドンなどの親水性ポリマー；グリシン、グルタミン、アスパラギン、ヒスチジン、アルギニン、もしくはリジンなどのアミノ酸；グルコース、マンノース、もしくはデキストリンを含む単糖類、二糖類、および他の炭水化物；ＥＤＴＡなどのキレート剤；スクロース、マンニトール、トレハロース、もしくはソルビトールなどの糖類；ナトリウムなどの塩形成対イオン；金属錯体（例えば、Ｚｎ−タンパク質錯体）；ならびに／またはＴＷＥＥＮ（商標）、ＰＬＵＲＯＮＩＣＳ（商標）、もしくはポリエチレングリコール（ＰＥＧ）などの非イオン界面活性剤が含まれる。
【０１６７】
具体的な一実施形態では、薬学的組成物は、薬学的に許容される担体中に、本明細書に開示の抗ＣＤ１３７（例えば、ヒトＣＤ１３７またはカニクイザルＣＤ１３７）抗体と、任意選択的に１つ以上の追加の予防薬または治療薬と、を含む。具体的な一実施形態では、薬学的組成物は、薬学的に許容される担体中に、有効量の本明細書に記載の抗体と、任意選択的に１つ以上の追加の予防薬または治療薬と、を含む。ある特定の実施形態では、抗体は、薬学的組成物中に含まれる唯一の活性成分である。本明細書に記載の薬学的組成物は、ＣＤ１３７（例えば、ヒトＣＤ１３７またはカニクイザルＣＤ１３７）の活性を増加または促進すること、および癌または感染症などの状態を治療することに有用であり得る。一実施形態では、本発明は、医薬品として使用するための本発明の抗ＣＤ１３７抗体を含む、本発明の薬学的組成物に関する。別の実施形態では、本発明は、癌または感染症を治療するための方法に使用するための、本発明の薬学的組成物に関する。
【０１６８】
非経口調製物に使用される薬学的に許容される担体としては、水性ビヒクル、非水性ビヒクル、抗菌剤、等張剤、緩衝液、抗酸化剤、局所麻酔剤、懸濁化剤および分散剤、乳化剤、封鎖剤またはキレート化剤、ならびに他の薬学的に許容される物質が挙げられる。水性ビヒクルの例としては、塩化ナトリウム注射剤、リンガー注射剤、等張デキストロース注射剤、滅菌水注射剤、デキストロース、および乳酸化リンガー注射剤が挙げられる。非水性非経口ビヒクルとしては、植物由来の固定油、綿実油、トウモロコシ油、ゴマ油、およびピーナツ油が挙げられる。静菌性または静真菌性の濃度の抗菌剤は、フェノールまたはクレゾール、水銀剤、ベンジルアルコール、クロロブタノール、メチル、およびプロピルｐ−ヒドロキシ安息香酸エステル、チメロサール、ベンズアルコニウムクロリド、およびベンゼトニウムクロリドを含む、多回投与容器中にパッケージされた非経口調製物に添加され得る。等張剤としては、塩化ナトリウムおよびデキストロースが挙げられる。緩衝液としては、リン酸塩およびクエン酸塩が挙げられる。抗酸化剤としては、重硫酸ナトリウムが挙げられる。局所麻酔剤としては、塩酸プロカインが挙げられる。懸濁化剤および分散剤としては、カルボキシメチルセルロースナトリウム、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、およびポリビニルピロリドンが挙げられる。乳化剤としては、Ｐｏｌｙｓｏｒｂａｔｅ８０（ＴＷＥＥＮ（登録商標）８０）が挙げられる。金属イオンの封鎖剤またはキレート化剤としては、ＥＤＴＡが挙げられる。薬学的担体としてはまた、水混和性ビヒクルのためのエチルアルコール、ポリエチレングリコール、およびプロピレングリコール、ならびにｐＨ調節のための水酸化ナトリウム、塩酸、クエン酸、または乳酸が挙げられる。
【０１６９】
薬学的組成物は、対象への投与の任意の経路用に配合されてもよい。投与経路の特定の例としては、鼻腔内、経口、肺、経皮、皮内、および非経口が挙げられる。皮下、筋肉内、または静脈内注射のいずれかを特徴とする非経口投与もまた、本明細書で企図される。注射物質は、液体溶液または懸濁液のいずれかの従来の形態で、注射前の液体中の溶液または懸濁液に好適な固体形態で、またはエマルジョンとして調製することができる。注射物質、溶液、およびエマルジョンはまた、１種以上の賦形剤を含有する。好適な賦形剤は、例えば、水、食塩水、デキストロース、グリセロール、またはエタノールである。さらに、所望であれば、投与すべき薬学的組成物はまた、少量の非毒性補助物質、例えば湿潤剤または乳化剤、ｐＨ緩衝剤、安定化剤、溶解度増強剤、および他のかかる薬剤、例えば、酢酸ナトリウム、ソルビタンモノラウレート、トリエタノールアミンオレアート、およびシクロデキストリンなどを含有することができる。
【０１７０】
抗体の非経口投与の調製物としては、注射可能な滅菌溶液、使用直前に溶媒と混合することができる、皮下注射錠剤を含む凍結乾燥粉末などの滅菌乾燥溶解性産生物、注射可能な滅菌懸濁液、使用直前に溶媒と混合することができる滅菌乾燥不溶性産生物、および滅菌エマルジョンが挙げられる。溶液は、水性であっても、非水性であってもよい。
【０１７１】
静脈内に投与される場合、好適な担体としては、生理食塩水またはリン酸緩衝食塩水（ＰＢＳ）、ならびに増粘剤および可溶化剤、例えば、グルコース、ポリエチレングリコール、およびポリプロピレングリコール、ならびにそれらの混合物を含む溶液が挙げられる。
【０１７２】
抗体を含む局所混合物は、局所および全身投与について記載されるように調製される。結果として生じる混合物は、溶液、懸濁液、またはエマルジョンなどであり得、クリーム、ゲル、軟膏、エマルジョン、溶液、エリキシル剤、ローション、懸濁液、チンキ剤、ペースト、泡沫、エアロゾル、潅注、スプレー、坐薬、包帯、皮膚パッチ、または外用投与に好適な任意の他の製剤として配合され得る。
【０１７３】
本明細書に開示の抗ＣＤ１３７（例えば、ヒトＣＤ１３７またはカニクイザルＣＤ１３７）抗体は、吸引などによる外用適用用のエアロゾルとして配合され得る（例えば、炎症性疾患、特に喘息の治療に有用なステロイドを送達するためのエアロゾルについて記載し、参照によりそれらの全体が本明細書に組み込まれる、米国特許第４，０４４，１２６号、同第４，４１４，２０９号、および同第４，３６４，９２３号を参照されたい）。気道への投与のためのこれらの製剤は、単独またはラクトースなどの不活性担体と組み合わせた、噴霧器用のエアロゾルまたは溶液の形態であっても、吹送法のための超微粒粉末としてあってもよい。かかる場合、製剤の粒子は、一実施形態では、５０ミクロン未満、一実施形態では、１０ミクロン未満の直径を有するであろう。
【０１７４】
本明細書に開示の抗ＣＤ１３７（例えば、ヒトＣＤ１３７またはカニクイザルＣＤ１３７）抗体は、皮膚および眼内などの粘膜への外用適用のためなど局所または外用適用用に、ならびに目への適用または嚢内もしくは脊髄内適用用に、ゲル、クリーム、およびローションの形態で配合されてもよい。外用投与は、経皮送達およびまた目もしくは粘膜への投与のため、または吸入療法のためにも企図される。単独または他の薬学的に許容される賦形剤と組み合わせた、この抗体の点鼻薬もまた、投与され得る。
【０１７５】
イオン泳動および電気泳動装置を含む、経皮パッチは、当業者に周知であり、抗体を投与するために使用することができる。例えば、そのようなパッチは、それらの全てが、参照によりそれらの全体が本明細書に組み込まれる、米国特許第６，２６７，９８３号、同第６，２６１，５９５号、同第６，２５６，５３３号、同第６，１６７，３０１号、同第６，０２４，９７５号、同第６，０１０７１５号、同第５，９８５，３１７号、同第５，９８３，１３４号、同第５，９４８，４３３号、および同第５，８６０，９５７号に開示されている。
【０１７６】
ある特定の実施形態では、本明細書に記載の抗体を含む薬学的組成物は、溶液、エマルジョン、および他の混合物として投与用に再構成することができる、凍結乾燥された粉末である。それはまた、固体またはゲルとして再構成および配合されてもよい。凍結乾燥された粉末は、本明細書に記載の抗体、またはその薬学的に許容される誘導体を好適な溶媒に溶解することによって調製される。ある特定の実施形態では、凍結乾燥された粉末は、滅菌されている。溶媒は、粉末または粉末から調製した再構成溶液の安定性または他の薬理学的構成成分を改善する賦形剤を含有してもよい。使用され得る賦形剤としては、デキストロース、ソルビトール、フルクトース、コーンシロップ、キシリトール、グリセリン、グルコース、スクロース、または他の好適な薬剤が挙げられるが、これらに限定されない。溶媒はまた、緩衝液、例えば、クエン酸塩、ナトリウム、もしくはリン酸カリウムまたは当業者に既知の他のかかる緩衝液、一実施形態では、約中性ｐＨで含有してもよい。その後溶液を滅菌濾過し、続いて当業者にとって既知である標準的な条件下で凍結乾燥させることにより、所望の製剤が得られる。一実施形態では、結果として生じる溶液は、凍結乾燥のためにバイアルに分配されるであろう。各バイアルは、単回投与量または複数回投与量の化合物を含有するであろう。凍結乾燥は、適切な条件下、例えば約４℃〜室温で保存することができる。凍結乾燥粉末の注射用水での再構成により、非経口投与に使用するための製剤が得られる。再構成のために、凍結乾燥粉末を滅菌水または他の好適な担体に添加する。正確な量は、選択される化合物に依存する。そのような量は、経験的に決定することができる。
【０１７７】
本明細書に開示の抗ＣＤ１３７（例えば、ヒトＣＤ１３７またはカニクイザルＣＤ１３７）抗体および本明細書に提供される他の組成物はまた、治療される対象の身体の特定の組織、受容体、または他の領域を標的とするように配合され得る。多くのかかる標的方法は、当業者に周知である。全てのかかる標的方法は、本組成物で使用するために本明細書で企図される。標的方法の非限定例については、例えば、それらの全てが、参照によりそれらの全体が本明細書に組み込まれる、米国特許第６，３１６，６５２号、同第６，２７４，５５２号、同第６，２７１，３５９号、同第６，２５３，８７２号、同第６，１３９，８６５号、同第６，１３１，５７０号、同第６，１２０，７５１号、同第６，０７１，４９５号、同第６，０６０，０８２号、同第６，０４８，７３６号、同第６，０３９，９７５号、同第６，００４，５３４号、同第５，９８５，３０７号、同第５，９７２，３６６号、同第５，９００，２５２号、同第５，８４０，６７４号、同第５，７５９，５４２号、および同第５，７０９，８７４号を参照されたい。具体的な一実施形態では、本明細書に記載の抗体は、腫瘍を標的とする。
【０１７８】
インビボ投与に使用される組成物は、滅菌され得る。これは、例えば、滅菌濾過膜を通した濾過によって容易に達成される。
【０１７９】
５．４  使用方法および使用
別の態様では、本開示は、本明細書に開示の抗ＣＤ１３７（例えば、ヒトＣＤ１３７またはカニクイザルＣＤ１３７）抗体を使用して対象を治療する方法を提供する。ＣＤ１３７（例えば、ヒトＣＤ１３７またはカニクイザルＣＤ１３７）機能の増加から利益を得るであろう対象の任意の疾患または障害は、本明細書に開示の抗ＣＤ１３７（例えば、ヒトＣＤ１３７またはカニクイザルＣＤ１３７）抗体を使用して治療することができる。本明細書に開示の抗ＣＤ１３７（例えば、ヒトＣＤ１３７）抗体は、腫瘍に対する免疫系の寛容性を阻害するのに特に有用であり、したがって、癌を有する対象のための免疫療法として使用することができる。例えば、ある特定の実施形態では、本開示は、対象における抗原に応答したＴ細胞活性化を増加させる方法であって、対象に有効量の本明細書に開示の抗ＣＤ１３７（例えば、ヒトＣＤ１３７またはカニクイザルＣＤ１３７）抗体またはその薬学的組成物を投与することを含む、方法を提供する。ある特定の実施形態では、本開示は、対象における癌を治療する方法であって、対象に有効量の本明細書に開示の抗体または薬学的組成物を投与することを含む、方法を提供する。
【０１８０】
本明細書に開示の抗ＣＤ１３７（例えば、ヒトＣＤ１３７またはカニクイザルＣＤ１３７）抗体または薬学的組成物を用いて治療することができる癌としては、限定されないが、固形腫瘍、血液癌（例えば、白血病、リンパ腫、例えば多発性骨髄腫などの骨髄腫）、および転移病巣が挙げられる。一実施形態では、癌は固形腫瘍である。固形腫瘍の例としては、悪性腫瘍、例えば肉腫および癌腫、例えば肺、乳房、卵巣、リンパ組織、胃腸（例えば、結腸）、肛門、性器、および泌尿生殖路（例えば、腎臓、尿路上皮、膀胱細胞、前立腺）、咽頭、ＣＮＳ（例えば、脳、神経、またはグリア細胞）、頭頸部、皮膚（例えば、黒色腫）、および膵臓に影響を与えるものなど様々な器官系の腺癌、ならびに結腸癌、直腸癌、腎細胞癌腫、肝臓癌、肺癌（例えば、非小細胞肺癌または小細胞肺癌）、小腸癌および食道癌などの悪性腫瘍を含む腺癌が挙げられる。癌は、早期、中期、末期、または転移性癌であり得る。
【０１８１】
一実施形態では、癌は、肺癌（例えば、肺腺癌または非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）（例えば、扁平組織および／または非扁平組織を有するＮＳＣＬＣ、またはＮＳＣＬＣ腺癌腫））、黒色腫（例えば進行性黒色腫）、腎臓癌（例えば腎細胞癌腫）、肝臓癌（例えば肝細胞癌腫）、骨髄腫（例えば多発性骨髄腫）、前立腺癌、乳癌（例えば、エストロゲン受容体、プロゲステロン受容体、またはＨｅｒ２／ｎｅｕのうちの１つ、２つ、または全てを発現しない乳癌、例えば、トリプルネガティブ乳癌）、卵巣癌、大腸癌、膵臓癌、頭頸部癌（例えば、頭頸部扁平細胞癌腫（ＨＮＳＣＣ）、肛門癌、胃食道癌（例えば、食道扁平細胞癌腫）、中皮腫、鼻咽頭癌、甲状腺癌、子宮頸癌、上皮癌、腹膜癌、またはリンパ増殖性疾患（例えば、移植後リンパ増殖性疾患）から選択される。具体的な一実施形態では、癌は、子宮頸癌である。
【０１８２】
一実施形態では、癌は、血液癌、例えば白血病、リンパ腫、または骨髄腫である。一実施形態では、癌は、白血病、例えば、急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、急性骨髄芽球性白血病（ＡＭＬ）、慢性リンパ球性白血病（ＣＬＬ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、慢性骨髄単球性白血病（ＣＭＭＬ）、慢性リンパ球性白血病（ＣＬＬ）、または有毛細胞白血病である。一実施形態では、癌は、リンパ腫、例えば、Ｂ細胞リンパ腫、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫（ＤＬＢＣＬ）、活性化Ｂ細胞様（ＡＢＣ）びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、胚中心Ｂ細胞（ＧＣＢ）びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、マントル細胞リンパ腫、ホジキンリンパ腫、非ホジキンリンパ腫、再発性非ホジキンリンパ腫、難治性非ホジキンリンパ腫、再発性濾胞性非ホジキンリンパ腫、バーキットリンパ腫、小リンパ球性リンパ腫、濾胞性リンパ腫、リンパ形質細胞性リンパ腫、または節外性辺縁帯リンパ腫である。一実施形態では、癌は、骨髄腫、例えば多発性骨髄腫である。
【０１８３】
別の実施形態では、癌は、癌腫（例えば、進行性または転移性癌腫）、黒色腫、または肺癌腫、例えば非小細胞肺癌腫から選択される。
【０１８４】
一実施形態では、癌は、肺癌、例えば肺腺癌、非小細胞肺癌、または小細胞肺癌である。
【０１８５】
一実施形態では、癌は、黒色腫、例えば進行性黒色腫である。一実施形態では、癌は、進行性黒色腫、または他の治療に応答しない切除不能な黒色腫である。他の実施形態では、癌は、ＢＲＡＦ変異（例えば、ＢＲＡＦ  Ｖ６００変異）を有する黒色腫である。さらに他の実施形態では、本明細書に開示の抗ＣＤ１３７（例えば、ヒトＣＤ１３７またはカニクイザルＣＤ１３７）抗体または薬学的組成物は、ＢＲＡＦ阻害剤（例えば、ベムラフェニブまたはダブラフェニブ）を含むかまたは含まない抗ＣＴＬＡ−４抗体（例えば、イピリムマブ）を用いた治療後に投与される。
【０１８６】
別の実施形態では、癌は、肝細胞癌腫、例えばウイルス感染を伴う例えば慢性ウイルス性肝炎か、または伴わない進行性肝細胞癌腫である。
【０１８７】
別の実施形態では、癌は、前立腺癌、例えば進行性前立腺癌である。
【０１８８】
さらに別の実施形態では、癌は、骨髄腫、例えば多発性骨髄腫である。
【０１８９】
さらに別の実施形態では、癌は、腎臓癌、例えば、腎細胞癌腫（ＲＣＣ）（例えば、転移性ＲＣＣ、淡明細胞腎細胞癌腫（ＣＣＲＣＣ）、または腎臓乳頭状癌腫）である。
【０１９０】
さらに別の実施形態では、癌は、肺癌、黒色腫、腎臓癌、乳癌、大腸癌、白血病、または癌の転移病巣から選択される。
【０１９１】
ある特定の実施形態では、本開示は、対象の感染症を予防または治療する方法であって、対象に有効量の本明細書に開示の抗ＣＤ１３７（ヒトＣＤ１３７またはカニクイザルＣＤ１３７）抗体、またはその薬学的組成物を投与することを含む、方法を提供する。一実施形態では、感染症（例えば、ウイルス感染症、細菌感染症、真菌感染症、原虫感染症、または寄生虫感染症）を予防および／または治療するための方法が本明細書に提供される。本方法に従って予防および／または治療された感染症は、本明細書に特定された感染性因子によって引き起こされ得る。具体的な一実施形態では、本明細書に記載の抗ＣＤ１３７（例えば、ヒトＣＤ１３７またはカニクイザルＣＤ１３７）抗体またはその組成物は、対象に投与される唯一の活性薬剤である。ある特定の実施形態では、本明細書に記載の抗ＣＤ１３７（ヒトＣＤ１３７またはカニクイザルＣＤ１３７）抗体またはその組成物は、感染症の治療のために、抗感染症介入物（例えば、抗ウイルス性、抗菌性、抗真菌性、または抗寄生虫性）と組み合わせて使用される。したがって、一実施形態では、本発明は、感染症を予防および／または治療する方法に使用するための本発明の抗体および／または薬学的組成物に関し、任意選択的に抗体または薬学的組成物が、対象に投与される唯一の活性薬剤であるか、または抗体もしくは薬学的組成物が、抗感染性介入物と組み合わせて使用される。
【０１９２】
本明細書に開示の抗ＣＤ１３７（例えば、ヒトＣＤ１３７またはカニクイザルＣＤ１３７）抗体または薬学的組成物によって治療および／または予防され得る感染症は、細菌、寄生虫、真菌、原虫、およびウイルスを含むが、これらに限定されない、感染病原体によって引き起こされる。具体的な一実施形態では、本明細書に開示の抗ＣＤ１３７（例えば、ヒトＣＤ１３７またはカニクイザルＣＤ１３７）抗体または薬学的組成物によって治療および／または予防される感染症は、ウイルスによって引き起こされる。本明細書に記載の方法に従って予防および／または治療され得るウイルス疾患またはウイルス感染としては、Ａ型肝炎、Ｂ型肝炎、Ｃ型肝炎、インフルエンザ（例えば、Ａ型インフルエンザまたはＢ型インフルエンザ）、水痘、アデノウイルス、単純ヘルペスＩ型（ＨＳＶ−Ｉ）、単純ヘルペスＩＩ型（ＨＳＶ−ＩＩ）、牛疫、ライノウイルス、エコーウイルス、ロタウイルス、呼吸器合胞体ウイルス、パピローマウイルス、パポバウイルス、サイトメガロウイルス、エキノウイルス（ｅｃｈｉｎｏｖｉｒｕｓ）、アルボウイルス、ハンタウイルス、コクサッキーウイルス、ムンプスウイルス、麻疹ウイルス、風疹ウイルス、ポリオウイルス、痘瘡、エプスタイン・バーウイルス、ヒト免疫不全ウイルスＩ型（ＨＩＶ−Ｉ）、ヒト免疫不全ウイルスＩＩ型（ＨＩＶ−ＩＩ）によって引き起こされるもの、およびウイルス性髄膜炎、脳炎、デング熱、または痘瘡などのウイルス疾患の病原因子が挙げられるが、これらに限定されない。
【０１９３】
予防および／または治療され得る細菌感染症としては、Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ  ｃｏｌｉ、Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ、Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ａｕｒｅｕｓ、Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ  ｆａｅｃａｌｉｓ、Ｐｒｏｔｅｕｓ  ｖｕｌｇａｒｉｓ、Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ｖｉｒｉｄａｎｓ、およびＰｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ａｅｒｕｇｉｎｏｓａによって引き起こされる感染症が挙げられる。本明細書に記載の方法に従って予防および／または治療され得る細菌（例えば、Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ  ｃｏｌｉ、Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ、Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ａｕｒｅｕｓ、Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ  ｆａｅｃａｌｉｓ、Ｐｒｏｔｅｕｓ  ｖｕｌｇａｒｉｓ、Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ｖｉｒｉｄａｎｓ、およびＰｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）によって引き起こされる細菌性疾患としては、Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉａ  ｒｉｃｋｅｔｔｓｉａ、Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ、Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ、Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａ、Ｂｏｒｒｅｌｉａ  ｂｕｒｇｄｏｒｆｅｒｉ（ライム病）、Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ａｎｔｒａｃｉｓ（炭疽）、破傷風、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ、Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ、ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ、百日咳、コレラ、ペスト、ジフテリア、クラミジア感染症、Ｓ．ａｕｒｅｕｓ、およびｌｅｇｉｏｎｅｌｌａが挙げられるが、これらに限定されない。
【０１９４】
本明細書に記載の方法に従って予防および／または治療され得る原虫によって引き起こされる原虫疾患または原虫感染症としては、リーシュマニア、コクシジウム症、トリパノソーマ住血吸虫属、またはマラリアが挙げられるが、これらに限定されない。本明細書に記載の方法に従って予防および／または治療され得る寄生虫によって引き起こされる寄生虫疾患または寄生虫感染症としては、クラミジア感染症およびリケッチアが挙げられるが、これらに限定されない。
【０１９５】
本明細書に記載の方法に従って予防および／または治療され得る真菌性疾患または真菌感染症としては、カンジダ感染症、接合菌症、カンジダ性髄膜炎、潜在性トリコスポロン血症を伴う進行性播種性トリコスポロン症、播種性カンジダ症、肺パラコクシジオイデス症、肺アスペルギルス症、ニューモシスチスカリニ肺炎、クリプトコッカス髄膜炎、コクシジオイデス髄膜脳炎、および脳脊髄脈管炎、アスペルギルスニガー感染症、フザリウム角膜炎、副鼻腔ミコース、アスペルギルス・フミガーツス心内膜炎、脛骨の軟骨発育不全症、カンジダグラブラタ膣炎、口腔咽頭カンジダ症、Ｘ連鎖慢性肉芽腫性疾患、足白癬、皮膚カンジダ症、真菌性胎盤炎、播種性トリコスポロン症、アレルギー性気管支肺アスペルギルス症、真菌性角膜炎、クリプトコックス・ネオフォルマンス感染症、真菌性腹膜炎、クルブラリアゲニクラータ感染症、ブドウ球菌性眼内炎、スポロトリクム症、および皮膚糸状菌症が挙げられるが、これらに限定されない。
【０１９６】
ある特定の実施形態では、これらの方法は、対象に追加の治療薬を投与することをさらに含む。ある特定の実施形態では、追加の治療薬は、化学療法薬、放射線療法薬、またはチェックポイント標的薬である。ある特定の実施形態では、化学療法薬は、低メチル化剤（例えば、アザシチジン）である。ある特定の実施形態では、チェックポイント標的薬は、アンタゴニスト抗ＣＴＬＡ−４抗体、アンタゴニスト抗ＰＤ−Ｌ１抗体、アンタゴニスト抗ＰＤ−Ｌ２抗体、アンタゴニスト抗ＰＤ−１抗体、アンタゴニスト抗ＴＩＭ−３抗体、アンタゴニスト抗ＬＡＧ−３抗体、アンタゴニスト抗ＶＩＳＴＡ抗体、アンタゴニスト抗ＣＤ９６抗体、アンタゴニスト抗ＣＥＡＣＡＭ１抗体、抗体抗ＴＩＧＩＴ抗体、アゴニスト抗ＧＩＴＲ抗体、およびアゴニスト抗ＯＸ４０抗体からなる群から選択される。
【０１９７】
一実施形態では、本発明は、本発明の方法に使用するための本発明の抗体および／または薬学的組成物に関し、方法が、対象に追加の治療薬を投与することをさらに含む。一実施形態では、本発明は、（ａ）本発明の抗体および／または薬学的組成物、ならびに（ｂ）医薬品として使用するための追加の治療薬に関する。一実施形態では、本発明は、癌を治療するための方法に使用するための、（ａ）本発明の抗体および／または薬学的組成物、ならびに（ｂ）追加の治療薬に関する。さらなる実施形態では、本発明は、（ａ）本発明の抗体、および／または薬学的組成物と、（ｂ）追加の治療薬と、を含む薬学的組成物、キット、または部品キットに関する。一実施形態では、追加の治療薬は、化学療法薬、放射線療法薬、またはチェックポイント標的薬である。
【０１９８】
ある特定の実施形態では、抗ＰＤ−１抗体は、本明細書に開示される方法において使用される。ある特定の実施形態では、抗ＰＤ−１抗体は、ニボルマブ（ＢＭＳ−９３６５５８またはＭＤＸ１１０６としても知られる、Ｂｒｉｓｔｏｌ−Ｍｙｅｒｓ  Ｓｑｕｉｂｂにより開発された）である。ある特定の実施形態では、抗ＰＤ−１抗体は、ペムブロリズマブ（ランブロリズマブまたはＭＫ−３４７５としても知られる、Ｍｅｒｃｋ  ＆  Ｃｏ．により開発された）である。ある特定の実施形態では、抗ＰＤ−１抗体は、ピディリズマブ（ＣＴ−０１１としても知られる、，ＣｕｒｅＴｅｃｈにより開発された）である。ある特定の実施形態では、抗ＰＤ−１抗体は、ＭＥＤＩ０６８０（ＡＭＰ−５１４としても知られる、Ｍｅｄｉｍｍｕｎｅにより開発された）である。ある特定の実施形態では、抗ＰＤ−１抗体は、Ｎｏｖａｒｔｉｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓにより開発されたＰＤＲ００１である。ある特定の実施形態では、抗ＰＤ−１抗体は、Ｒｅｇｅｎｅｒｏｎ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓにより開発されたＲＥＧＮ２８１０である。ある特定の実施形態では、抗ＰＤ−１抗体は、Ｐｆｉｚｅｒにより開発されたＰＦ−０６８０１５９１である。ある特定の実施形態では、抗ＰＤ−１抗体は、ＢｅｉＧｅｎｅにより開発されたＢＧＢ−Ａ３１７である。ある特定の実施形態では、抗ＰＤ−１抗体は、ＡｎａｐｔｙｓＢｉｏ  ａｎｄ  Ｔｅｓａｒｏにより開発されたＴＳＲ−０４２である。ある特定の実施形態では、抗ＰＤ−１抗体は、Ｈｅｎｇｒｕｉにより開発されたＳＨＲ−１２１０である。
【０１９９】
本明細書に開示の治療方法に使用され得る抗ＰＤ−１抗体のさらなる非限定的な例は、それらの全てが全ての目的のために参照によりそれらの全体が本明細書に組み込まれる、以下の特許および特許出願に開示されている：米国特許第６，８０８，７１０号、米国特許第７，３３２，５８２号、米国特許第７，４８８，８０２号、米国特許第８，００８，４４９号、米国特許第８，１１４，８４５号、米国特許第８，１６８，７５７号、米国特許第８，３５４，５０９号、米国特許第８，６８６，１１９号、米国特許第８，７３５，５５３号、米国特許第８，７４７，８４７号、米国特許第８，７７９，１０５号、米国特許第８，９２７，６９７号、米国特許第８，９９３，７３１号、米国特許第９，１０２，７２７号、米国特許第９，２０５，１４８号、米国公開第２０１３／０２０２６２３Ａ１号、米国公開第２０１３／０２９１１３６Ａ１号、米国公開第２０１４／００４４７３８Ａ１号、米国公開第２０１４／０３５６３６３Ａ１号、米国公開第２０１６／００７５７８３Ａ１号、ならびにＰＣＴ公開第ＷＯ２０１３／０３３０９１Ａ１号、ＰＣＴ公開第ＷＯ２０１５／０３６３９４Ａ１号、ＰＣＴ公開第ＷＯ２０１４／１７９６６４Ａ２号、ＰＣＴ公開第ＷＯ２０１４／２０９８０４Ａ１号、ＰＣＴ公開第ＷＯ２０１４／２０６１０７Ａ１号、ＰＣＴ公開第ＷＯ２０１５／０５８５７３Ａ１号、ＰＣＴ公開第ＷＯ２０１５／０８５８４７Ａ１号、ＰＣＴ公開第ＷＯ２０１５／２００１１９Ａ１号、ＰＣＴ公開第ＷＯ２０１６／０１５６８５Ａ１号、およびＰＣＴ公開第ＷＯ２０１６／０２０８５６Ａ１号。
【０２００】
ある特定の実施形態では、抗ＰＤ−Ｌ１抗体は、本明細書に開示される方法において使用される。ある特定の実施形態では、抗ＰＤ−Ｌ１抗体は、Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈによって開発されたアテゾリズマブである。ある特定の実施形態では、抗ＰＤ−Ｌ１抗体は、ＡｓｔｒａＺｅｎｅｃａ、Ｃｅｌｇｅｎｅ、およびＭｅｄｉｍｍｕｎｅによって開発されたデュルバルマブである。ある特定の実施形態では、抗ＰＤ−Ｌ１抗体は、アベルマブ（ＭＳＢ００１０７１８Ｃとしても知られる、Ｍｅｒｃｋ  ＳｅｒｏｎｏおよびＰｆｉｚｅｒにより開発された）である。ある特定の実施形態では、抗ＰＤ−Ｌ１抗体は、Ｂｒｉｓｔｏｌ−Ｍｙｅｒｓ  Ｓｑｕｉｂｂにより開発されたＭＤＸ−１１０５である。ある特定の実施形態では、抗ＰＤ−Ｌ１抗体は、ＡｍｐｌｉｍｍｕｎｅおよびＧＳＫにより開発されたＡＭＰ−２２４である。
【０２０１】
本明細書に開示の治療方法に使用され得る抗ＰＤ−Ｌ１抗体の非限定的な例は、それらの全てが、全ての目的のために参照によりそれらの全体が本明細書に組み込まれる、以下の特許および特許出願に開示されている：米国特許第７，９４３，７４３号、米国特許第８，１６８，１７９号、米国特許第．８，２１７，１４９号、米国特許第８，５５２，１５４号、米国特許第８，７７９，１０８号、米国特許第８，９８１，０６３号、米国特許第９，１７５，０８２号、米国公開第２０１０／０２０３０５６Ａ１号、米国公開第２００３／０２３２３２３Ａ１号、米国公開第２０１３／０３２３２４９Ａ１号、米国公開第２０１４／０３４１９１７Ａ１号、米国公開第２０１４／００４４７３８Ａ１号、米国公開第２０１５／０２０３５８０Ａ１号、米国公開第２０１５／０２２５４８３Ａ１号、米国公開第２０１５／０３４６２０８Ａ１号、米国公開第２０１５／０３５５１８４Ａ１号、ならびにＰＣＴ公開第ＷＯ２０１４／１０００７９Ａ１号、ＰＣＴ公開第ＷＯ２０１４／０２２７５８Ａ１号、ＰＣＴ公開第ＷＯ２０１４／０５５８９７Ａ２号、ＰＣＴ公開第ＷＯ２０１５／０６１６６８Ａ１号、ＰＣＴ公開第ＷＯ２０１５／１０９１２４Ａ１号、ＰＣＴ公開第ＷＯ２０１５／１９５１６３Ａ１号、ＰＣＴ公開第ＷＯ２０１６／０００６１９Ａ１号、およびＰＣＴ公開第ＷＯ２０１６／０３０３５０Ａ１号。
【０２０２】
ある特定の実施形態では、本明細書に開示の抗ＣＤ１３７（例えば、ヒトＣＤ１３７またはカニクイザルＣＤ１３７）抗体は、ＩＤＯ（インドールアミン−（２，３）−ジオキシゲナーゼ）および／またはＴＤＯ（トリプトファン２，３−ジオキシゲナーゼ）などの免疫調節酵素（複数可）を標的とする化合物と組み合わせて対象に投与される。したがって、一実施形態では、追加の治療薬は、インドールアミン−（２，３）−ジオキシゲナーゼ（ＩＤＯ）の阻害剤などの免疫調節酵素（複数可）を標的とする化合物である。ある特定の実施形態では、そのような化合物は、ｅｐａｃａｄｏｓｔａｔ（Ｉｎｃｙｔｅ  Ｃｏｒｐ、例えば、参照によりその全体が本明細書に組み込まれるＷＯ２０１０／００５９５８参照）、Ｆ００１２８７（Ｆｌｅｘｕｓ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ／Ｂｒｉｓｔｏｌ−Ｍｙｅｒｓ  Ｓｑｕｉｂｂ）、ｉｎｄｏｘｉｍｏｄ（ＮｅｗＬｉｎｋ  Ｇｅｎｅｔｉｃｓ）、およびＮＬＧ９１９（ＮｅｗＬｉｎｋ  Ｇｅｎｅｔｉｃｓ）からなる群から選択される。一実施形態では、化合物は、エパカドスタットである。別の実施形態では、この化合物は、Ｆ００１２８７である。別の実施形態では、化合物は、インドキシモドである。別の実施形態では、この化合物は、ＮＬＧ９１９である。具体的な一実施形態では、本明細書に開示の抗ＣＤ１３７（例えば、ヒトＣＤ１３７）抗体は、癌を治療するためのＩＤＯ阻害剤と組み合わせて対象に投与される。癌治療において使用するための本明細書に記載のＩＤＯ阻害剤は、錠剤、丸剤、またはカプセル剤などの薬学的組成物の固体剤形で存在し、この薬学的組成物は、ＩＤＯ阻害剤および薬学的に許容される賦形剤を含む。したがって、本明細書に記載の抗体および本明細書に記載のＩＤＯ阻害剤は、別個に、順次に、または別個の剤形として同時に投与され得る。一実施形態では、抗体は、非経口投与され、ＩＤＯ阻害剤は、経口投与される。特定の実施形態では、阻害剤は、エパカドスタット（Ｉｎｃｙｔｅ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ）、Ｆ００１２８７（Ｆｌｅｘｕｓ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ／Ｂｒｉｓｔｏｌ−Ｍｙｅｒｓ  Ｓｑｕｉｂｂ）、インドキシモド（ＮｅｗＬｉｎｋ  Ｇｅｎｅｔｉｃｓ）、およびＮＬＧ９１９（ＮｅｗＬｉｎｋ  Ｇｅｎｅｔｉｃｓ）からなる群から選択される。Ｅｐａｃａｄｏｓｔａｔは、全ての目的のために参照によりその全体が本明細書に組み込まれる、ＰＣＴ公開第ＷＯ２０１０／００５９５８号に記載されている。一実施形態では、阻害剤は、エパカドスタットである。別の実施形態では、阻害剤は、Ｆ００１２８７である。別の実施形態では、阻害剤は、インドキシモドである。別の実施形態では、阻害剤は、ＮＬＧ９１９である。
【０２０３】
ある特定の実施形態では、本明細書に開示の抗ＣＤ１３７（例えば、ヒトＣＤ１３７またはカニクイザルＣＤ１３７）抗体は、ワクチンと組み合わせて対象に投与される。ワクチンは、例えば、ペプチドワクチン、ＤＮＡワクチン、またはＲＮＡワクチンであり得る。ある特定の実施形態では、ワクチンは、熱ショックタンパク質ベースの腫瘍ワクチンまたは熱ショックタンパク質ベースの病原体ワクチンである。具体的な一実施形態では、本明細書に開示のＣＤ１３７（例えば、ヒトＣＤ１３７またはカニクイザルＣＤ１３７）抗体は、熱ショックタンパク質系腫瘍ワクチンと組み合わせて対象に投与される。熱ショックタンパク質（ＨＳＰ）は、全ての種にわたって遍在的に見出される高度に保存されたタンパク質のファミリーである。それらの発現は、熱ショック、または毒素への曝露、酸化的ストレス、もしくはグルコース除去を含む、他のストレス形態の結果としてさらにより高いレベルまで強力に誘導され得る。分子量により５つのファミリー：ＨＳＰ−１１０、−９０、−７０、−６０、および−２８に分類されている。ＨＳＰは、Ｔ細胞の活性化を引き起こす、マクロファージおよび樹状細胞（ＤＣ）などの抗原を呈する細胞（ＡＰＣ）における交差呈示経路を通して、免疫原性ペプチドを送達する。ＨＳＰは、腫瘍特異的免疫を誘導することが可能な複合体を形成する腫瘍関連抗原ペプチドのシャペロン担体としての機能を果たす。瀕死の状態である腫瘍細胞からの放出時、ＨＳＰ抗原複合体は、抗原が抗腫瘍ＣＤ８＋およびＣＤ４＋Ｔ細胞の活性化を引き起こすＭＨＣクラスＩおよびクラスＩＩ分子に結合するペプチドへと処理される、抗原提示細胞（ＡＰＣ）によって取り込まれる。腫瘍調製物由来のＨＳＰ複合体によって誘発される免疫は、各対象の癌によって発現される独自の抗原ペプチドレパートリーに対して特異的に指向される。したがって、一実施形態では、本発明は、例えば、癌を治療するための方法に使用するための医薬品として使用するための、（ａ）本発明の抗体および／または薬学的組成物、ならびに（ｂ）ワクチンに関する。一実施形態では、本発明は、（ａ）本発明の抗体、および／または薬学的組成物と、（ｂ）ワクチンと、を含む薬学的組成物、キット、または部品キットに関する。一実施形態では、ワクチンは、熱ショックタンパク質系腫瘍ワクチンである。一実施形態では、ワクチンは、熱ショックタンパク質系病原体ワクチンである。ある特定の実施形態では、ワクチンは、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる、ＷＯ２０１６／１８３４８６に記載されている。
【０２０４】
熱ショックタンパク質ペプチド複合体（ＨＳＰＰＣ）は、抗原ペプチドと非共有結合的に複合体形成された熱ショックタンパク質からなるタンパク質ペプチド複合体である。ＨＳＰＰＣは、先天性免疫応答および適応性免疫応答の両方を誘発する。具体的な実施形態では、抗原ペプチド（複数可）は、治療される癌に対して抗原性を示す。ＨＳＰＰＣは、膜受容体（主にＣＤ９１）を介するＡＰＣによってまたはＴｏｌｌ様受容体への結合によって効率よく獲得される。ＨＳＰＰＣの内在性は、ナチュラルキラー細胞（ＮＫ）、単球、ならびにＴｈ１およびＴｈ２媒介性免疫応答の活性化を引き起こすケモカインおよびサイトカイン産生によるＡＰＣの機能的成熟をもたらす。ある特定の実施形態では、本明細書に開示される方法で使用されるＨＳＰＰＣは、抗原ペプチドと複合体形成されたストレスタンパク質のｈｓｐ６０、ｈｓｐ７０、またはｈｓｐ９０ファミリーからの１つ以上の熱ショックタンパク質を含む。ある特定の実施形態では、ＨＳＰＰＣは、ｈｓｃ７０、ｈｓｐ７０、ｈｓｐ９０、ｈｓｐ１１０、ｇｒｐ１７０、ｇｐ９６、カルレティキュリン、またはそれらの２つ以上の組み合わせを含む。
【０２０５】
具体的な実施形態では、熱ショックタンパク質ペプチド複合体（ＨＳＰＰＣ）は、組み換え熱ショックタンパク質（例えば、ｈｓｐ７０またはｈｓｃ７０）または組み換え抗原ペプチドと複合体形成されたそのペプチド結合ドメインを含む。組み換え熱ショックタンパク質は、例えば、Ｄｗｏｒｎｉｃｚａｋ  ａｎｄ  Ｍｉｒａｕｌｔ，Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．１５：５１８１−５１９７（１９８７）およびＧｅｎＢａｎｋ受入番号Ｐ１１１４２および／またはＹ００３７１（その各々は参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）に記載のヒトｈｓｃ７０配列を使用して、組み換えＤＮＡ技術により産生され得る。ある特定の実施形態では、Ｈｓｐ７０配列は、その各々は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる、Ｈｕｎｔ  ａｎｄ  Ｍｏｒｉｍｏｔｏ  Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．８２（１９），６４５５−６４５９（１９８５）、ならびにＧｅｎＢａｎｋ受入番号Ｐ０ＤＭＶ８および／またはＭ１１７１７に記載のとおりである。抗原ペプチドも当該技術分野で既知の組み換えＤＮＡ方法により調製され得る。
【０２０６】
ある特定の実施形態では、抗原ペプチドは修飾されたアミノ酸を含む。ある特定の実施形態では、修飾されたアミノ酸は、翻訳後修飾を含む。ある特定の実施形態では、修飾されたアミノ酸は、翻訳後修飾の模倣物を含む。ある特定の実施形態では、修飾されたアミノ酸は、側鎖ヒドロキシルまたはアミンでリン酸化されたＴｙｒ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ａｒｇ、Ｌｙｓ、またはＨｉｓである。ある特定の実施形態では、修飾されたアミノ酸は、側鎖ヒドロキシルまたはアミンでリン酸化されたＴｙｒ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ａｒｇ、Ｌｙｓ、またはＨｉｓアミノ酸の模倣物である。
【０２０７】
具体的な一実施形態では、本明細書に開示の抗ＣＤ１３７（例えば、ヒトＣＤ１３７またはカニクイザルＣＤ１３７）抗体は、癌を治療するために、熱ショックタンパク質ペプチド複合体（ＨＳＰＰＣ）、例えば、熱ショックタンパク質ペプチド複合体−９６（ＨＳＰＰＣ−９６）と組み合わせて対象に投与される。ＨＳＰＰＣ−９６は、抗原ペプチドと複合体形成された９６ｋＤａ熱ショックタンパク質（Ｈｓｐ）、ｇｐ９６を含む。ＨＳＰＰＣ−９６は、対象の腫瘍から製作された癌免疫療法剤であり、癌の抗原性の「はっきりした特徴」を含む。ある特定の実施形態では、このはっきりした特徴は、その特定の対象の特異的癌細胞にのみ存在する独自の抗原を含有し、ワクチンの注射は、特異的な癌のはっきりした特徴を有するあらゆる細胞を認識し、攻撃するために、対象の免疫系を刺激するよう意図されている。したがって、一実施形態では、本発明は、医薬品として使用するためのおよび／または癌を治療するための方法に使用するための、熱ショックタンパク質ペプチド複合体（ＨＳＰＰＣ）と組み合わせた、本発明の抗体および／または薬学的組成物に関する。
【０２０８】
ある特定の実施形態では、ＨＳＰＰＣ、例えば、ＨＳＰＰＣ−９６は、対象の腫瘍組織から産生される。具体的な実施形態では、ＨＳＰＰＣ（例えば、ＨＳＰＰＣ−９６）は、治療される癌の種類の腫瘍またはその転移から産生される。別の具体的な実施形態では、ＨＳＰＰＣ（例えば、ＨＳＰＰＣ−９６）は、治療される対象に対して自家性である。ある特定の実施形態では、腫瘍組織は、非壊死腫瘍組織である。ある特定の実施形態では、少なくとも１グラム（例えば、少なくとも１、少なくとも２、少なくとも３、少なくとも４、少なくとも５、少なくとも６、少なくとも７、少なくとも８、少なくとも９、または少なくとも１０グラム）の非壊死腫瘍組織が、ワクチンレジメンを産生するために使用される。ある特定の実施形態では、外科的切除後、非壊死腫瘍組織は、ワクチン調製物で使用する前に冷凍される。ある特定の実施形態では、ＨＳＰＰＣ、例えば、ＨＳＰＰＣ−９６は、精製技法によって腫瘍組織から単離され、濾過され、注射可能なワクチン用に調製される。ある特定の実施形態では、対象は、６〜１２用量のＨＳＰＰＣ、例えば、ＨＳＰＣＣ−９６を投与される。そのような実施形態では、ＨＳＰＰＣ、例えば、ＨＳＰＰＣ−９６用量は、最初の４回の用量が週１回投与され得、次いで、２〜８回の追加用量が週２回投与され得る。
【０２０９】
本明細書に記載の方法に従って使用され得るＨＳＰＰＣのさらなる例は、それらの全ては、参照によりそれらの全体が本明細書に組み込まれる、以下の特許および特許出願：米国特許第６，３９１，３０６号、同第６，３８３，４９２号、同第６，４０３，０９５号、同第６，４１０，０２６号、同第６，４３６，４０４号、同第６，４４７，７８０号、同第６，４４７，７８１号、および同第６，６１０，６５９号に開示されている。
【０２１０】
ある特定の実施形態では、本明細書に開示の抗ＣＤ１３７（例えば、ヒトＣＤ１３７またはカニクイザルＣＤ１３７）抗体は、アジュバントと組み合わせて対象に投与される。様々なアジュバントを、治療状況に応じて使用することができる。適切なアジュバントの非限定的な例としては、完全フロイントアジュバント（ＣＦＡ）、不完全フロインドアジュバント（ＩＦＡ）、モンタニドＩＳＡ（不完全セピックアジュバント）、Ｒｉｂｉアジュバント系（ＲＡＳ）、Ｔｉｔｅｒ  Ｍａｘ、ムラミルペプチド、シンテックスアジュバント製剤（ＳＡＦ）、ミョウバン（水酸化アルミニウムおよび／またはリン酸アルミニウム）、アルミニウム塩アジュバント、Ｇｅｒｂｕ（登録商標）アジュバント、ニトロセルロース吸着抗原、被包性または封入抗原、３  Ｄｅ−Ｏ−アシル化モノホスホリル脂質Ａ（３  Ｄ−ＭＰＬ）、疫刺激性オリゴデオキシヌクレオチド、ｔｏｌｌ様受容体（ＴＬＲ）リガンド、マンナン結合レクチン（ＭＢＬ）リガンド、ＳＴＩＮＧアゴニスト、サポリンなどの免疫刺激複合体、Ｑｕｉｌ  Ａ、ＱＳ−２１、ＱＳ−７、ＩＳＣＯＭＡＴＲＩＸなどが挙げられるが、これらに限定されない。他のアジュバントとしては、ＣｐＧオリゴヌクレオチドおよび二本鎖ＲＮＡ分子、例えば、ポリ（Ａ）およびポリ（Ｕ）が挙げられる。また、上記のアジュバントの組み合わせも使用してもよい。例えば、米国特許第６，６４５，４９５号、同第７，０２９，６７８号、および同第７，８５８，５８９号（それらの全ては参照によりそれらの全体が本明細書に組み込まれる）を参照されたい。一実施形態では、本明細書で使用されるアジュバントはＱＳ−２１  ＳＴＩＭＵＬＯＮである。
【０２１１】
ある特定の実施形態では、本明細書に開示の抗ＣＤ１３７（例えば、ヒトＣＤ１３７またはカニクイザルＣＤ１３７）抗体は、ＴＣＲを含む追加の治療薬と組み合わせて対象に投与される。ある特定の実施形態では、追加の治療薬は、可溶性ＴＣＲである。ある特定の実施形態では、追加の治療薬は、ＴＣＲを発現する細胞である。したがって、一実施形態では、本発明は、医薬品として使用するためのおよび／または癌を治療するための方法に使用するための、ＴＣＲを含む追加の治療薬と組み合わせた、本発明の抗体および／または薬学的組成物に関する。
【０２１２】
ある特定の実施形態では、本明細書に開示の抗ＣＤ１３７（例えば、ヒトＣＤ１３７またはカニクイザルＣＤ１３７）抗体は、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）を発現する細胞と組み合わせて対象に投与される。ある特定の実施形態では、この細胞は、Ｔ細胞である。
【０２１３】
ある特定の実施形態では、本明細書に開示の抗ＣＤ１３７（例えば、ヒトＣＤ１３７またはカニクイザルＣＤ１３７）抗体は、ＴＣＲ模倣抗体と組み合わせて対象に投与される。ある特定の実施形態では、ＴＣＲ模倣抗体は、ペプチド−ＭＨＣ複合体に特異的に結合する抗体である。ＴＣＲ模倣抗体の非限定的な例は、例えば、それらの全てが、参照によりそれらの全体が本明細書に組み込まれる、米国特許第９，０７４，０００号、ならびに米国公開第２００９／０３０４６７９Ａ１号、および同第２０１４／０１３４１９１Ａ１号を参照されたい。
【０２１４】
ある特定の実施形態では、本明細書に開示の抗ＣＤ１３７（例えば、ヒトＣＤ１３７またはカニクイザルＣＤ１３７）抗体は、（例えば、参照によりその全体が本明細書に組み込まれるＷＯ２００５／０６１５４７Ａ２に記載の）二重特異Ｔ細胞誘導抗体（ｂｉｓｐｅｃｉｆｉｃ  Ｔ−ｃｅｌｌ  ｅｎｇａｇｅｒ）（ＢｉＴＥ）、および／または（例えば、参照によりその全体が本明細書に組み込まれるＷＯ２０１２／１６２０６７Ａ２に記載の）二重親和性再標的化抗体（ＤＡＲＴ）と組み合わせて対象に投与される。ある特定の実施形態では、ＢｉＴＥおよび／またはＤＡＲＴは、腫瘍関連抗原（例えば、腫瘍中で過剰発現したポリペプチド、腫瘍ウイルス由来のポリペプチド、腫瘍に特異的な翻訳後修飾を含むポリペプチド、腫瘍中で特異的に変異したポリペプチド）、およびエフェクター細胞上の分子（例えば、ＣＤ３またはＣＤ１６）に特異的に結合する。ある特定の実施形態では、腫瘍関連抗原は、ＥＧＦＲ（例えば、ヒトＥＧＦＲ）、Ｈｅｒ２（例えば、ヒトＨｅｒ２）、またはＣＤ２０（例えば、ヒトＣＤ２０）である。
【０２１５】
抗ＣＤ１３７（例えば、ヒトＣＤ１３７またはカニクイザルＣＤ１３７）抗体および追加の治療薬（例えば、化学療法薬、放射線療法薬、チェックポイント標的薬、ＩＤＯ阻害剤、ワクチン、アジュバント、可溶性ＴＣＲ、ＴＣＲを発現する細胞、キメラ抗原受容体を発現する細胞、および／またはＴＣＲ模倣抗体）は、別々に、連続的に、または同時に別々の剤形として投与することができる。一実施形態では、抗ＣＤ１３７（例えば、ヒトＣＤ１３７またはカニクイザルＣＤ１３７）抗体は、非経口投与され、ＩＤＯ阻害剤は、経口投与される。
【０２１６】
本明細書に記載の抗体または薬学的組成物は、種々の経路によって対象に送達され得る。これらにとして、非経口、鼻腔内、気管内、経口、皮内、局所、筋肉内、腹腔内、経皮、静脈内、腫瘍内、結膜、動脈内、および皮下経路が挙げられるが、これらに限定されない。肺内投与は、例えば、吸入器または噴霧器、およびスプレー用としてエアロゾル化剤を含む製剤の使用によっても用いられ得る。ある特定の実施形態では、本明細書に記載の抗体または薬学的組成物は、皮下または静脈内送達される。ある特定の実施形態では、本明細書に記載の抗体または薬学的組成物は、動脈内送達される。特定の実施形態では、本明細書に記載の抗体または薬学的組成物は、腫瘍内送達される。ある特定の実施形態では、本明細書に記載の抗体または薬学的組成物は、腫瘍流入領域リンパ節に送達される。
【０２１７】
状態の治療および／または予防に有効であろう抗体または薬学的組成物の量は、疾患の性質に依存し、標準的な臨床技法によって決定され得る。
【０２１８】
組成物中で用いられるべき正確な用量は、投与経路、およびそれによって引き起こされる感染症または疾患の重症度にも依存し、臨床医の判断および各対象の状況に従って決定されるべきである。例えば、有効な用量はまた、投与手段、標的部位、患者の生理的状態（年齢、体重、および健康を含む）、患者がヒトであるかまたは動物であるかということ、投与される他の薬品、または治療が予防的であるかまたは治療的であるかということによって異なってもよい。通常、患者は、ヒトであるが、トランスジェニック哺乳動物を含む非ヒト哺乳動物も治療することができる。治療投与量は、安全性および有効性を最適化するために最適に滴定される。
【０２１９】
本明細書に記載の抗ＣＤ１３７（例えば、ヒトＣＤ１３７またはカニクイザルＣＤ１３７）抗体を使用して、酵素結合免疫吸着アッセイ（ＥＬＩＳＡ）、免疫沈降、またはウェスタンブロット法などの免疫アッセイを含む、当業者に既知の従来の免疫組織学的方法を使用して、生体試料中のＣＤ１３７（例えば、ヒトＣＤ１３７またはカニクイザルＣＤ１３７）タンパク質レベルをアッセイすることもできる。好適な抗体アッセイ標識は、当該技術分野で既知であり、グルコース酸化酵素などの酵素標識、ヨウ素（１２５Ｉ、１２１Ｉ）、炭素（１４Ｃ）、硫黄（３５Ｓ）、トリチウム（３Ｈ）、インジウム（１２１Ｉｎ）、およびテクネチウム（９９Ｔｃ）などの放射性アイソトープ、ルミノールなどの発光標識、ならびにフルオレセインおよびローダミン、およびビオチンなどの蛍光標識が挙げられる。そのような標識を使用して、本明細書に記載の抗体を標識することができる。あるいは、本明細書に記載の抗ＣＤ１３７（例えば、ヒトＣＤ１３７またはカニクイザルＣＤ１３７）抗体を認識する第２の抗体を標識して、これを抗ＣＤ１３７（例えば、ヒトＣＤ１３７またはカニクイザルＣＤ１３７）抗体と組み合わせて使用して、ＣＤ１３７（例えば、ヒトＣＤ１３７またはカニクイザルＣＤ１３７）タンパク質レベルを検出することができる。したがって、一実施形態では、本発明は、生体試料中のＣＤ１３７（例えば、ヒトＣＤ１３７またはカニクイザルＣＤ１３７）タンパク質をインビトロで検出するための、本発明の抗体の使用に関する。さらなる実施形態では、本発明は、インビトロでの生体試料中のＣＤ１３７（例えば、ヒトＣＤ１３７またはカニクイザルＣＤ１３７）タンパク質レベルをアッセイおよび／または検出するための、本発明の抗ＣＤ１３７抗体の使用に関し、任意選択的に抗ＣＤ１３７抗体が、放射性核種もしくは検出可能な標識に共役され、かつ／または本明細書に記載の標識を担持し、かつ／または免疫組織学的方法が使用される。
【０２２０】
ＣＤ１３７（例えば、ヒトＣＤ１３７またはカニクイザルＣＤ１３７）タンパク質の発現レベルをアッセイすることは、直接的に（例えば、絶対的なタンパク質レベルを決定または推定することによって）、または相対的に（例えば、第２の生体試料中の疾患関連タンパク質レベルと比較することによって）のいずれかで、第１の生体試料中のＣＤ１３７（例えば、ヒトＣＤ１３７またはカニクイザルＣＤ１３７）タンパク質のレベルを定性的または定量的に測定または推定することを含むことが意図されている。第１の生体試料中のＣＤ１３７（例えば、ヒトＣＤ１３７またはカニクイザルＣＤ１３７）ポリペプチド発現レベルを測定または推定し、標準的なＣＤ１３７（例えば、ヒトＣＤ１３７またはカニクイザルＣＤ１３７）タンパク質レベルと比較することができ、この標準物は、例えば、障害を有しない個体から得た第２の生体試料から採取されるか、または障害を有しない個体の集団からのレベルを平均することによって決定される。当該技術分野で理解されるであろうように、「標準的な」ＣＤ１３７（例えば、ヒトＣＤ１３７またはカニクイザルＣＤ１３７）ポリペプチドレベルを知れば、それを比較のための標準物として繰り返し使用することができる。したがって、さらなる実施形態では、本発明は、生体試料中のＣＤ１３７タンパク質の、例えばヒトＣＤ１３７タンパク質のレベルを免疫組織学的方法によって定性的または定量的に測定または推定することを含む、生体試料中のＣＤ１３７タンパク質レベル、例えばヒトＣＤ１３７タンパク質レベルをアッセイおよび／または検出するための、インビトロ法に関する。
【０２２１】
本明細書で使用される場合、「生体試料」という用語は、ＣＤ１３７（例えば、ヒトＣＤ１３７またはカニクイザルＣＤ１３７）を潜在的に発現する、対象から得られた任意の生体試料、細胞株、組織、または他の細胞源を指す。動物（例えば、ヒトまたはカニクイザル）からの組織生検および体液を得るための方法は、当該技術分野で周知である。生体試料は、末梢血単核細胞を含む。
【０２２２】
本明細書に記載の抗ＣＤ１３７例えば、ヒトＣＤ１３７またはカニクイザルＣＤ１３７）抗体は、当業者に周知かつ標準的であり、本説明に基づいたインビトロおよびインビボでの適用を含む、予後的監視、診断的監視、およびスクリーニング用途に使用することができる。免疫系状態および／または免疫応答のインビトロ査定および評価のための予後的、診断的、監視、およびスクリーニングアッセイおよびキットを利用して、免疫系機能不全を有することが知られているか、もしくは疑われるものを含む患者試料、または所望の免疫系応答に関して抗原応答もしくはワクチン応答を評価するために、予測、診断、および監視することができる。免疫系状態および／または免疫応答の査定および評価はまた、異なる薬剤または抗体に対する、薬物の臨床試験への、または特定の化学療法薬、放射線療法薬、もしくは抗体（それらの組み合わせを含む）の投与への患者の適合性を決定するのに有用である。この種類の予後的監視および診断的監視ならびに査定は、乳癌におけるＨＥＲ２タンパク質（ＨｅｒｃｅｐＴｅｓｔ（商標）、Ｄａｋｏ）に対する抗体を利用して既に実際に使用されており、このアッセイはまた、Ｈｅｒｃｅｐｔｉｎ（登録商標）を使用する抗体治療のために患者を評価するのにも使用されている。インビボ用途には、指向性細胞療法および免疫系調節、ならびに免疫応答の放射線撮像が含まれる。したがって、一実施形態では、本発明は、本発明の抗ＣＤ１３７抗体および／または薬学的組成物の診断的使用に関する。一実施形態では、本発明は、免疫系機能不全を有するか有すると疑われ、かつ／あるいは期待されるかまたは所望の免疫系応答、抗原応答、またはワクチン応答に関して、対象を予測、診断、および／もしくは監視するための方法に使用するための、本発明の抗ＣＤ１３７抗体および／または薬学的組成物に関する。別の実施形態では、本発明は、免疫系機能不全を有するか有すると疑われ、かつ／あるいは期待されるかまたは所望の免疫系応答、抗原応答、もしくはワクチン応答に関して、インビトロでの対象の生体試料中のヒトＣＤ１３７タンパク質レベルをアッセイおよび／または検出することによって、対象を予測、診断、および／または監視するための方法に使用するための、本発明の抗ＣＤ１３７抗体の使用に関する。
【０２２３】
一実施形態では、抗ＣＤ１３７（例えば、ヒトＣＤ１３７またはカニクイザルＣＤ１３７）抗体は、生検試料を免疫組織学的に使用することができる。一実施形態では、方法は、インビトロ法である。別の実施形態では、抗ＣＤ１３７（例えば、ヒトＣＤ１３７またはカニクイザルＣＤ１３７）抗体を使用して、ＣＤ１３７（例えば、ヒトＣＤ１３７またはカニクイザルＣＤ１３７）のレベル、または細胞膜表面上にＣＤ１３７（例えば、ヒトＣＤ１３７またはカニクイザルＣＤ１３７）を含有する細胞のレベル、次いである特定の疾患症状に関連し得るそれらのレベルを検出することができる。本明細書に記載の抗ＣＤ１３７（例えば、ヒトＣＤ１３７またはカニクイザルＣＤ１３７）抗体は、検出可能な標識または機能的標識を担持してもよく、かつ／あるいは、放射性核種または検出可能な標識に共役されていてもよい。蛍光標識が使用される場合、現在入手可能な顕微鏡および蛍光活性化細胞分取装置分析（ＦＡＣＳ）または当該技術分野において既知である方法手順の両方の組み合わせを利用して、特異的結合メンバーを特定および定量化することができる。本明細書に記載の抗ＣＤ１３７（例えば、ヒトＣＤ１３７またはカニクイザルＣＤ１３７）抗体は、蛍光標識を担持しても、これに共役されていてもよい。例示的な蛍光標識としては、例えば、反応性およびコンジュゲートプローブ、例えば、アミノクマリン、フルオレセイン、およびテキサスレッド、Ａｌｅｘａ  Ｆｌｕｏｒ色素、Ｃｙ色素およびＤｙＬｉｇｈｔ色素が挙げられる。抗ＣＤ１３７（例えば、ヒトＣＤ１３７またはカニクイザルＣＤ１３７）抗体は、アイソトープ３Ｈ、１４Ｃ、３２Ｐ、３５Ｓ、３６Ｃｌ、５１Ｃｒ、５７Ｃｏ、５８Ｃｏ、５９Ｆｅ、６７Ｃｕ、９０Ｙ、９９Ｔｃ、１１１Ｉｎ、１１７Ｌｕ、１２１Ｉ、１２４Ｉ、１２５Ｉ、１３１Ｉ、１９８Ａｕ、２１１Ａｔ、２１３Ｂｉ、２２５Ａｃおよび１８６Ｒｅなどの放射性標識または放射性核種を担持しても、これに共役されていてもよい。放射性標識が使用されるとき、当該技術分野で既知の現在利用可能な計数手順を利用して、抗ＣＤ１３７（例えば、ヒトＣＤ１３７またはカニクイザルＣＤ１３７）抗体のＣＤ１３７（例えば、ヒトＣＤ１３７またはカニクイザルＣＤ１３７）への特異的結合を特定および定量化してもよい。標識が酵素である場合には、検出は、当該技術分野において既知である現在利用される比色分析法、分光光度法、蛍光分光光度法、電流測定技法、または気体定量技術のいずれかによって達成され得る。これは、抗体とＣＤ１３７（例えば、ヒトＣＤ１３７またはカニクイザルＣＤ１３７）との間の複合体の形成を可能にする条件下で、試料または対照試料を抗ＣＤ１３７（例えば、ヒトＣＤ１３７またはカニクイザルＣＤ１３７）抗体と接触させることによって、達成することができる。抗体とＣＤ１３７（例えば、ヒトＣＤ１３７またはカニクイザルＣＤ１３７）との間に形成される任意の複合体は、試料および対照で検出され、比較される。ＣＤ１３７（例えば、ヒトＣＤ１３７またはカニクイザルＣＤ１３７）への本明細書に記載の抗体の特異的結合を考慮して、細胞表面上のＣＤ１３７（例えば、ヒトＣＤ１３７またはカニクイザルＣＤ１３���）発現を特異的に検出するために抗体を使用することができる。また、本明細書に記載の抗体を使用して、免疫親和性精製を介してＣＤ１３７（例えば、ヒトＣＤ１３７またはカニクイザルＣＤ１３７）を精製することもできる。例えばＣＤ１３７（例えば、ヒトＣＤ１３７またはカニクイザルＣＤ１３７）、またはＣＤ１３７（例えば、ヒトＣＤ１３７またはカニクイザルＣＤ１３７）／ＣＤ１３７（例えば、ヒトＣＤ１３７またはカニクイザルＣＤ１３７）リガンド複合体の存在の範囲を定量的に分析するための試験キット、またはキット部品の形態で調製され得るアッセイシステムもまた本明細書に含まれる。システム、試験キット、またはキット部品は、標識構成成分、例えば、標識抗体と、１つ以上の追加の免疫化学試薬とを含み得る。
【０２２４】
５．５  抗ＣＤ１３７抗体を産生するポリヌクレオチド、ベクター、および方法
別の態様では、ＣＤ１３７（例えば、ヒトＣＤ１３７またはカニクイザルＣＤ１３７）抗原に特異的に結合する本明細書に記載の抗体またはその断片（例えば、軽鎖可変領域および／または重鎖可変領域）をコードするヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチド、ならびにベクター、例えば、宿主細胞（例えば、Ｅ．ｃｏｌｉおよび哺乳類細胞）内での組み換え発現のためのそのようなポリヌクレオチドを含むベクターが本明細書に提供される。本明細書に提供される抗体のうちのいずれかの重鎖および／または軽鎖をコードするヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチド、ならびにそのようなポリヌクレオチド配列を含むベクター、例えば、宿主細胞、例えば、哺乳類細胞においてそれらを効率的に発現するのための発現ベクターが本明細書に提供される。
【０２２５】
本明細書で使用される場合、「単離された」ポリヌクレオチドまたは核酸分子は、核酸分子の天然源（例えば、マウスまたはヒト）に存在する他の核酸分子から分離されたものである。さらに、ｃＤＮＡ分子などの「単離された」核酸分子は、組み換え技法によって産生されるとき、他の細胞材料または培養培地を実質的に含み得ないか、または化学的に合成されるとき、化学的前駆体もしくは他の化学物質を実質的に含み得ない。例えば、「実質的に含まない」という用語は、約１５％、１０％、５％、２％、１％、０．５％、または０．１％未満（特に約１０％未満）の他の物質、例えば、細胞材料、培養培地、他の核酸分子、化学的前駆体、および／または他の化学物質を有するポリヌクレオチドまたは核酸分子の調製物を含む。具体的な一実施形態では、本明細書に記載の抗体をコードする核酸分子（複数可）は、単離または精製される。
【０２２６】
特定の態様では、ＣＤ１３７（例えば、ヒトＣＤ１３７またはカニクイザルＣＤ１３７）ポリペプチドに特異的に結合し、本明細書に記載のアミノ酸配列、ならびにＣＤ１３７（例えば、ヒトＣＤ１３７またはカニクイザルＣＤ１３７）ポリペプチドへの結合についてそのような抗体と（例えば、用量依存的様式で）競合するか、またはそのような抗体のものと同じエピトープに結合する、抗体をコードするヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチドが本明細書に提供される。
【０２２７】
ある特定の態様では、本明細書に記載の抗体の軽鎖または重鎖をコードするヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチドが本明細書に提供される。ポリヌクレオチドは、本明細書に記載の抗体のＶＬ  ＦＲおよびＣＤＲを含む軽鎖をコードするヌクレオチド配列（例えば表１参照）、または本明細書に記載の抗体のＶＨ  ＦＲおよびＣＤＲを含む重鎖をコードするヌクレオチド配列（例えば表１参照）を含み得る。
【０２２８】
例えば、コドン／ＲＮＡ最適化、異種シグナル配列での置換、およびｍＲＮＡ不安定性要素の排除によって最適化された抗ＣＤ１３７（例えば、ヒトＣＤ１３７またはカニクイザルＣＤ１３７）抗体をコードするポリヌクレオチドもまた本明細書に提供される。したがって、ｍＲＮＡにおいてコドン変化を導入することおよび／または阻害領域を排除することによって、組み換え発現のための抗ＣＤ１３７（例えば、ヒトＣＤ１３７またはカニクイザルＣＤ１３７）抗体またはその断片（例えば、軽鎖、重鎖、ＶＨ領域、またはＶＬ領域）をコードする最適化された核酸を生成する方法は、例えば、それらの全てが、参照によりそれらの全体が本明細書に組み込まれる、米国特許第５，９６５，７２６号、同第６，１７４，６６６号、同第６，２９１，６６４号、同第６，４１４，１３２号、および同第６，７９４，４９８号に記載の最適化方法を適応することによって実行することができる。例えば、ＲＮＡ内の潜在的なスプライス部位および不安定性要素（例えば、Ａ／ＴまたはＡ／Ｕの豊富な要素）は、組み換え発現のためのＲＮＡの安定性を増加させるために核酸配列によってコードされるアミノ酸を改変させずに変異することができる。改変は、例えば、同一のアミノ酸についての代替的なコドンを使用して、遺伝子コードの縮重を利用する。ある特定の実施形態では、１つ以上のコドンを改変して、保存的変異、例えば元のアミノ酸と同様の化学構造ならびに特性および／または機能を有する同様のアミノ酸をコードすることが望ましい場合がある。そのような方法は、抗ＣＤ１３７（例えば、ヒトＣＤ１３７またはカニクイザルＣＤ１３７）抗体またはその断片の発現を、最適化されていないポリヌクレオチドによってコードされる抗ＣＤ１３７（例えば、ヒトＣＤ１３７またはカニクイザルＣＤ１３７）抗体の発現と比較して、少なくとも１倍、２倍、３倍、４倍、５倍、１０倍、２０倍、３０倍、４０倍、５０倍、６０倍、７０倍、８０倍、９０倍、または１００倍以上増加させることができる。
【０２２９】
ある特定の実施形態では、本明細書に記載の抗ＣＤ１３７（例えば、ヒトＣＤ１３７またはカニクイザルＣＤ１３７）抗体またはその断片（例えば、ＶＬドメインおよび／またはＶＨドメイン）をコードする最適化されているたポリヌクレオチド配列は、本明細書に記載の抗ＣＤ１３７（例えば、ヒトＣＤ１３７またはカニクイザルＣＤ１３７）抗体またはその断片（例えば、ＶＬドメインおよび／またはＶＨドメイン）をコードする最適化されていないポリヌクレオチド配列のアンチセンス（例えば相補的）ポリヌクレオチドにハイブリダイズすることができる。具体的な実施形態では、本明細書に記載の抗ＣＤ１３７（例えば、ヒトＣＤ１３７またはカニクイザルＣＤ１３７）抗体または断片をコードする最適化されているヌクレオチド配列は、本明細書に記載の抗ＣＤ１３７（例えば、ヒトＣＤ１３７またはカニクイザルＣＤ１３７）抗体またはその断片をコードする最適化されていないポリヌクレオチド配列のアンチセンスポリヌクレオチドに高厳密性条件下でハイブリダイズする。具体的な一実施形態では、本明細書に記載の抗ＣＤ１３７（例えば、ヒトＣＤ１３７またはカニクイザルＣＤ１３７）抗体またはその断片をコードする最適化されているヌクレオチド配列は、本明細書に記載の抗ＣＤ１３７（例えば、ヒトＣＤ１３７またはカニクイザルＣＤ１３７）抗体またはその断片をコードする最適化されていないポリヌクレオチド配列のアンチセンスポリヌクレオチドに高厳密性、中厳密性、または低厳密性ハイブリダイゼーション条件下でハイブリダイズする。ハイブリダイゼーション条件に関する情報は記載されており、例えば、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる米国特許出願公開第２００５／００４８５４９号（例えば、段落７２〜７３）を参照されたい。
【０２３０】
当該技術分野で既知の任意の方法によって、ポリヌクレオチドが得られ、ポリヌクレオチドのヌクレオチド配列が決定され得る。本明細書に記載の抗体、例えば、表１に記載の抗体およびこれらの抗体の修飾バージョンをコードするヌクレオチド配列は、当該技術分野において周知である方法を使用して決定することができ、すなわち、特定のアミノ酸をコードすることが知られているヌクレオチドコドンは、その抗体をコードする核酸を生成するような方法でアセンブリされる。抗体をコードするそのようなポリヌクレオチドは、化学的に合成されたオリゴヌクレオチドから組み立てることができ（例えば、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる、Ｋｕｔｍｅｉｅｒ  Ｇ  ｅｔ  ａｌ．，（１９９４）、ＢｉｏＴｅｃｈｎｉｑｕｅｓ  １７：  ２４２−６に記載）、これは、要するに、抗体をコードする配列の部分を含有するオリゴヌクレオチドの重複、それらのオリゴヌクレオチドのアニーリングおよび連結、ならびに次いでＰＣＲによって連結されたオリゴヌクレオチドの増幅による合成に関与する。
【０２３１】
あるいは、本明細書に記載の抗体をコードするポリヌクレオチドは、当該技術分野で周知の方法（例えば、ＰＣＲおよび他の分子クローニング方法）を使用して、好適な供給源（例えば、ハイブリドーマ）由来の核酸から生成してもよい。例えば、既知の配列の３’および５’末端にハイブリダイズ可能な合成プライマーを使用したＰＣＲ増幅は、対象となる抗体を産生するハイブリドーマ細胞から得られるゲノムＤＮＡを使用して実行され得る。そのようなＰＣＲ増幅方法を使用して、抗体の軽鎖および／または重鎖をコードする配列を含む核酸を得ることができる。そのようなＰＣＲ増幅方法を使用して、抗体の可変軽鎖領域および／または可変重鎖領域をコードする配列を含む核酸を得ることができる。宿主細胞内での発現および更なるクローニングのために、増幅核酸をベクターにクローニングして、例えば、キメラ抗体およびヒト化抗体を生成することができる。
【０２３２】
特定の抗体をコードする核酸を含有するクローンは入手不可能であるが、その抗体分子の配列が既知である場合、免疫グロブリンをコードする核酸を化学的に合成するか、あるいは好適な供給源（例えば、抗体ｃＤＮＡライブラリ、または抗体を発現する任意の組織もしくは細胞（本明細書に記載の抗体を発現するように選択されたハイブリドーマ細胞など）から生成されたｃＤＮＡライブラリ、またはそれから単離された核酸、好ましくはポリＡ＋ＲＮＡ）から、例えば、抗体をコードするｃＤＮＡライブラリ由来のｃＤＮＡクローンを特定するために、その配列の３’および５’末端にハイブリダイズ可能な合成プライマーを使用したＰＣＲ増幅によって、またはその特定の遺伝子配列に特異的なオリゴヌクレオチドプローブを使用したクローニングによってまたは得ることができる。その後、ＰＣＲによって生成された増幅核酸は、当該技術分野において周知である任意の方法を使用して、複製可能なクローニングベクターにクリーニングされ得る。
【０２３３】
本明細書に記載の抗ＣＤ１３７（例えば、ヒトＣＤ１３７またはカニクイザルＣＤ１３７）抗体をコードするＤＮＡは、（例えば、抗ＣＤ１３７（例えば、ヒトＣＤ１３７またはカニクイザルＣＤ１３７）抗体）の重鎖および軽鎖をコードする遺伝子に特異的に結合することが可能なオリゴヌクレオチドプローブを使用することによる）従来の手順を使用して、容易に単離および配列決定することができる。ハイブリドーマ細胞は、そのようなＤＮＡの供給源として機能し得る。単離され次第、ＤＮＡを発現ベクター中に置き、次いで、これを、Ｅ．ｃｏｌｉ細胞、サルＣＯＳ細胞、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞（例えば、ＣＨＯ  ＧＳ  Ｓｙｓｔｅｍ（商標）（Ｌｏｎｚａ）からのＣＨＯ細胞）、または免疫グロブリンタンパク質を産生しない骨髄腫細胞などの宿主細胞にトランスフェクトさせて、組み換え宿主細胞中で抗ＣＤ１３７（例えば、ヒトＣＤ１３７またはカニクイザルＣＤ１３７）抗体の合成を得ることができる。
【０２３４】
全抗体を生成するために、ＶＨまたはＶＬヌクレオチド配列、制限部位、および制限部位を保護するための隣接配列を含むＰＣＲプライマーを使用して、ｓｃＦｖクローンのＶＨまたはＶＬ配列を増幅することができる。当業者にとって既知であるクローニング技術を利用して、ＰＣＲ増幅ＶＨドメインは、重鎖定常領域、例えば、ヒトガンマ４定常領域を発現するベクターにクローニングすることができ、ＰＣＲ増幅ＶＬドメインは、軽鎖定常領域、例えば、ヒトカッパまたはラムダ定常領域を発現するベクターにクローニングすることができる。ある特定の実施形態では、ＶＨまたはＶＬドメインを発現させるためのベクターは、ＥＦ−１αプロモーター、分泌シグナル、可変領域に対するクローニング部位、定常ドメイン、および選択マーカー（ネオマイシンなど）を含む。ＶＨおよびＶＬドメインはまた、必要な定常領域を発現する１つのベクターにクローニングすることもできる。その後、重鎖変換ベクターおよび軽鎖変換ベクターは、当業者に既知の技術を使用して、完全長抗体、例えば、ＩｇＧを発現する、安定した細胞株または一過性型細胞株を生成するように細胞株に同時トランスフェクトされる。
【０２３５】
例えば、マウス配列に代わってヒト重鎖および軽鎖定常ドメインのコード配列を置換することによって、または免疫グロブリンコード配列に非免疫グロブリンポリペプチドのコード配列の全てまたは一部を共有結合させることによって、ＤＮＡを修飾することもできる。
【０２３６】
本明細書に記載の抗体をコードするポリヌクレオチドに高厳密性、中厳密性、または低厳密性ハイブリダイゼーション条件下でハイブリダイズするポリヌクレオチドもまた提供される。具体的な実施形態では、本明細書に記載のポリヌクレオチドは、本明細書に提供されるＶＨドメインおよび／またはＶＬドメインをコードするポリヌクレオチドに高厳密性、中厳密性、または低厳密性ハイブリダイゼーション条件下でハイブリダイズする。
【０２３７】
ハイブリダイゼーション条件は、当該技術分野に記載されており、当業者に既知である。例えば、ストリンジェント条件下でのハイブリダイゼーションは、約４５℃で６×塩化ナトリウム／クエン酸ナトリウム（ＳＳＣ）中でのフィルター結合ＤＮＡとのハイブリダイゼーション、続いて、約５０〜６５℃で０．２×ＳＳＣ／０．１％ＳＤＳ中の１回以上の洗浄に関与し得、高ストリンジェント条件下でのハイブリダイゼーションは、約４５℃で６×ＳＳＣ中でのフィルター結合核酸とのハイブリダイゼーション、続いて、約６８℃で０．１×ＳＳＣ／０．２％ＳＤＳ中の１回以上の洗浄に関与し得る。他のストリンジェントハイブリダイゼーション条件下でのハイブリダイゼーションは、当業者に既知であり、記載されており、例えば、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる、Ａｕｓｕｂｅｌ  ＦＭ  ｅｔ  ａｌ．，ｅｄｓ．，（１９８９）Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｖｏｌ．Ｉ，Ｇｒｅｅｎ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ａｓｓｏｃｉａｔｅｓ，Ｉｎｃ．ａｎｄ  Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ＆Ｓｏｎｓ，Ｉｎｃ．，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ  ａｔ  ｐａｇｅｓ  ６．３．１−６．３．６  ａｎｄ  ２．１０．３を参照されたい。
【０２３８】
ある特定の態様では、ＣＤ１３７（例えば、ヒトＣＤ１３７またはカニクイザルＣＤ１３７）および関連するポリヌクレオチド、ならびに発現ベクターに特異的に結合する、本明細書に記載の抗体を（例えば、組み換えによって）発現する細胞（例えば、宿主細胞）が本明細書に提供される。宿主細胞、好ましくは哺乳類細胞（例えばＣＨＯ細胞）内での組み換え発現のための抗ＣＤ１３７（例えば、ヒトＣＤ１３７またはカニクイザルＣＤ１３７）抗体または断片をコードするヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチドを含むベクター（例えば、発現ベクター）が本明細書に提供される。本明細書に記載の抗ＣＤ１３７（例えば、ヒトＣＤ１３７またはカニクイザルＣＤ１３７）抗体）（例えばヒトまたはヒト化抗体）を組み換え発現させるためのそのようなベクターを含む宿主細胞もまた本明細書に提供される。特定の一態様では、本明細書に記載の抗体を産生するための方法であって、宿主細胞からそのような抗体を発現させることを含む、方法が本明細書に提供される。
【０２３９】
ＣＤ１３７（例えば、ヒトＣＤ１３７またはカニクイザルＣＤ１３７）に特異的に結合する本明細書に記載の抗体（例えば、本明細書に記載の完全長抗体、抗体の重鎖および／もしくは軽鎖、または一本鎖抗体）の組み換え発現は一般に、その抗体をコードするポリヌクレオチドを含有する発現ベクターの構築に関与する。本明細書に記載の抗体分子をコードするポリヌクレオチド、抗体の重鎖および／もしくは軽鎖、またはその断片（例えば、重鎖および／もしくは軽鎖可変領域）が得られた後、抗体分子の産生のためのベクターが、当該技術分野において周知である技術を使用して組み換えＤＮＡ技術によって産生され得る。したがって、ヌクレオチド配列をコードする抗体または抗体断片（例えば、軽鎖または重鎖）を含有するポリヌクレオチドを発現させることによって、タンパク質を調製するための方法が本明細書に記載されている。当業者にとって周知である方法を使用して、配列をコードする抗体または抗体断片（例えば、軽鎖もしくは重鎖）ならびに適切な転写および翻訳制御シグナルを含有する発現ベクターを構築することができる。これらの方法としては、例えば、インビトロ組み換えＤＮＡ技法、合成技法、およびインビボ遺伝子組み換えが挙げられる。プロモーターに作動可能に結合された、本明細書に記載の抗体分子、抗体の重鎖もしくは軽鎖、抗体もしくはその断片の重鎖もしくは軽鎖可変領域、または重鎖もしくは軽鎖ＣＤＲをコードするヌクレオチド配列を含む、複製可能なベクターもまた提供される。そのようなベクターは、例えば、抗体分子の定常領域をコードするヌクレオチド配列（例えば、参照によりそれらの全体が本明細書に組み込まれる、国際公開第ＷＯ８６／０５８０７号、および同第ＷＯ８９／０１０３６号、ならびに米国特許第５，１２２，４６４号参照）を挙げることができ、抗体の可変領域は、重鎖全体、軽鎖全体、または重鎖全体および軽鎖全体の両方の発現のためのそのようなベクターにクローニングすることができる。
【０２４０】
発現ベクターは、従来の技法によって細胞（例えば、宿主細胞）に導入されてもよく、次いで得られる細胞を従来の技法によって培養して、本明細書に記載の抗体またはその断片を産生することができる。したがって、宿主細胞内でのそのような配列の発現のためにプロモーターに作動可能に結合された、本明細書に記載の抗体もしくはその断片、あるいはその重鎖もしくは軽鎖またはその断片、あるいは本明細書に記載の一本鎖抗体をコードするポリヌクレオチドを含有する、宿主細胞が本明細書に提供される。ある特定の実施形態では、二本鎖抗体の発現のために、重鎖および軽鎖の両方をコードするベクターを宿主細胞内で同時発現させて、個別に、以下に詳述される全免疫グロブリン分子の発現させることができる。ある特定の実施形態では、宿主細胞は、本明細書に記載の抗体、またはその断片の重鎖および軽鎖の両方をコードするポリヌクレオチドを含むベクターを含有する。具体的な実施形態では、宿主細胞は、２つの異なるベクターを含有し、第１のベクターは、本明細書に記載の抗体またはその断片の重鎖または重鎖可変領域をコードするポリヌクレオチドを含み、第２のベクターは、本明細書に記載の抗体またはその断片の軽鎖または軽鎖可変領域をコードするポリヌクレオチドを含む。他の実施形態では、第１の宿主細胞は、本明細書に記載の抗体またはその断片の重鎖または重鎖可変領域をコードするポリヌクレオチドを含む第１のベクターを含み、第２の宿主細胞は、本明細書に記載の抗体またはその断片の軽鎖または軽鎖可変領域をコードするポリヌクレオチドを含む第２のベクターを含む。具体的な実施形態では、重鎖／重鎖可変領域は、第２の細胞の軽鎖／軽鎖可変領域と会合した第１の細胞によって発現して、本明細書に記載の抗ＣＤ１３７（ヒトＣＤ１３７またはカニクイザルＣＤ１３７）抗体を形成した。ある特定の実施形態では、そのような第１の宿主細胞およびそのような第２の宿主細胞を含む宿主細胞の集団が本明細書に提供される。
【０２４１】
特定の実施形態で、本明細書に記載の抗ＣＤ１３７（例えば、ヒトＣＤ１３７またはカニクイザルＣＤ１３７）抗体の軽鎖／軽鎖可変領域をコードするポリヌクレオチドを含む第１のベクターと、本明細書に記載の抗ＣＤ１３７（例えば、ヒトＣＤ１３７またはカニクイザルＣＤ１３７）抗体の重鎖／重鎖可変領域をコードするポリヌクレオチドを含む第２のベクターと、を含む、ベクターの集団が本明細書に提供される。
【０２４２】
種々の宿主−発現ベクター系を利用して、本明細書に記載の抗体分子を発現することができる（例えば、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる、米国特許第５，８０７，７１５号を参照されたい）。そのような宿主発現系は、対象となるコード配列を産生およびその後精製することができるビヒクルであるが、適切なヌクレオチドコード配列で形質転換またはトランスフェクトされた場合に、原位置で本明細書に記載の抗体分子を発現し得る細胞でもある。これらには、抗体コード配列を含有する組み換えバクテリオファージＤＮＡ、プラスミドＤＮＡ、もしくはコスミドＤＮＡ発現ベクターで形質転換された細菌などの微生物（例えば、Ｅ．ｃｏｌｉおよびＢ．ｓｕｂｔｉｌｉｓ）；抗体コード配列を含有する組み換え酵母発現ベクターで形質転換された酵母（例えば、Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ  Ｐｉｃｈｉａ）；抗体コード配列を含有する組み換えウイルス発現ベクター（例えば、バキュロウイルス）に感染した昆虫細胞系；抗体コード配列を含有する組み換えウイルス発現ベクター（例えば、カリフラワーモザイクウイルス（ＣａＭＶ）、タバコモザイクウイルス（ＴＭＶ））に感染しているか、もしくは組み換えプラスミド発現ベクター（例えば、Ｔｉプラスミド）で形質転換された植物細胞系（例えば、Ｃｈｌａｍｙｄｏｍｏｎａｓ  ｒｅｉｎｈａｒｄｔｉｉなどの緑藻類）；または哺乳類細胞のゲノム由来のプロモーター（例えば、メタロチオネインプロモーター）もしくは哺乳動物ウイルス由来のプロモーター（例えば、アデノウイルス後期プロモーター、ワクシニアウイルス７．５Ｋプロモーター）を含有する組み換え発現構築物を有する哺乳類細胞系（例えば、ＣＯＳ（例えば、ＣＯＳ１もしくはＣＯＳ）、ＣＨＯ、ＢＨＫ、ＭＤＣＫ、ＨＥＫ２９３、ＮＳ０、ＰＥＲ．Ｃ６、ＶＥＲＯ、ＣＲＬ７Ｏ３Ｏ、ＨｓＳ７８Ｂｓｔ、ＨｅＬａ、およびＮＩＨ３Ｔ３、ＨＥＫ−２９３Ｔ、ＨｅｐＧ２、ＳＰ２１０、Ｒ１．１、Ｂ−Ｗ、Ｌ−Ｍ、ＢＳＣ１、ＢＳＣ４０、ＹＢ／２０、およびＢＭＴ１０細胞）が含まれるが、これらに限定されない。具体的な一実施形態では、本明細書に記載の抗体を発現するための細胞は、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞、例えば、ＣＨＯ  ＧＳ  Ｓｙｓｔｅｍ（商標）（Ｌｏｎｚａ）からのＣＨＯ細胞である。ある特定の実施形態では、ＣＨＯ細胞によって産生された抗体の重鎖および／または軽鎖は、Ｎ末端グルタミンまたはピログルタミン酸によって置換されたグルタミン酸残基を有し得る。特定の一実施形態では、本明細書に記載の抗体を発現させるための細胞は、ヒト細胞、例えば、ヒト細胞株である。具体的な実施形態では、哺乳類発現ベクターは、ｐＯｐｔｉＶＥＣ（商標）またはｐｃＤＮＡ３．３である。特定の一実施形態では、Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ  ｃｏｌｉなどの細菌細胞、または特に全組み換え抗体分子の発現のための真核細胞（例えば、哺乳類細胞）が、組み換え抗体分子の発現に使用される。例えば、ヒトサイトメガロウイルス由来の主要な中間初期遺伝子プロモーターエレメントなどのベクターと組み合わせたＣＨＯ細胞などの哺乳類細胞は、抗体の効果的な発現系である（Ｆｏｅｃｋｉｎｇ  ＭＫ＆Ｈｏｆｓｔｅｔｔｅｒ  Ｈ（１９���６）Ｇｅｎｅ  ４５：  １０１−５、およびＣｏｃｋｅｔｔ  ＭＩ  ｅｔ  ａｌ．，（１９９０）Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  ８（７）：  ６６２−７、その各々は参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）。ある特定の実施形態では、本明細書に記載の抗体は、ＣＨＯ細胞またはＮＳ０細胞によって産生される。具体的な一実施形態では、ＣＤ１３７（例えば、ヒトＣＤ１３７またはカニクイザルＣＤ１３７）に特異的に結合する本明細書に記載の抗体をコードするヌクレオチド配列の発現は、構成的プロモーター、誘導性プロモーター、または組織特異的プロモーターにより調節されている。
【０２４３】
細菌系では、抗体分子を発現させることを意図した使用に応じて、多くの発現ベクターを有利に選択することができる。例えば、抗体分子の薬学的組成物の生成のために、大量のそのような抗体が産生される場合、容易に精製される高レベルの融合タンパク質産物の発現を指向するベクターが望ましくあり得る。そのようなベクターとしては、限定されないが、Ｅ．ｃｏｌｉ発現ベクターｐＵＲ２７８（Ｒｕｅｔｈｅｒ  Ｕ＆Ｍｕｅｌｌｅｒ−Ｈｉｌｌ  Ｂ（１９８３）ＥＭＢＯ  Ｊ２：  １７９１−１７９４）が挙げられ、これは、融合タンパク質が産生されるように、配列をコードする抗体が、ｌａｃＺをコードする領域を有するフレームのベクターに個々に連結することができる（ｐＩＮ  ｖｅｃｔｏｒｓ（Ｉｎｏｕｙｅ  Ｓ＆Ｉｎｏｕｙｅ  Ｍ（１９８５）Ｎｕｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ１３：  ３１０１−３１０９、Ｖａｎ  Ｈｅｅｋｅ  Ｇ＆Ｓｃｈｕｓｔｅｒ  ＳＭ（１９８９）Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ  ２４：  ５５０３−５５０９）など、それらの全てが、参照によりそれらの全体が本明細書に組み込まれる）。例えば、ｐＧＥＸベクターはまた、グルタチオン５−トランスフェラーゼ（ＧＳＴ）との融合タンパク質として外来性ポリペプチドを発現するために使用することもできる。一般に、そのような融合タンパク質は、可溶性であり、マトリックスグルタチオンアガロースビーズへの吸着および結合、続いて遊離グルタチオンの存在下での溶出により、溶解した細胞から容易に精製することができる。ｐＧＥＸベクターは、クローニングされた標的遺伝子産物がＧＳＴ部分から放出され得るように、トロンビンまたはＸａ因子プロテアーゼ切断部位を含むように設計されている。
【０２４４】
昆虫系では、例えば、Ａｕｔｏｇｒａｐｈａ  ｃａｌｉｆｏｒｎｉｃａ核多角体病ウイルス（ＡｃＮＰＶ）が、外来遺伝子を発現するためのベクターとして使用することができる。ウイルスは、Ｓｐｏｄｏｐｔｅｒａ  ｆｒｕｇｉｐｅｒｄａ細胞中で成長する。抗体コード配列は、ウイルスの非必須領域（例えば、ポリヘドリン遺伝子）内に個々にクローニングされ、ＡｃＮＰＶプロモーター（例えば、ポリヘドリンプロモーター）の制御下に置かれ得る。
【０２４５】
哺乳類宿主細胞では、いくつかのウイルスベースの発現系を利用することができる。アデノウイルスが発現ベクターとして使用される場合、対象となる抗体コード配列は、アデノウイルス転写／翻訳制御複合体、例えば、後期プロモーターおよび三者間リーダー配列に連結され得る。次いで、このキメラ遺伝子は、インビトロまたはインビボ組み換えによってアデノウイルスゲノムに挿入され得る。ウイルスゲノムの非必須領域（例えば、領域ＥｌまたはＥ３）中への挿入により、感染した宿主内で生存可能であり、抗体分子を発現することが可能な組み換えウイルスが得られるであろう（例えば、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる、Ｌｏｇａｎ  Ｊ＆Ｓｈｅｎｋ  Ｔ（１９８４）ＰＮＡＳ８１（１２）：  ３６５５−９を参照されたい）。特異的開始シグナルはまた、挿入された抗体コード配列の効率的な翻訳に必要とされ得る。これらのシグナルは、ＡＴＧ開始コドンおよび隣接配列を含む。さらに、開始コドンは、全挿入の翻訳を確実にするように、所望のコード配列のリーディングフレームと一致しなければならない。これらの外因性の翻訳制御シグナルおよび開始コドンは、天然および合成の両方の、種々の起源のものであり得る。発現の効率は、適切な転写エンハンサー要素、転写ターミネーターなどの包含によって向上することができる（例えば、その全体が参照により本明細書に組み込まれる、Ｂｉｔｔｅｒ  Ｇ  ｅｔ  ａｌ．，（１９８７）Ｍｅｔｈｏｄｓ  Ｅｎｚｙｍｏｌ．１５３：５１６−５４４を参照されたい）。
【０２４６】
加えて、挿入された配列の発現を調節するか、または所望の特異的な形で遺伝子産物を修飾およびプロセシングする宿主細胞株を選択することができる。タンパク質産物のそのような修飾（例えば、グリコシル化）およびプロセシング（例えば、切断）は、タンパク質の機能に重要であり得る。異なる宿主細胞は、タンパク質および遺伝子産物の翻訳後のプロセシングおよび修飾に対する独特かつ特異的な機構を有する。適切な細胞株または宿主系を、発現した外来タンパク質の正しい修飾およびプロセシングを確実にするために選択することができる。この目的を達成するために、遺伝子産物の一次転写物の適当なプロセシング、グリコシル化、およびリン酸化のための細胞の機構を有する真核生物の宿主細胞を使用することができる。そのような哺乳類宿主細胞としては、ＣＨＯ、ＶＥＲＯ、ＢＨＫ、Ｈｅｌａ、ＭＤＣＫ、ＨＥＫ２９３、ＮＩＨ３Ｔ３、Ｗ１３８、ＢＴ４８３、Ｈｓ５７８Ｔ、ＨＴＢ２、ＢＴ２Ｏ、およびＴ４７Ｄ、ＮＳ０（任意の免疫グロブリン鎖を内因的に産生しないマウス骨髄腫細胞株）、ＣＲＬ７Ｏ３Ｏ、ＣＯＳ（例えば、ＣＯＳ１またはＣＯＳ）、ＰＥＲ．Ｃ６、ＶＥＲＯ、ＨｓＳ７８Ｂｓｔ、ＨＥＫ−２９３Ｔ、ＨｅｐＧ２、ＳＰ２１０、Ｒ１．１、Ｂ−Ｗ、Ｌ−Ｍ、ＢＳＣ１、ＢＳＣ４０、ＹＢ／２０、ＢＭＴ１０、およびＨｓＳ７８Ｂｓｔ細胞が挙げられるが、これらに限定されない。ある特定の実施形態では、本明細書に記載の抗ＣＤ１３７（例えば、ヒトＣＤ１３７またはカニクイザルＣＤ１３７）抗体は、ＣＨＯ細胞などの哺乳類細胞で産生される。
【０２４７】
具体的な一実施形態では、本明細書に記載の抗体は、フコース含有量が低減しているか、または一切のフコース含有量を有しない。そのような抗体は、当業者にとって既知である技法を使用して産生され得る。例えば、抗体は、フコシル化の能力が欠損または欠如している細胞内で発現され得る。具体的な一例では、α１，６−フコシルトランスフェラーゼの両方の対立遺伝子のノックアウトを有する細胞株は、低減したフコース含量を有する抗体を産生するために使用することができる。Ｐｏｔｅｌｌｉｇｅｎｔ（登録商標）系（Ｌｏｎｚａ）は、フコース含量が低減された抗体を産生するために使用することができるような系の一例である。
【０２４８】
組み換えタンパク質の長期的で高収率な産生では、安定した発現細胞を生成することができる。例えば、本明細書に記載の抗ＣＤ１３７（例えば、ヒトＣＤ１３７またはカニクイザルＣＤ１３７）抗体を安定的に発現する細胞株を操作することができる。具体的な実施形態では、本明細書に提供される細胞は、会合して本明細書に記載の抗体を形成する軽鎖／軽鎖可変領域および重鎖／重鎖可変領域を安定的に発現する。
【０２４９】
ある特定の態様では、ウイルスの複製起源を含有する発現ベクターを使用するよりもむしろ、宿主細胞を、適切な発現制御要素（例えば、プロモーター、エンハンサー、配列、転写ターミネーター、ポリアデニル化部位など）によって制御されたＤＮＡ、および選択可能なマーカーで形質転換することができる。外来ＤＮＡ／ポリヌクレオチドの導入後、操作された細胞は、濃縮養培地中で１〜２日間成長させることができ、次いで選択培地に交換される。組み換えプラスミド内の選択可能なマーカーは、選択への耐性を付与し、細胞が、その染色体中にプラスミドを安定して組み込み、焦点（これは、次にクローニングし、細胞株に拡大することができる）を形成するように成長することを可能にする。この方法を有利に使用して、本明細書に記載の抗ＣＤ１３７（例えば、ヒトＣＤ１３７またはカニクイザルＣＤ１３７）抗体またはその断片を発現する細胞株を操作することができる。そのような操作された細胞株は、抗体分子と直接的または間接的に相互作用する組成物のスクリーニングおよび評価において特に有用であり得る。
【０２５０】
限定されないが、単純ヘルペスウイルスチミジンキナーゼ（Ｗｉｇｌｅｒ  Ｍ  ｅｔ  ａｌ．，（１９７７）Ｃｅｌｌ  １１（１）：２２３−３２）、ヒポキサンチングアニンホスホリボシルトランスフェラーゼ（Ｓｚｙｂａｌｓｋａ  ＥＨ＆Ｓｚｙｂａｌｓｋｉ  Ｗ（１９６２）ＰＮＡＳ  ４８（１２）：２０２６−２０３４）、およびアデニンホスホリボシルトランスフェラーゼ（Ｌｏｗｙ  Ｉ  ｅｔ  ａｌ．，（１９８０）Ｃｅｌｌ  ２２（３）：８１７−２３）ｔｋ−、ｈｇｐｒｔ−またはａｐｒｔ−細胞中のそれぞれの遺伝子を含む、多数の系を選択して使用することができ、それらの全てが、参照によりそれらの全体が本明細書に組み込まれる。また、代謝拮抗物質耐性を、以下の遺伝子の選択の基準として使用することができる：メトトレキサートへの耐性を与えるｄｈｆｒ（Ｗｉｇｌｅｒ  Ｍ  ｅｔ  ａｌ．，（１９８０）ＰＮＡＳ  ７７（６）：３５６７−７０、Ｏ’Ｈａｒｅ  Ｋ  ｅｔ  ａｌ．，（１９８１）ＰＮＡＳ  ７８：１５２７−３１）、ミコフェノール酸への耐性を与えるｇｐｔ（Ｍｕｌｌｉｇａｎ  ＲＣ＆Ｂｅｒｇ  Ｐ（１９８１）ＰＮＡＳ  ７８（４）：２０７２−６）、アミノグリコシドＧ−４１８への耐性を与えるｎｅｏ（Ｗｕ  ＧＹ＆Ｗｕ  ＣＨ（１９９１）Ｂｉｏｔｈｅｒａｐｙ  ３：８７−９５、Ｔｏｌｓｔｏｓｈｅｖ  Ｐ（１９９３）Ａｎｎ  Ｒｅｖ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌ  Ｔｏｘｉｃｏｌ  ３２：５７３−５９６、Ｍｕｌｌｉｇａｎ  ＲＣ（１９９３）Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２６０：９２６−９３２、およびＭｏｒｇａｎ  ＲＡ＆Ａｎｄｅｒｓｏｎ  ＷＦ（１９９３）Ａｎｎ  Ｒｅｖ  Ｂｉｏｃｈｅｍ  ６２：１９１−２１７、Ｎａｂｅｌ  ＧＪ＆Ｆｅｉｇｎｅｒ  ＰＬ（１９９３）Ｔｒｅｎｄｓ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ  １１（５）：  ２１１−５）、およびハイグロマイシンへの耐性を与えるｈｙｇｒｏ（Ｓａｎｔｅｒｒｅ  ＲＦ  ｅｔ  ａｌ．，（１９８４）Ｇｅｎｅ  ３０（１−３）：１４７−５６）（それらの全てが、参照によりそれらの全体が本明細書に組み込まれる）。組み換えＤＮＡ技術の当該技術分野で一般に知られている方法は、所望の組み換えクローンを選択するために日常的に適用することができ、かかる方法は、例えば、Ａｕｓｕｂｅｌ  ＦＭ  ｅｔ  ａｌ．，（ｅｄｓ．），Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ＆Ｓｏｎｓ，ＮＹ（１９９３）、Ｋｒｉｅｇｌｅｒ  Ｍ，Ｇｅｎｅ  Ｔｒａｎｓｆｅｒ  ａｎｄ  Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ，Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，Ｓｔｏｃｋｔｏｎ  Ｐｒｅｓｓ，ＮＹ（１９９０）、ならびにＤｒａｃｏｐｏｌｉ  ＮＣ  ｅｔ  ａｌ．，（ｅｄｓ．），Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｈｕｍａｎ  Ｇｅｎｅｔｉｃｓ，  ｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ＆Ｓｏｎｓ，ＮＹ（１９９４）の第１２章および１３章、Ｃｏｌｂｅｒｅ−Ｇａｒａｐｉｎ  Ｆ  ｅｔ  ａｌ．，（１９８１）Ｊ  Ｍｏｌ  Ｂｉｏｌ  １５０：１−１４に記載されており、これらの全ては、それらの全体が参照により本明細書に組み込まれる。
【０２５１】
抗体の発現レベルは、ベクター増幅によって増加させることができる（概説としては、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる、Ｂｅｂｂｉｎｇｔｏｎ  ＣＲ＆Ｈｅｎｔｓｃｈｅｌ  ＣＣＧ，Ｔｈｅ  ｕｓｅ  ｏｆ  ｖｅｃｔｏｒｓ  ｂａｓｅｄ  ｏｎ  ｇｅｎｅ  ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ  ｆｏｒ  ｔｈｅ  ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  ｏｆ  ｃｌｏｎｅｄ  ｇｅｎｅｓ  ｉｎ  ｍａｍｍａｌｉａｎ  ｃｅｌｌｓ  ｉｎ  ＤＮＡ  ｃｌｏｎｉｎｇ，Ｖｏｌ．Ｖｏｌ．３（Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，１９８７）を参照されたい）。抗体を発現するベクター系におけるマーカーが増幅可能である場合、宿主細胞の培養物中に存在する阻害剤のレベルの増加は、マーカー遺伝子のコピー数を増加させる。増幅された領域が抗体遺伝子と関連するので、抗体の産生も増加するであろう（Ｃｒｏｕｓｅ  ＧＦ  ｅｔ  ａｌ．，（１９８３）Ｍｏｌ  Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌ  ３：２５７−６６（参照によりその全体が本明細書に組み込まれる））。
【０２５２】
宿主細胞は、本明細書に記載の２つ以上の発現ベクター、すなわち重鎖由来のポリペプチドをコードする第１のベクター、および軽鎖由来のポリペプチドをコードする第２のベクターでコトランスフェクトすることができる。２つのベクターは、重鎖および軽鎖ポリペプチドの等しい発現を可能にする同一の選択可能なマーカーを含有し得る。宿主細胞は、異なる量の２つ以上の発現ベクターで同時トランスフェクトされ得る。例えば、宿主細胞は、以下の、約１：１、１：２、１：３、１：４、１：５、１：６、１：７、１：８、１：９、１：１０、１：１２、１：１５、１：２０、１：２５、１：３０、１：３５、１：４０、１：４５、または１：５０のうちのいずれか１つの、第１の発現ベクターと第２の発現ベクターとの比でトランスフェクトすることができる。
【０２５３】
あるいは、重鎖および軽鎖ポリペプチドの両方をコードし、発現することが可能な単一ベクターを使用してもよい。そのような状況では、軽鎖を重鎖の前に置いて、過剰な毒性のない重鎖を回避するべきである（Ｐｒｏｕｄｆｏｏｔ  ＮＪ（１９８６）Ｎａｔｕｒｅ  ３２２：５６２−５６５、およびＫｏｈｌｅｒ  Ｇ（１９８０）ＰＮＡＳ  ７７：２１９７−２１９９、その各々は参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）。重鎖および軽鎖のコード配列は、ｃＤＮＡまたはゲノムＤＮＡを含み得る。発現ベクターは、モノシストロン性またはマルチシストロン性であり得る。マルチシストロン性核酸構築物は、２、３、４、５、６、７、８、９、１０個以上の遺伝子／ヌクレオチド配列、または２〜５、５〜１０、もしくは１０〜２０個の遺伝子／ヌクレオチド配列の範囲内でコードすることができる。例えば、２シストロン性核酸構築物は、以下の順序で、プロモーター、第１の遺伝子（例えば、本明細書に記載の抗体の重鎖）、および第２の遺伝子（例えば、本明細書に記載の抗体の軽鎖）を含むことができる。かかる発現ベクターでは、両方の遺伝子の転写がプロモーターによって駆動され得る一方で、第１の遺伝子由来のｍＲＮＡの翻訳は、キャップ依存的走査機構によるものであり得、第２の遺伝子由来のｍＲＮＡの翻訳は、例えば、ＩＲＥＳによるキャップ非依存的機構によるものであり得る。
【０２５４】
本明細書に記載の抗体分子が組み換え発現によって産生され次第、それは、免疫グロブリン分子の精製のための当該技術分野で既知の任意の方法によって、例えば、クロマトグラフィー（例えば、イオン交換、親和性、特にタンパク質Ａの後の特異的抗原に対する親和性、およびサイズカラムクロマトグラフィー）、遠心分離、吸収率較差溶解度によって、またはタンパク質の精製のための任意の他の標準的な技法によって精製することができる。さらに、本明細書に記載の抗体を、本明細書に記載されるか、または当該技術分野において別様に既知である異種ポリペプチド配列に融合させて、精製を促進することができる。
【０２５５】
具体的な実施形態では、本明細書に記載の抗体は、単離または精製される。一般に、単離された抗体は、単離された抗体とは異なる抗原特異性を有する他の抗体を実質的に含まないものである。例えば、特定の一実施形態では、本明細書に記載の抗体の調製物は、細胞材料および／または化学的前駆体を実質的に含まない。「細胞材料を実質的に含まない」という用語は、抗体が単離または組み換え産生される細胞の細胞構成成分から抗体が分離される、抗体の調製物を含む。したがって、細胞材料を実質的に含まない抗体は、（乾燥重量によって）約３０％、２０％、１０％、５％、２％、１％、０．５％、または０．１％未満の抗体の異種タンパク質（本明細書では「混入タンパク質」とも称される）および／またはバリアント、例えば、異なる翻訳後修飾形態の抗体または抗体の他の異なるバージョン（例えば、抗体断片）を有する、抗体の調製物を含む。抗体が組み換え産生される場合、それはまた一般に、培養培地を実質的に含まず、すなわち、培養培地は、タンパク質調製物の体積の約２０％、１０％、２％、１％、０．５％、または０．１％未満である。抗体が化学的合成によって産生される場合、それは一般に、化学的前駆体または他の化学物質を実質的に含まず、すなわち、それは、タンパク質の合成に関与する化学的前駆体または他の化学物質から分離される。したがって、抗体のかかる調製物は、約３０％、２０％、１０％、または５％（乾燥重量で）未満の化学的前駆体または対象となる抗体以外の化合物を有する。具体的な一実施形態では、本明細書に記載の抗体は、単離または精製される。
【０２５６】
ＣＤ１３７（例えば、ヒトＣＤ１３７またはカニクイザルＣＤ１３７）に特異的に結合する抗体またはその断片は、抗体の合成のための当該技術分野で既知の任意の方法によって、例えば、化学的合成によって、または組み換え発現技法によって産生することができる。本明細書に記載の方法は、特に明記しない限り、分子生物学、微生物学、遺伝分析、組み換えＤＮＡ、有機化学、生化学、ＰＣＲ、オリゴヌクレオチド合成および修飾、核酸ハイブリダイゼーション、ならびに当該技術分野の範囲内である関連分野における従来の技法を用いる。これらの技法は、本明細書で引用される参考文献に記載され、その文献で詳細に説明されている。例えば、Ｍａｎｉａｔｉｓ  Ｔ  ｅｔ  ａｌ．，（１９８２）Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ：  Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ、Ｓａｍｂｒｏｏｋ  Ｊ  ｅｔ  ａｌ．，（１９８９），Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，Ｓｅｃｏｎｄ  Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ、Ｓａｍｂｒｏｏｋ  Ｊ  ｅｔ  ａｌ．，（２００１）Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ：  Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ，ＮＹ、Ａｕｓｕｂｅｌ  ＦＭ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ＆Ｓｏｎｓ（１９８７および年次更新）、Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ＆Ｓｏｎｓ（１９８７および年次更新）Ｇａｉｔ（ｅｄ．）（１９８４）Ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ：  Ａ  Ｐｒａｃｔｉｃａｌ  Ａｐｐｒｏａｃｈ，  ＩＲＬ  Ｐｒｅｓｓ、Ｅｃｋｓｔｅｉｎ（ｅｄ．）（１９９１）Ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓ  ａｎｄ  Ａｎａｌｏｇｕｅｓ：Ａ  Ｐｒａｃｔｉｃａｌ  Ａｐｐｒｏａｃｈ，ＩＲＬ  Ｐｒｅｓｓ、Ｂｉｒｒｅｎ  Ｂ  ｅｔ  ａｌ．，（ｅｄｓ．）（１９９９）Ｇｅｎｏｍｅ  Ａｎａｌｙｓｉｓ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ（それらの全てが、参照によりそれらの全体が本明細書に組み込まれる）を参照されたい。
【０２５７】
具体的な一実施形態では、本明細書に記載の抗体は、例えば、合成、ＤＮＡ配列の遺伝子操作を介した作製に関与する任意の手段によって調製、発現、作製、または単離された抗体（例えば、組み換え抗体）である。ある特定の実施形態では、そのような抗体は、インビボで動物または哺乳動物（例えば、ヒト）の抗体生殖系列レパートリー内で天然に存在しない配列（例えば、ＤＮＡ配列またはアミノ酸配列）を含む。
【０２５８】
一態様では、本明細書に記載の細胞または宿主細胞を培養することを含む、ＣＤ１３７（例えば、ヒトＣＤ１３７またはカニクイザルＣＤ１３７）に特異的に結合する抗体を作製する方法が本明細書に提供される。一実施形態では、方法は、インビトロで実施される。ある特定の態様では、本明細書に記載の細胞または宿主細胞（例えば、本明細書に記載の抗体をコードするポリヌクレオチドを含む細胞または宿主細胞）を使用して抗体を発現すること（例えば、組み換え発現すること）を含む、ＣＤ１３７（例えば、ヒトＣＤ１３７またはカニクイザルＣＤ１３７）に特異的に結合する抗体を作製する方法が本明細書に提供される。特定の実施形態では、細胞は、単離された細胞である。特定の実施形態では、外因性ポリヌクレオチドは、細胞に導入されている。特定の実施形態では、本方法は、細胞または宿主細胞から得られた抗体を精製するステップをさらに含む。
【０２５９】
ポリクローナル抗体を産生するための方法は、当該技術分野で既知である（例えば、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる、Ｓｈｏｒｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，（２００２）５ｔｈ  Ｅｄ．，Ａｕｓｕｂｅｌ  ＦＭ  ｅｔ  ａｌ．，ｅｄｓ．，Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ａｎｄ  Ｓｏｎｓ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋを参照されたい）。
【０２６０】
モノクローナル抗体は、ハイブリドーマ、組み換え、およびファージディスプレイ技術、またはそれらの組み合わせの使用を含む当該技術分野で既知の多種多様の技法を使用して調製され得る。例えば、モノクローナル抗体は、当該技術分野で既知であり、例えば、Ｈａｒｌｏｗ  Ｅ＆Ｌａｎｅ  Ｄ，Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，（Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ，２ｎｄ  ｅｄ．１９８８）、Ｈａｍｍｅｒｌｉｎｇ  ＧＪ  ｅｔ  ａｌ．，ｉｎ：Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  ａｎｄ  Ｔ−Ｃｅｌｌ  Ｈｙｂｒｉｄｏｍａｓ  ５６３  ６８１（Ｅｌｓｅｖｉｅｒ，Ｎ．Ｙ．，１９８１）（その各々は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）に教示されるものを含む、ハイブリドーマ技法を使用して産生することができる。本明細書で使用される場合、「モノクローナル抗体」という用語は、ハイブリドーマ技術を通して産生される抗体に限定されない。例えば、モノクローナル抗体は、本明細書に記載の抗体またはその断片、例えば、そのような抗体の軽鎖および／または重鎖を外因的に発現する宿主細胞から組み換え産生され得る。
【０２６１】
具体的な実施形態では、本明細書で使用される場合、「モノクローナル抗体」は、単一細胞（例えば、組み換え抗体を産生するハイブリドーマまたは宿主細胞）によって産生される抗体であり、抗体は、例えば、ＥＬＩＳＡ、または当該技術分野で既知であるかまたは本明細書に提供される実施例の他の抗原結合または競合的結合アッセイによって決定した場合、ＣＤ１３７（例えば、ヒトＣＤ１３７またはカニクイザルＣＤ１３７）に特異的に結合する。特定の実施形態では、モノクローナル抗体は、キメラ抗体またはヒト化抗体であり得る。ある特定の実施形態では、モノクローナル抗体は、一価抗体または多価（例えば、二価）抗体である。特定の実施形態では、モノクローナル抗体は、単一特異性または多重特異性抗体（例えば、二重特異性抗体）である。本明細書に記載のモノクローナル抗体は、例えば、Ｋｏｈｌｅｒ  Ｇ＆Ｍｉｌｓｔｅｉｎ  Ｃ（１９７５）Ｎａｔｕｒｅ  ２５６：４９５に記載されるハイブリドーマ法によって作製され得るか、（参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）、または例えば、本明細書に記載の技法を使用して、例えばファージライブラリから単離され得る。クローナル細胞株およびそれによって発現されるモノクローナル抗体の調製のための他の方法は、当該技術分野で周知である（例えば、Ｓｈｏｒｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，（２００２）５ｔｈ  Ｅｄ．，Ａｕｓｕｂｅｌ  ＦＭ  ｅｔ  ａｌ．，上記の第１１章を参照）。
【０２６２】
本明細書で使用される場合、各一価の結合ドメインが抗原のエピトープに結合することが可能である、少なくとも２つの（例えば２つ以上の）一価の結合ドメインを含むとき、抗体は、抗原に多価的に（例えば二価的に）結合する。各一価の結合ドメインは、抗原上の同じかまたは異なるエピトープに結合することができる。
【０２６３】
ハイブリドーマ技術を使用した特異性抗体を産生およびスクリーニングするための方法は、当該技術分野で慣用的かつ周知である。例えば、ハイブリドーマ方法では、免疫化に使用されるタンパク質（例えば、ＣＤ１３７（例えば、ヒトＣＤ１３７またはカニクイザルＣＤ１３７））に特異的に結合するであろう抗体を産生するか、または産生することが可能なリンパ球を誘発するように、マウス、またはヒツジ、ヤギ、ウサギ、ラット、ハムスター、もしくはマカクザルなどの他の適切な宿主動物を免疫化する。あるいは、リンパ球をインビトロで免疫化してもよい。次いで、リンパ球は、ポリエチレングリコールなどの好適な融合剤を用いて骨髄腫細胞と融合して、ハイブリドーマ細胞を形成する（Ｇｏｄｉｎｇ  ＪＷ（Ｅｄ），Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ，ｐｐ．Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ，ｐｐ．５９−１０３（Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ，１９８６）（参照によりその全体が本明細書に組み込まれる））。加えて、ＲＩＭＭＳ（反復免疫化多重部位）技法を使用して、動物を免疫化してもよい（その全体が参照により本明細書に組み込まれる、Ｋｉｌｐａｔｒｉｃｋ  ＫＥ  ｅｔ  ａｌ．，（１９９７）Ｈｙｂｒｉｄｏｍａ１６：３８１−９）。
【０２６４】
ある特定の実施形態では、マウス（またはラット、サル、ロバ、ブタ、ヒツジ、ハムスター、もしくはイヌなどの他の動物）を、抗原（例えば、ＣＤ１３７（例えば、ヒトＣＤ１３７またはカニクイザルＣＤ１３７））で免疫化することができ、免疫応答が検出されると、例えば、マウス血清中に抗原に特異的な抗体が検出されると、マウス膵臓を採取し、膵細胞を単離する。次いで、周知の技法によって膵細胞を任意の好適な骨髄腫細胞、例えば、Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｔｙｐｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ（ＡＴＣＣ（登録商標））（Ｍａｎａｓｓａｓ，ＶＡ）から入手可能な細胞株ＳＰ２０由来の細胞と融合させて、ハイブリドーマを形成する。ハイブリドーマは、限界希釈により選択およびクローニングされる。ある特定の実施形態では、免疫化されたマウスのリンパ節が採取され、ＮＳ０骨髄腫細胞と融合する。
【０２６５】
このようにして調製されたハイブリドーマ細胞を、好ましくは未融合の親骨髄腫細胞の成長または生存を阻害する１つ以上の物質を含有する好適な培養培地中に播種し、成長させる。例えば、親骨髄腫細胞が酵素ヒポキサンチン・グアニン・ホスホリボシルトランスフェラーゼ（ＨＧＰＲＴまたはＨＰＲＴ）を欠いている場合、ハイブリドーマのための培養培地は、ヒポキサンチン、アミノプテリン、およびチミジン（ＨＡＴ培地）を含み、これらの物質は、ＨＧＰＲＴ欠損細胞の成長を阻止するであろう。
【０２６６】
特定の実施形態は、効果的に融合し、選択された抗体を産生する細胞によって安定した高レベルの抗体の産生を支援し、ＨＡＴ培地などの培地に対して感受性がある骨髄腫細胞を用いる。これらのなかでも、骨髄腫細胞株は、ＮＳ０細胞株またはＳａｌｋ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ  Ｃｅｌｌ  Ｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎ  Ｃｅｎｔｅｒ（Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ，ＵＳＡ）から入手可能なＭＯＰＣ−２１およびＭＰＣ−１１マウス腫瘍由来のもの、ならびにＡｍｅｒｉｃａｎ  Ｔｙｐｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ（Ｒｏｃｋｖｉｌｌｅ，ＭＤ，ＵＳＡ）から入手可能なＳＰ−２またはＸ６３−Ａｇ８．６５３細胞などのマウス骨髄腫株である。ヒト骨髄腫およびマウス−ヒトヘテロ骨髄腫細胞株はまた、ヒトモノクローナル抗体の産生について記載されている（Ｋｏｚｂｏｒ  Ｄ（１９８４）Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  １３３：３００１−５、Ｂｒｏｄｅｕｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ  Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ  ａｎｄ  Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ，ｐｐ．５１−６３（Ｍａｒｃｅｌ  Ｄｅｋｋｅｒ，Ｉｎｃ．，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，１９８７）（その各々は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）。
【０２６７】
ハイブリドーマ細胞が成長している培養培地は、ＣＤ１３７（例えば、ヒトＣＤ１３７またはカニクイザルＣＤ１３７）に対して指向されたモノクローナル抗体の産生についてアッセイされる。ハイブリドーマ細胞によって産生されたモノクローナル抗体の結合特異性は、当該技術分野で既知の方法によって、例えば、免疫沈降、または放射免疫アッセイ（ＲＩＡ）もしくは酵素結合免疫吸着アッセイ（ＥＬＩＳＡ）などのインビトロ結合アッセイによって決定される。
【０２６８】
所望の特異性、親和性、および／または活性の抗体を産生するハイブリドーマ細胞を特定した後、そのクローンを、限界希釈法によってサブクローニングし、標準の方法によって成長させることができる（Ｇｏｄｉｎｇ  ＪＷ（Ｅｄ），Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ、上記）。この目的のために好適な培養培地は、例えば、Ｄ−ＭＥＭまたはＲＰＭＩ  １６４０培地を含む。加えて、ハイブリドーマ細胞は、動物において腹水腫瘍としてインビボで成長させることができる。
【０２６９】
サブクローンにより分泌されるモノクローナル抗体は、例えば、プロテインＡ−セファロース、ヒドロキシアパタイトクロマトグラフィー、ゲル電気泳動、透析、または親和性クロマトグラフィーなどの従来の免疫グロブリン精製方法によって培養培地、腹水、または血清から適切に分離される。
【０２７０】
本明細書に記載の抗体は、特異的なＣＤ１３７（例えば、ヒトＣＤ１３７またはカニクイザルＣＤ１３７）を認識する抗体断片を含み、これは当業者に既知の任意の技法によって生成することができる。例えば、本明細書に記載のＦａｂおよびＦ（ａｂ′）２断片は、パパイン（Ｆａｂ断片を産生するため）またはペプシン（Ｆ（ａｂ′）２断片を産生するため）などの酵素を用いて、免疫グロブリン分子のタンパク質切断によって産生され得る。Ｆａｂ断片は、抗体分子の２つの同一のアームのうちの一方に対応し、重鎖のＶＨおよびＣＨ１ドメインと対になった完全な軽鎖を含有する。Ｆ（ａｂ′）２断片は、ヒンジ領域内のジスルフィド結合によって結合されている抗体分子の２つの抗原結合アームを含有する。
【０２７１】
さらに、本明細書に記載の抗体はまた、当該技術分野で既知の様々なファージディスプレイ法を使用して生成することもできる。ファージディスプレイ法では、機能的抗体ドメインは、それらをコードするポリヌクレオチド配列を保有するファージ粒子の表面上に提示される。具体的には、ＶＨおよびＶＬドメインをコードするＤＮＡ配列は、動物ｃＤＮＡライブラリ（例えば、患部組織のヒトまたはマウスｃＤＮＡライブラリ）から増幅される。ＶＨおよびＶＬドメインをコードするＤＮＡは、ＰＣＲによってｓｃＦｖリンカーと一緒に組み換えられ、ファージミドベクターにクローニングされる。ベクターは、Ｅ．ｃｏｌｉに電気穿孔処理され、Ｅ．ｃｏｌｉはヘルパーファージに感染する。これらの方法において使用されるファージは、典型的にはｆｄおよびＭ１３を含む繊維状ファージであり、ＶＨおよびＶＬドメインは通常、ファージ遺伝子ＩＩＩまたは遺伝子ＶＩＩＩのいずれかに組み換え融合される。特定の抗原に結合する抗原結合ドメインを発現しているファージは、抗原で、例えば、標識した抗原または固体表面もしくはビーズに結合もしくは捕捉された抗原を使用して、選択または特定することができる。本明細書に記載の抗体を作製するために使用され得るファージディスプレイ法の例としては、Ｂｒｉｎｋｍａｎ  Ｕ  ｅｔ  ａｌ．，（１９９５）Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  １８２：４１−５０、Ａｍｅｓ  ＲＳ  ｅｔ  ａｌ．，（１９９５）Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  １８４：１７７−１８６、Ｋｅｔｔｌｅｂｏｒｏｕｇｈ  ＣＡ  ｅｔ  ａｌ．，（１９９４）Ｅｕｒ  Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  ２４：９５２−９５８、Ｐｅｒｓｉｃ  Ｌ  ｅｔ  ａｌ．，（１９９７）Ｇｅｎｅ  １８７：９−１８、Ｂｕｒｔｏｎ  ＤＲ＆Ｂａｒｂａｓ  ＣＦ（１９９４）Ａｄｖａｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  ５７：１９１−２８０、ＰＣＴ出願第ＰＣＴ／ＧＢ９１／００１１３４号、国際公開第ＷＯ９０／０２８０９号、同第ＷＯ９１／１０７３７号、同第ＷＯ９２／０１０４７号、同第ＷＯ９２／１８６１９号、同第ＷＯ９３／１１２３６号、同第ＷＯ９５／１５９８２号、同第ＷＯ９５／２０４０１号、および同第ＷＯ９７／１３８４４号、ならびに米国特許第５，６９８，４２６号、同第５，２２３，４０９号、同第５，４０３，４８４号、同第５，５８０，７１７号、同第５，４２７，９０８号、同第５，７５０，７５３号、同第５，８２１，０４７号、同第５，５７１，６９８号、同第５，４２７，９０８号、同第５，５１６，６３７号、同第５，７８０，２２５号、同第５，６５８，７２７号、同第５，７３３，７４３号、および同第５，９６９，１０８号に開示のものが挙げられる（それらの全ては、参照によりそれらの全体が本明細書に組み込まれる）。
【０２７２】
上記の参考文献に記載されているように、ファージ選択後、ファージ由来の抗体コード領域は、ヒト抗体を含む抗体全体、または任意の他の所望の抗原結合断片を生成するために単離されかつ使用されて、例えば下述の哺乳類細胞、昆虫細胞、植物細胞、酵母、および細菌を含む任意の所望の宿主内で発現することができる。Ｆａｂ、Ｆａｂ′、およびＦ（ａｂ′）２断片などの抗体断片を組み換え産生する技法はまた、ＰＣＴ公開第ＷＯ９２／２２３２４号、Ｍｕｌｌｉｎａｘ  ＲＬ  ｅｔ  ａｌ．，（１９９２）ＢｉｏＴｅｃｈｎｉｑｕｅｓ  １２（６）：８６４−９、Ｓａｗａｉ  Ｈ  ｅｔ  ａｌ．，（１９９５）Ａｍ  Ｊ  Ｒｅｐｒｏｄ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  ３４：２６−３４、およびＢｅｔｔｅｒ  Ｍ  ｅｔ  ａｌ．，（１９８８）Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２４０：１０４１−１０４３に記載されており、これらの全ては、それらの全体が参照により本明細書に組み込まれる。
【０２７３】
ある特定の実施形態では、抗体全体を生成するために、ＶＨまたはＶＬヌクレオチド配列、制限部位、および制限部位を保護するための隣接配列を含むＰＣＲプライマーを使用して、テンプレート、例えば、ｓｃＦｖクローンからＶＨまたはＶＬ配列を増幅することができる。当業者にとって既知であるクローニング技術を利用して、ＰＣＲ増幅ＶＨドメインを、ＶＨ定常領域を発現するベクターにクローニングすることができ、ＰＣＲ増幅ＶＬドメインを、ＶＬ定常領域、例えば、ヒトカッパまたはラムダ定常領域を発現するベクターにクローニングすることができる。ＶＨおよびＶＬドメインはまた、必要な定常領域を発現する１つのベクターにクローニングすることもできる。その後、重鎖変換ベクターおよび軽鎖変換ベクターは、当業者に既知の技法を使用して、完全長抗体、例えば、ＩｇＧを発現する、安定した細胞株または一過性型細胞株を生成するように細胞株に同時トランスフェクトされる。
【０２７４】
キメラ抗体は、抗体の異なる部分が異なる免疫グロブリン分子に由来する分子である。例えば、キメラ抗体は、ヒト抗体の定常領域に融合したマウスまたはラットモノクローナル抗体の可変領域を含有することができる。キメラ抗体を産生するための方法は、当該技術分野において既知である。例えば、Ｍｏｒｒｉｓｏｎ  ＳＬ（１９８５）Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２２９：１２０２−７、Ｏｉ  ＶＴ＆Ｍｏｒｒｉｓｏｎ  ＳＬ（１９８６）ＢｉｏＴｅｃｈｎｉｑｕｅｓ  ４：２１４−２２１、Ｇｉｌｌｉｅｓ  ＳＤ  ｅｔ  ａｌ．，（１９８９）Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  １２５：１９１−２０２、および米国特許第５，８０７，７１５号、同第４，８１６，５６７号、同第４，８１６，３９７号、および同第６，３３１，４１５号（それらの全てが、参照によりそれらの全体が本明細書に組み込まれる）を参照されたい。
【０２７５】
ヒト化抗体は、所定の抗原に結合することができ、ヒト免疫グロブリンのアミノ酸配列を実質的に有するフレームワーク領域および非ヒト免疫グロブリン（例えば、マウス免疫グロブリン）のアミノ酸配列を実質的に有するＣＤＲを含む。特定の実施形態では、ヒト化抗体はまた、少なくとも免疫グロブリン定常領域（Ｆｃ）の一部分、典型的には、ヒト免疫グロブリンの一部分を含む。この抗体はまた、重鎖のＣＨ１、ヒンジ、ＣＨ２、ＣＨ３、およびＣＨ４領域を含み得る。ヒト化抗体は、ＩｇＭ、ＩｇＧ、ＩｇＤ、ＩｇＡ、およびＩｇＥを含む免疫グロブリンの任意のクラス、ならびにＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、およびＩｇＧ４を含む任意のアイソタイプから選択され得る。ヒト化抗体は、当該技術分野で既知の種々の技法を使用して産生することができ、ＣＤＲグラフト化（欧州特許第ＥＰ２３９４００号、国際公開第ＷＯ９１／０９９６７号、および米国特許第５，２２５，５３９号、同第５，５３０，１０１号、および同第５，５８５，０８９号）、ベニアリングまたはリサーフェシング（欧州特許第ＥＰ５９２１０６号および同第ＥＰ５１９５９６号、Ｐａｄｌａｎ  ＥＡ（１９９１）Ｍｏｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  ２８（４／５）：４８９−４９８、Ｓｔｕｄｎｉｃｋａ  ＧＭ  ｅｔ  ａｌ．，（１９９４）Ｐｒｏｔ  Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ  ７（６）：８０５−８１４、およびＲｏｇｕｓｋａ  ＭＡ  ｅｔ  ａｌ．，（１９９４）ＰＮＡＳ  ９１：９６９−９７３）、鎖シャッフリング（米国特許第５，５６５，３３２号）、ならびに例えば、米国特許第６，４０７，２１３号、米国特許第５，７６６，８８６号、国際公開第ＷＯ９３／１７１０５号、Ｔａｎ  Ｐ  ｅｔ  ａｌ．，（２００２）Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  １６９：１１１９−２５、Ｃａｌｄａｓ  Ｃ  ｅｔ  ａｌ．，（２０００）Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｅｎｇ．１３（５）：３５３−６０、Ｍｏｒｅａ  Ｖ  ｅｔ  ａｌ．，（２０００）Ｍｅｔｈｏｄｓ  ２０（３）：２６７−７９、Ｂａｃａ  Ｍ  ｅｔ  ａｌ．，（１９９７）Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ  ２７２（１６）：１０６７８−８４、Ｒｏｇｕｓｋａ  ＭＡ  ｅｔ  ａｌ．，（１９９６）Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｅｎｇ  ９（１０）：８９５  ９０４、Ｃｏｕｔｏ  ＪＲ  ｅｔ  ａｌ．，（１９９５）Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．５５（２３  Ｓｕｐｐ）：５９７３ｓ−５９７７ｓ、Ｃｏｕｔｏ  ＪＲ  ｅｔ  ａｌ．，（１９９５）Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ  ５５（８）：１７１７−２２、Ｓａｎｄｈｕ  ＪＳ（１９９４）Ｇｅｎｅ  １５０（２）：４０９−１０、およびＰｅｄｅｒｓｅｎ  ＪＴ  ｅｔ  ａｌ．，（１９９４）Ｊ  Ｍｏｌ  Ｂｉｏｌ  ２３５（３）：９５９−７３に記載されており、これらの全ては、それらの全体が参照により本明細書に組み込まれる。また、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる、米国出願公開第２００５／００４２６６４  Ａ１号（２００５年２月２４日）も参照されたい。
【０２７６】
多重特異性（例えば、二重特異性抗体）を作製するための方法は記載されており、例えば、それらの全ては、参照によりそれらの全体が本明細書に組み込まれる、米国特許第７，９５１，９１７号、同第７，１８３，０７６号、同第８，２２７，５７７号、同第５，８３７，２４２号、同第５，９８９，８３０号、同第５，８６９，６２０号、同第６，１３２，９９２号、および同第８，５８６，７１３号を参照されたい。
【０２７７】
単一ドメイン抗体、例えば、軽鎖を欠いている抗体は、当該技術分野で周知の方法によって産生することができる。Ｒｉｅｃｈｍａｎｎ  Ｌ＆Ｍｕｙｌｄｅｒｍａｎｓ  Ｓ（１９９９）Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  ２３１：２５−３８、Ｎｕｔｔａｌｌ  ＳＤ  ｅｔ  ａｌ．，（２０００）Ｃｕｒｒ  Ｐｈａｒｍ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ  １（３）：２５３−２６３、Ｍｕｙｌｄｅｒｍａｎｓ  Ｓ，（２００１）Ｊ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ  ７４（４）：２７７−３０２、米国特許第６，００５，０７９号、ならびに国際公開第ＷＯ９４／０４６７８号、同第ＷＯ９４／２５５９１号、および同第ＷＯ０１／４４３０１号（それらの全ては、参照によりそれらの全体が本明細書に組み込まれる）を参照されたい。
【０２７８】
さらに、ＣＤ１３７（例えば、ヒトＣＤ１３７またはカニクイザルＣＤ１３７）抗原に特異的に結合する抗体は、当業者に周知の技法を使用して、抗原を「模倣する」抗イディオタイプ抗体を生成するために利用することができる。例えば、Ｇｒｅｅｎｓｐａｎ  ＮＳ＆Ｂｏｎａ  ＣＡ（１９８９）ＦＡＳＥＢ  Ｊ  ７（５）：４３７−４４４、およびＮｉｓｓｉｎｏｆｆ  Ａ（１９９１）Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  １４７（８）：２４２９−２４３８（その各々は参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）を参照されたい。
【０２７９】
特定の実施形態では、本明細書に記載の抗ＣＤ１３７（例えば、ヒトＣＤ１３７またはカニクイザルＣＤ１３７）抗体と同じＣＤ１３７（例えば、ヒトＣＤ１３７またはカニクイザルＣＤ１３７）のエピトープに結合する、本明細書に記載の抗体は、ヒト抗体である。特定の実施形態では、本明細書に記載の抗体のうちのいずれか１つが、ＣＤ１３７（例えば、ヒトＣＤ１３７またはカニクイザルＣＤ１３７）に結合することから（例えば、用量依存的様式で）競合的に遮断する、本明細書に記載の抗体は、ヒト抗体である。ヒト抗体は、当該技術分野において既知である任意の方法を使用して産生することができる。例えば、機能的な内在性免疫グロブリンを発現することはできないが、ヒト免疫グロブリン遺伝子を発現することはできるトランスジェニックマウスを使用することができる。具体的には、ヒト重鎖および軽鎖免疫グロブリン遺伝子複合体は、ランダムに、または相同的組み換えによりマウス胚幹細胞内に導入することができる。あるいは、ヒト重鎖および軽鎖遺伝子に加えて、ヒト可変領域、定常領域、および多様性領域をマウス胚幹細胞に導入することができる。マウス重鎖および軽鎖免疫グロブリン遺伝子は、相同的組み換えによって、ヒト免疫グロブリン遺伝子座の導入で別々にまたは同時に非機能性を与えられ得る。具体的には、ＪＨ領域のホモ接合型欠失は、内因性抗体産生を防止する。修飾した胚幹細胞を拡大し、胚盤胞内に微量注入し、キメラマウスを産生する。次いで、キメラマウスを繁殖させて、ヒト抗体を発現するホモ接合性子孫を産生する。トランスジェニックマウスは、選択された抗原、例えば、抗原（例えば、ＣＤ１３７（例えば、ヒトＣＤ１３７またはカニクイザルＣＤ１３７））の全てまたは一部分を用いて、通常の様式で免疫化される。抗原に対して指向されたモノクローナル抗体は、従来のハイブリドーマ技術を使用して免疫化したトランスジェニックマウスから得ることができる。トランスジェニックマウスが有するヒト免疫グロブリントランス遺伝子は、Ｂ細胞分化の間に再編成し、その後クラススイッチおよび体細胞変異を起こす。したがって、かかる技法を使用して、治療に有用なＩｇＧ、ＩｇＡ、ＩｇＭ、およびＩｇＥ抗体を産生することが可能である。ヒト抗体を産生するためのこの技術の概要については、その全体が参照により本明細書に組み込まれる、Ｌｏｎｂｅｒｇ  Ｎ＆Ｈｕｓｚａｒ  Ｄ（１９９５）Ｉｎｔ  Ｒｅｖ  Ｉｍｍｕｎｏｌ１３：６５−９３を参照されたい。ヒト抗体およびヒトモノクローナル抗体を産生するためのこの技術、ならびにかかる抗体を産生するためのプロトコルの詳細な考察については、例えば、それらの全ては、参照によりそれらの全体が本明細書に組み込まれる、国際公開第ＷＯ９８／２４８９３号、同第ＷＯ９６／３４０９６号、および同第ＷＯ９６／３３７３５号、ならびに米国特許第５，４１３，９２３号、同第５，６２５，１２６号、同第５，６３３，４２５号、同第５，５６９，８２５号、同第５，６６１，０１６号、同第５，５４５，８０６号、同第５，８１４，３１８号、および同第５，９３９，５９８号を参照されたい。ヒト抗体を産生することが可能なマウスの例としては、それらの全ては、参照によりそ���らの全体が本明細書に組み込まれる、Ｘｅｎｏｍｏｕｓｅ（商標）（Ａｂｇｅｎｉｘ，Ｉｎｃ．、米国特許第６，０７５，１８１号および同第６，１５０，１８４号）、ＨｕＡｂ−マウス（商標）（Ｍｅｄｅｒｅｘ，Ｉｎｃ．／Ｇｅｎ  Ｐｈａｒｍ、米国特許第５，５４５，８０６号および同第５，５６９，８２５号）、Ｔｒａｎｓ  Ｃｈｒｏｍｏ  Ｍｏｕｓｅ（商標）（Ｋｉｒｉｎ）、およびＫＭ  Ｍｏｕｓｅ（商標）（Ｍｅｄａｒｅｘ／Ｋｉｒｉｎ）が挙げられる。
【０２８０】
ＣＤ１３７（例えば、ヒトＣＤ１３７またはカニクイザルＣＤ１３７）に特異的に結合するヒト抗体は、ヒト免疫グロブリン配列由来の抗体ライブラリを使用する上述のファージディスプレイ法を含む、当該技術分野で既知の種々の方法によって作製することができる。また、それらの全ては、参照によりそれらの全体が本明細書に組み込まれる、米国特許第４，４４４，８８７号、同第４，７１６，１１１号、および同第５，８８５，７９３号、ならびに国際公開第ＷＯ９８／４６６４５号、同第ＷＯ９８／５０４３３号、同第ＷＯ９８／２４８９３号、同第ＷＯ９８／１６６５４号、同第ＷＯ９６／３４０９６号、同第ＷＯ９６／３３７３５号、および同第ＷＯ９１／１０７４１号も参照されたい。
【０２８１】
ある特定の実施形態では、ヒト抗体は、マウス−ヒトハイブリドーマを使用して産生することができる。例えば、エプスタイン・バーウイルス（ＥＢＶ）で形質転換されたヒト末梢血リンパ球をマウス骨髄腫細胞と融合させて、ヒトモノクローナル抗体を分泌するマウス−ヒトハイブリドーマを産生することができ、これらのマウス−ヒトハイブリドーマをスクリーニングして、標的抗原（例えば、ＣＤ１３７（例えば、ヒトＣＤ１３７またはカニクイザルＣＤ１３７））に特異的に結合するヒトモノクローナル抗体を分泌するものを決定することができる。かかる方法は、当該技術分野で既知であり、記載されており、例えば、Ｓｈｉｎｍｏｔｏ  Ｈ  ｅｔ  ａｌ．，（２００４）Ｃｙｔｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  ４６：１９−２３、Ｎａｇａｎａｗａ  Ｙ  ｅｔ  ａｌ．，（２００５）Ｈｕｍａｎ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  １４：２７−３１（その各々は参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）を参照されたい。
【０２８２】
５．６  キット
本明細書に記載の１つ以上の抗体、またはその薬学的組成物もしくはその共役体を含むキットもまた提供される。特定の実施形態では、本明細書に提供される１つ以上の抗体などの本明細書に記載の薬学的組成物の成分のうちの１つ以上で充填された１つ以上の容器を含む薬学的パックまたはキットが本明細書に提供される。ある特定の実施形態では、キットは、本明細書に記載の薬学的組成物、およびの本明細書に記載のものなどの任意の予防薬または治療薬を含有する。ある特定の実施形態では、これらのキットは、例えば、フィトヘムアグルチニン（ＰＨＡ）および／もしくはホルボールミリステートアセテート（ＰＭＡ）、または抗ＣＤ３抗体および抗ＣＤ２８抗体などのＴＣＲ複合体刺激抗体などのＴ細胞マイトジェンを含有し得る。任意選択的に、そのような容器（複数可）とともに、調合薬または生物学的製剤の製造、使用、または販売を規制する行政機関によって規定された様式の注意書きを含むことができ、この注意書きは、ヒトへの投与のための製造、使用、または販売の機関による承認を反映する。
【０２８３】
上記の方法で使用され得るキットも提供される。一実施形態では、キットは、１つ以上の容器内に、本明細書に記載の抗体、好ましくは精製された抗体を含む。具体的な一実施形態では、本明細書に記載のキットは、対照として、実質的に単離されたＣＤ１３７（例えば、ヒトＣＤ１３７またはカニクイザルＣＤ１３７）抗原を含有する。別の具体的な実施形態では、本明細書に記載のキットは、ＣＤ１３７（例えば、ヒトＣＤ１３７またはカニクイザルＣＤ１３７）抗原と反応しない対照抗体をさらに含む。別の具体的な実施形態では、本明細書に記載のキットは、ＣＤ１３７（例えば、ヒトＣＤ１３７またはカニクイザルＣＤ１３７）抗原への抗体の結合を検出するための１つ以上の要素を含有する（例えば、抗体は、蛍光化合物、酵素基質、放射性化合物、もしくは発光化合物などの検出可能な基質に共役されてもよいか、または第１の抗体を認識する第２の抗体が、検出可能な基質に共役されてもよい）。具体的な実施形態では、本明細書で提供されるキットは、組み換え産生または化学的に合成されたＣＤ１３７（例えば、ヒトＣＤ１３７またはカニクイザルＣＤ１３７）抗原を含んでもよい。キットに提供されるＣＤ１３７（例えば、ヒトＣＤ１３７またはカニクイザルＣＤ１３７）抗原はまた、固体支持体に付着させてもよい。より具体的な一実施形態では、上述のキットの検出手段は、ＣＤ１３７（例えば、ヒトＣＤ１３７またはカニクイザルＣＤ１３７）抗原が付着している固体支持体を含む。そのようなキットはまた、非結合レポーター標識抗ヒト抗体または抗マウス／ラット抗体を含んでもよい。この実施形態では、ＣＤ１３７（例えば、ヒトＣＤ１３７またはカニクイザルＣＤ１３７）抗原への抗体の結合は、当該レポーター標識抗体の結合によって検出することができる。一実施形態では、本発明は、生体試料中のＣＤ１３７抗原（例えば、ヒトＣＤ１３７またはカニクイザルＣＤ１３７）のインビトロアッセイおよび／または検出のための本発明のキットの使用に関する。
【実施例】
【０２８４】
この項（すなわち、項６）における実施例は、例証として提供されており、限定するものではない。
【０２８５】
６．１  実施例１：抗ＣＤ１３７抗体の特徴評価
この実施例は、ヒトＣＤ１３７に結合する抗体の特徴評価について説明する。具体的には、ヒトＣＤ１３７に特異的に結合し、ヒトＣＤ１３７の機能を刺激するＢＡ００１抗体について、特徴評価した。ＢＡ００１の可変領域の配列情報を表１に提供する。
【０２８６】
６．１．１  抗ヒトＣＤ１３７抗体は、ＣＤ１３７を発現している細胞に結合する。
図１Ａおよび１Ｂに示されるように、種々の細胞の種類におけるヒト抗ＣＤ１３７ＩｇＧ１抗体Ｂａ００１の、ヒトＣＤ１３７またはカニクイザルＣＤ１３７を発現している細胞に結合する能力を試験した。
【０２８７】
操作されたＪｕｒｋａｔ細胞
一実施例では、ヒトＣＤ１３７またはカニクイザルＣＤ１３７のいずれかを構成的に発現するようにＪｕｒｋａｔ細胞を操作して、抗体Ｂａ００１の結合を分析するために使用した。要するに、トランスフェクトＪｕｒｋａｔ細胞を５×１０４細胞／ウェルで９６ウェル丸底プレートに被せ、段階希釈した抗体（すなわち、示されている濃度のＢＡ００１またはアイソタイプ対照）と４℃で２５分間培養した（図１Ａおよび１Ｂの左側パネル）。細胞を２回洗浄し、抗ヒトｌａｍｂｄａ−ＰＥの二次抗体（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ、Ｃａｔ＃ＭＨ１０６１４）と培養した。細胞を洗浄し、ＰＢＳ中で調製した２％のパラホルムアルデヒド（Ｅｌｅｃｔｒｏｎ  Ｍｉｃｒｏｓｃｏｐｙ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ）８０μｌに懸濁した。ＢＤ  ＦＡＣＳ  Ｃａｎｔｏを用いてデータを収集し、ＢＤ  ＦＡＣＳＤｉｖａソフトウェアを使用して分析した。
【０２８８】
図１Ａおよび１Ｂ（左側パネル）に示されるように、ＢＡ００１抗体は、ヒトＣＤ１３７またはカニクイザルＣＤ１３７のいずれかを発現しているＪｕｒｋａｔ細胞に結合した。
【０２８９】
活性化ＣＥＭ／Ｃ１  Ｔ細胞
第２の実施例では、内在性ヒトＣＤ１３７を発現している活性化ヒトＣＥＭ／Ｃ１  Ｔ細胞に結合するＢＡ００１の能力を試験した。要するに、ＣＥＭ／Ｃ１細胞を、１０ｎｇ／ｍｌのホルボール１２−ミリスチン酸１３−アセテート（ＰＭＡ）および１μｇ／ｍＬのイオノマイシンと３７℃で１８時間培養することによって刺激した。刺激した細胞を１×１０５細胞／ウェルで９６ウェル丸底プレートに被せ、段階希釈した抗体（すなわち、図１Ａの中央パネルに示されている濃度のＢＡ００１またはアイソタイプ対照）と４℃で２５分間培養した。細胞を２回洗浄しおよび抗ヒトｌａｍｂｄａ−ＰＥ二次抗体（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ、Ｃａｔ＃ＭＨ１０６１４）と培養した。細胞を洗浄し、ＰＢＳ中で調製した２％のパラホルムアルデヒド（Ｅｌｅｃｔｒｏｎ  Ｍｉｃｒｏｓｃｏｐｙ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ）８０μｌに懸濁した。ＢＤ  ＦＡＣＳ  Ｃａｎｔｏを用いてデータを収集し、ＢＤ  ＦＡＣＳＤｉｖａソフトウェアを使用して分析した。
【０２９０】
図１Ａの中央パネルに示されるように、ＢＡ００１抗体は、内在性ＣＤ１３７を発現している活性化ＣＥＭ／Ｃ１細胞に結合した。
【０２９１】
活性化初代ＣＤ８＋Ｔ細胞
第３の実施例では、ＢＡ００１の、活性化ヒトまたはカニクイザルＣＤ８＋Ｔ細胞に結合する能力を試験した。要するに、ヒトまたはカニクイザルＰＢＭＣを、１０ｎｇ／ｍｌのＰＭＡおよび１μｇ／ｍＬのイオノマイシンと３７℃で１８時間培養することによって刺激した。刺激した細胞を１×１０５細胞／ウェルで９６ウェル丸底プレートに被せ、段階希釈した抗体（すなわち、図１Ａおよび１Ｂの右側パネルに示される濃度のＢＡ００１またはアイソタイプ対照）、および抗ヒトＣＤ８−ＡＰＣ（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ、Ｃａｔ＃３１１０４９）と４℃で２５分間培養した。細胞を２回洗浄し、Ｆ（ａｂ’）２ヤギ抗ヒトＩｇＧ−ＰＥ二次抗体（Ｊａｃｋｓｏｎ  ＩｍｍｕｎｏＲｅｓｅａｒｃｈ、Ｃａｔ＃１０９−１１６−０９８）と培養した。細胞を洗浄し、ＰＢＳ中で調製した２％のパラホルムアルデヒド（Ｅｌｅｃｔｒｏｎ  Ｍｉｃｒｏｓｃｏｐｙ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ）８０μｌに懸濁した。ＢＤ  ＦＡＣＳ  Ｃａｎｔｏを用いてデータを収集し、次いでＦｌｏｗｊｏ  Ｖ１０を使用して（ＣＤ８＋Ｔ細胞にゲート設定して）分析した。
【０２９２】
図１Ａ〜１Ｂの右側パネルに示されるように、ＢＡ００１抗体は、内在性ＣＤ１３７を発現している活性化ヒトまたはカニクイザルＣＤ８＋Ｔ細胞に結合した。
【０２９３】
６．１．２  抗ＣＤ１３７抗体は、ＣＤ１３７Ｌの、ＣＤ１３７への結合を遮断しない。
ＣＤ１３７／ＢＡ００１−Ｆ（ａｂ’）２複合体へのＣＤ１３７Ｌの結合
表面プラズモン共鳴を使用して、ＢＡ００１（ＢＡ００１−Ｆ（ａｂ’）２）のＦ（ａｂ’）２断片に複合体形成されたＣＤ１３７に結合するＣＤ１３７Ｌの能力を評価した。ＦｒａｇｌＴ（商標）キット（Ｇｅｎｏｖｉｓ（Ｃａｔ＃Ａ２−ＦＲ２−１００））を使用して、ＢＡ００１−Ｆ（ａｂ’）２を生成した。ＢＩＡｃｏｒｅ（登録商標）Ｔ２００（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）および泳動用緩衝液として１Ｘ  ＨＢＳ−Ｐ＋（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ、ＢＲ−１００６−７１）を使用して、２５℃で全ての相互作用を分析した。
【０２９４】
一実施例では、ＢＡ００１−Ｆ（ａｂ’）２をチップ上に固定化し、次いでＣＤ１３７に結合させ、その後ＣＤ１３７ＬをＣＤ１３７／ＢＡ００１−Ｆ（ａｂ’）２複合体に結合させた。まず、抗ヒトＦａｂ捕捉抗体（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ、Ｆａｂ  Ｃａｐｔｕｒｅ  Ｋｉｔ、２８−９５８３−２５）をＣＭ５シリーズＳセンサーチップ（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ、２９−１４９６−０３）のフローセル２上に固定化した。次いで、ＢＡ００１−Ｆ（ａｂ’）２を泳動用緩衝液で６．７５μｇ／ｍＬに希釈し、１２０秒間１０μｌ／分でフローセル１に固定化した。ＣＤ１３７またはＣＤ１３７Ｌの非特異的な相互作用を測定するための対照として、チップのフローセル１を抗ヒトＦａｂ捕捉抗体と単独で結合させた。ＢＡ００１−Ｆ（ａｂ’）２の捕捉後、両方のチップのフローセル上に１００ｎＭのＣＤ１３７（Ａｅｒｏ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍ、４１Ｂ−Ｈ５２２７）を９０秒間３０μｌ／分で泳動させ、続いて４００秒解離させた。次いで、両方のフローセル上で２００ｎＭのＣＤ１３７Ｌ（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ、＃２２９５−４Ｌ−０２５）を９０秒間３０μｌ／分で泳動させ、続いて４００秒解離させた。
【０２９５】
フローセル２で得た応答から、フローセル１で得た応答を引いたものを図２Ａに示す。ＣＤ１３７をフローセル２上で泳動させると、応答シグナルの増加が検出され、これはＢＡ００１−Ｆ（ａｂ’）２へのＣＤ１３７の結合を示している。ＣＤ１３７は、ＢＡ００１−Ｆ（ａｂ’）２から非常にゆっくりと解離したように見えた。次いでＣＤ１３７Ｌをフローセル２上に泳動させると、シグナル応答の増加が観察され、これは、ＣＤ１３７／ＢＡ００１−Ｆ（ａｂ’）２複合体へのＣＤ１３７Ｌの結合を示している。これらの結果は、ＣＤ１３７へのＢＡ００１−Ｆ（ａｂ’）２の結合が、ＣＤ１３７へのＣＤ１３７Ｌの結合が遮断しないことを示している。
【０２９６】
別の実施例では、過剰なＣＤ１３７（１１０ｎＭ）をＢＡ００１−Ｆ（ａｂ’）２（６μｇ／ｍＬ、５４ｎＭ）と事前に混合して、ＣＤ１３７／ＢＡ００１−Ｆ（ａｂ’）２複合体を形成した。次いで複合体をＣＭ５シリーズＳセンサーチップ（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ、２９−１４９６−０３）のフローセル３上に１０μｌ／分で１８０秒固定化し、続いて６０秒解離させた。次いで、全てのフローセル上で６０ｎＭのＣＤ１３７Ｌを９０秒間５０μｌ／分で泳動させ、続いて４００秒解離させた。ＣＤ１３７またはＣＤ１３７Ｌの非特異的な相互作用を測定するための対照として、チップのフローセル１を抗ヒトＦａｂ捕捉抗体と単独で結合させた。
【０２９７】
フローセル３で得た応答から、フローセル１で得た応答を引いたものを図２Ｂに示す。これらのデータは、ＢＡ００１−Ｆ（ａｂ’）２は高い親和性でＣＤ１３７に結合するが、この相互反応は、ＣＤ１３７へのＣＤ１３７Ｌの結合を損なわないことを示している。
【０２９８】
ＢＡ００１およびＢＡ００１由来のＦａｂ断片（ＢＡ００１−Ｆａｂ、データは示さず）でも、この実施例に記載のものと同様の結果が観察された。したがって、ＢＡ００１は、リガンドを遮断しない抗ＣＤ１３７抗体である。
【０２９９】
ＢＡ００１は、ＣＤ１３７細胞表面に結合しているＣＤ１３７Ｌ細胞表面を遮断しなかった。
ＢＡ００１が、ＣＤ１３７Ｌと細胞の表面上に発現されるＣＤ１３７との間の結合を遮断し得るかどうかを決定するために、（すなわち、より生理学的な設定で）、Ｘｉａｏ  ｅｔ  ａｌ．（参照によりその全体が本明細書に組み込まれる、ＪＥＭ２１１（５）：９４３−９５９、２０１４）に記載の方法論を使用して、細胞共役アッセイを実施した。要するに、一組のＪｕｒｋａｔ細胞を、ヒトＣＤ１３７とトランスフェクトし（Ｊｕｒｋａｔ−ＣＤ１３７）、別の組のＪｕｒｋａｔ細胞をヒトＣＤ１３７Ｌとトランスフェクトした（Ｊｕｒｋａｔ−ＣＤ１３７Ｌ）。ＣＤ１３７発現Ｊｕｒｋａｔ細胞を赤色色素ＰＫＨ２６（Ｓｉｇｍａ  Ｃａｔ＃ＰＫＨ２６ＧＬ−１ＫＴ）で染色し、ＣＤ１３７Ｌ発現Ｊｕｒｋａｔ細胞を緑色色素ＰＫＨ６７（Ｓｉｇｍａ  Ｃａｔ＃ＰＫＨ６７ＧＬ−１ＫＴ）で染色した。赤色色素で標識したＪｕｒｋａｔ−ＣＤ１３７細胞（１×１０５／ウェル）を、丸底９６ウェルプレート中で、５０μｇ／ｍｌのＢＡ００１、参照抗ＣＤ１３７抗体＃１、参照抗ＣＤ１３７抗体＃２、またはアイソタイプ対照と室温で３０分間培養した。次いで緑色色素で標識したＪｕｒｋａｔ−ＣＤ１３７Ｌ細胞（１×１０５／ウェル）を添加し、３７℃で４５分間培養した。ＢＤ  ＦＡＣＳ  ＣａｎｔｏおよびＢＤ  ＦＡＣＳＤｉｖａソフトウェアを使用するフローサイトメトリーによって、細胞の細胞への結合／共役形成を分析した。赤色色素にはＰＥチャネルを使用し、緑色色素にはＦＩＴＣチャネルを使用した。したがって、ＣＤ１３７発現細胞とＣＤ１３７Ｌ発現細胞との間の結合により、検出される細胞サイズの増加を呈するダブルポジティブのシグナル（すなわち、赤色＋緑色）が得られるであろう。この効果は、抗ＣＤ１３７抗体を遮断するリガンドによって低減または停止されるであろう。
【０３００】
図３Ａは、ＢＡ００１および参照抗ＣＤ１３７抗体＃２が、細胞上のＣＤ１３７Ｌの細胞上のＣＤ１３７への結合を遮断しないことを示している。対照的に、参照抗ＣＤ１３７抗体＃１は、リガンドの結合を遮断した。
【０３０１】
同様の設定でＣＤ１３７Ｌ発現細胞およびＣＤ１３７発現細胞をＰＫＨ２６赤色蛍光細胞リンカーまたはＰＫＨ６７緑色蛍光細胞リンカーでそれぞれ染色し、ハンクス平衡塩溶液（ＨＢＳＳ）中に４×１０６細胞／ｍＬの濃度で懸濁した。三倍で段階希釈したＢＡ００１、参照抗ＣＤ１３７抗体＃１、参照抗ＣＤ１３７抗体＃２、またはそれぞれのアイソタイプ対照抗体を３Ｘ作用濃度で、ＨＢＳＳ中で調製した。Ｕ字底９６ウェルプレートで、２５ｕＬのＪｕｒｋａｔ−ＣＤ１３７細胞を２５ｕＬの抗ＣＤ１３７抗体と室温で３０分間培養し、ＣＤ１３７Ｌ発現細胞を添加した。あるいは、２５ｕＬのＪｕｒｋａｔ−ＣＤ１３７細胞を、２５ｕＬのＣＤ１３７Ｌ発現細胞と室温で３０分間培養し、抗ＣＤ１３７抗体を添加した。プレートを３７Ｃおよび５％ＣＯ２で４５分間培養し、ＢＤ  Ｆｏｒｔｅｓｓａサイトメーターを使用するフローサイトメトリーによって、ＰＥおよびＦＩＴＣダブルポジティブ性としてＣＤ１３７Ｌ発現細胞とＣＤ１３７発現細胞との共役を特定した。
【０３０２】
図３Ｂおよび３Ｃに示されるように、抗ＣＤ１３７抗体が細胞の共培養前（図３Ｂ）に添加されるか、または後（図３Ｃ）に添加されると、ＢＡ００１および参照抗ＣＤ１３７抗体＃２は、ＣＤ１３７発現細胞のＣＤ１３７Ｌ発現細胞との共役に影響しなかった。対照的に、参照抗ＣＤ１３７抗体＃１は、細胞の共役を阻害し、この抗体が細胞表面ＣＤ１３７Ｌの細胞表面ＣＤ１３７への結合を遮断したことを示している。
【０３０３】
６．２  実施例２：  抗ＣＤ１３７抗体のアゴニスト活性は、架橋依存性およびリガンド依存性である。
６．２．１  抗ＣＤ１３７抗体は、抗体架橋の存在下でのみＮＦ−κＢ駆動遺伝子発現を誘導する。
ＣＤ１３７シグナル伝達を活性化するＢＡ００１の能力を特徴評価するために、（ｉ）ＮＦκＢ−ルシフェラーゼレポーター構造体、および（ｉｉ）ヒトまたはカニクイザルＣＤ１３７のいずれかの発現構造体を組み込んだＪｕｒｋａｔレポーター細胞を生成した。したがって、レポーター細胞の表面上のＣＤ１３７の活性化により、ＮＦκＢプロモーターの制御下でルシフェラーゼの発現を駆動する下流のシグナル伝達が誘導された。
【０３０４】
ＣＤ１３７を活性化するＢＡ００１の能力は、ＢＡ００１の架橋に依存することが発見された。実際に、架橋していないＢＡ００１は、ＣＤ１３７およびＮＦ−κΒルシフェラーゼレポーター構造体を発現するように操作されたＪｕｒｋａｔ細胞のレポーター活性を刺激することは不可能であった（データは示さず）。架橋依存性を特徴評価するために、ＢＡ００１、アイソタイプ対照抗体、および参照抗ＣＤ１３７抗体＃２を、架橋剤（ＡｆｆｉｎｉＰｕｒｅ  Ｆ（ａｂ’）２断片ヤギ抗ヒトＩｇＧ、Ｆｃγ  Ｆｒａｇｍｅｎｔ  Ｓｐｅｃｉｆｉｃ（Ｊａｃｋｓｏｎ  ＩｍｍｕｎｏＲｅｓｅａｒｃｈ、１０９−００６−０９８））を用量漸増しながら培養した。Ｊｕｒｋａｔレポーター細胞を５０，０００細胞／ウェルの密度で播種し、２μｇ／ｍＬのＢＡ００１、アイソタイプ対照抗体、または参照抗ＣＤ１３７抗体＃２で４時間培養した。ＮＦ−ｋＢ活性をＮａｎｏ−Ｇｌｏ（登録商標）ルシフェラーゼアッセイシステム（Ｐｒｏｍｅｇａ  Ｎ１１２０）によって測定した。
【０３０５】
図４Ａに示されるように、１：１超の架橋剤対抗体の比で架橋されると、このアッセイでは、ＢＡ００１は活性を得た。対照的に、参照抗ＣＤ１３７抗体＃２は架橋剤なしで活性化され、架橋剤の量が増えると徐々に活性を喪失した。
【０３０６】
人工的な抗体架橋剤の不在下で抗体クラスタリングすると、ＢＡ００１がＣＤ１３７をアゴナイズすることが可能であるかどうかを、さらに評価した。ＦｃγＲＩＩＩａ（ＣＤ１６）を発現するように操作されたＣＨＯ細胞によって、抗体クラスタリングを誘導した。要するに、２μｇ／ｍＬのＢＡ００１、アイソタイプ対照抗体、またはＦｃ領域にＮ２９７Ａ変異を有するＢＡ００１多様体の存在下で、ＣＤ１６を発現するように操作されたＣＨＯ細胞または対照ＣＨＯ細胞を用量漸増しながら、５０，０００細胞／ウェルの密度でＪｕｒｋａｔレポーター細胞を共培養した。培養の４時間後に、ＮＦ−ｋＢ活性をＮａｎｏ−Ｇｌｏ（登録商標）ルシフェラーゼアッセイシステム（Ｐｒｏｍｅｇａ  Ｎ１１２０）によって測定した。
【０３０７】
図４Ｂに示されるように、ＢＡ００１単独では、ＣＤ１３７シグナル伝達を活性化せず、ＣＤ１６発現ＣＨＯ細胞単独では、限られた効果しか有さなかった。しかしながら、ＢＡ００１とＣＤ１６発現ＣＨＯ細胞との組み合わせは、レポーター細胞を相乗的に活性化した。Ｎ２９７Ａ変異は、ＣＤ１３７シグナル伝達を刺激するＢＡ００１の能力を無効にし、これは、Ｎ２９７Ａ  Ｆｃ多様体がＣＨＯ細胞上に発現されたＣＤ１６を係合することが不可能であり、したがって、抗体クラスタリングを実行することが不可能であるためと思われる。この結果は、ＢＡ００１が、ＣＤ１６発現細胞（例えば、抗原提示細胞またはＮＫ細胞）が存在する微小環境で選択的に活性であり得ることを示唆している。
【０３０８】
６．２．２  抗ＣＤ１３７抗体は、ＰＢＭＣ全体でＴ細胞機能を向上させるが、精製されたＴ細胞は向上させない。
ＣＤ１３７Ｌの存在下で、ＢＡ００１は、ヒトＴ細胞によるＩＬ−２分泌を促進した。
初代ヒトＰＢＭＣ上のＢＡ００１のアゴニスト活性を、ブドウ球菌エンテロトキシンＡ（ＳＥＡ）刺激後に評価した。要するに、冷凍保存したＰＢＭＣを、段階希釈した抗体（すなわち、図５に示される濃度のＢＡ００１、参照抗ＣＤ１３７抗体＃１もしくは＃２、またはアイソタイプ対照抗体）の存在下で、２００ｎｇ／ｍｌのＳＥＡスーパー抗原（Ｔｏｘｉｎ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ、Ｃａｔ＃ＡＴ１０１ｒｅｄ）と、５日間３７℃で刺激した。培養上清中のＩＬ−２濃度は、ＡｌｐｈａＬＩＳＡ（Ｐｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ、Ｃａｔ＃ＡＬ２２１Ｆ）によって分析した。各条件で５つの複製を試験した。
【０３０９】
図５に示されるように、抗ＣＤ１３７抗体Ｂａ００１（ＩｇＧ１）は、参照抗ＣＤ１３７抗体のものと同等かそれを超えるレベルで、用量依存的様式でヒトＰＢＭＣのＩＬ−２産生を増加させた。
ＣＤ１３７Ｌの不在下では、ＢＡ００１は、精製されたヒトＴ細胞によるＩＬ−２分泌を促進しなかった。
【０３１０】
ＣＤ１３７Ｌを発現している抗原提示細胞の不在下で、精製され刺激されたヒトＴ細胞上のＢＡ００１のアゴニスト活性を評価した。要するに、製造者の指示書に従って、ａｕｔｏＭＡＣＳカラムを備えたＭＡＣＳ  ＰａｎＴ細胞単離キット（ヒト）を使用して、冷凍保存されたＰＢＭＣからＴ細胞を精製した。少量のエンドトキシン、アジ化合物を含まない（ＬＥＡＦ）抗ＣＤ３抗体（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ  Ｃａｔ＃３００４３２）２μｇ／ｍＬで事前にコーティングした９６ウェル培養プレートに、精製されたＴ細胞を１×１０６細胞／ウェルで被せた。５μｇ／ｍＬの抗ＣＤ１３７抗体（ＢＡ００１、参照抗ＣＤ１３７抗体＃１、または参照抗ＣＤ１３７抗体＃２）またはアイソタイプ対照をＦ（ａｂ’）２断片ヤギ抗ヒトＩｇＧ（Ｊａｃｋｓｏｎ  ＩｍｍｕｎｏＲｅｓｅａｒｃｈ、Ｃａｔ＃１０９−００６−０９８）と架橋させ、次いでプレートに添加した。細胞を３７℃で３日間培養した。次いで培養上清中のＩＬ−２濃度を、ＡｌｐｈａＬＩＳＡ（Ｐｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ、Ｃａｔ＃ＡＬ２２１Ｆ）によって分析した。各条件で６つの複製を試験した。
【０３１１】
図６Ａ〜６Ｂに示されるように、ＢＡ００１は、アイソタイプ対照と比較して、精製されたＴ細胞によるＩＬ−２分泌の増加を促進しなかった。対照的に、両方の参照抗ＣＤ１３７抗体は、精製されたＴ細胞によるＩＬ−２分泌の上昇を誘導した。図６Ｃは、精製されたＴ細胞が、検出可能なレベルのＣＤ１３７Ｌを発現しなかったことを示している。
【０３１２】
総合すると、段落６．２．２のデータは、ＰＢＭＣ全体として、（例えば、ＣＤ１３７Ｌ発現細胞によって産生された）ＣＤ１３７Ｌ存在下でＢＡ００１のアゴニスト活性が上昇したことを示している。使用された条件下では、ＢＡ００１のアゴニスト活性は、ＣＤ１３７Ｌの存在を必要とし得ることが企図される。したがって、これらのデータは、ＣＤ１３７発現細胞を活性化するＢＡ００１の能力が、リガンド依存性であり得ることを示した。
【０３１３】
６．２．３  抗ＣＤ１３７抗体は、ＣＤ１３７Ｌの存在下でのみＮＦκＢ駆動遺伝子の発現を誘導する。
ＮＦκＢ−ルシフェラーゼレポーター細胞におけるＢＡ００１のリガンド依存性
ＢＡ００１活性は、ＣＤ１３７Ｌの不在下では、架橋に依存することが段落６．２．１に示された。ＣＤ１３７Ｌの存在下での架橋剤の効果をさらに評価した。要するに、１μｇ／ｍＬのＣＤ１３７Ｌ（組み換えヒト４−１ＢＢリガンド／ＴＮＦＳＦ９（Ｈｉｓタグ）、Ｒ＆Ｄ  ｓｙｓｔｅｍ、２２９５−４Ｌ−０２５／ＣＦ）を、任意選択的に上述の培養系に添加し、ＮＦ−κΒ活性を同様に測定した。
【０３１４】
図７Ａに示されるように、ＣＤ１３７Ｌの存在下では、ＢＡ００１はまたレポーターアッセイの活性に架橋剤を必要とし、ＣＤ１３７Ｌおよび架橋の効果は付加的なものであった。架橋剤対抗体の比が約１：１０〜１：１のとき、ＢＡ００１は、ＣＤ１３７Ｌの存在下でのみ活性を示した。
【０３１５】
外因的ＣＤ１３７Ｌがこの実験的な系においてＣＤ１３７Ｌの唯一の供給源であることを確認するために、Ｊｕｒｋａｔレポーター細胞をフローサイトメトリーによって分析した。要するに、ＣＤ１３７発現およびＣＤ１３７Ｌ発現Ｊｕｒｋａｔ細胞を解凍し、１０％のウシ胎児血清および１μｇ／ｍＬのピューロマイシンで補ったＲＰＭＩ培地で４時間または２４時間培養した。フローサイトメトリーによる分析用に、３×１０４細胞を９６ウェルＵ字底のプレートに被せ、２％のウシ胎児血清で補った冷たいリン酸緩衝生理食塩水で２回洗浄し、フィコエリスリン（ＰＥ）と共役させた抗ＣＤ１３７抗体、アロフィコシアニン（ＡＰＣ）と共役させた抗ＣＤ１３７Ｌ抗体、および近赤外線ｌｉｖｅ／ｄｅａｄ色素を用いて標識した。対照群の染色では、ＰＥと共役させた関連のないアイソタイプ対照抗体、ＡＰＣと共役させた関連のないアイソタイプ対照抗体、およびｌｉｖｅ／ｄｅａｄ色素を用いて細胞を標識した。
【０３１６】
図７Ｂに示されるように、ＣＤ１３７発現Ｊｕｒｋａｔレポーター細胞は、高いレベルのＣＤ１３７を発現したが、ＣＤ１３７Ｌは発現しなかった。比較すると、ＣＤ１３７Ｌ発現Ｊｕｒｋａｔ細胞は、高いレベルのＣＤ１３７Ｌを発現したが、ＣＤ１３７は発現しなかった。
【０３１７】
Ｊｕｒｋａｔレポーター細胞を使用した以下の全てのＮＦ−κΒ活性化アッセイでは、抗ＣＤ１３７抗体およびそれらのアイソタイプ対照抗体を、１：２の比で架橋させた。
【０３１８】
一実施例では、可溶性ヒトＣＤ１３７Ｌ（１２５ｎｇ／ｍｌ）の存在下でまたは不在下で、ヒトＣＤ１３７を発現しているＪｕｒｋａｔ  ＮＦκＢ−ルシフェラーゼレポーター細胞（５０，０００細胞／ウェル）を、段階希釈したＢＡ００１またはアイソタイプ対照と３７℃で４時間培養した。Ｎａｎｏ−Ｇｌｏ（登録商標）ルシフェラーゼアッセイシステム（Ｐｒｏｍｅｇａ  Ｃａｔ＃Ｎ１１２０）およびＥｎＶｉｓｉｏｎプレートリーダーを使用して、ルシフェラーゼ発現を検出した。図８Ａに示されるように、ＢＡ００１は、ＣＤ１３７Ｌの不在下でＮＦκＢ−ルシフェラーゼ発現を誘導しなかった。ＣＤ１３７Ｌの存在下では、ＢＡ００１は、用量依存的様式でＮＦκＢ−ルシフェラーゼ発現を誘導することが可能であった（図８Ｂ）。
【０３１９】
別の実施例では、可溶性ヒトＣＤ１３７Ｌ（１５０ｎｇ／ｍｌ）の存在下でまたは不在下で、カニクイザルＣＤ１３７を発現しているＪｕｒｋａｔ  ＮＦκＢ−ルシフェラーゼレポーター細胞（５０，０００細胞／ウェル）を、段階希釈したＢＡ００１またはアイソタイプ対照と３７℃で４時間培養した。Ｎａｎｏ−Ｇｌｏ（登録商標）ルシフェラーゼアッセイシステム（Ｐｒｏｍｅｇａ  Ｃａｔ＃Ｎ１１２０）およびＥｎＶｉｓｉｏｎプレートリーダーを使用して、ルシフェラーゼ発現を検出した。図８Ｃに示されるように、ＢＡ００１は、ＣＤ１３７Ｌの不在下でＮＦκＢ−ルシフェラーゼ発現を誘導しなかった。ＣＤ１３７Ｌの存在下では、ＢＡ００１は、用量依存的様式でＮＦκＢ−ルシフェラーゼ発現を誘導することが可能であった（図８Ｄ）。
【０３２０】
したがって、これらのデータは、使用した条件下では、対応するＣＤ１３７Ｌの存在下でのみ、ＢＡ００１がＮＦκＢを通じてヒトまたはカニクイザルＣＤ１３７シグナル伝達を誘導することを示している。
【０３２１】
ＢＡ００１は、ＣＤ１３７Ｌと協働してＣＤ１３７シグナル伝達を促進した。
さらなる実施例では、段階希釈した可溶性ヒトＣＤ１３７Ｌ（図９Ａ〜９Ｃに示されるように０〜１０００ｎｇ／ｍｌ）の存在下で、ヒトＣＤ１３７を発現しているＪｕｒｋａｔ  ＮＦκＢ−ルシフェラーゼレポーター細胞（５０，０００細胞／ウェル）を、２μｇ／モルの抗ＣＤ１３７抗体（ＢＡ００１、参照抗ＣＤ１３７抗体＃１、または参照抗ＣＤ１３７抗体＃２）、またはアイソタイプ対照と３７℃で４時間培養した。一組の試料では、ＣＤ１３７Ｌの前に抗ＣＤ１３７抗体を添加した（図９Ａ）。第２の組の試料では、抗ＣＤ１３７抗体およびＣＤ１３７Ｌを同時に添加した（図９Ｂ）。第３の組の試料では、抗ＣＤ１３７抗体の前にＣＤ１３７Ｌを添加した（図９Ｃ）。Ｎａｎｏ−Ｇｌｏ（登録商標）ルシフェラーゼアッセイシステム（Ｐｒｏｍｅｇａ  Ｃａｔ＃Ｎ１１２０）およびＥｎＶｉｓｉｏｎプレートリーダーを使用して、ルシフェラーゼ発現を検出した。
【０３２２】
図９Ａ〜９Ｃに示されるように、ＣＤ１３７Ｌは、用量依存的様式でＮＦκＢ−ルシフェラーゼ発現を誘導した。ＢＡ００１は、リガンド依存的様式でＮＦκＢ−ルシフェラーゼ発現を誘導し、より高いリガンド濃度のアイソタイプ対照で検出されるものを超えて、レポーター発現を実質的に増加させた。抗体およびリガンドを添加する順序に関係なく、この効果は観察された（図９Ａ〜９Ｃ、左側パネル）。対照的に、存在するＣＤ１３７Ｌの濃度に関係なく（例えば、ＣＤ１３７Ｌの不在下で）、かつ抗体およびリガンドを添加する順序に関係なく、リガンドを遮断する参照抗ＣＤ１３７抗体＃１は、ほぼ同じレベルのレポーター発現を駆動した（図９Ａ〜９Ｃ、中央パネル）。部分的にリガンドを遮断する／リガンドを遮断しない参照抗ＣＤ１３７抗体＃２はまた、リガンドの前に抗体が添加されると（図９Ａ、右側パネル）、存在するＣＤ１３７Ｌの濃度に関係なく（例えば、ＣＤ１３７Ｌの不在下で）同様のレベルのレポーター発現を駆動したが、抗体およびリガンドが一緒に添加されると（図９Ｂ、右側パネル）、または抗体の前にリガンドが添加されると（図９Ｃ、右側パネル）、より高いＣＤ１３７Ｌ濃度でレポーター発現の実質的な低減を示した。
【０３２３】
６．３  異なるＦｃ領域を有する抗ＣＤ１３７抗体の特徴付け
この実施例は、抗ＣＤ１３７抗体ＢＡ００１の機能的活性に対するＦｃ／Ｆｃ受容体相互作用の影響を分析する。具体的には、ＩｇＧ２およびＩｇＧ４を含む様々なＦｃ骨格、ならびにＦｃ領域がＥＵ番号付けシステムに従って番号付けられたＮ２９７ＡまたはＳ２６７Ｅ／Ｌ３２８Ｆ（ＳＥＬＦ）変異を含むＩｇＧ１骨格、およびＦｃ領域がＮ２９７Ａ変異を含むＩｇＧ２骨格を有するＢＡ００１のＶＨ領域を発現させた。当該技術分野で既知であるように、ＩｇＧ１  Ｎ２９７ＡおよびＩｇＧ２  Ｎ２９７Ａ多様体は、ＦｃγＲｓの係合を停止する、したがってＦｃγＲｓを介した抗体のＡＤＣＣ／ＡＤＣＰの潜在性または架橋を遮断する、Ｆｃサイレント変異を担持している。ＩｇＧ１  ＳＥＬＦ  Ｆｃ多様体は、ＦｃγＲＩＩＩａ結合の低減およびＦｃγＲＩＩｂ結合の向上を呈し、したがってＦｃγＲＩＩｂを介した抗体のＡＤＣＣ／ＡＤＣＰ潜在性を低減するが架橋を向上させる。ある場合では、本明細書に記載の抗ＣＤ１３７抗体の重鎖配列のＮ末端残基は、グルタミンである。ある場合では、本明細書に記載の抗ＣＤ１３７抗体の重鎖配列のＮ末端残基は、（例えば、翻訳後プロセシングに起因して）ピログルタミン酸である。
【０３２４】
抗体ＢＡ００１（ＩｇＧ１）は、配列番号９のアミノ酸配列を含む重鎖と、配列番号２１のアミノ酸配列を含む軽鎖と、を含む。抗体ＢＡ００１  ＩｇＧ１  Ｎ２９７Ａ（すなわちＢＡ００１のＩｇＧ１  Ｎ２９７Ａ多様体）は、配列番号１０のアミノ酸配列を含む重鎖と、配列番号２１のアミノ酸配列を含む軽鎖と、を含む。抗体ＢＡ００１  ＩｇＧ１  ＳＥＬＦ（すなわち、ＢＡ００１のＩｇＧ１  Ｓ２６７Ｅ／Ｌ３２８Ｆ多様体）は、配列番号のアミノ酸配列１１を含む重鎖と、配列番号のアミノ酸配列２１を含む軽鎖と、を含む。抗体ＢＡ００１  ＩｇＧ２（すなわち、ＢＡ００１のＩｇＧ２多様体）は、配列番号１２のアミノ酸配列を含む重鎖と、配列番号２１のアミノ酸配列を含む軽鎖と、を含む。抗体ＢＡ００１  ＩｇＧ２  Ｎ２９７Ａ（すなわちＢＡ００１のＩｇＧ２  Ｎ２９７Ａ多様体）は、配列番号１３のアミノ酸配列を含む重鎖と、配列番号２１のアミノ酸配列を含む軽鎖と、を含む。抗体ＢＡ００１  ＩｇＧ４（すなわち、ＢＡ００１のＩｇＧ４多様体）は、配列番号１４のアミノ酸配列を含む重鎖と、配列番号２１のアミノ酸配列を含む軽鎖と、を含む。ある場合では、ＩｇＧ４  Ｆｃ領域を含む抗体（例えば、抗体Ｂａ００１  ＩｇＧ４）は、重鎖の安定性を増加させ得るＳ２２８Ｐ変異を含む。次いで下述のように、機能的アッセイでこれらのＢＡ００１のＦｃ多様体を試験した。
【０３２５】
６．３．１  初代ヒトＰＢＭＣのＦｃ多様体機能性
初代ヒトＰＢＭＣについて、上述のＢＡ００１  Ｆｃ多様体の機能的活性を、ＳＥＡ刺激後に評価した。要するに、冷凍保存されたＰＢＭＣを、段階希釈したＢＡ００１  Ｆｃ多様体または対応するアイソタイプ対照抗体の存在下で、２００ｎｇ／ｍｌのＳＥＡスーパー抗原（Ｔｏｘｉｎ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ、Ｃａｔ＃ＡＴ１０１ｒｅｄ）と５日間３７℃で刺激した。培養上清中のＩＬ−２濃度は、ＡｌｐｈａＬＩＳＡ（Ｐｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ、Ｃａｔ＃ＡＬ２２１Ｆ）によって分析した。各条件で５つの複製を試験した。
【０３２６】
図１０Ａに示されるように、ＢＡ００１  ＩｇＧ１およびＢＡ００１  ＩｇＧ１  ＳＥＬＦは各々、ＳＥＡで刺激した初代ヒトＰＢＭＣにおいて強いＩＬ−２発現を誘導し、これは、これらの多様体の抗体の向上した架橋に起因し得る。対照的に、抗体の架橋を形成しないＢＡ００１  ＩｇＧ１  Ｎ２９７ＡおよびＢＡ００１  ＩｇＧ２  Ｎ２９７Ａ多様体は、検出可能な機能をほとんどまたは全く呈さなかった。これらのデータは、抗体の架橋が、初代ヒトＴ細胞上のＣＤ１３７をアゴナイズするＢＡ００１の機能を向上させたことを示した。ＢＡ００１  ＩｇＧ２およびＢＡ００１  ＩｇＧ４はまた、適度なレベルのＩＬ−２発現を誘導した。
【０３２７】
図１０Ｂは、ＳＥＡで刺激した初代ヒトＴ細胞によってＩＬ−２発現が向上した、Ｎ２９７Ａ変異体を除くＢＡ００１  Ｆｃ多様体の用量依存的活性を示している。ＢＡ００１  ＩｇＧ１  ＳＥＬＦおよびＢＡ００１  ＩｇＧ１は、最も強固な効果を誘導し、ＢＡ００１  ＩｇＧ４およびＢＡ００１  ＩｇＧ２が続いて強固な効果を誘導した。
【０３２８】
６．３．２  Ｆｃ多様体は、リガンド依存性を維持する。
段落２．２に記載のＮＦκＢ−ルシフェラーゼレポーター系を使用して、ＢＡ００１  Ｆｃ多様体のリガンド依存性を調べた。要するに、可溶性ヒトＣＤ１３７Ｌ（１２５ｎｇ／ｍｌ）の存在下でまたは不在下で、段落６．２．３に記載の方法によって架橋させた、ヒトＣＤ１３７を発現しているＪｕｒｋａｔ  ＮＦκＢ−ルシフェラーゼレポーター細胞（５０，０００細胞／ウェル）を、段階希釈したＢＡ００１  Ｆｃ多様体または対応するアイソタイプ対照と３７℃で４時間培養した。Ｎａｎｏ−Ｇｌｏ（登録商標）ルシフェラーゼアッセイシステム（Ｐｒｏｍｅｇａ  Ｃａｔ＃Ｎ１１２０）およびＥｎＶｉｓｉｏｎプレートリーダーを使用して、ルシフェラーゼ発現を検出した。
【０３２９】
図１１に示されるように、ＢＡ００１  Ｆｃ多様体の全てがリガンドに依存するＣＤ１３７のアゴニズムを呈した。ＣＤ１３７Ｌの不在下では、試験したＦｃ多様体のうちのいずれでもレポーター活性は検出されなかった（図１１左段）一方で、ＣＤ１３７Ｌの存在下では、全てのＢＡ００１  Ｆｃ多様体は、用量依存的様式でレポーター発現を誘導した（図１１右段）。すなわち、初代Ｔ細胞のＣＤ１３７発現レベルと比較して、この状況において、ＣＤ１３７をアゴナイズすることが可能な架橋がＦｃ多様体に不足しているのは、レポーター細胞によって発現される非常に高いレベルのＣＤ１３７に起因すると思われる。
【０３３０】
６．４  併用療法
６．４．１  抗ＰＤ−１抗体との組み合わせ
単独で、または抗ＰＤ−１抗体もしくは抗ＯＸ４０抗体と組み合わせた活性化Ｔ細胞による、サイトカイン産生を刺激する能力について、抗ＣＤ１３７抗体Ｂａ００１をさらに評価した。一実施例では、冷凍保存した初代ヒトＰＢＭＣを、ＢＡ００１（５μｇ／ｍＬ）とアイソタイプ対照（１０μｇ／ｍＬ）、抗ＰＤ−１抗体（１０μｇ／ｍＬ）とアイソタイプ対照（５μｇ／ｍＬ）、ＢＡ００１（５μｇ／ｍＬ）と抗ＰＤ−１抗体（１０μｇ／ｍＬ）との組み合わせ、またはアイソタイプ対照単独（１５μｇ／ｍＬ）のいずれかの存在下で、上述のようにＳＥＡで刺激した。別の実施例では、冷凍保存した初代ヒトＰＢＭＣを、ＢＡ００１（５μｇ／ｍＬ）とアイソタイプ対照（１０μｇ／ｍＬ）、抗ＯＸ４０抗体（１０μｇ／ｍＬ）とアイソタイプ対照（５μｇ／ｍＬ）、ＢＡ００１（５μｇ／ｍＬ）と抗ＯＸ４０抗体（１０μｇ／ｍＬ）との組み合わせ、またはアイソタイプ対照単独（１５μｇ／ｍＬ）のいずれかの存在下で、上述のようにＳＥＡで刺激した。培養上清中のＩＬ−２濃度を、ＡｌｐｈａＬＩＳＡ（Ｐｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ、Ｃａｔ＃ＡＬ２２１Ｆ）によって分析した。各条件で６つの複製を試験した。
【０３３１】
図１２Ａに示されるように、ＢＡ００１と抗ＰＤ−１抗体との組み合わせは、いずれの抗体単独よりも高いＩＬ−２分泌を生じた。同様に、図１２Ｂに示されるように、ＢＡ００１と抗ＯＸ４０抗体との組み合わせは、いずれの抗体単独よりも高いＩＬ−２分泌を誘導した。
【０３３２】
６．５  エピトープマッピング
ＨＤＸ質量分析法によって、ヒトＣＤ１３７の、ＢＡ００１（ＢＡ００１−Ｆａｂ）のＦａｂ断片またはＢＡ００１（ＢＡ００１−Ｆ（ａｂ’）２）のＦ（ａｂ’）２断片との相互作用を研究した。これらのデータを使用して、ヒトＣＤ１３７の細胞外のドメイン上のＢＡ００１−ＦａｂおよびＢＡ００１−Ｆ（ａｂ’）２によって結合されているエピトープ領域を特定した。
【０３３３】
６．５．１  水素−重水素交換（ＨＤＸ）による抗ＣＤ１３７抗体のエピトープマッピング
以下の方法を使用して、ＣＤ１３７の抗ヒトＣＤ１３７  Ｆ（ａｂ’）２および抗ヒトＣＤ１３７Ｆａｂとの相互作用を評価した。
【０３３４】
（Ａ）ＣＤ１３７の抗ヒトＣＤ１３７  Ｆ（ａｂ’）２との相互作用
２０μｌのヒトＣＤ１３７（５．４８μｇ）または２０μｌのヒトＣＤ１３７と、ＢＡ００１−Ｆ（ａｂ’）２との混合物（５．４８μｇ：  ２２．３６μｇ）を、２０℃の１０５μｌの酸化重水素標識緩衝液（５０ｍＭのリン酸ナトリウム、１００ｍＭの塩化ナトリウム、ｐＤ７．４）と、０秒、６０秒、３００秒、１８００秒、７２００秒、および１４４００秒間培養した。水素／重水素交換を１２５μＬの４Ｍのグアニジン塩酸塩、０．８５ＭのＴＣＥＰ緩衝液（最終ｐＨは２．５である）を添加することによってクエンチし、２０℃で５分間混合物を培養した。その後、クエンチした試料にオンカラムペプシン／プロテアーゼＸＩＩＩ消化および下述のＬＣ−ＭＳ分析を施した。質量スペクトルは、ＭＳオンリーモードで記録した。
【０３３５】
（Ｂ）ＣＤ１３７の抗ヒトＣＤ１３７  Ｆａｂとの相互作用
１５μｌのヒトＣＤ１３７（５．０μｇ）または１５μｌのヒトＣＤ１３７と、ＢＡ００１−Ｆａｂとの混合物（５．０μｇのヒトＣＤ１３７＋１５．０μｇのＦａｂ）を、２５℃の１１０μｌの酸化重水素標識緩衝液（５０ｍＭのリン酸ナトリウム、１００ｍＭの塩化ナトリウム、ｐＤ７．４）と、０秒、６０秒、３００秒、および１８００秒間培養した。水素／重水素交換を１２５μＬの４Ｍのグアニジン塩酸塩、０．８５ＭのＴＣＥＰ緩衝液（最終ｐＨは２．５である）を添加することによってクエンチし、２５℃で３分間混合物を培養した。その後、クエンチした試料にオンカラムペプシン／プロテアーゼＸＩＩＩ消化および下述のＬＣ−ＭＳ分析を施した。質量スペクトルは、ＭＳオンリーモードで記録した。
【０３３６】
ＨＤＸデータ分析
Ｈ／Ｄ交換ＭＳデータ分析のために、ＨＤＸ  ＷｏｒｋＢｅｎｃｈソフトウェアを使用して、未修正のＭＳデータを処理した。重水素化ペプチドとその天然形態（ｔｏ）との間の平均質量差を使用して、重水素レベルを計算した。重水素組み込みの計算のために、所与のペプチドについての質量分析を、抽出されたイオンクロマトグラムピークにわたって組み合わせ、加重平均ｍ／ｚを計算した。天然のペプチドの質量（０分）から加重平均質量への質量増加は、重水素の組み込みレベルに対応する。
【０３３７】
ペプシン／プロテアーゼＸＩＩＩ消化およびＬＣ−ＭＳ
ペプシン／プロテアーゼＸＩＩ消化によるＨＤＸに使用するために、Ｈｉｓタグ付けしたヒトＣＤ１３７（ＡｃｒｏＢｉｏｓｙｓｔｅｍｓ  Ｉｎｃ．）をペプチドに断片化した。１２５μＬの対照緩衝液（５０ｍＭのリン酸塩、１００ｍＭの塩化ナトリウム、ｐＨ７．４）中５．４８μｇのヒトＣＤ１３７を、１２５μＬの４Ｍ塩酸グアニジン、０．８５ＭのＴＣＥＰ緩衝液（最終ｐＨは２．５である）を添加し、混合物を２０℃で５分間培養することによって変性させた。混合物を、社内で充填したペプシン／プロテアーゼＸＩＩＩカラム（ｗ／ｗ１：１）を使用して、オンカラムペプシン／プロテアーゼＸＩＩＩ消化を施し、得られたペプチドを、Ｑ  Ｅｘａｃｔｉｖｅ（商標）Ｈｙｂｒｉｄ  Ｑｕａｄｒｕｐｏｌｅ−Ｏｒｂｉｔｒａｐ質量分析計（Ｔｈｅｒｍｏ）に取り付けられたＷａｔｅｒｓ  Ａｃｑｕｉｔｙ  ＵＰＬＣで構成されたＵＰＬＣ−ＭＳシステムを使用して分析した。ペプチドの特定は、Ｍａｓｃｏｔを用いて、ヒトＣＤ１３７配列に対するＭＳ／ＭＳデータを検索することによって実施した。前駆体および産生物イオンの質量耐性は、それぞれ１０ｐｐｍおよび０．０５Ｄａであった。
【０３３８】
抗ヒトＣＤ１３７  Ｆ（ａｂ’）２のエピトープ結合
ＣＤ１３７ペプチドの大部分は、ＢＡ００１−Ｆ（ａｂ’）２の存在下、および不在下で、同一または同様の重水素レベルを示した。しかしながら、いくつかのペプチドセグメントは、Ｆ（ａｂ’）２結合時に顕著に減少した重水素の組み込みを有することが見出された。この段落での全ての残基は、配列番号２５に従って番号付けされる。残基１２５〜１５５（ＦＮＤＱＫＲＧＩＣＲＰＷＴＮＣＳＬＤＧＫＳＶＬＶＮＧＴＫＥＲＤ、配列番号２７）からなる１つの領域は、ヒトＣＤ１３７がＢＡ００１−Ｆ（ａｂ’）２に結合すると、強い重水素保護を経験した。したがって、この領域は、ＣＤ１３７上のＢＡ００１のエピトープまたはその部分に対応する。ＢＡ００１が強く結合した、ヒトおよびカニクイザルＣＤ１３７（図１Ａおよび１Ｂ）の両方の配列を検査することにより、上述の領域における完全な配列同一性が明らかになった（図１１）。対照的に、ヒトＣＤ１３７と比較して多数のアミノ酸置換および挿入をこの領域に含むＢＡ００１は、顕著な程度ではマウスＣＤ１３７に結合しない（データは示さず）（図１４Ａ）。最後に、ＣＤ１３７の断片、残基２６〜６３（ＤＰＣＳＮＣＰＡＧＴＦＣＤＮＮＲＮＱＩＣＳＰＣＰＰＮＳＦＳＳＡＧＧＱＲＴＣＤ、配列番号３４）はまた、重水素保護を示した。理論に束縛されることを望むものではないが、このシグナルはＰＬＡＤ−ＰＬＡＤ相互作用を介したＣＤ１３７二量体化を反映しているとが企図され、これは、ＢＡ００１−Ｆ（ａｂ’）２の各アームによる例えば２つの別個のＣＤ１３７分子のうちの１つへの結合によって向上され得、それによりＣＤ１３７分子のＰＬＡＤドメインの十分に近位に近づいて結合してＰＬＡＤ−ＰＬＡＤ相互作用を可能にする。
【０３３９】
抗ヒトＣＤ１３７  Ｆａｂのエピトープ結合
ＣＤ１３７ペプチドの大部分は、ＢＡ００１Ｆａｂの存在下、および不在下で、同一または同様の重水素レベルを示した。しかしながら、いくつかのペプチドセグメントは、ＢＡ００１−Ｆａｂ結合時に顕著に減少した重水素の組み込みを有することが見出された。この段落での全ての残基は、配列番号２５に従って番号付けされる。残基１２５〜１４１（ＦＮＤＱＫＲＧＩＣＲＰＷＴＮＣＳＬ、配列番号２６）によって画定される領域は、ヒトＣＤ１３７がＢＡ００１−Ｆａｂに結合すると、強い重水素保護を経験した。したがって、この領域は、ＣＤ１３７上のＢＡ００１のエピトープまたはその部分に対応する。残基８９〜９８（ＴＰＧＦＨＣＬＧＡＧ、配列番号２８）、および残基１０７〜１１２（ＫＱＧＱＥＬ、配列番号２９）からなる２つの追加の領域はまた、実質的な重水素保護を呈し、したがって、ＣＤ１３７のＢＡ００１の追加のエピトープまたはその部分に任意選択的に対応する。ＢＡ００１が強く結合した、ヒトおよびカニクイザルＣＤ１３７（図１Ａおよび１Ｂ）の両方の配列を検査することにより、上述の、配列番号２６および２９に対応する領域における完全な配列同一性が明らかになった（図１３）。これらの領域でヒトＣＤ１３７とは実質的に異なるＢＡ００１は、顕著な程度ではマウスＣＤ１３７に結合しない（データは示さず）（図１４Ａ）。４つのアミノ酸置換は、配列番号２８（すなわち、Ｔ８２Ｉ、Ｐ８３Ｓ、Ｆ８５Ｙ、およびＧ９１Ｅ）に対応するカニクイザル配列の領域に見出される。残基２６〜６３（配列番号３４）からなるＣＤ１３７の領域は、この実験において重水素保護を全く呈さなかった。理論に束縛されることを望むものではないが、個々のＢＡ００１−Ｆａｂ断片のＣＤ１３７の単一分子へのその結合が、ＰＬＡＤ−ＰＬＡＤ二量体化を促進しないことが企図される。
【０３４０】
６．５．２  ヒト／マウスキメラタンパク質を使用する抗ＣＤ１３７抗体のエピトープマッピング
一連のＪｕｒｋａｔ細胞にトランスフェクトされたマウス切り替え変異構造体を使用して、抗ＣＤ１３７抗体Ｂａ００１によって認識されるヒトＣＤ１３７上のエピトープをさらに研究し、次いでＦＡＣＳによって分析することができた。細胞外ドメイン内に単一の変異した領域を含有するヒトＣＤ１３７を構造的に各々発現する、ヒトＣＤ１３７配列のその部分がマウスＣＤ１３７（すなわち、図１４Ａに示される変異体５０１４〜５０１８、以下の表５に提供される配列）からの対応する配列と切り替えられている、Ｊｕｒｋａｔ切り替え変異体を生成した。
【表５】
2020516240.tif 000023
【０３４１】
これらの操作された変異体細胞株を使用して、抗ＣＤ１３７抗体が、特定の切り替え変異体に結合することができるかどうかを試験した。それによる結合の不在は、可能なエピトープ位置を示したであろう。概して段落１．１に記載の細胞結合アッセイを実施した。要するに、段階希釈した抗ＣＤ１３７抗体（すなわち、ＢＡ００１、参照抗ＣＤ１３７抗体＃１、または参照抗ＣＤ１３７抗体＃２）を使用して、９６ウェルプレートで、５×１０４細胞／ウェルのトランスフェクトしたＪｕｒｋａｔ細胞を４℃で２５分間染色した。細胞を２回洗浄し、Ｆ（ａｂ’）２ヤギ抗ヒトＩｇＧ−ＰＥ二次抗体（Ｊａｃｋｓｏｎ  ＩｍｍｕｎｏＲｅｓｅａｒｃｈ、Ｃａｔ＃１０９−１１６−０９８）と培養した。次いで細胞を洗浄し、ＰＢＳ中で調製した２％のパラホルムアルデヒド（Ｅｌｅｃｔｒｏｎ  Ｍｉｃｒｏｓｃｏｐｙ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ）８０μｌに懸濁した。ＢＤ  ＦＡＣＳ  Ｃａｎｔｏを用いてデータを収集し、ＢＤ  ＦＡＣＳＤｉｖａソフトウェアを使用して分析した。
【０３４２】
図１４Ｂに示されるように、抗体Ｂａ００１は、ヒトＣＤ１３７の配列ＬＴＫＫＧＣＫＤＣＣＦＧＴＦＮＤＱＫＲＧＩＣＲＰＷＴＮＣ（配列番号３０）がマウスＣＤ１３７の対応する領域で置換されている、変異体５０１７を除く全てのマウス切り替え変異体を発現しているＪｕｒｋａｔ細胞に結合することができた。ＢＡ００１が呈する結合パターンは、参照抗ＣＤ１３７抗体＃１および＃２が呈するものとは異なる（図１４Ｂ）。参照抗ＣＤ１３７抗体＃１は、より低い抗体濃度で変異体５０１７へのわずかな結合を呈したが、結合は１０μｇ／ｍＬ以上の濃度ではっきりと検出された。加えて、ＢＡ００１とは異なり、参照抗ＣＤ１３７抗体＃１は、変異体５０１６への結合を全く示さなかった。
【０３４３】
マウス切り替え変異体から特定されたヒトＣＤ１３７のＢＡ００１エピトープは、段落６．５．１に記載のＨＤＸエピトープマッピング実験において特定されたＢＡ００１エピトープと実質的に重複した。重複している領域では、ＫＲＧＩ（配列番号４３）の配列を有する、ヒトＣＤ１３７の４つの連続したアミノ酸残基は、マウスＣＤ１３７の対応する領域で見出されるＮＧＴＧＶ（配列番号４４）の配列とは異なった（図１５Ａ）。この差異は、マウスＣＤ１３７へのＢＡ００１の実質的な親和性の欠如を説明し得る。ＫＲＧＩ（配列番号４３）の配列がＢＡ００１によって認識されるエピトープであるかどうかを決定するために、キメラＣＤ１３７細胞外ドメインを含む２つのタンパク質を生成した：「４−ａａヒトからマウス」ＣＤ１３７タンパク質は、ＫＲＧＩ配列がＮＧＴＧＶで置換されたヒトＣＤ１３７細胞外ドメインであり、「４−ａａマウスからヒト」ＣＤ１３７タンパク質は、ＮＧＴＧＶ配列がＫＲＧＩで置換されたマウスＣＤ１３７細胞外ドメインであった。これらのキメラタンパク質は、Ｃ−末端にＧｌｙ−Ｓｅｒリンカーおよび６×Ｈｉｓタグをさらに含む。細胞外ドメインの配列を表６に提供する。
【表６】
2020516240.tif 000024
【０３４４】
表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）アッセイで、上述のキメラＣＤ１３７タンパク質を試験した。要するに、まず、アミンカップリングキットを使用して、ＣＭ５センサーチップを抗ヒトＦａｂ抗体でコーティングした。フローセル１を参照として保持し、フローセル２および３上で６μｇ／ｍＬのＢＡ００１および参照抗ＣＤ１３７抗体＃１をそれぞれ１０μｌ／分の流量で捕捉した。次いで、６０ｎＭの濃度の完全なヒトＣＤ１３７タンパク質、「ヒトからマウス」ＣＤ１３７キメラタンパク質、および「マウスからヒト」ＣＤ１３７キメラタンパク質を、９０秒間３０μｌ／分でフローセル上に独立して泳動させ、続いて４００秒解離させた。会合および解離相の両方の間のセンサーグラムを記録した。
【０３４５】
図１５Ｂに示されるように、ヒトＣＤ１３７のＫＲＧＩ（配列番号４３）配列をマウスＣＤ１３７のＮＧＴＧＶ（配列番号４４）配列で置換すると、キメラタンパク質は、ＢＡ００１に結合するその能力を喪失した。逆に、マウスＣＤ１３７のＮＧＴＧＶ（配列番号４４）配列をヒトＣＤ１３７のＫＲＧＩ（配列番号４３）配列で置換すると、キメラタンパク質は、ＢＡ００１に結合する能力を得た。これらのデータは、ＫＲＧＩ（配列番号４３）配列が、ＢＡ００１への結合に関与するヒトＣＤ１３７の重要なエピトープ領域を表すことを示唆した。
【０３４６】
比較すると、図１５Ｃに示されるように、ヒトＣＤ１３７のＫＲＧＩ（配列番号４３）配列をマウスＣＤ１３７のＮＧＴＧＶ（配列番号４４）配列で置換すると、キメラタンパク質は、参照抗ＣＤ１３７抗体＃１に結合するその能力を喪失した。しかしながら、マウスＣＤ１３７のＮＧＴＧＶ（配列番号４４）配列をヒトＣＤ１３７のＫＲＧＩ（配列番号４３）配列で置換すると、キメラタンパク質は、参照抗ＣＤ１３７抗体＃１に結合する能力を得なかった。これらのデータは、ＫＲＧＩ（配列番号４３）配列が、参照抗ＣＤ１３７抗体＃１の結合に必要であるにもかかわらず、マウスＣＤ１３７の状況では十分でなかったことを示唆した。
【０３４７】
６．６  抗ＣＤ１３７抗体多様体の特徴評価
この実施例は、ＢＡ００１抗体の多様体である抗ＣＤ１３７抗体の特徴評価について説明する。これらの抗体のうちの４つの可変領域の配列情報を表１および２に提供する。
【０３４８】
６．６．１  ＢＡ００１多様体は、ヒトおよびカニクイザルＣＤ１３７に結合する。
ＢＡ００１のＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ３、およびＣＤＲＬ３にアミノ酸置換を含有するｓｃＦｖファージディスプレイライブラリをスクリーニングすることによって、ＢＡ００１の多様体を生成した。要するに、配列番号５５のアミノ酸配列を含むＢＡ００１のｓｃＦｖを生成し、ｓｃＦｖの変異誘発を行い、親和性に基づいて選択することによってポジティブクローンを濃厚にした。ヒトＣＤ１３７に結合する合計３４７個のクローンを特定した。３４７個のクローンのアミノ酸配列の分析から構成した、コンセンサスＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ３、およびＣＤＲＬ３配列は、それぞれ配列番号８２、８３、および８４に記載されている。３４７個のクローンのなかでも、２３３個が、１×１０−３秒−１未満の解離速度を有した。これらの２３３個のクローンから構成した、コンセンサスＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ３、およびＣＤＲＬ３配列は、それぞれ配列番号８５、８６、および８７に記載されている。
【０３４９】
ＢＡ００１多様体のうちの４つのＣＤ１３７への結合親和性をさらに特徴評価した。ＢＡ０４９、ＢＡ０５０、ＢＡ０５１、およびＢＡ０５２という名称のこれらの４つの多様体は、表１に提供される列配列番号６９、７０、７１、および７２にそれぞれ記載のｓｃＦｖアミノ酸配列を含んだ。４つの多様体をＩｇＧ１フォーマットに変換し、それらの重鎖配列および軽鎖配列を表１および２に提供する。結合親和性を測定するために、各々Ｇｌｙ−Ｓｅｒリンカー、続いて６×Ｈｉｓタグを含む、ヒトＣＤ１３７、カニクイザルＣＤ１３７、マウス−ヒト融合構造体５０１５（アミノ酸残基５３〜８１を対応するヒトＣＤ１３７の配列で置換したマウスＣＤ１３７）、およびマウス−ヒト融合構造体５０１７（アミノ酸残基１１２〜１４０を対応するヒトＣＤ１３７の配列で置換したマウスＣＤ１３７）の細胞外ドメインを、抗原として使用した。（リンカーおよび６×Ｈｉｓタグを除く）２つのキメラタンパク質の細胞外ドメイン配列を表７に提供する。
【表７】
2020516240.tif 000025
【０３５０】
（ＩｇＧ１フォーマットにおける）ＢＡ００１多様体の抗原に対する親和性をＥＬＩＳＡによって測定した。特に、１ｘＰＢＳ（ｐＨ７．４）（Ｇｉｂｃｏ（商標）、Ｃａｔ＃１００１００５６）で希釈した５μｇ／ｍＬの各抗原５０μｌを、Ｔｈｅｒｍｏ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ（商標）Ｂｌａｃｋ９６ウェルＩｍｍｕｎｏ  Ｐｌａｔｅ（Ｔｈｅｒｍｏｆｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、Ｃａｔ＃４３７１１１）の各ウェルに添加し、４℃で一晩培養した。Ｂｉｏｓｔａｃｋ３マイクロプレートスタッカーを備えたＢｉｏｔｅｋ４０５ＴＳマイクロプレート洗浄器を使用して、プレートをＰＢＳで３回洗浄した。ＰＢＳ中３％のミルク粉末（Ｍａｒｖｅｌ乾燥スキムミルク粉末）を含む３００ｕｌ／ウェルを用いて室温で１時間培養することによって、プレートを遮断し、１ｘＰＢＳで３回洗浄した。３％Ｍ−ＰＢＳ（１ｘＰＢＳ中のミルク粉末）に抗体を滴定してプレートに添加して、室温で１時間培養した。プレートを、０．１％のＴｗｅｅｎ２０（Ｓｉｇｍａ  Ａｌｄｒｉｃｈ、Ｃａｔ＃Ｐ１３７９）を含む１ｘＰＢＳで３回、プレート洗浄器を使用して１ｘＰＢＳで３回洗浄した。３％Ｍ−ＰＢＳ中１：２０００で希釈した、５０μｌのビオチン−ＳＰ（ロングスペーサー）ＡｆｆｉｎｉＰｕｒｅヤギ抗ヒトＩｇＧ、Ｆｃγ  Ｆｒａｇｍｅｎｔ  Ｓｐｅｃｉｆｉｃ（Ｊａｃｋｓｏｎ  Ｉｍｍｕｎｏ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ、Ｃｏｄｅ：１０９−０６５−０９８、ロット番号１２３９０９）を各ウェルに添加し、室温で１時間培養した。プレートを、０．１％のＴｗｅｅｎ２０を含む１ｘＰＢＳで３回、およびプレート洗浄器を使用して１ｘＰＢＳで３回洗浄した。検出用に、ＤＥＬＦＩＡ（登録商標）アッセイ緩衝液（ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ、製品番号４００２−００１０、ロット番号６４６７０２）中１：５００で希釈した、５０μｌのＤＥＬＦＩＡ（登録商標）ユウロピウムで標識したストレプトアビジン（ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ、製品番号１２４４−３６０、ロット番号２１９５９９７）を各ウェルに添加し、室温で１時間培養した。プレートを、０．１％のＴｗｅｅｎ２０を含む１ｘＰＢＳで３回、およびプレート洗浄器を使用してＰＢＳで３回洗浄した。５０ｕｌのＤＥＬＦＩＡ（登録商標）エンハンスメント溶液（ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ、製品番号４００１−００１０、ロット番号６５０８７２）を各ウェルに添加し、穏やかに振盪しながら室温で５分間培養した。Ｔｅｃａｎ  Ｉｎｆｉｎｉｔｅ  Ｍ１０００  Ｐｒｏプレートリーダーを使用して、励起３４０ｎＭおよび放射６１５ｎＭで蛍光を読み出した。データをＴｅｃａｎ  ｉＣｏｎｔｒｏｌソフトウェア１．１１．１．０版を用いて取得し、Ｇｒａｐｈｐａｄ  Ｐｒｉｓｍ７．０２版を用いて分析した。
【０３５１】
図１６Ａおよび１６Ｂに示されるように、４つのＢＡ００１多様体は、ヒトおよびカニクイザルＣＤ１３７への結合を示した。加えて、それらはマウス−ヒト融合構造体５０１７（「ｍＣＤ１３７−ヒト１１２−１３９」）に結合したが（図１６Ｃ）、マウス−ヒト融合構造体５０１５（「ｍＣＤ１３７−ヒト５３−８０」）には結合せず（図１６Ｄ）、それらはアミノ酸残基１１２〜１３９の領域におけるヒトＣＤ１３７のエピトープに結合したことを示している。これらのデータは、これらの４つの多様体が、ＢＡ００１と同じかまたは同様のエピトープに結合したことを示唆している。
【０３５２】
本発明の範囲は、本明細書に記載の具体的な実施形態に限定されるものではない。実際には、記載される修正に加えて本発明の様々な修正が、前述の説明および添付の図面から当業者に明らかになるであろう。そのような修正は、添付の特許請求の範囲内に収まるよう意図されている。
【０３５３】
本明細書に引用される全ての参考文献（例えば、出版物または特許または特許出願）は、各々の個別の参考文献（例えば、出版物または特許または特許出願）が全ての目的のために参照によりその全体が組み込まれると具体的かつ個別に示される場合と同じ程度に、参照によりそれらの全体がおよび全ての目的のために本明細書に組み込まれる。
【０３５４】
他の実施形態は、以下の特許請求の範囲内である。
【図１Ａ】
2020516240.tif 000026
【図１Ｂ】
2020516240.tif 000027
【図２Ａ】
2020516240.tif 000028
【図２Ｂ】
2020516240.tif 000029
【図３Ａ】
2020516240.tif 000030
【図３Ｂ】
2020516240.tif 000031
【図３Ｃ】
2020516240.tif 000032
【図４Ａ】
2020516240.tif 000033
【図４Ｂ】
2020516240.tif 000034
【図５】
2020516240.tif 000035
【図６Ａ】
2020516240.tif 000036
【図６Ｂ】
2020516240.tif 000037
【図６Ｃ】
2020516240.tif 000038
【図７Ａ】
2020516240.tif 000039
【図７Ｂ】
2020516240.tif 000040
【図８】
2020516240.tif 000041
【図９】
2020516240.tif 000042
【図１０Ａ】
2020516240.tif 000043
【図１０Ｂ】
2020516240.tif 000044
【図１１】
2020516240.tif 000045
【図１２Ａ】
2020516240.tif 000046
【図１２Ｂ】
2020516240.tif 000047
【図１３】
2020516240.tif 000048
【図１４Ａ】
2020516240.tif 000049
【図１４Ｂ】
2020516240.tif 000050
【図１５Ａ】
2020516240.tif 000051
【図１５Ｂ】
2020516240.tif 000052
【図１５Ｃ】
2020516240.tif 000053
【図１６Ａ】
2020516240.tif 000054
【図１６Ｂ】
2020516240.tif 000055
【図１６Ｃ】
2020516240.tif 000056
【図１６Ｄ】
2020516240.tif 000057
【配列表】
2020516240000001.app
【国際調査報告】
2020516240.tif 000058
2020516240.tif 000059
2020516240.tif 000060
2020516240.tif 000061
2020516240.tif 000062
2020516240.tif 000063
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