(57)【要約】  非石灰化アテローム動脈硬化プラークを診断、画像化、および定量化するための組成物および方法が、本明細書に記載される。本明細書に記載される組成物の実施形態は、他の炭水化物分子に加えて、例えば、診断用薬剤および診断用部分を含むマンノシル化デキストラン化合物を含む。本明細書において具体化される化合物および方法は、非石灰化アテローム動脈硬化プラークを画像化し、その場所を解剖学的に突き止め、定量化するための優れた局在化および結果をもたらす。【選択図】図２
2020521021.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
化合物であって、１個またはそれ以上のＣＤ２０６標的部分および１個またはそれ以上の診断用部分が結び付いたデキストラン主鎖を含む、前記化合物。
【請求項２】
式（ＩＩ）の化合物：
【化１】
2020521021.tif 000013
［式中、
各Ｘは、独立して、Ｈ、Ｌ１−Ａ、またはＬ２−Ｒであり；各Ｌ１およびＬ２は、独立して、リンカーであり；
各Ａは、独立して、検出部分またはＨを含み；各Ｒは、独立して、ＣＤ２０６標的部分またはＨを含み；
ｎは、ゼロよりも大きい整数であり；
ここで、少なくとも１個のＲは、ＣＤ２０６標的部分であり、少なくとも１個のＡは、診断用部分である］
である、請求項１に記載の化合物。
【請求項３】
少なくとも１個のＲは、マンノース、フコース、およびｎ−アセチルグルコサミンからなる群から選択される、請求項１に記載の化合物。
【請求項４】
少なくとも１個のＡは、ガンマ線放射剤である、請求項１に記載の化合物。
【請求項５】
少なくとも１個のＡは、同位体である、請求項１に記載の化合物。
【請求項６】
少なくとも１個のＡは、９９ｍＴｃ、２１０Ｂｉ、２１２Ｂｉ、２１３Ｂｉ、２１４Ｂｉ、１３１Ｂａ、１４０Ｂａ、１１Ｃ、１４Ｃ、５１Ｃｒ、６７Ｇａ、６８Ｇａ、１５３Ｇｄ、８８Ｙ、９０Ｙ、９１Ｙ、１２３Ｉ、１２４Ｉ、１２５Ｉ、１３１Ｉ、１１１Ｉｎ、１１５ｍＩｎ、１８Ｆ、１３Ｎ、１０５Ｒｈ、１５３Ｓｍ、６７Ｃｕ、６４Ｃｕ、１６６Ｈｏ、１７７Ｌｕ、２２３Ｒａ、６２Ｒｂ、１８６Ｒｅおよび１８８Ｒｅ、３２Ｐ、３３Ｐ、４６Ｓｃ、４７Ｓｃ、７２Ｓｅ、７５Ｓｅ、３５Ｓ、８９Ｓｒ、１８２Ｔａ、１２３ｍＴｅ、１２７Ｔｅ、１２９Ｔｅ、１３２Ｔｅ、６５Ｚｎ、ならびに８９Ｚｒ、９５Ｚｒからなる群から選択される、請求項１に記載の化合物。
【請求項７】
少なくとも１個のＬ１は、Ｏ、Ｓ、およびＮからなる群から選択される最大３個のヘテロ原子により割り込まれているＣ２−１２炭化水素鎖である、請求項１に記載の化合物。
【請求項８】
少なくとも１個のＬ１は、−（ＣＨ２）ｐＳ（ＣＨ２）ｑＮＨ−を含み、式中、ｐおよびｑは、１から５までの整数である、請求項１に記載の化合物。
【請求項９】
少なくとも１個のＬ２は、Ｏ、Ｓ、およびＮからなる群から選択される最大３個のヘテロ原子により割り込まれているＣ２−１２炭化水素鎖である、請求項１に記載の化合物。
【請求項１０】
少なくとも１個のＬ２は、−（ＣＨ２）ｐＳ（ＣＨ２）ｑＮＨ−を含み、式中、ｐおよびｑは、独立して１から５までの整数である、請求項１に記載の化合物。
【請求項１１】
血管炎症を画像化するための組成物であって：
９９ｍＴｃ−チルマノセプトを含み、ここで、前記組成物は、アテローム動脈硬化症内の炎症を画像化するために使用される、前記組成物。
【請求項１２】
血管炎症を画像化するための組成物であって：
９９ｍＴｃ−チルマノセプトを含み、ここで、前記組成物は、アテローム動脈硬化症内の炎症を画像化するために使用される、前記組成物。
【請求項１３】
アテローム動脈硬化症内の炎症を診断する方法であって：
１個またはそれ以上のＣＤ２０６標的部分および１個またはそれ以上の診断用部分が結び付いたデキストラン主鎖を含む化合物を、対象に投与する工程を含む、前記方法。
【請求項１４】
対象の血管組織中の非石灰化プラークの量を定量化する工程をさらに含む、請求項１３に記載の方法。
【請求項１５】
前記組成物は、非侵襲性である、請求項１３に記載の方法。
【請求項１６】
対象のアテローム動脈硬化非石灰化プラーク量を定量化する工程をさらに含む、請求項１３に記載の方法。
【請求項１７】
非石灰化アテローム動脈硬化プラークを定量化するための組成物であって：
９９ｍＴｃ−チルマノセプトを含み、ここで、前記組成物は、非石灰化アテローム動脈硬化プラークを画像化および定量化するために使用される、前記組成物。
【請求項１８】
アテローム動脈硬化プラーク内の炎症を非侵襲的に画像化するための組成物であって：
９９ｍＴｃ−チルマノセプトを含み、ここで、前記組成物は、アテローム動脈硬化プラーク内の炎症を画像化するために使用される、前記組成物。
【請求項１９】
前記対象は、ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）に感染している、請求項１８に記載の組成物。
【請求項２０】
組成物であって、アテローム動脈硬化プラーク内の炎症を非侵襲的に測定するための前記組成物。
【請求項２１】
組成物であって、対象における非石灰化プラークを定量化するための診断用部分を含む、前記組成物。
【請求項２２】
非侵襲性である、請求項２１に記載の組成物。
【請求項２３】
対象の非石灰化アテローム動脈硬化プラーク量を定量化する工程をさらに含む、請求項２１に記載の組成物。
【請求項２４】
非石灰化プラークを測定するための組成物であって：
９９ｍＴｃ−チルマノセプトを含み、前記組成物は、非石灰化プラークを画像化するため、および対象における非石灰化プラークを測定するために使用される、前記組成物。
【請求項２５】
アテローム動脈硬化プラークを非侵襲的に画像化するための組成物であって：
９９ｍＴｃ−チルマノセプトを含み、ここで、前記組成物は、アテローム動脈硬化プラークを画像化するために使用される、前記組成物。
【請求項２６】
前記対象は、ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）に感染している、請求項２１に記載の組成物。
【請求項２７】
組成物であって、アテローム動脈硬化プラーク中の炎症を非侵襲的に測定するための前記組成物。
【請求項２８】
組成物であって、対象における非石灰化プラークを定量化するための前記組成物。
【請求項２９】
非侵襲性である、請求項２７または２８に記載の組成物。
【請求項３０】
グルコース部分から構成されるマンノシル化デキストラン分子構築物であって、
デキストランから構成される主鎖、
デキストラン主鎖のグルコース部分に結び付いた少なくとも１つのリーシュ、
該少なくとも１つのリーシュの一部に結び付いた少なくとも１個のマンノース糖；および
該少なくとも１つのリーシュに結び付いた１個またはそれ以上の診断用部分
を含む、前記マンノシル化デキストラン分子構築物。
【請求項３１】
少なくとも１つのリーシュは、いかなるマンノース部分によっても占有されていない、請求項３０に記載の組成物。
【請求項３２】
少なくとも１つのリーシュに付加された少なくとも１個の他の糖部分をさらに含み、ここで、該少なくとも１個の他の糖部分は、マンノース部分によっても検出部分によっても占有されていない、請求項３０に記載の組成物。
【請求項３３】
アテローム動脈硬化プラーク中の炎症を診断する方法であって、請求項３０に記載の組成物を投与する工程を含む、前記方法。
【請求項３４】
対象における非石灰化プラークを識別する方法であって、請求項３０に記載の組成物を投与する工程を含む、前記方法。
【請求項３５】
対象における非石灰化プラークを定量化する方法であって、請求項３０に記載の組成物を投与する工程を含む、前記方法。
【請求項３６】
対象における非石灰化アテローム動脈硬化プラークの量を定量化する方法であって、請求項３０に記載の組成物を投与する工程を含む、前記方法。
【請求項３７】
対象が心血管疾患を発現する尤度を決定する工程をさらに含む、請求項３０に記載の方法。
【請求項３８】
血管炎症を画像化するための組成物であって：
診断用部分を含み、ここで、前記組成物は、血管炎症を画像化するために使用される、前記組成物。
【請求項３９】
少なくとも１個のＡは、コンピュータ断層撮影（ＣＴ）画像化に適切な造影剤である、請求項１に記載の化合物。
【請求項４０】
少なくとも１個のＡは、ヨウ素化分子、イッテルビウム、およびジスプロシウムからなる群から選択される、請求項１に記載の化合物。
【請求項４１】
単一光子放射コンピュータ技術（ＳＰＥＣＴ／ＣＴ）を使用して前記対象を画像化する工程をさらに含み、ここで、画像は、対象の血管組織における前記化合物の取り込みの視覚的表示を含む、請求項１３に記載の方法。
【請求項４２】
平面ガンマ画像化を使用して前記対象を画像化する工程をさらに含み、ここで、画像は、対象の血管組織中の前記化合物の取り込みの視覚的表示を含む、請求項１３に記載の方法。
【請求項４３】
対象における非石灰化アテローム動脈硬化プラークの解剖学的位置を決定する方法であって：
１個またはそれ以上のＣＤ２０６標的部分および１個またはそれ以上の診断用部分が結び付いた化合物を、対象に投与する工程を含む、前記方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本明細書では、非石灰化アテローム動脈硬化プラークにおけるマクロファージ媒介性炎症を可視化および定量化するための実用性を有する造影剤としての、マクロファージマンノース受容体（ＣＤ２０６）に対する合成高親和性リガンドのクラスである、９９ｍＴｃ−チルマノセプトにより例示されるようなマンノシル化デキストラン分子構築物の使用が開示される。非石灰化アテローム動脈硬化プラークにおける炎症プロセスは、共に世界的に主要な死因および障害である、心筋梗塞、大部分の虚血性脳卒中、および多数の他の血管疾病を引き起こす基礎病理である。
【背景技術】
【０００２】
アテローム動脈硬化症は、活性化マクロファージが、アテローム動脈硬化病変：動脈壁のプラークの始まり、持続、増殖、および最終的な破裂に著しく寄与している慢性、進行性、全身性、非適応性、炎症性の症候群である［１］。アテローム動脈硬化プラークの破裂（またはびらん）は、血流を遮断する血栓（梗塞を引き起こす塞栓）の原因となり、大多数の虚血性脳卒中（ＩＳ）［２］および心臓発作（心筋梗塞（ＭＩ））［３］をもたらす。このように、アテローム動脈硬化症は、米国および世界における、根本的で主要な死因および障害である［４、５］。現在、慣例の代替的なアテローム動脈硬化症画像診断法は、非常に侵襲的であるか、またはプラーク炎症に明白には関連しておらず、単にプラーク破裂のリスクに間接的に関連しているカルシウム含有量または狭窄のような、いくつかのアテローム動脈硬化プラークの物理的な属性を測定するかのいずれかである［６］。本発明により可能となるようなアテローム動脈硬化プラークの炎症性微小環境の直接画像化は、他の画像診断法により利用可能でない鍵となる情報を提供し、疾患の程度、プラーク破裂のリスクに関する、およびおそらくアテローム動脈硬化症を対象とする療法の有効性をモニタリングするための、アテローム動脈硬化プラークのより正確な検査を可能にする。
【０００３】
アテローム動脈硬化症は、以下の２つの機序：動脈の内腔径を狭めることによる血流の減少（狭窄）、または塞栓をもたらす破裂したアテローム動脈硬化プラークから発生する血栓で血流を遮断することにより塞栓をもたらし、梗塞を生じさせること（局所的細胞死）により、臨床症状をもたらす可能性がある。これら２つの機序のうち、凝血塞栓、およびそれらの生じる梗塞は、圧倒的に、アテローム動脈硬化症に起因する死亡および障害の原因の最も大きな割合となる。疾病管理センター（ＣＤＣ、２０１７年）によると、毎年７３５，０００人の米国人がＭＩに苦しみ、その約半数（３７０，０００人）が死亡している。同様に、およそ６９０，０００人の米国人が毎年ＩＳに苦しみ、そのうちの大部分が、頸動脈中に頻繁に存在するアテローム動脈硬化プラークの破裂から生じた塞栓により引き起こされていた。１００，０００人を超える米国人が、これらの発作で毎年死亡する。アテローム動脈硬化症は、全身性疾病であり、身体の他の部分における重大な病態の原因となる可能性もある。アテローム動脈硬化症は、末梢血管疾患（ＰＡＤ）の原因となり［７］、これが、高齢者の障害の重大な原因であり、メディケア人口のほぼ１２％に影響を与える［８］。アテローム動脈硬化症は、血管性認知症の原因となる可能性があり、腎疾患の一因となる可能性もある［９］。合計すると、アテローム動脈硬化症の結果は、数百万の米国人に負に影響を及ぼし、米国における主要な死因である。世界保健機関によると、世界中の８７５万人が心疾患で毎年死亡し、このうちの極めて大多数が、アテローム動脈硬化症により引き起こされていた。加えて、世界中の６２４万人が、ＩＳで死亡している。本明細書に記載される組成物は、アテローム動脈硬化症において観察されるタイプの炎症を試験する方法としても使用できる。本明細書に記載されるような組成物を使用することで、対象に与えられる抗炎症物質の正確なレベルのモニタリングを可能とすることができる。これにより、抗炎症物質の過剰投与を避けることができ、かつ量の変化および補正が可能となり、ならびに／または炎症を軽減するために投与される物質の量を滴定できる。
【０００４】
患者の一定の集団は、アテローム動脈硬化症の悪影響に不均一に苦しむ。患者のあるそのような集団は、ヒト免疫不全ウイルスの感染と共に生活しているヒト（ＨＩＶ＋ヒト）からなる。１９９０年代中頃の始め、高活性抗レトロウイルス剤療法（ＨＡＡＲＴ）の発展および利用可能性によって、ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）感染個体の死亡率が大幅に低減した［１０］。ＨＡＡＲＴの出現は、ＨＩＶ関連後天性免疫不全症候群（ＡＩＤＳ）の患者の平均余命を、数カ月または数年から数十年まで増大させた。しかしながら、ＨＡＡＲＴ療法は、患者の身体から、ＨＩＶを取り除かない（治療しない）。代わりに、ＨＩＶは、それがＨＡＡＲＴにより制御および抑制されるＨＡＡＲＴ抵抗性リザーバに残存するが、除去されることはない［１１］。この持続的ＨＩＶ感染症は、心血管の炎症が増加することを含む、多くの形態で現われる慢性炎症を引き起こす［１２、１３］。この炎症の増加は、ＨＡＡＲＴにおいて、ＨＩＶ感染者におけるアテローム動脈硬化症の進行を加速させる原因となり［１４〜１７］、これが、この患者集団における、ＩＳ［１８、１９］およびＭＩ［２０〜２２］のリスクの増大を順に引き起こす。したがって、ＨＩＶ患者は、一般集団において、ならびにＨＩＶおよび他の対象おいて、アテローム動脈硬化症疾病の病因を調査するための優れたモデルである。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
マクロファージは、非常に適応性がある。それらは周囲の刺激に反応して、多種多様な活性化された表現型状態を取ることができる［２３、２４］。本来記載される場合、活性化マクロファージ表現型は、以下の２つのクラスに分類されていた：非常に炎症誘発性であると見なされる、古典的に活性化されたマクロファージ（Ｍ１と呼ばれる）、ならびに免疫抑制性であり、かつ創傷治癒に関与すると見なされる、代替的に活性化されたマクロファージ（Ｍ２と呼ばれる）。ＣＤ２０６に対する遺伝子の発現レベルは、それらの活性化された表現型状態がＣＤ２０６であることが原因で、マクロファージにおいて劇的に変化する可能性がある［２５］（Ｑ−Ｐａｔｈから）。ＣＤ２０６の可溶型は公知であるが［２６、２７］、ＣＤ２０６は、典型的には、複数のマンノース部分を示すリガンドに対する高親和性多価結合を媒介する８つの細胞外糖結合ドメインを有する、およそ１７５ｋＤａ［２８］の膜貫通［２９］グリコシル化［３０］Ｃ型レクチン［３１］として生じる。一旦高マンノースリガンドがＣＤ２０６に結合すると、それは受容体依存性エンドサイトーシスにより内部移行される。ＣＤ２０６／リガンド複合体が内部移行された後、ＣＤ２０６は、そのリガンドを放出し、細胞表面に再利用される［３２、３３］。したがって、ＣＤ２０６リガンドは、複数のリガンド分子を内部移行できる各ＣＤ２０６受容体を用いて、細胞へと「充填」される。本来、高いレベルのＣＤ２０６発現は、Ｍ２（免疫抑制性）表現型を取った活性化マクロファージに限られると思われていた。しかしながら、Ｍ１またはＭ２のいずれかであるような活性化マクロファージ表現型の二分された区別が、過度に単純であり、環境刺激に対するマクロファージ反応の本当の柔軟性を表していないことが明らかとなった。マクロファージが、アテローム動脈硬化プラークの発生、進行、および最終的な消散において果たす重大な役割のために、アテローム動脈硬化プラークの活性化マクロファージの表現型状態が、広範に調査された［３４〜３７］。多くの異なる活性化表現型は、アテローム動脈硬化プラーク内に存在するマクロファージに対して記載され、マクロファージは、単一のアテローム動脈硬化プラーク内で同時に観察される異なる活性化表現型を示す。しかし、本発明より以前には、従来技術では、ＣＤ２０６の発現が、アテローム動脈硬化プラーク中で限定され、およびあらゆる量の発現が、本明細書に記載されるような画像診断または可視化を可能とするのに不十分であることが信じられていた。本発明者らは、予想外に、それが本明細書において議論されるような事例ではないと判断した。本発明より以前には、従来技術では、本発明の文脈において、ＣＤ２０６の発現のレベルを完全には検討していなかった。ＣＤ２０６の発現が、Ｍ２様（免疫抑制性）活性化表現型に限定されていたと、従来信じられていた。例において記載されていた研究後に実行されたＣｏｃｈａｉｎらによるより最近の研究［３８］は、ヒトアテローム動脈硬化症を非常に模倣するアテローム動脈硬化症のマウスモデルであるＬｄｌｒ−／−マウスにおける、アテローム動脈硬化プラークのＣＤ２０６の発現を直接評価した。この研究は、アテローム動脈硬化プラークから単離された個別細胞のディープｍＲＮＡ配列決定を使用して、プラークマクロファージを用いて活性化表現型を評価した。マクロファージ表現型が、以下の３つのクラスのうちの１つへと広く属することが観察された：Ｍ１様クラス、Ｍ２様クラス、およびマクロファージの合計のうちの約２０％を表す以前記載されていない第３のクラス。予想外に、Ｍ２様マクロファージのほぼ全て、およびＭ１様マクロファージの大部分が、ＣＤ２０６を高度に発現した。したがって、Ｍ２様細胞に限定された上昇したＣＤ２０６の発現の以前の観察に基づく予想に反して、試験したアテローム動脈硬化プラーク中の大部分のマクロファージは、それらの炎症誘発性または免疫抑制性の表現型とは無関係に、ＣＤ２０６を高度に発現した。
【０００６】
多くのタイプの免疫細胞がアテローム動脈硬化プラークの発生および進行に関与している一方で、マクロファージの関与は非常に顕著であり、マクロファージは、この疾患の特徴である慢性炎症の鍵となる推進要因である［３９、４０］。動脈内皮に対する損傷の後、低密度リポタンパク質（ＬＤＬ）は内皮に侵入し、酸化し、単球を引き寄せる炎症反応を発生させる。これらの単球は、酸化したＬＤＬを取り込み、炎症性サイトカインの分泌により炎症反応をさらに伝播するマクロファージ「泡沫細胞」になる［３８、４１］。最終的には、泡沫細胞は消滅するか、またはアポトーシスを経て、脂質が豊富な壊死性コアを作り出す［４２］。壊死性コアは、局所的な炎症性微小環境に応じて活性化されるようになるマクロファージをさらに引き寄せる。この進行の結末は、破裂（またはびらん）しやすいプラークである［４３、４４］。破裂しやすいプラークは、薄い線維皮膜で覆われた大きな脂質コアが特徴である［４５〜５１］。そのようなプラークは、薄被膜線維性プラークと呼ばれてきた。活性化マクロファージは、プラークのこのカテゴリーに非常に多く存在する。破裂しやすいプラークの２つの重要な解剖学的特徴がある：それらは、カルシウムの限定的な（まだらな）沈着を有し（微細石灰化）、および動脈壁リモデリングのために、それらは、臨床的に重大な狭窄に頻繁に関連することがない［５２、５３］。
【０００７】
全てのアテローム動脈硬化プラークが最終的に破裂するわけではなく、塞栓の原因となる梗塞を作り出す。代わりに、一部のプラークは消滅することもある。プラークは、破裂からプラークを安定化する、マクロファージ媒介粗大石灰化を受けることもある［３４、３６、５４、５５］。粗大石灰化は、炎症の低減およびプラーク安定性に関連する。高度に石灰化したプラークは破裂することはなく、低密度の活性化マクロファージを有する［５６〜５９］。本発明者らは、マクロファージを対象とする造影剤が、最も破裂しやすいアテローム動脈硬化プラークのクラスである非石灰化プラークを、活性炎症を用いて優先的に同定することを確認した。
【０００８】
本発明より以前、および現在の実務では、いくつかの非侵襲的な画像診断法が、アテローム動脈硬化症を評価するために使用されてきた。アテローム動脈硬化症に対するこれらの代替的な画像診断法の最も重大な欠点は、それらがアテローム動脈硬化プラーク内の炎症プロセスを直接評価しないということである［５８、６０〜６５］。ｘ線ベースのコンピュータ断層撮影法（ＣＴ）は、アテローム動脈硬化リスクに関して患者を評価するために最も一般的に使用される画像診断法である。ＣＴ画像は、ｘ線不透明度を検出し、これにより、カルシウム沈着の検出を容易に可能とし、この沈着をカルシウムスコアとして報告する。カルシウムスコアが高いほど、カルシウムの量が多い。したがって、ＣＴは、おそらく破裂しない安定しているプラークをほとんど検出する。石灰化プラークの存在は、場合によっては破裂する可能性がある非石灰化プラークの存在を推測するために使用される。実際には、カルシウムスコアが低いヒトは、ＣＶＤの事象ではめったに死亡せず［６６］、おそらくこれは、非石灰化プラーク負荷も小さいからである。加えて、カルシウムスコアは、将来のＣＶＤの事象のリスクと強く相関する。しかしながら、質問表および一般的に容易に入手可能な臨床的所を含んだ多変量リスクモデルに追加された場合、カルシウムスコアは、組合せモデルの識別精度をわずかに改善しただけであった（ｃ統計量：０．７４４対０．７５５）［６７］。異なるが同様な研究では、カルシウムスコアの添加前後のｃ統計量の間の差がより大きいが、組合せモデルのｃ統計量は、まだわずか０．７５５であった［６８］。これらの結果が非常に著しかった一方で、確立されたリスクモデルにカルシウムスコアを追加することにより、比較的少ない人々が、低リスク（処置しない）または高リスク（処置する）群へと再分類された。別の研究［６９］では、他の研究で使用されるものに類似する組合せリスクモデルにより、３１％の参加者が高リスク群と見なされた一方で、ＣＶＤの事象を経験した２４％の参加者は低リスク群へと区分された。明白に、より正確なリスク層別化の必要性が引き続き存在する。
【０００９】
ＣＴはまた、ＣＴ血管造影法（ＣＴＡ）を実行するために造影剤と組合せることができる。ＣＴＡは、動脈狭窄、および限られた範囲内で炎症ではなく非石灰化プラークを検出する。それは、冠動脈疾患（ＣＡＤ）の根拠に関する冠動脈を評価するために最も一般的に使用される。ＣＴのように、ＣＴＡは、心血管疾患（ＣＡＤ）に対する高い陰性的中率を有する。しかしながら、ＣＴＡは、ＣＡＤの検出に対して、比較的低い陽性的中率（ＰＰＶ）および特異性を有する。一研究では、ＣＡＤに対するＣＴＡのＰＰＶおよび特異性は、それぞれ６８％および５０％であった［７０］。別の研究では、患者毎を基準としたＰＰＶは、わずか４０％であった。［７１］。本明細書に記載される場合、９９ｍＴｃ−チルマノセプトベースの画像化の使用は、アテローム動脈硬化プラーク炎症の直接的観察によって、これらの技術よりも予想外に優れているだけでなく、さらなる予想外の恩恵も与える。
【００１０】
核磁気共鳴画像法（ＭＲＩ）は、急速に発展している技術および画像診断法である［７２］。それは、動脈狭窄を測定でき、興味深いことに、ＭＲＩは、多くの後期不安定プラークの特徴であるプラーク内出血を検出する可能性を有する。ＭＲＩは頸動脈のアテローム動脈硬化プラークを評価するために使用される［７３］。しかしながら、技術的な問題が、他の部位でのアテローム動脈硬化症のＭＲＩ評価が現時点での標準治療になることを妨げている。より重要なことに、ＭＲＩは、非石灰化プラークの一部のみを検出できる。ＭＲＩは、炎症を直接画像化しない。本明細書に記載されるように、（本明細書に記載される組成物の他の実施形態に加えて）９９ｍＴｃ−チルマノセプト画像化は予想外に、ＭＲＩにより検出されるものを含め、炎症性プラークに対してはるかに高い感応性を有する。
【００１１】
頸動脈の超音波（ＵＬＳ）画像化は、頸動脈のアテローム動脈硬化症を評価するために一般的に行われている［７４］。ＵＬＳは、カルシウム含有量、血流、および狭窄を測定する。さらに、頚動脈ＵＬＳは、頚動脈のプラーク破裂および虚血性脳卒中の危険性、ならびにアテローム動脈硬化症が全身性疾病であるので一般的にＣＶＤの危険性がある対象を識別する際に、本明細書に記載される組成物を投与することがある医師および他のユーザーを支援できる［７５］。ＵＬＳは、頚動脈のプラーク形態を画像化するが、不安定プラークの鍵となる解剖学的特徴を評価する性能を制限してきた。プラークの炎症を直接検出および測定することで、９９ｍＴｃ−チルマノセプト画像化は、ＵＬＳでは利用可能ではない程度および付随的リスクの両方に関する、頚動脈アテローム動脈硬化プラークについての鍵となる情報を提供する。
【００１２】
最後に、２つの診断用放射性医薬造影剤があり、その両方が１８フッ化物（［１８Ｆ］）であり、調査研究においてアテローム動脈硬化プラークを画像化するために使用されてきた。両方は、ポジトロン断層法（ＰＥＴ）を可能とするように、またはｘ線ベースのＣＴ、ＰＥＴ／ＣＴ画像化と組合せて使用される。これらの造影剤は、フッ化ナトリウム（［１８Ｆ］Ｎａ）およびフルオロデオキシグルコース（［１８Ｆ］ＦＤＧ）である。［１８Ｆ］Ｎａは、骨、およびアテローム動脈硬化プラークのカルシウム沈着物において生じるような、カルシウム沈着物に局在化する。以下に記載される例のうちの１つでは、［１８Ｆ］ＮａベースＰＥＴ画像化を、石灰化アテローム動脈硬化プラークと、非石灰化アテローム動脈硬化プラークとを区別するために使用した。
【００１３】
［１８Ｆ］ＦＤＧは、多くの腫瘍において生じるような、グルコース代謝がより高いレベルの組織を同定する。グルコース代謝が上昇する他の解剖学的部位は、活動性炎症の領域を含む。その頸動脈を［１８Ｆ］ＦＤＧ−ＰＥＴにより画像化した８人の個体の研究では、［１８Ｆ］ＦＤＧは、ＣＤ６８発現マクロファージが密集していることがさらに示された症候性（炎症性）プラークに局在化した［８５］。［１８Ｆ］ＦＤＧの動脈による取り込みは、将来のＣＶＤも事象と相関する［８６］。加えて、１２週間の高用量のスタチン療法（しかし低用量療法ではない）後に、大動脈および冠動脈のＦＤＧ−ＰＥＴ画像化により、炎症の１４％の減少が明らかとなった（バックグラウンドへの［１８Ｆ］ＦＤＧの局在化）［８７］。一般的な現在の医療の使用ではないが、［１８Ｆ］ＦＤＧ−ＰＥＴ画像化は、本発明に記載されている造影剤と有意な属性を共有し、ここで、両方の造影剤は、最も破裂しやすいプラークを含む炎症性の非石灰化アテローム動脈硬化プラークに局在化する。しかしながら、本発明に開示された造影剤が、炎症性の非石灰化アテローム動脈硬化プラークを画像化するためには、［１８Ｆ］ＦＤＧよりも好ましい３つの理由が存在する。初めに、［１８Ｆ］ＦＤＧの局在化は、炎症に関与する領域に対して特異的ではない。［１８Ｆ］ＦＤＧ−ＰＥＴ画像化は、グルコース代謝が上昇した領域を検出する。若干の例外を除いて、全ての組織がグルコースを代謝し、これが関連する信号対雑音問題を伴う画像化バックグラウンドを作り出す。次に、一部の臓器は、健康な個体においてグルコース代謝が自然に高いレベルである。グルコース代謝が自然に高いレベルである臓器の例は、脳および心臓を含む。心臓の高いレベルの自然なグルコース代謝は、破裂がＭＩの原因となる炎症性の冠動脈非石灰化プラークを画像化するための、［１８Ｆ］ＦＤＧの利用に対する著しい障害を生み出す。この障害の重大性を減少させるために、［１８Ｆ］ＦＤＧ心臓画像化が予定されている患者は、画像化手技を受ける前に、一定期間特別な食事をとらなければならない。最後に、［１８Ｆ］は、サイクロトロンを用いて製造され、かつ１１０分の半減期を有する。これにより、［１８Ｆ］ＦＤＧ（および［１８Ｆ］Ｎａ）の利用可能性に対する配送上の障害を生み出し、サイクロトロンを独自に備える機関へのそのアクセスが大幅に限定される。
【課題を解決するための手段】
【００１４】
本発明により具体化される造影剤の例は、９９ｍテクネチウム（９９ｍＴｃ）標識チルマノセプトである。チルマノセプトは、ＣＤ２０６に対する高親和性リガンドとして意図的に設計されている分子構築物（化合物）のクラスのメンバーである［７６、７７］。ＣＤ２０６に対するチルマノセプトの解離定数は、３×１０−１１である。非石灰化アテローム動脈硬化プラークに生じるような炎症プロセスがない状態の心臓または動脈の組織に著しく局在化することはないが、本発明の組成物が、アテローム動脈硬化非石灰化プラークにおける予想外に優れた局在化を実証したことが確認された。したがって、アテローム動脈硬化症を画像化する文脈内では、９９ｍＴｃ−チルマノセプトにより可能な画像化は、非石灰化プラークに生じるようなＣＤ２０６発現マクロファージの凝集に特異的であり、［１８Ｆ］ＦＤＧ−ＰＥＴ画像化を用いて観察されるような複雑ではない組織への非特異的な局在化により悩まされることがない。いくつかの実施形態では、９９ｍＴｃ−チルマノセプト局在化（または本明細書で開示されるような他の組成物の局在化）は、ガンマカメラ平面画像化を使用するか、または単一光子放射断層撮影（ＳＰＥＣＴ）もしくはＳＰＥＣＴ／ＣＴ画像化を使用して視覚化できる。９９ｍＴｃは６時間の半減期を有するので、中心位置で生産して地域に分配することができ、これにより、９９ｍＴｃを作る能力の無い施設でも、この同位体および９９ｍＴｃ−チルマノセプトを入手することが可能になる。
【００１５】
実施者は、非石灰化アテローム動脈硬化プラークを画像化するのに、［１８Ｆ］ＦＤＧよりも９９ｍＴｃ−チルマノセプトを好みそうであるが、［１８Ｆ］ＦＤＧの経験は、［１８Ｆ］ＦＤＧ−ＰＥＴ画像化が：１）非石灰化および炎症性のアテローム動脈硬化プラークの位置、程度、およびプラーク体積を検出かつ定量化し、２）ＭＩおよびＩＳのような将来の心血管疾患事象を予測し、ならびに３）処置の過程で非石灰化プラーク体積の変化を定量化することにより、アテローム動脈硬化症を対象とする療法の有効性をモニタリングできることを示した。９９ｍＴｃ−チルマノセプトベース画像化は、［１８Ｆ］ＦＤＧで見られる非炎症関連局在化なしで、予想外に、同じ属性および性能の特性を有する。［１８Ｆ］ＦＤＧでは、本発明の局在化がなく、高エネルギー放射体であるので、放射、およびそれに関係する健康問題が存在する。
【００１６】
９９ｍＴｃ−チルマノセプトは、出願番号ＰＣＴ／ＵＳ２０１５／０４１０３６に記載されており、その全体を参照することによって本明細書に組み入れる。チルマノセプトの合成は、以前に記載されている［７８、７９］。簡潔に言えば、１０ｋＤａのデキストラン主鎖から開始し、アミン終端分子リーシュ（leash）を、デキストランのグルコース部分に付加する。これらのリーシュに、およそ５個のキレート剤の部分、ＤＴＰＡ、およびおよそ１７個のマンノース部分を結び付けて、認可された市販品であるＬｙｍｐｈｏｓｅｅｋ（登録商標）を作り出す（図１）。Ｌｙｍｐｈｏｓｅｅｋは、アテローム動脈硬化症およびＣＶＤに無関係な指標（すなわち、固形腫瘍癌を除去するための手術間のセンチネルリンパ節の特定）のための、ＦＤＡに認可された画像診断用薬剤である。合成後、残留リーシュがチルマノセプトに残り、さらなる化学的付加に利用可能である。例に記載されているいくつかの実験に関して、チルマノセプトの蛍光誘導体は、以前に記載のように占有されていないリーシュに１〜２個のＡｌｅｘａ−４８８部分を付加することにより合成された［８０、８１］。
【００１７】
略語：９９ｍＴｃ、９９の原子量の準安定テクネチウム；ＳＰＥＣＴ、単光子放射型コンピュータ断層撮影法；ＣＴ、コンピュータ断層撮影法；ＨＩＶ、ヒト免疫不全ウイルス；ＨＩＶ＋、ＨＩＶ感染；ＨＩＶ−、ＨＩＶ非感染；ＨＵ、ハンスフィールド単位；ＣＤ２０６＋、ＣＤ２０６発現；ＣＤ１６３＋、ＣＤ１６３発現；ＭＤＭＣ、マンノシル化デキストラン分子構築物
【図面の簡単な説明】
【００１８】
【図１】９９ｍＴｃ−チルマノセプトの分子構造の例を示す。
【図２】図２Ａ〜Ｉは、ＨＩＶ＋およびＨＩＶ−対象の大動脈の９９ｍＴｃ−チルマノセプトＳＰＥＣＴ／ＣＴを示す。
【図３】図３Ａ〜Ｂは、高レベルな９９ｍＴｃ−チルマノセプト取り込みを有する大動脈の体積および大動脈の体積パーセントの例を示す。
【図４】図４Ａ〜Ｂは、９９ｍＴｃ−チルマノセプトＳＰＥＣＴ／ＣＴ取り込み対［１８Ｆ］Ｎａ−ＰＥＴ／ＣＴを示す。
【図５−１】図５Ａ〜Ｆは、ＨＩＶ個体および非ＨＩＶ個体からの、組織バンクの大動脈サンプルに対するエクスビボ実験の結果を示す。
【図５−２】図５−１の続き。
【図５−３】図５−２の続き。
【図６】図６Ａ〜Ｃは、肝臓および腎臓の組織における９９ｍＴｃ−チルマノセプト取り込みを実証する、代表的な対象を示す。
【図７−１】図７Ａ〜Ｄは、大動脈プラークの領域における、代表的なＨＩＶ＋対象の、ＳＰＥＣＴ／ＣＴでの９９ｍＴｃ−チルマノセプト取り込み；ＣＴＡパラメーター；および、高レベルな９９ｍＴｃ−チルマノセプト取り込みの非石灰化大動脈プラーク体積に対する関係を示す。
【図７−２】図７−１の続き。
【図７−３】図７−２の続き。
【図８−１】図８Ａ〜Ｂは、９９ｍＴｃ−チルマノセプトＳＰＥＣＴおよび１８Ｆ−ＮａＦ  ＰＥＴの注入の、画像化収集パラメーターに関するデータを示す。
【図８−２】図８−１の続き。
【発明を実施するための形態】
【００１９】
図１．９９ｍＴｃ−チルマノセプトにより例示されるようなマンノシル化デキストラン分子構築物（ＭＤＭＣ）の構造
９９ｍＴｃ−チルマノセプトは、マンノシル化デキストラン分子構築物（ＭＤＭＣ）の例である。９９ｍＴｃ−チルマノセプトは、それに限定されるものではないが：ジエチレントリアミン五酢酸（ＤＰＴＡ、青に着色される）およびマンノース（緑に着色される）のような複数の繋ぎ止め部分と共に、１０ｋＤａ（１０キロダルトン）のデキストラン主鎖で構成される。当業者は、同様な性能属性でＭＤＭＣを作り出すために、１０ｋＤａ以外の様々なサイズのデキストラン主鎖が利用できることを理解するであろう。９９ｍＴｃ−チルマノセプトは、マクロファージマンノース受容体であるＣＤ２０６に、マンノース単位を介して貪欲に結合する。ＤＰＴＡ（キレート剤）は、テクネチウムを有するチルマノセプト（９９ｍＴｃ、ガンマ線放射準安定同位体）の放射標識を可能とする。９９ｍＴｃ以外の放射性標識が使用されてもよく、これらは、当業者にとって確認可能であろう。
【００２０】
図２．ＨＩＶ＋およびＨＩＶ−対象における大動脈９９ｍＴｃ−チルマノセプトＳＰＥＣＴ／ＣＴ
図２は、図の上部のＨＩＶ＋対象（図２Ａ〜Ｆ）および図の下部のＨＩＶ−対象（図２Ｇ〜Ｉ）を用いて示される、９９ｍＴｃ−チルマノセプトＳＰＥＣＴ／ＣＴスキャンからの、大動脈の軸方向断面図を示す。高レベルな９９ｍＴｃ−チルマノセプト取り込みを有する大動脈の体積（ｍｍ３）および大動脈の体積パーセント（筋肉の９９ｍＴｃ−チルマノセプト取り込みよりも５倍高い）は、各対象に対して、それぞれの軸方向断面画像の下に示される。筋肉の９９ｍＴｃ−チルマノセプト取り込みに対する大動脈の９９ｍＴｃ−チルマノセプト取り込みは、隣接するスケールに基づいて示され、赤色は、９９ｍＴｃ−チルマノセプト取り込みが相対的に高い領域を表し、紫色は、９９ｍＴｃ−チルマノセプト取り込みが相対的に低い領域を表す。
【００２１】
図３．高レベルな９９ｍＴｃ−チルマノセプト取り込みを有する、大動脈の体積および大動脈の体積パーセント。
図３Ａは、ＨＩＶ−対象と比較して、ＨＩＶ＋対象の間の高レベルな９９ｍＴｃ−チルマノセプト取り込みを有する大動脈の体積を示す（筋肉中の高レベルな９９ｍＴｃ−チルマノセプトにおいて、＞５倍の９９ｍＴｃ−チルマノセプト取り込みを有する）。高レベルな９９ｍＴｃ−チルマノセプト取り込みを有する大動脈の体積は、ＨＩＶ−対象と比較して、ＨＩＶ＋対象で有意に増大した［３１，９１０（１９，９２２、６５，７４５）対８，２７６（６，５７４、１０，８９０）ｍｍ３、Ｐ＝０．０３］。図３Ｂは、ＨＩＶ−対象と比較して、ＨＩＶ＋対象の、高レベルな９９ｍＴｃ−チルマノセプト取り込みを有する大動脈の体積パーセントを示す。高レベルな９９ｍＴｃ−チルマノセプト取り込みの大動脈の体積パーセントは、ＨＩＶ−対象と比較して、ＨＩＶ＋対象の間で有意に増大した［２０．４±９．５対４．３±０．７０％、Ｐ＝０．００９］。
【００２２】
図４．９９ｍＴｃ−チルマノセプトＳＰＥＣＴ／ＣＴ取り込み対［１８Ｆ］Ｎａ−ＰＥＴ／ＣＴ
ＨＩＶ＋およびＨＩＶ−対象の、９９ｍＴｃ−チルマノセプトＳＰＥＣＴ／ＣＴ（上の行）ならびに［１８Ｆ］Ｎａ−ＰＥＴ／ＣＴ（下の行）の軸方向断面図。９９ｍＴｃ−チルマノセプトＳＰＥＣＴ／ＣＴにおける矢印は、大動脈の９９ｍＴｃ−チルマノセプト取り込みが高い領域を示す。［１８Ｆ］Ｎａ−ＰＥＴ／ＣＴにおける矢印は、９９ｍＴｃ−チルマノセプトＳＰＥＣＴ／ＣＴスキャンで強調された領域の、対応する大動脈のフッ化ナトリウム取り込みを示す。対象のうち数名では、ＳＰＥＣＴ／ＣＴでの９９ｍＴｃ−チルマノセプト取り込みが相対的に高い領域が存在し、対応する低いＳＵＶが［１８Ｆ］Ｎａ−ＰＥＴ／ＣＴで存在した。
【００２３】
図５．ＨＩＶ個体および非ＨＩＶ個体からの、組織バンクの大動脈サンプルに対するエクスビボ実験
図５は、ＨＩＶ個体および非ＨＩＶ個体からの、組織バンクの大動脈サンプルに対するエクスビボ実験の結果を示す。図５Ａは、１０人のＨＩＶ感染個体および１０人のＨＩＶ非感染個体からの大動脈のホルマリン固定パラフィン包埋切片に対して実行される、ＣＤ２０６＋およびＣＤ１６３＋マクロファージに関する単一標識免疫組織化学的検査の結果を示す。切片は、国立神経ＡＩＤＳ組織協会（ＮＮＴＣ）および国立疾患研究所（ＮＤＲＩ）により提供された。ＣＤ２０６＋およびＣＤ１６３＋マクロファージの単染色を用いた、ＨＩＶ＋個体およびＨＩＶ−個体からの大動脈の代表的な切片が示される。図５Ｂは、切片当たり２０の非重複２００倍視野（領域＝０．１４８ｍｍ２）の陽性のマクロファージの数を集計することにより決定された、ＣＤ２０６＋およびＣＤ１６３＋マクロファージの平均数／ｍｍ２±標準偏差を示す。ＣＤ２０６＋マクロファージの平均数／ｍｍ２は、ＨＩＶ−個体に対して、ＨＩＶ＋個体の方が有意に高かった（３０．１±７．９対１４．２±７．０、Ｐ＝０．０００２）。ＣＤ１６３＋マクロファージの平均数／ｍｍ２はまた、ＨＩＶ−個体と比較して、ＨＩＶ＋個体の方が有意に高かった（４６．７±１４．２対２２．９±１１．６、Ｐ＝０．０００７）。図５Ｃは、抗ＣＤ２０６抗体および蛍光標識チルマノセプトを使用して、１０人のＨＩＶ＋および１０人のＨＩＶ−個体からの大動脈のホルマリン固定パラフィン包埋切片で実行された、二重標識免疫蛍光法を示す。ＨＩＶ＋およびＨＩＶ−個体の両方からの切片において、蛍光性チルマノセプトおよび抗ＣＤ２０６の、高いかつ同程度の共局在が存在した（それぞれ、８９．１±６．３％対８６．３±６．８％）。ＣＤ２０６＋チルマノセプト−マクロファージのパーセンテージは、ＨＩＶ＋個体で７．８±７．０％、およびＨＩＶ−個体で１０．４±６．２％であったが、ＣＤ２０６−チルマノセプト＋マクロファージのパーセンテージは、ＨＩＶ＋個体で３．１±１．８％、およびＨＩＶ−個体で３．３±２．１％であった。図５Ｄは、ＣＤ１６３およびＣＤ２０６抗体に対する抗体を使用して、１０人のＨＩＶ＋および１０人のＨＩＶ−個体からの大動脈のホルマリン固定パラフィン包埋切片で実行された、二重標識免疫蛍光法を示す。ＨＩＶ＋およびＨＩＶ−個体の両方からの切片中のＣＤ１６３とＣＤ２０６との間に、高度な共局在が存在した（それぞれ、９０．０±６．３％対８８．２±４．５％）。ＣＤ１６３＋ＣＤ２０６−のパーセンテージは、ＨＩＶ感染個体で１０．０±３．３％、ＨＩＶ非感染個体で１０．８±５．１％であった。ＣＤ１６３−ＣＤ２０６＋であった任意の個体からの大動脈の切片中には、細胞が存在しなかった。
【００２４】
図６．肝臓および腎臓における９９ｍＴｃ−チルマノセプト取り込みを実証する代表的な対象
図６ａは、大動脈および肝臓における強烈な９９ｍＴｃ−チルマノセプト取り込みを実証する、代表的な対象の矢状断面図を示す。矢印は、大動脈弓および肝臓における高レベルなチルマノセプト取り込みの領域をそれぞれ表す。図６ｂは、筋活動に関する、肝臓における強烈な９９ｍＴｃ−チルマノセプト取り込みを実証する、代表的な対象の冠状断面図を示す。図６ｃは、筋活動に関する、腎臓における強烈な９９ｍＴｃ−チルマノセプト取り込みを実証する代表的な対象の冠状断面図を示す。
【００２５】
図７．大動脈プラークの領域における代表的なＨＩＶ＋対象のＳＰＥＣＴ／ＣＴでの９９ｍＴｃ−チルマノセプト取り込み；ＣＴＡパラメーター；ならびに高レベルな９９ｍＴｃ−チルマノセプト取り込みの非石灰化大動脈プラーク体積に対する関係
図７は、大動脈プラークの領域における代表的なＨＩＶ＋対象のＳＰＥＣＴ／ＣＴでの９９ｍＴｃ−チルマノセプト取り込み；ＣＴＡパラメーター；ならびに高レベルな９９ｍＴｃ−チルマノセプト取り込みの非石灰化大動脈プラーク体積に対する関係を示す。図７Ａは、代表的な対象（大動脈における９９ｍＴｃ−チルマノセプト取り込みを実証する図２Ｂの対象に対応する）の９９ｍＴｃ−チルマノセプトＳＰＥＣＴ／ＣＴを示す。図７Ｂは、ＳＰＥＣＴ／ＣＴでの高レベルな９９ｍＴｃ−チルマノセプト取り込みの領域において大部分が石灰化されていない大動脈プラーク（ハンスフィールド単位＜１３０、矢印により示される）を実証する、図７Ａと同じ対象の相互位置合わせＣＴＡを示す。図７Ｃは、大動脈の内壁を示す、図７Ａにおける代表的な対象からの大動脈の三次元ボリュームレンダリング技術（ＶＲＴ）再構成を示し、赤色の矢印は、大動脈プラーク内の石灰化の領域を示す。図７Ｄは、大動脈の外壁を示す、図７Ａにおける代表的な対象からの大動脈の三次元ボリュームレンダリング技術（ＶＲＴ）再構成を示し、赤色の矢印は、大動脈プラーク内の石灰化の領域を示す。図７Ｅは、ＨＩＶ＋対象の非石灰化大動脈プラーク体積（ハンスフィールド単位＜１３０）の、ＨＩＶ−対象に対する比較を示す。図７Ｅは、非石灰化大動脈プラーク体積（ハンスフィールド単位＜１３０）が、ＨＩＶ−対象に対して、ＨＩＶ＋対象の方が有意に高かったことを実証する（６，５４１．０±４，６９７．３対１，３７１．０±９００．２、Ｐ＝０．０４）。図７Ｆは、ＳＰＥＣＴ／ＣＴでの高レベルな９９ｍＴｃ−チルマノセプト取り込みを有する大動脈の体積パーセント、およびＨＵ＜１３０（非石灰化プラーク）の大動脈プラーク体積に関する回帰分析を示す。ＨＩＶ＋対象は、三角形（Ｎ＝６）として表され、およびＨＩＶ−対照対象は、正方形（Ｎ＝３）として表される。ピアソンの相関係数、および相関に関する対応するｒ値が与えられている。ＳＰＥＣＴ／ＣＴでの高レベルな９９ｍＴｃ−チルマノセプト取り込みを有する大動脈の体積パーセントと、ＨＵ＜１３０の大動脈プラーク体積（非石灰化大動脈プラーク体積）との間に、優れた思いもよらない有意な相関があった（ｒ＝０．７８、Ｐ＝０．０１）。図７Ｇは、平均±標準偏差として報告される正規分布データを示し、非正規分布データは、中央値（四分位範囲）として報告される。（ＣＴＡ）コンピュータ断層撮影法血管造影パラメーターと、高レベルな９９ｍＴｃ−チルマノセプト取り込みを有する大動脈の体積および大動脈の体積パーセントとの間の二変量分析は、両方の変数が正規分布した場合、ピアソンの相関係数（ｒ）、または図７Ｇ示されるように、少なくとも１つの変数が正規分布しなかった場合、スピアマンの順位相関係数（ρ）として示される。
【００２６】
図８は、９９ｍＴｃ−チルマノセプトＳＰＥＣＴおよび［１８Ｆ］−Ｎａ  ＰＥＴの注入の画像化収集パラメーターに関するデータを含む
特定の実施形態は、１個またはそれ以上のＣＤ２０６標的部分および１個またはそれ以上の診断用部分が結び付いたデキストラン主鎖を含む、化合物を含む。実施形態は、式（ＩＩ）の化合物：
【化１】
2020521021.tif 000003
［式中、ｎは、１またはそれ以上であり、各Ｘは、独立して、Ｈ、Ｌ１−Ａ、またはＬ２−Ｒであり；各Ｌ１およびＬ２は、独立して、リンカーであり；各Ａは、独立して、検出部分またはＨを含み；各Ｒは、独立して、ＣＤ２０６標的部分またはＨを含み；ｎは、ゼロよりも大きい整数であり；ここで、少なくとも１個のＲは、ＣＤ２０６標的部分であり、少なくとも１個のＡは、診断用部分である］である、請求項１に記載の化合物を含んでもよい。いくつかの実施形態では、少なくとも１個のＲは、マンノース、フコース、およびｎ−アセチルグルコサミンからなる群から選択される。いくつかの実施形態では、少なくとも１個のＡは、ガンマ線放射剤である。いくつかの実施形態では、少なくとも１個のＡは、９９ｍＴｃ、１１１Ｉｎ、および１２３Ｉからなる群から選択できる。いくつかの実施形態では、少なくとも１個のＡは、同位体であってもよい。いくつかの実施形態では、少なくとも１個のＡは、９９ｍＴｃ、２１０Ｂｉ、２１２Ｂｉ、２１３Ｂｉ、２１４Ｂｉ、１３１Ｂａ、１４０Ｂａ、１１Ｃ、１４Ｃ、５１Ｃｒ、６７Ｇａ、６８Ｇａ、１５３Ｇｄ、８８Ｙ、９０Ｙ、９１Ｙ、１２３Ｉ、１２４Ｉ、１２５Ｉ、１３１Ｉ、１１１Ｉｎ、１１５ｍＩｎ、１８Ｆ、１３Ｎ、１０５Ｒｈ、１５３Ｓｍ、６７Ｃｕ、６４Ｃｕ、１６６Ｈｏ、１７７Ｌｕ、２２３Ｒａ、６２Ｒｂ、１８６Ｒｅおよび１８８Ｒｅ、３２Ｐ、３３Ｐ、４６Ｓｃ、４７Ｓｃ、７２Ｓｅ、７５Ｓｅ、３５Ｓ、８９Ｓｒ、１８２Ｔａ、１２３ｍＴｅ、１２７Ｔｅ、１２９Ｔｅ、１３２Ｔｅ、６５Ｚｎおよび８９Ｚｒ、９５Ｚｒからなる群から選択される。いくつかの実施形態では、少なくとも１個のＬ１は、Ｏ、Ｓ、およびＮからなる群から選択される最大３個のヘテロ原子により場合により割り込まれているＣ２−１２炭化水素鎖である。いくつかの実施形態では、少なくとも１個のＬ１は、−（ＣＨ２）ｐＳ（ＣＨ２）ｑＮＨ−を含み、式中、ｐおよびｑは、１から５までの整数である。いくつかの実施形態では、少なくとも１個のＬ２は、Ｏ、Ｓ、およびＮからなる群から選択される最大９個のヘテロ原子により場合により割り込まれているＣ２−１２炭化水素鎖である。いくつかの実施形態では、少なくとも１個のＬ２は、−（ＣＨ２）ｐＳ（ＣＨ２）ｑＮＨ−を含み、式中、ｐおよびｑは、独立して１から５までの整数である。特定の実施形態では、少なくとも１個のＡは、コンピュータ断層撮影（ＣＴ）画像化に適切な造影剤であり、少なくとも１個のＡは、ヨウ素化分子、イッテルビウム、およびジスプロシウムからなる群から選択される。
【００２７】
本明細書に記載される特定の実施形態は、血管炎症を画像化するための組成物を含んでもよく、組成物は：９９ｍＴｃ−チルマノセプトを含み、ここで、前記組成物は、血管炎症を画像化するために使用される。いくつかの実施形態は、血管炎症、およびいくつかの実施形態ではアテローム動脈硬化プラークにおける炎症を画像化するための組成物を含み、組成物は：９９ｍＴｃ−チルマノセプトを含む。
【００２８】
特定の実施形態は、診断する血管炎症の方法を含み、その方法は：１個またはそれ以上のＣＤ２０６標的部分および１個またはそれ以上の診断用部分が結び付いたデキストラン主鎖を含む化合物を、対象に投与する工程と；単一光子放射コンピュータ技術（ＳＰＥＣＴ／ＣＴ）を使用する前記対象を画像化する工程と；を含み、ここで、画像は、対象の血管組織における前記化合物の取り込みの視覚的表示を含む。いくつかの実施形態では、対象を画像化する工程は、平面ガンマ画像化を使用して行うことができ、ここで、画像は、対象の血管組織における前記化合物の取り込みの視覚的表示を含む。特定の実施形態は、アテローム動脈硬化プラークにおける炎症を診断する方法を含み、その方法は：１個またはそれ以上のＣＤ２０６標的部分および１個またはそれ以上の診断用部分が結び付いたデキストラン主鎖（または、本明細書に記載される他の構造）を含む化合物を、対象に投与する工程を含む。いくつかの実施形態は、対象における非石灰化プラークの量を定量化する工程をさらに含む方法を含んでもよい。特定の実施形態では、方法は、非侵襲性である。いくつかの実施形態では、方法は、対象のアテローム動脈硬化非石灰化プラークの量を定量化する工程をさらに含む。特定の実施形態は、対象における非石灰化プラークの場所を解剖学的に突き止める方法を含む。
【００２９】
本明細書に記載される特定の実施形態は、アテローム動脈硬化非石灰化プラークを測定するための組成物を含み、組成物は：９９ｍＴｃ−チルマノセプトを含み、ここで、前記組成物は、アテローム動脈硬化プラークを画像化するために使用される。特定の実施形態は、アテローム動脈硬化プラークを非侵襲的に画像化するための組成物を含むことができ、組成物は：９９ｍＴｃ−チルマノセプトを含み、ここで、前記組成物は、アテローム動脈硬化プラークを画像化するために使用される。いくつかの実施形態では、対象は、ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）に感染している。
【００３０】
特定の実施形態は、非石灰化アテローム動脈硬化プラークを含むアテローム動脈硬化プラークを、非侵襲的に測定するための組成物を含むことができる。特定の実施形態は、非石灰化アテローム動脈硬化プラークを定量化するための診断用部分を含む組成物を含むことができる。いくつかの実施形態では、組成物は、非侵襲的であり、対象の非石灰化プラークの量を定量化するために使用できる。
【００３１】
いくつかの実施形態は、アテローム動脈硬化プラークを測定するための組成物を含むことができ、その方法は：９９ｍＴｃ−チルマノセプト（または、本明細書に記載されるような他の組成物）を含み、ここで、前記組成物は、アテローム動脈硬化プラークを画像化する、および対象におけるアテローム動脈硬化プラークを定量化するために使用される。特定の実施形態は、アテローム動脈硬化プラークを非侵襲的に画像化するための組成物を含むことができ、組成物は：９９ｍＴｃ−チルマノセプトを含み、ここで、前記組成物は、アテローム動脈硬化プラークを画像化するために使用される。いくつかの実施形態では、対象は、ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）を有する。
【００３２】
特定の実施形態は、非石灰化アテローム動脈硬化プラークを、非侵襲的に測定するための組成物を含むことができる。いくつかの実施形態は、対象におけるアテローム動脈硬化プラークを定量化するための組成物を含むことができ、組成物は非侵襲的であってもよい。
【００３３】
いくつかの実施形態は：デキストランから構成される主鎖、デキストラン主鎖のグルコース部分に結び付いた少なくとも１つのリーシュ、少なくとも１つのリーシュの一部に結び付いた少なくとも１個のマンノース糖；および、少なくとも１つのリーシュに結び付いた１個またはそれ以上の検出部分を含む、グルコース部分から構成されるマンノシル化デキストラン分子構築物を含む。特定の実施形態では、少なくとも１つのリーシュは、いかなるマンノース部分によっても占有されていない。いくつかの実施形態では、少なくとも１個の他の糖部分は、少なくとも１つのリーシュに付加でき、ここで、少なくとも１個の他の糖部分は、マンノース部分によっても診断用部分によっても占有されていない。
【００３４】
いくつかの実施形態は、本明細書に記載される組成物のうちのいずれかを投与する工程を含む、アテローム動脈硬化炎症を診断する方法を含むことができる。いくつかの実施形態は、本明細書に記載される組成物のうちのいずれかを投与する工程を含む、対象における非石灰化プラークを識別および／または定量化する方法を含むことができる。特定の実施形態は、本明細書に記載される組成物のうちのいずれかを投与する工程を含む、対象におけるアテローム動脈硬化プラークを定量化する方法を含むことができる。特定の実施形態は、本明細書に記載される組成物のうちのいずれかを投与する工程を含む、対象における非石灰化アテローム動脈硬化プラークの量を定量化する方法を含むことができる。本明細書に記載されるいくつかの方法は、本明細書に記載されるもののような、対象が心血管疾患を発現する尤度を決定する工程を含むことができる。
【００３５】
特定の実施形態は、アテローム動脈硬化プラークを画像化するための組成物を含むことができ、組成物は：診断用部分を含み、ここで、前記組成物は、アテローム動脈硬化プラークを画像化するために使用される。
【００３６】
定義
本明細書で使用する場合、有機化合物を含む化合物に対する命名は、一般的名称、命名に関するＩＵＰＡＣ、ＩＵＢＭＢ、またはＣＡＳの推奨を使用して付与することが可能である。１つまたはそれ以上の立体化学的特徴が存在する場合、立体化学的優先順位、Ｅ／Ｚ表記等を指定するために、立体化学についてのカーン・インゴルド・プレローグ則を利用できる。当業者は、名称を与えられた場合、命名規則を使用した化合物構造の体系的簡約によるか、またはＣＨＥＭＤＲＡＷ（商標）（Ｐｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ、Ｕ．Ｓ．Ａ．）等の市販のソフトウェアによるかのいずれかで、化合物の構造を容易に確かめることができる。
【００３７】
本明細書で使用される場合、単数形「１つの（ａ）」、「１つの（ａｎ）」、および「その（ｔｈｅ）」は、文脈上明らかに別の意味を規定していると判断されない限り、複数形の指示対象を含む。したがって、例えば、「官能基」、「アルキル」、または「残基」への言及は、２個以上のこのような官能基、アルキル、または残基等の混合物を含む。
【００３８】
本明細書における、組成物中の特定の要素または成分の重量部への言及は、明確に他の意味で記載されていない限り、重量部が表される組成物または物品中の、その要素または成分と、任意の他の要素または成分との間の重量関係を表す。したがって、２重量部の成分Ｘおよび５重量部の成分Ｙを含む化合物中において、ＸおよびＹは、２：５の重量比で存在し、さらなる成分が化合物中に含まれているかどうかに関わらず、このような比率で存在する。
【００３９】
成分の重量パーセント（ｗｔ％）は、具体的にそうでない旨が記載されない限り、成分が含まれる製剤または組成物の総重量に基づく。
【００４０】
本明細書で使用する場合、用語「場合による」または「場合により」は、後に記載される事象または状況が生じることもあれば、生じないこともあること、およびその記載が前記事象または状況が生じる例とそれが生じない例を含むことを意味する。
【００４１】
本明細書で使用する場合、用語「対象」は、哺乳類、魚類、鳥類、爬虫類、または両生類のような脊椎動物であってもよい。したがって、本明細書に開示される方法の対象は、ヒト、非ヒト霊長類、ウマ、ブタ、ウサギ、イヌ、ヒツジ、ヤギ、ウシ、ネコ、モルモット、またはげっ歯類であってもよい。その用語は、特定の年齢や性別を表さない。したがって、成人および新生児の対象ならびに胎児が、男性か女性に関わらず、包含されるように意図される。一態様では、対象は、哺乳類である。患者は、疾患または障害に罹患している対象を指す。用語「患者」は、ヒトおよび獣医学的対象を含む。
【００４２】
本明細書で使用する場合、用語「処置」は、疾患、病理学的疾病、または障害を治療、改善、安定化、または予防する意図がある患者の医学的管理を指す。この用語は積極的治療、すなわち具体的には、疾患、病理学的疾病、または障害の改善を対象とする処置を含み、さらに原因療法、すなわち、関連疾患、病理学的疾病、または障害の原因の除去を対象とする処置を含む。加えて、この用語は、緩和療法、すなわち、疾患、病理学的疾病または障害を治療するよりもむしろ症状を緩和するために立案された処置；予防の処置、すなわち、または関連疾患、病理学的疾病または障害の発現を最小化する、または部分的もしくは完全に阻害することを対象とする処置；および支持療法、すなわち、関連疾患、病理学的疾病、または障害の改善を対象とする別の特異療法を補うために利用される処置を含む。様々な態様では、その用語は、哺乳類（例えばヒト）を含む対象のいかなる処置も包含し、かつ：（ｉ）疾患が、その疾患に罹患しやすいが、まだその疾患を罹患していると診断されていない対象において発生することを予防すること；（ｉｉ）その疾患を阻害すること、すなわち、その発現を抑えること；または（ｉｉｉ）その疾患を緩和すること、すなわち、その疾患を退縮させることを含む。一態様では、対象は、霊長類のような哺乳類であり、さらなる態様では、対象は、ヒトである。用語「対象」はまた、飼いならされた動物（例えば、ネコ、イヌ等）、家畜（例えば、ウシ、ウマ、ブタ、ヒツジ、ヤギ等）および実験動物（例えば、マウス、ウサギ、ラット、モルモット、ミバエ等）を含む。
【００４３】
本明細書で使用する場合、用語「予防する」または「予防すること」は、特に事前の行動によって、何かが発生することを排除する、避ける、取り除く、未然に防ぐ、止める、または妨害することを指す。低減させる、阻害する、予防するが本明細書で使用される場合、具体的に示されない限り、他の２つの単語の使用も明確に表すことが理解される。
【００４４】
本明細書で使用する場合、用語「診断される」は、当業者、例えば医師による身体診察を受け、本明細書に開示される化合物、組成物、または方法によって診断または治療できる疾病を有することが発見されることを意味する。
【００４５】
本明細書で使用する場合、句「障害に対する処置が必要であると識別された」等は、障害の処置の必要性に基づく対象の選択に言及する。例えば、対象は、当業者による初期診断に基づいて障害を処置する必要性を有するように識別され、その後、その障害に対する処置を受けることができる。その識別が、一態様では、診断を行う人とは異なる人により実行できることが企図される。さらなる態様では、その識別が、投与を後に実行した人により実行できることが企図される。
【００４６】
本明細書で使用する場合、用語「投与すること」および「投与」は、対象に医薬調製物を提供するあらゆる方法を指す。そのような方法は、当業者に公知であり、それに限定されるものではないが、経口投与、経皮投与、吸入による投与、経鼻投与、局所投与、膣内投与、点眼投与、耳内投与、脳内投与、直腸投与、舌下投与、皮内投与、口腔内投与および非経口投与を含み、静脈内投与、動脈内投与、筋肉内投与、および皮下投与のような注入可能なものも含む。投与は、連続的または断続的であってもよい。
【００４７】
本明細書で使用する場合の「接触させること」は、化合物が、直接的に；すなわち、標的自体と相互作用するか、または間接的に；すなわち、標的の活性が依存する別の分子、補助因子、因子、またはタンパク質と相互作用するかのいずれかで標的の活性に影響を及ぼすことができるような様式で、開示される化合物および細胞、標的受容体（例えば、ＣＤ２０６もしくは他の受容体）、または他の生物学的実体を引き合わせることを指す。
【００４８】
本明細書で使用する場合、用語「有効量」および「有効な量」は、所望の結果を達成するか、または望ましくない疾病に対して効果があるのに十分な量を指す。例えば、あらゆる特定の対象に対する特異的な有効量は、分析されている障害および障害の重症度；利用される特定の組成物；患者の年齢、体重、健康状態、性別、および食事；投与回数；投与経路；利用された特定の化合物の排出の速度；診断の継続時間；利用された特定の化合物と併用して使用されるか、または同時に存在する薬物、ならびに医術において公知の同様な因子を含む様々な因子に依存するであろう。例えば、所望の診断効果を達成するために必要とされるレベルよりも小さいレベルの化合物の投薬を開始し、所望の効果が達成されるまで徐々に投与量を増大させることは十分に当業者の技能範囲内である。必要に応じて、有効な一日量は、投与目的のために、複数回の投与へと分割できる。それゆえ、単回投与の組成物は、そのような量、または一日量を構成するそれらの約数を含むことができる。投与量は、あらゆる禁忌の事象において、個々の医師により調節できる。投与量は変化させることができ、１日に１回またはそれ以上の投与で、１日または数日間投与できる。ガイダンスは、所与のクラスの医薬製品に対する適切な投与量に関する文献で見つけることができる。
【００４９】
本明細書で使用する場合、用語「非侵襲的」は、対象へのあらゆる器具の挿入または導入を含まない技術を指すこともある。例えば、診断用部分を有する診断用薬剤の投与を、本明細書に記載されるように対象へと注入することができ、その後本明細書に記載される画像化、測定、分析技術を、本明細書に記載される方法を活用するように使用できる。用語「非侵襲的」は、それが本明細書で使用される文脈で用語を考慮したときに、当業者に明確となるであろう。
【００５０】
用語「薬学的に許容可能な」は、生物学上でも他の点でも不適当でない、すなわち、許容不可能なレベルの不適当な生物学的効果の原因とならないか、または有害な様式で相互作用しない材料を示す。
【００５１】
本明細書で使用する場合、用語「薬学的に許容可能な担体」は、滅菌水溶液もしくは非水溶液、分散体、懸濁液もしくは乳濁液、ならびに使用直前に、滅菌注入可能溶液または分散体へと再構成するための滅菌粉体を指す。適切な水性および非水性の担体、希釈剤、溶媒、またはビヒクルの例は、水、エタノール、ポリオール（グリセリン、プロピレングリコール、ポリエチレングリコール等のような）、カルボキシメチルセルロースおよびその適切な混合物、植物油（オリーブオイルのような）、ならびにエチルオレエートのような注入可能な有機酸エステルを含む。適切な流動性は、例えば、レシチンのようなコーティング材料を使用することにより、分散体の場合に必要な粒子径を維持することにより、および界面活性剤を使用することにより維持できる。これらの組成物はまた、防腐剤、湿潤剤、乳化剤、および分散剤のような補助剤を含むことができる。微生物の作用の予防は、パラベン、クロロブタノール、フェノール、ソルビン酸等のような、様々な抗菌および抗カビ剤を含ませることにより確かなものにできる。糖類、塩化ナトリウム等のような等張剤を含むことが望ましいこともある。注入可能な医薬形態の長期間の吸収は、吸収を遅らせるアルミニウムモノステアレートおよびゼラチンのような薬剤を含ませることにより引き起こすことができる。注入可能なデポ形態は、ポリラクチド−ポリグリコリド、ポリ（オルトエステル）、およびポリ（無水物）のような生分解性ポリマー中に、薬物のマイクロカプセル化マトリックスを形成することにより作られる。薬物のポリマーに対する比率、および使用された特定のポリマーの性質に応じて、薬物放出の速度は制御可能である。デポ注入可能な製剤はまた、体内組織との適合性があるリポソームまたはマイクロエマルジョン中に薬物を閉じ込めることにより製造される。注射可能な製剤は、例えば、細菌保持フィルターによる濾過によって、または使用直前に、滅菌水あるいは他の無菌の注射可能な媒体に溶解または分散することができる無菌の固形組成物の形態の滅菌剤を組み込むことによって、殺菌可能である。適切な不活性担体は、ラクトースのような糖類を含むことができる。
【００５２】
「アルキル」は、直鎖状および分枝鎖状の基を含む脂肪族飽和炭化水素を指す。「アルキル」は、メチル、エチル、ｎ−プロピル、イソプロピル、ｎ−ブチル等のような基により例示できる。アルキル基は、置換されているまたは置換されていないこともある。１個より多くの置換基が存在してもよい。置換基はまた、それ自体置換できる。置換される場合、置換基は、それに限定されるものではないが、Ｃ１−Ｃ４アルキル、アリール、ヘテロアリール、アミノ、イミノ、シアノ、ハロゲン、アルコキシ、またはヒドロキシルであることが好ましい。「Ｃ１−Ｃ４アルキル」は、１〜４個の炭素原子を含むアルキル基を指す。
【００５３】
「アルケニル」は、直鎖状および分枝鎖状の基を含む脂肪族不飽和炭化水素部分を指す。アルケニル部分は、少なくとも１個のアルケンを含まなければならない。「アルケニル」は、エテニル、ｎ−プロペニル、イソプロペニル、ｎ−ブテニル等のような基により例示できる。アルケニル基は、置換されているまたは置換されていないこともある。１個より多くの置換基が存在してもよい。置換される時、置換基は、好ましくはアルキル、ハロゲン、またはアルコキシである。置換基はまた、それ自体置換できる。置換基は、アルケン自体に、および隣接する員原子またはアルケニル部分にも配置できる。「Ｃ２−Ｃ４アルケニル」は、２〜４個の炭素原子を含むアルケニル基を指す。
【００５４】
「アルキニル」は、直鎖状および分枝鎖状の基を含む脂肪族不飽和炭化水素部分を指す。アルキニル部分は、少なくとも１個のアルキンを含まなければならない。「アルキニル」は、エチニル、プロピニル、ｎ−ブチニル等のような基により例示できる。アルキニル基は、置換されているまたは置換されていないこともある。１個より多くの置換基が存在してもよい。置換される場合、置換基は、好ましくはアルキル、アミノ、シアノ、ハロゲン、アルコキシル、またはヒドロキシルである。置換基はまた、それ自体置換できる。置換基は、アルキン自体上にはないが、アルキニル部分の隣接する員原子上にある。「Ｃ２−Ｃ４アルキニル」は、２〜４個の炭素原子を含むアルキニル基を指す。
【００５５】
「アシル」または「カルボニル」は、−Ｃ（Ｏ）Ｒ基を指し、式中、Ｒは、アルキル；アルケニル；アルキニル、アリール、ヘテロアリール、炭素環式、複素炭素環式；Ｃ１−Ｃ４アルキルアリール、またはＣ１−Ｃ４アルキルヘテロアリールである。Ｃ１−Ｃ４アルキルカルボニルは、１〜４個の炭素原子のアルキル鎖がカルボニル部分の前にある基を指す。
【００５６】
「アルコキシ」は、−Ｏ−Ｒ基を指し、式中、Ｒは、アシル、アルキルアルケニル、アルキルアルキニル、アリール、炭素環式；複素炭素環式；ヘテロアリール、Ｃ１−Ｃ４アルキルアリール、またはＣ１−Ｃ４アルキルヘテロアリールである。
【００５７】
「アミノ」は、−ＮＲ’Ｒ’基を指し、式中、各Ｒ’は、独立して、水素、アミノ、ヒドロキシ、アルコキシル、アルキル、アリール、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、ヘテロアリール、Ｃ１−Ｃ４アルキルアリール、またはＣ１−Ｃ４アルキルヘテロアリールである。２個のＲ’基は、それら自体で結び付いて環を形成することもある。Ｒ’基は、それ自体さらに置換されることもあり、その場合は、グアニジニルとしても公知の基は、用語「アミノ」のもとで具体的に企図される。
【００５８】
「アリール」は、芳香族炭素環式基を指す。「アリール」は、フェニルにより例示できる。アリール基は、置換されているまたは置換されていないこともある。１個より多くの置換基が存在してもよい。置換基はまた、それ自体置換できる。置換される場合、置換基は、それに限定されるものではないが、ヘテロアリール、アシル、カルボキシル、カルボニルアミノ、ニトロ、アミノ、シアノ、ハロゲン、またはヒドロキシルであることが好ましい。
【００５９】
「カルボキシル」は、−Ｃ（＝Ｏ）Ｏ−Ｃ１−Ｃ４アルキル基を指す。
【００６０】
「カルボニル」は、−Ｃ（Ｏ）Ｒ基を指し、式中、各Ｒは、独立して、水素、アルキル、アリール、シクロアルキル；ヘテロシクロアルキル、ヘテロアリール、Ｃ１−Ｃ４アルキルアリール、またはＣ１−Ｃ４アルキルヘテロアリールである。
【００６１】
「カルボニルアミノ」は、−Ｃ（Ｏ）ＮＲ’Ｒ’基を指し、式中、各Ｒ’は、独立して、水素、アルキル、アリール、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、ヘテロアリール、Ｃ１−Ｃ４アルキルアリール、またはＣ１−Ｃ４アルキルヘテロアリールである。２個のＲ’基は、それら自体で結び付いて環を形成することもある。
【００６２】
「Ｃ１−Ｃ４アルキルアリール」は、アリール置換基がアルキル基を介して結合しているようにアリール置換基を有する、Ｃ１−Ｃ４アルキル基を指す。「Ｃ１−Ｃ４アルキルアリール」は、ベンジルにより例示できる。
【００６３】
「Ｃ１−Ｃ４アルキルヘテロアリール」は、ヘテロアリール置換基がアルキル基を介して結合されるようにヘテロアリール置換基を有する、Ｃ１−Ｃ４アルキル基を指す。
【００６４】
「炭素環式基」または「シクロアルキル」は、一価の飽和または不飽和の炭化水素環を意味する。炭素環式基は、単環式であるか、または縮合、スピロ、または架橋二環式の環系である。単環式炭素環式基は、環中に、３〜１０個の炭素原子、好ましくは４〜７個の炭素原子、およびより好ましくは５〜６個の炭素原子を含む。二環式炭素環式基は、環中に、８〜１２個の炭素原子、好ましくは９〜１０個の炭素原子を含む。炭素環式基は、置換されているまたは置換されていないこともある。１個より多くの置換基が存在してもよい。置換基はまた、それ自体置換できる。好ましい炭素環式基は、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロヘキシル、シクロヘキセニル、およびシクロヘプチルを含む。より好ましい炭素環式基は、シクロプロピルおよびシクロブチルを含む。最も好ましい炭素環式基は、シクロプロピルである。炭素環式基は、芳香族ではない。
【００６５】
本明細書で使用される場合も、用語「診断すること」は、医学的状態の有無を判断すること、ならびに患者における以前に確認された医学的状態の状態を決定または確認することを意味する。例えば、癌の場合、診断することという用語は、癌の有無、癌の病期を決定すること、および／または患者の前癌状態の有無もしくは病期を検出することを包含する。以前に確認された医学的状態の状態を決定することは、医学的状態（例えば、マクロファージ関連障害）の進行、進行しないこと、減少、または寛解を判断することも含む。
【００６６】
「ハロゲン」は、フルオロ、クロロ、ブロモ、またはヨード部分を指す。ハロゲンは、フルオロ、クロロ、またはブロモであることが好ましい。
【００６７】
「ヘテロアリール」または「複素環式芳香族」は、炭素環に１個またはそれ以上のヘテロ原子を有する、単環式または二環式の芳香族炭素環式ラジカルを指す。ヘテロアリールは、置換されているまたは置換されていないこともある。１個より多くの置換基が存在してもよい。置換される場合、置換基は、それ自体置換できる。好ましいが非限定的な置換基は、アリール、Ｃ１−Ｃ４アルキルアリール、アミノ、ハロゲン、ヒドロキシ、シアノ、ニトロ、カルボキシル、カルボニルアミノ、またはＣ１−Ｃ４アルキルである。好ましい複素環式芳香族基は、テトラゾイル、トリアゾリル、チエニル、チアゾリル、プリニル、ピリミジニル、ピリジル、およびフラニルを含む。より好ましい複素環式芳香族基は、ベンゾチオフラニル；チエニル、フラニル、テトラゾイル、トリアゾリル、およびピリジルを含む。
【００６８】
「ヘテロ原子」は、複素環式基または複素環式芳香族基の環、または不均一基（heterogeneous group）の鎖の炭素以外の原子を意味する。ヘテロ原子は、窒素、硫黄、および酸素原子からなる群から選択されることが好ましい。１個より多くのヘテロ原子を含む基は、異なるヘテロ原子を含むこともある。
【００６９】
「複素炭素環式基」または「ヘテロシクロアルキル」または、「複素環式」は、少なくとも１個のヘテロ原子を含む一価の飽和または不飽和の炭化水素環を意味する。複素炭素環式基は、単環式であるか、または縮合、スピロ、または架橋二環式の環系である。単環式複素炭素環式基は、環中に、３〜１０個の炭素原子、好ましくは４〜７個の炭素原子、およびより好ましくは５〜６個の炭素原子を含む。二環式複素炭素環式基は、環中に、８〜１２個の炭素原子、好ましくは９〜１０個の炭素原子を含む。複素炭素環式基は、置換されているまたは置換されていないこともある。１個より多くの置換基が存在してもよい。置換基はまた、それ自体置換できる。好ましい複素炭素環式基は、エポキシ、テトラヒドロフラニル、アザシクロペンチル、アザシクロヘキシル、ピペリジル、およびホモピペリジルを含む。より好ましい複素炭素環式基は、ピペリジルおよびホモピペリジルを含む。最も好ましい複素炭素環式基は、ピペリジルである。複素炭素環式基は、芳香族ではない。
【００７０】
「ヒドロキシ」または「ヒドロキシル」は、−ＯＨからなる化学成分を意味する。アルコールは、ヒドロキシ基を含む。ヒドロキシ基は、遊離しているか、または保護されていることもある。ヒドロキシの代替名は、ヒドロキシルである。
【００７１】
「リーシュ（ｌｅａｓｈ／ｌｅａｓｈｅｓ）」および「リンカー（ｌｉｎｋｅｒ／ｌｉｎｋｅｒｓ）」は、本明細書において交換可能に使用できる。用語「リーシュ（ｌｅａｓｈまたはｌｅａｓｈｅｓ）」は、マンノースのような、標的部分のために使用される結び付く部分を指すようにしばしば使用できる。用語「リンカー（ｌｉｎｋｅｒまたはｌｉｎｋｅｒｓ）」は、リンカーおよび診断用部分の化学的性質および前記薬剤の送達に関係する追加の特性を組み入れることができる、診断用部分に使用される結合部分を指すように使用できる。これらの用語は、本明細書において交換可能に使用できるが、それらの意味は、使用される文脈を考慮して当業者に明確となるであろう。
【００７２】
「員原子」は、炭素、窒素、酸素、または硫黄原子を意味する。員原子は、それらの通常の原子価まで置換できる。置換が明示されない場合、原子価に必要な置換基は水素である。
【００７３】
「環」は、環式の員原子の集合を意味する。環は、炭素環式、芳香族、または複素環式もしくは複素環式芳香族であり、および置換されているまたは置換されていなくてもよく、および飽和または不飽和であってもよい。１個より多くの置換基が存在してもよい。主鎖との環接合は、縮合またはスピロ環式であってもよい。環は、単環式または二環式であってもよい。環は、少なくとも３個の員原子、および多くとも１０個の員原子を含む。単環式環は、３〜７個の員原子を含むこともあり、二環式環は、８〜１２個の員原子を含むこともある。二環式環自体は、縮合またはスピロ環式であってもよい。
【００７４】
「チオアルキル」は、−Ｓ−アルキル基を指す。
【００７５】
「チルマノセプト」は、ＬＹＭＰＨＯＳＥＥＫ（登録商標）診断用薬剤の非放射性標識前駆体を指すこともある。本明細書に記載される組成物は、マンノシルアミノデキストランであってもよい。それらは、複数のアミノ末端リンカー（−Ｏ（ＣＨ２）３Ｓ（ＣＨ２）２ＮＨ２）がコアグルコース要素（core glucose element）に結び付いたデキストラン主鎖を有することもある。加えて、マンノース部分は、多数のリンカーのアミノ基にコンジュゲートでき、およびキレート剤であるジエチレントリアミン五酢酸（ＤＴＰＡ）は、マンノースを含まない他のリンカーのアミノ基にコンジュゲートできる。本明細書に記載された組成物は、デキストラン主鎖を有することができ、その主鎖中、複数のグルコース残基がアミノ末端リンカーを含む：
【化２】
2020521021.tif 000004
【００７６】
マンノース部分は、アミジンリンカーを介してリンカーのアミノ基にコンジュゲートできる：
【化３】
2020521021.tif 000005
【００７７】
キレート剤であるジエチレントリアミン五酢酸（ＤＴＰＡ）は、アミドリンカーを介してリンカーのアミノ基にコンジュゲートできる：
【化４】
2020521021.tif 000006
【００７８】
米国においてＬＹＭＰＨＯＳＥＥＫ（登録商標）に関して承認された処方情報に記載されるように、チルマノセプトは、化学名デキストラン３−［（２−アミノエチル）チオ］プロピル  １７−カルボキシ−１０，１３，１６−トリス（カルボキシメチル）−８−オキソ−４−チア−７，１０，１３，１６−テトラアザヘプタデカ−１−イル  ３−［［２−［［１−イミノ−２−（Ｄ−マンノピラノシルチオ）エチル］アミノ］エチル］チオ］プロピルエーテル複合体を有し、以下の分子式：
［Ｃ６Ｈ１０Ｏ５］ｎ・（Ｃ１９Ｈ２８Ｎ４Ｏ９Ｓ９９ｍＴｃ）ｂ・（Ｃ１３Ｈ２４Ｎ２Ｏ５Ｓ２）ｃ・（Ｃ５Ｈ１１ＮＳ）ａを有し、ならびに３〜８個のコンジュゲートしたＤＴＰＡ分子；１２〜２０個のコンジュゲートしたマンノース分子；および、０〜１７個のアミン側鎖を遊離したまま含む。チルマノセプトは、以下の一般構造を有する：
【化５】
2020521021.tif 000007
【００７９】
特定のグルコース部分は、アミノ末端リンカーが結び付いていないこともある。
【００８０】
「スルホニル」は、−Ｓ（Ｏ）２Ｒ’基を指し、式中、Ｒ’は、アルコキシ、アルキル、アリール、炭素環式、複素炭素環式；ヘテロアリール、Ｃ１−Ｃ４アルキルアリール、またはＣ１−Ｃ４アルキルヘテロアリールである。
【００８１】
「スルホニルアミノ」は、−Ｓ（Ｏ）２ＮＲ’Ｒ’基を指し、式中、各Ｒ’は、独立して、アルキル、アリール、ヘテロアリール、Ｃ１−Ｃ４アルキルアリール、またはＣ１−Ｃ４アルキルヘテロアリールである。
【００８２】
本明細書に記載される化合物は、１つまたはそれ以上の二重結合を含むことができ、したがって、シス／トランス（Ｅ／Ｚ）異性体、ならびに他の立体配座異性体を生じさせる可能性がある。反対の記載がない限り、本発明は、全てそのような可能性のある異性体、ならびにそのような異性体の混合物を含む。
【００８３】
反対の記載がない限り、実線としてのみ示され、くさび形または破線として示されない化学結合を有する式は、各可能性のある異性体、例えば、各エナンチオマーおよびジアステレオマー、ならびにラセミまたはスケールミック混合物のような異性体の混合物を企図する。本明細書に記載される化合物は、１個またはそれ以上の不斉中心を含むことができ、したがって、ジアステレオマーおよび光学異性体を生じさせる可能性がある。反対の記載がない限り、本発明は、全てのそのような可能性のあるジアステレオマーおよびそれらのラセミ混合物、それらの実質的に純粋な分解されたエナンチオマー、全ての可能性のある幾何異性体、ならびにそれらの薬学的に許容可能な塩を含む。立体異性体の混合物、ならびに単離された特定の立体異性体も含む。そのような化合物を製造するために使用される合成手順の過程の間、または当業者に公知のラセミ化もしくはエピ化手順を使用する際に、そのような手順の生成物は、立体異性体の混合物であってもよい。
【００８４】
多くの有機化合物が、平面偏光の平面を回転させる能力を有する光学活性形態で存在する。光学活性化合物を説明する際、接頭辞ＤおよびＬ、またはＲおよびＳは、そのキラル中心（複数可）の周りの分子の絶対配置を表すように使用される。接頭辞ｄおよびｌ、または（＋）および（−）は、化合物による平面偏光の回転を表記するために利用され、（−）またはｌは、化合物が左旋性であることを意味する。（＋）またはｄの接頭辞を有する化合物は、右旋性である。所与の化学構造に関して、立体異性体と呼ばれるこれらの化合物は、それらが互いの重ね合わせ不可能な鏡像であることを除いて同一である。特定の立体異性体は、エナンチオマーと呼ばれることもあり、そのような異性体の混合物は、しばしばエナンチオマー混合物と呼ばれる。エナンチオマーの５０：５０混合物は、ラセミ混合物と呼ばれる。本明細書に記載される化合物のうちの多くは、１個またはそれ以上のキラル中心を有してもよく、したがって異なる鏡像異性型で存在できる。必要に応じて、キラル炭素は、アスタリスク（＊）で指定できる。キラル炭素への結合が開示される式中で直線として図示される場合、キラル炭素の（Ｒ）および（Ｓ）配置の両方、したがってエナンチオマーおよびその混合物の両方が式内に包含されることが理解される。本技術分野で使用されるように、キラル炭素についての絶対配置を明記することが所望される場合、キラル炭素への結合の一方は、くさび形（平面より上の原子への結合）として示される可能性があり、他方は、一連のまたはくさび形の短い平行線（平面より下の原子への結合）として示すことができる。カーン・インゴルド・プレローグシステムを使用して、（Ｒ）または（Ｓ）配置をキラル炭素に割り当てることができる。
【００８５】
本明細書に記載される化合物は、天然同位体存在度および非天然存在度の両方の原子を含むことができる。開示される化合物は、１個またはそれ以上の原子が典型的に自然界で見られる原子質量または質量数とは異なる原子質量または質量数を有する原子によって置き換えられるという事実を別にすれば、記載されるものと同一である同位体標識化または同位体置換化合物であってもよい。本発明の化合物に組み入れることができる同位体の例は、水素、炭素、窒素、酸素、硫黄、フッ素、および塩素の同位体、例えば、それぞれ２Ｈ、３Ｈ、１３Ｃ、１４Ｃ、１３Ｎ、１５Ｎ、１８Ｏ、１７Ｏ、３５Ｓ、１８Ｆ、および３６Ｃｌを含む。化合物は、そのプロドラッグを含み、および前記化合物の、または前述の同位体および／または他の原子の他の同位体を含む前記プロドラッグの薬学的に許容可能な塩は、本発明の範囲内にある。本発明の特定の同位体標識化化合物、例えば、３Ｈおよび１４Ｃのような放射性同位体が組み入れられる化合物は、薬物および／または基質組織分布アッセイに有用である。トリチウム化された、すなわち３Ｈの、および炭素−１４の、すなわち１４Ｃの同位体は、それらの製造の容易さおよび検出性のために使用できる。さらに、重水素、すなわち２Ｈのようなより重い同位体での置換は、より大きな代謝安定性に由来する特定の利点、例えば、インビボでの半減期の増加または必要投与量の減少をもたらすことができ、したがって、いくつかの状況において好ましいこともある。本発明の同位体標識化化合物およびそのプロドラッグは、非同位体標識化試薬を、容易に利用可能な同位体標識化試薬で代用することによって、以下の手順を実行することにより一般的に製造できる。
【００８６】
化学物質が、多形体または修正形態と呼ばれる規則の異なる状態で存在する固体を形成することは公知である。多形物質の異なる修正形態は、それらの物理的性質において大いに異なる可能性がある。本発明にかかる化合物は、異なる多形体で存在する可能性があり、特定の修正形態は、準安定であることが可能である。反対の記載がない限り、本発明はそのような可能性のある多形体を全て含む。
【００８７】
本明細書に開示される特定の材料、化合物、組成物、および成分は、商業的に得ること、または当業者に一般的に公知の技術を使用して容易に合成することができる。例えば、開示される化合物および組成物を製造する際に使用される出発材料および試薬は、Ａｌｄｒｉｃｈ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｃｏ．（Ｍｉｌｗａｕｋｅｅ、Ｗｉｓ．）、Ａｃｒｏｓ  Ｏｒｇａｎｉｃｓ（Ｍｏｒｒｉｓ  Ｐｌａｉｎｓ、Ｎ．Ｊ．）、Ｆｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ（Ｐｉｔｔｓｂｕｒｇｈ、Ｐａ．）、またはＳｉｇｍａ（Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ、Ｍｏ．）のような商業供給者から入手可能であるか、またはＦｉｅｓｅｒ  ａｎｄ  Ｆｉｅｓｅｒ’ｓ  Ｒｅａｇｅｎｔｓ  ｆｏｒ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ、１〜１７巻（Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ａｎｄ  Ｓｏｎｓ、１９９１年）；Ｒｏｄｄ’ｓ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ｏｆ  Ｃａｒｂｏｎ  Ｃｏｍｐｏｕｎｄｓ、１〜５巻および付録（Ｅｌｓｅｖｉｅｒ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ、１９８９年）；Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｒｅａｃｔｉｏｎｓ、１〜４０巻（Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ａｎｄ  Ｓｏｎｓ、１９９１年）；Ｍａｒｃｈ’ｓ  Ａｄｖａｎｃｅｄ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ、（Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ａｎｄ  Ｓｏｎｓ、第４版）；ならびに、Ｌａｒｏｃｋ’ｓ  Ｃｏｍｐｒｅｈｅｎｓｉｖｅ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｔｒａｎｓｆｏｒｍａｔｉｏｎｓ（ＶＣＨ  Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ  Ｉｎｃ．、１９８９年）のような文献に記載されている以下の手順の当業者に公知の方法により製造される。
【００８８】
明確に記載されない限り、本明細書に記載されるあらゆる方法が、その工程が特定の順序で実行されることを必要とするように解釈されると意図されることは決してない。それに応じて、方法の請求項が、実際にその工程が続く順序を列挙しないか、または工程が特定の順序に限定されると請求項または明細書に特に記載されていない場合、順序が暗示されていると意図されることは、いかなる点においても決してない。このことは、以下のものを含む解釈に関するあらゆる可能性のある不明確な基準に関しても言える：工程または操作フローの配列に関する論理事項文法構成または句読点に由来する明白な意味；および、明細書に記載される実施形態の数またはタイプ。
【００８９】
本発明の組成物を製造するために使用される予定の成分、ならびに本明細書に開示される方法内で使用される予定の組成物自体が開示される。これらの、および他の材料は、本明細書に開示され、ならびにこれらの材料の組合せ、サブセット、相互作用、群等が開示される場合、これらの化合物の、様々な個々のおよび集合的な、組合せおよび順列の各々の特定の参照が明瞭に開示できない一方、各々が本明細書において具体的に企図および記載されていることが理解される。例えば、特定の化合物が開示および議論され、ならびに化合物を含む多数の分子に行うことができる多数の修正が議論される場合、反対の具体的な指示がない限り、化合物の組合せおよび順列、ならびに可能性のある修正の全ておよび各々が具体的に企図される。したがって、分子Ａ、Ｂ、およびＣのクラス、ならびに分子Ｄ、Ｅ、およびＦのクラスが開示され、ならびに組合せの分子の例であるＡ〜Ｄが開示される場合、各々が個々に列挙されていなくても、各々は、個々におよび集合的に企図される意味の組合せであり、Ａ〜Ｅ、Ａ〜Ｆ、Ｂ〜Ｄ、Ｂ〜Ｅ、Ｂ〜Ｆ、Ｃ〜Ｄ、Ｃ〜Ｅ、およびＣ〜Ｆが、開示されているものとして考慮される。同様に、あらゆるサブセット、またはこれらの組合せも開示される。したがって、例えば、Ａ〜Ｅ、Ｂ〜Ｆ、およびＣ〜Ｅのサブグループは、開示されているものとして考慮されるであろう。この概念は、それに限定されるものではないが、本発明の組成物を作るおよび使用する方法における工程を含む本出願の全ての態様に適用される。したがって、実行できる様々な追加の工程が存在する場合、これらの追加の工程の各々が、あらゆる特定の実施形態、または本発明の方法の実施形態の組合せにより実行できることが理解される。
【００９０】
本明細書に開示される組成物が特定の機能を有することが理解される。開示される機能を実行するための特定の構造の要件が本明細書に開示され、ならびに開示される構造に関係する同じ機能を実行できる様々な構造が存在すること、およびこれらの構造が典型的には同じ結果を達成するであろうことが理解される。
【００９１】
化合物
本発明の実施形態は、１つまたはそれ以上の医薬品有効成分を送達するために、ＣＤ２０６標的部分（例えばマンノース）が結び付いていてもよいポリマー（例えば炭水化物）主鎖を含む担体構築物を利用できる。そのような構築物の例は、マンノシルアミノデキストラン（ＭＡＤ）を含み、これは、主鎖であるマンノース分子のグルコース残基にコンジュゲートし、主鎖である医薬品有効成分の他のグルコース残基にコンジュゲートするデキストラン主鎖を含むことができる。チルマノセプトは、ＭＡＤの具体的な例である。ＤＴＰＡがそれにコンジュゲートされていないチルマノセプトであるチルマノセプト誘導体は、ＭＡＤのさらなる例である（時には、ｍ−チルマノセプトとも呼ばれる）。
【００９２】
いくつかの実施形態では、本発明は、１個またはそれ以上のＣＤ２０６標的部分を有するデキストランベースの部分または主鎖を含む化合物を提供する。デキストランベースの部分は、一般的に米国特許第６，４０９，９９０号（‘９９０特許）に記載されるものに類似するデキストラン主鎖を含み、その全体を参照することによって本明細書に組み入れる。したがって、主鎖は、α−１，６グリコシド結合によって主に結び付いた複数のグルコース部分（すなわち残基）を含む。α−１，４および／またはα−１，３結合のような他の結合がさらに存在することもある。いくつかの実施形態では、全ての主鎖部分が置換されることはない。いくつかの実施形態では、ＣＤ２０６標的部分は、デキストラン主鎖の約１０％から約５０％の間のグルコース残基、または約２０％から約４５％の間のグルコース残基、または約２５％から約４０％の間のグルコース残基に結び付いている。いくつかの実施形態では、３個のグルコース残基全てが置換できる。いくつかの実施形態では、４個のグルコース残基全てが置換できる。いくつかの実施形態では、５個のグルコース残基全てが置換できる。いくつかの実施形態は、第３のグルコース残基の全てに位置する１個のマンノースを含むこともある。いくつかの実施形態は、第４のグルコース残基の全てに位置する１個のマンノースを含むこともある。いくつかの実施形態は、第５のグルコース残基の全てに位置する１個のマンノースを含むこともある。いくつかの実施形態では、デキストランベースの部分は、約５０〜１００キロダルトン（ｋＤａ）である。デキストランベースの部分は、少なくとも約５０ｋＤａ、少なくとも約６０ｋＤａ、少なくとも約７０ｋＤａ、少なくとも約８０ｋＤａ、または少なくとも約９０ｋＤａであってもよい。デキストランベースの部分は、約１００ｋＤａ未満、約９０ｋＤａ未満、約８０ｋＤａ未満、約７０ｋＤａ未満、または約６０ｋＤａ未満であってもよい。いくつかの実施形態では、デキストラン主鎖は、約１から約５０ｋＤａの間の分子量（ＭＷ）を有する一方で、他の実施形態では、デキストラン主鎖は、約５から約２５ｋＤａの間のＭＷを有することもある。実施形態では、デキストラン主鎖は、約８から約１５ｋＤａの間、例えば約１０ｋＤａのＭＷを有することもある。一方で、他の実施形態では、デキストラン主鎖は、約１から約５ｋＤａの間の、例えば約２ｋＤａのＭＷを有することもある。組成物の特定の実施形態は、約１〜約５ｋＤａ、約１〜約１０ｋＤａ、約１〜約１５ｋＤａ、約５〜約１２ｋＤａ、約５〜約１０ｋＤａ、およびそれらの間の範囲の間の主鎖を含むことができる。いくつかの実施形態では、組成物は、約３〜約７個の間のマンノース分子、約５〜約１０個の間のマンノース分子、約１０〜約１５個の間のマンノース分子、約１５〜約２０個の間のマンノース分子、約１６〜約１７個の間のマンノース分子、およびそれらの間の範囲の間のマンノース分子を含むことができる。いくつかの実施形態では、主鎖は、約１〜約３ｋＤａであってもよく、さらに約３〜約７個のマンノース分子を含んでもよい。いくつかの実施形態では、主鎖は、約１０ｋＤａであってもよく、さらに含約１５〜約２０個、または約１６〜約１７個のマンノース分子を含んでもよい。実施形態は、約１０ｋＤａである主鎖を含んでもよく、さらに約１６〜約１７個のマンノース分子を含む。そのような構成は、予想外に優れ、改善された溶解性、改善された透明性、改善された注入可能性および分布を有する。
【００９３】
いくつかの実施形態は、デキストラン主鎖でない主鎖を含むこともある。いくつかの実施形態は、デキストランを含まない単糖類ベースの主鎖を有することもある。本明細書に記載される、炭水化物ベースの担体主鎖分子は、デキストラン以外のグリカンを含むことができ、ここで、グリカンは、複数の単糖残基（すなわち糖残基または修飾された糖残基）を含む。特定の実施形態では、グリカン主鎖は、約１〜約５０ｋＤａのＭＷを提供するように、十分な単糖残基、ならびに１個またはそれ以上のアミノ酸類、ポリペプチド類、および／または脂質類のような任意選択の群を有する。グリカンは、オリゴ糖類または多糖類を含んでもよい。本明細書に含まれる本開示を考慮する場合に当業者により理解されるように、「デキストラン」主鎖を指す場合、他の単糖残基は、本明細書に記載される化合物中で置換されていると見なしてもよい。ＣＤ２０６を標的とするために使用される炭水化物主鎖ベースの担体分子の追加の記載は、ＰＣＴ出願番号ＵＳ２０１７／０５５２１１に記載されており、その全体を参照することによって本明細書に組み入れる。
【００９４】
主鎖が１個またはそれ以上の主要な炭水化物（単糖類）とコンジュゲートする実施形態のうちのいずれかでは、そのような炭水化物は：フコース、アラビノース、アロース、アルトロース、グルコース、ガラクトース、グルコース、ガラクトサミン、ｎ−アセチルガラクトサミン、ハマメロース、リキソース、レボグルコセノン、マンノース、マンニトール、マンノサミン、ｎ−アセチルマンノサミン、リボース、ラムノース、トレオース、タロース、キシロース、および前述のものの２個以上の組合せのうちの１つまたはそれ以上を含む、様々な糖および修飾された糖残基（例えば、硫酸化、臭素化、または窒素化糖残基）のうちのいずれかを含んでもよい。特定の実施形態では、本明細書の組成物の主鎖は、グルコースを含まない炭水化物部分を含んでもよく、およびいかなる適切な重合体であってもよい。これらの部分は、例えば、しかし限定されるものではないが、フコース、ｎ−アセチルグルコースアミン、ｎ−アセチルガラクトースアミン、ガラクトース、ノイラミン酸等を含んでもよい。主鎖は、混成であってもよく、１種より多くの糖および／または炭水化物を含む。
【００９５】
本明細書に記載される組成物、キット、および診断法において使用される担体分子は、診断用部分（例えば細胞毒性薬）を送達するために使用される。担体分子は、検出可能な部分が、直接的または間接的に分子に結び付けられることを可能とする（例えば、リーシュを使用して）、１つまたはそれ以上の特徴を含む。いくつかの実施形態では、炭水化物ベースの主鎖は、約１から約５０ｋＤａの間の分子量（ＭＷ）を有する一方で、他の実施形態では、炭水化物ベースの主鎖は、約５から約２５ｋＤａの間のＭＷを有する。さらに他の実施形態では、炭水化物ベースの主鎖は、約８から約１５ｋＤａの間の、例えば約１０ｋＤａのＭＷを有する。一方で、他の実施形態では、炭水化物ベースの主鎖は、約１から約５ｋＤａの間の、例えば約２ｋＤａのＭＷを有する。炭水化物ベースの主鎖のＭＷは、インフラマソーム媒介障害に基づいて選択できる。加えて、‘９９０特許のデキストラン主鎖と異なり、本明細書に記載される炭水化物ベースの主鎖は、必ずしもそうではないが、無架橋である必要があり、およびＭＷがより大きい主鎖（＞５０ｋＤａ）が、いくつかの例において利用されることもある。
【００９６】
様々な検出可能な部分のうちのいずれかは、様々な目的のために、担体分子に、直接的または間接的に結び付けることができる。本明細書で使用する場合、用語、「検出可能な部分」または「診断用部分」（これらの用語は、交換可能に使用できる）は：（１）担体分子への結び付くことができ；（２）ヒトに対して非毒性であり；ならびに（３）直接的にまたは間接的に検出可能な信号、特に測定できるだけではなくその強度が検出可能な部分の量にも関係する（例えば、比例する）信号を提供する、原子、同位体、または化学構造を意味する。信号は、スペクトル、電気的、光学、磁気、聴覚的、無線信号、または触診検出手段を含むあらゆる適切な手段により、ならびに本明細書に記載される測定プロセスにより検出できる。
【００９７】
適切な検出可能な部分は、それに限定されるものではないが放射性同位体（放射性核種）、蛍光団、化学発光の薬剤、生物発光剤、磁気部分（常磁性部分を含む）、金属（例えば造影剤として使用するための）、ＲＦＩＤ部分、酵素学的反応物、比色分析用放出剤、色素、および微粒子形成剤を含む。
【００９８】
具体的な例として、適切な診断用部分は、それに限定されるものではないが：
−  ガドリニウム（Ｇｄ３＋）、常磁性および超常磁性材料、例えば超常磁性酸化鉄のような核磁気共鳴画像法（ＭＲＩ）に適切な造影剤；
−  ヨウ素化分子、イッテルビウム、およびジスプロシウムのようなコンピュータ断層撮影（ＣＴ）画像化に適切な造影剤；
−  ９９ｍＴｃ、２１０Ｂｉ、２１２Ｂｉ、２１３Ｂｉ、２１４Ｂｉ、１３１Ｂａ、１４０Ｂａ、１１Ｃ、１４Ｃ、５１Ｃｒ、６７Ｇａ、６８Ｇａ、１５３Ｇｄ、８８Ｙ、９０Ｙ、９１Ｙ、１２３Ｉ、１２４Ｉ、１２５Ｉ、１３１Ｉ、１１１Ｉｎ、１１５ｍＩｎ、１８Ｆ、１３Ｎ、１０５Ｒｈ、１５３Ｓｍ、６７Ｃｕ、６４Ｃｕ、１６６Ｈｏ、１７７Ｌｕ、２２３Ｒａ、６２Ｒｂ、１８６Ｒｅおよび１８８Ｒｅ、３２Ｐ、３３Ｐ、４６Ｓｃ、４７Ｓｃ、７２Ｓｅ、７５Ｓｅ、３５Ｓ、８９Ｓｒ、１８２Ｔａ、１２３ｍＴｅ、１２７Ｔｅ、１２９Ｔｅ、１３２Ｔｅ、６５Ｚｎおよび８９Ｚｒ、９５Ｚｒ；または他のキレート化可能な同位体のような、シンチグラフ画像化（またはシンチグラフィ）に適切な放射性同位体；
−  ９９ｍＴｃ、１１１Ｉｎ、および１２３Ｉのような単一光子放射断層撮影（ＳＰＥＣＴ）に適切なガンマ線放射剤
−  光学画像化に適切な色素および蛍光剤
−  １８Ｆのようなポジトロン断層法（ＰＥＴ）に適切な薬剤
を含む。
【００９９】
診断用部分は、直接的な結び付きによる、または担体分子に結び付いたキレート剤を使用するような、様々な方法で、担体分子に対して結び付くことができる。いくつかの実施形態では、診断用部分は、担体主鎖に結び付いたリーシュを使用して結び付くことができる。その後、直接攻撃によるような結合線で記載されるように、１つまたはそれ以上のリーシュのアミノ基に対してコンジュゲートでき、かつそれに診断用部分を結合するように使用できる。いくつかの例では、グルコース部分にアミノチオールリーシュが結び付いていない場合もあることに留意されたい。特定の実施形態は、単一タイプの診断用部分、または様々な診断用部分の混合物を含んでもよい。例えば、本明細書に開示される化合物の実施形態は、ＭＲＩに適切な造影剤、シンチグラフ画像化に適切な放射性同位体、およびさらに本明細書に記載される診断用部分の組合せを含んでもよい。
【０１００】
１個またはそれ以上の診断用部分は、適切なキレート剤を使用して、１つまたはそれ以上のリーシュに結び付くことができる。適切なキレート剤は、例えば、しかし限定されるものではないが、テトラアザシクロドデカン四酢酸（ＤＯＴＡ）、メルカプトアセチルグリシルグリシル−グリシン（ＭＡＧ３）、ジエチレントリアミン五酢酸（ＤＴＰＡ）、ジメルカプトコハク酸、ジフェニルエチレンジアミン、ポルフィリン、イミノ二酢酸、およびエチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ）のような、当業者に公知であるか、または以後開発されるものを含む。
【０１０１】
組成物の特定の実施形態は、約１〜約５ｋＤａ、約１〜約１０ｋＤａ、約１〜約１５ｋＤａ、約５〜約１２ｋＤａ、約５〜約１０ｋＤａ、およびそれらの間の範囲の間の主鎖を含むことができる。いくつかの実施形態では、組成物は、約２〜約７個の間のマンノース分子、約５〜約１０個の間のマンノース分子、約１０〜約１５個の間のマンノース分子、約１５〜約２８個の間のマンノース分子、約１６〜約１７個の間のマンノース分子、およびそれらの間の範囲の間のマンノース分子を含むことができる。いくつかの実施形態では、主鎖は、約１〜約３ｋＤａであってもよく、さらに約３〜約７個のマンノース分子を含んでもよい。いくつかの実施形態では、主鎖は、約１０ｋＤａであってもよく、さらに含約１５〜約２０個、または約１６〜約１７個のマンノース分子を含んでもよい。
【０１０２】
いくつかの実施形態では、ＣＤ２０６標的部分は、それに限定されるものではないが、マンノース、フコース、フコイド、ガラクトース、ｎ−アセチルガラクトサミン、およびｎ−アセチルグルコサミン、ならびにこれらの組合せから選択される。いくつかの実施形態では、標的部分は、デキストラン主鎖の約１０％から約５０％の間のグルコース残基、または約２０％から約４５％の間のグルコース残基、または約２５％から約４０％の間のグルコース残基に結び付いている（合成技術がある程度の可変性をもたらすので、本明細書で言及されるＭＷ、ならびにデキストラン主鎖に結び付いた受容体基質、リンカー、および診断用部分のコンジュゲーションの数および度合が、所与の量の担体分子の平均量を指すことに留意されたい）。
【０１０３】
いくつかの実施形態では、１個またはそれ以上のＣＤ２０６標的部分、および１つまたはそれ以上の検出標識は、デキストランベースの部分にリンカーを介して結び付けられる。リンカーは、約５０％から約１００％まで、または約７０％から約９０％までの主鎖部分に結び付くこともある。複数のリンカーを有する実施形態では、リンカーは同じまたは異なってもよい。いくつかの実施形態では、リンカーは、アミノ末端リンカーである。いくつかの実施形態では、リンカーは、−Ｏ（ＣＨ２）３Ｓ（ＣＨ２）２ＮＨ−を含んでもよい。いくつかの実施形態では、リンカーは、炭素、酸素、硫黄、窒素、およびリンから選択される１〜２０個の員原子の鎖であってもよい。リンカーは、直鎖状または分枝状であってもよい。リンカーはまた、それに限定されるものではないが、ハロ基、ペルフルオロアルキル基、パーフルオロアルコキシ基、Ｃ１〜４アルキルのようなアルキル基、Ｃ１〜４アルケニルのようなアルケニル基、Ｃ１〜４アルキニルのようなアルキニル基、ヒドロキシ基、オキソ基、メルカプト基、アルキルチオ基、アルコキシ基、ニトロ基、アジドアルキル基、アリールまたはヘテロアリール基、アリールオキシまたはヘテロアリールオキシ基、アラルキルまたはヘテロアラルキル基、アラルコキシまたはヘテロアラルコキシ基、ＨＯ−（Ｃ＝Ｏ）−基、複素環式基、シクロアルキル基、アミノ基、アルキル−およびジアルキルアミノ基、カルバモイル基、アルキルカルボニル基、アルキルカルボニルオキシ基、アルコキシカルボニル基、アルキルアミノカルボニル基、ジアルキルアミノカルボニル基、アリールカルボニル基、アリールオキシカルボニル基、アルキルスルホニル基、アリールスルホニル基、−ＮＨ−ＮＨ２；＝Ｎ−Ｈ；＝Ｎ−アルキル；−ＳＨ；−Ｓ−アルキル；−ＮＨ−Ｃ（Ｏ）−；−ＮＨ−Ｃ（＝Ｎ）−等を含む、１個またはそれ以上の置換基で置換できる。他の適切なリンカーは、当業者に公知であろう。
【０１０４】
いくつかの実施形態では、１個またはそれ以上の診断用部分は、生分解性リンカーを介して結び付くことができる。いくつかの実施形態では、生分解性リンカーは、ヒドラゾン部分のような酸感受性部分を含む。特定の実施形態では、リンカーは、リンカーに結び付いた生分解性部分を含む。
【０１０５】
当業者に公知であるか、後に発見される様々な他のリンカーは、−Ｏ（ＣＨ２）３Ｓ（ＣＨ２）２ＮＨ２の適所で（または、それに加えて）使用できる。これらは、例えば、ｒが２〜１２であるアルキレンジアミン類（Ｈ２Ｎ−（ＣＨ２）ｒ−ＮＨ２）；ｒが２〜１２であるアミノアルコール類（ＨＯ−（ＣＨ２）ｒ−ＮＨ２）；ｒが２〜１２であるアミノチオール類（ＨＳ−（ＣＨ２）ｒ−ＮＨ２）；場合によりカルボキシ保護されるアミノ酸類；エチレンおよびポリエチレングリコール類（ｎが１〜４であるＨ−（Ｏ−ＣＨ２−ＣＨ２）ｎ−ＯＨ）のような二官能性リンカー基を含む。適切な二官能性ジアミンは、エチレンジアミン、１，３−プロパンジアミン、１，４−ブタンジアミン、スペルミジン、２，４−ジアミノ酪酸、リジン、３，３’−ジアミノジプロピルアミン、ジアミノプロピオン酸、Ｎ−（２−アミノエチル）−１，３−プロパンジアミン、２−（４−アミノフェニル）エチルアミン、および同様な化合物を含む。１個またはそれ以上のアミノ酸類はまた、β−アラニン、γ−アミノ酪酸、もしくはシステインのような二官能性リンカー分子、またはジ−もしくはトリ−アラニンのようなオリゴペプチドとして利用できる。
【０１０６】
他の二官能性リンカーは：
ｒが２から５までである、−ＮＨ−（ＣＨ２）ｒ−ＮＨ−、
ｒが２から５までである、−Ｏ−（ＣＨ２）ｒ−ＮＨ−、
−ＮＨ−ＣＨ２−Ｃ（Ｏ）−、
−Ｏ−ＣＨ２−ＣＨ２−Ｏ−ＣＨ２−ＣＨ２−Ｏ−、
−ＮＨ−ＮＨ−Ｃ（Ｏ）−ＣＨ２−、
−ＮＨ−Ｃ（ＣＨ３）２Ｃ（Ｏ）−、
ｒが１から５までである、−Ｓ−（ＣＨ２）ｒ−Ｃ（Ｏ）−、
ｒが２から５までである、−Ｓ−（ＣＨ２）ｒ−ＮＨ−、
ｒが１から５までである、−Ｓ−（ＣＨ２）ｒ−Ｏ−、
−Ｓ−（ＣＨ２）−ＣＨ（ＮＨ２）−Ｃ（Ｏ）−、
−Ｓ−（ＣＨ２）−ＣＨ（ＣＯＯＨ）−ＮＨ−、
−Ｏ−ＣＨ２−ＣＨ（ＯＨ）−ＣＨ２−Ｓ−ＣＨ（ＣＯ２Ｈ）−ＮＨ−、
−Ｏ−ＣＨ２−ＣＨ（ＯＨ）−ＣＨ２−Ｓ−ＣＨ（ＮＨ２）−Ｃ（Ｏ）−、
−Ｏ−ＣＨ２−ＣＨ（ＯＨ）−ＣＨ２−Ｓ−ＣＨ２−ＣＨ２−ＮＨ−、
−Ｓ−ＣＨ２−Ｃ（Ｏ）−ＮＨ−ＣＨ２−ＣＨ２−ＮＨ−、および
−ＮＨ−Ｏ−Ｃ（Ｏ）−ＣＨ２−ＣＨ２−Ｏ−Ｐ（Ｏ２Ｈ）−、
を含む。
【０１０７】
本発明に有益な構築物の例は、チルマノセプトおよびｍ−チルマノセプトのようなマンノシルアミノデキストラン（ＭＡＤ）を含む。いくつかの実施形態では、少なくとも１個のＣＤ２０６標的部分が結び付いたデキストランベースの部分は、式（Ｉ）の化合物であってもよく：
【化６】
2020521021.tif 000008
式中、＊は、診断用部分が結び付くことができる点を示す。特定の実施形態では、診断用部分は、リンカーを介して結び付くことができる。特定の実施形態では、ｘは、約１０から約２５、約５から約２５、約１０から約２０、約１５から約２５、約１５から約２０の間、およびそれらの間の範囲の間であってもよい。いくつかの実施形態では、ｙは、約３５から約７０、約４０から約７０、約５０から約６５の間、およびそれらの間の範囲の間であってもよい。いくつかの実施形態では、ｚは、約４０〜約７０、約５０〜約６５、約５０〜約６０の間、およびそれらの間の範囲の間であってもよい。
【０１０８】
他の実施形態では、本発明の化合物は、式（ＩＩ）の化合物：
【化７】
2020521021.tif 000009
［式中、
各Ｘは、独立して、Ｈ、Ｌ１−ＡまたはＬ２−Ｒであり；各Ｌ１およびＬ２は、独立して、リンカーであり；
各Ａは、独立して、検出標識またはＨを含み；
各Ｒは、独立して、ＣＤ２０６標的部分またはＨを含み；
ｎは、ゼロよりも大きい整数である］
であってもよい。
【０１０９】
特定の実施形態では、Ｌ１は、上記したようなリンカーである。特定の実施形態では、Ｌ２は、上記したようなリンカーである。
【０１１０】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載される１容量の化合物は、約５〜５００μｇの間の化合物、約２００〜３００μｇの間の化合物、約１００〜３００μｇの間の化合物、約１００〜２００μｇの間の化合物、約５０〜４００μｇの化合物、約１２５〜１７５μｇの化合物、約１５０μｇの化合物、およびそれらの間の範囲の化合物を含むことができる。特定の実施形態では、放射標識する量は、線量の放射能に影響を及ぼすように変更できる。例えば、約０．１〜５０ｍＣｉ、約０．５〜１０ｍＣｉ、約１０〜５０ｍＣｉ、約１０ｍＣｉ、約５〜２５ｍＣｉ、約１〜１５ｍＣｉ、およびそれらの間の範囲の放射能である。
【０１１１】
合成
本発明の化合物は、文献において公知である、実験の段落に例示されている、または当業者に明白な他の標準の操作に加えて、開示されるスキームに示されるような反応を利用することにより製造できる。以下の例は、本発明をより完全に理解できるように提供され、単に例示となるものであり、および限定するように解釈されるべきでない。明確さのために、本明細書に開示される定義の下で複数の置換基が可能である場合、より少ない数の置換基を有する例が示される。
【０１１２】
各開示された方法が、追加の工程、操作、および／または成分をさらに含むことができることが企図される。任意の１つまたはそれ以上の工程、操作、および／または成分が、場合により、本発明から省略される可能性があることも企図される。開示された方法が、開示された化合物を提供するために使用できることが理解される。開示された方法の生成物が、開示された組成物、キット、および使用に利用できることも理解される。
【０１１３】
本発明の化合物は、当業者に公知の、あらゆる数の手法により合成できる。例えば、リンカー２は、カルバジン酸ｔｅｒｔ−ブチルによって無水コハク酸環を開くことにより合成できる。生じたカルボン酸は、ＥＤＣカップリング試薬を使用して、対応するＮ−ヒドロキシスクシンイミド（ＮＨＳ）エステルに転化される。その後、ＭＡＤは、アミド結合を形成することによりリンカー２で官能化される。その後、Ｂｏｃ保護基は、４を得るために、弱酸性条件（典型的には、ＤＭＳＯ中の３０〜４０％トリフルオロ酢酸）下で除去できる。弱酸性条件は、デキストラン主鎖に存在するグリコシド結合のあらゆる不要な切断を回避するために必要である。生じた官能性ＭＡＤは、サイズ排除濾過により精製できる。
【０１１４】
【化８】
2020521021.tif 000010
【０１１５】
代替的に、本発明の化合物は、スキーム２に従って合成できる。ＭＡＤの遊離第一級アミン基は、無水条件下で余剰なラクトンと反応させることができる。未反応のラクトンは、修飾されたＭＡＤ６を得るために、減圧下で除去できる。対応するヒドラジン誘導体７は、還元剤として、シアノ水素化ホウ素ナトリウムまたはナトリウムトリアセトキシホウ化水素を使用する還元アミノ化反応により製造できる。
【０１１６】
【化９】
2020521021.tif 000011
【０１１７】
ＭＡＤ誘導体４または７への診断用部分のコンジュゲートは、スキーム３に示される通りであってもよい。ＭＡＤ誘導体４または７は、無水酸性条件または水性酸性条件下で、ヒドラゾン結合を形成することにより診断用部分にコンジュゲートできる。
【０１１８】
当業者は、本開示に鑑みて、本発明の化合物を合成するための他の手法を認識することもある。
【０１１９】
本明細書で使用する場合、マンノシル化デキストラン分子構築物（ＭＤＭＣ）は、以下の特徴を共有する化合物のクラスである：
１．デキストランから構成される主鎖、
２．デキストラン主鎖のグルコース部分に結び付いた分子リーシュ、
３．分子リーシュの一部に結び付いたマンノース糖、
４．マンノース部分によって占有されていない分子リーシュに結び付いた１個またはそれ以上の検出部分、
５．マンノースに加えて他の糖部分が、場合により、マンノース部分によっても検出部分によっても占有されていない分子リーシュに付加できる。
【０１２０】
特定のＭＤＭＣに関して、リーシュ、マンノース部分、検出部分、および他の追加された成分（例えば糖類）の、主鎖（例えばデキストラン主鎖）の大きさ、数、および分子構造は、計画的に変化させることができ、これらの変化は、本明細書に含まれる記載に鑑みて当業者により想定されるであろう。ＭＤＭＣは、検出部分の小分子ペイロードをＣＤ２０６発現細胞に送達するように設計された構築物であってもよい。特定の実施形態では、ＭＤＭＣは、検出部分を、アテローム動脈硬化プラークに存在するＣＤ２０６発現細胞に送達するように設計できる。より具体的には、ＭＤＭＣは、検出部分をアテローム動脈硬化プラークに存在するＣＤ２０６発現マクロファージに送達するように設計できる。
【０１２１】
特定の実施形態では、ＭＤＭＣを利用する非侵襲的なマクロファージ特異的分子画像化は、大動脈および／または血管の炎症を画像化または視覚化するために使用できる。より具体的には、画像化または視覚化された大動脈および／または血管の炎症は、アテローム動脈硬化プラークに存在する。いくつかの実施形態では、ＭＤＭＣベースの画像化は、大動脈および／または血管の炎症の定量化を可能とする。いくつかの実施形態では、ＭＤＭＣの構造的マンノース要素は、放射標識されたＭＤＭＣを、活性化されたタイプのマクロファージが高レベルなＣＤ２０６を発現させるＣＤ２０６＋マクロファージに導くことができる。９９ｍＴｃ−チルマノセプトは、ＭＤＭＣの例である（図１）。より具体的には、そのようなＣＤ２０６発現マクロファージは、非石灰化アテローム動脈硬化プラークのような血管炎症の部位に蓄積する９９ｍＴｃ信号の区別を可能とする、飲作用のプロセスによりダウンレギュレートされない累積的な様式で、９９ｍＴｃ−チルマノセプトを内部移行する。ＣＤ２０６＋マクロファージを結合するための９９ｍＴｃ−チルマノセプトの特異性を考えると、このように定量化された大動脈の炎症は、インサイチュ動脈ＣＤ２０６＋マクロファージ浸潤に反映すると考えられることもある。マクロファージがアテローム動脈硬化プラークの進行を促進するという認識は、動脈炎を機能的に画像化するより特異的な非侵襲的分子技術の発展に弾みをつけており、そのような欠点に対処するための必要性が存在する。そのような技術は、臨床的アテローム動脈硬化症に媒介されるＣＶＤ心血管系事象の危険性がある患者を識別し、および抗炎症薬アテローム動脈硬化症標的療法に対するそのような患者の反応を追跡するのに役立つことが期待できる。
【０１２２】
９人の対象が参加した画像化の研究を実行した。全ての対象は、ＣＶＤの事象（ＭＩまたはＩＳ）を経験する中リスクを示すフラミンガムリスクスコア（ＦＲＳ）を有していた。対象のいずれも、画像化の研究の時点ではＣＶＤの症候を示さなかった。全ての対象は、中程度のＦＲＳにより、あるレベルのアテローム動脈硬化プラーク負荷を有することが予想された。対象のうちの６人はＨＩＶ＋であり、３人はＨＩＶ−であった。ＨＩＶ＋およびＨＩＶ−の対象のこの分布は、画像化前に、ＨＩＶ＋対象がＨＩＶ−対象よりも高いアテローム動脈硬化プラーク負荷を有することが予期されたために選択され、これにより、研究が、広範囲のプラーク負荷を有する対象を評価することを可能とする。対象の各々において、９９ｍＴｃ−チルマノセプトの全身投与は、血管系、いくつかの実施形態では大動脈における９９ｍＴｃ−チルマノセプト取り込みの著しい増大をもたらした。ＨＩＶ−対象の間で、９９ｍＴｃ−チルマノセプトの大動脈の取り込みが特に顕著であった（図２）。実際に、ＨＩＶ−対象の間で、高レベルな９９ｍＴｃ−チルマノセプト（非罹患血管組織の４０倍高い）取り込みは、平均２０．４％の大動脈の表面体積にわたって検出可能であった。ＦＲＳに対するＨＩＶ＋コホートと好一対のＨＩＶ−対象の間で、高レベルな９９ｍＴｃ−チルマノセプト取り込みは、大動脈の表面体積の平均４．３％にわたって検出可能である（図３）。これらの結果は、ＨＩＶ−対象が、ＨＩＶ＋対象よりも炎症性アテローム動脈硬化プラークが少ないという事前の画像化の予想と一致する。
【０１２３】
ＨＩＶ＋対象の大動脈の９９ｍＴｃ−チルマノセプト取り込みの臨床的意義上の文脈は、同時に実行される以下の２つの非侵襲的画像化研究からの発見により示すことができる：ＣＴＡ、および［１８Ｆ］Ｎａ−ＰＥＴ／ＣＴスキャン。ＣＴＡは、非石灰化プラークの体積、ひどく石灰化したプラークの体積、および合計プラーク体積を含む、大動脈および冠状動脈の無症候性なプラーク体積の定量化を達成する。［１８Ｆ］Ｎａ−ＰＥＴ／ＣＴスキャンは、活発な動脈／プラーク石灰化の領域のより正確な識別を可能とする。高レベルな９９ｍＴｃ−チルマノセプト取り込みを有する大動脈の体積と、非石灰化大動脈プラーク体積との有意な関係が識別できる（ｒ＝．０７８、ｐ＝．０１）（図７Ｆ）。ＣＶＤに関して無症状の個体の動脈炎とプラーク体積との間の病態生理学的な関連性は、本明細書に開示される実施形態を使用して識別できる。個々の指標対象の大動脈の９９ｍＴｃ−チルマノセプト取り込みと、大動脈の［１８Ｆ］Ｎａ取り込みとの比較は、空間的に非同期な取り込みを示した（図４）。そのような非同期は、９９ｍＴｃ−チルマノセプトＳＰＥＣＴスキャンが、炎症プロセスに積極的に関連するアテローム動脈硬化プラークの領域を優先的には識別し、これにより、破裂する可能性が高く、石灰化プラーク領域よりもＣＶＤの事象の原因となるプラークの領域が示唆されることを示す。
【０１２４】
本研究の強みは、９９ｍＴｃ−チルマノセプトの全身投与とその後のＳＰＥＣＴ／ＣＴスキャンを利用する、動脈マクロファージ浸潤を定量化するマクロファージ特異的な非侵襲的画像化戦略のヒト初の実証を含む。この新規な機能的動脈画像化技術は、［１８Ｆ］ＦＤＧ−ＰＥＴ／ＣＴスキャンのような既存の技術を超える進歩を表し、これは、マクロファージに特異的ではない。その技術は、薬物関連の有害事象がなく、全ての対象により良好に許容される。技術と併せて施された放射線のレベルは、ＣＴＡのような標準的なアテローム動脈硬化症画像化技術により施されたレベルよりも低かった。
【０１２５】
ヒトの大動脈の９９ｍＴｃ−チルマノセプト取り込みの生物学的意義に関する文脈は、ＮＮＣＴおよびＮＤＲＩのヒト大動脈のサンプルで実行される、説得力のあるエクスビボ共局在実験からもたらされる。これらの実験では、大動脈サンプルを、抗ＣＤ２０６抗体およびＡｌｅｘａ−４８８標識チルマノセプトを用いて調査した。これらの実験は、大動脈切片の細胞上の抗ＣＤ２０６とＡｌｅｘａ−４８８−チルマノセプトとの間で極めて高レベルな共局在を示し、同様な度合の共局在は、ＨＩＶ＋およびＨＩＶ−個体からのサンプルにも存在する（例えば９２対８９％）（図５）。これらの実験は、さらに、大動脈のＣＤ２０６＋マクロファージがまた、ほとんどの場合、活性化マクロファージマーカーＣＤ１６３に対して陽性であることも示した（ＨＩＶ＋個体からのサンプルにおいて約９０％；ＨＩＶ−個体からのサンプルにおいて約８８％）。共に、これらの研究は、チルマノセプトが、高い特異性を有するＣＤ２０６＋細胞を結合すること、およびチルマノセプトが大動脈サンプル中で結合する極めて大多数のＣＤ２０６＋細胞が、活性化マクロファージであることを示し、これが、アテローム動脈硬化プラークに対する９９ｍＴｃ−チルマノセプト局在化の程度が、プラークに存在する活性化マクロファージの数に比例するという主張を裏付ける。
【０１２６】
本明細書において議論されるような組成物は、血管プラークおよび／または動脈炎に関連または関係する疾病のための診断的使用に使用できる。いくつかの実施形態は、動脈炎を画像化する使用を含むこともある。いくつかの実施形態は、を含むこともある。
【実施例】
【０１２７】
全体的な試験デザイン
この研究の主要な目標は、ヒトにおけるＣＤ２０６＋大動脈マクロファージ浸潤のインビボの定量化が、胸部の単光子放射型コンピュータ断層撮影法（ＳＰＥＣＴ）／ＣＴスキャン、その後の９９ｍＴｃ−チルマノセプトの皮下投与により、非侵襲的に遂行できたかどうかを判断することであった。大動脈の９９ｍＴｃ−チルマノセプト取り込みの臨床的意義を文脈に当てはめるために、２つの追加の非侵襲的心血管画像化試験−コンピュータ断層撮影法血管造影法（ＣＴＡ）、および［１８Ｆ］Ｎａ−ＰＥＴ／ＣＴスキャンを実行した。大動脈の９９ｍＴｃ−チルマノセプト取り込みに関する臨床的パラメーターの識別を容易にするために、対象は詳細な病歴を受けた。この研究の結果は公開されている［８２］。
【実施例１】
【０１２８】
事前のＣＴＡに基づき無症候性アテローム動脈硬化症と分かっている６人のＨＩＶ＋対象を、募集および登録した。フラミンガムリスクスコア（ＦＲＳ）が一致する３人のＨＩＶ−対象も、募集および登録した。いずれの群にも、現在または以前に臨床的心血管疾患と分かっている対象はいなかった。
【０１２９】
対象の組入れ／除外基準および登録
研究の両方の群に関して、ＨＩＶ＋およびＨＩＶ−の対象は１８歳以上であった。除外基準は、心筋梗塞、安定もしくは不安定な狭心症、または冠動脈ステント術もしくは手術の病歴；全身性ステロイド薬の処方または抗炎症性／免疫抑制医薬療法を用いる現在の処置；スタチン療法によるあらゆる最近の処置；ＣＤＫ−ＥＰＩにより算出される＜６０ｍｌ／分／１．７３ｍ２の推定糸球体濾過率；デキストラン、および／またはＤＴＰＡ、および／または放射性金属に対するアレルギーと分かっていること；ヨード造影剤に対する重度のアレルギーと分かっていること；β遮断剤またはニトログリセリン（ＣＴＡ間に投与される）に対する臨床的禁忌；過去１２か月以内に受けた著しい放射線曝露；および、ＢＭＩ＞３５ｋｇ／ｍ２（スキャナの限界による）を含んだ。ＨＩＶ＋対象に関して、参加基準はまた、実証されたＨＩＶ感染症、過去３か月以内に処方計画が変更されていない抗レトロウイルス療法の現在の使用、およびＣＴＡで証明可能な無症候性アテローム動脈硬化症を含んだ。３人のＨＩＶ−対象を、以上の基準に基づき選択し、登録した。ＨＩＶ−対象を、ＨＩＶ感染対象間のものに類似するフラミンガムリスクスコアで選択して、群間のＣＶリスクを同等とした。適格な対象は、本明細書に記載されるような研究手順を受けた。
【０１３０】
結果：
ベースライン心血管代謝パラメーター
研究対象の平均年齢は、５８±５歳（平均±ＳＤ）であり、ＢＭＩは、２４．１±４．３ｋｇ／ｍ２であった。ベースライン総コレステロールは、１７８±１８ｍｇ／ｄＬであり、ＨＤＬは、５０（４４、６３）ｍｇ／ｄＬ［中央値（ＩＱＲ）］であり、ＬＤＬは、１０４±１２ｍｇ／ｄＬであった。対象は、研究の１年以内にスタチン療法を受けていなかった。フラミンガムリスクスコアは、群間で有意差はなかった（１１．０％対１０．３％、Ｐ＝０．６２；ＨＩＶ＋対ＨＩＶ−、表１）。ＨＩＶ＋対象間で、ＨＩＶ診断からの継続時間は、２３．５±８．０年であり、ｌｏｇ１０ＶＬは、１．４（１．３、２．８）コピー／ｍＬであり、およびＣＤ４＋Ｔ細胞の総数は、５３４±１３８細胞／ｍｍ３であった（表１）。
【０１３１】
【表１】
2020521021.tif 000012
【０１３２】
ＳＰＥＣＴ／ＣＴでの９９ｍＴｃ−チルマノセプト取り込みの領域
全ての対象に関して、腎臓の一部を含む、首の中間から肝臓の最下部まで及ぶ９９ｍＴｃ−チルマノセプトＳＰＥＣＴ／ＣＴ画像を、画像収集ウインドウ内で収集した。全ての対象の間で、具体的には３つの領域：腎臓、肝臓、および大動脈における９９ｍＴｃ−チルマノセプト取り込みを視覚化した（図６）。ＣＤ２０６を通常発現する細胞は、肝臓および腎臓に存在することが公知である。これらの領域の高い９９ｍＴｃ−チルマノセプト取り込みは、筋肉のような他の領域で観察される９９ｍＴｃ−チルマノセプトの取り込みの低さと対照的である。肝臓における取り込みは、ＨＩＶ感染対象とＨＩＶ非感染対象の間では同様であった（筋肉に対する肝臓における９９ｍＴｃ−チルマノセプト取り込みの比は、ＨＩＶ感染群の５．７（５．５、８．１）に対してＨＩＶ非感染群の５．１（４．２、５．８）であった（Ｐ＝０．３７））。
【０１３３】
ＳＰＥＣＴ／ＣＴでの大動脈の９９ｍＴｃ−チルマノセプト取り込み
全ての研究の対象の間で、ＳＰＥＣＴ／ＣＴによる９９ｍＴｃ−チルマノセプト取り込みは、具体的には大動脈弓で観察された（図２）。静脈血プールにおける低レベルの９９ｍＴｃ−チルマノセプト活性の代わりとして、筋肉における９９ｍＴｃ−チルマノセプト取り込みを使用して、各解剖学的関心領域の９９ｍＴｃ−チルマノセプト取り込みを、筋肉の平均９９ｍＴｃ−チルマノセプト取り込みに正規化した。特異性を高め、かついずれの群においても有意であるような低いレベルの大動脈の９９ｍＴｃ−チルマノセプト取り込みの標識領域を避けるため、および分析の厳格さを増大させるために、高レベルな９９ｍＴｃ−チルマノセプト取り込みを、５倍の平均筋肉９９ｍＴｃ−チルマノセプト取り込み以上の、または肝臓で観察される平均の９９ｍＴｃ−チルマノセプト取り込みにおおよそ等しい取り込みとして定義した。その後、大動脈における高レベルな９９ｍＴｃ−チルマノセプト取り込みの負荷を、高レベルな９９ｍＴｃ−チルマノセプト取り込みを有する大動脈の体積として、および高レベルな９９ｍＴｃ−チルマノセプト取り込みを有する大動脈の体積パーセントとして定量化した。全体として、高レベルな９９ｍＴｃ−チルマノセプト取り込みを有する大動脈の体積は、ＨＩＶ−対象と比較して、ＨＩＶ＋対象の間で有意に高く観察された（３１，９１０（１９，９２２、６５，７４５）対８，２７６（６，５７４、１０，８９０）ｍｍ３、Ｐ＝０．０３；図３Ａ）。高レベルな９９ｍＴｃ−チルマノセプト取り込みを有する大動脈の体積パーセントは、ＨＩＶ非感染対象と比較して、ＨＩＶ感染対象の間でも有意に増大した（２０．４±９．５対４．３±０．７％、Ｐ＝０．００９  図３Ｂ）。
【０１３４】
ＣＴＡおよび［１８Ｆ］Ｎａ  ＰＥＴ／ＣＴにより評価されたアテローム動脈硬化プラークに対する、大動脈の９９ｍＴｃ−チルマノセプト取り込み
大動脈プラークの体積および位置は、ＣＴＡにより決定され、ＳＰＥＣＴ／ＣＴによる大動脈の９９ｍＴｃ−チルマノセプト取り込みに関係していた（図７Ａ〜Ｄ）。ＨＩＶ＋対象は、類似するフラミンガムリスクスコアを有し年齢が一致するＨＩＶ非感染対象と比較して、合計大動脈プラーク体積が増加しており（１０，６２３．２±６７４６．７対２，２７１．３±１，１４８．５ｍｍ３、Ｐ＝０．０３）、ならびに非石灰化大動脈プラークの体積が増加（６，５４１．０±４６９７．３対１，３７１．０±９００．２ｍｍ３、Ｐ＝０．０４）していた（図７Ｅ）。対照的に、合計の大動脈カルシウムスコアは、群間で異なることはなかった（図７Ｇ）。合計の非石灰化および石灰化冠状動脈プラークの体積は、ＨＩＶ＋群において、［４３２．１（１３１．６、８１３．７）、１５１．４（５２．４、３８８．４）、およびそれぞれ２９６．７±２５７．６ｍｍ３］、ならびにＨＩＶ非感染群において、［２２．０（０．０、５６５．８）、４．３（０．０、２４６．１）、およびそれぞれ１１２．５±１７９．７ｍｍ３］であった。全ての研究の対象の間では、高レベルな９９ｍＴｃ−チルマノセプト取り込みを有する大動脈の体積パーセントと、大動脈のアテローム動脈硬化プラークの全体積との間で著しい相関があった（Ｒ＝０．７３、Ｐ＝０．０３）。９９ｍＴｃ−チルマノセプトの大動脈取り込みと、ＣＴＡにより決定されるような合計のプラークアテローム動脈硬化体積との間のこの相関は、ＨＵ＜１３０のｘ線不透明度を有するアテローム動脈硬化プラークとして定義されるような非石灰化プラークへの高レベルな９９ｍＴｃ−チルマノセプト取り込みにより、主として引き起こされた（Ｒ＝０．７８、Ｐ＝０．０１；図７Ｆ）。対照的に、本明細書に記載されるような組成物および方法は、高レベルな９９ｍＴｃ−チルマノセプト取り込みを有する大動脈の体積パーセントが、石灰化アテローム動脈硬化プラーク（ＨＵ＞１３０）と有意に相関していなかった（Ｒ＝０．５６、Ｐ＝０．１２）という予期しない結果をもたらした。対象を、９９ｍＴｃ−チルマノセプト局在化（取り込み）と、石灰化および非石灰化アテローム動脈硬化プラークの空間的分布との間の関係をさらに調査するために、［１８Ｆ］Ｎａ  ＰＥＴ／ＣＴによっても評価した（図４）。［１８Ｆ］Ｎａ、および高レベルな９９ｍＴｃ−チルマノセプトの取り込みの共局在のいくつかの領域が観察されたが；［１８Ｆ］Ｎａ取り込みおよび高レベルな９９ｍＴｃ−チルマノセプト取り込みの大部分の領域は、相互に区別できた。共に、９９ｍＴｃ−チルマノセプトのＳＰＥＣＴ／ＣＴにより得られる画像と比較して、ＣＴＡおよび［１８Ｆ］Ｎａ  ＰＥＴ／ＣＴの研究の両方からの画像は、全身投与された９９ｍＴｃ−チルマノセプトが、非石灰化アテローム動脈硬化プラークに局在化し、かつそこに優位に取り込まれ、非石灰化アテローム動脈硬化プラークの解剖学的位置および体積の定質的ＳＰＥＣＴ／ＣＴ画像化を可能とするという、驚くべきかつ予期しない結果をもたらした。
【実施例２】
【０１３５】
ＨＩＶ個体および非ＨＩＶ個体からの組織バンクの大動脈サンプルに対するエクスビボ実験
国立神経ＡＩＤＳ組織協会（ＮＮＴＣ）および国立疾患研究所（ＮＤＲＩ）から得た、１０人のＨＩＶ＋個体および１０人のＨＩＶ−個体からの大動脈の切片を研究した。おそらく、ＨＩＶ＋個体が経験した慢性炎症が原因で、ＣＤ２０６＋細胞／ｍｍ２の平均数は、ＨＩＶ−個体からの大動脈切片と比較して、ＨＩＶ＋個体からの大動脈切片で有意に高かった（３０．１±７．９対１４．２±７．０マクロファージ／ｍｍ２、Ｐ＝０．０００２、図５Ａおよび５Ｂ）。ＨＩＶ＋およびＨＩＶ−個体の両方からのサンプルでは、大多数のＣＤ２０６＋細胞が、活性化マクロファージマーカーであるＣＤ１６３を発現させることも示し、これにより、大多数のＣＤ２０６＋細胞がマクロファージであったことを確認した。ＨＩＶ感染個体とＨＩＶ非感染個体からの大動脈サンプルのＣＤ２０６＋ＣＤ１６３＋マクロファージのパーセンテージは、それぞれ９０．０±６．３％に対して８８．３±４．５％であった（図５Ｄおよび５Ｆ）。別のセットの実験では、ＨＩＶ＋およびＨＩＶ−個体からの大動脈の切片は、ＣＤ２０６＋に対する抗体および蛍光標識チルマノセプトにより調査された。
【０１３６】
抗ＣＤ２０６抗体および蛍光性チルマノセプトが局在化した（ＣＤ２０６＋チルマノセプト＋）細胞のパーセンテージは、それぞれＨＩＶ＋およびＨＩＶ−個体に由来するサンプルに関して８９．１±６．３％対８６．３±６．８％であった（図５Ｃ、５Ｅ）。ＣＤ２０６＋チルマノセプト−マクロファージのパーセンテージは、ＨＩＶ＋個体で７．８±７．０％、およびＨＩＶ−個体で１０．４±６．２％であった。両方の群からの大動脈サンプルは、チルマノセプト陽性であったが、ＣＤ２０６陰性であった極めて低い割合の細胞も示した（ＨＩＶ＋で３．１±１．８％およびＨＩＶ−で３．３±２．１％）（図５Ｅ）。これらの実験は、大動脈サンプルにおけるチルマノセプトの局在化が、主として、活性化マクロファージで発現させられるＣＤ２０６に結合するチルマノセプトが原因であることを実証する。これらの結果は、９９ｍＴｃ−チルマノセプトがアテローム動脈硬化プラークの非石灰化部分に主要素をなすように局在化することが示された、実施例１に示される画像化の結果の解釈に関連する。総合して、実施例１および実施例２から説明される発見は、９９ｍＴｃ−チルマノセプトの局在化および画像化の発見が、非石灰化プラークで最も数多く発生するマクロファージに発現したＣＤ２０６への９９ｍＴｃ−チルマノセプトの結合および内部移行によるものであるという、予期しない非常に臨床的に有意な結果を実証する。したがって、９９ｍＴｃ−チルマノセプトＳＰＥＣＴ／ＣＴ画像化は、非石灰化プラークの解剖学的位置および体積を提供するだけでなく、炎症性微小環境、具体的には、アテローム動脈硬化プラーク内で発生する炎症性病状への活性化マクロファージの関与の程度についての情報も提供している。アテローム動脈硬化症は、非石灰化プラークの破裂による死亡および障害の原因となる、慢性、マクロファージ媒介性、非適応性、炎症性の症候群である。非石灰化プラーク内の炎症への活性化マクロファージの関与を直接測定およびモニタリングするための能力は、アテローム動脈硬化症関連ＣＶＤの事象を経験するリスクにある患者のための療法の管理を容易にする、およびモニタリングすることに大きな意義を有する。
【０１３７】
研究手順の方法
対象は、同じ日に、９９ｍＴｃ−チルマノセプトＳＰＥＣＴ／ＣＴおよび［１８Ｆ］Ｎａ−ＰＥＴ／ＣＴを受け、加えて、別の日にＣＴＡを受けた。
【０１３８】
９９ｍＴｃ−チルマノセプトＳＰＥＣＴ／ＣＴ
９９ｍＴｃ−チルマノセプトＳＰＥＣＴ／ＣＴを、Ｓｙｍｂｉａ  Ｔ６  ＳＰＥＣＴ／ＣＴ（Ｓｉｅｍｅｎｓ、Ｈｏｆｆｍａｎ  Ｅｓｔａｔｅｓ、ＩＬ）を使用して実行した。ＳＰＥＣＴ／ＣＴ実施要領は、以下の通りであった：画像化前に、ＩＶアクセスを、腕または手の血管で得た。＜２ｍＣｉ（５０マイクログラム）（１．３７〜１．８５ｍＣＩ）の放射性トレーサ９９ｍＴｃ−チルマノセプトの総量を、核医学において熟練した医師により皮下注射した。各対象の、合計注入量、注入部位、および注入のタイミングを、図９に報告した。
【０１３９】
６人のＨＩＶ感染指標対象を初めに研究した後、対照対象を研究した。第１の指標対象に関しては、右足の長母趾伸筋と、第１の長指伸筋の腱との間の皮下組織に単回注入投与した。第２の指標対象に関しては、左足の類似の皮下組織空間に２回注入投与した。第３〜９の対象（４人の追加のＨＩＶ感染指標対象、および３人のＨＩＶ非感染対象）に関しては、各足の類似の空間に単回注入投与した。第１の対象に関しては、ＳＰＥＣＴ／ＣＴ画像を、９９ｍＴｃ−チルマノセプト注入の２０分後（３０分のスキャン継続時間）に、および９９ｍＴｃ−チルマノセプト注入の９４分後（６０分のスキャン継続時間）に取得した。第２の対象に関しては、ＳＰＥＣＴ／ＣＴ画像を、４０分後（３０分のスキャン継続時間）に、および１５５分後（６０分のスキャン継続時間）に取得した。９９ｍＴｃ−チルマノセプトＳＰＥＣＴ取り込みが、画像収集の第２の時点でより堅調であることがわかったので、次の（第３の）対象に関しては、画像収集は、注入の１２６分後（９０分のスキャン継続時間）に開始した。次の６人の対象に関しては、画像収集を、注入の約１８０〜２０９分後（９０分のスキャン継続時間）に開始した。各対象に関して、スキャナテーブル上の位置が類似していた。残像形スコープを使用して、関心領域が視野に含まれるように対象を配置した。Ｈモードのカメラヘッドを用いて、ＳＰＥＣＴの収集を、各カメラヘッド毎に３６０度の２×１２０ビュー、ステップアンドシュートモード、胸部のビュー当たり４５秒を用いて実行した。胸部の画像を、全ての対象に関して、首の中間から腎臓の一部を含む肝臓の最下部にまで拡張した。全ての投影を、２つのエネルギーウインドウ、すなわち［９０〜１２０ｋｅｖ］および［１２６〜１５４ｋｅｖ］で収集した。ＳＰＥＣＴの収集が終了した後、対象のＣＴスキャンを同じスキャナ上で収集し、ベッドの幾何学的形状を記録して、ＳＰＥＣＴ／ＣＴの自動相互位置合わせを可能とした。ＳＰＥＣＴ画像を、８つのサブセットおよび４回の反復で、反復するサブセット化による期待値最大化アルゴリズム（ＯＳＥＭ）を用いて再構成し、補正を、コンプトン散乱およびＣＴベースの減衰に対して行った。生じた再構成像の体積を、関心の参照領域に正規化された関心のチルマノセプト取り込みの領域上に描かれた、ＣＴガイド下の関心体積（ＶＯＩ）を使用し、バックグラウンド比率に対して標的を定量化するために使用した。
【０１４０】
全ての画像分析を、ソフトウェアＡＭＩＤＥ４６を使用して実行した。各対象に関しては、ＣＴガイド下の関心体積を、肝臓の右葉の大部分（１５６．０±６６．５ｃｃ）を覆うように、および三頭筋を左右対称に覆うように描いた。平均筋活動の平均肝臓活性に対する比率は、全ての対象（０．１８±０．０４）の間で、群間の有意差なく比較的一貫していた（Ｐ＝０．１６）。チルマノセプト注入の皮下経路が原因で、チルマノセプト取り込みのＳＵＶ算出は、適切ではなく、したがって、関心領域のチルマノセプト取り込みを、参照領域のチルマノセプト取り込みと比較して示した。対象および群にわたり低く一貫した活性のため、筋肉を、分析のための参照領域として選択した。各対象に関しては、チルマノセプト活性（取り込み）を、１の平均筋活動に正規化した。チルマノセプトの合計の大動脈取り込みを、以下のように筋活動に正規化された画像で分析した：各対象に関しては、ＣＴガイド下のＶＯＩを、ＳＰＥＣＴ視野で目視可能な大動脈の全体を覆うように手描きした。このＶＯＩは、大動脈根から大動脈弓まで拡張し、ＳＰＥＣＴ視野の末端の下行大動脈（肝臓の最下部に近い）で終端とした。大動脈ＶＯＩの平均サイズは、全ての対象に関して２０１±６３ｃｃであった。大動脈の分析の特異性を保証するために、「高レベルな」チルマノセプト取り込みを、筋活動の５倍の活性（取り込み）を有する任意のボクセル（この用語は、ＶＯＩ分析に関して使用され、当業者は、本発明の文脈においてその用語を理解するような）として定義した。チルマノセプト取り込みのこのレベルは、肝臓で観察される平均活量とほぼ同等であった（図６）。各対象に関しては、「高レベルな」活性しきい値以上であった大動脈ＶＯＩ内の全体積を算出し、そのレベル以上の全体積のパーセントも算出した。
【０１４１】
コンピュータ断層撮影血管造影法（ＣＴＡ）
冠動脈および胸部大動脈のＣＴＡを、Ｓｏｃｉｅｔｙ  ｏｆ  Ｃａｒｄｉａｃ  Ｃｏｍｐｕｔｅｄ  Ｔｏｍｏｇｒａｐｈｙの指針に従って、Ｓｏｍａｔｏｍ  Ｄｅｆｉｎｉｔｉｏｎ  Ｆｌａｓｈ１２８スライスデュアルソースＣＴスキャナ（Ｓｉｅｍｅｎｓ  Ｍｅｄｉｃａｌ  Ｓｏｌｕｔｉｏｎｓ、Ｆｏｒｃｈｈｅｉｍ、Ｇｅｒｍａｎｙ）を用いて実行した４７。ＣＴプロトコルは、カルシウムスコアリングのための非造影ＣＴ、タイミングボーラス、および造影増強ＣＴＡを含んだ。ＣＴの直前に、舌下ニトログリセリン０．６ｍｇを、血管拡張のために与えた。Ｚ軸適用範囲を、吸気呼吸停止中に、大動脈弓の上から横隔膜の水準まで拡張した。非造影カルシウムスコアＣＴ収集は、１２０ｋＶの管電圧および８０ｍＡの管電流を用いる前向きＥＣＧ同期であり；画像再構成は、石灰化プラークのピクセル解像度を最適化するように、１．５ｍｍの重複を含む３ｍｍの厚さ、軟組織フィルター補正逆投影カーネル（Ｂ３５ｆ）、および制限のある視野＜２５ｃｍであった。２０ｃｃのタイミングボーラス後に、６０〜８０ｃｃの静脈内造影剤（Ｉｏｐａｍｉｄｏｌ  ３７０ｇ／ｃｃ、Ｂｒａｃｃｏ  Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ，Ｉｎｃ、Ｐｒｉｎｃｅｔｏｎ、ＮＪ  ＵＳＡ）を、対象サイズに基づく４．５〜５．４ｃｃ／秒の速度で、肘前の静脈内カテーテルを介して注入した。各造影ボーラス後に、４０ｃｃの通常の生理食塩水洗浄を行った。前向きＥＧＣトリガ（Prospectively ECG-triggered）または後向きＥＧＣ同期（retrospectively ECG-gated）のＣＴＡスキャンモードを、心拍数に基づいて利用した。以下のＣＴＡ収集パラメーターを適用した：１００ｋＶの管電圧；３８０ｍＡが基準のＥＣＧ依存管電流変調；心拍数に基づく適応ピッチ０．２〜０．４；視準１２８×０．６ｍｍ；回転時間２８０ｍｓ；および、時間分解能７５ｍｓ。画像を、Ｒ−Ｒ間隔の６０％から７５％の間の５％の間隔、またはＲ波後の２００ｍｓから４４０ｍｓの間の２０ｍｓの間隔、０．７５ｍｍのスライス厚、０．４ｍｍのインクリメント、軟組織反復再構成カーネル（Ｉ３１ｆ）、および＜２５ｃｍの限定的な視野で再構成して、大動脈プラークおよび冠動脈プラークのピクセル解像度を最適化した。
【０１４２】
ＣＴＡ上の冠動脈および胸部大動脈プラーク体積の半自動測定を、専用の３Ｄワークステーション（Ａｑｕａｒｉｕｓ  ｉＮｔｕｉｔｉｏｎバージョン４．１１、Ｔｅｒａｒｅｃｏｎ、Ｆｏｓｔｅｒ  Ｃｉｔｙ、ＣＡ  ＵＳＡ）を使用して実行した。ソフトウェアが、中心線検出後に、動脈を通る湾曲した多断面の長軸および短軸画像を生成し、その後、内側管腔および外側動脈壁の輪郭を生成した。管腔および壁の境界の手動調整を、必要に応じて実行した。プラークを、任意の目視可能な局所的または周囲の壁肥厚として定義し；プラーク長を、近位および遠位のプラーク限界にカリパスを用いて視覚的に確立させた。非石灰化プラーク体積を、＜１３０ハンスフィールド単位（ＨＵ）の、ＣＴ減衰を含むボクセルとして定義し；合計プラーク体積を、任意の減衰のボクセルとして定義した。この体積測定のプラーク測定技術は、以前より、冠状動脈プラーク体積に対する、優れた観測者内、観察者間、飛び越し走査の再現性を有すると示されてきた４８〜５３。
【０１４３】
冠動脈および胸部大動脈石灰化の存在および程度を、非造影カルシウムスコアＣＴで評価し、＞１３０のハンスフィールド単位（ＨＵ）のしきい値を使用して石灰化プラークを定義するＡｇａｔｓｔｏｎ法を使用して算出した５４。大動脈弓プラークの、最小値投影（ＭｉｎＩＰ）および３ｄ体積レンダリング画像を、提示目的のために、３ｄワークステーション（ＡＱｉ、Ｔｅｒａｒｅｃｏｎ、Ｆｏｓｔｅｒ  Ｃｉｔｙ、ＣＡ  ＵＳＡ、およびＳｙｎｇｏＶｉａ、Ｓｉｅｍｅｎｓ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ、Ｅｒｌａｎｇｅｎ  Ｇｅｒｍａｎｙ）を使用して生成した。
【０１４４】
［１８Ｆ］Ｎａ−ＰＥＴ／ＣＴ
［１８Ｆ］Ｎａ−ＰＥＴ／ＣＴを、Ｓｉｅｍｅｎｓ  Ｂｉｏｇｒａｐｈ  ＰＥＴ／ＣＴ  ６４スライスシステム（Ｓｉｅｍｅｎｓ  Ｍｅｄｉｃａｌ  Ｓｏｌｕｔｉｏｎｓ、Ｋｎｏｘｖｉｌｌｅ、ＴＮ）を使用して実行した。ＰＥＴ／ＣＴプロトコルは、以下の通りであった：画像化前に、ＩＶアクセスを、腕または手の血管で得た。約４ｍＣＩの放射性トレーサ１８Ｆ−ＮａＦのＩＶ注入を行った。カテーテルを、およそ４０ｍｌの生理食塩水で注入後に洗浄した。［１８Ｆ］Ｎａ−ＰＥＴ／ＣＴスキャンを、その約６０分後に開始した。対象当たりのスキャンに対する注入量、注入の位置、および注入のタイミングは、公開されている［１４］。［１８Ｆ］Ｎａ−ＰＥＴ／ＣＴスキャンに関しては、対象を、背面および／または脚部の下に支持デバイスを備えたスキャナテーブルに配置した。およそ６０分の遅延時間後に、ＰＥＴ画像（２〜３つのベッド位置において、頭蓋骨の中央から肝臓の下部まで）をスカウトＣＴからの解剖学的目印に基づくＰＥＴスキャナを使用して収集した。減衰補正ＣＴスキャン（非増強の１２０ｋＶおよび５０ｍＡ）を最初に実行した後、２０分間／ベッドの位置で首および胸部のＰＥＴ画像化を実行した。同発事象データを、リストモードフォーマットで収集および記憶し、サイノグラム空間で圧縮した。偶発およびコンプトン散乱を推定し、減衰補正に加えて、反復するＯＳＥＭ再構成アルゴリズムに組み入れた。画像を、４回の反復および１６個のサブセットを用いるＯＳＥＭを使用して再構成した。補正を、散乱、偶発、および減衰に関して実行した。体重当たりの注入量で割ったトレーサの減衰補正された組織中濃度として定義される最大の標準取り込み値ＳＵＶを、上大静脈における血液プール活性に対して計算および補正した。
【０１４５】
人体測定値：対象の身長および体重を測定し、ＢＭＩを計算した。
【０１４６】
アッセイ：クレアチニン、グルコース、ＣＢＣ、脂質レベル、およびＨｂＡ１ｃを、標準的技術を使用する標準的化学および血液学研究所を介して測定した。ＨＩＶ感染対象に関しては、ＨＩＶウイルス負荷を、超高感度ＲＴ  ＰＣＲにより決定した（Ｃｏｂａｓ  Ａｍｐｌｉｐｒｅｐ／Ｃｏｂａｓ  Ｔａｑｍａｎ  ＨＩＶ−１検定；検出下限、２０コピー／ｍＬ）。ＨＩＶ非感染対象に関しては、ＨＩＶ検査を、ＥＬＩＳＡ（Ａｂｂｏｔｔ）により実行した。
【０１４７】
ＨＩＶ個体および非ＨＩＶ個体からの組織バンクの大動脈サンプルに対するエクスビボ実験
ＨＩＶである（ｎ＝１０）およびＨＩＶではない（ｎ＝１０）個体からの大動脈サンプルを、国立神経ＡＩＤＳ組織協会（ＮＮＴＣ）および国立疾患研究所（ＮＤＲＩ）から得た。原形のこれらの大動脈切片を、ホルマリン固定およびパラフィン包埋した。これらの切片の処理は、以下の通りであった：切片を、キシレンおよび段階的なエタノール中で脱パラフィンおよび再水和した後、２０分間高熱を用いて抗原賦活化（Ｖｅｃｔｏｒ）を行った。その後、切片を、ペルオキシダーゼブロック（Ｄａｋｏ）でインキュベートし、ＴＢＳ−Ｔ中で洗浄した後、３０分のタンパク質ブロックを行った。
【０１４８】
ＣＤ２０６およびＣＤ１６３に対する抗体を用いる単一標識免疫組織化学的検査
切片を、ＣＤ２０６（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ）またはＣＤ１６３＋（Ｓｅｒｏｔｅｃ）を認識するモノクローナル抗体で、４℃で一晩（ＣＤ２０６）または室温で１時間（ＣＤ１６３）インキュベートした。切片をＴＢＳ−Ｔ中で洗浄し、西洋ワサビペルオキシダーゼ（Ｄａｋｏ）にコンジュゲートする抗マウス二次抗体でインキュベートした。反応生成物を、３，３’−ジアミノベンジジンテトラヒドロクロリド（ＤＡＢ、Ｄａｋｏ）を使用して視覚化した。免疫陽性マクロファージ／ｍｍ２の平均数±標準偏差（ＳＤ）を、Ｐｌａｎ−Ａｐｏｃｈｒｏｍａｔ  ×２０／０．８  Ｋｏｒｒ対物レンズを備えたＺｅｉｓｓ  Ａｘｉｏ  Ｉｍａｇｅｒ  Ｍ１顕微鏡（Ｃａｒｌ  Ｚｅｉｓｓ  Ｍｉｃｒｏｉｍａｇｉｎｇ  Ｉｎｃ．、Ｔｈｏｒｎｗｏｏｄ、ＮＹ）を使用して、切片当たり２０の非重複２００倍視野（視野領域＝０．１４８ｍｍ２）から陽性マクロファージの数を集計することにより決定した。
【０１４９】
ＣＤ２０６およびＣＤ１６３に対する抗体、ならびに蛍光標識チルマノセプトを用いる二重標識免疫蛍光法
切片を、０．１％ＴｒｉｔｏｎＸ−１００／ＰＢＳ／魚皮ゼラチン（ＦＳＧ）中で透過処理し、ＰＢＳ／ＦＳＧを用いて洗浄した。それらを、１０％正常ヤギ血清（ＮＧＳ）を用いてＰＢＳ／ＦＳＧ中でブロッキングした後、ＰＢＳ／ＦＳＧ／正常ヤギ血清中で希釈した一次抗体で一晩のうち１時間インキュベーションを行った。一次インキュベーション後、切片を、ＰＢＳ／ＦＳＧ中で洗浄した後、ＰＢＳ／ＦＳＧ／正常ヤギ血清で希釈した蛍光二次抗体を追加した。最後に、切片を、ＰＢＳ／ＦＳＧ中で洗浄し、酢酸アンモニウム中の硫酸銅で４５分間インキュベートして、自家蛍光をクエンチした。組織切片を、ＣＤ２０６、ＣＤ１６３、およびチルマノセプトの組合せを用いて着色し、Ａｐｏｔｏｍｅフィルターおよび×２００対物レンズを備えたＺｅｉｓｓ  Ａｘｉｏ  Ｉｍａｇｅｒ．Ｚ２を使用して視覚化した。ＣＤ２０６およびＣＤ１６３の抗体で二重標識された切片に関しては、ＣＤ２０６＋ＣＤ１６３＋、ＣＤ２０６＋ＣＤ１６３−、ＣＤ２０６−ＣＤ１６３＋、および細胞のパーセンテージを、各表現型の陽性細胞の数を集計し、視野中の細胞の合計数で割ることにより決定した。平均パーセンテージを、２０の無作為な非重複２００倍視野から算出した。ＣＤ２０６およびチルマノセプトで二重標識された切片に関しては、ＣＤ２０６＋チルマノセプト＋、ＣＤ２０６＋チルマノセプト−、およびＣＤ２０６−チルマノセプト＋細胞のパーセンテージを、各表現型の陽性細胞の数を集計し、視野中の細胞の合計数で割ることにより決定した。平均パーセンテージを、２０の無作為な非重複２００倍視野から算出した。
【０１５０】
統計的考察
主要エンドポイントは、ＳＰＥＣＴ／ＣＴスキャンでの大動脈の９９ｍＴｃ−チルマノセプト取り込みであった。二次エンドポイントは、ＣＴＡでのプラーク、ＰＥＴ／ＣＴスキャンでの１８Ｆ−ＮａＦ取り込み、ならびに免疫および表現型データであった。本出願人の最初の目標は、ＨＩＶ感染対象の群における９９ｍＴｃ−チルマノセプト画像化の実現可能性を判断することであった。二次的なねらいは、ＨＩＶ感染群対ＨＩＶ非感染群の対象の間で、大動脈における９９ｍＴｃ−チルマノセプト取り込みを比較することであった。本発明者らの最初の推定は、一次比較のために、６人のＨＩＶ感染指標対象および６人のＨＩＶ非感染対照対象のサンプルサイズを用いるものであり、１のシグマ（平均のＳＤ）を仮定し、本出願人らは、８０％の検出力、ｐ＜０．０５における１．８ＳＤの、指標群と対照群との間の平均の正確な差を検出することができたであろう。調査された６人のＨＩＶ感染対象と、３人のＨＩＶ非感染対照対象との間で見られた明確な差に基づいて９人の対象を研究した後に、結果を報告した。連続的な対象の個体群統計学的パラメーターを、正常性に関して評価し、平均±ＳＤまたは中央値（ＩＱＲ）として示した。高レベルな９９ｍＴｃ−チルマノセプト取り込みを有する大動脈の体積および大動脈の体積パーセントに関する群間の比較を、ウィルコクソンの順位検定により比較した。他の比較を、連続変数に対してｔ検定、非連続変数に対してウィルコクソン検定を使用して行った。カテゴリー変数に関する群間の比較を、カイ二乗検定を使用して行った。ＳＰＥＣＴ取り込みと、ＣＴ／代謝／免疫パラメーターとの間の相関を、必要に応じて、ピアソンの相関係数またはスピアマンの順位相関係数を使用して評価した。分析を、ＪＭＰ（バージョン１１；ＳＡＳ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ、Ｃａｒｙ、ＮＣ）を使用して実行した。エクスビボ実験に関しては、ＨＩＶ個体および非ＨＩＶ個体からの大動脈サンプル中の、ＣＤ２０６＋およびＣＤ１６３＋マクロファージの平均数を比較するために、ｔ検定を使用した。前述の記載は、本発明の好ましい実施形態を対象としているが、他の変形例および修正例が、当業者に対して明白であること、および本発明の精神または範囲から逸脱することなく行うことができることに留意されたい。さらに、本発明の１つの実施形態と共に記載された特徴は、上に明記されていなくとも、他の実施形態と共に使用できる。
【０１５１】
以下の参考文献一覧は、それらの全体、特に、アテローム動脈硬化および血管プラーク等に関する異常および病態の診断および処置に関するそれらの開示が組み入れられる。
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【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５−１】
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【図５−２】
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【図５−３】
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【図６】
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【図７−１】
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【図７−２】
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【図７−３】
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【図８−１】
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【図８−２】
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【国際調査報告】
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