(57)【要約】エクスビボ培養系が提供される。したがって、培養培地と組織培養インサート上に置かれた精密切断組織切片とを含む培養系であって、精密切断組織切片は少なくとも５０％の酸素を含有する高含酸素雰囲気下に維持され、前記培養物は回転撹拌されることで培養培地への組織切片の間欠的浸漬を容易にする培養系が提供される。組織を培養する方法および疾患処置のための薬物を選択するために前記培養系を使用する方法も提供される。【特許請求の範囲】
【請求項１】
培養培地と組織培養インサート上に置かれた精密切断組織切片とを含む培養系であって、前記精密切断組織切片は少なくとも５０％の酸素を含有する高含酸素雰囲気下に維持され、前記培養物は回転撹拌されることで前記培養培地への前記組織切片の間欠的浸漬を容易にする培養系。
【請求項２】
前記培養物が組織培養プレート中にある、請求項１に記載の培養系。
【請求項３】
薬物を含む、請求項１〜２のいずれか一項に記載の培養系。
【請求項４】
組織を培養する方法であって、少なくとも５０％の酸素を含有する高含酸素雰囲気下、培養培地中で、組織培養インサート上の精密切断組織切片を培養すること、および前記培養培地への前記組織切片の間欠的浸漬を容易にする回転で前記培養物を撹拌することを含む方法。
【請求項５】
前記培養培地に薬物を添加することをさらに含む、請求項４に記載の方法。
【請求項６】
薬物または薬物のバッチの有効性を決定する方法であって、
（ｉ）請求項４に記載の方法に従って組織を培養すること、
（ｉｉ）前記培養培地に前記薬物または前記薬物のバッチを添加すること、および
（ｉｉｉ）前記組織に対する前記薬物または前記薬物のバッチの効果を決定すること
を含み、前記薬物に対する前記組織の感受性が前記薬物の有効性を示す方法。
【請求項７】
前記組織が病理組織である、請求項１〜３のいずれか一項に記載の培養系または請求項４〜６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項８】
処置を必要とする対象における疾患を処置するための薬物を選択する方法であって、
（ｉ）前記対象から得られた病理組織を請求項４に記載の方法に従って培養すること、
（ｉｉ）前記培養培地に前記薬物を添加すること、および
（ｉｉｉ）前記組織に対する前記薬物の効果を決定すること
を含み、前記薬物に対する前記組織の感受性が、前記対象における前記疾患の処置に関する前記薬物の有効性を示す方法。
【請求項９】
処置を必要とする対象における疾患を処置する方法であって、
（ａ）請求項８に記載の方法に従って薬物を選択すること、および
（ｂ）前記対象における前記疾患の処置に関して有効性を示す薬物または薬物の組合せの治療有効量を、前記対象に投与し、それによって前記対象における前記疾患を処置すること
を含む方法。
【請求項１０】
前記薬物が薬物組合せである、請求項３に記載の培養系または請求項５、８および９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１１】
前記組織または前記精密切断組織切片が新鮮単離される、請求項１〜１０のいずれか一項に記載の培養系または方法。
【請求項１２】
前記組織または前記精密切断組織切片が４℃で保存される、請求項１〜１０のいずれか一項に記載の培養系または方法。
【請求項１３】
前記組織または前記精密切断組織切片が凍結保存される、請求項１〜１０のいずれか一項に記載の培養系または方法。
【請求項１４】
前記決定が、形態評価、生存能評価、増殖評価および／または細胞死評価によって実行される、請求項６〜１３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１５】
前記決定が形態評価によって実行される、請求項６〜１３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１６】
前記決定が３〜５日以内の培養において実行される、請求項６〜１５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１７】
前記疾患ががんである、請求項８〜１６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１８】
前記がんが、卵巣がん、結腸直腸がん、肺がん、膵がん、胃がん、胃食道がんおよび乳がんからなる群より選択される、請求項１７に記載の方法。
【請求項１９】
前記病理組織ががん性組織である、請求項７〜１８のいずれか一項に記載の培養系または方法。
【請求項２０】
前記組織が、卵巣組織、結腸直腸組織、肺組織、膵臓組織、胃組織、食道組織および乳房組織からなる群より選択される、請求項１〜１８のいずれか一項に記載の培養系または方法。
【請求項２１】
前記組織が、卵巣組織、結腸直腸組織、肺組織、膵臓組織、胃組織、食道組織、乳房組織、肝組織、軟骨組織および骨組織からなる群より選択される、請求項１〜１８のいずれか一項に記載の培養系または方法。
【請求項２２】
前記添加が前記培養開始の１２〜２４時間後に実行される、請求項５〜２１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２３】
前記薬物が抗炎症薬または抗がん薬である、請求項３および５〜２２のいずれか一項に記載の培養系または方法。
【請求項２４】
前記薬物が、５−フルロウリシル（５−Ｆｌｕｒｏｕｒｉｃｉｌ）（５ＦＵ）、オキサリプラチン、イリノテカン、シスプラチン、４−ヒドロペルオキシシクロホスファミド、ドセタキセル、ドキソルビシン、ナバルビン、ゲムシタビン、ゲフィチニブ、タモキシフェン、オラパリブ、トラメチニブ、エベロリムスおよびパルボシクリブからなる群より選択される、請求項３および５〜２２のいずれか一項に記載の培養系または方法。
【請求項２５】
前記薬物濃度が細胞株における前記薬物のＩＣ５０よりも高い、請求項３および５〜２４のいずれか一項に記載の培養系または方法。
【請求項２６】
前記薬物濃度が、用量依存的応答が観察される用量決定実験から導き出される、請求項３および５〜２４のいずれか一項に記載の培養系または方法。
【請求項２７】
前記培養が少なくとも４日間実行される、請求項４〜２６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２８】
前記培養が少なくとも５日間実行される、請求項４〜２６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２９】
前記培養が最大７日間実行される、請求項４〜２８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３０】
前記培養が組織培養プレート中で実行される、請求項４〜２９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３１】
前記精密切断切片が２００〜３００μｍである、請求項１〜３０のいずれか一項に記載の培養系または方法。
【請求項３２】
前記切片が前記組織培養インサートの中央に置かれる、請求項１〜３１のいずれか一項に記載の培養系または方法。
【請求項３３】
前記切片が１つの切片である、請求項１〜３２のいずれか一項に記載の培養系または方法。
【請求項３４】
前記切片が前記組織培養インサートと直接接触する、請求項１〜３３のいずれかに記載の培養系または方法。
【請求項３５】
前記組織培養インサートがチタングリッドインサートである、請求項１〜３４のいずれか一項に記載の培養系または方法。
【請求項３６】
前記組織がヒト組織である、請求項１〜３５のいずれか一項に記載の培養系または方法。
【請求項３７】
前記高含酸素雰囲気が少なくとも７０％の酸素を含有する、請求項１〜３６のいずれか一項に記載の培養系または方法。
【請求項３８】
前記高含酸素雰囲気が９５％未満の酸素を含有する、請求項１〜３７のいずれか一項に記載の培養系または方法。
【請求項３９】
遺伝子プロファイリングと組み合わせて実行される、請求項４〜３８のいずれか一項に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、そのいくつかの実施形態において、エクスビボ培養系およびその使用方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
抗がん治療レジメンの従来の選択は、主として、原発がん組織、腫瘍の病期および悪性度、ならびに患者の総合的健康状態に基づく。そのような処置レジメンは一部の患者では有効であるが、それらは毒性であり、命に関わる場合もある有害作用を数多く誘発する。
【０００３】
標的薬治療の利用が可能になり、患者特有の腫瘍マーカーの同定が可能になることで、個別化された処置オプションが指示されるようになったが、それは同時に遺伝子プロファイリングの多用を必要とする［例えばＤａｎｃｅｙ  ｅｔ  ａｌ．（２０１２）Ｃｅｌｌ  １４８，４０９−４２０およびＧａｒｒａｗａｙ  ｅｔ  ａｌ．（２０１３）Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｏｎｃｏｌ．Ｏｆｆ．Ｊ．Ａｍ．Ｓｏｃ．Ｃｌｉｎ．Ｏｎｃｏｌ．３１，１８０６−１８１４を参照されたい］。しかし、具体的な処置レジメンへの遺伝子データの外挿は複雑であり、患者応答の予測は信頼性に欠ける。例えば、患者の腫瘍が２種類以上のターゲティング可能な変異を特徴とする場合に、候補薬物のうちのどれが最も有効であるかを予測することは極めて難しい。ある具体的変異に利用することができる薬物が２種類以上ある場合にも同じことが言える。したがって治療法の選択は試行錯誤に依るところが大きい。
【０００４】
ある具体的処置に対する患者のがん細胞の応答を直接的に試験するには、例えば患者の腫瘍から作成された腫瘍由来細胞株や、患者由来異種移植片（ｐａｔｉｅｎｔ−ｄｅｒｉｖｅｄ  ｘｅｎｏｇｒａｆｔ：ＰＤＸ）モデルなど、さまざまな技術を利用することができる［例えばＣｒｙｓｔａｌ  ｅｔ  ａｌ．（２０１４）Ｓｃｉｅｎｃｅ  ３４６，１４８０−１４８６、Ｃｌｅｖｅｒｓ  ｅｔ  ａｌ．（２０１６）Ｃｅｌｌ  １６５，１５８６−１５９７、およびＨｉｄａｌｇｏ  ｅｔ  ａｌ．（２０１４）Ｃａｎｃｅｒ  Ｄｉｓｃｏｖ．４，９９８−１０１３を参照されたい］。しかし、これらのモデルには多額の費用と時間がかかり、最も重要なことに、それらは薬物感受性に著しい影響を有しうる元の腫瘍微小環境を保持していない［Ｓｔｒａｕｓｓｍａｎ  ｅｔ  ａｌ．（２０１２）Ｎａｔｕｒｅ  ４８７，５００−５０４］。
【０００５】
がん生物学において使用されるエクスビボ器官培養（ｅｘ−ｖｉｖｏ  ｏｒｇａｎ  ｃｕｌｔｕｒｅ：ＥＶＯＣ）系は、患者の腫瘍の精密切断切片（ｐｒｅｃｉｓｉｏｎ−ｃｕｔ  ｓｌｉｃｅ）の培養物である。ＥＶＯＣは、薬物毒性、ウイルスの取込み、放射線または具体的抗がん薬に対する腫瘍の感受性の研究を含む多様な応用に使用されてきた［例えばＶａｉｒａ  ｅｔ  ａｌ．（２０１０）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．１０７，８３５２−８３５６、Ｖｉｃｋｅｒｓ  ｅｔ  ａｌ．（２００４）Ｃｈｅｍ．Ｂｉｏｌ．Ｉｎｔｅｒａｃｔ．１５０，８７−９６、ｄｅ  Ｋａｎｔｅｒ  ｅｔ  ａｌ．（２００２）Ｃｕｒｒ．Ｄｒｕｇ  Ｍｅｔａｂ．３，３９−５９、Ｓｔｏｆｆ−Ｋｈａｌｉｌｉ  ｅｔ  ａｌ．（２００５）Ｂｒｅａｓｔ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．ＢＣＲ  ７，Ｒ１１４１−１１５２、Ｍｅｒｚ  ｅｔ  ａｌ．（２０１３）Ｎｅｕｒｏ−Ｏｎｃｏｌ．１５，６７０−６８１、Ｇｅｒｌａｃｈ  ｅｔ  ａｌ．（２０１４）Ｂｒ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ  １１０，４７９−４８８、Ｍｅｉｊｅｒ  ｅｔ  ａｌ．（２０１３）Ｂｒ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ  １０９，２６８５−２６９５、Ｇｒｏｓｓｏ  ｅｔ  ａｌ．（２０１３）Ｃｅｌｌ  Ｔｉｓｓｕｅ  Ｒｅｓ．３５２，６７１−６８４、Ｖａｉｒａ  ｅｔ  ａｌ．（２０１０）ＰＮＡＳ  １０７，８３５２−８３５６、Ｒｏｉｆｅ  ｅｔ  ａｌ．（２０１６）Ｃｌｉｎ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．Ｊｕｎｅ  ３，１−１０、Ｍａｕｎｄ  ｅｔ  ａｌ．（２０１４）Ｌａｂ．Ｉｎｖｅｓｔ．９４，２０８−２２１、Ｖｉｃｋｅｒｓ  ｅｔ  ａｌ．（２００４）Ｔｏｘｉｃｏｌ  Ｓｃｉ．８２（２）：５３４−４４、Ｚｉｍｍｅｒｍａｎｎ  ｅｔ  ａｌ．（２００９）Ｃｙｔｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  ６１（３）：１４５−１５２）、Ｐａｒａｊｕｌｉ  ｅｔ  ａｌ．（２００９）Ｉｎ  Ｖｉｔｒｏ  Ｃｅｌｌ．Ｄｅｖ．Ｂｉｏｌ．−Ａｎｉｍａｌ  ４５：４４２−４５０、Ｋｏｃｈ  ｅｔ  ａｌ．（２０１４）Ｃｅｌｌ  Ｃｏｍｍｕｎｉｃａｔｉｏｎ  ａｎｄ  Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ  １２：７３、Ｇｒａａｆ  ｅｔ  ａｌ．Ｎａｔｕｒｅ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  （２０１０）５：１５４０−１５５１、Ｍａｊｕｍｄｅｒ  ｅｔ  ａｌ．Ｎａｔ．Ｃｏｍｍｕｎ．６，６１６９  （２０１５）、米国特許出願公開番号ＵＳ２０１４／０２２８２４６、同ＵＳ２０１０／０２０３５７５および同ＵＳ２０１４／０３０２４９１、ならびに国際特許出願公開番号ＷＯ２００２／０４４３４４を参照されたい。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００６】
【特許文献１】米国特許出願公開第２０１４／０２２８２４６号明細書
【特許文献２】米国特許出願公開第２０１０／０２０３５７５号明細書
【特許文献３】米国特許出願公開第２０１４／０３０２４９１号明細書
【特許文献４】国際公開第２００２／０４４３４４号パンフレット
【非特許文献】
【０００７】
【非特許文献１】Ｄａｎｃｅｙ  ｅｔ  ａｌ．（２０１２）Ｃｅｌｌ  １４８，４０９−４２０
【非特許文献２】Ｇａｒｒａｗａｙ  ｅｔ  ａｌ．（２０１３）Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｏｎｃｏｌ．Ｏｆｆ．Ｊ．Ａｍ．Ｓｏｃ．Ｃｌｉｎ．Ｏｎｃｏｌ．３１，１８０６−１８１４
【非特許文献３】Ｃｒｙｓｔａｌ  ｅｔ  ａｌ．（２０１４）Ｓｃｉｅｎｃｅ  ３４６，１４８０−１４８６
【非特許文献４】Ｃｌｅｖｅｒｓ  ｅｔ  ａｌ．（２０１６）Ｃｅｌｌ  １６５，１５８６−１５９７
【非特許文献５】Ｈｉｄａｌｇｏ  ｅｔ  ａｌ．（２０１４）Ｃａｎｃｅｒ  Ｄｉｓｃｏｖ．４，９９８−１０１３
【非特許文献６】Ｓｔｒａｕｓｓｍａｎ  ｅｔ  ａｌ．（２０１２）Ｎａｔｕｒｅ  ４８７，５００−５０４
【非特許文献７】Ｖａｉｒａ  ｅｔ  ａｌ．（２０１０）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．１０７，８３５２−８３５６
【非特許文献８】Ｖｉｃｋｅｒｓ  ｅｔ  ａｌ．（２００４）Ｃｈｅｍ．Ｂｉｏｌ．Ｉｎｔｅｒａｃｔ．１５０，８７−９６
【非特許文献９】ｄｅ  Ｋａｎｔｅｒ  ｅｔ  ａｌ．（２００２）Ｃｕｒｒ．Ｄｒｕｇ  Ｍｅｔａｂ．３，３９−５９
【非特許文献１０】Ｓｔｏｆｆ−Ｋｈａｌｉｌｉ  ｅｔ  ａｌ．（２００５）Ｂｒｅａｓｔ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．ＢＣＲ  ７，Ｒ１１４１−１１５２
【非特許文献１１】Ｍｅｒｚ  ｅｔ  ａｌ．（２０１３）Ｎｅｕｒｏ−Ｏｎｃｏｌ．１５，６７０−６８１
【非特許文献１２】Ｇｅｒｌａｃｈ  ｅｔ  ａｌ．（２０１４）Ｂｒ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ  １１０，４７９−４８８
【非特許文献１３】Ｍｅｉｊｅｒ  ｅｔ  ａｌ．（２０１３）Ｂｒ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ  １０９，２６８５−２６９５
【非特許文献１４】Ｇｒｏｓｓｏ  ｅｔ  ａｌ．（２０１３）Ｃｅｌｌ  Ｔｉｓｓｕｅ  Ｒｅｓ．３５２，６７１−６８４
【非特許文献１５】Ｖａｉｒａ  ｅｔ  ａｌ．（２０１０）ＰＮＡＳ  １０７，８３５２−８３５６
【非特許文献１６】Ｒｏｉｆｅ  ｅｔ  ａｌ．（２０１６）Ｃｌｉｎ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．Ｊｕｎｅ  ３，１−１０
【非特許文献１７】Ｍａｕｎｄ  ｅｔ  ａｌ．（２０１４）Ｌａｂ．Ｉｎｖｅｓｔ．９４，２０８−２２１
【非特許文献１８】Ｖｉｃｋｅｒｓ  ｅｔ  ａｌ．（２００４）Ｔｏｘｉｃｏｌ  Ｓｃｉ．８２（２）：５３４−４４
【非特許文献１９】Ｚｉｍｍｅｒｍａｎｎ  ｅｔ  ａｌ．（２００９）Ｃｙｔｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  ６１（３）：１４５−１５２）
【非特許文献２０】Ｐａｒａｊｕｌｉ  ｅｔ  ａｌ．（２００９）Ｉｎ  Ｖｉｔｒｏ  Ｃｅｌｌ．Ｄｅｖ．Ｂｉｏｌ．−Ａｎｉｍａｌ  ４５：４４２−４５０
【非特許文献２１】Ｋｏｃｈ  ｅｔ  ａｌ．（２０１４）Ｃｅｌｌ  Ｃｏｍｍｕｎｉｃａｔｉｏｎ  ａｎｄ  Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ  １２：７３
【非特許文献２２】Ｇｒａａｆ  ｅｔ  ａｌ．Ｎａｔｕｒｅ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  （２０１０）５：１５４０−１５５１
【非特許文献２２】Ｍａｊｕｍｄｅｒ  ｅｔ  ａｌ．Ｎａｔ．Ｃｏｍｍｕｎ．６，６１６９  （２０１５）
【発明の概要】
【０００８】
本発明のいくつかの実施形態の一側面によれば、培養培地と組織培養インサート上に置かれた精密切断組織切片とを含む培養系であって、精密切断組織切片が少なくとも５０％の酸素を含有する高含酸素雰囲気下に維持され、培養物が回転撹拌されることで培養培地への組織切片の間欠的浸漬を容易にする培養系が提供される。
本発明のいくつかの実施形態によれば、培養物は組織培養プレート中にある。
【０００９】
本発明のいくつかの実施形態によれば、培養系は薬物を含む。
【００１０】
本発明のいくつかの実施形態の一側面によれば、組織を培養する方法であって、少なくとも５０％の酸素を含有する高含酸素雰囲気下、培養培地中で、組織培養インサート上の精密切断組織切片を培養すること、および培養培地への組織切片の間欠的浸漬を容易にする回転で培養物を撹拌することを含む方法が提供される。
【００１１】
本発明のいくつかの実施形態によれば、本方法は培養培地に薬物を添加することをさらに含む。
【００１２】
本発明のいくつかの実施形態によれば、薬物または薬物のバッチの有効性を決定する方法であって、
（ｉ）本発明の方法に従って組織を培養すること、
（ｉ）培養培地に薬物または薬物のバッチを添加すること、および
（ｉｉｉ）組織に対する薬物または薬物のバッチの効果を決定すること
を含み、薬物に対する組織の感受性が薬物の有効性を示す方法が提供される。
【００１３】
本発明のいくつかの実施形態によれば、組織は病理組織である。
【００１４】
本発明のいくつかの実施形態によれば、処置を必要とする対象における疾患を処置するための薬物を選択する方法であって、
（ｉ）対象から得られた病理組織を本発明の方法に従って培養すること、
（ｉｉ）培養培地に薬物を添加すること、および
（ｉｉｉ）組織に対する薬物の効果を決定すること
を含み、薬物に対する組織の感受性が、対象における疾患の処置に関する薬物の有効性を示す方法が提供される。
【００１５】
本発明のいくつかの実施形態によれば、処置を必要とする対象における疾患を処置する方法であって、
（ａ）本発明の方法に従って薬物を選択すること、および
（ｂ）対象における疾患の処置に関して有効性を示す薬物の治療有効量を対象に投与し、それによって対象における疾患を処置すること
を含む方法が提供される。
【００１６】
本発明のいくつかの実施形態によれば、薬物は薬物組合せである。
【００１７】
本発明のいくつかの実施形態によれば、組織または精密切断組織切片は新鮮単離される。
【００１８】
本発明のいくつかの実施形態によれば、組織または精密切断組織切片は４℃で保存される。
【００１９】
本発明のいくつかの実施形態によれば、組織または精密切断組織切片は凍結保存される。
【００２０】
本発明のいくつかの実施形態によれば、決定は、形態評価、生存能評価、増殖評価および／または細胞死評価によって実行される。
【００２１】
本発明のいくつかの実施形態によれば、決定は形態評価によって実行される。
【００２２】
本発明のいくつかの実施形態によれば、決定は３〜５日以内の培養において実行される。
【００２３】
本発明のいくつかの実施形態によれば、疾患はがんである。
【００２４】
本発明のいくつかの実施形態によれば、がんは、卵巣がん、結腸直腸がん、肺がん、膵がん、胃がん、胃食道がんおよび乳がんからなる群より選択される。
【００２５】
本発明のいくつかの実施形態によれば、病理組織はがん性組織である。
【００２６】
本発明のいくつかの実施形態によれば、組織は、卵巣組織、結腸直腸組織、肺組織、膵臓胃組織、胃食道組織および乳房組織からなる群より選択される。
【００２７】
本発明のいくつかの実施形態によれば、組織は、卵巣組織、結腸直腸組織、肺組織、膵臓胃組織、胃食道組織、乳房組織、肝組織、軟骨組織および骨組織からなる群より選択される。
【００２８】
本発明のいくつかの実施形態によれば、添加は培養開始の１２〜２４時間後に実行される。
【００２９】
本発明のいくつかの実施形態によれば、薬物は抗炎症薬または抗がん薬である。
【００３０】
本発明のいくつかの実施形態によれば、薬物は、５−フルロウリシル（Ｆｌｕｒｏｕｒｉｃｉｌ）（５ＦＵ）、オキサリプラチン、イリノテカン、シスプラチン、４−ヒドロペルオキシシクロホスファミド、ドセタキセル、ドキソルビシン、ナバルビン（Ｎａｖａｌｂｉｎｅ）、ゲムシタビン、ゲフィチニブ、タモキシフェン、オラパリブ、トラメチニブ、エベロリムスおよびパルボシクリブからなる群より選択される。
【００３１】
本発明のいくつかの実施形態によれば、薬物濃度は細胞株におけるその薬物のＩＣ５０用量より高い。
【００３２】
本発明のいくつかの実施形態によれば、薬物濃度は、用量依存的応答が観察される用量決定実験から導き出される。
【００３３】
本発明のいくつかの実施形態によれば、培養は少なくとも４日間実行される。
【００３４】
本発明のいくつかの実施形態によれば、培養は少なくとも５日間実行される。
【００３５】
本発明のいくつかの実施形態によれば、培養は最大７日間実行される。
【００３６】
本発明のいくつかの実施形態によれば、培養は組織培養プレート中で実行される。
【００３７】
本発明のいくつかの実施形態によれば、精密切断切片は２００〜３００μｍである。
【００３８】
本発明のいくつかの実施形態によれば、切片は細胞培養インサートの中央に置かれる。
【００３９】
本発明のいくつかの実施形態によれば、切片は１つの切片である。
【００４０】
本発明のいくつかの実施形態によれば、切片は組織培養インサートと直接接触している。
【００４１】
本発明のいくつかの実施形態によれば、組織培養インサートはチタングリッドインサートである。
【００４２】
本発明のいくつかの実施形態によれば、組織はヒト組織である。
【００４３】
本発明のいくつかの実施形態によれば、高含酸素雰囲気は少なくとも７０％の酸素を含有する。
【００４４】
本発明のいくつかの実施形態によれば、高含酸素雰囲気は９５％未満の酸素を含有する。
【００４５】
本発明のいくつかの実施形態によれば、本方法は遺伝子プロファイリングと組み合わせて実行される。
【００４６】
別段の定義がある場合を除き、本明細書において使用する技術用語および／または科学用語はすべて、本発明が関係する技術分野における通常の技能を有する者が一般に理解している意味と同じ意味を有する。本発明の実施形態の実施または試験では本明細書に記載するものと類似するまたは等価な方法および材料を使用しうるが、例示的方法および材料を以下に記載する。矛盾が生じた場合は、定義を含めて、本特許明細書が優先される。また、材料、方法および実施例は例示に過ぎず、必ずしも限定を意図しない。
図面の各図の簡単な説明
【００４７】
本明細書には、単なる例として、添付の図面を参照しつつ本発明の実施形態をいくつか記載する。以下、図面について詳しく具体的に言及するが、ここに示される詳細は例示であって、本発明の実施形態の説明的議論を目的としていることを強調しておく。この点において、本記載を図面と共に理解することで、本発明の実施形態がどのように実施されうるかが、当業者には明白になる。
【図面の簡単な説明】
【００４８】
【図１】５日間のエクスビボ培養後のヒト卵巣がん由来異種移植片の切片の形態を示す代表的な組織学的顕微鏡写真である。収集した組織の精密切断切片を、６穴プレート中のチタンインサート上で（左列）、または６穴プレート中で直接（右列）、２１％Ｏ２下（下段）または８０％Ｏ２下（上段）で、５日間インキュベートし、Ｈ＆Ｅで染色した。スケールバーは５０μｍを表す。各条件について、組織を３つ一組にして試験した。
【図２】異なる培地における５日間のエクスビボ培養後のヒト乳がん由来異種移植片の切片の形態を示す代表的な組織学的顕微鏡写真。収集した組織の精密切断切片を、ＤＭＥＭ／Ｆ１２培地中（左パネル）またはＭ１９９培地中（右パネル）、８０％Ｏ２下、チタンインサート上で、５日間インキュベートし、Ｈ＆Ｅで染色した。スケールバーは５０μｍを表す。各条件について、組織を２つ一組にして試験した。
【図３】開発されたエクスビボ培養法が、抗がん薬処置に対するヒト乳癌由来異種移植片の応答を予測できることを示す図である。示されているのはＪａｃｋｓｏｎ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓによって作成されたグラフであって、４−ヒドロペルオキシシクロホスファミドによる処置に対する２つのヒト乳癌由来異種移植片のインビボ応答を示しており、これらは、ＴＭ０００９６乳癌は処置に対して抵抗性であるが、ＴＭ０００９８乳癌は処置に対して感受性であることを示している。ｙ軸は腫瘍サイズをｍｍ３の単位で示している。  表示した濃度の４−ヒドロペルオキシシクロホスファミドで４日間処置された、８０％Ｏ２下、チタンインサート上で５日間のエクスビボ培養後の、ＴＭ０００９６乳癌（左列）およびＴＭ０００９８乳癌（右列）の切片の形態を、代表的な組織学的顕微鏡写真が示している。スケールバーは５０μｍを表す。各条件について、組織を２つ一組にして試験した。
【図４】開発されたエクスビボ培養法が、抗がん薬処置に対するヒト結腸直腸癌（ｃｏｌｏｒｅｃｔａｌ  ｃａｒｃｉｎｏｍａ：ＣＲＣ）由来異種移植片の応答を予測できることを示す図である。示されているのはＪａｃｋｓｏｎ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓによって作成されたグラフであって、オキサリプラチンによる処置に対する３つのＣＲＣ由来異種移植片のインビボ応答を示しており、これらは、ＴＭ００１３４ＣＲＣは処置に対して抵抗性であるが、ＴＭ００１７０腫瘍は処置に対して部分感受性であり、ＴＭ００１６４ＣＲＣは感受性が高いことを示している。ｙ軸は腫瘍サイズをｍｍ３の単位で示している。  ０．２μＭオキサリプラチンで４日間処置された、８０％Ｏ２下、チタンインサート上で５日間のエクスビボ培養後の、ＴＭ００１３４ＣＲＣ（左パネル）、ＴＭ００１７０ＣＲＣ（中パネル）およびＴＭ００１６４ＣＲＣ（右パネル）の切片の形態を、代表的な組織学的顕微鏡写真が示している。ＤＭＳＯによる処置を対照とした。スケールバーは５０μｍを表す。各条件について、組織を３つ一組にして試験した。
【図５】開発されたエクスビボ培養法で培養された腫瘍組織切片が異なる抗がん薬に対して差異的感受性を呈することを示す図である。腫瘍縮小および腹腔内化学治療のための手術時に取り出された腹膜中の転移巣からヒト結腸直腸がん（ＣＲＣ）腫瘍組織を採取した。示されているのは、表示の抗がん薬５−フルオウリシル（Ｆｌｕｏｕｒｉｃｉｌ）（５−ＦＵ）イリノテカンまたはオキサリプラチンで４日間処置された、８０％Ｏ２下、チタンインサート上で５日間のエクスビボ培養後の、腫瘍切片の形態を示す代表的な組織学的顕微鏡写真である。ＤＭＳＯによる処置を対照とした。組織はオキサリプラチン処置およびイリノテカン処置には用量依存的に感受性であったが、５−フルオウリシルには抵抗性であったことに注目されたい。スケールバーは５０μｍを表す。各条件について、組織を３つ一組にして試験した。
【図６】異なる個体から得られ、開発されたエクスビボ培養法で培養された腫瘍組織切片が、同じ抗がん薬に対して差異的感受性を呈することを示す図である。腫瘍縮小および腹腔内化学治療のための手術時に取り出された腹膜中の転移巣からヒト結腸直腸がん（ＣＲＣ）腫瘍組織を採取した。示されているのは、表示の抗がん薬５−フルオウリシル（５−ＦＵ）またはオキサリプラチンで４日間処置された、８０％Ｏ２下、チタンインサート上で５日間のエクスビボ培養後の、腫瘍切片の形態を示す代表的な組織学的顕微鏡写真である。ＤＭＳＯによる処置を対照とした。ＰＲは部分応答（ｐａｒｔｉａｌ  ｒｅｓｐｏｎｓｅ）を示し、ＮＲは応答なし（ｎｏ  ｒｅｓｐｏｎｓｅ）を示す。患者番号８から得られた腫瘍がオキサリプラチンに対して強い部分応答を有し、５−フルオロウリシル（Ｆｌｕｏｒｏｕｒｉｃｉｌ）には応答しなかったのに対し、別の患者である患者番号６はどちらの薬物にも部分的に応答したことに注目されたい。スケールバーは５０μｍを表す。各条件について、組織を２つ一組にして試験した。
【図７】開発されたエクスビボ培養法が、標的治療に対する感受性を、分子プロファイリングによって予測されるとおりに予測できることを示す図である。示されているのは、ＡＺＤ４５４７（ＦＧＦＲ阻害剤）で４日間処置された、８０％Ｏ２下、チタンインサート上で５日間のエクスビボ培養後の、２人の患者からのトリプルネガティブ乳がん腫瘍の切片の形態を示す代表的な組織学的顕微鏡写真である。ＤＭＳＯによる処置を対照とした。ＦＧＦＲ１の増幅を内包する腫瘍を持つ患者番号１はＡＺＤ４５４７（ＦＧＦＲ阻害剤）に対して感受性であり、一方、この変異を内包しない患者番号２は処置に対して抵抗性であったことに注目されたい。スケールバーは５０μｍを表す。各条件について、組織を２つ一組にして試験した。
【図８】異なる処置に対する組織の感受性を評価するために、増殖に関するＫｉ６７による染色を使用できることを示す図である。示されているのは、表示の薬物で４日間処置された、８０％Ｏ２下、チタンインサート上で５日間のエクスビボ培養後の、ある患者からの形態（Ｈ＆Ｅ染色による）および増殖（Ｋｉ６７染色による）を示す代表的な組織学的顕微鏡写真である。右側のグラフはＪａｃｋｓｏｎ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓによって作成されたものであって、オキサリプラチンおよび５−フルオウリシルによる処置に対するこのＣＲＣ由来異種移植片のインビボ応答を示している。ｙ軸は腫瘍サイズをｍｍ３の単位で示している。この患者は、インビボでもエクスビボでも、５−フルオウリシルには部分感受性であったが、オキサリプラチンに対する感受性は非常に高かった。ＤＭＳＯ処置を対照とした。スケールバーは５０μｍを表す。各条件について、組織を２つ一組にして試験した。
【図９】ＥＶＯＣのためのコア生検材料の加工を示す図である。この例では、金属トレイ中のアガロース液に３つのコア生検材料を並べて置く。アガロースを追加し、トレイを冷却する。生検材料をアガロースから切り出し、そのブロックをコンタクト接着剤でプランジャー上に固定し、さらなるアガロースに（組織片の場合と同じ方法を使って）包埋してから、ミクロトームで切断する。生検切片は、組織切片と同様の方法で処理され、加工される。スケールバーは１００μｍを表す。
【図１０】組織を薄切し、実験を開始する前に最大４８時間培地中に貯蔵しても、組織に有害な影響は何もなく、アウトカムにも何も変化がないことを示す組織学的顕微鏡写真である。示されているのは、薄切後直ちにまたは冷蔵４８時間後に、対照ＤＭＳＯまたは５−フルオロウリシル（５−ＦＵ）で４日間処置された大腸がん組織である。実験が終了する１８時間前にＢｒｄＵを添加し、組織を抗ＢｒｄＵ抗体で染色することで、分裂細胞を同定した。どちらの条件でも、５−ＦＵで処置された組織は依然として、ある程度生存可能であるが、処置に応答し始めて細胞死が増加しＢｒｄＵが減少することに注目されたい。スケールバーは５０μＭを表す。
【図１１】５日間のエクスビボ培養後の、表示した組織を示す代表的な組織像と、検査した組織を要約した表であり、これらの組織はいずれも、少なくとも５日間の培養中は、組織の構造および生存能を維持した。収集した組織の精密切断切片を、ＤＭＥＭ／Ｆ１２中、８０％Ｏ２下、チタンインサート上で、５日間インキュベートし、Ｈ＆Ｅで染色した。実験はすべて、表示したがんの２つの異なる症例について、２つ一組にして行った。
【発明を実施するための形態】
【００４９】
本発明は、そのいくつかの実施形態において、エクスビボ培養系およびその使用方法に関する。
【００５０】
本発明の少なくとも１つの実施形態を詳しく説明する前に、本発明は、その応用において、以下の記載に示される詳細または実施例によって例証される詳細に、必ずしも限定されないことを理解すべきである。本発明には他の実施形態も可能であり、本発明はさまざまな形で実施または遂行することができる。
【００５１】
がんなどの疾患のための個別化された処置オプションは、典型的には、遺伝子プロファイリングと、ある具体的処置に対する患者の細胞の応答を、患者の腫瘍から作成された腫瘍由来細胞株や患者由来異種移植片（ＰＤＸ）モデルなどといった、多額の費用と時間のかかるモデルを使って試験することとを使用する。近年、薬物毒性、ウイルスの取込み、放射線または具体的抗がん薬に対する腫瘍の感受性の研究を含む多様な応用における使用に関して、エクスビボ器官培養（ＥＶＯＣ）系が提案されている。
【００５２】
本発明の実施化にあたって、本発明者らは、精密切断組織切片の構造および生存能を培養下に最大７日間保存することができ、したがってさまざまな薬物に対する病理組織の応答を予測することができるＥＶＯＣ系を、ここに開発した。
【００５３】
以下に、そして下記実施例項に例示するように、新たに開発されたＥＶＯＣ系は、培地への切片の間欠的浸漬を可能にすることによって切片全体にわたる栄養素およびガスの拡散を容易にする培養インサート上に（この場合はチタン製の再利用可能なグリッドの中央に）直接置かれた１つの組織切片を、酸素（８０％）を含有する高含酸素雰囲気下で、ウシ胎児血清（ｆｅｔａｌ−ｃａｌｆ  ｓｅｒｕｍ：ＦＣＳ）および抗微生物剤を加えただけの標準的培地を使って培養することに基づく（実施例１、表１、図１〜図２および図９）。この方法に従って培養された卵巣組織、結腸直腸組織、肺組織、膵臓組織および乳房組織を含むさまざまながん性組織のＥＶＯＣ系は、４〜６日間の培養後に高い生存能を呈した（実施例１、表１、図１１）。
【００５４】
次に本発明者らは、開発されたＥＶＯＣ系を、抗がん薬に対する腫瘍の応答を予測するために使用できることを示す（実施例２）。具体的に述べると、本発明者らは、さまざまな患者由来異種移植片（ＰＤＸ）モデルから得られたエクスビボがん性組織切片の抗がん処置に対する感受性が、処置に対するＰＤＸモデルのインビボ応答と一致すること（実施例２、表２、図３〜図４）、および患者から得られたエクスビボトリプルネガティブ乳がん組織切片の標的治療に対する感受性が、分子プロファイリングデータと一致すること（実施例２、図７）を示す。さらにまた本発明者らは、さまざまな患者からのヒト腫瘍のＥＶＯＣ系が、異なる抗がん処置に対して差異的感受性を呈することを示す（実施例２、表３〜４、図５〜図６および図８）。重要なことに、組織は、実験を開始する前に少なくとも４８時間にわたって培地中に貯蔵しても、組織または薬物感受性に有害な影響は何もない（実施例２、図１０）。
【００５５】
総合すると、新たに開発されたＥＶＯＣ系は、組織の微小環境、アーキテクチャ、生存能および遺伝的異質性を保存する。この系は、ヒト組織（例えばがん組織）の応答を迅速に高い信頼性および対費用効果で研究することを可能にする。その結果として、本教示はさらに、前臨床研究および基礎研究のための、ならびに疾患処置全般に関する、および個々の個別化された治療に関する、薬物の有効性を認定するための、開発されたこのＥＶＯＣ系の使用を提案する。
【００５６】
したがって、本発明の第１の態様によれば、培養培地と組織培養インサート上に置かれた精密切断組織切片とを含む培養系であって、前記精密切断組織切片が少なくとも５０％の酸素を含有する高含酸素雰囲気下に維持され、前記培養物が回転撹拌されることで前記培養培地への前記組織切片の間欠的浸漬を容易にする培養系が提供される。
【００５７】
本発明の別の一態様によれば、組織を培養する方法であって、少なくとも５０％の酸素を含有する高含酸素雰囲気下、培養培地中で、組織培養インサート上の精密切断組織切片を培養すること、および前記培養培地への前記組織切片の間欠的浸漬を容易にする回転で培養物を撹拌することを含む方法が提供される。
【００５８】
本明細書において使用する用語「培養系」は、エクスビボ環境における少なくとも精密切断組織切片、インサートおよび培地を指す。
【００５９】
具体的実施形態によれば、培養系は、精密切断組織切片の構造および生存能を、培養下に少なくとも２〜１０日間、２〜７日間、２〜５日間、４〜７日間、５〜７日間または４〜５日間は維持する。具体的一実施形態によれば、精密切断組織切片は生存能を、少なくとも５日間、６日間、７日間、さらには１０日間は維持する。具体的一実施形態によれば、精密切断組織切片は生存能を、少なくとも５日間は維持する。
【００６０】
具体的実施形態によれば、例えば生存至適区域（ｏｐｔｉｍａｌ  ａｒｅａ  ｏｆ  ｖｉａｂｉｌｉｔｙ）の形態分析による決定で、精密切断組織中の細胞の少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％は、４〜５日の培養後に生存能を維持している。
【００６１】
本明細書において使用する語句「生存至適区域」は、病理学者による評価で、同じ種のＥＶＯＣ直前試料と比較して、単位面積あたりに最も多数の生細胞が存在する、組織の（例えば倍率２０倍での）顕微鏡視野を指す。
【００６２】
したがって具体的実施形態によれば、培養は２〜１０日間、２〜７日間、２〜５日間、４〜７日間、５〜７日間または４〜５日間実行される。
【００６３】
具体的一実施形態によれば、培養は少なくとも４日間実行される。
【００６４】
具体的一実施形態によれば、培養は少なくとも５日間実行される。
【００６５】
具体的一実施形態によれば、培養は最大７日間実行される。
【００６６】
本明細書において使用する用語「組織」は、ある程度の血管分布を有する、生物の固形器官（すなわち血液でないもの）の一部であって、２つ以上の細胞タイプを含み、それを切除したインビボ組織のマクロ構造を少なくともある程度は維持しているものを指す。
【００６７】
例として、卵巣組織、結腸直腸組織、肺組織、膵臓組織、乳房組織、脳組織、網膜、皮膚組織、骨、心臓組織および腎臓組織が挙げられるが、これらに限定されるわけではない。具体的実施形態によれば、組織は、卵巣組織、結腸直腸組織、肺組織、膵臓組織、胃組織、胃食道組織および乳房組織からなる群より選択される。具体的実施形態によれば、組織は、卵巣組織、結腸直腸組織、肺組織、膵臓胃組織、胃食道組織、乳房組織、肝臓組織、軟骨組織および骨組織からなる群より選択される。具体的実施形態によれば、組織は、限定するわけではないが肝臓、骨、肺および腹膜などの部位から得られる転移がん組織である。
【００６８】
具体的実施形態によれば、組織は肝臓組織ではない。
【００６９】
具体的実施形態によれば、組織は前立腺組織ではない。
【００７０】
具体的実施形態によれば、組織は哺乳動物組織である。
【００７１】
具体的一実施形態によれば、組織はヒト組織である。
【００７２】
別の具体的一実施形態によれば、組織はマウス組織またはラット組織である。
【００７３】
具体的実施形態によれば、組織は健常組織である。
【００７４】
別の具体的実施形態によれば、組織は病理組織である。本方法では、複数の選別された精密切断組織切片（例えばそれぞれが別々のインサート上にあるもの）を使用してよく、それらはいずれも、病理組織、健常組織、またはそれらの組合せ（例えば健常組織を対照とする場合であって、その健常組織が病理組織と同じ組織源から採取される場合）からのものであることができる。
【００７５】
具体的実施形態によれば、組織は病理組織である。
【００７６】
本明細書において使用する用語「病理組織」は、疾患の原因となる組織を指す。したがってそのような組織の排除は、以下にさらに定義する処置につながると予想される。本発明のいくつかの態様による処置を適用できる疾患の具体例は以下に詳述する。具体的実施形態によれば、病理組織は炎症性組織、線維性組織またはがん性組織である。具体的一実施形態によれば、病理組織はがん性組織である。
【００７７】
具体的実施形態によれば、組織は、外科的に得られるか、生検、腹腔鏡検査、内視鏡検査によって得られるか、もしくは異種移植片として得られるか、またはそれらの任意の組合せとして得られる。
【００７８】
組織は、組織摘出後直ちに切断および培養してもよいし（すなわち初代組織）、動物モデルへの移植後に切断および培養してもよく［すなわち患者由来異種移植片（ＰＤＸ）］、各選択肢は本発明の別個の実施形態に相当する。
【００７９】
本発明のいくつかの実施形態による組織または組織切片は、新鮮単離するか、例えば４℃で貯蔵するか、または例えば液体窒素で凍結保存（すなわち冷凍）することができる。
【００８０】
具体的実施形態によれば、組織または組織切片は、以下にさらに開示するように、新鮮単離される（すなわち、対象からの回収後２４時間を超えず、保存加工に付されない）。
【００８１】
具体的実施形態によれば、組織は、組織回収後、切断に先だって、凍結保存される。
【００８２】
具体的実施形態によれば、組織は切断に先だって融解される。
【００８３】
具体的実施形態によれば、組織切片は切断後に凍結保存される。
【００８４】
具体的実施形態によれば、組織切片は培養に先だって融解される。
【００８５】
具体的実施形態によれば、組織は、組織回収後、切断に先だって、例えば培地中、４℃で保存される。
【００８６】
具体的実施形態によれば、組織切片は、切断後、培養に先だって、例えば培地中、４℃で保存される。
【００８７】
具体的実施形態によれば、４℃における保存は、最大１２０時間、最大９６時間、最大７２時間、または最大４８時間、実行される。
【００８８】
具体的実施形態によれば、４℃における保存は２４〜４８時間実行される。
【００８９】
したがって具体的実施形態によれば、本方法は、対象から、または組織を含む動物モデルから、組織を得ることをさらに含む。
【００９０】
本明細書において使用する語句「患者由来異種移植片（ＰＤＸ）」は、初代組織のドナーとは種が異なる動物への初代組織の移植によって作成された組織を指す。具体的実施形態によれば、ＰＤＸは、免疫不全マウスへのヒト初代組織（例えばがん性組織）の移植によって作成された組織である。
【００９１】
組織摘出に続いて組織を精密切断切片に薄切する。
【００９２】
本明細書において使用する語句「精密切断組織切片」は、単離された固形組織から得られる生存切片であって、再現性のある、明確に規定された厚さを持つもの（例えば切片間の厚さの変動は±５％）を指す。
【００９３】
典型的には、組織切片は、組織または器官を構成するさまざまな細胞タイプの中から特定の細胞タイプを選択することなく、組織の細胞をそれらの自然環境中に含有し、無傷の組織の細胞間相互作用および細胞−マトリックス相互作用などといった三次元的接続性を保っている、組織のミニモデルである。精密切断は、切片厚のばらつきおよび切断面の損傷（これらはどちらも組織切片全体での不均等なガス交換および栄養素交換の一因になる）による誤差原因を低減し、再現性を向上させ、隣接する切片を組織構造について評価し、異なる実験条件下でペアワイズに比較することを可能にする。
【００９４】
薄切片は、さまざまな方向（例えば前後方向、背腹方向、または鼻側頭方向）に、さまざまな厚さで、切断することができる。組織片のサイズ／厚さは組織源および切出しに使用する方法に基づく。具体的実施形態によれば、精密切断切片の厚さは、培養時に組織構造の維持を可能にする。
【００９５】
具体的実施形態によれば、精密切断切片の厚さは、内側細胞層が十分な酸素濃度および栄養素濃度に曝されるように、酸素および栄養素への内側細胞層の完全なアクセスを可能にする。
【００９６】
具体的実施形態によれば、精密切断切片の厚さは、内側細胞層が外側細胞層と同じ酸素濃度および栄養素濃度に曝されるように、酸素および栄養素への内側細胞層の完全なアクセスを可能にする。
【００９７】
具体的実施形態によれば、精密切断切片は５０〜１２００μｍ、１００〜１０００μｍ、１００〜５００μｍ、１００〜３００μｍ、または２００〜３００μｍである。
【００９８】
具体的一実施形態によれば、精密切断切片は２００〜３００μｍである。
【００９９】
組織切片を得る方法は当技術分野では知られていて、例えば下記の実施例項ならびにＲｏｉｆｅ  ｅｔ  ａｌ．（２０１６）Ｃｌｉｎ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．Ｊｕｎｅ  ３，１−１０、Ｖｉｃｋｅｒｓ  ｅｔ  ａｌ．（２００４）Ｔｏｘｉｃｏｌ  Ｓｃｉ．８２（２）：５３４−４４、Ｚｉｍｍｅｒｍａｎｎ  ｅｔ  ａｌ．（２００９）Ｃｙｔｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  ６１（３）：１４５−１５２）、Ｋｏｃｈ  ｅｔ  ａｌ．（２０１４）Ｃｅｌｌ  Ｃｏｍｍｕｎｉｃａｔｉｏｎ  ａｎｄ  Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ  １２：７３およびＧｒａａｆ  ｅｔ  ａｌ．Ｎａｔｕｒｅ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ（２０１０）５：１５４０−１５５１に記載されており、これら各文献の内容は参照により本明細書にすべて組み込まれる。そのような方法として、ビブラトームを用いる薄切、アガロース包埋とそれに続くミクロトームによる切出し、またはマトリックスを用いる薄切が挙げられるが、これらに限定されるわけではない。
【０１００】
限定でない一例として、組織を単離し、直ちに、抗生物質が補足されていてもよい生理的切離培地（例えば氷冷ＰＢＳ）に入れる。
【０１０１】
具体的実施形態によれば、温阻血時間は２時間未満、１．５時間未満または１時間未満である。
【０１０２】
具体的実施形態によれば、冷阻血時間は９６時間未満、７２時間未満、４８時間未満、２４時間未満、１２時間未満、５時間未満または２時間未満である。
【０１０３】
薄切に先だって、組織を、例えばコンタクト接着剤を使って組織切片作成装置に取付け、次に例えば低融点アガロースゲルに包埋する。次に、組織を精密切断切片に切り出す。適切な組織切出しデバイスは、例えば限定するわけではないが、Ｃｏｍｐｒｅｓｓｔｏｍｅ（商標）ＶＦ−３００（Ｐｒｅｃｉｓｉｏｎａｒｙ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ  Ｉｎｃ．、米国ノースカロライナ州）、Ｂｒｅｎｄｅｌ−Ｖｉｔｒｏｎ組織切片作成装置（アリゾナ州ツーソン）、Ｋｒｕｍｄｉｅｃｋ精密組織切片作成装置（モデル番号ＭＤ４０００−０１、Ａｌａｂａｍａ  Ｒ＆Ｄ）およびＬｅｉｃａ  ＶＴ１２００Ｓ振動刃ミクロトーム（Ｌｅｉｃａ、ドイツ・ウェツラー）など、数多く市販されている。具体的実施形態によれば、切出しデバイスをウィリアムス培地Ｅまたはクレブス−ヘンゼライト緩衝液（Ｋｒｅｂｓ−Ｈｅｎｓｅｌｅｉｔ  ｂｕｆｆｅｒ：ＫＨＢ）などの氷冷培地で満たす。切離のための、ならびに培養前の組織および組織切片の保存のための、組織タイプごとの培地および条件は、当業者にはわかるだろう。
【０１０４】
次に、培養培地で満たされた組織培養容器中の組織培養インサート上に組織切片を置く。単一の組織培養インサート上に１つの切片または複数の切片を置くことができる。具体的実施形態によれば、単一の組織培養インサート上に１つの切片を置く。
【０１０５】
具体的実施形態によれば、培養容器は、組織切片の底部まで培養培地（例えばインサートが入っている６穴プレートに４ｍｌの培地）で満たされる。
【０１０６】
培養物は、組織培養用の無菌環境を提供することができるガラス製、プラスチック製または金属製容器内にあることができる。具体的実施形態によれば、培養容器として、ディッシュ、プレート、フラスコ、ボトルおよびバイアルが挙げられる。ＣＯＳＴＡＲ（登録商標）、ＮＵＮＣ（登録商標）およびＦＡＬＣＯＮ（登録商標）などの培養容器が、さまざまな製造者から市販されている。
【０１０７】
具体的実施形態によれば、培養容器は、６穴プレート、２４穴プレート、４８穴プレートおよび９６穴プレートなどの組織培養プレートである。
【０１０８】
具体的一実施形態によれば、培養容器は組織培養６穴プレートである。
【０１０９】
具体的実施形態によれば、培養容器は対応組織から抽出されたタンパク質でプレコートされていない（例えば組織ががん性組織である場合、培養容器は病期および悪性度対応腫瘍抽出タンパク質でプレコートされていない）。そのようなタンパク質の限定でない例として、ＥＣＭタンパク質、例えばコラーゲン、フィブロネクチン、ラミニン、ビブロネクチン（ｖｉｂｒｏｎｅｃｔｉｎ）、カドヘリン、フィラミンＡ、ビメンチン、オステオポンチン、デコリン、テネイシンＸ、基底膜タンパク質、細胞骨格タンパク質およびマトリックスタンパク質、ならびに成長因子が挙げられる。
【０１１０】
本発明によって使用される培養培地は、塩類、栄養素、ミネラル、ビタミン、アミノ酸、核酸および／またはタンパク質、例えばサイトカイン、成長因子およびホルモンなど、いずれも細胞増殖にとって必要であり、組織の構造および生存能を維持することができる物質の組合せを含む、水性培地であることができる。例えば培養培地は、以下にさらに述べるように、必要な添加剤を補足した、ＤＭＥＭ／Ｆ１２（例えばＢｉｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｄｕｓｔｒｉｅｓから入手することができる）、Ｍ１９９（例えばＢｉｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｄｕｓｔｒｉｅｓから入手することができる）、ＲＰＭＩ（例えばＧｉｂｃｏ−Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ  ｐｒｏｄｕｃｔｓから入手することができる）、Ｍ１９９（例えばＳｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈから入手することができる）、Ｋｏ−ＤＭＥＭ（例えばＧｉｂｃｏ−Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ  ｐｒｏｄｕｃｔｓから入手することができる）などの合成組織培養培地であることができる。好ましくは、本発明の培養培地に含まれる成分はすべて、組織培養等級で、実質的に純粋である。
【０１１１】
想定した各組織タイプ用に培養培地を選択する方法は、当業者にはわかるだろう。
【０１１２】
本発明の具体的実施形態によれば、培養培地は、血清、例えばウシ胎児血清（ＦＣＳ、例えばＧｉｂｃｏ−Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ  ｐｒｏｄｕｃｔｓから入手することができる）を含む。
【０１１３】
具体的実施形態によれば、培養培地は１０％未満の血清を含む。
【０１１４】
具体的実施形態によれば、培養培地は、培養される組織と同じ種から得られる２％未満の血清を含む。
【０１１５】
具体的実施形態によれば、培養培地は培養される組織と同じ種から得られる血清を欠く。
【０１１６】
具体的実施形態によれば、培養培地は、培養される組織にとって自家の（すなわち同じ対象からの）２％未満の血清を含む。
【０１１７】
具体的実施形態によれば、培養培地は、培養される組織にとって自家の（すなわち同じ対象からの）血清を欠く。
【０１１８】
具体的実施形態によれば、培養培地は２％未満のヒト血清を含む。
【０１１９】
本発明のいくつかの実施形態によれば、培養培地はヒト血清を欠く。
【０１２０】
本発明のいくつかの実施形態によれば、培養培地は、あらゆる動物性夾雑物、すなわち動物細胞、体液、または病原体（例えば動物細胞に感染するウイルス）を欠く、すなわちゼノフリーである。
【０１２１】
本発明のいくつかの実施形態によれば、培養培地は、抗生物質（例えばペニシリン、ストレプトマイシン、ゲンタマイシン）、抗真菌剤（例えばアンホテリシンＢ）、Ｌ−グルタミンまたはＮＥＡＡ（ｎｏｎ−ｅｓｓｅｎｔｉａｌ  ａｍｉｎｏ  ａｃｉｄ：非必須アミノ酸）を、さらに含むことができる。
【０１２２】
具体的一実施形態によれば、培地は血清および抗生物質を含む。
【０１２３】
具体的一実施形態によれば、培地はＤＭＥＭ／Ｆ１２、５％ＦＣＳ、グルタミン、ペニシリン、ストレプトマイシン、ゲンタマイシンおよびアンホテリシンＢを含む。
【０１２４】
補足物のレベルを十分に維持するために、そして組織を損傷しうる代謝老廃物を除去するために、培養培地が定期的に更新されうることに留意すべきである。具体的実施形態によれば、培養培地は、１２〜７２時間ごと、２４〜７２時間ごと、２４〜４８時間ごとまたは１２〜４８時間ごとに更新される。
【０１２５】
具体的実施形態によれば、培養培地は１２〜４８時間ごとに更新される。
【０１２６】
具体的一実施形態によれば、培養培地は１２〜２４時間後に１回更新され、その後は約４８時間ごとに更新される。
【０１２７】
本明細書において使用する語句「組織培養インサート」は、組織培養用の容器中に懸架された多孔質膜を指し、組織切片のその後のエクスビボ培養に適合する。孔径は、組織切片を支えることができ、同時に培養培地を透過させることで、それぞれ切片へのおよび切片からの栄養素および代謝廃棄物の通過を可能にする。具体的実施形態によれば、組織切片は組織培養インサート上に置かれ、それにより、組織切片の頂端面および基底面の両方への培養培地のアクセスが可能になる。
【０１２８】
具体的実施形態によれば、孔径は０．１μｍ〜２０μｍ、０．１μｍ〜１５μｍ、０．１μｍ〜１０μｍ、０．１μｍ〜５μｍ、０．４μｍ〜２０μｍ、０．４μｍ〜１０μｍまたは０．４μｍ〜５μｍである。
【０１２９】
具体的実施形態によれば、孔径は０．４ｍｍ〜４ｍｍ、０．４ｍｍ〜１ｍｍ、１ｍｍ〜４ｍｍ、１ｍｍ〜３ｍｍまたは１ｍｍ〜２ｍｍである。
【０１３０】
具体的実施形態によれば、組織培養インサートは無菌である。
【０１３１】
具体的実施形態によれば、組織培養インセット（ｉｎｓｅｔ）は使い捨てである。
【０１３２】
具体的実施形態によれば、細胞培養インサートは再使用可能かつオートクレーブ可能である。
【０１３３】
細胞培養インサートは合成物でも天然物でもよく、無機物またはポリマー、例えばチタン、アルミナ、ポリテトラフルオロエチレン（ＰＴＦＥ）、テフロン、ステンレス鋼、ポリカーボネート、ニトロセルロースおよびセルロースエステルであることができる。具体的実施形態によれば、細胞培養インサートはチタンインサートである。本発明の具体的実施形態で使用することができる細胞培養インサートは、例えばＡｌａｂａｍａ  Ｒ＆Ｄ、Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ、Ｃｏｓｔａｒ、Ｃｏｒｎｉｎｇ  Ｉｎｃｏｒｐｏｒａｔｅｄ、Ｎｕｎｃ、Ｖｉｔｒｏｎ  Ｉｎｃ．およびＳＥＦＡＲから市販されており、例えば限定するわけではないが、ＭＡ００３６ウェルプレートインサート、ＢＩＯＣＯＡＴ（商標）、Ｔｒａｎｓｗｅｌｌ（登録商標）、Ｍｉｌｌｉｃｅｌｌ（登録商標）、Ｆａｌｃｏｎ（登録商標）−Ｃｙｃｌｏｐｏｒｅ、Ｎｕｎｃ（登録商標）Ａｎａｐｏｒｅ、チタンスクリーンおよびテフロンスクリーンなどがある。
【０１３４】
具体的実施形態によれば、組織培養インサートはチタングリッドインサート、例えば限定するわけではないが、チタンＭＡ００３６ウェルプレートインサート（Ａｌａｂａｍａ  Ｒ＆Ｄ）である。
【０１３５】
具体的実施形態によれば、組織培養インサートは、コラーゲン、フィブロネクチンまたはポリエチレングリコール（ＰＥＧ）などの有機材料でコートされていない。
【０１３６】
具体的実施形態によれば、組織培養インサートは、対応組織から抽出されたタンパク質でコートされていない（例えば組織ががん性組織である場合、組織培養インサートは病期および悪性度対応腫瘍抽出タンパク質でプレコートされていない）。
【０１３７】
具体的実施形態によれば、組織切片は、組織培養インサートと直接接触している。
【０１３８】
具体的実施形態によれば、組織切片は、コラーゲン、フィブロネクチンまたは合成ポリマー（培養容器の一部でないもの）、例えばポリエチレングリコール（ＰＥＧ）などの異種有機材料によって、培養培地から隔てられていない。
【０１３９】
具体的実施形態によれば、組織切片は培養培地と直接接触している。
【０１４０】
具体的実施形態によれば、組織切片は細胞培養インサートの中央に置かれる。したがって例えば、チタンＭＡ００３６ウェルプレートインサートなどのチタングリッドを適用する場合、組織切片はインサートの中央に位置するくぼみに入れられる。
【０１４１】
次に組織切片を、少なくとも５０％の酸素および例えば５％ＣＯ２を含有する高含酸素加湿雰囲気下、生理学的温度、例えば３７℃で培養（または維持）する。
【０１４２】
具体的実施形態によれば、高含酸素雰囲気は少なくとも６０％、少なくとも７０％または少なくとも８０％の酸素を含有する。
【０１４３】
具体的実施形態によれば、高含酸素雰囲気は少なくとも７０％の酸素を含有する。
【０１４４】
別の具体的実施形態によれば、高含酸素雰囲気は９５％未満の酸素を含有する。
【０１４５】
具体的一実施形態によれば、高含酸素雰囲気は約８０％の酸素を含有する。
【０１４６】
具体的一実施形態によれば、培養プロセス中、培養物は、培養培地への組織切片の間欠的浸漬を容易にする回転で撹拌される。
【０１４７】
本明細書において使用する語句「回転撹拌されることで培養培地への組織切片の間欠的浸漬を容易にする」または「培養培地への組織切片の間欠的浸漬を容易にする回転で撹拌する」は、培地全体および組織切片全体にわたる栄養素およびガスの拡散を容易にするような、培地への組織切片の定期的浸漬を可能にする撹拌を指す。
【０１４８】
具体的実施形態によれば、撹拌はオービタル撹拌である。
【０１４９】
具体的実施形態によれば、撹拌は角度付き撹拌（ａｎｇｌｅｄ  ａｇｉｔａｔｉｏｎ）、例えば３０°〜４５°の角度である。
【０１５０】
具体的実施形態によれば、撹拌は、傾斜付きローテーター（例えばＡｌａｂａｍａ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  ａｎｄ  Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔから市販されているＭＤ２５００インキュベーションユニット）によって実行される。
【０１５１】
具体的実施形態によれば、撹拌回転数は５０〜２００ｒｐｍ、５０〜１５０ｒｐｍまたは５０〜１００ｒｐｍである。
【０１５２】
具体的実施形態によれば、撹拌回転数は約７０ｒｐｍである。
【０１５３】
本発明の組織培養物および方法は、限定するわけではないが次に挙げる応用を含む、多くの応用に適合させることができる。
１．前臨床研究および基礎研究、例えば
−健康および疾患に関与する機序の研究、
−特異的マーカーの存在に関する病理組織（例えば腫瘍組織）のスクリーニング、
−抗がん薬などの新規薬物または新規薬物組合せのスクリーニングおよび／または開発、
−薬物のバッチの効力の決定、
−ヒト組織の感受性および抵抗性の機序の研究。したがって例えば、ヒト患者では容易に行うことができない詳細な機序研究のために、複数の薬物および薬物組合せによる同じ腫瘍の処置を利用することができる。
−腫瘍マイクロバイオーム、すなわちがん腫瘍中に存在するかもしれない細菌、ウイルスまたは真菌の研究。
２．さらなる薬物開発ならびに機序研究、前臨床インビボ試験および臨床治験のための薬物または薬物組合せに優先順位をつけるための、腫瘍切片に対する新規薬物または薬物組合せの効果の試験。
３．薬物（例えば抗がん薬）および薬物組合せに対する患者の応答を予測し、その結果として、その予測を使って、その患者のための具体的処置レジメンをテーラーメードすること（すなわち個別化医療）。
４．組織切片は５日間の培養後に構造を維持し高い生存能を呈するので、この系は、組織の代謝活性を含めて、急性毒性研究だけでなく慢性毒性研究のモデル化も可能にする。
５．陽性のエクスビボ応答を呈する培養物は、臨床治験における患者の組入れ基準として使用することができる。したがってこの工程は、応答する見込みが高い患者を前もって選択することができ、その結果として、臨床治験成功の見込みを向上させることができる。そのような場合、このエクスビボ組織培養物は、後に、薬物適格性の基準の一部になるかもしれない。
【０１５４】
したがって具体的実施形態によれば、培養系は薬物を含む。
【０１５５】
別の具体的実施形態によれば、上述した本発明の方法は、以下にさらに記載するように、薬物または薬物組合せを添加することを含む。
【０１５６】
本明細書において使用する語句「薬物」は、小分子および生物学的薬物（例えば核酸剤、ポリペプチド、抗体、アプタマーなど）を含む、抗病理効果を有する作用物質を指す。典型的には、薬物は、精密切断組織切片にとって、または精密切断組織切片が由来する人体もしくはヒト組織において、外因性である。薬物は、病変の処置に関して規制当局によって承認された薬物であっても、開発中の薬物であってもよい。具体的実施形態によれば、薬物は薬物のバッチである。
【０１５７】
具体的実施形態によれば、薬物は抗炎症薬である。
【０１５８】
本発明の具体的実施形態で使用することができる抗炎症薬の限定でない例として、以下の薬物が挙げられる：アルクロフェナク；ジプロピオン酸アルクロメタゾン；アルゲストンアセトニド；アルファアミラーゼ；アムシナファル；アムシナフィド；アンフェナクナトリウム；塩酸アミプリロース；アナキンラ；アニロラク；アニトラザフェン；アパゾン；バルサラジド二ナトリウム；ベンダザック；ベノキサプロフェン；塩酸ベンジダミン；ブロメライン；ブロペラモール；ブデソニド；カルプロフェン；シクロプロフェン；シンタゾン；クリプロフェン；プロピオン酸クロベタゾール；酪酸クロベタゾン；クロピラク；プロピオン酸クロチカゾン；コルメタソンアセタート；コルトドキソン；デフラザコート；デソニド；デスオキシメタゾン；ジプロピオン酸デキサメタゾン；ジクロフェナクカリウム；ジクロフェナクナトリウム；二酢酸ジフロラゾン；ジフルミドンナトリウム；ジフルニサル；ジフルプレドネート；ジフタロン；ジメチルスルホキシド；ドロシノニド；エンドリソン；エンリモマブ；エノリカムナトリウム；エピリゾール；エトドラク；エトフェナメート；フェルビナク；フェナモール；フェンブフェン；フェンクロフェナク；フェンクロラク；フェンドサール；フェンピパロン；フェンチアザク；フラザロン；フルアザコルト；フルフェナム酸；フルミゾール；酢酸フルニソリド；フルニキシン；フルニキシンメグルミン；フルオコルチンブチル；酢酸フルオロメトロン；フルクァゾン；フルルビプロフェン；フルレトフェン；プロピオン酸フルチカゾン；フラプロフェン；フロブフェン；ハルシノニド；プロピオン酸ハロベタゾール；酢酸ハロプレドン；イブフェナック；イブプロフェン；イブプロフェンアルミニウム；イブプロフェンピコノール；イロニダプ；インドメタシン；インドメタシンナトリウム；インドプロフェン；インドキソール；イントラゾール；イソフルプレドンアセタート；イソキセパク；イソキシカム；ケトプロフェン；ロフェミゾール塩酸塩；ロモキシカム（Ｌｏｍｏｘｉｃａｍ）；エタボン酸ロテプレドノール；メクロフェナム酸ナトリウム；メクロフェナム酸；メクロリソンジブチラート；メフェナム酸；メサラミン；メセクラゾン；スレプタン酸メチルプレドニゾロン；モミフルマート（Ｍｏｍｉｆｕｒｕｍａｔｅ）；ナブメトン；ナプロキセン；ナプロキセンナトリウム；ナプロキソール；ニマゾン；オルサラジンナトリウム；オルゴテイン；オルパノキシン；オキサプロジン；オキシフェンブタゾン；塩酸パラニリン；ポリ硫酸ペントサンナトリウム；フェンブタゾンナトリウムグリセラート；ピルフェニドン；ピロキシカム；ケイ皮酸ピロキシカム；ピロキシカムオラミン；ピルプロフェン；プレドナザート；プリフェロン；プロドール酸；プロカゾン；プロキサゾール；クエン酸プロキサゾール；リメキソロン；ロマザリット；サルコレクス；サルナセジン；サルサラート；塩化サングイナリウム；セクラゾン；セルメタシン；スドキシカム；スリンダク；スプロフェン；タルメタシン；タルニフルマート；タロサラート；テブフェロン；テニダップ；テニダップナトリウム；テノキシカム；テシカム；テシミド；テトリダミン；チオピナク；チキソコルトールピバラート；トルメチン；トルメチンナトリウム；トリクロニド；トリフルミダート；ジドメタシン；ゾメピラクナトリウム。
【０１５９】
別の具体的実施形態によれば、薬物は抗がん薬である。
【０１６０】
本明細書において使用する語句「抗がん薬」は、化学治療薬、小分子、生物学的薬物、ホルモン治療薬、抗体および標的治療薬を含む、抗腫瘍効果を有する作用物質を指す。
【０１６１】
本発明の具体的実施形態で使用することができる抗がん薬として、以下の薬物が挙げられるが、これらに限定されるわけではない：アシビシン；アクラルビシン；アコダゾール塩酸塩；アクロニン；アドリアマイシン；アドゼレシン；アルデスロイキン；アルトレタミン；アンボマイシン；酢酸アメタントロン；アミノグルテチミド；アムサクリン；アナストロゾール；アントラマイシン；アスパラギナーゼ；アスペルリン；アザシチジン；アゼテパ；アゾトマイシン；バチマスタット；ベンゾデパ；ビカルタミド；ビサントレン塩酸塩；メシル酸ビスナフィド；ビゼレシン；硫酸ブレオマイシン；ブレキナルナトリウム；ブロピリミン；ブスルファン；カクチノマイシン；カルステロン；カラセミド；カルベチマー；カルボプラチン；カルムスチン；カルビシン塩酸塩；カルゼレシン；セデフィンゴール；クロラムブシル；シロレマイシン；シスプラチン；クラドリビン；メシル酸クリスナトール；シクロホスファミド；シタラビン；ダカルバジン；ダクチノマイシン；ダウノルビシン塩酸塩；デシタビン；デキソルマプラチン；デザグアニン；メシル酸デザグアニン；ジアジコン；ドセタキセル；ドキソルビシン；ドキソルビシン塩酸塩；ドロロキシフェン；ドロロキシフェンクエン酸塩；プロピオン酸ドロモスタノロン；デュアゾマイシン；エダトレキサート；塩酸エフロルニチン；エルサミトルシン；エンロプラチン；エンプロマート；エピプロピジン；エピルビシン塩酸塩；エルブロゾール；エソルビシン塩酸塩；エストラムスチン；リン酸エストラムスチンナトリウム；エタニダゾール；エトポシド；リン酸エトポシド；エトプリン；塩酸ファドロゾール；ファザラビン；フェンレチニド；フロクスウリジン；リン酸フルダラビン；フルオロウラシル；フルロシタビン；ホスキドン；ホストリエシンナトリウム；ゲムシタビン；ゲムシタビン塩酸塩；ヒドロキシ尿素；イダルビシン塩酸塩；イホスファミド；イルモホシン；インターフェロンアルファ−２ａ；インターフェロンアルファ−２ｂ；インターフェロンアルファ−ｎ１；インターフェロンアルファ−ｎ３；インターフェロンベータ−Ｉａ；インターフェロンガンマ−Ｉｂ；イプロプラチン；イリノテカン塩酸塩；ランレオチド酢酸塩；レトロゾール；ロイプロリド酢酸塩；リアロゾール塩酸塩；ロメトレキソールナトリウム；ロムスチン；ロソキサントロン塩酸塩；マソプロコール；メイタンシン；塩酸メクロレタミン；酢酸メゲストロール；酢酸メレンゲストロール；メルファラン；メノガリル；メルカプトプリン；メトトレキサート；メトトレキサートナトリウム；メトプリン；メツレデパ；ミチンドミド；ミトカルシン；ミトクロミン；ミトギリン；ミトマルシン；マイトマイシン；ミトスペル；ミトタン；ミトキサントロン塩酸塩；ミコフェノール酸；ノコダゾール；ノガラマイシン；オルマプラチン；オキシスラン；パクリタキセル；ペグアスパルガーゼ；ペリオマイシン；ペンタムスチン；ペプロマイシン硫酸塩；ペルホスファミド；ピポブロマン；ピポスルファン；ピロキサントロン塩酸塩；プリカマイシン；プロメスタン；ポルフィマーナトリウム；ポルフィロマイシン；プレドニムスチン；プロカルバジン塩酸塩；ピューロマイシン；ピューロマイシン塩酸塩；ピラゾフリン；リボプリン；ログレチミド；サフィンゴール；サフィンゴール塩酸塩；セムスチン；シムトラゼン；スパルフォセートナトリウム；スパルソマイシン；スピロゲルマニウム塩酸塩；スピロムスチン；スピロプラチン；ストレプトニグリン；ストレプトゾシン；スロフェヌル；タリソマイシン；タキソール；テコガランナトリウム；テガフル；テロキサントロン塩酸塩；テモポルフィン；テニポシド；テロキシロン；テストラクトン；チアミプリン；チオグアニン；チオテパ；チアゾフイリン（Ｔｉａｚｏｆｕｉｒｉｎ）；チラパザミン；トポテカン塩酸塩；トレミフェンクエン酸塩；トレストロンアセタート；リン酸トリシリビン；トリメトレキサート；グルクロン酸トリメトレキサート；トリプトレリン；ツブロゾール塩酸塩；ウラシルマスタード；ウレデパ；バプレオチド；ベルテポルフィン；ビンブラスチン硫酸塩；ビンクリスチン硫酸塩；ビンデシン；ビンデシン硫酸塩；ビネピジンスルファート；ビングリシナートスルファート；硫酸ビンロイロシン；ビノレルビン酒石酸塩；ビンロシジンスルファート；ビンゾリジンスルファート；ボロゾール；ゼニプラチン；ジノスタチン；ゾルビシン塩酸塩。さらなる抗新生物剤として、Ｇｏｏｄｍａｎ  ａｎｄ  Ｇｉｌｍａｎ’ｓ「Ｔｈｅ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｂａｓｉｓ  ｏｆ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ」第８版、１９９０、ＭｃＧｒａｗ−Ｈｉｌｌ，Ｉｎｃ．（Ｈｅａｌｔｈ  Ｐｒｏｆｅｓｓｉｏｎｓ  Ｄｉｖｉｓｉｏｎ）の１２０２〜１２６３頁、第５２章、Ａｎｔｉｎｅｏｐｌａｓｔｉｃ  Ａｇｅｎｔｓ（Ｐａｕｌ  ＣａｌａｂｒｅｓｉおよびＢｒｕｃｅ  Ａ．Ｃｈａｂｎｅｒ）およびその序論に開示されているものが挙げられる。
【０１６２】
抗がん承認薬の限定でない例として、以下の薬物が挙げられる：アバレリックス、アルデスロイキン、アルデスロイキン、アレムツズマブ、アリトレチノイン、アロプリノール、アルトレタミン、アミフォスチン、アナストロゾール、三酸化ヒ素、アスパラギナーゼ、アザシチジン、ＡＺＤ９２９１、ＡＺＤ４５４７、ＡＺＤ２２８１、ベバクジマブ（ｂｅｖａｃｕｚｉｍａｂ）、ベキサロテン、ブレオマイシン、ボルテゾミブ、ブスルファン、カルステロン、カペシタビン、カルボプラチン、カルムスチン、セレコキシブ、セツキシマブ、シスプラチン、クラドリビン、クロファラビン、シクロホスファミド、シタラビン、ダブラフェニブ、ダカルバジン、ダクチノマイシン、アクチノマイシンＤ、ダルベポエチンアルファ、ダルベポエチンアルファ、ダウノルビシンリポソーム、ダウノルビシン、デシタビン、デニロイキンジフチトクス、デクスラゾキサン、デクスラゾキサン、ドセタキセル、ドキソルビシン、プロピオン酸ドロモスタノロン、エリオッツＢ溶液（Ｅｌｌｉｏｔ’ｓ  Ｂ  Ｓｏｌｕｔｉｏｎ）、エピルビシン、エポエチンアルファ、エルロチニブ、エストラムスチン、エトポシド、エクセメスタン、フィルグラスチム、フロクスウリジン、フルダラビン、フルオロウラシル５−ＦＵ、フルベストラント、ゲフィチニブ、ゲムシタビン、ゲムツズマブオゾガマイシン、酢酸ゴセレリン、酢酸ヒストレリン、ヒドロキシ尿素、イブリツモマブチウキセタン、イダルビシン、イホスファミド、メシル酸イマチニブ、インターフェロンアルファ２ａ、インターフェロンアルファ−２ｂ、イリノテカン、レナリドミド、レトロゾール、ロイコボリン、ロイプロリド酢酸塩、レバミソール、ロムスチン、ＣＣＮＵ、メクロレタミン（ｍｅｃｌｏｒｅｔｈａｍｉｎｅ）、ナイトロジェンマスタード、酢酸メゲストロール、メルファラン、Ｌ−ＰＡＭ、メルカプトプリン６−ＭＰ、メスナ、メトトレキサート、マイトマイシンＣ、ミトタン、ミトキサントロン、フェンプロピオン酸ナンドロロン、ネララビン、ノフェツモマブ、オプレルベキン、オプレルベキン、オキサリプラチン、パクリタキセル、パルボシクリブ  パリフェルミン、パミドロネート、ペガデマーゼ、ペグアスパルガーゼ、ペグフィルグラスチム、ペメトレキセド二ナトリウム、ペントスタチン、ピポブロマン、プリカマイシン  ミトラマイシン、ポルフィマーナトリウム、プロカルバジン、キナクリン、ラスブリカーゼ、リツキシマブ、サルグラモスチム、ソラフェニブ、ストレプトゾシン、スニチニブマレイン酸塩、タモキシフェン、テモゾロミド、テニポシドＶＭ−２６、テストラクトン、チオグアニン６−ＴＧ、チオテパ、チオテパ、トポテカン、トレミフェン、トシツモマブ、トラメチニブ、トラスツズマブ、トレチノインＡＴＲＡ、ウラシルマスタード、バルルビシン、ビンブラスチン、ビノレルビン、ゾレドロネートおよびゾレドロン酸。
【０１６３】
具体的実施形態によれば、抗がん薬は、ゲフィチニブ、ラパチニブ、アファチニブ、ＢＧＪ３９８、ＣＨ５１８３２８４、リンシチニブ、ＰＨＡ６６５７５２、クリゾチニブ、スニチニブ、パゾパニブ、イマチニブ、ルキソリチニブ、ダサチニブ、ＢＥＺ２３５、ピクチリシブ、エベロリムス、ＭＫ−２２０６、トラメチニブ／ＡＺＤ６２４４、ベムラフィニブ（Ｖｅｍｕｒａｆｉｎｉｂ）／ダブラフェニブ、ＣＣＴ１９６９６９／ＣＣＴ２４１１６１、バラセルチブ（Ｂａｒａｓｅｒｔｉｂ）、ＶＸ−６８０、ヌトリン３、パルボシクリブ、ＢＩ２５３６、バルドキソロン、ボリノスタット、ナビトクラックス（ＡＢＴ２６３）、ボルテゾミブ、ビスモデギブ、オラパリブ（ＡＺＤ２２８１）、シンバスタチン、５−フルオロウリシル、イリノテカン、エピルビシン、シスプラチンおよびオキサリプラチンからなる群より選択される。
【０１６４】
具体的実施形態によれば、抗がん薬は、４−ヒドロペルオキシシクロホスファミド、５−フルロウリシル（５ＦＵ）、オキサリプラチン、イリノテカン、ドセタキセル、シスプラチン、トラメチニブ、パルボシクリブおよびＡＺＤ４５４７からなる群より選択される。
【０１６５】
具体的実施形態によれば、抗がん薬は、５−フルロウリシル（５ＦＵ）、オキサリプラチン、イリノテカン、シスプラチン、４−ヒドロペルオキシシクロホスファミド、デセタキセル（Ｄｅｃｅｔａｘｅｌ）、ドキソルビシン、ナバルビン、ゲムシタニム（Ｇｅｍｃｉｔａｎｉｍｅ）、ゲフィチニブ、タモキシフェン、オラパリブ、トラメチニブ、エベロリムスおよびパルボシクリブからなる群より選択される。
【０１６６】
薬物組合せの差異的効果を試験するために本明細書に記載する培養系および方法を使用できることは理解されるであろう。
【０１６７】
したがって具体的実施形態によれば、薬物は薬物組合せである。
【０１６８】
本発明の培養系および方法における薬物の具体的濃度は、いくつかのがん組織（同じタイプまたは異なるタイプのもの）で異なる薬物濃度を培養し、用量依存的応答が達成される範囲を評価することによって導き出される。典型的には、この用量依存範囲は、培養されたがん組織が応答することまたは応答を示さないことで予測結果を与えると予想される領域を反映する。
【０１６９】
具体的実施形態によれば、本発明の培養系および方法における薬物濃度は、少なくとも、細胞株（例えば同じ組織タイプおよび／または同じ種の細胞株）におけるその薬物のＩＣ５０用量と同じである。
【０１７０】
具体的実施形態によれば、本発明の培養系および方法における薬物濃度は、細胞株（例えば同じ組織タイプおよび／または同じ種の細胞株）におけるその薬物のＩＣ５０用量より高い。
【０１７１】
具体的実施形態によれば、本発明の培養系および方法における薬物濃度は、細胞株（例えば同じ組織タイプおよび／または同じ種の細胞株）におけるその薬物のＩＣ５０用量の少なくとも２倍、少なくとも３倍、少なくとも５倍、少なくとも１０倍、少なくとも２５倍、少なくとも５０倍、少なくとも１００倍である。
【０１７２】
具体的実施形態によれば、本発明の培養系および方法は、細胞株（例えば同じ組織タイプおよび／または同じ種の細胞株）におけるその薬物のＩＣ５０用量の少なくとも１０倍である。
【０１７３】
本発明のいくつかの実施形態で使用することができる抗がん薬の具体的濃度を、下記表５〜表６に示す。
【０１７４】
【表５】
2020516243.tif 000002
【０１７５】
【表６】
2020516243.tif 000003
【０１７６】
具体的実施形態によれば、１つの組織から数個の組織切片を調製し、数個の培養容器（例えばプレートのウェル）において培養することで、いくつかの薬物および薬物組合せを試験できるようにする。
【０１７７】
具体的実施形態によれば、本発明の方法は、
（ｉ）本発明の方法に従って複数（例えば少なくとも２つ）の薬物の効果を決定すること、および
（ｉｉ）工程（ｉ）で有効であることが示された薬物の組合せの効果を決定すること
を含み、薬物組合せに対する組織の増加した感受性が、その薬物組合せの有効性を示す。
【０１７８】
本明細書において使用する用語「増加した感受性」は、その組合せ中の薬物のそれぞれによって誘発される効果との比較で、薬物組合せによって誘発される効果の増加を指し、それは相加効果であっても相乗効果であってもよい。具体的実施形態によれば、効果は相乗効果である。
【０１７９】
具体的実施形態によれば、増加は、組合せ中の薬物のそれぞれによって誘発される効果と比較して、少なくとも１．５倍、少なくとも２倍、少なくとも３倍、少なくとも５倍、少なくとも１０倍、または少なくとも２０倍である。
【０１８０】
別の具体的実施形態によれば、増加は、組合せ中の薬物のそれぞれによって誘発される効果と比較して、少なくとも５％、少なくとも１０％、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、または１００％超の増加である。
【０１８１】
前述のように、具体的実施形態によれば、組織または組織切片は、貯蔵、すなわち４℃で貯蔵するか、凍結保存して、所望に応じて融解することができるので、数種類の薬物および薬物組合せの逐次的な連続試験が可能である。
【０１８２】
したがって例えば、具体的実施形態によれば、本発明の方法は
（ｉ）本発明の方法に従って少なくとも２つの薬物の効果を決定すること、
（ｉｉ）対象から得られた病理組織から得られた追加の組織切片を（例えば凍結保存および融解後に）、本発明に従って培養すること、
（ｉｉｉ）工程（ｉ）で対象における疾患の処置に関して有効であると決定された薬物の組合せを添加すること、および
（ｉｖ）組織切片に対する前記薬物の組合せの効果を決定すること
を含み、薬物の組合せに対する組織切片の増加した感受性が、対象における疾患の処置に関する前記薬物の組合せの有効性を示す。
【０１８３】
薬物または薬物組合せは、さまざまな時点で培養物に添加することができる。具体的実施形態によれば、薬物は、培養開始の２〜４８時間後、２〜３６時間後、２〜２４時間後、１２〜４８時間後、１２〜３６時間後または１２〜２４時間後に、培養物に添加される。
【０１８４】
具体的一実施形態によれば、薬物または薬物組合せは、培養開始の１２〜２４時間後に、培養物に添加される。
【０１８５】
具体的一実施形態によれば、薬物または薬物組合せは培養開始の１２〜３６時間後に、培養物に添加される。
【０１８６】
具体的一実施形態によれば、薬物または薬物組合せは、培養開始の１２〜４８時間後に、培養物に添加される。
【０１８７】
薬物または薬物組合せの存在下での培養は、第１薬物添加から全培養器官全体にわたって実行するか、または時間を限定することができる。上記に代えて、または上記に加えて、薬物または薬物組合せを、培養物に複数回、例えば培養培地を更新するときに添加してもよい。
【０１８８】
薬物濃度および薬物または薬物組合せとのインキュベーション時間の選択は、十分に当業者の能力内である。
【０１８９】
具体的実施形態によれば、薬物濃度および薬物または薬物組合せとのインキュベーション時間は、以下にさらに記載するように、組織に対する検出可能な効果をもたらす。
【０１９０】
組織に対して検出可能な効果をもたらすであろうエクスビボ試験に使用される薬物濃度の選択は、十分に、当業者の能力の範囲内である。好ましくは、使用される濃度は、選択されたパラメータの線形範囲内にあるべきである。
【０１９１】
試験される薬物濃度の数は、同じアッセイにおいて少なくとも１、少なくとも２、少なくとも３、少なくとも５、少なくとも６、１〜１０、２〜１０、３〜１０、５〜１０、１〜５、２〜５および３〜５種類の異なる濃度であることができる。
【０１９２】
試験される薬物濃度のそれぞれについて試料の反復数は、２、３、４、５または６回の反復であることができる。
【０１９３】
培養に続いて、組織に対する薬物または薬物組合せの効果を決定し、それによって薬物の有効性を決定することができる。
【０１９４】
したがって本発明の別の一態様によれば、薬物または薬物のバッチの有効性を決定する方法であって、
（ｉ）少なくとも５０％の酸素を含有する高含酸素雰囲気下、培養培地中で、組織培養インサート上の精密切断組織切片を、前記培養培地への前記組織切片の間欠的浸漬を容易にする回転で培養物を撹拌しながら培養すること、
（ｉｉ）前記培養培地に薬物または薬物のバッチを添加すること、および
（ｉｉｉ）前記組織に対する前記薬物または前記薬物のバッチの効果を決定すること
を含み、前記薬物に対する前記組成物の感受性が前記薬物の有効性を示す方法がある。
【０１９５】
具体的実施形態によれば、決定工程は予め決定された培養時間後に実行される。培養時間はさまざまでありうるが、検出可能な効果をもたらすであろう培養時間の決定は、十分に、当業者の能力内である。
【０１９６】
具体的実施形態によれば、決定は、２〜１０日以内、２〜７日以内、２〜５日以内、３〜１０日以内、３〜７日以内、３〜５日以内または４〜５日以内の培養において実行される。
【０１９７】
具体的一実施形態によれば、決定は３〜５日以内の培養において実行される。
【０１９８】
別の具体的一実施形態によれば、決定は４〜５日以内の培養において実行される。
【０１９９】
薬物または薬物組合せによって誘発される効果を決定する方法は当技術分野において知られており、例えば以下が挙げられる：
−生存能評価、例えば黄色の塩ＭＴＴ（３−（４，５−ジメチルチアゾリル−２）−２，５−ジフェニルテトラゾリウムブロミド）（Ｓｉｇｍａ，Ａｌｄｒｉｃｈ、米国ミズーリ州セントルイス）を紫青色の不溶性ホルマザン沈殿物に還元する生細胞の選択的能力に基づくＭＴＴ試験、ＷＳＴアッセイまたはＡＴＰ取込みアッセイを用いるもの、
−増殖評価、例えばＢｒＤｕアッセイ［細胞増殖ＥＬＩＳＡ  ＢｒｄＵ比色分析キット（Ｒｏｃｈｅ、ドイツ・マンハイム］またはＫｉ６７染色を用いるもの、
−細胞死評価、例えばＴＵＮＥＬアッセイ［Ｒｏｃｈｅ、ドイツ・マンハイム］アネキシンＶアッセイ［ＡｐｏＡｌｅｒｔ（登録商標）アネキシンＶアポトーシスキット（Ｃｌｏｎｔｅｃｈ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，Ｉｎｃ．、米国カリフォルニア州）］、ＬＤＨアッセイ、活性化カスパーゼ３アッセイ、活性化カスパーゼ８アッセイおよび一酸化窒素シンターゼアッセイを用いるもの、
−老化評価、例えば老化関連β−ガラクトシダーゼアッセイ（Ｄｉｍｒｉ  ＧＰ，Ｌｅｅ  Ｘ，ｅｔ  ａｌ．１９９５．Ａ  ｂｉｏｍａｒｋｅｒ  ｔｈａｔ  ｉｄｅｎｔｉｆｉｅｓ  ｓｅｎｅｓｃｅｎｔ  ｈｕｍａｎ  ｃｅｌｌｓ  ｉｎ  ｃｕｌｔｕｒｅ  ａｎｄ  ｉｎ  ａｇｉｎｇ  ｓｋｉｎ  ｉｎ  ｖｉｖｏ．Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ＵＳＡ  ９２：９３６３−９３６７）およびテロメラーゼ短縮アッセイを用いるもの；
−細胞代謝評価、例えばグルコース取込みアッセイを用いるもの、
−さまざまなＲＮＡおよびタンパク質検出方法（発現および／または活性のレベルを検出するもの）、および
−形態評価、例えばヘマトキシリン（Ｈａｅｍａｏｔｘｙｌｉｎ）およびエオシン（Ｈ＆Ｅ）染色を用いるもの。
【０２００】
具体的実施形態によれば、決定は、形態評価、生存能評価、増殖評価および／または細胞死評価によって実行される。
【０２０１】
具体的実施形態によれば、決定は形態評価によって実行される。
【０２０２】
Ｈ＆Ｅ染色を用いる形態評価では、例えば細胞含有量、細胞のサイズおよび密度、生存細胞／死細胞の比、疾患（例えば腫瘍）細胞／健常細胞の比、免疫細胞浸潤、線維形成、核のサイズおよび密度および完全性、アポトーシス小体および有糸分裂像などに関する詳細を得ることができる。具体的実施形態によれば、組織に対する薬物の効果は、例えば病理学者などによる形態評価で決定される。
【０２０３】
典型的には、各アッセイの結果は数値形式で表現され、高いスコアは薬物感受性と相関し、低いスコアは薬物抵抗性と相関する。
【０２０４】
本明細書において使用する語句「薬物に対する感受性」または「薬物組合せに対する感受性」は、細胞変化、例えば細胞生存能、増殖速度、分化、細胞死、壊死、アポトーシス、老化、具体的遺伝子の転写および／または翻訳速度の変化、および／またはタンパク質の状態、例えばリン酸化、脱リン酸化、トランスロケーションおよびそれらの任意の組合せを誘発する薬物または薬物組合せの能力を指す。具体的実施形態によれば、細胞変化は、薬物が存在しない場合のそれと比較して、細胞生存能の減少、増殖速度の減少、細胞死の増加および／または異常な形態に反映される。
【０２０５】
具体的一実施形態によれば、細胞変化は細胞生存能の減少に反映される。
【０２０６】
具体的一実施形態によれば、細胞変化は異常な形態に反映される。
【０２０７】
具体的実施形態によれば、変化は、薬物が存在しない場合のそれと比較して、少なくとも１．５倍、少なくとも２倍、少なくとも３倍、少なくとも５倍、少なくとも１０倍、または少なくとも２０倍である。
【０２０８】
別の具体的実施形態によれば、変化は、薬物が存在しない場合のそれと比較して、少なくとも５％、少なくとも１０％、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％または少なくとも１００％の変化である。
【０２０９】
具体的実施形態によれば、薬物の決定された有効性は薬物のバッチの効力を示す。すなわち薬物感受性は、そのバッチに効力があることを示す。
【０２１０】
本明細書において使用する用語「効力」は、関連する生物学的性質（すなわち薬物感受性）に連関する薬物の属性に基づく、薬物の生物学的活性の尺度を指す。
【０２１１】
本発明の具体的実施形態によれば、本方法は、バッチの相対効力を決定するために、薬物に対する組織の感受性を、薬物の参照基準バッチに対する組織の感受性と比較することを含む。
【０２１２】
本明細書において使用する用語「相対効力」は、既知の効力を持つ薬物の標準的基準（ＲＳ）と比較した、薬物のバッチの効力の定性的尺度を指す。
【０２１３】
具体的実施形態によれば、薬物のバッチの効力は、参照基準（ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ  ｓｔａｎｄａｒｄ：ＲＳ）の既知効力に対して相対的に決定される。
【０２１４】
本明細書において使用する語句「参照基準」すなわち「ＲＳ」は、薬物の測定基準として使用される標準化された薬物を指す。ＲＳは、その薬物の新しい調製物の比較対象にすることができる、較正されたレベルの生物学的効果を与える。
【０２１５】
具体的一実施形態によれば、ＲＳは、疾患（例えば炎症性疾患、がん）の処置に有効な活性構成要素の最適な効力および品質を特徴とする。
【０２１６】
効力および相対効力の計算は当技術分野では知られている。具体的実施形態によれば、相対効力は、平行線分析ソフトウェア、例えばＰＬＡ（Ｓｔｅｇｍａｎｎ  Ｓｙｓｔｅｍｓ  ＧｍｂＨ）およびＧｅｎ５データ分析ソフトウェア（ＢｉｏＴｅｋ）などの、生物学的アッセイに適したソフトウェアを使って計算される。
【０２１７】
本発明の実施形態の方法および／または系の履行は、選択された課題を手作業で、自動的に、またはそれらの組合せで行うことまたは完了することを伴いうる。さらにまた、本発明の方法および／または系の実施形態の実際の器具使用および設備によれば、選択されたいくつかの課題を、ハードウェア、ソフトウェアもしくはファームウェアによって、またはオペレーティングシステムを使ってそれらの組合せによって履行することができるだろう。
【０２１８】
具体的実施形態によれば、薬物または薬物組合せの決定された有効性は、疾患の処置に関するその薬物の適性を示す。
【０２１９】
本発明者らは、開発されたＥＶＯＣ系が、抗がん薬および組合せ処置に対する腫瘍の応答を予測できることを示すので（下記実施例項の実施例２）、本発明では、ある処置レジメンに対する具体的一対象の応答を予測し、それによってこの具体的対象にとって適切な処置レジメンを選択し、その選択に従ってその対象を処置するための、本明細書に記載する培養系および方法の使用も考えられる。
【０２２０】
したがって、本発明の一態様によれば、処置を必要とする対象における疾患を処置するための薬物を選択する方法であって、
（ｉ）少なくとも５０％の酸素を含有する高含酸素雰囲気下、培養培地中で、組織培養インサート上の、対象から得られた病理組織精密切断組織切片を、前記培養培地への前記組織切片の間欠的浸漬を容易にする回転で撹拌しながら培養すること、
（ｉｉ）前記培養培地に薬物を添加すること、および
（ｉｉｉ）前記組織に対する前記薬物の効果を決定すること
を含み、前記薬物に対する前記組織の感受性が、前記対象における前記疾患の処置に関する前記薬物の有効性を示す方法が提供される。
【０２２１】
本発明の別の一態様において、処置を必要とする対象における疾患を処置する方法であって、
（ａ）本明細書に記載する方法に従って薬物または薬物の組合せを選択すること、および
（ｂ）前記対象における前記疾患の処置に関して有効性を示す薬物または薬物の組合せの治療有効量を、前記対象に投与し、それによって対象における疾患を処置すること
を含む方法が提供される。
【０２２２】
本明細書において使用する語句「対象」は、疾患の診断を下された、または疾患を発症するリスクがある、哺乳動物対象（例えばヒト）を指す。獣医学的使用も考えられる。対象は、新生児、幼児、小児、少年、青年、成人および高齢者を含む、任意の性別および年齢でありうる。
【０２２３】
「処置する」という用語は、病変（疾患、障害または状態）の発生を抑制または停止することおよび／または病変の低減、寛解または後退を引き起こすことを指す。病変の発生を評価するためにさまざまな方法論およびアッセイを使用できること、そしてまた、病変の低減、寛解または後退を評価するためにもさまざまな方法論およびアッセイを使用しうることは、当業者には理解されるであろう。
【０２２４】
薬物または薬物組合せの治療有効量の決定は、十分に、当業者の能力内である。投薬量は、選んだ薬物、使用する剤形および利用する投与経路に依存して変動しうる。個々の医師は患者の状態を考慮して厳密な製剤、投与経路および投薬量を選ぶことができる。（例えばＦｉｎｇｌ，ｅｔ  ａｌ．，１９７５，「Ｔｈｅ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｂａｓｉｓ  ｏｆ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ」のＣｈ．１、ｐ．１を参照されたい）。
【０２２５】
具体的実施形態によれば、疾患は炎症性疾患であり、これは慢性炎症性疾患または急性炎症性疾患であることができる。
【０２２６】
過敏症に関連する炎症性疾患
過敏症の限定でない例として以下が挙げられる：
ＩＩ型過敏症、例えば限定するわけではないが、リウマチ様疾患、リウマチ様自己免疫疾患、関節リウマチ（Ｋｒｅｎｎ  Ｖ．ｅｔ  ａｌ．，Ｈｉｓｔｏｌ  Ｈｉｓｔｏｐａｔｈｏｌ  ２０００  Ｊｕｌ；１５（３）：７９１）、脊椎炎、強直性脊柱炎（Ｊａｎ  Ｖｏｓｗｉｎｋｅｌ  ｅｔ  ａｌ．，Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ  Ｒｅｓ  ２００１；３（３）：１８９）、全身性疾患、全身性自己免疫疾患、全身性エリテマトーデス（Ｅｒｉｋｓｏｎ  Ｊ．ｅｔ  ａｌ．，Ｉｍｍｕｎｏｌ  Ｒｅｓ  １９９８；１７（１−２）：４９）、硬化症、全身性硬化症（Ｒｅｎａｕｄｉｎｅａｕ  Ｙ．ｅｔ  ａｌ．，Ｃｌｉｎ  Ｄｉａｇｎ  Ｌａｂ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．１９９９  Ｍａｒ；６（２）：１５６）、Ｃｈａｎ  ＯＴ．ｅｔ  ａｌ．，Ｉｍｍｕｎｏｌ  Ｒｅｖ  １９９９  Ｊｕｎ；１６９：１０７）、腺疾患、腺自己免疫疾患、膵臓自己免疫疾患、糖尿病、Ｉ型糖尿病（Ｚｉｍｍｅｔ  Ｐ．Ｄｉａｂｅｔｅｓ  Ｒｅｓ  Ｃｌｉｎ  Ｐｒａｃｔ  １９９６  Ｏｃｔ；３４  Ｓｕｐｐｌ：Ｓ１２５）、甲状腺疾患、自己免疫性甲状腺疾患、グレーブス病（Ｏｒｇｉａｚｚｉ  Ｊ．Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ  Ｍｅｔａｂ  Ｃｌｉｎ  Ｎｏｒｔｈ  Ａｍ  ２０００  Ｊｕｎ；２９（２）：３３９）、甲状腺炎、特発性自己免疫性甲状腺炎（Ｂｒａｌｅｙ−Ｍｕｌｌｅｎ  Ｈ．ａｎｄ  Ｙｕ  Ｓ，Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  ２０００  Ｄｅｃ  １５；１６５（１２）：７２６２）、橋本甲状腺炎（Ｔｏｙｏｄａ  Ｎ．ｅｔ  ａｌ．，Ｎｉｐｐｏｎ  Ｒｉｎｓｈｏ  １９９９  Ａｕｇ；５７（８）：１８１０）、粘液水腫、特発性粘液水腫（Ｍｉｔｓｕｍａ  Ｔ．Ｎｉｐｐｏｎ  Ｒｉｎｓｈｏ．１９９９  Ａｕｇ；５７（８）：１７５９）、自己免疫性生殖器疾患、卵巣疾患、卵巣自己免疫（Ｇａｒｚａ  ＫＭ．ｅｔ  ａｌ．，Ｊ  Ｒｅｐｒｏｄ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  １９９８  Ｆｅｂ；３７（２）：８７）、自己免疫性抗精子不妊（Ｄｉｅｋｍａｎ  ＡＢ．ｅｔ  ａｌ．，Ａｍ  Ｊ  Ｒｅｐｒｏｄ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．２０００  Ｍａｒ；４３（３）：１３４）、反復流産（Ｔｉｎｃａｎｉ  Ａ．ｅｔ  ａｌ．，Ｌｕｐｕｓ  １９９８；７  Ｓｕｐｐｌ  ２：Ｓ１０７−９）、神経変性疾患、神経疾患、神経学的自己免疫疾患、多発性硬化症（Ｃｒｏｓｓ  ＡＨ．ｅｔ  ａｌ．，Ｊ  Ｎｅｕｒｏｉｍｍｕｎｏｌ  ２００１  Ｊａｎ  １；１１２（１−２）：１）、アルツハイマー病（Ｏｒｏｎ  Ｌ．ｅｔ  ａｌ．，Ｊ  Ｎｅｕｒａｌ  Ｔｒａｎｓｍ  Ｓｕｐｐｌ．１９９７；４９：７７）、重症筋無力症（Ｉｎｆａｎｔｅ  ＡＪ．Ａｎｄ  Ｋｒａｉｇ  Ｅ，Ｉｎｔ  Ｒｅｖ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  １９９９；１８（１−２）：８３）、運動ニューロパチー（Ｋｏｒｎｂｅｒｇ  ＡＪ．Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．２０００  Ｍａｙ；７（３）：１９１）、ギラン・バレー症候群、ニューロパチーおよび自己免疫性ニューロパチー（Ｋｕｓｕｎｏｋｉ  Ｓ．Ａｍ  Ｊ  Ｍｅｄ  Ｓｃｉ．２０００  Ａｐｒ；３１９（４）：２３４）、筋無力症疾患、ランバート・イートン筋無力症候群（Ｔａｋａｍｏｒｉ  Ｍ．Ａｍ  Ｊ  Ｍｅｄ  Ｓｃｉ．２０００  Ａｐｒ；３１９（４）：２０４）、腫瘍随伴性神経疾患、小脳萎縮症、腫瘍随伴性小脳萎縮症、非腫瘍随伴性スティッフマン症候群、小脳萎縮症、進行性小脳萎縮症、脳炎、ラスムッセン脳炎、筋萎縮性側索硬化症、シデハム舞踏病（Ｓｙｄｅｈａｍ  ｃｈｏｒｅａ）、ジル・ド・ラ・トゥーレット症候群、多腺性内分泌障害、自己免疫性多腺性内分泌障害（Ａｎｔｏｉｎｅ  ＪＣ．ａｎｄ  Ｈｏｎｎｏｒａｔ  Ｊ．Ｒｅｖ  Ｎｅｕｒｏｌ（Ｐａｒｉｓ）２０００  Ｊａｎ；１５６（１）：２３）、ニューロパチー、免疫性ニューロパチー（Ｎｏｂｉｌｅ−Ｏｒａｚｉｏ  Ｅ．ｅｔ  ａｌ．，Ｅｌｅｃｔｒｏｅｎｃｅｐｈａｌｏｇｒ  Ｃｌｉｎ  Ｎｅｕｒｏｐｈｙｓｉｏｌ  Ｓｕｐｐｌ  １９９９；５０：４１９）、神経性筋強直症、後天性神経性筋強直症、先天性多発性関節拘縮症（Ｖｉｎｃｅｎｔ  Ａ．ｅｔ  ａｌ．，Ａｎｎ  ＮＹ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ．１９９８  Ｍａｙ  １３；８４１：４８２）、心血管疾患、心血管自己免疫疾患、アテローム性動脈硬化（Ｍａｔｓｕｕｒａ  Ｅ．ｅｔ  ａｌ．，Ｌｕｐｕｓ．１９９８；７  Ｓｕｐｐｌ  ２：Ｓ１３５）、心筋梗塞（Ｖａａｒａｌａ  Ｏ．Ｌｕｐｕｓ．１９９８；７  Ｓｕｐｐｌ  ２：Ｓ１３２）、血栓症（Ｔｉｎｃａｎｉ  Ａ．ｅｔ  ａｌ．，Ｌｕｐｕｓ  １９９８；７  Ｓｕｐｐｌ  ２：Ｓ１０７−９）、肉芽腫症、ウェゲナー肉芽腫症、動脈炎、高安動脈炎および川崎症候群（Ｐｒａｐｒｏｔｎｉｋ  Ｓ．ｅｔ  ａｌ．，Ｗｉｅｎ  Ｋｌｉｎ  Ｗｏｃｈｅｎｓｃｈｒ  ２０００  Ａｕｇ  ２５；１１２（１５−１６）：６６０）、抗第ＶＩＩＩ因子自己免疫疾患（Ｌａｃｒｏｉｘ−Ｄｅｓｍａｚｅｓ  Ｓ．ｅｔ  ａｌ．，Ｓｅｍｉｎ  Ｔｈｒｏｍｂ  Ｈｅｍｏｓｔ．２０００；２６（２）：１５７）、血管炎、壊死性小型血管炎、顕微鏡的多発血管炎、チャーグ・ストラウス症候群、糸球体腎炎、微量免疫型巣状壊死性糸球体腎炎、半月体形成性糸球体腎炎（Ｎｏｅｌ  ＬＨ．Ａｎｎ  Ｍｅｄ  Ｉｎｔｅｒｎｅ（Ｐａｒｉｓ）．２０００  Ｍａｙ；１５１（３）：１７８）、抗リン脂質症候群（Ｆｌａｍｈｏｌｚ  Ｒ．ｅｔ  ａｌ．，Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ａｐｈｅｒｅｓｉｓ  １９９９；１４（４）：１７１）、心不全、心不全におけるアゴニスト様β−アドレノセプター抗体（Ｗａｌｌｕｋａｔ  Ｇ．ｅｔ  ａｌ．，Ａｍ  Ｊ  Ｃａｒｄｉｏｌ．１９９９  Ｊｕｎ  １７；８３（１２Ａ）：７５Ｈ）、血小板減少性紫斑病（Ｍｏｃｃｉａ  Ｆ．Ａｎｎ  Ｉｔａｌ  Ｍｅｄ  Ｉｎｔ．１９９９  Ａｐｒ−Ｊｕｎ；１４（２）：１１４）、溶血性貧血、自己免疫性溶血性貧血（Ｅｆｒｅｍｏｖ  ＤＧ．ｅｔ  ａｌ．，Ｌｅｕｋ  Ｌｙｍｐｈｏｍａ  １９９８  Ｊａｎ；２８（３−４）：２８５）、胃腸疾患、消化管の自己免疫疾患、腸疾患、慢性炎症性腸疾患（Ｇａｒｃｉａ  Ｈｅｒｏｌａ  Ａ．ｅｔ  ａｌ．，Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌ  Ｈｅｐａｔｏｌ．２０００  Ｊａｎ；２３（１）：１６）、セリアック病（Ｌａｎｄａｕ  ＹＥ．ａｎｄ  Ｓｈｏｅｎｆｅｌｄ  Ｙ．Ｈａｒｅｆｕａｈ  ２０００  Ｊａｎ  １６；１３８（２）：１２２）、筋系の自己免疫疾患、筋炎、自己免疫性筋炎、シェーグレン症候群（Ｆｅｉｓｔ  Ｅ．ｅｔ  ａｌ．，Ｉｎｔ  Ａｒｃｈ  Ａｌｌｅｒｇｙ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  ２０００  Ｓｅｐ；１２３（１）：９２）、平滑筋自己免疫疾患（Ｚａｕｌｉ  Ｄ．ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏｍｅｄ  Ｐｈａｒｍａｃｏｔｈｅｒ  １９９９  Ｊｕｎ；５３（５−６）：２３４）、肝疾患、肝臓自己免疫疾患、���己免疫性肝炎（Ｍａｎｎｓ  ＭＰ．Ｊ  Ｈｅｐａｔｏｌ  ２０００  Ａｕｇ；３３（２）：３２６）および原発性胆汁性肝硬変（Ｓｔｒａｓｓｂｕｒｇ  ＣＰ．ｅｔ  ａｌ．，Ｅｕｒ  Ｊ  Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌ  Ｈｅｐａｔｏｌ．１９９９  Ｊｕｎ；１１（６）：５９５）；
ＩＶ型またはＴ細胞媒介性過敏症、例えば限定するわけではないが、リウマチ様疾患、関節リウマチ（Ｔｉｓｃｈ  Ｒ，ＭｃＤｅｖｉｔｔ  ＨＯ．Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ＵＳＡ  １９９４  Ｊａｎ  １８；９１（２）：４３７）、全身性疾患、全身性自己免疫疾患、全身性エリテマトーデス（Ｄａｔｔａ  ＳＫ．，Ｌｕｐｕｓ  １９９８；７（９）：５９１）、腺疾患、腺自己免疫疾患、膵疾患、膵臓自己免疫疾患、１型糖尿病（Ｃａｓｔａｎｏ  Ｌ．ａｎｄ  Ｅｉｓｅｎｂａｒｔｈ  ＧＳ．Ａｎｎ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．８：６４７）、甲状腺疾患、自己免疫性甲状腺疾患、グレーブス病（Ｓａｋａｔａ  Ｓ．ｅｔ  ａｌ．，Ｍｏｌ  Ｃｅｌｌ  Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ  １９９３  Ｍａｒ；９２（１）：７７）、卵巣疾患（Ｇａｒｚａ  ＫＭ．ｅｔ  ａｌ．，Ｊ  Ｒｅｐｒｏｄ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  １９９８  Ｆｅｂ；３７（２）：８７）、前立腺炎、自己免疫性前立腺炎（Ａｌｅｘａｎｄｅｒ  ＲＢ．ｅｔ  ａｌ．，Ｕｒｏｌｏｇｙ  １９９７  Ｄｅｃ；５０（６）：８９３）、多腺性症候群、自己免疫性多腺性症候群、Ｉ型自己免疫性多腺性症候群（Ｈａｒａ  Ｔ．ｅｔ  ａｌ．，Ｂｌｏｏｄ．１９９１  Ｍａｒ  １；７７（５）：１１２７）、神経疾患、自己免疫性神経疾患、多発性硬化症、神経炎、視神経炎（Ｓｏｄｅｒｓｔｒｏｍ  Ｍ．ｅｔ  ａｌ．，Ｊ  Ｎｅｕｒｏｌ  Ｎｅｕｒｏｓｕｒｇ  Ｐｓｙｃｈｉａｔｒｙ  １９９４  Ｍａｙ；５７（５）：５４４）、重症筋無力症（Ｏｓｈｉｍａ  Ｍ．ｅｔ  ａｌ．，Ｅｕｒ  Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  １９９０  Ｄｅｃ；２０（１２）：２５６３）、スティッフマン症候群（Ｈｉｅｍｓｔｒａ  ＨＳ．ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ＵＳＡ  ２００１  Ｍａｒ  ２７；９８（７）：３９８８）、心血管疾患、シャーガス病における心臓自己免疫（Ｃｕｎｈａ−Ｎｅｔｏ  Ｅ．ｅｔ  ａｌ．，Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ｉｎｖｅｓｔ  １９９６  Ｏｃｔ  １５；９８（８）：１７０９）、自己免疫性血小板減少性紫斑病（Ｓｅｍｐｌｅ  ＪＷ．ｅｔ  ａｌ．，Ｂｌｏｏｄ  １９９６  Ｍａｙ  １５；８７（１０）：４２４５）、抗ヘルパーＴリンパ球自己免疫（Ｃａｐｏｒｏｓｓｉ  ＡＰ．ｅｔ  ａｌ．，Ｖｉｒａｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  １９９８；１１（１）：９）、溶血性貧血（Ｓａｌｌａｈ  Ｓ．ｅｔ  ａｌ．，Ａｎｎ  Ｈｅｍａｔｏｌ  １９９７  Ｍａｒ；７４（３）：１３９）、肝疾患、肝臓自己免疫疾患、肝炎、慢性活動性肝炎（Ｆｒａｎｃｏ  Ａ．ｅｔ  ａｌ．，Ｃｌｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  Ｉｍｍｕｎｏｐａｔｈｏｌ  １９９０  Ｍａｒ；５４（３）：３８２）、胆汁性肝硬変、原発性胆汁性肝硬変（Ｊｏｎｅｓ  ＤＥ．Ｃｌｉｎ  Ｓｃｉ（Ｃｏｌｃｈ）１９９６  Ｎｏｖ；９１（５）：５５１）、腎疾患、腎臓自己免疫疾患、腎炎、間質性腎炎（Ｋｅｌｌｙ  ＣＪ．Ｊ  Ａｍ  Ｓｏｃ  Ｎｅｐｈｒｏｌ  １９９０  Ａｕｇ；１（２）：１４０）、結合組織疾患、耳疾患、自己免疫性結合組織疾患、自己免疫性耳疾患（Ｙｏｏ  ＴＪ．ｅｔ  ａｌ．，Ｃｅｌｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  １９９４  Ａｕｇ；１５７（１）：２４９）、内耳の疾患（Ｇｌｏｄｄｅｋ  Ｂ．ｅｔ  ａｌ．，Ａｎｎ  ＮＹ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  １９９７  Ｄｅｃ  ２９；８３０：２６６）、皮膚（ｓｋｉｎ）疾患、皮膚性（ｃｕｔａｎｅｏｕｓ）疾患、真皮（ｄｅｒｍａｌ）疾患、水疱性皮膚疾患、尋常性天疱瘡、水疱性類天疱瘡および落葉状天疱瘡；
遅延型過敏症、例えば限定するわけではないが、接触皮膚炎および薬疹。
【０２２７】
自己免疫疾患
自己免疫疾患としては、心血管疾患、リウマチ様疾患、腺疾患、胃腸疾患、皮膚性疾患、肝疾患、神経疾患、筋疾患、腎疾患、生殖に関係する疾患、結合組織疾患および全身身性疾患が挙げられるが、これらに限定されるわけではない。
【０２２８】
自己免疫性心血管疾患の例としては、アテローム性動脈硬化（Ｍａｔｓｕｕｒａ  Ｅ．ｅｔ  ａｌ．，Ｌｕｐｕｓ．１９９８；７  Ｓｕｐｐｌ  ２：Ｓ１３５）、心筋梗塞（Ｖａａｒａｌａ  Ｏ．Ｌｕｐｕｓ．１９９８；７  Ｓｕｐｐｌ  ２：Ｓ１３２）、血栓症（Ｔｉｎｃａｎｉ  Ａ．ｅｔ  ａｌ．，Ｌｕｐｕｓ  １９９８；７  Ｓｕｐｐｌ  ２：Ｓ１０７−９）、ウェゲナー肉芽腫症、高安動脈炎、川崎症候群（Ｐｒａｐｒｏｔｎｉｋ  Ｓ．ｅｔ  ａｌ．，Ｗｉｅｎ  Ｋｌｉｎ  Ｗｏｃｈｅｎｓｃｈｒ  ２０００  Ａｕｇ  ２５；１１２（１５−１６）：６６０）、抗第ＶＩＩＩ因子自己免疫疾患（Ｌａｃｒｏｉｘ−Ｄｅｓｍａｚｅｓ  Ｓ．ｅｔ  ａｌ．，Ｓｅｍｉｎ  Ｔｈｒｏｍｂ  Ｈｅｍｏｓｔ．２０００；２６（２）：１５７）、壊死性小型血管炎、顕微鏡的多発血管炎、チャーグ・ストラウス症候群、微量免疫型巣状壊死性および半月体形成性糸球体腎炎（Ｎｏｅｌ  ＬＨ．Ａｎｎ  Ｍｅｄ  Ｉｎｔｅｒｎｅ（Ｐａｒｉｓ）．２０００  Ｍａｙ；１５１（３）：１７８）、抗リン脂質症候群（Ｆｌａｍｈｏｌｚ  Ｒ．ｅｔ  ａｌ．，Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ａｐｈｅｒｅｓｉｓ  １９９９；１４（４）：１７１）、抗体誘発性心不全（Ｗａｌｌｕｋａｔ  Ｇ．ｅｔ  ａｌ．，Ａｍ  Ｊ  Ｃａｒｄｉｏｌ．１９９９  Ｊｕｎ  １７；８３（１２Ａ）：７５Ｈ）、血小板減少性紫斑病（Ｍｏｃｃｉａ  Ｆ．Ａｎｎ  Ｉｔａｌ  Ｍｅｄ  Ｉｎｔ．１９９９  Ａｐｒ−Ｊｕｎ；１４（２）：１１４、Ｓｅｍｐｌｅ  ＪＷ．ｅｔ  ａｌ．，Ｂｌｏｏｄ  １９９６  Ｍａｙ  １５；８７（１０）：４２４５）、自己免疫性溶血性貧血（Ｅｆｒｅｍｏｖ  ＤＧ．ｅｔ  ａｌ．，Ｌｅｕｋ  Ｌｙｍｐｈｏｍａ  １９９８  Ｊａｎ；２８（３−４）：２８５、Ｓａｌｌａｈ  Ｓ．ｅｔ  ａｌ．，Ａｎｎ  Ｈｅｍａｔｏｌ  １９９７  Ｍａｒ；７４（３）：１３９）、シャーガス病における心臓自己免疫（Ｃｕｎｈａ−Ｎｅｔｏ  Ｅ．ｅｔ  ａｌ．，Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ｉｎｖｅｓｔ  １９９６  Ｏｃｔ  １５；９８（８）：１７０９）および抗ヘルパーＴリンパ球自己免疫（Ｃａｐｏｒｏｓｓｉ  ＡＰ．ｅｔ  ａｌ．，Ｖｉｒａｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  １９９８；１１（１）：９）が挙げられるが、これらに限定されるわけではない。
【０２２９】
自己免疫性リウマチ様疾患の例としては、関節リウマチ（Ｋｒｅｎｎ  Ｖ．ｅｔ  ａｌ．，Ｈｉｓｔｏｌ  Ｈｉｓｔｏｐａｔｈｏｌ  ２０００  Ｊｕｌ；１５（３）：７９１、Ｔｉｓｃｈ  Ｒ，ＭｃＤｅｖｉｔｔ  ＨＯ．Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ｕｎｉｔｓ  Ｓ  Ａ  １９９４  Ｊａｎ  １８；９１（２）：４３７）および強直性脊柱炎（Ｊａｎ  Ｖｏｓｗｉｎｋｅｌ  ｅｔ  ａｌ．，Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ  Ｒｅｓ  ２００１；３（３）：１８９）が挙げられるが、これらに限定されるわけではない。
【０２３０】
自己免疫性腺疾患の例としては、膵疾患、Ｉ型糖尿病、甲状腺疾患、グレーブス病、甲状腺炎、特発性自己免疫性甲状腺炎、橋本甲状腺炎、特発性粘液水腫、卵巣自己免疫、自己免疫性抗精子不妊、自己免疫性前立腺炎およびＩ型自己免疫性多腺性症候群が挙げられるが、これらに限定されるわけではない。疾患としては、膵臓の自己免疫疾患、１型糖尿病（Ｃａｓｔａｎｏ  Ｌ．ａｎｄ  Ｅｉｓｅｎｂａｒｔｈ  ＧＳ．Ａｎｎ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．８：６４７、Ｚｉｍｍｅｔ  Ｐ．Ｄｉａｂｅｔｅｓ  Ｒｅｓ  Ｃｌｉｎ  Ｐｒａｃｔ  １９９６  Ｏｃｔ；３４  Ｓｕｐｐｌ：Ｓ１２５）、自己免疫性甲状腺疾患、グレーブス病（Ｏｒｇｉａｚｚｉ  Ｊ．Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ  Ｍｅｔａｂ  Ｃｌｉｎ  Ｎｏｒｔｈ  Ａｍ  ２０００  Ｊｕｎ；２９（２）：３３９、Ｓａｋａｔａ  Ｓ．ｅｔ  ａｌ．，Ｍｏｌ  Ｃｅｌｌ  Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ  １９９３  Ｍａｒ；９２（１）：７７）、特発性自己免疫性甲状腺炎（Ｂｒａｌｅｙ−Ｍｕｌｌｅｎ  Ｈ．ａｎｄ  Ｙｕ  Ｓ、Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  ２０００  Ｄｅｃ  １５；１６５（１２）：７２６２）、橋本甲状腺炎（Ｔｏｙｏｄａ  Ｎ．ｅｔ  ａｌ．，Ｎｉｐｐｏｎ  Ｒｉｎｓｈｏ  １９９９  Ａｕｇ；５７（８）：１８１０）、特発性粘液水腫（Ｍｉｔｓｕｍａ  Ｔ．Ｎｉｐｐｏｎ  Ｒｉｎｓｈｏ．１９９９  Ａｕｇ；５７（８）：１７５９）、卵巣自己免疫（Ｇａｒｚａ  ＫＭ．ｅｔ  ａｌ．，Ｊ  Ｒｅｐｒｏｄ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  １９９８  Ｆｅｂ；３７（２）：８７）、自己免疫性抗精子不妊（Ｄｉｅｋｍａｎ  ＡＢ．ｅｔ  ａｌ．，Ａｍ  Ｊ  Ｒｅｐｒｏｄ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．２０００  Ｍａｒ；４３（３）：１３４）、自己免疫性前立腺炎（Ａｌｅｘａｎｄｅｒ  ＲＢ．ｅｔ  ａｌ．，Ｕｒｏｌｏｇｙ  １９９７  Ｄｅｃ；５０（６）：８９３）およびＩ型自己免疫性多腺性症候群（Ｈａｒａ  Ｔ．ｅｔ  ａｌ．，Ｂｌｏｏｄ．１９９１  Ｍａｒ  １；７７（５）：１１２７）が挙げられるが、これらに限定されるわけではない。
【０２３１】
自己免疫性胃腸疾患の例としては、慢性炎症性腸疾患（Ｇａｒｃｉａ  Ｈｅｒｏｌａ  Ａ．ｅｔ  ａｌ．，Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌ  Ｈｅｐａｔｏｌ．２０００  Ｊａｎ；２３（１）：１６）、セリアック病（Ｌａｎｄａｕ  ＹＥ．ａｎｄ  Ｓｈｏｅｎｆｅｌｄ  Ｙ．Ｈａｒｅｆｕａｈ  ２０００  Ｊａｎ  １６；１３８（２）：１２２）、大腸炎、回腸炎およびクローン病が挙げられるが、これらに限定されるわけではない。
【０２３２】
自己免疫性皮膚性疾患の例としては、自己免疫性水疱性皮膚疾患、例えば限定するわけではないが、尋常性天疱瘡、水疱性類天疱瘡および落葉状天疱瘡が挙げられるが、これらに限定されるわけではない。
【０２３３】
自己免疫性肝疾患の例としては、肝炎、自己免疫性慢性活動性肝炎（Ｆｒａｎｃｏ  Ａ．ｅｔ  ａｌ．，Ｃｌｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  Ｉｍｍｕｎｏｐａｔｈｏｌ  １９９０  Ｍａｒ；５４（３）：３８２）、原発性胆汁性肝硬変（Ｊｏｎｅｓ  ＤＥ．Ｃｌｉｎ  Ｓｃｉ（Ｃｏｌｃｈ）１９９６  Ｎｏｖ；９１（５）：５５１、Ｓｔｒａｓｓｂｕｒｇ  ＣＰ．ｅｔ  ａｌ．，Ｅｕｒ  Ｊ  Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌ  Ｈｅｐａｔｏｌ．１９９９  Ｊｕｎ；１１（６）：５９５）および自己免疫性肝炎（Ｍａｎｎｓ  ＭＰ．Ｊ  Ｈｅｐａｔｏｌ  ２０００  Ａｕｇ；３３（２）：３２６）が挙げられるが、これらに限定されるわけではない。
【０２３４】
自己免疫性神経疾患としては、多発性硬化症（Ｃｒｏｓｓ  ＡＨ．ｅｔ  ａｌ．，Ｊ  Ｎｅｕｒｏｉｍｍｕｎｏｌ  ２００１  Ｊａｎ  １；１１２（１−２）：１）、アルツハイマー病（Ｏｒｏｎ  Ｌ．ｅｔ  ａｌ．，Ｊ  Ｎｅｕｒａｌ  Ｔｒａｎｓｍ  Ｓｕｐｐｌ．１９９７；４９：７７）、重症筋無力症（Ｉｎｆａｎｔｅ  ＡＪ．Ａｎｄ  Ｋｒａｉｇ  Ｅ，Ｉｎｔ  Ｒｅｖ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  １９９９；１８（１−２）：８３、Ｏｓｈｉｍａ  Ｍ．ｅｔ  ａｌ．，Ｅｕｒ  Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  １９９０  Ｄｅｃ；２０（１２）：２５６３）、ニューロパチー、運動ニューロパチー（Ｋｏｒｎｂｅｒｇ  ＡＪ．Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．２０００  Ｍａｙ；７（３）：１９１）、ギラン・バレー症候群および自己免疫性ニューロパチー（Ｋｕｓｕｎｏｋｉ  Ｓ．Ａｍ  Ｊ  Ｍｅｄ  Ｓｃｉ．２０００  Ａｐｒ；３１９（４）：２３４）、筋無力症、ランバート・イートン筋無力症候群（Ｔａｋａｍｏｒｉ  Ｍ．Ａｍ  Ｊ  Ｍｅｄ  Ｓｃｉ．２０００  Ａｐｒ；３１９（４）：２０４）、腫瘍随伴性神経疾患、小脳萎縮症、腫瘍随伴性小脳萎縮症およびスティッフマン症候群（Ｈｉｅｍｓｔｒａ  ＨＳ．ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ｕｎｉｔｓ  Ｓ  Ａ  ２００１  Ｍａｒ  ２７；９８（７）：３９８８）、非腫瘍随伴性スティッフマン症候群、進行性小脳萎縮症，脳炎、ラスムッセン脳炎、筋萎縮性側索硬化症、シデハム舞踏病、ジル・ド・ラ・トゥーレット症候群および自己免疫性多腺性内分泌障害（Ａｎｔｏｉｎｅ  ＪＣ．ａｎｄ  Ｈｏｎｎｏｒａｔ  Ｊ．Ｒｅｖ  Ｎｅｕｒｏｌ（Ｐａｒｉｓ）２０００  Ｊａｎ；１５６（１）：２３）、免疫性ニューロパチー（Ｎｏｂｉｌｅ−Ｏｒａｚｉｏ  Ｅ．ｅｔ  ａｌ．，Ｅｌｅｃｔｒｏｅｎｃｅｐｈａｌｏｇｒ  Ｃｌｉｎ  Ｎｅｕｒｏｐｈｙｓｉｏｌ  Ｓｕｐｐｌ  １９９９；５０：４１９）、後天性神経性筋強直症、先天性多発性関節拘縮症（Ｖｉｎｃｅｎｔ  Ａ．ｅｔ  ａｌ．，Ａｎｎ  ＮＹ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ．１９９８  Ｍａｙ  １３；８４１：４８２）、神経炎、視神経炎（Ｓｏｄｅｒｓｔｒｏｍ  Ｍ．ｅｔ  ａｌ．，Ｊ  Ｎｅｕｒｏｌ  Ｎｅｕｒｏｓｕｒｇ  Ｐｓｙｃｈｉａｔｒｙ  １９９４  Ｍａｙ；５７（５）：５４４）および神経変性疾患が挙げられるが、これらに限定されるわけではない。
【０２３５】
自己免疫性筋疾患の例としては、筋炎、自己免疫性筋炎および原発性シェーグレン症候群（Ｆｅｉｓｔ  Ｅ．ｅｔ  ａｌ．，Ｉｎｔ  Ａｒｃｈ  Ａｌｌｅｒｇｙ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  ２０００  Ｓｅｐ；１２３（１）：９２）および平滑筋自己免疫疾患（Ｚａｕｌｉ  Ｄ．ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏｍｅｄ  Ｐｈａｒｍａｃｏｔｈｅｒ  １９９９  Ｊｕｎ；５３（５−６）：２３４）が挙げられるが、これらに限定されるわけではない。
【０２３６】
自己免疫性腎疾患の例としては、腎炎および自己免疫性間質性腎炎（Ｋｅｌｌｙ  ＣＪ．Ｊ  Ａｍ  Ｓｏｃ  Ｎｅｐｈｒｏｌ  １９９０  Ａｕｇ；１（２）：１４０）が挙げられるが、これらに限定されるわけではない。
【０２３７】
生殖に関係する自己免疫疾患の例としては、反復流産（Ｔｉｎｃａｎｉ  Ａ．ｅｔ  ａｌ．，Ｌｕｐｕｓ  １９９８；７  Ｓｕｐｐｌ  ２：Ｓ１０７−９）が挙げられるが、これらに限定されるわけではない。
【０２３８】
自己免疫性結合組織疾患の例としては、耳疾患、自己免疫性耳疾患（Ｙｏｏ  ＴＪ．ｅｔ  ａｌ．，Ｃｅｌｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  １９９４  Ａｕｇ；１５７（１）：２４９）および内耳の自己免疫疾患（Ｇｌｏｄｄｅｋ  Ｂ．ｅｔ  ａｌ．，Ａｎｎ  ＮＹ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  １９９７  Ｄｅｃ  ２９；８３０：２６６）が挙げられるが、これらに限定されるわけではない。
【０２３９】
自己免疫性全身性疾患の例としては、全身性エリテマトーデス（Ｅｒｉｋｓｏｎ  Ｊ．ｅｔ  ａｌ．，Ｉｍｍｕｎｏｌ  Ｒｅｓ  １９９８；１７（１−２）：４９）および全身性硬化症（Ｒｅｎａｕｄｉｎｅａｕ  Ｙ．ｅｔ  ａｌ．，Ｃｌｉｎ  Ｄｉａｇｎ  Ｌａｂ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．１９９９  Ｍａｒ；６（２）：１５６）、Ｃｈａｎ  ＯＴ．ｅｔ  ａｌ．，Ｉｍｍｕｎｏｌ  Ｒｅｖ  １９９９  Ｊｕｎ；１６９：１０７）が挙げられるが、これらに限定されるわけではない。
【０２４０】
感染性疾患
感染性疾患の例としては、慢性感染性疾患、亜急性感染性疾患、急性感染性疾患、ウイルス性疾患、細菌性疾患、原生動物性疾患、寄生虫疾患、真菌性疾患、マイコプラズマ性疾患およびプリオン病が挙げられるが、これらに限定されるわけではない。
【０２４１】
具体的実施形態によれば、疾患はがんである。
【０２４２】
「がん」および「がん性」という用語は、典型的には制御されない細胞成長を特徴とする、哺乳動物における生理的状態を表す。本明細書において使用する用語「がん」および「がん性」は、任意の固形腫瘍、がん転移および／または固形前がんを指す。
【０２４３】
がんの例としては、癌、芽細胞腫、肉腫およびリンパ腫が挙げられるが、これらに限定されない。そのような癌のさらに具体的な例としては、扁平上皮細胞がん、肺がん（小細胞肺がん、非小細胞肺がん、肺の腺癌および肺の扁平上皮癌）、神経膠腫、黒色腫がん、腹膜のがん、肝細胞がん、胃（ｇａｓｔｒｉｃ）がん、胃食道がんまたは胃（ｓｔｏｍａｃｈ）がん（胃腸がんを含む）、膵がん、膠芽腫、子宮頸がん、卵巣がん、肝がん、膀胱がん、ヘパトーマ、乳がん、大腸がん、結腸直腸がん、子宮内膜がんまたは子宮癌、唾液腺癌、軟部組織肉腫、腎臓がんまたは腎がん、前立腺がん、外陰部がん、甲状腺がん、肝癌、カポジ肉腫  カルチノイド癌、およびさまざまなタイプの頭頸部がんが挙げられる。
【０２４４】
前がんは、当技術分野では、よく特徴づけられ、知られている（例えばＢｅｒｍａｎ  ＪＪ．ａｎｄ  Ｈｅｎｓｏｎ  ＤＥ．，２００３．Ｃｌａｓｓｉｆｙｉｎｇ  ｔｈｅ  ｐｒｅｃａｎｃｅｒｓ：ａ  ｍｅｔａｄａｔａ  ａｐｐｒｏａｃｈ．ＢＭＣ  Ｍｅｄ  Ｉｎｆｏｒｍ  Ｄｅｃｉｓ  Ｍａｋ．３：８を参照されたい）。前がんの例としては、後天性小型前がん、核異型を伴う後天性大型病変、がんに進行する遺伝性過形成症候群に伴って生じる前駆病変、ならびに後天性びまん性過形成およびびまん性異形成が挙げられるが、これらに限定されるわけではない。小型前がんの限定でない例としては、ＨＧＳＩＬ（Ｈｉｇｈ  ｇｒａｄｅ  ｓｑｕａｍｏｕｓ  ｉｎｔｒａｅｐｉｔｈｅｌｉａｌ  ｌｅｓｉｏｎ）（子宮頸部の高悪性度扁平上皮内病変）、ＡＩＮ（ａｎａｌ  ｉｎｔｒａｅｐｉｔｈｅｌｉａｌ  ｎｅｏｐｌａｓｉａ）（肛門上皮内新生物）、声帯の異形成、（大腸の）異常陰窩、ＰＩＮ（ｐｒｏｓｔａｔｉｃ  ｉｎｔｒａｅｐｉｔｈｅｌｉａｌ  ｎｅｏｐｌａｓｉａ）（前立腺上皮内新生物）が挙げられる。
【０２４５】
核異型を伴う後天性大型病変の限定でない例としては、管状腺腫、ＡＩＬＤ（ａｎｇｉｏｉｍｍｕｎｏｂｌａｓｔｉｃ  ｌｙｍｐｈａｄｅｎｏｐａｔｈｙ  ｗｉｔｈ  ｄｙｓｐｒｏｔｅｉｎｅｍｉａ）（異常タンパク質血症を伴う血管免疫芽球性リンパ節症）、異型性髄膜腫、胃ポリープ、大局面型類乾癬、骨髄形成異常、乳頭状移行上皮内癌、過剰な芽球を伴う不応性貧血、およびシュナイダー乳頭腫が挙げられる。がんに進行する遺伝性過形成症候群に伴って生じる前駆病変の限定でない例としては、異型母斑症候群、Ｃ細胞腺腫症およびＭＥＡが挙げられる。後天性びまん性過形成およびびまん性異形成の限定でない例としては、骨のパジェット病および潰瘍性大腸炎が挙げられる。
【０２４６】
具体的実施形態によれば、がんは、卵巣がん、結腸直腸がん、肺がん、膵がん、胃がん、胃食道がんおよび乳がんからなる群より選択される。
【０２４７】
具体的実施形態によれば、がんは転移がんである。
【０２４８】
処置レジメンに対する患者の応答を予測するために利用できる技術は他にも種々あるので、本発明の方法は、下記の実施例項でも述べるように、他の方法、例えば限定するわけではないが、遺伝子プロファイリング、患者の腫瘍から作成された腫瘍由来細胞株および患者由来異種移植片（ＰＤＸ）モデルなどと、組み合わせることができる。
【０２４９】
具体的実施形態によれば、本方法は、遺伝子プロファイリングと組み合わせて実行される。
【０２５０】
本明細書において使用する用語「遺伝子プロファイリング」は、例えば限定するわけではないがＤＮＡ配列決定、ＲＮＡ配列決定およびマイクロアレイ技法など、任意の適切なプロファイリング技術を使った、生物学的試料中の一組の遺伝子の分子シグネチャーを指す。
【０２５１】
本明細書において使用する用語「約」は±１０％を指す。
【０２５２】
「を含む」、「を包含する」、「を有する」（ｃｏｍｐｒｉｓｅｓ、ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ、ｉｎｃｌｕｄｅｓ、ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ、ｈａｖｉｎｇ）という用語およびそれらの活用形は、「を含むが、それに限定されない」こと（ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ  ｂｕｔ  ｎｏｔ  ｌｉｍｉｔｅｄ  ｔｏ）を意味する。
【０２５３】
「からなる」（ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇ  ｏｆ）という用語は、「を含み、それに限定される」こと（ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ  ａｎｄ  ｌｉｍｉｔｅｄ  ｔｏ）を意味する。
【０２５４】
「から本質的になる」（ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇ  ｅｓｓｅｎｔｉａｌｌｙ  ｏｆ）という用語は、組成物、方法または構造は、追加の成分、工程および／または部品を含みうるが、それは、その追加の成分、工程および／または部品が、請求項に係る組成物、方法および構造の不可欠かつ新規な特徴を実質的に変化させない場合に限ることを意味する。
【０２５５】
本明細書において使用する単数形「ａ」、「ａｎ」および「ｔｈｅ」は、文脈上明らかにそうでない場合を除き、複数の指示対象を包含する。例えば「ある化合物」（ａ  ｃｏｍｐｏｕｎｄ）または「少なくとも１つの化合物」（ａｔ  ｌｅａｓｔ  ｏｎｅ  ｃｏｍｐｏｕｎｄ）は、複数の化合物を、それらの混合物を含めて、包含しうる。
【０２５６】
本願全体を通して、本発明のさまざまな実施形態は範囲形式で提示されうる。範囲形式での記載は、便宜と簡潔さのためであるに過ぎず、本発明の範囲への揺るぎない限定と解釈してはならないことを理解すべきである。したがって、範囲の記載は、考えうる部分範囲とその範囲内の個々の数値をすべて具体的に開示しているとみなすべきである。例えば、１〜６などの範囲の記載は、１〜３、１〜４、１〜５、２〜４、２〜６、３〜６などの部分範囲、ならびにその範囲内の個々の数字、例えば１、２、３、４、５および６を、具体的に開示しているとみなすべきである。このことは範囲の幅とは無関係に適用される。
【０２５７】
本明細書において数値範囲が示される場合、それは常に、示された範囲内にある任意の言及された数値（分数または整数）を包含するものとする。第１の表示された数と第２の表示された数との「間の範囲にわたる」および第１の表示された数「から」第２の表示された数「までの範囲にわたる」という語句は、本明細書では相互可換的に使用することができ、当該第１および第２の表示された数と、それらの間にあるすべての分数および整数とを包含するものとする。
【０２５８】
本明細書において使用する用語「方法」は、与えられた課題を成し遂げるための手法、手段、技法および手順を指し、限定するわけではないが、化学、薬理学、生物学、生化学および医学分野の当業者に知られているか、それら当業者によって既知の手法、手段、技法および手順から容易に開発される、手法、手段、技法および手順を包含する。
【０２５９】
特定の配列表に言及する場合、そのような言及は、例えばシークエンスエラー、クローニングエラー、または塩基置換、塩基欠失もしくは塩基付加をもたらす他の改変に起因する軽微な配列変異を含むと共に、その相補配列に実質上対応する配列も包含すると理解すべきである。ただし、そのような変異の頻度は、５０ヌクレオチドあたり１つ未満、あるいは１００ヌクレオチドあたり１つ未満、あるいは２００ヌクレオチドあたり１つ未満、あるいは５００ヌクレオチドあたり１つ未満、あるいは１０００ヌクレオチドあたり１つ未満、あるいは５，０００ヌクレオチドあたり１つ未満、あるいは１０，０００ヌクレオチドあたり１つ未満であるものとする。
【０２６０】
明確な記載のために別々の実施形態として記載されている本発明の一定の特徴を単一の実施形態に組み合わせて提供することもできることは理解される。逆に、明確な記載のために単一の実施形態として記載されている本発明のさまざまな特徴を別々に、または任意の適切なサブコンビネーションで、または適宜、他の任意の記載した本発明の実施形態において、提供することもできる。さまざまな実施形態との関連において記載される一定の特徴は、その実施形態がそれらの要素なしでは作用しない場合を除き、それらの実施形態の不可欠な特徴とみなしてはならない。
【０２６１】
上述した、そして下記の特許請求の範囲に記載する、本発明のさまざまな実施形態および態様は、以下の実施例で実験的に裏付けられる。
実施例
【０２６２】
以下に実施例を挙げるが、これらは上述の記載と共に、本発明のいくつかの実施形態を、限定ではない形で例示するものである。
【０２６３】
一般に、本明細書において使用する術語および本発明において利用される実験手順は、分子技法、生化学的技法、微生物学的技法および組換えＤＮＡ技法を含む。そのような技法は、文献に十分に説明されている。例えば以下を参照されたい：「Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ  ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ」Ｓａｍｂｒｏｏｋら（１９８９）；「Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ」第Ｉ〜ＩＩＩ巻，Ａｕｓｕｂｅｌ，Ｒ．Ｍ．編（１９９４）；Ａｕｓｕｂｅｌら「Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ」Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ａｎｄ  Ｓｏｎｓ，メリーランド州ボルティモア（１９８９）；Ｐｅｒｂａｌ「Ａ  Ｐｒａｃｔｉｃａｌ  Ｇｕｉｄｅ  ｔｏ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ」Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ，ニューヨーク（１９８８）；Ｗａｔｓｏｎら「Ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ  ＤＮＡ」Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ  Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｂｏｏｋｓ，ニューヨーク；Ｂｉｒｒｅｎら（編）「Ｇｅｎｏｍｅ  Ａｎａｌｙｓｉｓ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ  Ｓｅｒｉｅｓ」第１〜４巻，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ，ニューヨーク（１９９８）；米国特許第４，６６６，８２８号、同第４，６８３，２０２号、同第４，８０１，５３１号、同第５，１９２，６５９号および同第５，２７２，０５７号に記載の方法論；「Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌｏｇｙ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｈａｎｄｂｏｏｋ」第Ｉ〜ＩＩＩ巻，Ｃｅｌｌｉｓ，Ｊ．Ｅ．編（１９９４）；「Ｃｕｌｔｕｒｅ  ｏｆ  Ａｎｉｍａｌ  Ｃｅｌｌｓ−Ａ  Ｍａｎｕａｌ  ｏｆ  Ｂａｓｉｃ  Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅ」Ｆｒｅｓｈｎｅｙ著，Ｗｉｌｅｙ−Ｌｉｓｓ，ニューヨーク（１９９４），第３版；「Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ」第Ｉ〜ＩＩＩ巻，Ｃｏｌｉｇａｎ  Ｊ．Ｅ．編（１９９４）；Ｓｔｉｔｅｓら（編）「Ｂａｓｉｃ  ａｎｄ  Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ」（第８版），Ａｐｐｌｅｔｏｎ  ＆  Ｌａｎｇｅ，コネチカット州ノーウォーク（１９９４）；ＭｉｓｈｅｌｌおよびＳｈｉｉｇｉ（編）「Ｓｅｌｅｃｔｅｄ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｃｅｌｌｕｌａｒ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ」Ｗ．Ｈ．Ｆｒｅｅｍａｎ  ａｎｄ  Ｃｏ．，ニューヨーク（１９８０）；利用できるイムノアッセイは特許および科学文献に広く記載されており、例えば米国特許第３，７９１，９３２号、同第３，８３９，１５３号、同第３，８５０，７５２号、同第３，８５０，５７８号、同第３，８５３，９８７号、同第３，８６７，５１７号、同第３，８７９，２６２号、同第３，９０１，６５４号、同第３，９３５，０７４号、同第３，９８４，５３３号、同第３，９９６，３４５号、同第４，０３４，０７４号、同第４，０９８，８７６号、同第４，８７９，２１９号、同第５，０１１，７７１号および同第５，２８１，５２１号を参照されたい；「Ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ」Ｇａｉｔ，Ｍ．Ｊ．ら（１９８４）；「Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄ  Ｈｙｂｉｒｉｄａｉｚａｔｉｏｎ」Ｈａｍｅｓ，Ｂ．Ｄ．およびＨｉｇｇｉｎｓ  Ｓ��Ｊ．編（１９８５）；「Ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ  ａｎｄ  Ｔｒａｎｓｌａｔｉｏｎ」Ｈａｍｅｓ，Ｂ．Ｄ．およびＨｉｇｇｉｎｓ  Ｓ．Ｊ．編（１９８４）；「Ａｎｉｍａｌ  Ｃｅｌｌ  Ｃｕｌｔｕｒｅ」Ｆｒｅｓｈｎｅｙ，Ｒ．Ｉ．編（１９８６）；「Ｉｍｍｏｂｉｌｉｚｅｄ  Ｃｅｌｌｓ  ａｎｄ  Ｅｎｚｙｍｅｓ」ＩＲＬ  Ｐｒｅｓｓ（１９８６）；「Ａ  Ｐｒａｃｔｉｃａｌ  Ｇｕｉｄｅ  ｔｏ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ」Ｐｅｒｂａｌ，Ｂ．，（１９８４）および「Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ」第１〜３１７巻，Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ；「ＰＣＲ  Ｐｒｏｔｏｒｏｌｓ：Ａ  Ｇｕｉｄｅ  Ｔｏ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  Ａｎｄ  Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ」Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ，カリフォルニア州サンディエゴ（１９９０）；Ｍａｒｓｈａｋら「Ｓｔｒａｔｅｇｉｅｓ  ｆｏｒ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ  ａｎｄ  Ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ−Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｃｏｕｒｓｅ  Ｍａｎｕａｌ」ＣＳＨＬ  Ｐｒｅｓｓ（１９９６）；これらはすべて、あたかもすべてが本明細書に記載されているかのように、参照により本明細書に組み込まれる。他の一般参考文献は本明細書の全体にわたって掲載する。そこに記載されている手順は当技術分野において周知であると考えられ、読者の便宜のために提供される。そこに含まれている情報はすべて参照により本明細書に組み込まれる。
材料および方法
【０２６４】
組織切片−健常組織およびがん性組織（肝臓、肺、大腸、乳房、膵臓、または肺、大腸、乳房もしくは膵臓に由来するがんの転移組織）を、マウスＰＤＸモデル（Ｎｏｄ  Ｓｃｉｄガンママウス、Ｊａｃｋｓｏｎ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ  ＵＳＡおよび／またはＨａｒｌａｎ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ）、ヒト生検材料および外科的に取り出された組織、ならびにヒト由来異種移植片（卵巣がん、膵ＰＤＸ）から得た。収集後直ちに、新鮮組織を氷冷リン酸緩衝食塩水（ＰＢＳ、Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｄｕｓｔｒｉｅｓ、キブツ・ベイト・ハエメック（Ｋｂｂｕｔｚ  Ｂｅｉｔ  Ｈａｍｅｋ））または氷冷培養培地（ＲＰＭＩ、Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｄｕｓｔｒｉｅｓ）に入れた。精密組織切片作成装置（Ｃｏｍｐｒｅｓｓｔｏｍｅ（商標）ＶＦ−３００：Ｐｒｅｃｉｓｉｏｎａｒｙ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ  Ｉｎｃ．、米国ノースカロライナ州）を７０％エタノールで清掃し、滅菌水で２回すすぎ、新しい刃（両刃ブレード３２０１７７５９、Ｂｅｌｇａｒ、エルサレム、イスラエル）を取付けて、正しく配置した。
【０２６５】
組織は予め清掃しておいた組織切片作成装置に移すまで氷上に保っておき、次に組織をＰＢＳから取り出し、コンタクト接着剤を使ってプランジャーに静かに取付け、５０℃に温めた３％低ゲル化温度アガロース中で安定化した後、冷却することで使用前に固化させた（アガロース、低ゲル化温度、Ａ０７０１、Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ、０．９ｇ  ＮａＣｌ中３％）。組織付きのプランジャーを、組織切片作成装置の指定場所に挿入し、槽を、ペニシリンおよびストレプトマイシンが添加されている氷冷ウィリアムス培地Ｅで満たした。槽中の培地を低温に維持するために、槽内に設置される中空冷却コイルを組み立てた。次に、標準的な液浸ポンプを使って、そのコイルに氷冷水を通した。組織を約２５０μＭ切片に薄切した。１ｃｍ３の組織片からおよそ３０〜４０の切片を調製した。２つまたは３つの切片を直ちに使い捨てプラスチック製組織カセットに入れ、４％ＰＦＡで固定した。
【０２６６】
培養手順−組織切片を個別に６穴プレート（Ｃｏｒｎｉｎｇ  ＣＣ−３５１６、Ｇｅｔｔｅｒ、ペタク・チクヴァ、イスラエル）に直接入れるか、チタンインサート（ＭＡ００３６ウェルインサート、Ａｌａｂａｍａ  Ｒ＆Ｄ、米国アラバマ州）上に置くか、またはＰＥＧ上に置くか、またはチタンインサートにのせたＰＥＧ上に置いた。各ウェルは、ペニシリン（１００ＩＵ／ｍｌ）、ストレプトマイシン（１００μｇ／ｍｌ）、ゲンタマイシン（Ｇ１３９７、５０μｇ／ｍｌ、Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ）、５％ウシ胎児血清（ＦＣＳ、１０２７０１０６、Ｇｉｂｃｏ  Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ、レホボート、イスラエル）、アンホテリシンＢ（Ａ−４８８８、２．５μｇ／ｍｌ、Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ）およびグルタミン（Ｌ−グルタミン、０３−０２０−１Ｂ、１００μｌ／ｍｌ、Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｄｕｓｔｒｉｅｓ）を補足した４．５ｍｌのＤＭＥＭ／Ｆ１２またはＭ１９９培地を含んでいた。プレートを、３７℃の加湿インキュベータ中、５％ＣＯ２および２１％または８０％Ｏ２（酸素チャンバ：ＢｉｏＳｐｈｅｒｉｘ  Ｃ２７４、米国ニューヨーク州；酸素コントローラ：Ｂｉｏｓｐｈｅｒｉｘ  ＰｒｏＯｘ  Ｃ２１、米国ニューヨーク州；および酸素９８％、Ｍａｘｘｉｍａ  Ａｉｒ  Ｉｎｎｏｖａｔｉｏｎｓ、アシュドド、イスラエルを使用）でインキュベートした。
【０２６７】
インキュベータ全体を７０ｒｐｍのオービタルシェーカー撹拌（ＴＯＵ−１２０Ｎ、ＭＲＣ、ホロン、イスラエル）にかけた。一晩のインキュベーション後に、培地を新鮮培地で置き換えた。表示したウェルでは、新鮮培地が、抗がん薬［４−ヒドロペルオキシシクロホスファミド（ｓｃ−２０６８８５、ＥＮＣＯ、ペターティクバ、イスラエル）、５−フルロウリシル（５ＦＵ、Ａ１００４２、Ａｄｏｏｑ  Ｂｉｏｔａｇ、クファル・ヨナ（Ｋｆａｒ  Ｙｏｎａ）、イスラエル）、オキサリプラチン（Ｏ９５１２、Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ）、イリノテカン（Ａ１０４７９−２００、Ａｄｏｏｑ  Ｂｉｏｔａｇ、クファル・ヨナ、イスラエル）、ドセタキセル（０１８８５、Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ）、シスプラチン（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ）、トラメチニブ（Ａ１１０２９、Ａｄｏｏｑ  Ｂｉｏｔａｇ、クファル・ヨナ、イスラエル）、ＣＤＫ４／６阻害剤パルボシクリブ（ＰＺ０１９９、Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ）またはＦＧＦＲ阻害剤ＡＺＤ４５４７（Ａ１１０７５−５、Ａｄｏｏｑ  Ｂｉｏｔａｇ）を、表示した濃度で含有した。４〜６日間にわたって、培地を、４８時間ごとに１回、新鮮な薬物／ＤＭＳＯで置き換えた。
【０２６８】
機能アッセイ−培養終了の１８〜２４時間前に、後で行う抗ＢｒｄＵ抗体（ＢＲＤＵ＋抗ＢＲＤＵ  Ｂ５００２、Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈおよび９４−ＭＳ−１０５８−Ｐ、Ｅｌｄａｎ、ペターティクバ、イスラエル）および／または抗Ｋｉ６７（９４−ＲＭ−９１０６−Ｓ、Ｅｌｄａｎ、ペターティクバ、イスラエル）による染色のために、ＢｒｄＵを培地に添加した（最終濃度：１０μｍ／ｍｌ）。培養が終わったら、組織を２枚のカバーガラスの間に置き、使い捨てプラスチック製組織カセットに入れ、４％パラホルムアルデヒド（ＰＦＡ）で一晩固定した。次に、ヘマトキシリンおよびエオシン（Ｈ＆Ｅ）染色ならびに他のＩＨＣ染色、例えばＫｉ６７染色のために、切片をパラフィン処理し、ブロックにして、５μＭ切片に切断した。
【実施例１】
【０２６９】
健常組織切片および腫瘍組織切片の構造および機能を維持するためのエクスビボ器官培養条件
エクスビボ器官培養（ＥＶＯＣ）において少なくとも５日間は組織の構造および機能が得られるように、いくつかの条件を検討した。条件には、
１．組織切片をチタンインサートなどの異なる表面上で培養して、培養培地中に切片を直接浸けた場合と比較すること、
２．組織を２１％Ｏ２および５％ＣＯ２の標準的組織培養条件下でインキュベートして、８０％Ｏ２を含有する高含酸素雰囲気と比較すること、
３．各ウェルで１つの切片を培養して、各ウェルに数個の切片の場合と比較すること、
４．ＤＭＥＭ／Ｆ１２とＭ１９９など、異なる培地を使用すること、
５．チタンインサートありまたはチタンインサートなしで、ＰＥＧ上で培養すること
を含めた。
【０２７０】
結果を下記表１に要約する。
【０２７１】
このために、８０％Ｏ２を含有する高含酸素雰囲気下で組織をインキュベートしたところ、２１％Ｏ２の標準的組織培養条件と比較して、組織の生存能が有意に増加した（ヒト卵巣がん由来異種移植片の代表的培養物を図１に示す）。加えて、組織は、切片が培地に完全に浸かるように組織を組織培養ウェルに直接挿入した場合と比較して、培地／空気界面をもたらすチタンインサート上に担持した場合の方が、生残性が向上する（ヒト卵巣がん由来異種移植片の代表的培養物を図１に示す）。さらにまた、ＤＭＥＭ／Ｆ１２はＭ１９９より良好な培地であった（ヒト卵巣がん由来異種移植片の代表的培養物を図２に示す）。
【０２７２】
【表１】
2020516243.tif 000004
【０２７３】
上記表１に掲載したＥＶＯＣ用の組織はすべて外科手術から得られた。しかし、開発されたアッセイは、腫瘍組織からコア生検によって採取された小さな生検材料組織に適合させることができる（図９）。具体的に述べると、組織は２工程でアガロースに包埋される：第１アガロース液を小さな金属製トレイに入れ、コア生検材料をそのアガロースにのせ、生検材料の上にアガロースを追加する。トレイを冷却し、生検材料を含むアガロースをひとまとめにして切り出す。第２工程では、アガロースのブロックをコンタクトクルー（ｃｏｎｔａｃｔ  ｃｌｕｅ）でプランジャーに固定し、組織片に使用した手法と同様の手法によってアガロースで取り囲む。
【０２７４】
全体として、数多くの組織を代表する異なる供給源から、組織の構造と生存能を少なくとも５日間の培養中は維持するＥＶＯＣが樹立された（図１、図２および図１１）。重要なことに、組織はすべて、病理学者によって検査され、完全に生存可能であり、患者からの定型的病理組織と同じ形態を持つとみなされた。
【０２７５】
総合すると、８０％Ｏ２を含有する高含酸素雰囲気下、ＤＭＥＭ／Ｆ１２培地において、培養培地への組織切片の間欠的浸漬を容易にするオービタル振とうで培養物を撹拌しながら、チタンインサートの中央で直接、１つの組織切片を培養すると、組織の構造および生存能が、少なくとも５日間の培養中は維持された。以下の実施例では、この新たに開発されたＥＶＯＣ系を使用した。
【実施例２】
【０２７６】
開発されたＥＶＯＣは抗がん薬に対する主要の応答を予測するために使用することができる
開発されたＥＶＯＣは処置に対する患者由来異種移植片のインビボ応答を予測することができる：抗がん薬に対するインビボ応答がわかっているマウス患者由来異種移植片（ＰＤＸ）モデルをＪａｃｋｓｏｎ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓから数種類購入した。マウスから腫瘍を切除し、上記材料および方法ならびに実施例１で述べたように培養し、抗がん剤に対する組織切片の感受性を試験した。３つの腫瘍タイプ（乳がん、肺がんおよび結腸直腸がん）に由来する全部で７つのＰＤＸモデルを試験したところ、試験したすべてのモデルにおいて、開発されたＥＶＯＣ系は薬物処置に対する腫瘍の感受性を正しく予測することができた（下記表２および図３〜図４）。加えて、ＥＶＯＣ系では明確な用量依存的応答が観察された。
【０２７７】
したがって、図３〜図４および下記表２に見られるように、インビボでの処置に抵抗性である腫瘍は、非常に高い用量を適用した場合でさえ、エクスビボでの処置にも抵抗性であった。対照的に、インビボで腫瘍が感受性である処置を適用すると、エクスビボでは低い薬物濃度で細胞死が検出され、薬物感受性は薬物濃度の増加と共に増加した。
【０２７８】
【表２】
2020516243.tif 000005
【０２７９】
開発されたＥＶＯＣは、ヒト腫瘍が異なる抗がん処置に対して差異的感受性を呈することを示す：外科的切除時に患者腫瘍から切除された患者腫瘍組織を、上記材料および方法ならびに実施例１で述べたように直接培養し、抗がん剤に対する組織切片の感受性を試験した。腫瘍タイプごとに最も一般的な抗がんレジメンを使用した。すなわち、例えばヒト結腸直腸がんの場合であれば、標準的処置は５−フルオルウリシル（ｆｌｕｏｒｕｒｉｃｉｌ）、オキサリプラチンおよび／またはイリノテカンである。図５は、高用量の５−フルオロウラシルには抵抗性であるが、イリノテカンおよびオキサプラチンには比較的感受性であることが見いだされた腫瘍の例を示している。組織切片の生存能および抗がん剤に対する感受性の評価には、例えばＫｉ６７染色などによる細胞増殖の決定も使用することができる。したがって図８は、５−フルオウラシル（ｆｌｕｏｕｒａｃｉｌ）には部分感受性であるが、オキサリプラチン処置に対する感受性は非常に高いことがＫｉ６７染色によってわかった、直腸結腸がんの例を示している。
【０２８０】
総合すると、開発されたＥＶＯＣ系は、患者腫瘍がある抗がん薬には感受性であるが、別の抗がん薬には抵抗性でありうることを、明確に示した。さらにまた、個々の異なる患者から作成されたＥＶＯＣは、同じ抗がん処置に差異的に応答した（図６および下記表３〜表４）。加えて、各抗がん処置について、用量依存的応答が観察された（例えば表３〜表４）。
【０２８１】
【表３】
2020516243.tif 000006
【０２８２】
【表４】
2020516243.tif 000007
０−完全応答、１−強い部分応答、２−中等度の部分応答、３−弱い部分応答、および４−応答なし。
【０２８３】
開発されたＥＶＯＣは分子プロファイリングによって予測される標的治療に対する感受性を予測することができる：個別化医療の手段として、患者の腫瘍組織を、考えうるアクショナブル遺伝子変異について、例えばエクソームシーケンシングなどによって試験することができる。得られた腫瘍の１つは、ＦＧＦＲ１の増幅およびＣＤＫ６の増幅を含む、潜在的にターゲティング可能な体細胞遺伝子変化を内包することがわかったトリプルネガティブ乳がんを持つ患者からのものであった。図７に見られるように、この患者（患者１）から得られた腫瘍はＣＤＫ４／６阻害剤パルボシクリブに対してエクスビボで抵抗性であったが、ＦＧＦＲ阻害剤ＡＺＤ４５４７には高い感受性を示した。最も重要なことに、ＦＧＦＲ１増幅を有しない別の患者（患者２）から得られた乳がんは、開発されたＥＶＯＣ系において、ＦＧＦＲ阻害に対して抵抗性であった。
【０２８４】
組織は培養する前に４８時間貯蔵することができる：外科的切除時に患者腫瘍から切除された患者腫瘍組織を、上記材料および方法ならびに実施例１で述べたように直接培養するか、または４℃の培地中で４８時間の貯蔵後に培養し、抗がん剤に対する組織切片の感受性を試験した。図１０は、どちらの条件でも（すなわち直接培養しても、４℃で４８時間後でも）５−フルオウラシルに対して同じように部分感受性であることがわかった大腸がん組織の例を示している。
【０２８５】
総合すると、実験を開始する前に組織を少なくとも４８時間にわたって培地中に貯蔵しても、組織または薬物感受性に有害な影響は何もない。
【０２８６】
総合すると、新たに開発されたＥＶＯＣは、ヒトがん組織の応答を研究するプロセスを迅速にし、対費用効果を高め、多くのがん組織に共通するものにする。試験したがん性組織は、卵巣組織、結腸直腸組織、肺組織、膵組織および乳房組織を含めてすべて、４〜７日間の培養後に高い生存能を呈した。
【０２８７】
本発明をその具体的実施形態と共に記述したが、多くの代替態様、変更態様および異形が当業者にとって明らかであることは明白である。したがって、添付の請求項の要旨および広い範囲内にあるそのような代替態様、変更態様および異形はすべて包含されるものとする。
【０２８８】
本明細書において言及した刊行物、特許および特許出願はすべて、個々の刊行物、特許または特許出願について、参照により本明細書に組み込まれることを具体的かつ個別に示した場合と同じ程度に、参照により、そのまま本明細書に組み込まれる。加えて、本明細書における任意の参考文献の引用または同定は、そのような参考文献を本発明の先行技術として利用できることの自白であるとみなしてはならない。項目見出しが使用される場合、それらを必ずしも限定と解釈してはならない。
参考文献
【０２８９】
１．  Ｄａｎｃｅｙ，Ｊ．Ｅ．，Ｂｅｄａｒｄ，Ｐ．Ｌ．，Ｏｎｅｔｔｏ，Ｎ．＆  Ｈｕｄｓｏｎ，Ｔ．Ｊ．Ｔｈｅ  ｇｅｎｅｔｉｃ  ｂａｓｉｓ  ｆｏｒ  ｃａｎｃｅｒ  ｔｒｅａｔｍｅｎｔ  ｄｅｃｉｓｉｏｎｓ．Ｃｅｌｌ  １４８，４０９−４２０（２０１２）．
２．  Ｇａｒｒａｗａｙ，Ｌ．Ａ．Ｇｅｎｏｍｉｃｓ−ｄｒｉｖｅｎ  ｏｎｃｏｌｏｇｙ：ｆｒａｍｅｗｏｒｋ  ｆｏｒ  ａｎ  ｅｍｅｒｇｉｎｇ  ｐａｒａｄｉｇｍ．Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｏｎｃｏｌ．Ｏｆｆ．Ｊ．Ａｍ．Ｓｏｃ．Ｃｌｉｎ．Ｏｎｃｏｌ．３１，１８０６−１８１４（２０１３）．
３．  Ｃｒｙｓｔａｌ，Ａ．Ｓ．ｅｔ  ａｌ．Ｐａｔｉｅｎｔ−ｄｅｒｉｖｅｄ  ｍｏｄｅｌｓ  ｏｆ  ａｃｑｕｉｒｅｄ  ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ  ｃａｎ  ｉｄｅｎｔｉｆｙ  ｅｆｆｅｃｔｉｖｅ  ｄｒｕｇ  ｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎｓ  ｆｏｒ  ｃａｎｃｅｒ．Ｓｃｉｅｎｃｅ  ３４６，１４８０−１４８６（２０１４）．
４．  Ｌｉｕ，Ｘ．ｅｔ  ａｌ．ＲＯＣＫ  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ  ａｎｄ  ｆｅｅｄｅｒ  ｃｅｌｌｓ  ｉｎｄｕｃｅ  ｔｈｅ  ｃｏｎｄｉｔｉｏｎａｌ  ｒｅｐｒｏｇｒａｍｍｉｎｇ  ｏｆ  ｅｐｉｔｈｅｌｉａｌ  ｃｅｌｌｓ．Ａｍ．Ｊ．Ｐａｔｈｏｌ．１８０，５９９−６０７（２０１２）．
５．  Ｄａｎｉｅｌ，Ｖ．Ｃ．ｅｔ  ａｌ．Ａ  ｐｒｉｍａｒｙ  ｘｅｎｏｇｒａｆｔ  ｍｏｄｅｌ  ｏｆ  ｓｍａｌｌ−ｃｅｌｌ  ｌｕｎｇ  ｃａｎｃｅｒ  ｒｅｖｅａｌｓ  ｉｒｒｅｖｅｒｓｉｂｌｅ  ｃｈａｎｇｅｓ  ｉｎ  ｇｅｎｅ  ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  ｉｍｐｏｓｅｄ  ｂｙ  ｃｕｌｔｕｒｅ  ｉｎ  ｖｉｔｒｏ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．６９，３３６４−３３７３（２００９）．
６．  Ｃｌｅｖｅｒｓ，Ｈ．Ｍｏｄｅｌｉｎｇ  Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ  ａｎｄ  Ｄｉｓｅａｓｅ  ｗｉｔｈ  Ｏｒｇａｎｏｉｄｓ．Ｃｅｌｌ  １６５，１５８６−１５９７（２０１６）．
７．  Ｈｉｄａｌｇｏ，Ｍ．ｅｔ  ａｌ．Ｐａｔｉｅｎｔ−ｄｅｒｉｖｅｄ  ｘｅｎｏｇｒａｆｔ  ｍｏｄｅｌｓ：ａｎ  ｅｍｅｒｇｉｎｇ  ｐｌａｔｆｏｒｍ  ｆｏｒ  ｔｒａｎｓｌａｔｉｏｎａｌ  ｃａｎｃｅｒ  ｒｅｓｅａｒｃｈ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｄｉｓｃｏｖ．４，９９８−１０１３（２０１４）．
８．  Ｓｔｒａｕｓｓｍａｎ，Ｒ．ｅｔ  ａｌ．Ｔｕｍｏｕｒ  ｍｉｃｒｏ−ｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔ  ｅｌｉｃｉｔｓ  ｉｎｎａｔｅ  ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ  ｔｏ  ＲＡＦ  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ  ｔｈｒｏｕｇｈ  ＨＧＦ  ｓｅｃｒｅｔｉｏｎ．Ｎａｔｕｒｅ  ４８７，５００−５０４（２０１２）．
９．  Ｏｌｓｏｎ，Ｏ．Ｃ．＆  Ｊｏｙｃｅ，Ｊ．Ａ．Ｍｉｃｒｏｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔ−ｍｅｄｉａｔｅｄ  ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ  ｔｏ  ａｎｔｉｃａｎｃｅｒ  ｔｈｅｒａｐｉｅｓ．Ｃｅｌｌ  Ｒｅｓ．２３，１７９−１８１（２０１３）．
１０．  Ｖａｉｒａ，Ｖ．ｅｔ  ａｌ．Ｐｒｅｃｌｉｎｉｃａｌ  ｍｏｄｅｌ  ｏｆ  ｏｒｇａｎｏｔｙｐｉｃ  ｃｕｌｔｕｒｅ  ｆｏｒ  ｐｈａｒｍａｃｏｄｙｎａｍｉｃ  ｐｒｏｆｉｌｉｎｇ  ｏｆ  ｈｕｍａｎ  ｔｕｍｏｒｓ．Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．１０７，８３５２−８３５６（２０１０）．
１１．  Ｖｉｃｋｅｒｓ，Ａ．Ｅ．Ｍ．＆  Ｆｉｓｈｅｒ，Ｒ．Ｌ．Ｏｒｇａｎ  ｓｌｉｃｅｓ  ｆｏｒ  ｔｈｅ  ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｈｕｍａｎ  ｄｒｕｇ  ｔｏｘｉｃｉｔｙ．Ｃｈｅｍ．Ｂｉｏｌ．Ｉｎｔｅｒａｃｔ．１５０，８７−９６（２００４）．
１２．  ｄｅ  Ｋａｎｔｅｒ，Ｒ．，Ｍｏｎｓｈｏｕｗｅｒ，Ｍ．，Ｍｅｉｊｅｒ，Ｄ．Ｋ．Ｆ．＆  Ｇｒｏｏｔｈｕｉｓ，Ｇ．Ｍ．Ｍ．Ｐｒｅｃｉｓｉｏｎ−ｃｕｔ  ｏｒｇａｎ  ｓｌｉｃｅｓ  ａｓ  ａ  ｔｏｏｌ  ｔｏ  ｓｔｕｄｙ  ｔｏｘｉｃｉｔｙ  ａｎｄ  ｍｅｔａｂｏｌｉｓｍ  ｏｆ  ｘｅｎｏｂｉｏｔｉｃｓ  ｗｉｔｈ  ｓｐｅｃｉａｌ  ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ  ｔｏ  ｎｏｎ−ｈｅｐａｔｉｃ  ｔｉｓｓｕｅｓ．Ｃｕｒｒ．Ｄｒｕｇ  Ｍｅｔａｂ．３，３９−５９（２００２）．
１３．  Ｓｔｏｆｆ−Ｋｈａｌｉｌｉ，Ｍ．Ａ．ｅｔ  ａｌ．Ｐｒｅｃｌｉｎｉｃａｌ  ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎａｌ  ｔａｒｇｅｔｉｎｇ  ｓｔｒａｔｅｇｉｅｓ  ｆｏｒ  ｃａｒｃｉｎｏｍａ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｂｒｅａｓｔ  ｉｎ  ａ  ｔｉｓｓｕｅ  ｓｌｉｃｅ  ｍｏｄｅｌ  ｓｙｓｔｅｍ．Ｂｒｅａｓｔ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．ＢＣＲ  ７，Ｒ１１４１−１１５２（２００５）．
１４．  Ｍｅｒｚ，Ｆ．ｅｔ  ａｌ．Ｏｒｇａｎｏｔｙｐｉｃ  ｓｌｉｃｅ  ｃｕｌｔｕｒｅｓ  ｏｆ  ｈｕｍａｎ  ｇｌｉｏｂｌａｓｔｏｍａ  ｒｅｖｅａｌ  ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ  ｓｕｓｃｅｐｔｉｂｉｌｉｔｉｅｓ  ｔｏ  ｔｒｅａｔｍｅｎｔｓ．Ｎｅｕｒｏ−Ｏｎｃｏｌ．１５，６７０−６８１（２０１３）．
１５．  Ｇｅｒｌａｃｈ，Ｍ．Ｍ．ｅｔ  ａｌ．Ｓｌｉｃｅ  ｃｕｌｔｕｒｅｓ  ｆｒｏｍ  ｈｅａｄ  ａｎｄ  ｎｅｃｋ  ｓｑｕａｍｏｕｓ  ｃｅｌｌ  ｃａｒｃｉｎｏｍａ：ａ  ｎｏｖｅｌ  ｔｅｓｔ  ｓｙｓｔｅｍ  ｆｏｒ  ｄｒｕｇ  ｓｕｓｃｅｐｔｉｂｉｌｉｔｙ  ａｎｄ  ｍｅｃｈａｎｉｓｍｓ  ｏｆ  ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ．Ｂｒ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ  １１０，４７９−４８８（２０１４）．
１６．  Ｍｅｉｊｅｒ，Ａ．ｅｔ  ａｌ．Ｎｕｔｌｉｎ−３  ｐｒｅｆｅｒｅｎｔｉａｌｌｙ  ｓｅｎｓｉｔｉｓｅｓ  ｗｉｌｄ−ｔｙｐｅ  ｐ５３−ｅｘｐｒｅｓｓｉｎｇ  ｃａｎｃｅｒ  ｃｅｌｌｓ  ｔｏ  ＤＲ５−ｓｅｌｅｃｔｉｖｅ  ＴＲＡＩＬ  ｏｖｅｒ  ｒｈＴＲＡＩＬ．Ｂｒ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ  １０９，２６８５−２６９５（２０１３）．
１７．  Ｇｒｏｓｓｏ，Ｓ．Ｈ．Ｇ．ｅｔ  ａｌ．Ｂｒｅａｓｔ  ｃａｎｃｅｒ  ｔｉｓｓｕｅ  ｓｌｉｃｅｓ  ａｓ  ａ  ｍｏｄｅｌ  ｆｏｒ  ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｒｅｓｐｏｎｓｅ  ｔｏ  ｒａｐａｍｙｃｉｎ．Ｃｅｌｌ  Ｔｉｓｓｕｅ  Ｒｅｓ．３５２，６７１−６８４（２０１３）．
１８．  Ｍａｊｕｍｄｅｒ，Ｂ．ｅｔ  ａｌ．Ｐｒｅｄｉｃｔｉｎｇ  ｃｌｉｎｉｃａｌ  ｒｅｓｐｏｎｓｅ  ｔｏ  ａｎｔｉｃａｎｃｅｒ  ｄｒｕｇｓ  ｕｓｉｎｇ  ａｎ  ｅｘ  ｖｉｖｏ  ｐｌａｔｆｏｒｍ  ｔｈａｔ  ｃａｐｔｕｒｅｓ  ｔｕｍｏｕｒ  ｈｅｔｅｒｏｇｅｎｅｉｔｙ．Ｎａｔ．Ｃｏｍｍｕｎ．６，６１６９（２０１５）．
１９．  Ｒｏｉｆｅ，Ｄ．ｅｔ  ａｌ．Ｅｘ  Ｖｉｖｏ  Ｔｅｓｔｉｎｇ  ｏｆ  Ｐａｔｉｅｎｔ−Ｄｅｒｉｖｅｄ  Ｘｅｎｏｇｒａｆｔｓ  Ｍｉｒｒｏｒｓ  ｔｈｅ  Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｏｕｔｃｏｍｅ  ｏｆ  Ｐａｔｉｅｎｔｓ  ｗｉｔｈ  Ｐａｎｃｒｅａｔｉｃ  Ｄｕｃｔａｌ  Ａｄｅｎｏｃａｒｃｉｎｏｍａ．Ｃｌｉｎ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．Ｊｕｎｅ  ３，２０１６；ＤＯＩ：１０．１１５８／１０７８−０４３２．ＣＣＲ−１５−２９３６．
２０．  Ｍａｕｎｄ，ＳＬ．ｅｔ  ａｌ．Ｏｐｔｉｍｉｚａｔｉｏｎ  ａｎｄ  ｃｏｍｐｒｅｈｅｎｓｉｖｅ  ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ  ｏｆ  ａ  ｆａｉｔｈｆｕｌ  ｔｉｓｓｕｅ  ｃｕｌｔｕｒｅ  ｍｏｄｅｌ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｂｅｎｉｇｎ  ａｎｄ  ｍａｌｉｇｎａｎｔ  ｈｕｍａｎ  ｐｒｏｓｔａｔｅ．Ｌａｂ．Ｉｎｖｅｓｔ．９４，２０８−２２１（２０１４）．
２１．  Ｓｉｏｌａｓ，Ｄ．，Ｈａｎｎｏｎ，Ｇ．Ｐａｔｉｅｎｔ  Ｄｅｒｖｉｄｅｄ  Ｔｕｍｏｒ  Ｘｅｎｇｒａｆｔｓ：ｔｒａｎｓｆｏｒｍｉｎｇ  ｃｌｉｎｉｃａｌ  ｓａｍｐｌｅｓ  ｉｎｔｏ  ｍｏｕｓｅ  ｍｏｄｅｌｓ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．７３：５３１５−５３１９（２０１３）．
２２．  Ｖａｉｒａ，Ｖ．ｅｔ  ａｌ．Ｐｒｅｃｌｉｎｉｃａｌ  ｍｏｄｅｌ  ｏｆ  ｏｒｇａｎｏｔｙｐｉｃ  ｃｕｌｔｕｒｅ  ｆｏｒ  ｐｈａｒｍａｃｏｄｙｎａｍｉｃ  ｐｒｏｆｉｌｉｎｇ  ｏｆ  ｈｕｍａｎ  ｔｕｍｏｒｓ．ＰＮＡＳ  １０７，８３５２−８３５６（２０１０）．
２３．  ｖａｎ  ｄｅｒ  Ｋｕｉｐ，Ｈ．，ｅｔ  ａｌ．Ｓｈｏｒｔ  ｔｅｒｍ  ｃｕｌｔｕｒｅ  ｏｆ  ｂｒｅａｓｔ  ｃａｎｃｅｒ  ｔｉｓｓｕｅｓ  ｔｏ  ｓｔｕｄｙ  ｔｈｅ  ａｃｔｉｖｉｔｙ  ｏｆ  ｔｈｅ  ａｎｔｉｃａｎｃｅｒ  ｄｒｕｇ  ｔａｘｏｌ  ｉｎ  ａｎ  ｉｎｔａｃｔ  ｔｕｍｏｒ  ｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔ．ＢＭＣ  Ｃａｎｃｅｒ  ６，８６−９０．
２４．  Ｓａｌｍｏｎ，Ｅ．，ｅｔ  ａｌ．Ｍａｔｒｉｘ  ａｒｃｈｉｔｅｃｔｕｒｅ  ｄｅｆｉｎｅｓ  ｔｈｅ  ｐｒｅｆｅｒｅｎｔｉａｌ  ｌｏｃａｌｉｚａｔｉｏｎ  ａｎｄ  ｍｉｇｒａｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｔ−ｃｅｌｌｓ  ｉｎｔｏ  ｔｈｅ  ｓｔｒｏｍａ  ｏｆ  ｈｕｍａｎ  ｌｕｎｇ  ｔｕｍｏｒｓ．Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．１２２，８９９−９１０（２０１２）．
【図１】
2020516243.tif 000008
【図２】
2020516243.tif 000009
【図３】
2020516243.tif 000010
【図４】
2020516243.tif 000011
【図５】
2020516243.tif 000012
【図６】
2020516243.tif 000013
【図７】
2020516243.tif 000014
【図８】
2020516243.tif 000015
【図９】
2020516243.tif 000016
【図１０】
2020516243.tif 000017
【図１１】
2020516243.tif 000018
【国際調査報告】
2020516243.tif 000019
2020516243.tif 000020
2020516243.tif 000021