(57)【要約】【課題】抗Ｇ−ＣＳＦ抗体及びその使用を提供する。【解決手段】本出願は、抗Ｇ−ＣＳＦ抗体の作製方法、抗Ｇ−ＣＳＦ抗体、抗Ｇ−ＣＳＦ抗体の活性をスクリーニングする方法、抗Ｇ−ＣＳＦ抗体の医薬組成物、抗Ｇ−ＣＳＦ抗体を含むキット、及び疾患を治療するための抗Ｇ−ＣＳＦ抗体の使用方法を開示する。【選択図】図１０
2020507339.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
顆粒球コロニー刺激因子（Ｇ−ＣＳＦ）に結合し、
ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１又はその中に保存的置換を有するＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１として参照される重鎖ＣＤＲ１；
ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２又はその中に保存的置換を有するＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２として参照される重鎖ＣＤＲ２；
ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３又はその中に保存的置換を有するＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３として参照される重鎖ＣＤＲ３；
ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４又はその中に保存的置換を有するＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４として参照される軽鎖ＣＤＲ１；
ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５又はその中に保存的置換を有するＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５として参照される軽鎖ＣＤＲ２；及び
ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：６又はその中に保存的置換を有するＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：６として参照される軽鎖ＣＤＲ３を含む、単離若しくは精製された抗体、又はその抗原結合断片。
【請求項２】
ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：７として参照される重鎖可変領域及びＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：８として参照される軽鎖可変領域を含む、請求項１に記載の単離若しくは精製された抗体、又はその抗原結合断片。
【請求項３】
顆粒球コロニー刺激因子（Ｇ−ＣＳＦ）に結合し、
ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：９又はその中に保存的置換を有するＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：９として参照される重鎖ＣＤＲ１；
ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１０又はその中に保存的置換を有するＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１０として参照される重鎖ＣＤＲ２；
ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１１又はその中に保存的置換を有するＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１１として参照される重鎖ＣＤＲ３；
ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１２又はその中に保存的置換を有するＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１２として参照される軽鎖ＣＤＲ１；
ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１３又はその中に保存的置換を有するＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１３として参照される軽鎖ＣＤＲ２；及び
ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１４又はその中に保存的置換を有するＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１４として参照される軽鎖ＣＤＲ３を含む、単離若しくは精製された抗体、又はその抗原結合断片。
【請求項４】
ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１５として参照される重鎖可変領域及びＳＥＱ
ＩＤ  ＮＯ：１６として参照される軽鎖可変領域を含む、請求項３に記載の単離若しくは精製された抗体、又はその抗原結合断片。
【請求項５】
請求項１乃至４のいずれか１項に記載の抗体又はその抗原結合断片をコードする核酸。
【請求項６】
請求項５に記載の核酸を含む宿主細胞又は発現ベクター。
【請求項７】
３７℃での表面プラズモン共鳴により測定される約２ｎＭ以下のＧ−ＣＳＦに対する結合親和性（ＫD）を含む、請求項１乃至６のいずれか１項に記載の単離された抗Ｇ−ＣＳＦ抗体又はその抗原結合断片。
【請求項８】
前記抗体は、ＩｇＧ、ＩｇＭ、ＩｇＥ、ＩｇＡ、ＩｇＤであるか又はそれらから誘導される請求項１乃至７のいずれか１項に記載の抗体又はその抗原結合断片。
【請求項９】
前記抗体は、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２ａ、ＩｇＧ２ｂ、ＩｇＧ３、及びＩｇＧ４からなる群より選択されるＩｇＧである、請求項８記載の抗体又はその抗原結合断片。
【請求項１０】
前記抗体は、Ｆｃ領域を含む、請求項１乃至９のいずれか１項に記載の抗体又はその抗原結合断片。
【請求項１１】
前記抗体は、モノクローナル抗体、移植抗体、キメラ抗体、ヒト抗体、又はヒト化抗体である、請求項１乃至１０のいずれか１項に記載の抗体。
【請求項１２】
前記抗体は、脱免疫化抗体である、請求項１乃至１１のいずれか１項に記載の抗体。
【請求項１３】
前記抗原結合断片は、Ｆａｂ断片、Ｆａｂ’断片、Ｆ（ａｂ’）２断片、ＦV断片、ｓｃＦV断片、単鎖結合ポリペプチド、Ｆｄ断片、可変重鎖、可変軽鎖及びｄＡｂ断片からなる群より選択される、請求項１記載の抗原結合断片。
【請求項１４】
治療薬に結合された、請求項１乃至１３のいずれか１項に記載の抗体又はその抗原結合断片。
【請求項１５】
前記治療薬は、毒素、薬物、酵素、サイトカイン、放射性核種、及び光力学剤からなる群より選択される、請求項１４記載の抗体又はその抗原結合断片。
【請求項１６】
前記毒素を含み、該毒素は、リシンＡ鎖、変異体シュードモナス外毒素、ジフテリアトキソイド、ストレプトニグリン、ボアマイシン、サポリン、ゲロニン、及びヤマゴボウ抗ウイルスタンパク質からなる群より選択される、請求項１５記載の抗体又はその抗原結合断片。
【請求項１７】
前記薬物を含み、該薬物は、ダウノルビシン、メトトレキサート、及びカリケアマイシンからなる群より選択される、請求項１５記載の抗体又はその抗原結合断片。
【請求項１８】
前記放射性核種を含み、該放射性核種は、放射性金属である、請求項１５に記載の抗体又はその抗原結合断片。
【請求項１９】
前記サイトカインを含み、該サイトカインは、形質転換成長因子（ＴＧＦ）−β、インターロイキン、インターフェロン、及び腫瘍壊死因子を含むが、これらに限定されないものからなる群より選択される、請求項１５に記載の抗体又はその抗原結合断片。
【請求項２０】
前記光力学剤を含み、該光力学剤は、フォトポルフィリン及びその誘導体からなる群より選択される、請求項１５に記載の抗体又はその抗原結合断片。
【請求項２１】
請求項１乃至２０のいずれか１項に記載の抗体又はその抗原結合断片と、薬学的に許容される担体又は賦形剤とを含む医薬組成物。
【請求項２２】
血管新生阻害剤を更に含む、請求項２１に記載の医薬組成物。
【請求項２３】
前記血管新生阻害剤は、抗ＶＥＧＦ剤又は化学療法剤である、請求項２２に記載の医薬組成物。
【請求項２４】
経口投与、舌下投与、吸入投与、経皮投与、皮下投与、静脈内投与、動脈内投与、関節内投与、関節周囲投与、又は筋肉内投与のために処方された、請求項２１乃至２３のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【請求項２５】
請求項２１乃至２４のいずれか１項に記載の医薬組成物を対象者に投与することを含む、それを必要とする対象者における癌を治療する方法。
【請求項２６】
前記癌は、肺癌、乳癌、卵巣癌、結腸癌、膵臓癌、脳癌、皮膚癌、又はそれらのいずれかの転移である、請求項２５に記載の方法。
【請求項２７】
前記医薬組成物は、静脈内、経口、舌下、吸入、経皮、皮下、動脈内、関節内、関節周囲、又は筋肉内に投与される、請求項２５又は２６に記載の方法。
【請求項２８】
前記医薬組成物中の前記抗体又はその抗原結合断片は、Ｇ−ＣＳＦ活性を中和する、請求項２５乃至２７のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２９】
前記医薬組成物中の前記抗体又はその抗原結合断片は、樹状細胞の成長又は成熟を増加させる、請求項２５乃至２８のいずれか１項に記載の方法。
【請求項３０】
前記医薬組成物中の前記抗体又はその抗原結合断片は、ＭＤＳＣを減少させる、請求項２５乃至２９のいずれか１項に記載の方法。
【請求項３１】
前記対象者は、前記医薬組成物の投与後にＴ細胞の抑制の減少を示す、請求項２５乃至２９のいずれか１項記載の方法。
【請求項３２】
前記対象者は、前記医薬組成物の投与後に白血球のＳＴＡＴ３活性化の減少を示す、請求項２５乃至２９のいずれか１項に記載の方法。
【請求項３３】
顆粒球コロニー刺激因子（Ｇ−ＣＳＦ）に結合し、全てその中に保存的置換を有するＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２４、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２７、ＳＥＱ  ＩＤ
ＮＯ：２８、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２９、又はＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３０として参照される重鎖、並びに、全てその中に保存的置換を有するＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２３、ＳＥＱ
ＩＤ  ＮＯ：２５、又はＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２６として参照される軽鎖を含む、単離若しくは精製された抗体、又はその抗原結合断片。
【請求項３４】
３７℃での表面プラズモン共鳴により測定される約２ｎＭ以下のＧ−ＣＳＦに対する結合親和性（ＫD）を含む、請求項３３のいずれか１項に記載の単離された抗Ｇ−ＣＳＦ抗体、又はその抗原結合断片。
【請求項３５】
請求項３３又は３４に記載の抗体又はその抗原結合断片と、薬学的に許容される担体又は賦形剤とを含む医薬組成物。
【請求項３６】
請求項３５に記載の医薬組成物を対象者に投与することを含む、それを必要とする対象者における癌を治療する方法。
【請求項３７】
請求項２１又は請求項３５に記載の医薬組成物を対象者に投与することを含む、それを必要とする対象者における関節炎を治療する方法。
【請求項３８】
前記抗体が、対象者における循環からのＧ−ＣＳＦのクリアランスの増加のために操作される、請求項１乃至４、７乃至２０、３３、及び３４のいずれか１項に記載の単離若しくは精製された抗体、又はその抗原結合断片。
【請求項３９】
請求項３８に記載の抗体又はその抗原結合断片を含む医薬組成物。
【請求項４０】
ここに記載される任意の特徴、特徴の組み合わせ及び／又は特徴のサブコンビネーションを含む組成物。
【請求項４１】
ここに記載される任意の特徴、特徴の組み合わせ及び／又は特徴のサブコンビネーションを含む方法。
【請求項４２】
ここに記載される任意の特徴、特徴の組み合わせ及び／又は特徴のサブコンビネーションを含む使用。
【請求項４３】
ここに記載される任意の特徴、特徴の組み合わせ及び／又は特徴のサブコンビネーションを含むキット。
【請求項４４】
ここに記載される任意の特徴、特徴の組み合わせ及び／又は特徴のサブコンビネーションを含む医薬品パッケージ。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
この出願は、２０１７年２月７日に出願された米国仮出願第６２／４５５，９９１号の優先権を主張するが、その全体が参照によりここに組み込まれる。
【背景技術】
【０００２】
本発明の背景
癌は先進国における主な死因の一つであり、毎年世界中で１，４００万を超える新たな癌の症例が発生している。遺伝的及び環境的要因が癌を引き起こす可能性があり、癌のリスクは年齢とともに著しく増加する。癌の発生率は、人々が長生きするにつれて、そして発展途上国で生活様式の変化が起こるにつれて増加している。癌の増殖は、無効な免疫系の活性化と慢性的な炎症によって裏付けられ得る。
【０００３】
感染又は炎症は、しばしば、感染の排除において生物学的役割を果たすサイトカインの放出に関連する。慢性炎症の間、これらの同じサイトカインは炎症と疾患の症状を持続させるのに重要な役割を果たし得る。加えて、サイトカインがニューロンのシグナル伝達を修飾することによって疼痛に影響を及ぼし得るという証拠が増えている。顆粒球コロニー刺激因子（Ｇ−ＣＳＦ）は、癌と関節炎のような慢性炎症性疾患の両方に重要な役割を果たす。
【発明の概要】
【０００４】
本開示の１観点に従って、顆粒球コロニー刺激因子（Ｇ−ＣＳＦ）に結合し、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１又はその中に保存的置換を有するＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１として参照される重鎖ＣＤＲ１；
ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２又はその中に保存的置換を有するＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２として参照される重鎖ＣＤＲ２；
ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３又はその中に保存的置換を有するＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３として参照される重鎖ＣＤＲ３；
ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４又はその中に保存的置換を有するＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４として参照される軽鎖ＣＤＲ１；
ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５又はその中に保存的置換を有するＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５として参照される軽鎖ＣＤＲ２；及び
ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：６又はその中に保存的置換を有するＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：６として参照される軽鎖ＣＤＲ３を含む、単離若しくは精製された抗体、又はその抗原結合断片が提供される。１例において、単離若しくは精製された抗体、又はその抗原結合断片は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：７として参照される重鎖可変領域及びＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：８として参照される軽鎖可変領域を含む。別の例において、そのような抗体は１Ｂ１１として参照される。
【０００５】
本開示の別の観点に従って、顆粒球コロニー刺激因子（Ｇ−ＣＳＦ）に結合し、
ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：９又はその中に保存的置換を有するＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：９として参照される重鎖ＣＤＲ１；
ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１０又はその中に保存的置換を有するＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１０として参照される重鎖ＣＤＲ２；
ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１１又はその中に保存的置換を有するＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１１として参照される重鎖ＣＤＲ３；
ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１２又はその中に保存的置換を有するＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１２として参照される軽鎖ＣＤＲ１；
ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１３又はその中に保存的置換を有するＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１３として参照される軽鎖ＣＤＲ２；及び
ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１４又はその中に保存的置換を有するＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１４として参照される軽鎖ＣＤＲ３を含む、単離若しくは精製された抗体、又はその抗原結合断片が提供される。１例において、単離若しくは精製された抗体、又はその抗原結合断片は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１５として参照される重鎖可変領域及びＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１６として参照される軽鎖可変領域を含む。別の例において、そのような抗体は３Ｂ３として参照される。
【０００６】
本開示の別の観点に従って、顆粒球コロニー刺激因子（Ｇ−ＣＳＦ）に結合し、全てその中に保存的置換を有するＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２４、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２７、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２８、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２９、又はＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３０として参照される重鎖、並びに、全てその中に保存的置換を有するＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２３、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２５、又はＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２６として参照される軽鎖を含む、単離若しくは精製された抗体、又はその抗原結合断片が提供される。
【０００７】
本開示の別の観点に従って、ここに記載される抗体、又はその抗原結合断片をコードする核酸が提供される。１例において、ここに記載される抗Ｇ−ＣＳＦ抗体は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１７によりコードされる可変重鎖及びＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１８によりコードされる可変軽鎖を有する。別の例において、ここに記載される抗Ｇ−ＣＳＦ抗体は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１９によりコードされる可変重鎖及びＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２０によりコードされる可変軽鎖を有する。ここに記載される核酸配列を含むか又はここに記載されるポリペプチド配列をコードする発現ベクター及び／又は宿主細胞が調製され得る。
【０００８】
幾つかの態様において、ここに記載される単離された抗Ｇ−ＣＳＦ抗体又はその抗原結合断片は、３７℃での表面プラズモン共鳴により測定される２ｎＭ以下のＧ−ＣＳＦに対する結合親和性（ＫD）を含む。
【０００９】
幾つかの態様において、ここに記載される抗体又はその抗原結合断片は、ＩｇＧ、ＩｇＭ、ＩｇＥ、ＩｇＡ若しくはＩｇＤであり得るか又はそれらから誘導される。抗体又はその抗原結合断片がＩｇＧである場合、該ＩｇＧは、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２ａ、ＩｇＧ２ｂ、ＩｇＧ３、又はＩｇＧ４であり得る。
【００１０】
幾つかの態様において、ここに記載される抗体又はその抗原結合断片は、幾つかの例において、Ｆｃ領域の一部又は全部を含み得る。
【００１１】
幾つかの態様において、ここに記載される抗体は、例えば、モノクローナル抗体、移植抗体、キメラ抗体、ヒト抗体、ヒト化抗体等であり得る。
【００１２】
幾つかの態様において、ここに記載される抗体又はその抗原結合断片は、例えば、脱免疫化抗体でもあり得る。
【００１３】
幾つかの態様において、抗原結合断片は、Ｆａｂ断片、Ｆａｂ’断片、Ｆ（ａｂ’）2断片、ＦV断片、ｓｃＦV断片、単鎖結合ポリペプチド、Ｆｄ断片、可変重鎖、可変軽鎖、ｄＡｂ断片、単一ドメイン抗体等であり得る。
【００１４】
幾つかの態様において、単離若しくは精製された抗体、又はその抗原結合断片は、対象者の循環からのＧ−ＣＳＦのクリアランスの増加のために操作される。幾つかの態様において、該二重特異性抗体は、Ｇ−ＣＳＦ及びＦｃ受容体に結合して、対象者における循環からの、結合したＧ−ＣＳＦのクリアランスの速度の増加を可能とする。
【００１５】
幾つかの態様において、ここに記載される抗体又はその抗原結合断片は、治療薬に結合され得る。治療薬は、例えば、毒素、薬物、酵素、サイトカイン、放射性核種、光力学剤等であり得る。
【００１６】
幾つかの態様において、毒素は、例えば、リシンＡ鎖、変異体シュードモナス外毒素、ジフテリアトキソイド、ストレプトニグリン、ボアマイシン、サポリン、ゲロニン、ヤマゴボウ抗ウイルスタンパク質等であり得る。
【００１７】
幾つかの態様において、薬物は、例えば、ダウノルビシン、メトトレキサート、カリケアマイシン又は本技術分野において既知の他の治療薬であり得る。
【００１８】
幾つかの態様において、放射性核種は、放射性金属を含むが、これに限定されない。
【００１９】
幾つかの態様において、サイトカインは、例えば、形質転換成長因子（ＴＧＦ；例えば、ＴＧＦ−β）、インターロイキン（ＩＬ）、インターフェロン（ＩＦＮ）、又は腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）であり得る。
【００２０】
幾つかの態様において、光力学剤は、例えば、フォトポルフィリン又はその誘導体であり得る。
【００２１】
本開示の別の観点に従って、ここに記載される抗体又はその抗原結合断片と、薬学的に許容される担体又は賦形剤とを含む医薬組成物が提供される。
【００２２】
幾つかの態様において、医薬組成物は、例えば、抗ＶＥＧＦ剤又は化学療法剤であり得る血管新生阻害剤を更に含む。
【００２３】
幾つかの態様において、医薬組成物は、経口投与、舌下投与、吸入投与、経皮投与、皮下投与、静脈内投与、動脈内投与、関節内投与、関節周囲投与、又は筋肉内投与のために処方され得る。
【００２４】
本開示の別の観点に従って、ここに記載される医薬組成物を対象者に投与することを含む、それを必要とする対象者における癌を治療する方法が提供される。
【００２５】
幾つかの態様において、癌は、例えば、肺癌、乳癌、卵巣癌、結腸癌、膵臓癌、脳癌、又は皮膚癌であり得る。
【００２６】
本開示の別の観点に従って、ここに記載される医薬組成物を対象者に投与することを含む、それを必要とする対象者における関節炎を治療する方法が提供される。
【００２７】
幾つかの態様において、医薬組成物は、静脈内、経口、舌下、吸入、経皮、皮下、動脈内、関節内、関節周囲、又は筋肉内に投与され得る。
【００２８】
幾つかの態様において、抗体又はその抗原結合断片の投与は、Ｇ−ＣＳＦ活性を阻害又は中和する。
【００２９】
幾つかの態様において、抗体又はその抗原結合断片は、樹状細胞の成長、樹状細胞の成熟又はそれらの組み合わせを増加する。
【００３０】
幾つかの態様において、抗体又はその抗原結合断片或いはそれを含む医薬組成物の投与
後に、対象者はＴ細胞の抑制の減少を示す。
【００３１】
幾つかの態様において、キット、医薬品パッケージ、及び他の組成物は、ここに記載される、抗体又は抗原結合断片、医薬組成物等を含み得る。
【００３２】
本開示の更なる観点は、以下の説明に鑑みて明らかとなるだろう。
【００３３】
参照による組み込み
この明細書中で言及される全ての刊行物、特許、及び特許出願は、あたかもそれぞれの個々の刊行物、特許、又は特許出願が具体的かつ個別に参照により組み込まれることが示されるのと同程度に参照によりここに組み込まれる。
【００３４】
本出願を通して記載されている配列は、参照によりここに組み込まれる。
【図面の簡単な説明】
【００３５】
図面の簡単な開示
本発明の新規な特徴は、添付の請求項に詳細に記載されている。本開示の特徴及び利点のより良い理解は、本開示の原理が利用される例示的な態様を説明する以下の詳細な説明、及び以下の添付の図面を参照することによって得られるであろう：
【図１】図１Ａ−Ｂ  幾つかの抗Ｇ−ＣＳＦ抗体クローンは、ヒトＧ−ＣＳＦに対する応答において、ＮＦＳ−６０細胞の増殖を中和する。Ａ）２．５×１０3個のＮＦＳ−６０細胞を、抗Ｇ−ＣＳＦ抗体クローン上清（１／５希釈）の存在下で、０．１２５ｎｇ／ｍＬの組換えヒトＧ−ＣＳＦと共に６日間培養した。パネルは各クローンのウェルの位置を特定するプレートレイアウトを示し、そして右側のパネルは各ウェルのそれぞれの細胞数を示す。Ｂ）６日目に、細胞をＭＡＣＳＱＵＡＮＴ（登録商標）を用いて計数した。
【図２】図２  抗Ｇ−ＣＳＦ抗体は、低濃度の０．１２５ｎｇ／ｍＬのヒトＧ−ＣＳＦ（ｈＧ−ＣＳＦ）を中和する。２．５×１０3個のＮＦＳ−６０細胞を、抗Ｇ−ＣＳＦ抗体クローン上清（１／５希釈）の存在下で、０．１２５ｎｇ／ｍＬの何れかの組換えヒトＧ−ＣＳＦと共に６日間培養した。６日目に、細胞をＭＡＣＳＱＵＡＮＴ（登録商標）を用いて計数した。ｔ検定を使用する*ｐ＜０．０５  **ｐ＜０．０１  ***ｐ＜０．００１  ****ｐ＜０．０００１
【図３】図３  抗Ｇ−ＣＳＦ抗体は、高濃度の０．６２５ｎｇ／ｍＬのヒトＧ−ＣＳＦ（ｈＧ−ＣＳＦ）を中和する。２．５×１０3個のＮＦＳ−６０細胞を、抗Ｇ−ＣＳＦ抗体クローン上清（１／５希釈）の存在下で、０．６２５ｎｇ／ｍＬの組換えヒトＧ−ＣＳＦと共に６日間培養した。６日目に、細胞をＭＡＣＳＱＵＡＮＴ（登録商標）を用いて計数した。ｔ検定を使用する*ｐ＜０．０５  **ｐ＜０．０１  ***ｐ＜０．００１  ****ｐ＜０．０００１
【図４】図４  抗Ｇ−ＣＳＦクローンはマウスＧ−ＣＳＦよりもヒトに対してより高い活性を示し、種を超えた交差反応性がほとんどないことを示唆する。２．５×１０3個のＮＦＳ−６０細胞を、抗Ｇ−ＣＳＦ抗体クローン上清（１／５希釈）の存在下で、０．１２５ｎｇ／ｍＬの組換えヒトＧ−ＣＳＦ（左）又は組換えマウスＧ−ＣＳＦ（右）の何れかと共に６日間培養した。６日目に、細胞をＭＡＣＳＱＵＡＮＴ（登録商標）を用いて計数した。全ての結果は３重であり、そして平均＋ＳＤを示す。Ｐ値は、Ｇ−ＣＳＦ対照と比較した有意性についての一元配置分散分析（ｏｎｅ  ｗａｙ  ＡＮＯＶＡ）とそれに続くダネットの多重比較検定を用いて計算した。*ｐ＜０．０５  **ｐ＜０．０１  ***ｐ＜０．００１  ****ｐ＜０．０００１
【図５】図５Ａ−Ｂ  抗ヒトＧ−ＣＳＦクローンは、グリコシル化及び非グリコシル化ヒトＧ−ＣＳＦの両方に対して活性を示す。２．５×１０3個のＮＦＳ−６０細胞を、抗Ｇ−ＣＳＦ抗体クローン上清（１／５希釈）又は精製された抗体（１０μｇ／ｍＬ）の存在下で、非グリコシル化大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）産生組換えヒトＧ−ＣＳＦ（左；Ａ）又はグリコシル化ＣＨＯ発現ヒトＧ−ＣＳＦ（右；Ｂ）の何れかで６日間培養した。６日目に、細胞をＭＡＣＳＱＵＡＮＴ（登録商標）を用いて計数した。全ての結果は３重であり、平均±ＳＤを示し、そして全ての結果はｐ値＜０．０００１を有する。．１及び．２の指定は、各一次抗体クローンのサブクローンを言及する。
【図６】図６Ａ−Ｄ  １Ｂ１１．２（Ａ）、３Ａ３．２（Ｂ）、３Ｂ２．２（Ｃ）及び２Ｂ３．２（Ｄ）は、用量依存的にＧ−ＣＳＦの生物活性を中和した。２．５×１０3個のＮＦＳ−６０細胞を、様々な希釈度の抗Ｇ−ＣＳＦ抗体クローン上清の存在下で、０．１２５ｎｇ／ｍＬの組換えヒトＧ−ＣＳＦと共に６日間培養した。６日目に、細胞をＭＡＣＳＱＵＡＮＴ（登録商標）を用いて計数した。全ての結果は３重であり、そして平均＋ＳＤを示す。
【図７】図７  １Ｂ１１と比較した３Ｂ３の中和活性。２．５×１０3個のＮＦＳ−６０細胞を、様々な濃度の精製した抗Ｇ−ＣＳＦ抗体クローン３Ｂ３（四角）又は１Ｂ１１（丸）の存在下で、０．１２５ｎｇ／ｍＬの組換えヒトＧ−ＣＳＦと共に６日間培養した。６日目に、細胞をＭＡＣＳＱＵＡＮＴ（登録商標）を用いて計数した。全ての結果は３重であり、そして平均±ＳＤを示す。
【図８】図８  抗ヒトＧ−ＣＳＦクローン１Ｂ１１及び３Ｂ３は、ｆｌｔ３Ｌ誘導骨髄樹状細胞成長におけるＧ−ＣＳＦの効果を逆転させる。マウス骨髄を、抗Ｇ−ＣＳＦクローン１Ｂ１１又は３Ｂ３（１０μｇ／ｍＬ）の存在下又は非存在下で９日間、ヒトＧ−ＣＳＦ産生ＮＯＰ１２腫瘍からの様々な濃度の上清の存在下で、組換えＦｌｔ３Ｌ（２００ｎｇ／ｍＬ）と共に培養した。９日目の細胞数（Ａ）。細胞上のＭＨＣクラスＩＩ及びＣＤ１１ｃの発現（Ｂ）を成熟樹状細胞（ＭＨＣクラスＩＩ＋  ＣＤ１１ｃ＋）の頻度の尺度として評価した。
【図９】図９Ａ−Ｂ  抗ヒトＧ−ＣＳＦクローン１Ｂ１１及び３Ｂ３は、ＧＭ−ＣＳＦ誘導骨髄樹状細胞上のＭＨＣクラスＩＩ発現におけるＧ−ＣＳＦの効果を逆転させる。マウス骨髄を、抗Ｇ−ＣＳＦクローン１Ｂ１１又は３Ｂ３（１０μｇ／ｍＬ）の存在下又は非存在下で９日間、ヒトＧ−ＣＳＦ産生ＮＯＰ１２腫瘍からの１％（左；Ａ）又は５％（右；Ｂ）の上清の存在下で、ＧＭ−ＣＳＦ（２９３Ｔ−Ｇ−ＣＳＦ上清の１／１０００希釈）と共に培養した。細胞上のＭＨＣクラスＩＩ発現を、樹状細胞成長の尺度として評価した。ヒストグラムは、抗体（赤）、クローン１Ｂ１１（青）、又は３Ｂ３（橙色）無しで増殖させた細胞上のＭＨＣクラスＩＩ発現を表す。
【図１０】図１０  抗Ｇ−ＣＳＦクローン１Ｂ１１及び３Ｂ３は、初代ヒト好中球中のＧ−ＣＳＦシグナル伝達を遮断する。様々な濃度のヒトＧ−ＣＳＦ（Ｇｅｎｓｃｒｉｐｔ）を１０μｇ／ｍＬの精製した抗体クローン１Ｂ１１、３Ｂ３、又はアイソタイプ対照とプレインキュベートした。３０分後、Ｇ−ＣＳＦ／抗体混合物を、１ウェルあたり５×１０5個の精製したヒト好中球を含むプレートに添加した。プレートを２０分間インキュベートした後、細胞を直ちに固定し、製造業者のプロトコル（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）に従って、細胞内リン酸化Ｓｔａｔ３（Ｐ−Ｔｙｒ  ７０５）のために染色した。サイトカイン無し及び抗体無しで培養した好中球をそれぞれ陰性対照及び陽性対照として用いた。Ｓｔａｔ３リン酸化の最大パーセントは、［ＭＦＩ（平均蛍光強度）実験試料］／［陽性対照のＭＦＩ］×１００％として各試料のために計算された。この図は、クローン３Ｂ３及び１Ｂ１１が両方ともヒト好中球中の初期Ｇ−ＣＳＦシグナル伝達を遮断すること及びクローン３Ｂ３が１Ｂ１１よりも２乃至３倍高い中和活性を表すことを示す。３Ｂ３（下部の円のセット）；１Ｂ１１（中央の円のセット）及びアイソタイプ対照（上部の円のセット）。
【図１１Ａ】及び
【図１１Ｂ】図１１Ａ−Ｂ  インビボでの腫瘍Ｇ−ＣＳＦ産生の中和は、ＭＤＳＣの頻度及びＴ細胞抑制能力を低下させる。Ｃ５７Ｂｌ／６マウスに、ヒトＧ−ＣＳＦを発現するように操作された１×１０6個のＭＣ３８結腸癌細胞を接種した。７日後、動物を１週間に３回、２００μｇの抗Ｇ−ＣＳＦクローン１Ｂ１１、又は３Ｂ３、又はアイソタイプ対照抗体で処理した。Ａ）２５日目に動物を安楽死させ、脾臓を摘出し、フローサイトメトリーによりＣＤ１１ｂ＋Ｌｙ６Ｇ＋細胞（ＭＤＳＣ）の存在について分析した。Ｂ）担癌マウス由来の脾臓を抑制細胞（ＭＤＳＣ）の供給源として使用し、増殖染料で標識したＯＴ−Ｉ  ＴＣＲトランスジェニック脾細胞に様々な比率で添加した。抗原の供給源として全ＯＶＡ（２００μｇ／ｍＬ）を培養物に添加した。ＯＴ−Ｉ細胞はまた、ＹＦＰ発現に基づいてＩＦＮ−γ産生を検出することを可能にするＩＦＮ−γプロモーターの制御下でＹＦＰも発現した。４日目に、細胞をＰＭＡ（５０ｎｇ／ｍＬ）で刺激し、そして増殖及びＩＦＮ−γ産生についてフローサイトメトリーによって分析した。ＭＤＳＣの非存在下、ＯＶＡ単独で培養したＯＴ−Ｉ脾細胞、及びＭＤＳＣを欠く腫瘍非保有脾細胞（非腫瘍群）と共に培養したＯＴ−Ｉ脾細胞を陽性対照として用いた。ＯＶＡの非存在下で培養したＯＴ−Ｉ脾細胞を陰性対照として用いた。左上の四分円中の数字は、少なくとも１回の分裂を経てＩＦＮ−γを産生することができるＯＴ−Ｉ  Ｔ細胞を表す。ＯＴ−Ｉ脾細胞に対する腫瘍脾細胞の比率１０対１においてＯＴ−Ｉ増殖の明らかな抑制が存在する。１Ｂ１１及び３Ｂ３処置マウス由来の脾細胞は、アイソタイプ対照処置群と比較した場合にＯＴ−Ｉ増殖を抑制する能力が低下している。
【図１２】図１２は、１Ｂ１１抗体の１５個のヒト化変異体の特徴を示す表である。
【図１３】図１３は、１Ｂ１１抗体のヒト化変異体によるインビトロでのＧ−ＣＳＦ依存性ＳＴＡＴ３シグナル伝達の遮断を示すフロープロットである。
【図１４】図１４は、ヒト化１Ｂ１１変異体７及び１２抗体によるＮＦＳ６０細胞のＧ−ＣＳＦ依存性増殖の中和を示す棒グラフである。
【図１５】図１５は、ヒト化１Ｂ１１変異体７及び１２抗体による用量依存的な様式でのＧ−ＣＳＦ依存性ＳＴＡＴ３活性化の中和を示すフロープロットである。
【図１６Ａ】及び
【図１６Ｂ】図１６Ａ及びＢは、ヒト化１Ｂ１１変異体１２抗体によるＧ−ＣＳＦ誘導性好中球増加の減少及び好中球ｐＳＴＡＴ３シグナル伝達の遮断を示すグラフである。
【発明を実施するための形態】
【００３６】
発明の詳細な説明
本発明の実施は、他に示さない限り、分子生物学（組換え技術を含む）、微生物学、細胞生物学、生化学及び免疫学の従来の技術を使用するが、それらは当該技術分野の範囲内である。そのような技術は、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ、ｓｅｃｏｎｄ  ｅｄｉｔｉｏｎ（Ｓａｍｂｒｏｏｋ等，１９８９年）Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｐｒｅｓｓ；Ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ（Ｍ．Ｊ．Ｇａｉｔ編集，１９８４年）；Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ、Ｈｕｍａｎａ  Ｐｒｅｓｓ；Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌｏｇｙ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｎｏｔｅｂｏｏｋ（Ｊ．Ｅ．Ｃｅｌｌｉｓ編集、１９９８年）Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ；Ａｎｉｍａｌ  Ｃｅｌｌ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  （Ｒ．Ｉ．Ｆｒｅｓｈｎｅｙ編集、１９８７年）；Ｉｎｔｒｏｄｕｃｔｉｏｎ  ｔｏ
Ｃｅｌｌ  ａｎｄ  Ｔｉｓｓｕｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ（Ｊ．Ｐ．Ｍａｔｈｅｒ及びＰ．Ｅ．Ｒｏｂｅｒｔｓ、１９９８年）Ｐｌｅｎｕｍ  Ｐｒｅｓｓ；Ｃｅｌｌ  ａｎｄ  Ｔｉｓｓｕｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ：Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｏｃｅｄｕｒｅｓ（Ａ．Ｄｏｙｌｅ、Ｊ．Ｂ．Ｇｒｉｆｆｉｔｈｓ及びＤ．Ｇ．Ｎｅｗｅｌｌ編集、１９９３−１９９８年）Ｊ．Ｗｉｌｅｙ  ａｎｄ  Ｓｏｎｓ；Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ（Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ，Ｉｎｃ．）；Ｈａｎｄｂｏｏｋ  ｏｆ  Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ（Ｄ．Ｍ．Ｗｅｉｒ及びＣ．Ｃ．Ｂｌａｃｋｗｅｌｌ編集）；Ｇｅｎｅ  Ｔｒａｎｓｆｅｒ  Ｖｅｃｔｏｒｓ  ｆｏｒ  Ｍａｍｍａｌｉａｎ  Ｃｅｌｌｓ（Ｊ．Ｍ．Ｍｉｌｌｅｒ及びＭ．Ｐ．Ｃａｂｓ編集、１９８７年）；Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ（Ｆ．Ｍ．Ａｕｓｕｂｅｌ等編集、１９８７年）；ＰＣＲ：Ｔｈｅ  Ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ  Ｃｈａｉｎ  Ｒｅａｃｔｉｏｎ、（Ｍｕｌｌｉｓ等編集、１９９４年）；Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  （Ｊ．Ｅ．Ｃｏｌｉｇａｎ等編集、１９９
１年）；Ｓｈｏｒｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ（Ｗｉｌｅｙ  ａｎｄ  Ｓｏｎｓ、１９９９年）；Ｉｍｍｕｎｏｂｉｏｌｏｇｙ（Ｃ．Ａ．Ｊａｎｅｗａｙ及びＰ．Ｔｒａｖｅｒｓ、１９９７年）；Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ（Ｐ．Ｆｉｎｃｈ、１９９７年）；Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：ａ  ｐｒａｃｔｉｃａｌ  ａｐｐｒｏａｃｈ  （Ｄ．Ｃａｔｔｙ編集、ＩＲＬ  Ｐｒｅｓｓ、１９８８−１９８９年）；Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：ａ  ｐｒａｃｔｉｃａｌ  ａｐｐｒｏａｃｈ（Ｐ．Ｓｈｅｐｈｅｒｄ及びＣ．Ｄｅａｎ編集、Ｏｘｆｏｒｄ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  Ｐｒｅｓｓ、２０００年）；Ｕｓｉｎｇ  ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：ａ  ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  ｍａｎｕａｌ（Ｅ．Ｈａｒｌｏｗ及びＤ．Ｌａｎｅ（Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ、１９９９年）；及びＴｈｅ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ（Ｍ．Ｚａｎｅｔｔｉ及びＪ．Ｄ．Ｃａｐｒａ編集、Ｈａｒｗｏｏｄ  Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ、１９９５年）のような文献中に十分に説明されている。
【００３７】
用語「約」は、等しい、及び所与の測定における実験誤差を考慮に入れる範囲を含み、プラスマイナス５、４、３、２又は１％又はその間のどこかを言及し得る。
【００３８】
ここで使用されるとき、「実質的に純粋な」、「単離された」又は「精製された」は、少なくとも５０％純粋（即ち、汚染物質を含まない）、より好ましくは少なくとも９０％純粋、より好ましくは少なくとも９５％純粋、より好ましくは少なくとも９８％純粋、より好ましくは少なくとも９９％純粋である物質を言及する。抗体は、飽和硫酸アンモニウム沈殿、オイグロブリン沈殿法、カプロン酸法、カプリル酸法、イオン交換クロマトグラフィー（ＤＥＡＥ又はＤＥ５２）、又は当該技術分野で認められている従来の方法を用いる、抗Ｉｇカラム又はプロテインＡ、Ｇ又はＬカラムを用いるアフィニティークロマトグラフィーによって上記の培養上清又は腹水から単離及び精製し得る。
【００３９】
用語「ポリペプチド」、「オリゴペプチド」、「ペプチド」及び「タンパク質」は、ここで互換的に使用され、任意の長さのアミノ酸のポリマーを言及する。ポリマーは直鎖又は分岐鎖であり得、それは修飾アミノ酸を含み得、そしてそれは非アミノ酸により中断され得る。この用語はまた、天然に又は介入により；例えば、ジスルフィド結合形成、グリコシル化、脂質化、アセチル化、リン酸化、或いは、標識成分との結合のような、任意の他の操作又は修飾により修飾されているアミノ酸ポリマーも含む。同様に定義内に含まれるものは、例えば、アミノ酸の１種以上の類似体（例えば、非天然アミノ酸等を含む）を含有するポリペプチド、並びに当技術分野において既知の他の修飾物である。本発明のポリペプチドは抗体に基づいているため、該ポリペプチドは一本鎖又は会合鎖として存在し得ることが理解される。
【００４０】
ここで交換可能に使用される「ポリヌクレオチド」又は「核酸」は、任意の長さのヌクレオチドのポリマーを言及し、そしてＤＮＡ及びＲＮＡを含む。ヌクレオチドは、デオキシリボヌクレオチド、リボヌクレオチド、修飾ヌクレオチド若しくは塩基、及び／又はそれらの類似体、或いはＤＮＡ若しくはＲＮＡポリメラーゼによりポリマー中に組み込まれ得る任意の基質であり得る。ポリヌクレオチドは、メチル化ヌクレオチド及びそれらの類似体のような修飾ヌクレオチドを含み得る。存在する場合、ヌクレオチド構造に対する修飾は、ポリマーの組み立ての前又は後に与えられ得る。ヌクレオチドの配列は、非ヌクレオチド成分によって中断され得る。ポリヌクレオチドは、標識成分との結合等によって、重合後に更に修飾され得る。修飾の他のタイプは、例えば、「キャップ」、天然に存在する１つ以上のヌクレオチドと類似体との置換、ヌクレオチド間修飾、例えば非荷電の連鎖を有するもの（例えば、メチルホスホネート、ホスホトリエステル、ホスホアミデート、カルバメート等）及び荷電した連鎖を有するもの（例えば、ホスホロチオエート、ホスホロジチオエート等）、ペンダント部分を含むもの、例えばタンパク質（例えばヌクレアー
ゼ、毒素、抗体、シグナルペプチド、ｐｌｙ−Ｌ−リジン等）、インターカレーターを有するもの（例えばアクリジン、ソラレン等）、キレート剤を含むもの（例えば金属、放射性金属、ホウ素、酸化性金属等）、アルキル化剤を含むもの、修飾連鎖を有するもの（例えばαアノマー核酸等）、並びにポリヌクレオチドの未修飾形態を含む。更に、糖中に通常存在する何れのヒドロキシル基も、例えば、ホスホネート基、ホスフェート基で置換され得るか、標準的な保護基で保護され得るか、又は更なるヌクレオチドへの更なる連鎖を調製するために活性化され得るか、又は固体担体に結合し得る。５’及び３’末端ＯＨは、リン酸化され得るか又はアミン若しくは１乃至２０個の炭素原子の有機キャッピング基部分で置換され得る。他のヒドロキシル基もまた、標準的な保護基に誘導体化され得る。ポリヌクレオチドはまた、例えば、２’−Ｏ−メチル−、２’−Ｏ−アリル、２’−フルオロ−又は２’−アジド−リボース、炭素環式糖類似体、α−アノマー糖、アラビノース等のエピマー糖、キシロース又はリキソース、ピラノース糖、フラノース糖、セドヘプツロース、非環式類似体及びメチルリボシドのような非塩基性ヌクレオシド類似体を含む、本技術分野において一般的に既知である、リボース又はデオキシリボース糖の類似形態も含み得る。１つ以上のホスホジエステル連鎖は、代替の連結基によって置き換えられ得る。これらの代替の連結基は、ホスフェートがＰ（Ｏ）Ｓ（「チオエート」）、Ｐ（Ｓ）Ｓ（「ジチオエート」）、（Ｏ）ＮＲ2（「アミデート」）、Ｐ（Ｏ）Ｒ、Ｐ（Ｏ）ＯＲ’、ＣＯ又はＣＨ2（「ホルムアセタール」）（ここで、各Ｒ又はＲ’は、独立して、Ｈ又は、エーテル（−Ｏ−）結合、アリール基、アルケニル基、シクロアルキル基、シクロアルケニル基又はアラルジル基を任意に含む置換若しくは未置換のアルキル基（炭素原子数１乃至２０）を表す。）で置き換えられた態様を含むが、これらに限定されない。ポリヌクレオチド中の全ての連鎖が同一である必要はない。前述の記載は、ＲＮＡ及びＤＮＡを含む、ここで言及された全てのポリヌクレオチドに適用される。
【００４１】
「補体依存性細胞傷害」及び「ＣＤＣ」は、補体の存在における標的の溶解を言及する。補体活性化経路は、補体系の第一成分（Ｃ１ｑ）の、同族抗原と複合体を形成した分子（例えば、抗体）への結合によって開始される。補体活性化を評価するために、例えば、Ｇａｚｚａｎｏ−Ｓａｎｔｏｒｏ等、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ、２０２：１６３（１９９６年）中に記載されているようなＣＤＣアッセイが実施され得る。
【００４２】
ここで使用される「抗体依存性細胞性細胞傷害」及び「ＡＤＣＣ」は、Ｆｃ受容体（ＦｃＲ）を発現する非特異的な細胞傷害性細胞（例えば、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、好中球及びマクロファージ）が標的細胞上に結合した抗体を認識し、続いて標的細胞の溶解を引き起こす細胞媒介反応を言及する。対象となる分子のＡＤＣＣ活性は、米国特許第５，５００，３６２号又は５，８２１，３３７号中に記載されているような、インビトロＡＤＣＣアッセイを使用して評価され得る。そのようなアッセイのために有用なエフェクター細胞は、末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）及びＮＫ細胞を含む。或いは、又は更に、対象となる分子のＡＤＣＣ活性は、例えばＣｌｙｎｅｓ等、１９９８年、ＰＮＡＳ  ＵＳＡ、９５：６５２−６５６中に開示されているような、インビボ、例えば、動物モデルで評価され得る。
【００４３】
用語「アポトーシス」又は「プログラムされた細胞死」は、成長及び他の正常な生物学的プロセスの間に、望ましくない又は無用の細胞が排除される生理学的プロセスを言及する。アポトーシスは、通常の生理学的条件下で起こる細胞死の様式であり、そして細胞はそれ自身の消滅（「細胞自殺」）に積極的に参加している。それは、正常細胞の代謝回転及び組織恒常性、胚形成、免疫寛容の誘導及び維持、神経系の成長並びに内分泌依存性の組織萎縮の間に最も頻繁に見られる。アポトーシスを起こしている細胞は、特徴的な形態学的及び生化学的特徴を示す。これらの特徴は、クロマチン凝集、核及び細胞質の凝縮、細胞質及び核の膜結合小胞（アポトーシス小体）（これはリボソーム、形態学的に無傷のミトコンドリア及び核物質を含む。）への分配を含む。インビボにおいて、これらのアポ
トーシス小体はマクロファージ、樹状細胞又は隣接する上皮細胞によって迅速に認識され貪食される。インビボにおけるアポトーシス細胞の除去のためのこの効率的なメカニズムのために、炎症反応は誘発されない。インビトロにおいて、アポトーシス小体並びに残りの細胞断片は、最終的に膨潤しそして最後に溶解する。インビトロにおける細胞死のこの最終段階は「二次的ネクローシス」と呼ばれてきた。アポトーシスは、ＤＮＡ断片化、アネキシンＶの曝露、カスパーゼの活性化、シトクロムｃの放出等のような当業者に既知の方法によって測定され得る。死滅するように誘導された細胞は、ここでは「アポトーシス細胞」と呼ばれる。
【００４４】
アポトーシスは標準的なアネキシンＶアポトーシスアッセイを用いて試験され得る：ＮＩＨ：ＯＶＣＡＲ−３細胞は、６−ウェルプレート（ＮＵＮＣ）中で増殖され、４乃至４８の間、照射されるか又はアンタゴニスト（又は別の抗癌剤との組み合わせ）で処理され、洗浄され、アネキシンＶ−ＦＩＴＣ（ＢＤ−ファーミンゲン）で１時間染色される。細胞はフローサイトメトリー（Ｂｅｃｔｏｎ−Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ、ＣｅｌｌＱｕｅｓｔ）で分析され、ヨウ化プロピジウムで対比染色され、フローサイトメーターで再度分析される。
【００４５】
ここで使用される場合、用語「顆粒球コロニー刺激因子」及び「Ｇ−ＣＳＦ」は、骨髄間質由来の線維芽細胞及び内皮細胞によって、そして免疫適格細胞（単球、マクロファージ）によって主に産生される糖タンパク質を言及する。Ｇ−ＣＳＦの受容体（Ｇ−ＣＳＦＲ）は、サイトカイン及びヘマトポイエチン受容体スーパーファミリーの一部である。ここで使用される場合、Ｇ−ＣＳＦは、天然配列Ｇ−ＣＳＦの全ての哺乳動物種、例えば、ヒト、イヌ、ネコ、ウマ、ウシ等を含む。
【００４６】
抗体
ここで使用される場合、「抗Ｇ−ＣＳＦ抗体」は、Ｇ−ＣＳＦに結合でき、そしてＧ−ＣＳＦの生物学的活性及び／又はＧ−ＣＳＦシグナル伝達によって媒介される下流経路を阻害し得る抗体を言及する。抗Ｇ−ＣＳＦ抗体は、Ｇ−ＣＳＦシグナル伝達によって媒介される下流経路を含む、Ｇ−ＣＳＦの生物学的活性を遮断、拮抗、抑制又は低減する（有意に含む）抗体を包含する。本出願の目的のために、用語「抗Ｇ−ＣＳＦ抗体」は、以前に定義されたすべての用語、タイトル、及び機能的状態及び特徴を包含し、それにより、Ｇ−ＣＳＦそれ自体、Ｇ−ＣＳＦの生物学的活性（癌を治療する能力を含むがこれらに限定されない）又は生物学的活性の結果が、任意の有意な程度で実質的に無効にされるか、減少されるか、又は中和されることが、明確に理解されるだろう。１態様において、抗Ｇ−ＣＳＦ抗体はＧ−ＣＳＦに結合し、その活性を中和する。
【００４７】
ここで提供されるものは、顆粒球コロニー刺激因子（Ｇ−ＣＳＦ）に結合し、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１又はその中に保存的置換を有するＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１として参照される重鎖ＣＤＲ１；ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２又はその中に保存的置換を有するＳＥＱ  ＩＤ
ＮＯ：２として参照される重鎖ＣＤＲ２；ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３又はその中に保存的置換を有するＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３として参照される重鎖ＣＤＲ３；ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４又はその中に保存的置換を有するＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４として参照される軽鎖ＣＤＲ１；ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５又はその中に保存的置換を有するＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５として参照される軽鎖ＣＤＲ２；及びＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：６又はその中に保存的置換を有するＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：６として参照される軽鎖ＣＤＲ３を含む、単離若しくは精製された抗体、又はその抗原結合断片である。１例において、単離若しくは精製された抗体、又はその抗原結合断片は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：７として参照される重鎖可変領域及びＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：８として参照される軽鎖可変領域を含む。別の例において、そのような抗体は、１Ｂ１１として言及される。
【００４８】
ここで同様に提供されるものは、顆粒球コロニー刺激因子（Ｇ−ＣＳＦ）に結合し、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：９又はその中に保存的置換を有するＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：９として参照される重鎖ＣＤＲ１；ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１０又はその中に保存的置換を有するＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１０として参照される重鎖ＣＤＲ２；ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１１又はその中に保存的置換を有するＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１１として参照される重鎖ＣＤＲ３；ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１２又はその中に保存的置換を有するＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１２として参照される軽鎖ＣＤＲ１；ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１３又はその中に保存的置換を有するＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１３として参照される軽鎖ＣＤＲ２；及びＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１４又はその中に保存的置換を有するＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１４として参照される軽鎖ＣＤＲ３を含む、単離若しくは精製された抗体、又はその抗原結合断片である。１例において、単離若しくは精製された抗体、又はその抗原結合断片は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１５として参照される重鎖可変領域及びＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１６として参照される軽鎖可変領域を含む。別の例において、そのような抗体は、３Ｂ３として言及される。
【００４９】
ここに記載される抗体が、以下に記載されるように又は本技術分野において既知であるように改変され得ることが理解される。
【００５０】
本発明において有用な「抗体」は、モノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、抗体断片（例えば、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）2、Ｆｖ、Ｆｃ等）、キメラ抗体、二重特異性抗体、多重特異性抗体、ヘテロ結合抗体、一本鎖（ＳｃＦｖ）、それらの変異体、抗体部分を含む融合タンパク質（例えばドメイン抗体）、ヒト化抗体、ヒト抗体、単一ドメイン抗体、及び、抗体のグリコシル化変異体、抗体のアミノ酸配列変異体、及び共有結合的に修飾された抗体を含む、必要な特異性の抗原認識部位を含む免疫グロブリン分子の任意の他の修飾配置を含むが、これらに限定されない。用語「キメラ」は、重鎖及び／又は軽鎖の一部が特定の供給源又は種に由来し、残りの重鎖及び／又は軽鎖が異なる供給源又は種に由来する抗体を言及する。
【００５１】
その重鎖の定常ドメインのアミノ酸配列に依存して、免疫グロブリンは異なるクラスに割り当てられ得る。免疫グロブリンの５つの主要なクラス：ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ、及びＩｇＭが存在し、これらの幾つかは、更にサブクラス（アイソタイプ）、例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１及びＩｇＡ２に分類され得る。免疫グロブリンの異なるクラスのサブユニット構造及び三次元立体配置は、本技術分野において周知である。
【００５２】
任意の脊椎動物種由来の抗体（免疫グロブリン）の「軽鎖」は、それらの定常ドメインのアミノ酸配列に基づいて、カッパ又は（「κ」又は「Ｋ」）及びラムダ又は（「λ」）と呼ばれる２種の明らかに異なるタイプのうちの１種に割り当てられ得る。
【００５３】
ここで使用される場合、「モノクローナル抗体」は、実質的に均質な抗体の集団から得られる抗体を言及し、即ち、集団を構成する個々の抗体は、少量存在し得る、天然に発生し得る突然変異を除いて同一である。典型的には異なる決定基（エピトープ）に対する異なる抗体を含むポリクローナル抗体調製物とは対照的に、各モノクローナル抗体は抗原（エピトープ）上の単一の決定基に対するものである。
修飾語「モノクローナル」は、実質的に均質な抗体の集団から得られるという抗体の性質を示し、そして任意の特定の方法による抗体の産生を必要とすると解釈されるべきではない。例えば、本発明に従って使用されるモノクローナル抗体は、Ｋｏｈｌｅｒ及びＭｉｌｓｔｅｉｎ、１９７５年、Ｎａｔｕｒｅ、２５６：４９５により最初に記載されたハイブリドーマ法により作製され得るか又は米国特許第４，８１６，５６７号中に記載されているような組換えＤＮＡ法によって作製され得る。モノクローナル抗体はまた、例えば、ＭｃＣａｆｆｅｒｔｙ等、１９９０年、Ｎａｔｕｒｅ、３４８：５５２−５５４中に記載さ
れた技術を用いて生成されたファージライブラリからも単離され得る。他の方法は本技術分野において既知であり、そしてここで使用が意図される。
【００５４】
ここで使用される場合、「ヒト化」抗体は、特異的キメラ免疫グロブリン、免疫グロブリン鎖、又は非ヒト免疫グロブリンに由来する最小配列を含むそれらの断片（例えば、Ｆｖ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）2、ｓｃＦｖ、又は抗体の他の抗原結合部分配列）である非ヒト（例えばマウス）抗体の形態を言及する。殆どの場合、ヒト化抗体は、レシピエントの相補性決定領域（ＣＤＲ）由来の残基が、所望の特異性、親和性、及び生物学的活性を有するマウス、ラット、又はウサギのような非ヒト種のＣＤＲ由来の残基（ドナー抗体）で置換されているヒト免疫グロブリン（レシピエント抗体）である。幾つかの例において、ヒト免疫グロブリンのＦｖフレームワーク領域（ＦＲ）残基は、対応する非ヒト残基によって置換されている。更に、ヒト化抗体は、レシピエント抗体にも、移入されたＣＤＲにも、又はフレームワーク配列にも見出されないが、抗体性能を更に洗練及び最適化するために含まれる残基を含み得る。一般に、ヒト化抗体は、実質的に少なくとも１つ、典型的には２つの可変ドメインの全てを含むが、ここでＣＤＲ領域の全て又は実質的に全ては、非ヒト免疫グロブリンのものに対応し、ＦＲ領域の全て又は実質的に全ては、ヒト免疫グロブリンコンセンサス配列のものである。ヒト化抗体は、最適には、免疫グロブリン定常領域又はドメイン（Ｆｃ）、典型的にはヒト免疫グロブリンの少なくとも一部も含むであろう。抗体は、例えば、国際公開第９９／５８５７２号パンフレットに記載されているように修飾されたＦｃ領域を有し得る。ヒト化抗体の他の形態は、起源の抗体に対して改変されている１つ以上のＣＤＲ（１、２、３、４、５又は６）を有するが、それらは、起源の抗体からの１つ以上のＣＤＲ「由来の」１つ以上のＣＤＲとも呼ばれる。
【００５５】
ここで使用される場合、「ヒト抗体」は、ヒトによって産生される抗体のアミノ酸配列に対応するアミノ酸配列を有する抗体及び／又は本技術分野において既知の又はここで開示されたヒト抗体を作製するための技術の何れかを用いて作製された抗体を意味する。ヒト抗体のこの定義は、少なくとも１つのヒト重鎖ポリペプチド又は少なくとも１つのヒト軽鎖ポリペプチドを含む抗体を含む。そのような１例は、マウス軽鎖及びヒト重鎖ポリペプチドを含む抗体である。ヒト抗体は、本技術分野において既知の種々の技術を用いて産生され得る。１態様において、ヒト抗体はファージライブラリから選択されるが、ここで、そのファージライブラリはヒト抗体を発現する（Ｖａｕｇｈａｎ等、１９９６年、Ｎａｔｕｒｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ、１４：３０９−３１４；Ｓｈｅｅｔｓ等、１９９８年、ＰＮＡＳ  ＵＳＡ、９５：６１５７−６１６２；Ｈｏｏｇｅｎｂｏｏｍ及びＷｉｎｔｅｒ、１９９１年、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．、２２７：３８１；Ｍａｒｋｓ等、１９９１年、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．、２２２：５８１）。ヒト抗体は、トランスジェニック動物、例えば、内因性免疫グロブリン遺伝子が部分的又は完全に不活性化されているマウスにヒト免疫グロブリン遺伝子座を導入することによっても作製され得る。このアプローチは、米国特許第５，５４５，８０７号；５，５４５，８０６号；５，５６９，８２５号；５，６２５，１２６号；５，６３３，４２５号；及び５，６６１，０１６号中に記載されている。或いは、ヒト抗体は、標的抗原に対する抗体を産生するヒトＢリンパ球を不死化することによって調製され得る（そのようなＢリンパ球は個体から回収され得るか、又はインビトロで免疫され得る）。例えば、Ｃｏｌｅ等、Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  ａｎｄ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｔｈｅｒａｐｙ、Ａｌａｎ  Ｒ．Ｌｉｓｓ、７７頁（１９８５年）；Ｂｏｅｒｎｅｒ等、１９９１年、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．、１４７（１）：８６−９５；及び米国特許第５，７５０，３７３号を参照。
【００５６】
抗体の「可変領域」は、抗体軽鎖の可変領域又は抗体重鎖の可変領域の、単独又は組み合わせの何れかを言及する。重鎖及び軽鎖の可変領域はそれぞれ、超可変領域としても既知の３つの相補性決定領域（ＣＤＲ）によって連結された４つのフレームワーク領域（ＦＲ）からなる。各鎖中のＣＤＲは、ＦＲにより、ごく接近して一緒に保持され、そして他
の鎖からのＣＤＲと共に、抗体の抗原結合部位の形成に寄与する。ＣＤＲを決定するための少なくとも２つの技術が存在する：（１）異種間配列変動性に基づくアプローチ（即ち、Ｋａｂａｔ等、Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ、（第５版、１９９１年、国立衛生研究所、ベセスダ  メリーランド州））；及び（２）抗原−抗体複合体の結晶学的研究に基づくアプローチ（Ａｌ−Ｉａｚｉｋａｎｉ等（１９９７年）Ｊ．Ｍｏｌｅｃ．Ｂｉｏｌ．２７３：９２７−９４８））。ここで使用される場合、ＣＤＲは、何れか一方のアプローチ又は両方のアプローチの組み合わせにより定義されるＣＤＲを言及し得る。
【００５７】
抗体の「定常領域」は、抗体軽鎖の定常領域又は抗体重鎖の定常領域の、単独又は組み合わせの何れかを言及する。
【００５８】
「エピトープ」は、抗体の可変領域結合ポケットと結合相互作用を形成し得る抗原又は他の巨大分子の部分を言及する。そのような結合相互作用は、１つ以上のＣＤＲの１つ以上のアミノ酸残基との分子間接触として示され得る。抗原結合は、例えば、ＣＤＲ３若しくはＣＤＲ３ペア、又は場合により、ＶH及びＶL鎖の６つまでの全てのＣＤＲの相互作用を含み得る。エピトープは、直鎖状ペプチド配列（即ち、「連続的」）であり得るか、又は非隣接アミノ酸配列（即ち、「立体配座の」又は「不連続的」）から構成され得る。抗体は１つ以上のアミノ酸配列を認識し得る；従って、エピトープは、１つを超える異なるアミノ酸配列を規定し得る。抗体により認識されるエピトープは、当業者に周知のペプチドマッピング及び配列分析技術により決定され得る。結合相互作用は、抗原上のエピトープとＣＤＲの１つ以上のアミノ酸残基との間の分子間接触として示される。
【００５９】
抗体又はポリペプチドに「優先的に結合する」又は「特異的に結合する」（ここでは互換的に使用される）エピトープは、本技術分野においてよく理解されている用語であり、そのような特異的又は優先的な結合を決定する方法もまた、本技術分野において周知である。抗体は、それが他の物質に結合するよりも高い親和性、アビディティで、より容易に、及び／又はより長い期間で結合する場合、標的に特異的に結合するか又は優先的に結合する。例えば、Ｇ−ＣＳＦエピトープに特異的又は優先的に結合する抗体は、それが他のＧ−ＣＳＦエピトープ又は非Ｇ−ＣＳＦエピトープに結合するよりも高い親和性、アビディティで、より容易に、及び／又はより長い期間で、このエピトープに結合する抗体である。
この定義を読むことにより、例えば、第一の標的に特異的又は優先的に結合する抗体（又は部分又はエピトープ）は、第二の標的に特異的又は優先的に結合してもしなくてもよいこともまた理解される。そのため、「特異的結合」又は「優先的結合」は必ずしも排他的結合を必要とするわけではない（しかし、含み得る）。必ずしもそうとは限らないが一般的に、結合への言及は、抗体又はその抗原結合断片の親和性が、無関係のアミノ酸配列に対する抗体の親和性よりも、少なくとも少なくとも２倍高い、少なくとも３倍高い、少なくとも４倍高い、少なくとも５倍高い、少なくとも６倍高い、少なくとも７倍高い、少なくとも８倍高い、少なくとも９倍高い、１０倍高い、少なくとも２０倍高い、少なくとも３０倍高い、少なくとも４０倍高い、少なくとも５０倍高い、少なくとも６０倍高い、少なくとも７０倍高い、少なくとも８０倍高い、少なくとも９０倍高い、少なくとも１００倍高い、又は少なくとも１０００倍高いところの優先的結合を意味する。
【００６０】
用語「Ｆｃ領域」は、免疫グロブリン重鎖のＣ末端領域を規定するために使用される。「Ｆｃ領域」は、天然配列Ｆｃ領域又は変異体Ｆｃ領域であり得る。免疫グロブリン重鎖のＦｃ領域の境界は変動し得るが、ヒトＩｇＧ重鎖Ｆｃ領域は通常、Ｃｙｓ２２６位のアミノ酸残基から、又はＰｒｏ２３０から、そのカルボキシル末端までの伸長と規定される。Ｆｃ領域中の残基の番号付けは、Ｋａｂａｔ等（Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ、第５版、公衆衛生局
、国立衛生研究所、ベセスダ、メリーランド州、１９９１年）中のＥＵインデックスのそれと同様である。免疫グロブリンのＦｃ領域は一般に、２つの定常ドメイン、ＣＨ２及びＣＨ３を含む。
【００６１】
ここで使用される場合、「Ｆｃ受容体」及び「ＦｃＲ」は、抗体のＦｃ領域に結合する受容体を記載する。
【００６２】
「機能的Ｆｃ領域」は、天然配列Ｆｃ領域の少なくとも１つのエフェクター機能を有する。例示的な「エフェクター機能」は、Ｃ１ｑ結合；補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）；Ｆｃレセプター結合；抗体依存性細胞性細胞傷害（ＡＤＣＣ）；食作用；細胞表面受容体（例えば、Ｂ細胞受容体；ＢＣＲ）の下方制御等を含む。そのようなエフェクター機能は一般に、Ｆｃ領域が結合ドメイン（例えば、抗体可変ドメイン）と組み合わされることを必要とし、そのような抗体エフェクター機能を評価するための本技術分野における既知の種々のアッセイを使用して評価され得る。
【００６３】
「天然配列Ｆｃ領域」は、天然に見出されるＦｃ領域のアミノ酸配列と同一のアミノ酸配列を含む。「変異体Ｆｃ領域」は、少なくとも１つのアミノ酸修飾によって天然配列Ｆｃ領域のものとは異なるが、天然配列Ｆｃ領域の少なくとも１つのエフェクター機能を保持しているアミノ酸配列を含む。好ましくは、変異型Ｆｃ領域は、天然配列Ｆｃ領域又は親ポリペプチドのＦｃ領域と比較して少なくとも１個のアミノ酸置換、例えば、天然配列Ｆｃ領域又は親ポリペプチドのＦｃ領域中に、約１乃至約１０個のアミノ酸置換、好ましくは約１乃至約５個のアミノ酸置換を有する。ここでの変異体Ｆｃ領域は、好ましくは天然配列Ｆｃ領域及び／又は親ポリペプチドのＦｃ領域と少なくとも約８０％の配列同一性、最も好ましくはそれとの少なくとも約９０％の配列同一性、より好ましくはそれとの少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％の配列同一性を有する。
【００６４】
用語「超可変領域」及び「ＣＤＲ」は、ここで使用されるとき、抗原結合に関与する抗体のアミノ酸残基を言及する。ＣＤＲは、抗原に相補的な様式で結合する３つの配列領域由来のアミノ酸残基を含み、ＶH鎖及びＶL鎖のそれぞれについてＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３として知られている。Ｋａｂａｔ等（同上）によると、軽鎖可変ドメインにおいて、ＣＤＲは典型的にはおよそ残基２４乃至３４（ＣＤＲＬ１）、５０乃至５６（ＣＤＲＬ２）及び８９乃至９７（ＣＤＲＬ３）に対応し、そして重鎖可変ドメインにおいて、ＣＤＲは典型的におよそ残基３１乃至３５（ＣＤＲＨ１）、５０乃至６５（ＣＤＲＨ２）及び９５乃至１０２（ＣＤＲＨ３）に対応する。異なる抗体のＣＤＲは挿入を含み得、従って、アミノ酸の番号付けが異なり得ることが理解される。Ｋａｂａｔの番号付けシステムは、異なる抗体間の番号付けにおける任意の挿入を反映するために、特定の残基（例えば、軽鎖におけるＣＤＲＬ１の２７Ａ、２７Ｂ、２７Ｃ、２７Ｄ、２７Ｅ、及び２７Ｆ）に付けられた文字を利用する番号付けスキームでそのような挿入を説明する。或いは、Ｃｈｏｔｈｉａ及びＬｅｓｋ、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．、１９６：９０１−９１７（１９８７年））によると、軽鎖可変ドメインにおいて、ＣＤＲは典型的にはおよそ残基２６乃至３２（ＣＤＲＬ１）、５０乃至５２（ＣＤＲＬ２）及び９１乃至９６（ＣＤＲＬ３）に対応し、そして重鎖可変ドメインにおいて、ＣＤＲは典型的にはおよそ残基２６乃至３２（ＣＤＲＨ１）、５３乃至５５（ＣＤＲＨ２）及び９６乃至１０１（ＣＤＲＨ３）に対応する。
【００６５】
ここで使用される場合、「フレームワーク領域」又は「ＦＲ」は、抗原結合ポケット又は溝の一部を形成するフレームワークアミノ酸残基を言及する。
幾つかの態様において、フレームワーク残基は、抗原結合ポケット又は溝の一部であるループを形成し、そして、ループ内のアミノ酸残基は抗原と接触してもしなくてもよい。フ
レームワーク領域は一般にＣＤＲ間の領域を含む。Ｋａｂａｔ等（同上）によると、軽鎖可変ドメインにおいて、ＦＲは典型的にはおよそ残基０乃至２３（ＦＲＬ１）、３５乃至４９（ＦＲＬ２）、５７乃至８８（ＦＲＬ３）、及び９８乃至１０９に対応し、そして重鎖可変ドメインにおいて、ＦＲは典型的にはおよそ残基０乃至３０（ＦＲＨ１）、３６乃至４９（ＦＲＨ２）、６６乃至９４（ＦＲＨ３）及び１０３乃至１３３に対応する。軽鎖のためのＫａｂａｔの番号付けで上述したように、重鎖も同様の様式で挿入を説明する（例えば、重鎖におけるＣＤＲＨ１の３５Ａ、３５Ｂ）。或いは、Ｃｈｏｔｈｉａ及びＬｅｓｋ（Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．、１９６：９０１−９１７（１９８７年））によると、軽鎖可変ドメインにおいて、ＦＲは典型的にはおよそ残基０乃至２５（ＦＲＬ１）、３３乃至４９（ＦＲＬ２）、５３乃至９０（ＦＲＬ３）、及び９７乃至１０９（ＦＲＬ４）に対応し、そして重鎖可変ドメインにおいて、ＦＲは典型的にはおよそ残基０乃至２５（ＦＲＨ１）、３３乃至５２（ＦＲＨ２）、５６乃至９５（ＦＲＨ３）及び１０２乃至１１３（ＦＲＨ４）に対応する。
【００６６】
ＦＲのループアミノ酸は、抗体重鎖及び／又は抗体軽鎖の三次元構造の検査によって評価及び決定され得る。そのような位置はループを形成する及び／又は抗体可変ドメイン内で抗原接触を提供する可能性があるため、三次元構造は、溶媒が接近可能なアミノ酸の位置について分析され得る。溶媒が接近可能な位置の幾つかは、アミノ酸配列の多様性を許容することができ、他のもの（例えば、構造的位置）は、一般に多様性が低い。抗体可変ドメインの三次元構造は、結晶構造又はタンパク質モデリングから誘導され得る。
【００６７】
ここで使用される用語「ｋon」は、抗原に対する抗体の会合の速度定数を言及することが意図される。
【００６８】
ここで使用される用語「Ｋoff」は、抗体／抗原複合体からの抗体の解離の速度定数をを言及することが意図される。
【００６９】
ここで使用される場合、用語「親和性」は、２つの薬剤の可逆的結合についての平衡定数を言及し、そしてＫDとして表される。ここに記載される抗体の結合親和性（ＫD）は、約０．０２ｐＭ乃至約２５０ｎＭ、又はその間の任意の整数であり得る。幾つかの態様において、結合親和性は、約２５０ｎＭ、約２２５ｎＭ、約２００ｎＭ、約１７５ｎＭ、約１５０ｎＭ、約１２５ｎＭ、１００ｎＭ、約７５ｎＭ、約５０ｎＭ、約２５ｎＭ、約１０ｎＭ、約５ｎＭ、約４ｎＭ、約３ｎＭ、約２．５ｎＭ、約２ｎＭ、約１．５ｎＭ、約１ｎＭ、約１ｎＭ、約７５０ｐＭ、約５００ｐＭ、約２７５ｐＭ、約２５０ｐＭ、約２２５ｐＭ、約１００ｐＭ、約７５ｐＭ、約６０ｐＭ、約５０ｐＭ、約２５ｐＭ、約２０ｐＭ、約１５ｐＭ、約１０ｐＭ、約５ｐＭ、約２ｐＭ、約１ｐＭ、約０．５ｐＭ、約０．１ｐＭ、約０．０５ｐＭ、又は約０．０２ｐＭ、約１フェムトモル（ｆＭ）、又はそれらの間の任意の整数の何れかである。
【００７０】
結合親和性は、表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）、Ｋｉｎｅｘａ  Ｂｉｏｃｅｎｓｏｒ、シンチレーション近接解析、酵素結合免疫吸着検査法（ＥＬＩＳＡ）、ＯＲＩＧＥＮイムノアッセイ（ＩＧＥＮ）、蛍光消光、蛍光移動、酵母ディスプレイ、又はそれらの任意の組み合わせを使用して決定され得る。結合親和性はまた、適切なバイオアッセイを用いてスクリーニングされ得る。
【００７１】
ここで使用される場合、用語「アビディティ」は、希釈後の解離に対する２つ以上の薬剤の複合体の耐性を言及する。見かけの親和性は、酵素結合免疫吸着検査法（ＥＬＩＳＡ）又は当業者によく知られている任意の他の技術のような方法によって決定され得る。アビディティは、スキャッチャード分析、又は当業者によく知られている任意の他の技術のような方法によって決定され得る。
【００７２】
抗体又はその抗原結合断片は、保存的又は非保存的置換を用いてアミノ酸配列中に１つ以上の置換を行うことにより修飾され得る。
【００７３】
語句「保存的アミノ酸置換」は、ある共通の特性に基づくアミノ酸のグループ化を言及する。個々のアミノ酸間の共通の特性を規定する機能的方法は、相同生物の対応するタンパク質間のアミノ酸変化の正規化頻度を分析することである（Ｓｃｈｕｌｚ，Ｇ．Ｅ．及びＲ．Ｈ．Ｓｃｈｉｒｍｅｒ、Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ、Ｓｐｒｉｎｇｅｒ−Ｖｅｒｌａｇ）。そのような分析に従って、アミノ酸のグループは、グループ内のアミノ酸が互いに優先的に交換され、それ故に、全体的なタンパク質構造へのそれらの影響において、互いに最も似ている際に規定され得る。このように規定されたアミノ酸グループの例は以下を含む：
（ｉ）Ｇｌｕ及びＡｓｐ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ及びＨｉｓからなる荷電グループ；
（ｉｉ）Ｌｙｓ、Ａｒｇ及びＨｉｓからなる正電荷荷電グループ；
（ｉｉｉ）Ｇｌｕ及びＡｓｐからなる負電荷荷電グループ；
（ｉｖ）Ｐｈｅ、Ｔｙｒ及びＴｒｐからなる芳香族グループ；
（ｖ）Ｈｉｓ及びＴｒｐからなる窒素環グループ；
（ｖｉ）Ｖａｌ、Ｌｅｕ及びＩｌｅからなる大型の脂肪族非極性グループ；
（ｖｉｉ）Ｍｅｔ及びＣｙｓからなる僅かな極性を有するグループ；
（ｖｉｉｉ）Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ａｓｐ、Ａｓｎ、Ｇｌｙ、Ａｌａ、Ｇｌｕ、Ｇｌｎ及びＰｒｏからなる小型の残基グループ；
（ｉｘ）Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｍｅｔ及びＣｙｓからなる脂肪族グループ；及び
（ｘ）Ｓｅｒ及びＴｈｒからなる小型のヒドロキシルグループ。
【００７４】
上記に提示されたグループに加えて、各アミノ酸残基はそれ自身のグループを形成し得、そして個々のアミノ酸により形成されるグループは、上記のように、本技術分野において一般的に使用されるそのアミノ酸のための１及び／又は３文字の略語により簡単に言及され得る。
【００７５】
「保存残基」は、類似タンパク質の範囲に亘って比較的不変のアミノ酸である。「保存的アミノ酸置換」について上述したように、保存残基は、類似のアミノ酸で置換されることによってのみ変わることが多い。
【００７６】
ここにおけるアミノ酸配列において使用される場合の文字「ｘ」又は「ｘａａ」は、特に明記しない限り、２０個の標準アミノ酸の何れかがこの位置で配置され得ることを示すことが意図される。ペプチド模倣物設計の目的のために、アミノ酸配列中の「ｘ」又は「ｘａａ」は、標的配列中に存在するアミノ酸の模倣物により置換され得るか、又は該アミノ酸は、ペプチド模倣物の活性を妨げない本質的に何れの形態のスペーサーによっても置換され得る。
【００７７】
「相同性」又は「同一性」又は「類似性」は、２つのペプチド間又は２つの核酸分子間の配列類似性を言及する。相同性及び同一性はそれぞれ、比較の目的のために整列され得る各配列中の位置を比較することにより決定され得る。比較した配列中の同等の位置が同じ塩基又はアミノ酸によって占められている場合、その分子はその位置で同一である；同価の部位が、同じ又は類似のアミノ酸残基（例えば、立体的及び／又は電子的性質が類似している）によって占められている場合、該分子は、その位置で相同（類似）として言及され得る。相同性／類似性又は同一性の百分率としての表現は、比較された配列によって共有される位置における同一又は類似のアミノ酸の数の関数を言及する。「無関係」又は「非相同」である配列は、本発明の配列と、４０％未満の同一性、好ましくは２５％未満
の同一性を共有する。２つの配列の比較において、残基（アミノ酸又は核酸）の不在又は余分な残基の存在もまた同一性及び相同性／類似性を低下させる。
【００７８】
用語「相同性」は、類似の機能又はモチーフを有する遺伝子又はタンパク質を同定するために使用される配列類似性の数学をベースとする比較を記載する。本発明の核酸（ヌクレオチド、オリゴヌクレオチド）及びアミノ酸（タンパク質）配列は、例えば、他のファミリーメンバー、関連する配列又は相同体を同定するために、公共のデータベースに対して検索を実施するための「問い合わせ配列」として使用され得る。そのような検索は、Ａｌｔｓｃｈｕｌ等、（１９９０年）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２１５：４０３−１０のＮＢＬＡＳＴ及びＸＢＬＡＳＴプログラム（バージョン２．０）を使用して実施され得る。
ＢＬＡＳＴヌクレオチド検索は、本発明の核酸分子に相同なヌクレオチド配列を得るために、ＮＢＬＡＳＴプログラム、スコア＝１００、ワード長＝１２を用いて実施され得る。ＢＬＡＳＴアミノ酸検索は、本発明のタンパク質分子に相同なアミノ酸配列を得るために、ＸＢＬＡＳＴプログラム、スコア＝５０、ワード長＝３を用いて実施され得る。比較目的のためのギャップありアライメントを取得するために、Ａｌｔｓｃｈｕｌ等、（１９９７年）Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．２５（１７）：３３８９−３４０２中に記載されるように、ギャップありＢＬＡＳＴ（Ｇａｐｐｅｄ  ＢＬＡＳＴ）が利用され得る。ＢＬＡＳＴ及びギャップありＢＬＡＳＴプログラムを利用する場合、それぞれのプログラム（例えば、ＸＢＬＡＳＴ及びＢＬＡＳＴ）のデフォルトパラメータが使用され得る（ｗｗｗ．ｎｃｂｉ．ｎｌｍ．ｎｉｈ．ｇｏｖを参照）。
【００７９】
ここで使用する場合、「同一性」は、配列が配列整合を最大化するために、即ち、ギャップ及び挿入を考慮して整列される場合の、２つ以上の配列における対応する位置での同一のヌクレオチド又はアミノ酸残基の百分率を意味する。同一性は、Ｃｏｍｐｕｔａｔｉｏｎａｌ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ、Ｌｅｓｋ、Ａ．Ｍ．編集、Ｏｘｆｏｒｄ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  Ｐｒｅｓｓ、Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ、１９８８年；Ｂｉｏｃｏｍｐｕｔｉｎｇ：Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ  ａｎｄ  Ｇｅｎｏｍｅ  Ｐｒｏｊｅｃｔｓ、Ｓｍｉｔｈ、Ｄ．Ｗ．編集、Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ、Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ、１９９３年；Ｃｏｍｐｕｔｅｒ  Ａｎａｌｙｓｉｓ  ｏｆ  Ｓｅｑｕｅｎｃｅ  Ｄａｔａ、パートＩ、Ｇｒｉｆｆｉｎ，Ａ．Ｍ．及びＧｒｉｆｆｉｎ，Ｈ．Ｇ．編集、Ｈｕｍａｎａ  Ｐｒｅｓｓ、Ｎｅｗ  Ｊｅｒｓｅｙ、１９９４年；Ｓｅｑｕｅｎｃｅ  Ａｎａｌｙｓｉｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ、ｖｏｎ  Ｈｅｉｎｊｅ，Ｇ．、Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ、１９８７年；及びＳｅｑｕｅｎｃｅ  Ａｎａｌｙｓｉｓ  Ｐｒｉｍｅｒ、Ｇｒｉｂｓｋｏｖ，Ｍ．及びＤｅｖｅｒｅｕｘ，Ｊ．編集、Ｍ  Ｓｔｏｃｋｔｏｎ  Ｐｒｅｓｓ、Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ、１９９１年；及びＣａｒｉｌｌｏ，Ｈ．及びＬｉｐｍａｎ，Ｄ．、ＳＩＡＭ  Ｊ．Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｍａｔｈ．、４８：１０７３（１９８８年）中に記載されたものを含むが、それらに限定されない、既知の方法により容易に計算され得る。同一性を決定する方法は、試験された配列間で最大の一致を与えるように設計される。更に、同一性を決定する方法は、公的に利用可能なコンピュータープログラムにおいて体系化されている。２つの配列間の同一性を決定するためのコンピュータープログラム方法は、ＧＣＧプログラムパッケージ（Ｄｅｖｅｒｅｕｘ、Ｊ．等、Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  １２（１）：３８７（１９８４年））、ＢＬＡＳＴＰ、ＢＬＡＳＴＮ、及びＦＡＳＴＡ（Ａｌｔｓｃｈｕｌ，Ｓ．Ｆ．等、Ｊ．Ｍｏｌｅｃ．Ｂｉｏｌ．２１５：４０３−４１０（１９９０年）及びＡｌｔｓｃｈｕｌ等、Ｎｕｃ．Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．２５：３３８９−３４０２（１９９７年））を含むが、これらに限定されない。ＢＬＡＳＴ  Ｘプログラムは、ＮＣＢＩ及び他のソースから公的に利用可能である（ＢＬＡＳＴ  Ｍａｎｕａｌ、Ａｌｔｓｃｈｕｌ，Ｓ．等、ＮＣＢＩ  ＮＬＭ  ＮＩＨ  ベセスダ、メリーランド州、２０８９４；Ａｌｔｓｃｈｕｌ、Ｓ．等、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２１５：４０３−４１０（１９９０年）。周知のスミスウォーターマンアルゴリズム（Ｓｍｉｔｈ  Ｗａｔｅｒｍａｎ  ａｌｇｏｒｉｔｈｍ）もまた、同一性を決定するため
に使用され得る。
【００８０】
必要ならば、ここに記載される抗体又はその抗原結合断片は、免疫原性のために評価され得、そして、必要に応じて脱免疫化（即ち、抗体の１つ以上のＴ細胞エピトープを変更することにより、抗体を低い免疫反応性とする）され得る。
ここに記載される抗体及び抗原結合断片に存在する免疫原性及びＴ細胞エピトープの分析は、ソフトウェア及び特定のデータベースの使用を介して実施され得る。例示的なソフトウェア及びデータベースは、英国ケンブリッジのＡｎｔｉｔｏｐｅによって開発されたｉＴｏｐｅ（登録商標）を含むが、これは、ヒトＭＨＣクラスＩＩ対立遺伝子へのペプチド結合の分析のためのｉｎ  ｓｉｌｉｃｏ技術である。
【００８１】
ｉＴｏｐｅ（登録商標）ソフトウェアは、ヒトＭＨＣクラスＩＩ対立遺伝子へのペプチド結合を予測し、それによりそのような「潜在的なＴ細胞エピトープ」の位置の初期スクリーニングを提供する。
ｉＴｏｐｅ（登録商標）ソフトウェアは、ペプチドのアミノ酸側鎖と３４のヒトＭＨＣクラスＩＩ対立遺伝子の結合溝内の特異的な結合ポケットとの間の好ましい相互作用を予測する。
鍵となる結合残基の位置は、試験抗体の可変領域配列に架かる１つのアミノ酸により重複する９ｍｅｒペプチドのｉｎ  ｓｉｌｉｃｏ生成により達成される。
各９ｍｅｒペプチドは、３４のＭＨＣクラスＩＩアロタイプのそれぞれに対して試験され得、それらの潜在的なＭＨＣクラスＩＩ結合溝との「適合」及び相互作用に基づいてスコア化され得る。
ＭＨＣクラスＩＩ対立遺伝子の＞５０％に対して高い平均結合スコア（ｉＴｏｐｅ（登録商標）スコアリング関数において＞０．５５）を生成するペプチドは、潜在的なＴ細胞エピトープと見做される。そのような領域において、ＭＨＣクラスＩＩ溝内のペプチド結合のためのコア９アミノ酸配列が分析されて、ＭＨＣクラスＩＩポケット残基（Ｐ１、Ｐ４、Ｐ６、Ｐ７、及びＰ９）及び見込まれるＴ細胞受容体（ＴＣＲ）接触残基（Ｐ−１、Ｐ２、Ｐ３、Ｐ５、Ｐ８）が決定される。
【００８２】
任意のＴ細胞エピトープの同定後、同定されたＴ細胞エピトープを除去するために、アミノ酸残基の変化、置換、付加及び／又は欠失を導入し得る。そのような変化は、同定されたエピトープを依然として除去しながら、抗体の構造及び機能を維持するためになされ得る。例示的な変化は、保存的アミノ酸変化が含まれ得るが、これに限定されない。
【００８３】
ここで提供されるものは、Ｇ−ＣＳＦに結合し、Ｇ−ＣＳＦの活性を阻害する中和抗体又は抗原結合断片である。
【００８４】
陰性対照の、少なくとも２倍、少なくとも３倍、少なくとも４倍、少なくとも５倍、少なくとも６倍、少なくとも７倍、少なくとも８倍、少なくとも９倍、少なくとも１０倍、少なくとも２０倍、少なくとも３０倍、少なくとも４０倍、少なくとも５０倍、少なくとも６０倍、又はそれよりも大きな、抗Ｇ−ＣＳＦ抗体又はその抗原結合断片による阻害／中和の百分率（％）は、抗体又はその抗原結合断片がＧ−ＣＳＦを阻害又は中和することを示す。
陰性対照の２倍未満の抗Ｇ−ＣＳＦ抗体又はその抗原結合断片によるＧ−ＣＳＦの阻害の百分率は、Ｇ−ＣＳＦを阻害しない抗体又はその抗原結合断片を示す。
【００８５】
ここに記載される抗体又はその抗原結合断片は、免疫複合体としても使用され得る。ここで使用される場合、本願明細書及び請求項の目的のために、免疫複合体は、本発明に従う抗Ｇ−ＣＳＦ抗体又はその断片及び少なくとも１つの治療用標識からなる複合体を言及する。治療用標識は、抗腫瘍剤及び血管新生阻害剤を含む。そのような抗腫瘍剤は本技術
分野において既知であり、毒素、薬物、酵素、サイトカイン、放射性核種、及び光力学剤を含むが、これらに限定されない。毒素は、リシンＡ鎖、変異体シュードモナス外毒素、ジフテリアトキソイド、ストレプトニグリン、ボアマイシン、サポリン、ゲロニン、及びヤマゴボウ抗ウイルスタンパク質を含むが、これらに限定されない。薬物は、ダウノルビシン、メトトレキサート、及びカリケアマイシンを含むが、これらに限定されない。放射性核種は、放射性金属を含む。サイトカインは、形質転換成長因子β（ＴＧＦ−β）、インターロイキン、インターフェロン、及び腫瘍壊死因子を含むが、これらに限定されない；これらのサイトカイン及びそれらの機能のそれぞれの例は、本技術分野において周知である。光力学剤は、ポルフィリン及びそれらの誘導体を含むが、これらに限定されない。更なる治療用標識は本技術分野において既知であり、ここでも同様に考慮される。抗Ｇ−ＣＳＦ  ｍＡｂ又はその抗原結合断片を少なくとも１つの薬剤と複合体化する方法は、当業者に周知である（即ち、Ｇｈｅｔｉｅ等、１９９４年、Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．Ｔｈｅｒ．６３：２０９−３４により概説されるような抗体複合体）。そのような方法は、分子をカップリング又は連結するために使用されるいくつかの利用可能なヘテロ二官能性試薬の１つを利用し得る。抗体を他の部分に結合するためのリンカーは、本技術分野において周知であり、ここで考慮される。
【００８６】
ポリペプチドを結合又は連結するための方法は、本技術分野において周知である。抗体と標識の間の会合（結合）は、共有及び非共有相互作用、化学的結合並びに組換え技術を含むがこれらに限定されない、本技術分野において既知の任意の手段を含む。
【００８７】
抗体又はその抗原結合断片は、例えば、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）の添加によるような、種々の目的のために本技術分野において既知の技術を使用して修飾され得る。ＰＥＧ修飾（ＰＥＧ化）は、改善された循環時間、改善された溶解性、タンパク質分解に対して改善された抵抗性、低下された抗原性と免疫原性、改善された生物学的利用率、低下された毒性、改善された安定性、及び容易化された製剤の１つ以上を導き得る（概説のために、Ｆｒａｎｃｉｓ等、Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｈｅｍａｔｏｌｏｇｙ、６８：１−１８、１９９８年参照）。
【００８８】
循環中の抗体ベースの融合タンパク質の半減期を改善する他の方法もまた、例えば、米国特許第７，０９１，３２１号及び６，７３７，０５６号中に記載されるように既知であり、これらの各々は、参照としてここに組み込まれる。加えて、抗体及びその抗原結合断片は、それらの複雑なＮ−グリコシド結合糖鎖にフコースを含まないように産生又は発現され得る。複雑なＮ−グリコシド結合糖鎖からのフコースの除去は、抗体依存性細胞性細胞傷害（ＡＤＣＣ）及び補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）を含むが、これらに限定されない、抗体及び抗原結合断片のエフェクター機能を増加することが知られている。同様に、Ｇ−ＣＳＦに結合し得る抗体又はその抗原結合断片は、それらのＣ末端で、任意の抗体アイソタイプ、例えば、ＩｇＧ、ＩｇＡ、ＩｇＥ、ＩｇＤ及びＩｇＭ並びにアイソタイプサブクラスの何れか、特にＩｇＧ１、ＩｇＧ２ｂ、ＩｇＧ２ａ、ＩｇＧ３及びＩｇＧ４から誘導された免疫グロブリン重鎖の全部又は一部に結合し得る。
【００８９】
Ｇ−ＣＳＦに結合する抗体又はその抗原結合断片はまた、Ｇ−ＣＳＦの精製のために及び／又は試料又は対象者におけるＧ−ＣＳＦレベルを検出するために使用され得る。ここに記載される抗体及び抗原結合断片の組成物は、非治療薬として（例えば、親和性精製薬として）使用され得る。一般に、１つのそのような態様において、対象のタンパク質は、本技術分野において既知の従来の方法を使用して、セファデックス樹脂（Ｓｅｐｈａｄｅｘ  ｒｅｓｉｎ）又はろ紙のような固相に固定化される。固定化されたタンパク質は、対象の標的（又はその断片）を含む試料と接触されて精製され、その後、該担体は、固定化された抗体に結合する標的のタンパク質を除き試料中の材料を実質的にすべて除去する適切な溶媒で洗浄される。最後に、担体は、グリシン緩衝液、ｐＨ５．０のような別の適切
な溶媒で洗浄され、標的タンパク質を放出する。
【００９０】
抗体又はその抗原結合断片は、親和性タグ（例えば、精製タグ）に結合されるか又は組換え的に操作され得る。例えば、Ｈｉｓ６タグ（Ｈｉｓ−Ｈｉｓ−Ｈｉｓ−Ｈｉｓ−Ｈｉｓ−Ｈｉｓ；ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２１）のような親和性タグが、本技術分野において慣用的なものである。
【００９１】
抗体の作製方法
ここに記載される抗体は、本技術分野において既知の任意の方法により作製され得る。宿主動物の免疫化の経路及びスケジュールは、一般に、ここで更に説明されるように、抗体刺激及び産生のための確立された慣用的な技術に沿う。ヒト及びマウス抗体の産生のための一般的な技術は、本技術分野において既知であり、ここで及び以下の実施例中に記載される。
【００９２】
ヒトを含む任意の哺乳動物被験体又はそれからの抗体産生細胞が操作されて、ヒトを含む哺乳動物ハイブリドーマ細胞株の産生の基礎として役立ち得ることが考慮される。典型的には、宿主動物は、ここに記載されるものを含む、免疫原の量で、腹腔内、筋肉内、経口、皮下、足底内、及び／又は皮内に接種される。
【００９３】
ヒトタンパク質、又は、免疫化される種、例えば、キーホールリンペットヘモシアニン、血清アルブミン、ウシサイログロブリン、又は、二官能性又は誘導体化剤、例えば、マレイミドベンゾイルスルホスクシンイミドエステル（システイン残基を介した結合）、Ｎ−ヒドロキシスクシンイミド（リジン残基を介した）、グルタアルデヒド、無水コハク酸、ＳＯＣｌ2を使用する大豆トリプシンインヒビターにおいて免疫原性であるアジュバント、又は本技術分野において既知の任意の他のアジュバントに結合した標的アミノ酸配列を含む断片を用いる宿主動物の免疫化は、抗体の集団を生み出し得る。
【００９４】
ハイブリドーマは、Ｋｏｈｌｅｒ，Ｂ．及びＭｉｌｓｔｅｉｎ，Ｃ．（１９７５年）Ｎａｔｕｒｅ  ２５６：４９５−４９７の一般的な体細胞ハイブリダイゼーション技術又はＢｕｃｋ，Ｄ．Ｗ．等、Ｉｎ  Ｖｉｔｒｏ、１８：３７７−３８１（１９８２年）による修正を使用して、免疫動物及び不死化骨髄腫細胞のリンパ球から調製され得る。Ｘ６３−Ａｇ８．６５３及び米国カリフォルニア州サンディエゴのＣｅｌｌ  Ｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎ  ＣｅｎｔｅｒのＳａｌｋ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅからのものを含むが、これらに限定されない利用可能な骨髄腫株が、ハイブリダイゼーションに使用され得る。一般に、この技法は、ポリエチレングリコールのような融合剤を使用して、又は当業者に周知の電気的手段により、骨髄腫細胞とリンパ系細胞を融合することを含む。融合後、細胞を融合培地から分離し、ヒポキサンチン−アミノプテリン−チミジン（ＨＡＴ）培地のような選択的増殖培地で増殖させて、ハイブリダイズしていない親細胞を排除する。血清が補完されるか又は補完されない、ここに記載される何れの培地も、モノクローナル抗体を分泌するハイブリドーマを培養するために使用され得る。細胞融合技術の別の選択肢として、ＥＢＶ不死化Ｂ細胞が、モノクローナル抗体を産生するために使用され得る。希望する場合、ハイブリドーマは、拡大及びサブクローニングされ、上清が従来の免疫アッセイ手順（例えば、放射免疫アッセイ、酵素免疫アッセイ、蛍光免疫アッセイ等）により抗免疫原活性について評価される。
【００９５】
抗体の供給源として使用され得るハイブリドーマは、すべての誘導体、モノクローナル抗体を産生する親ハイブリドーマの子孫細胞、又はその一部を含む。
【００９６】
そのような抗体を産生するハイブリドーマは、既知の手順を使用してインビトロ又はインビボにおいて増殖され得る。
モノクローナル抗体は、希望する場合、硫酸アンモニウム沈殿、ゲル電気泳動、透析、クロマトグラフィー、及び限外ろ過のような従来の免疫グロブリン精製手順により、培地又は体液から単離され得る。
【００９７】
望ましくない活性は、存在する場合、例えば、固相に付着した免疫原で作られた吸着剤上で製剤を流し、免疫原から所望の抗体を溶出又は放出することにより除去され得る。
【００９８】
抗体は、本技術分野において既知の任意の方法を使用して、組換えで作製され、及び発現され得る。
【００９９】
抗体は、ファージ提示技術により組換えにより作製され得る。例えば、米国特許第５，５６５，３３２号；５，５８０，７１７号；５，７３３，７４３号；及び６，２６５，１５０号；及びＷｉｎｔｅｒ等、Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１２：４３３−４５５（１９９４年）参照。或いは、ファージ提示技術（ＭｃＣａｆｆｅｒｔｙ等、Ｎａｔｕｒｅ  ３４８：５５２−５５３（１９９０年））が、免疫化されていないドナーからの免疫グロブリン可変（Ｖ）ドメイン遺伝子レパートリーから、インビトロでヒト抗体及び抗体断片を産生するために使用され得る。この技術に従って、抗体Ｖドメイン遺伝子は、Ｍ１３やｆｄのような糸状バクテリオファージの主要又はマイナーの外被タンパク質遺伝子にインフレームでクローン化され、ファージ粒子の表面に機能的な抗体断片として提示される。糸状粒子はファージゲノムの一本鎖ＤＮＡコピーを含むため、抗体の機能特性に基づく選択もまた、それらの特性を示す抗体をコードする遺伝子の選択を生じる。従って、ファージは、Ｂ細胞の特性を、ある程度模倣する。ファージ提示は、種々の形式において実施され得る；概説については、例えば、Ｊｏｈｎｓｏｎ，Ｋｅｖｉｎ  Ｓ及びＣｈｉｓｗｅｌｌ，Ｄａｖｉｄ  Ｊ．、Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｏｐｉｎｉｏｎ  ｉｎ  Ｓｔｒｕｃｔｕｒａｌ  Ｂｉｏｌｏｇｙ、３：５６４−５７１（１９９３年）参照。Ｖ遺伝子セグメントの幾つかのソースは、ファージ提示のために使用され得る。Ｃｌａｃｋｓｏｎ等、Ｎａｔｕｒｅ  ３５２：６２４−６２８（１９９１年）は、免疫したマウスの脾臓に由来するＶ遺伝子の小さな無作為のコンビナトリアルライブラリから抗オキサゾロン抗体の多様な配列を単離した。免疫化されていないヒトドナーからのＶ遺伝子のレパートリーは、構築することができ、抗原（自己抗原を含む）の多様な配列に対する抗体は、本質的に、Ｍａｒｋ等、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２２２：５８１−５９７（１９９１年）又はＧｒｉｆｆｉｔｈ等、ＥＭＢＯ  Ｊ．１２：７２５−７３４（１９９３年）により記載された技術に従って単離され得る。自然な免疫応答において、抗体遺伝子は突然変異を高率で蓄積する（体細胞超変異）。導入された変更の幾つかは、より高い親和性を付与し、高親和性表面免疫グロブリンを提示するＢ細胞は、後続の抗原チャレンジの間に優先的に複製及び分化される。この自然なプロセスは、「チェーンシャッフリング」として既知の技術を利用することにより模倣され得る。Ｍａｒｋｓ等、Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌ．１０：７７９−７８３（１９９２年））。この方法において、ファージ提示により得られる「一次」ヒト抗体の親和性は、重鎖及び軽鎖のＶ領域遺伝子を、免疫化されていないドナーから得られたＶドメイン遺伝子の天然変異体（レパートリー）のレパートリーで連続的に置き換えることにより改善され得る。この手法は、ｐＭ乃至ｎＭの範囲の親和性を有する抗体及び抗体断片の産生を可能とする。非常に大きなファージ抗体レパートリー（「究極のライブラリ」（ｔｈｅ  ｍｏｔｈｅｒ−ｏｆ−ａｌｌ  ｌｉｂｒａｒｉｅｓ）としても既知である）を作製するための戦略は、Ｗａｔｅｒｈｏｕｓｅ等、Ｎｕｃｌ．Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．２１：２２６５−２２６６（１９９３年）により記載されている。遺伝子シャッフリングはまた、げっ歯類の抗体からヒト抗体を誘導するためにも使用され得るが、ここで、該ヒト抗体は、開始するげっ歯類の抗体に対して類似の親和性及び特異性を有する。「エピトープインプリンティング」とも言及されるこの方法に従って、ファージ提示技術により得られたげっ歯類の抗体の重鎖又は軽鎖Ｖドメイン遺伝子は、ヒトＶドメイン遺伝子のレパートリーで置き換えられ、げっ歯類−ヒトキメラを生成する。抗原における選択は、結果とし
て、機能的な抗原結合部位を復元できるヒト可変領域の単離を生じ、即ち、エピトープがパートナーの選択を支配（インプリント）する。残りのげっ歯類Ｖドメインを置き換えるためにプロセスが繰り返される際に、ヒト抗体が得られる（１９９３年４月１日に公開された国際公開第９３／０６２１３号を参照）。ＣＤＲ移植によるげっ歯類の抗体の従来のヒト化とは異なり、この技術は、げっ歯類起源のフレームワーク又はＣＤＲ残基を有さない完全なヒト抗体を提供する。
【０１００】
モノクローナル抗体をヒト化するために、４つの一般的な工程が存在する。
それらは：（１）開始する抗体の軽及び重可変ドメインのヌクレオチド及び予測されるアミノ酸配列の決定（２）ヒト化抗体の設計、即ち、ヒト化プロセス中に使用する抗体フレームワーク領域の決定（３）実際のヒト化の方法論／技術、及び（４）ヒト化抗体のトランスフェクション及び発現である。例えば、米国特許第４，８１６，５６７号；５，８０７，７１５号；５，８６６，６９２号；６，３３１，４１５号；５，５３０，１０１号；５，６９３，７６１号；５，６９３，７６２号；５，５８５，０８９号；及び６，１８０，３７０号参照。
【０１０１】
ヒト定常ドメインに融合したげっ歯類又は改変げっ歯類Ｖ領域及びそれらの関連する相補性決定領域（ＣＤＲ）を有するキメラ抗体を含む、非ヒト免疫グロブリンに由来する抗原結合部位を含む多くの「ヒト化」抗体分子が、記載されてきた。例えば、Ｗｉｎｔｅｒ等、Ｎａｔｕｒｅ  ３４９：２９３−２９９（１９９１年）、Ｌｏｂｕｇｌｉｏ等、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ８６：４２２０−４２２４（１９８９年）、Ｓｈａｗ等、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１３８：４５３４−４５３８（１９８７年）、及びＢｒｏｗｎ等、Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．４７：３５７７−３５８３（１９８７年）参照。
【０１０２】
他の参考文献は、適切なヒト抗体定常ドメインとの融合の前に、ヒトサポーティングフレームワーク領域（ＦＲ）中に移植されたげっ歯類のＣＤＲを記載している。例えば、Ｒｉｅｃｈｍａｎｎ等、Ｎａｔｕｒｅ  ３３２：３２３−３２７（１９８８年）、Ｖｅｒｈｏｅｙｅｎ等、Ｓｃｉｅｎｃｅ、２３９：１５３４−１５３６（１９８８年）、及びＪｏｎｅｓ等、Ｎａｔｕｒｅ、３２１：５２２−５２５（１９８６年）参照。別の参考文献は、組換えベニアリングされたげっ歯類フレームワーク領域によってサポートされるげっ歯類のＣＤＲを記載する。例えば、欧州特許公開第０５１９５９６号参照。これらの「ヒト化」分子は、ヒトレシピエントにおけるこれらの部分の治療的適用の期間と有効性を制限するげっ歯類抗ヒト抗体分子に対して、望ましくない免疫反応を最小限に抑えるように設計される。例えば、抗体定常領域は、免疫学的に不活性（例えば、補体溶解を引き起こさない）であるように操作され得る。例えば、国際公開第９９／０５８５７２号；及び英国特許出願第９８０９９５１．８号参照。
【０１０３】
同様に利用され得る抗体をヒト化する他の方法は、Ｄａｕｇｈｅｒｔｙ等、Ｎｕｃｌ．Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．、１９：２４７１−２４７６（１９９１年）により及び米国特許第６，１８０，３７７号；６，０５４，２９７号；５，９９７，８６７号；５，８６６，６９２号；６，２１０，６７１号；及び６，３５０，８６１号；及び国際公開第０１／２７１６０号中に開示されている。
【０１０４】
更なる別の代替法において、完全なヒト抗体は、特定のヒト免疫グロブリンタンパク質を発現するように操作された市販で入手可能なマウスを使用することにより得られ得る。より望ましい（例えば、完全なヒト抗体）又はより強固な免疫応答を産生するように設計されたトランスジェニック動物もまた、ヒト化又はヒト抗体の生成のために使用され得る。そのような技術の例は、Ａｂｇｅｎｉｘ，Ｉｎｃ．（フレモント、カルフォルニア州）からのＸＥＮＯＭＯＵＳＥ（登録商標）及びＭｅｄａｒｅｘ，Ｉｎｃ．（プリンストン、ニュージャージー州）からのＨＵＭＡＢ−ＭＯＵＳＥ（登録商標）及びＴＣ  ＭＯＵＳＥ
（登録商標）である。
【０１０５】
上記の議論はヒト化抗体に関するものであるが、議論された一般原則は、例えば犬、猫、霊長類、ウマ及びウシに使用するために抗体をカスタマイズすることに適用可能であることは明らかであろう。ここに記載される、抗体をヒト化する１つ以上の観点、例えば、ＣＤＲ移植、フレームワーク突然変異及びＣＤＲ突然変異が組み合わせられ得ることは、更に明らかである。
【０１０６】
希望する場合、目的の抗体は、任意の既知の方法を使用して配列決定され得、ポリヌクレオチド配列は、その後、発現又は増殖のためにベクター中にクローニングされ得る。
【０１０７】
目的の抗体をコードする配列は、宿主細胞内のベクターで維持され得、宿主細胞は、その後、将来の使用のために拡大及び凍結され得る。代替案において、ポリヌクレオチド配列は、抗体を「ヒト化」するための又は抗体の親和性を改善するための遺伝子操作又は抗体の他の特性のために使用され得る。例えば、抗体がヒトの臨床試験及び治療で使用される場合、定常領域は、免疫応答を回避するために、よりヒトの定常領域に似るように操作され得る。
【０１０８】
ここで提供されるものはまた、これらの抗体又はポリペプチドの何れかを作製する方法である。本発明の抗体は、本技術分野において既知の任意の従来の手順を使用して作製され得る。ポリペプチドは、抗体のタンパク質分解又は他の分解により、上記の組換え法（即ち、単一又は融合ポリペプチド）により、又は化学合成により製造され得る。抗体のポリペプチド、特に約５０個のアミノ酸までのより短いポリペプチドは、化学合成により都合よく作製される。化学合成の方法は、本技術分野において既知であり、市販で入手可能である。例えば、抗体は、固相法を利用する自動ポリペプチド合成機により製造され得る。同様に、米国特許第５，８０７，７１５号；４，８１６，５６７号；及び６，３３１，４１５号参照。
【０１０９】
抗体は、最初に宿主動物から抗体及び抗体産生細胞を単離し、遺伝子配列を取得し、そして、遺伝子配列を使用して宿主細胞（例えば、ＣＨＯ細胞）中で抗体を組換え発現させることにより、組換えにより作製され得る。利用され得る別の方法は、植物（例えば、タバコ）又はトランスジェニックミルク中で抗体配列を発現させることである。植物又は牛乳中で組換えにより抗体を発現させる方法が記載されている。例えば、Ｐｅｅｔｅｒｓ等、Ｖａｃｃｉｎｅ  １９：２７５６（２００１年）；Ｌｏｎｂｅｒｇ，Ｎ．及びＤ．Ｈｕｓｚａｒ  Ｉｎｔ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ  １３：６５（１９９５年）；及びＰｏｌｌｏｃｋ等、Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ２３１：１４７（１９９９年）参照。抗体の誘導体、例えば一本鎖等を作製する方法は、本技術分野において既知である。
【０１１０】
ここで使用される場合、「宿主細胞」は、ポリヌクレオチド挿入物の組み込みのためのベクターのレシピエントであり得るか、又はレシピエントである個々の細胞又は細胞培養物を含む。宿主細胞は単一の宿主細胞の子孫を含み、該子孫は、自然、偶発的、又は意図的な突然変異に起因して、起源の親細胞と必ずしも完全に同一でなくてもよい（形態又はゲノムＤＮＡ相補体において）。宿主細胞は、本発明のポリヌクレオチドでトランスフェクトされた細胞を含む。
【０１１１】
抗体をコードするＤＮＡは、従来の手順を使用して容易に単離及び配列決定され得る（例えば、モノクローナル抗体の重鎖及び軽鎖をコードする遺伝子に特異的に結合することが可能なオリゴヌクレオチドプローブを使用することにより）。ハイブリドーマ細胞は、そのようなＤＮＡの好ましい供給源として役立ち得る。一度単離されると、ＤＮＡは発現ベクター（国際公開第８７／０４４６２号に開示されている発現ベクターのような）中に
入れられ、それはその後、そうでなければ免疫グロブリンタンパク質を産生しない、大腸菌細胞、サルＣＯＳ細胞、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞、又は骨髄腫細胞のような宿主細胞中にトランスフェクトされて、組換え宿主細胞でのモノクローナル抗体の合成が得られる。例えば、国際公開第８７／０４４６２号参照。ＤＮＡはまた、例えば、相同マウス配列の代わりにヒト重鎖及び軽鎖定常ドメインのコード配列を置換することにより、Ｍｏｒｒｉｓｏｎ等、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．８１：６８５１（１９８４年）、又は、非免疫グロブリンポリペプチドのコード配列の全部又は一部を免疫グロブリンコード配列に共有結合することによっても修飾され得る。そのようにして、ここに記載される抗体の結合特異性を有する「キメラ」又は「ハイブリッド」抗体が調製される。
【０１１２】
ここで使用される場合、「ベクター」は、宿主細胞において１つ以上の目的の遺伝子又は配列を送達でき、好ましくは発現できる構築物を意味する。ベクターの例は、ウイルスベクター、裸のＤＮＡ又はＲＮＡ発現ベクター、プラスミド、コスミド又はファージベクター、カチオン性凝縮剤を伴うＤＮＡ又はＲＮＡ発現ベクター、リポソームに封入されたＤＮＡ又はＲＮＡ発現ベクター、及び生成細胞のような特定の真核細胞を含むが、これらに限定されない。
【０１１３】
ここで使用される場合、「発現制御配列」は、核酸の転写を指示する核酸配列を意味する。発現制御配列は、構成的又は誘導性プロモーターのようなプロモーター、又はエンハンサーであり得る。発現制御配列は、転写される核酸配列に動作可能に連結されている。
【０１１４】
場合により、抗体配列を遺伝的に操作して、Ｇ−ＣＳＦに対するより高い親和性及びＧ−ＣＳＦの阻害及び／又は中和におけるより高い効力を得ることが望ましい場合があり得る。１つ以上のポリヌクレオチドの変化が抗体に対して行われ、それでもＧ−ＣＳＦに対する結合能力が維持され得ることは当業者に明らかであろう。
【０１１５】
発現ベクターは、抗体の発現を指示するために使用され得る。
当業者は、インビボにおいて外因性タンパク質の発現を得るための発現ベクターの管理に精通している。例えば、米国特許第６，４３６，９０８号；６，４１３，９４２号；及び６，３７６，４７１号参照。
【０１１６】
抗体の一本鎖可変領域断片（「ｓｃＦｖ」）がここに記載されている。一本鎖可変領域断片は、短鎖連結ペプチドを使用することにより、軽鎖及び／又は重鎖可変領域を結合することにより作製され得る。Ｂｉｒｄ等、（１９８８年）Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２４２：４２３−４２６。連結ペプチドの例は、１つの可変領域のカルボキシ末端と他の可変領域のアミノ末端との間を約３．５ｎｍで架橋する（ＧＧＧＧＳ）３（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２２）である。他の配列のリンカーが設計され及び使用されている。Ｂｉｒｄ等（同上）。リンカーは、薬物の結合又は固体担体への結合のような追加の機能のために順番に修飾され得る。一本鎖変異体は、組換えにより又は合成的に製造され得る。ｓｃＦｖの合成的製造のために、自動合成機が使用され得る。ｓｃＦｖの組換え製造のために、ｓｃＦｖをコードするポリヌクレオチドを含む適切なプラスミドが、酵母、植物、昆虫又は哺乳動物の細胞のような真核生物、又は大腸菌のような原核生物の何れかの適切な宿主細胞中に導入され得る。目的のｓｃＦｖをコードするポリヌクレオチドは、ポリヌクレオチドのライゲーションのような日常的な操作により作製され得る。得られたｓｃＦｖは、本技術分野において既知の標準的なタンパク質精製技術を使用して単離され得る。
【０１１７】
ダイアボディ（ｄｉａｂｏｄｙ）や単一ドメイン抗体のような一本鎖抗体の他の形態もまた含まれる。ダイアボディは、ＶＨ及びＶＬドメインが一本鎖ポリペプチド上に発現されており、しかし、同じ鎖上の２つのドメイン間のペアリングを可能にするには短すぎる
リンカーを使用し、それによりドメインを強制的に別の鎖の相補ドメインとペアリングさせ、そして２つの抗原結合部位を生成する、二価の二重特異性抗体である（例えば、Ｈｏｌｉｇｅｒ、Ｐ．等、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ、９０：６４４４−６４４８（１９９３年）；及びＰｏｌｊａｋ、Ｒ．Ｊ．等、Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ、２：１１２１−１１２３（１９９４年）参照）。
【０１１８】
例えば、二重特異性抗体、少なくとも２つの異なる抗原のための結合特異性を有するモノクローナル抗体は、ここに開示される抗体を使用して調製され得る。二重特異性抗体を作製する方法は、本技術分野において既知である（例えば、Ｓｕｒｅｓｈ等、１９８６年、Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ  １２１：２１０参照）。伝統的に、二重特異性抗体の組換え産生は、２つの免疫グロブリン重鎖−軽鎖ペアの、異なる特異性を有する２つの重鎖との共発現に基づいていた（Ｍｉｌｌｓｔｅｉｎ及びＣｕｅｌｌｏ、１９８３年、Ｎａｔｕｒｅ、３０５、５３７−５３９）。二重特異性抗体は、一方のアームに最初の結合特異性を持つハイブリッド免疫グロブリン重鎖と、もう一方のアームにハイブリッド免疫グロブリン重鎖−軽鎖ペア（２番目の結合特異性を提供する）から構成され得る。
二重特異性分子の半分だけに免疫グロブリン軽鎖を有するこの非対称構造は、望ましくない免疫グロブリン鎖の組み合わせからの望ましい二重特異性化合物の分離を促進する。このアプローチは、国際公開第９４／０４６９０号に記載されている。
【０１１９】
二重特異性抗体を作製するための１つのアプローチに従って、望ましい結合特異性（抗体−抗原結合部位）を有する抗体可変ドメインが、免疫グロブリン定常ドメイン配列に融合される。融合は、好ましくは、ヒンジ、ＣＨ２及びＣＨ３領域の少なくとも一部を含む免疫グロブリン重鎖定常ドメインとのものである。融合体の少なくとも１つに存在する、軽鎖結合に必要な部位を含む第１の重鎖定常領域（ＣＨ１）を有することが好ましい。免疫グロブリン重鎖融合体、及び希望する場合、免疫グロブリン軽鎖をコードするＤＮＡが別の発現ベクターに挿入され、適切な宿主生物中に共トランスフェクトされる。これは、構築に使用される３つのポリペプチド鎖の不均等な比率が最適な収率を提供する際の態様における、３つのポリペプチド断片の相互比率の調整において大きな柔軟性を提供する。しかし、等しい比率における少なくとも２つのポリペプチド鎖の発現が結果として高い収率を生じるか又は該比率が特に重要でない場合、１つの発現ベクター内に２つ又は３つ全てのポリペプチド鎖のコード配列を挿入し得る。
【０１２０】
２つの共有結合した抗体を含むヘテロ複合体抗体もまた、本発明の範囲内である。そのような抗体は、免疫系細胞を望ましくない細胞に標的化するために使用されてきた（米国特許第４，６７６，９８０号）。ヘテロ複合体抗体は、任意の簡便な架橋法を使用して作製され得る。適切な架橋剤及び技術は、本技術分野において周知であり、米国特許第４，６７６，９８０号に記載されている。
【０１２１】
キメラ又はハイブリッド抗体はまた、架橋剤を含む方法を含む合成タンパク質化学の既知の方法を使用して、インビトロで調製され得る。例えば、免疫毒素は、ジスルフィド交換反応を使用して、又はチオエーテル結合を形成することにより構築され得る。この目的に適した試薬の例は、イミノチオレート及びメチル−４−メルカプトブチルイミデートを含む。
【０１２２】
抗Ｇ−ＣＳＦ抗体及びその抗原結合断片は、本技術分野において既知の方法を使用して同定又は特徴付けられ得、それにより、Ｇ−ＣＳＦ生物活性の低下、改善、又は中和が検出及び／又は測定される。
【０１２３】
抗体は、本技術分野において周知の方法を使用して特徴付けられ得る。例えば、１つの
方法は、それが結合するエピトープ、又は「エピトープマッピング」を同定することである。例えば、Ｈａｒｌｏｗ及びＬａｎｅの第１１章、Ｕｓｉｎｇ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ，ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ、Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ、コールドスプリングハーバー、ニューヨーク州、１９９９年に記載されるような、抗体−抗原複合体の結晶構造の解明、競合アッセイ、遺伝子断片発現アッセイ、及び合成ペプチドベースのアッセイを含む、タンパク質上のエピトープの位置をマッピング及び特徴付けるための本技術分野において既知の多くの方法が存在する。追加の例において、抗Ｇ−ＣＳＦ抗体が結合する配列を決定するためにエピトープマッピングが使用され得る。エピトープマッピングは、種々の供給源、例えば、Ｐｅｐｓｃａｎ  Ｓｙｓｔｅｍｓ（エーデルフェルトウェフ  １５、８２１９  ＰＨ  レーリスタット、オランダ国）から市販で入手可能である。エピトープは、線形エピトープ、即ち、アミノ酸の単一のストレッチ中に含まれるか、又は必ずしも単一のストレッチ中に含まれなくてもよいアミノ酸の三次元相互作用により形成される立体構造エピトープであり得る。種々の長さのペプチド（例えば、少なくとも４乃至６個のアミノ酸の長さ）は、を単離又は合成（例えば、組換え）され得、抗Ｇ−ＣＳＦ抗体との結合アッセイのために使用され得る。別の例において、抗Ｇ−ＣＳＦ抗体が結合するエピトープは、抗Ｇ−ＣＳＦ配列に由来する重複ペプチドを使用し、抗Ｇ−ＣＳＦ抗体による結合を決定することにより、体系的なスクリーニングにおいて決定され得る。遺伝子断片発現アッセイに従って、Ｇ−ＣＳＦをコードするオープンリーディングフレームは、ランダムに、又は特定の遺伝子構築により断片化され、Ｇ−ＣＳＦの発現断片と試験される抗体との反応性が決定される。遺伝子断片は、例えば、ＰＣＲにより産生され得、その後、放射性アミノ酸の存在下において、インビトロで転写及びタンパク質に翻訳され得る。放射性標識Ｇ−ＣＳＦ断片への抗体の結合は、その後、免疫沈降及びゲル電気泳動により決定される。特定のエピトープはまた、ファージ粒子の表面に提示されるランダムペプチド配列の大きなライブラリ（ファージライブラリ）を使用することによっても同定され得る。或いは、重複ペプチド断片の同定されたライブラリは、単純な結合アッセイにおいて試験抗体への結合のために試験され得る。更なる例において、抗原結合ドメインの突然変異誘発、ドメイン交換実験、及びアラニンスキャニング突然変異誘発が、エピトープ結合のために必須の、十分な、及び／又は必要な残基を同定するために実施され得る。例えば、ドメイン交換実験は、Ｇ−ＣＳＦポリペプチドの種々の断片が密接に関連するものの抗原的に異なるタンパク質からの配列で置き換えられた（交換された）変異体Ｇ−ＣＳＦを使用して、実施され得る。抗体の変異体Ｇ−ＣＳＦへの結合を評価することにより、抗体結合に対する特定のＧ−ＣＳＦ断片の重要性が評価され得る。
【０１２４】
抗Ｇ−ＣＳＦ抗体を特徴付けるために使用され得る更なる別の方法は、同じ抗原、即ち、Ｇ−ＣＳＦ上の種々の断片に結合することが既知の他の抗体との競合アッセイを使用して、抗Ｇ−ＣＳＦ抗体が他の抗体と同じエピトープに結合するかどうかを決定することである。競合アッセイは、当業者に周知である。
【０１２５】
ここで提供されるものはまた、親和性成熟抗体である。例えば、親和性成熟抗体は、本技術分野において既知の手順により産生され得る（Ｍａｒｋｓ等、１９９２年、Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ、１０：７７９−７８３；Ｂａｒｂａｓ等、１９９４年、Ｐｒｏｃ
Ｎａｔ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ，ＵＳＡ  ９１：  ３８０９−３８１３；Ｓｃｈｉｅｒ等、１９９５年、Ｇｅｎｅ、１６９：１４７−１５５；Ｙｅｌｔｏｎ等、１９９５年、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．、１５５：１９９４−２００４；Ｊａｃｋｓｏｎ等、１９９５年、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．、１５４（７）：３３１０−９；Ｈａｗｋｉｎｓ等、１９９２年、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．、２２６：８８９−８９６；及び国際公開第２００４／０５８１８４号）。
【０１２６】
幾つかの態様において、抗Ｇ−ＣＳＦ抗体は、改変抗体である。例えば、対象者の循環
からの抗体との結合抗原のクリアランスを増加させるために、神経ｐＨで細胞表面の新生児Ｆｃ受容体への増加された結合を有し得るスイーピング抗体が、本技術分野において既知の手順により産生され得る（Ｈｉｇｕｃｈｉ等、２０１３年：８（５）、ｅ６３２３６）。Ｆｃγ受容体に結合し、対象者の循環からの結合抗原のクリアランスを可能にする大きな免疫複合体を形成する二重特異性／バイパラトピック抗体は、本技術分野において既知の手順により産生され得る（Ｋａｓｔｕｒｉｒａｎｇａｎ等、２０１７年、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．、１０：４３６１−４３７０）。
【０１２７】
以下の方法は、抗体の親和性を調整し、ＣＤＲを特徴付けるために使用され得る。抗体のＣＤＲを特徴付ける及び／又は抗体のようなポリペプチドの結合親和性を変更する（例えば改善する）１つの方法は、「ライブラリスキャニング突然変異誘発」と呼ばれる。一般に、ライブラリスキャニング突然変異誘発は次のように機能する。ＣＤＲの１つ以上のアミノ酸の位置が、本技術分野において認められた方法を使用して２つ以上（３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、又は２０個等の）のアミノ酸で置き換えられる。このことは、それぞれが２つ以上のメンバーの複雑さを伴う（２つ以上のアミノ酸が全ての位置で置換される場合）クローンの小さなライブラリ（幾つかの態様において、分析される全てのアミノ酸の位置につき１つ）を生成する。一般に、ライブラリはまた、天然の（未置換の）アミノ酸を含むクローンも含む。各ライブラリからの小数のクローン、例えば約２０乃至８０個のクローン（ライブラリの複雑さに依存する）は、標的ポリペプチド（又は他の結合標的）への結合親和性のためにスクリーニングされ、増加したか、同様か、減少したか、又は未結合の候補が同定される。結合親和性を決定する方法は、本技術分野において周知である。結合親和性は、約２倍以上の結合親和性の違いを検出するＢｉａｃｏｒｅ表面プラズモン共鳴分析を使用して決定され得る。Ｂｉａｃｏｒｅは、出発抗体が、比較的高い親和性、例えば約１０ｎＭ以下のＫDで既に結合している場合に特に有用である。
【０１２８】
幾つかの態様において、ＣＤＲ内の全てのアミノ酸の位置は、本技術分野において認められた突然変異誘発方法（それらの幾つかはここに記載されている）を使用して全２０個の天然アミノ酸で置き換えられる（幾つかの態様において、一度に１つ）。このことは、それぞれが２０個のメンバーの複雑さを伴う（２０個のアミノ酸の全てが全ての位置で置換される場合）クローンの小さなライブラリ（幾つかの態様において、分析される全てのアミノ酸の位置につき１つ）を生成する。
【０１２９】
幾つかの態様において、スクリーニングされるライブラリは、同一のＣＤＲ又は２つ以上のＣＤＲ中に存在し得る２つ以上の位置における置換を含む。従って、ライブラリは、１つのＣＤＲにおいて２つ以上の位置における置換を含み得る。ライブラリは、２つ以上のＣＤＲにおいて２つ以上の位置における置換を含み得る。ライブラリは、３、４、５、又はそれより多い位置における置換を含み得るが、前記位置は、２、３、４、５、又は６つのＣＤＲに見られる。置換は、低冗長性コドンを使用して調製され得る。例えば、Ｂａｌｉｎｔ等、Ｇｅｎｅ、１３７（１）：１０９−１８（１９９３年）の表２参照。ＣＤＲは、ＣＤＲＨ３及び／又はＣＤＲＬ３であり得る。ＣＤＲは、ＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、ＣＤＲＬ３、ＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、及び／又はＣＤＲＨ３の１つ以上であり得る。
ＣＤＲは、Ｋａｂａｔ  ＣＤＲ、Ｃｈｏｔｈｉａ  ＣＤＲ、又は拡張ＣＤＲであり得る。
【０１３０】
改善された結合を有する候補は配列決定され得、それにより、結果として改善された親和性（「改善された」置換とも呼ばれる）を生じるＣＤＲ置換変異体を同定し得る。結合する候補もまた、配列決定され得、それにより、結合を維持するＣＤＲ置換を同定し得る。
【０１３１】
複数回のスクリーニングが実施され得る。例えば、改善された結合を有する候補（それ
ぞれが１つ以上のＣＤＲの１つ以上の位置にアミノ酸置換を含む）は、各改善されたＣＤＲの位置（即ち、置換変異体が改善された結合を示したＣＤＲにおけるアミノ酸の位置）に少なくとも起源の及び置換されたアミノ酸を含む第２のライブラリの設計のためにも有用である。このライブラリの調製、及びスクリーニング又は選択は、以下で更に議論される。
【０１３２】
改善された結合、同一の結合、減少された結合又は未結合を伴うクローンの頻度がまた、抗体−抗原複合体の安定性のための各アミノ酸の位置の重要性に関する情報を提供する限りにおいて、ライブラリスキャニング突然変異誘発もまた、ＣＤＲを特徴付けるための手段を提供する。例えば、ＣＤＲにおける位置が２０個全てのアミノ酸に変更されたときに結合を保持する場合、その位置は抗原結合に必要とは考えられない位置として同定される。逆に、ＣＤＲにおける位置が少ない割合の置換でのみ結合を維持する場合、その位置はＣＤＲ機能にとって重要な位置として同定される。従って、ライブラリスキャニング突然変異誘発法は、多くの異なるアミノ酸（２０種類全てのアミノ酸を含む）に変更され得るＣＤＲにおける位置、及び変更できないか、又は僅かなアミノ酸にしか変更できないＣＤＲにおける位置に関する情報を生成する。
【０１３３】
改善された親和性を有する候補は、第２のライブラリにおいて組み合わせられ得るが、これは、改善されたアミノ酸、その位置の起源のアミノ酸を含み、そして、望ましいスクリーニング又は選択方法を使用する、望ましいか又は許可されたライブラリの複雑さに依存して、その位置に追加の置換を更に含み得る。更に、希望する場合、隣接するアミノ酸の位置は、少なくとも２つ以上のアミノ酸にランダム化され得る。隣接するアミノ酸のランダム化は、変異体ＣＤＲにおける更なる立体構造の柔軟性を許可し得るが、これは次に、より多くの改善された変異の導入を許可し得るか、又は促進し得る。ライブラリはまた、初回のスクリーニングにおいて改善された親和性を示さなかった位置にも置換を含み得る。
【０１３４】
第２のライブラリは、Ｂｉａｃｏｒｅ表面プラズモン共鳴分析を使用するスクリーニング、及びファージ提示、酵母提示、並びに、リボソーム提示を含む選択のための本技術分野において既知の任意の方法を使用する選択を含む、本技術分野において既知の任意の方法を使用して、改善された及び／又は変更された結合親和性を有するライブラリメンバーのためにスクリーニング又は選択される。
【０１３５】
組成物
ここに記載される抗体の治療製剤は、凍結乾燥製剤又は水溶液の形態において、所望の純度を有する抗体を任意の薬学的に許容される担体、賦形剤又は安定剤と混合することによって保存用であり得る（Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ、Ｔｈｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｙ  第２０版  Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ（２０００年））。
【０１３６】
ここで使用する場合、「薬学的に許容される担体」又は「薬学的に許容される賦形剤」は、有効成分と組み合わせた際、成分が生物学的活性を保持することを可能とし、対象者の免疫系と非反応性である任意の材料を含む。例は、リン酸緩衝生理食塩水、水、油／水エマルジョンのようなエマルジョン、及び種々のタイプの湿潤剤のような標準的な医薬担体の何れかを含むが、これらに限定されない。エアロゾル又は非経口投与のための好ましい希釈剤は、リン酸緩衝生理食塩水又は通常の（０．９％）生理食塩水である。そのような担体を含む組成物は、周知の従来の方法により製剤化される（例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ、第１８版、Ａ．  Ｇｅｎｎａｒｏ編集、Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏ．、イーストン、ペンシルベニア州、１９９０年；及びＲｅｍｉｎｇｔｏｎ、Ｔｈｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｐｒａｃ
ｔｉｃｅ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｙ、第２０版、Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ、２０００年）。
【０１３７】
許容される担体、賦形剤、又は安定剤は、使用される用量及び濃度においてレシピエントに対して無毒であり、リン酸、クエン酸、及び他の有機酸のような緩衝液；塩化ナトリウムのような塩；アスコルビン酸及びメチオニンを含む抗酸化剤；防腐剤（オクタデシルジメチルベンジルアンモニウムクロリド、塩化ヘキサメトニウム、塩化ベンザルコニウム、塩化ベンゼトニウム；フェノール、ブチル又はベンジルアルコール；メチル又はプロピルパラベンのようなアルキルパラベン；カテコール；レゾルシノール；シクロヘキサノール；３−ペンタノール；及びｍ−クレゾール等）；低分子量（約１０残基未満）ポリペプチド；血清アルブミン、ゼラチン、又は免疫グロブリンのようなタンパク質；ポリビニルピロリドンのような親水性ポリマー；グリシン、グルタミン、アスパラギン、ヒスチジン、アルギニン、又はリジンのようなアミノ酸；単糖類、二糖類、及びグルコース、マンノース、又はデキストリンを含む他の炭水化物；ＥＤＴＡのようなキレート剤；ショ糖、マンニトール、トレハロース又はソルビトールのような糖；ナトリウムのような塩形成性対イオン；金属錯体（例えば、Ｚｎ−タンパク質錯体）；及び／又はＴＷＥＥＮ（登録商標）、ＰＬＵＲＯＮＩＣＳ（登録商標）又はポリエチレングリコール（ＰＥＧ）のような非イオン性界面活性剤を含み得る。
【０１３８】
インビボ投与のために使用される製剤は滅菌され得る。これは、例えば、滅菌ろ過膜を介するろ過、又は本技術分野において認められている滅菌のための他の方法により達成され得る。抗体組成物は、一般に、無菌のアクセスポートを有する容器、例えば、皮下注射針で貫通可能なストッパーを有する静注液バッグ又はバイアルに入れられる。滅菌及びろ過のための他の方法は、本技術分野において既知であり、ここで考慮される。
【０１３９】
本発明の１態様において、組成物は、それらが対象者への投与に許容されるように、発熱物質を含まないように製剤化される。発熱物質について組成物を試験し、発熱物質を含まない医薬組成物を調製することは、当業者にはよく理解されている。
【０１４０】
本発明に従う組成物は、静脈内、経口、非経口又は直腸投与、又は吸入若しくは吹送による投与のために、溶液又は懸濁液、錠剤、丸剤、カプセル、粉末、顆粒又は坐剤等のような単位投与形態であり得る。
【０１４１】
語句「薬学的に許容される」は、生理学的に耐容性があり、対象者に投与された際に、アレルギー又は、胃の不調、めまい等の類似の有害な反応を典型的に生じない分子実体及び組成物を言及する。
【０１４２】
幾つかの例において、抗体は、１つ以上の担体に結合され得る。担体は、活性及び／又は不活性であり得る。周知の担体の例は、ポリプロピレン、ポリスチレン、ポリエチレン、デキストラン、ナイロン、アミラーゼ、ガラス、天然及び修飾セルロース、ポリアクリルアミド、アガロース及び磁鉄鉱を含む。担体の性質は、本発明の目的のために可溶性又は不溶性の何れかであり得る。当業者は、抗体を結合するための他の適切な担体を知っているか、又は日常的な実験を使用してそれを確認し得るであろう。
【０１４３】
治療用組成物又は医薬組成物に関して使用される場合の用語「単位用量」は、ヒトの単一の用量として適切な物理的に個別の単位を言及し、各単位は、要求される希釈剤；即ち、キャリア、又はビヒクルに関連して所望の治療効果を生み出すように計算された活性物質の所定量を含む。
【０１４４】
組成物は、投与製剤に適合する様式で、治療有効量で投与され得る。投与される量は、
治療される対象者、活性成分を利用する対象者の免疫系の能力、及び所望する結合能力の程度に依存する。投与するのに必要な活性成分の正確な量は、開業医の判断に依存し、各個人に対して固有である。初回投与及び追加接種のための適切なレジメもまた、様々であるが、初回投与とそれに続く注射又は他の投与による１時間以上の間隔での反復投与が典型的である。追加用量はまた、２週間、２か月、６か月の間隔、又は任意の他の適切な間隔でも与えられ得る。或いは、血中濃度を維持するのに十分な連続静脈内注入が考慮される。
【０１４５】
１態様は、ここに記載される状態、疾患又は障害を治療するための医薬品を製造するために、ここに記載される抗体の使用を考慮する。医薬品は、治療を必要とする対象者の身体的特徴に基づいて製剤化され得、そして、状態、疾患又は障害の段階に基づいて単一又は複数の製剤に製剤化され得る。医薬品は、病院及び診療所への配布のための適切なラベルと共に、適切なパッケージ中に包装され得るが、ここで、ラベルは、ここに記載される疾患を有する対象者の治療の指示のためのものである。医薬品は、単一又は複数の単位として包装され得る。組成物の用量及び投与のための説明書は、以下に記載されるようにパッケージに含まれ得る。本発明は更に、ここに記載される抗体又はその抗原結合断片及び医薬的に許容される担体の医薬に関する。
【０１４６】
ここで提供されるものは、Ｇ−ＣＳＦに結合する抗体及びその抗原結合断片の組成物であり、本明細書の他所に記載されるものを含む。ここに記載されるようなＧ−ＣＳＦに結合する抗体及びその抗原結合断片は、様々な形態の癌（例えば、原発腫瘍及び転移）の治療のために使用され得る。
【０１４７】
組成物（ここに記載される抗体又は抗原結合断片）は、単独で、又は治療される状態に応じて同時に又は連続的の何れかで第２の組成物との組み合わせにおいて投与され得る。１態様において、第２の治療処置は、血管新生阻害剤（例えば、抗ＶＥＧＦ剤又は化学療法剤）である。２つ以上の組成物が投与される場合、組成物は組み合わせで（連続的又は同時に）投与され得る。組成物は、単回投与又は複数回投与で投与され得る。ここに記載される方法における使用のために考慮される抗ＶＥＧＦ剤は、ラニビズマブ（ＬＵＣＥＮＴＩＳ（登録商標））、アフリベルセプト（ＶＥＧＦ−Ｔｒａｐ）、スニチニブ（ＳＵＴＥＮＴ（登録商標））、ソラフェニブ（ＮＥＸＡＶＡＲ（登録商標））、アキシチニブ、ペガプタニブ及びパゾパニブを含むが、これらに限定されない。
【０１４８】
本発明の１態様は、癌を治療するための医薬品を製造するための、本発明の組成物の何れの使用も考慮する。医薬品は、治療を必要とする対象者の身体的特徴に基づいて製剤化され得、また、障害に基づいて単一又は複数の製剤に製剤化され得る。本発明の医薬品は、病院及び診療所への配布のための適切なラベルと共に、適切な医薬パッケージ中に包装され得るが、ここで、ラベルは、対象者におけるここに記載されるような癌の治療の指示のためのものである。医薬品は、単一又は複数の単位として包装され得る。本発明の医薬組成物の用量及び投与のための説明書は、医薬パッケージに含まれ得る。
【０１４９】
治療方法
ここでの方法によって治療される「個体」又は「対象者」は、哺乳動物、より好ましくはヒトであり得る。哺乳動物はまた、霊長類、ウマ、ウシ、アルパカ、イヌ、ネコ、ウサギ、マウス及びラットを含むがこれらに限定されない農場動物、スポーツ動物、及びペットも含むが、これらに限定されない。
【０１５０】
「それを必要とする対象者」が、癌又はその転移のような疾患を患っている可能性があるものの、疾患の症状をまだ示していない可能性があることは理解されるだろう。例えば、癌が結腸癌（突然変異Ｋ−ｒａｓタンパク質に関連する）である場合、結腸のいくつか
の細胞に突然変異Ｋ−ｒａｓタンパク質を有する対象者は、たとえその対象者が結腸癌の症状をまだ示していない可能性があるとしても、本発明に従う対象者である。それを必要とする対象者はまた、関節炎又は他の炎症性疾患を有する対象者でもあり得る。
【０１５１】
「病気の兆候又は症状」は、臨床的に認められている疾患の兆候又は症状である。
【０１５２】
ここで使用する場合、ここに記載される医薬組成物の「治療有効投与量」又は「治療有効量」は、有益又は望ましい結果をもたらすのに十分な量である。有益又は望ましい結果は、疾患の生化学的、組織学的及び／又は行動的症状、その合併症、及び疾患の発症中に現れる中間の病理学的表現型を含む、疾患の重症度の緩和又は進行の遅延のような結果を含む。治療薬（アゴニスト、アンタゴニスト及び／又は同様のものを含む）の治療有効量は、対象者の病状、年齢、性別、及び体重、並びに対象者における所望の応答を引き出す治療薬の能力のような異なる因子に基づいて変化し得る。治療有効量はまた、治療的に有益な効果が、物質／分子、アゴニスト、又はアンタゴニストの任意の毒性又は有害な効果を上回る量でもある。
【０１５３】
臨床的な背景において理解されるように、医薬組成物の有効投与量は、別の薬物、化合物、又は医薬組成物との組み合わせで達成され得るか、又は達成され得ない。従って、「有効投与量」は、１つ以上の治療薬を投与するという状況の中で考慮され得、そして、１つ以上の他の薬剤との組み合わせにおいて望ましい結果が達成され得るか又は達成される場合、単一の薬剤が有効量で投与されると考えられ得る。従って、幾つかの例において、１つ以上の治療薬が対象者に投与され得る。他の例において、ここに記載される医薬組成物を用いる治療は、ここに記載される１つ以上の他の治療法の前又は後に実施される。
【０１５４】
用語「治療（ｔｒｅａｔｍｅｎｔ）」、「治療する（ｔｒｅａｔ）」、又は「治療する（ｔｒｅａｔｉｎｇ）」は、治療されている個体の自然経過を変えようとする臨床的介入を言及し、予防のため又は臨床病理学の過程における何れかで実施され得る。治療の効果は、疾患の発生又は再発の予防、症状の軽減、疾患の任意の直接又は間接的な病理学的結果の減少、転移の予防、疾患の進行速度の低下、疾患の状態の改善、疾患の結果として生じる臨床的障害又は症状の最小化、対象者が患う任意の痛み又は不快感の減少、寛解又は改善された予後、及びそのような治療がない場合に予想されるものを超える対象者の生存の延長を含み得る。治療は、Ｔ細胞等の抑制のような疾患により引き起こされる免疫機能の抑制の低下からの結果として生じ得る。
【０１５５】
癌又はその転移を患っている対象者を「治療する」ことにより、本発明による治療後に対象者の症状が、部分的に軽減、完全に軽減、又は変化しないままにされ得ることが意図される。治療された対象者は、腫瘍負荷の部分的又は全体的な軽減を示し得る。１つの非限定的な例において、高度な転移性癌（例えば、乳癌）を患った対象者は、治療を受けていない対象者と比較して、追加の転移が起こらないか、又は数が減少する場合に治療される。別の非限定的な例において、対象者は、治療を受けていない対象者と比較して、対象者の固形癌がサイズを減少するか、又はサイズを増加しない場合に、治療される。更なる別の非限定的な例において、治療された対象者の癌細胞の数は、治療を受けていない対象者の癌細胞の数と比較して、増加しないか又は減少する。改善はまた、例えば、細胞増殖の減少、細胞数の減少、アポトーシスの増加、及び／又は治療されている対象者の生存の増加としても規定され得る。癌の治療はまた、癌性細胞の成長又は拡散を阻害又は予防すること、又は癌に関与する細胞の成熟と増殖を、制限、中断、終了、又はそれ以外で制御することも含み得る。
【０１５６】
抗Ｇ−ＣＳＦ抗体の種々の製剤は、投与のために使用され得る。幾つかの態様において、抗Ｇ−ＣＳＦ抗体はそのまま投与され得る。幾つかの態様において、抗Ｇ−ＣＳＦ抗体
及び薬学的に許容される賦形剤は、種々のな製剤中に存在し得る。薬学的に許容される賦形剤は本技術分野において既知であり、薬理学的に有効な物質の投与を促進する比較的不活性な物質である。例えば、賦形剤は、形状又は粘稠度を与えたり、又は希釈剤として作用し得る。適切な賦形剤は、安定化剤、湿潤剤及び乳化剤、浸透圧を変化させるための塩、カプセル化剤、緩衝剤、及び皮膚浸透促進剤を含むが、これらに限定されない。非経口及び非経口でない薬物の送達のための賦形剤並びに製剤は、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ、Ｔｈｅ
Ｓｃｉｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｙ  第２０版、Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ（２０００年）に記述されている。
【０１５７】
幾つかの態様において、これらの抗体は、経口投与、非経口投与（例えば、筋膜上、関節包内、皮内、真皮内、筋肉内、眼窩内、腹腔内、脊髄内、胸骨内、血管内、静脈内、実質性、又は皮下投与）、経皮投与等を含む、限定を伴わない、既知の手順により対象者への投与のために製剤化される。従って、これらの薬剤は、生理食塩水、リンゲル液、デキストロース溶液等のような薬学的に許容されるビヒクルと組み合わせられ得る。特定の投与レジメ、即ち、用量、タイミング及び反復は、特定の個人及びその個人の病歴に依存するだろう。
【０１５８】
経口投与のために、抗体の製剤は、カプセル、錠剤、粉末、顆粒、又は懸濁液として存在し得る。製剤は、ラクトース、マンニトール、コーンスターチ、又はポテトスターチのような従来の添加物を有し得る。製剤はまた、結晶セルロース、セルロース誘導体、アカシア、コーンスターチ、又はゼラチンのような結合剤を伴って存在し得る。更に、製剤は、コーンスターチ、ポテトスターチ、又はカルボキシメチルセルロースナトリウムのような崩壊剤を伴って存在し得る。製剤はまた、無水二塩基性リン酸カルシウム又はデンプングリコール酸ナトリウムを伴って存在し得る。最後に、製剤は、タルクやステアリン酸マグネシウムのような潤滑剤を伴って存在し得る
【０１５９】
非経口投与のために、抗体は、好ましくは対象者の血液と等張である滅菌水溶液中に懸濁され得る。そのような製剤は、塩化ナトリウム、グリシン等のような生理学的に適合する物質を含有し、そして、生理学的条件に適合する緩衝されたｐＨを有する水に固体活性成分を溶解して水溶液を生成し、その後、前記溶液を無菌にすることにより調製され得る。
製剤は、密封されたアンプルやバイアルのような単位又は複数回投与用容器中に存在し得る。製剤は、筋膜上、関節包内、皮内、真皮内、筋肉内、眼窩内、腹腔内、脊髄内、胸骨内、血管内、静脈内、実質性、又は皮下を、限定を伴わずに含む、任意の注射様式により送達され得る。
【０１６０】
ここに記載されるように、抗Ｇ−ＣＳＦ抗体はまた、吸入によっても投与され得る。
【０１６１】
一般に、抗Ｇ−ＣＳＦ抗体の投与のために、初期候補用量は、約２ｍｇ／ｋｇであり得る。本発明の目的のために、典型的な１日用量は、上述の因子に依存して、３μｇ／ｋｇまで、約３０μｇ／ｋｇまで、約３００μｇ／ｋｇまで、約３ｍｇ／ｋｇまで、３０ｍｇ／ｋｇまで、１００ｍｇ／ｋｇまで又はそれ以上、或いはそれらの間の任意の整数であり得る。例えば、約１ｍｇ／ｋｇ、約２．５ｍｇ／ｋｇ、約５ｍｇ／ｋｇ、約１０ｍｇ／ｋｇ、又は約２５ｍｇ／ｋｇの投与量が使用され得る。
【０１６２】
状態により投与は、数日又はそれ以上に亘り繰り返されるため、症状の望ましい抑制が起こるまで又は十分な治療レベルが達成される、例えば、痛みが軽減されるまで、治療が持続される。例示的な投与レジメは、約２ｍｇ／ｋｇの初期用量、それに続く約１ｍｇ／ｋｇの抗Ｇ−ＣＳＦ抗体の毎週の維持用量、又はそれに続く約１ｍｇ／ｋｇの隔週の維持用量を投与することを含む。
【０１６３】
しかしながら、開業医が達成することを望む、薬物動態の減衰のパターンに依存して、他の投与レジメが有用であり得る。例えば、幾つかの態様において、週に１乃至４回の投与が考慮される。この療法の進歩は、従来の技術とアッセイにより容易に監視される。投与レジメは時間と共に変化し得る
【０１６４】
抗Ｇ−ＣＳＦ抗体の適切な投与量は、利用される抗Ｇ−ＣＳＦ抗体、治療される疾患の種類と病期、以前の手術及び／又は療法、対象者の病歴及び抗体への応答、並びに主治医の裁量に依存するだろう。
【０１６５】
典型的には、臨床医は、所望の結果が達成される用量に達するまで、抗Ｇ−ＣＳＦ抗体を投与するだろう。用量及び／又は頻度は、治療の過程で変化し得る。
【０１６６】
半減期のような経験的な検討事項は、一般的に投与量の決定に貢献するだろう。例えば、ヒト化抗体又は完全ヒト抗体のようなヒト免疫系に適合する抗体は、抗体の半減期を延長するために及び抗体が宿主の免疫系により攻撃されるのを防ぐために使用され得る。
【０１６７】
投与の頻度は、療法の過程に亘って決定及び調整され得る。或いは、抗Ｇ−ＣＳＦ抗体の持続性連続放出製剤が適切であり得る。持続放出を達成するための種々の製剤及びデバイスが本技術分野において既知である。抗Ｇ−ＣＳＦ抗体の有効性を評価するために、疾患の指標が検討され得る。
【０１６８】
更にここで使用される場合、癌の治療は、癌性の成長又は腫瘍の静止、部分的又は完全な除去を含む。治療又は部分的除去は、例えば、約２倍、約３倍、約４倍、約５倍、約１０倍、約２０倍、約５０倍又はその間の任意の倍率減少のような成長又は腫瘍のサイズ及び／又は容積における倍数減少を含む。同様に、治療又は部分的除去は、約１％、約２％、約３％、約４％、約５％、約１０％、約２０％、約３０％、約４０％、約５０％、約６０％、約７０％、約８０％、約９０％、約９５％、約９９％、１００％、又はその間の任意のパーセント減少の、成長又は腫瘍のサイズ及び／又は容積におけるパーセント減少を含み得る。
【０１６９】
癌の診断又は評価は、本技術分野において確立されている。評価は、患者の症状の特性評価のような主観的な測定に基づいて実施され得る。評価はまた、例えば、１つ以上の癌抗原のために血液又は組織試料を検査することのような客観的測定に基づいても実施され得る。評価の他のタイプは、以下に記載されている。
【０１７０】
治療効果は、本技術分野において周知の方法により評価され得る。
【０１７１】
腫瘍の非限定的な例は、肺癌、乳癌、卵巣癌、結腸癌、膵臓癌、脳癌、又は皮膚癌を含む。
【０１７２】
用語「腫瘍」は、癌組織（同じタイプの正常組織による発現と比較して）を言及するためにここで使用される。腫瘍は、固形腫瘍及び半固形腫瘍を含み得る。腫瘍はまた、幾つかの例において、転移され得る。
【０１７３】
肺癌
ここに記載される方法において、ここに記載される抗体又はその抗原結合断片を含む医薬組成物の治療有効量が、肺癌を有するそれを必要とする対象者に投与される。
【０１７４】
肺癌の最も一般的なタイプは、非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）であり、それは、肺癌の約
８０乃至８５％を占め、扁平上皮癌、腺癌、及び大細胞未分化癌に分類される。小細胞肺癌は、肺癌の約１５乃至２０％を占める。
【０１７５】
肺癌の病期分類は、その原初の発生源からの癌の拡がりの程度の評価である。それは、肺癌の予後と潜在的な治療に影響を及ぼす重要な因子である。非小細胞肺癌は、ＩＡ（「１Ａ」、最も良い予後）乃至ＩＶ（「４」、最も悪い予後）に分類される。小細胞肺癌は、胸部の半分に限定され、そして、単一の放射線治療の範囲内にある場合、限局期に分類され；さもなくば、それは進行期である。
【０１７６】
非小細胞肺癌は、ＴＮＭシステムに従って疾患の程度を分類するために、ＥＵＳ（内視鏡超音波）又はＣＴ又はＭＲＩスキャンを使用して、又は手術時に病期分類され得る。これらの対象者は、予後と治療を考慮する過程の一環として病期分類に従う。ＡＪＣＣは、ＴＮＭの病期分類に続く更なるグループ化を推奨している。
【０１７７】
原発腫瘍（Ｔ）：ＴＸ：原発腫瘍を評価できないか、又は喀痰又は気管支肺胞洗浄液中に悪性細胞が存在するものの、画像検査又は気管支鏡検査では見られない；Ｔｉｓ：上皮内癌。Ｔ０：原発腫瘍の証拠なし。Ｔ１：肺又は内臓胸膜に囲まれ、主気管支内への気管支鏡による浸潤を伴わない、その最大径が３ｃｍ未満である腫瘍。Ｔ２：以下の何れかを伴う腫瘍：最大径が３ｃｍを超える；主気管支内に波及し（しかし、竜骨に対して２ｃｍ以上遠位である）、且つ、閉塞性肺炎（しかし、肺全体を含むものではない）である。Ｔ３：以下の何れかを伴う腫瘍：胸壁、横隔膜、縦隔胸膜、又は壁側心膜の浸潤；竜骨の２ｃｍ以内で、主気管支内に波及しているものの、竜骨を含むものではない；及び、肺全体の閉塞性肺炎。Ｔ４：以下の何れかを伴う腫瘍：縦隔、心臓、大血管、気管、食道、脊椎、又は竜骨の浸潤；同じ葉内における別々の腫瘍結節；及び悪性胸水。リンパ節（Ｎ）：ＮＸ：リンパ節が評価できない；Ｎ０：リンパ節を含まない；Ｎ１：同側気管支周囲又は同側肺門のリンパ節への転移；Ｎ２：同側縦隔又は気管分岐部のリンパ節への転移；及びＮ３：以下の何れかへの転移：同側鎖骨上リンパ節；同側斜角筋リンパ節；及び対側リンパ節。遠隔転移（Ｍ）：ＭＸ：遠隔転移が評価できない；Ｍ０：遠隔転移無し；及びＭ１：遠隔転移が存在する。
【０１７８】
肺癌の治療のために併用療法が考慮される場合、１つ以上の追加の治療法は、手術、放射線療法（例えば、胸部放射線療法、荷電粒子を用いる放射線療法、ウラシル−テガフール及び白金ベースの化学療法（例えば、シスプラチン、カルボプラチン、オキサリプラチン等）、ビノレルビン、エルロチニブ（ＴＡＲＣＥＶＡ（登録商標））、ゲフィチニブ（ＩＲＥＳＳＡ（登録商標））、抗表皮成長因子受容体抗体（例えば、セツキシマブ）、抗血管内皮成長因子抗体（例えば、ベバシズマブ）、チロシンキナーゼの小分子阻害剤、肺癌細胞増殖に関与するタンパク質の直接阻害剤、オーロラキナーゼ阻害剤、レーザー誘発温熱療法、ＲＮＡｉ療法、顆粒球マクロファージコロニー刺激因子（ＧＭ−ＣＳＦ）（ＧＶＡＸとしても既知である）を分泌するように遺伝子改変された全腫瘍細胞、又はそれらの任意の組み合わせである。追加の治療法は、タキソール、ペメトレキセド、抗ＣＴＬＡ−４（ＹＥＲＶＯＹ）、抗ＰＤ−１（ＯＰＤＩＶＯ、ＫＥＹＴＲＵＤＡ）、抗ＰＤＬ１（ＢＭＳ−９３６５５９、ＭＰＤＬ３２８０Ａ）、開発中のその他のもの、Ｍｅｄｉｖａｔｉｏｎ／ＣｕｒｅＴｅｃｈによるピディリズマブ（Ｐｉｄｉｌｉｚｕｍａｂ）（ＣＴ−０１１、抗ＰＤ−１）、ＡｓｔｒａＺｅｎｅｃａによるＭＥＤＩ４７３６（抗ＰＤ−Ｌ１）、及びＭｅｒｃｋ−Ｓｏｒｏｎｏによるアベルマブ（Ａｖｅｌｕｍａｂ）（ＭＳＢ００１０７１８Ｃ、抗ＰＤ−Ｌ１）を含む。
【０１７９】
他の例において、併用療法が肺癌の治療のために考慮される場合、１つ以上の追加の治療法は、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）−リダイレクトＴ細胞（ＣＡＲ−Ｔ）細胞療法又は養子Ｔ細胞療法（ＡＣＴ）を含むがこれらに限定されない免疫療法である。
【０１８０】
乳癌
ここに記載される方法において、ここに記載される抗体又はその抗原結合断片を含む医薬組成物の治療有効量が、乳癌を有するそれを必要とする対象者に投与される。ここで使用される場合、「乳癌」はまた、個体において乳癌を発症しやすい傾向を示す表現型も包含する。
【０１８１】
ここに記載される方法を使用して治療される乳癌は、女性対象者において発症し得る何れの種類の乳癌も含む。例えば、乳癌は、ルミナールＡ（ＥＲ＋及び／又はＰＲ＋、ＨＥＲ２−、低Ｋｉ６７）、ルミナールＢ（ＥＲ＋及び／又はＰＲ＋、ＨＥＲ２＋（又は高Ｋｉ６７を伴うＨＥＲ２−）、３つとも陰性（Ｔｒｉｐｌｅ  ｎｅｇａｔｉｖｅ）／基本様の（ＥＲ−、ＰＲ−、ＨＥＲ２−）又はＨＥＲ２タイプ（ＥＲ−、ＰＲ−、ＨＥＲ２  ＋）として特徴付けられ得る。別の例において、乳癌は、アルキル化剤、白金剤、タキサン、ビンカ剤、抗エストロゲン薬、アロマターゼ阻害剤、卵巣抑制剤、内分泌／ホルモン剤、ビスホスホネート療法剤又は標的生物療法製剤のような療法又は治療法に対して抵抗性であり得る。
【０１８２】
非浸潤性の小葉癌と非浸潤性の腺管癌は、それぞれ小葉と腺管中で発症した乳癌であるが、胸部を取り巻く脂肪組織や身体の他の部位には波及していない。浸潤性（又は浸入性）小葉癌及び腺管癌は、それぞれ小葉及び腺管内で発症し、胸部の脂肪組織及び／又は身体の他の部分の何れかに波及している癌である。１観点において、ここで提供されるものは、乳腺中の腺管組織における腺管癌、Ｈｅｒ２−及び／又はＥＲ−及び／又はＰＲ−である乳癌のような乳癌の治療方法である。この方法による治療から恩恵を受ける胸部の他の癌は、髄様癌、膠様癌、管状腺癌、及び炎症性乳癌である。
【０１８３】
１態様において、乳癌はＴＮＭシステムに従って病期分類される。予後は病期分類の結果と密接に関連しており、病期分類はまた、臨床試験と臨床診療の両方において患者を治療に割り当てるためにも使用され得る。
【０１８４】
簡単に説明すると、病期分類のための情報は以下の通りである：ＴＸ：原発腫瘍を評価できない。Ｔ０：腫瘍の証拠なし。Ｔｉｓ：上皮内癌、浸潤なし；Ｔ１：腫瘍は２ｃｍ以下；Ｔ２：腫瘍は２ｃｍより大きいが５ｃｍ以下；Ｔ３：腫瘍は５ｃｍより大きい；Ｔ４：胸壁又は皮膚中で成長するあらゆるサイズの腫瘍、又は炎症性乳癌。ＮＸ：近くのリンパ節を評価できない  Ｎ０：癌は所属リンパ節に波及していない。Ｎ１：癌は、１乃至３つの上顎のリンパ節又は１つの内乳腺リンパ節に拡張している  Ｎ２：癌は４乃至９つの上顎のリンパ節又は複数の内乳腺リンパ節に波及している  Ｎ３：以下の内の１つが適用される：癌は、１０以上の上顎のリンパ節に波及しているか、又は癌は、鎖骨（ｃｌａｖｉｃｌｅ）（鎖骨（ｃｏｌｌａｒ  ｂｏｎｅ））の下のリンパ節に波及しているか、又は癌は、鎖骨の上のリンパ節に波及しているか、又は癌は、上顎のリンパ節を含み且つ拡大した内乳腺リンパ節を有するか、又は癌は４つ以上の上顎のリンパ節を含み、及び僅かな量の癌がセンチネルリンパ節生検において内乳腺リンパ節中に観察される。ＭＸ：遠隔転移（転移）の存在は評価できない。Ｍ０：遠隔転移無し。Ｍ１：遠隔臓器（鎖骨上のリンパ節を含まない）への波及が生じている。
【０１８５】
乳癌の治療のために併用療法が考慮される場合、１つ以上の追加の治療法は、手術、モノクローナル抗体（例えば、Ｈｅｒ−２抗体、ハーセプチン）、単剤化学療法又は併用化学療法のような補助化学療法（例えば、アントラサイクリン及びタキサン系ポリケモセラピー、タキソール、又はＰＭＲＴ、ビノレルビンを伴うか又は伴わない内分泌操作を伴うか又は伴わない標的特異的トラスツズマブ）、アドリアマイシン、シクロホスファミド、ゼローダ、タキソテール、タモキシフェン及びラロキシフェンのような選択的エストロゲ
ン受容体モジュレーター、トリロスタンのようなアロステリックエストロゲン受容体モジュレーター、放射線（例えば、間質性近接照射療法、マンモサイト装置、３次元共形外部照射及び術中放射線療法）、全身合成を抑制するアロマターゼ阻害剤（例えば、アナストロゾール、エキセメスタン及びレトロゾール）、ＲＮＡｉ療法、テムシロリムス（Ｔｅｍｓｉｒｏｌｉｍｕｓ）（ＣＣＩ７７９）のような免疫抑制性及び抗増殖性であるラパマイシンの静脈内類似体、又はそれらの任意の組み合わせである。追加の治療法は、抗ＣＴＬＡ−４（ＹＥＲＶＯＹ）、抗ＰＤ−１（ＯＰＤＩＶＯ、ＫＥＹＴＲＵＤＡ）、抗ＰＤＬ１（ＢＭＳ−９３６５５９、ＭＰＤＬ３２８０Ａ）、開発中のその他のもの、Ｍｅｄｉｖａｔｉｏｎ／ＣｕｒｅＴｅｃｈによるピディリズマブ（ＣＴ−０１１、抗ＰＤ−１）、ＡｓｔｒａＺｅｎｅｃａによるＭＥＤＩ４７３６（抗ＰＤ−Ｌ１）、及びＭｅｒｃｋ−Ｓｏｒｏｎｏによるアベルマブ（Ａｖｅｌｕｍａｂ）（ＭＳＢ００１０７１８Ｃ、抗ＰＤ−Ｌ１）を含むがこれらに限定されない。
【０１８６】
他の例において、肺癌の治療のために併用療法が考慮される場合、１つ以上の追加の治療法は、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）−リダイレクトＴ細胞（ＣＡＲ−Ｔ）細胞療法又は養子Ｔ細胞療法（ＡＣＴ）を含むがこれらに限定されない免疫療法である。
【０１８７】
卵巣癌
ここに記載される方法において、ここに記載される抗体又はその抗原結合断片を含む医薬組成物の治療有効量が、卵巣癌を有するそれを必要とする対象者に投与される。
【０１８８】
卵巣癌は、病理学報告書で得られた腫瘍の組織学に従って分類される。卵巣上皮癌としても既知の表面上皮−間質腫瘍は、卵巣癌の最も典型的なタイプである。それは、漿液性腫瘍、子宮内膜性腫瘍、粘液性嚢胞腺癌を含む。エストロゲン産生顆粒膜細胞腫瘍及び男性化セルトリ・ライディッヒ細胞腫瘍又は男性化腫瘍を含む性索間質腫瘍は、卵巣癌の８％を占める。胚細胞腫瘍は卵巣腫瘍の約３０％を占めるものの、殆どの胚細胞腫瘍は奇形腫であり、殆どの奇形腫は良性であるため、卵巣癌の５％のみを占めるだけである。胚細胞腫瘍は、若い女性や少女に発生する傾向がある。予後は胚細胞腫瘍の特定の組織学に依存するものの、全体的には良好である。混合腫瘍は、上記の腫瘍組織学の分類の１つ以上の要素を含む。
【０１８９】
卵巣癌はまた、体内の他の場所の原発癌からの転移の結果である二次癌でもあり得る。一般的な原発癌は、乳癌と胃腸癌である（この場合において、卵巣癌はクルケンベルク癌である）。表面上皮−間質腫瘍は、腹膜（腹腔の内層）に由来し得るが、この場合において、卵巣癌は、原発性腹膜癌に対する二次的なものであるものの、治療は基本的に腹膜を含む原発性の表面上皮−間質腫瘍と同じである。
【０１９０】
卵巣癌の病期分類は、ＦＩＧＯ病期分類システムによるものであり、手術後に得られる情報を使用するが、これは、腹部子宮全摘出術、卵巣と卵管の両方の除去、腹膜の網、及び細胞診のための骨盤（腹膜）洗浄を含み得る。ＡＪＣＣ病期はＦＩＧＯ病期と同じである。
【０１９１】
第Ｉ期（Ｓｔａｇｅ  Ｉ）は、一方又は両側の卵巣に限定される卵巣癌を言及する：ＩＡ−一方の卵巣を含む；被膜は無傷；卵巣表面に腫瘍無し；腹水又は腹膜洗浄液中に悪性細胞無し；ＩＢ−両方の卵巣を含む；被膜は無傷；卵巣表面に腫瘍無し；陰性の洗浄液；及びＩＣ−以下の何れかの卵巣に限定される腫瘍：被膜破裂、卵巣表面の腫瘍、陽性の洗浄液。
【０１９２】
第ＩＩ期（Ｓｔａｇｅ  ＩＩ）は、骨盤の拡張又は埋没を言及する：ＩＩＡ−子宮又は卵管への拡張又は埋没；陰性の洗浄液；ＩＩＢ−他の骨盤構造への拡張又は埋没；陰性の
洗浄液；及びＩＩＣ−陽性の腹膜洗浄液を伴う骨盤の拡張又は埋没。
【０１９３】
第ＩＩＩ期（Ｓｔａｇｅ  ＩＩＩ）は、骨盤外の顕微鏡的な腹腔内埋没を言及するか；又は、小腸又は腹膜の網への拡張を有する骨盤に限定される：ＩＩＩＡ−骨盤を超えた微視的な腹膜転移；ＩＩＩＢ−２ｃｍ未満のサイズの骨盤を超えた巨視的な腹膜転移；及びＩＩＩＣ−骨盤を＞２ｃｍ超える腹膜転移又はリンパ節転移。
【０１９４】
第ＩＶ期（Ｓｔａｇｅ  ＩＶ）は、肝臓又は腹腔外への遠隔転移を言及する。
【０１９５】
傍大動脈リンパ節転移は、所属リンパ節であると考えられる（第ＩＩＩＣ期）。
【０１９６】
幾つかの態様において、ここに記載される方法は、以下から選択される卵巣癌を治療する：卵巣における腺癌及び卵巣から腹腔に移動した腺癌。
【０１９７】
卵巣癌の治療のために併用療法が考慮される場合、１つ以上の追加の治療法は、手術、化学療法（例えば、ドキソルビシン、ドキシル、ゲムシタビン、ルビテカン、及びシスプラチン、カルボプラチン及びオキサリプラチンのような白金ベースの化学療法）、メルファラン、パクリタキセル、トポテカン及びイリノテカンのようなトポイソメラーゼＩ阻害剤、タキサンベースの療法、ホルモン、放射線療法、全身低体温法、フェノキソジアールのようなイソフラボン誘導体、エポチロンのような細胞毒性マクロライド、ベバシズマブのような血管新生阻害剤、トラスツズマブのようなシグナル伝達阻害剤、遺伝子療法、ＲＮＡｉ療法、免疫療法、モノクローナル抗体、ラパマイシンのようなホスファチジルイノシトール様キナーゼ阻害剤、又はそれらの任意の組み合わせである。
１態様において、この組み合わせは、抗Ｇ−ＣＳＦ抗体又はその抗原結合断片とドキシルである。別の態様において、この組み合わせは、抗Ｇ−ＣＳＦ抗体又はその抗原結合フラグメントとトポテカンである。更なる別の態様において、この組み合わせは、抗Ｇ−ＣＳＦ抗体又はその抗原結合断片とＶＥＧＦ受容体阻害剤である。
ＶＥＧＦ受容体阻害剤の非限定的な例は、ベバシズマブ（ＡＶＡＳＴＩＮ（登録商標））、ラニビズマブ（ＬＵＣＥＮＴＩＳ（登録商標））、アフリベルセプト（ＶＥＧＦ−Ｔｒａｐ）、スニチニブ（ＳＵＴＥＮＴ（登録商標））、ソラフェニブ（ＮＥＸＡＶＡＲ（登録商標））、アキシチニブ、ペガプタニブ及びパゾパニブを含む。
ここに記載される抗体及び抗原結合断片と卵巣癌療法との併用療法はまた、療法の共投与からの相乗効果に起因して、療法の一方、又は両方の低用量も提供し得る。追加の治療法は、抗ＣＴＬＡ−４（ＹＥＲＶＯＹ）、抗ＰＤ−１（ＯＰＤＩＶＯ、ＫＥＹＴＲＵＤＡ）、抗ＰＤＬ１（ＢＭＳ−９３６５５９、ＭＰＤＬ３２８０Ａ）、開発中のその他のもの  Ｍｅｄｉｖａｔｉｏｎ／ＣｕｒｅＴｅｃｈによるピディリズマブ（ＣＴ−０１１、抗ＰＤ−１）、ＡｓｔｒａＺｅｎｅｃａによるＭＥＤＩ４７３６（抗ＰＤ−Ｌ１）、及びＭｅｒｃｋ−ＳｏｒｏｎｏによるＡｖｅｌｕｍａｂ（ＭＳＢ００１０７１８Ｃ、抗ＰＤ−Ｌ１）を含むがこれらに限定されない。
【０１９８】
他の例において、肺癌の治療のために併用療法が考慮される場合、１つ以上の追加の治療法は、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）−リダイレクトＴ細胞（ＣＡＲ−Ｔ）細胞療法又は養子Ｔ細胞療法（ＡＣＴ）を含むがこれに限定されない免疫療法である。
【０１９９】
結腸癌又は結腸直腸癌
ここに記載される方法において、ここに記載される抗体又はその抗原結合断片を含む医薬組成物の治療有効量が、結腸癌を有するそれを必要とする対象者に投与される。結腸直腸癌（結腸癌又は大腸癌とも呼ばれる）は、結腸、直腸（肛門）及び虫垂における癌性増殖を含む。
【０２００】
Ｄｕｋｅs分類は、Ａ乃至Ｄ期（ｓｔａｇｅ  Ａ−Ｄ）に基づいて結腸直腸癌を分類するために使用され得る。Ａ期は、粘膜に限定される（即ち、腸壁に浸潤していない）結腸直腸癌を言及する。Ｂ１期は、筋固有層内へ拡張するものの、それを貫通していない（即ち、リンパは浸潤されていない）ことを言及する；一方、Ｂ２期の癌は筋固有層の貫通を始めるが、それを貫通していない（即ち、リンパ節は浸潤されていない）。Ｃ１期は、筋固有層内に拡張するものの、それを貫通していない（即ち、リンパ節への影響あり）癌を言及する；一方、Ｃ２期は、固有筋層内に拡張し、それを貫通する（即ち、リンパ節への影響あり）癌を言及する。Ｄ期は遠隔転移の広がりを言及する。ＴＮＭシステムはまた、本技術分野において既知の従来の手段に従って結腸直腸癌を病期分類するためにも使用され得る。
【０２０１】
結腸癌又は結腸直腸癌の治療のために併用療法が考慮される場合、１つ以上の追加の治療法は、手術、放射線療法、及び化学療法（例えば、５−フルオロウラシル、レバミゾール、ロイコボリン又はセムスチン（メチルＣＣＮＵ））、Ｎ−［２−（ジメチルアミノ）エチル］アクリジン−４−カルボキサミド及び他の関連するカルボキサミド抗癌剤；非トポイソメラーゼＩＩ阻害剤、イリノテカン、リポソームトポテカン、タキサンクラスの抗癌剤（例えば、パクリタキセル又はドセタキセル）、キサンテノン酢酸クラスの化合物（例えば、５，６−ジメチルアンテノン−４−酢酸ＰＭＡＡ）、ラミナリン、部位選択的サイクリックＡＭＰ類似体（例えば、８−クロロアデノシン３’，５’−サイクリックホスフェート）、Ｃｏｘ−２のピラノインドール阻害剤、Ｃｏｘ−２のカルバゾール阻害剤、Ｃｏｘ−２のテトラヒドロカルバゾール阻害剤、Ｃｏｘ−２のインデン阻害剤、ＮＳＡＩＤＳの局所阻害剤（例えば、アントラニル酸、アスピリン（５−アセチルサリチル酸）、アゾジサルナトリウム、カルボヘテロ環式酸、カルプロフェン、クロラムブシル、ジクロフェナク、フェンブフェン、フェンクロフェナク、フェノプロフェン、フルフェナミン酸、フルビプロフェン、フルプロフェン、フロセミド、金チオリンゴ酸ナトリウム、イブプロフェン、インドメタシン、インドプロフェン、ケトプロフェン、ロナゾラック、ロキソプロフェン、メクロフェナム酸、メファナミン酸、メルファラン、ナプロキセン、ペニシラミン、フェニル酢酸、プロピオン酸、サリチル酸、サラゾスルファピリジン、スリンダク、トルメチン、ピラゾロンブタゾンプロパゾンＮＳＡＩＤ、メロキシカム、オキシカム、ピロキシカム、フェルデン、ピロキシカムβシクロデキストラン、テノキシカム、エトドラク、及びオキサプロジン）、ＨＥＲ−２／ｎｅｕの阻害剤、ＲＮＡｉ療法、ＧＭ−ＣＳＦ、モノクローナル抗体（例えば、抗−Ｈｅｒ−２／ｎｅｕ抗体、抗ＣＥＡ抗体、Ａ３３（ＨＢ  ８７７９）、１００−２１０（ＨＢ  １１７６４）及び１００−３１０（ＨＢ
１１０２８））、アービタックス、ベクチビックス、ホルモン療法、ピリミジンアミン、カンプトテシン誘導体（例えば、ＣＰＴ−１１）、フォリン酸（ＦＡ）、ゲムシタビン、Ａｒａ−Ｃ、シスプラチン、カルボプラチン及びオキサリプラチンのような白金ベースの化学療法薬、ｃＧＭＰ特異的ホスホジエステラーゼ阻害薬、又はそれらの任意の組み合わせである。追加の治療法は、抗ＣＴＬＡ−４（ＹＥＲＶＯＹ）、抗ＰＤ−１（ＯＰＤＩＶＯ、ＫＥＹＴＲＵＤＡ）、抗ＰＤＬ１（ＢＭＳ−９３６５５９、ＭＰＤＬ３２８０Ａ）、開発中のその他のもの、Ｍｅｄｉｖａｔｉｏｎ／ＣｕｒｅＴｅｃｈによるピディリズマブ（ＣＴ−０１１、抗ＰＤ−１）、ＡｓｔｒａＺｅｎｅｃａによるＭＥＤＩ４７３６（抗ＰＤ−Ｌ１）、及びＭｅｒｃｋ−ＳｏｒｏｎｏによるＡｖｅｌｕｍａｂ（ＭＳＢ００１０７１８Ｃ、抗ＰＤ−Ｌ１）を含むがこれらに限定されない。
【０２０２】
他の例において、肺癌の治療のために併用療法が考慮される場合、１つ以上の追加の治療法は、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）−リダイレクトＴ細胞（ＣＡＲ−Ｔ）細胞療法又は養子Ｔ細胞療法（ＡＣＴ）を含むがこれに限定されない免疫療法である。
【０２０３】
膵臓癌
ここに記載される方法において、ここに記載される抗体又はその抗原結合断片を含む医
薬組成物の治療有効量が、膵臓癌を有するそれを必要とする対象者に投与される。
【０２０４】
ここに記載される方法により治療される膵臓癌は、膵管組織における上皮癌及び膵管における腺癌を含むが、これらに限定されない。膵臓癌の最も一般的なタイプは腺癌であるが、これは、膵管の内層に生じる。
【０２０５】
膵臓癌の治療のために併用療法が考慮される場合、１つ以上の追加の治療法は、手術、放射線療法（ＲＴ）、フルオロウラシル（５−ＦＵ）及びＲＴ、全身療法、ステント留置、ゲムシタビン（ＧＥＭＺＡＲ（登録商標））、ゲムシタビン及びＲＴ、セツキシマブ、エルロチニブ（ＴＡＲＣＥＶＡ（登録商標））、化学放射線療法、ベバシズマブ（ＡＶＡＳＴＩＮ（登録商標））、又はそれらの任意の組み合わせである。
更なる別の態様において、組み合わせは、抗Ｇ−ＣＳＦ抗体又はその抗原結合断片とＶＥＧＦ受容体阻害剤である。ＶＥＧＦ受容体阻害剤の非限定的な例は、ベバシズマブ（ＡＶＡＳＴＩＮ（登録商標））、ラニビズマブ（ＬＵＣＥＮＴＩＳ（登録商標））、アフリベルセプト（ＶＥＧＦ−Ｔｒａｐ）、スニチニブ（ＳＵＴＥＮＴ（登録商標））、ソラフェニブ（ＮＥＸＡＶＡＲ（登録商標））、アキシチニブ、ペガプタニブ及びパゾパニブを含む。
追加の治療法は、抗ＣＴＬＡ−４（ＹＥＲＶＯＹ）、抗ＰＤ−１（ＯＰＤＩＶＯ、ＫＥＹＴＲＵＤＡ）、抗ＰＤＬ１（ＢＭＳ−９３６５５９、ＭＰＤＬ３２８０Ａ）、開発中のその他のもの、Ｍｅｄｉｖａｔｉｏｎ／ＣｕｒｅＴｅｃｈによるピディリズマブ（ＣＴ−０１１、抗ＰＤ−１）、ＡｓｔｒａＺｅｎｅｃａによるＭＥＤＩ４７３６（抗ＰＤ−Ｌ１）、及びＭｅｒｃｋ−ＳｏｒｏｎｏによるＡｖｅｌｕｍａｂ（ＭＳＢ００１０７１８Ｃ、抗ＰＤ−Ｌ１）を含むがこれらに限定されない。
【０２０６】
他の例において、肺癌の治療のために併用療法が考慮される場合、１つ以上の追加の治療法は、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）−リダイレクトＴ細胞（ＣＡＲ−Ｔ）細胞療法又は養子Ｔ細胞療法（ＡＣＴ）を含むがこれに限定されない免疫療法である。
【０２０７】
脳癌
ここに記載される方法は、ここに記載される抗体又はその抗原結合断片を含む医薬組成物の治療有効量が、脳癌を有するそれを必要とする対象者に投与される。
【０２０８】
ここに記載される抗体又はその抗原結合断片はまた、それらが血液脳関門を通過できるように修飾され得る。ここに記載される抗体又は抗原結合断片のそのような修飾は、多形性膠芽腫（ＧＢＭ）のような脳疾患の治療を可能にする。
抗体又は抗原結合断片のようなタンパク質が血液脳関門を通過することを可能とする例示的な修飾は、血液脳関門を通過する抗体の修飾に関連する参照としてここに組み込まれる米国特許出願公開第２００７／００８２３８０号中に記載されている。
【０２０９】
ここに記載される方法を用いて治療される原発性脳腫瘍は、髄膜腫、膠芽腫のような星状細胞腫（例えば、多形性膠芽腫（ＧＢＭ）、及び悪性髄芽腫を含むが、これらに限定されない。
診断は通常、コンピュータ断層撮影法又は磁気共鳴画像法に加えて健康診断によるものである。診断は生検により確認され得る。調査結果に基づいて、腫瘍は異なる重症度に分類される。
【０２１０】
脳腫瘍の治療のために併用療法が考慮される場合、治療はまた、手術、放射線療法、化学療法及び／又は抗けいれん薬も含み得る。デキサメタゾンとフロセミドは、腫瘍周辺の腫れを抑えるために使用され得る。追加の治療法は、抗ＣＴＬＡ−４（ＹＥＲＶＯＹ）、抗ＰＤ−１（ＯＰＤＩＶＯ、ＫＥＹＴＲＵＤＡ）、抗ＰＤＬ１（ＢＭＳ−９３６５５９、
ＭＰＤＬ３２８０Ａ）、開発中のその他のもの、Ｍｅｄｉｖａｔｉｏｎ／ＣｕｒｅＴｅｃｈによるピディリズマブ（ＣＴ−０１１、抗ＰＤ−１）、ＡｓｔｒａＺｅｎｅｃａによるＭＥＤＩ４７３６（抗ＰＤ−Ｌ１）、及びＭｅｒｃｋ−ＳｏｒｏｎｏによるＡｖｅｌｕｍａｂ（ＭＳＢ００１０７１８Ｃ、抗ＰＤ−Ｌ１）を含むがこれらに限定されない。
【０２１１】
他の例において、肺癌の治療のために併用療法が考慮される場合、１つ以上の追加の治療法は、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）−リダイレクトＴ細胞（ＣＡＲ−Ｔ）細胞療法又は養子Ｔ細胞療法（ＡＣＴ）を含むがこれに限定されない免疫療法である。
【０２１２】
皮膚癌
ここに記載される方法において、ここに記載される抗体又はその抗原結合断片を含む医薬組成物の治療的効量が、卵巣癌を有するそれを必要とする対象者に投与される。
【０２１３】
皮膚癌には、主に３つのタイプが存在する：基底細胞皮膚癌（ＢＣＣ）、扁平上皮細胞癌（ＳＣＣ）及び黒色腫。
【０２１４】
黒色腫は、皮膚に多くみられるが、腸及び目（ブドウ膜黒色腫）にも見られるメラニン細胞の悪性腫瘍である。それは皮膚癌のまれなタイプの１つであるものの、皮膚癌に関連した死の大部分を引き起こす。悪性黒色腫は、メラニン細胞と呼ばれる色素細胞の制御されない成長により引き起こされる深刻なタイプの皮膚癌である。黒色腫はまた、脈絡膜黒色腫、悪性黒色腫、皮膚黒色腫及び眼内黒色腫も含むが、これらに限定されない。
【０２１５】
黒色腫は、以下のタイプに分類され得る：悪性黒子、悪性黒子型黒色腫、表在拡大型黒色腫、末端性黒子性黒色腫、粘膜黒色腫、結節性黒色腫、ポリープ状黒色腫、線維形成性黒色腫、メラニン欠乏性黒色腫、軟部組織黒色腫、及びブドウ膜黒色腫。
【０２１６】
皮膚癌の治療のために併用療法が考慮される場合、１つ以上の追加の治療は、手術、化学療法（外部ビーム放射線療法又は近接照射療法）、局所化学療法（イミキモド又は５−フルオロウラシル）、凍結療法（癌を凍結除去）、標的療法、光線力学療法、局所化学療法、電気乾燥、掻爬又はそれらの組み合わせを含むがこれらに限定されない。疾患が彼らの身体の他の領域に広がっている対象者において、生活の質を改善するために緩和ケアが使用され得る。追加の治療法は、抗ＣＴＬＡ−４（ＹＥＲＶＯＹ）、抗ＰＤ−１（ＯＰＤＩＶＯ、ＫＥＹＴＲＵＤＡ）、抗ＰＤＬ１（ＢＭＳ−９３６５５９、ＭＰＤＬ３２８０Ａ）、開発中のその他のもの、Ｍｅｄｉｖａｔｉｏｎ／ＣｕｒｅＴｅｃｈによるピディリズマブ（ＣＴ−０１１、抗ＰＤ−１）、ＡｓｔｒａＺｅｎｅｃａによるＭＥＤＩ４７３６（抗ＰＤ−Ｌ１）、及びＭｅｒｃｋ−ＳｏｒｏｎｏによるＡｖｅｌｕｍａｂ（ＭＳＢ００１０７１８Ｃ、抗ＰＤ−Ｌ１）を含むがこれらに限定されない。
【０２１７】
他の例において、肺癌の治療のために併用療法が考慮される場合、１つ以上の追加の治療法は、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）−リダイレクトＴ細胞（ＣＡＲ−Ｔ）細胞療法又は養子Ｔ細胞療法（ＡＣＴ）を含むがこれに限定されない免疫療法である。
【０２１８】
関節炎
ここに記載される方法において、ここに記載される抗Ｇ−ＣＳＦ抗体又はその抗原結合断片を含む医薬組成物の治療有効量が、関節リウマチのような抗体媒介の炎症性関節炎を含む関節炎を有する、それを必要とする対象者に投与される。
【０２１９】
Ｌｅｅ等、２０１７年、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ、１９８：３５６５−３５７５８、Ｃａｍｐｂｅｌｌ等、２０１６年、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．、１９７：４３９２−４４０２、及びカナダ特許出願第２４９６４８５号のような最近の文献及び公報は、抗Ｇ−ＣＳＦ抗体の
ような抗体を使用したＧ−ＣＳＦ／Ｇ−ＣＳＦ受容体のシグナル伝達の遮断が、痛みの軽減及び予後の改善を含む炎症性関節炎を治療し得ることを示している。
【０２２０】
関節炎の治療は、鬱血、痛み及び／又は炎症の部分的又は完全な除去を含む。治療はまた、対象者の全体的な機能の改善も含む。
【０２２１】
関節炎の診断又は評価は、本技術分野で確立されている。評価は、患者の症状の特性評価のような主観的な測定に基づいて実施され得る。評価はまた、例えば、リウマトイド因子及び抗シトルリン化タンパク質抗体のような関節炎の１つ以上のバイオマーカーのための血液又は組織試料の画像化、検査のような客観的な測定に基づいても実施され得る。評価はまた、抗環状シトルリン化ペプチドＥＬＩＳＡも含み得る。
【０２２２】
治療効果は、本技術分野において周知の方法により評価され得る。
【０２２３】
関節炎のような炎症性疾患の治療のために併用療法が考慮される場合、抗Ｇ−ＣＳＦ抗体又はその抗原結合断片は、当業者に既知の、他の抗炎症剤又は鎮痛剤を含む関節炎の治療に使用される薬物と組み合わせられ得る。
【０２２４】
キット
ここで提供されるものはまた、本方法における使用のためのキットである。キットは、ここに記載される抗Ｇ−ＣＳＦ抗体及びここに記載される方法の何れかに従って使用するための説明書を含む１つ以上の容器を含み得る。一般的に、これらの説明書は、ここに記載される方法の何れかに従って癌を治療するための抗Ｇ−ＣＳＦ抗体の投与の記載を含む。キットは、対象者が癌の症状を有するかどうか、又は対象が癌を有するが無症候性であるかどうかを同定することに基づいて、治療に適した個体を選択する記載を更に含み得る。更なる他の態様において、説明書は、抗Ｇ−ＣＳＦ抗体を、それを必要とする対象者に投与することの記載を含む。
【０２２５】
抗Ｇ−ＣＳＦ抗体の使用に関する説明書は、一般に、意図する治療のための投与量、投与スケジュール、及び投与経路に関する情報を含む。容器は、単位用量、バルクパッケージ（例えば、複数用量パッケージ）又はサブユニット用量であり得る。本発明のキットで提供される説明書は、典型的には、ラベル又は添付文書に記載された説明書（例えば、キットに含まれる紙シート）であるが、機械読み取り可能な説明書（例えば、磁気又は光学記憶ディスクに記載された説明書）もまた許容される。
【０２２６】
ラベル又は添付文書は、組成物が癌の治療のために使用されることを示す。説明書は、ここに記載される方法の何れかを実施するために提供され得る。
【０２２７】
キットは適切なパッケージで提供され得る。適切なパッケージは、バイアル、瓶、広口瓶、柔軟なパッケージ（例えば、密封されたマイラー又はプラスチックバッグ）等を含むが、これらに限定されない。同様に考慮されるものは、吸入器、経鼻投与装置（例えば、アトマイザー）のような特定の装置又はミニポンプのような注入装置との組み合わせで使用するためのパッケージである。キットは、滅菌アクセスポートを有し得る（例えば、容器は、静脈内溶液バッグ又は皮下注射針で貫通可能なストッパーを有するバイアルであり得る）。容器もまた、滅菌アクセスポートを有し得る（例えば、容器は、静脈内溶液バッグ又は皮下注射針で貫通可能なストッパーを有するバイアルであり得る）。組成物中の少なくとも１つの活性剤は、ここに記載される抗Ｇ−ＣＳＦ抗体である。容器は、第２の薬学的に活性な薬剤を更に含み得る。
【０２２８】
キットは、緩衝液や解釈情報のような追加のコンポーネントを任意に提供し得る。通常
、キットは、容器及び該容器上の又は該容器と一緒のラベル又は添付文書から構成される。
【実施例】
【０２２９】
本出願は、本出願の例示的な態様として提供される以下の非限定的な実施例を参照することにより、よりよく理解され得る。以下の実施例は、態様をより完全に説明するために提示されるものであり、決して本出願の広範な範囲を限定するものとして解釈されるべきではない。
【０２３０】
実施例１：抗Ｇ−ＣＳＦ抗体の作製方法
抗Ｇ−ＣＳＦ抗体は、それらの専用のＲａｐｉｄ  Ｐｒｉｍｅテクノロジーを使用して、ＩｍｍｕｎｏＰｒｅｃｉｓｅ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  Ｌｔｄ．（ビクトリア、ブリティッシュコロンビア州）により生産された。
【０２３１】
マウスは、組換えヒトＧ−ＣＳＦ（Ｇｅｎｓｃｒｉｐｔ）で免疫された。免疫化及びプライミング手順の後、脾細胞は、ＳＰ２／０骨髄腫と融合され、抗体産生細胞についてスクリーニングされた。
【０２３２】
実施例２：抗Ｇ−ＣＳＦ抗体のＧ−ＣＳＦへの結合をスクリーニングする方法
実施例１の方法により産生された抗Ｇ−ＣＳＦ抗体の結合は、炭酸緩衝液中のヒトＧ−ＣＳＦ（Ｇｅｎｓｃｒｉｐｔ）を０．１μｇ／ウェルでコーティングしたプレート上で直接ＥＬＩＳＡを使用して、ＩｍｍｕｎｏＰｒｅｃｉｓｅ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  Ｌｔｄ．で試験された。９２８個のハイブリドーマクローンからの上清が試験され、更なる試験のために最も強いシグナル（吸光度＞０．２００）を有する１８０個のクローンが選択された。これらの１８０個のクローンは、ヒトＧ−ＣＳＦ及び非特異的タンパク質（ヒトトランスフェリン）に対する直接ＥＬＩＳＡにより更に試験された。８７個のクローンが、トランスフェリンではなく、ヒトＧ−ＣＳＦに特異的に結合することが見出された。
【０２３３】
実施例３：中和アッセイ
ひとたび抗体が、ヒトＧ−ＣＳＦに特異的に結合すると同定されると、それらは最初に以下の２つのアッセイにおいて中和能力のために試験された：（１）Ｇ−ＣＳＦ依存性細胞株（ＮＦＳ−６０）の増殖の阻害及び（２）ＦＬＴ３Ｌ＋Ｇ−ＣＳＦで培養されたマウス骨髄細胞の増殖の阻害。
【０２３４】
ＧＣＳＦ−依存性細胞株（ＮＦＳ６０）の増殖の阻害
２．５×１０3個のＮＦＳ−６０細胞は、０．１２５ｎｇ／ｍＬのヒトＧ−ＣＳＦ（Ｇｅｎｓｃｒｉｐｔ）の存在下で、完全なＤＭＥＭ又はＲＰＭＩ培地で培養された。８７個の抗ヒトＧ−ＣＳＦ抗体クローン（抗体上清の１／５希釈）からの上清は、ウェルに添加され、３７℃（５％ＣＯ2）で７日間培養された。Ｇ−ＣＳＦを含むウェルと含まないウェルは、陰性及び陽性対照としての役割を果たした。
【０２３５】
細胞数は、ＭＡＣＳＱｕａｎｔ（登録商標）を使用して、７日目に計数された。幾つかのクローンは、ＮＦＳ−６０細胞数がＧ−ＣＳＦの非存在下で増殖したＮＦＳ−６０細胞の数に近いレベルまで減少したことを示し、これらのクローンがＧ−ＣＳＦ活性を中和したことを示唆した。
【０２３６】
図１．様々な抗Ｇ−ＣＳＦクローン（１／５希釈）からの上清の存在下でＧ−ＣＳＦで培養したＮＦＳ−６０細胞のプレートレイアウトと細胞数。各クローンは単回の複製として試験されたが、アッセイは３回繰り返された。
【０２３７】
ＦＬＴ３Ｌ＋Ｇ−ＣＳＦで培養されたマウス骨髄細胞の増殖の阻害
マウス骨髄細胞［１０6細胞／ｍＬ］は、抗Ｇ−ＣＳＦクローン（上清の１／５希釈）からの上清の存在下で、組換えＦＬＴ３Ｌ（２００ｎｇ／ｍＬ）＋ヒトＧ−ＣＳＦ（０．１２５ｎｇ／ｍＬ）と共に９日間培養された。９日目に、ウェルは、骨髄細胞増殖の変化のために視覚的に検査された。Ｇ−ＣＳＦの存在下Ｆｌｔ３Ｌで培養された骨髄細胞は細胞数の３乃至４倍の増加を示すため、Ｇ−ＣＳＦを中和する何れの抗体も培養中の細胞数の減少を引き起こすと予想される。Ｇ−ＣＳＦを用いて培養された細胞及び用いずに培養された細胞は、陰性及び陽性対照としての役割を果たした。
【０２３８】
細胞は、９日目に視覚的に検査され、細胞数が減少したウェルは潜在的に中和する抗体を含むものと認められた。このアッセイは２回繰り返され、結果はＮＦＳ−６０アッセイの結果と組み合わされて、更なる試験のために中和クローンのショートリストが作成された。
【０２３９】
中和クローンのショートリストの試験
ＦＬＴ３Ｌ−ＤＣスクリーニングとＮＦＳ−６０スクリーニングの両方で同定された中和抗体は：１Ｂ１１、１Ｃ７、２Ｆ６、３Ａ３、３Ｂ２、３Ｂ３、３Ｇ５、９Ｂ７、１０Ｂ９、１Ａ１、３Ｇ１０、６Ｆ５、７Ｈ６、１０Ｇ１、６Ｆ３、７Ｆ８、及び８Ｈ１２であった。これらの抗体は、上記の実施例２からの元のスクリーニングプレート（１−１０）及び対応するウェル識別子（Ａ−Ｈ；１−１２）に基づいて命名された。例えば、クローン１Ｂ１１はプレート＃１ウェルＢ１１のクローンに対応する。
【０２４０】
クローン１Ｂ１１、１Ｃ７、２Ｆ６、３Ａ３、３Ｂ２、３Ｂ３、３Ｇ５、９Ｂ７、１０Ｂ９、１Ａ１、３Ｇ１０、６Ｆ５、７Ｈ６、１０Ｇ１、６Ｆ３、７Ｆ８、及び８Ｈ１２は、０．１２５ｎｇ／ｍＬ又は０．６２５ｎｇ／ｍＬのヒトＧ−ＣＳＦで培養されたＮＦＳ−６０細胞の増殖を中和するそれらの能力のために３重複（ｔｒｉｐｌｉｃａｔｅ）で試験された。
【０２４１】
図２は、０．１２５ｎｇ／ｍＬのヒトＧ−ＣＳＦを使用した抗体の中和活性を示す。この研究において、クローン１Ｂ１１、１Ｃ７、２Ｆ６、３Ａ３、３Ｂ２、３Ｂ３、３Ｇ５、９Ｂ７、１０Ｂ９、及び１０Ｇ１は全て、ＮＦＳ６０細胞の増殖を有意に減少させた。*ｐ＜０．０５  **ｐ＜０．０１  ***ｐ＜０．００１  ****ｐ＜０．０００１。
【０２４２】
図３は、クローン１Ｂ１１、３Ａ３、３Ｂ２、３Ｂ３、１Ｃ７、３Ｇ５、及び１０Ｂ９が高濃度のヒトＧ−ＣＳＦ（０．６２５ｎｇ／ｍＬ）を中和することを示す。*ｐ＜０．０５  **ｐ＜０．０１  ***ｐ＜０．００１  ****ｐ＜０．０００１。
【０２４３】
抗体１Ｂ１１、１Ｃ７、２Ｆ６、３Ａ３、３Ｂ２、３Ｂ３、３Ｇ５、９Ｂ７、１０Ｂ９、及び１０Ｇ１は、ヒトＧ−ＣＳＦ依存性ＮＦＳ−６０増殖を阻害するものとして同定された（図２及び３）。クローン１Ｂ１１、３Ａ３、３Ｂ２、及び３Ｂ３は、高濃度のＧ−ＣＳＦ（０．６２５ｎｇ／ｍＬ）の存在下におけるＮＦＳ−６０増殖の最も有意な減少を示した。
【０２４４】
マウスＧ−ＣＳＦに対する抗ヒトＧ−ＣＳＦクローンの最小活性
クローン１Ｂ１１、１Ｃ７、２Ｆ６、３Ａ３、３Ｂ２、３Ｂ３、３Ｇ５、９Ｂ７、１０Ｂ９、１Ａ１、３Ｇ１０、６Ｆ５、７Ｈ６、１０Ｇ１、６Ｆ３、７Ｆ８、及び８Ｈ１２は、交差反応性をテストするために、０．１２５ｎｇ／ｍＬのヒト又はマウスＧ−ＣＳＦで培養されたＮＦＳ−６０細胞の増殖を中和するそれらの能力のために３重複（ｔｒｉｐｌｉｃａｔｅ）で試験された。
【０２４５】
図４は、ヒトＧ−ＣＳＦ誘導増殖を中和したクローンの多く（左パネル）が、マウスＧ−ＣＳＦに対して殆ど又は全く活性を有さない（右パネル）ことを示す。クローンの幾つかはマウスＧ−ＣＳＦを中和するように見えるものの、ＮＦＳ−６０細胞の増殖の減少は、ヒトＧ−ＣＳＦで見られる活性と比較して僅かであった（左パネル）。
【０２４６】
実施例４：サブクローニング及び中和活性
９つの中和クローン：２Ｆ６、３Ｇ５、１０Ｂ９、９Ｂ７、１０Ｇ１、１Ｂ１１、３Ａ３、３Ｂ２及び３Ｂ３は、更なる開発及びヒトＧ−ＣＳＦの非常に有意な中和に基づくサブクローニングのために選択された（図３及び４）。
【０２４７】
サブクローニングは、ＩｍｍｕｎｏＰｒｅｃｉｓｅ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  Ｌｔｄ．により実施され、２つの安定な高い抗体産生の、各クローンのサブクローンが提供された。
【０２４８】
サブクローンのＧ−ＣＳＦ中和活性
サブクローン（２Ｆ６．１及び．２、３Ｇ５．１及び．２、１０Ｂ９．１及び．２、９Ｂ７．１及び．２、１０Ｇ１．１及び．２、１Ｂ１１．２、及び３Ｂ３．２）は、ＮＦＳ−６０アッセイを使用して、非グリコシル化（大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）生成、Ｇｅｎｓｃｒｉｐｔ）又はグリコシル化（ＣＨＯ生成、Ｇｅｎｓｃｒｉｐｔ）ヒトＧ−ＣＳＦの何れかを中和する能力のために試験された。
【０２４９】
図５は、全てのサブクローンが、グリコシル化又は非グリコシル化ヒトＧ−ＣＳＦの何れかの生物活性を中和し得ることを示す。
【０２５０】
２．５×１０3個のＮＦＳ−６０細胞は、２０％の抗Ｇ−ＣＳＦ抗体上清（クローン２Ｆ６．１及び２Ｆ６．２、３Ｇ５．１及び３Ｇ５．２、１０Ｂ９．１及び１０Ｂ９．２、９Ｂ７．１及び９Ｂ７．２、１０Ｇ１．１及び１０Ｇ１．２）又は１０μｇ／ｍＬの精製抗体（クローン１Ｂ１１．２及び３Ｂ３．２）の存在下、０．１２５ｎｇ／ｍＬの非グリコシル化（左パネル；図５Ａ）又はグリコシル化（右パネル；図５Ｂ）ヒトＧ−ＣＳＦ（Ｇｅｎｓｃｒｉｐｔ）の存在下において、完全ＤＭＥＭ又はＲＰＭＩ培地で６日間培養された。６日目に、細胞数が、ＭＡＣＳＱｕａｎｔ（登録商標）を使用して計数され、Ｇ−ＣＳＦの存在下（陽性対照）又は非存在下（陰性対照）で増殖したＮＦＳ−６０細胞と比較された。
【０２５１】
サブクローン（１Ｂ１１．２、３Ａ３．２、３Ｂ２．２、及び３Ｂ３．２）は、ヒトＧ−ＣＳＦの生物活性を中和するそれらの一貫した能力に基づいて、リード候補として選択され、用量依存的な様式におけるＧ−ＣＳＦ誘発ＮＦＳ−６０細胞増殖を中和するそれらの能力のために試験された。
【０２５２】
図６は、１Ｂ１１．２（図６Ａ）、３Ａ３．２（図６Ｂ）、３Ｂ２．２（図６Ｃ）、及び３Ｂ３．２（図６Ｄ）が全て、用量依存的な様式でヒトＧ−ＣＳＦの生物活性を中和することを示す。
【０２５３】
２．５×１０3個のＮＦＳ−６０細胞は、ヒトＧ−ＣＳＦ（０．１２５ｎｇ／ｍＬ）及び種々の濃度のサブクローンからの上清の存在下で、完全ＤＭＥＭ又はＲＰＭＩ培地で培養された。全ての試験は３重複で行われ、データは平均＋／−ＳＤを示す。
【０２５４】
実施例５：配列
クローン１Ｂ１１、３Ａ３、３Ｂ２、及び３Ｂ３は、Ｇｅｎｓｃｒｉｐｔにより配列決定された。全ＲＮＡは、凍結したハイブリドーマ細胞から抽出され、ＲＮＡからｃＤＮＡ
が合成された。ＰＣＲが、その後、抗体の可変領域（重鎖及び軽鎖）を増幅するためにを実施されたが、それは、その後、標準クローニングベクター内に個別にクローニングされ、配列決定された。
【０２５５】
クローン１Ｂ１１及び３Ａ３は同一の配列を有することが見出され、同じ抗体であると決定された。
【０２５６】
クローン３Ｂ２及び３Ｂ３は同一の配列を有することが見出され、同じ抗体であると決定された。
【０２５７】
配列表
１Ｂ１１
重鎖：アミノ酸配列（１３８ＡＡ）
１Ｂ１  ＶＨ  ＣＤＲ１（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１）    ＩＹＴＭＨ
１Ｂ１  ＶＨ  ＣＤＲ２（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２）    ＹＩＮＰＳＩＧＹＡＮＹＮＱＫＦＲＤ
１Ｂ１  ＶＨ  ＣＤＲ３（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３）    ＧＧＹＧＤＳＬＦＡＹ
【０２５８】
軽鎖：アミノ酸配列（１３２  ＡＡ）
１Ｂ１  ＶＬ  ＣＤＲ１（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４）    ＲＳＳＫＳＬＬＨＳＮＧＩＴＹＬＹ
１Ｂ１  ＶＬ  ＣＤＲ２（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５）    ＱＭＳＮＬＡＳ
１Ｂ１  ＶＬ  ＣＤＲ３（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：６）    ＡＱＮＬＥＬＰＹＴ
【０２５９】
１Ｂ１１  ＶＨ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：７）
ＱＶＨＬＱＱＳＧＡＥＬＡＲＰＧＡＳＶＫＭＳＣＫＡＳＧＹＴＦＰＩＹＴＭＨＷＩＫＱＲＰＧＱＧＬＥＷＩＧＹＩＮＰＳＩＧＹＡＮＹＮＱＫＦＲＤＫＡＴＬＴＡＤＫＳＳＳＴＡＹＭＱＬＳＳＬＴＳＥＤＳＡＶＹＹＣＡＲＧＧＹＧＤＳＬＦＡＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＡ
【０２６０】
１Ｂ１１  ＶＬ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：８）
ＤＩＶＭＴＱＡＡＦＳＮＰＶＴＬＧＴＳＡＳＩＳＣＲＳＳＫＳＬＬＨＳＮＧＩＴＹＬＹＷＹＬＱＫＰＧＱＳＰＱＬＬＩＹＱＭＳＮＬＡＳＧＶＰＤＲＦＳＳＳＧＳＧＴＤＦＴＬＲＩＳＲＶＥＡＥＤＶＧＶＹＹＣＡＱＮＬＥＬＰＹＴＦＧＧＧＴＫＬＥＩＫ
【０２６１】
３Ｂ３
重鎖：アミノ酸配列（１３７ＡＡ）
３Ｂ３  ＶＨ  ＣＤＲ１（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：９）      ＰＹＴＭＨ
３Ｂ３  ＶＨ  ＣＤＲ２（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１０）    ＹＩＮＰＳＩＮＹＴＮＹＮＱＫＦＫＤ
３Ｂ３  ＶＨ  ＣＤＲ３（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１１）    ＲＧＳＹＧＮＦＤＹ
【０２６２】
軽鎖：アミノ酸配列（１３２ＡＡ）
３Ｂ３  ＶＬ  ＣＤＲ１（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１２）    ＲＳＮＫＳＬＬＨＳＮＧＩＴＹＬＹ
３Ｂ３  ＶＬ  ＣＤＲ１（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１３）    ＱＭＳＮＬＡＳ
３Ｂ３  ＶＬ  ＣＤＲ１（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１４）    ＡＱＮＬＥＬＰＬＴ
【０２６３】
３Ｂ３  ＶＨ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１５）
ＱＶＱＬＱＱＳＧＡＥＬＡＲＰＧＡＳＶＫＭＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴＰＹＴＭＨＷＶＫＱＲＰＧＱＤＬＥＷＩＧＹＩＮＰＳＩＮＹＴＮＹＮＱＫＦＫＤＫＡＴＬＴＡＤＫＳＳＳＴＡＹ
ＭＱＬＳＳＬＴＳＥＤＳＡＶＹＦＣＡＲＲＧＳＹＧＮＦＤＹＷＧＱＧＴＴＬＴＶＳＳ
【０２６４】
３Ｂ３  ＶＬ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１６）
ＤＩＶＭＴＱＡＡＦＳＮＰＶＴＬＧＴＳＡＳＩＳＣＲＳＮＫＳＬＬＨＳＮＧＩＴＹＬＹＷＹＬＱＫＰＧＱＳＰＱＬＬＩＹＱＭＳＮＬＡＳＧＶＰＤＲＦＳＳＳＧＳＧＴＤＦＴＬＲＩＳＲＶＥＡＥＤＶＧＶＹＹＣＡＱＮＬＥＬＰＬＴＦＧＡＧＴＫＬＥＬＫ
【０２６５】
１Ｂ１１核酸配列
１Ｂ１１可変重鎖：（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１７）
ＣＡＧＧＴＣＣＡＣＣＴＧＣＡＧＣＡＧＴＣＴＧＧＧＧＣＴＧＡＡＣＴＧＧＣＡＡＧＡＣＣＴＧＧＧＧＣＣＴＣＡＧＴＧＡＡＧＡＴＧＴＣＣＴＧＣＡＡＧＧＣＴＴＣＴＧＧＣＴＡＣＡＣＣＴＴＴＣＣＴＡＴＣＴＡＣＡＣＧＡＴＧＣＡＣＴＧＧＡＴＡＡＡＡＣＡＧＡＧＧＣＣＴＧＧＡＣＡＧＧＧＴＣＴＧＧＡＡＴＧＧＡＴＴＧＧＡＴＡＣＡＴＴＡＡＴＣＣＴＡＧＣＡＴＴＧＧＴＴＡＴＧＣＴＡＡＴＴＡＣＡＡＴＣＡＧＡＡＧＴＴＣＡＧＧＧＡＣＡＡＧＧＣＣＡＣＡＴＴＧＡＣＴＧＣＡＧＡＣＡＡＡＴＣＣＴＣＣＡＧＣＡＣＡＧＣＣＴＡＣＡＴＧＣＡＡＣＴＧＡＧＣＡＧＣＣＴＧＡＣＡＴＣＴＧＡＧＧＡＣＴＣＴＧＣＡＧＴＣＴＡＴＴＡＣＴＧＴＧＣＡＡＧＡＧＧＧＧＧＧＴＡＴＧＧＴＧＡＣＴＣＣＣＴＣＴＴＴＧＣＴＴＡＣＴＧＧＧＧＣＣＡＡＧＧＧＡＣＴＣＴＧＧＴＣＡＣＴＧＴＣＴＣＴＧＣＡ
【０２６６】
１Ｂ１１可変軽鎖：（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１８）
ＧＡＴＡＴＴＧＴＧＡＴＧＡＣＧＣＡＧＧＣＴＧＣＡＴＴＣＴＣＣＡＡＴＣＣＡＧＴＣＡＣＴＣＴＴＧＧＡＡＣＡＴＣＡＧＣＴＴＣＣＡＴＣＴＣＣＴＧＣＡＧＧＴＣＴＡＧＴＡＡＧＡＧＴＣＴＣＣＴＡＣＡＴＡＧＴＡＡＴＧＧＣＡＴＣＡＣＴＴＡＴＴＴＧＴＡＴＴＧＧＴＡＴＣＴＧＣＡＧＡＡＧＣＣＡＧＧＣＣＡＧＴＣＴＣＣＴＣＡＧＣＴＣＣＴＧＡＴＴＴＡＴＣＡＧＡＴＧＴＣＣＡＡＣＣＴＴＧＣＣＴＣＡＧＧＡＧＴＣＣＣＡＧＡＣＡＧＧＴＴＣＡＧＴＡＧＣＡＧＴＧＧＧＴＣＡＧＧＡＡＣＴＧＡＴＴＴＣＡＣＡＣＴＧＡＧＡＡＴＣＡＧＣＡＧＡＧＴＧＧＡＧＧＣＴＧＡＧＧＡＴＧＴＧＧＧＴＧＴＴＴＡＴＴＡＣＴＧＴＧＣＴＣＡＡＡＡＴＣＴＡＧＡＡＣＴＴＣＣＧＴＡＣＡＣＧＴＴＣＧＧＡＧＧＧＧＧＧＡＣＣＡＡＧＣＴＧＧＡＡＡＴＡＡＡＡ
【０２６７】
３Ｂ３核酸配列
３Ｂ３可変重鎖：（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１９）
ＣＡＧＧＴＣＣＡＧＣＴＧＣＡＧＣＡＧＴＣＴＧＧＧＧＣＴＧＡＡＣＴＧＧＣＡＡＧＡＣＣＴＧＧＧＧＣＣＴＣＡＧＴＧＡＡＧＡＴＧＴＣＣＴＧＣＡＡＧＧＣＴＴＣＴＧＧＣＴＡＣＡＣＣＴＴＴＡＣＴＣＣＣＴＡＣＡＣＧＡＴＧＣＡＣＴＧＧＧＴＧＡＡＡＣＡＧＡＧＧＣＣＴＧＧＡＣＡＧＧＡＴＣＴＧＧＡＡＴＧＧＡＴＴＧＧＡＴＡＣＡＴＴＡＡＴＣＣＴＡＧＣＡＴＴＡＡＴＴＡＴＡＣＴＡＡＴＴＡＣＡＡＴＣＡＧＡＡＧＴＴＣＡＡＧＧＡＣＡＡＧＧＣＣＡＣＡＴＴＧＡＣＴＧＣＡＧＡＣＡＡＡＴＣＣＴＣＣＡＧＣＡＣＡＧＣＣＴＡＴＡＴＧＣＡＡＣＴＧＡＧＣＡＧＣＣＴＧＡＣＡＴＣＴＧＡＧＧＡＣＴＣＴＧＣＡＧＴＣＴＡＴＴＴＣＴＧＴＧＣＡＡＧＡＡＧＡＧＧＧＴＣＴＴＡＴＧＧＴＡＡＣＴＴＴＧＡＣＴＡＣＴＧＧＧＧＣＣＡＡＧＧＣＡＣＣＡＣＴＣＴＣＡＣＡＧＴＣＴＣＣＴＣＡ
【０２６８】
３Ｂ３可変軽鎖：（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２０）
ＧＡＴＡＴＴＧＴＧＡＴＧＡＣＧＣＡＧＧＣＴＧＣＡＴＴＣＴＣＣＡＡＴＣＣＡＧＴＣＡＣＴＣＴＴＧＧＡＡＣＡＴＣＡＧＣＴＴＣＣＡＴＣＴＣＣＴＧＣＡＧＧＴＣＴＡＡＴＡＡＧＡＧＴＣＴＣＣＴＡＣＡＴＡＧＴＡＡＴＧＧＣＡＴＣＡＣＴＴＡＴＴＴＧＴＡＴＴＧＧＴＡＴＣＴＧＣＡＧＡＡＧＣＣＡＧＧＣＣＡＧＴＣＴＣＣＴＣＡＧＣＴＣＣＴＧＡＴＴＴＡＴＣＡＧＡＴＧＴＣＣＡＡＣＣＴＴＧＣＣＴＣＡＧＧＡＧＴＣＣＣＡＧＡＣＡＧＧＴＴＣＡＧＴＡＧＣＡＧＴＧＧＧＴＣＡＧＧＡＡＣＴＧＡＴＴＴＣＡＣＡＣＴＧＡＧＡＡＴＣＡＧＣＡＧＡＧＴＧＧＡＧＧＣＴＧＡＧＧＡＴＧＴＧＧＧＴＧＴＴＴＡＴＴＡＣＴＧＴＧ
ＣＴＣＡＡＡＡＴＣＴＡＧＡＡＣＴＴＣＣＧＣＴＣＡＣＧＴＴＣＧＧＴＧＣＴＧＧＧＡＣＣＡＡＧＣＴＧＧＡＧＣＴＧＡＡＡ
【０２６９】
ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２１        Ｈｉｓ−Ｈｉｓ−Ｈｉｓ−Ｈｉｓ−Ｈｉｓ−Ｈｉｓ
【０２７０】
ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２２        （ＧＧＧＧＳ）３
【０２７１】
実施例６：３Ｂ３と１Ｂ１１の中和活性の比較
２．５×１０3個のＮＦＳ−６０細胞は、ヒトＧ−ＣＳＦ（０．１２５ｎｇ／ｍＬ）及び種々の濃度の精製抗体の存在下で、完全なＤＭＥＭ又はＲＰＭＩ培地で６日間培養された。６日目に、ＮＦＳ−６０細胞は、ＭＡＣＳＱｕａｎｔ（登録商標）を使用して計数された。各抗体濃度は３重複で実施され、データは平均＋／−ＳＤを表す。
【０２７２】
図７は、種々の濃度の中和抗体の存在下における、ＮＦＳ−６０細胞のヒトＧ−ＣＳＦ（０．１２５ｎｇ／ｍＬ）への増殖を示す用量反応曲線である。クローン３Ｂ３は、図７に示されるように、クローン１Ｂ１１と比較して、Ｇ−ＣＳＦの生物活性の中和において約２乃至３倍効果が高いことが見出された。
【０２７３】
２．５×１０3個のＮＦＳ−６０細胞は、精製抗Ｇ−ＣＳＦ抗体クローン１Ｂ１１又は３Ｂ３の種々の希釈液の存在下、０．１２５ｎｇ／ｍＬのヒトＧ−ＣＳＦ（Ｇｅｎｓｃｒｉｐｔ（登録商標））の存在下において、完全なＤＭＥＭ又はＲＰＭＩ培地で６日間培養された。６日目に、細胞数が、ＭＡＣＳＱｕａｎｔ（登録商標）を使用して計数された。データは、各抗体濃度において平均＋／−ＳＤを示す。
【０２７４】
実施例７：抗Ｇ−ＣＳＦ抗体クローンの親和性
クローン２Ｆ６、１Ｂ１１、３Ｇ５、１０Ｂ９、９Ｂ７、１０Ｇ１、及び３Ｂ３の親和性は、ＳＰＲにより測定された。この作業はカナダ国家研究会議（モントリオール、ケベック州）で実施された。
【０２７５】
２．５％の上清（４％を使用した変異体１Ｂ１１．２及び１０Ｂ９．１．２を除く）は、緩衝液無しの３０、１０、３．３３、１．１１、及び０．３７ｎＭ濃度の一連のヒトＧ−ＣＳＦと共に流れる抗マウスＦｃ抗体に捕捉された。ＢｉｏＲａｄ  ＰｒｏｔｅＯｎ（登録商標）の機器を使用して、会合（ｋａ）及び解離（ｋｄ）速度が測定された。親和性（ＫD）はｋａ／ｋｄとして計算された。
【０２７６】
表１は、種々の抗Ｇ−ＣＳＦクローンの親和性を示す。
【表１】
2020507339.tif 000003
【０２７７】
クローンの親和性は、１．５×１０-9Ｍ（３Ｇ５）から６．４×１０-11Ｍ（１Ｂ１１）までの範囲であった。クローン１Ｂ１１は最も高い親和性のクローン（６４ｐＭ）であり、クローン３Ｂ３（３１０ｐＭ）は最高の結合速度を示した。
【０２７８】
実施例８：抗Ｇ−ＣＳＦ抗体クローン１Ｂ１１及び３Ｂ３は、樹状細胞の成長におけるヒトＧ−ＣＳＦの悪影響を逆転させる
図８は、抗Ｇ−ＣＳＦクローン１Ｂ１１及び３Ｂ３が、インビトロにおけるＦＬＴ３Ｌ誘導樹状細胞の成長における乳腺腫瘍由来Ｇ−ＣＳＦの効果を逆転し得ることを示す。
【０２７９】
マウスＧ−ＣＳＦの遺伝子は、マウスＧ−ＣＳＦを自然に産生するマウス乳腺腫瘍細胞株ＮＯＰ１２からノックアウトされた。続いて、ＮＯＰ１２細胞は、ＣＭＶプロモーターの下でヒトＧ−ＣＳＦ（ＳｉｎｏＢｉｏｌｏｇｉｃａｌ）をコードするプラスミドでトランスフェクトされた。細胞は、ハイグロマイシン耐性を使用してプラスミドの安定した統合のために選択された。ＮＯＰ１２ヒトＧ−ＣＳＦ（ＮＯＰ１２ｈＧＣＳＦ）クローンからの培地は、１０6細胞／ｍＬ及びＦＬＴ３Ｌ（２００ｎｇ／ｍＬ）を含む骨髄培養物に種々の濃度で添加された。抗Ｇ−ＣＳＦ抗体１Ｂ１１又は３Ｂ３は、１０μｇ／ｍＬで添加された。培養物は採取され、１０日目に計数され、続いてＭＨＣクラスＩＩ及びＣＤ１１ｃのＦＡＣＳ分析が行われた。
【０２８０】
図８Ａは、培養物の細胞計数を示し、遮断抗体を何ら伴わないＮＯＰ１２ｈＧＣＳＦ細胞からの上清の添加が培養物中の細胞計数を増加させることを示す。１Ｂ１１又は３Ｂ３の何れかの追加は、ＮＯＰ１２ｈＧＣＳＦの上清の効果を有意に減少する。加えて、中和クローン１Ｂ１１及び３Ｂ３はまた、ＣＤ１１ｃ+ＭＨＣ  ＩＩ+細胞の頻度の増加によって測定されるように、培養物中の成熟樹状細胞の頻度も増加させる（図８Ｂ）。
【０２８１】
全体的に、結果は、中和Ｇ−ＣＳＦ抗体が、腫瘍由来Ｇ−ＣＳＦがＦＬＴ３Ｌ誘導樹状細胞の成長に及ぼす効果を克服し得ることを示す。
【０２８２】
ＦＬＴ３Ｌ誘導樹状細胞培養物における腫瘍由来Ｇ−ＣＳＦの効果を調べることに加えて、ＧＭ−ＣＳＦ誘導ＤＣ培養物に何らかの効果があるかどうかも調べた。
【０２８３】
図９は、クローン１Ｂ１１又は３Ｂ３でＧ−ＣＳＦをブロックすると、細胞におけるＭＨＣクラスＩＩ発現により測定されるＧＭ−ＣＳＦ誘導樹状細胞の成長におけるＮＯＰ１２ｈＧＣＳＦ細胞からのＧ−ＣＳＦの効果を克服し得ることを示す。
【０２８４】
図９．骨髄細胞は、Ｇ−ＣＳＦ（１／１０００）でトランスフェクトされた２９３Ｔ細胞からの上清と伴に、非ＴＣ処理ペトリ皿（１０ｍＬ）又は２４ウェル超低付着プレート（１ｍＬ中）に播種（２×１０5細胞／ｍＬ）された。ＮＯＰ１２Ｈｇｃｓｆ細胞からの上清が、培養開始時に添加され（１又は５％）、ヒトＧ−ＣＳＦに対する抗体（１Ｂ１１又は３Ｂ３）もまた、同時に添加された（１０μｇ／ｍＬ）。３日目に、半量の新鮮な培地が培養物に添加された。６日目に、培地の半分の体積が除去され、培養物に半分の体積の新しい培地のが添加された。８日目に、培地の半分の体積が除去され、培養物に半分の体積の新しい培地のが添加された。細胞は、９日目又は１０日目に採取され、ＦＡＣＳ分析のために染色された。
【０２８５】
実施例９：抗Ｇ−ＣＳＦ抗体クローン１Ｂ１１及び３Ｂ３は、ヒト好中球におけるＧ−ＣＳＦ誘導ＳＴＡＴ３活性化を遮断する
図１０は、抗Ｇ−ＣＳＦクローン１Ｂ１１及び３Ｂ３の両方が、精製ヒト好中球におけるＧ−ＣＳＦ刺激に応答するＳＴＡＴ３活性化を遮断することを示す。
【０２８６】
抗Ｇ−ＣＳＦクローン１Ｂ１１及び３Ｂ３は、ヒト初代好中球のＧ−ＣＳＦシグナル伝達を遮断する。種々の濃度のヒトＧ−ＣＳＦ（Ｇｅｎｓｃｒｉｐｔ）は、１０μｇ／ｍＬの精製抗体クローン１Ｂ１１、３Ｂ３、又はアイソタイプ対照でプレインキュベートされた。３０分後、Ｇ−ＣＳＦ／抗体混合物は、ウェル当たり５×１０5個の精製ヒト好中球を含むプレートに添加された。プレートは２０分間インキュベートされた後、細胞は、製造業者のプロトコル（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）に従って、直ちに固定され、細胞内リン酸化Ｓｔａｔ３（Ｐ−Ｔｙｒ  ７０５）について染色された。サイトカイン無し及び抗体無しで培養された好中球は、それぞれ陰性及び陽性対照としての役割を果たした。［ＭＦＩ（平均蛍光強度）実験試料］／［陽性対照のＭＦＩ］×１００％として、各試料の最大Ｓｔａｔ３リン酸化パーセントが計算された。３Ｂ３（下部の円のセット）；１Ｂ１１（中央の円のセット）及びアイソタイプ対照（上部の円のセット）。
【０２８７】
実施例１０：インビボにおける腫瘍Ｇ−ＣＳＦ産生の中和は、ＭＤＳＣの頻度及びＴ細胞抑制能力を低下させる。
図１１は、抗Ｇ−ＣＳＦクローン１Ｂ１１及び３Ｂ３が、ＭＣ３８腫瘍を発現するヒトＧ−ＣＳＦを接種したマウスの脾臓におけるＭＤＳＣの頻度及びＴ細胞抑制活性を低下させることを示す。
【０２８８】
Ｃ５７Ｂｌ／６マウスに、ヒトＧ−ＣＳＦを発現するように操作された１×１０6個のＭＣ３８結腸癌細胞を接種した。７日後、動物を１週間に３回、２００μｇの抗Ｇ−ＣＳＦクローン１Ｂ１１、又は３Ｂ３、又はアイソタイプ対照抗体で処理した。Ａ）２５日目に動物を安楽死させ、脾臓を摘出し、フローサイトメトリーによりＣＤ１１ｂ＋Ｌｙ６Ｇ＋細胞（ＭＤＳＣ）の存在について分析した。Ｂ）担癌マウス由来の脾臓を抑制細胞（ＭＤＳＣ）の供給源として使用し、増殖染料で標識したＯＴ−Ｉ  ＴＣＲトランスジェニック脾細胞に様々な比率で添加した。抗原の供給源として全ＯＶＡ（２００μｇ／ｍＬ）を培養物に添加した。ＯＴ−Ｉ細胞はまた、ＹＦＰ発現に基づいてＩＦＮ−γ産生を検出することを可能にするＩＦＮ−γプロモーターの制御下でＹＦＰも発現した。４日目に、細胞をＰＭＡ（５０ｎｇ／ｍＬ）で刺激し、そして増殖及びＩＦＮ−γ産生についてフローサイトメトリーによって分析した。ＭＤＳＣの非存在下、ＯＶＡ単独で培養したＯＴ−Ｉ脾細胞、及びＭＤＳＣを欠く腫瘍非保有脾細胞（非腫瘍群）と共に培養したＯＴ−Ｉ脾細胞を陽性対照として用いた。ＯＶＡの非存在下で培養したＯＴ−Ｉ脾細胞を陰性対照として用いた。左上の四分円中の数字は、少なくとも１回の分裂を経てＩＦＮ−γを産生することができるＯＴ−Ｉ  Ｔ細胞を表す。ＯＴ−Ｉ脾細胞に対する腫瘍脾細胞の比率１０対１においてＯＴ−Ｉ増殖の明らかな抑制が存在する。１Ｂ１１及び３Ｂ３処置マウス由来の脾細胞は、アイソタイプ対照処置群と比較した場合にＯＴ−Ｉ増殖を抑制する能力が低下している。
【０２８９】
実施例１１：ヒト化１Ｂ１１抗Ｇ−ＣＳＦ抗体の生成
クローン１Ｂ１１の重鎖及び軽鎖ポリペプチド配列を使用して、以下の可変軽鎖及び可変重鎖配列並びに関連する定常ドメインの組み合わせを介して、キメラ、ハイブリッド、及びヒト化抗体が生成された：
【０２９０】
１Ｂ１１キメラ軽鎖（ｃＬ）：（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２３）
ＤＩＶＭＴＱＡＡＦＳＮＰＶＴＬＧＴＳＡＳＩＳＣＲＳＳＫＳＬＬＨＳＮＧＩＴＹＬＹＷＹＬＱＫＰＧＱＳＰＱＬＬＩＹＱＭＳＮＬＡＳＧＶＰＤＲＦＳＳＳＧＳＧＴＤＦＴＬＲＩＳＲＶＥＡＥＤＶＧＶＹＹＣＡＱＮＬＥＬＰＹＴＦＧＧＧＴＫＬＥＩＫ
【０２９１】
１Ｂ１１キメラ重鎖（ｃＨ）：（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２４）
ＱＶＨＬＱＱＳＧＡＥＬＡＲＰＧＡＳＶＫＭＳＣＫＡＳＧＹＴＦＰＩＹＴＭＨＷＩＫＱＲＰＧＱＧＬＥＷＩＧＹＩＮＰＳＩＧＹＡＮＹＮＱＫＦＲＤＫＡＴＬＴＡＤＫＳＳＳＴＡＹ
ＭＱＬＳＳＬＴＳＥＤＳＡＶＹＹＣＡＲＧＧＹＧＤＳＬＦＡＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＡ
【０２９２】
１Ｂ１１ヒト化軽鎖１（ｈ１Ｌ）（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２５）
ＤＩＶＭＴＱＳＰＬＳＬＰＶＴＰＧＥＰＡＳＩＳＣＲＳＳＫＳＬＬＨＳＮＧＩＴＹＬＹＷＹＬＱＫＰＧＱＳＰＱＬＬＩＹＱＭＳＮＬＡＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＫＩＳＲＶＥＡＥＤＶＧＶＹＹＣＡＱＮＬＥＬＰＹＴＦＧＱＧＴＫＬＥＩＫ
【０２９３】
１Ｂ１１ヒト化軽鎖２（ｈ２Ｌ）（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２６）
ＤＩＶＭＴＱＳＰＬＳＬＰＶＴＰＧＥＰＡＳＩＳＣＲＳＳＫＳＬＬＨＳＮＧＩＴＹＬＹＷＹＬＱＫＰＧＱＳＰＱＬＬＩＹＱＭＳＮＬＡＳＧＶＰＤＲＦＳＳＳＧＳＧＴＤＦＴＬＫＩＳＲＶＥＡＥＤＶＧＶＹＹＣＡＱＮＬＥＬＰＹＴＦＧＱＧＴＫＬＥＩＫ
【０２９４】
１Ｂ１１ヒト化重鎖１（ｈ１Ｈ）：（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２７）
ＱＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＡＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＹＴＦＰＩＹＴＭＨＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＥＷＭＧＹＩＮＰＳＩＧＹＡＮＹＮＱＫＦＲＤＲＶＴＩＴＡＤＴＳＴＳＴＡＹＭＥＬＳＳＬＲＳＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＧＧＹＧＤＳＬＦＡＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ
【０２９５】
１Ｂ１１ヒト化重鎖２（ｈ２Ｈ）：（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２８）
ＱＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＡＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＹＴＦＰＩＹＴＭＨＷＩＲＱＡＰＧＱＧＬＥＷＩＧＹＩＮＰＳＩＧＹＡＮＹＮＱＫＦＲ  ＤＲＡＴＬＴＡＤＴＳＴＳＴＡＹＭＥＬＳＳＬＲＳＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＧＧＹＧＤＳＬＦＡＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ
【０２９６】
１Ｂ１１ヒト化重鎖３（ｈ３Ｈ）：（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２９）
ＱＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＡＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＹＴＦＰＩＹＴＭＨＷＩＫＱＡＰＧＱＧＬＥＷＩＧＹＩＮＰＳＩＧＹＡＮＹＮＱＫＦＲ  ＤＲＡＴＬＴＡＤＫＳＴＳＴＡＹＭＥＬＳＳＬＲＳＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＧＧＹＧＤＳＬＦＡＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ
【０２９７】
１Ｂ１１ヒト化重鎖４（ｈ４Ｈ）：（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３０）
ＱＶＨＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＡＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＹＴＦＰＩＹＴＭＨＷＩＫＱＡＰＧＱＧＬＥＷＩＧＹＩＮＰＳＩＧＹＡＮＹＮＱＫＦＲ  ＤＫＡＴＬＴＡＤＫＳＴＳＴＡＹＭＥＬＳＳＬＲＳＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＧＧＹＧＤＳＬＦＡＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ
【０２９８】
合計で、１５個のクローンが、以下の重鎖と軽鎖の組み合わせを用いて作成された：
【表２】
2020507339.tif 000004
【０２９９】
ＣＨＯ−３Ｅ７は、無血清培地中で発現プラスミドを用いてトランスフェクトされて、上記で特定された１Ｂ１１抗体変異体のそれぞれが作製された。抗体の相対的発現レベルは、極性優位性（ｐｏｌａｒ  ａｄｖａｎｔａｇｅ）高速液体クロマトグラフィー（ｐＡ
ＨＰＬＣ）及びドデシル硫酸ナトリウムポリアクリルアミドゲル電気泳動（ＳＤＳ−ＰＡＧＥ）を使用して比較された。
【０３００】
アフィニティークロマトグラフィーを使用して精製された１Ｂ１１抗体変異体は、サイズ排除クロマトグラフィーにより更に精製される。精製された抗Ｇ−ＣＳＦ抗体は、その後、表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）分析及び熱安定性測定に付される。
【０３０１】
ＳＰＲ分析は、精製された１Ｂ１１抗体変異体を捕獲し、適切な抗Ｆｃ  ＳＰＲの表面上へコントロールし、そして、捕獲した抗体の上に一連の濃度の抗原及び無緩衝液を参照用に流すことを含む、間接捕獲法を使用する。間接捕獲法は、単純なラングミュア結合を確実なものとし、各１Ｂ１１抗体変異体の結合速度と親和性の決定を可能とする。
【０３０２】
示差走査熱量測定（ＤＳＣ）がまた、１Ｂ１１抗体のキメラ及びヒト化変異体において実施され、それらの熱安定性が評価された。ＤＳＣは、当業者に既知の分析技術である（
Ｄｕｒｏｗｏｊｕ等、Ｊ．Ｖｉｓ．Ｅｘｐ．２０１７年；（１２１）：５５２６２参照）。ＤＳＣは、温度の関数として試料のモル熱容量を測定する。ポリペプチドの場合、ＤＳＣプロファイルは熱安定性に関する情報を提供し、ある程度、構造的コンフォメーションを評価するために使用され得る構造的な「指紋」を提供する。ＤＳＣは、熱転移温度（融解温度；Ｔm）及びポリペプチドの三次構造（エンタルピー；ΔＨ）を安定化する相互作用を破壊するのに必要なエネルギーを測定する示差走査熱量計を使用することを含む。製剤間並びに製造ロット間で比較が行われ、得られた値の違いは、熱安定性と構造的コンフォメーションにおける違いを示す。
【０３０３】
図１２は、１．０乃至１．７（１０-4×ｓ-1）の範囲のＫoff値を有するクローン１、７、８、９、１０、１２、１３、１４、及び１５からの抗Ｇ−ＣＳＦ抗体変異体の結合特性及び７１℃から８５℃までの範囲であるこれらの変異抗体の熱安定性を示す。図１２はまた、８２．１％から１００％までの範囲であるＶ−ＦＲのヒト化の百分率も示している。変異体７の抗Ｇ−ＣＳＦ抗体は、１Ｂ１１  ＩｇＧ１の１００％ヒト化バージョンであり、変異体１２の抗Ｇ−ＣＳＦ抗体は、１Ｂ１１親抗体のＣＤＲ支持領域内に保持された単一のマウス残基を有する。
【０３０４】
図１２は、２００ｐＭの親和性及び１．１×１０-4×ｓ-1のＫoff速度を有する変異体１２抗体、及び熱安定性である抗体（例えば、トラスツズマブ（ハーセプチン）のそれよりも高いＴm２及びＴm３を有する）を示す。ハーセプチンは、６８℃のＴm１及び８０℃のＴm２を有し、一方、変異体１２は、７１℃のＴm１及び８２℃のＴm２を有する。図１２からのデータはまた、変異体１２の抗Ｇ−ＣＳＦ抗体が産生された際に凝集体が形成されなかったことも示す。
【０３０５】
実施例１２：ヒト化１Ｂ１１抗体の中和アッセイ
中和アッセイは、１５個全ての１Ｂ１１変異体抗体のために実施された。結果は親１Ｂ１１抗体と比較された。ＢａＦ３−ｈＧＣＳＦＲ細胞は、１０ｎｇ／ｍＬのｈＧ−ＣＳＦ及び１０μｇ／ｍＬのヒト化１Ｂ１１抗体と共に１５分間インキュベートされた。細胞は、続いて、固定され、透過処理され、そして、製造業者の指示に従って、抗ホスホ−ＳＴＡＴ３抗体（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）を用いて染色された。試料は、その後、フローサイトメーターを介して収集され、ＳＴＡＴ３レベルがＦｌｏｗｊｏのソフトウェアを使用して分析された。
【０３０６】
図１３は、１Ｂ１１の全ての１５の変異体が、インビトロにおけるＧ−ＣＳＦ依存性のＳＴＡＴ３シグナル伝達を遮断することを示す。図１３中に示されるフロープロットにおいて、灰色の網掛けは処理無しの対照を示し；青い線は、ｈＧ−ＣＳＦの処理のみを伴う処理を示し；そして、赤い線は、ヒト化１Ｂ１１抗体を用いる処理を示す。
【０３０７】
実施例１３：変異体７及び１２のヒト化１Ｂ１１抗体によるＮＦＳ−６０細胞の成長の中和
ｈＧ−ＣＳＦに応答するＮＦＳ−６０細胞が使用されて、変異体７及び１２のヒト化１Ｂ１１抗体の中和能力が、対照として親１Ｂ１１抗体を使用して試験された。
【０３０８】
ＮＦＳ６０細胞は、０．１２５ｎｇ／ｍＬのｈＧ−ＣＳＦ及び異なる濃度（μｇ／ｍＬ）の変異体７及び１２のヒト化１Ｂ１１抗体又は親１Ｂ１１抗体を伴う培地中で増殖された。６日後、細胞は収集され、洗浄され、固定数の計数用ビーズと混合された。続いて、試料はフローサイトメーターで分析され、細胞数はＮＦＳ６０細胞に対する計数用ビーズの比率に基づいて決定された。
【０３０９】
図１４は、０．０１、０．３、０．１、０．３、１、及び３μｇ／ｍＬの１Ｂ１１抗体
を伴う培地の細胞数を示す棒グラフである。処理無しの細胞とｈＧ−ＣＳＦ処理のみの細胞をコントロールとして使用した。図１４は、親１Ｂ１１抗体並びに変異体７及び１２のヒト化１Ｂ１１抗体が全て用量依存的にＮＦＳ６０細胞のＧ−ＣＳＦ依存性増殖を中和することを示している。
【０３１０】
実施例１４：変異体７及び１２のヒト化１Ｂ１１抗体の中和アッセイ
中和アッセイが、変異体７及び１２のヒト化１Ｂ１１抗体のために実施された。結果は、親の１Ｂ１１抗体と比較された。
【０３１１】
実験の最初のセット（図１５におけるフロープロットの最初の３つの列に示される）では、１０ｎｇ／ｍＬのｈＧ−ＣＳＦが、種々の濃度（μｇ／ｍＬ）の親又はヒト化１Ｂ１１抗体（即ち、変異体７又は１２）で３０分間前処理された。ｈＧ−ＣＳＦとヒト化／親１Ｂ１１抗体の混合物は、ＢａＦ３−ｈＧＣＳＦＲ細胞に添加された。混合物は、１５分間インキュベートされた。続いて、細胞は、固定され、透過処理され、そして、製造業者の指示に従って抗ホスホ−ＳＴＡＴ３抗体（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）で染色された。試料は、その後、フローサイトメーターを介して収集され、ＳＴＡＴ３レベルがＦｌｏｗｊｏソフトウェアを使用して分析された。
【０３１２】
実験の２番目のセット（図１５におけるフロープロットの最後の３つの列に示される）では、ＢａＦ３−ｈＧＣＳＦＲ細胞が、１０ｎｇ／ｍＬのｈＧ−ＣＳＦ及び種々の濃度の親又はヒト化１Ｂ１１抗体で１５分間インキュベートされた。細胞は、続いて、固定され、透過処理され、そして、製造業者の指示に従って抗ホスホ−ＳＴＡＴ３抗体（Ｌｉｆｅ
Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）で染色された。試料は、その後、フローサイトメーターを介して収集され、ＳＴＡＴ３レベルがＦｌｏｗｊｏソフトウェアを使用して分析された。
【０３１３】
図１５のフロープロットにおいて、灰色の網掛けは処理無しの対照を示し；赤い線は、ｈＧ−ＣＳＦの処理のみを伴う処理を示し；そして、青い線は、ヒト化１Ｂ１１抗体変異体又は親１Ｂ１１抗体を用いる処理を示す。
【０３１４】
実施例１５：クローン１２のヒト化１Ｂ１１抗体の中和アッセイ
更なる中和アッセイが、変異体１２のヒト化１Ｂ１１抗体のために実施された。このアッセイでは、２０ｍｇ／ｋｇの変異体ト１２のヒト化１Ｂ１１抗体の単回投与が、雌性の８週齢のＣ５７Ｂｌ／６マウスに腹腔内注射された（群当たりｎ＝３、平均＋／−ＳＥＭ）。臨床グレードの組換えヒトＧ−ＣＳＦ（Ｆｉｌａｇａｓｔｒｉｍ）が、変異体１２のヒト化１Ｂ１１抗体の注射の１６時間後に、同じマウスに皮下注射された。ベースライン対照マウスは、リン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）を用い、同じ時点及び投与経路で注射された。中和活性を測定するために、マウスからの血液が、Ｇ−ＣＳＦ注射の１時間後にサンプリングされ、氷上でＣＤ１１ｂ及びＬｙ６Ｇ（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）に対する抗体で染色された。続いて、細胞は、洗浄され、固定され、透過処理され、そして、製造業者の指示に従って、抗ホスホ−ＳＴＡＴ３抗体（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）で染色された。洗浄後、試料は、計数用ビーズと混合され、循環好中球（ＣＤ１１ｂ＋Ｌｙ６Ｇ＋）の頻度の阻害及び好中球におけるｐＳＴＡＴ３シグナル伝達活性の遮断のためにフローサイトメトリーにより分析された。統計的有意性は、スチューデントのｔ検定によって評価された（*ｐ＜０．０５、**ｐ＜０．０１）。結果は、それぞれ図１６Ａ及び１６Ｂに示される。
【０３１５】
図１６Ａ及び１６Ｂに示されるように、変異体１２のヒト化１Ｂ１１抗体は、Ｇ−ＣＳＦ誘発好中球増加を減少させ、好中球ｐＳＴＡＴ３シグナル伝達を遮断する。
【０３１６】
実施例１６：ＳＣＩＤマウス中に移植されたヒト皮膚における事前形成されたヒト乳癌腫
瘍の治療
ここに記載される抗Ｇ−ＣＳＦ抗体の効果は、ＳＣＩＤマウス中に移植されたヒト皮膚において成長した事前形成されたヒト乳癌腫瘍におけるそれらの抗癌効果に関して評価され得る。
【０３１７】
簡単に説明すると、ＭＣＦ−７細胞（０．１ｍＬのＰＢＳ中の８×１０6個の細胞）は、移植片が炎症、収縮又は拒絶の徴候を示さなかった際に、ＳＣＩＤマウス中に移植されたヒト全層皮膚中に皮内移植される。マウスは、明確な触知可能な腫瘍（殆どの場合、直径３乃至６ｍｍ）が現れるまで、治療せずに放置される。明確な腫瘍を有するマウスは、治療研究のために群に分けられる。抗Ｇ−ＣＳＦ抗体とアイソタイプが一致した対照ＩｇＧは、マウス血清アルブミンを含む滅菌ＰＢＳで希釈される（最終濃度０．０５％）。抗体療法では、１乃至２０ｍｇ／ｋｇの抗Ｇ−ＣＳＦ抗体又は対照ＩｇＧが、マウスの尾静脈を介して静脈内（ｉ．ｖ．）投与される。投与は２乃至３日毎に行われる。
【０３１８】
治療中、マウスは腫瘍の大きさと罹患率について毎日監視される。マウスは、電子天びん（ＯＨＡＵＳ（登録商標）Ｍｏｄｅｌ  ＧＴ２１０）を使用して週に２回体重を測定される。腫瘍サイズは、ＯＰＴＯＤＥＭＯ（登録商標）ソフトウェア（Ｆｏｗｌｅｒ  Ｃｏ．）を使用するコンピューターに接続された電子キャリパー（ＰＲＯ−ＭＡＸ  ６インチキャリパー、ＦｏｗｌｅｒＣｏ．、ニュートン、マサチューセッツ州）を使用して、週３回測定される。測定された腫瘍の直径は、以下の式を使用して腫瘍体積に変換される：Ｖ＝長さ×幅×高さ×π／６。マウスの異なる群の比較のためのデータの統計分析は、スチューデントのｔ検定を使用して実施される。
【０３１９】
実施例１７：卵巣癌のマウスモデル
卵巣癌を治療するための抗Ｇ−ＣＳＦ抗体又はその抗原結合断片の能力を決定するために、卵巣癌細胞株がＳＣＩＤ又はヌードマウスにおいて使用され得る。
【０３２０】
簡単に説明すると、卵巣癌細胞は、卵巣腫瘍を生成するために、ＳＣＩＤ又はヌードマウスに移植される。確立された腫瘍を有するマウスの群は、抗Ｇ−ＣＳＦ抗体又は対照ＩｇＧの漸増用量（１．８ｍｇ／ｋｇ体重から開始）の静脈内（ｉ．ｖ．）投与により治療される。治療は週当たり２又は３回行われる。ＶＥＧＦ阻害剤及び／又は他の抗癌剤は、別個の試験群で使用され得る。マウスは監視され、腫瘍の成長は週当たり２又は３回測定される。
【０３２１】
実施例１８：結腸直腸癌のマウスモデル
結腸直腸癌を治療するための抗Ｇ−ＣＳＦ抗体又はその抗原結合断片の能力を決定するために、結腸直腸癌細胞株がＳＣＩＤ、ヌード又は免疫応答性マウスにおいて使用され得る。
【０３２２】
簡単に説明すると、結腸直腸癌細胞は、結腸直腸腫瘍を生成するために、ＳＣＩＤ、ヌード又は免疫応答性マウスに移植される。確立された腫瘍を有するマウスの群は、抗Ｇ−ＣＳＦ抗体又は対照ＩｇＧの漸増用量（１．８ｍｇ／ｋｇ体重から開始）の静脈内（ｉ．ｖ．）投与により治療される。治療は週当たり２又は３回行われる。ＶＥＧＦ阻害剤及び／又は他の抗癌剤は、別個の試験群において使用され得る。マウスは監視され、腫瘍の成長が週当たり２又は３回測定される。腫瘍は、ＰＥＴ及び超音波を含む標準的な画像検査により画像化され得る。治療された腫瘍は、免疫組織化学により細胞内シグナル伝達経路又は血管新生を評価するために、外植され得る。
【０３２３】
実施例１９：結腸直腸癌のための併用療法の臨床試験
この実施例は、結腸直腸癌を有する患者における抗Ｇ−ＣＳＦ抗体の安全性と有効性の
予備評価を提供するために設計された、無作為、盲検、偽薬対照、多施設の、第２相試験を記載する。約１００乃至約８００人の患者が登録され、約５０乃至約４００人の患者が治療群に割り当てられ、約５０乃至約４００人の患者が偽薬群に割り当てられる。治験は、６乃至１０サイクルの間、１週間、２週間又は３週間毎に、約０．１乃至約２０ｍｇ／ｋｇの抗Ｇ−ＣＳＦ抗体又は偽薬の静脈内反復用量の投与からなる。ＶＥＧＦ阻害剤及び／又は他の抗癌剤は、別個の試験群において使用され得る。研究の時間枠は、初期の研究の終わりに示されるような、応答者のための継続的な治療を伴って、約６ヶ月乃至約５年と推定される。追加の結果測定は以下の通りである：
【０３２４】
主要な結果測定：全体的な奏効率。この研究の１つの目標は、抗Ｇ−ＣＳＦ抗体を用いる治療後、無増悪生存率が３５％増加することを提示することである。
【０３２５】
評価され得る二次的な結果測定は、全体的な奏効率、応答の持続時間、全体的な生存、重篤及び非重篤な有害事象を含む。例えば、治療は疾患（即ち、鬱血）の進行を予防し得るか、又は結果として改善を生じ得る。代わりに、又はそれに加えて、他の目標が以下の１つ以上に関して測定され得る：腫瘍量の減少、血管の減少、副作用の減少、有害反応の減少、及び／又は患者のコンプライアンスの増加。
【０３２６】
実施例２０：卵巣癌のための併用療法の臨床試験
この実施例は、卵巣癌を有する患者における抗Ｇ−ＣＳＦ抗体とＤｏｘｉｌ（登録商標）の併用の安全性と有効性の予備評価を提供するために設計された、無作為、盲検、偽薬対照、多施設の、第２相試験を記載する。約１００乃至約８００人の患者が登録され、約５０乃至約４００人の患者が治療群に割り当てられ、約５０乃至約４００人の患者が偽薬群に割り当てられる。治験は、４週間毎に１回、約５乃至約５０ｍｇ／ｋｇで投与されるＤｏｘｉｌ（登録商標）と併用される、１、２又は４週間毎の約０．１乃至約２０ｍｇ／ｋｇの抗Ｇ−ＣＳＦ抗体又は偽薬の静脈内反復用量の投与からなる。研究の時間枠は、初期の研究の終わりに示されるような、応答者のための継続的な治療を伴って、約６ヶ月乃至約５年と推定される。追加の結果測定は以下の通りである：
【０３２７】
主要な結果測定：無増悪生存率。この研究の１つの目標は、Ｄｏｘｉｌ（登録商標）と偽薬の治療群における約３乃至６ヶ月から、Ｄｏｘｉｌ（登録商標）と抗Ｇ−ＣＳＦ抗体の治療群における約４乃至１２ヶ月（又はそれ以上）までの無増悪生存率における増加を提示することである。
【０３２８】
評価され得る二次的な結果測定は、応答の持続時間、腫瘍進行への時間、全体的な生存、重篤及び非重篤な有害事象を含む。例えば、治療は疾患（即ち、鬱血）の進行を予防し得るか、又は結果として改善を生じ得る。代わりに、又はそれに加えて、他の目標が以下の１つ以上に関して測定され得る：腫瘍量の減少、血管の減少、副作用の減少、有害反応の減少、及び／又は患者のコンプライアンスの増加。
【０３２９】
実施例２１：卵巣癌に対する白金ベースの併用療法の臨床試験
この実施例は、卵巣癌を有する患者における抗Ｇ−ＣＳＦ抗体と白金ベースの化学療法の併用の安全性と有効性の予備評価を提供するために設計された、無作為、盲検、偽薬対照、多施設の、第２相試験を記載する。約１００乃至約８００人の患者が登録され、約５０乃至約４００人の患者が治療群に割り当てられ、約５０乃至約４００人の患者が偽薬群に割り当てられる。
治験は、過程が研究全体を通して繰り返される、静脈内注入による白金ベースの化学療法レジメン（例えば、カルボプラチン及びパクリタキセル）と併用される、１、２又は３週間毎の約０．１乃至約２０ｍｇ／ｋｇの抗Ｇ−ＣＳＦ抗体又は偽薬の静脈内反復用量の投与からなる。研究の時間枠は、初期の研究の終わりに示されるような、応答者のための継
続的な治療を伴って、約６ヶ月乃至約５年と推定される。追加の結果測定は以下の通りである：
【０３３０】
主要な結果測定：無増悪生存率。この研究の１つの目標は、トポテカンと偽薬の治療群における約１２乃至１８ヶ月から、白金ベースの化学療法と抗Ｇ−ＣＳＦ抗体の治療群における約１２乃至２４ヶ月（又はそれ以上）までの無増悪生存率における増加を提示することである。
【０３３１】
評価され得る二次的な結果測定は、応答の持続時間、腫瘍進行への時間、全体的な生存、重篤及び非重篤な有害事象を含む。例えば、治療は疾患（即ち、鬱血）の進行を予防し得るか、又は結果として改善を生じ得る。代わりに、又はそれに加えて、他の目標が以下の１つ以上に関して測定され得る：腫瘍量の減少、血管の減少、副作用の減少、有害反応の減少、及び／又は患者のコンプライアンスの増加。
【０３３２】
実施例２２：ＳＣＩＤマウスのマウスにおけるヒト乳癌腫瘍の治療
ここに記載される抗Ｇ−ＣＳＦ抗体の効果は、ＳＣＩＤマウスに移植されたヒト皮膚で成長した事前に形成されたヒト乳癌腫瘍におけるそれらの抗癌効果に関して評価され得る。
【０３３３】
簡単に説明すると、ＭＤＡ−ＭＢ−２３１細胞（０．１ｍＬ  ＰＢＳ中の１−２×１０6個の細胞）が、ＳＣＩＤマウスの脇腹に皮下移植される。マウスは、明確な触知可能な腫瘍（殆どの場合、直径３乃至６ｍｍ）が現れるまで、治療せずに放置される。明確な腫瘍を有するマウスは、治療研究のために群に分けられる。抗Ｇ−ＣＳＦ抗体とアイソタイプが一致した対照ＩｇＧは、マウス血清アルブミンを含む滅菌ＰＢＳで希釈される（最終濃度０．０５％）。抗体療法では、１乃至２０ｍｇ／ｋｇの抗Ｇ−ＣＳＦ抗体又は対照ＩｇＧが、マウスの尾静脈を介して静脈内（ｉ．ｖ．）又は腹腔内（ｉ．ｐ．）投与される。投与は２乃至３日毎に行われる。
【０３３４】
治療中、マウスは腫瘍の大きさと罹患率について毎日監視される。マウスは、電子天びん（ＯＨＡＵＳ（登録商標）Ｍｏｄｅｌ  ＧＴ２１０）を使用して週に２回体重を測定される。腫瘍サイズは、ＯｐｔｏＤｅｍｏ（登録商標）ソフトウェア（Ｆｏｗｌｅｒ  Ｃｏ．）を使用するコンピューターに接続された電子キャリパー（ＰＲＯ−ＭＡＸ  ６インチキャリパー、ＦｏｗｌｅｒＣｏ．、ニュートン、マサチューセッツ州）を使用して、週３回測定される。測定された腫瘍の直径は、以下の式を使用して腫瘍体積に変換される：Ｖ＝長さ×幅×高さ×π／６。マウスの異なる群の比較のためのデータの統計分析は、スチューデントのｔ検定を使用して実施される。
【０３３５】
実施例２３：皮膚癌の併用療法
以下の研究は、転移性黒色腫患者における偽薬との併用におけるイピルマムブ（Ｉｐｉｌｕｍａｍｂ）と比較した、イピルマムブ（Ｉｐｉｌｕｍａｍｂ）との併用における抗Ｇ−ＣＳＦ抗体の臨床試験である。
【０３３６】
主要な結果測定は以下を含むが、これらに限定されない：
【０３３７】
第１相：安全性と忍容性の測定としての有害事象を伴う患者数。ベースラインと結果は、中止又は死亡するまで３週間毎に測定される。推定される時間枠は、登録された最初の患者から中止又は死亡した最後の患者までの２９ヶ月である。
【０３３８】
第２相：全生的な存率は、５０番目の死亡が発生するまで、４週間毎に測定され、その後、残りの患者について３か月毎に追跡調査が実施される。
【０３３９】
二次的な結果測定は以下を含むが、これらに限定されない：
【０３４０】
腫瘍応答により評価される予備的有効性。腫瘍はベースラインで評価され、その後、各患者が１１ヶ月の間の研究にある推定される時間枠を伴って、９週間（３サイクル）ごとに評価される。
【０３４１】
５０番目の死亡が発生するまで、４週間毎に測定される無増悪生存の評価、その後３か月毎に追跡調査が実施される。
【０３４２】
群Ｉは、３００ｍｇのイピリムマブとの組み合わせにおける抗Ｇ−ＣＳＦ抗体を１日２回投与される。
【０３４３】
群ＩＩは、３００ｍｇのイピリムマブとの組み合わにおけるプラセボを１日２回投与される。
【０３４４】
治療される対象者は１８歳以上である。
【０３４５】
試験対象患者基準
１８歳以上の切除不能又は転移性の黒色腫を有する男性又は女性の対象者。
【０３４６】
＞１２週間の平均余命。
【０３４７】
プロトコルで規定されるような、臨床範囲及び医学的基準を満たす。
【０３４８】
対象者は、切除不能又は転移性の黒色腫のための体系的治療の１を超える事前のレジメンを受けていた可能性がある。
【０３４９】
研究の第２相の期間のみ、対象者は、利用可能で及び前の６か月間で収集された腫瘍組織の履歴又は前治療の研究生検におけるアクセス可能な疾患を有する必要がある。
【０３５０】
除外基準
妊娠中又は授乳中の女性。
【０３５１】
別の治験薬を伴う現行の治験への参加又はスクリーニング前２１日以内に何らかの抗癌薬物治療を受けた対象者（マイトマイシンＣ又はニトロソ尿素の６週間）。
【０３５２】
モノアミン酸化酵素阻害薬（ＭＡＯＩ）を受けている対象者；１種以上のセロトニン作動薬を受けた後にセロトニン症候群にかかったことがある対象者。
【０３５３】
以前に免疫チェックポイント阻害薬（例えば、抗ＣＴＬＡ−４、抗ＰＤ−１、抗ＰＤ−Ｌ１等）を受けた対象者、グレード３又は４の肝毒性、インフリキシマブを必要とする免疫大腸炎、置換術により制御されない内分泌毒性、何らかの他のグレード４の免疫有害事象（ＡＥ）又は眼毒性を有する対象者
【０３５４】
白斑又は甲状腺炎を除くプロトコル指定の活動性の自己免疫過程を有する対象者。
【０３５５】
対象者の安全性又はプロトコルの順守の安全性を危険にさらすような併発疾患を有する対象者。
【０３５６】
実施例２４：乳癌及びイピリムマブ
以下の研究は、体内の他の部位に拡がり、通常、治療で治癒又は制御できない（転移性）か又は手術により除去できない（切除不能）固形腫瘍或いはそれが始まった場所から近くの組織又はリンパ節又は体の他の部位に拡がったヒト上皮成長因子受容体２（ＨＥＲ２）陰性の乳癌を有する対象者の治療におけるイピリムマブと併用した場合の抗Ｇ−ＣＳＦ抗体の臨床試験である。
【０３５７】
治療すべき状態は、乳腺癌、ＨＥＲ２／Ｎｅｕ  Ｎｅｇａｔｉｖｅ、浸潤性乳癌、再発乳癌、充実性新生物、ステージＩＩＩＡ乳癌、ステージＩＩＩＢ乳癌、ステージＩＩＩＣ乳癌、及びステージＩＶ乳癌を含む。
【０３５８】
主要な結果測定は、以下を含むが、これらに限定されない：国立癌研究所の有害事象共通用語基準（ＣＴＣＡＥ）バージョン（ｖ）４．０に基づいた、イピリムマブとの併用にある抗Ｇ−ＣＳＦ抗体の有害事象の発生率は、ニボルマブの最終用量後の１００日までに評価された。
【０３５９】
安全性と忍容性は、各治療群における有害事象、重篤な有害事象、及び特定の検査所見の異常（最悪グレード）の発生率を介して分析される。毒性は、全ての用量の種類とグレードごとに集計され、ＣＴＣＡＥ  ｖ４．０に基づく頻度と百分率を使用して表示される。各用量レベルでの用量制限毒性の割合は、正確な９５％信頼区間で報告される。
【０３６０】
二次的な結果測定：以下を含むがこれらに限定されない：抗Ｇ−ＣＳＦ抗体後２週間までのベースラインでのパラフィン包埋腫瘍標本のＩＨＣ染色により測定される、腫瘍生検におけるＴｅｆｆ対Ｔｒｅｇの比率の変化。変化は連続変数として扱われ、記述統計で集約される。変化は試験プロット（例えば、棒プロット、ボックスプロット等）を使用してグラフで表示され、平均は９５％の信頼区間で推定される。対応のあるｔ検定又はノンパラメトリックなウィルコクソン（Ｗｉｌｃｏｘｏｎ）の符号付き順位検定が使用されて、データがベースラインからの変化の証拠を示しているかどうかが決定される。
【０３６１】
疾患制御率は、ＲＥＣＩＳＴ  ｖ１．１及びｉｒＲＣ（進行性乳癌を有する患者の拡大コホート）に基づいて全ての応答評価可能な患者の中で、ＣＲ、ＰＲ又は安定疾患（ＳＤ）を達成した患者の百分率として定義される。効果は５年間まで観察される。疾患制御率は、確認された応答を達成した患者数と、少なくとも６か月間の継続期間の間、安定した疾患を有する患者数との和を評価可能な患者の総数で割ることにより推定される。
【０３６２】
全体的な応答の継続期間（進行性乳癌を有する患者の拡大コホート）が評価される。時間測定基準は、再発性又は進行性疾患が客観的に記録されるか又は死亡の最初の日付まで、ＣＲ又はＰＲ（最初に記録された方）を満たし、５年間迄評価される。応答の継続期間は、認められる場合、Ｋａｐｌａｎ−Ｍｅｉｅｒの方法を使用して記述される。用量漸増部においてＲＰ２Ｄで治療される進行性乳癌患者は、幾らかでもあれば、これらの分析のための用量拡大コホートの患者と一緒にプールされる。
【０３６３】
安定した疾患の継続期間は、ＲＥＣＩＳＴ  ｖ１．１及びｉｒＲＣ（進行性乳癌患者の拡大コホート）に基づいている。時間測定基準は、再発性又は進行性疾患が客観的に記録されるか又は死亡の最初の日付まで、ＳＤを満たし、５年間迄評価される。安定した疾患の継続期間は、認められる場合、Ｋａｐｌａｎ−Ｍｅｉｅｒの方法を使用して記述される。用量漸増部においてＲＰ２Ｄで治療される進行性乳癌患者は、幾らかでもあれば、これらの分析のための用量拡大コホートの患者と一緒にプールされる。
【０３６４】
客観的奏効率は、完全応答（ＣＲ）又は部分応答（ＰＲ）の何れかの患者の総数を、５
年間までの間の対象集団（進行性乳癌を有する患者の拡大コホート）の総患者数で割ったものとして定義される。腫瘍評価は、ＲＥＣＩＳＴ  ｖ１．１及び免疫関連応答基準（ｉｒＲＣ）に基づいている。
【０３６５】
無増悪生存率（ＰＦＳ）は、生存し、疾患の進行がない患者の割合として定義される（進行性乳癌患者の拡大コホート）。治療開始から疾患の進行又は死亡の何れか早い方までの時間は、６ヶ月で評価される。正確な二項９５％信頼区間が提供される。ＰＦＳの分布、応答の継続時間、及び安定した疾患の継続時間は、認められる場合、Ｋａｐｌａｎ−Ｍｅｉｅｒの方法を使用して記述される。用量漸増部においてＲＰ２Ｄで治療される進行性乳癌患者は、幾らかでもあれば、これらの分析のための用量拡大コホートの患者と一緒にプールされる。
【０３６６】
他の結果測定は、以下を含むが、これらに限定さない：免疫介在性有害事象の遺伝的決定因子としてのＣＤ８６遺伝子多型；悪性組織における候補遺伝子の再発現の変化、循環ＤＮＡにおける遺伝子メチル化サイレンシング及び治療前及び治療後の悪性組織；変化は比率の変化（ｐｏｓｔ／ｐｒｅ）として推定され、データは対称性を誘導し、変動性を安定させるために、必要に応じて対数変換される；治療前及び治療後間の違いは、連続変数に適したペアｔ検定又はウィルコクソンの符号付きランク検定及び二項変数又はカテゴリー変数のためのマクネマー検定を使用して調査される；臨床応答者と非応答者にわたる免疫パラメーターの分布が評価され、ボックスプロットを使用してグラフで表示される（Ｊｏｎｃｋｈｅｅｒｅ−Ｔｅｒｐｓｔｒａトレンドテストを使用して評価された腫瘍応答によるこれらのパラメーターの変化）；治療前及び治療後の腫瘍生検における腫瘍特異的変異体ネオ抗原を認識するＴ細胞の頻度における変化；治療前及び治療後のフローサイトメトリーにより測定される末梢血及び腫瘍生検におけるＭＤＳＣの数の変化；腫瘍生検又は治療前及び治療後のＰＢＬにおける他の免疫関連バイオマーカーの変化（例えば、エフェクターＴ細胞の比率：調節性Ｔ細胞、炎症性Ｔ細胞シグネチャー、ＴＣＲレパートリー）。薬力学的結果（例、安全性、有効性、遺伝子メチル化状態の変化）；ＩＨＣで測定された腫瘍生検におけるチェックポイント阻害薬（ＰＤ−１／ＰＤ−Ｌ１）の併用療法後の発現；及び／又は全エクソーム配列決定により測定される腫瘍生検において患者のＴ細胞により認識される腫瘍特異的変異及び変異体ネオ抗原。
【０３６７】
実施例２５：卵巣癌、乳癌、膵臓癌及びイピリムマブ
以下の研究は、トリプルネガティブ乳癌（ＴＮＢＣ）、胃癌（ＧＣ）、膵臓腺癌（ＰＣ）、小細胞肺癌（ＳＣＬＣ）膀胱癌（ＢＣ）及び卵巣癌（ＯＣ）の６つの腫瘍タイプにおける単剤又はイピリムマブとの併用での抗Ｇ−ＣＳＦ抗体の安全性と有効性を調査する臨床試験である。
【０３６８】
主要な結果測定は、１７ヶ月までの間の客観的奏効率（ＯＲＲ）を含むが、これに限定されない。
【０３６９】
二次的な結果測定は、以下を含むが、これらに限定されない：薬物中止を導く治療関連の有害事象（ＡＥ）の数；無増悪生存率（ＰＦＳ）；及び治療の１２週までの間の全生存率（ＯＳ）。
【０３７０】
群１は、記録された疾患の進行、毒性に起因する中止、同意の撤回、又は試験が終了するまで、２週間毎に抗Ｇ−ＣＳＦ抗体溶液で静脈内治療される。
【０３７１】
群２は、抗Ｇ−ＣＳＦ抗体溶液で静脈内及びイピリムマブ１ｍｇ／ｋｇ溶液で３週間毎に４用量で治療され、続いて、記録された疾患の進行、毒性に起因する中止、同意の撤回、又は試験が終了するまで、２週間毎に抗Ｇ−ＣＳＦ抗体溶液で静脈内治療される。
【０３７２】
群３は、抗Ｇ−ＣＳＦ抗体溶液で静脈内及びイピリムマブ３ｍｇ／ｋｇ溶液で３週間毎に４用量で治療され、続いて、記録された疾患の進行、毒性に起因する中止、同意の撤回、又は試験が終了するまで、２週間毎に抗Ｇ−ＣＳＦ抗体溶液で静脈内治療される。
【０３７３】
群４は、抗Ｇ−ＣＳＦ抗体溶液で静脈内及びイピリムマブ１ｍｇ／ｋｇで３週間毎に４用量で治療され、続いて、記録された疾患の進行、毒性に起因する中止、同意の撤回、又は試験が終了するまで、２週間毎に抗Ｇ−ＣＳＦ抗体溶液で静脈内治療される。
【０３７４】
群５は、記録された疾患の進行、毒性に起因する中止、同意の撤回又は研究が終了するまで、６週間毎のイピリムマブ１ｍｇ／ｋｇと併用された３週間毎の抗Ｇ−ＣＳＦ抗体溶液で静脈内治療される。
【０３７５】
この研究に適格な患者は１８歳以上である。
【０３７６】
試験対象患者基準
以下の腫瘍タイプの組織学的に確認された局所進行又は転移性疾患を有する対象者：トリプルネガティブ乳癌、胃癌、膵臓癌、小細胞肺癌  膀胱癌、又は卵巣癌。
【０３７７】
対象者は測定可能な疾患を有する必要がある。
【０３７８】
０又は１のＥａｓｔｅｒｎ  Ｃｏｏｐｅｒａｔｉｖｅ  Ｏｎｃｏｌｏｇｙ  Ｇｒｏｕｐ（ＥＣＯＧ）である。
【０３７９】
除外基準
活動性の脳転移又は軟髄膜転移。
【０３８０】
活動性の、既知の又は疑われる自己免疫疾患を有する対象者。
【０３８１】
治療の１４日以内にコルチコステロイド（１日当たり＞１０ｍｇのプレドニゾン等価物）又は他の免疫抑制薬の何れかを用いる全身治療が必要な病気を有する対象者。
【０３８２】
実験的な抗腫瘍ワクチンを用いる事前の治療；イピリムマブを含む、抗ＰＤ−１、抗ＰＤ−Ｌ１、抗ＰＤ−Ｌ２、抗ＣＤ１３７、又は抗ＣＴＬＡ−４抗体のような、何れかのＴ細胞共刺激又はチェックポイント経路；又はＴ細胞を特異的に標的とする他の薬もまた禁止される。
【０３８３】
実施例２６：脳癌（膠芽腫又は神経膠肉腫）及びイピリムマブ
以下の研究は、新たに診断された膠芽腫又は神経膠肉腫を有する患者の治療において、テモゾロミドと併用されるイピリムマブ及び／又は抗Ｇ−ＣＳＦ抗体を調査する臨床試験である。
【０３８４】
この第Ｉ相試験は、新たに診断された膠芽腫又は神経膠肉腫を有する患者の治療において、イピリムマブ、抗Ｇ−ＣＳＦ抗体、又はその両方とテモゾロミドの併用の安全性及び最良の用量を研究する。イピリムマブ及び抗Ｇ−ＣＳＦ抗体のようなモノクローナル抗体は、特定の細胞を標的とすることにより、異なる方法において腫瘍の成長をブロックし得る。テモゾロミドのような化学療法で使用される薬剤は、細胞を殺すこと、分裂を停止すること、又は拡散を停止することの何れかで、腫瘍細胞の成長を停止するための異なる方法で機能する。
【０３８５】
主要な結果測定は、以下を含むが、これらに限定されない：テモゾロミドと共に投与される際のイピリムマブと抗Ｇ−ＣＳＦ抗体の併用のための免疫関連ＤＬＴ；抗Ｇ−ＣＳＦ抗体を用いる単剤治療のための免疫関連ＤＬＴ；８週までの間のイピリムマブを用いる単剤治療のための免疫関連用量制限毒性（ＤＬＴ）。
【０３８６】
二次的な結果測定は、以下を含むが、これらに限定されない：標準的な免疫組織化学を使用する腫瘍試料内の免疫細胞のバイオマーカー分析；国立癌研究所の有害事象共通用語基準バージョン４．０を使用して等級付けされた有害事象の発生率；イピリムマブ、ニボルマブを用いる単剤治療及び新たに診断された膠芽腫の維持相の間にテモゾロミドと共に投与される併用のための副作用プロファイル；及び、免疫療法治療の開始後２年間まで治療後に生存している患者の数。
【０３８７】
群Ｉ（テモゾロミド及びイピリムマブ）
【０３８８】
化学放射線療法の完了後５週間以内に、患者は１乃至５日目にテモゾロミドのＰＯを受ける。治療は、疾患の進行及び許容できない毒性の非存在において、６コースまで２８日毎に繰り返される。患者はまた、４週間毎に１回、９０分間に亘るイピリムマブのＩＶを４つのコースで受け、その後、コース４の３ヶ月後に、許容できない毒性の非存在において、３ヶ月毎に１回を４つのコースで開始する。
【０３８９】
群ＩＩ（テモゾロミド及び抗Ｇ−ＣＳＦ抗体）
【０３９０】
化学放射線療法の完了後５週間以内に、患者は１乃至５日目にテモゾロミドのＰＯを受ける。治療は、疾患の進行及び許容できない毒性の非存在において、６つのコースまで２８日毎に繰り返される。患者はまた、１６週間の間２週間毎に１回、その後、許容できない毒性の非存在において、４８週間の間２週間毎に１回、６０分間に亘る抗Ｇ−ＣＳＦ抗体のＩＶも受ける。
【０３９１】
群ＩＩＩ（テモゾロミド、抗Ｇ−ＣＳＦ抗体、イピリムマブ）
【０３９２】
化学放射線療法の完了後５週間以内に、患者は１乃至５日目にテモゾロミドのＰＯを受ける。治療は、疾患の進行及び許容できない毒性の非存在において、６コースまで２８日毎に繰り返される。患者はまた、４週間毎に１回９０分間に亘るイピリムマブのＩＶを４つのコースで、そして、許容できない毒性の非存在において、６４週間の間２週間毎に１回６０分間に亘る抗Ｇ−ＣＳＦ抗体のＩＶも受ける。
【０３９３】
主要な目的は、イピリムマブ、抗Ｇ−ＣＳＦ抗体を用いる単剤治療、及び新たに診断された膠芽腫の維持治療の間にテモゾロミドと共に投与される併用の最大安全用量を決定することを含む。
【０３９４】
二次的な目的は以下を含む
【０３９５】
イピリムマブ、抗Ｇ−ＣＳＦ抗体を用いる単剤治療、及び新たに診断された膠芽腫の維持相の間にテモゾロミドと共に投与される併用のための副作用プロファイルを収集及び記録すること；
【０３９６】
腫瘍試料内の免疫細胞のパイロット研究を実施すること、例えば、診断腫瘍ブロックから腫瘍組織を調べることにより、腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）の表現型を決定すること；及び
【０３９７】
イピリムマブ、抗Ｇ−ＣＳＦ抗体を用いる単剤治療、及び新たに診断された膠芽腫の維持相の間にテモゾロミドと共に投与される併用の開始後１及び２年間で生存する患者の数を報告すること。
【０３９８】
試験対象患者基準
病理学報告による登録前の膠芽腫又は神経膠肉腫の病理組織学的に証明された診断。
【０３９９】
腫瘍は、孤立性であり、小脳テント上のコンパートメントに限定され、そして、肉眼的な全切除又はほぼ肉眼的な全切除を受けている必要がある；このことは、患者がコルチコステロイドを必要としないか又は偽進行を発症しない可能性を増加する。
【０４００】
ホルマリン固定、パラフィン包埋（ＦＦＰＥ）腫瘍組織ブロックは、登録後のレトロスペクティブな中央病理学レビューのために送られるのに利用可能である必要がある。
【０４０１】
患者は化学放射線療法の完了の２８日以内に登録される必要がある。
【０４０２】
登録前の７日以内の病歴／身体検査。
【０４０３】
患者は、放射線照射完了の２８日以内に磁気共鳴画像法（ＭＲＩ）による評価を受けている必要があり、また、登録前の７日以内である必要がある；ＭＲＩは腫瘍の進行を示してはいけない。
【０４０４】
登録前の７日以内のカルノフスキーの一般状態は、≧７０である。
【０４０５】
絶対好中球数は、≧１，５００細胞／ｍｍ3である。
【０４０６】
血小板数は、≧１００，０００細胞／ｍｍ3である。
【０４０７】
ヘモグロビン（Ｈｇｂ）は、＞９ｇ／ｄＬ（輸血で達成可能）である。
【０４０８】
血中尿素窒素（ＢＵＮ）は、≦３０ｍｇ／ｄｌである。
【０４０９】
血清クレアチニンは、≦１．７ｍｇ／ｄｌである。
【０４１０】
総ビリルビン（この研究には適格であるものの総ビリルビン適格基準から除外されるギルバート症候群を有する患者を除く）は、≦２．０ｍｇ／ｄｌである。
【０４１１】
アラニンアミノトランスフェラーゼ（ＡＬＴ）及びアスパラギン酸アミノトランスフェラーゼ（ＡＳＴ）は、≦２．５×正常上限（ＵＬＮ）である。
【０４１２】
患者は、以下のような、放射線癌療法グループ（ＲＴＯＧ）／ネットワーク放射線療法グループ（ＮＲＧ）の腫瘍学研究によって確立された標準的治療の範囲内で化学放射線療法（全てのコホート）を完了している必要がある：放射線療法；モダリティ：３次元（３Ｄ）又は強度変調放射線療法（ＩＭＲＴ）、又は陽子線療法が許可される；開始までの時間：放射線療法は手術後３５日以内又は３５日目に開始される必要がある；照射野（ｔａｒｇｅｔ  ｖｏｌｕｍｅ）：照射野の定義は、術後造影ＭＲＩに基づく；必要に応じて、術前の画像化は、相関及び改善された同定のために使用されるべきである；線量ガイドライン：初期照射野は、２３分割で４６グレイ（Ｇｙ）に処理される；４６Ｇｙの後、それぞれ２Ｇｙの７つの追加のフラクション（１４Ｇｙブースト線量）を伴って、コーンダウン又はブーストボリュームは合計６０Ｇｙに処理される；併用放射線療法中のテモゾロミ
ド；又は、テモゾロミドは、最大４９日間、毎日７５ｍｇ／ｍ2の経口用量で、放射線治療の１日目から放射線の最終日まで、継続的に投与されている必要がある。
【０４１３】
患者は、１日当たり３０ｍｇのコルチゾンとして規定される生理学的補充投与よりも多いか又は等量のコルチコステロイドの投与を受けてはいけない。
【０４１４】
患者は、研究に参加する前に、研究固有のインフォームドコンセントを提供されなければならない。
【０４１５】
除外基準
進行性疾患の決定的な臨床的又は放射線学的証拠。
【０４１６】
グリアデルウェファー（Ｇｌｉａｄｅｌ  ｗａｆｅｒ）又は局所近接照射療法の事前配置。
【０４１７】
ワクチン療法、樹状細胞ワクチン又は腔内若しくはＣＥＤ（ｃｏｎｖｅｃｔｉｏｎａｌ
ｅｎｈａｎｃｅｄ  ｄｅｌｉｖｅｒｙ）療法のような免疫療法の使用。
【０４１８】
最低３年間無病である場合を除き、以前の侵襲性悪性腫瘍（非黒色腫性皮膚癌を除く）。
【０４１９】
登録前の最後の６ヶ月以内の不安定狭心症。
【０４２０】
登録前の最後の６ヶ月以内の貫壁性心筋梗塞。
【０４２１】
登録前の７日以内に実施された心電図（ＥＫＧ）の分析を使用した、≧２ｍｍのＳＴ上昇の所見による最近の心筋梗塞又は虚血の証拠。
【０４２２】
登録前の１２ヶ月以内の入院を必要とする、ニューヨーク心臓協会のレードＩＩ以上の鬱血性心不全。
【０４２３】
登録前の６ヶ月以内の脳卒中、脳血管障害（ＣＶＡ）又は一過性脳虚血発作の病歴。
【０４２４】
重篤且つ不適切に制御された不整脈。
【０４２５】
重大な血管疾患（例えば、大動脈瘤、大動脈解離の病歴）又は臨床的に重大な末梢血管疾患。
【０４２６】
出血性素因又は血液凝固障害の証拠。
【０４２７】
重傷又は非治癒性の創傷、潰瘍、又は骨折又は腹瘻の病歴、胃腸穿孔、腹腔内膿瘍の大手術、直視下生検、又は登録前の２８日以内の重大な外傷、但し、腫瘍切除のための開頭術を除く。
【０４２８】
登録時における抗生物質の静脈内投与を必要とする急性細菌又は真菌感染。
【０４２９】
慢性閉塞性肺疾患の増悪又は入院が必要な他の呼吸器疾患、又は登録時に試験治療を妨げるもの。
【０４３０】
臨床的黄疸及び／又は凝固障害を結果として生じる肝不全；しかし、追加の肝機能検査
及び凝固パラメーターのための臨床検査は、このプロトコルへの参加のためには必要ないことに留意する。
【０４３１】
現在の疾病管理予防センター（ＣＤＣ）の定義に基づく後天性免疫不全症候群（ＡＩＤＳ）；しかし、このプロトコルへの参加のために、ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）テストは必要でないことに留意する。
【０４３２】
治療する医師の意見において、患者を免疫毒性の高いリスクにさらし得る、ループスや強皮症のような活動性の結合組織障害。
【０４３３】
活動性の自己免疫疾患又は再発し得る自己免疫疾患の病歴を有する患者であって、重要な臓器機能に影響を及ぼし得るか又は全身性コルチコステロイドを含む免疫抑制治療を必要とする患者は除外すべきである；これらは、免疫関連神経疾患、多発性硬化症、自己免疫（脱髄性）神経障害、ギランバレー症候群又は慢性炎症性脱髄性多発神経障害（ＣＩＤＰ）、重症筋無力症；全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）、結合組織病、強皮症、炎症性腸疾患（ＩＢＤ）、クローン病、潰瘍性大腸炎、肝炎のような全身性自己免疫疾患の病歴を有する患者を含むが、これらに限定されず；そして、中毒性表皮壊死症（ＴＥＮ）、スティーブンス・ジョンソン症候群、又はリン脂質症候群の病歴を有する患者は除外されるべきである。
【０４３４】
注目すべきは、白斑、生理学的コルチコステロイドを含む補充ホルモンで管理された甲状腺炎を含む内分泌欠損症の患者は適格である；関節リウマチ及び他の関節症、シェーグレン症候群及び局所薬物療法で制御されている乾癬を有する患者、及び抗核抗体（ＡＮＡ）、抗甲状腺抗体のような陽性の血清学を有する患者は、標的臓器の関与の存在及び全身治療のための潜在的必要性について評価すべきであるが、それ以外は適格であるべきである。
【０４３５】
治験責任医師の意見において、プロトコル療法の投与又は完了を妨げる何れかの他の主要な医学的疾患又は精神障害。
【０４３６】
妊娠又は授乳中の女性；出産の可能性がある女性は、登録前の７日以内に血清妊娠検査が陰性である必要がある。
【０４３７】
何れかのモノクローナル抗体に対する重度の過敏症反応の病歴。
【０４３８】
実施例２７：結腸癌及びイピリムマブ
この研究の目的は、抗Ｇ−ＣＳＦ抗体単独、イピリムマブとの併用にある抗Ｇ−ＣＳＦ抗体、又はイピリムマブ（Ｉｐｉ）とコビメチニブとの併用にある抗Ｇ−ＣＳＦ抗体が、再発及び転移性の結腸癌を有する患者において有意な客観的奏効率を示すかどうかを調べることである。
【０４３９】
主要な結果測定は、以下を含むが、これに限定されない：治験責任医師により決定された全てのＭＳＩ−Ｈｉｇｈの対象者における客観的奏効率（ＯＲＲ）。主要エンドポイントの最終分析は、最後に登録された対象者の試験治療の最初の投与後の少なくとも６ヶ月に行われる（約３４ヶ月まで）。腫瘍画像評価は、最初の２４週間は最初の投与日（＋／−１週）から６週間（週）毎に、その後は１２週（＋／−１週）毎に疾患の進行又は治療が中止されるまで生じる（何れか遅く生じた方）。腫瘍画像評価は、最初の２４週間は最初の投与日（＋／−１週）から６週間毎に、その後は１２週（＋／−１週）毎に疾患の進行又は治療が中止されるまで生じる（何れか遅く生じた方）。
【０４４０】
二次的な結果測定は以下を含むが、これに限定されない：ＩＲＲＣの決定に基づく全てのＭＳＩ−Ｈ対象者におけるＯＲＲ及び腫瘍画像評価は、最初の２４週間は最初の投与日（＋／−１週）から６週間毎に、その後は１２週（＋／−１週）毎に疾患の進行又は治療が中止されるまで生じる（何れか遅く生じた方）。
【０４４１】
実験：抗Ｇ−ＣＳＦ抗体単剤療法：抗Ｇ−ＣＳＦ抗体を、疾患の進行まで２週間毎に３ｍｇ／ｋｇの用量でＩＶ注入として投与する。
【０４４２】
実験：抗Ｇ−ＣＳＦ抗体＋イピリムマブ（Ｉｐｉ）
【０４４３】
抗Ｇ−ＣＳＦ抗体３ｍｇ／Ｋｇ  ＩＶとＩｐｉ  １ｍｇ／Ｋｇ  ＩＶを３週間（週）毎４用量、続いて、進行まで抗Ｇ−ＣＳＦ抗体３ｍｇ／Ｋｇ  ＩＶを２週間毎
【０４４４】
用量漸増相：（完了）
【０４４５】
用量レベル（ＤＬ）１：抗Ｇ−ＣＳＦ抗体０．３ｍｇ／ＫｇとＩｐｉ  １ｍｇ／Ｋｇ  ＩＶを３週間毎４用量、続いて、進行まで抗Ｇ−ＣＳＦ抗体３ｍｇ／Ｋｇ  ＩＶを２週間毎
【０４４６】
ＤＬ  １：抗Ｇ−ＣＳＦ抗体１ｍｇ／Ｋｇ  ＩＶとＩｐｉ  １ｍｇ／Ｋｇ  ＩＶを３週間毎４用量、続いて、進行まで抗Ｇ−ＣＳＦ抗体３ｍｇ／Ｋｇ  ＩＶを２週間毎
【０４４７】
ＤＬ  ２ａ：抗Ｇ−ＣＳＦ抗体１ｍｇ／Ｋｇ  ＩＶとＩｐｉ  ３ｍｇ／Ｋｇ  ＩＶを３週間毎４用量、続いて、進行まで抗Ｇ−ＣＳＦ抗体３ｍｇ／Ｋｇ  ＩＶを２週間毎
【０４４８】
ＤＬ  ２ｂ：抗Ｇ−ＣＳＦ抗体３ｍｇ／Ｋｇ  ＩＶとＩｐｉ  １ｍｇ／Ｋｇ  ＩＶを３週間毎４用量、続いて、進行まで抗Ｇ−ＣＳＦ抗体３ｍｇ／Ｋｇ  ＩＶを２週間毎
【０４４９】
コホートＣ３：２週間毎に投与される抗Ｇ−ＣＳＦ抗体  ＩＶと、６週間毎に投与されるＩｐｉ  ＩＶ。
【０４５０】
コホートＣ４：１日１回で２１日間／７日間休みで経口投与されるコビメチニブと併用された、２週間毎に投与される抗Ｇ−ＣＳＦ抗体  ＩＶと、６週間毎に投与されるＩｐｉ
ＩＶ。
【０４５１】
試験対象患者基準
≧１８歳の年齢の男性と女性；
【０４５２】
米国東海岸癌臨床試験グループ（Ｅａｓｔｅｒｎ  Ｃｏｏｐｅｒａｔｉｖｅ  Ｏｎｃｏｌｏｇｙ  Ｇｒｏｕｐ（ＥＣＯＧ））の一般状態が０乃至１；
【０４５３】
組織学的に確認された結腸直腸癌；
【０４５４】
ＣＴ又はＭＲＩにより測定可能な疾患；
【０４５５】
ＭＳＩステータスの試験；
【０４５６】
研究固有の臨床検査で定義された適切な臓器機能；
【０４５７】
研究を通して、避妊の許容可能な形態を使用する必要がある。治験薬の最終投与後、避
妊の許容可能な形態が、妊娠可能性のある女性（ＷＯＣＢＰ）は２３週間、ＷＯＣＢＰと性的に活発な男性は３１週間、使用される必要がある。
【０４５８】
署名されたインフォームドコンセント；
【０４５９】
研究手順に従う用意があり且つ可能である；及び
【０４６０】
Ｃ３コホートに登録した対象者は、彼等の転移性疾患の治療を受けていなかったに違いない。
【０４６１】
除外基準
活動性の脳転移又は軟髄膜転移は許可されない；
【０４６２】
抗プログラム死受容体（ＰＤ）−１、抗ＰＤ−Ｌ１、抗ＰＤ−Ｌ２、抗細胞傷害性Ｔ細胞リンパ腫−４抗原（ＣＴＬＡ−４）抗体、又は任意の他の抗体又はＴ細胞の共刺激又は免疫チェックポイント経路を特異的に標的とする薬剤を用いる事前治療；
【０４６３】
局所治癒可能な癌を除いて、過去３年以内に活動していた以前の悪性腫瘍；
【０４６４】
活動性の、既知の又は疑われる自己免疫疾患を有する対象者；及び
【０４６５】
治験薬投与の１４日以内にコルチコステロイド又は他の免疫抑制薬の何れかを用いる全身治療が必要な病気を有する対象者。
【０４６６】
本出願の特定の態様がここにに示され及び記載されているものの、そのような態様が例としてのみ提供されることは明らかであろう。多数の変形物、変更物、及び置換物が、態様から逸脱することなく、当業者において起こり得る；ここに記載された態様に対する様々な代替物が、ここに記載された使用、方法、及び組成物の実施において利用され得ることが理解されるべきである。前述の態様は、明確性及び理解の目的ためにある程度詳細に説明されているが、本開示を読むことにより、添付の請求項における本発明の真の範囲から逸脱することなく、形態及び詳細における種々の変更がなされ得ることが当業者により理解されるだろう。
【図１】
2020507339.tif 000005
【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１Ａ】
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【図１１Ｂ】
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【図１２】
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【図１３】
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【図１４】
2020507339.tif 000019
【図１５】
2020507339.tif 000020
【図１６Ａ】
2020507339.tif 000021
【図１６Ｂ】
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【国際調査報告】
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2020507339.tif 000024
2020507339.tif 000025
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