【手続補正書】
【提出日】平成30年10月2日(2018.10.2)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
標的ＤＮＡを修飾する方法であって、
細胞内で該標的ＤＮＡを複合体と接触させることを含み、
該複合体は、
（ａ）Ｃａｓ９ポリペプチド並びに
（ｂ）ＤＮＡ標的化ＲＮＡであって、
（ｉ）該標的ＤＮＡ内の配列に対して相補的なヌクレオチド配列を含むＤＮＡ標的化セグメント；および
（ｉｉ）前記Ｃａｓ９ポリペプチドと相互作用するタンパク質結合セグメントであって、該タンパク質結合セグメントは、ハイブリダイズして二本鎖ＲＮＡ（ｄｓＲＮＡ）を形成する、２つの相補的な一続きのヌクレオチドを含み、前記ｄｓＲＮＡは、ｔｒａｃｒＲＮＡおよびＣＲＩＳＰＲ  ＲＮＡ（ｃｒＲＮＡ）の相補的なヌクレオチドを含む、該タンパク質結合セグメント
を含むＤＮＡ標的化ＲＮＡ
を含む複合体であり、
該細胞は、植物細胞、動物細胞または単細胞真核生物であり、
該細胞は、インビボのヒト細胞ではなく、ヒト生殖細胞ではなく、およびヒト胚細胞ではなく、
該修飾は標的ＤＮＡの切断である、
前記標的ＤＮＡを修飾する方法。
【請求項２】
前記細胞が動物細胞であり、該動物細胞が哺乳類細胞である、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記２つの相補的な一続きのヌクレオチドは、ハイブリダイズして８〜１５塩基対を形成する、請求項１または２に記載の方法。
【請求項４】
前記２つの相補的な一続きのヌクレオチドは、ハイブリダイズして１５〜１８塩基対を形成する、請求項１または２に記載の方法。
【請求項５】
前記ハイブリダイズして前記タンパク質結合セグメントのｄｓＲＮＡを形成するヌクレオチド間の相補性が７０％よりも大きい、請求項１〜４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６】
前記標的ＤＮＡが染色体ＤＮＡである、請求項１〜５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項７】
前記ＤＮＡ標的化ＲＮＡが、修飾ヌクレオチド塩基、修飾骨格または非天然ヌクレオシド間連結、修飾された糖部分、Ｌｏｃｋｅｄ核酸およびペプチド核酸の１つまたはそれ以上を含む、請求項１〜６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項８】
前記ＤＮＡ標的化ＲＮＡが、ホスホロチオエート、ホスホルアミダート、非リン酸ジエステル、ヘテロ原子、キラルホスホロチオエート、ホスホロジチオエート、ホスホトリエステル、アミノアルキルホスホトリエステル、３’−アルキレンホスホネート、５’−アルキレンホスホネート、キラルホスホネート、ホスフィネート、３’−アミノホスホルアミダート、アミノアルキルホスホルアミダート、ホスホロジアミダート、チオノホスホルアミダート、チオノアルキルホスホネート、チオノアルキルホスホトリエステル、セレノホスフェートおよびボラノホスフェートの１つまたはそれ以上を含む非天然ヌクレオシド間連結を含む、請求項１〜６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項９】
前記ＤＮＡ標的化ＲＮＡが、
（ｉ）ホスホロチオエート、逆の極性を有する連結および脱塩基性ヌクレオシド連結から選択される、非天然ヌクレオシド間連結、
（ｉｉ）Ｌｏｃｋｅｄ核酸（ＬＮＡ）、並びに
（ｉｉｉ）２’‐Ｏ‐メトキシメチル、２’‐Ｏ‐メチルおよび２’‐フルオロから選択される修飾された糖部分、
の１つまたはそれ以上を含む、
請求項１〜６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１０】
前記ＤＮＡ標的化ＲＮＡが、
２’−Ｏ−（２−メトキシエチル）、２’−ジメチルアミノオキシエトキシ、２’−ジメチルアミノエトキシエトキシ、２’‐Ｏ‐メチルおよび２’‐フルオロから選択される、修飾された糖部分の１つまたはそれ以上を含む、
請求項１〜６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１１】
前記ＤＮＡ標的化ＲＮＡが、
５−メチルシトシン、５−ヒロドキシメチルシトシン、キサンチン、ヒポキサンチン、２−アミノアデニン、アデニンの６−メチル誘導体、グアニンの６−メチル誘導体、アデニンの２−プロピル誘導体、グアニンの２−プロピル誘導体、２−チオウラシル、２−チオチミン、２−チオシトシン、５−プロピニルウラシル、５−プロピニルシトシン、６−アゾウラシル、６−アゾシトシン、６−アゾチミン、偽ウラシル（ｐｓｅｕｄｏｕｒａｃｉｌ）、４−チオウラシル、８−ハロアデニン、８−アミノアデニン、８−チオールアデニン、８−チオアルキルアデニン、８−ヒドロキシルアデニン、８−ハログアニン、８−アミノグアニン、８−チオールグアニン、８−チオアルキルグアニン、８−ヒドロキシルグアニン、５−ハロウラシル、５−ブロモウラシル、５−トリフルオロメチルウラシル、５−ハロシトシン、５−ブロモシトシン、５−トリフルオロメチルシトシン、５−置換ウラシル、５−置換シトシン、７−メチルグアニン、７−メチルアデニン、２−Ｆ−アデニン、２−アミノ−アデニン、８−アザグアニン、８−アザアデニン、７−デアザグアニン、７−デアザアデニン、３−デアザグアニン、３−デアザアデニン、三環式ピリミジン、フェノキサジンシチジン、フェノチアジンシチジン、置換フェノキサジンシチジン、カルバゾールシチジン、ピリドインドールシチジン、７−デアザグアノシン、２−アミノピリジン、２−ピリドン、５−置換ピリミジン、６−アザピリミジン、Ｎ−２、Ｎ−６もしくはＯ−６置換プリン、２−アミノプロピルアデニン、５−プロピニルウラシルおよび５−プロピニルシトシンから選択される、核酸塩基の１つまたはそれ以上を含む、
請求項１〜６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１２】
前記ＤＮＡ標的化ＲＮＡが、
ポリアミン、ポリアミド、ポリエチレングリコール、ポリエーテル、コレステロール部分、コール酸、チオエーテル、チオコレステロール、脂肪族鎖、リン脂質、アダマンタン酢酸、パルミチル部分、オクタデシルアミンもしくはヘキシルアミノ−カルボニル−オキシコレステロール部分、ビオチン、フェナジン、葉酸、フェナントリジン、アントラキノン、アクリジン、フルオレセイン、ローダミン、色素、クマリン、取り込みを増強する部分、分解への耐性を増強する部分および／または配列特異的なハイブリダイゼーションを強化する部分、並びに、取り込み、分布、代謝または排出を向上させる部分、から選択される部分に結合されている、
請求項１〜１１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１３】
前記ＤＮＡ標的化ＲＮＡが２つのＲＮＡ分子を含み、そのそれぞれが、ハイブリダイズしてｄｓＲＮＡを形成する２つの相補的な一続きのヌクレオチドの一方を含み、該２つのＲＮＡ分子は、１つまたはそれ以上の部分又は結合体に化学的に連結されている、請求項１〜１１のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１４】
前記ＤＮＡ標的化ＲＮＡが２つのＲＮＡ分子を含み、そのそれぞれが、ハイブリダイズしてｄｓＲＮＡを形成する２つの相補的な一続きのヌクレオチドの一方を含み、該２つのＲＮＡ分子は、介在ヌクレオチドによって共有結合されていない、請求項１〜１２のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１５】
前記接触が、
（ａ）前記Ｃａｓ９ポリペプチド又は前記Ｃａｓ９ポリペプチドをコードするポリヌクレオチド、および
（ｂ）前記ＤＮＡ標的化ＲＮＡまたは前記ＤＮＡ標的化ＲＮＡをコードする１つまたはそれ以上のＤＮＡポリヌクレオチド
を前記細胞に導入することを含む、請求項１〜１４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１６】
前記Ｃａｓ９ポリペプチドをコードするポリヌクレオチド、および前記ＤＮＡ標的化ＲＮＡをコードする１つまたはそれ以上のＤＮＡポリヌクレオチド：の１つまたはそれ以上が、組み換え発現ベクターである、請求項１５に記載の方法。
【請求項１７】
前記組み換え発現ベクターが、ウイルスベクターである、請求項１６に記載の方法。
【請求項１８】
前記ウイルスベクターが、レトロウイルスベクター、レンチウイルスベクター、アデノウイルスベクター、アデノ随伴ウイルスベクターおよび単純疱疹ウイルスベクターからなる群から選択される、請求項１７に記載の方法。
【請求項１９】
前記組み換え発現ベクターが、プラスミドベクター、コスミドベクター、ミニサークルベクター、ファージベクターおよびウイルスベクターからなる群から選択される、請求項１６に記載の方法。
【請求項２０】
さらに、ドナーポリヌクレオチドを細胞に導入することを含む、請求項１５〜１９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２１】
前記Ｃａｓ９ポリペプチドのアミノ末端に、タンパク質形質導入ドメインが共有結合的に連結されており、前記タンパク質形質導入ドメインは、前記Ｃａｓ９ポリペプチドの前記細胞の基質から小器官内への移行を促進する、請求項１〜２０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２２】
前記Ｃａｓ９ポリペプチドのカルボキシル末端に、タンパク質形質導入ドメインが共有結合的に連結されており、前記タンパク質形質導入ドメインは、前記Ｃａｓ９ポリペプチドの前記細胞の基質から小器官内への移行を促進する、請求項１〜２０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２３】
前記Ｃａｓ９ポリペプチドが、ＲｕｖＣドメインおよび／またはＨＮＨドメインに１つまたはそれ以上の変異を含む、請求項１〜２２のいずれか一項に記載の方法。 
【請求項２４】
前記Ｃａｓ９ポリペプチドが、対応する野生型Ｃａｓ９タンパク質に比して、低いヌクレアーゼ活性を有する、請求項１〜２３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２５】
前記標的ＤＮＡが、非相同末端結合（ＮＨＥＪ）修復機構により編集される、請求項１〜２４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２６】
前記標的ＤＮＡが、相同組換え修復（ＨＤＲ）機構により編集される、請求項１〜２４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２７】
前記標的ＤＮＡが、ドナーポリヌクレオチドの配列を、該標的ＤＮＡ分子の切断された鎖に挿入することにより編集される、請求項１〜２４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２８】
組成物であって、
（ａ）Ｃａｓ９ポリペプチド、または該Ｃａｓ９ポリペプチドをコードするポリヌクレオチド、並びに
（ｂ）ＤＮＡ標的化ＲＮＡ、または該ＤＮＡ標的化ＲＮＡをコードする１つまたはそれ以上のＤＮＡポリヌクレオチドを含み、
該ＤＮＡ標的化ＲＮＡは、
（ｉ）標的ＤＮＡ内の配列に対して相補的なヌクレオチド配列を含む、ＤＮＡ標的化セグメントであって、該標的ＤＮＡが植物細胞、動物細胞または単細胞真核生物内に存在するＤＮＡ標的化セグメント、および
（ｉｉ）前記Ｃａｓ９ポリペプチドと相互作用するタンパク質結合セグメントであって、該タンパク質結合セグメントは、ハイブリダイズして二本鎖ＲＮＡ（ｄｓＲＮＡ）を形成する２つの相補的な一続きのヌクレオチドを含み、前記ｄｓＲＮＡは、ｔｒａｃｒＲＮＡおよびＣＲＩＳＰＲ  ＲＮＡ（ｃｒＲＮＡ）の相補的なヌクレオチドを含む該タンパク質結合セグメント
を含むＤＮＡ標的化ＲＮＡである、
前記組成物。
【請求項２９】
前記２つの相補的な一続きのヌクレオチドは、ハイブリダイズして８〜１５塩基対または１５〜１８塩基対を形成する、請求項２８に記載の組成物。
【請求項３０】
前記ハイブリダイズして前記タンパク質結合セグメントのｄｓＲＮＡを形成するヌクレオチド間の相補性が７０％よりも大きい、請求項２８または２９に記載の組成物。
【請求項３１】
前記標的ＤＮＡが染色体ＤＮＡである、請求項２８〜３０のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項３２】
前記Ｃａｓ９ポリペプチドのアミノ末端に、タンパク質形質導入ドメインが共有結合的に連結されており、前記タンパク質形質導入ドメインは、該Ｃａｓ９ポリペプチドの細胞の基質から小器官内への移行を促進する、請求項２８〜３１のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項３３】
前記Ｃａｓ９ポリペプチドのカルボキシル末端に、タンパク質形質導入ドメインが共有結合的に連結されており、前記タンパク質形質導入ドメインは、前記Ｃａｓ９ポリペプチドの細胞の基質から小器官内への移行を促進する、請求項２８〜３１のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項３４】
前記Ｃａｓ９ポリペプチドと前記ＤＮＡ標的化ＲＮＡは、インビボのヒト細胞、ではない真核生物細胞中に存在する、請求項２８〜３３のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項３５】
前記ＤＮＡ標的化ＲＮＡが、修飾ヌクレオチド塩基、修飾骨格または非天然ヌクレオシド間連結、修飾された糖部分、Ｌｏｃｋｅｄ核酸およびペプチド核酸の１つまたはそれ以上を含む、請求項２８〜３４のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項３６】
前記ＤＮＡ標的化ＲＮＡが、ホスホロチオエート、ホスホルアミダート、非リン酸ジエステル、ヘテロ原子、キラルホスホロチオエート、ホスホロジチオエート、ホスホトリエステル、アミノアルキルホスホトリエステル、３’−アルキレンホスホネート、５’−アルキレンホスホネート、キラルホスホネート、ホスフィネート、３’−アミノホスホルアミダート、アミノアルキルホスホルアミダート、ホスホロジアミダート、チオノホスホルアミダート、チオノアルキルホスホネート、チオノアルキルホスホトリエステル、セレノホスフェートおよびボラノホスフェートの１つまたはそれ以上を含む非天然ヌクレオシド間連結を含む、請求項２８〜３４のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項３７】
前記ＤＮＡ標的化ＲＮＡが、
（ｉ）ホスホロチオエート、逆の極性を有する連結および脱塩基性ヌクレオシド連結から選択される、非天然ヌクレオシド間連結、
（ｉｉ）Ｌｏｃｋｅｄ核酸（ＬＮＡ）、並びに
（ｉｉｉ）２’‐Ｏ‐メトキシメチル、２’‐Ｏ‐メチルおよび２’‐フルオロから選択される修飾された糖部分、
の１つまたはそれ以上を含む、
請求項２８〜３４のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項３８】
前記ＤＮＡ標的化ＲＮＡが、
２’−Ｏ−（２−メトキシエチル）、２’−ジメチルアミノオキシエトキシ、２’−ジメチルアミノエトキシエトキシ、２’‐Ｏ‐メチルおよび２’‐フルオロから選択される、修飾された糖部分の１つまたはそれ以上を含む、
請求項２８〜３４のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項３９】
前記ＤＮＡ標的化ＲＮＡが、
５−メチルシトシン、５−ヒロドキシメチルシトシン、キサンチン、ヒポキサンチン、２−アミノアデニン、アデニンの６−メチル誘導体、グアニンの６−メチル誘導体、アデニンの２−プロピル誘導体、グアニンの２−プロピル誘導体、２−チオウラシル、２−チオチミン、２−チオシトシン、５−プロピニルウラシル、５−プロピニルシトシン、６−アゾウラシル、６−アゾシトシン、６−アゾチミン、偽ウラシル（ｐｓｅｕｄｏｕｒａｃｉｌ）、４−チオウラシル、８−ハロアデニン、８−アミノアデニン、８−チオールアデニン、８−チオアルキルアデニン、８−ヒドロキシルアデニン、８−ハログアニン、８−アミノグアニン、８−チオールグアニン、８−チオアルキルグアニン、８−ヒドロキシルグアニン、５−ハロウラシル、５−ブロモウラシル、５−トリフルオロメチルウラシル、５−ハロシトシン、５−ブロモシトシン、５−トリフルオロメチルシトシン、５−置換ウラシル、５−置換シトシン、７−メチルグアニン、７−メチルアデニン、２−Ｆ−アデニン、２−アミノ−アデニン、８−アザグアニン、８−アザアデニン、７−デアザグアニン、７−デアザアデニン、３−デアザグアニン、３−デアザアデニン、三環式ピリミジン、フェノキサジンシチジン、フェノチアジンシチジン、置換フェノキサジンシチジン、カルバゾールシチジン、ピリドインドールシチジン、７−デアザグアノシン、２−アミノピリジン、２−ピリドン、５−置換ピリミジン、６−アザピリミジン、Ｎ−２、Ｎ−６もしくはＯ−６置換プリン、２−アミノプロピルアデニン、５−プロピニルウラシルおよび５−プロピニルシトシンから選択される、核酸塩基の１つまたはそれ以上を含む、
請求項２８〜３４のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項４０】
該ＤＮＡ標的化ＲＮＡが、
ポリアミン、ポリアミド、ポリエチレングリコール、ポリエーテル、コレステロール部分、コール酸、チオエーテル、チオコレステロール、脂肪族鎖、リン脂質、アダマンタン酢酸、パルミチル部分、オクタデシルアミンもしくはヘキシルアミノ−カルボニル−オキシコレステロール部分、ビオチン、フェナジン、葉酸、フェナントリジン、アントラキノン、アクリジン、フルオレセイン、ローダミン、色素、クマリン、取り込みを増強する部分、分解への耐性を増強する部分および／または配列特異的なハイブリダイゼーションを強化する部分、並びに、取り込み、分布、代謝または排出を向上させる部分、から選択される部分に結合されている、
請求項２８〜３９のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項４１】
前記ＤＮＡ標的化ＲＮＡが２つのＲＮＡ分子を含み、そのそれぞれが、ハイブリダイズしてｄｓＲＮＡを形成する２つの相補的な一続きのヌクレオチドの一方を含み、該２つのＲＮＡ分子は、１つまたはそれ以上の部分又は結合体に化学的に連結されている、請求項２８〜３９のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項４２】
前記ＤＮＡ標的化ＲＮＡが２つのＲＮＡ分子を含み、そのそれぞれが、ハイブリダイズしてｄｓＲＮＡを形成する２つの相補的な一続きのヌクレオチドの一方を含み、該２つのＲＮＡ分子は、介在ヌクレオチドによって共有結合されていない、請求項２８〜４０のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項４３】
前記Ｃａｓ９ポリペプチドをコードするポリヌクレオチド、および前記ＤＮＡ標的化ＲＮＡをコードする１つまたはそれ以上のＤＮＡポリヌクレオチド：の１つまたはそれ以上が、組み換え発現ベクターである、請求項２８〜４２のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項４４】
前記組み換え発現ベクターが、ウイルスベクターである、請求項４３に記載の組成物。
【請求項４５】
前記ウイルスベクターが、レトロウイルスベクター、レンチウイルスベクター、アデノウイルスベクター、アデノ随伴ウイルスベクターおよび単純疱疹ウイルスベクターからなる群から選択される、請求項４４に記載の組成物。
【請求項４６】
前記組み換え発現ベクターが、プラスミドベクター、コスミドベクター、ミニサークルベクター、ファージベクターおよびウイルスベクターからなる群から選択される、請求項４３に記載の組成物。
【請求項４７】
前記Ｃａｓ９ポリペプチドが、ＲｕｖＣドメインおよび／またはＨＮＨドメインに１つまたはそれ以上の変異を含む、請求項２８〜４６のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項４８】
前記Ｃａｓ９ポリペプチドが、対応する野生型Ｃａｓ９タンパク質に比して、低いヌクレアーゼ活性を有する、請求項２８〜４７のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項４９】
ＤＮＡ標的化ＲＮＡ、または該ＤＮＡ標的化ＲＮＡをコードするＤＮＡポリヌクレオチドであって、該ＤＮＡ標的化ＲＮＡが
（ａ）標的ＤＮＡ内の標的配列に対して相補的なヌクレオチド配列を含む、ＤＮＡ標的化セグメントであって、該標的ＤＮＡが植物細胞、動物細胞または単細胞真核生物内に存在するＤＮＡ標的化セグメント、および
（ｂ）Ｃａｓ９タンパク質と相互作用するタンパク質結合セグメントであって、該タンパク質結合セグメントは、ハイブリダイズして二本鎖ＲＮＡ（ｄｓＲＮＡ）を形成する２つの相補的な一続きのヌクレオチドを含み、前記ｄｓＲＮＡは、ｔｒａｃｒＲＮＡおよびＣＲＩＳＰＲ  ＲＮＡ（ｃｒＲＮＡ）の相補的なヌクレオチドを含むタンパク質結合セグメント
を含む、前記ＤＮＡ標的化ＲＮＡ、または前記ＤＮＡ標的化ＲＮＡをコードするＤＮＡポリヌクレオチド。
【請求項５０】
前記２つの相補的な一続きのヌクレオチドは、ハイブリダイズして８〜１５塩基対または１５〜１８塩基対を形成する、請求項４９に記載のＤＮＡ標的化ＲＮＡ。
【請求項５１】
前記ハイブリダイズして前記タンパク質結合セグメントのｄｓＲＮＡを形成するヌクレオチド間の相補性が７０％よりも大きい、請求項４９または５０に記載のＤＮＡ標的化ＲＮＡ。
【請求項５２】
前記標的ＤＮＡが染色体ＤＮＡである、請求項４９〜５１のいずれか一項に記載のＤＮＡ標的化ＲＮＡ。
【請求項５３】
前記ＤＮＡ標的化ＲＮＡが、修飾ヌクレオチド塩基、修飾骨格または非天然ヌクレオシド間連結、修飾された糖部分、Ｌｏｃｋｅｄ核酸およびペプチド核酸の１つまたはそれ以上を含む、請求項４９〜５２のいずれか一項に記載のＤＮＡ標的化ＲＮＡ。
【請求項５４】
前記ＤＮＡ標的化ＲＮＡが、ホスホロチオエート、ホスホルアミダート、非リン酸ジエステル、ヘテロ原子、キラルホスホロチオエート、ホスホロジチオエート、ホスホトリエステル、アミノアルキルホスホトリエステル、３’−アルキレンホスホネート、５’−アルキレンホスホネート、キラルホスホネート、ホスフィネート、３’−アミノホスホルアミダート、アミノアルキルホスホルアミダート、ホスホロジアミダート、チオノホスホルアミダート、チオノアルキルホスホネート、チオノアルキルホスホトリエステル、セレノホスフェートおよびボラノホスフェートの１つまたはそれ以上を含む非天然ヌクレオシド間連結を含む、請求項４９〜５２のいずれか一項に記載のＤＮＡ標的化ＲＮＡ。
【請求項５５】
前記ＤＮＡ標的化ＲＮＡが、
（ｉ）ホスホロチオエート、逆の極性を有する連結および脱塩基性ヌクレオシド連結から選択される、非天然ヌクレオシド間連結、
（ｉｉ）Ｌｏｃｋｅｄ核酸（ＬＮＡ）、並びに
（ｉｉｉ）２’‐Ｏ‐メトキシメチル、２’‐Ｏ‐メチルおよび２’‐フルオロから選択される修飾された糖部分、
の１つまたはそれ以上を含む、
請求項４９〜５２のいずれか一項に記載のＤＮＡ標的化ＲＮＡ。
【請求項５６】
前記ＤＮＡ標的化ＲＮＡが、
２’−Ｏ−（２−メトキシエチル）、２’−ジメチルアミノオキシエトキシ、２’−ジメチルアミノエトキシエトキシ、２’‐Ｏ‐メチルおよび２’‐フルオロから選択される、修飾された糖部分の１つまたはそれ以上を含む、
請求項４９〜５２のいずれか一項に記載のＤＮＡ標的化ＲＮＡ。
【請求項５７】
前記ＤＮＡ標的化ＲＮＡが、
５−メチルシトシン、５−ヒロドキシメチルシトシン、キサンチン、ヒポキサンチン、２−アミノアデニン、アデニンの６−メチル誘導体、グアニンの６−メチル誘導体、アデニンの２−プロピル誘導体、グアニンの２−プロピル誘導体、２−チオウラシル、２−チオチミン、２−チオシトシン、５−プロピニルウラシル、５−プロピニルシトシン、６−アゾウラシル、６−アゾシトシン、６−アゾチミン、偽ウラシル（ｐｓｅｕｄｏｕｒａｃｉｌ）、４−チオウラシル、８−ハロアデニン、８−アミノアデニン、８−チオールアデニン、８−チオアルキルアデニン、８−ヒドロキシルアデニン、８−ハログアニン、８−アミノグアニン、８−チオールグアニン、８−チオアルキルグアニン、８−ヒドロキシルグアニン、５−ハロウラシル、５−ブロモウラシル、５−トリフルオロメチルウラシル、５−ハロシトシン、５−ブロモシトシン、５−トリフルオロメチルシトシン、５−置換ウラシル、５−置換シトシン、７−メチルグアニン、７−メチルアデニン、２−Ｆ−アデニン、２−アミノ−アデニン、８−アザグアニン、８−アザアデニン、７−デアザグアニン、７−デアザアデニン、３−デアザグアニン、３−デアザアデニン、三環式ピリミジン、フェノキサジンシチジン、フェノチアジンシチジン、置換フェノキサジンシチジン、カルバゾールシチジン、ピリドインドールシチジン、７−デアザグアノシン、２−アミノピリジン、２−ピリドン、５−置換ピリミジン、６−アザピリミジン、Ｎ−２、Ｎ−６もしくはＯ−６置換プリン、２−アミノプロピルアデニン、５−プロピニルウラシルおよび５−プロピニルシトシンから選択される、核酸塩基の１つまたはそれ以上を含む、
請求項４９〜５２のいずれか一項に記載のＤＮＡ標的化ＲＮＡ。
【請求項５８】
前記ＤＮＡ標的化ＲＮＡが、
ポリアミン、ポリアミド、ポリエチレングリコール、ポリエーテル、コレステロール部分、コール酸、チオエーテル、チオコレステロール、脂肪族鎖、リン脂質、アダマンタン酢酸、パルミチル部分、オクタデシルアミンもしくはヘキシルアミノ−カルボニル−オキシコレステロール部分、ビオチン、フェナジン、葉酸、フェナントリジン、アントラキノン、アクリジン、フルオレセイン、ローダミン、色素、クマリン、取り込みを増強する部分、分解への耐性を増強する部分および／または配列特異的なハイブリダイゼーションを強化する部分、並びに、取り込み、分布、代謝または排出を向上させる部分、から選択される部分に結合されている、
請求項４９〜５７のいずれか一項に記載のＤＮＡ標的化ＲＮＡ。
【請求項５９】
前記ＤＮＡ標的化ＲＮＡが２つのＲＮＡ分子を含み、そのそれぞれが、ハイブリダイズしてｄｓＲＮＡを形成する２つの相補的な一続きのヌクレオチドの一方を含み、該２つのＲＮＡ分子は、１つまたはそれ以上の部分又は結合体に化学的に連結されている、請求項４９〜５７のいずれか１項に記載のＤＮＡ標的化ＲＮＡ。
【請求項６０】
前記ＤＮＡ標的化ＲＮＡが２つのＲＮＡ分子を含み、そのそれぞれが、ハイブリダイズしてｄｓＲＮＡを形成する２つの相補的な一続きのヌクレオチドの一方を含み、該２つのＲＮＡ分子は、介在ヌクレオチドによって共有結合されていない、請求項４９〜５８のいずれか１項に記載のＤＮＡ標的化ＲＮＡ。
【請求項６１】
１つまたはそれ以上の核酸であって、
（ａ）ＤＮＡ標的化ＲＮＡをコードする、１つまたはそれ以上のヌクレオチド配列を含み、該ＤＮＡ標的化ＲＮＡは、
（ｉ）標的ＤＮＡ内の標的配列に対して相補的なヌクレオチド配列を含むＤＮＡ標的化セグメント、および
（ｉｉ）Ｃａｓ９ポリペプチドと相互作用するタンパク質結合セグメントであって、該タンパク質結合セグメントは、ハイブリダイズして二本鎖ＲＮＡ（ｄｓＲＮＡ）を形成する２つの相補的な一続きのヌクレオチドを含み、前記ｄｓＲＮＡは、ｔｒａｃｒＲＮＡおよびＣＲＩＳＰＲ  ＲＮＡ（ｃｒＲＮＡ）の相補的なヌクレオチドを含む該タンパク質結合セグメント
を含むＤＮＡ標的化ＲＮＡであり、
前記１つまたはそれ以上のヌクレオチド配列は、真核生物細胞において機能的な１つまたはそれ以上のプロモーターに作動可能に連結しており、並びに、
（ｂ）Ｃａｓ９ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列であって、前記Ｃａｓ９ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列は、真核生物細胞において機能的なプロモーターに作動可能に連結している、ヌクレオチド配列、
を含んでもよい、
前記１つまたはそれ以上の核酸。 
【請求項６２】
前記核酸は１つまたはそれ以上の組み換え発現ベクターである、請求項６１に記載の１つまたはそれ以上の核酸。
【請求項６３】
前記１つまたはそれ以上の組み換え発現ベクターが、１つまたはそれ以上のウイルスベクターである、請求項６２に記載の１つまたはそれ以上の核酸。
【請求項６４】
前記１つまたはそれ以上のウイルスベクターが、レトロウイルスベクター、レンチウイルスベクター、アデノウイルスベクター、アデノ随伴ウイルスベクターおよび単純疱疹ウイルスベクターからなる群から選択される、請求項６３に記載の１つまたはそれ以上の核酸。
【請求項６５】
前記１つまたはそれ以上の組み換え発現ベクターが、プラスミドベクター、コスミドベクター、ミニサークルベクター、ファージベクターおよびウイルスベクターからなる群から選択される、請求項６２に記載の１つまたはそれ以上の核酸。
【請求項６６】
前記Ｃａｓ９ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列が、前記Ｃａｓ９ポリペプチドのアミノ末端またはカルボキシル末端に共有結合的に連結された、タンパク質形質導入ドメインをコードし、ここで、前記タンパク質形質導入ドメインは、前記Ｃａｓ９ポリペプチドの前記真核生物細胞の基質から小器官内への移行を促進する、請求項６１〜６５のいずれか一項に記載の１つまたはそれ以上の核酸。
【請求項６７】
前記２つの相補的な一続きのヌクレオチドは、ハイブリダイズして８〜１５塩基対または１５〜１８塩基対を形成する、請求項６１〜６６のいずれか一項に記載の１つまたはそれ以上の核酸。
【請求項６８】
前記ハイブリダイズして前記タンパク質結合セグメントのｄｓＲＮＡを形成するヌクレオチド間の相補性が７０％よりも大きい、請求項６１〜６７のいずれか一項に記載の１つまたはそれ以上の核酸。
【請求項６９】
前記標的ＤＮＡが染色体ＤＮＡである、請求項６１〜６８のいずれか一項に記載の１つまたはそれ以上の核酸。
【請求項７０】
前記Ｃａｓ９ポリペプチドが、ＲｕｖＣドメインおよび／またはＨＮＨドメインに１つまたはそれ以上の変異を含む、請求項６１〜６９のいずれか一項に記載の１つまたはそれ以上の核酸。
【請求項７１】
前記Ｃａｓ９ポリペプチドが、対応する野生型Ｃａｓ９タンパク質に比して、低いヌクレアーゼ活性を有する、請求項６１〜７０のいずれか一項に記載の１つまたはそれ以上の核酸。
【請求項７２】
キットであって、
（ａ）Ｃａｓ９ポリペプチドまたは該Ｃａｓ９ポリペプチドをコードする核酸、並びに
（ｂ）ＤＮＡ標的化ＲＮＡ、または該ＤＮＡ標的化ＲＮＡをコードする１つまたはそれ以上の核酸を含み、
前記ＤＮＡ標的化ＲＮＡは、
（ｉ）標的ＤＮＡ内の配列に対して相補的なヌクレオチド配列を含むＤＮＡ標的化セグメントであって、該標的ＤＮＡが植物細胞、動物細胞または単細胞真核生物内に存在するＤＮＡ標的化セグメント、および
（ｉｉ）前記Ｃａｓ９ポリペプチドと相互作用するタンパク質結合セグメントであって、該タンパク質結合セグメントは、ハイブリダイズして二本鎖ＲＮＡ（ｄｓＲＮＡ）を形成する２つの相補的な一続きのヌクレオチドを含み、該ｄｓＲＮＡは、ｔｒａｃｒＲＮＡおよびＣＲＩＳＰＲ  ＲＮＡ（ｃｒＲＮＡ）の相補的なヌクレオチドを含む該タンパク質結合セグメント
を含むＤＮＡ標的化ＲＮＡであり、
（ａ）および（ｂ）は単一のまたは別々の容器中に存在する、
前記キット。
【請求項７３】
前記標的ＤＮＡが染色体ＤＮＡである、請求項７２に記載のキット。
【請求項７４】
前記Ｃａｓ９ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含む前記核酸、および前記ＤＮＡ標的化ＲＮＡをコードするヌクレオチド配列を含む前記１つまたはそれ以上の核酸：の１つまたはそれ以上が、組み換え発現ベクターである、請求項７２〜７３のいずれか一項に記載のキット。
【請求項７５】
前記組み換え発現ベクターが、ウイルスベクターである、請求項７４に記載のキット。
【請求項７６】
前記ウイルスベクターが、レトロウイルスベクター、レンチウイルスベクター、アデノウイルスベクター、アデノ随伴ウイルスベクターおよび単純疱疹ウイルスベクターからなる群から選択される、請求項７５に記載のキット。
【請求項７７】
前記組み換え発現ベクターが、プラスミドベクター、コスミドベクター、ミニサークルベクター、ファージベクターおよびウイルスベクターからなる群から選択される、請求項７４に記載のキット。
【請求項７８】
タンパク質形質導入ドメインが、前記Ｃａｓ９ポリペプチドのアミノ末端またはカルボキシル末端に共有結合的に連結されており、ここで、前記タンパク質形質導入ドメインは、前記Ｃａｓ９ポリペプチドの細胞の基質から小器官内への移行を促進する、請求項７２〜７７のいずれか一項に記載のキット。
【請求項７９】
前記ＤＮＡ標的化ＲＮＡが、修飾ヌクレオチド塩基、修飾骨格または非天然ヌクレオシド間連結、修飾された糖部分、Ｌｏｃｋｅｄ核酸およびペプチド核酸の１つまたはそれ以上を含む、請求項７２〜７８のいずれか一項に記載のキット。
【請求項８０】
前記ＤＮＡ標的化ＲＮＡが、ホスホロチオエート、ホスホルアミダート、非リン酸ジエステル、ヘテロ原子、キラルホスホロチオエート、ホスホロジチオエート、ホスホトリエステル、アミノアルキルホスホトリエステル、３’−アルキレンホスホネート、５’−アルキレンホスホネート、キラルホスホネート、ホスフィネート、３’−アミノホスホルアミダート、アミノアルキルホスホルアミダート、ホスホロジアミダート、チオノホスホルアミダート、チオノアルキルホスホネート、チオノアルキルホスホトリエステル、セレノホスフェートおよびボラノホスフェートの１つまたはそれ以上を含む非天然ヌクレオシド間連結を含む、請求項７２〜７８のいずれか一項に記載のキット。
【請求項８１】
前記ＤＮＡ標的化ＲＮＡが、
（ｉ）ホスホロチオエート、逆の極性を有する連結および脱塩基性ヌクレオシド連結から選択される、非天然ヌクレオシド間連結、
（ｉｉ）Ｌｏｃｋｅｄ核酸（ＬＮＡ）、並びに
（ｉｉｉ）２’‐Ｏ‐メトキシメチル、２’‐Ｏ‐メチルおよび２’‐フルオロから選択される修飾された糖部分、
の１つまたはそれ以上を含む、
請求項７２〜７８のいずれか一項に記載のキット。
【請求項８２】
前記ＤＮＡ標的化ＲＮＡが、
２’−Ｏ−（２−メトキシエチル）、２’−ジメチルアミノオキシエトキシ、２’−ジメチルアミノエトキシエトキシ、２’‐Ｏ‐メチルおよび２’‐フルオロから選択される、修飾された糖部分の１つまたはそれ以上を含む、
請求項７２〜７８のいずれか一項に記載のキット。
【請求項８３】
前記ＤＮＡ標的化ＲＮＡが、
５−メチルシトシン、５−ヒロドキシメチルシトシン、キサンチン、ヒポキサンチン、２−アミノアデニン、アデニンの６−メチル誘導体、グアニンの６−メチル誘導体、アデニンの２−プロピル誘導体、グアニンの２−プロピル誘導体、２−チオウラシル、２−チオチミン、２−チオシトシン、５−プロピニルウラシル、５−プロピニルシトシン、６−アゾウラシル、６−アゾシトシン、６−アゾチミン、偽ウラシル（ｐｓｅｕｄｏｕｒａｃｉｌ）、４−チオウラシル、８−ハロアデニン、８−アミノアデニン、８−チオールアデニン、８−チオアルキルアデニン、８−ヒドロキシルアデニン、８−ハログアニン、８−アミノグアニン、８−チオールグアニン、８−チオアルキルグアニン、８−ヒドロキシルグアニン、５−ハロウラシル、５−ブロモウラシル、５−トリフルオロメチルウラシル、５−ハロシトシン、５−ブロモシトシン、５−トリフルオロメチルシトシン、５−置換ウラシル、５−置換シトシン、７−メチルグアニン、７−メチルアデニン、２−Ｆ−アデニン、２−アミノ−アデニン、８−アザグアニン、８−アザアデニン、７−デアザグアニン、７−デアザアデニン、３−デアザグアニン、３−デアザアデニン、三環式ピリミジン、フェノキサジンシチジン、フェノチアジンシチジン、置換フェノキサジンシチジン、カルバゾールシチジン、ピリドインドールシチジン、７−デアザグアノシン、２−アミノピリジン、２−ピリドン、５−置換ピリミジン、６−アザピリミジン、Ｎ−２、Ｎ−６もしくはＯ−６置換プリン、２−アミノプロピルアデニン、５−プロピニルウラシルおよび５−プロピニルシトシンから選択される、核酸塩基の１つまたはそれ以上を含む、
請求項７２〜７８のいずれか一項に記載のキット。
【請求項８４】
前記ＤＮＡ標的化ＲＮＡが、
ポリアミン、ポリアミド、ポリエチレングリコール、ポリエーテル、コレステロール部分、コール酸、チオエーテル、チオコレステロール、脂肪族鎖、リン脂質、アダマンタン酢酸、パルミチル部分、オクタデシルアミンもしくはヘキシルアミノ−カルボニル−オキシコレステロール部分、ビオチン、フェナジン、葉酸、フェナントリジン、アントラキノン、アクリジン、フルオレセイン、ローダミン、色素、クマリン、取り込みを増強する部分、分解への耐性を増強する部分および／または配列特異的なハイブリダイゼーションを強化する部分、並びに、取り込み、分布、代謝または排出を向上させる部分、から選択される部分に結合されている、
請求項７２〜８３のいずれか一項に記載のキット。
【請求項８５】
前記ＤＮＡ標的化ＲＮＡが２つのＲＮＡ分子を含み、そのそれぞれが、ハイブリダイズしてｄｓＲＮＡを形成する２つの相補的な一続きのヌクレオチドの一方を含み、該２つのＲＮＡ分子は、１つまたはそれ以上の部分又は結合体に化学的に連結されている、請求項７２〜８３のいずれか１項に記載のキット。
【請求項８６】
前記ＤＮＡ標的化ＲＮＡが２つのＲＮＡ分子を含み、そのそれぞれが、ハイブリダイズしてｄｓＲＮＡを形成する２つの相補的な一続きのヌクレオチドの一方を含み、該２つのＲＮＡ分子は、介在ヌクレオチドによって共有結合されていない、請求項７２〜８４のいずれか１項に記載のキット。
【請求項８７】
前記Ｃａｓ９ポリペプチドが、ＲｕｖＣドメインおよび／またはＨＮＨドメインに１つまたはそれ以上の変異を含む、請求項７２〜８６のいずれか一項に記載のキット。
【請求項８８】
前記Ｃａｓ９ポリペプチドが、対応する野生型Ｃａｓ９タンパク質に比して、低いヌクレアーゼ活性を有する、請求項７２〜８７のいずれか一項に記載のキット。
【請求項８９】
患者の治療的な処置方法において用いるための、請求項２８〜４８のいずれか一項に記載の組成物、請求項４９〜６０のいずれか一項に記載のＤＮＡ標的化ＲＮＡ、請求項６１〜７１のいずれか一項に記載の１つまたはそれ以上の核酸、または請求項７２〜８８のいずれか一項に記載のキット。
【請求項９０】
遺伝子改変された真核生物細胞であって、
１つまたはそれ以上の
（ａ）ＤＮＡ標的化ＲＮＡおよび／または該ＤＮＡ標的化ＲＮＡをコードする核酸であって、該ＤＮＡ標的化ＲＮＡは、
（ｉ）標的ＤＮＡ内の配列に対して相補的なヌクレオチド配列を含むＤＮＡ標的化セグメント、および
（ｉｉ）Ｃａｓ９ポリペプチドと相互作用するタンパク質結合セグメントであって、ハイブリダイズして二本鎖ＲＮＡ（ｄｓＲＮＡ）を形成する２つの相補的な一続きのヌクレオチドを含み、該ｄｓＲＮＡは、ｔｒａｃｒＲＮＡおよびＣＲＩＳＰＲ  ＲＮＡ（ｃｒＲＮＡ）の相補的なヌクレオチドを含む前記タンパク質結合セグメント
を含む該単一分子ＤＮＡ標的化ＲＮＡ、並びに、
（ｂ）前記Ｃａｓ９ポリペプチドおよび／またはＣａｓ９ポリペプチドをコードする核酸
を含む前記遺伝子改変された真核生物細胞。
【請求項９１】
前記２つの相補的な一続きのヌクレオチドは、ハイブリダイズして８〜１５塩基対または１５〜１８塩基対を形成する、請求項９０に記載の遺伝子改変された真核生物細胞。
【請求項９２】
該ハイブリダイズして該タンパク質結合セグメントのｄｓＲＮＡを形成するヌクレオチド間の相補性が７０％よりも大きい、請求項９０または９１に記載の遺伝子改変された真核生物細胞。
【請求項９３】
前記標的ＤＮＡが前記真核生物細胞の染色体ＤＮＡである、請求項９０〜９２のいずれか一項に記載の遺伝子改変された真核生物細胞。
【請求項９４】
タンパク質形質導入ドメインが、前記Ｃａｓ９ポリペプチドのアミノ末端またはカルボキシル末端に共有結合的に連結されており、ここで、前記タンパク質形質導入ドメインは、前記Ｃａｓ９ポリペプチドの細胞基質から細胞小器官内への移行を促進する、請求項９０〜９３のいずれか一項に記載の遺伝子改変された真核生物細胞。
【請求項９５】
前記ＤＮＡ標的化ＲＮＡが、修飾ヌクレオチド塩基、修飾骨格または非天然ヌクレオシド間連結、修飾された糖部分、Ｌｏｃｋｅｄ核酸およびペプチド核酸の１つまたはそれ以上を含む、請求項９０〜９４のいずれか一項に記載の遺伝子改変された真核生物細胞。
【請求項９６】
前記ＤＮＡ標的化ＲＮＡが、ホスホロチオエート、ホスホルアミダート、非リン酸ジエステル、ヘテロ原子、キラルホスホロチオエート、ホスホロジチオエート、ホスホトリエステル、アミノアルキルホスホトリエステル、３’−アルキレンホスホネート、５’−アルキレンホスホネート、キラルホスホネート、ホスフィネート、３’−アミノホスホルアミダート、アミノアルキルホスホルアミダート、ホスホロジアミダート、チオノホスホルアミダート、チオノアルキルホスホネート、チオノアルキルホスホトリエステル、セレノホスフェートおよびボラノホスフェートの１つまたはそれ以上を含む非天然ヌクレオシド間連結を含む、請求項９０〜９４のいずれか一項に記載の遺伝子改変された真核生物細胞。
【請求項９７】
前記ＤＮＡ標的化ＲＮＡが、
（ｉ）ホスホロチオエート、逆の極性を有する連結および脱塩基性ヌクレオシド連結から選択される、非天然ヌクレオシド間連結、
（ｉｉ）Ｌｏｃｋｅｄ核酸（ＬＮＡ）、並びに
（ｉｉｉ）２’‐Ｏ‐メトキシメチル、２’‐Ｏ‐メチルおよび２’‐フルオロから選択される修飾された糖部分、
の１つまたはそれ以上を含む、
請求項９０〜９４のいずれか一項に記載の遺伝子改変された真核生物細胞。
【請求項９８】
前記ＤＮＡ標的化ＲＮＡが、
２’−Ｏ−（２−メトキシエチル）、２’−ジメチルアミノオキシエトキシ、２’−ジメチルアミノエトキシエトキシ、２’‐Ｏ‐メチルおよび２’‐フルオロから選択される、修飾された糖部分の１つまたはそれ以上を含む、
請求項９０〜９４のいずれか一項に記載の遺伝子改変された真核生物細胞。
【請求項９９】
前記ＤＮＡ標的化ＲＮＡが、
５−メチルシトシン、５−ヒロドキシメチルシトシン、キサンチン、ヒポキサンチン、２−アミノアデニン、アデニンの６−メチル誘導体、グアニンの６−メチル誘導体、アデニンの２−プロピル誘導体、グアニンの２−プロピル誘導体、２−チオウラシル、２−チオチミン、２−チオシトシン、５−プロピニルウラシル、５−プロピニルシトシン、６−アゾウラシル、６−アゾシトシン、６−アゾチミン、偽ウラシル（ｐｓｅｕｄｏｕｒａｃｉｌ）、４−チオウラシル、８−ハロアデニン、８−アミノアデニン、８−チオールアデニン、８−チオアルキルアデニン、８−ヒドロキシルアデニン、８−ハログアニン、８−アミノグアニン、８−チオールグアニン、８−チオアルキルグアニン、８−ヒドロキシルグアニン、５−ハロウラシル、５−ブロモウラシル、５−トリフルオロメチルウラシル、５−ハロシトシン、５−ブロモシトシン、５−トリフルオロメチルシトシン、５−置換ウラシル、５−置換シトシン、７−メチルグアニン、７−メチルアデニン、２−Ｆ−アデニン、２−アミノ−アデニン、８−アザグアニン、８−アザアデニン、７−デアザグアニン、７−デアザアデニン、３−デアザグアニン、３−デアザアデニン、三環式ピリミジン、フェノキサジンシチジン、フェノチアジンシチジン、置換フェノキサジンシチジン、カルバゾールシチジン、ピリドインドールシチジン、７−デアザグアノシン、２−アミノピリジン、２−ピリドン、５−置換ピリミジン、６−アザピリミジン、Ｎ−２、Ｎ−６もしくはＯ−６置換プリン、２−アミノプロピルアデニン、５−プロピニルウラシルおよび５−プロピニルシトシンから選択される、核酸塩基の１つまたはそれ以上を含む、
請求項９０〜９４のいずれか一項に記載の遺伝子改変された真核生物細胞。
【請求項１００】
前記ＤＮＡ標的化ＲＮＡが、
ポリアミン、ポリアミド、ポリエチレングリコール、ポリエーテル、コレステロール部分、コール酸、チオエーテル、チオコレステロール、脂肪族鎖、リン脂質、アダマンタン酢酸、パルミチル部分、オクタデシルアミンもしくはヘキシルアミノ−カルボニル−オキシコレステロール部分、ビオチン、フェナジン、葉酸、フェナントリジン、アントラキノン、アクリジン、フルオレセイン、ローダミン、色素、クマリン、取り込みを増強する部分、分解への耐性を増強する部分および／または配列特異的なハイブリダイゼーションを強化する部分、並びに、取り込み、分布、代謝または排出を向上させる部分、から選択される部分に結合されている、
請求項９０〜９９のいずれか一項に記載の遺伝子改変された真核生物細胞。
【請求項１０１】
前記ＤＮＡ標的化ＲＮＡが２つのＲＮＡ分子を含み、そのそれぞれが、ハイブリダイズしてｄｓＲＮＡを形成する２つの相補的な一続きのヌクレオチドの一方を含み、該２つのＲＮＡ分子は、１つまたはそれ以上の部分又は結合体に化学的に連結されている、請求項９０〜９９のいずれか１項に記載の遺伝子改変された真核生物細胞。
【請求項１０２】
前記ＤＮＡ標的化ＲＮＡが２つのＲＮＡ分子を含み、そのそれぞれが、ハイブリダイズしてｄｓＲＮＡを形成する２つの相補的な一続きのヌクレオチドの一方を含み、該２つのＲＮＡ分子は、介在ヌクレオチドによって共有結合されていない、請求項９０〜１００のいずれか１項に記載の遺伝子改変された真核生物細胞。
【請求項１０３】
前記Ｃａｓ９ポリペプチドが、ＲｕｖＣドメインおよび／またはＨＮＨドメインに１つ以上の変異を含む、請求項９０〜１０２のいずれか一項に記載の遺伝子改変された真核生物細胞。
【請求項１０４】
前記Ｃａｓ９ポリペプチドが、対応する野生型Ｃａｓ９タンパク質に比して、低いヌクレアーゼ活性を有する、請求項９０〜１０３のいずれか一項に記載の遺伝子改変された真核生物細胞。
【請求項１０５】
前記遺伝子改変された真核生物細胞が、インビボのヒト細胞ではない、請求項９０〜１０４のいずれか一項に記載の遺伝子改変された真核生物細胞。