(57)【要約】  本発明は、肝臓特異的送達技術（肝臓送達）（ＬＩｖｅｒ  ＳｐｅｃＩｆＩｃ  ＤｅｌＩｖｅｒｙ（ＬＳＤ））に基づく抗ウイルス性プロドラッグであるヌクレオシド環状リン酸エステル化合物及びその使用を提供する。具体的には、本発明は、式Ｉで表される化合物、その異性体、薬学的に使用可能な塩、水和物、溶媒和物、及び対応する医薬組成物を提供する。本発明は、抗ウイルス、特にＣ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）の治療における、本発明の化合物の単独使用、または他の抗ウイルス薬との併用をさらに提供する。
2020516583.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
下記式Ｉで表される化合物、その光学異性体、薬学的に許容される塩、水和物又は溶媒
和物。
2020516583.tif 000055
Ｉ
（式中、各Ｒ１は、それぞれ独立してハロゲン、ニトロ基、ヒドロキシ基、アミノ基、
シアノ基、置換されていてもよいＣ１−Ｃ６アルキル基、置換されていてもよいＣ３−Ｃ
８シクロアルキル基、置換されていてもよいＣ１−Ｃ６アルコキシ基、置換されていても
よいＣ１−Ｃ６アルキルアミノ基、置換されていてもよいＣ１−Ｃ６カルボキシル基、置
換されていてもよいＣ１−Ｃ６エステル基、置換されていてもよいＣ２−Ｃ６アルカノイ
ル基、置換されていてもよいＣ２−Ｃ６アルカノアミド基からなる群より選択される。
前記置換とは、ハロゲン、Ｃ１−Ｃ３アルキル基、Ｃ１−Ｃ３ハロゲン化アルキル基、
ニトロ基、ヒドロキシ基、アミノ基、シアノ基からなる群より選択される１つ又は複数の
置換基を有することをいう。
ｍは０、１、２、３、４、５である。）
【請求項２】
前記
2020516583.tif 000056
は、
2020516583.tif 000057
からなる群より選択される、請求項１に記載の化合物。
【請求項３】
前記式Ｉで表される化合物は、
2020516583.tif 000058
2020516583.tif 000059
ＩＩ                                      ＩＩＩ
からなる群より選択される構造を有する、請求項１に記載の化合物、その光学異性体、
薬学的に許容される塩、水和物、又は溶媒和物。
（式中、ｎは０、１、２又は３であり、Ｒ２、Ｒ３は、それぞれ独立して異なるハロゲ
ン（Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ又はＩ）であり、式ＩＩ及び式ＩＩＩにおいて、各キラル中心は、R
体又はS体である。）
【請求項４】
Ｒ２はＣｌ、Ｒ３はＦであり、或いはＲ２はＦ、Ｒ３はＣｌである、請求項３に記載の
化合物、その光学異性体、薬学的に許容される塩、水和物、又は溶媒和物。
【請求項５】
前記化合物は、
2020516583.tif 000060
2020516583.tif 000061
2020516583.tif 000062
2020516583.tif 000063
2020516583.tif 000064
2020516583.tif 000065
2020516583.tif 000066
2020516583.tif 000067
からなる群より選択される、請求項３に記載の化合物、その光学異性体、薬学的に許容
される塩、水和物、又は溶媒和物。
【請求項６】
前記式Ｉ、式ＩＩ及び式ＩＩＩで表される化合物の塩は、式Ｉ、式ＩＩ及び式ＩＩＩで
表される化合物と無機酸又は有機酸とで形成される薬学的に使用可能な塩であり、或いは
、
前記式Ｉ、式ＩＩ及び式ＩＩＩで表される化合物の塩は、式Ｉ、式ＩＩ及び式ＩＩＩで
表される化合物と塩基との反応により形成される薬学的に使用可能な塩であり、
前記式Ｉ、式ＩＩ及び式ＩＩＩで表される化合物又はその塩は、アモルファス又は結晶
である、請求項１から５のいずれか１項に記載の化合物、その光学異性体、薬学的に許容
される塩、水和物、又は溶媒和物。
【請求項７】
治療有効量の請求項１から６のいずれか１項に記載の化合物、その光学異性体、薬学的
に許容される塩、水和物又は溶媒和物、及び薬学的に許容される補助剤、希釈剤又は担体
を含む、医薬組成物。
【請求項８】
Ｃ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）感染に関連する急性若しくは慢性疾患を治療及び／又は予
防するための医薬組成物の製造における、請求項１から６のいずれか１項に記載の化合物
、その光学異性体、薬学的に許容される塩、水和物又は溶媒和物の使用。
【請求項９】
請求項３に記載の式ＩＩで表される化合物の製造方法であって、
2020516583.tif 000068
ＩＩａ                                  ＩＩ
不活性溶媒中で、式ＩＩａで表される化合物によりＴＢＳを除去し、式ＩＩで表される
化合物を形成するステップ（Ｉ−ａ）を含み、
式中、各基の定義は請求項３と同義であり、
前記式ＩＩａで表される化合物は、
2020516583.tif 000069
ＩＩｂ                                            ＩＩａ
不活性溶媒中で、式ＩＩｂで表される化合物と式ＩＩｃで表される化合物とを置換反応
させ、ＩＩａで表される化合物を得るステップ（Ｉ−ｃ）により製造される、製造方法。
【請求項１０】
請求項３に記載の式ＩＩＩで表される化合物の製造方法であって、
2020516583.tif 000070
ＩＩＩａ                                  ＩＩＩ
不活性溶媒中で、式ＩＩＩａで表される化合物によりＴＢＳを除去し、式ＩＩＩで表さ
れる化合物を形成するステップ（Ｉ−ｂ）を含み、
式中、各基の定義は請求項３と同義であり、
前記式ＩＩＩａで表される化合物は、
2020516583.tif 000071
ＩＩＩｂ                                      ＩＩＩａ
不活性溶媒中で、式ＩＩＩｂで表される化合物と式ＩＩＩｃで表される化合物とを置換
反応させ、式ＩＩＩａで表される化合物を得るステップ（Ｉ−ｄ）により製造される、製
造方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、肝臓送達に基づく抗ウイルス性プロドラッグであるヌクレオシド環状リン酸
エステル化合物の製造及びその使用、又はその光学異性体、水和物、溶媒和物、薬学的に
使用可能な塩及び医薬組成物に関する。
【背景技術】
【０００２】
Ｃ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）は、主要なヒト病原体であり、世界中で約２億人が感染し
ていると推定されている。慢性ＨＣＶ感染は、肝硬変及び肝細胞癌を含む重症進行性肝疾
患に進行する可能性がある。したがって、慢性ＨＣＶ感染は世界中の患者が肝疾患により
死亡する主な原因である。健康計画委員会が発表したデータによると、中国で報告された
Ｃ型肝炎ウイルス感染の症例数は過去１０年間で年々増加しており、全体的な傾向は依然
として楽観的ではない。
【０００３】
ＨＣＶはプラス鎖ＲＮＡウイルスであり、ゲノムは約９６００ヌクレオチドからなり、
１つの両端が非コード領域であるリボソーム進入部位（ＩＲＥＳ）及び１つのオープンリ
ーディングフレーム（ＯＲＦ）を含む。ＨＣＶゲノムは、１０個の遺伝子を含み、１０個
の構造タンパク質（コアタンパク質、エンベロープタンパク質Ｅ１及びＥ２、イオンチャ
ンネルタンパク質Ｐ７）及び非構造タンパク質（ＮＳ２、ＮＳ３、ＮＳ４Ａ、ＮＳ４Ｂ、
ＮＳ５Ａ及びＮＳ５Ｂ）を発現する。ＮＳ５Ｂは、ＲＮＡ依存するＲＮＡポリメラーゼ活
性を有し、ＨＣＶゲノム複製に関与する。
【０００４】
環状リン酸エステル（４−アリール−２−オキソ−１，３，２−ジオキサホスファシク
ロヘキサン）のような前駆体構造は、良好な肝臓送達性を有し、そのメカニズムが非常に
明確である。図１に示すように、４−アリールは肝細胞におけるシトクロムＰ４５０アイ
ソザイムファミリーのＣＹＰ３Ａによって特異的に触媒されて水酸基が生成され、さらに
開環して負に帯電したリン酸中間体が形成される。該中間体は細胞膜を透過しにくく細胞
内に存在し、ホスホジエステラーゼによる触媒下で、加水分解、β−脱離反応を経てヌク
レオシド一リン酸化合物（２−ＦＭ  ＵＭＰ）を形成し、さらにヌクレオチドキナーゼの
作用下で生物学的活性を有するヌクレオチド三リン酸化合物（２−ＦＭ  ＵＴＰ）を形成
するとともに、代謝副産物であるアリールビニルケトンは肝細胞に大量に含まれる、フリ
ーラジカルや過酸化物に対抗するグルタチオンとの１，４−付加反応により除去され、ま
た、いまだに該付加生成物には副作用がある報告がない。ヌクレオシド一リン酸化合物（
２−ＦＭ  ＵＭＰ）は、脱リン酸化してヌクレオシド（２−ＦＭ  ＵＲ）になることもあ
る。
【０００５】
ソフォスブビル（ｓｏｆｏｓｂｕｖＩｒ、ＳＦＢ）を活性成分として、環状リン酸エス
テル及び芳香族置換基によりプロドラッグ修飾を行い、次いで３位をヒドロキシプロピル
エステル化することで、ラットの肝細胞において生成した活性分子三リン酸の量は８７．
８ｎｍｏｌ／ｇ（ラミブジン三リン酸を基準とする）である（ＷＯ２００９０７３５０６
Ａ２）。
2020516583.tif 000003
【０００６】
現在市販されている抗Ｃ型肝炎薬の中で、ＮＳ５Ｂ標的薬はソフォスブビルのみである
。しかし、２０１５年３月に、ＦＤＡは、ソフォスブビル＋他の抗ウイルス薬＋アミオダ
ロン用いてＨＣＶを治療する際に、重篤な徐脈が発生する可能性があることを警告した。
また、重度腎機能障害のある患者（ｅＧＦＲ  ＜  ３０  ｍＬ／ｍＩｎ／１．７３ｍ２）
は、ソフォスブビルを使用するのに不適である。
【０００７】
しかし、現在、活性が高く、肝臓送達性が強く、かつ副作用が低いウイルス阻害化合物
は存在しない。そこで、当分野では、活性が高く、肝臓送達性が強く、且つ副作用が低い
等の利点を有する新規なウイルス阻害化合物の開発が切望されている。
【発明の概要】
【０００８】
本発明では、抗ウイルスのヌクレオチド薬の環状リン酸エステルを合成し、その芳香環
の置換基をさらに改造することにより、肝臓特異的送達（肝臓送達）作用を有するプロド
ラッグを得ることにより、治療効果が向上する一方、副作用が減少する。
【０００９】
本発明の第１態様では、下式Ｉで表される化合物、その光学異性体、薬学的に許容され
る塩、水和物又は溶媒和物が提供される。
2020516583.tif 000004
Ｉ
（式中、各Ｒ１は、それぞれ独立してハロゲン、ニトロ基、ヒドロキシ基、アミノ基、
シアノ基、置換されていてもよいＣ１−Ｃ６アルキル基、置換されていてもよいＣ３−Ｃ
８シクロアルキル基、置換されていてもよいＣ１−Ｃ６アルコキシ基、置換されていても
よいＣ１−Ｃ６アルキルアミノ基、置換されていてもよいＣ１−Ｃ６カルボキシル基、置
換されていてもよいＣ１−Ｃ６エステル基、置換されていてもよいＣ２−Ｃ６アルカノイ
ル基、置換されていてもよいＣ２−Ｃ６アルカノアミド基からなる群より選択される。前
記置換とは、ハロゲン、Ｃ１−Ｃ３アルキル基、Ｃ１−Ｃ３ハロゲン化アルキル基、ニト
ロ基、ヒドロキシ基、アミノ基、シアノ基からなる群より選択される１つ又は複数の置換
基を有することをいう。ｍは０、１、２、３、４、５である。）
【００１０】
他の好適例では、前記
2020516583.tif 000005
は、
2020516583.tif 000006
からなる群より選択される。
【００１１】
他の好適例では、前記式Ｉで表される化合物は、
2020516583.tif 000007
2020516583.tif 000008
ＩＩ                                  ＩＩＩ                      
からなる群より選択される構造を有する。
（式中、ｎは０、１、２又は３である。
Ｒ２、Ｒ３は、それぞれ独立して異なるハロゲン（Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ又はＩ）であり、式
ＩＩ及び式ＩＩＩにおける各キラル中心はR体又はS体である。）
【００１２】
他の好適例では、Ｒ２はＣｌ、Ｒ３はＦであり、又はＲ２はＦ、Ｒ３はＣｌである。
【００１３】
他の好適例では、前記光学異性体は、包括互変異性体、シス・トランス異性体、立体配
座異性体、メソ化合物及び鏡像又は非鏡像関係を有する光学異性体を含む。
【００１４】
他の好適例では、前記化合物は、
2020516583.tif 000009
2020516583.tif 000010
2020516583.tif 000011
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2020516583.tif 000016
からなる群より選択される。
【００１５】
他の好適例では、前記式Ｉ、式ＩＩ及び式ＩＩＩで表される化合物の塩は、式Ｉ、式Ｉ
Ｉ及び式ＩＩＩで表される化合物と無機酸又は有機酸とで形成された薬学的に使用可能な
塩であり、或いは前記式Ｉ、式ＩＩ及び式ＩＩＩで表される化合物の塩は、式Ｉ、式ＩＩ
及び式ＩＩＩで表される化合物と塩基との反応により形成された薬学的に使用可能な塩で
ある。前記式Ｉ、式ＩＩ及び式ＩＩＩで表される化合物又はその塩は、アモルファス又は
結晶である。
【００１６】
本発明の第２態様では、治療有効量の本発明の第１態様に記載の前記化合物、その光学
異性体、薬学的に許容される塩、水和物又は溶媒和物、及び薬学的に許容される補助剤、
希釈剤又は担体を含む医薬組成物が提供される。
【００１７】
本発明の第３態様では、Ｃ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）感染に関連する急性又は慢性疾患
を治療及び／又は予防するための医薬組成物の製造における、本発明の第１態様に記載の
化合物、その光学異性体、薬学的に許容される塩、水和物又は溶媒和物の使用が提供され
る。
【００１８】
本発明の第４態様では、本発明の第１態様に記載の前記式ＩＩで表される化合物の製造
方法が提供される。前記方法は、
2020516583.tif 000017
ＩＩａ                            ＩＩ
不活性溶媒中で、ＩＩａで表される化合物によりＴＢＳを除去し、式ＩＩで表される化
合物を形成するステップ（Ｉ−ａ）を含む。
式中、各基の定義は、上記と同義である。
【００１９】
他の好適例では、前記ステップ（Ｉ−ａ）において、前記ＴＢＳ除去試薬は、ＴＢＡＦ
、氷酢酸、希塩酸又はそれらの組み合わせからなる群より選択され、好ましくはＴＢＡＦ
である。
【００２０】
他の好適例では、前記ステップ（Ｉ−ａ）において、前記不活性溶媒は、Ｎ，Ｎ−ジメ
チルホルムアミド、テトラヒドロフラン又はそれらの組み合わせからなる群より選択され
、好ましくはテトラヒドロフラン溶媒である。
【００２１】
他の好適例では、前記ステップ（Ｉ−ａ）において、反応温度は、−５０−３０℃（好
ましくは、約２５±５℃）である。
【００２２】
他の好適例では、前記ステップ（Ｉ−ａ）において、脱保護反応の反応時間は、０．５
−６時間、好ましくは０．５−３時間、より好ましくは０．５−２時間である。
【００２３】
本発明の第５態様では、式ＩＩＩで表される製造方法が提供される。前記方法は、
2020516583.tif 000018
ＩＩＩａ                                ＩＩＩ
不活性溶媒中で、式ＩＩＩａで表される化合物によりＴＢＳを除去し、式ＩＩＩで表さ
れる化合物を形成するステップ（Ｉ−ｂ）を含む。
式中、各基の定義は、上記と同義である。
【００２４】
他の好適例では、前記ステップ（Ｉ−ｂ）において、ＴＢＳ除去試薬は、ＴＢＡＦ、氷
酢酸、希塩酸又はそれらの組み合わせからなる群より選択され、好ましくはＴＢＡＦであ
る。
【００２５】
他の好適例では、前記ステップ（Ｉ−ｂ）において、前記不活性溶媒は、Ｎ，Ｎ−ジメ
チルホルムアミド、テトラヒドロフラン又はそれらの組み合わせからなる群より選択され
、好ましくはテトラヒドロフラン溶媒である。
【００２６】
他の好適例では、前記ステップ（Ｉ−ｂ）において、反応温度は−５０−３０℃、好ま
しくは約２５±５℃である。
【００２７】
他の好適例では、前記ステップ（Ｉ−ｂ）において、脱保護反応の反応時間は０．５−
６時間、好ましくは０．５−３時間、より好ましくは０．５−２時間である。
【００２８】
他の好適例では、前記式ＩＩａで表される化合物は、
2020516583.tif 000019
ＩＩｂ                                          ＩＩａ
不活性溶媒中で、式ＩＩｂで表される化合物と式ＩＩｃとを置換反応させ、式ＩＩａで
表される化合物を得るステップ（Ｉ−ｃ）により製造される。
【００２９】
他の好適例では、ステップ（Ｉ−ｃ）において、前記反応は、グリニャール試薬の存在
下で行われ、好ましくは、前記グリニャール試薬は、ｔｅｒｔ−ブチルマグネシウムクロ
リド（ｔ−ＢｕＭｇＣｌ）である。
【００３０】
他の好適例では、前記ステップ（Ｉ−ｃ）において、置換反応は、−５０−３０℃（好
ましくは約２５±５℃）で行われる。
【００３１】
他の好適例では、前記ステップ（Ｉ−ｃ）において、置換反応の反応時間は１−７２時
間、好ましくは３−４８時間、より好ましくは６−２４時間である。
【００３２】
他の好適例では、前記ステップ（Ｉ−ｃ）の不活性溶媒は、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムア
ミド、テトラヒドロフラン又はそれらの組み合わせからなる群より選択され、好ましくは
テトラヒドロフラン溶媒である。
【００３３】
他の好適例では、前記式ＩＩＩａで表される化合物は、
2020516583.tif 000020
ＩＩＩｂ                                    ＩＩＩａ
不活性溶媒中で、式ＩＩＩｂで表される化合物と式ＩＩＩｃとを置換反応させ、式ＩＩ
Ｉａで表される化合物を得るステップ（Ｉ−ｄ）により製造される。
【００３４】
他の好適例では、ステップ（Ｉ−ｄ）において、前記反応は、グリニャール試薬の存在
下で行われ、好ましくは前記グリニャール試薬は、ｔｅｒｔ−ブチルマグネシウムクロリ
ド（ｔ−ＢｕＭｇＣｌ）である。
【００３５】
他の好適例では、前記ステップ（Ｉ−ｄ）において、置換反応は−５０−３０℃（好ま
しくは約２５±５℃）で行われる。
【００３６】
他の好適例では、前記ステップ（Ｉ−ｄ）において、置換反応の反応時間は１−７２時
間、好ましくは３−４８時間、より好ましくは６−２４時間である。
【００３７】
他の好適例では、前記ステップ（Ｉ−ｄ）の不活性溶媒は、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムア
ミド、テトラヒドロフラン又はそれらの組み合わせからなる群より選択され、好ましくは
テトラヒドロフラン溶媒である。
【００３８】
理解できるように、本発明の範囲内において、本発明の上記各技術特徴及び以下に(例
えば、実施例)で具体的に説明する各技術特徴は互いに組み合わせて新しい又は好ましい
技術案が成立することができる。ここで省略する。
【図面の簡単な説明】
【００３９】
【図１】肝臓による化合物送達のメカニズムを示す模式図である。
【図２】ラットに３０ｍｇ／ｋｇのＰＡ２０２０、ＰＡ２０２４、ＰＡ２０２９及びソフォスブビルを強制経口投与した後の、肝臓中の三リン酸活性分子２ＦＭ−ＵＴＰの濃度−時間柱状図（ｎｇ／ｇ、濃度／組織の重量）を示す。
【図３】ラットに３０ｍｇ／ｋｇのＰＡ２０２０、ＰＡ２０２４、ＰＡ２０２９及びソフォスブビルを強制経口投与した後の、心臓（Ａ）及び血漿（Ｂ）中の一リン酸代謝物２ＦＭ−ＵＭＰの濃度−時間柱状図（ｎｇ／ｇ、濃度／組織重量又はｎｇ／ｍＬ）を示す。
【図４】ラットに３０ｍｇ／ｋｇのＰＡ２０２９及びソフォスブビルを強制経口投与した後の、心臓（Ａ）及び血漿（Ｂ）中の脱リン酸化代謝物２ＦＭ−ＵＲの濃度−時間柱状図（ｎｇ／ｇ、濃度／組織重量又はｎｇ／ｍＬ）を示す。  備考：  ２−ＦＭ−ＵＲ：（２Ｒ）−２−デオキシ−２−フルオロ−２−メチル−ウリジン  ２−ＦＭ−ＵＭＰ：（２Ｒ）−２−デオキシ−２−フルオロ−２−メチル−ウリジン−５−一リン酸  ２−ＦＭ−ＵＴＰ：（２Ｒ）−２−デオキシ−２−フルオロ−２−メチル−ウリジン−５−三リン酸
【発明を実施するための形態】
【００４０】
本発明者は鋭意研究を重ね、大量の化合物のスクリーニングを行なったところ、特定の構
造を有する式ＩＩ及び式ＩＩＩで表される化合物（ここで、ベンゼン環部分の３位及び５
位は異なるハロゲンであるもの、又はベンゼン環部分の２位及び５位は異なるハロゲンで
あるもの）は意外に非常に優れた抗ウイルス活性、顕著に向上した肝臓送達性及び顕著に
低減した副作用を有することを初めて発見し、この発見に基づいて本発明に至ったもので
ある。
【００４１】
用語
本明細書で用いられる用語「Ｃ１−Ｃ６アルキル基」は、１〜６炭素原子を有する直鎖状
又は分枝状のアルキル基、例えば、メチル基、エチル基、プロピル基、イソプロピル基、
ブチル基、イソブチル基、ｓｅｃ−ブチル基、ｔｅｒｔ−ブチル基又は類似基である。
【００４２】
本明細書で用いられる用語「Ｃ２−Ｃ６アルカノイル基」は、１〜６炭素原子を有する直
鎖状又は分枝状のアルキル−カルボニルの構造のような置換基、例えば、アセチル基、プ
ロピオニル基、ブチリル基又は類似基である。
【００４３】
本明細書で用いられる用語「Ｃ１−Ｃ６アルキルアミノ基」は、１〜６炭素原子を有する
直鎖状又は分枝状アルキル−アミノの構造のような置換基、例えば、メチルアミノ基、ジ
メチルアミノ基、エチルアミノ基、プロピルアミノ基、ジエチルアミノ基又は類似基であ
る。
【００４４】
用語「ハロゲン」は、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ及びＩである。
【００４５】
本発明において、用語「有する」、「包含する」又は「含む」とは、各成分が本発明の混
合物又は組成物に同時に用いられることができることを意味する。そのため、用語「主に
．．．からなる」及び「．．．からなる」は、用語「含有する」の意味に含まられる。
【００４６】
本発明において、用語「薬学的に許容される」成分は、ヒト及び／又は動物に適用される
ものであって、過度の副作用（例えば、毒性、刺激及びアレルギー反応）がなく、合理的
な利益／リスク比を有する物質である。
【００４７】
本発明において、用語「有効量」とは、治療剤の目的疾患又は状況を治療、緩和、予防す
る量、或いは検出可能な治療又は予防効果を示す量をいう。ある受験体に対する正確な有
効量は、該受験体の体型、健康状況、病状の性質及び程度、並びに投与される治療剤及び
／又は治療剤の組み合わせに依存する。したがって、正確な有効量を事前に指定すること
は無意味である。しかし、与えられた状況では、該有効量は臨床医師によって通常の実験
で確定されることができる。
【００４８】
本明細書において、特に明記しない限り、用語「置換」とは、基における１つ又は複数の
水素原子がハロゲン、Ｃ１−Ｃ３アルキル基、Ｃ１−Ｃ３ハロゲン化アルキル基、ニトロ
基、ヒドロキシル基、アミノ基、シアノ基からなる群より選択される置換基で置き換えら
れることを意味する。
【００４９】
特に明記しない限り、本発明における全ての化合物は、全ての光学異性体、例えば、単一
のキラル化合物又は異なるキラル化合物の混合物（即ち、ラセミ体）を含むことを意図し
ている。本発明の全ての化合物において、各キラル炭素原子は、Ｒ体若しくはＳ体、又は
Ｒ体とＳ体の混合物のいずれかであることができる。
【００５０】
本明細書で用いられる用語「本発明の化合物」とは、式Ｉ、ＩＩ、ＩＩＩで表される化合
物である。該用語は、式Ｉ、ＩＩ、ＩＩＩで表される化合物の各結晶形、薬学的に許容さ
れる塩、水和物又は溶媒和物をさらに含む。
【００５１】
本明細書で用いられる用語「薬学的に許容される塩」とは、本発明の化合物と酸又は塩基
で形成した薬物に適用される塩である。薬学的に許容される塩には、無機塩及び有機塩が
含まれる。好ましい塩は、本発明の化合物と酸で形成した塩である。塩形成に適する酸は
、塩酸、臭化水素酸、フッ化水素酸、硫酸、硝酸、リン酸等の無機酸、ギ酸、酢酸、プロ
ピオン酸、シュウ酸、マロン酸、コハク酸、フマル酸、マレイン酸、乳酸、リンゴ酸、酒
石酸、クエン酸、ピクリン酸、メタンスルホン酸、ベンジルメタンスルホン酸、ベンゼン
スルホン酸等の有機酸、及びアスパラギン酸、グルタミン酸などの酸性アミノ酸を含むが
、これらに限定されない。
【００５２】
本発明におけるいくつかの化合物は、水又は有機溶媒で結晶又は再結晶させて溶媒和物を
形成することができる。本発明の溶媒和物には、化学量論的溶媒和物、例えば水和物等、
及び低圧昇華乾燥法で製造するときに形成する可変量の水を含む化合物が含まれる。
【００５３】
理解できるように、製造された本発明の化合物には、様々な熱力学的に安定な異性体、例
えば、互変異性体、配座異性体、メソ化合物、及び鏡像又は非鏡像関係を有する光学異性
体等が含まれる場合がある。これらの変形は、本発明の開示を読めば当業者には明らかに
なるであろう。
【００５４】
式ＩＩで表される化合物及びその製造
肝臓送達メカニズムにより抗ウイルスのヌクレオチド薬を肝細胞において集中して放出
できる効率的で低毒性の肝臓送達に基づくプロドラッグを提供するために、本発明者は、
式ＩＩで表される化合物を製造する。
2020516583.tif 000021
ＩＩ
式中、各Ｒ１は、それぞれ独立してハロゲン、ニトロ基、ヒドロキシ基、アミノ基、シ
アノ基、置換されていてもよいＣ１−Ｃ６アルキル基、置換されていてもよいＣ３−Ｃ８
シクロアルキル基、置換されていてもよいＣ１−Ｃ６アルコキシ基、置換されていてもよ
いＣ１−Ｃ６アルキルアミノ基、置換されていてもよいＣ１−Ｃ６カルボキシル基、置換
されていてもよいＣ１−Ｃ６エステル基、置換されていてもよいＣ２−Ｃ６アルカノイル
基、置換されていてもよいＣ２−Ｃ６アルカノアミド基からなる群より選択される。前記
置換とは、ハロゲン、Ｃ１−Ｃ３アルキル基、Ｃ１−Ｃ３ハロゲン化アルキル基、ニトロ
基、ヒドロキシ基、アミノ基、シアノ基からなる群より選択される１つ又は複数の置換基
を有することをいう。
ｎは、０、１、２又は３である。
Ｒ２、Ｒ３は、それぞれ独立して異なるハロゲン（Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ又はＩ）であり、式
ＩＩ中、各キラル中心はR体又はＳ体である。
【００５５】
前記化合物は、ラセミ体又は光学異性体であってもよく、いずれも一定の抗ウイルス活
性を有する。好ましい前記式Ｉで表される化合物は、
2020516583.tif 000022
2020516583.tif 000023
ＩＩａ                              ＩＩｂ
2020516583.tif 000024
2020516583.tif 000025
ＩＩｃ                              ＩＩｄ
からなる群より選択される構造を有する。
【００５６】
他の好適例では、前記式ＩＩで表される化合物は、式ＩＩａで表される化合物である。
他の好適例では、前記Ｐ２とリン酸エステル環構造における４位の芳香族基とは互いに
シス型であり、Ｐ２はＲ体、Ｃ４はＳ体である。
他の好適例では、Ｒ２はＣｌ、Ｒ３はＦであり、又はＲ２はＦ、Ｒ３はＣｌである。
他の好適例では、前記光学異性体は、互変異性体、シス・トランス異性体、立体配座異
性体、メソ化合物及び鏡像又は非鏡像関係を有する光学異性体を含む。
他の好適例では、前記化合物は、
2020516583.tif 000026
又は
2020516583.tif 000027
シス                        トランス
からなる群より選択される。
【００５７】
一般式ＩＩで表される化合物の製造方法
テトラヒドロフラン溶液中にＩＩｃ化合物を加え、次いで０℃でｔｅｒｔ−ブチルマグ
ネシウムクロリドを滴下し、３０分間反応させた後、ＩＩｂで表される化合物を一気に加
え、一晩反応させた後、反応を停止し、シリカゲルカラムクロマトグラフィーにより精製
し、中間体を得、中間体をテトラヒドロフランに溶解し、ＴＢＡＦを加え、保護基ＴＢＳ
を除去し、一般式ＩＩで表される化合物を得る。
2020516583.tif 000028
ＩＩｂ                            ＩＩａ                    ＩＩ                
各反応物は、市販品であってもよく、市販原料を用いて当分野での常法により製造され
たものであってもよい。
【００５８】
式ＩＩＩで表される化合物及びその製造
肝臓送達メカニズムにより抗ウイルスのヌクレオチド薬を肝細胞において集中して放出
できる効率的で低毒性の肝臓送達に基づくプロドラッグを提供するために、本発明者は、
式ＩＩＩで表される化合物を製造する。
2020516583.tif 000029
ＩＩＩ
各Ｒ１は、それぞれ独立してハロゲン、ニトロ基、ヒドロキシ基、アミノ基、シアノ基
、置換されていてもよいＣ１−Ｃ６アルキル基、置換されていてもよいＣ３−Ｃ８シクロ
アルキル基、置換されていてもよいＣ１−Ｃ６アルコキシ基、置換されていてもよいＣ１
−Ｃ６アルキルアミノ基、置換されていてもよいＣ１−Ｃ６カルボキシル基、置換されて
いてもよいＣ１−Ｃ６エステル基、置換されていてもよいＣ２−Ｃ６アルカノイル基、置
換されていてもよいＣ２−Ｃ６アルカノアミド基からなる群より選択される。前記置換と
は、ハロゲン、Ｃ１−Ｃ３アルキル基、Ｃ１−Ｃ３ハロゲン化アルキル基、ニトロ基、ヒ
ドロキシ基、アミノ基、シアノ基からなる群より選択される１つ又は複数の置換基を有す
ることをいう。
ｎは０、１、２又は３である。
Ｒ２、Ｒ３それぞれ独立して異なるハロゲン（Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ又はＩ）である。
式ＩＩＩ中、各キラル中心はＲ体又はＳ体である。
前記化合物は、ラセミ体又は光学異性体であってもよく、いずれも一定の抗ウイルス活
性を有する。好ましい前記式Ｉで表される化合物は、
2020516583.tif 000030
2020516583.tif 000031
ＩＩＩａ                                ＩＩＩｂ
2020516583.tif 000032
2020516583.tif 000033
ＩＩＩｃ                                ＩＩＩｄ
からなる群より選択される構造を有する。
他の好適例では、前記式ＩＩＩで表される化合物は、式ＩＩＩａで表される化合物であ
る。
他の好適例では、前記Ｐ２とリン酸エステル環構造における４位にある芳香族基とは互
いにシス型であり、Ｐ２はＲ体、Ｃ４はＳ体である。
他の好適例では、Ｒ２はＣｌ、Ｒ３はＦであり、又はＲ２はＦ、Ｒ３はＣｌである。
他の好適例では、前記光学異性体は、互変異性体、シス・トランス異性体、立体配座異
性体、メソ化合物及び鏡像又は非鏡像関係を有する光学異性体を含む。
他の好適例では、前記化合物は、
2020516583.tif 000034
又は
2020516583.tif 000035
シス                        トランス
からなる群より選択される。
【００５９】
一般式ＩＩＩで表される化合物の製造方法
テトラヒドロフラン溶液中にＩＩＩｃ化合物を加え、次いで０℃でｔｅｒｔ−ブチルマ
グネシウムクロリドを滴下し、３０分間反応させた後、ＩＩＩｂで表される化合物を一気
に加え、一晩反応させ、反応を停止し、シリカゲルカラムクロマトグラフィーにより精製
し、中間体を得、中間体をテトラヒドロフランに溶解し、ＴＢＡＦを加え、保護基ＴＢＳ
を除去し、一般式ＩＩＩで表される化合物を得る。
2020516583.tif 000036
ＩＩＩｂ                      ＩＩＩａ                    ＩＩＩ
各反応物は、市販品であってもよく、市販原料を用いて当分野での常法により製造され
たものであってもよい。
【００６０】
医薬組成物及び投与方法
本発明の化合物は優れたＣ型肝炎ウイルスに対する阻害活性を有するため、本発明の化合
物及びその様々な結晶形、薬学的に許容される無機又は有機塩、水和物又は溶媒和物、及
び本発明の化合物を主要な活性成分として含有する医薬組成物は、Ｃ型肝炎ウイルスによ
る疾患の治療、予防及び緩和に適用できる。従来技術によれば、本発明の化合物は、ＨＢ
Ｖ、ＨＣＶ、ＨＩＶ及びＨＣＭＶ等の感染による疾患の治療に適用できる。
【００６１】
本発明の医薬組成物は、安全有効量の本発明の化合物又はその薬理学的に許容される塩、
及び薬理学的に許容される賦形剤又は担体を含む。「安全有効量」とは、重篤な副作用が
発生することなく、病状を顕著に改善するのに十分である化合物の量をいう。通常、医薬
組成物には０．１−１０００ｍｇの本発明の化合物／剤を含むが、好ましくは、０．５−
１００ｍｇの本発明の化合物／剤を含む。好ましくは、前記「剤」はカプセル又は錠剤で
ある。
【００６２】
「薬学的に許容される担体」とは、１種又は複数種の相容性のある固体又は液体フィラー
又はゲル物質をいう。こういう単体は、ヒトに適用され、且つ十分に高い純度及び十分に
低い毒性を有する必要がある。ここで、「相容性」とは、組成物における各成分及び本発
明の化合物は化合物の効果を顕著に低下させずに互いにブレンドすることができることを
いう。薬学的に許容される担体の例には、セルロース及びその誘導体（例えば、カルボキ
シメチルセルロースナトリウム、エチルセルロースナトリウム、セルロースアセテート等
）、ゼラチン、タルク、固体潤滑剤（例えば、ステアリン酸、ステアリン酸マグネシウム
）、硫酸カルシウム、植物油（例えば、大豆油、ごま油、ピーナッツ油、オリーブ油等）
、ポリオール（例えば、プロピレングリコール、グリセリン、マンニトール、ソルビトー
ル等）、乳化剤（例えば、トゥイーン（登録商標））、湿潤剤（例えば、デシル硫酸ナト
リウム）、着色剤、香味剤、安定剤、酸化防止剤、防腐剤、パイロジェンフリー水等が含
まれる。
【００６３】
本発明の化合物又は医薬組成物の投与方式は特に制限されないが、代表的な投与方式は、
経口投与、直腸投与、非経口投与（静脈内投与、筋肉内投与又は皮下投与）、及び局所投
与を含むが、これらに限定されない。特に好ましくは経口投与である。
【００６４】
経口投与に用いられる固体剤形には、カプセル剤、錠剤、丸剤、散剤及び顆粒剤が含まれ
る。これらの固体剤形のうち、活性化合物は少なくとも１種の通常の不活性賦形剤（又は
担体）、例えば、クエン酸ナトリウム又はリン酸二カルシウムと混合され、或いは以下の
成分と混合される。すなわち、（ａ）フィラー又は相溶化剤、例えば、デンプン、ラクト
ース、スクロース、グルコース、マンニトール及びケイ酸；（ｂ）接着剤、例えば、ヒド
ロキシメチルセルロース、アルギン酸塩、ゼラチン、ポリビニルピロリドン、ショ糖及び
アカシア；（ｃ）湿潤剤、例えば、グリセリン；（ｄ）崩壊剤、例えば、寒天、炭酸カル
シウム、ジャガイモデンプン又はタピオカデンプン、アルギン酸、特定の複合ケイ酸塩、
及び炭酸ナトリウム；（ｅ）溶解遅延剤、例えば、パラフィン；（ｆ）吸収促進剤、例え
ば、第四級アミン化合物；（ｇ）湿潤剤、例えば、セチルアルコール及びグリセリルモノ
ステアレート；（ｈ）吸着剤、例えば、カオリン；及び（Ｉ）潤滑剤、例えば、タルク、
ステアリン酸カルシウム、ステアリン酸マグネシウム、固体ポリエチレングリコール、デ
シル硫酸ナトリウム、又はその混合物である。カプセル剤、錠剤及び丸剤には、緩衝剤が
含まれてもよい。
【００６５】
固体剤形、例えば、錠剤、ピル、カプセル剤、丸剤及び顆粒剤は、コーティング及びシェ
ル、例えば、ケーシングその他の当分野で周知されている材料で製造されてもよい。これ
らの剤形は不透明剤を含んでもよい。また、このような組成物における活性化合物又は化
合物の放出は、遅延の方式により消化管の特定の部分で放出されてもよい。用いられる包
埋成分の例は、重合物質及びワックス物質である。必要な場合、活性化合物は、前記賦形
剤のうちの１種又は複数種とマイクロカプセルを形成してもよい。
【００６６】
経口投与に用いられる液体剤形は、薬学的に許容されるエマルジョン、溶液、懸濁液、シ
ロップ又はチンキを含む。活性化合物に加えて、液体剤形には、当分野で通常に用いられ
ている不活性希釈剤、例えば、水又は他の溶媒、可溶化剤及び乳化剤、例えば、エタノー
ル、イソプロパノール、エチルカーボネート、酢酸エチル、プロピレングリコール、１，
３−ブタンジオール、ジメチルホルムアミド及び油、特に、綿実油、落花生油、トウモロ
コシ胚芽油、オリーブ油、ひまし油及びごま油又はこれらの混合物等が含まれてもよい。
【００６７】
これらの不活性希釈剤に加えて、組成物には、助剤、例えば、湿潤剤、乳化剤、懸濁剤、
甘味剤、香味剤及び香料を含んでもよい。
活性化合物に加えて、懸濁液には、懸濁剤、例えば、エトキシル化イソステアリルアルコ
ール、ポリオキシエチレンソルビトール及びソルビタンエステル、微結晶セルロース、ア
ルミニウムメトキシド、寒天又はこれらの混合物等を含んでもよい。
【００６８】
非経口注射に用いられる組成物は、生理学的に許容される滅菌水溶液又は非水溶液、分散
液、懸濁液又はエマルジョン、及び無菌注射溶液若しくは分散液に改めに溶解するための
滅菌粉末を含んでもよい。適切な水性及び非水性担体、希釈剤、溶媒又は賦形剤は、水、
エタノール、ポリオール及びその適切な混合物を含む。
【００６９】
局所投与に用いられる本発明の化合物の剤形には、軟膏剤、散剤、貼付剤、噴霧剤及び吸
入剤が含まれる。活性成分は、無菌条件下で生理学的に許容される担体及び任意の防腐剤
、緩衝剤、又は必要に応じて推進剤と混合される。
【００７０】
本発明化合物は、単独して投与されてもよいか、又は他の薬学的に許容される化合物と併
用されてもよい。
【００７１】
医薬組成物を使用する場合に、安全有効量の本発明の化合物を、治療を必要とする哺乳動
物（例えば、ヒト）に用いる。投与用量は、薬学的な有効量である。体重が６０ｋｇのヒ
トの場合、毎日の用量は、通常０．２〜１０００ｍｇであり、好ましくは０．５〜５００
ｍｇである。無論、熟練した医師に理解できるように、具体的な用量は、投与経路、患者
の健康状態等の要因を考慮した上で決定するものである。
【００７２】
本発明は、以下の利点を有する。
（１）肝臓送達性が強い。また、化合物は肝細胞におけるシトクロムＰ４５０アイソザイ
ムファミリーのＣＹＰ３Ａのみによって特異的に触媒され、活性分子を形成する。当該活
性分子は、負帯電性が高く、肝臓から排出されにくいため、肝臓における濃度がより高く
、肝臓送達性の効果を達成できる。
（２）活性が高い。肝臓送達性により、より多くの薬物が肝臓に存在できるため、抗ウイ
ルス活性は大幅に向上する。
（３）副作用が低い。同じ用量のプロドラッグは、肝臓で代謝されて活性分子を生成する
量が非常に少ないため、腎臓、心臓などの主要臓器に対する毒性が大幅に減少する。
【００７３】
以下、具体的な実施例により本発明をさらに説明する。理解できるように、これらの実施
例は、本発明を説明するものに過ぎず、本発明の範囲を制限しない。以下の実施例におい
て具体的な条件が明記されない実験方法は、通常の条件又は製造業者の推奨条件によれば
よい。特に明記しない限り、百分率及び部は、重量によるものである。
【００７４】
実施例１    ＰＡ２００１
合成経路：
2020516583.tif 000037
実験
ステップ１）：化合物ＰＡ２００１−２の合成
ＰＡ２００１−１（６．０ｇ、２３．０７ｍｍｏｌ）を称量して２５０ｍｌナス型フラ
スコに入れ、ＤＭＦ（６０ｍＬ）を加え、完全に溶解するまで撹拌し、イミダゾール（９
．４ｇ、１３８．４６ｍｍｏｌ）を称量して反応系に加え、撹拌して溶解させた後、ＴＢ
ＳＣｌ（１３．８５ｇ、９２．３０ｍｍｏｌ）を反応系に加え、反応液を室温で一晩撹拌
し、ＴＬＣ（ＰＥ：ＥＡ＝２：１）で原料がなくなったことを確認した後、５０ｍｌを加
えて希釈し、ＥＡ（１５０ｍｌ＊３）で３回抽出し、有機相を合わせ、回転蒸発により溶
媒を除去し、カラム  （ＰＥ：ＥＡ＝５：１）を通って精製し、白色固体１１ｇを得た。
【００７５】
ステップ２）：化合物ＰＡ２００１−３の合成
ＰＡ２００１−２（３．０ｇ、６．１６ｍｍｏｌ）を称量して５０ｍｌ  三つ口フラス
コに入れ、注射器でＴＨＦ（６ｍＬ）を取って三つ口フラスコに注入し、室温で完全に溶
解するまで撹拌した。Ｎ２保護、氷水浴の条件下で、分液漏斗を用いて６ｍｌＴＦＡと６
ｍｌＴＨＦの混合液をゆっくりと滴下し、室温で４時間撹拌しながら反応させ、ＴＬＣ（
ＰＥ：ＥＡ＝２：１）で大量の原料（ＰＡ２００１−２）が残っていることを確認し、再
度、氷水浴条件下で分液漏斗を用いて６ｍｌＴＦＡを追加し、１時間撹拌しながら反応さ
せた後、氷水浴を取り外し、反応液を室温で一晩撹拌した後、ＴＬＣ（ＰＥ：ＥＡ＝２：
１）で目的化合物と原料との比が約１：１であることを確認した。水（５０ｍｌ）を加え
て希釈し、ＥＡ（１２０ｍｌ＊３）で抽出した後、有機相を合わせ、回転蒸発により溶媒
を除去し、５０ｍｌ飽和ＮａＨＣＯ３溶液を加えて中和することでＰＨを中性に調整し、
ＥＡ（１２０ｍｌ＊３）で抽出し、回転蒸発により溶媒を除去し、カラム  （ＰＥ：ＥＡ
＝３：１）を通って精製し、白色固体粉末２．０ｇを得た。収率は８６％であった。
【００７６】
ステップ３）：化合物ＰＡ２００１−５の合成
Ｎ２の保護下で、ＰＡ２００１−３（１．７ｇ、４．５ｍｍｏｌ）及び無水ＴＨＦ（１
０ｍＬ）を５０ｍＬ三つ口フラスコに順に入れ、Ｎ２で３回置換した後、約０℃に高温し
、１Ｍのｔ−ＢｕＭｇＣｌ（６．４ｍＬ）をゆっくりと滴下し、滴下終了後、Ｎ２の保護
下で１時間反応させ、次いでＰＡ２００１−４（２ｇ，５．４ｍｍｏｌ）を一気に加え、
室温まで自然昇温し、一晩撹拌した。２０ｍＬ飽和ＮＨ４Ｃｌ溶液を加え、３０分間撹拌
した後、さらにＥＡ（１００ｍＬ）を加え、水（５０ｍＬ＊３）で３回洗浄し、５０ｍＬ
飽和食塩水で１回洗浄した後、減圧し、４５℃で回転蒸発により溶媒を除去し、クロマト
グラフィーカラム（ＰＥ：ＥＡ＝２：１）により精製し、白色固体９５４ｍｇを得た。収
率は３５％であった。
【００７７】
ステップ４）：化合物ＰＡ２００１の合成
化合物ＰＡ２００１−５  （５３４ｍｇ、０．８８ｍｍｏｌ）をテトラヒドロフラン（
５ｍｌ）に溶解し、５％の水を含有する１Ｍフッ化テトラブチルアンモニウムのテトラヒ
ドロフラン溶液（２．６ｍＬ、２．６ｍｍｏｌ）を加え、室温下で２０分間撹拌しながら
反応させた。ＴＬＣで反応終了を確認した後、３０ｍＬ水を加えて希釈し、酢酸エチル（
５０ｍＬ）で２回抽出し、有機相を合わせた後、無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、溶媒を減
圧除去し、シリカゲルカラムクロマトグラフィー  （ＰＥ：ＥＡ＝１：１）により分離し
て精製し、固体を得た後、ＣｏｍｂＩｆｌａｓｈを通って精製し、白色固体（３５ｍｇ）
を得た。収率は２５％であった。
【００７８】
実施例2  PA2020
合成経路
2020516583.tif 000038
実験
【００７９】
ステップ１）：化合物ＰＡ２０２０−２の合成
Ｎ２の保護下で、ＰＡ２００１−３（１．７ｇ、４．５１ｍｍｏｌ）及び無水ＴＨＦ（
１０ｍＬ）を５０ｍＬ三つ口フラスコに順に入れ、Ｎ２で３回置換した後、約０℃に降温
し、ＢｕＭｇＣｌ（１０．２ｍＬ、１．７Ｎ）と無水ＴＨＦ（２０ｍＬ）の混合溶液を１
０分間をかけて滴下した後、Ｎ２の保護下で３０分間反応させ、次いでＰＡ２０２０−１
（１．７５ｇ、４．５１ｍｍｏｌ）を一気に加え、ＲＴに自然昇温し、一晩撹拌し、１０
０ｍＬ飽和ＮＨ４Ｃｌ溶液を加えて３０分間撹拌した後、さらに２００ｍＬのＥＡを加え
、５０ｍＬ＊３の水で３回洗浄し、５０ｍＬの飽和食塩水で１回洗浄した後、減圧し、４
５℃で回転蒸発により溶媒を除去し、クロマトグラフィーカラム（ＰＥ、ＰＥ：ＥＡ＝２
：１、ＰＥ：ＥＡ＝１：１、ＥＡ）により精製し、茶褐色固体６７８ｍｇを得た。収率は
２０％であった。
【００８０】
ステップ２）：化合物ＰＡ２０２０の合成
ＰＡ２０２０−２（２７０ｍｇ）、ＴＨＦ（５ｍＬ）及びＴＢＡＦのＴＨＦ溶液（１ｍ
Ｌ、１Ｎ）を２５ｍＬ一つ口フラスコに加え、ＲＴで１０分間撹拌し、１００ｍＬのＤＣ
Ｍを加え、それぞれ３０ｍＬ＊３の水、３０ｍＬ塩水で洗浄した後、減圧し、４０℃で回
転蒸発により溶媒を除去し、クロマトグラフィーカラムＤＣＭ（ＤＣＭ：ＭｅＯＨ＝５０
：１、ＤＣＭ：ＭｅＯＨ＝４０：１、ＤＣＭ：ＭｅＯＨ＝３０：１、ＤＣＭ：ＭｅＯＨ＝
２０：１）を通って類白色固体を得、さらにＣｏｍｂＩｆｌａｓｈにより精製した後、冷
凍乾燥させ、１４６ｍｇの白色固体を得た。
【００８１】
実施例３    ＰＡ２０２４
合成経路
2020516583.tif 000039
実験
ステップ１）：化合物ＰＡ２０２４−２の合成
化合物ＰＡ２００１−３（４４０ｍｇ、１．０６ｍｍｏｌ）をＮ２の保護下でテトラヒ
ドロフラン（３０ｍｌ）に溶解し、氷浴で０℃に冷却し、１．７Ｍのｔｅｒｔ−ブチルマ
グネシウムクロリド溶液（３．２ｍＬ、５．４４ｍｍｏｌ、５ｅｑ）をゆっくりと滴下し
、滴下終了後、反応液を室温で１時間撹拌し、さらに０℃に冷却し、ＰＡ２０２４−１（
５００ｍｇ、１．２４ｍｍｏｌ）を加え、次いで反応液を室温で一晩撹拌し、飽和塩化ア
ンモニウム水溶液（３０ｍＬ）で反応を停止し、酢酸エチル（６０ｍＬ）で２回抽出し、
有機相を合わせ、無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、溶媒を減圧除去し、シリカゲルカラムク
ロマトグラフィー  （溶離液においてＰＥ：ＥＡ（Ｖ：Ｖ）＝１：１から１：４）により
分離精製し、褐色固体  （１１５ｍｇ）を得た。収率は１５％であった。
【００８２】
ステップ２）：化合物ＰＡ２０２４の合成
化合物ＰＡ２０２４−２  （１００ｍｇ、０．１５ｍｍｏｌ）をテトラヒドロフラン（
５ｍｌ）に溶解し、５％の水を含有する１Ｍフッ化テトラブチルアンモニウムのテトラヒ
ドロフラン溶液（０．５ｍＬ、０．５ｍｍｏｌ）に加え、室温で２時間撹拌しながら反応
させた。ＴＬＣで反応終了を確認した後、５０ｍＬの水を加えて希釈し、酢酸エチル（３
０）で２回抽出し、有機相を合わせ、無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させた後、溶媒を減圧除去
し、シリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶離液においてＥＡ：ＭｅＯＨ（Ｖ：Ｖ）＝
２０：１から１０：１）により分離精製し、固体を得た後、ＣｏｍｂＩｆｌａｓｈにより
精製し、淡白色固体（３５ｍｇ）を得た。収率は５３％であった。
【００８３】
実施例４    ＰＡ２０２５
合成経路
2020516583.tif 000040
実験
ステップ１）：化合物ＰＡ２０２５−２の合成
Ｎ２の保護下で、ＰＡ２００１−３（２００ｍｇ、０．５３ｍｍｏｌ）及び無水ＴＨＦ
（５ｍＬ）を２５ｍＬ三つ口フラスコに順に入れ、Ｎ２で３回置換した後、約０℃に降温
し、５分間をかけてＢｕＭｇＣｌ（１．２ｍＬ、１．７Ｎ）と無水ＴＨＦ（３ｍＬ）の混
合溶液を滴下し、滴下終了後、Ｎ２の保護下で３０分間反応させ、次いでＰＡ２０２５−
１（１９６．６ｍｇ、０．５３ｍｍｏｌ）を一気に加え、ＲＴに自然昇温し、一晩撹拌し
、５０ｍＬ飽和ＮＨ４Ｃｌ溶液を加えて３０分間撹拌した後、さらに１００ｍＬのＥＡを
加え、それぞれ３０ｍＬ＊３の水で３回洗浄し、３０ｍＬの飽和食塩水で１回洗浄した後
、減圧し、４５℃で回転蒸発により溶媒を除去し、クロマトグラフィーカラム（ＰＥ、Ｐ
Ｅ：ＥＡ＝２：１、ＰＥ：ＥＡ＝１：１、ＥＡ）を通って茶褐色固体１５１ｍｇを得た。
収率は４６％であった。
【００８４】
ステップ２）：化合物ＰＡ２０２５の合成
ＰＡ２０２５−２（１５０ｍｇ）、ＴＨＦ（４ｍＬ）及びＴＢＡＦのＴＨＦ溶液（１ｍ
Ｌ）を２５ｍＬの一つ口フラスコに順に入れ、ＲＴで１０分間撹拌し、１００ｍＬのＤＣ
Ｍを加え、それぞれ３０ｍＬ＊３水、３０ｍＬの塩水で洗浄した後、減圧し、４０℃で回
転蒸発により溶媒を除去し、クロマトグラフィーカラム（ＤＣＭ、ＤＣＭ：ＭｅＯＨ＝５
０：１、ＤＣＭ：ＭｅＯＨ＝４０：１、ＤＣＭ：ＭｅＯＨ＝３０：１、ＤＣＭ：ＭｅＯＨ
＝２０：１）を通って類白色固体を得、さらにＣｏｍｂＩｆｌａｓｈで精製した後冷凍乾
燥させ、３９ｍｇ白色固体を得た。
【００８５】
実施例５    ＰＡ２０２６
合成経路
2020516583.tif 000041
実験
ステップ１）：化合物ＰＡ２０２６−２の合成
化合物ＰＡ２００１−３（２００ｍｇ、０．５３ｍｍｏｌ）をＮ２の保護下、即ち無水
無酸素の雰囲気下でテトラヒドロフラン（１０ｍｌ）に溶解し、氷浴冷で０℃に冷却し、
１．７Ｍのｔｅｒｔ−ブチルマグネシウムクロリド溶液（１．２ｍＬ、２．０４ｍｍｏｌ
）を滴下し、その後、反応液を室温下で１時間撹拌し、さらに０℃に冷却し、ＰＡ２０２
６−１（２４９ｍｇ、０．６４ｍｍｏｌ）を加え、反応液を室温下で一晩撹拌し、飽和塩
化アンモニウム水溶液（３０ｍＬ）で反応を停止し、酢酸エチル（６０ｍＬ）で２回抽出
した後、有機相を合わせ、無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、減圧して溶媒を除去し、シリカ
ゲルカラムクロマトグラフィー（溶離液においてＰＥ：ＥＡ（Ｖ：Ｖ）＝１：１から１：
３）により分離精製し、褐色固体（１９３ｍｇ）を得た。収率は５７％であった。
【００８６】
ステップ２）：化合物ＰＡ２０２６の合成
化合物ＰＡ２０２６−２  （１９３ｍｇ、０．３１ｍｍｏｌ）をテトラヒドロフラン（
５ｍｌ）に溶解し、５％の水を含有する１Ｍフッ化テトラブチルアンモニウムのテトラヒ
ドロフラン溶液（１ｍＬ、１ｍｍｏｌ）を加え、室温で２時間撹拌しながら反応させた。
ＴＬＣで反応終了を確認した後、５０ｍＬ水を加えて希釈し、酢酸エチル（３０ｍＬ）で
２回抽出し、有機相を合わせ、無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、減圧して溶媒を除去し、シ
リカゲルカラムクロマトグラフィー（溶離液においてＥＡ：ＭｅＯＨ（Ｖ：Ｖ）＝２０：
１から１０：１）により分離精製し、ＰＡ２０２６固体を得た後、ＣｏｍｂＩｆｌａｓｈ
により精製し、淡白色固体（５６ｍｇ）を得た。収率は３５％であった。
【００８７】
実施例６    ＰＡ２０２７
合成経路
2020516583.tif 000042
実験
ステップ１）：化合物ＰＡ２０２７−２の合成
Ｎ２の保護下で、ＰＡ２００１−３（１７６ｍｇ，０．４７ｍｍｏｌ）及び無水ＴＨＦ
（４ｍＬ）を２５ｍＬの三つ口フラスコに順に入れ、Ｎ２で３回置換した後、約０℃に降
温し、５分間をかけてＢｕＭｇＣｌ（０．９２ｍＬ、１．５６ｍｍｏｌ）を滴下し、滴下
終了後、Ｎ２の保護下で３０分間反応させ、次いでＰＡ２０２７−１（１５０ｍｇ、０．
３９ｍｍｏｌ）を一気に加え、ＲＴに自然昇温し、一晩撹拌し、５ｍＬ飽和ＮＨ４Ｃｌ溶
液を加え、３０分間撹拌した後、１０ｍｌ水を加え、ＥＡ（３０ｍＬ＊３）で３回抽出し
、１０ｍＬ飽和食塩水で１回洗浄した後、減圧し、４５℃で回転蒸発により溶媒を除去し
、クロマトグラフィーカラム（ＰＥ、ＰＥ：ＥＡ＝２：１、ＰＥ：ＥＡ＝１：１、ＥＡ）
を通って茶褐色固体５５ｍｇを得た。収率は２３％であった。
【００８８】
ステップ２）：化合物ＰＡ２０２７の合成
ＰＡ２０２７−２（５０ｍｇ）、ＴＨＦ（２ｍＬ）及びＴＢＡＦのＴＨＦ溶液（１．９
ｍＬ）を２５ｍＬの一つ口フラスコに順に入れ、ＲＴで１０分間撹拌し、１０ｍＬのＥＡ
を加え、１０ｍＬ水、１０ｍＬ塩水でそれぞれ洗浄した後、減圧し、４０℃で回転蒸発に
より溶媒を除去し、クロマトグラフィーカラム（ＤＣＭ、ＤＣＭ：ＭｅＯＨ＝５０：１、
ＤＣＭ：ＭｅＯＨ＝４０：１、ＤＣＭ：ＭｅＯＨ＝３０：１、ＤＣＭ：ＭｅＯＨ＝２０：
１）を通って類白色固体を得、さらにＣｏｍｂＩｆｌａｓｈにより精製した後、冷凍乾燥
させ、８ｍｇの白色固体を得た。
【００８９】
実施例７    ＰＡ２０２８
合成経路
2020516583.tif 000043
実験
ステップ１）：化合物ＰＡ２０２８−２の合成
化合物ＰＡ２００１−３（４００ｍｇ、１．０３ｍｍｏｌ）をＮ２の保護下、即ち無水
無酸素の雰囲気下でテトラヒドロフラン（３０ｍｌ）に溶解し、氷浴冷で０℃に冷却し、
１Ｍのｔｅｒｔ−ブチルマグネシウムクロリド溶液（４．２ｍＬ、４．２ｍｍｏｌ、３．
９ｅｑ）をゆっくりと滴下し、滴下終了後、反応液を室温下で１時間撹拌し、さらに０℃
に冷却し、ＰＡ２０２８−１（４３０ｍｇ、１．１ｍｍｏｌ）を加え、次いで反応液を室
温下で一晩撹拌し、飽和塩化アンモニウム水溶液（３０ｍＬ）で反応を停止し、酢酸エチ
ル（６０ｍＬ）で２回抽出し、有機相を合わせ、無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、減圧して
溶媒を除去し、シリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶離液においてＰＥ：ＥＡ（Ｖ：
Ｖ）＝１：１から１：３）により分離精製し、褐色固体（１３４ｍｇ）を得た。収率は２
０％であった。
【００９０】
ステップ２）：化合物ＰＡ２０２８の合成
化合物ＰＡ２０２８−２（１３０ｍｇ、０．２ｍｍｏｌ）をテトラヒドロフラン（５ｍ
ｌ）に溶解し、５％水を含有する１Ｍのフッ化テトラブチルアンモニウムのテトラヒドロ
フラン溶液（０．４５ｍＬ、０．４５ｍｍｏｌ）を加え、室温で２時間撹拌しながら反応
させた。ＴＬＣで反応終了を確認した後、５０ｍＬ水を加えて希釈し、酢酸エチル（３０
ｍＬ）で２回抽出し、有機相を合わせ、無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、減圧して溶媒を除
去し、シリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶離液においてＥＡ：ＭｅＯＨ（Ｖ：Ｖ）
＝２０：１から１０：１）により分離精製し、ＰＡ２０２８固体を得、ＣｏｍｂＩｆｌａ
ｓｈにより精製し、淡白色固体（５０ｍｇ）を得た。収率は５３％であった。
【００９１】
実施例８  ＰＡ２０２９
合成経路
2020516583.tif 000044
実験
ステップ１）：化合物ＰＡ２０２９−２の合成
ＰＡ２００１−３（５００ｍｇ、１．３４ｍｍｏｌ）を称量して５０ｍｌの三つ口フラ
スコに入れ、Ｎ２の保護、氷水浴の条件下で、注射器を用いて５ｍｌの乾燥した無水ＴＨ
Ｆを取って三つ口フラスコに注入し、完全に溶解するまで撹拌し、さらに注射器によりｔ
−ＢｕＭｇＣｌ（５．１ｍＬ、５．０８ｍｍｏｌ、１Ｍ）を取って反応系にゆっくりと注
入し、滴下した後、反応液を氷浴の条件下で０．５時間撹拌しながら反応させ、氷水浴を
取り外し、反応液を室温下でさらに１時間撹拌しながら反応させた。この場合、反応液は
、白色&#12316;微黄色の糊状であり、ＰＡ２０２９−１（６２０ｍｇ、１．６０ｍｍｏｌ
）を一気に加え、反応液を室温下で一晩撹拌した。ＴＬＣ（ＰＥ：ＥＡ＝１：１）でＰＡ
２０２９−１が基本的になくなったことを確認した後、飽和塩化アンモニウム溶液（４０
ｍｌ）を加えて反応を停止し、ＥＡ（１００ｍｌ＊３）で抽出し、有機相を合わせ、回転
蒸発によりＥＡを除去し、カラム  （ＰＥ：ＥＡ＝２：１）を通って精製し、茶褐色固体
３６７ｍｇを得た。収率は４４％であった。
【００９２】
ステップ２）：化合物ＰＡ２０２９の合成
ＰＡ２０２９−２（３６７ｍｇ、０．５９ｍｍｏｌ）を称量して１００ｍｌのナス型フ
ラスコに入れ、注射器で乾燥したＴＨＦ（４ｍＬ）を取ってナス型フラスコに注入し、室
温で完全に溶解するまで撹拌し、注射器でＴＢＡＦ（１ｍＬ、１ｍｍｏｌ）を取って反応
系に注入し、室温で２時間撹拌しながら反応させ、ＴＬＣ（ＤＣＭ：ＭｅＯＨ＝１０：１
）で原料がなくなったことを確認した後、水（４０ｍｌ）を加えて希釈した。ＥＡ（５０
ｍｌ＊３）で抽出し、有機相を合わせ、回転蒸発によりＥＡを除去し、カラム（ＤＣＭ：
ＭｅＯＨ＝２０：１）を通って白色固体を得、さらにＣｏｍｂＩｆｌａｓｈにより精製し
、白色固体１３９ｍｇを得た。
【００９３】
表１  各実施例で製造された化合物
2020516583.tif 000045
2020516583.tif 000046
【００９４】
表２  各実施例で製造された化合物のＮＭＲデータ
2020516583.tif 000047
2020516583.tif 000048
【００９５】
実施例９  インビトロでのヒト肝ミクロソームによる代謝の評価
測定方法
本試験に用いられるヒト肝ミクロソーム（ＨＬＭ，Ｈｕｍａｎ  ＬＩｖｅｒ  ＭＩｃｒ
ｏｓｏｍｅｓ）はＩｎ  ＶＩｔｒｏ  ＴｅｃｈｎｏｌｏｇＩｅｓ（ＩＶＴ）社から購入さ
れたバッチ番号ＳＳＰ  Ｘ００８０７０であって、１５０人のドナーの肝臓組織から抽出
した混合肝ミクロソームである。製品説明書に当該パッチの肝ミクロソームのＣＹＰ３Ａ
４の代謝活性が１．７３４ｎｍｏｌ／ｍｇ／ｍＩｎ（テストステロンが代謝されて６−β
テストステロンを生成する速度）であることが記載されている。試験化合物（浙江柏柏拉
阿圖医薬科技有限公司製）をメタノールに溶解し、濃度２５ｍＭの保存液に作製した。酵
素触媒反応は、１００ｍＭのＫＨ２ＰＯ４緩衝液（ｐＨ７．４）中で行われた。試験化合
物の濃度は２５μＭ，ヒト肝ミクロソームの濃度は２ｍｇ／ｍｌであった。ＮＡＤＰＨ（
最終濃度２ｍＭ）を加えて反応を開始させた。恒温振盪水浴内で５ｍＩｎ反応させた直後
、１．５倍体積のメタノールを加えて反応を停止した。Ｅｐｐｅｎｄｏｒｆ卓上遠心機に
より最大回転速度１３，６００ｒｐｍで２０分間遠心分離した。上清を取り、窒素ブロワ
ーで乾燥させた後、新たに移動相Ａ（５ｍＭ酢酸アンモニウム及び０．０５％ギ酸ｖ／ｖ
を含有する水溶液）に溶解した。得られた試料をＬＣ−ＭＳ／ＭＳ（Ｗａｔｅｒｓ，  Ａ
ｃｑｕＩｔｙ  ＵＰＬＣ  ＨＳＳ  Ｔ３  ｃｏｌｕｍｎ）で分析した。
【００９６】
表３  インビトロでのヒト肝ミクロソームによる代謝化合物からの一リン酸生成物２ＦＭ
−ＵＭＰの放出速度
2020516583.tif 000049
注：Ｓ−シスは、特に明記しない限り、リン酸エステル環構造におけるＣ４がＳ体であ
り、且つＰ２とその４位にある芳香族基とが互いにシス型であることをいう。
【００９７】
結果分析：化合物は、インビトロでヒト肝ミクロソームにより一リン酸代謝物２ＦＭ−
ＵＭＰに活性化され、異なる化合物は、代謝速度が異なる。意外には、ＰＡ２０２９、Ｐ
Ａ２０２０及びＰＡ２０２４の変換速度が他の候補化合物よりも遥かに高く、他の候補化
合物の２倍以上であった（表３）。これらの化合物をラットに経口投与することによって
、それらの一リン酸（２ＦＭ−ＵＭＰ）及び三リン酸（２ＦＭ−ＵＴＰ）代謝生成物の組
織分布特性を調査した。
【００９８】
実施例１２  化合物の組織分布実験
１２．１  方法
１２．１．１  動物実験
雄性ＳＤラット（体重１８０〜３００ｇ）は上海西普爾−必凱実験動物有限公司によっ
て提供された。雄性動物を３日以上環境に適応させ、実験前夜に断水せずに１２時間断食
させた。ＰＡ２０２０、ＰＡ２０２４、ＰＡ２０２９及びソフォスブビルの溶液剤（Ｃｒ
ｅｍｏｐｈｏｒ  ＥＬ  ：エタノール：生理食塩水＝１０：１０：８０，Ｖ／Ｖ／Ｖ）を
調製した。投与前に動物の体重が実験要求を満たすか否かを確認した。１２匹のラットを
選び、２匹／群で６群に分けた。３０ｍｇ／ｋｇの薬液を強制経口投与し、それぞれ０．
５ｈ、１ｈ、３ｈ、６ｈ、１２ｈ及び２４ｈ後に、二酸化炭素ガスでラットを安楽死させ
た後、サンプルを採取した。具体的には、心臓から採血してヘパリン抗凝固チューブに保
存し、４℃下、６０００ｒｐｍで５ｍＩｎ遠心分離した後、上清血漿を取ってドライアイ
ス中で保存し、ラットの腎臓、肝臓及び心臓を摘出し、４℃に予冷した生理食塩水で洗浄
し、水を取り除いてドライアイス中で保存した。実験後、サンプルを−８０℃の冷蔵庫に
保蔵した。
【００９９】
１２．１．２．  脱リン酸化、一リン酸及び三リン酸代謝生成物である２ＦＭ−ＵＲ、
２ＦＭ−ＵＭＰ及び２ＦＭ−ＵＴＰの生物学的サンプルにおける含有量の測定
極性の差のため、２ＦＭ−ＵＲ、２ＦＭ−ＵＭＰ及び２ＦＭ−ＵＴＰについて、それぞ
れ異なる分離検出方法、異なる液相−トリプル四重極質量分析計、異なるサンプル前処理
、及びクロマトグラフィー、質量分析条件を採用した。
【０１００】
２ＦＭ−ＵＲサンプルの前処理
血漿サンプル：氷浴中で５０μＬの血漿と５０μＬの内部標準溶液（５００ｎｇ／ｍＬ
テノホビルの１０％トリクロロ酢酸溶液）とを均一に混合した。４°Ｃ、１３０００ｒｐ
ｍで１０分間遠心分離した後、２０μＬの上澄みを取って１８０μＬの水と均一に混合し
、５μＬ取ってＬＣ−ＭＳ／ＭＳにより分析した。
腎臓、肝臓、心臓組織：氷浴中で、組織と５倍体積のホモジネート緩衝液とを十分に破
砕して均一に混合した。２０μＬの組織ホモジネートを取って２０μＬの内部標準溶液（
５００ｎｇ／ｍＬテノホビルの１０％トリクロロ酢酸溶液）と均一に混合した。４°Ｃ、
１３０００ｒｐｍで１０分間遠心分離した後、２０μＬの上澄みを取って１８０μＬの水
と均一に混合させ、さらに５μＬ取ってＬＣ−ＭＳ／ＭＳにより分析した。
【０１０１】
２ＦＭ−ＵＲのクロマトグラフィー−質量分析条件
ＬＣ−ＭＳ／ＭＳ−ＡＪ  （ＴｒＩｐｌｅ  Ｑｕａｄ  ５５００、ＡＢ  ＳＣＩＥＸ）
をサンプル分析に用いた。カラム：ＡｃｑｕＩｔｙ  ＵＰＬＣ  ＨＳＳ  Ｔ３  （２．１
×５０ｍｍ、１．８μｍ）、カラム温度：４０℃、流速：０．５ｍＬ／分間であった。移
動相Ａ：０．１％のギ酸水溶液、移動相Ｂ：アセトニトリル溶液であった。サンプル分離
は、グラジエント溶出法を採用し、条件を表４に示す。エレクトロスプレーイオン化（Ｅ
ＳＩ）陽イオンモード、多重反応モニタリング（ＭＲＭ）のモニタリングイオン対ｍ／ｚ
： ２８８／１７６  （テノホビル）、２６１／１１３  （２ＦＭ−ＵＲ）、温度：５０
０°Ｃ、走査時間：０．０３秒、衝突エネルギー：１５Ｖであった。
【０１０２】
表４  ２ＦＭ−ＵＲ液相溶出グラジエント条件
2020516583.tif 000050
【０１０３】
２ＦＭ−ＵＭＰサンプルの前処理
血漿サンプル：氷浴中で、３０μＬの血漿と３０μＬの内部標準溶液（１００ｎｇ／ｍ
Ｌのトルブタミドの５％トリクロロ酢酸溶液）とを均一に混合した。４°Ｃ、１３０００
ｒｐｍで１０分間遠心分離した後、４０μＬの上澄みを取って８０μＬの水と均一に混合
し、５μＬ取って分析した。
腎臓、肝臓、心臓組織：氷浴中で、組織と５倍体積のホモジネート緩衝液（１．７５ｍ
Ｌのメタノール、５μＬの５０％  ＫＯＨ溶液、及び０．７５ｍＬの２６８ｍＭ  ＥＤＴ
Ａ溶液、ｐＨ＝８）とを十分に破砕して均一に混合した。６０μＬの組織ホモジネートを
取って６０μＬの内部標準溶液（１００  ｎｇ／ｍＬトルブタミドの５％トリクロロ酢酸
溶液）と均一に混合した。４°Ｃ、１３０００ｒｐｍで１０分間遠心分離した後、４０μ
Ｌの上澄みを取って８０μＬの水と均一に混合し、さらに５μＬ取って分析した。
【０１０４】
２ＦＭ−ＵＭＰのクロマトグラフィー−質量分析条件
ＬＣ−ＭＳ／ＭＳ−ＡＪ  （ＴｒＩｐｌｅ  Ｑｕａｄ  ５５００、ＡＢ  ＳＣＩＥＸ）
を用いてサンプルを分析した。カラム：ＡＣＥ  ３  ＡＱ  （２．１×５０ｍｍ）、カラ
ム温度：５５℃、流速：０．４５ｍＬ／分間であった。移動相Ａ：１．５％ギ酸水溶液、
移動相Ｂ：１．５％ギ酸アセトニトリル溶液であった。サンプル分&#31163;は、グラジエ
ント溶出法を採用し、条件を表５に示す。２ＦＭ−ＵＭＰ及び対応する内部標準物質トル
ブタミドのピーク時間は、それぞれ１．０２及び２．４２分間であった。質量分析条件は
、エレクトロスプレーイオン化（ＥＳＩ）陰イオンモード、多重反応モニタリング（ＭＲ
Ｍ）のモニタリングイオン対ｍ／ｚ： ３３９．２／７９．０（２ＦＭ−ＵＭＰ）、２６
９．０／１６９．８（トルブタミド）であった。
【０１０５】
表５  ２ＦＭ−ＵＭＰ液相溶出グラジエント条件
2020516583.tif 000051
【０１０６】
２ＦＭ−ＵＴＰサンプルの前処理
【０１０７】
血漿サンプル：氷浴中で、３０μＬの血漿と３０μＬの緩衝液（２０ｍＭの酢酸アンモ
ニウム水溶液、ｐＨ＝８．０）とを均一に混合し、さらに１２０μＬの内部標準溶液（２
００ｎｇ／ｍＬのトルブタミド及び４０ｍＭのＤＢＢＡメタノール溶液）とを均一に混合
した。４°Ｃ、１３０００ｒｐｍで１０分間遠心分離した後、６０μＬの上澄みを取って
６０μＬの水と均一に混合し、１０μＬ取って分析した。
腎臓、肝臓、心臓組織：氷浴中で、組織と５倍体積のホモジネート緩衝液（１．７５ｍ
Ｌのメタノール、５μＬの５０％  ＫＯＨ溶液及び０．７５ｍＬの２６８ｍＭ  ＥＤＴＡ
溶液、ｐＨ＝８）とを十分に破砕して均一に混合した。３０μＬの組織ホモジネートを取
って３０μＬの２０ｍＭ酢酸アンモニウム溶液（ｐＨ＝８．０）と均一に混合し、さらに
１２０μＬの内部標準溶液（２００ｎｇ／ｍＬのトルブタミド及び４０ｍＭのＤＢＢＡメ
タノール溶液）と均一に混合した。４°Ｃ、１３０００ｒｐｍで１０分間遠心分離した後
、６０μＬの上澄みを取って６０μＬの水と均一に混合し、さらに１０μＬ取って分析し
た。
【０１０８】
２ＦＭ−ＵＴＰのクロマトグラフィー−質量分析条件
ＬＣ−ＭＳ／ＭＳ（ＡＰＩ  ４０００、ＡＢ  ＳＣＩＥＸ）を用いてサンプルを分析し
た。カラム：ＡｇＩｌｅｎｔ  ＺＯＲＢＡ  ｘ    Ｅｘｔｅｎｄ−Ｃ１８  （２．１  ×
５０  ｍｍ、５  μｍ）、移動相Ａ：０．００１％のアンモニア水＆０．１８  ｍＭの
ＤＢＡＡ、移動相Ｂ：１０ｍＭのＤＭＨＡ＆３ｍＭの酢酸アンモニウムアセトニトリル／
水溶液（ｖ：ｖ、５０：５０）であった。サンプル分離は、グラジエント溶出法を採用し
、条件を表６に示す。流速は０．４ｍＬ／分間であった。２ＦＭ−ＵＴＰ及び対応する内
部標準物質トルブタミドのピーク時間は、それぞれ１．９８及び３．１０分間であった。
質量分析条件は、エレクトロスプレーイオン化（ＥＳＩ）陰イオンモード、多重反応モニ
タリング（ＭＲＭ）のモニタリングイオン対ｍ／ｚ：４９８．７／１５８．７（２ＦＭ−
ＵＴＰ）、２６９．０／１６９．８（トルブタミド）であった。
【０１０９】
表6  2FM-UTP液相溶出グラジエント条件
2020516583.tif 000052
【０１１０】
１２．１．３．  データ分析
各化合物の代謝生成物の肝臓中の濃度−時間のヒストグラムを作製した。２ＦＭ−ＵＲ
、２ＦＭ−ＵＭＰ及び２ＦＭ−ＵＴＰの組織濃度−時間曲線下面積（ＡＵＣ０−ｔ）は、
ＷＩｎＮｏｎＬＩｎ６．２．１（ＰｈａｒｓＩｇｈｔ，  ＣＡ）の非コンパートメントモ
デルの対数−線形台形法によりフィッティング計算された。２ＦＭ−ＵＭＰ及び２ＦＭ−
ＵＴＰの肝臓−腎臓比は、それらの肝臓、心臓中のＡＵＣ０−ｔ比値である。
【０１１１】
４．実験結果
ＰＡ２０２０、ＰＡ２０２４、ＰＡ２０２９及びソフォスブビルによる２ＦＭ−ＵＭＰ
及び２ＦＭ−ＵＴＰの放出の結果を表７に示す。ＰＡ２０２９及びソフォスブビルによる
２ＦＭ−ＵＲの放出の結果を表８に示す。
【０１１２】
表７  ラットに３０ｍｇ／ｋｇのＰＡ２０２０、ＰＡ２０２４、ＰＡ２０２９及びソフォ
スブビルを強制経口投与した後の２４時間内の、一リン酸代謝物２ＦＭ−ＵＭＰ及び三リ
ン酸活性分子２ＦＭ−ＵＴＰの肝臓、心臓及び血漿における暴露量（ｈ・ｎｇ／ｇ、濃度
／組織重量）
2020516583.tif 000053
Ｎ．Ｄ．＝Ｎｏｔ  ｄｅｔｅｃｔａｂｌｅ、未検出（対応する器官又は組織における暴露
量が５ｎｇ／ｇ又は５ｎｇ／ｍＬ未満であることを示す）
【０１１３】
表８  ラットに３０ｍｇ／ｋｇのＰＡ２０２９及びソフォスブビルを強制経口投与した後
の２４時間内の、脱リン酸化代謝物２ＦＭ−ＵＲの肝臓、心臓及び血漿における暴露量（
ｈ・ｎｇ／ｇ、濃度／組織重量）。
2020516583.tif 000054
【０１１４】
４．１  肝臓における代謝生成物の組織分布（病変組織）
【０１１５】
ＳＤラットに３０ｍｇ／Ｋｇの薬を強制経口投与した後の肝臓組織分布の結果は、ＰＡ
２０２０、ＰＡ２０２４及びＰＡ２０２９の代謝により放出した活性分子２ＦＭ−ＵＴＰ
は、いずれも対応する時点のソフォスブビルよりも顕著に高いことを示す（ｐ＜０．０１
、図２）。用ＷＩｎＮｏｎＬＩｎ６．２．１薬物血中濃度−時間曲線下面積をフィッティ
ングしたところ、ＰＡ２０２０、ＰＡ２０２４及びＰＡ２０２９による放出したＣ型肝炎
ウイルスを抑制するポリメラーゼの活性分子２ＦＭ−ＵＴＰの肝臓における暴露量はそれ
ぞれソフォスブビルの９．９倍（２６６８２ｈ・ｎｇ／ｇ：２６９１ｈ・ｎｇ／ｇ）、３
．６倍（９５９１  ｈ・ｎｇ／ｇ：２６９１  ｈ・ｎｇ／ｇ）及び４．４倍（１１８２０
ｈ・ｎｇ／ｇ：２６９１ｈ・ｎｇ／ｇ）（表７）ことが分かった。これらの結果は、ソフ
ォスブビルと比較して、同じ用量で肝臓送達基による修飾が活性分子２ＦＭ−ＵＴＰの肝
臓中の分布を大幅に増加させることを示し、用量効果関係の原理に基づいて、ＰＡ２０２
０、ＰＡ２０２４及びＰＡ２０２９のような化合物は、より少ない容量でもソフォスブビ
ルの臨床効果と同じ効果を奏することができることを示唆している。
【０１１６】
４．２  血液、肝臓における代謝生成物の組織分布（正常組織）
ＰＡ２０２０、ＰＡ２０２４、ＰＡ２０２９及びソフォスブビルの代謝により放出した
活性分子２ＦＭ−ＵＴＰは、血液、構築したＬＣ−ＭＳ／ＭＳ検出方法の定量下限（ＬＯ
Ｄ＝５ｎｇ／ｍＬ又は５ｎｇ／ｇ）以上で心臓において検出できなかった。ソフォスブビ
ルの代謝により放出した非活性分子２ＦＭ−ＵＲは、体内において活性分子２ＦＭ−ＵＭ
Ｐよりも安定的に存在し、体内の主要な代謝生成物であるので、多種のソフォスブビルに
関連する毒性作用に関係がある。
【０１１７】
２０１５年３月に、ＦＤＡは、ソフォスブビル＋他の抗ウイルス薬＋アミオダロン用い
てＨＣＶを治療する際に、重篤な徐脈が発生する可能性があり、死亡に至る恐れがあるこ
とを警告した。ソフォスブビルの一リン酸代謝物２ＦＭ−ＵＭＰ及び２ＦＭ−ＵＲの心臓
などの器官又は組織における濃度が高いことは、臨床毒性の主な原因である可能性がある
。ＰＡ２０２０、ＰＡ２０２４及びＰＡ２０２９は、心臓においてソフォスブビルよりも
少ない２ＦＭ−ＵＭＰを放出し（ｐ＜０．０１、図３及び表７）、ＰＡ２０２９は、心臓
において放出した２ＦＭ−ＵＲも同じ用量のソフォスブビルよりも少なかった（ｐ＜０．
０１、図４及び表８）。したがって、同じ用量下で、本発明のＰＡ２０ＸＸシリーズ化合
物は、ソフォスブビルよりも顕著に低い心毒性リスクを有する。
【０１１８】
重度腎機能障害のある患者（ｅＧＦＲ＜３０ｍＬ／分間／１．７３ｍ２）において、ソ
フォスブビルの代謝生成物２ＦＭ−ＵＭＰ及び２ＦＭ−ＵＲが血液から除去されることが
影響されることで、代謝生成物による全身毒性が悪化する。そのため、ソフォスブビルの
臨床投薬ガイドには、このような患者に対してソフォスブビルの服用が推奨されていない
。これにより、腎機能障害のあるＨＣＶ患者がソフォスブビルを使用するチャンスを失う
ことになる。同じ用量下で、ＰＡ２０２０、ＰＡ２０２４及びＰＡ２０２９の血漿におけ
る２ＦＭ−ＵＭＰ濃度は、ソフォスブビルの約１／１３、１／５４及び１／４のみであり
（表７）、ＰＡ２０２９の血漿における２ＦＭ−ＵＲ濃度は、ソフォスブビルの約半分で
ある（表８）。したがって、ＰＡ２０２０、ＰＡ２０２４及びＰＡ２０２９を使用するこ
とにより、臨床上、重度腎機能障害のあるＨＣＶ患者がソフォスブビル治療を受けられな
いという問題の解決が期待できる。
【０１１９】
以上の結果から明らかなように、本発明の式ＩＩ及び式ＩＩＩで表される化合物はより高
い活性及びより高い肝臓組織特異的送達を有するため、治療に必要な容量は低くなり、よ
り高い安全性及び低い副作用を有する。
【０１２０】
本発明に掲げる全ての文献は、各文献が単独して参考として援用されるように、本出願に
おいて参考として援用される。また、理解できるように、本発明に記載の内容に基づいて
、当業者は本発明に対して様々な変更又は修正を行うことができ、これらの同等態様は同
様に本出願の特許請求の範囲に含まれる。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【国際調査報告】
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