(57)【要約】  本発明は、がんの処置のための、ある特定の二重特異性のＶＥＧＦおよびＡｎｇ２結合分子のＰＤ１アンタゴニストとの組み合わせ使用に関する。本発明は、このような結合分子およびアンタゴニストを含む、医薬組成物およびキットにさらに関する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
腫瘍学的疾患または過剰増殖性疾患を処置または予防する方法であって、それを必要とする患者に、
ａ）治療有効量の化合物Ａ、および
ｂ）治療有効量の化合物Ｂ
を投与することを含み、
ここで、
化合物Ａが、
ＶＥＧＦ結合免疫グロブリン単一可変ドメイン、
血清アルブミン結合免疫グロブリン単一可変ドメイン、および
Ａｎｇ２結合免疫グロブリン単一可変ドメイン
を含む二重特異性結合分子であり、
前記ＶＥＧＦ結合免疫グロブリン単一可変ドメインが、以下のＣＤＲ配列：
ＣＤＲ１：ＳＹＳＭＧ（配列番号１）、
ＣＤＲ２：ＡＩＳＫＧＧＹＫＹＤＡＶＳＬＥＧ（配列番号２）、
ＣＤＲ３：ＳＲＡＹＧＳＳＲＬＲＬＡＤＴＹＥＹ（配列番号３）
を有し、
前記血清アルブミン結合免疫グロブリン単一可変ドメインが、以下のＣＤＲ配列：
ＣＤＲ１：ＳＦＧＭＳ（配列番号４）、
ＣＤＲ２：ＳＩＳＧＳＧＳＤＴＬＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号５）、
ＣＤＲ３：ＧＧＳＬＳＲ（配列番号６）
を有し、
前記Ａｎｇ２結合免疫グロブリン単一可変ドメインが、以下のＣＤＲ配列：
ＣＤＲ１：ＤＹＡＩＧ（配列番号７）、
ＣＤＲ２：ＡＩＲＳＳＧＧＳＴＹＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号８）、
ＣＤＲ３：ＶＰＡＧＲＬＲＹＧＥＱＷＹＰＩＹＥＹＤＡ（配列番号９）
を有し、
化合物Ｂが、ＰＤ−１アンタゴニストである、
前記方法。
【請求項２】
腫瘍学的疾患または過剰増殖性疾患が、がんまたは腫瘍疾患である、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
腫瘍学的疾患または過剰増殖性疾患が、非小細胞肺がん（ＮＳＣＬＣ）である、請求項１または２に記載の方法。
【請求項４】
前記化合物Ａの免疫グロブリン単一可変ドメインが、ＶＨＨドメインである、請求項１から３のいずれか１項に記載の方法。
【請求項５】
化合物Ａが、配列番号：１１、配列番号：１２または配列番号：１３に記載のアミノ酸配列を有する、請求項１から４のいずれか１項に記載の方法。
【請求項６】
ＰＤ−１アンタゴニストが、抗ＰＤ−１抗体または抗ＰＤ−Ｌ１抗体である、請求項１から５のいずれか１項に記載の方法。
【請求項７】
抗ＰＤ−１抗体が、ペムブロリズマブ、ニボルマブ、ピディリズマブ、ＰＤ１−１、ＰＤ１−２、ＰＤ１−３、ＰＤ１−４およびＰＤ１−５からなる群から選択される、請求項６に記載の方法。
【請求項８】
抗ＰＤ−Ｌ１抗体が、アテゾリズマブ、アベルマブおよびデュルバルマブからなる群から選択される、請求項６に記載の方法。
【請求項９】
化合物Ａが、化合物Ｂと、同時に、同時的に、順次、連続的に、交互に、または別々に投与される、請求項１から８のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１０】
腫瘍学的疾患または過剰増殖性疾患、好ましくは、がんまたは腫瘍疾患、とりわけ好ましくは、ＮＳＣＬＣを処置または予防する方法における使用のための、請求項１、４または５のいずれか１項に定義される化合物Ａであって、前記方法が、それを必要とする患者に、化合物Ａを化合物Ｂと組み合わせて投与することを含み、化合物Ｂが、請求項１および６から８のいずれか１項に定義される、化合物Ａ。
【請求項１１】
化合物Ａが、化合物Ｂと、同時に、同時的に、順次、連続的に、交互に、または別々に投与される、請求項１０に記載の使用のための化合物Ａ。
【請求項１２】
腫瘍学的疾患または過剰増殖性疾患、特に、がんまたは腫瘍疾患、とりわけ、ＮＳＣＬＣを処置または予防する方法における使用のための、請求項１および６から８のいずれか１項に定義される化合物Ｂであって、前記方法が、それを必要とする患者に、化合物Ｂを化合物Ａと組み合わせて投与することを含み、化合物Ａが、請求項１、４または５のいずれか１項に定義される、化合物Ｂ。
【請求項１３】
化合物Ｂが、化合物Ａと、同時に、同時的に、順次、連続的に、交互に、または別々に投与される、請求項１２に記載の使用のための化合物Ｂ。
【請求項１４】
腫瘍学的疾患または過剰増殖性疾患、好ましくは、がんまたは腫瘍疾患、より好ましくは、ＮＳＣＬＣを処置または予防するための医薬組成物を調製するための、請求項１、４または５のいずれか１項に定義される化合物Ａの使用であって、化合物Ａが、化合物Ｂと組み合わせて使用され、化合物Ｂが、請求項１および６から８のいずれか１項に定義される、使用。
【請求項１５】
化合物Ａが、化合物Ｂと、同時に、同時的に、順次、連続的に、交互に、または別々に投与される、請求項１４に記載の化合物Ａの使用。
【請求項１６】
腫瘍学的疾患または過剰増殖性疾患、好ましくは、がんまたは腫瘍疾患、より好ましくは、ＮＳＣＬＣを処置または予防するための医薬組成物を調製するための、請求項１および６から８のいずれか１項に定義される化合物Ｂの使用であって、化合物Ｂが、化合物Ａと組み合わせて使用され、化合物Ａが、請求項１、４または５のいずれか１項に定義される、使用。
【請求項１７】
化合物Ｂが、化合物Ａと、同時に、同時的に、順次、連続的に、交互に、または別々に投与される、請求項１６に記載の化合物Ｂの使用。
【請求項１８】
ａ）化合物Ａ、および
ｂ）化合物Ｂ
を含む医薬組成物であって、
ここで、
化合物Ａが、
ＶＥＧＦ結合免疫グロブリン単一可変ドメイン、
血清アルブミン結合免疫グロブリン単一可変ドメイン、および
Ａｎｇ２結合免疫グロブリン単一可変ドメイン
を含む二重特異性結合分子であり、
前記ＶＥＧＦ結合免疫グロブリン単一可変ドメインが、以下のＣＤＲ配列：
ＣＤＲ１：ＳＹＳＭＧ（配列番号１）、
ＣＤＲ２：ＡＩＳＫＧＧＹＫＹＤＡＶＳＬＥＧ（配列番号２）、
ＣＤＲ３：ＳＲＡＹＧＳＳＲＬＲＬＡＤＴＹＥＹ（配列番号３）
を有し、
前記血清アルブミン結合免疫グロブリン単一可変ドメインが、以下のＣＤＲ配列：
ＣＤＲ１：ＳＦＧＭＳ（配列番号４）、
ＣＤＲ２：ＳＩＳＧＳＧＳＤＴＬＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号５）、
ＣＤＲ３：ＧＧＳＬＳＲ（配列番号６）
を有し、
前記Ａｎｇ２結合免疫グロブリン単一可変ドメインが、以下のＣＤＲ配列：
ＣＤＲ１：ＤＹＡＩＧ（配列番号７）、
ＣＤＲ２：ＡＩＲＳＳＧＧＳＴＹＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号８）、
ＣＤＲ３：ＶＰＡＧＲＬＲＹＧＥＱＷＹＰＩＹＥＹＤＡ（配列番号９）
を有し、
化合物Ｂが、ＰＤ−１アンタゴニストである、
前記医薬組成物。
【請求項１９】
前記化合物Ａの免疫グロブリン単一可変ドメインが、ＶＨＨドメインである、請求項１８に記載の医薬組成物。
【請求項２０】
化合物Ａが、配列番号：１１、配列番号：１２または配列番号：１３に記載のアミノ酸配列を有する、請求項１８または１９に記載の医薬組成物。
【請求項２１】
ＰＤ−１アンタゴニストが、抗ＰＤ−１抗体または抗ＰＤ−Ｌ１抗体である、請求項１８から２０のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【請求項２２】
抗ＰＤ−１抗体が、ペムブロリズマブ、ニボルマブ、ピディリズマブ、ＰＤ１−１、ＰＤ１−２、ＰＤ１−３、ＰＤ１−４およびＰＤ１−５からなる群から選択される、請求項２１に記載の医薬組成物。
【請求項２３】
抗ＰＤ−Ｌ１抗体が、アテゾリズマブ、アベルマブおよびデュルバルマブからなる群から選択される、請求項２２に記載の医薬組成物。
【請求項２４】
１つまたは複数の薬学的に許容される、担体、賦形剤および／またはビヒクルをさらに含む、請求項１８から２３のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【請求項２５】
腫瘍学的疾患または過剰増殖性疾患、好ましくは、がんまたは腫瘍疾患、より好ましくは、ＮＳＣＬＣを処置および予防する方法における使用のための、請求項１８から２４のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【請求項２６】
ａ）化合物Ａを含む第１の医薬組成物、および
ｂ）化合物Ｂを含む第２の医薬組成物
を含むキットであって、
ここで、
化合物Ａが、
ＶＥＧＦ結合免疫グロブリン単一可変ドメイン、
血清アルブミン結合免疫グロブリン単一可変ドメイン、および
Ａｎｇ２結合免疫グロブリン単一可変ドメイン
を含む二重特異性結合分子であり、
前記ＶＥＧＦ結合免疫グロブリン単一可変ドメインが、以下のＣＤＲ配列：
ＣＤＲ１：ＳＹＳＭＧ（配列番号１）、
ＣＤＲ２：ＡＩＳＫＧＧＹＫＹＤＡＶＳＬＥＧ（配列番号２）、
ＣＤＲ３：ＳＲＡＹＧＳＳＲＬＲＬＡＤＴＹＥＹ（配列番号３）
を有し、
前記血清アルブミン結合免疫グロブリン単一可変ドメインが、以下のＣＤＲ配列：
ＣＤＲ１：ＳＦＧＭＳ（配列番号４）、
ＣＤＲ２：ＳＩＳＧＳＧＳＤＴＬＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号５）、
ＣＤＲ３：ＧＧＳＬＳＲ（配列番号６）
を有し、
前記Ａｎｇ２結合免疫グロブリン単一可変ドメインが、以下のＣＤＲ配列：
ＣＤＲ１：ＤＹＡＩＧ（配列番号７）、
ＣＤＲ２：ＡＩＲＳＳＧＧＳＴＹＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号８）、
ＣＤＲ３：ＶＰＡＧＲＬＲＹＧＥＱＷＹＰＩＹＥＹＤＡ（配列番号９）
を有し、
化合物Ｂが、ＰＤ−１アンタゴニストである、
前記キット。
【請求項２７】
前記化合物Ａの免疫グロブリン単一可変ドメインが、ＶＨＨドメインである、請求項２６に記載のキット。
【請求項２８】
化合物Ａが、配列番号：１１、配列番号：１２または配列番号：１３に記載のアミノ酸配列を有する、請求項２６または２７に記載のキット。
【請求項２９】
ＰＤ−１アンタゴニストが、抗ＰＤ−１抗体または抗ＰＤ−Ｌ１抗体である、請求項２６から２８のいずれか１項に記載のキット。
【請求項３０】
抗ＰＤ−１抗体が、ペムブロリズマブ、ニボルマブ、ピディリズマブ、ＰＤ１−１、ＰＤ１−２、ＰＤ１−３、ＰＤ１−４およびＰＤ１−５からなる群から選択される、請求項２９に記載のキット。
【請求項３１】
抗ＰＤ−Ｌ１抗体が、アテゾリズマブ、アベルマブおよびデュルバルマブからなる群から選択される、請求項２９に記載のキット。
【請求項３２】
それを必要とする患者における、腫瘍学的疾患または過剰増殖性疾患、好ましくは、がんまたは腫瘍疾患、とりわけ好ましくは、ＮＳＣＬＣの処置または予防における、同時の、同時的な、順次の、連続的な、交互の、または別々の、患者への投与のための、可読の説明書を含む添付文書をさらに含む、請求項２６から３１のいずれか１項に記載のキット。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、がんの処置における組み合わせ治療、およびこのような組み合わせ治療における使用のための化合物に関する。組み合わせのための化合物は、抗体誘導体のような二重特異性結合分子、およびＰＤ−１アンタゴニストである。
【背景技術】
【０００２】
血管新生は、栄養の血液供給、ならびに固形腫瘍の増殖および生存のための必要条件を提供する新たな血管の発生である。血管新生経路に関わる重要な分子を標的とする、がん治療におけるアプローチが行われている。血管内皮増殖因子（ＶＥＧＦ）が最も強力な血管新生増殖因子であると考えられているので、これらは、ＶＥＧＦのシグナル伝達経路の阻害の様式を含む。
肺がんは、２０１２年には世界中でほぼ１６０万人が死亡し、または全体としてがんの死亡率のおよそ２０％という、がん関連死亡率の主要な原因である（Molina et al., Mayo Clin Proc. 2008;83(5):584-594; Chan et al., Transl Lung Cancer Res. 2014;4(1):36-54）。最も一般的な種類の肺がんは、非小細胞肺がん（ＮＳＣＬＣ）であり、これは、すべての肺がんのおよそ８５％を占める（Chen et al. Nat Rev Cancer 2014;14:535-546; Nawaz et al. Nat Rev Drug Discov. 2016;15:229-230）。ＮＳＣＬＣは、今日では、多様な病態生理学的特徴を有する疾患、これらの中でも、最も突出したサブタイプとして、肺腺癌、扁平上皮癌（ＳＣＣ）および大細胞癌の異種のセットを含むものとして理解されている。
【０００３】
近年、化学療法および放射線治療に加えて、診断の時点で局所進行性または転移性疾患を有する患者のための多様な新しい処置の選択肢が、がん、とりわけ、ＮＳＣＬＣのために開発されている。これらの新しい処置方法は、例えば、低分子阻害剤または受容体モノクローナル抗体（ｍＡｂ）を含む標的治療であり、上皮性増殖因子受容体（ＥＧＦＲ）などの受容体チロシンキナーゼ（ＴＫ）における変化を含む、主な細胞シグナル伝達および制御経路の変化、ならびに肺がんにおいて頻繁な血管新生経路における変化に基づく。最近の研究の多くは、ＥＧＦＲの変異、ならびにＥＧＦＲチロシンキナーゼ阻害剤およびクリゾチニブによって阻害される未分化リンパ腫キナーゼ（ＡＬＫ）の異常な融合に焦点を合わせている。ＶＥＧＦを標的とするモノクローナル抗体であるベバシズマブの投与と化学療法を組み合わせることにより、結腸直腸がん（Hurwitz et al. New Eng J Med 2004;350:2335-2342）または進行性の非扁平上皮ＮＳＣＬＣ（Sandler et al. J Clin Oncol 2005 23(16s pt 1):2s）を有する患者の間で生存の顕著な改善をもたらすことがさらに示されている。ＶＥＧＦ経路、例えば、アンジオポエチン２（Ａｎｇ２）に直接関与する成分を遮断する治療に加えて、ＶＥＧＦなどの他の血管新生因子の機能を有効にすることによって血管リモデリングを制御するＴｉｅ２受容体チロシンキナーゼのリガンドは、がん治療における別の魅力的な標的である。
国際公開第２０１０／０４０５０８号およびKienast et al.（Clin Cancer Res; 19(24), 2013）は、二重特異性抗ＶＥＧＦ−Ａｎｇ−２抗体であるバヌシズマブ、およびがんの処置におけるその使用を開示している。
【０００４】
欧州特許第２６９４５４６号および国際公開第２０１２／１３１０７８号は、ＶＥＧＦ結合免疫グロブリン単一可変ドメインおよびＡｎｇ２結合免疫グロブリン単一可変ドメイン、ならびにさらにがんおよび他の疾患の処置において使用される血清アルブミン結合免疫グロブリン単一可変ドメインを含む、二重特異性結合分子に関する。
国際公開第２０１６／１７００３９号は、アンジオポエチン２に特異的に結合する抗体と、プログラム死１ポリペプチド（ＰＤ−１）に特異的に結合する抗体との組み合わせ治療に関する。
国際公開第２０１６／１７００４０号は、アンジオポエチン２に特異的に結合する抗体およびＶＥＧＦに特異的に結合する抗体と、プログラム死リガンド１（ＰＤ−Ｌ１）に特異的に結合する抗体との組み合わせ治療に関する。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
すべてのアプローチにもかかわらず、依然として、がん患者のための改善された処置の選択肢についての必要性が存在する。したがって、本発明の目的は、改善された治療有効性および適用性のためのがん治療における医薬組成物および方法を提供することである。
【課題を解決するための手段】
【０００６】
本発明は、二重特異性抗ＶＥＧＦ／抗Ａｎｇ２抗体と、Ｔ細胞受容体シグナルを負に調節する免疫阻害性タンパク質であるプログラム死１（ＰＤ−１）に対するアンタゴニストとを一緒に、患者に処置するための方法を提供する。この処置は、腫瘍の増殖の顕著な低減、またはさらに腫瘍の縮小をもたらす（図１）。したがって、本発明は、二重特異性抗ＶＥＧＦ／抗Ａｎｇ−２抗体およびＰＤ−１アンタゴニストを含む組み合わせ治療を提供する。
【０００７】
詳細な態様において、本発明は、腫瘍学的疾患または過剰増殖性疾患、特に、がんまたは腫瘍疾患を処置および／または予防する方法であって、それを必要とする患者に、
ａ）治療有効量の化合物Ａ、および
ｂ）治療有効量の化合物Ｂ
を投与することを含み、
ここで、
・化合物Ａが、
〇ＶＥＧＦ結合免疫グロブリン単一可変ドメイン、
〇血清アルブミン結合免疫グロブリン単一可変ドメイン、および
〇Ａｎｇ２結合免疫グロブリン単一可変ドメイン
を含む二重特異性結合分子であり、
〇前記ＶＥＧＦ結合免疫グロブリン単一可変ドメインが、以下のＣＤＲ配列：
・ＣＤＲ１：ＳＹＳＭＧ（配列番号１）
・ＣＤＲ２：ＡＩＳＫＧＧＹＫＹＤＡＶＳＬＥＧ（配列番号２）
・ＣＤＲ３：ＳＲＡＹＧＳＳＲＬＲＬＡＤＴＹＥＹ（配列番号３）
を有し、
〇前記血清アルブミン結合免疫グロブリン単一可変ドメインが、以下のＣＤＲ配列：
・ＣＤＲ１：ＳＦＧＭＳ（配列番号４）
・ＣＤＲ２：ＳＩＳＧＳＧＳＤＴＬＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号５）
・ＣＤＲ３：ＧＧＳＬＳＲ（配列番号６）
を有し、
〇前記Ａｎｇ２結合免疫グロブリン単一可変ドメインが、以下のＣＤＲ配列：
・ＣＤＲ１：ＤＹＡＩＧ（配列番号７）
・ＣＤＲ２：ＡＩＲＳＳＧＧＳＴＹＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号８）
・ＣＤＲ３：ＶＰＡＧＲＬＲＹＧＥＱＷＹＰＩＹＥＹＤＡ（配列番号９）
を有し、
・化合物Ｂが、ＰＤ−１抗体アンタゴニストである、
方法に関する。
【０００８】
関連する態様において、本発明は、腫瘍学的疾患または過剰増殖性疾患を処置および／または予防する方法におけるそれぞれの使用のための、化合物Ａおよび化合物Ｂであって、前記方法が、化合物Ａおよび化合物Ｂをそれを必要とする患者に投与することを含む、化合物Ａおよび化合物Ｂを提供する。
【０００９】
本発明は、腫瘍学的疾患または過剰増殖性疾患を処置および／または予防するための医薬組成物をそれぞれ調製するための、化合物Ａおよび化合物Ｂの使用であって、化合物Ａおよび化合物Ｂが、化合物Ａおよび化合物Ｂの組み合わせ投与を意図するか、または化合物Ａおよび化合物Ｂの組み合わせ投与を提供する、化合物Ａおよび化合物Ｂの使用にさらに関する。
【００１０】
別の態様において、本発明は、
ａ）化合物Ａ、および
ｂ）化合物Ｂ
を含む医薬組成物であって、
ここで、
・化合物Ａが、
〇ＶＥＧＦ結合免疫グロブリン単一可変ドメイン、
〇血清アルブミン結合免疫グロブリン単一可変ドメイン、および
〇Ａｎｇ２結合免疫グロブリン単一可変ドメイン
を含む二重特異性結合分子であり、
〇前記ＶＥＧＦ結合免疫グロブリン単一可変ドメインが、以下のＣＤＲ配列：
・ＣＤＲ１：ＳＹＳＭＧ（配列番号１）
・ＣＤＲ２：ＡＩＳＫＧＧＹＫＹＤＡＶＳＬＥＧ（配列番号２）
・ＣＤＲ３：ＳＲＡＹＧＳＳＲＬＲＬＡＤＴＹＥＹ（配列番号３）
を有し、
〇前記血清アルブミン結合免疫グロブリン単一可変ドメインが、以下のＣＤＲ配列：
・ＣＤＲ１：ＳＦＧＭＳ（配列番号４）
・ＣＤＲ２：ＳＩＳＧＳＧＳＤＴＬＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号５）
・ＣＤＲ３：ＧＧＳＬＳＲ（配列番号６）
を有し、
〇前記Ａｎｇ２結合免疫グロブリン単一可変ドメインが、以下のＣＤＲ配列：
・ＣＤＲ１：ＤＹＡＩＧ（配列番号７）
・ＣＤＲ２：ＡＩＲＳＳＧＧＳＴＹＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号８）
・ＣＤＲ３：ＶＰＡＧＲＬＲＹＧＥＱＷＹＰＩＹＥＹＤＡ（配列番号９）
を有し、
・化合物Ｂが、ＰＤ−１アンタゴニストである、
医薬組成物を開示する。
【００１１】
さらなる態様において、本発明は、
ａ）化合物Ａを含む第１の医薬組成物、および
ｂ）化合物Ｂを含む第２の医薬組成物
を含むキットであって、化合物Ａおよび化合物Ｂが上記に定義される通りである、キットに関する。
【図面の簡単な説明】
【００１２】
【図１】二重特異性結合分子のＶＥＧＦＡＮＧＢＩＩ２２（化合物Ａ）（用量：１５ｍｇ／ｋｇ；スケジュール：３〜４日ごと）（Ａ−Ｂ）、および国際公開第２０１０／０４０５０８号またはKienast et al.（2013、上記）に定義された抗ＶＥＧＦ／抗Ａｎｇ−２抗体のクロスマブ（バヌシズマブ）（用量：１５ｍｇ／ｋｇ；スケジュール：３〜４日ごと）（Ｃ−Ｄ）を、それぞれ、ラットＩｇＧ２ａ抗マウスＰＤ−１抗体ＥＸ１０１３５９（クローンＲＭＰ１−１４）（用量：１０ｍｇ／ｋｇ；スケジュール：３〜４日ごと）と組み合わせて、９試験個体（白三角、下側の線）を処置した際の腫瘍増殖阻害を、９未処置個体（黒丸、上側の線）と比較して示すグラフである。処置された個体には、マウスモデルにおける抗ＶＥＧＦ活性を模倣する、低分子チロシンキナーゼ阻害剤のバタラニブ（ＥＸＢＦ００３）（用量：１００ｍｇ／ｋｇ；スケジュール：１日１回）をさらに投与した。処置は、マウス個体あたり５×１０4ＬＬ／２皮下腫瘍細胞の注射５日後に開始した。実験の３５日目までの、腫瘍体積（Ａ、Ｃ）をｍｍ3で、対応する無作為化された相対腫瘍体積（Ｂ、Ｄ）をそれぞれ示す。
【図２】対照／アイソタイプ抗体の抗ＰＤ−１抗体（用量：１０ｍｇ／ｋｇ；スケジュール：３〜４日ごと）、ＶＥＧＦＡＮＧＢＩＩ２２（用量：１５ｍｇ／ｋｇ；スケジュール：３〜４日ごと）、バタラニブ（用量：１００ｍｇ／ｋｇ；スケジュール：１日１回）、バタラニブ＋抗ＰＤ１抗体、バタラニブ＋抗ＰＤ１抗体＋ＶＥＧＦＡＮＧＢＩＩ２２、または抗ＰＤ１抗体＋ＶＥＧＦＡＮＧＢＩＩ２２で処置されたマウスの平均生存を示すグラフである。それぞれの処置群は、１０個体の腫瘍を有する無作為化されたマウスで構成した。処置は、マウス個体あたり５×１０4ＬＬ／２皮下腫瘍細胞の注射３日後に開始した。
【発明を実施するための形態】
【００１３】
本発明は、
・化合物Ａが、
〇ＶＥＧＦ結合免疫グロブリン単一可変ドメイン、
〇血清アルブミン結合免疫グロブリン単一可変ドメイン、および
〇Ａｎｇ２結合免疫グロブリン単一可変ドメイン
を含む二重特異性結合分子であり、
〇前記ＶＥＧＦ結合免疫グロブリン単一可変ドメインが、以下のＣＤＲ配列：
・ＣＤＲ１：ＳＹＳＭＧ（配列番号１）
・ＣＤＲ２：ＡＩＳＫＧＧＹＫＹＤＡＶＳＬＥＧ（配列番号２）
・ＣＤＲ３：ＳＲＡＹＧＳＳＲＬＲＬＡＤＴＹＥＹ（配列番号３）
を有し、
〇前記血清アルブミン結合免疫グロブリン単一可変ドメインが、以下のＣＤＲ配列：
・ＣＤＲ１：ＳＦＧＭＳ（配列番号４）
・ＣＤＲ２：ＳＩＳＧＳＧＳＤＴＬＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号５）
・ＣＤＲ３：ＧＧＳＬＳＲ（配列番号６）
を有し、
〇前記Ａｎｇ２結合免疫グロブリン単一可変ドメインが、以下のＣＤＲ配列：
・ＣＤＲ１：ＤＹＡＩＧ（配列番号７）
・ＣＤＲ２：ＡＩＲＳＳＧＧＳＴＹＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号８）
・ＣＤＲ３：ＶＰＡＧＲＬＲＹＧＥＱＷＹＰＩＹＥＹＤＡ（配列番号９）
を有し、
・化合物Ｂが、ＰＤ−１アンタゴニストである、
化合物Ａおよび化合物Ｂの組み合わせ治療または組み合わせ提供にすべて言及する、方法、使用のための化合物、化合物の使用、医薬組成物およびキットに関する。
【００１４】
本発明者らは、驚くべきことに、化合物Ａおよび化合物Ｂの組み合わせが、化合物Ａのみ、または化合物Ｂのみによる治療と比較して、腫瘍増殖の顕著な低減、またはさらに縮小をもたらすことを見出した。化合物Ａおよび化合物Ｂは、相乗的に一緒に作用し、がんの低減をもたらすことができる。
【００１５】
本発明による化合物Ａは、二重特異性抗ＶＥＧＦ／抗Ａｎｇ−２結合分子である。抗血管新生治療は、いくつかの種類の腫瘍のための重要な処置の選択肢になっている。これらの治療は、ＶＥＧＦまたはその受容体を中和することによって、ＶＥＧＦ経路（Ferrara et al., Nat Rev Drug Discov. 2004;3(5):391-400）を遮断することに焦点を合わせている。マウスにおける最近の研究は、Ｔｉｅ２受容体のリガンドであるアンジオポエチン２（Ａｎｇ２）が、ＶＥＧＦなどの他の血管新生因子の機能を有効にすることによって血管リモデリングを制御することを示している。Ａｎｇ２は、内皮細胞によって主に発現され、低酸素症および他の血管新生因子によって強力に誘発され、腫瘍血管の柔軟性を調節して、血管をＶＥＧＦおよびＦＧＦ２に応答させることが実証されている（Augustin et al., Nat Rev Mol Cell Biol. 2009;10(3):165-77）。この役割と一致して、Ａｎｇ２の欠損または阻害は、血管新生の低減をもたらす（Gale et al., Dev Cell. 2002;3(3):302-4）、（Falcon et al., Am J Pathol. 2009;175(5):2159-70）。Ａｎｇ２の血清濃度の上昇は、結腸直腸癌、ＮＳＣＬＣおよびメラノーマを有する患者について報告されている（Goede et al., Br J Cancer. 2010 Oct 26;103(9):1407-14）、（Park et al., Chest. 2007;132(1): 200-6）、（Helfrich et al., Clin Cancer Res. 2009 15;15(4):1384-92）。ＣＲＣがんにおいて、Ａｎｇ２の血清レベルは、抗ＶＥＧＦ治療に対する治療応答と相関している。
【００１６】
Ａｎｇ２は、Ｔｉｅ２受容体チロシンキナーゼのための分泌された６６ｋＤａのリガンドである（Augustin et al., Nat Rev Mol Cell Biol. 2009;10(3):165-77）。Ａｎｇ２は、Ｎ末端のコイルドコイルドメインおよびＣ末端のフィブリノゲン様ドメインからなり、後者は、Ｔｉｅ２の相互作用のために必要である。Ａｎｇ２は、内皮細胞によって主に発現され、低酸素症、およびＶＥＧＦを含む他の血管新生因子によって強力に誘発される。Ｔｉｅ２は、内皮細胞、造血幹細胞および腫瘍細胞上に見出される。Ａｎｇ２−Ｔｉｅ２は、腫瘍血管の柔軟性を調節して、血管をＶＥＧＦおよびＦＧＦ２に応答させることが実証されている。
【００１７】
Ａｎｇ−Ｔｉｅ系は、２つの受容体（Ｔｉｅ１およびＴｉｅ２）、および３つのリガンド（Ａｎｇ１、Ａｎｇ２およびＡｎｇ４）からなる（Augustin et al., Nat Rev Mol Cell Biol. 2009;10(3):165-77）。Ｔｉｅ２、Ａｎｇ１およびＡｎｇ２は、このファミリーの最もよく研究されたメンバーであり、Ｔｉｅ１は、オーファン受容体であり、血管リモデリングのためのＡｎｇ４の役割は、依然として定義される必要がある。Ａｎｇ２およびＡｎｇ１は、Ｔｉｅ２の結合および活性化の際に、反対の機能を媒介する。Ａｎｇ２によって媒介されるＴｉｅ２の活性化は、内皮細胞の活性化、周皮細胞の解離、血管の漏出および血管の発芽の誘導をもたらす。Ａｎｇ２とは対照的に、Ａｎｇ１のシグナル伝達は、周皮細胞の動員によって血管の完全性を維持し、それによって、内皮細胞の静止状態を維持する。
本発明に従って使用することができる二重特異性抗ＶＥＧＦ／抗Ａｎｇ−２結合分子は、例えば、参照によって本明細書に組み込まれる国際公開第２０１２／１３１０７８号に開示されている。
【００１８】
本発明による化合物Ｂは、ＰＤ−１それ自体またはそのリガンドの１つであるＰＤ−Ｌ１もしくはＰＤ−Ｌ２などのタンパク質プログラム死１（ＰＤ−１）ファミリーのメンバーに対するアンタゴニストである。ＰＤ−１は、ＴＣＲシグナルを負に調節する免疫阻害性タンパク質として知られている（Ishida, Y. et al. (1992) EMBO J. 11:3887-3895; Blank, C. et al. (2006) Immunol. Immunother. 56(6):739-745）。ＰＤ−１およびＰＤ−Ｌ１の間の相互作用は、免疫チェックポイントとしての機能を果たし得、これは、例えば、腫瘍浸潤リンパ球の減少、Ｔ細胞受容体が媒介する増殖の減少、および／またはがん細胞による免疫回避をもたらし得る（Dong et al. (2003) J. Mol. Med. 81:281-7; Blank et al. (2005) Cancer Immunol. Immunother. 54:307-314; Konishi et al. (2004) Clin. Cancer Res. 10:5094-100）。免疫抑制は、ＰＤ−１とＰＤ−Ｌ１またはＰＤ−Ｌ２の局所の相互作用を阻害することによって反転させることができ、この効果は、ＰＤ−１とＰＤ−Ｌ２の相互作用が同様に遮断される場合に、相加的である（Iwai et al. (2002) Proc. Nat'l. Acad. Sci USA 99:12293-7; Brown et al. (2003) J. Immunol. 170:1257-66）。
【００１９】
ＰＤ−１は、Ｔ細胞制御因子の拡張ＣＤ２８／ＣＴＬＡ−４ファミリーの阻害性メンバーである。ＣＤ２８ファミリーの他のメンバーとしては、ＣＤ２８、ＣＴＬＡ−４、ＩＣＯＳおよびＢＴＬＡが挙げられる。ＰＤ−１は、単量体として存在することが示唆されており、他のＣＤ２８ファミリーのメンバーの不対のシステイン残基の特徴が欠如している。ＰＤ−１は、活性化したＢ細胞、Ｔ細胞および単球上で発現される（Okazaki et al. (2002) Curr Opin Immunol 14:391779-82; Bennett et al. (2003) J. Immunol. 170:711-8）。ＰＤ−Ｌ１（Ｂ７−Ｈ１）およびＰＤ−Ｌ２（Ｂ７−ＤＣ）のＰＤ−１のための２つのリガンドが特定されており、これは、ＰＤ−１に結合する際に、Ｔ細胞の活性化を下方制御することが示されている（Freeman et al. (2000) J. Exp. Med. 192:1027-34; Carter et al. (2002) Eur. J. Immunol. 32:634-43）。ＰＤ−Ｌ１およびＰＤ−Ｌ２は両方とも、ＰＤ−１と結合するＢ７ホモログである。ＰＤ−Ｌ１は、さまざまなヒトのがんにおいて豊富である（Dong et al. (2002) Nat. Med. 8:787-9）。
ＰＤ−１遺伝子は、Ｉｇ遺伝子スーパーファミリーの部分である、５５ｋＤａのＩ型膜貫通タンパク質をコードする（Agata et al. (1996) Int Immunol. 8:765-72）。完全ＰＤ−１配列は、ＧｅｎＢａｎｋ受託番号Ｕ６４８６３で見出すことができる。ＣＴＬＡ−４と構造的に類似するが、ＰＤ−１は、Ｂ７−１およびＢ７−２結合のために重要なＭＹＰＰＹモチーフ（配列番号：１０）を欠いている。
【００２０】
上記の観点から、ＰＤ−１アンタゴニストとしてのモノクローナル抗体は、近年、治療における使用のため、より正確には、がんおよび感染性疾患を含む各種の疾患を処置するために開発されている（例えば、国際公開第２００６／１２１１６８号；国際公開第２０１５／１１２９００号）。このような抗体のいずれか１つを本発明に従って使用することができる。
【００２１】
本発明者らは、驚くべきことに、上記／下記に定義される化合物Ａおよび化合物Ｂの組み合わせで個体を処置すると、化合物Ａのみ、または化合物Ｂのみによる処置と比較して、腫瘍体積の顕著に強い低減、またはさらに縮小をもたらすことを見出した。また、バヌシズマブおよび同じＰＤ−１アンタゴニストによる個体の処置と比較した場合に、上記／下記に定義される化合物Ａおよび化合物Ｂを含む組成物による処置は、腫瘍の縮小をさらに生じた（実施例１；図１）。化合物Ａおよび化合物Ｂは両方とも、本発明による活性薬剤である。
本発明の意味の範囲内のＰＤ−１アンタゴニストは、ＰＤ−１とその受容体またはリガンドの相互作用を阻害する化合物である。
好ましくは、ＰＤ−１アンタゴニストは、ＰＤ−１の阻害剤またはＰＤ−Ｌ１の阻害剤である。ＰＤ−１アンタゴニストは、好ましくは、抗ＰＤ−１抗体または抗ＰＤ−Ｌ１抗体、より好ましくは、ヒト化もしくは完全ヒト抗ＰＤ−１抗体、またはヒト化もしくは完全ヒト抗ＰＤ−Ｌ１抗体であってもよい。これらの抗体のいずれか１つは、組換えヒト抗体であってもよい。
【００２２】
本明細書において「抗体」という用語は、最も広い意味で使用され、各種の抗体構造を包含し、限定されるものではないが、これらが所望の抗原結合活性を示す限り、モノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、多特異性抗体（例えば、二重特異性抗体）、単鎖抗体、シングルドメイン抗体、および断片化抗体（抗体断片とも称する）、例えば、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ）2、Ｆ（ａｂ’）2、Ｆａｂ’、単鎖可変断片（ｓｃＦｖ）または抗体の抗原結合ドメインが挙げられる。
【００２３】
抗体は、抗体のＦｃ部分（抗体の定常領域）によって通常媒介される、ＡＤＣＣまたはＣＤＣなどのエフェクター機能を有していてもよく、あるいは抗体は、例えば、ＦＣ部分が欠如することによって、または遮断され、マスクされたＦｃ部分、本質的に、免疫細胞もしくは補体系のような免疫系成分によって認識されないか、または不十分に認識されるＦｃ部分を有することによって、エフェクター機能を有していなくてもよい。
抗体またはその断片は、任意の種類、例えば、ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ、ＩｇＭのものであってもよい。好ましくは、ＩｇＧである。
本明細書において使用される「モノクローナル抗体」または「モノクローナル抗体組成物」という用語は、単一のアミノ酸組成の抗体分子の調製物を指す。
「組換え抗体」は、組換え操作された宿主細胞によって産生された抗体である。これは、単離または精製されていてもよい。
「ヒト抗体」は、ヒト細胞によって産生された抗体、またはヒト抗体レパートリーもしくは他のヒト抗体をコードする配列を利用する非ヒト源に由来する抗体のものに対応するアミノ酸配列を有するものである。ヒト抗体のこの定義は、具体的には、非ヒト抗原結合残基を含むヒト化抗体を除く。
【００２４】
「組換えヒト抗体」という用語は、本明細書で使用される場合、ＮＳ０細胞もしくはＣＨＯ細胞などの宿主細胞から単離された抗体、またはヒト免疫グロブリン遺伝子についてトランスジェニックである動物（例えば、マウス）から単離された抗体、あるいは宿主細胞にトランスフェクトされた組換え発現ベクターを使用して発現された抗体などの組換え手段によって、調製、発現、作製または単離されたすべてのヒト抗体を含むことを意図する。このような組換えヒト抗体は、再編成された形態中に可変領域および定常領域を有する。本発明による組換えヒト抗体は、インビボで体細胞高頻度突然変異に付されている。したがって、組換え抗体のＶＨおよびＶＬ領域のアミノ酸配列は、ヒト生殖細胞系のＶＨおよびＶＬ配列に由来し、関連しているが、インビボでヒト抗体の生殖細胞系レパートリー内に天然に存在し得ない配列である。
【００２５】
「ヒト化」抗体とは、非ヒト超可変領域（ＨＶＲ）からのアミノ酸残基、およびヒトＦＲからのアミノ酸残基を含むキメラ抗体を指す。ある特定の実施形態において、ヒト化抗体は、少なくとも１つ、典型的には２つの可変ドメインの実質的にすべてを含み、すべてまたは実質的にすべてのＨＶＲ（例えば、相補性決定領域（ＣＤＲ））が非ヒト抗体のものに対応し、すべてまたは実質的に全体のフレームワーク領域（ＦＲ）がヒト抗体のものに対応する。ヒト化抗体は、ヒト抗体に由来する抗体の定常領域の少なくとも１部を含んでいてもよい。抗体、例えば、非ヒト抗体の「ヒト化形態」は、ヒト化を受けた抗体を指す。
ポリペプチド（免疫グロブリン、抗体、本発明の免疫グロブリン単一可変ドメイン、または一般に抗原結合分子もしくはその断片など）の「結合する」は、ある特定のエピトープ、抗原またはタンパク質（またはこれらの少なくとも１つの部分、断片もしくはエピトープ）に「親和性を有すること」または「特異性を有すること」を意味する。
【００２６】
一般に、「特異性」という用語は、特定の抗原結合分子または抗原結合タンパク質（本発明の免疫グロブリン単一可変ドメインなど）の分子が結合することができる、異なる種類の抗原またはエピトープの数を指す。抗原結合分子の特異性は、その親和性および／またはアビディティーに基づいて決定することができる。抗原と抗原結合タンパク質の解離の平衡定数（ＫＤ）によって表される親和性は、エピトープおよび抗原結合タンパク質上の抗原結合部位の間の結合の強度の測定値であり、ＫＤ値が小さければ小さいほど、エピトープおよび抗原結合分子の間の結合強度は強くなる（あるいは、親和性は、親和性定数（ＫＡ）としても表すことができ、これは、１／ＫＤである）。当業者に明らかであるように（例えば、本明細書のさらなる開示に基づいて）、親和性は、対象の特異的な抗原に応じて、それ自体公知の方法で決定することができる。アビディティーは、それを含有する抗原結合分子（免疫グロブリン、抗体、免疫グロブリン単一可変ドメインまたはポリペプチドなど）および関連する抗原の間の結合強度の測定値である。アビディティーは、エピトープおよび抗原結合分子上のその抗原結合部位の間の親和性、ならびに抗原結合分子上に存在する関連する結合部位の数の両方に関係する。
【００２７】
自然抗体は、例えば、単一特異性である。本明細書において使用される「単一特異性抗体」という用語は、それぞれが同じ抗原の同じエピトープに結合する、１つまたは複数の結合部位を有する抗体を意味する。「多重特異性抗体」は、２つ以上の異なるエピトープ（例えば、２つ、３つ、４つまたはそれよりも多くの異なるエピトープ）と結合する。エピトープは、同じまたは異なる抗原上にあり得る。多重特異性抗体の例は、２つの異なるエピトープと結合する「二重特異性抗体」である。抗体が、２つ以上の特異性を有する場合、認識されるエピトープは、単一の抗原または２つ以上の抗原に関連していてもよい。
【００２８】
エピトープは、抗体または抗原結合部分によって結合される、抗原の領域である。「エピトープ」という用語は、抗体または抗原結合部分と特異的に結合する能力がある任意のポリペプチド決定基を含む。ある特定の実施形態において、エピトープ決定基は、アミノ酸、グリカン側鎖、ホスホリルまたはスルホニルなどの分子の化学的活性表面基を含み、ある特定の実施形態において、特異的な三次元構造の特徴および／または特異的な電荷特徴を有し得る。立体構造エピトープまたは非立体構造エピトープは、変性溶媒の存在中で、前者への結合は喪失し、後者への結合は喪失しないという点で区別される。本明細書で使用される場合、「結合する」および「特異的に結合する」という用語は、インビトロアッセイにおいて、好ましくは、精製された野生型抗原を用いるプラズモン共鳴アッセイ（ＢＩＡｃｏｒｅ（登録商標）、ＧＥ−Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ  Ｕｐｐｓａｌａ、スウェーデン）において、抗体または抗原結合部分が抗原のエピトープに結合することを指す。
【００２９】
抗原に対する化合物Ａまたは化合物Ｂのこれらの抗体を含む、本発明による結合分子（例えば、抗体）の結合の親和性は、Ｋa（抗体／抗原複合体からの抗体の会合についての速度定数）、ｋD（解離定数）およびＫD（ｋＤ／ｋａ）という用語によって定義される。１つの実施形態において、結合すること、または特異的に結合するものとは、１０-8ｍｏｌ／ｌ未満、１つの実施形態において、１０-8Ｍ〜１０-13ｍｏｌ／ｌの結合親和性（ＫD）を意味する。したがって、本発明による多重特異性抗体は、１０-8ｍｏｌ／ｌ未満の結合親和性（ＫD）、例えば、１０-8〜１０-13ｍｏｌ／ｌの結合親和性（ＫD）の特異性でそれぞれの抗原と特異的に結合する。１つの実施形態において、結合親和性（ＫD）は、１０-9〜１０-13ｍｏｌ／ｌである。
【００３０】
本明細書において使用される「可変ドメイン」または「可変領域」またはＦｖの表現は、抗体の抗原への結合に直接関与する軽鎖および重鎖のそれぞれの対を意味する。軽鎖の可変ドメインは、「ＶＬ」と略され、重鎖の可変ドメインは、「ＶＨ」と略される。可変の軽鎖および重鎖のドメインは、同じ一般構造を有し、それぞれのドメインは、配列が、幅広く保存され、３つのＨＶＲ（またはＣＤＲ）によって連結されている４つのフレームワーク（ＦＲ）領域を含む。フレームワーク領域は、ベータ−シート高次構造の形をとり、ＣＤＲは、ベータ−シート構造を連結するループを形成し得る。それぞれの鎖中のＣＤＲは、フレームワーク領域によってそれらの三次元構造中で保持され、他の鎖の抗原結合部位からのＣＤＲと一緒に形成する。抗体の重鎖および軽鎖のＣＤＲ３領域は、本発明による抗体の結合特異性／親和性において特に重要な役割を果たし、したがって、本発明のさらなる目的を提供する。
本出願内で使用される「定常ドメイン」または「定常領域」という用語は、可変領域以外の抗体のドメインの合計を意味する。定常領域は、抗原の結合に直接関与しないが、各種のエフェクター機能を示す。
【００３１】
本明細書に開示される抗体において使用される「定常ドメイン」は、好ましくは、ヒト起源であり、これは、サブクラスＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３もしくはＩｇＧ４のヒト抗体の定常重鎖領域および／または定常軽鎖カッパ領域もしくはラムダ領域に由来する。このような定常ドメインおよび領域は、当技術分野の技術水準において周知であり、例えば、Kabat et al.（"Sequence of proteins of immunological interest", US Public Health Services, NIH Bethesda, MD, Publication No. 91）によって記載されている。
【００３２】
抗体の「Ｆｃ部分」は、抗原への抗体の結合に直接関与しないが、各種のエフェクター機能を示す。「抗体のＦｃ部分」は、当業者に周知の用語であり、抗体のパパイン切断に基づいて定義される。これらの重鎖の定常領域のアミノ酸配列に応じて、抗体または免疫グロブリンは、ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧおよびＩｇＭのクラスに分けられ、これらのいくつかは、サブクラス（アイソタイプ）、例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３およびＩｇＧ４、ＩｇＡ１およびＩｇＡ２にさらに分けられ得る。重鎖定常領域によれば、異なる免疫グロブリンのクラスは、それぞれ、α、δ、ε、γおよびμと呼ばれる。抗体のＦｃ部分は、補体活性化、Ｃ１ｑ結合およびＦｃ受容体結合に基づいて、ＡＤＣＣ（抗体依存性細胞媒介性傷害）およびＣＤＣ（補体依存性細胞傷害）に直接関与する。補体活性化（ＣＤＣ）は、ほとんどのＩｇＧ抗体サブクラスのＦｃ部分への補体因子Ｃ１ｑの結合によって惹起される。補体系における抗体の影響は、ある特定の条件に依存するが、Ｃ１ｑへの結合は、定義されたＦｃ部分中の結合部位によって引き起こされる。このような結合部位は、当技術分野の技術水準において公知であり、例えば、Boackle, R.J., et al, Nature 282 (1979) 742-743；Lukas, T.J., et al, J. Immunol. 127 (1981) 2555-2560；Brunhouse, R., and Cebra, J.J., Mol. Immunol. 16 (1979) 907-917；Burton, D.R., et al, Nature 288 (1980) 338-344；Thommesen, J.E., et al, Mol. Immunol. 37 (2000) 995-1004；Idusogie, E.E., et al, J. Immunol.164 (2000) 4178-4184；Hezareh, M., et al, J. Virology 75 (2001) 12161-12168；Morgan, A., et al, Immunology 86 (1995) 319-324；欧州特許出願第０３０７４３４号によって記載されている。このような結合部位は、例えば、Ｌ２３４、Ｌ２３５、Ｄ２７０、Ｎ２９７、Ｅ３１８、Ｋ３２０、Ｋ３２２、Ｐ３３１およびＰ３２９（Kabat, E.A.のＥＵインデックスに従って番号付け；下記を参照のこと）である。サブクラスＩｇＧ１、ＩｇＧ２およびＩｇＧ３の抗体は、通常、補体活性化ならびにＣ１ｑおよびＣ３結合を示すのに対して、ＩｇＧ４は、補体系を活性化せず、Ｃ１ｑおよびＣ３と結合しない。
【００３３】
化合物Ａに関して、「二重特異性結合分子」という用語は、少なくとも１つのＡｎｇ２結合分子（「Ａｎｇ２結合成分」）および少なくとも１つのＶＥＦＧ結合分子（「ＶＥＦＧ結合成分」）を含む分子を指す。二重特異性結合分子は、２つ以上のＡｎｇ２結合分子および／または２つ以上のＶＥＦＧ結合分子、すなわち、Ａｎｇ２またはＶＥＦＧと結合する分子の部分において、すなわち、それぞれ、その「Ａｎｇ２結合成分」（または抗Ａｎｇ２成分）または「ＶＥＦＧ結合成分」（または抗ＶＥＧＦ成分）において、二重特異性結合分子がバイパラトピック（下記に定義する）Ａｎｇ２結合分子および／またはバイパラトピックＶＥＦＧ結合分子を含有する場合において、を含有していてもよい。しかしながら、この文脈における「二重特異性」という語は、二重特異性結合分子からのＶＥＧＦおよびＡｎｇ２以外の分子に結合特異性を有するさらなる結合成分を除外するものとされるべきでない。このようなさらなる結合成分の非限定的な例は、血清アルブミンと結合する結合成分である。
【００３４】
他に指示がない限り、「ＶＥＧＦ結合分子」または「Ａｎｇ２結合分子」という用語は、本明細書において定義される、抗ＶＥＧＦ抗体もしくは抗Ａｎｇ２抗体、抗ＶＥＧＦ抗体もしくは抗Ａｎｇ２抗体の断片、「抗ＶＥＧＦ抗体様分子」もしくは「抗Ａｎｇ２抗体様分子」、およびこれらのいずれかとのコンジュゲートを含む。抗体としては、限定されるものではないが、モノクローナル抗体およびキメラ化モノクローナル抗体が挙げられる。「抗体」という用語は、宿主細胞における組換え体の発現によって産生されるモノクローナル抗体のような完全な免疫グロブリン、ならびに抗体断片、または例えば、国際公開第２００２／０５６９１０号に記載されているような、単鎖抗体および直鎖抗体、いわゆる「ＳＭＩＰ」（「小モジュラー免疫医薬」）を含む「抗体様分子」を包含し；抗体様分子としては、本明細書において定義される免疫グロブリン単一可変ドメインが挙げられる。抗体様分子の他の例は、免疫グロブリンスーパーファミリー抗体（ＩｇＳＦ）またはＣＤＲ移植分子である。
【００３５】
「Ａｎｇ２結合分子」または「ＶＥＧＦ結合分子」は、それぞれ、両方の一価の標的結合分子（すなわち、それぞれの標的の１つのエピトープと結合する分子）、および二価または多価結合分子（すなわち、２つ以上のエピトープと結合する結合分子、例えば、本明細書の下記に定義される「バイパラトピック」分子）を指す。２つ以上のＡｎｇ２（またはＶＥＧＦ）結合免疫グロブリン単一可変ドメインを含有するＡｎｇ２（またはＶＥＧＦ）結合分子は、「フォーマット化」結合分子とも称され、これらは、標的結合成分内に、免疫グロブリン単一可変ドメインに加えて、リンカーおよび／またはエフェクター機能を有する部分、例えば、アルブミン結合免疫グロブリン単一可変ドメインのような半減期を延長する部分、ならびに／または血清アルブミンのような融合パートナー、ならびに／またはＰＥＧのような結合ポリマーを含んでいてもよい。
本明細書において使用される「バイパラトピックＡｎｇ２（またはＶＥＧＦ）結合分子」または「バイパラトピック免疫グロブリン単一可変ドメイン」という用語は、本明細書において定義される第１の免疫グロブリン単一可変ドメインおよび第２の免疫グロブリン単一可変ドメインを含む結合分子を意味するものとし、ここで、２つの分子は、それぞれの抗原の２つの非オーバーラップエピトープに結合する。バイパラトピック結合分子は、エピトープに関して異なる特異性を有する免疫グロブリン単一可変ドメインで構成される。
【００３６】
フォーマット化結合分子はまた、たとえ好ましさが劣るとしても、２つの同一の免疫グロブリン単一可変ドメイン、あるいは同じエピトープもしくはオーバーラップエピトープまたはそれらのそれぞれの抗原を認識する２つの異なる免疫グロブリン単一可変ドメインも含んでいてもよい。この場合において、ＶＥＧＦに関して、２つの免疫グロブリン単一可変ドメインは、ＶＥＧＦ二量体を形成する２つの単量体のそれぞれにおいて、同じエピトープまたはオーバーラップエピトープに結合し得る。
本発明の二重特異性結合分子およびこれを含む組成物の有効性は、対象の特定の疾患または障害に応じて、それ自体公知の任意の適切なインビトロアッセイ、細胞系アッセイ、インビボアッセイおよび／もしくは動物モデル、またはこれらの任意の組み合わせを使用して試験することができる。適切なアッセイおよび動物モデルは、当業者には明らかであり、例えば、欧州特許第２６９４５４６号に記載されているアッセイが挙げられる。
【００３７】
他に指示がない限り、「免疫グロブリン」および「免疫グロブリン配列」という用語は、重鎖抗体または従来型の４鎖抗体を指すために本明細書において使用されようとも、フルサイズ抗体、その個々の鎖だけでなく、全ての部分、ドメインまたは断片（限定されるものではないが、それぞれ、抗原結合ドメイン、またはＶＨＨドメインもしくはＶＨ／ＶＬドメインなどの断片を含む）の両方を含む一般的な用語として使用される。加えて、本明細書において使用される「配列」という用語（例えば、「免疫グロブリン配列」、「抗体配列」、「（単一）可変ドメイン配列」、「ＶＨＨ配列」または「タンパク質配列」のような用語において）は、文脈がより限定的な解釈を必要としない限り、一般に、関連するアミノ酸配列、ならびにこれをコードする核酸配列またはヌクレオチド配列の両方を含むと理解されるべきである。
本明細書において使用される（ポリペプチドまたはタンパク質の）「ドメイン」という用語は、その三次元構造を、タンパク質の残部と独立して維持する能力を有する、折り畳まれたタンパク質構造を指す。一般に、ドメインは、タンパク質の個別の機能的特性の原因であり、多くの場合において、タンパク質および／またはドメインの残りの機能を損なうことなく、他のタンパク質に、付加、除去または移転され得る。
【００３８】
本明細書において使用される「免疫グロブリンドメイン」という用語は、抗体鎖（例えば、従来型の４鎖抗体または重鎖抗体の鎖など）の球形の領域、または本質的にそのような球形の領域からなるポリペプチドを指す。免疫グロブリンドメインは、それらが、抗体分子に特徴的な免疫グロブリンの折り畳みを維持するという特徴を有し、これは、２つのベータシート中に配置され、保存されたジスルフィド結合によって安定化されていてもよい、約７個の逆平行のベータ鎖の２層のサンドイッチからなる。免疫グロブリンドメインは、可変ドメイン、すなわち、１つまたは複数の免疫グロブリン可変ドメインを含む。
【００３９】
本明細書において使用される「免疫グロブリン可変ドメイン」という用語は、当技術分野および本明細書の下記で、それぞれ、「フレームワーク領域１」もしくは「ＦＲ１」、「フレームワーク領域２」もしくは「ＦＲ２」、「フレームワーク領域３」もしくは「ＦＲ３」および「フレームワーク領域４」もしくは「ＦＲ４」と称される、本質的に４つの「フレームワーク領域」からなる免疫グロブリンドメインを意味し、このフレームワーク領域は、３つの「相補性決定領域」または「ＣＤＲ」によって中断され、これは、当技術分野および本明細書の下記で、それぞれ、「相補性決定領域１」もしくは「ＣＤＲ１」、「相補性決定領域２」もしくは「ＣＤＲ２」および「相補性決定領域３」もしくは「ＣＤＲ３」と称される。したがって、免疫グロブリン可変ドメインの一般構造または配列は、以下の通り示すことができる：ＦＲ１−ＣＤＲ１−ＦＲ２−ＣＤＲ２−ＦＲ３−ＣＤＲ３−ＦＲ４。これは、抗原結合部位を有することによって抗原に対する特異性を抗体に付与する免疫グロブリン可変ドメインである。本発明の分子としては、ＶＨＨのような免疫グロブリン単一可変ドメインが挙げられる。
本明細書において使用される「免疫グロブリン単一可変ドメイン」という用語は、追加の可変免疫グロブリンドメインと対形成することなく、抗原のエピトープと特異的に結合する能力がある免疫グロブリン可変ドメインを意味する。本発明の意味における免疫グロブリン単一可変ドメインの一例は、「ドメイン抗体」、例えば、免疫グロブリン単一可変ドメインＶＨおよびＶＬ（ＶＨドメインおよびＶＬドメイン）である。免疫グロブリン単一可変ドメインの別の例は、本明細書の以下に記載されるラクダ科動物由来の「ＶＨＨドメイン」（または単に「ＶＨＨ」）である。
【００４０】
上記定義の観点から、これらの場合において、抗原のそれぞれのエピトープとの結合が、通常、１つの（単一の）免疫グロブリンドメインによって生じないが、軽鎖および重鎖可変ドメインなどの一対の（会合している）免疫グロブリンドメインによって、すなわち、それぞれの抗原のエピトープと一緒に結合する免疫グロブリンドメインのＶＨ−ＶＬ対によって生じるので、従来型の４鎖抗体（ＩｇＧ、ＩｇＭ、ＩｇＡ、ＩｇＤまたはＩｇＥ分子など；当技術分野で公知である）の抗原結合ドメイン、あるいはＦａｂ断片、Ｆ（ａｂ’）２断片、ジスルフィド連結ＦｖもしくはｓｃＦｖ断片などのＦｖ断片、またはこのような従来型の４鎖抗体に由来するダイアボディ（すべて、当技術分野で公知である）の抗原結合ドメインは、通常、免疫グロブリン単一可変ドメインとみなされない。
【００４１】
ＶＨＨ、ＶHＨドメイン、ＶＨＨ抗体断片およびＶＨＨ抗体としても公知の「ＶＨＨドメイン」は、当初は「重鎖抗体」（すなわち「軽鎖のない抗体」）の抗原結合免疫グロブリン（可変）ドメインとして記載されている；Hamers-Casterman C, Atarhouch T, Muyldermans S, Robinson G, Hamers C, Songa EB, Bendahman N, Hamers R.: "Naturally occurring antibodies devoid of light chains"; Nature 363, 446-448 (1993)。「ＶＨＨドメイン」という用語は、これらの可変ドメインを従来型の４鎖抗体に存在する重鎖可変ドメイン（本明細書において、「ＶHドメイン」または「ＶＨドメイン」と称する）から、および従来型の４鎖抗体に存在する軽鎖可変ドメイン（本明細書において「ＶLドメイン」または「ＶＬドメイン」と称する）から区別するために選択されている。ＶＨＨドメインは、追加の抗原結合ドメインなしで、エピトープと特異的に結合することができる（従来型の４鎖抗体中のＶＨまたはＶＬドメインとは逆に、この場合では、エピトープは、ＶＨドメインと一緒にＶＬドメインによって認識される）。ＶＨＨドメインは、単一の免疫グロブリンドメインによって形成される、小さくて強い、効率的な抗原認識ユニットである。
【００４２】
本発明の文脈において、ＶＨＨドメイン、ＶＨＨ、ＶHＨドメイン、ＶＨＨ抗体断片、ＶＨＨ抗体という用語は、互換可能に使用され、免疫グロブリン単一可変ドメイン（ＦＲ１−ＣＤＲ１−ＦＲ２−ＣＤＲ２−ＦＲ３−ＣＤＲ３−ＦＲ４の構造を有し、第２の免疫グロブリン可変ドメインの存在を必要とせずに、エピトープに特異的に結合する）を代表し、これは、例えば、国際公開第２００９／１０９６３５号の図１において定義される、いわゆる「ホールマーク残基」によってＶＨドメインと区別される。
【００４３】
免疫グロブリン単一可変ドメイン、例えば、ＶＨＨのアミノ酸残基は、例えば、Riechmann and Muyldermans, J. Immunol. Methods 231, 25-38 (1999)の図２に示されている、ラクダ科動物由来のＶＨＨドメインに適用されるように、Kabat et al.（"Sequence of proteins of immunological interest", US Public Health Services, NIH Bethesda, MD, Publication No. 91）によって与えられるＶHドメインについての一般的な番号付けに従って番号付けされる。この番号付けによれば、
−  ＦＲ１は１〜３０番目のアミノ酸残基を含み、
−  ＣＤＲ１は３１〜３５番目のアミノ酸残基を含み、
−  ＦＲ２は３６〜４９番目のアミノ酸を含み、
−  ＣＤＲ２は５０〜６５番目のアミノ酸残基を含み、
−  ＦＲ３は６６〜９４番目のアミノ酸残基を含み、
−  ＣＤＲ３は９５〜１０２番目のアミノ酸残基を含み、
−  ＦＲ４は１０３〜１１３番目のアミノ酸残基を含む。
【００４４】
しかしながら、ＶHドメインおよびＶＨＨドメインについて当技術分野で周知のように、それぞれのＣＤＲにおけるアミノ酸残基の総数は変わってもよく、Ｋａｂａｔの番号付けによって示されるアミノ酸残基の総数とは一致しない場合があることに留意すべきである（すなわち、Ｋａｂａｔに従った番号付けによる１つまたは複数の位置は、実際の配列で占められていなくてもよく、あるいは実際の配列は、Ｋａｂａｔの番号付けによって許容される数よりも多い、１つまたは複数のアミノ酸残基を含有していてもよい）。これは、一般的に、Ｋａｂａｔに従った番号付けは、実際の配列中のアミノ酸残基の実際の番号付けと一致していてもよく、または一致しなくてもよい。
【００４５】
類似の手法でＶＨＨドメインにも適用することができる方法である、ＶHドメインのアミノ酸残基の番号付けの代替の方法は、当技術分野において公知である。しかしながら、本明細書、特許請求の範囲および図面において、他に指示がない限り、Ｋａｂａｔに従った番号付けおよび上に記載のＶＨＨドメインに適用される番号付けに従う。
ＶＨＨドメイン中のアミノ酸残基の総数は、通常、１１０から１２０、しばしば、１１２から１１５の間の範囲である。しかしながら、より小さい配列およびより大きい配列もまた、本明細書に記載の目的のために適切であり得ることに留意すべきである。
【００４６】
免疫グロブリン単一可変ドメイン、例えば、ＶＨＨおよびドメイン抗体は、本発明の好ましい実施態様によれば、それらを、機能的な抗原結合分子としての治療における使用のために、非常に有利にする、多数の固有の構造的特徴および機能的特性を有する。特に、それらに限定されないが、ＶＨＨドメイン（軽鎖可変ドメインと対を形成することなく、生来、抗原と機能的に結合するように「設計」されている）は、単一の比較的小さい機能性抗原結合構造ユニットとして機能することができる。
免疫グロブリン単一可変ドメインの利点について、およびＶＨＨを得ることについてのさらなる詳細および情報は、欧州特許第２６９４５４６号に詳細に開示されている。
本発明の免疫グロブリン単一可変ドメインは、それらを得る特定の生物学的供給源、または特定の調製の方法に関して限定されない。特定の抗原またはエピトープに結合するＶＨＨドメインを得るための適切な方法および技術は、国際公開第２００６／０４０１５３号および国際公開第２００６／１２２７８６号に記載されている。
【００４７】
特定の実施形態によれば、本発明の免疫グロブリン単一可変ドメインは、天然に存在するＶＨＨドメインのアミノ酸配列と本質的に一致するが、すなわち、前記天然に存在するＶＨＨ配列のアミノ酸配列中の１つまたは複数のアミノ酸残基を、ヒト由来の従来型の４鎖抗体の可変重鎖ドメイン中の対応する位置に存在するアミノ酸残基の１つまたは複数によって置き換えることによって「ヒト化」または「配列最適化」（親和性成熟後でもよい）されているアミノ酸配列を有するＶＨＨドメインである。これは、当技術分野において公知の方法を使用して行うことでき、当業者によって日常的に使用することができる。
【００４８】
ヒト化ＶＨＨドメインは、１つまたは複数の完全なヒトフレームワーク領域配列を含有していてもよく、さらにより特定の実施態様において、ＪＨ５などのＪＨ配列と組み合わせてもよい、ヒト生殖細胞系列Ｖｈ３配列のＤＰ−２９、ＤＰ−４７、ＤＰ−５１に由来する、またはこれらとの高度に相同であるヒトフレームワーク領域配列もしくはこれらの部分を含有していてもよい。したがって、ヒト化プロトコールは、ＤＰ４７、ＤＰ２９およびＤＰ５１などの生殖細胞系列ＶＨ遺伝子のフレームワーク１、２および３（ＦＲ１、ＦＲ２およびＦＲ３）残基に対応する任意のＶＨＨ残基のいずれか単独、または組み合わされた置き換えを含んでいてもよい。本発明の免疫グロブリン単一可変ドメインの適切なフレームワーク領域（ＦＲ）は、例えば国際公開第２００６／００４６７８号において説明されたものから選択することができ、具体的には、いわゆる「ＫＥＲＥ」および「ＧＬＥＷ」クラスが挙げられる。例は、約４４から４７番目にアミノ酸配列Ｇ−Ｌ−Ｅ−Ｗを有する免疫グロブリン単一可変ドメイン、およびそれらのそれぞれのヒト化対応物である。ヒト化ＶＨＨドメインは、１つまたは複数の完全なヒトフレームワーク領域配列を含有していてもよい。
例として、１０３Ｐ、Ｒ、Ｓ群および／またはＧＬＥＷ群（下記で定義する）に属するＶＨＨについてのヒト化置換は、１０８Ｑから１０８Ｌである。免疫グロブリン単一可変ドメインのヒト化のための方法は当技術分野において公知である。
【００４９】
治療適用の観点から改善された特性、例えば、増強された親和性または減少した免疫原性を有する免疫グロブリン単一可変ドメインの結合は、「配列最適化」とも称される、本明細書に記載の、親和性成熟（例えば、合成、ランダムまたは天然に存在する免疫グロブリン配列から出発する）、ＣＤＲ移植、ヒト化、異なる免疫グロブリン配列に由来する断片の結合、オーバーラップするプライマーを使用するＰＣＲアッセンブリー、および当業者に周知の免疫グロブリン配列を操作するための類似の技術、または前述のいずれかの適切な任意の組み合わせなどの当技術分野において公知の技術によって、個々の結合分子から得られ得る。例えば、標準的なハンドブック、ならびにさらなる説明および例を参照できる。
上記によれば、好ましい実施形態において、化合物Ａの免疫グロブリン単一可変ドメインは、ＶＨＨドメインである。より好ましくは、化合物Ａは、以下のアミノ酸配列
【化１】
2020521797.tif 000002
を有する化合物から選択される。
【００５０】
上記に示された３つの配列は、Ｎ末端配列を除きほぼ同一であり、これは、選択した発現系（発現ベクター、宿主細胞）に配列を最適に適合させるため、または他の必要性を理由として、変更または改変することができる。したがって、本質的に上記の配列を含むが、例えば、得られるポリペプチドの結合親和性を変化させないアミノ酸の変更、欠失または付加によってわずかに改変されたさらなるポリペプチドも、本発明による医薬の組み合わせの「化合物Ａ」として有用であることは当業者に明らかである。
【００５１】
別の実施形態においてにおいて、本発明のＶＥＧＦおよび／またはＡｎｇ２結合免疫グロブリン単一可変ドメインの代表的なクラスは、すなわち、従来型の４鎖抗体の天然に存在する可変重鎖のアミノ酸配列中の１つまたは複数のアミノ酸残基を、重鎖抗体のＶＨＨドメイン中の対応する位置に存在する１つまたは複数のアミノ酸残基によって置き換えることによって、「ラクダ化」された天然に存在するＶＨドメインのアミノ酸配列と一致するアミノ酸配列を有する。これは、当業者には明らかであるそれ自体公知の手法で行うことができ、国際公開第１９９４／０４６７８号を追加して参照できる。このようなラクダ化は、ＶＨ−ＶＬの境界面、およびいわゆるラクダ科動物のホールマーク残基に存在するアミノ酸の位置で優先的に生じ得る（例えば、国際公開第１９９４／０４６７８号も参照のこと）。このような「ヒト化」および「ラクダ化」技術の詳細な説明、ならびにそれらと一致する好ましいフレームワーク領域配列は、追加で、例えば、国際公開第２００６／０４０１５３号の９８頁、および国際公開第２００６／１２２７８６号の１０７頁から取得することができる。
【００５２】
本発明の意味の範囲内のＰＤ−１アンタゴニストおよびその実施形態のすべては、ＰＤ−１とその受容体の相互作用を阻害する化合物である。ＰＤ−１アンタゴニストは、当技術分野において周知であり、例えば、Li et al., Int. J. Mol. Sci. 2016, 17, 1151（参照によって本明細書に組み込まれる）によって概説されている。任意のＰＤ−アンタゴニスト、とりわけ、抗体、例えば、Li et al.によって開示されているもの、ならびに本明細書の下記に開示されているさらなる抗体を、本発明に従って使用することができる。好ましくは、本発明のＰＤ−１アンタゴニストおよびそのすべての実施形態は、以下の抗体：
−  ペムブロリズマブ（抗ＰＤ−１抗体）；
−  ニボルマブ（抗ＰＤ−１抗体）；
−  ピディリズマブ（抗ＰＤ−１抗体）；
−  ＰＤＲ−００１（抗ＰＤ−１抗体）；
−  本明細書の下記に開示される、ＰＤ１−１、ＰＤ１−２、ＰＤ１−３、ＰＤ１−４およびＰＤ１−５（抗ＰＤ−１抗体）；
−  アテゾリズマブ（抗ＰＤ−Ｌ１抗体）；
−  アベルマブ（抗ＰＤ−Ｌ１抗体）；
−  デュルバルマブ（抗ＰＤ−Ｌ１抗体）
からなる群から選択される。
【００５３】
ペムブロリズマブ（以前は、ランブロリズマブとしても公知；商品名キイトルーダ；ＭＫ−３４７５としても公知）は、例えば、Hamid, O. et al. (2013) New England Journal of Medicine 369(2):134-44に開示されており、ＰＤ−１に結合するヒト化ＩｇＧ４モノクローナル抗体であり、Ｆｃ媒介性細胞傷害を予防するために設計されたＣ２２８Ｐに変異を含有する。ペムブロリズマブは、例えば、米国特許第８，３５４，５０９号および国際公開第２００９／１１４３３５号に開示されている。これは、切除不可能または転移性のメラノーマを患う患者、および転移性ＮＳＣＬＣを有する患者の処置のために、ＦＤＡによって承認されている。
【００５４】
ニボルマブ（ＣＡＳ登録番号：９４６４１４−９４−４；ＢＭＳ−９３６５５８またはＭＤＸ１１０６ｂ）は、検出可能な抗体依存性細胞毒性（ＡＤＣＣ）がない、ＰＤ−１を特異的に遮断する完全ヒトＩｇＧ４モノクローナル抗体である。ニボルマブは、例えば、米国特許第８，００８，４４９号および国際公開第２００６／１２１１６８号に開示されている。これは、切除不可能または転移性のメラノーマ、転移性ＮＳＣＬＣ、および進行性腎細胞癌を患う患者の処置のために、ＦＤＡによって承認されている。
ピディリズマブ（ＣＴ−０１１；Ｃｕｒｅ  Ｔｅｃｈ）は、ＰＤ−１に結合するヒト化ＩｇＧ１ｋモノクローナル抗体である。ピディリズマブは、例えば、国際公開第２００９／１０１６１１号に開示されている。
【００５５】
ＰＤＲ−００１またはＰＤＲ００１は、ＰＤ−Ｌ１およびＰＤ−Ｌ２とＰＤ−１の結合を遮断する、高親和性でリガンドを遮断するヒト化抗ＰＤ−１  ＩｇＧ４抗体である。ＰＤＲ−００１は、国際公開第２０１５／１１２９００号および国際公開第２０１７／０１９８９６号に開示されている。
抗体ＰＤ１−１からＰＤ１−５は、表１に示される配列によって定義される抗体分子であり、ここで、ＨＣは、（全長）重鎖を意味し、ＬＣは、（全長）軽鎖を意味する。
【表１−１】
2020521797.tif 000003
【表１−２】
2020521797.tif 000004
【００５６】
具体的には、本明細書の上に記載の抗ＰＤ−１抗体分子は、以下を有する：
（ＰＤ１−１：）配列番号：１４のアミノ酸配列を含む重鎖、および配列番号：１５のアミノ酸配列を含む軽鎖；または
（ＰＤ１−２：）配列番号：１６のアミノ酸配列を含む重鎖、および配列番号：１７のアミノ酸配列を含む軽鎖；または
（ＰＤ１−３：）配列番号：１８のアミノ酸配列を含む重鎖、および配列番号：１９のアミノ酸配列を含む軽鎖；または 
（ＰＤ１−４：）配列番号：２０のアミノ酸配列を含む重鎖、および配列番号：２１のアミノ酸配列を含む軽鎖；または 
（ＰＤ１−５：）配列番号：２２のアミノ酸配列を含む重鎖、および配列番号：２３のアミノ酸配列を含む軽鎖。
アテゾリズマブ（テセントリク、ＭＰＤＬ３２８０Ａとしても公知）は、ＰＤ−Ｌ１を標的とする、ファージ由来ヒトＩｇＧ１ｋモノクローナル抗体であり、例えば、Deng et al. mAbs 2016;8:593-603に記載されている。これは、尿路上皮癌を患う患者の処置のために、ＦＤＡによって承認されている。
アベルマブは、完全ヒト抗ＰＤ−Ｌ１  ＩｇＧ１モノクローナル抗体であり、例えば、Boyerinas et al. Cancer Immunol. Res. 2015;3:1148-1157に記載されている。
デュルバルマブ（ＭＥＤＩ４７３６）は、ＰＤ−Ｌ１に対する高い特異性を有するヒトＩｇＧ１ｋモノクローナル抗体であり、例えば、Stewart et al. Cancer Immunol. Res. 2015;3:1052-1062またはIbrahim et al. Semin. Oncol. 2015;42:474-483に記載されている。
【００５７】
Li et al.（上記）によって開示されているか、または臨床試験で公知のさらなるＰＤ−１抗体、例えば、ＡＭＰ−２２４、ＭＥＤＩ０６８０（ＡＭＰ−５１４）、ＲＥＧＮ２８１０、ＢＭＳ−９３６５５９、ＪＳ００１−ＰＤ−１、ＳＨＲ−１２１０、ＢＭＳ−９３６５５９、ＴＳＲ−０４２、ＪＮＪ−６３７２３２８３、ＭＥＤＩ４７３６、ＭＰＤＬ３２８０ＡおよびＭＳＢ００１０７１８Ｃを、上述のアンタゴニストの代替として、または上述のアンタゴニストに加えて、使用してもよい。
【００５８】
本明細書において使用されるＩＮＮは、限定されるものではないが、米国において合衆国法律集第４２編§２６２のサブセクション（ｋ）および他の管轄の同等の規制の下で認可されたバイオシミラー抗体を含む、創製者の抗体と同じまたは実質的に同じアミノ酸配列を有するすべてのバイオシミラー抗体を包含することも意味する。
上記に列挙されたＰＤ−１アンタゴニストは、それらのそれぞれの製造、治療的使用および特性により、当技術分野において公知である。
１つの実施形態において、ＰＤ−１アンタゴニストは、ペムブロリズマブである。
別の実施形態において、ＰＤ−１アンタゴニストは、ニボルマブである。
別の実施形態において、ＰＤ−１アンタゴニストは、ピディリズマブである。
別の実施形態において、ＰＤ−１アンタゴニストは、アテゾリズマブである。
別の実施形態において、ＰＤ−１アンタゴニストは、アベルマブである。
別の実施形態において、ＰＤ−１アンタゴニストは、デュルバルマブである。
別の実施形態において、ＰＤ−１アンタゴニストは、ＰＤＲ−００１である。
別の実施形態において、ＰＤ−１アンタゴニストは、ＰＤ１−１である。
別の実施形態において、ＰＤ−１アンタゴニストは、ＰＤ１−２である。
別の実施形態において、ＰＤ−１アンタゴニストは、ＰＤ１−３である。
別の実施形態において、ＰＤ−１アンタゴニストは、ＰＤ１−４である。
別の実施形態において、ＰＤ−１アンタゴニストは、ＰＤ１−５である。
【００５９】
本発明内では、本発明による使用のための、組み合わせ、組成物、キット、方法、使用または化合物は、活性薬剤または活性成分の、同時、同時的、順次、連続的、交互、または別々の投与が構想され得ることが理解されるべきである。二重特異性結合分子およびＰＤ−１アンタゴニストは、独立せず、または独立してのいずれかで製剤化して投与することができ、例えば、二重特異性結合分子およびＰＤ−１アンタゴニストを、同じ医薬組成物／剤形の部分として、または好ましくは、別々の医薬組成物／剤形のいずれかで投与され得ることが認識される。
【００６０】
この文脈において、本発明の意味内の「組み合わせ」または「組み合わされた」とは、限定されるものではないが、２つ以上の活性薬剤の混合または組み合わせから生じる生成物を含み、例えば、成分もしくは薬剤の、同時、同時的、順次、連続的、交互、または別々の使用などの、固定された組み合わせおよび固定されていない（例えば、自由な）組み合わせ（キットを含む）の両方ならびに使用を含む。「固定された組み合わせ」という用語は、活性薬剤が、単一のものまたは単回投薬量の形態で、患者に、同時に、両方とも投与されることを意味する。「固定されていない組み合わせ」という用語は、活性薬剤が、別々のものとして、患者に、同時に（simultaneously）、同時的に（concurrently）、または特定の時間制限を伴わない順次のいずれかで、両方とも投与されることを意味し、このような投与は、患者の体内で、２つの化合物の治療的に有効なレベルを提供する。後者は、カクテル治療、例えば、３つ以上の活性薬剤の投与にも適用される。
二重特異性分子／化合物ＡおよびＰＤ−１アンタゴニスト／化合物Ｂの投与は、活性成分または活性薬剤の共投与によって、例えば、１つの単一の製剤もしくは剤形、または２つの別々の製剤もしくは剤形で、これらを同時または同時的に投与することによって、行われてもよい。あるいは、二重特異性結合分子およびＰＤ−１アンタゴニストの投与は、例えば、２つの別々の製剤または剤形などで、順次または交互に、活性成分または活性薬剤を投与することによって、行われてもよい。
【００６１】
例えば、同時投与は、実質的に同じ時点での投与を含む。この投与の形態は、「併用」投与とも称し得る。同時的投与は、同じ一般的な期間、例えば、必ずしも同じ時点ではないが同じ日に、活性薬剤を投与することを含む。交互投与は、期間の間、例えば、数日または１週間の治療単位にわたって、１つの薬剤の投与、続いて、その後の期間の間、例えば、数日または１週間の治療単位にわたって、他の薬剤の投与、次いで、１回または複数回のサイクルでこのパターンを繰り返すことを含む。順次投与または連続的投与は、１つまたは複数の用量を使用して、第１の期間の間（例えば、数日または１週間の治療単位にわたって）、１つの薬剤を投与し、続いて１つまたは複数の用量を使用して、第２の期間の間（例えば、数日または１週間の治療単位にわたって）、他の薬剤を投与することを含む。重複するスケジュールも使用してよく、これは、必ずしも規則的な順番に従わず、処置の期間にわたって、異なる日に活性薬剤を投与することを含む。例えば、使用される薬剤および対象の状態により、これらの一般的な指針に対する変更も用いられてよい。
【００６２】
したがって、好ましい実施形態において、本発明による方法では、本明細書に記載の化合物Ａは、本明細書に記載の化合物Ｂと、同時に、同時的に、順次、連続的に、交互に、または別々に投与される。類似の好ましい実施形態において、本発明による方法における使用のための本明細書に記載の化合物Ａは、本明細書に記載の化合物Ｂと、同時に、同時的に、順次、連続的に、交互に、または別々に投与される。関連する好ましい実施形態において、本発明による方法における使用のための本明細書に記載の化合物Ｂは、本明細書に記載の化合物Ａと、同時に、同時的に、順次、連続的に、交互に、または別々に投与される。さらに好ましい実施形態において、化合物Ａが、化合物Ｂと、同時に、同時的に、順次、連続的に、交互に、または別々に投与される、本明細書に記載の化合物Ａの使用が提供される。さらに関連する実施形態において、化合物Ｂが、化合物Ａと、同時に、同時的に、順次、連続的に、交互に、または別々に投与される、本明細書に記載の化合物Ｂの使用が提供される。別の実施形態において、第１の医薬組成物が、第２の医薬組成物と、同時に、同時的に、順次、連続的に、交互に、または別々に投与される、本発明によるキットが提供される。
【００６３】
別々または同時に投与される、化合物Ａ、化合物Ｂまたはその両方についての好ましい投与の経路は、限定されるものではないが、経口、腸管、非経口（例えば、筋肉内、腹腔内、静脈内、経皮もしくは皮下の注射、またはインプラント）、経鼻、経膣、直腸または局所投与が挙げられる。好ましい実施形態において、投与の経路は、静脈内投与、とりわけ、静脈内への注入または注射である。本発明の化合物は、単独または一緒に、それぞれの投与の経路に適した、従来の非毒性の薬学的に許容される担体、賦形剤および／またはビヒクルを含有する、適切な投薬単位の製剤に製剤化されてもよい。より好ましくは、製剤は、凍結乾燥、溶液（例えば、注射可能および注入可能な溶液）、分散液または懸濁液、リポソームおよび坐剤などの、固体、半固体または液体の剤形を含む。好ましい様式は、意図された投与の様式および治療適用に依存する。とりわけ好ましい実施形態としては、液体製剤および凍結乾燥が挙げられる。凍結乾燥の場合において、凍結乾燥物は、液体中、好ましくは、水中で再構成され得る。
本明細書に記載の化合物は、毎日、１週間に５回、１週間に３回、１週間に２回、１週間に１回、２週間に１回、３週間に１回、４週間に１回、投与されてもよい。好ましい投与間隔としては、１週間に１回および２週間に１回が挙げられる。
好ましくは、化合物Ａおよび化合物Ｂは、静脈内注入によって、１週間に１回投与される。
【００６４】
投与レジメンは、長期の処置を含んでいてもよい。「長期」とは、少なくとも２週間、好ましくは、数週間、数カ月または数年の期間を意味する。この投薬レジメンにおける必要な改変は、本明細書における教示を考慮すると、日常的な実験のみを使用して、当業者によって決定することができる。Remington's Pharmaceutical Sciences (Martin, E.W., ed. 4), Mack Publishing Co., Easton, PAを参照のこと。投薬量はまた、任意の合併症の事象において、個々の医師によって調整することができる。投与は、毎日、２日ごと、３日ごと、４日ごと、週あたり１日、週あたり２日、２週間あたり１日、３週間あたり１日などであり得る。
【００６５】
本明細書に記載の化合物は、適した時間間隔で投与される、単一用量または分割用量の治療有効量で投与され得る。治療有効量は、所望の治療結果を達成するために必要な投薬量および期間での有効な量を指し、疾患もしくは障害を予防、緩和または処置するために必要な最小量である。本発明による化合物の治療有効量は、個体の疾患状態、年齢、性別および体重、ならびに個体において所望の応答を誘発する化合物の能力などの要因によって変更してもよい。治療有効量は、治療的に有益な効果が、化合物の任意の毒性効果または有害効果を上回る量でもある。治療有効用量は、好ましくは、測定可能なパラメーター、例えば、腫瘍増殖速度を、未処置の対象と比較して、または処置される同じ対象の未処置の先行期間と比較して、少なくとも約２０％、より好ましくは、少なくとも約４０％、さらにより好ましくは、少なくとも約６０％、またより好ましくは、少なくとも約８０％、阻害する。
【００６６】
活性化合物は、単剤治療における治療有効量であるような用量で、または単剤治療であるが、所望の（一緒の）治療有効量をもたらすように組み合わせた場合に、使用される用量よりも低いまたは高いような用量で、投与され得る。処置における使用のために必要な本発明の二重特異性結合分子の量は、特定の選択された結合分子、投与の経路、処置される状態の本質、ならびに患者の年齢および状態に適合され得、最終的には、主治医または臨床医の裁量である。また、本発明の結合分子の投薬量は、標的細胞、腫瘍、組織、移植片または臓器に応じて、適合され得る。
化合物Ａまたは化合物Ｂの所望の用量は、患者において設定された血中濃度に達するために、投与あたりの固定量として、またはボーラス投与として投与されてもよい。
【００６７】
本明細書に記載の化合物ＢであるＰＤ−１アンタゴニストの投与は、例えば、約０．１〜３０ｍｇ／患者の体重１ｋｇ、例えば、約０．５〜２５ｍｇ／患者の体重１ｋｇ、約１〜２０ｍｇ／患者の体重１ｋｇ、約２〜５ｍｇ／患者の体重１ｋｇ、または約３ｍｇ／患者の体重１ｋｇの用量での、例えば、注射（例えば、皮下または静脈内）によるものであり得る。
【００６８】
ＰＤ−１アンタゴニストの投薬量および治療レジメンは、当業者によって決定することができる。本発明のＰＤ−１アンタゴニストのための好ましい投薬レジメンは、静脈内投与による１ｍｇ／宿主の体重１ｋｇまたは３ｍｇ／宿主体重の１ｋｇを含み、抗体は、以下の投与スケジュールの１つを使用して投与される：（ｉ）４週間ごとに６回の投薬、その後は３か月ごと；（ｉｉ）３週間ごと；（ｉｉｉ）３ｍｇ／宿主の体重１ｋｇを１回、続いて、１ｍｇ／宿主の体重１ｋｇを３週間ごと。ある特定の実施形態において、ＰＤ−１アンタゴニストは、約１〜４０ｍｇ／宿主の体重１ｋｇ、例えば、１〜３０ｍｇ／宿主の体重１ｋｇ、例えば、約５〜２５ｍｇ／宿主の体重１ｋｇ、約１０〜２０ｍｇ／宿主の体重１ｋｇ、約１〜５ｍｇ／宿主の体重１ｋｇ、１〜１０ｍｇ／宿主の体重１ｋｇ、５〜１５ｍｇ／宿主の体重１ｋｇ、１０〜２０ｍｇ／宿主の体重１ｋｇ、１５〜２５ｍｇ／宿主の体重１ｋｇ、または約３ｍｇ／宿主の体重１ｋｇの用量で、注射（例えば、皮下または静脈内）によって投与される。投与スケジュールは、例えば、１週間に１回から、２週間、３週間または４週間に１回で変更することができる。１つの実施形態において、ＰＤ−１アンタゴニストは、隔週で、約１０〜２０ｍｇ／宿主の体重１ｋｇの用量で投与される。抗体分子は、約３５〜４００ｍｇ／ｍ2、典型的には、約７０〜３１０ｍｇ／ｍ2、より典型的には、約１００〜１３０ｍｇ／ｍ2の用量に達するように、２０ｍｇ／分よりも速い速度、例えば、２０〜４０ｍｇ／分の速度、典型的には、４０ｍｇ／分以上の速度での静脈内注入によって投与することができる。実施形態において、約１１０〜１３０ｍｇ／ｍ2の注入速度は、約３ｍｇ／宿主の体重１ｋｇのレベルに達する。他の実施形態において、抗体分子は、約１〜１００ｍｇ／ｍ2、例えば、約５〜５０ｍｇ／ｍ2、約７〜２５ｍｇ／ｍ2または約１０ｍｇ／ｍ2の用量に達するように、１０ｍｇ／分未満、例えば、５ｍｇ／分以下の速度での静脈内注入によって投与することができる。いくつかの実施形態において、抗体は、約３０分の時間にわたって注入される。投薬量の値は、緩和される状態の種類および重症度によって変更し得ることに留意すべきである。任意の特定の対象について、特定の投薬レジメンは、個々の必要性および組成物の投与を投与または監督する人の専門的判断に従って、経時的に調整すべきであること、ならびに本明細書おいて説明される投薬量の範囲が、例示のみであって、特許請求に係る組成物の範囲または実施を制限することを意図するものではないことがさらに理解されるべきである。
【００６９】
化合物Ａおよび化合物Ｂの別々または一緒の投与スケジュールは、例えば、１週間に１回から２、３または４週間ごとに１回で変更し得る。ある特定の実施形態において、化合物Ａ、化合物Ｂもしくはその両方の投与量または投薬量は、より低い（例えば、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、または少なくとも５０％低い）。他の実施形態において、所望の効果をもたらす（例えば、過剰増殖性疾患または腫瘍学的疾患の処置）、化合物Ａ、化合物Ｂもしくはその両方の量または投薬量は、より低い（例えば、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、または少なくとも５０％低い）。
本発明による、方法、化合物、使用のための化合物、化合物の使用、医薬組成物およびキットは、本明細書に記載の二重特異性抗体分子および抗ＰＤ−１抗体分子の組み合わせを対象に投与することを含む。
【００７０】
処置されるがん性疾患に応じて、本明細書に定義される組み合わせ治療は、それ自体で、あるいは特に、がん細胞における血管新生、シグナル伝達経路もしくは有糸分裂チェックポイントを阻害する化学療法剤または治療的に活性な化合物から選択される、１つもしくは複数の追加の治療薬剤とさらに組み合わせて、使用してもよい。
追加の治療薬剤は、同時に投与されてもよく、これは同じ医薬調製物の成分としてであってもよく、あるいは、結合分子および／もしくＰＤ１アンタゴニストの投与の前または後に、投与されてもよい。
【００７１】
化学療法剤は、ホルモン、ホルモンアナログおよび抗ホルモン（例えば、タモキシフェン、トレミフェン、ラロキシフェン、フルベストラント、酢酸メゲストロール、フルタミド、ニルタミド、ビカルタミド、酢酸シプロテロン、フィナステリド、酢酸ブセレリン、フルドロコルチゾン、フルオキシメステロン、メドロキシプロゲステロン、オクトレオチド、アルゾキシフェン、パシレオチド、バプレオチド）、アロマターゼ阻害剤（例えば、アナストロゾール、レトロゾール、リアロゾール、エキセメスタン、アタメスタン、フォルメスタン）、ＬＨＲＨアゴニストおよびアンタゴニスト（例えば、酢酸ゴセレリン、ロイプロリド、アバレリックス、セトロレリクス、デスロレリン、ヒストレリン、トリプトレリン）、代謝拮抗剤（例えば、メトトレキサート、ペメトレキセドのような抗葉酸剤、５フルオロウラシル、カペシタビン、デシタビン、ネララビンおよびゲムシタビンのようなピリミジンアナログ、メルカプトプリンチオグアニン、クラドリビンおよびペントスタチンなどのプリンおよびアデノシンアナログ、シタラビン、フルダラビン）；抗腫瘍性抗生物質（例えば、ドキソルビシン、ダウノルビシン、エピルビシンおよびイダルビシンのようなアントラサイクリン、マイトマイシン−Ｃ、ブレオマイシン、ダクチノマイシン、プリカマイシン、ミトキサントロン、ピクサントロン、ストレプトゾシン）；白金誘導体（例えば、シスプラチン、オキサリプラチン、カルボプラチン、ロバプラチン、サトラプラチン）；アルキル化剤（例えば、エストラムスチン、メクロレタミン（ｍｅｃｌｏｒｅｔｈａｍｉｎｅ）、メルファラン、クロラムブシル、ブスルファン、ダカルバジン、シクロホスファミド、イホスファミド、ヒドロキシウレア、テモゾロマイド、カルムスチンおよびロムスチンなどのニトロソウレア、チオテパ）；抗有糸分裂剤（例えば、ビンブラスチン、ビンデシン、ビノレルビン、ビンフルニンおよびビンクリスチンのようなビンカアルカロイド）；パクリタキセル、ドセタキセルおよびそれらの製剤、ラロタキセルのようなタキサン；シモタキセル、およびイクサベピロンのようなエポチロン、パツピロン、ＺＫ−ＥＰＯ）；トポイソメラーゼ阻害剤（例えば、エトポシドおよびエトポホスのようなエピポドフィロトキシン、テニポシド、アムサクリン、トポテカン、イリノテカン）、ならびにアミホスチン、アナグレリド、インターフェロンアルファ、プロカルバジン、ミトタン、およびポルフィマー、ベキサロテン、セレコキシブなどの種々の化学療法薬から選択され得る。
【００７２】
好ましい実施形態において、化合物Ａおよび化合物Ｂを含む処置は、「白金ダブレット」治療、すなわち、（ｉ）シスプラチンまたはカルボプラチンなどの白金化合物と、（ｉｉ）ドセタキセル、パクリタキセル、ビノレルビンまたはゲムシタビンなどの第三世代の化学療法剤による治療をさらに含む。
別の好ましい実施形態において、化合物Ａおよび化合物Ｂを含む処置は、がん細胞標的治療と組み合わされる。
【００７３】
ある特定の実施形態において、本明細書に開示される組み合わせ治療で処置される、腫瘍学的疾患または過剰増殖性疾患、特に、がんまたは腫瘍疾患としては、限定されるものではないが、固形腫瘍、血液がん（例えば、白血病、リンパ腫、骨髄腫、例えば、多発性骨髄腫）および転移性病変が挙げられる。１つの実施形態において、がんは固形腫瘍である。固形腫瘍の例としては、悪性腫瘍、例えば、肉腫および癌腫、例えば、肺、乳房、卵巣、リンパ系、胃腸（例えば、結腸）、肛門、生殖器および尿生殖路（例えば、腎臓、尿路上皮、膀胱細胞、前立腺）、咽頭、ＣＮＳ（例えば、脳、神経細胞およびグリア細胞）、頭頸部、皮膚（例えば、メラノーマ）および膵臓に影響を及ぼすものなどの各種の臓器系の腺癌、ならびに結腸がん、直腸がん、腎細胞癌、肝臓がん、非小細胞肺がん、小腸のがんおよび食道のがんなどの悪性腫瘍を含む腺癌が挙げられる。がんは、早期、中期、後期または転移性のがんであってもよい。
本明細書で使用される場合、「過剰増殖性疾患」とは、細胞増殖が、正常なレベルを超えて増加している状態を指す。例えば、過剰増殖性疾患または障害としては、悪性疾患（例えば、食道がん、結腸がん、胆道がん）および非悪性疾患（例えば、アテローム性動脈硬化症、良性過形成、良性前立腺肥大症）が挙げられる。
【００７４】
１つの実施形態において、がんは、肺がん（例えば、ＮＳＣＬＣ（例えば、扁平上皮および／もしくは非扁平上皮組織を有するＮＳＣＬＣ、またはＮＳＣＬＣ腺癌））、メラノーマ（例えば、進行性メラノーマ）、腎臓がん（例えば、腎細胞癌）、肝臓がん、骨髄腫（例えば、多発性骨髄腫）、前立腺がん、乳がん（例えば、エストロゲン受容体、プロゲステロン受容体またはＨｅｒ２／ｎｅｕのうちの１つ、２つまたはすべてを発現しない乳がん、例えば、トリプルネガティブ乳がん）、結腸直腸がん、膵臓がん、頭頸部がん（例えば、頭頸部扁平上皮癌（ＨＮＳＣＣ））、肛門がん、胃食道がん、甲状腺がん、子宮頸がん、リンパ増殖性疾患（例えば、移植後リンパ増殖性疾患）、または血液がん、Ｔ細胞リンパ腫、Ｂ細胞リンパ腫、非ホジキンリンパ腫もしくは白血病（例えば、骨髄性白血病またはリンパ性白血病）から選択される。
別の実施形態において、がんは、癌腫（例えば、進行性または転移性の癌腫）、メラノーマ、または肺癌、例えば、ＮＳＣＬＣから選択される。
１つの実施形態において、がんは、肺がん、例えば、ＮＳＣＬＣまたは小細胞肺がんである。好ましい実施形態において、がんは、ＮＳＣＬＣである。
【００７５】
本発明の任意の態様および実施形態と組み合わせ可能なとりわけ好ましい実施形態において、本発明による組み合わせ治療は、ＥＧＦＲ変異またはＡＬＫ転座がない、局所進行性または転移性の非扁平上皮ＮＳＣＬＣを患う患者を処置するためのものである。したがって、患者は、高または低ＰＤ−Ｌ１発現状態などの患者のＰＤ−Ｌ１発現状態に従って選択されてもよい。処置は、一次治療、すなわち、疾患（ＮＳＣＬＣ）のために与えられる第１の処置であり得る。したがって、患者は、化学療法または放射線治療を受けていなくてもよく、特に、本発明に従って処置されるときにＮＳＣＬＣの処置を受けていなくてもよい。患者の任意のがん処置の前のＰＤ−Ｌ１発現状態を決定することによって、信頼できる結果を達成することができる。
【００７６】
ＰＤ−Ｌ１発現状態は、例えば、免疫組織化学的検査を使用することによって、Han et al. (Journal of Pathology and Translational Medicine 2017; 51: 40-48)またはWang et al. (OncoTargets and Therapy 2016:9 5023-5039)によって記載されているようにして決定することができる。処置される患者の腫瘍の生検試料は、ＰＤ−Ｌ１発現状態の決定のために使用されてもよい。２つ以上の生検が使用される場合において、個々の患者からの単一の腫瘍生検または複数の生検が使用されてもよく、好ましくは、最も高いＰＤ−Ｌ１発現を有する生検が、本発明に従ってＰＤ−Ｌ１発現状態を決定するために使用される。ＰＤ−Ｌ１は、細胞表面（膜）または細胞質発現、腫瘍細胞のみによる発現および／または腫瘍環境（例えば、免疫細胞）の他の細胞による発現において決定することができる。ＰＤ−Ｌ１陽性の発現を検討するための閾値は、例えば、細胞、例えば、腫瘍および／または免疫細胞において、少なくとも１％、少なくとも５％、または少なくとも１０％のＰＤ−Ｌ１発現であり得、ここで、例えば、免疫組織化学的検査によって決定される、細胞において１≧％、≧５％または１０≧％のＰＤ−Ｌ１発現を有する試料をＰＤ−Ｌ１「陽性」と考えることができる。好ましい実施形態において、上記の、好ましくは、例えば、Han et al.またはWang et al.によって記載されているように、免疫組織化学的検査による決定によって、ＰＤ−Ｌ１発現状態は、腫瘍細胞または免疫細胞、より好ましくは、腫瘍細胞について決定され、細胞の１％〜５％のＰＤ−Ｌ１発現は、低ＰＤ−Ｌ１発現と考えられ、細胞の＞５％、例えば、細胞の＞５％〜４０％のＰＤ−Ｌ１発現は、高ＰＤ−Ｌ１発現と考えられる。処置される患者は、低ＰＤ−Ｌ１発現の患者、高ＰＤ−Ｌ１発現の患者、高ＰＤ−Ｌ１発現を有する患者を除く低ＰＤ−Ｌ１発現の患者、または低ＰＤ−Ｌ１発現の患者を除く高ＰＤ−Ｌ１発現の患者であってもよい。
【００７７】
１つの実施形態において、がんは、メラノーマ、例えば、進行性メラノーマである。１つの実施形態において、がんは、他の治療に応答しない、進行性または切除不可能メラノーマである。他の実施形態において、がんは、ＢＲＡＦ変異（例えば、ＢＲＡＦ  Ｖ６００変異）を有するメラノーマである。
別の実施形態において、がんは、ウイルス感染、例えば、慢性ウイルス性肝炎を有するか、または有さない、肝細胞癌、例えば、進行性肝細胞癌である。
別の実施形態において、がんは、前立腺がん、例えば、進行性前立腺がんである。
また別の実施形態において、がんは、骨髄腫、例えば、多発性骨髄腫である。
また別の実施形態において、がんは、腎臓がん、例えば、腎細胞癌（ＲＣＣ）（例えば、転移性ＲＣＣまたは腎明細胞癌（ＣＣＲＣＣ））である。
上記で概要を述べたように、本発明は、本明細書において定義される化合物Ａおよび化合物Ｂを含む医薬組成物、ならびに本明細書に定義される化合物Ａを含む第１の医薬組成物、および本明細書に定義される化合物Ｂを含む第２の医薬組成物を含むキットに関する。
【００７８】
本明細書において定義される「医薬組成物」という用語は、その中に含有される活性成分の生物学的活性を有効にすることが可能であるような、そのような形態であって、組成物が投与される対象に対して容認しがたい毒性である追加の成分を含有しない調製物を指す。本発明の医薬組成物は、当技術分野において公知のさまざまな方法によって投与することができる。当業者には明らかであるように、投与の経路および／または様式は、所望の結果に応じて、変更される。
選択された投与の経路にかかわらず、本発明の組み合わせ治療、ならびに／または本発明の医薬組成物、第１の医薬組成物および第２の医薬組成物において使用される化合物は、当業者に公知の慣用の方法によって、薬学的に許容される剤形に製剤化される。
本明細書において定義されるキットは、第１の医薬組成物および／または第２の医薬組成物を含む、適切な１つの容器またはいくつかの適切な容器を含んでいてもよく、ここで、第１および第２の医薬組成物は、同じ容器、または異なる容器に含有されていてもよい。キットは、本発明の任意の方法または任意の使用において使用され得る。
【００７９】
好ましくは、本発明によるキットは、それを必要とする患者における腫瘍学的疾患または過剰増殖性疾患、好ましくは、がんまたは腫瘍疾患、とりわけ、ＮＳＣＬＣの処置および／または予防において化合物Ａおよび／または化合物Ｂを使用するための可読の指示を含む添付文書をさらに含む。指示は、本発明の方法およびその好ましい実施形態のいずれかに関する上記の記載のように、さらなる詳述を提供し得る。
特許請求の範囲および／または明細書において「含む」という用語と組み合わせて使用される場合の「ａ」または「ａｎ」という語の使用は、「１つ」を意味してもよいが、これは、「１つまたは複数」、「少なくとも１つ」および「１つまたは２つ以上」の意味とも一致する。
本明細書において使用される「約」は、測定の精度の性質を考慮した、測定された量について許容可能な程度の誤差を意味する。例示的な誤差の程度は、所与の値または値の範囲の２０％以内、典型的には、１０％以内、より典型的には、５％以内である。
【００８０】
本明細書において使用される「処置する」または「処置」という用語は、すでに存在する、疾患状態もしくは状態を治癒させること、または疾患状態もしくは状態からの回復の可能性を増加させることを意味する。処置することには、阻害すること、すなわち、疾患状態もしくは状態の進行を抑止すること、および緩和すること、すなわち、疾患の進行の退縮を引き起こすことまたは遅延させることも含み得る。処置は、患者を治癒させず、疾患の症状を緩和させるためであり得る。
本明細書において使用される「予防する」または「予防」という用語は、患者または対象に疾患状態または状態が完全に発生するのを止めることを意味しないが、疾患状態または状態が進行する危険性を低減させることも指す。
本発明を、本発明のこれらの実施形態に必ずしも限定されることなく、以下の実施例によってさらに例証する。化合物、用量および投与経路、ならびに処置の組み合わせを含む、例またはその一部は、それぞれそのままで、または上記の詳細な記載と組み合わせて、本発明の一部を形成する。
【実施例】
【００８１】
頭字語および略語
ＣＤ  表面抗原分類
ＤＭＥＭ  ダルベッコ改変イーグル培地
ＦＣＳ  ウシ胎仔血清
ＩＤ  識別子
ｉ．ｐ．  腹腔内
ＬＡＧ−３  リンパ球活性化遺伝子３
Ｍ  モル濃度
ＭＥＭ  最小必須培地
ＰＢＳ  リン酸緩衝食塩水 
ＰＤ−１  プログラム細胞死１
ＰＤ−Ｌ１  プログラム細胞死リガンド１
ＰＤ−Ｌ２  プログラム細胞死リガンド２
ｑ３ｏｒ４ｄ  ３日または４日ごと（週に２回）
Ｒ  応答
ＴＧＩ  式：
ＴＧＩ＝１００×｛１−［処置最終日−処置1日目］／［対照最終日−対照1日目］｝
によって計算された、腫瘍増殖阻害
ＴＩＬ  腫瘍浸潤リンパ球
【００８２】
（例１）
試験化合物
ラットＩｇＧ２ａ抗マウスＰＤ−１抗体のＥＸ１０１３５９（クローンＲＭＰＩ−１４）（１０ｍｇ／ｋｇ）、二重特異性のＶＥＧＦおよびＡｎｇ２結合タンパク質のＶＥＧＦＡＮＧＢＩＩ２２（本明細書の上記に定義され、配列番号：１１、１２および１３の構造／配列を有する）、低分子ＴＫＩのバタラニブおよびクロスマブ抗体のバヌシズマブ（抗ヒトＶＥＧＦ−Ａおよび抗ヒト／マウスＡｎｇ−２）をこれらの実験のために使用した。対照群のために、ＰＤ−１抗体のラットＩｇＧ２ａ（ＥＸ１０１３６２）に対応するアイソタイプ、すなわち、類似の配列を有するが、ＰＤ−１と結合しない抗体を使用した（１０ｍｇ／ｋｇ）。すべての抗体を１×ＰＢＳで希釈し、ＢｉｏＸｃｅｌｌ、Ｗｅｓｔ  Ｌｅｂａｎｏｎ、ＮＨ、米国に注文した。
【００８３】
細胞
ＬＬ／２（ＬＬＣ１）は、アメリカ合衆国培養細胞系統保存機関（ＡＴＣＣ）、米国（ＣＲＬ−１６４２）から購入した、マウス肺癌細胞系である。細胞を、Ｔ１７５組織培養フラスコ中、３７℃、５％ＣＯ2で培養した。使用した培地は、１０％ＦＣＳ（ＨｙＣｌｏｎｅ（登録商標）Ｆｅｔａｌ  Ｂｏｖｉｎｅ  Ｓｅｒｕｍ  Ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚｅｄ；カタログ番号ＳＨ３００７１．０３；Ｔｈｅｒｍｏ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ製）で補充されたＤＭＥＭであった。培養物を、２〜３日ごとに、１：４／１：６の比で分割した。
【００８４】
マウス
Ｃ５７ＢＬ／６ＮＴａｃは、完全免疫適格性のマウス系統であり、Ｔａｃｏｎｉｃ  Ｄｅｎｍａｒｋによって供給された。雌マウスは、Ｔａｃｏｎｉｃから７週齢で地域の動物施設に発送された。動物施設に到着後、マウスは、マウスを実験に使用する前に、少なくとも５日間、条件に順応させた。マウスを、２１．５±１．５℃の温度、５５±１０％の湿度の標準条件下、１０頭の群で収容した。標準試料（ＰＲＯＶＩＭＩ  ＫＬＩＢＡ）およびオートクレーブされた水道水を自由に提供した。イソフルレン麻酔下で移植された皮下マイクロチップを使用して、それぞれのマウスを識別した。試験番号、動物識別番号、抗体および化合物、ならびに用量レベル、投与経路、ならびにスケジュールを示すケージカードを、試験の間中、動物と一緒にしておいた。
腫瘍の確立、無作為化
動物を、コンピュータープログラムＳＥＰＩＡによって、異なる群に無作為に送った。皮下腫瘍モデルを確立するために、ＬＬ／２細胞を収集し、ＰＢＳ／５％ＦＣＳ中に再懸濁し、５×１０5／ｍｌで、Ｍａｔｒｉｇｅｌ  Ｍａｔｒｉｘ（増殖因子なし、Ｃｏｒｎｉｎｇ、Ｔｅｗｋｓｂｕｒｙ、ＭＡ、米国）と１：２で混合した。５×１０4細胞を含有する１００μｌの細胞懸濁液をマウスごとに注射した（５日目）。
【００８５】
試験化合物の投与
抗体をＰＢＳで１ｍｇ／ｍＬに希釈し、１０ｍｌ／ｋｇの容積で腹腔内に注射した。希釈物を最大で５日間、４℃で保管した。処置の開始（１日目）は、細胞注射の３日後であった。バタラニブを、５％のＮａｔｒｏｓｏｌ溶液（ヒドロキシエチルセルロース）に懸濁し、経管栄養ニードル（Ｉｎｆｕｓｉｏｎｓｋａｎｕｌｅ  Ｏｌｉｖｅ  Ａ、Ａｃｕｆｉｒｍ、Ｎｏ．１４  ６４  ｌｌ−１）によって胃内に投与した。投与容積は、体重１ｋｇあたり１０ｍｌであった。投与は、２４時間ごとに１回であった。懸濁液を調製するために、化合物をＮａｔｒｏｓｏｌ溶液に添加し、混合物を終夜撹拌した。時々、超音波処理が必要であった。溶液を、最大で１週間、暗所で室温で保管した。
【００８６】
【表２】
2020521797.tif 000005
【００８７】
腫瘍増殖および疾患の進行の監視
腫瘍直径を、週に３回（月曜日、水曜日および金曜日）、キャリパーで測定した。処置の開始後１４日目から２８日目まで、すべての腫瘍を毎日測定した。それぞれの腫瘍の体積［ｍｍ3］を、式「腫瘍体積＝長さ×直径2×π／６」に従って計算した。処置の副作用を監視するために、マウスを、異常について毎日検査し、体重を、少なくとも週に３回決定した。動物を、腫瘍が１５００ｍｍ3のサイズに達したとき、または腫瘍のネクロシスが腫瘍表面の１／３より大きくなったときに、屠殺した。加えて、体重の＞１８％を失った動物は、倫理的な理由のために安楽死させた。腫瘍増殖阻害（ＴＧＩ）値は、以下の通り計算した：
ＴＧＩ＝１００×｛１−［（処置最終日−処置1日目）／（対照最終日−対照1日目）］｝
【００８８】
統計解析−抗腫瘍有効性
腫瘍阻害の統計学的有意性の評価のために、片側非母数マン−ホイットニー−ウィルコクソン−Ｕ検定を、効果が一方向でのみ測定され得るという仮説に基づいて（すなわち、腫瘍阻害は予想されるが、腫瘍刺激は予想されない）、行った。この場合において、Ｕ検定を、特定の日における絶対体積に従って、２つの群の個々の腫瘍のランキングを比較した（群間の一対比較）。解析を実験の１７日目に行った。Ｕ検定から得られたｐ値を、ボンフェローニ−ホルム補正を使用して調整した。慣例により、ｐ値が≦０．０５は、差の有意性を示す。
【００８９】
結果
同位体対照群のマウスを、ＥＸ１０１３６２で腹腔内に週に２回処置した。処置期間の間、腫瘍は、４１ｍｍ2の体積の中央値から１２７５ｍｍ3の体積に増殖した。１０ｍｇ／ｋｇのＥＸ１０１３５９、抗マウスＰＤ−１抗体での処置は、腹腔内に週に２回投与した。ＥＸ１０１３５９処置は、アイソタイプの対照と比較して、腫瘍増殖を低減させた（中央値ＴＧＩ＝５１％）。
ＶＥＧＦＡＮＧＢＩＩ２２単独での処置は、４９％のＴＧＩという結果であった。バタラニブ単独での処置は、５４％のＴＧＩという結果であった。バタラニブ、ＶＥＧＦＡＮＧＢＩＩ２２および抗ＰＤ１での組み合わせ処置は、７９％のＴＧＩという結果であった。
バヌシズマブ単独での処置は、６４％のＴＧＩという結果であった。バタラニブ、バヌシズマブおよび抗ＰＤ１での組み合わせ処置は、８１％のＴＧＩという結果であった。
組み合わせのさらなる結果および比較化合物の結果を図１に示す。
【００９０】
結論
この研究において、抗ＰＤ１、バタラニブ（ＶＥＧＦＲを標的とする）、ＶＥＧＦＡＮＧＢＩＩ２２およびバヌシズマブの単剤治療は、それぞれ、５１％、５４％、４９％および６４％のＴＧＩ値で、最小から中度の抗腫瘍応答を示した。抗ＰＤ１＋バタラニブ＋ＶＥＧＦＡＮＧＢＩＩ２２または抗ＰＤ１＋バタラニブ＋バヌシズマブの３剤併用は、７９％および８１％のＴＧＩ値で、明らかにより有効であった。個々の腫瘍の応答曲線を解析することによって、抗ＰＤ１＋バタラニブ＋ＶＥＧＦＡＮＧＢＩＩ２２の３剤併用は、処置された腫瘍の１つが縮小を示したように優れている一方、抗ＰＤ１＋バタラニブ＋バヌシズマブで処置された群におけるすべての腫瘍は、腫瘍増殖の低減を示す。
３剤併用は、アイソタイプの対照および単剤治療と比較して、より良好な抗腫瘍効果を示す。抗ＰＤ１＋バタラニブ＋ＶＥＧＦＡＮＧＢＩＩ２２の３剤併用は、処置された１個体において腫瘍の縮小でさえ誘導した。すべての処置は、この実験において十分に耐容であった。
【００９１】
上記から、これらの結果をヒトにおける治療に移す際に、ＶＥＧＦＡＮＧＢＩＩ２２の化合物がヒトＶＥＧＦに結合するので、この化合物には、抗Ａｇｎ２だけでなく抗ＶＥＧＦ活性が含まれることを理解すべきである。したがって、上に記載の実験におけるバタラニブなどの抗ＶＥＧＦ剤の追加の使用は必要ではない。したがって、上記のデータは、ＶＥＧＦＡＮＧＢＩＩ２２＋抗ＰＤ１抗体などのＰＤ１アンタゴニストでのヒトの処置が、ヒト患者において有用な治療効果をもたらすことを示す。
【００９２】
（例２）
さらなる実験を、本質的に実施例１に記載されているように構成し、単剤治療とＶＥＧＦＡＮＧＢＩＩ２２＋抗ＰＤ１抗体＋バタラニブの３剤併用とを比較する（バタラニブは、マウスの抗ＶＥＧＦ活性を再び模倣し、その活性は、その化合物のＶＥＧＦ結合成分がマウスＶＥＧＦに結合しないので、ＶＥＧＦＡＮＧＢＩＩ２２からは予想することができない）。
再び、ＴＧＩ値を決定し、３剤併用の投与で８０％を達成した。これとは対照的に、２２％（抗ＰＤ−１抗体）、２７％（ＶＥＧＦＡＮＧＢＩＩ２２の抗Ａｎｇ２活性）および４３％（バタラニブ）のＴＧＩ値が単剤治療によって達成された。
【００９３】
加えて、それぞれの処置群のマウスの生存率を決定した。図２から分かるように、ＶＥＧＦＡＮＧＢＩＩ２２、バタラニブおよびＰＤ１アンタゴニストでの処置のみが、３０日の制限を顕著に超える生存を提供した。再び、これは、提案された処置が、ヒトにおいても優れた効果を達成すると予想され得ることを示す（再び、抗ＶＥＧＦ活性がＶＥＧＦＡＮＧＢＩＩ２２成分によってすでに提供されているので、バタラニブの追加は必要がないことが理解されている）。
【図１−１】
2020521797.tif 000006
【図１−２】
2020521797.tif 000007
【図２】
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【配列表】
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【国際調査報告】
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