(57)【要約】  ポリアミノ糖カチオンとアニオンからなる中性塩、該中性塩の調製方法、並びに生体材料及び医薬組成物の成分としてのその使用を開示する。実際に、驚くべきことに、前記中性塩は高い水溶性と高純度を示した。該調製方法は、最終製品中の高リスク汚染物質の含有量を最小限に抑え、反応及び精製時間を短縮する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
ポリアミノ糖カチオンとアニオンとからなる中性塩であって、
該ポリアミノ糖カチオンが、下記の３つの繰り返し単位からなり：
・最大２５％の下記式で示される繰り返し単位ａ）
【化１】
2020521840.tif 000008
・６５％未満の下記式で示される繰り返し単位ｂ）
【化２】
2020521840.tif 000009
・最大９０％の下記式で示される繰り返し単位ｃ）
【化３】
2020521840.tif 000010
（式中、Ｒはアルドース部分又はケトース部分である）；そして、
該アニオンが、一価、二価又は三価である中性塩。
【請求項２】
Ｒが、下記式（１）で示される部分であるか：
【化４】
2020521840.tif 000011
（式中、Ｒ１は−ＣＨ２−又は−ＣＯ−、Ｒ２は−ＯＨ又は−ＮＨＣＯＣＨ３、Ｒ３はＨ、単糖、二糖又はオリゴ糖である）；又は、
Ｒが、下記式（２）で示される部分である：
【化５】
2020521840.tif 000012
（式中、Ｒ４は−ＣＨ−、Ｒ５及びＲ６は、互いに独立して、Ｈ、単糖、二糖又はオリゴ糖である）；
請求項１に記載の中性塩。
【請求項３】
Ｒ３、Ｒ５及びＲ６が、互いに独立して、Ｈ、グルコース、ガラクトース、アラビノース、キシロース、マンノース、ラクトース、トレロース、ゲンチオビオース、セロビオース、セロトリオース、マルトース、マルトトリオース、キトビオース、キトトリオース、マンノビオース、メリビオース、フルクトース、Ｎ−アセチルグルコサミン、Ｎ−アセチルガラクトサミン、又はそれらの組み合わせである、請求項２に記載の中性塩。
【請求項４】
Ｒが、ラクトース部分又はガラクトース部分である、請求項１に記載の中性塩。
【請求項５】
ポリアミノ糖カチオンにおいて、繰り返し単位ａ）が、５％〜２０％、好ましくは、７％〜１８％の割合で存在する、請求項１〜４のいずれか一項に記載の中性塩。
【請求項６】
ポリアミノ糖カチオンにおいて、繰り返し単位ｂ）が、５％〜４５％、好ましくは、２０％〜４０％の割合で存在する、請求項１〜５のいずれか一項に記載の中性塩。
【請求項７】
ポリアミノ糖カチオンにおいて、繰り返し単位ｃ）が、４５％〜９０％、好ましくは、５０％〜７０％の割合で存在する、請求項１〜６のいずれか一項に記載の中性塩。
【請求項８】
アニオンが、塩化物イオン、臭化物イオン、フッ化物イオン、ヨウ化物イオン、酢酸イオン、トリフルオロ酢酸イオン、炭酸イオン、重炭酸イオン、硫酸イオン、重硫酸イオン、Ｃ１〜Ｃ１０アルキル硫酸イオン、Ｃ１〜Ｃ６アルキルスルホン酸イオン、Ｃ６〜Ｃ１０アリールスルホン酸イオン、硝酸イオン、リン酸水素イオン、リン酸二水素イオン、オルトリン酸イオン、シュウ酸イオン、フマル酸イオン、アスコルビン酸イオン、クエン酸イオン、グルコン酸イオン、乳酸イオン、ギ酸イオン、酒石酸イオン、コハク酸イオン、マンデル酸イオン、ｐ−トルエンスルホン酸イオン、カルボン酸イオン、糖酸イオン、安息香酸イオン、又はそれらの混合物である、請求項１〜７のいずれか一項に記載の中性塩。
【請求項９】
中性塩の重量平均分子量が２５００ｋＤａ以下であるか、中性塩の数平均分子量が２０００ｋＤａ以下である、請求項１〜８のいずれか一項に記載の中性塩。
【請求項１０】
請求項１に記載の中性塩の調製方法であって、下記工程を含む調製方法：
ｉ）繰り返し単位ａ）及びｂ）からなるポリアミノ糖ポリマーを提供する工程；
ｉｉ）前記ポリアミノ糖ポリマーを水溶液中で単糖、二糖又はオリゴ糖と反応させる工程；
ｉｉｉ）アミノボランを添加する工程；
ｉｖ）酸を添加してｐＨを４未満に低下させる工程；
ｖ）有機溶媒を添加して、中性塩を沈殿させる工程；及び、
ｖｉ）沈殿した中性塩を分離する工程。
【請求項１１】
前記ポリアミノ糖ポリマーが、５％〜９５％の繰り返し単位ａ）及び９５％〜５％の繰り返し単位ｂ）からなる、請求項１０に記載の方法。
【請求項１２】
前記アミノボランが、２−メチルピリジンボラン、５−エチル−２−メチルピリジンボラン、ピリジンボラン、トリメチルアミンボラン、トリエチルアミンボラン、ジメチルアミンボラン、ｔｅｒｔ−ブチルアミンボラン、又はそれらの混合物である、請求項１０又は１１に記載の方法。
【請求項１３】
前記有機溶媒が、アセトン、メタノール、エタノール、２−プロパノール、又はそれらの混合物であり、好ましくは、有機溶媒は２−プロパノールである、請求項１０〜１２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１４】
単糖、二糖又はオリゴ糖と、ポリアミノ糖ポリマーの繰り返し単位ｂ）とのモル比が０．５〜３０であるか、アミノボランとポリアミノ糖ポリマーの繰り返し単位ｂ）とのモル比が０．７５〜２０である、請求項１０〜１３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１５】
請求項１〜９のいずれか一項に記載の中性塩と、生物活性物質を少なくとも含む医薬組成物であって、
該生物活性物質が、コラーゲン、フィブリノーゲン、フィブリン、アルギン酸、アルギン酸ナトリウム、アルギン酸カリウム、アルギン酸マグネシウム、セルロース、コンドロイチン硫酸、デルマタン硫酸、ケラタン硫酸、ヘパリン、ヘパラン硫酸、ラミニン、フィブロネクチン、エラスチン、ポリ乳酸、ポリグリコール酸、ポリ（乳酸−ｃｏ−グリコール酸）、ポリカプロラクトン、ゼラチン、アルブミン、ポリ（グリコリド−ｃｏ−カプロラクトン）、ポリ（グリコリド−ｃｏ−トリメチレンカーボネート）、ヒドロキシアパタイト、リン酸三カルシウム、リン酸二カルシウム、脱灰骨基質、及びそれらの混合物から選択される医薬組成物。
【請求項１６】
前記中性塩と前記生物活性物質が、１０：１〜１：５０の比である、請求項１５に記載の医薬組成物。
【請求項１７】
前記中性塩と前記生物活性物質が、５：１〜１：１、好ましくは４：１〜１：１、より好ましくは３：１〜１：１の比である、請求項１５又は１６に記載の医薬組成物。
【請求項１８】
前記生物活性物質が、ヘパリン、コンドロイチン硫酸、コラーゲン、アルギン酸ナトリウム、アルギン酸カリウム、アルギン酸マグネシウム、及びそれらの混合物から選択される、請求項１７に記載の医薬組成物。
【請求項１９】
前記中性塩と前記生物活性物質が、１：１０〜１：４５、好ましくは１：２０〜１：４０、より好ましくは１：２５〜１：３５の比である、請求項１５又は１６に記載の医薬組成物。
【請求項２０】
前記生物活性物質が、ヒドロキシアパタイト、リン酸三カルシウム、リン酸二カルシウム、脱灰骨基質、及びそれらの混合物から選択される、請求項１９に記載の医薬組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、ポリアミノ糖カチオンとアニオンからなる中性塩、該中性塩の調製方法、並びに生体材料及び医薬組成物の成分としてのその使用に関する。
【０００２】
実際に、最終製品中の高リスク汚染物質の含有量を最小限に抑え、反応及び精製時間を短縮し、置換度の変更を容易にする調製方法が開発されたため、驚くべきことに、本発明の中性塩は高い水溶性と高純度を示した。
【背景技術】
【０００３】
キチンとキトサンは、動物界と菌界で非常に一般的な２つの多糖類である。化学的な観点から、キチンはβ−１，4型結合によって連結された複数単位のＮ−アセチルグルコサミン（Ｎ−アセチル−Ｄ−グルコサミン）からなる多糖類である。天然に存在するキチンは通常、対応するグルコサミン（Ｄ−グルコサミン）に脱アセチル化された繰り返し単位を約１５％有し、多くの場合、キトサン（すなわち、対応する高い脱アセチル化度（＞６０％）の類似多糖類）の存在下で見られる。繰り返し単位Ｎ−アセチルグルコサミンのグルコサミンへの脱アセチル化により、ポリマーに基本的な特性を与える一級アミノ基が得られる（キトサンｐＫａ＝約６．３）。キチン及びキトサンの典型的な溶解性プロファイル（すなわち、それらは水及び一般的な有機溶媒に実質的に不溶性である）は、それらの工業的利用の可能性を制限する。この点に関して、酢酸又は他の酸の溶液中におけるこれらの多糖類の可溶化のための詳細なプロトコルが特定されている。しかしながら、その中の避けられない副作用は該ポリマーの加水分解である。
【０００４】
多糖類の溶解性プロファイルの改善は、主鎖の分岐の達成を目的とした誘導体化反応により得ることができる。それは低溶解性プロファイルの原因となることが多い分子間相互作用を減少させる。しかしながら、透析及び／又はゲル浸透クロマトグラフィー（ＧＰＣ）による精製を必要とする、又は、静菌剤としてのアジ化ナトリウムの存在下での透析による精製と併せてシアン化物イオンを含む還元剤の使用を必要とするこれらの誘導体の単離は、誘導体の汚染物質プロファイルに寄与するが、明らかにこれは医療の観点からは受け入れられない。
【０００５】
特許文献１は、キトラク塩酸塩（ｃｈｉｔｌａｃ  ｈｙｄｒｏｃｈｌｏｒｉｄｅ）と呼ばれる化合物に言及している。キトラクは、５０〜７０％のラクトース置換度によって特徴付けられ、約１５％の残留アセチル化度を有する２００〜４００ｋＤａキトサンから得られる。
【０００６】
したがって、本発明の目的は、その溶解性プロファイルを改善することにより、キチン及びキトサンの工業的利用を増加させると同時に、医学的及び薬学的観点からその許容性プロファイルを改善する製品を提供することである。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００７】
【特許文献１】国際公開第２０１７／２１１７７６号
【発明の概要】
【０００８】
前記目的は、請求項１に記載のポリアミノ糖カチオンとアニオンからなる中性塩により達成された。
別の態様では、本発明は、ポリアミノ糖カチオンとアニオンからなる中性塩の調製方法に関する。
さらなる態様では、本発明は、整形外科疾患の治療における、細胞増殖のための生体材料又は足場としての前記中性塩の使用に関する。
【０００９】
さらに別の態様では、本発明は、美容形成外科学、血液透析、心臓病学、脈管学、眼科学、耳鼻咽喉科学、歯学、婦人科学、泌尿器学、皮膚科学及び組織修復における細胞増殖のための生体材料又は足場としての前記中性塩の使用に関する。
【００１０】
別の態様では、本発明は、生物活性物質と、ポリアミノ糖カチオンとアニオンからなる少なくとも１つの中性塩を含む医薬組成物に関する。
さらなる態様では、本発明は、整形外科疾患の治療における前記医薬組成物の使用に関する。
【００１１】
本発明の目的のために、「整形外科疾患」という用語は、骨関節疾患、筋肉疾患、靭帯疾患及び腱疾患などの筋骨格系に影響を及ぼす疾患を指す。
【００１２】
さらなる態様において、本発明は、美容形成外科学、血液透析、心臓病学、脈管学、眼科学、耳鼻咽喉科学、歯学、婦人科学、泌尿器学、皮膚科学及び組織修復における前記医薬組成物の使用に関する。
【００１３】
非限定的な例として提供される以下の詳細な説明及び実施形態において明らかになるように、最終製品中の高リスク汚染物質の含有量を最小限に抑え、反応及び精製時間を短縮し、置換度の変更を容易にする調製方法が開発されたため、驚くべきことに、本発明の中性塩は高い水溶性と高純度を示した。
【００１４】
［発明の詳細な説明］
したがって、本発明はポリアミノ糖カチオンとアニオンからなる中性塩に関し、該ポリアミノ糖カチオンは、下記の３つの繰り返し単位からなり：
・最大２５％の下記式で示される繰り返し単位ａ）
【００１５】
【化１】
2020521840.tif 000002
【００１６】
・６５％未満の下記式で示される繰り返し単位ｂ）
【００１７】
【化２】
2020521840.tif 000003
【００１８】
・最大９０％の下記式で示される繰り返し単位ｃ）
【００１９】
【化３】
2020521840.tif 000004
【００２０】
（式中、Ｒはアルドース部分又はケトース部分である）；
そして、該アニオンは一価、二価又は三価である。
【００２１】
実際、驚くべきことに、本発明の中性塩は、劇的に短縮した期間で高い水溶性に達し、同時に薬学的及び医学的用途に適していることも見出された。
【００２２】
「中性塩」の定義は、非晶質もしくは結晶質又は共結晶質のすべての多形形態、並びに無水物、水和物及び溶媒和物の形態を含むことを意味する。
【００２３】
繰り返し単位ｂ）及びｃ）は、窒素原子に正電荷を持つものとして上に示されているが、示されている最も可能性の高いアンモニウム型と平衡状態にある他の型の共役酸は除外されない。
【００２４】
好ましくは、Ｒは下記式（１）で示される部分であるか：
【００２５】
【化４】
2020521840.tif 000005
【００２６】
（式中、Ｒ１は−ＣＨ２−又は−ＣＯ−、Ｒ２は−ＯＨ又は−ＮＨＣＯＣＨ３、Ｒ３はＨ、単糖、二糖又はオリゴ糖である）；
又は、Ｒは下記式（２）で示される部分である：
【００２７】
【化５】
2020521840.tif 000006
【００２８】
（式中、Ｒ４は−ＣＨ−、Ｒ５及びＲ６は、互いに独立して、Ｈ、単糖、二糖又はオリゴ糖である）。
【００２９】
好ましくは、Ｒ３、Ｒ５及びＲ６は、互いに独立して、Ｈ、グルコース、ガラクトース、アラビノース、キシロース、マンノース、ラクトース、トレロース、ゲンチオビオース、セロビオース、セロトリオース、マルトース、マルトトリオース、キトビオース、キトトリオース、マンノビオース、メリビオース、フルクトース、Ｎ−アセチルグルコサミン、Ｎ−アセチルガラクトサミン、又はそれらの組み合わせである。
【００３０】
より好ましくは、Ｒ３はＨ、グルコース、ガラクトース、マンノース、Ｎ−アセチルグルコサミン、Ｎ−アセチルガラクトサミン、又はそれらの組み合わせである。
特に好ましい実施形態では、Ｒはラクトース部分又はガラクトース部分である。
【００３１】
好ましくは、ポリアミノ糖カチオンにおいて、繰り返し単位ａ）は５％〜２０％の割合で存在する。
より好ましくは、ポリアミノ糖カチオンにおいて、繰り返し単位ａ）は７％〜１８％の割合で存在する。
【００３２】
好ましくは、ポリアミノ糖カチオンにおいて、繰り返し単位ｂ）は５％〜４５％の割合で存在する。
より好ましくは、ポリアミノ糖カチオンにおいて、繰り返し単位ｂ）は２０％〜４０％の割合で存在する。
【００３３】
好ましくは、ポリアミノ糖カチオンにおいて、繰り返し単位ｃ）は４５％〜９０％の割合で存在する。
より好ましくは、ポリアミノ糖カチオンにおいて、繰り返し単位ｃ）は５０％〜７０％の割合で存在する。
【００３４】
好ましい実施形態では、ポリアミノ糖カチオンは以下からなる：
５％〜２０％の繰り返し単位ａ）、５％〜４５％の繰り返し単位ｂ）、及び４５％〜９０％の繰り返し単位ｃ）。
より好ましい実施形態では、ポリアミノ糖カチオンは以下からなる：
７％〜１８％の繰り返し単位ａ）、２０％〜４０％の繰り返し単位ｂ）、及び５０％〜７０％の繰り返し単位ｃ）。
【００３５】
好ましくは、アニオンは、塩化物イオン、臭化物イオン、フッ化物イオン、ヨウ化物イオン、酢酸イオン、トリフルオロ酢酸イオン、炭酸イオン、重炭酸イオン、硫酸イオン、重硫酸イオン、Ｃ１〜Ｃ１０アルキル硫酸イオン、Ｃ１〜Ｃ６アルキルスルホン酸イオン、Ｃ６〜Ｃ１０アリールスルホン酸イオン、硝酸イオン、リン酸水素イオン、リン酸二水素イオン、オルトリン酸イオン、シュウ酸イオン、フマル酸イオン、アスコルビン酸イオン、クエン酸イオン、グルコン酸イオン、乳酸イオン、ギ酸イオン、酒石酸イオン、コハク酸イオン、マンデル酸イオン、ｐ−トルエンスルホン酸イオン、カルボン酸イオン、糖酸イオン、安息香酸イオン、又はそれらの混合物である。
【００３６】
より好ましくは、アニオンは、塩化物イオン、臭化物イオン、酢酸イオン、硫酸イオン、トリフルオロ酢酸イオン、メタンスルホン酸イオン、オルトリン酸イオンもしくは硝酸イオン、又はそれらの混合物である。
【００３７】
好ましくは、本発明の中性塩の重量平均分子量（Ｍｗ）は、２５００ｋＤａ以下、より好ましくは２５０ｋＤａ〜１５００ｋＤａ以下、さらにより好ましくは４００ｋＤａ〜９００ｋＤａ以下である。
好ましくは、本発明の中性塩の数平均分子量（Ｍｎ）は、２０００ｋＤａ以下、より好ましくは１００ｋＤａ〜１０００ｋＤａ以下、さらにより好ましくは２００ｋＤａ〜５００ｋＤａ以下である。
【００３８】
特定の実施形態において、ポリアミノ糖カチオンとアニオンからなる前記中性塩は、上記の通りである。ただし：
繰り返し単位ｃ）が５０〜７０％、Ｒがラクトース、及びアニオンが塩化物イオンの場合、残存アセチル化度が約１５％である２００〜４００ｋＤａのキトサンから該ポリアミノ糖カチオンは得られない。
【００３９】
別の態様において、本発明は、ポリアミノ糖カチオンとアニオンからなる中性塩の調製方法に関し、前記方法は下記工程を含む：
ｉ）繰り返し単位ａ）及びｂ）からなるポリアミノ糖ポリマーを提供する工程；
ｉｉ）前記ポリアミノ糖ポリマーを水溶液中で単糖、二糖又はオリゴ糖と反応させる工程；
ｉｉｉ）アミノボランを添加する工程；
ｉｖ）酸を添加してｐＨを４未満に低下させる工程；
ｖ）有機溶媒を添加して、中性塩を沈殿させる工程；及び、
ｖｉ）沈殿した中性塩を分離する工程。
【００４０】
驚くべきことに、アミノボランは、カルボニル基と比べてイミノ基の還元に顕著な選択性を示し、水性環境と親和性があることが観察された。同時に、酸との反応による塩の形成により、最終生成物の精製と過剰な水素化物イオンの中和に必要な時間が短縮され、静菌剤の使用が有利に回避される。したがって、最終製品の純度が著しく向上したため、プロセス全体として、医学的及び薬学的観点で許容性が向上し、かつ、調製の全体的な速度が向上するという利点がある。
【００４１】
好ましくは、前記ポリアミノ糖ポリマーは、５％〜９５％の繰り返し単位ａ）及び９５％〜５％の繰り返し単位ｂ）からなる。
【００４２】
前記単糖、二糖又はオリゴ糖は、部分Ｒについて上で示した定義に対応する。
【００４３】
好ましくは、工程ｉｉ）の水溶液は、０．５〜５重量％、より好ましくは０．５〜２．５重量％の酢酸の水溶液である。
【００４４】
前記アミノボランは、好ましくは２−メチルピリジンボラン、５−エチル−２−メチルピリジンボラン、ピリジンボラン、トリメチルアミンボラン、トリエチルアミンボラン、ジメチルアミンボラン、ｔｅｒｔ−ブチルアミンボラン、又はそれらの混合物である。より好ましくは、前記アミノボランは、２−メチルピリジンボラン、５−エチル−２−メチルピリジンボラン、又はそれらの混合物である。
【００４５】
アミノボランは、そのまま使用してもよいし、アルコールなどの水混和性有機溶媒に予め可溶化又は分散させてもよい。最も好ましいアルコールは、メタノール、エタノール、２−プロパノール、又はそれらの混合物である。
【００４６】
用語「酸」は、上記アニオンの対応する酸を意味する。
用語「有機溶媒」は、水性反応溶液の誘電率を低下させることができる有機水混和性溶媒を意味する。適切な有機溶媒は、アセトン、メタノール、エタノール、２−プロパノール、又はそれらの混合物であり、好ましくは、有機溶媒は２−プロパノールである。
【００４７】
任意には、工程ｖｉ）で分離された沈殿物は、水と有機溶媒の混合物（水は最大６０％、より好ましくは、水は最大４０％の割合）で洗浄される。
【００４８】
好ましくは、単糖、二糖又はオリゴ糖と、ポリアミノ糖ポリマーの繰り返し単位ｂ）とのモル比は、０．５〜３０、より好ましくは１〜２０、さらにより好ましくは１〜５である。
【００４９】
好ましくは、アミノボランとポリアミノ糖ポリマーの繰り返し単位ｂ）とのモル比は、０．７５〜２０、より好ましくは１〜１０、さらにより好ましくは１〜３である。
【００５０】
さらなる態様において、本発明は、医薬としての前記中性塩の使用に関する。
【００５１】
さらなる態様において、本発明は、細胞増殖のための生体材料又は足場としての前記中性塩の使用に関する。
【００５２】
さらなる態様において、本発明は、少なくとも、上記のポリアミノ糖カチオンとアニオンからなる中性塩と、生物活性物質を含む医薬組成物に関する。該生物活性物質は、コラーゲン、フィブリノーゲン、フィブリン、アルギン酸、アルギン酸ナトリウム、アルギン酸カリウム、アルギン酸マグネシウム、セルロース、コンドロイチン硫酸、デルマタン硫酸、ケラタン硫酸、ヘパリン、ヘパラン硫酸、ラミニン、フィブロネクチン、エラスチン、ポリ乳酸、ポリグリコール酸、ポリ（乳酸−ｃｏ−グリコール酸）、ポリカプロラクトン、ゼラチン、アルブミン、ポリ（グリコリド−ｃｏ−カプロラクトン）、ポリ（グリコリド−ｃｏ−トリメチレンカーボネート）、ヒドロキシアパタイト、リン酸三カルシウム、リン酸二カルシウム、脱灰骨基質、及びそれらの混合物から選択される。
【００５３】
好ましくは、前記中性塩と前記生物活性物質は、１０：１〜１：５０の重量比である。
【００５４】
好ましくは、本発明の医薬組成物は、医薬組成物の重量に基づいて最大１０重量％の前記中性塩、より好ましくは最大５重量％の前記中性塩を含む。特に好ましいのは、前記中性塩の量が組成物の重量に基づいて０．５〜５重量％である医薬組成物である。
【００５５】
医薬組成物の好ましい第１の実施形態において、前記生物活性物質は、コラーゲン、フィブリノーゲン、フィブリン、アルギン酸、アルギン酸ナトリウム、アルギン酸カリウム、アルギン酸マグネシウム、セルロース、コンドロイチン硫酸、デルマタン硫酸、ケラタン硫酸、ヘパリン、ヘパラン硫酸、ラミニン、フィブロネクチン、エラスチン、ポリ乳酸、ポリグリコール酸、ポリ（乳酸−ｃｏ−グリコール酸）、ポリカプロラクトン、ゼラチン、アルブミン、ポリ（グリコリド−ｃｏ−カプロラクトン）、ポリ（グリコリド−ｃｏ−トリメチレンカーボネート）、及びそれらの混合物から選択される。これらの実施形態では、前記中性塩の量は、好ましくは前記生物活性物質の量以上である。これらの実施形態では、好ましくは、前記中性塩と前記生物活性物質の重量比は、５：１〜１：１、好ましくは４：１〜１：１、より好ましくは３：１〜１：１である。
【００５６】
前記第１の実施形態は、活性物質がヘパリン、コンドロイチン硫酸、コラーゲン、アルギン酸ナトリウム、アルギン酸カリウム、アルギン酸マグネシウム、及びそれらの混合物から選択される場合、さらに好ましい。
【００５７】
医薬組成物の好ましい第２の実施形態において、前記生物活性物質は、ヒドロキシアパタイト、リン酸三カルシウム、リン酸二カルシウム、脱灰骨基質、及びそれらの混合物から選択される。これらの実施形態では、前記中性塩の量は、好ましくは前記生物活性物質の量以下である。これらの実施形態では、好ましくは、前記中性塩と前記生物活性物質の重量比は、１：１０〜１：４５、好ましくは１：２０〜１：４０、より好ましくは１：２５〜１：３５である。
【００５８】
前記第２の実施形態は、活性物質がヒドロキシアパタイト及びリン酸三カルシウム、並びにそれらの混合物から選択される場合、さらに好ましい。
【００５９】
特に好ましい実施形態において、本発明は、上記のポリアミノ糖カチオンとアニオンからなる中性塩、及びヒドロキシアパタイトを少なくとも含む医薬組成物に関する。前記組成物は、骨格系に関する整形外科の用途において有利な使用を見出す。
【００６０】
該医薬組成物は、経口、筋肉内、静脈内、関節内、経皮、皮下、又は局所外部もしくは内部経路を介して、例えば外科的に投与することができる。
【００６１】
好ましくは、前記医薬組成物は、関節内、経皮、又は局所内部経路を介して投与される。
【００６２】
医薬組成物は、薬学的に許容される賦形剤をさらに含むことができる。
【００６３】
適切な薬学的に許容される賦形剤は、例えば、ｐＨ調節剤、等張調節剤、溶媒、安定剤、キレート剤、希釈剤、結合剤、崩壊剤、潤滑剤、流動促進剤、着色剤、懸濁剤、界面活性剤、凍結保護剤、防腐剤、及び酸化防止剤である。
【００６４】
また本発明は、上記の中性塩を、単独で、又は上記の活性物質の少なくとも１つと組み合わせて含む生体材料にも関する。前記生体材料は、ミクロスフェア、ナノスフェア、膜、スポンジ、ワイヤ、フィルム、ガーゼ、ガイド導管、ヒドロゲル、織布、不織布、又はそれらの組み合わせの形態であってもよい。
【００６５】
中性塩にとって好ましく、かつ有利であると特定されたすべての態様は、上記の調製方法、組成物、生体材料、及び使用にとっても等しく好ましく、かつ有利であると見なされるべきであると理解される。
【００６６】
また、上述の中性塩、調製方法、組成物、生体材料、及び使用の好ましい態様のすべての可能な組み合わせが本明細書に記載されており、したがって好ましいことも理解される。
【００６７】
以下は、例示の目的で提供される本発明の実施例である。
【実施例】
【００６８】
調製方法の一般的な手順：
単糖、二糖又はオリゴ糖（０．３０〜０．２０Ｍ）、水、酢酸（０．１０〜０．２０Ｍ）及び５％〜２０％の繰り返し単位ａ）を有するキトサン（０．１０Ｍ）を反応器に投入した。こうして得られた混合物を２時間、６０℃に加熱した。次いで、同じ条件下で、アミノボラン（０．１０〜０．２５Ｍ）をアルコール（１０〜２０％）に分散させた後、徐々に加え、この系を６０℃で２時間攪拌した。続いて、酸の水溶液（２〜４Ｎ）を約２のｐＨに達するまで滴下した。次に、この系を室温に冷却し、有機溶媒を添加して生成物を沈殿させた。沈殿物をデカントし、上清を除去し、固体部分を最初に水：有機溶媒（３０：７０）混合物で洗浄し、次に水：有機溶媒（１５：８５）混合物で数回洗浄し、最後に有機溶媒で洗浄した。こうして得られた固体を減圧下の制御された温度条件で最後に乾燥させた。
【００６９】
実施例１
ラクトース（３６ｇ）、水（４００ｍＬ）、酢酸（１００％）、及びキトサン（１２ｇ）を反応器に投入し、こうして得られた混合物を２時間、６０℃に加熱した。次に、同じ条件下で、メタノール（５０ｍＬ）にあらかじめ分散させた２−メチルピリジンボラン（８ｇ）を徐々に加え、この系を６０℃で２時間撹拌した。続いて、塩酸の水溶液（４Ｎ）を約２のｐＨに達するまで滴下した。次に、この系を室温に冷却し、２−プロパノールを添加して生成物を沈殿させた。その後、沈殿物をデカントし、上清を除去し、固体部分を最初に水：２−プロパノール（３０：７０）混合物で洗浄し、次に水：２−プロパノール（１５：８５）混合物で数回洗浄した、そして最後に２−プロパノールで洗浄した。こうして得られた固体を減圧下の制御された温度条件で最後に乾燥させた。
【００７０】
実施例２
ラクトース（２２ｇ）、水（４００ｍＬ）、酢酸（１００％）、及びキトサン（１２ｇ）を反応器に投入し、こうして得られた混合物を２時間、６０℃に加熱した。次に、同じ条件下で、メタノール（５０ｍＬ）にあらかじめ分散させた２−メチルピリジンボラン（８ｇ）を徐々に加え、この系を６０℃で２時間撹拌した。続いて、塩酸の水溶液（４Ｎ）を約２のｐＨに達するまで滴下した。次いで、この系を室温に冷却し、２−プロパノールを添加して生成物を沈殿させた。その後、沈殿物をデカントし、上清を除去し、固体部分を最初に水：２−プロパノール（３０：７０）混合物で洗浄し、次に水：２−プロパノール（１５：８５）混合物で数回洗浄した。そして最後に２−プロパノールで洗浄した。こうして得られた固体を減圧下の制御された温度条件で最後に乾燥させた。
【００７１】
実施例３
ラクトース（３６ｇ）、水（４００ｍＬ）、酢酸（１００％）、及びキトサン（１２ｇ）を反応器に投入し、こうして得られた混合物を２時間、６０℃に加熱した。次に、同じ条件下で、メタノール（８０ｍＬ）にあらかじめ分散させた２−メチルピリジンボラン（１４ｇ）を徐々に加え、この系を６０℃で２時間撹拌した。続いて、塩酸の水溶液（４Ｎ）を約２のｐＨに達するまで滴下した。次に、この系を室温に冷却し、２−プロパノールを添加して生成物を沈殿させた。その後、沈殿物をデカントし、上清を除去し、固体部分を最初に水：２−プロパノール（３０：７０）混合物で洗浄し、次に、水：２−プロパノール（１５：８５）混合物で数回洗浄した。そして最後に２−プロパノールで洗浄した。こうして得られた固体を減圧下の制御された温度条件で最後に乾燥させた。
【００７２】
実施例４
ラクトース（３６ｇ）、水（５００ｍＬ）、酢酸（１００％）、及びキトサン（１２ｇ）を反応器に投入し、こうして得られた混合物を２時間、６０℃に加熱した。次に、同じ条件下で、あらかじめメタノール（８０ｍＬ）に分散させた２−メチルピリジンボラン（８ｇ）を徐々に加え、この系を６０℃で２時間撹拌した。続いて、塩酸の水溶液（４Ｎ）を約２のｐＨに達するまで滴下した。次いで、この系を室温に冷却し、２−プロパノールを添加して生成物を沈殿させた。その後、沈殿物をデカントし、上清を除去し、固体部分を最初に水：２−プロパノール（３０：７０）混合物で洗浄し、次に、水：２−プロパノール（１５：８５）混合物で数回洗浄した。そして、最後に２−プロパノールで洗浄した。こうして得られた固体を減圧下の制御された温度条件で最後に乾燥させた。
【００７３】
実施例５
ラクトース（３６ｇ）、水（５００ｍＬ）、酢酸（１００％）、及びキトサン（１２ｇ）を反応器に投入し、こうして得られた混合物を２時間、６０℃に加熱した。次に、同じ条件下で、あらかじめメタノール（８０ｍＬ）に分散させた２−メチルピリジンボラン（８ｇ）を徐々に加え、この系を６０℃で２時間撹拌した。続いて、塩酸の水溶液（４Ｎ）を約２のｐＨに達するまで滴下した。次に、この系を室温まで冷却し、アセトンを添加して生成物を沈殿させた。その後、沈殿物をデカントし、上清を除去し、固体部分を最初に水：メタノール（２０：８０）混合物で洗浄し、次に、水：メタノール（１０：９０）混合物で数回洗浄し、最後に、メタノールで洗浄した。こうして得られた固体を減圧下の制御された温度条件で最後に乾燥させた。
【００７４】
実施例６
ラクトース（３６ｇ）、水（５００ｍＬ）、酢酸（１００％）、及びキトサン（１２ｇ）を反応器に投入し、こうして得られた混合物を２時間、６０℃に加熱した。次に、同じ条件下で、あらかじめメタノール（８０ｍＬ）に分散させた２−メチルピリジンボラン（８ｇ）を徐々に加え、この系を６０℃で２時間撹拌した。続いて、塩酸の水溶液（４Ｎ）を約２のｐＨに達するまで滴下した。次に、この系を室温まで冷却し、アセトンを添加して生成物を沈殿させた。その後、沈殿物をデカントし、上清を除去し、固体部分を最初に、水：エタノール（２５：７５）混合物で洗浄し、次に、水：エタノール（１５：８５）混合物で数回洗浄し、最後に、エタノールで洗浄した。こうして得られた固体を減圧下の制御された温度条件で最後に乾燥させた。
【００７５】
実施例７
ラクトース（３６ｇ）、水（４００ｍＬ）、酢酸（１００％）、及びキトサン（１２ｇ）を反応器に投入し、こうして得られた混合物を２時間、６０℃に加熱した。次に、同じ条件下で、あらかじめメタノール（５０ｍＬ）に分散させた２−メチルピリジンボラン（８ｇ）を徐々に加え、この系を６０℃で２時間撹拌した。続いて、硫酸の水溶液（２Ｎ）を約２のｐＨに達するまで滴下した。次に、この系を室温に冷却し、２−プロパノールを添加して生成物を沈殿させた。その後、沈殿物をデカントし、上清を除去し、固体部分を最初に水：２−プロパノール（３０：７０）混合物で洗浄し、次に水：２−プロパノール（１５：８５）混合物で数回洗浄した。そして最後に、２−プロパノールで洗浄した。こうして得られた固体を減圧下の制御された温度条件で最後に乾燥させた。
【００７６】
実施例８
ラクトース（３６ｇ）、水（４００ｍＬ）、酢酸（１００％）、及びキトサン（１２ｇ）を反応器に投入し、こうして得られた混合物を２時間、６０℃に加熱した。次に、同じ条件下で、あらかじめメタノール（５０ｍＬ）に分散させた２−メチルピリジンボラン（８ｇ）を徐々に加え、この系を６０℃で２時間撹拌した。その後、オルトリン酸水溶液（２Ｎ）を約２のｐＨに達するまで滴下した。次に、この系を室温に冷却し、２−プロパノールを添加して生成物を沈殿させた。その後、沈殿物をデカントし、上清を除去し、固体部分を最初に水：２−プロパノール（３０：７０）混合物で洗浄し、次に水：２−プロパノール（１５：８５）混合物で数回洗浄した。そして、最後に、２−プロパノールで洗浄した。こうして得られた固体を減圧下の制御された温度条件で最後に乾燥させた。
【００７７】
実施例９
ラクトース（３６ｇ）、水（４００ｍＬ）、酢酸（１００％）、及びキトサン（１２ｇ）を反応器に投入し、こうして得られた混合物を２時間、６０℃に加熱した。次に、同じ条件下で、あらかじめメタノール（５０ｍＬ）に分散させた２−メチルピリジンボラン（８ｇ）を徐々に加え、この系を６０℃で２時間撹拌した。続いて、トリフルオロ酢酸の水溶液（４Ｎ）を約２のｐＨに達するまで滴下した。次に、この系を室温に冷却し、２−プロパノールを添加して生成物を沈殿させた。その後、沈殿物をデカントし、上清を除去し、固体部分を最初に、水：２−プロパノール（３０：７０）混合物で洗浄し、次に、水：２−プロパノール（１５：８５）混合物で数回洗浄した。そして最後に２−プロパノールで洗浄した。こうして得られた固体を減圧下の制御された温度条件で最後に乾燥させた。
【００７８】
実施例１０
ラクトース（３６ｇ）、水（４００ｍＬ）、酢酸（１００％）、及びキトサン（１２ｇ）を反応器に投入し、こうして得られた混合物を２時間、６０℃に加熱した。次に、同じ条件下で、あらかじめメタノール（５０ｍＬ）に分散させた２−メチルピリジンボラン（８ｇ）を徐々に加え、この系を６０℃で２時間撹拌した。続いて、メタンスルホン酸の水溶液（４Ｎ）を約２のｐＨに達するまで滴下した。次に、この系を室温に冷却し、２−プロパノールを添加して生成物を沈殿させた。その後、沈殿物をデカントし、上清を除去し、固体部分を最初に、水：２−プロパノール（３０：７０）混合物で洗浄し、次に、水：２−プロパノール（１５：８５）混合物で数回洗浄した。そして最後に２−プロパノールで洗浄した。こうして得られた固体を減圧下の制御された温度条件で最後に乾燥させた。
【００７９】
実施例１１
ラクトース（３６ｇ）、水（４００ｍＬ）、酢酸（１００％）、及びキトサン（１２ｇ）を反応器に投入し、こうして得られた混合物を２時間、６０℃に加熱した。次に、同じ条件下で、あらかじめメタノール（５０ｍＬ）に分散させた５−エチル−２−メチルピリジンボラン（１０ｇ）を徐々に加え、この系を６０℃で２時間撹拌した。続いて、塩酸の水溶液（４Ｎ）を約２のｐＨに達するまで滴下した。次に、この系を室温に冷却し、２−プロパノールを添加して生成物を沈殿させた。その後、沈殿物をデカントし、上清を除去し、固体部分を最初に、水：２−プロパノール（３０：７０）混合物で洗浄し、次に、水：２−プロパノール（１５：８５）混合物で数回洗浄した。そして最後に、２−プロパノールで洗浄した。こうして得られた固体を減圧下の制御された温度条件で最後に乾燥させた。
【００８０】
実施例１２
ガラクトース（２０ｇ）、水（４００ｍＬ）、酢酸（１００％）、及びキトサン（１２ｇ）を反応器に投入し、得られた混合物を２時間６０℃に加熱した。次に、同じ条件下で、あらかじめメタノール（５０ｍＬ）に分散させた２−メチルピリジンボラン（８ｇ）を徐々に加え、この系を６０℃で２時間撹拌した。続いて、塩酸の水溶液（４Ｎ）を約２のｐＨに達するまで滴下した。次に、この系を室温に冷却し、２−プロパノールを添加して生成物を沈殿させた。その後、沈殿物をデカントし、上清を除去し、固体部分を最初に、水：２−プロパノール（３０：７０）混合物で洗浄し、次に、水：２−プロパノール（１５：８５）混合物で数回洗浄した。そして最後に、２−プロパノールで洗浄した。こうして得られた固体を減圧下の制御された温度条件で最後に乾燥させた。
【００８１】
結果
表１は、上記の実施例１〜１２で得られた塩の化学的及び物理的特性を要約したものである。多糖類の誘導体は、有利な収率で、置換度を容易に変更し、そして高純度で得られた。
ポリアミノ糖カチオンの３つの異なる繰り返し単位に対応する割合は、文献（Ｎ．Ｄ’Ａｍｅｌｉｏ  ｅｔ  ａｌ．Ｊ．Ｐｈｙｓ．Ｃｈｅｍ．Ｂ２０１３，１１７，１３５７８）で報告されている通りに、１Ｈ−ＮＭＲ分析によって決定した。
【００８２】
【表１】
2020521840.tif 000007
【００８３】
実施例１３
ポリ乳酸を含有する組成物（中性塩１．００％、ポリ乳酸０．５０％）
実施例４で得られた中性塩（０．６３０ｇ）を水（２５ｍＬ）に溶解し、得られた溶液を室温で１時間混合した。続いて、水酸化ナトリウム溶液（２．４ｍＬ、０．５Ｎ）を同じ条件下で滴下し、得られた溶液をさらに３０分間混合した。次いで、同じ条件下で、以下を順番に追加した：ＰＢＳの１０Ｘ溶液（６．３０ｍＬ，ＰＢＳ  １０Ｘ：Ｎａ２ＨＰＯ４  ８１Ｍｍ，ＮａＨ２ＰＯ４  １７．６Ｍｍ，ＮａＣｌ  １３７０Ｍｍ，ＫＣｌ  ２７Ｍｍ）、水（２０ｍＬ）、ポリ乳酸（０．３１５ｇ）及び水（９．３０ｍＬ）。こうして得られた混合物を、均一系が得られるまで室温で撹拌した。
【００８４】
実施例１４
コラーゲンを含有する組成物（中性塩１．００％、コラーゲン１．００％）
実施例４で得られた中性塩（０．６３０ｇ）を水（２５ｍＬ）に溶解し、得られた溶液を室温で１時間混合した。続いて、水酸化ナトリウム溶液（２．４ｍＬ、０．５Ｎ）を同じ条件下で滴下し、得られた溶液をさらに３０分間混合した。次に、同じ条件下で以下を順番に追加した：ＰＢＳの１０Ｘ溶液（６．３０ｍＬ，ＰＢＳ  １０Ｘ：Ｎａ２ＨＰＯ４  ８１Ｍｍ，ＮａＨ２ＰＯ４  １７．６Ｍｍ，ＮａＣｌ  １３７０Ｍｍ，ＫＣｌ  ２７Ｍｍ）、水（２０ｍＬ）、ポリ乳酸（０．６３０ｇ）及び水（９．３０ｍＬ）。こうして得られた混合物を、均一系が得られるまで室温で撹拌した。
【００８５】
実施例１５
コンドロイチン硫酸を含有する組成物（中性塩１．２０％、コンドロイチン硫酸０．４０％）
実施例４で得られた中性塩（０．７５６ｇ）を水（２５ｍＬ）に溶解し、得られた溶液を室温で１時間混合した。続いて、水酸化ナトリウム溶液（２．８８ｍＬ、０．５Ｎ）を同じ条件下で滴下し、得られた溶液をさらに３０分間混合した。次に、同じ条件下で以下を順番に加えた：ＰＢＳの１０Ｘ溶液（６．３０ｍＬ，ＰＢＳ  １０Ｘ：Ｎａ２ＨＰＯ４  ８１Ｍｍ，ＮａＨ２ＰＯ４  １７．６Ｍｍ，ＮａＣｌ  １３７０Ｍｍ，ＫＣｌ  ２７Ｍｍ）、水（２０ｍＬ）、コンドロイチン硫酸塩（０．２５２ｇ）及び水（８．８２ｍＬ）。こうして得られた混合物を、コンドロイチン硫酸が完全に溶解するまで室温で撹拌した。
【００８６】
実施例１６
ポリ（乳酸−ｃｏ−グリコール酸）又はＰＬＧＡを含有する組成物（中性塩１．８０％、ＰＧＬＡ１．００％）
実施例４で得られた中性塩（１．１３４ｇ）を水（２５ｍＬ）に溶解し、得られた溶液を室温で１時間混合した。続いて、水酸化ナトリウム溶液（４．３２ｍＬ、０．５Ｎ）を同じ条件下で滴下し、得られた溶液をさらに３０分間混合した。次に、同じ条件下で、以下を順番に加えた：ＰＢＳの１０Ｘ溶液（６．３０ｍＬ，ＰＢＳ  １０Ｘ：Ｎａ２ＨＰＯ４  ８１Ｍｍ，ＮａＨ２ＰＯ４  １７．６Ｍｍ，ＮａＣｌ  １３７０Ｍｍ，ＫＣｌ  ２７Ｍｍ）、水（２０ｍＬ）、ＰＬＧＡ（０．６３０ｇ）及び水（７．３８ｍＬ）。こうして得られた混合物を、均一系が得られるまで室温で撹拌した。
【００８７】
実施例１７
エラスチンを含有する組成物（中性塩０．７５％、エラスチン０．２５％）
実施例４で得られた中性塩（０．４７３ｇ）を水（２５ｍＬ）に溶解し、得られた溶液を室温で１時間混合した。続いて、水酸化ナトリウム溶液（１．８０ｍＬ、０．５Ｎ）を同じ条件下で滴下し、得られた溶液をさらに３０分間混合した。次に、以下を同じ条件下で順番に追加した：ＰＢＳの１０Ｘ溶液（６．３０ｍＬ，ＰＢＳ  １０Ｘ：Ｎａ２ＨＰＯ４  ８１Ｍｍ，ＮａＨ２ＰＯ４  １７．６Ｍｍ，ＮａＣｌ  １３７０Ｍｍ，ＫＣｌ  ２７Ｍｍ）、水（２０ｍＬ）、エラスチン（０．１５８ｇ）及び水（１１．１０ｍＬ）。こうして得られた混合物を、均一系が得られるまで室温で撹拌した。
【００８８】
実施例１８
アルギン酸カリウムを含有する組成物（中性塩１．００％、アルギン酸カリウム０．７５％）
実施例４で得られた中性塩（０．６３０ｇ）を水（２５ｍＬ）に溶解し、得られた溶液を室温で１時間混合した。続いて、水酸化ナトリウム溶液（２．４０ｍＬ、０．５Ｎ）を同じ条件下で滴下し、得られた溶液をさらに３０分間混合した。次に、同じ条件下で、以下を順番に加えた：ＰＢＳの１０Ｘ溶液（６．３０  ｍＬ，ＰＢＳ  １０Ｘ：Ｎａ２ＨＰＯ４  ８１Ｍｍ，ＮａＨ２ＰＯ４  １７．６Ｍｍ，ＮａＣｌ  １３７０Ｍｍ，ＫＣｌ  ２７Ｍｍ）、水（２０ｍＬ）、アルギン酸カリウム（０．４７３ｇ）及び水（９．３０ｍＬ）。こうして得られた混合物を、アルギン酸カリウムが完全に溶解するまで室温で撹拌した。
【００８９】
実施例１９
リン酸三カルシウム中のヒドロキシアパタイトを含有する組成物（中性塩１．９４％、ヒドロキシアパタイト１．７８％、リン酸三カルシウム５７．５８％）
実施例４で得られた中性塩（０．１６３ｇ）を水（２．６４ｍＬ）に入れ、室温で１時間、次いで６０℃で２時間混合した。その後、水酸化ナトリウム溶液（０．６２ｍＬ、０．５Ｎ）を同じ条件下で滴下し、得られた溶液をさらに３０分間混合した。次いで、こうして得られた溶液を、室温で、リン酸三カルシウム（４．８５０ｇ）に均一に分散したヒドロキシアパタイト（０．１５０ｇ）を含むビーカーに移した。次に、セメントペーストが得られるまで液相と固相をよく混合した。
【００９０】
実施例２０
ヒドロキシアパタイト中のリン酸三カルシウムを含有する組成物（中性塩１．９４％、リン酸三カルシウム１．７８％、ヒドロキシアパタイト５７．５８％）
実施例４で得られた中性塩（０．１６３ｇ）を水（２．６４ｍＬ）に入れ、室温で１時間、次いで６０℃で２時間混合した。その後、水酸化ナトリウム溶液（０．６２ｍＬ、０．５Ｎ）を同じ条件下で滴下し、得られた溶液をさらに３０分間混合した。次いで、こうして得られた溶液を、室温で、ヒドロキシアパタイト（４．８５０ｇ）に均一に分散したリン酸三カルシウム（０．１５０ｇ）を含むビーカーに移した。次に、セメントペーストが得られるまで液相と固相をよく混合した。
【００９１】
実施例２１
ラクトース（３６ｇ）、水（５００ｍＬ）、約５．５以下のｐＨ値を有する酢酸（１００％）、及びキトサン（１２ｇ）を反応器に投入し、こうして得られた混合物を２時間、６０℃に加熱した。次に、同じ条件下で、メタノール（５０ｍＬ）にあらかじめ分散させた２−メチルピリジンボラン（７ｇ）を徐々に加え、この系を６０℃で５時間攪拌した。続いて、塩酸の水溶液（４Ｎ）を約２のｐＨに達するまで滴下した。次に、この系を室温に冷却し、２−プロパノールを添加して生成物を沈殿させた。その後、沈殿物をデカントし、上清を除去し、固体部分を最初に、水：２−プロパノール（２０：８０）混合物で洗浄し、次に、水：２−プロパノール（１０：９０）混合物で数回洗浄した。そして最後に２−プロパノールで洗浄した。こうして得られた固体を減圧下の制御された温度条件で最後に乾燥させた。
【００９２】
実施例２２
キトサン（１２ｇ）、水（４００ｍＬ）、及び約５．５以下のｐＨ値を有する酢酸（１００％）を反応器に入れ、こうして得られた混合物を室温で２時間混合した。次に、同じ条件下で、あらかじめ水（２００ｍＬ）に溶解したラクトース（３６ｇ）を加え、混合物を６０℃に加熱した。続いて、あらかじめメタノール（５０ｍＬ）に分散させた２−メチルピリジンボラン（７ｇ）を徐々に加え、この系を６０℃で５時間攪拌した。続いて、塩酸の水溶液（４Ｎ）を約２のｐＨに達するまで滴下した。次に、この系を室温に冷却し、２−プロパノールを添加して生成物を沈殿させた。その後、沈殿物をデカントし、上清を除去し、固体部分を最初に、水：２−プロパノール（２０：８０）混合物で洗浄し、次に水：２−プロパノール（１０：９０）混合物で数回洗浄した。そして最後に２−プロパノールで洗浄した。こうして得られた固体を減圧下の制御された温度条件で最後に乾燥させた。
【００９３】
実施例２３
キトサン（１２ｇ）、水（４００ｍＬ）、及び約６以下のｐＨ値を有する酢酸（１００％）を反応器に投入し、こうして得られた混合物を室温で２時間混合した。次に、同じ条件下で、あらかじめ水（２００ｍＬ）に溶解したラクトース（３６ｇ）を添加し、混合物を６０℃に加熱した。続いて、同じ条件下で、メタノール（５０ｍＬ）にあらかじめ分散させた２−メチルピリジンボラン（７ｇ）を徐々に加え、この系を６０℃で２時間撹拌した。続いて、塩酸の水溶液（４Ｎ）を約２のｐＨに達するまで滴下した。次に、この系を室温に冷却し、２−プロパノールを添加して生成物を沈殿させた。続いて、沈殿物をデカントし、上清を除去し、固体部分の洗浄の最初の２回を水：２−プロパノール（２０：８０）混合物で行い、次に水：２−プロパノール（１０：９０）混合物で数回洗浄した。そして、最後に２−プロパノールで洗浄した。こうして得られた固体を減圧下の制御された温度条件で最後に乾燥させた。
【国際調査報告】
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2020521840.tif 000015