(57)【要約】  ＩＬ３３アンタゴニストが、単独でまたはＩＬ−４Ｒアンタゴニストと組み合わせて、イントロンＩＬ１ＲＬ１バリアントｒｓ１４２０１０１中に、ＩＬ３３バリアントｒｓ１３４２３２６中に、その両方に、またはその連鎖不平衡にあるバリアント中に１つ以上のリスクアレルを有する対象において好酸球性喘息、好酸球性ＣＯＰＤ、好酸球性ＡＣＯＳ、及び鼻茸を処置または阻害するために使用され得る。【特許請求の範囲】
【請求項１】
好酸球性喘息、アレルギー性鼻炎、または好酸球性喘息ＣＯＰＤオーバーラップ症候群（ＡＣＯＳ）の発症リスクの評価方法であって、
（Ａ）対象から得られた試料中のイントロンＩＬ１ＲＬ１バリアントｒｓ１４２０１０１（配列番号：３５７）もしくはその連鎖不平衡にあるバリアント中に、ＩＬ３３バリアントｒｓ１３４２３２６（配列番号：３５８）もしくはその連鎖不平衡にあるバリアント中に、または前記イントロンＩＬ１ＲＬ１バリアントｒｓ１４２０１０１（配列番号：３５７）もしくはその連鎖不平衡にあるバリアント及び前記ＩＬ３３バリアントｒｓ１３４２３２６（配列番号：３５８）もしくはその連鎖不平衡にあるバリアント中の両方に好酸球性喘息、アレルギー性鼻炎、または好酸球性ＡＣＯＳと関連する１つ以上のリスクアレルを検出することと、
（Ｂ）（ｉ）前記対象が、２番染色体ホモログの１つにおける前記イントロンＩＬ１ＲＬ１バリアントｒｓ１４２０１０１（配列番号：３５７）もしくはその連鎖不平衡にあるバリアント中にリスクアレルまたは９番染色体ホモログの１つにおける前記ＩＬ３３バリアントｒｓ１３４２３２６（配列番号：３５８）もしくはその連鎖不平衡にあるバリアント中にリスクアレルを有する場合、前記対象にリスクスコア１を割り当てることと、
（Ｂ）（ｉｉ）前記対象が、前記２番染色体ホモログの両方における前記イントロンＩＬ１ＲＬ１バリアントｒｓ１４２０１０１（配列番号：３５７）もしくはその連鎖不平衡にあるバリアント中にリスクアレルを有する場合、前記対象が、前記９番染色体ホモログの両方における前記ＩＬ３３バリアントｒｓ１３４２３２６（配列番号：３５８）もしくはその連鎖不平衡にあるバリアント中にリスクアレルを有する場合、または前記対象が、前記２番染色体ホモログの１つにおける前記イントロンＩＬ１ＲＬ１バリアントｒｓ１４２０１０１（配列番号：３５７）もしくはその連鎖不平衡にあるバリアント中にリスクアレル及び前記９番染色体ホモログの１つにおける前記ＩＬ３３バリアントｒｓ１３４２３２６（配列番号：３５８）もしくはその連鎖不平衡にあるバリアント中にリスクアレルを有する場合、前記対象にリスクスコア２を割り当てることと、
（Ｂ）（ｉｉｉ）前記対象が、前記２番染色体ホモログの両方における前記イントロンＩＬ１ＲＬ１バリアントｒｓ１４２０１０１（配列番号：３５７）もしくはその連鎖不平衡にあるバリアント中にリスクアレル及び前記９番染色体ホモログの１つにおける前記ＩＬ３３バリアントｒｓ１３４２３２６（配列番号：３５８）もしくはその連鎖不平衡にあるバリアント中にリスクアレルを有する場合、または前記対象が、前記２番染色体ホモログの１つにおける前記イントロンＩＬ１ＲＬ１バリアントｒｓ１４２０１０１（配列番号：３５７）もしくはその連鎖不平衡にあるバリアント中にリスクアレル及び前記９番染色体ホモログの両方における前記ＩＬ３３バリアントｒｓ１３４２３２６（配列番号：３５８）もしくはその連鎖不平衡にあるバリアント中にリスクアレルを有する場合、前記対象にリスクスコア３を割り当てることと、あるいは
（Ｂ）（ｉｖ）前記対象が、前記２番染色体ホモログの両方における前記イントロンＩＬ１ＲＬ１バリアントｒｓ１４２０１０１（配列番号：３５７）またはその連鎖不平衡にあるバリアント中にリスクアレル及び前記９番染色体ホモログの両方における前記ＩＬ３３バリアントｒｓ１３４２３２６（配列番号：３５８）またはその連鎖不平衡にあるバリアント中にリスクアレルを有する場合、前記対象にリスクスコア４を割り当てることと、
（Ｃ）好酸球性喘息、アレルギー性鼻炎、または好酸球性ＡＣＯＳの前記対象の発症リスクを分類し、リスクスコア１は、前記対象が好酸球性喘息の高好酸球サブセット、アレルギー性鼻炎の高好酸球サブセット、または好酸球性ＡＣＯＳの高好酸球サブセットの発症リスクを有することを示し、リスクスコア２は、前記対象が好酸球性喘息の前記高好酸球サブセット、アレルギー性鼻炎の高好酸球サブセット、または好酸球性ＡＣＯＳの高好酸球サブセットの上昇した発症リスクを有することを示し、リスクスコア３は、前記対象が好酸球性喘息の前記高好酸球サブセット、アレルギー性鼻炎の高好酸球サブセット、または好酸球性ＡＣＯＳの高好酸球サブセットを発症するリスクが高いことを示し、リスクスコア４は、前記対象が好酸球性喘息の前記高好酸球サブセット、アレルギー性鼻炎の高好酸球サブセット、または好酸球性ＡＣＯＳの高好酸球サブセットを発症するリスクが非常に高いことを示すことと
を含む、前記方法。
【請求項２】
好酸球性喘息の前記高好酸球サブセット、アレルギー性鼻炎の高好酸球サブセット、または好酸球性ＡＣＯＳの高好酸球サブセットを処置または阻害するのに有効な量で投与されるＩＬ３３アンタゴニストまたはＩＬ３３アンタゴニスト及びＩＬ−４Ｒアンタゴニストの組合せによる処置のための候補として前記対象を同定することをさらに含む、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記対象にＩＬ３３アンタゴニストを投与すること、またはＩＬ３３アンタゴニスト及びＩＬ−４Ｒアンタゴニストを投与することをさらに含む、請求項１または請求項２に記載の方法。
【請求項４】
前記方法が、前記対象にＩＬ３３アンタゴニストを投与することを含む、請求項３に記載の方法。
【請求項５】
前記方法が、前記対象にＩＬ３３アンタゴニスト及びＩＬ−４Ｒアンタゴニストを投与することを含む、請求項３に記載の方法。
【請求項６】
前記ＩＬ３３アンタゴニストがＩＬ３３トラップを含む、請求項２〜５のいずれか１項に記載の方法。
【請求項７】
前記ＩＬ３３トラップが、ＩＬ１ＲＬ１のＩＬ３３結合部分を含む第１ＩＬ３３結合ドメイン及びＩＬ−１ＲＡｃＰの細胞外部分を含む第２ＩＬ３３結合ドメインを含む、請求項６に記載の方法。
【請求項８】
前記ＩＬ３３アンタゴニストが、ＩＬ３３に特異的に結合する抗体またはその抗原結合断片を含む、請求項２〜５のいずれか１項に記載の方法。
【請求項９】
ＩＬ３３に特異的に結合する前記抗体またはその抗原結合断片が、配列番号：２７４のＨ１、Ｈ２、及びＨ３ドメインならびに配列番号：２８２のＬ１、Ｌ２、及びＬ３ドメインを含む、請求項８に記載の方法。
【請求項１０】
前記ＩＬ−４Ｒアンタゴニストが、ＩＬ−４Ｒに特異的に結合する抗体またはその抗原結合断片を含む、請求項２、３または５〜９のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１１】
ＩＬ−４Ｒに特異的に結合する前記抗体またはその抗原結合断片が、配列番号：３３７のＨ１、Ｈ２、及びＨ３ドメインならびに配列番号：３３８のＬ１、Ｌ２、及びＬ３ドメインを含む、請求項１０に記載の方法。
【請求項１２】
前記対象から単離した血液または痰から、好酸球数のレベル増加を検出することをさらに含む、請求項１〜１１のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１３】
好酸球性喘息の処置または阻害方法であって、イントロンＩＬ１ＲＬ１バリアントｒｓ１４２０１０１（配列番号：３５７）もしくはその連鎖不平衡にあるバリアント中に、ＩＬ３３バリアントｒｓ１３４２３２６（配列番号：３５８）もしくはその連鎖不平衡にあるバリアント中に、または前記イントロンＩＬ１ＲＬ１バリアントｒｓ１４２０１０１（配列番号：３５７）もしくはその連鎖不平衡にあるバリアント及び前記ＩＬ３３バリアントｒｓ１３４２３２６（配列番号：３５８）もしくはその連鎖不平衡にあるバリアント中の両方に好酸球性喘息と関連する１つ以上のリスクアレルを有する対象にＩＬ３３アンタゴニストを投与すること、またはＩＬ３３アンタゴニスト及びＩＬ−４Ｒアンタゴニストを投与することを含み、好酸球性喘息が前記対象内で処置または阻害されるものである、前記方法。
【請求項１４】
前記対象が、前記ＩＬ１ＲＬ１バリアントｒｓ１４２０１０１（配列番号：３５７）またはその連鎖不平衡にあるバリアント中に好酸球性喘息と関連する少なくとも１つのリスクアレルを有する、請求項１３に記載の方法。
【請求項１５】
前記対象が、前記ＩＬ１ＲＬ１バリアントｒｓ１４２０１０１（配列番号：３５７）またはその連鎖不平衡にあるバリアント中に好酸球性喘息と関連する２つのリスクアレルを有する、請求項１３または１４に記載の方法。
【請求項１６】
前記対象が、前記ＩＬ３３バリアントｒｓ１３４２３２６（配列番号：３５８）またはその連鎖不平衡にあるバリアント中に好酸球性喘息と関連する少なくとも１つのリスクアレルを有する、請求項１３に記載の方法。
【請求項１７】
前記対象が、前記ＩＬ３３バリアントｒｓ１３４２３２６（配列番号：３５８）またはその連鎖不平衡にあるバリアント中に好酸球性喘息と関連する２つのリスクアレルを有する、請求項１３または１６に記載の方法。
【請求項１８】
前記対象が、前記ＩＬ３３バリアントｒｓ１３４２３２６（配列番号：３５８）またはその連鎖不平衡にあるバリアント中に好酸球性喘息と関連する少なくとも１つのリスクアレルをさらに有する、請求項１４または１５に記載の方法。
【請求項１９】
前記対象が、前記ＩＬ３３バリアントｒｓ１３４２３２６（配列番号：３５８）またはその連鎖不平衡にあるバリアント中に好酸球性喘息と関連する２つのリスクアレルをさらに有する、請求項１４、１５、または１８のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２０】
前記方法が、前記対象にＩＬ３３アンタゴニストを投与することを含む、請求項１３〜１９のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２１】
前記方法が、前記対象にＩＬ３３アンタゴニスト及びＩＬ−４Ｒアンタゴニストを投与することを含む、請求項１３〜１９のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２２】
前記ＩＬ３３アンタゴニストがＩＬ３３トラップを含む、請求項１３〜２１のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２３】
前記ＩＬ３３トラップが、ＩＬ１ＲＬ１のＩＬ３３結合部分を含む第１ＩＬ３３結合ドメイン及びＩＬ−１ＲＡｃＰの細胞外部分を含む第２ＩＬ３３結合ドメインを含む、請求項２２に記載の方法。
【請求項２４】
前記ＩＬ３３アンタゴニストが、ＩＬ３３に特異的に結合する抗体またはその抗原結合断片を含む、請求項１３〜２１のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２５】
ＩＬ３３に特異的に結合する前記抗体またはその抗原結合断片が、配列番号：２７４の前記Ｈ１、Ｈ２、及びＨ３ドメインならびに配列番号：２８２の前記Ｌ１、Ｌ２、及びＬ３ドメインを含む、請求項２４に記載の方法。
【請求項２６】
前記ＩＬ−４Ｒアンタゴニストが、ＩＬ−４Ｒに特異的に結合する抗体またはその抗原結合断片を含む、請求項１３〜１９または２１〜２５のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２７】
ＩＬ−４Ｒに特異的に結合する前記抗体またはその抗原結合断片が、配列番号：３３７の前記Ｈ１、Ｈ２、及びＨ３ドメインならびに配列番号：３３８の前記Ｌ１、Ｌ２、及びＬ３ドメインを含む、請求項２６に記載の方法。
【請求項２８】
アレルギー性鼻炎の処置または阻害方法であって、イントロンＩＬ１ＲＬ１バリアントｒｓ１４２０１０１（配列番号：３５７）もしくはその連鎖不平衡にあるバリアント中に、ＩＬ３３バリアントｒｓ１３４２３２６（配列番号：３５８）もしくはその連鎖不平衡にあるバリアント中に、または前記イントロンＩＬ１ＲＬ１バリアントｒｓ１４２０１０１（配列番号：３５７）もしくはその連鎖不平衡にあるバリアント及び前記ＩＬ３３バリアントｒｓ１３４２３２６（配列番号：３５８）もしくはその連鎖不平衡にあるバリアント中の両方にアレルギー性鼻炎と関連する１つ以上のリスクアレルを有する対象にＩＬ３３アンタゴニストを投与すること、またはＩＬ３３アンタゴニスト及びＩＬ−４Ｒアンタゴニストを投与することを含み、アレルギー性鼻炎が前記対象内で処置または阻害されるものである、前記方法。
【請求項２９】
前記対象が、前記ＩＬ１ＲＬ１バリアントｒｓ１４２０１０１（配列番号：３５７）またはその連鎖不平衡にあるバリアント中にアレルギー性鼻炎と関連する少なくとも１つのリスクアレルを有する、請求項２８に記載の方法。
【請求項３０】
前記対象が、前記ＩＬ１ＲＬ１バリアントｒｓ１４２０１０１（配列番号：３５７）またはその連鎖不平衡にあるバリアント中にアレルギー性鼻炎と関連する２つのリスクアレルを有する、請求項２８または２９に記載の方法。
【請求項３１】
前記対象が、前記ＩＬ３３バリアントｒｓ１３４２３２６（配列番号：３５８）またはその連鎖不平衡にあるバリアント中にアレルギー性鼻炎と関連する少なくとも１つのリスクアレルを有する、請求項２８に記載の方法。
【請求項３２】
前記対象が、前記ＩＬ３３バリアントｒｓ１３４２３２６（配列番号：３５８）またはその連鎖不平衡にあるバリアント中にアレルギー性鼻炎と関連する２つのリスクアレルを有する、請求項２８または３１に記載の方法。
【請求項３３】
前記対象が、前記ＩＬ３３バリアントｒｓ１３４２３２６（配列番号：３５８）またはその連鎖不平衡にあるバリアント中にアレルギー性鼻炎と関連する少なくとも１つのリスクアレルをさらに有する、請求項２９または３１に記載の方法。
【請求項３４】
前記対象が、前記ＩＬ３３バリアントｒｓ１３４２３２６（配列番号：３５８）またはその連鎖不平衡にあるバリアント中にアレルギー性鼻炎と関連する２つのリスクアレルをさらに有する、請求項２９、３０、または３３のいずれか１項に記載の方法。
【請求項３５】
前記方法が、前記対象にＩＬ３３アンタゴニストを投与することを含む、請求項２８〜３４のいずれか１項に記載の方法。
【請求項３６】
前記方法が、前記対象にＩＬ３３アンタゴニスト及びＩＬ−４Ｒアンタゴニストを投与することを含む、請求項２８〜３４のいずれか１項に記載の方法。
【請求項３７】
前記ＩＬ３３アンタゴニストがＩＬ３３トラップを含む、請求項２８〜３６のいずれか１項に記載の方法。
【請求項３８】
前記ＩＬ３３トラップが、ＩＬ１ＲＬ１のＩＬ３３結合部分を含む第１ＩＬ３３結合ドメイン及びＩＬ−１ＲＡｃＰの細胞外部分を含む第２ＩＬ３３結合ドメインを含む、請求項３７に記載の方法。
【請求項３９】
前記ＩＬ３３アンタゴニストが、ＩＬ３３に特異的に結合する抗体またはその抗原結合断片を含む、請求項２８〜３６のいずれか１項に記載の方法。
【請求項４０】
ＩＬ３３に特異的に結合する前記抗体またはその抗原結合断片が、配列番号：２７４の前記Ｈ１、Ｈ２、及びＨ３ドメインならびに配列番号：２８２の前記Ｌ１、Ｌ２、及びＬ３ドメインを含む、請求項３９に記載の方法。
【請求項４１】
前記ＩＬ−４Ｒアンタゴニストが、ＩＬ−４Ｒに特異的に結合する抗体またはその抗原結合断片を含む、請求項２８〜３４または３６〜４０のいずれか１項に記載の方法。
【請求項４２】
ＩＬ−４Ｒに特異的に結合する前記抗体またはその抗原結合断片が、配列番号：３３７の前記Ｈ１、Ｈ２、及びＨ３ドメインならびに配列番号：３３８の前記Ｌ１、Ｌ２、及びＬ３ドメインを含む、請求項４１に記載の方法。
【請求項４３】
好酸球性喘息−慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）オーバーラップ症候群（ＡＣＯＳ）の処置または阻害方法であって、イントロンＩＬ１ＲＬ１バリアントｒｓ１４２０１０１（配列番号：３５７）もしくはその連鎖不平衡にあるバリアント中に、ＩＬ３３バリアントｒｓ１３４２３２６（配列番号：３５８）もしくはその連鎖不平衡にあるバリアント中に、または前記イントロンＩＬ１ＲＬ１バリアントｒｓ１４２０１０１（配列番号：３５７）もしくはその連鎖不平衡にあるバリアント及び前記ＩＬ３３バリアントｒｓ１３４２３２６（配列番号：３５８）もしくはその連鎖不平衡にあるバリアント中の両方に好酸球性喘息と関連する１つ以上のリスクアレルを有する対象にＩＬ３３アンタゴニストを投与すること、またはＩＬ３３アンタゴニスト及びＩＬ−４Ｒアンタゴニストを投与することを含み、好酸球性ＣＯＰＤが前記対象内で処置または阻害されるものである、前記方法。
【請求項４４】
前記対象が、前記ＩＬ１ＲＬ１バリアントｒｓ１４２０１０１（配列番号：３５７）またはその連鎖不平衡にあるバリアント中に好酸球性ＡＣＯＳと関連する少なくとも１つのリスクアレルを有する、請求項４３に記載の処置方法。
【請求項４５】
前記対象が、前記ＩＬ１ＲＬ１バリアントｒｓ１４２０１０１（配列番号：３５７）またはその連鎖不平衡にあるバリアント中に好酸球性ＡＣＯＳと関連する２つのリスクアレルを有する、請求項４３または４４に記載の処置方法。
【請求項４６】
前記対象が、前記ＩＬ３３バリアントｒｓ１３４２３２６（配列番号：３５８）またはその連鎖不平衡にあるバリアント中に好酸球性ＡＣＯＳと関連する少なくとも１つのリスクアレルを有する、請求項４３に記載の処置方法。
【請求項４７】
前記対象が、前記ＩＬ３３バリアントｒｓ１３４２３２６（配列番号：３５８）またはその連鎖不平衡にあるバリアント中に好酸球性ＡＣＯＳと関連する２つのリスクアレルを有する、請求項４３または４６に記載の処置方法。
【請求項４８】
前記対象が、前記ＩＬ３３バリアントｒｓ１３４２３２６（配列番号：３５８）またはその連鎖不平衡にあるバリアント中に好酸球性ＡＣＯＳと関連する少なくとも１つのリスクアレルをさらに有する、請求項４４または４５に記載の処置方法。
【請求項４９】
前記対象が、前記ＩＬ３３バリアントｒｓ１３４２３２６（配列番号：３５８）またはその連鎖不平衡にあるバリアント中に好酸球性ＡＣＯＳと関連する２つのリスクアレルをさらに有する、請求項４４、４５、または４８のいずれか１項に記載の処置方法。
【請求項５０】
前記方法が、前記対象にＩＬ３３アンタゴニストを投与することを含む、請求項４３〜４９のいずれか１項に記載の方法。
【請求項５１】
前記方法が、前記対象にＩＬ３３アンタゴニスト及びＩＬ−４Ｒアンタゴニストを投与することを含む、請求項４３〜４９のいずれか１項に記載の方法。
【請求項５２】
前記ＩＬ３３アンタゴニストがＩＬ３３トラップを含む、請求項４３〜５１のいずれか１項に記載の方法。
【請求項５３】
前記ＩＬ３３トラップが、ＩＬ１ＲＬ１のＩＬ３３結合部分を含む第１ＩＬ３３結合ドメイン及びＩＬ−１ＲＡｃＰの細胞外部分を含む第２ＩＬ３３結合ドメインを含む、請求項５２に記載の方法。
【請求項５４】
前記ＩＬ３３アンタゴニストが、ＩＬ３３に特異的に結合する抗体またはその抗原結合断片を含む、請求項４３〜５１のいずれか１項に記載の方法。
【請求項５５】
ＩＬ３３に特異的に結合する前記抗体またはその抗原結合断片が、配列番号：２７４の前記Ｈ１、Ｈ２、及びＨ３ドメインならびに配列番号：２８２の前記Ｌ１、Ｌ２、及びＬ３ドメインを含む、請求項５４に記載の方法。
【請求項５６】
前記ＩＬ−４Ｒアンタゴニストが、ＩＬ−４Ｒに特異的に結合する抗体またはその抗原結合断片を含む、請求項４３〜４９または５１〜５５のいずれか１項に記載の方法。
【請求項５７】
ＩＬ−４Ｒに特異的に結合する前記抗体またはその抗原結合断片が、配列番号：３３７の前記Ｈ１、Ｈ２、及びＨ３ドメインならびに配列番号：３３８の前記Ｌ１、Ｌ２、及びＬ３ドメインを含む、請求項５６に記載の方法。
【請求項５８】
好酸球性喘息、アレルギー性鼻炎、好酸球性喘息−慢性閉塞性肺疾患オーバーラップ症候群（ＡＣＯＳ）、高好酸球好酸球性喘息、高好酸球アレルギー性鼻炎、高好酸球好酸球性ＡＣＯＳ、または鼻茸の患者が、前記イントロンＩＬ１ＲＬ１バリアントｒｓ１４２０１０１（配列番号：３５７）もしくはその連鎖不平衡にあるバリアント中に、ＩＬ３３バリアントｒｓ１３４２３２６（配列番号：３５８）もしくはその連鎖不平衡にあるバリアント中に、またはイントロンＩＬ１ＲＬ１バリアントｒｓ１４２０１０１（配列番号：３５７）もしくはその連鎖不平衡にあるバリアント及び前記ＩＬ３３バリアントｒｓ１３４２３２６（配列番号：３５８）もしくはその連鎖不平衡にあるバリアント中の両方に好酸球性喘息、アレルギー性鼻炎、または好酸球性ＡＣＯＳと関連する１つ以上のリスクアレルを有する場合に、好酸球性喘息、アレルギー性鼻炎、好酸球性喘息−慢性閉塞性肺疾患オーバーラップ症候群（ＡＣＯＳ）、高好酸球好酸球性喘息、高好酸球アレルギー性鼻炎、高好酸球好酸球性ＡＣＯＳ、または鼻茸のいずれか１つの処置または阻害に使用するための、ＩＬ３３アンタゴニストまたはＩＬ３３アンタゴニスト及びＩＬ−４Ｒアンタゴニストの組合せ。
【請求項５９】
好酸球性喘息の前記処置または阻害に使用するための、請求項５８に記載のＩＬ３３アンタゴニストまたはＩＬ３３アンタゴニスト及びＩＬ−４Ｒアンタゴニストの組合せ。
【請求項６０】
アレルギー性鼻炎の前記処置または阻害に使用するための、請求項５８に記載のＩＬ３３アンタゴニストまたはＩＬ３３アンタゴニスト及びＩＬ−４Ｒアンタゴニストの組合せ。
【請求項６１】
好酸球性ＡＣＯＳの前記処置または阻害に使用するための、請求項５８に記載のＩＬ３３アンタゴニストまたはＩＬ３３アンタゴニスト及びＩＬ−４Ｒアンタゴニストの組合せ。
【請求項６２】
高好酸球好酸球性喘息の前記処置または阻害に使用するための、請求項５８に記載のＩＬ３３アンタゴニストまたはＩＬ３３アンタゴニスト及びＩＬ−４Ｒアンタゴニストの組合せ。
【請求項６３】
高好酸球アレルギー性鼻炎の前記処置または阻害に使用するための、請求項５８に記載のＩＬ３３アンタゴニストまたはＩＬ３３アンタゴニスト及びＩＬ−４Ｒアンタゴニストの組合せ。
【請求項６４】
高好酸球好酸球性ＡＣＯＳの前記処置または阻害に使用するための、請求項５８に記載のＩＬ３３アンタゴニストまたはＩＬ３３アンタゴニスト及びＩＬ−４Ｒアンタゴニストの組合せ。
【請求項６５】
鼻茸の前記処置または阻害に使用するための、請求項５８に記載のＩＬ３３アンタゴニストまたはＩＬ３３アンタゴニスト及びＩＬ−４Ｒアンタゴニストの組合せ。
【請求項６６】
前記ＩＬ３３アンタゴニストがＩＬ３３トラップを含む、請求項５８〜６５のいずれか１項に記載のＩＬ３３アンタゴニストまたはＩＬ３３アンタゴニスト及びＩＬ−４Ｒアンタゴニストの組合せ。
【請求項６７】
前記ＩＬ３３トラップが、ＩＬ１ＲＬ１のＩＬ３３結合部分を含む第１ＩＬ３３結合ドメイン及びＩＬ−１ＲＡｃＰの細胞外部分を含む第２ＩＬ３３結合ドメインを含む、請求項６６に記載のＩＬ３３アンタゴニストまたはＩＬ３３アンタゴニスト及びＩＬ−４Ｒアンタゴニストの組合せ。
【請求項６８】
前記ＩＬ３３アンタゴニストが、ＩＬ３３に特異的に結合する抗体またはその抗原結合断片を含む、請求項５８〜６５のいずれか１項に記載のＩＬ３３アンタゴニストまたはＩＬ３３アンタゴニスト及びＩＬ−４Ｒアンタゴニストの組合せ。
【請求項６９】
前記抗体またはその抗原結合断片が、配列番号：２７４の前記Ｈ１、Ｈ２、及びＨ３ドメインならびに配列番号：２８２の前記Ｌ１、Ｌ２、及びＬ３ドメインを含む、請求項６８に記載のＩＬ３３アンタゴニストまたはＩＬ３３アンタゴニスト及びＩＬ−４Ｒアンタゴニストの組合せ。
【請求項７０】
前記ＩＬ−４Ｒアンタゴニストが、ＩＬ−４Ｒに特異的に結合する抗体またはその抗原結合断片を含む、請求項５８〜６９のいずれか１項に記載のＩＬ３３アンタゴニストまたはＩＬ３３アンタゴニスト及びＩＬ−４Ｒアンタゴニストの組合せ。
【請求項７１】
ＩＬ−４Ｒに特異的に結合する前記抗体またはその抗原結合断片が、配列番号：３３７の前記Ｈ１、Ｈ２、及びＨ３ドメインならびに配列番号：３３８の前記Ｌ１、Ｌ２、及びＬ３ドメインを含む、請求項７０に記載のＩＬ３３アンタゴニストまたはＩＬ３３アンタゴニスト及びＩＬ−４Ｒアンタゴニストの組合せ。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本開示は、全般的に精密医療の分野に関する。より具体的には、本開示は、ＩＬ３３及びＩＬ１ＲＬ１をコードする遺伝子におけるリスクアレルの検出に関し、そのリスクアレルは、炎症性肺疾患の状態及びそれらの好酸球サブタイプのうち１つ以上を発症するリスクが高い炎症性肺疾患患者を階層化するために使用され得る。
【背景技術】
【０００２】
特許、公開された出願、アクセッション番号、技術論文及び学術論文を含む様々な出版物が、本明細書全体にわたって引用される。これらの引用出版物の各々は、その全体があらゆる目的のために本明細書に参照によって組み込まれる。
【０００３】
喘息及び慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）は、非常に蔓延している閉塞性肺疾患であり、実質的には満たされていない臨床的要求及び大幅な診断重複を伴うため、喘息−ＣＯＰＤオーバーラップ症候群（ＡＣＯＳ）と称されるこれらの状態の共通部分に関心が高まっている。２つの疾患が共通の病因を有している（いわゆる「オランダ仮説」）か、または独立した機序的原因を有する（いわゆる「イギリス仮説」）かどうかに関して、長年にわたって論争が続いている。最近、閉塞性肺疾患を含む、共通した複合的疾患リスクに対する遺伝的寄与の解明に進展があったにもかかわらず、喘息とＣＯＰＤとを関連付ける十分に確立された遺伝的知見は一切存在しない。
【０００４】
ゲノムワイド関連解析（ＧＷＡＳ）によって、インターロイキン−３３（ＩＬ３３）及び／またはＩＬ１ＲＬ１の、喘息と関連する共通した遺伝的バリアントが同定された。ＩＬ３３は、炎症性サイトカインかつインターロイキン−１（ＩＬ−１）サイトカインファミリーのメンバーであって、肺上皮を含む関門組織における細胞のサブセット中で発現される。ＩＬ３３は、ＩＬ３３特異的受容体のＩＬ１ＲＬ１（ＳＴ２またはＩＬ３３Ｒとしても知られる）と、ＩＬ−１ファミリーのいくつかの受容体に共通しているＩＬ−１ＲＡｃＰとの共受容体で構成されるヘテロ二量体受容体複合体を介してシグナル伝達する。
【０００５】
損傷組織中において、元より隔離されていたＩＬ３３は、壊死細胞によって細胞外区画中に受動的に放出され、炎症及び修復経路を活性化させる内因性「危険シグナル」（アラーミン）として機能する。タバコの煙は、マウスの肺上皮細胞中でＩＬ３３発現を誘導し、ＩＬ３３発現は、喘息及びＣＯＰＤ患者の両方の気管支上皮で上昇する。炎症性浸潤物及び炎症性サイトカインがすでに存在する疾患状態においては、ＩＬ３３応答細胞のプールが増加し、ＩＬ３３シグナル伝達によってさらに免疫応答が増幅され、病的炎症及び過度な免疫応答を招いて、ＣＯＰＤなどの慢性炎症性疾患を引き起こす可能性がある。
【０００６】
喘息及びＣＯＰＤの両方に共通する症状を特徴とする、喘息−ＣＯＰＤオーバーラップ症候群（ＡＣＯＳ）も存在している。それにもかかわらず、オーバーラップする共通の特徴のせいで、喘息とＣＯＰＤを区別する難しさを考慮すると、ＡＣＯＳを診断する能力には臨床的課題が残っている。
【０００７】
コルチコステロイド（標準治療）に対する抵抗性が非常にありふれたものであるため、喘息、ＣＯＰＤ、及びＡＣＯＳの処置課題も残っている。同様に、ＩＬ−５療法などの他の処置は、喘息及びＣＯＰＤの好酸球サブセットに対して一切良好には機能しない。
【０００８】
したがって、喘息、ＣＯＰＤ、及びＡＣＯＳ間で区別をつけること、加えてこれらの障害の好酸球サブセットを有する患者をより正確に同定することが、当該技術分野において依然として必要である。適切な診断は、治療レジメンをより的確に指示し、患者の転帰を改善し得る。
【発明の概要】
【０００９】
本開示の第１の態様では、好酸球性喘息を処置または阻害する方法は、イントロンＩＬ１ＲＬ１バリアントｒｓ１４２０１０１（配列番号：３５７）もしくはその連鎖不平衡にあるバリアント中に、ＩＬ３３バリアントｒｓ１３４２３２６（配列番号：３５８）もしくはその連鎖不平衡にあるバリアント中に、またはイントロンＩＬ１ＲＬ１バリアントｒｓ１４２０１０１（配列番号：３５７）もしくはその連鎖不平衡にあるバリアント及びＩＬ３３バリアントｒｓ１３４２３２６（配列番号：３５８）もしくはその連鎖不平衡にあるバリアント中の両方に好酸球性喘息と関連する１つ以上のリスクアレルを有する対象にＩＬ３３アンタゴニストを投与すること、またはＩＬ３３アンタゴニスト及びＩＬ−４Ｒアンタゴニストを投与することを含む。ＩＬ３３アンタゴニスト及び／またはＩＬ−４Ｒアンタゴニストの投与は、好酸球性喘息が対象内で処置または阻害されるものである。
【００１０】
本開示の第２の態様では、好酸球性慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）を処置または阻害する方法は、イントロンＩＬ１ＲＬ１バリアントｒｓ１４２０１０１（配列番号：３５７）もしくはその連鎖不平衡にあるバリアント中に、ＩＬ３３バリアントｒｓ１３４２３２６（配列番号：３５８）もしくはその連鎖不平衡にあるバリアント中に、またはイントロンＩＬ１ＲＬ１バリアントｒｓ１４２０１０１（配列番号：３５７）もしくはその連鎖不平衡にあるバリアント及びＩＬ３３バリアントｒｓ１３４２３２６（配列番号：３５８）もしくはその連鎖不平衡にあるバリアント中の両方に好酸球性ＣＯＰＤと関連する１つ以上のリスクアレルを有する対象にＩＬ３３アンタゴニストを投与すること、またはＩＬ３３アンタゴニスト及びＩＬ−４Ｒアンタゴニストを投与することを含む。ＩＬ３３アンタゴニスト及び／またはＩＬ−４Ｒアンタゴニストの投与は、好酸球性ＣＯＰＤが対象内で処置または阻害されるものである。
【００１１】
本開示の第３の態様では、好酸球性喘息−慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）オーバーラップ症候群（ＡＣＯＳ）を処置または阻害する方法は、イントロンＩＬ１ＲＬ１バリアントｒｓ１４２０１０１（配列番号：３５７）もしくはその連鎖不平衡にあるバリアント中に、ＩＬ３３バリアントｒｓ１３４２３２６（配列番号：３５８）もしくはその連鎖不平衡にあるバリアント中に、またはイントロンＩＬ１ＲＬ１バリアントｒｓ１４２０１０１（配列番号：３５７）もしくはその連鎖不平衡にあるバリアント及びＩＬ３３バリアントｒｓ１３４２３２６（配列番号：３５８）もしくはその連鎖不平衡にあるバリアント中の両方に好酸球性喘息と関連する１つ以上のリスクアレルを有する対象にＩＬ３３アンタゴニストを投与すること、またはＩＬ３３アンタゴニスト及びＩＬ−４Ｒアンタゴニストを投与することを含む。ＩＬ３３アンタゴニスト及び／またはＩＬ−４Ｒアンタゴニストの投与は、好酸球性ＣＯＰＤが対象内で処置または阻害されるものである。
【００１２】
本開示の第４の態様では、鼻茸を処置または阻害する方法は、イントロンＩＬ１ＲＬ１バリアントｒｓ１４２０１０１（配列番号：３５７）もしくはその連鎖不平衡にあるバリアント中に、ＩＬ３３バリアントｒｓ１３４２３２６（配列番号：３５８）もしくはその連鎖不平衡にあるバリアント中に、またはイントロンＩＬ１ＲＬ１バリアントｒｓ１４２０１０１（配列番号：３５７）もしくはその連鎖不平衡にあるバリアント及びＩＬ３３バリアントｒｓ１３４２３２６（配列番号：３５８）もしくはその連鎖不平衡にあるバリアント中の両方に鼻茸と関連する１つ以上のリスクアレルを有する対象にＩＬ３３アンタゴニストを投与すること、またはＩＬ３３アンタゴニスト及びＩＬ−４Ｒアンタゴニストを投与することを含む。ＩＬ３３アンタゴニスト及び／またはＩＬ−４Ｒアンタゴニストの投与は、鼻茸が対象内で処置または阻害されるものである。
【００１３】
本開示の第５の態様では、好酸球性喘息、好酸球性慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、または好酸球性喘息ＣＯＰＤオーバーラップ症候群（ＡＣＯＳ）の発症リスクを評価する方法は、
（Ａ）対象から得られた試料中のイントロンＩＬ１ＲＬ１バリアントｒｓ１４２０１０１（配列番号：３５７）もしくはその連鎖不平衡にあるバリアント中で、ＩＬ３３バリアントｒｓ１３４２３２６（配列番号：３５８）もしくはその連鎖不平衡にあるバリアント中で、またはイントロンＩＬ１ＲＬ１バリアントｒｓ１４２０１０１（配列番号：３５７）もしくはその連鎖不平衡にあるバリアント及びＩＬ３３バリアントｒｓ１３４２３２６（配列番号：３５８）もしくはその連鎖不平衡にあるバリアント中の両方で好酸球性喘息、好酸球性ＣＯＰＤ、または好酸球性ＡＣＯＳと関連する１つ以上のリスクアレルを検出するステップ、
（Ｂ）（ｉ）対象が、２番染色体ホモログの１つにおけるイントロンＩＬ１ＲＬ１バリアントｒｓ１４２０１０１（配列番号：３５７）もしくはその連鎖不平衡にあるバリアント中にリスクアレルまたは９番染色体ホモログの１つにおけるＩＬ３３バリアントｒｓ１３４２３２６（配列番号：３５８）もしくはその連鎖不平衡にあるバリアント中にリスクアレルを有する場合、対象にリスクスコア１を割り当てるステップ、
（Ｂ）（ｉｉ）対象が、２番染色体ホモログの両方におけるイントロンＩＬ１ＲＬ１バリアントｒｓ１４２０１０１（配列番号：３５７）もしくはその連鎖不平衡にあるバリアント中にリスクアレルを有する場合、対象が、９番染色体ホモログの両方におけるＩＬ３３バリアントｒｓ１３４２３２６（配列番号：３５８）もしくはその連鎖不平衡にあるバリアント中にリスクアレルを有する場合、または対象が、２番染色体ホモログの１つにおけるイントロンＩＬ１ＲＬ１バリアントｒｓ１４２０１０１（配列番号：３５７）もしくはその連鎖不平衡にあるバリアント中にリスクアレル及び９番染色体ホモログの１つにおけるＩＬ３３バリアントｒｓ１３４２３２６（配列番号：３５８）もしくはその連鎖不平衡にあるバリアント中にリスクアレルを有する場合、対象にリスクスコア２を割り当てるステップ、
（Ｂ）（ｉｉｉ）対象が、２番染色体ホモログの両方におけるイントロンＩＬ１ＲＬ１バリアントｒｓ１４２０１０１（配列番号：３５７）もしくはその連鎖不平衡にあるバリアント中にリスクアレル及び９番染色体ホモログの１つにおけるＩＬ３３バリアントｒｓ１３４２３２６（配列番号：３５８）もしくはその連鎖不平衡にあるバリアント中にリスクアレルを有する場合、または対象が、２番染色体ホモログの１つにおけるイントロンＩＬ１ＲＬ１バリアントｒｓ１４２０１０１（配列番号：３５７）もしくはその連鎖不平衡にあるバリアント中にリスクアレル及び９番染色体ホモログの両方におけるＩＬ３３バリアントｒｓ１３４２３２６（配列番号：３５８）もしくはその連鎖不平衡にあるバリアント中にリスクアレルを有する場合、対象にリスクスコア３を割り当てるステップ、あるいは
（Ｂ）（ｉｖ）対象が、２番染色体ホモログの両方におけるイントロンＩＬ１ＲＬ１バリアントｒｓ１４２０１０１（配列番号：３５７）またはその連鎖不平衡にあるバリアント中にリスクアレル及び９番染色体ホモログの両方におけるＩＬ３３バリアントｒｓ１３４２３２６（配列番号：３５８）またはその連鎖不平衡にあるバリアント中にリスクアレルを有する場合、対象にリスクスコア４を割り当てるステップ、ならびに
（Ｃ）好酸球性喘息、好酸球性ＣＯＰＤ、または好酸球性ＡＣＯＳの対象の発症リスクを分類し、リスクスコア１は、対象が好酸球性喘息の高好酸球サブセット、好酸球性ＣＯＰＤの高好酸球サブセット、または好酸球性ＡＣＯＳの高好酸球サブセットの発症リスクを有することを示し、リスクスコア２は、対象が好酸球性喘息の高好酸球サブセット、好酸球性ＣＯＰＤの高好酸球サブセット、または好酸球性ＡＣＯＳの高好酸球サブセットの上昇した発症リスクを有することを示し、リスクスコア３は、対象が好酸球性喘息の高好酸球サブセット、好酸球性ＣＯＰＤの高好酸球サブセット、または好酸球性ＡＣＯＳの高好酸球サブセットを発症するリスクが高いことを示し、リスクスコア４は、対象が好酸球性喘息の高好酸球サブセット、好酸球性ＣＯＰＤの高好酸球サブセット、または好酸球性ＡＣＯＳの高好酸球サブセットを発症するリスクが非常に高いことを示すステップを含む。本方法は、対象の好酸球性喘息、好酸球性ＣＯＰＤ、または好酸球性ＡＣＯＳの高好酸球サブセットを含む、好酸球性喘息、好酸球性ＣＯＰＤ、または好酸球性ＡＣＯＳのうち１つ以上を、対象にＩＬ３３アンタゴニストまたはＩＬ３３アンタゴニスト及びＩＬ−４Ｒアンタゴニストを投与することによって処置または阻害することをさらに含んでよい。
【００１４】
本開示の第６の態様では、ＩＬ３３アンタゴニストまたはＩＬ３３アンタゴニスト及びＩＬ−４Ｒアンタゴニストの組合せは、好酸球性喘息、好酸球性慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、好酸球性喘息−慢性閉塞性肺疾患オーバーラップ症候群（ＡＣＯＳ）、高好酸球好酸球性喘息、高好酸球好酸球性ＣＯＰＤ、高好酸球好酸球性ＡＣＯＳ、または鼻茸の患者が、イントロンＩＬ１ＲＬ１バリアントｒｓ１４２０１０１（配列番号：３５７）もしくはその連鎖不平衡にあるバリアント中に、ＩＬ３３バリアントｒｓ１３４２３２６（配列番号：３５８）もしくはその連鎖不平衡にあるバリアント中に、またはイントロンＩＬ１ＲＬ１バリアントｒｓ１４２０１０１（配列番号：３５７）もしくはその連鎖不平衡にあるバリアント及びＩＬ３３バリアントｒｓ１３４２３２６（配列番号：３５８）もしくはその連鎖不平衡にあるバリアント中の両方に好酸球性喘息、好酸球性ＣＯＰＤ、または好酸球性ＡＣＯＳと関連する１つ以上のリスクアレルを有する場合に、好酸球性喘息、好酸球性慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、好酸球性喘息−慢性閉塞性肺疾患オーバーラップ症候群（ＡＣＯＳ）、高好酸球好酸球性喘息、高好酸球好酸球性ＣＯＰＤ、高好酸球好酸球性ＡＣＯＳ、または鼻茸のいずれか１つの処置もしくは阻害に使用するもの、またはその処置もしくは阻害のための医薬品の製造に使用するものである。
【００１５】
これらの態様のいずれか１つによれば、対象は、イントロンＩＬ１ＲＬ１バリアントｒｓ１４２０１０１（配列番号：３５７）もしくはその連鎖不平衡にあるバリアント中に好酸球性喘息と関連する少なくとも１つのリスクアレルを有する可能性があるか、イントロンＩＬ１ＲＬ１バリアントｒｓ１４２０１０１（配列番号：３５７）もしくはその連鎖不平衡にあるバリアント中に好酸球性喘息と関連する２つのリスクアレルを有する可能性があるか、ＩＬ３３バリアントｒｓ１３４２３２６（配列番号：３５８）もしくはその連鎖不平衡にあるバリアント中に好酸球性喘息と関連する少なくとも１つのリスクアレルを有する可能性があるか、またはＩＬ３３バリアントｒｓ１３４２３２６（配列番号：３５８）もしくはその連鎖不平衡にあるバリアント中に好酸球性喘息と関連する２つのリスクアレルを有する可能性があり、ＩＬ３３バリアントｒｓ１３４２３２６（配列番号：３５８）もしくはその連鎖不平衡にあるバリアント中に好酸球性喘息と関連する少なくとも１つのリスクアレルをさらに有する可能性がある、及び／またはＩＬ３３バリアントｒｓ１３４２３２６（配列番号：３５８）もしくはその連鎖不平衡にあるバリアント中に好酸球性喘息と関連する２つのリスクアレルをさらに有する可能性がある。
【００１６】
これらの態様のいずれか１つによれば、本方法は、対象にＩＬ３３アンタゴニストを投与することを含んでよいか、もしくは本使用は、対象にＩＬ３３アンタゴニストを投与するためであってよいか、または本方法は、対象にＩＬ３３アンタゴニスト及びＩＬ−４Ｒアンタゴニストを投与することを含んでよいか、もしくは本使用は、対象にＩＬ３３アンタゴニスト及びＩＬ−４Ｒアンタゴニストを投与するためであってよい。ＩＬ３３アンタゴニストは、ＩＬ３３トラップまたはＩＬ３３に特異的に結合する抗体を含んでよい。ＩＬ−４Ｒアンタゴニストは、ＩＬ−４Ｒに特異的に結合する抗体を含んでよい。
【００１７】
これらの態様のいずれかによれば、ＩＬ３３トラップは、ＩＬ１ＲＬ１のＩＬ３３結合部分を含む第１ＩＬ３３結合ドメイン及びＩＬ−１ＲＡｃＰの細胞外部分を含む第２ＩＬ３３結合ドメインを含んでよい。これらの態様のいずれかによれば、ＩＬ３３に特異的に結合する抗体またはその抗原結合断片は、配列番号：２７４のＨ１、Ｈ２、及びＨ３ドメインならびに配列番号：２８２のＬ１、Ｌ２、及びＬ３ドメインを含んでよい。これらの態様のいずれかによれば、ＩＬ−４Ｒに特異的に結合する抗体またはその抗原結合断片は、配列番号：３３７のＨ１、Ｈ２、及びＨ３ドメインならびに配列番号：３３８のＬ１、Ｌ２、及びＬ３ドメインを含んでよい。
【図面の簡単な説明】
【００１８】
【図１】パネルＡ、Ｂ、Ｃ、及びＤは、ＩＬ３３アンタゴニストの、互いに関連した個々の成分に関する４つの例示的な配置を示す。パネルＡは、第１ＩＬ３３結合ドメイン（Ｄ１）が、第１多量体化ドメイン（Ｍ１）のＮ末端に結合し、第２ＩＬ３３結合ドメイン（Ｄ２）が、第２多量体化ドメイン（Ｍ２）のＮ末端に結合している配置を示す。Ｄ１は白い四角として示され、Ｄ２は黒い四角として示されて、Ｄ１及びＤ２が、異なるＩＬ３３結合タンパク質に由来することを示している。パネルＢは、第１ＩＬ３３結合ドメイン（Ｄ１）が、第１多量体化ドメイン（Ｍ１）のＮ末端に結合し、第２ＩＬ３３結合ドメイン（Ｄ２）が、第２多量体化ドメイン（Ｍ２）のＣ末端に結合している配置を示す。Ｄ１は白い四角として示され、Ｄ２は黒い四角として示されて、Ｄ１及びＤ２が、異なるＩＬ３３結合タンパク質に由来することを示している。パネルＣ及びＤは、４つのＩＬ３３結合ドメイン、すなわちＤ１、Ｄ２、Ｄ３及びＤ４を含む配置を示す。これらの配置では、Ｄ３−Ｄ１−Ｍ１及びＤ４−Ｄ２−Ｍ２は一列に並んで結合し、Ｄ３はＤ１のＮ末端に結合し、Ｄ１はＭ１のＮ末端に結合し、Ｄ４はＤ２のＮ末端に結合し、Ｄ２はＭ２のＮ末端に結合している。パネルＣでは、Ｄ３及びＤ４は、互いに同一または実質的に同一であり、Ｄ１及びＤ２は互いに同一または実質的に同一である。パネルＤでは、Ｄ１及びＤ４は、互いに同一または実質的に同一であり、Ｄ３及びＤ２は互いに同一または実質的に同一である。
【図２−１】パネルＡ、Ｂ、Ｃ、及びＤは、（パネルＡ）好酸球数（パネルＢ）ｌｏｇ１０好酸球数とのｒｓ１４２０１０１（ＩＬ１ＲＬ１、ＳＴ２としても知られる）、ｒｓ１３４２３２６（ＩＬ３３）及びｒｓ１４６５９７５８７（ＩＬ３３−ｐＬｏＦ）の関連を示す。ｒｓ１４２０１０１及びｒｓ１３４２３２６リスクアレルの総量と（パネルＣ）好酸球数（パネルＤ）ｌｏｇ１０好酸球数との関連も示されている。好酸球数及びｌｏｇ１０好酸球数の効果量及びＰ値を、線形回帰を使用し、年齢、年齢２、性別、喫煙状態及び祖先の主成分に関する調整を用いて算出した。Ｐ値及び効果量／オッズ比を、個々のスコアに対して推定し、いずれの場合もリスクアレルを持たない個体と比較した。さらに、全体的なアレル効果ｐ値が示されている。
【図２−２】同上。
【図２−３】同上。
【図２−４】同上。
【図３−１】パネルＡ、Ｂ、及びＣは、（パネルＡ）喘息、（パネルＢ）高好酸球喘息サブセット及び（パネルＣ）低好酸球喘息サブセットとのｒｓ１４２０１０１（ＩＬ１ＲＬ１、ＳＴ２としても知られる）、ｒｓ１３４２３２６（ＩＬ３３）及びｒｓ１４６５９７５８７（ＩＬ３３−ｐＬｏＦ）の関連を示す。疾患に対するオッズ比を、ロジスティック回帰を使用し、年齢、年齢２、性別、喫煙状態及び祖先の主成分に関する調整を用いて算出した。
【図３−２】同上。
【図３−３】同上。
【図４−１】パネルＡ、Ｂ、及びＣは、（パネルＡ）ＣＯＰＤ、（パネルＢ）高好酸球ＣＯＰＤサブセット及び（パネルＣ）低好酸球ＣＯＰＤサブセットとのｒｓ１４２０１０１（ＩＬ１ＲＬ１、ＳＴ２としても知られる）、ｒｓ１３４２３２６（ＩＬ３３）及びｒｓ１４６５９７５８７（ＩＬ３３−ｐＬｏＦ）の関連を示す。疾患に対するオッズ比を、ロジスティック回帰を使用し、年齢、年齢２、性別、喫煙状態及び祖先の主成分に関する調整を用いて算出した。
【図４−２】同上。
【図４−３】同上。
【図５−１】パネルＡ、Ｂ、及びＣは、（パネルＡ）ＡＣＯＳ、（パネルＢ）高好酸球ＡＣＯＳサブセット及び（パネルＣ）低好酸球ＡＣＯＳサブセットとのｒｓ１４２０１０１（ＩＬ１ＲＬ１、ＳＴ２としても知られる）、ｒｓ１３４２３２６（ＩＬ３３）及びｒｓ１４６５９７５８７（ＩＬ３３−ｐＬｏＦ）の関連を示す。疾患に対するオッズ比を、ロジスティック回帰を使用し、年齢、年齢２、性別、喫煙状態及び祖先の主成分に関する調整を用いて算出した。
【図５−２】同上。
【図５−３】同上。
【図６−１】パネルＡ、Ｂ、及びＣは、（パネルＡ）喘息（パネルＢ）ＣＯＰＤ及び（パネルＣ）ＡＣＯＳとの遺伝子スコア（ｒｓ１４２０１０１及びｒｓ１３４２３２６リスクアレルの総量）の関連を示す。Ｐ値オッズ比を、個々のスコアに対して推定し、いずれの場合もリスクアレルを持たない個体と比較した。さらに、全体的な傾向検定ｐ値が示されている。
【図６−２】同上。
【図６−３】同上。
【図７−１】パネルＡ、Ｂ、及びＣは、（パネルＡ）高及び低好酸球喘息（パネルＢ）高及び低好酸球ＣＯＰＤならびに（パネルＣ）高及び低好酸球ＡＣＯＳとの遺伝子スコア（ｒｓ１４２０１０１及びｒｓ１３４２３２６リスクアレルの総量）の関連を示す。Ｐ値オッズ比を、個々のスコアに対して推定し、いずれの場合もリスクアレルを持たない個体と比較した。さらに、全体的な傾向検定ｐ値が示されている。
【図７−２】同上。
【図７−３】同上。
【図８−１】パネルＡ、Ｂ、Ｃ、及びＤは、捕捉試薬（パネルＡ）ＶＣＲｏｍｅ及び（パネルＢ）ｘＧＥＮ、ならびにチッププラットフォーム（パネルＣ）ＯＭＮＩ及び（パネルＤ）ＧＳＡによって階層化された試験参加者の臨床的特徴を示す。
【図８−２】同上。
【図９−１】パネルＡ及びＢは、（パネルＡ）アレルギー性鼻炎及び（パネルＢ）鼻茸とのｒｓ１４２０１０１（ＩＬ１ＲＬ１、ＳＴ２としても知られる）、ｒｓ１３４２３２６（ＩＬ３３）、ｒｓ１４６５９７５８７（ＩＬ３３−ｐＬｏＦ）ならびに遺伝子スコア（ｒｓ１４２０１０１及びｒｓ１３４２３２６リスクアレルの総量）の関連を示す。疾患に対するオッズ比を、ロジスティック回帰を使用し、年齢、年齢２、性別、喫煙状態及び祖先の主成分に関する調整を用いて算出した。共通するリスクバリアントの総量を試験するために、Ｐ値及びオッズ比を、個々のスコアに対して推定し、いずれの場合もリスクアレルを持たない個体と比較した。さらに、全体的な傾向検定ｐ値が示されている。
【図９−２】同上。
【発明を実施するための形態】
【００１９】
本開示の態様に関する様々な用語が、本明細書及び特許請求の範囲全体にわたって使用される。そのような用語は、別段の指示がない限り、当該技術分野において所与であるそれらの通常の意味とする。その他の具体的に定義された用語は、本明細書で提供される定義と一致する方法で解釈されることとする。
【００２０】
本明細書で使用される場合、単数形「ａ」、「ａｎ」、及び「ｔｈｅ」は、別段の明確な記述がない限り、複数の指示対象を含む。
「対象」及び「患者」という用語は、同じ意味として使用され、任意の動物を含む。哺乳動物が好ましく、コンパニオン（例えば、ネコ、イヌ）及び家畜哺乳動物（例えば、ブタ、ウマ、雌ウシ）、加えてげっ歯類を含み、マウス、ウサギ、及びラット、モルモット、ならびにその他のげっ歯類を含む。非ヒト霊長類がより好ましく、ヒトが非常に好ましい。
【００２１】
「単離した」という用語は、ヒトの手によって自然環境から除去及び／または変化されたことを意味する。
「リスクアレル」は、疾患、障害、または状態を発症するリスクと関連する、特定の位置の代替的多型を含む。
【００２２】
「連鎖不平衡」は、２つ以上の遺伝子座におけるアレルの非ランダム関連を指す。
本開示に従って、ＩＬ１Ｒ１  ｒｓ１４２０１０１（配列番号：３５７）及びＩＬ３３  ｒｓ１３４２３２６（配列番号：３５８）の一塩基多型が、喘息、加えて喘息、ＣＯＰＤ、及びＡＣＯＳの高好酸球サブセットのリスク増加と関連することが観察されている。加えて、両方の遺伝子座にわたってこれらのリスクアレルの量をより多く持つ個体は、付随するより大きな疾患リスクを有し、ＩＬ３３における希少ｐＬＯＦバリアントのヘテロ接合体キャリアは、生涯の好酸球数中央値が低く、喘息のリスク低減を反映する傾向、加えて喘息、ＣＯＰＤ、及びＡＣＯＳの高好酸球サブセットのリスク低減を反映する傾向を有したことが観察された。ＩＬ３３経路の遺伝的バリアントは、これまでＣＯＰＤとは関連していないと考えられていて、さらに、喘息とＣＯＰＤとの遺伝的関連またはＩＬ３３経路と喘息、ＣＯＰＤ及びＡＣＯＳの高好酸球サブセットに関するリスクとの遺伝的関連は、一切報告されていないと考えられている。さらに、ＩＬ１Ｒ１  ｒｓ１４２０１０１及びＩＬ３３  ｒｓ１３４２３２６の一塩基多型は、個別でも全体として考慮しても、鼻茸及びアレルギー性鼻炎のリスク増加と関連することが観察された。これらのデータは、喘息、ＣＯＰＤ、及びＡＣＯＳなどの閉塞性肺疾患の高好酸球型、加えて鼻茸及びそれらの高好酸球サブセットなどのその他の上気道疾患の処置においてインターロイキン−３３を遮断する役割を示している。したがって、本開示は、喘息、ＣＯＰＤ、及びＡＣＯＳ、特にそれらの高好酸球サブセットのリスクを同定し、それらを診断、処置、及び阻害する方法を特徴とする。
【００２３】
第１の態様では、本開示は、炎症性肺疾患の発症リスクを評価する方法を特徴とする。炎症性肺疾患は、喘息、ＣＯＰＤ、ＡＣＯＳ、または鼻茸のうち１つ以上であってよい。喘息は、好酸球性喘息または高好酸球好酸球性喘息であってよい。ＣＯＰＤは、好酸球性ＣＯＰＤまたは高好酸球好酸球性ＣＯＰＤであってよい。ＡＣＯＳは、好酸球性ＡＣＯＳまたは高好酸球好酸球性ＡＣＯＳであってよい。概して、本方法は、そのような炎症性肺疾患の発症リスクと関連する１つ以上のリスクアレルを検出することを含む。
【００２４】
いくつかの実施形態では、本方法は、対象から得られた試料中のイントロンＩＬ１ＲＬ１バリアントｒｓ１４２０１０１（配列番号：３５７）もしくはその連鎖不平衡にあるバリアント中で、ＩＬ３３バリアントｒｓ１３４２３２６（配列番号：３５８）もしくはその連鎖不平衡にあるバリアント中で、またはイントロンＩＬ１ＲＬ１バリアントｒｓ１４２０１０１（配列番号：３５７）もしくはその連鎖不平衡にあるバリアント及びＩＬ３３バリアントｒｓ１３４２３２６（配列番号：３５８）もしくはその連鎖不平衡にあるバリアント中の両方で好酸球性喘息、好酸球性ＣＯＰＤ、好酸球性ＡＣＯＳ、または鼻茸と関連する１つ以上のリスクアレルを検出すること、次いで対象が、２番染色体ホモログの１つにおけるイントロンＩＬ１ＲＬ１バリアントｒｓ１４２０１０１（配列番号：３５７）もしくはその連鎖不平衡にあるバリアント中にリスクアレルまたは９番染色体ホモログの１つにおけるＩＬ３３バリアントｒｓ１３４２３２６（配列番号：３５８）もしくはその連鎖不平衡にあるバリアント中にリスクアレルを有する場合、対象にリスクスコア１を割り当てること、対象が、２番染色体ホモログの両方におけるイントロンＩＬ１ＲＬ１バリアントｒｓ１４２０１０１（配列番号：３５７）もしくはその連鎖不平衡にあるバリアント中にリスクアレルを有する場合、対象が、９番染色体ホモログの両方におけるＩＬ３３バリアントｒｓ１３４２３２６（配列番号：３５８）もしくはその連鎖不平衡にあるバリアント中にリスクアレルを有する場合、または対象が、２番染色体ホモログの１つにおけるイントロンＩＬ１ＲＬ１バリアントｒｓ１４２０１０１（配列番号：３５７）もしくはその連鎖不平衡にあるバリアント中にリスクアレル及び９番染色体ホモログの１つにおけるＩＬ３３バリアントｒｓ１３４２３２６（配列番号：３５８）もしくはその連鎖不平衡にあるバリアント中にリスクアレルを有する場合、対象にリスクスコア２を割り当てること、対象が、２番染色体ホモログの両方におけるイントロンＩＬ１ＲＬ１バリアントｒｓ１４２０１０１（配列番号：３５７）もしくはその連鎖不平衡にあるバリアント中にリスクアレル及び９番染色体ホモログの１つにおけるＩＬ３３バリアントｒｓ１３４２３２６（配列番号：３５８）もしくはその連鎖不平衡にあるバリアント中にリスクアレルを有する場合、または対象が、２番染色体ホモログの１つにおけるイントロンＩＬ１ＲＬ１バリアントｒｓ１４２０１０１（配列番号：３５７）もしくはその連鎖不平衡にあるバリアント中にリスクアレル及び９番染色体ホモログの両方におけるＩＬ３３バリアントｒｓ１３４２３２６（配列番号：３５８）もしくはその連鎖不平衡にあるバリアント中にリスクアレルを有する場合、対象にリスクスコア３を割り当てること、あるいは対象が、２番染色体ホモログの両方におけるイントロンＩＬ１ＲＬ１バリアントｒｓ１４２０１０１（配列番号：３５７）またはその連鎖不平衡にあるバリアント中にリスクアレル及び９番染色体ホモログの両方におけるＩＬ３３バリアントｒｓ１３４２３２６（配列番号：３５８）またはその連鎖不平衡にあるバリアント中にリスクアレルを有する場合、対象にリスクスコア４を割り当てることを含む。
【００２５】
いくつかの実施形態では、ＩＬ３３バリアントｒｓ１３４２３２６のリスクアレルは、一塩基多型（ＳＮＰ）を含む。いくつかの詳細な実施形態では、ＩＬ３３バリアントは、ＳＮＰ９：６１９００７６：Ａ：Ｃ（ヒトゲノムＧＲＣｈ３８）を含む。バリアントｒｓ１３４２３２６は、以下の核酸配列を含む：ＣＣＡＡＴＣＴＴＴＴＣＴＣＡＴＧＡＡＧＡＣＡＣＣＡ［Ｇ／Ｔ］ＣＡＴＧＡＣＣＴＣＴＴＡＴＴＣＴＴＡＴＴＴＡＴＡＴ（配列番号：３５８）。
【００２６】
いくつかの実施形態では、ＩＬ１ＲＬ１バリアントｒｓ１４２０１０１のリスクアレルは、ＳＮＰを含む。いくつかの詳細な実施形態では、ＩＬ１ＲＬ１バリアントは、ＳＮＰ２：１０２３４１２５６：Ｃ：Ｔ（ヒトゲノムＧＲＣｈ３８）を含む。バリアントｒｓ１４２０１０１は、以下の核酸配列を含む：ＴＡＴＡＣＣＡＴＣＡＣＡＡＡＧＣＣＴＣＴＣＡＴＴＡ［Ａ／Ｇ］ＡＣＴＴＴＧＡＡＴＣＣＡＡＴＧＡＧＴＡＴＴＡＣＴＡ（配列番号：３５７）。
【００２７】
検出は、任意の好適な手法によるものであってよい。リスクアレルは、例えば、相補的核酸プローブを用いたシーケンシング、ジェノタイピング、インピュテーション、プロービングによって検出されてよい。
【００２８】
本方法は、好酸球性喘息、好酸球性ＣＯＰＤ、または好酸球性ＡＣＯＳの対象の発症リスクを分類することをさらに含んでよく、リスクスコア１は、対象が好酸球性喘息の高好酸球サブセット、好酸球性ＣＯＰＤの高好酸球サブセット、または好酸球性ＡＣＯＳの高好酸球サブセットの発症リスクを有することを示し、リスクスコア２は、対象が好酸球性喘息の高好酸球サブセット、好酸球性ＣＯＰＤの高好酸球サブセット、または好酸球性ＡＣＯＳの高好酸球サブセットの上昇した発症リスクを有することを示し、リスクスコア３は、対象が好酸球性喘息の高好酸球サブセット、好酸球性ＣＯＰＤの高好酸球サブセット、または好酸球性ＡＣＯＳの高好酸球サブセットを発症するリスクが高いことを示し、リスクスコア４は、対象が好酸球性喘息の高好酸球サブセット、好酸球性ＣＯＰＤの高好酸球サブセット、または好酸球性ＡＣＯＳの高好酸球サブセットを発症するリスクが非常に高いことを示す。このスケールでは、上昇したリスクとはリスクよりも大きいが、高リスクよりも小さく、非常に高いリスクは高リスクよりも大きい。したがって、疾患を発症する患者リスクに関して、リスク＜上昇したリスク＜高リスク＜非常に高いリスク、またはリスクスコア１＜リスクスコア２＜リスクスコア３＜リスクスコア４である。
【００２９】
本方法は、対象から試料を得ることをさらに含んでよい。概して、試料は、それからリスクアレルが検出される可能性がある任意の試料を含んでよい。試料は、組織試料または痰を含んでよい。組織試料は、末梢血、気道または肺組織を含んでよい。
【００３０】
本方法は、ＩＬ３３アンタゴニストまたはＩＬ３３アンタゴニスト及びＩＬ−４Ｒアンタゴニストの組合せによる処置のための候補として対象を同定することをさらに含んでよい。対象のリスクをリスクスコア１、リスクスコア２、リスクスコア３、またはリスクスコア４とした分類に基づいて、対象は、好酸球性喘息、好酸球性ＣＯＰＤ、好酸球性ＡＣＯＳ、もしくはそれらの高好酸球サブセット、または鼻茸を阻害する治療レジメンから恩恵を受ける可能性がある。阻害治療レジメンは、ＩＬ３３アンタゴニストの種類、用量、投薬頻度などの調整、加えてＩＬ−４Ｒアンタゴニストと組み合わせるか否か、もしそうであれば、例えば、リスクのレベルに応じたＩＬ−４Ｒアンタゴニストの種類、用量、及び投薬頻度などの調整を含んでよい。
【００３１】
本方法は、対象から単離した血液または痰から、好酸球数のレベル増加を検出することをさらに含んでよい。レベル増加は、正常レベルを超える、または喘息、ＣＯＰＤ、もしくはＡＣＯＳの非好酸球サブセットを有する対象で通常観察されるレベルを超えると見なされるレベルである。本方法は、この目的のために、対象から血液または痰を単離することをさらに含んでよい。
【００３２】
本方法は、対象にＩＬ３３アンタゴニストを投与すること、またはＩＬ３３アンタゴニスト及びＩＬ−４Ｒアンタゴニストを投与することをさらに含んでよい。そのような投与は、好酸球性喘息、好酸球性ＣＯＰＤ、もしくは好酸球性ＡＣＯＳ、またはそれらの高好酸球サブセットを阻害するのに有効な量によるものであってよい。いくつかの実施形態では、ＩＬ３３アンタゴニストは、ＩＬ３３トラップを含んでよい。いくつかの実施形態では、ＩＬ３３アンタゴニストは、ＩＬ３３に特異的に結合する抗体またはその抗原結合断片を含んでよい。好適なＩＬ３３アンタゴニストは、本明細書に記載されている。いくつかの実施形態では、ＩＬ−４Ｒアンタゴニストは、ＩＬ−４Ｒに特異的に結合する抗体またはその抗原結合断片を含んでよい。好適なＩＬ−４Ｒアンタゴニストは、本明細書に記載されている。
【００３３】
第２の態様では、本開示は、好酸球性喘息の処置または阻害を必要とする対象の好酸球性喘息を処置または阻害する方法を特徴とする。好酸球性喘息は、好酸球性喘息の低好酸球サブセットであってよい、または好酸球性喘息の高好酸球サブセットであってよい。
【００３４】
いくつかの実施形態では、本方法は、イントロンＩＬ１ＲＬ１バリアントｒｓ１４２０１０１（配列番号：３５７）もしくはその連鎖不平衡にあるバリアント中に、ＩＬ３３バリアントｒｓ１３４２３２６（配列番号：３５８）もしくはその連鎖不平衡にあるバリアント中に、またはイントロンＩＬ１ＲＬ１バリアントｒｓ１４２０１０１（配列番号：３５７）もしくはその連鎖不平衡にあるバリアント及びＩＬ３３バリアントｒｓ１３４２３２６（配列番号：３５８）もしくはその連鎖不平衡にあるバリアント中の両方に好酸球性喘息と関連する１つ以上のリスクアレルを有する対象にＩＬ３３アンタゴニストを投与すること、またはＩＬ３３アンタゴニスト及びＩＬ−４Ｒアンタゴニストを投与することを含み、好酸球性喘息が対象内で処置または阻害されるものである。
【００３５】
いくつかの実施形態では、ＩＬ３３アンタゴニストは、ＩＬ３３トラップを含んでよい。いくつかの実施形態では、ＩＬ３３アンタゴニストは、ＩＬ３３に特異的に結合する抗体またはその抗原結合断片を含んでよい。好適なＩＬ３３アンタゴニストは、本明細書に記載されている。いくつかの実施形態では、ＩＬ−４Ｒアンタゴニストは、ＩＬ−４Ｒに特異的に結合する抗体またはその抗原結合断片を含んでよい。好適なＩＬ−４Ｒアンタゴニストは、本明細書に記載されている。
【００３６】
第３の態様では、本開示は、好酸球性ＣＯＰＤの処置または阻害を必要とする対象の好酸球性ＣＯＰＤを処置または阻害する方法を特徴とする。好酸球性ＣＯＰＤは、好酸球性ＣＯＰＤの低好酸球サブセットであってよい、または好酸球性ＣＯＰＤの高好酸球サブセットであってよい。
【００３７】
いくつかの実施形態では、本方法は、イントロンＩＬ１ＲＬ１バリアントｒｓ１４２０１０１（配列番号：３５７）もしくはその連鎖不平衡にあるバリアント中に、ＩＬ３３バリアントｒｓ１３４２３２６（配列番号：３５８）もしくはその連鎖不平衡にあるバリアント中に、またはイントロンＩＬ１ＲＬ１バリアントｒｓ１４２０１０１（配列番号：３５７）もしくはその連鎖不平衡にあるバリアント及びＩＬ３３バリアントｒｓ１３４２３２６（配列番号：３５８）もしくはその連鎖不平衡にあるバリアント中の両方に好酸球性ＣＯＰＤと関連する１つ以上のリスクアレルを有する対象にＩＬ３３アンタゴニストを投与すること、またはＩＬ３３アンタゴニスト及びＩＬ−４Ｒアンタゴニストを投与することを含み、好酸球性ＣＯＰＤが対象内で処置または阻害されるものである。
【００３８】
いくつかの実施形態では、ＩＬ３３アンタゴニストは、ＩＬ３３トラップを含んでよい。いくつかの実施形態では、ＩＬ３３アンタゴニストは、ＩＬ３３に特異的に結合する抗体またはその抗原結合断片を含んでよい。好適なＩＬ３３アンタゴニストは、本明細書に記載されている。いくつかの実施形態では、ＩＬ−４Ｒアンタゴニストは、ＩＬ−４Ｒに特異的に結合する抗体またはその抗原結合断片を含んでよい。好適なＩＬ−４Ｒアンタゴニストは、本明細書に記載されている。
【００３９】
第４の態様では、本開示は、好酸球性ＡＣＯＳの処置または阻害を必要とする対象の好酸球性ＡＣＯＳを処置または阻害する方法を特徴とする。好酸球性ＡＣＯＳは、好酸球性ＡＣＯＳの低好酸球サブセットであってよい、または好酸球性ＡＣＯＳの高好酸球サブセットであってよい。
【００４０】
いくつかの実施形態では、本方法は、イントロンＩＬ１ＲＬ１バリアントｒｓ１４２０１０１（配列番号：３５７）もしくはその連鎖不平衡にあるバリアント中に、ＩＬ３３バリアントｒｓ１３４２３２６（配列番号：３５８）もしくはその連鎖不平衡にあるバリアント中に、またはイントロンＩＬ１ＲＬ１バリアントｒｓ１４２０１０１（配列番号：３５７）もしくはその連鎖不平衡にあるバリアント及びＩＬ３３バリアントｒｓ１３４２３２６（配列番号：３５８）もしくはその連鎖不平衡にあるバリアント中の両方に好酸球性ＡＣＯＳと関連する１つ以上のリスクアレルを有する対象にＩＬ３３アンタゴニストを投与すること、またはＩＬ３３アンタゴニスト及びＩＬ−４Ｒアンタゴニストを投与することを含み、好酸球性ＡＣＯＳが対象内で処置または阻害されるものである。
【００４１】
いくつかの実施形態では、ＩＬ３３アンタゴニストは、ＩＬ３３トラップを含んでよい。いくつかの実施形態では、ＩＬ３３アンタゴニストは、ＩＬ３３に特異的に結合する抗体またはその抗原結合断片を含んでよい。好適なＩＬ３３アンタゴニストは、本明細書に記載されている。いくつかの実施形態では、ＩＬ−４Ｒアンタゴニストは、ＩＬ−４Ｒに特異的に結合する抗体またはその抗原結合断片を含んでよい。好適なＩＬ−４Ｒアンタゴニストは、本明細書に記載されている。
【００４２】
本明細書に記載または例示される方法のいずれにおいても、ＩＬ３３アンタゴニストは、治療レジメンの一部として投与されてよい。ＩＬ３３アンタゴニストは、ＩＬ３３とその結合パートナーのうち１つ以上との相互作用を阻害し、その際に、ＩＬ３３媒介シグナル伝達を阻害する任意の剤を含んでよい。例えば、ＩＬ３３アンタゴニストは、ＩＬ３３に結合してよい、及び／またはＩＬ３３と、もしくは「腫瘍形成抑制因子（ｓｕｐｐｒｅｓｓｉｏｎ  ｏｆ  ｔｕｍｏｒｉｇｅｎｉｃｉｔｙ）」（ＳＴ２としても知られる）と称されるＩＬ３３受容体と、もしくはＩＬ３３共受容体のインターロイキン−１受容体アクセサリータンパク質（ＩＬ−１ＲＡｃＰ）と、もしくは次のいずれかの複合体：ＩＬ３３／ＳＴ２、もしくはＳＴ２／ＩＬ−１ＲＡｃＰと相互作用してよい。
【００４３】
ＩＬ３３アンタゴニストのカテゴリーの非限定的な例は、小分子ＩＬ３３阻害剤、または受容体アンタゴニスト、またはストリンジェントな条件下で、ＩＬ３３、もしくはＩＬ３３受容体もしくは共受容体のいずれかをコードする核酸配列にハイブリダイズする核酸（例えば、短分子干渉ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）もしくは規則的な間隔をもってクラスター化された短鎖反復回文配列ＲＮＡ（ＣＲＩＳＰＲ−ＲＮＡもしくはｃｒＲＮＡ）であり、ｃｒＲＮＡ及びｔｒａｃｒＲＮＡ配列を有する単一ガイドＲＮＡ（ｓｇＲＮＡ）を含む）を含む。その他のＩＬ３３アンタゴニストは、ＩＬ３３受容体（例えば、ＳＴ２）のリガンド結合部分、ＩＬ３３結合足場分子（例えば、ＤＡＲＰｉｎ、ＨＥＡＴリピートタンパク質、ＡＲＭリピートタンパク質、テトラトリコペプチドリピートタンパク質、フィブロネクチンベースの足場構築物、及び天然に存在するリピートタンパク質をベースにしたその他の足場）、ならびに抗ＩＬ３３アプタマーまたはその部分を含むタンパク質を含む。
【００４４】
好ましい実施形態では、ＩＬ３３アンタゴニストは、ヒトＩＬ３３に特異的に結合する抗体（ＩＬ３３抗体）、またはその抗原結合断片を含む。本明細書に記載される方法に使用するための例示的な抗ＩＬ３３抗体のアミノ酸配列識別子を、表１に示す。抗ＩＬ３３抗体は、米国特許第９，４５３，０７２号明細書に記載されている任意の抗体を含んでよく、その全体が参照によって組み込まれる。
【００４５】
【表１】
2020516289.tif 000002
【００４６】
いくつかの実施形態では、ＩＬ３３アンタゴニストは、米国特許第９，４５３，０７２号明細書に、及び本明細書の表１に記載されるような抗ＩＬ３３抗体のアミノ酸配列の重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）、軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）、及び／または相補性決定領域（ＣＤＲ）を含む、抗ＩＬ３３抗体、またはその抗原結合断片を含む。いくつかの実施形態では、ＩＬ３３アンタゴニストは、配列番号：２７４のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域の重鎖相補性決定領域（ＣＤＲ、例えば、Ｈ１、Ｈ２、Ｈ３）及び配列番号：２８２のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域の軽鎖ＣＤＲ（例えば、Ｌ１、Ｌ２、Ｌ３）を含む。いくつかの実施形態では、Ｈ１は配列番号：２７６のアミノ酸配列を含み、Ｈ２は配列番号：２７８のアミノ酸配列を含み、Ｈ３は配列番号：２８０のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、Ｌ１は配列番号：２８４のアミノ酸配列を含み、Ｌ２は配列番号：２８６のアミノ酸配列を含み、Ｌ３は配列番号：２８８のアミノ酸配列を含む。さらにその他の実施形態では、抗ＩＬ３３抗体またはその抗原結合断片は、配列番号：２７４を含むＨＣＶＲ及び配列番号：２８２を含むＬＣＶＲを含む。
【００４７】
いくつかの実施形態では、ＩＬ３３抗体またはその抗原結合断片は、配列番号：２、１８、３４、５０、６６、８２、９８、１１４、１３０、１４６、１６２、１７８、１９４、２１０、２２６、２４２、２５８、２７４、２９０、及び３０８からなる群から選択される重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）アミノ酸配列内に含有される３つの重鎖ＣＤＲ（ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３）を含み、配列番号：１０、２６、４２、５８、７４、９０、１０６、１２２、１３８、１５４、１７０、１８６、２０２、２１８、２３４、２５０、２６６、２８２、２９８、及び３１６からなる群から選択される軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）アミノ酸配列内に含有される３つの軽鎖ＣＤＲ（ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３）を含む。
【００４８】
いくつかの実施形態では、抗ＩＬ３３抗体、またはその抗原結合断片は、配列番号：２／１０、１８／２６、３４／４２、５０／５８、６６／７４、８２／９０、９８／１０６、１１４／１２２、１３０／１３８、１４６／１５４、１６２／１７０、１７８／１８６、１９４／２０２、２１０／２１８、２２６／２３４、２４２／２５０、２５８／２６６、２７４／２８２、２９０／２９８、または３０８／３１６のＨＣＶＲ及びＬＣＶＲ（ＨＣＶＲ／ＬＣＶＲ）配列対を含む。
【００４９】
いくつかの実施形態では、抗ＩＬ３３抗体、またはその抗原結合断片は、配列番号：４、２０、３６、５２、６８、８４、１００、１１６、１３２、１４８、１６４、１８０、１９６、２１２、２２８、２４４、２６０、２７６、２９２、及び３１０からなる群から選択されるアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ１（ＨＣＤＲ１）ドメイン、または少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％もしくは少なくとも９９％の配列同一性を有する実質的に同様のそれらの配列、配列番号：６、２２、３８、５４、７０、８６、１０２、１１８、１３４、１５０、１６６、１８２、１９８、２１４、２３０、２４６、２６２、２７８、２９４、及び３１２からなる群から選択されるアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２（ＨＣＤＲ２）ドメイン、または少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％もしくは少なくとも９９％の配列同一性を有する実質的に同様のそれらの配列、配列番号：１２、２８、４４、６０、７６、９２、１０８、１２４、１４０、１５６、１７２、１８８、２０４、２２０、２３６、２５２、２６８、２８４、３００、及び３１８からなる群から選択されるアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ１（ＬＣＤＲ１）ドメイン、または少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％もしくは少なくとも９９％の配列同一性を有する実質的に同様のそれらの配列、ならびに配列番号：１４、３０、４６、６２、７８、９４、１１０、１２６、１４２、１５８、１７４、１９０、２０６、２２２、２３８、２５４、２７０、２８６、３０２、及び３２０からなる群から選択されるアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２（ＬＣＤＲ２）ドメイン、または少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％もしくは少なくとも９９％の配列同一性を有する実質的に同様のそれらの配列を含む。
【００５０】
いくつかの好ましい実施形態では、抗ＩＬ３３抗体またはその抗原結合断片は、ＨＣＤＲ１−ＨＣＤＲ２−ＨＣＤＲ３−ＬＣＤＲ１−ＬＣＤＲ２−ＬＣＤＲ３ドメインがそれぞれ、配列番号：４−６−８−１２−１４−１６（例えば、Ｈ１Ｍ９５５９Ｎ）、２０−２２−２４−２８−３０−３２（例えば、Ｈ１Ｍ９５６６Ｎ）、３６−３８−４０−４４−４６−４８（例えば、Ｈ１Ｍ９５６８Ｎ）、５２−５４−５６−６０−６２−６４（例えば、Ｈ４Ｈ９６２９Ｐ）、６８−７０−７２−７６−７８−８０（例えば、Ｈ４Ｈ９６３３Ｐ）、８４−８６−８８−９２−９４−９６（例えば、Ｈ４Ｈ９６４０Ｐ）、１００−１０２−１０４−１０８−１１０−１１２（例えば、Ｈ４Ｈ９６５９Ｐ）、１１６−１１８−１２０−１２４−１２６−１２８（例えば、Ｈ４Ｈ９６６０Ｐ）、１３２−１３４−１３６−１４０−１４２−１４４（例えば、Ｈ４Ｈ９６６２Ｐ）、１４８−１５０−１５２−１５６−１５８−１６０（例えば、Ｈ４Ｈ９６６３Ｐ）、１６４−１６６−１６８−１７２−１７４−１７６（例えば、Ｈ４Ｈ９６６４Ｐ）、１８０−１８２−１８４−１８８−１９０−１９２（例えば、Ｈ４Ｈ９６６５Ｐ）、１９６−１９８−２００−２０４−２０６−２０８（例えば、Ｈ４Ｈ９６６６Ｐ）、２１２−２１４−２１６−２２０−２２２−２２４（例えば、Ｈ４Ｈ９６６７Ｐ）、２２８−２３０−２３２−２３６−２３８−２４０（例えば、Ｈ４Ｈ９６７０Ｐ）、２４４−２４６−２４８−２５２−２５４−２５６（例えば、Ｈ４Ｈ９６７１Ｐ）、２６０−２６２−２６４−２６８−２７０−２７２（例えば、Ｈ４Ｈ９６７２Ｐ）、２７６−２７８−２８０−２８４−２８６−２８８（例えば、Ｈ４Ｈ９６７５Ｐ）、２９２−２９４−２９６−３００−３０２−３０４（例えば、Ｈ４Ｈ９６７６Ｐ）、及び３１０−３１２−３１４−３１８−３２０−３２２（Ｈ１Ｍ９５６５Ｎ）からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するものを含む。
【００５１】
いくつかの実施形態では、抗ＩＬ３３抗体、またはその抗原結合断片は、配列番号：２／１０、１８／２６、３４／４２、５０／５８、６６／７４、８２／９０、９８／１０６、１１４／１２２、１３０／１３８、１４６／１５４、１６２／１７０、１７８／１８６、１９４／２０２、２１０／２１８、２２６／２３４、２４２／２５０、２５８／２６６、２７４／２８２、２９０／２９８、または３０８／３１６の重鎖及び軽鎖可変領域（ＨＣＶＲ／ＬＣＶＲ）配列内に含有される重鎖及び軽鎖ＣＤＲドメインを含む。ＣＤＲの境界は、Ｋａｂａｔ定義、Ｃｈｏｔｈｉａ定義、またはＡｂＭ定義によるものであってよい。
【００５２】
本明細書に記載される方法に使用されてよい、その他の抗ＩＬ３３抗体及びその抗原結合断片は、欧州公開第ＥＰ１７２５２６１号明細書、ＰＣＴ公開第ＷＯ２０１１／０３１６００号明細書、同第ＷＯ２０１５／０９９１７５号明細書、同第ＷＯ２０１５／１０６０８０号明細書（ＡＮＢ０２０）、同第ＷＯ２０１６／０７７３８１号明細書、同第ＷＯ２０１６／０７７３６６号明細書、または同第ＷＯ２０１６／１５６４４０号明細書、米国特許第８，１８７，５９６号明細書、及び米国公開第２０１６／０１６８２４２号明細書に開示され、その各々全体が参照によって本明細書に組み込まれる。
【００５３】
代替的な好ましい実施形態では、ＩＬ３３アンタゴニストは、ＩＬ３３トラップを含む。ＩＬ３３トラップは少なくとも１つのＩＬ３３結合ドメインを含み、そのドメインはＳＴ２と称される、ＩＬ３３受容体タンパク質のＩＬ３３結合部分を含む。いくつかの実施形態では、ＩＬ３３トラップは、ＩＬ−１受容体アクセサリータンパク質、またはＩＬ−１ＲＡｃＰと称される、ＩＬ３３共受容体の細胞外部分をさらに含む。ＩＬ３３トラップは少なくとも１つの多量体化成分も含んでよく、その成分はトラップの様々な成分を互いに結合させるように機能する。ＩＬ３３トラップの様々な成分は、以下に記載され、図１で示される。ＩＬ３３トラップは、米国公開第２０１４／０２７１６４２号明細書及びＰＣＴ公開第ＷＯ２０１４／１５２１９５号明細書に記載されている任意のトラップを含んでよく、その各々全体が参照によって本明細書に組み込まれる。
【００５４】
ＩＬ３３トラップは、多量体化ドメイン（Ｍ）に結合した第１ＩＬ３３結合ドメイン（Ｄ１）を含んでよい。いくつかの実施形態では、ＩＬ３３トラップは、Ｄ１及び／またはＭに結合した第２ＩＬ３３結合ドメイン（Ｄ２）を含む。いくつかの好ましい実施形態では、Ｄ１は、ＳＴ２タンパク質のＩＬ３３結合部分を含む。いくつかの好ましい実施形態では、Ｄ２は、ＩＬ−１ＲＡｃＰタンパク質の細胞外部分を含む。
【００５５】
ＩＬ３３トラップの個々の成分は、ＩＬ３３と結合できる機能性アンタゴニスト分子をもたらす様々な方法で互いに関連して配置されてよい。例えば、Ｄ１及び／またはＤ２は、ＭのＮ末端に結合されてよい。いくつかの実施形態では、Ｄ１及び／またはＤ２は、ＭのＣ末端に結合される。その他の実施形態では、Ｄ１はＤ２のＮ末端に結合され、Ｄ２はＭのＮ末端に結合されて、式Ｄ１−Ｄ２−Ｍで表されるアンタゴニスト分子の、Ｎ末端からＣ末端へのインライン融合をもたらす。個々の成分に関するその他の配置は、図１の本明細書内の他の箇所に開示される。
【００５６】
ＩＬ３３トラップは、少なくとも１つのＩＬ３３結合ドメイン（名称「Ｄ」、または「Ｄ１」、「Ｄ２」などで本明細書において称される時もある）を含む。いくつかの実施形態では、ＩＬ３３結合ドメインは、ＳＴ２タンパク質のＩＬ３３結合部分を含む。ＳＴ２タンパク質のＩＬ３３結合部分は、ＳＴ２タンパク質の細胞外ドメインの全てまたは一部を含み得るか、またはそれらからなり得る。好ましい実施形態では、ＳＴ２タンパク質はヒトＳＴ２タンパク質であり、アクセッション番号ＮＰ＿０５７３１６．３のアミノ酸１〜５５６（配列番号：３５２）のＳＴ２タンパク質を含む。いくつかの代替的実施形態では、ＳＴ２タンパク質は、非ヒト種に由来するＳＴ２タンパク質（例えば、マウスＳＴ２、非ヒト霊長類ＳＴ２など）を含む。ＳＴ２タンパク質の好ましいＩＬ３３結合部分は、配列番号：３２８のアミノ酸配列（ヒトＳＴ２の細胞外ドメイン［ＮＣＢＩアクセッション番号ＮＰ＿０５７３１６．３のＫ１９−Ｓ３２８］に相当する）として本明細書に記載される。ＳＴ２タンパク質のＩＬ３３結合部分のその他の例は、配列番号：３２９のアミノ酸配列（マウスＳＴ２の細胞外ドメイン［ＮＣＢＩアクセッション番号Ｐ１４７１９のＳ２７−Ｒ３３２］に相当する）として本明細書に記載される。
【００５７】
いくつかの実施形態では、トラップのＩＬ３３結合ドメインは、ＩＬ−１ＲＡｃＰタンパク質の細胞外部分を含む。ある種の実施形態では、ＩＬ−１ＲＡｃＰタンパク質はヒトＩＬ−１ＲＡｃＰタンパク質を含み、配列番号：３５３のアミノ酸配列を有するＩＬ−１ＲＡｃＰタンパク質を含む。いくつかの代替的実施形態では、ＩＬ−１ＲＡｃＰタンパク質は、非ヒト種に由来するＩＬ−１ＲＡｃＰタンパク質（例えば、マウスＩＬ−１ＲＡｃＰ、非ヒト霊長類ＩＬ−１ＲＡｃＰなど）を含む。ＩＬ−１ＲＡｃＰタンパク質の例示的な細胞外部分は、配列番号：３３０のアミノ酸配列（ヒトＩＬ−１ＲＡｃＰの細胞外ドメイン［ＮＣＢＩアクセッション番号Ｑ９ＮＰＨ３のＳ２１−Ｅ３５９］に相当する）として本明細書に記載される。ＩＬ−１ＲＡｃＰタンパク質の細胞外部分のその他の例は、配列番号：３３１のアミノ酸配列（マウスＩＬ−１ＲＡｃＰの細胞外ドメイン［ＮＣＢＩアクセッション番号Ｑ６１７３０のＳ２１−Ｅ３５９］に相当する）として本明細書に記載される。
【００５８】
本方法に使用するためのＩＬ３３トラップの非限定的な例は表２に示され、「ｈＳＴ２−ｈＦＣ」、「ｈＳＴ２−ｍＦｃ」、「ｈＳＴ２−ｈＩＬ１ＲＡｃＰ−ｍＦｃ」、「ｈＳＴ２−ｈＩＬ１ＲＡｃＰ−ｈＦｃ」及び「ｍＳＴ２−ｍＩＬ１ＲＡｃＰ−ｍＦｃ」と称されるＩＬ３３トラップを含む。これらは、それぞれ配列番号：３２３、３２４、３２５、３２６及び３２７に相当する。ＩＬ３３受容体ベースのトラップは、本明細書に記載される例示的なＩＬ３３受容体ベースのトラップ（例えば、配列番号：３２３、３２４、３２５、３２６及び３２７）のいずれかと少なくとも約８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％同一であるアミノ酸配列を含んでよい。ＩＬ３３トラップは、本明細書に記載される例示的なＩＬ３３結合ドメイン成分のアミノ酸配列（例えば、配列番号：３２８、３２９、３３０及び３３１）のいずれかと少なくとも約８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％同一であるアミノ酸配列を有するＤ１及び／またはＤ２成分を含んでよい。
【００５９】
５つの異なる例示的なＩＬ３３トラップを構築した。第１ＩＬ３３アンタゴニスト（ｈＳＴ２−ｈＦｃ、配列番号：３２３）は、ヒトＩｇＧ１Ｆｃ領域（配列番号：３３２）のＮ末端に、ヒトＳＴ２の可溶性細胞外領域（配列番号：３２８）をそのＣ末端で融合させたものを含む。第２ＩＬ３３アンタゴニスト（ｈＳＴ２−ｍＦｃ、配列番号：３２４）は、マウスＩｇＧ２ａＦｃ領域（配列番号：３３３）のＮ末端に、ヒトＳＴ２の可溶性細胞外領域（配列番号：３２８）をそのＣ末端で融合させたものからなる。第３ＩＬ３３アンタゴニスト（ｈＳＴ２−ｈＩＬ１ＲＡｃＰ−ｍＦｃ、配列番号：３２５）は、そのＮ末端にヒトＳＴ２（配列番号：３２８）、続いてヒトＩＬ−１ＲＡｃＰの細胞外領域（配列番号：３３０）、続いてそのＣ末端にマウスＩｇＧ２ａＦｃ（配列番号：３３３）を有するインライン融合からなる。第４ＩＬ３３アンタゴニスト（ｍＳＴ２−ｍＩＬ１ＲＡｃＰ−ｍＦｃ、配列番号：３２６）は、そのＮ末端にマウスＳＴ２（配列番号：３２９）、続いてマウスＩＬ−１ＲＡｃＰの細胞外領域（配列番号：３３１）、続いてそのＣ末端にマウスＩｇＧ２ａＦｃ（配列番号：３３３）を有するインライン融合からなる。第５ＩＬ３３アンタゴニスト（ｈＳＴ２−ｈＩＬ１ＲＡｃＰ−ｈＦｃ、配列番号：３２７）は、そのＮ末端に配列番号：３２８のヒトＳＴ２、続いてヒトＩＬ−１ＲＡｃＰの細胞外領域（配列番号：３３０）、続いてそのＣ末端にヒトＩｇＧ１Ｆｃ（配列番号：３３２）を有するインライン融合からなる。表２を参照のこと。
【００６０】
【表２】
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【００６１】
ＩＬ３３トラップは、少なくとも１つの多量体化ドメイン（略語「Ｍ」、「Ｍ１」、「Ｍ２」などで本明細書において称される時もある）を含んでよい。大まかに言えば、多量体化ドメイン（複数可）は、ＩＬ３３アンタゴニストの様々な成分（例えば、ＩＬ３３結合ドメイン（複数可））を互いに結合させるように機能する。多量体化ドメインは、同じまたは類似した構造または構成を持つ第２高分子と関連する（共有結合または非共有結合）能力を有する任意の高分子を含んでよい。例えば、多量体化ドメインは、免疫グロブリンＣＨ３ドメインを含むポリペプチドを含んでよい。多量体化ドメインの非限定的な例は、免疫グロブリンのＦｃ部分、例えば、アイソタイプＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、及びＩｇＧ４、加えて各アイソタイプ群内の任意のアロタイプから選択されるＩｇＧのＦｃドメインである。
【００６２】
ＩＬ３３トラップで使用され得る非限定的で例示的な多量体化ドメインは、ヒトＩｇＧ１Ｆｃ（配列番号：３３２）またはマウスＩｇＧ２ａＦｃ（配列番号：３３３）を含む。ＩＬ３３トラップは、本明細書に記載される例示的なＭ成分のアミノ酸配列（例えば、配列番号：３３２または３３３）のいずれかと少なくとも約８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％同一であるアミノ酸配列を有するＭ成分を含んでよい。
【００６３】
いくつかの実施形態では、ＩＬ３３トラップは２つの多量体化ドメイン、すなわちＭ１及びＭ２を含み、Ｍ１及びＭ２は互いに同一である。例えば、Ｍ１は特定のアミノ酸配列を有するＦｃドメインであり得、Ｍ２はＭ１と同じアミノ酸配列を有するＦｃドメインである。ＩＬ３３アンタゴニストの個々の成分（例えば、Ｄ１、Ｄ２、Ｍなど）は、様々な方法で互いに関連して配置され得る。２つの多量体化ドメイン（Ｍ１及びＭ２）ならびに４つのＩＬ３３結合ドメイン（Ｄ１、Ｄ２、Ｄ３及びＤ４）を含むＩＬ３３トラップの一例を含む、上記した配置全ての非限定的な例は、図１で概略的に図示されている。
【００６４】
ＩＬ３３トラップの個々の成分（例えば、Ｄ１、Ｄ２、Ｍ１、Ｍ２など）は、互いに直接結合されてよく（例えば、Ｄ１及び／またはＤ２がＭに直接結合されてよいなど）、あるいは、個々の成分は、リンカー成分を介して互いに結合されてよい（例えば、Ｄ１及び／またはＤ２が個々の成分間に配向されるリンカーを介してＭに結合されてよく、Ｄ１がリンカーを介してＤ２に結合されてよいなど）。
【００６５】
ＩＬ３３及び／またはその受容体（ＳＴ２及び／またはＩＬ−１ＲＡｃＰ）と結合し、リガンド−受容体相互作用をブロックするポリペプチドは、ＩＬ３３アンタゴニストと見なされ、それらはＰＣＴ公開第ＷＯ２０１４／１５２１９５号明細書に開示され、その全体が参照によって組み込まれる。ＩＬ３３トラップの生物学的特徴は、米国公開第２０１４／０２７１６４２号明細書に記載され、その全体が参照によって本明細書に組み込まれる。
【００６６】
ＩＬ３３アンタゴニストとして作用する可能性があり、本方法で使用されてよいその他の剤は、イムノアドヘシン、ペプチボディ、及び可溶性ＳＴ２、またはそれらの誘導体、ＰＣＴ公開第ＷＯ２０１２／１１３８１３号明細書、同第ＷＯ２０１３／１７３７６１号明細書、及び同第ＷＯ２０１３／１６５８９４号明細書、加えて米国特許第８，４４４，９８７号明細書及び同第７，４５２，９８０号明細書に記載され、その各々全体が参照によって本明細書に組み込まれる抗ＩＬ３３受容体抗体（例えば、抗ＳＴ２抗体、例えば、ＡＭＧ−２８２（Ａｍｇｅｎ）もしくはＳＴＬＭ１５（Ｊａｎｓｓｅｎ）または抗ＳＴ２抗体のいずれか）を含む。その他のＩＬ３３アンタゴニストはＳＴ２−Ｆｃタンパク質、例えば、ＰＣＴ公開第ＷＯ２０１３／１７３７６１号明細書及び同第ＷＯ２０１３／１６５８９４号明細書に記載されているものなどを含み、その各々全体が参照によって本明細書に組み込まれる。
【００６７】
本明細書に記載または例示される方法のいずれにおいても、ＩＬ−４Ｒアンタゴニストは、治療レジメンの一部として投与されてよい。ＩＬ−４Ｒアンタゴニストは、ＩＬ３３アンタゴニストと組み合わせて好ましくは投与されるが、ＩＬ−４ＲアンタゴニストがＩＬ３３アンタゴニストと同時に投与される必要はない。ＩＬ−４Ｒアンタゴニストは、ＩＬ−４ＲαまたはＩＬ−４Ｒリガンドに結合するか、またはそれと相互作用し、１型及び／または２型ＩＬ−４受容体の正常な生物学的シグナル伝達機能を阻害または減弱させる任意の剤を含んでよい。ＩＬ−４Ｒは、配列番号：３４７のアミノ酸配列、またはその生物学的に活性な断片を含んでよい。１型ＩＬ−４受容体は、ＩＬ−４Ｒα鎖及びγｃ鎖からなる二量体受容体である。２型ＩＬ−４受容体は、ＩＬ−４Ｒα鎖及びＩＬ−１３Ｒα１鎖からなる二量体受容体である。１型ＩＬ−４受容体はＩＬ−４と相互作用し、それによって刺激されるが、２型ＩＬ−４受容体はＩＬ−４及びＩＬ−１３の両方と相互作用し、それらによって刺激される。したがって、本方法で使用されるＩＬ−４Ｒアンタゴニストは、ＩＬ−４媒介シグナル伝達、ＩＬ−１３媒介シグナル伝達、またはＩＬ−４及びＩＬ−１３媒介シグナル伝達の両方をブロックすることによって機能してよい。したがって、ＩＬ−４Ｒアンタゴニストは、ＩＬ−４及び／またはＩＬ−１３と、１型または２型受容体との相互作用を阻害または防止してよい。
【００６８】
ＩＬ−４Ｒアンタゴニストのカテゴリーの非限定的な例は、小分子ＩＬ−４Ｒアンタゴニスト、ＩＬ−４Ｒ発現または活性の核酸ベースの阻害剤（例えば、ｓｉＲＮＡまたはアンチセンス）、特異的にＩＬ−４Ｒと相互作用するペプチドベースの分子（例えば、ペプチボディ）、「受容体ボディ」（例えば、ＩＬ−４Ｒ成分のリガンド結合ドメインを含む遺伝子操作された分子）、ＩＬ−４Ｒ結合足場分子（例えば、ＤＡＲＰｉｎ、ＨＥＡＴリピートタンパク質、ＡＲＭリピートタンパク質、テトラトリコペプチドリピートタンパク質、フィブロネクチンベースの足場構築物、及び天然に存在するリピートタンパク質をベースにしたその他の足場）、ならびに抗ＩＬ−４Ｒアプタマーまたはその部分を含む。
【００６９】
好ましい実施形態では、ＩＬ−４Ｒアンタゴニストは、ヒトＩＬ−４Ｒに特異的に結合する抗体を含む。抗体は、次の命名法によって本明細書において通常称される：Ｆｃ接頭辞（例えば、「Ｈ１Ｍ」、または「Ｈ４Ｈ」）、続いて数値識別子（例えば、表１に示されるような「９５５９」、「９５６６」、または「９６２９」）、続いて「Ｐ」、または「Ｎ」接尾辞。この命名法によると、抗体は、例えば、「Ｈ１Ｍ９５５９Ｎ」、「Ｈ１Ｍ９５６６Ｎ」、「Ｈ４Ｈ９６２９Ｐ」などと本明細書において称されてよい。本明細書で使用される抗体名称のＨ１Ｍ及びＨ４Ｈ接頭辞は、抗体の特定のＦｃ領域アイソタイプを示す。例えば、「Ｈ１Ｍ」抗体は、マウスＩｇＧ１Ｆｃを有するのに対して、「Ｈ４Ｈ」抗体はヒトＩｇＧ４Ｆｃを有する。特定のＦｃアイソタイプを有する抗体は、異なるＦｃアイソタイプを有する抗体へと変換され得る（例えば、マウスＩｇＧ１Ｆｃを有する抗体が、ヒトＩｇＧ４を有する抗体へと変換され得るなど）一方で、いずれにしても、表１に示される数値識別子によって示される可変ドメイン（ＣＤＲを含む）は同じままであることとし、Ｆｃの性質にかかわらず、結合特性は同一または実質的に同様であると予想される。
【００７０】
好ましい実施形態では、抗ＩＬ−４Ｒ抗体は、デュピルマブである。米国特許第７，６０５，２３７号明細書、同第７，６０８，６９３号明細書、及び同第９，２９０，５７４号明細書を参照し、それらは参照によって組み込まれる。
【００７１】
ヒト抗ＩＬ−４Ｒ抗体は、米国特許第７，６０８，６９３号明細書に記載されているように生成され得る。１つの例示的なＩＬ−４Ｒ抗体は、マウスＩＬ−４Ｒに特異的なマウス抗体であり、次のアミノ酸配列：配列番号：３３５を含む重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）及び配列番号：３３６を含む軽鎖可変ドメイン（ＬＣＶＲ）を有する。デュピルマブと称される、ヒト抗ＩＬ−４Ｒ抗体は、ヒトＩＬ−４Ｒαに特異的に結合し、配列番号：３３７を含む重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）及び配列番号：３３８を含む軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）、配列番号：３３９を含む重鎖相補性決定領域１（ＨＣＤＲ１）、配列番号：３４０を含むＨＣＤＲ２、配列番号：３４１を含むＨＣＤＲ３、配列番号：３４２を含む軽鎖相補性決定領域１（ＬＣＤＲ１）、配列番号：３４３を含むＬＣＤＲ２ならびに配列番号：３４４を含むＬＣＤＲ３を含む。デュピルマブの全長重鎖は、配列番号：３４５として示され、全長軽鎖は配列番号：３４６として示される。
【００７２】
いくつかの実施形態では、ＩＬ−４Ｒアンタゴニストは、米国特許第７，６０５，２３７号明細書及び同第７，６０８，６９３号明細書に記載されるような抗ＩＬ−４Ｒ抗体のアミノ酸配列のいずれかを含む重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）、軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）、及び／または相補性決定領域（ＣＤＲ）を含む、抗ＩＬ−４Ｒα抗体、またはその抗原結合断片を含む。いくつかの実施形態では、ＩＬ−４Ｒアンタゴニストは、本明細書においてデュピルマブと称される参照抗体の結合特性を有する抗ＩＬ−４Ｒ抗体を含む（米国特許第７，６０５，２３７号明細書及び米国特許第７，６０８，６９３号明細書）。いくつかの実施形態では、抗ＩＬ−４Ｒα抗体またはその抗原結合断片は、配列番号：３３７のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）の重鎖相補性決定領域（ＨＣＤＲ）及び配列番号：３３８のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）の軽鎖相補性決定領域（ＬＣＤＲ）を含む。いくつかの実施形態では、抗ＩＬ−４Ｒα抗体またはその抗原結合断片は、３つのＨＣＤＲ（ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３）ならびに３つのＬＣＤＲ（ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３）を含み、ＨＣＤＲ１は配列番号：３３９のアミノ酸配列を含み、ＨＣＤＲ２は配列番号：３４０のアミノ酸配列を含み、ＨＣＤＲ３は配列番号：３４１のアミノ酸配列を含み、ＬＣＤＲ１は配列番号：３４２のアミノ酸配列を含み、ＬＣＤＲ２は配列番号：３４３のアミノ酸配列を含み、ＬＣＤＲ３は配列番号：３４４のアミノ酸配列を含む。さらにその他の実施形態では、抗ＩＬ−４Ｒ抗体またはその抗原結合断片は、配列番号：３３７を含むＨＣＶＲ及び配列番号：３３８を含むＬＣＶＲを含む。さらにその他の実施形態では、抗ＩＬ−４Ｒ抗体またはその抗原結合断片は、配列番号：３３５を含むＨＣＶＲ及び配列番号：３３６を含むＬＣＶＲを含む。いくつかの実施形態では、抗ＩＬ−４Ｒ抗体またはその抗原結合断片は、配列番号：３４５に記載されるような重鎖（ＨＣ）アミノ酸配列及び配列番号：３４６に記載されるような軽鎖（ＬＣ）アミノ酸配列を含む。
【００７３】
いくつかの実施形態では、ＩＬ−４Ｒ抗体またはその抗原結合断片は、配列番号：３３５または配列番号：３３７のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）の重鎖相補性決定領域（ＨＣＤＲ）及び配列番号：３３６または配列番号：３３８のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）の軽鎖相補性決定領域（ＬＣＤＲ）を含む。
【００７４】
いくつかの実施形態では、ＩＬ−４Ｒ抗体またはその抗原結合断片は、３つのＨＣＤＲ（ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３）ならびに３つのＬＣＤＲ（ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３）を含み、ＨＣＤＲ１は配列番号：３３９のアミノ酸配列を含み、ＨＣＤＲ２は配列番号：３４０のアミノ酸配列を含み、ＨＣＤＲ３は配列番号：３４１のアミノ酸配列を含み、ＬＣＤＲ１は配列番号：３４２のアミノ酸配列を含み、ＬＣＤＲ２は配列番号：３４３のアミノ酸配列を含み、ＬＣＤＲ３は配列番号：３４４のアミノ酸配列を含む。
【００７５】
いくつかの実施形態では、本開示の本方法に使用するためのＩＬ−４Ｒ抗体またはその抗原結合断片は、配列番号：３３５または配列番号：３３７のアミノ酸配列を含むＨＣＶＲ及び配列番号：３３６または配列番号：３３８のアミノ酸配列を含むＬＣＶＲを含む。
【００７６】
いくつかの実施形態では、本開示の本方法に使用するためのＩＬ−４Ｒ抗体またはその抗原結合断片は、配列番号：３３５／３３６または配列番号：３３７／３３８のＨＣＶＲ／ＬＣＶＲアミノ酸配列対を含む。
【００７７】
その他の抗ＩＬ−４Ｒα抗体としては、例えば、ＡＭＧ３１７と称され、それとして当該技術分野において既知の抗体（Ｃｏｒｒｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，２０１０，Ａｍ  Ｊ  Ｒｅｓｐｉｒ  Ｃｒｉｔ  Ｃａｒｅ  Ｍｅｄ．，１８１（８）：７８８−７９６）、またはＭＥＤＩ９３１４、または米国特許第７，１８６，８０９号明細書、同第７，６０５，２３７号明細書、同第７，６３８，６０６号明細書、同第８，０９２，８０４号明細書、同第８，６７９，４８７号明細書、もしくは同第８，８７７，１８９号明細書のいずれかに記載されるような抗ＩＬ−４Ｒα抗体のいずれかが挙げられる。
【００７８】
抗ＩＬ−４Ｒα及びＩＬ３３抗体は、ｐＨ依存的結合特性を有してよい。例えば、抗ＩＬ−４Ｒα抗体または抗ＩＬ３３抗体は、中性ｐＨと比較した場合に酸性ｐＨで、それぞれＩＬ−４Ｒαへの、またはＩＬ３３への結合減少を示す可能性がある。あるいは、抗ＩＬ−４Ｒα抗体または抗ＩＬ３３抗体は、中性ｐＨと比較した場合に酸性ｐＨで、その抗原への結合増強を示す可能性がある。「酸性ｐＨ」は、約６．２未満のｐＨ値、例えば、約６．０、５．９５、５．９、５．８５、５．８、５．７５、５．７、５．６５、５．６、５．５５、５．５、５．４５、５．４、５．３５、５．３、５．２５、５．２、５．１５、５．１、５．０５、５．０、またはそれ未満を含む。「中性ｐＨ」は、約７．０〜約７．４、加えて約７．０、７．０５、７．１、７．１５、７．２、７．２５、７．３、７．３５、及び７．４のｐＨを含む。
【００７９】
別の態様では、ＩＬ３３アンタゴニストは、肺の炎症状態を処置または阻害するために単独でまたはＩＬ−４Ｒアンタゴニストと組み合わせて使用される。ＩＬ３３アンタゴニストまたは組合せは、喘息、ＣＯＰＤ、またはＡＣＯＳのうち１つ以上を処置または阻害するために使用されてよい。ＩＬ３３アンタゴニストまたは組合せは、鼻茸を処置または阻害するために使用されてよい。組合せは、好酸球性喘息、好酸球性ＣＯＰＤ、または好酸球性ＡＣＯＳのうち１つ以上を処置または阻害するために使用されてよい。ＩＬ３３アンタゴニストまたは組合せは、好酸球性喘息、好酸球性ＣＯＰＤ、または好酸球性ＡＣＯＳの高好酸球サブセットのうち１つ以上を処置または阻害するために使用されてよい。組合せは、各抗体が単独療法として単独で使用される場合に得られる処置または阻害と比較した場合、有効性の増強を示す。
【００８０】
いくつかの実施形態では、ＩＬ３３アンタゴニストまたはＩＬ３３アンタゴニスト及びＩＬ−４Ｒアンタゴニストの組合せは、好酸球性喘息、好酸球性慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、好酸球性喘息−慢性閉塞性肺疾患オーバーラップ症候群（ＡＣＯＳ）、高好酸球好酸球性喘息、高好酸球好酸球性ＣＯＰＤ、高好酸球好酸球性ＡＣＯＳ、または鼻茸のいずれか１つの処置または阻害のための医薬品の製造に使用される。好ましい実施形態では、ＩＬ３３アンタゴニストまたは組合せは、好酸球性喘息、好酸球性ＣＯＰＤ、好酸球性ＡＣＯＳ、高好酸球好酸球性喘息、高好酸球好酸球性ＣＯＰＤ、高好酸球好酸球性ＡＣＯＳ、または鼻茸の患者が、イントロンＩＬ１ＲＬ１バリアントｒｓ１４２０１０１（配列番号：３５７）もしくはその連鎖不平衡にあるバリアント中に、ＩＬ３３バリアントｒｓ１３４２３２６（配列番号：３５８）もしくはその連鎖不平衡にあるバリアント中に、またはイントロンＩＬ１ＲＬ１バリアントｒｓ１４２０１０１（配列番号：３５７）もしくはその連鎖不平衡にあるバリアント及びＩＬ３３バリアントｒｓ１３４２３２６（配列番号：３５８）もしくはその連鎖不平衡にあるバリアント中の両方に好酸球性喘息、好酸球性ＣＯＰＤ、または好酸球性ＡＣＯＳと関連する１つ以上のリスクアレルを有する場合に、好酸球性喘息、好酸球性ＣＯＰＤ、好酸球性ＡＣＯＳ、高好酸球好酸球性喘息、高好酸球好酸球性ＣＯＰＤ、高好酸球好酸球性ＡＣＯＳ、または鼻茸のいずれか１つのそのような処置または阻害のための医薬品の製造に使用される。
【００８１】
そのような使用によれば、ＩＬ３３アンタゴニストは、ＩＬ３３トラップを含んでよい。ＩＬ３３トラップは、ＩＬ１ＲＬ１のＩＬ３３結合部分を含む第１ＩＬ３３結合ドメイン及びＩＬ−１ＲＡｃＰの細胞外部分を含む第２ＩＬ３３結合ドメインを含んでよい。ＩＬ３３アンタゴニストは、その代わりにＩＬ３３に特異的に結合する抗体またはその抗原結合断片を含んでよい。ＩＬ３３に特異的に結合する抗体またはその抗原結合断片は、配列番号：２７４のＨ１、Ｈ２、及びＨ３ドメインならびに配列番号：２８２のＬ１、Ｌ２、及びＬ３ドメインを含んでよい。ＩＬ−４Ｒアンタゴニストは、ＩＬ−４Ｒに特異的に結合する抗体またはその抗原結合断片を含んでよい。ＩＬ−４Ｒに特異的に結合する抗体またはその抗原結合断片は、配列番号：３３７のＨ１、Ｈ２、及びＨ３ドメインならびに配列番号：３３８のＬ１、Ｌ２、及びＬ３ドメインを含んでよい。
【００８２】
以下の実施例は、さらに詳細に本開示を記載するために提供される。それらは、限定されることなく本開示を例証することを意図する。
【実施例】
【００８３】
実施例１
慢性室内塵ダニ誘発線維症及び重篤な肺炎モデルにおける抗ＩＬ３３抗体、抗ＩＬ−４Ｒ抗体、及び両方の組合せ
慢性炎症性気道疾患は、主にアレルゲンまたはその他の病原体への反復曝露に起因する気道炎症の再発エピソードの結果である。ヒトでは、そのような慢性的損傷によって、免疫細胞による肺浸潤、サイトカイン産生、粘液産生及びコラーゲン沈着の増加を含む非常に幅広い病状が誘発される。強い気道リモデリングを伴う、炎症性サイトカイン及び免疫細胞浸潤物の増加は、気道狭窄、アレルゲンまたは病原体などの吸入トリガーに対する過敏症、気道閉塞及び肺機能喪失を招く。
【００８４】
関連インビボモデルにおいて抗ＩＬ３３阻害の効果を決定するために、慢性室内塵ダニ抽出物（ＨＤＭ）誘発線維症及び重篤な肺炎及びリモデリング試験を、マウスＩＬ３３の代わりにヒトＩＬ３３を発現するホモ接合体であるマウス（ＩＬ３３  ＨｕｍＩｎマウス）で実施した。米国公開第２０１５／０３２００２１号明細書及び同第２０１５／０３２００２２号明細書を参照のこと。慢性ＨＤＭ抽出物曝露によって重篤な肺炎が誘発されて、甚大な細胞浸潤、サイトカイン発現、及びリモデリングが引き起こされる。抗ＩＬ３３抗体、抗マウスＩＬ−４Ｒα抗体または両方の組合せに関する有効性を、本モデルで比較した。本試験で使用した抗マウスＩＬ−４Ｒα抗体は、Ｍ１Ｍ１８７５Ｎと称され、配列番号：３３５／３３６のＨＣＶＲ／ＬＣＶＲアミノ酸配列対を含む。本試験で使用した抗ＩＬ３３抗体は、Ｈ４Ｈ９６７５Ｐと称され、配列番号：２７４／２８２のＨＣＶＲ／ＬＣＶＲアミノ酸配列対を含む。
【００８５】
ＩＬ３３  ＨｕｍＩｎマウスに、２０μＬの１×リン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）で希釈した５０μｇの室内塵ダニ抽出物（ＨＤＭ、Ｇｒｅｅｒ、＃ＸＰＢ７０Ｄ３Ａ２．５）、または２０μＬの１×ＰＢＳのいずれかを、週に３日間で１５週間鼻腔内投与した。ＩＬ３３  ＨｕｍＩｎマウスの第２対照群に、２０μＬの１×ＰＢＳで希釈した５０μｇのＨＤＭ抽出物を、週に３日間で１１週間投与し、抗体処置の開始時における疾患の重篤さを評価した。４つの群のＨＤＭ負荷マウスに、２５ｍｇ／ｋｇの抗ＩＬ３３抗体Ｈ４Ｈ９６７５Ｐ、抗マウスＩＬ−４Ｒα抗体Ｍ１Ｍ１８７５Ｎ、両方の組合せ抗体、またはアイソタイプ対照抗体のいずれかを、ＨＤＭ負荷の１１週間後から開始して、次いでＨＤＭ負荷の終了まで週に２回（４週間の抗体処置）で皮下注射した。試験の１０８日目、全てのマウスを犠牲死させ、それらの肺を採取した。マウス群の実験上の投薬及び処置プロトコールを表３に示す。
【００８６】
【表３】
2020516289.tif 000004
【００８７】
サイトカイン分析用肺採取物。典型的な２型サイトカインのＩＬ−４、ＩＬ−５、及びＩＬ−１３、加えてＩＬ−１βまたはＴＮＦαなどの１型免疫応答により特徴的なサイトカインなどの主要なメディエーターの肺レベル上昇は、ヒトの肺疾患発症に関与している。これらの炎症性サイトカインの肺レベルを、本試験で測定した。
【００８８】
放血後、各マウスから右肺の前葉及び中葉を取り出し、１×Ｈａｌｔプロテアーゼ阻害剤カクテル（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、＃８７７８６）を補充した、組織タンパク質抽出試薬（１×Ｔ−ＰＥＲ試薬、Ｐｉｅｒｃｅ、＃７８５１０）の溶液を含有するチューブ内に入れた。以後の全ステップを氷上で実施した。Ｔ−ＰＥＲ試薬（プロテアーゼ阻害剤カクテル含有）の容積を、組織対Ｔ−ＰＥＲ比が１：７（ｗ／ｖ）に一致するよう各試料について調整した。肺試料を、ＴｉｓｓｕｅＬｙｓｅｒ  ＩＩ（Ｑｉａｇｅｎ  ＃８５３００）を使用して機械的に破砕した。得られた溶解物を遠心分離し、ペレット破片にした。可溶性タンパク質抽出物を含有する上清を新しいチューブに移し、さらなる分析時まで４℃で保存した。
【００８９】
肺タンパク質抽出物中の総タンパク質含有量を、Ｂｒａｄｆｏｒｄアッセイを使用して測定した。アッセイのために、１０μＬの希釈抽出物試料を９６ウェルプレート中に２連で播種し、２００μＬの１×色素試薬（Ｂｉｏｒａｄ、＃５００−０００６）と混合した。ウシ血清アルブミン（ＢＳＡ、Ｓｉｇｍａ、＃Ａ７９７９）の、１×Ｔ−Ｐｅｒ試薬中７００μｇ／ｍＬで開始した段階希釈物を標準物として使用し、抽出物のタンパク質濃度を決定した。５分間のインキュベーションを室温で行った後、５９５ｎｍでの吸光度を、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｄｅｖｉｃｅｓ  ＳＰＥＣＴＲＡＭＡＸ（登録商標）Ｍ５プレートリーダー上で測定した。ＢＳＡ標準に基づいて、肺抽出物の総タンパク質含有量を決定するためのデータ分析は、ＧｒａｐｈＰａｄ  Ｐｒｉｓｍ（商標）ソフトウェアを使用して実施した。
【００９０】
肺タンパク質抽出物中のサイトカイン濃度を、Ｐｒｏｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ  Ｐａｎｅｌ１（マウス）マルチプレックスイムノアッセイキット（ＭｅｓｏＳｃａｌｅ  Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ、＃Ｋ１５０４８Ｇ−２）及びカスタムマウス６プレックスＭＵＬＴＩ−ＳＰＯＴ（登録商標）イムノアッセイキット（ＭｅｓｏＳｃａｌｅ  Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ、＃Ｋ１５２Ａ４１−４）を使用し、製造業者の指示に従って測定した。簡潔に述べると、５０μＬ／ウェルの較正物質及び試料（Ｄｉｌｕｅｎｔ４１で希釈）を、捕捉抗体でプレコートしたプレートに添加し、７００ｒｐｍで振盪しながら２時間室温でインキュベートした。次いで、プレートを、０．０５％（ｗ／ｖ）ＴＷＥＥＮ（登録商標）−２０界面活性剤を含有する１×ＰＢＳで３回洗浄し、続いてＤｉｌｕｅｎｔ４５で希釈した２５μＬの検出抗体溶液を添加した。振盪しながら室温で２時間インキュベートした後、プレートを３回洗浄し、１５０μＬの２×リード緩衝液を各ウェルに添加した。電気化学発光をＭＳＤ  Ｓｐｅｃｔｏｒ機器で直ちに読み取った。データ分析を、Ｇｒａｐｈｐａｄ  Ｐｒｉｓｍソフトウェアを使用して実施した。
【００９１】
各群の全マウスからの肺総タンパク質抽出物中における各サイトカイン濃度を、Ｂｒａｄｆｏｒｄアッセイによって測定した抽出物の総タンパク質含有量を基準として正規化し、表４に示す通り、各群について、肺総タンパク質ｍｇあたりのサイトカインの平均ｐｇ（ｐｇ／ｍｇ肺タンパク質、±ＳＤ）として表した。
【００９２】
肺サイトカイン分析。表４に示す通り、アイソタイプ対照抗体での処置有りまたは無しの、ＨＤＭを１５週間施したＩＬ３３  ＨｕｍＩｎマウスの肺中で放出されるサイトカイン及びケモカインＩＬ−４、ＩＬ−５、ＩＬ−６、ＩＬ−１β及びＭＣＰ−１のレベルは、１×ＰＢＳ単独で負荷したＩＬ３３  ＨｕｍＩｎマウス中よりも著しく高かった。同様に、ＨＤＭを１５週間施したＩＬ３３  ＨｕｍＩｎマウスの肺中では、サイトカインＩＬ−１３及びＴＮＦαの放出が増加する傾向があった。対照的に、抗ＩＬ３３及び抗マウスＩＬ−４Ｒα抗体の組合せで処置したＩＬ３３  ＨｕｍＩｎマウスの肺中では、慢性的なＨＤＭ負荷の最後の４週間で、この期間中にアイソタイプ対照抗体と共にＨＤＭを投与したＩＬ３３  ＨｕｍＩｎマウスと比較した場合、ＩＬ−６、ＩＬ−１３及びＭＣＰ−１のレベルが大幅に減少した。抗ＩＬ３３及び抗マウスＩＬ−４Ｒα抗体の組合せで処置したＩＬ３３  ＨｕｍＩｎマウスでは、慢性的なＨＤＭ負荷の最後の４週間で、この期間中にアイソタイプ対照抗体と共にＨＤＭを投与したＩＬ３３  ＨｕｍＩｎマウスと比較した場合、ＩＬ−４、ＩＬ−５、ＩＬ−１β及びＴＮＦαの肺レベルが減少する傾向があった。抗ＩＬ３３及び抗マウスＩＬ−４Ｒα抗体の組合せで観察した肺サイトカインに対する効果は、個々の抗体のいずれかによる単独での処置よりも大きかった。
【００９３】
【表４−１】
2020516289.tif 000005
【００９４】
【表４−２】
2020516289.tif 000006
【００９５】
遺伝子発現分析用肺採取物。放血後、各マウスから右肺の副葉を取り出し、４００μＬのＲＮＡ  Ｌａｔｅｒ（Ａｍｂｉｏｎ、＃ＡＭ７０２０）を含有するチューブ内に入れ、処理時まで−２０℃で保存した。組織をＴＲＩｚｏｌ中で均質化し、クロロホルムを相分離のために使用した。全ＲＮＡを含有する水相を、製造業者の仕様に従って、ＭａｇＭＡＸ（商標）−９６  ｆｏｒ  Ｍｉｃｒｏａｒｒａｙｓ  Ｔｏｔａｌ  ＲＮＡ  Ｉｓｏｌａｔｉｏｎ  Ｋｉｔ（Ｌｉｆｅ  ＴｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓによるＡｍｂｉｏｎ、＃ＡＭ１８３９）を使用して精製した。ゲノムＤＮＡを、上に列挙したＭａｇＭＡＸキットからのＭａｇＭＡＸ（商標）Ｔｕｒｂｏ（商標）ＤＮａｓｅ  Ｂｕｆｆｅｒ及びＴＵＲＢＯ  ＤＮａｓｅを使用して取り出した。ｍＲＮＡ（最大２．５μｇ）を、ＳｕｐｅｒＳｃｒｉｐｔ（登録商標）ＶＩＬＯ（商標）Ｍａｓｔｅｒ  Ｍｉｘ（Ｌｉｆｅ  ＴｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓによるＩｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、＃１１７５５５００）を使用してｃＤＮＡに逆転写した。ｃＤＮＡを２ｎｇ／μＬに希釈し、１０ｎｇのｃＤＮＡを、ＴａｑＭａｎ（登録商標）Ｇｅｎｅ  Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  Ｍａｓｔｅｒ  Ｍｉｘ（Ｌｉｆｅ  ＴｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓによるＡｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ、＃４３６９５４２）及び関連プローブ（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ、マウスＢ２ｍ：Ｍｍ００４３７７６２＿ｍ１、マウスＩｌ４：Ｍｍ００４４５２５９＿ｍ１、マウスＩｌ５：Ｍｍ００４３９６４６＿ｍ１、マウスＩｌ１３：Ｍｍ００４３４２０４＿ｍ１、マウスＩｌ９：Ｍｍ００４３４３０５＿ｍ１、マウスＩｌ６：Ｍｍ００４４６１９０＿ｍ１、マウスＣｃｌ２：Ｍｍ００４４１２４２＿ｍ１、マウスＣｃｌ１１：Ｍｍ００４４１２３８＿ｍ１、マウスＣｃｌ２４：Ｍｍ００４４４７０１＿ｍ１、マウスＴｎｆ：Ｍｍ００４４３２５８＿ｍ１、マウスＴｇｆｂ１：Ｍｍ０１１７８８２０＿ｍ１、マウスＩｌ１ｒｌ１：Ｍｍ００５１６１１７＿ｍ１、マウスＩｌ１３ｒａ２：Ｍｍ００５１５１６６＿ｍ１、マウスＣｏｌ１５ａ１：Ｍｍ００４５６５８４＿ｍ１、マウスＣｏｌ２４ａ１：Ｍｍ０１３２３７４４＿ｍ１）を用いて、ＡＢＩ  ７９００ＨＴ  Ｓｅｑｕｅｎｃｅ  Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ  Ｓｙｓｔｅｍ（Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ）を使用して増幅した。Ｂ２ｍを内部標準遺伝子として使用し、任意のｃＤＮＡ入力差を正規化した。全ての試料の正規化に使用した参照群は、群１試料（「１×ＰＢＳ負荷」）の平均であった。各遺伝子の発現を、同じ試料内のＢ２ｍ発現を基準として正規化し、表５に示す通り、参照群におけるその正規化発現と比較して表した（平均±ＳＤ）。
【００９６】
肺遺伝子発現分析。表５に示す通り、アイソタイプ対照抗体での処置有りまたは無しの、ＨＤＭを１５週間施したＩＬ３３  ＨｕｍＩｎマウスの肺中におけるサイトカイン、ケモカイン及びコラーゲン遺伝子Ｉｌ４、Ｉｌ１３、Ｉｌ６、Ｃｃｌ２、Ｔｇｆｂ１、Ｉｌ１３ｒａ２及びＣｏｌ２４ａ１の発現レベルは、１×ＰＢＳ単独で負荷したＩＬ３３  ＨｕｍＩｎマウスと比較して著しく増加した。同様に、ＨＤＭを１５週間施したＩＬ３３  ＨｕｍＩｎマウスの肺中では、遺伝子Ｉｌ５、Ｉｌ９、Ｃｃｌ１１、Ｃｃｌ２４、Ｔｎｆ、Ｉｌ１ｒｌ１及びＣｏｌ１５ａ１の発現が増加する傾向があった。
【００９７】
対照的に、抗ＩＬ３３及び抗マウスＩＬ−４Ｒα抗体の組合せで処置したＩＬ３３  ＨｕｍＩｎマウスの肺中では、慢性的なＨＤＭ負荷の最後の４週間で、この期間中にアイソタイプ対照抗体と共にＨＤＭを投与したＩＬ３３  ＨｕｍＩｎマウスと比較した場合、Ｉｌ６、Ｃｃｌ２、Ｃｃｌ１１及びＣｃｌ２４の発現レベルが大幅に減少した。抗ＩＬ３３及び抗マウスＩＬ−４Ｒα抗体の組合せで処置したマウスでは、慢性的なＨＤＭ負荷の最後の４週間で、この期間中にアイソタイプ対照抗体と共にＨＤＭを投与したＩＬ３３  ＨｕｍＩｎマウスと比較した場合、Ｉｌ４、Ｉｌ５、Ｉｌ１３、Ｉｌ９、Ｔｎｆ、Ｔｇｆｂ１、Ｉｌ１ｒｌ１、Ｉｌ１３ｒａ２、Ｃｏｌ１５ａ１及びＣｏｌ２４ａ１発現レベルが減少する傾向があった。抗ＩＬ３３及び抗マウスＩＬ−４Ｒα抗体の組合せで観察した遺伝子発現に対する効果は、個々の抗体のいずれかによる単独での処置よりも大きかった。
【００９８】
【表５−１】
2020516289.tif 000007
【００９９】
【表５−２】
2020516289.tif 000008
【０１００】
【表５−３】
2020516289.tif 000009
【０１０１】
肺細胞浸潤物分析用の肺採取物。免疫細胞による肺浸潤は、喘息及びＣＯＰＤを含む、多数の気道炎症性疾患で観察される。好中球性肺炎は、喘息患者の肺機能低下及び重篤な組織リモデリングと関連している。好酸球性肺炎は、アトピー性疾患で通常見られる２型炎症の顕著な特徴である。ヒトでは、肉芽腫性肺疾患及びその他の慢性炎症状態を有する患者において、高ＣＤ４／ＣＤ８比が観察される。フローサイトメトリーを本試験で使用し、ＨＤＭ曝露マウスの肺中において細胞浸潤のレベルを決定した。
【０１０２】
放血後、各マウスから右肺の後葉を取り出し、およそ２〜３ｍｍサイズの細かい角切りにして、次いでハンクス平衡塩類溶液（ＨＢＳＳ）（Ｇｉｂｃｏ、＃１４０２５）で希釈した２０μｇ／ｍＬのＤＮＡｓｅ（Ｒｏｃｈｅ、＃１０１０４１５９００１）及び０．７Ｕ／ｍＬのリベラーゼＴＨ（Ｒｏｃｈｅ、＃０５４０１１５１００１）の溶液を含有するチューブ内に入れ、それを３７℃水浴中で２０分間インキュベートし、５分おきにボルテックスした。エチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ、Ｇｉｂｃｏ、＃１５５７５）を、１０ｍＭの最終濃度で添加することによって反応を停止させた。その後、各肺を、ｇｅｎｔｌｅＭＡＣＳ  ｄｉｓｓｏｃｉａｔｏｒ（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ  Ｂｉｏｔｅｃ、＃１３０−０９５−９３７）を使用して分離し、次いで７０μｍフィルターに通して濾過して遠心分離した。得られた肺ペレットを、１ｍＬの１×赤血球溶解緩衝液（Ｓｉｇｍａ、＃Ｒ７７５７）中に再懸濁させて、赤血球を除去した。３分間室温でインキュベートした後、３ｍＬの１×ＤＭＥＭを添加して、赤血球溶解緩衝液を不活化させた。次いで、細胞懸濁液を遠心分離し、得られた細胞ペレットを、５ｍＬのＭＡＣＳ緩衝液（ａｕｔｏＭＡＣＳ  Ｒｕｎｎｉｎｇ  Ｂｕｆｆｅｒ、Ｍｉｌｔｅｎｙｉ  Ｂｉｏｔｅｃ、＃１３０−０９１−２２１）中に再懸濁させた。再懸濁した試料を７０μｍフィルターに通して濾過し、１ウェルあたり１×１０６細胞を９６ウェルＶ底プレート中に播種した。次いで、細胞を遠心分離し、ペレットを１×ＰＢＳで洗浄した。２回目の遠心分離後、細胞生存能を決定するために、細胞ペレットを、１×ＰＢＳで１：５００に希釈した１００μＬのＬＩＶＥ／ＤＥＡＤ  Ｆｉｘａｂｌｅ  Ｂｌｕｅ  Ｄｅａｄ  Ｃｅｌｌ  Ｓｔａｉｎ（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ、＃Ｌ２３１０５）中に再懸濁させ、遮光しながら室温で２０分間インキュベートした。１×ＰＢＳで１回洗浄した後、細胞を、１０μｇ／ｍＬの精製ラット抗マウスＣＤ１６／ＣＤ３２Ｆｃ  Ｂｌｏｃｋ（クローン：２．４Ｇ２、ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ、＃５５３１４２）を含有するＭＡＣＳ緩衝液の溶液中において４℃で１０分間インキュベートした。次いで、細胞を、ＭＡＣＳ緩衝液で希釈した適切な２×抗体混合物（表６に記載）中において遮光しながら４℃で３０分間インキュベートした。抗体のインキュベーション後、細胞をＭＡＣＳ緩衝液で２回洗浄し、ＢＤ  ＣｙｔｏＦｉｘ（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ、＃５５４６５５）中に再懸濁させて、次いで遮光しながら４℃で１５分間インキュベートした。その後、細胞を洗浄してＭＡＣＳ緩衝液中に再懸濁させ、次いでフローサイトメトリーによる細胞浸潤物の分析のためにＢＤ  ＦＡＣＳチューブ（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ、＃３５２２３５）に移した。
【０１０３】
ＣＤ４及びＣＤ８Ｔ細胞を、それぞれ生細胞でＣＤ４５＋、ＳＳＣＬｏ、ＦＳＣＬｏ、ＣＤ３＋、ＣＤ１９−、ＣＤ４＋、ＣＤ８−及び生細胞でＣＤ４５＋、ＳＳＣＬｏ、ＦＳＣＬｏ、ＣＤ３＋、ＣＤ１９−、ＣＤ４−、ＣＤ８＋である細胞として定義した。活性化ＣＤ４Ｔ細胞を、生細胞でＣＤ４５＋、ＳＳＣＬｏ、ＦＳＣＬｏ、ＣＤ３＋、ＣＤ１９−、ＣＤ４＋、ＣＤ８−、及びＣＤ６９＋である細胞として定義した。活性化ＣＤ８Ｔ細胞を、生細胞でＣＤ４５＋、ＳＳＣＬｏ、ＦＳＣＬｏ、ＣＤ３＋、ＣＤ１９−、ＣＤ４−、ＣＤ８＋、及びＣＤ６９＋である細胞として定義した。活性化Ｂ細胞を、生細胞でＣＤ４５＋、ＳＳＣＬｏ、ＦＳＣＬｏ、ＣＤ３−、ＣＤ１９＋、及びＣＤ６９＋である細胞として定義した。ＳＴ２＋ＣＤ４＋Ｔ細胞を、生細胞でＣＤ４５＋、ＳＳＣＬｏ、ＦＳＣＬｏ、ＣＤ３＋、ＣＤ１９−、ＳＴ２＋及びＣＤ４＋である細胞として定義した。好酸球を、生細胞でＣＤ４５＋、ＧＲ１−、ＣＤ１１ｃｌｏ、ＳｉｇｌｅｃＦｈｉとして定義した。肺胞マクロファージを、生細胞でＣＤ４５＋、ＧＲ１−、ＣＤ１１ｃＨｉ、ＳｉｇｌｅｃＦｈｉとして定義した。活性化細胞のデータを、母集団（ＣＤ４）内の活性化細胞（ＣＤ６９＋）の頻度として表す（±ＳＤ）。ＳＴ２＋ＣＤ４＋Ｔ細胞のデータを、Ｔ細胞（生細胞でＣＤ４５＋、ＳＳＣＬｏ、ＦＳＣＬｏ、ＣＤ３＋及びＣＤ１９−である細胞として定義した）の頻度として表す。好酸球及び肺胞マクロファージのデータを、生細胞の頻度として表す。ＣＤ４／ＣＤ８Ｔ細胞比を、生集団内におけるＣＤ４Ｔ細胞頻度対ＣＤ８Ｔ細胞頻度の比として算出する。全てのデータを表７に示す。
【０１０４】
【表６】
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【０１０５】
肺細胞浸潤物分析。表７に示す通り、アイソタイプ対照抗体での処置有りまたは無しの、ＨＤＭを１５週間施したＩＬ３３  ＨｕｍＩｎマウスの肺中における好酸球、活性化Ｂ細胞、活性化ＣＤ８細胞、ＳＴ２＋Ｃｄ４＋Ｔ細胞の頻度及びＣＤ４／ＣＤ８Ｔ細胞比は、１×ＰＢＳ単独で負荷したＩＬ３３  ＨｕｍＩｎマウス中よりも著しく高かった。同様に、ＨＤＭを１５週間施したＩＬ３３  ＨｕｍＩｎマウスの肺中では、活性化ＣＤ４Ｔ細胞の頻度が増加する傾向があった。アイソタイプ対照抗体処置の存在下または不存在下における、ＨＤＭを１５週間施したＩＬ３３  ＨｕｍＩｎマウスの肺中では、フローサイトメトリーによって検出した肺胞マクロファージの頻度が低減する傾向があった。抗ＩＬ３３及び抗マウスＩＬ−４Ｒα抗体の組合せで処置したＩＬ３３  ＨｕｍＩｎマウスの肺中では、慢性的なＨＤＭ負荷の最後の４週間で、この期間中にアイソタイプ対照抗体と共にＨＤＭを投与したＩＬ３３  ＨｕｍＩｎマウスと比較した場合、肺胞マクロファージの頻度が著しく増加した。同様に、抗ＩＬ３３及び抗マウスＩＬ−４Ｒα抗体の組合せで処置したマウスの肺中では、慢性的なＨＤＭ負荷の最後の４週間で、この期間中にアイソタイプ対照抗体と共にＨＤＭを投与したＩＬ３３  ＨｕｍＩｎマウスと比較した場合、好酸球、活性化ＣＤ４及びＣＤ８Ｔ細胞、活性化Ｂ細胞、ＳＴ２＋ＣＤ４＋Ｔ細胞の頻度、加えてＣＤ４／ＣＤ８Ｔ細胞比が減少する傾向があった。抗ＩＬ３３及び抗マウスＩＬ−４Ｒα抗体の組合せで観察した肺中における好酸球、肺胞マクロファージ、活性化ＣＤ８Ｔ細胞、ＳＴ２＋ＣＤ４＋Ｔ細胞の頻度及びＣＤ４／ＣＤ８細胞比に対する効果は、個々の抗体のいずれかによる単独での処置よりも有効性が高いという傾向を示す。
【０１０６】
【表７−１】
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【０１０７】
【表７−２】
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【０１０８】
組織病理学の定量用肺採取物。本モデルで観察した炎症パターンは、ＨＤＭ曝露肺の広範かつ重篤な構造変化を伴い、杯細胞化生、上皮下コラーゲン沈着及び甚大な肺硬化の増加という証拠を有する。これらの病状は、肺機能及び気道過敏性低下の一因となるヒト炎症性呼吸器疾患の既知の特徴である。
【０１０９】
放血後、左肺を取り出して、１×リン酸緩衝生理食塩水中の４％（ｗ／ｖ）パラホルムアルデヒド（Ｂｏｓｔｏｎ  Ｂｉｏｐｒｏｄｕｃｔｓ、＃ＢＭ−１５５）の３ｍＬ溶液を含有するプレート内に入れ、室温で３日間保存した。次いで、肺試料を拭って乾燥させ、組織学的分析のために７０％エタノールを含有するチューブに移した。パラフィン包埋、切断ならびに過ヨウ素酸シッフ（ＰＡＳ）またはヘマトキシリン及びエオシン（Ｈ＆Ｅ）染色のために、試料をＨｉｓｔｏｓｅｒｖ，Ｉｎｃ（Ｇｅｒｍａｎｔｏｗｎ、ＭＤ）に送付した。
【０１１０】
杯細胞化生の定量。杯細胞化生及び粘液分泌過多は、喘息、慢性閉塞性肺疾患、及び嚢胞性線維症を含む多くの肺疾患の顕著な特徴である。過度な粘液産生は気道閉塞を招き、いくつかの重要な転帰、例えば、ヒトの肺機能、健康関連生活の質、憎悪、入院、及び死亡率などに影響を及ぼす。ＰＡＳ陽性杯細胞及び全上皮細胞を、１ミリメートル長の主気管支で計数した。杯細胞化生は、表８に示す通り、１ミリメートルの気管支上皮中におけるＰＡＳ陽性細胞の頻度（％、±ＳＤ）として表す。
【０１１１】
肺硬化の定量。肺硬化は、肺胞腔中における固形または液状物質の蓄積を含む。肺硬化は、肉眼病変の測定値として本明細書で使用した、細胞浸潤物、過形成、及び粘液産生の組合せを反映する可能性がある複合エンドポイントである。結晶体が占めている肺領域の画分を、モバットペンタクローム染色パラフィン包埋肺切片上で、ＩｍａｇｅＪソフトウェア（ＮＩＨ、Ｂｅｔｈｅｓｄａ、ＭＤ）を使用して定量した。粒子分析機能を使用して、切片の全肺領域、加えて切片の硬化領域を測定した。硬化肺領域の画分を、表８に示す通り、両方の測定値の比によって求める。
【０１１２】
上皮下線維症の定量。上皮下線維症は、肺上皮の下における過剰な間質性コラーゲン沈着を含む。上皮下線維症の増加は、ヒトの喘息と特に関連していると報告されている。本モデルでは、上皮下線維症をマッソントリクローム染色パラフィン包埋肺切片上で、ＨａＬｏソフトウェア（Ｉｎｄｉｃａ  Ｌａｂｓ、ＮＭ）を使用して測定した。層厚さツールを使用して、気管支上皮の下にあるコラーゲン層の厚さを、主気管支１ミリメートル間にわたって約３０μｍ間隔で複数回記録した。上皮下線維症を、表８に示す通り、上皮の下にあるコラーゲン層の平均厚さ（μｍ、±ＳＤ）として表す。
【０１１３】
肺組織病理学の分析。表９に示す通り、１×ＰＢＳ単独で負荷したＩＬ３３  ＨｕｍＩｎマウスと比較して、アイソタイプ対照抗体での処置有りまたは無しの、ＨＤＭを１５週間施したＩＬ３３  ＨｕｍＩｎマウスの肺中では、杯細胞化生が増加する傾向があった。同様に、ＨＤＭを１５週間施したＩＬ３３  ＨｕｍＩｎマウス中では、肺硬化、加えて上皮下コラーゲンの厚さが大幅に増加した。
【０１１４】
対照的に、抗ＩＬ３３及び抗マウスＩＬ−４Ｒα抗体の組合せで処置したＩＬ３３  ＨｕｍＩｎマウスでは、慢性的なＨＤＭ負荷の最後の４週間で、この期間中にアイソタイプ対照抗体と共にＨＤＭを投与したＩＬ３３  ＨｕｍＩｎマウスと比較した場合、杯細胞化生及び上皮下コラーゲンの厚さが減少する傾向、ならびに肺硬化が大幅に減少する傾向があった。抗ＩＬ３３及び抗マウスＩＬ−４Ｒα抗体の組合せで観察した杯細胞化生、肺硬化及び上皮下コラーゲンの厚さに対する効果は、個々の抗体のいずれかによる単独での処置よりも有効性が高いという傾向を示した。
【０１１５】
【表８】
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【０１１６】
ＩｇＥ及びＨＤＭ特異的ＩｇＧ１レベル測定用の血清収集物。各マウスの血清試料中における総ＩｇＥ濃度を決定するために、サンドイッチＥＬＩＳＡ  ＯＰＴＥＩＡキット（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ、＃５５５２４８）を製造業者の指示に従って使用した。血清試料を希釈し、９６ウェルプレート上にコーティングした抗ＩｇＥ捕捉抗体と共にインキュベートした。総ＩｇＥを、ビオチン化抗マウスＩｇＥ二次抗体によって検出した。精製西洋ワサビペルオキシダーゼ（ＨＲＰ）標識マウスＩｇＥを、標準物として使用した。クロマゲン３，３’，５，５’−テトラメチルベンジジン（ＴＭＢ）（ＢＤ  ＯＰＴＥＩＡ基質試薬セット、ＢＤ、＃５５５２１４）を使用して、ＨＲＰ活性を検出した。次いで、１Ｍ硫酸の停止溶液を添加し、４５０ｎｍでの吸光度をＭｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｄｅｖｉｃｅｓ  ＳｐｅｃｔｒａＭａｘ  Ｍ５プレートリーダー上で測定した。データ分析を、Ｐｒｉｓｍ（商標）ソフトウェアを使用して実施した。各実験群について血清中の循環ＩｇＥレベルの平均量を、表９に示す通り、ｎｇ／ｍＬ（±ＳＤ）として表す。
【０１１７】
各マウスからの血清試料中におけるＨＤＭ特異的ｌｇＧ１レベルを決定するために、ＥＬＩＳＡを利用した。ＨＤＭ（Ｇｒｅｅｒ、＃ＸＰＢ７０Ｄ３Ａ２．５）コーティングプレートを、段階希釈マウス血清試料と共にインキュベートし、続いてラット抗マウスｌｇＧ１−ＨＲＰ複合化抗体（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ、＃５５９６２６）と共にインキュベートした。全ての試料をＴＭＢ溶液で発色させて、上に記載した通りに分析した。血清中の循環ｌｇＧ１の相対レベルを、力価単位として表した（力価単位は、２回のバックグラウンドを超える、ＯＤ４５０を達成するのに必要な希釈係数を、測定したＯＤに乗じることによって算出した）。各実験群について血清中の平均循環ＨＤＭ特異的ｌｇＧ１レベルを、表９に示す通り、力価×１０６（±ＳＤ）として表す。
【０１１８】
ＩｇＥ及びＨＤＭ特異的ＩｇＧ１の循環レベルの分析。表９に示す通り、１×ＰＢＳ単独で負荷したＩＬ３３  ＨｕｍＩｎマウス中において、アイソタイプ対照抗体での処置有りまたは無しの、ＨＤＭを１５週間施したＩＬ３３  ＨｕｍＩｎマウスの血清中では、ＩｇＥの循環レベルが大幅に増加した。同様に、ＨＤＭを１５週間施したＩＬ３３  ＨｕｍＩｎマウスの血清中では、循環ＨＤＭ特異的ＩｇＧ１のレベルが増加する傾向があった。対照的に、アイソタイプ対照抗体と共にＨＤＭを投与したＩＬ３３  ＨｕｍＩｎマウスと比較した場合、抗ＩＬ３３及び抗マウスＩＬ−４Ｒα抗体の組合せで処置したＩＬ３３  ＨｕｍＩｎマウスの血清中では、慢性的なＨＤＭ負荷の最後の４週間でＩｇＥの循環レベルが大幅に低減し、ＨＤＭ特異的ＩｇＧ１の循環レベルが低減する傾向があった。
【０１１９】
【表９】
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【０１２０】
重篤な混合炎症と関連して開始したＨ４Ｈ９６７５Ｐ及び抗ｍＩＬ−４Ｒα処置の組合せは、測定した全ての炎症パラメータを改善し、最大でベースラインレベルまで減少させる。さらに、複合的な肺肉眼病変、杯細胞化生、肺細胞浸潤、及びサイトカインレベルを含む、最も致命的なエンドポイントのいくつかに対して相加効果を観察する。したがって、両方の経路を同時にブロックすることは、重篤な混合炎症及び組織病変と関連する多数の炎症性メディエーターに影響を与え、多数のパラメータをベースラインまで正常化する可能性を有する。
【０１２１】
実施例２
ＩＬ３３及びその受容体の遺伝的バリアントは、好酸球性喘息及びＣＯＰＤの両方と関連する
本実施例では、喘息、ＣＯＰＤ、及びＡＣＯＳのリスクを有するＩＬ３３及びＩＬ１ＲＬ１の以前に同定した喘息リスクバリアント間の関係を、これまでに集められたそのような症例に関する最大の混合収集物で検査し、その中で遺伝子データを電子健康記録に関連付ける。喘息、ＣＯＰＤ、及びＡＣＯＳの好酸球サブタイプに対する、加えて鼻茸などの関連上気道疾患に対するこれらのバリアントの重要性を検査した。加えて、これらの疾患を有するＩＬ１ＲＬ１及びＩＬ３３の予測した機能喪失バリアント（ｐＬＯＦ）間の関連を評価した。
【０１２２】
ヒト遺伝学研究監督。ヒト遺伝学研究は、Ｒｅｇｅｎｅｒｏｎ  Ｇｅｎｅｔｉｃｓ  Ｃｅｎｔｅｒ（ＲＧＣ）及びＧｅｉｓｉｎｇｅｒ  Ｈｅａｌｔｈ  Ｓｙｓｔｅｍ（ＧＨＳ）のＤｉｓｃｏｖＥＨＲ研究の一部として実施された。
【０１２３】
ＤｉｓｃｏｖＥＨＲ参加者及び疾患定義。本試験の際、ＤｉｓｃｏｖＥＨＲ研究は、ＧＨＳのＭｙＣｏｄｅ（登録商標）Ｃｏｍｍｕｎｉｔｙ  Ｈｅａｌｔｈ  Ｉｎｉｔｉａｔｉｖｅに登録した、合計で９２，３２３人の成人個体を含んだ。本試験について、ヨーロッパ系祖先を持つ８６，００４人及び８３，３３９人の個体は、分析のための表現型、ならびにそれぞれエクソームシーケンシング及び遺伝子型データを有した。参加者を、プライマリ・ケア及び専門クリニックの外来患者から募集した。好酸球数及び疾患診断コード（国際疾病分類第９回改訂版［ＩＣＤ−９］）をＥＨＲから抽出し、これは１４年間の臨床ケアの中央値をカバーしていた。ＥＨＲ記録好酸球数の中央測定値を、個体内中央値からの＞３標準偏差であった偽の可能性がある値を除去した後、完全血球数から導いた。次の基準のうち少なくとも１つに合致した場合、症例状態をＩＣＤ−９コードに基づいて割り当てた：（１）診断コードの問題リスト登録、または（２）別々の暦日に２件の別々の臨床面接を開始した面接診断コード。個体を、ＩＣＤ−９診断コードに基づいて３つの症例分類（喘息、ＣＯＰＤ及びＡＣＯＳ）のうち１つ以上に割り当てた。
【０１２４】
全ての二分形質分析の対照患者を、喘息またはＣＯＰＤのＩＣＤ−９診断コードに１つも当てはまらない個体として定義した。
シーケンシング及びジェノタイピング。試料調製及び全エクソームシーケンシングを実施した。簡潔に述べると、エクソーム捕捉を、ＮｉｍｂｌｅＧｅｎプローブ（Ｒｏｃｈｅ、ＳｅｑＣａｐ  ＶＣＲｏｍｅ）またはＩｎｔｅｇｒａｔｅｄ  ＤＮＡ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓプローブ（ＩＤＴ、ｘＧＥＮ  Ｅｘｏｍｅ  Ｒｅｓｅａｒｃｈパネル）のいずれかを追加のコンテンツと共に使用し、各々の製造業者の推奨プロトコールに従って実施した。捕捉ＤＮＡをＰＣＲ増幅し、ｑＲＴ−ＰＣＲ（Ｋａｐａ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ）で定量した。多重化試料を、Ｉｌｌｕｍｉｎａ  ｖ４  ＨｉＳｅｑ２５００またはＨｉＳｅｑ  Ｘシーケンサー上で７５ｂｐペアエンドシーケンシングを使用し、試料の９６％における、標的塩基の８５％を超える部分の２０×半数体リード深度よりも多くを提供するのに十分なカバレッジ深度（標的塩基のおよそ８０×平均半数体リード深度）までシーケンスした。各Ｉｌｌｕｍｉｎａ  ＨｉＳｅｑ２５００ランからの生配列データを、配列リードアラインメント及びバリアント同定のためにＤＮＡｎｅｘｕｓプラットフォームにアップロードした。生配列データを、ＢＣＬファイルから試料特有のＦＡＳＴＱファイルに変換し、これを、ＢＷＡ−ｍｅｍを用いてヒト参照ビルドＧＲＣｈ３８にアラインメントした。一塩基バリアント（ＳＮＶ）及び挿入／欠失（インデル）配列バリアントを、Ｇｅｎｏｍｅ  Ａｎａｌｙｓｉｓ  Ｔｏｏｌｋｉｔを使用して同定した。１０％未満の遺伝子型率を有する試料を除外した。最終分析のために、エクソームデータは、それぞれＶＣＲｏｍｅ  ｘＧＥＮプローブセットを使用して捕捉したヨーロッパ系祖先を持つ５９，０８２人及び２９，５０４人の個体について利用可能であった。
【０１２５】
ＤＮＡのアリコートを、Ｈｕｍａｎ  ＯｍｎｉＥｘｐｒｅｓｓ  Ｅｘｏｍｅ  ＢｅａｄｃｈｉｐまたはＧｌｏｂａｌ  Ｓｃｒｅｅｎｉｎｇ  Ａｒｒａｙ（Ｉｌｌｕｍｉｎａ  Ｃｏｒｐ．）を使用してジェノタイピングした。最終分析のために、チップデータは、それぞれＯｍｎｉ及びＧＳＡ  ＢｅａｄＣｈｉｐ上でアッセイしたヨーロッパ系祖先を持つ５６，２３９人及び２８，５００人の個体について利用可能であった。
【０１２６】
試験設計及び統計分析。ＯＭＮＩ及びＧＳＡチップデータを使用して、閉塞性肺疾患、その他の気道疾患、及び循環好酸球数との関連について、２つの以前に同定した喘息リスクバリアント（ＩＬ３３（ｒｓ１３４２３２６）及びＩＬ１ＲＬ１（ｒｓ１４２０１０１））を評価した。これらのバリアントを、共変量として年齢、年齢２、性別、喫煙状態、及び祖先に関する最初の４つの主成分を含む、ＰＬＩＮＫまたはＲでのロジスティック回帰を使用し、加法モデル下において疾患との関連について試験した。ＥＨＲ記録好酸球数の中央値を対数変換し、上記と同じ共変量について制御した線形（ＰＬＩＮＫ、Ｒ）モデルを使用し、加法遺伝子モデル下において遺伝子型との関連について試験した。全てのｐ値は、加法遺伝子モデルに一致する。両方のプラットフォームに関する分析から得られた要約統計量を、メタ分析によって組み合わせた。
【０１２７】
同じ統計的枠組み下において、エクソームデータを使用し、ＩＬ１ＲＬ１またはＩＬ３３内に凝集したｐＬＯＦバリアントならびに閉塞性肺疾患転帰及び好酸球数間の関連を同定した。各遺伝子において、個体を、個体がｐＬＯＦを一切持たなかった場合に０、個体が少なくとも１つのｐＬＯＦのヘテロ接合体キャリアであった場合に１とコードし、ＩＬ１ＲＬ１またはＩＬ３３のいずれかのホモ接合体ｐＬＯＦキャリアは、本試験では一切観察しなかった。両方のプラットフォームに関する分析から得られた要約統計量を、メタ分析によって組み合わせた。
【０１２８】
２つの独立したバリアント（ＩＬ３３（ｒｓ１３４２３２６）及びＩＬ１ＲＬ１（ｒｓ１４２０１０１））のリスクアレルの合計を反映している遺伝的リスクスコアも、ロジスティック及び線形回帰モデルならびに上に記載した同じ共変量を使用して、閉塞性肺疾患転帰及び好酸球数の予測因子として使用した。バリアントの一方または両方の遺伝子型データを欠損している個体を除外した。１つ、２つ、３つ、または４つのリスクアレルを持つ効果を、いずれのバリアントにもリスクアレルを全く持たない個体と比較して別々に決定した。スコアの増加と好酸球数または疾患リスクの増加との間の傾向を、それぞれ線形回帰及びＣｏｃｈｒａｎ−Ａｒｍｉｔａｇｅ検定を使用して試験した。
【０１２９】
全ての統計分析を、ＰＬＩＮＫソフトウェア（ｖ１．９０ｐ）またはＲバージョン３．２．１を使用して実施した。
ＤｉｓｃｏｖＥＨＲ好酸球数及びＥＨＲ定義喘息を用いた、ＩＬ３３及びＩＬ１ＲＬ１の以前に同定した喘息リスクバリアントの確認。ＤｉｓｃｏｖＥＨＲ研究におけるＭｙＣｏｄｅ（登録商標）参加者の臨床的特徴を、図８に記載する。本試験でエクソームシーケンシングしたヨーロッパ系祖先を持つ８６，００４人の患者の中で、１３２６７人（１５．４％）の患者を喘息と、９７８３人（１１．４％）の患者をＣＯＰＤと、２９９３人（３．４％）の患者を喘息及びＣＯＰＤの両方（本明細書では喘息−ＣＯＰＤオーバーラップ症候群、またはＡＣＯＳと称される）と診断した。本試験のために利用可能なチップデータを用いたヨーロッパ系祖先を持つ８３，３３９人の患者の中で、１２８３２人（１５．４％）の患者を喘息と、９５３６人（１１．４％）の患者をＣＯＰＤと、２９０９人（３．５％）の患者をＡＣＯＳと診断した。
【０１３０】
喘息に関する最初の大きなＧＷＡＳは、喘息及び循環好酸球数の両方と関連したイントロンＩＬ１ＲＬ１バリアント（ｒｓ１４２０１０１）を同定し、次のＧＷＡＳは、喘息と関連した上流ＩＬ３３バリアント（ｒｓ１３４２３２６）を同定した。本試験では、ｒｓ１４２０１０１（ＩＬ１ＲＬ１）及びｒｓ１３４２３２６（ＩＬ３３）と喘息との関連（メタアレルオッズ比（ＯＲａｌｌｅｌｉｃ））を確認した（９５％信頼区間）（それぞれ１．０７（１．０４−１．１１）、Ｐ＝８．２×１０−７及びメタ−ＯＲａｌｌｅｌｉｃ１．０９（１．０５−１．１６）、Ｐ＝６．０×１０−６）（図３）。
【０１３１】
さらに、両方のバリアントは、生涯の循環好酸球数中央値と関連していた（ｎ＝６６，７７６人の個体）（それぞれメタ−ベータ＝０．００６６（０．００５４−０．００７９）ｅｏｓ／ｍｌ、Ｐ＝２．０×１０−２３及びメタ−ベータ＝０．００６１（０．００４５−０．００７８）ｅｏｓ／ｍｌ、Ｐ＝２．０×１０−１３）。
【０１３２】
喘息とのＩＬ３３及びＩＬ１ＲＬ１の関連は、好酸球サブセットに特異的である。好酸球性喘息は、喘息の重要なサブセットとして認識され、喘息の重篤さの増加及びステロイド不応性、加えて生物学的療法に対する反応差と関連すると考えられている。ＩＬ３３及びＩＬ１ＲＬ１バリアントと、異なる表現型として独立して評価した好酸球数加えて喘息との前述した関連を確認するため、本試験では次に、これらのリスクが喘息の好酸球サブセットとの特異的関連によって関連付けられるかどうかを評価し、したがって、高い（＞２００ｅｏｓ／μＬ）及び低い（≦２００ｅｏｓ／μＬ）生涯の好酸球数中央値によって階層化した喘息患者サブグループにおける関連を評価した（図３）。ＩＬ３３（ｒｓ１３４２３２６）及びＩＬ１ＲＬ１（ｒｓ１４２０１０１）バリアントの両方とも、好酸性喘息サブセットとのみ有意に関連していた（ＩＬ３３について、アレルメタオッズ比は、高好酸球群において１．１２（１．０６−１．１８）対低好酸球群において１．０４（０．９８−１．０９）であって、ＩＬ１ＲＬ１について、アレルオッズ比は、高好酸球群において１．０７（１．０４−１．１）対低好酸球群において１．０２（０．９８−１．０６）であった）（図３）。
【０１３３】
ＩＬ３３及びＩＬ１ＲＬ１の喘息リスクバリアントと、特に好酸球サブセットにおけるＣＯＰＤ及びＡＣＯＳに関するリスク増加との間の新規関連。好酸球性喘息との上記関連に加えて、ＩＬ３３（ｒｓ１３４２３２６）及びＩＬ１ＲＬ１（ｒｓ１４２０１０１）バリアントが、ＣＯＰＤ（図４、ＩＬ３３について、メタＯＲａｌｌｅｌｉｃ＝１．０４（０．９９−１．０９）、Ｐ＝８．９×１０−２、及びＩＬ１ＲＬ１について、メタ−ＯＲａｌｌｅｌｉｃ＝１．０４（１−１．０７）、Ｐ＝３．９×１０−２）ならびにＡＣＯＳ（図５のＩＬ３３について、メタＯＲａｌｌｅｌｉｃ１．０８（１．０−１．１６）、Ｐ＝３．８×１０−２、及びＩＬ１ＲＬ１について、１．０６（１．０−１．１２）、Ｐ＝４．８×１０−２）と示唆的に、またはわずかに有意に関連することをさらに発見した。
【０１３４】
喘息と同様に、ＣＯＰＤ及びＡＣＯＳの好酸球サブセットは、より深刻な疾患と関連する。ＣＯＰＤ及びＡＣＯＳとのＩＬ３３及びＩＬ１ＲＬ１の関連もまた、発明者らが喘息で確認したように、好酸球サブタイプに特異的であるかどうかを決定するために、高い（＞２００ｅｏｓ／μＬ）及び低い（≦２００ｅｏｓ／μＬ）生涯の好酸球数中央値によって階層化したＣＯＰＤ及びＡＣＯＳサブグループにおけるＩＬ３３（ｒｓ１３４２３２６）及びＩＬ１ＲＬ１（ｒｓ１４２０１０１）間の関連を評価した（図４及び図５）。両方のバリアントは、高循環好酸球を特徴とする疾患サブグループにおいてのみＣＯＰＤ及びＡＣＯＳと示唆的に関連していた。
【０１３５】
ＩＬ３３シグナル伝達経路における多量のリスク増加アレルは、喘息、ＣＯＰＤ及びＡＣＯＳリスクの大幅な増加を招く。ＩＬ３３及びＩＬ１ＲＬ１が同じシグナル伝達複合体の一部であるため、またこれらのバリアントが、個別に分析される場合にそれらのリスク関連性において注目すべきアレル量依存を示すため、２つのバリアント遺伝的リスクスコアを、ＩＬ３３（ｒｓ１３４２３２６）及びＩＬ１ＲＬ１（ｒｓ１４２０１０１）のリスクアレルの数を合計することによって構築し（各個体は０〜４の範囲のスコアを有した）、スコアと、喘息、ＣＯＰＤ及びＡＣＯＳの好酸球数及びリスクとの間の関連を試験した。各遺伝的リスクスコアを持つ個体群を、リスクアレルを持たない群と比較した。傾向検定では、遺伝的リスクスコアの増加は、好酸球数の増加（図２、Ｐ＝１×１０−３９）ならびに喘息（図６、Ｐ＝３．２７×１０−１２）、ＣＯＰＤ（図６、Ｐ＝６．６５×１０−３）、及びＡＣＯＳ（Ｐ＝４．３×１０−３）のリスク増加と有意に関連した。最大効果（名目上の有意性を超える）を、３つのリスクアレルを持つ患者で観察した（図２、好酸球数について、メタベータ＝０．００７１（０．００５７−０．００８５）ｅｏｓ／ｍｌ、Ｐ＝８．８×１０−２４、喘息について（図６）、メタＯＲ＝１．２８（１．１７−１．４１）、Ｐ＝６．９９×１０−８、ＣＯＰＤについて（図６）、ＯＲ＝１．１７（１．０４−１．３１）、Ｐ＝９．３５×１０−３、及びＡＣＯＳについて（図６）、ＯＲ＝１．２３（１．０３−１．４８）、Ｐ＝２．４９×１０−２）（図２）。少数の個体がリスクアレルを４つ持ち、結果として、効果量推定値は幅広い信頼区間を有した。
【０１３６】
２つのバリアントスコアと、高及び低好酸球患者サブグループとの関連も評価した（図７）。傾向検定では、スコアは、喘息（Ｐ＝１．３７×１０−１５）、ＣＯＰＤ（Ｐ＝３．９×１０−８）、及びＡＣＯＳ（Ｐ＝１．８×１０−５）の高好酸球サブセットと有意に関連していたが、喘息、ＣＯＰＤ、またはＡＣＯＳの低好酸球サブセットとは関連しなかった（各疾患についてＰ＞０．０５）。最大スコア特異的効果を、３つのリスクアレルを持つ患者で観察した（高好酸球喘息について、メタ−ＯＲ＝１．６１（１．４２−１．８４）、Ｐ＝６．３３×１０−１３、高好酸球ＣＯＰＤについて、メタ−ＯＲ＝１．５３（１．３１−１．７９）、Ｐ＝４．７６×１０−８、及び高好酸球ＡＣＯＳについて、ＯＲ＝１．７（１．３４−２．１４）、Ｐ＝１×１０−５）。先述の通り、リスクアレルを４つ持つ相対的に少数の個体が存在し、各々の効果量推定値は幅広い信頼区間を有した。
【０１３７】
ＩＬ３３の予測した機能喪失（ｐＬＯＦ）バリアントは、循環好酸球数及び閉塞性肺疾患リスクの低減と関連する。ＩＬ３３  ｐＬＯＦバリアントｒｓ１４６５９７５８７の分析では、ＩＬ３３不活性化は、好酸球数の減少と関連する（メタ−ベータ＝−０．０２（−０．０３−０．００９２）、Ｐ＝７．３×１０−５）が、好酸球性喘息、ＣＯＰＤ及びＡＣＯＳのリスク減少とは有意に関連しなかった（それぞれＯＲ＝０．８２（０．６３−１．０７）、Ｐ＝０．１５、ＯＲ＝０．９９（０．７４−１．３３）、Ｐ＝０．９４、及びＯＲ＝０．９３（０．５６−１．５３）、Ｐ＝０．７６）（図７）。ＩＬ１ＲＬ１  ｐＬＯＦ変異は、閉塞性肺疾患のリスクと関連しなかった。
【０１３８】
その他の気道疾患を有するＩＬ１ＲＬ１バリアントｒｓ１４２０１０１及びＩＬ３３バリアントｒｓ１３４２３２６の分析。統一気道理論は、喘息が、共通の機序に起因してその他の気道疾患と共起する可能性があると仮定している。したがって、ｒｓ１４２０１０１及びｒｓ１３４２３２６との関連について、気道に関するその他のＥＨＲ記録疾患を試験した（図９）。ＩＬ３３バリアントｒｓ１３４２３２６及びＩＬ１ＲＬ１バリアントｒｓ１４２０１０１は、アレルギー性鼻炎のリスク増加（メタ−ＯＲ１．０４（１．０１−１．０８）、Ｐ＝０．０２、メタ−ＯＲ１．０４（１．０１−１．０６）、Ｐ＝２．４×１０−３）加えて鼻茸のリスク増加（メタ−ＯＲ１．４８（１．２８−１．７２）、Ｐ＝１．２×１０−７、メタ−ＯＲ１．１７（１．０４−１．３３）、Ｐ＝１．２×１０−２）と関連していた。さらに、これらの共通したリスクバリアントの量も、アレルギー性鼻炎及び鼻茸のリスクを有意に増加させた（Ｐ＝１．４５×１０−４、Ｐ＝２．４８×１０−７）。これらの結果は、鼻茸リスクにおけるＩＬ３３の共通した遺伝的変異を示唆するこれまでの報告と一致する。
【０１３９】
要約。ＩＬ３３は、肺上皮を含む、上皮組織のバリア防御に関与すると考えられ、喘息の病因に関与している。本実施例に記載した２つのバリアント、すなわちＩＬ３３（ｒｓ１３４２３２６）及びＩＬ１ＲＬ１（ｒｓ１４２０１０１）は、いくつかの研究でこれまでに喘息と関連してきた。リガンド（ＩＬ３３）及びその特異的受容体（ＩＬ１Ｒ１）の両方を有する、これらの再現可能かつ独立した関連性（ＩＬ３３は９番染色体上に位置し、ＩＬ１ＲＬ１は２番染色体上に位置する）は、喘息リスクにおけるＩＬ３３シグナル伝達の役割を示唆する。
【０１４０】
本研究は、これらの以前の知見を大幅に広げている。ＤｉｓｃｏｖＥＨＲ研究関連の８３，０００人を超える成人参加者において全エクソームシーケンシング及びジェノタイピングを実施することによって、ＩＬ３３及びＩＬ１ＲＬ１と、異なる表現型として独立して評価した好酸球数加えて喘息との間を確認した。さらに、ＩＬ３３及びＩＬ１ＲＬ１バリアントと、ＣＯＰＤ及びＡＣＯＳのリスク増加との示唆的関連を実証し、すなわち、これらの非常に蔓延している肺疾患の３つ全てに共通した機序的病因の可能性を支持する遺伝的関連を提供した。これらのバリアントと、鼻茸及びアレルギー性鼻炎との関連も実証した。加えて、両方の遺伝子座にわたってこれらのリスクアレルの量をより多く持つ個体では、疾患リスクに対するより大きな効果を観察したことを見出した。さらに、ＩＬ３３における希少ｐＬＯＦバリアントのヘテロ接合体キャリアは、生涯の好酸球数中央値が低く、喘息について約２０％のリスク低減を反映する傾向を有した。これらのデータは、リスク増加共通アレル及びリスク低減希少ｐＬＯＦアレルの両方を含む一連のアレルによって、ＩＬ３３経路と喘息とを、また恐らくＣＯＰＤとを関連付ける遺伝学的証拠を提供すると考える。
【０１４１】
本研究よりも前、ＩＬ３３経路の遺伝的バリアントは、これまでにＣＯＰＤとは関連していなかったと考える。同様に、いずれかの経路と、喘息、ＣＯＰＤ及びＡＣＯＳの好酸球サブセットリスクとを関連付ける先の遺伝子データは一切存在しなかったと考える。本実施例の結果は、喘息及びＣＯＰＤの好酸球サブタイプのリスク増加に対するＩＬ３３シグナル伝達増強の関連を示唆し、ＡＣＯＳ患者で見られる数値的により高いリスク関連性は、これらの状態の共通部分におけるこの実体が、実際には特有の特徴を有する可能性があることを示唆している。これまで明確に分類されてきた閉塞性肺疾患の好酸球サブセット間における統一的な遺伝的かつ機序的関連を提供することに加えて、データはまた、好酸球性肺疾患が、関連する上気道疾患を含む連続体を表す可能性があると仮定している「統一気道理論」の原理を支持する。この点において、アレルギー性鼻炎及び鼻茸におけるＩＬ３３バリアントの著しいリスク増加を観察した。
【０１４２】
統計的に有意ではないが、本実施例に記載したＩＬ３３  ｐＬＯＦバリアントとの保護的関連は、ＩＬ３３の希少機能喪失バリアントが喘息において保護的であったことを実証した最近の研究と一致し、ＩＬ３３シグナル伝達の阻害が、閉塞性肺疾患の重要な治療戦略である可能性を支持している。データは、特に、喘息及びＣＯＰＤなどの閉塞性肺疾患の好酸球型において、加えてアレルギー性鼻炎及び鼻茸などの好酸球性上気道疾患に対してインターロイキン−３３を遮断する役割を示唆している。
【０１４３】
関連して、重篤かつステロイド抵抗性喘息の処置に生物製剤を用いる最近の進歩は、好酸球性疾患を区別すると考えられている。インターロイキン−５及びインターロイキン−１３を標的とする多数の療法が、喘息患者の好酸球サブセットのみに役立つと考えられる一方で、インターロイキン−４及びインターロイキン−１３経路の両方をブロックする抗体（デュピルマブ）は、好酸球性の患者において数値的により大きな利益を有するが、低好酸球サブセットにおいても非常に高い活性を有すると考えられている。これらの療法は、鼻茸及びアレルギー性鼻炎にも利益を有すると考えられる。生物学的療法に対する好酸球性喘息患者の応答におけるこれらの前述した差と一致して、本実施例からのデータは、インターロイキン−３３の遮断が喘息、ＡＣＯＳ及びＣＯＰＤの好酸球サブセットを標的とするのに最適である可能性を示唆している。
【０１４４】
本研究には一定の限界があるが、それにもかかわらず研究は実社会の臨床ケア状況を表し、本集団におけるＩＬ３３及びＩＬ１ＲＬ１遺伝的変異が、喘息及びＣＯＰＤの両方の診断リスク増加と関連している。患者の個別化処置の目的で、人が喘息、ＣＯＰＤ、またはＡＣＯＳの診断ラベルに到達するかどうかは、恐らく特定の患者または患者群で発生している機序的病変を同定することよりも重要ではなく、これらのデータは、喘息、ＣＯＰＤ及びＡＣＯＳ患者のサブセットが、部分的には過度なＩＬ３３活性によって促進される可能性があることを示唆している。これらのデータの様々な限界を軽減させることは、同じ経路内における２つの異なる遺伝子の遺伝的バリアントを使用した知見の顕著な一貫性であり、類似した結果が、ＩＬ３３に加えてその受容体の遺伝子におけるバリアントに見られた。両方の遺伝子におけるバリアントについて、一貫したリスク関連性が複数の関連ＥＨＲ定義疾患状況にわたって見られ、これらの疾患状況内で、一貫した結果もまた、これらの疾患の好酸球サブセットに特有であることを繰り返し示した。データに関して別の説得力がある側面は、多くのリスク関連性の一致及び注目すべきアレル依存、加えて２つのバリアントリスクスコア分析から得られる付加力を含む。最後に、ＩＬ３３  ｐＬＯＦバリアントの相互的知見も支えとなる。
【０１４５】
これらのデータは、ＩＬ３３シグナル伝達を増強する遺伝的変異が、喘息、ＣＯＰＤ及びＡＣＯＳの好酸球型のリスク増加に寄与すること、ならびにＩＬ３３のｐＬＯＦ遺伝的バリアントが、これらの疾患のリスク減少に寄与する可能性があることを示唆し、鼻茸などの上気道疾患のリスクもＩＬ３３シグナル伝達に関連すると思われる。ＩＬ３３シグナル伝達を増強する遺伝的バリアントを持つ個体は、それらの特定の喘息及びＣＯＰＤ患者が、ＩＬ３３の治療的遮断から多大な恩恵を受ける可能性があるため、精密医療の機会を表す可能性がある。データはまた、好酸球性気道疾患に罹患している患者が、サブタイプ及びバリアント状態にかかわらず、ＩＬ３３の阻害から恩恵を受ける可能性を高める。
【０１４６】
本開示は、上に記載かつ例示された実施形態に限定されないが、添付の特許請求の範囲内で変化及び変更できる。２０１７年１１月３０日出願の米国特許出願第１５／８２７，３５７号明細書は、その全体があらゆる目的のために参照によって本明細書に組み込まれる。
【図１】
2020516289.tif 000015
【図２−１】
2020516289.tif 000016
【図２−２】
2020516289.tif 000017
【図２−３】
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【図２−４】
2020516289.tif 000019
【図３−１】
2020516289.tif 000020
【図３−２】
2020516289.tif 000021
【図３−３】
2020516289.tif 000022
【図４−１】
2020516289.tif 000023
【図４−２】
2020516289.tif 000024
【図４−３】
2020516289.tif 000025
【図５−１】
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【図５−２】
2020516289.tif 000027
【図５−３】
2020516289.tif 000028
【図６−１】
2020516289.tif 000029
【図６−２】
2020516289.tif 000030
【図６−３】
2020516289.tif 000031
【図７−１】
2020516289.tif 000032
【図７−２】
2020516289.tif 000033
【図７−３】
2020516289.tif 000034
【図８−１】
2020516289.tif 000035
【図８−２】
2020516289.tif 000036
【図９−１】
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【図９−２】
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【配列表】
2020516289000001.app
【国際調査報告】
2020516289.tif 000039
2020516289.tif 000040
2020516289.tif 000041
2020516289.tif 000042
2020516289.tif 000043
2020516289.tif 000044