【誤訳訂正書】
【提出日】平成30年3月26日(2018.3.26)
【誤訳訂正１】
【訂正対象書類名】特許請求の範囲
【訂正対象項目名】全文
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
エンドサイトーシスを検出する方法であって、
ａ）レポーター要素を細胞表面分析物に係留し、融合要素を作り出すことと、ここで、前記レポーター要素からの検出可能なシグナルが、前記レポーター要素のエンドサイトーシス時に変化する、及び
ｂ）前記レポーター要素からの検出可能なシグナルを監視し、それによってエンドサイトーシスを検出することと、を含み、
前記検出可能なシグナル及び前記変化した検出可能なシグナルが、前記レポーター要素とレポーター基質との相互作用時に放出され、
前記レポーター要素がルシフェラーゼ酵素であり、かつ、
前記レポーター基質が、以下：
【化１】
2017060521.tif 000001
からなる群より選ばれるルシフェラーゼ基質である、方法。
【請求項２】
ステップ（ａ）と（ｂ）との間に、前記レポーター要素をレポーター基質と接触させるステップをさらに含む、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記検出可能なシグナルを監視し、エンドサイトーシスを検出することは、
ｉ）エンドサイトーシスの前の前記レポーター要素からの前記シグナルを検出することと、
ｉｉ）前記融合要素のエンドサイトーシスを可能にすることと、
ｉｉｉ）前記レポーター要素からの前記シグナルの検出を繰り返すことと、及び、
ｉｖ）ステップ（ｉ）からの前記シグナルをステップ（ｉｉｉ）からの前記シグナルと比較し、エンドサイトーシスを検出することと、を含む、請求項１に記載の方法。
【請求項４】
前記細胞表面分析物が、細胞表面受容体を含む、請求項１に記載の方法。
【請求項５】
前記細胞表面分析物が、細胞表面の成分と非共有結合的に会合している、請求項１に記載の方法。
【請求項６】
前記レポーター要素および前記細胞表面分析物が、融合タンパク質として発現される、請求項１に記載の方法。
【請求項７】
前記ルシフェラーゼ酵素が、甲虫もしくはオプロフォーラスルシフェラーゼ酵素、またはそれらの変異型もしくは変異体であり、
前記変異型もしくは変異体は、配列番号３〜４のうちの１つと７０％を超える配列同一性を有し、かつ、配列番号３〜４のうちの１つの生物学的活性のすべてまたは一部分を保持する、請求項１に記載の方法。
【請求項８】
前記検出可能なシグナルが、細胞外空間と比較して細胞内空間内で検出可能に変化する、請求項１に記載の方法。
【請求項９】
前記検出可能なシグナルが、細胞外空間と比較してエンドソーム内で検出可能に変化する、請求項１に記載の方法。
【請求項１０】
ステップ（ｉ）と（ｉｉ）との間に、エンドサイトーシスを誘起するステップをさらに含む、請求項３に記載の方法。
【請求項１１】
前記レポーター基質が、細胞の形質膜に対して透過性である、請求項２に記載の方法。
【請求項１２】
前記レポーター基質は、前記細胞の細胞内空間から完全にまたは大部分が排除される、請求項２に記載の方法。
【請求項１３】
前記レポーター要素が、複数のレポーター基質を代謝回転することができる、請求項２に記載の方法。
【請求項１４】
前記レポーター要素が細胞外空間に局在するように、前記融合要素が細胞膜に取り込まれる、請求項１に記載の方法。
【請求項１５】
前記レポーター要素のエンドサイトーシスが、細胞外空間からエンドソーム内への前記レポーター要素の移動をもたらす、請求項１に記載の方法。
【請求項１６】
エンドサイトーシスを検出する方法であって、
ａ）融合要素を細胞の細胞膜に取り込むことと、ここで、前記融合要素が細胞表面分析物およびレポーター要素を含む、
ｂ）前記レポーター要素をレポーター基質と接触させることと、ここで、前記接触が検出可能なシグナルを生成する、
ｃ）前記検出可能なシグナルを監視し、それによってエンドサイトーシスを検出することと、を含み、
前記検出可能なシグナルが、前記レポーター要素とレポーター基質との相互作用時に放出され、
前記レポーター要素がルシフェラーゼ酵素であり、かつ、
前記レポーター基質が、以下：
【化２】
2017060521.tif 000002
からなる群より選ばれるルシフェラーゼ基質である、方法。
【請求項１７】
エンドサイトーシスを検出する方法であって、
ａ）融合タンパク質を細胞の細胞膜に取り込むことと、ここで、前記融合タンパク質がレポーターポリペプチドおよび細胞表面受容体を含み、前記レポーターポリペプチドがレポーター基質との相互作用時に検出可能なシグナルを放出する、
ｂ）前記レポーターポリペプチドを前記レポーター基質と接触させることと、
ｃ）前記検出可能なシグナルを検出することと、
ｄ）エンドサイトーシスを誘発する、および／またはエンドサイトーシスの発生を可能にすることと、
ｅ）前記検出可能なシグナルの検出を繰り返すことと、
ｆ）ステップ（ｃ）からの前記シグナルをステップ（ｅ）からの前記シグナルと比較することと、ここで、前記シグナルの変化が、エンドサイトーシスが発生したことを示す、
を含み、
前記検出可能なシグナル及び前記変化した検出可能なシグナルが、前記レポーターポリペプチドとレポーター基質との相互作用時に放出され、
前記レポーターポリペプチドがルシフェラーゼ酵素であり、かつ、
前記レポーター基質が、以下：
【化３】
2017060521.tif 000003
からなる群より選ばれるルシフェラーゼ基質である、方法。
【請求項１８】
膜貫通輸送を検出する方法であって、
ａ）融合タンパク質を細胞の膜に取り込むことと、ここで、前記融合タンパク質がレポーター要素および膜会合要素を含み、前記レポーター要素がレポーター基質との相互作用時に検出可能なシグナルを放出する、
ｂ）前記レポーター要素を前記レポーター基質と接触させることと、および、
ｃ）前記検出可能なシグナルを検出することと、を含み、
前記検出可能なシグナルが、前記レポーター要素とレポーター基質との相互作用時に放出され、
前記レポーター要素がルシフェラーゼ酵素であり、かつ、
前記レポーター基質が、以下：
【化４】
2017060521.tif 000004
からなる群より選ばれるルシフェラーゼ基質である、方法。
【請求項１９】
ｄ）膜貫通輸送を誘発し、および／または膜貫通輸送の発生を可能にするステップと、
ｅ）前記検出可能なシグナルの検出を繰り返すステップと、及び、
ｆ）ステップ（ｃ）からの前記シグナルをステップ（ｅ）からの前記シグナルと比較するステップと、ここで、前記シグナルの変化が、膜貫通輸送が発生したことを示す、
をさらに含む、請求項１８に記載の方法。
【誤訳訂正２】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０００４
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０００４】
一部の実施形態において、本発明は、（ａ）レポーター要素を細胞表面分析物に係留（tethering）し、融合要素を作り出すことと、（ｂ）レポーター要素からの検出可能なシグナルを監視し、それによってエンドサイトーシスを検出することと、を含む、エンドサイトーシスを検出する方法を提供する。一部の実施形態において、レポーター要素は、レポーター基質との相互作用時に検出可能なシグナルを放出する。一部の実施形態において、方法は、ステップ（ａ）と（ｂ）との間に、レポーター要素をレポーター基質と接触させるステップをさらに含む。一部の実施形態において、方法は、ステップ（ａ）と（ｂ）との間に、細胞表面分析物、レポーター要素、および／または融合要素のエンドサイトーシスを可能にするステップをさらに含む。一部の実施形態において、レポーター要素からの検出可能なシグナルは、レポーター要素のエンドサイトーシス時に変化する。一部の実施形態において、検出可能なシグナルを監視し、それによってエンドサイトーシスを検出することは、（ｉ）融合要素のエンドサイトーシスを可能にすることと、（ｉｉ）エンドサイトーシスの誘発後にシグナルを検出することと、を含む。一部の実施形態において、エンドサイトーシスを検出するために検出可能なシグナルを監視することは、（ｉ）エンドサイトーシスの前のレポーター要素からのシグナルを検出することと、（ｉｉ）融合要素のエンドサイトーシスを可能にすることと、（ｉｉｉ）レポーター要素からのシグナルの検出を繰り返すことと、（ｉｖ）ステップ（ｉ）からのシグナルとステップ（ｉｉｉ）からのシグナルを比較し、エンドサイトーシスを検出することと、を含む。一部の実施形態において、融合要素のエンドサイトーシスを可能にすることは、エンドサイトーシスの時間（例えば、十分な時間）を考慮することを含む（例えば、１秒．．．２秒．．．５秒．．．３０秒．．．１分．．．２分．．．５分．．．３０分．．．６０分以上）。一部の実施形態において、細胞表面分析物は、細胞表面成分である。一部の実施形態において、細胞表面成分は、細胞表面受容体を含む。一部の実施形態において、細胞表面分析物は、細胞表面の成分に非共有結合的に会合している。一部の実施形態において、レポーター要素および細胞表面分析物は、融合タンパク質として発現される。一部の実施形態において、レポーター要素および細胞表面分析物は、共有結合的または非共有結合的に共役する（例えば、翻訳後）。一部の実施形態において、レポーター要素および細胞表面分析物は、融合タンパク質として発現される。一部の実施形態において、検出可能なシグナルは、光学的シグナルを含む。一部の実施形態において、検出可能なシグナルは、発光を含む。一部の実施形態において、レポーター要素は、ルシフェラーゼ酵素を含む。一部の実施形態において、ルシフェラーゼ酵素は、甲虫またはオプロフォーラスルシフェラーゼ酵素である。一部の実施形態において、ルシフェラーゼ酵素は、野生型ルシフェラーゼ（例えば、甲虫またはオプロフォーラスルシフェラーゼ酵素）またはそれらの変異体（例えば、野生型と７０％超配列同一性）である。一部の実施形態において、エンドサイトーシスは、細胞外空間から細胞内空間へのレポーター要素の移動をもたらす。一部の実施形態において、レポーター要素は、生体膜（例えば、形質膜）を通過して移動する。一部の実施形態において、レポーター要素は、新規膜微小環境に転位置する。一部の実施形態において、検出可能なシグナルは、細胞外空間と比較して細胞内空間内で、検出可能に変化する（例えば、シグナルの増大、シグナルの減少、放出性質の変化等）。一部の実施形態において、レポーターからの検出可能なシグナルは、細胞外空間と比較して細胞内空間内で減少する。一部の実施形態において、細胞内空間は、エンドソームを含む。一部の実施形態において、検出可能なシグナルは、細胞外空間と比較してエンドソーム内で検出可能に変化する（例えば、シグナルの増大、シグナルの減少、放出性質の変化等）。一部の実施形態において、レポーターからの検出可能なシグナルは、細胞の外側と比較してエンドソーム内で減少する。一部の実施形態において、方法は、ステップ（ｉ）と（ｉｉ）との間に、エンドサイトーシスを誘起するステップをさらに含む。一部の実施形態において、エンドサイトーシスは、受容体作動薬（例えば、小分子、サイトカイン等）、修飾された成長条件、薬理化合物、細胞シグナル経路の変化、種を誘発する任意のエンドサイトーシスの存在等の１つ以上によって誘起される。一部の実施形態において、レポーター基質は、生細胞の形質膜に対して透過性である。一部の実施形態において、レポーター基質は、細胞膜に対して透過性である。一部の実施形態において、レポーター基質は、細胞の細胞内空間から完全にまたは大部分が排除される。一部の実施形態において、レポーターは、複数のレポーター基質を代謝回転することができる（例えば、複数の基質代謝回転）。一部の実施形態において、レポーター基質は、ルシフェリン、ルシフェリン誘導体、セレンテラジン、またはセレンテラジン誘導体である。
【誤訳訂正３】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０００５
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０００５】
一部の実施形態において、本発明は、（ａ）融合要素を細胞の細胞膜に取り込むことであって、融合要素が細胞表面分析物およびレポーター要素を含む、取り込むことと、（ｂ）レポーターをレポーター基質と接触させることであって、その接触が検出可能なシグナルを生成する、接触することと、（ｃ）検出可能なシグナルを監視し、それによってエンドサイトーシスを検出することと、を含む、エンドサイトーシスを検出する方法を提供する。一部の実施形態において、検出可能なシグナルの監視は、（ｉ）融合要素のエンドサイトーシスを可能にすることと、（ｉｉ）エンドサイトーシスの誘発後にシグナルを検出することと、を含む。一部の実施形態において、検出可能なシグナルを監視することは、（ｉ）エンドサイトーシスの前のシグナルを検出することと、（ｉｉ）融合要素のエンドサイトーシスを可能にすることと、（ｉｉｉ）エンドサイトーシス後のシグナルを検出することと、（ｉｖ）ステップ（ｉ）からのシグナルとステップ（ｉｉｉ）からのシグナルを比較し、エンドサイトーシスを検出することと、を含む。一部の実施形態において、融合要素は、融合タンパク質を含む。一部の実施形態において、エンドサイトーシスを可能にすることは、エンドサイトーシスの時間（例えば、十分な時間）を考慮することを含む（例えば、１秒．．．２秒．．．５秒．．．３０秒．．．１分．．．２分．．．５分．．．３０分．．．６０分以上）。一部の実施形態において、細胞表面分析物は、細胞表面成分を含む。一部の実施形態において、細胞表面成分は、細胞表面受容体を含む。一部の実施形態において、細胞表面分析物は、細胞表面の成分に非共有結合的に会合している。一部の実施形態において、レポーター要素は、ルシフェラーゼ酵素を含む。一部の実施形態において、ルシフェラーゼ酵素は、甲虫またはオプロフォーラスルシフェラーゼ酵素である。一部の実施形態において、ルシフェラーゼ酵素は、野生型酵素（例えば、甲虫またはオプロフォーラスルシフェラーゼ酵素）またはそれらの変異体（例えば、７０％超配列同一性）である。一部の実施形態において、融合要素は、レポーター要素が細胞外空間内に局在（例えば、細胞に隣接）するように、細胞膜に取り込まれる。一部の実施形態において、レポーター要素のエンドサイトーシスは、細胞外空間からエンドソーム内へのレポーター要素の移動をもたらす。一部の実施形態において、シグナルは、細胞外空間と比較してエンドソーム内で検出可能に変化する。一部の実施形態において、シグナルは、細胞外空間と比較してエンドソーム内で減少する。一部の実施形態において、方法は、ステップ（ｉ）と（ｉｉ）との間に、エンドサイトーシスを誘起するステップをさらに含む。一部の実施形態において、エンドサイトーシスは、受容体作動薬（例えば、小分子、サイトカイン等）、修飾された成長条件、薬理化合物、細胞シグナル経路の変化、種を誘発する任意のエンドサイトーシスの存在等の１つ以上によって誘起される。一部の実施形態において、レポーター基質は、生細胞の形質膜に対して透過性であることが知られている。一部の実施形態において、レポーター基質は、細胞膜に対して透過性であるか、または実験の条件下で細胞の位相的内側から完全にもしくは大部分が排除される。一部の実施形態において、レポーター基質は、ルシフェリン、ルシフェリン誘導体、セレンテラジン、またはセレンテラジン誘導体である。
【誤訳訂正４】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０００６
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０００６】
一部の実施形態において、本発明は、（ａ）融合タンパク質を細胞の細胞膜に取り込むステップであって、融合タンパク質がレポーターポリペプチドおよび細胞表面受容体を含み、レポーターポリペプチドがレポーター基質との相互作用時に検出可能なシグナルを放出する、取り込むステップ、（ｂ）レポーターポリペプチドをレポーター基質と接触させるステップ、（ｃ）検出可能なシグナルを検出するステップ、（ｄ）エンドサイトーシスを誘発し、かつ／またはエンドサイトーシスの発生を可能にするステップ、（ｅ）検出可能なシグナルの検出を繰り返すステップ、および（ｆ）ステップ（ｃ）からのシグナルをステップ（ｅ）からのシグナルと比較するステップであって、シグナルの変化が、エンドサイトーシスが発生したことを示す、比較するステップのうちの１つ以上（例えば、すべてのステップ、順序通りのすべてのステップ）を含むエンドサイトーシスを検出する方法を提供する。一部の実施形態において、融合タンパク質は、融合構築物から発現される。一部の実施形態において、融合タンパク質は、抗体抗原会合に基づいて生成される。一部の実施形態において、融合タンパク質は、細胞内で発現される。一部の実施形態において、細胞表面分析物は、外因的に生成され、細胞の培地に添加される。一部の実施形態において、レポーター基質は、細胞膜透過性である。一部の実施形態において、レポーターポリペプチドは、レポーター基質の複数の代謝回転能力を有する。一部の実施形態において、レポーターポリペプチドは、ルシフェラーゼ酵素を含む。一部の実施形態において、ルシフェラーゼ酵素は、甲虫またはオプロフォーラスルシフェラーゼ酵素である。一部の実施形態において、ルシフェラーゼ酵素は、野生型酵素（例えば、甲虫またはオプロフォーラスルシフェラーゼ酵素）またはそれらの変異体（例えば、７０％超配列同一性）である。一部の実施形態において、融合タンパク質は、レポーター要素が細胞の外側に局在するように、細胞膜に取り込まれる。一部の実施形態において、レポーターポリペプチドのエンドサイトーシスは、細胞外空間から細胞内空間へのレポーターポリペプチドの移動をもたらす。一部の実施形態において、シグナルは、細胞外空間と比較して細胞内空間内で検出可能に変化する。一部の実施形態において、細胞内空間は、エンドソーム内にある。一部の実施形態において、シグナルは、細胞外空間と比較してエンドソーム内で検出可能に変化する。一部の実施形態において、シグナルは、細胞外空間と比較して細胞内空間内で減少する。一部の実施形態において、シグナルは、細胞外空間と比較してエンドソーム内で減少する。一部の実施形態において、レポーター基質は、生細胞の形質膜に対して透過性であることが知られている。一部の実施形態において、レポーター基質は、細胞膜に対して透過性であるか、または実験の条件下で細胞の位相的内側から完全にもしくは大部分が排除される。一部の実施形態において、レポーター基質は、ルシフェリン、ルシフェリン誘導体、セレンテラジン、またはセレンテラジン誘導体である。
【誤訳訂正５】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０００７
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０００７】
一部の実施形態において、本発明は、（ａ）レポーター要素を細胞表面分析物に係留することと、（ｂ）レポーター要素からの検出可能なシグナルを監視し、それによってエンドサイトーシスを検出することと、を含む、エンドサイトーシスを検出する組成物および方法を提供する。一部の実施形態において、レポーター要素は、レポーター基質との相互作用時に検出可能なシグナルを放出する。一部の実施形態において、方法は、ステップ（ａ）と（ｂ）との間に、レポーター要素をレポーター基質と接触させるステップをさらに含む。一部の実施形態において、方法は、ステップ（ａ）と（ｂ）との間に、細胞表面分析物および／またはレポーター要素のエンドサイトーシスの時間を考慮するステップをさらに含む。一部の実施形態において、レポーター要素からの検出可能なシグナルは、レポーター要素のエンドサイトーシス時に変化する。一部の実施形態において、検出可能なシグナルを監視し、エンドサイトーシスを検出することは、（ｉ）融合要素のエンドサイトーシスを可能にすることと、（ｉｉ）エンドサイトーシスのシグナル誘発を検出することと、を含む。一部の実施形態において、検出可能なシグナルを監視し、エンドサイトーシスを検出することは、（ｉ）エンドサイトーシスの前のシグナルを検出することと、（ｉｉ）融合要素のエンドサイトーシスを可能にすることと、（ｉｉｉ）エンドサイトーシス後のシグナルを検出することと、（ｉｖ）ステップ（ｉ）からのシグナルとステップ（ｉｉｉ）からのシグナルを比較し、それによってエンドサイトーシスを検出することと、を含む。一部の実施形態において、レポーター要素は、細胞表面成分に係留される。一部の実施形態において、細胞表面成分は、細胞表面受容体を含む。一部の実施形態において、細胞表面受容体は、配列番号５、配列番号６、配列番号７、配列番号８、配列番号９、または配列番号１０の配列を含む。一部の実施形態において、細胞表面受容体は、配列番号５〜１０のうちの１つと７０％超える配列同一性（例えば、７５％．．．８０％．．．９０％．．．９５％．．．９８％．．．９９％）を含む。一部の実施形態において、細胞表面受容体は、配列番号５〜１０のうちの１つの生物学的活性のすべてまたは一部分を保持する。一部の実施形態において、レポーター要素および細胞表面成分は、融合タンパク質として発現される。一部の実施形態において、融合タンパク質は、レポーター要素および細胞表面成分に加えて１つ以上のペプチド要素を含む。一部の実施形態において、融合タンパク質は、１つ以上のシグナルペプチド（例えば、ＩＬ６シグナルペプチド）を含む。一部の実施形態において、融合タンパク質は、配列番号１と７０％以上配列同一性（例えば、７０％．．．８０％．．．９０％．．．９５％．．．９８％．．．９９％）のシグナルペプチドを含む。一部の実施形態において、融合タンパク質は、１つ以上のリンカーセグメント（例えば、ＧＳＳＧリンカー）を含む。一部の実施形態において、リンカーセグメントは、融合タンパク質の２つのポリペプチド部分を含むペプチドまたは非ペプチド（例えば、核酸、ＰＥＧ、アルキル鎖）セグメントである。一部の実施形態において、融合タンパク質は、配列番号２と７０％以上（例えば、７０％．．．８０％．．．９０％．．．９５％．．．９８％．．．９９％）配列同一性のリンカーを含む。一部の実施形態において、検出可能なシグナルは、光学的シグナルを含む。一部の実施形態において、検出可能なシグナルは、発光を含む。一部の実施形態において、レポーター要素は、ルシフェラーゼ酵素を含む。一部の実施形態において、ルシフェラーゼ酵素は、配列番号３または配列番号４の配列を含む。一部の実施形態において、ルシフェラーゼ酵素は、配列番号３〜４のうちの１つと７０％を超える配列同一性（例えば、７５％．．．８０％．．．９０％．．．９５％．．．９８％．．．９９％）を含む。一部の実施形態において、ルシフェラーゼ酵素は、配列番号３〜４のうちの１つの生物学的活性のすべてまたは一部分を保持する。一部の実施形態において、エンドサイトーシスは、細胞の外側からエンドソーム内へのレポーター要素の移動をもたらす。一部の実施形態において、エンドサイトーシスは、細胞外空間から細胞内空間（例えば、エンドソーム）内へのレポーター要素の移動をもたらす。一部の実施形態において、検出可能なシグナルは、細胞の外側と比較してエンドソーム内で検出可能に変化する。一部の実施形態において、レポーター要素からの検出可能なシグナルは、細胞の外側と比較してエンドソーム内で減少する。一部の実施形態において、方法は、ステップ（ｉ）と（ｉｉ）との間に、エンドサイトーシスを誘起するステップ（例えば、化学物質を用いて（例えば、医薬品を用いて））をさらに含む。一部の実施形態において、レポーター基質は、細胞培地に添加される。一部の実施形態において、レポーター基質は、生細胞の形質膜に対して透過性であるか、細胞膜に対して透過性であるか、または細胞の位相的内側から完全にもしくは大部分が排除される。
【誤訳訂正６】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０００８
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０００８】
一部の実施形態において、本発明は、（ａ）融合要素を細胞の細胞膜に取り込むことであって、融合要素が細胞表面分析物およびレポーター要素を含む、取り込むことと、（ｂ）レポーター要素をレポーター基質と接触させることであって、その接触は、レポーター要素からシグナルを生成する、接触することと、（ｃ）シグナルを監視し、それによってエンドサイトーシスを検出することと、を含む、エンドサイトーシスを検出する方法を提供する。一部の実施形態において、シグナルを監視し、エンドサイトーシスを検出することは、（ｉ）エンドサイトーシスの前のシグナルを検出することと、（ｉｉ）融合要素および細胞表面分析物のエンドサイトーシスを可能にすることと、（ｉｉｉ）エンドサイトーシス後のシグナルを検出することと、（ｉｖ）ステップ（ｉ）からのシグナルとステップ（ｉｉｉ）からのシグナルを比較し、それによってエンドサイトーシスを検出することと、を含む。一部の実施形態において、融合要素は、融合タンパク質を含む。一部の実施形態において、細胞表面分析物は、細胞表面成分を含む。一つの実施形態において、細胞表面成分は、細胞表面受容体を含む。一部の実施形態において、レポーター要素は、ルシフェラーゼ酵素（例えば、甲虫またはオプロフォーラスルシフェラーゼ酵素）を含む。一部の実施形態において、ルシフェラーゼ酵素は、野生型酵素（例えば、甲虫またはオプロフォーラスルシフェラーゼ酵素）またはそれらの変異体（例えば、７０％超配列同一性）である。一部の実施形態において、融合要素は、レポーター要素が細胞の外側に局在するように細胞膜に取り込まれる。一部の実施形態において、レポーター要素のエンドサイトーシスは、細胞の外側からエンドソーム内へのレポーター要素の移動をもたらす。一部の実施形態において、シグナルは、エンドソーム内で細胞の外側と比較して検出可能に変化する。一部の実施形態において、シグナルは、細胞の外側と比較してエンドソーム内で減少する。一部の実施形態において、放出性質、例えば、シグナルの波長は、細胞の外側と比較してエンドソーム内で変化する。一部の実施形態において、方法は、ステップ（ｉ）と（ｉｉ）との間に、エンドサイトーシスを誘起するステップをさらに含む。一部の実施形態において、レポーター基質は、生細胞の形質膜に対して透過性であるか、細胞膜に対して透過性であるか、または細胞の位相的内側から完全にもしくは大部分が排除される。一部の実施形態において、レポーター基質は、膜透過性基質である。
【誤訳訂正７】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００１１
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００１１】
一部の実施形態において、本発明は、レポータータンパク質および細胞表面成分を含む融合タンパク質、ならびにそれらを使用する、例えば、エンドサイトーシスを検出するための方法を提供する。一部の実施形態において、レポータータンパク質は、レポーター酵素である。一部の実施形態において、レポーター酵素は、ルシフェラーゼである。一部の実施形態において、ルシフェラーゼは、ホタルルシフェラーゼ、オプロフォーラスルシフェラーゼ、ウミシイタケルシフェラーゼ、それらの変異型もしくは変異体、または他の好適なルシフェラーゼである。一部の実施形態において、ルシフェラーゼは、配列番号３または配列番号４のすべてまたは一部分に対して７０％以上の配列同一性を有する。一部の実施形態において、ルシフェラーゼは、配列番号３、配列番号６、配列番号７、配列番号８、配列番号９、または配列番号１０のルシフェラーゼの生物学的活性を有する。一部の実施形態において、ルシフェラーゼは、配列番号３または配列番号４のルシフェラーゼの生物学的活性を有する。一部の実施形態において、細胞表面成分は、細胞表面タンパク質である。一部の実施形態において、細胞表面タンパク質は、細胞表面受容体である。一部の実施形態において、細胞表面受容体は、配列番号３、配列番号６、配列番号７、配列番号８、配列番号９、または配列番号１０のすべてまたは一部分に対して７０％以上の配列同一性を有する。一部の実施形態において、融合タンパク質は、１つ以上のシグナルペプチド（例えば、細胞表面シグナル、分泌シグナル等）を含む。一部の実施形態において、シグナルペプチドは、配列番号１のすべてまたは一部分に対して７０％以上の配列同一性を有する。一部の実施形態において、シグナルペプチドは、配列番号１のシグナルペプチドの生物学的活性を有する。一部の実施形態において、融合タンパク質は、１つ以上のリンカーセグメントを含む。一部の実施形態において、リンカーセグメントは、ペプチドまたは非ペプチドである。一部の実施形態において、リンカーセグメントは、ポリマーである。一部の実施形態において、リンカーセグメントは、炭素含有鎖である。一部の実施形態において、リンカーは、ＧＳＳＧリンカーである。一部の実施形態において、リンカーは、配列番号２のすべてまたは一部分に対して７０％以上の配列同一性を有する。一部の実施形態において、リンカーは、細胞表面成分、レポーター、および／またはシグナルペプチドを細胞表面成分、レポーター要素、および／またはシグナルペプチドの１つ以上に共有結合的に連結する。一部の実施形態において、分泌タグ（例えば、ＩＬ６分泌タグ（例えば、配列番号１））およびリンカー（例えば、ＧＳＳＧリンカー（例えば、配列番号２））は、融合タンパク質のＮ末端にある。一部の実施形態において、分泌タグは、リンカーによってルシフェラーゼレポーター酵素のＮ末端に付着される。一部の実施形態において、ルシフェラーゼレポーター酵素のＣ末端は、直接またはリンカーによってのいずれかで、細胞表面成分、例えば、細胞表面タンパク質または受容体のＮ末端に付着される。