(57)【要約】  対象における認知機能の低下の素因を特定するための方法であって、対象から得られた１つ以上の試料において独立して、（ａ）オメガ−３脂肪酸、及びビタミンＤ若しくはその代謝産物、（ｂ）オメガ−３脂肪酸、及びホモシステイン、（ｃ）ビタミンＤ若しくはその代謝産物、及びホモシステイン、又は（ｄ）オメガ−３脂肪酸、ビタミンＤ若しくはその代謝産物、及びホモシステインのレベルを測定することを含む、方法。【選択図】  なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
対象における認知機能の低下の素因を特定するための方法であって、前記対象から得られた１つ以上の試料において独立して、
（ａ）オメガ−３脂肪酸、及びビタミンＤ若しくはその代謝産物、
（ｂ）オメガ−３脂肪酸、及びホモシステイン、
（ｃ）ビタミンＤ若しくはその代謝産物、及びホモシステイン、又は
（ｄ）オメガ−３脂肪酸、ビタミンＤ若しくはその代謝産物、及びホモシステイン
のレベルを測定することを含む、方法。
【請求項２】
オメガ−３脂肪酸、ビタミンＤ若しくはその代謝産物、及びホモシステインのレベルを測定することを含む、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
（ａ）オメガ−３脂肪酸のレベルが測定され、基準値と比較した、前記対象からの前記試料中のオメガ−３脂肪酸の前記レベルの減少が、認知機能の低下の素因を示す、
（ｂ）ビタミンＤ若しくはその代謝産物のレベルが測定され、基準値と比較した、前記対象からの前記試料中のビタミンＤ若しくはその代謝産物の前記レベルの減少が、認知機能の低下の素因を示す、及び／又は
（ｃ）ホモシステインのレベルが測定され、基準値と比較した、前記対象からの前記試料中のホモシステインの前記レベルの増加が、認知機能の低下の素因を示す、請求項１又は２に記載の方法。
【請求項４】
前記１つ以上の試料が、血液試料、血漿試料、及び血清試料からなる群から独立して選択される、請求項１〜３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５】
オメガ−３脂肪酸の前記レベルが、血液試料、好ましくは赤血球試料において測定され、
ビタミンＤ若しくはその代謝産物の前記レベルが、血清試料において測定され、及び／又はホモシステインの前記レベルが、血漿試料において測定される、請求項１〜４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６】
前記オメガ−３脂肪酸が、エイコサペンタエン酸（ＥＰＡ）及び／又はドコサヘキサエン酸（ＤＨＡ）、好ましくは赤血球膜ＥＰＡ及び／又は赤血球膜ＤＨＡである、請求項１〜５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項７】
前記ビタミンＤ若しくはその代謝産物が、ビタミンＤ３、ビタミンＤ２、２５−ヒドロキシビタミンＤ３及び／又は２５−ヒドロキシビタミンＤ２、好ましくは２５−ヒドロキシビタミンＤ３及び２５−ヒドロキシビタミンＤ２である、請求項１〜６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項８】
前記対象が、ヒト対象又はコンパニオンアニマル対象、好ましくは老化しているヒト対象、好ましくは５０歳以上のヒト対象である、請求項１〜７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項９】
対象における認知機能の低下の軽減若しくは予防、又は認知能力の改善に使用するためのオメガ−３脂肪酸であって、ビタミンＤ若しくはその代謝産物、及び／又は、血漿ホモシステインのレベルを低減することができる薬剤と同時に、順次に、又は別々に前記対象に投与される、オメガ−３脂肪酸。
【請求項１０】
対象における認知機能の低下の低減若しくは予防、又は認知能力の改善に使用するためのビタミンＤ若しくはその代謝産物であって、オメガ−３脂肪酸、及び／又は、血漿ホモシステインのレベルを低減することができる薬剤と同時に、順次に、又は別々に前記対象に投与される、ビタミンＤ若しくはその代謝産物。
【請求項１１】
対象における認知機能の低下の軽減若しくは予防、又は認知能力の改善に使用するための、血漿ホモシステインのレベルを低減することができる薬剤であって、オメガ−３脂肪酸及び／又はビタミンＤ若しくはその代謝産物と同時に、順次に、又は別々に前記対象に投与される、血漿ホモシステインのレベルを低減することができる薬剤。
【請求項１２】
対象における認知機能の低下の軽減若しくは予防、又は認知能力の改善に使用するための（ａ）オメガ−３脂肪酸と、（ｂ）ビタミンＤ若しくはその代謝産物と、（ｃ）血漿ホモシステインのレベルを低減することができる薬剤との組み合わせであって、（ａ）、（ｂ）及び（ｃ）は、同時に、順次に、又は別々に前記対象に投与される、組み合わせ。
【請求項１３】
請求項９に記載の使用のためのオメガ−３脂肪酸、請求項１０に記載の使用のためのビタミンＤ若しくはその代謝産物、請求項１１に記載の使用のための血漿ホモシステインのレベルを低減することができる薬剤、又は、請求項１２に記載の使用のための組み合わせであって、前記対象が、請求項１〜８のいずれか一項に記載の方法によって認知機能の低下の素因があると特定された対象である、オメガ−３脂肪酸、ビタミンＤ若しくはその代謝産物、血漿ホモシステインのレベルを低減することができる薬剤、又は、組み合わせ。
【請求項１４】
請求項９又は１３に記載の使用のためのオメガ−３脂肪酸、請求項１０又は１３に記載の使用のためのビタミンＤ若しくはその代謝産物、請求項１１又は１３に記載の使用のための血漿ホモシステインのレベルを低減することができる薬剤、又は、請求項１２又は１３に記載の使用のための組み合わせであって、前記オメガ−３脂肪酸が、エイコサペンタエン酸（ＥＰＡ）及び／又はドコサヘキサエン酸（ＤＨＡ）である、オメガ−３脂肪酸、ビタミンＤ若しくはその代謝産物、血漿ホモシステインのレベルを低減することができる薬剤、又は、組み合わせ。
【請求項１５】
請求項９、１３又は１４のいずれか一項に記載の使用のためのオメガ−３脂肪酸、請求項１０、１３又は１４のいずれか一項に記載の使用のためのビタミンＤ若しくはその代謝産物、請求項１１、１３又は１４のいずれか一項に記載の使用のための血漿ホモシステインのレベルを低減することができる薬剤、又は、請求項１２〜１４のいずれか一項に記載の使用のため組み合わせであって、前記ビタミンＤ若しくはその代謝産物が、ビタミンＤ３、ビタミンＤ２、２５−ヒドロキシビタミンＤ３及び／又は２５−ヒドロキシビタミンＤ２である、オメガ−３脂肪酸、ビタミンＤ若しくはその代謝産物、血漿ホモシステインのレベルを低減することができる薬剤、又は、組み合わせ。
【請求項１６】
請求項９又は１３〜１５のいずれか一項に記載の使用のためのオメガ−３脂肪酸、請求項１０又は１３〜１５のいずれか一項に記載の使用のためのビタミンＤ若しくはその代謝産物、請求項１１又は１３〜１５のいずれか一項に記載の使用のための血漿ホモシステインのレベルを低減することができる薬剤、又は、請求項１２〜１５のいずれか一項に記載の使用のための組み合わせであって、血漿ホモシステインのレベルを低減することができる前記薬剤が、ビタミンＢ６及び／又はビタミンＢ９である、オメガ−３脂肪酸、ビタミンＤ若しくはその代謝産物、血漿ホモシステインのレベルを低減することができる薬剤、又は、組み合わせ。
【請求項１７】
請求項９又は１３〜１６のいずれか一項に記載の使用のためのオメガ−３脂肪酸、請求項１０又は１３〜１６のいずれか一項に記載の使用のためのビタミンＤ若しくはその代謝産物、請求項１１又は１３〜１６のいずれか一項に記載の使用のための血漿ホモシステインのレベルを低減することができる薬剤、又は請求項１２〜１６のいずれか一項に記載の使用のための組み合わせであって、前記対象が、オメガ−３脂肪酸、ビタミンＤ若しくはその代謝産物、血漿ホモシステインのレベルを低減することができる薬剤及びビタミンＢ１２を投与され、前記血漿ホモシステインのレベルを低減することができる薬剤が、ビタミンＢ６である、オメガ−３脂肪酸、ビタミンＤ若しくはその代謝産物、血漿ホモシステインのレベルを低減することができる薬剤、又は組み合わせ。
【請求項１８】
請求項９又は１３〜１７のいずれか一項に記載の使用のためのオメガ−３脂肪酸、請求項１０又は１３〜１７のいずれか一項に記載の使用のためのビタミンＤ若しくはその代謝産物、請求項１１又は１３〜１７のいずれか一項に記載の使用のための血漿ホモシステインのレベルを低減することができる薬剤、又は請求項１２〜１７のいずれか一項に記載の使用のための組み合わせであって、前記対象が、一酸化窒素放出化合物を投与されない、オメガ−３脂肪酸、ビタミンＤ若しくはその代謝産物、血漿ホモシステインのレベルを低減することができる薬剤、又は組み合わせ。
【請求項１９】
請求項９又は１３〜１８のいずれか一項に記載の使用のためのオメガ−３脂肪酸、請求項１０又は１３〜１８のいずれか一項に記載の使用のためのビタミンＤ若しくはその代謝産物、請求項１１又は１３〜１８のいずれか一項に記載の使用のための血漿ホモシステインのレベルを低減することができる薬剤、又は請求項１２〜１８のいずれか一項に記載の使用のための組み合わせであって、前記対象が、老化しているヒト対象、好ましくは５０歳以上のヒト対象である、オメガ−３脂肪酸、ビタミンＤ若しくはその代謝産物、血漿ホモシステインのレベルを低減することができる薬剤、又は組み合わせ。
【請求項２０】
請求項９又は１３〜１９のいずれか一項に記載の使用のためのオメガ−３脂肪酸、請求項１０又は１３〜１９のいずれか一項に記載の使用のためのビタミンＤ若しくはその代謝産物、請求項１１又は１３〜１９のいずれか一項に記載の使用のための血漿ホモシステインのレベルを低減することができる薬剤、又は請求項１２〜１９のいずれか一項に記載の使用のための組み合わせであって、前記オメガ−３脂肪酸、ビタミンＤ若しくはその代謝産物、及び／又は血漿ホモシステインのレベルを低減することができる薬剤が、ビタミンＢ１２と同時に、順次に、又は別々に前記対象に投与され、前記ビタミンＢ１２は、１日当たりビタミンＢ１２のＲＤＡの０．１〜４０倍の用量、又は１日当たりビタミンＢ１２のＲＤＡの５０〜５００倍の用量で投与される、オメガ−３脂肪酸、ビタミンＤ若しくはその代謝産物、血漿ホモシステインのレベルを低減することができる薬剤、又は組み合わせ。
【請求項２１】
請求項９又は１３〜２０のいずれか一項に記載の使用のためのオメガ−３脂肪酸、請求項１０又は１３〜２０のいずれか一項に記載の使用のためのビタミンＤ若しくはその代謝産物、請求項１１又は１３〜２０のいずれか一項に記載の使用のための血漿ホモシステインのレベルを低減することができる薬剤、又は請求項１２〜２０のいずれか一項に記載の使用のための組み合わせであって、前記対象が、ヒト対象又はコンパニオンアニマル対象である、オメガ−３脂肪酸、ビタミンＤ若しくはその代謝産物、血漿ホモシステインのレベルを低減することができる薬剤、又は組み合わせ。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、対象における認知機能の低下の素因を特定するための方法、及び認知機能の低下を軽減若しくは予防するための薬剤、又は認知能力を改善するための薬剤に関し、特に、本発明の方法により特定された対象における認知機能の低下を軽減若しくは予防、又は認知能力を改善するための薬剤に関する。
【背景技術】
【０００２】
人口の高齢化は、注目すべき人口統計事象である。寿命の延長により、高齢者人口の増加が総人口の増加を上回るにつれて、高齢者人口の他の人口に対する割合は、出生率の低下もあって大幅に増加している。例えば、１９５０年代には６０歳以上の高齢者は１２人に１人であったのが、２０００年代の終わりには６０歳以上の高齢者は１０人に１人となっていた。２０５０年の終わりには、世界全体で５人に１人が６０歳以上になっているものと予測される。
【０００３】
高齢又は加齢個体は、年齢と共に進行する認知機能の低下を含む、ある程度の認知障害を患うことが多く、通常、年齢に関連する脳形態及び脳血管機能の変化が観察される。認知機能の低下は、処理速度、注意、エピソード記憶、空間能力、及び遂行機能を含む広範な認知領域の老化と併せて報告されている。脳の画像解析により、これらの正常な加齢に関連する認知機能の低下は、脳における灰白質及び白質の両方の容積の減少に関連しており、老化に伴って最も強く損傷を受けるのは前頭線条体系であることが判明している。このような皮質容積の減少は、時間経過に伴い酸化的損傷をもたらすフリーラジカルによる損傷の蓄積、慢性的な軽度の炎症、ホモシステイン（Ｈｃｙ）の蓄積、及びミトコンドリア効率の低下などの、通常の老化に関与する多くの有害な細胞プロセスに起因する場合がある。直接的な細胞の損傷に加え、脳は、微小血管構造の傷害からも間接的な損傷を受ける。老化、更には認知症の病理が、これらの因子間の複雑な相互作用を内包すること、また各作用は相関するものであることは明らかである。例えば、ミトコンドリアの機能不全は結果として酸化ストレスを増加させ、酸化ストレスは炎症及び血管損傷のトリガーとなり得る。
【０００４】
更に、認知機能の低下はアルツハイマー病理の初期の予測因子であり、認知症の発症前に始まる。この場合、認知についての総合得点が、認知症前の認知機能の低下を評価するための信頼性の高い手段となる。脳の健康を維持し、加齢に伴う認知機能の低下を予防することは、アルツハイマー病及び加齢に関連する他の神経病理に起因する認知症の発症を予防又は先延ばしできることが、相当のエビデンスにより示されている。
【０００５】
近年、栄養摂取、学習、運動及び認知エクササイズが、加齢による認知機能の低下を予防し得る介入方法として実証されている。豊富な臨床的、疫学的、及び個別的エビデンスにより、個々の栄養因子が、加齢に関連する神経変性及び認知症リスクを低減することが裏付けられている。しかし、栄養学的介入についての公式の試験により得られた結果は錯綜している（Ｓｃｈｍｉｔｔ  ｅｔ  ａｌ．（２０１０）Ｎｕｔｒｉｔｉｏｎ  Ｒｅｖｉｅｗｓ  ６８：Ｓ２−Ｓ５）。
【０００６】
いくつかの長期試験が行われたが、Ｂ６と、Ｂ１２と、葉酸塩との組み合わせを使用した介入では、認知機能に対するいかなる利益も観察されなかった。ＭｃＭａｈｏｎ  ｅｔ  ａｌ．（２００６）Ｎ  Ｅｎｇｌ  Ｊ  Ｍｅｄ  ３５４（２６）：２７６４−２７７２では、葉酸塩（１０００μｇ）と、ビタミンＢ１２（５００μｇ）と、Ｂ６（１０ｍｇ）とを含有する栄養補助食品を２年摂取した後の６５歳超の成人の認知において効果は見られなかった。同様に、Ｈａｎｋｅｙ  ｅｔ  ａｌ．（２０１３）Ｓｔｒｏｋｅ  ４４（８）：２２３２−２２３９）によると、脳卒中又は一過性虚血発作の既往があるものの認知機能は損なわれていない患者に対し、葉酸（２０００μｇ）、ビタミンＢ６（２５ｍｇ）及びビタミンＢ１２（５００μｇ）を毎日補給させた場合、中央値で２．８年の間、平均ｔＨｃｙが低下したが、ミニメンタルステート検査（ＭＭＳＥ）によって測定される認知障害又は認知機能の低下の発生には効果がなかったことが判明している。
【０００７】
いくつかの短期試験においてもまた、認知機能の改善について、Ｂ６と、Ｂ１２と、葉酸塩とを組み合わせることによる効果を示すことができなかった。Ｌｅｗｅｒｉｎ  ｅｔ  ａｌ．（２００５）Ａｍ  Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ｎｕｔｒ  ８１（５）：１１５５−１１６２では、葉酸（８００μｇ）、ビタミンＢ１２（５００μｇ）及びビタミンＢ６（３ｍｇ）の４ヶ月間の補給では、高齢者（年齢中央値７６歳）における認知に効果はなかったことが判明している。
【０００８】
したがって、対象における認知機能の低下を軽減若しくは予防、又は認知能力を改善する方法が依然として強く必要とされている。更に、認知機能の低下の素因がある対象を特定すること、例えば、認知機能の低下の発生及び／又は程度を軽減するために、それらの対象における早期の介入治療を可能にすることが必要とされている。
【発明の概要】
【０００９】
本発明者らは、マルチドメインアルツハイマー予防試験（Ｍｕｌｔｉ−ｄｏｍａｉｎ  Ａｌｚｈｅｉｍｅｒ  Ｐｒｅｖｅｎｔｉｖｅ  Ｔｒｉａｌ、ＭＡＰＴ；７０歳以上の１６８０人の認知症ではない成人の認知機能の低下の予防において、オメガ３栄養補助食品、栄養カウンセリングと、身体運動と、認知的エンゲージメント（ｃｏｇｎｉｔｉｖｅ  ｅｎｇａｇｅｍｅｎｔ）とからなるマルチドメイン介入、又は栄養補助食品とマルチドメイン介入との組み合わせの効果を、プラセボに対して評価するように設計された研究）に由来する保存された生体試料を利用し、認知機能の低下及び認知症に向かう異なる経路を表す３つのバイオマーカーを定量した。バイオマーカーは、一炭素代謝障害のマーカーとしてホモシステインと、脳におけるビタミンＤ結合タンパク質及び受容体活性の障害についてのステロイドホルモンマーカーとして２５−ヒドロキシビタミンＤと、脂肪酸代謝の指標であるオメガ３指数とした。本発明者らは、これらのマーカーのそれぞれが認知機能の低下に関する独立したリスク因子であり、これらが組み合わせられることで、認知機能の低下速度が増すことを見出した。
【００１０】
これらの知見に基づいて、本発明者らは、オメガ−３脂肪酸、ホモシステイン及びビタミンＤレベルに基づく「栄養リスク指数（ＮＲＩ）」を開発した。この指数は、年齢、性別、教育、ＡＰＯＥ４遺伝子型及び介入アームとは無関係に、認知機能の低下の推移が異なる成人を特定する。ＮＲＩにおける各点の増加は、３年にわたって認知機能の低下がより加速されていることに関連する。これらのデータは、ビタミンＤ３及び赤血球オメガ３脂肪酸が低レベルであることに起因する栄養リスクを軽減すること、及び／又は高レベルホモシステインは、加齢に関連する認知機能の低下を軽減若しくは予防できること又は認知能力を改善できることを示唆している。
【００１１】
更に、本発明者らは、認知機能の低下、認知症リスク、及び加齢関連神経変性の低減を試みる従来の栄養学的介入は、栄養素を単独で投与することに目を向けており、十分な認識のもとにそれらを組み合わせて、栄養素の相互作用により効果を増強させるものではなかったものと考える。更に、認知機能に対する混合成分の効果を調査した研究では、構成成分の全てが同じ機序を標的とする混合物（例えば、ホモシステインのレベルを標的とする葉酸塩とビタミンＢ１２とＢ６との混合物、又は酸化的損傷を標的とするビタミンＣとビタミンＥの混合物）を使用しており、この点が、このエビデンスが単一成分による研究と同様の矛盾を示す理由である可能性がある。対照的に、本開示は、介入治療のそれぞれが認知機能の低下に関連する異なるリスク要因を標的とする、複数の介入によるアプローチに関する。
【００１２】
したがって、一態様では、本発明は対象における認知機能の低下の素因を特定するための方法であって、対象から得られた１つ以上の試料において、独立して、
（ａ）オメガ−３脂肪酸、及びビタミンＤ若しくはその代謝産物、
（ｂ）オメガ−３脂肪酸、及びホモシステイン、
（ｃ）ビタミンＤ若しくはその代謝産物、及びホモシステイン、又は
（ｄ）オメガ−３脂肪酸、ビタミンＤ若しくはその代謝産物、及びホモシステイン
のレベルを測定することを含む、方法を提供する。
【００１３】
一実施形態では、この方法は、オメガ−３脂肪酸、及びビタミンＤ若しくはその代謝産物のレベルを測定することを含む。一実施形態では、この方法は、オメガ−３脂肪酸、及びホモシステインのレベルを測定することを含む。一実施形態では、この方法は、ビタミンＤ若しくはその代謝産物、及びホモシステインのレベルを測定することを含む。
【００１４】
好ましい実施形態では、この方法は、オメガ−３脂肪酸、ビタミンＤ若しくはその代謝産物、及びホモシステインのレベルを測定することを含む。
【００１５】
一実施形態では、この方法は、
（ａ）対象から得られた１つ以上の試料において、独立して、オメガ−３脂肪酸、ビタミンＤ若しくはその代謝産物、又はホモシステインのうち２つ以上のレベルを測定することと、
（ｂ）オメガ−３脂肪酸、ビタミンＤ若しくはその代謝産物、又はホモシステインのうちの２つ以上のレベルを、２つ以上の基準値と比較することと、を含み、
２つ以上の基準値と比較したオメガ−３脂肪酸、ビタミンＤ若しくはその代謝産物、又ホモシステインの２つ以上のレベルは、対象における認知機能の低下の素因を示す。
【００１６】
一実施形態では、
（ａ）オメガ−３脂肪酸のレベルが測定され、基準値と比較した、対象由来の試料中のオメガ−３脂肪酸のレベルの減少が、認知機能の低下の素因を示す、
（ｂ）ビタミンＤ若しくはその代謝産物のレベルが測定され、基準値と比較した、対象由来の試料中のビタミンＤ若しくはその代謝産物のレベルの減少が、認知機能の低下の素因を示す、及び／又は
（ｃ）ホモシステインのレベルが測定され、基準値と比較した、対象由来の試料中のホモシステインのレベルの増加が、認知機能の低下の素因を示す。
【００１７】
一実施形態では、１つ以上の試料は、血液試料、血漿試料、及び血清試料からなる群から独立して選択される。
【００１８】
一実施形態では、オメガ−３脂肪酸のレベルは、血液試料、好ましくは赤血球試料で測定される。一実施形態では、ビタミンＤ若しくはその代謝産物のレベルは、血清試料で測定される。一実施形態では、ホモシステインのレベルは、血漿試料で測定される。
【００１９】
一実施形態では、オメガ−３脂肪酸は、エイコサペンタエン酸（ＥＰＡ）及び／又はドコサヘキサエン酸（ＤＨＡ）である。好ましい実施形態では、オメガ−３脂肪酸は、赤血球膜ＥＰＡ及び／又は赤血球膜ＤＨＡである。
【００２０】
一実施形態では、オメガ−３脂肪酸はＥＰＡである。一実施形態では、オメガ−３脂肪酸はＤＨＡである。一実施形態では、オメガ−３脂肪酸はＥＰＡ及びＤＨＡである。好ましい実施形態では、オメガ−３脂肪酸は赤血球膜ＥＰＡである。好ましい実施形態では、オメガ−３脂肪酸は赤血球膜ＤＨＡである。特に好ましい実施形態では、オメガ−３脂肪酸は、赤血球膜ＥＰＡ及び赤血球膜ＤＨＡである。
【００２１】
一実施形態では、ビタミンＤ若しくはその代謝産物は、ビタミンＤ３、ビタミンＤ２、２５−ヒドロキシビタミンＤ３及び／又は２５−ヒドロキシビタミンＤ２である。
【００２２】
一実施形態では、ビタミンＤ若しくはその代謝産物はビタミンＤ３である。一実施形態では、ビタミンＤ若しくはその代謝産物はビタミンＤ２である。一実施形態では、ビタミンＤ若しくはその代謝産物は、２５−ヒドロキシビタミンＤ３である。一実施形態では、ビタミンＤ若しくはその代謝産物は、２５−ヒドロキシビタミンＤ２である。
【００２３】
好ましい実施形態では、ビタミンＤ若しくはその代謝産物は、２５−ヒドロキシビタミンＤである。好ましい実施形態では、ビタミンＤ若しくはその代謝産物は、２５−ヒドロキシビタミンＤ３及び２５−ヒドロキシビタミンＤ２である。
【００２４】
一実施形態では、試料中のオメガ３脂肪酸のレベルは、ガスクロマトグラフィーを使用して測定される。一実施形態では、試料中のビタミンＤ若しくはその代謝産物のレベルは、電気化学発光結合アッセイを使用して測定される。一実施形態では、試料中のホモシステインのレベルは、酵素サイクリングアッセイを用いて測定される。
【００２５】
一実施形態では、対象はヒト対象者である。
【００２６】
一実施形態では、対象は老化しているヒト対象である。一実施形態では、対象は、少なくとも５０歳、５５歳、６０歳、６５歳、７０歳、７５歳、８０歳、８５歳、９０歳又は９５歳のヒト対象である。好ましい実施形態では、対象は、５０歳以上のヒト対象である。特に好ましい実施形態では、対象は、７０歳以上のヒト対象である。
【００２７】
一実施形態では、対象は認知症を有さない。
【００２８】
一実施形態では、対象は、ベースラインで０．５の臨床的認知症尺度（ＣＤＲ）を有する。
【００２９】
一実施形態では、対象は、ベースラインで心臓血管リスク因子、加齢及び認知症（Ｃａｒｄｉｏｖａｓｃｕｌａｒ  Ｒｉｓｋ  Ｆａｃｔｏｒｓ，Ａｇｉｎｇ  ａｎｄ  Ｄｅｍｅｎｔｉａ、ＣＡＩＤＥ）において１０〜１５のリスクスコアを有する。
【００３０】
一実施形態では、対象は、ベースラインでアミロイドＰＥＴスキャンにおいてアミロイド陽性である。
【００３１】
一実施形態では、対象は、認知機能の低下のリスクを示す遺伝子型を有する。一実施形態では、対象はＡＰＯＥ４キャリアである。
【００３２】
別の実施形態では、対象は、年齢、血管リスク因子（例えば、高血圧及び／又は糖尿病）、ＡＰＯＥ４遺伝子型、アミロイド陽性（例えば、アミロイドＰＥＴスキャンによる）、白質損傷の存在、脳小血管疾患の他の兆候（例えば、梗塞及び／又はラクナ梗塞）及びうつ病からなる群から選択される１つ以上のリスク因子によって決定される認知症のリスクがある。
【００３３】
一実施形態では、方法は、オメガ−３脂肪酸、ビタミンＤ若しくはその代謝産物、及び／又はホモシステインのレベルを、対象の１つ以上の身体計測値及び／又は生活習慣特性と組み合わせることを更に含む。好ましくは、身体計測値は、性別、体重、身長、年齢、及び体格指数からなる群から選択される。好ましくは、生活習慣特性は、対象が喫煙者又は非喫煙者のいずれであるかである。
【００３４】
一実施形態では、方法は、オメガ−３脂肪酸、ビタミンＤ若しくはその代謝産物、及び／又はホモシステインのレベルを対象の性別と組み合わせることを更に含む。
【００３５】
一実施形態では、方法は、オメガ−３脂肪酸、ビタミンＤ若しくはその代謝産物、及び／又はホモシステインのレベルを対象の年齢と組み合わせることを更に含む。
【００３６】
好ましくは、方法は、インビトロでの方法である。
【００３７】
別の態様では、本発明は、対象における認知機能の低下の軽減若しくは予防、又は認知能力を改善するための使用するためのオメガ−３脂肪酸であって、ビタミンＤ若しくはその代謝産物、及び／又は、血漿ホモシステインのレベルを低減することができる薬剤と同時に、順次に、又は別々に対象に投与される、オメガ−３脂肪酸を提供する。
【００３８】
一実施形態では、オメガ−３脂肪酸は、ビタミンＤ若しくはその代謝産物と同時に、順次に、又は別々に対象に投与される。一実施形態では、オメガ−３脂肪酸は、血漿ホモシステインのレベルを低減することができる薬剤と同時に、順次に、又は別々に対象に投与される。好ましい実施形態では、オメガ−３脂肪酸は、ビタミンＤ若しくはその代謝産物、及び、血漿ホモシステインのレベルを低減することができる薬剤と同時に、順次に、又は別々に対象に投与される。
【００３９】
別の態様では、本発明は、対象における認知機能の低下の軽減若しくは予防、又は認知能力の改善に使用するためのビタミンＤ若しくはその代謝産物であって、オメガ−３脂肪酸、及び／又は、血漿ホモシステインのレベルを低減することができる薬剤と同時に、順次に、又は別々に対象に投与される、ビタミンＤ若しくはその代謝産物を提供する。
【００４０】
一実施形態では、ビタミンＤ若しくはその代謝産物は、オメガ−３脂肪酸と同時に、順次に、又は別々に対象に投与される。一実施形態では、ビタミンＤ若しくはその代謝産物は、血漿ホモシステインのレベルを低減することができる薬剤と同時に、順次に、又は別々に対象に投与される。好ましい実施形態では、ビタミンＤ若しくはその代謝産物は、オメガ−３脂肪酸、及び、血漿ホモシステインのレベルを低減することができる薬剤と同時に、順次に、又は別々に対象に投与される。
【００４１】
別の態様では、本発明は、対象における認知機能の低下の軽減若しくは予防、又は認知能力の改善に使用するための血漿ホモシステインのレベルを低減することができる薬剤であって、オメガ−３脂肪酸及び／又はビタミンＤ若しくはその代謝産物と同時に、順次に、又は別々に対象に投与される、血漿ホモシステインのレベルを低減することができる薬剤を提供する。
【００４２】
一実施形態では、血漿ホモシステインのレベルを低減することができる薬剤は、オメガ−３脂肪酸と同時に、順次に、又は別々に対象に投与される。一実施形態では、血漿ホモシステインのレベルを低減することができる薬剤は、ビタミンＤ若しくはその代謝産物と同時に、順次に、又は別々に対象に投与される。好ましい実施形態では、血漿ホモシステインのレベルを低減することができる薬剤は、オメガ−３脂肪酸、及びビタミンＤ若しくはその代謝産物と同時に、順次に、又は別々に対象に投与される。
【００４３】
別の態様では、本発明は、対象における認知機能の低下の低減又は予防に使用するための、（ａ）オメガ−３脂肪酸と、（ｂ）ビタミンＤ若しくはその代謝産物と、（ｃ）血漿ホモシステインのレベルを低減することができる薬剤との組み合わせであって、（ａ）、（ｂ）及び（ｃ）は、同時に、順次に、又は別々に対象に投与される、組み合わせを提供する。
【００４４】
別の態様では、本発明は、対象における認知機能の低下を軽減若しくは予防、又は認知能力を改善するための方法であって、
（ａ）オメガ−３脂肪酸、及びビタミンＤ若しくはその代謝産物、
（ｂ）オメガ−３脂肪酸、及び、血漿ホモシステインのレベルを低減することができる薬剤、
（ｃ）ビタミンＤ若しくはその代謝産物、及び、血漿ホモシステインのレベルを低減することができる薬剤、又は
（ｄ）オメガ−３脂肪酸、ビタミンＤ若しくはその代謝産物、及び、血漿ホモシステインのレベルを低減することができる薬剤を、
対象に投与することを含む方法を提供する。
【００４５】
一実施形態では、使用又は方法は、対象における認知機能の低下を軽減若しくは予防するためのものである。別の実施形態では、使用又は方法は、対象における認知能力を改善するためのものである。
【００４６】
好ましい実施形態では、この方法は、オメガ−３脂肪酸、ビタミンＤ若しくはその代謝産物、及び、血漿ホモシステインのレベルを低減することができる薬剤を、対象に投与することを含む。
【００４７】
一実施形態では、対象は、本発明の方法によって認知機能の低下の素因があると特定された対象である。
【００４８】
一実施形態では、オメガ−３脂肪酸は、エイコサペンタエン酸（ＥＰＡ）及び／又はドコサヘキサエン酸（ＤＨＡ）である。
【００４９】
一実施形態では、オメガ−３脂肪酸はＥＰＡである。一実施形態では、オメガ−３脂肪酸はＤＨＡである。一実施形態では、オメガ−３脂肪酸はＥＰＡ及びＤＨＡである。
【００５０】
一実施形態では、ビタミンＤ若しくはその代謝産物は、ビタミンＤ３、ビタミンＤ２、２５−ヒドロキシビタミンＤ３及び／又は２５−ヒドロキシビタミンＤ２である。
【００５１】
一実施形態では、ビタミンＤ若しくはその代謝産物はビタミンＤ３である。一実施形態では、ビタミンＤ若しくはその代謝産物はビタミンＤ２である。一実施形態では、ビタミンＤ若しくはその代謝産物は、２５−ヒドロキシビタミンＤ３である。一実施形態では、ビタミンＤ若しくはその代謝産物は、２５−ヒドロキシビタミンＤ２である。
【００５２】
一実施形態では、ビタミンＤ若しくはその代謝産物は、２５−ヒドロキシビタミンＤである。一実施形態では、ビタミンＤ若しくはその代謝産物は、２５−ヒドロキシビタミンＤ３及び２５−ヒドロキシビタミンＤ２である。
【００５３】
一実施形態では、血漿ホモシステインのレベルを低減することができる薬剤は、ビタミンＢ６及び／又はビタミンＢ９である。
【００５４】
一実施形態では、血漿ホモシステインのレベルを低減することができる薬剤は、ビタミンＢ６である。一実施形態では、血漿ホモシステインのレベルを低減することができる薬剤は、ビタミンＢ９である。一実施形態では、血漿ホモシステインのレベルを低減することができる薬剤は、ビタミンＢ６及びビタミンＢ９である。
【００５５】
他の実施形態では、血漿ホモシステインのレベルを低減することができる薬剤は、ベタイン（トリメチルグリシン）である。
【００５６】
一実施形態では、対象は一酸化窒素放出化合物を投与されない。
【００５７】
一実施形態では、オメガ−３脂肪酸、ビタミンＤ若しくはその代謝産物、及び／又は、血漿ホモシステインのレベルを低減することができる薬剤は、一酸化窒素放出化合物と同時に、順次に、又は別々に投与されない。
【００５８】
一実施形態では、対象はヒト対象である。
【００５９】
一実施形態では、対象は老化しているヒト対象である。一実施形態では、対象は、少なくとも５０歳、５５歳、６０歳、６５歳、７０歳、７５歳、８０歳、８５歳、９０歳又は９５歳のヒト対象である。好ましい実施形態では、対象は、５０歳以上のヒト対象である。特に好ましい実施形態では、対象は、７０歳以上のヒト対象である。
【００６０】
一実施形態では、対象は認知症を有さない。
【００６１】
一実施形態では、対象は、ベースラインで０．５の臨床的認知症尺度（ＣＤＲ）を有する。
【００６２】
一実施形態では、対象は、ベースラインで心臓血管リスク因子、加齢及び認知症（ＣＡＩＤＥ）において１０〜１５のリスクスコアを有する。
【００６３】
一実施形態では、対象は、ベースラインでアミロイドＰＥＴスキャンにおいてアミロイド陽性である。
【００６４】
一実施形態では、対象は、認知機能の低下のリスクを示す遺伝子型を有する。一実施形態では、対象はＡＰＯＥ４キャリアである。
【００６５】
別の実施形態では、対象は、年齢、血管リスク因子（例えば、高血圧及び／又は糖尿病）、ＡＰＯＥ４遺伝子型、アミロイド陽性（例えば、アミロイドＰＥＴスキャンによる）、白質損傷の存在、脳小血管疾患の他の兆候（例えば、梗塞及び／又は損傷）及びうつ病からなる群から選択される１つ以上のリスク因子によって決定される認知症のリスクがある。
【００６６】
一実施形態では、投与は食事介入である。
【００６７】
一実施形態では、オメガ−３脂肪酸、ビタミンＤ若しくはその代謝産物、及び／又は、血漿ホモシステインのレベルを低減することができる薬剤は、少なくとも１ヶ月間、対象に毎日経口投与される。
【００６８】
一実施形態では、対象は、ビタミンＢ１、ビタミンＢ２、ビタミンＢ３、ビタミンＢ５、ビタミンＢ７及びビタミンＢ１２からなる群から選択される１種以上のビタミンＢを更に投与される。
【００６９】
好ましい実施形態では、対象はビタミンＢ１２を更に投与される。
【００７０】
好ましい実施形態では、血漿ホモシステインのレベルを低減することができる薬剤は、ビタミンＢ６であり、対象はビタミンＢ１２を更に投与される。
【００７１】
一実施形態では、対象は、オメガ−３脂肪酸、ビタミンＤ若しくはその代謝産物、血漿ホモシステインのレベルを低減することができる薬剤、及びビタミンＢ１２を投与され、血漿ホモシステインのレベルを低減することができる薬剤はビタミンＢ６である。
【００７２】
一実施形態では、ビタミンＢ１２は、１日当たりビタミンＢ１２のＲＤＡの０．１〜４０倍、好ましくは１日当たりビタミンＢ１２のＲＤＡの１０〜４０、１０〜３０又は１０〜２５倍、より好ましくは１日当たりビタミンＢ１２のＲＤＡの１２〜２１倍の用量で投与される。
【００７３】
一実施形態では、オメガ−３脂肪酸、ビタミンＤ若しくはその代謝産物、及び／又は、血漿ホモシステインのレベルを低減することができる薬剤は、ビタミンＢ１２と同時に、順次に、又は別々に対象に投与され、ビタミンＢ１２は、１日当たり、ビタミンＢ１２のＲＤＡの０．１〜４０倍、好ましくは１日当たり、ビタミンＢ１２のＲＤＡの１０〜４０、１０〜３０又は１０〜２５倍、より好ましくは１日当たり、ビタミンＢ１２のＲＤＡの１２〜２１倍の用量で投与される。
【００７４】
他の実施形態では、オメガ−３脂肪酸、ビタミンＤ若しくはその代謝産物、及び／又は、血漿ホモシステインのレベルを低減することができる薬剤は、ビタミンＢ１２と同時に、順次に、又は別々に対象に投与され、ビタミンＢ１２は、１日当たりビタミンＢ１２のＲＤＡの５０〜５００倍の容量、好ましくは１日当たりビタミンＢ１２のＲＤＡの１００〜３００倍の容量、より好ましくは１日当たりビタミンＢ１２のＲＤＡの１５０〜２５０倍の用量、例えば１日当たりビタミンＢ１２のＲＤＡの約２００倍の用量で投与される。
【００７５】
一実施形態では、対象は、ビタミンＣ、ビタミンＤ、ビタミンＥ及びセレンからなる群から選択される１種以上の酸化防止剤を更に投与される。
【００７６】
一実施形態では、本発明の使用又は方法は、記憶及び／又は学習の低下を軽減又は防止する。
【００７７】
一実施形態では、本発明の使用又は方法は、記憶及び／又は学習を改善する。
【００７８】
一実施形態では、本発明の使用又は方法は、神経細胞の細胞膜流動性の改善、神経細胞の可塑性及び活性の刺激、抗炎症性の改善、認知能力の支持又は維持、脳の性能の支持又は維持、脳の老化の低下、活発な精神及び脳の適応度の支持、健康な脳の支持又は維持、記憶の強化、遂行機能の強化、注意の強化、認知健康の維持及び／又は脳細胞の健康の維持を提供する。
【００７９】
一実施形態では、オメガ−３脂肪酸、ビタミンＤ若しくはその代謝産物、及び／又は、血漿ホモシステインのレベルを低減することができる薬剤は、食品製品の形態であり、好ましくはタンパク質、炭水化物、脂肪、及びこれらの組み合わせからなる群から選択される成分を更に含む。
【００８０】
一実施形態では、オメガ−３脂肪酸、ビタミンＤ若しくはその代謝産物、及び／又は、血漿ホモシステインのレベルを低減することができる薬剤は、医薬的に許容される担体、希釈剤又は賦形剤を更に含む医薬組成物の形態である。
【００８１】
別の態様では、本発明は、脳萎縮の減少、シナプスの数の増加又は維持、アミロイド−β食作用の増加又は維持、及び神経炎症の減少からなる群から選択される１つ以上の利益を、これらの利益を必要とする対象において達成する方法であって、
（ａ）オメガ−３脂肪酸、及びビタミンＤ若しくはその代謝産物、
（ｂ）オメガ−３脂肪酸、及び、血漿ホモシステインのレベルを低減することができる薬剤、
（ｃ）ビタミンＤ若しくはその代謝産物、及び、血漿ホモシステインのレベルを低下させることができる薬剤、又は
（ｄ）オメガ−３脂肪酸、ビタミンＤ若しくはその代謝産物、及び、血漿ホモシステインのレベルを低減することができる薬剤を、
当該対象に投与することを含む、方法を提供する。
【００８２】
好ましい実施形態では、方法は、オメガ−３脂肪酸、ビタミンＤ若しくはその代謝産物、及び、血漿ホモシステインのレベルを低減することができる薬剤を、対象に投与することを含む。
【００８３】
別の態様では、本発明は、認知症のリスクのある対象における認知症を低減又は予防する方法であって、治療有効量のオメガ−３脂肪酸、ビタミンＢ６、及びビタミンＢ９を含む組成物を、対象に投与することを含む、方法を提供する。
【００８４】
（ａ）オメガ−３脂肪酸、及びビタミンＤ若しくはその代謝産物、
（ｂ）オメガ−３脂肪酸、及び、血漿ホモシステインのレベルを低減することができる薬剤、
（ｃ）ビタミンＤ若しくはその代謝産物、及び、血漿ホモシステインのレベルを低下させることができる薬剤、又は
（ｄ）オメガ−３脂肪酸、ビタミンＤ若しくはその代謝産物、及び、血漿ホモシステインのレベルを低減することができる薬剤を、
対象に。
【００８５】
好ましい実施形態では、方法は、オメガ−３脂肪酸、ビタミンＤ若しくはその代謝産物、及び、血漿ホモシステインのレベルを低減することができる薬剤を、対象に投与することを含む。
【００８６】
一実施形態では、認知症は、アルツハイマー病、血管性認知症、レヴィー小体認知症、前頭側頭型認知症及びそれらの組み合わせからなる群から選択される。
【００８７】
別の態様では、本発明は、対象における認知能力を改善する方法であって、
（ａ）オメガ−３脂肪酸、及びビタミンＤ若しくはその代謝産物、
（ｂ）オメガ−３脂肪酸、及び、血漿ホモシステインのレベルを低減することができる薬剤、
（ｃ）ビタミンＤ若しくはその代謝産物、及び、血漿ホモシステインのレベルを低下させることができる薬剤、又は
（ｄ）オメガ−３脂肪酸、ビタミンＤ若しくはその代謝産物、及び、血漿ホモシステインのレベルを低減することができる薬剤を、
対象に投与することを含む、方法を提供する。
【００８８】
好ましい実施形態では、方法は、オメガ−３脂肪酸、ビタミンＤ若しくはその代謝産物、及び、血漿ホモシステインのレベルを低減することができる薬剤を、対象に投与することを含む。
【００８９】
一実施形態では、対象は認知症を有さない。
【００９０】
別の態様において、本発明は対象の生活習慣の変更を選択する方法を提供し、
（ａ）本発明の方法に従い、対象に認知機能の低下の素因があるかどうかを判定することと、
（ｂ）認知機能の低下を予防若しくは軽減すること、又は認知能力を改善することができる生活習慣の変更を必要としていると特定された対象において、このような変更を選択することと、を含む。
【００９１】
一実施形態では、方法は、選択された生活習慣の変更を対象に適用することを更に含む。
【００９２】
一実施形態では、生活習慣の変更は、
（ａ）オメガ−３脂肪酸、及びビタミンＤ若しくはその代謝産物、
（ｂ）オメガ−３脂肪酸、及び、血漿ホモシステインのレベルを低減することができる薬剤、
（ｃ）ビタミンＤ若しくはその代謝産物、及び、血漿ホモシステインのレベルを低下させることができる薬剤、又は
（ｄ）オメガ−３脂肪酸、ビタミンＤ若しくはその代謝産物、及び、血漿ホモシステインのレベルを低減することができる薬剤を、
対象に投与することを含む。
【００９３】
好ましい実施形態では、この方法は、オメガ−３脂肪酸、ビタミンＤ若しくはその代謝産物、及び、血漿ホモシステインのレベルを低減することができる薬剤を、対象に投与することを含む。
【００９４】
別の態様では、本発明は、プログラム可能なコンピュータに、本明細書に開示される方法に従い、対象に認知機能の低下の素因があるかを判定させるための、コンピュータに実装可能な命令を含むコンピュータプログラム製品を提供する。
【００９５】
別の態様では、本発明は、プログラム可能なコンピュータに、ユーザーからのオメガ−３脂肪酸、ビタミンＤ若しくはその代謝産物、及び／又はホモシステインのレベルを考慮して、対象に認知機能の低下の素因があるかを判定させるための、コンピュータに実装可能な命令を含むコンピュータプログラム製品を提供する。
【図面の簡単な説明】
【００９６】
【図１】（Ａ）ＭＡＰＴにおけるベースライン栄養リスク指数に応じた３年間にわたる認知複合Ｚスコアにおける変化の平均勾配。栄養リスク指数は、ＲＢＣ  ＥＰＡ＋ＤＨＡ≦全体の４．８２重量％、血清ビタミンＤ≦２０ｎｇ／ｍＬ、血漿ホモシステイン≧１４のうちの各々に対して１ポイント増加する。（Ｂ）栄養リスク指数によりベースラインで特定された各別個の栄養リスクプロファイルに応じた３年間にわたる認知複合Ｚスコアにおける変化の平均勾配。図１Ｂは、認知機能の低下率が栄養リスク指数（ＮＲＩ）スコアによってどのように異なるかを示す図である。各対象に、以下の基準を満たすかどうかに応じて０又は１のスコアを割り当てる。血清２５−ヒドロキシビタミンＤ≦２０ｍｇ／ｍＬ＝１、そうでない場合には０；血漿ホモシステイン≧１４＝１、そうでない場合には０；ＲＢＣオメガ３≦全体の４．８２重量％＝１、そうでない場合には０。したがって、各対象には０〜３のＮＲＩが割り当てられ、ここでＮＲＩ＝３は認知機能の低下に関し栄養学的リスクが最も高いと見なされる。認知機能の変化は、３年にわたって４回の時点で測定される。  「低ｈ高ｄ高ｏ」線は、ＮＲＩ＝０を有する対象における認知機能の低下の速度を示す。「高ｈ高ｄ高ｏ」、「低ｈ低ｄ高ｏ」、及び「低ｈ高ｄ低ｏ」線は、ＮＲＩ＝１を有する対象における認知機能の低下の速度を示す。「高ｈ低ｄ高ｏ」、「低ｈ低ｄ低ｏ」及び「高ｈ高ｄ低ｏ」線は、ＮＲＩ＝２を有する対象における認知機能の低下の速度を示し、「高ｈ低ｄ低ｏ」線は、最も高い栄養リスク（ＮＲＩ＝３）を有する対象及びその認知機能の低下の速度を示す。
【図２】対象集団におけるビタミンＤレベル（ｎｇ／ｍＬ）の分布及び確率プロット。
【図３】対象集団におけるホモシステインのレベル（μｍｏｌ／Ｌ）の分布及び確率プロット。
【発明を実施するための形態】
【００９７】
本明細書で使用する場合、用語「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」、「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅｓ）」、及び「から構成される（ｃｏｍｐｒｉｓｅｄ  ｏｆ）」は、「含む（ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ）」又は「含む（ｉｎｃｌｕｄｅｓ）」又は「含有する（ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ）」又は「含有する（ｃｏｎｔａｉｎｓ）」と同義であり、包括的又は非限定的であり、追加の、列挙されていない構成要素、要素、又は工程を除外しない。用語「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」、「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅｓ）」、及び「から構成される（ｃｏｍｐｒｉｓｅｄ  ｏｆ）」はまた、用語「からなる（ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇ  ｏｆ）」を含む。
【００９８】
本明細書に記載する全てのパーセンテージは、別途記載のない限り組成物の総重量によるものである。
【００９９】
本明細書で使用される「食品」、「食品製品」及び「食品組成物」という用語は、ヒトなどの個体による摂取を対象とした製品又は組成物を意味し、個体に少なくとも１種の栄養を提供する。本明細書に記載の実施形態を含む本開示の組成物は、本明細書に開示される要素、並びに本明細書に記載の又はそうでない場合には規定食に有用な任意の追加成分若しくは任意成分、構成要素、若しくは要素を含むか、これらからなるか、又は本質的にこれらからなることができる。
【０１００】
本明細書で使用するとき、「有効量」とは、欠乏を予防する、個体の疾患若しくは医学的状態を治療する、又はより一般的には、症状を軽減させる、疾患の進行を管理する、若しくは個体に対して栄養学的、生理学的若しくは医学的利益を提供する、量である。本願明細書に開示される組成物の効果に関連する「改善された」、「増加した」、「高められた」等の相対的用語は、１つ以上の成分を欠く、及び／又は１つ以上の成分の量が異なるが、その他の成分については同一である組成物と比較した場合に用いられる。
【０１０１】
認知機能の低下及び老化
本明細書で使用するとき、用語「認知機能」及び「認知能力」は、個人が理念を意識、知覚、又は理解することによる知的プロセスを意味し得る。認知能力は、認知することの質を包含し、これには知覚、認識、構想、感知、思考、推論、記憶及び想像の全ての態様を含む。認知能力の低下とは、新たな情報又は状況への対処又は反応が困難なことをいう。認知機能の低下又は障害は、例えば短期記憶の喪失、学習能力の低下、学習速度の低下、注意力の低下、運動能力の低下、及び／又は他の兆候の中でもとりわけ認知症のような多くの方法で顕在化し得る。加齢と共に低下する能力を含む具体的な認知領域の非限定的な例には、（ｉ）注意：処理速度、並びに選択的及び分割的注意；（ｉｉ）学習及び記憶：遅延自由再生、情報源記憶、展望的記憶及びエピソード記憶；（ｉｉｉ）言語：発話流暢性、視覚性呼称及び喚語；（ｉｖ）視覚空間能力：視覚構築技能；並びに（ｖ）遂行機能：計画、意思決定、推論、及び精神的柔軟性がある。
【０１０２】
本明細書で使用するとき、用語「認知機能の老化」及び「加齢に関連する認知機能の低下」は、年齢を重ねるにつれ、例えば老齢から年齢を重ねるにつれ進行する認知能力の低下を意味し、脳形態及び／又は脳血管機能における加齢に関連する変化を含み得る。認知機能の老化は、頭部損傷又はうつ病などの、老化以外の基礎症状によって引き起こされる認知能力の障害を含まない。
【０１０３】
認知の水準及び改善は、情報処理速度、遂行機能及び記憶を評価するように設計された認知検査を含む、当該技術分野において既知である任意の好適な神経学及び認知検査を用いて、当業者により容易に評価することができる。好適な例示的試験としては、ミニメンタルステート検査（ＭＭＳＥ）、ケンブリッジ神経心理学的自動検査（ＣＡＮＴＡＢ）、アルツハイマー病評価尺度認知検査（ＡＤＡＳｃｏｇ）、ウィスコンシンカードソーティングテスト、言語及び図形流暢性検査、並びにトレイルメイキングテスト、脳波計（ＥＥＧ）、脳磁計（ＭＥＧ）、ポジトロン放出型断層撮影（ＰＥＴ）、単光子放出型コンピュータ断層撮影（ＳＰＥＣＴ）、磁気共鳴像画像（ＭＲＩ）、機能的磁気共鳴画像（ｆＭＲＩ）、コンピュータ断層撮影並びに長期増強が挙げられる。
【０１０４】
ＥＥＧ、脳の電気的活動度の測定は、様々なランドマークで頭皮に電極を配置し、脳信号を大きく増幅して記録することによって達成される。ＭＥＧは、電場に関係する磁場を測定するという点で、ＥＥＧに類似している。ＭＥＧは、神経系における同期波を含む自発的な脳活動を測定するために使用される。
【０１０５】
ＰＥＴは、酸素利用及びグルコース代謝の測定を提供する。この技術では、放射性ポジトロン放出トレーサーを投与し、脳によるトレーサーの取り込みは脳の活動度と相関する。これらのトレーサーはガンマ線を放出し、頭を取り囲むセンサによって検出され、脳活動の３Ｄマップをもたらす。トレーサーが脳によって取り込まれるとすぐに、局所的な脳血流量に応じ、放射能が検出される。活性化の間、脳血流量及び神経グルコース代謝の増大を、数秒以内に検出することができる。
【０１０６】
好適な分析はまた、神経心理学試験、臨床検査、及び認知機能喪失の個々の訴え（例えば、主観的記憶喪失）に基づくこともできる。
【０１０７】
認知機能の低下は、例えば、好適な試験におけるベースライン性能から、統計的に有意な差として解釈され得る。
【０１０８】
「認知症ではない」個体（本明細書では、「認知症を有さない」個体とも表現される）は、最大で０．５の臨床的認知症尺度を有する。ＣＤＲは、認知症の重症度を測定し、半構造化した対象及び情報提供者のインタビュー（Ｈｕｇｈｅｓ  ｅｔ  ａｌ．（１９８２）Ｂｒ．Ｊ．Ｐｓｙｃｈｉａｔｒｙ  １４０：５６６−７２）によって評価された０〜３（０、０．５、１、２及び３）の範囲のスコアによる認知症の国際的な評価である。臨床医は、記憶、見当識、判断及び問題解決、コミュニティの事象、家事及び趣味、並びに身の回りのケアを含む６つのドメインに基づいて認知能力及び機能性を総合的に扱う。この尺度は、評価者間でよく一致する。
【０１０９】
認知症ではない個体は、アルツハイマー病、血管性認知症、レヴィー小体認知症又は前頭側頭型認知症のいずれも有さない。いくつかの実施形態では、認知症ではない個体は健康な加齢個体である。他の実施態様では、認知症ではない個体は、加齢関連の認知障害に関連する表現型を有する。例えば、認知症ではない個体は、かかる表現型を有しない対照個体と比較したときに、思い出す能力の低下、短期記憶の喪失、学習速度の低下、学習能力の低下、問題解決能力の低下、注意持続時間の減少、運動能力の低下又は混乱増加、のうちの１つ以上を含む表現型を有し得る。
【０１１０】
認知機能の老化のリスクがある、認知症ではない個体の非限定例は、自然発症した記憶障害を有するヒトであるが、それでもなお、少なくとも２４のミニメンタルステート検査（ＭＭＳＥ）スコアを有し、少なくとも４の日常生活動作（ＡＤＬ）スコアによって示されるとおり基本的な日常活動における自立性を有する。本発明の課題解決のためのＭＭＳＥスコアは、例えば２４〜３０であってもよく、より好ましくは２６〜３０であってもよい。
【０１１１】
ＭＭＳＥは、非常に信頼性が高く、有効な手段であることが証明されており、神経変性疾患に関連する認知障害の進行を検出し、追跡するための、非常に簡便な、容易に制御／実施できる精神機能評価方法である。ＭＭＳＥは、７つのカテゴリ：場所に対する見当識（州、国、街、病院及び階）、時間に対する見当識（年、季節、月、日、及び日付）、見当合せ（３つの言葉をすぐに繰り返す）、注意力及び集中力（連続的に７を差し引く、１００から始める、あるいは単語を後方から綴る）、想起（以前に繰り返された３つの単語を呼び出す）、言語（２つの項目の名前を言う、フレーズを復唱する、音読して文章を理解する、文章を書く、及び３段階の命令に従う）、並びに視覚情報の構築（図形の模写）にグループ化された３０点からなる完全に構造化されたスケールである（Ｆｏｌｓｔｅｉｎ  ｅｔ  ａｌ．（１９７５）Ｊ．Ｐｓｙｃｈｉａｔ．Ｒｅｓ．１２：１８９−１９８）。
【０１１２】
ＭＭＳＥは、正確に完了した項目の数に関してスコアリングされ、スコアが低くなるほど能力は乏しくなり、より大きな認知障害を示す。合計スコアは０〜３０の範囲となる。
【０１１３】
ＡＤＬは、ＡＤを有する又は有さない人の日常生活動作を評価するための、情報提供者ベースの日常生活動作スケールとして広く用いられている手段である。この手段は、広範囲にわたる能力を評価する。ＡＤＬは、障害のない対照と比較して、軽度に障害のある個体間の変化に対する感度を示し、機能的変化を捕捉することができる（Ｇａｌａｓｋｏ  ｅｔ  ａｌ．（１９９７）Ａｌｚｈｅｉｍｅｒ  Ｄｉｓ．Ａｓｓｏｃ．Ｄｉｓｏｒｄ．１１  Ｓｕｐｐｌ．２：Ｓ３３−９）。
【０１１４】
本願明細書で前述したように、脳の健康を維持し、加齢による認知機能の低下を予防することにより、認知症の発症を予防又は先延ばしできることを、多くのエビデンスが示唆している。したがって、認知機能の低下又は老化を予防又は低減する本明細書に開示される方法はまた、究極的にはアルツハイマー病などの認知症を予防することができる。したがって、本開示の別の態様は、認知症のリスクがある個体における認知症を予防する方法である。本発明は、本明細書に開示される組成物を治療有効量で個体に投与することを含む方法に関する。予防される認知症は、アルツハイマー病、血管性認知症、レヴィー小体認知症、前頭側頭型認知症及びそれらの組み合わせからなる群から選択され得る。
【０１１５】
アルツハイマー病
アルツハイマー病は、脳の領域の萎縮によって引き起こされる。萎縮を引き起こすものは既知ではないが、研究によりアルツハイマー病患者の脳にアミロイド斑、神経原線維変化及びアセチルコリンの不均衡が認められている。健常ニューロンを損傷する可能性のある、脳における血管損傷はまた、アルツハイマー患者において共通である。
【０１１６】
アルツハイマー病は、複数の脳機能に影響を及ぼす進行状態である。病気の早期徴候には、通常、例えば、最近の出来事、又は場所及び物の名前を忘れるなどといった軽度の記憶障害が含まれる。疾患が進行すると、記憶障害がより深刻になり、混乱、方向感覚の喪失、意思決定の困難化、言葉及び言語の問題、性格の変化のような追加症状が生じる場合がある。
【０１１７】
血管性認知症
血管性認知症は、脳への血流の減少により脳細胞が損傷することで生じる。血流の減少は多くの原因で発生し得、脳内の血管の狭窄（皮質下血管性認知症）、脳卒中（単一梗塞性認知症）及び多数の小規模脳卒中（多発梗塞性認知症）を含む。血流の減少は、アルツハイマー病、混合型認知症と呼ばれる組み合わせによって更に引き起こされる場合がある。
【０１１８】
血管性認知症の早期症状は、思考の遅れ、計画の困難化、言語の困難化、注意と集中の問題、行動の変化が含まれる。症状は典型的には段階的に悪化し、数か月又は数年の安定期を挟む。
【０１１９】
パーキンソン病
パーキンソン病は、黒質の神経細胞が漸進的に損傷される状態である。脳のこの領域の神経細胞は、体の動きを制御する脳部位及び神経系部位間のメッセンジャーとして作用するドーパミンを産生する。これらの神経細胞に対する損傷により、脳内で産生されるドーパミン量が減少し、動きを制御する脳部位の機能が低下するという影響が生じる。
【０１２０】
パーキンソン病の症状は、振戦、動作緩慢、及び筋肉の強剛と固縮を含む。パーキンソン病患者はまた、うつ病、便秘、不眠症、無臭覚症及び記憶障害を含む更なる症状を経験することもあり得る。
【０１２１】
バイオマーカーのレベルの決定
試料中の個々のバイオマーカー種のレベルを、当該技術分野で知られている任意の好適な方法によって測定又は判定することができる。例えば、質量分析（ＭＳ）、抗体に基づく検出方法（例えば酵素結合免疫吸着アッセイ、ＥＬＩＳＡ）、非抗体タンパク質による足場に基づく方法（例えばフィブロネクチン足場）、放射免疫測定法（ＲＩＡ）又はアプタマーに基づく方法を用いてもよい。他の分光法、クロマトグラフ法、標識技術、又は定量化学的な方法もまた用いることができる。
【０１２２】
個体のバイオマーカーのレベルを測定するための好適な例示的方法を以下に記載する。
【０１２３】
２５−ヒドロキシビタミンＤ
総２５−ヒドロキシビタミンＤのインビトロ測定には電気化学発光結合アッセイを利用することができる（例えば、市販のＣｏｂａｓ８０００（Ｒｏｃｈｅ）を使用）。例えば、総ビタミンＤを定量することを意図して、ビタミンＤ結合タンパク質（ＶＤＢＰ）を使用して２５−ヒドロキシビタミンＤ３及びＤ２の両方を捕捉することができる。簡潔に述べると、試料を前処理試薬とインキュベートして、試料中の天然ＶＤＢＰを変性させて結合ビタミンＤを放出できる。次いで、試料を、組換えルテニウム標識ＶＤＢＰと更にインキュベートして、２５−ヒドロキシビタミンＤ（２５−ＯＨ−Ｄ）とルテニル化−ＶＤＢＰとの複合体を形成できる。ビオチン化２５−ＯＨ−Ｄの添加により、ルテニウム標識ＶＤＢＰ及びビオチン化２５−ＯＨ−Ｄからなる複合体が生成される。複合体全体は、ビオチンとストレプトアビジンコーティングされた微小粒子との相互作用によって固相に結合でき、これは電極の表面上に捕捉できる。結合していない物質を除去した後、電極に電圧を加えることにより、光電子増倍器によって測定され得る化学発光放出が誘発される。結果は、機器固有の検量線によって判定することができる。
【０１２４】
ホモシステイン
総血漿ホモシステインは、酵素サイクリングアッセイを用いて測定することができる。簡潔に述べると、酸化されたホモシステインを最初に還元し、次いで、ホモシステインＳ−メチルトランスフェラーゼの存在下でＳ−アデノシルメチオニンと反応させて、メチオニン及びＳ−アデノシルホモシステイン（ＳＡＨ）を形成することができる。次いで、ＳＡＨを、ＳＡＨ加水分解酵素によりアデノシン及びホモシステインに加水分解される共役酵素反応により評価してよい。ホモシステインは、検出シグナルを増幅するのに役立つホモシステイン変換反応に利用される。形成されたアデノシンは、イノシン及びアンモニアに加水分解でき、次いで、グルタミン酸デヒドロゲナーゼを使用してアンモニアと２−オキソグルタレート及びＮＡＤＨとの反応を触媒して、ＮＡＤ＋を形成することができる。試料中のホモシステインの濃度は、ＮＡＤ＋に変換されたＮＡＤＨの量に正比例し、これは、３４０ｎｍの吸光度で分光法で測定することができる。
【０１２５】
オメガ３脂肪酸
例えば、全脂肪酸の重量パーセントとして表されるＥＰＡ及びＤＨＡなどのオメガ３脂肪酸は、水素炎イオン化検出器に連結されたガスクロマトグラフィーを使用して定量することができる。簡潔に述べると、遠心分離によって赤血球を血漿から分離し、洗浄し、酸性化した後に、ヘキサンとイソプロパノールとの混合物を含むＦｏｌｃｈ法による脂質抽出を行うことができる。マルガリン酸を、内部標準として添加してもよい。次いで、全脂質抽出物を鹸化及びメチル化し、脂肪酸メチルエステル（ＦＡＭＥ）をペンタンで抽出し、ガスクロマトグラフィー（ＧＣ）により分析してもよい。例示的なプロトコルは、スプリットインジェクター、結合シリカキャピラリカラム（ＢＰＸ７０、６０ｍ×０．２５ｍｍ；０．２５μｍの膜厚）を備えるガスクロマトグラフ及び水素炎イオン化検出器（キャリアガスとしてヘリウムを使用でき、カラム温度プログラムは１５０℃で開始し、２２０℃まで１．３℃／分で上昇させ、２２０℃で１０分間保持しできる）を使用してよい。ＦＡＭＥの特定は、脂肪酸標準から調製されたＦＡＭＥについて得られた保持時間に基づいてもよい。
【０１２６】
試料
本発明は、対象から得られた１つ以上の試料中の２つ以上のバイオマーカーのレベルを測定する工程を含む。
【０１２７】
一実施形態では、１つ以上の試料は、血液試料、血漿試料、及び血清試料からなる群から独立して選択される。
【０１２８】
対象から試料を採取するための技術は当該技術分野においてよく知られている。
【０１２９】
基準値との比較
本方法は、試験試料中のオメガ−３脂肪酸、ビタミンＤ若しくはその代謝産物、及び／又はホモシステインのレベルを、１つ以上の基準値又は対照値と比較する工程を含み得る。用語「基準値」は、「対照値」と同義であり、技術的データの正確な解釈を促すために当業者が使用するデータを広く含む。
【０１３０】
通常、本方法において測定された各個体のバイオマーカーに関する基準値が使用される。基準値は、健常の対象における同じ種の試料（例えば、血液、血清、又は血漿）中のバイオマーカーのレベルなどの、そのバイオマーカーの正常のレベルであってもよい。基準値は、例えば、対象の対照集団、例えば、５、１０、１００又は１０００以上の通常の対象（この対象は、試験対象と年齢及び／又は性別が同じ又は同じでなくてもよい）における、バイオマーカーの平均又は中央値のレベルに基づいてもよい。正しい基準値をどのように割り当てるかについては、当業者に周知であり、これらは、例えば、性別、人種、ジェネリック・ヘリテージ（ｇｅｎｅｔｉｃ  ｈｅｒｉｔａｇｅ）、健康状態又は年齢に応じて変わる。
【０１３１】
試験試料中のバイオマーカーのレベルを測定する対応方法を用いて、例えば、正常な対象から採取した１つ以上の試料を用いて、基準値を測定することができる。例えば、いくつかの実施形態では、対照試料におけるバイオマーカーのレベルを、試験試料に対する並行分析で測定することができる。あるいは、いくつかの実施形態において、特定の種類の試料（例えば、血液、血清又は血漿）中の個体のバイオマーカーのレベルに関する基準値を、例えば、公表されている研究から先に入手することもできる。したがって、いくつかの実施形態では、基準値は前もって測定してもよいし、又は得られた各試験試料に関する対照試料について対応する測定を実施することなく、計算若しくは推測してもよい。
【０１３２】
一実施形態では、オメガ−３脂肪酸、ビタミンＤ若しくはその代謝産物、血漿ホモシステインのレベルを低減することができる薬剤、又は本開示の組み合わせは、
（ａ）第１の基準値以下のオメガ−３脂肪酸のレベル、
（ｂ）第２の基準値以下のビタミンＤ若しくはその代謝産物のレベル、及び／又は
（ｃ）第３の基準値以上のホモシステインのレベルを有する対象に投与してよい。
【０１３３】
一実施形態では、本発明の方法は、指数（本明細書では、栄養リスク指数、ＮＲＩと称される）を計算することを含み、この指数は、
（ａ）オメガ−３脂肪酸のレベルを測定し、第１の基準値以下である対象からのサンプル中のオメガ−３脂肪酸のレベルをスコアｎとし、第１の基準値を超える対象からのサンプル中のオメガ−３脂肪酸のレベルをスコアゼロとする工程、
（ｂ）ビタミンＤ若しくはその代謝産物のレベルを測定し、第２の基準値以下である対象からのサンプル中のビタミンＤ又はその代謝産物のレベルをスコアｎとし、第２の基準値を超える対象からのサンプル中のビタミンＤ若しくはその代謝産物のレベルをスコアゼロとする工程、及び／又は
（ｃ）ホモシステインのレベルを測定し、第３の基準値以上である対象からのサンプル中のホモシステインのレベルをスコアｎとし、第３の基準値未満である対象からのサンプル中のホモシステインのレベルをスコアゼロとする工程を含み、
ｎは正の整数（例えば＋１）であり、指数は、工程（ａ）、（ｂ）及び／又は（ｃ）から得られたスコアの合計として計算され、指数スコアが大きいほど認知機能の低下（リスク）の素因が大きいことを示す。
【０１３４】
０のスコアは、オメガ−３脂肪酸、ビタミンＤ若しくはその代謝産物、血漿ホモシステインのレベルを低減することができる薬剤、又は本開示の組み合わせを投与したときに認知能力を改善する対象に対応し得る。
【０１３５】
第１、第２、及び／又は第３の基準値は、例えば、臨床検査室データ、例えば、公的に入手可能なデータを使用して決定されてもよい。
【０１３６】
一実施形態では、赤血球ＥＰＡ及びＤＨＡの基準値（第１の基準値）は、全脂肪酸の約４．８２重量％である。この第１の基準値以下のレベルは、本明細書に開示される指標内のスコアｎを割り当てられてもよい。一実施形態では、血漿２５−ヒドロキシビタミンＤの基準値は、約２０ｎｇ／ｍＬである。この基準値以下のレベルは、本明細書に開示される指標内のスコアｎを割り当てられてもよい。一実施形態では、血漿ホモシステインの基準値は、約１４μｍｏｌ／Ｌである。この基準値以上のレベルは、本明細書に開示される指標内のスコアｎを割り当てられてもよい。
【０１３７】
特定の試料中の本明細書に記載のバイオマーカーに関する対照値又は基準値は、データベースに保存し、対象に対して実施した方法の結果を解釈するために使用してもよい。
【０１３８】
試験試料中のバイオマーカーのレベル、例えば、対象由来の試料中のオメガ−３脂肪酸、ビタミンＤ若しくはその代謝産物、及び／又はホモシステインのレベルは、対照の対象の１つ以上のコホート（集団／群）中の同じ標的のそれぞれの量と比較することができる。
【０１３９】
対象由来の試料中のオメガ−３脂肪酸、ビタミンＤ若しくはその代謝産物、及び／又はホモシステインのレベルの比較は、四分割された対象の対照集団に由来する基準値のレベルと比較することを含んでもよい。
【０１４０】
一実施形態では、オメガ−３脂肪酸のレベルが測定され、対象由来の試料中のオメガ−３脂肪酸のレベルが、対照集団に由来する基準値の最低四分位（ｌｏｗｅｓｔ  ｑｕａｒｔｉｌｅ）内の値であると、認知機能の低下の素因であることを意味する。
【０１４１】
一実施形態では、ビタミンＤ若しくはその代謝産物のレベルが測定され、対象由来の試料中のビタミンＤ若しくはその代謝産物のレベルが、対照集団に由来する基準値の最低四分位内の値であると、認知機能の低下の素因であることを意味する。
【０１４２】
一実施形態では、ホモシステインのレベルが測定され、対象由来の試料中のホモシステインのレベルが、対照集団に由来する基準値の最大四分位（ｈｉｇｈｅｓｔ  ｑｕａｒｔｉｌｅ）内の値であると、認知機能の低下の素因であることを意味する。
【０１４３】
一実施形態では、本発明の方法は、指数（本明細書では、栄養リスク指数、ＮＲＩと称される）を計算することを含み、この指数は、
（ａ）オメガ−３脂肪酸のレベルを測定し、対象由来の試料中のオメガ−３脂肪酸のレベルが対照集団に由来する基準値の最低四分位内の値であると、スコアｎとし、対象由来の試料中のオメガ−３脂肪酸のレベルが最低四分位外であると、スコアゼロとする工程、
（ｂ）ビタミンＤ若しくはその代謝産物のレベルを測定し、対象由来の試料中のビタミンＤ若しくはその代謝産物のレベルが対照集団に由来する基準値の最低四分位内の値であると、スコアｎとし、対象由来の試料中のビタミンＤ若しくはその代謝産物のレベルが最低四分位外であると、スコアゼロとする工程、及び／又は
（ｃ）ホモシステインのレベルを測定し、対象由来の試料中のホモシステインのレベルが対照集団に由来する基準値の最大四分位値内の値であると、スコアｎとし、対象由来の試料中のホモシステインのレベルが最大四分位外であると、スコアゼロとする工程を含み、
ｎは正の整数（例えば＋１）であり、指数は、工程（ａ）、（ｂ）及び／又は（ｃ）から得られたスコアの合計として計算され、指数スコアが大きくなるほど認知機能の低下の素因が大きいことを示す。
【０１４４】
一実施形態では、赤血球ＥＰＡ及びＤＨＡの基準値は、全脂肪酸の約４．８２重量％である。この基準値よりも低いレベルには、本明細書に開示される指標におけるスコアｎを割り当てることができる。一実施形態では、血漿２５−ヒドロキシビタミンＤの基準値は、約１５ｎｇ／ｍＬである。この基準値よりも低いレベルには、本明細書に開示される指標におけるスコアｎを割り当てることができる。一実施形態では、血漿ホモシステインの基準値は、約１８．１μｍｏｌ／Ｌである。この基準値よりも高いレベルには、本明細書に開示される指標におけるスコアｎを割り当てることができる。
【０１４５】
本明細書に記載のバイオマーカーのレベルに関する基準値は、好ましくは、試験試料中のバイオマーカーのレベルを評価するのに使用されるものと同じ単位を用いて測定される。したがって、本明細書に記載のバイオマーカーのレベルが、μｍｏｌ／Ｌ（μＭ）などの絶対値である場合、基準値は、一般個体群又は対象の選択された対照群の個体における単位μｍｏｌ／Ｌ（μＭ）に基づいてもよい。
【０１４６】
対象のバイオマーカーのレベルと、対応する基準値との差の程度もまた、どちらの対象が、ある種の介入から最も利益を得ることになるかを判定するのに有用である。試験試料中のバイオマーカーのレベルは、例えば、基準値に比べて少なくとも１％、少なくとも５％、少なくとも１０％、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも５０％又は少なくとも１００％増加又は減少し得る。
【０１４７】
治療方法
オメガ−３脂肪酸、ビタミンＤ若しくはその代謝産物、及び／又は、血漿ホモシステインのレベルを低減することができる薬剤を同時に、順次に、又は別々に投与してよい。
【０１４８】
本明細書で使用される用語「組み合わせ」又は「組み合わせて」、「組み合わせて使用される」若しくは「組み合わせた調製」という表現は、オメガ−３脂肪酸、ビタミンＤ若しくはそれらの代謝産物、及び／又は血漿ホモシステインのレベルを低減することができる薬剤の２つ以上の組み合わせを同時に、順次に、又は別々に投与することを指す。
【０１４９】
本明細書で使用される用語「同時」は、薬剤が同時に投与される、すなわち、同じ時に投与されることを意味する。本明細書で使用される用語「順次」とは、薬剤がもう一方の後に投与されることを意味する。本明細書で使用される用語「別々に」は、薬剤が、互いに独立して投与されるが、但し薬剤を組み合わせた効果、好ましくは相乗的な効果を示すことを可能にする時間間隔内で投与されることを意味する。したがって、「別々に」投与するとは、１つの薬剤を、例えば、もう一方の後の１分以内、５分以内、又は１０分以内に投与することを容認し得る。
【０１５０】
本明細書において「治療」についてなされる全ての言及は、治癒的、緩和的、及び予防的治療を含むものであると理解される。哺乳類、特にヒトの治療が好ましい。ヒト及び動物治療の両方が、本発明の範囲内である。
【０１５１】
投与量
当業者は、過度の実験を行わずとも、本発明の薬剤の１つを対象に投与するのに適切な用量を容易に決定することができる。典型的には、医師は、個々の患者に最も好適である実際の投与量を、使用される特定の薬剤の活性、代謝安定性及びその薬剤の作用の長さ、年齢、体重、全般的な健康、性別、規定食、投与方法及び投与時間、排泄速度、薬物の組み合わせ、特定の状態の重症度、並びに治療を受けている個体を含む様々な因子をもとに決定する。当然ではあるが、より高い又はより低い投与量範囲が優れている個別の場合があり得、そのような場合も本発明の範囲内にある。
【０１５２】
対象
「対象」（又は「個体」）は、ヒト又は非ヒト動物のいずれかを指す。非ヒト動物は、コンパニオンアニマルであってもよい。
【０１５３】
非ヒト動物の例としては、鳥類、ウシ、イヌ、ウマ、ネコ、ヤギ（ｈｉｃｒｉｎｅ）、オオカミ、ネズミ、ヒツジ、又はブタなどの動物が挙げられる。「コンパニオンアニマル」は、任意の飼いならされた動物であり、限定されないが、ネコ、イヌ、ウサギ、モルモット、フェレット、ハムスター、マウス、アレチネズミ、ウマ、ウシ、ヤギ、ヒツジ、ロバ、ブタなどが挙げられる。
【０１５４】
一実施形態では、対象はヒト個体である。一実施形態では、対象はコンパニオンアニマルである。好ましくは、対象は、ヒトである。
【０１５５】
一実施形態では、対象は老化しているヒト対象である。用語「老化しているヒト対象」は、５０歳以上のヒト対象を意味し得る。一実施形態では、対象は、少なくとも５０歳、５５歳、６０歳、６５歳、７０歳、７５歳、８０歳、８５歳、９０歳又は９５歳のヒト対象である。好ましい実施形態では、対象は、５０歳以上のヒト対象である。特に好ましい実施形態では、対象は、７０歳以上のヒト対象である。
【０１５６】
ヒトの文脈における用語「老齢」（ｅｌｄｅｒｌｙ）は、少なくとも６０歳、好ましくは６３歳以上、より好ましくは６５歳以上、最も好ましくは７０歳以上の年齢を意味する。ヒトの文脈における用語「高齢者」（ｏｌｄｅｒ  ａｄｕｌｔ）は、少なくとも４５歳、好ましくは５０歳以上、より好ましくは５５歳以上の年齢を意味し、老齢の個体を含む。
【０１５７】
他の動物の場合、「高齢個体」とは、その個々の種及び／又は種内の系統において、平均寿命の５０％を超えた動物をいう。動物は、平均期待寿命の６６％を超えた場合、好ましくは平均期待寿命の７５％を超えた場合、より好ましくは平均期待寿命の８０％を超えた場合に、「老齢」と考えられる。老齢のネコ又はイヌは、少なくとも約７歳齢である。
【０１５８】
食事介入
本明細書で使用される用語「食事介入」は、対象に適用され、対象の食習慣に変化をもたらす外部因子を指す。
【０１５９】
一実施形態では、食事介入は、オメガ３脂肪酸を補給した規定食である。一実施形態では、食事介入は、ビタミンＤを補給した規定食である。一実施形態では、食事介入は、血漿ホモシステインのレベルを低減することができる薬剤を補給した規定食である。
【０１６０】
一実施形態では、本発明の食事介入は、好ましくはオメガ３脂肪酸栄養補助食品を投与することによって、対象によるオメガ−３脂肪酸摂取を増加させることを含む。一実施形態では、食事介入は、好ましくはビタミンＤ栄養補助食品を投与することによって、対象によるビタミンＤ摂取を増加させることを含む。一実施形態では、食事介入は、好ましくは、血漿ホモシステインのレベルを低減することができる薬剤の栄養補助食品を投与することによって、対象による血漿ホモシステインのレベルを減少させることができる薬剤の摂取量を増加させることを含む。
【０１６１】
規定食は、対象の初期体重に合わせて調整したものであってよい。
【０１６２】
食事介入には、少なくとも１つの規定食製品の投与が含まれていてもよい。規定食製品は、食事代替品であってもよいし、サプリメント製品であってもよい。規定食製品は、食品製品、飲料、ペットフード製品、食品栄養補給剤、機能性食品、食品添加物、又は栄養配合物を含み得る。
【０１６３】
組成物
本発明の薬剤及び組成物は、老化プロセスによってもたらされるものなどの認知機能の低下を受けやすい個体又は認知機能の低下に苦しんでいる個体（例えば、認知症ではない個体）における認知機能を向上させることができる。本発明の薬剤及び組成物は、老化プロセスによってもたらされるものなどの認知機能の低下を受けやすい個体又は認知機能の低下に罹患している個体（例えば、認知症ではない個体）における認知機能の低下を予防、低減、又は先延ばしできる。いくつかの実施形態では、本発明の方法は、投与の前に、認知的加齢を有する又は認知的加齢のリスクを有する個体を特定することを含む。例えば、方法は、投与の前に、認知能力の改善を必要とする個体を特定することを含み得る。本発明の薬剤及び組成物は、脳萎縮及び神経炎症を減少させ、アミロイド−β食作用及びシナプス数を増加させ得る。
【０１６４】
オメガ−３脂肪酸、ビタミンＤ若しくはその代謝産物、及び／又は、血漿ホモシステインのレベルを低減することができる薬剤（すなわち、本発明の薬剤）を同時に、順次に、又は別々に投与してよい。
【０１６５】
オメガ−３脂肪酸、ビタミンＤ若しくはその代謝産物、及び／又は、血漿ホモシステインのレベルを低減することができる薬剤は、１つ以上の組成物内に含まれてもよい。
【０１６６】
一実施形態では、オメガ３脂肪酸、ビタミンＤ若しくはその代謝産物、及び／又は、血漿ホモシステインのレベルを低減することができる薬剤は、食品製品の形態であり、好ましくはタンパク質、炭水化物、脂肪、及びこれらの組み合わせからなる群から選択される成分を更に含む。
【０１６７】
一実施形態では、オメガ３脂肪酸、ビタミンＤ若しくはその代謝産物、及び／又は、血漿ホモシステインのレベルを低減することができる薬剤は、医薬的に許容される担体、希釈剤又は賦形剤を更に含む医薬組成物の形態である。
【０１６８】
様々な実施形態では、オメガ３脂肪酸は、食品製品又は組成物の１〜５０重量％、好ましくは食品製品又は組成物の１〜３０重量％、最も好ましくは食品製品又は組成物の１〜１５重量％である。好ましくは、オメガ３脂肪酸は、エイコサペンタエン酸（ＥＰＡ）又はドコサヘキサエン酸（ＤＨＡ）のうちの少なくとも１つを含み、より好ましくはＥＰＡ及びＤＨＡの両方を含む。食品製品又は組成物の１日用量は、好ましくは１日当たり０．５ｇ〜１．０ｇのＤＨＡ、及び／又は１日当たり０．５ｇ〜１．０ｇのＥＰＡ、より好ましくは１日当たり０．７ｇ〜１．０ｇのＤＨＡ、及び／又は１日当たり０．６ｍｇ〜０．７５ｇのＥＰＡ、最も好ましくは１日当たり約７７０ｍｇのＤＨＡ、及び／又は１日当たり約７００ｍｇのＥＰＡを提供する。
【０１６９】
一実施形態では、オメガ−３脂肪酸は、１日当たり０．５ｇ〜２．０ｇ、例えば１日当たり０．５ｇ〜１．５ｇの用量で投与される。一実施形態では、対象は１日当たり０．５ｇ〜１．０ｇのＤＨＡ、及び／又は１日当たり０．５ｇ〜１．０ｇのＥＰＡ、より好ましくは１日当たり０．７ｇ〜１．０ｇのＤＨＡ、及び／又は１日当たり０．６ｍｇ〜０．７５ｇのＥＰＡ、最も好ましくは１日当たり約７７０ｍｇのＤＨＡ、及び／又は１日当たり約７００ｍｇのＥＰＡを投与される。
【０１７０】
オメガ３脂肪酸は、オメガ３脂肪酸の１つ以上の供給源の混合物を含んでよく、オメガ３脂肪酸の１つ以上の供給源のそれぞれは、天然（例えば、魚油）又は合成（すなわち、自然由来のものとは対照的に、人間によって操作されるプロセスを通じて形成されたもの）であり得る。本明細書で使用される「魚油」という用語は、海洋個体から得られる、粗製の若しくは精製された、オメガ３脂肪酸が豊富な脂肪性又は油性抽出物を意味し、その海洋個体は、例えば、限定されないが、サケ、マグロ、サバ、ニシン、シーバス、ストライプトバス、オヒョウ、ナマズ、及びイワシなどの冷水魚、並びにサメ、エビ、及び二枚貝、又はこれらの任意の組み合わせである。
【０１７１】
一実施形態では、食品製品又は組成物は、ビタミンＤ若しくはその代謝産物の６０〜２０００ＩＵ／日を提供する１日用量で投与される。
【０１７２】
一実施形態では、食品製品又は組成物は、０．００１ｍｇ／日〜０．１ｍｇ／日のビタミンＤ若しくはその代謝産物、例えば、０．０１ｍｇ／日〜０．０５ｍｇ／日のビタミンＤ若しくはその代謝産物、好ましくは約０．０１５ｍｇ／日のビタミンＤ若しくはその代謝産物を提供する１日用量で投与される。
【０１７３】
一実施形態では、ビタミンＤ若しくはその代謝産物は、６０〜２０００ＩＵ／日の用量で投与される。
【０１７４】
一実施形態では、ビタミンＤ若しくはその代謝産物は、０．００１ｍｇ／日〜０．１ｍｇ／日、例えば０．０１ｍｇ／日〜０．０５ｍｇ／日、好ましくは約０．０１５ｍｇ／日の用量で投与される。
【０１７５】
一実施形態では、血漿ホモシステインのレベルを低減することができる薬剤は、ビタミンＢ６及び／又はビタミンＢ９である。
【０１７６】
一実施形態では、食品製品又は組成物は、１日当りに、１日当たりの推奨一日所要量（ＲＤＡ）の少なくとも０．０１〜１００倍のビタミンＢ６、例えば、ＲＤＡの１０〜８０倍のビタミンＢ６、及び／又は１日当たりのＲＤＡの０．０１〜５．０倍のビタミンＢ９、例えば、ＲＤＡの１．０〜２．５倍のビタミンＢ９を提供する１日用量で個体に投与される。ビタミンＢ６のＲＤＡは１．３ｍｇ／日であり、したがって、食品製品又は組成物は、０．１３ｍｇ／日〜１３０ｍｇ／日のビタミンＢ６、例えば、１３ｍｇ／日〜１００ｍｇ／日のビタミンＢ６を提供する１日用量で投与することができる。ビタミンＢ９のＲＤＡは０．４ｍｇ／日であり、したがって、食品製品又は組成物は、０．００４ｍｇ／日〜２．０ｍｇ／日のビタミンＢ９、例えば、０．４ｍｇ／日〜１．０ｍｇ／日のビタミンＢ９を提供する１日用量で投与することができる。しかしながら、本開示は、ビタミンＢ６の特定の１日用量又はビタミンＢ９の特定の１日用量に限定されない。
【０１７７】
一実施形態では、対象は、１日当たりビタミンＢ６のＲＤＡの少なくとも０．０１〜１００倍、例えば、ビタミンＢ６のＲＤＡの１０〜８０倍、及び／又は１日当たりビタミンＢ９のＲＤＡの０．０１〜５．０倍、例えば、ビタミンＢ９のＲＤＡの１．０〜２．５倍を投与される。一実施形態では、対象は、０．１３ｍｇ／日〜１３０ｍｇ／日のビタミンＢ６、例えば、１３ｍｇ／日〜１００ｍｇ／日のビタミンＢ６を投与される。一実施形態では、対象は、０．００４ｍｇ／日〜２．０ｍｇ／日のビタミンＢ９、例えば、０．４ｍｇ／日〜１．０ｍｇ／日のビタミンＢ９を投与される。
【０１７８】
一実施形態では、食品製品又は組成物は、任意選択的に、一酸化窒素放出化合物を含み得る。
【０１７９】
一実施形態では、食品製品又は組成物は、一酸化窒素放出化合物を含まない。
【０１８０】
「一酸化窒素放出化合物」という用語は、個体において一酸化窒素の放出を引き起こす又はもたらし得る任意の化合物（１種又は複数）を意味する。一酸化窒素放出化合物は、好ましくはアルギニン、シトルリン、オルニチンの１つ以上を含み、又はこれらのアミノ酸、より好ましくはアルギニン及び／又はシトルリンの少なくとも１つ、より更に好ましくはシトルリンを含むペプチド又はタンパク質を含み、特に血流、内皮機能及び血圧を改善することから心血管系に対する有益な効果を提供する。様々な実施形態では、一酸化窒素放出化合物は、食品製品又は組成物の１〜２０重量％、好ましくは食品製品又は組成物の１〜１５重量％、より好ましくは食品製品又は組成物の１〜１０重量％である。一実施形態では、食品製品又は組成物の１日用量は、１日当たり０．５ｇ〜１０．０ｇ、好ましくは１日当たり１．０ｇ〜５．０ｇ、より好ましくは１日当たり２．０ｇ〜４．０ｇ、最も好ましくは１日当たり約３．０ｇの一酸化窒素放出化合物（例えば、シトルリン）を提供する。
【０１８１】
食品製品又は組成物は、ビタミンＢ６及び／又はビタミンＢ９に加えて、少なくとも１つのビタミンＢ、例えば、ビタミンＢ１（チアミン）、ビタミンＢ２（リボフラビン）、ビタミンＢ３（ナイアシン）、ビタミンＢ５（パントテン酸）、ビタミンＢ７（ビオチン）、及びビタミンＢ１２（コバラミン）、又はビタミンＢ活性を有するその塩、複合体若しくは誘導体のうちの１つ以上を更に含み得る。食品製品又は組成物は、任意選択的にこれらの追加的なビタミンＢの１つ以上ＲＤＡの０．１〜４０倍、好ましくはＲＤＡの１〜２０倍、より好ましくはＲＤＡの１〜１０倍含み得る。一実施形態では、食品製品又は組成物は、ビタミンＢ１（チアミン）、ビタミンＢ２（リボフラビン）、ビタミンＢ３（ナイアシン）、ビタミンＢ５（パントテン酸）、ビタミンＢ７（ビオチン）及びビタミンＢ１２（コバラミン）の全てを更に含む。
【０１８２】
また、一実施形態では、オメガ−３脂肪酸と、１日当たりの推奨一日所要量（ＲＤＡ）の少なくとも０．０１〜１００倍のビタミンＢ６及び／又は１日当たりのＲＤＡの０．０１〜５．０倍のビタミンＢ９と、の組み合わせを含む食品製品又は組成物は、好ましくは、１日当たりの推奨一日所要量（ＲＤＡ）の０．１〜４０倍のビタミンＢ１２、例えば、１日当たりの推奨一日所要量（ＲＤＡ）の１〜１０倍のビタミンＢ１２を提供する。
【０１８３】
したがって、ビタミンＢ１２は、１日当たりのビタミンＢ１２のＲＤＡの約１０倍、２０倍、３０倍又は４０倍の１日用量で、追加のビタミンＢとして投与され得る。好ましくは、１日用量は、１日当たりのビタミンＢ１２のＲＤＡの１０〜４０倍、より好ましくは１０〜３０倍、又は更により好ましくは１０〜２５倍、最も好ましくは約１２〜２１倍を提供する。
【０１８４】
また、他の実施形態では、オメガ−３脂肪酸、１日当たりのビタミンＢ６の推奨一日所要量（ＲＤＡ）の少なくとも０．０１〜１００倍、及び／又は１日当たりビタミンのＢ９のＲＤＡの０．０１〜５．０倍の組み合わせを含む食品製品又は組成物は、好ましくは、１日当たりのビタミンＢ１２の推奨一日所要量（ＲＤＡ）の５０〜５００倍、例えば、１日当たりのビタミンＢ１２の推奨一日所要量（ＲＤＡ）の１００〜３００倍、好ましくは１日当たりのビタミンＢ１２の推奨一日所要量（ＲＤＡ）の１５０〜２５０倍を提供する。
【０１８５】
したがって、ビタミンＢ１２は、１日当たりのビタミンＢ１２のＲＤＡの約５０倍、１００倍、１５０倍、２００倍、２５０倍、３００倍、３５０倍、４００倍、４５０倍又は５００倍の１日用量の追加のビタミンＢとして投与され得る。好ましくは、１日用量は、１日当たりビタミンＢ１２のＲＤＡの５０〜５００倍、より好ましくは１００〜３００倍、又は更により好ましくは１５０〜２５０倍を提供する。
【０１８６】
米国におけるビタミンＢ１２のＲＤＡは、１４歳以上のヒトに対して一日２．４μｇであり、そのため個体には、１日当たり約０．００２ｍｇ〜約０．４ｍｇのビタミンＢ１２、好ましくは１日当たり０．０２ｍｇ〜０．０７ｍｇのビタミンＢ１２、より好ましくは、１日当たり０．０３ｍｇ〜０．０５ｍｇのビタミンＢ１２を提供する１日用量の食品製品又は組成物が投与されてもよく、又は個体は、１日当たり約０．１ｍｇ〜約１．２ｍｇのビタミンＢ１２、好ましくは１日当たり０．２ｍｇ〜０．７ｍｇのビタミンＢ１２、より好ましくは１日当たり０．４ｍｇ〜０．６ｍｇのビタミンＢ１２を提供する１日用量の食品製品又は組成物が投与されてもよい。
【０１８７】
好ましい実施形態では、対象はビタミンＢ１２を更に投与される。一実施形態では、ビタミンＢ１２は、１日当たりビタミンＢ１２のＲＤＡの０．１〜４０倍、好ましくは１日当たりビタミンＢ１２のＲＤＡの１０〜４０、１０〜３０又は１０〜２５倍、より好ましくは１日当たりビタミンＢ１２のＲＤＡの１２〜２１倍の用量で投与される。
【０１８８】
一実施形態では、ビタミンＢ１２は、１日当たり約０．００２ｍｇ〜約０．４ｍｇ、好ましくは１日当たり０．０２ｍｇ〜０．０７ｍｇ、より好ましくは１日当たり０．０３ｍｇ〜０．０５ｍｇの用量で投与される。
【０１８９】
一実施形態では、オメガ−３脂肪酸、ビタミンＤ若しくはその代謝産物、及び／又は、血漿ホモシステインのレベルを低減することができる薬剤は、ビタミンＢ１２と同時に、順次に、又は別々に対象に投与され、ビタミンＢ１２は、１日当たりビタミンＢ１２のＲＤＡの０．１〜４０倍、好ましくは１日当たりビタミンＢ１２のＲＤＡの１０〜４０、１０〜３０又は１０〜２５倍、より好ましくは１日当たりビタミンＢ１２のＲＤＡの１２〜２１倍の用量で投与される。
【０１９０】
好ましい実施形態では、対象はビタミンＢ１２を更に投与される。一実施形態では、ビタミンＢ１２は、１日当たりビタミンＢ１２のＲＤＡの５０〜５００倍、好ましくは１日当たりビタミンＢ１２のＲＤＡの１００〜３００倍又は１５０〜２５０倍の用量で投与される。
【０１９１】
一実施形態では、ビタミンＢ１２は、１日当たり約０．１ｍｇ〜約１．２ｍｇ、好ましくは１日当たり０．２ｍｇ〜０．７ｍｇ、より好ましくは１日当たり０．４ｍｇ〜０．６ｍｇの用量で投与される。
【０１９２】
一実施形態では、オメガ−３脂肪酸、ビタミンＤ若しくはその代謝産物、及び／又は、血漿ホモシステインのレベルを低減することができる薬剤は、ビタミンＢ１２と同時に、順次又は別々に対象に投与され、ビタミンＢ１２は、１日当たりビタミンＢ１２のＲＤＡの５０〜５００倍、好ましくは１日当たりビタミンＢ１２のＲＤＡの１００〜３００倍又は１５０〜２５０倍の用量で投与される。
【０１９３】
いくつかの実施形態では、食品製品又は組成物は、酸化的損傷及び炎症誘発性の損傷から保護するための１つ以上の酸化防止剤を更に含み得る。好適な抗酸化剤の非限定的な例としては、ビタミンＣ、ビタミンＤ、ビタミンＥ、セレン及びそれらの組み合わせが挙げられる。例えば、食品製品又は組成物は、０．０００１重量％〜２５重量％の酸化防止剤を含み得、存在する場合、好ましくは、０．０００１重量％〜約１５重量％、より好ましくは、０．００１重量％〜５重量％、最も好ましくは０．００１重量％〜２重量％である。
【０１９４】
一実施形態では、組成物は、ヒト及び／又はコンパニオン個体などのペット用の食品組成物（食品製品）である。食品組成物は、ミネラル、別のビタミン、塩、又は機能性添加剤、例えば、香味剤、着色剤、乳化剤、若しくは抗菌化合物、若しくは他の防腐剤などの、１種以上の追加の物質を含み得る。好適なミネラルの非限定的な例としては、カルシウム、リン、カリウム、ナトリウム、鉄、塩化物、ホウ素、銅、亜鉛、マグネシウム、マンガン及びヨウ素が挙げられる。好適な追加ビタミン類の非限定的な例としては、ビタミンＡ、Ｄ、Ｅ及びＫなどの脂溶性ビタミンが挙げられる。
【０１９５】
一実施形態では、組成物は、１つ以上の医薬的に許容される担体、希釈剤、又は賦形剤を含む医薬組成物である。一般に、医薬組成物は、オメガ−３脂肪酸、ビタミンＤ若しくはその代謝産物、及び／又は、血漿ホモシステインのレベルを低減することができる薬剤を、賦形剤、緩衝剤、結合剤、可塑剤、着色剤、希釈剤、圧縮剤、潤滑剤、風味剤、又は湿潤剤の１つ以上と混合することによって調製される。
【０１９６】
オメガ−３脂肪酸、ビタミンＤ若しくはその代謝産物、及び／又は、血漿ホモシステインのレベルを低減することができる薬剤は、１ヶ月未満で確認できる急性効果を有し得る。追加的に又は代替的に、オメガ−３脂肪酸、ビタミンＤ若しくはその代謝産物、及び／又は、血漿ホモシステインのレベルを低減することができる薬剤は、長期効果を有することができ、したがって、様々な実施形態は、少なくとも１ヶ月の期間にわたって個体に投与すること（例えば、経口で）を含み、好ましくは少なくとも２カ月、より好ましくは少なくとも３、４、５又は６カ月、最も好ましくは少なくとも１年の期間にわたって個体に投与される。期間中、オメガ−３脂肪酸、ビタミンＤ若しくはその代謝産物、及び／又は、血漿ホモシステインのレベルを低減することができる薬剤を、個体に１週間当たり少なくとも１日投与することができ、好ましくは１週間に少なくとも２日、より好ましくは１週間に少なくとも３、４、５又は６日、最も好ましくは、１週間に７日、個体に投与できる。オメガ−３脂肪酸、ビタミンＤ若しくはその代謝産物、及び／又は、血漿ホモシステインのレベルを低減することができる薬剤を、１日当たり１回の用量で、又は１日当たり複数の別個の用量で投与することができる。
【０１９７】
キット
別の態様では、本発明は、オメガ−３脂肪酸、ビタミンＤ若しくはその代謝産物、及び／又は、本発明の血漿ホモシステインのレベルを低減することができる薬剤を含む、キットを提供する。
【０１９８】
オメガ−３脂肪酸、ビタミンＤ若しくはその代謝産物、及び／又は、血漿ホモシステインのレベルを低減することができる薬剤は、好適な容器に提供され得る。
【０１９９】
キットはまた、使用のための使用説明書を含んでもよい。
【０２００】
当業者は、開示される本発明の範囲から逸脱することなく、本明細書に開示される本発明の全ての特徴を組み合わせることができることを理解するであろう。
【０２０１】
本発明の好ましい特徴及び実施形態を、これより非限定的な例によって記述する。
【０２０２】
本発明の実施は、特に指示がない限り、当業者の能力の範囲内である、化学、生化学、分子生物学、微生物学、及び免疫学の従来技術を使用する。
【実施例】
【０２０３】
実施例１
７０歳以上の成人における認知機能の低下速度の減少における、オメガ３栄養補助食品（１日当たりＤＨＡ８００ｍｇ、ＥＰＡ２００）、マルチドメイン介入（栄養カウンセリング、運動、認知刺激）、又は栄養補助食品＋マルチドメインの組み合わせの有効性を、プラセボに対し評価するよう、マルチドメインアルツハイマー予防実験（ＭＡＰＴ）を設計した。ＭＡＰＴ結果の事後解析は、ベースラインのオメガ３のステータスが低い対象の認知機能の低下はオメガ３の補給により予防されることを示唆している。ＶＩＴＡＣＯＧ試験は、ホモシステインを低下させるビタミンＢ群が、７０歳以上でＭＣＩ及び高ホモシステイン血症を有する対象において全脳萎縮を軽減できることを実証した。ＶＩＴＡＣＯＧからの２つの後続の事後報告により、ビタミンＢの効果は、ベースラインのオメガ３の状態が上位三分位に含まれる対象の、脳萎縮及び認知機能の低下の合計に対し最も顕著であったことが実証された。ベースラインの栄養状態及び栄養素の相互作用は、将来の栄養介入を検討するための合理的な設計要素である。これらの新たな洞察から、「栄養リスク」にある対象を被験者とする次世代の臨床試験（臨床試験登録：ＮＣＴ０１９５３７０５）が導かれ、相乗作用のある代謝を利用する栄養素の組み合わせは、認知機能の低下を予防する能力がより高いことが証明され得る。これらの臨床試験設計要素（例えば、栄養強化及び／又はオーバーサンプリング）を実施するには、任意の臨床試験の費用及び操作負荷が増すことから、第１に、強力な科学的根拠が必要とされる。本発明者らは、ＭＡＰＴ試験データを使用して、血漿ホモシステイン、血清ビタミンＤ、及び赤血球オメガ３脂肪酸によって反映されるベースラインの栄養状態が、認知機能の低下に関してそれぞれ独立したリスク因子であるという仮説を試験したが、「栄養リスク指数」を使用して組み合わせたところリスクが悪化し、３６ヶ月にわたって認知機能の低下速度が加速することが明らかとなった。
【０２０４】
結果
【表１】
2020516864.tif 000002
表１．ＭＡＰＴ分析サンプルのベースライン特性
各処理アームからのＭＡＰＴ参加者の約２５％に、ベースラインの栄養素バイオマーカーについての分析を行った。これにより、平均年齢が７５．６歳（４．５）であり、平均ＭＭＳＥが２８である、７１２人の参加者の分析サンプルを得た。６７．４％が女性であり、２０．７％はＡＰＯＥ４対立遺伝子を保有していた（表１）。人口統計学的特性及び臨床所見は、もとのＭＡＰＴ参加者（ｎ＝１６８０）と同様であった（例えば、平均年齢７５．３；平均ＭＭＳＥ２８；６４％女性；ＡＰＯＥ４キャリア２３％）。赤血球（ＲＢＣ）ＥＰＡ＋ＤＨＡの２５パーセンタイル、中央値及び７５パーセンタイルはそれぞれ４．８、５．７及び６．７であった。血清ビタミンＤ２５パーセンタイル、中央値及び７５パーセンタイルはそれぞれ１５、２２、３１ｎｇ／ｍＬであり、血漿ホモシステインについては１２．２、１４．９、１８．１ｕｍｏｌ／Ｌであった（図２及び３）。
【０２０５】
【表２】
2020516864.tif 000003
表２．ＭＡＰＴにおける栄養リスクについての被験者の割合＃「不十分」カラムにおいて塗りつぶしがある場合、栄養状態が不十分であったことを示す。ＲＢＣ  ＥＰＡ＋ＤＨＡが不十分であった被験者の割合は２６．４％（１８８／７１２名）であり、血清ビタミンＤが不十分であった割合は４５．２％（３２２／７１２名）であり、ホモシステインが不十分であった割合は６２．７％（４４７／７１２名）である。
【０２０６】
７１２名の参加者のうち５７３名（８０．４％）が栄養リスクに関する基準を満たし（ＮＲＩ≧１）、４０．８％（２９１／７１２名）の参加者が、ＭＡＰＴのエントリー時に少なくとも２つの栄養リスク因子を有していた（ＮＲＩ≧２）。各ＮＲＩスコアの割合は、９．３％（ＮＲＩ＝３、ｎ＝６６／７１２）〜１９．５％（ＮＲＩ＝０、ｎ＝１３９／７１２）の範囲であり、可能性のある異なる栄養リスクプロファイルを８通り得た。ＲＢＣ  ＥＰＡ＋ＤＨＡ（≦４．８２％）、血清ビタミンＤ（≦２０ｎｇ／ｍＬ）、及び血漿ホモシステイン（≧１４ｕｍｏｌ／Ｌ）であり、不十分であった被験者の割合は、それぞれ２６．４％、４５．２％、及び６２．７％であった。２つの栄養リスク因子（ＮＲＩ＝２）を有する被験者の割合は３１．６％であり、その範囲は、ビタミンＤ不足及びオメガ３不足を組み合わせた場合（ＮＲＩ−Ｄ＋Ｏ３＝２、ｎ＝２７／７１２）の３．８％から、ビタミンＤ不足及びホモシステイン不足を組み合わせた場合（ＮＲＩ−Ｄ＋ＨＣｙ＝２、ｎ＝６６／７１２）の１７．６％までであった（表２）。
【０２０７】
【表３】
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表３．調整した混合モデルにおける、栄養リスク指数のスコア及び３年にわたる認知機能低下率。
【０２０８】
認知複合Ｚスコアにおける年次変化の全体的な割合は、−０．００８標準単位（ＳＵ）であった（３年間のフォローアップ期間にわたって０．０２４ＳＵ）。年齢、性別、教育、及び試験アームについて調整した混合効果モデルでは、各ＮＲＩポイントの増加は、認知機能の低下の平均速度の漸増的増加と関連付けられた（図１Ａ）。これらの推定された効果は、栄養リスク指数を有さない（ＮＲＩ＝０）高齢者が、３年の試験期間にわたって、認知複合Ｚスコアにおいて平均０．０９ＳＵの認知性能の累積的な改善を示したことを示す。比較すると、栄養リスク最大（ＮＲＩ＝３）で試験に参加した被験者は、３年の試験期間にわたって、認知複合Ｚスコアにおいて０．３３ＳＵの低下を経験した。認知機能の変化率において、ＮＲＩ＝０と３との間に見積もられた効果量の差は、年齢が１３．７５歳若いことと同等である（表３）。発明者らはまた、ＣＤＲ（０対０．５）及びＣＤＲと時間との相互作用、ＡＰＯＥ４キャリアとしてのステータス、及び時間とＡＰＯＥ４ステータスとの相互作用、並びに教育＊時間相互作用を調整したところ、各ＮＲＩについて係数は本質的に変化しなかった（データ非掲載）。オメガ３の補給が未経験の参加者に分析を制限したところ、再度一貫した結果が得られた：１）プラセボ群のみ（ｎ＝１７９）ＮＲＩ＝１、β＝−０．１００、ｐ＝０．０２１；ＮＲＩ＝２、β＝−０．１０８、ｐ＝０．００１；ＮＲＩ＝３、β＝−０．２０２、ｐ＝０．００５（表１）、及び２）プラセボ及びマルチドメインアームのみ（ｎ＝３５５）ＮＲＩ＝１、β＝−０．０８２、ｐ＝０．００６；ＮＲＩ＝２、β＝−０．０９５、ｐ＝０．００２；ＮＲＩ＝３、β＝−０．１９５、ｐ＝０．０００４）（表２）。各栄養バイオマーカーについての集団ベースの四分位閾値を使用する、認知機能の変化におけるＮＲＩの効果についての感度分析でも、結果に重要な変化は生じなかった（表７）。
【０２０９】
【表４】
2020516864.tif 000005
表４．別個の栄養リスク指数スコア、及び３年にわたる認知機能の変化率。
【０２１０】
認知機能の変化率に対するＮＲＩスコアの推定された効果は、各点の増加に依存するだけでなく、むしろ栄養バイオマーカー及びＮＲＩスコア自体を構成する別個の組み合わせに依存することは可能である。したがって、同じ調整されたモデルにおいて、ＮＲＩに固有の、可能性のある８通りの栄養リスクプロファイルのそれぞれに応じた、平均変化率（ｔｈｅ  ｍｅａｎ  ｒａｔｅｓ  ｏｆ  ｃｈａｎｇｅ）を調査した（図１Ｂ）。血清ビタミンＤ（ＮＲＩ−Ｄ＝１）が不足している場合には、栄養リスクのないもの（ＮＲＩ＝０）と比較して認知機能が低下する速度がより速く（−０．０６ＳＵ／年）、一方で不足しているものがＲＢＣ  ＥＰＡ＋ＤＨＡ（ＮＲＩ−Ｏ３＝１）又は血漿ホモシステイン（ＮＲＩ−ＨＣｙ＝１）である場合には速くなかった（表４）。しかし、２つの栄養リスク因子を有する参加者（ＮＲＩ＝２）は、２つのうちのいずれが関与しているかに関わらず、β＝−０．０６〜−０．０９／年（ＮＲＩ−ＨＣｙ＋Ｏ３＝２及びＮＲＩ−ＨＣｙ＋Ｄ＝２）の範囲で認知機能の低下の加速が観察された（表４）。
【０２１１】
結論
主観的記憶に懸念がある７０歳以上の成人において、オメガ３脂肪酸、ビタミンＤ、及びホモシステインの定量的及び客観的な栄養リスク指数を展開し、栄養が関連する認知機能の低下についてのリスクを判定した。集団の８０．４％で栄養不足状態であると特定され、そのうち４０％超が少なくとも２つの栄養リスク因子を有していた。ＮＲＩは、３年にわたり認知機能の低下速度において観察される差違を説明する。各スコアが大きくなると、それに相関して認知機能はより急速に低下した。栄養状態が十分な参加者は、オメガ３多価不飽和脂肪酸、ＥＰＡ及びＤＨＡ、ビタミンＤ及びホモシステインの濃度を最適化すると、試験期間中に、知機能低下を防ぐことができることを示唆する、有意な学習効果又は認知機能の向上を示した。
【０２１２】
本発明者らの知る限り、オメガ−３脂肪酸と、ビタミンＤと、ホモシステインを低下させるビタミンＢ群とを組み合わせることで、最適な栄養状態（ＲＢＣ  ＥＰＡ＋ＤＨＡ＞４．８２％、血清ビタミンＤ＞２０ｎｇ／ｍＬ及び血漿ホモシステイン＜１４ｕｍｏｌ／Ｌ）を達成することは、臨床試験において公式に試験されていない。
【０２１３】
各栄養バイオマーカーのカットオフは、エビデンスベースで事前に確立したが、認知機能の低下を予防するための、個別の栄養要求量又は十分な栄養状態についての推奨は現在のところ存在していない。そのため、本発明者らは、我々の研究知見の感度を初期閾値で試験するために、「集団ベース」のアプローチを用い、我々の基準を試験することも余儀なくされた。また、一般に臨床診療において推奨が強く必要とされる研究領域に報告することも余儀なくされた。ＲＢＣ  ＥＰＡ＋ＤＨＡは、最低四分位値で既に設定されているが（４．８２重量％以下は栄養リスクとしてみなされる）、ＭＡＰＴで観察される分布を使用すると、ビタミンＤはより低く（２０ｎｇ／ｍＬ以下に対して１５ｎｇ／ｍＬ以下）、ホモシステインはより高かった（１４μｍｏｌ／Ｌ以上に対して１８．１μｍｏｌ／Ｌ以上）（表６）。本発明者らは、認知機能の低下速度に対し及ぼす影響がほぼ間違いなく大きいＮＲＩ３（−０．１８／年に対して−０．１０／年）を除いて、見込まれる有意な効果は本質的に変わらないという事実により手応えをもった（表７）。これはまた、栄養リスクについての基準をより極端に不十分なレベルに移動させると、これに対応する影響が認知機能の低下速度に対しより強く現れる、「用量効果」として解釈することもできる。統計分析では、最初に、利用可能な全てのデータを含め、試験アームを調節した。これは、主観的尺度（すなわち、食事歴アンケート）を使用したにもかかわらず、認知機能の低下速度が平均−０．００８／年であったこと、及び食事歴的に栄養の効果量が小さいことと合わせて、ＭＡＰＴにおいて群間の違いが明らかでなかったためである。全ての試験アームを含む一次分析が完了した後、アプローチの有効性及び結果の感度を保証するために、オメガ３の補給を未経験の群のみに限定した事後解析を行った。プラセボのみの群（ｎ＝１７９）におけるこの感度分析では、認知機能の低下において同様の影響が見込まれるＮＲＩ１及び２（β＝−０．１００／年に対して−０．１０８／年）と、効果の強さがほぼ倍であるＮＲＩ３（β＝−０．２０２／年に対して−０．１１０／年）とを除いて、本質的に同様の結果が生じた（表９）。次に、プラセボ群及びＭＤ＋プラセボ群を一緒に合わせたところ、同じ主題が明らかであった（ｎ＝３５５）（ＮＲＩ＝１：β＝−０．０８２／年；ＮＲＩ＝２：β＝−０．０９５／年；ＮＲＩ＝３：β＝−０．１９５／年）。これらの内的整合性は、認知機能の変化速度に対するＮＲＩの効果のロバスト性を高め（ｅｎｃｏｕｒａｇｉｎｇ）、支持するものである。
【０２１４】
ＭＡＰＴ参加者における栄養バイオマーカー濃度の分布は、いくつかの例外を除いて他の集団と類似している。平均血漿ホモシステインは１５μｍｏｌ／Ｌであり、これは、米国において栄養強化がなされる前の時期、並びにその他、欧州における栄養強化がなされていない国々と同様である（Ｇａｎｇｕｌｙ  Ｐ  ｅｔ  ａｌ．（２０１５）Ｎｕｔｒ  Ｊ  １４：６）。しかし、高ホモシステイン血症は、閾値１４μｍｏｌ／Ｌで別の栄養リスク因子を伴う場合にのみ、認知機能の低下速度が増大した。これらの所見は、ＶＩＴＡＣＯＧ試験を含む他の研究とある程度一致している。それらの研究では、ホモシステインを低下させるビタミンＢ群を補給することで、ベースラインにおいて高ホモシステイン血症及び高オメガ３脂肪酸を有する人における認知機能の低下が先延ばされている。また、認知機能面で栄養が十分に最適である人と、栄養面で様々なリスクを抱えている人とを比較する本発明者らの分析も注目に値する。本発明者らが独立した栄養リスク因子として血漿ＨＣｙ（及びその原因に関係するオメガ３）を検出できないのは、このアプローチ、並びに単独の栄養素又は関連する因子に着目している他の研究における明らかな差異に起因している可能性がある。ビタミンＤのレベルは、フランス、ヨーロッパ、及び米国での７０歳以上の高齢者における他の研究と同様であり（Ｆｅａｒｔ  Ｃ  ｅｔ  ａｌ．（２０１７）Ａｌｚｈｅｉｍｅｒｓ  Ｄｅｍｅｎｔ  １３：１２０７−１２１６；Ｇｏｏｄｗｉｌｌ  ＡＭ  ｅｔ  ａｌ．（２０１７）Ｊ  Ａｍ  Ｇｅｒｉａｔｒ  Ｓｏｃ  ６５：２１６１−２１６８）、ＲＢＣ  ＥＰＡ＋ＤＨＡの平均及び中央値は、Ｆｒａｍｉｎｇｈａｍの研究及びＣａｒｄｉｏｖａｓｃｕｌａｒ  Ｈｅａｌｔｈ  Ｓｔｕｄｙで見られたものと類似していたが、検査されたアッセイ及び組織における方法論上の差は、なおも制限のままである（Ｓｔａｒｋ  ＫＤ  ｅｔ  ａｌ．（２０１６）Ｐｒｏｇ  Ｌｉｐｉｄ  Ｒｅｓ  ６３：１３２−１５２；Ｈｅｕｄｅ  Ｂ  ｅｔ  ａｌ．（２００３）Ａｍ  Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ｎｕｔｒ  ７７：８０３−８０８）。
【０２１５】
【表５】
2020516864.tif 000006
表５．集団ベースの栄養バイオマーカーの基準を用いたＭＡＰＴの参加者のベースライン特性。
【０２１６】
【表６】
2020516864.tif 000007
表６．集団ベースの基準（ｎ＝７１２）を用いたＭＡＰＴにおける栄養リスクの割合。「不十分」のカラムにおける塗りつぶしは、集団の四分位値に基づく栄養リスクを示す。
【０２１７】
分析サンプルにおいてＲＢＣ  ＥＰＡ＋ＤＨＡが不十分なものの割合は、２６．４％（１８８／７１２）であった。血清２５−ＯＨ−Ｄ不足の合計割合は４５．２％（３２２／７１２）であり、高ホモシステイン血症の割合は６２．７％であった（４４７／７１２）。
【０２１８】
【表７】
2020516864.tif 000008
表７．感度分析：集団ベースの基準を用いた栄養リスク指数に応じた認知複合Ｚスコアにおける変化率の平均差（ｎ＝７１２）。
【０２１９】
【表８】
2020516864.tif 000009
表８．感度分析：集団ベースの基準を用いた栄養リスク指数で特定された、各別個の栄養リスクプロファイルに応じた認知複合Ｚスコアの変化率の平均差。
【０２２０】
【表９】
2020516864.tif 000010
表９．感度分析：プラセボ群のみ（ｎ＝１７９）に限定された、栄養リスク指数に応じた認知複合Ｚスコアにおける変化率の平均差。
【０２２１】
【表１０】
2020516864.tif 000011
表１０．感度分析：プラセボ及びマルチドメイングループのみ（ｎ＝３５５）に限定された、栄養リスク指数に応じた認知複合Ｚスコアにおける変化率の平均差。
【０２２２】
材料及び方法
試験集団
簡潔に述べると、マルチドメインアルツハイマー予防試験（ＭＡＰＴ）（Ａｎｄｒｉｅｕ  Ｓ  ｅｔ  ａｌ．（２０１７）  Ｌａｎｃｅｔ  Ｎｅｕｒｏｌ  １６：３７７−３８９；Ｖｅｌｌａｓ  Ｂ  ｅｔ  ａｌ．（２０１４）Ｊ  Ｐｒｅｖ  Ａｌｚｈｅｉｍｅｒｓ  Ｄｉｓ  １：１３−２２）は、プラセボにマルチドメイン（ＭＤ）介入を加えたもの、長鎖オメガ３多価不飽和脂肪酸（ＰＵＦＡ）補給、及びＭＤにオメガ３を加えたものという３つの活性物質アームを、プラセボのみの群と比較して試験する４つの平行群による、３年間の多施設無作為化プラセボ比較試験である。フランス及びモナコにまたがり１３箇所の認知症治療施設（ｍｅｍｏｒｙ  ｃｅｎｔｅｒｓ）で、認知機能の障害及び認知症の、診断及び管理の専門家により試験を実施した。その地域に在住する７０歳以上の高齢者は、３つの基準：主治医に記憶障害が自然発症していると訴えたこと、手段的日常生活動作のうち１つが制限されていること、又は４メートルを歩く歩行速度が≦０．８ｍ／秒若しくは＞５秒であると記録されることのうちの少なくとも１つを満たした。ミニメンタルステート検査（ＭＭＳＥ）のスコアが２４未満の参加者は認知症であると診断され、基本的な日常生活動作に支障をきたしている者と、ベースラインにおいてオメガ３ＰＵＦＡ補給剤を摂取している者とは除外した（Ａｎｄｒｉｅｕ  Ｓ  ｅｔ  ａｌ．（２０１７）  Ｌａｎｃｅｔ  Ｎｅｕｒｏｌ  １６：３７７−３８９）。８３１人のＭＡＰＴ参加志願者の全てで採血を行い、これらの試料を適宜保管した。各アームからの合計集団の約２５％に栄養バイオマーカー分析を行ったところ（ｎ＝７９１名）、そのうち７１２名の参加者が一次分析を行うのに十分なデータを有していた。試験プロトコルは、トゥールーズに位置するフランスの倫理委員会（ＣＰＰ  ＳＯＯＭ  ＩＩ）によって承認され、フランスの保健機関によって認証された。当該研究プロトコルは、ＭＡＰＴ／ＤＳＡによって承認され、特定の研究目的を実行するために、組織及び既存のデータの利用を許可された。
【０２２３】
神経心理学的評価
ＭＡＰＴにおける主要評価項目は、１）Ｆｒｅｅ  ａｎｄ  Ｃｕｅｄ  Ｓｅｌｅｃｔｉｖｅ  Ｒｅｍｉｎｄｉｎｇ  Ｔｅｓｔ（Ｇｒｏｂｅｒ  Ｅ  ｅｔ  ａｌ．（１９８８）Ｎｅｕｒｏｌｏｇｙ  ３８：９００−９０３）による、自由再生及び完全記憶能力、２）ＭＭＳＥ見当識の１０項目、３）ウェクスラー成人知能検査−改定版（Ｗｅｃｈｓｌｅｒ  Ｄ．Ｗｅｃｈｓｌｅｒ  ａｄｕｌｔ  ｉｎｔｅｌｌｉｇｅｎｃｅ  ｓｃａｌｅ−ｒｅｖｉｓｅｄ．Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ：Ｐｓｙｃｈｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｃｏｒｐ；１９８１）からのＤｉｇｉｔ  Ｓｙｍｂｏｌ  Ｓｕｂｓｔｉｔｕｔｉｏｎ  Ｔｅｓｔスコア及び４）Ｃａｔｅｇｏｒｙ  Ｎａｍｉｎｇ  Ｔｅｓｔ［すなわち、動物名のカテゴリ流暢性について２分間］）（Ｃａｒｄｅｂａｔ  Ｄ  ｅｔ  ａｌ．（１９９０）Ａｃｔａ  Ｎｅｕｒｏｌ  Ｂｅｌｇ  ９０：２０７−２１７）を含む４つのタスクからなる認知複合Ｚスコアとした。
【０２２４】
栄養バイオマーカーアッセイ
赤血球膜オメガ３脂肪酸．赤血球膜エイコサペンタエン酸（ＥＰＡ、２０：５ｎ−３）及びドコサヘキサエン酸（ＤＨＡ、２２：６ｎ−３）の濃度（％）を、火炎イオン化検出器と連結させたガスクロマトグラフィーを用いて定量した。簡潔に述べると、遠心分離によって赤血球を血漿から分離し、３回洗浄した後、酸性化し、ヘキサンとイソプロパノールとの混合物を含むＦｏｌｃｈ法による脂質抽出を行う。マルガリン酸（Ｓｉｇｍａ）を内部標準として添加する。全脂質抽出物を鹸化し、メチル化した。脂肪酸メチルエステルをペンタンで抽出し、スプリットインジェクター、結合型シリカキャピラリカラム（ＢＰＸ７０、６０ｍ×０．２５ｍｍ；０．２５μｍの膜厚）及び水素炎イオン化検出器を取り付けたＡｇｉｌｅｎｔ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ  ６８９０Ｎガスクロマトグラフを使用して、ガスクロマトグラフィー（ＧＣ）で分析した。キャリアガスとしてヘリウムを使用し、カラム温度プログラムを１５０℃で開始し、２２０℃まで１．３℃／分で上昇させ、２２０℃で１０分間保持した（Ｌｅｇｒａｎｄ  Ｐ  ｅｔ  ａｌ．（２０１０）Ｌｉｐｉｄｓ  ４５：１１−１９）。ＦＡＭＥの特定は、脂肪酸標準から調製されたＦＡＭＥに得られた保持時間に基づいた。曲線下面積を、ＣｈｅｍＳｔａｔｉｏｎソフトウェア（Ａｇｉｌｅｎｔ）を使用して求めた。ＥＰＡ及びＤＨＡ濃度は、内部標準を用いて計算し、μｇ／ｇの赤血球として表現した。ＦＡメチルエステル（ＦＡＭＥ）は、ＣＰ  Ｗａｘ  ５８ＣＢ  ５０−ｍ溶融シリカキャピラリカラムを備えたＧＣ２１００ガスクロマトグラフ（Ｓｈｉｍａｄｚｕ）を使用するＦＡＭＥ分析を使用して、メチル基転移後に定量可能である。温度をプログラムした噴霧インジェクタ及び火炎イオン化検出器によりＥＰＡ及びＤＨＡを計算し、ＲＢＣ  ＥＰＡ＋ＤＨＡとして標識された全脂肪酸の割合（％）として表した。
【０２２５】
血清２５−ヒドロキシビタミンＤ．総２５−ヒドロキシビタミンＤをインビトロ測定するために、電気化学発光結合アッセイを利用した（Ｃｏｂａｓ８０００（Ｒｏｃｈｅ））。このアッセイは、全血清ビタミンＤ（２５−ＯＨ）を定量することを意図して、ビタミンＤ結合タンパク質（ＶＤＢＰ）を用いて、２５−ヒドロキシビタミンＤ３及びＤ２の両方を捕捉する（Ｈｏｌｉｃｋ  ＭＦ  ｅｔ  ａｌ．（２００９）Ａｎｎ  Ｅｐｉｄｅｍｉｏｌ  １９：７３−７８）。簡潔に述べると、サンプルを前処理試薬と９分間インキュベートし、サンプル中の天然ＶＤＢＰを変性させて、結合していたビタミンＤ（２５−ＯＨ−Ｄ）を放出させる。次いで、サンプルを、組換えルテニウムで標識したＶＤＢＰと共に更にインキュベートして、２５−ＯＨ−Ｄとルテニル化−ＶＤＢＰとの複合体を形成する。ビオチン化２５−ＯＨ−Ｄの添加により、ルテニウム標識ＶＤＢＰとビオチン化２５−ＯＨ−Ｄとからなる複合体が生成される。複合体全体は、ビオチン及びストレプトアビジンコーティングされた微小粒子の相互作用によって固相に結合され、電極の表面上に捕捉される。結合しなかった物質を除去する。電極に電圧を加えることにより、光電子増倍器によって測定される化学発光放出が誘発される。結果は、２点較正及び試薬バーコードを介して提供される較正マスター曲線によって生成される、機器固有の検量線により決定される。単位はｎｇ／ｍＬとして表される。
【０２２６】
血漿ホモシステイン．総血漿ホモシステインは、市販の酵素サイクリングアッセイ（Ｃｏｂａｓ  ８０００（Ｒｏｃｈｅ））を使用して測定した（Ｄｏｕ  Ｃ  ｅｔ  ａｌ．（２００５）Ｃｌｉｎ  Ｃｈｅｍ  ５１：１９８７−１９８９）。血漿試料中の総血漿ホモシステインのレベルを、標準曲線に対してμｍｏｌ／Ｌで測定した。酸化されたホモシステインを最初に還元し、次いで、Ｓ−アデノシルメチオニンと反応させて、ホモシステインＳ−メチルトランスフェラーゼの存在下でメチオニン及びＳ−アデノシルホモシステイン（ＳＡＨ）を生成した。次いで、ＳＡＨを、ＳＡＨがＳＡＨ加水分解酵素によりアデノシン及びホモシステインに加水分解される共役酵素反応により評価する。ホモシステインは、検出シグナルを増幅させるホモシステイン変換反応に利用される。形成されたアデノシンを、イノシン及びアンモニアに加水分解する。グルタメートデヒドロゲナーゼは、アンモニアと２−オキソグルタレート及びＮＡＤＨとの反応を触媒して、ＮＡＤ＋を生成する。試料中のホモシステインの濃度は、ＮＡＤ＋に変換されたＮＡＤＨの量に正比例し、これは、３４０ｎｍの吸光度で分光法で読み取った。単位はμｍｏｌ／Ｌとして表す。
【０２２７】
栄養バイオマーカーを使用した認知の栄養リスク指数の開発
栄養リスク指数は、以下の基準：１）栄養及び代謝の定量的及び客観的尺度、２）十分に検証された生化学的分析アプローチ、３）認知機能の低下及び認知症における生物学的妥当性を有する栄養バイオマーカーを含むこと、４）食事摂取又は栄養補給によって変更可能であること、を用いて概念化した。これらの基準を満たす栄養バイオマーカーのうち、３つが選択された：１）オメガ３脂肪酸代謝及び／又は摂取を表す、赤血球膜エイコサペンタエン酸（２０：５ｎ−３）及びドコサヘキサエン酸（２２：６ｎ−３）（ＲＢＣ  ＥＰＡ＋ＤＨＡ）（Ｂｏｗｍａｎ  ＧＬ  ｅｔ  ａｌ．（２０１３）Ｆｒｏｎｔ  Ａｇｉｎｇ  Ｎｅｕｒｏｓｃｉ  ５：９２）、２）２５−ＯＨ−Ｄ２及び２５−ＯＨ−Ｄ３の両方を包含する血清総２５−ＯＨ−Ｄ、１α２５−ＯＨ−Ｄに対する前駆体及びＶＤＲによる遺伝子発現及び食事暴露の調節因子（ｒｅｇｕｌａｔｏｒ  ｏｆ  ＶＤＲ  ｍｅｄｉａｔｅｄ  ｇｅｎｅ  ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  ａｎｄ  ｄｉｅｔａｒｙ  ｅｘｐｏｓｕｒｅ）（Ｆｅａｒｔ  Ｃ  ｅｔ  ａｌ．（２０１７）Ａｌｚｈｅｉｍｅｒｓ  Ｄｅｍｅｎｔ  １３：１２０７−１２１６；Ｍｉｌｌｅｒ  ＪＷ  ｅｔ  ａｌ．（２０１５）ＪＡＭＡ  Ｎｅｕｒｏｌ  ７２：１２９５−１３０３；Ｇｏｏｄｗｉｌｌ  ＡＭ  ｅｔ  ａｌ．（２０１７）Ｊ  Ａｍ  Ｇｅｒｉａｔｒ  Ｓｏｃ  ６５：２１６１−２１６８）、３）１炭素代謝のマーカーとして及び特定のビタミンＢ（Ｂ６、Ｂ９、Ｂ１２、ベタイン）摂取の指標としての血漿総ホモシステイン（Ｄａｙｏｎ  Ｌ  ｅｔ  ａｌ．（２０１７）Ａｌｚｈｅｉｍｅｒｓ  Ｒｅｓ  Ｔｈｅｒ  ９：４３）。各参加者のＮＲＩスコアは、不十分な状態に関する以下の定義：１）ＲＢＣ  ＥＰＡ＋ＤＨＡ≦４．８２（Ａｎｄｒｉｅｕ  Ｓ  ｅｔ  ａｌ．（２０１７）Ｌａｎｃｅｔ  Ｎｅｕｒｏｌ  １６：３７７−３８９；Ｔａｎ  ＺＳ  ｅｔ  ａｌ．（２０１２）Ｎｅｕｒｏｌｏｇｙ  ７８：６５８−６６４；Ｈｏｏｐｅｒ  Ｃ  ｅｔ  ａｌ．（２０１７）Ｊ  Ｎｕｔｒ  Ｈｅａｌｔｈ  Ａｇｉｎｇ  ２１：９８８−９９３）、２）血清ビタミンＤ≦２０ｎｇ／ｍＬ（Ｆｅａｒｔ  Ｃ  ｅｔ  ａｌ．（２０１７）Ａｌｚｈｅｉｍｅｒｓ  Ｄｅｍｅｎｔ  １３：１２０７−１２１６；Ｒｏｓｓ  ＡＣ  ｅｔ  ａｌ．（２０１１）Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ  Ｍｅｔａｂ  ９６：５３−５８）、及び３）血漿ホモシステイン≧１４μｍｏｌ／Ｌ（Ｓｅｓｈａｄｒｉ  Ｓ  ｅｔ  ａｌ．（２００２）Ｎ  Ｅｎｇｌ  Ｊ  Ｍｅｄ  ３４６：４７６−４８３）を含む、入手可能な文献に基づくバイナリコード化した栄養バイオマーカーの合計とした。感度分析の一部として、ＭＡＰＴコホートに観察された各栄養バイオマーカーの分布を用い栄養リスクを規定するため、「集団ベースの」アプローチを使用した。これにより、血清ビタミンＤの最低四分位値（≦１５１５ｎｇ／ｍＬ）及び血漿ホモシステインの最大四分位値（≧１８．１μｍｏｌ／Ｌ）に関して不十分な基準が得られ、一方でＲＢＣ  ＥＰＡ＋ＤＨＡの最低四分位値は変化しなかった。
【０２２８】
統計の分析
記述統計．各対象の各栄養バイオマーカーに関する濃度が不十分な場合、バイナリコード化を用いてポイントを受けた。各栄養バイオマーカーにわたる個体群統計及び臨床医特性評価分布を比較し、潜在的な効果修飾因子を特定し、主要評価、認知複合Ｚスコアにわたり、潜在的な交絡因子を特定する。各栄養バイオマーカーの分布は、バイオマーカー濃度を表すｘ軸と、各濃度の頻度を表すｙ軸をもつヒストグラムとして表される。特定された効果修飾子による積み上げヒストグラムが表される（つまり、性別、ＡＰＯＥ４遺伝子型）。
【０２２９】
分析的アプローチ及び仮定試験．線形混合効果モデルを使用して、栄養バイオマーカー分析を受けるおおよその参加者において、３年にわたるベースラインＮＲＩスコアと認知複合Ｚスコアの変化率との関係を評価する。最初に、ＮＲＩスコアと認知複合Ｚスコアの変化との関係を、各栄養バイオマーカーに応じた認知機能の変化に対する効果推定の大きさが均一であるという仮定の下で評価した。したがって、バイオマーカー１のいずれかが関与し得るものの、１つのみの場合にはＮＲＩ１について不十分な基準を満たし、ＮＲＩ２については任意の２の条件を満たすことができる。次に、効果は不均一であり、ＮＲＩスコアを構成する特定の栄養バイオマーカー又は個別の栄養バイオマーカーの組み合わせに依存するという仮定の下で、ＮＲＩスコアと認知機能の変化との関係を評価した。このアプローチにより、８つの異なるＮＲＩスコアが得られた。それぞれ栄養リスクなし又は最大リスクを表す、ＮＲＩ０及びＮＲＩ３は変化しない。ＮＲＩ１の場合、可能性のある３つの栄養リスクプロファイルが得られ、各栄養バイオマーカーに関し、１つが不十分と判断された。ＮＲＩ２の場合、可能性のある３つの栄養リスクプロファイルが得られた。ランダム効果として切片と勾配を用い、混合モデルのそれぞれをベースラインの年齢、性別、教育（年数）、及び試験群（モデル１）に対して調整した。ＡＰＯＥ４キャリアの状態とベースラインＣＤＲ（モデル２）を更に調整した。第一の結果の感度を調べるには、次の２つのアプローチが存在する。１）各ＮＲＩスコアを構成する各栄養バイオマーカーのカットオフのバイナリコーディングに、集団ベースの基準（四分位値）を使用すること、２）ＮＲＩの分析を、オメガ３補給が未経験の参加者（プラセボのみ、プラセボとマルチドメイン介入アームのみ）に制限すること。
【０２３０】
実施例２
以下の非限定的な例は、本開示によって提供される実施形態において、認知症ではない個体における認知機能の老化を緩和するための組成物の例示である。
【０２３１】
【表１１】
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本発明は、以下の番号付けされた段落によって更に説明される。
【０２３２】
１．  認知的加齢の緩和、治療、又は予防を必要とする又はこれらのリスクのある、認知症ではない個体における、これらの軽減、治療、又は予防方法であって、治療的に有効な量のオメガ−３脂肪酸、ビタミンＢ６、及びビタミンＢ９を含む組成物を個体に投与することを含む、方法。
２．  個体が高齢の成人である、段落１に記載の方法。
３．  個体が老齢のヒトである、段落１又は２に記載の方法。
４．  組成物が、少なくとも１ヶ月間毎日個体に経口投与される、段落１〜３のいずれかに記載の方法。
５．  組成物が、酸化窒素放出化合物を更に含む、段落１〜４のいずれかに記載の方法。
６．  一酸化窒素放出化合物がシトルリンを含む、段落５に記載の方法。
７．  オメガ−３脂肪酸が、ドコサヘキサエン酸、エイコサペンタエン酸、及びこれらの混合物からなる群から選択される脂肪酸を含む、段落１〜６のいずれかに記載の方法。
８．  組成物が、ビタミンＢ１、ビタミンＢ２、ビタミンＢ３、ビタミンＢ５、ビタミンＢ７及びビタミンＢ１２からなる群から選択される１種以上の追加のビタミンＢを含む、段落１〜７のいずれかに記載の方法。
９．  組成物が、ビタミンＣ、ビタミンＤ、ビタミンＥ、及びセレンからなる群から選択される１種以上の酸化防止剤を含む、段落１〜８のいずれかに記載の方法。
１０．  個体が、ベースラインにおいて低ＤＨＡ状態である、段落１〜９のいずれかに記載の方法。
１１．  個体が、ベースラインで０．５の臨床的認知症尺度（ＣＤＲ）を有する、段落１〜１０のいずれかに記載の方法。
１２．  個体が、ベースラインで少なくとも１２μｍｏｌ／Ｌの低血漿ホモシステインのレベルである、段落１〜１１のいずれかに記載の方法。
１３．  個体が、ベースラインで心臓血管リスク因子、加齢及び認知症（ＣＡＩＤＥ）において１０〜１５のリスクスコアを有する、段落１〜１２のいずれかに記載の方法。
１４．  個体が、ベースラインでアミロイドのＰＥＴスキャンでアミロイド陽性である、段落１〜１３のいずれかに記載の方法。
１５．  個体が、認知機能の低下のリスクを示す遺伝子型を有する、段落１〜１４のいずれかに記載の方法。
１６．  組成物が、０．１３ｍｇ／日〜１３０ｍｇ／日のビタミンＢ６、及び／又は０．００４ｍｇ／日〜２．０ｍｇ／日のビタミンＢ９を提供する１日用量で個体に投与される、段落１〜１５のいずれかに記載の方法。
１７．  組成物が、１日当たり０．００２ｍｇ〜０．４ｍｇのビタミンＢ１２、好ましくは１日当たり０．０２〜０．０７ｍｇのビタミンＢ１２、より好ましくは１日当たり０．０３〜０．０５ｍｇのビタミンＢ１２を提供する１日用量で個体に投与される、段落１〜１６のいずれかに記載の方法。
１８．  投与により、神経細胞の細胞膜流動性の改善、神経細胞の可塑性及び活性の刺激、抗炎症性の改善、認知能力の支持又は維持、脳の性能の支持又は維持、脳の老化の低下、活発な精神及び脳の適応度の支持、健康な脳の支持又は維持、記憶の強化、遂行機能の強化、注意の強化、認知健康の維持、脳細胞の健康の維持が提供される、段落１〜１７のいずれかに記載の方法。
１９．  認知的加齢の緩和、治療、又は予防を必要とする又はこれらのリスクのある、認知症ではない個体における、これらの軽減、治療、又は予防方法であって、治療有効量のオメガ−３脂肪酸、ビタミンＢ６、及びビタミンＢ９を含む組成物を個体に投与することを含む、方法。
２０．  脳萎縮の減少、シナプスの数の増加又は維持、アミロイド−β食作用の増加又は維持、及び神経炎症の減少からなる群から選択される１つ以上の利益を必要とする、認知症ではない個体において、これらを達成する方法であって、オメガ−３脂肪酸、ビタミンＢ６、及びビタミンＢ１２を含む治療有効量の組成物を個体に投与することを含む、方法。
２１．  オメガ−３脂肪酸、ビタミンＢ６及びビタミンＢ１２の組み合わせを含む組成物、及び認知症ではない個体における認知的加齢を緩和するのに有効な量の組み合わせを含む組成物。
２２．  組成物が、組成物の１〜５０重量％の量のオメガ−３脂肪酸、１日当たり０．００２ｍｇ〜０．４ｍｇのビタミンＢ１２、好ましくは１日当たり０．０２〜０．０７ｍｇのビタミンＢ１２を含む、段落２１に記載の組成物。
２３．  組成物が、タンパク質、炭水化物、脂肪、及びこれらの組み合わせからなる群から選択される構成成分を含む食品製品である、段落２１又は２２に記載の組成物。
２４．  組成物が、製薬上許容できる担体、希釈剤、及び賦形剤からなる群から選択される成分を含む医薬組成物である、段落２１又は２２に記載の組成物。
２５．  認知的加齢の緩和、治療、又は予防を必要とする、認知症ではない個体における、これらの緩和、治療、又は予防に使用するための、段落２１〜２４のいずれかに記載の組成物。
２６．  神経細胞の細胞膜流動性の改善、神経細胞の可塑性及び活性の刺激、抗炎症性の改善、認知能力の支持又は維持、脳の性能の支持又は維持、脳の老化の低下、活発な精神及び脳の適応度の支持、健康な脳の支持又は維持、記憶の強化、遂行機能の強化、注意の強化、認知健康の維持、は脳細胞の健康の維持の改善に使用する、段落２１〜２５のいずれかに記載の組成物。
２７．  認知症ではない個体における認知的加齢を緩和するための食品組成物の製造方法であって、有効量のオメガ−３脂肪酸、ビタミンＢ６及びビタミンＢ９の組み合わせを、タンパク質、炭水化物、及び脂肪からなる群から選択される少なくとも１つの成分に添加することを含む、方法。
２８．  認知症ではない個体における認知的加齢を緩和するための医薬組成物の製造方法であって、有効量のオメガ−３脂肪酸、ビタミンＢ６及びビタミンＢ９の組み合わせを、製薬上許容できる担体、希釈剤及び賦形剤からなる群から選択される少なくとも１つの成分に添加することを含む、方法。
２９．  リスクのある個体における認知症を予防する方法であって、治療有効量のオメガ−３脂肪酸、ビタミンＢ６、及びビタミンＢ９を含む組成物を個体に投与することを含む、方法。
３０．  予防される認知症が、アルツハイマー病、血管性認知症、レヴィー小体認知症、前頭側頭型認知症及びそれらの組み合わせからなる群から選択される、段落２９に記載の方法。
３１．  認知症ではない個体における認知能力を改善する方法であって、治療有効量のオメガ−３脂肪酸、ビタミンＢ６、及びビタミンＢ９を含む組成物を個体に投与することを含む、方法。
【０２３３】
上記明細書で言及した全ての出版物は、本明細書に参照により組み込まれる。開示される薬剤、組成物、本発明の使用及び方法の様々な修正及び変更は、本発明の範囲及び主旨から逸脱することなく、当業者には明白であろう。本発明は、特定の好ましい実施形態に関連して開示されているが、特許請求される本発明は、このような特定の実施形態に過度に限定されるべきではないことを理解されたい。実際、当業者には自明の、開示した、本発明を実施するためのモードの種々の改変は以下の特許請求の範囲の範囲内であることを意図している。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【国際調査報告】
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