(57)【要約】【課題】天然物由来であってかつ人体に有害な影響を及ぼさず、体重あたりの脂肪蓄積抑制の効果を有する脂肪蓄積抑制剤を提供することである。【解決手段】本発明は、植物、好ましくはバラ科植物、特にリンゴの果実若しくは未熟果実由来の果実ポリフェノールを有効成分として含有する脂肪蓄積抑制剤に関し、詳しくはポリフェノールがプロアントシアニジン、特にはプロシアニジンであり、それを含有する食品、飲料、食品添加物、医薬品、医薬部外品、飼料である。【特許請求の範囲】
【請求項１】
果実若しくは未熟果実由来のポリフェノールを有効成分として含有してなることを特徴とする脂肪蓄積抑制剤。
【請求項２】
果実がバラ科植物である請求項１に記載の脂肪蓄積抑制剤。
【請求項３】
バラ科植物がリンゴである請求項２に記載の脂肪蓄積抑制剤。
【請求項４】
ポリフェノールがプロアントシアニジンである請求項１に記載の脂肪蓄積抑制剤。
【請求項５】
プロアントシアニジンがプロシアニジンである請求項４に記載の脂肪蓄積抑制剤。
【請求項６】
生体内のインシュリン上昇抑制またはレプチン上昇抑制作用を有する請求項１〜５のいずれか一項に記載の脂肪蓄積抑制剤。
【請求項７】
脂肪蓄積率を抑制することを特徴とする請求項１〜５のいずれか一項に記載の脂肪蓄積抑制剤。
【請求項８】
体脂肪率を低減することを特徴とする請求項１〜５のいずれか一項に記載の脂肪蓄積抑制剤。
【請求項９】
請求項１〜８のいずれか一項に記載の脂肪蓄積抑制剤を含有する食品。
【請求項１０】
請求項１〜８のいずれか一項に記載の脂肪蓄積抑制剤を含有する飲料。
【請求項１１】
請求項１〜８のいずれか一項に記載の脂肪蓄積抑制剤を含有する食品添加物。
【請求項１２】
請求項１〜８のいずれか一項に記載の脂肪蓄積抑制剤を含有する医薬品。
【請求項１３】
請求項１〜８のいずれか一項に記載の脂肪蓄積抑制剤を含有する医薬部外品。
【請求項１４】
請求項１〜８のいずれか一項に記載の脂肪蓄積抑制剤を含有する動物飼料。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、植物、好ましくはバラ科植物、特にリンゴの果実若しくは未熟果実由来の果実ポリフェノールを有効成分として含有する脂肪蓄積抑制剤に関し、詳しくはポリフェノールがプロアントシアニジン、特にはプロシアニジンであり、生体内のインシュリン上昇抑制、レプチン上昇抑制、体重あたりの脂肪蓄積抑制等の効果を有する脂肪蓄積抑制剤及び、それを含有する食品、飲料、食品添加物、医薬品、医薬部外品、飼料に関する。
【背景技術】
【０００２】
欧米の食事はもとより日本の食事も近年著しく欧米化し、高脂肪食、高カロリー化が進んでいる。特に、脂質や糖質の過剰摂取により脂肪の蓄積過多が生じ、肥満や体脂肪増加に悩む人が増加している。体脂肪は皮下脂肪と内臓脂肪の合計したものであるが、内臓脂肪量と体脂肪は正の相関が得られており、内臓脂肪量が体脂肪を反映することが知られている。
また、肥満や体脂肪増加は高血圧や高脂血症などを合併しやすく、虚血性心疾患、脳卒中、糖尿病などの危険因子と考えられており、生活習慣病予防の観点から肥満対策はきわめて重要である。
これまでの肥満予防や治療の方法として、ほとんどが食事制限やダイエット食によるものであるが、食事制限は精神的困難さを伴い、その方法を誤ると栄養障害や拒食症といった病的症状を呈する危険性もある。また、無理なダイエットや消化酵素の阻害は、栄養成分の体内供給を減少させる事であるため、ダイエット後のリバウンドの原因となっている。
一方で、各種医薬品の投与も行われているが、効能とともに副作用を考慮しなければならない。【０００３】
ここで植物界に広く存在するポリフェノールは、最近の研究によって様々な生理機能性を有することが確認されており、バラ科果実もしくは未熟果実由来のポリフェノールについても酸化防止、抗う蝕、アレルギー抑制等の機能が見出されている（特許文献１）が、脂肪蓄積抑制の機能については、報告されていない。
また、果実ポリフェノールを有効成分とする生体内脂質代謝抑制が報告されているが（特許文献２）、生体内脂質の酸化抑制、HDL（善玉コレステロール）／総コレステロール比の改善、コレステロールの吸収抑制について報告されているが果実ポリフェノールやプロシアニジンと脂肪蓄積との関係については全く言及されていない。
また、プロシアニジンの肥満防止について報告されているが（特許文献３）、実施例では摂食障害あるいは消化酵素阻害による体重増加や血清脂質、血糖上昇抑制が示されており、体重あたりの体脂肪量（内臓脂肪量）については全く言及されていない。
【特許文献１】特開平７−２８５８７６号公報
【特許文献２】特開平１０−３３０２７８号公報
【特許文献３】特開平９−２９１０３９号公報
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００４】
前述の通り、体重増加に影響を与えず、生体内のインシュリン上昇抑制、レプチン上昇抑制、特に体重あたりの脂肪蓄積抑制の効果を有する脂肪蓄積抑制剤は、体脂肪率増加を予防し、高血圧や高脂血症、虚血性心疾患、脳卒中、糖尿病などを予防する上において期待されている。
そこで本発明の課題は、天然物由来であってかつ人体に有害な影響を及ぼさない、これらの性質を満足する脂肪蓄積抑制剤を提供することである。
【課題を解決するための手段】
【０００５】
本発明者らは、高脂肪食の系において脂肪蓄積抑制作用を有し、なおかつ安全である天然物を見出すべく鋭意研究を行った結果、リンゴ果実あるいは未熟果実由来のポリフェノールが、生体内のインシュリン上昇抑制作用、レプチン上昇抑制作用、特に体重あたりの脂肪蓄積抑制作用を有することを見出し、本発明に到達した。
即ち、本発明によれば、果実若しくは未熟果実由来のポリフェノールを有効成分として含有してなることを特徴とする脂肪蓄積抑制剤が提供される。
また、本発明の脂肪蓄積抑制剤は、生体内のインシュリン上昇抑制、レプチン上昇抑制等により、体重あたりの脂肪蓄積の抑制を行うものである。
また、本発明の脂肪蓄積抑制剤には、植物のうちバラ科植物、中でもリンゴの果実若しくは未熟果実由来のポリフェノールを用いることが好ましい。
さらに、本発明の脂肪蓄積抑制剤は、食品、飲料、食品添加物、医薬品、医薬部外品及び飼料に含有させて用いることができる。
【発明の効果】
【０００６】
本発明によれば、バラ科植物、特にリンゴの果実若しくは未熟果実から抽出・精製されるリンゴ抽出物またはポリフェノールまたはプロシアニジンを有効成分として含有することを特徴とする脂肪蓄積抑制剤が提供され、当該脂肪蓄積抑制剤の有する内臓脂肪の蓄積抑制、高インシュリン血症抑制、高レプチン血症抑制等の機能により、脂肪蓄積抑制を行うことが可能となる。
さらに、本発明の脂肪蓄積抑制剤は、体脂肪の増加や肥満、高脂血症や動脈硬化、糖尿病などが気になる方のための食品や飲料、食品添加物、医薬品、医薬部外品、および動物飼料に含有させて用いることができる。
【図面の簡単な説明】
【０００７】
【図１】リンゴポリフェノールを用いた、動物実験による腸間膜脂肪蓄積抑制作用効果を示すグラフである。
【図２】リンゴポリフェノールを用いた、動物実験による総内臓脂肪蓄積抑制作用効果を示すグラフである。
【図３】リンゴポリフェノールを用いた、動物実験による血中インシュリン濃度上昇抑制作用効果を示すグラフである。
【図４】リンゴポリフェノールを用いた、動物実験による血中レプチン濃度上昇抑制作用効果を示すグラフである。
【発明を実施するための最良の形態】
【０００８】
本発明に用いるポリフェノールは、果実若しくは未熟果実から抽出・精製されたポリフェノール画分からなるものであるが、当該ポリフェノール画分は、まず原料果実の搾汁果汁もしくは水やエタノールなどの有機溶媒を用いて抽出した抽出液を用いることができる。
前記搾汁果汁や有機溶媒を除去した抽出液はそのままでも使用することは可能であるが、遠心分離やろ過等の工程を経て、清澄な果汁若しくは抽出液が得られ、当該ポリフェノール画分はさらに、イオン交換樹脂や合成吸着樹脂、或いはシリカゲル等の吸着剤やゲルろ過剤等によって精製される。
当該ポリフェノール画分は、次いで濃縮することにより液体製剤を得ることができ、さらに、濃縮液を噴霧乾燥もしくは凍結乾燥処理することにより粉末製剤を得ることもできる。
液体製剤にはエタノール等の有機溶媒やクエン酸などの有機酸等の助剤を用いることができ、粉末製剤にはデキストリンや糖類等を賦形剤として用いることができる。
本発明では、果実、好ましくはバラ科植物の果実、具体的にはリンゴ、ナシ、モモ、ウメ等を原料として用いることができるが、ポリフェノール濃度がたかいことから、特にリンゴが好ましい。
また果実としては成熟果実、未熟果実ともに用いることができるが、より多くのポリフェノールを含有すること、及び広範な生理機能性を有する各種活性成分を多く含有することから、未熟果実が特に好ましい。
本発明に記載した脂肪蓄積抑制剤、そしてインシュリン上昇抑制剤、レプチン上昇抑制剤を経口剤として用いる場合の投与量は、投与の目的や投与対象者の性別、年齢、体重、健康状況等により異なるが、乾燥ポリフェノール画分の重量として１ｍｇ／ｋｇ体重から１００ｍｇ／ｋｇ体重の範囲で投与することができる。
本発明のリンゴ由来のポリフェノールは、原料が食品に用いられている果実であるため安全性の面で問題は無いが、ポリフェノール画分については急性毒性試験、亜慢性毒性試験、変異原性試験などの各種安全性試験を行い、その安全性を確認している。
前記のようにして得られるポリフェノール画分は、クロロゲン酸等のカフェ酸誘導体（エステル）やp-クマル酸誘導体、フラバン−３−オール類（カテキン類）、ケルセチン配糖体等のフラボノール類、フロレチン配糖体等のカルコン類、プロシアニジンＢ−２等のプロシアニジン類等のポリフェノール類で構成され、中でもプロシアニジン類を主要成分とする組成であること、及び抗酸化、血圧上昇抑制、変異原性抑制、アレルギー性抑制、抗う蝕、消臭、生体内脂質代謝制御等の生理機能を有することも既に確認されている（特開平７−２８５８７６号公報、特開平１０−３３０２７８号公報）。【０００９】
その後さらに、本発明者らが鋭意検討した結果、前記ポリフェノールは次に示すような新たな生理機能を有することが確認された。
第一に、前記ポリフェノールは内臓脂肪の蓄積を抑制する機能を有することが確認された。即ち、前記プロシアニジン類を主要成分とするポリフェノールは体脂肪蓄積の抑制に極めて有効なものである。
第二に、前記ポリフェノールはインシュリンの上昇を抑制する機能を有することが確認された。即ち、前記プロシアニジン類を主要成分とするポリフェノールは高インシュリン血症の改善に極めて有効なものである。
第三に、前記ポリフェノールはレプチンの上昇を抑制する機能を有することが確認された。即ち、前記プロシアニジン類を主要成分とするポリフェノールは高レプチン血症の改善に極めて有効なものである。
次に、本発明を実施例に基づいてさらに詳細に説明するが、本発明はこれらの実施例に限定されるものではない。
【実施例１】
【００１０】
３週齢のＳｐｒａｕｇｅ−Ｄａｗｌｅｙ（ＳＤ）系雄ラットを市販の固形飼料で１週間予備飼育した後、肥満及び糖尿病誘導飼料の食餌構成を基本とした高脂肪飼料（対照は低脂肪飼料）に、当該ポリフェノールを１．０％配合（対照群は無配合）した飼料を６４日間与えた。なお、ポリフェノール配合飼料は、固有の苦味により投与初期に一時的に摂取量低下が生じるので、摂取量が全ての群で最終的に同じになるように１群６匹のペアーフィーディング条件で与えた（表１）。飼育終了後、エーテル麻酔下、腹部大動脈より採血死させた後、血液ならびに種々の組織を採取し、各種脂肪及び組織重量、肝臓と血清の脂質代謝システム諸パラメータを測定した。【００１１】
【表１】
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【００１２】
脂肪組織重量：飼育後、腎臓周囲（後腹膜）、睾丸周囲（副睾丸）および腸間膜脂肪組織を採取し重量を測定した。
血清インスリンおよびレプチンの測定：肥満に関わる指標として血清インスリン、およびレプチンの各レベルを市販のＥＬＩＳＡキット（インスリン：Ｍｅｒｃｏｄｉａ社ＥＬＩＳＡキット; レプチン：矢内原研究所ＥＬＩＳＡキット）を使用して測定した。
統計処理：得られた結果はすべて平均値±標準誤差で示し、各群間の有意差検定は、ダンカンの新多重レンジテストを用いて行った。なお、有意差水準をｐ＜０．０５とした。
その結果、表２に示すように、体重増加量や摂食量については対照群と比較し、高脂肪食群では有意に体重増加および摂食量が増大したが、高脂肪食群と高脂肪食ポリフェノール群間に有意な差は見られなかったが、表３および図１、図２に示すように、内臓脂肪量は有意に抑制された。
脂肪蓄積率（総内臓脂肪量増加量÷対照群総内臓脂肪量）でみると、高脂肪食群は（７．３６−４．９４）÷４．９４×１００＝４９．０％であるのに対し、高脂肪食＋ポリフェノール群では（５．９９−４．９４）÷４．９４×１００＝２１．２％で、脂肪蓄積率は抑制されており、体脂肪率の変化（総内臓脂肪量増加量÷体重増加量×１００）でみると、高脂肪食群は（７．３６−４．９４）÷４２４．７×１００＝０．５６％であるのに対し、高脂肪食＋ポリフェノール群では（５．９９−４．９４）÷４３２．７×１００＝０．２４％で体脂肪率も低減されている。
【００１３】
【表２】
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【００１４】
【表３】
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【００１５】
また測定の結果、血清インシュリン濃度および血清レプチン濃度は、図３および図４に示すように、通常食の対照群に比べ、高脂肪食群で大幅に上昇しているが、双方ともリンゴ由来のポリフェノールが配合されることで、その上昇が抑制される傾向が観察された。
【実施例２】
【００１６】
（製造例）青森県産リンゴ幼果３００ｋｇを破砕、圧搾し果汁２１０ｋｇを得た。得られた果汁にペクチナーゼ３０ｐｐｍで清澄化を行い、遠心分離後、珪藻土（シリカ３００Ｓ、中央シリカ社製）濾過により清澄化を行い清澄果汁を得た。清澄果汁を吸着力ラム（セバヒーズＨＰ−２０、三菱化学社製）に通液し、ポリフェノール類を吸着させた。続いて純水を通液し、カラム中の非吸着物質（糖類、有機酸類など）を除去したのち、８０％アルコールで溶出した。得られた画分からアルコールを減圧濃縮し、抽出粉末品約２ｋｇを調製した。抽出粉末品を逆相高速液体クロマトグラフィーを用いて検定したところ、クロロゲン酸類（約２０％）、フロレチレン配糖体類（約５％）、フラボノール類（約１５％）、プロアントシアニジン（約５０％）及びその他褐変物質（約１０％）からなることが確認できた。更に、このプロトシアジニン頼は、マトリックス支援レーザーイオン化−飛行時間型質量分析計（ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ／ＭＳ、アプライドバイオシステム社製）による解析の結果、フラボノール類であるカテキンやエビカテキンから構成される２量体から１５量体までのオリゴマーやポリマーであることが確認された。（M．Ohnishi−kameyama et al．Mass Spectrometry，11，31-36，1997）【００１７】
（比較例）錠剤  ラクトース１４０ｇとコーンスターチ１７ｇとを混合し、この混合物をあらかじめコーンスターチ７０ｇから調製したペーストとともに顆粒化した。得られた顆粒にステアリン酸マグネシウム１ｇを加えてよく混合し、この混合物を打錠機にて打錠して錠剤１０００個を製造した。
（実用例）錠剤  製造例１で得られたリンゴポリフェノール１５０ｇとラクトース９０ｇとコーンスターチ１７ｇを混合し、この混合物をあらかじめコーンスターチ７０ｇから調製したペーストとともに顆粒化した。得られた顆粒にステアリン酸マグネシウム１ｇを加えてよく混合し、この混合物を打錠機にて打錠して錠剤１０００個を製造した。
（試験例）リンゴポリフェノールの脂肪蓄積抑制作用（ヒト）  
次に、臨床試験により、リンゴポリフェノールの脂肪蓄積抑制作用を検討した。【００１８】
（方法）
対象
有償ボランティアで、本試験への参加を自発的に志願した２０歳以上の男女の中から、試験開始４週間前に実施した予備試験において、肥満指数が２２＜ＢＭＩ≦３０を示す５０名を選択した。ただし、脂質代謝に影響を及ぼす可能性のある医薬品や健康食晶を服用している者、食品アレルギーの既往歴のある者、本試験開始１ケ月以内に２００ｍｌ、または、３ケ月以内に４００ｍｌを越えるような採血（献血などをした者、試験責任医師が試験参加に不適であると判断した者は対象から除外した。この５０名を、試験に直接参加しない医師が、予備試験の検査結果（血液、理学的検査）および摂取前に行ったＣＴ検査索果をもとに、年齢、体重、身長、肥満指数、血圧、中性脂肪、全脂肪面積（ＴＦＡ）、内臓脂肪面積（ＶＦＡ）および皮下脂肪面積（ＳＦＡ）、ウェスト／ヒップ等の背景がそろうように２群に分けた。なお、本試験は、ヘルシンキ宣言の主旨に従い、被験者に対しては研究内容、方法などについて十分な説明を行い、文書による同意を得て実施した。【００１９】
試験食  
本試験食は、実用例で製造されたリンゴポリフェノールを含有した錠剤（１５０ｍｇ／１錠）および比較例で製造されたポリフェノールが配合されていない対照食（プラセポ錠剤）とした。また、試験実施前に、試験責任医師が、風味、香りなどの官能面やパッケージなどにより、被験飲料とプラセボ錠剤間で区別がつかないことを確認した。
摂取方法とスケジュール  
試験は、無作為割付による２重盲検法を採用した並行２群間比較試験とした。試験期間は、前期観察期間４週間、摂取期間１２週間、摂取終了後の観察期間４週間の計２０週間を設定した。被験者は、２つのグループに分け、次の方法で試験錠剤を摂取させた。
Ａ群：リンゴポリフェノール含有被験錠剤（１５０ｍｇ／１錠）を夕食前に各４錠摂取（計４錠／日）、以下  リンゴポリフェノール被験錠剤摂取群
Ｂ群：プラセボ錠剤（１５０ｍｇ／１錠）を夕食前に各４錠摂取（計４錠／日）、以下  プラセボ錠剤摂取群
なお、被験者には、試験錠剤を毎日摂取することを除いて、それまでの食生活、喫煙および運動なとの日常生活を変えないように指導した。【００２０】
ＣＴ検査
全ての被験者に、ＣＴスキャンによる腹部脂肪解析を実施した。解析は、Ｌ４／Ｌ５椎間板横断部の腹部ＣＴ断層撮影から得られた画像から内臓脂肪計測ＰＣソフト「Ｆａｔ  Ｓｃａｎ」（Ｎ２システム株式会社製）を用いて、全脂肪面積（ＴＦＡ）、内臓脂肪面積（ＶＦＡ）を求めた。
実施時期は、摂取開始、摂取１２週間後（摂取終了）の計２回とした。原則、検査の前後４日間以内に実施し、検査日は、少なくとも４時間の絶食、２時間の絶飲の後に検査を実施した。
結果
結果を表４に示した。２元配置の分散分析の結果、全被験者における全脂肪面積（ＴＦＡ）、内臓脂肪面積（ＶＦＡ）、皮下脂肪面積（ＳＦＡ）の推移において、ＴＦＡでは、プラセボ錠剤摂取群で摂取１２週間後増加傾向を示したが（ｐ＜０．１）、リンゴポリフェノール被験錠剤摂取群での変動傾向は認められなかった。【００２１】
【表４】
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【００２２】
ＶＦＡについては、プラセポ錠剤摂取群において、変動傾向が認められなかったのに対して、リンゴポリフェノール被験錠剤摂取群で摂取１２週間後に有意な減少傾向が認められた（ｐ＜０．１）。変化量推移の結果、プラセポ錠剤摂取群とリンゴポリフェノール被験錠剤摂取群感に差のある傾向が認められた（ｐ＜０．１）
以上の結果より、リンゴポリフェノールには体脂肪を減少させる効果があることが示された。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【国際調査報告】
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2005082390.tif 000011
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