【手続補正書】
【提出日】平成30年1月16日(2018.1.16)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
転移性乳癌の患者からの循環腫瘍細胞を特徴付けるためのキットの製造における成分ｉ）、ｉｉ）、及びｉｉｉ）、
ｉ）ＥｐＣＡＭ抗体と、循環腫瘍細胞と特異的に反応する磁気応答粒子との複合体であって、他のサンプル成分が実質的に除外されたような、そのような結合された循環腫瘍細胞を生物学的試料の他のサンプル成分から分離させる複合体、
ｉｉ）循環腫瘍細胞及び患者の他のサンプル成分の一方又は両方に特異的に結合する少なくとも１種の試薬であって、ＤＡＰＩ、蛍光染料に接合された抗サイトケラチン抗体、ＣＤ４５に特異的に結合する蛍光接合体、からなる群から選択される試薬、及び、
ｉｉｉ）前記患者の循環腫瘍細胞内のステロイド受容体に対する結合親和力を有する薬剤であって、前記エストロゲン受容体のＮ末端領域またはＣ末端領域の一方に対する抗体である薬剤、
の使用であって、前記特徴付けは、
（ａ）血液及び骨髄サンプルから選択された患者からの生物学的試料を提供する段階と、
（ｂ）循環腫瘍細胞と特異的に反応し、他のサンプル成分が実質的に除外されたような、そのような結合された循環腫瘍細胞を前記生物学的試料の他のサンプル成分から分離させるリガンドと、前記生物学的試料を接触させる段階であって、前記リガンドが磁気応答粒子に結合した抗ＥｐＣＡＭ抗体である、段階と、
（ｃ）段階（ｂ）の前記生成物を磁場にさらし、前記循環腫瘍細胞を含む前記サンプルの容積を減少させる段階と、
（ｄ）段階（ｃ）の前記サンプルを、段階（ｂ）の前記サンプル内の前記細胞に特異的に結合する少なくとも１つの試薬と接触させる段階であって、前記少なくとも１つの試薬は、ＤＡＰＩ、蛍光染料に結合した抗サイトケラチン抗体、及び、ＣＤ４５に特異的に結合する蛍光接合体からなる群から選択される、段階と、
（ｅ）段階（ｄ）の前記サンプルを、前記エストロゲン受容体のＮ末端領域及びＣ末端領域の一方又は両方に対する結合親和力を有する薬剤と接触させる段階と、
（ｆ）ステロイド受容体を発現する循環腫瘍細胞の存在を決定するために前記サンプルを解析する段階と、
（ｇ）前記ステロイド受容体を発現する前記サンプル内の前記循環腫瘍細胞の数を決定する段階と、を含む、使用。
【請求項２】
段階（ｆ）の前記サンプルは、マルチパラメーターフローサイトメトリー、免疫蛍光顕微鏡法、レーザー走査サイトメトリー、明視野に基づく画像解析、スペクトル画像解析、手動細胞解析、ＣＥＬＬＳＴＲＡＣＫＳ（登録商標）解析、及び自動細胞解析からなる群から選択される少なくとも１つの方法によって解析される、請求項１に記載の使用。
【請求項３】
前記磁気応答粒子がコロイド状である、請求項１に記載の使用。
【請求項４】
前記薬剤が、Ｈ２２２、ＩＤ５、Ｅ１１５（ｒｂモノ）、及びＳＰ−１（ｒｂモノ）からなる群から選択される抗体である、請求項１に記載の使用。
【請求項５】
前記薬剤はＥ１１５ウサギモノクローナル抗体である、請求項１に記載の使用。
【請求項６】
前記リガンドは、抗ＥｐＣＡＭ抗体クローンＶＵ−１Ｄ９を含む、請求項１に記載の使用。
【請求項７】
前記リガンドは、抗体クローンＶＵ−１Ｄ９に結合された磁性流体を含む、請求項６に記載の使用。
【請求項８】
段階（ｃ）の前記サンプルを、ＨＥＲ／２ｎｅｕに特異的な抗体と接触させる段階を、段階（ｄ）がさらに含む、請求項１に記載の使用。
【請求項９】
前記ＨＥＲ／２ｎｅｕに特異的な抗体が、Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  ｏｆ  Ｔｅｘａｓからのモノクローナル抗体Ｈｅｒ−８１である、請求項８に記載の使用。
【請求項１０】
ステロイド受容体を発現する循環腫瘍細胞の存在について、転移性乳癌の患者サンプルをスクリーニングするための試験キットであって、
ａ）ＥｐＣＡＭ抗体と、循環腫瘍細胞と特異的に反応する磁気応答粒子との複合体であって、他のサンプル成分を実質的な排除、及びそのような結合した循環腫瘍細胞を生物学的試料の他のサンプル成分から分離させるための複合体、
ｂ）循環腫瘍細胞及び患者の他のサンプル成分の一方又は両方に特異的に結合する少なくとも１つの試薬であって、ＤＡＰＩ、蛍光染料に接合した抗サイトケラチン抗体、及びＣＤ４５に特異的に結合する蛍光接合体からなる群から選択される試薬、及び、
ｃ）前記患者の前記循環腫瘍細胞内のステロイド受容体に対する結合親和力を有する薬剤であって、前記薬剤は、前記エストロゲン受容体のＮ末端領域またはＣ末端領域に対する抗体であり、前記薬剤は、Ｈ２２２、ＩＤ５、Ｅ１１５（ｒｂモノ）、及びＳＰ−１（ｒｂモノ）からなる群から選択される抗体である、薬剤を含む、試薬キット。
【請求項１１】
転移性癌の患者から循環腫瘍細胞を特徴付けるためのｉｎ  ｖｉｔｒｏ方法であって、
（ａ）血液及び骨髄から選択された、患者から予め得られた生物学的試料を提供する段階と、
（ｂ）他のサンプル成分を実質的に排除して、そのような結合した循環腫瘍細胞を前記生物学的試料の他のサンプル成分から分離させるために、前記生物学的試料を循環腫瘍細胞と特異的に反応するリガンドと接触させる段階であって、前記リガンドは、磁気応答粒子に結合した抗ＥｐＣＡＭ抗体である、段階と、
（ｃ）段階（ｂ）の前記生成物を磁場にさらし、前記循環腫瘍細胞を含むサンプルの容積を減少させる段階と、
（ｄ）段階（ｃ）の前記サンプル内の前記細胞を、段階（ｂ）の前記サンプル内の前記細胞に特異的に結合する少なくとも１つの試薬と接触させる段階であって、前記少なくとも１つの試薬は、ＤＡＰＩ、蛍光染料に接合した抗サイトケラチン抗体、及びＣＤ４５に特異的に結合する蛍光接合体からなる群から選択される、段階と、
（ｅ）段階（ｄ）の前記サンプル内の前記細胞を、前記エストロゲン受容体の前記Ｎ末端領域及びＣ末端領域の一方又は両方に対する結合親和力を有する薬剤と接触させる段階と、
（ｆ）ステロイド受容体を発現する循環腫瘍細胞の存在を決定するために、前記選択した無傷細胞を含む前記サンプルを解析する段階と、
（ｇ）前記ステロイド受容体を発現する前記循環腫瘍細胞の数を決定する段階と、を含むｉｎ  ｖｉｔｒｏ方法。
【請求項１２】
段階（ｅ）の前記サンプルは、マルチパラメーターフローサイトメトリー、免疫蛍光顕微鏡法、レーザー走査サイトメトリー、明視野に基づく画像解析、スペクトル画像解析、手動細胞解析、免疫磁気的に選択された循環腫瘍細胞（ＣＴＣ）の計数のための半自動蛍光解析、及び自動細胞解析からなる群から選択される少なくとも１つの方法によって解析される、請求項１１に記載のｉｎ  ｖｉｔｒｏ方法。
【請求項１３】
前記磁気応答粒子がコロイド状である、請求項１１に記載のｉｎ  ｖｉｔｒｏ方法。
【請求項１４】
前記薬剤はＥ１１５ウサギモノクローナル抗体である、請求項１１に記載のｉｎ  ｖｉｔｒｏ方法。
【請求項１５】
前記リガンドは、抗ＥｐＣＡＭ抗体クローンＶＵ−１Ｄ９を含む、請求項１１に記載のｉｎ  ｖｉｔｒｏ方法。
【請求項１６】
前記リガンドは、抗体クローンＶＵ−１Ｄ９と結合した磁性流体を含む、請求項１１に記載のｉｎ  ｖｉｔｒｏ方法。
【請求項１７】
段階（ｃ）の前記サンプルを、ＨＥＲ／２ｎｅｕに特異的な抗体と接触させる段階を、段階（ｄ）がさらに含む、請求項１１に記載のｉｎ  ｖｉｔｒｏ方法。
【請求項１８】
前記ＨＥＲ／２ｎｅｕに特異的な抗体が、Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  ｏｆ  Ｔｅｘａｓからのモノクローナル抗体Ｈｅｒ−８１である、請求項１７に記載のｉｎ  ｖｉｔｒｏ方法。