(57)【要約】本発明は、ある特定の核酸（例えば、二本鎖ｓｉＲＮＡ分子）、ならびに標的化部分、二本鎖ｓｉＲＮＡ、及び任意選択の結合基を含むコンジュゲートを提供する。ある特定の実施形態は、コンジュゲートを調製するために有用な合成方法も提供する。コンジュゲートは、治療用二本鎖ｓｉＲＮＡを肝臓に標的化し、肝炎（例えばＢ型肝炎及びＤ型肝炎）をはじめとする肝臓病を処置するために有用である。本発明は、式Ｉの化合物を調製するために有用である、本明細書に開示される合成中間体及び方法も提供する。【選択図】図１
2020516296.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
配列番号１、配列番号３、配列番号５、配列番号７、配列番号９、配列番号１１、配列番号１３、配列番号１５、配列番号１７、配列番号１９、配列番号２１、配列番号２３、配列番号２５、配列番号２７、配列番号２９、配列番号３１、配列番号３３、配列番号３５、配列番号３７、配列番号３９、配列番号４１、配列番号４３、配列番号４５、配列番号４７、配列番号４９、配列番号５１、配列番号５３、配列番号５５、配列番号５７、配列番号５９、配列番号６１、配列番号６３、配列番号６５、配列番号６７、配列番号６９、配列番号７１、及び配列番号７３からなる群から選択される核酸分子。
【請求項２】
配列番号２、配列番号４、配列番号６、配列番号８、配列番号１０、配列番号１２、配列番号１４、配列番号１６、配列番号１８、配列番号２０、配列番号２２、配列番号２４、配列番号２６、配列番号２８、配列番号３０、配列番号３２、配列番号３４、配列番号３６、配列番号３８、配列番号４０、配列番号４２、配列番号４４、配列番号４６、配列番号４８、配列番号５０、配列番号５２、配列番号５４、配列番号５６、配列番号５８、配列番号６０、配列番号６２、配列番号６４、配列番号６６、配列番号６８、配列番号７０、配列番号７２、及び配列番号７４からなる群から選択される核酸分子。
【請求項３】
請求項１に記載の核酸分子、請求項２に記載の核酸分子、またはそれらの組み合わせを含む、組成物。
【請求項４】
ｓｉＲＮＡ  １（配列番号１及び２）、２（配列番号３及び４）、３（配列番号５及び６）、４（配列番号７及び８）、５（配列番号９及び１０）、６（配列番号１１及び１２）、７（配列番号１３及び１４）、８（配列番号１５及び１６）、９（配列番号１７及び１８）、１０（配列番号１９及び２０）、１１（配列番号２１及び２２）、１２（配列番号２３及び２４）、１３（配列番号２５及び２６）、１４（配列番号２７及び２８）、１５（配列番号２９及び３０）、１６（配列番号３１及び３２）、１７（配列番号３３及び３４）、１８（配列番号３５及び３６）、１９（配列番号３７及び３８）、２０（配列番号３９及び４０）、２１（配列番号４１及び４２）、２２（配列番号４３及び４４）、２３（配列番号４５及び４６）、２４（配列番号４７及び４８）、２５（配列番号４９及び５０）、２６（配列番号５１及び５２）、２７（配列番号５３及び５４）、２８（配列番号５５及び５６）、２９（配列番号５７及び５８）、３０（配列番号５９及び６０）、３１（配列番号６１及び６２）、３２（配列番号６３及び６４）、３３（配列番号６５及び６６）、３４（配列番号６７及び６８）、３５（配列番号６９及び７０）、３６（配列番号７１及び７２）、及び３７（配列番号７３及び７４）からなる群から選択される二本鎖ｓｉＲＮＡ分子。
【請求項５】
請求項４に記載の二本鎖ｓｉＲＮＡ分子を含む組成物。
【請求項６】
薬学的に許容される担体を含む医薬組成物である、請求項３または５に記載の組成物。
【請求項７】
式（Ｉ）の化合物：
【化３０１】
2020516296.tif 000308
（Ｉ）
またはその塩であって、
式中、
Ｒ１は、標的化リガンドであり、
Ｌ１は、存在しないか、または結合基であり、
Ｌ２は、存在しないか、または結合基であり、
Ｒ２は、請求項４に記載の二本鎖ｓｉＲＮＡ分子から選択される二本鎖ｓｉＲＮＡ分子であり、
環Ａは、存在しないか、３〜２０員シクロアルキル、５〜２０員アリール、５〜２０員ヘテロアリール、または３〜２０員ヘテロシクロアルキルであり、
各ＲＡは、独立して、水素、ヒドロキシ、ＣＮ、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、−Ｃ１〜２アルキル−ＯＲＢ、Ｃ１〜１０アルキルＣ２〜１０アルケニル、及びＣ２〜１０アルキニルからなる群から選択され、前記Ｃ１〜１０アルキルＣ２〜１０アルケニル、及びＣ２〜１０アルキニルは、ハロ、ヒドロキシ、及びＣ１〜３アルコキシから独立して選択される１つ以上の基で場合により置換されており、
ＲＢは、水素、保護基、固体支持体への共有結合、または固体支持体に結合した結合基への結合であり、
ｎは、０、１、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０である、
前記化合物またはその塩。
【請求項８】
Ｒ１は、標的化リガンドであり、
Ｌ１は、存在しないか、または結合基であり、
Ｌ２は、存在しないか、または結合基であり、
Ｒ２は、請求項４に記載の二本鎖ｓｉＲＮＡ分子から選択される二本鎖ｓｉＲＮＡ分子であり、
環Ａは、存在しないか、３〜２０員シクロアルキル、５〜２０員アリール、５〜２０員ヘテロアリール、または３〜２０員ヘテロシクロアルキルであり、
各ＲＡは、独立して、水素、ヒドロキシ、ＣＮ、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、−Ｃ１〜２アルキル−ＯＲＢ、ならびにハロ、ヒドロキシ、及びＣ１〜３アルコキシから独立して選択される１つ以上の基で場合により置換されているＣ１〜８アルキルからなる群から選択され、
ＲＢは、水素、保護基、固体支持体への共有結合、または固体支持体に結合した結合基への結合であり、
ｎは、０、１、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０である、
請求項７に記載の化合物、またはその塩。
【請求項９】
Ｒ１は、−Ｃ（Ｈ）（３−ｐ）（Ｌ３−糖類）ｐであり、
式中、各Ｌ３は独立して結合基であり、
ｐは、１、２、または３であり、
糖類は、単糖または二糖である、
請求項８に記載の化合物、またはその塩。
【請求項１０】
前記糖類は、
【化３０２】
2020516296.tif 000309
であり、
式中、
ＸはＮＲ３であり、Ｙは、−（Ｃ＝Ｏ）Ｒ４、−ＳＯ２Ｒ５、及び−（Ｃ＝Ｏ）ＮＲ６Ｒ７から選択されるか、またはＸは−（Ｃ＝Ｏ）−であり、ＹはＮＲ８Ｒ９であり、
Ｒ３は、水素または（Ｃ１〜Ｃ４）アルキルであり、
Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、及びＲ９は、それぞれ独立して、水素、（Ｃ１〜Ｃ８）アルキル、（Ｃ１〜Ｃ８）ハロアルキル、（Ｃ１〜Ｃ８）アルコキシ、ならびにハロ、（Ｃ１〜Ｃ４）アルキル、（Ｃ１〜Ｃ４）ハロアルキル、（Ｃ１〜Ｃ４）アルコキシ、及び（Ｃ１〜Ｃ４）ハロアルコキシからなる群から独立して選択される１つ以上の基で場合により置換されている（Ｃ３〜Ｃ６）シクロアルキルからなる群から選択され、
Ｒ１０は、−ＯＨ、−ＮＲ８Ｒ９、または−Ｆであり、
Ｒ１１は、−ＯＨ、−ＮＲ８Ｒ９、−Ｆ、またはハロ、ヒドロキシル、カルボキシル、アミノ、（Ｃ１〜Ｃ４）アルキル、（Ｃ１〜Ｃ４）ハロアルキル、（Ｃ１〜Ｃ４）アルコキシ、及び（Ｃ１〜Ｃ４）ハロアルコキシからなる群から独立して選択される１つ以上の基で場合により置換されている５員複素環である、
請求項９に記載の化合物またはその塩。
【請求項１１】
前記糖類は、
【化３０３】
2020516296.tif 000310
またはそれらの塩からなる群から選択される、請求項９または１０に記載の化合物。
【請求項１２】
前記糖類は、
【化３０４】
2020516296.tif 000311
である、請求項９〜１０のいずれか１項に記載の化合物、またはその塩。
【請求項１３】
各Ｌ３は、独立して、０〜５０個の炭素原子を有する二価の、分枝状または非分岐状、飽和または不飽和の炭化水素鎖であり、前記炭化水素鎖中の炭素原子のうち１個以上（例えば１個、２個、３個、または４個）は、−Ｏ−、−ＮＲＸ−、−ＮＲＸ−Ｃ（＝Ｏ）−、−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＲＸ−、または−Ｓ−で場合により置き換えられており、ＲＸは、水素または（Ｃ１〜Ｃ６）アルキルであり、前記炭化水素鎖は、（Ｃ１〜Ｃ６）アルコキシ、（Ｃ３〜Ｃ６）シクロアルキル、（Ｃ１〜Ｃ６）アルカノイル、（Ｃ１〜Ｃ６）アルカノイルオキシ、（Ｃ１〜Ｃ６）アルコキシカルボニル、（Ｃ１〜Ｃ６）アルキルチオ、アジド、シアノ、ニトロ、ハロ、ヒドロキシ、オキソ（＝Ｏ）、カルボキシ、アリール、アリールオキシ、ヘテロアリール、及びヘテロアリールオキシから選択される１つ以上（例えば１つ、２つ、３つ、または４つ）の置換基で場合により置換されている、請求項９〜１２のいずれか１項に記載の化合物、またはその塩。
【請求項１４】
各Ｌ３は、独立して、１〜２０個の炭素原子を有する二価の、分枝状または非分枝状、飽和または不飽和の炭化水素鎖であり、前記炭化水素鎖中の炭素原子のうち１個以上（例えば１個、２個、３個、または４個）は、−Ｏ−、−ＮＲＸ−、−ＮＲＸ−Ｃ（＝Ｏ）−、−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＲＸ−、または−Ｓ−で場合により置き換えられており、ＲＸは、水素または（Ｃ１〜Ｃ６）アルキルであり、前記炭化水素鎖は、（Ｃ１〜Ｃ６）アルコキシ、（Ｃ３〜Ｃ６）シクロアルキル、（Ｃ１〜Ｃ６）アルカノイル、（Ｃ１〜Ｃ６）アルカノイルオキシ、（Ｃ１〜Ｃ６）アルコキシカルボニル、（Ｃ１〜Ｃ６）アルキルチオ、アジド、シアノ、ニトロ、ハロ、ヒドロキシ、オキソ（＝Ｏ）、カルボキシ、アリール、アリールオキシ、ヘテロアリール、及びヘテロアリールオキシから選択される１つ以上（例えば１つ、２つ、３つ、または４つ）の置換基で場合により置換されている、請求項９〜１３のいずれか１項に記載の化合物、またはその塩。
【請求項１５】
Ｌ３は、
【化３０５】
2020516296.tif 000312
またはその塩である、請求項９〜１４のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項１６】
Ｒ１は、
【化３０６】
2020516296.tif 000313
またはその塩である、請求項８〜１５のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項１７】
Ｒ１は、
【化３０７】
2020516296.tif 000314
であり、
式中、
Ｇは、−ＮＨ−または−Ｏ−であり、
ＲＣは、水素、（Ｃ１〜Ｃ８）アルキル、（Ｃ１〜Ｃ８）ハロアルキル、（Ｃ１〜Ｃ８）アルコキシ、（Ｃ１〜Ｃ６）アルカノイル、（Ｃ３〜Ｃ２０）シクロアルキル、（Ｃ３〜Ｃ２０）複素環、アリール、ヘテロアリール、単糖、二糖、または三糖であり、前記シクロアルキル、複素環、アリール、ヘテロアリール、及び糖類は、ハロ、カルボキシル、ヒドロキシル、アミノ、（Ｃ１〜Ｃ４）アルキル、（Ｃ１〜Ｃ４）ハロアルキル、（Ｃ１〜Ｃ４）アルコキシ、及び（Ｃ１〜Ｃ４）ハロアルコキシからなる群から独立して選択される１つ以上の基で場合により置換されている、
請求項８に記載の化合物、またはその塩。
【請求項１８】
ＲＣは、
【化３０８】
2020516296.tif 000315
である、請求項１７に記載の化合物、またはその塩。
【請求項１９】
Ｒ１は、
【化３０９】
2020516296.tif 000316
である、請求項８、１７、及び１８のいずれか１項に記載の化合物、またはその塩。
【請求項２０】
ＲＣは、
【化３１０】
2020516296.tif 000317
である、請求項１７に記載の化合物、またはその塩。
【請求項２１】
Ｇは−ＮＨ−である、請求項１７〜２０のいずれか１項に記載の化合物、またはその塩。
【請求項２２】
Ｒ１は、
【化３１１】
2020516296.tif 000318
である、請求項８、１７、２０、及び２１のいずれか１項に記載の化合物、またはその塩。
【請求項２３】
Ｒ１は、
【化３１２】
2020516296.tif 000319
であり、
式中、各ＲＤは、独立して、水素、（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル、（Ｃ９〜Ｃ２０）アルキルシリル、（ＲＷ）３Ｓｉ−、（Ｃ２〜Ｃ６）アルケニル、テトラヒドロピラニル、（Ｃ１〜Ｃ６）アルカノイル、ベンゾイル、アリール（Ｃ１〜Ｃ３）アルキル、ＴＭＴｒ（トリメトキシトリチル）、ＤＭＴｒ（ジメトキシトリチル）、ＭＭＴｒ（モノメトキシトリチル）、及びＴｒ（トリチル）からなる群から選択され、
各ＲＷは、独立して、（Ｃ１〜Ｃ４）アルキル及びアリールからなる群から選択される）
である、請求項８に記載の化合物、またはその塩。
【請求項２４】
Ｌ１及びＬ２は、独立して、１〜５０個の炭素原子を有する二価の、分枝状または非分枝状、飽和または不飽和の炭化水素鎖であり、前記炭化水素鎖中の炭素原子のうち１個以上（例えば１個、２個、３個、または４個）は、−Ｏ−、−ＮＲＸ−、−ＮＲＸ−Ｃ（＝Ｏ）−、−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＲＸ−、または−Ｓ−で場合により置き換えられており、ＲＸは、水素または（Ｃ１〜Ｃ６）アルキルであり、前記炭化水素鎖は、（Ｃ１〜Ｃ６）アルコキシ、（Ｃ３〜Ｃ６）シクロアルキル、（Ｃ１〜Ｃ６）アルカノイル、（Ｃ１〜Ｃ６）アルカノイルオキシ、（Ｃ１〜Ｃ６）アルコキシカルボニル、（Ｃ１〜Ｃ６）アルキルチオ、アジド、シアノ、ニトロ、ハロ、ヒドロキシ、オキソ（＝Ｏ）、カルボキシ、アリール、アリールオキシ、ヘテロアリール、及びヘテロアリールオキシから選択される１つ以上（例えば１つ、２つ、３つ、または４つ）の置換基で場合により置換されている、請求項８〜２３のいずれか１項に記載の化合物、またはその塩。
【請求項２５】
Ｌ１及びＬ２は、独立して、１〜２０個の炭素原子を有する二価の、分枝状または非分枝状、飽和または不飽和の炭化水素鎖であり、前記炭化水素鎖中の炭素原子のうち１個以上（例えば１個、２個、３個、または４個）は、−Ｏ−、−ＮＲＸ−、−ＮＲＸ−Ｃ（＝Ｏ）−、−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＲＸ−、または−Ｓ−で場合により置き換えられており、ＲＸは、水素または（Ｃ１〜Ｃ６）アルキルであり、前記炭化水素鎖は、（Ｃ１〜Ｃ６）アルコキシ、（Ｃ３〜Ｃ６）シクロアルキル、（Ｃ１〜Ｃ６）アルカノイル、（Ｃ１〜Ｃ６）アルカノイルオキシ、（Ｃ１〜Ｃ６）アルコキシカルボニル、（Ｃ１〜Ｃ６）アルキルチオ、アジド、シアノ、ニトロ、ハロ、ヒドロキシ、オキソ（＝Ｏ）、カルボキシ、アリール、アリールオキシ、ヘテロアリール、及びヘテロアリールオキシから選択される１つ以上（例えば１つ、２つ、３つ、または４つ）の置換基で場合により置換されている、請求項８〜２４のいずれか１項に記載の化合物、またはその塩。
【請求項２６】
Ｌ１及びＬ２は、独立して、１〜１４個の炭素原子を有する二価の、分枝状または非分枝状、飽和または不飽和の炭化水素鎖であり、前記炭化水素鎖中の炭素原子のうち１個以上（例えば１個、２個、３個、または４個）は、場合により置き換えられており、−Ｏ−、−ＮＲＸ−、−ＮＲＸ−Ｃ（＝Ｏ）−、−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＲＸ−、または−Ｓ−であり、ＲＸは、水素または（Ｃ１〜Ｃ６）アルキルであり、前記炭化水素鎖は、（Ｃ１〜Ｃ６）アルコキシ、（Ｃ３〜Ｃ６）シクロアルキル、（Ｃ１〜Ｃ６）アルカノイル、（Ｃ１〜Ｃ６）アルカノイルオキシ、（Ｃ１〜Ｃ６）アルコキシカルボニル、（Ｃ１〜Ｃ６）アルキルチオ、アジド、シアノ、ニトロ、ハロ、ヒドロキシ、オキソ（＝Ｏ）、カルボキシ、アリール、アリールオキシ、ヘテロアリール、及びヘテロアリールオキシから選択される１つ以上（例えば１つ、２つ、３つ、または４つ）の置換基で場合により置換されている、請求項８〜２５のいずれか１項に記載の化合物、またはその塩。
【請求項２７】
Ｌ１は、−ＮＨ−、−Ｏ−、−Ｓ−、−（Ｃ＝Ｏ）−、−（Ｃ＝Ｏ）−ＮＨ−、−ＮＨ−（Ｃ＝Ｏ）−、−（Ｃ＝Ｏ）−Ｏ−、−ＮＨ−（Ｃ＝Ｏ）−ＮＨ−、または−ＮＨ−（ＳＯ２）−を介してＲ１に結合している、請求項８〜２６のいずれか１項に記載の化合物、またはその塩。
【請求項２８】
Ｌ２は、−Ｏ−を介してＲ２に結合している、請求項８〜２７のいずれか１項に記載の化合物、またはその塩。
【請求項２９】
Ｌ１は、
【化３１３】
2020516296.tif 000320
からなる群から選択される、請求項８〜２８のいずれか１項に記載の化合物、またはその塩。
【請求項３０】
Ｌ２は、−ＣＨ２−Ｏ−または−ＣＨ２−ＣＨ２−Ｏ−である、請求項８〜２９のいずれか１項に記載の化合物、またはその塩。
【請求項３１】
式（Ｉａ）の化合物：
【化３１４】
2020516296.tif 000321
（Ｉａ）
であって、
式中、
各Ｄは、独立して、
【化３１５】
2020516296.tif 000322
及び−Ｎ＝からなる群から選択される、
請求項８に記載の化合物、またはその塩。
【請求項３２】
【化３１６】
2020516296.tif 000323
【化３１７】
2020516296.tif 000324
【化３１８】
2020516296.tif 000325
【化３１９】
2020516296.tif 000326
ならびにそれらの塩からなる群から選択され、
式中、
Ｑ１は水素であり、Ｑ２はＲ２であるか、またはＱ１はＲ２であり、Ｑ２は水素であり、
Ｚは−Ｌ１−Ｒ１である、
請求項８または請求項３１に記載の化合物、またはその塩。
【請求項３３】
式（Ｉｂ）の化合物：
【化３２０】
2020516296.tif 000327
（Ｉｂ）
であって、
式中、
各Ｄは、独立して、
【化３２１】
2020516296.tif 000328
及び−Ｎ＝からなる群から選択され、
各ｍは、独立して、１または２である、
請求項８に記載の化合物、またはその塩。
【請求項３４】
【化３２２】
2020516296.tif 000329
ならびにそれらの塩からなる群から選択され、
式中、
Ｑ１は水素であり、Ｑ２はＲ２であるか、またはＱ１はＲ２であり、Ｑ２は水素であり、
Ｚは−Ｌ１−Ｒ１である、
請求項８または請求項３３に記載の化合物、またはその塩。
【請求項３５】
式（Ｉｃ）の化合物：
【化３２３】
2020516296.tif 000330
（Ｉｃ）
またはその塩であり、
式中、
Ｅは、−Ｏ−または−ＣＨ２−であり、
ｎは、０、１、２、３、及び４からなる群から選択され、
ｎ１及びｎ２は、それぞれ独立して、０、１、２、及び３からなる群から選択される、
請求項８に記載の化合物、またはその塩。
【請求項３６】
【化３２４】
2020516296.tif 000331
ならびにそれらの塩からなる群から選択され、式中、Ｚは−Ｌ１−Ｒ１である）、
請求項８または請求項３５に記載の化合物、またはその塩。
【請求項３７】
前記−Ａ−Ｌ２−Ｒ２部分は、
【化３２５】
2020516296.tif 000332
であり、
式中、
Ｑ１は水素であり、Ｑ２はＲ２であるか、またはＱ１はＲ２であり、Ｑ２は水素であり、
各ｑは、独立して、０、１、２、３、４、または５である、
請求項８に記載の化合物、またはその塩。
【請求項３８】
【化３２６】
2020516296.tif 000333
【化３２７】
2020516296.tif 000334
【化３２８】
2020516296.tif 000335
及び
【化３２９】
2020516296.tif 000336
ならびにそれらの塩からなる群から選択される、請求項８に記載の化合物、またはその塩。
【請求項３９】
Ｒ１は、
【化３３０】
2020516296.tif 000337
【化３３１】
2020516296.tif 000338
からなる群から選択され、
式中、
ＲＳは、
【化３３２】
2020516296.tif 000339
であり、
ｎは、２、３、または４であり、
ｘは、１または２である、
請求項７に記載の化合物、またはその塩。
【請求項４０】
Ｌ１は、
【化３３３】
2020516296.tif 000340
からなる群から選択される、請求項７または３９に記載の化合物、またはその塩。
【請求項４１】
Ａは、存在しないか、フェニル、ピロリジニル、またはシクロペンチルである、請求項７、３９、及び４０のいずれか１項に記載の化合物、またはその塩。
【請求項４２】
Ｌ２は、ヒドロキシで場合により置換されているＣ１〜４アルキレン−Ｏ−である、請求項７及び３９〜４１のいずれか１項に記載の化合物、またはその塩。
【請求項４３】
Ｌ２は、−ＣＨ２Ｏ−、−ＣＨ２ＣＨ２Ｏ−、または−ＣＨ（ＯＨ）ＣＨ２Ｏ−である、請求項７及び３９〜４２のいずれか１項に記載の化合物、またはその塩。
【請求項４４】
各ＲＡは、独立して、ヒドロキシ、またはヒドロキシルで場合により置換されているＣ１〜８アルキルである、請求項７及び３９〜４３のいずれか１項に記載の化合物、またはその塩。
【請求項４５】
各ＲＡは、独立して、ヒドロキシ、メチル、及び−ＣＨ２ＯＨからなる群から選択される、請求項７及び３９〜４４のいずれか１項に記載の化合物、またはその塩。
【請求項４６】
式（Ｉｇ）の化合物：
【化３３４】
2020516296.tif 000341
（Ｉｇ）
またはその塩であり、
式中、
Ｂは、−Ｎ−または−ＣＨ−であり、
Ｌ２は、ヒドロキシルまたはハロで場合により置換されているＣ１〜４アルキレン−Ｏ−であり、
ｎは、０、１、２、３、４、５、６、または７である、
請求項７に記載の化合物、またはその塩。
【請求項４７】
【化３３５】
2020516296.tif 000342
ならびにそれらの塩からなる群から選択され、
式中、Ｑは−Ｌ１−Ｒ１であり、
Ｒ’は、Ｃ１〜９アルキル、Ｃ２〜９アルケニル、またはＣ２〜９アルキニルであり、前記Ｃ１〜９アルキル、Ｃ２〜９アルケニル、またはＣ２〜９アルキニルは、ハロまたはヒドロキシルで場合により置換されている、
請求項７または４６に記載の化合物、またはその塩。
【請求項４８】
【化３３６】
2020516296.tif 000343
ならびにそれらの塩からなる群から選択され、
式中、Ｑは−Ｌ１−Ｒ１である、
請求項７に記載の化合物、またはその塩。
【請求項４９】
【化３３７】
2020516296.tif 000344
【化３３８】
2020516296.tif 000345
【化３３９】
2020516296.tif 000346
【化３４０】
2020516296.tif 000347
【化３４１】
2020516296.tif 000348
【化３４２】
2020516296.tif 000349
【化３４３】
2020516296.tif 000350
【化３４３】
2020516296.tif 000351
【化３４４】
2020516296.tif 000352
【化３４５】
2020516296.tif 000353
【化３４６】
2020516296.tif 000354
【化３４７】
2020516296.tif 000355
【化３４８】
2020516296.tif 000356
【化３４９】
2020516296.tif 000357
及び
【化３５０】
2020516296.tif 000358
ならびにそれらの薬学的に許容される塩からなる群から選択され、式中、Ｒ２は、請求項４に記載の二本鎖ｓｉＲＮＡ分子から選択される二本鎖ｓｉＲＮＡ分子である、
請求項７に記載の化合物、またはその塩。
【請求項５０】
請求項１〜４９のいずれか１項に記載の化合物、またはその薬学的に許容される塩、及び薬学的に許容される担体を含む、医薬組成物。
【請求項５１】
動物の肝臓にｓｉＲＮＡを送達する方法であって、請求項１〜４９のいずれか１項に記載の式Ｉの化合物またはその薬学的に許容される塩を前記動物に投与することを含む、前記方法。
【請求項５２】
式（Ｉｄ）の化合物：
【化３５１】
2020516296.tif 000359
（Ｉｄ）
またはその塩であり、
式中、
Ｒ１ｄは、
【化３５２】
2020516296.tif 000360
及び
【化３５３】
2020516296.tif 000361
から選択され、
Ｘｄは、Ｃ２〜１０アルキレンであり、
ｎｄは、０または１であり、
Ｒ２ｄは、請求項４に記載の二本鎖ｓｉＲＮＡ分子から選択される二本鎖ｓｉＲＮＡ分子であり、
Ｒ３ｄは、Ｈ、保護基、固体支持体への共有結合、または固体支持体に結合した結合基への結合である、
請求項８に記載の化合物、またはその塩。
【請求項５３】
Ｒ１ｄは、
【化３５４】
2020516296.tif 000362
である、請求項５２に記載の化合物、またはその塩。
【請求項５４】
Ｒ１ｄは、
【化３５５】
2020516296.tif 000363
である、請求項５２に記載の化合物、またはその塩。
【請求項５５】
Ｘｄは、Ｃ８アルキレンである、請求項５２〜５４のいずれか１項に記載の化合物または塩。
【請求項５６】
ｎｄは、０である、請求項５２〜５４のいずれか１項に記載の化合物または塩。
【請求項５７】
Ｒ３ｄは、Ｈである、請求項５２〜５６のいずれか１項に記載の化合物または塩。
【請求項５８】
Ｒ３ｄは、固体支持体への共有結合である、請求項５２〜５６のいずれか１項に記載の化合物または塩。
【請求項５９】
Ｒ３ｄは、固体支持体に結合した結合基への結合であり、前記結合基は、２〜１５個の炭素原子を有する二価の、分枝状または非分枝状、飽和または不飽和の炭化水素鎖であり、前記炭素原子のうち１個以上（例えば１個、２個、３個、または４個）は、（−Ｏ−）または（−Ｎ（Ｈ）−）で場合により置き換えられており、前記鎖は、（Ｃ１〜Ｃ６）アルコキシ、（Ｃ３〜Ｃ６）シクロアルキル、（Ｃ１〜Ｃ６）アルカノイル、（Ｃ１〜Ｃ６）アルカノイルオキシ、（Ｃ１〜Ｃ６）アルコキシカルボニル、（Ｃ１〜Ｃ６）アルキルチオ、アジド、シアノ、ニトロ、ハロ、ヒドロキシ、オキソ（＝Ｏ）、カルボキシ、アリール、アリールオキシ、ヘテロアリール、及びヘテロアリールオキシから選択される１つ以上（例えば１つ、２つ、３つ、または４つ）の置換基で炭素が場合により置換されている、請求項５２〜５６のいずれか１項に記載の化合物、またはその塩。
【請求項６０】
Ｒ３ｄは、固体支持体に結合した結合基への結合であり、前記結合基は、２〜１０個の炭素原子を有する二価の、分枝状または非分枝状、飽和または不飽和の炭化水素鎖であり、前記炭素原子のうち１個以上（例えば１個、２個、３個、または４個）は、（−Ｏ−）または（−Ｎ（Ｈ）−）で場合により置き換えられており、前記鎖は、（Ｃ１〜Ｃ６）アルコキシ、（Ｃ３〜Ｃ６）シクロアルキル、（Ｃ１〜Ｃ６）アルカノイル、（Ｃ１〜Ｃ６）アルカノイルオキシ、（Ｃ１〜Ｃ６）アルコキシカルボニル、（Ｃ１〜Ｃ６）アルキルチオ、アジド、シアノ、ニトロ、ハロ、ヒドロキシ、オキソ（＝Ｏ）、カルボキシ、アリール、アリールオキシ、ヘテロアリール、及びヘテロアリールオキシから選択される１つ以上（例えば１つ、２つ、３つ、または４つ）の置換基で炭素が場合により置換されている、請求項５２〜５６のいずれか１項に記載の化合物、またはその塩。
【請求項６１】
Ｒ３ｄは、固体支持体に結合した結合基への結合であり、前記結合基は、−Ｃ（＝Ｏ）ＣＨ２ＣＨ２Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（Ｈ）−である、請求項５２〜５６のいずれか１項に記載の化合物、またはその塩。
【請求項６２】
請求項５２〜６１のいずれか１項に記載の化合物、またはその薬学的に許容される塩、及び薬学的に許容される担体を含む、医薬組成物。
【請求項６３】
動物の肝臓にｓｉＲＮＡを送達する方法であって、請求項５２〜６１のいずれか１項に記載の式Ｉｄの化合物またはその薬学的に許容される塩を前記動物に投与することを含む、前記方法。
【請求項６４】
請求項４８に記載の式（Ｉｄ）の化合物、またはその塩を調製する方法であって、対応する式（Ｉｅ）の化合物：
【化３５６】
2020516296.tif 000364
（Ｉｅ）
（式中、
Ｘｄは、Ｃ２〜８アルキレンであり、
ｎｄは、０または１であり、
Ｐｇ１は、Ｈであり、
Ｒ３ｄは、固体支持体への共有結合、または固体支持体に結合した結合基への結合である）を、固相核酸合成条件に供し、対応する式Ｉｄの化合物（式中、Ｒ２ｄは、請求項４に記載の二本鎖ｓｉＲＮＡ分子から選択される二本鎖ｓｉＲＮＡ分子である）をもたらすことを含む、前記方法。
【請求項６５】
前記化合物を前記固体支持体から除去して、Ｒ３ｄがＨである対応する式Ｉｄの化合物をもたらすことを更に含む、請求項６４に記載の方法。
【請求項６６】
【化３５７】
2020516296.tif 000365
【化３５８】
2020516296.tif 000366
及び
【化３５９】
2020516296.tif 000367
ならびにそれらの塩からなる群から選択される、請求項５２に記載の化合物、またはその塩。
【請求項６７】
式（Ｉ）の化合物：
【化３６０】
2020516296.tif 000368
（Ｉ）
またはその塩であって、
式中、
Ｒ１は、Ｈまたは合成活性化基であり、
Ｌ１は、存在しないか、または結合基であり、
Ｌ２は、存在しないか、または結合基であり、
Ｒ２は、請求項４に記載の二本鎖ｓｉＲＮＡ分子から選択される二本鎖ｓｉＲＮＡ分子であり、
環Ａは、存在しないか、３〜２０員シクロアルキル、５〜２０員アリール、５〜２０員ヘテロアリール、または３〜２０員ヘテロシクロアルキルであり、
各ＲＡは、独立して、水素、ヒドロキシ、ＣＮ、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、−Ｃ１〜２アルキル−ＯＲＢ、Ｃ１〜１０アルキルＣ２〜１０アルケニル、及びＣ２〜１０アルキニルからなる群から選択され、前記Ｃ１〜１０アルキルＣ２〜１０アルケニル、及びＣ２〜１０アルキニルは、ハロ、ヒドロキシ、及びＣ１〜３アルコキシから独立して選択される１つ以上の基で場合により置換されており、
ＲＢは、水素、保護基、固体支持体への共有結合、または固体支持体に結合した結合基への結合であり、
ｎは、０、１、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０である、
前記化合物、またはその塩。
【請求項６８】
式（Ｉｇ）の化合物：
【化３６１】
2020516296.tif 000369
（Ｉｇ）
またはその塩であり、
式中、
Ｂは、−Ｎ−または−ＣＨ−であり、
Ｌ２は、ヒドロキシルまたはハロで場合により置換されているＣ１〜４アルキレン−Ｏ−であり、
ｎは、０、１、２、３、４、５、６、または７である、
請求項６７に記載の化合物、またはその塩。
【請求項６９】
【化３６２】
2020516296.tif 000370
ならびにそれらの塩からなる群から選択され、
式中、
Ｑは−Ｌ１−Ｒ１であり、
Ｒ’は、Ｃ１〜９アルキル、Ｃ２〜９アルケニル、またはＣ２〜９アルキニルであり、前記Ｃ１〜９アルキル、Ｃ２〜９アルケニル、またはＣ２〜９アルキニルは、ハロまたはヒドロキシルで場合により置換されている、
請求項６７に記載の化合物、またはその塩。
【請求項７０】
【化３６３】
2020516296.tif 000371
ならびにそれらの塩からなる群から選択され、
式中、Ｑは−Ｌ１−Ｒ１である、請求項６７に記載の化合物、またはその塩。
【請求項７１】
Ｒ１は、Ｈ、またはＤＣＣ、ＨＯＢｔ、ＥＤＣ、ＢＯＰ、ＰｙＢＯＰ、もしくはＨＢＴＵから誘導できる合成活性化基である、請求項６６〜７３のいずれか１項に記載の化合物、またはその塩。
【請求項７２】
Ｒ１は、ＤＣＣ、ＨＯＢｔ、ＥＤＣ、ＢＯＰ、ＰｙＢＯＰ、またはＨＢＴＵから誘導できる合成活性化基である、請求項６６〜７３のいずれか１項に記載の化合物、またはその塩。
【請求項７３】
Ｌ１は、５〜２０個の炭素原子を有する二価の、分枝状または非分枝状、飽和または不飽和の炭化水素鎖であり、前記炭化水素鎖中の炭素原子のうち１個以上（例えば１個、２個、３個、または４個）は、場合により置き換えられており、−Ｏ−、−ＮＨ−、−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−、−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ−、または−Ｓ−である、請求項６６〜７７のいずれか１項に記載の化合物、またはその塩。
【請求項７４】
式（ＸＸ）の化合物：
【化３６４】
2020516296.tif 000372
（ＸＸ）
またはその塩であって、
式中、
Ｒ１は、標的化リガンドであり、
Ｌ１は、存在しないか、または結合基であり、
Ｌ２は、存在しないか、または結合基であり、
Ｒ２は、請求項４に記載の二本鎖ｓｉＲＮＡ分子から選択される二本鎖ｓｉＲＮＡ分子であり、
Ｂは、二価であり、かつ、
【化３６５】
2020516296.tif 000373
からなる群から選択され、ここで、
各Ｒ’は、独立して、Ｃ１〜９アルキル、Ｃ２〜９アルケニル、またはＣ２〜９アルキニルであり、前記Ｃ１〜９アルキル、Ｃ２〜９アルケニル、またはＣ２〜９アルキニルは、ハロまたはヒドロキシルで場合により置換されており、
＊が付いた原子価は、Ｌ１に結合しているか、またはＬ１が存在しない場合はＲ１に結合しており、
＊＊が付いた原子価は、Ｌ２に結合しているか、またはＬ２が存在しない場合はＲ２に結合している、
前記化合物、またはその塩。
【請求項７５】
前記標的化リガンドＲ１は、２〜８の糖類を含む、請求項７４に記載の化合物、またはその塩。
【請求項７６】
前記標的化リガンドＲ１は、２〜４の糖類を含む、請求項７４に記載の化合物、またはその塩。
【請求項７７】
前記標的化リガンドＲ１は、３〜８の糖類を含む、請求項７４に記載の化合物、またはその塩。
【請求項７８】
前記標的化リガンドＲ１は、３〜６の糖類を含む、請求項７４に記載の化合物、またはその塩。
【請求項７９】
前記標的化リガンドＲ１は、３〜４の糖類を含む、請求項７４に記載の化合物、またはその塩。
【請求項８０】
前記標的化リガンドＲ１は、３つの糖類を含む、請求項７４に記載の化合物、またはその塩。
【請求項８１】
前記標的化リガンドＲ１は、４つの糖類を含む、請求項７４に記載の化合物、またはその塩。
【請求項８２】
前記標的化部分Ｒ１は、次式：
【化３６６】
2020516296.tif 000374
を有し、
式中、
Ｂ１は、約１個〜約２０個の原子を含む三価基であり、Ｌ１、Ｔ１、及びＴ２に共有結合しており、
Ｂ２は、約１個〜約２０個の原子を含む三価基であり、Ｔ１、Ｔ３、及びＴ４に共有結合しており、
Ｂ３は、約１個〜約２０個の原子を含む三価基であり、Ｔ２、Ｔ５、及びＴ６に共有結合しており、
Ｔ１は、存在しないか、または結合基であり、
Ｔ２は、存在しないか、または結合基であり、
Ｔ３は、存在しないか、または結合基であり、
Ｔ４は、存在しないか、または結合基であり、
Ｔ５は、存在しないか、または結合基であり、
Ｔ６は、存在しないか、または結合基である、
請求項７〜８、３１〜３６、３８〜３９、４０〜４４、４６〜４８、６７〜６９、及び７４のいずれか１項に記載の化合物、またはその塩。
【請求項８３】
各糖類は、独立して、
【化３６７】
2020516296.tif 000375
から選択され、  
式中、
ＸはＮＲ３であり、Ｙは、−（Ｃ＝Ｏ）Ｒ４、−ＳＯ２Ｒ５、及び−（Ｃ＝Ｏ）ＮＲ６Ｒ７から選択されるか、またはＸは−（Ｃ＝Ｏ）−であり、ＹはＮＲ８Ｒ９であり、
Ｒ３は、水素または（Ｃ１〜Ｃ４）アルキルであり、
Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、及びＲ９は、それぞれ独立して、水素、（Ｃ１〜Ｃ８）アルキル、（Ｃ１〜Ｃ８）ハロアルキル、（Ｃ１〜Ｃ８）アルコキシ、ならびにハロ、（Ｃ１〜Ｃ４）アルキル、（Ｃ１〜Ｃ４）ハロアルキル、（Ｃ１〜Ｃ４）アルコキシ、及び（Ｃ１〜Ｃ４）ハロアルコキシからなる群から独立して選択される１つ以上の基で場合により置換されている（Ｃ３〜Ｃ６）シクロアルキルからなる群から選択され、
Ｒ１０は、−ＯＨ、−ＮＲ８Ｒ９、または−Ｆであり、
Ｒ１１は、−ＯＨ、−ＮＲ８Ｒ９、−Ｆ、またはハロ、ヒドロキシル、カルボキシル、アミノ、（Ｃ１〜Ｃ４）アルキル、（Ｃ１〜Ｃ４）ハロアルキル、（Ｃ１〜Ｃ４）アルコキシ、及び（Ｃ１〜Ｃ４）ハロアルコキシからなる群から独立して選択される１つ以上の基で場合により置換されている５員複素環である、
請求項８２に記載の化合物、またはその塩。
【請求項８４】
前記糖類のそれぞれは、独立して、
【化３６８】
2020516296.tif 000376
【化３６９】
2020516296.tif 000377
からなる群から選択される、請求項８２に記載の化合物、またはその塩。
【請求項８５】
各糖類は、独立して、
【化３７０】
2020516296.tif 000378
である、請求項８２に記載の化合物、またはその塩。
【請求項８６】
Ｔ１及びＴ２のうちの一方は存在しない、請求項８２〜８５のいずれか１項に記載の化合物、またはその塩。
【請求項８７】
Ｔ１及びＴ２はいずれも存在しない、請求項８２〜８５のいずれか１項に記載の化合物、またはその塩。
【請求項８８】
Ｔ１、Ｔ２、Ｔ３、Ｔ４、Ｔ５、及びＴ６のそれぞれは、独立して、存在しないか、または１〜５０個の炭素原子を有する分枝状もしくは非分枝状、飽和もしくは不飽和の炭化水素鎖であり、前記炭化水素鎖中の炭素原子のうち１個以上（例えば１個、２個、３個、または４個）は、−Ｏ−、−ＮＲＸ−、−ＮＲＸ−Ｃ（＝Ｏ）−、−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＲＸ−、または−Ｓ−で場合により置き換えられており、ＲＸは、水素または（Ｃ１〜Ｃ６）アルキルであり、前記炭化水素鎖は、（Ｃ１〜Ｃ６）アルコキシ、（Ｃ３〜Ｃ６）シクロアルキル、（Ｃ１〜Ｃ６）アルカノイル、（Ｃ１〜Ｃ６）アルカノイルオキシ、（Ｃ１〜Ｃ６）アルコキシカルボニル、（Ｃ１〜Ｃ６）アルキルチオ、アジド、シアノ、ニトロ、ハロ、ヒドロキシ、オキソ（＝Ｏ）、カルボキシ、アリール、アリールオキシ、ヘテロアリール、及びヘテロアリールオキシから選択される１つ以上（例えば１つ、２つ、３つ、または４つ）の置換基で場合により置換されている、請求項８２〜８５のいずれか１項に記載の化合物、またはその塩。
【請求項８９】
Ｔ１、Ｔ２、Ｔ３、Ｔ４、Ｔ５、及びＴ６のそれぞれは、独立して、存在しないか、または１〜２０個の炭素原子を有する分枝状もしくは非分枝状、飽和もしくは不飽和の炭化水素鎖であり、前記炭化水素鎖中の炭素原子のうち１個以上（例えば１個、２個、３個、または４個）は、−Ｏ−、−ＮＲＸ−、−ＮＲＸ−Ｃ（＝Ｏ）−、−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＲＸ−、または−Ｓ−で場合により置き換えられており、ＲＸは、水素または（Ｃ１〜Ｃ６）アルキルであり、前記炭化水素鎖は、（Ｃ１〜Ｃ６）アルコキシ、（Ｃ３〜Ｃ６）シクロアルキル、（Ｃ１〜Ｃ６）アルカノイル、（Ｃ１〜Ｃ６）アルカノイルオキシ、（Ｃ１〜Ｃ６）アルコキシカルボニル、（Ｃ１〜Ｃ６）アルキルチオ、アジド、シアノ、ニトロ、ハロ、ヒドロキシ、オキソ（＝Ｏ）、カルボキシ、アリール、アリールオキシ、ヘテロアリール、及びヘテロアリールオキシから選択される１つ以上（例えば１つ、２つ、３つ、または４つ）の置換基で場合により置換されている、請求項８２〜８５のいずれか１項に記載の化合物、またはその塩。
【請求項９０】
Ｔ１、Ｔ２、Ｔ３、Ｔ４、Ｔ５、及びＴ６のそれぞれは、独立して、存在しないか、または１〜５０個の炭素原子を有する分枝状もしくは非分枝状、飽和もしくは不飽和の炭化水素鎖、またはその塩であり、前記炭化水素鎖中の炭素原子のうち１個以上（例えば１個、２個、３個、または４個）は、−Ｏ−または−ＮＲＸ−で場合により置き換えられており、ＲＸは、水素または（Ｃ１〜Ｃ６）アルキルであり、前記炭化水素鎖は、ハロ、ヒドロキシ、及びオキソ（＝Ｏ）から選択される１つ以上（例えば１つ、２つ、３つ、または４つ）の置換基で場合により置換されている、請求項８２〜８５のいずれか１項に記載の化合物、またはその塩。
【請求項９１】
Ｔ１、Ｔ２、Ｔ３、Ｔ４、Ｔ５、及びＴ６のそれぞれは、独立して、存在しないか、または１〜２０個の炭素原子を有する分枝状もしくは非分枝状、飽和もしくは非飽和の炭化水素鎖であり、前記炭化水素鎖中の炭素原子のうち１個以上（例えば１個、２個、３個、または４個）は、−Ｏ−で場合により置き換えられており、前記炭化水素鎖は、ハロ、ヒドロキシ、及びオキソ（＝Ｏ）から選択される１つ以上（例えば１つ、２つ、３つ、または４つ）の置換基で場合により置換されている、請求項８２〜８５のいずれか１項に記載の化合物、またはその塩。
【請求項９２】
Ｔ１、Ｔ２、Ｔ３、Ｔ４、Ｔ５、及びＴ６のそれぞれは、独立して、存在しないか、または１〜２０個の炭素原子を有する分枝状もしくは非分枝状、飽和もしくは非飽和の炭化水素鎖であり、前記炭化水素鎖中の炭素原子のうち１個以上（例えば１個、２個、３個、または４個）は、−Ｏ−で場合により置き換えられており、前記炭化水素鎖は、ハロ、ヒドロキシ、及びオキソ（＝Ｏ）から選択される１つ以上（例えば１つ、２つ、３つ、または４つ）の置換基で場合により置換されている、請求項８２〜８５のいずれか１項に記載の化合物、またはその塩。
【請求項９３】
Ｔ３、Ｔ４、Ｔ５、及びＴ６のうち少なくとも１つは、
【化３７１】
2020516296.tif 000379
であり、
式中、
ｎ＝１、２、３である、
請求項８２〜８５のいずれか１項に記載の化合物、またはその塩。
【請求項９４】
Ｔ３、Ｔ４、Ｔ５、及びＴ６のそれぞれは、独立して、
【化３７２】
2020516296.tif 000380
からなる群から選択され、
式中、
ｎ＝１、２、３である、
請求項８２〜８５のいずれか１項に記載の化合物、またはその塩。
【請求項９５】
Ｔ１及びＴ２のうち少なくとも１つはグリシンである、請求項８２〜８５のいずれか１項に記載の化合物、またはその塩。
【請求項９６】
Ｔ１及びＴ２のそれぞれはグリシンである、請求項８２〜８５のいずれか１項に記載の化合物、またはその塩。
【請求項９７】
Ｂ１は、１〜１５個の原子を含む三価基であり、Ｌ１、Ｔ１、及びＴ２に共有結合している、請求項８２〜９６のいずれか１項に記載の化合物、またはその塩。
【請求項９８】
Ｂ１は、１〜１０個の原子を含む三価基であり、Ｌ１、Ｔ１、及びＴ２に共有結合している、請求項８２〜９６のいずれか１項に記載の化合物、またはその塩。
【請求項９９】
Ｂ１は（Ｃ１〜Ｃ６）アルキルを含む、請求項８２〜９６のいずれか１項に記載の化合物、またはその塩。
【請求項１００】
Ｂ１はＣ３〜８シクロアルキルを含む、請求項８２〜９６のいずれか１項に記載の化合物、またはその塩。
【請求項１０１】
Ｂ１はシリル基を含む、請求項８２〜９６のいずれか１項に記載の化合物、またはその塩。
【請求項１０２】
Ｂ１はＤ−アミノ酸またはＬ−アミノ酸を含む、請求項８２〜９６のいずれか１項に記載の化合物、またはその塩。
【請求項１０３】
Ｂ１は糖類を含む、請求項８２〜９６のいずれか１項に記載の化合物、またはその塩。
【請求項１０４】
Ｂ１はリン酸基を含む、請求項８２〜９６のいずれか１項に記載の化合物、またはその塩。
【請求項１０５】
Ｂ１はホスホン酸基を含む、請求項８２〜９６のいずれか１項に記載の化合物、またはその塩。
【請求項１０６】
Ｂ１はアリールを含む、請求項８２〜９６のいずれか１項に記載の化合物、またはその塩。
【請求項１０７】
Ｂ１はフェニル環を含む、請求項８２〜９６のいずれか１項に記載の化合物、またはその塩。
【請求項１０８】
Ｂ１はフェニル環である、請求項８２〜９６のいずれか１項に記載の化合物、またはその塩。
【請求項１０９】
Ｂ１はＣＨである、請求項８２〜９６のいずれか１項に記載の化合物、またはその塩。
【請求項１１０】
Ｂ１はヘテロアリールを含む、請求項８２〜９６のいずれか１項に記載の化合物、またはその塩。
【請求項１１１】
Ｂ１は、
【化３７３】
2020516296.tif 000381
である、請求項８２〜９６のいずれか１項に記載の化合物、またはその塩。
【請求項１１２】
Ｂ２は、１〜１５個の原子を含む三価基であり、Ｌ１、Ｔ１、及びＴ２に共有結合している、請求項８２〜１１１のいずれか１項に記載の化合物、またはその塩。
【請求項１１３】
Ｂ２は、１〜１０個の原子を含む三価基であり、Ｌ１、Ｔ１、及びＴ２に共有結合している、請求項８２〜１１１のいずれか１項に記載の化合物、またはその塩。
【請求項１１４】
Ｂ２は（Ｃ１〜Ｃ６）アルキルを含む、請求項８２〜１１１のいずれか１項に記載の化合物、またはその塩。
【請求項１１５】
Ｂ２はＣ３〜８シクロアルキルを含む、請求項８２〜１１１のいずれか１項に記載の化合物、またはその塩。
【請求項１１６】
Ｂ２はシリル基を含む、請求項８２〜１１１のいずれか１項に記載の化合物、またはその塩。
【請求項１１７】
Ｂ２はＤ−アミノ酸またはＬ−アミノ酸を含む、請求項８２〜１１１のいずれか１項に記載の化合物、またはその塩。
【請求項１１８】
Ｂ２は糖類を含む、請求項８２〜１１１のいずれか１項に記載の化合物、またはその塩。
【請求項１１９】
Ｂ２はリン酸基を含む、請求項８２〜１１１のいずれか１項に記載の化合物、またはその塩。
【請求項１２０】
Ｂ２はホスホン酸基を含む、請求項８２〜１１１のいずれか１項に記載の化合物、またはその塩。
【請求項１２１】
Ｂ２はアリールを含む、請求項８２〜１１１のいずれか１項に記載の化合物、またはその塩。
【請求項１２２】
Ｂ２はフェニル環を含む、請求項８２〜１１１のいずれか１項に記載の化合物、またはその塩。
【請求項１２３】
Ｂ２はフェニル環である、請求項８２〜１１１のいずれか１項に記載の化合物、またはその塩。
【請求項１２４】
Ｂ２はＣＨである、請求項８２〜１１１のいずれか１項に記載の化合物、またはその塩。
【請求項１２５】
Ｂ２はヘテロアリールを含む、請求項８２〜１１１のいずれか１項に記載の化合物、またはその塩。
【請求項１２６】
Ｂ２は、
【化３７４】
2020516296.tif 000382
からなる群から選択される、請求項８２〜１１１のいずれか１項に記載の化合物、またはその塩。
【請求項１２７】
Ｂ３は、１〜１５個の原子を含む三価基であり、Ｌ１、Ｔ１、及びＴ２に共有結合している、請求項８２〜１２６のいずれか１項に記載の化合物、またはその塩。
【請求項１２８】
Ｂ３は、１〜１０個の原子を含む三価基であり、Ｌ１、Ｔ１、及びＴ２に共有結合している、請求項８２〜１２６のいずれか１項に記載の化合物、またはその塩。
【請求項１２９】
Ｂ３は（Ｃ１〜Ｃ６）アルキルを含む、請求項８２〜１２６のいずれか１項に記載の化合物、またはその塩。
【請求項１３０】
Ｂ３はＣ３〜８シクロアルキルを含む、請求項８２〜１２６のいずれか１項に記載の化合物、またはその塩。
【請求項１３１】
Ｂ３はシリル基を含む、請求項８２〜１２６のいずれか１項に記載の化合物、またはその塩。
【請求項１３２】
Ｂ３はＤ−アミノ酸またはＬ−アミノ酸を含む、請求項８２〜１２６のいずれか１項に記載の化合物、またはその塩。
【請求項１３３】
Ｂ３は糖類を含む、請求項８２〜１２６のいずれか１項に記載の化合物、またはその塩。
【請求項１３４】
Ｂ３はリン酸基を含む、請求項８２〜１２６のいずれか１項に記載の化合物、またはその塩。
【請求項１３５】
Ｂ３はホスホン酸基を含む、請求項８２〜１２６のいずれか１項に記載の化合物、またはその塩。
【請求項１３６】
Ｂ３はアリールを含む、請求項８２〜１２６のいずれか１項に記載の化合物、またはその塩。
【請求項１３７】
Ｂ３はフェニル環を含む、請求項８２〜１２６のいずれか１項に記載の化合物、またはその塩。
【請求項１３８】
Ｂ３はフェニル環である、請求項８２〜１２６のいずれか１項に記載の化合物、またはその塩。
【請求項１３９】
Ｂ３はＣＨである、請求項８２〜１２６のいずれか１項に記載の化合物、またはその塩。
【請求項１４０】
Ｂ３はヘテロアリールを含む、請求項８２〜１２６のいずれか１項に記載の化合物、またはその塩。
【請求項１４１】
Ｂ３は、
【化３７５】
2020516296.tif 000383
またはそれらの塩からなる群から選択される、請求項８２〜１２６のいずれか１項に記載の化合物、またはその塩。
【請求項１４２】
Ｌ１及びＬ２は、独立して、１〜５０個の炭素原子を有する二価の、分枝状または非分枝状、飽和または不飽和の炭化水素鎖であり、前記炭化水素鎖中の炭素原子のうち１個以上（例えば１個、２個、３個、または４個）は、−Ｏ−、−ＮＲＸ−、−ＮＲＸ−Ｃ（＝Ｏ）−、−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＲＸ−、または−Ｓ−で場合により置き換えられており、ＲＸは、水素または（Ｃ１〜Ｃ６）アルキルであり、前記炭化水素鎖は、（Ｃ１〜Ｃ６）アルコキシ、（Ｃ３〜Ｃ６）シクロアルキル、（Ｃ１〜Ｃ６）アルカノイル、（Ｃ１〜Ｃ６）アルカノイルオキシ、（Ｃ１〜Ｃ６）アルコキシカルボニル、（Ｃ１〜Ｃ６）アルキルチオ、アジド、シアノ、ニトロ、ハロ、ヒドロキシ、オキソ（＝Ｏ）、カルボキシ、アリール、アリールオキシ、ヘテロアリール、及びヘテロアリールオキシから選択される１つ以上の置換基で場合により置換されている、請求項８７〜１４６のいずれか１項に記載の化合物、またはその塩。
【請求項１４３】
Ｌ１は、
【化３７６】
2020516296.tif 000384
またはそれらの塩からなる群から選択される、請求項８２〜１４１のいずれか１項に記載の化合物、またはその塩。
【請求項１４４】
Ｌ１は、−Ｏ−、−Ｓ−、−（Ｃ＝Ｏ）−、−（Ｃ＝Ｏ）−ＮＨ−、−ＮＨ−（Ｃ＝Ｏ）、−（Ｃ＝Ｏ）−Ｏ−、−ＮＨ−（Ｃ＝Ｏ）−ＮＨ−、または−ＮＨ−（ＳＯ２）−からなる群から選択される結合を介してＢ１に結合している、請求項８２〜１４１のいずれか１項に記載の化合物、またはその塩。
【請求項１４５】
Ｌ１は、
【化３７７】
2020516296.tif 000385
からなる群から選択される、請求項８７〜１４１のいずれか１項に記載の化合物、またはその塩。
【請求項１４６】
Ｌ２は、−Ｏ−を介してＲ２に結合している、請求項８２〜１４５のいずれか１項に記載の化合物、またはその塩。
【請求項１４７】
Ｌ２は、ヒドロキシで場合により置換されているＣ１〜４アルキレン−Ｏ−である、請求項８２〜１４５のいずれか１項に記載の化合物、またはその塩。
【請求項１４８】
Ｌ２は、−Ｏ−を介してＲ２に結合している、請求項８２〜１４５のいずれか１項に記載の化合物、またはその塩。
【請求項１４９】
Ｌ２は存在しない、請求項８２〜１４５のいずれか１項に記載の化合物、またはその塩。
【請求項１５０】
【化３７８】
2020516296.tif 000386
【化３７９】
2020516296.tif 000387
【化３８０】
2020516296.tif 000388
【化３８１】
2020516296.tif 000389
【化３８２】
2020516296.tif 000390
【化３８３】
2020516296.tif 000391
【化３８４】
2020516296.tif 000392
及び
【化３８５】
2020516296.tif 000393
ならびにそれらの薬学的に許容される塩からなる群から選択され、式中、Ｒ２は、請求項４に記載の二本鎖ｓｉＲＮＡ分子から選択される二本鎖ｓｉＲＮＡ分子である、
請求項８７に記載の化合物、またはその塩。
【請求項１５１】
化合物
【化３８６】
2020516296.tif 000394
またはその塩であって、式中、Ｒ２は、請求項４に記載の二本鎖ｓｉＲＮＡ分子から選択される二本鎖ｓｉＲＮＡ分子である、前記化合物またはその塩。
【請求項１５２】
式ＸのＧａｌＮＡｃコンジュゲート：
Ａ−Ｂ−Ｃ
（Ｘ）
であって、
式中、Ａは標的化リガンドであり、
Ｂは、任意選択のリンカーであり、
Ｃは、請求項４に記載のｓｉＲＮＡ分子である、
前記ＧａｌＮＡｃコンジュゲート。
【請求項１５３】
次式の化合物：
【化３８７】
2020516296.tif 000395
またはその薬学的に許容される塩であって、式中、Ｒ２は、請求項４に記載の二本鎖ｓｉＲＮＡ分子から選択される二本鎖ｓｉＲＮＡ分子である、
前記化合物、またはその薬学的に許容される塩。
【請求項１５４】
次式の化合物：
【化３８８】
2020516296.tif 000396
またはその薬学的に許容される塩であって、式中、Ｒ２は、請求項４に記載の二本鎖ｓｉＲＮＡ分子から選択される二本鎖ｓｉＲＮＡ分子である）、
前記化合物、またはその薬学的に許容される塩。
【請求項１５５】
次式の化合物：
【化３８９】
2020516296.tif 000397
またはその薬学的に許容される塩であって、式中、Ｒ２は、請求項４に記載の二本鎖ｓｉＲＮＡ分子から選択される二本鎖ｓｉＲＮＡ分子である）、
前記化合物、またはその薬学的に許容される塩。
【請求項１５６】
次式の化合物：
【化３９０】
2020516296.tif 000398
またはその薬学的に許容される塩であって、式中、Ｒ２は、請求項４に記載の二本鎖ｓｉＲＮＡ分子から選択される二本鎖ｓｉＲＮＡ分子である、
前記化合物、またはその薬学的に許容される塩。
【請求項１５７】
次式の化合物：
【化３９１】
2020516296.tif 000399
またはその薬学的に許容される塩であって、式中、Ｒ２は、請求項４に記載の二本鎖ｓｉＲＮＡ分子から選択される二本鎖ｓｉＲＮＡ分子である、
前記化合物、またはその薬学的に許容される塩。
【請求項１５８】
次式の化合物：
【化３９２】
2020516296.tif 000400
またはその薬学的に許容される塩であって、式中、Ｒ２は、請求項４に記載の二本鎖ｓｉＲＮＡ分子から選択される二本鎖ｓｉＲＮＡ分子である、
前記化合物、またはその薬学的に許容される塩。
【請求項１５９】
次式の化合物：
【化３９３】
2020516296.tif 000401
またはその薬学的に許容される塩であって、式中、Ｒ２は、請求項４に記載の二本鎖ｓｉＲＮＡ分子から選択される二本鎖ｓｉＲＮＡ分子である、
前記化合物、またはその薬学的に許容される塩。
【請求項１６０】
次式の化合物：
【化３９４】
2020516296.tif 000402
またはその薬学的に許容される塩であって、式中、Ｒ２は、請求項４に記載の二本鎖ｓｉＲＮＡ分子から選択される二本鎖ｓｉＲＮＡ分子である、
前記化合物、またはその薬学的に許容される塩。
【請求項１６１】
次式の化合物：
【化３９５】
2020516296.tif 000403
またはその薬学的に許容される塩であって、式中、Ｒ２は、請求項４に記載の二本鎖ｓｉＲＮＡ分子から選択される二本鎖ｓｉＲＮＡ分子である、
前記化合物、またはその薬学的に許容される塩。
【請求項１６２】
次式の化合物：
【化３９６】
2020516296.tif 000404
またはその薬学的に許容される塩であって、式中、Ｒ２は、請求項４に記載の二本鎖ｓｉＲＮＡ分子から選択される二本鎖ｓｉＲＮＡ分子である、
前記化合物、またはその薬学的に許容される塩。
【請求項１６３】
次式の化合物：
【化３９７】
2020516296.tif 000405
またはその薬学的に許容される塩であって、式中、Ｒ２は、請求項４に記載の二本鎖ｓｉＲＮＡ分子から選択される二本鎖ｓｉＲＮＡ分子である、
前記化合物、またはその薬学的に許容される塩。
【請求項１６４】
次式の化合物：
【化３９８】
2020516296.tif 000406
またはその薬学的に許容される塩であって、式中、Ｒ２は、請求項４に記載の二本鎖ｓｉＲＮＡ分子から選択される二本鎖ｓｉＲＮＡ分子である、
前記化合物、またはその薬学的に許容される塩。
【請求項１６５】
次式の化合物：
【化３９９】
2020516296.tif 000407
またはその薬学的に許容される塩であって、式中、Ｒ２は、請求項４に記載の二本鎖ｓｉＲＮＡ分子から選択される二本鎖ｓｉＲＮＡ分子である、
前記化合物、またはその薬学的に許容される塩。
【請求項１６６】
次式の化合物：
【化４００】
2020516296.tif 000408
またはその薬学的に許容される塩。
【請求項１６７】
次式の化合物：
【化４０１】
2020516296.tif 000409
またはその薬学的に許容される塩。
【請求項１６８】
次式の化合物：
【化４０２】
2020516296.tif 000410
またはその薬学的に許容される塩。
【請求項１６９】
次式の化合物：
【化４０３】
2020516296.tif 000411
またはその薬学的に許容される塩。
【請求項１７０】
次式の化合物：
【化４０４】
2020516296.tif 000412
またはその薬学的に許容される塩。
【請求項１７１】
次式の化合物：
【化４０５】
2020516296.tif 000413
またはその薬学的に許容される塩。
【請求項１７２】
次式の化合物：
【化４０６】
2020516296.tif 000414
またはその薬学的に許容される塩。
【請求項１７３】
次式の化合物：
【化４０７】
2020516296.tif 000415
またはその薬学的に許容される塩。
【請求項１７４】
式（Ｉ）の化合物：
【化４０８】
2020516296.tif 000416
またはその塩であって、
式中、
Ｌ１は、存在しないか、または結合基であり、
Ｌ２は、存在しないか、または結合基であり、
Ｒ２は、核酸であり、
環Ａは、存在しないか、３〜２０員シクロアルキル、５〜２０員アリール、５〜２０員ヘテロアリール、または３〜２０員ヘテロシクロアルキルであり、
各ＲＡは、独立して、水素、ヒドロキシ、ＣＮ、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、−Ｃ１〜２アルキル−ＯＲＢ、Ｃ１〜１０アルキルＣ２〜１０アルケニル、及びＣ２〜１０アルキニルからなる群から選択され、前記Ｃ１〜１０アルキルＣ２〜１０アルケニル、及びＣ２〜１０アルキニルは、ハロ、ヒドロキシ、及びＣ１〜３アルコキシから独立して選択される１つ以上の基で場合により置換されており、
ＲＢは、水素、保護基、固体支持体への共有結合、または固体支持体に結合した結合基への結合であり、
ｎは、０、１、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０である、
前記化合物、またはその塩。
【請求項１７５】
式（Ｉａ）の化合物：
【化４０９】
2020516296.tif 000417
またはその塩であって、
式中、
Ｌ２は、存在しないか、または結合基であり、
Ｒ２は、核酸であり、
環Ａは、存在しないか、３〜２０員シクロアルキル、５〜２０員アリール、５〜２０員ヘテロアリール、または３〜２０員ヘテロシクロアルキルであり、
各ＲＡは、独立して、水素、ヒドロキシ、ＣＮ、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、−Ｃ１〜２アルキル−ＯＲＢ、Ｃ１〜１０アルキルＣ２〜１０アルケニル、及びＣ２〜１０アルキニルからなる群から選択され、前記Ｃ１〜１０アルキルＣ２〜１０アルケニル、及びＣ２〜１０アルキニルは、ハロ、ヒドロキシ、及びＣ１〜３アルコキシから独立して選択される１つ以上の基で場合により置換されており、
ＲＢは、水素、保護基、固体支持体への共有結合、または固体支持体に結合した結合基への結合であり、
ｎは、０、１、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０である、
前記化合物、またはその塩。
【請求項１７６】
式（ＸＸ）の化合物：
【化４１０】
2020516296.tif 000418
またはその塩であって、
式中、
Ｌ１は、存在しないか、または結合基であり、
Ｌ２は、存在しないか、または結合基であり、
Ｒ２は、核酸であり、
Ｂは、二価であり、かつ、
【化４１１】
2020516296.tif 000419
からなる群から選択され、ここで、
各Ｒ’は、独立して、Ｃ１〜９アルキル、Ｃ２〜９アルケニル、またはＣ２〜９アルキニルであり、前記Ｃ１〜９アルキル、Ｃ２〜９アルケニル、またはＣ２〜９アルキニルは、ハロまたはヒドロキシルで場合により置換されており、
＊が付いた原子価は、Ｌ１に結合しているか、またはＬ１が存在しない場合はＲ１に結合しており、
＊＊が付いた原子価は、Ｌ２に結合しているか、またはＬ２が存在しない場合はＲ２に結合している、
前記化合物、またはその塩。
【請求項１７７】
Ｌ１及びＬ２は、独立して、１〜５０個の炭素原子を有する二価の、分枝状または非分枝状、飽和または不飽和の炭化水素鎖であり、前記炭化水素鎖中の炭素原子のうち１個以上（例えば１個、２個、３個、または４個）は、−Ｏ−、−ＮＲＸ−、−ＮＲＸ−Ｃ（＝Ｏ）−、−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＲＸ−、または−Ｓ−で場合により置き換えられており、ＲＸは、水素または（Ｃ１〜Ｃ６）アルキルであり、前記炭化水素鎖は、（Ｃ１〜Ｃ６）アルコキシ、（Ｃ３〜Ｃ６）シクロアルキル、（Ｃ１〜Ｃ６）アルカノイル、（Ｃ１〜Ｃ６）アルカノイルオキシ、（Ｃ１〜Ｃ６）アルコキシカルボニル、（Ｃ１〜Ｃ６）アルキルチオ、アジド、シアノ、ニトロ、ハロ、ヒドロキシ、オキソ（＝Ｏ）、カルボキシ、アリール、アリールオキシ、ヘテロアリール、及びヘテロアリールオキシから選択される１つ以上の置換基で場合により置換されている、請求項１７５に記載の化合物、またはその塩。
【請求項１７８】
Ｌ１は、
【化４１２】
2020516296.tif 000420
またはそれらの塩からなる群から選択される、請求項１７６に記載の化合物、またはその塩。
【請求項１７９】
Ｌ１は、−Ｏ−、−Ｓ−、−（Ｃ＝Ｏ）−、−（Ｃ＝Ｏ）−ＮＨ−、−ＮＨ−（Ｃ＝Ｏ）、−（Ｃ＝Ｏ）−Ｏ−、−ＮＨ−（Ｃ＝Ｏ）−ＮＨ−、または−ＮＨ−（ＳＯ２）−からなる群から選択される結合を介してＢ１に結合している、請求項１７６に記載の化合物、またはその塩。
【請求項１８０】
Ｌ１は、
【化４１３】
2020516296.tif 000421
からなる群から選択される、請求項１７６に記載の化合物、またはその塩。
【請求項１８１】
Ｌ２は、−Ｏ−を介してＲ２に結合している、請求項１７６に記載の化合物、またはその塩。
【請求項１８２】
Ｌ２は、ヒドロキシで場合により置換されているＣ１〜４アルキレン−Ｏ−である、請求項１７６に記載の化合物、またはその塩。
【請求項１８３】
Ｌ２は存在しない、請求項１７６に記載の化合物、またはその塩。
【請求項１８４】
化合物
【化４１４】
2020516296.tif 000422
またはその塩であって、式中、Ｒ２は核酸である、
前記化合物、またはその塩。
【請求項１８５】
化合物
【化４１５】
2020516296.tif 000423
またはその塩であって、式中、Ｒ２は核酸である、
前記化合物、またはその塩。
【請求項１８６】
化合物
【化４１６】
2020516296.tif 000424
またはその塩であって、式中、Ｒ２は核酸である、
前記化合物、またはその塩。
【請求項１８７】
Ｒ２は、請求項４に記載の二本鎖ｓｉＲＮＡ分子から選択される二本鎖ｓｉＲＮＡ分子である、請求項１７４〜１８６のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項１８８】
請求項１７４〜１８６のいずれか１項に記載の化合物、またはその薬学的に許容される塩、及び薬学的に許容される担体を含む、医薬組成物。
【請求項１８９】
動物の肝臓にｓｉＲＮＡを送達する方法であって、請求項１７４〜１８６のいずれか１項に記載の式Ｉの化合物またはその薬学的に許容される塩を前記動物に投与することを含む、前記方法。
【請求項１９０】
動物のＢ型肝炎ウイルス感染を処置する方法であって、請求項１〜４９、５２〜６１、または１７４〜１８６のいずれか１項に記載の式ＩもしくはＩｄの化合物またはその薬学的に許容される塩を、有効量で前記動物に投与することを含む、前記方法。
【請求項１９１】
式ＩもしくはＩｄの前記化合物またはその薬学的に許容される塩が皮下投与される、請求項１９０に記載の方法。
【請求項１９２】
医学療法に使用するための、請求項１〜４９、５２〜６１、または１７４〜１８６のいずれか１項に記載の式ＩもしくはＩｄの化合物、またはその薬学的に許容される塩。
【請求項１９３】
動物のＢ型肝炎ウイルス感染の予防処置または治療処置のための、請求項１〜４９、５２〜６１、または１７４〜１８６のいずれか１項に記載の式ＩもしくはＩｄの化合物、またはその薬学的に許容される塩。
【請求項１９４】
動物のＢ型肝炎ウイルス感染を処置するための薬物を調製するための、請求項１〜４９、５２〜６１、または１７４〜１８６のいずれか１項に記載の式ＩもしくはＩｄの化合物、またはその薬学的に許容される塩の使用。
【請求項１９５】
前記動物はヒトである、請求項１９０〜１９４のいずれか１項に記載の方法、化合物、または使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願の相互参照
本特許出願は、２０１７年６月２６日に出願された米国特許出願第６２／５２５，０７１号、及び２０１７年４月１１日に出願された米国特許出願第６２／４８４，２４７号に基づく優先権の利益を主張する。これらの出願は、参照により本明細書に組み込まれる。
【背景技術】
【０００２】
例えばＢ型肝炎及び非アルコール性脂肪性肝炎（ＮＡＳＨ）のようないくつかの疾患は、肝臓に特異的である。したがって、生きている対象の肝臓、腎臓、心臓、膵臓、または他の器官を主に標的とすることができる治療用組成物があれば有益であろう。
【０００３】
ｓｉＲＮＡを含む核酸は、治療剤として有用である。
【０００４】
現在、生きている対象に二本鎖ｓｉＲＮＡなどの治療用核酸を送達（例えば、標的化）するために使用することができる組成物及び方法が必要とされている。
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【０００５】
本発明は、核酸分子（例えば、治療用二本鎖ｓｉＲＮＡ分子）、ならびにかかる核酸を（例えば肝臓に）標的化するために使用することができる化合物、組成物、及び方法を提供する。
【０００６】
したがって、一態様において本発明は、ｓｉＲＮＡ  １（配列番号１及び２）、２（配列番号３及び４）、３（配列番号５及び６）、４（配列番号７及び８）、５（配列番号９及び１０）、６（配列番号１１及び１２）、７（配列番号１３及び１４）、８（配列番号１５及び１６）、９（配列番号１７及び１８）、１０（配列番号１９及び２０）、１１（配列番号２１及び２２）、１２（配列番号２３及び２４）、１３（配列番号２５及び２６）、１４（配列番号２７及び２８）、１５（配列番号２９及び３０）、１６（配列番号３１及び３２）、１７（配列番号３３及び３４）、１８（配列番号３５及び３６）、１９（配列番号３７及び３８）、２０（配列番号３９及び４０）、２１（配列番号４１及び４２）、２２（配列番号４３及び４４）、２３（配列番号４５及び４６）、２４（配列番号４７及び４８）、２５（配列番号４９及び５０）、２６（配列番号５１及び５２）、２７（配列番号５３及び５４）、２８（配列番号５５及び５６）、２９（配列番号５７及び５８）、３０（配列番号５９及び６０）、３１（配列番号６１及び６２）、３２（配列番号６３及び６４）、３３（配列番号６５及び６６）、３４（配列番号６７及び６８）、３５（配列番号６９及び７０）、３６（配列番号７１及び７２）、及び３７（配列番号７３及び７４）からなる群から選択される二本鎖ｓｉＲＮＡ分子を提供する。
【０００７】
本発明の別の態様は、式Ｉの化合物
【化１】
2020516296.tif 000003
（Ｉ）
またはその塩を提供し、式中、
Ｒ１は、標的化リガンドであり、
Ｌ１は、存在しないか、または結合基であり、
Ｌ２は、存在しないか、または結合基であり、
Ｒ２は、表１の二本鎖ｓｉＲＮＡから選択される二本鎖ｓｉＲＮＡ分子であり、
環Ａは、存在しないか、３〜２０員シクロアルキル、５〜２０員アリール、５〜２０員ヘテロアリール、または３〜２０員ヘテロシクロアルキルであり、
各ＲＡは、独立して、水素、ヒドロキシ、ＣＮ、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、−Ｃ１〜２アルキル−ＯＲＢ、Ｃ１〜１０アルキルＣ２〜１０アルケニル、及びＣ２〜１０アルキニルからなる群から選択され、このＣ１〜１０アルキルＣ２〜１０アルケニル、及びＣ２〜１０アルキニルは、ハロ、ヒドロキシ、及びＣ１〜３アルコキシから独立して選択される１つ以上の基で場合により置換されており、
ＲＢは、水素、保護基、固体支持体への共有結合、または固体支持体に結合した結合基への結合であり、
ｎは、０、１、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０である。
【０００８】
本発明の別の態様は、本明細書に記載されるｓｉＲＮＡのうちの１つを含むＧａｌＮＡｃコンジュゲートを提供し、このコンジュゲートは、本明細書に開示されるリガンド−リンカーを含むコンジュゲートに限定されない。例えば、本発明のある態様は、式ＸのＧａｌＮＡｃコンジュゲート：
Ａ−Ｂ−Ｃ
（Ｘ）
を提供し、式中、
Ａは標的化リガンドであり、
Ｂは、任意選択のリンカーであり、
Ｃは、本明細書に記載のｓｉＲＮＡ分子である。
【０００９】
本明細書に記載の治療用二本鎖ｓｉＲＮＡ、ならびにかかるｓｉＲＮＡを含む化合物及び組成物は、Ｂ型肝炎ウイルス及びＢ型肝炎ウイルス／Ｄ型肝炎ウイルスを処置するために使用され得る。
【００１０】
本発明は、式Ｉの化合物を調製するために有用である、本明細書に開示される合成中間体及び方法も提供する。
【００１１】
当業者には、以下の詳細な説明及び図面から、本発明の他の目的、特徴、及び利点が明らかになるであろう。
【図面の簡単な説明】
【００１２】
【図１】標的化リガンド／リンカーが固相支持体に結合しており、Ｐｇ１が保護基ＤＭＴｒである、式Ｉｅの中間体化合物を例示する図である。
【図２】標的化リガンドが固相支持体に結合しており、核酸が共有結合した、式Ｉｄの代表的な化合物を例示する図である。
【図３】式Ｉの化合物をもたらすように、標的化リガンド−核酸コンジュゲートが固相支持体から切断され、脱保護されている、式Ｉｄの代表的な化合物を例示する図である。
【発明を実施するための形態】
【００１３】
図、実施例、及びスキームを含め、本出願において、オリゴヌクレオチドは、表１に記載の二本鎖ｓｉＲＮＡ分子であり得ることを理解されたい。
【００１４】
本明細書で使用される場合、以下の用語は、別段の定めがない限り、それらに帰せられる意味を有する。
【００１５】
本明細書で使用される「コンジュゲート」という用語は、標的化リガンドに結合したオリゴヌクレオチド（例えば、ｓｉＲＮＡ分子）を含む式（Ｉ）の化合物を含む。したがって、化合物及びコンジュゲートという用語は、本明細書では交換可能に使用され得る。
【００１６】
本明細書で使用される「低分子干渉ＲＮＡ」または「ｓｉＲＮＡ」という用語は、ｓｉＲＮＡが標的遺伝子または配列と同じ細胞内にあるとき、（例えば、ｓｉＲＮＡ配列と相補的なｍＲＮＡの分解を媒介するか、またはその翻訳を阻害することによって）標的遺伝子または配列の発現を低減または阻害することができる二本鎖ＲＮＡ（すなわち、二重鎖ＲＮＡ）を指す。ｓｉＲＮＡは、標的遺伝子または配列と実質的もしくは完全な同一性を有する場合もあれば、またはミスマッチの領域（すなわち、ミスマッチモチーフ）を含む場合もある。ある特定の実施形態において、ｓｉＲＮＡは、約１９〜２５（二重鎖）ヌクレオチド長であってよく、好ましくは、約２０〜２４、２１〜２２、または２１〜２３（二重鎖）ヌクレオチド長である。ｓｉＲＮＡ二重鎖は、約１〜約４ヌクレオチドまたは約２〜約３ヌクレオチドの３’オーバーハング、及び５’リン酸末端を含み得る。ｓｉＲＮＡの例としては、限定されるものではないが、一方の鎖がセンス鎖であり、他方が相補的なアンチセンス鎖である、２本の別々の鎖状分子から構築された二本鎖ポリヌクレオチド分子が挙げられる。
【００１７】
ある特定の実施形態において、ｓｉＲＮＡの一方または両方の鎖の５’及び／または３’オーバーハングは、１〜４つ（例えば、１つ、２つ、３つ、または４つ）の修飾及び／または未修飾デオキシチミジン（ｔまたはｄＴ）ヌクレオチド、１〜４つ（例えば、１つ、２つ、３つ、または４つ）の修飾（例えば、２’ＯＭｅ）及び／または未修飾ウリジン（Ｕ）リボヌクレオチド、及び／または、標的配列（例えば、アンチセンス鎖の３’オーバーハング）もしくはその相補鎖（例えば、センス鎖の３’オーバーハング）との相補性を有する１〜４つ（例えば、１つ、２つ、３つ、または４つ）の修飾（例えば、２’ＯＭｅ）及び／または未修飾リボヌクレオチドもしくはデオキシリボヌクレオチドを含む。
【００１８】
好ましくは、ｓｉＲＮＡは化学合成される。ｓｉＲＮＡは、より長いｄｓＲＮＡ（例えば、約２５ヌクレオチドを超える長さのｄｓＲＮＡ）をＥ．ｃｏｌｉ  ＲＮａｓｅ  ＩＩＩまたはダイサーで切断することによって生成することもできる。これらの酵素は、ｄｓＲＮＡをプロセシングして、生物活性のあるｓｉＲＮＡにする（例えば、Ｙａｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，９９：９９４２−９９４７（２００２）、Ｃａｌｅｇａｒｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，９９：１４２３６（２００２）、Ｂｙｒｏｍ  ｅｔ  ａｌ．，Ａｍｂｉｏｎ  ＴｅｃｈＮｏｔｅｓ，１０（１）：４−６（２００３）、Ｋａｗａｓａｋｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．，３１：９８１−９８７（２００３）、Ｋｎｉｇｈｔ  ｅｔ  ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ，２９３：２２６９−２２７１（２００１）、及びＲｏｂｅｒｔｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，２４３：８２（１９６８）を参照されたい）。好ましくは、ｄｓＲＮＡは、少なくとも５０ヌクレオチド〜約１００、２００、３００、４００、または５００ヌクレオチドの長さである。ｄｓＲＮＡは、１０００、１５００、２０００、５０００ヌクレオチド長ほどの長さ、またはこれを超える長さであってもよい。ｄｓＲＮＡは、遺伝子転写物の全体または部分的な遺伝子転写物をコードし得る。ある特定の事例では、ｓｉＲＮＡは、プラスミドによってコードされる（例えば、ヘアピンループを有する二重鎖に自動的にフォールディングする配列として転写される）場合がある。
【００１９】
「標的遺伝子の発現を阻害する」という表現は、標的遺伝子の発現をサイレンシング、低減、または阻害する本発明のｓｉＲＮＡの能力を指す。遺伝子サイレンシングの程度を検査するためには、標的遺伝子の発現をサイレンシング、低減、または阻害するｓｉＲＮＡに、試験試料（例えば、標的遺伝子を発現する目的の生物から得た生体試料、または標的遺伝子を発現する培養細胞の試料）を接触させる。この試験試料中の標的遺伝子の発現を、ｓｉＲＮＡに接触させていない対照試料（例えば、標的遺伝子を発現する目的の生物から得た生体試料、または標的遺伝子を発現する培養細胞の試料）中の標的遺伝子の発現と比較する。対照試料（例えば、標的遺伝子を発現する試料）には、１００％の値を割り当てることができる。特定の実施形態では、対照試料（例えば、バッファーのみ、異なる遺伝子を標的とするｓｉＲＮＡ配列、スクランブルｓｉＲＮＡ配列など）に対して、試験試料の値が、約１００％、９９％、９８％、９７％、９６％、９５％、９４％、９３％、９２％、９１％、９０％、８９％、８８％、８７％、８６％、８５％、８４％、８３％、８２％、８１％、８０％、７９％、７８％、７７％、７６％、７５％、７０％、６５％、６０％、５５％、５０％、４５％、４０％、３５％、３０％、２５％、２０％、１５％、１０％、５％、または０％であるとき、標的遺伝子の発現のサイレンシング、阻害、または低減が達成される。好適なアッセイとしては、限定されるものではないが、例えば、ドットブロット、ノーザンブロット、インサイツハイブリダイゼーション、ＥＬＩＳＡ、免疫沈降、酵素機能などの当業者に公知の技術を使用したタンパク質またはｍＲＮＡレベルの検査、ならびに当業者に公知の表現型アッセイが挙げられる。
【００２０】
「合成活性化基」という用語は、原子に結合し、その原子を活性化して別の反応基と共有結合を形成させることができる基を指す。合成活性化基の性質は、それが活性化させている原子に左右され得ることが理解される。例えば、合成活性化基が酸素原子に結合している場合、合成活性化基は、その酸素原子を活性化して、別の反応基と結合（例えば、エステル結合、カルバメート結合、またはエーテル結合）を形成させる基である。そのような合成活性化基は公知である。酸素原子に結合し得る合成活性化基の例としては、アセテート、サクシネート、トリフレート、及びメシレートが挙げられるが、これらに限定されない。合成活性化基がカルボン酸の酸素原子に結合している場合、合成活性化基は、公知のカップリング試薬（例えば、公知のアミドカップリング試薬）から誘導される基であり得る。そのようなカップリング試薬は公知である。そのようなカップリング試薬の例としては、Ｎ，Ｎ’−ジシクロヘキシルカルボジイミド（ＤＣＣ）、ヒドロキシベンゾトリアゾール（ＨＯＢｔ）、Ｎ−（３−ジメチルアミノプロピル）−Ｎ’−エチルカーボネート（ＥＤＣ）、（ベンゾトリアゾール−１−イルオキシ）トリス（ジメチルアミノ）ホスホニウムヘキサフルオロホスフェート（ＢＯＰ）、ベンゾトリアゾール−１−イル−オキシトリピロリジノホスホニウムヘキサフルオロホスフェート（ＰｙＢＯＰ）、またはＯ−ベンゾトリアゾール−１−イル−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスフェート（ＨＢＴＵ）が挙げられるが、これらに限定されない。
【００２１】
ｓｉＲＮＡなどの治療用核酸の「有効量」または「治療有効量」とは、所望の効果、例えば、ｓｉＲＮＡの非存在下で検出される通常の発現レベルと比較した、標的配列の発現の阻害をもたらすのに十分な量である。特定の実施形態では、対照（例えば、バッファーのみ、異なる遺伝子を標的とするｓｉＲＮＡ配列、スクランブルｓｉＲＮＡ配列など）に対して、ｓｉＲＮＡで得られる値が、約１００％、９９％、９８％、９７％、９６％、９５％、９４％、９３％、９２％、９１％、９０％、８９％、８８％、８７％、８６％、８５％、８４％、８３％、８２％、８１％、８０％、７９％、７８％、７７％、７６％、７５％、７０％、６５％、６０％、５５％、５０％、４５％、４０％、３５％、３０％、２５％、２０％、１５％、１０％、５％、または０％であるとき、標的遺伝子または標的配列の発現の阻害が達成される。標的遺伝子または標的配列の発現を測定するために好適なアッセイとしては、例えば、ドットブロット、ノーザンブロット、インサイツハイブリダイゼーション、ＥＬＩＳＡ、免疫沈降、酵素機能などの当業者に公知の技術を使用したタンパク質またはｍＲＮＡレベルの検査、ならびに当業者に公知の表現型アッセイが挙げられるが、これらに限定されない。
【００２２】
本明細書で使用される「核酸」という用語は、一本鎖または二本鎖のいずれかの形態で、少なくとも２つのヌクレオチド（すなわち、デオキシリボヌクレオチドまたはリボヌクレオチド）を含有するポリマーを指し、ＤＮＡ及びＲＮＡを含む。「ヌクレオチド」は、糖のデオキシリボース（ＤＮＡ）またはリボース（ＲＮＡ）、塩基、及びリン酸基を含有する。ヌクレオチドは、リン酸基を介してひとつに結合する。「塩基」にはプリン及びピリミジンが含まれ、これらには、プリン及びピリミジンの天然化合物であるアデニン、チミン、グアニン、シトシン、ウラシル、イノシン、及び天然類似体、ならびに合成誘導体が更に含まれ、合成誘導体は、例えばアミン、アルコール、チオール、カルボキシレート、及びハロゲン化アルキルなどだがこれらに限定されない新しい反応基を配置する修飾を含むが、これに限定されない。核酸には、合成のもの、天然に存在するもの、及び天然に存在しないものであり、かつ参照核酸と同様の結合特性を有する、公知のヌクレオチド類似体または修飾された骨格残基もしくは結合を含有する核酸が含まれる。そのような類似体及び／または修飾残基の例としては、限定されるものではないが、ホスホロチオエート、ホスホルアミデート、メチルホスホネート、キラル−メチルホスホネート、２’−Ｏ−メチルリボヌクレオチド、及びペプチド核酸（ＰＮＡ）が挙げられる。更に、核酸は、１つ以上のＵＮＡ部分を含み得る。
【００２３】
「核酸」という用語には、任意のオリゴヌクレオチドまたはポリヌクレオチドが含まれ、最大６０個のヌクレオチドを含有する断片は一般的にオリゴヌクレオチドと称され、より長い断片はポリヌクレオチドと称される。デオキシリボオリゴヌクレオチドは、デオキシリボースと呼ばれる５炭素糖が、この糖の５’炭素及び３’炭素でリン酸と共有結合して、交互の非分枝状ポリマーを形成したものからなる。ＤＮＡは、例えば、アンチセンス分子、プラスミドＤＮＡ、予め凝縮されたＤＮＡ、ＰＣＲ産物、ベクター、発現カセット、キメラ配列、染色体ＤＮＡ、またはこれらの群の誘導体及び組み合わせの形態であってよい。リボオリゴヌクレオチドは、５炭素糖がリボースである同様の反復構造からなる。ＲＮＡは、例えば、低分子干渉ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）、ダイサー基質ｄｓＲＮＡ、低分子ヘアピンＲＮＡ（ｓｈＲＮＡ）、非対称干渉ＲＮＡ（ａｉＲＮＡ）、マイクロＲＮＡ（ｍｉＲＮＡ）、ｍＲＮＡ、ｔＲＮＡ、ｒＲＮＡ、ｔＲＮＡ、ウイルスＲＮＡ（ｖＲＮＡ）、及びそれらの組み合わせの形態であり得る。したがって、本発明との関連において、「ポリヌクレオチド」及び「オリゴヌクレオチド」という用語は、天然に存在する塩基、糖、及び糖間（骨格）結合からなるヌクレオチドまたはヌクレオシドモノマーのポリマーまたはオリゴマーを指す。「ポリヌクレオチド」及び「オリゴヌクレオチド」という用語には、同様に機能する天然に存在しないモノマーまたはその一部分を含むポリマーまたはオリゴマーも含まれる。そのような修飾または置換されたオリゴヌクレオチドは、例えば、増強された細胞取り込み、低減した免疫原性、及びヌクレアーゼの存在下における増加した安定性などの特性を理由として、天然型よりも好ましいことが多い。
【００２４】
別段の記載がない限り、特定の核酸配列は、明示される配列だけでなく、その保存的に修飾された変異体（例えば、縮重コドン置換）、対立遺伝子、オルソログ、ＳＮＰ、及び相補配列を暗に包含する。特に、縮重コドン置換は、１つ以上の選択された（または全ての）コドンの第３位が混合塩基及び／またはデオキシイノシン残基で置換されている配列を生成することにより達成され得る（Ｂａｔｚｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄ  Ｒｅｓ．，１９：５０８１（１９９１）、Ｏｈｔｓｕｋａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，２６０：２６０５−２６０８（１９８５）、Ｒｏｓｓｏｌｉｎｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ．Ｐｒｏｂｅｓ，８：９１−９８（１９９４））。
【００２５】
「遺伝子」という用語は、ポリペプチドまたは前駆体ポリペプチドの産生に必要な部分長または全長のコード配列を含む核酸（例えば、ＤＮＡまたはＲＮＡ）配列を指す。
【００２６】
本明細書で使用される「遺伝子産物」とは、ＲＮＡ転写物またはポリペプチドなどの遺伝子の産物を指す。
【００２７】
本明細書で使用される「アルキル」という用語は、別段の記載がない限り、単独で、または別の置換基の一部として、指定された数の炭素原子を有する（すなわち、Ｃ１〜８は炭素数１〜８を意味する）直鎖または分枝鎖の炭化水素基を意味する。アルキル基の例としては、メチル、エチル、ｎ−プロピル、イソプロピル、ｎ−ブチル、ｔ−ブチル、イソブチル、ｓｅｃ−ブチル、ｎ−ペンチル、ｎ−ヘキシル、ｎ−ヘプチル、ｎ−オクチルなどが挙げられる。「アルケニル」という用語は、１つ以上の二重結合を有する不飽和アルキル基を指す。同様に、「アルキニル」という用語は、１つ以上の三重結合を有する不飽和アルキル基を指す。そのような不飽和アルキル基の例としては、ビニル、２−プロペニル、クロチル、２−イソペンテニル、２−（ブタジエニル）、２，４−ペンタジエニル、３−（１，４−ペンタジエニル）、エチニル、１−プロピニル及び３−プロピニル、３−ブチニル、ならびに高級同族体及び異性体が挙げられる。
【００２８】
「アルキレン」という用語は、単独で、または別の置換基の一部として、−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２−及び−ＣＨ（ＣＨ３）ＣＨ２ＣＨ２−によって例示されるような、アルカン（直鎖状アルカン及び分枝状アルカンを含む）に由来する二価基を意味する。
【００２９】
「シクロアルキル」、「炭素環式」、または「炭素環」という用語は、全環原子数が３〜２０の炭化水素環系を指し（例えば、３〜２０員シクロアルキルは、環原子数３〜２０のシクロアルキルであり、またはＣ３〜２０シクロアルキルは、炭素環原子数３〜２０のシクロアルキルである）、３〜５員シクロアルキルの場合、完全に飽和しているか、または環頂点間に１つを超える二重結合を有しないものであり、６員以上のシクロアルキルの場合、完全に飽和しているか、または環の頂点間に２つを超える二重結合を有しないものである。本明細書で使用される場合、「シクロアルキル」、「炭素環式」、または「炭素環」とは、例えば、ビシクロ［２．２．１］ヘプタン、ピナン、ビシクロ［２．２．２］オクタン、アダマンタン、ノルボルネン、スピロ環式Ｃ５〜１２アルカンなどの、二環式、多環式、及びスピロ環式の炭化水素環系を指すことも意図される。本明細書で使用される場合、「アルケニル」、「アルキニル」、「シクロアルキル」、「炭素環」、及び「炭素環式」という用語は、それらのモノハロゲン化変異体及びポリハロゲン化変異体を含むよう意図される。
【００３０】
「ヘテロシクロアルキル」、「複素環式」、または「複素環」という用語は、環原子として、Ｎ、Ｏ、及びＳから選択される１〜１０個のヘテロ原子を含有する、全環原子数が３〜２０の飽和または部分的に不飽和の環系基を指し（例えば、３〜２０員ヘテロシクロアルキルは、環原子数３〜２０のヘテロシクロアルキル基であり、Ｃ２〜１９ヘテロシクロアルキルは、環原子数３〜１０であり、２〜１９個の環原子が炭素であるヘテロシクロアルキルである）、ここで、窒素原子及び硫黄原子は、場合により酸化されており、窒素原子（複数可）は、場合により四級化されている。別段の記載がない限り、「ヘテロシクロアルキル」、「複素環式」、または「複素環」の環は、単環式、二環式、スピロ環式、または多環式の環系であり得る。「ヘテロシクロアルキル」、「複素環式」、または「複素環」の環の非限定的な例としては、ピロリジン、ピペリジン、Ｎ−メチルピペリジン、イミダゾリジン、ピラゾリジン、ブチロラクタム、バレロラクタム、イミダゾリジノン、ヒダントイン、ジオキソラン、フタルイミド、ピペリジン、ピリミジン−２，４（１Ｈ，３Ｈ）−ジオン、１，４−ジオキサン、モルホリン、チオモルホリン、チオモルホリン−Ｓ−オキシド、チオモルホリン−Ｓ，Ｓ−オキシド、ピペラジン、ピラン、ピリドン、３−ピロリン、チオピラン、ピロン、テトラヒドロフラン、テトラヒドロチオフェン、キヌクリジン、トロパン、２−アザスピロ［３．３］ヘプタン、（１Ｒ，５Ｓ）−３−アザビシクロ［３．２．１］オクタン、（１ｓ，４ｓ）−２−アザビシクロ［２．２．２］オクタン、（１Ｒ，４Ｒ）−２−オキサ−５−アザビシクロ［２．２．２］オクタンなどが挙げられる。「ヘテロシクロアルキル」、「複素環式」、または「複素環」基は、１つ以上の環炭素またはヘテロ原子を介して分子の残部に結合することができる。「ヘテロシクロアルキル」、「複素環式」、または「複素環」は、それらのモノハロゲン化変異体及びポリハロゲン化変異体を含み得る。
【００３１】
「アルコキシ」及び「アルキルチオ」という用語は、それらの従来的な意味で使用され、酸素原子（「オキシ」）またはチオ基を介して分子の残部に結合したアルキル基を指し、それらのモノハロゲン化変異体及びポリハロゲン化変異体を更に含む。
【００３２】
「ハロ」または「ハロゲン」という用語は、単独で、または別の置換基の一部として、別段の記載がない限り、フッ素原子、塩素原子、臭素原子、またはヨウ素原子を意味する。「（ハロ）アルキル」という用語は、「アルキル」置換基及び「ハロアルキル」置換基の両方を含むよう意図される。更に、「ハロアルキル」という用語は、モノハロアルキル及びポリハロアルキルを含むよう意図される。例えば、「Ｃ１〜４ハロアルキル」という用語は、トリフルオロメチル、２，２，２−トリフルオロエチル、４−クロロブチル、３−ブロモプロピル、ジフルオロメチルなどを含むよう意図される。
【００３３】
「アリール」という用語は、１つ以上の基に縮合しているか否かを問わず、６〜１４個の炭素原子を有する炭素環式の芳香族基を意味する。アリール基の例としては、別段の記載がない限り、フェニル、ナフチル、ビフェニルなどが挙げられる。
【００３４】
「ヘテロアリール」という用語は、Ｎ、Ｏ、及びＳから選択される１〜５個のヘテロ原子を含有するアリール環（複数可）を指し、ここで、窒素原子及び硫黄原子は、場合により酸化されており、窒素原子（複数可）は、場合により四級化されている。ヘテロアリール基は、ヘテロ原子を介して分子の残部に結合することができる。ヘテロアリール基の例としては、ピリジル、ピリダジニル、ピラジニル、ピリミジニル、トリアジニル、キノリニル、キノキサリニル、キナゾリニル、シンノリニル、フタラジニル、ベンゾトリアジニル、プリニル、ベンズイミダゾリル、ベンゾピラゾリル、ベンゾトリアゾリル、ベンゾイソオキサゾリル、イソベンゾフリル、イソインドリル、インドリジニル、ベンゾトリアジニル、チエノピリジニル、チエノピリミジニル、ピラゾロピリミジニル、イミダゾピリジン、ベンゾチアキソリル、ベンゾフラニル、ベンゾチエニル、インドリル、キノリル、イソキノリル、イソチアゾリル、ピラゾリル、インダゾリル、プテリジニル、イミダゾリル、トリアゾリル、テトラゾリル、オキサゾリル、イソオキサゾリル、チアジアゾリル、ピロリル、チアゾリル、フリル、チエニルなどが挙げられる。
【００３５】
糖類という用語には、単糖、二糖、及び三糖が含まれる。この用語には、グルコース、スクロース、フルクトース、ガラクトース、及びリボース、ならびにデオキシリボースなどのデオキシ糖及びガラクトサミンなどのアミノ糖が含まれる。糖類誘導体は、好都合なことに、国際特許出願公開第ＷＯ９６／３４００５号及び同第９７／０３９９５号に記載されるように調製することができる。糖類は、好都合に、エーテル結合、チオエーテル結合（例えばＳ−グリコシド）、アミン窒素（例えばＮ−グリコシド）、または炭素間結合（例えばＣ−グリコシド）を介して、式Ｉの化合物の残部に結合することができる。一実施形態において、糖類は、好都合に、エーテル結合を介して式Ｉの化合物の残部に結合することができる。一実施形態において、糖類という用語は、次式：
【化２】
2020516296.tif 000004
の基を含み、式中、
ＸはＮＲ３であり、Ｙは、−（Ｃ＝Ｏ）Ｒ４、−ＳＯ２Ｒ５、及び−（Ｃ＝Ｏ）ＮＲ６Ｒ７から選択されるか、またはＸは−（Ｃ＝Ｏ）−であり、ＹはＮＲ８Ｒ９であり、
Ｒ３は、水素または（Ｃ１〜Ｃ４）アルキルであり、
Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、及びＲ９は、それぞれ独立して、水素、（Ｃ１〜Ｃ８）アルキル、（Ｃ１〜Ｃ８）ハロアルキル、（Ｃ１〜Ｃ８）アルコキシ、ならびにハロ、（Ｃ１〜Ｃ４）アルキル、（Ｃ１〜Ｃ４）ハロアルキル、（Ｃ１〜Ｃ４）アルコキシ、及び（Ｃ１〜Ｃ４）ハロアルコキシからなる群から独立して選択される１つ以上の基で場合により置換されている（Ｃ３〜Ｃ６）シクロアルキルからなる群から選択され、
Ｒ１０は、−ＯＨ、−ＮＲ８Ｒ９、または−Ｆであり、
Ｒ１１は、−ＯＨ、−ＮＲ８Ｒ９、−Ｆ、またはハロ、ヒドロキシル、カルボキシル、アミノ、（Ｃ１〜Ｃ４）アルキル、（Ｃ１〜Ｃ４）ハロアルキル、（Ｃ１〜Ｃ４）アルコキシ、及び（Ｃ１〜Ｃ４）ハロアルコキシからなる群から独立して選択される１つ以上の基で場合により置換されている５員複素環である。別の実施形態では、糖類は、
【化３】
2020516296.tif 000005
からなる群から選択することができる。
【００３６】
別の実施形態では、糖類は、
【化４】
2020516296.tif 000006
であってよい。
【００３７】
「動物」という用語には、ヒト、マウス、ラット、イヌ、ネコ、ハムスター、モルモット、ウサギ、家畜などの哺乳動物種が含まれる。
【００３８】
「脂質」という用語は、脂肪酸のエステルを含むがこれに限定されず、水に不溶であるが多くの有機溶媒に溶解することを特徴とする有機化合物の群を指す。脂質は通常、（１）脂肪及び油ならびにワックスを含む「単純脂質」、（２）リン脂質及び糖脂質を含む「複合脂質」、及び（３）ステロイドなどの「誘導脂質」という少なくとも３つのクラスに分けられる。
【００３９】
「脂質粒子」という用語には、治療用核酸（例えば、ｓｉＲＮＡ）を目的の標的部位（例えば、細胞、組織、器官など）に送達するために使用することができる脂質製剤が含まれる。好ましい実施形態において、本発明の脂質粒子は核酸−脂質粒子であり、これは典型的には、カチオン性脂質と、非カチオン性脂質（例えばリン脂質）と、粒子の凝集を防止するコンジュゲート脂質（例えばＰＥＧ−脂質）と、場合によりコレステロールとから形成される。典型的には、治療用核酸（例えば、ｓｉＲＮＡ）は、酵素分解から保護されるように、粒子の脂質部分に封入され得る。
【００４０】
「高電子密度コア」という用語は、本発明の脂質粒子について説明するために使用される場合、クライオ透過型電子顕微鏡（「クライオＴＥＭ」）を使用して可視化したときに暗く見える脂質粒子の内部を指す。本発明の脂質粒子のいくつかは、高電子密度コアを有し、脂質二重層構造をもたない。本発明の脂質粒子のいくつかは、高電子密度コアを有し、脂質二重層構造をもたず、逆六方相または立方相構造を有する。理論に束縛されることを望むものではないが、非二重層脂質の充填は、水及び核が内部にある脂質シリンダーの３次元ネットワーク、すなわち本質的には核酸を含有する脂肪滴が浸透した水性チャネルをもたらすと考えられる。
【００４１】
本明細書で使用される場合、「ＳＮＡＬＰ」という用語は、安定な核酸−脂質粒子を指す。ＳＮＡＬＰは、脂質（例えば、カチオン性脂質、非カチオン性脂質、及び粒子の凝集を防止するコンジュゲート脂質）から作られた粒子であり、この脂質内に核酸（例えばｓｉＲＮＡ）が完全に封入されている。ある特定の事例では、ＳＮＡＬＰは、静脈内（ｉ．ｖ．）注射後の長期の循環寿命を呈することができ、遠位部位（例えば、投与部位から物理的に分離した部位）で蓄積することができ、これらの遠位部位においてｓｉＲＮＡ発現を媒介することができるため、全身適用に極めて有用である。核酸は、ＰＣＴ公開第ＷＯ００／０３６８３号（その開示内容は、あらゆる目的でその全体が参照により本明細書に組み込まれている）に記述されているように、縮合剤と複合体を形成し、ＳＮＡＬＰ内に封入されていてよい。
【００４２】
本発明の脂質粒子（例えば、ＳＮＡＬＰ）は、典型的には、約３０ｎｍ〜約１５０ｎｍ、約４０ｎｍ〜約１５０ｎｍ、約５０ｎｍ〜約１５０ｎｍ、約６０ｎｍ〜約１３０ｎｍ、約７０ｎｍ〜約１１０ｎｍ、約７０ｎｍ〜約１００ｎｍ、約８０ｎｍ〜約１００ｎｍ、約９０ｎｍ〜約１００ｎｍ、約７０〜約９０ｎｍ、約８０ｎｍ〜約９０ｎｍ、約７０ｎｍ〜約８０ｎｍ、または約３０ｎｍ、３５ｎｍ、４０ｎｍ、４５ｎｍ、５０ｎｍ、５５ｎｍ、６０ｎｍ、６５ｎｍ、７０ｎｍ、７５ｎｍ、８０ｎｍ、８５ｎｍ、９０ｎｍ、９５ｎｍ、１００ｎｍ、１０５ｎｍ、１１０ｎｍ、１１５ｎｍ、１２０ｎｍ、１２５ｎｍ、１３０ｎｍ、１３５ｎｍ、１４０ｎｍ、１４５ｎｍ、または１５０ｎｍの平均直径を有し、実質的に無毒である。加えて、核酸は、本発明の脂質粒子中に存在する場合、水溶液中でヌクレアーゼによる分解に耐性がある。核酸−脂質粒子及びそれらの調製方法は、例えば、米国特許公開第２００４０１４２０２５号及び同第２００７００４２０３１号に開示されており、これらの開示内容は、あらゆる目的でその全体が参照により本明細書に組み込まれている。
【００４３】
本明細書で使用される場合、「脂質に封入された」とは、ｓｉＲＮＡなどの治療用核酸に、完全な封入、部分的な封入、または両方をもたらす脂質粒子を指すことができる。好ましい実施形態において、核酸（例えば、ｓｉＲＮＡ）は、（例えば、ＳＮＡＬＰまたは他の核酸−脂質粒子を形成するように）脂質粒子中に完全に封入されている。
【００４４】
「脂質コンジュゲート」という用語は、脂質粒子の凝集を阻害するコンジュゲート脂質を指す。そのような脂質コンジュゲートとしては、ＰＥＧ−脂質コンジュゲート、例えば、ジアルキルオキシプロピルにカップリングされたＰＥＧ（例えば、ＰＥＧ−ＤＡＡコンジュゲート）、ジアシルグリセロールにカップリングされたＰＥＧ（例えば、ＰＥＧ−ＤＡＧコンジュゲート）、コレステロールにカップリングされたＰＥＧ、ホスファチジルエタノールアミンにカップリングされたＰＥＧ、及びセラミドにカップリングされたＰＥＧ（例えば、米国特許第５，８８５，６１３号を参照されたい）、カチオン性ＰＥＧ脂質、ポリオキサゾリン（ＰＯＺ）−脂質コンジュゲート、ポリアミドオリゴマー（例えば、ＡＴＴＡ−脂質コンジュゲート）、ならびにそれらの混合物が挙げられるが、これらに限定されない。ＰＯＺ−脂質コンジュゲートの更なる例は、ＰＣＴ公開第ＷＯ２０１０／００６２８２号に記載されている。ＰＥＧまたはＰＯＺは、脂質に直接コンジュゲートされていてもよいし、またはリンカー部分を介して脂質に結合していてもよい。例えば、エステル不含リンカー部分及びエステル含有リンカー部分を含め、ＰＥＧまたはＰＯＺを脂質にカップリングするために好適な任意のリンカー部分を使用することができる。ある特定の好ましい実施形態では、エステル不含リンカー部分、例えばアミドまたはカルバメートが使用される。上記特許文献のそれぞれの開示内容は、あらゆる目的でその全体が参照により本明細書に組み込まれている。
【００４５】
「両親媒性脂質」という用語は、ひとつには、脂質物質の疎水性部分が疎水性相に向かい、親水性部分が水相に向かう、任意の好適な物質を指す。親水性の特徴は、極性基または荷電基、例えば炭水化物基、リン酸基、カルボン酸基、スルファト基、アミノ基、スルフヒドリル基、ニトロ基、ヒドロキシル基、及び他の同様の基の存在に由来する。疎水性は、長鎖の飽和及び不飽和の脂肪族炭化水素基、ならびにこのような基が１つ以上の芳香族基、脂環式基、または複素環式基（複数可）で置換されたものを含むがこれらに限定されない、無極性基の包含によってもたらされ得る。両親媒性化合物の例としては、リン脂質、アミノ脂質、及びスフィンゴ脂質が挙げられるが、これらに限定されない。
【００４６】
リン脂質の代表例としては、ホスファチジルコリン、ホスファチジルエタノールアミン、ホスファチジルセリン、ホスファチジルイノシトール、ホスファチジン酸、パルミトイルオレオイルホスファチジルコリン、リゾホスファチジルコリン、リゾホスファチジルエタノールアミン、ジパルミトイルホスファチジルコリン、ジオレオイルホスファチジルコリン、ジステアロイルホスファチジルコリン、及びジリノレオイルホスファチジルコリンが挙げられるが、これらに限定されない。リンを欠いている他の化合物、例えばスフィンゴ脂質、スフィンゴ糖脂質ファミリー、ジアシルグリセロール、及びβ−アシルオキシ酸も、両親媒性脂質と指定される群に含まれる。更に、上述の両親媒性脂質は、トリグリセリド及びステロールを含む他の脂質と混合することができる。
【００４７】
「中性脂質」という用語は、選択されたｐＨにおいて無電荷または中性の双性イオン形態のいずれかで存在するいくつかの脂質種のうちのいずれかを指す。生理的ｐＨにおいて、そのような脂質は、例えば、ジアシルホスファチジルコリン、ジアシルホスファチジルエタノールアミン、セラミド、スフィンゴミエリン、セファリン、コレステロール、セレブロシド、及びジアシルグリセロールを含む。
【００４８】
「非カチオン性脂質」という用語は、任意の両親媒性脂質、及び任意の他の中性脂質またはアニオン性脂質を指す。
【００４９】
「アニオン性脂質」という用語は、生理的ｐＨで負に帯電している任意の脂質を指す。これらの脂質には、限定されるものではないが、ホスファチジルグリセロール、カルジオリピン、ジアシルホスファチジルセリン、ジアシルホスファチジン酸、Ｎ−ドデカノイルホスファチジルエタノールアミン、Ｎ−サクシニルホスファチジルエタノールアミン、Ｎ−グルタリルホスファチジルエタノールアミン、リジルホスファチジルグリセロール、パルミトイルオレオイルホスファチジルグリセロール（ＰＯＰＧ）、及び他のアニオン性修飾基が中性脂質に結合したものが含まれる。
【００５０】
「疎水性脂質」という用語は、長鎖の飽和及び不飽和の脂肪族炭化水素基、ならびにこのような基が１つ以上の芳香族基、脂環式基、または複素環式基（複数可）で場合により置換されているものを含むがこれらに限定されない、無極性基を有する化合物を指す。好適な例としては、ジアシルグリセロール、ジアルキルグリセロール、Ｎ−Ｎ−ジアルキルアミノ、１，２−ジアシルオキシ−３−アミノプロパン、及び１，２−ジアルキル−３−アミノプロパンが挙げられるが、これらに限定されない。
【００５１】
本明細書において、「カチオン性脂質」及び「アミノ脂質」という用語は、１つ、２つ、３つ、またはそれ以上の脂肪酸または脂肪アルキル鎖と、ｐＨ滴定可能なアミノ頭部基（例えば、アルキルアミノまたはジアルキルアミノ頭部基）とを有する脂質及びそれらの塩を含むよう、交換可能に使用される。カチオン性脂質は、典型的には、カチオン性脂質のｐＫａを下回るｐＨではプロトン化（すなわち正に帯電）しており、ｐＫａを上回るｐＨでは実質的に中性である。本発明のカチオン性脂質は、滴定可能なカチオン性脂質と称される場合もある。いくつかの実施形態では、カチオン性脂質は、プロトン化可能な三級アミン（例えばｐＨ滴定可能な）頭部基、各アルキル鎖が独立して０〜３（例えば、０、１、２、または３つ）の二重結合を有するＣ１８アルキル鎖、及び頭部基とアルキル鎖との間のエーテル結合、エステル結合、またはケタール結合を含む。そのようなカチオン性脂質としては、ＤＳＤＭＡ、ＤＯＤＭＡ、ＤＬｉｎＤＭＡ、ＤＬｅｎＤＭＡ、γ−ＤＬｅｎＤＭＡ、ＤＬｉｎ−Ｋ−ＤＭＡ、ＤＬｉｎ−Ｋ−Ｃ２−ＤＭＡ（別称ＤＬｉｎ−Ｃ２Ｋ−ＤＭＡ、ＸＴＣ２、及びＣ２Ｋ）、ＤＬｉｎ−Ｋ−Ｃ３−ＤＭＡ、ＤＬｉｎ−Ｋ−Ｃ４−ＤＭＡ、ＤＬｅｎ−Ｃ２Ｋ−ＤＭＡ、γ−ＤＬｅｎ−Ｃ２Ｋ−ＤＭＡ、ＤＬｉｎ−Ｍ−Ｃ２−ＤＭＡ（別称ＭＣ２）、ＤＬｉｎ−Ｍ−Ｃ３−ＤＭＡ（別称ＭＣ３）、及び（ＤＬｉｎ−ＭＰ−ＤＭＡ）（別称１−Ｂ１１）が挙げられるが、これらに限定されない。
【００５２】
「アルキルアミノ」という用語は、式−Ｎ（Ｈ）Ｒの基を含み、式中、Ｒは本明細書で定義されるアルキルである。
【００５３】
「ジアルキルアミノ」という用語は、式−ＮＲ２の基を含み、式中、各Ｒは独立して、本明細書で定義されるアルキルである。
【００５４】
「塩」という用語は、カチオン性脂質と１つ以上のアニオンとの間に形成された錯体など、任意のアニオンとカチオンとの錯体を含む。アニオンの非限定的な例としては、無機アニオン及び有機アニオン、例えば、水素化物、フッ化物、塩化物、臭化物、ヨウ化物、シュウ酸（例えば、ヘミオキサレート）、リン酸、ホスホン酸、リン酸水素、リン酸二水素、酸化物、炭酸、炭酸水素、硝酸、亜硝酸、窒化物、亜硫酸水素、硫化物、亜硫酸、重硫酸、硫酸、チオ硫酸、硫酸水素、ホウ酸、ギ酸、酢酸、安息香酸、クエン酸、酒石酸、乳酸、アクリル酸、ポリアクリル酸、フマル酸、マレイン酸、イタコン酸、グリコール酸、グルコン酸、リンゴ酸、マンデル酸、チグリン酸、アスコルビン酸、サリチル酸、ポリメタクリル酸、過塩素酸、塩素酸、亜塩素酸、次亜塩素酸、臭素酸、次亜臭素酸、ヨウ素酸、アルキルスルホネート、アリールスルホネート、ヒ酸、亜ヒ酸、クロム酸、二クロム酸、シアン化物、シアン酸、チオシアン酸、水酸化物、過酸化物、過マンガン酸、及びそれらの混合物が挙げられる。特定の実施形態では、本明細書に開示されるカチオン性脂質の塩は、結晶塩である。
【００５５】
「アシル」という用語には、以下に定義するように、結合点における炭素がオキソ基で置換されている、任意のアルキル、アルケニル、またはアルキニルが含まれる。以下は、アシル基の非限定的な例である：−Ｃ（＝Ｏ）アルキル、−Ｃ（＝Ｏ）アルケニル、及び−Ｃ（＝Ｏ）アルキニル。
【００５６】
「膜融合性」という用語は、ＳＮＡＬＰなどの脂質粒子が細胞の膜と融合する能力を指す。この膜は、細胞膜か、または例えば、エンドソーム、核などのオルガネラを包囲する膜かのいずれであってもよい。
【００５７】
本明細書で使用される場合、「水溶液」という用語は、水を全体または一部に含む組成物を指す。
【００５８】
本明細書で使用される場合、「有機脂質溶液」という用語は、脂質を有する有機溶媒を全体または一部に含む組成物を指す。
【００５９】
本明細書で使用される「遠位部位」とは、物理的に分離した部位を指し、隣接する毛細血管床に限定されず、生物全体に広く分布する部位を含む。
【００６０】
ＳＮＡＬＰなどの核酸−脂質粒子に関する「血清安定性」とは、遊離ＤＮＡまたはＲＮＡを著しく分解する血清またはヌクレアーゼアッセイへの曝露後に粒子が著しく分解されないことを意味する。好適なアッセイとしては、例えば、標準的な血清アッセイ、ＤＮＡｓｅアッセイ、またはＲＮＡｓｅアッセイが挙げられる。
【００６１】
本明細書で使用される「全身送達」とは、生物におけるｓｉＲＮＡなどの活性剤の広い体内分布をもたらす脂質粒子の送達を指す。いくつかの投与技術は、ある特定の薬剤の全身送達をもたらすことができるが、その他のものにこれは当てはまらない。全身送達とは、有用な（好ましくは治療的な）量の薬剤が、身体のほとんどの部分に曝露されることを意味する。広い体内分布を得るには、一般に、薬剤が投与部位から遠位にある疾患部位に達する前に急速に（例えば初回通過器官（肝臓、肺など）によって、または急速な非特異的細胞結合によって）分解または排出されないような血中寿命が必要である。脂質粒子の全身送達は、例えば、静脈内、皮下、及び腹腔内を含め、当技術分野で公知の任意の手段によるものであってよい。好ましい実施形態において、脂質粒子の全身送達は、静脈内送達によるものである。
【００６２】
本明細書で使用される「局所送達」とは、ｓｉＲＮＡなどの活性剤の、生物における標的部位への直接的な送達を指す。例えば、薬剤は、疾患部位、他の標的部位、または肝臓、心臓、膵臓、腎臓などの標的器官への直接注射によって局所送達され得る。
【００６３】
本明細書において、脂質：ｓｉＲＮＡの比について説明するために使用される場合、「脂質」という用語は、粒子中の全脂質を指す。
【００６４】
当業者には、キラル中心を有する本発明の化合物が光学活性形態及びラセミ形態で存在し、これらの形態で単離され得ることが察知されよう。いくつかの化合物は、多型性を呈し得る。本発明は、本明細書に記載される有用な特性を有する、本発明の化合物の任意のラセミ形態、光学活性形態、多型形態、もしくは立体異性体形態、またはそれらの混合物を包含するものと理解されたい。当技術分野において、光学活性形態を調製する方法（例えば、再結晶技術によるラセミ形態の分割によるもの、光学活性のある出発物質からの合成によるもの、キラル合成によるもの、またはキラル固定相を使用したクロマトグラフ分離によるもの）は周知である。
【００６５】
本明細書における化合物式中の結合が非立体化学的様式（例えば平面）で描かれている場合、その結合が結合している原子は、あらゆる立体化学的な可能性を含む。特に別段の記載がない限り、本明細書における化合物式中の結合が所定の立体化学的様式（例えば太線、太線のくさび形、破線または破線のくさび形）で描かれている場合、立体化学的結合が結合している原子が、示されている絶対立体異性体において濃縮されていると理解される。一実施形態において、化合物の少なくとも５１％が、示されている絶対立体異性体であり得る。別の実施形態では、化合物の少なくとも６０％が、示されている絶対立体異性体であり得る。別の実施形態では、化合物の少なくとも８０％が、示されている絶対立体異性体であり得る。別の実施形態では、化合物の少なくとも９０％が、示されている絶対立体異性体であり得る。別の実施形態では、化合物の少なくとも９５が、示されている絶対立体異性体であり得る。別の実施形態では、化合物の少なくとも９９％が、示されている絶対立体異性体であり得る。
【００６６】
本明細書に別段の記載がない限り、「約」という用語は、値または値の範囲に関連して使用される場合、規定の値または値の範囲のプラスまたはマイナス５％を意味する。
【００６７】
ｓｉＲＮＡ分子の生成
ｓｉＲＮＡは、例えば、１つ以上の単離された低分子干渉ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）二重鎖として、より長い二本鎖ＲＮＡ（ｄｓＲＮＡ）として、またはＤＮＡプラスミド内の転写カセットから転写されたｓｉＲＮＡもしくはｄｓＲＮＡとしての形態を含む、いくつかの形態で用意することができる。一部の実施形態では、ｓｉＲＮＡは、酵素的に、または部分的／完全有機合成によって産生してよく、インビトロ酵素合成または有機合成により、修飾されたリボヌクレオチドを導入することができる。ある特定の事例では、各鎖が化学的に調製される。ＲＮＡ分子を合成する方法は、例えばＶｅｒｍａ  ａｎｄ  Ｅｃｋｓｔｅｉｎ（１９９８）に記載された化学合成方法のように当技術分野において公知であるか、または本明細書に記載される。
【００６８】
ＲＮＡを単離する方法、ＲＮＡを合成する方法、核酸をハイブリダイズする方法、ｃＤＮＡライブラリを作製しスクリーニングする方法、及びＰＣＲを行なう方法は、当技術分野で周知である（例えば、Ｇｕｂｌｅｒ  ａｎｄ  Ｈｏｆｆｍａｎ，Ｇｅｎｅ，２５：２６３−２６９（１９８３）、Ｓａｍｂｒｏｏｋ  ｅｔ  ａｌ．（上記）、Ａｕｓｕｂｅｌ  ｅｔ  ａｌ．（上記）を参照されたい）。また、ＰＣＲ法も当技術分野で周知である（米国特許第４，６８３，１９５号及び同第４，６８３，２０２号、ＰＣＲ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ：Ａ  Ｇｕｉｄｅ  ｔｏ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ａｎｄ  Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ（Ｉｎｎｉｓ  ｅｔ  ａｌ．，ｅｄｓ，１９９０）を参照されたい）。発現ライブラリも当業者には周知である。本発明における使用の一般的方法を開示する更なる基本的なテキストとしては、Ｓａｍｂｒｏｏｋ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ，Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ（２ｎｄ  ｅｄ．１９８９）、Ｋｒｉｅｇｌｅｒ，Ｇｅｎｅ  Ｔｒａｎｓｆｅｒ  ａｎｄ  Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ（１９９０）、及びＣｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ（Ａｕｓｕｂｅｌ  ｅｔ  ａｌ．，ｅｄｓ．，１９９４）が挙げられる。これらの参考文献の開示内容は、あらゆる目的でその全体が参照により本明細書に組み込まれている。
【００６９】
典型的には、ｓｉＲＮＡは化学合成される。本発明のｓｉＲＮＡ分子を含むオリゴヌクレオチドは、Ｕｓｍａｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．，１０９：７８４５（１９８７）、Ｓｃａｒｉｎｇｅ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎｕｃｌ．Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．，１８：５４３３（１９９０）、Ｗｉｎｃｏｔｔ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎｕｃｌ．Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．，２３：２６７７−２６８４（１９９５）、及びＷｉｎｃｏｔｔ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｅｔｈｏｄｓ  Ｍｏｌ．Ｂｉｏ．，７４：５９（１９９７）に記載されているものなど、当技術分野で公知の種々の技術のいずれかを使用して合成することができる。オリゴヌクレオチドの合成は、５’末端におけるジメトキシトリチル及び３’末端におけるホスホラミダイトなどの一般的な核酸保護基及びカップリング基を利用する。非限定的な例として、Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓの合成機で０．２μｍｏｌ規模のプロトコールを使用した小規模合成を実施することができる。代替的には、Ｐｒｏｔｏｇｅｎｅ（Ｐａｌｏ  Ａｌｔｏ，ＣＡ）の９６ウェルプレート合成機で０．２μｍｏｌ規模の合成を行なうことができる。しかしながら、より大規模または小規模の合成も本発明の範囲内である。オリゴヌクレオチド合成に好適な試薬、ＲＮＡ脱保護のための方法、及びＲＮＡ精製のための方法は、当業者には公知である。
【００７０】
ｓｉＲＮＡ分子は、一方のオリゴヌクレオチドがｓｉＲＮＡのセンス鎖を含み、他方がアンチセンス鎖を含む、２つの別個のオリゴヌクレオチドから構築され得る。例えば、各鎖を別々に合成し、合成及び／または脱保護後にハイブリダイゼーションまたはライゲーションによってひとつに結合させることができる。
【００７１】
本発明の実施形態
実施例２５の表１は、Ｂ型肝炎ウイルス（「ＨＢＶ」と略す）を標的とする一連の化学修飾されたｓｉＲＮＡ二重鎖を記載する（センス鎖及びアンチセンス鎖が示されている）。本明細書に記載されるように、本発明の化合物は、かかるｓｉＲＮＡ（すなわち、ｓｉＲＮＡ  １〜３７）を含み得る。
【００７２】
したがって、本発明の一態様は、配列番号１、配列番号３、配列番号５、配列番号７、配列番号９、配列番号１１、配列番号１３、配列番号１５、配列番号１７、配列番号１９、配列番号２１、配列番号２３、配列番号２５、配列番号２７、配列番号２９、配列番号３１、配列番号３３、配列番号３５、配列番号３７、配列番号３９、配列番号４１、配列番号４３、配列番号４５、配列番号４７、配列番号４９、配列番号５１、配列番号５３、配列番号５５、配列番号５７、配列番号５９、配列番号６１、配列番号６３、配列番号６５、配列番号６７、配列番号６９、配列番号７１、及び配列番号７３からなる群から選択される核酸分子である。
【００７３】
本発明の別の態様は、配列番号２、配列番号４、配列番号６、配列番号８、配列番号１０、配列番号１２、配列番号１４、配列番号１６、配列番号１８、配列番号２０、配列番号２２、配列番号２４、配列番号２６、配列番号２８、配列番号３０、配列番号３２、配列番号３４、配列番号３６、配列番号３８、配列番号４０、配列番号４２、配列番号４４、配列番号４６、配列番号４８、配列番号５０、配列番号５２、配列番号５４、配列番号５６、配列番号５８、配列番号６０、配列番号６２、配列番号６４、配列番号６６、配列番号６８、配列番号７０、配列番号７２、及び配列番号７４からなる群から選択される核酸分子である。
【００７４】
本発明の一態様は、本明細書に記載の核酸分子またはその組み合わせを含む組成物である。
【００７５】
本発明の一態様は、ｓｉＲＮＡ  １（配列番号１及び２）、２（配列番号３及び４）、３（配列番号５及び６）、４（配列番号７及び８）、５（配列番号９及び１０）、６（配列番号１１及び１２）、７（配列番号１３及び１４）、８（配列番号１５及び１６）、９（配列番号１７及び１８）、１０（配列番号１９及び２０）、１１（配列番号２１及び２２）、１２（配列番号２３及び２４）、１３（配列番号２５及び２６）、１４（配列番号２７及び２８）、１５（配列番号２９及び３０）、１６（配列番号３１及び３２）、１７（配列番号３３及び３４）、１８（配列番号３５及び３６）、１９（配列番号３７及び３８）、２０（配列番号３９及び４０）、２１（配列番号４１及び４２）、２２（配列番号４３及び４４）、２３（配列番号４５及び４６）、２４（配列番号４７及び４８）、２５（配列番号４９及び５０）、２６（配列番号５１及び５２）、２７（配列番号５３及び５４）、２８（配列番号５５及び５６）、２９（配列番号５７及び５８）、３０（配列番号５９及び６０）、３１（配列番号６１及び６２）、３２（配列番号６３及び６４）、３３（配列番号６５及び６６）、３４（配列番号６７及び６８）、３５（配列番号６９及び７０）、３６（配列番号７１及び７２）、及び３７（配列番号７３及び７４）からなる群から選択される二本鎖ｓｉＲＮＡ分子を提供する。
【００７６】
本発明の別の態様は、本明細書に記載の二本鎖ｓｉＲＮＡ分子を含む組成物を提供する。
【００７７】
一実施形態において、本組成物は、薬学的に許容される担体を含む医薬組成物である。
【００７８】
本発明の一態様は、発明の概要に記述される式Ｉの化合物、またはその塩である。
【００７９】
式Ｉの化合物の一実施形態において、Ｒ１は、標的化リガンドであり、
Ｌ１は、存在しないか、または結合基であり、
Ｌ２は、存在しないか、または結合基であり、
Ｒ２は、表１の二本鎖ｓｉＲＮＡから選択される二本鎖ｓｉＲＮＡ分子であり、
環Ａは、存在しないか、３〜２０員シクロアルキル、５〜２０員アリール、５〜２０員ヘテロアリール、または３〜２０員ヘテロシクロアルキルであり、
各ＲＡは、独立して、水素、ヒドロキシ、ＣＮ、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、−Ｃ１〜２アルキル−ＯＲＢ、ならびにハロ、ヒドロキシ、及びＣ１〜３アルコキシから独立して選択される１つ以上の基で場合により置換されているＣ１〜８アルキルからなる群から選択され、
ＲＢは、水素、保護基、固体支持体への共有結合、または固体支持体に結合した結合基への結合であり、
ｎは、０、１、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０である。
【００８０】
一実施形態において、Ｒ１は、−Ｃ（Ｈ）（３−ｐ）（Ｌ３−糖類）ｐであり、式中、各Ｌ３は独立して結合基であり、ｐは、１、２、または３であり、糖類は、単糖または二糖である。
【００８１】
一実施形態において、糖類は、
【化５】
2020516296.tif 000007
またはその塩であり、
式中、
ＸはＮＲ３であり、Ｙは、−（Ｃ＝Ｏ）Ｒ４、−ＳＯ２Ｒ５、及び−（Ｃ＝Ｏ）ＮＲ６Ｒ７から選択されるか、またはＸは−（Ｃ＝Ｏ）−であり、ＹはＮＲ８Ｒ９であり、
Ｒ３は、水素または（Ｃ１〜Ｃ４）アルキルであり、
Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、及びＲ９は、それぞれ独立して、水素、（Ｃ１〜Ｃ８）アルキル、（Ｃ１〜Ｃ８）ハロアルキル、（Ｃ１〜Ｃ８）アルコキシ、ならびにハロ、（Ｃ１〜Ｃ４）アルキル、（Ｃ１〜Ｃ４）ハロアルキル、（Ｃ１〜Ｃ４）アルコキシ、及び（Ｃ１〜Ｃ４）ハロアルコキシからなる群から独立して選択される１つ以上の基で場合により置換されている（Ｃ３〜Ｃ６）シクロアルキルからなる群から選択され、
Ｒ１０は、−ＯＨ、−ＮＲ８Ｒ９、または−Ｆであり、
Ｒ１１は、−ＯＨ、−ＮＲ８Ｒ９、−Ｆ、またはハロ、ヒドロキシル、カルボキシル、アミノ、（Ｃ１〜Ｃ４）アルキル、（Ｃ１〜Ｃ４）ハロアルキル、（Ｃ１〜Ｃ４）アルコキシ、及び（Ｃ１〜Ｃ４）ハロアルコキシからなる群から独立して選択される１つ以上の基で場合により置換されている５員複素環である。
【００８２】
一実施形態において、糖類は、
【化６】
2020516296.tif 000008
ならびにそれらの塩からなる群から選択される。
【００８３】
一実施形態において、糖類は、
【化７】
2020516296.tif 000009
である。
【００８４】
一実施形態において、各Ｌ３は、独立して、０〜５０個の炭素原子を有する二価の、分枝状または非分枝状、飽和または不飽和の炭化水素鎖であり、炭化水素鎖中の炭素原子のうち１個以上（例えば１個、２個、３個、または４個）は、−Ｏ−、−ＮＲＸ−、−ＮＲＸ−Ｃ（＝Ｏ）−、−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＲＸ−、または−Ｓ−で場合により置き換えられており、ＲＸは、水素または（Ｃ１〜Ｃ６）アルキルであり、炭化水素鎖は、（Ｃ１〜Ｃ６）アルコキシ、（Ｃ３〜Ｃ６）シクロアルキル、（Ｃ１〜Ｃ６）アルカノイル、（Ｃ１〜Ｃ６）アルカノイルオキシ、（Ｃ１〜Ｃ６）アルコキシカルボニル、（Ｃ１〜Ｃ６）アルキルチオ、アジド、シアノ、ニトロ、ハロ、ヒドロキシ、オキソ（＝Ｏ）、カルボキシ、アリール、アリールオキシ、ヘテロアリール、及びヘテロアリールオキシから選択される１つ以上（例えば１つ、２つ、３つ、または４つ）の置換基で場合により置換されている。
【００８５】
一実施形態において、各Ｌ３は、独立して、１〜２０個の炭素原子を有する二価の、分枝状または非分枝状、飽和または不飽和の炭化水素鎖であり、炭化水素鎖中の炭素原子のうち１個以上（例えば１個、２個、３個、または４個）は、−Ｏ−、−ＮＲＸ−、−ＮＲＸ−Ｃ（＝Ｏ）−、−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＲＸ−、または−Ｓ−で場合により置き換えられており、ＲＸは、水素または（Ｃ１〜Ｃ６）アルキルであり、炭化水素鎖は、（Ｃ１〜Ｃ６）アルコキシ、（Ｃ３〜Ｃ６）シクロアルキル、（Ｃ１〜Ｃ６）アルカノイル、（Ｃ１〜Ｃ６）アルカノイルオキシ、（Ｃ１〜Ｃ６）アルコキシカルボニル、（Ｃ１〜Ｃ６）アルキルチオ、アジド、シアノ、ニトロ、ハロ、ヒドロキシ、オキソ（＝Ｏ）、カルボキシ、アリール、アリールオキシ、ヘテロアリール、及びヘテロアリールオキシから選択される１つ以上（例えば１つ、２つ、３つ、または４つ）の置換基で場合により置換されている。
【００８６】
一実施形態において、Ｌ３は、
【化８】
2020516296.tif 000010
またはその塩である。
【００８７】
一実施形態において、Ｒ１は、
【化９】
2020516296.tif 000011
またはその塩である。
【００８８】
一実施形態において、Ｒ１は、
【化１０】
2020516296.tif 000012
またはその塩であり、
式中、Ｇは−ＮＨ−または−Ｏ−であり、
ＲＣは、水素、（Ｃ１〜Ｃ８）アルキル、（Ｃ１〜Ｃ８）ハロアルキル、（Ｃ１〜Ｃ８）アルコキシ、（Ｃ１〜Ｃ６）アルカノイル、（Ｃ３〜Ｃ２０）シクロアルキル、（Ｃ３〜Ｃ２０）複素環、アリール、ヘテロアリール、単糖、二糖、または三糖であり、ここでシクロアルキル、複素環、アリール、ヘテロアリール、及び糖類は、ハロ、カルボキシル、ヒドロキシル、アミノ、（Ｃ１〜Ｃ４）アルキル、（Ｃ１〜Ｃ４）ハロアルキル、（Ｃ１〜Ｃ４）アルコキシ、及び（Ｃ１〜Ｃ４）ハロアルコキシからなる群から独立して選択される１つ以上の基で場合により置換されている）。
【００８９】
一実施形態において、ＲＣは、
【化１１】
2020516296.tif 000013
である。
【００９０】
一実施形態において、Ｒ１は、
【化１２】
2020516296.tif 000014
である。
【００９１】
一実施形態において、ＲＣは、
【化１３】
2020516296.tif 000015
である。
【００９２】
一実施形態において、Ｇは、−ＮＨ−である。
【００９３】
一実施形態において、Ｒ１は、
【化１４】
2020516296.tif 000016
である。
【００９４】
一実施形態において、Ｒ１は、
【化１５】
2020516296.tif 000017
であり、
式中、各ＲＤは、独立して、水素、（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル、（Ｃ９〜Ｃ２０）アルキルシリル、（ＲＷ）３Ｓｉ−、（Ｃ２〜Ｃ６）アルケニル、テトラヒドロピラニル、（Ｃ１〜Ｃ６）アルカノイル、ベンゾイル、アリール（Ｃ１〜Ｃ３）アルキル、ＴＭＴｒ（トリメトキシトリチル）、ＤＭＴｒ（ジメトキシトリチル）、ＭＭＴｒ（モノメトキシトリチル）、及びＴｒ（トリチル）からなる群から選択され、
各ＲＷは、独立して、（Ｃ１〜Ｃ４）アルキル及びアリールからなる群から選択される。
【００９５】
一実施形態において、結合基Ｌ１及びＬ２は、独立して、１〜５０個の炭素原子を有する二価の、分枝状または非分枝状、飽和または不飽和の炭化水素鎖であり、炭化水素鎖中の炭素原子のうち１個以上（例えば１個、２個、３個、または４個）は、−Ｏ−、−ＮＲＸ−、−ＮＲＸ−Ｃ（＝Ｏ）−、−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＲＸ−、または−Ｓ−で場合により置き換えられており、ＲＸは、水素または（Ｃ１〜Ｃ６）アルキルであり、炭化水素鎖は、（Ｃ１〜Ｃ６）アルコキシ、（Ｃ３〜Ｃ６）シクロアルキル、（Ｃ１〜Ｃ６）アルカノイル、（Ｃ１〜Ｃ６）アルカノイルオキシ、（Ｃ１〜Ｃ６）アルコキシカルボニル、（Ｃ１〜Ｃ６）アルキルチオ、アジド、シアノ、ニトロ、ハロ、ヒドロキシ、オキソ（＝Ｏ）、カルボキシ、アリール、アリールオキシ、ヘテロアリール、及びヘテロアリールオキシから選択される１つ以上（例えば１つ、２つ、３つ、または４つ）の置換基で場合により置換されている。
【００９６】
一実施形態において、Ｌ１及びＬ２は、独立して、１〜２０個の炭素原子を有する二価の、分枝状または非分枝状、飽和または不飽和の炭化水素鎖であり、炭化水素鎖中の炭素原子のうち１個以上（例えば１個、２個、３個、または４個）は、−Ｏ−、−ＮＲＸ−、−ＮＲＸ−Ｃ（＝Ｏ）−、−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＲＸ−、または−Ｓ−で場合により置き換えられており、ＲＸは、水素または（Ｃ１〜Ｃ６）アルキルであり、炭化水素鎖は、（Ｃ１〜Ｃ６）アルコキシ、（Ｃ３〜Ｃ６）シクロアルキル、（Ｃ１〜Ｃ６）アルカノイル、（Ｃ１〜Ｃ６）アルカノイルオキシ、（Ｃ１〜Ｃ６）アルコキシカルボニル、（Ｃ１〜Ｃ６）アルキルチオ、アジド、シアノ、ニトロ、ハロ、ヒドロキシ、オキソ（＝Ｏ）、カルボキシ、アリール、アリールオキシ、ヘテロアリール、及びヘテロアリールオキシから選択される１つ以上（例えば１つ、２つ、３つ、または４つ）の置換基で場合により置換されている。
【００９７】
一実施形態において、Ｌ１及びＬ２は、独立して、１〜１４個の炭素原子を有する二価の、分枝状または非分枝状、飽和または不飽和の炭化水素鎖であり、炭化水素鎖中の炭素原子のうち１個以上（例えば１個、２個、３個、または４個）は、場合により置き換えられており、−Ｏ−、−ＮＲＸ−、−ＮＲＸ−Ｃ（＝Ｏ）−、−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＲＸ−、または−Ｓ−であり、ＲＸは、水素または（Ｃ１〜Ｃ６）アルキルであり、炭化水素鎖は、（Ｃ１〜Ｃ６）アルコキシ、（Ｃ３〜Ｃ６）シクロアルキル、（Ｃ１〜Ｃ６）アルカノイル、（Ｃ１〜Ｃ６）アルカノイルオキシ、（Ｃ１〜Ｃ６）アルコキシカルボニル、（Ｃ１〜Ｃ６）アルキルチオ、アジド、シアノ、ニトロ、ハロ、ヒドロキシ、オキソ（＝Ｏ）、カルボキシ、アリール、アリールオキシ、ヘテロアリール、及びヘテロアリールオキシから選択される１つ以上（例えば１つ、２つ、３つ、または４つ）の置換基で場合により置換されている。
【００９８】
一実施形態において、Ｌ１は、−ＮＨ−、−Ｏ−、−Ｓ−、−（Ｃ＝Ｏ）−、−（Ｃ＝Ｏ）−ＮＨ−、−ＮＨ−（Ｃ＝Ｏ）−、−（Ｃ＝Ｏ）−Ｏ−、−ＮＨ−（Ｃ＝Ｏ）−ＮＨ−、または−ＮＨ−（ＳＯ２）−を介してＲ１に結合している。
【００９９】
一実施形態において、Ｌ２は、−Ｏ−を介してＲ２に結合している。
【０１００】
一実施形態において、Ｌ１は、
【化１６】
2020516296.tif 000018
からなる群から選択される。
【０１０１】
一実施形態において、Ｌ１は、
【化１７】
2020516296.tif 000019
ならびにそれらの塩からなる群から選択される。
【０１０２】
一実施形態において、Ｌ２は、−ＣＨ２−Ｏ−または−ＣＨ２−ＣＨ２−Ｏ−である。
【０１０３】
一実施形態において、式Ｉの化合物は、次式Ｉａ：
【化１８】
2020516296.tif 000020
（Ｉａ）
を有するか、またはその塩であり、
式中、
各Ｄは、独立して、
【化１９】
2020516296.tif 000021
及び−Ｎ＝からなる群から選択される。
【０１０４】
一実施形態において、式Ｉａの化合物は、
【化２０】
2020516296.tif 000022
ならびにそれらの塩からなる群から選択され、
式中、
Ｑ１は水素であり、Ｑ２はＲ２であるか、またはＱ１はＲ２であり、Ｑ２は水素であり、
Ｚは−Ｌ１−Ｒ１である。
【０１０５】
一実施形態において、式Ｉの化合物は、次式Ｉｂ：
【化２１】
2020516296.tif 000023
（Ｉｂ）
を有するか、またはその塩であり、
式中、
各Ｄは、独立して、
【化２１】
2020516296.tif 000024
及び−Ｎ＝からなる群から選択され、
各ｍは、独立して、１または２である。
【０１０６】
一実施形態において、式Ｉｂの化合物は、
【化２２】
2020516296.tif 000025
ならびにそれらの塩からなる群から選択され、
式中、
Ｑ１は水素であり、Ｑ２はＲ２であるか、またはＱ１はＲ２であり、Ｑ２は水素であり、
Ｚは−Ｌ１−Ｒ１である。
【０１０７】
一実施形態において、式Ｉの化合物は、次式（Ｉｃ）：
【化２３】
2020516296.tif 000026
（Ｉｃ）
を有するか、またはその塩であり、
式中、Ｅは、−Ｏ−または−ＣＨ２−であり、
ｎは、０、１、２、３、及び４からなる群から選択され、
ｎ１及びｎ２は、それぞれ独立して、０、１、２、及び３からなる群から選択される。
【０１０８】
ある特定の実施形態において、式（Ｉｃ）の化合物は、
【化２４】
2020516296.tif 000027
ならびにそれらの塩からなる群から選択され、
式中、Ｚは−Ｌ１−Ｒ１である。
【０１０９】
一実施形態において、−Ａ−Ｌ２−Ｒ２部分は、
【化２５】
2020516296.tif 000028
またはその塩であり、
式中、
Ｑ１は水素であり、Ｑ２はＲ２であるか、またはＱ１はＲ２であり、Ｑ２は水素であり、
各ｑは、独立して、０、１、２、３、４、または５である。
【０１１０】
一実施形態において、式（Ｉ）の化合物は、
【化２６】
2020516296.tif 000029
【化２７】
2020516296.tif 000030
及び
【化２８】
2020516296.tif 000031
ならびにそれらの塩からなる群から選択される。
【０１１１】
一実施形態において、Ｒ１は、
【化２９】
2020516296.tif 000032
からなる群から選択され、
式中、ＲＳは、
【化３０】
2020516296.tif 000033
であり、
ｎは、２、３、または４であり、
ｘは、１または２である。
【０１１２】
一実施形態において、Ｌ１は、
【化３１】
2020516296.tif 000034
からなる群から選択される。
【０１１３】
一実施形態において、Ｌ１は、
【化３２】
2020516296.tif 000035
からなる群から選択される。
【０１１４】
一実施形態において、Ａは、存在しないか、フェニル、ピロリジニル、またはシクロペンチルである。
【０１１５】
一実施形態において、Ｌ２は、ヒドロキシで場合により置換されているＣ１〜４アルキレン−Ｏ−である。
【０１１６】
一実施形態において、Ｌ２は、−ＣＨ２Ｏ−、−ＣＨ２ＣＨ２Ｏ−、または−ＣＨ（ＯＨ）ＣＨ２Ｏ−である。
【０１１７】
一実施形態において、各ＲＡは、独立して、ヒドロキシ、またはヒドロキシルで場合により置換されているＣ１〜８アルキルである。
【０１１８】
一実施形態において、各ＲＡは、独立して、ヒドロキシ、メチル、及び−ＣＨ２ＯＨからなる群から選択される。
【０１１９】
一実施形態において、式Ｉの化合物は、次式（Ｉｇ）：
【化３３】
2020516296.tif 000036
（Ｉｇ）
を有するか、またはその塩であり、
式中、Ｂは、−Ｎ−または−ＣＨ−であり、
Ｌ１は、存在しないか、または−ＮＨ−であり、
Ｌ２は、ヒドロキシルまたはハロで場合により置換されているＣ１〜４アルキレン−Ｏ−であり、
ｎは、０、１、または２である。
【０１２０】
一実施形態において、式Ｉの化合物は、次式（Ｉｇ）：
【化３４】
2020516296.tif 000037
（Ｉｇ）
を有するか、またはその塩であり、
式中、Ｂは、−Ｎ−または−ＣＨ−であり、
Ｌ１は、存在しないか、または−ＮＨ−であり、
Ｌ２は、ヒドロキシルまたはハロで場合により置換されているＣ１〜４アルキレン−Ｏ−であり、
ｎは、０、１、２、３、４、５、６、または７である。
【０１２１】
一実施形態において、式Ｉの化合物は、次式（Ｉｇ）：
【化３５】
2020516296.tif 000038
（Ｉｇ）
を有するか、またはその塩であり、
式中、Ｂは、−Ｎ−または−ＣＨ−であり、
Ｌ１は、存在しないか、または−ＮＨ−であり、
Ｌ２は、ヒドロキシルまたはハロで場合により置換されているＣ１〜４アルキレン−Ｏ−であり、
ｎは、０、１、２、３、または４である。
【０１２２】
一実施形態において、式Ｉｇの化合物は、
【化３６】
2020516296.tif 000039
ならびにそれらの塩からなる群から選択され、
式中、Ｒ’は、Ｃ１〜９アルキル、Ｃ２〜９アルケニル、またはＣ２〜９アルキニルであり、このＣ１〜９アルキル、Ｃ２〜９アルケニル、またはＣ２〜９アルキニルは、ハロまたはヒドロキシルで場合により置換されている。
【０１２３】
一実施形態において、式Ｉの化合物は、
【化３７】
2020516296.tif 000040
ならびにそれらの塩からなる群から選択される。
【０１２４】
一実施形態において、式Ｉの化合物またはその塩は、
【化３８】
2020516296.tif 000041
【化３９】
2020516296.tif 000042
【化４０】
2020516296.tif 000043
【化４１】
2020516296.tif 000044
【化４２】
2020516296.tif 000045
【化４３】
2020516296.tif 000046
【化４４】
2020516296.tif 000047
【化４５】
2020516296.tif 000048
【化４６】
2020516296.tif 000049
【化４７】
2020516296.tif 000050
【化４８】
2020516296.tif 000051
【化４９】
2020516296.tif 000052
【化５０】
2020516296.tif 000053
【化５１】
2020516296.tif 000054
、及び
【化５２】
2020516296.tif 000055
からなる群から選択される。
【０１２５】
一実施形態において、式Ｉの化合物またはその塩は、
【化５３】
2020516296.tif 000056
【化５４】
2020516296.tif 000057
【化５５】
2020516296.tif 000058
【化５６】
2020516296.tif 000059
【化５７】
2020516296.tif 000060
【化５８】
2020516296.tif 000061
【化５９】
2020516296.tif 000062
【化６０】
2020516296.tif 000063
【化６１】
2020516296.tif 000064
【化６２】
2020516296.tif 000065
【化６３】
2020516296.tif 000066
【化６４】
2020516296.tif 000067
【化６５】
2020516296.tif 000068
【化６６】
2020516296.tif 000069
及び
【化６７】
2020516296.tif 000070
またはそれらの薬学的に許容される塩からなる群から選択され、
式中、Ｒ２は、表１の二本鎖ｓｉＲＮＡ分子から選択される二本鎖ｓｉＲＮＡ分子である。
【０１２６】
一実施形態において、式Ｉの化合物は、
【化６８】
2020516296.tif 000071
またはその薬学的に許容される塩であり、式中、Ｒ２は、二本鎖ｓｉＲＮＡ分子（例えば、表１の二本鎖ｓｉＲＮＡ分子から選択される二本鎖ｓｉＲＮＡ分子）である。
【０１２７】
一実施形態において、式Ｉの化合物は、
【化６９】
2020516296.tif 000072
またはその薬学的に許容される塩であり、式中、Ｒ２は、二本鎖ｓｉＲＮＡ分子（例えば、表１の二本鎖ｓｉＲＮＡ分子から選択される二本鎖ｓｉＲＮＡ分子）である。
【０１２８】
一実施形態において、式Ｉの化合物は、
【化７０】
2020516296.tif 000073
またはその薬学的に許容される塩であり、式中、Ｒ２は、二本鎖ｓｉＲＮＡ分子（例えば、表１の二本鎖ｓｉＲＮＡ分子から選択される二本鎖ｓｉＲＮＡ分子）である。
【０１２９】
一実施形態において、式Ｉの化合物は、
【化７１】
2020516296.tif 000074
またはその薬学的に許容される塩であり、式中、Ｒ２は、二本鎖ｓｉＲＮＡ分子（例えば、表１の二本鎖ｓｉＲＮＡ分子から選択される二本鎖ｓｉＲＮＡ分子）である。
【０１３０】
一実施形態において、式Ｉの化合物は、
【化７２】
2020516296.tif 000075
またはその薬学的に許容される塩であり、式中、Ｒ２は、二本鎖ｓｉＲＮＡ分子（例えば、表１の二本鎖ｓｉＲＮＡ分子から選択される二本鎖ｓｉＲＮＡ分子）である。
【０１３１】
一実施形態において、式Ｉの化合物は、
【化７３】
2020516296.tif 000076
またはその薬学的に許容される塩であり、式中、Ｒ２は、二本鎖ｓｉＲＮＡ分子（例えば、表１の二本鎖ｓｉＲＮＡ分子から選択される二本鎖ｓｉＲＮＡ分子）である。
【０１３２】
一実施形態において、式Ｉの化合物は、
【化７４】
2020516296.tif 000077
またはその薬学的に許容される塩であり、式中、Ｒ２は、二本鎖ｓｉＲＮＡ分子（例えば、表１の二本鎖ｓｉＲＮＡ分子から選択される二本鎖ｓｉＲＮＡ分子）である。
【０１３３】
一実施形態において、式Ｉの化合物は、
【化７５】
2020516296.tif 000078
またはその薬学的に許容される塩であり、式中、Ｒ２は、二本鎖ｓｉＲＮＡ分子（例えば、表１の二本鎖ｓｉＲＮＡ分子から選択される二本鎖ｓｉＲＮＡ分子）である。
【０１３４】
一実施形態において、式Ｉの化合物は、
【化７６】
2020516296.tif 000079
またはその薬学的に許容される塩であり、式中、Ｒ２は、二本鎖ｓｉＲＮＡ分子（例えば、表１の二本鎖ｓｉＲＮＡ分子から選択される二本鎖ｓｉＲＮＡ分子）である。
【０１３５】
一実施形態において、式Ｉの化合物は、
【化７７】
2020516296.tif 000080
またはその薬学的に許容される塩であり、式中、Ｒ２は、二本鎖ｓｉＲＮＡ分子（例えば、表１の二本鎖ｓｉＲＮＡ分子から選択される二本鎖ｓｉＲＮＡ分子）である。
【０１３６】
一実施形態において、式Ｉの化合物は、
【化７８】
2020516296.tif 000081
またはその薬学的に許容される塩であり、式中、Ｒ２は、二本鎖ｓｉＲＮＡ分子（例えば、表１の二本鎖ｓｉＲＮＡ分子から選択される二本鎖ｓｉＲＮＡ分子）である。
【０１３７】
一実施形態において、式Ｉの化合物は、
【化７９】
2020516296.tif 000082
またはその薬学的に許容される塩であり、式中、Ｒ２は、二本鎖ｓｉＲＮＡ分子（例えば、表１の二本鎖ｓｉＲＮＡ分子から選択される二本鎖ｓｉＲＮＡ分子）である。
【０１３８】
一実施形態において、式Ｉの化合物は、
【化８０】
2020516296.tif 000083
またはその薬学的に許容される塩であり、式中、Ｒ２は、二本鎖ｓｉＲＮＡ分子（例えば、表１の二本鎖ｓｉＲＮＡ分子から選択される二本鎖ｓｉＲＮＡ分子）である。
【０１３９】
一実施形態において、式Ｉの化合物は、
【化８１】
2020516296.tif 000084
またはその薬学的に許容される塩である。
【０１４０】
一実施形態において、式Ｉの化合物は、
【化８２】
2020516296.tif 000085
またはその薬学的に許容される塩である。
【０１４１】
一実施形態において、式Ｉの化合物は、
【化８３】
2020516296.tif 000086
またはその薬学的に許容される塩である。
【０１４２】
一実施形態において、式Ｉの化合物は、
【化８４】
2020516296.tif 000087
またはその薬学的に許容される塩である。
【０１４３】
一実施形態において、式Ｉの化合物は、
【化８５】
2020516296.tif 000088
またはその薬学的に許容される塩である。
【０１４４】
一実施形態において、式Ｉの化合物は、
【化８６】
2020516296.tif 000089
またはその薬学的に許容される塩である。
【０１４５】
一実施形態において、式Ｉの化合物は、
【化８７】
2020516296.tif 000090
またはその薬学的に許容される塩である。
【０１４６】
一実施形態において、式Ｉの化合物は、
【化８８】
2020516296.tif 000091
またはその薬学的に許容される塩である。
【０１４７】
一実施形態において、本発明は、式（Ｉ）の化合物：
【化８９】
2020516296.tif 000092
またはその塩を提供し、
式中、
Ｌ１は、存在しないか、または結合基であり、
Ｌ２は、存在しないか、または結合基であり、
Ｒ２は、核酸であり、
環Ａは、存在しないか、３〜２０員シクロアルキル、５〜２０員アリール、５〜２０員ヘテロアリール、または３〜２０員ヘテロシクロアルキルであり、
各ＲＡは、独立して、水素、ヒドロキシ、ＣＮ、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、−Ｃ１〜２アルキル−ＯＲＢ、Ｃ１〜１０アルキルＣ２〜１０アルケニル、及びＣ２〜１０アルキニルからなる群から選択され、このＣ１〜１０アルキルＣ２〜１０アルケニル、及びＣ２〜１０アルキニルは、ハロ、ヒドロキシ、及びＣ１〜３アルコキシから独立して選択される１つ以上の基で場合により置換されており、
ＲＢは、水素、保護基、固体支持体への共有結合、または固体支持体に結合した結合基への結合であり、
ｎは、０、１、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０である）。
【０１４８】
一実施形態において、本発明は、次式の化合物：
【化９０】
2020516296.tif 000093
またはその塩を提供し、
式中、
Ｌ２は、存在しないか、または結合基であり、
Ｒ２は、核酸であり、
環Ａは、存在しないか、３〜２０員シクロアルキル、５〜２０員アリール、５〜２０員ヘテロアリール、または３〜２０員ヘテロシクロアルキルであり、
各ＲＡは、独立して、水素、ヒドロキシ、ＣＮ、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、−Ｃ１〜２アルキル−ＯＲＢ、Ｃ１〜１０アルキルＣ２〜１０アルケニル、及びＣ２〜１０アルキニルからなる群から選択され、このＣ１〜１０アルキルＣ２〜１０アルケニル、及びＣ２〜１０アルキニルは、ハロ、ヒドロキシ、及びＣ１〜３アルコキシから独立して選択される１つ以上の基で場合により置換されており、
ＲＢは、水素、保護基、固体支持体への共有結合、または固体支持体に結合した結合基への結合であり、
ｎは、０、１、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０である。
【０１４９】
一実施形態において、本発明は、次式の化合物：
【化９１】
2020516296.tif 000094
またはその塩を提供し、
式中、
Ｌ１は、存在しないか、または結合基であり、
Ｌ２は、存在しないか、または結合基であり、
Ｒ２は、核酸であり、
Ｂは、二価であり、かつ、
【化９２】
2020516296.tif 000095
からなる群から選択され、ここで、
各Ｒ’は、独立して、Ｃ１〜９アルキル、Ｃ２〜９アルケニル、またはＣ２〜９アルキニルであり、このＣ１〜９アルキル、Ｃ２〜９アルケニル、またはＣ２〜９アルキニルは、ハロまたはヒドロキシルで場合により置換されており、
＊が付いた原子価は、Ｌ１に結合しているか、またはＬ１が存在しない場合はＲ１に結合しており、
＊＊が付いた原子価は、Ｌ２に結合しているか、またはＬ２が存在しない場合はＲ２に結合している。
【０１５０】
一実施形態において、Ｌ１及びＬ２は、独立して、１〜５０個の炭素原子を有する二価の、分枝状または非分枝状、飽和または不飽和の炭化水素鎖であり、炭化水素鎖中の炭素原子のうち１個以上（例えば１個、２個、３個、または４個）は、−Ｏ−、−ＮＲＸ−、−ＮＲＸ−Ｃ（＝Ｏ）−、−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＲＸ−、または−Ｓ−で場合により置き換えられており、ＲＸは、水素または（Ｃ１〜Ｃ６）アルキルであり、炭化水素鎖は、（Ｃ１〜Ｃ６）アルコキシ、（Ｃ３〜Ｃ６）シクロアルキル、（Ｃ１〜Ｃ６）アルカノイル、（Ｃ１〜Ｃ６）アルカノイルオキシ、（Ｃ１〜Ｃ６）アルコキシカルボニル、（Ｃ１〜Ｃ６）アルキルチオ、アジド、シアノ、ニトロ、ハロ、ヒドロキシ、オキソ（＝Ｏ）、カルボキシ、アリール、アリールオキシ、ヘテロアリール、及びヘテロアリールオキシから選択される１つ以上の置換基で場合により置換されている。
【０１５１】
一実施形態において、Ｌ１は、
【化９３】
2020516296.tif 000096
またはそれらの塩からなる群から選択される。
【０１５２】
一実施形態において、Ｌ１は、−Ｏ−、−Ｓ−、−（Ｃ＝Ｏ）−、−（Ｃ＝Ｏ）−ＮＨ−、−ＮＨ−（Ｃ＝Ｏ）、−（Ｃ＝Ｏ）−Ｏ−、−ＮＨ−（Ｃ＝Ｏ）−ＮＨ−、または−ＮＨ−（ＳＯ２）−からなる群から選択される結合を介してＢ１に結合している。
【０１５３】
一実施形態において、Ｌ１は、
【化９４】
2020516296.tif 000097
からなる群から選択される。
【０１５４】
一実施形態において、Ｌ２は、−Ｏ−を介してＲ２に結合している。
【０１５５】
一実施形態において、Ｌ２は、ヒドロキシで場合により置換されているＣ１〜４アルキレン−Ｏ−である。
【０１５６】
一実施形態において、Ｌ２は存在しない。
【０１５７】
一実施形態において、本発明は、化合物
【化９５】
2020516296.tif 000098
またはその塩を提供し、式中、Ｒ２は核酸である。
【０１５８】
本発明の一態様は、式Ｉの化合物、及び薬学的に許容される担体を含む、医薬組成物である。
【０１５９】
本発明の別の態様は、動物の肝臓に二本鎖ｓｉＲＮＡを送達する方法であって、式Ｉの化合物またはその薬学的に許容される塩を動物に投与することを含む、方法である。
【０１６０】
本発明の別の態様は、動物の疾患または障害（例えば、肝臓病、またはＢ型肝炎ウイルス感染などのウイルス感染）を処置する方法であって、式Ｉの化合物またはその薬学的に許容される塩を動物に投与することを含む、方法である。
【０１６１】
本発明のある特定の実施形態は、医学療法に使用するための、式（Ｉ）の化合物またはその薬学的に許容される塩を提供する。
【０１６２】
本発明のある特定の実施形態は、動物の疾患または障害（例えば、肝臓病、またはＢ型肝炎ウイルス感染などのウイルス感染）の予防処置または治療処置のための、式（Ｉ）の化合物またはその薬学的に許容される塩を提供する。
【０１６３】
本発明のある特定の実施形態は、動物の疾患または障害（例えば、肝臓病、またはＢ型肝炎ウイルス感染などのウイルス感染）を処置するための薬物を調製するための、式（Ｉ）の化合物またはその薬学的に許容される塩の使用を提供する。
【０１６４】
ある特定の実施形態において、動物は、ヒト（例えば、ＨＢＶ感染患者）などの哺乳動物である。
【０１６５】
一実施形態において、式Ｉの化合物は、次式（Ｉｄ）：
【化９６】
2020516296.tif 000099
（Ｉｄ）
を有し、
式中、
Ｒ１ｄは、
【化９７】
2020516296.tif 000100
及び
【化９８】
2020516296.tif 000101
から選択され、
Ｘｄは、Ｃ２〜１０アルキレンであり、
ｎｄは、０または１であり、
Ｒ２ｄは、表１の二本鎖ｓｉＲＮＡから選択される二本鎖ｓｉＲＮＡ分子であり、
Ｒ３ｄは、Ｈ、保護基、固体支持体への共有結合、または固体支持体に結合した結合基への結合である。
【０１６６】
一実施形態において、Ｒ３ｄは、式Ｉｄの化合物の残部を固体支持体に結合させる結合基を含む。化合物が、Ｒ２ｄが表１の二本鎖ｓｉＲＮＡから選択される二本鎖ｓｉＲＮＡ分子である式Ｉｄの化合物を調製するのに好適な中間体である限り、結合基の性質は重要ではない。
【０１６７】
一実施形態において、Ｒ３ｄのリンカーは、約２０ダルトン〜約１，０００ダルトンの分子量を有する。
【０１６８】
一実施形態において、Ｒ３ｄのリンカーは、約２０ダルトン〜約５００ダルトンの分子量を有する。
【０１６９】
一実施形態において、Ｒ３ｄのリンカーは、固体支持体を式Ｉの化合物の残部から長さ約５オングストローム〜約４０オングストローム（境界値を含む）だけ分離させる。
【０１７０】
一実施形態において、Ｒ３ｄのリンカーは、２〜１５個の炭素原子を有する二価の、分枝状または非分枝状、飽和または不飽和の炭化水素鎖であり、炭素原子のうち１個以上（例えば１個、２個、３個、または４個）は、（−Ｏ−）または（−Ｎ（Ｈ）−）で場合により置き換えられており、この鎖は、（Ｃ１〜Ｃ６）アルコキシ、（Ｃ３〜Ｃ６）シクロアルキル、（Ｃ１〜Ｃ６）アルカノイル、（Ｃ１〜Ｃ６）アルカノイルオキシ、（Ｃ１〜Ｃ６）アルコキシカルボニル、（Ｃ１〜Ｃ６）アルキルチオ、アジド、シアノ、ニトロ、ハロ、ヒドロキシ、オキソ（＝Ｏ）、カルボキシ、アリール、アリールオキシ、ヘテロアリール、及びヘテロアリールオキシから選択される１つ以上（例えば１つ、２つ、３つ、または４つ）の置換基で炭素が場合により置換されている。
【０１７１】
一実施形態において、Ｒ３ｄのリンカーは、２〜１０個の炭素原子を有する二価の、分枝状または非分枝状、飽和または不飽和の炭化水素鎖であり、炭素原子のうち１個以上（例えば１個、２個、３個、または４個）は、（−Ｏ−）または（−Ｎ（Ｈ）−）で場合により置き換えられており、この鎖は、（Ｃ１〜Ｃ６）アルコキシ、（Ｃ３〜Ｃ６）シクロアルキル、（Ｃ１〜Ｃ６）アルカノイル、（Ｃ１〜Ｃ６）アルカノイルオキシ、（Ｃ１〜Ｃ６）アルコキシカルボニル、（Ｃ１〜Ｃ６）アルキルチオ、アジド、シアノ、ニトロ、ハロ、ヒドロキシ、オキソ（＝Ｏ）、カルボキシ、アリール、アリールオキシ、ヘテロアリール、及びヘテロアリールオキシから選択される１つ以上（例えば１つ、２つ、３つ、または４つ）の置換基で炭素が場合により置換されている。
【０１７２】
一実施形態において、Ｒ３ｄのリンカーは、−Ｃ（＝Ｏ）ＣＨ２ＣＨ２Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（Ｈ）−である。
【０１７３】
一実施形態において、Ｒ１ｄは、
【化９９】
2020516296.tif 000102
である。
【０１７４】
一実施形態において、Ｒ１ｄは、
【化１００】
2020516296.tif 000103
である。
【０１７５】
一実施形態において、Ｘｄは、Ｃ８アルキレンである。
【０１７６】
一実施形態において、ｎｄは、０である。
【０１７７】
一実施形態において、Ｒ２ｄは、ｓｉＲＮＡである。
【０１７８】
一実施形態において、Ｒ３ｄは、Ｈである。
【０１７９】
別の実施形態では、（Ｉｄ）の化合物またはその塩は、
【化１０１】
2020516296.tif 000104
ならびにそれらの塩からなる群から選択される。
【０１８０】
本発明の一態様は、式（Ｉｄ）の化合物、及び薬学的に許容される担体を含む、医薬組成物である。
【０１８１】
本発明の一態様は、動物の肝臓に二本鎖ｓｉＲＮＡを送達する方法であって、式（Ｉｄ）の化合物またはその薬学的に許容される塩を動物に投与することを含む、方法である。
【０１８２】
本発明の別の態様は、動物の疾患または障害（例えば、Ｂ型肝炎ウイルス感染などのウイルス感染）を処置する方法であって、式（Ｉｄ）の化合物またはその薬学的に許容される塩を動物に投与することを含む、方法である。
【０１８３】
本発明のある特定の実施形態は、医学療法に使用するための、式（Ｉｄ）の化合物またはその薬学的に許容される塩を提供する。
【０１８４】
本発明のある特定の実施形態は、動物の疾患または障害（例えば、Ｂ型肝炎ウイルス感染などのウイルス感染）の予防処置または治療処置のための、式（Ｉｄ）の化合物またはその薬学的に許容される塩を提供する。
【０１８５】
本発明のある特定の実施形態は、動物の疾患または障害（例えば、Ｂ型肝炎ウイルス感染などのウイルス感染）を処置するための薬物を調製するための、式（Ｉｄ）の化合物またはその薬学的に許容される塩の使用を提供する。
【０１８６】
ある特定の実施形態において、動物は、ヒト（例えば、ＨＢＶ感染患者）などの哺乳動物である。
【０１８７】
本発明は、式（Ｉｄ）の化合物を調製するために有用である、本明細書に開示される合成中間体及び方法も提供する。例えば、本発明は、式Ｉｅの中間体化合物：
【化１０２】
2020516296.tif 000105
（Ｉｅ）
またはその塩を含み、式中、
Ｒ１ｄは、
【化１０３】
2020516296.tif 000106
から選択され、
Ｘｄは、Ｃ２〜８アルキレンであり、
ｎｄは、０または１であり、
Ｐｇ１は、Ｈまたは好適な保護基であり、
Ｒ３ｄは、Ｈ、保護基、固体支持体への共有結合、または固体支持体に結合した結合基への結合である。図１は、標的化リガンド／リンカーが固相支持体に結合しており、Ｐｇ１が保護基ＤＭＴｒである、式（Ｉｅ）の代表的な中間体化合物を例示する。
【０１８８】
一実施形態において、Ｐｇ１は、ＴＭＴｒ（トリメトキシトリチル）、ＤＭＴｒ（ジメトキシトリチル）、ＭＭＴｒ（モノメトキシトリチル）、またはＴｒ（トリチル）である。
【０１８９】
本発明はまた、本明細書に記載の式（Ｉｄ）の化合物を調製する方法であって、対応する式（Ｉｅ）の化合物：
【化１０４】
2020516296.tif 000107
（Ｉｅ）
（式中、
Ｘｄは、Ｃ２〜８アルキレンであり、
ｎｄは、０または１であり、
Ｐｇ１は、Ｈであり、
Ｒ３ｄは、固体支持体への共有結合、または固体支持体に結合した結合基への結合である）を、固相核酸合成条件に供し、対応する式Ｉｄの化合物（式中、Ｒ２ｄは、表１の二本鎖ｓｉＲＮＡ分子から選択される二本鎖ｓｉＲＮＡ分子である）をもたらすことを含む、方法を提供する。
【０１９０】
一実施形態において、本方法は、化合物を固体支持体から除去して、Ｒ３ｄがＨである対応する式Ｉｄの化合物をもたらすことを更に含む。
【０１９１】
一実施形態において、化合物は、式Ｉｄの化合物：
【化１０５】
2020516296.tif 000108
（Ｉｄ）
またはその塩
（式中、Ｒ１ｄは、
【化１０６】
2020516296.tif 000109
及び
【化１０７】
2020516296.tif 000110
から選択され、
Ｘｄは、Ｃ２〜１０アルキレンであり、
Ｎｄは、０または１であり、
Ｒ２ｄは、表１の二本鎖ｓｉＲＮＡ分子から選択される二本鎖ｓｉＲＮＡ分子であり、
Ｒ３ｄは、Ｈ、保護基、固体支持体への共有結合、または固体支持体に結合した結合基への結合である）ではない。
【０１９２】
一実施形態において、化合物は、式Ｉｅの化合物：
【化１０８】
2020516296.tif 000111
（Ｉｅ）
またはその塩
（式中、Ｒ１ｄは、
【化１０９】
2020516296.tif 000112
から選択され、
Ｘｄは、Ｃ２〜８アルキレンであり、
ｎｄは、０または１であり、
Ｐｇ１は、Ｈまたは好適な保護基であり、
Ｒ３ｄは、Ｈ、保護基、固体支持体への共有結合、または固体支持体に結合した結合基への結合である）ではない。
【０１９３】
一実施形態において、Ｒ３ｄは、Ｈである。
【０１９４】
一実施形態において、Ｒ３ｄは、固体支持体への共有結合である。
【０１９５】
一実施形態において、Ｒ３ｄは、固体支持体に結合した結合基への結合であり、結合基は、２〜１５個の炭素原子を有する二価の、分枝状または非分枝状、飽和または不飽和の炭化水素鎖であり、炭素原子のうち１個以上（例えば１個、２個、３個、または４個）は、（−Ｏ−）または（−Ｎ（Ｈ）−）で場合により置き換えられており、この鎖は、（Ｃ１〜Ｃ６）アルコキシ、（Ｃ３〜Ｃ６）シクロアルキル、（Ｃ１〜Ｃ６）アルカノイル、（Ｃ１〜Ｃ６）アルカノイルオキシ、（Ｃ１〜Ｃ６）アルコキシカルボニル、（Ｃ１〜Ｃ６）アルキルチオ、アジド、シアノ、ニトロ、ハロ、ヒドロキシ、オキソ（＝Ｏ）、カルボキシ、アリール、アリールオキシ、ヘテロアリール、及びヘテロアリールオキシから選択される１つ以上（例えば１つ、２つ、３つ、または４つ）の置換基で炭素が場合により置換されている。
【０１９６】
一実施形態において、Ｒ３ｄは、固体支持体に結合した結合基への結合であり、結合基は、２〜１０個の炭素原子を有する二価の、分枝状または非分枝状、飽和または不飽和の炭化水素鎖であり、炭素原子のうち１個以上（例えば１個、２個、３個、または４個）は、（−Ｏ−）または（−Ｎ（Ｈ）−）で場合により置き換えられており、この鎖は、（Ｃ１〜Ｃ６）アルコキシ、（Ｃ３〜Ｃ６）シクロアルキル、（Ｃ１〜Ｃ６）アルカノイル、（Ｃ１〜Ｃ６）アルカノイルオキシ、（Ｃ１〜Ｃ６）アルコキシカルボニル、（Ｃ１〜Ｃ６）アルキルチオ、アジド、シアノ、ニトロ、ハロ、ヒドロキシ、オキソ（＝Ｏ）、カルボキシ、アリール、アリールオキシ、ヘテロアリール、及びヘテロアリールオキシから選択される１つ以上（例えば１つ、２つ、３つ、または４つ）の置換基で炭素が場合により置換されている。
【０１９７】
一実施形態において、Ｒ３ｄは、固体支持体に結合した結合基への結合であり、結合基は、−Ｃ（＝Ｏ）ＣＨ２ＣＨ２Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（Ｈ）−である。
【０１９８】
一実施形態において、本発明は、式（Ｉ）の化合物：
【化１１０】
2020516296.tif 000113
（Ｉ）
またはその塩を提供し、
式中、
Ｒ１は、Ｈまたは合成活性化基であり、
Ｌ１は、存在しないか、または結合基であり、
Ｌ２は、存在しないか、または結合基であり、
Ｒ２は、表１の二本鎖ｓｉＲＮＡ分子から選択される二本鎖ｓｉＲＮＡ分子であり、
環Ａは、存在しないか、３〜２０員シクロアルキル、５〜２０員アリール、５〜２０員ヘテロアリール、または３〜２０員ヘテロシクロアルキルであり、
各ＲＡは、独立して、水素、ヒドロキシ、ＣＮ、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、−Ｃ１〜２アルキル−ＯＲＢ、Ｃ１〜１０アルキルＣ２〜１０アルケニル、及びＣ２〜１０アルキニルからなる群から選択され、このＣ１〜１０アルキルＣ２〜１０アルケニル、及びＣ２〜１０アルキニルは、ハロ、ヒドロキシ、及びＣ１〜３アルコキシから独立して選択される１つ以上の基で場合により置換されており、
ＲＢは、水素、保護基、固体支持体への共有結合、または固体支持体に結合した結合基への結合であり、
ｎは、０、１、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０である。
【０１９９】
一実施形態において、本発明は、式（Ｉ）の化合物：
【化１１１】
2020516296.tif 000114
（Ｉ）
またはその塩を提供し、
式中、
Ｒ１は、標的化リガンドであり、
Ｌ１は、存在しないか、または結合基であり、
Ｌ２は、存在しないか、または結合基であり、
Ｒ２は、Ｈまたは合成活性化基であり、
環Ａは、存在しないか、３〜２０員シクロアルキル、５〜２０員アリール、５〜２０員ヘテロアリール、または３〜２０員ヘテロシクロアルキルであり、
各ＲＡは、独立して、水素、ヒドロキシ、ＣＮ、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、−Ｃ１〜２アルキル−ＯＲＢ、Ｃ１〜１０アルキルＣ２〜１０アルケニル、及びＣ２〜１０アルキニルからなる群から選択され、このＣ１〜１０アルキルＣ２〜１０アルケニル、及びＣ２〜１０アルキニルは、ハロ、ヒドロキシ、及びＣ１〜３アルコキシから独立して選択される１つ以上の基で場合により置換されており、
ＲＢは、水素、保護基、固体支持体への共有結合、または固体支持体に結合した結合基への結合であり、
ｎは、０、１、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０である。
【０２００】
一実施形態において、本発明は、式（Ｉｇ）の化合物：
【化１１２】
2020516296.tif 000115
（Ｉｇ）
またはその塩を提供し、
式中、
Ｂは、−Ｎ−または−ＣＨ−であり、
Ｌ２は、ヒドロキシルまたはハロで場合により置換されているＣ１〜４アルキレン−Ｏ−であり、
ｎは、０、１、２、３、４、５、６、または７である。
【０２０１】
一実施形態において、本発明は、
【化１１３】
2020516296.tif 000116
ならびにそれらの塩からなる群から選択される化合物を提供し、
式中、
Ｑは−Ｌ１−Ｒ１であり、
Ｒ’は、Ｃ１〜９アルキル、Ｃ２〜９アルケニル、またはＣ２〜９アルキニルであり、このＣ１〜９アルキル、Ｃ２〜９アルケニル、またはＣ２〜９アルキニルは、ハロまたはヒドロキシルで場合により置換されている。
【０２０２】
一実施形態において、本発明は、
【化１１４】
2020516296.tif 000117
ならびにそれらの塩からなる群から選択される化合物を提供し、
式中、Ｑは−Ｌ１−Ｒ１である。
【０２０３】
一実施形態において、本発明は、式（Ｉｇ）の化合物：
【化１１５】
2020516296.tif 000118
（Ｉｇ）
またはその塩を提供し、
式中、
Ｂは、−Ｎ−または−ＣＨ−であり、
Ｌ１は、存在しないか、または結合基であり、
Ｌ２は、ヒドロキシルまたはハロで場合により置換されているＣ１〜４アルキレン−Ｏ−であり、
ｎは、０、１、２、３、４、５、６、または７であり、
Ｒ１は、Ｈまたは合成活性化基であり、
Ｒ２は、Ｈまたは合成活性化基である。
【０２０４】
一実施形態において、本発明は、
【化１１６】
2020516296.tif 000119
からなる群から選択される化合物、またはその塩を提供し、
式中、Ｑは−Ｌ１−Ｒ１であり、
Ｌ１は、存在しないか、または結合基であり、
Ｒ’は、Ｃ１〜９アルキル、Ｃ２〜９アルケニル、またはＣ２〜９アルキニルであり、このＣ１〜９アルキル、Ｃ２〜９アルケニル、またはＣ２〜９アルキニルは、ハロまたはヒドロキシルで場合により置換されており、
Ｒ１は、Ｈまたは合成活性化基であり、
Ｒ２は、Ｈまたは合成活性化基である。
【０２０５】
一実施形態において、本発明は、
【化１１７】
2020516296.tif 000120
からなる群から選択される化合物、またはその塩を提供し、
式中、
Ｑは−Ｌ１−Ｒ１であり、
Ｌ１は、存在しないか、または結合基であり、
Ｒ１は、Ｈまたは合成活性化基であり、
Ｒ２は、Ｈまたは合成活性化基である。
【０２０６】
一実施形態において、Ｒ１は、Ｈ、またはＤＣＣ、ＨＯＢｔ、ＥＤＣ、ＢＯＰ、ＰｙＢＯＰ、もしくはＨＢＴＵから誘導できる合成活性化基である。
【０２０７】
一実施形態において、Ｒ２は、Ｈ、アセテート、トリフレート、メシレート、またはサクシネートである。
【０２０８】
一実施形態において、Ｒ１は、ＤＣＣ、ＨＯＢｔ、ＥＤＣ、ＢＯＰ、ＰｙＢＯＰ、またはＨＢＴＵから誘導できる合成活性化基である。
【０２０９】
一実施形態において、Ｒ２は、アセテート、トリフレート、メシレート、またはサクシネートである。
【０２１０】
一実施形態において、Ｌ１は、５〜２０個の炭素原子を有する二価の、分枝状または非分枝状、飽和または不飽和の炭化水素鎖であり、炭化水素鎖中の炭素原子のうち１個以上（例えば１個、２個、３個、または４個）は、場合により置き換えられており、−Ｏ−、−ＮＨ−、−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−、−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ−、または−Ｓ−である。
【０２１１】
一実施形態において、本発明は、式（ＸＸ）の化合物：
【化１１８】
2020516296.tif 000121
（ＸＸ）
またはその塩を提供し、
式中、
Ｒ１は、標的化リガンドであり、
Ｌ１は、存在しないか、または結合基であり、
Ｌ２は、存在しないか、または結合基であり、
Ｒ２は、表１の二本鎖ｓｉＲＮＡ分子から選択される二本鎖ｓｉＲＮＡ分子であり、
Ｂは、二価であり、かつ、
【化１１９】
2020516296.tif 000122
【化１２０】
2020516296.tif 000123
からなる群から選択され、ここで、
各Ｒ’は、独立して、Ｃ１〜９アルキル、Ｃ２〜９アルケニル、またはＣ２〜９アルキニルであり、このＣ１〜９アルキル、Ｃ２〜９アルケニル、またはＣ２〜９アルキニルは、ハロまたはヒドロキシルで場合により置換されており、
＊が付いた原子価は、Ｌ１に結合しているか、またはＬ１が存在しない場合はＲ１に結合しており、
＊＊が付いた原子価は、Ｌ２に結合しているか、またはＬ２が存在しない場合はＲ２に結合している。
【０２１２】
一実施形態において、Ｒ１は、２〜８の糖類を含む。
【０２１３】
一実施形態において、Ｒ１は、２〜６の糖類を含む。
【０２１４】
一実施形態において、Ｒ１は、２〜４の糖類を含む。
【０２１５】
一実施形態において、Ｒ１は、３〜８の糖類を含む。
【０２１６】
一実施形態において、Ｒ１は、３〜６の糖類を含む。
【０２１７】
一実施形態において、Ｒ１は、３〜４の糖類を含む。
【０２１８】
一実施形態において、Ｒ１は、３つの糖類を含む。
【０２１９】
一実施形態において、Ｒ１は、４つの糖類を含む。
【０２２０】
一実施形態において、Ｒ１は、次式：
【化１２１】
2020516296.tif 000124
を有し、
式中、
Ｂ１は、約１個〜約２０個の原子を含む三価基であり、Ｌ１、Ｔ１、及びＴ２に共有結合しており、
Ｂ２は、約１個〜約２０個の原子を含む三価基であり、Ｔ１、Ｔ３、及びＴ４に共有結合しており、
Ｂ３は、約１個〜約２０個の原子を含む三価基であり、Ｔ２、Ｔ５、及びＴ６に共有結合しており、
Ｔ１は、存在しないか、または結合基であり、
Ｔ２は、存在しないか、または結合基であり、
Ｔ３は、存在しないか、または結合基であり、
Ｔ４は、存在しないか、または結合基であり、
Ｔ５は、存在しないか、または結合基であり、
Ｔ６は、存在しないか、または結合基である。
【０２２１】
一実施形態において、各糖類は、独立して、
【化１２２】
2020516296.tif 000125
から選択され、
式中、
ＸはＮＲ３であり、Ｙは、−（Ｃ＝Ｏ）Ｒ４、−ＳＯ２Ｒ５、及び−（Ｃ＝Ｏ）ＮＲ６Ｒ７から選択されるか、またはＸは−（Ｃ＝Ｏ）−であり、ＹはＮＲ８Ｒ９であり、
Ｒ３は、水素または（Ｃ１〜Ｃ４）アルキルであり、
Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、及びＲ９は、それぞれ独立して、水素、（Ｃ１〜Ｃ８）アルキル、（Ｃ１〜Ｃ８）ハロアルキル、（Ｃ１〜Ｃ８）アルコキシ、ならびにハロ、（Ｃ１〜Ｃ４）アルキル、（Ｃ１〜Ｃ４）ハロアルキル、（Ｃ１〜Ｃ４）アルコキシ、及び（Ｃ１〜Ｃ４）ハロアルコキシからなる群から独立して選択される１つ以上の基で場合により置換されている（Ｃ３〜Ｃ６）シクロアルキルからなる群から選択され、
Ｒ１０は、−ＯＨ、−ＮＲ８Ｒ９、または−Ｆであり、
Ｒ１１は、−ＯＨ、−ＮＲ８Ｒ９、−Ｆ、またはハロ、ヒドロキシル、カルボキシル、アミノ、（Ｃ１〜Ｃ４）アルキル、（Ｃ１〜Ｃ４）ハロアルキル、（Ｃ１〜Ｃ４）アルコキシ、及び（Ｃ１〜Ｃ４）ハロアルコキシからなる群から独立して選択される１つ以上の基で場合により置換されている５員複素環である。
【０２２２】
一実施形態において、各糖類は、独立して、
【化１２３】
2020516296.tif 000126
からなる群から選択される。
【０２２３】
一実施形態において、各糖類は、独立して、
【化１２４】
2020516296.tif 000127
である。
【０２２４】
一実施形態において、Ｔ１及びＴ２のうちの一方は存在しない。
【０２２５】
一実施形態において、Ｔ１及びＴ２はいずれも存在しない。
【０２２６】
一実施形態において、Ｔ１、Ｔ２、Ｔ３、Ｔ４、Ｔ５、及びＴ６のそれぞれは、独立して、存在しないか、または１〜５０個の炭素原子を有する分枝状もしくは非分枝状、飽和もしくは不飽和の炭化水素鎖であり、炭化水素鎖中の炭素原子のうち１個以上（例えば１個、２個、３個、または４個）は、−Ｏ−、−ＮＲＸ−、−ＮＲＸ−Ｃ（＝Ｏ）−、−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＲＸ−、または−Ｓ−で場合により置き換えられており、ＲＸは、水素または（Ｃ１〜Ｃ６）アルキルであり、炭化水素鎖は、（Ｃ１〜Ｃ６）アルコキシ、（Ｃ３〜Ｃ６）シクロアルキル、（Ｃ１〜Ｃ６）アルカノイル、（Ｃ１〜Ｃ６）アルカノイルオキシ、（Ｃ１〜Ｃ６）アルコキシカルボニル、（Ｃ１〜Ｃ６）アルキルチオ、アジド、シアノ、ニトロ、ハロ、ヒドロキシ、オキソ（＝Ｏ）、カルボキシ、アリール、アリールオキシ、ヘテロアリール、及びヘテロアリールオキシから選択される１つ以上（例えば１つ、２つ、３つ、または４つ）の置換基で場合により置換されている。
【０２２７】
一実施形態において、Ｔ１、Ｔ２、Ｔ３、Ｔ４、Ｔ５、及びＴ６のそれぞれは、独立して、存在しないか、または１〜２０個の炭素原子を有する分枝状もしくは非分枝状、飽和もしくは不飽和の炭化水素鎖であり、炭化水素鎖中の炭素原子のうち１個以上（例えば１個、２個、３個、または４個）は、−Ｏ−、−ＮＲＸ−、−ＮＲＸ−Ｃ（＝Ｏ）−、−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＲＸ−、または−Ｓ−で場合により置き換えられており、ＲＸは、水素または（Ｃ１〜Ｃ６）アルキルであり、炭化水素鎖は、（Ｃ１〜Ｃ６）アルコキシ、（Ｃ３〜Ｃ６）シクロアルキル、（Ｃ１〜Ｃ６）アルカノイル、（Ｃ１〜Ｃ６）アルカノイルオキシ、（Ｃ１〜Ｃ６）アルコキシカルボニル、（Ｃ１〜Ｃ６）アルキルチオ、アジド、シアノ、ニトロ、ハロ、ヒドロキシ、オキソ（＝Ｏ）、カルボキシ、アリール、アリールオキシ、ヘテロアリール、及びヘテロアリールオキシから選択される１つ以上（例えば１つ、２つ、３つ、または４つ）の置換基で場合により置換されている。
【０２２８】
一実施形態において、Ｔ１、Ｔ２、Ｔ３、Ｔ４、Ｔ５、及びＴ６のそれぞれは、独立して、存在しないか、または１〜５０個の炭素原子を有する分枝状もしくは非分枝状、飽和もしくは不飽和の炭化水素鎖、またはその塩であり、炭化水素鎖中の炭素原子のうち１個以上（例えば１個、２個、３個、または４個）は、−Ｏ−または−ＮＲＸ−で場合により置き換えられており、ＲＸは、水素または（Ｃ１〜Ｃ６）アルキルであり、炭化水素鎖は、ハロ、ヒドロキシ、及びオキソ（＝Ｏ）から選択される１つ以上（例えば１つ、２つ、３つ、または４つ）の置換基で場合により置換されている。
【０２２９】
一実施形態において、Ｔ１、Ｔ２、Ｔ３、Ｔ４、Ｔ５、及びＴ６のそれぞれは、独立して、存在しないか、または１〜２０個の炭素原子を有する分枝状もしくは非分枝状、飽和もしくは非飽和の炭化水素鎖であり、炭化水素鎖中の炭素原子のうち１個以上（例えば１個、２個、３個、または４個）は、−Ｏ−で場合により置き換えられており、炭化水素鎖は、ハロ、ヒドロキシ、及びオキソ（＝Ｏ）から選択される１つ以上（例えば１つ、２つ、３つ、または４つ）の置換基で場合により置換されている。
【０２３０】
一実施形態において、Ｔ１、Ｔ２、Ｔ３、Ｔ４、Ｔ５、及びＴ６のそれぞれは、独立して、存在しないか、または１〜２０個の炭素原子を有する分枝状もしくは非分枝状、飽和もしくは非飽和の炭化水素鎖であり、炭化水素鎖中の炭素原子のうち１個以上（例えば１個、２個、３個、または４個）は、−Ｏ−で場合により置き換えられており、炭化水素鎖は、ハロ、ヒドロキシ、及びオキソ（＝Ｏ）から選択される１つ以上（例えば１つ、２つ、３つ、または４つ）の置換基で場合により置換されている。
【０２３１】
一実施形態において、Ｔ３、Ｔ４、Ｔ５、及びＴ６のうち少なくとも１つは、
【化１２５】
2020516296.tif 000128
であり、
式中、
ｎ＝１、２、３である。
【０２３２】
一実施形態において、Ｔ３、Ｔ４、Ｔ５、及びＴ６のそれぞれは、独立して、
【化１２６】
2020516296.tif 000129
からなる群から選択され、
式中、
ｎ＝１、２、３である。
【０２３３】
一実施形態において、Ｔ１及びＴ２のうち少なくとも１つはグリシンである。
【０２３４】
一実施形態において、Ｔ１及びＴ２のそれぞれはグリシンである。
【０２３５】
一実施形態において、Ｂ１は、１〜１５個の原子を含む三価基であり、Ｌ１、Ｔ１、及びＴ２に共有結合している。
【０２３６】
一実施形態において、Ｂ１は、１〜１０個の原子を含む三価基であり、Ｌ１、Ｔ１、及びＴ２に共有結合している。
【０２３７】
一実施形態において、Ｂ１は（Ｃ１〜Ｃ６）アルキルを含む。
【０２３８】
一実施形態において、Ｂ１はＣ３〜８シクロアルキルを含む。
【０２３９】
一実施形態において、Ｂ１はシリル基を含む。
【０２４０】
一実施形態において、Ｂ１はＤ−アミノ酸またはＬ−アミノ酸を含む。
【０２４１】
一実施形態において、Ｂ１は糖類を含む。
【０２４２】
一実施形態において、Ｂ１はリン酸基を含む。
【０２４３】
一実施形態において、Ｂ１はホスホン酸基を含む。
【０２４４】
一実施形態において、Ｂ１はアリールを含む。
【０２４５】
一実施形態において、Ｂ１はフェニル環を含む。
【０２４６】
一実施形態において、Ｂ１はフェニル環である。
【０２４７】
一実施形態において、Ｂ１はＣＨである。
【０２４８】
一実施形態において、Ｂ１はヘテロアリールを含む。
【０２４９】
一実施形態において、Ｂ１は、
【化１２７】
2020516296.tif 000130
からなる群から選択される。
【０２５０】
一実施形態において、Ｂ１は、
【化１２８】
2020516296.tif 000131
からなる群から選択される。
【０２５１】
一実施形態において、Ｂ２は、１〜１５個の原子を含む三価基であり、Ｌ１、Ｔ１、及びＴ２に共有結合している。
【０２５２】
一実施形態において、Ｂ２は、１〜１０個の原子を含む三価基であり、Ｌ１、Ｔ１、及びＴ２に共有結合している。
【０２５３】
一実施形態において、Ｂ２は（Ｃ１〜Ｃ６）アルキルを含む。
【０２５４】
一実施形態において、Ｂ２はＣ３〜８シクロアルキルを含む。
【０２５５】
一実施形態において、Ｂ２はシリル基を含む。
【０２５６】
一実施形態において、Ｂ２はＤ−アミノ酸またはＬ−アミノ酸を含む。
【０２５７】
一実施形態において、Ｂ２は糖類を含む。
【０２５８】
一実施形態において、Ｂ２はリン酸基を含む。
【０２５９】
一実施形態において、Ｂ２はホスホン酸基を含む。
【０２６０】
一実施形態において、Ｂ２はアリールを含む。
【０２６１】
一実施形態において、Ｂ２はフェニル環を含む。
【０２６２】
一実施形態において、Ｂ２はフェニル環である。
【０２６３】
一実施形態において、Ｂ２はＣＨである。
【０２６４】
一実施形態において、Ｂ２はヘテロアリールを含む。
【０２６５】
一実施形態において、Ｂ２は、
【化１２９】
2020516296.tif 000132
からなる群から選択される。
【０２６６】
一実施形態において、Ｂ２は、
【化１３０】
2020516296.tif 000133
またはそれらの塩からなる群から選択される。
【０２６７】
一実施形態において、Ｂ３は、１〜１５個の原子を含む三価基であり、Ｌ１、Ｔ１、及びＴ２に共有結合している。
【０２６８】
一実施形態において、Ｂ３は、１〜１０個の原子を含む三価基であり、Ｌ１、Ｔ１、及びＴ２に共有結合している。
【０２６９】
一実施形態において、Ｂ３は（Ｃ１〜Ｃ６）アルキルを含む。
【０２７０】
一実施形態において、Ｂ３はＣ３〜８シクロアルキルを含む。
【０２７１】
一実施形態において、Ｂ３はシリル基を含む。
【０２７２】
一実施形態において、Ｂ３はＤ−アミノ酸またはＬ−アミノ酸を含む。
【０２７３】
一実施形態において、Ｂ３は糖類を含む。
【０２７４】
一実施形態において、Ｂ３はリン酸基を含む。
【０２７５】
一実施形態において、Ｂ３はホスホン酸基を含む。
【０２７６】
一実施形態において、Ｂ３はアリールを含む。
【０２７７】
一実施形態において、Ｂ３はフェニル環を含む。
【０２７８】
一実施形態において、Ｂ３はフェニル環である。
【０２７９】
一実施形態において、Ｂ３はＣＨである。
【０２８０】
一実施形態において、Ｂ３はヘテロアリールを含む。
【０２８１】
一実施形態において、Ｂ３は、
【化１３１】
2020516296.tif 000134
からなる群から選択される。
【０２８２】
一実施形態において、Ｂ３は、
【化１３２】
2020516296.tif 000135
またはそれらの塩からなる群から選択される。
【０２８３】
一実施形態において、Ｌ１及びＬ２は、独立して、１〜５０個の炭素原子を有する二価の、分枝状または非分枝状、飽和または不飽和の炭化水素鎖であり、炭化水素鎖中の炭素原子のうち１個以上（例えば１個、２個、３個、または４個）は、−Ｏ−、−ＮＲＸ−、−ＮＲＸ−Ｃ（＝Ｏ）−、−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＲＸ−、または−Ｓ−で場合により置き換えられており、ＲＸは、水素または（Ｃ１〜Ｃ６）アルキルであり、炭化水素鎖は、（Ｃ１〜Ｃ６）アルコキシ、（Ｃ３〜Ｃ６）シクロアルキル、（Ｃ１〜Ｃ６）アルカノイル、（Ｃ１〜Ｃ６）アルカノイルオキシ、（Ｃ１〜Ｃ６）アルコキシカルボニル、（Ｃ１〜Ｃ６）アルキルチオ、アジド、シアノ、ニトロ、ハロ、ヒドロキシ、オキソ（＝Ｏ）、カルボキシ、アリール、アリールオキシ、ヘテロアリール、及びヘテロアリールオキシから選択される１つ以上（例えば１つ、２つ、３つ、または４つ）の置換基で場合により置換されている。
【０２８４】
一実施形態において、Ｌ１は、
【化１３３】
2020516296.tif 000136
またはそれらの塩からなる群から選択される。
【０２８５】
一実施形態において、Ｌ１は、−Ｏ−、−Ｓ−、−（Ｃ＝Ｏ）−、−（Ｃ＝Ｏ）−ＮＨ−、−ＮＨ−（Ｃ＝Ｏ）、−（Ｃ＝Ｏ）−Ｏ−、−ＮＨ−（Ｃ＝Ｏ）−ＮＨ−、または−ＮＨ−（ＳＯ２）−からなる群から選択される結合を介してＢ１に結合している。
【０２８６】
一実施形態において、Ｌ１は、
【化１３４】
2020516296.tif 000137
からなる群から選択される。
【０２８７】
一実施形態において、Ｌ２は、−Ｏ−を介してＲ２に結合している。
【０２８８】
一実施形態において、Ｌ２は、ヒドロキシで場合により置換されているＣ１〜４アルキレン−Ｏ−である。
【０２８９】
一実施形態において、Ｌ２は、−Ｏ−を介してＲ２に結合している。
【０２９０】
一実施形態において、Ｌ２は存在しない。
【０２９１】
一実施形態において、本発明は、
【化１３５】
2020516296.tif 000138
【化１３６】
2020516296.tif 000139
【化１３７】
2020516296.tif 000140
【化１３８】
2020516296.tif 000141
【化１３９】
2020516296.tif 000142
【化１４０】
2020516296.tif 000143
【化１４１】
2020516296.tif 000144
【化１４２】
2020516296.tif 000145
及びそれらの薬学的に許容される塩からなる群から選択される化合物または塩を提供し、式中、Ｒ２は、表１の二本鎖ｓｉＲＮＡ分子から選択される二本鎖ｓｉＲＮＡ分子である。
【０２９２】
一実施形態において、本発明は、次式の化合物：
【化１４３】
2020516296.tif 000146
またはその塩を提供し、式中、Ｒ２は核酸である。
【０２９３】
一実施形態において、本発明は、次式の化合物：
【化１４４】
2020516296.tif 000147
またはその塩を提供し、式中、Ｒ２は核酸である。
【０２９４】
一実施形態において、核酸分子（例えば、ｓｉＲＮＡ）は、センス鎖の３’末端におけるリン酸の酸素を介して化合物の残部に結合している。
【０２９５】
一実施形態において、化合物または塩は皮下投与される。
【０２９６】
化合物が次式の基を含む場合、
【化１４５】
2020516296.tif 000148
環上で４種の立体異性体（２種のシス及び２種のトランス）が可能である。別段の記載がない限り、本発明の化合物は、そのような環に関する４種全ての立体異性体を含む。一実施形態において、２つのＲ’基は、シス配座をとる。一実施形態において、２つのＲ’基は、トランス配座をとる。
【０２９７】
本発明の一態様は、
（ａ）表１の二本鎖ｓｉＲＮＡ分子から選択される１つ以上の二本鎖ｓｉＲＮＡ分子と、
（ｂ）カチオン性脂質と、
（ｃ）非カチオン性脂質と
を含む、核酸−脂質粒子である。
【実施例】
【０２９８】
特定の実施例によって本発明を更に詳細に説明する。以下の実施例は例示目的で提示するものであり、本発明をいかようにも限定することを意図するものではない。当業者であれば、変更または改変しても本質的に同じ結果をもたらすことができる種々の重要でないパラメータを容易に認識するであろう。一実施形態において、オリゴヌクレオチドは表１に記載される二本鎖ｓｉＲＮＡ分子であることが理解される。
【０２９９】
実施例１。コンジュゲート１の合成
スキーム１。
【化１４６】
2020516296.tif 000149
スキーム２。
【化１４７】
2020516296.tif 000150
スキーム３。
【化１４８】
2020516296.tif 000151
スキーム４。
【化１４９】
2020516296.tif 000152
スキーム５。
【化１５０】
2020516296.tif 000153
【化１５１】
2020516296.tif 000154
【化１５２】
2020516296.tif 000155
【化１５３】
2020516296.tif 000156
【０３００】
ステップ１。２−（２−（２−（２−ヒドロキシエトキシ）エトキシ）エトキシ）エチル４−メチルベンゼンスルホネート３の調製
【化１５４】
2020516296.tif 000157
ＴＨＦ（１７５ｍＬ）及びＮａＯＨ水溶液（５Ｍ、１４５ｍＬ）にテトラエチレングリコール（９３４ｇ、４．８ｍｏｌ）を含む溶液を冷却し（０℃）、ＴＨＦ（６０５ｍＬ）中に溶解したｐ−トルエンスルホニルクロリド（９１．４ｇ、４８０ｍｍｏｌ）で処理し、次いで２時間撹拌した（０℃）。この混合物を水（３Ｌ）で希釈し、ＣＨ２Ｃｌ２で抽出した（３×５００ｍＬ）。合わせた抽出物を水及びブラインで洗浄し、次いで乾燥させ（ＭｇＳＯ４）、濾過し、濃縮させて、２−（２−（２−（２−ヒドロキシエトキシ）エトキシ）エトキシ）エチル４−メチルベンゼンスルホネート（３）（１４０ｇ、８４％）を淡黄色油状物として得た。Ｒｆ （０．５７， １０％ ＭｅＯＨ−ＣＨ２Ｃｌ２）。
【０３０１】
ステップ２。２−（２−（２−（２−アジドエトキシ）エトキシ）エトキシ）エタン−１−オール（４）の調製
【化１５５】
2020516296.tif 000158
３（１４０ｇ、４０３ｍｍｏｌ）のＤＭＦ溶液（８８０ｍＬ）をアジ化ナトリウム（１３１ｇ、２．０２ｍｏｌ）で処理し、一晩加熱した（４５℃）。ＤＭＦの大部分を減圧下で除去し、残渣をＣＨ２Ｃｌ２（５００ｍＬ）に溶解させ、ブラインで洗浄し（３×５００ｍＬ）、次いで乾燥させ（ＭｇＳＯ４）、濾過し、濃縮させた。残渣を短いシリカ床（５％  ＭｅＯＨ−ＣＨ２Ｃｌ２）に通し、濃縮させて、２−（２−（２−（２−アジドエトキシ）エトキシ）エトキシ）エタン−１−オール（４）（６５ｇ、７４％）を黄色油状物として得た。Ｒｆ （０．５６， １０％ ＭｅＯＨ−ＣＨ２Ｃｌ２）。
【０３０２】
ステップ３。過アセチル化ガラクトサミン（６）の調製
【化１５６】
2020516296.tif 000159
Ｄ−ガラクトサミン塩酸塩（５）（２５０ｇ、１．１６ｍｏｌ）を含むピリジン（１．５Ｌ）を４５分間にわたって無水酢酸（１．２５Ｌ、１３．２ｍｏｌ）で処理した。一晩撹拌した後、反応混合物を３つの１Ｌ分量に分けた。各１Ｌ分量を３Ｌの氷水に注ぎ、１時間混合した。混合した後、固体を濾過して除き、合わせて液体窒素で凍結してから、５日間にわたって凍結乾燥させて、過アセチル化ガラクトサミン（６）（３６９．４ｇ、８２％）を白色固体として得た。Ｒｆ （０．５８， １０％ ＭｅＯＨ−ＣＨ２Ｃｌ２）。
【０３０３】
ステップ４。（３ａＲ，５Ｒ，６Ｒ，７Ｒ，７ａＲ）−５−（アセトキシメチル）−２−メチル−３ａ，６，７，７ａ−テトラヒドロ−５Ｈ−ピラノ［３，２−ｄ］オキサゾール−６，７−ジイルジアセテート（７）の調製
【化１５７】
2020516296.tif 000160
過アセチル化ガラクトサミン（６）（８．４５ｇ、２１．７ｍｍｏｌ）のＣＨＣｌ３溶液（３２０ｍＬ）を、ＴＭＳＯＴｆ（４．３２ｍＬ、２３．９ｍｍｏｌ）の滴下により処理した。撹拌（１．５時間、４０℃）の後、トリエチルアミン（５ｍＬ）の添加により反応物をクエンチし、濃縮乾固させて、化合物７を淡黄色ガラス状物として得た（７．２ｇ、定量的）。この生成物を、更に精製することなく使用した。Ｒｆ （０．５９， １０％ ＭｅＯＨ−ＣＨ２Ｃｌ２）。
【０３０４】
ステップ５。（２Ｒ，３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ，６Ｒ）−５−アセトアミド−２−（アセトキシメチル）−６−（２−（２−（２−（２−アジドエトキシ）エトキシ）エトキシ）エトキシ）テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−３，４−ジイルジアセテート（８）の調製
【化１５８】
2020516296.tif 000161
化合物７（７．２ｇ、２１．７ｍｍｏｌ）及び２−（２−（２−（２−アジドエトキシ）エトキシ）エトキシ）エタン−１−オール４（２．６５ｇ、１５．２ｍｍｏｌ）をトルエン（１５０ｍＬ）から共沸させ（３回）、微量の水を除去した。脱水した物質を１，２−ジクロロエタン（１５０ｍＬ）に溶解させ、冷却し（約５℃）、ＴＭＳＯＴｆ（７８４μＬ、４．３４ｍｍｏｌ）で処理した。一晩撹拌した後、トリエチルアミン（５ｍＬ）の添加により反応物をクエンチし、濃縮させた。クロマトグラフィ（１％→５％  ＭｅＯＨ−ＣＨ２Ｃｌ２）によって残渣を精製して、８（７．１２ｇ、８５％）を褐色油状物として得た。Ｒｆ （０．３， １０％ ＭｅＯＨ−ＣＨ２Ｃｌ２）。
【０３０５】
ステップ６。２−（２−（２−（２−（（（２Ｒ，３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ，６Ｒ）−３−アセトアミド−４，５−ジアセトキシ−６−（アセトキシメチル）テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル）オキシ）エトキシ）エトキシ）エトキシ）エタン−１−アミニウム２，２，２−トリフルオロアセテート（９）の調製
【化１５９】
2020516296.tif 000162
ＥｔＯＡｃ（１５０ｍＬ）及びトリフルオロ酢酸（２ｍＬ）にアジド８（７．１２ｇ、１３ｍｍｏｌ）を含む溶液を、パラジウム炭素（１．５ｇ、１０％ｗ／ｗ湿量基準）で処理した。次いで、この反応混合物を水素でパージし、一晩勢いよく撹拌した。窒素でパージした後、混合物をセライトで濾過し、ＭｅＯＨですすいだ。この濾液を濃縮させ、クロマトグラフィ（５％→１０％→２０％  ＭｅＯＨ−ＣＨ２Ｃｌ２）によって精製して、９（５．８ｇ、７２％）を褐色油状物として得た。Ｒｆ （０．３４， １５％ ＭｅＯＨ−ＣＨ２Ｃｌ２）。
【０３０６】
ステップ７。ジ−ｔｅｒｔ−ブチル４−（（（ベンジルオキシ）カルボニル）アミノ）−４−（３−（ｔｅｒｔ−ブトキシ）−３−オキソプロピル）ヘプタンジオエート（１１）の調製
【化１６０】
2020516296.tif 000163
ジ−ｔｅｒｔ−ブチル４−アミノ−４−（３−（ｔｅｒｔ−ブトキシ）−３−オキソプロピル）ヘプタンジオエート（１０）（１３．５ｇ、３３ｍｍｏｌ）、２５％  Ｎａ２ＣＯ３（水溶液）（１５０ｍＬ）、及びジクロロメタン（３００ｍＬ）の溶液に、クロロギ酸ベンジル（１４ｍＬ、９８ｍｍｏｌ）をゆっくりと添加した。この溶液を室温で一晩（１６時間）勢いよく撹拌した。完了次第、更なるジクロロメタン（１００ｍＬ）を添加し、ジクロロメタン層を分離させた。水層をジクロロメタン（２×１００ｍＬ）で抽出した。合わせたジクロロメタン抽出物を硫酸マグネシウムで乾燥させ、濾過し、濃縮乾固させた。生成物１１が無色油状物として単離され、更なる精製は必要なかった（１５．８ｇ、８８％）。Ｒｆ （０．７， １：１ ＥｔＯＡｃ−ヘキサン）。
【０３０７】
ステップ８。４−（（（ベンジルオキシ）カルボニル）アミノ）−４−（２−カルボキシエチル）ヘプタン二酸（１２）の調製
【化１６１】
2020516296.tif 000164
１２
１１（１５．６ｇ、２８．８ｍｍｏｌ）のギ酸溶液（５０ｍＬ）を室温で２時間撹拌した。この溶液を濃縮乾固させ、酢酸エチル（約２５ｍＬ）に溶解させた。静置すると、この生成物は無色固体として結晶化した。固体を濾過し、酢酸エチルで洗浄し、空気乾燥させて、１２を無色固体として得た（１０．２ｇ、９３％）。Ｒｆ （０．１， １０％ ＭｅＯＨ−ＣＨ２Ｃｌ２）。
【０３０８】
ステップ９。化合物１３の調製
【化１６２】
2020516296.tif 000165
１３
１２（７９３ｍｇ、２．０８ｍｍｏｌ）及び９（５．８ｇ、９．３６ｍｍｏｌ）のＤＭＦ溶液（５０ｍＬ）を、ＢＯＰ（３．６７ｇ、８．３２ｍｍｏｌ）、次いでＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（４．３１ｍＬ、２５ｍｍｏｌ）で処理した。一晩撹拌した後、混合物を濃縮乾固させ、クロマトグラフィ（１％→２％→５％→１０％→１５％  ＭｅＯＨ−ＣＨ２Ｃｌ２）に供して、１３を得た（５．７１ｇ［未精製］、＞１００％−次のステップに影響しなかったカップリング副生成物を含有した）。Ｒｆ （０．４５， １０％ ＭｅＯＨ−ＣＨ２Ｃｌ２）。
【０３０９】
ステップ１０。化合物１４の調製
【化１６３】
2020516296.tif 000166
１４
化合物１３（５．７ｇ）をＭｅＯＨ（１５０ｍＬ）及びＴＦＡ（１．５ｍＬ）に溶解させ、パラジウム炭素（１ｇ、１０％ｗ／ｗ湿量基準）で処理した。次いで、この反応混合物を水素でパージし、一晩勢いよく撹拌した。窒素でパージした後、混合物をセライトで濾過し、ＭｅＯＨですすいだ。この濾液を濃縮させ、クロマトグラフィ（５％→１０％→２０％  ＭｅＯＨ−ＣＨ２Ｃｌ２）によって精製して、１４を褐色油状物として得た（２．１５ｇ、２ステップで５６％）。Ｒｆ （０．３２， １０％ ＭｅＯＨ−ＣＨ２Ｃｌ２）。
【０３１０】
ステップ１１。（５−アミノ−１，３−フェニレン）ジメタノール（１５）の調製
【化１６４】
2020516296.tif 000167
ジメチル５−アミノイソフタレート（２０．０ｇ、９６ｍｍｏｌ）のＴＨＦ溶液（３５０ｍＬ）を、ＴＨＦ（４４０ｍＬ）中の３．７５当量のＬｉＡｌＨ４（１３．６ｇ、３５８ｍｍｏｌ）の還流混合物に、１時間にわたって滴加した。この混合物を還流下で更に２時間撹拌し、次いで室温に冷まし、ＭｅＯＨ（２７ｍＬ）の次に水（４０ｍＬ）を注意深く添加することによりクエンチした。クエンチした混合物を２時間撹拌した後、これを濾過し、濃縮乾固させた。残渣をＥｔＯＡｃから再結晶させ（２回）、１５を褐色がかった黄色の結晶として得た（１０．２ｇ、７０％）。
【０３１１】
ステップ１２。メチル１０−（（３，５−ビス（ヒドロキシメチル）フェニル）アミノ）−１０−オキソデカノエート（１６）の調製
【化１６５】
2020516296.tif 000168
セバシン酸メチル（３．８ｇ、１７ｍｍｏｌ）、１５（２．５ｇ、１７ｍｍｏｌ）、及びＥＥＤＱ（８．１ｇ、３３ｍｍｏｌ）の２：１ジクロロメタン／メタノール溶液（２００ｍＬ）を、室温で２時間撹拌した。完了次第、溶液を濃縮乾固させた。得られた固体をジクロロメタン（５０ｍＬ）で粉砕し、濾過した。固体を冷ジクロロメタンですすぎ、空気乾燥させて、１６を無色固体として得た（４．３ｇ、７２％）。Ｒｆ （０．３３， ＥｔＯＡｃ）。
【０３１２】
ステップ１３。メチル１０−（（３−（（ビス（４−メトキシフェニル）（フェニル）メトキシ）メチル）−５−（ヒドロキシメチル）フェニル）アミノ）−１０−オキソデカノエート（１７）の調製
【化１６６】
2020516296.tif 000169
１６（４．３ｇ、１２ｍｍｏｌ）のピリジン溶液（５０ｍＬ）に、４，４’−（クロロ（フェニル）メチレン）ビス（メトキシベンゼン）（４．１ｇ、１２ｍｍｏｌ）を添加した。この溶液を室温で一晩、窒素下で撹拌した。完了次第、溶液を濃縮乾固させ、カラムクロマトグラフィ（０．５％→０．７５％→１％→１．５％  ＭｅＯＨ−ＣＨ２Ｃｌ２）によって残渣を精製して、１７を黄色固体として得た（２．９ｇ、３５％）。Ｒｆ （０．６， １０％ ＭｅＯＨ−ＣＨ２Ｃｌ２）。
【０３１３】
ステップ１４。１０−（（３−（（ビス（４−メトキシフェニル）（フェニル）メトキシ）メチル）−５−（ヒドロキシメチル）フェニル）アミノ）−１０−オキソデカン酸リチウム（１８）の調製
【化１６７】
2020516296.tif 000170
１７（２．９ｇ、４．３ｍｍｏｌ）のＴＨＦ溶液（６０ｍＬ）に、水（１５ｍＬ）及び水酸化リチウム（１１２ｍｇ、４．７ｍｍｏｌ）を添加した。この溶液を室温で一晩撹拌した。完了次第、溶液を濃縮させ、ＴＨＦを除去した。残った水溶液を液体窒素で急速凍結し、一晩凍結乾燥させて無色固体を得た（２．９ｇ、定量的）。Ｒｆ （０．３， １０％ ＭｅＯＨ−ＣＨ２Ｃｌ２）。
【０３１４】
ステップ１５。化合物１９の調製
【化１６８】
2020516296.tif 000171
１４（４５４ｍｇ、０．６７ｍｍｏｌ）、１８（１．２５ｇ、０．６７ｍｍｏｌ）、及びＨＢＴＵ（３８１ｍｇ、１．０ｍｍｏｌ）の無水ＤＭＦ溶液（２５ｍＬ）に、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（０．３５ｍＬ、２．０ｍｍｏｌ）を添加した。この溶液を室温で一晩撹拌した。完了次第、溶液を酢酸エチル（２５０ｍＬ）に注ぎ、ブライン（３×２００ｍＬ）で洗浄した。酢酸エチル層を硫酸マグネシウムで乾燥させ、濾過し、濃縮乾固させた。カラムクロマトグラフィ（５％→７．５％→１０％→１５％のＭｅＯＨを含むＣＨ２Ｃｌ２）による精製により、１９を淡橙色泡状物として得た（１．５ｇ、９４％）。Ｒｆ （０．２５， １０％ ＭｅＯＨ−ＣＨ２Ｃｌ２）。
【０３１５】
ステップ１６。化合物２０の調製
【化１６９】
2020516296.tif 000172
化合物１９（１．５ｇ、０．６ｍｍｏｌ）、無水コハク酸（１２０ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）、ＤＭＡＰ（２２０ｍｇ、１．８ｍｍｏｌ）、及びトリメチルアミン（２５０μＬ、１．８ｍｍｏｌ）の無水ＣＨ２Ｃｌ２溶液（５０ｍＬ）を、室温で一晩撹拌した。完了次第、溶液を濃縮乾固させ、短いシリカプラグ（１００％  ＣＨ２Ｃｌ２→１５％のＭｅＯＨを含むＣＨ２Ｃｌ２）で濾過し、生成物２０を明るいベージュ色の泡状物として得た（１．１ｇ、７０％）。質量ｍ／ｚ （ＥＳ−ＴＯＦ ＭＳ） ７２７．７ ［Ｍ ＋ ３Ｈ − ＤＭＴｒ］＋， １０９１．１ ［Ｍ ＋ ２Ｈ − ＤＭＴｒ］。１Ｈ ＮＭＲ （４００ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３） δ ８．９２ （ｂｒ ｓ， １Ｈ）， ７．７８ （ｓ， １Ｈ）， ７．４９−７．４７ （ｍ， ３Ｈ）， ７．４１ （ｂｒ ｓ， １Ｈ）， ７．３８−７．３４ （ｍ， ５Ｈ）， ７．３２−７．２６ （ｍ， ４Ｈ）， ７．２４−７．０８ （ｂｒ ｓ， ３Ｈ）， ７．０８ （ｓ， １Ｈ）， ６．９０−６．８０ （ｍ， ７Ｈ）， ５．３１ （ｄ， ３Ｈ， Ｊ ＝ ２．７Ｈｚ）， ５．１２ （ｓ， ２Ｈ）， ５．０６ （ｄｄ， ３Ｈ， Ｊ ＝ １１．２， ３．２ Ｈｚ）， ４．７８ （ｄ， ３Ｈ， Ｊ ＝ ８．５ Ｈｚ）， ４．２４−４．０８ （ｍ， １２Ｈ）， ３．９５−３．８８ （ｍ， ７Ｈ）， ３．８５−３．７６ （ｍ， ４Ｈ）， ３．７８ （ｓ， ６Ｈ）， ３．６８−３．５６ （ｍ， ３４Ｈ）， ３．５４−３．４４ （ｍ， ８Ｈ）， ３．４１−３．３３ （ｍ， ６Ｈ）， ２．７０−２．６０ （ｍ， ４Ｈ）， ２．５２−２．３０ （ｍ， ３０Ｈ）， ２．２４−２．１６ （ｍ， ８Ｈ）， ２．１４ （ｓ， ９Ｈ）， ２．０４ （ｓ， ９Ｈ）， ２．０２−１．９６ （ｍ， ６Ｈ）， １．９８ （ｓ， ９Ｈ）， １．９６ （ｓ， ９Ｈ）， １．７４−１．５２ （ｍ， ４Ｈ）， １．３６−１．２４ （ｍ， １２Ｈ）。
【０３１６】
ステップ１７。コンジュゲート１の調製
【化１７０】
2020516296.tif 000173
標準的なアミドカップリング化学を使用し、サクシネート２０を１０００Å  ＬＣＡＡ（長鎖アミノアルキル）ＣＰＧ（制御細孔ガラス）に負荷した。ジイソプロピルカルボジイミド（５２．６μｍｏｌ）、Ｎ−ヒドロキシサクシニミド（０．３ｍｇ、２．６μｍｏｌ）、及びピリジン（１０μＬ）の無水アセトニトリル溶液（０．３ｍＬ）を、２０（２０．６ｍｇ、８μｍｏｌ）を含む無水ジクロロメタン（０．２ｍＬ）に添加した。この混合物をＬＣＡＡ  ＣＰＧ（１８３ｍｇ）に加えた。この懸濁液を室温で一晩穏やかに混合した。２０が消失したら（ＨＰＬＣ）、反応混合物を濾過し、ジクロロメタン、アセトニトリル、５％無水酢酸／５％Ｎ−メチルイミダゾール／５％ピリジンのＴＨＦ溶液、次いでＴＨＦ、アセトニトリル及びジクロロメタン各１ｍＬでＣＰＧを洗浄した。次いで、ＣＰＧを高真空下で一晩乾燥させた。ＵＶ／Ｖｉｓ（５０４ｎｍ）による標準的なＤＭＴｒアッセイによって、負荷を２５μｍｏｌ／ｇと判定した。結果として得られたＧａｌＮＡｃが負荷されたＣＰＧ固体支持体を、標準的な手順を使用した自動化オリゴヌクレオチド合成に用いた。ヌクレオチド脱保護の後に固体支持体からの除去を（ガラクトサミンアセテート脱保護と同時に）行なうと、代表例としてのＧａｌＮＡｃ−オリゴヌクレオチドコンジュゲート１が得られた。
【０３１７】
実施例２：コンジュゲート３４の合成
スキーム６。
【化１７１】
2020516296.tif 000174
スキーム７。
【化１７２】
2020516296.tif 000175
スキーム８。
【化１７３】
2020516296.tif 000176
【０３１８】
ステップ１。ジ−ｔｅｒｔ−ブチル４−（２−（（（ベンジルオキシ）カルボニル）アミノ）アセトアミド）−４−（３−（ｔｅｒｔ−ブトキシ）−３−オキソプロピル）ヘプタンジオエート（２１）の調製
【化１７４】
2020516296.tif 000177
ジ−ｔｅｒｔ−ブチル４−アミノ−４−（３−（ｔｅｒｔ−ブトキシ）−３−オキソプロピル）ヘプタンジオエート（２５ｇ、６０ｍｍｏｌ）及びＺ−グリシン（１８．９ｇ、９０．２ｍｍｏｌ）のＣＨ２Ｃｌ２溶液（３００ｍＬ）を、ＥＤＣ（２３ｇ、１２０ｍｍｏｌ）、ジイソプロピルエチルアミン（３２ｍＬ、１８０ｍｍｏｌ）、及びＤＭＡＰ（触媒、１７ｍｇ）で連続的に処理した。撹拌（１６時間）した後、反応混合物をＮａＨＣＯ３（飽和水溶液）に注ぎ、ＣＨ２Ｃｌ２で抽出し、ブラインで洗浄し、乾燥させ（ＭｇＳＯ４）、濾過し、濃縮して、ジ−ｔｅｒｔ−ブチル４−（２−（（（ベンジルオキシ）カルボニル）アミノ）アセトアミド）−４−（３−（ｔｅｒｔ−ブトキシ）−３−オキソプロピル）ヘプタンジオエート２１を非晶質固体として得て、これを更に処理することなく使用した（３６ｇ、定量的）。Ｒｆ （０．８５， １０％ ＭｅＯＨ−ＣＨ２Ｃｌ２）。
【０３１９】
ステップ２。４−（２−（（（ベンジルオキシ）カルボニル）アミノ）アセトアミド）−４−（２−カルボキシエチル）ヘプタン二酸（２２）の調製
【化１７５】
2020516296.tif 000178
ジ−ｔｅｒｔ−ブチル４−（２−（（（ベンジルオキシ）カルボニル）アミノ）アセトアミド）−４−（３−（ｔｅｒｔ−ブトキシ）−３−オキソプロピル）ヘプタンジオエート（２１）（５９．３ｍｍｏｌ、３６ｇ）の溶液を、無希釈ギ酸（１５０ｍＬ）中で７２時間撹拌した。完了次第、ギ酸を減圧下で除去し、粗固体を高真空で一晩乾燥させて、２２を無色固体として得た（１５．９ｇ、６１％）。Ｒｆ （０．１５， １０％ ＭｅＯＨ−ＣＨ２Ｃｌ２）。
【０３２０】
ステップ３。化合物２３の調製
【化１７６】
2020516296.tif 000179
２２（６．２ｇ、１４．１ｍｍｏｌ）及び２−（２−（２−（２−（（（２Ｒ，３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ，６Ｒ）−３−アセトアミド−４，５−ジアセトキシ−６−（アセトキシメチル）テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル）オキシ）エトキシ）エトキシ）エトキシ）エタン−１−アミニウム２，２，２−トリフルオロアセテート（３５ｇ、５６．５ｍｍｏｌ）のＤＭＦ溶液（２５０ｍＬ）を、ＢＯＰ（２５ｇ、５６．５ｍｍｏｌ）、次いでＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（２９ｍＬ、１７０ｍｍｏｌ）で処理した。一晩撹拌した後、混合物を濃縮乾固させ、クロマトグラフィ（１００％  ＣＨ２Ｃｌ２から１５％  ＭｅＯＨ−ＣＨ２Ｃｌ２）に供して、化合物２３を得た（２４．６ｇ、８９％）。Ｒｆ （０．５５， １５％ ＭｅＯＨ−ＣＨ２Ｃｌ２）。
【０３２１】
ステップ４。化合物２４の調製
【化１７７】
2020516296.tif 000180
化合物２３（２４．６ｇ）をＭｅＯＨ（２００ｍＬ）及びＴＦＡ（１．５ｍＬ）に溶解させ、窒素でパージした。パラジウム炭素（１ｇ、１０％ｗ／ｗ湿量基準）を添加し、次いで反応混合物を水素でパージし、一晩勢いよく撹拌した。完了次第、反応物を窒素でパージし、セライトで濾過し、ＭｅＯＨですすいだ。この濾液を濃縮させ、シリカゲル６０でのカラムクロマトグラフィ（勾配：５％→１０％→２０％  ＭｅＯＨ−ＣＨ２Ｃｌ２）によって精製して、２４を淡褐色粘性油状物として得た（２３ｇ）。Ｒｆ （０．３２， １０％ ＭｅＯＨ−ＣＨ２Ｃｌ２）。
【０３２２】
ステップ５。（５−アミノ−１，３−フェニレン）ジメタノール（２６）の調製
【化１７８】
2020516296.tif 000181
水素化アルミニウムリチウム（１３．６ｇ、３５８ｍｍｏｌ）の無水テトラヒドロフラン懸濁液（４５０ｍＬ）を窒素雰囲気下で還流し、ジメチル−５−アミノイソフタレート（２５）（２０ｇ、９６ｍｍｏｌ）の無水テトラヒドロフラン溶液（３５０ｍＬ）の滴下により処理した。添加が完了した後、混合物を更に２時間にわたって加熱還流した。完了次第、溶液を室温に冷まし、ＭｅＯＨ（２７ｍＬ）の次に水（４０ｍＬ）をゆっくりと添加することによってクエンチした。２時間撹拌した後、混合物を濾過し、濃縮させ、ＥｔＯＡｃから再結晶させ、（５−アミノ−１，３−フェニレン）ジメタノール（２６）をオフホワイトの結晶として得た（１０．２ｇ、７０％）。Ｒｆ ０．５ （１５％ ＭｅＯＨ−ＣＨ２Ｃｌ２）。
【０３２３】
ステップ６。３，５−ビス（ヒドロキシメチル）ベンゾニトリル（２７）の調製
【化１７９】
2020516296.tif 000182
２６（５ｇ、３３ｍｍｏｌ）の２Ｎ塩酸溶液（１００ｍＬ）を０℃に冷却し、亜硝酸ナトリウム（３．５３ｇ、３６ｍｍｏｌ）の冷水溶液（５０ｍＬ）で処理した。反応混合物を５℃以下の温度に３０分間維持し、次いで１回分量のシアン化銅（Ｉ）（３．１９ｇ、３５．６ｍｍｏｌ）及びシアン化ナトリウム（３．５３ｇ、７２ｍｍｏｌ）の水溶液（５０ｍＬ）で処理した。室温で一晩撹拌した後、混合物を濾過し、ジクロロメタン（３×１００ｍＬ）で抽出し、濃縮させ、更に精製することなく使用した。ジオールである３，５−ビス（ヒドロキシメチル）ベンゾニトリル（２７）を黄色固体として得た（２．１９ｇ、４１％）。Ｒｆ ０．７５ （１５％ ＭｅＯＨ−ＣＨ２Ｃｌ２）。
【０３２４】
ステップ７。３−（（ビス（４−メトキシフェニル）（フェニル）メトキシ）メチル）−５−（ヒドロキシメチル）ベンゾニトリル（２８）の調製
【化１８０】
2020516296.tif 000183
３，５−ビス（ヒドロキシメチル）ベンゾニトリル（２７）（５３８ｍｇ、３．３ｍｍｏｌ）のピリジン溶液（１４ｍＬ）を４，４’−ジメトキシトリチルクロリド（１．１７ｇ、３．４６ｍｍｏｌ）で処理し、室温で一晩撹拌した。完了次第、混合物を濃縮させ、ジエチルエーテル（２５ｍＬ）に分散させ、濾過し、濃縮させた。シリカゲル６０でのカラムクロマトグラフィ（勾配：１０％から５０％のＥｔＯＡｃ−ヘキサン）によって粗生成物を精製して、２８を黄色固体として得た（７２５ｍｇ、４７％）。Ｒｆ ０．５ （１：１ ＥｔＯＡｃ−ヘキサン）。
【０３２５】
ステップ８。（３−（アミノメチル）−５−（（ビス（４−メトキシフェニル）（フェニル）メトキシ）メチル）フェニル）メタノール（２９）の調製
【化１８１】
2020516296.tif 000184
２８（１００ｍｇ、０．２２ｍｍｏｌ）のメチルテトラヒドロフラン溶液（５ｍＬ）を０℃に冷却し、水素化アルミニウムリチウムでゆっくりと処理した（０．６４ｍｍｏｌ＝０．２８ｍＬの２．３Ｍ  ＭｅＴＨＦ溶液）。１時間撹拌した後、メタノール（１ｍＬ）の次に水（０．３ｍＬ）を添加することにより反応物をクエンチし、３０分間撹拌した。混合物を濾過し、濃縮させて、（３−（アミノメチル）−５−（（ビス（４−メトキシフェニル）（フェニル）メトキシ）メチル）フェニル）メタノール（２９）を得た（７８ｍｇ、７７％）。Ｒｆ ０．１５ （１０％ ＭｅＯＨ−ＣＨ２Ｃｌ２）。
【０３２６】
ステップ９。メチル１０−（（３−（（ビス（４−メトキシフェニル）（フェニル）メトキシ）メチル）−５−（ヒドロキシメチル）ベンジル）アミノ）−１０−オキソデカノエート（３０）の調製
【化１８２】
2020516296.tif 000185
（３−（アミノメチル）−５−（（ビス（４−メトキシフェニル）（フェニル）メトキシ）−メチル）フェニル）メタノール（２９）（７８ｍｇ、０．１７ｍｍｏｌ）及びセバシン酸モノメチル（３８ｍｇ、０．１７ｍｍｏｌ）のジクロロメタン溶液（５ｍＬ）を、ＥＤＣ（４８ｍｇ、０．２５ｍｍｏｌ）、ＤＭＡＰ（触媒、５ｍｇ）、及びジイソプロピルエチルアミン（５７μＬ、０．３３ｍｍｏｌ）で連続的に処理した。撹拌（３．５時間）した後、反応混合物を飽和炭酸水素ナトリウム溶液（５０ｍＬ）に注いだ。炭酸水素ナトリウム溶液をジクロロメタン（３×５０ｍＬ）で抽出し、ブライン（５０ｍＬ）で洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥させ、濾過し、濃縮乾固させた。シリカゲル６０でのカラムクロマトグラフィ（勾配：２％から５％のＭｅＯＨ−ＣＨ２Ｃｌ２）によって粗物質を精製して、メチル１０−（（３−（（ビス（４−メトキシフェニル）（フェニル）メトキシ）メチル）−５−（ヒドロキシメチル）ベンジル）アミノ）−１０−オキソデカノエート（３０）を黄色油状物として得た（５７ｍｇ、５３％）。Ｒｆ ０．４５ （１０％ ＭｅＯＨ−ＣＨ２Ｃｌ２）。
【０３２７】
ステップ１０。１０−（（３−（（ビス（４−メトキシフェニル）（フェニル）メトキシ）メチル）−５−（ヒドロキシメチル）ベンジル）アミノ）−１０−オキソデカン酸リチウム（３１）の調製
【化１８３】
2020516296.tif 000186
化合物３０（１８８ｍｇ、０．２８ｍｍｏｌ）をテトラヒドロフラン（５ｍＬ）に溶解させ、ＬｉＯＨ（７ｍｇ、０．３０ｍｍｏｌ）の水溶液（１ｍＬ）で処理した。完了次第、テトラヒドロフランを真空中で除去し、残った水性混合物を凍結及び凍結乾燥させて、１０−（（３−（（ビス（４−メトキシフェニル）（フェニル）メトキシ）メチル）−５−（ヒドロキシメチル）ベンジル）アミノ）−１０−オキソデカン酸リチウム（３１）を無色固体として得た（１８０ｍｇ、９９％）。Ｒｆ ０．４５ （１０％ ＭｅＯＨ−ＣＨ２Ｃｌ２）。
【０３２８】
ステップ１１。化合物３２、３３、及び３４の調製
化合物３２、３３、及び３４を、それぞれ、化合物１９、２０、及び１を合成するために使用したものと同じ手順に従って調製した。
【０３２９】
実施例３。コンジュゲート３６の合成
【化１８４】
2020516296.tif 000187
【０３３０】
ステップ１。コンジュゲート３６の調製
化合物３４及び全ての対応する中間体を合成するために使用したものと同一の手順を使用し、コンジュゲート３６を調製した。唯一の例外は、無水酢酸の代わりにプロパン酸無水物を使用した化合物６の合成であった。
【０３３１】
実施例４。コンジュゲート４２の合成
スキーム９。
【化１８５】
2020516296.tif 000188
スキーム１０。
【化１８６】
2020516296.tif 000189
【化１８７】
2020516296.tif 000190
【０３３２】
ステップ１。化合物３７の調製
【化１８８】
2020516296.tif 000191
１８β−グリチルレチン酸（２．５ｇ、５．３ｍｍｏｌ）、ｔｅｒｔ−ブチル（３−アミノプロピル）カルバメート（１．１ｇ、６．４ｍｍｏｌ）、及びＨＢＴＵ（３．０ｇ、８．０ｍｍｏｌ）のＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド溶液（２０ｍＬ）に、ジイソプロピルエチルアミン（２．７５ｍＬ、１５．９ｍｍｏｌ）を添加した。この溶液を室温で一晩撹拌した。完了次第、溶液を真空中で濃縮乾固させた。シリカゲル６０でのカラムクロマトグラフィ（勾配：２％から５％のＭｅＯＨ／ＣＨ２Ｃｌ２）によって残渣を精製して、生成物を無色固体として得た（２．１ｇ、６３％）。
【０３３３】
ステップ２。化合物３８の調製
【化１８９】
2020516296.tif 000192
３７（２．１ｇ、３．３ｍｍｏｌ）及びトリエチルアミン（３．５ｍＬ、１０ｍｍｏｌ）のジクロロメタン溶液（２５ｍＬ）に、無水酢酸（８５０μＬ、５．３ｍｍｏｌ）及びＤＭＡＰ（５ｍｇ）を添加した。この溶液を室温で一晩撹拌した。完了次第、溶液を濃縮乾固させ、酢酸エチル（１００ｍＬ）に溶解させ、水（１００ｍＬ）で洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥させ、濾過し、濃縮乾固させて、淡褐色泡状物を得た（１．９ｇ、８５％）。
【０３３４】
ステップ３。化合物３９の調製
【化１９０】
2020516296.tif 000193
３８（１．５ｇ、２．３ｍｍｏｌ）の無水ジオキサン溶液（２５ｍＬ）に、２Ｍ塩化水素を含むジオキサン（２５ｍＬ）を添加した。この溶液を室温で一晩撹拌し、次いで真空中で濃縮乾固させて、明褐色固体を得た（１．３ｇ、９６％）。
【０３３５】
ステップ４。化合物４０、４１、及び４２の調製
化合物４０、４１、及び４２は、それぞれ、化合物１９、２０、及び１を合成するために使用したものと同じ手順に従って調製した。
【０３３６】
実施例５。コンジュゲート４３の合成
スキーム１１。
【化１９１】
2020516296.tif 000194
スキーム１２。
【化１９２】
2020516296.tif 000195
【０３３７】
ステップ１。メチル１１−（２，６−ビス（ヒドロキシメチル）−４−メチルフェノキシ）ウンデカノエート（４４）の調製
【化１９３】
2020516296.tif 000196
２，６−ビス（ヒドロキシメチル）−ｐ−クレゾール（２．７ｇ、１６．３ｍｍｏｌ）、メチル１１−ブロモウンデカノエート（５．０ｇ、１７．９ｍｍｏｌ）、及び炭酸カリウム（４．５ｇ、３２．６ｍｍｏｌ）のアセトン溶液（１００ｍＬ）を、１６時間還流した。完了次第、溶液を真空中で濃縮乾固させ、酢酸エチル（１５０ｍＬ）に懸濁し、水（２×１００ｍＬ）及びブライン（１００ｍＬ）で洗浄した。酢酸エチル層を硫酸マグネシウムで乾燥させ、濾過し、真空中で濃縮乾固させた。シリカゲル６０でのカラムクロマトグラフィ（勾配１００％  Ｈｅｘ→５０％  ＥｔＯＡｃ／Ｈｅｘ）によって残渣を精製して、メチル１１−（２，６−ビス（ヒドロキシメチル）−４−メチルフェノキシ）ウンデカノエート（４４）を無色油状物として得た（１．６ｇ、２７％）。
【０３３８】
ステップ２。メチル１１−（２−（（ビス（４−メトキシフェニル）（フェニル）メトキシ）メチル）−６−（ヒドロキシメチル）−４−メチルフェノキシ）ウンデカノエート（４５）の調製
【化１９４】
2020516296.tif 000197
メチル１１−（２，６−ビス（ヒドロキシメチル）−４−メチルフェノキシ）ウンデカノエート（４４）（１．５ｇ、４．１ｍｍｏｌ）の無水ピリジン溶液（２０ｍＬ）に、４，４’−ジメトキシトリチルクロリド（１．４ｇ、４．１ｍｍｏｌ）を添加した。この溶液を室温で一晩撹拌した。完了次第、溶液を真空中で濃縮乾固させ、シリカゲル６０でのカラムクロマトグラフィ（０．５から１％のＭｅＯＨを含むＣＨ２Ｃｌ２）によって精製して、メチル１１−（２−（（ビス（４−メトキシフェニル）（フェニル）メトキシ）メチル）−６−（ヒドロキシメチル）−４−メチルフェノキシ）ウンデカノエート（４５）を淡黄色固体として得た（１．１ｇ、４０％）。
【０３３９】
ステップ３。１１−（２−（（ビス（４−メトキシフェニル）（フェニル）メトキシ）メチル）−６−（ヒドロキシメチル）−４−メチルフェノキシ）ウンデカン酸リチウム（４６）の調製
【化１９５】
2020516296.tif 000198
無水テトラヒドロフラン（４０ｍＬ）及び水（１０ｍＬ）にメチル１１−（２−（（ビス（４−メトキシフェニル）（フェニル）メトキシ）メチル）−６−（ヒドロキシメチル）−４−メチルフェノキシ）ウンデカノエート（４５）（１．１ｇ、１．７ｍｍｏｌ）を含む溶液に、水酸化リチウム（４４ｍｇ、１．８ｍｍｏｌ）を添加した。この溶液を真空中で濃縮させて、テトラヒドロフランを全て除去した。残った水溶液を液体窒素で急速凍結し、次いで一晩凍結乾燥させて、１１−（２−（（ビス（４−メトキシフェニル）（フェニル）メトキシ）メチル）−６−（ヒドロキシメチル）−４−メチルフェノキシ）ウンデカン酸リチウム（４６）を淡桃色固体として得た（１．１ｇ、９４％）。
【０３４０】
ステップ４。化合物４７の調製
１０（１．３３ｇ、０．６６ｍｍｏｌ）、４６（０．５ｇ、０．７３ｍｍｏｌ）、ＨＢＴＵ（４００ｍｇ、１ｍｍｏｌ）のＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド溶液（２５ｍＬ）に、ジイソプロピルエチルアミン（０．３５ｍＬ、２ｍｍｏｌ）を添加した。この溶液を室温で一晩（１８時間）撹拌した。完了次第、溶媒を真空中で除去し、シリカゲルでのカラムクロマトグラフィ（勾配：１００％  ＣＨ２Ｃｌ２−５％−１０％−１５％のＭｅＯＨを含むＣＨ２Ｃｌ２）によって残渣を精製して、４７を無色固体として得た（７１０ｍｇ、４１％）。
【０３４１】
ステップ５。化合物４８の調製
４７（０．７１ｇ、０．３ｍｍｏｌ）、トリエチルアミン（０．４ｍＬ、３．０ｍｍｏｌ）、及びポリスチレン−ＤＭＡＰ（３ｍｍｏｌ／ｇ負荷、２００ｍｇ、０．６ｍｍｏｌ）のジクロロメタン溶液（１５ｍＬ）に、無水コハク酸（６０ｍｇ、０．６ｍｍｏｌ）を添加した。この溶液を室温で一晩撹拌し、完了次第、濾過し、真空中で濃縮乾固させた。シリカゲル６０でのカラムクロマトグラフィ（勾配５％から２０％のＭｅＯＨを含むＣＨ２Ｃｌ２）によって残渣を精製して、４８を淡黄色固体として得た（５７０ｍｇ、７０％）。１Ｈ ＮＭＲ （ＤＭＳＯ−ｄ６， ４００ ＭＨｚ） δ ７．９１ （ｍ， １Ｈ）， ７．８６−７．７６ （ｍ， ６Ｈ）， ７．４５−７．４０ （ｍ， ２Ｈ）， ７．３６−７．１４ （ｍ， １０Ｈ）， ７．１０ （ｓ， １Ｈ）， ６．９１ （ｄ， Ｊ ＝ ８．９ Ｈｚ， ４Ｈ）， ５．２１ （ｄ， Ｊ ＝ ３．３ Ｈｚ， ３Ｈ）， ５．０１ （ｓ， ２Ｈ）， ４．９７ （ｄｄ， Ｊ ＝ １１．２， ３．４ Ｈｚ， ３Ｈ）， ４．５６ （ｄ， Ｊ ＝ ８．５ Ｈｚ， ３Ｈ）， ４．０６−３．９８ （ｍ， １１Ｈ）， ３．９３−３．８４ （ｍ， ３Ｈ）， ３．８１−３．７２ （ｍ， ３Ｈ）， ３．７４ （ｓ， ６Ｈ）， ３．６５−３．４６ （ｍ， ３８Ｈ）， ３．４０−３．３５ （ｍ， ６Ｈ）， ３．２０−３．１６ （ｍ， ６Ｈ）， ２．５６−２．４４ （ｍ， ４Ｈ）， ２．３３ （ｓ， ３Ｈ）， ２．１５−２．０８ （ｍ， ２Ｈ）， ２．１０ （ｓ， ９Ｈ）， ２．０４−１．９６ （ｍ， ６Ｈ）， １．８９ （ｓ， ９Ｈ）， １．８２−１．７６ （ｍ， ４Ｈ）， １．７７ （ｓ， ９Ｈ）， １．５４−１．３４ （ｍ， ４Ｈ）， １．２８−１．１０ （ｍ， １２Ｈ）。
【０３４２】
ステップ６。化合物４９の調製
ジクロロメタン（２ｍＬ）及びアセトニトリル（３ｍＬ）に４８（１００ｍｇ、４０μｍｏｌ）、Ｎ−ヒドロキシサクシニミド（３０ｍｇ／ｍＬアセトニトリル溶液、５０μＬ、１３μｍｏｌ）、Ｎ，Ｎ’−ジイソプロピルカルボジイミド（４０μＬ、２６４μｍｏｌ）、及びピリジン（５０μＬ）を含む溶液に、１０００Å  ｌｃａａ  ＣＰＧ（プライム合成、９２０ｍｇ）を加えた。この溶液をオービタルシェーカーにて室温で一晩撹拌した。反応溶液のＴＬＣ分析は、活性化されたＮ−ヒドロキシコハク酸エステルの部分的な消費しか示さなかったため、更なるＣＰＧ（５００ｍｇ）を加えた。この溶液を再度一晩撹拌した。完了次第、ＣＰＧを濾過し、ジクロロメタン（２５ｍＬ）、アセトニトリル（２５ｍＬ）、及びテトラヒドロフラン（２５ｍＬ）で洗浄した。無水酢酸を含むアセトニトリル（３ｍＬ）と１０％Ｎ−メチルイミダゾール／１０％ピリジンを含むテトラヒドロフラン（３ｍＬ）との１：１溶液を添加することにより、ＣＰＧ上の未反応のアミン残基をアセチル化（キャッピング）した。この懸濁液を２時間静置してから濾過し、等量のテトラヒドロフラン（２５ｍＬ）、アセトニトリル（２５ｍＬ）、及びジクロロメタン（２５ｍＬ）ですすいだ。負荷されたＣＰＧ  ４９を高真空下で一晩乾燥させた。標準的なＤＭＴ負荷アッセイ（ＣＨ２Ｃｌ２中３％のトリクロロ酢酸、ＵＶ−ＶＩＳ、Ａ５０４）を使用し、リガンド負荷効率を２２μモル／ｇと判定した。
【０３４３】
ステップ７。コンジュゲート４３の調製
結果として得られたＧａｌＮＡｃが負荷されたＣＰＧ固体支持体４９を、標準的な手順を使用した自動化オリゴヌクレオチド合成に用いた。ヌクレオチド脱保護の後に固体支持体からの除去を（ガラクトサミンアセテート脱保護と同時に）行なうと、ＧａｌＮＡｃ−オリゴヌクレオチドコンジュゲート４３が得られた。
【０３４４】
実施例６。コンジュゲート５０の合成
スキーム１３。
【化１９６】
2020516296.tif 000199
スキーム１４。
【化１９７】
2020516296.tif 000200
【化１９８】
2020516296.tif 000201
【０３４５】
ステップ１。２−（（２−（（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル）オキシ）エチル）アミノ）エタン−１−オール（５１）の調製
【化１９９】
2020516296.tif 000202
エタノールアミン（７７ｍＬ、１．２５ｍｏｌ）及び（２−ブロモエトキシ）−ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシラン（１５ｇ、６２．７ｍｍｏｌ）の無水アセトニトリル溶液（２００ｍＬ）を、３時間還流した。完了次第、反応物を室温に冷まし、水（４００ｍＬ）で希釈し、酢酸エチル（３×１５０ｍＬ）で抽出した。合わせた酢酸エチル抽出物を硫酸マグネシウムで乾燥させ、濾過し、真空中で濃縮乾固させた。まず５０％酢酸エチル／ヘキサン、次いで５０％  ＭｅＯＨ／ＥｔＯＡｃを用い、シリカパッドを通した濾過によって残渣を精製して、５１を淡黄色油状物として得た（１４ｇ、１００％）。
【０３４６】
ステップ２。２−（ビス（４−メトキシフェニル）（フェニル）メトキシ）−Ｎ−（２−（（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル）オキシ）エチル）エタン−１−アミン（５２）の調製
【化２００】
2020516296.tif 000203
２−（（２−（（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル）オキシ）エチル）アミノ）エタン−１−オール（５１）（１４ｇ、６４ｍｍｏｌ）及びトリエチルアミン（１７．５ｍＬ、１２８ｍｍｏｌ）の無水ジクロロメタン溶液（２５０ｍＬ）に、４，４’−ジメトキシトリチルクロリド（２４ｇ、７０ｍｍｏｌ）を添加した。この溶液を室温で一晩撹拌し、次いで真空中で濃縮乾固させた。残渣を酢酸エチル（３００ｍＬ）に溶解させ、水（２５０ｍＬ）及びブライン（２５０ｍＬ）で洗浄した。酢酸エチルを硫酸マグネシウムで乾燥させ、濾過し、真空中で濃縮乾固させた。シリカゲル６０でのカラムクロマトグラフィ（１％から５％のＭｅＯＨを含むＣＨ２Ｃｌ２）による精製により、５２を淡黄色粘性油状物として得た（１３ｇ、３９％）。
【０３４７】
ステップ３。メチル１０−（（２−（ビス（４−メトキシフェニル）（フェニル）メトキシ）エチル）（２−（（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル）オキシ）エチル）アミノ）−１０−オキソデカノエート（５３）の調製
【化２０１】
2020516296.tif 000204
２−（ビス（４−メトキシフェニル）（フェニル）メトキシ）−Ｎ−（２−（（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル）オキシ）エチル）エタン−１−アミン（５２）（５．４ｇ、１０．３ｍｍｏｌ）、セバシン酸モノメチル（２．２ｇ、１０．３ｇ）、ＨＢＴＵ（４．９ｇ、１２．９ｍｍｏｌ）、ＤＩＰＥＡ（５．３ｍＬ、３０．９ｍｍｏｌ）のＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド溶液（１００ｍＬ）を、室温で３時間撹拌した。完了次第、溶液を水（４００ｍＬ）に注ぎ、酢酸エチル（１×５００ｍＬ）で抽出した。酢酸エチル抽出物をブライン（２×２５０ｍＬ）で洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥させ、濾過し、真空中で濃縮乾固させた。シリカゲル６０でのカラムクロマトグラフィ（１０％から２５％の酢酸エチルを含むヘキサン）による精製により、５３を粘性黄色油状物として得た（６．５ｇ、８７％）。
【０３４８】
ステップ４。メチル１０−（（２−（ビス（４−メトキシフェニル）（フェニル）メトキシ）エチル）（２−ヒドロキシエチル）アミノ）−１０−オキソデカノエート（５４）の調製
【化２０２】
2020516296.tif 000205
メチル１０−（（２−（ビス（４−メトキシフェニル）（フェニル）メトキシ）エチル）（２−（（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル）オキシ）エチル）アミノ）−１０−オキソデカノエート（５３）（２．０ｇ、２．８ｍｍｏｌ）及びトリエチルアミン（１ｍＬ）の無水テトラヒドロフラン溶液（２０ｍＬ）に、ＴＢＡＦ（ＴＨＦ中１Ｍ、３．４ｍＬ、３．３ｍｍｏｌ）を添加した。この溶液を６時間撹拌したが、ＴＬＣ（５％のＭｅＯＨを含むＣＨ２Ｃｌ２）では部分的な変換しか観察されなかった。更に１．７ｍＬのＴＢＡＦを添加し、この溶液を室温で一晩撹拌した。完了次第、溶液を真空中で濃縮させ、シリカゲル６０でのカラムクロマトグラフィ（１０％から５０％のＥｔＯＡｃを含むヘキサン、次いで１００％  ＥｔＯＡｃ）によって精製して、５４を粘性無色油状物として得た（０．５ｇ、２９％）。
【０３４９】
ステップ５。１０−（（２−（ビス（４−メトキシフェニル）（フェニル）メトキシ）エチル）（２−ヒドロキシエチル）アミノ）−１０−オキソデカン酸リチウム（５５）の調製
【化２０３】
2020516296.tif 000206
メチル１０−（（２−（ビス（４−メトキシフェニル）（フェニル）メトキシ）エチル）（２−ヒドロキシエチル）アミノ）−１０−オキソデカノエート（５４）（０．５ｇ、０．８３ｍｍｏｌ）のＴＨＦ溶液（４０ｍＬ）に、水（１０ｍＬ）及び水酸化リチウム（２４ｍｇ、１．０ｍｍｏｌ）を添加した。この溶液を室温で一晩撹拌し、次いで真空中で濃縮させてＴＨＦを除去した。残った水溶液を液体窒素で急速凍結し、凍結乾燥させて、５５を無色固体として得た（４８５ｍｇ、９５％）。
【０３５０】
ステップ６。化合物５６、５７、５８、及び５０の調製
化合物５６、５７、５８、及び５０は、それぞれ、化合物４７、４８、４９、及び４３を合成するために使用したものと同一の手順を使用して調製した。
【０３５１】
実施例７。コンジュゲート５９の合成
スキーム１５。
【化２０４】
2020516296.tif 000207
【化２０５】
2020516296.tif 000208
【化２０６】
2020516296.tif 000209
スキーム１６。
【化２０７】
2020516296.tif 000210
【０３５２】
ステップ１。メチル（２Ｒ，５Ｒ）−５−ヒドロキシピペリジン−２−カルボキシレート（６１）の調製
【化２０８】
2020516296.tif 000211
（２Ｒ，５Ｒ）−５−ヒドロキシピペリジン−２−カルボン酸（６０）（３．５ｇ、２４．１ｍｍｏｌ）をＭｅＯＨ（５０ｍＬ）中で撹拌した。この溶液にＨＣｌ（ガス）を２分間通気させ、反応物を還流下で１．５時間撹拌した。この反応物を真空中で濃縮させると、定量的収率のメチル（２Ｒ，５Ｒ）−５−ヒドロキシピペリジン−２−カルボキシレート（６１）がもたらされ、これを更に精製することなく使用した。
【０３５３】
ステップ２。１−（ｔｅｒｔ−ブチル）２−メチル（２Ｒ，５Ｒ）−５−ヒドロキシピペリジン−１，２−ジカルボキシレート（６２）の調製
【化２０９】
2020516296.tif 000212
メチル（２Ｒ，５Ｒ）−５−ヒドロキシピペリジン−２−カルボキシレート（６１）
（２４．１ｍｍｏｌ）及びＴＥＡ（７．２ｍＬ、５３．０２ｍｍｏｌ）を、ＤＣＭ（１００ｍＬ）中で室温にて撹拌した。ジ−ｔｅｒｔ−ブチル−ジ−カルボネート（５．７ｇ、２６．５ｍｍｏｌ）を少量に分けて添加し、反応物を２時間撹拌した。この反応物をＤＣＭ（１００ｍＬ）で希釈し、１ＭのＨＣｌ（２×７５ｍＬ）、飽和ＮａＨＣＯ３（２×７５ｍＬ）、Ｈ２Ｏ（２×７５ｍＬ）、及び飽和ＮａＣｌ溶液（２×７５ｍＬ）で順次洗浄した。有機物を分離させ、乾燥させ（Ｎａ２ＳＯ４）、真空中で濃縮させると、１−（ｔｅｒｔ−ブチル）２−メチル（２Ｒ，５Ｒ）−５−ヒドロキシピペリジン−１，２−ジカルボキシレート６２（５．５３ｇ、８８％）がもたらされ、これを更に精製することなく使用した。
【０３５４】
ステップ３。ｔｅｒｔ−ブチル（２Ｒ，５Ｒ）−５−ヒドロキシ−２−（ヒドロキシメチル）ピペリジン−１−カルボキシレート（６３）の調製
【化２１０】
2020516296.tif 000213
（２Ｒ，５Ｒ）−１−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−５−ヒドロキシピペリジン−２−カルボン酸（６２）（５．５３ｇ、２１．４ｍｍｏｌ）を、０℃のＴＨＦ中で撹拌した。ＬｉＢＨ４（３．０Ｍ  ＴＨＦ溶液）（８．９ｍＬ、２７．７ｍｍｏｌ）を１時間にわたって滴加した。この反応物を室温に戻し、撹拌を１６時間続けた。反応物を１ＭのＮａＯＨでクエンチし、ＴＨＦを真空中で除去し、水性物をＥｔＯＡｃ（１０×１００ｍＬ）で徹底的に抽出した。合わせた有機物をＨ２Ｏ（５０ｍＬ）、飽和ＮａＣｌ溶液（２×５０ｍＬ）で洗浄し、乾燥させ（Ｎａ２ＳＯ４）、真空中で濃縮させると、ｔｅｒｔ−ブチル（２Ｒ，５Ｒ）−５−ヒドロキシ−２−（ヒドロキシメチル）ピペリジン−１−カルボキシレート（６３）（２．４ｇ、４９．０％）がもたらされ、これを更に精製することなく使用した。
【０３５５】
ステップ４。（３Ｒ，６Ｒ）−６−（ヒドロキシメチル）ピペリジン−３−オール（６４）の調製
【化２１１】
2020516296.tif 000214
ｔｅｒｔ−ブチル（２Ｒ，５Ｒ）−５−ヒドロキシ−２−（ヒドロキシメチル）ピペリジン−１−カルボキシレート（６３）（２．４ｇ、１０．４ｍｍｏｌ）を、Ｅｔ２Ｏ中で室温にて撹拌した。ＨＣｌ（ガス）を４５秒間通気させ、反応物を室温で４５分間撹拌した。この反応物を真空中で濃縮させ、高真空下で乾燥させて、（３Ｒ，６Ｒ）−６−（ヒドロキシメチル）ピペリジン−３−オール（６４）を得た。この生成物を、更に精製することなく使用した。
【０３５６】
ステップ５。２，２，２−トリフルオロ−１−（（２Ｒ，５Ｒ）−５−ヒドロキシ−２−（ヒドロキシメチル）ピペリジン−１−イル）エタン−１−オン（６５）の調製
【化２１２】
2020516296.tif 000215
先の反応から得た粗製の（３Ｒ，６Ｒ）−６−（ヒドロキシメチル）ピペリジン−３−オール（６４）を、ＴＥＡ（３．５ｍＬ、２５．２ｍｍｏｌ）を含むＭｅＣＮ（５０ｍＬ）中で室温にて撹拌した。トリフルオロ酢酸エチル（３ｍＬ、２５．２ｍｍｏｌ）を添加し、この反応物を室温で１６時間撹拌してから真空中で濃縮させると、２，２，２−トリフルオロ−１−（（２Ｒ，５Ｒ）−５−ヒドロキシ−２−（ヒドロキシメチル）ピペリジン−１−イル）エタン−１−オン（６５）がもたらされた。この生成物を、更に精製することなく使用した。
【０３５７】
ステップ６。１−（（２Ｒ，５Ｒ）−２−（（ビス（４−メトキシフェニル）（フェニル）メトキシ）メチル）−５−ヒドロキシピペリジン−１−イル）−２，２，２−トリフルオロエタン−１−オン（６６）の調製
【化２１３】
2020516296.tif 000216
先の反応から得た粗製の２，２，２−トリフルオロ−１−（（２Ｒ，５Ｒ）−５−ヒドロキシ−２−（ヒドロキシメチル）ピペリジン−１−イル）エタン−１−オン（６５を）、ＴＥＡ（５０ｍＬ）を含むＤＣＭ中でＲＴにて撹拌した。４，４’−ジメトキシトリチルクロリド（ＤＭＴｒＣｌ）（３．８７ｇ、１１．４４ｍｍｏｌ）を１回で添加し、反応物を室温で３時間撹拌した。この反応物をＤＣＭ（５０ｍＬ）で希釈し、飽和ＮａＨＣＯ３（２×７５ｍＬ）、Ｈ２Ｏ（２×７５ｍＬ）、及び飽和ＮａＣｌ溶液（２×７５ｍＬ）で順次洗浄した。有機物を分離させ、乾燥させ（Ｎａ２ＳＯ４）、真空中で濃縮させ、カラムクロマトグラフィ（１００％ヘキサン−６０％  ＥｔＯＡｃ／ヘキサン）（０．１％  ＴＥＡ）によって精製すると、１−（（２Ｒ，５Ｒ）−２−（（ビス（４−メトキシフェニル）（フェニル）メトキシ）メチル）−５−ヒドロキシピペリジン−１−イル）−２，２，２−トリフルオロエタン−１−オン（６６）がもたらされた（３．１４ｇ、５７％）。
【０３５８】
ステップ７。（３Ｒ，６Ｒ）−６−（（ビス（４−メトキシフェニル）（フェニル）メトキシ）メチル）−ピペリジン−３−オール（６７）の調製
【化２１４】
2020516296.tif 000217
１−（（２Ｒ，５Ｒ）−２−（（ビス（４−メトキシフェニル）（フェニル）メトキシ）メチル）−５−ヒドロキシピペリジン−１−イル）−２，２，２−トリフルオロエタン−１−オン（６６）（３．１４ｇ、６．０ｍｍｏｌ）を、ＭｅＯＨ（５０ｍＬ）中で室温にて撹拌した。ＫＯＨ（６７２ｍｇ、１２ｍｍｏｌ）を添加し、反応物を室温で１６時間撹拌した。更なるＫＯＨ（３００ｍｇ、６ｍｍｏｌ）を添加し、撹拌を更に２４時間続けた。この反応物を真空中で濃縮させ、ＤＣＭ（１５０ｍＬ）に取り、Ｈ２Ｏ（４×５０ｍＬ）で洗浄し、乾燥させ（Ｎａ２ＳＯ４）、真空中で濃縮させると、（３Ｒ，６Ｒ）−６−（（ビス（４−メトキシフェニル）（フェニル）メトキシ）メチル）ピペリジン−３−オール（６７）（２．３４ｇ、９０％）がもたらされ、これを更に精製することなく使用した。
【０３５９】
ステップ８。メチル１２−（（２Ｒ，５Ｒ）−２−（（ビス（４−メトキシフェニル）（フェニル）−メトキシ）メチル）−５−ヒドロキシピペリジン−１−イル）−１２−オキソドデカノエート（６８）の調製
【化２１５】
2020516296.tif 000218
（３Ｒ，６Ｒ）−６−（（ビス（４−メトキシフェニル）（フェニル）メトキシ）メチル）ピペリジン−３−オール（６７）（２．３４ｇ、５．３４ｍｍｏｌ）を、ＤＣＭ（７５ｍＬ）中で室温にて撹拌した。トリエチルアミン（２．２ｍＬ、１６．２ｍｍｏｌ）、ＨＡＴＵ（３．５ｇ、９．２ｍｍｏｌ）、及び１２−メトキシ−１２−オキソドデカン酸（１．３２ｇ、５．４ｍｍｏｌ）を添加し、反応物を室温で３時間撹拌した。結果として生じた固体沈殿物を濾過によって除去し、この濾液を真空中で濃縮させ、カラムクロマトグラフィ（２．５％ＭｅＯＨ／ＤＣＭ、０．１％ＴＥＡ）によって残渣を精製すると、定量的収率のメチル１２−（（２Ｒ，５Ｒ）−２−（（ビス（４−メトキシフェニル）（フェニル）メトキシ）メチル）−５−ヒドロキシピペリジン−１−イル）−１２−オキソドデカノエート（６８）がもたらされた。
【０３６０】
ステップ９。１２−（（２Ｒ，５Ｒ）−２−（（ビス（４−メトキシフェニル）（フェニル）メトキシ）−メチル）−５−ヒドロキシピペリジン−１−イル）−１２−オキソドデカン酸リチウム（６９）の調製
【化２１６】
2020516296.tif 000219
メチル１２−（（２Ｒ，５Ｒ）−２−（（ビス（４−メトキシフェニル）（フェニル）メトキシ）メチル）−５−ヒドロキシピペリジン−１−イル）−１２−オキソドデカノエート（６８）（５．４ｍｍｏｌ）及びＬｉＯＨ（１４０ｍｇ、５．９４ｍｍｏｌ）を、ＴＨＦ：Ｈ２Ｏ（１：１、１００ｍＬ）中で室温にて４８時間撹拌した。ＴＨＦを真空中で除去し、水性物を凍結及び凍結乾燥させると、１２−（（２Ｒ，５Ｒ）−２−（（ビス（４−メトキシフェニル）（フェニル）メトキシ）メチル）−５−ヒドロキシピペリジン−１−イル）−１２−オキソドデカン酸リチウム（６９）がもたらされた（３．２ｇ、９１％）。これを、更に精製することなく後続の反応に使用した。
【０３６１】
ステップ１０。化合物７０、７１、７２、及び５９の調製
化合物７０、７１、７２、及び５９は、それぞれ、化合物４７、４８、４９、及び４３を合成するために使用したものと同一の手順を使用して調製した。
【０３６２】
実施例８。コンジュゲート１４２の合成
スキーム１７。
【化２１７】
2020516296.tif 000220
【化２１８】
2020516296.tif 000221
スキーム１８。
【化２１９】
2020516296.tif 000222
【０３６３】
ステップ１。３，４，５−トリアセトキシ安息香酸（７３）の調製
ピリジン（５０ｍＬ）及び無水酢酸（５０ｍＬ）に没食子酸（２０ｇ）を含む溶液に。この溶液を室温で一晩撹拌し、次いで氷水（１Ｌ）に注いだ。この溶液を濃塩酸で酸性にするとすぐに無色固体が沈殿した。この固体を濾過により収集し、水（５×１００ｍＬ）で洗浄した。この湿った固体を液体窒素で凍結し、フリーズドライして、３，４，５−トリアセトキシ安息香酸を得た（２６ｇ、７５％）。
【０３６４】
ステップ２。５−（（２−（（２−オキソ−２−フェニル−１λ２−エチル）アミノ）エチル）カルバモイル）ベンゼン−１，２，３−トリイルトリアセテート（７４）の調製
３，４，５−トリアセトキシ安息香酸（１０ｇ、３３．８ｍｍｏｌ）、Ｎ−カルボベンゾキシ−１，２−ジアミノエタン塩酸塩（５．３ｇ、３３．８ｍｍｏｌ）、及びＨＢＴＵ（１３．５ｇ、３５．５ｍｍｏｌ）のＤＭＦ溶液（２００ｍＬ）に、ＤＩＰＥＡ（１７．５ｍＬ、１０１ｍｍｏｌ）を添加した。この溶液を１６時間撹拌し、次いで酢酸エチル（２５０ｍＬ）で希釈し、ブライン（３×２００ｍＬ）で洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥させ、濾過し、真空中で濃縮乾固させた。シリカゲルでのカラムクロマトグラフィ（勾配１％から５％のＭｅＯＨを含むＤＣＭ）によって粗生成物を精製して、５−（（２−（（２−オキソ−２−フェニル−１λ２−エチル）アミノ）エチル）カルバモイル）ベンゼン−１，２，３−トリイルトリアセテートをオフホワイトの固体として得た（５．５ｇ）。
【０３６５】
ステップ３。３，４，５−トリヒドロキシ−Ｎ−（２−（（２−オキソ−２−フェニル−１λ２−エチル）アミノ）エチル）ベンズアミド（７５）の調製
５−（（２−（（２−オキソ−２−フェニル−１λ２−エチル）アミノ）エチル）カルバモイル）ベンゼン−１，２，３−トリイルトリアセテート（５ｇ、１．１ｍｍｏｌ）の１：１  ＭｅＯＨ／ＣＨ２Ｃｌ２溶液（１００ｍＬ）を、室温で３日間撹拌した。完了次第、溶媒を除去して、３，４，５−トリヒドロキシ−Ｎ−（２−（（２−オキソ−２−フェニル−１λ２−エチル）アミノ）エチル）ベンズアミドを無色固体として得た（４ｇ、定量的）。
【０３６６】
ステップ４。トリメチル２，２’，２’’−（（５−（（２−（（２−オキソ−２−フェニル−１λ２−エチル）アミノ）エチル）カルバモイル）ベンゼン−１，２，３−トリイル）トリス（オキシ））トリアセテート（７６）の調製
３，４，５−トリヒドロキシ−Ｎ−（２−（（２−オキソ−２−フェニル−１λ２−エチル）アミノ）エチル）ベンズアミド（４ｇ、１１．６ｍｍｏｌ）、ブロモ酢酸メチル（７．７ｇ、４６．４ｍｍｏｌ）、及び炭酸カリウム（９．６ｇ、６９．４ｍｍｏｌ）のＤＭＦ溶液（１００ｍＬ）を、６０℃で一晩撹拌した。完了次第、この溶液を室温に冷まし、酢酸エチル（２００ｍＬ）で希釈し、水（２００ｍＬ）、ブライン（３×１００ｍＬ）で洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥させ、濾過し、真空中で濃縮乾固させた。シリカゲルでのカラムクロマトグラフィ（勾配２％から１０％のＭｅＯＨを含むＤＣＭ）によって粗生成物を精製して、トリメチル２，２’，２’’−（（５−（（２−（（２−オキソ−２−フェニル−１λ２−エチル）アミノ）エチル）カルバモイル）ベンゼン−１，２，３−トリイル）トリス（オキシ））−トリアセテートをベージュ色の固体として得た（５ｇ、７９％）。
【０３６７】
ステップ５。２，２’，２’’−（（５−（（２−（（２−オキソ−２−フェニル−１λ２−エチル）アミノ）エチル）−カルバモイル）ベンゼン−１，２，３−トリイル）トリス（オキシ））トリ酢酸（７７）の調製
トリメチル２，２’，２’’−（（５−（（２−（（２−オキソ−２−フェニル−１λ２−エチル）アミノ）エチル）−カルバモイル）ベンゼン−１，２，３−トリイル）トリス（オキシ））トリアセテート（５ｇ、９．２ｍｍｏｌ）及び１ＭのＮａＯＨ（３０ｍＬ）のメタノール溶液（１００ｍＬ）を、室温で２時間撹拌した。完了次第、反応物を濃縮させてメタノールを除去し、水（７５ｍＬ）で希釈した。この混合物を０℃に冷却し、２ＭのＨＣｌで酸性化し、酢酸エチル（５×１５０ｍＬ）で抽出した。合わせた酢酸エチル抽出物を硫酸マグネシウムで乾燥させ、濾過し、真空中で濃縮乾固させて、２，２’，２’’−（（５−（（２−（（２−オキソ−２−フェニル−１λ２−エチル）アミノ）エチル）カルバモイル）ベンゼン−１，２，３−トリイル）トリス（オキシ））トリ酢酸を無色固体として得た（２．３ｇ、５０％）。
【０３６８】
ステップ６。化合物７８の調製
化合物１３に使用したものと同一の手順を使用し、化合物９（２．７５ｇ、４．３ｍｍｏｌ）及び７７（０．５ｇ、０．９６ｍｍｏｌ）から化合物７８を調製した。収量：６００ｍｇ。
【０３６９】
ステップ７。化合物７９の調製
化合物１４に使用したものと同一の手順を使用し、化合物７８（０．６ｇ）から化合物７９を調製した。収量：５００ｍｇ。
【０３７０】
ステップ８。化合物１４０の調製
化合物１９に使用したものと同一の手順を使用し、化合物７９（５００ｍｇ、０．２５ｍｍｏｌ）及び化合物１８（１７５ｍｇ、０．２５ｍｍｏｌ）から化合物１４０を調製した。収量：２５０ｍｇ、４４％。
【０３７１】
ステップ９。化合物１４１の調製
化合物２０に使用したものと同一の手順を使用し、化合物１４０（２５０ｍｇ、０．１１ｍｍｏｌ）から化合物１４１を調製した。収量：２００ｍｇ。
【０３７２】
ステップ１０。コンジュゲート１４２の調製
化合物１に使用したものと同一の手順を使用し、化合物１４１（２００ｍｇ）及び１０００Ａ  ｌｃａａ  ＣＰＧ（１．８ｇ）からコンジュゲート１４２を調製した。収量：１．９ｇ、２２μｍｏｌ／ｇ  ＣＰＧ負荷。結果として得られたＧａｌＮＡｃが負荷されたＣＰＧ固体支持体を、標準的な手順を使用した自動化オリゴヌクレオチド合成に用いた。ヌクレオチド脱保護の後に固体支持体からの除去を（ガラクトサミンアセテート脱保護と同時に）行なうと、ＧａｌＮＡｃ−オリゴヌクレオチドコンジュゲート１４２が得られた。
【０３７３】
実施例９。コンジュゲート１４５の合成
スキーム１９。
【化２２０】
2020516296.tif 000223
スキーム２０。
【化２２１】
2020516296.tif 000224
【０３７４】
ステップ１。ラセミ（シス）５−ベンジル−３ａ，６ａ−ジメチルテトラヒドロ−１Ｈ−フロ［３，４−ｃ］ピロール−１，３（３ａＨ）−ジオン（１２３）の調製
ジクロロメタン（７５ｍＬ）に３，４−ジメチルフラン−２，５−ジオン（３ｇ、２４ｍｍｏｌ）及びＮ−ベンジル−１−メトキシ−Ｎ−（（トリメチルシリル）メチル）メタンアミン（７ｇ、２９．８ｍｍｏｌ）を含む冷却溶液（０℃）に、トリフルオロ酢酸（７５μＬ）をゆっくりと添加した。一晩撹拌し、氷浴が溶けるにつれて溶液が室温にゆっくりと戻るようにした。この反応混合物を濃縮乾固させ、酢酸エチル（１００ｍＬ）に溶解させ、飽和炭酸水素ナトリウム（２×１００ｍＬ）で洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥させ、濾過し、濃縮乾固させた。シリカゲルでのカラムクロマトグラフィ（勾配：２０％の酢酸エチルを含むヘキサンから１００％の酢酸エチル）による精製により、ラセミ（シス）５−ベンジル−３ａ，６ａ−ジメチルテトラヒドロ−１Ｈ−フロ［３，４−ｃ］ピロール−１，３（３ａＨ）−ジオンを黄色油状物として得た（３．５ｇ、５６％）。
【０３７５】
ステップ２。ラセミ（シス）１−ベンジル−３，４−ジメチルピロリジン−３，４−ジイル）ジメタノール（１２４）の調製
無水ジエチルエーテル（５０ｍＬ）に（３ａＲ，６ａＳ）−５−ベンジル−３ａ，６ａ−ジメチルテトラヒドロ−１Ｈ−フロ［３，４−ｃ］ピロール−１，３（３ａＨ）−ジオン（３．５ｇ、１３．４ｍｍｏｌ）を含む冷却溶液（０℃）に、水素化アルミニウムリチウムペレット（１．５ｇ、４０ｍｍｏｌ）を３回に分けてゆっくりと添加した。この溶液を一晩撹拌し、氷水浴が溶けるにつれて室温に戻るようにした。完了次第、反応物を０℃に冷却し、１．５ｍＬの５ＭのＮａＯＨに続いて１．５ｍＬの水で非常にゆっくりとクエンチした。３０分間撹拌し、次いで硫酸マグネシウムを添加し、濾過した。この濾液を濃縮させて、ラセミ（シス）１−ベンジル−３，４−ジメチルピロリジン−３，４−ジイル）ジメタノールを無色油状物として得た（２．７ｇ）。
【０３７６】
ステップ３。ラセミ（シス）３，４−ジメチルピロリジン−３，４−ジイル）ジメタノール（１２５）の調製
（（３Ｒ，４Ｓ）−１−ベンジル−３，４−ジメチルピロリジン−３，４−ジイル）ジメタノール（１０ｇ、４０ｍｍｏｌ）のメタノール溶液（１０ｍＬ）に、湿った１０％パラジウム活性炭（１ｇ）を添加した。この溶液を、水素雰囲気下で１６時間にわたって勢いよく撹拌した。完了次第、溶液をセライトで濾過し、濃縮乾固させて、ラセミ（シス）３，４−ジメチルピロリジン−３，４−ジイル）ジメタノールを無色固体として得た（５．５ｇ、８６％）。
【０３７７】
ステップ４。ラセミ（シス）メチル１０−（３，４−ビス（ヒドロキシメチル）−３，４−ジメチルピロリジン−１−イル）−１０−オキソデカノエート（１２６）の調製
化合物１７に使用したものと同一の手順を使用し、化合物１２５（１．３ｇ、８．２ｍｍｏｌ）及びセバシン酸モノメチル（１．８ｇ、８．２ｍｍｏｌ）から化合物１２６を調製した。収量：１．８ｇ、６１％。
【０３７８】
ステップ５。ラセミ（シス）メチル１０−（３−（（ビス（４−メトキシフェニル−）（フェニル）メトキシ）−メチル）−４−（ヒドロキシメチル）−３，４−ジメチルピロリジン−１−イル）−１０−オキソデカノエート（１２７）の調製
化合物１８に使用したものと同一の手順を使用し、化合物１２６（１．８ｇ、５．０ｍｍｏｌ）及び４，４’−ジメトキシトリチルクロリド（１．７ｇ、５．０ｍｍｏｌ）から化合物１２７を調製した。収量：１．４ｇ、４２％。
【０３７９】
ステップ６。ラセミ（シス）１０−（３−（（ビス（４−メトキシフェニル）−（フェニル）メトキシ）−メチル）−４−（ヒドロキシメチル）−３，４−ジメチルピロリジン−１−イル）−１０−オキソデカン酸リチウム（１２８）の調製
ＴＨＦ（５０ｍＬ）及び水（５０ｍＬ）に化合物１２７（３．０ｇ、４．６ｍｍｏｌ）を含む溶液に、水酸化リチウム（１２１ｍｇ、５．０ｍｍｏｌ）を添加した。この溶液を室温で４時間撹拌し、次いで濃縮させてＴＨＦを除去した。残った水溶液を一晩フリーズドライして、淡桃色固体を得た（２．９ｇ、定量的）。
【０３８０】
ステップ７。化合物１４３の調製
化合物１９に使用したものと同一の手順を使用し、化合物１２８（２７０ｍｇ、０．４２ｍｍｏｌ）及び化合物１４（８００ｍｇ、０．４２ｍｍｏｌ）から化合物１４３を調製した。収量：９００ｍｇ、８７％。
【０３８１】
ステップ８。化合物１４４の調製
化合物２０に使用したものと同一の手順を使用し、化合物１４３（５００ｍｇ、０．２ｍｍｏｌ）から化合物１４４を調製した。収量：２００ｍｇ。
【０３８２】
ステップ９。コンジュゲート１４５の調製
化合物１に使用したものと同一の手順を使用し、化合物１４４（２００ｍｇ）及び１０００Ａ  ｌｃａａ  ＣＰＧ（１．８ｇ）からコンジュゲート１４５を調製した。収量：１．９ｇ、２０μｍｏｌ／ｇ  ＣＰＧ負荷。結果として得られたＧａｌＮＡｃが負荷されたＣＰＧ固体支持体を、標準的な手順を使用した自動化オリゴヌクレオチド合成に用いた。ヌクレオチド脱保護の後に固体支持体からの除去を（ガラクトサミンアセテート脱保護と同時に）行なうと、ＧａｌＮＡｃ−オリゴヌクレオチドコンジュゲート１４５が得られた。
【０３８３】
実施例１０。コンジュゲート１５０の合成
スキーム２１。
【化２２２】
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【化２２３】
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【０３８４】
ステップ１。１４６−１の調製
ドデカン二酸のモノメチルエステル（１２．２ｇ、５０．０ｍｍｏｌ）のジクロロメタン溶液（３００ｍＬ）に、Ｎ−ヒドロキシサクシニミド（６．１０ｇ、５３．０ｍｍｏｌ）及び１−エチル−３−（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド塩酸塩（ＥＤＣ）（１０．５２ｇ、５５．０ｍｍｏｌ）を添加した。濁った混合物を室温で一晩撹拌すると、反応物は透明な溶液になった。ＴＬＣは反応が完了したことを示した。有機物を飽和ＮＨ４Ｃｌ（３００ｍＬ）及びブライン（１００ｍＬ）で洗浄した。有機層を分離させ、ＭｇＳＯ４で乾燥させ、濃縮乾固させて、純粋な１−（２，５−ジオキソピロリジン−１−イル）１２−メチルドデカンジオエート（１４６−１）を白色固体として得た（１６．７ｇ、９７．８％）。
【０３８５】
ステップ２。シクロペンタ−３−エン−１−イルメタノール（１４６−２）の調製
窒素下で０℃の水素化アルミニウムリチウム（１５．２ｇ、０．４０ｍｏｌ）の無水エーテル懸濁液（１Ｌ）に、メチルシクロペンタ−３−エンカルボキシレート（５０ｇ、０．４０ｍｏｌ）のエーテル溶液（３００ｍＬ）を５時間にわたって滴加した。この懸濁液を室温で一晩撹拌した。ＴＬＣは反応の完了を示した。この反応物を０℃に再冷却した。Ｎａ２ＳＯ４の飽和溶液（３２ｍＬ）を滴加して、反応物をクエンチした。添加が完了した後、混合物を更に３時間撹拌し、セライトパッドで濾過した。溶媒の蒸発により、シクロペンタ−３−エニルメタノール１４６−２（３７．３ｇ、９５％）が無色液体として得られた。
【０３８６】
ステップ３。（６−オキサビシクロ［３．１．０］ヘキサン−３−イル）メタノール１４６−３の調製
０℃のシクロペンタ−３−エニルメタノール（１４６−２）（４．０ｇ、４１ｍｍｏｌ）のジクロロメタン溶液（１５０ｍＬ）に、３−クロロ過安息香酸（１０ｇ、４５ｍｍｏｌ、純度７７％）を少量に分けて添加した。この反応物を一晩撹拌した。ジクロロメタン（１５０ｍＬ）を添加した。チオ硫酸ナトリウム（１０ｍＬの水中１２ｇ）、続いて飽和ＮａＨＣＯ３（４０ｍＬ）で有機物を洗浄した。残った３−クロロ過安息香酸が全て洗い流されるまでこれを繰り返した。有機物をＭｇＳＯ４で乾燥させた。溶媒の蒸発により、シス及びトランスの６−オキサビシクロ［３．１．０］ヘキサン−３−イルメタノール（１４６−３）の混合物（２．６ｇ、５７％）が黄色油状物としてもたらされた。ＧＣ−ＭＳ： ｍ／ｚ １１４ （５） （Ｍ＋）， ９５ （１５）， ８８ （１００）， ８１ （１５）。
【０３８７】
ステップ４。２−アミノ−４−（ヒドロキシメチル）シクロペンタン−１−オール（１４６−４）の調製
０℃の６−オキサビシクロ［３．１．０］ヘキサン−３−イルメタノール１４６−３（２．０ｇ、１７．６ｍｍｏｌ）のメタノール溶液（２０ｍＬ）に、アンモニアガスを１０分間パージした。この反応物を室温で一晩撹拌した。ＴＬＣは反応の未完了を示した。メタノールを除去し、ＮＨ３・Ｈ２Ｏ（５０ｍＬ）を添加し、これを室温で１週間にわたって撹拌した。ＴＬＣにより反応の完了が確認された。エタノールとの共沸により水を除去して、２−アミノ−４−（ヒドロキシメチル）シクロペンタノール（１４６−４）（２．１ｇ、９１％）を黄色油状物として得た。
【０３８８】
ステップ５。メチル１２−（２−ヒドロキシ−４−（ヒドロキシメチル）シクロペンチルアミノ）−１２−オキソドデカノエート（１４６−５）の調製
１２−（２−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）エチルアミノ）−１２−オキソドデカノエート（３−２）の合成において説明したものと同じ手順を使用し、２−アミノ−４−（ヒドロキシメチル）シクロペンタノール（１４６−４）及び１−（２，５−ジオキソピロリジン−１−イル）１２−メチルドデカンジオエート（１４６−１）から化合物１４６−５を調製した。メチル１２−（２−ヒドロキシ−４−（ヒドロキシメチル）シクロペンチルアミノ）−１２−オキソドデカノエート（１４６−５）を、８７．４％の収率でオフホワイトの固体として得た。
【０３８９】
ステップ６。化合物１４７の調製
化合物１８に使用したものと同一の手順を使用し、化合物１４６（１．４ｇ、２．３３ｍｍｏｌ）から化合物１４７を定量的に調製した。
【０３９０】
ステップ７。化合物１４８の調製
化合物１９に使用したものと同一の手順を使用し、化合物１４７（１５０ｍｇ、０．２３ｍｍｏｌ）及び化合物１４（４３１ｍｇ、０．２３ｍｍｏｌ）から化合物１４８を調製した。収量：４６０ｍｇ、８４％。
【０３９１】
ステップ８。化合物１４９の調製
化合物２０に使用したものと同一の手順を使用し、化合物１４８（４６０ｍｇ、０．１９ｍｍｏｌ）から化合物１４９を調製した。収量：４３６ｍｇ、９１％。
【０３９２】
ステップ９。コンジュゲート１５０の調製
化合物１に使用したものと同一の手順を使用し、化合物１４９（４３６ｍｇ）及び１０００Ａ  ｌｃａａ  ＣＰＧ（２．６２ｇ）から化合物１５０を調製した。収量：２．７ｇ、２１．３μｍｏｌ／ｇ  ＣＰＧ負荷。結果として得られたＧａｌＮＡｃが負荷されたＣＰＧ固体支持体を、標準的な手順を使用した自動化オリゴヌクレオチド合成に用いた。ヌクレオチド脱保護の後に固体支持体からの除去を（ガラクトサミンアセテート脱保護と同時に）行なうと、ＧａｌＮＡｃ−オリゴヌクレオチドコンジュゲート１５０が得られた。
【０３９３】
実施例１１。コンジュゲート１５３、１５８、１６３、１６８、及び１７３の合成
スキーム２２。
【化２２４】
2020516296.tif 000227
【化２２５】
2020516296.tif 000228
【０３９４】
ステップ１。１−（ｔｅｒｔ−ブチル）２−メチル（２Ｓ，４Ｒ）−４−ヒドロキシピロリジン−１，２−ジカルボキシレート（１３３）の調製
メチル（２Ｓ，４Ｒ）−４−ヒドロキシピロリジン−２−カルボキシレート（２５．９ｇ、４６ｍｍｏｌ）、ＢＯＣ無水物（６５．９ｇ、３０２．５ｍｍｏｌ）、及びＴＥＡ（４２ｍｌ、３０２．５ｍｍｏｌ）を、ＤＣＭ中で室温にて１６時間撹拌した。有機物を１ＭのＨＣｌ（２回）、飽和ＮａＨＣＯ３（２回）、Ｈ２Ｏ、及びブラインで順次洗浄し、乾燥させ、真空中で濃縮させると、１−（ｔｅｒｔ−ブチル）２−メチル（２Ｓ，４Ｒ）−４−ヒドロキシピロリジン−１，２−ジカルボキシレート（１３３）がもたらされた（５８．１ｇ、８５％）。
【０３９５】
ステップ２。１−（ｔｅｒｔ−ブチル）２−メチル（４Ｒ）−４−ヒドロキシ−２−メチルピロリジン−１，２−ジカルボキシレート（１３４）の調製
１−（ｔｅｒｔ−ブチル）２−メチル（２Ｓ，４Ｒ）−４−ヒドロキシピロリジン−１，２−ジカルボキシレート（１３３）（５ｇ、２０．４ｍｍｏｌ）及びＭｅＩ（１２ｇ、８４．５ｍｍｏｌ）を、−４０℃の無水ＴＨＦ中で撹拌した。ＬＤＡ（２．０Ｍ  ＴＨＦ溶液）（３７．５ｍＬ、７５ｍｍｏｌ）を滴加した。この反応物を室温に戻し、４時間撹拌してから、飽和ＮＨ４Ｃｌでクエンチした。この反応物をＥｔＯＡｃで抽出し、Ｈ２Ｏ及びブラインで洗浄し、乾燥させ（Ｎａ２ＳＯ４）、真空中で濃縮させた。カラムクロマトグラフィ５０：５０  ＥｔＯＡｃ／／ヘキサンによって残渣を精製すると、１−（ｔｅｒｔ−ブチル）２−メチル（４Ｒ）−４−ヒドロキシ−２−メチルピロリジン−１，２−ジカルボキシレート（１３４）がラセミ混合物としてもたらされた（３．６ｇ、６８％）。
【０３９６】
ステップ３。ｔｅｒｔ−ブチル（２Ｓ，４Ｒ）−４−ヒドロキシ−２−（ヒドロキシメチル）−２−メチルピロリジン−１−カルボキシレート（１３５ａ）の調製
１−（Ｔｅｒｔ−ブチル）２−メチル（４Ｒ）−４−ヒドロキシ−２−メチルピロリジン−１，２−ジカルボキシレート（１３４）（１９ｇ、７３．５ｍｍｏｌ）を、Ｎ２下の無水ＴＨＦ中で撹拌した。ＬｉＢＨ４溶液（４８ｍｌ、９６ｍｍｏｌ）を滴加し、反応物を室温で４８時間撹拌した。反応物を１ＭのＮａＯＨでクエンチし、ＴＨＦを真空中で除去し、残留物をＥｔＯＡｃ（４×１００ｍｌ）で抽出した。有機物をＨ２Ｏ及びブラインで洗浄し、乾燥させ（Ｎａ２ＳＯ４）、真空中で濃縮させた。カラムクロマトグラフィ（５％  ＭｅＯＨ／ＤＣＭ）によって残渣を精製すると、ｔｅｒｔ−ブチル（２Ｓ，４Ｒ）−４−ヒドロキシ−２−（ヒドロキシメチル）−２−メチルピロリジン−１−カルボキシレート（１３５ａ）が主な生成物としてもたらされた（８ｇ、４７％）。構造は、参考文献に従って割り当てた。
【０３９７】
ステップ４。（３Ｒ，５Ｓ）−５−（ヒドロキシメチル）−５−メチルピロリジン−３−オール塩酸塩（１３６）の調製
ｔｅｒｔ−ブチル（２Ｓ，４Ｒ）−４−ヒドロキシ−２−（ヒドロキシメチル）−２−メチルピロリジン−１−カルボキシレート（１３５ａ）（８ｇ、３４．６ｍｍｏｌ）を、ＥｔＯＡｃ中で室温にて撹拌し、ＨＣｌガスをおよそ２分間適用した。この反応物を１時間撹拌し、次いで真空中で濃縮させ、高真空下で乾燥させると、（３Ｒ，５Ｓ）−５−（ヒドロキシメチル）−５−メチルピロリジン−３−オール塩酸塩（１３６）が定量的な様式でもたらされた。
【０３９８】
ステップ５。メチル１２−（（２Ｓ，４Ｒ）−４−ヒドロキシ−２−（ヒドロキシメチル）−２−メチルピロリジン−１−イル）−１２−オキソドデカノエート（１３７）の調製
（３Ｒ，５Ｓ）−５−（ヒドロキシメチル）−５−メチルピロリジン−３−オール塩酸塩（１３６）（７．９ｇ、４７．４ｍｍｏｌ）、１２−メトキシ−１２−オキソドデカン酸（１１．５ｇ、４７．４ｍｍｏｌ）、ＨＢＴＵ（３６ｇ、７６ｍｍｏｌ）、及びＴＥＡ（２０ｍＬ、１４２．２ｍｍｏｌ）を、ＤＣＭ中で室温にて１６時間撹拌した。沈殿物を濾過により除去し、有機物を１ＭのＨＣｌ（２回）、飽和ＮａＨＣＯ３（２回）、Ｈ２Ｏ、及びブラインで洗浄した。乾燥後、有機物を真空中で濃縮させ、カラムクロマトグラフィ（５％ＭｅＯＨ／ＤＣＭ）によって精製すると、メチル１２−（（２Ｓ，４Ｒ）−４−ヒドロキシ−２−（ヒドロキシメチル）−２−メチルピロリジン−１−イル）−１２−オキソドデカノエート（１３７）がもたらされた（３．１ｇ、１８．３％）。
【０３９９】
ステップ６。メチル１２−（（２Ｓ，４Ｒ）−２−（（ビス（４−メトキシフェニル）（フェニル）メトキシ）−メチル）−４−ヒドロキシ−２−メチルピロリジン−１−イル）−１２−オキソドデカノエート（１３８）の調製
メチル１２−（（２Ｓ，４Ｒ）−４−ヒドロキシ−２−（ヒドロキシメチル）−２−メチルピロリジン−１−イル）−１２−オキソドデカノエート（１３７）（３．１ｇ、９．０ｍｍｏｌ）、ＤＭＴｒ−Ｃｌ（２．８ｇ、８．２ｍｍｏｌ）、及びＴＥＡ（１．１ｍｌ、８．２ｍｍｏｌ）を、ＤＣ＜中で室温にて１６時間撹拌した。この反応物を真空中で濃縮させ、カラムクロマトグラフィ（５％  ＭｅＯＨ／ＤＣＭ、０．１％ＴＥＡ）によって残渣を精製すると、メチル１２−（（２Ｓ，４Ｒ）−２−（（ビス（４−メトキシフェニル）（フェニル）メトキシ）メチル）−４−ヒドロキシ−２−メチルピロリジン−１−イル）−１２−オキソドデカノエート（１３８）がもたらされた（２．７ｇ、４５．５ｍｍｏｌ）。
【０４００】
スキーム２３
【化２２６】
2020516296.tif 000229
【０４０１】
ステップ７。化合物１５４−１の調製
窒素下で０℃のＮ−（２−ヒドロキシエチル）フタルイミド（４．８０ｇ、２５．０ｍｍｏｌ）及び４，４’−ジメトキシトリチルクロリド（８．８ｇ、２６．０ｍｍｏｌ）のジクロロメタン溶液（２００ｍＬ）に、トリエチルアミン（１０．４ｍＬ、７４．６ｍｍｏｌ）を滴加した。この反応混合物を室温で３時間撹拌した。ＴＬＣは反応の完了を示した。有機層をブライン（１００ｍＬ）で洗浄し、ＭｇＳＯ４で乾燥させ、濃縮乾固させた。これを精製することなく次の反応に直接使用した。
【０４０２】
ステップ８。化合物１５４−２の調製
上記で得られた２−（２−（ビス（４−メトキシフェニル）（フェニル）メトキシ）エチル）イソインドリン−１，３−ジオン（１５４−１）及びヒドラジン一水和物（３．６ｍＬ、７４ｍｍｏｌ）を含むエタノール（１００ｍＬ）を、室温で一晩撹拌した。ＴＬＣは反応の完了を示した。沈殿物を濾過して取り除いた。濾液を蒸発させた。残渣を酢酸エチル（１００ｍＬ）によって取った。この有機溶液を１０％のＮａＯＨ、水、及びブラインで洗浄し、ＭｇＳＯ４で乾燥させた。溶媒の蒸発により、２−（ビス（４−メトキシフェニル）（フェニル）メトキシ）エタンアミン（１５４−２）が黄色液体として得られた（８．１１ｇ、２ステップで収率８９．３％）。これを更に精製することなく次の反応に使用した。
【０４０３】
ステップ９。化合物１５４−３の調製
水（２０ｍＬ）及びジオキサン（１０ｍＬ）にＬ−スレオニン（１．１９ｇ、１０．０ｍｍｏｌ）及びＮａＨＣＯ３（２．３ｇ、２７ｍｍｏｌ）を含む溶液に、１−（２，５−ジオキソピロリジン−１−イル）１２−メチルドデカンジオエート（１４６−１）（３．１ｇ、９．１ｍｍｏｌ）を含むジオキサン（１０ｍＬ）を滴加した。この反応混合物を室温で一晩撹拌した。４ＮのＨＣｌ（１０ｍＬ）を添加した。沈殿物を濾過により収集し、水（３×１０ｍＬ）で洗浄した。この固体をデシケーターにおいてＰ２Ｏ５で乾燥させて、（２Ｓ，３Ｒ）−３−ヒドロキシ−２−（１２−メトキシ−１２−オキソドデカンアミド）ブタン酸（１５４−３）をオフホワイトの固体として得た（２．８４ｇ、８２．２％）。ＬＣ−ＭＳ （ＥＳＩ）： ｍ／ｚ： ３４６ （１００）， （Ｍ ＋ Ｈ＋）。
【０４０４】
ステップ１０。化合物１５４の調製
（２Ｓ，３Ｒ）−３−ヒドロキシ−２−（１２−メトキシ−１２−オキソドデカンアミド）ブタン酸（１５４−３）（２．４７ｇ、７．１５ｍｍｏｌ）、２−（ビス（４−メトキシフェニル）（フェニル）メトキシ）エタンアミン（１５４−２）（２．６０ｇ、７．１５ｍｍｏｌ）、ＥＤＣ（１．６４ｇ、８．５８ｍｍｏｌ）、１−ヒドロキシベンゾトリアゾール（ＨＯＢｔ）（１．１６ｇ、８．５８ｍｍｏｌ）、及びＴＥＡ（２．４ｍＬ、１７．２ｍｍｏｌ）を、室温のジクロロメタン（７２ｍＬ）中で２時間撹拌した。水（３０ｍＬ）を添加した。有機層を分離させ、ブライン（２×３０ｍＬ）で洗浄した。溶媒の蒸発に続いてカラムクロマトグラフィ（３０％酢酸エチル／ヘキサン−５０％酢酸エチル／ヘキサン）を行なって、メチル１２−（（２Ｓ，３Ｒ）−１−（２−（ビス（４−メトキシフェニル）（フェニル）メトキシ）エチルアミノ）−３−ヒドロキシ−１−オキソブタン−２−イルアミノ）−１２−オキソドデカノエート（１５４）をワックス状の黄色半固体として得た（２．６０ｇ、５２．６％）。１ＨＮＭＲ （４００ＭＨｚ， アセトン−ｄ６， ｐｐｍ）：δ ７．５１ （ｔ， Ｊ ＝ ５．５ Ｈｚ， １Ｈ）， ７．４５−７．４９ （ｍ， ２Ｈ）， ７．２８−７．３６ （ｍ， ６Ｈ）， ７．２１ （ｔｔ， Ｊ ＝ ７．２， １．２ Ｈｚ， １Ｈ）， ７．０８ （ｄ， Ｊ ＝ ８．１ Ｈｚ， １Ｈ）， ６．８８ （ｄｔ， Ｊ ＝ ８．９， ２．５ Ｈｚ， ４Ｈ）， ４．３９ （ｄｄ， Ｊ ＝ ８．２， ３．０ Ｈｚ， １Ｈ）， ４．２０−４．２７ （ｍ， １Ｈ）， ３．７８ （ｓ， ６Ｈ）， ３．６０ （ｓ， １Ｈ）， ３．３５−３．５２ （ｍ， ２Ｈ）， ３．０７−３．１６ （ｍ， ２Ｈ）， ２．２３−２．３７ （ｍ， ４Ｈ）， １．５３−１．６５ （ｍ， ４Ｈ）， １．２３−１．３６ （ｍ， １２Ｈ）， １．１０ （ｄ， Ｊ ＝ ６．４ Ｈｚ， ３Ｈ）。
【０４０５】
スキーム２４
【化２２７】
2020516296.tif 000230
【０４０６】
ステップ１１。化合物１６４−１の調製
ＴＨＦ（１２０ｍＬ）／エーテル（３６０ｍＬ）にカリウムｔ−ブトキシド（１４．６ｇ、１３０ｍｏｌ）を含む懸濁液に、メチルトリフェニルホスホニウムブロミド（４６．６ｇ、１３０ｍｍｏｌ）を添加した。この混合物を２時間還流し、次いで０℃に冷却した。ｔｅｒｔ−ブチル２−ホルミルピロリジン−１−カルボキシレート（１３．０ｇ、６５．２ｍｍｏｌ）を含むエーテル（５０ｍＬ）を滴加した。この反応混合物を０℃で撹拌してから、水（２５０ｍＬ）の添加によってクエンチした。有機層を分離させ、水性物をエーテル（２５０ｍＬ）で抽出した。合わせた抽出物をＭｇＳＯ４で乾燥させた。溶媒の蒸発に続いてカラムクロマトグラフィ精製（５％酢酸エチル／ヘキサン）を行なうと、ｔｅｒｔ−ブチル３−ビニルピロリジン−１−カルボキシレート（１６４−１）（１１．５ｇ、８９．４％）が無色液体としてもたらされた。ＧＣ−ＭＳ： ｍ／ｚ： １９７ （２） （Ｍ＋）， １４１ （４０）， １２４ （３０）， ５７ （１００）。
【０４０７】
ステップ１２。化合物１６４−２の調製
ｔ−ＢｕＯＨ（１４０ｍＬ）及び水（７０ｍＬ）の混合物に、ＡＤ−ｍｉｘ−β（４７．４ｇ）及びメタンスルホンアミド（２．８９ｇ、３０．４ｍｍｏｌ）を加えた。この混合物を室温で３０分間撹拌し、次いで０℃に冷却した。ｔｅｒｔ−ブチル３−ビニルピロリジン−１−カルボキシレート（１６４−１）（６．００ｇ、３０．４ｍｍｏｌ）を添加した。この反応物を室温で一晩撹拌した。この反応混合物を０℃に冷却した。チオ硫酸ナトリウム五水和物（９６ｇ、３８７ｍｍｏｌ）を添加し、温度を室温に戻した。水（７００ｍＬ）を添加し、混合物を酢酸エチル（５００ｍＬ）で抽出した。抽出物を水（２×５０ｍＬ）及びブライン（５０ｍＬ）で洗浄し、ＭｇＳＯ４で乾燥させた。溶媒の蒸発に続いてカラムクロマトグラフィ（２％メタノール／ジクロロメタン−７％メタノール／ジクロロメタン）を行なうと、ｔｅｒｔ−ブチル３−（１，２−ジヒドロキシエチル）ピロリジン−１−カルボキシレート（１６４−２）（５．４ｇ、７７％）が明褐色油状物としてもたらされた。
【０４０８】
ステップ１３。化合物１６４−３の調製
ｔｅｒｔ−ブチル３−（１，２−ジヒドロキシエチル）ピロリジン−１−カルボキシレート（１６４−２）（３．１ｇ、１３．４ｍｍｏｌ）のエタノール溶液（１０ｍＬ）に、３ＮのＨＣｌ（３０ｍＬ、９０ｍｍｏｌ）を添加した。この反応混合物を室温で一晩撹拌した。ＴＬＣは反応の完了を示した。エタノールを蒸発させた。トルエンを添加し、蒸発させた。これを３回繰り返すと、１−（ピロリジン−３−イル）エタン−１，２−ジオール塩酸塩（１６４−３）（２．０ｇ、８９％）が褐色油状物としてもたらされた。ＬＣ−ＭＳ （ＥＳＩ）： ｍ／ｚ： １３２ （１００）， （Ｍ ＋ Ｈ＋， 遊離アミン）。
【０４０９】
ステップ１４  化合物１６４−４の調製
１−（ピロリジン−３−イル）エタン−１，２−ジオール塩酸塩（１６４−２）（２．０ｇ、１２ｍｍｏｌ）の水溶液（３０ｍＬ）に、ＮａＨＣＯ３（３．７ｇ、４４ｍｍｏｌ）を少量に分けて添加した。次いでジオキサン（２０ｍＬ）を添加した。上記の溶液に、１−（２，５−ジオキソピロリジン−１−イル）１２−メチルドデカンジオエート（１４６−１）（３．７ｇ、１１ｍｍｏｌ）を含むジオキサン（３０ｍＬ）を添加した。この反応混合物を一晩撹拌した。これを酢酸エチル（３×１００ｍＬ）で抽出した。合わせた抽出物を０．５ＮのＨＣｌ（５０ｍＬ）及びブライン（５０ｍＬ）で洗浄し、ＭｇＳＯ４で乾燥させた。
【０４１０】
ステップ１５。化合物１６４の調製
この物質は、２−（２−（ビス（４−メトキシフェニル）（フェニル）メトキシ）エチル）イソインドリン−１，３−ジオン（１３８）の合成において説明したものと同じ手順を使用し、メチル１２−（３−（１，２−ジヒドロキシエチル）ピロリジン−１−イル）−１２−オキソドデカノエート（１６４−４）及び４，４−ジメトキシトリチルクロリド（１当量）から調製した。この生成物をカラムクロマトグラフィ（１．５％メタノール／ジクロロメタン）によって精製した。メチル１２−（３−（２−（ビス（４−メトキシフェニル）（フェニル）メトキシ）−１−ヒドロキシエチル）ピロリジン−１−イル）−１２−オキソドデカノエート（１６４）は、収率５１％で黄色油状物として得られた。１ＨＮＭＲ （４００ＭＨｚ， アセトン−ｄ６， ｐｐｍ）：δ ７．４９−７．５４ （ｍ， ２Ｈ）， ７．３５−７．４０ （ｍ， ４Ｈ）， ７．２８−７．３４ （ｍ， ２Ｈ）， ７．１９−７．２５ （ｍ， １Ｈ）， ６．８６−６．９１ （ｍ， ４Ｈ）， ４．１１−４．２０ （ｍ， １Ｈ）， ３．７９ （ｓ， ６Ｈ）， ３．６８−３．７７ （ｍ， １Ｈ）， ３．６０ （ｓ， ３Ｈ）， ３．２９−３．５９ （ｍ， ３Ｈ）， ３．０６−３．２０ （ｍ， ３Ｈ）， ２．３３−２．５５ （ｍ， １Ｈ）， ２．２９ （ｔ， Ｊ ＝ ７．４ Ｈｚ， ２Ｈ）， ２．１９ （ｔ， Ｊ ＝ ７．６ Ｈｚ， ２Ｈ）， １．６５−２．０ （ｍ， ２Ｈ）， １．５１−１．６２ （ｍ， ４Ｈ）， １．２６−１．３５ （ｍ， １２Ｈ）。
【０４１１】
スキーム２５
【化２２８】
2020516296.tif 000231
【０４１２】
ステップ１６。化合物１７０−１の調製
ｔｅｒｔ−ブチル２−アミノエチルカルバメート（２．８８ｇ、１８．０ｍｍｏｌ）及びトリエチルアミン（２．９８ｇ、２９．４ｍｍｏｌ）のジクロロメタン溶液（１００ｍＬ）に、１−（２，５−ジオキソピロリジン−１−イル）１２−メチルドデカンジオエート（１４６−１）（５．０９ｇ、１４．９ｍｍｏｌ）を含むジクロロメタン（５０ｍＬ）を室温で滴加した。この反応混合物を一晩撹拌し、ＴＬＣは反応の完了を示した。１００ｍＬのブラインを添加し、有機層を分離させた。有機層を０．５ＮのＨＣｌ（１５０ｍＬ）、ブライン（２×１００ｍＬ）で洗浄し、ＭｇＳＯ４で乾燥させた。溶媒の蒸発により、純粋なメチル１２−（２−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）エチルアミノ）−１２−オキソドデカノエート（１７０−１）（５．８５ｇ、１００％）が白色固体としてもたらされた。
【０４１３】
ステップ１７。化合物１７０−２の調製
０℃の１２−（２−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）エチルアミノ）−１２−オキソドデカノエート（１７０−１）（５．５５ｇ、１４．４ｍｍｏｌ）のメタノール溶液（１００ｍＬ）に、塩化チオニル（３．３ｍＬ、４５．５ｍｍｏｌ）を滴加した。次いで、この反応物を室温で一晩撹拌した。ＴＬＣは反応の完了を示した。溶媒及び揮発性有機物を蒸発させた。次いで、この残渣をヘプタンと２回共蒸発させると、メチル１２−（２−アミノエチルアミノ）−１２−オキソドデカノエート塩酸塩（１７０−２）が白色固体として定量的にもたらされた。ＬＣ−ＭＳ （ＥＳＩ）： ｍ／ｚ： ２８７ （１００）， （Ｍ ＋ Ｈ＋， 遊離アミン）。
【０４１４】
ステップ１８。化合物１７０−３の調製
（−）−メチル（Ｓ）−２，２−ジメチル−１，３−ジオキソラン−４−カルボキシレート（５．０１ｇ、３１．２ｍｍｏｌ）及びＬｉＯＨ・Ｈ２Ｏ（２．５５ｇ、６０．８ｍｍｏｌ）を含むＴＨＦ（５０ｍＬ）及び水（５０ｍＬ）を一晩撹拌した。ＴＬＣは反応の完了を示した。ＴＨＦを蒸発させ、水性物を１ＮのＨＣｌでｐＨ＝１に酸性化した。これを酢酸エチル（５×５０ｍＬ）で抽出した。合わせた抽出物をＭｇＳＯ４で乾燥させた。溶媒の蒸発により、（Ｓ）−２，２−ジメチル−１，３−ジオキソラン−４−カルボン酸（１７０−３）（２．９３ｇ、６４．３％）が淡黄色液体としてもたらされた。
【０４１５】
ステップ１９。化合物１７０−４の調製
化合物（１７０−４）は、１−（２，５−ジオキソピロリジン−１−イル）１２−メチルドデカンジオエート（１４６−１）の合成において説明したものと同じ手順を使用し、（Ｓ）−２，２−ジメチル−１，３−ジオキソラン−４−カルボン酸（１７０−３）及びＮ−ヒドロキシサクシニミドから収率８６％で合成した。（Ｓ）−２，５−ジオキソピロリジン−１−イル２，２−ジメチル−１，３−ジオキソラン−４−カルボキシレート（１７０−４）は、収率８６％で白色固体として得られた。
【０４１６】
ステップ２０。化合物１７０−５の調製
メチル１２−（２−アミノエチルアミノ）−１２−オキソドデカノエート塩酸塩（１７０−２）（１４．４ｍｍｏｌ）及び（Ｓ）−２，５−ジオキソピロリジン−１−イル２，２−ジメチル−１，３−ジオキソラン−４−カルボキシレート（１７０−４）（３．８０ｇ、１５．６ｍｍｏｌ）のジクロロメタン懸濁液（１００ｍＬ）に、トリエチルアミン（６ｍＬ、４３．０ｍｍｏｌ）を含むジクロロメタン（２５ｍＬ）を４時間にわたって０℃で添加した。次いで、この反応混合物を室温で一晩撹拌した。ＬＣ−ＭＳは、出発物質１７０−２が完全に変換されたことを示した。有機層をブライン（５０ｍＬ）、１ＮのＨＣｌ（５０ｍＬ）、ブライン（５０ｍＬ）で洗浄し、ＭｇＳＯ４で乾燥させ、濃縮乾固させて、（Ｓ）−メチル１２−（２−（２，２−ジメチル−１，３−ジオキソラン−４−カルボキサミド）エチルアミノ）−１２−オキソドデカノエート（１７０−５）（５．９３ｇ、９９．３％）を白色固体として得た。
【０４１７】
ステップ２１。化合物１７０−６の調製
（Ｓ）−メチル１２−（２−（２，２−ジメチル−１，３−ジオキソラン−４−カルボキサミド）エチルアミノ）−１２−オキソドデカノエート（１７０−５）（５．９３ｇ、１４．３ｍｍｏｌ）の溶液に、濃硫酸を１滴添加した。これを６時間還流し、次いで室温に冷ました。固体を濾過によって収集し、冷メタノールで２回洗浄した。この固体を空気中で乾燥させた（３．３２ｇ）。母液から第２の収集物（０．４２ｇ）を得て、（Ｓ）−メチル１２−（２−（２，３−ジヒドロキシプロパンアミド）エチルアミノ）−１２−オキソドデカノエート（１７０−６）（総量３．７４ｇ、６９．４％）を白色結晶として得た。ＬＣ−ＭＳ （ＥＳＩ）： ｍ／ｚ： ３７５ （１００）， （Ｍ ＋ Ｈ＋）。１ＨＮＭＲ （４００ＭＨｚ， ＤＭＳＯ−ｄ６， ｐｐｍ）：δ ７．７９ （ｂｒ， ２Ｈ）， ５．４９ （ｄ， Ｊ ＝ ５．３ Ｈｚ， １Ｈ）， ４．６６ （ｔ， Ｊ ＝ ５．８ Ｈｚ， １Ｈ）， ３．８３−３．８８ （ｍ， １Ｈ）， ３．５５−３．６１ （ｍ， ４Ｈ）， ３．４１−３．４７ （ｍ， １Ｈ）， ３．０５−３．１５ （ｍ， ４Ｈ）， ２．２９ （ｔ， Ｊ ＝ ７．４ Ｈｚ， ２Ｈ）， ２．０３ （ｔ， Ｊ ＝ ７．６ Ｈｚ， ２Ｈ）， １．４２−１．５２ （ｍ， ４Ｈ）， １．１８−１．２９ （ｍ， １２Ｈ）。
【０４１８】
ステップ２２。化合物１７０の調製
窒素下の（Ｓ）−メチル１２−（２−（２，３−ジヒドロキシプロパンアミド）エチルアミノ）−１２−オキソドデカノエート（１７０−６）（２．９９ｇ、７．９９ｍｍｏｌ）の無水ピリジン溶液（５７．５ｍＬ）に、４，４’−ジメトキシトリチルクロリド（２．８４ｇ、８．３８ｍｍｏｌ）を１回で添加した。この反応物を室温で２日間撹拌した。メタノール（５ｍＬ）を添加して反応物をクエンチした。ピリジンを蒸発させた。トルエンを添加し、次いで蒸発させた。これを３回繰り返した。水（１００ｍＬ）を添加し、これを酢酸エチル（５×２５０ｍＬ）で抽出した。抽出物を合わせ、ＭｇＳＯ４で乾燥させた。溶媒の蒸発に続いてカラムクロマトグラフィ（１％メタノール／ジクロロメタン−３％メタノール／ジクロロメタン）を行なうと、（Ｓ）−メチル１２−（２−（３−（ビス（４−メトキシフェニル）（フェニル）メトキシ）−２−ヒドロキシプロパンアミド）−エチルアミノ）−１２−オキソドデカノエート（１７０）（１．７０ｇ、３１．４％）が粘性油状物としてもたらされた。１ＨＮＭＲ （４００ＭＨｚ， アセトン−ｄ６， ｐｐｍ）：δ ７．６４−７．７０ （ｂｒ， １Ｈ）， ７．４７−７．５１ （ｍ， ２Ｈ）， ７．３３−７．３７ （ｍ， ４Ｈ）， ７．２６−７．３２ （ｍ， ２Ｈ）， ７．２０ （ｄｔ， Ｊ ＝ ７．３， ２．１ Ｈｚ， １Ｈ）， ７．１１ （ｂｒ， １Ｈ）， ６．８６ （ｄ， Ｊ ＝ ８．７ Ｈｚ， ４Ｈ）， ４．８４ （ｂｒ， １Ｈ）， ４．２１ （ｄｄ， Ｊ ＝ ５．１， ３．８ Ｈｚ， １Ｈ）， ３．７８ （ｓ， ６Ｈ）， ３．６０ （ｓ， １Ｈ）， ３．２５−３．４２ （ｍ， ６Ｈ）， ２．２８ （ｔ， Ｊ ＝ ７．４ Ｈｚ， ２Ｈ）， １．４８−１．６２ （ｍ， ４Ｈ）， １．２１−１．３４ （ｍ， １２Ｈ）。
【０４１９】
スキーム２６。
【化２２９】
2020516296.tif 000232
【化２３０】
2020516296.tif 000233
【０４２０】
ステップ２３。化合物１３９、１５５、１６０、１６５、及び１７０の調製
化合物１８に使用したものと同一の手順を使用し、化合物１３８、１５４、１５９、１６４、及び１６９から化合物１３９、１５５、１６０、１６５、及び１７０を調製した。
【０４２１】
ステップ２４。コンジュゲート１５３、１５８、１６３、１６８、及び１７３の調製
化合物１に使用したものと同一の手順を使用し、化合物１３９、１５４、１５９、１６４、及び１６９からコンジュゲート１５３、１５８、１６３、１６８、及び１７３を調製した。
【０４２２】
実施例１２。コンジュゲート１７６の合成
スキーム２７。
【化２３１】
2020516296.tif 000234
スキーム２８。
【化２３２】
2020516296.tif 000235
【０４２３】
ステップ１。メチル１２−アミノドデカノエート（１３２）の調製
１２−アミノウンデカン酸（１３１）（１０ｇ、４．６４ｍｍｏｌ）をＭｅＯＨ中で室温にて撹拌した。塩化アセチル（８５６μＬ、１２ｍｍｏｌ）を滴加し、反応物を１．５時間撹拌した。溶媒を真空中で除去し、残渣をＭＴＢＥに取り、冷蔵庫で一晩冷やした。結果として生じた沈殿物を濾過によって収集し、氷冷ＭＴＢＥで洗浄し、高真空下で乾燥させて、メチル１２−アミノドデカノエート（１３２）を得た。
【０４２４】
ステップ２。ラセミ（シス）メチル１２−（１２−（１０−（３−（（ビス（４−メトキシフェニル）−（フェニル）メトキシ）メチル）−４−（ヒドロキシメチル）−３，４−ジメチルピロリジン−１−イル）−１０−オキソデカンアミド）ドデカンアミド）ドデカノエート（１２９）の調製
メチル１２−アミノドデカノエート（１３２）（７７８ｍｇ、３．１ｍｍｏｌ）のラセミ（シス）１０−（３−（（ビス（４−メトキシフェニル）（フェニル）メトキシ）メチル）−４−（ヒドロキシメチル）−３，４−ジメチルピロリジン−１−イル）−１０−オキソデカン酸リチウム（１２８）（２ｇ、３．１ｍｍｏｌ）、ＨＢＴＵ（１．２ｇ、３．１ｍｍｏｌ）、及びＴＥＡ（１．４ｍＬ、１０ｍｍｏｌ）を、ＤＣＭ中で室温にて一晩（Ｏ／Ｎ）撹拌した。沈殿物を濾過によって除去し、濾液を真空中で濃縮させ、カラムクロマトグラフィ（５％  ＭｅＯＨ、ＤＣＭ）によって残渣を精製した。ＴＬＣは、同一の質量で接近して泳動する２つのスポットを示した。これらを幾何異性体として割り当て、一緒にプールしたところ、メチル１２−（１２−（１０−（（３Ｒ，４Ｓ）−３−（（ビス（４−メトキシフェニル）（フェニル）メトキシ）メチル）−４−（ヒドロキシメチル）−３，４−ジメチルピロリジン−１−イル）−１０−オキソデカンアミド）ドデカンアミド）ドデカノエート（１２９）が定量的な様式でもたらされた。
【０４２５】
ステップ３。ラセミ（シス）１２−（１２−（１０−（−３−（（ビス（４−メトキシフェニル）（フェニル）−メトキシ）メチル）−４−（ヒドロキシメチル）−３，４−ジメチルピロリジン−１−イル）−１０−オキソデカンアミド）−ドデカンアミド）ドデカン酸リチウム（１３０）の調製
ラセミ（シス）メチル１２−（１２−（１０−（３−（（ビス（４−メトキシフェニル）（フェニル）メトキシ）メチル）−４−（ヒドロキシメチル）−３，４−ジメチルピロリジン−１−イル）−１０−オキソデカンアミド）ドデカンアミド）ドデカノエート（１２９）（３．１ｍｍｏｌ）を、ＬｉＯＨ（８８ｍｇ、３．７ｍｍｏｌ）を含むＴＨＦ：Ｈ２Ｏ（５０：５０）中で室温にて一晩撹拌した。反応をＴＬＣにより確認し、ＴＨＦを真空中で除去した。この水溶液を液体Ｎ２中で凍結させ、４８時間にわたって凍結乾燥させると、ラセミ（シス）１２−（１２−（１０−（３−（（ビス（４−メトキシフェニル）（フェニル）−メトキシ）メチル）−４−（ヒドロキシメチル）−３，４−ジメチルピロリジン−１−イル）−１０−オキソデカンアミド）−ドデカンアミド）ドデカン酸リチウム（１３０）が定量的にもたらされた。
【０４２６】
ステップ４。コンジュゲート１７６の調製
化合物１に使用したものと同一の手順を使用し、化合物２４及び１３０からコンジュゲート１７６を調製した。
【０４２７】
実施例１３。コンジュゲート１７９の合成
スキーム２９。
【化２３３】
2020516296.tif 000236
スキーム３０。
【化２３４】
2020516296.tif 000237
【０４２８】
ステップ１。化合物８０の調製
化合物２４（２ｇ、０．８６ｍｍｏｌ）、Ｎ−カルボベンゾキシ−Ｌ−グルタミン酸（１２０ｍｇ、０．４３ｍｍｏｌ）、ＨＢＴＵ（３２６ｍｇ、０．８６ｍｍｏｌ）、及びＴＥＡ（３５３μＬ、２．６ｍｍｏｌ）を、ＤＣＭ中で室温にて一晩撹拌した。この混合物を真空中で濃縮させ、カラムクロマトグラフィによって精製すると、化合物８０がもたらされた（２．８８ｇ、８３％）。
【０４２９】
ステップ２。化合物８１の調製
化合物１４に使用したものと同一の手順を使用し、化合物８０（６７０ｍｇ、０．１７ｍｍｏｌ）から化合物８１を調製した。この化合物を後続の反応で粗製のまま使用し、収率を定量的に求めた。
【０４３０】
ステップ３。コンジュゲート１７９の調製
化合物１に使用したものと同一の手順を使用し、化合物１８及び８１からコンジュゲート１７９を調製した。
【０４３１】
実施例１４。コンジュゲート１８２の合成
スキーム３１。
【化２３５】
2020516296.tif 000238
スキーム３２。
【化２３６】
2020516296.tif 000239
【０４３２】
ステップ１。化合物９３の調製
化合物８９に使用したものと同一の手順を使用し、（２−オキソ−２−フェニル−１λ２−エチル）−Ｄ−グルタミン酸（２．２５ｇ、８．１ｍｍｏｌ）及び９（１３ｇ、２１ｍｍｏｌ）から化合物９３を調製した。収量：１１．２ｇ。
【０４３３】
ステップ２。化合物９４の調製
化合物９０に使用したものと同一の手順を使用し、化合物９３（１１．１ｇ）から化合物９４を調製した。収量：１０．２ｇ。
【０４３４】
ステップ３。コンジュゲート１８２の調製
化合物１に使用したものと同一の手順を使用し、化合物１８及び９４からコンジュゲート１８２を調製した。
【０４３５】
実施例１５。コンジュゲート１８５及び１８８の合成
スキーム３３。
【化２３７】
2020516296.tif 000240
スキーム３４。
【化２３８】
2020516296.tif 000241
スキーム３５。
【化２３９】
2020516296.tif 000242
【０４３６】
ステップ１。１４−ヒドロキシ−３，６，９，１２−テトラオキサテトラデシル４−メチルベンゼンスルホネート（８２）の調製
ペンタエチレングリコール（３５ｇ、１４７ｍｍｏｌ）、ＴＥＡ（４１ｍＬ、２９４ｍｍｏｌ）、及びトリメチルアミン−ＨＣｌ（１．４ｇ、１４．７ｍｍｏｌ）のＣＨ２Ｃｌ２溶液（６００ｍＬ）を、塩化トシル（２９．４ｇ、１５４ｍｍｏｌ）で処理した。撹拌（１８時間）した後、反応混合物をＨ２Ｏ−ブライン（１：１）で洗浄し、乾燥させ（ＭｇＳＯ４）、濾過し、濃縮し、クロマトグラフィに供して、８２（２４．６ｇ、４３％）を淡黄色油状物として得た。Ｒｆ ０．８ （１０％ ＣＨ３ＯＨ−ＣＨ２Ｃｌ２）。
【０４３７】
ステップ２。１４−アジド−３，６，９，１２−テトラオキサテトラデカン−１−オール（８３）
化合物４に使用したものと同一の手順を使用し、８２（２４．６ｇ、６２．７ｍｍｏｌ）及びアジ化ナトリウム（７．１３ｇ、１１０ｍｍｏｌ）から１４−アジド−３，６，９，１２−テトラオキサテトラデカン−１−オール（８３）を調製した。収量：１４．８ｇ、９０％。
【０４３８】
ステップ３。化合物８４の調製
ＧａｌＮＡｃ  ６（１２．２ｇ、３１．４ｍｍｏｌ）及びＨＯ−ＰＥＧ−Ｎ３  ８３（９．２ｇ、３５ｍｍｏｌ）の１，２−ジクロロエタン溶液（１５０ｍＬ）を、Ｓｃ（ＯＴｆ）３（７７１ｍｇ、１．６ｍｍｏｌ）で処理した。撹拌（８５℃、２時間）した後、反応物を冷まし（室温）、ＴＥＡ（４０ｍＬ）の添加によってクエンチし、濃縮させた。この粗物質をクロマトグラフィに供して、８４（１１．１６ｇ、６０％）を淡黄色泡状物として得た。Ｒｆ ０．７ （１０％ ＣＨ３ＯＨ−ＣＨ２Ｃｌ２）。
【０４３９】
ステップ４。化合物８５の調製
８４（１１．１６ｇ、１８．８ｍｍｏｌ）及びＰｄ／Ｃ（１．１ｇ、１０％−湿潤支持体）のＥｔＯＡｃ溶液（１２０ｍＬ）を、ＴＦＡ（４．３２ｍＬ、５６．５ｍｍｏｌ）で処理し、Ｈ２でパージした。勢いよく撹拌（４．５時間）した後、反応物をＮ２でパージし、セライトで濾過し、濃縮させた。この粗物質をクロマトグラフィに供して、８５（５．７７ｇ、４５％）を無色泡状物として得た。Ｒｆ ０．５ （１０％ ＣＨ３ＯＨ−ＣＨ２Ｃｌ２）。
【０４４０】
ステップ５。化合物９５の調製
化合物９１に使用したものと同一の手順を使用し、（２−オキソ−２−フェニル−１λ２−エチル）−Ｄ−グルタミン酸（１．０４ｇ、３．７ｍｍｏｌ）及び化合物９４（１０．２ｇ）から化合物９５を調製した。収量：７．２ｇ。
【０４４１】
ステップ６。化合物９６の調製
化合物９２に使用したものと同一の手順を使用し、化合物９５（１１．１ｇ）から化合物９６を調製した。収量：６．５ｇ。
【０４４２】
ステップ７。化合物９７の調製
化合物８９に使用したものと同一の手順を使用し、（２−オキソ−２−フェニル−１λ２−エチル）−Ｄ−グルタミン酸（２ｇ、７．１ｍｍｏｌ）及び８５（１２．１ｇ、１７．８ｍｍｏｌ）から化合物９７を調製した。収量：１０ｇ、定量的。
【０４４３】
ステップ８。化合物９８の調製
化合物９０に使用したものと同一の手順を使用し、化合物９７（１０ｇ、７．２ｍｍｏｌ）から化合物９８を調製した。収量：３．５ｇ、３６％。
【０４４４】
ステップ９。化合物９９の調製
化合物９１に使用したものと同一の手順を使用し、（２−オキソ−２−フェニル−１λ２−エチル）−Ｄ−グルタミン酸（３５０ｍｇ、１．２５ｍｍｏｌ）及び化合物９８（２．８６ｍｇ、２．５ｍｍｏｌ）から化合物９９を定量的に調製した。
【０４４５】
ステップ１０。化合物１００の調製
化合物９２に使用したものと同一の手順を使用し、化合物９９（３．２ｇ、１．２５ｍｍｏｌ）から化合物１００を定量的に調製した。
【０４４６】
ステップ１１。コンジュゲート１８５及び１８８の調製
化合物１に使用したものと同一の手順を使用し、化合物１８及び９６または１８及び１００からコンジュゲート１８５及び１８８を調製した。
【０４４７】
実施例１６。コンジュゲート１９１、１９４、１９７、及び２００の合成
スキーム３６
【化２４０】
2020516296.tif 000243
スキーム３７。
【化２４１】
2020516296.tif 000244
スキーム３８。
【化２４２】
2020516296.tif 000245
【０４４８】
ステップ１。２−（２−（２−アジドエトキシ）エトキシ）エタン−１−オール（８６）の調製
２−（２−（２−クロロエトキシ）エトキシ）エタン−１−オール（１３ｇ、７７ｍｍｏｌ）の水溶液（２００ｍＬ）に、アジ化ナトリウム（１０ｇ、１５４ｍｍｏｌ）を添加した。この反応物を１８時間にわたって１００℃に加熱した。この反応物を室温に冷まし、１Ｌの分液漏斗に注ぎ、ジクロロメタン（３×２００ｍＬ）で抽出した。合わせたジクロロメタン抽出物を硫酸マグネシウムで乾燥させ、濾過し、濃縮乾固させて、２−（２−（２−アジドエトキシ）エトキシ）エタン−１−オールを無色油状物として得た（１１．７ｇ）。
【０４４９】
ステップ２。化合物８７の調製
化合物８４に使用したものと同一の手順を使用し、８６（４．９５ｇ、２８．３ｍｍｏｌ）及び６（１０ｇ、２５．７ｍｍｏｌ）から化合物８７を調製した。収量：１０ｇ、７７％。
【０４５０】
ステップ３。化合物８８の調製
化合物８５に使用したものと同一の手順を使用し、８７（１０ｇ、１９．８ｍｍｏｌ）から化合物８８を調製した。収量：７．６３ｇ、６５％。
【０４５１】
ステップ４。化合物８９の調製
８８（２ｇ、３．３８ｍｍｏｌ）及びＺ−グルタミン酸（４２７ｍｇ、１．５２ｍｍｏｌ）のＣＨ２Ｃｌ２溶液（５０ｍＬ）を、ＨＢＴＵ（１．４１ｇ、３．７ｍｍｏｌ）及びヒューニッヒ塩基（１．７７ｍＬ、１０．１ｍｍｏｌ）で処理した。撹拌（１８時間）した後、混合物を濃縮させ、クロマトグラフィに供して、８９（８７１ｍｇ、４８％）を無色泡状物として得た。Ｒｆ ０．５ （１０％ ＣＨ３ＯＨ−ＣＨ２Ｃｌ２）。
【０４５２】
ステップ５。化合物９０の調製
８９（８７０ｍｇ、０．７２ｍｍｏｌ）及びＰｄ／Ｃ（９０ｍｇ、１０％−湿潤支持体）のＥｔＯＡｃ溶液（１０ｍＬ）を、ＴＦＡ（８４μＬ、１．１ｍｍｏｌ）で処理し、Ｈ２でパージした。勢いよく撹拌（２時間）した後、反応物をＮ２でパージし、セライトで濾過し、濃縮させた。この粗物質を更に処理することなく使用し、９０（８５０ｍｇ、定量的）を無色泡状物として得た。Ｒｆ ０．２５ （１０％ ＣＨ３ＯＨ−ＣＨ２Ｃｌ２）。
【０４５３】
ステップ６。化合物９１の調製
９０（８５０ｍｇ、０．７２ｍｍｏｌ）及びＺ−グルタミン酸（９１ｍｇ、０．３２ｍｍｏｌ）のＣＨ２Ｃｌ２溶液（１０ｍＬ）を、ＨＢＴＵ（３００ｍｇ、０．７９ｍｍｏｌ）及びヒューニッヒ塩基（５０２μＬ、２．９ｍｍｏｌ）で処理した。撹拌（１．５時間）した後、混合物をＣＨ２Ｃｌ２で希釈し、ＮａＨＣＯ３（飽和水溶液）で洗浄し、乾燥させ（ＭｇＳＯ４）、濾過し、濃縮させた。この粗物質をクロマトグラフィに供して、９１（５９０ｍｇ、７６％）を無色泡状物として得た。Ｒｆ ０．５ （１０％ ＣＨ３ＯＨ−ＣＨ２Ｃｌ２）。
【０４５４】
ステップ７。化合物９２の調製
９１（５９０ｍｇ、０．２５ｍｍｏｌ）及びＰｄ／Ｃ（１００ｍｇ、１０％−湿潤支持体）のＣＨ３ＯＨ溶液（３０ｍＬ）を、ＴＦＡ（２９μＬ、０．３７ｍｍｏｌ）で処理し、Ｈ２でパージした。撹拌（３時間）した後、混合物をＮ２でパージし、セライトで濾過し、濃縮させた。この粗物質を更に処理することなく使用し、９２（６００ｍｇ、定量的）を無色泡状物として得た。Ｒｆ ０．１ （１０％ ＣＨ３ＯＨ−ＣＨ２Ｃｌ２）。
【０４５５】
ステップ８。化合物１０１の調製
化合物８９に使用したものと同一の手順を使用し、（Ｒ）−２−（（２−オキソ−２−フェニル−１ｌ２−エチル）アミノ）ヘキサン二酸（２．５１ｇ、８．６ｍｍｏｌ）及び９（１１ｇ、１７．２ｍｍｏｌ）から化合物１０１を調製した。収量：４．２ｇ、３７％。
【０４５６】
ステップ９。化合物１０２の調製
化合物９０に使用したものと同一の手順を使用し、化合物１０１（４．２ｇ、３．２ｍｍｏｌ）から化合物１０２を調製した。収量：２．１ｇ、４７％。
【０４５７】
ステップ１０。化合物１０３の調製
化合物９１に使用したものと同一の手順を使用し、（Ｒ）−２−（（２−オキソ−２−フェニル−１ｌ２−エチル）アミノ）ヘキサン二酸（２６５ｍｇ、０．９ｍｍｏｌ）及び化合物１０２（２．１ｇ、１．８ｍｍｏｌ）から化合物１０３を調製した。収量：（５６０ｍｇ、２４％）。
【０４５８】
ステップ１１。化合物１０４の調製
化合物９２に使用したものと同一の手順を使用し、化合物１０３（５６０ｍｇ）から化合物１０４を定量的に調製した。この化合物を精製することなく使用した。
【０４５９】
ステップ１２。コンジュゲート１９１、１９４、及び１９７の調製
化合物１に使用したものと同一の手順を使用し、化合物１２８及び９２、９６、及び１００からコンジュゲート１９１、１９４、及び１９７を調製した。
【０４６０】
実施例１６ａ。コンジュゲート１９１ａの合成
スキーム３６ａ
【化２４３】
2020516296.tif 000246
スキーム３７ａ。
【化２４４】
2020516296.tif 000247
スキーム３８ａ。
【化２４５】
2020516296.tif 000248
【０４６１】
ステップ１。２−（２−（２−アジドエトキシ）エトキシ）エタン−１−オール（８６ａ）の調製
２−（２−（２−クロロエトキシ）エトキシ）エタン−１−オール（１３ｇ、７７ｍｍｏｌ）の水溶液（２００ｍＬ）に、アジ化ナトリウム（１０ｇ、１５４ｍｍｏｌ）を添加した。この反応物を１８時間にわたって１００℃に加熱した。この反応物を室温に冷まし、１Ｌの分液漏斗に注ぎ、ジクロロメタン（３×２００ｍＬ）で抽出した。合わせたジクロロメタン抽出物を硫酸マグネシウムで乾燥させ、濾過し、濃縮乾固させて、２−（２−（２−アジドエトキシ）エトキシ）エタン−１−オールを無色油状物として得た（１１．７ｇ）。
【０４６２】
ステップ２。化合物８７ａの調製
化合物８４に使用したものと同一の手順を使用し、８６ａ（４．９５ｇ、２８．３ｍｍｏｌ）及び６ａ（１０ｇ、２５．７ｍｍｏｌ）から化合物８７ａを調製した。収量：１０ｇ、７７％。
【０４６３】
ステップ３。化合物８８ａの調製
化合物８５に使用したものと同一の手順を使用し、８７ａ（１０ｇ、１９．８ｍｍｏｌ）から化合物８８ａを調製した。収量：７．６３ｇ、６５％。
【０４６４】
ステップ４。化合物８９ａの調製
８８ａ（２ｇ、３．３８ｍｍｏｌ）及びＺ−Ｌ−グルタミン酸（４２７ｍｇ、１．５２ｍｍｏｌ）のＣＨ２Ｃｌ２溶液（５０ｍＬ）を、ＨＢＴＵ（１．４１ｇ、３．７ｍｍｏｌ）及びヒューニッヒ塩基（１．７７ｍＬ、１０．１ｍｍｏｌ）で処理した。撹拌（１８時間）した後、混合物を濃縮させ、クロマトグラフィに供して、８９ａ（８７１ｍｇ、４８％）を無色泡状物として得た。Ｒｆ ０．５ （１０％ ＣＨ３ＯＨ−ＣＨ２Ｃｌ２）。
【０４６５】
ステップ５。化合物９０ａの調製
８９ａ（８７０ｍｇ、０．７２ｍｍｏｌ）及びＰｄ／Ｃ（９０ｍｇ、１０％−湿潤支持体）のＥｔＯＡｃ溶液（１０ｍＬ）を、ＴＦＡ（８４μＬ、１．１ｍｍｏｌ）で処理し、Ｈ２でパージした。勢いよく撹拌（２時間）した後、反応物をＮ２でパージし、セライトで濾過し、濃縮させた。この粗物質を更に処理することなく使用し、９０ａ（８５０ｍｇ、定量的）を無色泡状物として得た。Ｒｆ ０．２５ （１０％ ＣＨ３ＯＨ−ＣＨ２Ｃｌ２）。
【０４６６】
ステップ６。化合物９１ａの調製
９０ａ（８５０ｍｇ、０．７２ｍｍｏｌ）及びＺ−グルタミン酸（９１ｍｇ、０．３２ｍｍｏｌ）のＣＨ２Ｃｌ２溶液（１０ｍＬ）を、ＨＢＴＵ（３００ｍｇ、０．７９ｍｍｏｌ）及びヒューニッヒ塩基（５０２μＬ、２．９ｍｍｏｌ）で処理した。撹拌（１．５時間）した後、混合物をＣＨ２Ｃｌ２で希釈し、ＮａＨＣＯ３（飽和水溶液）で洗浄し、乾燥させ（ＭｇＳＯ４）、濾過し、濃縮させた。この粗物質をクロマトグラフィに供して、９１ａ（５９０ｍｇ、７６％）を無色泡状物として得た。Ｒｆ ０．５ （１０％ ＣＨ３ＯＨ−ＣＨ２Ｃｌ２）。
【０４６７】
ステップ７。化合物９２ａの調製
９１ａ（５９０ｍｇ、０．２５ｍｍｏｌ）及びＰｄ／Ｃ（１００ｍｇ、１０％−湿潤支持体）のＣＨ３ＯＨ溶液（３０ｍＬ）を、ＴＦＡ（２９μＬ、０．３７ｍｍｏｌ）で処理し、Ｈ２でパージした。撹拌（３時間）した後、混合物をＮ２でパージし、セライトで濾過し、濃縮させた。この粗物質を更に処理することなく使用し、９２ａ（６００ｍｇ、定量的）を無色泡状物として得た。Ｒｆ ０．１ （１０％ ＣＨ３ＯＨ−ＣＨ２Ｃｌ２）。
【０４６８】
ステップ８。コンジュゲート１９１ａの調製
化合物１に使用したものと同一の手順を使用し、化合物１２８及び化合物９２ａからコンジュゲート１９１ａを調製した。
【０４６９】
実施例１６ｂ。コンジュゲート１９１ｂの合成
スキーム３６ｂ
【化２４６】
2020516296.tif 000249
スキーム３７ｂ。
【化２４７】
2020516296.tif 000250
スキーム３８ｂ。
【化２４８】
2020516296.tif 000251
【０４７０】
ステップ１。２−（２−（２−アジドエトキシ）エトキシ）エタン−１−オール（８６ｂ）の調製
２−（２−（２−クロロエトキシ）エトキシ）エタン−１−オール（１３ｇ、７７ｍｍｏｌ）の水溶液（２００ｍＬ）に、アジ化ナトリウム（１０ｇ、１５４ｍｍｏｌ）を添加した。この反応物を１８時間にわたって１００℃に加熱した。この反応物を室温に冷まし、１Ｌの分液漏斗に注ぎ、ジクロロメタン（３×２００ｍＬ）で抽出した。合わせたジクロロメタン抽出物を硫酸マグネシウムで乾燥させ、濾過し、濃縮乾固させて、２−（２−（２−アジドエトキシ）エトキシ）エタン−１−オールを無色油状物として得た（１１．７ｇ）。
【０４７１】
ステップ２。化合物８７ｂの調製
化合物８４に使用したものと同一の手順を使用し、８６ｂ（４．９５ｇ、２８．３ｍｍｏｌ）及び６ｂ（１０ｇ、２５．７ｍｍｏｌ）から化合物８７ａを調製した。収量：１０ｇ、７７％。
【０４７２】
ステップ３。化合物８８ｂの調製
化合物８５に使用したものと同一の手順を使用し、８７ｂ（１０ｇ、１９．８ｍｍｏｌ）から化合物８８ａを調製した。収量：７．６３ｇ、６５％。
【０４７３】
ステップ４。化合物８９ｂの調製
８８ｂ（２ｇ、３．３８ｍｍｏｌ）及びラセミＺ−グルタミン酸（４２７ｍｇ、１．５２ｍｍｏｌ）のＣＨ２Ｃｌ２溶液（５０ｍＬ）を、ＨＢＴＵ（１．４１ｇ、３．７ｍｍｏｌ）及びヒューニッヒ塩基（１．７７ｍＬ、１０．１ｍｍｏｌ）で処理した。撹拌（１８時間）した後、混合物を濃縮させ、クロマトグラフィに供して、８９ｂ（８７１ｍｇ、４８％）を無色泡状物として得た。Ｒｆ ０．５ （１０％ ＣＨ３ＯＨ−ＣＨ２Ｃｌ２）。
【０４７４】
ステップ５。化合物９０ｂの調製
８９ｂ（８７０ｍｇ、０．７２ｍｍｏｌ）及びＰｄ／Ｃ（９０ｍｇ、１０％−湿潤支持体）のＥｔＯＡｃ溶液（１０ｍＬ）を、ＴＦＡ（８４μＬ、１．１ｍｍｏｌ）で処理し、Ｈ２でパージした。勢いよく撹拌（２時間）した後、反応物をＮ２でパージし、セライトで濾過し、濃縮させた。この粗物質を更に処理することなく使用し、９０ｂ（８５０ｍｇ、定量的）を無色泡状物として得た。Ｒｆ ０．２５ （１０％ ＣＨ３ＯＨ−ＣＨ２Ｃｌ２）。
【０４７５】
ステップ６。化合物９１ｂの調製
９０ｂ（８５０ｍｇ、０．７２ｍｍｏｌ）及びＺ−グルタミン酸（９１ｍｇ、０．３２ｍｍｏｌ）のＣＨ２Ｃｌ２溶液（１０ｍＬ）を、ＨＢＴＵ（３００ｍｇ、０．７９ｍｍｏｌ）及びヒューニッヒ塩基（５０２μＬ、２．９ｍｍｏｌ）で処理した。撹拌（１．５時間）した後、混合物をＣＨ２Ｃｌ２で希釈し、ＮａＨＣＯ３（飽和水溶液）で洗浄し、乾燥させ（ＭｇＳＯ４）、濾過し、濃縮させた。この粗物質をクロマトグラフィに供して、９１ｂ（５９０ｍｇ、７６％）を無色泡状物として得た。Ｒｆ ０．５ （１０％ ＣＨ３ＯＨ−ＣＨ２Ｃｌ２）。
【０４７６】
ステップ７。化合物９２ｂの調製
９１ｂ（５９０ｍｇ、０．２５ｍｍｏｌ）及びＰｄ／Ｃ（１００ｍｇ、１０％−湿潤支持体）のＣＨ３ＯＨ溶液（３０ｍＬ）を、ＴＦＡ（２９μＬ、０．３７ｍｍｏｌ）で処理し、Ｈ２でパージした。撹拌（３時間）した後、混合物をＮ２でパージし、セライトで濾過し、濃縮させた。この粗物質を更に処理することなく使用し、９２ｂ（６００ｍｇ、定量的）を無色泡状物として得た。Ｒｆ ０．１ （１０％ＣＨ３ＯＨ−ＣＨ２Ｃｌ２）。
【０４７７】
ステップ８。コンジュゲート１９１ｂの調製
化合物１に使用したものと同一の手順を使用し、化合物１２８及び化合物９２ｂからコンジュゲート１９１ｂを調製した。
【０４７８】
実施例１６ｃ。コンジュゲート１９１ｃの合成
スキーム３６ｃ
【化２４９】
2020516296.tif 000252
スキーム３７ｃ。
【化２５０】
2020516296.tif 000253
スキーム３８ｃ。
【化２５１】
2020516296.tif 000254
【０４７９】
ステップ１。２−（２−（２−アジドエトキシ）エトキシ）エタン−１−オール（８６ｃ）の調製
２−（２−（２−クロロエトキシ）エトキシ）エタン−１−オール（１３ｇ、７７ｍｍｏｌ）の水溶液（２００ｍＬ）に、アジ化ナトリウム（１０ｇ、１５４ｍｍｏｌ）を添加した。この反応物を１８時間にわたって１００℃に加熱した。この反応物を室温に冷まし、１Ｌの分液漏斗に注ぎ、ジクロロメタン（３×２００ｍＬ）で抽出した。合わせたジクロロメタン抽出物を硫酸マグネシウムで乾燥させ、濾過し、濃縮乾固させて、２−（２−（２−アジドエトキシ）エトキシ）エタン−１−オールを無色油状物として得た（１１．７ｇ）。
【０４８０】
ステップ２。化合物８７ｃの調製
化合物８４に使用したものと同一の手順を使用し、８６ｃ（４．９５ｇ、２８．３ｍｍｏｌ）及び６ｃ（１０ｇ、２５．７ｍｍｏｌ）から化合物８７ｃを調製した。収量：１０ｇ、７７％。
【０４８１】
ステップ３。化合物８８ｃの調製
化合物８５に使用したものと同一の手順を使用し、８７ｃ（１０ｇ、１９．８ｍｍｏｌ）から化合物８８ｃを調製した。収量：７．６３ｇ、６５％。
【０４８２】
ステップ４。化合物８９ｃの調製
８８ｃ（２ｇ、３．３８ｍｍｏｌ）及びラセミＺ−グルタミン酸（４２７ｍｇ、１．５２ｍｍｏｌ）のＣＨ２Ｃｌ２溶液（５０ｍＬ）を、ＨＢＴＵ（１．４１ｇ、３．７ｍｍｏｌ）及びヒューニッヒ塩基（１．７７ｍＬ、１０．１ｍｍｏｌ）で処理した。撹拌（１８時間）した後、混合物を濃縮させ、クロマトグラフィに供して、８９ｃ（８７１ｍｇ、４８％）を無色泡状物として得た。Ｒｆ ０．５ （１０％ ＣＨ３ＯＨ−ＣＨ２Ｃｌ２）。
【０４８３】
ステップ５。化合物９０ｃの調製
８９ｃ（８７０ｍｇ、０．７２ｍｍｏｌ）及びＰｄ／Ｃ（９０ｍｇ、１０％−湿潤支持体）のＥｔＯＡｃ溶液（１０ｍＬ）を、ＴＦＡ（８４μＬ、１．１ｍｍｏｌ）で処理し、Ｈ２でパージした。勢いよく撹拌（２時間）した後、反応物をＮ２でパージし、セライトで濾過し、濃縮させた。この粗物質を更に処理することなく使用し、９０ｃ（８５０ｍｇ、定量的）を無色泡状物として得た。Ｒｆ ０．２５ （１０％ ＣＨ３ＯＨ−ＣＨ２Ｃｌ２）。
【０４８４】
ステップ６。化合物９１ｃの調製
９０ｃ（８５０ｍｇ、０．７２ｍｍｏｌ）及びＺ−グルタミン酸（９１ｍｇ、０．３２ｍｍｏｌ）のＣＨ２Ｃｌ２溶液（１０ｍＬ）を、ＨＢＴＵ（３００ｍｇ、０．７９ｍｍｏｌ）及びヒューニッヒ塩基（５０２μＬ、２．９ｍｍｏｌ）で処理した。撹拌（１．５時間）した後、混合物をＣＨ２Ｃｌ２で希釈し、ＮａＨＣＯ３（飽和水溶液）で洗浄し、乾燥させ（ＭｇＳＯ４）、濾過し、濃縮させた。この粗物質をクロマトグラフィに供して、９１ｃ（５９０ｍｇ、７６％）を無色泡状物として得た。Ｒｆ ０．５ （１０％ ＣＨ３ＯＨ−ＣＨ２Ｃｌ２）。
【０４８５】
ステップ７。化合物９２ｃの調製
９１ｃ（５９０ｍｇ、０．２５ｍｍｏｌ）及びＰｄ／Ｃ（１００ｍｇ、１０％−湿潤支持体）のＣＨ３ＯＨ溶液（３０ｍＬ）を、ＴＦＡ（２９μＬ、０．３７ｍｍｏｌ）で処理し、Ｈ２でパージした。撹拌（３時間）した後、混合物をＮ２でパージし、セライトで濾過し、濃縮させた。この粗物質を更に処理することなく使用し、９２ｃ（６００ｍｇ、定量的）を無色泡状物として得た。Ｒｆ ０．１ （１０％ ＣＨ３ＯＨ−ＣＨ２Ｃｌ２）。
【０４８６】
ステップ８。コンジュゲート１９１ｃの調製
化合物１に使用したものと同一の手順を使用し、化合物１２８及び化合物９２ｃからコンジュゲート１９１ｃを調製した。
【０４８７】
実施例１７。コンジュゲート２０３及び２０６の合成
スキーム３９。
【化２５２】
2020516296.tif 000255
【０４８８】
ステップ１。化合物６９ｂの調製
化合物６９に使用したものと同一の手順を使用し、（２Ｓ，４Ｒ）−４−ヒドロキシピロリジン−２−カルボン酸から化合物６９ｂを調製した。
【０４８９】
ステップ２。コンジュゲート２０３及び２０６の調製
化合物１に使用したものと同一の手順を使用し、化合物９６及び１００からコンジュゲート２０３及び２０６を調製した。
【０４９０】
実施例１８。コンジュゲート２０９の合成
スキーム４０。
【化２５３】
2020516296.tif 000256
【０４９１】
ステップ１。コンジュゲート２０９の調製
化合物１に使用したものと同一の手順を使用し、化合物９６及び１６０からコンジュゲート２０９を調製した。
【０４９２】
実施例１８ａ。コンジュゲート２０９ａの合成
スキーム４０ａ。
【化２５４】
2020516296.tif 000257
【０４９３】
ステップ１。コンジュゲート２０９ａの調製
化合物１に使用したものと同一の手順を使用し、化合物９６ａ及び１６０からコンジュゲート２０９ａを調製した。
【０４９４】
実施例１９。コンジュゲート２１２及び２１５の合成
スキーム４１。
【化２５５】
2020516296.tif 000258
スキーム４２。
【化２５６】
2020516296.tif 000259
【０４９５】
ステップ１。ジメチル５−（２−（（２−オキソ−２−フェニル−１λ２−エチル）アミノ）アセトアミド）−イソフタレート（１０５）の調製
ジメチル５−アミノイソフタレート（５ｇ、２４ｍｍｏｌ）、Ｚ−Ｇｌｙ−ＯＨ（５ｇ、２４ｍｍｏｌ）、ＥＤＣ（５ｇ、２６．３ｍｍｏｌ）、ＨＯＢｔ（３．６ｇ、２６．３ｍｍｏｌ）、ＮＭＭ（２．９ｍＬ、２６．３ｍｍｏｌ）のＤＭＦ溶液（５０ｍＬ）を、室温で一晩撹拌した。完了次第、反応混合物を酢酸エチル（２５０ｍＬ）で希釈し、それぞれ１ＭのＨＣｌ（２×１００ｍＬ）、飽和炭酸水素ナトリウム（１×１００ｍＬ）、及びブライン（２×１００ｍＬ）で洗浄した。硫酸マグネシウムで乾燥させ、濾過し、濃縮乾固させて、ジメチル５−（２−（（２−オキソ−２−フェニル−１λ２−エチル）アミノ）アセトアミド）イソフタレートを無色固体として得た（７．２ｇ、７９％）。
【０４９６】
ステップ２。５−（２−（（２−オキソ−２−フェニル−１λ２−エチル）アミノ）アセトアミド）イソフタル酸（１０６）の調製
メタノール（２５ｍＬ）及びＴＨＦ（２５ｍＬ）にメチル５−（２−（（２−オキソ−２−フェニル−１λ２−エチル）アミノ）アセトアミド）イソフタレート（７．２ｇ）を含む溶液に、１ＭのＮａＯＨ（２５ｍＬ）を添加した。この溶液を室温で２時間撹拌し、次いで濃縮させてＴＨＦ及びＭｅＯＨを除去した。残った水溶液を水（７５ｍＬ）で希釈し、氷水浴で冷却し、６ＭのＨＣｌでｐＨ＝１に酸性化した。この固体を濾過し、水（３×１００ｍＬ）で洗浄した。この固体をフリーズドライして、５−（２−（（２−オキソ−２−フェニル−１λ２−エチル）アミノ）アセトアミド）−イソフタル酸を得た（６．９ｇ、定量的）。
【０４９７】
ステップ３。化合物１０７の調製
化合物９５に使用したものと同一の手順を使用し、５−（２−（（２−オキソ−２−フェニル−１λ２−エチル）アミノ）アセトアミド）イソフタル酸１０６（２００ｍｇ、０．５４ｍｍｏｌ）及び９４（１．７ｇ、１．３ｍｍｏｌ）から化合物１０７を調製した。収量：６００ｍｇ。
【０４９８】
ステップ４。化合物１０８の調製
化合物９６に使用したものと同一の手順を使用し、化合物１０７（６００ｍｇ）から化合物１０８を調製した。収量：６５０ｍｇ、定量的。
【０４９９】
ステップ５。化合物１０９の調製
化合物９９に使用したものと同一の手順を使用し、５−（２−（（２−オキソ−２−フェニル−１λ２−エチル）アミノ）アセトアミド）イソフタル酸（１０６）（１８０ｍｇ、０．４８ｍｍｏｌ）及び９８（１．５ｇ、１．１ｍｍｏｌ）から化合物１０９を調製した。収量：９００ｍｇ。
【０５００】
ステップ６。化合物１１０の調製
化合物１００に使用したものと同一の手順を使用し、化合物１０９（９００ｍｇ）から化合物１１０を調製した。収量：９２０ｍｇ、定量的。
【０５０１】
ステップ７。コンジュゲート２１２及び２１５の調製
化合物１に使用したものと同一の手順を使用し、化合物１２８及び１０８または１１０からコンジュゲート２１２及び２１５を調製した。
【０５０２】
実施例１９ａ。コンジュゲート２１２ａ及び２１５ａの合成
スキーム４１ａ。
【化２５７】
2020516296.tif 000260
スキーム４２ａ。
【化２５８】
2020516296.tif 000261
【０５０３】
ステップ１。ジメチル５−（２−（（２−オキソ−２−フェニル−１λ２−エチル）アミノ）アセトアミド）−イソフタレート（１０５ａ）の調製
ジメチル５−アミノイソフタレート（５ｇ、２４ｍｍｏｌ）、Ｚ−Ｇｌｙ−ＯＨ（５ｇ、２４ｍｍｏｌ）、ＥＤＣ（５ｇ、２６．３ｍｍｏｌ）、ＨＯＢｔ（３．６ｇ、２６．３ｍｍｏｌ）、ＮＭＭ（２．９ｍＬ、２６．３ｍｍｏｌ）のＤＭＦ溶液（５０ｍＬ）を、室温で一晩撹拌した。完了次第、反応混合物を酢酸エチル（２５０ｍＬ）で希釈し、それぞれ１ＭのＨＣｌ（２×１００ｍＬ）、飽和炭酸水素ナトリウム（１×１００ｍＬ）、及びブライン（２×１００ｍＬ）で洗浄した。硫酸マグネシウムで乾燥させ、濾過し、濃縮乾固させて、ジメチル５−（２−（（２−オキソ−２−フェニル−１λ２−エチル）アミノ）アセトアミド）イソフタレートを無色固体として得た（７．２ｇ、７９％）。
【０５０４】
ステップ２。５−（２−（（２−オキソ−２−フェニル−１λ２−エチル）アミノ）アセトアミド）イソフタル酸（１０６ａ）の調製
メタノール（２５ｍＬ）及びＴＨＦ（２５ｍＬ）にメチル５−（２−（（２−オキソ−２−フェニル−１λ２−エチル）アミノ）アセトアミド）イソフタレート（７．２ｇ）を含む溶液に、１ＭのＮａＯＨ（２５ｍＬ）を添加した。この溶液を室温で２時間撹拌し、次いで濃縮させてＴＨＦ及びＭｅＯＨを除去した。残った水溶液を水（７５ｍＬ）で希釈し、氷水浴で冷却し、６ＭのＨＣｌでｐＨ＝１に酸性化した。この固体を濾過し、水（３×１００ｍＬ）で洗浄した。この固体をフリーズドライして、５−（２−（（２−オキソ−２−フェニル−１λ２−エチル）アミノ）アセトアミド）−イソフタル酸を得た（６．９ｇ、定量的）。
【０５０５】
ステップ３。化合物１０７ａの調製
化合物９５に使用したものと同一の手順を使用し、５−（２−（（２−オキソ−２−フェニル−１λ２−エチル）アミノ）アセトアミド）イソフタル酸１０６ａ（２００ｍｇ、０．５４ｍｍｏｌ）及び９４ａ（１．７ｇ、１．３ｍｍｏｌ）から化合物１０７ａを調製した。収量：６００ｍｇ。
【０５０６】
ステップ４。化合物１０８ａの調製
化合物９６ａに使用したものと同一の手順を使用し、化合物１０７ａ（６００ｍｇ）から化合物１０８ａを調製した。収量：６５０ｍｇ、定量的。
【０５０７】
ステップ５。化合物１０９ａの調製
化合物９９に使用したものと同一の手順を使用し、５−（２−（（２−オキソ−２−フェニル−１λ２−エチル）アミノ）アセトアミド）イソフタル酸１０６ａ（１８０ｍｇ、０．４８ｍｍｏｌ）及び９８ａ（１．５ｇ、１．１ｍｍｏｌ）から化合物１０９ａを調製した。収量：９００ｍｇ。
【０５０８】
ステップ６。化合物１１０ａの調製
化合物１００に使用したものと同一の手順を使用し、化合物１０９（９００ｍｇ）から化合物１１０ａを調製した。収量：９２０ｍｇ、定量的。
【０５０９】
ステップ７。コンジュゲート２１２ａ及び２１５ａの調製
化合物１に使用したものと同一の手順を使用し、化合物１２８及び１０８ａまたは１１０ａからコンジュゲート２１２ａ及び２１５ａを調製した。
【０５１０】
実施例２０。コンジュゲート２１８及び２２１の合成
スキーム４３。
【化２５９】
2020516296.tif 000262
スキーム４４。
【化２６０】
2020516296.tif 000263
【０５１１】
ステップ１。化合物１１１の調製
化合物８９に使用したものと同一の手順を使用し、４−（（（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ）メチル）フタル酸（１．１３ｇ、３．８４ｍｍｏｌ）及び８８（５ｇ、８．４４ｍｍｏｌ）から化合物１１１を調製した。収量：２．２１ｇ、４９％。
【０５１２】
ステップ２。化合物１１２の調製
１１１（２．２１ｇ、１．８７ｍｍｏｌ）のＣＨ２Ｃｌ２溶液（４０ｍＬ）を、ＴＦＡ（５ｍＬ）でゆっくりと処理した。撹拌（２時間）した後、混合物を濃縮させ、クロマトグラフィに供して、１１２（１．０８ｇ、４７％）を無色泡状物として得た。Ｒｆ ０．１ （１０％ ＣＨ３ＯＨ−ＣＨ２Ｃｌ２）。
【０５１３】
ステップ３。化合物１１３の調製
化合物９１に使用したものと同一の手順を使用し、化合物１１２（１．０８ｇ、０．８８ｍｍｏｌ）及び（２−オキソ−２−フェニル−１λ２−エチル）−Ｄ−グルタミン酸（１１２ｍｇ、０．３９ｍｍｏｌ）から化合物１１３を調製した。収量：６００ｍｇ、６２％。
【０５１４】
ステップ４。化合物１１４の調製
化合物９２に使用したものと同一の手順を使用し、化合物１１３から化合物１１４を調製した。
【０５１５】
ステップ５。化合物１１５の調製
化合物９３に使用したものと同一の手順を使用し、４−（（（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ）メチル）フタル酸（３．９４ｇ、１３．３ｍｍｏｌ）及び９（１８．２ｇ、２９．４ｍｍｏｌ）から化合物１１５を調製した。収量：９．０２ｇ、５３％。
【０５１６】
ステップ６。化合物１１６の調製
化合物１１２に使用したものと同一の手順を使用し、化合物１１５（８ｇ、６．３ｍｍｏｌ）から化合物１１６を調製した。収量：３．２３ｇ、３９％。
【０５１７】
ステップ７。化合物１１７の調製
化合物９５に使用したものと同一の手順を使用し、化合物１１６（３．２３ｇ、２．４５ｍｍｏｌ）及び（２−オキソ−２−フェニル−１λ２−エチル）−Ｄ−グルタミン酸（１９２ｍｇ、１．１ｍｍｏｌ）から化合物１１７を調製した。収量：２．２２ｇ、３４％。
【０５１８】
ステップ８。化合物１１８の調製
化合物９６に使用したものと同一の手順を使用し、化合物１１７（２．２２ｇ、０．８４ｍｍｏｌ）から化合物１１８を調製した。収量：２．０２ｇ、９１％。
【０５１９】
ステップ９。コンジュゲート２１８及び２２１の調製
化合物１に使用したものと同一の手順を使用し、化合物１２８及び１１４または１１８からコンジュゲート２１８及び２２１を調製した。
【０５２０】
実施例２０ａ。コンジュゲート２１８ａ及び２２１ａの合成
スキーム４３ａ。
【化２６１】
2020516296.tif 000264
スキーム４４ａ。
【化２６２】
2020516296.tif 000265
【０５２１】
ステップ１。化合物１１１ａの調製
化合物８９に使用したものと同一の手順を使用し、４−（（（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ）メチル）フタル酸（１．１３ｇ、３．８４ｍｍｏｌ）及び８８（５ｇ、８．４４ｍｍｏｌ）から化合物１１１ａを調製した。収量：２．２１ｇ、４９％。
【０５２２】
ステップ２。化合物１１２ａの調製
１１１ａ（２．２１ｇ、１．８７ｍｍｏｌ）のＣＨ２Ｃｌ２溶液（４０ｍＬ）を、ＴＦＡ（５ｍＬ）でゆっくりと処理した。撹拌（２時間）した後、混合物を濃縮させ、クロマトグラフィに供して、１１２ａ（１．０８ｇ、４７％）を無色泡状物として得た。Ｒｆ ０．１ （１０％ ＣＨ３ＯＨ−ＣＨ２Ｃｌ２）。
【０５２３】
ステップ３。化合物１１３ａの調製
化合物９１に使用したものと同一の手順を使用し、化合物１１２ａ（１．０８ｇ、０．８８ｍｍｏｌ）及び（２−オキソ−２−フェニル−１λ２−エチル）−Ｄ−グルタミン酸（１１２ｍｇ、０．３９ｍｍｏｌ）から化合物１１３ａを調製した。収量：６００ｍｇ、６２％。
【０５２４】
ステップ４。化合物１１４ａの調製
化合物９２に使用したものと同一の手順を使用し、化合物１１３ａから化合物１１４ａを調製した。
【０５２５】
ステップ５。化合物１１５ａの調製
化合物９３に使用したものと同一の手順を使用し、４−（（（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ）メチル）フタル酸（３．９４ｇ、１３．３ｍｍｏｌ）及び９（１８．２ｇ、２９．４ｍｍｏｌ）から化合物１１５ａを調製した。収量：９．０２ｇ、５３％。
【０５２６】
ステップ６。化合物１１６ａの調製
化合物１１ａに使用したものと同一の手順を使用し、化合物１１５ａ（８ｇ、６．３ｍｍｏｌ）から化合物１１６ａを調製した。収量：３．２３ｇ、３９％。
【０５２７】
ステップ７。化合物１１７ａの調製
化合物９５に使用したものと同一の手順を使用し、化合物１１６ａ（３．２３ｇ、２．４５ｍｍｏｌ）及び（２−オキソ−２−フェニル−１λ２−エチル）グルタミン酸（１９２ｍｇ、１．１ｍｍｏｌ）から化合物１１７ａを調製した。収量：２．２２ｇ、３４％。
【０５２８】
ステップ８。化合物１１８ａの調製
化合物９６に使用したものと同一の手順を使用し、化合物１１７ａ（２．２２ｇ、０．８４ｍｍｏｌ）から化合物１１８ａを調製した。収量：２．０２ｇ、９１％。
【０５２９】
ステップ９。コンジュゲート２１８ａ及び２２１ａの調製
化合物１に使用したものと同一の手順を使用し、化合物１２８及び１１４ａまたは１１８ａからコンジュゲート２１８ａ及び２２１ａを調製した。
【０５３０】
実施例２１。コンジュゲート２２４の合成
スキーム４５。
【化２６３】
2020516296.tif 000266
【０５３１】
ステップ１。化合物２２４の調製
化合物１に使用したものと同一の手順を使用し、化合物９６及び１３０からコンジュゲート２２４を調製した。
【０５３２】
実施例２１ａ。コンジュゲート２２４ｂの合成
スキーム４５ａ。
【化２６４】
2020516296.tif 000267
【化２６５】
2020516296.tif 000268
【０５３３】
ステップ１。化合物２２４ｂの調製
化合物１に使用したものと同一の手順を使用し、化合物９６ｂ及び１３０からコンジュゲート２２４ｂを調製した。
【０５３４】
実施例２２  コンジュゲート２３１の合成
スキーム４６
【化２６６】
2020516296.tif 000269
【化２６７】
2020516296.tif 000270
スキーム４７
【化２６８】
2020516296.tif 000271
【化２６９】
2020516296.tif 000272
【０５３５】
ステップ１  化合物２２５の調製
８９に使用したものと同一の手順を使用し、５−（２−アミノアセトアミド）イソフタル酸（１０６）（５６０ｍｇ、１．５ｍｍｏｌ）及び９（２．２４ｇ、３．６ｍｍｏｌ）から化合物２２５を調製した。収量１．６ｇ、８０％。
【０５３６】
ステップ２  化合物２２６の調製
１４と同じ様式で化合物２２６を調製した。収量１．２２ｇ、７８％。
【０５３７】
ステップ３  化合物２２７の調製
Ｚ−グルタミン酸（１０８ｍｇ、０．３８ｍｍｏｌ）及び２２６（１．２２ｇ、０．９２ｍｍｏｌ）から、８９と同じ様式で化合物２２７を調製した。収量４７１ｍｇ、４５％。
【０５３８】
ステップ４  化合物２２８の調製
１４と同じ様式で化合物２２８を調製した。収量４６０ｍｇ、定量的。
【０５３９】
ステップ５  化合物２２９の調製
８９と同じ様式で、２２８（４６０ｍｇ、０．１７ｍｍｏｌ）及び１２８（１２５ｍｇ、０．１９ｍｍｏｌ）から化合物２２９を調製した。収量３６５ｍｇ、６６％。
【０５４０】
ステップ６  化合物２３１の調製
化合物１に使用したものと同一の手順を使用し、コンジュゲート２３１を調製した。
【０５４１】
実施例２２ａ  コンジュゲート２３１ａの合成
スキーム４６ａ
【化２７０】
2020516296.tif 000273
【化２７１】
2020516296.tif 000274
スキーム４７ａ
【化２７２】
2020516296.tif 000275
【化２７３】
2020516296.tif 000276
【０５４２】
ステップ１  化合物２２５ａの調製
８９に使用したものと同一の手順を使用し、５−（２−アミノアセトアミド）イソフタル酸（１０６）（５６０ｍｇ、１．５ｍｍｏｌ）及び９（２．２４ｇ、３．６ｍｍｏｌ）から化合物２２５ａを調製した。収量１．６ｇ、８０％。
【０５４３】
ステップ２  化合物２２６ａの調製
１４と同じ様式で化合物２２６ａを調製した。収量１．２２ｇ、７８％。
【０５４４】
ステップ３  化合物２２７ａの調製
Ｚ−グルタミン酸（１０８ｍｇ、０．３８ｍｍｏｌ）及び２２６ａ（１．２２ｇ、０．９２ｍｍｏｌ）から、８９と同じ様式で化合物２２７ａを調製した。収量４７１ｍｇ、４５％。
【０５４５】
ステップ４  化合物２２８ａの調製
１４と同じ様式で化合物２２８ａを調製した。収量４６０ｍｇ、定量的。
【０５４６】
ステップ５  化合物２２９ａの調製
８９と同じ様式で、２２８ａ（４６０ｍｇ、０．１７ｍｍｏｌ）及び１２８（１２５ｍｇ、０．１９ｍｍｏｌ）から化合物２２９ａを調製した。収量３６５ｍｇ、６６％。
【０５４７】
ステップ６  化合物２３１ａの調製
化合物１に使用したものと同一の手順を使用し、コンジュゲート２３１ａを調製した。
【０５４８】
実施例２２ｂ  コンジュゲート２３１ｂの合成
スキーム４６ｂ
【化２７４】
2020516296.tif 000277
【化２７５】
2020516296.tif 000278
スキーム４７ｂ
【化２７６】
2020516296.tif 000279
【化２７７】
2020516296.tif 000280
【０５４９】
ステップ１  化合物２２５ｂの調製
８９に使用したものと同一の手順を使用し、５−（２−アミノアセトアミド）イソフタル酸（１０６）（５６０ｍｇ、１．５ｍｍｏｌ）及び９（２．２４ｇ、３．６ｍｍｏｌ）から化合物２２５ｂを調製した。収量１．６ｇ、８０％。
【０５５０】
ステップ２  化合物２２６ｂの調製
１４と同じ様式で化合物２２６ｂを調製した。収量１．２２ｇ、７８％。
【０５５１】
ステップ３  化合物２２７ｂの調製
Ｚ−グルタミン酸（１０８ｍｇ、０．３８ｍｍｏｌ）及び２２６ｂ（１．２２ｇ、０．９２ｍｍｏｌ）から、８９と同じ様式で化合物２２７ｂを調製した。収量４７１ｍｇ、４５％。
【０５５２】
ステップ４  化合物２２８ｂの調製
１４と同じ様式で化合物２２８ｂを調製した。収量４６０ｍｇ、定量的。
【０５５３】
ステップ５  化合物２２９ｂの調製
８９と同じ様式で、２２８ｂ（４６０ｍｇ、０．１７ｍｍｏｌ）及び１２８（１２５ｍｇ、０．１９ｍｍｏｌ）から化合物２２９ｂを調製した。収量３６５ｍｇ、６６％。
【０５５４】
ステップ６  化合物２３１ｂの調製
化合物１に使用したものと同一の手順を使用し、コンジュゲート２３１ｂを調製した。
【０５５５】
実施例２３。コンジュゲート２３３の合成
スキーム４８
【化２７８】
2020516296.tif 000281
【化２７９】
2020516296.tif 000282
【０５５６】
ステップ１。化合物２３２の調製
化合物１９に使用したものと同一の手順を使用し、化合物２４（６５０ｍｇ、０．３３ｍｍｏｌ）及び化合物６９ｂ（１７５ｍｇ、０．３３ｍｍｏｌ）から化合物２３２を調製した。収量：３８０ｍｇ、４７％。
【０５５７】
ステップ２。化合物２３３の調製
化合物１に使用したものと同一の手順を使用し、化合物２３２から化合物２３３を調製した。
【０５５８】
実施例２４。コンジュゲート２３５の合成
スキーム４９
【化２８０】
2020516296.tif 000283
【化２８１】
2020516296.tif 000284
【化２８２】
2020516296.tif 000285
【０５５９】
ステップ１。化合物２３４の調製
化合物１９に使用したものと同一の手順を使用し、化合物２４（１．１ｇ、０．５５ｍｍｏｌ）及び化合物１８（１７５ｍｇ、０．３３ｍｍｏｌ）から化合物２３４を調製した。収量：６８５ｍｇ、５１％。
【０５６０】
ステップ２。化合物２３５の調製
化合物１に使用したものと同一の手順を使用し、化合物２３４から化合物２３５を調製した。
【０５６１】
実施例２５。ＨＢＶ  ｓｉＲＮＡコンジュゲートのインビボ試験
慢性ＨＢＶ感染は、肝臓への進行性の損傷を伴う世界的な疾患である。現在利用可能な処置は、ウイルスＤＮＡを低減させ得るが、疾患進行の大きな一因となるウイルス抗原に対してはほとんど影響を及ぼしていない。したがって、ウイルス抗原を低減させるためにＨＢＶを標的とするｓｉＲＮＡを設計した。
【０５６２】
ＧａｌＮＡｃリガンドにコンジュゲートされた、表１に記載の化学修飾されたＨＢＶ  ｓｉＲＮＡを、ＨＢＶ感染の確立されたマウスモデルにおいて、インビボ活性について試験した。ＡＡＶ−ＨＢＶ１．２  Ｃ５７ＢＬ／６マウスモデルにおいて、ＨＢＶのゲノム長を超える配列をコードするアデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）ベクターを注射した後、安定した持続的なＨＢＶ発現が達成され、ＨＢＶ  ＲＮＡ及びタンパク質の肝臓における発現、ならびにウイルス粒子及びサブウイルス粒子の血中への分泌がもたらされる。
【０５６３】
これらの研究に使用したＡＡＶ−ＨＢＶ１．２構築物は、Ｄｉｏｎ，Ｓ．，ｅｔ  ａｌ．，Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｖｉｒｏｌｏｇｙ，２０１３，８７（１０）：５５５４−５５６３において提供される詳細に基づくものであった。動物関連の手技は全て、Ｃａｎａｄｉａｎ  Ｃｏｕｎｃｉｌ  ｏｎ  Ａｎｉｍａｌ  Ｃａｒｅ（ＣＣＡＣ）Ｇｕｉｄｅｌｉｎｅｓ  ｏｎ  Ｇｏｏｄ  Ａｎｉｍａｌ  Ｐｒａｃｔｉｃｅｓに従う作業手順書に従って実施し、現地のＩｎｓｔｉｔｕｔｉｏｎａｌ  Ａｎｉｍａｌ  Ｃａｒｅ  ａｎｄ  Ｕｓｅ  Ｃｏｍｍｉｔｔｅｅ（ＩＡＣＵＣ）によって認可された。
【０５６４】
各動物に、１Ｅ１１ベクターゲノム（ＶＧ）のＡＡＶ−ＨＢＶ１．２ベクターを接種した。処置前に、全ての動物の試験採血を行ない、確立されたＨＢＶ発現を確認するため、個々の動物の血清ＨＢｓＡｇレベルを判定した。
【０５６５】
ｓｉＲＮＡ処置：マウス群（典型的にはｎ＝５）に、単回３ｍｇ／ｋｇ用量のＨＢＶ  ｓｉＲＮＡコンジュゲートを、０日目に１回（動物１匹当たり１用量）、肩甲部への皮下注射によって投与した。ビヒクルのみ（食塩水）を投与した１つの動物群を対照とした。
【０５６６】
収集：０日目、処置前、及び試験品投与後の所定の時点（例えば試験７日目、１４日目、２１日目、２８日目、３５日目、４２日目、４９日目、５６日目、６３日目、及び７０日目）に、全マウスの試験採血を行なって、血清ＨＢｓＡｇレベルの最大低下率及び薬理活性の持続時間を判定した。
【０５６７】
分析：Ｂｉｏｒａｄ  ＥＩＡ  ＧＳ  ＨＢｓＡｇ  ３．０キット（ＢｉｏＲａｄ、カタログ番号３２５９１）を製造元の説明に従って使用し、血清試料中のＨＢｓＡｇレベルを判定した。各処置群からプールされた血清を使用して、個々の時点における群平均ＨＢｓＡｇレベルを判定した。データを分析し、処置前ベースラインに対するＨＢｓＡｇレベル（０日目に対する％）として表した。
【０５６８】
結果：表１に記載の化学修飾されたＨＢＶ  ｓｉＲＮＡのそれぞれを試験した結果を、表２に提示する。値は、処置後７日目、１４日目、２１日目、２８日目、４２日目、４９日目、５６日目、及び７０日目におけるＨＢｓＡｇレベルの（０日目ベースラインに対する）パーセント（％）を表す。
【表１−１】
2020516296.tif 000286
【表１−２】
2020516296.tif 000287
２’−Ｏ−メチルヌクレオチド＝小文字；２’−フルオロヌクレオチド＝大文字下線付き、
ホスホロチオエートリンカー＝ｓ、未修飾＝大文字
【表２−１】
2020516296.tif 000288
【表２−２】
2020516296.tif 000289
表２は、試験したＨＢＶ  ｓｉＲＮＡコンジュゲートの化合物番号（縦列２）及び対応するオリゴヌクレオチド（縦列１）を特定する。
【０５６９】
実施例２６  コンジュゲート３２０の合成
スキーム５０  活性化リンカーの調製
【化２８３】
2020516296.tif 000290
【０５７０】
ステップ１。ラセミ（シス）５−ベンジル−３ａ，６ａ−ジメチルテトラヒドロ−１Ｈ−フロ［３，４−ｃ］ピロール−１，３（３ａＨ）−ジオン（３０１）の調製
ジクロロメタン（７５ｍＬ）に３，４−ジメチルフラン−２，５−ジオン（３ｇ、２４ｍｍｏｌ）及びＮ−ベンジル−１−メトキシ−Ｎ−（（トリメチルシリル）メチル）メタンアミン（７ｇ、２９．８ｍｍｏｌ）を含む冷却溶液（０℃）に、トリフルオロ酢酸（７５μＬ）をゆっくりと添加した。一晩撹拌し、氷浴が溶けるにつれて溶液が室温にゆっくりと戻るようにした。この反応混合物を濃縮乾固させ、酢酸エチル（１００ｍＬ）に溶解させ、飽和炭酸水素ナトリウム（２×１００ｍＬ）で洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥させ、濾過し、濃縮乾固させた。シリカゲルでのカラムクロマトグラフィ（勾配：２０％の酢酸エチルを含むヘキサンから１００％の酢酸エチル）による精製により、（３ａＲ，６ａＳ）−５−ベンジル−３ａ，６ａ−ジメチルテトラヒドロ−１Ｈ−フロ［３，４−ｃ］ピロール−１，３（３ａＨ）−ジオンを黄色油状物として得た（３．５ｇ、５６％）。
【０５７１】
ステップ２。ラセミ（シス）（１−ベンジル−３，４−ジメチルピロリジン−３，４−ジイル）ジメタノール（３０２）の調製
無水ジエチルエーテル（５０ｍＬ）に（３ａＲ，６ａＳ）−５−ベンジル−３ａ，６ａ−ジメチルテトラヒドロ−１Ｈ−フロ［３，４−ｃ］ピロール−１，３（３ａＨ）−ジオン（３．５ｇ、１３．４ｍｍｏｌ）を含む冷却溶液（０℃）に、水素化アルミニウムリチウムペレット（１．５ｇ、４０ｍｍｏｌ）を３回に分けてゆっくりと添加した。この溶液を一晩撹拌し、氷水浴が溶けるにつれて室温に戻るようにした。完了次第、反応物を０℃に冷却し、１．５ｍＬの５ＭのＮａＯＨに続いて１．５ｍＬの水で非常にゆっくりとクエンチした。３０分間撹拌し、次いで硫酸マグネシウムを添加し、濾過した。この濾液を濃縮させて、（（３Ｒ，４Ｓ）−１−ベンジル−３，４−ジメチルピロリジン−３，４−ジイル）ジメタノールを無色油状物として得た（２．７ｇ）。
【０５７２】
ステップ３。ラセミ（シス）（３，４−ジメチルピロリジン−３，４−ジイル）ジメタノール（３０３）の調製
（（３Ｒ，４Ｓ）−１−ベンジル−３，４−ジメチルピロリジン−３，４−ジイル）ジメタノール（１０ｇ、４０ｍｍｏｌ）のメタノール溶液（１０ｍＬ）に、湿った１０％パラジウム活性炭（１ｇ）を添加した。この溶液を、水素雰囲気下で１６時間にわたって勢いよく撹拌した。完了次第、溶液をセライトで濾過し、濃縮乾固させ、（（３Ｒ，４Ｓ）−３，４−ジメチルピロリジン−３，４−ジイル）ジメタノールを無色固体として得た（５．５ｇ、８６％）。
【０５７３】
ステップ４。ラセミ（シス）メチル１０−（３，４−ビス（ヒドロキシメチル）−３，４−ジメチルピロリジン−１−イル）−１０−オキソデカノエート（３０４）の調製
３（１．３ｇ、８．２ｍｍｏｌ）及びセバシン酸モノメチル（１．８ｇ、８．２ｍｍｏｌ）のＣＨ２Ｃｌ２溶液（１００ｍＬ）を、ＨＢＴＵ（３．４１ｇ、９．０２ｍｍｏｌ）及びヒューニッヒ塩基（５．７１ｍＬ、３２．８ｍｍｏｌ）で処理した。一晩撹拌した後、混合物をＮａＨＣＯ３（飽和水溶液）、水、及びブラインで洗浄し、次いで乾燥させ（ＭｇＳＯ４）、濾過し、濃縮させた。この粗物質をクロマトグラフィ（勾配：０％のＣＨ３ＯＨ−ＣＨ２Ｃｌ２から２０％）に供して、４（１．８ｇ、６１％）を得た。
【０５７４】
ステップ５。ラセミ（シス）メチル１０−（３−（（ビス（４−メトキシフェニル）（フェニル）−メトキシ）メチル）−４−（ヒドロキシメチル）−３，４−ジメチルピロリジン−１−イル）−１０−オキソデカノエート（３０５）の調製
３０４（１．８ｇ、５．０ｍｍｏｌ）及び４，４’−ジメトキシトリチルクロリド（１．７ｇ、５．０ｍｍｏｌ）のピリジン溶液（１８０ｍＬ）を一晩撹拌した。次いで、ピリジンを減圧下で除去し、この粗物質をクロマトグラフィ（勾配：０％のＣＨ３ＯＨ−ＣＨ２Ｃｌ２から１０％）に供して、５（１．４ｇ、４２％）を黄色油状物として得た。
【０５７５】
ステップ６。ラセミ（シス）１０−（３−（（ビス（４−メトキシフェニル）−（フェニル）メトキシ）メチル）−４−（ヒドロキシメチル）−３，４−ジメチルピロリジン−１−イル）−１０−オキソデカン酸リチウム（３０６）の調製
ＴＨＦ（５０ｍＬ）及び水（５０ｍＬ）に化合物３０５（３．０ｇ、４．６ｍｍｏｌ）を含む溶液に、水酸化リチウム（１２１ｍｇ、５．０ｍｍｏｌ）を添加した。この溶液を室温で４時間撹拌し、次いで濃縮させてＴＨＦを除去した。残った水溶液を一晩凍結乾燥して、淡桃色固体を得た（２．９ｇ、定量的）。２つのシス−ジアステレオマーの混合物として化合物３０６を調製した。
【０５７６】
スキーム５１  過アセチル化ガラクトサミン（３０７）の合成
【化２８４】
2020516296.tif 000291
Ｄ−ガラクトサミン塩酸塩（２５０ｇ、１．１６ｍｏｌ）を含むピリジン（１．５Ｌ）を４５分間にわたって無水酢酸（１．２５Ｌ、１３．２ｍｏｌ）で処理した。一晩撹拌した後、反応混合物を３つの１Ｌ分量に分けた。各１Ｌ分量を３Ｌの氷水に注ぎ、１時間混合した。混合した後、固体を濾過して除き、合わせて液体窒素で凍結してから、５日間にわたって凍結乾燥させて、過アセチル化ガラクトサミン（３０７）（３６９．４ｇ、８２％）を白色固体として得た。Ｒｆ （０．５８， １０％ ＭｅＯＨ−ＣＨ２Ｃｌ２）。
【０５７７】
スキーム５２  ＧａｌＮＡｃモノマーの合成
【化２８５】
2020516296.tif 000292
【０５７８】
ステップ１  化合物３０９の調製
２−［２−（２−クロロエトキシ）］エタノール（３０８）（１００ｇ、５９３ｍｍｏｌ）の水溶液（１Ｌ）を、ＮａＮ３（７７ｇ、１．１９ｍｏｌ）で処理し、加熱した（９０℃）。撹拌（７２時間）した後、溶液を冷まし（室温）、ＣＨ２Ｃｌ２で抽出した（４回）。合わせた有機物をブラインで洗浄し、乾燥させ（ＭｇＳＯ４）、濾過し、濃縮させ、更に処理することなく使用した。化合物９（８８．９ｇ、８６％）を淡黄色油状物として得た。
【０５７９】
ステップ２  化合物３１０の調製
７（２．７６ｇ、７．１ｍｍｏｌ）及び３０９（１．３７ｇ、７．８ｍｍｏｌ）の１，２−ジクロロエタン溶液（４０ｍＬ）を、Ｓｃ（ＯＴｆ）３（１７４ｍｇ、０．３６ｍｍｏｌ）で処理し、加熱した（８５℃）。撹拌（２時間）した後、混合物を冷まし（室温）、ＴＥＡ（４ｍＬ）の添加によってクエンチし、濃縮させた。この粗物質をクロマトグラフィに供して、３１０（３．０３ｇ、８５％）を淡黄色泡状物として得た。
【０５８０】
ステップ３  化合物３１１の調製
３１０（３．０２ｇ、５．９９ｍｍｏｌ）及びＰｄ／Ｃ（３００ｍｇ、１０％  Ｐｄ負荷−湿潤支持体）のＥｔＯＡｃ溶液（３０ｍＬ）を、ＴＦＡ（５７６μＬ、７．５ｍｍｏｌ）で処理した。この反応混合物を水素ガスでパージし（４５分間）、次いで窒素ガスでパージし（１０分間）、次いでセライトで濾過した。この濾液を濃縮させ、次いでクロマトグラフィに供して、３１１（２．６７ｇ、７５％）を褐色泡状物として得た。
【０５８１】
スキーム５３  芳香族コアの合成
【化２８６】
2020516296.tif 000293
【０５８２】
ステップ１。ジメチル５−（２−（（２−オキソ−２−フェニル−１λ２−エチル）アミノ）アセトアミド）−イソフタレート（３１２）の調製
ジメチル５−アミノイソフタレート（５ｇ、２４ｍｍｏｌ）、Ｚ−Ｇｌｙ−ＯＨ（５ｇ、２４ｍｍｏｌ）、ＥＤＣ（５ｇ、２６．３ｍｍｏｌ）、ＨＯＢｔ（３．６ｇ、２６．３ｍｍｏｌ）、ＮＭＭ（２．９ｍＬ、２６．３ｍｍｏｌ）のＤＭＦ溶液（５０ｍＬ）を、室温で一晩撹拌した。完了次第、反応混合物を酢酸エチル（２５０ｍＬ）で希釈し、それぞれ１ＭのＨＣｌ（２×１００ｍＬ）、飽和炭酸水素ナトリウム（１×１００ｍＬ）、及びブライン（２×１００ｍＬ）で洗浄した。硫酸マグネシウムで乾燥させ、濾過し、濃縮乾固させて、ジメチル５−（２−（（２−オキソ−２−フェニル−１λ２−エチル）アミノ）−アセトアミド）イソフタレートを無色固体として得た（７．２ｇ、７９％）。
【０５８３】
ステップ２。５−（２−（（２−オキソ−２−フェニル−１λ２−エチル）アミノ）アセトアミド）イソフタル酸（３１３）の調製
メタノール（２５ｍＬ）及びＴＨＦ（２５ｍＬ）にメチル５−（２−（（２−オキソ−２−フェニル−１λ２−エチル）アミノ）アセトアミド）イソフタレート（７．２ｇ）を含む溶液に、１ＭのＮａＯＨ（２５ｍＬ）を添加した。この溶液を室温で２時間撹拌し、次いで濃縮させてＴＨＦ及びＭｅＯＨを除去した。残った水溶液を水（７５ｍＬ）で希釈し、氷水浴で冷却し、６ＭのＨＣｌでｐＨ＝１に酸性化した。この固体を濾過し、水（３×１００ｍＬ）で洗浄した。この固体をフリーズドライして、５−（２−（（２−オキソ−２−フェニル−１λ２−エチル）アミノ）アセトアミド）−イソフタル酸を得た（６．９ｇ、定量的）。
【０５８４】
スキーム５４：四量体の調製
【化２８７】
2020516296.tif 000294
【化２８８】
2020516296.tif 000295
【０５８５】
ステップ１  化合物３１４の調製
３１３（２．０９ｇ、５．６ｍｍｏｌ）及び３１１（８．３４ｇ、１４．０７ｍｍｏｌ）のＣＨ２Ｃｌ２溶液（１５０ｍＬ）を、ＨＢＴＵ（６．４ｇ、１６．９ｍｍｏｌ）及びヒューニッヒ塩基（７．３５ｍＬ、４２．２ｍｍｏｌ）で処理した。撹拌（一晩）した後、反応混合物をＮａＨＣＯ３（飽和水溶液）に注ぎ、次いで水及びブラインで洗浄し、乾燥させ（ＭｇＳＯ４）、濾過し、濃縮させた。この粗物質をクロマトグラフィ（勾配１−１２％のＣＨ３ＯＨ−ＣＨ２Ｃｌ２）に供して、６（３．９７ｇ、５５％）を淡黄色泡状物として得た。
【０５８６】
ステップ２  化合物３１５の調製
化合物３１４（３．９２ｇ、３．０７ｍｍｏｌ）、Ｐｄ／Ｃ（４００ｍｇ、１０％負荷−湿潤支持体）、及びトリフルオロ酢酸（３０８μＬ、４ｍｍｏｌ）を、Ｈ２でパージした。Ｈ２下で（一晩）撹拌した後、混合物をＮ２でパージし（１５〜２０分間）、次いでセライトで濾過し、濃縮させた。この粗物質をクロマトグラフィに供して、７（３．３６ｇ、８６％）を白色からクリーム色の泡状物として得た。
【０５８７】
ステップ３  化合物３１６の調製
Ｚ−グルタミン酸（３０６ｍｇ、１．０９ｍｍｏｌ）及び３１５（３．３ｇ、２．６ｍｍｏｌ）から、３１４と同じ様式で化合物３１６を調製した。収量１．６６ｇ、６０％。
【０５８８】
ステップ４  化合物３１７の調製
３１５と同じ様式で化合物３１７を調製した。収量１．６５ｇ、定量的。
【０５８９】
スキーム５５  完全なコンジュゲートの調製
【化２８９】
2020516296.tif 000296
【０５９０】
ステップ１  化合物３１８の調製
３１７（１．９１ｇ、０．７５ｍｍｏｌ）のＣＨ２Ｃｌ２溶液（１００ｍＬ）を、まずヒューニッヒ塩基（３９２μＬ、２．２５ｍｍｏｌ）、次いで６（２つのシス−ジアステレオマーの混合物、５０９ｍｇ、０．７９ｍｍｏｌ）、続いてＨＢＴＵ（３５６ｍｇ、０．９４ｍｍｏｌ）で処理した。撹拌（一晩）した後、溶液をＮａＨＣＯ３（飽和水溶液）に注ぎ、次いで水及びブラインで洗浄し、乾燥させ（ＭｇＳＯ４）、濾過し、濃縮させた。この粗物質をクロマトグラフィに供して、３１８（１．１９ｇ、５２％）を白色泡状物として得た。
【０５９１】
ステップ２  化合物３１９の調製
３１８（１．１９ｇ、０．３９ｍｍｏｌ）の１，２ジクロロエタン溶液（１００ｍＬ）を、ＴＥＡ（５４２μＬ、３．９ｍｍｏｌ）、ＤＭＡＰ（２３８ｍｇ、１．９５ｍｍｏｌ）、及び無水コハク酸（１９５ｍｇ、１．９５ｍｍｏｌ）で処理し、加熱した（８５℃）。撹拌（２．５時間）した後、溶液を熱源から離し、ＣＨ３ＯＨ（１０ｍＬ）で処理し、撹拌させた（１時間）。撹拌した後、混合物をＮａＨＣＯ３（飽和水溶液）に注ぎ、次いでブラインで洗浄し、乾燥させ（ＭｇＳＯ４）、濾過し、濃縮させた。得られた残渣を、更に処理することなく使用した。収量＝１．４ｇ、定量的。
【０５９２】
ステップ３  コンジュゲート３２０の調製
標準的なアミドカップリング化学を使用し、サクシネート３１９を１０００Å  ＬＣＡＡ（長鎖アミノアルキル）ＣＰＧ（制御細孔ガラス）に負荷した。ジイソプロピルカルボジイミド（５２．６μｍｏｌ）、Ｎ−ヒドロキシサクシニミド（０．３ｍｇ、２．６μｍｏｌ）、及びピリジン（１０μＬ）の無水アセトニトリル溶液（０．３ｍＬ）を、３１９（２０．６ｍｇ、８μｍｏｌ）を含む無水ジクロロメタン（０．２ｍＬ）に添加した。この混合物をＬＣＡＡ  ＣＰＧ（１８３ｍｇ）に加えた。この懸濁液を室温で一晩穏やかに混合した。３１９が消失したら（ＨＰＬＣ）、反応混合物を濾過し、ジクロロメタン、アセトニトリル、５％無水酢酸／５％Ｎ−メチルイミダゾール／５％ピリジンのＴＨＦ溶液、次いでＴＨＦ、アセトニトリル及びジクロロメタン各１ｍＬでＣＰＧを洗浄した。次いで、ＣＰＧを高真空下で一晩乾燥させた。ＵＶ／Ｖｉｓ（５０４ｎｍ）による標準的なＤＭＴｒアッセイによって、負荷を１９μｍｏｌ／ｇと判定した。結果として得られたＧａｌＮＡｃが負荷されたＣＰＧ固体支持体を、標準的な手順を使用した自動化オリゴヌクレオチド合成に用いた。ヌクレオチド脱保護の後に固体支持体からの除去を（ガラクトサミンアセテート脱保護と同時に）行なうと、ＧａｌＮＡｃ−オリゴヌクレオチドコンジュゲート３２０が得られた。
【０５９３】
実施例２７  コンジュゲート５２０の合成
スキーム５６  活性化リンカーの調製
【化２９０】
2020516296.tif 000297
【０５９４】
ステップ１。ラセミ（シス）５−ベンジル−３ａ，６ａ−ジメチルテトラヒドロ−１Ｈ−フロ［３，４−ｃ］ピロール−１，３（３ａＨ）−ジオン（３０１）の調製
ジクロロメタン（７５ｍＬ）に３，４−ジメチルフラン−２，５−ジオン（３ｇ、２４ｍｍｏｌ）及びＮ−ベンジル−１−メトキシ−Ｎ−（（トリメチルシリル）メチル）メタンアミン（７ｇ、２９．８ｍｍｏｌ）を含む冷却溶液（０℃）に、トリフルオロ酢酸（７５μＬ）をゆっくりと添加した。一晩撹拌し、氷浴が溶けるにつれて溶液が室温にゆっくりと戻るようにした。この反応混合物を濃縮乾固させ、酢酸エチル（１００ｍＬ）に溶解させ、飽和炭酸水素ナトリウム（２×１００ｍＬ）で洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥させ、濾過し、濃縮乾固させた。シリカゲルでのカラムクロマトグラフィ（勾配：２０％の酢酸エチルを含むヘキサンから１００％の酢酸エチル）による精製により、（３ａＲ，６ａＳ）−５−ベンジル−３ａ，６ａ−ジメチルテトラヒドロ−１Ｈ−フロ［３，４−ｃ］ピロール−１，３（３ａＨ）−ジオンを黄色油状物として得た（３．５ｇ、５６％）。
【０５９５】
ステップ２。ラセミ（シス）（１−ベンジル−３，４−ジメチルピロリジン−３，４−ジイル）ジメタノール（３０２）の調製
無水ジエチルエーテル（５０ｍＬ）に（３ａＲ，６ａＳ）−５−ベンジル−３ａ，６ａ−ジメチルテトラヒドロ−１Ｈ−フロ［３，４−ｃ］ピロール−１，３（３ａＨ）−ジオン（３．５ｇ、１３．４ｍｍｏｌ）を含む冷却溶液（０℃）に、水素化アルミニウムリチウムペレット（１．５ｇ、４０ｍｍｏｌ）を３回に分けてゆっくりと添加した。この溶液を一晩撹拌し、氷水浴が溶けるにつれて室温に戻るようにした。完了次第、反応物を０℃に冷却し、１．５ｍＬの５ＭのＮａＯＨに続いて１．５ｍＬの水で非常にゆっくりとクエンチした。３０分間撹拌し、次いで硫酸マグネシウムを添加し、濾過した。この濾液を濃縮させて、（（３Ｒ，４Ｓ）−１−ベンジル−３，４−ジメチルピロリジン−３，４−ジイル）ジメタノールを無色油状物として得た（２．７ｇ）。
【０５９６】
ステップ３。ラセミ（シス）（３，４−ジメチルピロリジン−３，４−ジイル）ジメタノール（３０３）の調製
（（３Ｒ，４Ｓ）−１−ベンジル−３，４−ジメチルピロリジン−３，４−ジイル）ジメタノール（１０ｇ、４０ｍｍｏｌ）のメタノール溶液（１０ｍＬ）に、湿った１０％パラジウム活性炭（１ｇ）を添加した。この溶液を、水素雰囲気下で１６時間にわたって勢いよく撹拌した。完了次第、溶液をセライトで濾過し、濃縮乾固させ、（（３Ｒ，４Ｓ）−３，４−ジメチルピロリジン−３，４−ジイル）ジメタノールを無色固体として得た（５．５ｇ、８６％）。
【０５９７】
ステップ４。ラセミ（シス）メチル１０−（３，４−ビス（ヒドロキシメチル）−３，４−ジメチルピロリジン−１−イル）−１０−オキソデカノエート（３０４）の調製
３（１．３ｇ、８．２ｍｍｏｌ）及びセバシン酸モノメチル（１．８ｇ、８．２ｍｍｏｌ）のＣＨ２Ｃｌ２溶液（１００ｍＬ）を、ＨＢＴＵ（３．４１ｇ、９．０２ｍｍｏｌ）及びヒューニッヒ塩基（５．７１ｍＬ、３２．８ｍｍｏｌ）で処理した。一晩撹拌した後、混合物をＮａＨＣＯ３（飽和水溶液）、水、及びブラインで洗浄し、次いで乾燥させ（ＭｇＳＯ４）、濾過し、濃縮させた。この粗物質をクロマトグラフィ（勾配：０％のＣＨ３ＯＨ−ＣＨ２Ｃｌ２から２０％）に供して、４（１．８ｇ、６１％）を得た。
【０５９８】
ステップ５。ラセミ（シス）メチル１０−（３−（（ビス（４−メトキシフェニル）（フェニル）−メトキシ）メチル）−４−（ヒドロキシメチル）−３，４−ジメチルピロリジン−１−イル）−１０−オキソデカノエート（３０５）の調製
３０４（１．８ｇ、５．０ｍｍｏｌ）及び４，４’−ジメトキシトリチルクロリド（１．７ｇ、５．０ｍｍｏｌ）のピリジン溶液（１８０ｍＬ）を一晩撹拌した。次いで、ピリジンを減圧下で除去し、この粗物質をクロマトグラフィ（勾配：０％のＣＨ３ＯＨ−ＣＨ２Ｃｌ２から１０％）に供して、５（１．４ｇ、４２％）を黄色油状物として得た。
【０５９９】
ステップ６。ラセミ（シス）１０−（３−（（ビス（４−メトキシフェニル）−（フェニル）メトキシ）メチル）−４−（ヒドロキシメチル）−３，４−ジメチルピロリジン−１−イル）−１０−オキソデカン酸リチウム（３０６）の調製
ＴＨＦ（５０ｍＬ）及び水（５０ｍＬ）に化合物３０５（３．０ｇ、４．６ｍｍｏｌ）を含む溶液に、水酸化リチウム（１２１ｍｇ、５．０ｍｍｏｌ）を添加した。この溶液を室温で４時間撹拌し、次いで濃縮させてＴＨＦを除去した。残った水溶液を一晩凍結乾燥して、淡桃色固体を得た（２．９ｇ、定量的）。２つのシス−ジアステレオマーの混合物として化合物３０６を調製した。
【０６００】
スキーム５７  過アセチル化ガラクトサミン（５０７）の合成
【化２９１】
2020516296.tif 000298
ガラクトサミン塩酸塩（２５０ｇ、１．１６ｍｏｌ）を含むピリジン（１．５Ｌ）を４５分間にわたって無水酢酸（１．２５Ｌ、１３．２ｍｏｌ）で処理した。一晩撹拌した後、反応混合物を３つの１Ｌ分量に分けた。各１Ｌ分量を３Ｌの氷水に注ぎ、１時間混合した。混合した後、固体を濾過して除き、合わせて液体窒素で凍結してから、５日間にわたって凍結乾燥させて、過アセチル化ガラクトサミン（５０７）（３６９．４ｇ、８２％）を白色固体として得た。Ｒｆ （０．５８， １０％ ＭｅＯＨ−ＣＨ２Ｃｌ２）。
【０６０１】
スキーム５８  ＧａｌＮＡｃモノマーの合成
【化２９２】
2020516296.tif 000299
【０６０２】
ステップ１  化合物５０９の調製
２−［２−（２−クロロエトキシ）］エタノール（５０８）（１００ｇ、５９３ｍｍｏｌ）の水溶液（１Ｌ）を、ＮａＮ３（７７ｇ、１．１９ｍｏｌ）で処理し、加熱した（９０℃）。撹拌（７２時間）した後、溶液を冷まし（室温）、ＣＨ２Ｃｌ２で抽出した（４回）。合わせた有機物をブラインで洗浄し、乾燥させ（ＭｇＳＯ４）、濾過し、濃縮させ、更に処理することなく使用した。化合物５０９（８８．９ｇ、８６％）を淡黄色油状物として得た。
【０６０３】
ステップ２  化合物５１０の調製
５０７（２．７６ｇ、７．１ｍｍｏｌ）及び５０９（１．３７ｇ、７．８ｍｍｏｌ）の１，２−ジクロロエタン溶液（４０ｍＬ）を、Ｓｃ（ＯＴｆ）３（１７４ｍｇ、０．３６ｍｍｏｌ）で処理し、加熱した（８５℃）。撹拌（２時間）した後、混合物を冷まし（ＲＴ）、ＴＥＡ（４ｍＬ）の添加によってクエンチし、濃縮させた。この粗物質をクロマトグラフィに供して、５１０（３．０３ｇ、８５％）を淡黄色泡状物として得た。
【０６０４】
ステップ３  化合物５１１の調製
５１０（３．０２ｇ、５．９９ｍｍｏｌ）及びＰｄ／Ｃ（３００ｍｇ、１０％  Ｐｄ負荷−湿潤支持体）のＥｔＯＡｃ溶液（３０ｍＬ）を、ＴＦＡ（５７６μＬ、７．５ｍｍｏｌ）で処理した。この反応混合物を水素ガスでパージし（４５分間）、次いで窒素ガスでパージし（１０分間）、次いでセライトで濾過した。この濾液を濃縮させ、次いでクロマトグラフィに供して、５１１（２．６７ｇ、７５％）を褐色泡状物として得た。
【０６０５】
スキーム５９  芳香族コアの合成
【化２９３】
2020516296.tif 000300
【０６０６】
ステップ１。ジメチル５−（２−（（２−オキソ−２−フェニル−１λ２−エチル）アミノ）アセトアミド）−イソフタレート（３１２）の調製
ジメチル５−アミノイソフタレート（５ｇ、２４ｍｍｏｌ）、Ｚ−Ｇｌｙ−ＯＨ（５ｇ、２４ｍｍｏｌ）、ＥＤＣ（５ｇ、２６．３ｍｍｏｌ）、ＨＯＢｔ（３．６ｇ、２６．３ｍｍｏｌ）、ＮＭＭ（２．９ｍＬ、２６．３ｍｍｏｌ）のＤＭＦ溶液（５０ｍＬ）を、室温で一晩撹拌した。完了次第、反応混合物を酢酸エチル（２５０ｍＬ）で希釈し、それぞれ１ＭのＨＣｌ（２×１００ｍＬ）、飽和炭酸水素ナトリウム（１×１００ｍＬ）、及びブライン（２×１００ｍＬ）で洗浄した。硫酸マグネシウムで乾燥させ、濾過し、濃縮乾固させて、ジメチル５−（２−（（２−オキソ−２−フェニル−１λ２−エチル）アミノ）−アセトアミド）イソフタレートを無色固体として得た（７．２ｇ、７９％）。
【０６０７】
ステップ２。５−（２−（（２−オキソ−２−フェニル−１λ２−エチル）アミノ）アセトアミド）イソフタル酸（３１３）の調製
メタノール（２５ｍＬ）及びＴＨＦ（２５ｍＬ）にメチル５−（２−（（２−オキソ−２−フェニル−１λ２−エチル）アミノ）アセトアミド）イソフタレート（７．２ｇ）を含む溶液に、１ＭのＮａＯＨ（２５ｍＬ）を添加した。この溶液を室温で２時間撹拌し、次いで濃縮させてＴＨＦ及びＭｅＯＨを除去した。残った水溶液を水（７５ｍＬ）で希釈し、氷水浴で冷却し、６ＭのＨＣｌでｐＨ＝１に酸性化した。この固体を濾過し、水（３×１００ｍＬ）で洗浄した。この固体を凍結乾燥して、５−（２−（（２−オキソ−２−フェニル−１λ２−エチル）アミノ）アセトアミド）−イソフタル酸を得た（６．９ｇ、定量的）。
【０６０８】
スキーム６０：四量体の調製
【化２９４】
2020516296.tif 000301
【化２９５】
2020516296.tif 000302
【０６０９】
ステップ１  化合物５１４の調製
３１３（２．０９ｇ、５．６ｍｍｏｌ）及び５１１（８．３４ｇ、１４．０７ｍｍｏｌ）のＣＨ２Ｃｌ２溶液（１５０ｍＬ）を、ＨＢＴＵ（６．４ｇ、１６．９ｍｍｏｌ）及びヒューニッヒ塩基（７．３５ｍＬ、４２．２ｍｍｏｌ）で処理した。撹拌（一晩）した後、反応混合物をＮａＨＣＯ３（飽和水溶液）に注ぎ、次いで水及びブラインで洗浄し、乾燥させ（ＭｇＳＯ４）、濾過し、濃縮させた。この粗物質をクロマトグラフィ（勾配１−１２％のＣＨ３ＯＨ−ＣＨ２Ｃｌ２）に供して、６（３．９７ｇ、５５％）を淡黄色泡状物として得た。
【０６１０】
ステップ２  化合物５１５の調製
化合物５１４（３．９２ｇ、３．０７ｍｍｏｌ）、Ｐｄ／Ｃ（４００ｍｇ、１０％負荷−湿潤支持体）、及びトリフルオロ酢酸（３０８μＬ、４ｍｍｏｌ）を、Ｈ２でパージした。Ｈ２下で（一晩）撹拌した後、混合物をＮ２でパージし（１５〜２０分間）、次いでセライトで濾過し、濃縮させた。この粗物質をクロマトグラフィに供して、７（３．３６ｇ、８６％）を白色からクリーム色の泡状物として得た。
【０６１１】
ステップ３  化合物５１６の調製
Ｚ−グルタミン酸（３０６ｍｇ、１．０９ｍｍｏｌ）及び５１５（３．３ｇ、２．６ｍｍｏｌ）から、５１４と同じ様式で化合物５１６を調製した。収量１．６６ｇ、６０％。
【０６１２】
ステップ４  化合物５１７の調製
５１５と同じ様式で化合物５１７を調製した。収量１．６５ｇ、定量的。
【０６１３】
スキーム６１  完全なコンジュゲートの調製
【化２９６】
2020516296.tif 000303
【化２９７】
2020516296.tif 000304
【０６１４】
ステップ１  化合物５１８の調製
５１７（１．９１ｇ、０．７５ｍｍｏｌ）のＣＨ２Ｃｌ２溶液（１００ｍＬ）を、まずヒューニッヒ塩基（３９２μＬ、２．２５ｍｍｏｌ）、次いで３０６（２つのシス−ジアステレオマーの混合物、５０９ｍｇ、０．７９ｍｍｏｌ）、続いてＨＢＴＵ（３５６ｍｇ、０．９４ｍｍｏｌ）で処理した。撹拌（一晩）した後、溶液をＮａＨＣＯ３（飽和水溶液）に注ぎ、次いで水及びブラインで洗浄し、乾燥させ（ＭｇＳＯ４）、濾過し、濃縮させた。この粗物質をクロマトグラフィに供して、５１８（１．１９ｇ、５２％）を白色泡状物として得た。
【０６１５】
ステップ２  化合物５１９の調製
５１８（１．１９ｇ、０．３９ｍｍｏｌ）の１，２ジクロロエタン溶液（１００ｍＬ）を、ＴＥＡ（５４２μＬ、３．９ｍｍｏｌ）、ＤＭＡＰ（２３８ｍｇ、１．９５ｍｍｏｌ）、及び無水コハク酸（１９５ｍｇ、１．９５ｍｍｏｌ）で処理し、加熱した（８５℃）。撹拌（２．５時間）した後、溶液を熱源から離し、ＣＨ３ＯＨ（１０ｍＬ）で処理し、撹拌させた（１時間）。撹拌した後、混合物をＮａＨＣＯ３（飽和水溶液）に注ぎ、次いでブラインで洗浄し、乾燥させ（ＭｇＳＯ４）、濾過し、濃縮させた。得られた残渣を、更に処理することなく使用した。収量＝１．４ｇ、定量的。
【０６１６】
ステップ３  コンジュゲート５２０の調製
標準的なアミドカップリング化学を使用し、サクシネート５１９を１０００Å  ＬＣＡＡ（長鎖アミノアルキル）ＣＰＧ（制御細孔ガラス）に負荷した。ジイソプロピルカルボジイミド（５２．６μｍｏｌ）、Ｎ−ヒドロキシサクシニミド（０．３ｍｇ、２．６μｍｏｌ）、及びピリジン（１０μＬ）の無水アセトニトリル溶液（０．３ｍＬ）を、５１９（２０．６ｍｇ、８μｍｏｌ）を含む無水ジクロロメタン（０．２ｍＬ）に添加した。この混合物をＬＣＡＡ  ＣＰＧ（１８３ｍｇ）に加えた。この懸濁液を室温で一晩穏やかに混合した。５１９が消失したら（ＨＰＬＣ）、反応混合物を濾過し、ジクロロメタン、アセトニトリル、５％無水酢酸／５％Ｎ−メチルイミダゾール／５％ピリジンのＴＨＦ溶液、次いでＴＨＦ、アセトニトリル及びジクロロメタン各１ｍＬでＣＰＧを洗浄した。次いで、ＣＰＧを高真空下で一晩乾燥させた。ＵＶ／Ｖｉｓ（５０４ｎｍ）による標準的なＤＭＴｒアッセイによって、負荷を１９μｍｏｌ／ｇと判定した。結果として得られたＧａｌＮＡｃが負荷されたＣＰＧ固体支持体を、標準的な手順を使用した自動化オリゴヌクレオチド合成に用いた。ヌクレオチド脱保護の後に固体支持体からの除去を（ガラクトサミンアセテート脱保護と同時に）行なうと、ＧａｌＮＡｃ−オリゴヌクレオチドコンジュゲート（５２０）が得られた。
【０６１７】
実施例２８。ＴＴＲ  ｓｉＲＮＡコンジュゲートのインビボ試験
ＴＴＲノックダウンの野生型マウスモデルにおけるインビボ活性について、化合物３２０（式中、Ｒ２は、表３に記載の修飾されたＴＴＲ  ｓｉＲＮＡを含む）を試験した。本実施例において、化合物３２０（式中、Ｒ２は、修飾されたＴＴＲ  ｓｉＲＮＡを含む）は、奇病であるＴＴＲ（トランスサイレチン）アミロイドーシスのための可能性のある処置として示される。この疾患の罹患者では、トランスサイレチンタンパク質のミスフォールディング及び凝集が疾患進行に関連している。このｓｉＲＮＡ−ＧａｌＮＡｃコンジュゲートを使用することにより、患者におけるタンパク質のミスフォールディング／凝集の量を低減させることができ、疾患の進行を停止させる結果が伴う可能性もある。したがって、ある特定の実施形態は、化合物３２０（式中、Ｒ２は、修飾されたＴＴＲ  ｓｉＲＮＡを含む）、及びトランスサイレチンアミロイドーシスを処置するためのその使用を提供する。
【表３】
2020516296.tif 000305
２’−Ｏ−メチルヌクレオチド＝小文字；２’−フルオロヌクレオチド＝大文字下線付き、
ホスホロチオエートリンカー＝ｓ、未修飾＝大文字
【０６１８】
ＴＴＲ  ｓｉＲＮＡ配列及び動物モデルはいずれも、Ｎａｉｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．，３６（４９），１６９５８−１６９６１（２０１４）に記載されたものであった。動物関連の手技は全て、Ｃａｎａｄｉａｎ  Ｃｏｕｎｃｉｌ  ｏｎ  Ａｎｉｍａｌ  Ｃａｒｅ（ＣＣＡＣ）Ｇｕｉｄｅｌｉｎｅｓ  ｏｎ  Ｇｏｏｄ  Ａｎｉｍａｌ  Ｐｒａｃｔｉｃｅｓに従う作業手順書に従って実施し、現地のＩｎｓｔｉｔｕｔｉｏｎａｌ  Ａｎｉｍａｌ  Ｃａｒｅ  ａｎｄ  Ｕｓｅ  Ｃｏｍｍｉｔｔｅｅ（ＩＡＣＵＣ）によって認可された。
【０６１９】
ｓｉＲＮＡ処置：雌Ｃ５７ＢＬ／６マウス（ｎ＝４）に、単回２ｍｇ／ｋｇ用量の化合物３２０（Ｒ２は、修飾されたＴＴＲ  ｓｉＲＮＡを含む）を、０日目に１回（動物１匹当たり１用量）、肩甲部への皮下注射によって投与した。ビヒクルのみ（ＰＢＳ）を投与した１つの動物群を対照とした。
【０６２０】
収集：試験品投与後の所定の時点（２日目、４日目、７日目、９日目、１４日目、及び２１日目）に、全動物の試験採血を行なって、血漿ＴＴＲレベルの最大低下率及び薬理活性の持続時間を判定した。
【０６２１】
分析：Ａｂｎｏｖａ  Ｐｒｅａｌｂｕｍｉｎ（Ｍｏｕｓｅ）ＥＬＩＳＡキット（Ｃｅｄａｒ  Ｌａｎｅ、カタログ番号ＫＡ２０７０）を製造元の説明に従って使用し、血漿試料中のＴＴＲタンパク質レベルを判定した。個々の血漿試料についてＴＴＲ血漿タンパク質値を計算し、各群の平均を求めた。これらの平均から、対照に対するＴＴＲタンパク質レベル（ＰＢＳ処置動物に対する％）を判定した。
【０６２２】
結果：試験結果を表４に提示する。値は、処置後２日目、４日目、７日目、９日目、１４日目、及び２１日目におけるＴＴＲタンパク質レベルの（ＰＢＳ対照に対する）パーセント（％）を表す。
【表４】
2020516296.tif 000306
【０６２３】
結論：化合物３２０（式中、Ｒ２は、表３に記載の修飾されたＴＴＲ  ｓｉＲＮＡを含む）で処置した動物は、標的ｍＲＮＡ及びタンパク質の顕著なノックダウンを呈し、ＴＴＲタンパク質の最大ノックダウンは、皮下注射後４日目から９日目の間に起こった。
【０６２４】
実施例２９。ＨＢＶ  ｓｉＲＮＡコンジュゲートのインビボ試験
ＧａｌＮＡｃリガンドにコンジュゲートされた、実施例２５の表１に記載の化学修飾されたＨＢＶ  ｓｉＲＮＡを、ＨＢＶ感染の確立されたマウスモデルにおいて、インビボ活性について試験した。ＡＡＶ−ＨＢＶ１．２  Ｃ５７ＢＬ／６マウスモデルでは、ＨＢＶのゲノム長を超える配列をコードするアデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）ベクターを注射した後、安定した持続的なＨＢＶ発現が達成され、ＨＢＶ  ＲＮＡ及びタンパク質の肝臓における発現、ならびにウイルス粒子及びサブウイルス粒子の血中への分泌がもたらされる。
【０６２５】
これらの試験に使用したＡＡＶ−ＨＢＶ１．２構築物は、Ｄｉｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｖｉｒｏｌｏｇｙ，８７（１０），５５５４−５５６３（２０１３）において提供される詳細に基づくものであった。動物関連の手技は全て、Ｃａｎａｄｉａｎ  Ｃｏｕｎｃｉｌ  ｏｎ  Ａｎｉｍａｌ  Ｃａｒｅ（ＣＣＡＣ）Ｇｕｉｄｅｌｉｎｅｓ  ｏｎ  Ｇｏｏｄ  Ａｎｉｍａｌ  Ｐｒａｃｔｉｃｅｓに従う作業手順書に従って実施し、現地のＩｎｓｔｉｔｕｔｉｏｎａｌ  Ａｎｉｍａｌ  Ｃａｒｅ  ａｎｄ  Ｕｓｅ  Ｃｏｍｍｉｔｔｅｅ（ＩＡＣＵＣ）によって認可された。
【０６２６】
各動物に、１Ｅ１１ベクターゲノム（ＶＧ）のＡＡＶ−ＨＢＶ１．２ベクターを接種した。処置前に、全ての動物の試験採血を行ない、確立されたＨＢＶ発現を確認するため、個々の動物の血清ＨＢｓＡｇレベルを判定した。
【０６２７】
ｓｉＲＮＡ処置：マウス群（典型的にはｎ＝５）に、単回３ｍｇ／ｋｇ用量のＨＢＶ  ｓｉＲＮＡコンジュゲートを、０日目に１回（動物１匹当たり１用量）、肩甲部への皮下注射によって投与した。ビヒクルのみ（食塩水）を投与した１つの動物群を対照とした。
【０６２８】
収集：０日目、処置前、及び試験品投与後の所定の時点（例えば研究７日目、１４日目、２１日目、２８日目、４２日目、５６日目、及び７０日目）に、全マウスの試験採血を行なって、血清ＨＢｓＡｇレベルの最大低下率及び薬理活性の持続時間を判定した。
【０６２９】
分析：Ｂｉｏｒａｄ  ＥＩＡ  ＧＳ  ＨＢｓＡｇ  ３．０キット（ＢｉｏＲａｄ、カタログ番号３２５９１）を製造元の説明に従って使用し、血清試料中のＨＢｓＡｇレベルを判定した。各処置群からプールされた血清を使用して、個々の時点における群平均ＨＢｓＡｇレベルを判定した。データを分析し、処置前ベースラインに対するＨＢｓＡｇレベル（０日目に対する％）として表した。
【０６３０】
結果：表１に記載の化学修飾されたＨＢＶ  ｓｉＲＮＡのそれぞれを試験した結果を、表５に提示する。値は、処置後７日目、１４日目、２１日目、２８日目、４２日目、５６日目、及び７０日目におけるＨＢｓＡｇレベルの（０日目ベースラインに対する）パーセント（％）を表す。
【表５】
2020516296.tif 000307
【０６３１】
試験した１３種の化合物はそれぞれ、単回用量の皮下投与処置後に血清ＨＢＶ表面抗原の低減をもたらし、最大効果は１４日目または２１日目に得られた。最も優れた低減を示した４種の化合物は、オリゴヌクレオチドがｓｉＲＮＡ  ３または２５を含んだ化合物１９１ａ、及びＲ２がｓｉＲＮＡ  ３または２５を含んだ化合物３２０であった。これら４種の化合物は、第１の時点（７日目）でより急速な低減（９７％以上）、より優れた最大低下率（９９％以上）、及びより持続的な低減効果（５６日目、処置８週間後で依然として９７％以上）が顕著であった。
【図１】
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【図２】
2020516296.tif 000426
【図３】
2020516296.tif 000427
【配列表】
2020516296000001.app
【国際調査報告】
2020516296.tif 000428
2020516296.tif 000429
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