(57)【要約】  本発明は、腫瘍化学療法腸管毒性を予防するための微生物剤を提供し、具体的に、本発明で開示される微生物剤は、セレン富化ビフィズス菌を含み、実験結果は、セレン富化ビフィズス菌が化学療法によって引き起こされる腸粘膜の損傷を予防および／または治療することに顕著な治癒効果を持ち、化学療法動物の生存時間を顕著に延長することができるので、腫瘍の補助治療に使用することができ、腫瘍化学療法の副作用を軽減することができることを示す。本発明は、セレン富化微生物またはその水溶性タンパク質がアルコール性肝疾患を予防または治療することができ、免疫を増加し、腸管細菌叢を調整し、及腸上皮細胞の保護剤として使用されることをさらに見出した。【特許請求の範囲】
【請求項１】
薬物の調製におけるセレン富化微生物の応用であって、
前記薬物は、
（１）腸管の損傷の予防および／または治療のためであり、
（２）腫瘍の補助治療のためであり、および／または
（３）腫瘍化学療法の副作用を軽減するための薬物である、前記薬物の調製におけるセレン富化微生物の応用。
【請求項２】
前記腸管の損傷は、腫瘍化学療法によって引き起こされる腸管の損傷であることを特徴とする
請求項１に記載の薬物の調製におけるセレン富化微生物の応用。
【請求項３】
前記腸管の損傷は、小腸の粘膜の損傷、下痢などを含むことを特徴とする
請求項１に記載の薬物の調製におけるセレン富化微生物の応用。
【請求項４】
前記セレン富化微生物の乾燥菌体１グラム当たりのセレン含有量は、≧２ｍｇ（例えば、≧４ｍｇ、好ましくは、≧５ｍｇ、より好ましくは、≧１０ｍｇ、最も好ましくは、≧２０ｍｇ）である
請求項１に記載の薬物の調製におけるセレン富化微生物の応用。
【請求項５】
前記セレン富化微生物は、セレン富化プロバイオティクスであり、好ましくは、前記セレン富化微生物は、セレン富化ビフィズス菌であることを特徴とする
請求項１に記載の薬物の調製におけるセレン富化微生物の応用。
【請求項６】
前記微生物は、哺乳動物の腸管に定着することができる微生物であることを特徴とする
請求項１に記載の薬物の調製におけるセレン富化微生物の応用。
【請求項７】
微生物剤であって、
前記微生物剤は、生体セレン富化微生物を含む、前記微生物剤。
【請求項８】
前記微生物剤において、セレン富化微生物の含有量は、１＊１０＾７−９＊１０＾１１ＣＦＵ／ｇであり、好ましくは、１＊１０＾９−９＊１０＾１０ＣＦＵ／ｇであることを特徴とする
請求項７に記載の微生物剤。
【請求項９】
前記セレン富化微生物の菌体の１０＾８ＣＦＵ当たりのセレン含有量は、０．１〜１００μｇ、好ましくは、１〜５０μｇ、より好ましくは、２〜３０μｇ、最も好ましくは、３〜１０μｇであることを特徴とする
請求項７に記載の微生物剤。
【請求項１０】
腸管の損傷の予防および／または治療の方法であって、
予防および／または治療有効量のセレン富化微生物を、それを必要とする対象に投与するステップを含むことを特徴とする
請求項７に記載の微生物剤。
【請求項１１】
薬物の調製におけるセレン富化微生物または請求項７〜９のいずれか一項に記載の微生物剤の応用であって、
前記薬物は、アルコール性肝疾患を予防または治療するために使用される、前記薬物の調製におけるセレン富化微生物または請求項７〜９のいずれか一項に記載の微生物剤の応用。
【請求項１２】
薬物または健康食品の調製におけるセレン富化微生物または請求項７〜９のいずれか一項に記載の微生物剤の応用であって、
前記薬物は、免疫を増加するために使用され、前記薬物または健康食品の調製におけるセレン富化微生物または請求項７〜９のいずれか一項に記載の微生物剤の応用。
【請求項１３】
薬物または健康食品の調製におけるセレン富化微生物または請求項７〜９のいずれか一項に記載の微生物剤の応用であって、
前記薬物は、腸管細菌叢の調節のために使用される、前記薬物または健康食品の調製におけるセレン富化微生物または請求項７〜９のいずれか一項に記載の微生物剤の応用。
【請求項１４】
薬物の調製におけるセレン富化微生物またはその水溶性タンパク質、または請求項７〜９のいずれか一項に記載の微生物剤の応用であって、
前記薬物は、腸上皮細胞の保護剤として使用される、前記薬物の調製におけるセレン富化微生物またはその水溶性タンパク質、または請求項７〜９のいずれか一項に記載の微生物剤の応用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、生物技術分野に属し、具体的に、本発明は、腫瘍化学療法腸管毒性を予防するための微生物剤に関する。
【背景技術】
【０００２】
化学療法は、化学薬物を使用して癌細胞の増殖、浸潤、および転移を阻害し、最終的に癌細胞を殺す治療方法である。化学療法は、外科手術、放射線療法とともに全身治療であり、癌の三つの主要な治療法と呼ばれている。化学療法薬物の選択性が強くないため、癌細胞を殺しながら人体の正常な細胞に必然的に損傷を与え、薬物の副作用が起こる。従って、化学療法薬物を服用する場合、一方では最高の抗腫瘍効果を達成することを望み、他方では化学療法薬物の副作用の予防および特定にも注意を払わなければならない。臨床応用における高用量化学療法の拡大に伴い、化学療法によって引き起こされる副作用の発生率と重症度も増加している。多くの化学療法薬物は、深刻な腸粘膜バリア機能障害を引き起こし、腸粘膜バリアの損傷を引き起こす。
【０００３】
イリノテカン塩酸塩（ＣＰＴ−１１）は、カンプトテシン抗がん剤であり、強力なトポイソメラーゼ−Ｉ阻害剤であり、標準的な化学療法の失敗後の転移性結腸直腸癌に、転移性結腸直腸癌の第一選択薬物として最初に臨床的に使用された。しかし、この薬物は胃腸管に深刻な毒性副作用があり、急速に分裂して増殖する腸粘膜陰窩上皮細胞を殺すことができ、腸粘膜構造の破壊につながり、最終的に化学療法誘発性腸粘膜炎と化学療法関連下痢の発生につながる。
【０００４】
従って、化学療法によって引き起こされる腸粘膜の損傷を効果的に予防または治療できる薬物を開発することが当技術分野で緊急に必要である。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
本発明の目的は、腫瘍化学療法腸管毒性を予防するための微生物剤を提供することである。
【課題を解決するための手段】
【０００６】
本発明の第１の態様は、薬物の調製におけるセレン富化微生物の応用を提供し、前記薬物は、
（１）腸管の損傷の予防および／または治療のためであり、
（２）腫瘍の補助治療のためであり、および／または
（３）腫瘍化学療法の副作用を軽減するための薬物である。
【０００７】
別の好ましい例において、前記腸管の損傷は、腫瘍化学療法によって引き起こされる腸管の損傷である。
別の好ましい例において、前記薬物はさらに、腫瘍化学療法によって引き起こされる体重減少を予防するために使用される。
【０００８】
別の好ましい例において、前記薬物はさらに、腫瘍患者の生存時間を延長するために使用される。
別の好ましい例において、前記薬物はさらに、腫瘍患者の免疫レベルを高めるために使用される。
【０００９】
別の好ましい例において、前記腸管の損傷は、小腸の粘膜の損傷、下痢などを含む。
別の好ましい例において、前記セレン富化微生物の乾燥菌体１グラム当たりのセレン含有量は、≧２ｍｇ（例えば、≧４ｍｇ、好ましくは、≧５ｍｇ、より好ましくは、≧１０ｍｇ、最も好ましくは、≧２０ｍｇ）である。
【００１０】
別の好ましい例において、前記セレン富化微生物は、セレン富化プロバイオティクスである。
別の好ましい例において、前記セレン富化微生物は、セレン富化ビフィズス菌である。
【００１１】
別の好ましい例において、前記微生物は、哺乳動物の腸管に定着することができる微生物である。
本発明の第２の態様は、生体セレン富化微生物を含む微生物剤を提供する。
【００１２】
別の好ましい例において、前記セレン富化微生物は、セレン富化プロバイオティクスである。
別の好ましい例において、前記セレン富化微生物は、セレン富化ビフィズス菌である。
【００１３】
別の好ましい例において、前記微生物剤は、液体製剤、粉末剤または錠剤である。
別の好ましい例において、前記微生物剤中のセレン富化微生物の含有量は、１＊１０＾７−９＊１０＾１１ＣＦＵ／ｇであり、好ましくは、１＊１０＾９−９＊１０＾１０ＣＦＵ／ｇである。
【００１４】
別の好ましい例において、前記セレン富化微生物の菌体の１０＾８ＣＦＵ当たりのセレン含有量は、０．１〜１００μｇ、好ましくは、１〜５０μｇ、より好ましくは、２〜３０μｇ、最も好ましくは、３〜１０μｇである。
【００１５】
別の好ましい例において、前記微生物剤中のセレン含有量は、１０−３００μｇ／ｇ、好ましくは、２０−２００μｇ／ｇ、より好ましくは、３０−１００μｇ／ｇである。
別の好ましい例において、前記微生物剤は、保護剤をさらに含み、，前記保護剤は、５重量部の脱脂粉乳、２重量部のトレハロース、及び０．０１重量部のＬ−システイン塩酸塩を含む。
【００１６】
本発明の第３の態様は、予防および／または治療有効量のセレン富化微生物を、それを必要とする対象に投与するステップを含む腸管の損傷の予防および／または治療の方法を提供する。
【００１７】
別の好ましい例において、前記対象は、腫瘍患者である。
別の好ましい例において、前記腸管の損傷は、腫瘍化学療法によって引き起こされる腸管の損傷である。
【００１８】
別の好ましい例において、前記セレン富化微生物は、セレン富化ビフィズス菌である。
別の好ましい例において、前記セレン富化微生物の投与量は、１＊１０＾７−９＊１０＾１０ＣＦＵ／対象であり、好ましくは、１＊１０＾８−９＊１０＾８ＣＦＵ／対象である。
【００１９】
別の好ましい例において、前記対象は、人間である。
別の好ましい例において、前記セレン富化微生物の菌体の１０＾８ＣＦＵ当たりのセレン含有量は、０．１〜１００μｇ、好ましくは、１〜５０μｇ、より好ましくは、２〜３０μｇ、最も好ましくは、３〜１０μｇである。
【００２０】
別の好ましい例において、前記方法で、化学療法の前に、予防および／または治療有効量のセレン富化微生物を、それを必要とする対象に投与する。
別の好ましい例において、前記方法で、化学療法１−８日前に、予防および／または治療有効量のセレン富化微生物をそれを必要とする対象に投与し、好ましくは、毎回の投与量は、１＊１０＾７−１＊１０＾１０ＣＦＵ／対象であり、より好ましくは、毎回の投与量は、１＊１０＾８−１＊１０＾１０ＣＦＵ／対象である。
【００２１】
本発明の第４の態様は、薬物の調製におけるセレン富化微生物または第２の態様に記載の微生物剤の応用を提供し、前記薬物は、アルコール性肝疾患を予防または治療するために使用される。
【００２２】
−好ましい例において、前記セレン富化微生物の乾燥菌体１グラム当たりのセレン含有量、≧２ｍｇ（例えば、≧４ｍｇ、好ましくは、≧５ｍｇ、より好ましくは、≧１０ｍｇ、最も好ましくは、≧２０ｍｇ）である。
【００２３】
−好ましい例において、前記セレン富化微生物は、セレン富化プロバイオティクスである。
−好ましい例において、前記セレン富化微生物は、セレン富化ビフィズス菌である。
【００２４】
−好ましい例において、前記微生物は、哺乳動物の腸管に定着することができる微生物である。
本発明の第５の態様は、薬物または健康食品の調製におけるセレン富化微生物または第２の態様に記載の微生物剤の応用を提供し、前記薬物は、免疫を増加するために使用される。
【００２５】
−好ましい例において、前記セレン富化微生物の乾燥菌体１グラム当たりのセレン含有量、≧２ｍｇ（例えば、≧４ｍｇ、好ましくは、≧５ｍｇ、より好ましくは、≧１０ｍｇ、最も好ましくは、≧２０ｍｇ）である。
【００２６】
−好ましい例において、前記セレン富化微生物は、セレン富化プロバイオティクスである。
−好ましい例において、前記セレン富化微生物は、セレン富化ビフィズス菌である。
【００２７】
−好ましい例において、前記微生物は、哺乳動物の腸管に定着することができる微生物である。
本発明の第６の態様は、薬物または健康食品の調製におけるセレン富化微生物または第２の態様に記載の微生物剤の応用を提供し、前記薬物は、腸管細菌叢の調節のために使用される。
【００２８】
−好ましい例において、前記腸管細菌叢の調節とは、腸管細菌叢の改善、プロバイオティクスの数の増加、病原菌の数の減少を指す。
−好ましい例において、前記セレン富化微生物の乾燥菌体１グラム当たりのセレン含有量は、≧２ｍｇ（例えば、≧４ｍｇ、好ましくは、≧５ｍｇ、より好ましくは、≧１０ｍｇ、最も好ましくは、≧２０ｍｇ）である。
【００２９】
−好ましい例において、前記セレン富化微生物は、セレン富化プロバイオティクスである。
−好ましい例において、前記セレン富化微生物は、セレン富化ビフィズス菌である。
【００３０】
−好ましい例において、前記微生物は、哺乳動物の腸管に定着することができる微生物である。
本発明の第７の態様は、薬物の調製におけるセレン富化微生物またはその水溶性タンパク質、または第２の態様に記載の微生物剤の応用を提供し、前記薬物は、腸上皮細胞の保護剤として使用される。
【００３１】
−好ましい例において、前記セレン富化微生物の乾燥菌体１グラム当たりのセレン含有量は、≧２ｍｇ（例えば、≧４ｍｇ、好ましくは、≧５ｍｇ、より好ましくは、≧１０ｍｇ、最も好ましくは、≧２０ｍｇ）である。
【００３２】
−好ましい例において、前記セレン富化微生物は、セレン富化プロバイオティクスである。
−好ましい例において、前記セレン富化微生物は、セレン富化ビフィズス菌である。
【００３３】
−好ましい例において、前記微生物は、哺乳動物の腸管に定着することができる微生物である。
【発明の効果】
【００３４】
本発明の範囲内で、本発明の上述した様々な技術的特徴および以下（例えば、実施例）に具体的に説明する様々な技術的特徴は、互いに組み合わせて、新規または好ましい技術的解決策を構成できることを理解されたい。スペースの制限により、ここでは繰り返して説明しない。
【図面の簡単な説明】
【００３５】
【図１】ＢＬ群、Ｎａ２ＳＯ３群、Ｓｅｌ−ＢＬ群、Ｐｈｙ  Ｍｉｘ群及びＭｏｄ  Ｃｔｒ群マウスの０日目に対する６日目の体重減少率の比較図（ｎ＝１２）であり、操作方法は、毎日同じ時間に計量した。
【図２】ＢＬ群、Ｎａ２ＳＯ３群、Ｓｅｌ−ＢＬ及びＭｏｄ  Ｃｔｒ群マウスの３日目から６日目の異なる下痢程度の発生率の比較（ｎ＝１２）であり、操作方法は、以下の通りである。毎日マウスの下痢状況を２回観察し（朝と夜一回ずつ）、文献報告方法および実際の状況に従ってマウスの下痢をスコア化し、スコア基準は、０、下痢なし、１、軽度の下痢（わずかに湿った柔らかい便）、２、中度の下痢（便が湿っており、形成されておらず、軽度の肛門周囲の着色がある）、３、重度の下痢（重度の肛門周囲の着色を伴う水様便）。
【図３】Ｍｏｄ  Ｃｔｒ群、ＢＬ群、Ｎａ２ＳＯ３群、Ｓｅｌ−ＢＬ群及びＰｈｙ  Ｍｉｘ群マウスの生存率の比較図（ｎ＝１２）であり、操作方法は以下の通りである。毎日マウスの死亡状況を２回観察し（朝と夜一回ずつ）、連続観察時間は、ＣＰＴ−１１の最後の腹腔内注射から少なくとも１４日である。
【図４】マウスの腹部の解剖学であり、（Ａ）Ｂｌａ  Ｃｔｒ群、（Ｂ）Ｍｏｄ  Ｃｔｒ群、（Ｃ）Ｓｅｌ−ＢＬ群である。
【図５】Ｍｏｄ  Ｃｔｒ群、ＢＬ群、Ｎａ２ＳＯ３群、Ｓｅｌ−ＢＬ群及びＰｈｙ  Ｍｉｘ群マウスの小腸組織のＨＥ染色図である。操作方法は、以下の通りである。６日目にマウスを殺し、回盲部から２ｃｍ離れた小腸組織を取ってパラフィン切片を作成して、ＨＥ染色し、（Ａ）ブランク対照群、（Ｂ）モデル対照群、（Ｃ）一般的なビフィズス菌群、（Ｄ）亜セレン酸ナトリウム群、（Ｅ）セレン富化ビフィズス菌群である。
【図６】異なる用量のＳｅｌ−ＢＬ予防群とＭｏｄ  Ｃｔｒ群マウスの０日目に対する６日目の体重減少率の比較図（ｎ＝１２）であり、操作方法は、毎日同じ時間に計量した。
【図７】異なる用量のＳｅｌ−ＢＬ予防群とＭｏｄ  Ｃｔｒ群マウスの３日目から６日目の異なる下痢程度の発生率の比較（ｎ＝１２）である。
【図８】異なる用量のＳｅｌ−ＢＬ予防群とＭｏｄ  Ｃｔｒ群マウスの死亡曲線比較図（ｎ＝１２）であり、操作方法は、以下の通りである。毎日マウスの死亡状況を２回観察し（朝と夜一回ずつ）、連続観察時間は、ＣＰＴ−１１の最後の腹腔内注射から少なくとも１４日である。
【図９】ＢｌａＣｔｒ群、ＢＬ群、Ｎａ２ＳＯ３群、Ｓｅｌ−ＢＬ群とＰｈｙ  Ｍｉｘ群腸管内のビフィズス菌の比較図（ｎ＝３）であり、操作方法は、以下の通りである。０日目に、即ち、ＣＰＴ−１１の最初の腹腔内注射前に、マウスの糞便を収集し、糞便中の腸管細菌叢のゲノムを抽出し、Ｒｅａｌ−Ｔｉｍｅ  ＰＣＲ技術を使用して、ＢｌａＣｔｒ群に対する予防群のマウス体内のビフィズス菌の変化を検出した。
【図１０】Ｓｅｌ−ＢＬ群とＢｌａＣｔｒ群マウスの全血におけるグルタチオンペルオキシダーゼ（ＧＳＨ−Ｐｘ）活性の比較図（ｎ＝６）であり、血液サンプル採取方法は、以下の通りである。０日目に、即ち、ＣＰＴ−１１の最初の腹腔内注射前に、まぶたから血液を採取し、ヘパリンナトリウムによって抗凝固した。
【図１１】Ｍｏｄ  Ｃｔｒ群、ＢＬ群、Ｎａ２ＳＯ３群、Ｓｅｌ−ＢＬ群とＰｈｙ  Ｍｉｘ群マウスの脾臓指数の比較図（ｎ＝６）であり、実現操作は、以下の通りである。６日目にマウスを殺し、脾臓を取り出し、計量した。
【図１２】セレン富化プロバイオティクス水溶性タンパク質がＩＥＣ６細胞の活力を増加させることを示す。ここで、５０μｇ／ｍｌのＬＰＳでラットの腸上皮細胞のＩＥＣ６細胞を処理し、同時に、異なる濃度のセレン富化プロバイオティクス水溶性タンパク質を加え、２４時間インキュベートした後、それぞれＭＴＴアッセイにより細胞活力を検出した。＊Ｐ＜０．０５。Ｓｅ：セレン富化プロバイオティクス水溶性タンパク質。
【図１３】セレン富化プロバイオティクス水溶性タンパク質がＬＰＳによって誘導されたＩＥＣ６細胞のアポトーシスを阻害することを示す。５０μｇ／ｍｌのＬＰＳでラット腸上皮細胞のＩＥＣ６細胞を処理し、同時に、異なる濃度のセレン富化プロバイオティクス水溶性タンパク質を加え、２４時間インキュベートした後、ＦＩＴＣ結合Ａｎｎｅｘｉｎ  ＶとＰＩでＩＥＣ６細胞を染色し、フローサイトメトリー（ｆｌｏｗ  ｃｙｔｏｍｅｔｒｙ）で細胞アポトーシスを検出した。細胞アポトーシスは、３つの独立した反復の結果として検出した。Ｓｅ：セレン富化プロバイオティクス水溶性タンパク質。
【図１４】セレン富化プロバイオティクス水溶性タンパク質がＬＰＳによって誘導されたＩＥＣ６細胞ミトコンドリア膜電位崩壊を阻害することを示す。５０μｇ／ｍｌのＬＰＳでラット腸上皮細胞のＩＥＣ６細胞を処理し、同時に、異なる濃度のセレン富化プロバイオティクス水溶性タンパク質を添加し、２４時間インキュベートした後、ＪＣ−１でＩＥＣ６細胞を染色し、フローサイトメトリーで細胞ミトコンドリア膜電位を検出した。細胞ミトコンドリア膜電位は、３つの独立した反復の結果として検出した。Ｓｅ：セレン富化プロバイオティクス水溶性タンパク質。
【図１５】セレン富化プロバイオティクス水溶性タンパク質がＬＰＳによって誘導されたＩＥＣ６細胞密着結合タンパク質ＺＯ−１とＯｃｃｌｕｄｉｎレベルの低下を阻害することを示す。５０μｇ／ｍｌのＬＰＳでラット腸上皮細胞のＩＥＣ６細胞を処理し、同時に、異なる濃度のセレン富化プロバイオティクス水溶性タンパク質を加え、２４時間インキュベートした後、Ｑ−ＰＣＲでＺＯ−１とＯｃｃｌｕｄｉｎのｍＲＮＡレベルを検出した。＊Ｐ＜０．０５、＊＊Ｐ＜０．０１。ＮＳ，顕著な差なし。Ｓｅ：セレン富化プロバイオティクス水溶性タンパク質。
【図１６】セレン富化ビフィドバクテリウムロングムがマウス肝臓指数を低下することを示す。エタノールで４２時間処理した後、マウスの肝臓を収集し、計量した。肝臓指数を計算した。値は、平均値±ＳＤ、ｎ＝６、＊Ｐ＜０．０５，、＊＊Ｐ＜０．０１、ＮＳ、有意性なしとして示された（生徒の二重切り捨てｔ検定）。Ｓｅ−Ｂ．Ｌ．：セレン富化ビフィドバクテリウムロングム。
【図１７】セレン富化ビフィドバクテリウムロングムがエタノール処理後のマウスの血清ＡＬＴとＡＳＴの増加を阻害することを示す。エタノールで４２時間処理した後、マウスの血清を収集し、ＡＬＴとＡＳＴレベルを検出した。値は、平均値±ＳＤ、ｎ＝６、＊Ｐ＜０．０５、＊＊Ｐ＜０．０１、＊＊＊Ｐ＜０．００１、ＮＳ、有意性なしとして示された（生徒の二重切り捨てｔ検定）。Ｓｅ−Ｂ．Ｌ．：セレン富化ビフィドバクテリウムロングム。
【図１８】セレン富化ビフィドバクテリウムロングムがマウス肝臓ＳＯＤレベルを増加させ、マウス肝臓ＭＤＡレベルを阻害することを示す。エタノールと異なる用量のセレン富化ビフィドバクテリウムロングムでマウスを４２時間処理した後、マウスの肝臓ＭＤＡとＳＯＤレベルを検出した。値は、平均値±ＳＤ、ｎ＝６、＊Ｐ＜０．０５、＊＊Ｐ＜０．０１、＊＊＊Ｐ＜０．００１、ＮＳ、有意性なしとして示された（生徒の二重切り捨てｔ検定）。Ｓｅ−Ｂ．Ｌ．：セレン富化ビフィドバクテリウムロングム。
【図１９】セレン富化ビフィドバクテリウムロングムがマウスの血清ＴＮＦ−αレベルを阻害することを示す。エタノールと異なる用量のセレン富化ビフィドバクテリウムロングムでマウスを４２時間処理した後、マウスの血清ＴＮＦ−αを検出した。値は、平均値±ＳＤ、ｎ＝６、＊Ｐ＜０．０５、＊＊Ｐ＜０．０１、＊＊＊Ｐ＜０．００１として示された（生徒の二重切り捨てｔ検定）。Ｓｅ−Ｂ．Ｌ．：セレン富化ビフィドバクテリウムロングム。
【図２０】セレン富化ビフィドバクテリウムロングムがマウス肝臓損傷を阻害することを示す。エタノールと異なる用量のセレン富化ビフィドバクテリウムロングムでマウスを４２時間処理した後、マウスの肝臓組織病理学スコアを検出した。値は、平均値±ＳＤ、ｎ＝６、＊Ｐ＜０．０５、＊＊＊Ｐ＜０．００１として示された（生徒の二重切り捨てｔ検定）。Ｓｅ−Ｂ．Ｌ．：セレン富化ビフィドバクテリウムロングム。
【図２１】各群のマウスに３０日間投与した後の遅延型過敏反応（ＤＴＨ）反応値（ｎ＝６、Ｘ±ＳＤ）を示し、ここで、註、対照群と比較して、＊Ｐ＜０．０５、＊＊Ｐ＜０．０１。
【図２２】各群のマウスの投与期間の体重変化状況を示す（ｎ＝６、Ｘ±ＳＤ）。
【図２３】各群のマウスに３０日間投与した後の腸管内のビフィズス菌の数の変化を示す（ｎ＝６、Ｘ±ＳＤ）。ここで、対照群と比較して、＊Ｐ＜０．０５、＊＊Ｐ＜０．０１。
【図２４】各群のマウスに３０日間投与した後の腸管内のエンテロバクターの数の変化を示す（ｎ＝６、Ｘ±ＳＤ）。ここで、対照群と比較して、＊Ｐ＜０．０５、＊＊Ｐ＜０．０１。
【発明を実施するための形態】
【００３６】
本発明者らは、広範囲かつ詳細な研究を通じて腫瘍化学療法の腸管毒性を予防する微生物剤を獲得し、前記微生物剤は、セレン富化ビフィズス菌を含み、実験結果は、セレン富化ビフィズス菌が化学療法によって引き起こされる腸粘膜の損傷を予防および／または治療することに顕著な治癒効果を持ち、化学療法動物の生存時間を顕著に延長することができるので、腫瘍の補助治療に使用することができ、腫瘍化学療法の副作用を軽減することができることを示す。
【００３７】
本発明を説明する前に、説明した具体的な方法および実験条件は変化する可能性があるので、そのような方法および条件に限定されないことを理解されたい。また、本明細書で使用される用語は、具体的な実施形態を説明するためのものであり、限定することを意図するものではなく、本発明の範囲は添付の特許請求の範囲によってのみ限定される。
【００３８】
特に定義されない限り、本明細書で使用されるすべての技術用語および科学用語は、本発明が属する技術分野の当業者によって一般的に理解されるのと同じ意味を有する。本明細書で使用される場合、具体的な列挙された値に関して使用される場合、用語「約」は、当該値が列挙された値から１％以下しか変化できないことを意味する。例えば、本明細書で使用される「約１００」という表現は、９９から１０１までのすべての値を含む（例えば、９９．１、９９．２、９９．３、９９．４など）。
【００３９】
本発明の実施または試験において、本発明に記載のものと類似または同等の任意の方法および材料を使用することができるが、本明細書は、ここで好ましい方法および材料を例示する。
【００４０】
セレン富化微生物
本発明は、一種のセレン富化微生物（特に、セレン富化ビフィズス菌）を提供し、前記セレン富化微生物の乾燥菌体１グラム当たりのセレン含有量は、、≧２ｍｇ（例えば、≧４ｍｇ、好ましくは、≧５ｍｇ、より好ましくは、≧１０ｍｇ、最も好ましくは、≧３０ｍｇであり）である。本発明におけるセレン含有量は、特に明記しない限り、すべて有機セレンの含有量を指す。セレン含有量の測定方法は、本発明における従来のまたは標準的な測定方法を使用した。例えば、文献「ＧＢ  ５００９．９３−２０１０食品中のセレンの測定」に記載の方法。
【００４１】
本発明の一好ましい実施形態において、前記セレン富化微生物の乾燥菌体１グラム当たりのセレン含有量は、≧５０ｍｇ（好ましくは、≧１００ｍｇ、より好ましくは、≧２００ｍｇ）である。
【００４２】
本発明の一好ましい実施形態において、前記セレン富化微生物の乾燥菌体１グラム当たりのセレン含有量は、≦５００ｍｇである。
本発明の一好ましい実施形態において、前記微生物は、原核微生物、または真核微生物である。
【００４３】
本発明の一好ましい実施形態において、前記微生物は、プロバイオティクスである。
別の好ましい例において、前記微生物は、ビフィズス菌（Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ）、乳酸杆菌（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ）、大腸菌（Ｅ．  ｃｏｌｉ）からなる群から選択される一つまたは複数である。
【００４４】
本発明によるセレン富化微生物は、腫瘍化学療法によって引き起こされる腸管の損傷を効果的に予防および／または治療することができる。
プロバイオティクス
用語「プロバイオティクス」とは、ヒトの胃腸管や膣などの動物組織で有益な作用を持つ細菌を指す。プロバイオティクスとして最も一般的に使用される細菌は乳酸菌とビフィズス菌である。ただし、高温性連鎖球菌（Ｓ．ｔｈｅｒｍｏｐｈｉｌｉｓ）のような他の有益細菌もビフィズス菌であることができる。胃と小腸で増殖した後、一部のプロバイオティクスは生き残り、大腸で一時的に生き残り、そこで結腸の発酵能力が積極的に変化する。例えば、Ｒｏｂｅｒｆｒｏｉｄ，ＡＭ  Ｊ  ＣＬＩＮ  ＮＵＴＲ  ７１（ＳＵＰＰＬ）：１６８２Ｓ−１６８７Ｓ（２０００）を参照することができる。
【００４５】
本発明で使用されるプロバイオティクスは、例えば、好酸性乳酸杆菌（Ｌ．  ａｃｉｄｏｐｈｉｌｕｓ）、ブルガリア乳酸かん菌（Ｌ．  ｂｕｌｇａｒｉｃｕｓ）、ラクトバチルスカゼイ  （Ｌ．  ｃａｓｅｉ）、ラクトバチルスパラカセイ（Ｌ．  ｐａｒａｃａｓｅｉ）、発酵乳酸杆菌（Ｌ．  ｆｅｒｍｅｎｔｕｍ）、ラクトバチルスプランタルム（Ｌ．  ｐｌａｎｔａｒｕｍ）、ラクトバチルスラムノサス（Ｌ．  ｒｈａｍｎｏｓｕｓ）、ラクトバチルスサリバリウス（Ｌ．  ｓａｌｉｖａｒｉｕｓ）、ビフィドバクテリウムビフィドゥム（Ｂ．  ｂｉｆｉｄｕｍ）、ビフィドバクテリウムインファンティス（Ｂ．  ｉｎｆａｎｔｉｓ）、ビフィドバクテリウム乳酸サブタイプ（Ｂ．  ａｎｉｍａｌｉｓ  ｓｕｂｓｐ．  Ｌａｃｔｉｓ）、ビフィドバクテリウムロングム（Ｂ．  ｌｏｎｇｕｍ）、高温性連鎖球菌（Ｓ．  ｔｈｅｒｍｏｐｈｉｌｉｓ）、フェカリス菌（Ｅ．  ｆａｅｃａｌｉｓ）、及びフェシウム菌（Ｅ．  ｆａｅｃｉｕｍ）のような、任意の既知のプロバイオティクスであることができる。
【００４６】
上記のリストは説明のみを目的としており、プロバイオティクスの限定的な説明を意図するものではないことを理解されたい。これに関して、任意の追加のプロバイオティクス、例えば任意の追加の既知および／または利用可能な乳酸菌またはビフィズス菌を本発明で使用することもできる。
【００４７】
本発明の一好ましい実施形態において、プロバイオティクスは、宿主にとって有益な一種の活性微生物を含むことができ、これは、ヒトまたは動物の体の腸管および生殖系に定着し、正確な健康効果を生み出すことができ、それによって宿主のミクロ生態学的バランスを改善し、有益な効果を発揮する。人体、動物体内の有益な細菌または真菌には、主に、クロストリジウムブチリカム、乳酸菌、ビフィズス菌、好酸性乳酸杆菌、放線菌、酵母菌などが含まれる。
【００４８】
セレン富化微生物の調製方法
本発明に関与するセレン富化微生物は、以下の方法で調製することができ、前記方法は、
セレン（外因性の人工的に添加されたセレン）を含む培地を用意し、前記培地で微生物を培養するステップ（Ｉ）と、及び
ステップ（Ｉ）で培養した微生物を分離して、前記セレン富化微生物を生成するステップ（ＩＩ）を含み、
ここで、前記培地において、セレンの濃度はＣは、≧１０μｇ／ｍｌ（例えば、≧２０μｇ／ｍｌ、好ましくは、≧３０μｇ／ｍｌ、より好ましくは、≧５０μｇ／ｍｌ、最も好ましくは、≧１００μｇ／ｍｌ、例えば、≧２００μｇ／ｍｌ、≧５００μｇ／ｍｌ）である。
【００４９】
本発明の一好ましい実施形態において、培地中のセレンの含有量は、培地中のセレンの濃度がＣに達するように勾配を増加させることにより徐々に増加させることができる。
本発明の一好ましい実施形態において、前記方法は、
セレン含有培地を用意し、前記培地で微生物を培養するステップ（Ｉ）と、及び
ステップ（Ｉ）で培養した微生物を分離して、前記セレン富化微生物を生成するステップ（ＩＩ）を含み、
ここで、前記培地におけるセレンの濃度Ｃは、≧１０μｇ／ｍｌ（例えば、≧２０μｇ／ｍｌ、好ましくは、≧３０μｇ／ｍｌ、より好ましくは、≧５０μｇ／ｍｌ、最も好ましくは、≧１００μｇ／ｍｌ、例えば、≧２００μｇ／ｍｌ、≧５００μｇ／ｍｌ）である。
【００５０】
別の好ましい例において、前記培地おけるセレンの濃度Ｃは、≦１０００μｇ／ｍｌ（好ましくは、≦８００μｇ／ｍｌ）である。
別の好ましい例において、前記セレン含有培地において、最初に添加されるセレンを含む成分は、無機セレンであり、好ましくは、Ｈ２ＳｅＯ３、および／またはＮａ２ＳｅＯ４である。
【００５１】
別の好ましい例において、前記ステップ（Ｉ）は、
セレンを含まない培地で微生物を培養するステップ（Ｉ０）と、
セレン濃度がＣである新鮮な培地をステップ（Ｉ０）の培養液に連続的に添加し、培養液の総体積を維持しながら、一部の培養液を除去して、培養液中のセレンの濃度がＣに達し且つそれを維持させ、培養し続けるステップ（Ｉ１）を含む。
【００５２】
本発明の一好ましい実施形態において、前記ステップ（Ｉ）において、
セレンを含まない培地で微生物を培養し、得られた培養物の体積はＶであるステップ（Ｉ０）と、
ステップ（Ｉ０）の培養物に、第１セレン含有培地を連続的に添加し、ここで、第１セレン含有培地中のセレンの濃度は、Ｃ１であり、添加速度は、１０ｈ〜２４ｈあたり０．０１Ｖ〜１Ｖ（好ましくは、０．０５Ｖ〜０．５Ｖ、より好ましくは、０．１Ｖ〜０．４Ｖ）であり、培養液の総体積を維持しながら、一部の培養液を除去して、培養液中のセレン濃度が約Ｃ１に達するようにする１回目のフィーディングステップ（Ｉ１）と、
１回目のフィーディング後に得られた培養物に、第２セレン含有培地を連続的に添加し、ここで、前記第２セレン含有培地中のセレンの濃度は、Ｃ２であり、添加速度は、１０ｈ〜２４ｈあたり０．０１Ｖ〜１Ｖ（好ましくは、０．０５Ｖ〜０．５Ｖ、より好ましくは、０．１Ｖ〜０．４Ｖ）であり、培養液の総体積を維持しながら、一部の培養液を除去して、培養液中のセレン濃度が約Ｃ２に達するようにする２回目のフィーディングステップ（Ｉ２）と、
……
ｎ−１回目のフィーディング後に得られた培養物に、第Ｎセレン含有培地を連続的に添加し、ここで、前記第Ｎセレン含有培地中のセレンの濃度は、Ｃｎであり、添加速度は、１０ｈ〜２４ｈあたり０．０１Ｖ〜１Ｖ（好ましくは、０．０５Ｖ〜０．５Ｖ、より好ましくは、０．１Ｖ〜０．４Ｖ）であり、培養液の総体積を維持しながら、一部の培養液を除去して、培養液中のセレン濃度が約Ｃｎに達するようにし、Ｃｎ＝Ｃであるｎ回目のフィーディングステップ（Ｉｎ）とを含み、
ここで、Ｃ１≦Ｃ２≦……≦Ｃｎであり、ｎは、２〜１００の正の整数（好ましくは、３〜５０の正の整数、より好ましくは、４〜３０の正の整数、最も好ましくは、５〜２０の正の整数であり、例えば、６、７、８、９、１０）である。
【００５３】
別の好ましい例において、前回のフィーディングに使用されたセレン含有培地中のセレン濃度と次回のフィーディングに使用されるセレン含有培地中のセレン濃度の比は、１：１〜１０（好ましくは、１：１．２〜５、より好ましくは、１：１．５〜３）である。
【００５４】
別の好ましい例において、次回のフィーディングに使用されるセレン含有培地中のセレン濃度は、前回のフィーディングに使用されたセレン含有培地中のセレン濃度より０〜５００μｇ／ｍｌ（好ましくは、１０〜２００μｇ／ｍｌ高い、より好ましくは、２０〜１００μｇ／ｍｌ高い、例えば、５０μｇ／ｍｌ高い）高い。
【００５５】
別の好ましい例において、前記方法は、毎回のフィーディングの過程中で、または２回のフィーディングの間で、１ｈ〜２４ｈ安定的に培養し、この過程中に、培養液は補充せず且つ培養液を除去しない選択的なステップをさらに含む。
【００５６】
別の好ましい例において、前記方法は、ステップ（２）で得られた前記セレン富化微生物を乾燥させて、セレン富化微生物の乾燥菌体を得るステップ（３）をさらに含む。
本発明において、用語「培地」（Ｍｅｄｉｕｍ）は、微生物の成長および維持のために手動で調合された栄養素であり、一般に炭水化物、窒素含有物質、無機塩（微量元素を含む）、およびビタミンおよび水を含む。実際のニーズに応じて、異なる培地いくつかの従来の物質を添加することができる。本発明で使用される用語「培地」は、特に明記しない限り、当技術分野の基礎培地を指す。当業者は、当技術分野の従来の技術知識に従って培養されている微生物のタイプに応じて適切な培地を選択することができる。例えば、「微生物学実験」（Ｈｉｇｈｅｒ  Ｅｄｕｃａｔｉｏｎ  Ｐｒｅｓｓ、２００７）を参照して培地を選択できます。
【００５７】
本発明好ましい実施形態において、微生物の培養温度は、２０℃〜４５℃であり、好ましくは、３５℃〜４０℃である。
本発明好ましい実施形態において、微生物培養のｐＨは、３．０〜９．０であり、好ましくは、５．５〜８．０であり、例えば、７．５である。
【００５８】
微生物剤と投与方法
本発明の微生物剤は、本発明によるセレン富化微生物を含む。前記微生物剤は、薬物組成物、健康食品組成物、または食品組成物であることができる。
【００５９】
本発明の微生物剤は、生理学的に許容される担体を含むことができる。生理学的に許容される担体は、食品または薬理学的担体であることができる。本明細書で使用される用語「生理学的に許容される」（または「薬学的に許容される」）とは、動物またはヒトに適切に投与された場合に有害、アレルギーまたは他の有害な反応を引き起こさない分子実体および組成物を指す。本明細書で使用される用語「薬学的に許容される担体」とは、薬学的に許容される物質のビヒクルとして使用できる、ありとあらゆる溶媒、分散媒、コーティング、抗菌剤、等張剤および吸収遅延剤、緩衝剤、賦形剤、結合剤、潤滑剤、ゲル、界面活性剤などを含む。
【００６０】
従って、本発明の微生物剤は、活性成分として、本発明による生体セレン富化微生物、および一つまたは複数の薬学的に許容される担体を含む薬物組成物をさらに含む。本発明の組成物の調製のために、本発明によるセレン富化微生物は、一般に賦形剤と混合され、賦形剤で希釈され、または担体にカプセル化され、その形態は、液体製剤、カプセル、または錠剤であることができる。賦形剤が希釈剤として機能する場合、それは、活性成分のビヒクル、担体またはビヒクルとして使用される固体、半固体または液体材料（例えば、生理食塩水）であることができる。従って、組成物は、錠剤、丸剤、粉末剤、ロゼンジ、ポーチ、フラットカプセル、エリキシル、懸濁液、エマルジョン、溶液、シロップ、エアロゾル（固体形態または液体媒体中）、軟膏、軟および硬ゼラチンカプセル、座薬、滅菌注射液、および無菌包装粉末であることができる。当技術分野で知られているように、希釈剤の種類は、所望の投与経路に応じて変えられる。得られた組成物は、防腐剤などの追加の試薬を含むことができる。賦形剤または担体は、投与方法および経路に応じて選択される。適切な医薬担体および医薬処方に使用されるいくつかの医薬的必要な物は、既知の教科書「レミントンファーマシューティカルサイエンス」（Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ（Ｅ．Ｗ．Ｍａｒｔｉｎ））、およびＵＳＰ／ＮＦ（米国薬局方と国民医薬品集）に記載されたようである。適切な賦形剤のいくつかの例は、ラクトース、デキストロース、スクロース、ソルビトール、マンニトール、デンプン、アラビアゴム、リン酸カルシウム、アルギン酸塩、トラガント、ゼラチン、ケイ酸カルシウム、微結晶セルロース、ポリビニルピロリドン、セルロース、水、シロップ、メチルセルロースを含む。製剤は、タルク、ステアリン酸マグネシウム、鉱油などの潤滑剤、湿潤剤、乳化剤及び懸濁剤、メチルパラベンやプロピルパラベンなどの防腐剤、甘味料、香料などをさらに含むことができる。薬物組成物は、当技術分野で公知の方法を使用して、患者への投与後に活性成分の迅速、持続、または遅延放出を提供するように製剤化することができる。
【００６１】
本発明の方法における使用のための薬学的に許容される組成物は、本発明によるセレン富化微生物が経口送達のためにコロイドに封入されるものを含む標準的な技術を使用して調製され得る。本発明によるセレン富化微生物は、乾燥により経口投与用のカプセルに入れることができる。いくつかの実施形態において、本発明によるセレン富化微生物は、一つまたは複数の賦形剤、例えば、崩壊剤、充填剤、流動促進剤、または防腐剤と混合されることができる。適切なカプセルは、ハードシェルカプセルまたはソフトシェルカプセルを含む。カプセルは、脂質ベースまたはポリマーベースのコロイドから形成されることができる。コロイド調製のための例示的なポリマーは、ゼラチン、植物多糖類またはカラギーナンおよびデンプンの修飾形態などのその誘導体、ならびにヒプロメロースなどのセルロースを含む。選択的に、グリセリンおよび／またはソルビトールなどの可塑剤、着色剤、防腐剤、崩壊剤、潤滑剤および表面処理剤などの他の成分をゲル化剤溶液に添加して、カプセルの硬度を低下させてもよい。いくつかの実施形態において、カプセルはゼラチンを含まない。他の実施形態において、カプセルは植物多糖またはその誘導体を含まない。
【００６２】
組成物は、単位剤形で製剤化することができ、各剤形は、例えば約０．００５ｍｇ〜２０００ｍｇの本発明によるセレン強化微生物の１日用量を含む。用語「単位剤形」とは、ヒト対象または他の哺乳動物における単回用量としての使用に適した物理的に個別の単位を指し、各単位は、所定量の活性成分および適切な医薬賦形剤を含み、前記所定量は計算により望ましい治療効果を生み出すことができる。錠剤などの固体組成物を調製するために、主要な活性成分を医薬賦形剤と混合して、本発明の化合物の均一な混合物を含む固体前製剤組成物を形成する。これらの予め形成された混合物が均質である場合、活性成分は一般に組成物中に均一に分散され、成分を錠剤、丸薬およびカプセルなどの同等の有効単位投与形態にさらに容易に分割できる。次いで、固体の予め形成された混合物は、例えば、０．００５ｍｇ〜約１０００ｍｇの本発明のセレン富化微生物を含む上記タイプの単位剤形に分割される。
【００６３】
組成物は、単位剤形で製剤化することができ、各剤形は、例えば、約０．１ｍｇから約１０００ｍｇ、約０．１ｍｇから約４０ｍｇ、約０．１ｍｇから約２０ｍｇ、約０．１ｍｇから約１０ｍｇ、約０．２ｍｇから約２０ｍｇ、約０．３ｍｇから約１５ｍｇ、約０．４ｍｇから約１０ｍｇ、約０．５ｍｇから約１ｍｇの活性成分、約０．５ｍｇから約１００ｍｇ、約０．５ｍｇから約５０ｍｇ、約０．５ｍｇから約３０ｍｇ，、約０．５ｍｇから約２０ｍｇ、約０．５ｍｇから約１０ｍｇ、約０．５ｍｇから約５ｍｇの活性成分、約１ｍｇから約５０ｍｇ、約１ｍｇから約３０ｍｇ、約１ｍｇから約２０ｍｇ、約１ｍｇから約１０ｍｇ、約１ｍｇから約５ｍｇの活性成分、約５ｍｇから約５０ｍｇ、約５ｍｇから約２０ｍｇ、約５ｍｇから約１０ｍｇの活性成分、約１０ｍｇから約１００ｍｇ、約２０ｍｇから約２００ｍｇ、約３０ｍｇから約１５０ｍｇ、約４０ｍｇから約１００ｍｇ、約５０ｍｇから約１００ｍｇの活性成分を含む。
【００６４】
いくつかの実施形態において、本発明の錠剤または丸剤をコーティング、または配合して、長期作用の利点を達成する剤形を提供することができる。例えば、錠剤または丸剤は、内部用量成分と外部用量成分を含むことができ、後者は前者をカプセル化する。この二つの成分は、胃での崩壊を防ぎ、内部成分が十二指腸または遅延放出をそのまま通過できるようにするケーシング層によって分離されることができる。このようなケーシング層またはコーティングには、シェラック、セチルアルコール、酢酸セルロースなどの材料とポリマー酸の混合物など、さまざまな材料を使用されることができる。
【００６５】
経口投与用または注射用の本発明の組成物に組み込むことができる液体剤形は、水溶液、適切な風味のシロップ、水性または油性懸濁剤、および例えば食用油を含む風味付きエマルジョンを含む。前記食用油は、例えば、綿実油、ゴマ油、ココナッツ油または落花生油、チンキ剤および類似の医薬用担体である。
【００６６】
薬物組成物中の本発明の組成物の割合または濃度は、投与量、化学的性質（例えば、疎水性）、および投与経路を含む多くの要因に応じて変わり得る。例えば、本発明によるセレン富化微生物または産生されるその一つまたは複数の代謝産物は、経口投与用に約０．００５ｍｇ〜１０００ｍｇを含むカプセルで提供されることができる。
【００６７】
本発明の主な利点は次のとおりである。
（１）セレン富化微生物が化学療法による腸管の損傷を予防および／または治療する効果があることを初めて掲示した。
【００６８】
（２）化学療法によって引き起こされる腸管の損傷を予防および／または治療するためのセレン富化ビフィズス菌の使用は、腸管の損傷を大幅に減らすだけでなく、化学療法動物の生存時間を延ばすことができる予期しない技術的効果を達成した。
【００６９】
（３）化学療法によって引き起こされる腸管の損傷を予防および／または治療するためのセレン富化ビフィズス菌の使用は、動物の抗酸化能力を改善し、動物の免疫力を高めることができる予期しない技術的効果を達成した。
【００７０】
本発明を、具体的な実施例に結び付けて以下でさらに詳細に説明する。それらの実施例は、本発明を説明するだけで、本発明の範囲を限定することを意図するものではないことを理解されたい。詳細な条件を指定していない以下の例の実験方法は、通常、メーカーが推奨する条件に従う。特に明記しない限り、パーセントと部数は、重量による。以下の例で使用される実験材料および試薬は、特に指定がない限り、市販のソースから入手できる。
【００７１】
実施例１．セレン富化ビフィズス菌の調製
（１）菌株
プロバイオティクス菌株
ビフィドバクテリウムロングム（ラテン名Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｌｏｎｇｕｍ，アクセッション番号ＣＩＣＣ  ６１８７）は、中国工業微生物菌株コレクション管理センター（Ｃｈｉｎａ  Ｃｅｎｔｅｒ  ｏｆ  Ｉｎｄｕｓｔｒｉａｌ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ：ＣＩＣＣ）から購入した。
【００７２】
（２）培地
ＲＣＭ培地の主要成分は、牛肉エキス、ペプトン、酵母粉末、グルコース、デンプン、塩化ナトリウム、酢酸ナトリウム、Ｌ−システイン塩酸塩であり、各成分の含有量は、当技術分野の従来の知識に従って調整することができる。
【００７３】
好ましくは、重量部により、ＲＣＭ培地１０部ごとに、０．１部の牛肉エキス、０．０５部のペプトン、０．０３部の酵母粉末、０．０５部のグルコース、０．０１部のデンプン、０．０５部の塩化ナトリウム、０．０３部の酢酸ナトリウム、０．００５部のＬ−システイン塩酸塩、ｐＨ  ６．８±０．２、残りは水からなる。
【００７４】
培養方法：
ビフィドバクテリウムロングムをＲＣＭ液体培地に接種し、接種量体積比、即ち、種子液とＲＣＭ液体培地の体積比は１％であり、嫌気性培養は３７±１℃で８時間行われ、これが一次種子であり、重量部により、ＲＣＭ培地１０部ごとに、約０．１部の牛肉エキス、約０．０５部のペプトン、約０．０３部の酵母粉末、約０．０５部のグルコース、約０．０１部のデンプン、約０．０５部の塩化ナトリウム、約０．０３部の酢酸ナトリウム、約０．００５部のＬ−システイン塩酸塩、残りは水からなる。一次種子液を５％の接種量体積比で２Ｌ連続培養装置に接種し、培地液量は５０％であり、嫌気性ガスは窒素ガスにより継続的に維持され、３７±１℃で１６時間培養した後、一定濃度のセレン（亜セレン酸ナトリウム）を含む培地を使用し始め、連続的に供給し（Ｎａ２ＳｅＯ３のＳｅの質量分率は４５．７％、即ち、１００μｇ／ｍｌのＮａ２ＳｅＯ３を含む培地のＳｅの含有量は４５．７μｇ／ｍｌである）、供給サイクルを次の表に示されたようである。
【表Ａ】
2020516699.tif 000002
【００７５】
2020516699.tif 000003
【００７６】
連続培養の過程において、２０日目に５００ｍｌの発酵ブロスを放出し、遠心分離によって濃縮し、上澄みを廃棄し、菌泥を滅菌０．９％の塩化ナトリウム溶液に再懸濁し、上澄みが無色透明になるまで遠心分離させ、遠心分離後、底部に赤い粒子状物質が濃縮されることはなく、菌泥を注ぎ出し、底の赤い固く詰まった菌泥を流さないように注意する。収集した菌泥と保護剤を、それぞれ１対２、１対４、１対８、１対１６の重量比で混合した後、真空凍結乾燥して生菌粉末を得た。菌泥（菌泥１グラムあたり約０．０５ｇの乾燥菌体）と保護剤の異なる比率により、調製された生菌粉末中の総セレン含有量は約１２０μｇ／ｇ、６０μｇ／ｇ、３０μｇ／ｇ、１５μｇであり、生菌数は、約１０９−１０ＣＦＵ／ｇである。保護剤は、重量部によると、５部の脱脂粉乳、２部のトレハロース、および０．０１部のＬ−システイン塩酸塩からなる。
【００７７】
本実施例において、ビフィドバクテリウムロンガムを、異なる亜セレン酸ナトリウム濃度条件下で連続的に培養することができ、ビフィドバクテリウムロングム菌体に富化された総セレンの量により菌体を収穫することができる。
【００７８】
菌体中のセレン含有量の検出方法は、文献「ＧＢ  ５００９．９３−２０１０食品中のセレンの測定」を参照することができる。
【００７９】
【表１】
2020516699.tif 000004
【００８０】
2020516699.tif 000005
【００８１】
実施例２
ＣＰＴ−１１（イリノテカン）は、成人の転移性結腸直腸癌の治療に使用され、５−Ｆｕ化学療法に失敗した患者の二次治療として使用できる。  同時に、イリノテカンは、胃癌、食道癌、および広範囲の小細胞肺癌にも一定の効果を示した。
【００８２】
【表２】
2020516699.tif 000006
【００８３】
【表３】
2020516699.tif 000007
【００８４】
【表４】
2020516699.tif 000008
【００８５】
注：予防群の毎日の投与量は、表２及び表３に示されたようである
ＳＰＳＳ  ２０．０ソフトウェアを使用して統計分析を行い、測定データのデータをＸ±Ｓで表し、二組の体重変化、脾臓指数、ＧＳＨ−Ｐｘ活性、腸管細菌叢比較は、Ｉｎｄｅｐｅｎｄｅｎｔ−ｓａｍｐｌｅｓ  Ｔ  ｔｅｓｔを使用して分析した。下痢の発生率と重症度比較は、Ｎｏｎ−ｐａｒａｍｅｔｒｉｃ  Ｍａｎｎ−Ｗｈｉｔｎｅｙ  Ｕ  ｔｅｓｔを使用して統計分析した。死亡率の違いは、Ｌｏｇ−ｒａｎｋ  ｔｅｓｔ  ａｎｄ  Ｋａｐｌａｎ−Ｍｅｉｅｒ  Ｓｕｒｖｉｖａｌ  Ａｎａｌｙｓｉｓを使用して統計分析した。二組以上の測定データは、Ｏｎｅ−Ｗａｙ  ＡＮＯＶＡ  Ｓｃｈｅｆｆｅを使用して統計分析した。Ｐ  ＜０．０５は、差が有意であることを示す。
【００８６】
一般的なビフィズス菌、亜セレン酸ナトリウム及び二つの物理的混合物と比較して、セレン富化ビフィズス菌の予防的投与は、マウスにおけるＣＰＴ−１１誘発性の体重減少、ＣＩＤ、およびマウスの死を有意に改善した。
【００８７】
本発明は、一般的なビフィズス菌（生菌数５＊１０＾８ＣＦＵ／匹）、亜セレン酸ナトリウム（元素セレン投与量０．３ｍｇ／ｋｇ  ＢＷ）、およびそれらの物理的混合物、セレン富化ビフィズス菌（元素セレンの投与量０．３ｍｇ／ｋｇ  ＢＷ、生菌数５＊１０＾８ＣＦＵ／匹）を予防的に補充し、ＣＰＴ−１１（ＣＰＴ−１１腹腔内注射量は、７５ｍｇ／ｋｇ  ＢＷであり、４日間連続）によって引き起こされる体重減少、ＣＩＤおよび死亡率に対して緩和効果があるかどうかを観察した。
【００８８】
実験中に、Ｂｌａ  Ｃｔｒ群のマウスの体重は増加し続け、Ｍｏｄ  Ｃｔｒ群、ＢＬ群、Ｎａ２ＳＯ３群、Ｓｅｌ−ＢＬ群、及びＰｈｙ  Ｍｉｘ群のマウスの６日目の体重減少率は、それぞれ２３．８０±７．８８％、２０．３７±６．４８％、２２．７６±３．４１％、１８．４５±３．０９％、２２．２６±５．６１％であった。その中で、Ｓｅｌ−ＢＬ群のみがＭｏｄ  Ｃｔｒ群と比較して体重減少率に有意に差があった（Ｐ＜０．０５、図１に示したようである）。この結果から、Ｓｅｌ−ＢＬを予防的に補充することにより、ＣＰＴ−１１によって引き起こされるマウスの体重減少を軽減できるが、ビフィズス菌または亜セレン酸ナトリウムまたは二つの物理的混合物を単に補充しても、ＣＰＴ−１１よって引き起こされるマウスの体重減少を改善しないことを示す。
【００８９】
実験中に、Ｂｌａ  Ｃｔｒ群のマウスには下痢はなかった。Ｍｏｄ  Ｃｔｒ群、ＢＬ群、Ｎａ２ＳＯ３群、Ｓｅｌ−ＢＬ群、およびＰｈｙ  Ｍｉｘ群のマウスは、３〜６日間に重度の下痢を起こし（下痢の程度は２〜３レベル）、発生率はそれぞれ１４％、１１％、１６％、３％、１４％であり、ＢＬ群およびＳｅｌ−ＢＬ群のみが、マウスの２〜３レベルの下痢の発生率を有意に減少させた（Ｐ＜０．０５）。
【００９０】
実験の６日目に、残りのマウスを殺し、マウスの小腸組織を収集した。肉眼で見ると、Ｂｌａ  Ｃｔｒ群の膀胱は光沢があり、色は混雑や体液貯留のない正常な色（濃い黄色）になり、Ｍｏｄ  Ｃｔｒ群のマウスは、腸管拡張と浮腫が重く、腸壁が薄くて透光し、軽度の充血を伴った。ＢＬ群、Ｎａ２ＳＯ３群、及びその二つの物理的混合群は、Ｍｏｄ  Ｃｔｒ群とほとんど差がなく、Ｓｅｌ−ＢＬ群のマウスの腸管拡張と体液貯留の程度はＭｏｄ  Ｃｔｒ群より有意に軽く、腸壁は厚かった（図４に示したようである）。顕微鏡的病理切片観察の結果は、図５に示したようである。図Ａから、ブランク対照群のマウスの小腸構造は無傷で明瞭であり、絨毛および陰窩の形態が明らかであり、腸粘膜上皮細胞が密接に配置されていることが分かる。図Ｂから、Ｍｏｄ  Ｃｔｒ群のマウスの腸粘膜構造は完全に破壊され、上皮細胞は萎縮し、絨毛および陰窩構造は基本的に消失し、炎症細胞は著しく浸潤したことが分かる。図Ｃ、図Ｄ、および図Ｅから、一般的なビフィズス菌群、亜セレン酸ナトリウム群及びセレン富化ビフィズス菌群マウスの小腸も損傷を受けたが、損傷の程度は異なることが分かる。セレン富化ビフィズス菌群群は、粘膜の底部でいくつかの無傷の陰窩構造が見られ、比較的無傷の絨毛構造が見られ、腸粘膜の損傷の程度は他の群よりもかなり軽い。
【００９１】
生存曲線の結果は、一般的なビフィズス菌はマウスの生存時間の延長、マウスの死亡率を低下に改善効果を持ってないが、一般的なビフィズス菌、亜セレン酸ナトリウムおよびその二つの物理的混合物と比較して、セレン富化ビフィズス菌は、マウスの死亡率を効果的に減少させ、マウスの生存期間を延長した（ｌｏｇ−ｒａｎｋ  ｔｅｓｔ  ｐ＜０．０５）  ）、図３に示したようである。
【００９２】
上記の実験結果は、一般的なビフィズス菌、亜セレン酸ナトリウム、およびその二つの物理的混合物と比較して、セレン富化ビフィズス菌の予防的使用は、ＣＰＴ−１１によって引き起こされるマウスの体重減少、ＣＩＤおよびマウスの生存時間を延長することに明確な利点があることが分かる。
【００９３】
実施例３
本発明は、異なる用量のセレン富化ビフィズス菌（元素セレンの用量はそれぞれ０．１５ｍｇ／ｋｇ  ＢＷ、０．３ｍｇ／ｋｇ  ＢＷ、０．６ｍｇ／ｋｇ  ＢＷ、１．２ｍｇ／ｋｇ  ＢＷであり、生菌の数はすべて５＊１０＾８ＣＦＵ／匹である）を予防的に使用して、ＣＰＴ−１１（４日間連続で７５ｍｇ／ｋｇのＣＰＴ−１１腹腔内注射）によって引き起こされる体重減少、ＣＩＤおよび死亡率に緩和効果があるかどうかを観察した。
【００９４】
実験中に、Ｂｌａ  Ｃｔｒ群の体重は増加し続け、Ｍｏｄ  Ｃｔｒ群、Ｓｅｌ−ＢＬ  ０．１５ｍｇ／ｋｇ群、Ｓｅｌ−ＢＬ  ０．３ｍｇ／ｋｇ群、Ｓｅｌ−ＢＬ  ０．６ｍｇ／ｋｇ群、およびＳｅｌ−ＢＬ  １．２ｍｇ／ｋｇ群のマウスの６日目の体重減少率は、それぞれ３２．０２±５．１０％、２９．２２±２．９５％、１８．４５±３．０９％、１４．４４±６．３８％、および２７．０４±９．５０％である。図６に示したように、Ｍｏｄ  Ｃｔｒ群と比較して、Ｓｅｌ−ＢＬ  ０．３ｍｇ／ｋｇ群とＳｅｌ−ＢＬ  ０．６ｍｇ／ｋｇ群の体重減少率は、統計的に差（Ｐ＜０．０５）がある。
【００９５】
本発明は、異なる用量のセレン富化ビフィズス菌を予防的に使用することにより、ＣＰＴ−１１化学療法によって引き起こされるＣＩＤに対して阻害作用があるかどうかを観察した。ＢｌａＣｔ群のマウスでは実験中に下痢はなかった。他の群のマウスは、３〜６日目に重度の下痢が発生し、発生率は、それぞれ１４％、１１％、０％、３％、１２％であり、軽度の下痢（下痢の程度は１レベルである）の発生率は、それぞれ４６％、４８％、８％、３％、７％であった。実験の結果は、Ｍｏｄ  Ｃｔｒと比較して、Ｓｅｌ−ＢＬ  ０．１５ｍｇ／ｋｇ群は、ＣＰＴ−１１によって引き起こされるＣＩＤ（Ｐ＞０．０５）を緩和することができず、Ｓｅｌ−ＢＬ  ０．３ｍｇ／ｋｇ群、Ｓｅｌ−ＢＬ  ０．６ｍｇ／ｋｇ群、およびＳｅｌ−ＢＬ  １．２ｍｇ／ｋｇ群は、ＣＰＴ−１１によって引き起こされるＣＩＤ（Ｐ＞０．０５）を効果的に軽減することができることを示した。
【００９６】
本発明は、異なる用量のセレン富化ビフィズス菌を予防的に使用することにより、マウスの生存時間を延長し、マウスの死亡を減らすことができるかどうかを観察した。Ｍｏｄ  Ｃｔｒと比較して、Ｓｅｌ−ＢＬ  ０．３ｍｇ／ｋｇ群とＳｅｌ−ＢＬ  ０．６ｍｇ／ｋｇ群のみがマウスの生存時間を有意に延長し、マウスの死亡率を低下させ、ＣＰＴ−１１に対するマウスの耐性を増加させ（ｌｏｇ−ｒａｎｋ  ｔｅｓｔ  ｐ＜０．０５））、図８に示したようである。
【００９７】
要約すると、Ｓｅｌ−ＢＬ  ０．１５ｍｇ／ｋｇ群は、ＣＴＴ−１１によって引き起こされる体重減少、ＣＩＤ、およびマウス死亡を改善しなかった。Ｓｅｌ−ＢＬ  ０．３ｍｇ／ｋｇ群およびＳｅｌ−ＢＬ  ０．６ｍｇ／ｋｇ群は、ＣＰＴ−１１によって引き起こされるマウスの体重減少とＣＩＤを有意に緩和し、マウスの生存時間を延長することができる。Ｓｅｌ−ＢＬ  １．２ｍｇ／ｋｇは、マウスのＣＩＤを緩和できるが、ＣＰＴ−１１によって引き起こされるマウスの体重減少は緩和できず、マウスの生存時間を延長できず、その緩和効果は限られている。
【００９８】
上記の結果は、Ｓｅｌ−ＢＬが用量依存的方法でＣＰＴ−１１によって引き起こされる体重減少、ＣＩＤおよびマウス死亡を予防及び治療することを示した。
実施例４
セレン富化ビフィズス菌は、ＣＰＴ−１１によって引き起こされる化学療法損傷の改善は、マウス腸管細菌叢構造の改善、体の抗酸化能力の強化、および免疫機能の改善に関連している可能性がある。
【００９９】
本発明は、正常マウスに一般的なビフィズス菌、亜セレン酸ナトリウムおよびそれらの物理的混合物、およびセレン富化ビフィズス菌を補充することにより、マウスの腸管細菌叢および全血におけるＧＳＨ−Ｐｘ酵素の活性の影響を観察した。図９に示したように、ＢｌａＣｔｒと比較して、セレン富化ビフィズス菌を８日間補充すると、腸管のビフィズス菌の数を有意に増加させることができ（ｐ＜０．０５）、図１０に示したように、セレン富化ビフィズス菌の補充により、全血中のＧＳＨ−Ｐｘの酵素活性を有意に増加させることができる（ｐ＜０．０５）。
【０１００】
脾臓は体の重要な免疫器官であり、脾臓指数（脾臓重量／体重）は通常、体の免疫レベルを反映するために使用される。図１１に示すように、実験の結果は、マウスの腹腔内にＣＰＴ−１１を注射すると、脾臓指数の有意な減少をもたらし、一般的なビフィズス菌、亜セレン酸ナトリウムおよびそれらの混合物の予防的補充は、脾臓指数の低下を緩和することはできなかったが、予防的補充は、ＣＰＴ−１１によって引き起こされる脾臓指数の低下（Ｐ＜０．０５）を有意に緩和することを示した。この結果は、セレン富化ビフィズス菌が、ＣＰＴ−１１によって引き起こされるマウスの免疫力の低下を緩和する点で、一般的なビフィズス菌および亜セレン酸ナトリウムよりも優れていることを示した。
【０１０１】
上記の実験結果は、腸管のビフィズス菌の数を増やし、全血中のＧＳＨ−Ｐｘ酵素の活性を高め、マウスの免疫力を改善する点で、セレン富化ビフィズス菌が一般的なビフィズス菌と亜セレン酸ナトリウムおよびそれらの物理的混合物と比較すると大きな利点があることを示した。
【０１０２】
【表６】
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【０１０３】
表６は、Ｂｌａ  Ｃｔｒ群のマウスには下痢が発生せず、Ｍｏｄ  Ｃｔｒ群、ＢＬ群、Ｎａ２ＳＯ３群、Ｓｅｌ−ＢＬ群およびＰｈｙ  Ｍｉｘ群のマウスは、３〜６日間に重度の下痢を起こし（下痢の程度は２〜３レベル）、発生率はそれぞれ１４％、１１％、１６％、３％、１４％であり、ＢＬ群およびＳｅｌ−ＢＬ群のみが、マウスの２〜３レベルの下痢の発生率を有意に減少させた（Ｐ＜０．０５）ことを反映した。
【０１０４】
【表７】
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【０１０５】
表７は、異なる用量のセレン富化ビフィズス菌を予防的に使用することにより、ＣＰＴ−１１化学療法によって引き起こされるＣＩＤに対して阻害作用があるかどうかを観察したことを反映した。ＢｌａＣｔｒ群のマウスでは実験中に下痢はなかった。他の群のマウスは、３〜６日目に重度の下痢の発生し、発生率は、それぞれ１４％、１１％、０％、３％、１２％であり、軽度の下痢（下痢の程度は１レベルである）の発生率は、それぞれ４６％、４８％、８％、３％、７％であった。実験の結果は、Ｍｏｄ  Ｃｔｒと比較して、Ｓｅｌ−ＢＬ  ０．１５ｍｇ／ｋｇ群は、ＣＰＴ−１１によって引き起こされるＣＩＤ（Ｐ＞０．０５）を緩和することができず、Ｓｅｌ−ＢＬ  ０．３ｍｇ／ｋｇ群、Ｓｅｌ−ＢＬ  ０．６ｍｇ／ｋｇ群、およびＳｅｌ−ＢＬ  １．２ｍｇ／ｋｇ群は、ＣＰＴ−１１によって引き起こされるＣＩＤ（Ｐ＞０．０５）を効果的に軽減することができることを示した。
【０１０６】
本発明によって調製されたセレン富化ビフィズス菌は、微生物株を無機セレン（例えば、亜セレン酸ナトリウム）の培地に入れることによって調製され、バクテリアによってセレンに対して自己吸収と変換を行い、セレンと菌体細胞内のタンパク質、アミノ酸、多糖などと結合し、それによって無機セレンを有機セレンに変換し、無機セレンの毒性を効果的に低減する。ビフィズス菌は腸管内の非常に重要なプロバイオティクスでもあり、腸粘膜バリアの生物学的バリアの主成分であり、人体の主要なプロバイオティクスの一つであり、宿主の消化、栄養、代謝、吸収、免疫、感染防止プロセスに関与し、特に、腸粘膜バリアの完全性を維持する点で重要な役割を果たし、化学療法薬によって引き起こされる患者の下痢の症状を緩和することができる。実験により、本発明のセレン富化ビフィズス菌は、一般的なビフィズス菌および一般的なビフィズス菌とセレンの物理的混合物よりも、ＣＰＴ−１１によって引き起こされる腸管の損傷を緩和する効果が著しく優れていることを示した。
【０１０７】
実施例５．ＬＰＳによって引き起こされるラット腸上皮細胞ＩＥＣ６損傷に対するセレン富化プロバイオティクス水溶性タンパク質の保護作用
本実施例において、ＬＰＳを使用してラット腸上皮細胞ＩＥＣ６損傷モデルを誘導し、ＩＥＣ６細胞活力、胞アポトーシス、細胞ミトコンドリア膜電位、および細胞間密着結合タンパク質ＺＯ−１およびＯｃｃｌｕｄｉｎの発現に対するセレン富化プロバイオティクス製剤の影響を調査した。
【０１０８】
方法：それぞれ５つの群に分け：陰性対照群（ＰＢＳ処理）、モデル群（ＬＰＳ処理）、セレン富化プロバイオティクス水溶性タンパク質１０、３０、１００μｇ／ｍｌの三つの濃度群（ＬＰＳ処理、異なる濃度のセレン富化プロバイオティクス水溶性タンパク質を加え）。ここで、セレン富化プロバイオティクス水溶性タンパク質は、実施例１に記載のセレン富化ビフィズス菌から常法により調製した。
【０１０９】
ＬＰＳ処理２４時間後、細胞活力（ＭＴＴアッセイ）、細胞アポトーシス（Ａｎｎｅｘｉｎ−Ｖ／ＦＩＴＣ二重染色検出）、ミトコンドリア膜電位（ＪＣ−１染色）、腸上皮細胞密着結合タンパク質ＺＯ−１およびＯｃｃｌｕｄｉｎ発現をそれぞれ検出した。
【０１１０】
結論：図１２〜図１５に示したように、セレン富化プロバイオティクス水溶性タンパク質は、ＬＰＳによって引き起こされる腸上皮細胞の活力の低下、細胞アポトーシス及びミトコンドリア膜電崩壊の抑制を含む、ＬＰＳによって誘導される腸上皮損傷の損傷を抑制することができる。セレン富化プロバイオティクス水溶性タンパク質は、ＬＰＳによって引き起こされる腸上皮細胞の密着結合破壊を抑制し、腸上皮細胞密着結合タンパク質の発現を増加させることができる。セレンを含まないプロバイオティクス水溶性タンパク質は、ＬＰＳによって誘導される腸上皮細胞の損傷も抑制し、密着結合タンパク質の発現を減少されることができる。
【０１１１】
実施例６．マウスアルコール性肝疾患に対するセレン富化プロバイオティクスの保護作用
本実施例において、アルコール性肝障害に対するセレン富化ビフィドバクテリウムロングムの保護作用とメカニズムを研究した。雌のＣ５７／ＢＬ６マウスを、通常の対照群、モデル群、およびセレン富化ビフィドバクテリウムロングムの高用量群と低用量群にランダムに分けた。慢性アルコール性肝障害のモデルを構築し、セレン富化ビフィドバクテリウムロングムを介入し、４０日間の胃内投与した後、肝臓の質量を測定し、肝臓係数を計算し、マウスの血清アラニンアミノトランスフェラーゼ（ＡＬＴ）およびアスパラギン酸アミノトランスフェラーゼ（ＡＳＴ）活性、トリグリセリド（ＴＧ）、肝内マロンジアルデヒド（ＭＤＡ）およびスーパーオキシドジスムターゼ（ＳＯＤ）の含有量を測定し、ＨＥ染色を使用して、マウスの肝臓の病理学的変化を観察し、炎症指数を評価した。
【０１１２】
結果は、図１６〜図２０に示したように、高用量および低用量のセレン富化ビフィドバクテリウムロングムは、アルコール性肝障害マウスの肝臓係数を著しくに低下させ、血清中のＡＬＴおよびＡＳＴのレベルを下げ、肝臓組織のＭＤＡ含有量を減少させ、肝臓組織のＳＯＤ含有量を増やし、肝臓組織の炎症指数を下げ、肝臓組織の病理学的損傷を減少させる。セレン富化ビフィドバクテリウムロングムはアルコール性肝障害に対する一定の保護作用があり、そのメカニズムは抗酸化と炎症の抑制に関係している可能性がある。
【０１１３】
実施例７．セレン富化ビフィドバクテリウムロングムによるマウスの免疫機能を効果するテスト
正常な対照マウスと比較して、ビフィズス菌の高用量群のマウスのマクロファージの食作用率と食作用指数は有意に増加した（Ｐ＜０．０１）。ジニトロフルオロベンゼンによって誘導されるマウスの遅延型過敏反応も有意に増加した（Ｐ＜０．０１）。衡欣プロバイオティクス群のマウスＣｏｎＡ誘発脾臓形質転換能力は有意に増加した（Ｐ＜０．０１）。ビフィズス菌の低用量群は、マウスのマクロファージの食作用率と食作用指数、およびマウスのジニトロフルオロベンゼン誘発遅延型過敏反応で、正常マウスよりも高かったが、有意差はなかった。
【０１１４】
結論は、図２１に示したように、セレン富化ビフィドバクテリウムロングムは、単核−マクロファージの免疫機能と細胞の免疫機能を向上させることができる。
本研究では、ビフィズス菌菌株ＤＤ９８を健康なＩＣＲマウスに経口投与した後、そのメカニズム機能に対する影響を評価した。研究は、この菌株が遅延型過敏反応を増強し、ナチュラルキラー細胞活性および腹腔マクロファージの食細胞活性を向上させることを示してた。これは、この菌株が体の免疫力を強化し、低用量の菌株（１０６ｃｆｕ／ｍＬ）と比較して、免疫強化機能を発揮できることを示した。
【０１１５】
実施例８．マウス腸管細菌叢の調節に対するセレン富化ビフィドバクテリウムロングムのテスト
本実施例において、マウスの腸管細菌叢に対するセレン富化ビフィズス菌の影響を研究した。
【０１１６】
方法：１２匹のマウスをランダムにビフィズス菌群と正常対照群に分け、各群６匹のマウスに分けた。ビフィズス菌群には０．２ｍｌのビフィドバクテリウムを１日あたり６＊１０＾８ｃｆｕ／ｍｌの濃度で投与し、正常対照群には１日あたり０．２ｍｌの０．９％塩化ナトリウム溶液を投与した。３０日後、マウスの糞便中のビフィズス菌、エンテロバクターの数をテストインデックスとして使用して、３０個のサンプルのマウスの腸管細菌叢の変化を研究した。
【０１１７】
結果は、図２２〜図２４に示したように、対照群と比較して、ビフィズス菌のマウスの腸管内ビフィズス菌の数は有意に増加し、エンテロバクターの数は有意に減少した。
結論：セレン富化ビフィズス菌ＤＤ９８は、腸管細菌叢を改善し、プロバイオティクスの数を増やし、病原菌の数を減らすことができる。
【０１１８】
本発明に記載されるすべての文献は、参考として、各文書が参照として個別に引用されるように、本発明に引用される。また、本発明の当業者は、本発明の上記の教示を読んだ後、本発明の様々な変更又は修正を行うことができ、それらの均等物も添付された特許請求の範囲によって、限定された範囲内にある。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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【図１４】
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【図１５】
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【図１６】
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【図１７】
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【図１８】
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【図１９】
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【図２０】
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【図２１】
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【図２２】
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【図２３】
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【図２４】
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【国際調査報告】
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