(57)【要約】  本発明は、式Iにしたがう化合物であって、式中、R1、R2、及びCyは本明細書に定義されるとおりであるもの、及びJAK阻害活性を有する第二の化合物を含む組成物を開示する。本発明は、本発明の化合物を投与することによる、炎症性疾患、自己免疫疾患、増殖性疾患、アレルギー性疾患、移植拒絶反応、軟骨代謝回転の障害を含む疾患、先天性軟骨奇形、及び／又はIL6若しくはインターフェロンの分泌過多と関連付けられた疾患の予防及び/又は治療のための、組成物、その製造方法、それを含む医薬組成物、及びそれを使用する治療方法に関する。【化１】2020507612.tif 000088【選択図】図１
2020507612.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
a)  式Iにしたがう化合物：
【化１】
2020507612.tif 000085
（式中
Cyは
−  1個以上の独立に選択されるR3により任意に置換されている単環式C3-7シクロアルキル、又は
−  N、S、及びOから独立に選択される1個又は2個のヘテロ原子を含み、1個以上の独立に選択されるR3により任意に置換されている4乃至7員単環式ヘテロシクロアルキルであり；
R1は
−  H、
−  -SO3H、
−  -P(=O)(OH)2、
−  C1-4アルキル、
−  -C(=O)-(N、S、及びOから独立に選択される1個又は2個のヘテロ原子を含む4乃至7員単環式ヘテロシクロアルキル)、又は
−  C1-6アルキルが1個以上の独立に選択されるR4基により任意に置換されている-C(=O)C1-6アルキルであり；
R2は、H又はC1-4アルキルであり；
各R3は：
−  OH、
−  =O、
−  ハロ、及び
−  C1-4アルキル
から独立に選択され；
各R4は：
−  -NR5aR5b、
−  -C(=O)OH、
−  N、S、及びOから独立に選択される1個又は2個のヘテロ原子を含み、1個以上の独立に選択されるC1-4アルキルにより任意に置換されている4乃至7員単環式ヘテロシクロアルキル、及び
−  -NHC(=O)-C1-4アルキル-NH2
から独立に選択され；且つ
R5a及びR5bは、独立に、H又はC1-4アルキルである）;
又は、その医薬として許容し得る塩若しくは溶媒和物又は溶媒和物の塩；及び
b)  JAK阻害活性を有する第二の化合物
を含む組成物。
【請求項２】
式Iにしたがう化合物又はその医薬として許容し得る塩において、Cyが、1個又は2個の独立に選択されるR3により置換されている単環式C3-7シクロアルキルである、請求項１にしたがう組成物。
【請求項３】
式Iにしたがう化合物又はその医薬として許容し得る塩において、Cyが、それぞれ1個又は2個の独立に選択されるR3により任意に置換されているテトラヒドロピラニル又はテトラヒドロチオピラニルである、請求項１又は２にしたがう組成物。
【請求項４】
式Iにしたがう化合物又はその医薬として許容し得る塩において、R3が、OH、=O、F、及び-CH3から選択される、請求項１乃至３のいずれか一項にしたがう組成物。
【請求項５】
式Iにしたがう化合物又はその医薬として許容し得る塩が、式IIa、IIb、IIc、IId、IIe又はIIfにしたがう、請求項１にしたがう組成物：
【化２】
2020507612.tif 000086
。
【請求項６】
式I乃至IIfのいずれか一つにしたがう化合物又はその医薬として許容し得る塩において、R1が、H、-CH3、-SO3H、又は-P(=O)(OH)2である、請求項１乃至５のいずれか一項にしたがう組成物。
【請求項７】
式I乃至IIfのいずれか一つにしたがう化合物又はその医薬として許容し得る塩において、R1が-C(=O)C1-6アルキルであり、ここで、C1-6アルキルは、1個又は2個の独立に選択されるR4により置換されている、請求項１乃至５のいずれか一項にしたがう組成物。
【請求項８】
式I乃至IIfのいずれか一つにしたがう化合物又はその医薬として許容し得る塩において、R1が-C(=O)C1-6アルキルであり、ここで、C1-6アルキルは、1個又は2個の独立に選択される-C(=O)OH、-NH2、-NHCH3、又は-N(CH3)2により置換されている、請求項１乃至５のいずれか一項にしたがう組成物。
【請求項９】
式I乃至IIfのいずれか一つにしたがう化合物又はその医薬として許容し得る塩において、R2がH又は-CH3である、請求項１乃至８のいずれか一項にしたがう組成物。
【請求項１０】
式Iにしたがう化合物が、
6-[6-[2-(2-ヒドロキシ-エトキシ)-エトキシ]-5-(テトラヒドロ-ピラン-4-イルアミノ)-イミダゾ[4,5-b]ピリジン-3-イル]-ニコチノニトリル、及び
(S)-2-アミノ-3-メチル-酪酸2-{2-[3-(5-シアノ-ピリジン-2-イル)-5-(テトラヒドロ-ピラン-4-イルアミノ)-3H-イミダゾ[4,5-b]ピリジン-6-イルオキシ]-エトキシ}-エチルエステル
から選択される、請求項1にしたがう組成物。
【請求項１１】
JAK阻害化合物がJAK1阻害剤である、請求項1乃至10のいずれか一項にしたがう組成物。
【請求項１２】
JAK阻害化合物Iが、式XXa又はXXbにしたがう、請求項1乃至10のいずれか一項にしたがう組成物：
【化３】
2020507612.tif 000087
。
【請求項１３】
医薬として有効な量の請求項1乃至12のいずれか一項にしたがう組成物、及び医薬として許容し得る担体を含む医薬組成物。
【請求項１４】
さらなる治療剤を含む、請求項13にしたがう医薬組成物。
【請求項１５】
さらなる治療剤が、炎症性疾患、自己免疫疾患、増殖性疾患、アレルギー性疾患、移植拒絶反応、軟骨代謝回転の障害を含む疾患、先天性軟骨奇形、及び／又はIL6若しくはインターフェロンの分泌過多と関連付けられた疾患の予防及び／又は治療のための薬剤である、請求項14にしたがう医薬組成物。
【請求項１６】
医薬において使用するための、請求項1乃至12のいずれか一項にしたがう組成物又は請求項13乃至15のいずれか一項にしたがう医薬組成物。
【請求項１７】
炎症性疾患、自己免疫疾患、増殖性疾患、アレルギー性疾患、移植拒絶反応、軟骨代謝回転の障害を含む疾患、先天性軟骨奇形、及び／又はIL6若しくはインターフェロンの分泌過多と関連付けられた疾患の予防及び／又は治療において使用するための、請求項1乃至12のいずれか一項にしたがう組成物又は請求項13乃至15のいずれか一項にしたがう医薬組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
（発明の分野）
本発明は、炎症性疾患、自己免疫疾患、増殖性疾患、アレルギー性疾患、移植拒絶反応、軟骨代謝回転の障害を含む疾患、先天性軟骨奇形、及び／又はIL6若しくはインターフェロンの分泌過多と関連付けられた疾患の予防及び/又は治療に有用な組成物に関する。具体的な側面においては、当該組成物は、IRAK阻害活性を有する第一の化合物、及びJAK阻害活性を有する第二の化合物を含む。本発明は、本発明の組合せを含む医薬組成物、及び本発明の組合せを投与することによる、炎症性疾患、自己免疫疾患、増殖性疾患、アレルギー性疾患、移植拒絶反応、軟骨代謝回転の障害を含む疾患、先天性軟骨奇形、及び／又はIL6若しくはインターフェロンの分泌過多と関連付けられた疾患を含む疾患の予防及び/又は治療のための方法も提供する。
【背景技術】
【０００２】
（発明の背景）
キナーゼは、細胞生理機能の多くの必須プロセス、例えばタンパク質リン酸化に関与している。特に、プロテイン・キナーゼ及び脂質キナーゼは、細胞の活性化、成長、分化、及び生存に関与している。プロテイン・キナーゼは、優先的にチロシン残基をリン酸化するものと、優先的にセリン残基及び／又はスレオニン残基をリン酸化するものとに分けられ得る。
【０００３】
長年にわたり、キナーゼは、抗炎症性薬物の開発のための非常に重要な標的となるようになってきている（Cohenの文献、2009）。特に、インターロイキン-1受容体関連キナーゼ（IRAK）、及びより具体的にはIRAK-4は、炎症及び自己免疫疾患において、ある種の役割を果たすとして特定されていた（Ringwood及びLiの文献、2008；Wangらの文献、2009)。
【０００４】
IRAKは多くの細胞型中で発現され、且つインターロイキン-1（IL-1）及びToll様受容体（TLR）を含む種々の細胞受容体からのシグナルを媒介している。IRAKファミリー中に、四つのメンバー、すなわちIRAK1乃至4が特定されており（Wangらの文献、2009）、且つそのファミリーの一番新しいメンバーであるIRAK-4は魅力的な治療標的である（Liらの文献、2002）。実際に、IRAK-4は、IL-1受容体及びTLR（TLR3は除く）のすぐ下流で（early downstream）活性化され、IRAK-1及びIRAK-2の迅速な活性化を通してシグナル伝達を開始させ、自然免疫応答をもたらす主要なプロテイン・キナーゼであると考えられている。また、IL-18及びIL-33のような他のインターロイキンは、シグナル伝達に関してIRAK-4に依存している。したがって、これらのサイトカインが病原性プロセスに関与している疾患（例えば、線維症（Liらの文献、2014；McHedlidzeらの文献、2013；Rankinらの文献、2010）及びアトピー性皮膚炎（Salimiらの文献、2013））は、IRAK-4阻害剤による治療の潜在的な標的疾患である。
【０００５】
野生型の代りに不活性なIRAK-4変異体を発現しているマウスにおいて、数種のTLRアゴニストにより誘発される敗血症ショックに対する完全な耐性並びにIL-1に対する低下した応答が観察される。さらに、野生型の代りに不活性なIRAK-4変異体を発現するマウスは、関節リウマチ（Koziczak-Holbroらの文献、2009）及び多発性硬化症（Staschkeらの文献、2009）のような自己免疫疾患のいくつかのモデルにおいて、部分的に保護されている。興味深いことに、関節リウマチ及び全身性エリテマトーデス患者の血清が、IRAK-4依存的に形質細胞様樹状細胞を活性化することが示された（Chiangらの文献、2011）。最後に、再発性化膿性細菌感染が、IRAK-4不活性につながる遺伝子欠損を患っている小児に観察された。これらの化膿性感染は、不活性化しているIRAK-4変異を保持する成人には観察されないので、IRAK-4シグナル伝達系は、成人の自然免疫の特定の局面には不必要であるようにみえる。
【０００６】
自然免疫系のシグナル伝達成分の調節不全も、癌の開始及び進行における重要な因子としてますます認識されている（Rhyasen及びStarczynowskiの文献、2015）。実際に、IL-1が、腫瘍細胞成長、血管新生、浸潤、薬剤耐性、及び転移において直接的な役割を果たしていることの証拠がある（Carmiらの文献、2013；Vidal-Vanaclochaらの文献、2000）。さらに、TLRは、腫瘍細胞の状況に応じて多数の腫瘍形成促進応答に関与している。IL-1受容体及びTLRシグナル伝達の必須メディエーターとして、IRAKファミリーキナーゼは、期待の持てる癌薬物標的である。さらに、いくつかの癌タイプが、IRAK-4を活性化するTLR及びIL-1Rの下流のアダプター分子、MYD88の活性化された形態に依存性であることが示されている。活性化MYD88変異は、例えば、びまん性大細胞型B細胞リンパ腫（DLBCL）（Ngoらの文献、2011）、及びワルデンシュトレーム・マクログロブリン血症（Treonらの文献、2012）において特定されている。別な報告は、腫瘍学の分野、特にT細胞急性リンパ芽球性白血病（T-ALL）におけるIRAK-4の役割を支持している（Liらの文献、2015）。IRAK-4の薬理学的阻害は、化学療法剤に対するT-ALLの感受性を高めることが示されている。
【０００７】
IL-33が、線維性疾患及びアレルギー性疾患、具体的には喘息及びアトピー性皮膚炎の発生において、ある役割を果たすことが示されている（Nabeの文献、2014）。このサイトカインはIRAK-4依存性経路によりシグナル伝達するので（Kroegerらの文献、2009）、これらの疾患もIRAK-4阻害剤の標的であり得る。
【０００８】
最後に、いくつかの自己炎症性疾患が、IL-1活性に依存性であることが示され、且つその結果、IL-1遮断生物製剤は、これらの患者にとってのいくらかの利点を示す。痛風、若年性特発性関節炎、マックル・ウェルズ病、家族性地中海熱、ベーチェット病、成人発症スティル病は、そのような自己炎症性疾患の例である（Dinarelloらの文献、2012）。
【０００９】
小分子によるサイトカインシグナル伝達の阻害は、免疫炎症性疾患において疾患の予後を減少させることに役立ち得る（Sundbergらの文献、2014）。特に、サイトカインは、病原体及び感染に対する生命体の防衛においてある種の役割を果たし得る。しかし、免疫炎症性疾患の新たな療法を開発する場合、多数のサイトカイン応答経路の同時の阻害は免疫系を過度に弱め得るので、獲得免疫及び／又は自然免疫応答を損なわずに阻害され得る経路に関与する標的を選択することが一方で重大である。しかし、キナーゼに対する薬物選択性は達成が困難であり（Bainらの文献、2003；Fabianらの文献、2005）、しかし特に慢性治療の状況では、オフターゲット関連副作用を避けるために非常に望ましい（Broekmanらの文献、2011；Dy及びAdjeiの文献、2013；Force及びKolajaの文献、2011）。
【００１０】
特に、IL-1遮断剤（アナキンラ）及びTNFαブロッカー（エタネルセプト）の同時使用が、好中球減少症及び感染のリスク増大をもたらすことが最近示された（Genoveseらの文献、2003、EMEA public statement EMEA/31631/02, 05 Feb 2003）。この知見は、新たな医薬を開発する際に選択性が重要な要素であることを強調しており、且つしたがって、他のシグナル伝達経路に影響を与えずに、あるシグナル伝達経路を選択的に調節できる化合物、特に、TNFαシグナル伝達経路に影響を与えずにIL-1応答を選択的に調節できる化合物を開発することが望ましいであろう。
【００１１】
ヤーヌス・キナーゼ（JAK）は、膜受容体からシグナル伝達されるサイトカインをSTAT転写因子に形質導入する細胞質チロシン・キナーゼである。四種のJAKファミリー・メンバーは、JAK1、JAK2、JAK3及びTYK2と記載される。サイトカインの、その受容体への結合の際、JAKファミリー・メンバーは、互いに、自己及び／又はトランスリン酸化し、その後STATのリン酸化が生じ、それは、その後、転写を調節するように核に移動する。JAK-STAT細胞内シグナル伝達は、EPO、TPO、GH、OSM、LIF、CNTF、GM-CSF及びPRLのような様々なサイトカイン及び内分泌因子同様、インターフェロン、大部分のインターロイキンを供給する（Vainchenker W.らの文献(2008)）。
【００１２】
遺伝モデル及び小分子JAK阻害剤研究の組合せが、いくつかのJAKの治療可能性を明らかとした。JAK3は、マウス及びヒトの遺伝的特徴によって、免疫抑制標的であるとして確認されている（O'Shea J.らの文献(2004)）。JAK3阻害剤は、最初は臓器移植拒絶反応のために、しかしその後は、リウマチ性関節炎(RA)、乾癬及びクローン病のような他の免疫炎症の症状においても、首尾よく臨床開発が考慮された（http://clinicaltrials.gov/）。
【００１３】
TYK2は、ヒト遺伝子及びマウスのノックアウト研究によって確認されている、免疫炎症性疾患のための可能性ある標的である（Levy D. 及びLoomis C.の文献(2007)）。
【００１４】
JAK1は、免疫炎症性疾患領域における新規の標的である。JAK1は、他のJAKと共に異種二量体化され、サイトカインによって駆動される、炎症反応を促進するシグナル伝達を形質導入する。それゆえ、JAK1及び／又は他のJAKの阻害は、様々な範囲の炎症性疾患のためにも、JAKが介在したシグナル変換によって駆動される他の疾患のためにも、治療有用性があることが期待されている。
現在の療法は満足できるものではないので、及びそれゆえ、炎症性疾患、自己免疫疾患、増殖性疾患、アレルギー性疾患、移植拒絶反応、軟骨代謝回転の障害を含む疾患、先天性軟骨奇形、及び／又はIL6若しくはインターフェロンの分泌過多と関連付けられた疾患の予防及び／又は治療において役立ち得る、オフターゲット関連副作用が減少した化合物をさらに特定する必要性が依然として存在する。
【図面の簡単な説明】
【００１５】
(図面の簡単な説明)
【図１】図１は、31日目乃至46日目の期間にわたる、ビヒクル（黒菱形）と比較した、実施例化合物1の1 mg/kgを1日2回（黒三角）、3 mg/kgを1日2回（十字）、10  mg/kgを1日2回（星印）、及び30 mg/kgを1日2回（黒丸）の治療CIAモデルにおける臨床スコアを記載している。
【図２】図２は、31日目乃至41日目の、ビヒクル（黒菱形）と比較した、実施例化合物XXbの7.5 mg/kgを1日2回（黒三角）及び15 mg/kgを1日2回（傾いた十字）、並びに化合物1（30 mg/kgを1日2回）＋化合物XXb（15 mg/kgを1日2回）（黒丸）の治療CIAモデルにおける臨床スコアを記載している。
【発明の概要】
【００１６】
（発明の概要）
本発明は、炎症性疾患、自己免疫疾患、増殖性疾患、アレルギー性疾患、移植拒絶反応、軟骨代謝回転の障害を含む疾患、先天性軟骨奇形、及び／又はIL6若しくはインターフェロンの分泌過多と関連付けられた疾患の予防及び/又は治療において有用な発明の組成物の特定に基づいている。具体的な側面において、当該組成物は、IRAK阻害活性を有する第一の化合物、及びJAK阻害活性を有する第二の化合物を含む。
【００１７】
本発明は、本発明の組合せを含む医薬組成物、及び本発明の組合せを投与することによる、炎症性疾患、自己免疫疾患、増殖性疾患、アレルギー性疾患、移植拒絶反応、軟骨代謝回転の障害を含む疾患、先天性軟骨奇形、及び／又はIL6若しくはインターフェロンの分泌過多と関連付けられた疾患を含む疾患の予防及び/又は治療の方法も提供する。
【００１８】
具体的な側面において、JAK阻害剤は、JAK1阻害活性を有する。より具体的な実施態様において、JAK阻害剤は、JAK1選択的阻害剤である。
【００１９】
他の具体的な側面において、IRAK阻害剤は、IRAK4阻害活性を有する。より具体的な実施態様において、IRAK阻害剤は、IRAK4選択的阻害剤である。
【００２０】
したがって、本発明の第一の側面において、以下の化合物を含む本発明の組成物が提供される：
a)  式Iにしたがう化合物：
【化１】
2020507612.tif 000003
（式中、
Cyは、
−  1個以上の独立に選択されるR3により任意に置換されている単環式C3-7シクロアルキル、又は
−  N、S、及びOから独立に選択される1個又は2個のヘテロ原子を含み、1個以上の独立に選択されるR3により任意に置換されている4乃至7員単環式ヘテロシクロアルキルであり；
R1は
−  H、
−  -SO3H、
−  -P(=O)(OH)2、
−  C1-4アルキル、
−  -C(=O)-(N、S、及びOから独立に選択される1個又は2個のヘテロ原子を含む4乃至7員単環式ヘテロシクロアルキル)、又は
−  C1-6アルキルが1個以上の独立に選択されるR4基により任意に置換されている-C(=O)C1-6アルキルであり；
R2は、H又はC1-4アルキルであり；
各R3は：
−  OH、
−  =O、
−  ハロ、及び
−  C1-4アルキル
から独立に選択され；
各R4は：
−  -NR5aR5b、
−  -C(=O)OH、
−  N、S、及びOから独立に選択される1個又は2個のヘテロ原子を含み、1個以上の独立に選択されるC1-4アルキルにより任意に置換されている4乃至7員単環式ヘテロシクロアルキル、及び
−  -NHC(=O)-C1-4アルキル-NH2
から独立に選択され；且つ
R5a及びR5bは、独立に、H又はC1-4アルキルである）；
又は、その医薬として許容し得る塩若しくは溶媒和物又はその溶媒和物の塩；及び
b)  JAK阻害活性を有する第二の化合物。
【００２１】
具体的な一側面において、本発明の組成物は、炎症性疾患、自己免疫疾患、増殖性疾患、アレルギー性疾患、移植拒絶反応、軟骨代謝回転の障害を含む疾患、先天性軟骨奇形、及び／又はIL6若しくはインターフェロンの分泌過多と関連付けられた疾患の予防及び／又は治療における使用のために提供される。
【００２２】
一側面において、本発明の組合せは、IRAKキナーゼ・ファミリー・メンバー、及びより詳細にはIRAK-4を阻害し得る。
【００２３】
一側面において、本発明の組合せは、JAKキナーゼ・ファミリー・メンバー、及びより詳細にはJAK1を阻害し得る。
【００２４】
さらなる一側面において、本発明の組合せは、IRAK-4及びJAK1への選択性を示し得て、それは、改善された安全性及びより低いオフターゲット関連副作用をもたらし得る。具体的な一側面において、本発明の組合せは、IL-1の選択的阻害剤であり得る。
【００２５】
本発明のなおさらなる一側面において、本発明の組合せは、予想外に、各メンバーが個別的に使用された場合と比べて高められた効能を示すことが示されてもいる。具体的な一側面において、本発明の組合せは、相乗効果を示し得、それは、今度は、本発明の組成物の各成分の用量低減を可能にし得る。これは、効能を維持しつつ不必要な薬物量の摂取を避け、且つしたがって薬物有害事象のリスクを低減するために、好都合であり得る。
【００２６】
さらなる一側面において、本発明は、本発明の組成物、及び医薬担体、賦形剤又は希釈剤を含む医薬組成物を提供する。具体的な一側面において、当該医薬組成物は、本発明の化合物との組合せにおける使用に適する、さらなる治療有効成分をさらに含み得る。より具体的な一側面において、そのさらなる治療有効成分は、炎症性疾患、自己免疫疾患、増殖性疾患、アレルギー性疾患、移植拒絶反応、軟骨代謝回転の障害を含む疾患、先天性軟骨奇形、及び／又はIL6若しくはインターフェロンの分泌過多と関連付けられた疾患の治療のための薬剤である。
【００２７】
さらに、本明細書に開示される医薬組成物及び治療方法において有用な本発明の組成物は、調製及び使用されるときに、医薬として許容され得るものである。
【００２８】
本発明のさらなる一側面において、本発明は、本明細書に列記されるものの中から選択される病態、特に、炎症性疾患、自己免疫疾患、増殖性疾患、アレルギー性疾患、移植拒絶反応、軟骨代謝回転の障害を含む疾患、先天性軟骨奇形、及び／又はIL6若しくはインターフェロンの分泌過多と関連付けられた疾患に罹患している、哺乳動物、特にヒトを治療する方法を提供し、当該方法は、有効量の本明細書に記載されている本発明の医薬組成物又は組合せを投与することを含む。
【００２９】
本発明はまた、本発明の組成物、及び医薬における使用のために適切な医薬担体、賦形剤又は希釈剤を含む医薬組成物を提供する。具体的な一側面において、当該医薬組成物は、炎症性疾患、自己免疫疾患、増殖性疾患、アレルギー性疾患、移植拒絶反応、軟骨代謝回転の障害を含む疾患、先天性軟骨奇形、及び／又はIL6若しくはインターフェロンの分泌過多と関連付けられた疾患の予防及び／又は治療における使用のためのものである。
【００３０】
追加の側面において、本発明は、本明細書において以下に開示される代表的な合成プロトコル及び経路を用いて、本発明の組成物の化合物を合成する方法を提供する。
【００３１】
他の目的及び利点は、次の詳細な説明の考察から、当業者には明らかになるであろう。
【００３２】
本発明の化合物が代謝されて、生体活性のある代謝産物を生じ得ることが認識されるであろう。
【発明を実施するための形態】
【００３３】
（発明の詳細な説明）
（定義）
以下の用語は、それとともに以下に提示される意味を有することが意図されており、及び本発明の説明及び意図される範囲を理解する際に有用である。
【００３４】
化合物、そのような化合物を含む医薬組成物、並びにそのような化合物及び組成物を使用する方法を包含し得る本発明を説明する場合、以下の用語は、存在する場合、特記されない限り、以下の意味を有する。本明細書に記載される場合、以下に定義される部分はいずれも、種々の置換基で置換され得ること、及びそれぞれの定義が、そのような置換部分を以下に示されるようなその範囲内に含むように意図されていることも理解されるべきである。特記されない限り、「置換された」という用語は、以下に示されるように定義されるものとする。「基」及び「ラジカル」という用語は、本明細書で使用される場合、互換的であるとみなされ得ることがさらに理解されるべきである。
【００３５】
「a」及び「an」という冠詞は、本明細書において、当該冠詞の文法上の対象の、一つ又は一つを超える（すなわち、少なくとも一つ）を指すように使用され得る。例として、「アナログ(an analogue)」は、一つのアナログ又は一つを超えるアナログを意味する。
【００３６】
「アルキル」は、明示された数の炭素原子を有する直鎖又は分岐鎖の脂肪族炭化水素を意味する。特定のアルキル基は、1乃至6個の炭素原子又は1乃至4個の炭素原子を有する。分岐されたは、メチル、エチル、又はプロピルのような１個以上のアルキル基が直鎖アルキル鎖に結合されていることを意味する。特定のアルキル基は、メチル（-CH3）、エチル（-CH2-CH3）、n-プロピル（-CH2-CH2-CH3）、イソプロピル（-CH(CH3)2）、n-ブチル（-CH2-CH2-CH2-CH3）、tert-ブチル（-CH2-C(CH3)3）、sec-ブチル（-CH2-CH(CH3)2）、n-ペンチル（-CH2-CH2-CH2-CH2-CH3）、n-ヘキシル（-CH2-CH2-CH2-CH2-CH2-CH3）、及び1,2-ジメチルブチル（-CHCH3)-C(CH3)H2-CH2-CH3）である。特定のアルキル基は1乃至4個の炭素原子を有する。
【００３７】
「アルケニル」は、明示された数の炭素原子を有する一価オレフィン系（不飽和）炭化水素基を指す。特定のアルケニルは、2乃至8個の炭素原子、及びより具体的には2乃至6個の炭素原子を有し、それは直鎖でも分岐されていてもよく、且つ少なくとも一個、特に1乃至2個のオレフィン系不飽和部位を有する。特定のアルケニル基は、エテニル（-CH=CH2）、n-プロペニル（-CH2CH=CH2）、イソプロペニル（-C(CH3)=CH2）等を包含する。
【００３８】
「アルキレン」は、直鎖又は分岐されていてよい、明示された数の炭素原子を、具体的には1乃至6個の炭素原子を、且つより具体的には1乃至4個の炭素原子を有する、二価アルケンラジカル基を指す。この用語は、メチレン（-CH2-）、エチレン（-CH2-CH2-）、又は-CH(CH3)-等のような基によって実例が示される。
【００３９】
「アルキニレン」は、直鎖又は分岐されていてよい、明示された数の炭素原子及び三重結合を、具体的には2乃至6個の炭素原子を、且つより具体的には2乃至4個の炭素原子を有する、二価アルキンラジカル基を指す。この用語は、
-C≡C-、-CH2-C≡C-、及び-C(CH3)H-C≡CH-のような基によって実例が示される。
【００４０】
「アルコキシ」は、アルキル基が明示された数の炭素原子を有する基O-アルキルを指す。具体的には、当該用語は、基-O-C1-6アルキルを指す。具体的なアルコキシ基は、メトキシ、エトキシ、n-プロポキシ、イソプロポキシ、n-ブトキシ、tert-ブトキシ、sec-ブトキシ、n-ペントキシ、n-ヘキソキシ、及び1,2-ジメチルブトキシである。具体的なアルコキシ基は、低級アルコキシ、すなわち1乃至6個の炭素原子を有するものである。さらに具体的なアルコキシ基は、1乃至4個の炭素原子を有する。
【００４１】
「アミノ」はラジカル-NH2を指す。
【００４２】
「アリール」は、親芳香環系の単一の炭素原子からの1個の水素原子の除去により誘導される一価芳香族炭化水素基を指す。具体的には、アリールは、明示された数の環原子を有する、単環式又は縮合多環式の芳香環構造を指す。特に、当該用語は、6乃至10個の環員を含む基を包含する。具体的なアリール基は、フェニル及びナフチルを包含する。
【００４３】
「シクロアルキル」は、明示された数の環原子を有する、単環式、縮合多環式、架橋多環式、又はスピロ環式の非芳香族ヒドロカルビル環構造を指す。シクロアルキルは、3乃至12個の炭素原子、具体的には3乃至10個、より具体的には3乃至7個の炭素原子を有し得る。そのようなシクロアルキル基には、例としては、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロヘキシル、及びシクロヘプチルのような単環構造を包含する。
【００４４】
「シアノ」はラジカル-CNを指す。
【００４５】
「ハロ」又は「ハロゲン」は、フルオロ（F）、クロロ（Cl）、ブロモ（Br）、及びヨード（I）を指す。具体的なハロ基は、フルオロかクロロのいずれかである。
【００４６】
化合物又は化合物上に存在する基を説明するために使用される場合の「ヘテロ」は、当該化合物又は基中の1個以上の炭素原子が窒素、酸素、又は硫黄ヘテロ原子により置き換えられていることを意味する。ヘテロは、1乃至4個、及び具体的には1乃至3個のヘテロ原子、より典型的には1又は2個のヘテロ原子、例えば単一のヘテロ原子を有するアルキル、例えばヘテロアルキル、シクロアルキル、例えばヘテロシクロアルキル、アリール、例えばヘテロアリールなどのような、上述のヒドロカルビル基のいずれにも適用され得る。
【００４７】
「ヘテロアリール」は、O、N及びSから独立に選択される1個以上のヘテロ原子及び明示された数の環原子を含む、単環式又は縮合多環式の芳香環構造を意味する。具体的には、芳香環構造は、5乃至9個の環メンバーを有し得る。ヘテロアリール基は、例えば、5員若しくは6員の単環式環又は、縮合5及び6員環から若しくは2個の縮合6員環から、又はさらなる例として2個の縮合5員環から形成された縮合二環式構造であり得る。各環は、典型的には窒素、硫黄及び酸素から選択される4個までのヘテロ原子を含有し得る。典型的には、ヘテロアリール環は、4個までのヘテロ原子を、より典型的には3個までのヘテロ原子を、より通常には2個まで、例えば単一のヘテロ原子を含有するであろう。一実施態様において、ヘテロアリール環は、少なくとも1個の環窒素原子を含む。ヘテロアリール環中の窒素原子は、イミダゾール若しくはピリジンの場合におけるように塩基性であり得、又は、インドール若しくはピロール窒素の場合におけるように本質的に非塩基性であり得る。一般的に、ヘテロアリール基中に存在する塩基性窒素原子の数は、環のあらゆるアミノ基置換基を含めて、5個未満であろう。
【００４８】
5員単環式ヘテロアリール基の例は、これらに限定されないが、ピロリル、フラニル、チオフェニル、イミダゾリル、フラザニル、オキサゾリル、オキサジアゾリル、オキサトリアゾリル、イソキサゾリル、チアゾリル、イソチアゾリル、ピラゾリル、トリアゾリル及びテトラゾリル基を包含する。
【００４９】
6員単環式ヘテロアリール基の例は、これらに限定されないが、ピリジニル、ピラジニル、ピリダジニル、ピリミジニル及びトリアジニルを包含する。
【００５０】
他の5員環に縮合した5員環を含む二環式ヘテロアリール基の具体例は、これらに限定されないが、イミダゾチアゾリル及びイミダゾイミダゾリルを包含する。
【００５１】
5員環に縮合した6員環を含む二環式ヘテロアリール基の具体例は、これらに限定されないが、ベンゾフラニル、ベンゾチオフェニル、ベンゾイミダゾリル、ベンゾキサゾリル、イソベンゾキサゾリル、ベンズイソキサゾリル、ベンゾチアゾリル、ベンゾイソチアゾリル、イソベンゾフラニル、インドリル、イソインドリル、インドリジニル、プリニル（例えばアデニン、グアニン）、インダゾリル、ピラゾロピリミジニル、トリアゾロピリミジニル、及びピラゾロピリジニル基を包含する。
【００５２】
2個の縮合した6員環を含む二環式ヘテロアリール基の具体例は、これらに限定されないが、キノリニル、イソキノリニル、ピリドピリジニル、キノキサリニル、キナゾリニル、シンノリニル、フタラジニル、ナフチリジニル、及びプテリジニル基を包含する。具体的なヘテロアリール基は、チオフェニル、ピロリル、ベンゾチオフェニル、ベンゾフラニル、インドリル、ピリジニル、キノリニル、イミダゾリル、オキサゾリル及びピラジニルから誘導されるものである。
【００５３】
代表的なヘテロアリールの例は、次のものを包含する：
【化２】
2020507612.tif 000004
（式中、各Yは、>C=O、NH、O及びSから選択される。）。
【００５４】
「ヘテロシクロアルキル」は、O、N、及びSから独立に選択される１個以上のヘテロ原子及び明示された数の環原子を含む、単環式、縮合多環式、スピロ環式、又は架橋多環式の非芳香族完全飽和環構造を意味する。ヘテロシクロアルキル環構造は、4乃至12個の環員、具体的には4乃至10個の環員、及びより具体的には4乃至7個の環員を有し得る。各環は、典型的には窒素、硫黄、及び酸素から選択される、4個までのヘテロ原子を含み得る。典型的には、ヘテロシクロアルキル環は、4個までのヘテロ原子、より典型的には3個までのヘテロ原子、より普通には2個まで、例えば単一のヘテロ原子を含むであろう。ヘテロ環式環の例は、これらに限定されないが、アゼチジニル、オキセタニル、チエタニル、ピロリジニル（例えば、1-ピロリジニル、2-ピロリジニル及び3-ピロリジニル）、テトラヒドロフラニル（例えば、1-テトラヒドロフラニル、2-テトラヒドロフラニル及び3-テトラヒドロフラニル）、テトラヒドロチオフェニル（例えば、1-テトラヒドロチオフェニル、2-テトラヒドロチオフェニル及び3-テトラヒドロチオフェニル）、ピペリジニル（例えば、1-ピペリジニル、2-ピペリジニル、3-ピペリジニル及び4-ピペリジニル）、テトラヒドロピラニル（例えば、4-テトラヒドロピラニル）、テトラヒドロチオピラニル（例えば、4-テトラヒドロチオピラニル)、モルホリニル、チオモルホリニル、ジオキサニル、又はピペラジニルを包含する。
【００５５】
本明細書において使用される時、「ヘテロシクロアルケニル」という用語は、少なくとも1個の二重結合を含む「ヘテロシクロアルキル」を意味する。ヘテロシクロアルケニル基の具体例は、以下の実例中に示されている：
【化３】
2020507612.tif 000005
（式中、各Wは、CH2、NH、O及びSから選択され；各Yは、NH、O、C(=O)、SO2及びSから選択され；及び各Zは、N又はCHから選択される。）。
【００５６】
単環式環の具体例は、以下の実例中に示されている：
【化４】
2020507612.tif 000006
（式中、各W及びYは、-CH2-、-NH-、-O-及び-S-から独立に選択される。）。
【００５７】
縮合二環式環の具体例は、以下の実例中に示されている：
【化５】
2020507612.tif 000007
（式中、各W及びYは、-CH2-、-NH-、-O-及び-S-から独立に選択される。）。
【００５８】
架橋二環式環の具体例は、以下の実例中に示されている：
【化６】
2020507612.tif 000008
（式中、各W及びYは、-CH2-、-NH-、-O-及び-S-から独立に選択され、且つ各Zは、N又はCHから選択される。）。
【００５９】
スピロ環式環の具体例は、以下の実例中に示されている：
【化７】
2020507612.tif 000009
（式中、各Yは、-CH2-、-NH-、-O-及び-S-から選択される。）。
【００６０】
「ヒドロキシル」は、ラジカル-OHを指す。
【００６１】
「オキソ」は、ラジカル=Oを指す。
【００６２】
「置換された」は、1個以上の水素原子が、それぞれ独立に、同じ又は異なる置換基（複数可）により置換されている基を指す。
【００６３】
「スルホ」又は「スルホン酸」は、-SO3Hのようなラジカルを指す。
【００６４】
「チオール」は、基-SHを指す。
【００６５】
本明細書において使用されるとき、「1個以上により置換された」という用語は、1乃至4個の置換基を指す。一実施態様において、この用語は、1乃至3個の置換基を指す。さらなる実施態様において、この用語は、1又は2個の置換基を指す。またさらなる実施態様において、この用語は、1個の置換基を指す。
【００６６】
「チオアルコキシ」は、基-S-アルキルを指し、ここで、アルキル基は、明示された数の炭素原子を有する。具体的には、当該用語は、基-S-C1-6アルキルを指す。具体的なチオアルコキシ基は、チオメトキシ、チオエトキシ、n-チオプロポキシ、イソチオプロポキシ、n-チオブトキシ、tert-チオブトキシ、sec-チオブトキシ、n-チオペントキシ、n-チオヘキソキシ、及び1,2-ジメチルチオブトキシである。具体的なチオアルコキシ基は、低級チオアルコキシ、即ち、1乃至6個の炭素原子を伴うものである。さらに具体的なアルコキシ基は、1乃至4個の炭素原子を有する。
【００６７】
有機合成の分野の当業者は、安定で、化学的に実現可能なヘテロ環式環中のヘテロ原子の最大数が、芳香族であるか非芳香族であるかに関わらず、環のサイズ、不飽和度及びヘテロ原子の原子価によって決定されることを認識しているであろう。一般に、ヘテロ環式環は、芳香族ヘテロ環が化学的に実現可能で且つ安定である限り、1乃至4個のヘテロ原子を有し得る。
【００６８】
「医薬として許容し得る」とは、動物、より具体的にはヒトでの使用について、連邦政府若しくは州政府の規制当局又は米国以外の国の対応する規制当局により承認されている又は承認され得ること、或いは米国薬局方又は他の一般に認められた薬局方に収載されていることを意味する。
【００６９】
「医薬として許容し得る塩」は、医薬として許容し得て且つ親化合物の所望の薬理活性を有する本発明の化合物の塩を指す。具体的には、そのような塩は非毒性であり、無機又は有機の酸付加塩及び塩基付加塩であり得る。具体的には、そのような塩は：(1)塩酸、臭化水素酸、硫酸、硝酸、リン酸等の無機酸により形成された；又は酢酸、プロピオン酸、ヘキサン酸、シクロペンタンプロピオン酸、グリコール酸、ピルビン酸、乳酸、マロン酸、コハク酸、リンゴ酸、マレイン酸、フマル酸、酒石酸、クエン酸、安息香酸、3-(4-ヒドロキシベンゾイル)安息香酸、ケイ皮酸、マンデル酸、メタンスルホン酸、エタンスルホン酸、1,2-エタン-ジスルホン酸、2-ヒドロキシエタンスルホン酸、ベンゼンスルホン酸、4-クロロベンゼンスルホン酸、2-ナフタレンスルホン酸、4-トルエンスルホン酸、カンファースルホン酸、4-メチルビシクロ[2.2.2]-オクタ-2-エン-1-カルボン酸、グルコヘプトン酸、3-フェニルプロピオン酸、トリメチル酢酸、tert-ブチル酢酸、ラウリル硫酸、グルコン酸、グルタミン酸、ヒドロキシナフトエ酸、サリチル酸、ステアリン酸、ムコン酸等の有機酸により形成された、酸付加塩；或いは(2)親化合物中に存在する酸性プロトンが、金属イオン、例えば、アルカリ金属イオン、アルカリ土類イオン、若しくはアルミニウムイオンにより置換されているか；又はエタノールアミン、ジエタノールアミン、トリエタノールアミン、N-メチルグルカミン等のような有機塩基と配位するときに形成される塩を包含する。塩は、さらに一例としてのみであるが、ナトリウム、カリウム、カルシウム、マグネシウム、アンモニウム、テトラアルキルアンモニウム等；及び化合物が塩基性官能性を含有する場合、塩酸塩、臭化水素酸塩、酒石酸塩、メシル酸塩、酢酸塩、マレイン酸塩、シュウ酸塩等のような無毒な有機酸又は無機酸の塩を包含する。「医薬として許容し得るカチオン」という用語は、酸性官能基の許容し得るカチオン性対イオンを指す。そのようなカチオンは、ナトリウム、カリウム、カルシウム、マグネシウム、アンモニウム、テトラアルキルアンモニウムカチオン等により例示される。
【００７０】
「医薬として許容し得るビヒクル」は、それとともに本発明の化合物が投与される希釈剤、補助剤、賦形剤、又は担体を指す。
【００７１】
「プロドラッグ」は、開裂可能な基を有し、且つ加溶媒分解によるか又は生理的条件下で、イン・ビボで医薬として活性がある本発明の化合物になる、本発明の化合物の誘導体を含む化合物を指す。そのような例は、これらに限定されないが、コリンエステル誘導体等、N-アルキルモルホリンエステル等を包含する。
【００７２】
「溶媒和物」は、溶媒と、通常は加溶媒分解反応によって会合している化合物の形態を指す。この物理的会合には、水素結合を含む。従来の溶媒は、水、EtOH、酢酸等を包含する。本発明の化合物は、例えば、結晶形態で調製され得且つ溶媒和又は水和され得る。好適な溶媒和物は、水和物のような医薬として許容し得る溶媒和物を包含し、且つさらに、化学量論的溶媒和物と非化学量論的溶媒和物の両者を包含する。ある例において、溶媒和物は、例えば、1個以上の溶媒分子が、結晶性固体の結晶格子中に組み込まれている場合、単離できるであろう。「溶媒和物」は、溶液相と単離可能溶媒和物との両者を包含する。代表的な溶媒和物は、水和物、エタノラート及びメタノラートを包含する。
【００７３】
「対象」は、ヒトを包含する。「ヒト」、「患者」及び「対象」という用語は、本明細書において互換的に使用される。
【００７４】
「有効量」は、疾患を治療するために対象に投与されたとき、そのような疾患のために治療をもたらすのに十分である、本発明の化合物の量を意味する。「有効量」は、化合物、疾患及びその重症度、並びに治療されるべき対象の年齢、体重等によって多様となり得る。
【００７５】
「予防する」又は「予防」は、疾患又は障害を獲得又は発症するリスクの低下（すなわち、疾患を引き起こす原因物質に暴露され得るか、又は疾患に罹る素因を有し得る対象において、疾患の発症前に疾患の臨床症状の少なくとも一つを発症させないこと）を指す。
【００７６】
「予防(prophylaxis)」という用語は、「予防(prevention)」に関連し、且つその目的が、疾患を治療し又は治癒させることというよりは、疾患を予防することである対策又は処置を指す。予防対策の非限定的な例は、ワクチンの投与；例えば、動けないことが原因で血栓症のリスクがある入院患者への低分子量ヘパリンの投与；及びマラリアが風土病であるか、又はマラリアに罹るリスクが高い地理的地域への訪問に先立つ、クロロキンのような抗マラリア剤の投与を包含し得る。
【００７７】
任意の疾患若しくは障害の「治療する」又は「治療」は、一実施態様において、疾患又は障害を改善させること（すなわち、疾患を止めること、又はその臨床症状のうちの少なくとも一つの徴候、範囲、若しくは重症度を低下させること）を指す。他の実施態様において、「治療する」又は「治療」は、対象によって認識され得ない少なくとも1つの身体的パラメータを改善させることを指す。また別の実施態様において、「治療する」又は「治療」は、疾患又は障害を、身体的に調節する（例えば、認識可能な症状の安定化）か若しくは生理的に調節すること（例えば、身体的パラメータの安定化）、又はその両者を指す。さらなる実施態様において、「治療する」又は「治療」は、疾患の進行を遅らせることに関する。
【００７８】
本明細書において使用されるとき、「炎症性疾患（複数可）」という用語は、関節リウマチ、変形性関節症、若年性特発性関節炎、乾癬、乾癬性関節炎、強直性脊椎炎、アレルギー性気道疾患（例えば、喘息、鼻炎）、慢性閉塞性肺疾患（COPD）、炎症性腸疾患（例えば、クローン病、潰瘍性大腸炎）、サルコイドーシス、内毒素により推進される病態（例えば、バイパス手術後の合併症又は例えば慢性心不全の一因となる慢性内毒素状態）、及び関節の疾患のような軟骨が関与する関連疾患を含む病態の群を指す。具体的には、当該用語は、関節リウマチ、乾癬性関節炎、強直性脊椎炎、変形性関節症、アレルギー性気道疾患（例えば、喘息）、サルコイドーシス、慢性閉塞性肺疾患（COPD）及び炎症性腸疾患を指す。より具体的には、当該用語は、関節リウマチ、サルコイドーシス、乾癬性関節炎、強直性脊椎炎、及び炎症性腸疾患を指す。
【００７９】
本明細書において使用されるとき、「自己免疫疾患（複数可）」という用語は、COPD、喘息（例えば、内因性喘息、外因性喘息、塵埃喘息、小児喘息）、具体的には慢性又は難治性喘息（例えば、遅発性喘息及び気道過剰反応性）のような病態を含む閉塞性の気道疾患、気管支喘息を含む気管支炎、全身性エリテマトーデス（SLE）、皮膚エリテマトーデス、膜性ループス腎炎、皮膚筋炎、シェーグレン症候群、多発性硬化症、乾癬、ドライアイ疾患、I型糖尿病及びそれと関連する合併症、アトピー性湿疹（アトピー性皮膚炎）、甲状腺炎（橋本甲状腺炎及び自己免疫性甲状腺炎）、接触性皮膚炎及びさらなる湿疹性皮膚炎、炎症性腸疾患（例えば、クローン病及び潰瘍性大腸炎）、アテローム性動脈硬化及び筋萎縮性側索硬化症、円形脱毛症、白斑を含む疾患の群を指す。具体的には、当該用語は、COPD、喘息、皮膚エリテマトーデス、膜性ループス腎炎、円形脱毛症、白斑、I型糖尿病及び炎症性腸疾患を指す。
【００８０】
本明細書において使用されるとき、「増殖性疾患」という用語は、癌（例えば、子宮平滑筋肉腫若しくは前立腺癌）、骨髄増殖性障害（例えば、真性赤血球増加症、本態性血小板血症及び骨髄線維症)、白血病(例えば、急性骨髄性白血病、急性及び慢性リンパ芽球性白血病)、多発性骨髄腫、乾癬、再狭窄、強皮症、又は線維症のような病態を指す。具体的には、当該用語は、癌、白血病、多発性骨髄腫及び乾癬を指す。
【００８１】
本明細書において使用されるとき、「癌」という用語は、皮膚における、又は身体器官、例えば、しかし限定なしに、乳房、前立腺、肺、腎臓、膵臓、胃若しくは腸における、細胞の悪性又は良性増殖を指す。癌は、隣接組織に浸潤し、且つ遠隔器官、例えば、骨、肝臓、肺、又は脳に分散（転移）する傾向にある。本明細書において使用されるとき、癌という用語は、転移性腫瘍細胞型（例えば、しかし限定なしに、黒色腫、リンパ腫、白血病、線維肉腫、横紋筋肉腫、及び肥満細胞腫）と組織癌型（例えば、しかし限定なしに、結腸直腸癌、前立腺癌、小細胞肺癌及び非小細胞肺癌、乳癌、膵癌、膀胱癌、腎臓癌、胃癌、膠芽腫、原発性肝癌、卵巣癌、前立腺癌並びに子宮平滑筋肉腫）の両者を包含する。具体的には、「癌」という用語は、急性リンパ芽球性白血病、急性骨髄性白血病、副腎皮質癌、肛門癌、虫垂癌、星細胞腫、非定型奇形腫様/横紋筋様腫瘍、基底細胞癌、胆管癌、膀胱癌、骨癌（骨肉腫及び悪性線維性組織球腫）、脳幹神経膠腫、脳腫瘍、脳脊髄腫瘍、乳癌、気管支腫瘍、バーキットリンパ腫、子宮頸癌、慢性リンパ球性白血病、慢性骨髄性白血病、結腸癌、結腸直腸癌、頭蓋咽頭腫、皮膚T細胞リンパ腫、胚芽腫、子宮内膜癌、上衣芽細胞腫、上衣腫、食道癌、ユーイング肉腫ファミリー腫瘍、眼癌、網膜芽腫、胆嚢癌、胃（gastric）(胃（stomach）)癌、消化管カルチノイド腫瘍、消化管間質腫瘍（GIST）、消化管間質細胞腫瘍、胚細胞腫瘍、神経膠腫、有毛細胞白血病、頭頸部癌、肝細胞(肝臓)癌、ホジキンリンパ腫、下咽頭癌、眼内メラノーマ、膵島細胞腫瘍（内分泌膵臓）、カポジ肉腫、腎臓癌、ランゲルハンス細胞組織球増加症、喉頭癌、白血病、急性リンパ芽球性白血病、急性骨髄性白血病、慢性リンパ球性白血病、慢性骨髄性白血病、有毛細胞白血病、肝臓癌、非小細胞肺癌、小細胞肺癌、バーキットリンパ腫、皮膚T細胞リンパ腫、ホジキンリンパ腫、非ホジキンリンパ腫、リンパ腫、ワルデンシュトレーム・マクログロブリン血症、髄芽腫、髄様上皮腫、黒色腫、中皮腫、口腔癌、慢性骨髄性白血病、骨髄性白血病、多発性骨髄腫、鼻咽頭癌、神経芽腫、非ホジキンリンパ腫、非小細胞肺癌、口腔癌、中咽頭癌、骨肉腫、骨の悪性線維性組織球腫、卵巣癌、卵巣上皮癌、卵巣胚細胞腫瘍、卵巣低悪性度腫瘍、膵癌、乳頭腫症、副甲状腺癌、陰茎癌、咽頭癌、中等度分化型の松果体実質腫瘍、松果体芽腫及びテント上原始神経外胚葉性腫瘍、下垂体腫瘍、形質細胞新生物/多発性骨髄腫、胸膜肺芽腫、原発性中枢神経系リンパ腫、前立腺癌、直腸癌、腎細胞(腎臓)癌、網膜芽腫、横紋筋肉腫、唾液腺癌、肉腫、ユーイング肉腫ファミリー腫瘍、肉腫、カポジ、セザリー症候群、皮膚癌、小細胞肺癌、小腸癌、軟部組織肉腫、扁平上皮細胞癌、胃（stomach）（胃（gastric））癌、テント上原始神経外胚葉性腫瘍、T細胞リンパ腫、精巣癌、咽喉癌、胸腺腫及び胸腺癌、甲状腺癌、尿道癌、子宮癌、子宮肉腫、膣癌、外陰癌、ワルデンシュトレーム・マクログロブリン血症、並びにウィルムス腫瘍を指す。
【００８２】
本明細書において使用されるとき、「白血病」という用語は、血液及び造血器官の腫瘍性疾患を指す。そのような疾患は、宿主を極めて感染及び出血しやすい状態にする骨髄及び免疫系の機能障害を引き起こし得る。具体的には、白血病という用語は、急性骨髄性白血病（AML）、並びに急性リンパ芽球性白血病（ALL）及び慢性リンパ芽球性白血病（CLL）を指す。
【００８３】
本明細書において使用されるとき、「アレルギー性疾患（複数可）」という用語は、アレルギー性気道疾患（例えば、喘息、鼻炎）、副鼻腔炎、湿疹及び蕁麻疹、並びに食物アレルギー又は昆虫毒に対するアレルギーを包含する、免疫系の過敏症障害を特徴とする病態の群を指す。
【００８４】
本明細書において使用されるとき、本明細書で使用される「喘息」という用語は、あらゆる原因（内因性、外因性、又は両者；アレルギー性又は非アレルギー性）の気道収縮と関連する肺の気流の変動を特徴とする、肺のあらゆる疾患を指す。用語喘息は、原因を示す一つ以上の形容詞と共に使用され得る。
【００８５】
本明細書において使用されるとき、「移植拒絶反応」という用語は、細胞、組織若しくは固形臓器の、例えば、膵臓ランゲルハンス島、幹細胞、骨髄、皮膚、筋肉、角膜組織、神経組織、心臓、肺、複合心肺、腎臓、肝臓、腸、膵臓、気管若しくは食道の、同種若しくは異種移植片の急性若しくは慢性拒絶反応、又は移植片対宿主疾患を指す。
【００８６】
本明細書において使用されるとき、「軟骨代謝回転の障害を含む疾患」という用語は、変形性関節症、乾癬性関節炎、若年性関節リウマチ、痛風性関節炎、敗血症性若しくは感染性関節炎、反応性関節炎、反射性交感神経性ジストロフィー、疼痛性ジストロフィー、ティーツェ症候群若しくは肋軟骨炎、線維筋痛、骨軟骨炎、神経性若しくは神経障害性関節炎、関節症、地方性関節炎様変形性骨関節炎の風土性形態、ムセレニ疾患及びハンディゴドゥ疾患；線維筋痛によってもたらされる変性、全身性エリテマトーデス、強皮症及び強直性脊椎炎のような病態を包含する。
【００８７】
本明細書において使用されるとき、「先天性軟骨奇形（複数可）」という用語は、遺伝性軟骨融解、軟骨異形成及び疑似軟骨異形成のような病態、具体的には、しかし限定なしに、小耳症、無耳症、骨幹端軟骨形成不全、及び関連する障害を包含する。
【００８８】
本明細書において使用されるとき、「IL6の分泌過多と関連付けられた疾患（複数可）」という用語は、キャッスルマン病、多発性骨髄腫、乾癬、カポジ肉腫及び／又はメサンギウム増殖性糸球体腎炎のような病態を包含する。
【００８９】
本明細書において使用されるとき、「インターフェロンの分泌過多と関連付けられた疾患（複数可）」という用語は、全身性及び皮膚のエリテマトーデス、ループス腎炎、皮膚筋炎、シェーグレン症候群、乾癬、関節リウマチのような病態を包含する。
【００９０】
「本発明の組成物（複数可）」及び等価な表現は、本明細書に記載される式（複数可）の化合物を包含することを意味し、文脈上許容される場合、その表現は、医薬として許容し得る塩、及び溶媒和物、例えば、水和物、並びに医薬として許容し得る塩の溶媒和物を包含する。同様に、中間体への言及は、それら自体が特許請求されているかどうかに関わらず、文脈上許容される場合、それらの塩及び溶媒和物を包含することを意味する。
【００９１】
本明細書において範囲が言及される場合、例えば、限定なしに、C1-8アルキルでの範囲の引用は、当該範囲の各々のメンバーの表示とみなされるべきである。
【００９２】
本発明の化合物の他の誘導体は、それらの酸と酸誘導体形態の両者で活性を有するが、しかし酸感受性形態は、多くの場合、哺乳動物生体での溶解性、組織適合性、又は遅延放出という利点を提供する（Bundgard, H,の文献、1985）。プロドラッグは、例えば、親酸と好適なアルコールとの反応により調製されるエステル、又は親酸化合物と置換若しくは非置換アミンとの反応により調製されるアミド、又は酸無水物、又は混合無水物のような、その分野の熟練者に周知の酸誘導体を包含する。本発明の化合物についている酸性基から誘導される単純な脂肪族又は芳香族エステル、アミド及び無水物は、特に有用なプロドラッグである。場合によっては、（アシルオキシ）アルキルエステル又は（（アルコキシカルボニル）オキシ）アルキルエステルのような二重エステル型プロドラッグを調製することが望ましい。特定のそのようなプロドラッグは、本発明の化合物のC1-8アルキル、C2-8アルケニル、任意に置換されたC6-10アリール、及び（C6-10アリール）−（C1-4アルキル）エステルである。
【００９３】
本明細書において使用されるとき、「同位体変種」という用語は、そのような化合物を構成する原子のうちの1個以上において非天然の比率の同位体を含有する化合物を指す。例えば、化合物の「同位体変種」は、例えば、重水素（2H又はD）、炭素-13（13C）、ニトロ（15N）等のような1個以上の非放射性同位体を含有し得る。そのような同位体置換が行なわれる化合物において、以下の原子は、存在する場合、例えば、任意の水素が2H/Dとなり得、任意の炭素が13Cとなり得、又は任意の窒素が15Nとなり得るように、異なるものとなり得るということ、並びにそのような原子の存在及び配置は当技術分野の技量の範囲内で決定され得ることが理解されるであろう。同様に、本発明は、例えば、得られる化合物が薬物及び／又は基質の組織分布研究に使用され得る場合、放射性同位体を有する同位体変種の調製を含み得る。放射性同位体トリチウム、すなわち3H、及び炭素-14、すなわち14Cは、それらの取込みが容易であり且つ検出手段が整っていることを考慮すると、本目的に特に有用である。さらに、11C、18F、15O及び13Nのような陽電子放出同位体により置換されており、且つ陽電子放出断層撮影（PET）研究において基質受容体占有率を調べるのに有用であろうという化合物が調製され得る。
【００９４】
同じ分子式を有するが、それらの原子の結合の性質若しくは配列、又はそれらの原子の空間内での配置が異なる化合物が「異性体」と称されることも理解されるべきである。それらの原子の空間内での配置が異なる異性体は、「立体異性体」と称される。
【００９５】
互いの鏡像でない立体異性体は「ジアステレオマー」と称され、且つ互いの重ね合わせることのできない鏡像である立体異性体は「エナンチオマー」と称される。化合物が不斉中心を有する場合、例えば、それが4個の異なる基に結合されている場合、エナンチオマー対が可能である。エナンチオマーは、その不斉中心の絶対配置によって特徴付けられ得、且つカーン及びプレローグのR-及びS-順位則によって記述されるか、又は分子が偏光面を回転する様式によって且つ右旋性若しくは左旋性（すなわち、それぞれ(+)又は(-)-異性体）として名付けられて特徴付けられ得る。キラル化合物は、個々のエナンチオマーとしても、又はその混合物としても存在し得る。同じ比率のエナンチオマーを含有する混合物は、「ラセミ混合物」と呼ばれる。
【００９６】
「互変異性体」は、特定の化合物構造の互換的形態であり、且つ水素原子及び電子の転位の点で異なる化合物を指す。したがって、二つの構造は、π電子及び原子(通常はH)の移動を介して平衡となり得る。例えば、エノールとケトンは、それらが酸か塩基のいずれかによる処理により速やかに相互変換されるので、互変異性体である。互変異性の他の例は、フェニルニトロメタンのアシ形態及びニトロ形態であり、これらは酸又は塩基による処理により同様に形成される。
【００９７】
互変異性形態は、対象となる化合物の最適な化学反応性及び生体活性の実現に関連し得る。
【００９８】
本発明の化合物は、1個以上の不斉中心を有し得；したがって、そのような化合物は、個々の(R)-若しくは(S)-立体異性体として、又はそれらの混合物として製造され得る。
【００９９】
別途示されない限り、本明細書及び特許請求の範囲における特定の化合物の記載又は命名は、個々のエナンチオマーと、ラセミ体かそうでないかにかかわらず、その混合物の両者を含むことが意図されている。立体化学の決定及び立体異性体の分離のための方法は、当技術分野において周知である。
【０１００】
本発明の化合物が代謝され得て、生物活性のある代謝体を生じることが認識されるであろう。
【０１０１】
（本発明）
本発明は、炎症性疾患、自己免疫疾患、増殖性疾患、アレルギー性疾患、移植拒絶反応、軟骨代謝回転の障害を含む疾患、先天性軟骨奇形、及び／又はIL6若しくはインターフェロンの分泌過多と関連付けられた疾患の予防及び／又は治療において有用な、発明の組成物の特定に基づいている。一の具体的な側面において、当該組成物は、IRAK阻害活性を有する第一の化合物、及びJAK阻害活性を有する第二の化合物を含む。
【０１０２】
本発明は、本発明の組合せを含む医薬組成物、及び、本発明の組合せを投与することによる、炎症性疾患、自己免疫疾患、増殖性疾患、アレルギー性疾患、移植拒絶反応、軟骨代謝回転の障害を含む疾患、先天性軟骨奇形、及び／又はIL6若しくはインターフェロンの分泌過多と関連付けられた疾患を包含する疾患の予防及び/又は治療の方法をも提供する。
【０１０３】
一の具体的な側面において、JAK阻害剤は、JAK1阻害活性を有する。より具体的な実施態様において、JAK阻害剤は、JAK1選択的阻害剤である。
【０１０４】
他の具体的な側面において、IRAK阻害剤は、IRAK4阻害活性を有する。より具体的な実施態様において、IRAK阻害剤は、IRAK4選択的阻害剤である。
【０１０５】
したがって、本発明の第一の側面において、以下の化合物を含む本発明の組成物が提供される：
a)  式Iにしたがう化合物：
【化８】
2020507612.tif 000010
（式中、
Cyは、
−  1個以上の独立に選択されるR3により任意に置換されている単環式C3-7シクロアルキル、又は
−  N、S、及びOから独立に選択される1個又は2個のヘテロ原子を含み、1個以上の独立に選択されるR3により任意に置換されている4乃至7員単環式ヘテロシクロアルキルであり;
R1は
−  H、
−  -SO3H、
−  -P(=O)(OH)2、
−  C1-4アルキル、
−  -C(=O)-(N、S、及びOから独立に選択される1個又は2個のヘテロ原子を含む4乃至7員単環式ヘテロシクロアルキル)、又は
−  C1-6アルキルが1個以上の独立に選択されるR4基により任意に置換されている-C(=O)C1-6アルキルであり；
R2は、H又はC1-4アルキルであり；
各R3は:
−  OH、
−  =O、
−  ハロ、及び
−  C1-4アルキル
から独立に選択され；
各R4は：
−  -NR5aR5b、
−  -C(=O)OH、
−  N、S、及びOから独立に選択される1個又は2個のヘテロ原子を含み、1個以上の独立に選択されるC1-4アルキルにより任意に置換されている4乃至7員単環式ヘテロシクロアルキル、及び
−  -NHC(=O)-C1-4アルキル-NH2
から独立に選択され；且つ
R5a及びR5bは、独立に、H又はC1-4アルキルである）；
又は、その薬学的に許容可能な塩若しくは溶媒和物又はその溶媒和物の塩；及び
b)  JAK阻害活性を有する第二の化合物。
【０１０６】
一実施態様において、本発明の組成物は、Cyが単環式C3-7シクロアルキルである式Iにしたがう化合物を含む。具体的な実施態様において、Cyはシクロヘキシルである。
【０１０７】
一実施態様において、本発明の組成物は、Cyが、1個、2個又は3個の独立に選択されるR3により置換されている単環式C3-7シクロアルキルである式Iにしたがう化合物を含む。具体的な実施態様において、Cyは、1個、2個又は3個の独立に選択されるR3により置換されているシクロヘキシルである。他の具体的な実施態様において、Cyは、1個又は2個のR3により置換されている単環式C3-7シクロアルキルである。より具体的な実施態様において、Cyは、1個又は2個の独立に選択されるR3により置換されているシクロヘキシルである。
【０１０８】
一実施態様において、本発明の組成物は、Cyが、N、S、及びOから独立に選択される1個又は2個のヘテロ原子を含む4乃至7員単環式ヘテロシクロアルキルである、式Iにしたがう化合物を含む。具体的な実施態様において、Cyは、テトラヒドロピラニル又はテトラヒドロチオピラニルである。より具体的な実施態様において、Cyは
【化９】
2020507612.tif 000011
である。
【０１０９】
一実施態様において、本発明の組成物は、Cyが、N、S、及びOから独立に選択される1個又は2個のヘテロ原子を含み、1個、2個又は3個の独立に選択されるR3により置換されている単環式4乃至7員単環式ヘテロシクロアルキルである、式Iにしたがう化合物を含む。他の実施態様において、Cyは、それぞれが1個、2個又は3個の独立に選択されるR3により置換されているテトラヒドロピラニル又はテトラヒドロチオピラニルである。具体的な実施態様において、Cyは、N、S、及びOから独立に選択される1個又は2個のヘテロ原子を含み、1個又は2個のR3により置換されている4乃至7員単環式ヘテロシクロアルキルである。他の具体的な実施態様において、Cyは、それぞれが1個又は2個の独立に選択されるR3により置換されているテトラヒドロピラニル又はテトラヒドロチオピラニルである。より具体的な実施態様において、Cyは、それぞれが1個又は2個の独立に選択されるR3により置換されている
【化１０】
2020507612.tif 000012
である。
【０１１０】
一実施態様において、本発明の組成物は、各R3が、OH、=O、ハロ、及びC1-4アルキルから選択される、式Iにしたがう化合物を含む。具体的な実施態様において、各R3は、OH、=O、F、及び-CH3から選択される。より具体的な実施態様において、各R3は、OH及び-CH3から選択される。他のより具体的な実施態様において、各R3はFである。さらに他のより具体的な実施態様において、各R3は=Oである。
【０１１１】
一実施態様において、本発明の組成物は、式IIa、IIb、IIc、IId、IIe、又はIIfにしたがう化合物を含む：
【化１１】
2020507612.tif 000013
【０１１２】
（式中、R1及びR2は上述の通りである。）。
【０１１３】
一実施態様において、本発明の組成物は、R1が、H、-SO3H、又は-P(=O)(OH)2である、式I乃至IIfのいずれか一つにしたがう化合物を含む。
【０１１４】
一実施態様において、本発明の組成物は、R1がC1-4アルキルである、式I乃至IIfのいずれか一つにしたがう化合物を含む。具体的な実施態様において、R1は、-CH3、-CH2CH3、又は-CH(CH3)2である。より具体的な実施態様において、R1は-CH3である。
【０１１５】
一実施態様において、本発明の組成物は、R1が、-C(=O)-(N、S、及びOから独立に選択される1個又は2個のヘテロ原子を含む4乃至7員単環式ヘテロシクロアルキル)である、式I乃至IIfのいずれか一つにしたがう化合物を含む。具体的な実施態様において、R1は-C(=O)-ピロリジニルである。
【０１１６】
一実施態様において、本発明の組成物は、R1が-C(=O)C1-6アルキルである、式I乃至IIfのいずれか一つにしたがう化合物を含む。具体的な実施態様において、R1は-C(=O)C1-6アルキルであり、当該C1-6アルキルは、-CH3、-CH2CH3、-CH2CH2CH3、又は-CH2(CH(CH3)2)から選択される。
【０１１７】
一実施態様において、本発明の組成物は、R1が-C(=O)C1-6アルキルであり、当該C1-6アルキルは、1個以上の独立に選択されるR4により置換されている、式I乃至IIfのいずれか一つにしたがう化合物を含む。具体的な実施態様において、R1は-C(=O)C1-6アルキルであり、当該C1-6アルキルは、それぞれが1個以上の独立に選択されるR4により置換されている、-CH3、-CH2CH3、-CH2CH2CH3、又は-CH2(CH(CH3)2)から選択される。他の具体的な実施態様において、R1は-C(=O)C1-6アルキルであり、当該C1-6アルキルは、1個又は2個の独立に選択されるR4により置換されている。より具体的な実施態様において、R1は-C(=O)C1-6アルキルであり、当該C1-6アルキルは、それぞれが1個又は2個の独立に選択されるR4により置換されている-CH3、-CH2CH3、-CH2CH2CH3、又は-CH2(CH(CH3)2)から選択される。
【０１１８】
一実施態様において、本発明の組成物は、式I乃至IIfのいずれか一つにしたがい、且つR4は-NR5aR5bであり、式中、各R5a及びR5bは、独立に、H又はC1-4アルキルである、化合物を含む。具体的な実施態様において、各R5a及びR5bは、独立に、H、-CH3、又は-CH2CH3である。より具体的な実施態様において、R5aはHであり、且つR5bは、H、-CH3、又は-CH2CH3である。最も具体的な実施態様において、R4は、-NH2、-NHCH3、又は-N(CH3)2である。
【０１１９】
一実施態様において、本発明の組成物は、式I乃至IIfのいずれか一つにしたがい、式中、R4は-C(=O)OHである化合物を含む。
【０１２０】
一実施態様において、本発明の組成物は、式I乃至IIfのいずれか一つにしたがい、式中、R4は、N、S、及びOから独立に選択される1個又は2個のヘテロ原子を含み、1個以上の独立に選択されるC1-4アルキルにより任意に置換されている4乃至7員単環式ヘテロシクロアルキルである化合物を含む。具体的な実施態様において、R4は、それぞれが1個以上の独立に選択されるC1-4アルキルにより任意に置換されているモルホリニル、ピペリジニル、又はピペラジニルである。他の具体的な実施態様において、R4は、N、S、及びOから独立に選択される1個又は2個のヘテロ原子を含み、1個のC1-4アルキルにより任意に置換されている4乃至7員単環式ヘテロシクロアルキルである。より具体的な実施態様において、R4は、N、S、及びOから独立に選択される1個又は2個のヘテロ原子を含み、1個の-CH3により任意に置換されている4乃至7員単環式ヘテロシクロアルキルである。他のより具体的な実施態様において、R4は、それぞれが1個以上の-CH3により任意に置換されているモルホリニル、ピペリジニル、又はピペラジニルである。最も具体的な実施態様において、R4は、それぞれが1個の-CH3により任意に置換されているモルホリニル、ピペリジニル、又はピペラジニルである。
【０１２１】
一実施態様において、本発明の組成物は、式I乃至IIfのいずれか一つにしたがい、式中、R4は-NHC(=O)-C1-4アルキル-NH2である化合物を含む。具体的な実施態様において、R4は-NHC(=O)-CH2-NH2である。
【０１２２】
一実施態様において、本発明の組成物は、式I乃至IIfのいずれか一つにしたがい、式中、R1は、-C(=O)CH2NH2、-C(=O)CH2NHCH3、-C(=O)CH2N(CH3)2、-C(=O)CH2CH2N(CH3)2、-C(=O)CH(NH2)CH(CH3)2、-C(=O)CH2CH2C(=O)OH、-C(=O)CH(NH2)CH2C(=O)OH、-C(=O)CH(NH2)CH2CH2C(=O)OH、-C(=O)CH(CH(CH3)2)NHC(=O)CH2NH2、
【化１２】
2020507612.tif 000014
である化合物を含む。
【０１２３】
一実施態様において、本発明の組成物は、式I乃至IIfのいずれか一つにしたがい、式中、R2がHである化合物を含む。
【０１２４】
一実施態様において、本発明の組成物は、式I乃至IIfのいずれか一つにしたがい、式中、R2がC1-4アルキルである化合物を含む。具体的な実施態様において、R2は-CH3である。
【０１２５】
一実施態様において、本発明の組成物は、式Iにしたがう化合物を含み、ここで、当該化合物は、下記から選択される：
6-[6-[2-(2-ヒドロキシ-エトキシ)-エトキシ]-5-(テトラヒドロ-ピラン-4-イルアミノ)-イミダゾ[4,5-b]ピリジン-3-イル]-ニコチノニトリル、
6-{5-(1,1-ジオキソ-テトラヒドロ-2H-チオピラン-4-イルアミノ)-6-[2-(2-ヒドロキシ-エトキシ)-エトキシ]-イミダゾ[4,5-b]ピリジン-3-イル}-ニコチノニトリル、
6-{6-[2-(2-ヒドロキシ-エトキシ)-エトキシ]-5-[((cis-1,4)-4-ヒドロキシ-4-メチル-シクロヘキシル)-メチル-アミノ]-イミダゾ[4,5-b]ピリジン-3-イル}-ニコチノニトリル、
6-{6-[2-(2-メトキシ-エトキシ)-エトキシ]-5-[メチル-(テトラヒドロ-ピラン-4-イル)-アミノ]-イミダゾ[4,5-b]ピリジン-3-イル}-ニコチノニトリル、
6-[6-[2-(2-メトキシ-エトキシ)-エトキシ]-5-(テトラヒドロ-ピラン-4-イルアミノ)-イミダゾ[4,5-b]ピリジン-3-イル]-ニコチノニトリル、
6-{5-(3-ヒドロキシ-シクロヘキシルアミノ)-6-[2-(2-ヒドロキシ-エトキシ)-エトキシ]-イミダゾ[4,5-b]ピリジン-3-イル}-ニコチノニトリル、
6-{5-(4,4-ジフルオロ-シクロヘキシルアミノ)-6-[2-(2-ヒドロキシ-エトキシ)-エトキシ]-イミダゾ[4,5-b]ピリジン-3-イル}-ニコチノニトリル、
硫酸モノ-(2-{2-[3-(5-シアノ-ピリジン-2-イル)-5-(テトラヒドロ-ピラン-4-イルアミノ)-3H-イミダゾ[4,5-b]ピリジン-6-イルオキシ]-エトキシ}-エチル)エステル、
(S)-2-アミノ-3-メチル-酪酸2-{2-[3-(5-シアノ-ピリジン-2-イル)-5-(テトラヒドロ-ピラン-4-イルアミノ)-3H-イミダゾ[4,5-b]ピリジン-6-イルオキシ]-エトキシ}-エチルエステル、
(S)-2-アミノ-3-メチル-酪酸2-{2-[3-(5-シアノ-ピリジン-2-イル)-5-(テトラヒドロ-ピラン-4-イルアミノ)-3H-イミダゾ[4,5-b]ピリジン-6-イルオキシ]-エトキシ}-エチルエステルシュウ酸塩、
6-[6-[2-(2-ヒドロキシエトキシ)エトキシ]-5-[[(cis-3,4)-4-ヒドロキシテトラヒドロピラン-3-イル]アミノ]イミダゾ[4,5-b]ピリジン-3-イル]ピリジン-3-カルボニトリル、
6-[6-[2-(2-ヒドロキシエトキシ)エトキシ]-5-[((cis-1,4)-4-ヒドロキシ-4-メチルシクロヘキシル)アミノ]イミダゾ[4,5-b]ピリジン-3-イル]ピリジン-3-カルボニトリル、
6-[5-[((cis-1,4)-4-ヒドロキシ-4-メチル-シクロヘキシル)-メチル-アミノ]-6-[2-(2-メトキシエトキシ)エトキシ]イミダゾ[4,5-b]ピリジン-3-イル]ピリジン-3-カルボニトリル、
6-[5-[((cis-1,4)-4-ヒドロキシ-4-メチルシクロヘキシル)アミノ]-6-[2-(2-メトキシエトキシ)エトキシ]イミダゾ[4,5-b]ピリジン-3-イル]ピリジン-3-カルボニトリル、
2-[2-[3-(5-シアノ-2-ピリジル)-5-(テトラヒドロピラン-4-イルアミノ)イミダゾ[4,5-b]ピリジン-6-イル]オキシエトキシ]エチル2-(ジメチルアミノ)アセタート、
2-[2-[3-(5-シアノ-2-ピリジル)-5-(テトラヒドロピラン-4-イルアミノ)イミダゾ[4,5-b]ピリジン-6-イル]オキシエトキシ]エチル2-アミノアセタート、
2-[2-[3-(5-シアノ-2-ピリジル)-5-(テトラヒドロピラン-4-イルアミノ)イミダゾ[4,5-b]ピリジン-6-イル]オキシエトキシ]エチル2-(メチルアミノ)アセタート、
2-[2-[3-(5-シアノ-2-ピリジル)-5-(テトラヒドロピラン-4-イルアミノ)イミダゾ[4,5-b]ピリジン-6-イル]オキシエトキシ]エチル(2S)-ピロリジン-2-カルボキシラート、
2-[2-[3-(5-シアノ-2-ピリジル)-5-(テトラヒドロピラン-4-イルアミノ)イミダゾ[4,5-b]ピリジン-6-イル]オキシエトキシ]エチル(2S)-2-[(2-アミノアセチル)アミノ]-3-メチル-ブタノアート、
2-[2-[3-(5-シアノ-2-ピリジル)-5-(テトラヒドロピラン-4-イルアミノ)イミダゾ[4,5-b]ピリジン-6-イル]オキシエトキシ]エチル2-モルホリノアセタート、
2-[2-[3-(5-シアノ-2-ピリジル)-5-(テトラヒドロピラン-4-イルアミノ)イミダゾ[4,5-b]ピリジン-6-イル]オキシエトキシ]エチル2-(4-メチルピペラジン-1-イル)アセタート、
2-[2-[3-(5-シアノ-2-ピリジル)-5-(テトラヒドロピラン-4-イルアミノ)イミダゾ[4,5-b]ピリジン-6-イル]オキシエトキシ]エチル3-(ジメチルアミノ)プロパノアート、
2-[2-[3-(5-シアノ-2-ピリジル)-5-(テトラヒドロピラン-4-イルアミノ)イミダゾ[4,5-b]ピリジン-6-イル]オキシエトキシ]エチル2-(ジメチルアミノ)アセタートシュウ酸塩、
2-[2-[3-(5-シアノ-2-ピリジル)-5-(テトラヒドロピラン-4-イルアミノ)イミダゾ[4,5-b]ピリジン-6-イル]オキシエトキシ]エチル2-アミノアセタートシュウ酸塩、
2-[2-[3-(5-シアノ-2-ピリジル)-5-(テトラヒドロピラン-4-イルアミノ)イミダゾ[4,5-b]ピリジン-6-イル]オキシエトキシ]エチル2-(メチルアミノ)アセタートシュウ酸塩、
2-[2-[3-(5-シアノ-2-ピリジル)-5-(テトラヒドロピラン-4-イルアミノ)イミダゾ[4,5-b]ピリジン-6-イル]オキシエトキシ]エチル(2S)-ピロリジン-2-カルボキシラートシュウ酸塩、
(3S)-3-アミノ-4-[2-[2-[3-(5-シアノ-2-ピリジル)-5-(テトラヒドロピラン-4-イルアミノ)イミダゾ[4,5-b]ピリジン-6-イル]オキシエトキシ]エトキシ]-4-オキソ-ブタン酸塩酸塩、
(4S)-4-アミノ-5-[2-[2-[3-(5-シアノ-2-ピリジル)-5-(テトラヒドロピラン-4-イルアミノ)イミダゾ[4,5-b]ピリジン-6-イル]オキシエトキシ]エトキシ]-5-オキソ-ペンタン酸塩酸塩、
2-[2-[3-(5-シアノ-2-ピリジル)-5-(テトラヒドロピラン-4-イルアミノ)イミダゾ[4,5-b]ピリジン-6-イル]オキシエトキシ]エチル(2S)-2-[(2-アミノアセチル)アミノ]-3-メチル-ブタノアートシュウ酸塩、
2-[2-[3-(5-シアノ-2-ピリジル)-5-(テトラヒドロピラン-4-イルアミノ)イミダゾ[4,5-b]ピリジン-6-イル]オキシエトキシ]エチル2-モルホリノアセタートシュウ酸塩、
2-[2-[3-(5-シアノ-2-ピリジル)-5-(テトラヒドロピラン-4-イルアミノ)イミダゾ[4,5-b]ピリジン-6-イル]オキシエトキシ]エチル2-(4-メチルピペラジン-1-イル)アセタートシュウ酸塩、
2-[2-[3-(5-シアノ-2-ピリジル)-5-(テトラヒドロピラン-4-イルアミノ)イミダゾ[4,5-b]ピリジン-6-イル]オキシエトキシ]エチル3-(ジメチルアミノ)プロパノアートシュウ酸塩、及び
4-[2-[2-[3-(5-シアノ-2-ピリジル)-5-(テトラヒドロピラン-4-イルアミノ)イミダゾ[4,5-b]ピリジン-6-イル]オキシエトキシ]エトキシ]-4-オキソ-ブタン酸。
【０１２６】
一実施態様において、本発明の組成物は式Iにしたがう化合物を含み、ここで、当該化合物は、6-[6-[2-(2-ヒドロキシ-エトキシ)-エトキシ]-5-(テトラヒドロ-ピラン-4-イルアミノ)-イミダゾ[4,5-b]ピリジン-3-イル]-ニコチノニトリルである。
【０１２７】
一実施態様において、本発明の組成物は式Iにしたがう化合物を含み、ここで、当該化合物は、6-[6-[2-(2-ヒドロキシ-エトキシ)-エトキシ]-5-(テトラヒドロ-ピラン-4-イルアミノ)-イミダゾ[4,5-b]ピリジン-3-イル]-ニコチノニトリルではない。
【０１２８】
一実施態様において、本発明の組成物は式Iにしたがう化合物を含み、ここで、当該化合物は、(S)-2-アミノ-3-メチル-酪酸2-{2-[3-(5-シアノ-ピリジン-2-イル)-5-(テトラヒドロ-ピラン-4-イルアミノ)-3H-イミダゾ[4,5-b]ピリジン-6-イルオキシ]-エトキシ}-エチルエステルである。
【０１２９】
一実施態様において、本発明の組成物は式Iにしたがう化合物を含み、ここで、当該化合物は、(S)-2-アミノ-3-メチル-酪酸2-{2-[3-(5-シアノ-ピリジン-2-イル)-5-(テトラヒドロ-ピラン-4-イルアミノ)-3H-イミダゾ[4,5-b]ピリジン-6-イルオキシ]-エトキシ}-エチルエステルではない。
【０１３０】
他の実施態様において、本発明の組成物は、JAK阻害活性を有する化合物を含む。具体的な実施態様において、JAK阻害活性を有する化合物は、WO2010/010190に開示されている化合物である。
【０１３１】
他の実施態様において、本発明の組成物は、JAK1阻害活性を有する化合物を含む。具体的な実施態様において、JAK1阻害活性を有する化合物は、式XXa又はXXbにしたがう：
【化１３】
2020507612.tif 000015
。
【０１３２】
具体的な実施態様において、本発明の組成物は：
a)  6-[6-[2-(2-ヒドロキシ-エトキシ)-エトキシ]-5-(テトラヒドロ-ピラン-4-イルアミノ)-イミダゾ[4,5-b]ピリジン-3-イル]-ニコチノニトリル、及び(S)-2-アミノ-3-メチル-酪酸2-{2-[3-(5-シアノ-ピリジン-2-イル)-5-(テトラヒドロ-ピラン-4-イルアミノ)-3H-イミダゾ[4,5-b]ピリジン-6-イルオキシ]-エトキシ}-エチルエステルから選択される化合物；並びに
b)   式XXa及びXXbにしたがう化合物から選択される化合物
を含む。
【０１３３】
具体的な実施態様において、本発明の組成物は：
a)  6-[6-[2-(2-ヒドロキシ-エトキシ)-エトキシ]-5-(テトラヒドロ-ピラン-4-イルアミノ)-イミダゾ[4,5-b]ピリジン-3-イル]-ニコチノニトリル、及び(S)-2-アミノ-3-メチル-酪酸2-{2-[3-(5-シアノ-ピリジン-2-イル)-5-(テトラヒドロ-ピラン-4-イルアミノ)-3H-イミダゾ[4,5-b]ピリジン-6-イルオキシ]-エトキシ}-エチルエステルから選択される化合物；並びに
b)   式XXbにしたがう化合物
を含む。
【０１３４】
より具体的な実施態様において、本発明の組成物は：
a)  6-[6-[2-(2-ヒドロキシ-エトキシ)-エトキシ]-5-(テトラヒドロ-ピラン-4-イルアミノ)-イミダゾ[4,5-b]ピリジン-3-イル]-ニコチノニトリル；及び
b)  式XXbにしたがう化合物
を含む。
【０１３５】
一実施態様において、本発明の組成物に由来する化合物は、同位体変種ではない。
【０１３６】
一側面において、本明細書に記載の実施態様のいずれか一つにしたがう、本発明の組成物に由来する化合物は、遊離塩基として存在する。
【０１３７】
一側面において、本明細書に記載の実施態様のいずれか一つにしたがう、本発明の組成物に由来する化合物は、医薬として許容され得る塩である。
【０１３８】
一側面において、本明細書に記載の実施態様のいずれか一つにしたがう、本発明の組成物に由来する化合物は、当該化合物の溶媒和物である。
【０１３９】
一側面において、本明細書に記載の実施態様のいずれか一つにしたがう、本発明の組成物の化合物は、化合物の医薬として許容され得る塩の溶媒和物である。
【０１４０】
各々の実施態様についての明示された基は、一般に先に個別に列記されてきたが、本発明の組成物の化合物は、上記の式及び本明細書に提示される他の式におけるいくつかの又は各々の実施態様が、各々の変数についてそれぞれ指定された特定のメンバー又は基の1個以上から選択される化合物を含む。したがって、本発明は、そのような実施態様の全ての組合せをその範囲内に含むことが意図される。
【０１４１】
各々の実施態様についての明示された基は、一般に先に個別に列記されてきたが、本発明の化合物は、1個以上の変数（例えば、R基）が、先に列記された式（複数可）のいずれかにしたがう一つ以上の実施態様から選択されるものであり得る。したがって、本発明は、開示された実施態様のいずれかに由来する変数の全ての組合せをその範囲内に含むことが意図されている。
【０１４２】
或いは、ある基若しくはある実施態様、又はそれらの組合せに由来する明示された変数の一つ以上の排除も、本発明によって企図されている。
【０１４３】
ある側面において、本発明は、上記の式にしたがう化合物のプロドラッグ及び誘導体を提供する。プロドラッグは、代謝的に開裂可能な基を有し、且つ加溶媒分解によるか又は生理的条件下で、イン・ビボで医薬として活性がある本発明の化合物になる、本発明の組成物の化合物の誘導体である。そのような例は、これらに限定されないが、コリンエステル誘導体等、N-アルキルモルホリンエステル等を包含する。
【０１４４】
本発明の組成物の化合物の他の誘導体は、それらの酸形態と酸誘導体形態の両者で活性を有するが、酸感受性形態は、しばしば、哺乳動物生体における溶解性、組織適合性、又は遅延放出という利点を提供する（Bundgard, H,の文献、1985)。プロドラッグは、当業者に周知の酸誘導体、例えば、親酸と好適なアルコールとの反応により調製されるエステル、又は親酸化合物と置換若しくは非置換アミンとの反応により調製されるアミド、又は酸無水物、又は混合無水物のようなものが包含される。本発明の化合物についている酸性基から誘導される単純な脂肪族又は芳香族エステル、アミド、及び無水物は、好ましいプロドラッグである。場合によっては、（アシルオキシ）アルキルエステル又は（（アルコキシカルボニル）オキシ）アルキルエステルのような二重エステル型プロドラッグを調製することが望ましい。特に有用であるのは、本発明の化合物のC1乃至C8アルキル、C2乃至C8アルケニル、アリール、C7乃至C12置換アリール、及びC7乃至C12アリールアルキルエステルである。
【０１４５】
（医薬組成物）
医薬として使用される場合、本発明の組成物は、典型的には、医薬組成物の形態で投与される。そのような組成物は、医薬分野で周知の様式で調製され得、且つ式Iにしたがう少なくとも一種の本発明の活性化合物を含む。通常、本発明の組成物は、医薬として有効な量で投与される。実際に投与される本発明の化合物の量は、典型的には、治療されるべき病態、選択された投与経路、投与される実際の本発明の化合物、個々の患者の年齢、体重、及び応答、患者の症状の重症度等を含む関連状況を考慮して、医師により決定されるであろう。
【０１４６】
本発明の医薬組成物は、経口、直腸、経皮、皮下、関節内、静脈内、筋肉内、及び鼻腔内を含む、種々の経路により投与され得る。意図される送達経路に応じて、本発明の化合物は、好ましくは、注射用若しくは経口組成物として、又は全て経皮投与用の、軟膏として、ローションとして、若しくはパッチとして製剤化される。
【０１４７】
経口投与用の組成物は、バルク液体溶液若しくは懸濁液、又はバルク粉末の形態を取り得る。しかしながら、より一般的には、該組成物は、正確な投薬を容易にするために単位剤形で提供される。「単位剤形」という用語は、ヒト対象及び他の哺乳動物用の単位投薬量として好適な物理的に別個の単位を指し、各々の単位は、所望の治療効果を与えるように計算された所定量の活性材料を、好適な医薬賦形剤、ビヒクル、又は担体と共に含有している。典型的な単位剤形は、液体組成物の予め充填され、予め測定されたアンプル若しくは注射器、又は固体組成物の場合、丸剤、錠剤、カプセル剤等を包含する。そのような組成物において、本発明の組成物は、通常、より少ない成分(約0.1乃至約50重量％又は好ましくは約1乃至約40重量％)であり、残りは、所望の投薬形態を形成するのに役立つ、様々なビヒクル又は担体及び加工助剤である。
【０１４８】
経口投与に好適な液体形態は、緩衝剤、懸濁化及び分散化剤、着色料、香料等を伴う好適な水性又は非水性のビヒクルを包含し得る。固体形態は、例えば、以下の成分：微結晶性セルロース、トラガカントガム、若しくはゼラチンのような結合剤；デンプン若しくはラクトースのような賦形剤；アルギン酸、プリモゲル、若しくはトウモロコシデンプンのような崩壊剤；ステアリン酸マグネシウムのような滑沢剤；コロイド状二酸化ケイ素のような流動促進剤；スクロース若しくはサッカリンのような甘味剤；ペパーミント若しくはオレンジ香料のような着香剤のうちのいずれか、或いは類似の性質の本発明の化合物を包含し得る。
【０１４９】
注射用組成物は、典型的には、当技術分野で公知の注射用滅菌生理食塩水若しくはリン酸緩衝生理食塩水又は他の注射用担体に基づく。上述の通り、そのような組成物中の本発明の組成物の活性化合物は、典型的には、より少ない成分であり、しばしば、約0.05乃至10重量％であり、残りは注射用担体などである。
【０１５０】
経皮組成物は、典型的には、有効成分（複数可）を、一般的には約0.01乃至約20重量％、好ましくは約0.1乃至約20重量％、好ましくは約0.1乃至約10重量％、及びより好ましくは0.5乃至約15重量％の範囲の量で含有する局所軟膏剤又はクリームとして製剤化される。軟膏剤として製剤化される場合、有効成分は、典型的には、パラフィン性軟膏基剤か水混和性軟膏基剤のいずれかと組み合わされるであろう。或いは、活性成分は、例えば、水中油型クリーム基剤とともにクリーム中に製剤化され得る。そのような経皮製剤は当技術分野で周知であり、且つ通常、活性成分又は製剤の安定性の皮膚透過性を増進する追加成分を含む。全てのそのような公知の経皮製剤及び成分は、本発明の範囲内に含まれる。
【０１５１】
本発明の組成物は、経皮装置により投与され得る。したがって、経皮投与は、貯留槽型若しくは多孔性膜型又は固体マトリクス型のいずれかのパッチ剤を用いて達成され得る。
【０１５２】
経口投与可能な、注射可能な又は局所投与可能な組成物のための上記の成分は、代表的なものであるに過ぎない。他の材料及び加工技術等は、引用により本明細書中に組み込まれる、レミントンの医薬科学（Remington's Pharmaceutical Sciences）、第17版、1985、Mack Publishing Company, Easton, Pennsylvaniaのパート8に記載されている。
【０１５３】
本発明の組成物は、持続放出形態でも、又は持続放出薬物送達系からでも投与され得る。代表的な持続放出材料の説明は、レミントンの医薬科学(Remington's Pharmaceutical Sciences)に見出され得る。
【０１５４】
以下の製剤例は、本発明に従って調製され得る代表的な医薬組成物を例示したものである。しかしながら、本発明は、以下の医薬組成物に限定されない。
【０１５５】
（製剤1−錠剤）
式Iにしたがう化合物及びJAK阻害剤を含む本発明の組成物は、乾燥ゼラチン結合剤を約1:2の重量比で伴う乾燥粉末として混合され得る。微量のステアリン酸マグネシウムが、滑沢剤として添加され得る。混合物は、打錠機で240乃至270mg錠（1錠当たり、式Iにしたがう本発明の活性化合物が80乃至90mg）に成形され得る。
【０１５６】
（製剤2−カプセル剤）
式Iにしたがう化合物及びJAK阻害剤を含む本発明の組成物は、デンプン希釈剤を約1:1の重量比で伴う乾燥粉末として混合され得る。混合物は、250mgカプセル（1カプセル当たり、式Iにしたがう本発明の活性化合物が125mg）中に充填され得る。
【０１５７】
（製剤3−液剤）
式Iにしたがう化合物及びJAK阻害剤（125mg）を含む本発明の組成物は、スクロース（1.75g）及びキサンタンガム（4mg）と混合され得、結果として得られる混合物は、ブレンドされ、No.10メッシュU.S.シーブに通され、その後、予め作製しておいた微結晶性セルロース及びカルボキシメチルセルロースナトリウム（11:89、50mg）の水溶液と混合され得る。安息香酸ナトリウム（10mg）、香料、及び着色料が水で希釈され、且つ撹拌しながら添加され得る。その後、撹拌しながら、十分な水が添加され得る。その後、さらに十分な水が添加され得、5mLの総体積を生じさせる。
【０１５８】
（製剤4−錠剤）
式Iにしたがう化合物及びJAK阻害剤を含む本発明の組成物は、乾燥ゼラチン結合剤を約1:2の重量比で伴う乾燥粉末として混合され得る。微量のステアリン酸マグネシウムが、滑沢剤として添加され得る。混合物は、打錠機で450乃至900mg錠（式Iにしたがう本発明の活性化合物が150乃至300mg）に成形され得る。
【０１５９】
（製剤5−注射剤）
式Iにしたがう化合物及びJAK阻害剤を含む本発明の組成物は、緩衝滅菌生理食塩水の注射用水性媒体に、約5mg/mLの濃度まで溶解又は懸濁され得る。
【０１６０】
（製剤6−局所剤）
ステアリルアルコール（250g）及び白色ワセリン（250g）は、約75℃で融解され得、且つその後、式Iにしたがう化合物及びJAK阻害剤を含む本発明の組成物（50g）、メチルパラベン（0.25g）、プロピルパラベン（0.15g）、ラウリル硫酸ナトリウム（10g）、及び水（約370g）に溶解されたプロピレングリコール（120g）の混合物が添加され得、得られる混合物は、それが凝固するまで撹拌され得る。
【０１６１】
（治療の方法）
一実施態様において、本発明は、医薬における使用のための、本発明の組成物、又は本発明の組成物を含む医薬組成物を提供する。具体的な実施態様において、本発明は、炎症性疾患、自己免疫疾患、増殖性疾患、アレルギー性疾患、移植拒絶反応、軟骨代謝回転の障害を含む疾患、先天性軟骨奇形、及び／又はIL6若しくはインターフェロンの分泌過多と関連付けられた疾患の予防及び/又は治療において使用するための、本発明の組成物又は本発明の組成物を含む医薬組成物を提供する。
【０１６２】
他の実施態様において、本発明は、炎症性疾患、自己免疫疾患、増殖性疾患、アレルギー性疾患、移植拒絶反応、軟骨代謝回転の障害を含む疾患、先天性軟骨奇形、及び／又はIL6若しくはインターフェロンの分泌過多と関連付けられた疾患の予防及び／又は治療における使用のための医薬の製造における使用のための、本発明の組成物又は本発明の組成物を含む医薬組成物を提供する。
【０１６３】
治療の側面の追加の方法において、本発明は、炎症性疾患、自己免疫疾患、増殖性疾患、アレルギー性疾患、移植拒絶反応、軟骨代謝回転の障害を含む疾患、先天性軟骨奇形、及び／又はIL6若しくはインターフェロンの分泌過多と関連付けられた疾患に罹患している哺乳動物の予防及び／又は治療の方法を提供し、当該方法は、有効量の本発明の組成物又は本明細書に記載される医薬組成物の一種以上の、前記病態の治療又は予防のための投与を含む。
【０１６４】
一実施態様において、本発明は、本発明の組成物及び他の治療剤を含む医薬組成物を提供する。具体的な実施態様において、他の治療剤は、炎症性疾患、自己免疫疾患、増殖性疾患、アレルギー性疾患、移植拒絶反応、軟骨代謝回転の障害を含む疾患、先天性軟骨奇形、及び／又はIL6若しくはインターフェロンの分泌過多と関連付けられた疾患の治療のための薬剤である。
【０１６５】
一実施態様において、本発明は、炎症性疾患の予防及び／又は治療における使用のための、本発明の組成物又は本発明の組成物を含む医薬組成物を提供する。具体的な実施態様において、当該炎症性疾患は、関節リウマチ、乾癬性関節炎、強直性脊椎炎、変形性関節症、アレルギー性気道疾患、サルコイドーシス、慢性閉塞性肺疾患（COPD）及び炎症性腸疾患から選択される。より具体的な実施態様において、当該炎症性疾患は、関節リウマチ、サルコイドーシス、乾癬性関節炎、強直性脊椎炎、及び炎症性腸疾患から選択される。
【０１６６】
他の実施態様において、本発明は、炎症性疾患の予防及び／又は治療における使用のための医薬の製造における使用のための、本発明の組成物又は本発明の組成物を含む医薬組成物を提供する。具体的な実施態様において、当該炎症性疾患は、関節リウマチ、乾癬性関節炎、強直性脊椎炎、変形性関節症、アレルギー性気道疾患、サルコイドーシス、慢性閉塞性肺疾患（COPD）及び炎症性腸疾患から選択される。より具体的な実施態様において、当該炎症性疾患は、関節リウマチ、サルコイドーシス、乾癬性関節炎、強直性脊椎炎、及び炎症性腸疾患から選択される。
【０１６７】
治療の側面の追加の方法において、本発明は、炎症性疾患に罹患している哺乳動物の予防及び／又は治療の方法を提供し、当該方法は、有効量の本発明の組成物又は本明細書に記載される医薬組成物の一種以上の、前記病態の治療又は予防のための投与を含む。具体的な実施態様において、当該炎症性疾患は、関節リウマチ、乾癬性関節炎、強直性脊椎炎、変形性関節症、アレルギー性気道疾患、サルコイドーシス、慢性閉塞性肺疾患（COPD）及び炎症性腸疾患から選択される。より具体的な実施態様において、当該炎症性疾患は、関節リウマチ、サルコイドーシス、乾癬性関節炎、強直性脊椎炎、及び炎症性腸疾患から選択される。
【０１６８】
一実施態様において、本発明は、本発明の組成物及び他の治療剤を含む医薬組成物を提供する。具体的な実施態様において、他の治療剤は、炎症性疾患の治療のための薬剤である。具体的な実施態様において、当該炎症性疾患は、関節リウマチ、乾癬性関節炎、強直性脊椎炎、変形性関節症、アレルギー性気道疾患、サルコイドーシス、慢性閉塞性肺疾患（COPD）及び炎症性腸疾患から選択される。より具体的な実施態様において、当該炎症性疾患は、関節リウマチ、サルコイドーシス、乾癬性関節炎、強直性脊椎炎、及び炎症性腸疾患から選択される。
【０１６９】
一実施態様において、本発明は、自己免疫疾患の予防及び／又は治療における使用のための、本発明の組成物又は本発明の組成物を含む医薬組成物を提供する。具体的な実施態様において、当該自己免疫疾患は、COPD、喘息、皮膚エリテマトーデス、膜性ループス腎炎、円形脱毛症、白斑、I型糖尿病及び炎症性腸疾患から選択される。
【０１７０】
他の実施態様において、本発明は、自己免疫疾患の予防及び／又は治療における使用のための医薬の製造における使用のための、本発明の組成物又は本発明の組成物を含む医薬組成物を提供する。具体的な実施態様において、当該自己免疫疾患は、COPD、喘息、皮膚エリテマトーデス、膜性ループス腎炎、円形脱毛症、白斑、I型糖尿病及び炎症性腸疾患から選択される。
【０１７１】
治療の側面の追加の方法において、本発明は、自己免疫疾患に罹患している哺乳動物の予防及び／又は治療の方法を提供し、当該方法は、有効量の本発明の組成物又は本明細書に記載される医薬組成物の一種以上の、前記病態の治療又は予防のための投与を含む。具体的な実施態様において、当該自己免疫疾患は、COPD、喘息、皮膚エリテマトーデス、膜性ループス腎炎、円形脱毛症、白斑、I型糖尿病及び炎症性腸疾患から選択される。
【０１７２】
一実施態様において、本発明は、本発明の組成物及び他の治療剤を含む医薬組成物を提供する。具体的な実施態様において、他の治療剤は、自己免疫疾患の治療のための薬剤である。具体的な実施態様において、当該自己免疫疾患は、COPD、喘息、皮膚エリテマトーデス、膜性ループス腎炎、円形脱毛症、白斑、I型糖尿病及び炎症性腸疾患から選択される。
【０１７３】
一実施態様において、本発明は、増殖性疾患の予防及び／又は治療における使用のための、本発明の組成物又は本発明の組成物を含む医薬組成物を提供する。具体的な実施態様において、当該増殖性疾患は、癌、白血病、多発性骨髄腫及び乾癬から選択される。
【０１７４】
他の実施態様において、本発明は、増殖性疾患の予防及び／又は治療における使用のための医薬の製造における使用のための、本発明の組成物又は本発明の組成物を含む医薬組成物を提供する。具体的な実施態様において、当該増殖性疾患は、癌、白血病、多発性骨髄腫及び乾癬から選択される。
【０１７５】
治療の側面の追加の方法において、本発明は、増殖性疾患に罹患している哺乳動物の予防及び／又は治療の方法を提供し、当該方法は、有効量の本発明の組成物又は本明細書に記載される医薬組成物の一種以上の、前記病態の治療又は予防のための投与を含む。具体的な実施態様において、当該増殖性疾患は、癌、白血病、多発性骨髄腫及び乾癬から選択される。
【０１７６】
一実施態様において、本発明は、本発明の組成物及び他の治療剤を含む医薬組成物を提供する。具体的な実施態様において、他の治療剤は、増殖性疾患の治療のための薬剤である。具体的な実施態様において、当該増殖性疾患は、癌、白血病、多発性骨髄腫及び乾癬から選択される。
【０１７７】
一実施態様において、本発明は、アレルギー性疾患の予防及び／又は治療における使用のための、本発明の組成物又は本発明の組成物を含む医薬組成物を提供する。具体的な実施態様において、当該アレルギー性疾患は湿疹である。
【０１７８】
他の実施態様において、本発明は、アレルギー性疾患の予防及び／又は治療における使用のための医薬の製造における使用のための、本発明の組成物又は本発明の組成物を含む医薬組成物を提供する。具体的な実施態様において、当該アレルギー性疾患は湿疹である。
【０１７９】
治療の側面の追加の方法において、本発明は、アレルギー性疾患に罹患している哺乳動物の予防及び／又は治療の方法を提供し、当該方法は、有効量の本発明の組成物又は本明細書に記載される医薬組成物の一種以上の、前記病態の治療又は予防のための投与を含む。具体的な実施態様において、当該アレルギー性疾患は湿疹である。
【０１８０】
一実施態様において、本発明は、本発明の組成物及び他の治療剤を含む医薬組成物を提供する。具体的な実施態様において、他の治療剤は、アレルギー性疾患の治療のための薬剤である。具体的な実施態様において、当該アレルギー性疾患は湿疹である。
【０１８１】
一実施態様において、本発明は、移植拒絶反応の予防及び／又は治療における使用のための、本発明の組成物又は本発明の組成物を含む医薬組成物を提供する。具体的な実施態様において、当該移植拒絶反応は移植片対宿主病である。
【０１８２】
他の実施態様において、本発明は、移植拒絶反応の予防及び／又は治療における使用のための医薬の製造における使用のための、本発明の組成物又は本発明の組成物を含む医薬組成物を提供する。具体的な実施態様において、当該移植拒絶反応は移植片対宿主病である。
【０１８３】
治療の側面の追加の方法において、本発明は、移植拒絶反応に罹患している哺乳動物の予防及び／又は治療の方法を提供し、当該方法は、有効量の本発明の組成物又は本明細書に記載される医薬組成物の一種以上の、前記病態の治療又は予防のための投与を含む。具体的な実施態様において、当該移植拒絶反応は移植片対宿主病である。
【０１８４】
一実施態様において、本発明は、本発明の組成物及び他の治療剤を含む医薬組成物を提供する。具体的な実施態様において、他の治療剤は、移植拒絶反応の治療のための薬剤である。具体的な実施態様において、当該移植拒絶反応は移植片対宿主病である。
【０１８５】
一実施態様において、本発明は、軟骨代謝回転の障害を含む疾患の予防及び／又は治療における使用のための、本発明の組成物又は本発明の組成物を含む医薬組成物を提供する。具体的な実施態様において、当該軟骨代謝回転の障害を含む疾患は強直性脊椎炎である。
【０１８６】
他の実施態様において、本発明は、軟骨代謝回転の障害を含む疾患の予防及び／又は治療における使用のための医薬の製造における使用のための、本発明の組成物又は本発明の組成物を含む医薬組成物を提供する。具体的な実施態様において、当該軟骨代謝回転の障害を含む疾患は強直性脊椎炎である。
【０１８７】
治療の側面の追加の方法において、本発明は、軟骨代謝回転の障害を含む疾患に罹患している哺乳動物の予防及び／又は治療の方法を提供し、当該方法は、有効量の本発明の組成物又は本明細書に記載される医薬組成物の一種以上の、前記病態の治療又は予防のための投与を含む。具体的な実施態様において、当該軟骨代謝回転の障害を含む疾患は強直性脊椎炎である。
【０１８８】
一実施態様において、本発明は、本発明の組成物及び他の治療剤を含む医薬組成物を提供する。具体的な実施態様において、他の治療剤は、軟骨代謝回転の障害を含む疾患の治療のための薬剤である。具体的な実施態様において、当該軟骨代謝回転の障害を含む疾患は強直性脊椎炎である。
【０１８９】
一実施態様において、本発明は、先天性軟骨奇形の予防及び／又は治療における使用のための、本発明の組成物又は本発明の組成物を含む医薬組成物を提供する。
【０１９０】
他の実施態様において、本発明は、先天性軟骨奇形の予防及び／又は治療における使用のための医薬の製造における使用のための、本発明の組成物又は本発明の組成物を含む医薬組成物を提供する。
【０１９１】
治療の側面の追加の方法において、本発明は、先天性軟骨奇形に罹患している哺乳動物の予防及び／又は治療の方法を提供し、当該方法は、有効量の本発明の組成物又は本明細書に記載される医薬組成物の一種以上の、前記病態の治療又は予防のための投与を含む。
【０１９２】
一実施態様において、本発明は、本発明の組成物及び他の治療剤を含む医薬組成物を提供する。具体的な実施態様において、他の治療剤は、先天性軟骨奇形の治療のための薬剤である。
【０１９３】
一実施態様において、本発明は、IL6若しくはインターフェロンの分泌過多と関連付けられた疾患の予防及び／又は治療における使用のための、本発明の組成物又は本発明の組成物を含む医薬組成物を提供する。
【０１９４】
他の実施態様において、本発明は、IL6若しくはインターフェロンの分泌過多と関連付けられた疾患の予防及び／又は治療における使用のための医薬の製造における使用のための、本発明の組成物又は本発明の組成物を含む医薬組成物を提供する。
【０１９５】
治療の側面の追加の方法において、本発明は、IL6若しくはインターフェロンの分泌過多と関連付けられた疾患に罹患している哺乳動物の予防及び／又は治療の方法を提供し、当該方法は、有効量の本発明の組成物又は本明細書に記載される医薬組成物の一種以上の、前記病態の治療又は予防のための投与を含む。
【０１９６】
一実施態様において、本発明は、本発明の組成物及び他の治療剤を含む医薬組成物を提供する。具体的な実施態様において、他の治療剤は、IL6若しくはインターフェロンの分泌過多と関連付けられた疾患の治療のための薬剤である。
【０１９７】
注射用量レベルは、全てが約1乃至約120時間、及び特に24乃至96時間の間に、約0.1mg/kg/時乃至少なくとも10mg/kg/時の範囲である。適正な定常状態レベルを達成するために、約0.1mg/kg乃至約10mg/kg又はそれを超える予充填ボーラスが投与され得る。最大総用量は、40乃至80kgのヒト患者の場合、約1g/日を超えないと考えられる。
【０１９８】
変性状態のような長期間の病態の予防及び／又は治療のために、治療用レジメンは、通常、数カ月又は数年にわたり、したがって患者の便宜及び忍容性のために経口投与が好ましい。経口投与の場合、1日に1乃至4回(1〜4)の常用量、特に、1日に1乃至3回(1〜3)の常用量、典型的には、1日に1乃至2回(1〜2)の常用量、及び最も典型的には、1日に1回(1)の常用量が代表的なレジメンである。或いは、長期持続作用型薬物について、経口投薬の場合、1週間おき、1週間に1回、及び1日に1回が代表的なレジメンである。具体的には、投薬レジメンは、1乃至14日おき、より具体的には1乃至10日おき、さらにより具体的には1〜7日おき、及び最も具体的には1乃至3日おきであり得る。
【０１９９】
これらの投薬パターンを用いて、各々の用量は、約1乃至約1000mgの本発明の組成物を提供するが、具体的な用量は、各々約10乃至約500mgを提供し、且つ特に約30乃至約250mgである。
【０２００】
経皮用量は、通常、注射用量を用いて達成されるのと同様又はそれよりも低い血液レベルを提供するように選択される。
【０２０１】
病態の発症を妨げるために使用する場合、本発明の組成物は、当該病態を発症するリスクのある患者に、典型的には医師の助言に従い、且つその監督下で、上記の投薬量レベルで投与されるであろう。特定の病態を発症するリスクのある患者は、通常、当該病態の家族歴を有する者、又は遺伝子検査若しくはスクリーニングによって当該病態を特に発症しやすいことが確認されている者を包含する。
【０２０２】
本発明の組成物は、唯一の活性薬剤として投与され得、或いはそれは、同一若しくは同様の治療活性を示し且つそのような併用投与に安全且つ有効であることが明らかにされている本発明の他の化合物を含む、他の治療剤との組合せで投与され得る。具体的な実施態様において、二種（又はそれより多く）の薬剤の共投与が、それぞれの著しく少ない用量の使用を可能とし、それにより、認められる副作用を低減させる。
【０２０３】
一実施態様において、本発明の組成物又は本発明の組成物を含む医薬組成物は、医薬として投与される。具体的な実施態様において、当該医薬組成物は、さらなる有効成分をさらに含む。
【０２０４】
一実施態様において、本発明の組成物は、炎症を伴う疾患の治療及び／又は予防のための他の治療剤と共投与され、具体的な薬剤は、これらに限定されないが、免疫調節剤、例えば、アザチオプリン、コルチコステロイド（例えば、プレドニゾロン又はデキサメタゾン）、シクロホスファミド、シクロスポリンA、タクロリムス、ミコフェノラート、モフェチル、ムロモナブ-CD3（OKT3、例えば、オルソクローン（登録商標））、ATG、アスピリン、アセトアミノフェン、イブプロフェン、ナプロキセン、及びピロキシカムを包含する。
【０２０５】
一実施態様において、本発明の組成物は、関節炎（例えば、関節リウマチ）の治療及び／又は予防のための他の治療剤と共投与され、具合的な薬剤は、これらに限定されないが、鎮痛薬、非ステロイド性抗炎症薬（NSAIDS）、ステロイド、合成DMARDS（例えば、しかし限定なしに、メトトレキセート、レフルノミド、スルファサラジン、オーラノフィン、金チオリンゴ酸ナトリウム、ペニシラミン、クロロキン、ヒドロキシクロロキン、アザチオプリン、トファシチニブ、バリシチニブ、ホスタマチニブ、及びシクロスポリン）、並びに生物学的DMARDS（例えば、しかし限定なしに、インフリキシマブ、エタネルセプト、アダリムマブ、リツキシマブ、及びアバタセプト）を包含する。
【０２０６】
一実施態様において、本発明の組成物は、増殖性障害の治療及び／又は予防のための他の治療剤と共投与され、具合的な薬剤は、これらに限定されないが、メトトレキセート、ロイコボリン、アドリアマイシン、プレドニゾン、ブレオマイシン、シクロホスファミド、5-フルオロウラシル、パクリタキセル、ドセタキセル、ビンクリスチン、ビンブラスチン、ビノレルビン、ドキソルビシン、タモキシフェン、トレミフェン、酢酸メゲストロール、アナストロゾール、ゴセレリン、抗HER2モノクローナル抗体（例えば、ハーセプチン（商標））、カペシタビン、塩酸ラロキシフェン、EGFR阻害剤（例えば、イレッサ（登録商標）、タルセバ（商標）、エルビタックス（商標））、VEGF阻害剤（例えば、アバスチン（商標））、プロテアソーム阻害剤（例えば、ベルケイド（商標））、グリベック（登録商標）及びhsp90阻害剤（例えば、17-AAG）を包含する。さらに、式Iにしたがう化合物及びJAK阻害剤を含む本発明の組成物は、放射線療法又は外科手術を含むがこれらに限定されない他の療法との組合せで投与され得る。具体的な実施態様において、当該増殖性障害は、癌、骨髄増殖性疾患又は白血病から選択される。
【０２０７】
一実施態様において、本発明の組成物は、自己免疫疾患の治療及び／又は予防のための他の治療剤と共投与され、具体的な薬剤は、これらに限定されないが、グルココルチコイド、細胞増殖抑制剤（例えば、プリン・アナログ）、アルキル化剤、（例えば、ナイトロジェン・マスタード（シクロホスファミド）、ニトロソウレア、本発明の白金化合物、及びその他）、代謝拮抗剤（例えば、メトトレキサート、アザチオプリン及びメルカプトプリン）、細胞傷害性抗生物質（例えば、ダクチノマイシン、アントラサイクリン、マイトマイシンC、ブレオマイシン、及びミトラマイシン）、抗体（例えば、抗CD20、抗CD25又は、抗CD3（OTK3）モノクローナル抗体、アトガム（登録商標）及びサイモグロブリン（登録商標））、シクロスポリン、タクロリムス、ラパマイシン（シロリムス）、インターフェロン（例えば、IFN-β）、TNF結合タンパク質（例えば、インフリキシマブ、エタネルセプト、又はアダリムマブ）、ミコフェノレート、フィンゴリモド及びミリオシンを包含する。
【０２０８】
一実施態様において、本発明の組成物は、移植拒絶反応の治療及び／又は予防のための他の治療剤と共投与され、具体的な薬剤は、これらに限定されないが、カルシニューリン阻害剤（例えば、シクロスポリン又はタクロリムス（FK506））、mTOR阻害剤（例えば、シロリムス、エベロリムス）、抗増殖剤（例えば、アザチオプリン、ミコフェノール酸）、副腎皮質ステロイド（例えば、プレドニゾロン、ヒドロコルチゾン）、抗体（例えば、モノクローナル抗IL-2Rα受容体抗体、バジリキシマブ、ダクリズマブ）、ポリクローナル抗T細胞抗体（例えば、抗胸腺細胞グロブリン（ATG）、抗リンパ球グロブリン（ALG））を包含する。
【０２０９】
一実施態様において、本発明の組成物は、喘息及び／又は鼻炎及び／又はCOPDの治療及び／又は予防のための他の治療剤と共投与され、具体的な薬剤は、これらに限定されないが、β2-アドレナリン受容体作動薬（例えば、サルブタモール、レバルブテロール、テルブタリン及びビトルテロール）、エピネフリン（吸入される又は錠剤）、抗コリン作動薬（例えば、臭化イプラトロピウム）、グルココルチコイド（経口用又は吸入される）、長時間作用型β2-作動薬（例えば、サルメテロール、ホルモテロール、バンブテロール、及び持続放出性経口アルブテロール）、吸入ステロイドと長時間作用型気管支拡張薬の組合せ（例えば、フルチカゾン／サルメテロール、ブデソニド／ホルモテロール）、ロイコトリエン拮抗薬及び合成阻害剤（例えば、モンテルカスト、ザフィルルカスト及びジロイトン）、メディエーター放出阻害剤（例えば、クロモグリケート及びケトチフェン）、IgE応答の生体調節因子（例えば、オマリズマブ）、抗ヒスタミン薬（例えば、セチリジン（ceterizine）、シンナリジン、フェキソフェナジン）並びに血管収縮薬（例えば、オキシメタゾリン、キシロメタゾリン、ナファゾリン及びトラマゾリン）を包含する。
【０２１０】
さらに、本発明の組成物は、喘息及び／又はCOPDの緊急治療との組合せで投与され得、そのような治療は、酸素又はヘリオックス投与、噴霧型サルブタモール又はテルブタリン（抗コリン作動薬（例えば、イプラトロピウム)と任意に組み合わされる）、全身性ステロイド（経口又は静脈内、例えば、プレドニゾン、プレドニゾロン、メチルプレドニゾロン、デキサメタゾン、又はヒドロコルチゾン）、静脈内サルブタモール、非特異的β-作動薬、注射又は吸入（例えば、エピネフリン、イソエタリン、イソプロテレノール、メタプロテレノール）、抗コリン作動薬（静脈注射又は噴霧、例えば、グリコピロレート、アトロピン、イプラトロピウム）、メチルキサンチン（テオフィリン、アミノフィリン、バミフィリン）、気管支拡張作用を有する吸入麻酔薬（例えば、イソフルラン、ハロタン、エンフルラン）、ケタミン及び静脈内硫酸マグネシウムを包含する。
【０２１１】
一実施態様において、本発明の組成物は、炎症性腸疾患（IBD）の治療及び／又は予防のための他の治療剤と共投与され、具体的な薬剤は、これらに限定されないが、グルココルチコイド（例えば、プレドニゾン、ブデソニド）合成疾患修飾性免疫調整剤（例えば、メトトレキセート、レフルノミド、スルファサラジン、メサラジン、アザチオプリン、6-メルカプトプリン及びシクロスポリン）並びに生体疾患修飾性免疫調整剤（インフリキシマブ、アダリムマブ、リツキシマブ、及びアバタセプト）を包含する。
【０２１２】
一実施態様において、本発明の組成物は、SLEの治療及び／又は予防のための他の治療剤と共投与され、具体的な薬剤は、これらに限定されないが、ヒトモノクローナル抗体（ベリムマブ（ベンリスタ））、抗マラリア薬（例えば、プラケニル、ヒドロキシクロロキン）のような疾患修飾性抗リウマチ薬（DMARD）、免疫抑制剤（例えば、メトトレキセート及びアザチオプリン）、シクロホスファミド及びミコフェノール酸、非ステロイド性抗炎症薬のような免疫抑制薬及び鎮痛薬、鎮静剤（例えば、デキストロプロポキシフェン及びココダモール）、オピオイド（例えば、ヒドロコドン、オキシコドン、MSコンチン、又はメタドン）並びにフェンタニル・デュラジェシック経皮パッチを包含する。
【０２１３】
一実施態様において、本発明の組成物は、乾癬の治療及び／又は予防のための他の治療剤と共投与され、具体的な薬剤は、これらに限定されないが、コールタール、ジトラノール（アントラリン）、コルチコステロイド様デスオキシメタゾン（トピコート（商標））、フルオシノニド、ビタミンD3類似体（例えば、カルシポトリオール）、アルガン油、及びレチノイド（エトレチナート、アシトレチン、タザロテン）を含有する浴用液、保湿剤、薬用クリーム及び軟膏剤のような局所治療薬、メトトレキセート、シクロスポリン、レチノイド、チオグアニン、ヒドロキシウレア、スルファサラジン、ミコフェノール酸モフェチル、アザチオプリン、タクロリムス、フマル酸エステルのような全身治療薬、又はアメビブ（商標）、エンブレル（商標）、ヒュミラ（商標）、レミケード（商標）、ラプティバ（商標）及びウステキヌマブ（IL-12及びIL-23遮断薬）のような生物製剤を包含する。さらに、本発明の化合物は、光線療法又は光化学療法（例えば、ソラレン及び紫外線A療法（PUVA））を含むがこれらに限定されない他の療法との組合せで投与され得る。
【０２１４】
一実施態様において、本発明の組成物は、アレルギー反応の治療及び／又は予防のための他の治療剤と共投与され、具体的な薬剤は、これらに限定されないが、抗ヒスタミン薬（例えば、セチリジン、ジフェンヒドラミン、フェキソフェナジン、レボセチリジン）、グルココルチコイド（例えば、プレドニゾン、ベタメタゾン、ベクロメタゾン、デキサメタゾン）、エピネフリン、テオフィリン又は抗ロイコトリエン剤（例えば、モンテルカスト又はザフィルルカスト）、抗コリン剤及び充血除去剤を包含する。
【０２１５】
当業者には明らかであるように、共投与により、2種以上の治療剤を同じ治療レジメンの一部として患者に送達するあらゆる手段が包含される。当該2種以上の薬剤は、単一の製剤中で、すなわち単一の医薬組成物として同時に投与され得るが、これは必須ではない。当該薬剤は、異なる製剤中で且つ異なる時間に投与され得る。
【実施例】
【０２１６】
（化学合成手順）
（概要）
本発明の組成物の化合物は、以下の一般的方法及び手順を用いて、容易に入手可能な出発物質から調製され得る。典型的な又は好ましいプロセス条件（すなわち、反応温度、時間、反応物のモル比、溶媒、圧力その他）が与えられる場合、別途明記されない限り、他のプロセス条件も使用され得ることが理解されるであろう。最適な反応条件は、使用される具体的な反応物又は溶媒によって異なり得るが、そのような条件は、当業者によりルーチンの最適化手順により決定され得る。
【０２１７】
さらに、当業者には明らかであるように、特定の官能基が望ましくない反応を受けるのを防ぐために、従来の保護基が必要となる場合がある。特定の官能基のための好適な保護基、並びに保護及び脱保護のための好適な条件の選択は、当技術分野において周知である。例えば、多くの保護基、並びにその導入及び除去は、T. W. Greene及びP. G. M. Wutsの文献、有機合成における保護基（Protecting Groups in Organic Synthesis）, Wiley Blackwell;第4改訂版（2006）、及びその中に引用されている参考文献（Wuts及びGreeneの文献、2006）に記載されている。
【０２１８】
以下の方法は、本明細書において上で定義されている本発明の組成物の化合物の調製及び比較例に関して、詳細に提示されている。本発明の組成物の化合物は、有機合成の分野の当業者により公知の又は市販の出発材料及び試薬から調製され得る。
【０２１９】
全ての試薬は商用等級であり、且つ別途明記されない限り、さらなる精製なしに、受け取った状態で使用される。市販の無水溶媒は、不活性雰囲気下で実施される反応に使用される。別途規定されない限り、試薬等級溶媒は、他の全ての場合に使用される。カラム・クロマトグラフィーは、シリカ規格（silica standard）（30乃至70μm）で実施される。薄層クロマトグラフィーは、予めコーティングされたシリカゲル60F-254プレート（0.25mm厚）を用いて実施される。1H NMRスペクトルは、400 MHz Bruker Avance分光計又は300 MHz Bruker Avance DPX分光計で記録される。1H NMRスペクトルの化学シフト（δ）は、内部基準としてのテトラメチルシラン（δ0.00）又は適当な残留溶媒ピークと比べた百万分率（ppm）で報告される。多重度は、一重線（s）、二重線（d）、三重線（t）、四重線（q）、五重線（quin）、多重線（m）、及びブロード（br）として与えられる。エレクトロスプレーMSスペクトルは、WatersプラットフォームLC/MS分光計又はWaters Acquity PDA検出器及びSQD質量分析計を備えたWaters Acquity UPLCで得られる。使用されたカラム：UPLC BEH C18 1.7μm、2.1×5 mm VanGuardプレカラムとAcquity UPLC BEH C18 1.7μm、2.1×30 mmカラム又はAcquity UPLC BEH C18 1.7μm、2.1×50 mmカラム。全ての方法は、MeCN/H2O勾配を使用している。MeCN及びH2Oは、0.1%ギ酸又は0.05% NH3を含む。分取LCMS:使用されたカラム、Waters XBridge Prep C18 5μm ODB 30×100 mm（分取カラム）及びWaters XBridge C18 5μm、4.6 mm×100 mm（分析カラム）。全ての方法は、MeCN/H2O勾配を使用している。MeCN及びH2Oは、0.1％ギ酸又は0.1％ジエチルアミンを含む。
表I．実験セクションに使用される略語のリスト
【表１】
2020507612.tif 000016
2020507612.tif 000017
【０２２０】
(本発明の化合物の合成的調製)
式（XXa）にしたがう本発明の組成物の化合物は、広範にわたってその概略が記載され、且つデータは、WO2013/189771（Van't Kloosterらの文献、2013）に開示されている。
【０２２１】
同様に、式（XXb）にしたがう本発明の化合物は、広範にわたってその概略が記載され、且つデータは、WO2010/149769（Menet及びSmitsの文献、2010）に開示されている。塩の合成及び適切な製剤は、WO2015/117980及びWO2015/117981に記載されている。
【０２２２】
（実施例1.  一般的合成方法）
（1.1.  合成方法の概略）
【化１４】
2020507612.tif 000018
（1.2.  一般的な方法）
（1.2.1.  一般的な方法A）
【化１５】
2020507612.tif 000019
NaH（2当量、鉱油中60%）の0℃に冷却された乾燥THF溶液に、対応する6-アミノ-ニコチノニトリル（1.1乃至1.2当量）を加える。0℃で30分後、2-クロロ-3-ニトロピリジン（1当量）を加え、当該反応物を室温で撹拌し、UPLC-MSによりモニターする。反応が完了していない場合、当該反応物を再び0℃に冷却し、さらなるNaHを加え、それに続いてさらなるアミンを加える。当該反応混合物を氷水に注ぎ、2時間撹拌する。沈殿物をろ過し、H2Oで洗浄し、真空下で風乾させると、所望の化合物を与える。
【０２２３】
（一般的方法Aの例示的合成：）
（6-(6-クロロ-3-ニトロ-ピリジン-2-イルアミノ)-ニコチノニトリル（中間体1））
【化１６】
2020507612.tif 000020
NaH（2.07g、51.81mmol、2当量、鉱油中60%）の0℃に冷却された乾燥THF（50mL）溶液に、6-アミノ-ニコチノニトリル（3.4g、28.5mmol、1.1当量）を加える。0℃で30分後、2,6-ジクロロ-3-ニトロ-ピリジン（5g、25.91mmol、1当量）を加え、且つ当該反応物を室温で16時間撹拌する。当該反応物を0℃に冷却し、NaH（0.5g、13mmol、0.5当量）を加え、且つ当該反応物を、0℃で1時間、次いで室温で2時間撹拌する。当該反応混合物を氷水に注ぎ、且つ2時間撹拌する。沈殿物をろ過し、H2Oで洗浄し、真空下で風乾させる。得られた固体をMeCN（75mL）に吸収させ、室温で1時間30分、及び0℃で1時間撹拌する。次いで、それをろ過し、MeOHで洗浄すると、所望の化合物を与える。
【０２２４】
【化１７】
2020507612.tif 000021
【０２２５】
（1.2.2.  一般的方法B）
【化１８】
2020507612.tif 000022
DMSO中の6-クロロ-3-ニトロ-ピリジン-2-イルアミノ誘導体（1当量）に、対応するアミン（1.1当量）及びDIPEA（2当量）を加え、次いで、当該反応混合物を、反応の完了まで110乃至130℃でマイクロ波処理する。当該混合物をH2Oで希釈し、沈殿物をろ過し、且つ真空下で風乾させると、所望の化合物を与える。
【０２２６】
（一般的方法Bの例示的合成：）
（（6-[3-ニトロ-6-(テトラヒドロ-ピラン-4-イルアミノ)-ピリジン-2-イルアミノ]-ニコチノニトリル（中間体8））
【化１９】
2020507612.tif 000023
DMSO（20mL）中の6-(6-クロロ-3-ニトロ-ピリジン-2-イルアミノ)-ニコチノニトリル（中間体1、4g、14.51mmol、1当量）に、テトラヒドロ-ピラン-4-イルアミン（1.65mL、15.96mmol、1.1当量）及びDIPEA（5.05mL、29.02mmol、2当量）を加え、次いで、該反応混合物を130℃で20分間マイクロ波処理する。当該混合物をH2O及びEt2Oで希釈し、沈殿物をろ過し、且つ真空下で風乾させると、所望の化合物を与える。
【０２２７】
【化２０】
2020507612.tif 000024
【０２２８】
（1.2.3.  一般的方法C）
【化２１】
2020507612.tif 000025
NBS（1.1乃至2当量）を、3-ニトロ-ピリジン-2,6-ジアミノ誘導体（1当量）の乾燥MeCN溶液に加え、該反応物を室温で撹拌し、且つUPLC-MSによりモニターする。完全な完了に達しない場合、出発物質が全く残されなくなるまで、追加のNBSを加える。形成された沈殿物をろ過し、Et2Oで洗浄し、真空下で風乾させると、所望の化合物を与える。
【０２２９】
（一般的方法Cの例示的合成：）
（6-[5-ブロモ-3-ニトロ-6-(テトラヒドロ-ピラン-4-イルアミノ)-ピリジン-2-イルアミノ]-ニコチノニトリル（中間体11））
【化２２】
2020507612.tif 000026
NBS（2.04g、11.46mmol、1.3当量）を、6-[3-ニトロ-6-(テトラヒドロ-ピラン-4-イルアミノ)-ピリジン-2-イルアミノ]-ニコチノニトリル（中間体8、3g、8.81mmol、1当量）の乾燥MeCN（150mL）溶液に加え、当該反応物を室温で4時間撹拌する。NBS（0.31g、1.76mmol、0.2当量）を加え、且つ当該反応物を室温でさらに16時間撹拌する。形成された沈殿物をろ過し、Et2Oで洗浄し、真空下で風乾させると、所望の化合物を与える。
【０２３０】
【化２３】
2020507612.tif 000027
【０２３１】
（1.2.4.  一般的方法D）
【化２４】
2020507612.tif 000028
LiOtBu（3当量）を、対応するアルコール（5当量）の乾燥1,4-ジオキサン溶液に、又は溶媒として使用される対応するアルコール中に少量ずつ加える。次いで、2-アミノ-3-ブロモピリジン誘導体（1当量）を加え、それに続いてCuI（0.6当量）を加える。当該反応物を、反応の完了まで、マイクロ波照射下で、80乃至120℃まで、又は110乃至150℃で加熱する。当該混合物を氷水に注ぐか、HClの1N水溶液を加える。沈殿物をろ過し、真空下で風乾させる。次いで、残渣をシリカゲルのフラッシュ・クロマトグラフィーにより精製すると、所望の化合物を与える。
【０２３２】
（一般的方法Dの例示的合成：）
（6-[5-[2-(2-ヒドロキシ-エトキシ)-エトキシ]-3-ニトロ-6-(テトラヒドロ-ピラン-4-イルアミノ)-ピリジン-2-イルアミノ]-ニコチノニトリル（中間体19））
【化２５】
2020507612.tif 000029
LiOtBu（2.87g、35.8mmol、3当量）を、2-(2-ヒドロキシ-エトキシ)-エタノール（5.7mL、59.7mmol、5当量）の乾燥1,4-ジオキサン（50mL）溶液に少量ずつ加える。6-[5-ブロモ-3-ニトロ-6-(テトラヒドロ-ピラン-4-イルアミノ)-ピリジン-2-イルアミノ]-ニコチノニトリル（中間体11、5.0g、11.9mmol、1当量）を加え、それに続いてCuI（1.36g、7.2mmol、0.6当量）を加える。次いで、当該反応物を120℃に4時間加熱する。当該混合物を0℃に冷却し、HClの1N水溶液（50mL）を加え、且つ生じた混合物を室温で20分間撹拌する。沈殿物をろ過し、真空下で乾燥させる。次いで、残渣を、シリカゲルのフラッシュ・クロマトグラフィーにより、DCM中0乃至5%のMeOHから溶出させて精製すると、所望の化合物を与える。
【０２３３】
MW（計算値）：444.45；MW（観測値）：445.18 ES+。
【０２３４】
【化２６】
2020507612.tif 000030
【０２３５】
（1.2.5.  一般的方法E）
【化２７】
2020507612.tif 000031
2,6-ジアミノ-5-ニトロ-ピリジン誘導体（1当量）の乾燥MeOH溶液に、オルトギ酸トリメチル（0.1mmolの2,6-ジアミノ-5-ニトロ-ピリジン誘導体に対しておよそ0.1mL）及びギ酸（0.1mmolの2,6-ジアミノ-5-ニトロ-ピリジン誘導体に対しておよそ0.1mL）を加える。次いで、NH4Cl（4当量）及びZn（4乃至5当量）を加え、当該混合物を、反応の完了まで70℃まで加熱する。次いで、当該反応混合物を室温に冷却する。
【０２３６】
冷却時に沈殿物が観察される場合、当該固体をろ過し、DCM/CHCl3及び2%ギ酸水溶液による水性の後処理に付すると、所望の化合物を与える。
【０２３７】
冷却時に沈殿が起こらない場合、溶媒を蒸発させ、次いで、残渣をシリカゲルのフラッシュ・クロマトグラフィーにより精製すると、所望の化合物を与える。
【０２３８】
（一般的方法Eの例示的合成：）
（6-[6-[2-(2-ヒドロキシ-エトキシ)-エトキシ]-5-(テトラヒドロ-ピラン-4-イルアミノ)-イミダゾ[4,5-b]ピリジン-3-イル]-ニコチノニトリル（化合物1））
【化２８】
2020507612.tif 000032
6-[5-[2-(2-ヒドロキシ-エトキシ)-エトキシ]-3-ニトロ-6-(テトラヒドロ-ピラン-4-イルアミノ)-ピリジン-2-イルアミノ]-ニコチノニトリル（中間体19、2.3g、5.2mmol、1当量）の乾燥MeOH（60mL）溶液に、オルトギ酸トリメチル（10mL）及びギ酸（10mL）を加える。次いで、NH4Cl（1.1g、20.7mmol、4当量）及びZn（1.4g、20.7mmol、4当量）を加え、且つ当該混合物を2時間還流するように加熱する。MeOH（30mL）を加え、当該反応混合物を1時間還流するように加熱する。
【０２３９】
当該混合物を室温まで冷却し、形成された沈殿物をろ過し、真空下で乾燥させる。MeOH（100mL）及びギ酸（2mL）を加え、且つ生じた混合物を還流下で1時間撹拌する。当該混合物を室温まで冷却し、氷水に注ぎ、形成された沈殿物をろ過し、且つ真空下で乾燥させる。当該固体をDCMとCHCl3の混合物に懸濁させ、セライトに通してろ過し、ろ液を2%ギ酸水溶液で洗浄する。有機相をNa2SO4で乾燥させ、ろ過し、且つ濃縮乾固すると所望の化合物を与える。
【０２４０】
MW（計算値）：424.46；MW（観測値）：425.40 ES+
【０２４１】
【化２９】
2020507612.tif 000033
【０２４２】
（1.2.6.  一般的方法F）
【化３０】
2020507612.tif 000034
化合物1、対応するカルボン酸（1.5当量）、DMAP（1.5当量）、及びEDCI（2.25当量）の混合物を、反応の完了まで、DCM中で、室温で撹拌する。当該反応物をH2Oによりクエンチし、DCMで抽出し、且つ次いで、有機層をMgSO4で乾燥させ、且つ蒸発乾固させる。残渣をシリカゲルのフラッシュ・クロマトグラフィーにより精製すると、所望の化合物を得る。
【０２４３】
（一般的方法Fの例示的合成：）
（(S)-2-tert-ブトキシカルボニルアミノ-3-メチル-酪酸2-{2-[3-(5-シアノ-ピリジン-2-イル)-5-(テトラヒドロ-ピラン-4-イルアミノ)-3H-イミダゾ[4,5-b]ピリジン-6-イルオキシ]-エトキシ}-エチルエステル（中間体30））
【化３１】
2020507612.tif 000035
化合物1（42mg、0.1mmol、1当量）、boc-(S)-バリン（33mg、0.15mmol、1.5当量）、DMAP（19mg、0.15mmol、1.5当量）、及びEDCI（45mg、0.225mmol、2.25当量）の混合物を、DCM（5mL）中で、室温で3時間撹拌する。当該反応物をH2Oによりクエンチし、DCMで抽出し、次いで、有機層をMgSO4で乾燥させ、蒸発乾固させる。残渣を、シリカゲルのフラッシュ・クロマトグラフィーにより、ヘプタン中0乃至100%のEtOAcから溶出させて精製すると、所望の化合物を与える。
【０２４４】
（1.2.7.  一般的方法G：塩化方法）
出発物質を、熱EtOAc中に、又はEtOAcとMeOH（5/1）の熱混合物中に溶解させる。シュウ酸（EtOAc中0.2 M、1当量）を、当該熱溶液に加える。沈殿物が形成し、それをろ過し、Et2Oですすぎ、乾燥させると、所望の化合物を出発物質のシュウ酸塩として与える。
【０２４５】
（一般的方法Gの例示的合成：）
（(S)-2-アミノ-3-メチル-酪酸2-{2-[3-(5-シアノ-ピリジン-2-イル)-5-(テトラヒドロ-ピラン-4-イルアミノ)-3H-イミダゾ[4,5-b]ピリジン-6-イルオキシ]-エトキシ}-エチルエステルシュウ酸塩（化合物10））
【化３２】
2020507612.tif 000036
化合物9（100mg、0.19mmol、1当量）を熱EtOAc（10mL）に溶解させ、且つシュウ酸（EtOAc中0.2 M、0.96mL、0.19mmol、1当量）を当該熱溶液に加える。形成された沈殿物をろ過し、Et2Oですすぎ、乾燥させると所望の化合物を与える。
【０２４６】
（1.2.8.  (3,4 cis)-3-アミノ-テトラヒドロ-ピラン-4-オール（中間体28）の合成）
【化３３】
2020507612.tif 000037
（1.2.8.1  工程i)：  3,7-ジオキサ-ビシクロ[4.1.0]ヘプタン）
m-クロロ過安息香酸（23.51g、136.2mmol、2当量）のDCM（15mL）溶液に、3,6-ジヒドロ-2H-ピラン（5.73g、68.1mmol、1当量）のDCM（10mL）溶液を加える。当該反応混合物を室温で6時間撹拌し、その後m-クロロ過安息香酸（11.76g、68.1mmol、1当量）を加える。当該反応混合物を室温で16時間撹拌し、且つろ過する。ろ液を、Na2SO3、NaHCO3の飽和溶液、及び水で洗浄する。次いで、有機層をNa2SO4で乾燥させ、ろ過し、且つ真空中で濃縮すると、所望の化合物を与え、さらに精製せずに次の工程に使用する。
【０２４７】
（1.2.8.2  工程ii)：  (3,4 trans)-3-ベンジルアミノ-テトラヒドロ-ピラン-4-オール）
EtOH（10mL）中の3,7-ジオキサ-ビシクロ[4.1.0]ヘプタン（2.7mmol、1当量）及びベンジルアミン（300μL、2.7mmol、1当量）の混合物を、還流温度で18時間加熱する。次いで、EtOHを蒸発させ、且つ粗生成物を、シリカゲルのカラム・クロマトグラフィーにより、DCM:MeOH:NH4OH 10:1:0.1により溶出させて精製すると、所望の化合物を与える。
【０２４８】
（1.2.8.3  工程iii)：  N-ベンジル-N-((3,4 trans)-4-ヒドロキシ-テトラヒドロ-ピラン-3-イル)-ベンズアミド）
塩化ベンゾイル（78μL、0.68mmol、1当量）を、前の工程からの(3,4 anti)-3-ベンジルアミノ-テトラヒドロ-ピラン-4-オール（140mg、0.68mmol、1当量）及びTEA（280μL、2.03mmol、3当量）のDCM（2mL）中の氷冷溶液に滴下する。当該反応混合物を室温で1時間撹拌する。次いで、当該混合物を2N HCl水溶液で2回洗浄する。水層をDCMで抽出し、次いで、合わせた有機層をNa2SO4上で乾燥させ、ろ過し、且つ真空中で濃縮すると、所望の化合物を与える。
【０２４９】
（1.2.8.4  工程iv)：  (3,4 cis)-3-ベンジルアミノ-テトラヒドロ-ピラン-4-オール）
N-ベンジル-N-((3,4 trans)-4-ヒドロキシ-テトラヒドロ-ピラン-3-イル)-ベンズアミド（220mg、0.71mmol、1当量）のDCM（2.5mL）溶液を、0℃にて塩化チオニル（195μL、2.68mmol、3.8当量）に滴加する。当該反応混合物を室温で4時間撹拌し、且つ次いで真空中で濃縮する。残渣に、6N HCl水溶液（2mL）を加え、生じた混合物を還流温度で18時間加熱する。冷却後、沈殿物をろ過し、水で洗浄し、且つろ液をEtOAcで抽出する。水層にEt2Oを加え、2N NaOH水溶液を加えて、混合物をアルカリ性にする。相を分離し、水相をDCM及びEtOAcで抽出する。次いで、合わせた有機層をNa2SO4上で乾燥させ、ろ過し、且つ真空中で濃縮すると、所望の化合物を与える。
【０２５０】
（1.2.8.5  工程v)：  (3,4 cis)-3-アミノ-テトラヒドロ-ピラン-4-オール）
(3,4 cis)-3-ベンジルアミノ-テトラヒドロ-ピラン-4-オール（100mg、0.48mmol、1当量）のMeOH（3mL）溶液を、10% Pd/C（40mg）上で、1.5時間、室温で1気圧のH2下で水素化する。触媒を、セライトに通すろ過により除き、MeOHで洗浄し、且つろ液を蒸発させると、所望の化合物を与える。
【０２５１】
（1.2.9.  (cis-1,4)-1-メチル-4-メチルアミノ-シクロヘキサノール（中間体29）の合成）
【化３４】
2020507612.tif 000038
（1.2.9.1.  工程i)：  (cis-1,4)-(4-ヒドロキシ-4-メチル-シクロヘキシル)-カルバミン酸tert-ブチルエステル）
MeCN（15mL）中のcis-4-アミノ-1-メチルシクロヘキサノール（1.0g、7.74mmol、1当量）の懸濁液に、二炭酸ジtert-ブチル（1.85g、8.47mmol、1.1当量）を加え、且つ当該混合物を室温で16時間撹拌する。沈殿物をろ過し、ヘキサンで洗浄し、且つ乾燥させると所望の化合物を与える。
【０２５２】
（1.2.9.2.  工程ii)：  (cis-1,4)-1-メチル-4-メチルアミノ-シクロヘキサノール）
2.0M LiAlH4のTHF（7mL、14.0mmol、4.9当量）溶液を、(cis-1,4)-(4-ヒドロキシ-4-メチル-シクロヘキシル)-カルバミン酸tert-ブチルエステル（660mg、2.9mmol、1当量）に室温で少量ずつ加える。当該反応混合物を、室温で1時間及び還流状態で45分間撹拌する。当該反応混合物を室温まで冷却し、次いで、水及びTHFを加える。沈殿物をろ過し、且つTHFで洗浄する。ろ液を濃縮乾固すると、所望の化合物を与える。
【０２５３】
（1.2.10.  中間体34：  2-[2-[3-(5-シアノ-2-ピリジル)-5-(テトラヒドロピラン-4-イルアミノ)イミダゾ[4,5-b]ピリジン-6-イル]オキシエトキシ]エチル(2S)-2-[[2-(tert-ブトキシカルボニルアミノ)アセチル]アミノ]-3-メチル-ブタノアート）
【化３５】
2020507612.tif 000039
化合物9（170mg、0.40mmol、1当量）、2-(tert-ブトキシカルボニルアミノ)酢酸（Boc-Gly-OH、105mg、0.60mmol、1.5当量）、EDCI（173mg、0.90mmol、2.25当量）及びDMAP（73mg、0.6mmol、1.5当量）をDCM（4mL）中で混合し、且つ室温で一晩撹拌する。当該反応物をブラインによりクエンチし、DCMで抽出し、且つ合わせた有機相を蒸発させると、所望の化合物を与える。
表II.  本発明の化合物に向けて使用される中間体
SM=出発物質、Mtd=方法、MS Mes'd=測定された質量
【表２】
2020507612.tif 000040
2020507612.tif 000041
2020507612.tif 000042
2020507612.tif 000043
2020507612.tif 000044
2020507612.tif 000045
2020507612.tif 000046
2020507612.tif 000047
【０２５４】
（実施例2.  本発明の化合物の調製）
（2.1.  化合物3：  6-{6-[2-(2-ヒドロキシ-エトキシ)-エトキシ]-5-[((cis-1,4)-4-ヒドロキシ-4-メチル-シクロヘキシル)-メチル-アミノ]-イミダゾ[4,5-b]ピリジン-3-イル}-ニコチノニトリル）
【化３６】
2020507612.tif 000048
ホルムアルデヒド（3.1μL、0.11mmol、1当量）を、TFA/DCMの混合物（2mL、1/1）中の化合物12（50mg、0.11mmol、1当量）の溶液に加える。室温で30分間撹拌した後、NaBH(OAc)3（47mg、0.22mmol、2当量）を加え、且つ当該反応物を室温で1時間撹拌する。次いで、当該反応混合物を蒸発乾固させ、且つ当該粗生成物を分取HPLC-MSにより精製すると、所望の化合物を得る。
【０２５５】
（2.2.  化合物8：  硫酸モノ-(2-{2-[3-(5-シアノ-ピリジン-2-イル)-5-(テトラヒドロ-ピラン-4-イルアミノ)-3H-イミダゾ[4,5-b]ピリジン-6-イルオキシ]-エトキシ}-エチル)エステル）
【化３７】
2020507612.tif 000049
化合物1（84mg、0.2mmol、1当量）を、ピリジン-SO3錯体（127mg、0.8mmol、4当量）のピリジン（5mL）溶液に加え、且つ当該反応物を16時間還流までに加熱する。次いで、当該混合物を蒸発乾固させ、シリカゲルのフラッシュ・クロマトグラフィーにより、100% EtOAcから100%（DCM/MeOH/AcOH/H2O:90/10/1/1）へ、次いで100%（DCM/MeOH/AcOH/H2O:85/15/2/2）に溶出させて精製すると、所望の化合物を与える。
【０２５６】
（2.3.  化合物9：  (S)-2-アミノ-3-メチル-酪酸2-{2-[3-(5-シアノ-ピリジン-2-イル)-5-(テトラヒドロ-ピラン-4-イルアミノ)-3H-イミダゾ[4,5-b]ピリジン-6-イルオキシ]-エトキシ}-エチルエステル）
【化３８】
2020507612.tif 000050
TFA（0.5mL）を、中間体30（20mg、0.032mmol、1当量）のDCM（10mL）溶液に加え、当該混合物を室温で1時間撹拌する。当該反応物を飽和NaHCO3水溶液によりクエンチし、EtOAcで抽出する。有機層をMgSO4上で乾燥させ、且つ蒸発乾固させる。残渣をペンタン中のDCM/Et2O溶媒系から再結晶化すると、所望の化合物を与える。
【０２５７】
（2.4.  化合物16：  2-[2-[3-(5-シアノ-2-ピリジル)-5-(テトラヒドロピラン-4-イルアミノ)イミダゾ[4,5-b]ピリジン-6-イル]オキシエトキシ]エチル2-アミノアセタート）
【化３９】
2020507612.tif 000051
中間体31（195mg、0.34mmol、1当量）をTFA/DCM混合物（1/5mL）中に配置し、且つ当該反応物を室温で2時間撹拌する。次いで、当該反応混合物をトルエンで希釈し、蒸発乾固させる。残渣をDCMに吸収させ、飽和NaHCO3水溶液で洗浄し、有機相を蒸発乾固させる。残渣を最少量のDCMに溶解させ、大量のEt2Oを加え、形成された固体をフラスコの底に沈殿させる。固体をフラスコに残しながら溶媒を慎重に除去し、ペンタンを加え、且つ当該固体をろ過すると所望の化合物を与える。
【０２５８】
（2.5.  化合物17：  2-[2-[3-(5-シアノ-2-ピリジル)-5-(テトラヒドロピラン-4-イルアミノ)イミダゾ[4,5-b]ピリジン-6-イル]オキシエトキシ]エチル2-(メチルアミノ)アセタート）
【化４０】
2020507612.tif 000052
中間体32（205mg、0.34mmol、1当量）をTFA/DCM混合物（1/5mL）中に配置し、当該反応物を室温で2時間撹拌する。次いで、当該反応混合物をトルエンで希釈し、且つ蒸発乾固させる。残渣をDCMに吸収させ、飽和NaHCO3水溶液で洗浄し、且つ有機相を蒸発乾固させる。残渣を最少量のDCMに溶解させ、大量のEt2Oを加え、形成された固体をフラスコの底に沈殿させる。固体をフラスコに残しながら溶媒を慎重に除き、ペンタンを加え、且つ当該固体をろ過すると所望の化合物を与える。
【０２５９】
（1.1.  化合物18：  2-[2-[3-(5-シアノ-2-ピリジル)-5-(テトラヒドロピラン-4-イルアミノ)イミダゾ[4,5-b]ピリジン-6-イル]オキシエトキシ]エチル(2S)-ピロリジン-2-カルボキシラート）
【化４１】
2020507612.tif 000053
中間体33（211mg、0.34mmol、1当量）をTFA/DCM混合物（1/5mL）中に配置し、当該反応物を室温で2時間撹拌する。次いで、当該反応混合物をトルエンで希釈し、且つ蒸発乾固させる。残渣をDCMに吸収させ、飽和NaHCO3水溶液で洗浄し、且つ有機相を蒸発乾固させる。残渣を最少量のDCMに溶解させ、大量のEt2Oを加え、形成された固体をフラスコの底に沈殿させる。固体をフラスコに残しながら溶媒を慎重に除き、ペンタンを加え、且つ当該固体をろ過すると所望の化合物を与える。
【０２６０】
（2.6.  化合物19：  2-[2-[3-(5-シアノ-2-ピリジル)-5-(テトラヒドロピラン-4-イルアミノ)イミダゾ[4,5-b]ピリジン-6-イル]オキシエトキシ]エチル(2S)-2-[(2-アミノアセチル)アミノ]-3-メチル-ブタノアート）
【化４２】
2020507612.tif 000054
中間体34（212mg、0.31mmol、1当量）をTFA/DCM混合物（1/5mL）中に配置し、且つ当該反応物を室温で2時間撹拌する。次いで、トルエンを加え、溶媒を蒸発乾固させる。残渣をDCMに溶解させ、飽和NaHCO3水溶液の添加後固体が沈殿する。それをろ過し、且つ乾燥させると所望の化合物を与える。
【０２６１】
（2.7.  化合物27：  (3S)-3-アミノ-4-[2-[2-[3-(5-シアノ-2-ピリジル)-5-(テトラヒドロピラン-4-イルアミノ)イミダゾ[4,5-b]ピリジン-6-イル]オキシエトキシ]エトキシ]-4-オキソ-ブタン酸塩酸塩）
【化４３】
2020507612.tif 000055
HClの1,4-ジオキサン溶液（4 M、0.4mL、1.6mmol、5当量）を、1,4-ジオキサン（4mL）中の中間体35（222mg、0.32mmol、1当量）に加える。当該混合物を室温で3時間撹拌し、次いで、蒸発乾固させる。残渣をHClの1,4-ジオキサン溶液（4 M、6mL）に吸収させ、当該反応物を室温で2時間撹拌し、且つさらなるHClの1,4-ジオキサン溶液（4 M、2mL）を加える。室温で1時間撹拌後、溶媒を蒸発乾固させると所望の化合物を与える。
【０２６２】
（2.8.  化合物28：  4S)-4-アミノ-5-[2-[2-[3-(5-シアノ-2-ピリジル)-5-(テトラヒドロピラン-4-イルアミノ)イミダゾ[4,5-b]ピリジン-6-イル]オキシエトキシ]エトキシ]-5-オキソ-ペンタン酸塩酸塩）
【化４４】
2020507612.tif 000056
HClの1,4-ジオキサン溶液（4 M、0.41mL、1.63mmol、5当量）を、1,4-ジオキサン（4mL）中の中間体36（232mg、0.33mmol、1当量）に加える。当該混合物を室温で3時間撹拌し、次いで、蒸発乾固させる。残渣をHClの1,4-ジオキサン溶液（4 M、6mL）に吸収させ、且つ当該反応物を室温で2時間撹拌する。溶媒を蒸発乾固させると所望の化合物を与える。
【０２６３】
（2.9.  化合物33：  4-[2-[2-[3-(5-シアノ-2-ピリジル)-5-(テトラヒドロピラン-4-イルアミノ)イミダゾ[4,5-b]ピリジン-6-イル]オキシエトキシ]エトキシ]-4-オキソ-ブタン酸）
【化４５】
2020507612.tif 000057
中間体37（90mg、0.16mmol、1当量）をTFA/DCM混合物（1/5mL）中に配置し、且つ当該反応物を室温で2時間撹拌する。次いで、トルエンを加え、且つ溶媒を蒸発乾固させる。残渣を、シリカゲルのフラッシュ・クロマトグラフィーにより、DCM中の0乃至6% MeOHから溶出させて精製し、且つ得られた生成物をMeOHから沈殿させると、ろ過後に所望の化合物を与える。
表III.  例示的な本発明の化合物
SM=出発物質、Mtd=方法、MS Mes'd=測定された質量
【表３】
2020507612.tif 000058
2020507612.tif 000059
2020507612.tif 000060
2020507612.tif 000061
2020507612.tif 000062
2020507612.tif 000063
2020507612.tif 000064
表IV.  代表的な本発明の化合物のNMRデータ
【表４】
2020507612.tif 000065
2020507612.tif 000066
2020507612.tif 000067
2020507612.tif 000068
【０２６４】
（生物学的実施例）
（実施例3.  イン・ビトロ・アッセイ）
（3.1.  ヒトIRAK-4に対するIC50の決定）
IRAK-4に対するIC50値を、放射性のフィルター・プレート・アッセイにおいて決定する。アッセイの原理は、[γ-33P]ATP及びATPを使用する酵素IRAK-4によるリン酸化時の、RIP140基質内への取り込まれた33Pの測定にある。取り込まれなかった33Pは、フィルター・プレートへの試料のローディング（ハーベスター（PerkinElmer社）を使用）及び6回のその後の洗浄工程により除去する。RIP140中の取り込まれた33Pを、MicroScint（商標）-20（PerkinElmer社、6013621）のフィルター・プレートへの添加後に、シンチレーション・カウンター（Topcount、PerkinElmer社）により測定する。
【０２６５】
100% DMSOストック溶液からの、試験化合物の1/5希釈の水希釈系列（20μM又は6.6μMの最高濃度から出発）の5μLをウェルに加える（反応アッセイ中の最終DMSO濃度1%）。IRAK-4（Carna Biosciences社、09-145）及びRIP140（配列番号1、表VII参照）を、それぞれ、10ng/mL及び4μMの最終濃度で使用する。当該酵素及び基質を、25mMトリスpH 7.5、0.025% トリトンX-100、5mM MnCl2、及び2mM DTT中で、総体積11μLに希釈する。9μLの1μM ATP（Sigma社、A6419-5G）+0.25μCi[γ-33P]ATP（PerkinElmer社、NEG602K001MC）の添加により反応を開始させ、当該酵素及び基質と同じ緩衝液に希釈する。当該混合物を、30℃で45分間インキュベートする。25μLの150mMリン酸（VWR社、1.00573.1000）を加えることにより、反応を終了させる。試料をフィルター・プレートに移し、取り込まれた放射能を、シンチレーション・カウンターを使用して測定する。
【０２６６】
10μMスタウロスポリン（1% DMSO）を陽性対照（100%阻害）として；ビヒクル（水+1% DMSO）を陰性対照（0%阻害）として使用する。
表V．  本発明の化合物のイン・ビトロのヒトIRAK-4 IC50
【表５】
2020507612.tif 000069
【０２６７】
（3.2.  キナーゼ選択性プロファイリング（ブロードなパネル(broad panel)））
ヒトキナーゼの阻害を、REACTION BIOLOGY（Reaction Biology Corp., 1 Great Valley Parkway, Suite 2 Malvern, PA 19355, USA）で、放射分析キナーゼ・アッセイで決定する。
【０２６８】
そのIC50を決定するために、化合物を、10μM（最高濃度）で始まり、3倍段階希釈を有する10種の投与量で試験する。IC50値を、残存酵素活性の%（DMSO対照に対する）の用量反応曲線をフィッティングすることにより誘導する。
【０２６９】
（3.3.  キナーゼ選択性プロファイリング（集中されたパネル(focused panel)））
このアッセイの目的は、阻害される場合望ましくない副作用をもたらし得る、選択された範囲のヒトキナーゼに対する本発明の化合物の活性及び選択性を決定することである（Dy及びAdjeiの文献、2013；Force及びKolajaの文献、2011）。
【０２７０】
（3.3.1.  アッセイ・プロトコル）
オフターゲット・キナーゼに対するIC50値を、放射性のフィルター・プレート・アッセイで決定する。アッセイの原理は、[γ-33P]ATP及びATPを使用するキナーゼ酵素によるリン酸化時の、ペプチド基質内への取り込まれた33Pの測定にある。取り込まれなかった33Pは、フィルター・プレートへの試料のローディング（ハーベスター（PerkinElmer社）を使用）及び6回のその後の洗浄工程により除去する。ペプチド基質中の取り込まれた33Pを、MicroScint（商標）-20（PerkinElmer社、6013621）のフィルター・プレートへの添加後に、シンチレーション・カウンター（Topcount、PerkinElmer社）により測定する。
【０２７１】
100% DMSOストック溶液からの、試験化合物の1/5希釈の水希釈系列（20μM又は6.6μMの最高濃度から出発）の5μLを、ウェルに加える（反応アッセイ中の最終DMSO濃度1%）。酵素及びペプチド基質を最適な濃度で使用する（表VI参照）。当該酵素及び基質を、アッセイ緩衝液中で、総体積11μLに希釈する。当該酵素及び基質と同じ緩衝液に希釈した、9μLのATP+[γ-33P]ATPの添加により反応を開始させる。当該混合物を、30℃でインキュベートする。25μLの150mMリン酸を加えることにより、反応を終了させる。試料をフィルター・プレートに移し、取り込まれた放射能を、シンチレーション・カウンターを使用して測定する。
【０２７２】
インキュベーション時間、アッセイ緩衝液組成、並びにATP、酵素、及び基質の濃度を、例えばキナーゼ・オフターゲット・アッセイについて、表VIに報告する。
【０２７３】
10μMスタウロスポリン（1% DMSO）を陽性対照（100%阻害）として；ビヒクル（水+1% DMSO）を陰性対照（0%阻害）として使用する。
表VI.  ヒトキナーゼ・オフターゲット阻害アッセイの条件
【表６】
2020507612.tif 000070
表VII.  ヒトキナーゼ・オフターゲット阻害アッセイに使用されたペプチド基質
【表７】
2020507612.tif 000071
表VIII.  例示的な本発明の化合物のイン・ビトロのヒトキナーゼ・オフターゲットIC50
【表８】
2020507612.tif 000072
【０２７４】
（3.3.2.  結論）
表VIIIのデータは、表Vのデータと関連して、IRAK-4中に対してキナーゼ・オフターゲット中での本発明の化合物のより低い阻害性効力を示す。これらのデータは、IRAK-4に対する本発明の化合物の選択性を確認し、そのため、キナーゼ・オフターゲット阻害と関連する副作用のリスクを限定する。
【０２７５】
（3.4.  細胞アッセイ：  PBMC中でのCL097活性化TNFα放出阻害）
本発明の化合物を、初代単離ヒト末梢血単核細胞（PBMC）を使用する細胞アッセイにおいて試験して、特異的なTLR7/8アゴニスト、CL097を使用するTLR活性化時の炎症性サイトカインTNFαの分泌を測定する。細胞培養上清中のTNFαタンパク質の放出を、ヒトTNFα酵素結合免疫吸着測定（ELISA）プロトコルにより定量化する。
【０２７６】
（3.4.1.  ヒトのバフィー・コートからのヒト初代PBMCの単離）
ヒトのバフィー・コート（クロアチア輸血医療研究所（the Croatian Institute for Transfusion Medicine）により提供）を、一晩4℃に保ち、且つ翌日、PBMCの単離のために処理する。PBMCを、Ficoll Paque（商標）PLUS（GE HealthCare社、17-1440-02）を使用して密度勾配遠心分離により単離する。等体積のバフィー・コートを、滅菌されたPBS（1X）で１：４に希釈し、適切な50mL Falcon（登録商標）チューブ中で、35mLを15mLのFicoll Paque PLUSの上に注意深く層状に置く。チューブを35分間1500rpmで、室温で、加速も中断もせずに遠心分離する。遠心分離後、上の血漿層を除去し、且つ単核細胞のリングを慎重に単離し、新しいFalcon（登録商標）チューブに移す。単離された細胞懸濁液を、PBS中で50mLまで希釈し、それに続いて1300rpmで、10分間室温で遠心分離工程を行う。2回の追加のPBS中での洗浄工程及び細胞プーリング（cell pooling）の後、残存する赤血球を、50mLのAKL溶解緩衝液（150mM NH4Cl、10mM NaHCO3、1mM Na2EDTA、pH 7.4）中への細胞ペレットの再懸濁とそれに続く穏やかな混合により溶解させる。次いで、50mLの懸濁液を、1300rpmで10分間、室温で遠心分離し、それに続いて上清を除去し、細胞ペレットを、培地（RPMI 1640（Gibco、21875）+56℃で30分間熱非働化された10%ウシ胎児血清（FBS、Biowest社、S1810）+Pen/Strep（Gibco、15240））中に再懸濁させる。
【０２７７】
（3.4.2.  PBMCアッセイにおける化合物処理及び誘発）
細胞を、血液分析器（Sysmex社XS 500i）を使用して計数し、且つウェルあたり4.0×105細胞の密度で、96ウェル培養プレート中の160μL培地に播種する。その後に、PBMCを、20μLの10倍濃度の化合物溶液の添加により、試験化合物と共に、1時間37℃及び5% CO2でプレインキュベートする。化合物を異なる濃度で試験し、且つDMSO中の10mMストック溶液からの３倍段階希釈と、それに続く1% FBS及び1% Pen/Strepを補った2X M199培地（Gibco、21157-029）中での１：５０希釈工程により調製する。アッセイ中の最終試験濃度は、20μMから始まり、その後３倍段階希釈され、最終DMSO濃度は等しく0.2%とする。化合物プレインキュベーション工程の後、20μLの10μg/mL CL097溶液（InvivoGen社、tlrl-c97-5）をウェルへ添加し、最終アッセイ体積をウェルあたり200μLとし、1μg/mLの最終CL097誘発濃度として、PBMCを誘発する。陰性対照は、CL097による誘発なしに等しいDMSO濃度に調整する。次いで、アッセイ・プレートを、加湿インキュベーター中で、37℃及び5% CO2で、4時間インキュベートする。次いで、細胞上清を、細胞培地を384ディープ・ウェル・プレートに移すことにより収集し、且つヒトTNFαの定量化のために直ちにELISAプレートに移す。
【０２７８】
（3.4.3.  ELISAによるTNFαの定量化）
細胞上清中の分泌されたTNFαのレベルを、抗体捕捉活性アッセイ（ELISA）で定量化する。白色のGreiner Lumitrac（商標）384ウェル・プレートを、ウェルあたり40μLのPBS中に希釈された1μg/mL抗ヒトTNFα抗体溶液（MAb1；BD Biosciences社、551220）により、4℃での一晩のインキュベーションの間、被覆する。100μL PBSによりウェルを洗浄した後、残っている結合部位を100μLのブロッキング緩衝液（PBS+1%ウシ血清アルブミン+5%スクロース）でブロッキングし、且つ室温で4時間インキュベートする。ブロッキング工程に続いて、ウェルを、ツイーン20を含むPBS（PBST）で1回洗浄し、それに続いて試料及び標準を加える。TNFαを含む試料を、希釈緩衝液で1/3に希釈し、且つ40μLを4℃での一晩のインキュベーションのために加える。次いで、250ng/mLの最終濃度での1/2000希釈フォーマットの35μLの二次ビオチン化抗TNFα検出抗体（MAb11；BD Biosciences社、554511）を加えた後、ウェルを、3回（PBSTにより2回、PBSにより1回）洗浄する。室温での2時間のインキュベーション及び適切な洗浄工程（2×PBST、1×PBS）の後、ウェルを、35μLの1/4000希釈されたホースラディッシュペルオキシダーゼ結合ストレプトアビジン溶液（Life Technologies社製、SNN2004）と共にインキュベートし、それに続いて、室温で暗所での45分のインキュベーション工程を行う。次いで、ウェルを3回洗浄し（2×PBST、1×PBS）、それに続いて、50μLのChemiluminescence ELISA Substrate溶液（Roche社、11582950001）と共に5分のインキュベーションを行う。転化された基質発光シグナルを、PerkinElmer EnVision 2104 Multilabelプレート・リーダーで測定する。
【０２７９】
（3.4.4.  データ分析）
全対照を、ELISAのヒトTNFα標準曲線の直線範囲内で測定する。全データを、アッセイの品質パラメータに対する妥当性に関して確認する（シグナル/バックグラウンド＞2及びZ'＞0.3）。
【０２８０】
刺激されていない試料（誘発なし/ビヒクル（0.2% DMSO））を陽性対照（100%阻害）として使用する。陰性対照（0%阻害）として、刺激された試料（誘発/ビヒクル（0.2% DMSO））を使用する。陽性対照及び陰性対照を使用して、以下の式により、Z'及び阻害パーセント（PIN）値を計算する：
【０２８１】
【数１】
2020507612.tif 000073
（但し、RCLU=相対化学ルミネセンス光単位）。
【０２８２】
PIN値は、濃度反応モードで試験された化合物に関してプロットされ、非線形回帰（S字状）カーブ・フィッティングを適用して、GraphPad Prism（登録商標）ソフトウェアを使用して、IC50値が誘導される。
【０２８３】
（3.5.  細胞アッセイ：  癌細胞アッセイ）
（3.5.1.  細胞株）
OCI-Ly3、OCI-Ly10、OCI-Ly7、及びOCI-Ly19細胞株（DSMZ、Germany又はATTC、USから）由来のヒトリンパ腫細胞を、10%ウシ胎児血清（Invitrogen、S7524）又は20%ヒト血清（Invitrogen、34005100）を補ったIMDM（Gibco（登録商標）、21980-032）中で、37℃で5% CO2中で培養する。
【０２８４】
（3.5.2.  細胞成長アッセイ）
リンパ腫細胞（2乃至7×103）を96ウェル・プレート中に播種し、且つ30μM（1/3希釈、8点）からの異なる投与量の試験化合物により処理する。処理された細胞を、7日間37℃で5% CO2中でインキュベートする。スタウロスポリン（10μM）を陽性対照として使用する。
【０２８５】
細胞成長は、製造者の説明に従って、アラマーブルー（登録商標）（Invitrogen、DAL 1025）と共に細胞をインキュベートすることによって決定される。PerkinElmer EnVision（登録商標）プレート・リーダーを使用して、蛍光が測定される。DMSOビヒクル値を0%阻害として、且つスタウロスポリン値を100%阻害として使用して、成長阻害のパーセンテージが計算される。
【０２８６】
（3.5.3.  SW1353細胞におけるIL-1及びTNFα反応細胞アッセイ）
このアッセイの目的は、イン・ビトロのヒト細胞アッセイ状況中での活性化されたTLR/IRAK-4経路に対する本発明の化合物の選択性を評価することである。SW1353細胞は軟骨細胞株由来であり、且つインターロイキン1（IL-1）とTNFαサイトカイン誘因の両者に感受性がある。両サイトカイン誘因は、これらの細胞によるインターロイキン6（IL-6）及びMMP13の発現を誘導する。IL-6及びMMP13放出は、このアッセイにおける読取り値（readouts）として使用され、且つ試験される化合物によるTLR/IRAK-4経路の阻害のレベルの尺度を表す。IL-1誘因は、IRAK-4依存性経路を介してシグナル伝達するが、TNFαはシグナル伝達にIRAK-4を要さない。したがって、IRAK-4のみを選択的に阻害する化合物は、SW1353細胞による、IL-1により推進されるMMP13又はIL-6の発現に影響し、且つTNFαにより推進されるこれらのタンパク質の発現には影響しない。
【０２８７】
（3.5.4.  SW1353細胞の採取及び播種）
SW1353細胞を、10% FBS及び1%ペニシリン／ストレプトマイシンを補ったDMEM中で培養する。細胞を、5% CO2の加湿された雰囲気中で、37℃でインキュベートし、且つ週に2回継代培養する。継代培養の間、トリプシン-EDTAを使用して細胞を剥がし、それに続いて細胞培地による中和工程を行う。遠心分離（5分の間1,000rpm）の後、ペレットを、細胞培地中に再懸濁させ、且つ細胞を、自動セル・カウンター（Invitrogen Countess（商標））を使用して計数する。
【０２８８】
細胞を16継代で使用し、且つウェルあたり15,000細胞の密度で、96ウェル培養プレート中の120μL細胞培地に播種する。細胞を、一晩のインキュベーションの間に接着させる。
【０２８９】
（3.5.5.  SW1353アッセイにおける化合物処理及び誘発）
SW1353細胞を、15μLの10倍濃度の化合物溶液を加えることにより、試験化合物と共に2時間37℃及び5% CO2でプレインキュベートする。化合物を異なる濃度で試験し、且つDMSO中の10mMストック溶液からの3倍段階希釈と、それに続いて細胞培地中の1/50希釈工程により調製する。アッセイ中の最終試験濃度は20μMから始まり、その後3倍段階希釈され、最終DMSO濃度は等しく0.2%とする。化合物プレインキュベーション工程後、15μLの10倍濃度IL-1β（Peprotech社、200-01B）又はTNFα誘因（Peprotech社、300-01A）を、ウェルに、最終アッセイ体積をウェルあたり150μLにして、最終誘発濃度をそれぞれ1ng/mL及び10ng/mLにして加えることにより、SW1353細胞を誘発する。陰性対照を、誘発なしで、等しいDMSO濃度により調整する。次いで、アッセイプレートを、加湿インキュベーター中で、37℃及び5% CO2でインキュベートする。細胞上清を、細胞培地をV字底ポリプロピレン96-ウェル・プレートに移すことにより24時間及び48時間後に収集し、ELISA読取りまで-80℃で保存する。
【０２９０】
（3.5.6.  ELISAによるIL-6の定量化）
細胞上清中の分泌されたIL-6のレベルを、酵素結合免疫吸着法（ELISA）で定量化する。白色のLumitrac（商標）384-ウェル・プレートを、ウェルあたり40μLのPBSで希釈した1μg/mL抗-ヒトIL-6マウス抗体（R&D Systems社、MAB206）溶液により、4℃で一晩被覆する。100μLのPBSTで2回及びPBSで1回ウェルを洗浄した後、残存する結合部位を、100μLのブロッキング緩衝液（PBS中1% BSA及び5%スクロース）でブロッキングし、且つ室温で4時間インキュベートする。ブロッキング工程の後、ウェルをPBSTで1回洗浄し、それに続いて、試料か、標準としての組換え型ヒトIL-6（R&D Systems社、206-IL-050）のいずれかを加える。試料を希釈緩衝液中で1/20に希釈し、且つ40μLを4℃での一晩のインキュベーションのために加える。次いで、35μLの二次ビオチン化抗-IL-6検出抗体（ヒトIL-6ビオチン化ヤギポリクローナル抗体（R&D Systems社、BAF206））を50ng/mLの最終濃度で加えた後で、ウェルを、3回（PBSTにより2回、PBSにより1回）洗浄する。室温での2時間のインキュベーション及び適切な洗浄工程（PBSTにより2回及びPBSにより1回）の後、ウェルを、35μLの1/2,000希釈されたストレプトアビジン-HRP溶液（Invitrogen社、SNN2004）と共にインキュベートし、それに続いて、室温で、暗所で45分インキュベーションを行う。次いで、ウェルを3回（PBSTにより2回及びPBSにより1回）洗浄し、それに続いて、50μLの化学発光ELISA基質溶液（Roche社製、11 582 950 001）と共に5分インキュベーションを行う。転化された基質のルミネセンスを、Luminoskan（商標）Ascent照度計により測定する。
【０２９１】
（3.5.7.  ELISAによるMMP13の定量化）
細胞上清中の分泌されたMMP13のレベルを、抗体捕捉活性アッセイで定量化する。この目的のために、黒色のNunc（登録商標）MaxiSorp（商標）384-ウェル・プレートを、35μLの1.5μg/mL抗-ヒトMMP13抗体溶液により一晩4℃で被覆する。ウェルを2回PBSTで洗浄した後、残存する結合部位を、100μLのPBS中の5%脱脂粉乳により24時間4℃でブロッキングする。ブロッキング工程の後で、ウェルをPBSTにより2回洗浄し、それに続いて試料及び標準を添加する。試料を、希釈緩衝液中で1/5に希釈し、且つ35μLを4時間室温で加える。次いで、ウェルをPBSTで2回洗浄する。その後に、MMP13タンパク質を、35μLの1.5mM APMA溶液（Sigma-Aldrich社、A9563）の添加により十分に活性化し、且つ37℃1時間インキュベートする。次いで、ウェルをPBSTで2回洗浄し、且つ35μL MMP13基質（OMNIMMP（登録商標）蛍光発生基質（BIOMOL、P-126））を加える。37℃で1時間のインキュベーション後、転化された基質の蛍光を、PerkinElmer EnVision（登録商標）（励起波長：320nm、発光波長：405nm）により測定する。
【０２９２】
（3.5.8.  データ分析及び計算）
全対照を、ELISAのヒトIL-6及びMMP13標準曲線の直線範囲内で測定する。発生した全データを、アッセイ品質パラメータに対する妥当性に関して確認する（シグナル/バックグラウンド＞2及びZ'＞0.3）。
【０２９３】
刺激されない試料（誘発なし/ビヒクル（0.2% DMSO））を陽性対照（100%阻害）として使用する。陰性対照（0%阻害）として、刺激された試料（誘発／ビヒクル（0.2% DMSO））を使用する。陽性対照及び陰性対照を使用して、Z'及び阻害パーセント（PIN）値を計算する。
【０２９４】
阻害パーセンテージ（PIN）=（（RU誘発/ビヒクル-RU試験化合物）／（RU誘発／ビヒクル-RU誘発なし／ビヒクル）*100）；但し、RUは、それぞれIL-6及びMMP13 ELISAの相対化学ルミネセンス光単位又は相対蛍光単位を意味する。PIN値を、濃度反応で試験された試験化合物に関してプロットし、IC50値を、非線形回帰(S字状)カーブ・フィッティングを適用し、GraphPad Prism（登録商標）ソフトウェアを使用して導き出す。
表IX.  例示的な本発明の化合物のSW1353細胞選択性アッセイ結果
【表９】
2020507612.tif 000074
【０２９５】
(3.5.9.  結論）
表IXのデータは、本発明の組成物の式Iにしたがう化合物が、IL-1βにより誘発されたSW1352細胞中でIL-6及びMMP13発現を強力に阻害するが、TNFαにより誘発された事象に対するそのような化合物の効果が、効力と最大の大きさの両方の点で限定的とされていることを示す。これらのデータは、TNFαシグナル伝達に対しては非常に限定的な影響しかないIRAK-4により推進される経路に向けた本発明の組成物の式Iにしたがう化合物の選択性を確認するが、それは、一方、好中球減少症及び感染のような、治療と関連する副作用の発生を限定し得る。
【０２９６】
（実施例4.  ADMEアッセイ）
（4.1.  動力学的溶解度）
化合物の3.3mM DMSOストック溶液から出発して、化合物の段階希釈液を、1/2希釈を実施することによりDMSO中で調製する：3.3、1.6、0.83、0.41及び0.21mM。この希釈系列を、透明なV字底96ウェル・プレート（Greiner社製、651201）に移し、さらに、0.1 Mリン酸緩衝液pH 7.4又は0.1 Mクエン酸緩衝液pH 3.0中で1/33.5に希釈する。最終化合物濃度は、99.5、49.7、24.9、12.4及び6.22μMである。最終DMSO濃度は、3%以下である。沈殿の陽性対照として、ピレン（30mM）を、各96ウェル・プレートの角のウェルに加える。アッセイ・プレートを密封し、且つ230rpmで振とうしながら37℃で1時間インキュベートする。次いで、プレートを白色光顕微鏡下でスキャンし、1濃度あたりの沈殿物の個別の写真（50倍の倍率）を得る。各ウェルを画像分析ソフトウェアにより分析し、且つ化合物が完全に溶解したように見える最高濃度を報告する。
【０２９７】
（4.2.  ミクロソーム安定性）
DMSO中の化合物の10mMストック溶液をDMSO中で3倍希釈する。次いで、この予備希釈された化合物溶液を、96ディープ・ウェル・プレート（Nunc、278752）中で、105mMリン酸緩衝液（pH 7.4）中で2μMに希釈し、37℃で前以て温める。
【０２９８】
700U/mLのグルコース-6-リン酸デヒドロゲナーゼ（G6PDH、Roche社、10127671001）使用ストック溶液を、105mMリン酸緩衝液、pH 7.4中で1:700の倍率で希釈する。0.528M MgCl2.6H2O（Sigma社、M2670）、0.528M D-グルコース-6-リン酸（Sigma社、G7879）、及び0.208M NADP+（Sigma社、N0505）を含むコファクター・ミックスを、105mMリン酸緩衝液、pH 7.4中で1:8の倍率で希釈する。
【０２９９】
対象の種（例えば、ヒト、マウス、ラット、イヌ）の1mg/mL肝臓ミクロソーム（Tebu-bio社製）、1.2U/mL G6PDH及びコファクター・ミックス（6.6mM MgCl2、6.6mMグルコース-6-リン酸、2.6mM NADP+）を含む使用溶液を作製する。この混合物を、15分間、決して20分を超えずに室温でプレインキュベートする。
【０３００】
プレインキュベーション後に、化合物希釈液及びミクロソームを含む混合物を等量で加え、30分間300rpmでインキュベートする。0分の時点で、ミクロソーム混合物を加える前に、2体積のMeCNを化合物希釈液に加える。インキュベーションの間の最終濃度は、1μM試験化合物又は対照化合物、0.2% DMSO、0.5mg/mLミクロソーム、0.6U/mL G6PDH、3.3mM MgCl2、3.3mMグルコース-6-リン酸、及び1.3mM NaDP+である。
【０３０１】
37℃での30分のインキュベーションの後で、反応を2体積のMeCNで停止させる。
【０３０２】
試料を混合し、遠心分離し、且つ上清を、LC-MS/MSでの分析のために収集する。残存する化合物のパーセンテージを決定するために、装置応答（すなわち、ピーク高さ）の基準を零時点の試料（100%と考えられる）にする。プロプラノロール及びベラパミルを、アッセイ・デザインにおいて基準として含める。
【０３０３】
ミクロソーム安定性に関するデータを、30分のインキュベーション後に残存する化合物の総量のパーセンテージとして表す。
（4.3.  S9細胞内分画における代謝安定性）
このアッセイの目的は、アルデヒドオキシダーゼによる化合物代謝を、S9細胞分画におけるそのイン・ビトロ代謝安定性の決定により評価することである。
DMSO中の化合物の10mMストック溶液を、最初にDMSO中で希釈して（40倍）、250μM濃度を得る。この化合物溶液を、さらに水で希釈して（5倍）、50μM化合物使用溶液を得る（1μMの化合物最終濃度を得るため）。ヒドララジン（アルデヒドオキシダーゼの選択的阻害剤）を、5mMで水中に調製する（100μMの最終濃度を得るため）。インキュベーション混合物を、10μLの肝臓S9懸濁液（ヒト、ラット、マウス、サル、BD Gentest（商標）、20mg/mL）を、86μLの50mMリン酸カリウム緩衝液、pH 7.4に、37℃で加える（2mgタンパク質/mLの最終濃度）ことによって調製する。2μLの5mMヒドララジンを、選択的阻害剤又は2μLの水の添加と一緒のインキュベーションのために、阻害剤なしのインキュベーションのために加える。5分の予備加温の後、当該反応を、2μLの50μM試験化合物のインキュベーション混合物への添加により開始させる。0、3、6、12、18、及び30分のインキュベーションの後、当該反応物（100μL）を、分析内部標準としての10ng/mLのワルファリンを含む1%酢酸混合物を伴う300μLのMeCN:MeOH（2:1）により停止させる。当該試料を混合し、遠心分離し、上清をLC-MS/MSにより分析する。フタラジン（Phtalazine）を陽性対照として含める。
残存する化合物のパーセンテージを決定するために、装置応答（化合物と内部標準のピーク面積比）の基準を、零時点の試料（100%と考えられる）にする。残存する化合物の%のプロットを、GraphPad Prism（登録商標）ソフトウェアを使用してS9インキュベーション中の半減期及び固有クリアランスを決定するために使用する。以下の式を、イン・ビトロ固有クリアランス（μL/分/mg）を計算するために使用する：
CL中間体(μL/分/mg)=0.693/t1/2(分)*(インキュベーションのmL/mgタンパク質)*1000
S9によるクリアランスがヒドララジンにより阻害される場合、試験化合物は、アルデヒドオキシダーゼの基質として分類できる。試験化合物の種に特異的なクリアランスも、アルデヒドオキシダーゼによる代謝を示し得る。
【０３０４】
（4.4.  肝細胞中の代謝安定性）
DMSO中の試験化合物の10mMストック溶液を、最初に、DMSO中で3mMに希釈し、次いで、改変型クレブス・ヘンゼライト緩衝液（Sigma社、K3753）中で5μMに希釈する。この化合物希釈液を、プールされた凍結保存肝細胞（BioreclamationIVT）の懸濁液に37℃で穏やかな振とうをしながら加える。最終的な反応条件は、1μMの試験化合物、0.03% DMSO、50万の生存肝細胞/mL、及び75μLインキュベーション体積である。テストステロン（1μM）及び7-ヒドロキシクマリン（1μM）を、それぞれ、I期及びII期代謝反応対照として使用する。
【０３０５】
0、10、20、45、90、120及び180分のインキュベーション後に、当該反応を、分析内部標準としての10ng/mLのワルファリンナトリウムを含む、225μLのMeCN:MeOH（2:1）により停止させる。試料を混合し、遠心分離し、且つ上清をLC-MS/MSにより分析する。
【０３０６】
残存する化合物のパーセンテージを決定するために、装置応答（試験化合物と内部標準のピーク面積の比率）の基準を、零時点の試料(100%と考えられる)にする。
【０３０７】
GraphPad Prism（登録商標）ソフトウェアを使用して肝細胞インキュベーション中の半減期及び固有クリアランスを決定するための、残存するパーセンテージ化合物のプロットを使用する。
【０３０８】
（4.5.  CYP阻害）
ヒトチトクロムP450アイソザイム（CYP1A2、2C9、2C19、2D6及び3A4）に対する試験化合物の阻害可能性を、cDNAにより発現されるヒトチトクロムP450アイソザイム及び代謝されて蛍光性代謝物になる非蛍光基質を使用して評価する。
【０３０９】
化合物を、最終DMSO濃度を0.3%として、3.3及び10μMで試験する。化合物を酵素と共に15分間インキュベートしてから、補因子基質ミックスを加える。CYP3A4（BD Biosciences社製、456202）、CYP2C9（BD Biosciences社、456258）、CYP2C19（BD Biosciences社、456259）及びCYP1A2（BD Biosciences社、456203）アッセイ用の補因子ミックスの最終反応濃度は、0.4U/mLグルコース-6-リン酸（phophate）デヒドロゲナーゼ（G6PDH、Roche社、10165875001）、3.3mM MgCl2（Sigma社、M2670）、3.3mM D-グルコース-6-リン酸（Sigma社、G7879）及び1.3mM NADP+（Sigma社、N0505）である。CYP2D6（BD Biosciences社、456217）では、アッセイ中の最終反応濃度は、0.4U/mL G6PDH、0.41mM MgCl2、0.41mM D-グルコース-6-リン酸及び8.2μM NADP+である。酵素及び基質の濃度を表Xに報告する。インキュベーション期間の後に、当該反応を、停止液の添加により停止させる。基質としてDBFを使用する実験では2N NaOH停止液を使用し、他の全ての基質では、停止液は80% MeCN/20% 0.5Mトリス塩基である。
【０３１０】
蛍光を、直ちに（CEC、AMMC、BFCの場合）、又は20分後（基質としてDBFを使用するCYP2C9及びCYP3A4の場合）、PerkinElmer EnVision（登録商標）リーダーで、適切な励起及び発光波長（表X参照）で読み取る。
【０３１１】
次いで、試験化合物によるCYPの阻害パーセンテージを、データをブランク試料に対して標準化することにより計算する：100%阻害は、酵素／基質ミックスの添加前に停止されたブランク試料であり、且つ0%阻害は、酵素反応が起こった（50分）後に停止されたブランク試料である。
表X.  試験された各CYP450アイソザイムに使用された阻害アッセイ条件
【表１０】
2020507612.tif 000075
AMMC：アミノエチル-7-メトキシ-4-メチルクマリン  CEC：3-シアノ-7-エトキシクマリン
BFC：7-ベンジルオキシ-4-トリフルオロメチルクマリン  DBF：ジベンジルフルオレセイン
【０３１２】
（4.6.  MDCKII-MDR1透過性）
MDCKII-MDR1細胞は、P糖タンパク質（P-gp）をコードするヒト多剤耐性（MDR1）遺伝子を過剰発現するメイディン・ダービー（Madin-Darby）イヌ腎臓上皮細胞である。細胞は、オランダ癌研究所（the Netherlands Cancer Institute）から得て、且つ24-ウェルMillicell（登録商標）セル・カルチャー・インサート・プレート（Millipore、PSRP010R5）中での3乃至4日の培養後に使用する。双方向MDCKII-MDR1透過性アッセイを、以下に記載のとおり実施する。
【０３１３】
3×105細胞/mL（1.2×105細胞／ウェル）を、DMEM（Sigma社、D5796）+1%グルタマックス-100（Sigma社、G8541）+1%抗生物質／抗真菌剤（Sigma社、A5955）+10% FBS（Sigma社、F7524；56℃で30分間非働化）からなる播種培地に播種する。細胞を、CO2インキュベーター中に3乃至4日間おく。培地を、播種の24時間後及び実験の日に交換する。
【０３１４】
試験化合物及び参照化合物（アンプレナビル（Moravek Biochemicals社製、M-1613）、ジクロフェナク（Sigma社製、D6889））を、ダルベッコのリン酸緩衝生理食塩水（D-PBS、pH 7.4；Sigma社製、D8662）中で調製し、且つMillicell細胞培養プレート・アセンブリーの頂端側（400μL）又は側底側（800μL）チャンバーに、10μM（アンプレナビルの場合0.5μM）の最終濃度で、最終DMSO濃度を1%として加える。レシーバー溶液（D-PBS+1% DMSO）を、Millicell細胞培養プレートの反対のチャンバーに加える。
【０３１５】
ルシファーイエロー透過をモニターすることにより細胞単層の完全性を評価するために、100μMルシファーイエロー（Sigma社、L0259）を全ドナー緩衝溶液に加える。ルシファーイエローは、傍細胞輸送経路の蛍光マーカーであり、且つアッセイ中の全ての細胞単層の密着結合完全性を確認する内部対照として使用する。
【０３１６】
オービタル・シェーカー上で150rpmで振とうしながら37℃で1時間インキュベートした後、75μLのアリコートを、頂端側と底側の両チャンバーから採り、且つ96ウェル・プレート中の分析用内部標準（10ng/mLワルファリン）を含む225μLのMeCN:水溶液（2:1）に加える。ドナー溶液からの分注を、実験開始時にも実施して、初期濃度を得る。
【０３１７】
試料中の化合物濃度を、高速液体クロマトグラフィー／質量分析法（LC-MS/MS）により測定する。
【０３１８】
ルシファーイエローを、全レシーバー・ウェル（側底側又は頂端側）からの150μLの液体を含む96ウェル・プレート中で、Thermo Scientific Fluoroskan Ascent FL（励起波長：485nm、測定波長：530nm）により測定する。
【０３１９】
（実施例5.  全血アッセイ）
（5.1.  エクス・ビボのヒトTNFα放出阻害（全血アッセイ））
本アッセイの目的は、エクス・ビボのヒト全血状況において、活性化されたTLR/IRAK-4経路に対する本発明の化合物の活性を評価することである。Toll様受容体（TLR）は、病原体関連分子パターン（PAMP）と呼ばれる多種多様な微生物分子を認識するパターン認識受容体である。ヒトTLR7及びTLR8は、イミダゾキノリン化合物（例えば、CL097）及び一本鎖RNAをその天然のリガンドとして認識する。TLRの活性化は、TLRアゴニストによって処理された細胞によるいくつかのサイトカイン（例えば、TNFα、IL-8、IL-6）の産生を導く。サイトカイン放出は、このアッセイにおける読取り値として使用され、試験される化合物によるTLR/IRAK-4経路の阻害のレベルの尺度を表す。完全な生命体の状況において、例えば、マクロファージ（Fcγ受容体の活性化時（Yanらの文献、2012））又はT細胞（T細胞受容体の活性化時（Brehmらの文献、2005））のような、TLR/IRAK-4経路に依存しないこれらのサイトカインの他の起源が存在することに留意されたい。
【０３２０】
（5.1.1.  実験計画）
血液を、健康なボランティアからヘパリン・リチウムチューブに静脈穿刺により回収し、次いで凝固を防ぐために数回穏やかに反転し、且つロッキング・ミキサー・シェーカー上で少なくとも15分間、37℃でインキュベートする。次いで、200μLの血液を2mLのマイクロチューブに分注し、且つDMSO 0.3%又は異なる濃度の試験化合物（10乃至0.01μM、グルタミン不含のRPMI 1640（Life Technologies社、31870）中の3倍希釈）と共に、15分間37℃で、二連でプレインキュベートする。このプレインキュベーションの後、血液を、CL097（1mg/mL水溶液から2μg/mL；InvivoGen社、tlrl-c97）又はビヒクル（蒸留水）により、3時間30分、37℃で誘発する。マイクロチューブを5000×gで10分間、4℃で遠心分離し、且つおよそ80μLの血漿をポリスチレン96ウェル・プレート中に回収する。血漿を、新鮮なまま分析しても、誘発直後に-80℃で凍結してもよい。最後に、TNFαの定量化を、ヒトTNF-アルファDuoSet ELISAキット（R&D Systems社、DY210）を製造者の説明に従って使用して、血漿を40倍希釈して実施する。光学濃度（OD）を、450nmで、PerkinElmer EnVision 2102 Multilabelプレート・リーダーで測定する。
【０３２１】
（5.1.2.  データ分析）
標準曲線を、x軸上の濃度に対して平均吸光度をy軸にプロットすることにより作成し、且つベスト・フィット・カーブをグラフ上の点を通して描く。線形回帰分析を実施して、式（y=ax +b）及びR2乗値を決定する。各血液試料反復実験のために、TNFα濃度を、希釈係数を考慮して、下記式を使用して計算する：
【０３２２】
TNFα濃度試料1=40*(OD試料1-b)/a
【０３２３】
次いで、データを、各反復実験に関して、下記式を使用して阻害のパーセンテージ（PIN）として表す：
【数２】
2020507612.tif 000076
（式中、「CL097を伴う平均TNFα」は、CL097により誘発された反復実験試料の平均TNFα濃度であり；「TNFα試料1」は、試料1のTNFα濃度であり；及び「ビヒクルを伴う平均TNFα」は、ビヒクルにより処理された反復実験試料の平均TNFα濃度である。
【０３２４】
カーブ・フィッティングを、平均PIN±SEMを使用して作成する。グラフ及びIC50計算は、GraphPad Prism（登録商標）ソフトウェアを使用して誘導する。
【０３２５】
（5.2.  エクス・ビボのラットTNFα放出阻害（全血アッセイ））
本アッセイの目的は、エクス・ビボのラット全血状況において活性化されたTLR/IRAK-4経路に対する本発明の化合物の活性を評価することである。Toll様受容体（TLR）は、病原体関連分子パターン（PAMP）と呼ばれる、多種多様な微生物の分子を認識するパターン認識受容体である。ヒトTLR7とTLR8はどちらもイミダゾキノリン化合物（例えば、CL097）及び一本鎖RNAをその天然のリガンドとして認識するが、齧歯動物のTLR8は、活性化のために、オリゴデオキシヌクレオチド（例えば、ポリ(dT)）のような追加の因子を必要とする。
【０３２６】
（5.2.1.  実験計画）
スプラーグ・ドーリー（Sprague Dawley）ラット（雄、7乃至8週齢、体重200乃至250g）を、Janvier Labs社（フランス）から得る。
【０３２７】
少なくとも2匹のラットから放血により得た血液を、ヘパリン酸リチウムチューブ中に回収し、且つ次いで、ロッキング・ミキサー・シェーカー上で少なくとも15分間、37℃でプレインキュベートする。全ラットから得た血液を50mLポリプロピレン・チューブ中に混合し、唯一の血液バッチを得る。次いで、200μLの血液を2mLマイクロチューブに分注し、且つDMSO 0.3%又は異なる濃度の試験化合物（10乃至0.01μM、グルタミン不含のRPMI 1640（Life Technologies社、31870）中の3倍希釈）と共に、15分間37℃で、二連でインキュベートする。このプレインキュベーション後、血液をCL097（1mg/mL水溶液から10μg/mL、InvivoGen社、tlrl-c97）及びポリ(dT)（100μM水溶液から1μM；InvivoGen社、tlrl-pt17）又はビヒクル（蒸留水）により、3時間30分、37℃で誘発する。マイクロチューブを5000×gで10分間、4℃で遠心分離し、且つおよそ80μLの血漿をポリスチレン96ウェル・プレート中に回収する。血漿を、新鮮なまま分析しても、誘発の直後に-80℃で凍結してもよい。最後に、TNFαの定量化を、ラットTNF-アルファQuantikine ELISAキット（R&D Systems社、SRTA00）を製造者の説明に従って使用して、血漿（1:3希釈）で実施する。光学濃度（OD）を、450nmで、PerkinElmer EnVision 2102 Multilabelプレート・リーダーで測定する。
【０３２８】
（5.2.2.  データ分析）
標準曲線を、x軸上の濃度に対して平均吸光度をy軸にプロットすることにより作成し、且つベスト・フィット・カーブをグラフ上の点を通して描く。線形回帰分析を実施して、式（y=ax +b）及びR2乗値を決定する。各血液試料反復実験のために、TNFα濃度を、希釈係数を考慮して、下記式を使用して計算する：
【０３２９】
TNFα濃度試料1=40*(OD試料1-b)/a
【０３３０】
次いで、データを、各反復実験に関して、下記式を使用して阻害のパーセンテージ（PIN）として表す：
【数３】
2020507612.tif 000077
（式中、「CL097を伴う平均TNFα」は、CL097+ポリ(dT)により誘発された反復実験試料の平均TNFα濃度であり；「TNFα試料1」は、試料1のTNFα濃度であり；及び「ビヒクルを伴う平均TNFα」は、ビヒクルにより処理された反復実験試料の平均TNFα濃度である。）。
【０３３１】
カーブ・フィッティングは、平均PIN±SEMを使用して作成する。グラフ及びIC50計算は、GraphPad Prism（登録商標）ソフトウェアを使用して誘導する。
【０３３２】
（実施例6.  イン・ビボ  アッセイ）
（6.1.  TLR7/8アゴニスト、イミキモドの局所塗布により誘発される乾癬様表皮過形成のマウスモデル）
（6.1.1.  材料）
アルダラ（登録商標）5%イミキモド・クリームを、MEDA社から得る。
【０３３３】
抗マウスIL-12/IL-23 p40 FG精製抗体（C17.8）を、Affymetrix eBioscience社（カタログ番号16-7123-85）から得る。
【０３３４】
（6.1.2.  動物）
Balb/cJマウス（雌、体重18乃至20g）を、Janvier Labs社（フランス）から得る。マウスを、12時間の明暗周期（07:00乃至19:00)）に維持する。温度を、22±2℃に維持し、餌及び水は自由に与える。
【０３３５】
（6.1.3.  試験設計）
試験の設計を、Van der Fits L.ら（van der Fitsらの文献、2009）に適合させる。
【０３３６】
第1日に、マウスを、イソフルランによる軽い麻酔下で、2つの耳の周囲を剃毛する。
【０３３７】
30mgの市販のイミキモド・クリーム（アルダラ社、5%クリーム）を、各耳の内表面と外表面の両方に、連続４日間塗布するが、これは1.5mgの活性化合物の１日量ということになる。対照動物は同じ量のワセリンを受け取った。
【０３３８】
第1日から第5日に、マウスに、イミキモドの塗布前に、試験化合物を、メチルセルロース0.5%中10又は30mg/kgで経口的に1日2回投薬する（第5日には、マウスに、安楽死の2時間前に1回のみ投薬する）。
【０３３９】
陽性参照群において、動物は、第1日及び第1日の3日前に、抗-マウスIL-12/IL-23 p40抗体、10mg/kgの2回の腹腔内注射を受ける。
【０３４０】
（6.1.4.  疾患の評価）
両耳の厚さを、シックネス・ゲージ（Mitutoyo社、Absolute Digimatic、547-321）により毎日測定する。体重を、実験開始時及び犠死時に評価する。第5日に、最後の投薬の2時間後にマウスを犠死させる。耳の耳介を、軟骨を除いて切除する。耳介を秤量し、且つ次いで、1mLのRNAlater（登録商標）溶液を含むバイアル中に浸漬して遺伝子発現を評価し、又は組織学のためにホルマリンに浸漬する。
【０３４１】
１群あたり14匹のマウスがいる。結果を平均±SEMで表し、且つ統計分析は、一元配置ANOVAを使用し、それに続いてイミキモド-ビヒクル群に対するダネットの事後検定を使用して実施する。
【０３４２】
（6.1.5.  組織学）
犠死の後、耳を回収し、且つパラフィンに包埋する前に3.7%ホルムアルデヒド中で固定する。2μm厚さの切片を切り出し、且つヘマトキシリン及びエオシンにより染色する。耳の表皮厚さを、画像分析（SisNcomソフトウェア）により、20倍の倍率で取り込まれた耳あたり6つの画像で測定する。データを平均±SEMで表し、且つ統計分析を、一元配置ANOVAを使用し、それに続いてイミキモド-ビヒクル群に対するダネットの事後検定を使用して実施する。
【０３４３】
（6.1.6.  遺伝子発現分析）
耳をRNAlater（登録商標）溶液から取り出し、且つPrecellys装置中での1.4 mmセラミック・ビーズによる破壊後にTrizol（登録商標）に入れる。次いで、全RNAを、NucleoSpin（登録商標）RNAキットを使用して精製する。cDNAを調製し、且つ定量PCRを、ViiA7リアルタイムPCRシステム（Applied Biosystems社）中でSYBR Green技術を使用して、Qiagen社の遺伝子特異的プライマーにより実施する。各遺伝子（IL17A、IL1B、IL22、LCN2、S100A8及びS100A9）の発現レベルを、シクロフィリンAハウスキーピング遺伝子発現レベルに対して計算する。データを、相対量の平均±SEMで表す（RQ=2-ΔCT、式中、ΔCT=CT試料-CTシクロフィリンA）。使用した統計的検定は、イミキモド-ビヒクル群に対するダネットの事後検定を伴うANOVA分散分析である。
【０３４４】
（6.2.  IL-23の皮内注射により誘発される乾癬様表皮過形成のマウスモデル）
（6.2.1.  材料）
マウス組換え型IL-23、キャリア不含（14-8231、CF）は、e-Bioscience社により提供される。
【０３４５】
（6.2.2.  動物）
Balb/cマウス（雌、体重18乃至20g）は、CERJ社（フランス）から得る。マウスを、12時間の明暗周期（07:00乃至19:00）に維持する。温度を22℃に維持し、餌及び水は自由に与える。
【０３４６】
（6.2.3.  試験設計）
試験の設計を、Rizzo HL.ら（Rizzoらの文献、2011）に適合させる。
【０３４７】
第1日に（D1）、マウスは2つの耳の周囲を剃毛される。
【０３４８】
連続4日間（D1乃至D4）、マウスは、イソフルランの吸入により誘導された麻酔下で、右の耳介にはマウス組換え型IL-23（PBS/0.1% BSA中1μg/20μL）の、且つ左の耳介には20μLのPBS/0.1% BSAの、毎日の皮内投与を受ける。
【０３４９】
D1乃至D5に、IL-23注射の1時間前に、マウスに、試験化合物（メチルセルロース0.5%中、10、30、又は100mg/kg、経口的、1日1回）又はビヒクルが投薬される。
【０３５０】
（6.2.4.  疾患の評価）
両耳の厚さを、自動カリパスにより毎日測定する。体重を、開始時及び犠死時に評価する。第5日に、最後の投薬の2時間後、マウスを犠死させる。耳の耳介を、軟骨を除いて切り取る。耳介を秤量し、且つ次いで、1mLのRNAlater（登録商標）溶液を含むバイアル又はホルムアルデヒド中に配置する。
【０３５１】
D4に、PKプロファイリングのために、投薬直前（T0）及び投薬後1時間、3時間、6時間に、血液試料も後眼窩洞から回収する。
【０３５２】
１群あたり8匹のマウスがいる。結果を平均±SEMで表し、且つ統計分析を、一元配置ANOVAを使用し、それに続いてIL-23ビヒクル群に対するダネットの事後検定を使用して実施する。
【０３５３】
（6.2.5.  組織学）
犠死の後、耳を回収し且つパラフィンに包埋する前に、3.7%ホルムアルデヒド中で固定する。2μmの厚さの薄切を行い、且つヘマトキシリン及びエオシンにより染色する。耳の表皮厚さを、20倍の倍率で取り込まれた耳あたり6画像での画像分析（Sis'Ncomソフトウェア）により測定する。データを平均±SEMで表し、且つ統計分析を、一元配置ANOVAを使用し、それに続いてIL-23ビヒクル群に対するダネットの事後検定を使用して実施する。
【０３５４】
（6.2.6.  遺伝子発現分析）
半分の耳を、RNAlater（登録商標）溶液から取り出し、且つPrecellys装置中での1.4mmセラミック・ビーズによる破壊の後にTrizol（登録商標）に入れる。次いで、全RNAを、NucleoSpin（登録商標）RNAキットを使用して精製する。cDNAを調製し、且つ定量PCRを、Qiagen社の遺伝子特異的プライマーにより、SYBR Green技術を使用して、ViiA7リアルタイムPCRシステム（Applied Biosystems社）中で実施する。各遺伝子（IL17A、IL1B、IL22、LCN2、S100A8及びS100A9）の発現レベルを、シクロフィリンAハウスキーピング遺伝子発現レベルに対して計算する。データを、相対量の平均±SEMで表す（RQ=2-ΔCT、式中、ΔCT=CT試料-CTシクロフィリンA）。使用した統計的検定は、IL-23ビヒクル群に対するダネットの事後検定を伴うANOVA分散分析である。
（6.3.  PK/PDモデル：  CL097、特異的TLR7/8アゴニストにより誘発されるTNFα放出）
このアッセイの目的は、本発明の化合物の投与時のイン・ビボのIRAK-4依存性事象の阻害とこの化合物の循環濃度レベルとの関係を決定することである。
【０３５５】
（6.3.1.  材料）
CL097(カタログ番号tlrl-c97)及びポリ(dT)(カタログ番号tlrl-pt17)を、InvivoGen社から得る。
【０３５６】
AlphaLISA(登録商標)マウスTNFαキットを、Perkin-Elmer社(カタログ番号AL505C)から得る。
【０３５７】
（6.3.2.  動物）
DBA/1Jマウス（雄、体重18乃至20g）を、Janvier Labs社（フランス）から得る。マウスを、12時間の明暗周期（07:00乃至19:00）に維持する。温度を22±2℃に維持し、餌及び水は自由に与える。
【０３５８】
（6.3.3.  試験設計）
マウスは、試験化合物の経口投与を受け取る。投薬を全く受けないそのままの動物の群を、t=0時点として使用する。
【０３５９】
心臓内サンプリング（イソフルラン麻酔下）により得た二つの血液試料を、投薬後30分、1時間、3時間、8時間、又は24時間において、ヘパリン酸リチウムチューブに回収する。一つは薬物動態（PK）分析に、及び第二は薬力学（PD）マーカー定量化に使用する。
【０３６０】
（6.3.4.  血漿中の化合物レベルの定量）
全血試料を5000rpmで10分間遠心分離し、且つ、生じた血漿試料を、分析を待つ間、-20℃で保存する。各試験化合物の血漿濃度を、LC-MS/MS法により測定する。
【０３６１】
（6.3.5.  薬物動態パラメータの決定）
薬物動態パラメータを、WinNonlin（登録商標）(Pharsight（登録商標）、アメリカ合衆国)を使用して計算する。
【０３６２】
（6.3.6.  PDマーカーの定量）
各血液試料を、CL097及びポリ(dT)により、37℃で2時間刺激する。次いで、血漿を回収し、且つ、TNFαに関して、製造者の使用説明書にしたがって、AlphaLISAによって分析する。
【０３６３】
１群あたり6匹のマウスがいる。結果を、TNFα濃度（pg/mL）、又はt=0時点に対する阻害のパーセンテージ（PIN）として表す。データを、平均±SEMとして提示し、且つ統計分析を、一元配置ANOVAと、それに続いて、対応する時点のビヒクル群に対するダネットの事後検定を使用して実施する。
【０３６４】
（6.4.  MC903の局所塗布により誘発されるアトピー性皮膚炎のマウス予防モデル）
（6.4.1.  材料）
メチルセルロース0.5%を、VWR社（カタログ番号AX021233）から得る。MC903（カルシポトリオール）を、Tocris Bioscience社（カタログ番号2700/50）から得る。ProSense（登録商標）680を、PerkinElmer社（カタログ番号NEV10003）から得る。RNAlater（登録商標）を、Ambion社（カタログ番号AM7021）から得る。イマルゲン（Imalgene）（登録商標）1000（Merial社）及びロンプン（登録商標）2%（Bayer社）を、Centravet社（カタログ番号IMA004-6827812及びROM001-6835444）から得る。
【０３６５】
（6.4.2.  動物）
BALB/cNマウス（雌、体重18乃至20g）又はCD1/Swissマウス（雌、体重24乃至26g）を、Janvier Labs社（フランス）から得る。マウスを、12時間の明暗周期（07:00乃至19:00）に維持する。温度を22±2℃に維持し、餌及び水は自由に与える。
【０３６６】
（6.4.3.  試験設計）
試験の設計を、Li M.ら（Liらの文献、2006）に適合させる。
【０３６７】
第１日（D1）に、マウスはイマルゲン及びロンプン（7.5%/2.5%；0.1mL/10g）の腹腔内注射により麻酔され、且つ2つの耳の周囲が剃毛される。
【０３６８】
D1より、20μL EtOHか2nmolのMC903（20μL EtOH中）のいずれかを、連続5日間、マウスの両耳に局所的に塗布する。
【０３６９】
D1乃至D8に、マウスに、試験化合物（15又は30mg/kg、経口的、1日2回、メチルセルロース0.5%中）又はデキサメタゾン（5mg/kg、経口的、1日1回、メチルセルロース0.5%中）、又はビヒクルを投薬する。
【０３７０】
（6.4.4.  血漿中の化合物レベルの定量）
各試験化合物の血漿濃度を、質量分析計がポジティブ又はネガティブ・エレクトロスプレー・モードで運転されているLC-MS/MS法により測定する。
【０３７１】
（6.4.5.  薬物動態パラメータの測定）
薬物動態パラメータを、Phoenix（登録商標）WinNonlin（登録商標）（Pharsight（登録商標）、アメリカ合衆国）を使用して計算する。
【０３７２】
（6.4.6.  疾患の評価）
両耳の厚さを、（イソフルラン吸入により誘導される麻酔の後に）、試験の開始時、1日おき及び犠死時に、シックネス・ゲージ（Mitutoyo社、Absolute Digimatic、547-321）を使用して測定する。
【０３７３】
体重を、試験開始時、1日おき及び犠死時に評価する。
【０３７４】
D4に、全群のマウスは、ProSense（登録商標）680プローブを受け取る（0.8nmol/10g、腹腔内）。D5に、マウスは、イマルゲン及びロンプンの腹腔内注射（7.5%/2.5%；0.1mL/10g）により麻酔される。顆粒球浸潤を、イン・ビボ分子イメージングを使用して測定する（Bruker In-Vivo Xtreme画像化システム、励起波長：630nm、発光波長：700nm、取得時間：5秒）。
【０３７５】
D8に、最後の投薬の2時間後に、マウスを犠死させ、且つ全血液をEDTAコートされたチューブで回収し、且つ血漿（循環化合物を含む）を、さらなる測定のために凍結する。血液の試料は、ヘパリン・コートされたチューブにも回収する。
【０３７６】
耳の耳介を回収し且つ秤量する。一つの耳を、縦方向に二等分となるよう切断する。一方の半分を、組織学のためにホルムアルデヒド緩衝液4%中で固定する；もう片方は、遺伝子発現を評価するために、RNAlater（登録商標）に浸漬する。
【０３７７】
１群あたり8匹のマウスがいる。結果を平均±SEMで表し、且つ統計分析を、一元配置ANOVAを使用し、それに続いて、耳の厚さ及び重量に関してはMC903ビヒクル群に対して、体重に関してはEtOHビヒクル群に対して、ダネットの事後検定によって実施する。
【０３７８】
（6.4.7.  組織学）
犠死後に、半分の耳を回収し、且つパラフィンに包埋する前に、3.7%ホルムアルデヒド中で固定する。4μm厚さの切片を、特異的細胞マーカー抗体：T細胞にはCD3及び好酸球にはEPXにより、免疫組織化学によって免疫染色する。マウスあたりの切片全体からの免疫染色された細胞面積を、画像分析（CaloPixソフトウェア、TRIBVN Healthcare社）により測定する。データを平均±SEMで表し、且つ統計分析を、一元配置ANOVAと、それに続いてMC903ビヒクル群に対するダネットの事後検定を使用して実施する。
【０３７９】
（6.4.8.  遺伝子発現分析）
耳を、RNAlater（登録商標）溶液から取り出し、且つBertin Instruments社製Precellys（登録商標）ホモジェナイザー中で、1.4 mmセラミック・ビーズによる破壊の後に、Trizol（登録商標）中に置く。次いで、全RNAを、フェノール／クロロホルム・プロトコルを使用して抽出し、且つRNeasy（登録商標）96 QIAcube（登録商標）HT Kit（Qiagen社、カタログ番号74171）を使用してQIAcubeで精製する。cDNAを調製し、且つ定量PCRを、Qiagen社の遺伝子特異的プライマーにより、SYBR Green技術を使用して、ViiA 7リアルタイムPCRシステム（Applied Biosystems社）中で実施する。各遺伝子（IL4、IL5、IL13、TSLP、IL33、ST2、IL25、IL31、IFNγ、IL6、IL10、LCN2、S100A8及びS100A9）の発現レベルを、HPRT、GAPDH及びβ-アクチン・ハウスキーピング遺伝子発現レベルに対して計算する。データを相対量の平均±SEMで表す（RQ=2-ΔCT、式中、ΔCT=CT試料-平均（CT HPRT、CT GAPDH、CTβ-アクチン）。使用した統計的検定は、EtOH/MC903ビヒクル群に対するダネットの事後検定を伴うANOVA分散分析である。
【０３８０】
（6.5.  MC903の局所塗布により誘発されるアトピー性皮膚炎のマウス治療モデル）
（6.5.1.  材料）
メチルセルロース0.5%を、VWR社（カタログ番号AX021233）から得る。MC903（カルシポトリオール）を、Tocris Bioscience社（カタログ番号2700/50）から得る。ProSense（登録商標）680を、PerkinElmer社（(カタログ番号NEV10003）から得る。RNAlater（登録商標）を、Ambion社（カタログ番号AM7021）から得る。イマルゲン（登録商標） 1000（Merial社）及びロンプン（登録商標）2%（Bayer社）は、Centravet社（カタログ番号IMA004-6827812及びROM001-6835444）から得る。
【０３８１】
（6.5.2.  動物）
BALB/cNマウス（雌、体重18乃至20g）又はCD1/Swissマウス（雌、体重24乃至26g）を、Janvier  Labs社（フランス）から得る。マウスを、12時間の明暗周期（07:00乃至19:00）に維持する。温度を22±2℃に維持し、餌及び水は自由に与える。
【０３８２】
（6.5.3.  試験設計）
試験の設計を、Li M.ら（Liらの文献、2006）に適合させる。
【０３８３】
第１日（D1）に、マウスは、イマルゲン及びロンプンの腹腔内注射（7.5%/2.5%；0.1mL/10 g）で麻酔され、且つ二つの耳の周囲が剃毛される。
【０３８４】
D1より、20μL EtOHか2nmolのMC903（20μL EtOH中）のいずれかを、D9、D11、又はD15まで（週末の間を除く）、マウスの両耳に局所的に塗布する。
【０３８５】
D5からD10、D12、又はD16まで、マウスに、試験化合物（15又は30mg/kg、経口的、1日2回、メチルセルロース0.5%中）又はデキサメタゾン（5mg/kg、経口的、1日1回、メチルセルロース0.5%中）、又はビヒクルを投薬する。
【０３８６】
（6.5.4.  血漿中の化合物レベルの定量化）
各試験化合物の血漿濃度を、質量分析計がポジティブ又はネガティブ・エレクトロスプレー・モードで運転されているLC-MS/MS法によって測定する。
【０３８７】
（6.5.5.  薬物動態パラメータの決定）
薬物動態パラメータを、Phoenix（登録商標）WinNonlin（登録商標）（Pharsight（登録商標）、アメリカ合衆国）を使用して計算する。
【０３８８】
（6.5.6.  疾患の評価）
両耳の厚さを、（イソフルラン吸入により誘導される麻酔の後で）MC903の塗布前に、試験開始時、1週間に3回、及び犠死時に、シックネス・ゲージ（Mitutoyo社、Absolute Digimatic、547-321）を使用して測定する。
【０３８９】
体重を、試験開始時、１週間に3回、及び犠死時に評価する。
【０３９０】
D8、D10、又はD11に、全群のマウスはProSense（登録商標）680プローブ（0.8nmol/10g、腹腔内）を受け取る。翌日（D9、D11、又はD12）、マウスは、イマルゲン及びロンプンの腹腔内注射（7.5%/2.5%；0.1mL/10g）によって麻酔される。次いで、顆粒球浸潤を、イン・ビボ分子イメージング（Bruker In-Vivo Xtremeイメージング・システム、励起波長：630nm、発光波長：700nm、取得時間：5秒）を使用して測定する。
【０３９１】
D10、D12、又はD16に、最後の投薬の2時間後、マウスを犠死させる；全血液を、EDTAコートされたチューブで回収し、且つ血漿（循環化合物を含む）を、さらなる測定のために凍結する。
【０３９２】
耳の耳介を回収する。一つの耳を、縦方向に二等分となるよう切断する。一方の半分を、組織学のためにホルムアルデヒド緩衝剤4%中で固定する；もう片方は、遺伝子発現を評価するために、RNAlater（登録商標）に浸漬する。
【０３９３】
1群あたり8匹のマウスがいる。結果を平均±SEMで表し、且つ統計分析を、一元配置ANOVAを、それに続いて耳の厚さ及び重量に関してはMC903ビヒクル群に対して、体重に関してはEtOHビヒクル群に対して、ダネットの事後検定を使用して実施する。
【０３９４】
（6.5.7.  組織学）
犠死後に、半分の耳を回収し、且つパラフィンに包埋する前に、3.7%ホルムアルデヒド中で固定する。4μmの厚さの切片を、抗-CD3抗体により、免疫組織化学により免疫染色する。マウスあたりの切片全体からの免疫染色された細胞面積を、画像分析（CaloPixソフトウェア、TRIBVN Healthcare社）によって測定する。データを、平均±SEMで表し、且つ統計分析を、一元配置ANOVAを、それに続いて、MC903ビヒクル群に対するダネットの事後検定を使用して実施する。
（6.5.8.  遺伝子発現分析）
耳を、RNAlater（登録商標）溶液から取り出し、且つBertin Instruments社製Precellys（登録商標）ホモジェナイザー中での1.4 mmセラミック・ビーズによる破壊の後に、Trizol（登録商標）中に置く。次いで、全RNAを、フェノール／クロロホルム・プロトコルを使用して抽出し、且つRNeasy（登録商標）96 QIAcube（登録商標）HT Kit（Qiagen社、カタログ番号74171）を使用してQIAcubeにより精製する。cDNAを調製し、且つ定量PCRを、ViiA 7リアルタイムPCRシステム（Applied Biosystems社）中で、SYBR Green技術を使用して、Qiagen社の遺伝子特異的プライマーによって実施する。各目的遺伝子（GOI=IL4、IL5、IL13、TSLP、IL33、ST2、IL25、IL31、IFNγ、IL6、IL10、LCN2、S100A8及びS100A9）の発現レベルを、HPRT、GAPDH及びβ-アクチン・ハウスキーピング遺伝子発現レベルに対して計算する。
全qPCRデータを、標準化された相対量の平均±SEMで表す（NRQ=2＾(ΔCq GOI)/幾何平均(2^(ΔCq HPRT)、2^(ΔCq GAPDH)、2^(ΔCqβ-アクチン))、式中、ΔCq=Cq平均-Cq試料である。使用される統計的検定は、EtOH/MC903ビヒクル群に対するダネットの事後検定を伴うANOVA分散分析である。
【０３９５】
（6.6.  イミキモドの皮膚上塗布により誘発される全身性エリテマトーデスのマウスモデル）
（6.6.1.  材料）
アルダラ（登録商標）5%イミキモド・クリームを、MEDA社から得る。
【０３９６】
マウス抗-二本鎖DNA抗体ELISAキットを、Alpha Diagnostic International社（カタログ番号5120）から得る。マウス尿アルブミンELISAキットを、Abcam社（カタログ番号ab108792）から得る。尿クレアチニン・アッセイ・キットを、Abnova社（カタログ番号KA4344）から得る。
【０３９７】
（6.6.2.  動物）
BALB/cJマウス（雌、体重18乃至20g）を、Janvier Labs社（フランス）から得る。マウスを、12時間の明暗周期（07:00乃至19:00）に維持する。温度を22±2℃に維持し、餌及び水は自由に与える。
【０３９８】
（6.6.3.  試験設計）
試験の設計を、Yokogawa M.ら（Yokogawaらの文献、2014）に適合させる。
【０３９９】
第1日（D1）に、マウスは右の耳周囲が剃毛される。
【０４００】
マウスは、右の耳介への1.25mgのイミキモドの皮膚上塗布を、週に3回、連続した12週間（D1乃至D86）受け取る。対照群は、同じ量のワセリンを受け取る。
【０４０１】
D1乃至D86に、マウスに、試験化合物（30mg/kg、経口的、1日1回、メチルセルロース0.5%中）又はビヒクル（10mL/kg）を投薬する。
【０４０２】
（6.6.4.  疾患の評価）
耳の厚さを、週に1回、自動ゲージ（Mitutoyo社、Absolute Digimatic、547-321）によって測定する。
【０４０３】
体重を、開始時及び犠死まで週に1回評価する。剖検時に、脾臓の重量も測定する。マウスを、最後の投薬の2時間後に犠死させる。
【０４０４】
異なる時点で（例えば、D28、D56及びD84の日に）、マウスを個別に代謝ケージ内に置き、尿検査を実施し且つタンパク尿（アルブミン／クレアチニン比率）を評価する。
【０４０５】
血清を、異なる時点で（例えば、D28、D56及びD86に）回収し、抗二本鎖-DNA IgGレベルを評価する。
【０４０６】
D13に、投薬直前（T0）及び投薬の1時間、3時間、6時間後に、PKプロファイリングのために、血液試料も後眼窩洞から回収する。
【０４０７】
１群あたり8乃至19匹のマウスがいる。結果を平均±SEMで表し、且つ統計分析を、一元配置ANOVAを、それに続いて、イミキモド・ビヒクル群に対するダネットの事後検定を使用して実施する。
【０４０８】
（6.6.5.  血漿中の化合物レベルの定量）
各試験化合物の血漿濃度を、質量分析計がポジティブ又はネガティブ・エレクトロスプレー・モードで運転されているLC-MS/MS法によって測定する。
【０４０９】
（6.6.6.  薬物動態パラメータの決定）
薬物動態パラメータを、Phoenix（登録商標）WinNonlin（登録商標）（Pharsight（登録商標）、アメリカ合衆国）を使用して計算する。
【０４１０】
（6.6.7.  組織学）
犠死後に、左の腎臓を回収し、且つ二つの部分となるよう、縦方向に切断する。一方の部分を、パラフィンに包埋する前に、3.7%ホルムアルデヒド中で固定する。4μm厚さの切片を作製し、且つ過ヨウ素酸（Period acid）-シッフ（PAS）により染色するか、又はCD3（T細胞）、CD20（B細胞）及びF4/80（マクロファージ）で免疫染色する。
【０４１１】
（6.6.7.1.  組織病理学）
各糸球体において、メサンギウム増殖（mesangioproliferation）、管内増殖、メサンギウム・マトリックス拡張（mesangial matrix expansion）及び分節性硬化を含む四つの異なる読取り値を、0乃至2のスケールで等級付けし、且つ次いで総計を計算する。各腎臓について、約50の糸球体を採点し、且つ次いで平均化し、一つの糸球体病変スコアを与える（Yokogawaらの文献、2014）。データを、平均±SEMで表し、且つ統計分析を、クラスカル・ウォリス検定、それに続いてイミキモド・ビヒクル群に対するダンの事後検定を使用して実施する。
【０４１２】
（6.6.7.2.  細胞の定量化）
各細胞型について、免疫組織化学的分析を、20倍の倍率での画像分析（CaloPixソフトウェア、TRIBVN Healthcare社）を使用して、組織切片全体に対して実施する。データを平均±SEMで表し、且つ統計分析を、一元配置ANOVAを、それに続いて、イミキモド・ビヒクル群に対するダネットの事後検定を使用して実施する。
【０４１３】
（6.6.7.3.  遺伝子発現分析）
犠死時に、左の腎臓の第二の部分を、1.4 mmセラミック・ビーズを含むチューブ中に置き、且つBertin Instruments社製Precellys（登録商標）ホモジェナイザーにより、1% DTT RLT溶解緩衝液（Qiagen社、カタログ番号79216）中で破壊する。次いで、全RNAを、RNeasy（登録商標）96 QIAcube（登録商標）HT Kit（Qiagen社、カタログ番号74171）を使用して、QIAcubeにより精製する。cDNAを調製し、且つ定量PCRを、ViiA 7リアルタイムPCRシステム（Applied Biosystems社）中で、SYBR Green技術を使用して、Qiagen社の遺伝子特異的プライマーによって実施する。各目的遺伝子（GOI=CD3、CD68、CD20、OAS1、Mx1、IFIT1、CXCL11及びUsp18）の発現レベルを、シクロフィリン、GAPDH及びβ-アクチン・ハウスキーピング遺伝子発現レベルに対して計算する。
【０４１４】
犠死時に、脾臓の3分の1を、1.4 mmセラミック・ビーズを含むチューブ中に置き、且つBertin Instruments社製Precellys（登録商標）ホモジェナイザーにより、Trizol（登録商標）中で破壊する。全RNAを、フェノール／クロロホルム・プロセスを使用して抽出し、且つ次いで、RNeasy（登録商標）96 QIAcube（登録商標）HT Kit（Qiagen社、カタログ番号74171）を使用して、QIAcubeにより精製する。cDNAを調製し、且つ定量PCRを、ViiA 7リアルタイムPCRシステム（Applied Biosystems社）中で、SYBR Green技術を使用して、Qiagen社の遺伝子特異的プライマーによって実施する。各目的遺伝子（GOI=CD20、IRF7、OAS1、Mx1、IFIT1、CXCL11、Usp18、BCL6、CXCL13、CXCR5、MAF、ICOSL、PDCD1、SH2D1a）の発現レベルを、シクロフィリン、GAPDH及びβ-アクチン・ハウスキーピング遺伝子発現レベルに対して計算する。
全qPCRデータを、標準化された相対量の平均±SEMで表す（NRQ=2^(ΔCq GOI)/幾何平均（2^(ΔCqシクロフィリン)、2^(ΔCq GAPDH)、2^(ΔCqβ-アクチン))、式中、ΔCq=Cq平均-Cq試料である。使用される統計的検定は、イミキモド・ビヒクル群に対するダネットの事後検定を伴うANOVA分散分析である。
【０４１５】
（6.7.  IL-23の過剰発現により誘発される乾癬性関節炎のマウスモデル）
（6.7.1.  材料）
マウスIL-23増強エピソーマル発現ベクター（EEV）を、System Biosciences社（カタログ番号EEV651A-1）から得る。リンゲル液タブレットを、Sigma-Aldrich社（カタログ番号96724-100TAB）から得る。マウスIL-23 Quantikine ELISAキットを、R&D Systems社（カタログ番号M2300）から得る。ProSense（登録商標）680及びOsteoSense（登録商標）750EXを、PerkinElmer社（カタログ番号NEV10003及びNEV10053EX）から得る。RNAlater（登録商標）を、Ambion社（カタログ番号AM7021）から得る。イマルゲン（登録商標）1000（Merial社）及びロンプン（登録商標）2%（Bayer社）を、Centravet社（カタログ番号IMA004-6827812及びROM001-6835444）から得る。
【０４１６】
（6.7.2.  動物）
B10.RIIIマウス（雄、8週齢）を、Charles River社（フランス）から得る。マウスを、12時間の明暗周期（07:00乃至19:00）に維持する。温度を22±2℃に維持し、餌及び水は自由に与える。
【０４１７】
（6.7.3.  試験設計）
試験の設計を、Sherlock JP.ら（Sherlockらの文献、2012）に適合させる。
【０４１８】
第1日（D1）に、マウスは、尾静脈へのリンゲル又はリンゲル中のIL-23 EEVのハイドロダイナミック注入を受ける（3μg/2.1mL、4乃至6秒の期間にわたり、静脈内に注入される）。
【０４１９】
D5より、週に2回、実験の終了まで、マウスを臨床症状に関してスコア付けする。
【０４２０】
D5に、顎下腺静脈中の穿刺により血液を回収し、血清IL-23濃度を評価する。
【０４２１】
D9に、全群のマウスは、ProSense（登録商標）680プローブ（0.8nmol/10g、腹腔内）を受け取る。D10に、マウスは、イマルゲン及びロンプンの腹腔内注射（7.5%/2.5%；0.1mL/10 g）で麻酔される。次いで、顆粒球浸潤を、イン・ビボ分子イメージング（Bruker In-Vivo Xtremeイメージング・システム、励起波長：630nm、発光波長：700nm、取得時間：5秒）を使用して測定する。
【０４２２】
D11に、無作為化を、ProSense（登録商標）680分子イメージング及びスコアリングにしたがって実施する。
【０４２３】
D12より、マウスに、試験化合物（30mg/kg、経口的、1日2回、メチルセルロース0.5%中）又はビヒクルを投薬する。
【０４２４】
D19に、最後の投薬後T0、T1時間、T3時間及びT6時間の時点で、血液をサンプリングする。血漿を分離し、且つ生物分析まで20℃に維持する。
【０４２５】
D36に、化合物の最後の投与の2時間後に、全群のマウスを犠死させる。下記を回収する：
【０４２６】
左後肢の腱・靱帯付着部周囲（皮膚なし）の踵が、Precellysチューブ中で直ちに急速凍結する。指を、RNAlater（登録商標）を含むチューブ中に回収する。右後肢を、組織学評価のために、直ちにホルムアルデヒド緩衝液4%中で固定する。X線測定を、固定の48時間後に実施する。
【０４２７】
一つの耳を、転写物分析のために、RNAlater（登録商標）を含むチューブ中に回収する。
【０４２８】
全血液を、血清血液チューブ中に回収し、且つ8乃至10回の穏やかな反転によって混合する。凝固後に、血液試料を1800×gで10分間遠心分離する。遠心分離後、血清を-80℃において保存する。
【０４２９】
結腸の一部（1cm遠位結腸）を、転写物分析のために、Precellysチューブ中で直ちに急速凍結する。別の部分（1cm遠位結腸）を、さらなる組織学分析のために、ホルムアルデヒド緩衝液4%中で直ちに固定する。
【０４３０】
（6.7.4.  疾患の評価）
体重を、試験開始時、次いで週に2回及び犠死時に評価する。
【０４３１】
週に2回、炎症の臨床徴候をスコア付けする：正常な肢には0；１本の指の腫脹の場合1；2本以上の指の腫脹の場合2；肢全体の腫脹の場合3。全肢のスコアを総計し、包括的なスコアとする。
【０４３２】
D23に、全群のマウスは、ProSense（登録商標）680プローブ（0.8nmol/10g、腹腔内）を受け取る。D24に、マウスを、イマルゲン及びロンプンの腹腔内注射（7.5%/2.5%；0.1mL/10 g）によって麻酔する。次いで、顆粒球浸潤を、イン・ビボ分子イメージング（Bruker In-Vivo Xtremeイメージング・システム、励起波長：630nm、発光波長：700nm、取得時間：5秒）を使用して測定する。
【０４３３】
D32に、全群のマウスは、ProSense（登録商標）680プローブ（0.8nmol/10g、腹腔内）及びOsteoSense（登録商標）750EXプローブ（0.8nmol/10g、腹腔内）を受け取る。D33に、マウスを、イマルゲン及びロンプンの腹腔内注射（7.5%/2.5%；0.1mL/10 g）によって麻酔する。顆粒球浸潤及び骨リモデリングを、イン・ビボ分子イメージング（Bruker In-Vivo Xtremeイメージング・システム；ProSense（登録商標）680プローブには、励起波長：630nm、発光波長：700nm、取得時間：5秒；OsteoSense（登録商標）750EXプローブには、励起波長：720nm、発光波長：790nm、取得時間：5秒）を使用して測定する。
【０４３４】
1群あたり10匹のマウスがいる。結果を平均±SEMで表し、且つ統計分析を、一元配置ANOVAを、それに続いて、スコアリング及び画像分析については疾患を有するビヒクル群に対して、体重については偽のビヒクル群に対して、ダネットの事後検定を使用して実施する。
【０４３５】
（6.8  CIAモデル)
（6.8.1  材料）
完全フロイント・アジュバント（CFA）及び不完全フロイント・アジュバント（IFA）を、Difco社から購入した。ウシ・コラーゲンII型（CII）、リポ多糖（LPS）、及びエンブレルを、それぞれ、Chondrex社（アイル・ダボー島、フランス）；Sigma社（P4252、アイル・ダボー島、フランス）、Whyett社（25mg注射用シリンジ、フランス）Acros Organics（パロ・アルト、カリフォルニア州）から得た。使用した、他の全ての試薬は、試薬グレードのものであり、且つすべての溶剤は、分析グレードのものであった。
【０４３６】
（6.8.2.  動物）
Dark Agoutiラット（雄、7乃至8週齢）を、Harlan Laboratories社（メゾン・アルフォール、フランス）から得た。ラットを、12時間の明暗周期（07:00乃至19:00）に維持した。温度を22℃に維持し、且つ餌及び水は自由に与えた。
【０４３７】
（6.8.3.  コラーゲンにより誘発される関節炎（CIA））
実験の1日前に、CII溶液（2mg/mL）を、0.05M酢酸で調製し且つ4℃に貯蔵した。免疫付与の直前、同容量のアジュバント（IFA）とCIIを、氷水浴中の予め冷却されたガラス瓶中で、ホモジナイザーで混合した。乳化物が形成されない時には、追加のアジュバント及びより長い均質化が必要とされ得る。第1日に、各ラットの尾の付け根に、0.2mLの乳化物を皮内注入し、第9日に、第二の追加免疫の皮内注入（CFA 0.1mL生理食塩水中、2mg/mLのCII溶液）を実施した。この免疫付与方法は、公開された方法（Simsらの文献 2004；Jouらの文献 2005）から修飾されたものであった。
【０４３８】
（6.8.4.   試験設計）
化合物の治療効果を、ラットCIAモデルで試験した。ラットを、ランダムに等しい群に分け、且つ各群は10匹のラットを含んでいた。全てのラットについて、第1日に免疫付与し、且つ第9日に追加免疫を行った。治療投薬を、第16日乃至第30日に持続させた。負の対照群は、ビヒクル（MC 0.5％）で処理し、且つ正の対照群は、エンブレル（10mg/kg、週3回、皮下注射）で処理した。目的の化合物を、典型的には4用量、例えば、1、3、10、30mg/kg、1日2回で試験した。
【０４３９】
（6.8.5  関節炎の臨床的評価）
関節炎は、Khachigianの文献 2006、Linらの文献 2007及びNishidaらの文献 2004の方法にしたがってスコア付けされる。4肢の各々の腫脹が、関節炎スコアで次のようにランク付けされる：0-症状なし；1-足首又は手首のような関節の1タイプの軽度ではあるが明白な（definite）赤み及び腫脹、又は侵襲された指の数に関わりなく、個々の指に限定された明白な（apparent）赤み及び腫脹；2-関節の2以上のタイプの中程度の赤み及び腫脹；3-指を含む全肢の深刻な赤み及び腫脹；4-多数の関節の関与を伴う最大限に赤く腫れた肢（動物1頭当たり、16の最大の累積臨床関節炎スコア）（Nishidaらの文献、2004）。
【０４４０】
多数の研究のメタ分析を容認するために、臨床スコア値を、次のように標準化した。
【０４４１】
臨床スコアのAUC（AUCスコア）：  第1日乃至第14日の曲線下面積（AUC）を、各個々のラットについて計算した。各動物のAUCを、その動物のデータを得た研究でビヒクルについて得られた平均AUCで除し、且つ100倍した（即ち、AUCは、研究当たりの平均ビヒクルAUCの百分率として表現された）。
【０４４２】
第1日乃至第14日の臨床スコアの上昇（評価項目スコア）：  各動物についての臨床スコアの差を、その動物のデータを得た研究でビヒクルについて得られた平均臨床スコアの差で除し、且つ100倍された（即ち、差は、研究当たりのビヒクルに対する平均臨床スコアの差の百分率として表現された）。
【０４４３】
（6.8.5.1.  関節炎の発病後の体重の変化（％））
臨床的に、体重減少は関節炎と関連付けられている（Sheltonら、2005；Argilesら、1998；Rall、2004；Walsmithら、2004）。したがって、関節炎の発病後の体重の変化は、ラットモデルにおいて、治療の効果を評価するための非特異的評価項目として使用され得る。関節炎の発病後の体重の変化（％）を、次のように計算した：
【０４４４】
【数４】
2020507612.tif 000078
【０４４５】
【数５】
2020507612.tif 000079
【０４４６】
（6.8.5.2  放射線医学）
各個々の動物の後肢のX線写真を撮影した。ランダムな盲検の固有番号を、写真の各々に振り、且つ、骨浸食の重症度を、次のような放射線医学のラーセンのスコア・システムで、二名の独立したスコアラーによってランク付けした：0-正常、損傷を受けていない骨の外形及び正常な関節腔を伴う；1-少しの異常、外側の中足骨のいずれか一つ又は二つが少しの骨浸食を示している；2-明白な初期異常、外側の中足骨のいずれか3本乃至5本が骨浸食を示している：3-中程度の破壊的な異常、全ての外側の中足骨及び内側の中足骨のいずれか一つ又は二つが明白な骨浸食を示している；4-激しい破壊的な異常、全ての中足骨が明白な骨浸食を示しており、かつ少なくとも一つの内側の中足骨関節が完全に浸食され、いくつかの骨関節の外形が部分的に保存されている；5-多面的な異常、骨の外形を呈さない。このスコアリング・システムは、Salveminiらの文献、2001；Bushらの文献、2002；Simsらの文献、2004；Jouらの文献、2005からの変法である。
【０４４７】
（6.8.5.3.  組織学）
放射線分析の後、マウスの後肢は、10％リン酸緩衝ホルマリン（pH 7.4）で固定し、詳細な組織学のために急速な骨脱灰を伴って脱灰させ（Laboratories Eurobio）且つパラフィンに包埋した。関節炎の関節のさらなる評価を確実にするため、少なくとも四枚の連続切片（5μm厚）を切り出し、且つ各一連の切片は、その間が100μmであった。切片を、ヘマトキシリン及びエオシン（H&E）で染色した。滑膜炎並びに骨及び軟骨損傷の組織学的評価を、二重盲検で行った。各肢において、四点等級を使用して、四つのパラメータを評価した。当該パラメータは、細胞浸潤、パンヌス重症度、軟骨浸食及び骨浸食であった。スコア付けは、次のように行った：1-正常、2-少し、3-中位、4-著しい。これらの四スコアを合計し、且つ付加スコア、即ち、「RA総スコア」として表す。
【０４４８】
（6.8.5.4  踵骨（踵骨）のミクロ計算された断層撮影（μCT）分析）
RAで見られた骨劣化は、特に、皮質骨において生じ、且つμCT分析によって明らかとされ得た（Sims NAらの文献、Arthritis Rheum. 50 (2004) 2338-2346：ゾレドロン酸での破骨細胞の標的化は、コラーゲンで誘発された関節炎において、骨破壊を予防する；Oste Lらの文献、ECTC  Montreal 2007；ミクロ計算された断層撮影形態計測による、マウスCIAモデルにおける骨構造障害のハイスループット測定方法）。踵骨のスキャン及び３Dボリューム再構成の後に、骨の縦軸に垂直にコンピュータ内で単離された、スライド当たりに存在する個別の物体の数として、骨劣化を測定する。骨が分解されるにしたがって、より離散した物体が測定される。踵骨に沿って（約10.8μmの空間をおいて）均等に分配された1000切片を分析する。
【０４４９】
（6.8.5.5  定常状態PK）
第7日目又は第11日目に、眼窩後方の洞において、抗凝固剤としてヘパリン・リチウムを使用して、次の時点（投薬前、1、3及び6時間）で血液サンプルを回収した。全血サンプルを遠心分離し、且つその結果得られた血漿サンプルを、分析を待つ間、-20℃に貯蔵した。各試験化合物の血漿濃度をLC/MS/MS法によって測定し、ここで、質量分析計は、正の電気スプレー・モードにおいて作動されていた。薬物動態パラメータを、Winnonlin（登録商標）（Pharsight（登録商標）、アメリカ合衆国）を使用して計算し、且つ投薬前血漿レベルは24時間血漿レベルと等しいと推測した。
（6.8.6  結果）
表XI.  臨床スコア
【表１１】
2020507612.tif 000080
表XII.  臨床スコア（ｐ値）
【表１２】
2020507612.tif 000081
【０４５０】
（6.8.7.  結論）
上記から理解され得るように、IRAK及びJAK阻害剤の組合せは、一緒にすると、各化合物が個々に用いられた場合よりもより優れた効果をもたらす。
【０４５１】
これは、次に、より少量の薬剤で、同じ又はより優れた治療効果の達成を与え得る。これは、とりわけ、効果を維持しつつ、不必要な薬剤量の摂取を避けるために有益であり得、且つしたがって、薬剤誘発性副作用のリスクを低減し得る。
【０４５２】
（結語）
前述の説明は例示的且つ説明的な性質のものであって、且つ本発明及びその好ましい実施態様を説明するように意図されていることが、当業者に理解されるであろう。ルーチンの実験を通じて、当業者は、本発明の趣旨を逸脱することなくなされ得る明白な修飾及び変更を認識するであろう。添付の特許請求の範囲の範囲内に入る全てのそのような修飾は、その中に含まれることが意図されている。したがって、本発明は、上記の説明によるだけでなく、以下の特許請求の範囲及びその等価物によっても定義されることが意図されている。
【０４５３】
本明細書中に引用される特許及び特許出願を含むがこれらに限定されない全ての刊行物は、各々の個々の刊行物が、あたかも完全に述べられているように、引用により本明細書中に組み込まれていることが具体的に且つ個別的に示されているかのように、引用により本明細書中に組み込まれている。
【０４５４】
様々な化合物の示差的な細胞透過能力のような因子が、化合物の活性の、イン・ビトロの生化学的アッセイと細胞アッセイとの間における違いに寄与し得ることが理解されるべきである。
【０４５５】
本出願で与えられ且つ記載されている本発明の化合物の化学名の少なくとも一部は、市販の化学物質命名ソフトウェアプログラムの使用によって自動的に作り出された可能性があり、且つ独立に確認されたものではない。この機能を実施する代表的なプログラムは、OpenEye Scientific Software社によって販売されているLexichem命名ツール、及びMDL Information Systems社によって販売されているAutonom Softwareツールを包含する。表示された化学名と図示された構造が異なる場合には、図示された構造が優先する。
（参考文献）
【化４６】
2020507612.tif 000082
2020507612.tif 000083
2020507612.tif 000084
【図１】
2020507612.tif 000089
【図２】
2020507612.tif 000090
【手続補正書】
【提出日】令和1年12月27日(2019.12.27)
【手続補正１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】配列表
【補正方法】追加
【補正の内容】
【配列表】
2020507612000001.app
【国際調査報告】
2020507612.tif 000091
2020507612.tif 000092
2020507612.tif 000093