(57)【要約】  光学異性体を分離することができる多糖誘導体を有する光学異性体用分離剤を有するカラムを用いる超臨界流体クロマトグラフィーにおいて、移動相には超臨界流体を含む移動相を用い、光学異性体を分離するためにカラムに収容される光学異性体用分離剤には、光学異性体を分離する多糖誘導体を、光学異性体用分離剤全体に対して５０質量％以上含有する光学異性体用分離剤を用いることにより、識別部位の多い光学異性体用分離剤を用いても光学異性体の良好な分離を行う。【特許請求の範囲】
【請求項１】
光学異性体の混合物を含有する試料を移動相に注入し、試料が注入された移動相を、光学異性体を分離する光学異性体用分離剤を有するカラムに通して、前記試料中の光学異性体を分離する方法において、
前記移動相には超臨界流体を含む移動相を用い、
前記光学異性体用分離剤には、光学異性体を分離する多糖誘導体を、光学異性体用分離剤全体に対して５０質量％以上含有する光学異性体用分離剤を用いることを特徴とする方法。
【請求項２】
前記光学異性体用分離剤は、前記多糖誘導体を光学異性体用分離剤全体に対して６０質量％以上含有することを特徴とする請求項１記載の方法。
【請求項３】
前記光学異性体用分離剤は、前記多糖誘導体を光学異性体用分離剤全体に対して８０質量％以上含有することを特徴とする請求項１記載の方法。
【請求項４】
前記多糖誘導体は、セルロース  トリスベンゾエート、セルロース  トリス（フェニルカルバメート）、及びセルロース  トリス（３，５−ジメチルフェニルカルバメート）から選択されるいずれかであることを特徴とする請求項１記載の方法。
【請求項５】
前記多糖誘導体は、アミロースを骨格とする多糖誘導体であることを特徴とする請求項１記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、光学異性体用分離剤を有するカラムを用いる超臨界流体クロマトグラフィーによって光学異性体を分離する方法に関し、特に、光学異性体を分離することができる多糖誘導体を高い割合で有する光学異性体用分離剤を有するカラムを用いる超臨界流体クロマトグラフィーによって光学異性体を分離する方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
試料中の所望の物質を分離する方法としては、種々のクロマトグラフィーが用いられている。このようなクロマトグラフィーの一つとして、超臨界流体を移動相として用いる超臨界流体クロマトグラフィーが知られている。超臨界流体クロマトグラフィーは、超臨界流体という、一般の溶媒に比べて種々の特性を有する流体を移動相に用いることから、分離が困難とされていた光学異性体等の種々の物質の分離、分析、精製等への利用が検討されている。【０００３】
一方で、光学異性体の分離では、光学異性体を分離する多糖エステル誘導体や多糖カルバメート誘導体等の多糖誘導体をシリカ等の粒子状の担体に担持した光学異性体用分離剤が充填されたカラムを、回分式の液体クロマトグラフィーに用いて、光学異性体を分離する技術が知られている（例えば、国際公開第９５／２３１２５号パンフレット参照。）。【０００４】
ところで、ラセミ体等の光学異性体の混合物中から光学異性体を工業的な用途で分取する場合では、光学異性体用分離剤における光学異性体の識別部位（例えば多糖誘導体等）が多いことが、分取される光学異性体の生産性を高める上で好ましいと考えられる。このような考えに基づけば、前記識別部位をなるべく多く含む光学異性体用分離剤を用いることが最も好ましい。【０００５】
識別部位が多い光学異性体用分離剤を一般の高速液体クロマトグラフィーに用いると、有機溶剤やこれと水との混合溶媒のような移動相では、識別部位に対して光学異性体の脱着が繰り返されるため、識別部位間において、識別部位の多さに見合った十分な速さで光学異性体を移動させることができない場合がある。このため、検出されるピークがブロードになる等、良好な分離を行うことが困難である。
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
本発明は、光学異性体を分離することができる多糖誘導体を有する光学異性体用分離剤を有するカラムを用いる超臨界流体クロマトグラフィーにおいて、識別部位の多い光学異性体用分離剤を用いても良好な分離を行うことができる光学異性体の分離技術を提供することを課題とする。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
本発明では、前記多糖誘導体を含む光学異性体用分離剤であって、識別部位としての多糖誘導体の含有量が十分に高い光学異性体用分離剤を有するカラムを、超臨界流体を移動相に用いる超臨界流体クロマトグラフィーに用いて光学異性体を分離する。【０００８】
すなわち本発明は、光学異性体の混合物を含有する試料を移動相に注入し、試料が注入された移動相を、光学異性体を分離する光学異性体用分離剤を有するカラムに通して、試料中の光学異性体を分離する方法において、移動相には超臨界流体を含む移動相を用い、光学異性体用分離剤には、光学異性体を分離する多糖誘導体を、光学異性体用分離剤全体に対して５０質量％以上含有する光学異性体用分離剤を用いる方法（以下、単に「分離方法」ともいう）である。
【図面の簡単な説明】
【０００９】
【図１】本発明に用いられる超臨界流体クロマト分取装置の一例を示す図である。
【図２】実施例１において、ＯＢビーズが充填されたカラム１を超臨界流体クロマトグラフィーに用いてトランス−スチルベンオキシドの光学分割を行ったときのクロマトグラフである。
【図３】比較例１において、ＯＢポリマーを担持させたシリカ粒子が充填された比較用カラムを超臨界流体クロマトグラフィーに用いてトランス−スチルベンオキシドの光学分割を行ったときのクロマトグラフである。
【図４】実施例２において、ＯＢビーズが充填されたカラム１を超臨界流体クロマトグラフィーに用いて、４００μｇのトランス−スチルベンオキシドを注入して光学分割を行ったときのクロマトグラフである。
【図５】実施例２において、ＯＢビーズが充填されたカラム１を超臨界流体クロマトグラフィーに用いて、５００μｇのトランス−スチルベンオキシドを注入して光学分割を行ったときのクロマトグラフである。
【図６】実施例２において、ＯＢビーズが充填されたカラム１を超臨界流体クロマトグラフィーに用いて、７００μｇのトランス−スチルベンオキシドを注入して光学分割を行ったときのクロマトグラフである。
【図７】比較例２において、ＯＢポリマーを担持させたシリカ粒子が充填された比較用カラムを超臨界流体クロマトグラフィーに用いて、４００μｇのトランス−スチルベンオキシドを注入して光学分割を行ったときのクロマトグラフである。
【図８】比較例２において、ＯＢポリマーを担持させたシリカ粒子が充填された比較用カラムを超臨界流体クロマトグラフィーに用いて、５００μｇのトランス−スチルベンオキシドを注入して光学分割を行ったときのクロマトグラフである。
【図９】比較例２において、ＯＢポリマーを担持させたシリカ粒子が充填された比較用カラムを超臨界流体クロマトグラフィーに用いて、７００μｇのトランス−スチルベンオキシドを注入して光学分割を行ったときのクロマトグラフである。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１０】
本発明では、光学異性体の混合物を含有する試料を移動相に注入し、試料が注入された移動相を、光学異性体を分離する光学異性体用分離剤を有するカラムに通して、前記試料中の光学異性体を分離する方法において、前記移動相に超臨界流体を含む移動相を用いる。【００１１】
前記移動相は、超臨界流体を含んでいれば特に限定されない。本発明における超臨界流体とは、臨界圧力を超えた圧力及び臨界温度を超えた温度の少なくともいずれかの条件下にあるガスである。前記ガスには、二酸化炭素、アンモニア、二酸化イオウ、ハロゲン化水素、亜酸化窒素、硫化水素、メタン、エタン、プロパン、ブタン、エチレン、プロピレン、ハロゲン化炭化水素、水等を用いることができる。前記ガスには、可燃性、爆発性、人体への有害性、取り扱いの容易性や経済性等の観点から、二酸化炭素が好ましい。【００１２】
本発明では、前記移動相として、超臨界流体や超臨界流体と溶媒とを含む混合溶媒等が挙げられる。超臨界流体と混合される溶媒としては、例えば有機溶媒が挙げられる。この有機溶媒には、分離対象の光学異性体の種類や光学異性体用分離剤の種類等に応じて選択される公知の有機溶媒が用いられるが、例えばエタノール、２−プロパノール等の低級アルコールが挙げられる。【００１３】
本発明では、前記光学異性体用分離剤には、光学異性体用分離剤全体に対して５０質量％以上含有する光学異性体用分離剤を用いる。光学異性体用分離剤は、前記多糖誘導体のみから、又は担体と、これに担持される多糖誘導体とから構成される。【００１４】
前記多糖誘導体は、光学異性体の分離に用いることができる多糖誘導体であれば特に限定されない。このような多糖誘導体としては、例えば、光学活性な多糖を骨格として含み、この多糖が有する水酸基及びアミノ基の少なくとも一部が、試料中の光学異性体に作用する官能基で置換されている多糖誘導体が挙げられる。【００１５】
前記多糖は、合成多糖、天然多糖及び天然物変性多糖のいずれかを問わず、光学活性な多糖であればいかなるものでもよいが、結合様式の規則性の高いものが好ましく、また鎖状のものが好ましい。【００１６】
例示すればβ−１，４−グルカン（セルロース）、α−１，４−グルカン（アミロース、アミロペクチン）、α−１，６−グルカン（デキストラン）、β−１，６−グルカン（ブスツラン）、β−１，３−グルカン（例えばカードラン、シゾフィラン等）、α−１，３−グルカン、β−１，２−グルカン（Ｃｒｏｗｎ  Ｇａｌｌ多糖）、β−１，４−ガラクタン、β−１，４−マンナン、α−１，６−マンナン、β−１，２−フルクタン（イヌリン）、β−２，６−フルクタン（レバン）、β−１，４−キシラン、β−１，３−キシラン、β−１，４−キトサン、α−１，４−Ｎ−アセチルキトサン（キチン）、プルラン、アガロース、アルギン酸等であり、アミロースを含有する澱粉も含まれる。【００１７】
これらの中では、高純度の多糖を容易に入手できるセルロース、アミロース、β−１，４−キシラン、β−１，４−キトサン、キチン、β−１，４−マンナン、イヌリン、カードラン等が好ましく、特にセルロース、アミロースが好ましい。【００１８】
多糖の数平均重合度（１分子中に含まれるピラノースあるいはフラノース環の平均数）は５以上、好ましくは１０以上であり、特に上限はないが、１，０００以下であることが、前記分離剤の製造の際における取り扱いの容易さの点で好ましい。【００１９】
前記官能基は、前記試料中の分離対象の光学異性体に作用する官能基である。光学異性体に対する官能基の作用は、分離対象の光学異性体の種類に応じて官能基の種類が異なるので一概には言えないが、多糖誘導体による前記光学異性体の光学分割を行うのに十分な程度の作用であれば特に限定されない。このような作用としては、例えば前記光学異性体と前記官能基との水素結合、π−π相互作用、双極子−双極子相互作用等の親和的な相互作用、及び立体障害等の非親和的な相互作用が挙げられる。このような相互作用によって、一対の光学異性体が多糖誘導体に接近する際に、多糖誘導体への少なくとも片方の光学異性体の接近を邪魔せずに光学異性体の向きが整えられ、あるいは多糖誘導体自身の高次構造が不斉識別する上で有利な形状に整えられるものと考えられる。【００２０】
前記官能基は、分離対象の前記光学異性体の種類に応じて選択される。前記官能基としては、例えば、エステル結合や、ウレタン結合、エーテル結合を介して多糖と結合し、置換基を有していても良い芳香族基を含む基等が挙げられる。前記芳香族基は、複素環や縮合環を含む。前記芳香族基が有していても良い置換基としては、例えば炭素数８程度までのアルキル基、ハロゲン、アミノ基、アルコキシル基等が挙げられる。また、前記官能基の置換度や多糖誘導体における前記官能基の配置は特に限定されず、官能基の種類や多糖の種類等に応じて適宜選択される。【００２１】
前記多糖誘導体は、公知の方法によって製造することができる。前記多糖誘導体は、例えば、多糖が有する水酸基又はアミノ基と反応可能な化合物であって、前記官能基を含むか又は前記水酸基又はアミノ基との反応によって前記官能基となる化合物と、多糖とを脱水反応によって反応させることにより製造することができる。【００２２】
前記多糖誘導体は、種々の光学異性体の分離を実現する観点から、例えば国際公開９５／２３１２５号パンフレット等に記載されているような、多糖のエステル誘導体又は多糖のカルバメート誘導体であることが特に好ましい。より具体的には、前記多糖誘導体としては、例えばアミロースを骨格とする多糖誘導体、セルロース  トリスベンゾエート、セルロース  トリス（フェニルカルバメート）、及びセルロース  トリス（３，５−ジメチルフェニルカルバメート）等が挙げられる。【００２３】
多糖誘導体のみからなる光学異性体用分離剤、すなわち多糖誘導体の含有量が１００質量％である光学異性体用分離剤は、前記多糖誘導体を構成単位として形成される。前記多糖誘導体のみからなる光学異性体用分離剤は、多糖誘導体同士が、直接又は適当な他の物質を介して化学結合してなる重合体等の化合物から形成される。前記化合物は、公知のエステル化反応等によって生成することができる。前記多糖誘導体のみからなる光学異性体用分離剤は、カラムに収容される形態であればどのような形態でも良い。本発明に用いられる場合の形態としては、粒子の形態や、カラム管に収容されたときの固定相を一体的に形成する多孔質の一体成形物の形態等が挙げられる。【００２４】
なお、本発明に用いられる光学異性体用分離剤の形態が粒子である場合では、その粒径は１〜１００μｍであることが好ましく、１〜７５μｍであることがより好ましく、１〜３０μｍであることがさらに好ましい。【００２５】
前記多糖誘導体のみからなる光学異性体用分離剤は、公知の方法を利用して製造することができる。例えば前記粒子は、特許第２７８３８１９号明細書に記載されているように、前記化合物を溶媒に溶解し、得られた前記化合物の溶液を、水等の前記化合物が溶解しない不溶性溶媒、好ましくは陰イオン界面活性剤等の分散剤を含有する前記不溶性溶媒に、この不溶性溶媒を攪拌しながら滴下することによって生成することができる。前記一体成形物は、前記化合物によって所定の形状の多孔質体を形成することによって製造することができる。このような製造方法としては、例えば前記化合物の溶液に、前記不溶性溶媒を分散させ、又は気泡を分散させた状態で溶媒を留去又は置換する方法が挙げられる。【００２６】
担体とこの担体に担持された前記多糖誘導体とからなる光学異性体用分離剤（以下、「担持型分離剤」ともいう）では、前記担体は、前記多糖誘導体を担持し、前記カラムにおいて固定相を形成することができるものであれば特に限定されない。このような担体としては、クロマトグラフィーで用いられている無機及び有機の公知の担体を用いることができる。担体は、光学異性体の分離効率を高める観点から、多孔質体であることがより好ましい。【００２７】
前記担体としては、例えばポリスチレン、ポリアクリルアミド、ポリアクリレート、及びこれらの誘導体等の多孔質有機担体；シリカ、アルミナ、マグネシア、ガラス、カオリン、酸化チタン、ケイ酸塩、ヒドロキシアパタイト等の多孔質無機担体；等が挙げられる。【００２８】
前記担持型分離剤における多糖誘導体には前述した多糖誘導体が用いられる。多糖誘導体は、多糖誘導体と担体との間の化学吸着や物理吸着、多糖誘導体と担体との間の、直接又は他の化合物を介しての化学結合等によって担体に担持される。多糖誘導体の担体への担持は、多糖誘導体及び必要に応じて他の化合物を含む溶液に担体を浸漬し、必要に応じて前記他の化合物を反応させ、溶液中の溶媒を留去するか、溶液中の溶媒を他の溶媒に置換する等の公知の方法によって行うことができる。【００２９】
前記担持型分離剤には、担持型分離剤全体に対する多糖誘導体の担持量が５０質量％以上である担持型分離剤が用いられる。前記担持量が５０質量％よりも少ないと、光学異性体の十分な生産性が得られないことがある。前記担持量は、光学異性体の生産性をさらに高める観点から、６０質量％以上がより好ましく、８０質量％以上であることがより一層好ましい。【００３０】
前記多糖誘導体の担持量は、担体に担持された多糖誘導体に、化学吸着や直接又は他の化合物を介しての化学結合により、さらに多糖誘導体を結合することによって調整することができる。また、前記多糖誘導体の担持量は、質量分析；担持型分離剤の断面の観察における、担体上に担持されている多糖誘導体の層厚の測定；多糖誘導体又は担体に特有の元素の元素分析；等によって求めることができる。【００３１】
本発明の分離方法は、前述した光学異性体用分離剤を有するカラムを用いる以外は、通常の超臨界流体クロマトグラフィーと同様に行うことができる。光学異性体用分離剤のカラム管への充填や収納も、光学異性体用分離剤の形態に応じて公知の分離剤と同様に行うことができる。【００３２】
以下に、本発明の一実施の形態を示す。まず、本発明の分離方法に用いられる超臨界流体クロマト分取装置を説明する。【００３３】
前記超臨界流体クロマト分取装置は、図１に示すように、高圧の二酸化炭素が充填されているガス供給手段としてのボンベ１と、高圧の二酸化炭素を冷却して液化するための熱交換器２と、熱交換器２で生成した二酸化炭素の液化ガスを送液するためのポンプ３と、ポンプ３で送られる液化ガスに溶媒タンク４から供給される溶媒を供給するためのポンプ５と、前記液化ガスと前記溶媒との混合溶媒を加熱して前記液化ガスを超臨界流体にするための熱交換器６と、生成した超臨界流体と前記溶媒との混合物である移動相に、光学異性体の混合物を含有する試料を注入するための注入装置７と、注入された試料中の光学異性体を分離するためのカラム８と、カラム８を通った移動相中の光学異性体を検出する検出器９と、ポンプ３から検出器９までの系内の圧力を所定の圧力に保つための圧力調整装置である背圧弁１０と、背圧弁１０を通過した移動相を気液分離するための複数の気液分離装置１１と、気液分離させた液を収容する槽１２と、気液分離させたガスからさらに液体を除去するための精製装置１３と、精製装置１３でガスから除去された液を収容する槽１４とを有する。【００３４】
ボンベ１、熱交換器２、ポンプ３、熱交換器６、注入装置７、カラム８、検出器９、及び背圧弁１０は、管で直列に接続されている。気液分離装置１１は、背圧弁１０及び精製装置１３に対して並列に管で接続されている。一方で、溶媒タンク４とポンプ５とは管で接続されており、ポンプ５は、ポンプ３と熱交換器６とを接続する管に、管で接続されている。各気液分離装置１１と各槽１２、及び精製装置１３と槽１４も、それぞれ管で接続されている。【００３５】
ボンベ１と熱交換器２との間には、ボンベ１から所定の圧力で二酸化炭素を放出する圧力調整弁１６が設けられている。熱交換器２とポンプ３との間には、熱交換器２で生成した液化ガスを受けるバッファタンク１８が設けられている。また、カラム８は、カラム８内を所定の温度に調整するためのカラムオーブン１９に収容されている。【００３６】
背圧弁１０と各気液分離装置１１との間には、背圧弁１０からの移動相の供給先を選択できるように、それぞれの気液分離装置１１に対応してバルブ２０が設けられている。各気液分離装置１１と精製装置１３との間には、精製装置１３側から各気液分離装置１１へのガスの逆流を防止するための逆止弁２１が、それぞれの気液分離装置１１に対応して設けられている。【００３７】
ポンプ３及び５は定量的に送液できるポンプである。カラム８は、前記多糖誘導体からなる光学異性体用分離剤又は前記担持型分離剤が充填されたカラムである。背圧弁１０は、背圧弁１０のカラム８側、すなわちポンプ３及び５から背圧弁１０まで（背圧弁１０の一次側）の系の圧力を一定の圧力（例えば２０ＭＰａ）に維持する弁である。【００３８】
前記超臨界流体クロマト分取装置は、図示しないが、検出器９での検出結果に応じたバルブ２０の開閉をさらに制御する制御装置をさらに有している。また、前記超臨界流体クロマト分取装置では、図示しないが、これらのほかにも、バルブ、逆止弁、安全弁等の弁や、圧力計、温度計、流量計等の各種検出手段、ヒータやブラインチラー、アキュムレータ等の周辺機器が適所に設けられている。【００３９】
前記超臨界流体クロマト分取装置において、圧力調整弁１６を調整すると、所定の圧力（例えば４ＭＰａ）でボンベ１から二酸化炭素が熱交換器２に供給される。二酸化炭素は、熱交換器２において冷却されて液化する。【００４０】
熱交換器２で生成した二酸化炭素の液化ガスは、バッファタンク１８に収容され、ポンプ３によって熱交換器６に供給される。熱交換器６に供給される液化ガスには、溶媒タンク４からポンプ５によって送られてきた低級アルコール等の有機溶媒が供給され、前記液化ガスと前記有機溶媒とが混合し、この混合溶媒が熱交換器６に供給される。【００４１】
熱交換器６では、前記混合溶媒が加熱され、混合溶媒中の液化ガスが超臨界流体となる。また、この超臨界流体と前記溶媒とが混合してなる移動相は、カラムオーブン１９で設定されているカラム８の温度（例えば４０℃）に調整される。温度が調整された移動相には、注入装置７から、光学異性体の混合溶液が試料として注入される。【００４２】
注入装置７から注入された試料はカラム８に送られ、試料中に含まれる光学異性体の混合物は、カラム８の通過に伴って分けられる。【００４３】
カラム８を通過した移動相中の光学異性体は検出器９によって検出される。検出器９を通過した移動相は背圧弁１０に送られる。背圧弁１０での通過に伴い移動相の圧力は低減する。一方で、前記制御装置は、検出器９での検出結果に応じて所定のバルブ２０を開き、その他のバルブ２０を閉じる。したがって、背圧弁１０を通過した移動相は、所定の気液分離装置１１に供給される。【００４４】
気液分離装置１１では、供給された移動相を気液分離し、超臨界流体を構成していた二酸化炭素の多くは気相として移動相から放出され、光学異性体を含有する有機溶媒が液相として槽１２に収容される。槽１２に収容された有機溶媒を解圧し、又はさらに減圧濃縮することにより、前記光学異性体が取り出される。【００４５】
移動相から放出された二酸化炭素のガスは、精製装置１３に送られる。精製装置１３では、例えば気液分離装置１１と同様に、供給された二酸化炭素ガスを気液分離する。これにより二酸化炭素ガスと二酸化炭素ガス中の少量の有機溶媒とが分離される。二酸化炭素ガスは例えば外気に放出され、分離した有機溶媒は槽１４に収容される。【００４６】
以後、検出器９での検出結果に応じてバルブ２０の開閉が適宜行われ、試料中の光学異性体が取り分けられる。なお、精製装置１３から気液分離装置１１へのガスの逆流や、一方の気液分離装置１１から他方の気液分離装置１１へのガスの流入は、逆止弁２１によって防止される。【００４７】
前述した超臨界流体クロマトグラフィーでは、前記多糖誘導体の含有量が５０質量％以上の光学異性体用分離剤を有するカラムを用いることから、二酸化炭素の超臨界流体と有機溶媒との混合溶媒を移動相とする超臨界流体クロマトグラフィーによる光学異性体の分離において、光学異性体の識別部位が多く、一方で光学異性体を識別部位間において速く移動させることができる。したがって、カラムの単位容積当たりの分離能力が非常に高く、多量の光学異性体を短時間で鮮明に分離することができる。したがって、試料から光学異性体を分離することによって光学異性体を工業的に製造する場合において、高い生産性で光学異性体を製造することができる。
【実施例】
【００４８】
本発明に用いられるカラムの例として、多糖誘導体のみからなる光学異性体用分離剤及びこれを充填してなるカラムの例を以下に示す。【００４９】
＜光学異性体用分離剤の例１＞
１０ｇのセルロール  トリスベンゾエートのポリマー（以下、「ＯＢポリマー」ともいう）を、５００ｍｌの塩化メチレンと５０ｍｌのｎ−ヘキシルアルコールとの混合溶媒に溶解させ、ＯＢポリマー溶液を得た。【００５０】
一方、１０００ｍｌの精製水に２．５ｇのドデシルベンゼンスルホン酸ナトリウム（東京化成）を溶解させた水溶液を調製した。この水溶液を１５℃に保ち、５００ｒｐｍの攪拌を行いながら、前記水溶液に前記ＯＢポリマー溶液を４．６時間かけて滴下した（滴下速度：２ｍｌ／ｍｉｎ）。【００５１】
滴下終了後、同じ速度の攪拌を保ち、前記水溶液の温度を４０℃とし、窒素ガスを流して塩化メチレンを留去した。その後静置し、前記水溶液中からＯＢポリマーの粒子を得た。【００５２】
得られたＯＢポリマーの粒子を２００ｍｌのメタノールに投入し、静置し、上澄み液のデカント除去を行った。この操作を数回繰り返した。【００５３】
メタノール中に沈殿したＯＢポリマーの粒子をＧ４グラスフィルタにより濾取し、３００ｍｌの水で水洗し、次いでメタノール、さらにｎ−ヘキサンと２−プロパノールとの混合溶媒（以下、単に「Ｈ／Ｉ溶媒」ともいう。体積比はｎ−ヘキサン（Ｈ）／２−プロパノール（Ｉ）＝９／１）で順次洗浄し、アスピレータで十分に引き、ＯＢポリマーの粒子を得た（収量：９．０７ｇ、収率：９１％）。【００５４】
得られたＯＢポリマーの粒子をＨ／Ｉ溶媒（体積比：Ｈ／Ｉ＝９／１）に投入し、これに超音波を約３０分間照射した後、開き目７５μｍのメッシュに、さらに開き目３０μｍのメッシュに通してＯＢポリマーの粒子を分級した。分級結果を以下に示す。
分級１：＞７５μｍ          収量：０．０３ｇ（収率：０．３％）
分級２：７５〜３０μｍ      収量：＜０．０１ｇ（収率：−）
分級３：＜３０μｍ          収量：９．０４ｇ（収率：９０％）【００５５】
前記分級３をエタノールに投入し、攪拌後、３０分間静置し、上澄み液のデカント除去を行った。この操作を数回繰り返し、Ｇ４グラスフィルタにより濾取して光学異性体用分離剤１を得た。【００５６】
＜カラムの例１＞
４．０ｇの前記光学異性体用分離剤１をｎ−ヘキサンに投入して分散し、得られた分散液をメッシュ（＃４００）に通し、スラリー法によってステンレススチールカラム管（管径：０．４６ｍｍ、長さ：２５ｃｍ）に１００ｋｇｆ／ｃｍ2（９．８ＭＰａ）で定圧パッキングを行い、カラム１を得た。【００５７】
＜光学異性体用分離剤の例２＞
１０ｇのセルロール  トリス（フェニルカルバメート）のポリマー（以下、「ＯＣポリマー」ともいう）を、５００ｍｌの塩化メチレンと６０ｍｌのアセトンとの混合溶媒に溶解させ、ＯＣポリマー溶液を得た。【００５８】
一方、１０００ｍｌの精製水に５．０ｇのドデシルベンゼンスルホン酸ナトリウム（東京化成）を溶解させた水溶液を調製した。この水溶液を１５℃に保ち、５００ｒｐｍの攪拌を行いながら、前記水溶液に前記ＯＣポリマー溶液を４．７時間かけて滴下した（滴下速度：２ｍｌ／ｍｉｎ）。【００５９】
滴下終了後、同じ速度の攪拌を保ち、前記水溶液の温度を４０℃とし、窒素ガスを流して塩化メチレンを留去した。その後静置し、前記水溶液中からＯＣポリマーの粒子を得た。【００６０】
得られたＯＣポリマーの粒子を約１００ｍｌの精製水に投入し、静置し、上澄み液のデカント除去を行った。この操作を数回繰り返した。【００６１】
精製水中に沈殿したＯＣポリマーの粒子をＧ４グラスフィルタにより濾取し、２００ｍｌの水で水洗し、次いでメタノール、さらにＨ／Ｉ溶媒（体積比：Ｈ／Ｉ＝９／１）で順次洗浄し、アスピレータで十分に引き、真空乾燥（８０℃、３時間）を行い、ＯＣポリマーの粒子を得た（収量：７．４６ｇ、収率：７５％）。【００６２】
得られたＯＣポリマーの粒子をＨ／Ｉ溶媒（体積比：Ｈ／Ｉ＝９／１）に投入し、これに超音波を約３０分間照射した後、開き目７５μｍのメッシュに、さらに開き目３０μｍのメッシュに通してＯＣポリマーの粒子を分級し、光学異性体用分離剤２（分級３）を得た。分級結果を以下に示す。
分級１：＞７５μｍ          収量：０．０８ｇ（収率：０．８％）
分級２：７５〜３０μｍ      収量：＜０．７ｇ（収率：７％）
分級３：＜３０μｍ          収量：６．６８ｇ（収率：６７％）【００６３】
＜カラムの例２＞
４．０ｇの前記光学異性体用分離剤２をＨ／Ｉ溶媒（体積比：Ｈ／Ｉ＝１／１）に投入して分散し、得られた分散液をメッシュ（＃４００）に通し、スラリー法によってステンレススチールカラム管（管径：０．４６ｍｍ、長さ：２５ｃｍ）に１５０ｋｇｆ／ｃｍ2（１４．７ＭＰａ）で定圧パッキングを行い、カラム２を得た。【００６４】
＜光学異性体用分離剤の例３＞
１０ｇのセルロール  トリス（３，５−フェニルカルバメート）のポリマー（以下、「ＯＤポリマー」ともいう）を、５００ｍｌの塩化メチレンと６０ｍｌのアセトンとの混合溶媒に溶解させ、ＯＤポリマー溶液を得た。【００６５】
一方、１０００ｍｌの精製水に１．０ｇのドデシルベンゼンスルホン酸ナトリウム（東京化成）を溶解させた水溶液を調製した。この水溶液を１５℃に保ち、５００ｒｐｍの攪拌を行いながら、前記水溶液に前記ＯＤポリマー溶液を５．０時間かけて滴下した（滴下速度：２ｍｌ／ｍｉｎ）。【００６６】
滴下終了後、同じ速度の攪拌を保ち、前記水溶液の温度を４０℃とし、窒素ガスを流して塩化メチレンを留去した。その後静置し、上澄み液をデカントにより除去し、約５０ｍｌの精製水を加えて静置し、上澄み液のデカント除去を行った。この操作を数回繰り返した。【００６７】
精製水中に沈殿したＯＤポリマーの粒子をＧ４グラスフィルタにより濾取し、３００ｍｌの水で水洗し、次いでエタノールで洗浄し、アスピレータで十分に引き、真空乾燥（８０℃、＞３時間）を行い、ＯＤポリマーの粒子を得た（収量：４．３８ｇ、収率：４４％）。【００６８】
得られたＯＤポリマーの粒子をＨ／Ｉ溶媒（体積比：Ｈ／Ｉ＝９／１）に投入し、これに超音波を約３０分間照射した後、開き目７５μｍのメッシュに、さらに開き目３０μｍのメッシュに通してＯＤポリマーの粒子を分級し、光学異性体用分離剤３（分級２）を得た。分級結果を以下に示す。
分級１：＞７５μｍ          収量：１．０５ｇ（収率：１１％）
分級２：７５〜３０μｍ      収量：３．３３ｇ（収率：３３％）
分級３：＜３０μｍ          収量：−【００６９】
＜カラムの例３＞
４．５ｇの前記光学異性体用分離剤３をＨ／Ｉ溶媒（体積比：Ｈ／Ｉ＝９／１）に投入して分散し、得られた分散液をメッシュ（＃４００）に通し、スラリー法によってステンレススチールカラム管（管径：０．４６ｍｍ、長さ：２５ｃｍ）に１００ｋｇｆ／ｃｍ2（９．８ＭＰａ）で定圧パッキングを行い、カラム３を得た。【００７０】
＜実施例１＞
前述したように得たポリマーの粒子からなる光学異性体用分離剤を収容してなるカラム１〜３のうち、ＯＢポリマーの粒子からなる光学異性体用分離剤１を収容するカラム１を、超臨界流体クロマトグラフィーに用いて、光学異性体を分離した。分離サンプルには、トランス−スチルベンオキシドのメタノール溶液を用い、下記の分離条件でトランス−スチルベンオキシドの光学分割を行った。この光学分割で得られたクロマトグラフを図２に示す。【００７１】
(分離条件)
移動相      ：ＣＯ2／メタノール＝９０／１０（ｖ／ｖ）
流量        ：３．０ｍＬ／ｍｉｎ．
圧力        ：１５ＭＰａ
カラム温度  ：２５℃
検出        ：ＵＶ  ２３０ｎｍ
カラムサイズ：０．４６ｍｍＩ．Ｄ．×２５０ｍｍＬ
注入量      ：１０μｇ
（但し、注入量は、分離サンプル中のトランス−スチルベンオキシドの光学異性体の混合物の質量である。）【００７２】
図２から明らかなように、超臨界流体クロマトグラフィーに、ＯＢビーズを充填してなるカラム１を用いることによって、トランス−スチルベンオキシドの光学異性体を短時間で鮮明に分割することができる。【００７３】
＜比較例１＞
担体としてのシリカ粒子と、このシリカ粒子に担持されたＯＢポリマーとを有する担持型の光学異性体用分離剤を充填した比較用カラムを用いる以外は、実施例１と同様にトランス−スチルベンオキシドの光学分割を行った。前記担持型の光学異性体用分離剤は、ＯＢポリマーの溶液にシリカ粒子を浸漬させた後に乾燥させる公知の方法に基づいて製造した。前記担持型の光学異性体用分離剤におけるＯＢポリマーの含有量は２０質量％であった。この光学分割で得られたクロマトグラフを図３に示す。【００７４】
図３から明らかなように、実施例１と同じ条件では、超臨界流体クロマトグラフィーに比較用カラムを用いても、トランス−スチルベンオキシドの光学異性体を短時間で鮮明に分割することができる。【００７５】
＜実施例２＞
検出波長を２５４ｎｍに変え、さらに注入量を４００μｇ、５００μｇ及び７００μｇに変える以外は、実施例１と同じ条件でトランス−スチルベンオキシドの光学分割を行った。この光学分割で得られたクロマトグラフを図４〜６に示す。【００７６】
図４〜６から明らかなように、ＯＢビーズを充填してなるカラム１を超臨界流体クロマトグラフィーに用いたトランス−スチルベンオキシドの光学分割では、上記のように注入量が増えても、トランス−スチルベンオキシドの光学異性体のそれぞれのピークが鮮明に、かつ短時間に検出される。【００７７】
＜比較例２＞
比較用カラムを用いる以外は、実施例２と同じ条件でトランス−スチルベンオキシドの光学分割を行った。この光学分割で得られたクロマトグラフを図７〜９に示す。【００７８】
図７〜９から明らかなように、ＯＢポリマーをシリカ粒子に担持させた担持型の光学異性体用分離剤を充填してなる比較用カラムを超臨界流体クロマトグラフィーに用いたトランス−スチルベンオキシドの光学分割では、５００μｇの混合物を注入すると検出されるピークの形状に乱れが生じ、７００μｇの混合物を注入すると検出されるピークの形状の乱れがさらに顕著となった。【００７９】
これらの例から明らかなように、多糖誘導体のビーズを充填してなるカラムを用いた超臨界流体クロマトグラフィーによる光学分割は、従来の担持型の光学異性体用分離剤を充填してなるカラムを用いた超臨界流体クロマトグラフィーによる光学分割に比べて、より多量の光学異性体を一度に分離することができる。そして、光学異性体の分離によって光学異性体を製造する場合では、原料となる光学異性体の混合物の一回当たりの注入量（負荷量）を増やすことができ、より高い生産性で光学異性体を製造することができる。
【産業上の利用の可能性】
【００８０】
本発明では、移動相に超臨界流体を含む。超臨界流体は、密度は液体に近く、拡散係数は気体に近く液体の１００倍程度ある。したがって超臨界流体を含む移動相は、従来の高速液体クロマトグラフィーでの移動相に比べて、光学異性体用分離剤の間における光学異性体の移動を十分に速くすることができる。したがって、前記多糖誘導体の含有量が５０質量％以上という、識別部位の多い光学異性体用分離剤を用いても、光学異性体の良好な分離を行うことができる。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【国際調査報告】
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