(57)【要約】【解決手段】  下記の一般式(I)で表される化合物またはその塩。【化１】2005075414.tif 000022（式中、Ｒ1、Ｒ2およびＲ3は、それぞれ独立に、水素原子または炭素数１〜３のアルキル基であるが、ただし、Ｒ1、Ｒ2およびＲ3のうちの少なくとも１つは水素原子ではなく、Ｒ4は置換基を有するアミノ基であり、Ｒ5は置換基を有してもよいカルボキシル基である）  また、ペプチジルアルギニンデイミナーゼ４阻害剤も提供される。この阻害剤を利用することにより、ペプチジルアルギニンデイミナーゼが関与する疾患（例えば、関節リウマチ、多発性硬化症など）を予防および／または治療することができる。【特許請求の範囲】
【請求項１】
下記の一般式(I)で表される化合物またはその塩。
【化１】
2005075414.tif 000016
（式中、Ｒ1、Ｒ2およびＲ3は、それぞれ独立に、水素原子または炭素数１〜３のアルキル基であるが、ただし、Ｒ1、Ｒ2およびＲ3のうちの少なくとも１つは水素原子ではなく、Ｒ4は置換基を有するアミノ基であり、Ｒ5は置換基を有してもよいカルボキシル基である）
【請求項２】
Ｒ4が、下記の式
【化２】
2005075414.tif 000017
（式中、Ｒ41は、Ｒ401ＣＯ−〔式中、Ｒ401は、水素原子、置換基を有してもよい炭化水素基または置換基を有してもよい複素環基である〕で表される基、Ｒ402Ｓ(Ｏ)m−〔式中、Ｒ402は、水素原子、置換基を有してもよい炭化水素基または置換基を有してもよい複素環基であり、mは１または２の整数である〕で表される基、Ｒ405Ｎ(Ｒ406)−ＣＨＲ404−ＣＯ−[ＮＨ−ＣＨＲ403−ＣＯ］n−〔式中、Ｒ403, Ｒ404, Ｒ405およびＲ406は、それぞれ独立に、水素原子、置換基を有してもよい炭化水素基または置換基を有してもよい複素環基であり、nは１〜50のいずれかの整数である〕で表される基または置換基を有してもよいペプチジル基、Ｒ42は水素原子または炭素数１〜３のアルキル基である）で表される基である請求項１記載の化合物またはその塩。
【請求項３】
Ｒ41が、置換基を有してもよいベンゾイル基、置換基を有してもよいベンゾイルペプチジル基、置換基を有してもよいダンシル基または置換基を有してもよいダンシルペプチジル基であり、Ｒ42が水素原子である請求項２記載の化合物またはその塩。
【請求項４】
Ｒ1、Ｒ2およびＲ3は、それぞれ独立に、水素原子またはメチル基であるが、ただし、Ｒ1、Ｒ2およびＲ3のうちの少なくとも１つはメチル基である請求項１〜３のいずれかに記載の化合物またはその塩。
【請求項５】
下記の(Ia)、(Ib)または(Ic)で表される化合物またはその塩である請求項４記載の化合物またはその塩。
【化３】
2005075414.tif 000018
【化４】
2005075414.tif 000019
【化５】
2005075414.tif 000020
【請求項６】
下記のスキームで表される、配列番号１のアミノ酸配列を有するペプチジルアルギニンデイミナーゼ４とその反応基質との反応機構における工程１〜５のいずれかを阻害することができる物質を有効成分として含有するペプチジルアルギニンデイミナーゼ４阻害剤。
【化６】
2005075414.tif 000021
（スキーム中、Asp350, His471, Asp473及びCys645は、それぞれ、配列番号１のアミノ酸配列における３５０位のアスパラギン酸残基、４７１位のヒスチジン残基、４７３位のアスパラギン酸残基及び６４５位のシステイン残基を表す）
【請求項７】
配列番号１のアミノ酸配列を有するペプチジルアルギニンデイミナーゼ４とその反応基質との反応機構における工程１〜５のいずれかを阻害することができる物質がアルギニン誘導体である請求項６記載のペプチジルアルギニンデイミナーゼ４阻害剤。
【請求項８】
アルギニンのアミノ基およびグアニジノ基が置換基を有し、アルギニンのカルボキシル基が置換基を有してもよいアルギニン誘導体を有効成分として含有するペプチジルアルギニンデイミナーゼ４阻害剤。
【請求項９】
アルギニン誘導体が請求項１〜５のいずれかに記載の化合物またはその塩である請求項７または８記載のペプチジルアルギニンデイミナーゼ４阻害剤。
【請求項１０】
ペプチジルアルギニンデイミナーゼが関与する疾患を予防および／または治療するために用いられる請求項６〜９のいずれかに記載のペプチジルアルギニンデイミナーゼ４阻害剤。
【請求項１１】
ペプチジルアルギニンデイミナーゼが関与する疾患が関節リウマチ、乾癬及び多発性硬化症からなる群より選択される請求項１０記載のペプチジルアルギニンデイミナーゼ４阻害剤。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、ペプチジルアルギニンデイミナーゼ４阻害剤に関する。
【背景技術】
【０００２】
ペプチジルアルギニンデイミナーゼ（PAD）は動物の組織に広く分布しているタンパク質修飾酵素で、カルシウムイオン依存的に（すなわち、カルシウムイオン存在下で）タンパク質中のアルギニン残基を脱イミノ化してシトルリン残基に変換する反応を触媒する。タンパク質の脱イミノ化はタンパク質分子内の正電荷の分布を変化させるので、立体構造が変化してタンパク質の生理機能に多大な影響を与える。【０００３】
PADはげっ歯類において最初にその存在が確認され、その組織中に3種類のPADが存在していることが明らかにされた(非特許文献1, 2, 3, 4)。その後、中島らは、ヒト骨髄性白血病HL-60 細胞をレチノイン酸やDMSOや1,25-dihydroxyvitamin D3で処理して顆粒球に分化させた細胞においてPADの活性を検出し、そのcDNAをクローニングして解析した(非特許文献5)。その結果、そのcDNAは2238bpから成り、663アミノ酸残基をコードしていること、および、すでに知られていたヒトのPADのアミノ酸配列と50-55%程度一致していることなどが明らかにされ、ヒトHL-60細胞のPADをPAD4と命名した（当初はPAD Vと命名されたが、後にPAD4と改名された）。その後、PAD4はヒト抹消血顆粒球でも発現が確認された(非特許文献6)。【０００４】
これまでに、ヒトではPADはタイプ1, 2, 3, 4, 6の5種類のアイソフォームが同定されている(非特許文献7,8,9,10,11,12,13,14,25,26)。PAD1は皮膚の分化に(非特許文献15,16,17)、PAD2はミエリン塩基性タンパク質の脱イミノ化に(非特許文献18,19)、そしてPAD3は毛嚢のケラチン化に関与している（非特許文献14,20,21）。ヒトHL-60細胞やヒト末端梢血に存在するPAD4（旧名：ペプチジルアルギニンデイミナーゼＶ、PAD V）は、カルシウムイオノフォア処理し細胞内のカルシウム濃度を上昇させると、ヌクレオフォスミンB/23やヒストンH2A, H3, H4を脱イミノ化する(非特許文献22,23)。また、PAD4は56PPAKKKST63という核移行シグナルを持っているので、４種類のアイソフォームのPAD中で唯一核内に局在している。このようなことから、PAD4はカルシウムイオン依存的にクロマチンに作用して核の機能を制御する新規のヒストン修飾酵素と考えられている(非特許文献23)。また、ヒトPADのアイソフォーム間のアミノ酸配列を比較すると、C末端の3分の2の領域のホモロジーが高いことから、C末端の3分の2の領域の構造はPADのアイソフォーム間で共通であり、この領域に活性部位があると考えられる。さらに、最近になってPAD4遺伝子の一塩基多型（SNPs）がmRNAの分解を減少させて過剰のシトルリン残基を産出し、リウマチ性関節炎の発病者の血液中にこのシトルリン化されたタンパク質に対する自己抗体ができることが報告され、PAD4がリウマチ性関節炎に深く関与していることが示されている(非特許文献24)。【０００５】
【非特許文献１】Lamensa, J. W. and Moscarello, M. A. (1993) J. Neurochem., 61, 987-996
【非特許文献２】Kubilus, J. and Baden, H. P. (1983) Purification and properties of a brain enzyme which deiminates proteins. Biochim. Biophys. Acta, 745, 285-291
【非特許文献３】Kubilus, J. and Baden, H. P. (1983) Purification and properties of a brain enzyme which deiminates proteins. Biochim. Biophys. Acta, 745, 285-291
【非特許文献４】Terakawa, H., Takahara, H. and Sugawara, K. (1991) Three types of mouse peptidylarginine deiminase: characterization and tissue distribution. J. Biochem. (Tokyo) 110, 661-666
【非特許文献５】Nakashima, K., Hagiwara, T., Ishigami, A., Nagata, S., Asaga, H., Kuramoto, M., Senshu, T. and Yamada, M. (1999) Molecular characterization of peptidylarginine deiminase in HL-60 cells induced by retinoic acid and 1α,25-dihydroxyvitamin D3. J. Biol. Chem., 274, 27786-27792
【非特許文献６】Asaga, H., Nakashima, K. Senshu, T., Ishigami, A. and Yamada, M. (2001) Immunocytochemical localization of peptidylarginine deiminase in human eosinophils and neutrophils. J. Leukocyte Biol., 70, 46-51
【非特許文献７】Watanabe, K. and Senshu, T. (1989) J. Biol. Chem., 264, 15255-15260
【非特許文献８】Tsuchida, M., Takahara, H., Minami, N., Arai, T., Kobayashi, Y., Tsujimoto, H., Fukazawa, C. and Sugawara, K. (1993) Eur. J. Biochem., 215, 677-685
【非特許文献９】Nishijyo, T., Kawada, A., Kanno, T., Shiraiwa, M. and Takahara, H. (1997) J. Biochem. (Tokyo) 121, 868-875
【非特許文献１０】Yamakoshi, A., Ono, H., Nishijyo, T., Shiraiwa, M. and Takahara, H. (1998) Biochim. Biophys. Acta, 1386, 227-232
【非特許文献１１】Ishigami, A., Kuramoto, M., Yamada, M., Watanabe, K. and Senshu, T. (1998) FEBS Lett., 433, 113-118
【非特許文献１２】Rus’d, A. A., Ikejiri, Y., Ono, H., Yonekawa, T., Shiraiwa, M., Kawada, A. and Takahara, H. (1999) Eur. J. Biochem., 259, 660-669
【非特許文献１３】Nakashima, K., Hagiwara, T., Ishigami, A., Nagata, S., Asaga, H., Kuramoto, M., Senshu, T. and Yamada, M. (1999) Molecular characterization of peptidylarginine deiminase in HL-60 cells induced by retinoic acid and 1α,25-dihydroxyvitamin D3. J. Biol. Chem., 274, 27786-27792
【非特許文献１４】Kanno, T., Kawada, A., Yamanouchi, J., Yosida-Noro, C., Yoshiki, A., Siraiwa, M., Kusakabe, M., Manabe, M., Tezuka, T. and Takahara, H. (2000) J. Invest. Dermatol., 115, 813-823
【非特許文献１５】Senshu, T., Akiyama, K., Kan, S., Asaga, H., Ishigami, A. and Manabe, M. (1995) J. Invest. Dermatol., 105, 163-169
【非特許文献１６】Senshu, T., Akiyama, K., Ishigami, A. and Nomura, K. (1999) J. Dermatol. Sci., 21, 113-126
【非特許文献１７】Ishida-Yamamoto, A., Senshu, T., Eady, R. A., Takahashi, H., Shimizu, H., Akiyama, M. and Iizuka, H. (2002) J. Invest. Dermatol., 118, 282-287
【非特許文献１８】Pritzker LB, Nguyen TA, Moscarello MA. (1997) The developmental expression and activity of peptidylarginine deiminase in the mouse. Neurosci Lett.266, 161-164
【非特許文献１９】Moscarello MA, Pritzker L, Mastronardi FG, Wood DD. Peptidylarginine deiminase: a candidate factor in demyelinating disease. J Neurochem. 81, 335-43
【非特許文献２０】Rogers, G., Winter, B., McLaughlan, C., Powell, B. and Nesci, T. (1997) J. Invest. Dermatol., 108, 700-707
【非特許文献２１】Ohsawa, T., Ishigami, A., Akiyama, K. and Asaga, H. (2001) Biomed. Res., 22, 91-97Pritzker, L. B., Nguyen, T. A. and Moscarello, M. A. (1999) Neurosci. Lett., 266, 161-164
【非特許文献２２】Hagiwara, T., Nakashima, K., Hirano, H., Senshu, T. and Yamada, M. (2002) Biochem. Biophys. Res. Commun. 290, 979-983
【非特許文献２３】Nakashima K, Hagiwara T, Yamada M. (2002) Nuclear localization of peptidylarginine deiminase V and histone deimination in granulocytes. J. Biol. Chem., 277, 49562-49568
【非特許文献２４】Suzuki, A., Yamada, R., Chang, X., Tokuhiro, S., Sawada, T., Suzuki, M., Nagasaki, M., Nakayama-Hamada, M., Kawaida, R., Ono, M., Ohtsuki, M., Furukawa, H., Yoshino, S., Yukioka, M., Tohma, S., Matsubara, T., Wakitani, S., Teshima, R., Nishioka, Y., Sekine, A., Iida, A., Takahashi, A., Tsunoda, T., Nakamura, Y. and Yamamoto, K. (2003) Functional haplotypes of PADI4, encoding citrullinating enzyme peptidylarginine deiminase 4, are associated with rheumatoid arthritis. Nature Genetics, 34, 395-402
【非特許文献２５】Wright, P.W. et al. (2003) ePAD, an oocyte and early embryo-abundant peptidylarginine deiminase-like protein that localizes to egg cytoplasmic sheets. Dev Biol. 256, 74-89
【非特許文献２６】Chavanas, S. et al. (2004) Comparative analysis of the mouse and human peptidylarginine deiminase gene clusters reveals highly conserved non-coding segments and a new human gene, PADI6. Gene 330, 19-27
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
本発明は、PAD4の酵素活性を阻害する新たな物質をデザインし、リウマチ性関節炎に対する新薬を開発することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
本発明者らは、カルシウム非存在下でのPAD4（以下、Ca2+-free PAD4と記すこともある。）の立体構造と、活性残基の１つであるCys645をAlaに置換して不活性化した変異体（C645A）にカルシウムイオンを結合させたもの（以下、Ca2+-bound PAD4 (C645A)と記すこともある。）及び、活性残基の１つであるCys645をAlaに置換して不活性化した変異体（C645A）にカルシウムイオンと基質（benzoyl-L-arginine amide：BA, benzoyl-L-arginine ethylester:BAEE, benzol-glycyl-L-arginine:BGA, KQTARKSTGG:H3 peptide 1, KAPRKQLATK:H3 peptide 2及びSGRGKGGKGL:H4 peptide）を結合させた複合体（以下、それぞれ、Ca2+-bound PAD4 (C645A)-BA complex, Ca2+-bound PAD4 (C645A)-BAEE complex, Ca2+-bound PAD4 (C645A)-BGA complex, Ca2+-bound PAD4 (C645A)-H3 peptide 1 complex, Ca2+-bound PAD4 (C645A)-H3 peptide 2 complex, Ca2+-bound PAD4 (C645A)-H4 peptide complexと記すこともある。）の立体構造をX線結晶構造解析法によってそれぞれ分解能2.80オングストローム、2.60オングストローム、2.30オングストローム、2.20オングストローム、2.25オングストローム、2.10オングストローム、2.10オングストローム、2.25オングストロームで決定した（特願2003-358459号及び特願2004-259125号）。構造解析された８つの立体構造はカルシウム結合部位を含む活性部位近辺を除きほとんど同じであった。PAD4はブーツ型の細長い形をしており、結晶格子内の最近接分子と結晶学的な2回軸で関係付けられて機能的な2量体を形成していた。PAD4分子はN末端ドメインとC末端ドメインの２つに分けることができるが、N末端ドメインはさらに２つのサブドメインに分けられ、２つのサブドメインを合わせた構造は免疫グロブリン様の構造をとるT-cell surface glycoprotein CD4に類似するとともに、１つのサブドメインの構造はさらにp53のDNA結合ドメインとも類似していた。一方、C末端ドメインは５つのββαβプロペラ構造から構成され、その中心部に負に帯電した大きな溝が存在していた。溝の内部には活性残基であるAsp350, His471, Asp473, Cys645とカルシウムイオンが２つ存在し、活性残基部位近辺の構造はamidinotransferase（AT）とN(G), N(G)-dimetyl-L-arginine amidinohydroraseと類似していた。カルシウムイオンが存在しないPAD4と活性残基近辺の構造を比較すると、２つのカルシウムイオンが負に帯電した大きな溝に結合することによりC645（A645）およびAsp350近傍の構造が大きく変化してクレフトが形成され、そこに基質が結合することが明らかとなった。また、いずれのカルシウムイオンの結合様式もよく知られているEFハンドモチーフとは明らかに異なっていた。以上の結果から、PAD4はアルギニン修飾酵素のスーパーファミリーに属するタンパク質であるが、活性部位の２つのカルシウムイオンが触媒活性を制御し、その結合様式はカルシウム結合モチーフとして知られているEFハンドモチーフをもつタンパク質とは異なるので、これまでないまったく新しいカルシウムイオンによる酵素の活性化機構を有するタンパク質であることが明らかとなった。【０００８】
ところで、白井らはプログラムPSI-BLAST、FUGUEによってアルギニンprocessing enzymeが共通のフォールドを持つことを推測し、アルギニンの脱イミノ化の反応機構を提唱した(Shirai, H., Blundell, T. L. and Mizuguchi, K. (2001) A novel superfamily of enzymes that catalyze the modification of guanidino groups. TIBS, 26, 465-468)。さらに、DasらはMycoplasma arginini由来のアルギニンデイミナーゼと反応中間体との複合体のX線結晶構造解析を行い、L-アルギニンの脱イミノ化の反応機構を提唱した（Das et al. (2004) Crystal structures of arginine deiminase with covalent reaction intermediates: Implication for catalytic mechanism）。本発明者らのBA-Ca2+ PAD4（C645A）の構造解析により、ペプチジルアルギニン（PAD4の反応基質）の脱イミノ化反応のメカニズムにおける基質認識機構がDasらによって提唱されたモデルと一致していることが示されたので、PAD4によるタンパク質の脱イミノ化反応はDasらによって提唱されている2段階の反応機構、すなわち、第1段階では、Cys645のチオール基がペプチジルアルギニンのグアニジノ基の炭素Cζを求核攻撃してtetrahedral adductが形成され、その後、Asp350とAsp473が基質と水素結合及び塩橋を形成することによってグアニジノ基の炭素Cζの求核性が高められ、グアニジノ基のCζとNh2の間の結合が切断されてアンモニアが生成する。そして、第2段階では、His471によって活性化された水分子がCζを求核攻撃して再度tetrahedral adductが形成された後、CζとCys645の硫黄原子Sγの間の結合が開裂してペプチジルシトルリン残基（PAD4の反応生成物）が生ずるものと考えられる。本発明者らが提唱するPAD4の脱イミノ化反応機構を図１に示す。【０００９】
以上の知見に基づき、本発明者らは、PAD4の酵素活性を阻害する新たな化合物を設計および作製して、PAD4阻害活性を測定した。その結果、これらの化合物がPAD4阻害活性を有することを見出し、本発明を完成させるに至った。【００１０】
本発明の要旨は以下の通りである。【００１１】
（１）  下記の一般式(I)で表される化合物またはその塩。【００１２】
【化７】
2005075414.tif 000002
（式中、Ｒ1、Ｒ2およびＲ3は、それぞれ独立に、水素原子または炭素数１〜３のアルキル基であるが、ただし、Ｒ1、Ｒ2およびＲ3のうちの少なくとも１つは水素原子ではなく、Ｒ4は置換基を有するアミノ基であり、Ｒ5は置換基を有してもよいカルボキシル基である）
（２）  Ｒ4が、下記の式【００１３】
【化８】
2005075414.tif 000003
（式中、Ｒ41は、Ｒ401ＣＯ−〔式中、Ｒ401は、水素原子、置換基を有してもよい炭化水素基または置換基を有してもよい複素環基である〕で表される基、Ｒ402Ｓ(Ｏ)m−〔式中、Ｒ402は、水素原子、置換基を有してもよい炭化水素基または置換基を有してもよい複素環基であり、mは１または２の整数である〕で表される基、Ｒ405Ｎ(Ｒ406)−ＣＨＲ404−ＣＯ−[ＮＨ−ＣＨＲ403−ＣＯ］n−〔式中、Ｒ403, Ｒ404, Ｒ405およびＲ406は、それぞれ独立に、水素原子、置換基を有してもよい炭化水素基または置換基を有してもよい複素環基であり、nは１〜50のいずれかの整数である〕で表される基または置換基を有してもよいペプチジル基、Ｒ42は水素原子または炭素数１〜３のアルキル基である）で表される基である（１）記載の化合物またはその塩。【００１４】
（３）  Ｒ41が、置換基を有してもよいベンゾイル基、置換基を有してもよいベンゾイルペプチジル基、置換基を有してもよいダンシル基または置換基を有してもよいダンシルペプチジル基であり、Ｒ42が水素原子である（２）記載の化合物またはその塩。【００１５】
（４）  Ｒ1、Ｒ2およびＲ3は、それぞれ独立に、水素原子またはメチル基であるが、ただし、Ｒ1、Ｒ2およびＲ3のうちの少なくとも１つはメチル基である（１）〜（３）のいずれかに記載の化合物またはその塩。【００１６】
（５）  下記の(Ia)、(Ib)または(Ic)で表される化合物またはその塩である（４）記載の化合物またはその塩。【００１７】
【化９】
2005075414.tif 000004
【００１８】
【化１０】
2005075414.tif 000005
【００１９】
【化１１】
2005075414.tif 000006
（６）  下記のスキームで表される、配列番号１のアミノ酸配列を有するペプチジルアルギニンデイミナーゼ４とその反応基質との反応機構における工程１〜５のいずれかを阻害することができる物質を有効成分として含有するペプチジルアルギニンデイミナーゼ４阻害剤。【００２０】
【化１２】
2005075414.tif 000007
（スキーム中、Asp350, His471, Asp473及びCys645は、それぞれ、配列番号１のアミノ酸配列における３５０位のアスパラギン酸残基、４７１位のヒスチジン残基、４７３位のアスパラギン酸残基及び６４５位のシステイン残基を表す）
（７）  配列番号１のアミノ酸配列を有するペプチジルアルギニンデイミナーゼ４とその反応基質との反応機構における工程１〜５のいずれかを阻害することができる物質がアルギニン誘導体である（６）記載のペプチジルアルギニンデイミナーゼ４阻害剤。【００２１】
（８）  アルギニンのアミノ基およびグアニジノ基が置換基を有し、アルギニンのカルボキシル基が置換基を有してもよいアルギニン誘導体を有効成分として含有するペプチジルアルギニンデイミナーゼ４阻害剤。【００２２】
（９）  アルギニン誘導体が（１）〜（５）のいずれかに記載の化合物またはその塩である（７）または（８）記載のペプチジルアルギニンデイミナーゼ４阻害剤。【００２３】
（１０）  ペプチジルアルギニンデイミナーゼが関与する疾患を予防および／または治療するために用いられる（６）〜（９）のいずれかに記載のペプチジルアルギニンデイミナーゼ４阻害剤。【００２４】
（１１）  ペプチジルアルギニンデイミナーゼが関与する疾患が、関節リウマチ、乾癬及び多発性硬化症からなる群より選択される（１０）記載のペプチジルアルギニンデイミナーゼ４阻害剤。【００２５】
本明細書において、「ペプチジルアルギニンデイミナーゼ４」とは、配列番号１のアミノ酸配列を有する野生型ペプチジルアルギニンデイミナーゼ４のことであり、同様の生物学的活性（すなわち、カルシウムイオン存在下でタンパク質中のアルギニン残基を脱イミノ化してシトルリン残基に変換する反応を触媒する酵素活性）を有し、かつ、配列番号１のアミノ酸配列と相同のアミノ酸配列をもつものも包含する。【００２６】
また、本明細書において、Bocはt-ブトキシ基、Argはアルギニン、Tosはp-トルエンスルフォニル、Meはメチル基、ADMAはNG,NG-ジメチル-L-アルギニン、SDMAはNG,N’G-ジメチル-L-アルギニン、Bzはベンゾイル基を表す。【００２７】
なお、本明細書において、「〜」はその前後に記載される数値をそれぞれ最小値および最大値として含む範囲を示す。【００２８】
以下、本発明を詳細に説明する。【００２９】
１．一般式(I)で表される化合物またはその塩
本発明は、一般式(I)で表される化合物またはその塩を提供する。【００３０】
【化１３】
2005075414.tif 000008
一般式(I)で表される化合物またはその塩は、L体、D体、DL体のいずれであってもよいが、L体が効果的である。【００３１】
一般式(I)において、Ｒ1、Ｒ2およびＲ3は、それぞれ独立に、水素原子または炭素数１〜３のアルキル基であるが、ただし、Ｒ1、Ｒ2およびＲ3のうちの少なくとも１つは水素原子ではない。炭素数１〜３のアルキル基としては、メチル基、エチル基、ｎ−プロピル基、ｉ−プロピル基を挙げることができる。【００３２】
Ｒ1、Ｒ2およびＲ3が、それぞれ独立に、水素原子またはメチル基であるが、ただし、Ｒ1、Ｒ2およびＲ3のうちの少なくとも１つはメチル基であることが好ましい。【００３３】
一般式(I)において、Ｒ4は置換基を有するアミノ基である。Ｒ4のアミノ基に付加される置換基は、その置換基を有する化合物がPAD4に認識される（すなわち、PAD4と相互作用する）限り、いかなるものであってもよいが、Ｒ4のアミノ基の窒素に直接結合する原子にオキソ基（＝Ｏ）が結合しているものが好ましい。Ｒ4の一例として、下記の式で表される基を挙げることができる。【００３４】
【化１４】
2005075414.tif 000009
上式において、Ｒ41は、Ｒ401ＣＯ−〔式中、Ｒ401は、水素原子、置換基を有してもよい炭化水素基または置換基を有してもよい複素環基である〕で表される基、Ｒ402Ｓ(Ｏ)m−〔式中、Ｒ402は、水素原子、置換基を有してもよい炭化水素基または置換基を有してもよい複素環基であり、mは１または２の整数である〕で表される基、Ｒ405Ｎ(Ｒ406)−ＣＨＲ404−ＣＯ−[ＮＨ−ＣＨＲ403−ＣＯ］n−〔式中、Ｒ403, Ｒ404, Ｒ405およびＲ406は、それぞれ独立に、水素原子、置換基を有してもよい炭化水素基または置換基を有してもよい複素環基であり、nは１〜50のいずれかの整数である〕で表される基または置換基を有してもよいペプチジル基であり、Ｒ42は水素原子または炭素数１〜３のアルキル基である。Ｒ405Ｎ(Ｒ406)−ＣＨＲ404−ＣＯ−で表される基及び−ＮＨ−ＣＨＲ403−ＣＯ−で表される基としては、天然のタンパク質やペプチド中に存在するアミノ酸残基を例示することができる。Ｒ41のペプチジル基の置換基としては、ベンゾイル基、ダンシル基などを挙げることができ、このベンゾイル基、ダンシル基などはさらに置換基を有してもよい。ベンゾイル基、ダンシル基などの置換基としては、ハロゲン原子（例えば、フッ素，塩素，臭素，ヨウ素など）、水酸基、炭素数１〜６のアルコキシ基（例えば、メトキシ、エトキシ、プロポキシ、ブトキシ、ペントキシなど）、アミノ基、カルバモイル基、炭素数１〜６のアルコキシカルボニル基（例えば、メトキシカルボニル，エトキシカルボニル，プロポキシカルボニルなど）、複素環基（複素環基の複素環としては、１個の硫黄原子、窒素原子または酸素原子を含む５〜７員環、２〜４個の窒素原子を含む５〜６員環、１〜２個の窒素原子および１個の硫黄原子または酸素原子を含む５〜６員環などを挙げることができ、これらの複素環は１〜２個の窒素原子を含む６員環、ベンゼン環または１個の硫黄原子を含む５員環と縮合していてもよく、複素環基の具体例としては、２−ピリジル、３−ピリジル、４−ピリジル、ピリミジル、ピラジニル、ピリダジニル、ピラゾリル、イミダゾリル、チアゾリル、イソチアゾリル、オキサゾリル、イソオキサゾリル、ピリド［２，３−ｄ］ピリミジル、ベンゾピラニル、１，８−ナフチリジル、１，５−ナフチリジル、１，６−ナフチリジル、１，７−ナフチリジル、キノリル、チエノ［２，３−b]ピリジル、テトラゾリル、チアジアゾリル、オキサジアゾリル、トリアジニル、トリアゾリル、チエニル、ピロリル、ピロリニル、フリル、ピロリジニル、ベンゾチエニル、インドリル、イミダゾリジニル、ピペリジル、ピペリジノ、ピペラジニル、モルホリニル、モルホリノなどを挙げることができる）などを挙げることができる。アミノ基は炭素数１〜６のアルキル基や炭素数１〜１０のアシル基で置換されていてもよい。また、カルバモイル基は、炭素数１〜６のアルキル基で置換されていてもよい。【００３５】
Ｒ401、Ｒ402、Ｒ403、Ｒ404、Ｒ405およびＲ406の炭化水素基としては、飽和鎖式炭化水素基（例えば、炭素数１〜6の直鎖状および分枝状アルキル基など）、不飽和鎖式炭化水素基（例えば、炭素数１〜6の直鎖状および分枝状アルケニル基、炭素数１〜6の直鎖状および分枝状アルキニル基など）、脂環式炭化水素基（例えば、炭素数１〜6のシクロアルキル基、炭素数１〜6のシクロアルケニル基、炭素数１〜6のシクロアルキニル基など）、芳香族炭化水素基（例えば、フェニル基、ナフチル基、アントリル基、フェナントリル基など）を挙げることができる。【００３６】
Ｒ401、Ｒ402、Ｒ403、Ｒ404、Ｒ405およびＲ406が置換基を有してもよい炭化水素基である場合の置換基としては、ハロゲン原子（例えば、フッ素，塩素，臭素，ヨウ素など）、水酸基、炭素数１〜６のアルコキシ基（例えば、メトキシ、エトキシ、プロポキシ、ブトキシ、ペントキシなど）、アミノ基、カルバモイル基、炭素数１〜６のアルコキシカルボニル基（例えば、メトキシカルボニル，エトキシカルボニル，プロポキシカルボニルなど）、複素環基（複素環基の複素環としては、１個の硫黄原子、窒素原子または酸素原子を含む５〜７員環、２〜４個の窒素原子を含む５〜６員環、１〜２個の窒素原子および１個の硫黄原子または酸素原子を含む５〜６員環などを挙げることができ、これらの複素環は１〜２個の窒素原子を含む６員環、ベンゼン環または１個の硫黄原子を含む５員環と縮合していてもよく、複素環基の具体例としては、２−ピリジル、３−ピリジル、４−ピリジル、ピリミジル、ピラジニル、ピリダジニル、ピラゾリル、イミダゾリル、チアゾリル、イソチアゾリル、オキサゾリル、イソオキサゾリル、ピリド［２，３−ｄ］ピリミジル、ベンゾピラニル、１，８−ナフチリジル、１，５−ナフチリジル、１，６−ナフチリジル、１，７−ナフチリジル、キノリル、チエノ［２，３−b]ピリジル、テトラゾリル、チアジアゾリル、オキサジアゾリル、トリアジニル、トリアゾリル、チエニル、ピロリル、ピロリニル、フリル、ピロリジニル、ベンゾチエニル、インドリル、イミダゾリジニル、ピペリジル、ピペリジノ、ピペラジニル、モルホリニル、モルホリノなどを挙げることができる）などを挙げることができる。アミノ基は炭素数１〜６のアルキル基や炭素数１〜１０のアシル基で置換されていてもよい。また、カルバモイル基は、炭素数１〜６のアルキル基で置換されていてもよい。【００３７】
Ｒ401、Ｒ402、Ｒ403、Ｒ404、Ｒ405およびＲ406の複素環基における複素環としては、１個の硫黄原子、窒素原子または酸素原子を含む５〜７員環、２〜４個の窒素原子を含む５〜６員環、１〜２個の窒素原子および１個の硫黄原子または酸素原子を含む５〜６員環などを挙げることができ、これらの複素環は１〜２個の窒素原子を含む６員環、ベンゼン環または１個の硫黄原子を含む５員環と縮合していてもよい。複素環基の具体例としては、２−ピリジル、３−ピリジル、４−ピリジル、ピリミジル、ピラジニル、ピリダジニル、ピラゾリル、イミダゾリル、チアゾリル、イソチアゾリル、オキサゾリル、イソオキサゾリル、ピリド［２，３−ｄ］ピリミジル、ベンゾピラニル、１，８−ナフチリジル、１，５−ナフチリジル、１，６−ナフチリジル、１，７−ナフチリジル、キノリル、チエノ［２，３−b]ピリジル、テトラゾリル、チアジアゾリル、オキサジアゾリル、トリアジニル、トリアゾリル、チエニル、ピロリル、ピロリニル、フリル、ピロリジニル、ベンゾチエニル、インドリル、イミダゾリジニル、ピペリジル、ピペリジノ、ピペラジニル、モルホリニル、モルホリノなどを挙げることができる。【００３８】
Ｒ401、Ｒ402、Ｒ403、Ｒ404、Ｒ405およびＲ406が置換基を有してもよい複素環基である場合の置換基としては、ハロゲン原子（例えば、フッ素，塩素，臭素，ヨウ素など）、水酸基、炭素数１〜６のアルキル基（例えば、メチル基、エチル基、ｎ−プロピル基、ｉ−プロピル基など）、炭素数１〜６のアルコキシ基（例えば、メトキシ、エトキシ、プロポキシ、ブトキシ、ペントキシなど）、アミノ基、カルバモイル基、炭素数１〜６のアルコキシカルボニル基（例えば、メトキシカルボニル，エトキシカルボニル，プロポキシカルボニルなど）、上記の複素環などを挙げることができる。アミノ基は炭素数１〜６のアルキル基や炭素数１〜１０のアシル基で置換されていてもよい。また、カルバモイル基は、炭素数１〜６のアルキル基で置換されていてもよい。【００３９】
Ｒ42の炭素数１〜３のアルキル基としては、メチル基、エチル基、ｎ−プロピル基、ｉ−プロピル基を挙げることができる。【００４０】
Ｒ41が、置換基を有してもよいベンゾイル基、置換基を有してもよいベンゾイルペプチジル基、置換基を有してもよいダンシル基または置換基を有してもよいダンシルペプチジル基であり、Ｒ42が水素原子であることが好ましい。
一般式(I)において、Ｒ5は置換基を有してもよいカルボキシル基である。Ｒ5が置換基を有するカルボキシル基である場合の置換基はいかなるものであってもよい。例えば、PAD4に対する阻害活性を上げるためには、Ｒ5は、−ＣＯＯＲ51（式中、Ｒ51は炭素数１〜２０のアルキル基である）で表される基、-COO-{Ｒ54Ｎ(Ｒ55)−ＣＨＲ53−ＣＯ−[ＮＨ−ＣＨＲ52−ＣＯ］p−}〔式中、Ｒ52, Ｒ53, Ｒ54およびＲ55は、それぞれ独立に、水素原子、置換基を有してもよい炭化水素基または置換基を有してもよい複素環基であり、pは１〜50のいずれかの整数である〕で表される基などであるとよい。Ｒ54Ｎ(Ｒ55)−ＣＨＲ53−ＣＯ−で表される基及び−ＮＨ−ＣＨＲ52−ＣＯ−で表される基としては、天然のタンパク質やペプチド中に存在するアミノ酸残基を例示することができる。
Ｒ51のアルキル基は、炭素数１〜２０の直鎖状および分枝状アルキル基のいずれでもよく、具体的には、メチル基、エチル基、ｎ−プロピル基、ｉ−プロピル基、ｎ−ブチル、ｉ−ブチル、sec−ブチル、tert−ブチル、ペンチル、イソペンチル、ネオペンチル、ヘキシル、ヘプチル、オクチル、ノニル、デシルなどを挙げることができる。
Ｒ52、Ｒ53、Ｒ54およびＲ55の炭化水素基としては、飽和鎖式炭化水素基（例えば、炭素数１〜６の直鎖状および分枝状アルキル基など）、不飽和鎖式炭化水素基（例えば、炭素数１〜６の直鎖状および分枝状アルケニル基、炭素数１〜６の直鎖状および分枝状アルキニル基など）、脂環式炭化水素基（例えば、炭素数１〜６のシクロアルキル基、炭素数１〜６のシクロアルケニル基、炭素数１〜６のシクロアルキニル基など）、芳香族炭化水素基（例えば、フェニル基、ナフチル基、アントリル基、フェナントリル基など）を挙げることができる。
Ｒ52、Ｒ53、Ｒ54およびＲ55が置換基を有してもよい炭化水素基である場合の置換基としては、ハロゲン原子（例えば、フッ素，塩素，臭素，ヨウ素など）、水酸基、炭素数１〜６のアルコキシ基（例えば、メトキシ、エトキシ、プロポキシ、ブトキシ、ペントキシなど）、アミノ基、カルバモイル基、炭素数１〜６のアルコキシカルボニル基（例えば、メトキシカルボニル，エトキシカルボニル，プロポキシカルボニルなど）、複素環基（複素環基の複素環としては、１個の硫黄原子、窒素原子または酸素原子を含む５〜７員環、２〜４個の窒素原子を含む５〜６員環、１〜２個の窒素原子および１個の硫黄原子または酸素原子を含む５〜６員環などを挙げることができ、これらの複素環は１〜２個の窒素原子を含む６員環、ベンゼン環または１個の硫黄原子を含む５員環と縮合していてもよく、複素環基の具体例としては、２−ピリジル、３−ピリジル、４−ピリジル、ピリミジル、ピラジニル、ピリダジニル、ピラゾリル、イミダゾリル、チアゾリル、イソチアゾリル、オキサゾリル、イソオキサゾリル、ピリド［２，３−ｄ］ピリミジル、ベンゾピラニル、１，８−ナフチリジル、１，５−ナフチリジル、１，６−ナフチリジル、１，７−ナフチリジル、キノリル、チエノ［２，３−b]ピリジル、テトラゾリル、チアジアゾリル、オキサジアゾリル、トリアジニル、トリアゾリル、チエニル、ピロリル、ピロリニル、フリル、ピロリジニル、ベンゾチエニル、インドリル、イミダゾリジニル、ピペリジル、ピペリジノ、ピペラジニル、モルホリニル、モルホリノなどを挙げることができる）などを挙げることができる。アミノ基は炭素数１〜６のアルキル基や炭素数１〜１０のアシル基で置換されていてもよい。また、カルバモイル基は、炭素数１〜６のアルキル基で置換されていてもよい。
Ｒ52、Ｒ53、Ｒ54およびＲ55の複素環基における複素環としては、１個の硫黄原子、窒素原子または酸素原子を含む５〜７員環、２〜４個の窒素原子を含む５〜６員環、１〜２個の窒素原子および１個の硫黄原子または酸素原子を含む５〜６員環などを挙げることができ、これらの複素環は１〜２個の窒素原子を含む６員環、ベンゼン環または１個の硫黄原子を含む５員環と縮合していてもよい。複素環基の具体例としては、２−ピリジル、３−ピリジル、４−ピリジル、ピリミジル、ピラジニル、ピリダジニル、ピラゾリル、イミダゾリル、チアゾリル、イソチアゾリル、オキサゾリル、イソオキサゾリル、ピリド［２，３−ｄ］ピリミジル、ベンゾピラニル、１，８−ナフチリジル、１，５−ナフチリジル、１，６−ナフチリジル、１，７−ナフチリジル、キノリル、チエノ［２，３−b]ピリジル、テトラゾリル、チアジアゾリル、オキサジアゾリル、トリアジニル、トリアゾリル、チエニル、ピロリル、ピロリニル、フリル、ピロリジニル、ベンゾチエニル、インドリル、イミダゾリジニル、ピペリジル、ピペリジノ、ピペラジニル、モルホリニル、モルホリノなどを挙げることができる。
Ｒ52、Ｒ53、Ｒ54およびＲ55が置換基を有してもよい複素環基である場合の置換基としては、ハロゲン原子（例えば、フッ素，塩素，臭素，ヨウ素など）、水酸基、炭素数１〜６のアルキル基（例えば、メチル基、エチル基、ｎ−プロピル基、ｉ−プロピル基など）、炭素数１〜６のアルコキシ基（例えば、メトキシ、エトキシ、プロポキシ、ブトキシ、ペントキシなど）、アミノ基、カルバモイル基、炭素数１〜６のアルコキシカルボニル基（例えば、メトキシカルボニル，エトキシカルボニル，プロポキシカルボニルなど）、上記の複素環基などを挙げることができる。アミノ基は炭素数１〜６のアルキル基や炭素数１〜１０のアシル基で置換されていてもよい。また、カルバモイル基は、炭素数１〜６のアルキル基で置換されていてもよい。
一般式(I)で表される化合物の具体例として、下記の(Ia)、(Ib)または(Ic)で表される化合物を挙げることができる。【００４１】
【化１５】
2005075414.tif 000010
【００４２】
【化１６】
2005075414.tif 000011
【００４３】
【化１７】
2005075414.tif 000012
式(Ia)で表される化合物はBz-Arg(mono-methyl)である。式(Ib)で表される化合物はBz-ADMAである。式(Ic)で表される化合物はBz-SDMAである。
一般式(I)で表される化合物は、市販のアルギニンまたは下記の構造式で表されるアルギニン誘導体を出発物質として合成することができる。【００４４】
【化１８】
2005075414.tif 000013
（式中、Ｒ1、Ｒ2およびＲ3は、それぞれ独立に、水素原子または炭素数１〜３のアルキル基であるが、ただし、Ｒ1、Ｒ2およびＲ3のうちの少なくとも１つは水素原子ではない）
一般式(I)において、Ｒ4がＲ401−ＣＯ−ＮＨ−（式中、Ｒ401は、水素原子、置換基を有してもよい炭化水素基または置換基を有してもよい複素環基である）で表される基であり、Ｒ5がカルボキシル基である化合物は、出発物質である上記のアルギニンまたはアルギニン誘導体をＲ401ＣＯ-Ｏ-ＣＯＲ401で表される酸対称無水物でのアシル化またはBz2O（安息香酸無水物、benzoic anhydride）でベンゾイル化することにより製造することができる。ベンゾイル化反応は公知の方法で行うことができる。例えば、不活性溶媒中で、塩基の存在下に、ベンゾイル化反応を行うとよい。この反応に用いられる不活性溶媒としては、例えば、ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）、ジメチルスルフォキシド（DMSO）,テトラヒドロフラン（THF）などと水あるいはこれらの混合物などを挙げることができる。また、塩基としては、炭酸水素ナトリウムあるいは炭酸水素カリウムを用い、アルギニン側鎖のグアニジノ骨格のpKaが約12であることを考慮し、反応溶液のpHが約10以下になるようにする。反応温度は約０〜３７℃が適当であり、反応時間は約１０分〜約２４時間が適当である。Bz2Oの使用量はアルギニンまたはアルギニン誘導体（出発物質）の１モルに対して約１〜１．２モルが適当である。
一般式(I)において、Ｒ4がＲ402−Ｓ(Ｏ)m−ＮＨ−（式中、Ｒ402は、水素原子、置換基を有してもよい炭化水素基または置換基を有してもよい複素環基であり、mは１または２の整数である）で表される基であり、Ｒ5がカルボキシル基である化合物は、例えばm=2の場合、出発物質である上記のアルギニンまたはアルギニン誘導体をDNS-Cl(ダンシルクロリド)でダンシル化することにより製造することができる。ダンシル化反応は公知の方法で行うことができる（B.S. Hartley, V. Massey, Biochim. Biophys. Acta, 21, 58 (1956)）。例えば、不活性溶媒中で、塩基の存在下に、ダンシル化反応を行うとよい。この反応に用いられる不活性溶媒としては、例えば、アセトン、ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）、ジメチルスルフォキシド（DMSO）,テトラヒドロフラン（THF）などと水あるいはこれらの混合物などを挙げることができる。また、塩基としては、炭酸水素ナトリウムあるいは炭酸水素カリウムを用い、アルギニン側鎖のグアニジノ骨格のpKaが約12であることを考慮し、反応溶液のpHが約10以下になるようにする。反応温度は約０〜３７℃が適当であり、反応時間は約１０分〜約２４時間が適当である。DNS-Clの使用量は、アルギニンまたはアルギニン誘導体（出発物質）の１モルに対して約１〜１．２モルが適当であり、濃度を5 mM付近にするのがのぞましい。
一般式(I)において、Ｒ4がＲ405Ｎ(Ｒ406)−ＣＨＲ404−ＣＯ−[ＮＨ−ＣＨＲ403−ＣＯ］n−ＮＨ−〔式中、Ｒ403, Ｒ404, Ｒ405およびＲ406は、それぞれ独立に、水素原子、置換基を有してもよい炭化水素基または置換基を有してもよい複素環基であり、nは１〜50のいずれかの整数である〕で表される基であり、Ｒ5がカルボキシル基である化合物は、たとえば以下の方法により合成することができる。まず、出発物質である上記のアルギニンまたはアルギニン誘導体を、ベンゾイル化と同様に、Boc2O（t-ブチルオキシカルボニル酸対象無水物）によりBoc化する。得られたBoc-Argあるいはその誘導体を公知の方法を用い（J. Ramachandran, C.H. Li, J. Org. Chem., 27, 4006 (1962)）、p-トルエンスルフォニルクロリドにより、側鎖のグアニジノ基をトシル化する。この誘導体を用いることで、公知の方法(ノーベル化学賞受賞)であるペプチドの固相合成法により（R.B. Merrifield, J. Am. Chem. Soc., 85, 2149 (1963)）、上記ペプチドを得ることが可能である。
一般式(I)において、Ｒ4がＲ41−ＮＨ−〔式中、Ｒ41は置換基を有してもよいベンゾイルペプチジル基である〕であり、Ｒ5がカルボキシル基である化合物は、たとえば以下の方法により合成することができる。
まず、既知の方法であるFmoc固相合成法(Atherton, E. and Sheppard, R.C.,1989, Solid Phase Peptide Synthesis. A Practical Approach., IPF Press, Oxford, UK)を用いてペプチド鎖を合成する。ただし、この時に用いるAsp, GluにはFmoc-Asp(OcHex), Fmoc-Glu(OcHex)、Lys,ArgにはFmoc-Lys(Cl-Z),Fmoc-Arg(Tos)のように側鎖カルボキシル基がTFAで切断を受けずHFで切断されるものを用いる。最後のN末端アミノ酸のFmoc基を除去した後、前述のように、Bz2O（安息香酸無水物）を用いて公知の方法によりベンゾイル化をおこなう。次に、ethanedithiol,thioanisoleなどのスカベンジャー試薬の存在下で目的ペプチド樹脂をTFAで処理し、遊離する目的ペプチドをHPLC等で精製する。次に、この遊離ペプチドをDMF等の溶媒に溶解し、氷冷下、1-ethyl-3-(3-dimethylaminopropyl)carbodiimideを1等量加えて、ペプチドの無水物の生成後、ArgあるいはArg誘導体を加える。また、この時に加える塩基としては、炭酸水素ナトリウムあるいは炭酸水素カリウムを用い、アルギニン側鎖のグアニジノ骨格のpKaが約12であることを考慮し、反応溶液のpHが約10以下になるようにする。反応温度は約０〜３７℃が適当であり、反応時間は約１０分〜約２４時間が適当である。最後に、生成したペプチドをHF（無水フッ化水素）で処理し、ベンゾイル基以外のすべての保護基を除去し、精製する。
一般式(I)において、Ｒ4がＲ41−ＮＨ−〔式中、Ｒ41は置換基を有してもよいダンシルペプチジル基である〕であり、Ｒ5がカルボキシル基である化合物は、上記反応で、Fmoc基をはずしたあとにdansyl chlorideを加えることにより、ダンシル化し、あとは上記と同様の方法で合成することができる。
一般式(I)において、Ｒ4がＲ401−ＣＯ−ＮＲ42−（式中、Ｒ401は、水素原子、置換基を有してもよい炭化水素基または置換基を有してもよい複素環基である）で表される基であり、Ｒ5がカルボキシル基である化合物は、例えばＲ42がメチル基（ＣＨ3-）である場合、出発物質である上記のアルギニンまたはアルギニン誘導体のNα-metyl体をＲ401ＣＯ-Ｏ-ＣＯＲ401で表される酸対称無水物を用いることで製造することができる。例えば、不活性溶媒中で、塩基の存在下に、反応を行うとよい。この反応に用いられる不活性溶媒としては、例えば、ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）、ジメチルスルフォキシド（DMSO）,テトラヒドロフラン（THF）などと水あるいはこれらの混合物などを挙げることができる。また、塩基としては、炭酸水素ナトリウムあるいは炭酸水素カリウムを用い、アルギニン側鎖のグアニジノ骨格のpKaが約12であることを考慮し、反応溶液のpHが約10以下になるようにする。反応温度は約０〜３７℃が適当であり、反応時間は約１０分〜約２４時間が適当である。酸対称無水物の使用量は、アルギニンまたはアルギニン誘導体のNa-metyl体（出発物質）の１モルに対して約１〜１．２モルが適当である。
Ｒ42がメチル基（ＣＨ3-）である化合物の出発物質として、Boc-N-Me-Arg(Tos)-OHがBACHEM社で市販されている。これをトリフルオロ酢酸で処理して脱Boc反応を行い、N-Me-Arg(Tos)-OHを得ることができる（生化学実験講座１、タンパク質の化学IV-化学修飾とペプチド合成-,  p234, 日本生化学編、東京化学同人）。これを、酸対象無水物あるいはBz2Oを用いてmethyl体のα-アミノ基に様々な修飾を行うことができる。
側鎖グアノジニノ基がメチル化され、さらにα-アミノ基がメチル化されたものは、市販のArg(mono-methyl), ADMA, SDMAをBoc化し（T. Nagasawa, K. Kuroiwa, K. Narita, Y. Isowa, Bull. Chem. Soc. Jpn., 46, 1269 (1973)）、まず、Boc-Arg(mono-methyl), Boc-ADMA, Boc-SDMAを合成する。つぎに、メチル化された側鎖グアノジニノ基をさらにトシル化し（J. Ramachandran, C.H. Li, J. Org. Chem., 27, 4006 (1962)）、それぞれのトシル体であるBoc-Arg(mono-methyl,Tos), Boc-ADMA(Tos), Boc-SDMA(Tos)を調製する。これをトリフルオロ酢酸で処理して脱Boc反応を行い、Arg(mono-methyl,Tos), ADMA(Tos), SDMA(Tos)を調製する。これを出発物質とし、N-ベンジリデンアミノ酸にして還元することでN-ベンジル化物とし、ホルマリンとギ酸でメチル化後接触還元してベンジル基を除去することによりN-Me-Arg(mono-metyl,Tos), N-Me-ADMA(Tos), N-Me-SDMA(Tos)を得ることができる(P. Quitt, J. Hellerbach, K. Volger, Helv. Chim. Acta, 46, 327 (1963))。これを前述のように、HFで処理することにより（S. Sakakibara, Y. Shimonishi, Y. Kishida, M. Okada, H. Sugihara, Bull. Chem. Soc. Jpn, 40, 2164 (1967)）N-Me-Arg(mono-methyl), N-Me-ADMA, N-Me-SDMAを得ることができる。これらを出発物質として、酸対象無水物あるいはBz2Oを用いてmethyl体のα-アミノ基に様々な修飾を行うことができる。
一般式(I)において、Ｒ4がＲ402−Ｓ(Ｏ)m−ＮＲ42−（式中、Ｒ402は、水素原子、置換基を有してもよい炭化水素基または置換基を有してもよい複素環基であり、mは１または２の整数である）で表される基であり、Ｒ5がカルボキシル基である化合物は、例えばm=2の場合でＲ42がメチル基（ＣＨ3-）である場合、出発物質である上記のアルギニンまたはアルギニン誘導体のNa-metyl体をDNS-Cl(ダンシルクロリド)でダンシル化することにより製造することができる。ダンシル化反応は公知の方法で行うことができる（B.S. Hartley, V. Massey, Biochim. Biophys. Acta, 21, 58 (1956)）。例えば、不活性溶媒中で、塩基の存在下に、ダンシル化反応を行うとよい。この反応に用いられる不活性溶媒としては、例えば、アセトン、ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）、ジメチルスルフォキシド（DMSO）,テトラヒドロフラン（THF）などと水あるいはこれらの混合物などを挙げることができる。また、塩基としては、炭酸水素ナトリウムあるいは炭酸水素カリウムを用い、アルギニン側鎖のグアニジノ骨格のpKaが約12であることを考慮し、反応溶液のpHが約10以下になるようにする。反応温度は約０〜３７℃が適当であり、反応時間は約１０分〜約２４時間が適当である。DNS-Clの使用量は、アルギニンまたはアルギニン誘導体のNa-metyl体（出発物質）の１モルに対して約１〜１．２モルが適当であり、濃度を5 mM付近にするのがのぞましい。
一般式(I)において、Ｒ4がＲ405Ｎ(Ｒ406)−ＣＨＲ404−ＣＯ−[ＮＨ−ＣＨＲ403−ＣＯ］n−ＮＲ42−〔式中、Ｒ403, Ｒ404, Ｒ405およびＲ406は、それぞれ独立に、水素原子、置換基を有してもよい炭化水素基または置換基を有してもよい複素環基であり、nは１〜50のいずれかの整数である〕で表される基であり、Ｒ5がカルボキシル基である化合物は、例えばＲ42がメチル基（ＣＨ3-）である場合、出発物質である上記のアルギニンまたはアルギニン誘導体のNa-metyl体をベンゾイル化と同様に、Boc2O（t-ブチルオキシカルボニル酸対象無水物）によりBoc化する。得られたBoc-Argあるいはその誘導体のNa-metyl体を公知の方法を用い（J. Ramachandran, C.H. Li, J. Org. Chem., 27, 4006 (1962)）、p-トルエンスルフォニルクロリドにより、側鎖のグアニジノ基をトシル化する。この誘導体を用いることで、公知の方法(ノーベル化学賞受賞)であるペプチドの固相合成法により（R.B. Merrifield, J. Am. Chem. Soc., 85, 2149 (1963)）、上記ペプチドを得ることが可能である。
一般式(I)において、Ｒ4がＲ41−ＮＲ42−〔式中、Ｒ41は置換基を有してもよいベンゾイルペプチジル基である〕であり、Ｒ5がカルボキシル基である化合物は、例えばＲ42がメチル基（ＣＨ3-）である場合の合成法の一例を以下に記載する。
まず、既知の方法であるFmoc固相合成法(Atherton, E. and Sheppard, R.C.,1989, Solid Phase Peptide Synthesis. A Practical Approach., IPF Press, Oxford, UK)を用いてペプチド鎖を合成する。ただし、この時に用いるAsp, GluにはFmoc-Asp(OcHex), Fmoc-Glu(OcHex)、Lys,ArgにはFmoc-Lys(Cl-Z),Fmoc-Arg(Tos)のように側鎖カルボキシル基がTFAで切断を受けずHFで切断されるものを用いる。最後のN末端アミノ酸のFmoc基を除去した後、前述のように、Bz2O（安息香酸無水物）を用いて公知の方法によりベンゾイル化をおこなう。次に、ethanedithiol,thioanisoleなどのスカベンジャー試薬の存在下で目的ペプチド樹脂をTFAで処理し、遊離する目的ペプチドをHPLC等で精製する。次に、この遊離ペプチドをDMF等の溶媒に溶解し、氷冷下、1-ethyl-3-(3-dimethylaminopropyl)carbodiimideを1等量加えて、ペプチドの無水物の生成後、Na-metyl化したArgあるいはNa-metyl化したArg誘導体を加える。また、この時に加える塩基としては、炭酸水素ナトリウムあるいは炭酸水素カリウムを用い、アルギニン側鎖のグアニジノ骨格のpKaが約12であることを考慮し、反応溶液のpHが約10以下になるようにする。反応温度は約０〜３７℃が適当であり、反応時間は約１０分〜約２４時間が適当である。最後に、生成したペプチドをHF（無水フッ化水素）で処理し、ベンゾイル基以外のすべての保護基を除去し、精製する。
一般式(I)において、Ｒ4がＲ41−ＮＲ42−〔式中、Ｒ41は置換基を有してもよいダンシルペプチジル基である〕であり、Ｒ5がカルボキシル基である化合物は、例えばＲ42がメチル基（ＣＨ3-）である場合、上記反応で、Fmoc基をはずしたあとにdansyl chlorideを加えることにより、ダンシル化し、あとは上記と同様の方法で合成することができる。
Ｒ5のカルボキシル基に置換基を導入する方法について簡単に説明する。例えば、Ｒ5のカルボキシル基にアルキル基（例えばメチル基、エチル基）やベンジル基を導入する場合、公知の方法（H. Yajima, Y. Kiso, K. Kitagawa, Chem. Pharm. Bull., 22, 1079 (1974)およびM. Brenner, W. Huber, Helv. Chim. Acta, 36, 1109 (1953)）により、Argあるいはその誘導体のエステル化を行う。得られた物質を出発物質とし、上記のBz化反応等と同様にしてBz化等の反応をおこない、様々な化合物を合成することができる。
また、R5が-COO-[NR54-CHR53-CO-(NH-CHR52CO-)p]である場合の化合物の合成法を簡単に説明する。R54が水素の場合、まず、Merrifield樹脂（ポリスチレン樹脂）にＣ末端アミノ酸を結合させた保護アミノ酸樹脂をGisin法（B.F. Gisin, Helv. Chem.Acta, 56, 1476 (1973)）により調製する。この保護アミノ酸樹脂を出発物質としてp-1回のペプチド固相合成（R.B. Merrifield, J. Am. Chem. Soc., 85, 2149 (1963)）を繰り返し、さらにBoc-NR54-CHR53-COOHを縮合させる。次にBoc-Arg(Tos) (ペプチド研究所、大阪箕面)あるいはArg誘導体をp-トルエンスルフォニルクロリドにより、側鎖のグアニジノ基をTos化したもの（J. Ramachandran, C.H. Li, J. Org. Chem., 27, 4006 (1962)）を、ペプチド固相合成によりさらに連結させる。これをフッ化水素（ＨＦ）で処理することにより（S. Sakakibara, Y. Shimonishi, Y. Kishida, M. Okada, H. Sugihara, Bull. Chem. Soc. Jpn, 40, 2164 (1967)）、目的物を得ることができる。
また、R5が-COO-[NR54-CHR53-CO-(NH-CHR52CO-)p]であり、R54がメチル基の場合の化合は、前述の、N-Me-Arg(mono-methyl,Tos), N-Me-ADMA(Tos), N-Me-SDMA(Tos)をBoc化することでBoc-N-Me-Arg(mono-methyl,Tos), Boc-N-Me-ADMA(Tos), Boc-N-Me-SDMA(Tos)を調製し、これらを上述のペプチド固相合成により目的の位置に導入し、目的物を調製することができる。
一般式(I)で表される化合物が酸性官能基（例えば、カルボキシル基など） を有する場合、常法により塩基（例えば、薬学的に許容され得る塩基）との塩を形成させてもよい。このような塩としては、例えば、ナトリウム塩、カリウム塩、アルミニウム塩、カルシウム塩などを挙げることができる。一般式(I)で表される化合物が塩基性官能基（例えば、アミノ基、一置換アミノ基など）を含む場合、常法により酸（例えば、薬学的に許容され得る酸）との塩を形成させてもよい。このような塩としては、例えば、塩酸塩、硫酸塩、酢酸塩、フマル酸塩などを挙げることができる。
一般式(I)で表される化合物およびその塩は、ペプチジルアルギニンデイミナーゼ４阻害剤として利用することができる。
２．ペプチジルアルギニンデイミナーゼ４（PAD4）阻害剤
本発明は、下記のスキームで表される、配列番号１のアミノ酸配列を有するペプチジルアルギニンデイミナーゼ４とその反応基質との反応機構における工程１〜５のいずれかを阻害することができる物質を有効成分として含有するペプチジルアルギニンデイミナーゼ４阻害剤を提供する。【００４５】
【化１９】
2005075414.tif 000014
（スキーム中、Asp350, His471, Asp473及びCys645は、それぞれ、配列番号１のアミノ酸配列における３５０位のアスパラギン酸残基、４７１位のヒスチジン残基、４７３位のアスパラギン酸残基及び６４５位のシステイン残基を表す）
配列番号１のアミノ酸配列を有するペプチジルアルギニンデイミナーゼ４とその反応基質との反応機構における工程１〜５のいずれかを阻害することができる物質としては、アルギニン誘導体等を挙げることができる。アルギニン誘導体としては、アルギニンのアミノ基およびグアニジノ基が置換基を有し、アルギニンのカルボキシル基が置換基を有してもよいアルギニン誘導体を挙げることができ、具体的には、一般式(I)で表される化合物およびその塩を例示することができる。
また、配列番号１のアミノ酸配列を有するペプチジルアルギニンデイミナーゼ４とその反応基質との反応機構における工程１〜５のいずれかを阻害することができる物質は、ペプチジルアルギニンデイミナーゼ４又はその変異体タンパク質の３次元構造座標の全部又は一部を利用して探索することができる。例えば、Protein Data Bankに登録されているCa2+-free PAD4の３次元構造座標(accession code 1WD8)又はそれからの根平均二乗偏差が、結合長について0.019オングストロームであり、結合角について1.894°である座標の全部又は一部、Ca2+-bound PAD4(C645A)の３次元構造座標(accession code 1WD9)又はそれからの根平均二乗偏差が、結合長について0.017オングストロームであり、結合角について1.662°である座標の全部又は一部、あるいはPAD4(C645A)・カルシウムイオン・基質（benzoly-L-arginine-amide:BA）の複合体の３次元構造座標(accession code 1WDA)又はそれからの根平均二乗偏差が、結合長について0.014オングストロームであり、結合角について1.595°である座標の全部又は一部を利用して、コンピュータにより、配列番号１のアミノ酸配列を有するペプチジルアルギニンデイミナーゼ４に認識される物質を探索（例えば、同定、検索、評価又は設計）し、次いで、その物質の適当な位置に適当な種類の原子又は原子団を付加又は置換することにより、配列番号１のアミノ酸配列を有するペプチジルアルギニンデイミナーゼ４に認識される物質とその反応基質との反応機構における工程１〜５のいずれかを阻害することができる物質を設計することができる。物質の探索に用いるコンピュータは特に限定されるものではなく、物質探索のためのプログラムが動作するものであればよい。プログラムとしては、DOCK（Science, 1992, 257, 1078）、Gold4、 Glide、FlexX（J.Mol. Biol., 1996, 261, 470）、AutoDock（J. Comput. Chem., 1998, 19, 1639）、ICM（J. Comput. Chem., 1994, 15, 488）、Ludiなどを例示することができる。
工程１〜５のいずれかあるいはすべてを阻害する物質を設計するには、アルギニンの=NH2(+)基の水素原子及び／又は-NH2基の水素原子をアルキル基（例えば、メチル基やエチル基など）に置換、及び／又は-NH-を-CH2-に置換するとよい。
配列番号１のアミノ酸配列を有するペプチジルアルギニンデイミナーゼ４とその反応基質との反応機構における工程１〜５のいずれかを阻害することができる物質は、天然物又は合成品のいずれであってもよく、高分子化合物又は低分子化合物のいずれであってもよい。
配列番号１のアミノ酸配列を有するペプチジルアルギニンデイミナーゼ４とその反応基質との反応機構における工程１〜５のいずれかを阻害することができる物質は、その物質の種類に応じて、公知の手法で製造するとよい。
次いで、配列番号１のアミノ酸配列を有するペプチジルアルギニンデイミナーゼ４とその反応基質との反応機構における工程１〜５のいずれかを阻害することができる物質とペプチジルアルギニンデイミナーゼ４との相互作用（例えば、ペプチジルアルギニンデイミナーゼ４に対する解離定数）、配列番号１のアミノ酸配列を有するペプチジルアルギニンデイミナーゼ４とその反応基質との反応機構における工程１〜５のいずれかを阻害することができる物質の存在下でのペプチジルアルギニンデイミナーゼ４の酵素活性を調べるとよい。ペプチジルアルギニンデイミナーゼ４は公知の方法（例えば、The Journal of Biological Chemistry, Vol.277, No.51, pp.49562-49568, 2002及びその中に引用された論文に記載の方法）で調製することができる。ペプチジルアルギニンデイミナーゼ４に対する解離定数は、BIACORE3000 (Pharamacia Biosensor AB)を用いた表面プラスモン共鳴実験によって測定することができる。簡単に説明すると、ペプチジルアルギニンデイミナーゼ４をセンサーチップの表面に固定した後、被験物質をセンサーチップ上に注ぎ、平衡状態に達した後、スキャッチャードプロットによって解離定数を測定する。ペプチジルアルギニンデイミナーゼ４の酵素活性はNakashima, K., Hagiwara, T., Ishigami, A., Nagata, S., Asaga, H., Kuramoto, M., Senshu, T. and Yamada, M. (1999) Molecular characterization of peptidylarginine deiminase in HL-60 cells induced by retinoic acid and 1α,25-dihydroxyvitamin D3. J. Biol. Chem., 274, 27786-27792に記載の方法で測定することができる。ペプチジルアルギニンデイミナーゼ４の酵素活性を低下させる物質は、ペプチジルアルギニンデイミナーゼ４阻害剤として利用することができる。
本発明のペプチジルアルギニンデイミナーゼ４阻害剤は、医薬品として、ヒト、その他の動物に投与してもよいし、実験用の試薬として用いてもよい。本発明のペプチジルアルギニンデイミナーゼ４阻害剤は、単独で使用してもよいし、あるいは他の薬剤（例えば、他の関節リウマチ予防・治療薬）と組み合わせて使用してもよい。
本発明のペプチジルアルギニンデイミナーゼ４阻害剤をヒトに投与する場合には、例えば、有効成分の量に換算して、１日あたり約0.1〜9000 mg/kg（体重）、好ましくは１日あたり約1〜900 mg/kg（体重）の投与量で、１回または数回に分けて経口投与するとよいが、その投与量や投与回数は、症状、年齢、投与方法などにより適宜変更しうる。
本発明のペプチジルアルギニンデイミナーゼ４阻害剤は、錠剤、カプセル剤、顆粒剤、散剤、シロップ剤などの製剤にして、経口投与してもよいし、注射剤、坐剤などの製剤にして、腹腔内や静脈内への注射により非経口投与することもできる。製剤中の有効成分の含有率は、１〜９０重量％の間で変動させることができる。例えば、錠剤、カプセル剤、顆粒剤、散剤などの形態をとる場合には、有効成分を５〜８０重量％含有させるのが好ましい。シロップ剤などの液剤の場合には、有効成分を１〜３０重量％含有させるのが好ましい。さらに、非経口投与する注射剤の場合には、有効成分を１〜１０重量％含有させるのが好ましい
本発明のペプチジルアルギニンデイミナーゼ４阻害剤の製剤化は、賦形剤（乳糖、白糖、ブドウ糖、マンニトールなどの糖類、バレイショ、コムギ、トウモロコシなどのデンプン、炭酸カルシウム、硫酸カルシウム、炭酸水素ナトリウムなどの無機物、結晶セルロースなど）、結合剤（デンプンのり液、アラビアゴム、ゼラチン、アルギン酸ナトリウム、メチルセルロース、エチルセルロース、ポリビニルピロリドン、ポリビニルアルコール、ヒドロキシプロピルセルロース、カルメロースなど）、滑沢剤（ステアリン酸マグネシウム、タルク、水素添加植物油、マクロゴール、シリコーン油）、崩壊剤（デンプン、寒天、ゼラチン末、結晶セルロース、CMC・Na、CMC・Ca、炭酸カルシウム、炭酸水素ナトリウム、アルギン酸ナトリウムなど）、矯味矯臭剤（乳糖、白糖、ブドウ糖、マンニトール、芳香性精油類など）、溶剤（注射用水、滅菌精製水、ゴマ油、ダイズ油、トウモロコシ油、オリーブ油、綿実油など）、安定剤（窒素、二酸化炭素などの不活性ガス、EDTA、チオグリコール酸などのキレート剤、亜硫酸水素ナトリウム、チオ硫酸ナトリウム、L-アスコルビン酸、ロンガリットなどの還元物質など）、保存剤（パラオキシ安息香酸エステル、クロロブタノール、ベンジルアルコール、フェノール、塩化ベンザルコニウムなど）、界面活性剤（水素添加ヒマシ油、ポリソルベート８０、２０など）、緩衝剤（クエン酸、酢酸、リン酸のナトリウム塩、ホウ酸など）、希釈剤などの製剤添加物を用いて、公知の方法で行われる。
本発明のペプチジルアルギニンデイミナーゼ４阻害剤は、ペプチジルアルギニンデイミナーゼが関与する疾患を予防および／または治療するために利用することができる。ペプチジルアルギニンデイミナーゼが関与する疾患としては、関節リウマチ、乾癬、多発性硬化症などが知られているが、本発明のペプチジルアルギニンデイミナーゼ４阻害剤は、関節リウマチ、多発性硬化症などの予防および／または治療に効果的である。また、本発明のペプチジルアルギニンデイミナーゼ４阻害剤は、ペプチジルアルギニンデイミナーゼ４の研究に利用することができる。
本明細書は、本願の優先権の基礎である日本国特許出願、特願2004-28467号明細書および／または図面に記載される内容を包含する。
【発明の効果】
【００４６】
本発明により、ペプチジルアルギニンデイミナーゼ４阻害剤が提供された。この阻害剤を利用することにより、ペプチジルアルギニンデイミナーゼが関与する疾患（例えば、関節リウマチ、多発性硬化症など）を予防および／または治療することができる。
【図面の簡単な説明】
【００４７】
【図１】本発明者らが提唱するPAD4の脱イミノ化反応機構。
【図２】製造例における最終精製品のHPLCチャート。1はBz-Arg, 2はBz-Arg(mono-methyl), 3はBz-ADMA, 4はBz-SDMAのピークである。
【図３】製造例で製造したBz-Arg誘導体のPAD4消化における阻害反応（反応時間４０分）の結果を示す。
【図４】製造例で製造したBz-Arg誘導体のPAD4消化における阻害反応（反応時間６０分）の結果を示す。
【発明を実施するための最良の形態】
【００４８】
以下、本発明を実施例によって具体的に説明する。なお、これらの実施例は、本発明を説明するためのものであって、本発明の範囲を限定するものではない。
【実施例】
【００４９】
〔製造例〕Bz-Arg誘導体の合成
Arg誘導体（Arg:ナカライテスク（京都）、シトルリン：Sigma (St louis, USA)、NG-Monomethyl-L-arginine:和光純薬(大阪)、ADMA (NG,NG-Dimethyl-L-Argnine):ALEXIS Biochemicals (Lausen, Switzerland)、SDMA (NG,N’G-Dimethyl-L-Argnine):ALEXIS Biochemicals (Lausen, Switzerland)）(10 μmol)を0.1 M NaHCO3(200 μl)に溶解し、Bz2O(10 μmol)/DMF(200 μl)を加えて攪拌後、室温で１時間放置した。反応液に水(200 μl)を加えて希釈後、酢酸エチル(500 μl)で３回洗浄した。得られた水溶液に6 M HCl(100 μl) を加え、酢酸エチル(500 μl)で４回洗浄した。次に、逆相HPLCを用いて、得られた反応溶液から目的Bz-Arg誘導体（1. Bz-Arg, 2. Bz-Arg(mono-methyl), 3. Bz-ADMA, 4. Bz-SDMA）を精製した。いずれのBz-Arg誘導体も精製後の収率は40%程度であった。
HPLC 条件
Waters M600 multi-solvent delivery system
UV: 220 nm
カラム：Develosil ODS-UG-5 (4.6 x 150 mm)
Temp: 30度
溶媒：0.05%TFA水溶液中、5%アセトニトリルから1%/minでアセトニトリル濃度を上昇させた。
最終精製品のHPLCチャートを図２に示す。図２の1はBz-Arg, 2はBz-Arg(mono-methyl), 3はBz-ADMA, 4はBz-SDMAのピークである。
化合物の同定はMALDI-TOFMS(質量分析)により行った。
装置  Applied Biosystems Voyager System 6178【００５０】
【表１】
2005075414.tif 000015
〔試験例〕Bz-Arg誘導体のPAD4消化における阻害反応
緩衝液B （0.1 M Tris/HCl, 10 mM CaCl2, 2 mM DTT, pH7.6, 125 μl）、Bz-Arg (0.1 M Tris/HCl, 10 mM CaCl2, pH7.6, 25 μl  (濃度1nmol/μlのものから))、PAD4 (1μl)を氷冷下で混合した。PAD4は、The Journal of Biological Chemistry, Vol.277, No.51, pp.49562-49568, 2002及びその中に引用された論文に記載の方法に従って調製した。Bz-Arg(mono-methyl), Bz-ADMA, Bz-SDMA, 緩衝液A (0.1 M Tris/HCl, 10 mM CaCl2, pH7.6)をそれぞれ20μl取り(濃度1nmol/μlのものから)、上記Bz-Arg溶液（30μl）と混合し、37度で40分あるいは60分反応させた。1 M HCl (50μl)を加えて反応を停止後、逆相ＨＰＬＣで反応混合物を分離した。結果、Bz-ADMAが最も阻害作用が強く、次にBz-Arg(mono-methyl)が強かった。また、今回使用した濃度ではBz-SDMAには阻害作用は認められなかった。反応時間４０分の結果を図３に、反応時間６０分の結果を図４に示す。図３および４において、１は阻害剤なし、２はBz-Arg(mono-methyl)、3はBz-ADMA、4はBz-SDMAの結果である。また、縦軸は試料番号を、横軸はデイミノ化反応収率（Bz-citrullineの生成収率）を示す。
本明細書で引用した全ての刊行物、特許および特許出願をそのまま参考として本明細書にとり入れるものとする。
【産業上の利用可能性】
【００５１】
本発明により、ペプチジルアルギニンデイミナーゼ４阻害剤が提供される。この阻害剤を利用することにより、ペプチジルアルギニンデイミナーゼが関与する疾患（例えば、関節リウマチ、多発性硬化症など）を予防および／または治療することができる。
【配列表フリーテキスト】
【００５２】
配列番号１は、ヒトペプチジルアルギニンデイミナーゼ４のアミノ酸配列を示す。
【図１】
2005075414.tif 000023
【図２】
2005075414.tif 000024
【図３】
2005075414.tif 000025
【図４】
2005075414.tif 000026
【配列表】
2005075414000001.app
【手続補正書】
【提出日】平成17年10月12日(2005.10.12)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【書類名】請求の範囲
【請求項１】下記の一般式（ＩＩ）で表される化合物またはその塩。
【化１】
2005075414.tif 000027
（式中、Ｒ１、Ｒ２およびＲ３は、それぞれ独立に、水素原子または炭素数１〜３のアルキル基であるが、ただし、Ｒ１、Ｒ２およびＲ３のうちの少なくとも１つは水素原子ではなく、Ｒ４１は、Ｒ４０１ＣＯ−〔式中、Ｒ４０１は、水素原子、置換基を有してもよい炭化水素基または置換基を有してもよい複素環基である〕で表される基又はＲ４０２Ｓ（Ｏ）ｍ−〔式中、Ｒ４０２は、水素原子、置換基を有してもよい炭化水素基または置換基を有してもよい複素環基であり、ｍは１または２の整数である〕で表される基であり、Ｒ５は置換基を有してもよいカルボキシル基である）
【請求項２】（削除）
【請求項３】Ｒ４１が、置換基を有してもよいベンゾイル基、置換基を有してもよいベンゾイルペプチジル基、置換基を有してもよいダンシル基または置換基を有してもよいダンシルペプチジル基であり、Ｒ４２が水素原子である請求項１記載の化合物またはその塩。
【請求項４】Ｒ１、Ｒ２およびＲ３は、それぞれ独立に、水素原子またはメチル基であるが、ただし、Ｒ１、Ｒ２およびＲ３のうちの少なくとも１つはメチル基である請求項１〜３のいずれかに記載の化合物またはその塩。
【請求項５】下記の（Ｉａ）、（Ｉｂ）または（Ｉｃ）で表される化合物またはその塩である請求項４記載の化合物またはその塩。
【化２】
2005075414.tif 000028
【化３】
2005075414.tif 000029
【化４】
2005075414.tif 000030
【請求項６】（削除）
【請求項７】（削除）
【請求項８】請求項１、３〜５のいずれかに記載の化合物またはその塩を有効成分として含有するペプチジルアルギニンデイミナーゼ４阻害剤。
【請求項９】（削除）
【請求項１０】ペプチジルアルギニンデイミナーゼが関与する疾患を予防および／または治療するために用いられる請求項８記載のペプチジルアルギニンデイミナーゼ４阻害剤。
【請求項１１】ペプチジルアルギニンデイミナーゼが関与する疾患が関節リウマチ、乾癬及び多発性硬化症からなる群より選択される請求項１０記載のペプチジルアルギニンデイミナーゼ４阻害剤。
【手続補正書】
【提出日】平成18年4月5日(2006.4.5)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【書類名】請求の範囲
【請求項１】下記の一般式（ＩＩ）で表される化合物またはその塩。
【化１】
2005075414.tif 000031
（式中、Ｒ１、Ｒ２およびＲ３は、それぞれ独立に、水素原子または炭素数１〜３のアルキル基であるが、ただし、Ｒ１、Ｒ２およびＲ３のうちの少なくとも１つは水素原子ではなく、Ｒ４１は、Ｒ４０１ＣＯ−〔式中、Ｒ４０１は、水素原子、置換基を有してもよい不飽和鎖式炭化水素基、置換基を有してもよい脂環式炭化水素基、置換基を有してもよい芳香族炭化水素基または置換基を有してもよい複素環基である〕で表される基又はＲ４０２Ｓ（Ｏ）ｍ−〔式中、Ｒ４０２は、水素原子、置換基を有してもよい炭化水素基または置換基を有してもよい複素環基であり、ｍは１または２の整数である〕で表される基であり、Ｒ４２は水素原子または炭素数１〜３のアルキル基であり、Ｒ５は置換基を有してもよいカルボキシル基である）
【請求項２】（削除）
【請求項３】Ｒ４１が、置換基を有してもよいベンゾイル基、置換基を有してもよいベンゾイルペプチジル基、置換基を有してもよいダンシル基または置換基を有してもよいダンシルペプチジル基であり、Ｒ４２が水素原子である請求項２記載の化合物またはその塩。
【請求項４】Ｒ１、Ｒ２およびＲ３は、それぞれ独立に、水素原子またはメチル基であるが、ただし、Ｒ１、Ｒ２およびＲ３のうちの少なくとも１つはメチル基である請求項１〜３のいずれかに記載の化合物またはその塩。
【請求項５】下記の（Ｉａ）、（Ｉｂ）または（Ｉｃ）で表される化合物またはその塩である請求項４記載の化合物またはその塩。
【化３】
2005075414.tif 000032
【化４】
2005075414.tif 000033
【化５】
2005075414.tif 000034
【請求項６】下記のスキームで表される、配列番号１のアミノ酸配列を有するペプチジルアルギニンデイミナーゼ４とその反応基質との反応機構における工程１〜５のいずれかを阻害することができる物質を有効成分として含有するペプチジルアルギニンデイミナーゼ４阻害剤。
【化６】
2005075414.tif 000035
（スキーム中、Ａｓｐ３５０，Ｈｉｓ４７１，Ａｓｐ４７３及びＣｙｓ６４５は、それぞれ、配列番号１のアミノ酸配列における３５０位のアスパラギン酸残基、４７１位のヒスチジン残基、４７３位のアスパラギン酸残基及び６４５位のシステイン残基を表す）
【請求項７】（削除）
【請求項８】下記の一般式（ＩＩ’）で表される化合物またはその塩を有効成分として含有するペプチジルアルギニンデイミナーゼ４阻害剤。
【化５】
2005075414.tif 000036
（式中、Ｒ１、Ｒ２およびＲ３は、それぞれ独立に、水素原子または炭素数１〜３のアルキル基であるが、ただし、Ｒ１、Ｒ２およびＲ３のうちの少なくとも１つは水素原子ではなく、Ｒ４１’は、Ｒ４０１’ＣＯ−〔式中、Ｒ４０１’は、水素原子、置換基を有してもよい炭化水素基または置換基を有してもよい複素環基である〕で表される基又はＲ４０２Ｓ（Ｏ）ｍ−〔式中、Ｒ４０２は、水素原子、置換基を有してもよい炭化水素基または置換基を有してもよい複素環基であり、ｍは１または２の整数である〕で表される基であり、Ｒ４２は水素原子または炭素数１〜３のアルキル基であり、Ｒ５は置換基を有してもよいカルボキシル基である）
【請求項９】（削除）
【請求項１０】ペプチジルアルギニンデイミナーゼが関与する疾患を予防および／または治療するために用いられる請求項８記載のペプチジルアルギニンデイミナーゼ４阻害剤。
【請求項１１】ペプチジルアルギニンデイミナーゼが関与する疾患が関節リウマチ、乾癬及び多発性硬化症からなる群より選択される請求項１０記載のペプチジルアルギニンデイミナーゼ４阻害剤。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００１３
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００１３】
などを挙げることができ、このベンゾイル基、ダンシル基などはさらに置換基を有してもよい。ベンゾイル基、ダンシル基などの置換基としては、ハロゲン原子（例えば、フッ素，塩素，臭素，ヨウ素など）、水酸基、炭素数１〜６のアルコキシ基（例えば、メトキシ、エトキシ、プロポキシ、ブトキシ、ペントキシなど）、アミノ基、カルバモイル基、炭素数１〜６のアルコキシカルボニル基（例えば、メトキシカルボニル，エトキシカルボニル，プロポキシカルボニルなど）、複素環基（複素環基の複素環としては、１個の硫黄原子、窒素原子または酸素原子を含む５〜７員環、２〜４個の窒素原子を含む５〜６員環、１〜２個の窒素原子および１個の硫黄原子または酸素原子を含む５〜６員環などを挙げることができ、これらの複素環は１〜２個の窒素原子を含む６員環、ベンゼン環または１個の硫黄原子を含む５員環と縮合していてもよく、複素環基の具体例としては、２−ピリジル、３−ピリジル、４−ピリジル、ピリミジル、ピラジニル、ピリダジニル、ピラゾリル、イミダゾリル、チアゾリル、イソチアゾリル、オキサゾリル、イソオキサゾリル、ピリド［２，３−ｄ］ピリミジル、ベンゾピラニル、１，８−ナフチリジル、１，５−ナフチリジル、１，６−ナフチリジル、１，７−ナフチリジル、キノリル、チエノ［２，３−ｂ］ピリジル、テトラゾリル、チアジアゾリル、オキサジアゾリル、トリアジニル、トリアゾリル、チエニル、ピロリル、ピロリニル、フリル、ピロリジニル、ベンゾチエニル、インドリル、イミダゾリジニル、ピペリジル、ピペリジノ、ピペラジニル、モルホリニル、モルホリノなどを挙げることができる）などを挙げることができる。アミノ基は炭素数１〜６のアルキル基や炭素数１〜１０のアシル基で置換されていてもよい。また、カルバモイル基は、炭素数１〜６のアルキル基で置換されていてもよい。
［００３５］  Ｒ４０１、Ｒ４０２、Ｒ４０３、Ｒ４０４、Ｒ４０５およびＲ４０６の炭化水素基としては、飽和鎖式炭化水素基（例えば、炭素数１〜６の直鎖状および分枝状アルキル基など）、不飽和鎖式炭化水素基（例えば、炭素数２〜６の直鎖状および分枝状アルケニル基、炭素数２〜６の直鎖状および分枝状アルキニル基など）、脂環式炭化水素基（例えば、炭素数３〜６のシクロアルキル基、炭素数３〜６のシクロアルケニル基、炭素数３〜６のシクロアルキニル基など）、芳香族炭化水素基（例えば、フェニル基、ナフチル基、アントリル基、フェナントリル基など）を挙げることができる。
［００３６］  Ｒ４０１、Ｒ４０２、Ｒ４０３、Ｒ４０４、Ｒ４０５およびＲ４０６が置換基を有してもよい炭化水素基である場
【手続補正３】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００１６
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００１６】
もよく、具体的には、メチル基、エチル基、ｎ−プロピル基、ｉ−プロピル基、ｎ−ブチル、ｉ−ブチル、ｓｅｃ−ブチル、ｔｅｒｔ−ブチル、ペンチル、イソペンチル、ネオペンチル、ヘキシル、ヘプチル、オクチル、ノニル、デシルなどを挙げることができる。
Ｒ５２、Ｒ５３、Ｒ５４およびＲ５５の炭化水素基としては、飽和鎖式炭化水素基（例えば、炭素数１〜６の直鎖状および分枝状アルキル基など）、不飽和鎖式炭化水素基（例えば、炭素数２〜６の直鎖状および分枝状アルケニル基、炭素数２〜６の直鎖状および分枝状アルキニル基など）、脂環式炭化水素基（例えば、炭素数３〜６のシクロアルキル基、炭素数３〜６のシクロアルケニル基、炭素数３〜６のシクロアルキニル基など）、芳香族炭化水素基（例えば、フェニル基、ナフチル基、アントリル基、フェナントリル基など）を挙げることができる。
Ｒ５２、Ｒ５３、Ｒ５４およびＲ５５が置換基を有してもよい炭化水素基である場合の置換基としては、ハロゲン原子（例えば、フッ素，塩素，臭素，ヨウ素など）、水酸基、炭素数１〜６のアルコキシ基（例えば、メトキシ、エトキシ、プロポキシ、ブトキシ、ペントキシなど）、アミノ基、カルバモイル基、炭素数１〜６のアルコキシカルボニル基（例えば、メトキシカルボニル，エトキシカルボニル，プロポキシカルボニルなど）、複素環基（複素環基の複素環としては、１個の硫黄原子、窒素原子または酸素原子を含む５〜７員環、２〜４個の窒素原子を含む５〜６員環、１〜２個の窒素原子および１個の硫黄原子または酸素原子を含む５〜６員環などを挙げることができ、これらの複素環は１〜２個の窒素原子を含む６員環、ベンゼン環または１個の硫黄原子を含む５員環と縮合していてもよく、複素環基の具体例としては、２−ピリジル、３−ピリジル、４−ピリジル、ピリミジル、ピラジニル、ピリダジニル、ピラゾリル、イミダゾリル、チアゾリル、イソチアゾリル、オキサゾリル、イソオキサゾリル、ピリド［２，３−ｄ］ピリミジル、ベンゾピラニル、１，８−ナフチリジル、１，５−ナフチリジル、１，６−ナフチリジル、１，７−ナフチリジル、キノリル、チエノ［２，３−ｂ］ピリジル、テトラゾリル、チアジアゾリル、オキサジアゾリル、トリアジニル、トリアゾリル、チエニル、ピロリル、ピロリニル、フリル、ピロリジニル、ベンゾチエニル、インドリル、イミダゾリジニル、ピペリジル、ピペリジノ、ピペラジニル、モルホリニル、モルホリノなどを挙げることができる）などを挙げることができる。アミノ基は炭素数１〜６のアルキル          基や炭素数１〜１０のアシル基で置換されていてもよい。また、
【国際調査報告】
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