(57)【要約】  臨床試料においてパルボウイルスB19をホモジナイズする方法  本発明の種々の態様は、血液血漿、血液血清、及び血漿由来製品の製造プールを分析する組成物及び方法に関し、アニオン界面活性剤は分析に先立って血液血漿、血液血清、又は製造プールのアリコートに添加され、アニオン界面活性剤の対イオンはナトリウムイオンではない。アニオン界面活性剤は、例えば、ラウリル硫酸塩でもよい。アニオン界面活性剤の対イオンは、例えば、リチウムイオンでもよい。
2020507306.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ヒト血液血漿又はヒト血漿由来製品の製造プールにおいてヒトパルボウイルスB19の濃度を決定する方法であって、
試料をアニオン界面活性剤を含む界面活性剤溶液に接触させて、それによって処理試料を作成する工程であって、前記試料が、ヒト血液血漿又はヒト血漿由来製品の製造プールのアリコートを含んでいる、工程と、
前記アリコート中のヒトパルボウイルスB19の濃度が閾値よりも上又は下なのかを判定する工程と、を含み、
前記界面活性剤溶液中のナトリウムのアニオン界面活性剤に対するモル比が1:10未満である方法。
【請求項２】
前記アニオン界面活性剤がラウリル硫酸塩である、請求項1に記載の方法。
【請求項３】
前記界面活性剤溶液が本質的に、前記アニオン界面活性剤、その対イオン、及び水からなる、請求項1又は2に記載の方法。
【請求項４】
前記接触が約4℃から約37℃の温度で起きる、請求項1から3のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５】
前記界面活性剤溶液中のリチウムカチオンのアニオン界面活性剤に対するモル比が約1:2から約2:1である、請求項1から4のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６】
前記処理試料中の前記アニオン界面活性剤の濃度が少なくとも4%(質量/容積)である、請求項1から5のいずれか一項に記載の方法。
【請求項７】
前記アリコート中のヒトパルボウイルスB19の濃度が閾値よりも上又は下なのかを判定する工程が核酸検査を含む、請求項1から6のいずれか一項に記載の方法。
【請求項８】
前記核酸検査が転写増幅法又はPCRを含む、請求項7に記載の方法。
【請求項９】
前記核酸検査がヒトパルボウイルスB19のあらゆる既知の遺伝子型を検出することができる、請求項7又は8に記載の方法。
【請求項１０】
前記アリコート中のヒトパルボウイルスB19の濃度が前記閾値よりも大きい場合は、前記ヒト血液血漿、前記製造プール、又はその下流製造プールを破棄する工程を更に含む、請求項1から9のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１１】
前記試料中のヒトパルボウイルスB19の濃度を測定し、それによって測定値を得る工程を更に含み、
同じヒト血液血漿又は同じ製造プールの異なるアリコートについて得られた異なる測定値の変動係数が、前記界面活性剤溶液に接触させ同じ試料調製及び前記異なるアリコート中のヒトパルボウイルスB19の濃度が前記閾値よりも上又は下なのかを判定するための分析工程を受けているアリコートについての50%以下であり、
同じヒト血液血漿又は同じ製造プールの異なるアリコートについて得られた異なる測定値の変動係数が、前記界面活性剤溶液に接触させていないが他の点では同じ試料調製及び前記異なるアリコート中のヒトパルボウイルスB19の濃度が前記閾値よりも上又は下なのかを判定するための分析工程を受けているアリコートについての50%よりも大きい、
請求項1から10のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１２】
血漿由来製品を製造する方法であって、
請求項1から11のいずれか一項に記載の方法を実施する工程と、
前記アリコート中のヒトパルボウイルスB19の濃度が前記閾値未満である場合には前記ヒト血液血漿又は前記製造プールから血漿由来製品を製造する工程と、を含む方法。
【請求項１３】
前記血漿由来製品が、プール血漿、溶媒/洗浄剤処理プール血漿、凝固因子、フィブリン組織接着剤、アルブミン、又は免疫グロブリン製品である、請求項12に記載の方法。
【請求項１４】
請求項12又は13に記載の方法に従って製造される血漿由来製品。
【請求項１５】
パルボウイルス科ウイルスゲノム;
アニオン界面活性剤;及び
それぞれがパルボウイルス科ウイルスゲノムのヌクレオチド配列又はその逆相補体に特異的に結合し、それによってパルボウイルス科ウイルスヌクレオチド配列の増幅を可能にする少なくとも2つの増幅プライマー
を含む組成物であって、
前記組成物が液体を含み;
前記液体が前記パルボウイルス科ウイルスゲノム及び前記アニオン界面活性剤を含み;
前記液体に存在する前記アニオン界面活性剤の任意のナトリウムイオンに対するモル比が1:1よりも大きい
組成物。
【請求項１６】
前記少なくとも2つの増幅プライマーが、ヒトパルボウイルスB19のそれぞれの既知の遺伝子型のヌクレオチド配列の増幅を可能にする、請求項15に記載の組成物。
【請求項１７】
ビーズ、膜、マイクロタイタープレート、ポリペプチドチップ、又はクロマトグラフィーカラムの固相である固体支持体を更に含み、
オリゴヌクレオチドが前記固体支持体に固定化されている、
請求項15又は16に記載の組成物。
【請求項１８】
前記アニオン界面活性剤が6から26個の炭素原子を含む脂肪族鎖を含む、請求項15から17のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１９】
前記脂肪族鎖が飽和している、請求項18に記載の組成物。
【請求項２０】
前記脂肪族鎖が分岐していない、請求項18又は19に記載の組成物。
【請求項２１】
前記アニオン界面活性剤が前記脂肪族鎖以外の分岐していない直鎖状炭素鎖を欠く、請求項18から20のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項２２】
前記アニオン界面活性剤が前記脂肪族鎖の炭素原子以外のいかなる炭素原子も欠く、請求項18から21のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項２３】
前記アニオン界面活性剤がpH5から10で約-1の正味電荷を有する、請求項15から22のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項２４】
前記アニオン界面活性剤が、有機硫酸塩、スルホン酸塩、有機リン酸塩、有機ホスホン酸化合物、又はカルボン酸塩である、請求項15から23のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項２５】
前記アニオン界面活性剤がラウリル硫酸塩である、請求項15から24のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項２６】
前記液体中の前記アニオン界面活性剤の濃度が、少なくとも4%(質量/容積)である、請求項15から25のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項２７】
前記液体中の前記アニオン界面活性剤の濃度が、約4%から約9%(質量/容積)である、請求項26に記載の組成物。
【請求項２８】
前記液体中のナトリウムイオンの濃度が1%(質量/容積)未満である、請求項15から27のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項２９】
前記液体中のリチウムイオンの濃度が少なくとも0.01%(質量/容積)である、請求項15から28のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項３０】
前記パルボウイルス科ウイルスゲノムがパルボウイルスB19のゲノムである、請求項15から29のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項３１】
ヒト血液血漿又はヒト血漿由来製品の製造プールを含む、請求項15から30のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項３２】
前記パルボウイルス科ウイルスゲノムがパルボウイルスB19のゲノムであり;
前記アニオン界面活性剤がラウリル硫酸塩であり;
前記液体中のラウリル硫酸塩の濃度が少なくとも4%(質量/容積)であり;
前記液体中のリチウムイオンの濃度が少なくとも0.1%(質量/容積)であり;
前記リチウム及びラウリル硫酸塩が約11:10から約10:11のモル比で前記液体中に存在しており;
前記液体中のナトリウムイオンの濃度が0.5%(質量/容積)未満であり;
ヒト血液血漿又はヒト血漿由来製品の製造プールのアリコートが前記組成物内に分散されており;
前記組成物の前記パルボウイルス科ウイルスゲノムが前記ヒト血液血漿のアリコート又は前記製造プールのアリコートに由来する
請求項15から31のいずれか一項に記載の組成物。
【発明の詳細な説明】
【背景技術】
【０００１】
欧州医薬品庁及び米国食品医薬品局を含む種々の規制当局が、血漿由来製品の生産中にいくつかの異なるウイルスについて検査し、A型肝炎ウイルス、B型肝炎ウイルス、C型肝炎ウイルス、ヒト免疫不全ウイルス1及び2、並びにパルボウイルスB19を含む通常の供血から血液成分を放出することを要求している。パルボウイルスB19感染は典型的には慢性の健康問題を引き起こすことはないが、高力価血漿供血由来のパルボウイルスB19は血漿由来製品を受けている患者において重度の有害反応を引き起こすことがある。
【０００２】
高力価のパルボウイルスB19を含有する血漿供血は頻繁にあり、血漿プールを汚染することがある。汚染された血漿プールのせいで、今度は、凝固因子、フィブリン組織接着剤、及び溶媒/洗浄剤処理血漿を含む血漿由来製品によりパルボウイルスB19が伝染されてしまう。
【０００３】
パルボウイルスB19力価は典型的には、血漿プールから高力価供血を排除するために核酸検査により定量化され、これにより汚染及び伝染を著しく低減することが可能になる。しかしながら、パルボウイルスB19は、ウイルス粒子が凝集するために一部の血漿試料において定量化するのは難問であり、パルボウイルスB19を定量化する方法の改善が望ましい。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００４】
【特許文献１】米国特許第9,752,201号
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【０００５】
実施形態の種々の態様は、ヒト血液血漿又はヒト血漿由来製品の製造プールにおいてヒトパルボウイルスB19の濃度を決定する方法に関する。方法は、試料をアニオン界面活性剤を含む界面活性剤溶液に接触させて、それによって処理試料を作成することを含んでいてもよい。試料は、ヒト血液血漿又はヒト血漿由来製品の製造プールのアリコートを含んでいてもよい。試料は、ヒト血液血漿又はヒト血漿由来製品の製造プールのアリコートからなっていてもよい。方法は、アリコート中のヒトパルボウイルスB19の濃度が閾値よりも上又は下なのかを判定することを更に含んでいてもよい。好ましい実施形態では、界面活性剤溶液中でのナトリウムのアニオン界面活性剤に対するモル比が1:10未満である。
【０００６】
アニオン界面活性剤はラウリル硫酸塩でもよい。
【０００７】
界面活性剤溶液は本質的に、アニオン界面活性剤(例えば、ラウリル硫酸塩)、その対イオン(例えば、リチウム)、及び水からなっていてもよい。界面活性剤溶液は、アニオン界面活性剤(例えば、ラウリル硫酸塩)、その対イオン(例えば、リチウム)、及び水からなっていてもよい(すなわち、避けられない汚染物質を除いて他のいかなる分子又はイオンも欠く)。
【０００８】
一部の実施形態では、接触は約4℃から約37℃までの温度で起こる。
【０００９】
一部の実施形態では、界面活性剤溶液中でのリチウムカチオンのアニオン界面活性剤に対するモル比は約1:1等の約1:2から約2:1までである。
【００１０】
一部の実施形態では、処理試料中のアニオン界面活性剤の濃度は、少なくとも5%、4%から10%まで又は5%から10%まで等の少なくとも4%(質量/容積)である。
【００１１】
一部の実施形態では、アリコート中のヒトパルボウイルスB19の濃度が閾値よりも上又は下なのかを判定することは、転写増幅法(TMA)又はポリメラーゼ連鎖反応(PCR)等の核酸検査を含む。ある特定の実施形態では、核酸検査はヒトパルボウイルスB19のあらゆる既知の遺伝子型を検出することができる。
【００１２】
ある特定の実施形態では、方法は、アリコート中のヒトパルボウイルスB19の濃度が閾値よりも大きい場合は、ヒト血液血漿、その製造プール、又はその下流製造プールを破棄することを更に含む。
【００１３】
一部の実施形態では、方法は、試料中のヒトパルボウイルスB19の濃度を測定し、それによって測定値を得ることを更に含む。ある特定の好ましい実施形態では、同じヒト血液血漿又は同じ製造プールの異なるアリコートについて得られた異なる測定値の変動係数は、界面活性剤溶液に接触させ同じ試料調製及び異なるアリコート中のヒトパルボウイルスB19の濃度が閾値よりも上又は下なのかを判定するための分析工程を受けているアリコートについての50%以下である;並びに、同じヒト血液血漿又は同じ製造プールの異なるアリコートについて得られた異なる測定値の変動係数は、界面活性剤溶液に接触させていないが他の点では同じ試料調製及び異なるアリコート中のヒトパルボウイルスB19の濃度が閾値よりも上又は下なのかを判定するための分析工程を受けているアリコートについての50%よりも大きい。
【００１４】
実施形態の種々の態様は、血漿由来製品を製造する方法であって、血液血漿又は製造プールのアリコート中のヒトパルボウイルスB19の濃度を決定し、アリコート中のヒトパルボウイルスB19の濃度が閾値未満である場合にはヒト血液血漿又は製造プールから血漿由来製品を製造することを含む方法に関する。血漿由来製品は、例えば、プール血漿、溶媒/洗浄剤処理プール血漿、凝固因子、フィブリン組織接着剤、アルブミン、又は免疫グロブリン製品でもよい。
【００１５】
実施形態の種々の態様は、本明細書に記載される方法に従って製造される血漿由来製品に関する。
【００１６】
実施形態の種々の態様は、パルボウイルス科(Parvoviridae)ウイルスゲノム;アニオン界面活性剤;及びそれぞれがパルボウイルス科ウイルスゲノムのヌクレオチド配列又はその逆相補体に特異的に結合し、それによってパルボウイルス科ウイルスヌクレオチド配列の増幅を可能にする少なくとも2つの増幅プライマーを含む組成物に関する。組成物は液体を含んでいてもよい。液体は、パルボウイルス科ウイルスゲノム及びアニオン界面活性剤を含んでいてもよい。好ましい実施形態では、アニオン界面活性剤の液体中に存在する任意のナトリウムイオンに対するモル比が1対1よりも大きい。
【００１７】
一部の実施形態では、少なくとも2つの増幅プライマーは、ヒトパルボウイルスB19のそれぞれの既知の遺伝子型のヌクレオチド配列の増幅を可能にする。
【００１８】
一部の実施形態では、組成物は、ビーズ、膜、マイクロタイタープレート、ポリペプチドチップ、又はクロマトグラフィーカラムの固相である固体支持体を更に含む。組成物は、固体支持体に固定化されているオリゴヌクレオチドを更に含んでもよい。
【００１９】
一部の実施形態では、アニオン界面活性剤は6から26個の炭素原子を含む脂肪族鎖を含む。例えば、脂肪族鎖は飽和し及び/又は分岐していなくてもよく、例えば、アニオン界面活性剤は脂肪族鎖以外の分岐していない直鎖状炭素鎖を欠いていてもよい。一部の実施形態では、アニオン界面活性剤は脂肪族鎖の炭素原子以外のいかなる炭素原子も欠く。好ましい実施形態では、アニオン界面活性剤はpH5から10で約-1の正味電荷を有する。アニオン界面活性剤は、有機硫酸塩、スルホン酸塩、有機リン酸塩、有機ホスホン酸化合物、又はカルボン酸塩から選択することが可能である。例えば、好ましい実施形態では、アニオン界面活性剤はラウリル硫酸塩である。
【００２０】
一部の実施形態では、液体中のアニオン界面活性剤の濃度は、4%から約10%(質量/容積)、約5%から約10%(質量/容積)、4%から約9%(質量/容積)、又は約5%から約9%(質量/容積)等の少なくとも4%(質量/容積)である。
【００２１】
好ましい実施形態では、液体中のナトリウムイオンの濃度は1%(質量/容積)未満である。一部の実施形態では、液体中のリチウムイオンの濃度は少なくとも0.01%(質量/容積)である。
【００２２】
一部の実施形態では、パルボウイルス科ウイルスゲノムはパルボウイルスB19のゲノムである。
【００２３】
一部の実施形態では、組成物はヒト血液血漿又はヒト血漿由来製品の製造プールを含む。
【００２４】
実施形態の種々の態様は本明細書に記載される組成物に関しており、パルボウイルス科ウイルスゲノムはパルボウイルスB19のゲノムであり;アニオン界面活性剤はラウリル硫酸塩であり;液体中のラウリル硫酸塩の濃度は少なくとも4%(質量/容積)であり;液体中のリチウムイオンの濃度は少なくとも0.1%(質量/容積)であり;リチウム及びラウリル硫酸塩は約11:10から約10:11のモル比で液体中に存在しており;液体中のナトリウムイオンの濃度は0.5%(質量/容積)未満であり;ヒト血液血漿又はヒト血漿由来製品の製造プールのアリコートは組成物内に分散されており;組成物のパルボウイルス科ウイルスゲノムはヒト血液血漿のアリコート又は製造プールのアリコートに由来する。
【図面の簡単な説明】
【００２５】
【図１】種々の異なる条件下で凍結し解凍した後にパルボウイルスB19についての核酸検査により分析した負荷血漿試料GDFL211(黒棒)及び対照血漿試料(白棒)由来のアリコートの変動係数(%CV)の分析を示す棒グラフである。分析した凍結/解凍/混合条件は、同じ凍結/解凍プロトコルを受けた血漿試料GDFL211の異なるアリコート間での変動係数を改善しなかった。
【図２】種々の異なる条件下で加熱した後にパルボウイルスB19についての核酸検査により分析した負荷血漿試料GDFL211(黒棒)及び対照血漿試料(白棒)由来のアリコートの変動係数(%CV)の分析を示す棒グラフである。高温(60℃)で30分間混合すると%CVを対照レベルまで下げると思われたが、この結果は再現できなかった。他の混合/加熱条件は同じ加熱プロトコルを受けた血漿試料GDFL211の異なるアリコート間での変動係数を改善しなかった。
【図３】種々の異なる条件下で加熱し超音波処理した後にパルボウイルスB19についての核酸検査により分析した負荷血漿試料GDFL211(黒棒)及び対照血漿試料(白棒)由来のアリコートの変動係数(%CV)の分析を示す棒グラフである。分析された加熱及び超音波処理条件は、同じ加熱及び超音波処理プロトコルを受けた血漿試料GDFL211の異なるアリコート間での変動係数を改善しなかった。
【図４】中性pH、pH=3、及びpH=11でのパルボウイルスB19についての核酸検査により分析した負荷血漿試料GDFL211(黒棒)及び対照血漿試料(白棒)由来のアリコートの変動係数(%CV)の分析を示す棒グラフである。pH=11での分析は血漿試料GDFL211の異なるアリコート間の変動係数を改善しているように思われたが、アルカリ性pHはRNA半減期を実質的に低減するという理由でこれらの条件は望ましくないとして拒絶された。
【図５】異なるプロテアーゼ処理後にパルボウイルスB19についての核酸検査により分析した負荷血漿試料GDFL211(黒棒)及び対照血漿試料(白棒)由来のアリコートの変動係数(%CV)の分析を示す棒グラフである。分析されたプロテアーゼは、同じプロテアーゼ処理を受けた血漿試料GDFL211の異なるアリコート間での変動係数を改善しなかった。
【図６】異なる界面活性剤の添加後にパルボウイルスB19についての核酸検査により分析した負荷血漿試料GDFL211(黒棒)及び対照血漿試料(白棒)由来のアリコートの変動係数(%CV)の分析を示す棒グラフである。5%のリチウムラウリル硫酸(LLS)は血漿試料GDFL211の分析では%CVを改善した。5%のドデシル硫酸ナトリウム(SDS)試料は沈殿物を含有し、このせいで無効な検査結果となった。1%のトリトンX-100は%CVを改善しなかった。
【図７】3%のLLS、4%のLLS、5%のLLS、6%のLLS、7%のLLS、8%のLLS、及び9%のLLSの濃度でリチウムラウリル硫酸(LLS)を添加後にパルボウイルスB19についての核酸検査により分析した負荷血漿試料GDFL211(黒棒)及び対照血漿試料(白棒)由来のアリコートの変動係数(%CV)の分析を示す棒グラフである。4%のLLS処理試料は3%のLLS処理試料と比べて改善された%CVを示し、5%のLLS処理試料は4%のLLS処理試料と比べて改善された%CVを示した。
【図８】4%のLLS、5%のLLS、6%のLLS、又は7%のLLSの濃度でのリチウムラウリル硫酸(LLS)の添加及び貯蔵なし、2〜8℃で24時間の冷蔵、又は≦-20℃での72時間の凍結後にパルボウイルスB19についての核酸検査により分析した負荷血漿試料GDFL211(黒棒)及び対照血漿試料(白棒)由来のアリコートの変動係数(%CV)の分析を示す棒グラフである。5%のLLS処理試料は4%のLLS処理試料と比べて改善された%CVを示した。冷蔵及び凍結は%CVのLLS関連改善には何ら効果がないことが分かった。
【図９】LLS(黒棒)で処理された又は無処理(白棒)のHAV RNA(NIBCSコード00/560)についてのWHO国際標準の異なる希釈度でのA型肝炎ウイルスRNAの検出の分析を示す棒グラフである。HAV RNA標準にLLSを添加しても、無処理試料と比べてLLS処理試料の核酸検査の感度に影響を与えなかった。
【発明を実施するための形態】
【００２６】
種々の実施形態は、血漿にリチウムラウリル硫酸(LLS)を添加すると、血漿中のパルボウイルスB19の検出の精度が著しく増加するという所見に関する。これは、一般に使用されている界面活性剤である、ドデシル硫酸ナトリウム(SDS)は同じ血漿試料由来のアリコートにおいて沈殿物を作り出し、SDS処理血漿試料の分析では無効な結果が生じたという点で予想外である。
【００２７】
LLS及びSDSは同じアニオン界面活性剤であるラウリル硫酸塩を含み、これはドデシル硫酸塩及びラウリサルフェート(laurisulfate)としても知られる。ラウリル硫酸塩は、単一の分岐していない不飽和12炭素脂肪族基を含有する有機硫酸塩である。LLSとSDSは、SDSが対イオンナトリウムを含み、LLSは対イオンリチウムを含むという点が異なり、これによりナトリウムイオンが少なくとも部分的に、SDS処理血漿試料を分析できない原因であることが示唆される。したがって、対イオンの選択が、本明細書で開示されるような方法においては予想外の、しかし重大な役割を担っている。
【００２８】
一般に使用されている非イオン性界面活性剤トリトンX-100は、対イオンが欠けており、血漿試料中でのパルボウイルスB19の測定値の精度を高めなかった。したがって、アニオン界面活性剤が、血漿試料中でのパルボウイルスB19の測定の精度を改善するのに必要であることが見出された。
【００２９】
下の実例部において詳細に記載されるように、種々の試料へのLLSの添加により、測定の正確さに影響せずに多様な異なる条件下でのパルボウイルスB19の測定の精度が高くなった。したがって、LLSは、パルボウイルスB19の上昇した力価を求める血漿、血清、及び血漿由来製品の製造プールのスクリーニングにおいて使用するための有望な試薬である。
【００３０】
LLSは、HAV RNAについてのWHO国際標準においてA型肝炎ウイルス(HAV)RNAの検出感度に影響を与えず、したがって、LLSは、血液、血漿、及び血清試料から得られる測定値の精度を高めるための試薬として一般的に適用可能である可能性がある。
【００３１】
A.アニオン界面活性剤
本発明の種々の態様はアニオン界面活性剤に関する。アニオン界面活性剤は定義によれば、疎水性基及び正味負電荷を含む。疎水性基の性質は特に限定的ではない。疎水性基は、例えば、脂肪族鎖が可能である。一部の実施形態では、アニオン界面活性剤は脂肪族鎖を含む。
【００３２】
脂肪族鎖の性質は特に限定的ではない。脂肪族鎖は任意選択により、1つ若しくは複数の二重結合、1つ若しくは複数の三重結合、O、N、S、若しくはSi等の1つ若しくは複数のヘテロ原子、分岐、1つ若しくは複数のホモ環若しくはヘテロ環、及び/又は1つ若しくは複数の一般に知られている置換基を含むことが可能である。脂肪族鎖の1つ又は複数の陽子は任意選択により、F、Cl、Br、若しくはI等のハロゲン、ヒドロキシル又はチオールで置換することが可能である。脂肪族鎖は任意選択により、エーテル、チオエーテル、エステル、又はチオエステルを含むことが可能である。
【００３３】
脂肪族鎖は、例えば、6から26、8から20、又は10から16個の炭素原子等の4から30個の炭素原子を含むことが可能である。脂肪族鎖は、例えば、少なくとも4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、又は26個の炭素原子を含むことが可能である。脂肪族鎖は、例えば、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、又は26個の炭素原子を含むことが可能である。
【００３４】
一部の実施形態では、アニオン界面活性剤は1つの脂肪族鎖を含有する。一部の実施形態では、アニオン界面活性剤は脂肪族鎖の炭素原子以外のいかなる炭素原子も欠く。
【００３５】
一部の実施形態では、アニオン界面活性剤は天然には存在しない。例えば、アニオン界面活性剤はヒト血液にもヒト血液血漿にも存在しない場合もある。一部の実施形態では、アニオン界面活性剤はヒト血液血漿に存在しない。にもかかわらず、アニオン界面活性剤は天然に存在する場合もあるが、アニオン界面活性剤は典型的には、混ぜ物がないヒト血液血漿において、例えば、0.1%よりも大きな濃度(質量/容積)では見出されない。
【００３６】
一般的なクラスのアニオン界面活性剤は、硫酸塩、スルホン酸塩、リン酸塩、ホスホン酸塩、及びカルボン酸塩を含み、これらのクラスはアニオン界面活性剤の負電荷の起源となり得る基(例えば、硫酸、スルホン酸、リン酸、ホスホン酸、又はカルボキシル基)を同定する。
【００３７】
本明細書に記載される種々の実施形態において有用であり得る代表的なアニオン界面活性剤は、アルキル硫酸塩(例えば、ラウリル硫酸塩)、アルキルエーテル硫酸塩(例えば、ラウレス硫酸塩、ミレス硫酸塩)、ジオクチルスルホコハク酸塩、乳酸塩(例えば、ステアロイル乳酸塩)、アルキルベンゼンスルホン酸塩(例えば、ドデシルベンゼンスルホン酸塩)、ペルフルオロアルキルスルホン酸塩(例えば、ペルフルオロオクタンスルホン酸塩)、アルキルリン酸塩、ジアルキルリン酸塩、アルキルエーテルリン酸塩、アルキルアリルエーテルリン酸塩、及び脂肪酸(例えば、ステアリン酸塩)を含む。
【００３８】
脂肪族鎖は飽和していても不飽和でもよく、脂肪族鎖の飽和又は不飽和は特に限定的ではない。ラウリル硫酸塩は、例えば、飽和脂肪族鎖を含む。脂肪族鎖は分岐していても分岐していなくてもよく、脂肪族鎖の分岐は特に限定的ではない。ラウリル硫酸塩は、例えば、分岐していない脂肪族鎖を含む。脂肪族鎖は直鎖状でも環状でもよく、この特長は特に限定的ではない。ラウリル硫酸塩は、例えば、直鎖状脂肪族鎖を含む。
【００３９】
アニオン界面活性剤は典型的には、中性pHで負の正味電荷を有し、中性pHは本明細書で定義されるpH=7.4である。本明細書で定義される負の正味電荷とは、-0.5未満の電荷のことであり、これは、アニオン界面活性剤の分子の半分超が所与のセットの条件下で負電荷を有することを示している(典型的にはpHにより制御される)。
【００４０】
アニオン界面活性剤は、pH5から10、pH5から7、pH6から8、pH7から9、又はpH8から10等の1から14のpHで-0.5未満の正味電荷を有することが可能である。アニオン界面活性剤は、pH5から10、pH5から7、pH6から8、pH7から9、又はpH8から10等の1から14のpHで約-1の正味電荷を有することが可能である。
【００４１】
液体組成物中のアニオン界面活性剤の濃度は、アニオン界面活性剤の性質及び液体組成物の他の成分の濃度に依存する。>20%、>30%、>40%、>50%、>60%、>70%、>80%、又は>90%のヒト血液血漿等の>10%のヒト血液血漿を含む液体組成物では、アニオン界面活性剤は、例えば、少なくとも約2%、3%、4%、5%、6%、7%、8%、9%、又は10%のアニオン界面活性剤等の少なくとも約1%の濃度で存在することが可能である。
【００４２】
アニオン界面活性剤は、約3%から約9%、約4%から約9%、約1%から約5%、約3%から約7%、約5%から約9%、約1%、約2%、約3%、約4%、約5%、約6%、約7%、約8%、約9%、又は約10%等の約1%から約20%の濃度(質量/容積)で液体組成物中に存在していてもよい。
【００４３】
アニオン界面活性剤は、約150mmol/Lから約500mmol/L、約150mmol/Lから約350mmol/L、約100mmol/Lから約200mmol/L、約150mmol/Lから約250mmol/L、約200mmol/Lから約300mmol/L、約250mmol/Lから約350mmol/L、約120mmol/L、約130mmol/L、約140mmol/L、約150mmol/L、約160mmol/L、約170mmol/L、約180mmol/L、約190mmol/L、約200mmol/L、約210mmol/L、約220mmol/L、約230mmol/L、約240mmol/L、約250mmol/L、約260mmol/L、約270mmol/L、約280mmol/L、約290mmol/L、又は約300mmol/L等の約100mmol/Lから約1mol/Lの濃度で液体組成物中に存在していてもよい。
【００４４】
液体組成物中のアニオン界面活性剤の濃度は、液体組成物中のパルボウイルス力価の測定値の精度を高めるのに優先的に十分である。例えば、アニオン界面活性剤は典型的には、約60%未満、約50%未満、約40%未満、又は更に約30%未満等の、負荷試料について約70%未満まで液体組成物中のパルボウイルスB19力価測定値の複製についての変動係数を低減するのに十分大きな濃度で液体組成物中に存在している。例えば、約4%のLLSは、負荷試料について約70%未満まで液体組成物中のパルボウイルスB19力価測定値の複製についての変動係数を低減するのに十分大きいアニオン界面活性剤LLSの濃度である。同様に、約5%のLLSは、負荷試料について約30%未満まで液体組成物中のパルボウイルスB19力価測定値の複製についての変動係数を低減するのに十分大きいアニオン界面活性剤LLSの濃度である。
【００４５】
本明細書で定義される用語「負荷試料」とは、核酸検査(例えば、PCR)等の方法を使用してパルボウイルスB19等の試料中の分析物を測定する場合、下の実例部に記載される対照試料等の典型的な試料又は平均試料の変動係数の50%よりも大きく2倍よりも大きいの両方である変動係数を示す試料のことである。
【００４６】
B.対イオン
アニオン界面活性剤は典型的には、1つ又は複数のカチオン対イオンと一緒に水溶液中に存在しており、カチオン対イオンは陽子及びヒドロニウムイオン以外のカチオンである。用語「カチオン対イオン」及び「対イオン」は、その用語が本明細書で使用される場合には、ナトリウムイオンが明白に含まれなければ、ナトリウムイオンを含まない。1つ又は複数のカチオン対イオンは典型的には、1つ又は複数の硬いルイス酸、特に、リチウムイオンを含む又はからなるが、1つ又は複数のカチオン対イオンは、カリウムイオン、チタニウムイオン、マグネシウムイオン、カルシウムイオン、アルミニウムイオン、ケイ素イオン、アンモニウム、リジン、ヒスチジン、又はアルギニンも含むことが可能である。
【００４７】
C.界面活性剤溶液
界面活性剤溶液は典型的には、アニオン界面活性剤、カチオン対イオン、及び水を含む液体である。界面活性剤溶液は本質的に、アニオン界面活性剤、カチオン対イオン、及び水からなるものでよい。アニオン界面活性剤は、例えば、ラウリル硫酸塩が可能であり、これは少なくとも約11%、12%、13%、14%、15%、16%、17%、18%、19%、又は20%等の少なくとも約10%の濃度(質量/容積)で界面活性剤溶液中に存在することが可能である。一部の実施形態では、界面活性剤溶液はラウリル硫酸塩を約10%、11%、12%、13%、14%、15%、16%、17%、18%、19%、又は20%の濃度で含む。
【００４８】
界面活性剤溶液はアニオン界面活性剤を、少なくとも約180mmol/L、190mmol/L、200mmol/L、225mmol/L、250mmol/L、275mmol/L、300mmol/L、325mmol/L、350mmol/L、375mmol/L、400mmol/L、450mmol/L、500mmol/L、550mmol/L、600mmol/L、650mmol/L、700mmol/L、又は750mmol/L等の少なくとも約175mmol/Lの濃度で含んでいてもよい。
【００４９】
界面活性剤溶液はアニオン界面活性剤を、少なくとも約5%、約6%、約7%、約8%、約9%、約10%、約11%、約12%、約13%、約14%、約15%、約16%、約17%、約18%、約19%、又は約20%等の少なくとも約5%の濃度(質量/容積)で含んでいてもよい。
【００５０】
界面活性剤溶液はアニオン界面活性剤を、約200mmolから約800mmol、約400mmolから約800mmol、約600mmolから約800mmol、約300mmolから約500mmol、約400mmolから約600mmol、約500mmolから約700mmol、約600mmolから約800mmol、約700mmolから約800mmol、約180mmol/L、約190mmol/L、約200mmol/L、約225mmol/L、約250mmol/L、約275mmol/L、約300mmol/L、約325mmol/L、約350mmol/L、約375mmol/L、約400mmol/L、約450mmol/L、約500mmol/L、約550mmol/L、約600mmol/L、約650mmol/L、約700mmol/L、又は約750mmol/L等の約175mmol/Lから約800mmol/Lの濃度で含んでいてもよい。
【００５１】
界面活性剤溶液はアニオン界面活性剤を、約10%から約25%、約10%から約14%、約12%から約16%、約14%から約18%、約16%から約20%、約18%から約22%、約20%から約24%、約5%、約6%、約7%、約8%、約9%、約10%、約11%、約12%、約13%、約14%、約15%、約16%、約17%、約18%、約19%、約20%、約21%、約22%、約23%、約24%、又は約25%等の約5%から約30%の濃度で含んでいてもよい。
【００５２】
好ましい実施形態では、界面活性剤溶液は本質的に、ナトリウムイオンがない。にもかかわらず、ナトリウムイオンは、例えば、痕跡レベルで又は1:5、1:10、1:20、1:25、若しくは1:100未満のナトリウムイオン対アニオン界面活性剤モル比等の実質的に1対1未満である対アニオン界面活性剤モル比で界面活性剤溶液中に存在していてもよい。界面活性剤溶液はナトリウムイオンを欠いていてもよい。
【００５３】
界面活性剤溶液はカチオン対イオンを、少なくとも約180mmol/L、190mmol/L、200mmol/L、225mmol/L、250mmol/L、275mmol/L、300mmol/L、325mmol/L、350mmol/L、375mmol/L、400mmol/L、450mmol/L、500mmol/L、550mmol/L、600mmol/L、650mmol/L、700mmol/L、又は750mmol/L等の少なくとも約175mmol/Lの濃度で含んでいてもよい。
【００５４】
界面活性剤溶液はリチウムイオンを、少なくとも約180mmol/L、190mmol/L、200mmol/L、225mmol/L、250mmol/L、275mmol/L、300mmol/L、325mmol/L、350mmol/L、375mmol/L、400mmol/L、450mmol/L、500mmol/L、550mmol/L、600mmol/L、650mmol/L、700mmol/L、又は750mmol/L等の少なくとも約175mmol/Lの濃度で含んでいてもよい。
【００５５】
界面活性剤溶液はリチウムイオンを、少なくとも約0.01%、約0.05%、約0.10%、約0.11%、約0.12%、約0.13%、約0.14%、約0.15%、約0.16%、約0.17%、約0.18%、約0.19%、約0.20%、約0.21%、約0.22%、約0.23%、約0.24%、約0.25%、約0.26%、約0.27%、約0.28%、約0.29%、約0.30%、約0.31%、約0.32%、約0.33%、約0.34%、約0.35%、約0.36%、約0.37%、約0.38%、約0.39%、約0.40%、約0.41%、約0.42%、約0.43%、約0.44%、約0.45%、約0.46%、約0.47%、約0.48%、約0.49%、約0.50%、約0.51%、約0.52%、又は約0.53%等の少なくとも約0.001%の濃度(質量/容積)で含んでいてもよい。
【００５６】
界面活性剤溶液はカチオン対イオンを、約200mmolから約800mmol、約400mmolから約800mmol、約600mmolから約800mmol、約300mmolから約500mmol、約400mmolから約600mmol、約500mmolから約700mmol、約600mmolから約800mmol、約700mmolから約800mmol、約180mmol/L、約190mmol/L、約200mmol/L、約225mmol/L、約250mmol/L、約275mmol/L、約300mmol/L、約325mmol/L、約350mmol/L、約375mmol/L、約400mmol/L、約450mmol/L、約500mmol/L、約550mmol/L、約600mmol/L、約650mmol/L、約700mmol/L、又は約750mmol/L等の約175mmol/Lから約800mmol/Lの濃度で含んでいてもよい。
【００５７】
界面活性剤溶液はリチウムイオンを、約200mmolから約800mmol、約400mmolから約800mmol、約600mmolから約800mmol、約300mmolから約500mmol、約400mmolから約600mmol、約500mmolから約700mmol、約600mmolから約800mmol、約700mmolから約800mmol、約180mmol/L、約190mmol/L、約200mmol/L、約225mmol/L、約250mmol/L、約275mmol/L、約300mmol/L、約325mmol/L、約350mmol/L、約375mmol/L、約400mmol/L、約450mmol/L、約500mmol/L、約550mmol/L、約600mmol/L、約650mmol/L、約700mmol/L、又は約750mmol/L等の約175mmol/Lから約800mmol/Lの濃度で含んでいてもよい。
【００５８】
界面活性剤溶液はカチオン対イオンを、約0.01%から約1.0%、約0.01%から約0.10%、約0.05%から約0.50%、約0.10%から約1.0%、又は約0.5%から約5.0%等の約0.001%から約5%の濃度(質量/容積)で含んでいてもよい。
【００５９】
界面活性剤溶液はリチウムイオンを、約0.01%から約0.8%、約0.05%から約0.60%、約0.10%から約0.55%、約0.20%から約0.55%、約0.50%から約0.55%、約0.01%、約0.05%、約0.10%、約0.11%、約0.12%、約0.13%、約0.14%、約0.15%、約0.16%、約0.17%、約0.18%、約0.19%、約0.20%、約0.21%、約0.22%、約0.23%、約0.24%、約0.25%、約0.26%、約0.27%、約0.28%、約0.29%、約0.30%、約0.31%、約0.32%、約0.33%、約0.34%、約0.35%、約0.36%、約0.37%、約0.38%、約0.39%、約0.40%、約0.41%、約0.42%、約0.43%、約0.44%、約0.45%、約0.46%、約0.47%、約0.48%、約0.49%、約0.50%、約0.51%、約0.52%、約0.53%又は約0.54%等の約0.001%から約1%の濃度(質量/容積)で含んでいてもよい。
【００６０】
界面活性剤溶液はカチオン対イオンを、約1:3から約3:1、約1:2から約2:1、約2:3から約3:2、約3:4から約4:3、約4:5から約5:4、約5:6から約6:5、約6:7から約7:6、約7:8から約8:7、約8:9から約9:8、約9:10から約10:9、約1:11から約11:10、又は約1:1等の約1:4から約4:1の対アニオン界面活性剤モル比で含んでいてもよい。
【００６１】
界面活性剤溶液はカチオン対イオンを、約1:3から約3:1、約1:2から約2:1、約2:3から約3:2、約3:4から約4:3、約4:5から約5:4、約5:6から約6:5、約6:7から約7:6、約7:8から約8:7、約8:9から約9:8、約9:10から約10:9、約10:11から約11:10、又は約1:1等の約1:4から約4:1の対ラウリル硫酸塩モル比で含んでいてもよい。
【００６２】
界面活性剤溶液はリチウムイオンを、約1:3から約3:1、約1:2から約2:1、約2:3から約3:2、約3:4から約4:3、約4:5から約5:4、約5:6から約6:5、約6:7から約7:6、約7:8から約8:7、約8:9から約9:8、約9:10から約10:9、約10:11から約11:10、又は約1:1等の約1:4から約4:1の対アニオン界面活性剤モル比で含んでいてもよい。
【００６３】
界面活性剤溶液はリチウムイオンを、約1:3から約3:1、約1:2から約2:1、約2:3から約3:2、約3:4から約4:3、約4:5から約5:4、約5:6から約6:5、約6:7から約7:6、約7:8から約8:7、約8:9から約9:8、約9:10から約10:9、約10:11から約11:10、又は約1:1等の約1:4から約4:1の対ラウリル硫酸塩モル比で含んでいてもよい。
【００６４】
20%のラウリル硫酸リチウム(質量/容積)を含む界面活性剤溶液は、都合の良い測定が可能になり、例えば、5分の4のヒト血漿を5分の1の界面活性剤溶液と組み合わせれば、4%のLLSを含む処理試料をもたらすことが可能であり、4分の3のヒト血漿を4分の1の界面活性剤溶液と組み合わせれば、5%のLLSを含む処理試料をもたらすことが可能になる。したがって、一部の実施形態では、界面活性剤溶液は20%のラウリル硫酸リチウム(質量/容積)を含む。
【００６５】
一部の実施形態では、界面活性剤溶液は本質的に、4-(2-ヒドロキシエチル)-1-ピペラジンエタンスルホン酸(HEPES)、コハク酸塩、磁性粒子、ポリデオキシチミジンオリゴヌクレオチド、磁性粒子に結合しているポリデオキシチミジンオリゴヌクレオチド、2,2'-ジチオジピリジン、エチレンジアミン四酢酸塩(EDTA)、エチレングリコール-ビス(β-アミノエチルエーテル)-N,N,N',N'-四酢酸塩(EGTA)、エタノール、ホウ酸、及び/又はトリトンX-100がない。界面活性剤溶液は本質的にいかなる核酸(例えば、ポリデオキシチミジン等のオリゴヌクレオチド)がなくてもよい。界面活性剤溶液は本質的にいかなる粒子(例えば、磁性粒子)がなくてもよい。
【００６６】
一部の実施形態では、界面活性剤溶液は、4-(2-ヒドロキシエチル)-1-ピペラジンエタンスルホン酸(HEPES)、コハク酸塩、磁性粒子、ポリデオキシチミジンオリゴヌクレオチド、磁性粒子に結合しているポリデオキシチミジンオリゴヌクレオチド、2,2'-ジチオジピリジン、エチレンジアミン四酢酸塩(EDTA)、エチレングリコール-ビス(β-アミノエチルエーテル)-N,N,N',N'-四酢酸塩(EGTA)、エタノール、ホウ酸、及び/又はトリトンX-100を欠く。界面活性剤溶液は核酸(例えば、ポリデオキシチミジン等のオリゴヌクレオチド)を欠いてもよい。界面活性剤溶液は粒子(例えば、磁性粒子)を欠いてもよい。
【００６７】
D.試料
本明細書で使用される用語「試料」とは、動物の血液から得られる組成物のことである(この定義が用語試料の明白な文脈に抵触しなければ)。試料は典型的には、少なくとも抗凝固剤(例えば、エチレンジアミン四酢酸塩、クエン酸塩、シュウ酸塩)に接触させており、試料はさらなる下流加工を受けていてもよい。試料は、任意選択により、混ぜ物がない。
【００６８】
血液は、任意の年齢、人種、民族性、又は性別のヒト等の哺乳動物から得てもよい。一部の実施形態では、試料は、血液血漿が血液血漿ドナーから得られたという事実を特徴とする血液血漿のアリコートからなる。
【００６９】
試料は典型的には、血液血漿(ヒト血液血漿等の)、血液血清(ヒト血液血清等の)のアリコート、又は血漿由来製品(ヒト血漿由来製品等の)の製造プールのアリコートである。試料は任意選択により、血液血漿(ヒト血液血漿等の)、血液血清(ヒト血液血清等の)のアリコート、又は血漿由来製品(ヒト血漿由来製品等の)の製造プールのアリコートを含んでいてもよく、例えば、血液血漿、血液血清、又は製造プールのアリコートが試料内に分散している。血漿由来製品の製造プールは典型的には、複数のドナー由来のプール血漿を含む製造プールよりはむしろ単一ドナー由来の血漿を含む製造プールである。なぜならば、本明細書に開示される組成物及び方法は典型的には、単一ドナー由来の血漿を合わせて複数ドナー由来のプール血漿にするのに先立って単一ドナー由来の血漿をスクリーニングするのに使用されるからである。にもかかわらず、製造プールのアリコートは、例えば、プール血漿又はその下流製造プールの品質管理スクリーニングを可能にするために、プール血漿又はその下流製造プールを含んでいてもよい。
【００７０】
試料は典型的には全血ではない。なぜならば、全血は核酸検査及びELISA等の他のアッセイを妨害することがある細胞を含有しているからである。にもかかわらず、試料は、例えば、全血由来の血液血漿を得るのに一般に使用される遠心分離工程を除く等の便宜上、全血である又はこれを含んでいてもよい。
【００７１】
試料は任意選択により、パルボウイルス科のウイルス等の分析物を含む。例えば、分析物がパルボウイルスB19である場合に、分析物に曝露されたことがないヒト対象から得られる試料等の多くの試料は分析物を含有しないことになる。
【００７２】
E.処理試料
本明細書で使用される用語「処理試料」とは、アニオン界面活性剤が添加されている試料のことである。処理試料は一般には液体組成物であり、処理試料は任意選択により、例えば、液体組成物中に浮遊しているウイルス粒子等の微粒子を含むことが可能である。
【００７３】
処理試料は典型的には、アニオン界面活性剤を、少なくとも約4%又は少なくとも約5%等の少なくとも約3%の濃度(質量/容積)で含む。好ましい実施形態では、処理試料は少なくとも約4%のラウリル硫酸塩等の少なくとも約4%のアニオン界面活性剤を含む。
【００７４】
処理試料は典型的には、アニオン界面活性剤を、約3%から約9%、約4%から約9%、約1%から約5%、約3%から約7%、約5%から約9%、約1%、約2%、約3%、約4%、約5%、約6%、約7%、約8%、約9%、又は約10%等の約1%から約20%の濃度(質量/容積)で含む。
【００７５】
処理試料は典型的には、アニオン界面活性剤を、少なくとも約120mmol/L、約130mmol/L、約140mmol/L、約150mmol/L、約160mmol/L、約170mmol/L、約180mmol/L、又は約190mmol/L等の少なくとも約110mmol/Lの濃度で含む。好ましい実施形態では、処理試料は、少なくとも約150mmmol/Lのラウリル硫酸塩等の少なくとも約150mmol/Lのアニオン界面活性剤を含む。
【００７６】
処理試料は典型的には、アニオン界面活性剤を、約150mmol/Lから約500mmol/L、約150mmol/Lから約350mmol/L、約100mmol/Lから約200mmol/L、約150mmol/Lから約250mmol/L、約200mmol/Lから約300mmol/L、約250mmol/Lから約350mmol/L、約120mmol/L、約130mmol/L、約140mmol/L、約150mmol/L、約160mmol/L、約170mmol/L、約180mmol/L、約190mmol/L、約200mmol/L、約210mmol/L、約220mmol/L、約230mmol/L、約240mmol/L、約250mmol/L、約260mmol/L、約270mmol/L、約280mmol/L、約290mmol/L、又は約300mmol/L等の約100mmol/Lから約1mol/Lの濃度で含む。好ましい実施形態では、処理試料は少なくとも160mmol/L、170mmol/L、又は180mmol/Lのラウリル硫酸塩等の少なくとも150mmol/Lのアニオン界面活性剤を含む。
【００７７】
処理試料は典型的には、250mmol/L、200mmol/L、180mmol/L、160mmol/L、又は150mmol/L未満等の300mmol/L未満のナトリウムイオンを含む。例えば、ヒト血液血清は典型的には、約135から145mmol/Lのナトリウムイオンを含有し、したがって、処理試料は典型的には、その希釈係数に応じて約100mmol/Lから145mmol/Lのナトリウムイオンを含有することになる。
【００７８】
処理試料は典型的には、0.60%、0.55%、0.50%、0.45%、0.40%、又は0.35%未満のナトリウムイオン等の0.65%未満のナトリウムイオン(質量/容積)を含む。
【００７９】
処理試料は任意選択により、リチウムイオンを、少なくとも約120mmol/L、約130mmol/L、約140mmol/L、約150mmol/L、約160mmol/L、約170mmol/L、約180mmol/L、又は約190mmol/L等の少なくとも約110mmol/Lの濃度で含む。処理試料は任意選択により、少なくとも約150mmol/Lのリチウムイオン等の少なくとも約150mmol/Lのリチウムイオンを含む。
【００８０】
処理試料は任意選択により、リチウムイオンを、約150mmol/Lから約500mmol/L、約150mmol/Lから約350mmol/L、約100mmol/Lから約200mmol/L、約150mmol/Lから約250mmol/L、約200mmol/Lから約300mmol/L、約250mmol/Lから約350mmol/L、約120mmol/L、約130mmol/L、約140mmol/L、約150mmol/L、約160mmol/L、約170mmol/L、約180mmol/L、約190mmol/L、約200mmol/L、約210mmol/L、約220mmol/L、約230mmol/L、約240mmol/L、約250mmol/L、約260mmol/L、約270mmol/L、約280mmol/L、約290mmol/L、又は約300mmol/L等の約100mmol/Lから約1mol/Lの濃度で含む。処理試料は任意選択により、少なくとも160mmol/L、170mmol/L、又は180mmol/Lのリチウムイオン等の少なくとも150mmol/Lのリチウムイオンを含む。
【００８１】
処理試料はリチウムイオンを、少なくとも約0.01%、約0.02%、約0.03%、約0.04%、約0.05%、約0.06%、約0.07%、約0.08%、約0.09%、約0.10%、約0.11%、約0.12%、約0.13%、約0.14%、約0.15%、約0.16%、約0.17%、約0.18%、約0.19%、約0.20%、約0.21%、約0.22%、約0.23%、約0.24%、又は約0.25%等の少なくとも約0.001%の濃度(質量/容積)で含んでいてもよい。
【００８２】
処理試料はカチオン対イオンを、約0.005%から約2%、又は約0.01%から約1%等の約0.001%から約5%の濃度で含んでいてもよい。
【００８３】
処理試料はリチウムイオンを、約0.01%から約0.80%、約0.05%から約0.50%、約0.07%から約0.40%、約0.01%から約0.30%、約0.10%から約0.25%、約0.01%、約0.02%、約0.03%、約0.04%、約0.05%、約0.06%、約0.07%、約0.08%、約0.09%、約0.10%、約0.11%、約0.12%、約0.13%、約0.14%、約0.15%、約0.16%、約0.17%、約0.18%、約0.19%、約0.20%、約0.21%、約0.22%、約0.23%、約0.24%、約0.25%、約0.26%、又は約0.27%等の約0.001%から約1%の濃度(質量/容積)で含んでいてもよい。
【００８４】
一部の実施形態では、処理試料は本質的に、4-(2-ヒドロキシエチル)-1-ピペラジンエタンスルホン酸(HEPES)、コハク酸塩、磁性粒子、ポリデオキシチミジンオリゴヌクレオチド、磁性粒子に結合しているポリデオキシチミジンオリゴヌクレオチド、2,2'-ジチオジピリジン、エチレンジアミン四酢酸塩(EDTA)、エチレングリコール-ビス(β-アミノエチルエーテル)-N,N,N',N'-四酢酸塩(EGTA)、エタノール、ホウ酸、及び/又はトリトンX-100がない。
【００８５】
一部の実施形態では、処理試料は、4-(2-ヒドロキシエチル)-1-ピペラジンエタンスルホン酸(HEPES)、コハク酸塩、磁性粒子、ポリデオキシチミジンオリゴヌクレオチド、磁性粒子に結合しているポリデオキシチミジンオリゴヌクレオチド、2,2'-ジチオジピリジン、エチレンジアミン四酢酸塩(EDTA)、エチレングリコール-ビス(β-アミノエチルエーテル)-N,N,N',N'-四酢酸塩(EGTA)、エタノール、ホウ酸、及び/又はトリトンX-100を欠く。
【００８６】
F.分析物
本発明の種々の態様は、任意選択によって試料又は処理試料中に存在する分析物に関する。分析物は、例えば、パルボウイルスB19等のパルボウイルス科のウイルスが可能である。分析物は、例えば、パルボウイルス科のウイルスの抗原が可能である。分析物は、例えば、パルボウイルス科のウイルスの抗原に特異的に結合する抗体が可能である。分析物は、例えば、パルボウイルス科のウイルスの核酸が可能である。したがって、分析物は任意選択により、タンパク質又は核酸でもよく、分析物の正確な性質は特に限定的ではない。
【００８７】
G.アッセイ組成物
本発明の種々の態様は、分析物を検出する及び/又は相対濃度(例えば、濃度が閾値に対するものである場合)若しくは絶対濃度等の分析物の濃度を測定するアッセイに関する。アッセイは、例えば、転写増幅法(TMA)又はポリメラーゼ連鎖反応(PCR)等の核酸検査でもよい。
【００８８】
1.TMA
一部の実施形態では、本発明は、アニオン界面活性剤を含む液体を含む組成物に関しており、この界面活性剤は本明細書に記載される試料を処理するのに使用される。
【００８９】
本発明は、それぞれが分析物のヌクレオチド配列又はその逆相補体に特異的に結合し、それによって分析物のTMA増幅を可能にする少なくとも2つの増幅プライマーを含む液体を含む組成物にも関する。増幅プライマーの間では、少なくとも1つのプライマー、いわゆるプロモータープライマー、はプライマーの5'末端にT7プロモーター配列を含む。
【００９０】
本発明は、分析物のTMA増幅を可能にする少なくとも2つの酵素、逆転写酵素及びT7 RNAポリメラーゼを含む液体を含む組成物にも関する。TMA増幅は、RNAポリメラーゼ、DNAポリメラーゼ、デオキシリボヌクレオシド三リン酸、リボヌクレオシド三リン酸、及びプロモーター鋳型相補的オリゴヌクレオチドを用いる。増幅の第1工程では、プロモータープライマーは所定の部位で標的核酸にハイブリダイズする。逆転写酵素は、プロモータープライマーの3'末端からの伸長により標的核酸の相補的DNAコピーを作り出す。新たに合成されたDNA鎖との反対鎖プライマーの相互作用に続いて、DNAの第2の鎖が逆転写酵素によりプライマーの末端から合成され、それによって二本鎖DNA分子を作り出す。RNAポリメラーゼはこの二本鎖DNA鋳型中のプロモーター配列を認識し、転写を開始する。新たに合成されたRNAアンプリコンのそれぞれがTMAプロセスに再び入り、新たなラウンドの複製のための鋳型の役割を果たし、それによってRNAアンプリコンの指数関数的膨脹をもたらす。DNA鋳型のそれぞれがRNAアンプリコンの100〜1000コピーを作ることができるので、この膨脹は1時間未満で100億のアンプリコンを作成することが可能である(例えば、米国特許第9,752,201号参照。前記特許文献はこれにより参照によりその全体を組み込まれる)。
【００９１】
2.PCR
一部の実施形態では、本発明は、アニオン界面活性剤を含む液体を含む組成物に関しており、この界面活性剤は本明細書に記載される試料を処理するのに使用される。本発明は、それぞれが分析物のヌクレオチド配列又はその逆相補体に特異的に結合し、それによって分析物のPCR産物のPCR増幅を可能にする少なくとも2つのPCRプライマーを含む液体を含む組成物にも関していた。
【００９２】
本明細書で使用される用語「PCRプライマー」とは、その逆相補体にアニールした場合、少なくとも50℃の融解温度を有する8から40ヌクレオチドからなる一本鎖DNA分子のことである。
【００９３】
少なくとも2つのPCRプライマーを含む組成物は典型的には、少なくとも2つのPCRプライマーのそれぞれのPCRプライマーを、少なくとも50nM、少なくとも100nM、又は少なくとも200nM等の少なくとも10nMの濃度で含む。
【００９４】
少なくとも2つのPCRプライマーを含む組成物は、任意選択により、少なくとも10μM dNTP、少なくとも25μM dNTP、又は少なくとも50μM dNTP等の少なくとも5μM dNTP(すなわち、dATP、dTTP、dCTP、及びdGTPのそれぞれの少なくとも5μM)を含む。
【００９５】
少なくとも2つのPCRプライマーを含む組成物は、任意選択により、Taqポリメラーゼ等の熱安定性DNAポリメラーゼを含む。熱安定性DNAポリメラーゼは50℃で水溶液中少なくとも60分の半減期を有する。ヒトDNAポリメラーゼは定義によれば熱安定性ではない。
【００９６】
3.免疫アッセイ
組成物は抗体又はその抗原結合部分を含んでいてもよい。抗体は典型的には、マウス、ラット、モルモット、ハムスター、ウサギ、ヤギ、ヒツジ、ブタ、ネコ、サル、イヌ、ロバ、ウマ、ウシ、又はニワトリ等のヒト以外の種のものである。
【００９７】
抗体は分析物のエピトープに特異的に結合してもよい。例えば、抗体は、パルボウイルスB19のエピトープ等のパルボウイルス科のウイルスのエピトープに特異的に結合してもよい。
【００９８】
抗体又はその抗原結合部分は、任意選択により、ビーズ、膜、マイクロタイタープレート、ポリペプチドチップ、又はクロマトグラフィーカラムの固相等の固体支持体に共有結合的に又は非共有結合的に繋ぎ止められていることが可能である。抗体又はその抗原結合部分は、任意選択により、フルオロフォア、色素、酵素(例えば、西洋ワサビペルオキシダーゼ)、又は放射標識等の検出標識に共有結合又は非共有結合していることが可能である。
【００９９】
組成物は、任意選択により、一次抗体及び二次抗体(又は抗原結合部分)を含むことが可能であり、一次抗体及び二次抗体は本明細書に記載される抗体であり、一次抗体は分析物に特異的に結合し、二次抗体は一次抗体のFc領域に特異的に結合する。
【０１００】
組成物は、パルボウイルス科のウイルス等の分析物のエピトープ(例えば、パルボウイルスB19のエピトープ)を含む組換えタンパク質を含んでいてもよい。組換えタンパク質は固体支持体(例えば、ビーズ、膜、マイクロタイタープレート、ポリペプチドチップ、又はクロマトグラフィーカラムの固相)に固定化されている又は検出標識(例えば、フルオロフォア、色素、酵素、又は放射標識)に共有結合若しくは非共有結合していることが可能である。
【０１０１】
H.濃度を測定する又は相対濃度を決定する方法
本発明の種々の態様は、試料中の分析物の濃度を決定する方法に関する。分析物はウイルス又はウイルスの核酸でもよい。分析物はパルボウイルス科のウイルス又はパルボウイルス科のウイルスの核酸でもよい。分析物はヒトパルボウイルスB19又はヒトパルボウイルスB19の核酸でもよい。試料は、ヒト血液血漿等の血液血漿、ヒト血液血清等の血液血清、又は血漿由来製品の製造プールのアリコートでもよく又はこれを含んでいてもよい。
【０１０２】
方法は、試料を本明細書に記載される界面活性剤溶液に接触させ、それによって処理試料を作成することを含んでいてよい。試料は、例えば、血液血漿、血液血清、又は血漿由来製品の製造プールのアリコートを含んでいてもよい。血液血漿、血液血清、又は製造プールのアリコートは、任意選択により、試料内に分散していることが可能であり又は試料は本質的にアリコートからなっていてもよい。
【０１０３】
接触は、約55℃、約50℃、約45℃、約40℃、又は約37℃未満等の60℃未満の温度で起きてもよい。接触は、約4℃から約50℃、約4℃から約40℃、約20℃から約50℃、約20℃から約40℃、約4℃から約37℃、約4℃から約25℃、約4℃から約23℃、約20℃から約37℃、又は約20℃から約25℃等の約4℃から約55℃の温度で起きてもよい。
【０１０４】
方法は、分析物の濃度が閾値より上又は下なのかを判定することを含んでいてもよい。分析物の濃度が閾値より上又は下なのかの判定は、TMA等の核酸検査を含んでいてもよい。例えば、分析物はヒトパルボウイルスB19又はヒトパルボウイルスB19の核酸でもよく、核酸検査はヒトパルボウイルスB19のすべての既知の遺伝子型を検出することができてもよい。
【０１０５】
方法は、分析物が試料中に存在している及び/又は検出可能であるかどうかを判定することを含んでいてもよい。
【０１０６】
方法は、分析物の濃度を測定し、例えば、それにより測定値を得ることを含んでいてもよい。分析物の濃度の測定は、TMA等の核酸検査を含んでいてもよい。例えば、分析物はヒトパルボウイルスB19又はヒトパルボウイルスB19の核酸でもよく、核酸検査はヒトパルボウイルスB19のすべての既知の遺伝子型を検出することができてもよい。
【０１０７】
一部の実施形態では、方法は、試料中のヒトパルボウイルスB19の濃度を測定し、それにより測定値を得ることを含む。
【０１０８】
一部の実施形態では、同じ試料の異なるアリコートについて得られる異なる測定値の変動係数は、界面活性剤溶液に接触させ同じ試料調製及び異なるアリコート中の分析物の濃度が閾値よりも上又は下なのかを判定するための分析工程を受けるアリコートについての50%以下であり、同じ試料の異なるアリコートについて得られた異なる測定値の変動係数は、界面活性剤溶液に接触させていないが他の点では同じ試料調製及び異なるアリコート中の分析物の濃度が閾値よりも上又は下なのかを判定するための分析工程を受けるアリコートについて50%よりも大きい。
【０１０９】
方法は、任意選択により、アリコート中の分析物の濃度が閾値よりも大きい場合、前述のいずれか1つの血液血漿、血液血清、製造プール、又は下流製造プールを破棄することを含んでいてもよい。例えば、分析物はヒトパルボウイルスB19又はヒトパルボウイルスB19の核酸でもよく、閾値は10,000IU/mL未満又はこれに等しくてもよい。例えば、分析物はヒトパルボウイルスB19又はヒトパルボウイルスB19の核酸でもよく、方法は、ヒトパルボウイルスB19の濃度又はヒトパルボウイルスB19の核酸の濃度が10,000IU/mLよりも大きい場合は、血液血漿、血液血清、製造プール、又はその下流製造プールを破棄することを含んでいてもよい。
【０１１０】
I.血液若しくはその成分を放出する、プール血漿を調製する、又は血漿由来製品を製造する方法
本発明の種々の態様は、全血又は血液成分(血液血清又は血液血漿等の)を、例えば、輸血において使用するために安全に放出することが可能かどうかを判定する方法に関する。方法は、試料のアリコート中のヒトパルボウイルスB19の濃度が閾値よりも下である場合、輸血において使用するために試料に関連する全血又は血液成分を放出することを更に含んでいてもよい。方法は、試料のアリコート中のヒトパルボウイルスB19の濃度が閾値よりも上である場合、試料に関連する全血又は血液成分を輸血において使用させないことを更に含んでいてもよい。
【０１１１】
本発明の種々の態様は、血漿由来製品を製造する方法であって、本明細書に記載される試料中の分析物の濃度を決定する方法を実施し、血漿由来製品を製造することを含む方法に関する。血漿由来製品は、例えば、プール血漿、溶媒/洗浄剤処理プール血漿、凝固因子、フィブリン組織接着剤、アルブミン、又は免疫グロブリン製品でもよい。
【０１１２】
本発明の種々の態様は、プール血漿を調製する方法であって、本明細書に記載される試料中の分析物の濃度を決定する方法を実施することを含む方法に関し、アリコートは血液血漿由来であり、方法は、分析物の濃度が閾値未満である場合は、血液血漿をプール血漿に添加することを含む。
【０１１３】
本発明の種々の態様は、本明細書に記載される方法に従って製造される血漿由来製品に関する。例えば、血漿由来製品は、任意選択により、(1)本明細書に記載される試料中の分析物の濃度(例えば、絶対濃度又は相対濃度)を決定する方法を実施する、及び(2)試料中の分析物の濃度が、例えば、濃度が閾値よりも下であるために許容可能である場合には、血漿由来製品を製造することにより製造することが可能である。
【実施例】
【０１１４】
(実施例1)
負荷血漿試料GDFL211の最先端の分析
試料GDFL211はBiomat USA社(Raleigh、NC)より入手した。試料GDFL211は、>10,000,000IU/mLパルボウイルスB19を含有する血漿試料である。試料GDFL211は眼に見える凝集塊を示さないが、試料の分析によりパルボウイルスB19力価の極めて変わりやすい測定値が得られる。
【０１１５】
希釈GDFL211試料の10アリコートをProcleix Parvo/HAVアッセイを使用して分析し、パルボウイルスB19力価を決定した。測定値は1,922から>100,000までの範囲に及び、変動係数(CV)は107%であった(Table 1 (表1)、Procleix Parvo/HAV)。希釈GDFL211試料の8アリコートを、ニューヨーク州保健局が承認している確証された定量的PCRアッセイを用いた検査のためにARUP研究所(Salt Lake City、UT)に送った。測定値は884から91,700までの範囲に及び、CVは115%であった(Table 1 (表1)、qPCR)。
【０１１６】
【表１】
2020507306.tif 000003
【０１１７】
(実施例2)
試料調製プロトコルに加えるルーチンな修正をスクリーニングしてもパルボウイルスB19核酸検査についての変動係数は改善されない
希釈試料GDFL211のアリコートは、一度も凍結させておらず、ロッカー上で1時間、室温でインキュベートした。希釈試料GDFL211のアリコートは凍結させ、4℃で24時間解凍し、次に、5秒間ボルテックスした。希釈試料GDFL211のアリコートは凍結させ、次に、ロッカー上で1時間解凍した。希釈試料GDFL211のアリコートは凍結させ、30℃で30分間解凍し、次に、5秒間ボルテックスした。希釈試料GDFL211のアリコートは凍結させ、30℃で60分間解凍し、次に、15分間ボルテックスした。希釈試料GDFL211のアリコートは凍結させ、次に、37℃で急速解凍した。希釈試料GDFL211のアリコートは凍結させ、37℃で70分間解凍し、次に、5秒間反転することにより混合した。希釈試料GDFL211のアリコートは凍結させ、試薬調製インキュベーターにおいて回転させながら45分間、60℃で解凍した。次に、それぞれの試料は核酸検査により分析した。パルボウイルスB19を含み力価測定値に高い可変性を示さない対照血漿試料を並行して加工し分析した。前述の試料調製戦略により、CVは希釈試料GDFL211では58%から141%、対照試料では15%から24%の範囲に及んだ(図1)。これらの結果に基づいて、凍結解凍は、負荷試料におけるパルボウイルスB19力価測定値の変動係数を改善するのに役に立たないことが判定された。
【０１１８】
希釈試料GDFL211のアリコートは、15分から60分の持続期間30℃から60℃の範囲に及ぶ温度で混合し、次に、核酸検査により分析した。対照血漿試料は並行して加工し分析した。60℃で30分間混合すると、30%のCVになり、この数値は対照試料に匹敵したが、この結果には再現性がなかった(図2)。60℃でのインキュベーションと試料分析の間の時間が測定分散に影響を及ぼすのかどうかを判定するため、60℃で30分間インキュベートした試料のアリコートは、インキュベーション後直ちに検査する又は検査に先立って室温で5時間静置させた。試料調製プロトコルにそのような修正を加えても30%のCVを再現せず、したがって、60℃で30分間の混合後に得られた観測された30%のCVは、本物の変動係数ではなく統計上の例外であることが分かった。これらの結果に基づいて、上昇させた温度でのインキュベーションは、負荷試料におけるパルボウイルスB19力価測定値の変動係数を改善するのに役に立たないことが判定された。
【０１１９】
希釈試料GDFL211のアリコートは、5から30分間加熱し、次に、5から60分間超音波処理し、次に、核酸検査により分析した。対照血漿試料は並行して加工し分析した。前述の試料調製戦略により、CVは試料GDFL211では58%から117%、対照試料では17%から62%の範囲に及んだ(図3)。これらの結果に基づいて、超音波処理は、負荷試料におけるパルボウイルスB19力価測定値の変動係数を改善するのに役に立たないことが判定された。
【０１２０】
希釈試料GDFL211のアリコートのpHはpH3、pH11に調整する、又は調整しなかった。対照血漿試料のアリコートのpHは並行して調整した。次に、それぞれの試料は核酸検査により分析した。11のpHは好ましいCVを可能にすることが分かった(図4)。しかし、高pHはRNAの半減期を低減するので、高pH試料分析は好ましくない。試料GDFL211については、3のpHは94%のCVをもたらし、中性pHは107%のCVをもたらした。これらの結果に基づいて、pHの調整は、負荷試料におけるパルボウイルスB19力価測定値の変動係数を改善するのに役に立たないことが判定された。
【０１２１】
試料GDFL211のアリコートは、プロテアーゼEndoZyme(登録商標) (Hyglos GmbH社、Germany;組換えファクターC)及び/又はプロテイナーゼKと一緒にインキュベートし、次に、核酸検査により分析した。対照血漿試料は並行して加工し分析した。それぞれの酵素は1.5%濃度で使用した。EndoZyme(登録商標)試料は30℃から60℃で30分間インキュベートした。プロテイナーゼK試料は50℃で30分間インキュベートした。EndoZyme(登録商標)/プロテイナーゼK試料は60℃で15分間インキュベートした。前述の試料調製戦略により、CVは試料GDFL211では53%から118%、対照試料では20%から23%の範囲に及んだ(図5)。これらの結果に基づいてプロテアーゼ処理は、負荷試料におけるパルボウイルスB19力価測定値の変動係数を改善するのに役に立たないことが判定された。
【０１２２】
(実施例3)
ドデシル硫酸ナトリウムのナトリウムカチオンをリチウムカチオンと置換すると変動係数を驚くほど低減する
一般に使用されている界面活性剤のドデシル硫酸ナトリウム(SDS)及びトリトンX-100を試料GDFL211のアリコートに添加し、次に、アリコートは核酸検査により分析した。SDSは低いCVを示したが、SDSを含有する試料は沈殿物を形成し無効な結果を生じた。トリトンX-100は、負荷試料におけるパルボウイルスB19測定値の変動係数を改善するのに役に立たないことが判定された。しかしながら、驚くべきことに、SDSのナトリウムカチオンをリチウムと置換するだけで、試料CVは改善され、妥当な結果が可能になった。言い換えると、SDS(ラウリル硫酸ナトリウムとSLSの両方でも知られる)に代わってラウリル硫酸リチウム(LLSとドデシル硫酸リチウムの両方としても知られる)を使用すると、予想外なことに負荷試料におけるパルボウイルスB19測定値の変動係数が改善された。具体的には、以下の実験を実施した。
【０１２３】
希釈試料GDFL211のアリコートをLLSを含む界面活性剤溶液に接触させて、それによって5%のLLSを含む処理試料が得られた。試料GDFL211のアリコートをSDSを含む界面活性剤溶液に接触させて、それによって5%のSDSを含む処理試料が得られた。希釈試料GDFL211のアリコートを無電荷界面活性剤トリトンX-100を含む界面活性剤溶液に接触させて、それによって1%のトリトンX-100を含む処理試料が得られた。次に、それぞれの試料は核酸検査により分析した。パルボウイルスB19を含み力価測定値に高い可変性を示さない対照血漿試料は並行して加工し分析した。5%のLLSを含む処理GDFL211試料は21%のCVを示した(図6)。5%のLLSを含む処理対照試料は16%のCVを示した(図6)。5%のSDSを含む処理試料は同様に低いCVを示した(図6)が、これらの試料は沈殿物を含有し、5%のSDSを含む処理試料から得られた結果は無効だと分かった。1%のトリトンX-100を含む処理GDFL211試料は150%のCVを示した(図6)。これらの結果に基づいて、SDS及びトリトンX-100は、負荷試料におけるパルボウイルスB19力価測定値の変動係数を改善するのに役に立たないことが判定され、LLSは負荷試料におけるパルボウイルスB19測定値の変動係数を改善することが分かった。注目すべきことに、界面活性剤の電荷(すなわち、アニオン界面活性剤対無電荷界面活性剤)とアニオン界面活性剤の対イオン(すなわち、リチウム対ナトリウム)の両方が、界面活性剤で処理した試料において示される変動係数の低減に影響を及ぼすことが分かった。
【０１２４】
(実施例4)
LLS作動範囲の決定
希釈試料GDFL211のアリコートをアニオン界面活性剤ラウリル硫酸塩及び対イオンリチウムを含む界面活性剤溶液に接触させ、それによって3%のLLS、4%のLLS、5%のLLS、6%のLLS、7%のLLS、8%のLLS、及び9%のLLSを含む処理試料を作成した。処理試料は核酸検査により分析した。対照血漿試料は並行して加工し分析した。3%のLLS、4%のLLS、5%のLLS、6%のLLS、7%のLLS、8%のLLS、及び9%のLLS処理GDFL211試料はそれぞれ104%、65%、20%、30%、17%、18%、及び31%のCVを示した(図7)。処理対照試料は19%から30%の範囲に及ぶCVを示した。これらの結果に基づいて、約4%及びそれよりも大きいLLS濃度は、負荷試料におけるパルボウイルスB19力価測定値の変動係数を改善するのに役立つことが判定された。具体的には、4% LLSは3% LLSと比べて測定分散を改善し、5% LLSは4% LLSと比べて測定分散を改善した(図7)。
【０１２５】
(実施例5)
LLS処理試料の貯蔵条件の分析
試料GDFL211のアリコートをラウリル硫酸リチウムを含む界面活性剤溶液に接触させ、それによって4%のLLS、5%のLLS、6%のLLS、及び7%のLLSを含む処理試料を作成し、次に、2〜8℃で24時間冷蔵する又は≦-20℃で72時間凍結させ、次に37℃で急速解凍した。処理試料は核酸検査により分析した。対照血漿試料は並行して加工し分析した。冷蔵又は凍結による貯蔵は、LLS処理試料の変動係数に対してなんの効果もないことが分かった。4%から7%のLLSは、例えば、3%のLLS(図7)と比べてそれが添加されたすべてのGDFL211試料において変動係数を改善することが分かった(図8)。
【０１２６】
(実施例6)
A型肝炎ウイルスRNAについてのLLS処理試料の分析
A型肝炎ウイルスRNAの世界保健機構の第1国際標準のアリコート(National Institute for Biological Standards and Control code: 00/560)は連続希釈され、LLSで処理される又は処理されず(対照として)、次に、核酸検査により分析した。連続希釈試料にLLSを添加しても、プロビット及び統計解析に基づくA型肝炎ウイルスRNA検出の感度に影響を与えなかった(Table 2 (表2)及び図9)。
【０１２７】
【表２】
2020507306.tif 000004
【０１２８】
(実施例7)
LLS処理試料中のパルボウイルスB19濃度の正確さの分析
10,000IU/mLのパルボウイルスB19を含有するプール血漿試料の60アリコートを20%のLLS溶液と混合し、最終LLS濃度6%又は無処理にした。LLS処理試料は平均パルボウイルスB19濃度5370IU/mL(103.73)を示し、無処理試料は平均パルボウイルスB19濃度10,965IU/mL(104.04)を示した。
【０１２９】
【表３】
2020507306.tif 000005
【０１３０】
10,000IU/mLのパルボウイルスB19を含有するプール血漿のアリコートを20%のLLS溶液と混合し、最終LLS濃度6%又は無処理にした。アリコートは、2〜8℃で6日間冷蔵する、又は≦-20℃で6日間凍結させ、次に37℃で急速解凍した。平均パルボウイルス定量化はこれらの貯蔵条件の影響を受けなかった(Table 4 (表4))。
【０１３１】
【表４】
2020507306.tif 000006
【０１３２】
パルボウイルスB19を含有する血漿のアリコートを種々の濃度で希釈し、次に、20%のLLS溶液と混合し、最終LLS濃度6%又は無処理のままにした。LLSは、これらの試料中では300IU/mL(102.48IU/mL)から30,000IU/mL(104.48IU/mL)の範囲に及ぶ濃度ではパルボウイルスB19測定の正確さ又は精度に影響を与えなかった(Table 5 (表5))。
【０１３３】
【表５】
2020507306.tif 000007
【０１３４】
>100,000IU/mLパルボウイルスB19を含有する実際の血漿試料のアリコートを、パルボウイルスB19アッセイのダイナミックレンジに入るようにプール血漿で連続希釈し、次に、20%のLLS溶液と混合し、最終LLS濃度6%又は無処理のままにした。無処理のアリコートと比べて複製のグループについての低い変動係数により証明されるように、LLS処理は一般に測定精度を改善した(Table 6 (表6))。
【０１３５】
【表６】
2020507306.tif 000008
【図１】
2020507306.tif 000009
【図２】
2020507306.tif 000010
【図３】
2020507306.tif 000011
【図４】
2020507306.tif 000012
【図５】
2020507306.tif 000013
【図６】
2020507306.tif 000014
【図７】
2020507306.tif 000015
【図８】
2020507306.tif 000016
【図９】
2020507306.tif 000017
【国際調査報告】
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