(57)【要約】  本発明は、二次細菌感染、好ましくは二次呼吸器感染の治療および／または予防に有用な、ＩＬ−８阻害剤化合物、好ましくは二重ＣＸＣＲ１／ＣＸＣＲ２受容体阻害剤に関する。
2020521799.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ＩＬ−８阻害剤が小分子量分子から選択される、二次細菌感染、好ましくは二次呼吸器感染、より好ましくは二次肺炎球菌感染の予防および／または治療における使用のためのＩＬ−８阻害剤。
【請求項２】
前記二次細菌感染が、先行するインフルエンザ感染、敗血症、重度の虚血または再灌流傷害に関連する、請求項１に記載の使用のためのＩＬ−８阻害剤。
【請求項３】
前記ＩＬ−８阻害剤が、ＣＸＣＲ１受容体、または、ＣＸＣＲ１受容体およびＣＸＣＲ２受容体の両方によって媒介されるＩＬ−８の活性の阻害剤である、請求項１または２に記載の使用のためのＩＬ−８阻害剤。
【請求項４】
１，３−チアゾール−２−イルアミノフェニルプロピオン酸誘導体、２−フェニル−プロピオン酸誘導体およびこれらの薬剤的に許容できる塩から選択される、請求項１から３のいずれか１項に記載の使用のためのＩＬ−８阻害剤。
【請求項５】
前記１，３−チアゾール−２−イルアミノフェニルプロピオン酸誘導体が、式（Ｉ）の化合物である、請求項４に記載の使用のためのＩＬ−８阻害剤。
【化１】
2020521799.tif 000006
［式中、
−Ｒ１は水素またはＣＨ3であり、
−Ｒ２は水素または直鎖Ｃ1〜Ｃ4アルキルであり、好ましくはこれは水素であり、
−ＹはＳ、ＯおよびＮから選択されるヘテロ原子であり、好ましくはこれはＳであり、
−Ｚはハロゲン、直鎖または分岐鎖Ｃ1〜Ｃ4アルキル、Ｃ2〜Ｃ4アルケニル、Ｃ2〜Ｃ4アルキニル、Ｃ1〜Ｃ4アルコキシ、ヒドロキシル、カルボキシル、Ｃ1〜Ｃ4アシロキシ、フェノキシ、シアノ、ニトロ、アミノ、Ｃ1〜Ｃ4アシルアミノ、ハロＣ1〜Ｃ3アルキル、ハロＣ1〜Ｃ3アルコキシ、ベンゾイル、直鎖または分岐鎖Ｃ1〜Ｃ8アルカンスルホネート、直鎖または分岐鎖Ｃ1〜Ｃ8アルカンスルホンアミド、直鎖または分岐鎖Ｃ1〜Ｃ8アルキルスルホニルメチルから選択され、好ましくはこれはトリフルオロメチルであり、
−ＸはＯＨまたは式ＮＨＲ3の残基（式中、Ｒ3は、
−水素、ヒドロキシル、直鎖または分岐鎖Ｃ1〜Ｃ6アルキル、Ｃ3〜Ｃ6シクロアルキル、Ｃ2〜Ｃ6アルケニル、Ｃ1〜Ｃ5アルコキシ、または、Ｃ1〜Ｃ6フェニルアルキル（ここで、アルキル、シクロアルキルまたはアルケニル基はＣＯＯＨ残基によって置換され得る）
−式ＳＯ2Ｒ４の残基（式中、Ｒ４はＣ1〜Ｃ2アルキル、Ｃ3〜Ｃ6シクロアルキル、Ｃ1〜Ｃ3ハロアルキルである）
から選択される）
である。］
【請求項６】
Ｒ１が水素またはＣＨ3であり、
ＸがＯＨであり、
Ｒ２が水素または直鎖Ｃ1〜Ｃ4アルキルであり、
ＹがＳ、ＯおよびＮから選択されるヘテロ原子であり、
Ｚが直鎖または分岐鎖Ｃ1〜Ｃ4アルキル、直鎖または分岐鎖Ｃ1〜Ｃ4アルコキシ、ハロＣ1〜Ｃ3アルキルおよびハロＣ1〜Ｃ3アルコキシから選択される、
請求項５に記載の使用のためのＩＬ−８阻害剤。
【請求項７】
Ｒ１が水素であり、フェニルプロピオン酸基のキラル炭素原子がＳ配置である、請求項５に記載の使用のためのＩＬ−８阻害剤。
【請求項８】
２−メチル−２−（４−｛［４−（トリフルオロメチル）−１，３−チアゾール−２−イル］アミノ｝フェニル）プロピオン酸およびその薬剤的に許容できる塩、好ましくはそのナトリウム塩から選択される、請求項４から６のいずれか１項に記載の使用のためのＩＬ−８阻害剤。
【請求項９】
前記化合物が、（２Ｓ）−２−（４−｛［４−（トリフルオロメチル）−１，３−チアゾール−２−イル］アミノ｝フェニル）プロピオン酸およびその薬剤的に許容できる塩、好ましくはそのナトリウム塩である、請求項４から７のいずれか１項に記載の使用のためのＩＬ−８阻害剤。
【請求項１０】
前記２−フェニル−プロピオン酸誘導体が、式（ＩＩ）の化合物またはその薬剤的に許容できる塩である、請求項４に記載の使用のためのＩＬ−８阻害剤。
【化２】
2020521799.tif 000007
［式中、
Ｒ4は直鎖または分岐鎖Ｃ1〜Ｃ6アルキル、ベンゾイル、フェノキシ、トリフルオロメタンスルホニルオキシであり、好ましくはＲ4は、ベンゾイル、イソブチルおよびトリフルオロメタンスルホニルオキシから選択され、より好ましくは、Ｒ4は３−ベンゾイル、４−イソブチルまたは４−トリフルオロメタンスルホニルオキシであり、
Ｒ5はＨまたは直鎖もしくは分岐鎖Ｃ1〜Ｃ3アルキル、好ましくはこれはＨであり、
Ｒ6は直鎖または分岐鎖Ｃ1〜Ｃ6アルキルまたはトリフルオロメチルであり、好ましくはこれは直鎖または分岐鎖Ｃ1〜Ｃ6アルキル、より好ましくはこれはＣＨ3である。］
【請求項１１】
前記２−フェニル−プロピオン酸誘導体が式（ＩＩＩ）の化合物またはその薬剤的に許容できる塩である、請求項４に記載の使用のためのＩＬ−８阻害剤。
【化３】
2020521799.tif 000008
［式中、
Ｒ’は水素であり、
Ｒは水素または式ＳＯ2Ｒａの残基（式中、Ｒａは直鎖または分岐鎖Ｃ1〜Ｃ4アルキル、またはハロＣ1〜Ｃ3アルキルであり、好ましくはＲａはＣＨ3である）である。］
【請求項１２】
フェニルプロピオン酸基のキラル炭素原子がＲ配置である、請求項１０または１１に記載の使用のためのＩＬ−８阻害剤。
【請求項１３】
前記化合物が、Ｒ−（−）−２−（４−イソブチルフェニル）プロピオニルメタンスルホンアミドおよびその薬剤的に許容できる塩、好ましくは、リシンｉｎ  ｓｉｔｕ塩から選択される、請求項１０または１２に記載の使用のためのＩＬ−８阻害剤。
【請求項１４】
前記化合物が、Ｒ（−）−２−（４−トリフルオロメタンスルホニルオキシ）フェニル］−Ｎ−メタンスルホニルプロピオンアミドおよびその薬剤的に許容できる塩、好ましくはそのナトリウム塩である、請求項１０から１２のいずれか１項に記載の使用のためのＩＬ−８阻害剤。
【請求項１５】
前記化合物が、Ｒ（−）−２−［（４'−トリフルオロメタンスルホニルオキシ）フェニル］プロピオンアミドである、請求項１１または１２に記載の使用のためのＩＬ−８阻害剤。
【請求項１６】
ＩＬ−８阻害剤が、抗体、好ましくは抗ＣＸＣＲ１／ＣＸＣＲ２受容体抗体から選択される、二次細菌感染、好ましくは二次呼吸器感染、より好ましくは二次肺炎球菌感染の予防および／または治療における使用のためのＩＬ−８阻害剤。
【請求項１７】
請求項１から１６のいずれか１項に記載の使用のためのＩＬ−８阻害剤、および、薬剤的に許容できる賦形剤および／または希釈剤を含む、医薬組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、二次細菌感染、好ましくは二次呼吸器感染の予防および／または治療のためのＩＬ−８阻害剤に関する。当該二次細菌感染は、先行する（preceding）インフルエンザ感染、敗血症、重度の虚血または再灌流傷害に関連する。
【背景技術】
【０００２】
肺は、最終的には集中的に血管が形成された肺胞となる、無数の樹状の分岐で構成されている。肺の粘膜表面は信じられないほど大きく（９０ｍ2）、多数の粒子や病原体を含む微生物に毎日さらされている[Kopf, M., C. Schneider, and S.P. Nobs, The development and function of lung-resident macrophages and dendritic cells. Nat Immunol, 2015. 16(1): p. 36-44（非特許文献１）]。したがって、自然免疫系を含む多くの物理的および生物学的障壁が肺を感染の可能性から保護する。炎症促進性サイトカインとケモカインは、好中球の動員と炎症の発症を促進する常在免疫細胞および肺上皮細胞によって産生され、微生物の拡散と増殖を制御するのに重要である。しかし、感染によって引き起こされる制御されない炎症反応は、肺の損傷、罹患率、および致死の増加にもつながり得る [Garcia, C.C., et al., The development of anti-inflammatory drugs for infectious diseases. Discov Med, 2010. 10(55): p. 479-88（非特許文献２）]。
【０００３】
インフルエンザＡウイルス（ＩＡＶ）は、世界的に非常に重要な呼吸器病原体であり、３００万から５００万人の重病と、流行中に３００．０００人超の死を引き起こす。二次細菌感染は、季節性インフルエンザおよびパンデミックの間、致死と罹患率の増加に大きく寄与する。インフルエンザに関連した死亡の約２５％は、細菌の同時感染が原因であると推定されている[Gupta, R.K., R. George, and J.S. Nguyen-Van-Tam, Bacterial pneumonia and pandemic influenza planning. Emerg Infect Dis, 2008. 14(8): p. 1187-92（非特許文献３）]。
【０００４】
二次インフルエンザ感染に関連するさまざまな細菌の中で、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）は、最も一般的な原因病原体の１つであり [Short, K.R., et al., Interactions between Streptococcus pneumoniae and influenza virus: a mutually beneficial relationship? Future Microbiol, 2012. 7(5): p. 609-24（非特許文献４）]、季節性インフルエンザの死亡の主な原因と考えられている[McCullers, J.A., Insights into the interaction between influenza virus and pneumococcus. Clin Microbiol Rev, 2006. 19(3): p. 571-82（非特許文献５）]。実際、Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅは、小児および成人、特に以前にインフルエンザを発症した人の間で市中肺炎の主な原因である[Madhi, S.A., K.P. Klugman, and G. Vaccine Trialist, A role for Streptococcus pneumoniae in virus-associated pneumonia. Nat Med, 2004. 10(8): p. 811-3（非特許文献６）]。抗生物質が入手可能にもかかわらず、インフルエンザ後の肺炎球菌の二次感染の発生率と致死率は依然として高い。実際、ＩＡＶおよび肺炎球菌の同時感染中に、抗生物質で治療すると、細菌の溶解、免疫系の過剰な刺激、好中球の大量の動員、激しい組織の損傷と死亡につながり得るイベントが発生する[Karlstrom, A., et al., Toll-like receptor 2 mediates fatal immunopathology in mice during treatment of secondary pneumococcal pneumonia following influenza. J Infect Dis, 2011. 204(9): p. 1358-66（非特許文献７）]。
【０００５】
好中球は、ＩＡＶおよび肺炎球菌感染中に肺に動員される主要な炎症細胞である[Jose, R., et al., Regulation of neutrophilic inflammation in lung injury induced by community-acquired pneumonia. Lancet, 2015. 385 Suppl 1: p. S52（非特許文献８）]。微生物が肺上皮に到達すると、微生物は、ＣＸＣＬ８（マウスでのＣＸＣＬ１／ＣＸＣＬ２）などのケモカインの分泌につながる免疫細胞および非免疫細胞によって認識される[Wang, J.P., et al., Toll-like receptor-mediated activation of neutrophils by influenza A virus. Blood, 2008. 112(5): p. 2028-34（非特許文献９）]。これらのケモカインは、単球、ＣＤ８＋Ｔ細胞、ナチュラルキラー、および好中球などの無数の細胞型で発現するその受容体、ＣＸＣＲ１およびＣＸＣＲ２を介して作用する。好中球では、ＣＸＣＲ１およびＣＸＣＲ２の活性化により、走化性、顆粒酵素の放出、および活性酸素種の産生がもたらされる[Russo, R.C., et al., The CXCL8/IL-8 chemokine family and its receptors in inflammatory diseases. Expert Rev Clin Immunol, 2014. 10(5): p. 593-619（非特許文献１０）]。これらのイベントは、ウイルスまたは細菌の増殖と播種を制御するために非常に重要であるが、好中球の圧倒的な活性化は、それが激しい肺損傷につながり得るため、宿主にとって有害であり得る。これは、高度に活性化された好中球の激しい流入が疾患の重症度と関連しているため、ＩＡＶおよび肺炎球菌の両方の感染に当てはまる[Ramos, I. and A. Fernandez-Sesma, Modulating the Innate Immune Response to Influenza A Virus: Potential Therapeutic Use of Anti-Inflammatory Drugs. Front Immunol, 2015. 6: p. 361（非特許文献１１）; Tavares, L.P., et al., Inhibition of PDE4 During Pneumococcal Pneumonia Reduces Inflammation and Lung Injury in Mice. Am J Respir Cell Mol Biol, 2015（非特許文献１２）]。したがって、呼吸器感染中の炎症反応を制御する戦略により、疾病の大きさ（ｄｉｓｅａｓｅ  ｍａｇｎｉｔｕｄｅ）を低減することができる。
【０００６】
上記のように、先行するインフルエンザ感染は、その後の細菌（他の病原体）感染のリスクを高める可能性がある。この状況は、他のタイプの重度の感染（例えば、敗血症）が実験系で同様の状況を引き起こし、ヒトの敗血症後に観察される致死率増大の一因となり得るため、インフルエンザに限ったことではない。重度の虚血および再灌流傷害を含む他の重篤な状態もまた、二次感染のリスクと関連し得る。
【０００７】
インターロイキン−８（ＩＬ−８；ＣＸＣＬ８）は、ＰＭＮ（多形核好中球）動員の主要なメディエーターとみなされ、乾癬、関節リウマチ、慢性閉塞性肺疾患、移植臓器の再灌流傷害などのいくつかの病理に関与している (Griffin et al, Arch Dermatol 1988, 124: 216（非特許文献１３）; Fincham et al, J Immunol 1988, 140: 4294（非特許文献１４）; Takematsu et al, Arch Dermatol 1993, 129: 74（非特許文献１５）; Liu et al, 1997, 100:1256（非特許文献１６）; Jeffery, Thorax 1998, 53: 129（非特許文献１７）; Pesci et al, Eur Respir J. 1998, 12: 380（非特許文献１８）; Lafer et al, Br J Pharmacol. 1991, 103: 1153（非特許文献１９）;  Romson et al, Circulation 1993, 67: 1016（非特許文献２０）; Welbourn et al, Br J Surg. 1991, 78: 651（非特許文献２１）; Sekido et al, Nature 1993, 365, 654（非特許文献２２）)。ＩＬ−８の生物学的活性は、７ＴＭ−ＧＰＣＲファミリーに属し、ヒトＰＭＮの表面に発現する、２つの受容体、ＣＸＣＲ１およびＣＸＣＲ２との相互作用によって媒介される。ＣＸＣＲ１は選択的で、ＣＸＣＬ６とＩＬ−８の２つのケモカインのみと高い親和性で結合し、ＩＬ−８に対してはるかに高い親和性を示すが(Wolf et al, Eur J Immunol 1998, 28: 164（非特許文献２３）)、ヒトＣＸＣＲ２は、より無差別な受容体であり、多くの異なるサイトカインおよびケモカインに結合する。したがって、ＣＸＣＲ２は多くの異なる生物学的分子の活性を媒介する。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００８】
【特許文献１】国際公開第２０１０／０３１８３５号
【特許文献２】国際公開第００／２４７１０号
【特許文献３】国際公開第２００５／０９０２９５号
【非特許文献】
【０００９】
【非特許文献１】Kopf, M., C. Schneider, and S.P. Nobs, The development and function of lung-resident macrophages and dendritic cells. Nat Immunol, 2015. 16(1): p. 36-44
【非特許文献２】Garcia, C.C., et al., The development of anti-inflammatory drugs for infectious diseases. Discov Med, 2010. 10(55): p. 479-88
【非特許文献３】Gupta, R.K., R. George, and J.S. Nguyen-Van-Tam, Bacterial pneumonia and pandemic influenza planning. Emerg Infect Dis, 2008. 14(8): p. 1187-92
【非特許文献４】Short, K.R., et al., Interactions between Streptococcus pneumoniae and influenza virus: a mutually beneficial relationship? Future Microbiol, 2012. 7(5): p. 609-24
【非特許文献５】McCullers, J.A., Insights into the interaction between influenza virus and pneumococcus. Clin Microbiol Rev, 2006. 19(3): p. 571-82
【非特許文献６】Madhi, S.A., K.P. Klugman, and G. Vaccine Trialist, A role for Streptococcus pneumoniae in virus-associated pneumonia. Nat Med, 2004. 10(8): p. 811-3
【非特許文献７】Karlstrom, A., et al., Toll-like receptor 2 mediates fatal immunopathology in mice during treatment of secondary pneumococcal pneumonia following influenza. J Infect Dis, 2011. 204(9): p. 1358-66
【非特許文献８】Jose, R., et al., Regulation of neutrophilic inflammation in lung injury induced by community-acquired pneumonia. Lancet, 2015. 385 Suppl 1: p. S52
【非特許文献９】Wang, J.P., et al., Toll-like receptor-mediated activation of neutrophils by influenza A virus. Blood, 2008. 112(5): p. 2028-34
【非特許文献１０】Russo, R.C., et al., The CXCL8/IL-8 chemokine family and its receptors in inflammatory diseases. Expert Rev Clin Immunol, 2014. 10(5): p. 593-619
【非特許文献１１】Ramos, I. and A. Fernandez-Sesma, Modulating the Innate Immune Response to Influenza A Virus: Potential Therapeutic Use of Anti-Inflammatory Drugs. Front Immunol, 2015. 6: p. 361
【非特許文献１２】Tavares, L.P., et al., Inhibition of PDE4 During Pneumococcal Pneumonia Reduces Inflammation and Lung Injury in Mice. Am J Respir Cell Mol Biol, 2015
【非特許文献１３】Griffin et al, Arch Dermatol 1988, 124: 216
【非特許文献１４】Fincham et al, J Immunol 1988, 140: 4294
【非特許文献１５】Takematsu et al, Arch Dermatol 1993, 129: 74
【非特許文献１６】Liu et al, 1997, 100:1256
【非特許文献１７】Jeffery, Thorax 1998, 53: 129
【非特許文献１８】Pesci et al, Eur Respir J. 1998, 12: 380
【非特許文献１９】Lafer et al, Br J Pharmacol. 1991, 103: 1153
【非特許文献２０】Romson et al, Circulation 1993, 67: 1016
【非特許文献２１】Welbourn et al, Br J Surg. 1991, 78: 651
【非特許文献２２】Sekido et al, Nature 1993, 365, 654
【非特許文献２３】Wolf et al, Eur J Immunol 1998, 28: 164
【非特許文献２４】Bertini R. et al., Proc. Nat. Acad. Sci. USA (2004), 101 (32), pp. 11791-11796
【非特許文献２５】Bertini R. et al., Br. J. Pharm. (2012), 165, pp. 436-454
【非特許文献２６】Remington, "The Science and Practice of Pharmacy", 21st ed. (Lippincott Williams and Wilkins
【非特許文献２７】Tavares, L.P., et al., Inhibition of PDE4 During Pneumococcal Pneumonia Reduces Inflammation and Lung Injury in Mice. Am J Respir Cell Mol Biol, 2015
【非特許文献２８】Garcia, C.C., et al., Platelet-activating factor receptor plays a role in lung injury and death caused by Influenza A in mice. PLoS Pathog, 2010. 6(11): p. e1001171
【非特許文献２９】Russo, R.C., et al., Role of the chemokine receptor CXCR2 in bleomycin-induced pulmonary inflammation and fibrosis. Am J Respir Cell Mol Biol, 2009. 40(4): p. 410-21
【非特許文献３０】Cunha, T.M., et al., Treatment with DF 2162, a non-competitive allosteric inhibitor of CXCR1/2, diminishes neutrophil influx and inflammatory hypernociception in mice. Br J Pharmacol, 2008. 154(2): p. 460-70
【非特許文献３１】Klein, E.Y., et al., The Frequency of Influenza and Bacterial Co-infection: A Systematic Review and Meta-Analysis. Influenza Other Respir Viruses, 2016
【非特許文献３２】Palacios, G., et al., Streptococcus pneumoniae coinfection is correlated with the severity of H1N1 pandemic influenza. PLoS One, 2009. 4(12): p. e8540
【非特許文献３３】Jain, S., et al., Hospitalized patients with 2009 H1N1 influenza in the United States, April-June 2009. N Engl J Med, 2009. 361(20): p. 1935-44
【非特許文献３４】Dominguez-Cherit, G., et al., Critically Ill patients with 2009 influenza A(H1N1) in Mexico. JAMA, 2009. 302(17): p. 1880-7
【非特許文献３５】Sethi, S. et al. Am. J. Med. 125, 1162-1170; 2012
【非特許文献３６】Kolaczkowska, E. & Kubes, Nat. Rev. Immunol. 13, 159-75; 2013
【非特許文献３７】Rabe KF et al. Am. J. Respir. Crit. Care Med. 532-555; 2007
【非特許文献３８】Jeffery, P. Chest Filley Lec, 251S-260S; 2000
【非特許文献３９】Oostwoud, L. C. et al. Nat. Publ. Gr. 1-16, 2016
【非特許文献４０】Barnes, P. Nat Rev Drug Discov 1, 437-446; 2002
【非特許文献４１】Garnock-Jones, K. P. Drugs 75, 1645-1656; 2015
【非特許文献４２】Mackay, A. J. & Hurst, J. R. Immunol Allergy Clin North Am 33, 95-115; 2013
【発明の概要】
【００１０】
細菌感染に関連し、上記に報告されるように、本発明者らは、好中球では、ＣＸＣＲ１およびＣＸＣＲ２の活性化により、細菌の増殖と播種を制御するために非常に重要な、走化性、顆粒酵素の放出、および活性酸素種の産生がもたらされることを観察した。上記の観点からは、細菌感染の治療のためにＩＬ−８阻害剤を使用する動機はなかった。実際のところ、細菌によって引き起こされる感染は抗生物質で治療される。
【００１１】
本発明者らは、驚くべきことに、ＣＸＣＲ１／ＣＸＣＲ２を遮断することによる炎症応答の調節が、二次感染、好ましくは呼吸器感染、および、より好ましくは肺炎球菌感染中に病原体に対する免疫応答を損なうことなく、疾患の転帰を改善することを発見した。
【００１２】
したがって、本発明の第１の目的は、二次細菌感染、好ましくは二次呼吸器感染、より好ましくは肺炎球菌感染の予防および／または治療における使用のための、小分子量分子、好ましくはＣＸＣＲ１阻害剤、より好ましくは二重ＣＸＣＲ１／ＣＸＣＲ２阻害剤から選択されるＩＬ−８阻害剤である。
【００１３】
本発明の第２の目的は、二次細菌感染、好ましくは二次呼吸器感染、より好ましくは肺炎球菌感染の予防および／または治療のための薬物の調製のための上記のＩＬ−８阻害剤の使用である。
【００１４】
本発明の第３の目的は、二次細菌感染、好ましくは二次呼吸器感染、より好ましくは肺炎球菌感染の予防および／または治療の方法であって、それを必要とする対象に治療上有効な量の上記のＩＬ−８阻害剤を投与する工程を含む方法である。
【００１５】
本発明の第４の目的は、本発明のＩＬ−８阻害剤および薬剤的に許容できる賦形剤および／または希釈剤を含む、二次細菌感染、好ましくは二次呼吸器感染、より好ましくは肺炎球菌感染の予防および／または治療のための医薬組成物である。
【００１６】
好ましい一実施形態によれば、前記二次呼吸器感染は、先行するインフルエンザ感染、敗血症、重度の虚血または再灌流傷害に関連している。
【図面の簡単な説明】
【００１７】
【図１】ＩＡＶ感染によって引き起こされる炎症反応の動態。マウスにＩＡＶ（１０4および１０6ＰＦＵ）を感染させるか、ＰＢＳ（モック（Ｍｏｃｋ））を点滴し、感染１、３、４、５、７、および１０日後に安楽死させた。ケモカインＣＸＣＬ１およびＣＸＣＬ２のレベル（ＡおよびＤ）、気道（ＢおよびＥ）および肺（ＣおよびＦ）の好中球の数は、感染後のさまざまな時点で評価した。（グループあたりｎ＝５−６匹のマウス）。結果は、細胞数、サイトカインのレベル（ｐｇ／ｍｌ）、吸光度または初期重量のパーセンテージとして表され、平均±ＳＥＭとして示される。モックマウス（Ｍｏｃｋ  ｍｉｃｅ）または示されたグループと比較した場合、＊はＰ＜０．０５であり、＊＊はＰ＜０．０１であり、＊＊＊はＰ＜０．００１である。
【図２】ＣＸＣＲ１／ＣＸＣＲ２拮抗作用は、ＩＡＶ感染中の炎症反応を減少させ、マウスを病的状態から保護する。マウスに１０4ＰＦＵのＩＡＶを感染させ、感染の最初の５日間に１日２回ＤＦ２１６２（１０ｍｇ／ｋｇ）または薬物ビヒクル（ＰＢＳ中のＣＭＣ０．１％）で処置した。対照動物には、鼻腔内にＰＢＳ（モック）を滴下注入した。体重減少（Ａ）、白血球（Ｂ）の数、気道（Ｃ）または肺（Ｄ）における好中球の数、および肺におけるウイルス数（Ｅ）を、感染５日後に評価した（各グループあたりｎ＝５−６匹のマウス）。データは平均±ＳＥＭとして示される。モックグループと比較した場合、＊はＰ＜０，０５であり、＊＊はＰ＜０，０１であり、＊＊＊はＰ＜０．００１であり、ビヒクルグループ（Ｆｌｕ）と比較した場合、＃はＰ＜０．０５であり、＃＃＃はＰ＜０．００１である。
【図３】炎症促進性サイトカインと肺損傷のレベルは、ＤＦ２１６２治療後に減少する。マウスに１０4ＰＦＵのＩＡＶを感染させ、感染の最初の５日間に１日２回ＤＦ２１６２（１０ｍｇ／ｋｇ）または薬物ビヒクル（ＰＢＳ中のＣＭＣ０．１％）で処置した。対照動物には、鼻腔内にＰＢＳ（モック）を滴下注入した。マウスの気道におけるＴＮＦ−α（Ａ）、ＣＸＣＬ１（Ｂ）およびＩＬ−６（Ｃ）のレベルを測定した。組織学的分析を行い、組織病理学的スコア（Ｄ）を、最大１８ポイント（気道、血管、実質性炎症、好中球浸潤および上皮損傷）で示す。結果を、平均±ＳＥＭ（各グループあたりｎ＝５−６匹のマウス）で示す。モックグループと比較した場合、＊＊は、Ｐ＜０．０１の場合、＊＊＊はＰ＜０．００１である。ビヒクルグループと比較した場合、＃はＰ＜０．０５であり、＃＃はＰ＜０．０１である。
【図４】マウスの肺炎球菌性肺炎の経過に対するＣＸＣＲ１／ＣＸＣＲ２拮抗作用の影響。マウスに１０4ＣＦＵのＳ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅまたはＰＢＳ（モック）を鼻腔内感染させ、感染の最初の２日間に１日２回ＤＦ２１６２（１０ｍｇ／ｋｇ）または薬物ビヒクル（ＰＢＳ中ＣＭＣ０．１％）で処置した。致死の間、マウスに１０日間毎日伴った（Ａ）。感染後４８時間でマウスを安楽死させ、総白血球数（Ｂ）、およびＢＡＬＦ（Ｃ）中のおよび肺（Ｄ）における好中球の数を入手した。ＢＡＬＦにおける細菌数も測定した（Ｅ）。グラフＦは、全体的な病理学的スコア（最大１８ポイント）を示す。結果は、各グループの少なくとも６匹のマウスの中央値（Ｅ）または平均±ＳＥＭ（他のすべてのグラフ）として示される。モックグループと比較した場合、＊は、Ｐ＜０，０５であり、＊＊＊は、Ｐ＜０．００１であり、およびビヒクル処置グループと比較した場合、＃は、Ｐ＜０．０５であり、＃＃は、Ｐ＜０．０１である。
【図５】ＣＸＣＲ１／ＣＸＣＲ２治療後、体重減少、二次感染マウスの血液中の好中球動員および細菌が減少する。マウスに、ＩＡＶ（５ｘ１０2ＰＦＵ、鼻腔内投与）を感染させ、感染３、４、５、および６日後、ＤＦ２１６２（１０ｍｇ／ｋｇ−強制経口投与）または薬物のビヒクルで１日２回処置した。ＩＡＶ感染の１４日後、マウスにＳ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ（１０3ＣＦＵ、鼻腔内投与）を二次感染させた。単一感染も行った。モックマウスにＰＢＳを滴下注入した（鼻腔内投与）。致死（Ａ）と体重減少（Ｂ）を伴った。別の実験では、同じ処置と感染状態にあるマウスを、２次感染から４８時間後に安楽死させた。気道における総白血球数（Ｃ）および好中球数（Ｄ）、肺の好中球（Ｅ−ＭＰＯアッセイ）、およびＢＡＬＦ（Ｆ）または血液（Ｇ）の細菌数を入手した。結果は平均±ＳＥＭとして表示される。モックグループと比較した場合、＊はＰ＜０，０５であり、＊＊はＰ＜０，０１であり、＊＊＊はＰ＜０．００１である。ビヒクルグループと比較した場合、＃＃はＰ＜０，０１であり、＃＃＃は、Ｐ＜０．００１である（グループあたりｎ＝１０匹マウス）。
【図６】ＩＡＶ一次感染中のＣＸＣＲ１／ＣＸＣＲ２拮抗作用は、肺炎球菌二次感染中のサイトカインのレベルを低下させた。マウスにＩＡＶ（５ｘ１０2ＰＦＵ、鼻腔内投与）を感染させ、感染後３、４、５、および６日目に、ＤＦ２１６２（１０ｍｇ／ｋｇ−強制経口投与）または薬物のビヒクルで１日２回処置した。動物は、ＩＡＶ感染中にのみ薬物を投与された。ＩＡＶ感染の１４日後、マウスにＳ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ（１０3ＣＦＵ、鼻腔内投与）を二次感染させた。単一感染も行った。モックマウスにＰＢＳを滴下注入した（鼻腔内投与）。Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ感染の４８時間後にマウスを安楽死させ、ＴＮＦ−α（Ａ）、ＩＬ−６（Ｂ）、ＩＬ−１２（Ｃ）、ＣＸＣＬ−１（Ｄ）およびＩＬ−１０（Ｅ）のレベルをＢＡＬ液中で測定した。データは平均±ＳＥＭとして表示される。モックグループと比較した場合、＊は、Ｐ＜０，０５であり、＊＊はＰ＜０，０１であり、＊＊＊はＰ＜０．００１である。ビヒクルグループと比較した場合、＃＃は、Ｐ＜０，０１であり、＃＃＃は、Ｐ＜０．００１である（グループあたりｎ＝１０匹マウス）。
【図７】二次肺炎球菌感染による肺損傷の増加は、ＤＦ２１６２治療後に減少する。マウスにＩＡＶ（５ｘ１０2ＰＦＵ、鼻腔内投与）を感染させ、感染後３、４、５、および６日目に、ＤＦ２１６２（１０ｍｇ／ｋｇ−強制経口投与）または薬物のビヒクルで１日２回処置した。動物はＩＡＶ感染中にのみ薬物を投与された。ＩＡＶ感染の１４日後、マウスにＳ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ（１０3ＣＦＵ、鼻腔内投与）を二次感染させた。単一感染も行った。モックマウスにＰＢＳを滴下注入した（鼻腔内投与）。二次感染の４８時間後、肺を採取して、処置し、組織学的分析を行った。モック、単一感染マウス（ＩＡＶおよびＳ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）および二次感染マウス（ビヒクルおよびＤＦ２１６２処置）の代表的なスライドをＡに示す（横棒は倍率１００倍で１５０μｍを表す）。グラフＢは、感染マウスの肺損傷の総合スコアを示す。ＢＡＬ液を使用して、感染によるタンパク質漏れを測定した（Ｃ）。データは平均±ＳＥＭとして示す。モックグループと比較した場合、＊は、Ｐ＜０，０５であり、＊＊はＰ＜０，０１であり、＊＊＊はＰ＜０．００１であり、ビヒクルグループと比較した場合、＃は、Ｐ＜０，０５であり、＃＃は、Ｐ＜０．０１である（グループあたりｎ＝１０匹マウス）。
【図８】ＩＡＶ感染マウスの肺の組織病理学的変化は、ＤＦ２１６２治療後に減少する。マウスに１０4ＰＦＵのＩＡＶを感染させ、感染の最初の５日間に１日２回ＤＦ２１６２（１０ｍｇ／ｋｇ）または薬物ビヒクル（ＰＢＳ中のＣＭＣ０．１％）で処置した。対照動物には、鼻腔内にＰＢＳ（モック）を滴下注入した。モックおよびＩＡＶ感染動物（ビヒクルおよびＤＦ処置）の肺の代表的なＨ＆Ｅ染色スライドを１００倍の倍率で示す。
【図９】ＣＸＣＲ１／ＣＸＣＲ２アンタゴニストによる治療は、Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ感染マウスの肺における組織病理学的変化を予防する。マウスに１０4ＣＦＵのＳ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅまたはＰＢＳ（モック）を鼻腔内感染させ、感染の最初の２日間に１日２回ＤＦ２１６２（１０ｍｇ／ｋｇ）または薬物ビヒクル（ＰＢＳ中のＣＭＣ０．１％）で処置した。モックおよびＳ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ感染動物の肺の代表的なＨ＆Ｅ染色スライド（ビヒクルおよびＤＦ処置）を１００倍の倍率で示す。
【図１０】Ｃｓ−Ｈ１Ｎ１マウスでのデキサメタゾン治療。周囲の空気（Ａｉｒ）、タバコの煙（Ｃｓ）に曝露した、Ｈ１Ｎ１ウイルス（Ｈ１Ｎ１）に感染した、Ｈ１Ｎ１ウイルスに感染し、Ｃｓに曝露した（Ｃｓ  Ｈ１Ｎ１）、およびＣｓに曝露し、Ｈ１Ｎ１ウイルスに感染させ、４日間、感染してから４８時間後に１日１回、デキサメタゾン（１ｍｇ／ｋｇ  ｐ．ｏ）で処置した（Ｃｓ  Ｈ１Ｎ１  デキサメタゾン）、マウスの、（Ａ）肺組織におけるシトカイン濃度、（Ｂ）ＢＡＬ分析から得られた総白血球数、および（Ｃ）肺組織におけるＭＰＯ活性。
【図１１】Ｃｓ−Ｈ１Ｎ１マウスをＣＸＣＲ１／ＣＸＣＲ２アンタゴニストであるＤＦ２１５６Ａで治療する生存アッセイ。周囲の空気（Ａｉｒ）、タバコの煙（Ｃｓ）に曝露した、Ｈ１Ｎ１ウイルス（Ｈ１Ｎ１）に感染した、Ｈ１Ｎ１ウイルスに感染し、Ｃｓに曝露した（Ｃｓ  Ｈ１Ｎ１）、Ｃｓに曝露し、Ｈ１Ｎ１ウイルスに感染させ、感染の日から７日間に１日１回デキサメタゾンで処置した（Ｃｓ  Ｈ１Ｎ１  デキサメタゾンｖ．ｏ）、Ｃｓに曝露し、Ｈ１Ｎ１ウイルスに感染させ、感染の日から７日間に１日１回、ＤＦ２１５６Ａ（１０ｍｇ／ｋｇ  ｐ．ｏ）で処置した、およびＣｓに曝露し、Ｈ１Ｎ１ウイルスに感染させ、感染の日から７日間、１日１回、３ｍｌのチオトロピウム（０，３ｍｇ／ｍｌ  エアロゾル）で処置したマウスの生存率。
【発明を実施するための形態】
【００１８】
実験セクションで詳細に開示されるように、本発明者らは、ＩＬ−８活性の阻害剤、好ましくは二重ＣＸＣＲ１／ＣＸＣＲ２受容体阻害剤として作用する本発明の分子が、二次細菌感染の治療および／または予防において治療効果を有することを発見した。
【００１９】
したがって、本発明の第１の目的は、二次細菌感染、好ましくは二次呼吸器感染、より好ましくは肺炎球菌感染の治療および／または予防に使用するためのＩＬ−８阻害剤であり、ＩＬ−８阻害剤は小分子量分子から選択される。
【００２０】
好ましい実施形態によれば、前記二次細菌感染は、先行するインフルエンザ感染、敗血症、重度の虚血または再灌流傷害に関連している。
【００２１】
本出願によれば、用語「ＩＬ−８阻害剤」は、ＩＬ−８の生物学的活性を部分的にまたは完全に阻害することができる任意の化合物をいう。このような化合物は、ＩＬ−８の発現若しくは活性を低下させることによって、または、ＩＬ−８受容体によって活性化される細胞内シグナル伝達のトリガーを阻害することによって作用し得る。前記ＩＬ−８阻害剤は、５００ｎＭ以下、好ましくは１００ｎＭ以下の濃度で、ＰＭＮ中のＩＬ−８によって誘導される走化性を少なくとも５０％、好ましくは少なくとも６０％阻害できることが好ましい。
【００２２】
好ましい実施形態によれば、本発明のすべての目的のＩＬ−８阻害剤は、ＣＸＣＲ１受容体によって媒介されるか、またはＣＸＣＲ１およびＣＸＣＲ２受容体の両方によって媒介されるＩＬ−８の活性を阻害する。
【００２３】
好ましくは、この実施形態によれば、前記ＩＬ−８阻害剤は、ＣＸＣＲ１受容体またはＣＸＣＲ１およびＣＸＣＲ２受容体の両方のアロステリック阻害剤またはオルソステリックアンタゴニストのいずれかである。
【００２４】
好ましくは、前記ＩＬ−８阻害剤は、ＣＸＣＲ１受容体に対して選択的であるか、ＣＸＣＲ１およびＣＸＣＲ２受容体に対して同等に効力がある。より好ましくは、前記ＩＬ−８阻害剤は、ＣＸＣＲ１およびＣＸＣＲ２受容体に対して同等に効力がある。
【００２５】
本発明による「ＣＸＣＲ１に対して選択的」とは、ＣＸＣＲ２に対してよりもＣＸＣＲ１に対して、対数で、少なくとも２、好ましくは３高いＩＣ50値を示す化合物を意味する。(Bertini R. et al., Proc. Nat. Acad. Sci. USA (2004), 101 (32), pp. 11791-11796（非特許文献２４）)。
【００２６】
「ＣＸＣＲ１およびＣＸＣＲ２に対して同等に効力がある」とは、ＣＸＣＲ１およびＣＸＣＲ２に対して１０ピコモル（１０-11Ｍ）〜１マイクロモル（１０-6Ｍ）の範囲のＩＣ50値を示す化合物を意味する。(Bertini R. et al., Br. J. Pharm. (2012), 165, pp. 436-454（非特許文献２５）)。
【００２７】
より好ましくは、本発明によるＩＬ−８阻害剤は、低ナノモル範囲、好ましくは０．０２〜５ナノモルの範囲のＣＸＣＲ１受容体に対するＩＣ50値を有する。
【００２８】
本発明によれば、前述の実施形態と組み合わせて、前記ＩＬ−８阻害剤は、小分子量分子から選択される。別の実施形態によれば、前記ＩＬ−８阻害剤は、抗体、好ましくは抗ＣＸＣＲ１／ＣＸＣＲ２受容体抗体から選択される。
【００２９】
ＣＸＣＲ１受容体によって媒介される、またはＣＸＣＲ１およびＣＸＣＲ２の両方の受容体によって媒介されるＩＬ−８の活性を阻害することができる、上記の定義に従うＩＬ−８阻害剤は、当技術分野で知られている。
【００３０】
本発明による好ましいＩＬ−８阻害剤は、１，３−チアゾール−２−イルアミノフェニルプロピオン酸誘導体、２−フェニル−プロピオン酸誘導体およびそれらの薬学的に許容できる塩から選択される二重ＣＸＣＲ１／ＣＸＣＲ２受容体阻害剤である。
【００３１】
上記化合物のうち、前記１，３−チアゾール−２−イルアミノフェニルプロピオン酸誘導体は、好ましくは、式（Ｉ）の化合物、またはその薬剤的に許容できる塩である。
【００３２】
【化１】
2020521799.tif 000003
【００３３】
式中、
−Ｒ１は水素またはＣＨ3であり、
−Ｒ２は水素または直鎖Ｃ1〜Ｃ4アルキルであり、好ましくはこれは水素であり、
−ＹはＳ、ＯおよびＮから選択されるヘテロ原子であり、好ましくはこれはＳであり、
−Ｚはハロゲン、直鎖または分岐鎖Ｃ1〜Ｃ4アルキル、Ｃ2〜Ｃ4アルケニル、Ｃ2〜Ｃ4アルキニル、Ｃ1〜Ｃ4アルコキシ、ヒドロキシル、カルボキシル、Ｃ1〜Ｃ4アシロキシ、フェノキシ、シアノ、ニトロ、アミノ、Ｃ1〜Ｃ4アシルアミノ、ハロＣ1〜Ｃ3アルキル、ハロＣ1〜Ｃ3アルコキシ、ベンゾイル、直鎖または分岐鎖Ｃ1〜Ｃ8アルカンスルホネート、直鎖または分岐鎖Ｃ1〜Ｃ8アルカンスルホンアミド、直鎖または分岐鎖Ｃ1〜Ｃ8アルキルスルホニルメチルから選択され、好ましくはこれはトリフルオロメチルであり、
−ＸはＯＨまたは式ＮＨＲ3の残基［式中、Ｒ3は、
−水素、ヒドロキシル、直鎖または分岐鎖Ｃ1〜Ｃ6アルキル、Ｃ3〜Ｃ6シクロアルキル、Ｃ2〜Ｃ6アルケニル、Ｃ1〜Ｃ5アルコキシ、または、Ｃ1〜Ｃ6フェニルアルキル（ここで、アルキル、シクロアルキルまたはアルケニル基はＣＯＯＨ残基によって置換され得る）
−式ＳＯ2Ｒ４の残基（式中、Ｒ４はＣ1〜Ｃ2アルキル、Ｃ3〜Ｃ6シクロアルキル、Ｃ1〜Ｃ3ハロアルキルである。）から選択される。］である。
【００３４】
好ましくは、上記化合物において、ＸはＯＨである。
【００３５】
上記化合物のうち、特に好ましいものは、
Ｒ１がＣＨ3であり、
Ｒ２が水素または直鎖Ｃ1〜Ｃ4アルキルであり、好ましくはこれは水素であり、
ＹがＳ、ＯおよびＮから選択されるヘテロ原子であり、好ましくはこれはＳであり、
Ｚがハロゲン、直鎖または分岐鎖Ｃ1〜Ｃ4アルキル、Ｃ2〜Ｃ4アルケニル、Ｃ2〜Ｃ4アルキニル、Ｃ1〜Ｃ4アルコキシ、ヒドロキシル、カルボキシル、Ｃ1〜Ｃ4アシロキシ、フェノキシ、シアノ、ニトロ、アミノ、Ｃ1〜Ｃ4アシルアミノ、ハロＣ1〜Ｃ3アルキル、ハロＣ1〜Ｃ3アルコキシ、ベンゾイル、直鎖または分岐鎖Ｃ1〜Ｃ8アルカンスルホネート、直鎖または分岐鎖Ｃ1〜Ｃ8アルカンスルホンアミド、直鎖または分岐鎖Ｃ1〜Ｃ8アルキルスルホニルメチルから選択され、好ましくはこれはトリフルオロメチルであり、
ＸがＯＨまたは式ＮＨＲ3の残基［式中、Ｒ3は、
−水素、ヒドロキシル、直鎖または分岐鎖Ｃ1〜Ｃ6アルキル、Ｃ3〜Ｃ6シクロアルキル、Ｃ2〜Ｃ6アルケニル、Ｃ1〜Ｃ5アルコキシ、または、Ｃ1〜Ｃ6フェニルアルキル（ここで、アルキル、シクロアルキルまたはアルケニル基はＣＯＯＨ残基によって置換され得る）
−式ＳＯ2Ｒ４の残基（式中、Ｒ４はＣ1〜Ｃ2アルキル、Ｃ3〜Ｃ6シクロアルキル、Ｃ1〜Ｃ3ハロアルキルである。）から選択される。］である、前記式（Ｉ）の化合物、またはその薬剤的に許容できる塩である。
【００３６】
好ましくは、これらの化合物において、ＸはＯＨである。
【００３７】
上記化合物のうち、特に好ましいものはまた、
Ｒ１が水素であり、
Ｒ２が水素または直鎖Ｃ1〜Ｃ4アルキルであり、好ましくはこれは水素であり、
ＹがＳ、ＯおよびＮから選択されるヘテロ原子であり、好ましくはこれはＳであり、
Ｚがハロゲン、直鎖または分岐鎖Ｃ1〜Ｃ4アルキル、Ｃ2〜Ｃ4アルケニル、Ｃ2〜Ｃ4アルキニル、Ｃ1〜Ｃ4アルコキシ、ヒドロキシル、カルボキシル、Ｃ1〜Ｃ4アシロキシ、フェノキシ、シアノ、ニトロ、アミノ、Ｃ1〜Ｃ4アシルアミノ、ハロＣ1〜Ｃ3アルキル、ハロＣ1〜Ｃ3アルコキシ、ベンゾイル、直鎖または分岐鎖Ｃ1〜Ｃ8アルカンスルホネート、直鎖または分岐鎖Ｃ1〜Ｃ8アルカンスルホンアミド、直鎖または分岐鎖Ｃ1〜Ｃ8アルキルスルホニルメチルから選択され、好ましくはこれはトリフルオロメチルから選択され、
ＸがＯＨまたは式ＮＨＲ3の残基［式中、Ｒ3は、
−水素、ヒドロキシル、直鎖または分岐鎖Ｃ1〜Ｃ6アルキル、Ｃ3〜Ｃ6シクロアルキル、Ｃ2〜Ｃ6アルケニル、Ｃ1〜Ｃ5アルコキシ、または、Ｃ1〜Ｃ6フェニルアルキル（ここで、アルキル、シクロアルキルまたはアルケニル基はＣＯＯＨ残基によって置換され得る）
−式ＳＯ2Ｒ４の残基（式中、Ｒ４はＣ1〜Ｃ2アルキル、Ｃ3〜Ｃ6シクロアルキル、Ｃ1〜Ｃ3ハロアルキルである。）から選択される。］である、前記式（Ｉ）の化合物、またはその薬剤的に許容できる塩である。
【００３８】
より好ましくはＸはＮＨ2である。
【００３９】
好ましくは、上記化合物において、ＸはＯＨである。
【００４０】
上記化合物のうち、特に好ましいものはまた、
Ｒ１が水素またはＣＨ3であり、
Ｒ２が水素または直鎖Ｃ1〜Ｃ4アルキルであり、好ましくはこれは水素であり、
ＹがＳ、ＯおよびＮから選択されるヘテロ原子であり、好ましくはこれはＳであり、
Ｚが直鎖または分岐鎖Ｃ1〜Ｃ4アルキル、直鎖または分岐鎖Ｃ1〜Ｃ4アルコキシ、ハロＣ1〜Ｃ3アルキルおよびハロＣ1〜Ｃ3アルコキシから選択され、好ましくはこれはメチル、メトキシ、トリフルオロメトキシ、トリフルオロメチルから選択され、より好ましくは、これはトリフルオロメチルであり、
ＸがＯＨである、
前記式（Ｉ）の化合物、またはその薬剤的に許容できる塩である。
【００４１】
上記化合物のうち、特に好ましいものはまた、
Ｒ１がＣＨ3であり、
Ｒ２が水素または直鎖Ｃ1〜Ｃ4アルキルであり、好ましくはこれは水素であり、
ＹがＳ、ＯおよびＮから選択されるヘテロ原子であり、好ましくはこれはＳであり、
Ｚが直鎖または分岐鎖Ｃ1〜Ｃ4アルキル、直鎖または分岐鎖Ｃ1〜Ｃ4アルコキシ、ハロＣ1〜Ｃ3アルキルおよびハロＣ1〜Ｃ3アルコキシから選択され、好ましくはこれはメチル、メトキシ、トリフルオロメトキシ、トリフルオロメチルから選択され、より好ましくはこれはトリフルオロメチルである、前記式（Ｉ）の化合物、またはその薬剤的に許容できる塩である。
【００４２】
上記化合物のうち、特に好ましいものはまた、
Ｒ１が水素であり、
ＸがＯＨである、
Ｒ２が水素または直鎖Ｃ1〜Ｃ4アルキルであり、好ましくはこれは水素であり、
ＹがＳ、ＯおよびＮから選択されるヘテロ原子であり、好ましくはこれはＳであり、
Ｚが直鎖または分岐鎖Ｃ1〜Ｃ4アルキル、直鎖または分岐鎖Ｃ1〜Ｃ4アルコキシ、ハロＣ1〜Ｃ3アルキルおよびハロＣ1〜Ｃ3アルコキシから選択され、好ましくはこれはトリフルオロメチルである、前記式（Ｉ）の化合物、またはその薬剤的に許容できる塩である。
【００４３】
好ましくは、上記式（Ｉ）の化合物の全てにおいて、Ｒ１は水素であり、フェニルプロピオン酸基のキラル炭素原子はＳ配置である。
【００４４】
特に好ましいものは、２−メチル−２−（４−｛［４−（トリフルオロメチル）−１，３−チアゾール−２−イル］アミノ｝フェニル）プロピオン酸（本明細書において、ＤＦ２７２６Ｙとも表す。）およびその薬剤的に許容できる塩、好ましくはそのナトリウム塩（本明細書において、ＤＦ２７２６Ａとも表す。）、並びに、２−（４−｛［４−（トリフルオロメチル）−１，３−チアゾール−２−イル］アミノ｝フェニル）プロピオン酸およびその薬剤的に許容できる塩、好ましくは（２Ｓ）−２−（４−｛［４−（トリフルオロメチル）−１，３−チアゾール−２−イル］アミノ｝フェニル）プロピオン酸（ＤＦ２７５５Ｙとしても知られる。）およびＤＦ２７５５Ａとしても知られるそのナトリウム塩から選択される、本発明による式（Ｉ）の化合物である。
【００４５】
式（Ｉ）の化合物は、国際公開第２０１０／０３１８３５号（特許文献１）に開示されており、これにはまた、それらの合成方法、ＩＬ−８阻害剤としてのそれらの活性、並びに、一過性脳虚血、水疱性類天疱瘡、関節リュウマチ、突発性線維症、糸球体腎炎および虚血および再灌流によって起こる損傷などのＩＬ−８依存性の病状の治療におけるそれらの使用も開示されている。
【００４６】
上記ＩＬ−８阻害剤のうち、前記２−フェニル−プロピオン酸誘導体は、好ましくは、式（ＩＩ）の化合物、またはその薬剤的に許容できる塩である。
【００４７】
【化２】
2020521799.tif 000004
【００４８】
式中、
Ｒ4は直鎖または分岐鎖Ｃ1〜Ｃ6アルキル、ベンゾイル、フェノキシ、トリフルオロメタンスルホニルオキシであり、好ましくはこれはベンゾイル、イソブチルおよびトリフルオロメタンスルホニルオキシから選択される。
【００４９】
また、好ましい実施形態によれば、Ｒ4はフェニル環の３位または４位にあり、より好ましくは、これは３−ベンゾイル、４−イソブチルまたは４−トリフルオロメタンスルホニルオキシである。
【００５０】
Ｒ5はＨ、または直鎖または分岐鎖Ｃ1〜Ｃ3アルキル、好ましくはこれはＨである。
【００５１】
Ｒ6は直鎖または分岐鎖Ｃ1〜Ｃ6アルキルまたはトリフルオロメチルであり、好ましくはこれは直鎖または分岐鎖Ｃ1〜Ｃ6アルキル、より好ましくはこれはＣＨ3である。
【００５２】
上記化合物のうち、好ましいものは、式（ＩＩ）の化合物またはその薬剤的に許容できる塩であり、
Ｒ4がＣ1〜Ｃ6アルキルまたはベンゾイルであり、好ましくはこれは３位および４位にあり、より好ましくはこれは３−ベンゾイルまたは４−イソブチルである。
【００５３】
Ｒ5がＨ、または直鎖または分岐鎖Ｃ1〜Ｃ3アルキル、好ましくはこれはＨであり、
Ｒ6が直鎖または分岐鎖Ｃ1〜Ｃ6アルキルまたはトリフルオロメチルであり、好ましくはこれは直鎖または分岐鎖Ｃ1〜Ｃ6アルキル、より好ましくはこれはＣＨ3である。
【００５４】
上記化合物のうち、好ましいものは、
Ｒ4がトリフルオロメタンスルホニルオキシ、好ましくは４−トリフルオロメタンスルホニルオキシであり、
Ｒ5がＨ、または直鎖または分岐鎖Ｃ1〜Ｃ3アルキル、好ましくはこれはＨであり、
Ｒ6が直鎖または分岐鎖Ｃ1〜Ｃ6アルキルまたはトリフルオロメチルであり、好ましくはこれは直鎖または分岐鎖Ｃ1〜Ｃ16アルキルであり、より好ましくはこれはＣＨ3である、式（ＩＩ）の化合物またはその薬剤的に許容できる塩である。
【００５５】
上記化合物のうち、好ましいものはまた、式（ＩＩＩ）の化合物またはその薬剤的に許容できる塩である。
【００５６】
【化３】
2020521799.tif 000005
【００５７】
式中、
Ｒ’は水素であり、
Ｒは、Ｈまたは式ＳＯ2Ｒａの残基（式中、Ｒａは直鎖または分岐鎖Ｃ1〜Ｃ4アルキル、またはハロＣ1〜Ｃ3アルキルであり、好ましくはＲａはＣＨ3である）である。
【００５８】
好ましくは、式（ＩＩ）または式（ＩＩＩ）の上記化合物において、フェニルプロピオン酸基のキラル炭素原子はＲ配置である。
【００５９】
本発明による、特に好ましい式（ＩＩ）の化合物は、Ｒ−（−）−２−（４−イソブチルフェニル）プロピオニルメタンスルホンアミド（レパリキシンとしても知られる）およびその薬剤的に許容できる塩から選択される。好ましくは、前記化合物は、Ｒ−（−）−２−（４−イソブチルフェニル）プロピオニルメタンスルホンアミドのリシンｉｎ  ｓｉｔｕ塩（本明細書でＤＦ１６８１Ｂとも表す。）である。
【００６０】
更に、本発明による特に好ましい式（ＩＩ）または式（ＩＩＩ）の化合物は、２−（４−トリフルオロメタンスルホニルオキシ）フェニル］−Ｎ−メタンスルホニルプロピオンアミドおよびその薬剤的に許容できる塩、好ましくはそのナトリウム塩、好ましくはＲ（−）−２−（４−トリフルオロメタンスルホニルオキシ）フェニル］−Ｎ−メタンスルホニルプロピオンアミド（ＤＦ２１５６Ｙとしても知られる。）およびそのナトリウム塩（ラダリキシンまたはＤＦ２１５６Ａとしても知られる。）である。
【００６１】
本発明による式（ＩＩＩ）のさらに特に好ましい化合物は、Ｒ（−）−２−［（４'−トリフルオロメタンスルホニルオキシ）フェニル］プロピオンアミド（ＤＦ２１６２としても知られる。）である。
【００６２】
式（ＩＩ）および（ＩＩＩ）のＩＬ−８阻害剤は、国際公開第００／２４７１０号（特許文献２）および国際公開第２００５／０９０２９５号（特許文献３）に開示されており、これにはまた、それらの合成方法、ＩＬ−８阻害剤としてのそれらの活性、ならびに、ＩＬ−８によって誘導される好中球走化性および脱顆粒の阻害剤としてのそれらの使用、および乾癬、潰瘍性大腸炎、メラノーマ、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、水疱性類天疱瘡、関節リュウマチ、突発性線維症、糸球体腎炎および虚血および再灌流によって起こる損傷などのＩＬ−８依存性の病状の治療におけるそれらの使用も開示されている。
【００６３】
本発明の第２の目的は、二次細菌感染、好ましくは二次呼吸器感染、より好ましくは肺炎球菌感染の治療および／または予防のための薬物の調製のための上記定義のＩＬ−８阻害剤の使用である。
【００６４】
本発明の好ましい実施形態によれば、前記薬物は、先行するインフルエンザ感染、敗血症、重度の虚血または再灌流傷害に関連する二次細菌感染の治療および/または予防のためのものである。
【００６５】
本発明の第３の目的は、二次細菌感染、好ましくは二次呼吸器感染、より好ましくは肺炎球菌感染の治療および／または予防のための方法であって、それを必要とする対象に、治療上有効な量の、上記で定義されたＩＬ−８阻害剤を投与する工程を含む方法である。
【００６６】
本発明の好ましい実施形態によれば、前記方法は、先行するインフルエンザ感染、敗血症、重度の虚血または再灌流傷害に関連する二次細菌感染の治療および／または予防のためのものである。
【００６７】
本明細書で使用される、「治療上有効な量」は、その疾患の治療または予防を実現するのに十分な量をいう。有効な量の決定は、所望の効果の実現に基づいて、十分に当業者の能力の範囲内である。有効な量は、対象の体重および／または疾患の程度、または対象が受ける望まない状態を含むがこれらに限定されない因子に依存するであろう。
【００６８】
本明細書で使用する、用語「治療」および「予防」は、それぞれ、患者が潜在的疾患にまだ悩まされているかもしれないという事実にかかわらず、治療される疾患またはそれに関連する１以上の症候の根絶／改善または発症の予防／遅延をいう。
【００６９】
本発明の第４の目的は、薬剤的に許容できる賦形剤および／または希釈剤と共に、二次細菌感染、好ましくは二次呼吸器感染、より好ましくは肺炎球菌感染の治療および／または予防に使用するための上記定義のＩＬ−８阻害剤を含む医薬組成物である。
【００７０】
好ましい実施形態によれば、前記二次細菌感染は、先行するインフルエンザ感染、敗血症、重度の虚血または再灌流傷害に関連している。
【００７１】
本発明の目的のために、本発明によるＩＬ−８の阻害剤は、錠剤、カプセル、シロップなど経口製剤による、好ましくは制御放出製剤の形態での使用、または 非経口投与、好ましくは静脈内または筋肉内投与に適した滅菌溶液の形態での使用に適した医薬組成物に配合される。医薬組成物は、例えばRemington, "The Science and Practice of Pharmacy", 21st ed. (Lippincott Williams and Wilkins（非特許文献２６）)に開示されている、従来の方法に従って調製することができる。
【００７２】
平均日用量は、患者の疾患の重症度、状態、年齢、性別、体重などのいくつかの因子に依存する。用量は一般に、１日あたり、式（Ｉ）の化合物の１から１５００ｍｇまで変動し、任意に複数回投与に分けられる。
【実施例】
【００７３】
以下の実験セクションにおいて、本発明をさらに詳細に説明する。
【００７４】
実験セクション
実施例１
材料および方法
マウス
雄のＣ５７ＢＬ／６Ｊマウス（８−１２週齢）を、ミナス  ジェライス連邦大学（ＣＥＢＩＯ  ＵＦＭＧ／ブラジル）のＣｅｎｔｒａｌ  Ａｎｉｍａｌ  Ｆａｃｉｌｉｔｙから入手し、市販の固形飼料と水を自由に摂取できる状態に維持した。記載されているすべての手順は、地元の動物倫理委員会（ＣＥＴＥＡ／ＵＦＭＧ  １３／２０１０および３８１／２０１５）の事前承認を受けた。
【００７５】
細菌株およびウイルス株
Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ（ＡＴＣＣ  ６３０３  血清型３）を、血液寒天プレート上で３７℃、５％ＣＯ2で１２時間増殖し、感染ストックを［Tavares, L.P., et al., Inhibition of PDE4 During Pneumococcal Pneumonia Reduces Inflammation and Lung Injury in Mice. Am J Respir Cell Mol Biol, 2015（非特許文献２７）]に記載のように調製した。接種物は常に細菌懸濁液のプレーティングにより確認された。
【００７６】
本明細書でＩＡＶと称されるマウス適応ウイルスインフルエンザ  Ａ／ＷＳＮ／３３  Ｈ１Ｎ１を、[Garcia, C.C., et al., Platelet-activating factor receptor plays a role in lung injury and death caused by Influenza A in mice. PLoS Pathog, 2010. 6(11): p. e1001171（非特許文献２８）]に記載されているようにＭＤＣＫ（Ｍａｄｉｎ−Ｄａｒｂｙ  Ｃａｎｉｎｅ  Ｋｉｄｎｅｙ）培養細胞中で増殖した。感染前に、ストックを氷上で解凍し、滅菌リン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）で希釈した。
【００７７】
マウス感染
ＩＡＶおよびＳ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅの単一感染については、マウスに、６０ｍｇ／ｋｇのケタミンと４ｍｇ／ｋｇのキシラジンで麻酔をかけ、１０4ＰＦＵのＩＡＶまたは１０4ＣＦＵのＳｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅを鼻腔内に滴下注入した。二次肺炎球菌感染モデルでは、麻酔したマウスに、５００ＰＦＵのＩＡＶを感染させ、ウイルス感染の１４日間後、マウスに、イソフルランを麻酔し、１０3ＣＦＵのＳ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅを感染させた。対照マウスにはＰＢＳを投与した（モック感染）。
【００７８】
治療プロトコル
呼吸器感染中のＣＸＣＲ１／ＣＸＣＲ２拮抗作用の効果を評価するために、強制経口投与により、０．１％カルボキシメチルセルロース（ＣＭＣ）で希釈したＣＸＣＲ１／ＣＸＣＲ２非競合的アロステリックアンタゴニスト、Ｒ（−）−２−［（４’−トリフルオロメタンスルホニルオキシ）フェニル］プロピオンアミド（ＤＦ２１６２）（１００μｌ−１０ｍｇ／ｋｇ）で、マウスを処置した。ビヒクルで処置した動物には、０．１％のＣＭＣのみ１００μｌを投与した[Russo, R.C., et al., Role of the chemokine receptor CXCR2 in bleomycin-induced pulmonary inflammation and fibrosis. Am J Respir Cell Mol Biol, 2009. 40(4): p. 410-21（非特許文献２９）]。この投与量および投与スケジュールは、他のモデルで好中球の流入を有意に阻害することが示されており、当該分子の長い半減期と一致している[Cunha, T.M., et al., Treatment with DF 2162, a non-competitive allosteric inhibitor of CXCR1/2, diminishes neutrophil influx and inflammatory hypernociception in mice. Br J Pharmacol, 2008. 154(2): p. 460-70（非特許文献３０）]。
【００７９】
単一のＩＡＶ感染では、感染したマウス（１０4ＰＦＵ）を、感染の日から５日間、１日２回処置した。炎症、ウイルス力価および肺損傷にアクセスするために、感染の５日後にマウスを安楽死させた。体重減少も伴った。
【００８０】
肺炎球菌の単一感染では、感染マウス（１０5ＣＦＵ）を、感染の６時間後、次いで、１２、２４、３６時間後に処置した。感染の４８時間後、マウスを肺損傷、細菌数、および炎症の評価のために安楽死させた。致死実験のために、マウスは、２日間、１日２回処置され、１０日間伴われた。
【００８１】
最後に、二次肺炎球菌感染実験では、マウスに５００ＰＦＵのＩＡＶを感染させ、感染の３日目から６日目まで（１日２回）処置した。ＩＡＶ感染の１４日後、マウスに、１０3ＣＦＵのＳ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅを感染させた。致死と体重減少を伴った。ＩＡＶ感染の１６日後（肺炎球菌感染の２日後）に、肺の損傷、炎症、ならびに気道および血液中の細菌数の分析のためにマウスを安楽死させた。
【００８２】
気管支肺胞洗浄（ＢＡＬ）および組織抽出
指定された時点で、マウスを致死量のケタミン／キシラジン（それぞれ１８０ｍｇ／ｋｇおよび１５ｍｇ／ｋｇ）で安楽死させ、細菌数を測定するために血液を採取し、気管支肺胞洗浄（ＢＡＬ）を実施した。そのために、マウスの気管を露出させ、１．７ｍｍのカテーテルを挿入し、１ｍｌのＰＢＳの２つのアリコートを気管支肺胞コンパートメント内に３回流して、マウスの気道の白血球と細菌を回収した[Garcia, C.C., et al., Platelet-activating factor receptor plays a role in lung injury and death caused by Influenza A in mice. PLoS Pathog, 2010. 6(11): p. e1001171（非特許文献２８）]。細菌数を測定するために、ＢＡＬ液１００μｌを血液寒天に播種した。遠心分離後、細胞のペレットを使用して、総細胞数および示差細胞数を得た。製造元の説明書（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ、米国）によるＥＬＩＳＡおよびＢｒａｄｆｏｒｄアッセイ（Ｂｉｏｒａｄ）を使用した総タンパク質定量によるサイトカイン（ＩＬ−１２ｐ４０、ＩＬ−１０、ＴＮＦ−α、ＩＬ−６、ＣＸＣＬ１およびＣＸＣＬ２）の測定にＢＡＬ液体上清を使用した。マウスの右肺を、組織への好中球動員の間接的な定量化（ミエロペルオキシダーゼアッセイ−ＭＰＯ）およびウイルス滴定のために採取した。肺の左葉を、さらなる組織学的検査のためにホルマリンで固定した。
【００８３】
肺ミエロペルオキシダーゼアッセイ
前述のように、５０ｍｇの肺組織を、抗プロテアーゼを含む緩衝液で均質化した[Russo, R.C., et al., Role of the chemokine receptor CXCR2 in bleomycin-induced pulmonary inflammation and fibrosis. Am J Respir Cell Mol Biol, 2009. 40(4): p. 410-21（非特許文献２９）]。均質化したサンプルの上清２５μｌと、１．６ｍＭの３，３９−５，５９−テトラメチルベンジジン（ＴＭＢ；Ｓｉｇｍａ−ジメチルスルホキシドに溶解）および、ＨＴＡＢを含むリン酸緩衝液（ｐＨ５．４）に溶解した、０．０１ｍＭのＨ2Ｏ2の溶液２５μｌとを使用して、ＭＰＯレベルを入手した[Russo, R.C., et al., Role of the chemokine receptor CXCR2 in bleomycin-induced pulmonary inflammation and fibrosis. Am J Respir Cell Mol Biol, 2009. 40(4): p. 410-21（非特許文献２９）]。
【００８４】
ウイルスの定量化−プラークアッセイ
ウイルス滴定のために、無菌状態で採取された肺の重量を測定し、無菌の冷ＰＢＳで均質化した。サンプルの連続希釈液を、ＭＤＣＫ細胞単層で１時間インキュベートし、前述のように７２時間アガロースで覆った [Garcia, C.C., et al., Platelet-activating factor receptor plays a role in lung injury and death caused by Influenza A in mice. PLoS Pathog, 2010. 6(11): p. e1001171（非特許文献２８）]。肺のグラムあたりのプラーク形成単位の数を表した。
【００８５】
組織学的分析
肺損傷、それに続くＩＡＶおよび肺炎球菌感染にアクセスするために、肺の固定左葉をエタノールで徐々に脱水し、パラフィンに包埋した。光学顕微鏡下での検査のために、４ｍｍの切片を切り取り、Ｈ＆Ｅで染色した。組織病理学的スコアは、実験グループを知らない病理学者によって実施され、気道、血管および実質の炎症、さらに５ポイントの一般的な好中球性炎症を合計１８ポイントのスコアで評価した[Garcia, C.C., et al., Platelet-activating factor receptor plays a role in lung injury and death caused by Influenza A in mice. PLoS Pathog, 2010. 6(11): p. e1001171（非特許文献２８）]。
【００８６】
統計分析
ＧｒａｐｈＰａｄ  Ｐｒｉｓｍ  ４．０を使用して、統計とグラフを実行した。一元配置（ｏｎｅ−ｗａｙ）ＡＮＯＶＡ、それに続くＮｅｗｍａｎ  Ｋｅｕｌｓ事後検定を使用して３つ以上のグループを比較し、２つのグループ間の比較には、対応のないｔ検定を使用した。生存率曲線は、ロングランク検定によって分析され、体重減少曲線は、曲線下面積の分析を使用して比較された。ｐ＜０．０５の結果は、統計的に有意であるとみなされた。
【００８７】
結果
ＩＡＶ感染はＣＸＣＬ１とＣＸＣＬ２のレベルを増加させ、マウスの気道および肺への好中球の流入を増加させる
致死的および重度のＩＡＶ感染後の好中球浸潤およびケモカインＣＸＣＬ１およびＣＸＣＬ２のレベルを調査するために、マウスに１０4（重度の接種）または１０6ＰＦＵ（致死的接種）のウイルスを感染させた。より少ない接種量の場合には、１、４、７、１０日後、より多い接種量の場合には、１、３、５日後、ＢＡＬおよび肺を採取した。気道における両方のケモカインのレベルは、１０4ＰＦＵのＩＡＶによる感染の４日後にピークに達し、その後減少した（図１Ａ）。致死接種量での感染は、マウスの気道におけるケモカインのより速くより高い産生をもたらした（図１Ｄ）。ＣＸＣＬ１およびＣＸＣＬ２の産生の増加は、マウスの気道および肺への好中球の大量流入と相関し、接種量に依存していた（図１Ｂ−ＣおよびＥ−Ｆ）。
【００８８】
ＣＸＣＲ１／ＣＸＣＲ２拮抗作用はＩＡＶ感染中マウスを保護する
治療環境でのインフルエンザ感染に対するＣＸＣＲ１／２の役割を調べるため、マウスに１０4ＰＦＵのＩＡＶを感染させ、次いで、マウスの肺における好中球数を効率的に減少させる用量のＤＦ２１６２で１日２回（感染後０日から５日）処置した[Russo, R.C., et al., Role of the chemokine receptor CXCR2 in bleomycin-induced pulmonary inflammation and fibrosis. Am J Respir Cell Mol Biol, 2009. 40(4): p. 410-21（非特許文献２９）]。ＤＦ２１６２による治療は、体重減少の低下に見られるように、罹患率を減少させた（図２Ａ）。薬物治療は、気道に取り込まれた白血球の数（図２Ｂ）、特に好中球の数（図２Ｃ）、ならびに炎症促進性サイトカインＴＮＦ−αおよびＣＸＣＬ１のレベル（図３Ａ−Ｂ）を含む、炎症反応のいくつかのパラメーターも低下させた。ＤＦ２１６２による治療では、感染マウスの肺のＭＰＯレベル（図２Ｄ）およびＩＬ−６レベル（図３Ｃ）は減少しなかった。驚くべきことに、ビヒクルで処置した動物と比較して、治療したマウスの肺におけるウイルス量は減少した（図２Ｆ）。さらに、ＤＦ２１６２での治療により、ＩＡＶ感染に伴う肺損傷が減少した（図３Ｄ）。組織学的分析により、肺のより保存された領域が示され、治療した動物の肺の細気管支炎および血管炎症が減少した（図８）。
【００８９】
ＣＸＣＲ１／ＣＸＣＲ２拮抗作用は、Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ感染中マウスを保護する
好中球は、細菌の複製と播種を制御するために重要であることが知られているが、肺炎球菌性肺炎中の肺の損傷および死とも相関している[Tavares, L.P., et al., Inhibition of PDE4 During Pneumococcal Pneumonia Reduces Inflammation and Lung Injury in Mice. Am J Respir Cell Mol Biol, 2015（非特許文献２７）]。したがって、マウスは感染後０日（６時間）から２日目までＤＦ２１６２で処置され、致死率と炎症パラメーターが観察された。肺炎球菌感染の状況でのＤＦ２１６２治療は、マウスを致死から守り（図４Ａ）、これは、感染マウスの気道に動員される、白血球（図４Ｂ）、特に好中球（図４Ｃ）の数の減少と関連していた。驚いたことに、感染した治療マウスの気道と肺（図４Ｄ）の好中球が減少したにもかかわらず、ＤＦ２１６２は、マウスの気道において同様の細菌数で見られるように、感染を制御する宿主の能力を変更しなかった（図４Ｅ）。さらに、感染したマウスの肺の組織学的分析は、ＤＦ２１６２での治療が感染に起因する肺損傷を減少させることを示した（図４Ｆおよび図９）。
【００９０】
ＣＸＣＲ１／ＣＸＣＲ２の拮抗作用はＩＡＶ感染後の肺炎球菌感染から保護する
主にＳｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅによって引き起こされる二次性細菌性肺炎は、ＩＡＶ感染患者の予後不良の重要な一因であり、死亡率と罹患率の増加につながる[Klein, E.Y., et al., The Frequency of Influenza and Bacterial Co-infection: A Systematic Review and Meta-Analysis. Influenza Other Respir Viruses, 2016（非特許文献３１）]。２００９年に発生したようなインフルエンザの大流行の間、致命的な症例のかなりの割合は、抗生物質の使用にもかかわらず、二次肺炎球菌感染によるものであった[Palacios, G., et al., Streptococcus pneumoniae coinfection is correlated with the severity of H1N1 pandemic influenza. PLoS One, 2009. 4(12): p. e8540（非特許文献３２）; Jain, S., et al., Hospitalized patients with 2009 H1N1 influenza in the United States, April-June 2009. N Engl J Med, 2009. 361(20): p. 1935-44（非特許文献３３）; Dominguez-Cherit, G., et al., Critically Ill patients with 2009 influenza A(H1N1) in Mexico. JAMA, 2009. 302(17): p. 1880-7（非特許文献３４）]。二次細菌感染によって引き起こされる悪化した炎症反応は、この死亡率の増加の理由の１つである。二次細菌感染に対するＣＸＣＲ１／２の役割を調べるために、マウスに、致死量以下のＩＡＶ（５００ＰＦＵ）接種物を感染させ、感染の３〜６日間はＤＦ２１６２またはビヒクルで処置した。ＩＡＶ感染の１４日後、感染したマウスの肺ではウイルスは検出されなかった（データは示していない）。その後、マウスは致死量以下のＳ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ（１０3ＣＦＵ、二次感染）による二次感染を受けた。対照マウスは、ＩＡＶまたはＳ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅのいずれかの単一感染を受けた。両方の単一感染は、致死率が低く、体重減少が小さい軽度の疾患をもたらした（図５Ａ−Ｂ）。単一のＩＡＶ感染の１６日後、または肺炎球菌の接種量が少ない単一の感染の２日後、マウスの気道または肺の好中球数の増加はなかった（図５Ｄ−Ｅ）。さらに、気道内には少数の細菌しか検出されず、Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅのみに感染したマウスの血液には細菌は検出されなかった（図５Ｆ−Ｇ）。対照的に、ＩＡＶ感染後の肺炎球菌感染は、マウスの気道および肺への好中球の大量動員（図５Ｃ〜Ｅ）、気道内の細菌の過剰増殖（図５Ｆ）、および血液へのそれらの浸透（図５Ｇ）を引き起こした。これにより、二次感染マウスの死亡率は１００％になった（図５Ａ）。
【００９１】
インフルエンザ感染中のＤＦ２１６２の投与は、ＣＸＣＲ１／２拮抗作用が二次感染後の死亡を遅延させ（図５Ａ）、体重減少を低下させたこと（図５Ｂ）を示した。これは、二次感染後の気道（図５Ｄ）および肺（図５Ｅ）への好中球の動員の減少と関連していた。上記で報告したように、好中球の数の減少にもかかわらず、本発明者らは、マウスの気道内の細菌数が変化していないことを観察した（図５Ｆ）。驚くべきことに、二次感染マウスの血液中の細菌数が減少した（図５Ｇ）。さらに、ＤＦ２１６２による治療は、二次感染中に生じた炎症促進性サイトカインＩＬ−６、ＴＮＦ−α、ＣＸＣＬ−１およびＩＬ−１２のレベルの増加を防いだ（図６Ａ−Ｄ）。驚くべきことに、ＩＬ−１２レベルはＩＡＶ単一感染の１６日後も、より高いままであった（図６Ｃ）。ビヒクルで処置した二次感染マウスと比較した場合、抗炎症性サイトカインＩＬ−１０のレベルもＤＦ２１６２処置マウスで減少した（図６Ｅ）。
【００９２】
要するに、ＤＦ２１６２で処置したマウスでの好中球の流入とサイトカイン産生の減少により、二次感染に関連する激しい肺損傷が減少した（図７Ａ−Ｂ）。ＩＡＶまたはＳ．  ｐｎｅｕｍｏｎｉａの致死量以下接種による単一感染は、別個の白血球浸潤を特徴とする軽度の気道、血管および実質の炎症を引き起こした。対照的に、二次性肺炎球菌感染は、実質構造の著しい損失を伴う気道への大量のポリモルフォおよび単核細胞の移動を誘発した。一部のマウスの肺には、壊死および線維化組織のいくつかの領域が認められた。ＤＦ２１６２による治療は、そのような組織病理学的肺損傷を減少させた（図７Ｃ）。これらの結果を確認するために、ＢＡＬの液体中のタンパク質のレベルを、血漿漏出、したがって、肺上皮バリアの破壊または組織損傷のマーカーとして使用した[Garcia, C.C., et al., Platelet-activating factor receptor plays a role in lung injury and death caused by Influenza A in mice. PLoS Pathog, 2010. 6(11): p. e1001171（非特許文献２８）]。タンパク質漏出の評価は、ＩＡＶ感染の１６日後、ＢＡＬＦ中のタンパク質レベルの増加が感染マウスでまだ観察されることを示した。二次的であるが、一次的ではない肺炎球菌感染は、顕著なタンパク質漏出をもたらし、組織学的結果と一致して、ＤＦ治療によりＢＡＬＦ中のタンパク質レベルを低下させた（図７Ｃ）。
【００９３】
本発明者らはまた、ＤＦ２１６２による治療により、好中球の動員、ならびにＩＡＶおよびＳ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ感染の両方に関連する罹患率および死亡率が減少することを観察した。本発明の化合物はまた、その後のＩＡＶおよびＳ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ感染に関連する肺の損傷および死亡を防いだ。炎症の減少にもかかわらず、ＤＦ２１６２による治療は感染を制御する能力を低下させなかった。
【００９４】
実施例２
マウスにおけるウイルス（インフルエンザＡ）感染およびタバコの煙曝露を組み合わせた肺炎症悪化モデルにおけるＣＸＣＲ１／２経路の効果
慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）は、世界的に重要な健康問題であり、世界中の全死亡の約５％を占めている有病率を高めている。この疾病は、通常進行性であり、有害な粒子またはガスに対する肺気道の慢性炎症反応の増大に関連する持続的な気流制限によって特徴付けられる(Sethi, S. et al. Am. J. Med. 125, 1162-1170; 2012（非特許文献３５）)。喫煙は主な危険因子であり、適切な治療法はない。
【００９５】
肺組織における好中球の存在の増加は、特にＴＮＦ−α、ＩＬ−６、ＩＬ−８などの炎症性サイトカインの過剰産生をしばしば伴うＣＯＰＤ患者の特徴である。好中球は疑いなく急性炎症の主要なエフェクターであるが、いくつかの証拠は好中球が慢性炎症状態にも寄与する可能性もあることを示している(Kolaczkowska, E. & Kubes, Nat. Rev. Immunol. 13, 159-75; 2013（非特許文献３６）)。ＣＯＰＤの主な臨床症状には、慢性気管支炎、気流制限、肺気腫があり、ＣＯＰＤ患者は、罹患率と死亡率を劇的に増加させるこれらの症状の悪化を頻繁に経験する。(Rabe KF et al. Am. J. Respir. Crit. Care Med. 532-555; 2007（非特許文献３７）; Jeffery, P. Chest Filley Lec, 251S-260S; 2000（非特許文献３８）)。
【００９６】
これらの悪化の間、肺組織の好中球の数は、肺組織のリモデリングを促進するマトリックスメタロプロテイナーゼと酸素反応性種（ＲＯＳ）のレベルの上昇と並行して、著しく増加する。(Oostwoud, L. C. et al. Nat. Publ. Gr. 1-16, 2016（非特許文献３９）)。特に、ＣＯＰＤの病態生理における炎症の重要性にもかかわらず、糖質コルチコイドによる治療は、疾患の進行を回避したり、その悪化を防ぐことができない。したがって、ＣＯＰＤ患者に対する新しい安全で効果的な治療がとても必要とされている。(Barnes, P. Nat Rev Drug Discov 1, 437-446; 2002（非特許文献４０）; Garnock-Jones, K. P. Drugs 75, 1645-1656; 2015（非特許文献４１）).
ウイルス感染はＣＯＰＤ悪化の主な原因の１つである(Mackay, A. J. & Hurst, J. R. Immunol Allergy Clin North Am 33, 95-115; 2013（非特許文献４２）)。そのため、本発明者らは、ＣＯＰＤ悪化をモデル化するために、マウスでインフルエンザ感染とタバコの煙曝露（Ｃｓ）を組み合わせた。本発明者らは、本質的に雌のＣ５７ＢＬ／６マウスを１２日間Ｃｓに曝露し、毎日のＣｓ曝露開始後７日目に１０００ｐｆｕのＨ１Ｎ１インフルエンザウイルスに感染させた（Ｃｓ−Ｈ１Ｎ１）。感染後５日目の肺組織および気管支肺胞洗浄（ＢＡＬ）の分析は、ウイルス感染とＣｓの組み合わせが、ウイルス感染（Ｈ１Ｎ１）またはＣｓ単独（Ｃｓ）と比較した場合、ＢＡＬの好中球浸潤と肺組織のＭＰＯ活性を相乗的に増加させることを示した（図１０ＡおよびＢ）。また、ＣＳまたはＨ１Ｎ１感染単独と比較して、ＫＣおよびＴＮＦ−αなどの炎症促進性ケモカインとサイトカインのレベルも大幅に増加した（図１０Ｃ）。
【００９７】
インフルエンザウイルスのＬＤ５０を使用した生存アッセイでは、Ｃｓと組み合わせると、マウスの死亡率が８０〜１００％に達することが示された（図１１）。
【００９８】
このモデルのデキサメタゾン治療（１ｍｇ／ｋｇ  ｐ．ｏ．）は、ＢＡＬの単核細胞浸潤を減少させたが、好中球浸潤の増加または死亡率の増加を変化させることはできなかった（図１０および１１）。これらの知見は、好中球がこのモデルの炎症悪化および死亡率の増加の主な要因である可能性を示唆しているため、発明者らは、Ｃｓ−Ｈ１Ｎ１マウスを、感染の日から７日間、１日１回、１０ｍｇ／Ｋｇ  ｐ．ｏで、ＣＸＣＲ１／２アンタゴニストであるＤＦ２１５６Ａで処置する別の生存アッセイを実施した。本発明によるＤＦ２１５６Ａ治療は、マウスの死亡率を有意に遅らせ（ｐ＜０、００２１）、わずかに低下もさせた。対照的に、デキサメタゾンまたはチオトロピウム治療は、マウスのＣｓ−Ｈ１Ｎ１グループと有意な差を示さなかった。
【図１】
2020521799.tif 000009
【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【国際調査報告】
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