(57)【要約】ＴＬＲ９アゴニストである配列番号１〜１２の配列を含む免疫調節ポリヌクレオチドが提供される。該免疫調節ポリヌクレオチドを含む治療的組合せも提供される。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
配列番号１、配列番号２、配列番号３、配列番号４、配列番号５、配列番号６、配列番号７、配列番号８、配列番号９、配列番号１０、配列番号１１、及び配列番号１２からなる群から選択される配列を含む免疫調節ポリヌクレオチド。
【請求項２】
前記ポリヌクレオチドが、化学修飾を含む、請求項１に記載の免疫調節ポリヌクレオチド。
【請求項３】
前記ポリヌクレオチドが、１つ又は複数のリン酸基の修飾を含む、請求項１に記載の免疫調節ポリヌクレオチド。
【請求項４】
１つ又は複数のリン酸基の前記修飾が、ホスホロチオエート結合である、請求項３に記載の免疫調節ポリヌクレオチド。
【請求項５】
前記ポリヌクレオチドのリン酸骨格が、完全にホスホロチオエートで修飾されている、請求項３に記載の免疫調節ポリヌクレオチド。
【請求項６】
１つ又は複数のリン酸基の前記修飾が、結合である、請求項２に記載の免疫調節ポリヌクレオチド。
【請求項７】
対象における免疫応答を調節する方法であって、請求項１〜６のいずれか一項に記載の免疫調節ポリヌクレオチドを、前記個体における免疫応答を調節するのに十分な量で、対象に投与するステップを含む方法。
【請求項８】
対象におけるインターフェロン−アルファ（ＩＦＮ−α）を増加させる方法であって、請求項１〜６のいずれか一項に記載の免疫調節ポリヌクレオチドを、前記対象におけるＩＦＮ−αを増加させるのに十分な量で、対象に投与するステップを含む方法。
【請求項９】
対象におけるインターフェロン−ガンマ（ＩＦＮ−γ）を増加させる方法であって、請求項１〜６のいずれか一項に記載の免疫調節ポリヌクレオチドを、前記対象におけるＩＦＮ−γを増加させるのに十分な量で、対象に投与するステップを含む方法。
【請求項１０】
対象における感染症の症状を回復させる方法であって、対象に、請求項１〜６のいずれか一項に記載の免疫調節ポリヌクレオチドの有効量を投与するステップを含み、有効量が前記感染症の症状を回復させるのに十分な量である、方法。
【請求項１１】
対象におけるがん又は腫瘍の治療する方法であって、対象に、請求項１〜６のいずれか一項に記載の免疫調節ポリヌクレオチドの有効量を投与するステップを含み、有効量が前記がん又は腫瘍を治療するのに十分な量である、方法。
【請求項１２】
（ｉ）がんに対する有効量の標的治療；及び
（ｉｉ）有効量の請求項１〜６のいずれか一項に記載の免疫調節ポリヌクレオチド、又はその組合せ
を含む、治療的組合せ。
【請求項１３】
前記標的治療が、非腫瘍細胞と比較して、特異的に又は好ましくは腫瘍細胞に結合することが可能である、請求項１２に記載の治療的組合せ。
【請求項１４】
前記腫瘍細胞が、癌、肉腫、リンパ腫、ミエローマ、又は中枢神経系がんである、請求項１３に記載の治療的組合せ。
【請求項１５】
前記標的治療が、非腫瘍抗原と比較して、特異的に又は好ましくは腫瘍抗原に結合することが可能である、請求項１２〜１４のいずれか一項に記載の治療的組合せ。
【請求項１６】
前記腫瘍抗原が、ＣＤ２、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＣＤ２７、ＣＤ３３、ＣＤ３７、ＣＤ３８、ＣＤ４０、ＣＤ４４、ＣＤ４７、ＣＤ５２、ＣＤ５６、ＣＤ７０、ＣＤ７９、及びＣＤ１３７からなる群から選択される、請求項１５に記載の治療的組合せ。
【請求項１７】
前記腫瘍抗原が、４−１ＢＢ、５Ｔ４，ＡＧＳ−５，ＡＧＳ−１６、アンギオポエチン２、Ｂ７．１、Ｂ７．２、Ｂ７ＤＣ、Ｂ７Ｈ１、Ｂ７Ｈ２、Ｂ７Ｈ３、ＢＴ−０６２、ＢＴＬＡ、ＣＡＩＸ、癌胎児抗原、ＣＴＬＡ４、Ｃｒｉｐｔｏ、ＥＤ−Ｂ、ＥｒｂＢ１、ＥｒｂＢ２、ＥｒｂＢ３、ＥｒｂＢ４、ＥＧＦＬ７、ＥｐＣＡＭ、ＥｐｈＡ２、ＥｐｈＡ３、ＥｐｈＢ２、ＦＡＰ、フィブロネクチン、葉酸受容体、ガングリオシドＧＭ３、ＧＤ２、糖質コルチコイド誘導性腫瘍壊死因子受容体（ＧＩＴＲ）、ｇｐ１００、ｇｐＡ３３、ＧＰＮＭＢ、ＩＣＯＳ、ＩＧＦ１Ｒ、インテグリンαγ、インテグリンαγβ、ＫＩＲ、ＬＡＧ−３、ルイスＹ、メソテリン、ｃ−ＭＥＴ、ＭＮカルボニックアンヒドラーゼＩＸ、ＭＵＣ１、ＭＵＣ１６、Ｎｅｃｔｉｎ−４、ＮＫＧＤ２、ＮＯＴＣＨ，ＯＸ４０、ＯＸ４０Ｌ、ＰＤ−１、ＰＤＬ１、ＰＳＣＡ、ＰＳＭＡ、ＲＡＮＫＬ、ＲＯＲ１、ＲＯＲ２、ＳＬＣ４４Ａ４、ＳＴＩＮＧ（ＩＦＮ遺伝子刺激因子）、Ｓｙｎｄｅｃａｎ−１、ＴＡＣＩ、ＴＡＧ−７２、テネイシン、ＴＩＭ３、ＴＲＡＩＬＲ１、ＴＲＡＩＬＲ２、ＶＥＧＦＲ−１、ＶＥＧＦＲ−２、ＶＥＧＦＲ−３、及びその変形からなる群から選択される、請求項１５に記載の治療的組合せ。
【請求項１８】
前記標的治療が、免疫グロブリン、タンパク質、ペプチド、小分子、ナノ粒子、又は核酸を含む、請求項１２〜１７のいずれか一項に記載の治療的組合せ。
【請求項１９】
前記標的治療が、抗体、又はその機能的な断片を含む、請求項１２〜１７のいずれか一項に記載の治療的組合せ。
【請求項２０】
前記抗体が、Ｒｉｔｕｘａｎ（リツキシマブ）、Ｈｅｒｃｅｐｔｉｎ（トラスツズマブ）、Ｅｒｂｉｔｕｘ（セツキシマブ）、Ｖｅｃｔｉｂｉｘ（パニツムマブ）、Ａｒｚｅｒｒａ（オファツムマブ）、Ｂｅｎｌｙｓｔａ（ベリムマブ）、Ｙｅｒｖｏｙ（イピリムマブ）、Ｐｅｒｊｅｔａ（ペルツズマブ）、Ｔｒｅｍｅｌｉｍｕｍａｂ、Ｏｐｄｉｖｏ（ニボルマブ）、Ｄａｃｅｔｕｚｕｍａｂ、Ｕｒｅｌｕｍａｂ、Ｔｅｃｅｎｔｒｉｑ（アテゾリズマブ、ＭＰＤＬ３２８０Ａ）、Ｌａｍｂｒｏｌｉｚｕｍａｂ、Ｂｌｉｎａｔｕｍｏｍａｂ、ＣＴ−０１１、Ｋｅｙｔｒｕｄａ（ペムブロリズマブ、ＭＫ−３４７５）、ＢＭＳ−９３６５５９、ＭＥＤ１４７３６、ＭＳＢ００１０７１８Ｃ、Ｉｍｆｉｎｚｉ（デュルバルマブ）、Ｂａｖｅｎｃｉｏ（アベルマブ）及びマルジェツキシマブ（ＭＧＡＨ２２）からなる群から選択される、請求項１９に記載の治療的組合せ。
【請求項２１】
前記標的治療は、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、単一ドメイン抗体、Ｔ及びＡｂｓ二量体、Ｆｖ、ｓｃＦｖ、ｄｓＦｖ、ｄｓ−ｓｃＦｖ、Ｆｄ、直鎖状抗体、ミニボディ、ダイアボディ、二重特異性抗体断片、バイボディ、トリボディ、ｓｃ−ダイアボディ、カッパ（ラムダ）ボディ、ＢｉＴＥ、ＤＶＤ−Ｉｇ、ＳＩＰ、ＳＭＩＰ、ＤＡＲＴ、又は１つ又は複数のＣＤＲを含む抗体類似体を含む、請求項１８に記載の治療的組合せ。
【請求項２２】
化学療法剤をさらに含む、請求項１２〜２１のいずれか一項に記載の治療的組合せ。
【請求項２３】
前記化学療法剤が、タモキシフェン、ラロキシフェン、アナストロゾール、エキセメスタン、レトロゾール、イマタニブ、パクリタキセル、シクロホスファミド、ロバスタチン、ミノシン、ゲムシタビン、シタラビン、５−フルオロウラシル、メトトレキセート、ドセタキセル、ゴセレリン、ビンクリスチン、ビンブラスチン、ノコダゾール、テニポシド、エトポシド、ゲムシタビン、エポチロン、ビノレルビン、カンプトセシン、ダウノルビシン、アクチノマイシンＤ、ミトキサントロン、アクリジン、ドキソルビシン、エピルビシン、又はイダルビシンからなる群から選択される、請求項２２に記載の治療的組合せ。
【請求項２４】
治療を必要とする対象における疾患状態を治療するための方法であって、前記対象に、請求項１２〜２３のいずれか一項に記載の治療的組合せを投与するステップを含む方法。
【請求項２５】
前記疾患状態が、腫瘍である、請求項２４に記載の方法。
【請求項２６】
前記疾患状態が、異常な細胞増殖を含む、請求項２４に記載の方法。
【請求項２７】
前記異常な細胞増殖が、前癌性病変を含む、請求項２４に記載の方法。
【請求項２８】
前記異常な増殖が、がん細胞の増殖である、請求項２７に記載の方法。
【請求項２９】
前記がんが、乳がん、結腸直腸がん、びまん性大細胞性Ｂ細胞リンパ腫、子宮内膜がん、濾胞性リンパ腫、胃がん、グリア芽細胞腫、頭頸部がん、肝細胞がん、肺がん、メラノーマ、多発性骨髄腫、卵巣がん、膵臓がん、前立腺がん、及び腎細胞癌からなる群から選択される、請求項２８に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
（関連出願の相互参照）
[0001]本出願は、その開示全体が参照によりその全体が本明細書に組み込まれる２０１７年４月１８日に出願された中国特許出願第２０１７１０２５１１９８．４号の利益及び優先権を主張する。
【０００２】
[0002]本発明は、例えば、免疫療法用の治療剤として免疫調節ポリヌクレオチドを含む組成物に関する。さらに、本発明は、がんなどの疾患の治療における組成物の使用に関する。
【背景技術】
【０００３】
[0003]様々なＴＬＲアゴニストが、それらの抗腫瘍免疫を促進する能力について臨床試験で調査されている。抗腫瘍応答は、次々に腫瘍特異的Ｔ細胞応答を活性化する、樹状細胞（ＤＣ）などのＡＰＣを刺激する、それらの能力に大部分は起因している。
【０００４】
[0004]Ｔｏｌｌ様受容体９（ＴＬＲ９）は、ＣｐＧモチーフ（ＣｐＧ  ＯＤＮ）を含有する合成オリゴヌクレオチドによって模倣することができる、微生物ＤＮＡのサインである非メチル化ＣｐＧジヌクレオチドを感知する。ＣｐＧ  ＤＮＡ又はＣｐＧ  ＯＤＮによるＴＬＲ９刺激は、マクロファージ、ＤＣ及びＢ細胞の活性化、並びにサイトカイン、ケモカイン、及び免疫グロブリンの産生へと導く細胞内シグナル伝達を誘発する。続いて、ＤＣによって産生されるサイトカイン、例えばＩＬ−１２は、Ｔヘルパー１（Ｔｈ１）及び細胞傷害性Ｔ細胞（ＣＴＬ）へのナイーブＴ細胞の分化を誘導する。
【０００５】
[0005]ＴＬＲ９アゴニストは、感染症及びがんに関するワクチンアジュバント又は免疫療法として、それらの開発を強調する特性である、先天性免疫防御及び抗原Ｔ細胞特異的応答を誘発させることができる。動物モデルにおける研究は、ＣｐＧ  ＯＤＮ単独によって又はワクチンアジュバントとしてマウントされる免疫防御が、種々のウイルス、細菌、及び寄生虫疾患に対抗して保護することができることが実証された。Ｂ型肝炎の予防的治療の有望な結果は、ＣｐＧ  ＯＤＮ及びＢ型肝炎表面抗原（Ｈｅｐｌｉｓａｖ）の組合せで第ＩＩＩ相試験から得られている。
【０００６】
[0006]ＣｐＧ  ＯＤＮの抗腫瘍性活性はまた、多数のマウスモデルにおいて確立されている。がんの治療の有望な結果は、単独療法又は化学療法との組合せで、腫瘍ワクチンアジュバントとしてＣｐＧ  ＯＤＮを使用するＩ相及びＩＩ相臨床試験からである。しかしながら、ある製薬会社が、非小細胞肺癌におけるＴＬＲ９アゴニストで、その臨床プログラムを最近終了したといういくつかの不本意な結果もある。ＰＦ−３５１２６７６（以前ＣｐＧ２００６と呼ばれた）の２つの第３相試験のデータにより、それが、化学療法単独と比較して、臨床転帰を改善することに失敗することが示された。新規免疫調節ポリヌクレオチドを継続して同定することが依然として必要とされている。
【０００７】
[0007]免疫療法は、疾患、例えばがん及び自己免疫疾患の治療のための有望な選択肢を提供する。ますます多くの腫瘍関連抗原（本明細書において腫瘍抗原とも称される）が同定されることにより、免疫療法のための適切な標的を広範に集積することが導かれた。他方、標的指向性療法、例えば抗体指向性療法は、非標的療法、例えば薬物の経口又はｉ．ｖ．投与を介した全身療法又は全身性療法、例えば外部放射線療法（ＸＲＴ）に優る利点を提案する。抗体指向性療法の及びモノクローナル抗体（ＭＡｂ）を使用する療法の利点は、特に、腫瘍に対して治療剤の増加用量を送達する能力であり、治療剤の影響から正常組織を多大に回避させる。この指向性療法は、薬物、細菌性の若しくは他の毒素、放射性核種、又は中性子捕捉剤、例えばホウ素付加物にコンジュゲートした裸のＭＡｂ又はＭＡｂの使用を含みうる。
【０００８】
[0008]一般に、治療抗体は、３つの機構（Ｓｃｏｔｔ  ＡＭ、Ｗｏｌｃｈｏｋ  ＪＤ、Ｏｌｄ  ＬＪ．  Ａｎｔｉｂｏｄｙ  ｔｈｅｒａｐｙ  ｏｆ  ｃａｎｃｅｒ．  Ｎａｔ  Ｒｅｖ  Ｃａｎｃｅｒ．  （２０１２）、１２  ：２７８〜８７）を介して腫瘍細胞を殺傷する：（１）直接的な抗体作用、すなわち、リガンド／受容体シグナル伝達の遮断又はアゴニスト活性、アポトーシスの誘導、及び薬物又は細胞傷害剤の送達。抗体受容体活性化活性は、直接的な腫瘍細胞殺傷効果を発生させることができる。例えば、いくつかの抗体は、腫瘍細胞の表面上の受容体に結合し、受容体を活性化することができ、アポトーシス（例えば、ミトコンドリアにおける）が導かれる。抗体はまた、受容体−アンタゴニスト活性によって腫瘍細胞殺傷を媒介することができる。例えば、ある特定の抗体は、細胞表面レセプターに結合し、二量体化、キナーゼ活性化及び下流シグナル伝達を遮断することができ、それによって増殖が阻害され、アポトーシスが促進される。酵素に対する抗体の結合により、中和、シグナル抑止、及び細胞死を導くことができる。（２）補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）、抗体依存性細胞媒介性細胞傷害（ＡＤＣＣ）、Ｔ細胞機能制御などを含む免疫媒介性細胞殺傷機構によって。腫瘍細胞の免疫媒介性殺傷は、以下の手段によって達成することができる：Ｔ細胞を活性化させる樹状細胞に対する抗体媒介性の抗原交差提示による、単一鎖可変性断片（ｓｃＦｖ）による腫瘍を標的とする、食作用、補体活性化、抗体依存性細胞媒介性細胞傷害、遺伝的に修飾されたＴ細胞の誘導、Ｔ細胞阻害性受容体、例えば、細胞傷害性Ｔリンパ球関連抗原４（ＣＴＬＡ４）の阻害。それらのなかで、抗体特徴のＦｃ部分は、ＣＤＣ及びＡＤＣＣ−媒介性腫瘍細胞殺傷効果に特に重要である。（３）ストローマ細胞阻害、ストローマ細胞への毒素の送達、及び血管構造への毒素の送達を含む、血管及びストローマ細胞切除を誘導する血管受容体アンタゴニスト又はリガンドのトラップによる、腫瘍血管構造及びマトリックスにおける抗体の特異的な効果。（Ｓｃｏｔｔ  ＡＭ、Ｗｏｌｃｈｏｋ  ＪＤ、Ｏｌｄ  ＬＪ．  Ａｎｔｉｂｏｄｙ  ｔｈｅｒａｐｙ  ｏｆ  ｃａｎｃｅｒ．  Ｎａｔ  Ｒｅｖ  Ｃａｎｃｅｒ．  ２０１２、１２  （４）  ：２７８〜８７）。
【０００９】
[0009]治療モノクローナル抗体薬は、抗がん薬研究及び開発を前進させている。しかしながら、いくつかの問題は、抗体免疫原性、腫瘍標的の長期使用の耐性、及びシグナル伝達経路の単純な単独遮断の長期の影響などの解決されるべきさらなる研究をなお必要としている。手短に言えば、単純に多数の抗体が、長期の効率的な阻害及び腫瘍細胞の殺傷を達成するのは困難である。
【発明の概要】
【００１０】
[0010]一態様において、本発明は、配列番号１、配列番号２、配列番号３、配列番号４、配列番号５、配列番号６、配列番号７、配列番号８、配列番号９、配列番号１０、配列番号１１及び配列番号１２からなる群から選択される配列を含む免疫調節ポリヌクレオチドを提供した。
【００１１】
[0011]いくつかの実施形態において、ポリヌクレオチドは、化学修飾を含む。いくつかの実施形態において、ポリヌクレオチドは、１つ又は複数のリン酸基の修飾を含む。いくつかの実施形態において、１つ又は複数のリン酸基の修飾は、ホスホロチオエート結合（ｌｉｎｋａｇｅ）である。いくつかの実施形態において、前記ポリヌクレオチドのリン酸骨格は、完全にホスホロチオエートで修飾されている。いくつかの実施形態において、１つ又は複数のリン酸基の修飾は、結合（ｌｉｎｋａｇｅ）である。
【００１２】
[0012]別の態様において、本発明は、対象に、本明細書に提供される免疫調節ポリヌクレオチドを、前記個体における免疫応答を調節するのに十分な量で投与するステップを含む、対象における免疫応答を調節する方法を提供する。
【００１３】
[0013]別の態様において、本発明は、対象に、本明細書に提供される免疫調節ポリヌクレオチドを、前記対象におけるＩＦＮ−αを増加させるのに十分な量で投与するステップを含む、対象におけるインターフェロン−アルファ（ＩＦＮ−α）を増加させる方法を提供する。
【００１４】
[0014]さらに別の態様において、本発明は、対象に、本明細書に提供される免疫調節ポリヌクレオチドを、前記対象におけるＩＦＮ−γを増加させるのに十分な量で投与するステップを含む、対象におけるインターフェロン−ガンマ（ＩＦＮ−γ）を増加させる方法を提供する。
【００１５】
[0015]さらなる態様において、本発明は、対象に、本明細書に提供される有効量の免疫調節ポリヌクレオチドを投与するステップを含み、有効量は、前記感染症の症状を回復させるのに十分な量である、対象における感染症の症状を回復させる方法を提供する。
【００１６】
[0016]別の態様において、本発明は、対象に、本明細書に提供される有効量の免疫調節ポリヌクレオチドを投与するステップを含み、有効量は、前記がん又は腫瘍を治療するのに十分な量である、対象におけるがん又は腫瘍を治療する方法を提供する。
【００１７】
[0017]別の態様において、本発明は、（ｉ）がんに対する有効量の標的治療；及び（ｉｉ）本明細書に提供される有効量の免疫調節ポリヌクレオチド又はその組合せを含む、治療的組合せを提供する。
【００１８】
[0018]いくつかの実施形態において、標的治療は、非腫瘍細胞と比較して、特異的に又は好ましくは腫瘍細胞に結合することが可能である。いくつかの実施形態において、腫瘍細胞は、癌、肉腫、リンパ腫、ミエローマ、又は中枢神経系がんである。いくつかの実施形態において、標的治療は、非腫瘍抗原と比較して、特異的に又は好ましくは腫瘍抗原に結合することが可能である。
【００１９】
[0019]いくつかの実施形態において、腫瘍抗原は、ＣＤ２、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＣＤ２７、ＣＤ３３、ＣＤ３７、ＣＤ３８、ＣＤ４０、ＣＤ４４、ＣＤ４７、ＣＤ５２、ＣＤ５６、ＣＤ７０、ＣＤ７９、及びＣＤ１３７からなる群から選択される。
【００２０】
[0020]いくつかの実施形態において、腫瘍抗原は、４−１ＢＢ、５Ｔ４，ＡＧＳ−５，ＡＧＳ−１６、アンギオポエチン２、Ｂ７．１、Ｂ７．２、Ｂ７ＤＣ、Ｂ７Ｈ１、Ｂ７Ｈ２、Ｂ７Ｈ３、ＢＴ−０６２、ＢＴＬＡ、ＣＡＩＸ、癌胎児抗原、ＣＴＬＡ４、Ｃｒｉｐｔｏ、ＥＤ−Ｂ、ＥｒｂＢ１、ＥｒｂＢ２、ＥｒｂＢ３、ＥｒｂＢ４、ＥＧＦＬ７、ＥｐＣＡＭ、ＥｐｈＡ２、ＥｐｈＡ３、ＥｐｈＢ２、ＦＡＰ、フィブロネクチン、葉酸受容体、ガングリオシドＧＭ３、ＧＤ２、糖質コルチコイド誘導性腫瘍壊死因子受容体（ＧＩＴＲ）、ｇｐ１００、ｇｐＡ３３、ＧＰＮＭＢ、ＩＣＯＳ、ＩＧＦ１Ｒ、インテグリンαγ、インテグリンαγβ、ＫＩＲ、ＬＡＧ−３、ルイスＹ、メソテリン、ｃ−ＭＥＴ、ＭＮカルボニックアンヒドラーゼＩＸ、ＭＵＣ１、ＭＵＣ１６、Ｎｅｃｔｉｎ−４、ＮＫＧＤ２、ＮＯＴＣＨ，ＯＸ４０、ＯＸ４０Ｌ、ＰＤ−１、ＰＤＬ１、ＰＳＣＡ、ＰＳＭＡ、ＲＡＮＫＬ、ＲＯＲ１、ＲＯＲ２、ＳＬＣ４４Ａ４、ＳＴＩＮＧ（ＩＦＮ遺伝子刺激因子）、Ｓｙｎｄｅｃａｎ−１、ＴＡＣＩ、ＴＡＧ−７２、テネイシン、ＴＩＭ３、ＴＲＡＩＬＲ１、ＴＲＡＩＬＲ２，ＶＥＧＦＲ−１、ＶＥＧＦＲ−２、ＶＥＧＦＲ−３、及びその変形からなる群から選択される。
【００２１】
[0021]いくつかの実施形態において、標的治療は、免疫グロブリン、タンパク質、ペプチド、小分子、ナノ粒子、又は核酸を含む。いくつかの態様において、標的治療は、抗体、又はその機能的な断片を含む。いくつかの実施形態において、抗体は、Ｒｉｔｕｘａｎ（リツキシマブ）、Ｈｅｒｃｅｐｔｉｎ（トラスツズマブ）、Ｅｒｂｉｔｕｘ（セツキシマブ）、Ｖｅｃｔｉｂｉｘ（パニツムマブ）、Ａｒｚｅｒｒａ（オファツムマブ）、Ｂｅｎｌｙｓｔａ（ベリムマブ）、Ｙｅｒｖｏｙ（イピリムマブ）、Ｐｅｒｊｅｔａ（ペルツズマブ）、Ｔｒｅｍｅｌｉｍｕｍａｂ、Ｏｐｄｉｖｏ（ニボルマブ）、Ｄａｃｅｔｕｚｕｍａｂ、Ｕｒｅｌｕｍａｂ、Ｔｅｃｅｎｔｒｉｑ（アテゾリズマブ、ＭＰＤＬ３２８０Ａ）、Ｌａｍｂｒｏｌｉｚｕｍａｂ、Ｂｌｉｎａｔｕｍｏｍａｂ、ＣＴ−０１１、Ｋｅｙｔｒｕｄａ（ペムブロリズマブ、ＭＫ−３４７５）、ＢＭＳ−９３６５５９、ＭＥＤ１４７３６、ＭＳＢ００１０７１８Ｃ、Ｉｍｆｉｎｚｉ（デュルバルマブ）、Ｂａｖｅｎｃｉｏ（アベルマブ）及びマルジェツキシマブ（ＭＧＡＨ２２）からなる群から選択される。
【００２２】
[0022]いくつかの実施形態において、標的治療は、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、単一ドメイン抗体、Ｔ及びＡｂｓ二量体、Ｆｖ、ｓｃＦｖ、ｄｓＦｖ、ｄｓ−ｓｃＦｖ、Ｆｄ、直鎖状抗体（ｌｉｎｅａｒ  ａｎｔｉｂｏｄｙ）、ミニボディ、ダイアボディ、二重特異性抗体断片、バイボディ（ｂｉｂｏｄｙ）、トリボディ（ｔｒｉｂｏｄｙ）、ｓｃ−ダイアボディ、カッパ（ラムダ）ボディ、ＢｉＴＥ、ＤＶＤ−Ｉｇ、ＳＩＰ、ＳＭＩＰ、ＤＡＲＴ、又は１つ又は複数のＣＤＲを含む抗体類似体を含む。
【００２３】
[0023]いくつかの実施形態において、標的治療は、ＡＴＷＬＰＰＲポリペプチドｏｆ  ＶＥＧＦＲ、Ｔｈｒｏｍｂｏｓｐｏｎｄｉｎ−１模倣体、ＣＤＣＲＧＤＣＦＣＧ（環状）ポリペプチド、ＳＣＨ  ２２１１５３断片、ＮＣＮＧＲＣ（環状）ポリペプチド、ＣＴＴＨＷＧＦＴＬＣポリペプチド、ＣＧＮＫＲＴＲＧＣポリペプチド（ＬｙＰ−１）、Ｏｃｔｒｅｏｔｉｄｅ、Ｖａｐｒｅｏｔｉｄｅ、Ｌａｎｒｅｏｔｉｄｅ、Ｃ−３９４０ポリペプチド、Ｄｅｃａｐｅｐｔｙｌ、Ｌｕｐｒｏｎ、Ｚｏｌａｄｅｘ、又はＣｅｔｒｏｒｅｌｉｘを含む。
【００２４】
[0024]いくつかの実施形態において、標的治療は、細胞外ドメイン（ＥＣＤ）又は可溶型のＰＤ−１、ＰＤＬ−１、ＣＴＬＡ４、ＢＴＬＡ、ＫＩＲ、ＴＩＭ３、４−１ＢＢ、ＬＡＧ３、表面リガンドアンフィレグリン、ベータセルリン、ＥＧＦ、エフリン、エピジェン、エピレグリン、ＩＧＦ、ニューレグリン、ＴＧＦ、ＴＲＡＩＬ、又はＶＥＧＦの全長又は一部を含む。
【００２５】
[0025]いくつかの実施形態において、本明細書に提供される組合せは、化学療法剤をさらに含む。いくつかの実施形態において、化学療法剤は、タモキシフェン、ラロキシフェン、アナストロゾール、エキセメスタン、レトロゾール、イマタニブ（ｉｍａｔａｎｉｂ）、パクリタキセル、シクロホスファミド、ロバスタチン、ミノシン（ｍｉｎｏｓｉｎｅ）、ゲムシタビン、シタラビン、５−フルオロウラシル、メトトレキセート、ドセタキセル、ゴセレリン、ビンクリスチン、ビンブラスチン、ノコダゾール、テニポシド、エトポシド、ゲムシタビン、エポチロン、ビノレルビン、カンプトセシン、ダウノルビシン、アクチノマイシンＤ、ミトキサントロン、アクリジン、ドキソルビシン、エピルビシン、又はイダルビシンからなる群から選択される。
【００２６】
[0026]さらなる態様において、本発明は、対象に、本明細書に提供される治療的組合せを投与するステップを含む、治療を必要とする対象における疾患状態を治療するための方法を提供する。いくつかの実施形態において、疾患状態は、腫瘍である。
【００２７】
[0027]いくつかの実施形態において、疾患状態は、異常な細胞増殖を含む。いくつかの実施形態において、異常な細胞増殖は、前癌性病変を含む。いくつかの実施形態において、異常な増殖は、がん細胞の増殖である。いくつかの実施形態において、がんは、乳がん、結腸直腸がん、びまん性大細胞性Ｂ細胞リンパ腫、子宮内膜がん、濾胞性リンパ腫、胃がん、グリア芽細胞腫、頭頸部がん、肝細胞がん、肺がん、メラノーマ、多発性骨髄腫、卵巣がん、膵臓がん、前立腺がん、及び腎細胞癌からなる群から選択される。
【００２８】
（参照による組み込み）
[0028]本明細書に言及されている全ての刊行物、特許、及び特許出願は、あたかもそれぞれ個々の刊行物、特許、又は特許出願が、参照によって組み込まれるために具体的且つ個別に示されたかのように、同程度に参照により本明細書に組み込まれる。
【００２９】
[0029]本発明の新規の特徴は、添付の特許請求の範囲に詳細に記載される。本発明の特徴及び利点のより良い理解は、本発明の原理が活用されている例示的実施形態について記載している以下の詳細な説明、及び添付の図面を参照することによって得られる。
【図面の簡単な説明】
【００３０】
【図１】ｐＤＣからのＩＦＮ−α分泌が、効率よくＣｐＧ５によって刺激されたことを示す図である。９６ウェルプレートに入れたヒトＰＢＭＣ（細胞５×１０５個／ウェル）及びマウス脾臓細胞（細胞１×１０６個／ウェル）を、１μＭの異なるＣｐＧ（ＣｐＧ３、ＣｐＧ５及びＣｐＧ２３）、培地対照（ＲＰＭＩ−１６４０培地）及び陽性対照としてのＣｐＧ６８４で２４時間及び４８時間培養した。培養上清を、回収し、分泌されたＩＦＮ−αの量を、ＥＬＩＳＡ又はＣＢＡによって測定した（平均±ＳＥＭ、ｎ＝３）。
【図２】Ｂ細胞からのＩＬ−６分泌が、効率よくＣｐＧ５によって刺激されたことを示す図である。９６ウェルプレートに入れたヒトＰＢＭＣ（細胞５×１０５個／ウェル）及びマウス脾臓細胞（細胞１×１０６個／ウェル）を、１μＭの異なるＣｐＧ（ＣｐＧ３、ＣｐＧ５及びＣｐＧ２３）、培地対照（ＲＰＭＩ−１６４０培地）及び陽性対照としてのＣｐＧ２００６で２４時間及び４８時間培養した。培養上清を、回収し、分泌されたＩＬ−６の量を、ＥＬＩＳＡ又はＣＢＡによって測定した（平均±ＳＥＭ、ｎ＝３）。
【図３】ｐＤＣからのＩＦＮ−α分泌が、効率よくＣｐＧ１及びＣｐＧ１０によって刺激されたことを示す図である。９６ウェルプレートに入れたヒトＰＢＭＣ（細胞５×１０５個／ウェル）及びマウス脾臓細胞（細胞１×１０６個／ウェル）を、１μＭの異なるＣｐＧ（ＣｐＧ１、ＣｐＧ９及びＣｐＧ１０）、培地対照（ＲＰＭＩ−１６４０培地）及び陽性対照としてのＣｐＧ２３９５で２４時間及び４８時間培養した。培養上清を、回収し、分泌されたＩＦＮ−αの量を、ＥＬＩＳＡ又はＣＢＡによって測定した（平均±ＳＥＭ、ｎ＝３）。
【図４Ａ】マウスのＣＴ２６結腸癌成長における腫瘍内ＣｐＧ−６の阻害効果を示す図である。ＢＡＬＢ／ｃマウスは、０日に２×１０５個のＣＴ２６細胞を右脇腹及び４日に１×１０５細胞を左脇腹のｓ．ｃ．に接種された。８日まで、６群（ｎ＝６）において、右の腫瘍がおよそ１００ｍｍ３に達した場合、マウスは、５用量について３日目ごとに１回、右脇腹にＣｐＧ−６（０．３〜５ｍｇ／ｋｇ）、ＧＣ−対照（２．５ｍｇ／ｋｇ）又はＰＢＳ−ビヒクルを、無作為に注射された。動物は、次に、体重変化（Ａ）、右（Ｂ）及び左（Ｃ）の脇腹における腫瘍成長、及び生存率（Ｄ）が調べられた。全ての統計分析を、Ｐｒｉｓｍ（ＧｒａｐｈＰａｄ）ソフトウェアｖ６を使用して実施した。腫瘍成長を一元配置ＡＮＯＶＡを使用して分析し、生存データをログランクマンテル−コックス検定を使用して分析した。差を、０．０５未満のｐ値で有意であると判定した。
【図４Ｂ】マウスのＣＴ２６結腸癌成長における腫瘍内ＣｐＧ−６の阻害効果を示す図である。ＢＡＬＢ／ｃマウスは、０日に２×１０５個のＣＴ２６細胞を右脇腹及び４日に１×１０５細胞を左脇腹のｓ．ｃ．に接種された。８日まで、６群（ｎ＝６）において、右の腫瘍がおよそ１００ｍｍ３に達した場合、マウスは、５用量について３日目ごとに１回、右脇腹にＣｐＧ−６（０．３〜５ｍｇ／ｋｇ）、ＧＣ−対照（２．５ｍｇ／ｋｇ）又はＰＢＳ−ビヒクルを、無作為に注射された。動物は、次に、体重変化（Ａ）、右（Ｂ）及び左（Ｃ）の脇腹における腫瘍成長、及び生存率（Ｄ）が調べられた。全ての統計分析を、Ｐｒｉｓｍ（ＧｒａｐｈＰａｄ）ソフトウェアｖ６を使用して実施した。腫瘍成長を一元配置ＡＮＯＶＡを使用して分析し、生存データをログランクマンテル−コックス検定を使用して分析した。差を、０．０５未満のｐ値で有意であると判定した。
【図５Ａ】腫瘍内ＣｐＧ−６による、Ｂ１６Ｆ１０メラノーマを担持するマウスの生存の延長を示す図である。Ｃ５７ＢＬ／６マウスは、０日に１×１０５個のＢ１６Ｆ１０細胞を右脇腹及び４日に０．５×１０５細胞を左脇腹のｓ．ｃ．に接種された。９日まで、５群（ｎ＝６）において、右の腫瘍がおよそ８５ｍｍ３に達した場合、マウスは、５用量について１日おきに１回、右脇腹の腫瘍に０．３〜１０ｍｇ／ｋｇ  ＣｐＧ−６又はＰＢＳ−ビヒクルを、無作為に注射された。動物は、次に、右（Ａ１−Ａ４）及び左（Ｂ１−Ｂ４）の脇腹における腫瘍成長に加えて生存（Ｃ）が調べられた。生存率の統計分析を、Ｐｒｉｓｍ  （ＧｒａｐｈＰａｄ）ソフトウェアｖ６中のログランクマンテル−コックス検定を使用して実施した。差を、０．０５未満のｐ値で有意であると判定した。
【図５Ｂ】腫瘍内ＣｐＧ−６による、Ｂ１６Ｆ１０メラノーマを担持するマウスの生存の延長を示す図である。Ｃ５７ＢＬ／６マウスは、０日に１×１０５個のＢ１６Ｆ１０細胞を右脇腹及び４日に０．５×１０５細胞を左脇腹のｓ．ｃ．に接種された。９日まで、５群（ｎ＝６）において、右の腫瘍がおよそ８５ｍｍ３に達した場合、マウスは、５用量について１日おきに１回、右脇腹の腫瘍に０．３〜１０ｍｇ／ｋｇ  ＣｐＧ−６又はＰＢＳ−ビヒクルを、無作為に注射された。動物は、次に、右（Ａ１−Ａ４）及び左（Ｂ１−Ｂ４）の脇腹における腫瘍成長に加えて生存（Ｃ）が調べられた。生存率の統計分析を、Ｐｒｉｓｍ  （ＧｒａｐｈＰａｄ）ソフトウェアｖ６中のログランクマンテル−コックス検定を使用して実施した。差を、０．０５未満のｐ値で有意であると判定した。
【図５Ｃ】腫瘍内ＣｐＧ−６による、Ｂ１６Ｆ１０メラノーマを担持するマウスの生存の延長を示す図である。Ｃ５７ＢＬ／６マウスは、０日に１×１０５個のＢ１６Ｆ１０細胞を右脇腹及び４日に０．５×１０５細胞を左脇腹のｓ．ｃ．に接種された。９日まで、５群（ｎ＝６）において、右の腫瘍がおよそ８５ｍｍ３に達した場合、マウスは、５用量について１日おきに１回、右脇腹の腫瘍に０．３〜１０ｍｇ／ｋｇ  ＣｐＧ−６又はＰＢＳ−ビヒクルを、無作為に注射された。動物は、次に、右（Ａ１−Ａ４）及び左（Ｂ１−Ｂ４）の脇腹における腫瘍成長に加えて生存（Ｃ）が調べられた。生存率の統計分析を、Ｐｒｉｓｍ  （ＧｒａｐｈＰａｄ）ソフトウェアｖ６中のログランクマンテル−コックス検定を使用して実施した。差を、０．０５未満のｐ値で有意であると判定した。
【図５Ｄ】腫瘍内ＣｐＧ−６による、Ｂ１６Ｆ１０メラノーマを担持するマウスの生存の延長を示す図である。Ｃ５７ＢＬ／６マウスは、０日に１×１０５個のＢ１６Ｆ１０細胞を右脇腹及び４日に０．５×１０５細胞を左脇腹のｓ．ｃ．に接種された。９日まで、５群（ｎ＝６）において、右の腫瘍がおよそ８５ｍｍ３に達した場合、マウスは、５用量について１日おきに１回、右脇腹の腫瘍に０．３〜１０ｍｇ／ｋｇ  ＣｐＧ−６又はＰＢＳ−ビヒクルを、無作為に注射された。動物は、次に、右（Ａ１−Ａ４）及び左（Ｂ１−Ｂ４）の脇腹における腫瘍成長に加えて生存（Ｃ）が調べられた。生存率の統計分析を、Ｐｒｉｓｍ  （ＧｒａｐｈＰａｄ）ソフトウェアｖ６中のログランクマンテル−コックス検定を使用して実施した。差を、０．０５未満のｐ値で有意であると判定した。
【図５Ｅ】腫瘍内ＣｐＧ−６による、Ｂ１６Ｆ１０メラノーマを担持するマウスの生存の延長を示す図である。Ｃ５７ＢＬ／６マウスは、０日に１×１０５個のＢ１６Ｆ１０細胞を右脇腹及び４日に０．５×１０５細胞を左脇腹のｓ．ｃ．に接種された。９日まで、５群（ｎ＝６）において、右の腫瘍がおよそ８５ｍｍ３に達した場合、マウスは、５用量について１日おきに１回、右脇腹の腫瘍に０．３〜１０ｍｇ／ｋｇ  ＣｐＧ−６又はＰＢＳ−ビヒクルを、無作為に注射された。動物は、次に、右（Ａ１−Ａ４）及び左（Ｂ１−Ｂ４）の脇腹における腫瘍成長に加えて生存（Ｃ）が調べられた。生存率の統計分析を、Ｐｒｉｓｍ  （ＧｒａｐｈＰａｄ）ソフトウェアｖ６中のログランクマンテル−コックス検定を使用して実施した。差を、０．０５未満のｐ値で有意であると判定した。
【図６】腫瘍内ＣｐＧ−６及び全身性抗ｎｅｕでの組合せ治療によるＴＵＢＯ腫瘍成長の抑制を示す図である。ＢＡＬＢ／ｃマウスは、それらの右脇腹上部にＴＵＢＯ細胞（５×１０５／０．１ｍＬ）をｓ．ｃ．で接種された。１１日まで、腫瘍がおよそ６０〜１２０ｍｍ３にまで形成されたとき、マウスを、組合せ治療に対して無作為に群分けした。ＣｐＧ−６、ＧＣ−対照又はＰＢＳ−ビヒクルを４用量について３日目毎に１回ｉ．ｔ．で投与したが、抗ｎｅｕ又はＰＢＳ緩衝剤は３週間にわたって週当たり１回ｉ．ｖ．注射した。各群は、ＣｐＧ−６＋抗ｎｅｕ（ｎ＝２４）を除き、６マウスからなるものであった。マウスは、次に、体重変化（Ａ）、腫瘍成長（Ｂ）及び生存（Ｃ）が調べられた。全ての統計分析を、Ｐｒｉｓｍ（ＧｒａｐｈＰａｄ）ソフトウェアｖ６を使用して実施した。腫瘍成長を、反復測定二元配置ＡＮＯＶＡを使用して分析した；生存データを、ログランク（マンテル−コックス）検定及びゲーハン−ブレスロウ−ウィルコクソン検定を使用して分析した。差を、＜０．０５のｐ値で有意であると判定した。
【図７】ＴＵＢＯ腫瘍リチャレンジに対するＣｐＧ−６及び抗ｎｅｕジョイント治療の持続効果を示す図である。抗ｎｅｕ及びＣｐＧ−６での組合せ治療の最終用量の１月後、生存したマウスを、それらの左脇腹へのＴＵＢＯ細胞（５×１０５／０．１ｍＬ）又は４Ｔ１細胞（１×１０５／０．１ｍＬ）の第二のｓ．ｃ．接種に対して２群（ｎ＝１２）に無作為に群分けした。追加の齢及び性別適合ナイーブマウス（雌性３〜４月齢、２０〜２２ｇ）を、同量のＴＵＢＯ又は４Ｔ１腫瘍細胞での第一の接種後の腫瘍発生に対する対照として採用した。マウスは、次に、体重変化（Ａ）、腫瘍成長（Ｂ）及び生存（Ｃ）が調べられた。全ての統計分析を、Ｐｒｉｓｍ（ＧｒａｐｈＰａｄ）ソフトウェアｖ６を使用して実施した。差を、０．０５未満のｐ値で有意であると判定した。腫瘍成長を対応のないマン−ホイットニーのｔ検定を使用して分析し、生存データをログランクマンテル−コックス検定及びゲーハン−ブレスロウ−ウィルコクソン検定を使用して分析した。
【図８】第３のＴＵＢＯ移植に対するＣｐＧ−６及び抗ｎｅｕ組合せ治療の長期記憶効果を示す図である。抗ｎｅｕ及びＣｐＧ−６での組合せ治療の最終用量の１００日後、２つの下位群における全ての生存したマウスを、対応させて、それらの右脇腹下部に第三のＴＵＢＯ細胞（５×１０５／０．１ｍＬ、ｎ＝１２）又は第二の４Ｔ１細胞（１×１０５／０．１ｍＬ、ｎ＝６）をｓ．ｃ．接種した。もう一度、新しい一組のナイーブＢＡＬＢ／ｃマウス（雌性、６〜７月齢、２４〜３５ｇ）を、同量のＴＵＢＯ又は４Ｔ１腫瘍細胞での、それらの第一の接種後の腫瘍発生に対する対照として使用した。マウスは、次に、体重変化（Ａ）、腫瘍成長（Ｂ）及び生存（Ｃ）が調べられた。全ての統計分析を、Ｐｒｉｓｍ（ＧｒａｐｈＰａｄ）ソフトウェアｖ６を使用して実施した。差を、０．０５未満のｐ値で有意であると判定した。腫瘍成長を反復測定二元配置ＡＮＯＶＡを使用して分析し、生存データをログランクマンテル−コックス検定及びゲーハン−ブレスロウ−ウィルコクソン検定を使用して分析した。
【発明を実施するための形態】
【００３１】
[0038]本発明の幾つかの態様は、例示のための例の適用を参照しながら以下に説明される。特定の多数の詳細、関係性及び方法が、本発明の完全な理解を実現するために記載されることが理解される。しかしながら、関連性のある分野の当業者は、本発明が、１つ又は複数の特定の詳細なしで又は他の方法で実施できることを容易に認識する。いくつかの作用は、他の作用又は事象と異なる順序で及び／又は併発的に生じ得るので、本発明は作用又は事象の例示される順序によって限定されない。
【００３２】
[0039]さらに、全ての例示される作用又は事象が、本発明に従う方法を実行するのに必要とされるわけではない。
【００３３】
[0040]本明細書で使用される用語は、特定の実施形態を記載する目的のためのものにすぎず、本発明が限定されることを意図されていない。本明細書で使用される単数形「１つの（ａ）」、「１つの（ａｎ）」及び「その（ｔｈｅ）」は、文脈上明らかな別の指示がない限り、複数形も同様に含むことが意図される。さらに、用語「含む（ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ）」、「含む（ｉｎｃｌｕｄｅｓ）」、「有する（ｈａｖｉｎｇ）」、「有する（ｈａｓ）」、「有する（ｗｉｔｈ）」、又はその変形が、詳細な説明及び／又は特許請求の範囲に使用される限度まで、そのような用語は、用語「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」と類似する様式の包含的なものであることが意図される。
【００３４】
[0041]用語「約」又は「およそ」は、当業者によって決定されるような特定の値に対して許容可能な誤差範囲内であることを意味し、どのようにして、その値が、測定される又は決定されるか、すなわち、測定システムの制限に部分的に依存する。例えば、「約」は、当分野における１実施当たり、１又は１超の標準偏差内であることを意味し得る。或いは、「約」は、所与の値の、２０％まで、好ましくは１０％まで、より好ましくは５％まで、及びより好ましくはさらに１％までの範囲であることを意味し得る。或いは、特に生物学的なシステム又はプロセスに関して、用語は、値の桁内、好ましくは５倍内、及びより好ましくは２倍内であることを意味し得る。特定の値が出願及び特許請求の範囲に記載される場合、別記しない限り、特定の値に対して許容可能な誤差範囲内であることを意味する用語「約」が、仮定されるべきである。
【００３５】
Ｉ．定義及び略語
[0042]別途の規定がない限り、本明細書で使用される全ての技術用語及び科学用語は、通常、本発明が属する分野の当業者が一般的に理解している意味と同じ意味を有する。一般的に、本明細書に使用されている命名法及び細胞培養、分子遺伝学、有機化学及び核酸化学及びハイブリダイゼーションにおける研究手順は、周知されているものであり、当分野で共通して採用される。標準技術が、核酸及びペプチド合成に使用される。技術及び手順は、当分野の従来法及び様々な一般的な参照に従って一般に実施され、本文書全体を通して提供される。本明細書に使用されている命名法及び以下に記載される分析化学、及び有機合成における研究手順は、周知されているものであり、当分野で共通して採用される。標準技術又はその修飾は、化学合成及び化学分析に使用される。
【００３６】
[0043]用語「アルキル」は、単独で又は別の置換基の一部として、別記しない限り、完全に飽和、単又は多価不飽和であってもよい及び二価及び多価ラジカルを含みうる、指定される炭素原子の数（すなわち、Ｃ１〜Ｃ１０は、１から１０の炭素を意味する）を有する、直鎖又は分枝鎖、又は環状炭化水素ラジカル、又はその組合せを意味する。飽和炭化水素ラジカルの例は、例えば、メチル、エチル、ｎ−プロピル、イソプロピル、ｎ−ブチル、ｔ−ブチル、イソブチル、ｓｅｃ−ブチル、シクロヘキシル、（シクロヘキシル）メチル、シクロプロピルメチル、その相同体及び異性体、例えば、ｎ−ペンチル、ｎ−ヘキシル、ｎ−ヘプチル、ｎ−オクチル等の基を含むが、限定されない。不飽和アルキル基は、１つ又は複数の二重結合又は三重結合を有するものである。不飽和アルキル基の例は、ビニル、２−プロペニル、クロチル、２−イソペンテニル、２−（ブタジエニル）、２，４−ペンタジエニル、３−（１，４−ペンタジエニル）、エチニル、１−及び３−プロピニル、３−ブチニル、並びにより高級な相同体及び異性体を含むが、限定されない。用語「アルキル」は、別に注記しない限り、以下により詳細に規定されるアルキルの誘導体、例えば、「ヘテロアルキル」を含むことも意味する。炭化水素基に限定される、アルキル基は、「ホモアルキル」と称される。
【００３７】
[0044]用語「アルキレン」は、単独で又は別の置換基の一部として、アルカンから誘導される二価ラジカルを意味し、−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２−によって例証されるが、限定されず、以下に「ヘテロアルキレン」として記載される基をさらに含む。典型的に、アルキル（又はアルキレン）基は、１〜２４個の炭素原子を有し、１０個以下の炭素原子を有する基が本発明において好ましい。「低級アルキル」又は「低級アルキレン」は、短鎖アルキル又はアルキレン基であり、一般に８個以下の炭素原子を有する。
【００３８】
[0045]用語「アルコキシ」、「アルキルアミノ」及び「アルキルチオ」（又はチオアルコキシ）は、それらの従来の意義で使用され、それぞれ酸素原子、アミノ基、又は硫黄原子を介して分子の残部に結合したアルキル基を指す。
【００３９】
[0046]用語「ヘテロアルキル」、単独で又は別の用語との組合せとして、別記しない限り、指定数の炭素原子とＯ、Ｎ、Ｓｉ及びＳからなる群から選択される少なくとも１つのヘテロ原子からなる、安定な直鎖又は分枝鎖、又は環状炭化水素ラジカル、又はその組合せを意味し、ここで、窒素及び硫黄原子は任意選択で酸化型であってもよく、窒素ヘテロ原子は任意選択で四級化されてもよい。ヘテロ原子（複数可）Ｏ、Ｎ及びＳ及びＳｉは、ヘテロアルキル基の任意の内部位置に又はアルキル基が分子の残部に結合した位置に配置されてもよい。例は、−ＣＨ２−ＣＨ２−Ｏ−ＣＨ３、−ＣＨ２−ＣＨ２−ＮＨ−ＣＨ３、−ＣＨ２−ＣＨ２−Ｎ（ＣＨ３）−ＣＨ３、−ＣＨ２−Ｓ−ＣＨ２−ＣＨ３、−ＣＨ２−ＣＨ２，−Ｓ（Ｏ）−ＣＨ３、−ＣＨ２−ＣＨ２−Ｓ（Ｏ）２−ＣＨ３、−ＣＨ＝ＣＨ−Ｏ−ＣＨ３、−Ｓｉ（ＣＨ３）３、−ＣＨ２−ＣＨ＝Ｎ−ＯＣＨ３、及び−ＣＨ＝ＣＨ−Ｎ（ＣＨ３）−ＣＨ３を含むが、限定されない。２つのヘテロ原子までが連続してもよく、例えば、−ＣＨ２−ＮＨ−ＯＣＨ３及び−ＣＨ２−Ｏ−Ｓｉ（ＣＨ３）３であってもよい。同様に、用語「ヘテロアルキレン」は、単独で又は別の置換基の一部として、ヘテロアルキルから誘導される二価ラジカルを意味し、−ＣＨ２−ＣＨ２−Ｓ−ＣＨ２−ＣＨ２−及び−ＣＨ２−Ｓ−ＣＨ２−ＣＨ２−ＮＨ−ＣＨ２−によって例証されるが、限定されない。ヘテロアルキレン基に関して、ヘテロ原子はまた、鎖の末端のいずれか又は両方を占有してもよい（例えば、アルキレンオキシ、アルキレンジオキシ、アルキレンアミノ、アルキレンジアミノなど）。なおさらに、アルキレン及びヘテロアルキレン連結基に関して、連結基の配向は、連結基の式が記入される方向によって示唆されない。例えば、式−Ｃ（Ｏ）２Ｒ’−は、−Ｃ（Ｏ）２Ｒ’−及び−Ｒ’Ｃ（Ｏ）２−の両方を表す。
【００４０】
[0047]一般に、「アシル置換基」はまた、上記の群から選択される。本明細書で使用される用語「アシル置換基」は、本発明の化合物の多環式核に直接的又は間接的に結合する、カルボニル炭素に結合し、カルボニル炭素の価数を満たす基を指す。
【００４１】
[0048]用語「シクロアルキル」及び「ヘテロシクロアルキル」は、それら自身で又は他の用語と組合せて、別記しない限り、それぞれ「アルキル」及び「ヘテロアルキル」の環状バージョンを表す。さらに、ヘテロシクロアルキルに関して、ヘテロ原子は、複素環が分子の残部に結合した位置を占有し得る。シクロアルキルの例は、シクロペンチル、シクロヘキシル、１−シクロヘキセニル、３−シクロヘキセニル、シクロヘプチル等を含むが、限定されない。ヘテロシクロアルキルの例は、１−（１，２，５，６−テトラヒドロピリジル）、１−ピペリジニル、２−ピペリジニル、３−ピペリジニル、４−モルフォリニル、３−モルフォリニル、テトラヒドロフラン−２−イル、テトラヒドロフラン−３−イル、テトラヒドロチエン−２−イル、テトラヒドロチエン−３−イル、１−ピペラジニル、２−ピペラジニル等を含むが、限定されない。
【００４２】
[0049]用語「ハロ」及び「ハロゲン」は、それら自身で又は別の置換基の一部として、別記しない限り、フッ素、塩素、臭素、又はヨウ素原子を意味する。さらに、「ハロアルキル」などの用語は、モノハロアルキル及びポリハロアルキルを含むことを意味する。例えば、用語「ハロ（Ｃ１〜Ｃ４）アルキル」は、トリフルオロメチル、２，２，２−トリフルオロエチル、４−クロロブチル、３−ブロモプロピル等を含むが、限定されないことを意味する。
【００４３】
[0050]用語「アリール」は、別記しない限り、単環又は一緒に縮合若しくは共有結合で連結された多環（好ましくは１〜３環）とすることができる、多価不飽和の、芳香族の、炭化水素置換基を意味する。用語「ヘテロアリール」は、Ｎ、Ｏ、及びＳから選択される１〜４つのヘテロ原子を含有するアリール基（又は環）を指し、ここで、窒素及び硫黄原子は任意選択で酸化型であり、窒素原子（複数可）は任意選択で四級化される。ヘテロアリール基は、ヘテロ原子によって分子の残部に結合し得る。アリール及びヘテロアリール基の非限定的な例は、フェニル、１−ナフチル、２−ナフチル、４−ビフェニル、１−ピロリル、２−ピロリル、３−ピロリル、３−ピラゾリル、２−イミダゾリル、４−イミダゾリル、ピラジニル、２−オキサゾリル、４−オキサゾリル、２−フェニル−４−オキサゾリル、５−オキサゾリル、３−イソキサゾリル、４−イソキサゾリル、５−イソキサゾリル、２−チアゾリル、４−チアゾリル、５−チアゾリル、２−フリル、３−フリル、２−チエニル、３−チエニル、２−ピリジル、３−ピリジル、４−ピリジル、２−ピリミジル、４−ピリミジル、５−ベンゾチアゾリル、プリニル、２−ベンズイミダゾリル、５−インドリル、１−イソキノリル、５−イソキノリル、２−キノキサリニル、５−キノキサリニル、３−キノリル、及び６−キノリルを含む。上に注記したアリール及びヘテロアリール環系の各々に対する置換基は、以下に記載される許容可能な置換基の群から選択される。
【００４４】
[0051]簡潔さのため、他の用語（例えば、アリールオキシ、アリールチオキシ、アリールアルキル）との組合せに使用される場合、用語「アリール」は、上記で規定されたアリール及びヘテロアリール環の両方を含む。したがって、用語「アリールアルキル」は、炭素原子（例えば、メチレン基）が、例えば、酸素原子によって置き換えられているアルキル基（例えば、フェノキシメチル、２−ピリジルオキシメチル、３−（１−ナフチルオキシ）プロピル等）を含む、アリール基が、アルキル基に結合されたラジカル（例えば、ベンジル、フェネチル、ピリジルメチル等）を含むことを意味する。
【００４５】
[0052]上記用語の各々（例えば、「アルキル」、「ヘテロアルキル」、「アリール」及び「ヘテロアリール」）は、示されたラジカルの置換及び非置換形態の両方を含む。各タイプのラジカルに対する好ましい置換基は、以下に提供される。
【００４６】
[0053]アルキル、及びヘテロアルキルラジカル（アルキレン、アルケニル、ヘテロアルキレン、ヘテロアルケニル、アルキニル、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、シクロアルケニル、及びヘテロシクロアルケニルと称されることが多い基を含む）に対する置換基は、それぞれ「アルキル置換基」及び「ヘテロアルキル置換基」と一般に称され、これらは、ゼロから（２ｍ’＋１）の範囲の数の−ＯＲ’、＝Ｏ、＝ＮＲ’、＝Ｎ−ＯＲ’、−ＮＲ’Ｒ’’、−ＳＲ’、−ハロゲン、−ＳｉＲ’Ｒ’’Ｒ’’’、−ＯＣ（Ｏ）Ｒ’、−Ｃ（Ｏ）Ｒ’、−ＣＯ２Ｒ’、−ＣＯＮＲ’Ｒ’’、−ＯＣ（Ｏ）ＮＲ’Ｒ’’、−ＮＲ’’Ｃ（Ｏ）Ｒ’、−ＮＲ’−Ｃ（Ｏ）ＮＲ’’Ｒ’’’、−ＮＲ’’Ｃ（Ｏ）２Ｒ’、−ＮＲ−Ｃ（ＮＲ’Ｒ’’Ｒ’’’）＝ＮＲ’’’’、−ＮＲ−Ｃ（ＮＲ’Ｒ’’）＝ＮＲ’’’、−Ｓ（Ｏ）Ｒ’、−Ｓ（Ｏ）２Ｒ’、−Ｓ（Ｏ）２ＮＲ’Ｒ’’、−ＮＲＳＯ２Ｒ’、−ＣＮ及び−ＮＯ２（式中のｍ’は、そのようなラジカルにおける炭素原子の総数である）から選択される種々の基のうちの１つ又は複数であり得るが、限定されない。各々Ｒ’、Ｒ’’、Ｒ’’’及びＲ’’’’は、好ましくは、独立して、水素、置換又は非置換ヘテロアルキル、置換又は非置換アリール、例えば、１〜３ハロゲン、置換又は非置換アルキル、アルコキシ又はチオアルコキシ基、又はアリールアルキル基で置換されたアリールを指す。本発明の化合物が、１つを超えるＲ基を含む場合、例えば、これらの基が１つを超えて存在する場合、各々のＲ基は、独立して、各Ｒ’、Ｒ’’、Ｒ’’’及びＲ’’’’基として選択される。Ｒ’及びＲ’’が同じ窒素原子に結合する場合、これらを窒素原子と組合せて５−、６−、又は７−員環を形成させてもよい。例えば、−ＮＲ’Ｒ’’は、１−ピロリジニル及び４−モルフォリニルを含むことを意味するが、限定されない。置換基の上記考察から、当業者には、用語「アルキル」が、水素基以外の基、例えば、ハロアルキル（例えば、−ＣＦ３及び−ＣＨ２ＣＦ３）及びアシル（例えば、−Ｃ（Ｏ）ＣＨ３、−Ｃ（Ｏ）ＣＦ３、−Ｃ（Ｏ）ＣＨ２ＯＣＨ３等）に結合させた炭素原子を含む基を含むことを意味するということが理解されよう。
【００４７】
[0054]アルキルラジカルに関して記載される置換基と類似して、アリール置換基及びヘテロアリール置換基は、それぞれ、「アリール置換基」及び「ヘテロアリール置換基」と一般に称され、変動し、例えば、芳香環系におけるゼロからオープン原子価の総数の範囲の数のハロゲン、−ＯＲ’、＝Ｏ、＝ＮＲ’、＝Ｎ−ＯＲ’、−ＮＲ’Ｒ’’、−ＳＲ’、−ハロゲン、−ＳｉＲ’Ｒ’’Ｒ’’’、−ＯＣ（Ｏ）Ｒ’、−Ｃ（Ｏ）Ｒ’、−ＣＯ２Ｒ’、−ＣＯＮＲ’Ｒ’’、−ＯＣ（Ｏ）ＮＲ’Ｒ’’、−ＮＲ’’Ｃ（Ｏ）Ｒ’、−ＮＲ’−Ｃ（Ｏ）ＮＲ’’Ｒ’’’、−ＮＲ’’Ｃ（Ｏ）２Ｒ’、−ＮＲ−Ｃ（ＮＲ’Ｒ’’）＝ＮＲ’’’、−Ｓ（Ｏ）Ｒ’、−Ｓ（Ｏ）２Ｒ’、−Ｓ（Ｏ）２ＮＲ’Ｒ’’、−ＮＲＳＯ２Ｒ’、−ＣＮ及び−ＮＯ２、−Ｒ’、−Ｎ３、−ＣＨ（Ｐｈ）２、フルオロ（Ｃ１〜Ｃ４）アルコキシ、及びフルオロ（Ｃ１〜Ｃ４）アルキルから選択される；並びに式中Ｒ’、Ｒ’’、Ｒ’’’及びＲ’’’’は、好ましくは、独立して、水素、（Ｃ１〜Ｃ８）アルキル及びヘテロアルキル、非置換アリール及びヘテロアリール、（非置換アリール）−（Ｃ１〜Ｃ４）アルキル、及び（非置換アリール）オキシ−（Ｃ１〜Ｃ４）アルキルから選択される。本発明の化合物が、１つを超えるＲ基を含む場合、例えば、これらの基が１つを超えて存在する場合、各々のＲ基は、独立して、各Ｒ’、Ｒ’’、Ｒ’’’及びＲ’’’’基として選択される。
【００４８】
[0055]アリール又はヘテロアリール環に隣接する原子における２つのアリール置換基は、式−Ｔ−Ｃ（Ｏ）−（ＣＲＲ’）ｑ−Ｕ−の置換基で任意選択で置き換えられていてもよく、式中、Ｔ及びＵは、独立して−ＮＲ−、−Ｏ−、−ＣＲＲ’−又は単結合であり、ｑは、０〜３の整数である。或いは、アリール又はヘテロアリール環に隣接する原子における２つのアリール置換基は、式−Ａ−（ＣＨ２）ｒ−Ｂ−の置換基で任意選択で置き換えられていてもよく、式中、Ａ及びＢは、独立して−ＣＲＲ’−、−Ｏ−、−ＮＲ−、−Ｓ−、−Ｓ（Ｏ）−、−Ｓ（Ｏ）２−、−Ｓ（Ｏ）２ＮＲ’−又は単結合であり、ｒは、１〜４の整数である。そのように形成された新しい環の単結合の１つは、二重結合で任意選択で置き換えられていてもよい。或いは、アリール又はヘテロアリール環に隣接する原子における２つの置換基は、式−（ＣＲＲ’）ｓ−Ｘ−（ＣＲ’’Ｒ’’’）ｄ−の置換基で任意選択で置き換えられていてもよい（式中ｓ及びｄは、独立して０〜３の整数であり、Ｘは、−Ｏ−、−ＮＲ’−、−Ｓ−、−Ｓ（Ｏ）−、−Ｓ（Ｏ）２−、又は−Ｓ（Ｏ）２ＮＲ’−である）。置換基Ｒ、Ｒ’、Ｒ’’及びＲ’’’は、好ましくは、独立して水素又は置換又は非置換（Ｃ１〜Ｃ６）アルキルから選択される。
【００４９】
[0056]本明細書で使用される用語「ヘテロ原子」は、酸素（Ｏ）、窒素（Ｎ）、硫黄（Ｓ）、リン（Ｐ）及びケイ素（Ｓｉ）を含む。
【００５０】
ＩＩ．組成物
[0057]一般に、本発明は、免疫調節ポリヌクレオチド、ＣｐＧモチーフを含有する特異的に合成されたオリゴヌクレオチド（ＣｐＧ  ＯＤＮ）、並びに免疫調節ポリヌクレオチドを含む医薬組成物及び組合せ、並びにそのような組成物を使用して疾患（例えば、がん）を予防又は治療する方法を提供する。
【００５１】
Ａ．ＴＬＲ９アゴニスト
[0058]一般に、本発明の組成物は、ＴＬＲ９アゴニストを含む。
【００５２】
[0059]ＴＬＲ９は、細菌ＤＮＡ及び合成オリゴヌクレオチドにおける非メチル化ＣｐＧモチーフを認識することが知られている。ＣｐＧ含有ホスホロチオエートオリゴヌクレオチドの他の修飾はまた、それらの能力に影響することができ、ＴＬＲ９によって免疫応答の調節因子として作用する。
【００５３】
[0060]本明細書で「調節」又は「調節性」は、ＴＬＲ９−媒介性応答における応答又は定性的な差における増加などの変化を意味する。
【００５４】
[0061]本明細書で「ＴＬＲ９アゴニスト」は、ＴＬＲ９によって媒介される免疫刺激を増強、誘導、又は調節できる、オリゴヌクレオチドに基づく化合物などの化合物を意味する。
【００５５】
[0062]いくつかの実施形態において、ＴＬＲ９アゴニストは、免疫調節ポリヌクレオチド、例えば、免疫刺激ポリヌクレオチドを含む。
【００５６】
[0063]本明細書で「免疫刺激ポリヌクレオチド」は、インビトロ、インビボ及び／又はエクスビボで測定される測定可能な免疫応答に影響及び／又は寄与する核酸分子（例えば、ポリヌクレオチド）を意味する。測定可能な免疫応答の例は、抗原特異的な抗体産生、サイトカインの分泌、リンパ球集団、例えば、ＮＫ細胞、ＣＤ４＋Ｔリンパ球、ＣＤ８＋Ｔリンパ球、Ｂリンパ球等の活性化又は拡大（ｅｘｐａｎｓｉｏｎ）を含むが、限定されない。免疫刺激核酸（ＩＳＮＡ）配列は、先天性免疫応答、特に、細胞におけるＴＬＲ−９シグナル伝達によって生じる応答を刺激することが知られている。当技術分野において知られているように、免疫刺激核酸（ＩＳＮＡ）分子は、微生物供給源、例えば、細菌から単離することができる、遺伝子治療における使用のための核酸ベクターに存在させてもよい又は本明細書に記載される及び当技術分野において知られている技術及び機器を使用して合成することができる。一般に、免疫刺激核酸配列は、少なくとも１つのＣＧジヌクレオチドを含み、このジヌクレオチドのＣは非メチル化である。したがって、微生物感染及び投与されたＤＮＡは、一部の例では、先天性免疫応答の刺激を引き起こす。
【００５７】
[0064]本明細書で「免疫刺激」又は「免疫応答を刺激」は、免疫反応に参加し、特異的な抗原性物質に対する免疫応答を増強する細胞型の刺激を意味する。免疫刺激核酸によって刺激される免疫応答は、一般に「Ｔｈ１タイプ」免疫応答であり、「Ｔｈ２タイプ」免疫応答とは対照的である。Ｔｈ１タイプ免疫応答は、抗原に対する「遅延型過敏症」反応及び活性化マクロファージ機能によって通常特徴づけられており、Ｔｈ１関連サイトカイン、例えばＩＦＮ−γ、１Ｌ−２、ＩＬ−１２、及びＴＮＦ−βの増加レベルによる生化学的なレベルで検出することができる。Ｔｈ２タイプ免疫応答は、高レベルの抗体産生、特にＩｇＥ抗体産生及び好酸球数及び活性化の増強、並びにＴｈ２関連サイトカイン、例えばＩＬ−４、ｌＬ−５及びＩＬ−１３の発現と一般に関連する。
【００５８】
[0065]本明細書で「先天性免疫応答」又は「先天性免疫」は、細胞又は個体が、病原体の存在に対して認識及び応答する種々の先天性耐性機構を含むことを意味する。本明細書で使用される「先天性免疫応答」は、細胞が病原体関連分子パターン又はシグナルを認識するとき生じる細胞内及び細胞間事象及び反応を含む。本明細書に記載のように、先天性免疫応答において活性な細胞受容体はＴｏｌｌ様受容体（ＴＬＲ）のファミリーを含み、微生物リガンドが幾つかのＴＬＲに関して同定されている。測定可能な先天性免疫応答の例は、サイトカインの分泌、リンパ球集団、例えば、ＮＫ細胞、ＣＤ４＋Ｔリンパ球、ＣＤ８＋Ｔリンパ球の活性化又は拡大を含むが、限定されない。
【００５９】
[0066]ＴＬＲ９アゴニストは、先天性及び適応免疫応答の両方を活性化する（Ａｒｔｈｕｒ  Ｍ．  Ｋｒｉｅｇ．  Ｎａｔｕｒｅ  Ｒｅｖｉｅｗｓ  Ｄｒｕｇ  Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ、Ｖｏｌ  ５．  Ｊｕｎｅ  ２００６、４７１〜４８４）。ＣｐＧ含有オリゴヌクレオチド（ＣｐＧ  ＯＤＮ）は、ＴＬＲ９アゴニストである（Ｄ．Ｍ．  Ｋｌｉｎｍａｎ、Ｎａｔ．  Ｒｅｖ．、Ｉｍｍｕｎｏｌ．  ４  （２００４）  ２４９−  ２５８）。機能的な特徴に基づいて、ＣｐＧ  ＯＤＮは、３つのタイプに分けられる。Ｔｏｍｏｋｉ  Ｉｔｏ、ｅｔ  ａｌ．  Ｂｌｏｏｄ、２００６、Ｖｏｌ  １０７、Ｎｕｍ  ６：  ２４２３〜２４３１。ＡタイプＣｐＧ  ＯＤＮは、ヒト形質細胞様樹状細胞（ｐＤＣ）を活性化して、大量のタイプＩインターフェロン（ＩＦＮ−ａ／β）を産生させて、ナチュラルキラー細胞（ＮＫ細胞）を強く活性化する。ＢタイプＣｐＧ  ＯＤＮは、主にＢ細胞を活性化して、それらの増殖及び抗体分泌を引き起こす。ＣタイプＣｐＧ  ＯＤＮは、Ａ及びＢタイプＣｐＧ  ＯＤＮの両方の活性を共有する。ＴＬＲ９アゴニストとして、ＣｐＧ２２１６又はＣｐＧ２００６又はＣｐＧ２３９５などのＣｐＧ  ＯＤＮは、これらがＴＬＲ９に対して曝され、活性化される細胞区画にエンドサイトーシスされ得る。ｐＤＣでは、ＴＬＲ９活性化は急速な先天性免疫応答を開始し、これは、炎症誘発性サイトカイン（ＩＬ−６、腫瘍ネクローシス因子α（ＴＮＦα））の分泌、タイプＩインターフェロン（ＩＦＮ）の分泌及びＩＦＮ誘導性ケモカインの分泌によって特徴づけられる。ＩＦＮ依存性及びＩＦＮ非依存性経路の両方によって、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、単球及び好中球を含む先天性免疫細胞が、ｐＤＣによって二次的に活性化される。ＴＬＲ９によって活性化されるＢ細胞は、抗原刺激に対する感受性が非常に増加し、抗体分泌細胞に効率的に分化し、したがって、適応免疫応答、特に体液性免疫応答に寄与する。ＴＬＲ９によるｐＤＣ活性化はＩＦＮαを分泌させ、これが遊走並びにｐＤＣのリンパ節及び他の二次リンパ系組織へのクラスタリングを駆動し、ここで、ｐＤＣがナイーブ及びメモリーＴ細胞を活性化し、可溶性タンパク質抗原のＣＤ８＋細胞傷害性Ｔリンパ球（ＣＴＬ）への交差提示を補助し、強いＴＨ１に偏向した細胞性ＣＤ４及びＣＤ８  Ｔ細胞応答を促進する。上記に言及された所見に基づいて、ＣｐＧ  ＯＤＮの活性に拮抗する薬剤が、先天性及び適応免疫応答の両方を阻害することによって免疫媒介性障害を治療又は予防するために使用することができることは自明である。
【００６０】
[0067]一般に、本発明のＴＬＲ９アゴニストは、オリゴヌクレオチド（ＯＤＮ）を含む。
【００６１】
[0068]本明細書で「オリゴヌクレオチド」は、複数のヌクレオチド（すなわち、リン酸基及び交換可能な有機塩基に連結された糖（例えば、デオキシリボース）を含む分子であり、これは、置換されたピリミジン（Ｐｙ）（例えば、シトシン（Ｃ）、チミン（Ｔ））又は置換されたプリン（Ｐｕ）（例えば、アデニン（Ａ）又はグアニン（Ｇ）のいずれかである）を意味する。本明細書で使用される用語「オリゴヌクレオチド」は、オリゴデオキシリボヌクレオチド（ＯＤＮ）を指す。オリゴヌクレオチドは、既存の核酸供給源（例えば、ゲノム又はｃＤＮＡ）から得られうるが、合成が好ましい。本発明のオリゴヌクレオチドは、市販の種々の自動核酸シンセサイザーで合成することができる。これらのオリゴヌクレオチドは、合成オリゴヌクレオチドと称される。
【００６２】
[0069]いくつかの実施形態において、ＴＬＲ９アゴニストは、非メチル化ＣｐＧモチーフを含有するオリゴヌクレオチドを含む。
【００６３】
[0070]いくつかの実施形態において、ＴＬＲ９アゴニストは、表１から選択される配列を有するオリゴヌクレオチドを含む。
【００６４】
【表１】
2020516305.tif 000002
【００６５】
[0071]いくつかの実施形態において、本発明のオリゴヌクレオチドは、表１の配列の１つを含み又は有し、１つ又は追加のヌクレオチド（例えば、１、２、３、４、又は５）を５’又は３’端、又は両端で有する。
【００６６】
[0072]いくつかの実施形態において、本発明のオリゴヌクレオチドは、表１の配列の厳密に１つを有し、任意の追加のヌクレオチドを５’端又は３’端のいずれにも有さない。
【００６７】
[0073]いくつかの実施形態において、本発明のオリゴヌクレオチドは、表１の配列の１つからなる。
【００６８】
[0074]いくつかの実施形態において、本発明のオリゴヌクレオチドは、化学修飾を含まない。いくつかの実施形態において、本発明のオリゴヌクレオチドは、化学修飾を含む。
【００６９】
[0075]本発明に開示されるオリゴヌクレオチドは、ホスホジエステルヌクレオシド間ブリッジ、リボース単位及び／又は天然ヌクレオシド塩基（アデニン、グアニン、シトシン、及びチミン）が関与する、天然ＤＮＡと比較して、様々な化学修飾を包含することができる。修飾は、オリゴヌクレオチドの合成の間又は後のいずれかで生じ得る。合成の間、修飾塩基は、内部又はその端に組み込まれ得る。合成の後、修飾は、活性基（アミノ修飾剤を介して、３’若しくは５’ヒドロキシル基を介して、又はリン酸基を介して）を使用して実施することができる。
【００７０】
[0076]本発明によるオリゴヌクレオチドは、１つ又は複数の修飾を有していてもよく、ここで、各修飾は、天然ＤＮＡから構成される同じ配列のオリゴヌクレオチドと比較して、特定のホスホジエステルヌクレオシド間ブリッジ及び／又は特定のリボース単位及び／又は特定の天然ヌクレオシド塩基位置に位置する。化学修飾は、本発明のオリゴヌクレオチドの「骨格修飾」を含む。本明細書で使用される本発明のオリゴヌクレオチドの修飾骨格は、非ブリッジリン酸酸素（ｎｏｎ−ｂｒｉｄｇｉｎｇ  ｐｈｏｓｐｈａｔｅ  ｏｘｙｇｅｎ）が、少なくとも１つのヌクレオチド間結合（ｌｉｎｋａｇｅ）で硫黄によって置き換えられる核酸分子の安定化糖リン酸骨格を指す「ホスホロチオエート骨格」を含むが、限定されない。
【００７１】
[0077]いくつかの実施形態において、非ブリッジリン酸酸素は、ヌクレオチド間結合（ｌｉｎｋａｇｅ）の各々全てで硫黄によって置き換えられる。他の骨格修飾は、非イオン性ＤＮＡ類似体、例えば、アルキル−及びアリール−ホスホネート（荷電ホスホネート酸素が、アルキル又はアリール基によって置き換えられる）、ホスホジエステル及びアルキルホスホトリエステル（荷電酸素部分がアルキル化される）での修飾を示す。
【００７２】
[0078]いくつかの実施形態において、オリゴヌクレオチドのリン酸骨格は、未修飾である。いくつかの実施形態において、オリゴヌクレオチドのリン酸骨格は、部分的又は完全にホスホロチオエートで修飾されている。いくつかの実施形態において、オリゴヌクレオチドは、ホスホロチオエート／ホスホジエステルキメラである。
【００７３】
[0079]化学修飾は、本発明に開示されるオリゴヌクレオチドの塩基置換も含む。置換プリン及びピリミジンは、Ｃ−５プロピンピリミジン及び７−デアザ−７−置換プリンであってもよい。置換プリン及びピリミジンは、アデニン、シトシン、グアニン、及びチミン、及び他の天然及び非天然の核酸塩基を含むが、限定されない。本発明のオリゴヌクレオチドの化学修飾は、オリゴヌクレオチドの塩基の修飾をさらに含む。修飾塩基は、Ｔ、Ｃ、Ｇ及びＡなどのＤＮＡにおいて典型的に見出される天然の塩基から化学的に区別されるが、これらの天然の塩基と基礎の化学的な構造を共有する、任意の塩基である。
【００７４】
[0080]いくつかの実施形態において、本発明のオリゴヌクレオチドは、シチジン誘導体を使用して修飾される。用語「シチジン誘導体」はシチジン様ヌクレオチド（シチジンを除く）を指し、用語「チミジン誘導体」はチミジン様ヌクレオチド（チミジンを除く）を指す。加えて、本発明のオリゴヌクレオチドは、ジオール、例えばテトラエチレングリコール又はヘキサエチレングリコールを、オリゴヌクレオチドの末端のいずれか又は両方で連結することによって化学的に修飾することができる。
【００７５】
[0081]オリゴヌクレオチドは、Ｐｙ−Ｐｕジヌクレオチドでホスホノアセタート又はホスホノアセタート様結合（ｌｉｎｋａｇｅ）に加えて、さらなる骨格修飾を有してもよい。安定化ヌクレオチド間結合（ｌｉｎｋａｇｅ）は、ホスホジエステルヌクレオチド間結合（ｌｉｎｋａｇｅ）と比較して、インビボ分解（例えば、エキソ−又はエンド−ヌクレアーゼを介して）に対して相対的に耐性のヌクレオチド間結合（ｌｉｎｋａｇｅ）である。ホスホノアセタート及びホスホノアセタート様結合（ｌｉｎｋａｇｅ）に加えて、オリゴヌクレオチドは、限定されることなく、ホスホロチオエート、ホスホロジチオエート、メチルホスホネート、及びメチルホスホロチオエートを含む、他の安定化ヌクレオチド間結合（ｌｉｎｋａｇｅ）を含有してもよい。他の安定化ヌクレオチド間結合（ｌｉｎｋａｇｅ）は、限定されることなく、ペプチド、アルキル、及びデホスホを含む。ホスホノアセタートヌクレオチド間結合（ｌｉｎｋａｇｅ）は、他の安定化結合（ｌｉｎｋａｇｅ）のように、ヌクレアーゼ消化に対して低下した感受性及びＲＮＡｓｅ  Ｈを活性化する増加した能力を有する。したがって、例えばホスホジエステル（しかし、ホスホノアセタートではない）オリゴヌクレオチドは、ヌクレアーゼ消化に対して感受性であるが、ホスホジエステル及びホスホノアセタートオリゴヌクレオチドの両方ともＲＮＡｓｅ  Ｈを活性化する。いくつかの実施形態において、Ｐｙ−Ｐｕオリゴヌクレオチドは、少なくとも１つのホスホジエステルヌクレオチド間結合（ｌｉｎｋａｇｅ）を含む。オリゴヌクレオチドは、好ましい内部位置でのホスホノアセタート又はホスホノアセタート様ヌクレオチド間結合（ｌｉｎｋａｇｅ）に加えて、分解に対して耐性の５’及び３’端を含んでもよい。そのような分解耐性端は、対応する未修飾端へのエキソヌクレアーゼ消化に対して増加した耐性を引き起こす任意の適切な修飾を伴ってもよい。例えば、５’及び３’端は、そこに骨格の少なくとも１つのリン酸修飾を含ませることによって安定化することができる。一実施形態において、各端での骨格の少なくとも１つのリン酸修飾は、独立してホスホロチオエート、ホスホロジチオエート、ホスホノアセタート、ホスホノアセタート様、メチルホスホネート、又はメチルホスホロチオエートヌクレオチド間結合（ｌｉｎｋａｇｅ）である。別の実施形態において、分解耐性端は、３’端でペプチド又はアミド結合（ｌｉｎｋａｇｅ）によって接続される１つ又は複数のヌクレオチド単位を含む。
【００７６】
[0082]用語「核酸」及び「オリゴヌクレオチド」は、例えば、塩基及び／又は糖において、置換又は修飾を有する核酸又はオリゴヌクレオチドも包含する。例えば、これらは、２’位でのヒドロキシル基以外及び５’位でのリン酸基又はヒドロキシ基以外の低分子有機基に共有結合で連結された骨格糖を有する核酸を含む。したがって、修飾核酸は、２’−Ｏ−アルキル化デオキシリボース基を含んでもよい。加えて、修飾核酸は、デオキシリボースの代わりに糖、例えばアラビノース又は２’−フルオロアラビノースを含んでもよい。したがって、核酸は、骨格組成において異種性であってもよく、それによってペプチド−核酸（これは、アミノ酸骨格を核酸塩基とともに有する）などの一緒に連結されるポリマー単位の任意の可能な組合せを含有させる。本件発明の文脈において、オリゴヌクレオチドは、アンチセンスオリゴヌクレオチド、リボザイム、又はアプタマーではない。
【００７７】
[0083]核酸はまた、置換プリン及びピリミジンは、例えばＣ−５プロピンピリミジン及び７−デアザ−７−置換プリン修飾塩基を含む（Ｗａｇｎｅｒ  ＲＷ  ｅｔ  ａｌ．、（１９９６）  Ｎａｔ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ  １４：８４０〜４）。プリン及びピリミジンは、アデニン、シトシン、グアニン、チミン、５−メチルシトシン、５−ヒドロキシシトシン、５−フルオロシトシン、２−アミノプリン、２−アミノ−６−クロロプリン、２，６−ジアミノプリン、ヒポキサンチン、及び他の天然及び非天然の核酸塩基、置換及び非置換芳香族部分を含むが、限定されない。他のそのような修飾は、当業者に周知である。
【００７８】
[0084]オリゴヌクレオチドは、ＤＮＡ又はＲＮＡであってもよい。一実施形態において、本発明のオリゴヌクレオチドは、リボース及びデオキシリボースの混合性骨格を含むＤＮＡ／ＲＮＡハイブリッド分子である。ＤＮＡ／ＲＮＡハイブリッドオリゴヌクレオチドは、増加した活性を実証することが多い。一実施形態において、これらのＤＮＡ／ＲＮＡハイブリッドオリゴヌクレオチドは、単一鎖である。別の実施形態において、オリゴヌクレオチドの全て又は一部は、二重鎖である。一実施形態において、本発明のオリゴヌクレオチドは、共有結合性に閉鎖された、一次及び二次構造の両方を有するダンベル状分子の形態にある。一実施形態において、そのような環状オリゴリボヌクレオチドは、介在する二重鎖セグメントによって接続される２つの単一鎖ループを含む。一実施形態において、少なくとも１つの単一鎖ループは、本発明の免疫刺激ＤＮＡモチーフを含む。本発明の他の共有結合性に閉鎖された、ダンベル状分子は、キメラＤＮＡ／ＲＮＡ分子を含み、ここで、例えば、二重鎖セグメントは、少なくとも部分的にＤＮＡ（例えば、ホモ二量体ｄｓＤＮＡ又はヘテロ二量体ＤＮＡ：ＲＮＡのいずれか）であり、少なくとも１つの単一鎖ループは、本発明の免疫刺激ＤＮＡモチーフを含む。或いは、キメラ分子の二重鎖セグメントは、ＤＮＡである。
【００７９】
[0085]本発明のオリゴヌクレオチドはまた、他の修飾を含み得る。これらは、非イオン性ＤＮＡ類似体、例えば、アルキル−及びアリール−ホスフェート（荷電ホスホネート酸素が、アルキル又はアリール基によって置き換えられる）、ホスホジエステル及びアルキルホスホトリエステル（荷電酸素部分がアルキル化される）を含む。ジオール、例えばテトラエチレングリコール又はヘキサエチレングリコールを、末端のいずれか又は両方で含有する核酸は、ヌクレアーゼ分解に対して実質的に耐性であることも示されている。
【００８０】
[0086]本件発明のオリゴヌクレオチドは、ホスホジエステルヌクレオチド間ブリッジ、β−Ｄ−リボース単位及び／又は天然ヌクレオチド塩基（アデニン、グアニン、シトシン、チミン、ウラシル）が関与する、天然ＲＮＡ及びＤＮＡと比較して、様々な化学修飾及び置換を包含することができる。化学修飾の例は、当業者に知られており、例えば、Ｕｈｌｍａｎｎ、Ｅ．  ｅｔ  ａｌ．、（１９９０）  Ｃｈｅｍ  Ｒｅｖ  ９０：５４３；“Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｆｏｒ  Ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓ  ａｎｄ  Ａｎａｌｏｇｓ”  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ  ａｎｄ  Ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ  ＆  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ  ａｎｄ  Ａｎａｌｙｔｉｃａｌ  Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ、Ｓ．  Ａｇｒａｗａｌ、Ｅｄ、Ｈｕｍａｎａ  Ｐｒｅｓｓ、Ｔｏｔｏｗａ、ＵＳＡ  １９９３；Ｃｒｏｏｋｅ、ＳＴ．  ｅｔ  ａｌ．、（１９９６）  Ａｎｎｕ  Ｒｅｖ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌ  Ｔｏｘｉｃｏｌ  ３６：１０７〜１２９  及びＨｕｎｚｉｋｅｒ、Ｊ．  ｅｔ  ａｌ．、（１９９５）  Ｍｏｄ  Ｓｙｎｔｈ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ７：３３１〜４１７に記載されている。本発明によるオリゴヌクレオチドは、１つ又は複数の修飾を有していてもよく、ここで、各修飾は、天然ＤＮＡ又はＲＮＡから構成される同じ配列のオリゴヌクレオチドと比較して、特定のホスホジエステルヌクレオチド間ブリッジ及び／又は特定のβ−Ｄ−リボース単位及び／又は特定の天然ヌクレオチド塩基位置に位置する。
【００８１】
[0087]例えば、本発明は、１つ又は複数の修飾を含みうる、オリゴヌクレオチドに関し、ここで、各修飾は、独立して、ａ）修飾ヌクレオチド間ブリッジによるヌクレオチドの３’及び／又は５’端に位置するホスホジエステルヌクレオチド間ブリッジの置き換え、ｂ）デホスホブリッジによるヌクレオチドの３’及び／又は５’端に位置するホスホジエステルブリッジの置き換え、ｃ）別の単位による糖リン酸骨格からの糖リン酸単位の置き換え、ｄ）修飾糖単位によるβ−Ｄ−リボース単位の置き換え、及びｅ）修飾ヌクレオチド塩基による天然ヌクレオチド塩基の置き換えから選択される。
【００８２】
[0088]ヌクレオチドの３’及び／又は５’端に位置するホスホジエステルヌクレオチド間ブリッジは、修飾ヌクレオチド間ブリッジによって置き換えることができ、ここで、修飾ヌクレオチド間ブリッジは、例えば、ホスホロチオエート、ホスホロジチオエート、ＮＲ１Ｒ２−ホスホルアミデート、ボラノホスフェート、α−ヒドロキシベンジルホスホネート、リン酸−（Ｃ１〜Ｃ２１）−Ｏ−アルキルエステル、リン酸−［（Ｃ６〜Ｃ１２）アリール−（Ｃ１〜Ｃ２１）−Ｏ−アルキルエステル、ｄ−アルキルホスホネート及び／又は
（Ｃ６〜Ｃ１２）アリールホスホネート
ブリッジ、（Ｃ７〜Ｃ１２）−α−ヒドロキシメチル−アリール（例えば、国際公開第９５／０１３６３号に開示される）から選択され、ここで、（Ｃ６〜Ｃ１２）アリール、（Ｃ８〜Ｃ２０）アリール及び（Ｃ６〜Ｃ１４）アリールは、任意選択で、ハロゲン、アルキル、アルコキシ、ニトロ、シアノによって置換され、及び式中Ｒ１及びＲ２は、互いに独立して、水素、（Ｃ１〜Ｃ１８）−アルキル、（Ｃ６〜Ｃ２０）−アリール、（Ｃ６〜Ｃ１４）−アリール−（Ｃ１〜Ｃ８）−アルキル、好ましくは水素、（Ｃ１〜Ｃ８）−アルキル、好ましくは（Ｃ１〜Ｃ４）−アルキル及び／又はメトキシエチルであり、又はＲ１及びＲ２は、それらを保持する窒素原子と一緒に、Ｏ、Ｓ及びＮ基からのさらなるヘテロ原子を追加的に含有し得る、５〜６員の複素環を形成する。
【００８３】
[0089]デホスホブリッジによるヌクレオチドの３’及び／又は５’端に位置するホスホジエステルブリッジの置き換え（デホスホブリッジは、例えば、Ｕｈｌｍａｎｎ  Ｅ  ａｎｄ  Ｐｅｙｍａｎ  Ａ  ｉｎ  “Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ”、Ｖｏｌ．  ２０、“Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｆｏｒ  Ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓ  ａｎｄ  Ａｎａｌｏｇｓ”、Ｓ．  Ａｇｒａｗａｌ、Ｅｄ．、Ｈｕｍａｎａ  Ｐｒｅｓｓ、Ｔｏｔｏｗａ  １９９３、Ｃｈａｐｔｅｒ  １６、ｐｐ．  ３５５  ｆｆに記載されている）、  ここで、デホスホブリッジは、例えば、デホスホブリッジホルムアセタール、３’−チオホルムアセタール、メチルヒドロキシルアミン、オキシム、メチレンジメチル−ヒドラゾ、ジメチレンスルホン及び／又はシリル基から選択される。糖リン酸骨格（つまり、糖リン酸骨格は糖リン酸単位から構成される）からの糖リン酸単位（つまり、β−Ｄ−リボース及びホスホジエステルヌクレオチド間ブリッジが一緒に糖リン酸単位を形成する）は、別の単位によって置き換えることができ、ここで、他の単位は、例えば、「モルホリノ誘導体」オリゴマー（例えば、Ｓｔｉｒｃｈａｋ  ＥＰ  ｅｔ  ａｌ．、（１９８９）  Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ  １７：６１２９〜４１に記載の通り）、すなわち、例えば、モルホリノ誘導体単位による置き換えである；又はポリアミド核酸（「ＰＮＡ」；例えば、Ｎｉｅｌｓｅｎ  ＰＥ  ｅｔ  ａｌ．、（１９９４）  Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇ  Ｃｈｅｍ  ５：３〜７に記載の通り）、すなわち、例えば、ＰＮＡ骨格単位による、例えば、２−アミノエチルグリシンによる置き換えを構築するため適切である。
【００８４】
[0090]β−Ｄ−リボース単位又はβ−Ｄ−２’−デオキシリボース単位は、修飾糖単位によって置き換えることができ、  ここで、修飾糖単位は、例えば、α−Ｄ−２’−デオキシリボース、α−Ｌ−２’−デオキシリボース、β−Ｌ−２’−デオキシリボース、β−Ｌ−リボース、２’−Ｆ−２１−デオキシリボース、２’−Ｆ−２’−デオキシ−アラビノース、２’−Ｏ−（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル−リボースから選択され、好ましくは２’−Ｏ−（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル−リボースは、２’−Ｏ−メチルリボース、２Ｉ−Ｏ−（Ｃ２〜Ｃ６）アルケニル−リボース、２１−［Ｏ−（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル−Ｏ−（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル］−リボース、２１−ＮＨ２−２１−デオキシリボース、β−Ｄ−キシロ−フラノース、α−アラビノフラノース、２，４−ジデオキシ−β−Ｄ−エリスロ−ヘキソ−ピラノース、及び炭素環式（例えば、Ｆｒｏｅｈｌｅｒ、Ｊ．  （１９９２）  Ａｍ  Ｃｈｅｍ  Ｓｏｃ  １１４：８３２０  に記載の通り）及び／又は開鎖糖類似体（例えば、Ｖａｎｄｅｎｄｒｉｅｓｓｃｈｅ  ｅｔ  ａｌ．、（１９９３）  Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ  ４９：７２２３に記載の通り）及び／又は二環式糖類似体（例えば、Ｔａｒｋｏｖ、Ｍ．  ｅｔ  ａｌ．、（１９９３）  ＨｅＩｖ  Ｃｈｉｍ  Ａｃｔａ  ７６：４８１に記載の通り）である。
【００８５】
[0091]いくつかの実施形態において、糖は、２’−Ｏ−メチルリボース、２’−デオキシリボース、２’−フルオロ−２’−デオキシリボース、２’−アミノ−２’デオキシリボース、２’−Ｏ−アルキル−リボース、又は３’−Ｏ−アルキル−リボース及び／又は２’−Ｏ−４’−Ｃ−アルキレンリボース、例えば、２’−Ｏ−４’−Ｃ−メチレンリボース（ＬＮＡとも呼ばれる）である。
【００８６】
[0092]核酸はまた、置換プリン及びピリミジンは、例えばＣ−５プロピンピリミジン及び７−デアザ−７−置換プリン修飾塩基を含む（Ｗａｇｎｅｒ、Ｒ．Ｗ．  ｅｔ  ａｌ．、（１９９６）  Ｎａｔ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ  １４：８４０〜４）。プリン及びピリミジンは、アデニン、シトシン、グアニン、及びチミン、並びに他の天然及び非天然の核酸塩基、置換及び非置換芳香族部分を含むが、限定されない。
【００８７】
[0093]修飾塩基は、Ｔ、Ｃ、Ｇ、Ａ、及びＵなどのＤＮＡ及びＲＮＡにおいて典型的に見出される天然の塩基から化学的に区別されるが、これらの天然の塩基と基礎の化学的な構造を共有する、任意の塩基である。修飾ヌクレオチド塩基は、例えば、ヒポキサンチン、ウラシル、ジヒドロウラシル、偽ウラシル、２−チオウラシル、４−チオウラシル、５−アミノウラシル、５−（Ｃ１〜Ｃ６）−アルキルウラシル、５−（Ｃ２〜Ｃ８）−アルケニルウラシル、５−（Ｃ２〜Ｃ６）−アルキニルウラシル、５−（ヒドロキシメチル）ウラシル、５−クロロウラシル、５−フルオロウラシル、５−ブロモウラシル、５−ヨード−ウラシル、２．４−ジフルオロ−トルエン、及び３−ニトロピロール、５−ヒドロキシシトシン、５−（Ｃ１〜Ｃ６）−アルキルシトシン、５−（Ｃ２〜Ｃ６）−アルケニルシトシン、５−（Ｃ２〜Ｃ６）−アルキニルシトシン、５−クロロシトシン、５−フルオロシトシン、５−ブロモシトシン、Ｎ２−ジメチルグアニン、２，４−ジアミノ−プリン、８−アザプリン、置換７−デアザプリン、好ましくは７−デアザ−７−置換及び／又は７−デアザ−８−置換プリン、５−ヒドロキシメチルシトシン、Ｎ４−アルキルシトシン、例えば、Ｎ４−エチルシトシン、５−ヒドロキシデオキシシチジン、５−ヒドロキシメチルデオキシシチジン、Ｎ４−アルキルデオキシシチジン、例えば、Ｎ４−エチルデオキシシチジン、６−チオデオキシグアノシン、及びニトロピロールのデオキシリボヌクレオチド、Ｃ５−プロピニルピリミジン、及びジアミノプリン、例えば、２，６−ジアミノプリン、イノシン、５−メチルシトシン、２−アミノプリン、２−アミノ−６−クロロプリン、ヒポキサンチン又は天然ヌクレオチド塩基の他の修飾から選択されてもよい。このリストが、例示的であること及び限定されると解釈されないことが意図されている。
【００８８】
[0094]本明細書で「Ｐｙ」を使用してピリミジンを指し及びいくつかの実施形態においては、シトシン又は修飾シトシンを含有するヌクレオチドを指すために使用される。本明細書で使用される修飾シトシンは、シトシンの天然又は非天然のピリミジン塩基類似体であり、これは、オリゴヌクレオチドの免疫刺激活性を損なうことなく、この塩基を置き換えることができる。修飾シトシンは、５−置換シトシン（例えば、５−メチル−シトシン、５−フルオロ−シトシン、５−クロロ−シトシン、５−ブロモシトシン、５−ヨード−シトシン、５−ヒドロキシ−シトシン、５−ヒドロキシメチル−シトシン、５−ジフルオロメチル−シトシン、及び非置換又は置換５−アルキニル−シトシン）、６−置換シトシン、Ｎ４−置換シトシン（例えば、Ｎ４−エチル−シトシン）、５−アザ−シトシン、２−メルカプト−シトシン、イソシトシン、偽イソシトシン、縮合環系を有するシトシン類似体（例えば、Ｎ．Ｎ’−プロピレンシトシン又はフェノキサジン）、及びウラシル及びその誘導体（例えば、５−フルオロ−ウラシル、５−ブロモ−ウラシル、５−ブロモビニル−ウラシル、４−チオ−ウラシル、５−ヒドロキシ−ウラシル、５−プロピニル−ウラシル）を含むが、限定されない。いくつかの好ましいシトシンは、５−メチルシトシン、５−フルオロ−シトシン、５−ヒドロキシ−シトシン、５−ヒドロキシメチル−シトシン、及びＮ４−エチル−シトシンを含む。本発明の別の実施形態において、シトシン塩基は、普遍的塩基（例えば、３−ニトロピロール、Ｐ−塩基）、芳香環系（例えば、フルオロベンゼン又はジフルオロベンゼン）又は水素原子（ｄＳｐａｃｅｒ）によって置換される。
【００８９】
[0095]本明細書で「Ｐｕ」を使用してプリン又は修飾プリンを指す。いくつかの実施形態において、Ｐｕは、グアニン又は修飾グアニン塩基である。本明細書で使用される修飾グアニンは、グアニンの天然又は非天然のプリン塩基類似体であり、これは、オリゴヌクレオチドの免疫刺激活性を損なうことなく、この塩基を置き換えることができる。修飾グアニンは、７−デアザグアニン、７−デアザ−７−置換グアニン（例えば、７−デアザ−７−（Ｃ２〜Ｃ６）アルキニルグアニン）、７−デアザ−８−置換グアニン、ヒポキサンチン、Ｎ２−置換グアニン（例えば、Ｎ２−メチル−グアニン）、５−アミノ−３−メチル−３Ｈ，６Ｈ−チアゾロ［４，５−ｄ］ピリミジン−２，７−ジオン、２，６−ジアミノプリン、２−アミノプリン、プリン、インドール、アデニン、置換アデニン（例えば、Ｎ６−メチル−アデニン、８−ヒドロキシアデニン）８−置換グアニン（例えば、８−ヒドロキシグアニン及び８−ブロモグアニン）、及び６−チオグアニンを含むが、限定されない。本発明の別の実施形態において、グアニン塩基は、普遍的塩基（例えば、４−メチル−インドール、５−ニトロ−インドール、及びＫ−塩基）、芳香環系（例えば、ベンズイミダゾール又はジクロロ−ベンズイミダゾール、１−メチル−１Ｈ−［１，２，４］トリアゾール−３−カルボン酸アミド）又は水素原子（ｄＳｐａｃｅｒ）によって置換される。
【００９０】
[0096]本発明はまた、５’−５’、２’−２’、２’−３’、及び２’−５’ヌクレオチド間結合（ｌｉｎｋａｇｅ）を含む異例のヌクレオチド間結合（ｌｉｎｋａｇｅ）を有するオリゴヌクレオチドを包含する。本発明のいくつかの態様において、オリゴヌクレオチドについて１つ又は複数の接触可能な５’端を有することが有利である。２つのそのような５’端を有する修飾オリゴヌクレオチドを作り出すことは可能である。これは、例えば、１つ又は２つの接触可能な５’端を有するオリゴヌクレオチドを生じさせるのに３’−３’結合（ｌｉｎｋａｇｅ）によって２つのオリゴヌクレオチドを結合することによって達成されうる。３’−３’結合（ｌｉｎｋａｇｅ）は、ホスホジエステル、ホスホロチオエート、ホスホノアセタート又は任意の他の修飾ヌクレオチド間ブリッジであってもよい。そのような結合（ｌｉｎｋａｇｅ）を達成するための方法は、当技術分野において知られている。例えば、そのような結合（ｌｉｎｋａｇｅ）は、Ｓｅｌｉｇｅｒ、Ｈ．  ｅｔ  ａｌ．  Ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ  ａｎａｌｏｇｓ  ｗｉｔｈ  ｔｅｒｍｉｎａｌ  ３’−３’−  ａｎｄ  ５’−５’−ｉｎｔｅｒｎｕｃｌｅｏｔｉｄｉｃ  ｌｉｎｋａｇｅｓ  ａｓ  ａｎｔｉｓｅｎｓｅ  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ  ｏｆ  ｖｉｒａｌ  ｇｅｎｅ  ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ、Ｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓ  ＆  Ｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓ  （１９９１  ）、１０（１〜３）、４６９〜７７及びＪｉａｎｇ  ｅｔ  ａｌ．、Ｐｓｅｕｄｏ−ｃｙｃｌｉｃ  ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓ：  ｉｎ  ｖｉｔｒｏ  ａｎｄ  ｉｎ  ｖｉｖｏ  ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ、Ｂｉｏｏｒｇａｎｉｃ  ＆  Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  （１９９９）、７（１２）、２７２７〜２７３５に記載されている。一実施形態において、そのような異例の結合（ｌｉｎｋａｇｅ）は、免疫刺激ＤＮＡモチーフから除かれるが、１つ又は複数のそのような結合（ｌｉｎｋａｇｅ）は、ポリマー内の他の場所に生じてもよい。遊離末端を有するポリマーに関して、１つの３’−３’ヌクレオチド間結合（ｌｉｎｋａｇｅ）を含ませることによって、２つの遊離５’末端を有するポリマーがもたらされ得る。逆に、遊離末端を有するポリマーに関して、１つの５−５’ヌクレオチド間結合（ｌｉｎｋａｇｅ）を含ませることによって、２つの遊離３’末端を有するポリマーがもたらされ得る。さらに、結合（ｌｉｎｋａｇｅ）がホスホジエステル、ホスホロチオエート、ホスホノアセタートではない３’３’−、５−５’−、２’−２’−、２’−３’−、及び２’−５’−結合核酸又は他の修飾ブリッジは、追加のスペーサー、例えば、トリ−又はテトラ−エチレングリコールリン酸部分（Ｄｕｒａｎｄ、Ｍ．  ｅｔ  ａｌ．、Ｔｒｉｐｌｅ−ｈｅｌｉｘ  ｆｏｒｍａｔｉｏｎ  ｂｙ  ａｎ  ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ  ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ  ｏｎｅ  （ｄＡ）１２  ａｎｄ  ｔｗｏ  （ｄＴ）１２  ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｂｒｉｄｇｅｄ  ｂｙ  ｔｗｏ  ｈｅｘａｅｔｈｙｌｅｎｅ  ｇｌｙｃｏｌ  ｃｈａｉｎｓ、Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  （１９９２）、３１（３８）、９１９７〜２０４、米国特許第５６５８７３８号、及び米国特許第５６６８２６５号）を使用して調製することができる。或いは、非ヌクレオチドリンカーは、標準ホスホラミダイト化学を使用して、エタンジオール、プロパンジオール、又は脱塩基デオキシリボース（ｄＳｐａｃｅｒ）単位（Ｆｏｎｔａｎｅｌ、Ｍａｒｉｅ  Ｌａｕｒｅｎｃｅ  ｅｔ  ａｌ．、Ｓｔｅｒｉｃａｌ  ｒｅｃｏｇｎｉｔｉｏｎ  ｂｙ  Ｔ４  ｐｏｌｙｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ  ｋｉｎａｓｅ  ｏｆ  ｎｏｎ−ｎｕｃｌｅｏｓｉｄｉｃ  ｍｏｉｅｔｉｅｓ  ５１−  ａｔｔａｃｈｅｄ  ｔｏ  ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓ；Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  （１９９４）、２２（１１）、２０２２〜７）から誘導されうる。非ヌクレオチドリンカーは、１回若しくは複数回組み込む、又は互いに組合せることができ、連結される２つのＯＤＮの３’端の間での任意の望ましい距離が可能とされる。
【００９１】
[0097]オリゴヌクレオチドは、ダブラー（ｄｏｕｂｌｅｒ）又はトレブラー（ｔｒｅｂｌｅｒ）単位（Ｇｌｅｎ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ、Ｓｔｅｒｌｉｎｇ、ＶＡ）、特に３’−３’結合（ｌｉｎｋａｇｅ）を有する修飾オリゴデオキシリボヌクレオチド類似体を含有していてもよい。一実施形態において、ダブラー単位は、１，３−ビス−［５−（４，４’−ジメトキシトリチルオキシ）ペンチルアミド］プロピル−２−［（２−シアノエチル）−（Ｎ，Ｎ−ジイソプロピル）］−ホスホラミダイトに基づくことができる。一実施形態において、トレブラー単位は、トリス−２，２，２−［３−（４，４’−ジメトキシトリチルオキシ）プロピルオキシメチル］エチル−［（２−シアノエチル）−（Ｎ，Ｎ−ジイソプロピル）］−ホスホラミダイトの組み込みに基づくことができる。複数のダブラー、トレブラー、又は他のマルティプライアー単位による修飾オリゴリボヌクレオチド類似体の分枝により、本発明のさらなる実施形態であるデンドリマーが導かれる。分枝状修飾オリゴリボヌクレオチド類似体は、類似体の非分枝形態と比較して、特に、区別される免疫効果を有するＴＬＲ３、ＴＬＲ７、ＴＬＲ８、及びＴＬＲ９などの免疫刺激性ＲＮＡ及びＤＮＡの組合せのための受容体の架橋を導きうる。加えて、分枝状又は別の多量体の類似体の合成は、分解に対してＤＮＡを安定化することができ、治療上の有用なレベルの免疫活性が発揮するための弱い又は部分的に有効なＤＮＡ配列を可能としうる。修飾オリゴデオキシリボヌクレオチド類似体は、ペプチド修飾試薬又はオリゴヌクレオチド修飾試薬（Ｇｌｅｎ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ）からもたらされるリンカー単位も含有しうる。さらに、修飾オリゴデオキシリボヌクレオチド類似体は、ペプチド（アミド）結合（ｌｉｎｋａｇｅ）によってポリマーに接続される、１つ又は複数の天然又は不自然なアミノ酸残基を含有してもよい。
【００９２】
[0098]３’−５’、５’−５’、３’−３＼２’−２’、２’−３’、及び２’−５’ヌクレオチド間結合（ｌｉｎｋａｇｅ）は、直接的又は間接的であってもよい。この文脈において、直接的な結合（ｌｉｎｋａｇｅ）は、介在リンカー部なしの、本明細書で開示されるリン酸又は修飾リン酸結合（ｌｉｎｋａｇｅ）を指す。介在リンカー部は、本明細書で開示されるリン酸又は修飾リン酸結合（ｌｉｎｋａｇｅ）から区別される有機部分であり、これは、例えば、ポリエチレングリコール、トリエチレングリコール、ヘキサエチレングリコール、ｄＳｐａｃｅｒ（すなわち、脱塩基デオキシヌクレオチド）、ダブラー単位、又はトレブラー単位を含み得る。結合（ｌｉｎｋａｇｅ）は、好ましくは３〜３００原子を含有する、Ｃ、Ｈ、Ｎ、Ｏ、Ｓ、Ｂ、Ｐ、及びハロゲンから構成される。３原子を有する例は、例えば、１つのヌクレオチドの３’−ヒドロキシ基と第二のオリゴヌクレオチドの３’−ヒドロキシ基を接続するアセタール結合（ｌｉｎｋａｇｅ）（ＯＤＮ１−３’−Ｏ−ＣＨ２−Ｏ−３’−ＯＤＮ２）である。約３００原子を有する例は、ＰＥＧ−４０（テトラコンタポリエチレングリコール）である。好ましい結合（ｌｉｎｋａｇｅ）は、ホスホジエステル、ホスホロチオエート、メチルホスホネート、ホスホルアミデート、ボラノホスホネート（ｂｏｒａｎｏｐｈｏｓｐｈｏｎａｔｅ）、アミド、エーテル、チオエーテル、アセタール、チオアセタール、尿素、チオ尿素、スルホンアミド、シッフ塩基及びジスルフィド結合（ｌｉｎｋａｇｅ）である。Ｓｏｌｕｌｉｎｋ  ＢｉｏＣｏｎｊｕｇａｔｉｏｎシステムを使用することも可能である。
【００９３】
[0099]オリゴヌクレオチドが２つ又はこれを超える配列部分から構成される場合、これらの部分は、同一であってもよい又は異なってもよい。したがって、３’３’−結合（ｌｉｎｋａｇｅ）を有するオリゴヌクレオチドにおいて、配列は、同一の５’−ＯＤＮ１−３’３’−ＯＤＮ１−５’であってもよい又は異なる５’−ＯＤＮ１−３’３’−ＯＤＮ２−５’であってもよい。さらに、様々なオリゴヌクレオチド部分並びにそれらを接続するリンカーの化学修飾は、異なってもよい。短いオリゴヌクレオチドの取り込みは長いオリゴヌクレオチドの取り込みよりも効率が低いと思われるため、２つ又はこれを超える短い配列の結合は免疫刺激の改善をもたらす。短いオリゴヌクレオチドの長さは、好ましくは、２〜２０ヌクレオチド、より好ましくは３〜１６ヌクレオチドであるが、最も好ましくは５〜１０ヌクレオチドである。２つ又はこれを超える未結合５’端を有する結合オリゴヌクレオチドが好ましい。
【００９４】
[0100]オリゴヌクレオチド部分配列はまた、非ヌクレオチドリンカーによって結合されてもよい。本明細書で使用される「非ヌクレオチドリンカー」は、ヌクレオチド又はそのポリマー（すなわち、ポリヌクレオチド）ではない、任意のリンカーエレメントを指し、ここで、ヌクレオチドは、プリン又はピリミジン核酸塩基及び糖リン酸、特に脱塩基リンカー（ｄＳｐａｃｅｒｓ）、トリエチレングリコール単位又はヘキサエチレングリコール単位を含む。さらに、好ましいリンカーは、アルキルアミノリンカー、例えば、Ｃ３、Ｃ６、Ｃ１２アミノリンカーであり、またアルキルチオールリンカー、例えば、Ｃ３又はＣ６チオールリンカーである。オリゴヌクレオチドはまた、アルキル又は置換アルキル基によってさらに置換されてもよい芳香族残基によって結合され得る。
【００９５】
[0101]他の安定化オリゴヌクレオチドは、非イオン性ＤＮＡ類似体、例えば、アルキル−及びアリール−ホスフェート（荷電ホスホネート酸素が、アルキル又はアリール基によって置き換えられる）、ホスホジエステル及びアルキルホスホトリエステル（荷電酸素部分がアルキル化される）を含む。ジオール、例えばテトラエチレングリコール又はヘキサエチレングリコールを、末端のいずれか又は両方で含有する核酸は、ヌクレアーゼ分解に対して実質的に耐性であることも示されている。
【００９６】
[0102]いくつかの実施形態において、活性化部分は、樹状細胞、及びＢ細胞、又はその組合せを含むが、限定されないヒト免疫細胞を活性化することが可能である。
【００９７】
樹状細胞
[0103]いくつかの実施形態において、本明細書で提供されるＯＤＮは、樹状細胞、特に形質球様樹状細胞を活性化することが可能である。
【００９８】
[0104]樹状細胞は、最も強力な抗原提示細胞である。樹状細胞は、先天性及び適応免疫応答の両方の開始に関して必須の役割を果たしている。樹状細胞はまた、免疫寛容の誘導及び維持において重要な役割を果たしている。
【００９９】
[0105]本明細書で「樹状細胞」（ＤＣ）により、２つの主なサブタイプ：すなわち、骨髄球性ＤＣ（ｍＤＣ）及び形質細胞様ＤＣ（ｐＤＣ）（Ｓｔｅｉｎｍａｎ  ｅｔ  ａｌ．、１９７９、Ｊ．  Ｅｘｐ．  Ｍｅｄ．、１４９、１〜１６）を含む異種性の細胞集団を意味する。これら２つの血液ＤＣサブセットは、ＣＤ１１ｃ（インテグリン補体受容体）及びＣＤ１２３（ＩＬ−３Ｒα）の、それらの発現によって当初は分化させられた。ｐＤＣ及びｍＤＣ集団の各々は、ヒトにおいてＰＢＭＣ集団の約０．２から約０．６％の間で構成される。
【０１００】
[0106]本明細書で「ｐＤＣ」は、形質細胞様樹状細胞を意味し、それらは血液及び末梢性リンパ様器官に見出される樹状細胞のサブタイプを代表する。これらの細胞は、表面マーカーＣＤ１２３、ＢＤＣＡ−２（ＣＤ３０３）及びＢＤＣＡ−４（ＣＤ３０４）及びＨＬＡ−ＤＲを発現するが、ＣＤ１１ｃ、ＣＤ１４、ＣＤ３、ＣＤ２０又はＣＤ５６を発現せず、これにより、それらは従来の樹状細胞、単球、Ｔ細胞、Ｂ細胞及びＮＫ細胞から区別される。先天性免疫システムの構成要素として、これらの細胞は、細胞内Ｔｏｌｌ様受容体７及び９を発現し、これが、ウイルス性及び細菌性核酸、例えばｓｓＲＮＡ又はＣｐＧ  ＤＮＡモチーフの検出を可能にする。刺激及び続く活性化の際、これらの細胞は、広範囲の効果を媒介する重大で多面的な抗ウイルス性化合物である、大量のタイプＩインターフェロン（主にＩＦＮ−α及びＩＦＮ−β）及びタイプＩＩＩインターフェロン（例えば、ＩＦＮ−λ）を産生する。多数のタイプＩインターフェロンを生成することにより、サイトカイン及びケモカイン、形質細胞様樹状細胞は、体の先天性及び適応免疫応答に広く関与している。それらは、免疫応答強度、持続時間、及び応答モードに関与するＮＫ細胞、Ｔ細胞、Ｂ細胞及び他の細胞を制御することができ、したがって、腫瘍、感染及び自己免疫疾患において非常に重要な機能を果たしている。（Ｌｉｕ  ＹＪ．  ＩＰＣ：  ｐｒｏｆｅｓｓｉｏｎａｌ  ｔｙｐｅ  １  ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎ−ｐｒｏｄｕｃｉｎｇ  ｃｅｌｌｓ  ａｎｄ  ｐｌａｓｍａｃｙｔｏｉｄ  ｄｅｎｄｒｉｔｉｃ  ｃｅｌｌ  ｐｒｅｃｕｒｓｏｒｓ．  Ａｎｎｕ  Ｒｅｖ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．  ２００５；２３：２７５−３０６．Ｇｉｌｌｉｅｔ  Ｍ、Ｃａｏ  Ｗ、Ｌｉｕ  ＹＪ．  Ｐｌａｓｍａｃｙｔｏｉｄ  ｄｅｎｄｒｉｔｉｃ  ｃｅｌｌｓ：  ｓｅｎｓｉｎｇ  ｎｕｃｌｅｉｃ  ａｃｉｄｓ  ｉｎ  ｖｉｒａｌ  ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ  ａｎｄ  ａｕｔｏｉｍｍｕｎｅ  ｄｉｓｅａｓｅｓ．Ｎａｔ  Ｒｅｖ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．２００８  Ａｕｇ；８（８）：５９４〜６０６）。
【０１０１】
[0107]本明細書で「ｍＤＣ」は、骨髄球性樹状細胞を意味し、それらは血液及び末梢性リンパ様器官に見出される循環樹状細胞のサブタイプを代表する。これらの細胞は、表面マーカーＣＤ１１ｃ、ＣＤ１ａ、ＨＬＡ−ＤＲ及びＢＤＣＡ−１（ＣＤ１ｃ）又はＢＤＣＡ−３（ＣＤ１４１）のいずれかを発現する。それらはＢＤＣＡ−２又はＣＤ１２３を発現しなく、これにより、それらはｐＤＣから区別される。ｍＤＣはまた、ＣＤ３、ＣＤ２０又はＣＤ５６を発現しない。先天性免疫システムの構成要素として、ｍＤＣは、ＴＬＲ２、３、４、５、６及び８を含む、Ｔｏｌｌ様受容体（ＴＬＲ）を発現し、これが、細菌性及びウイルス性成分の検出を可能にする。刺激及び続く活性化の際、これらの細胞は、抗原特異的ＣＤ４並びにＣＤ８  Ｔ細胞を活性化する最も強力な抗原提示細胞である。加えて、ｍＤＣは、大量のＩＬ−１２及びＩＬ２３を産生する能力を有しており、これはＴｈ１媒介性又はＴｈ１７細胞性免疫の誘導に関して重大である。
【０１０２】
[0108]研究により、多くの固形腫瘍、例えば乳がん及び頭頸部がん、卵巣がんが、ｐＤＣの浸潤を有すること（Ｔｒｅｉｌｌｅｕｘ  Ｉ、Ｂｌａｙ  ＪＹ、Ｂｅｎｄｒｉｓｓ−Ｖｅｒｍａｒｅ  Ｎ  ｅｔ  ａｌ．  Ｄｅｎｄｒｉｔｉｃ  ｃｅｌｌ  ｉｎｆｉｌｔｒａｔｉｏｎ  ａｎｄ  ｐｒｏｇｎｏｓｉｓ  ｏｆ  ｅａｒｌｙ  ｓｔａｇｅ  ｂｒｅａｓｔ  ｃａｎｃｅｒ．  Ｃｌｉｎ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ  ２００４；１０：７４６６〜７４７４．Ｈａｒｔｍａｎｎ  Ｅ、Ｗｏｌｌｅｎｂｅｒｇ  Ｂ、Ｒｏｔｈｅｎｆｕｓｓｅｒ  Ｓ  ｅｔ  ａｌ．  Ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ  ａｎｄ  ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ  ａｎａｌｙｓｉｓ  ｏｆ  ｔｕｍｏｒ−ｉｎｆｉｌｔｒａｔｉｎｇ  ｐｌａｓｍａｃｙｔｏｉｄ  ｄｅｎｄｒｉｔｉｃ  ｃｅｌｌｓ  ｉｎ  ｈｅａｄ  ａｎｄ  ｎｅｃｋ  ｃａｎｃｅｒ．  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ  ２００３；６３：６４７８〜６４８７．Ｚｏｕ  ＷＰ、Ｍａｃｈｅｌｏｎ  Ｖ、Ｃｏｕｌｏｍｂ−Ｌ’Ｈｅｒｍｉｎ  Ａ、ｅｔ  ａｌ．  Ｓｔｒｏｍａｌ−ｄｅｒｉｖｅｄ  ｆａｃｔｏｒ−１  ｉｎ  ｈｕｍａｎ  ｔｕｍｏｒｓ  ｒｅｃｒｕｉｔｓ  ａｎｄ  ａｌｔｅｒｓ  ｔｈｅ  ｆｕｎｃｔｉｏｎ  ｏｆ  ｐｌａｓｍａｃｙｔｏｉｄ  ｐｒｅｃｕｒｓｏｒ  ｄｅｎｄｒｉｔｉｃ  ｃｅｌｌｓ．  Ｎａｔ  Ｍｅｄ  ２００１；７：１３３９〜１３４６）及び腫瘍細胞によって分泌される因子がＤＣ成熟を阻害すること（Ｇａｂｒｉｌｏｖｉｃｈ  ＤＩ、Ｃｏｒａｋ  Ｊ、Ｃｉｅｒｎｉｋ  ＩＦ  ｅｔ  ａｌ．  Ｄｅｃｒｅａｓｅｄ  ａｎｔｉｇｅｎ  ｐｒｅｓｅｎｔａｔｉｏｎ  ｂｙ  ｄｅｎｄｒｉｔｉｃ  ｃｅｌｌｓ  ｉｎ  ｐａｔｉｅｎｔｓ  ｗｉｔｈ  ｂｒｅａｓｔ  ｃａｎｃｅｒ．  Ｃｌｉｎ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ  １９９７；３：４８３〜４９０．Ｂｅｌｌ  Ｄ、Ｃｈｏｍａｒａｔ  Ｐ、Ｂｒｏｙｌｅｓ  Ｄ  ｅｔ  ａｌ．  Ｉｎ  ｂｒｅａｓｔ  ｃａｒｃｉｎｏｍａ  ｔｉｓｓｕｅ、ｉｍｍａｔｕｒｅ  ｄｅｎｄｒｉｔｉｃ  ｃｅｌｌｓ  ｒｅｓｉｄｅ  ｗｉｔｈｉｎ  ｔｈｅ  ｔｕｍｏｒ、ｗｈｅｒｅａｓ  ｍａｔｕｒｅ  ｄｅｎｄｒｉｔｉｃ  ｃｅｌｌｓ  ａｒｅ  ｌｏｃａｔｅｄ  ｉｎ  ｐｅｒｉｔｕｍｏｒａｌ  ａｒｅａｓ．  Ｊ  Ｅｘｐ  Ｍｅｄ  １９９９；１９０：１４１７〜１４２５．Ｍｅｎｅｔｒｉｅｒ−Ｃａｕｘ  Ｃ、Ｍｏｎｔｍａｉｎ  Ｇ、Ｄｉｅｕ  ＭＣ  ｅｔ  ａｌ．    Ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｄｅｎｄｒｉｔｉｃ  ｃｅｌｌｓ  ｆｒｏｍ  ＣＤ３４  （＋）  ｐｒｏｇｅｎｉｔｏｒｓ  ｂｙ  ｔｕｍｏｒ  ｃｅｌｌｓ：  ｒｏｌｅ  ｏｆ  ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ−６  ａｎｄ  ｍａｃｒｏｐｈａｇｅ  ｃｏｌｏｎｙ−ｓｔｉｍｕｌａｔｉｎｇ  ｆａｃｔｏｒ．  Ｂｌｏｏｄ  １９９８；９２：４７７８〜４７９１）が見出された。これらの未成熟ＤＣ細胞は、抗腫瘍免疫を促進することに役割を果たしていない。対照的に、腫瘍微小環境内でＤＣは、抗腫瘍免疫を阻害すること及び血管形成を促進することによって腫瘍成長を促進する。Ｔｏｌｌ様受容体９アゴニストＣｐＧ薬が、腫瘍微小環境内でｐＤＣを刺激して腫瘍発生を阻害することができるとの証拠がある（Ｈｏｆｍａｎｎ  ＭＡ、Ｋｏｒｓ  Ｃ、Ａｕｄｒｉｎｇ  Ｈ  ｅｔ  ａｌ  Ｐｈａｓｅ  １  ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｉｎｔｒａｌ��ｓｉｏｎａｌｌｙ  ｉｎｊｅｃｔｅｄ  ＴＬＲ９−ａｇｏｎｉｓｔ  ＰＦ−３５１２６７６  ｉｎ  ｐａｔｉｅｎｔｓ  ｗｉｔｈ  ｂａｓａｌ  ｃｅｌｌ  ｃａｒｃｉｎｏｍａ  ｏｒ  ｍｅｔａｓｔａｔｉｃ  ｍｅｌａｎｏｍａ．  Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ  ２００８；３１：５２０〜５２７）。
【０１０３】
[0109]いくつかの実施形態において、ヒト樹状細胞は、形質細胞様樹状細胞である。
【０１０４】
Ｂ．標的治療との組合せ
[0110]別の態様において、本発明は、（ｉ）がんに対する有効量の標的治療；（ｉｉ）有効量の免疫調節ポリヌクレオチド（例えば、本明細書に提供されるＣｐＧ  ＯＤＮ）又はその組合せ；及び任意選択で（ｉｉｉ）１つ又は複数の薬学的に許容される担体を含む、治療的組合せ又は医薬組成物を提供する。
【０１０５】
[0111]治療的組合せは、標的治療及び免疫療法の両方を一緒に投与することができるように、単一の医薬組成物に供給されてもよい。代替的実施形態において、治療的組合せは、１つを超える医薬組成物を使用して提供されてもよい。そのような実施形態において、２つの化合物が、別々に、例えば、異なる時間で、異なる投与経路等によって、投与することができるように、標的治療が１つの医薬組成物に供給されてもよい及び免疫療法が第二の医薬組成物に供給されてもよい。したがって、異なる投薬計画に標的治療及び免疫療法を設けることも可能でありうる。
【０１０６】
[0112]別に記載しない限り、化合物に対する参照は、任意の異性体（例えば、ジアステレオマー又は鏡像異性体）、塩、溶媒和物、多形等を含む、任意の薬学的に許容される形態における化合物を含み得る。特に、化合物が光学活性である場合、化合物に対する参照は、化合物のエナンチオマー並びにエナンチオマーのラセミ混合物の各々が含まれ得る。
【０１０７】
[0113]一般に、標的治療及び免疫調節ポリヌクレオチドは、例えば、共有結合リンカーによって互いに結合されない。
【０１０８】
標的治療
[0114]一般に、本明細書に提供される組合せは、標的治療を含む。
【０１０９】
[0115]本明細書で「標的治療」は、標的分子、細胞、粒子、組織又は凝集物に特異的又は選択的に結合する治療剤を意味し、これは、一般に「標的」又は「マーカー」と称され、これらは本明細書においてさらなる詳細が論じられる。
【０１１０】
[0116]本明細書で「治療剤」は、例えば、がんを回復させる又は治療する治療効果を有する薬剤を意味する。
【０１１１】
[0117]いくつかの実施形態において、標的治療は、免疫グロブリン、タンパク質、ペプチド、小分子、ナノ粒子、又は核酸を含む。
【０１１２】
[0118]いくつかの実施形態において、標的治療は、本明細書に提供される、抗体薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）を含む。
【０１１３】
[0119]いくつかの実施形態において、標的治療は、免疫グロブリン、タンパク質、又はペプチドを含むが、小分子は含有しない。
【０１１４】
[0120]いくつかの実施形態において、標的治療は、ＡＤＣではない。
【０１１５】
[0121]抗体（例えば、キメラ、ヒト化及びヒト）などの例示的な標的治療は、当技術分野において認識されており、本発明の実施に限定されることなく有用である。
【０１１６】
[0122]いくつかの実施形態において、標的治療剤は、抗体、抗体断片、二重特異性抗体又は他の抗体に基づく分子若しくは化合物である。
【０１１７】
[0123]いくつかの実施形態において、標的治療剤は、アプタマー、アビマー（ａｖｉｍｅｒ）、受容体−結合リガンド、核酸、ビオチン−アビジン結合ペア、結合ペプチド又はタンパク質などから選択され、これは、両方が、標的分子に特異的又は好ましくは結合し、例えば、がん又は腫瘍に対して治療効果を有する。
【０１１８】
[0124]本明細書で「標的」又は「マーカー」は、特定の標的治療、例えば、Ｈｅｒ２／Ｎｅｕに特異的に結合することが可能である任意の実体を意味する。いくつかの実施形態において、標的は、１つ又は複数の特定の細胞又は組織型と特異的に相互作用する。いくつかの実施形態において、標的は、１つ又は複数の特定の病的状態と特異的に相互作用する。いくつかの実施形態において、標的は、１つ又は複数の特定の発生段階と特異的に相互作用する。例えば、細胞型特異的マーカーは、細胞の参照集団におけるよりもその細胞型において少なくとも２倍高いレベルで典型的に発現される。いくつかの実施形態において、細胞型特異的マーカーは、参照集団におけるその平均発現よりも少なくとも３倍、少なくとも４倍、少なくとも５倍、少なくとも６倍、少なくとも７倍、少なくとも８倍、少なくとも９倍、少なくとも１０倍、少なくとも５０倍、少なくとも１００倍、又は少なくとも１，０００倍高いレベルで存在する。細胞型特異的マーカーの検出又は測定は、多くの、ほとんどの、又は全ての他のタイプの細胞からの目的とする細胞タイプ又は複数の細胞タイプを区別することを可能としうる。いくつかの実施形態において、標的は、本明細書に記載のように、タンパク質、炭水化物、脂質、及び／又は核酸を含み得る。
【０１１９】
[0125]本明細書で「特異的に結合」又は「好ましくは結合」は、２つの結合パートナーの間（例えば、標的化部分とその結合パートナーとの間）の結合が、２つの結合パートナーに対して選択的であり、望まれない又は非特異的な相互作用から区別できることを意味する。例えば、特異的な抗原決定基に結合する抗原結合部分の能力は、当業者が精通する酵素結合免疫吸着検査法（ＥＬＩＳＡ）又は表面プラズモン共鳴技術（ＢＩＡｃｏｒｅ機器で分析）（Ｌｉｌｊｅｂｌａｄ  ｅｔ  ａｌ．、Ｇｌｙｃｏ  Ｊ  １７、３２３〜３２９  （２０００））、及び伝統的な結合アッセイ（Ｈｅｅｌｅｙ、Ｅｎｄｏｃｒ  Ｒｅｓ  ２８、２１７〜２２９  （２００２））などの他の技術のいずれかによって測定することができる。用語「抗［抗原］抗体」及び「［抗原］に結合する抗体」は、抗体が、抗原を標的化する診断及び／又は治療剤として有用であるように、十分な親和性を伴って、それぞれの抗原を結合することが可能である抗体を指す。いくつかの実施形態において、無関係のタンパク質に対する抗［抗原］抗体の結合の程度は、例えば、ラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ）によって測定されるような、抗原に対する抗体の結合の約１０％未満である。いくつかの実施形態において、抗原に結合する抗体は、＜１μΜ、＜１００ｎＭ、＜１０ｎＭ、＜１ｎＭ、＜０．１ｎＭ、＜０．０１ｎＭ、又は＜０．００１ｎＭ（例えば、１０−８Ｍ以下、例えば、１０−８Ｍ〜１０−１３Ｍ、例えば、１０−９Ｍ〜１０−１３Ｍ）の解離定数（ＫＤ）を有する。上記定義は、抗原に結合する抗原結合部分に対しても適用可能であることが理解される。
【０１２０】
[0126]ある特定の実施形態において、標的は、腫瘍マーカーである。いくつかの実施形態において、腫瘍マーカーは、正常な器官、組織、及び／又は細胞に存在しない腫瘍に存在する抗原である。いくつかの実施形態において、腫瘍マーカーは、正常な器官、組織、及び／又は細胞におけるよりも腫瘍においてより優勢な抗原である。いくつかの実施形態において、腫瘍マーカーは、正常細胞におけるよりも悪性がん細胞においてより優勢な抗原である。
【０１２１】
[0127]本明細書で「腫瘍抗原」は、腫瘍細胞において産生される抗原性物質を意味し、つまり、それにより宿主において免疫応答が誘発される。体内の正常なタンパク質は、自己反応性細胞傷害性Ｔリンパ球（ＣＴＬ）及び自己抗体産生性Ｂリンパ球が、一次リンパ組織（ＢＭ）において「中心性」に及び二次リンパ組織（たいていはＴ細胞に関して胸腺及びＢ細胞に関して脾臓／リンパ節）において「末梢性」に選抜プロセスである自己寛容のため、抗原性ではない。したがって、免疫システムに対して曝露されない任意のタンパク質が、免疫応答を誘発する。これには、免疫システムからうまく隔離される正常なタンパク質、極度に少量で通常産生されるタンパク質、発生のある段階でのみ通常産生されるタンパク質、又は、その構造が変異に起因して修飾されるタンパク質が含まれうる。
【０１２２】
[0128]いくつかの実施形態において、標的は、腫瘍組織及び／又は細胞対正常組織及び／又は細胞において優先的に発現される。
【０１２３】
[0129]本発明のいくつかの実施形態において、マーカーは、腫瘍マーカーである。マーカーは、非分裂細胞におけるよりも分裂細胞において高レベルで発現されるポリペプチドであってもよい。例えば、Ｈｅｒ−２／ｎｅｕ（ＥｒｂＢ−２としても知られている）は、ＥＧＦ受容体ファミリーのメンバーであり、乳がんに関連する腫瘍の細胞表面において発現される。別の例は、ナノ粒子をヌクレオリンに向けるための適切な標的化剤であるＦ３として知られるペプチドである（Ｐｏｒｋｋａ  ｅｔ  ａｌ．、２００２、Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔｌ．  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．、ＵＳＡ、９９：７４４４；及びＣｈｒｉｓｔｉａｎ  ｅｔ  ａｌ．、２００３、Ｊ．  Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌ．、１６３：８７１）。ナノ粒子及びＡ１０アプタマー（これは、ＰＳＭＡに対して特異的に結合する）を含む標的粒子が、ドセタキセルを前立腺がん腫瘍に特異的及び効率よく送達できることが示されている。
【０１２４】
[0130]腫瘍細胞の生物学的行動のシグナル伝達経路に特異的に干渉する及び制御する、これらの腫瘍標的を特異的に標的とする抗体又は他の薬物は、シグナル伝達経路を直接的に制御又は遮断して、腫瘍細胞成長を阻害する又はアポトーシスを誘導する。現在まで、固形腫瘍又は血液学的な悪性腫瘍の臨床研究及び治療に関して承認されている数ダースの標的薬物が存在し、血液学的な悪性腫瘍に関するいくつかの標的薬物が存在する。
【０１２５】
[0131]いくつかの実施形態において、腫瘍抗原（又は腫瘍標的）は、ＣＤ２、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＣＤ２７、ＣＤ３３、ＣＤ３７、ＣＤ３８、ＣＤ４０、ＣＤ４４、ＣＤ４７、ＣＤ５２、ＣＤ５６、ＣＤ７０、ＣＤ７９、及びＣＤ１３７からなる群から選択される。
【０１２６】
[0132]いくつかの実施形態において、腫瘍抗原（又は腫瘍標的）は、４−１ＢＢ、５Ｔ４、ＡＧＳ−５、ＡＧＳ−１６、アンギオポエチン２、Ｂ７．１、Ｂ７．２、Ｂ７ＤＣ、Ｂ７Ｈ１、Ｂ７Ｈ２、Ｂ７Ｈ３、ＢＴ−０６２、ＢＴＬＡ、ＣＡＩＸ、癌胎児抗原、ＣＴＬＡ４、Ｃｒｉｐｔｏ、ＥＤ−Ｂ、ＥｒｂＢ１、ＥｒｂＢ２、ＥｒｂＢ３、ＥｒｂＢ４、ＥＧＦＬ７、ＥｐＣＡＭ、ＥｐｈＡ２、ＥｐｈＡ３、ＥｐｈＢ２、ＦＡＰ、フィブロネクチン、葉酸受容体、ガングリオシドＧＭ３、ＧＤ２、糖質コルチコイド誘導性腫瘍壊死因子受容体（ＧＩＴＲ）、ｇｐ１００、ｇｐＡ３３、ＧＰＮＭＢ、ＩＣＯＳ、ＩＧＦ１Ｒ、インテグリンαβ、インテグリンαγβ、ＫＩＲ、ＬＡＧ−３、ルイスＹ抗原、メソテリン、ｃ−ＭＥＴ、ＭＮカルボニックアンヒドラーゼＩＸ、ＭＵＣ１、ＭＵＣ１６、Ｎｅｃｔｉｎ−４、ＮＫＧＤ２、ＮＯＴＣＨ，ＯＸ４０、ＯＸ４０Ｌ、ＰＤ−１、ＰＤＬ１、ＰＳＣＡ、ＰＳＭＡ、ＲＡＮＫＬ、ＲＯＲ１、ＲＯＲ２、ＳＬＣ４４Ａ４、ＳＴＩＮＧ、Ｓｙｎｄｅｃａｎ−１、ＴＡＣＩ、ＴＡＧ−７２、テネイシン、ＴＩＭ３、ＴＲＡＩＬＲ１、ＴＲＡＩＬＲ２、ＶＥＧＦＲ−１、ＶＥＧＦＲ−２、ＶＥＧＦＲ−３、及びその変形からなる群から選択される。腫瘍抗原の変形は、当技術分野において知られている及び／又は天然の様々な変異体若しくは多形を包含する。
【０１２７】
[0133]いくつかの実施形態において、標的治療は、抗体、又はその機能的な断片を含む。
【０１２８】
[0134]本明細書で「免疫グロブリン」又は「抗体」は、全長（つまり、天然の又は通常の免疫グロブリン遺伝子断片組換えプロセスによって形成される）免疫グロブリン分子（例えば、ＩｇＧ抗体）或いは抗体断片のような免疫グロブリン分子の免疫学的に活性（つまり、特異的に結合する）な部分を意味する。抗体又は抗体断片は、請求される主題の範囲内で、コンジュゲート又は別途誘導体化されてもよい。そのような抗体は、ＩｇＧｌ、ｌｇＧ２ａ、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４  （及びＩｇＧ４サブフォーム）、並びにＩｇＡアイソタイプを含む。
【０１２９】
[0135]本明細書で用語「抗体」は、最も広い意味で使用され、モノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、多重特異性抗体（例えば、二重特異性抗体）、並びに所望の抗原結合活性を呈する限り、免疫グロブリンのＦｃ領域又はＦｃ領域と均等な領域を含む抗体断片を含むが、限定されない、様々な抗体構造を包含する。用語「全長抗体」、「インタクトな抗体」、及び「全抗体（ｗｈｏｌｅ  ａｎｔｉｂｏｄｙ）」は、本明細書に互換的に使用され、ネイティブ抗体構造に実質的に類似する構造を有する又は本明細書に規定されるＦｃ領域を含有する重鎖を有する抗体を指す。
【０１３０】
[0136]本明細書で「ネイティブ抗体」は、変動する構造を有する天然の免疫グロブリン分子を意味する。例えば、ネイティブＩｇＧ抗体は、ジスルフィド結合された２つの同一の軽鎖及び２つの同一の重鎖から構成される約１５０，０００ダルトンのヘテロ四量体糖タンパク質である。ＮからＣ末端に、各重鎖は、可変性重ドメイン（ｖａｒｉａｂｌｅ  ｈｅａｖｙ  ｄｏｍａｉｎ）又は重鎖可変ドメインとも呼ばれる、可変領域（ＶＨ）に続いて、重鎖定常領域とも呼ばれる３つの定常ドメイン（ＣＨ１、ＣＨ２、及びＣＨ３）を有する。同様に、ＮからＣ末端に、各軽鎖は、可変性軽ドメイン（ｖａｒｉａｂｌｅ  ｌｉｇｈｔ  ｄｏｍａｉｎ）又は軽鎖可変ドメインとも呼ばれる、可変領域（ＶＬ）に続いて、軽鎖定常領域とも呼ばれる定常軽（ＣＬ）ドメインを有する。抗体の軽鎖は、その定常ドメインのアミノ酸配列に基づいて、カッパ（κ）及びラムダ（λ）と呼ばれる、２つのタイプのうち１つに割り当てられうる。
【０１３１】
[0137]本明細書で「抗体断片」は、インタクトな抗体以外の分子であって、インタクトな抗体が結合する抗原と結合するインタクトな抗体の一部を含むものを意味する。抗体断片の例は、Ｆｖ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆａｂ’−ＳＨ、Ｆ（ａｂ’）２、ダイアボディ、直鎖状抗体、単一鎖抗体分子（例えば、ｓｃＦｖ）、単一ドメイン抗体、及び抗体断片から形成される多重特異性抗体を含むが、限定されない。ある抗体断片の総説に関して、Ｈｕｄｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．、Ｎａｔ  Ｍｅｄ  ９、１２９〜１３４  （２００３）を参照されたい。ｓｃＦｖ断片の総説に関して、Ｐｌｉｉｃｋｔｈｕｎ、ｉｎ  Ｔｈｅ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ  ｏｆ  Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ、ｖｏｌ．  １１３、Ｒｏｓｅｎｂｕｒｇ  ａｎｄ  Ｍｏｏｒｅ  ｅｄｓ．、Ｓｐｒｉｎｇｅｒ−Ｖｅｒｌａｇ、Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ、ｐｐ．  ２６９〜３１５  （１９９４）を参照されたい；国際公開第９３／１６１８５号；及び米国特許第５，５７１，８９４号及び同５，５８７，４５８号も参照されたい。サルベージ受容体結合エピトープ残基を含む及び増加したインビボ半減期を有するＦａｂ及びＦ（ａｂ’）２断片の考察に関して、米国特許第５，８６９，０４６号を参照されたい。ダイアボディは、二価又は二重特異性であってもよい２つの抗原結合部位を有する抗体断片である。例えば、ＥＰ４０４，０９７；国際公開第１９９３／０１１６１号；Ｈｕｄｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．、Ｎａｔ  Ｍｅｄ  ９、１２９−１３４  （２００３）；及びＨｏｌｌｉｎｇｅｒ  ｅｔ  ａｌ．、Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ＵＳＡ  ９０、６４４４〜６４４８  （１９９３）を参照されたい。トリアボディ及びテトラボディはまた、Ｈｕｄｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．、Ｎａｔ  Ｍｅｄ  ９、１２９〜１３４  （２００３）に記載されている。単一ドメイン抗体は、抗体の重鎖可変ドメインの全て若しくは一部又は軽鎖可変ドメインの全て若しくは一部を含む抗体断片である。ある実施形態において、単一ドメイン抗体は、ヒト単一ドメイン抗体である（Ｄｏｍａｎｔｉｓ、Ｉｎｃ．、Ｗａｌｔｈａｍ、ＭＡ；例えば、米国特許第６，２４８，５１６Ｂｌを参照されたい）。抗体断片は、本明細書に記載のように、インタクトな抗体のタンパク分解消化並びに組換え宿主細胞（例えば、大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）又はファージ）による産生を含むが、限定されない様々な技術によって作ることができる。
【０１３２】
[0138]本明細書で「抗原結合ドメイン」は、抗原の一部又は全てに特異的に結合する及び相補的である領域を含む抗体の一部を意味する。抗原結合ドメインは、例えば、１つ又は複数の抗体可変ドメイン（抗体可変領域とも呼ばれる）によって供給されうる。特に、抗原結合ドメインは、抗体軽鎖可変領域（ＶＬ）及び抗体重鎖可変領域（ＶＨ）を含む。
【０１３３】
[0139]本明細書で「可変領域」又は「可変ドメイン」は、抗原に抗体を結合させることに関与する抗体重又は軽鎖のドメインを意味する。ネイティブ抗体の重鎖及び軽鎖（それぞれＶＨ及びＶＬ）の可変ドメインは、４つの保存されているフレームワーク領域（ＦＲ）及び３つの超可変領域（ＨＶＲ）を含む各ドメインを有する類似する構造を一般に有する。例えば、Ｋｉｎｄｔ  ｅｔ  ａｌ．、Ｋｕｂｙ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ、６ｔｈ  ｅｄ．、Ｗ．Ｈ．  Ｆｒｅｅｍａｎ  ａｎｄ  Ｃｏ．、ｐａｇｅ  ９１  （２００７）を参照されたい。抗原−結合特異性を付与するのに、単一のＶＨ又はＶＬドメインで十分なことがある。
【０１３４】
[0140]本明細書で「超可変領域」又は「ＨＶＲ」は、配列において超可変である及び／又は構造的に規定されるループ（「超可変ループ」）を形成する、抗体可変ドメインの領域の各々を意味する。一般に、ネイティブ四鎖抗体は、ＶＨに３つ（Ｈ１、Ｈ２、Ｈ３）、及びＶＬに３つ（Ｌ１、Ｌ２、Ｌ３）の６つのＨＶＲを含む。一般に、ＨＶＲは、超可変ループ及び／又は相補性決定領域（ＣＤＲ）からのアミノ酸残基を含み、後者は配列変動性が最大である及び／又は抗原認識に関与する。ＶＨにおけるＣＤＲｌは例外として、ＣＤＲは、超可変ループを形成するアミノ酸残基を一般に含む。超可変領域（ＨＶＲ）は、「相補性決定領域」（ＣＤＲ）とも称され、これらの用語は、抗原結合領域を形成する可変領域の一部を参照して本明細書に互換的に使用される。この特定の領域は、Ｋａｂａｔ  ｅｔ  ａｌ．、Ｕ．Ｓ．  Ｄｅｐｔ．  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ  ａｎｄ  Ｈｕｍａｎ  Ｓｅｒｖｉｃｅｓ、Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ  （１９８３）及びＣｈｏｔｈｉａ  ｅｔ  ａｌ．、Ｊ  Ｍｏｌ  Ｂｉｏｌ  １９６：９０１〜９１７  （１９８７）によって記載されており、ここで、定義には、互いに対して比較したときのアミノ酸残基のオーバーラップ又はサブセットが含まれる。それでも、抗体又はその変形のＣＤＲを指すいずれかの定義の適用は、本明細書で規定及び使用される用語の範囲内であることが意図される。特定のＣＤＲを包含する正確な残基数は、ＣＤＲの配列及びサイズに依存して変動する。当業者は、どの残基が、抗体の可変領域アミノ酸配列を与える特定のＣＤＲを含むかをルーチン的に決定することができる。
【０１３５】
[0141]本発明の抗体は、キメラ抗体、ヒト化抗体、ヒト抗体、又は抗体融合タンパク質であってもよい。
【０１３６】
[0142]本明細書で「キメラ抗体」は、１つの種に由来する抗体、好ましくはげっ歯類抗体、より好ましくはマウス抗体の相補性決定領域（ＣＤＲ）を含むが、抗体分子の定常性ドメインがヒト抗体のものに由来するものを含む、重及び軽抗体鎖の両方の可変ドメインを含有する組換えタンパク質を意味する。獣医学的適用に関して、キメラ抗体の定常ドメインは、他の種、例えば、類人猿、ネコ又はイヌのものに由来してもよい。
【０１３７】
[0143]本明細書で「ヒト化抗体」は、１つの種からの抗体；例えば、げっ歯類抗体からのＣＤＲが、げっ歯類抗体の重及び軽可変鎖からヒト重及び軽可変ドメインに移される組換えタンパク質を意味する。抗体分子の定常ドメインは、ヒト抗体のものに由来する。いくつかの実施形態において、ヒト化抗体のフレームワーク領域の特異的な残基、（特にＣＤＲ配列に触れる又は近いもの）は、修飾されてもよく、例えば、当初のげっ歯類、類人猿、又は他の抗体からの対応する残基で置き換えられてもよい。
【０１３８】
[0144]本明細書で「ヒト抗体」は、例えば、抗原チャレンジに応答して特異的なヒト抗体を産生するよう操作されているトランスジェニックマウスから得られた抗体を意味する。この技術では、ヒト重及び軽鎖座位のエレメントは、内因性重鎖及び軽鎖座位の標的破壊を含有する胚性幹細胞株に由来するマウスの株に導入される。トランスジェニックマウスは、ヒト抗原に特異的なヒト抗体を合成することができ、マウスを使用してヒト抗体分泌ハイブリドーマを産生することができる。トランスジェニックマウスからヒト抗体を得るための方法は、Ｇｒｅｅｎ  ｅｔ  ａｌ、Ｎａｔｕｒｅ  Ｇｅｎｅｔ．  ７：  １３  （１９９４）、Ｌｏｎｂｅｒｇ  ｅｔ  ａｌ、Ｎａｔｕｒｅ  ３６８：８５６  （１９９４）、及びＴａｙｌｏｒ  ｅｔ  ａｌ、Ｉｎｔ．  Ｉｍｍｕｎ．  ６：５７９  （１９９４）によって記載されている。完全なヒト抗体は、遺伝的な又は染色体のトランスフェクション法、並びにファージディスプレイ技術によって構築することができ、これら全ては当技術分野において知られている。例えば、未免疫ドナーの免疫グロブリン可変ドメイン遺伝子レパートリーからのインビトロでのヒト抗体及びその断片の産生に関してＭｃＣａｆｆｅｒｔｙ  ｅｔ  ａｌ、Ｎａｔｕｒｅ  ３４８：５５２〜５５３  （１９９０）を参照されたい。この技術では、抗体可変ドメイン遺伝子は、糸状バクテリオファージのメジャー又はマイナーコートタンパク質遺伝子のいずれにインフレームでクローン化され、ファージ粒子の表面で機能的な抗体断片として提示される。糸状粒子はファージゲノムの単一鎖ＤＮＡコピーを含有するので、抗体の機能的な特性に基づく選択はまた、そのような特性を呈する抗体をコードする遺伝子の選択をもたらす。この手段では、ファージは、Ｂ細胞のいくつかの特性を模倣する。ファージディスプレイは、種々の形式で実施することができ、それらの総説に関しては例えば、Ｊｏｈｎｓｏｎ  ａｎｄ  Ｃｈｉｓｗｅｌｌ、Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｏｐｉｎｉｏｎ  ｉｎ  Ｓｔｒｕｃｔｕｒａｌ  Ｂｉｏｌｏｇｙ  ３：５５６４〜５７１  （１９９３）を参照されたい。ヒト抗体はまた、インビトロ活性化Ｂ細胞によって生じさせうる。米国特許第５，５６７，６１０号及び同５，２２９，２７５号を参照されたい、これらは、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。
【０１３９】
[0145]本明細書で「抗体融合タンパク質」は、同じ又は異なる特異性を有する、２つ又はこれを超える同じ又は異なる天然抗体、単一鎖抗体又は抗体断片セグメントが結合される、組換えで産生される抗原結合分子を意味する。融合タンパク質は、少なくとも１つの特異的な結合部位を含む。融合タンパク質の結合価は、融合タンパク質が有する抗原（複数可）又はエピトープ（複数可）に対する結合アーム又は部位の総数；すなわち、一価、二価、三価又は多価を示す。抗体融合タンパク質の多価性は、多価性が、抗原に対する結合における複数の相互作用の利点を取りうる、したがって、抗原又は異なる抗原に対する結合のアビディティを増加させることを意味する。特異性は、どの程度多くの異なるタイプの抗原又はエピトープと抗体融合タンパク質が、結合できるかを示す；すなわち、単一特異性、二重特異性、三重特異性、多重特異性。これらの定義を使用して、天然抗体、例えば、ＩｇＧは、二価であり、その理由は、それが２つの結合アームを有するからであるが、単一特異性であり、その理由は、それが１つのタイプの抗原又はエピトープに結合するからである。単一特異性で多価の融合タンパク質は、同じ抗原又はエピトープに対する１超の結合部位を有する。例えば、単一特異性ダイアボディは、同じ抗原と反応性の２つの結合部位を有する融合タンパク質である。融合タンパク質は、異なる抗体成分又は同じ抗体成分の複数のコピーの多価又は多重特異性組合せを含んでいてもよい。融合タンパク質は、治療剤を追加的に含んでいてもよい。
【０１４０】
[0146]いくつかの実施形態において、標的化部分は、プロボディ、例えば、米国特許第８，５１８，４０４号；同８，５１３，３９０号；及び米国特許出願公開第２０１２０２３７９７７Ａ１号、同２０１２０１４９０６１Ａ１号、同２０１３０１５０５５８Ａ１号に開示のものを含み、それらの開示は、参照によりその全体が組み込まれる。
【０１４１】
[0147]プロボディは、がん微小環境内で選択的に活性化されるモノクローナル抗体であり、治療抗体の活性を腫瘍に集束させて、健常組織を残す。
【０１４２】
[0148]一般に、プロボディは、標的を特異的に結合に結合することが可能である、少なくとも抗体又はその抗体断片（集合的に「ＡＢ」と称される）（ここで、ＡＢは、マスキング部分（ＭＭ）によって修飾される）を含む。ＡＢがＭＭで修飾され且つ標的の存在下にある場合、その標的に対するＡＢの特異的な結合は、ＭＭで修飾されないＡＢの特異的な結合又は標的に対する親ＡＢの特異的な結合と比較して、低下又は阻害される。ＡＢに対するＭＭの解離定数（Ｋｄ）は、標的に対するＡＢのＫｄよりも一般に高い。ＡＢがＭＭで修飾され且つ標的の存在下にある場合、その標的に対するＡＢの特異的な結合は、ＭＭで修飾されないＡＢの特異的な結合又は標的に対する親ＡＢの特異的な結合と比較して、低下又は阻害され得る。ＡＢがＭＭにカップリングされる又はＭＭによって修飾される場合、ＭＭは、その標的に対するＡＢの特異的な結合を、「マスク」又は低下又は阻害し得る。ＡＢがＭＭにカップリングされる又はＭＭによって修飾される場合、そのようなカップリング又は修飾は、構造上の変化に影響することができ、これが、その標的に特異的に結合するＡＢの能力を低下又は阻害する。
【０１４３】
[0149]いくつかの実施形態において、プロボディは、活性化可能な抗体（ＡＡ）であり、ここで、ＭＭによって修飾されるＡＢは、１つ又は複数の切断可能な部分（ＣＭ）をさらに含み得る。そのようなＡＡは、ＡＢの標的に対する活性化可能な／切り替え可能な結合を呈する。ＡＡは、マスキング部分（ＭＭ）及び修飾可能な又は切断可能な部分（ＣＭ）によって修飾又はカップリングされた抗体又は抗体断片（ＡＢ）を一般に含む。いくつかの実施形態において、ＣＭは、目的とするプロテアーゼに対する基質として機能するアミノ酸配列を含有する。他の実施形態において、ＣＭは、還元によって切断可能であるシステイン−システインジスルフィド結合を実現する。さらに他の実施形態において、ＣＭは、光分解によって活性化可能である光分解性基質を提供する。
【０１４４】
[0150]ＡＡのＣＭ及びＡＢは、ＡＢが、目的とする標的に対する結合部分を表し、ＣＭが、対象における治療部位で標的と共局在するプロテアーゼに対する基質を提示するように、選択されうる。或いは（又は加えて）、ＣＭは、このジスルフィド結合の還元の結果として切断可能なシステイン−システインジスルフィド結合である。ＡＡは、少なくとも１つのプロテアーゼ切断可能ＣＭ又はシステイン−システインジスルフィド結合、及びいくつかの実施形態において、両方の種類のＣＭを含む。ＡＡは、光源によって活性化可能な感光性基質を、代替的に又はさらに含み得る。本明細書で開示されるＡＡは、例えば、ＣＭ中の部位を切断することが可能であるプロテアーゼが、非治療部位の組織中（例えば、健常組織中）よりも治療部位の標的含有組織中（例えば、罹患した組織；例えば、治療処置又は診断処置のために）で相対的に高レベルで存在する、特定の使用が見出されている。本明細書で開示されるＡＡは、例えば、ＣＭ中の部位を還元することが可能である還元剤が、非治療非診断部位の組織中よりも治療又は診断部位の標的含有組織中で相対的に高レベルで存在する、特定の使用も見出されている。本明細書で開示されるＡＡは、例えば、ＣＭ中の部位を光分解することが可能であるレーザーの手段によるなどの光源が、治療又は診断部位の標的含有組織に導入される、特定の使用も見出されている。
【０１４５】
[0151]いくつかの実施形態において、ＡＡは、ＡＢがマスクされない又は別途その標的との結合から阻害される場合、非治療部位でのＡＢの結合から別途もたらされるであろう、毒性及び／又は有害な副作用の低下を実現することができる。ＡＡが、ジスルフィド結合の還元を促進する還元剤によって切断可能であるＣＭを含有する場合、そのようなＡＡのＡＢは、ＡＢの活性化を活用するため選択されてもよく、ここで、目的とする標的は、環境が、例えば、非治療部位の環境よりも高い還元電位の環境であるように、還元剤の上昇レベルによって特徴づけられる所望の治療部位に存在する。
【０１４６】
[0152]一般に、ＡＡは、立体構造上拘束される場合に、ＭＭが、ＡＢのマスキング又はその標的に対するＡＢの結合の低下を実現するように、目的とするＡＢを選択すること及びＡＡの残部を構築することによって設計することができる。この機能的な特徴を実現するために、構造上の設計判定基準が考慮に入れられる。
【０１４７】
[0153]いくつかの実施形態において、標的治療は、目的とする、標的細胞に又は標的部位で発現される抗原に対する、その特異性に基づいて選択される、抗体又は抗体断片である。多種多様な腫瘍特異的又は他の疾患特異的な抗原が同定されており、それらの抗原に対する抗体が、そのような腫瘍又は他の疾患の治療において使用され又は使用のために提案されている。当技術分野において知られている抗体は、本発明の組成物に、特に標的抗原が関連する疾患の治療のために、使用することができる。本発明の標的治療が標的とされ得る、標的抗原（及びそれらの関連する疾患）の例は、ＣＤ２、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＣＤ２７、ＣＤ３３、ＣＤ３７、ＣＤ３８、ＣＤ４０、ＣＤ４４、ＣＤ４７、ＣＤ５２、ＣＤ５６、ＣＤ７０、ＣＤ７９、ＣＤ１３７、４−１ＢＢ、５Ｔ４，ＡＧＳ−５，ＡＧＳ−１６、アンギオポエチン２、Ｂ７．１、Ｂ７．２、Ｂ７ＤＣ、Ｂ７Ｈ１、Ｂ７Ｈ２、Ｂ７Ｈ３、ＢＴ−０６２、ＢＴＬＡ、ＣＡＩＸ、癌胎児抗原、ＣＴＬＡ４、Ｃｒｉｐｔｏ、ＥＤ−Ｂ、ＥｒｂＢ１、ＥｒｂＢ２、ＥｒｂＢ３、ＥｒｂＢ４、ＥＧＦＬ７、ＥｐＣＡＭ、ＥｐｈＡ２、ＥｐｈＡ３、ＥｐｈＢ２、ＦＡＰ、フィブロネクチン、葉酸受容体、ガングリオシドＧＭ３、ＧＤ２、糖質コルチコイド誘導性腫瘍壊死因子受容体（ＧＩＴＲ）、ｇｐ１００、ｇｐＡ３３、ＧＰＮＭＢ、ＩＣＯＳ、ＩＧＦ１Ｒ、インテグリンαγ、インテグリンαγβ、ＫＩＲ、ＬＡＧ−３、ルイスＹ、メソテリン、ｃ−ＭＥＴ、ＭＮカルボニックアンヒドラーゼＩＸ、ＭＵＣ１、ＭＵＣ１６、Ｎｅｃｔｉｎ−４、ＮＫＧＤ２、ＮＯＴＣＨ，ＯＸ４０、ＯＸ４０Ｌ、ＰＤ−１、ＰＤＬ１、ＰＳＣＡ、ＰＳＭＡ、ＲＡＮＫＬ、ＲＯＲ１、ＲＯＲ２、ＳＬＣ４４Ａ４、ＳＴＩＮＧ、Ｓｙｎｄｅｃａｎ−１、ＴＡＣＩ、ＴＡＧ−７２、テネイシン、ＴＩＭ３、ＴＲＡＩＬＲ１、ＴＲＡＩＬＲ２，ＶＥＧＦＲ−１、ＶＥＧＦＲ−２、ＶＥＧＦＲ−３を含む。
【０１４８】
[0154]いくつかの実施形態において、抗体は、Ｒｉｔｕｘａｎ（リツキシマブ）、Ｈｅｒｃｅｐｔｉｎ（トラスツズマブ）、Ｅｒｂｉｔｕｘ（セツキシマブ）、Ｖｅｃｔｉｂｉｘ  （パニツムマブ）、Ａｒｚｅｒｒａ（オファツムマブ）、Ｂｅｎｌｙｓｔａ（ベリムマブ）、Ｙｅｒｖｏｙ（イピリムマブ）、Ｐｅｒｊｅｔａ（ペルツズマブ）、Ｔｒｅｍｅｌｉｍｕｍａｂ、Ｏｐｄｉｖｏ（ニボルマブ）、Ｄａｃｅｔｕｚｕｍａｂ、Ｕｒｅｌｕｍａｂ、Ｔｅｃｅｎｔｒｉｑ（アテゾリズマブ、ＭＰＤＬ３２８０Ａ）、Ｌａｍｂｒｏｌｉｚｕｍａｂ、Ｂｌｉｎａｔｕｍｏｍａｂ、ＣＴ−０１１、Ｋｅｙｔｒｕｄａ  （ペムブロリズマブ、ＭＫ−３４７５）、ＢＭＳ−９３６５５９、ＭＥＤ１４７３６、ＭＳＢ００１０７１８Ｃ、Ｉｍｆｉｎｚｉ（デュルバルマブ）、Ｂａｖｅｎｃｉｏ（アベルマブ）及びマルジェツキシマブ（ＭＧＡＨ２２）からなる群から選択される。
【０１４９】
[0155]いくつかの実施形態において、抗ＨＥＲ２抗体は、トラスツズマブ（Ｈｅｒｃｅｐｔｉｎ）、ペルツズマブ（ｐｅｒｔｕｚｕｍａｂ）又はマルジェツキシマブ（ＭＧＡＨ２２）である。トラスツズマブ及びペルツズマブの両方は、ＨＥＲ２陽性腫瘍又はがん細胞に対して抗腫瘍活性を有するモノクローナル抗体である。マルジェツキシマブ（又はＭＧＡＨ２２）は、ＨＥＲ２を標的とする、次世代のＦｃ最適化モノクローナル抗体（ｍＡｂ）である。臨床試験は、マルジェツキシマブが、中等度レベルのＨＥＲ２を発現する、腫瘍  又はがん細胞について有効であることを示している。
【０１５０】
[0156]Ｈｅｒｃｅｐｔｉｎ（トラスツズマブ）は、２５％〜３０％の乳がんに発現される、Ｈｅｒ２のヒト上皮細胞成長因子受容体細胞外ドメインに作用するヒト化モノクローナル抗体である。トラスツズマブは、（１）Ｈｅｒ２受容体のダウンレギュレーション、Ｈｅｒ２細胞内シグナル伝達トランスダクション経路の阻害及びアポトーシスの誘導；（２）腫瘍細胞を殺傷する免疫機構関連の抗体依存性ＡＤＣＣ及びＣＤＣ；（３）化学療法の効果の増強によって抗腫瘍効果を有すると考えられる。
【０１５１】
[0157]いくつかの実施形態において、抗ＥＧＦＲ抗体は、セツキシマブ（ｃｅｔｕｘｉｍａｂ）、パニツムマブ（ｐａｎｉｔｕｍｕｍａｂ）、ネシツムマブ、マツズマブ（ｍａｔｕｚｕｍａｂ）  ニモツズマブ（ｎｉｍｏｔｕｚｕｍａｂ）、ザルツムマブ（ｚａｌｕｔｕｍｕｍａｂ）、ＲＯ５０８３９４５、ＭＤＸ４４７、又はＭＥＨＤ７９４５である。これらの抗体は、ＥＧＦＲに結合し、腫瘍細胞分裂、増殖及び成長を活性化する、シグナル伝達トランスダクション経路を阻害する。
【０１５２】
[0158]Ｅｒｂｉｔｕｘ（Ｃｅｔｕｘｉｍａｂ）は、上皮細胞成長因子受容体（ＥＧＦＲ）に作用するキメラ抗体である。Ｅｒｂｉｔｕｘは、ＥＧＦＲに結合して、そのシグナル伝達経路を阻害し、細胞増殖、浸潤及び転移、及び血管形成に影響する。ＥＧＦＲシグナル伝達経路の阻害により、化学療法薬物及び放射線療法の有効性を増強することができる。
【０１５３】
[0159]いくつかの実施形態において、抗ＣＤ２０抗体は、リツキシマブ、オファツムマブ、ベルツズマブ（ｖｅｌｔｕｚｕｍａｂ）、オクレリズマブ、ＡＭＥ−１３３ｖ、ＰＲＯ１３１９２１、ＧＡ１０１、Ｉｂｒｉｔｕｍｏｍａｂ  ｔｉｕｘｅｔａｎ、トシツモマブ（ｔｏｓｉｔｕｍｏｍａｂ）、及びＴＲＵ−０１５からなる群から選択される。
【０１５４】
[0160]第一世代のＣＤ２０  ｍＡｂであるリツキシマブは、補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）及び抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）を誘導することができ、リンパ腫細胞に対する、その臨床活性が導かれる。ＣＤＣは、リツキシマブによる細胞殺傷に関する一次機構を代表する。しかしながら、いくつかのリンパ様細胞（すなわち、ＣＬＬ細胞の１０％）は、低レベルの補体活性化又は活性化した補体の減少した細胞傷害性のため、ＣＤＣに耐性であった。加えて、リツキシマブは、ＣＤ２０に対する結合の際に、Ｂ細胞のアポトーシスを導くことができ、したがって、細胞成長を直接的に阻害することができる。最近、ｍＡｂによる細胞殺傷の新規機構が、ＮＡＤＰＨによって媒介される活性酸素種が関与することが報告された。
【０１５５】
[0161]「リツキシマブ」抗体は、ヒトＣＤ２０抗原を対象とする遺伝的に操作されたキメラヒトガンマ１マウス定常ドメイン含有モノクローナル抗体である。このキメラ抗体は、ヒトガンマ１定常ドメインを含有し、米国特許第５，７３６，１３７号中で「Ｃ２Ｂ８」という名称によって同定されている。
【０１５６】
[0162]Ｒｉｔｕｘａｎ（リツキシマブ）は、Ｂ細胞非ホジキンリンパ腫の治療に使用されるキメラ抗体である。Ｒｉｔｕｘａｎは、９０％のＢ細胞非ホジキンリンパ腫に発現されるＣＤ２０抗原を発現するＢ細胞の表面に作用する。Ｒｉｔｕｘａｎは、ＣＤ２０に結合して、ＣＤＣ及びＡＤＣＣによってＢ細胞溶解を誘導し、いくつかの細胞傷害性の化学療法剤に対して薬物抵抗性であるヒトリンパ球を感作する。
【０１５７】
[0163]第二世代の抗ＣＤ２０  ｍＡｂは、オファツムマブ、ベルツズマブ、及びオクレリズマブを含む。これらはヒト化され、免疫原性を低下させる。
【０１５８】
[0164]オファツムマブ（Ｇｅｎｍａｂ）は、完全ヒトタイプＩ抗ＣＤ２０  ＩｇＧ１ｋａｐｐａ  ｍＡｂである。オファツムマブは、ＣＤ２０分子のスモール及びラージ細胞外ループ（ＥＣＬ）の両方に結合し、標的細胞を殺傷させる際に、リツキシマブよりも効果的である。オファツムマブは、リツキシマブ感受性及び耐性細胞の両方に対して、リツキシマブよりも強力であることが示されている。そのリツキシマブ耐性細胞に対する活性及び強力なＣＤＣ効果は、ＣＤ２０分子のスモールループの近位エピトープ及びＣ１ｑ活性化に対する高い能力に起因すると考えられる。オファツムマブ（ａｒｚｅｒｒａ）は、フルダラビン及びアレムツズマブ（ＦＡ−ｒｅｆ）に失敗している再発性又は不応性ＣＬＬの治療に関して承認されている。オファツムマブは、固定用量（用量１に関して３００ｍｇ）を毎週及び続く用量に２０００ｍｇを毎週ｘ７でＩＶで与えられる。これに続いて、４回のさらなる用量を四週ごとに与えられる。
【０１５９】
[0165]オクレリズマブ（ＰＲＯ７０７６９）（Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ／Ｒｏｃｈｅ／Ｂｉｏｇｅｎ）は、別のタイプＩの第二世代ヒト化ｍＡｂであり、軽鎖及び重鎖可変領域のＣＤＲ内の幾つかのアミノ酸位置でリツキシマブと異なっている。リンパ様悪性腫瘍に向けての有効性の増強及びＦｃγＲＩＩＩａ受容体（ＣＤ１６）の低親和性バリアントに対する結合親和性の増加に伴って、このｍＡｂは、リツキシマブと比較して、増加したＡＤＣＣ及び低いＣＤＣ活性を有する。
【０１６０】
[0166]ベルツズマブ（ＩＭＭＵ−１０６、ｈＡ２０）は、リツキシマブよりも、より強力な結合アビディティ及びより強いＣＤＣにおける効果を有する。ベルツズマブは、ヒト化、タイプＩ抗ＣＤ２０  ＩｇＧ１  ｍＡｂであり、リツキシマブと同一の相補性決定領域（ＣＤＲ）で組換えで操作されている、但し、可変性重鎖のＣＤＲ３における単一のアミノ酸変化（Ａｓｎ１０１の代わりにＡｓｐ１０１）を除く。この修飾は、３種のヒトリンパ腫細胞株において、有意に遅いオフ率及び増加したＣＤＣ細胞傷害性をもたらす。
【０１６１】
[0167]第三世代のヒト化ＣＤ−２０  ｍＡｂは、ＦｃγＲＩＩＩａ受容体に対して、それらの結合親和性を増加させる操作されたＦｃ領域を有する。少なくとも３種の第三世代のｍＡｂｓ、ＡＭＥ−１３３ｖ、ＰＲＯ１３１９２１及びＧＡ１０１が存在する。
【０１６２】
[0168]ＡＭＥ−１３３ｖ（ＬＹ２４６９２９８、オカラツズマブ（ｏｃａｒａｔｕｚｕｍａｂ））（Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｅｖｏｌｕｔｉｏｎ／Ｅｌｉ  Ｌｉｌｌｙ）は、タイプＩ、ヒト化ＩｇＧ１  ｍＡｂである。そのＣＤ２０に対する結合親和性は、１３〜２０倍の増加を有し、ＦｃγＲＩＩＩａ受容体の低親和性（Ｆ／Ｆ及びＦ／Ｖ）バリアントに対して５〜７倍高いアビディティを有する。これらは、リツキシマブに対する応答性に関して、より低い応答速度及びより短い持続時間を克服する機構でありうる。
【０１６３】
[0169]ＰＲＯ１３１９２１（Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ）は、ヒト化ＩｇＧ１（オクレリズマブ）であり、リツキシマブに対するＣＤＣ及びＡＤＣＣ活性の増強に関して修飾されたＦｃを有する。
【０１６４】
[0170]ＧＡ１０１（ＲＯ５０７２７５９、オビヌツズマブ）（Ｇｌｙｃａｒｔ／Ｒｏｃｈｅ）は、親Ｂ−Ｌｙ１マウス抗体のヒト化及び続くＦｃ領域の糖鎖工学に由来する、完全ヒト化、タイプＩＩ、ＩｇＧ１  ｍＡｂである。ＧＡ１０１は、リツキシマブとは全く異なる配向で、より大きなエピトープに対して、ＣＤ２０に結合する。ＧＡ１０１は、直接的な殺傷によるより強力な活性並びにＮＫ細胞媒介性ＡＤＣＣ効果を有するように見える。ＧＡ１０１は、リツキシマブ耐性細胞株において活性を有することが示されていた。
【０１６５】
[0171]いくつかの実施形態において、抗ＰＤ−１抗体は、ＭＫ−３４７５（以前はｌａｍｂｒｏｌｉｚｕｍａｂ、Ｍｅｒｃｋ）、ＡＭＰ−５１４、ＡＭＰ−２２４（ＭｅｄＩｍｍｕｎｅ／ＡｓｔｒａＺｅｎｅｃａ）、ＢＭＳ−９３６５５８（ＭＤＸ−１１０６、Ｂｒｉｓｔｏｌ−Ｍｙｅｒｓ  Ｓｑｕｉｂｂ）、又はＣＴ−０１１（Ｃｕｒｅｔｅｃｈ）である。
【０１６６】
[0172]ペムブロリズマブ（ＭＫ−３４７５）は、抗腫瘍免疫を再活性化するように設計された、ヒト化されたモノクローナル抗ＰＤ−１抗体である。ペムブロリズマブは、Ｔ細胞におけるＰＤ−１と、そのリガンドＰＤ−Ｌ１及びＰＤ−Ｌ２との相互作用を阻害することによってＰＤ−１経路の二重リガンド遮断を発揮する。
【０１６７】
[0173]いくつかの実施形態において、抗ＰＤ−１抗体は、その開示が、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる、米国特許第８，３５４，５０９号及び米国特許第８，１６８，７５７号に開示された抗体の１つである。
【０１６８】
[0174]ニボルマブ（ＢＭＳ−９３６５５８又はＭＤＸ１１０６としても知られている）は、がんの治療に関してＢｒｉｓｔｏｌ−Ｍｙｅｒｓ  Ｓｑｕｉｂｂによって開発された完全ヒトＩｇＧ４モノクローナル抗体である。
【０１６９】
[0175]いくつかの実施形態において、抗ＰＤ−１抗体は、その開示が、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる、国際公開第２００４／０５６８７５号、米国特許第７，４８８，８０２号及び米国特許第８，００８，４４９号に開示された抗体の１つである。
【０１７０】
[0176]ＡＭＰ−５１４及びＡＭＰ−２２４は、ＭｅｄＩｍｍｕｎｅによって獲得された、Ａｍｐｌｉｍｍｕｎｅによって開発された抗プログラム細胞死１（ＰＤ−１）モノクローナル抗体（ｍＡｂ）である。
【０１７１】
[0177]いくつかの実施形態において、抗ＰＤ−１抗体は、その開示が、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる、米国特許出願公開第２０１４００４４７３８号に開示された抗体の１つである。
【０１７２】
[0178]いくつかの実施形態において、６つのＣＤＲは、（Ａ）抗ＰＤ−１抗体１Ｅ３の３つの軽鎖及び３つの重鎖ＣＤＲ；（Ｂ）抗ＰＤ−１抗体１Ｅ８の３つの軽鎖及び３つの重鎖ＣＤＲ；又は（Ｃ）抗ＰＤ−１抗体１Ｈ３の３つの軽鎖及び３つの重鎖ＣＤＲである。
【０１７３】
[0179]ピジリズマブ（ＣＴ−０１１）は、Ｉｓｒａｅｌ−ｂａｓｅｄ  Ｃｕｒｅｔｅｃｈ  Ｌｔｄによって開発された抗ＰＤ−１モノクローナル抗体である。
【０１７４】
[0180]いくつかの実施形態において、抗ＰＤ−１抗体は、その開示が、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる、米国特許出願公開第２００８００２５９８０号及び同２０１３００２２５９５号に開示された抗体の１つである。
【０１７５】
[0181]いくつかの実施形態において、抗ＰＤ−Ｌ１抗体は、ＭＰＤＬ３２８０Ａ及びＹＷ２４３．５５．Ｓ７０、（Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ／Ｒｏｃｈｅ）、ＭＥＤＩ−４７３６（ＭｅｄＩｍｍｕｎｅ／ＡｓｔｒａＺｅｎｅｃａ）、ＢＭＳ−９３６５５９（ＭＤＸ−１１０５、Ｂｒｉｓｔｏｌ−Ｍｙｅｒｓ  Ｓｑｕｉｂｂ）、及びＭＳＢ００１０７１８Ｃ（ＥＭＤ  Ｓｅｒｏｎｏ／Ｍｅｒｃｋ  ＫＧａＡ）である。
【０１７６】
[0182]ＭＰＤＬ３２８０Ａ（Ｔｅｃｅｎｔｒｉｑ、Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ）は、腫瘍細胞及び腫瘍浸潤性免疫細胞に発現されるＰＤ−Ｌ１を標的とするように設計された、操作された抗ＰＤ−Ｌ１抗体である。ＭＰＤＬ３２８０Ａは、ＰＤ−Ｌ１を、ＰＤ−１及びＢ７．１に対する結合から防ぐように設計されている。このＰＤ−Ｌ１の遮断は、Ｔ細胞の活性化を可能にし得、腫瘍細胞を検出及び攻撃する、それらの能力を元に戻す。ＭＰＤＬ３２８０Ａは、抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）を最小限にすることによって有効性及び安全性を最適化するように設計された、操作された結晶化可能断片（Ｆｃ）ドメインを含有する。
【０１７７】
[0183]いくつかの実施形態において、抗ＰＤ−Ｌ１抗体は、その開示が、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる、米国特許第７，９４３，７４３号に開示された抗体の１つである。
【０１７８】
[0184]ＢＭＳ−９３６５５９（ＭＤＸ−１１０５、Ｂｒｉｓｔｏｌ−Ｍｙｅｒｓ  Ｓｑｕｉｂｂ）は、ＰＤ−１及びＣＤ８０の両方に対するＰＤ−Ｌ１リガンドの結合を阻害する、完全ヒトＩｇＧ４抗−ＰＤ−Ｌ１  ｍＡｂである。
【０１７９】
[0185]いくつかの実施形態において、抗ＰＤ−Ｌ１抗体は、その開示が、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる、米国特許第７，９４３，７４３号に開示された抗体の１つである。
【０１８０】
[0186]ＭＳＢ００１０７１８Ｃ  （ＥＭＤ  Ｓｅｒｏｎｏ  ｏｆ  Ｍｅｒｃｋ  ＫＧａＡ）は、ＰＤ−Ｌ１に結合する完全ヒトＩｇＧ１モノクローナル抗体である。
【０１８１】
[0187]いくつかの実施形態において、抗ＰＤ−Ｌ１抗体は、その開示が、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる、国際公開第２０１３０７９１７４Ａ１号に開示された抗体の１つである。
【０１８２】
[0188]ＭＥＤＩ４７３６（ＭｅｄＩｍｍｕｎｅ／ＡｓｔｒａＺｅｎｅｃａ）は、ＰＤ−Ｌ１に特異的に結合し、ＰＤ−１及びＣＤ８０に対する結合を防ぐ、ヒトＩｇＧ１抗体である。
【０１８３】
[0189]いくつかの実施形態において、抗ＰＤ−Ｌ１抗体は、その開示が、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる、国際公開第２０１１０６６３８９Ａ１号及び米国特許第８，７７９，１０８号に開示された抗体の１つである。
【０１８４】
[0190]いくつかの実施形態において、抗ＰＤ−Ｌ１抗体は、その開示が、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる、米国特許第８，５５２，１５４号に開示された抗体の１つである。
【０１８５】
[0191]Ａｖａｓｔｉｎ（Ｂｅｖａｃｉｚｕｍａｂ）は、血管内皮増殖因子（ＶＥＧＦ）を標的とする、ヒト化モノクローナル抗体である。ＶＥＧＦＲへのＡｖａｓｔｉｎの結合は、ＶＥＧＦ及びシグナル伝達を阻害し、腫瘍血管形成の阻害をもたらす。
【０１８６】
[0192]現在開発中の他の抗体も、標的治療として使用することができる。例えば、以下の標的に対する治療モノクローナル抗体は、腫瘍の治療に関して開発中である：ＣＤ２、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＣＤ２７、ＣＤ３３、ＣＤ３７、ＣＤ３８、ＣＤ４０、ＣＤ４４、ＣＤ４７、ＣＤ５２、ＣＤ５６、ＣＤ７０、ＣＤ７９、及びＣＤ１３７並びに腫瘍の治療に関して以下の標的：４−１ＢＢ、５Ｔ４，ＡＧＳ−５，ＡＧＳ−１６、アンギオポエチン２、Ｂ７．１、Ｂ７．２、Ｂ７ＤＣ、Ｂ７Ｈ１、Ｂ７Ｈ２、Ｂ７Ｈ３、ＢＴ−０６２、ＢＴＬＡ、ＣＡＩＸ、癌胎児抗原、ＣＴＬＡ４、Ｃｒｉｐｔｏ、ＥＤ−Ｂ、ＥｒｂＢ１、ＥｒｂＢ２、ＥｒｂＢ３、ＥｒｂＢ４、ＥＧＦＬ７、ＥｐＣＡＭ、ＥｐｈＡ２、ＥｐｈＡ３、ＥｐｈＢ２、ＦＡＰ、フィブロネクチン、葉酸受容体、ガングリオシドＧＭ３、ＧＤ２、糖質コルチコイド誘導性腫瘍壊死因子受容体（ＧＩＴＲ）、ｇｐ１００、ｇｐＡ３３、ＧＰＮＭＢ、ＩＣＯＳ、ＩＧＦ１Ｒ、インテグリンαγ、インテグリンαγβ、ＫＩＲ、ＬＡＧ−３、ルイス、メソテリン、ｃ−ＭＥＴ、ＭＮカルボニックアンヒドラーゼＩＸ、ＭＵＣ１、ＭＵＣ１６、Ｎｅｃｔｉｎ−４、ＮＫＧＤ２、ＮＯＴＣＨ，ＯＸ４０、ＯＸ４０Ｌ、ＰＤ−１、ＰＤＬ１、ＰＳＣＡ、ＰＳＭＡ、ＲＡＮＫＬ、ＲＯＲ１、ＲＯＲ２、ＳＬＣ４４Ａ４、ＳＴＩＮＧ、Ｓｙｎｄｅｃａｎ−１、ＴＡＣＩ、ＴＡＧ−７２、テネイシン、ＴＩＭ３、ＴＲＡＩＬＲ１、ＴＲＡＩＬＲ２、ＶＥＧＦＲ−１、ＶＥＧＦＲ−２、及びＶＥＧＦＲ−３並びにそれらの変形。（Ｓｃｏｔｔ  ＡＭ、Ｗｏｌｃｈｏｋ  ＪＤ、Ｏｌｄ  ＬＪ．  Ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ｔｈｅｒａｐｙ  ｏｆ  Ｃａｎｃｅｒ．  Ｎａｔ  Ｒｅｖ  Ｃａｎｃｅｒ．  ２０１２  Ｍａｒ  ２２；１２（４）：２７８〜８７）。
【０１８７】
[0193]いくつかの実施形態において、標的治療は、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、単一ドメイン抗体、Ｔ及びＡｂｓ二量体、Ｆｖ、ｓｃＦｖ、ｄｓＦｖ、ｄｓ−ｓｃＦｖ、Ｆｄ、直鎖状抗体、ミニボディ、ダイアボディ、二重特異性抗体断片、バイボディ、トリボディ、ｓｃ−ダイアボディ、カッパ（ラムダ）ボディ、ＢｉＴＥ、ＤＶＤ−Ｉｇ、ＳＩＰ、ＳＭＩＰ、ＤＡＲＴ、又は１つ又は複数のＣＤＲを含む抗体類似体を含む。
【０１８８】
ＩＩＩ．医薬製剤及び投与
[0194]本発明は、本発明の化合物又はその薬学的に許容される塩及び１つ又は複数の薬学的に許容される担体を含む医薬製剤にさらに関する。
【０１８９】
[0195]薬学的に許容される担体、例えば、その付加塩又は水和物を含む、本明細書に記載される化合物は、多種多様な投与の経路又は様式を使用して患者に送達することができる。投与の適切な経路には、吸入、経皮、経口、直腸、経粘膜、経腸並びに筋肉内、皮下及び静脈内注射を含む非経口投与が含まれるが、限定されない。標的化部分として抗体又は抗体断片を含む本発明の化合物は、非経口的に投与されることが好ましく、静脈内に投与されることがより好ましい。
【０１９０】
[0196]本明細書で使用される用語「投与すること」又は「投与」は、その意図される作用部位に化合物を直接的及び間接的に送達するための全ての手段を包含することが意図される。
【０１９１】
[0197]本明細書に記載される化合物又はその薬学的に許容される塩及び／又は水和物は、単独で、本発明の他の化合物と組合せて、及び／又は他の治療剤と組合せたカクテルにおいて投与されてもよい。当然ながら、本発明の化合物と同時投与することができる治療剤の選択は、治療される状態に部分的に依存する。
【０１９２】
[0198]例えば、オートインデューサーに依存する生体によって引き起こされる病的状態を患う患者に投与される場合、本発明の化合物は、疾患に一般に関連する疼痛、感染及び他の症状及び副作用を治療するために使用されるカクテル含有剤において投与することができる。そのような薬剤には、例えば、鎮痛薬、抗生物質などが含まれる。
【０１９３】
[0199]がん治療を受けている患者に投与される場合、化合物はカクテル含有抗がん剤及び／又は補充的な増強剤において投与されうる。化合物はまた、例えば、抗催吐剤、放射線保護剤（ｒａｄｉａｔｉｏｎ  ｐｒｏｔｅｃｔａｎｔ）などの放射線療法の副作用を治療するカクテル含有剤において投与されてもよい。
【０１９４】
[0200]本発明の化合物と同時投与することができる補充的な増強剤は、例えば、三環系抗鬱薬（例えば、イミプラミン、デシプラミン、アミトリプチリン、クロミプラミン、トリミプラミン、ドキセピン、ノルトリプチリン、プロトリプチリン、アモキサピン及びマプロチリン）；非三環系及び抗鬱薬（例えば、セルトラリン、トラゾドン及びシタロプラム）；Ｃａ＋２アンタゴニスト（例えば、ベラパミル、ニフェジピン、ニトレンジピン及びカロベリン）；アンホテリシン；トリパラノール類似体（例えば、タモキシフェン）；抗不整脈薬（例えば、キニジン）；抗高血圧薬（例えば、レセルピン）；チオール枯渇化剤（例えば、ブチオニン及びスルホキシイミン）；及びロイコボリンカルシウムを含む。
【０１９５】
[0201]本発明の活性化合物（複数可）は、それ自体で又は活性化合物（複数可）が１つ又は複数の薬学的に許容される担体、賦形剤又は希釈剤と混合されている医薬組成物の形態で投与される。本発明に従う使用のための医薬組成物は、薬学的に使用することができる調製物への活性化合物のプロセシングを促進する、賦形剤及び助剤を含む１つ又は複数の生理学的に許容される担体を使用して従来の様式に典型的に製剤化される。適切な製剤は、選択された投与の経路に依存する。
【０１９６】
[0202]経粘膜投与に関して、その製剤には、透過しようとするバリアに適切な浸透剤を使用する。そのような浸透剤は、一般に当技術分野において知られている。
【０１９７】
[0203]経口投与に関して、化合物は、活性化合物（複数可）を当技術分野において周知の薬学的に許容される担体と組合せることによって容易に製剤化されうる。そのような担体により、本発明の化合物が、治療される患者によって経口摂取されるための錠剤、丸剤、糖衣錠剤、カプセル剤、液剤、ゲル剤、シロップ剤、スラリー剤、及び懸濁剤として製剤化されることが可能とされる。経口使用のための医薬調製物は、錠剤又は糖衣錠剤コアを得ることが所望される場合に、固体賦形剤を使用して、任意選択で、生じた混合物を粉砕する及び適切な助剤を添加する後に、顆粒剤の混合物をプロセシングすることによって得ることができる。適切な賦形剤は、特に、充填剤、例えば、ラクトース、スクロース、マンニトール、又はソルビトールを含む糖；セルロース調製物、例えば、トウモロコシデンプン、コムギデンプン、米デンプン、ジャガイモデンプン、ゼラチン、トラガカントゴム、メチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチル−セルロース、カルボキシメチルセルロースナトリウム、及び／又はポリビニルピロリドン（ＰＶＰ）である。所望される場合、崩壊剤は、例えば、架橋ポリビニルピロリドン、寒天、又はアルギン酸若しくはその塩、例えば、アルギン酸ナトリウムを添加されてもよい。
【０１９８】
[0204]糖衣錠剤コアは、適切にコーティングして供給される。この目的に関して、濃縮された糖溶液を使用してもよく、これは任意選択でアラビアゴム、タルク、ポリビニルピロリドン、カルボポールゲル、ポリエチレングリコール、及び／又は二酸化チタン、ラッカー溶液（ｌａｃｑｕｅｒ  ｓｏｌｕｔｉｏｎ）、並びに適切な有機溶媒又は溶媒混合物を含んでもよい。染料又は色素を、活性化合物の用量を識別するため又は異なる組合せを特徴づけるため錠剤又は糖衣錠剤コーティングに添加してもよい。
【０１９９】
[0205]経口的に使用できる医薬調製物は、ゼラチンで作られているプッシュフィットカプセル、並びに、ゼラチンで作られている密閉軟カプセル及び可塑剤、例えば、グリセロール又はソルビトールを含む。プッシュフィットカプセルは、活性成分を充填剤（例えば、ラクトース）、結合剤（例えば、デンプン）、及び／又は滑沢剤（例えば、タルク又はステアリン酸マグネシウム）及び、任意選択で安定化剤との混合物に含有し得る。軟カプセル中で活性化合物は、適切な液剤、例えば、脂肪油、流動パラフィン、又は液体ポリエチレングリコールに溶解又は懸濁されてもよい。加えて、安定化剤を添加してもよい。経口投与のための全ての製剤は、そのような投与に適切な投与量であるべきである。
【０２００】
[0206]口腔内投与に関して、組成物は、従来の様式で錠剤又はロゼンジの形態をとって製剤化されてもよい。
【０２０１】
[0207]吸入による投与に関して、本発明による使用のための化合物は、適切な噴霧剤、例えば、ジクロロジフルオロメタン、トリクロロフルオロメタン、ジクロロテトラフルオロエタン、二酸化炭素又は他の適切なガスを使用することで、加圧パック又はネブライザーからのエアロゾルスプレー提示の形態で簡便に送達される。加圧されたエアロゾルの場合、投与量単位は、一定量を送達するためのバルブを設けることによって決定されてもよい。吸入器又は注入器に使用するためのゼラチンなどのカプセル及びカートリッジを、化合物の粉末混合物及び適切な粉末基剤、例えば、ラクトース又はデンプンを含有するよう製剤化してもよい。
【０２０２】
[0208]化合物は、ボーラス注射又は連続的な輸液などの注射による非経口投与のために製剤化されてもよい。注射は、本発明の組成物についての投与の好ましい方法である。注射のための製剤は、保存剤が添加されたアンプル又は複数用量容器などの単位剤形で存在させてもよい。組成物は、油性又は水性ビヒクル中の懸濁剤、溶液剤又はエマルジョン剤のような形態をとってもよく及び製剤化剤を含有してもよく、例えば、懸濁剤、安定剤及び／又は分散剤は、例えば、架橋ポリビニルピロリドン、寒天、又はアルギン酸又はその塩、例えば、アルギン酸ナトリウムを添加されてもよい。
【０２０３】
[0209]非経口投与のための医薬製剤は、水溶性形態における活性化合物の水溶液を含む。さらに、活性化合物の懸濁物は、適切な油性注射懸濁物として調製されてもよい。適切な親油性の溶媒又はビヒクルは、脂肪油、例えば、ゴマ油、又は合成の脂肪酸エステル、例えば、オレイン酸エチル又はトリグリセリド、又はリポソームを含む。水性の注射懸濁液は、カルボキシメチルセルロースナトリウム、ソルビトール、又はデキストランなどの懸濁液の粘性を増加させる物質を含んでもよい。任意選択で、懸濁液はまた、適切な安定化剤又は化合物の溶解性を増加して高度に濃縮された溶液の調製を可能にする物質を含有してもよい。注射に関して、本発明の薬剤は、水性溶液、好ましくは生理学的に適合性の緩衝剤、例えば、ハンクス液、リンゲル液、又は生理食塩水緩衝液に製剤化してもよい。
【０２０４】
[0210]或いは、活性成分は、使用前に、滅菌したパイロジェンが存在しない水などの適切なビヒクルで構成するための粉末形態であってもよい。
【０２０５】
[0211]化合物はまた、直腸組成物、例えば、カカオバター又は他のグリセリドなどの従来の坐剤の基剤を含有している坐剤又は保持性浣腸剤に製剤化されてもよい。
【０２０６】
[0212]前に記載した製剤に加えて、化合物はまた、デポー調製物として製剤化されてもよい。そのような長時間作用する製剤は、移植又は経皮送達（例えば、皮下又は筋肉内）、筋肉内注射又は経皮パッチによって投与されてもよい。したがって、例えば、化合物は、適切な重合性又は疎水性の材料（例えば、認容された油中のエマルジョン剤として）又はイオン交換レジンで、又は溶けにくい誘導体（例えば、溶けにくい塩）として製剤化されてもよい。
【０２０７】
[0213]医薬組成物はまた、適切な固体若しくはゲル相担体又は賦形剤を含んでもよい。そのような担体又は賦形剤の例には、炭酸カルシウム、リン酸カルシウム、様々な糖、デンプン、セルロース誘導体、ゼラチン、及びポリマー、例えば、ポリエチレングリコールが含まれる。
【０２０８】
[0214]好ましい医薬組成物は、注射、例えば、静脈内注射のために製剤化された組成物であり、総医薬組成物の１００重量％に基づいて、本発明の化合物の約０．０１重量％〜約１００重量％を含む。薬物−リガンドコンジュゲートは、抗体が、特定のがんを標的にするため選択されている、抗体−細胞傷害性コンジュゲートであってもよい。
【０２０９】
[0215]いくつかの実施形態において、本発明の医薬組成物は、第二の化学療法剤をさらに含む。
【０２１０】
[0216]本明細書で「化学療法剤」は、がんの治療に有用な化学化合物を意味する。例は、ゲムシタビン、イリノテカン、ドキソルビシン、５−フルオロウラシル、シトシンアラビノシド（「Ａｒａ−Ｃ」）、シクロホスファミド、チオテパ、ブスルファン、Ｃｙｔｏｘｉｎ、ＴＡＸＯＬ、メトトレキセート、シスプラチン、メルファラン、ビンブラスチン及びカルボプラチンであるが、限定されない。
【０２１１】
[0217]いくつかの実施形態において、第二の化学療法剤は、タモキシフェン、ラロキシフェン、アナストロゾール、エキセメスタン、レトロゾール、イマタニブ（ｉｍａｔａｎｉｂ）、パクリタキセル、シクロホスファミド、ロバスタチン、ミノシン（ｍｉｎｏｓｉｎｅ）、ゲムシタビン、シタラビン、５−フルオロウラシル、メトトレキセート、ドセタキセル、ゴセレリン、ビンクリスチン、ビンブラスチン、ノコダゾール、テニポシド、エトポシド、ゲムシタビン、エポチロン、ビノレルビン、カンプトセシン、ダウノルビシン、アクチノマイシンＤ、ミトキサントロン、アクリジン、ドキソルビシン、エピルビシン、又はイダルビシンからなる群から選択される。
【０２１２】
ＩＶ．本発明のキット
[0218]別の態様において、本発明は、キットを提供する。特定の実施形態において、本発明のキットは、本明細書に提供される組成物又は化合物を含む１つ又は複数の容器を含む。キットは、意図される治療（例えば、免疫調節、感染症の症状を回復させること、腫瘍の治療、ＩＦＮ−γレベルを増加させること、ＩＦＮ−αレベルを増加させること、又はＩｇＥ関連障害を回復させること）のための組成物の使用に関連する、指示書の適切な組、一般に書面による指示書をさらに含んでもよい。
【０２１３】
[0219]キットは、任意の簡便な適切な包装に包装される本明細書に提供される組成物を含んでもよい。例えば、組成物が乾燥製剤（例えば、フリーズドライ又は乾燥粉末）である場合、弾力のある栓を有するバイアルが、弾力のある栓を通して流体を注射することによって組成物が容易に再懸濁されうるように、通常使用される。弾力のない取り外し可能な閉塞栓を有するアンプル（例えば、密封ガラス）又は弾力のある栓は、組成物の液体製剤に最も簡便に使用される。吸入器、経鼻投与装置（例えば、噴霧器）又は輸液装置、例えば、ミニポンプなどの特定の装置との組合せにおける使用のための包装も企図される。
【０２１４】
[0220]組成物の使用に関連する指示書は、意図される治療のための投与の投与量、投薬スケジュール、及び経路についての情報を一般に含む。組成物の容器は、単位用量、バルク包装（例えば、複数用量包装）又は小単位用量（ｓｕｂ−ｕｎｉｔ  ｄｏｓｅ）であってもよい。本発明のキットに供給される指示書は、典型的には、ラベル又は添付文書（例えば、キットに含まれる紙シート）における書面による指示書であるが、機械読取り可能な指示書（例えば、磁気的又は光学的な貯蔵ディスクで実行される指示書）も許容される。
【０２１５】
Ｖ．医学的使用
[0221]別の態様において、本発明は、対象に、治療有効量の、本発明の化合物、その薬学的に許容される塩、及び薬学的に許容される担体を含む医薬組成物を投与するステップを含む、治療を必要とする対象における疾患状態を治療するための方法を提供する。
【０２１６】
[0222]上に記載した組成物及び構築物に加えて、本発明は、本発明の化合物の幾つかの使用も提供する。本発明の化合物の使用は、腫瘍細胞又はがん細胞の成長又は複製を殺傷又は阻害すること、がんを治療すること、前癌性状態を治療すること、腫瘍細胞又はがん細胞の繁殖を防ぐこと、がんを防止すること、自己免疫抗体を発現する細胞の繁殖を防ぐことを含む。これらの使用は、必要とする動物、例えば、哺乳動物又はヒトに、有効量の本発明の化合物を、投与することを含む。
【０２１７】
[0223]本発明の化合物は、疾患、例えば、動物、例えば、ヒトにおけるがんを治療するために有用である。対象に、本発明の薬学的な有効量の組成物を有する、薬学的に許容される様式で組成物を供給することによって腫瘍を治療するための組成物及び使用が提供される。
【０２１８】
[0224]本明細書で「がん」は、未制御の細胞増殖によって特徴づけられるヒトにおける病態を意味する。例は、癌、リンパ腫、芽細胞腫、及び白血病を含むが、限定されない。がんのより詳細な例は、肺がん（小細胞がん及び非小細胞がん）、乳がん、前立腺がん、カルチノイド、膀胱がん、胃がん、膵臓がん、肝臓がん（肝細胞がん）、肝芽腫、結腸直腸がん、頭頚部扁平上皮癌、食道がん、卵巣がん、頚部がん、子宮内膜がん、中皮腫、メラノーマ、肉腫、骨肉腫、脂肪肉腫、甲状腺がん、デスモイド、慢性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、及び慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）を含むが、限定されない。
【０２１９】
[0225]本明細書で「阻害すること」又は「治療すること」又は「治療」は、課題が、目標とする病的な障害又は状態を低下又は防止することである、低下、治療処置及び予防的又は防止的処置を意味する。一例において、本発明の化合物を投与後に、がん患者は、腫瘍サイズの低下を経験しうる。「治療」又は「治療すること」は、（１）疾患の病状又は症状を経験している又は呈している対象における疾患を阻害すること、（２）疾患の病状又は症状を経験している又は呈している対象における疾患を回復させること、及び／又は（３）疾患の病状又は症状を経験している又は呈している対象又は患者における疾患の任意の測定可能な減少に影響することを含む。本発明の化合物が、がん細胞の成長を防ぎ及び／又は殺傷させることができる限り、その化合物は細胞分裂抑制性（ｃｙｔｏｓｔａｔｉｃ）及び／又は細胞傷害性でありうる。
【０２２０】
[0226]本明細書で「治療有効量」は、対象又は哺乳動物における障害を「治療する」のに有効な本明細書に提供される化合物の量を意味する。がんの場合、薬物の治療有効量は、がん細胞の数を低下させうる、腫瘍サイズを低下させうる、末梢器官へのがん細胞浸潤を阻害しうる、腫瘍転移を阻害しうる、ある程度まで腫瘍成長を阻害しうる、及び／又はがんに関連する１つ又は複数の症状をある程度軽減しうる。
【０２２１】
[0227]１つ又は複数のさらなる治療剤「と組合せた」投与は、同時（併発）及び任意の順序での連続的な投与を含む。本明細書で使用される用語「医薬組合せ」は、活性成分を混合すること又は組み合わせることから得られる産物を指し、活性成分の固定及び非固定の組み合わせの両方を含む。用語「固定の組合せ」は、活性成分、例えば、式（１）の化合物及び共薬剤（ｃｏ−ａｇｅｎｔ）が、単一の実体又は投与量の形態で同時に患者に両方が投与されることを意味する。用語「非固定の組合せ」は、活性成分、例えば、式（１）の化合物及び共薬剤が、特定の制限時間を伴わずに、同時に、併発的に、又は順次に、別個の実体として患者に両方が投与されることを意味し、そのような投与は、患者の身体に活性成分の治療有効レベルを供給する。後者は、例えば３つ又はそれ以上の活性成分の投与の、カクテル療法にも適用される。
【０２２２】
[0228]いくつかの実施形態において、疾患状態は、腫瘍である。いくつかの実施形態において、疾患状態は、異常な細胞増殖、例えば、前癌性病変を含む。
【０２２３】
[0229]本発明は、動物における、がんの治療のため及び腫瘍細胞又はがん細胞の繁殖の阻害のため特に有用である。がん又は前癌状態は、腫瘍、転移、又は制御されない細胞成長によって特徴づけられる任意の疾患若しくは障害を含み、本発明の薬物−リガンド複合体の投与によって、治療又は予防することができる。化合物は、腫瘍細胞又はがん細胞に活性化部分を送達する。いくつかの実施形態において、標的化部分は、がん細胞若しくは腫瘍細胞関連抗原に特異的に結合する又は相互作用する。そのリガンドへの近接性のため、内在化された後に、活性化部分は、例えば、受容体媒介性エンドサイトーシスを通して腫瘍細胞又はがん細胞の内側に取り入れられ得る。抗原は、腫瘍細胞若しくはがん細胞に付着することができる又は腫瘍細胞若しくはがん細胞に関連する細胞外マトリックスタンパク質であり得る。細胞の内側に取り入れられたら、リンカーは、腫瘍細胞又はがん細胞関連プロテアーゼによって加水分解又は酵素的に切断され、それによって活性化部分が放出される。放出された活性化部分は、次に、遊離して、拡散し、免疫細胞又は腫瘍細胞の免疫活性を誘導する又は増強させる。代替的な実施形態において、活性化部分は化合物腫瘍微小環境から切断され、薬物は続いて細胞を浸透する。
【０２２４】
[0230]本発明の化合物によって標的とされうる、前癌状態の代表的な例は、異形成、過形成、異形成、結腸直腸ポリープ、光線性角化症、日射性口唇炎、ヒトパピローマウイルス、白斑症、扁平苔癬及びボーエン病を含む。
【０２２５】
[0231]本発明の化合物によって標的とされうる、がん又は腫瘍の代表的な例は、肺がん、結腸がん、前立腺がん、リンパ腫、メラノーマ、乳がん、卵巣がん、精巣がん、ＣＮＳがん、腎臓がん、腎臓がん、膵臓がん、胃がん、口腔がん、鼻のがん、頚部がん及び白血病を含む。化合物に使用される特定の標的化部分が、それが薬物で治療される腫瘍組織に活性化部分を標的化するように、選択できること（すなわち、腫瘍特異的な抗原に特異的な標的化剤が、選択される）は、当業者には容易に明らかとなる。そのような標的化部分の例は、当技術分野において周知されており、その例には、乳がんの治療のための抗Ｈｅｒ２、リンパ腫の治療のための抗ＣＤ２０、前立腺がんの治療のための抗ＰＳＭＡ、及び非ホジキンリンパ腫を含むリンパ腫の治療のための抗ＣＤ３０が含まれる。
【０２２６】
[0232]したがって、本発明は、以下を含む、限定されない、種々のがんを相乗的に治療するための方法を提供する：膀胱（加速性及び転移性膀胱がんを含む）、胸部、結腸（結腸直腸がんを含む）、腎臓、肝臓、肺（小細胞及び非小細胞肺癌及び肺腺癌を含む）、卵巣、前立腺、精巣、尿生殖路、リンパ系、直腸、喉頭、膵臓（外分泌腺性膵臓癌（ｅｘｏｃｒｉｎｅ  ｐａｎｃｒｅａｔｉｃ  ｃａｒｃｉｎｏｍａ）を含む）、食道、胃、胆嚢、頚部、甲状腺、及び皮膚（扁平上皮癌を含む）の癌を含む癌；白血病、急性リンパ球性白血病、急性リンパ性白血病、Ｂ細胞リンパ腫、Ｔ細胞リンパ腫、ホジキンリンパ腫、非ホジキンリンパ腫、ヘアリー細胞リンパ腫、組織球性リンパ腫、及びバーキットリンパ腫（Ｂｕｒｋｅｔｔｓ  ｌｙｍｐｈｏｍａ）を含むリンパ球系列の造血系腫瘍；急性及び慢性骨髄性白血病、骨髄異形成症候群、骨髄球性白血病、及び前骨髄球性白血病を含む骨髄球系列の造血系腫瘍；星細胞腫、神経芽細胞腫、神経膠腫、及びシュワン腫を含む中枢及び末梢神経系の腫瘍；線維肉腫、横紋筋肉腫、及び骨肉腫を含む間葉起源の腫瘍；メラノーマ、色素性乾皮症、角化棘細胞腫、セミノーマ、甲状腺濾胞がん、及び奇形癌腫を含む他の腫瘍；メラノーマ、切除不能のステージＩＩＩ又はＩＶの悪性黒色腫、扁平上皮癌、小細胞肺がん、非小細胞肺がん、神経膠腫、胃腸がん、腎臓がん、卵巣がん、肝臓がん、結腸直腸がん、子宮内膜がん、腎臓がん、前立腺がん、甲状腺がん、神経芽細胞腫、膵臓がん、多形性膠芽腫、頚部がん、胃がん、膀胱がん、肝細胞腫、乳がん、結腸癌、及び頭頸部がん、胃がん、胚細胞腫瘍、骨がん、骨腫瘍、骨の成人性悪性線維性組織球腫；骨の小児性悪性線維性組織球腫、肉腫、小児性肉腫、副鼻腔性（ｓｉｎｏｎａｓａｌ）ナチュラルキラー、新生物、プラズマ細胞新生物；骨髄異形成症候群；神経芽細胞腫；精巣胚細胞腫瘍、眼内メラノーマ、骨髄異形成症候群；脊髄形成異常／骨髄増殖性疾患、滑膜肉腫、慢性骨髄球性白血病、急性リンパ芽球性白血病、フィラデルフィア染色体陽性急性リンパ芽球性白血病（Ｐｈ＋ＡＬＬ）、多発性骨髄腫、急性骨髄性白血病、慢性リンパ性白血病、肥満細胞症及び肥満細胞症に関連する任意の症状、並びに任意のその転移。加えて、障害は、ヒトにおける色素性じんま疹、肥満細胞症、例えば、びまん性皮膚肥満細胞症、孤立性肥満細胞腫並びにイヌの肥満細胞腫及び水胞性、紅皮症性及び末梢血管拡張性の肥満細胞症のようないくつかの稀なサブタイプ、関連する血液疾患、例えば、骨髄増殖性又は骨髄異形成性症候群、又は急性白血病を伴う肥満細胞症、肥満細胞症、肥満細胞白血病と関連する骨髄増殖性障害を、他のがんに加えて、含む。他のがんは、以下を含むが、限定されない障害の範囲内も含む：膀胱、尿路上皮性癌、胸部、結腸、腎臓、肝臓、肺、卵巣、膵臓、胃、頚部、甲状腺、精巣、特に精巣セミノーマ、及び皮膚（扁平上皮癌を含む）の癌を含む癌；消化管間質腫瘍（「ＧＩＳＴ」）；白血病、急性リンパ球性白血病、急性リンパ性白血病、Ｂ細胞リンパ腫、Ｔ細胞リンパ腫、ホジキンリンパ腫、非ホジキンリンパ腫、ヘアリー細胞リンパ腫，及びバーキットリンパ腫を含むリンパ球系列の造血系腫瘍；急性及び慢性骨髄性白血病及び前骨髄球性白血病を含む骨髄球系列の造血系腫瘍；線維肉腫及び横紋筋肉腫を含む間葉起源の腫瘍；メラノーマ、セミノーマ、奇形癌腫細胞、神経芽細胞腫及び神経膠腫を含む他の腫瘍；星細胞腫、神経芽細胞腫、神経膠腫、及びシュワン腫を含む中枢及び末梢神経系の腫瘍；線維肉腫、横紋筋肉腫、及び骨肉腫を含む間葉起源の腫瘍；及びメラノーマ、色素性乾皮症、角化棘細胞腫、セミノーマ、甲状腺濾胞がん、奇形癌腫、化学療法不応性の非セミノーマ胚細胞腫瘍、及びカポジ肉腫、並びに任意のその転移を含む他の腫瘍。
【０２２７】
[0233]本発明は、膀胱の加速性又は転移性がん、膵臓がん、前立腺がん、非小細胞肺がん、結腸直腸がん、及び乳がんを治療するために使用されることが最も好ましい。
【０２２８】
[0234]本発明の好ましい実施形態において、方法は、癌性腫瘍を相乗的に治療するために提供される。本発明の相乗的な方法は、腫瘍の発生を低下させ、腫瘍負荷を低下させ、又は哺乳動物宿主において腫瘍退縮を起こすことが有利である。
【０２２９】
[0235]いくつかの実施形態において、異常な増殖は、がん細胞の増殖である。
【０２３０】
[0236]いくつかの実施形態において、がんは、乳がん、結腸直腸がん、びまん性大細胞性Ｂ細胞リンパ腫、子宮内膜がん、濾胞性リンパ腫、胃がん、グリア芽細胞腫、頭頸部がん、肝細胞がん、肺がん、メラノーマ、多発性骨髄腫、卵巣がん、膵臓がん、前立腺がん、及び腎細胞癌からなる群から選択される。
【０２３１】
[0237]いくつかの実施形態において、本発明は、細胞を殺傷することに使用するための化合物を提供する。化合物は、細胞に、前記細胞を殺傷させるのに十分な量で投与される。例示的な実施形態において、化合物は、細胞を担持する対象に投与される。さらなる例示的な実施形態において、投与は、細胞（例えば、細胞は、腫瘍細胞であってもよい）を含む腫瘍の成長を遅延させる又は中止するのに機能する。成長を遅延させるための投与に関して、細胞の成長の速度は、投与前の成長の速度の少なくとも１０％未満であるべきである。成長の速度は、少なくとも２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％遅延する又は完全に停止することが好ましい。
【０２３２】
[0238]別の態様において、本明細書に提供される本発明の組成物は、治療を必要とする対象又は個体における自己免疫疾患状態を治療するために使用される。
【０２３３】
[0239]ある実施形態において、個体は、望まれない免疫活性化、例えば、自己免疫疾患及び炎症性疾患と関連する障害を患う。自己免疫疾患又は炎症性疾患を有する個体は、現存する自己免疫疾患又は炎症性疾患の認識できる症状を有する個体である。
【０２３４】
[0240]自己免疫疾患は、臓器特異的及び全身性の２つの広いカテゴリーに分類することができる。自己免疫疾患は、限定されることなく、関節リウマチ（ＲＡ）、全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）、タイプＩ真性糖尿病、タイプＩＩ真性糖尿病、多発性硬化症（ＭｖＳ）、免疫媒介性不妊症、例えば、早発閉経、強皮症、シェーグレン病、白斑、脱毛症（脱毛）、多腺性不全（ｐｏｌｙｇｌａｎｄｕｌａｒ  ｆａｉｌｕｒｅ）、グレーブス病、甲状腺機能低下症、多発性筋炎、尋常性天疱瘡、落葉性天疱瘡、クローン病及び潰瘍性大腸炎を含む炎症性腸疾患、Ｂ型肝炎ウイルス（ＨＢＶ）及びＣ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）に関連するものを含む自己免疫性肝炎、下垂体機能不全、移植片対宿主病（ＧｖＨＤ）、心筋炎、アジソン病、自己免疫性皮膚疾患、ブドウ膜炎、悪性貧血、並びに副甲状腺機能低下症を含む。
【０２３５】
[0241]自己免疫疾患は、限定されることなく、橋本甲状腺炎、タイプＩ及びタイプＩｌ自己免疫性多腺性症候群、腫瘍随伴性天疱瘡、水疱性類天疱瘡、疱疹状皮膚炎、線状ＩｇＡ疾患、後天性表皮水疱症、結節性紅斑、妊娠性天疱瘡、瘢痕性類天疱瘡、本態性混合性クリオグロブリン血症（ｍｉｘｅｄ  ｅｓｓｅｎｔｉａｌ  ｃｒｙｏｇｌｏｂｕｌｉｎｅｍｉａ）、幼児期の慢性水胞性疾患、溶血性貧血、血小板減少性紫斑病、グッドパスチャー症候群、自己免疫性の好中球減少症、重症筋無力症、イートンランバート筋無力症候群、スティッフマン症候群、急性散在性脳脊髄炎、ギランバレー症候群、慢性炎症性脱髄性多発神経根筋障害、伝導ブロックを伴う多巣性運動ニューロパシー、単クローン免疫グロブリン血症を伴う慢性神経障害、眼球クローヌスミオクローヌス症候群、小脳変性症、脳脊髄炎、網膜症、原発性胆汁性硬化症、硬化性胆管炎、グルテン過敏性腸症、強直性脊椎炎、反応性関節炎、多発性筋炎／皮膚筋炎、混合性結合組織疾患、ベーチェット症候群、乾癬、結節性多発性動脈炎、アレルギー性血管炎及び肉芽腫症（Ｃｈｕｒｇ−Ｓｔｒａｕｓｓ疾患）、多発性血管炎重複症候群、過敏性血管炎、ヴェーゲナー肉芽腫症、側頭動脈炎、高安動脈炎、川崎病、中枢神経系の孤立性血管炎、閉塞性血栓血管炎、サルコイドーシス、糸球体腎炎、及び寒冷症も含みうる。これらの状態は、医学分野において周知されており、例えば、Ｈａｒｒｉｓｏｎ’ｓ  Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ  ｏｆ  Ｉｎｔｅｒｎａｌ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ、１４ｔｈ  ｅｄ．、Ｆａｕｃｉ  Ａ  Ｓ  ｅ／  ａｌ．、ｅｄｓ．、Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ：  ＭｃＧｒａｗ−Ｈｉｌｌ、１９９８に記載されている。
【０２３６】
[0242]全身性疾患ＳＬＥは、ほとんど全ての細胞中に大量にある抗原に対する抗体、例えば、抗クロマチン抗体、抗スプライセオソーム抗体、抗リボソーム抗体及び抗ＤＮＡ抗体の存在によって特徴づけられる。結果的に、ＳＬＥの影響は、種々の組織、例えば、皮膚及び腎臓に見られる。自己反応性Ｔ細胞は、ＳＬＥにおいても役割を果たしている。例えば、マウスのエリテマトーデスのモデルでの研究は、非ＤＮＡヌクレオソーム抗原、例えば、ヒストンが、抗ＤＮＡ産生性Ｂ細胞性を促進できる自己反応性Ｔ細胞を刺激することが示されている。ＩＦＮ−αの増加した血清レベルが、ＳＬＥ患者において観察されており、発熱及び皮膚発疹、並びに疾患プロセスに関連する必須マーカー（例えば、抗ｄｓＤＮＡ抗体価）を含む、疾患活動性及び重症度の両方と相関することが示されている。循環中に存在する免疫複合体が、これらの患者においてＩＦＮ−αを誘発することができることも示されており、このようにして、この上昇したＩＦＮ−αの慢性的な存在が維持される。２つの異なるタイプの免疫複合体が、ヒトＰＤＣ：ＤＮＡ／抗ＤＮＡ抗体複合体及びＲＮＡ／抗リボ核タンパク質ＲＮＡ抗体複合体からＩＦＮ−αを誘発させることが記載されている。ＤＮＡがＴＬＲ−９のリガンドである及びＲＮＡがＴＬＲ−７／８のリガンドであるため、これら２つの経路が、慢性的にＩＦＮ−αを誘導し、したがって、ＳＬＥの疾病原因に参加するために、それぞれ、ＴＬＲ−９及びＴＬＲ−７／８シグナル伝達を利用することが予想される。したがって、ＴＬＲ−７／８及びＴＬＲ−９応答を阻害することに有効なＩＲＰ及び／又はＩＲＣ組成物は、ＳＬＥを治療することに特に有効でありうる。
【０２３７】
[0243]いくつかの実施形態において、自己免疫疾患は、エリテマトーデス、多発性硬化症、関節リウマチ、乾癬、強皮症、及びシェーグレン症候群からなる群から選択される。
【０２３８】
有効投与量
[0244]本発明での使用に適切な医薬組成物は、活性成分が、治療有効量、すなわち、その意図される目的を達成するのに有効な量を含有する、組成物を含む。特定の適用に有効な実際の量は、とりわけ、治療される条件に依存する。有効量の決定は、特に本明細書の詳細な開示に照らして、当業者の能力の範囲内である。
【０２３９】
[0245]本明細書に記載される任意の化合物に関して、治療有効量は、最初に細胞培養アッセイから決定することができる。標的血漿濃度は、細胞成長又は分裂を阻害することが可能である、活性化合物（複数可）の濃度である。好ましい実施形態において、細胞活性は、少なくとも２５％阻害される。細胞活性の少なくとも約３０％、５０％、７５％、若しくはさらに９０％又はそれ以上の阻害を誘導することが可能である、活性化合物（複数可）の標的血漿濃度が、現在では好ましい。患者における細胞活性の阻害のパーセンテージをモニターして、達成される血漿薬物濃度の適切性を評価することができ、投与量は、阻害の所望のパーセンテージを達成するために上向き又は下向きに調節することができる。
【０２４０】
[0246]当技術分野において周知されている通り、ヒトにおける使用に関する治療有効量はまた、動物モデルから決定することができる。例えば、ヒトに関する用量は、動物において有効であることが見出されている、循環濃度を達成するよう製剤化されてもよい。ヒトにおける投与量は、上に記載のように、細胞阻害をモニターすること及び投与量を上向き又は下向きに調節することによって調節することができる。
【０２４１】
[0247]治療有効量はまた、類似する薬理学的な活性を呈することが知られている化合物に関するヒトデータから決定することができる。適用される用量は、公知の化合物と比較して、投与された化合物の相対的バイオアベイラビリティー及び効力に基づいて調節することができる。
【０２４２】
[0248]上に記載した方法及び当技術分野において周知の他の方法に基づいてヒトにおいて最大の有効性を達成する用量を調節することは、当業者の能力の範囲内である。
【０２４３】
[0249]局所投与の場合、投与された化合物の全身循環濃度は、特に重要なものではない。そのような例において、化合物は、意図される結果を達成するのに有効な局所領域で、ある濃度を達成するように投与される。
【０２４４】
[0250]異常な細胞増殖に関連する疾患の予防及び／又は治療における使用に関して、約０．００１μＭ〜２０μＭの投与された化合物の循環濃度が好ましく、約０．０１μＭ〜５μＭが好ましい。
【０２４５】
[0251]本明細書に記載される化合物の経口投与に関する患者用量は、典型的には、約１ｍｇ／日から約１０，０００ｍｇ／日、より典型的には約１０ｍｇ／日から約１，０００ｍｇ／日、及び最も典型的には約５０ｍｇ／日から約５００ｍｇ／日の範囲である。患者体重について記述すると、典型的には約０．０１から約１５０ｍｇ／ｋｇ／日、より典型的には約０．１から約１５ｍｇ／ｋｇ／日、及び最も典型的には約１から約１０ｍｇ／ｋｇ／日、例えば、５ｍｇ／ｋｇ／日又は３ｍｇ／ｋｇ／日の投与量範囲である。
【０２４６】
[0252]少なくともいくつかの実施形態において、腫瘍成長を遅延させる又は阻害する患者用量は、１μｍｏｌ／ｋｇ／日又はそれ以下であってもよい。例えば、患者用量は、（薬物のモルを参照して）０．９、０．６、０．５、０．４５、０．３、０．２、０．１５、又は０．１μｍｏｌ／ｋｇ／日又はそれ以下であってもよい。少なくとも５日の期間にわたって１日投与量で投与される場合、薬物コンジュゲートを有する抗体は、腫瘍の成長を遅延させることが好ましい。
【０２４７】
[0253]投与の他の様式に関して、投与量及びインターバルを個々に調節して、治療される特定の臨床指標に有効な投与される化合物の血漿レベルを実現することができる。例えば、一実施形態において、本発明による化合物は、１日当たり複数回相対的に高い濃度で投与することができる。或いは、最小の有効な濃度で本発明の化合物を投与すること及び低頻度の投与レジメンを使用することがより望ましい可能性がある。これにより、個体の疾患の重症度と釣り合った治療レジメンが提供される。
【０２４８】
[0254]本明細書に提供される教示を活用することにより、実質的な毒性を引き起こさず、さらに特定の患者によって示された臨床症状を治療するのに完全に有効である、有効な治療処置レジメンを計画することができる。この設計は、化合物効力、相対的バイオアベイラビリティー、患者体重、有害な副作用の存在及び重症度、投与の好ましい様式及び選択される薬剤の毒性プロファイルなどの要素を考慮することによる活性化合物の慎重な選択を伴うべきである。
【０２４９】
[0255]本発明の好ましい実施形態が示され、本明細書に記載されているが、そのような実施形態が、例のみの手段によって提供されることが当業者には自明である。本発明を逸脱しない範囲において、当業者は、多数の変形、変化、及び置換を思いつく。本明細書に記載の本発明の実施形態に対する様々な代替が、本発明の実施において採用されうることを理解されるべきである。以下の請求項は本発明の範囲を規定するものであり、この方法及び構造がこれらの請求項の範囲内であるということが意図される。
【実施例】
【０２５０】
[0256]本発明は、本発明の化合物の調製物を例示する以下の実施例によってさらに例証されるが、限定されない。
【０２５１】
実施例１
[0257]ＣｐＧオリゴヌクレオチド。ＣｐＧ−ＯＤＮを、Ｓｕｚｈｏｕ  Ｒｕｉｂｏ  Ｂｉｏｔｅｃｈ  Ｌｔｄによって合成した。ＣｐＧ１−１２は、配列が修飾された。タイプＣｐＧ２２１６（５’−ｇｇＧＧＧＡＣＧＡＴＣＧＴＣｇｇｇｇｇＧ−３’配列番号１３）、ＢタイプＣｐＧ２００６（５’−ＴＣＧＴＣＧＴＴＴＴＧＴＣＧＴＴＴＴＧＴＣＧＴＴ−３、配列番号１４）及びＣｐＧ６８４（５’−ＴＣｇＡＣｇＴＴＣｇＴＣｇＴＴＣｇＴＣｇＴＴＣ−３’、配列番号１５）、及びＣタイプＣｐＧ２３９５（５’ｔｃｇｔｃｇｔｔｔｔｃｇｇｃｇｃｇｃｇｃｃｇ−３’、配列番号１６１７）を、陽性対照として使用した。ＧＣ−ＯＤＮ（５’−ｔｇｇｃｃａａｇｃｔｔｇｇｇｃｃｃｃｔｔｇｃａａｇｇｇｃｃ−３’配列番号１８）を、陰性対照として使用した。全てのＣｐＧ−ＯＤＮを、エンドトキシン（ＩｎｖｉｖｏＧｅｎ、アメリカ）なしの滅菌水に溶解し、使用するまで−４０℃に維持した。
【０２５２】
[0258]白血球を、ヒト末梢血及び実験動物から濃縮した。ヒト末梢血から濃縮した白血球は、Ｃｈａｎｇｃｈｕｎ  Ｂｌｏｏｄ  Ｂａｎｋ  Ｃｅｎｔｒｅから得られた。
【０２５３】
[0259]マウス及び細胞株。雌性ＢＡＬＢ／ｃマウス（６〜８週齢）を、Ｃｈａｎｇｃｈｕｎ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｐｒｏｄｕｃｔｓ  Ｃｏｍｐａｎｙ（中国）から購入し、全ての動物実験を、Ｉｎｓｔｉｔｕｔｉｏｎａｌ  Ａｎｉｍａｌ  Ｃａｒｅ  ａｎｄ  Ｕｓｅ  Ｃｏｍｍｉｔｔｅｅ  ａｔ  Ｔｈｅ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  ｏｆ  Ｊｉｌｉｎよって承認されたプロトコールに従って実施した。ＢＡＬＢ／ｃマウスからの脾臓細胞を、１０％ウシ胎児血清（Ｃｌａｒｋ、中国）及び１００ＩＵ／ｍＬペニシリン及び１００μｇ／ｍＬストレプトマイシン（Ｈｙｃｌｏｎｅ、ＵＳＡ）を補充したＲＰＭＩ−１６４０培地（Ｃｏｒｎｉｎｇ、ＵＳＡ）で５％ＣＯ２を有するインキュベーターで３７℃で培養した。
【０２５４】
[0260]ｈＰＢＭＣの単離。ヒト末梢血単核球（ｈＰＢＭＣ）を、フィコール密度勾配遠心分離を使用してヒト末梢血から単離した。簡潔に述べると、血液を、２回のリン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）で希釈した。希釈した血液を、１：１でフィコール（Ａｘｉｓ−Ｓｈｉｅｌｄ、ノルウェー）上に重層にし、続いて２，８００ｒｐｍ、２０分間、室温で、８に加速し、０に減速して勾配遠心分離した。ｈＰＢＭＣ界面を、ピペッティングすることによって慎重に収集し、ＰＢＳで洗浄し、１，５００ｒｐｍで５分間遠心分離した。得られたｈＰＢＭＣを、１０％ヒト血清（Ｅｑｕｉｔｅｃｈ−Ｂｉｏ、ＵＳＡ）及び１００ＩＵ／ｍＬペニシリン及び１００μｇ／ｍＬストレプトマイシン（Ｈｙｃｌｏｎｅ、ＵＳＡ）を補充したＲＰＭＩ−１６４０培地（Ｃｏｒｎｉｎｇ、ＵＳＡ）で５％ＣＯ２を有するインキュベーターで３７℃で培養した。
【０２５５】
[0261]増殖アッセイ。細胞増殖を、カルボキシフルオレセイン二酢酸スクシンイミジルエステル（ＣＦＳＥ）アッセイによって決定した。約細胞１０７個／ｍｌの濃度で細胞を、１ｍｌ  ＰＢＳに懸濁した。ｈＰＢＭＣを９μＭ  ＣＦＳＥ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、ＵＳＡ）で処理し、マウス脾臓細胞を６．３μＭ  ＣＦＳＥで処理した。一度により多くの細胞で実施する場合には、それに応じてスケールアップする。細胞を暗所で７分間静置し、続いて最終容量１５ｍｌまで１０％ウシ胎児血清を補充した冷ＲＰＭＩ−１６４０培地を加えた。１，５００ｒｐｍで５分間の遠心分離後に、上清を取り除いた。細胞を、１０％ＦＢＳ、１００ＩＵ／ｍＬペニシリン、及び１００μｇ／ｍＬストレプトマイシンを有するＲＰＭＩ−１６４０培養培地に再懸濁し、細胞５×１０５個／ウェルで９６ウェルプレートに入れた。１時間後、細胞を、１μＭ  ＣｐＧ  ＯＤＮで刺激した。細胞をインキュベーターで３７℃、５％ＣＯ２で６（ｈＰＢＭＣ）又は５（マウス脾臓細胞）日間インキュベートした後、細胞を収集し、染色し、次にフローサイトメーターで分析した。
【０２５６】
[0262]フローサイトメトリー分析。ｈＰＢＭＣ及びマウス脾臓細胞をＣｐＧ  ＯＤＮ（１μＭ）の存在下又は不在下で、２４時間、４８時間及び６又は５日間インキュベートし、細胞をＰＢＳに懸濁した。活性化実験に関して、２４時間及び４８時間刺激した細胞を以下のｍＡｂで染色した：抗ＣＤ３、抗ＣＤ４、抗ＣＤ１９、抗ＣＤ６９。増殖アッセイに関して、６又は５日間刺激した細胞を、以下のｍＡｂで染色した：抗ＣＤ３、抗ＣＤ４及び抗ＣＤ１９。それぞれのＡｂで３０分間４℃でインキュベーション後、細胞を２回ＰＢＳで洗浄し、次にＬＳＲＦｏｒｔｅｓｓａ（商標）フローサイトメーター（ＢＤ、ＵＳＡ）で分析した。
【０２５７】
[0263]ＥＬＩＳＡ及びＣＢＡアッセイ。ｈＰＢＭＣ（細胞５×１０５個／ウェル）及びマウス脾臓細胞（細胞１×１０６個／ウェル）を、９６ウェルプレートに入れ、滅菌／無エンドトキシン水（ＩｎｖｉｖｏＧｅｎ、ＵＳＡ）に溶解したＣｐＧ  ＯＤＮを培養した細胞に添加した。培養物の上清を、２４時間及び４８時間後に収集した。ＥＬＩＳＡキットの指示に従って、培養上清中のヒトＩＦＮ−α（Ｍａｂｔｅｃｈ、スウェーデン）、マウスＩＦＮ−α（ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ、オーストラリア）、マウスＩＬ−６（Ｍａｂｔｅｃｈ、スウェーデン）及びマウスＴＮＦ−α（Ｍａｂｔｅｃｈ、スウェーデン）の量を測定した。簡潔に述べると、５０μｌの試料又は組換え標準を、５０μｌの混合捕獲ビーズに添加し、１時間インキュベートした。次に、５０μｌ  ＰＥ検出試薬を、さらに２時間添加した。非結合性ＰＥ検出試薬を除去するために２回洗浄した後、試料をフローサイトメーターＦＡＣＳアレイ（ＢＤ）で検出し、ＦＣＡＰアレイソフトウェア（ＢＤ）を使用して分析した。
【０２５８】
【表２】
2020516305.tif 000003
【０２５９】
[0264]ＥＬＩＳＡ及びＣＢＡアッセイ。ｈＰＢＭＣ（細胞５×１０５個／ウェル）及びマウス脾臓細胞（１×１０６）。表３は、ＣｐＧ２が、Ｂ細胞の活性化及び増殖を効率よく誘導したことを示す。ヒトＰＢＭＣ（細胞５×１０５個／ウェル）及びマウス脾臓細胞（細胞１×１０６個／ウェル）を、様々なＣｐＧ（ＣｐＧ１−１２）１μＭ、培養対照（ＲＰＭＩ−１６４０培養培地）及び陽性対照としてＣｐＧ６８４を含有する９６ウェルプレートに接種した。２４及び４８時間後、細胞を収集し、抗ＣＤ３、抗ＣＤ４、抗ＣＤ１９及び抗ＣＤ６９で染色した。次に、フローサイトメーターによって分析を実施した（平均±ＳＥＭ、ｎ＝３）。
【０２６０】
【表３】
2020516305.tif 000004
【０２６１】
[0265]ＥＬＩＳＡ及びＣＢＡアッセイ。ｈＰＢＭＣ（細胞５×１０５個／ウェル）及びマウス脾臓細胞（１×１０６）。表４は、ＣｐＧが、ＣＤ８＋Ｔ細胞及びＣＤ４＋Ｔ細胞の活性化を効率よく誘導したことを示す。ヒトＰＢＭＣ（細胞５×１０５個／ウェル）及びマウス脾臓細胞（細胞１×１０６個／ウェル）を、様々なＣｐＧ（ＣｐＧ１−１２）１μＭ、培養対照（ＲＰＭＩ−１６４０培養培地）及び陽性対照としてＣｐＧ６８４を含有する９６ウェルプレートに接種した。２４及び４８時間後、細胞を収集し、抗ＣＤ３、抗ＣＤ４、抗ＣＤ１９  及び抗ＣＤ６９で染色した。次に、フローサイトメーターによって分析を実施した（平均±ＳＥＭ、ｎ＝３）。
【０２６２】
【表４】
2020516305.tif 000005
【０２６３】
実施例２
[0266]マウスＣＴ２６結腸直腸腫瘍モデルにおけるＣｐＧ−６の有効性
[0267]材料及び方法：全てのインビボ実験は、Ｐｈａｒｍａｒｏｎ、Ｉｎｃ．（Ｂｅｉｊｉｎｇ、中国）によって、そのＩｎｓｔｉｔｕｔｉｏｎａｌ  Ａｎｉｍａｌ  Ｃａｒｅ  ａｎｄ  Ｕｓｅ  Ｃｏｍｍｉｔｔｅｅによって承認されたプロトコールに従って実施された。ＣＴ２６マウス結腸癌モデルは、Ｈｅｍｍｅｒｌｅ  Ｔ  ａｎｄ  Ｎｅｒｉ  Ｄ  （Ｉｎｔ．  Ｊ．  Ｃａｎｃｅｒ  ２０１４、１３４：  ４６７〜４７７）によって前に記載された。簡潔に述べると、Ｂｅｉｊｉｎｇ  Ｖｉｔａｌ  Ｒｉｖｅｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ａｎｉｍａｌ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  Ｃｏ．、Ｌｔｄ．からの６〜８週齡ＢＡＬＢ／ｃ雌性マウスは、それぞれ、２部位の腫瘍発生について、研究の０日又は４日に右又は左脇腹に２×１０５個又は１×１０５個のＣＴ２６腫瘍細胞を皮下に移植された。右脇腹の腫瘍が８日に明らかに触知可能であったときに、マウスを無作為に群化（ｎ＝６）し、ＣｐＧ−６、ＧＣ対照（非ＣｐＧ  ＯＤＮ対照）又はビヒクル（リン酸緩衝生理食塩水）を右腫瘍（平均＝１０４ｍｍ３）に注射した。１日当たり１回、３日目ごとに５用量の治療を与えた。全ての動物の体重を、研究を通して３日ごとに測定した。腫瘍サイズをキャリパーで３日ごとに測定し、腫瘍体積を体積＝長さ×幅２×０．５の式を使用して推定した。全てのデータは、ｍｍ３＋ＳＥＭの平均として表される。腫瘍体積が３，０００ｍｍ３を超えた又は重篤な苦痛及び／又は疼痛の明白な徴候が観察されていた場合に、動物を二酸化炭素窒息及び頸椎脱臼によって屠殺した。
【０２６４】
[0268]群間の腫瘍体積における差の統計分析を、一元配置ＡＮＯＶＡを使用して、治療開始後１５日に得られたデータで実施した；比較する群に関する全生存時間の間の差を、ＧｒａｐｈＰａｄ  Ｐｒｉｓｍ６ソフトウェア中のログランク（マンテル−コックス）検定を使用して分析した；ｐ＜０．０５を、統計学的に有意であると考えた。
【０２６５】
[0269]結果：腫瘍内ＣｐＧ−６によるＣＴ２６腫瘍成長の阻害は、図４に示される。類似する腫瘍成長曲線が、ＰＢＳ−ビヒクル群及びＧＣ−対照（２．５ｍｇ／ｋｇ）群に関して提示され、これが非−ＣｐＧ−ＯＤＮとして、その陰性対照特徴を確立する（図４Ｂ）。対照的に、腫瘍内ＣｐＧ−６は、同じ用量レベルで、腫瘍成長の高度に有意な阻害を生じさせた（ｐ＜０．００１）。また、ＣｐＧ−６媒介性抗腫瘍効果は、用量依存性を示し、５ｍｇ／ｋｇ群は０．３ｍｇ／ｋｇ治療マウスとは有意に異なっていた（ｐ＝０．００９）。類似する体重増加が、４２日の研究期間の過程にわたって各六群で観察され、腫瘍内ＣｐＧ−６治療の良好な耐容性を示唆している（図４Ａ）。
【０２６６】
【表５】
2020516305.tif 000006
【０２６７】
[0270]ＣｐＧ−６の免疫媒介性全身効果は、注射していないＣＴ２６腫瘍においても観測された（図４Ｃ）。左脇腹の類似する腫瘍成長曲線は、右脇腹におけるＰＢＳ又はＧＣ−対照の腫瘍内注射の際、２つの陰性対照群に存在する。そのＯＤＮ対照と比較して、右脇腹腫瘍へのＣｐＧ−６の投与は、マウスの左脇腹においてＣＴ２６腫瘍成長の有意な抑制をもたらした（２．５ｍｇ／ｋｇについてｐ＝０．０１７）。５又は１ｍｇ／ｋｇ（ｐ＝０．００８又は０．０３７）で腫瘍内ＣｐＧ−６も、左腫瘍において類似する有効性を呈し、用量依存的な全身効果を示している、しかし、０．３ｍｇ／ｋｇは呈さなかった（ｐ＝０．１２３）。
【０２６８】
【表６】
2020516305.tif 000007
【０２６９】
[0271]腫瘍内ＣｐＧ−６の全体的な有効性が、ＣＴ２６腫瘍担持マウスの生存において呈されている（図４Ｄ）。陰性対照として、ＰＢＳ又はＧＣ−対照群における全ての動物を、それらの拡大した腫瘍が３０００ｍｍ３を超えるかしだいで、２３日までに屠殺した。比較して、腫瘍内ＣｐＧ−６治療は、ＣＴ２６−腫瘍を担持するマウスの有意な延命をもたらした（２．５ｍｇ／ｋｇ、ｐ＝０．０００９）。一方、全て４用量のＣｐＧ−６は、ＰＢＳ群に対して高度に有意な保護を示した（ｐ＝０．０００９）；５ｍｇ／ｋｇと０．３ｍｇ／ｋｇ群との間に有意差（ｐ＝０．００５）が存在し、ＣＴ２６腫瘍担持マウスの生存における用量応答性効果を示している。
【０２７０】
【表７】
2020516305.tif 000008
【０２７１】
実施例３
[0272]マウスＢ１６Ｆ１０メラノーマ腫瘍モデルにおけるＣｐＧ−６の有効性
[0273]研究課題：研究の課題は、Ｃ５７ＢＬ／６マウスにおける皮下Ｂ１６Ｆ１０マウスメラノーマがんモデルの治療におけるＣｐＧ−６の治療効果を評価することである。
【０２７２】
[0274]材料及び方法：全てのインビボ実験は、Ｐｈａｒｍａｒｏｎ、Ｉｎｃ．（Ｂｅｉｊｉｎｇ、中国）によって、そのＩｎｓｔｉｔｕｔｉｏｎａｌ  Ａｎｉｍａｌ  Ｃａｒｅ  ａｎｄ  Ｕｓｅ  Ｃｏｍｍｉｔｔｅｅによって承認されたプロトコールに従って実施された。Ｂ１６Ｆ１０マウスメラノーマモデルは、Ｃｈｅｎ  Ｓ．  ｅｔ．ａｌ．  （Ｃａｎｃｅｒ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  Ｒｅｓ．  ２０１５、３：  １４９〜６０）によって前に記載された。簡潔に述べると、Ｂｅｉｊｉｎｇ  ＨＦＫ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ  Ｃｏ．、Ｌｔｄ．からの６〜８週齡Ｃ５７ＢＬ／６雌性マウスは、それぞれ、２部位の腫瘍発生について、研究の０日又は４日に右又は左脇腹に１×１０５個又は０．５×１０５個のＢ１６Ｆ１０腫瘍細胞を皮下に移植された。右脇腹の腫瘍が９日に明らかに触知可能であったときに、マウスを無作為に群化（ｎ＝６）し、ＣｐＧ−６（０．３〜１０ｍｇ／ｋｇ）又はビヒクル（リン酸緩衝生理食塩水）を右腫瘍（平均約８５ｍｍ３）に注射した。１日当たり１回、１日おきに５用量の治療を与えた。腫瘍サイズをキャリパーで３日ごとに測定し、腫瘍体積を体積＝長さ×幅２×０．５の式を使用して推定した。各腫瘍体積が３，０００ｍｍ３を超えた又は重篤な苦痛及び／又は疼痛の明白な徴候が観察されていた場合に、動物を二酸化炭素窒息及び頸椎脱臼によって屠殺した。
【０２７３】
[0275]比較する群に関する全生存時間における差の統計分析を、ＧｒａｐｈＰａｄ  Ｐｒｉｓｍ６ソフトウェア中のログランクマンテル−コックス検定を使用して分析した；ｐ＜０．０５を、統計学的に有意であると考えた。
【０２７４】
[0276]結果：腫瘍内ＣｐＧ−６の治療効果を、Ｂ１６Ｆ１０メラノーママウスモデルにおいて評価した。全てが２０日内に右脇腹に大きい腫瘍を発生したＰＢＳ−ビヒクル群と比較して；ＣｐＧ−６注射腫瘍は、成長遅延の用量依存的な傾向を呈した、すなわち、１０、３、及び１ｍｇ／ｋｇ群でより多くの腫瘍が、０．３ｍｇ／ｋｇ治療群よりもゆっくりと拡大した（図５Ａ１−Ａ４）。研究期間の間、ＰＢＳ群中の２匹のマウス（３３％）も、それらの左脇腹に大きい腫瘍を発生し；一方、全ＣｐＧ−６治療群中で１匹の動物（４％）のみが、注射していない脇腹に拡大した腫瘍を有していた（図５Ｂ１−Ｂ４）。ＣｐＧ−６投与の全体的な有効性が、腫瘍担持マウスの生存において実証されている（図５Ｃ）。類似する生存曲線がＰＢＳビヒクルとＣｐＧ−６  ０．３ｍｇ／ｋｇ治療群との間で観測され、Ｂ１６Ｆ１０細胞接種後の２９日付近で大きい腫瘍で全てのマウスが死亡し；ＣｐＧ−６腫瘍内注射は１０ｍｇ／ｋｇ及び３ｍｇ／ｋｇでメラノーマを担持するマウスの生存を有意に改善（ｐ＜０．０５  対ＰＢＳ）したが、１ｍｇ／ｋｇではしなかった。
【０２７５】
【表８】
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【０２７６】
実施例４
[0277]マウスＴＵＢＯ乳房腫瘍モデルにおけるＣｐＧ−６及び抗ｎｅｕ  ｍＡｂの組合せの有効性
[0278]材料及び方法：全てのインビボ実験は、Ｂｅｉｊｉｎｇ  Ｖｉｔａｌ  Ｒｉｖｅｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ａｎｉｍａｌ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  Ｃｏ、Ｌｔｄ．  （Ｂｅｉｊｉｎｇ、中国）で、そのＩｎｓｔｉｔｕｔｉｏｎａｌ  Ａｎｉｍａｌ  Ｃａｒｅ  ａｎｄ  Ｕｓｅ  Ｃｏｍｍｉｔｔｅｅによって承認されたプロトコールに従って実施された。ＴＵＢＯマウス乳房モデルは、Ｍｏｒｔｅｎｓｏｎ  Ｅ  Ｄ  ｅｔ．ａｌ．  （Ｃｌｉｎ．  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．  ２０１３、１９：  １４７６〜１４８６）によって前に記載された。簡潔に述べると、Ｂｅｉｊｉｎｇ  Ｖｉｔａｌ  Ｒｉｖｅｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ａｎｉｍａｌ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  Ｃｏ．、Ｌｔｄ．からの８〜１０週齡Ｂａｌｂ／ｃ雌性マウスは、第一ラウンドでの腫瘍発生について、０日に右脇腹上部に５×１０５個のＴＵＢＯ腫瘍細胞を皮下に移植された。腫瘍が１１日に明らかに触知可能であったときに、マウスは、無作為に群化（表９）され、４用量について３日目ごとに１日当たり１回、腫瘍（６０〜１２０ｍｍ３）にＣｐＧ−６（ｎ＝２４）、ＧＣ−対照（ｎ＝６）又はＰＢＳ−ビヒクル（ｎ＝６）を注射された。組合せ治療群において、抗ｎｅｕ  ｍＡｂ（Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ  ｏｆ  Ｂｉｏｐｈｙｓｉｃｓ、Ｂｅｉｊｉｎｇ、中国からのクローン７．１６．４）は、３用量について静脈内に１０ｍｇ／ｋｇ／週を投与された。
【０２７７】
【表９】
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【０２７８】
[0279]５３日の研究後、抗ｎｅｕ及びＣｐＧ−６治療マウスにおいて右上部腫瘍が辛うじて触知可能なまで縮小したときに（＜３０ｍｍ３）、第二のｓ．ｃ．接種を、二群（ＴＵＢＯ  ５×１０５／０．１ｍＬ又は４Ｔ１  １×１０５／０．１ｍＬ）に対し、それらの左脇腹に与えた。追加ナイーブマウス（雌性３〜４月齢、２０〜２２ｇ）を、ＴＵＢＯ又は４Ｔ１接種後の腫瘍発生に対する対照として採用した（表１０）。
【０２７９】
【表１０】
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【０２８０】
[0280]研究１１２日に、全てのナイーブマウスが腫瘍成長で死亡したときに、第三の腫瘍細胞接種（同様に、ＴＵＢＯ  ５×１０５／０．１ｍＬ又は４Ｔ１  １×１０５／０．１ｍＬ）を、前にＣｐＧ−６及び抗ｎｅｕで治療された全ての生存マウスの右脇腹下部付近にｓ．ｃ．で送達した。もう一度、新しい一組のナイーブＢＡＬＢ／ｃマウス（雌性、６〜７月齢、２４〜３５ｇ）を、ＴＵＢＯ又は４Ｔ１接種後の腫瘍発生に対する対照として使用した（表１１）。
【０２８１】
【表１１】
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【０２８２】
[0281]全ての動物の体重を、研究を通して３日ごとに測定した。体重変化（％）を、ＢＷ変化（％）＝（ＢＷ  Ｘ日／ＢＷ  ０日）×１００の式を使用して計算した。腫瘍サイズをキャリパーで３日ごとに測定し、腫瘍体積を体積＝長さ×幅２×０．５の式を使用して推定した。全てのデータは、ｍｍ３＋ＳＥＭの平均として表される。各腫瘍体積が３，０００ｍｍ３を超えた又は重篤な苦痛及び／又は疼痛の明白な徴候が観察されていた場合に、動物を二酸化炭素窒息及び頸椎脱臼によって屠殺した。
【０２８３】
[0282]示されるように二元配置分散分析（ＡＮＯＶＡ）又は対応のないｔ検定によって統計分析を実施して群間の腫瘍成長を比較した。比較する群の全生存時間の間の差を、ＧｒａｐｈＰａｄ  Ｐｒｉｓｍ６ソフトウェア中のログランク（マンテル−コックス）検定及びゲーハン−ブレスロウ−ウィルコクソン検定を使用して分析した；ｐ＜０．０５を、統計学的に有意であると考えた。
【０２８４】
[0283]結果
[0284]第１のＴＵＢＯ腫瘍移植における治療効果
[0285]抗ｎｅｕ及びＣｐＧ−６の組合せ治療を、ＴＵＢＯ乳がんモデルにおいて評価した（図６）。４つの治療群を、マウスの右脇腹におけるＴＵＢＯ細胞のｓ．ｃ．接種後１１日に形成した（それらの腫瘍体積が６０〜１２０ｍｍ３に達したとき）。抗ｎｅｕはｉ．ｖ．で毎週ｘ３週間投与されたが；ＣｐＧ−６又はそのＧＣ対照はｉ．ｔ．で３日ごとにｘ４回与えられた。そのため、全治療は、第１の接種以後２４日までに完了した。
【０２８５】
[0286]類似する体重が、４８日の研究期間の過程にわたって各四群で観察され、治療の良好な耐容性を示唆している（図６Ａ）。ビヒクル群中のマウスは時間の経過に伴ってサイズが増加する固形腫瘍を発生したが、抗ｎｅｕの静脈内注射は腫瘍成長の有意な抑制をもたらした（ｐ＜０．０００１  対ＰＢＳ）。腫瘍内ＧＣ対照で同時治療するとき追加の効果は示されなかったが（図６Ｂ）、ＣｐＧ−６との組合せ治療は腫瘍成長のさらに有意な阻害が導かれた（ｐ＝０．０００９  対ＧＣ対照）。
【０２８６】
[0287]腫瘍担持マウスを、それらの腫瘍が３０００ｍｍ３のサイズを超えたときに、屠殺し、各治療群における生存率（％）を分析した（図６Ｃ）。全て６匹のマウスは、ＴＵＢＯ細胞接種４０日後までにビヒクル群中で大きい腫瘍で死亡し；一方、わずかに１／３の腫瘍担持マウスが、抗ｎｅｕ治療群中で屠殺された（ｐ＝０．００６）。１匹が技術的な事故に起因して死亡したことを除き、ＣｐＧ−６での組合せ治療は、腫瘍が引き起こす死から全てのマウスを保護したが、そのＧＣ対照はしなかった（ｐ＝０．０３９  対  抗ｎｅｕ＋ＧＣ対照）。
【０２８７】
【表１２】
2020516305.tif 000013
【０２８８】
【表１３】
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【０２８９】
[0288]第２のＴＵＢＯ腫瘍移植における治療の持続効果
[0289]新しい腫瘍形成における継続的な治療効果を評価するため、５０日まで抗ｎｅｕ＋ＣｐＧ−６治療群における全ての生存したマウスは、それらの左脇腹におけるＴＵＢＯ又は４Ｔ１腫瘍細胞のいずれかでのリチャレンジｓ．ｃ．に関して二群に群分けされた。ナイーブマウスの一組も、第１の接種の際のＴＵＢＯ又は４Ｔ１腫瘍成長に対する対照として使用した。体重、腫瘍成長及び生存データを、図７に示す。
【０２９０】
[0290]四群のマウスの間の体重変化に差が示されないが（図７Ａ）；腫瘍サイズの有意な低下が、対応するＴＵＢＯ（ｐ＜０．０００１）又は４Ｔ１（ｐ＝０．００５）腫瘍細胞のいずれでリチャレンジ／チャレンジ後のナイーブマウスよりも抗ｎｅｕ＋ＣｐＧ−６レシピエントにおいて示された（図７Ｂ）。主要な差は、ナイーブマウスにおける２つのタイプの腫瘍成長に見出されなかったが；抗ｎｅｕ＋ＣｐＧ−６レシピエントは、第１の４Ｔ１腫瘍移植（６／１１マウス、５４．５％）よりも有意（ｐ＝０．０２１）に第２のＴＵＢＯチャレンジ（１１／１２マウス、９１．７％）を拒絶した。さらに、６５日内に腫瘍接種で全てが死亡したナイーブマウスと比較して（図７Ｃ）、抗ｎｅｕ＋ＨＰ０７Ｔ０６−レシピエントは、第２のＴＵＢＯ接種（ｐ＜０．０００１）でチャレンジした左脇腹からの有意な保護をもたらしたが、第１の４Ｔ１接種（ｐ＝０．０５６）ではもたらさなかった。後者の二群の間の生存の差も、統計的に有意である（ｐ＝０．００９）。
【０２９１】
【表１４】
2020516305.tif 000015
【０２９２】
【表１５】
2020516305.tif 000016
【０２９３】
[0291]第３のＴＵＢＯ腫瘍接種における組合せ治療の長期記憶効果
[0292]免疫記憶形成における治療研究を拡大するため、第２のＴＵＢＯ接種後７０日（すなわち、第１のＴＵＢＯ接種以後１２０日）までの抗ｎｅｕ＋ＣｐＧ−６治療下位群における全ての生存したマウスは、それらの左脇腹に第３のＴＵＢＯ又は第２の４Ｔ１腫瘍細胞のいずれかで、もう一度チャレンジｓ．ｃ．された。ナイーブマウスの一組も、それらの第１の接種の際のＴＵＢＯ又は４Ｔ１腫瘍成長に対する対照として使用した。体重、腫瘍成長及び生存データを、図８に全て示す。
【０２９４】
[0293]四群のマウスの間の体重変化に差が呈されないが（図８Ａ）；両方の腫瘍サイズの有意な低下が、ＴＵＢＯ（ｐ＜０．０００１）又は４Ｔ１（ｐ＝０．００６）腫瘍細胞でチャレンジ後のナイーブマウスと比較して抗ｎｅｕ＋ＣｐＧ−６レシピエントにおいて示された（図８Ｂ）。主要な差は、ナイーブマウスにおける２つのタイプの腫瘍成長に見出されなかったが；抗ｎｅｕ＋ＣｐＧ−６レシピエントは、第２の４Ｔ１移植よりも有意（ｐ＜０．０００１）に第３のＴＵＢＯ腫瘍を拒絶した。さらに、４５日内にいずれかの腫瘍接種で全てが死亡したナイーブマウスと比較して（図８Ｃ）、抗ｎｅｕ＋ＣｐＧ−６レシピエントは、接種６０日内で、第２の４Ｔ１（０％）よりも、第３のＴＵＢＯ（８３％）でチャレンジした右脇腹下部からの有意（ｐ＝０．０００３）な保護をもたらした。
【０２９５】
【表１６】
2020516305.tif 000017
【０２９６】
【表１７】
2020516305.tif 000018
【図１】
2020516305.tif 000019
【図２】
2020516305.tif 000020
【図３】
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【図４Ａ】
2020516305.tif 000022
【図４Ｂ】
2020516305.tif 000023
【図５Ａ】
2020516305.tif 000024
【図５Ｂ】
2020516305.tif 000025
【図５Ｃ】
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【図５Ｄ】
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【図５Ｅ】
2020516305.tif 000028
【図６】
2020516305.tif 000029
【図７】
2020516305.tif 000030
【図８】
2020516305.tif 000031
【配列表】
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【国際調査報告】
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