(57)【要約】  本発明は、診断マーカーとしての使用のためのＳＨ２Ｂアダプタータンパク質３（ＳＨ２Ｂ３）に関する。さらに、本発明は、ＳＨ２Ｂ３遺伝子発現の測定のための方法に関する。
2020516301.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
診断マーカーとしての使用のためのＳＨ２Ｂ３。
【請求項２】
骨髄応答および免疫応答の予測のための診断における使用のためのＳＨ２Ｂ３。
【請求項３】
ＳＨ２Ｂ３遺伝子の発現が、ＲＮＡのレベルで、より好ましくはｍＲＮＡのレベルで測定される、請求項１または２記載の使用のためのＳＨ２Ｂ３。
【請求項４】
骨髄性幹（前駆）細胞または非骨髄性幹（前駆）細胞および／または血液細胞および／または免疫細胞および／または血管細胞および／または組織細胞の増殖および炎症応答の予測のための請求項１〜３のいずれか１項に記載の使用のためのＳＨ２Ｂ３。
【請求項５】
インテグリンレセプターまたはエリスロポエチン（ＥＰＯ）レセプターまたは幹細胞因子（ＣＤ１０５）またはＶＥＧＦ−ＲＥＣ（ＣＤ３０９）または幹細胞増殖因子（ＣＤ１１７）またはノッチレセプターの内皮活性化または抑制の発現の予測のための請求項１〜３のいずれか１項に記載の使用のためのＳＨ２Ｂ３。
【請求項６】
インテグリンレセプターもしくはエリスロポエチンレセプターもしくは幹細胞因子（ＣＤ１０５）もしくはＶＥＧＦ−ＲＥＣ（ＣＤ３０９）もしくはＣＸＣＲ４（ＣＤ１８４）もしくは幹細胞増殖因子（ＣＤ１１７）もしくはノッチ受容体の骨髄性幹（前駆）細胞（ＭＳＣのＣＤ１３３＋）活性化または抑制の発現の予測のための請求項１〜３のいずれか１項に記載の使用のためのＳＨ２Ｂ３。
【請求項７】
ＥＰＯおよびＶＥＧＦの末梢血液への遊走の予測のための請求項１〜３のいずれか１項に記載の使用のためのＳＨ２Ｂ３。
【請求項８】
末梢血液中への、炎症性サイトカインの遊走の予測、好ましくは、ＴＮＦアルファ、ＩＰ−１０、インターロイキンの遊走の予測のための請求項１〜３のいずれか１項に記載の使用のためのＳＨ２Ｂ３。
【請求項９】
ＥＰＯおよびＶＥＧＦの末梢血液中への遊走への（幹）細胞応答の予測のための請求項１〜３のいずれか１項に記載の使用のためのＳＨ２Ｂ３。
【請求項１０】
炎症性サイトカインまたは増殖因子の末梢血液中への遊走への（幹）細胞応答の予測のための請求項１〜３のいずれか１項に記載の使用のためのＳＨ２Ｂ３。
【請求項１１】
末梢血液中における、薬剤、栄養素、（ナノ）粒子、マイクロ−ＲＮＡ、タンパク質、融合溶液、および／または有毒な試薬の末梢血液レベルへの（幹）細胞応答の予測のための請求項１〜３のいずれか１項に記載の使用のためのＳＨ２Ｂ３。
【請求項１２】
特には骨髄性幹細胞（ＣＤ１３３＋）増殖および末梢のＶＥＧＦ−ＲＥＣへ結合するＥＰＣ（ＣＤ１３３＋、ＣＤ１１７＋、ＣＤ３４＋）の遊走による、血管新生刺激の予測のための請求項１〜３のいずれか１項に記載の使用のためのＳＨ２Ｂ３。
【請求項１３】
特には骨髄性幹細胞（ＣＤ１３３＋）増殖および血小板の遊走による、巨核球刺激または抑制の予測のための請求項１〜３のいずれか１項に記載の使用のためのＳＨ２Ｂ３。
【請求項１４】
特には骨髄性幹細胞（ＣＤ１３３＋）増殖ならびに赤血球、骨髄性細胞およびリンパ球の遊走による、血管新生増加刺激または抑制の予測のための請求項１〜３のいずれか１項に記載の使用のためのＳＨ２Ｂ３。
【請求項１５】
内皮または脈管前駆細胞またはＭＳＣの増殖刺激または増殖の抑制の予測のための請求項１〜３のいずれか１項に記載の使用のためのＳＨ２Ｂ３。
【請求項１６】
幹細胞因子またはインテグリンレセプターまたは細胞接着レセプターの内皮活性化の発現の予測のための請求項１〜３のいずれか１項に記載の使用のためのＳＨ２Ｂ３。
【請求項１７】
エリスロポエチンレセプターまたはＶＥＧＦ−ＲＥＣの内皮活性化の発現の予測のための請求項１〜３のいずれか１項に記載の使用のためのＳＨ２Ｂ３。
【請求項１８】
白血球またはリンパ球インテグリンレセプター発現の予測のための請求項１〜３のいずれか１項に記載の使用のためのＳＨ２Ｂ３。
【請求項１９】
末梢組織の修復および酸素化の予測のための請求項１〜３のいずれか１項に記載の使用のためのＳＨ２Ｂ３。
【請求項２０】
骨髄応答または骨髄不全または骨髄性幹細胞増殖応答または血液細胞の骨髄遊走の予測のための請求項１〜３のいずれか１項に記載の使用のためのＳＨ２Ｂ３。
【請求項２１】
血液細胞、免疫細胞、造血（ＣＤ１３３＋）幹細胞、骨髄細胞または組織細胞または内皮細胞または非造血性幹細胞の炎症応答の予測のための請求項１〜３のいずれか１項に記載の使用のためのＳＨ２Ｂ３。
【請求項２２】
骨髄性幹細胞増殖およびＥＰＣ  ＣＤ１３３+の遊走の予測のための請求項１〜３のいずれか１項に記載の使用のためのＳＨ２Ｂ３。
【請求項２３】
末梢性虚血および炎症の処置における使用のための請求項１〜３のいずれか１項に記載の使用のためのＳＨ２Ｂ３。
【請求項２４】
血管修復、心筋再生およびアテローム性動脈硬化の治療における使用のための請求項１〜３のいずれか１項に記載の使用のためのＳＨ２Ｂ３。
【請求項２５】
心筋梗塞、虚血性心筋症、および冠動脈疾患の後の心不全を患う被検体の処置のための請求項１〜３のいずれか１項に記載の使用のためのＳＨ２Ｂ３。
【請求項２６】
ＬＶＥＦ修復の治療のための請求項１〜３のいずれか１項に記載の使用のためのＳＨ２Ｂ３。
【請求項２７】
心臓、血管、または非心血管性の組織再生、応答している患者の選択、および血管新生応答のモニタリングにおける請求項１〜３のいずれか１項に記載の使用のためのＳＨ２Ｂ３。
【請求項２８】
虚血性疾患、発作、末梢性虚血、（多発）外傷、蘇生、ショック、敗血性炎症反応症候群（ＳＩＲＳ）、および／または敗血症を患う被検体の処置のための請求項１〜３のいずれか１項に記載の使用のためのＳＨ２Ｂ３。
【請求項２９】
感染性疾患、ウイルス性疾患、被爆、化学療法、薬物副作用、および／またはがんを患う被検体の処置のための請求項１〜３のいずれか１項に記載の使用のためのＳＨ２Ｂ３。
【請求項３０】
ｉ．被験体からの血液サンプリング、
ii．好ましくはＲＴ−ＰＣＲおよび／またはｑＰＣＲによる、ＳＨ２Ｂ３遺伝子発現の測定、
iii．レスポンダーまたはノンレスポンダーへの分類
を含む、ＳＨ２Ｂ３遺伝子発現を調べるための方法。
【請求項３１】
被検体の組織サンプリングを含む、請求項３０記載の方法。
【請求項３２】
骨髄性幹細胞レスポンダー対ノンレスポンダーを含む、請求項３０記載の方法。
【請求項３３】
炎症レスポンダー対ノンレスポンダーを含む、請求項３０記載の方法。
【請求項３４】
前記被検体が、冠動脈疾患、アテローム性動脈硬化、セリアック病、一型糖尿病、感染性疾患、自己免疫疾患、および／または関節性リウマチを患っている、請求項３０記載の方法。
【請求項３５】
前記分類が、共分散分析（ＡＮＣＯＶＡ）および／または２標本検定を介して行われる請求項３０記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、診断マーカーとしての使用のためのＳＨ２Ｂアダプタータンパク質３（ＳＨ２Ｂ３）に関する。さらに、本発明は、ＳＨ２Ｂ３遺伝子発現の測定のための方法に関する。
【０００２】
リンパ球アダプタータンパク質（lymphocyte adapter protein、ＬＮＫ）としても知られるＳＨ２Ｂ３は、ヒトにおいて、１２番染色体上のＳＨ２Ｂ３遺伝子によってエンコードされているタンパク質である。これは、多くの組織およびセルタイプ中の至る所に発現している（"BioGPS - your Gene Portal System". biogps.org. ２０１６年１０月１１日に検索）。ＳＨ２Ｂ３は、造血、炎症および細胞遊走に関連するシグナル経路におけるレギュレーターとして機能する（Devalliere J, Charreau B (２０１１年、１１月). Biochemical Pharmacology. 82 (10): 1391-402. doi:10.1016/j.bcp.2011.06.023. PMID 21723852）。この結果、これは血液疾患、自己免疫不全および血管疾患に関わっている（Auburger G, Gispert S, Lahut S, Omur O, Damrath E, Heck M, Basak N (２０１４年、６月). Wourld Journal of Diabetes. 5 (3): 316-27. doi:10.4239/wjd.v5.i3.316. PMC 4058736. PMID 24936253）。ＳＨ２Ｂ３遺伝子はまた、冠動脈疾患、一型糖尿病および関節リウマチの増大されたリスクと関連する２７の一塩基多型のうちの一つを含んでいる（Mega JL, Stitziel NO, Smith JG, Chasman DI, Caulfield MJ, Devlin JJ, Nordio F, Hyde CL, Cannon CP, Sacks FM, Poulter NR, Sever PS, Ridker PM, Braunwald E, Melander O, Kathiresan S, Sabatine MS (２０１５年、６月). Lancet. 385 (9984): 2264-71. doi:10.1016/S0140-6736(14)61730-X. PMC 4608367. PMID 25748612）。
【０００３】
心臓組織の修復のための幹細胞を用いた再生医療は、ここ１６年における前臨床および臨床開発の最先端である。種々のアプローチのうち、心臓組織中への骨髄性幹細胞の直接的な適用が２００１年の初めての人への適用以来、依然として、最も熱心に行われている臨床開発的治療である（Stamm C, Westphal B, Kleine HD, et al. Lancet. 2003; 361(9351):45-46; Tse HF, Kwong YL, Chan JK, Lo G, Ho CL, Lau CP. Lancet 2003; 361(9351):47-9; Stamm C, Kleine HD, Choi YH, et al. J Thorac Cardiovasc Surg 2007; 133(3):717-25）。しかしながら、これまでのところ、その後のいかなるプラセボ対照第III相試験においても効能は示され得なかった（Timothy D. Henry, Lem Moye, Jay H. Traverse. Circulation Research 2016; 119:404-406; Nasseri BA, Ebell W, Dandel Mら、Eur Heart J 2014; 35(19):1263-74; Bartunek J, Terzic A, Davison BAら、Eur Heart J 2016 Dec 23. pii: ehw543. doi: 10.1093/eurheartj/ehw543）。
【０００４】
このことは、幹細胞適用から独立した再生メカニズムの導入およびＣＤ３４+ＥＰＣ細胞に関連する血管内修復の潜在的な抑制因子という問題を提起した（Werner N, Kosiol S, Schiegl T, et al. N Engl J Med. 2005; 353(10):999-1007）。最近発表された仮説に関して、ＣＤ１３３／ＣＤ３４+末梢循環ＥＰＣ細胞の極めて重要な役割は、心筋再生の欠如に関連付けられ得るかもしれないということが留意されるべきである（Taylor DA, Perin EC, Willerson JTら、 Cell Transplant  2016; 25(9):1675-1687; Bhatnagar A, Bolli R, Johnstone BHら、 Am Heart J 2016; 179:142-50; Contreras A, Orozco AF, Resende M, et al. Basic Res Cardiol 2017;112(1):3）。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
したがって、心筋再生のメカニズムおよび骨髄性幹細胞調節の血管新生の役割についての疑問は依然として未解決のままである。
【課題を解決するための手段】
【０００６】
本発明者は、今回、ＳＨ２Ｂ３遺伝子の導入が、いくつかの生化学的プロセスの応答の抑制または誘導に関連付けられ得ることを見出した。
【図面の簡単な説明】
【０００７】
【図１】図１は、レスポンダーおよびノンレスポンダーの末梢血液中でのＳＨ２Ｂ３遺伝子発現分析を示す図である。
【発明を実施するための形態】
【０００８】
したがって、本発明は、診断マーカーとしての使用のためのＳＨ２Ｂアダプタータンパク質３およびその遺伝子発現に関する。
【０００９】
本発明によれば、種々のセルシステムおよび組織におけるＳＨ２Ｂ３遺伝子の発現ならびにそれに関連した応答は、種々の疾患（以下に記載されている）の発症機序の同定を優位に可能にする。加えて、種々のセルシステムおよび応答メカニズムにおけるＳＨ２Ｂ３の遺伝子発現は、診断のためおよび効果的な医療の恩恵を受けるための被験体に合った予測療法のために使用される。
【００１０】
好ましくは、ＳＨ２Ｂ３は、ｉｎ  ｖｉｔｒｏ／ｅｘ  ｖｉｖｏ診断のために、特には、医学的利用のために使用される。
【００１１】
本発明はまた、ＳＨ２Ｂ３遺伝子発現の検査のための方法に関し、該方法は、
ｉ．被験体からの血液サンプリング
ii．ＳＨ２Ｂ３遺伝子発現の測定、好ましくはＲＴ−ＰＣＲおよび／またはｑＰＣＲによる
iii．レスポンダーであるかまたはノンレスポンダーであるかの分類
を含む。
【００１２】
本発明によれば、被検体、例えば患者の応答挙動に関する予測診断、すなわち、患者がある処置に対して応答する（「レスポンダー」）か、または応答しない（「ノンレスポンダー」）か、を可能にする。有利には、ノンレスポンダーとして分類される被検体は、したがって、それから恩恵を受けることがないであろう治療を受けるようには選択されず、これにより、医薬品を用いる治療によって通常受けるであろう薬物有害反応が低減される。加えて、被検体の治療は、効果的な処理に集中するように減らされ得、これによってまたコスト効率のよい治療へと減らされる。
【００１３】
好ましくは、本発明の方法は、ｉｎ  ｖｉｔｒｏ／ｅｘ  ｖｉｖｏ法である。さらに、上記で明確に記載された工程以外の工程を含み得る。例えば、さらなる工程は、サンプル前処置、またはさらなる評価、または該方法によって得られる結果の使用に関連し得る。該方法は、手動で行われてもよいし、または、自動化の助けを借りて行われてもよい。好ましくは、工程（ｉ）は、自動化によって、例えば適切なロボティックおよびセンサー機器などによって、完全にまたは一部支援され得る。工程（ii）および／または（iii）は、上述されるようなそれぞれの比較および／または予測を行うデータプロセッシングユニットによって支援され得る。
【００１４】
好ましくは、ＳＨ２Ｂ３遺伝子発現の測定は、骨髄応答および免疫応答の予測のための診断において使用され、ここで、「診断（diagnosis）」との用語は、好ましくは、ｉｎ  ｖｉｔｒｏ／ｅｘ  ｖｉｖｏ診断を意味している。特には、ＳＨ２Ｂ３遺伝子発現の測定は、予測治療から恩恵を受け得る疾患に罹患している被検体の予測処置のための診断において使用される。
【００１５】
本明細書において使用される「被検体（subject）」との用語は、動物、好ましくはほ乳類、および、最も好ましくはヒトを意味している。本発明にしたがって、そのような被検体のサンプルは、血液、特には抹消血液、および／または血清および／または血漿サンプルおよび／または組織生検サンプルおよび／または例えば内皮前駆細胞（ＥＰＣ）などの循環（幹）細胞のサンプル由来である。
【００１６】
本明細書中で意味されるＳＨ２Ｂ３またはその遺伝子発現の量の測定とは、量または濃度を、好ましくは、半定量的または定量的に、測定することに関連する。測定は、直接的または間接的に行われ得る。直接的な測定は、ＳＨ２Ｂ３自体から得られるシグナルに基づいてＳＨ２Ｂ３の量または濃度、および、サンプル中に存在するＳＨ２Ｂ３の分子の数に直接的に相関する強度を測定することに関する。このようなシグナル−本明細書においてしばしば強度シグナルとも称される−は、例えば、ＳＨ２Ｂ３の特定の物理的または化学的特性の強度値を測定することなどによって得られ得る。間接的な測定は、二次成分（すなわち、ＳＨ２Ｂ３自体ではない成分）または生物学的な読み出しシステム、例えば、計測可能な細胞応答、リガンド、レベル、または酵素反応生成物などから得られるシグナルを測定することを含む。
【００１７】
本発明にしたがって、ＳＨ２Ｂ３の量を測定することは、サンプル中の、ペプチド、タンパク質、低分子、例えばＤＮＡもしくはＲＮＡなどの核酸、または細胞もしくはその亜集団の量を測定するための全ての公知の方法によって達成され得る。該方法は、免疫測定法および様々なサンドイッチアッセイ、競争的アッセイ、また他のアッセイのフォーマット中のラベルされた分子を利用し得る方法を含む。このようなアッセイは、好ましくは、測定されるＳＨ２Ｂ３またはその遺伝子発現を特異的に認識する例えば抗体などの検出試薬に基づいている。検出試薬は、ＳＨ２Ｂ３の存在または非存在を示すシグナルを直接的または間接的のどちらかで生成することができるであろう。さらに、シグナル強度は、好ましくは、サンプル中に存在するＳＨ２Ｂ３の量に直接的または間接的に（例えば反比例的に）相関し得る。さらなる適切な方法は、例えばその正確な分子量またはＮＭＲスペクトルなどのＳＨ２Ｂ３に特異的な物理的または化学的特性を測定することを含んでいる。これらの方法は、好ましくは、バイオセンサー、免疫測定法、ＦＡＣＳ分析、バイオチップに連結された光学装置、例えば質量分析器、ＮＭＲ分析器またはクロマトグラフィー装置などの分析装置を含む。さらに、該方法は、マイクロプレートＥＬＩＳＡベースの方法、完全に自動化されたまたはロボティックな免疫測定法、酵素コバルト結合分析、およびラテックス凝集分析を含む。
【００１８】
好ましくは、ＳＨ２Ｂ３またはその遺伝子発現の量をそれぞれ測定することは、（ａ）細胞応答を引き出すことのでき、その強度が適切な時間のあいだＳＨ２Ｂ３の量を示すことができる例えば血液細胞などの細胞を接触させる工程、（ｂ）細胞応答を測定する工程を含む。細胞応答を測定するために、サンプルまたは処理されたサンプルが、好ましくは、細胞培養液へと添加され、そして、細胞内応答または細胞外応答が測定される。細胞応答としては、測定可能なレポーター遺伝子の発現、または、例えばペプチド、ポリペプチドまたは低分子などの物質の分泌が挙げられる。発現または物質は、ＳＨ２Ｂ３の量と相関する強度シグナルを作製するであろう。
【００１９】
また好ましくは、ＳＨ２Ｂ３の量を測定することは、サンプル中のＳＨ２Ｂ３から得られ得る特異的なシグナルの強度を測定する工程を含む。上述されるように、このようなシグナルは、マススペクトルにおいて観察されるＳＨ２Ｂ３に特異的なｍ／ｚ変数で観察される、またはＳＨ２Ｂ３に特異的なＮＭＲスペクトルで観察されるシグナル強度であり得る。
【００２０】
本明細書において使用される「量（amount）」との用語は、ＳＨ２Ｂ３の絶対量、ＳＨ２Ｂ３の相対量または濃度、および、それに相関するまたはそれから導かれ得る任意の値またはパラメータを包含する。このような値またはパラメータは、例えば、マススペクトルまたはＮＭＲスペクトルにおける強度値などの、直接的な測定によって該ペプチドから得られる、全ての特異的な物理的または化学的特性由来のシグナル強度値を含む。さらに、本明細書中で特定される、間接的な測定によって得られる全ての値またはパラメータ、例えば、ペプチドに応答して生物学的読み出しシステムから決定される応答レベル、または、特異的に結合したリガンドから得られるシグナル強度などが含まれる。上述の量またはパラメータに相関している値はまた、全ての標準的な数学的操作によって得られ得ること、および、次数なしに、例えば本明細書中で記載される評価システムなどにおいて、使用され得ることが理解されるであろう。
【００２１】
本発明の方法において意味される分類は、手動でまたはコンピューターに支援されて実行され得る。コンピューター支援の分類のために、測定された量の値は、コンピュータープログラムによってデータベース内に保管されている適切な参照に対応する値と比較され得る。コンピュータープログラムは、さらに、比較の結果を評価し得る、すなわち、適切な出力フォーマットで所望の評価を自動的に提供し得る。好ましくは、このような評価は、機械学習（ＭＬ）によって行われる。測定値と参照値との比較に基づいて、例えば、心臓幹細胞治療後の心臓の機能改善などの応答を予測することが可能である。特には、高い確からしさ（すなわち被検体がレスポンダーであろうこと）または低い確からしさ（すなわち、被検体がノンレスポンダーであろうこと）があるのか、または被検体が両価性であるのかを分類しおよび予測することが可能であろう。したがって、参照値は、比較される量のあいだの相違または類似性のどちらかがこれらの試験の被検体を同定することを可能とするように選択される。
【００２２】
本明細書中で使用される用語「参照（reference）」とは、被験体を、治療から恩恵を受けることが期待され得る被検体の群または恩恵のある治療が期待できない被検体の群のどちらかの群または両価性である被検体へと振り分けることを可能にするＳＨ２Ｂ３の量に基づいた値、閾値または差を意味する。
【００２３】
用語「サンプル（sample）」とは、体液のサンプル、および、好ましくは、血液（全血）、血漿または血清のサンプルを意味する、しかしながら、該用語はまた、上述の全血、血漿、または血清から、例えば部分精製などによって得られる例えば血液、血漿または血清の画分などの例えば前処置工程などによって得られる全てのサンプルを包含する。
【００２４】
本発明のさらに好ましい態様は、以下の記載とともに従属クレームから導かれ、ここで、ある種のカテゴリーの特許クレームは異なるカテゴリーの従属クレームによって形成され得、および、種々の実施例の特徴は、新しい実施例へと組み合わせられ得る。上記および下記でなされた用語の定義および説明は、本明細書および添付のクレーム中で記載される全ての実施例に適切に適用されることが理解されるべきである。以下において、本発明の方法の具体的な実施形態がさらに特定される。
【００２５】
好ましい実施形態において、ＳＨ２Ｂ３は、骨髄応答および免疫応答の予測のための診断において使用される。用語「診断（diagnosis）」は好ましくは、ｉｎ  ｖｉｔｒｏ／ｅｘ  ｖｉｖｏ診断を意味している。
【００２６】
本明細書において使用される用語「予測すること（predicting）」は、確からしさであって、それに基づいて試験体が、例えば骨髄応答および／または免疫応答などから恩恵を受けるであろうという確からしさを評価することを意味する。本発明にしたがって行われる予測は、確からしさが高く、および、したがって、例えば被検体の例えば心臓システムなどの機能的改善が起こることが期待されているかどうか、または、確からしさが治療の成功が両価的であるくらいであるか、または、確からしさが低く、および、したがって、被検体での機能的改善が起こらないであろうことが期待されるのかどうか、を評価することを可能にする。
【００２７】
当該技術分野における当業者によって理解されるであろうように、このような評価は、通常、診断される被検体の１００％について正確であることは意図されない。しかしながら、用語は、統計的に有意な割合の被検体に対して正確であることを要件としている（例えばコホート研究におけるコホート）。割合が統計的に有意であるかどうかは、当該技術分野における当業者によって困難なしに、例えば信頼区間の決定、ｐ値の決定、Ｓｔｕｄｅｎｔのｔ検定、Ｍａｎｎ−Ｗｈｉｔｎｅｙ検定などの様々な公知の統計評価ツールを用いて決定され得る。詳細は、例えば、Dowdy and Wearden, Statistics for Research, John Wiley & Sons, New York 1983などで見ることができる。優位には、本発明の方法は、共分散分析（ＡＮＣＯＶＡ）および／または２標本検定を介して行われ得る分類を含み得る。
【００２８】
好ましくは、ＳＨ２Ｂ３遺伝子の発現は、ＲＮＡレベルで、より好ましくはｍＲＮＡレベルで定量的に検出され、これにより、ＳＨ２Ｂ３遺伝子発現の迅速かつ正確な測定が可能である。診断マーカーとしての使用のためのＳＨ２Ｂ３遺伝子発現は、ヒトまたは非ヒトＳＨ２Ｂ３全配列の天然のバリアントを包含するだけでなく、例えばwww.uniprot.org/uniprot/Q9UQQ2もしくはO09039またはwww.genecards.org/cgi-bin/carddisp.pl?gene=SH2B3に示されているようなその配列の一部およびそれらの修飾物をも包含する。特には、例えば全血、ＣＤ１４単球、ＣＤ３３骨髄細胞、ＢＤＣＡ４樹状細胞、ＣＤ５６ＮＫ細胞、ＣＤ４Ｔ細胞、ＣＤ８Ｔ細胞などである、体液および／または組織および／または細胞中のＳＨ２Ｂ３ｂの遺伝子発現パターンもまた決定され得る。しかしながら、ＳＨ２Ｂ３遺伝子の発現または遺伝子パターンは、代わりにまたは追加で、タンパク質レベルにおける間接的な方法によって、例えば、ＳＨ２Ｂ３へと結合する抗体を介した検出などによって、決定されてもよい。
【００２９】
好ましい実施形態において、本発明は、骨髄性幹（前駆）細胞または非骨髄性幹（前駆）細胞および／または血液細胞および／または免疫細胞および／または血管細胞および／または組織細胞の増殖および炎症応答の予測のための診断におけるＳＨ２Ｂ３に関連する。
【００３０】
さらに好ましい実施形態は、インテグリンレセプターまたはエリスロポエチン（ＥＰＯ）レセプターまたは幹細胞因子（ＣＤ１０５）またはＶＥＧＦ−ＲＥＣ（ＣＤ３０９）または幹細胞増殖因子（ＣＤ１１７）またはノッチレセプターの内皮活性化または抑制の発現の予測のための診断マーカーとしての使用のためのＳＨ２Ｂ３に関する。
【００３１】
本明細書において使用される用語「インテグリンレセプター（Integrin Receptor）」は、細胞−細胞外マトリックス（ＥＣＭ）接着を可能にする膜貫通レセプターを意味する。リガンドの結合の際、インテグリンは、例えば細胞サイクルの調節、細胞内の細胞骨格の組織化、および細胞膜への新規レセプターの移動などの細胞シグナルを媒介するシグナル伝達経路を活性化する。
【００３２】
本明細書において使用される用語「エリスロポエチン（Erythropoeitin、ＥＰＯ）」は、サイトカインである溶解性のポリペプチドを意味する。これは、典型的には低酸素条件下で腎臓細胞によって産生される。
【００３３】
好ましくは、ＥＰＯは、例えばYanagawa 1984, J. Biol. Chem. 259(5): 2707-2710などに記載されているように、ヒトＩＬ−６を意味する。より好ましくは、ヒトＩＬ−６は、Ｇｅｎｂａｎｋの登録番号p01588.1, GI: 119526で示されるようなアミノ酸配列を有する。該用語はまた、上記のヒトＥＰＯポリペプチドのバリアントも包含する。このようなバリアントは、上記のＥＰＯポリペプチドと少なくとも同一の必須の生物学的および免疫学的特性を有する。具体的には、それらは、本明細書において言及される同一の特異的アッセイによって、例えば該ＥＰＯポリペプチドを特異的に認識するポリクローナルまたはモノクローナル抗体を用いたＥＬＩＳＡアッセイなどによってそれらが検出可能である場合、同一の必須の生物学的および免疫学的特性を共有する。さらに、本発明にしたがって言及されるバリアントは、少なくとも一つのアミノ酸の置換、欠失および／または付加に起因して異なるアミノ酸配列を有し得、ここで、バリアントのアミノ酸配列は依然として、好ましくは、特異的なＩＬ−６アミノ酸配列と少なくとも５０％、６０％、７０％、８０％、８５％、９０％、９２％、９５％、９７％、９８％、または９９％同一である。バリアントは、アレル多型、スプライシングバリアント、または任意の他の種に特異的なホモログ、パラログ、またはオルソログであり得る。さらに、本明細書において言及されるバリアントは、特異的なＥＰＯまたは上述の種類のバリアントのフラグメントを、これらのフラグメントが上記で記載されるような必須の免疫学的および生物学的特性を有している限り、包含する。このようなフラグメントは、例えば、ＥＰＯの分解生成物などであり得る。バリアントは、それらが本明細書で言及された同一の特異的なアッセイによって、例えばＥＰＯポリペプチドを特異的に認識するポリクローナルまたはモノクローナル抗体を用いたＥＬＩＳＡアッセイなどによって検出可能である場合に同一の必須の生物学的および免疫学的特性を有しているとみなされる。好ましいアッセイは、以下の実施例に記載されている。例えばリン酸化またはミリスチル化などの翻訳語修飾に起因して異なるバリアントもさらに含まれる。
【００３４】
用語「ＶＥＧＦ−ＲＥＣ（ＣＤ３０９）」は、キナーゼ挿入ドメインレセプター（ＫＤＲ、タイプIII受容体型チロシンキナーゼ）を意味し、これは、血管内皮増殖因子受容体２（ＶＥＧＦＲ−２）とも知られている。ＫＤＲは、それをエンコードしているヒト遺伝子である。ＫＤＲは、ＣＤ３０９（分化抗原群（cluster of differentiation）  ３０９）とも称されている。ＫＤＲはまた、Ｆｌｋ  １（Fetal Liver Kinase 1）とも知られている。
【００３５】
本明細書において使用される用語「幹細胞（stem cell）」とは、他のタイプの幹細胞へと分化することのできる生物学的細胞を意味し、同じタイプの幹細胞をさらに産生するために分裂し得る。これらは、多細胞生物においてみられる。幹細胞因子（ＣＤ１０５）はまた、エンドグリン（endoglin）としても知られており、幹細胞において発現している主な細胞膜糖タンパク質である。
【００３６】
用語「幹細胞因子レセプター（stem cell factor receptor）（ＳＣＦＲ）」はまた、がん原遺伝子ｃ−ＫｉｔまたはチロシンプロテインキナーゼＫｉｔまたはＣＤ１１７としても知られており、ヒトにおいてはＫＩＴ遺伝子によってエンコードされている受容体型チロシンキナーゼタンパク質である。種々のアイソフォームをエンコードする複数の転写物バリアントがこの遺伝子に関して発見されている。
【００３７】
用語「ノッチ受容体（Notch receptor）」とは、ノッチタンパク質、例えばＮＯＴＣＨ１、ＮＯＴＣＨ２、ＮＯＴＣＨ３およびＮＯＴＣＨ４を意味している。ノッチ受容体は、一回膜貫通タンパクである。短い細胞外領域を含むより小さなノッチタンパク質とのカルシウム依存性の非共有的な相互作用に関連する大きな細胞外部分、単一の膜貫通部分、および小さな細胞内領域を含むヘテロオリゴマーである。
【００３８】
次の好適な実施形態は、インテグリンレセプターもしくはエリスロポエチンレセプターもしくは幹細胞因子（ＣＤ１０５）もしくはＶＥＧＦ−ＲＥＣ（ＣＤ３０９）もしくはＣＸＣＲ４（ＣＤ１８４）もしくは幹細胞増殖因子（ＣＤ１１７）もしくはノッチ受容体の骨髄性幹（前駆）細胞（ＭＳＣのＣＤ１３３＋）活性化または抑制の発現の予測のための診断マーカーとしての使用のためのＳＨ２Ｂ３に関する。
【００３９】
用語「骨髄性幹細胞活性の発現（expression of bone marrow stem cell activation）」とは、骨髄の間葉系幹細胞（ＭＳＣ）上でのＣＤ１３３の発現（＝ＣＤ１３３＋）を意味する。「ＣＤ１３３」は、抗原であり、ヒトにおいてはＰＲＯＭ１遺伝子によってエンコードされているＰｒｏｍｉｎｉｎ−１としても知られている。これは、ペンタスパン膜貫通糖タンパク質（5-transmembrane、５−ＴＭ）のうちの一つであり、細胞突起に特異的に局在している。
【００４０】
用語「ＣＸＣＲ−４」は、ＣＸＣケモカインレセプター４型を意味し、融合体またはＣＤ１８４（分化抗原群  １８４）としても知られており、ヒトにおいてはＣＸＣＲ４遺伝子によってエンコードされているタンパク質である。
【００４１】
さらにまた好適な実施例は、ＥＰＯおよびＶＥＧＦの末梢血液への遊走の予測のための診断マーカーとしての使用のためのＳＨ２Ｂ３を包含する。
【００４２】
本明細書において使用される用語「血管内皮増殖因子（ＶＥＧＦ）」とは、血管新生、脈管形成、および血管透過性を刺激する溶解性ポリペプチド増殖因子を意味する。これは様々なセルタイプで産生される。これらは、５つの異なるＶＥＧＦポリペプチド、ＶＥＧＦ−Ａ、プラセンタ増殖因子（ＰＧＦ）、ＶＥＧＦ−Ｂ、ＶＥＧＦ−Ｃ、およびＶＥＧＦ−Ｄである。本明細書において使用される場合、好ましくは、ＶＥＧＦ−Ａが意図される。ＶＥＧＦ−Ａに関して公知の択一的なスプライシングの結果得られる様々なアイソフォームが存在する。最も知られているものは、ＶＥＧＦ121、ＶＥＧＦ121ｂ、ＶＥＧＦ145、ＶＥＧＦ165、ＶＥＧＦ165ｂ、ＶＥＧＦ189、およびＶＥＧＦ206である。
【００４３】
好ましくは、ＶＥＧＦは、Tischer 1991, J. Biol. Chem. 266 (18): 11947-11954に記載されているヒトＶＥＧＦ−Ａ（ＶＥＧＦ−Ａの最も長いアイソフォームとして開示されている）を意味する。アミノ酸配列に関しては、例えば、Ｇｅｎｂａｎｋ受理番号NP_001020537.2, GI: 76781480も参照のこと（Ｇｅｎｂａｎｋは、www.ncbi.nlm.nih.gov/entrezで、ＮＣＢＩ（アメリカ合衆国）からアクセス可能である）。用語はまた、上記のヒトＶＥＧＦポリペプチドのバリアントを包含する。このようなバリアントは、上記のＶＥＧＦポリペプチドと同一の必須の生物学的および免疫学的特性を少なくとも有する。具体的には、それらは、本明細書において言及される同一の特異的アッセイによって、例えば該ＶＥＧＦポリペプチドを特異的に認識するポリクローナルまたはモノクローナル抗体を用いたＥＬＩＳＡアッセイなどによってそれらが検出可能である場合、同一の必須の生物学的および免疫学的特性を共有する。さらに、本発明にしたがって言及されるバリアントは、少なくとも一つのアミノ酸の置換、欠失および／または付加に起因して異なるアミノ酸配列を有し得、ここで、バリアントのアミノ酸配列は依然として、好ましくは、特異的なＶＥＧＦポリペプチドのアミノ酸配列と少なくとも５０％、６０％、７０％、８０％、８５％、９０％、９２％、９５％、９７％、９８％、または９９％同一である。２つのアミノ酸配列のあいだの同一性の程度は当該技術分野において公知であるアルゴリズムによって決定され得る。好ましくは、同一性の程度は、比較ウインドウにわたって最適にアラインされた２つの配列を比較することによって決定されるものであり、ここで、比較ウインドウ内のアミノ酸配列のフラグメントは、最適なアラインメントのための参照配列（すなわち付加または欠失を含んでいない）と比較して、付加または欠失（例えばギャップまたはオーバーハングなど）を含んでいてもよい。パーセンテージは、一致した位置の数を得るために両方の配列において同一のアミノ酸残基が存在している位置の数を決定すること、一致した位置の数を比較ウインドウ内の位置の総数で除算すること、および配列相同性のパーセンテージを得るために結果に１００を乗じることによって算出される。比較のために最適な配列のアラインメントは、Smith 1981, Add. APL. Math. 2:482に開示されている局地的相同性アルゴリズムによって、Needleman 1970, J. Mol. Biol. 48:443の相同性アライメントアルゴリズムによって、Pearson 1988, Proc Natl, Acad. Sci. (USA) 85:2444の類似性サーチの方法によって、これらのアルゴリズムのコンピューター処理された実行（Wisconsin Genetics Software Package, Genetics Computer Group (GCG), 575 Science Dr., Madison WIのＧＡＰ、ＢＥＳＴＦＩＴ、ＢＬＡＳＴ、ＦＡＳＴ、ＰＡＤＴＡ、およびＴＦＡＳＴＡ）によって、または目視での検査によって行われ得る。２つの配列が比較のために同定された場合、ＧＡＰおよびＢＥＳＴＦＩＴが好ましくは、それらの最適なアライメントおよびしたがって同一性の程度を決定するために用いられる。好ましくは、ギャップ重みとして５．００のデフォルト値およびギャップ重み長さとして０．３０のデフォルト値が使用される。上記で言及されたバリアントは、アレル多型、または任意の他の種に特異的なホモログ、パラログ、またはオルソログであり得る。さらに、本明細書において言及されるバリアントは、特定のＶＥＧＦポリペプチドまたは上述のタイプのバリアントのフラグメントまたはサブユニットを、これらのフラグメントが上記で記載されるような必須の免疫学的および生物学的特性を有している限り、包含する。このようなフラグメントは、例えばＶＥＧＦポリペプチドの分解生成物などであってもよい。バリアントは、それらが本明細書で言及された同一の特異的なアッセイによって、例えば該ＶＥＧＦポリペプチドを特異的に認識するポリクローナルまたはモノクローナル抗体を用いたＥＬＩＳＡアッセイなどによって検出可能である場合に同一の必須の生物学的および免疫学的特性を有しているとみなされる。
【００４４】
別の好ましい実施形態にしたがい、ＳＨ２Ｂ３は、炎症性サイトカイン（例えば、ＴＮＦアルファ、ＩＰ−１０、インターロイキンなど）の末梢血液中への遊走の予測のための診断用マーカーとして使用される。
【００４５】
別の好ましい実施形態は、ＥＰＯおよびＶＥＧＦの末梢血液中への遊走に対する（幹）細胞応答の予測のための診断用マーカーとしての使用のためのＳＨ２Ｂ３に関する。
【００４６】
次の実施形態は、炎症性サイトカインまたは増殖因子の末梢血液中への遊走に対する（幹）細胞応答の予測のための診断用マーカーとしての使用のためのＳＨ２Ｂ３に関する。
【００４７】
さらなる実施形態は、末梢血液中における、薬剤、栄養素、（ナノ）粒子、マイクロ−ＲＮＡ，タンパク質、融合溶液、および／または有毒な試薬の末梢血液レベルへの（幹）細胞応答の予測のための診断用マーカーとしての使用のためのＳＨ２Ｂ３に関する。
【００４８】
次の実施形態によれば、ＳＨ２Ｂ３は、特には、骨髄性幹細胞（ＣＤ１３３＋）増殖および末梢のＶＥＧＦ−ＲＥＣへ結合するＥＰＣ（ＣＤ１３３＋、ＣＤ１１７＋、ＣＤ３４＋）の遊走による、血管新生刺激の予測のための診断用マーカーとして使用される。
【００４９】
さらに別の好ましい実施形態は、特には、骨髄性幹細胞（ＣＤ１３３＋）増殖および血小板の遊走による、巨核球刺激または抑制の予測のための診断用マーカーとしての使用のためのＳＨ２Ｂ３に関する。
【００５０】
次の実施形態によれば、ＳＨ２Ｂ３は、特には、骨髄性幹細胞（ＣＤ１３３＋）増殖および赤血球、骨髄性細胞およびリンパ球の遊走による、血管新生増加刺激または抑制の予測のための診断用マーカーとして使用される。
【００５１】
さらなる実施形態は、内皮または脈管前駆細胞またはＭＳＣの増殖刺激または増殖の抑制の予測のための診断用マーカーとしての使用のためのＳＨ２Ｂ３に関する。
【００５２】
次の実施形態は、幹細胞因子（ＳＣＦ）またはインテグリンレセプターまたは細胞接着レセプターの内皮活性化の発現の予測のための診断用マーカーとしての使用のためのＳＨ２Ｂ３を扱う。
【００５３】
別の実施形態は、エリスロポエチンレセプターまたはＶＥＧＦ−ＲＥＣの内皮活性化の発現の予測のための診断用マーカーとしての使用のためのＳＨ２Ｂ３を扱う。
【００５４】
さらなる別の実施形態は、白血球またはリンパ球インテグリンレセプター発現の予測のための診断用マーカーとしての使用のためのＳＨ２Ｂ３に関する。
【００５５】
さらなる実施形態は、末梢組織の修復および酸素化の予測のための診断用マーカーとしての使用のためのＳＨ２Ｂ３に関する。
【００５６】
別の実施形態は、骨髄応答または骨髄不全または骨髄性幹細胞増殖応答または血液細胞の骨髄遊走の予測のための診断用マーカーとしての使用のためのＳＨ２Ｂ３を包含する。
【００５７】
さらなる実施形態は、血液細胞、免疫細胞、造血（ＣＤ１３３＋）幹細胞、骨髄細胞または組織細胞または内皮細胞または非造血性幹細胞の炎症応答の予測のための診断用マーカーとしての使用のためのＳＨ２Ｂ３を包含する。
【００５８】
用語「造血幹細胞（hematopoietic stem cell）、ＨＳＣ」は、他の血液細胞を増加させる幹細胞を意味する。このプロセスは造血と称される。このプロセスは、赤色骨髄中、大部分の骨の中心部で起こる。
【００５９】
別の実施形態は、骨髄性幹細胞増殖およびＥＰＣ  ＣＤ１３３+の遊走の予測のための診断用マーカーとしての使用のためのＳＨ２Ｂ３に関する。
【００６０】
さらなる他の実施形態は、末梢性虚血および炎症の処置における使用のための、診断用マーカーとしての使用のためのＳＨ２Ｂ３に関する。
【００６１】
別の実施形態によれば、ＳＨ２Ｂ３は、血管修復、心筋再生およびアテローム性動脈硬化の治療における診断用マーカーとして使用される。
【００６２】
さらに別の実施形態は、心筋梗塞、虚血性心筋症、および冠動脈疾患の後の心不全を患う被検体の処置における使用のためのＳＨ２Ｂ３に関する。
【００６３】
本明細書中において使用される用語「心不全（heart failure）」は、左心不全、右心不全、または両室不全を含む心臓の任意の機能障害を意味する。典型的には、本明細書中で言及される用語心不全は、減少された駆出分画、例えば顕著に減少されたＬＶＥＦ（左室駆出率）を結果としてもたらす左心不全である。心不全のさらなる徴候は、臨床医にとっては広く公知である。本明細書において言及される心不全は、急性型および慢性型の、ならびに、全てのステージの重症度の心不全、例えば、Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ  Ｈｅａｒｔ  Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ（ＮＹＨＡ）の分類システム、ＮＹＨＡ  Ｉ〜ＩＶにしたがった全てのステージ左心不全など、を包含する。
【００６４】
次の実施形態は、ＬＶＥＦ修復の治療のための診断用マーカーとして使用のためのＳＨ２Ｂ３に関する。
【００６５】
本明細書において使用される用語「回復（recovery）」とは、該ＬＶＥＦを試験体の処置の前および後で比較した際に観察される心臓のＬＶＥＦの増加を意味する。好ましくは、顕著な増加とは、処置後に観察される５％以上のＬＶＥＦの増加である。機能向上を見出すために追加で考慮され得るさらなるパラメータは、１０％より大きい全灌流欠損サイズの減少、ＭＩＢＩ  ＳＰＥＣＴで定量された左室収縮終期容積の１０％より大きい減少、および経胸壁エコー法によって測定される収縮期最高流速の１０％より大きい増加である。
【００６６】
さらなる次の実施形態は、心臓、血管、または非心血管性の組織再生、応答している患者の選択、および血管新生応答のモニタリングにおける診断用マーカーとしての使用のためのＳＨ２Ｂ３を包含する。
【００６７】
本明細書において使用される用語「心臓、血管、または心血管性の組織再生（cardiac, vascular or cardiovascular tissue regeneration）」とは、心臓、血管、または心血管性システムに関連する再生および／または疾患の処置および／または改善を含む。
【００６８】
さらなる好ましい実施形態は、虚血性疾患、発作、末梢性虚血、（多発）外傷、蘇生、ショック、敗血性炎症反応症候群（ＳＩＲＳ）、および／または敗血症のための診断用マーカーとしての使用のためのＳＨ２Ｂ３に関する。
【００６９】
優位な、診断用マーカーとしての使用のためのＳＨ２Ｂ３は、感染性疾患、ウイルス性疾患、被爆、化学療法、薬物副作用、および／またはがんを患う被検体の処置のために使用される。
【００７０】
本発明による診断用マーカーとしての使用のためのＳＨ２Ｂ３は、ヒト被検体における使用に非常に優位であるが、ヒトに限定されるわけではなく、非ヒトである対象に対しても用いられ得る。
【００７１】
好ましい方法は、被検体がレスポンダーであるかまたはノンレスポンダーであるかを予測することに関連し、および、以下の工程：
（ｉ）被験体からの血液サンプリング、
（ii）好ましくはＲＴ−ＰＣＲおよび／またはｑＰＣＲによる、ＳＨ２Ｂ３遺伝子発現の測定、
（iii）測定された量をベースライン値および／または参照値と比較すること、
（iv）レスポンダーまたはノンレスポンダーへの分類
を含む。
【００７２】
好ましい方法は、優位には、ｉｎ  ｖｉｔｒｏ／ｅｘ  ｖｉｖｏ診断に使用され、および、医学的使用のために使用される。
【００７３】
好ましい方法は、被検体の組織サンプリングを含む。組織サンプリングは、あるいは、血液サンプリングのために行われてもよい。
【００７４】
好ましい方法にしたがって、血液および／または組織サンプルは、前処理工程によって得られ、具体的には、例えば部分的精製などによって血液、血漿または血清が得られる。
【００７５】
別の好ましい方法は、骨髄性幹細胞レスポンダー対ノンレスポンダーの分類を包含する。
【００７６】
さらなる好ましい方法は、炎症レスポンダー対ノンレスポンダーの分類を包含する。
【００７７】
次の好ましい実施形態によれば、好ましい方法は、冠動脈疾患、アテローム性動脈硬化、セリアック病、一型糖尿病、感染性疾患、自己免疫疾患、および／または関節性リウマチを患っている被検体を扱う。
【００７８】
好ましい実施形態によれば、方法は、骨髄性幹（前駆）細胞または非骨髄性幹（前駆）細胞および／または血液細胞および／または免疫細胞および／または血管細胞および／または組織細胞の増殖および炎症反応の予測のための診断において使用される。
【００７９】
さらなる好ましい方法は、インテグリンレセプターもしくはエリスロポエチン（ＥＰＯ）レセプターもしくは幹細胞因子（ＣＤ１０５）もしくはＶＥＧＦ−ＲＥＣ（ＣＤ３０９）もしくは幹細胞増殖因子（ＣＤ１１７）もしくはノッチ受容体の内皮活性化または抑制の発現の予測のために使用される。
【００８０】
次の好ましい方法は、インテグリンレセプターもしくはエリスロポエチンレセプターもしくは幹細胞因子（ＣＤ１０５）もしくはＶＥＧＦ−ＲＥＣ（ＣＤ３０９）もしくはＣＸＣＲ４（ＣＤ１８４）もしくは幹細胞増殖因子（ＣＤ１１７）もしくはノッチ受容体の骨髄性幹（前駆）細胞（ＭＳＣのＣＤ１３３＋）活性化または抑制の発現の予測のために使用される。
【００８１】
さらにより好ましい方法は、末梢血液へのＥＰＯおよびＶＥＧＦの遊走の予測のために使用される。
【００８２】
別の好ましい方法によれば、炎症性サイトカイン（例えばＴＮＦ−アルファ、ＩＰ−１０、インターロイキンなど）の末梢血液への遊走の予測のために使用される。
【００８３】
別の好ましい方法は、ＥＰＯおよびＶＥＧＦの末梢血液への遊走に対する（幹）細胞応答の予測のために使用される。
【００８４】
次の方法は、炎症性サイトカインまたは成長因子の末梢血液への遊走に対する（幹）細胞応答の予測のために使用される。
【００８５】
さらなる方法は、末梢血液中の薬剤、栄養素、（ナノ）粒子、マイクロ−ＲＮＡ，タンパク質、融合溶液、および／または有毒な試薬の末梢血液レベルに対する（幹）細胞応答の予測のために使用される。
【００８６】
次の好ましい実施形態によれば、方法は、特には、骨髄性幹細胞（ＣＤ１３３＋）増殖および末梢のＶＥＧＦ−ＲＥＣへ結合するＥＰＣ（ＣＤ１３３＋、ＣＤ１１７＋、ＣＤ３４＋）の遊走による、血管新生刺激の予測のために使用される。
【００８７】
さらに別の好ましい方法は、特には、骨髄性幹細胞（ＣＤ１３３＋）増殖および血小板の遊走による、巨核球刺激または抑制の予測のために使用される。
【００８８】
次の実施形態によれば、方法は、特には、骨髄性幹細胞（ＣＤ１３３＋）増殖および赤血球、骨髄性細胞およびリンパ球の遊走による、造血増大刺激または増大の抑制の予測のために使用される。
【００８９】
さらなる方法は、内皮または脈管前駆細胞またはＭＳＣの増殖刺激または増殖の抑制の予測のために使用される。
【００９０】
次の好ましい方法は、幹細胞因子（ＳＣＦ）またはインテグリンレセプターまたは細胞接着レセプターの内皮活性化の発現の予測のために使用される。
【００９１】
別の方法は、エリスロポエチンレセプターまたはＶＥＧＦ−ＲＥＣの内皮活性化の発現の予測のために使用される。
【００９２】
さらなる次の方法は、白血球またはリンパ球インテグリンレセプター発現の予測のために使用される。
【００９３】
さらなる方法は、末梢組織の修復および酸素化の予測のために使用される。
【００９４】
別の方法は、骨髄応答または骨髄不全または骨髄性幹細胞増殖応答または血液細胞の骨髄遊走の予測のために使用される。
【００９５】
さらなる方法は、血液細胞、免疫細胞、造血（ＣＤ１３３＋）幹細胞、骨髄細胞または組織細胞または内皮細胞または非造血性幹細胞の炎症応答の予測のために使用される。
【００９６】
さらに別の方法は、骨髄性幹細胞増殖およびＥＰＣ  ＣＤ１３３+の遊走の予測のために使用される。
【００９７】
さらなる方法は、末梢性虚血および炎症を処置するために使用される。
【００９８】
別の実施形態によれば、方法は、血管修復、心筋再生およびアテローム性動脈硬化の治療において使用される。
【００９９】
さらなる別の方法は、心筋梗塞、虚血性心筋症、および冠動脈疾患の後の心不全を患う被検体の処置のために使用される。
【０１００】
次の方法は、ＬＶＥＦ修復の治療のために使用される。
【０１０１】
さらに次の方法は、心臓、血管、または非心血管性の組織再生、応答している患者の選択、および血管新生応答のモニタリングにおいて使用される。
【０１０２】
さらなる好ましい方法は、虚血性疾患、発作、末梢性虚血、（多発）外傷、蘇生、ショック、敗血性炎症反応症候群（ＳＩＲＳ）、および／または敗血症を患う被検体の処置のために使用される。
【０１０３】
さらなる別の方法は、感染性疾患、ウイルス性疾患、被爆、化学療法、薬物副作用、および／またはがんを患う被検体の処置のために使用される。
【０１０４】
優位には、本発明の方法は、共分散分析（ＡＮＣＯＶＡ）および／または２標本検定を介して行われ得る分類を含み得る。
【０１０５】
本発明のさらなる特徴は、クレームおよび図面と組み合わされて実施例から導き出される。単一の特徴は、具体的な実施例において、他の特徴と組み合わされて実行されてもよく、本発明が主張する範囲を限定するものではない。本発明による以下の実施例の記載は、以下の図面に関連する。
【０１０６】
ここで、図１は、レスポンダーおよびノンレスポンダーの末梢血液中でのＳＨ２Ｂ３遺伝子発現分析を示している。
【実施例】
【０１０７】
実施例１
心筋内ＣＤ１３３+精製自己骨髄性幹細胞（ＢＭＳＣ）移植が、急性ＰＣＩおよび二次的な冠動脈バイパス術による冠動脈血行再建で順に処置された、ＳＴ上昇型心筋梗塞（ＳＴＥＭＩ）および冠動脈３枝病変疾患の後の、左室駆出率（ＬＶＥＦ）の低下を伴う左室心機能の回復のための冠動脈バイパスグラフト（ＣＡＢＧ）血管再生への補助的方法として調べられた。安全性および有効性に関する先のトライアル（フェーズＩ、IIａ、IIｂ）は、向上された左室駆出率（ＬＶＥＦ）、および、補助的なＣＤ１３３+  ＢＭＳＣ処置の冠動脈血管再建術への臨床的安全性を示した。無作為化二重盲検プラセボ対照臨床試験が、臨床的安定性、有効性、および、インターベンションＣＤ１３３+  ＢＭＳＣ移植による心臓の修復機序と関連するＣＤ１３３+骨髄性幹細胞を同定するためのバイオマーカーを評価するためにデザインされた。
【０１０８】
無作為化二重盲検プラセボ対照第III層臨床試験が、心筋再生の誘導のための冠動脈バイパス術（ＣＡＢＧ）と組み合わされた心筋内ＣＤ１３３+骨髄性幹細胞処置の臨床的安定性および有効性を評価するために行われた。
【０１０９】
デザイン：ＧＣＰ−ＩＣＨにしたがった多施設二重盲検無作為化プラセボ対照臨床試験。
【０１１０】
参加者：資格のある患者は、慢性虚血、冠動脈狭窄、および低下したＬＶＥＦ（２５〜５０％）をもつ梗塞後患者であった。
【０１１１】
介入：８２人の患者が、ＣＡＢＧ血管再生と組み合わせた、５ｍＬのプラセボまたは０．５〜５×１０6の精製自己ＣＤ１３３+骨髄性幹細胞の懸濁液の心筋内適用を受ける２つの群に無作為に選ばれた。
【０１１２】
結果：主要エンドポイントは、ＭＲＩで測定された６ｍ／０後のデルタ（Δ）ＬＶＥＦであった。
【０１１３】
発見：事前に定められた解析：全体での有効群（ｎ＝５８）はベースラインＬＶＥＦ３３．５±６．３％から９．６±１１．６％（ｐ＝０．００１）。プラセボ（ｎ＝３０）は８．２±２．１（−１１．２〜−４．５）、ｐ＜０．００１。ＣＤ１３３+群（ｎ＝２８）は１．１±１３．７  ＳＤ、Ｃｌ  −１６．７〜−６．１、ｐ＜０．００１。プラセボ／ＣＤ１３３+は、ΔＬＶＥＦにおいて差異がなかった（ｐ＝０．３５５）。ＣＤ１３３+はプラセボと比較して、梗塞サイズの減少（ｐ＝０．０２２）および生育不能組織の減少（ｐ＝０．０２２）で異なっていた。
事後解析：主要エンドポイントレスポンダー（Ｒ：ΔＬＶＥＦが５％以上）群は、ΔＬＶＥＦにおいて大きな増加を示した（１７．６％  ６か月／０、プラセボ対ＣＤ１３３+：＋１３．９対＋１９．１％、ｐ＝０．０６６）。ノンレスポンダー（ＮＲ）（ＬＶＥＦ＜５％  ６か月／０）（ＣＤ１３３+で３６％およびプラセボで４３．５％）は、末梢血液において、増加されたＳＨ２Ｂ３  ｍＲＮＡ発現（ｐ＝０．０３２片側ｐ値／ｐ＝０．０７３両側ｐ値、ＮＲ対Ｒ）、増加したＥＰＯ（ｐ＝０．０２、ＮＲ対Ｒ）の存在下の減少した血小板（ｐ＝０．００４、ＮＲ対Ｒ）およびＥＰＣ（ＮＲ対Ｒ、ＣＤ１３３＋１１７＋、ｐ＝０．０２７）によって術前に特徴づけられた。長期生存は、ＮＲにおいて低下した（カプランマイヤー法、Ｒ対ＮＲ、ＨＲ  ０．３、ｐ＝０．０６７）。機械学習を用いて、レスポンダーまたはノンレスポンダーの患者の区別を可能にする１０個の術前パラメータが同定された。
【０１１４】
ＳＨ２Ｂ３発現が、レスポンダーおよびノンレスポンダーの末梢血液中で分析された。全血サンプルが、冠動脈バイパスグラフト（ＣＡＢＧ）血管再生の前に２１人の患者から採取された。ＳＨ２Ｂ３の相対的な発現（ａ）および対応するΔＣＴ値（ｂ）が２−ΔΔＣＴ法を用いて算出された。全ての価は、平均の±ＳＥＭとしてならびにＧＡＰＤＨおよびＰＯＬＲ２Ａに対して正規化されて表された。ｎ＝１３（レスポンダー）、ｎ＝８（ノンレスポンダー）。ΔＣＴ値：ｐ＝０．０３３（両側ｔ検定）。得られたデータは、図１に示されている。結果は、ＳＨ２Ｂ３発現がレスポンダーに対してノンレスポンダーにおいて顕著に高かったことを示している。
【０１１５】
上記の臨床試験は末梢血液ＥＰＣ、血小板およびＳＨ２Ｂ３レベルと関連した心筋再生の重要な調節の証拠を示している。これは、高い応答性の患者の診断選択を可能とし、患者にとってテイラーメイドの再生医療へのアクセスを与える。
【０１１６】
実施例２
ＳＨ２Ｂ３遺伝子発現の測定が全血のサンプリング、その後のＲＴ−ＰＣＲによって行われた。
【０１１７】
【表１】
2020516301.tif 000003
【０１１８】
実施例３
末梢血液（ＥＤＴＡ血液）の未変性のサンプルが、ＬｉｇｈｔＣｙｃｌｅｒ（登録商標）  ４８０  システムII（Roche Deutschland Holding GmbH）を用いた定量リアルタイムＰＣＲに用いられた。
【０１１９】
１ｍＬの全血アリコット（−８０℃にて保存）からのＲＮＡの単離が、GeneJET（登録商標）Stabilized and Fresh Whole Blood RNA Kit（サーモフィッシャーサイエンティフィック社）を用いて行われた。逆転写反応が、High Capacity cDNA Reverse Transcription Kit（サーモフィッシャーサイエンティフィック社）を用いて行われた。ＲＴ−ＰＣＲが、StepOnePlus（登録商標）リアルタイムＰＣＲシステム（Applied Biosystems（登録商標））を用いて行われた。ｃＤＮＡ（それぞれの反応について３０ｎｇ）、ＴａｑＭａｎ（登録商標）Ｕｎｉｖｅｒｓａｌ  ＰＣＲ  Ｍａｓｔｅｒ  Ｍｉｘ（（サーモフィッシャーサイエンティフィック社）、およびＳＨ２Ｂ３  ＴａｑＭａｎ（登録商標）  Ｇｅｎｅ  Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  Ａｓｓａｙ（Ｈｓ０１０８１９５９＿ｇ１、サーモフィッシャーサイエンティフィック社）が用いられた。３回のテクニカルリプリケートが行われた。ＳＨ２Ｂ３の相対的発現比率を算出するために、ΔΔＣＴ方法が適用された。
【０１２０】
実施例４
未変性のヒト組織サンプルが、全血サンプルの代わりに用いられた。ＳＨ２Ｂ３の測定が、実施例２または３で記載されているようにＲＴ−ＰＣＲによって行われた。
【０１２１】
実施例５
培養されたヒトまたは非ヒト細胞および組織が、全血サンプルの代わりに用いられた。ＳＨ２Ｂ３の測定が、実施例２または３で記載されているようにＲＴ−ＰＣＲによって行われた。
【０１２２】
実施例６
遺伝子組み換えのヒトまたは非ヒト細胞、組織および器官が、全血サンプルの代わりに用いられた。ＳＨ２Ｂ３の測定が、実施例２または３で記載されているようにＲＴ−ＰＣＲによって行われた。
【０１２３】
略語
ＣＤ＝分化抗原群
ＣＡＢＧ＝冠動脈バイパスグラフト
ＢＭ＝骨髄
ＱＣ＝ＢＭから単離されたＣＤ１３３+内で行われる品質維持
ＬＶＥＦ＝左室駆出率
ＭＮＣ＝単核細胞
ＰＢ＝末梢血液
ＩＨＧ＝ＩＳＨＡＧＥガイドラインに従って行われる分析
ＥＰＣ＝内皮前駆細胞、ＥＰＣパネル、ＰＢ中で測定されるＣＤ
ＣＥＣ＝循環内皮細胞、ＣＥＣパネル、ＰＢ中で測定されるＣＤ
ＳＣＦ＝幹細胞因子
ＶＥＧＦ＝血管内皮増殖因子
ＶＥＧＦＲ２／ＫＤＲ／ＶＥＧＦ−ＲＥＣ＝血管内皮増殖因子レセプター２／キナーゼ挿入ドメインレセプター
【０１２４】
実施例７
末梢血液中の誘導されたＳＨ２Ｂ３発現の組織再生に対する影響が以下の表２に示されている。
【０１２５】
【表２】
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【０１２６】
ベースラインでのノンレスポンダー対レスポンダーにおける低下された骨髄刺激および血管新生応答の主要な特徴が以下の表３に示されている。
【０１２７】
【表３】
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【図１】
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【国際調査報告】
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