(57)【要約】  本発明は、4-(4-クロロアニリノ)-7-(2-メチルアミノカルボニル-4-オキシメチル)ピリジルフロ[2,3-d]ピリダジンメタンスルホネート(EOC315)のMod.I結晶形化合物の製造方法、結晶形のキャラクタリゼーション及びその医薬の用途に関する。2020516685.tif 000012【選択図】図１
2020516685.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
下式１で示されたEOC315 Mod.I結晶形化合物であって、
【化１】
2020516685.tif 000010
Ｘ線回折CuKαを用いた分析で、Ｘ線回折パターンにおいて、4.01、7.85、9.94、13.04、19.08、19.46、20.10、21.82、22.49、23.76、24.26、27.17、28.52、30.48にＸ線粉末回折ピークが現れることを特徴とする前記結晶形化合物。
【請求項２】
Ｘ線粉末回折CuKαを用いた分析で、Ｘ線回折パターンが図１に示された通りであることを特徴とする請求項１に記載の結晶形化合物。
【請求項３】
赤外分光法KBrで、3415cm-1、3058cm-1、2805cm-1、1668cm-1、1652cm-1及び1227cm-1においてスペクトル帯域を有することを特徴とする請求項１に記載の結晶形化合物。
【請求項４】
赤外線スペクトルが図７に示された通りであることを特徴とする請求項１に記載の結晶形化合物。
【請求項５】
1）EOC315の遊離塩基を溶媒に溶かしてEOC315溶液を調製し、メタンスルホン酸を溶媒に溶かしてメタンスルホン酸溶液を調製するステップと、
2)20〜90℃でメタンスルホン酸溶液をEOC315溶液に加えるステップと、 
3)減圧下で蒸留して大部分の溶媒を除去し、極性又は非極性溶媒を加え、0〜30℃で攪拌、濾過し、濾過ケークを回収するステップと、
4)25〜90℃で真空乾燥するステップと、
を含むことを特徴とする請求項１〜４のいずれか一項に記載の結晶形化合物の製造方法。
【請求項６】
前記ステップ1)において、溶媒は、メタノール、エタノール、イソプロパノール、ブタノール、ヘキサン、ヘプタン、アセトン、エチルプロピルエーテル、テトラヒドロフラン、トルエン、酢酸エチル及びアセトニトリルの何れか１つの単一有機溶媒又はそれらの混合溶媒であることを特徴とする請求項５に記載の方法。
【請求項７】
前記ステップ1)において、溶媒は、メタノール、エタノール、イソプロパノール及びブタノールの何れか１つの単一溶媒又はそれらの混合溶媒であることを特徴とする請求項６に記載の方法。
【請求項８】
粒径がD90≦15μmの下式１で示されたEOC315 Mod.I結晶形化合物微粉末であって、
【化２】
2020516685.tif 000011
Ｘ線粉末回折CuKαを用いた分析で、Ｘ線回折パターンが図２に示された通りであることを特徴とする前記結晶形化合物微粉末。
【請求項９】
請求項１〜８のいずれか一項に記載の結晶形化合物又はその微粉末を含有し、さらに一種又は複数種の薬学的に許容される担体又は賦形剤を含有することを特徴とする医薬組成物。
【請求項１０】
VEGFR-2及びPDGFRキナーゼ活性阻害剤を製造するためのEOC315 Mod.I型結晶体化合物又はその微粉末の使用。
【請求項１１】
EOC315 Mod.I型結晶体化合物又はその微粉末と、パクリタキセル、カペシタビン及びゲムシタビンの一種又は複数種とを含有する併用医薬。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、医薬の技術分野に関し、具体的にはEOC315 Mod.I結晶形化合物の製造及びキャラクタリゼーションに関し、さらに前記EOC315 Mod.I結晶形化合物の製薬への応用に関する。
【背景技術】
【０００２】
EOC315(4-(4-クロロアニリノ)-7-(2-メチルアミノカルボニル-4-オキシメチル)ピリジルフロ[2,3-d]ピリダジンメタンスルホネート)は現在まだどの国でも市販されていない。アメリカ生物製薬企業ACT Biotech，Inc.(ACT Biotech、以下、ACTと略称する)は、2008年にBayer HealthCare PharmaceuticalsからEOC315の許諾を取得し、2014年1月、EddingpharmはACT社と資産買収契約を締結し、そのグローバル独占権を取得した。その構造式は以下に示される通りである。
【０００３】
【化１】
2020516685.tif 000003
【０００４】
EOC315は経口生物学的利用能を有する血管内皮増殖因子受容体2(VEGFR2)チロシンキナーゼ活性の強力的な阻害剤であり、生化学測定の結果によれば、IC50値が6nMである。この薬は血小板由来成長因子受容体(PDGFR)チロシンキナーゼ活性も阻害し、IC50値が15nMである。この２つの受容体は、内皮細胞の血管形成を刺激する血管生成過程、及びPDGFRを発現する周皮細胞による血管の新生へのサポートの過程で、重要な役割を果たしている。EOC315は、開発段階における最も選択性の高い既知のVEGFR阻害剤であり、上記の標的と他のキナーゼとを区別させることができる。経口製剤として、患者にとって予期標的に対する持続的、長期的な阻害を達成することができる。
【０００５】
EOC315は国際的にII期臨床開発段階にあり、カペシタビン/シスプラチンと併用する抗がん医薬品として、末期の未治療胃がんの化学療法に用いられる。これまでに、EOC315はすでに300例超の累積数の患者に、合計７つのI、Ib期とII期臨床研究を行った。
【０００６】
多くの臨床研究により、様々な末期固形腫瘍患者におけるEOC315の安全性と有効性を調べた。結果として、EOC315(単剤と併用療法)は優れた寛容性を有し、抗腫瘍の分野で有望視されている。特に、II期臨床研究は、EOC315の末期胃がん又は胃食道接合部(GEJ)がん患者において、EOC315とカペシタビン及びシスプラチンとを併用する第一選択療法としての有効性と安全性を評価した。結果として、その全奏効率(ORR)が67％に達し、単独化学療法で得られた過去奏効率のほぼ２倍であった。無増悪生存期間(PFS)の中央値が4.5か月であった。Kaplan-Meier分析より、６か月以内で無増悪患者の割合が52％であった。腫瘍寛解した患者の無増悪期間の中央値が6.4か月であった。そのため、現在の臨床開発は、胃がん又は胃食道接合部がんの治療を目的としている。
【０００７】
アメリカバイエル薬品株式会社はその特許CN00816369及びCN200510127109において、化合物EOC315及びその類似体の合成方法を開示し、その医薬組成物及び医薬組成物の薬学への応用も開示した。当社はZL200510140054にもEOC315の工業化生産に適する製造方法を開示した。これまでは、EOC315結晶形に関連する報告が公開されておらず、本発明は薬学研究用のEOC315のMod.I結晶形を初めて開示する。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００８】
本発明の目的の一つは、安定したEOC315 Mod.I結晶形を提供し、それをキャラクタリゼーションすることにある。
【０００９】
本発明のもう一つの目的は、前記結晶形の製造方法を提供することにある。
【００１０】
本発明のもう一つの目的は、EOC315の微粉化前後のＸ線粉末回折ピーク値の相対強度、DSC及び結晶形状の変化を提供することにある。
【００１１】
本発明のもう一つの目的は、EOC315の微粉化によって結晶形が変化することはなく、Mod.I結晶形のままであることを示すことにある。
【００１２】
本発明のさらなる目的は、EOC315 Mod.Iを含む医薬組成物を提供することにある。
【００１３】
本発明の他の目的は、前記EOC315 Mod.I結晶形の医薬のVEGFR-2(血管内皮増殖因子受容体2)及びPDGFR(人血小板由来成長因子受容体)キナーゼ活性阻害剤における応用を提供することにある。
【課題を解決するための手段】
【００１４】
本発明の技術方案は以下の通りである。
【００１５】
本発明のEOC315 Mod.I結晶形化合物は式Iに示される。
【化２】
2020516685.tif 000004
【００１６】
Ｘ線回折CuKαを用いた分析では、Ｘ線粉末回折パターンにおいて、4.01、7.85、9.94、13.04、19.08、19.46、20.10、21.82、22.49、23.76、24.26、27.17、28.52、30.48にＸ線回折ピークが現れた。
【００１７】
Ｘ線回折パターンの2θ、d(A)は表1に示される。
【表１】
2020516685.tif 000005
【００１８】
Ｘ線回折CuKαを用いた分析では、前記Ｘ線回折パターンは図１に示されるとおりである。
【００１９】
Mod.I結晶形化合物の融点は200.6℃であり、DSC熱分析結果は図３に示されるとおりである。
【００２０】
TGA分析結果により、Mod.I結晶形化合物の分解温度は241.71℃であることを示し、そのTGA図は図８に示されるとおりである。
【００２１】
Mod.I結晶形化合物の赤外分光法 (KBr)は、3415cm-1、3058cm-1、2805cm-1、1668cm-1、1652cm-1及び1227cm-1においてスペクトル帯域があり、その赤外検出結果は図７に示されるとおりである。
【００２２】
Mod.I結晶形化合物のホットステージ偏光顕微鏡分析結果より、この製品は針状結晶であり、粒子が粗く(長さが数百ミクロンに達する)、結晶化度が高いことを示す。そのHSM図は図５に示されるとおりである。
【００２３】
本発明はさらに前記Mod.I結晶形化合物の製造方法を提供する。この方法は、EOC315遊離塩基を有機溶媒に溶かし、メタンスルホン酸の有機溶液を一滴ずつ加え、滴下後、一部の溶媒を留出し、さらに他の溶媒を加えて降温し、結晶させてEOC315 Mod.I結晶形化合物を得ることを含む。
【００２４】
Mod.I結晶形化合物の製造方法、詳しい製造方法は以下の通りである。
1)EOC315の遊離塩基を溶媒に溶かしてEOC315溶液を調製し、メタンスルホン酸を溶媒に溶かしてメタンスルホン酸溶液を調製する。
2)20〜90℃でメタンスルホン酸溶液をEOC315溶液に加える。
3)減圧下で大部分の溶媒を留出し、極性又は非極性溶媒を加え、0〜30℃で攪拌、濾過し、濾過ケーク（filter cake）を回収する。
4)25〜90℃で真空乾燥する。
【００２５】
前記ステップ1)において、溶媒は、メタノール、エタノール、イソプロパノール、ブタノール、ヘキサン、ヘプタン、アセトン、エチルプロピルエーテル、テトラヒドロフラン、トルエン、酢酸エチル及びアセトニトリルの単一有機溶媒又はそれらの混合溶媒である。
【００２６】
好ましくは、前記ステップ1)において、溶媒は、メタノール、エタノール、イソプロパノール及びブタノールの単一溶媒又はそれらの混合溶媒である。
【００２７】
薬物の粒子サイズは、その薬物の様々な溶媒への溶解度に影響し、特に経口固形製剤の場合、その薬物の人体における生物学的利用能に直接影響を及ぼし、生物学的利用能の大きさは薬物の薬効を直接決めるものである。
【００２８】
乾燥後に得られたEOC315 Mod.I型結晶体を、粒径D90≦15μmとなるまで微粉化し、EOC315 Mod.I結晶形化合物微粉末を得た。
【００２９】
EOC315 Mod.I結晶形化合物微粉末は、Ｘ線粉末回折CuKαを用いた分析では、Ｘ線回折パターンが図２に示され、微粉化する前のパターンとほぼ一致し、微粉化の前後でサンプル結晶形は変わらないことを示すが、固体性質は変化した。例えば、粒子のサイズや優先配向はスペクトルのピーク値の相対強度に影響を及ぼす可能性があるが、ピーク値の位置、特に低角度ピーク値の位置に影響を及ぼすことはなく、微粉化後のスペクトルは一定のベースライン隆起も示し、ある程度の結晶化度の問題が存在する可能性があることを示している。
【００３０】
微粉化後のＸ線回折パターンの2θ、d(A)は表２に示される。
【００３１】
【表２】
2020516685.tif 000006
【００３２】
EOC315 Mod.I結晶形化合物微粉末は、転移温度が196.39℃であり、微粉化する前の200.6℃より低く、微粉化後に結晶化度が低いことを示し、微粉化後のDSC熱分析の分析結果は図４に示される。
【００３３】
EOC315 Mod.I結晶形化合物微粉末は、ホットステージ偏光顕微鏡(HSM)分析結果より、このサンプルは微粉末結晶(10ミクロン未満)であり、結晶化度が低いことを示し、そのHSM分析結果は図６に示される。
【００３４】
EOC315 Mod.I結晶形化合物微粉末は、HSM結果、Ｘ-粉末回折及びDSC結果より、Mod.I結晶形化合物であることを示す。
【００３５】
EOC315 Mod.I結晶形化合物微粉末は微粉化前の結晶形に比べて変化がなく、いずれもMod.I結晶形化合物であり、ただ微粉化前の粒度がより粗く、清浄度がより高い。
【００３６】
もう一方、本発明はさらに、本発明にかかるEOC315 Mod.I結晶形化合物、及び一種又は複数種の薬学的に許容される担体又は賦形剤を含む医薬組成物を提供する。本発明のEOC315 Mod.I結晶体は、一種又は複数種の薬学的に許容される担体又は賦形剤とともに、薬学分野で一般的に用いられる剤形、例えば錠剤、カプセル剤、注射剤などの製剤、好ましくは固体経口製剤に製造され得る。経口投与に用いられる医薬組成物は、EOC315 Mod.I型結晶体化合物と一種又は複数種の固体担体とを混合することにより得られ、必要に応じて、得られた混合物を造粒し、さらに粒子の混合を行い、必要に応じて、追加の賦形剤を添加する方法で、錠剤又は錠剤コアを得ることができる。特に、好適な担体は、充填剤(例えば、乳糖、ショ糖、マンニトール又はソルビトールのような糖、セルロース製剤及び/又はリン酸三カルシウム又はリン酸水素カルシウムのようなリン酸カルシウム)、及び接合剤(例えば、コーン淀粉、小麦淀粉、米淀粉又はジャガイモ淀粉のような淀粉、メチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、カルボキシメチルセルロースナトリウム、及び/又はポリビニルピロリドン)、必要に応じて、及び/又は崩壊剤(例えば、上記の淀粉、及びカルボキシメチル淀粉、架橋ポリビニルピロリドン、アルギン酸又はその塩、例えばアルギン酸ナトリウム)である。特に、追加の賦形剤は、流動調整剤と潤滑剤であり、例えばケイ酸、タルク、ステアリン酸又はその塩、例えばステアリン酸マグネシウム又はカルシウム、及び/又はポリエチレングリコール又はその誘導体である。
【００３７】
錠剤コアは好適なコーティングを有してもよく、前記コーティングは、特に濃糖溶液(アラビアガム、タルク、ポリビニルピロリドン、ポリエチレングリコール及び/又は酸化チタンを含んでもよい)、又は好適な有機溶媒又は溶媒混合物におけるコーティング溶液を使用することにより行われる。例えば、識別のために、又は異なる用量のEOC315を示すために、前記錠剤又は錠剤コーティングに染料又は顔料を加えてもよい。
【００３８】
もう一方、本発明が提供する前記EOC315 Mod.I型結晶体化合物は強力的なVEGFR-2(血管内皮増殖因子受容体2)とPDGFR(人血小板由来成長因子受容体)キナーゼ活性阻害剤であり、関連腫瘍細胞の増殖を効果的に阻害することができる。
【００３９】
EOC315は、標準治療薬パクリタキセル（Taxol、登録商標）、カペシタビン（Xeloda、登録商標） 、及びゲムシタビン（Gemzar、登録商標）と併用投与することができる。
【００４０】
1)いずれかの薬剤単独の投与に比べて、より優れた腫瘍成長の低減ひいては腫瘍を除去する効力を生み出す。
2)投与する化学療法薬の投与量をさらに減らす。
3)患者の寛容性が高く、単剤化学療法や他の併用療法よりも有害な薬理学的合併症が少ない化学療法の方法を提供する。
3)哺乳類、特にヒトの様々ながんの種類に対し、より幅広い治療方法を提供する。
4)患者を治療する、より高い応答速度を提供する。
5)標準な化学療法に比べて、治療患者のより長い生存期間を提供する。
6)他のがん薬剤と併用して拮抗作用が発生する既知の状況に比べて、より長い腫瘍進行時間を提供し、及び/又は少なくとも前記薬剤を単独に使用する場合と同様な効力と寛容性をもたらす。
【００４１】
薬学的有効量で、これらの細胞毒性剤の一種又は数種と同時に、別々に、又は連続的に投与することができる。投与される併用活性剤の量(「薬学的有効量」)は広い範囲内で変化し、治療しようとする病症及び投与方法によって決まる。この量は予期の治療に有効な任意の量を含んでもよい。併用活性剤の「薬学的有効量」を決めることは当業者の能力範囲内にできることである。
【図面の簡単な説明】
【００４２】
【図１】EOC315 Mod.I結晶形のＸ線粉末回折パターンである。
【図２】EOC315 Mod.I結晶形の微粉化後のＸ線回折パターンである。
【図３】EOC315 Mod.I結晶形の示差走査熱量測定(DSC)図である。
【図４】EOC315 Mod.I結晶形の微粉化後の示差走査熱量測定(DSC)図である。
【図５】EOC315 Mod.I結晶形のホットステージ偏光顕微鏡(HSM)結果表示図である。
【図６】EOC315 Mod.I結晶形の微粉化後のホットステージ偏光顕微鏡(HSM)結果表示図である。
【図７】EOC315 Mod.I結晶形の赤外分光法(IR)図である。
【図８】EOC315 Mod.I結晶形の熱重量分析(TG/DTA)図である。
【発明を実施するための形態】
【００４３】
下記の実施例により本発明をさらに説明するが、本発明は下記の実施例に限定されることはなく、これらの実施例は決して本発明の範囲を制限するものではない。当業者が請求の範囲内で行われた変更や修正も本発明の技術的範囲に属すると見なすべきである。
【００４４】
（実施例1）
EOC315 Mod.I結晶形化合物の製造
EOC315 Mod.I型結晶体化合物の製造は以下のステップを含む。
1)EOC315アルカリ9gをメタノール90mLに溶かしてEOC315溶液を調製し、メタンスルホン酸2.5gをメタノール16mLに溶かしてメタンスルホン酸溶液を調製する。
2)50℃になると、メタンスルホン酸溶液をEOC315溶液に滴下し、滴下完了後15分間加熱を続ける。
3)濾液を減圧蒸留し、一部の溶媒を留出した後、イソプロパノール200mlを加え、液体が約250mLとなるまで減圧蒸留を継続し、降温して１時間結晶析出させ、吸引濾過し、濾過ケークを回収する。
4)45℃で真空乾燥して、収率90.5〜96.3％、純度99.1〜99.9％であるEOC315 Mod.I結晶形化合物を得る。
【００４５】
Ｘ線回折で分析し、図１で示されるＸ線粉末回折パターンが得られた。
【００４６】
（実施例2）
示差走査熱量測定法(DSC)による実施例１のEOC315 Mod.I結晶形化合物の分析
窒素雰囲気で10℃/minの加熱速度でアルミパンでDSCトレースを記録し、実施例１で得られたEOC315が200.7℃に１つのシャープな吸熱ピークがあることが測定され、EOC315が単一Mod.I結晶形であり、融点が200.7℃であることを示す。分析結果は図３に示されるとおりである。
【００４７】
当業者は、測定される融解温度は実験条件、特に採用される加熱速度に依存することを理解している。また、融解温度は物質の純度に影響される。報告されている融解温度は、純度が少なくとも98.5％である製品で測定されたものである。
【００４８】
（実施例３）
Ｘ粉末回折による実施例１のEOC315 Mod.I結晶形化合物の分析
室温の下、ゲルマニウム誘発単色化CuKα1-放射でＸ線粉末回折データを記録した。室温条件で、小型リニア位置検出センサで、3°≦2θ≦35°(ステップ0.5°)の間で0.08°の角度分解能で2θスキャンした。Ｘ線粉末回折パターンは図１に示され、2θとd(A)値は表１に示される。
【００４９】
当業者は、得られたＸ線回折パターンには測定誤差が存在する可能性があり、この誤差は測定条件に依存することを理解している。特に、Ｘ線回折パターンの強度は物質の結晶や使用する測定条件によって変動することが一般的に知られている。また、所定の温度において、通常のＸ線回折パターンの回折角θの測定誤差は一般的に約±0.1°であり、回折角に関してはこの程度の測定誤差を考慮する必要がある。従って、図面で開示されたＸ線粉末回折パターンとほぼ一致するＸ線回折パターンを有する任意の結晶形も本発明の技術的範囲内に含まれる。
【００５０】
（実施例４）
実施例１のEOC315 Mod.I結晶形化合物の熱重量分析(TG/DTA)
窒素雰囲気で10℃/minの加熱速度で測定し、実施例１で得られたEOC315が188.9℃で質量分率が99.8％であり、重量減少が0.2％であり、ほぼ重量減少がなく、サンプルに結晶溶媒が含まれず、揮発性物質の含有量も非常に低いことを示す。試験サンプルのDTA曲線は198.1℃で１つの吸熱ピークがあり、DSC結果と一致し、そのTGA図が図８に示される。
【００５１】
当業者は、測定の温度は実験条件、特に使用する加熱速度に依存することを理解している。また、温度は物質の純度に影響される。報告されている溶解温度は、純度が少なくとも98.5％のもので測定されたものである。
【００５２】
（実施例５）
EOC315 Mod.I結晶形のホットステージ偏光顕微鏡(HSM)分析
EOC315サンプルについて、HSM分析結果より、このサンプルが針状結晶であり、粒度が大きく(長さが数百ミクロンに達する)、結晶化度が高いことを示し、そのHSM図が図5に示される。
【００５３】
（実施例６）
実施例１のEOC315 Mod.I結晶形化合物の赤外分析
乱反射(KBr)により、EOC315 Mod.I型結晶体の赤外線スペクトルを記録した。赤外線スペクトルが図７に示され、主な赤外線スペクトル帯域及びその帰属は表３に示される。
【００５４】
【表３】
2020516685.tif 000007
【００５５】
当業者は、使用する機器及び測定条件に基づいて、許容される波数シフトの許容値が±２cm-1であることを理解している。従って、図面に開示されたFT-ラマンスペクトルとほぼ一致するFT-ラマンスペクトルを有する任意の固体形式も本発明の技術的範囲内に含まれる。
【００５６】
（実施例７）
実施例１で得られたEOC315 Mod.I結晶形化合物の微粉化
微粉機器圧力≧0.65MPaに設定し、微粉化後に粒径D90≦15μmのEOC315結晶形化合物微粉を得る。上記の方法により、微粉化後にサンプルのＸ-粉末回折、DSC、及びHSMを測定し、その結果は図２、図４及び図６に示される。
【００５７】
図示された結果から、微粉化前後のEOC315結晶形に変化がなく、Mod.I結晶形のままであることが分かる。
【００５８】
（実施例８）
EOC315 Mod.I結晶形化合物の腫瘍細胞に対する阻害作用
EOC315 Mod.I結晶形化合物は体外で生化学的及び細胞活性を示し、抗血管新生の作用メカニズムと一致する。従って、Colo-205ヒトCRC異種移植モデルでは、体内で観察された抗腫瘍活性がこの仮説と一致するか否かを評価する研究が行われた。内皮細胞マーカーCD31を染色した後、定量的組織形態計測法により、腫瘍の微小血管密度を調べた。薬物の初回の投与の４時間後、各溶媒対照組に比べて、腫瘍微小血管面積(MVA)が顕著に減少した(32％；P＜0.05)。24時間後、腫瘍MVAの低下レベルがさらに増えた(53％；P＜0.01)。３日間投与後、効果がより明らかとなり、４時間と24時間にMVAがそれぞれ64％と68％低下したことが観察された。
【００５９】
上記の実験結果より、当業者は、EOC315 Mod.I結晶形化合物を使用すれば、腫瘍細胞の増殖を明らかに阻害することができることがわかる。
【００６０】
（実施例９）
末期胃がん又は胃食道接合部(GEJ)がん患者におけるEOC315とカペシタビン(X)及びシスプラチン(P)との併用研究の考察
最大６周期のシスプラチン治療後、毒性反応状況によって、被験者に以前の用量で続けてカペシタビンとEOC315を併用するか、カペシタビン又はEOC315を単独的に用いて疾患が進行するまで治療を行った。
【００６１】
この研究では合計48例の被験者が入った。そのうち、45例の被験者(94％)が腫瘍転移、35例の被験者(73％)が２つ以上の部位転移、26例の被験者(54％)が肝転移を起こした。26例の被験者(54％)の主な進展部位が胃食道接合部であり、22人の被験者(46％)が胃部であり、被験者の大半はECOGスコアが1(n＝41,85％)であった。
【００６２】
39例の被験者が少なくとも１コースの治療を完了して治療効果を評価した。客観的奏効率(ORR)が67％であった。1例(2.6％)の被験者が完全寛解を達成し、25例(64.1％)の被験者が部分寛解を達成した。11例(28.2％)の被験者の病状が安定で12週間以上続いた。評価より、客観的寛解は一般的に治療の最初の２つの周期に発生し、持続時間が比較的に長く、被験者が治療を受ける時間の長さと密接に関係している。抗腫瘍効果は腫瘍の組織種類、原発部位、肝臓へ進展したか否か、及び研究センタとは関係がない。無増悪生存期間(PFS)の中央値が4.5か月であった。Kaplan-Meier分析より、6か月以内の無増悪患者の割合が52％であった。腫瘍寛解した患者の無増悪時間の中央値が6.4か月であった。OSの中央値は7.8か月と推定され、１年間の生存率が33％であった。
【００６３】
初歩的な結果より、全体的奏効率が高く(67％の客観的奏効率(ORR)、単独化学療法で得られた歴史的奏効率のほぼ２倍)、寛解時間が長くなっており、生存期の延長を示唆する証拠になる。
【００６４】
（実施例10）  
安定性の実験結果
25℃、相対湿度60％、12か月の長期安定性、又は40℃、相対湿度75％、6か月の加速安定性を考察し、結果は下記の表４と表５に示される。
【００６５】
【表４】
2020516685.tif 000008
【００６６】
【表５】
2020516685.tif 000009
【００６７】
上記の表から、EOC315のMod.I結晶形は熱力学的な安定構造であることがわかる。
【００６８】
その生物学的利用能を向上させるために、生産された薬物を微粉化し、微粉化後の薬物結晶形はMod.I結晶形のままであり、ただ結晶化度が低下した。
【図１】
2020516685.tif 000013
【図２】
2020516685.tif 000014
【図３】
2020516685.tif 000015
【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【手続補正書】
【提出日】令和1年12月5日(2019.12.5)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
下式１で示された4-(4-クロロアニリノ)-7-(2-メチルアミノカルボニル-4-オキシメチル)ピリジルフロ[2,3-d]ピリダジンメタンスルホネート（EOC315）Mod.I結晶形化合物であって、
【化１】
2020516685.tif 000021
Ｘ線回折CuKαを用いた分析で、Ｘ線回折パターンにおいて、4.01°(±0.1°)、7.85°(±0.1°)、9.94°(±0.1°)、13.04°(±0.1°)、19.08°(±0.1°)、19.46°(±0.1°)、20.10°(±0.1°)、21.82°(±0.1°)、22.49°(±0.1°)、23.76°(±0.1°)、24.26°(±0.1°)、27.17°(±0.1°)、28.52°(±0.1°)、30.48°(±0.1°)にＸ線粉末回折ピークを有する前記Mod.I結晶形化合物。
【請求項２】
Ｘ線粉末回折CuKαを用いた分析で、Ｘ線回折パターンが図１に示されたＸ線回折パターンとほぼ一致する請求項１に記載のMod.I結晶形化合物。
【請求項３】
赤外分光法KBrで、3415cm-1(±2cm-1)、3058cm-1(±2cm-1)、2805cm-1(±2cm-1)、1668cm-1(±2cm-1)、1652cm-1(±2cm-1)及び1227cm-1(±2cm-1)においてスペクトル帯域を有する請求項１又は２に記載のMod.I結晶形化合物。
【請求項４】
赤外線スペクトルが図７に示された赤外線スペクトルとほぼ一致する請求項１〜３のいずれか一項に記載のMod.I結晶形化合物。
【請求項５】
融点が200.6℃である請求項１〜４のいずれか一項に記載のMod.I結晶形化合物。
【請求項６】
下式１で示された4-(4-クロロアニリノ)-7-(2-メチルアミノカルボニル-4-オキシメチル)ピリジルフロ[2,3-d]ピリダジンメタンスルホネート（EOC315）Mod.I結晶形化合物微粉末であって、
【化２】
2020516685.tif 000022
Ｘ線粉末回折CuKαを用いた分析で、Ｘ線回折パターンが図２に示されたＸ線回折パターンとほぼ一致し、粒径がD90≦15μmである前記Mod.I結晶形化合物微粉末。
【請求項７】
1）EOC315の遊離塩基を溶媒に溶かしてEOC315溶液を調製し、メタンスルホン酸を溶媒に溶かしてメタンスルホン酸溶液を調製するステップと、
2)前記メタンスルホン酸溶液を前記EOC315溶液に加えるステップと、
3)得られた混合溶液を減圧蒸留して一部の溶媒を留去後、結晶を析出させ、濾過し、濾過ケークを回収するステップと、
4)前記濾過ケークを真空乾燥するステップと、
を含む、請求項１〜５のいずれか一項に記載のMod.I結晶形化合物の製造方法。
【請求項８】
前記ステップ1)において、前記溶媒が、メタノール、エタノール、イソプロパノール、ブタノール、ヘキサン、ヘプタン、アセトン、エチルプロピルエーテル、テトラヒドロフラン、トルエン、酢酸エチル及びアセトニトリルの何れか１つの単一有機溶媒又はそれらの混合溶媒である請求項７に記載の製造方法。
【請求項９】
請求項１〜５のいずれか一項に記載のMod.I結晶形化合物及び／又は請求項６に記載のMod.I結晶形化合物微粉末と、一種以上の薬学的に許容される担体又は賦形剤を含有する医薬組成物。
【請求項１０】
がんの治療のための請求項９に記載の医薬組成物。
【請求項１１】
前記がんが進行性固形腫瘍及び／又は転移性固形腫瘍を含む、請求項１０に記載のがんの治療のための医薬組成物。
【請求項１２】
前記がんが胃がん及び／又は胃食道接合部(GEJ)がんを含む、請求項１０又は１１に記載のがんの治療のための医薬組成物。
【請求項１３】
さらに別の治療薬と併用される、請求項１０〜１２のいずれか一項に記載のがんの治療のための医薬組成物。
【請求項１４】
前記別の治療薬が、パクリタキセル、カペシタビン、シスプラチン及びゲムシタビンからなる群より選択される一つ以上である請求項１３に記載のがんの治療のための医薬組成物。
【請求項１５】
前記別の治療薬が、カペシタビン及びシスプラチンである請求項１３又は１４に記載のがんの治療のための医薬組成物。
【国際調査報告】
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