(57)【要約】本発明は、抗菌活性、抗真菌活性および抗ウイルス活性を有する分画ポリマー組成物を提供する。これらの組成物は、病原体によって引き起こされる感染性疾患の治療および他の用途に有用である。
2020521838.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
約７８０Ｄａ〜約５７００Ｄａの平均分子量および約１０ｋＤａ未満の分子分布を有する式Ｉのポリマー画分：
【化１】
2020521838.tif 000059
式中、ｎは１〜３であり、ｍは４〜１４であり、ｚは１〜６であり、ｚは酸である。
【請求項２】
実質的に他のポリマー成分を含まない、請求項１に記載のポリマー画分。
【請求項３】
実質的に分離されている、請求項１に記載のポリマー画分。
【請求項４】
ＸはＨＣｌ、Ｈ２ＳＯ４またはＡｃＯＨから選択される、請求項１に記載のポリマー画分。
【請求項５】
前記ポリマー画分の分子量中央値は約１３３０Ｄａ〜約３５００Ｄａの範囲である、請求項１に記載のポリマー画分。
【請求項６】
ｎは１であり、ｍは８であり、ｚは１．４であり、ＸはＨＣｌであり、平均分子量は１８５０（±１０％）Ｄａであり、分子分布は約３０００Ｄａ未満である、請求項１に記載のポリマー画分。
【請求項７】
ｎは１であり、ｍは８であり、ｚは２．４であり、ＸはＨＣｌであり、平均分子量は３１７０（±１０％）Ｄａであり、分子分布は約１００００Ｄａ未満である、請求項１に記載のポリマー画分。
【請求項８】
ｎは１であり、ｍは８であり、ｚは１．８であり、ＸはＨＣｌであり、平均分子量は２３００（±１０％）Ｄａであり、分子分布は約１０００Ｄａと約３０００Ｄａの間である、請求項１に記載のポリマー画分。
【請求項９】
ｎは１であり、ｍは８であり、ｚは１．９であり、ＸはＨＣｌであり、平均分子量は２５００（±１０％）Ｄａであり、分子分布は約２０００Ｄａと約３０００Ｄａの間である、請求項１に記載のポリマー画分。
【請求項１０】
ｎは１であり、ｍは２．８であり、ＸはＨＣｌであり、平均分子量は３６８０（±１０％）Ｄａであり、分子分布は約３０００Ｄａと約５０００Ｄａの間である、請求項１に記載のポリマー画分。
【請求項１１】
ｎは３であり、ｍは４であり、ｚは１．４であり、ＸはＨＣｌであり、平均分子量は１６００（±１０％）Ｄａであり、分子量分布は約３０００Ｄａ未満である、請求項１に記載のポリマー画分。
【請求項１２】
ｎは１であり、ｍは１４であり、ｚは１．３であり、ＸはＨＣｌであり、平均分子量は３１７０（±１０％）Ｄａであり、分子分布は約１００００Ｄａ未満である、請求項１に記載のポリマー画分。
【請求項１３】
ｎは１であり、ｍは８であり、ｚは１．７であり、ＸはＨ２ＳＯ４であり、平均分子量は２６００（±１０％）Ｄａであり、分子分布は１００００Ｄａ未満である、請求項１に記載のポリマー画分。
【請求項１４】
ｎは１であり、ｍは８であり、ｚは１．７であり、ＸはＡｃＯＨであり、平均分子量は２２００（±１０％）Ｄａであり、分子分布は約３０００Ｄａ未満である、請求項１に記載のポリマー画分。
【請求項１５】
ｎは１であり、ｍは１であり、ｚは１であり、ＸはＨＣｌであり、平均分子量は１３３０（＋１０％）Ｄａであり、分子分布は約２０００Ｄａ未満である、請求項１に記載のポリマー画分。
【請求項１６】
ｎは１であり、ｍは８であり、ｚは２．４であり、ＸはＨＣｌであり、平均分子量は３１００（＋１０％）Ｄａであり、分子分布は約５０００Ｄａ未満である、請求項１に記載のポリマー画分。
【請求項１７】
ｎは１であり、ｍは８であり、ｚは４．３であり、ＸはＨＣｌであり、平均分子量は５７００（＋１０％）Ｄａであり、分子分布は約５０００と約１００００Ｄａまでの間である、請求項１に記載のポリマー画分。
【請求項１８】
ｎは１であり、ｍは８であり、ｚは２．０であり、ＸはＨＣｌであり、平均分子量は５７００（＋１０％）Ｄａであり、分子分布は約２０００と約１００００Ｄａまでの間である、請求項１に記載のポリマー画分。
【請求項１９】
請求項１に記載のポリマー画分と医薬賦形剤とを含む医薬組成物。
【請求項２０】
式Ｉのポリマー画分を調製する方法であって、
ヘキサメチレンジアミンを、グアニジン塩、ならびにヒドラジン水和物、セミカルバジド、セミカルバジド塩酸塩、カルボヒドラジドおよびアミノグアニジン塩酸塩からなる群より選択される化合物と、１７５℃〜１９５℃の温度で反応させるステップ；および
透析によりポリマー画分を分離するステップ
を含む、方法。
【請求項２１】
約７８０Ｄａ〜約５７００Ｄａの平均分子量および約１０ｋＤａ未満の分子分布を有する式Ｉのポリマー画分であって：
【化２】
2020521838.tif 000060
式中、ｎは１〜３であり、ｍは４〜１４であり、ｚは１〜６であり、Ｘは酸であり、前記ポリマー画分は、ヘキサメチレンジアミンを、グアニジン塩、ならびにヒドラジン水和物、セミカルバジド、セミカルバジド塩酸塩、カルボヒドラジドおよびアミノグアニジン塩酸塩からなる群より選択される化合物と、１７５℃〜１９５℃の温度で反応させるステップ；および透析によりポリマー画分を分離するステップ；を含むプロセスにより調製されたものである、ポリマー画分。
【請求項２２】
細菌因子、真菌因子、ウイルス因子、原生動物因子およびがん細胞からなる群より選択される因子の増殖を阻害する方法であって、前記因子を、有効量の請求項１に記載のポリマー画分と接触させることを含む、方法
【請求項２３】
有効量の請求項１に記載のポリマー画分を対象に投与することを含む、必要とする対象において感染症を治療する方法。
【請求項２４】
有効量の請求項１に記載のポリマー画分を対象に投与することを含む、必要とする対象においてがんを治療する方法。
【請求項２５】
前記感染症は、細菌因子、真菌因子、ウイルス因子および原生動物因子からなる群より選択される因子によって引き起こされたものである、請求項２３に記載の方法。
【請求項２６】
前記感染症は混合感染症である、請求項２３に記載の方法。
【請求項２７】
前記感染症は全身感染症である、請求項２３に記載の方法。
【請求項２８】
前記感染症は歯性感染症である、請求項２３に記載の方法。
【請求項２９】
前記感染症は、皮膚および軟組織感染症、または創傷／潰瘍の感染症である、請求項２３に記載の方法。
【請求項３０】
前記感染症は粘膜感染症である、請求項２３に記載の方法。
【請求項３１】
前記感染症は気道感染症である、請求項２３に記載の方法。
【請求項３２】
前記感染症は肺感染症である、請求項２３に記載の方法。
【請求項３３】
前記肺感染症は、細菌株と真菌株の混合によって引き起こされる、請求項３２に記載の方法。
【請求項３４】
前記肺感染症は、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、肺炎、および人工呼吸器関連肺炎（ＶＡＰ）から選択される、請求項３２に記載の方法。
【請求項３５】
前記感染症は、皮膚および軟組織感染症である、請求項２３に記載の方法。
【請求項３６】
前記感染症は、膿瘍の感染症である、請求項２３に記載の方法。
【請求項３７】
前記感染症は副鼻腔炎である、請求項２３に記載の方法。
【請求項３８】
前記感染症は眼感染症である、請求項２３に記載の方法。
【請求項３９】
前記ポリマー画分は腫瘍を治療するために使用される、請求項２４に記載の方法。
【請求項４０】
前記ポリマー画分は局所的に投与される、請求項２３に記載の方法。
【請求項４１】
前記ポリマー画分は点滴注入される、請求項２３に記載の方法。
【請求項４２】
前記ポリマー画分は局所投与される、請求項２３に記載の方法。
【請求項４３】
前記ポリマー画分は経腸的に投与される、請求項２３に記載の方法。
【請求項４４】
前記ポリマー画分は非経口投与される、請求項２３に記載の方法。
【請求項４５】
抗菌剤の活性を増強する少なくとも１つの化合物と組み合わせて前記ポリマー画分を投与することを含む、請求項２３に記載の方法。
【請求項４６】
前記化合物は他の抗菌薬または抗がん剤と組み合わせて投与される、請求項２３または２４に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、抗菌活性、抗真菌活性および抗ウイルス活性を有する分画ポリマー組成物を提供する。これらの組成物は、病原体によって引き起こされる感染性疾患の治療および他の用途に有用である。
【背景技術】
【０００２】
薬剤耐性病原体の急速な進化は重要な公衆衛生問題である（非特許文献１）。抵抗性の感染症を治療するための新しい抗菌化合物が広く求められており、いくつかの公報が有効なクラスの化合物を報告している。特許文献１は、次式の抗ウイルス剤を開示する：
【化１】
2020521838.tif 000003
式中、ＨＸは酸であり、ｎは３〜２０であり、ｍは４〜２０である。このような化合物は、グアニジン塩酸塩とヘキサメチレンジアミンおよびヒドラジン水和物の三元重縮合(ternary polycondensatio)により合成できる。
【０００３】
特許文献２は、次式のヒドラジン止血剤を開示する：
【化２】
2020521838.tif 000004
式中、ｎは１〜２０であり、ｍは１〜１０であり、ｎｘｍは≧８である。
【０００４】
特許文献３は、次式のヒドラジン化合物を開示する：
【化３】
2020521838.tif 000005
式中、ｎは１〜３であり、ｍは２〜１０であり、ｚは４〜２０であり、Ｘは存在しないかまたは酸である。そのような化合物は、強力な抗菌性および抗真菌性を示す。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００５】
【特許文献１】米国特許出願公開第２０１７／００１３８３８号明細書
【特許文献２】国際公開第２０１６／１１８０４３号
【特許文献３】米国特許第８，９９３，７１２号明細書
【非特許文献】
【０００６】
【非特許文献１】Fidel, P.L, et al., Clin. Microbiol. Rev., 1999, 12(1):80-96
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
低毒性、増強された抗菌活性および他の有利な特徴を有する、耐性病原体を標的とする新しいまたは改善された薬剤が継続的に必要とされている。本明細書に記載の化合物、組成物および方法は、これらの目的および他の目的に向けられている。
【課題を解決するための手段】
【０００８】
本発明は、約７８０Ｄａ〜約５７００Ｄａの平均分子量および約１０ｋＤａ未満の分子分布を有する、式Ｉを含むポリマー画分を提供し、式Ｉは以下の構造を有する：
【化４】
2020521838.tif 000006
式中の構成メンバーは下記において定義する。
【０００９】
本発明はさらに、式Ｉのポリマー画分および薬学的に許容される担体を含む組成物を提供する。
【００１０】
本発明はさらに、例えば、ヘキサメチレンジアミンとヒドラジン水和物とグアニジン塩との三元重縮合反応、および式Ｉの特定の画分を分離するための粗生成物の透析により、本発明の式Ｉのポリマー画分を調製する方法を提供する。
【００１１】
本発明はさらに、病原体（例えば、細菌、真菌、ウイルスおよび原生動物因子（bacterial, fungal, viral, and protozoal agents)）またはがん細胞の増殖(growth)を阻害する方法であって、病原体を有効量の本発明の式Ｉのポリマー画分と接触させることを含む方法を提供する。
【００１２】
本発明はさらに、有効量の本発明の式Ｉのポリマー画分を対象に投与することを含む、必要とする対象において感染を治療する方法を提供する。
【００１３】
本発明はさらに、有効量の本発明の式Ｉのポリマー画分を対象に投与することを含む、必要とする対象においてがんを治療する方法を提供する。
【００１４】
本発明はさらに、式Ｉのポリマー画分を用いて、気道感染症、特に肺感染症（例えば、細菌株と真菌株の混合によって引き起こされる感染症）、ならびに慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、肺炎、および人工呼吸器関連肺炎（ＶＡＰ）を治療する方法を提供する。
【図面の簡単な説明】
【００１５】
【図１】実施例１に記載の化合物調製物の質量スペクトルである。
【図２−１】実施例３０に記載のように本発明の化合物調製物の存在下で増殖させたがん細胞の用量反応曲線を示す。
【図２−２】図２−１の続きである。
【図２−３】図２−２の続きである。
【図２−４】図２−３の続きである。
【図２−５】図２−４の続きである。
【図２−６】図２−５の続きである。
【図２−７】図２−６の続きである。
【図２−８】図２−７の続きである。
【図２−９】図２−８の続きである。
【図３−１】実施例３０に記載のがん細胞スクリーニングの平均グラフデータを示す。
【図３−２】図３−１の続きである。
【図３−３】図３−２の続きである。
【発明を実施するための形態】
【００１６】
本発明は、とりわけ、高い抗菌および抗ウイルス活性と低い毒性とを有する殺生物製剤を提供する。より詳細には、本発明は、式Ｉのポリマー画分を提供する：
【化５】
2020521838.tif 000007
式中、ｎは１〜３であり、ｍは４〜１４であり、ｚは１〜６であり、Ｘは酸である。
【００１７】
式Ｉは、ヘキサメチレンジアミンと、ヒドラジン水和物と、グアニジンの塩との三元重縮合反応により、重合反応によって生成されるすべての生成物を含む生成物ポリマーを形成することによって製造することができる。出願人は、驚くべきことに、式Ｉの生成物ポリマーを、分子量および後述する他のパラメーターに基づいてポリマー画分に分離すると、その分画された調製物が有利な特性、例えば低毒性および増強された効力を示すことを発見した。
【００１８】
一部の実施形態では、分画された式Ｉの調製物の平均分子量は、約７８０Ｄａ〜約５７００Ｄａである。
【００１９】
一部の実施形態では、平均分子量値は、式Ｉの化合物の遊離塩基形態（酸部分を含まない）の値を示す。例えば、一部の実施形態では、式Ｉの化合物の遊離塩基形態（酸部分を含まない）の平均分子量は、約７８０Ｄａ〜約５７００Ｄａである。
【００２０】
本発明の一部の実施形態において、式Ｉの化合物の平均分子量（酸部分を含まない）は約３６８０Ｄａ未満である。
【００２１】
一部の実施形態では、式Ｉのポリマー画分の平均分子量は約１３３０±１０％Ｄａである。
【００２２】
一部の実施形態では、式Ｉのポリマー画分の平均分子量は約１６００±１０％Ｄａである。
【００２３】
一部の実施形態では、式Ｉのポリマー画分の平均分子量は約１８５０±１０％Ｄａである。
【００２４】
一部の実施形態では、式Ｉのポリマー画分の平均分子量は約２０００±１０％Ｄａである。
【００２５】
一部の実施形態では、式Ｉのポリマー画分の平均分子量は約２２００±１０％Ｄａである。
【００２６】
一部の実施形態では、式Ｉのポリマー画分の平均分子量は約２３００±１０％Ｄａである。
【００２７】
一部の実施形態では、式Ｉのポリマー画分の平均分子量は約２５００±１０％Ｄａである。
【００２８】
一部の実施形態では、式Ｉのポリマー画分の平均分子量は約２６００±１０％Ｄａである。
【００２９】
一部の実施形態では、式Ｉのポリマー画分の平均分子量は約２６３０±１０％Ｄａである。
【００３０】
一部の実施形態では、式Ｉのポリマー画分の平均分子量は約２８００±１０％Ｄａである。
【００３１】
一部の実施形態では、式Ｉのポリマー画分の平均分子量は約３１００±１０％Ｄａである。
【００３２】
一部の実施形態では、式Ｉのポリマー画分の平均分子量は約３１７０±１０％Ｄａである。
【００３３】
一部の実施形態では、式Ｉのポリマー画分の平均分子量は約３６８０±１０％Ｄａである。
【００３４】
一部の実施形態では、式Ｉのポリマー画分の平均分子量は約５７００±１０％Ｄａである。
【００３５】
一部の実施形態では、式Ｉのポリマー画分の平均分子量は約９１０Ｄａ〜約１２００Ｄａである。
【００３６】
いくつかのさらなる実施形態では、本発明の式Ｉのポリマー画分の分子分布（molecular distribution）は約１０ｋＤａ未満である。
【００３７】
一部の実施形態において、分画された式Ｉの調製物の分子量中央値（median molecular weight）は、約１３３０Ｄａ〜約３５００Ｄａである。
【００３８】
一部の実施形態では、分画された式Ｉの調製物の分子量中央値は、約１３３０Ｄａ、または約１３４０Ｄａ、または約１３５０Ｄａ、または約１３６０Ｄａ、または約１３７０Ｄａ、または約１３８０Ｄａ、または約１３９０Ｄａ、または約１４００Ｄａ、または約１４１０Ｄａ、または約１４２０Ｄａ、または約１４３０Ｄａ、または約１４４０Ｄａ、または約１４５０Ｄａ、または約１４６０Ｄａ、または約１４７０Ｄａ、または約１４８０Ｄａ、または約１４９０Ｄａ、または約１５００Ｄａ、または約１５５０Ｄａ、または約１６００Ｄａ、または約１６５０Ｄａ、または約１７００Ｄａ、または約１７５０Ｄａ、または約１８００Ｄａ、または約１８５０Ｄａ、または約１９００Ｄａ、または約１９５０Ｄａ、または約２０００Ｄａ、または約２５００Ｄａ、または約３０００Ｄａ、または約３１００Ｄａ、または約３２００Ｄａ、または約３３００Ｄａ、または３４００Ｄａ、または３５００Ｄａである。
【００３９】
一部の実施形態において、ポリマー画分は、特定の分子量範囲外にある他のポリマー成分を実質的に含まないように、例えば、透析により実質的に精製される。一部の実施形態において、式Ｉのポリマー画分は、式Ｉの反応生成物配合物から実質的に分離される。
【００４０】
式Ｉの構造は、例えば、ＨＣｌ、Ｈ２ＳＯ４、ＡｃＯＨ、Ｈ３ＰＯ４、Ｈ２ＣＯ３、またはＣ６Ｈ５ＣＯＯＨなどの、酸「Ｘ」部分で修飾され、あらゆる酸付加塩を含む。
【００４１】
一部の実施形態では、ＸはＨＣｌである。
【００４２】
一部の実施形態では、ＸはＨ２ＳＯ４である。
【００４３】
一部の実施形態では、ＸはＡｃＯＨである。
【００４４】
一部の実施形態では、ｎ、ｍ、およびｚは、分画されたポリマー調製物中の構成成分の平均値を表す。
【００４５】
一部の実施形態では、ｎ：ｍの比は１：８である。
【００４６】
一部の実施形態では、ｎは１である。
【００４７】
一部の実施形態では、ｎは２である。
【００４８】
一部の実施形態では、ｎは３である。
【００４９】
一部の実施形態では、ｍは４である。
【００５０】
一部の実施形態では、ｍは５である。
【００５１】
一部の実施形態では、ｍは６である。
【００５２】
一部の実施形態では、ｍは７である。
【００５３】
一部の実施形態では、ｍは８である。
【００５４】
一部の実施形態では、ｍは９である。
【００５５】
一部の実施形態では、ｍは１０である。
【００５６】
一部の実施形態では、ｍは１１である。
【００５７】
一部の実施形態では、ｍは１２である。
【００５８】
一部の実施形態では、ｍは１３である。
【００５９】
一部の実施形態では、ｍは１４である。
【００６０】
いくつかのさらなる実施形態では、ｚは、１〜６、あるいは１．１、１．２、１．３、１．４、１．５、１．６、１．７、１．８、１．９、２．０、２．１、２．２、２．３、２．４、２．５、２．６、２．７、２．８、２．９、３．０、３．１、３．２、３．３、３．４、３．５、３．６、３．７、３．８、３．９、４．０、４．１、４．２、４．３、４．４、４．５、４．６、４．７、４．８、４．９、５．０、５．１、５．２、５．３、５．４、５．５、５．６、５．７、５．８、５．９、または６．０である。
【００６１】
一部の実施形態では、ｚは１である。
【００６２】
一部の実施形態では、ｚは１．３である。
【００６３】
一部の実施形態では、ｚは１．４である。
【００６４】
一部の実施形態では、ｚは１．７である。
【００６５】
一部の実施形態では、ｚは１．８である。
【００６６】
一部の実施形態では、ｚは１．９である。
【００６７】
一部の実施形態では、ｚは２．０である。
【００６８】
一部の実施形態では、ｚは２．４である。
【００６９】
一部の実施形態では、ｚは２．８である。
【００７０】
一部の実施形態では、ｚは４．３である。
【００７１】
一部の実施形態では、式Ｉのポリマー画分は、ｎが１であり、ｍが８であり、ｚが１．４であり、ＸがＨＣｌであり、平均分子量が１８５０（±１０％）Ｄａであり、分子分布が約３０００Ｄａ未満であるように定義される。
【００７２】
一部の実施形態では、式Ｉのポリマー画分は、ｎが１であり、ｍが８であり、ｚが２．４であり、ＸがＨＣｌであり、平均分子量が３１７０（±１０％）Ｄａであり、分子分布が約１００００Ｄａ未満であるように定義される。
【００７３】
一部の実施形態では、式Ｉのポリマー画分は、ｎが１であり、ｍが８であり、ｚが１．８であり、ＸがＨＣｌであり、平均分子量が２３００（±１０％）Ｄａであり、分子分布が約１０００Ｄａと約３０００Ｄａの間であるように定義される。
【００７４】
一部の実施形態では、式Ｉのポリマー画分は、ｎが１であり、ｍが８であり、ｚが１．９であり、ＸがＨＣｌであり、平均分子量が２５００（±１０％）Ｄａであり、分子分布が約２０００Ｄａと約３０００Ｄａの間であるように定義される。
【００７５】
一部の実施形態では、式Ｉのポリマー画分は、ｎが１であり、ｍが８であり、ｚが２．８であり、ＸがＨＣｌであり、平均分子量が３６８０（±１０％）Ｄａであり、分子分布が約３０００Ｄａと約５０００Ｄａの間であるように定義される。
【００７６】
一部の実施形態では、式Ｉのポリマー画分は、ｎが３、ｍが４であり、ｚが１．４であり、ＸがＨＣｌであり、平均分子量が１６００（±１０％）Ｄａであり、分子量分布が約３０００Ｄａ未満であるように定義される。
【００７７】
一部の実施形態では、式Ｉのポリマー画分は、ｎが１であり、ｍが１４であり、ｚが１．３であり、ＸがＨＣｌであり、平均分子量が３１７０（±１０％）Ｄａであり、分子分布が約１００００Ｄａ未満であるように定義される。
【００７８】
一部の実施形態では、式Ｉのポリマー画分は、ｎが１であり、ｍが８であり、ｚが１．７であり、ＸがＨ２ＳＯ４であり、平均分子量が２６００（±１０％）Ｄａであり、分子分布が１００００Ｄａ未満であるように定義される。
【００７９】
一部の実施形態では、式Ｉのポリマー画分は、ｎが１であり、ｍが８であり、ｚが１．７であり、ＸがＡｃＯＨであり、平均分子量が２２００（±１０％）Ｄａであり、分子分布が約３０００Ｄａ未満であるように定義される。
【００８０】
一部の実施形態では、式Ｉのポリマー画分は、ｎが１であり、ｍが８であり、ｚが１であり、ＸがＨＣｌであり、平均分子量が１３３０（＋１０％）Ｄａであり、分子分布が約２０００Ｄａ未満であるように定義される。
【００８１】
一部の実施形態では、式Ｉのポリマー画分は、ｎが１であり、ｍが８であり、ｚが２．４であり、ＸがＨＣｌであり、平均分子量が３１００（＋１０％）Ｄａであり、分子分布が約５０００Ｄａ未満であるように定義される。
【００８２】
一部の実施形態では、式Ｉのポリマー画分は、ｎが１であり、ｍが８であり、ｚが４．３であり、ＸがＨＣｌであり、平均分子量が５７００（＋１０％）Ｄａであり、分子分布が約５０００Ｄａと約１００００Ｄａまでの間であるように定義される。
【００８３】
一部の実施形態では、式Ｉのポリマー画分は、ｎが１であり、ｍが８であり、ｚが２．０であり、ＸがＨＣｌであり、平均分子量が５７００（＋１０％）Ｄａであり、分子分布が約２０００Ｄａと約１００００Ｄａまでの間であるように定義される。
【００８４】
合成
本発明の化合物およびポリマー画分（それらの塩を含む）は、公知の有機合成技術を使用して調製することができ、多数の可能な合成経路のいずれかに従って合成することができる。例えば、一部の実施形態では、式Ｉの化合物は、ヘキサメチレンジアミンと、ヒドラジン水和物と、グアニジンの塩との三元重縮合反応により合成される。その後、粗生成物の透析を実施して、狭く正確な分子量分布を有する式Ｉの調製物の分離を容易にすることができる。透析ステップでは、分画は、当業者によって選択される適切な透析モジュールを使用してろ過および濃縮の１または複数のステップを含んでもよい。
【００８５】
一部の実施形態において、本発明は、式Ｉのポリマー画分を調製する方法であって、
ヘキサメチレンジアミンを、グアニジン塩、ならびにヒドラジン水和物、セミカルバジド、セミカルバジド塩酸塩、カルボヒドラジドおよびアミノグアニジン塩酸塩からなる群より選択される化合物と、１７５℃〜１９５℃の温度で反応させるステップ；および
透析によりポリマー画分を分離するステップ
を含む方法を提供する。
【００８６】
一部の実施形態では、ヘキサメチレンジアミンおよびグアニジン塩をヒドラジン水和物と反応させて、式Ｉの重合生成物を得る。
【００８７】
一部の実施形態では、ヘキサメチレンジアミンおよびグアニジン塩をセミカルバジドと反応させて、式Ｉの重合生成物を得る。
【００８８】
一部の実施形態では、ヘキサメチレンジアミンおよびグアニジン塩をセミカルバジド塩酸塩と反応させて、式Ｉの重合生成物を得る。
【００８９】
一部の実施形態では、ヘキサメチレンジアミンおよびグアニジン塩をカルボヒドラジドと反応させる。
【００９０】
一部の実施形態では、ヘキサメチレンジアミンおよびグアニジン塩をアミノグアニジン塩酸塩と反応させて、式Ｉの重合生成物を得る。
【００９１】
一部の実施形態において、本発明は、約１３３０Ｄａ〜約５７００Ｄａの平均分子量および約１０ｋＤａ未満の分子分布を有する式Ｉのポリマー画分を提供し、式Ｉは、以下の構造：
【化６】
2020521838.tif 000008
を有し、
式中、ｎは１〜３であり、ｍは４〜１４であり、ｚは１〜６であり、Ｘは酸であり、そのポリマー画分は、ヘキサメチレンジアミンを、グアニジン塩、ならびにヒドラジン水和物、セミカルバジド、セミカルバジド塩酸塩、カルボヒドラジドおよびアミノグアニジン塩酸塩からなる群より選択される化合物と、１７５℃〜１９５℃の温度で反応させ；さらに透析によりポリマー画分を分離する；ことを含むプロセスによって調製される。
【００９２】
本発明の一部の実施形態において、式Ｉの化合物は、以下の試薬およびモル％割合を使用して調製される：
2020521838.tif 000009
【００９３】
本発明の一部の実施形態において、式Ｉの化合物は、以下の試薬およびモル％割合を使用して調製される：
2020521838.tif 000010
【００９４】
本発明の一部の実施形態において、式Ｉの化合物は、以下の試薬およびモル％割合を使用して調製される：
2020521838.tif 000011
【００９５】
本発明の一部の実施形態において、式Ｉの化合物は、以下の試薬およびモル％割合を使用して調製される：
2020521838.tif 000012
【００９６】
本発明の一部の実施形態において、式Ｉの化合物は、以下の試薬およびモル％割合を使用して調製される：
2020521838.tif 000013
【００９７】
方法
本発明の化合物およびポリマー画分は抗菌活性を有し、１つまたは複数の病原体および／または感染因子の増殖を阻害することができる。したがって、病原体を本明細書に記載の化合物および／またはポリマー画分の１つまたは複数と接触させることにより、本発明の化合物およびポリマー画分を用いて病原体の増殖を阻害することができる。一部の実施形態では、化合物およびポリマー画分は、細菌、真菌、ウイルス、原生動物因子またはがん細胞の増殖および／または活性を阻害するように作用することができる。さらなる実施形態では、有効量の本発明の化合物またはポリマー画分を投与することにより、本発明の化合物を用いて治療を必要とする個体または対象において感染症を治療することができる。さらなる実施形態では、有効量の本発明の化合物またはポリマー画分を投与することにより、本発明の化合物またはポリマー画分を用いて、そのような治療を必要とする個体または対象においてがんを治療することができる。
【００９８】
本化合物およびポリマー画分が阻害および／または調節する因子（agent）には、感染または疾患を引き起こすことができる任意の因子が含まれる。一部の実施形態では、本発明の化合物は選択的であり得る。「選択的」とは、少なくとも１つの他の化合物またはポリマー画分と比較して、その化合物またはポリマー画分が、特定の因子に対してより高い親和性で結合しまたはより高い効力で阻害することを意味する。
【００９９】
本発明の別の態様は、治療有効量または用量の本発明の化合物またはポリマー画分、あるいはその医薬組成物を、そのような治療を必要とする個体に投与することにより、個体（例えば患者）における感染症または感染性疾患を治療および／または予防する方法に関する。感染症には、病原体の活性に直接または間接的に関連するあらゆる疾患、障害または状態が含まれる。感染症には、細菌、真菌、ウイルスおよび原生動物因子などの病原体の増殖を調節することにより予防、改善または治癒され得る疾患、障害または状態も含まれる。
【０１００】
一部の実施形態では、感染症は混合感染症である。
【０１０１】
一部の実施形態では、感染症は全身感染症である。
【０１０２】
一部の実施形態では、感染症は歯性感染症である。
【０１０３】
一部の実施形態では、感染症は、皮膚および軟部組織の感染症または創傷／潰瘍の感染症である。
【０１０４】
一部の実施形態では、感染症は粘膜感染症である。
【０１０５】
一部の実施形態では、感染症は気道感染症である。
【０１０６】
一部の実施形態では、感染症は、細菌、真菌および／またはウイルス株の混合によって引き起こされる肺感染症を含む、肺感染症である。一部の実施形態では、肺感染症は、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、肺炎、人工呼吸器関連肺炎（ＶＡＰ）、嚢胞性線維症患者における肺感染症、または真菌性肺炎である。本発明はまた、本明細書に記載の疾患を含む特定の疾患の予防、例えば免疫不全患者における真菌性肺炎の予防にも関する。一部の実施形態では、感染症は皮膚および／または軟部組織感染症である。
【０１０７】
一部の実施形態では、感染症は膿瘍の感染症である。
【０１０８】
一部の実施形態では、感染症は副鼻腔炎である。
【０１０９】
一部の実施形態では、感染症は歯性感染症である。
【０１１０】
一部の実施形態では、感染症は眼感染症である。
【０１１１】
一部の実施形態では、本発明は腫瘍の治療に有用である。
【０１１２】
一部の実施形態では、本発明は、ウイルス性気道感染症の治療および／または予防に有用である。
【０１１３】
一部の実施形態では、本発明は尿路感染症の治療および／または予防に有用である。
【０１１４】
一部の実施形態では、本発明は膀胱炎の治療および／または予防に有用である。
【０１１５】
一部の実施形態では、本発明は、耳炎の治療および／または予防に有用である。
【０１１６】
一部の実施形態では、本発明は、腹膜炎および腹腔内敗血症の治療および／または予防に有用である。
【０１１７】
一部の実施形態では、本発明は、膿胸（pleural empyema）の治療および／または予防に有用である。
【０１１８】
一部の実施形態では、本発明は、敗血症の治療および／または予防に有用である。
【０１１９】
一部の実施形態において、本発明は、ＩＢＤ、クローン病、および／またはクロストリジウム感染症の治療および／または予防に有用である。
【０１２０】
一部の実施形態では、本発明は、多剤耐性の細菌、ウイルスまたは真菌によって引き起こされる感染症を治療および／または予防するのに有用である。
【０１２１】
一部の実施形態では、本発明は、バンコマイシン耐性黄色ブドウ球菌（ＶＲＳＡ）によって引き起こされる感染症の治療および／または予防に有用である。
【０１２２】
一部の実施形態では、本発明は、バークホルデリア・セパシア（Ｂｕｒｋｈｏｌｄｅｒｉａ  ｃｅｐａｃｉａ）細菌によって引き起こされる感染症を治療および／または予防するのに有用である。
【０１２３】
一部の実施形態では、本発明は、微生物バイオフィルムの成長を処置および／または予防するのに有用である。
【０１２４】
一部の実施形態において、本発明は、表面、例えば、自然に見られる表面（例えば、池）の処理に有用である。
【０１２５】
製剤および剤形
薬剤または医薬品として使用される場合、本明細書に記載の式Ｉの調製物は、医薬組成物の形態で投与することができる。これらの組成物は、製薬業界で周知の方法で調製することができ、局所治療が望ましいかまたは全身治療が望ましいか、および治療される領域に応じて、様々な経路で投与することができる。投与は、局所投与（経皮、表皮、眼、あるいは鼻腔内、膣内および直腸送達を含む粘膜への投与を含む）、肺内投与（例えば、ネブライザーによるものを含む粉末またはエアロゾルの吸入または吸送（insufflation）による投与;気管内または鼻腔内投与）、経口または非経口投与であってよい。非経口投与には、静脈内、動脈内、皮下、腹腔内、筋肉内投与、または注射もしくは注入；あるいは頭蓋内投与、例えば髄腔内または脳室内投与が含まれる。非経口投与は、単回ボーラス投与の形態であっても、あるいは、例えば連続注入ポンプによるものであってもよい。局所投与用の医薬組成物および製剤には、経皮パッチ、軟膏、ローション、クリーム、ゲル、ドロップ、坐薬、スプレー、液剤および粉末が含まれる。従来の医薬担体、水性、粉末または油性の基剤、増粘剤などが必要であるかまたは望ましい場合がある。コーティングされたコンドーム、手袋なども有用となり得る。
【０１２６】
本発明は、１つ以上の薬学的に許容される担体（賦形剤）と組み合わせて、活性成分（または有効成分）として式Ｉの調製物を含む医薬組成物も包含する。本発明の組成物の製造において、活性成分は、典型的には、賦形剤と混合されるか、賦形剤により希釈されるか、あるいは、例えば水溶液、カプセル、サシェ、紙、または他の容器の形態のそのような担体内に封入される。賦形剤が希釈剤としての役割を果たす場合、それは、活性成分のためのビヒクル、担体または媒体として働く固体、半固体または液体材料であってよい。したがって、組成物は、懸濁液、エマルジョン、溶液、シロップ、エアロゾル（固体としてまたは液体媒体中）、錠剤、丸薬、粉末、ロゼンジ、サシェ、カシェ、エリキシル、懸濁液、エマルジョン、溶液、シロップ、エアロゾル（固体としてまたは液体媒体中）、例えば最大１０質量％の活性化合物を含む軟膏、軟および硬ゼラチンカプセル、坐剤、滅菌注射液、および滅菌包装粉末の形態であってよい。
【０１２７】
本発明の化合物および組成物を局所投与、経口投与または注射による投与のために組み込むことができる液体剤形には、水溶液、適切なフレーバーシロップ、水性または油性懸濁液、およびエマルジョン、ならびにエリキシルおよび類似の医薬ビヒクルが含まれる。
【０１２８】
吸入または吹送用の組成物には、薬学的に許容される水性または有機溶媒、またはそれらの混合物中の溶液および懸濁液、ならびに粉末が含まれる。液体または固体組成物は、上記のような適切な薬学的に許容される賦形剤を含むことができる。一部の実施形態では、組成物は、局所または全身効果のために、経口または鼻呼吸経路によって投与される。組成物は、不活性ガスを使用して噴霧することができる。噴霧溶液は、噴霧装置から直接吸い込むことができ、あるいは噴霧装置をフェイスマスクテントまたは間欠的陽圧呼吸器に取り付けてもよい。溶液、懸濁液または粉末組成物は、適切な方法で製剤を送達するデバイスから経口または経鼻投与することができる。
【０１２９】
一部の実施形態において、式Ｉおよび／またはそのポリマー画分は局所的に（locally）投与される。
【０１３０】
一部の実施形態では、式Ｉおよび／またはそのポリマー画分は点滴注入(instillation)により投与される。
【０１３１】
一部の実施形態では、式Ｉおよび／またはそのポリマー画分は局所(topically)投与される。
【０１３２】
一部の実施形態では、式Ｉおよび／またはそのポリマー画分は経腸的に投与される。
【０１３３】
一部の実施形態では、式Ｉおよび／またはそのポリマー画分は非経口投与される。
【０１３４】
一部の実施形態では、本発明の化合物およびポリマー画分は、抗菌剤の活性を増強する少なくとも１つの他の化合物または成分と組み合わせて投与される。がんおよび／または腫瘍の成長の治療に使用される場合、化合物およびポリマー画分は、他の抗菌薬または抗がん剤と組み合わせて投与されてよい。
【０１３５】
一部の実施形態では、本発明の式Ｉおよび／またはポリマー画分は、吸入用の溶液形態に調製される。
【０１３６】
一部の実施形態では、式Ｉおよび／またはそのポリマー画分は、吸入用の粉末形態に調製される。
【０１３７】
一部の実施形態では、式Ｉおよび／またはそのポリマー画分は、嚢胞性線維症、慢性閉塞性肺疾患、気管支拡張症、肺移植、真菌性肺炎、人工呼吸器関連肺炎などにおける肺感染症を治療するためのものである。
【０１３８】
一部の実施形態では、式Ｉおよび／またはそのポリマー画分は、点滴注入用の溶液形態に調製される。そのような溶液は、例えば、尿路感染症、副鼻腔炎、膿瘍、腹膜炎、膿胸(lung empyema)の治療に有用である。
【０１３９】
一部の実施形態において、式Ｉおよび／またはそのポリマー画分は、例えば、根管の治療、歯周ポケットに適用される組成物、および口腔リンス溶液などの歯科用途のための溶液形態に調製される。
【０１４０】
式Ｉおよび／またはそのポリマー画分の局所製剤は、様々な用途、例えば、潰瘍、火傷の治療、および材料の含浸(impregnation of materials)に使用することができる。
【０１４１】
患者に投与される化合物または組成物の量は、投与されているもの、予防または治療などの投与の目的、患者の状態、投与方法などによって異なる。治療用途では、すでに疾患を患っている患者に、疾患およびその合併症の症状を治癒するまたは少なくとも部分的に抑えるのに十分な量で組成物を投与することができる。有効用量は、治療中の疾患の状態、ならびに疾患の重症度、患者の年齢、体重、全身状態などの要因に応じた主治医の判断によって決まる。
【０１４２】
本発明の化合物およびポリマー画分の治療用量は、例えば、治療が行われる特定の用途、化合物の投与方法、患者の健康および状態、ならびに処方医師の判断に従って変動し得る。医薬組成物中の本発明の化合物の割合または濃度は、投与量、化学的特性（例えば、疎水性）および投与経路を含む、多くの要因によって変動し得る。例えば、本発明の化合物およびポリマー画分は、非経口投与用に約０．１〜約１０％ｗ／ｖの化合物を含む生理学的緩衝水溶液で提供することができる。ある典型的な用量範囲は、約１μｇ／ｋｇ体重／日〜約１ｇ／ｋｇ体重／日である。一部の実施形態において、用量範囲は、約０．０１ｍｇ／ｋｇ体重／日〜約１００ｍｇ／ｋｇ体重／日である。投与量は、疾患または障害の進行のタイプおよび程度、特定の患者の全体的な健康状態、選択化合物の相対的な生物学的効果、賦形剤の組成、およびその投与経路などの変数に依存する可能性が高い。有効用量は、ｉｎ  ｖｉｔｒｏまたは動物モデルの試験システムから得られる用量反応曲線から推定できる。
【０１４３】
本発明を特定の実施例によりさらに詳細に説明する。以下の例は、例示の目的で提供されており、いかなる形でも本発明を限定することを意図するものではない。当業者は、本質的に同じ結果をもたらすために変更または修正することができるさまざまな重要でないパラメーターを容易に認識するであろう。
【実施例】
【０１４４】
以下で使用する試薬および溶媒は、Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈなどの商業的供給元から入手できる。質量分析の結果は、電荷に対する質量の比として報告され、その後に各イオンの相対存在量が続く（括弧内）。表では、最も一般的な原子同位体を含むＭ＋Ｈ（または、記述のように、Ｍ−Ｈ）イオンについて単一のｍ／ｅ値が報告されている。
【０１４５】
以下のものは、本発明の化合物およびポリマー画分の例である。
【０１４６】
実施例１
【化７】
2020521838.tif 000014
ガス排出管、攪拌子および温度計を備えた耐熱１Ｌフラスコに、グアニジン塩酸塩（９５．５ｇ、１．０モル、４８．７質量％）、ヘキサメチレンジアミン（１０４．４ｇ、０．９モル、４８．７質量％）およびヒドラジン水和物（５．０ｇ、０．１モル、２．６質量％）を装填した。アンモニアを捕捉するために、排出管をレシーバーに接続した。フラスコの内容物を攪拌し、１７５〜１８０℃に加熱し、１７５〜１８０℃で１時間にわたり水とアンモニアを徐々に除去した。次に、温度を１９０℃に上げ、フラスコの内容物を１時間撹拌した。温かい反応塊を１３０〜１４０℃に冷却し、撹拌しながら熱水（１５０ｍＬ）を加え、反応塊が完全に溶解するまで混合物を撹拌し続けた。得られた溶液をデカントし、フラスコを水（３０ｍＬ）ですすぎ、その後、デカントした溶液と再び混ぜ合わせた。合わせた溶液を酸でｐＨ６〜７に中和し、５０％の濃度を有するオリゴマー水溶液３３０ｍＬを透明で実質的に無色の液体として得た。
【０１４７】
得られた５０％オリゴマー溶液３００ｍＬに水（１２００ｍＬ）を加えて、粗生成物の１０％溶液を得た。次いで、その溶液を３ｋＤａの上限カットオフを有する膜モジュールを通してろ過し、実施例１の表題化合物１２０ｇを含むろ液１２５０ｍＬを得た。残留末端アミノ基の酸塩基滴定により、表題化合物（酸を含まない遊離塩基形態）について１８５０（±１０％）Ｄａの平均分子量が決定された。
【０１４８】
実施例１の化合物をＭＡＬＤＩ−ＭＳで調べた。０．１ｍｌのα−シアノ−４−ヒドロキシケイ皮酸（ＣＨＣＡ）の水溶液を、実施例１の調製物の０．１ｍｇ／ｍｌ水溶液０．１ｍｌに加えて混合した。得られた溶液１μｌをＭＡＬＤＩのターゲットに塗布し、風乾した。得られたサンプルを、４００ｎｍのレーザー動作周波数を使用して、ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦデバイス（Ｂｒｕｃｋｅｒ  Ｄａｌｔｏｎｉｃｓ）で試験した。マスイオンが、ｍ／ｚ４８０〜２０００Ｄａの範囲において正イオンモードで登録された。実施例１の調製物の質量スペクトルを図１に示す。
【０１４９】
代替合成Ａ：
ガス排出管、攪拌子および温度計を備えた耐熱１Ｌフラスコに、グアニジン塩酸塩（９５．５ｇ、１．０モル、４８．７質量％）、ヘキサメチレンジアミン（１０４．４ｇ、０．９モル、４８．７質量％）およびセミカルバジド（７．５ｇ、０．１モル）を装填した。アンモニアを捕捉するために、排出管をレシーバーに接続した。フラスコの内容物を攪拌し、１７５〜１８０℃に加熱し、１７５〜１８０℃で２時間にわたり水とアンモニアを徐々に除去した。次に、温度を１９０℃に上げ、フラスコの内容物を１時間撹拌した。温かい反応塊を１３０〜１４０℃に冷却し、撹拌しながら熱水（１５０ｍＬ）を加え、反応塊が完全に溶解するまで混合物を撹拌し続けた。得られた溶液をデカントし、フラスコを水（３０ｍＬ）ですすぎ、その後、デカントした溶液と再び混ぜ合わせた。合わせた溶液を酸でｐＨ６〜７に中和し、５０％の濃度を有する３３０ｍＬのオリゴマー水溶液を透明で実質的に無色の液体として得た。
【０１５０】
得られた５０％オリゴマー溶液３００ｍＬに水（１２００ｍＬ）を加えて、粗生成物の１０％溶液を得た。次いで、その溶液を、３ｋＤａの上限質量カットオフを有する膜モジュールを通してろ過し、実施例１の表題化合物１２０ｇを含むろ液１２５０ｍＬを得た。
【０１５１】
代替合成Ｂ：
ガス排出管、攪拌子および温度計を備えた耐熱１Ｌフラスコに、グアニジン塩酸塩（９５．５ｇ、１．０モル、４８．７質量％）、ヘキサメチレンジアミン（１０４．４ｇ、０．９モル、４８．７質量％）およびセミカルバジド塩酸塩（１１．０５ｇ、０．１モル）を装填した。アンモニアを捕捉するために、排出管をレシーバーに接続した。フラスコの内容物を攪拌し、１７５〜１８０℃に加熱し、１７５〜１８０℃で２時間にわたり水とアンモニアを徐々に除去した。次に、温度を１９０℃に上げ、フラスコの内容物を１時間撹拌した。温かい反応塊を１３０〜１４０℃に冷却し、撹拌しながら熱水（１５０ｍＬ）を加え、反応塊が完全に溶解するまで混合物を撹拌し続けた。得られた溶液をデカントし、フラスコを水（３０ｍＬ）ですすぎ、その後、デカントした溶液と再び混ぜ合わせた。合わせた溶液を酸でｐＨ６〜７に中和し、５０％の濃度を有する３３０ｍＬのオリゴマー水溶液を透明で実質的に無色の液体として得た。
【０１５２】
得られた５０％オリゴマー溶液３００ｍＬに水（１２００ｍＬ）を加えて、粗生成物の１０％溶液を得た。次いで、その溶液を、３ｋＤａの上限質量カットオフを有する膜モジュールを通してろ過し、実施例１の表題化合物１２０ｇを含むろ液１２５０ｍＬを得た。
【０１５３】
代替合成Ｃ：
ガス排出管、攪拌子および温度計を備えた耐熱１Ｌフラスコに、グアニジン塩酸塩（９５．５ｇ、１．０モル、４８．７質量％）、ヘキサメチレンジアミン（１０４．４ｇ、０．９モル、４８．７質量％）およびセミカルバジド塩酸塩（１１．０５ｇ、０．１モル）および水（５ｍＬ）を装填した。アンモニアを捕捉するために、排出管をレシーバーに接続した。フラスコの内容物を攪拌し、１７５〜１８０℃に加熱し、１７５〜１８０℃で２時間にわたり水とアンモニアを徐々に除去した。次に、温度を１９０℃に上げ、フラスコの内容物を１時間撹拌した。温かい反応塊を１３０〜１４０℃に冷却し、撹拌しながら熱水（１５０ｍＬ）を加え、反応塊が完全に溶解するまで混合物を撹拌し続けた。得られた溶液をデカントし、フラスコを水（３０ｍＬ）ですすぎ、その後、デカントした溶液と再び混ぜ合わせた。合わせた溶液を酸でｐＨ６〜７に中和し、５０％の濃度を有する３３０ｍＬのオリゴマー水溶液を透明で実質的に無色の液体として得た。
【０１５４】
得られた５０％オリゴマー溶液３００ｍＬに水（１２００ｍＬ）を加えて、粗生成物の１０％溶液を得た。次いで、その溶液を、３ｋＤａの上限質量カットオフを有する膜モジュールを通してろ過し、実施例１の表題化合物１２０ｇを含むろ液１２５０ｍＬを得た。
【０１５５】
代替合成Ｄ：
ガス排出管、攪拌子、および温度計を備えた耐熱１Ｌフラスコに、グアニジン塩酸塩（９５．５ｇ、１．０モル、４８．７質量％）、ヘキサメチレンジアミン（１０４．４ｇ、０．９モル、４８．７質量％）およびカルボヒドラジド（９０ｇ、０．１モル）を装填した。アンモニアを捕捉するために、排出管をレシーバーに接続した。フラスコの内容物を攪拌し、１７５〜１８０℃に加熱し、１７５〜１８０℃で２時間にわたり水とアンモニアを徐々に除去した。次に、温度を１９０℃に上げ、フラスコの内容物を１時間撹拌した。温かい反応塊を１３０〜１４０℃に冷却し、撹拌しながら熱水（１５０ｍＬ）を加え、反応塊が完全に溶解するまで混合物を撹拌し続けた。得られた溶液をデカントし、フラスコを水（３０ｍＬ）ですすぎ、その後、デカントした溶液と再び混ぜ合わせた。合わせた溶液を酸でｐＨ６〜７に中和し、５０％の濃度を有する３３０ｍＬのオリゴマー水溶液を透明で実質的に無色の液体として得た。
【０１５６】
得られた５０％オリゴマー溶液３００ｍＬに水（１２００ｍＬ）を加えて、粗生成物の１０％溶液を得た。次いで、その溶液を、３ｋＤａの上限質量カットオフを有する膜モジュールを通してろ過し、実施例１の表題化合物１２０ｇを含むろ液１２５０ｍＬを得た。
【０１５７】
代替合成Ｅ：
ガス排出管、攪拌子、および温度計を備えた耐熱１Ｌフラスコに、グアニジン塩酸塩（９５．５ｇ、１．０モル、４８．７質量％）、ヘキサメチレンジアミン（１０４．４ｇ、０．９モル、４８．７質量％）およびアミノグアニジン塩酸塩（１１０．５ｇ、０．１モル）を装填した。アンモニアを捕捉するために、排出管をレシーバーに接続した。フラスコの内容物を攪拌し、１７５〜１８０℃に加熱し、１７５〜１８０℃で２時間にわたり水とアンモニアを徐々に除去した。次に、温度を１９０℃に上げ、フラスコの内容物を１時間撹拌した。温かい反応塊を１３０〜１４０℃に冷却し、撹拌しながら熱水（１５０ｍＬ）を加え、反応塊が完全に溶解するまで混合物を撹拌し続けた。得られた溶液をデカントし、フラスコを水（３０ｍＬ）ですすぎ、その後、デカントした溶液と再び混ぜ合わせた。合わせた溶液を酸でｐＨ６〜７に中和し、５０％の濃度を有する３３０ｍＬのオリゴマー水溶液を透明で実質的に無色の液体として得た。
【０１５８】
得られた５０％オリゴマー溶液３００ｍＬに水（１２００ｍＬ）を加えて、粗生成物の１０％溶液を得た。次いで、その溶液を、３ｋＤａの上限質量カットオフを有する膜モジュールを通してろ過し、実施例１の表題化合物１２０ｇを含むろ液１２５０ｍＬを得た。
【０１５９】
実施例２
【化８】
2020521838.tif 000015
ガス排出管、攪拌子および温度計を備えた耐熱１Ｌフラスコに、グアニジン塩酸塩（９５．５ｇ、１．０モル、４８．７質量％）、ヘキサメチレンジアミン（１０４．４ｇ、０．９モル、４８．７質量％）およびヒドラジン水和物（５．０ｇ、０．１モル、２．６質量％）を装填した。アンモニアを捕捉するために、排出管をレシーバーに接続した。フラスコの内容物を攪拌し、１７５〜１８０℃に加熱し、１７５〜１８０℃で２時間にわたり水とアンモニアを徐々に除去した。次に、温度を１９５℃まで上げ、フラスコの内容物を１時間撹拌した。温かい反応塊を１３０〜１４０℃に冷却し、撹拌しながら熱水（１５０ｍＬ）を加え、反応塊が完全に溶解するまで混合物を撹拌し続けた。得られた溶液をデカントし、フラスコを水（３０ｍＬ）ですすぎ、その後、デカントした溶液と再び混ぜ合わせた。合わせた溶液を酸でｐＨ６〜７に中和し、５０％の濃度を有する３３０ｍＬのオリゴマー水溶液を透明で実質的に無色の液体として得た。
【０１６０】
得られた５０％オリゴマー溶液３００ｍＬに水（１２００ｍＬ）を加えて、粗生成物の１０％溶液を得た。次いで、その溶液を、１０ｋＤａの上限カットオフを有する膜モジュールを通してろ過し、実施例２の表題化合物１３０ｇを含むろ液１３５０ｍＬを得た。残留末端アミノ基の酸塩基滴定により、表題化合物（酸を含まない遊離塩基形態）について３１７０（±１０％）Ｄａの平均分子量が決定された。
【０１６１】
実施例３
【化９】
2020521838.tif 000016
実施例１に記載の方法を使用して、表題化合物を調製した。この実施例では、６００ｍＬの得られたろ液（３０００Ｄａの上限質量カットオフのオリゴマー溶液）を水で５．９Ｌに希釈し、上限質量カットオフが１０００Ｄａの膜を備えたろ過膜モジュールで透析して、５．４Ｌのろ液を分離した。残りの透析物を分離して、実施例３の表題化合物４４ｇを含む溶液４５０ｍＬを得た。表題化合物（酸を含まない遊離塩基形態）について２３００Ｄａの平均分子量が決定された。
【０１６２】
実施例４
【化１０】
2020521838.tif 000017
ガス排出管、攪拌子および温度計を備えた耐熱１Ｌフラスコに、グアニジン塩酸塩（９５．５ｇ、１．０モル、４８．７質量％）、ヘキサメチレンジアミン（１０４．４ｇ、０．９モル、４８．７質量％）およびヒドラジン水和物（５．０ｇ、０．１モル、２．６質量％）を装填した。アンモニアを捕捉するために、排出管をレシーバーに接続した。フラスコの内容物を攪拌し、１７５〜１８０℃に加熱し、１７５〜１８０℃で１時間にわたり水とアンモニアを徐々に除去した。次に、温度を１９０℃に上げ、フラスコの内容物を４時間撹拌した。温かい反応塊を１３０〜１４０℃に冷却し、熱水（１５０ｍＬ）を撹拌しながら加え、反応塊が完全に溶解するまで混合物を撹拌し続けた。得られた溶液をデカントし、フラスコを水（３０ｍＬ）ですすぎ、その後、デカントした溶液と再び混ぜ合わせた。合わせた溶液を酸でｐＨ６〜７に中和し、５０％の濃度を有する３３０ｍＬのオリゴマー水溶液を透明で実質的に無色の液体として得た。
【０１６３】
得られた５０％オリゴマー溶液３００ｍＬに水（１２００ｍＬ）を加えて、粗生成物の１０％溶液を得た。次いで、溶液を、３ｋＤａの上限カットオフを有する膜モジュールを通してろ過し、１１０ｇの不揮発性物質を含むろ液１３００ｍＬを得た。このろ液６００ｍＬを水で５Ｌに希釈し、上限質量カットオフが２ｋＤａの膜を備えたろ過膜モジュールで透析して、４．７Ｌのろ液を分離した。残りの透析物を分離して、実施例４の表題化合物２８ｇを含む溶液２９０ｍＬを得た。表題化合物（酸を含まない遊離塩基形態）について２５００の平均分子量（±１０％）Ｄａが決定された。
【０１６４】
実施例５
【化１１】
2020521838.tif 000018
ガス排出管、攪拌子、および温度計を備えた耐熱１Ｌフラスコに、グアニジン塩酸塩（９５．５ｇ、１．０モル、４８．７質量％）、ヘキサメチレンジアミン（１０４．４ｇ、０．９モル、４８．７質量％）およびヒドラジン水和物（５．０ｇ、０．１モル、２．６質量％）を装填した。アンモニアを捕捉するために、排出管をレシーバーに接続した。フラスコの内容物を攪拌し、１７５〜１８０℃に加熱し、１７５〜１８０℃で２時間にわたり水とアンモニアを徐々に除去した。次に、温度を１９５℃に上げ、フラスコの内容物を１．５時間撹拌した。温かい反応塊を１３０〜１４０℃に冷却し、熱水（１５０ｍＬ）を撹拌しながら加え、反応塊が完全に溶解するまで混合物を撹拌し続けた。得られた溶液をデカントし、フラスコを水（３０ｍＬ）ですすぎ、その後、デカントした溶液と再び混ぜ合わせた。合わせた溶液を酸でｐＨ６〜７に中和し、５０％の濃度を有する３３０ｍＬのオリゴマー水溶液を透明で実質的に無色の液体として得た。
【０１６５】
得られた５０％オリゴマー溶液３００ｍＬに水（１２００ｍＬ）を加えて、粗生成物の１０％溶液を得た。次に、溶液を５ｋＤａの上限カットオフを有する膜モジュールを通してろ過し、５ｋＤａの上限カットオフのオリゴマー１２０ｇを含むろ液１２３０ｍＬを得た。このろ液６００ｍＬを水で６Ｌに希釈し、上限質量カットオフが３ｋＤａの膜を備えたろ過膜モジュールで透析して、５．６Ｌのろ液を分離した。残りの透析物を分離して、実施例５の表題化合物３５ｇを含む溶液３６０ｍＬを得た。表題化合物（酸を含まない遊離塩基形態）について３６８０（±１０％）Ｄａの平均分子量が決定された。
【０１６６】
実施例６
【化１２】
2020521838.tif 000019
表題化合物は、以下の試薬を用いて、実施例１に記載の方法を使用して調製した：
2020521838.tif 000020
【０１６７】
実施例６の表題化合物は、１０％水溶液として得られた。表題化合物（酸を含まない遊離塩基形態）の平均分子量は、残留末端アミノ基の酸塩基滴定により決定して、１６００（±１０％）Ｄａであった。
【０１６８】
実施例７
【化１３】
2020521838.tif 000021
表題化合物は、以下の試薬を用いて、実施例２に記載の方法を使用して調製した：
2020521838.tif 000022
【０１６９】
実施例７の表題化合物は、１０％水溶液として得られた。表題化合物（酸を含まない遊離塩基形態）の平均分子量は、残留末端アミノ基の酸塩基滴定により測定して、２８００（±１０％）Ｄａであった。
【０１７０】
実施例８
【化１４】
2020521838.tif 000023
表題化合物は、以下の試薬を用いて、実施例２に記載の方法を使用して調製した：
2020521838.tif 000024
【０１７１】
実施例８の表題化合物は、１０％水溶液として得られた。表題化合物（酸を含まない遊離塩基形態）の平均分子量は、残留末端アミノ基の酸塩基滴定により決定して、２６００（±１０％）Ｄａであった。
【０１７２】
実施例９
【化１５】
2020521838.tif 000025
表題化合物は、以下の試薬を用いて、実施例１に記載の方法を使用して調製した：
2020521838.tif 000026
【０１７３】
実施例９の表題化合物は、１０％水溶液として得られた。表題化合物（酸を含まない遊離塩基形態）の平均分子量は、残留末端アミノ基の酸塩基滴定により測定して、２０００（±１０％）Ｄａであった。
【０１７４】
実施例１０
【化１６】
2020521838.tif 000027
ガス排出管、攪拌子および温度計装を備えた耐熱１Ｌフラスコに、グアニジン塩酸塩（９５．５ｇ、１．０モル、４８．７質量％）、ヘキサメチレンジアミン（１０４．４ｇ、０．９モル、４８．７質量％）およびヒドラジン水和物（５．０ｇ、０．１モル、２．６質量％）を装填した。アンモニアを捕捉するために、排出管をレシーバーに接続した。フラスコの内容物を攪拌し、１７５〜１８０℃に加熱し、１７５〜１８０℃で１時間にわたり水とアンモニアを徐々に除去した。次に、温度を１９０℃に上げ、フラスコの内容物を１時間撹拌した。温かい反応塊を１３０〜１４０℃に冷却し、撹拌しながら熱水（１５０ｍＬ）を加え、反応塊が完全に溶解するまで混合物を撹拌し続けた。得られた溶液をデカントし、フラスコを水（３０ｍＬ）ですすぎ、その後、デカントした溶液と再び混ぜ合わせた。合わせた溶液を酸でｐＨ６〜７に中和し、５０％の濃度を有する３３０ｍＬのオリゴマー水溶液を透明で実質的に無色の液体として得た。
【０１７５】
得られた５０％オリゴマー溶液３００ｍＬに水（１２００ｍＬ）を加えて、粗生成物の１０％溶液を得た。次いで、溶液を２ｋＤａの上限カットオフを有する膜モジュールを通してろ過し、実施例１０の表題化合物８０ｇを含むろ液１０００ｍＬを得た。残留末端アミノ基の酸塩基滴定により、表題化合物（酸を含まない遊離塩基形態）について１３３０（±１０％）Ｄａの平均分子量が決定された。
【０１７６】
実施例１１
【化１７】
2020521838.tif 000028
ガス排出管、攪拌子および温度計を備えた耐熱１Ｌフラスコに、グアニジン塩酸塩（９５．５ｇ、１．０モル、４８．７質量％）、ヘキサメチレンジアミン（１０４．４ｇ、０．９モル、４８．７質量％）およびヒドラジン水和物（５．０ｇ、０．１モル、２．６質量％）を装填した。アンモニアを捕捉するために、排出管をレシーバーに接続した。フラスコの内容物を攪拌し、１７５〜１８０℃に加熱し、１７５〜１８０℃で２時間にわたり水とアンモニアを徐々に除去した。次に、温度を１９５℃まで上げ、フラスコの内容物を１時間撹拌した。温かい反応塊を１３０〜１４０℃に冷却し、撹拌しながら熱水（１５０ｍＬ）を加え、反応塊が完全に溶解するまで混合物を撹拌し続けた。得られた溶液をデカントし、フラスコを水（３０ｍＬ）ですすぎ、その後、デカントした溶液と再び混ぜ合わせた。合わせた溶液を酸でｐＨ６〜７に中和し、５０％の濃度を有する３３０ｍＬのオリゴマー水溶液を透明で実質的に無色の液体として得た。
【０１７７】
得られた５０％オリゴマー溶液３００ｍＬに水（１２００ｍＬ）を加えて、粗生成物の１０％溶液を得た。次いで、溶液を、５ｋＤａの上限カットオフを有する膜モジュールを通してろ過し、実施例１１の表題化合物１２６ｇを含む溶液１３００ｍＬを得た。残留末端アミノ基の酸塩基滴定により、表題化合物（酸を含まない遊離塩基形態）について、３１００（±１０％）Ｄａの平均分子量が決定された。
【０１７８】
実施例１２
【化１８】
2020521838.tif 000029
ガス排出管、攪拌子および温度計を備えた耐熱１Ｌフラスコに、グアニジン塩酸塩（９５．５ｇ、１．０モル、４８．７質量％）、ヘキサメチレンジアミン（１０４．４ｇ、０．９モル、４８．７質量％）およびヒドラジン水和物（５．０ｇ、０．１モル、２．６質量％）を装填した。アンモニアを捕捉するために、排出管をレシーバーに接続した。フラスコの内容物を攪拌し、１７５〜１８０℃に加熱し、１７５〜１８０℃で２時間にわたり水とアンモニアを徐々に除去した。次に、温度を１９５℃まで上げ、フラスコの内容物を２時間撹拌した。温かい反応塊を１３０〜１４０℃に冷却し、撹拌しながら熱水（１５０ｍＬ）を加え、反応塊が完全に溶解するまで混合物を撹拌し続けた。次に、得られた溶液を注ぎ出し、フラスコを水（３０ｍＬ）ですすぎ、両方の溶液を合わせた。合わせた溶液を酸でｐＨ６〜７に中和し、５０％の濃度を有する３３０ｍＬのオリゴマー水溶液を透明で実質的に無色の液体として得た。
【０１７９】
得られた５０％オリゴマー溶液３００ｍＬに水（１２００ｍＬ）を加えて、粗生成物の１０％溶液を得た。次に、この溶液を、１０ｋＤａの上限カットオフを有する膜モジュールでろ過し、１２７０ｇの不揮発性物質を含む溶液１３５０ｍＬを得た。このろ液６００ｍＬを水で６Ｌに希釈し、上限質量カットオフが５ｋＤａの膜を備えたろ過膜モジュールで透析して、５．８Ｌのろ液を分離した。残りの透析物を分離して、実施例１２の目的の表題化合物９ｇを含む溶液１８０ｍＬを得た。表題化合物（酸を含まない遊離塩基形態）について、５７００（±１０％）Ｄａの平均分子量が決定された。
【０１８０】
実施例１３
ガス排出管、攪拌子および温度計を備えた耐熱１Ｌフラスコに、グアニジン塩酸塩（９５．５ｇ、１．０モル、４８．７質量％）、ヘキサメチレンジアミン（１０４．４ｇ、０．９モル、４８．７質量％）およびヒドラジン水和物（５．０ｇ、０．１モル、２．６質量％）を装填した。アンモニアを捕捉するために、排出管をレシーバーに接続した。フラスコの内容物を攪拌し、１７５〜１８０℃に加熱し、２時間にわたり水とアンモニアを徐々に除去し、その後１９５℃に温度を上げて１時間混合した。次に、温度を１９５℃まで上げ、フラスコの内容物を２時間撹拌した。温かい反応塊を１３０〜１４０℃に冷却し、撹拌しながら熱水（１５０ｍＬ）を加え、反応塊が完全に溶解するまで混合物を撹拌し続けた。得られた溶液をデカントし、フラスコを水（３０ｍＬ）ですすぎ、その後、デカントした溶液と再び混ぜ合わせた。合わせた溶液を酸でｐＨ６〜７に中和し、５０％の濃度を有する３３０ｍＬのオリゴマー水溶液を透明で実質的に無色の液体として得た。
【０１８１】
得られた５０％オリゴマー溶液３００ｍＬに水（１２００ｍＬ）を加えて、粗生成物の１０％溶液を得た。次に、この溶液を、１０ｋＤａの上限カットオフを有する膜モジュールでろ過し、１２７０ｇの不揮発性物質を含む溶液１３５０ｍＬを得た。このろ液６００ｍＬを水で６Ｌに希釈し、上限質量カットオフが２ｋＤａの膜を備えたろ過膜モジュールで透析して、５．７Ｌのろ液を分離した。残りの透析物を分離して、下記式で表される目
的化合物２８ｇを含む溶液２９０ｍＬを得た：
【化１９】
2020521838.tif 000030
表題化合物（酸を含まない遊離塩基形態）について、２６３０（±１０％）Ｄａの平均分子量が決定された。
【０１８２】
実施例１４
実施例１〜１３で分離された調製物の構造的特徴を表１に示す。実施例１〜１２の調製物の元素分析（乾物ベース）を表２に示す。
【０１８３】
【表１】
2020521838.tif 000031
【０１８４】
【表２】
2020521838.tif 000032
【０１８５】
実施例１〜１２の調製物の殺生物活性と、米国特許第８，９９３，７１２号に記載されているプロトタイプ調製物（５２７３〜２６０００Ｄａの平均分子量を有する）との比較を以下の実施例に示す。プロトタイプ調製物は、下記式の化合物である：
【化２０】
2020521838.tif 000033
式中、ｎ＝１〜３；ｍ＝２〜１０；ｚ＝４〜２０；およびＸは不在または酸であり、ｎ／ｍの平均比は１／９であり、重合度は４０以上であり、ポリマー分子の平均分子量（対イオンなし）は約５２７３Ｄａ〜約２６０００Ｄａの範囲である。
【０１８６】
実施例１５
この実施例では、実施例１〜１２の調製物の有効性を、様々な細菌（好気性および嫌気性）ならびに真菌病原体に対して試験した。
2020521838.tif 000034
【０１８７】
抗菌活性は、連続希釈法によって評価した。化合物を滅菌水に溶解し、５００〜０．００２５ｍｇ／Ｌの濃度で使用した。隣接する試験管の培地中の薬物濃度は２倍異なっていた。３７℃で７２時間細菌を培養した後、実験結果を収集した。データを表３に示す。
【０１８８】
【表３】
2020521838.tif 000035
【０１８９】
これらのデータは、本発明の化合物が顕著な抗菌活性を有することを示す。
【０１９０】
【表４】
2020521838.tif 000036
【０１９１】
これらのデータは、本発明の化合物が顕著な抗真菌活性を有することを示す。
【０１９２】
実施例１６
この実施例では、本発明の化合物の抗ウイルス活性を試験した。
2020521838.tif 000037
【０１９３】
実施例１〜１２の調製物の５．０％水溶液を調製した。ウイルスが薬剤と接触する時間は、２０±２℃の温度で０．５〜１．０分であった。ウイルス感染力価の阻害の程度によって決定されるウイルス誘発性細胞変性効果によって細胞内でのウイルス複製を評価し、ＥＣ５０として測定した。データを表５に示す。
【０１９４】
【表５】
2020521838.tif 000038
【０１９５】
これらのデータは、本発明の化合物が、単純構造および多構造のＲＮＡおよびＤＮＡ含有ウイルスに対して顕著な殺ウイルス活性を有することを示す。
【０１９６】
実施例１７
この実験では、式Ｉの調製物の毒性を、生体外（Ex Vivo）赤血球溶血アッセイ（ヒト赤血球）を使用して分析した。ヒト赤血球をＰＢＳに溶解させた。各化合物を５希釈で試験した。データを表６に示す。
【０１９７】
【表６】
2020521838.tif 000039
【０１９８】
実施例１３〜１６の調製物の生物学的活性および毒性のデータは、式Ｉの調製物の予想外の利点を実証する。本発明のいかなる理論にも拘束されることなく、本発明の方法は、特定の病原体に対して高レベルの活性をもたらす狭く有利な分子量分布を有するポリマー調製物を提供すると考えられる。調製物からある低分子量および高分子量の成分を除去すると、低毒性、強化された抗菌活性、促進された生体膜への浸透、有利な崩壊プロファイルおよびその他の有利な特徴を有する式Ｉの画分がもたらされる。式Ｉの化合物のある画分は、特定の微生物を標的とする独自の活性プロファイルを有する。例えば、実施例１の調製物は、アスペルギルス属の多細胞真菌に対して高い活性を示す。実施例４の調製物は、カンジダ属の単細胞真菌に関して非常に効果的である。実施例１１の調製物は、グラム陽性細菌に対して高い活性を示す。実施例２の調製物は、グラム陰性菌に対して活性である。マイコバクテリアは、実施例１２の調製物に対して非常に感受性が高い。実施例１、２、３、１０、および１３の化合物はそれぞれ、特定のウイルスに対して高い活性を示す。したがって、調製されたサンプルは、特定の種類の病原体を標的とするのに役に立つ、独特でかつ予想外の活性プロファイルを有する。
【０１９９】
実施例１８
この実施例では、式Ｉの化合物の抗腫瘍活性を、継代エールリッヒ固形腫瘍のモデルを使用して試験した。式Ｉの調製物を、腫瘍移植と同時に腹腔内に投与した（０．０１％溶液を０．２ｍｌ）。対照動物には水（試験薬物の溶媒として使用）を投与した。
【０２００】
【表７】
2020521838.tif 000040
【０２０１】
結果は、試験サンプルが実験動物の腫瘍の成長を阻害することを示す。
【０２０２】
実施例１９
この実験では、継代エールリッヒ固形腫瘍のモデルを使用して、本発明の生成物の抗がん剤との併用効果を試験した。薬物を、腫瘍移植と同時に腹腔内に投与した（０．０１％溶液を０．２ｍｌ）。対照動物には水（試験薬物の溶媒として使用）を投与した。
【０２０３】
【表８】
2020521838.tif 000041
【０２０４】
結果は、試験サンプルが、抗がん剤と一緒に実験動物における腫瘍の成長を阻害することを示す。当業者によって理解されるように、式Ｉの調製物が他の抗がん剤、例えば、アルキル化剤、代謝拮抗剤、プリン拮抗薬、ピリミジン拮抗薬、植物アルカロイド、抗生物質、ホルモン剤、およびその他の抗がん剤と組み合わせた場合に、同様の抗がん効果が生じると予想される。
【０２０５】
実施例２０
本明細書に記載の化合物を、実施例１の方法に従ってＭＡＬＤＩ−ＭＳにより調べた。表９は、ｍ／ｚ４８０〜２０００Ｄａの範囲での実施例１、１ａ、１ｂ、１ｃ、１ｄ、６、９、１０の調製物の質量スペクトルにおける特徴的なＭＨ＋イオンの質量値（ｍ／ｚ）とそれらの相対強度を示す。
【０２０６】
【表９】
2020521838.tif 000042
【０２０７】
【表１０】
2020521838.tif 000043
【０２０８】
【表１１】
2020521838.tif 000044
【０２０９】
実施例２１
この実施例では、嚢胞性線維症の患者における肺感染細菌病原体に対する実施例１の調製物の有効性を試験した。この試験の結果を表１２に示す。
【０２１０】
【表１２】
2020521838.tif 000045
【０２１１】
これらのデータは、本発明のポリマー画分が、ＣＦ患者に一般的に見られる耐性株に対して広いスペクトルの活性をもたらすことを示す。本発明のポリマー画分は、ＴＯＢＩおよびケイストン(Cayston)などの従来の薬物よりも強化された活性を有する。
【０２１２】
実施例２２
この実施例では、混合呼吸器感染症の動物モデルに対する調製物の有効性を試験した。
【０２１３】
方法：実施例１、５および１０の調製物の効力を、嚢胞性線維症患者由来の細菌分離株に対して調べた。ＭＩＣ値は、ＣＬＳＩガイドラインに従ってブロスマクロ希釈法により決定した。ｉｎ  ｖｉｖｏ試験では、８週齢のＣ５７ＢＬ／６マウスに、緑膿菌ＭＲ−６（２ｘ１０７ｃｆｕ／マウス）＋アスペルギルス・フミガーツス（６ｘ１０６ｃｆｕ／マウス）を鼻腔内感染させた。感染の１２時間後に、実施例１、５、および１０の調製物、あるいはトブラマイシンまたはアズトレオナム（aztreonam）を３２ｘＭＩＣで鼻腔内吸入により投与して、治療を開始した。
【０２１４】
結果：実施例１、５、および１０の調製物は、アスペルギルス・フミガーツスに対して０．２５〜０．５ｍｇ／ＬのＭＩＣおよび緑膿菌に対して１．０〜４．０ｍｇ／ＬのＭＩＣで、高レベルの抗菌活性を示した。トブラマイシンおよびアズトレオナムの活性はそれより低かった：トブラマイシンは緑膿菌に対して１６〜３２ｍｇ／ＬのＭＩＣを示し、アスペルギルス・フミガーツスに対しては有効ではなかった；アズトレオナムは、緑膿菌に対して６４ｍｇ／ＬのＭＩＣを示し、アスペルギルス・フミガーツスに対しては有効ではなかった。
【０２１５】
【表１３】
2020521838.tif 000046
【０２１６】
実施例２３
この実施例では、調製物（実施例１および１０）の有効性をヒト副鼻腔炎の治療について試験した。副鼻腔炎の患者（合計１５人）は、直接副鼻腔穿刺、ならびに０．０５％の実施例１の調製物（５人の患者）または０．０５％の実施例１０の調製物（５人の患者）の２ｍｌの点滴注入を受ける。対照患者には、滅菌０．９％生理食塩水を点滴注入した（５人の患者）。臨床的有効性は、体温の正常化および痛みの低減とみなされた。微生物学的効果は、注入の４８時間後にコロンビア寒天培地にプレーティングして３７℃で２４時間後のＣＦＵ数の減少として決定した。
【０２１７】
【表１４】
2020521838.tif 000047
【０２１８】
実施例２４
この実施例では、調製物（実施例１および４）の有効性をヒト膀胱炎の治療について試験した。膀胱炎の患者（合計１５人）は、０．００５％の実施例１の調製物（５人の患者）または０．１％の実施例４の調製物（５人の患者）の１０ｍｌの膀胱内点滴注入を受けた。対照患者には、滅菌０．９％生理食塩水を点滴注入した（５人の患者）。微生物学的効果は、注入の４８時間後にコロンビア寒天培地にプレーティングして３７℃で２４時間後のＣＦＵ数の減少として決定した。
【０２１９】
【表１５】
2020521838.tif 000048
【０２２０】
実施例２５
この実施例では、調製物の有効性をバクテリオファージに対して試験した。特に、サルモネラ属菌に感染するバクテリオファージに対する０．０５％の実施例１、３、９、１０、１２および１３の調製物の効力を調べた。ファージは、Ｇｒａｔｉａの方法（Kropinski et al. "Enumeration of bacteriophages by double agar overlay plaque assay." Bacteriophages: Methods and Protocols, Volume 1: Isolation, Characterization, and Interactions, Humana Press, 2009, vol. 501, 69-76）によって数えた。バクテリオファージを化合物と５分間インキュベートし、次いでろ過し、ＰＢＳバッファーで洗浄した。次に、バクテリオファージサンプルをプラークアッセイベースの方法で使用して、その活性を調べた。
【０２２１】
【表１６】
2020521838.tif 000049
【０２２２】
実施例２６
この実施例では、多剤耐性微生物に対する実施例１、１０、および１３の調製物の有効性を試験した。
【０２２３】
試験細菌株：多剤耐性緑膿菌ＡＧＲ１８およびＭＲ２３
真菌株：アンホテリシンＢおよびボリコナゾールに耐性のカンジダ・グラブラータ（Candida glabrata）ＣＧ１５、ＶＴ１８
微生物学的効果は、最小阻害濃度（ＭＩＣ）として決定した。ＭＩＣは、目に見える増殖を完全に阻害する抗生物質の最低濃度として定義された。
【０２２４】
多剤耐性緑膿菌分離株に対する実施例１、１０および１３の調製物の殺菌活性を以下の表１７に示す。
【表１７】
2020521838.tif 000050
【０２２５】
多剤耐性カンジダ・グラブラータ分離株に対する実施例１、１０および１３の調製物の殺菌活性を以下の表１８に示す。
【表１８】
2020521838.tif 000051
【０２２６】
実施例２７
この実施例では、バンコマイシン耐性黄色ブドウ球菌（ＶＲＳＡ）に対する本発明の調製物の有効性を試験した。
【０２２７】
ＭＩＣは、ＣＬＳＩの推奨に従って、標準接種（１０５ｃｆｕ／ｍＬ）で陽イオン調整ミューラーヒントンブロスＩＩ（Ｂｅｃｔｏｎ  Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ）を使用したブロスマクロ希釈法（broth macrodilution method）を使用して決定した。この試験で使用した培養物は、ヒトの感染からの臨床分離菌であった。これらの実験のデータを表１９に示す。
【０２２８】
【表１９】
2020521838.tif 000052
【０２２９】
実施例２８
この実施例では、本発明の調製物の有効性を、予め形成されたバイオフィルムに対して試験した。具体的には、予め形成された２４時間の古さのバイオフィルムに対する実施例１の調製物の有効性を試験した。抗菌剤のＭＩＣは、ＣＬＳＩガイドラインに従って、ブロスマクロ希釈法によって決定した。５×１０５コロニー形成単位（ＣＦＵ）／ｍＬの標準的な細菌接種を使用した。抗菌剤の２倍連続希釈液を陽イオン調整ＭＨＢ中に調製した。ＭＩＣは、目に見える増殖を完全に阻害する抗生物質の最低濃度として定義された。
【０２３０】
９６ウェルの平底ポリスチレン組織培養マイクロタイタープレート（Ｓａｒｓｔｅｄｔ、ニュームブレヒト、ドイツ）の各ウェルに、カチオン調整ＭＨＢ中の標準化された緑膿菌接種材料（５×１０５ＣＦＵ／ｍＬ）２００μｌを添加した。３７℃で２４時間インキュベートした後、バイオフィルムサンプルをリン酸緩衝生理食塩水で２回洗浄して非付着細菌を除去し、ＭＩＣの１、２、４、８、１６、３２、および６４倍の濃度で本発明の調製物を含む２００μＬのＭＨＢに２４時間曝露した。未処理のバイオフィルムを陰性対照として使用した。曝露後、抗菌剤のキャリーオーバーを防ぐためにウェルの内容物を吸引し、各ウェルを滅菌脱イオン水で３回洗浄した。
【０２３１】
ＣＦＵ数を評価するために、バイオフィルムをウェルの端に特に注意して徹底的にこすり取った（１１）。ウェルの内容物を吸引し、１ｍＬの等張リン酸緩衝液（０．１５Ｍ、ｐＨ７．２）中に入れ、連続希釈およびミューラーヒントン寒天培地へのプレーティングにより総ＣＦＵ数を決定した。データをｌｏｇ１０スケールに変換し、未処理対照と比較した。
【０２３２】
ＭＢＥＣは、予め形成されたバイオフィルム中の細菌を５０％（ＭＢＥＣ５０）、９０％（ＭＢＥＣ９０）、および１００％（ＭＢＥＣ１００）殺した薬物の濃度として決定された。ＭＢＥＣの感度は、米国臨床検査標準協議会解釈ガイドライン２０１２（2012 Clinical and Laboratory Standards Institute guidelines for interpretation）を使用して決定された。すべてのアッセイには最低３回の反復が含まれ、３回の独立した実験で繰り返された。これらの実験の結果を表２０に示す。
【０２３３】
【表２０】
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【０２３４】
実施例２９
この実施例では、表面の一般的な処理について調製物の効力を試験した。実施例７の調製物の、７フィート（２．１３ｍ）×５フィート（１．５２ｍ）×２フィート（０．６１ｍ）（幅×長さ×高さ）の寸法の池の水を殺菌する能力を試験した。試験の前に、水を池から採取し、ろ過し、ミューラーヒントン寒天プレート（Ｏｘｏｉｄ  Ｌｔｄ．、ロンドン、イギリス）にプレーティングし、３７℃で一晩インキュベートした。推定コロニー形成単位数は約４１ｏｇｌ０ＣＦＵ／ｍｌであった。水に実施例７の試験化合物を最終濃度０．０１％まで添加し、ミューラーヒントン寒天プレート（ＯｘｏｉｄＬｔｄ．、ロンドン、イギリス）にプレーティングし、３７℃で一晩インキュベートした後、目に見える細菌の増殖はなかった。
【０２３５】
実施例３０
この実施例では、実施例３に記載の分画調製物をがん細胞スクリーニングで試験した。
【０２３６】
方法：がんスクリーニングパネルのヒト細胞株を、５％ウシ胎児血清および２ｍＭのＬ−グルタミンを含むＲＰＭＩ  １６４０培地中において増殖させた。細胞を、個々の細胞株の倍加時間に応じて５，０００〜４０，０００細胞／ウェルの範囲のプレーティング密度で、１００μＬの培地中において９６ウェルマイクロタイタープレートに接種した。細胞接種後、マイクロタイタープレートを３７℃、５％ＣＯ２、９５％空気および１００％相対湿度で２４時間インキュベートした後、実施例３の調製物を添加した。
【０２３７】
２４時間後、各細胞株の２枚のプレートをＴＣＡでｉｎ  ｓｉｔｕで固定し、実施例３の調製物の添加時の各細胞株の細胞集団の対照測定値（Ｔｚ）を示した。実施例３の調製物を、所望の最終最大試験濃度の４００倍でジメチルスルホキシドに可溶化し、使用前に凍結保存した。添加時に、実施例３の調製物の凍結濃縮物のアリコートを解凍し、５０μｇ／ｍｌゲンタマイシンを含む完全培地で所望の最終最大試験濃度の２倍に希釈した。追加の４つの１０倍または１／２ｌｏｇ連続希釈を行い、合計５種類の濃度の実施例３の調製物と対照とを提供する。１００μｌの様々な希釈率のアリコートを、１００μｌの培地を含む適切なマイクロタイターウェルに添加し、必要最終濃度の実施例３の調製物を各サンプル中に提供した。
【０２３８】
実施例３の調製物の添加後、プレートを３７℃、５％ＣＯ２、９５％空気、および１００％相対湿度でさらに４８時間インキュベートした。接着細胞については、冷ＴＣＡの添加によりアッセイを終了した。５０μｌの５０％（ｗ／ｖ）冷ＴＣＡ（最終濃度、１０％ＴＣＡ）を穏やかに加えることにより、ｉｎ  ｓｉｔｕで細胞を固定し、４℃で６０分間インキュベートした。上清を廃棄し、プレートを水道水で５回洗浄し、風乾した。１％酢酸中０．４％（ｗ／ｖ）のスルホローダミンＢ（ＳＲＢ）溶液（１００ｕｌ）を各ウェルに添加し、プレートを室温で１０分間インキュベートした。染色後、１％酢酸で５回洗浄して結合していない色素を除去し、プレートを風乾した。続いて、結合した染料を１０ｍＭトリス塩基で可溶化し、５１５ｎｍの波長において自動プレートリーダーで吸光度を読み取った。浮遊細胞の場合、５０μｌの８０％ＴＣＡ（最終濃度、１６％ＴＣＡ）を穏やかに加えることによって、ウェルの底に沈降細胞を固定することによりアッセイを終了したことを除き、方法論は同じであった。７つの吸光度測定［時間ゼロ（Ｔｚ）、対照増殖（Ｃ）、および５つの濃度レベルの実施例３の調製物の存在下での試験増殖（Ｔｉ）］を用いて、実施例３調製物の各濃度レベルについて増殖率(percentage growth)を次のように計算した。
Ｔｉ＞／＝Ｔｚの濃度に関して、［（Ｔｉ−Ｔｚ）／（Ｃ−Ｔｚ）］ｘ１００
Ｔｉ＜Ｔｚの濃度に関して、［（Ｔｉ−Ｔｚ）／Ｔｚ］ｘ１００
【０２３９】
３つの用量反応パラメーターが計算された。５０％の増殖阻害（ＧＩ５０）は、［（Ｔｉ−Ｔｚ）／（Ｃ−Ｔｚ）］ｘ１００＝５０から計算され、これは、薬物インキュベーション中に対照細胞における正味のタンパク質の増加（ＳＲＢ染色により測定）の５０％の減少をもたらす実施例３の調製物の濃度である。全増殖阻害（ＴＧＩ）をもたらす実施例３の調製物の濃度は、Ｔｉ＝Ｔｚから計算された。処理後の細胞の正味の損失を示すＬＣ５０（開始時と比較して、薬物処理の終了時に測定タンパク質の５０％の減少をもたらす薬物の濃度）は、［（Ｔｉ−Ｔｚ）／Ｔｚ］ｘ１００＝−５０から計算される。活性レベルに達すると、これら３つのパラメーターのそれぞれについて値が計算される；ただし、効果に達しないかまたはそれを超えている場合、そのパラメーターの値は、試験された最高濃度よりも高いまたは最低濃度よりも低いと表現される。
【０２４０】
ｉｎ  ｖｉｔｒｏスクリーニングで使用したヒトがん細胞株のリストを表２１に示す。細胞株はＮＣＩ−Ｆｒｅｄｅｒｉｃｋで維持されている。
【表２１−１】
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【表２１−２】
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【表２１−３】
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【表２１−４】
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【０２４１】
この実験の結果を表２２に示す。がん細胞スクリーニングの用量反応曲線を図２に示す。データを平均グラフ形式に置き換えたものを図３に示す。
【０２４２】
【表２２】
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【図１】
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【図２−１】
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【図２−２】
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【図２−３】
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【図２−４】
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【図２−５】
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【図２−６】
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【図２−７】
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【図２−８】
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【図２−９】
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【図３−１】
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【図３−２】
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【図３−３】
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【国際調査報告】
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