(57)【要約】  本発明は、広く知られたインスリンと共に１：１の比で産生される小タンパク質であるＣペプチドによる、血管炎症及びエラスチン修復に関与するタンパク質であるエラスチン受容体のこれまで見過ごされてきたロック・アンド・キー（ｌｏｃｋ−ａｎｄ−ｋｅｙ）活性化により、メタボリックシンドロームにおける炎症が増大することを示す。エラスチン受容体は、Ｃペプチド中及びその分解産物（ＰＧドメイン断片）中に見出されるアミノ酸のキーモチーフ（ＰＧドメイン）により活性化されるロックである。２つの間のこのロック・アンド・キー相互作用はこれまで誰にも発見されておらず、エラスチン受容体（エラスチンペプチド）の通常のキーのみならず、食後に血液中にグルコースが生じるたびにインスリンと共に産生されるペプチドであるＣペプチドがエラスチン受容体とロック・アンド・キー様式で相互作用するという発見を活用して、メタボリックシンドロームの治療のための新規のペプチドの新規の開発が提供される。
2020507623.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ヒトエラスチン受容体へのヒトＣペプチドの結合を調整することができる少なくとも１つのペプチドモチーフを付された、ヒト疾患の治療において使用するための単離された又は合成ペプチド。
【請求項２】
ペプチドが、少なくとも１つのヒトエラスチン受容体結合モチーフＧｘｘＰＧを有し、少なくとも１つのアミノ酸Ｑを有し、Ｇが１文字表記でアミノ酸グリシンを表し、Ｐがアミノ酸プロリンを表し、Ｑがアミノ酸グルタミンを表し、ｘが任意のアミノ酸を表し、ペプチドが５〜３０アミノ酸からなる、請求項１に記載の単離された又は合成ペプチド。
【請求項３】
５〜２０アミノ酸からなる、請求項１又は２に記載のペプチド。
【請求項４】
５〜１５アミノ酸からなる、請求項１又は２に記載のペプチド。
【請求項５】
５〜１２アミノ酸からなる、請求項１又は２に記載のペプチド。
【請求項６】
５〜９アミノ酸からなる、請求項１又は２に記載のペプチド。
【請求項７】
炎症の治療において使用するための、請求項２〜６のいずれか一項に記載のペプチド。
【請求項８】
１型糖尿病及び／又は末期２型糖尿病の治療において使用するための、請求項２〜７のいずれか一項に記載のペプチド。
【請求項９】
微小血管合併症の治療において使用するための、請求項２〜８のいずれか一項に記載のペプチド。
【請求項１０】
１型糖尿病及び／又は末期２型糖尿病における微小血管合併症の治療において使用するための、請求項２〜９のいずれか一項に記載のペプチド。
【請求項１１】
細胞上のヒトエラスチン受容体と組み合わされることができ、ヒトエラスチン受容体へのヒトＣペプチドの結合により典型的に産生されるものと同じ生理学的活性を開始させることができる、請求項１〜１０のいずれか一項に記載のペプチド。
【請求項１２】
少なくともモチーフＱＤＥＡ（配列番号３１）を有し、ペプチドが、ヒトエラスチン受容体へのヒトＣペプチドの結合を阻害し、ヒトＣペプチドの生理学的活性を低減させ、ペプチドが４〜４０アミノ酸からなる、請求項１に記載のペプチド。
【請求項１３】
４〜２０アミノ酸からなる、請求項１２に記載のペプチド。
【請求項１４】
４〜１５アミノ酸からなる、請求項１２に記載のペプチド。
【請求項１５】
４〜１２アミノ酸からなる、請求項１２に記載のペプチド。
【請求項１６】
４〜９アミノ酸からなる、請求項１２に記載のペプチド。
【請求項１７】
ヒトインスリン抵抗性の治療において使用するための、請求項１２〜１６のいずれかに記載のペプチド。
【請求項１８】
ヒト脂質異常症の治療において使用するための、請求項１２〜１７のいずれかに記載のペプチド。
【請求項１９】
ヒト高血圧の治療において使用するための、請求項１２〜１８のいずれかに記載のペプチド。
【請求項２０】
ヒト大血管性合併症の治療において使用するための、請求項１２〜１９のいずれかに記載のペプチド。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本開示は、ヒトの医学の分野に属し、薬学、バイオテクノロジー及び薬物開発の分野に属する。本開示は、メタボリックシンドロームの病因論に関し、ヒトにおける炎症、インスリン抵抗性、アテローム性疾患、動脈硬化症、アテローム性動脈硬化症、心臓血管疾患、１型及び２型糖尿病における微小及び大血管性病理の治療のための免疫調整ペプチドの使用を提供する。
【背景技術】
【０００２】
暴食というあまりに人間的な習慣及び日常的に食品が容易に手に入ることの結果として、健康に悲惨な帰結を有する肥満症の流行が世界中でもたらされた。１５億人が過体重（そのうち５億人が肥満）であり、彼らの非常に多くが、高所得及び中間所得の国々において健常でない加齢及び死の主要な原因であるメタボリックシンドロームと多くの場合に呼ばれる慢性炎症性疾患を患っている。これらの１５億人は心臓血管疾患（血管の慢性炎症［アテローム性疾患、動脈硬化症、アテローム性動脈硬化症］、血圧増加［高血圧］及び血中の増加した異常な脂肪レベル［脂質異常症］）を発症し、心臓発作及び卒中にまで繋がる増加したリスクがある。これらの１５億人の少なくとも３０％は、２型糖尿病を発症するさらなるリスクがある（世界保健機関）。他の者は、腎不全又は認知症などの加齢の早過ぎる発現を発症する。非致死性及び致死性心筋梗塞としての心不全及び末梢動脈疾患（ＰＡＤ）は、２型糖尿病における心臓血管疾患の最も一般的な初期発現であり、他のものとしては一過性虚血発作（ＴＩＡ）又は虚血性卒中及び安定狭心症である。座りがちの生活及び喫煙はこれらの状態からの死亡のリスクをさらに増加させる。現在、これらの唖然とさせる数字の背景にある初期には穏やかであるが最終的に慢性の炎症性疾患に繋がる原因事象の（過食以外の）満足のいく医学的理解は存在しない。この摂食誘導性の炎症が起こり、これほど多くの人々に影響する理由はほとんど分かっておらず、多くの議論が為されている。
【０００３】
Ｃペプチドは、プロインスリン分子中のＡ鎖とＢ鎖との連結ペプチドである。膵島ベータ細胞の小胞体中での切断後、インスリン及び３５アミノ酸のペプチドが生成される。後者は、分子の両側における２つの塩基性残基の酵素的除去により、３１アミノ酸のペプチドであるＣペプチドに加工される。Ｃペプチドは、膵島ベータ細胞から門脈循環中にインスリンと等モル量で共分泌される。２鎖インスリン構造のフォールディングへの寄与の他に、Ｃペプチドのさらなる生物学的活性はその発見後長年にわたり疑問となっている。
【０００４】
ヒトＣペプチドは、以下の配列を有する３１アミノ酸のペプチドである。
【０００５】
配列番号１（ＥＡＥＤＬＱＶＧＱＶＥＬＧＧＧＰＧＡＧＳＬＱＰＬＡＬＥＧＳＬＱ、アミノ酸の１文字表記による）。
【０００６】
Ｃペプチドは古典的に、より保存されたＮ及びＣ末端セグメント及びより可変の中間配列、又は内部の疎水性中央部分というトリパータイトの全体構造とみなされている。したがって、ヒトＣペプチドの場合、Ｎ末端セグメントは多くの場合に残基１〜１２（配列番号２（ＥＡＥＤＬＱＶＧＱＶＥＬ））、中央部分は残基１３〜２５（配列番号３（ＧＧＧＰＧＡＧＳＬＱＰＬＡ））、及びＣ末端セグメントは残基２５〜３１（配列番号４（ＬＥＧＳＬＱ））と考えられている。配列番号５（ＥＡＥＤ）のテトラペプチドが、ベータ細胞中で２鎖インスリン構造をフォールディングさせる過程において必要とされると考えられている（Ｃｈｅｎ  ａｔ  ａｌ．，Ｊ  Ｂｉｏｃｈｅｍ．２００２  Ｊｕｎ；１３１（６）：８５５−９）。最近、一部の研究により、充分に定義された二次構造を示すＣペプチドのＣ末端ペンタペプチド（ヒトＣペプチドにおいて配列番号６、ＥＧＳＬＱ、ラットＣペプチドにおいて配列番号７（ＥＶＡＲＱ））がヒト腎臓尿細管細胞において細胞内Ｃａ２＋の増加を誘導し得ることが示唆された（Ｓｈａｆｑａｔ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｅｌｌ  Ｍｏｌ  Ｌｉｆｅ  Ｓｃｉ．２００２  Ｊｕｌ；５９（７）：１１８５−９．）。
【０００７】
Ｃペプチドはインスリンと等量で産生され、糖尿病患者における内因性インスリン分泌の最良の追加の指標である。Ｃペプチドを使用するインスリン分泌の測定は、臨床プラクティスにおいて役立つと考えられており、インスリン分泌の差異は、１型及び２型糖尿病の異なる治療要件の基礎となっている。Ｊｏｎｅｓ  ａｎｄ  Ｈａｔｔｅｒｓｌｅｙ（Ｄｉａｂｅｔ  Ｍｅｄ．２０１３  Ｊｕｌ；３０（７）：８０３−１７）には、糖尿病患者の臨床管理におけるＣペプチド測定の使用が総説されており、Ｃペプチド試験の解釈及び選択並びに糖尿病の分類及び治療の選択、及びＣペプチドをどの場面で使用するべきかの推奨、試験の選択及び結果の解釈を補助するためのその使用が含まれる。ベータ細胞機能の緩慢な衰退に起因して、２型糖尿病においてＣペプチドレベルと代謝制御及び慢性合併症との関係性はあまり分かっていないため、Ｂｏ  ｅｔ  ａｌ．，（Ａｃｔａ  Ｄｉａｂｅｔｏｌ．２０００；３７（３）：１２５−９）は２型糖尿病患者のコホートにおいてこれらの関連性を評価した。Ｃペプチドの生物学的効果は、インスリンとの相互作用により又は特異的若しくは非特異的な膜相互作用を介して媒介されると考えられている。当該技術分野における一部の研究は、まだ同定（ｉｎｄｅｎｔｉｆｉｅｄ）されていないＧＰＣＲによる特異的相互作用の理論を支持する。しかしながら、ＣペプチドのＤ−エナンチオマーはＬ−エナンチオマーと同じ生物学的活性を有し（Ｉｄｏ  ｅｔ  ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ，１９９７，２７７（５３２５）：５６３−６）、したがってＩＤＯらは、天然Ｃペプチドと等しい能力の反転（レトロ）及び全てＤアミノ酸の（エナンチオ）Ｃペプチドを発見して、配列番号８（ＧＧＧＰＧＡＧ）の活性は受容体により媒介されないと結論付けており、それによりＣペプチドの受容体から遠ざける教示をしており、他の受容体非依存性の相互作用がＣペプチド（Ｃ−ｐｅｐｔｄｅ）の機能のために重要であることを当業者に示唆している。脂質二重層中のカチオン選択性チャネルの形成もまた、より非特異的な相互作用を示唆することに繋がった。したがって、Ｃペプチドの受容体は把握されていないままである。
【０００８】
Ｉｄｏ  ｅｔ  ａｌ．（Ｓｃｉｅｎｃｅ，１９９７  Ｊｕｌ  ２５；２７７（５３２５）：５６３−６；及び本出願の図１）は、ラット顆粒状組織においてグルコース誘導性の血管機能障害を正常化するために配列番号８（ＧＧＧＰＧＡＧ）の疎水性中央部分を有するヒトＣペプチド断片を示しているが、インスリンを用いるそれらのラットの処置と組み合わせたＣペプチド断片の試験を提供しておらず、前記疎水性中央部分を有する断片の受容体媒介性の活性から遠ざける教示をしている。ＵＳ２００２０１０７１７５において、配列番号９（ＥＬＧＧＧＰＧＡＧ）のＣペプチド断片及びより小さいその断片の一部がラット腎尿細管細胞のＮａ．ｓｕｐ．＋Ｋ．ｓｕｐ．＋ＡＴＰアーゼ活性を刺激している。ＵＳ２００６０２３４９１４及びＵＳ２００７００８２８４２には、配列番号８（ＧＧＧＰＧＡＧ）の上記で議論した疎水性中央部分の活性とは関係しない生物学的活性を提供する少なくとも１つのグルタミン（３文字表記でＧｌｕ；１文字表記でＥ）を含むＮ末端及び／又はＣ末端Ｃペプチド断片が列記されており、上記中央部分の配列はＵＳ２００６０２３４９１４及びＵＳ２００７００８２８４２において列記されたいずれの断片にも見られない。
【０００９】
１型糖尿病は、一般に、膵島ベータ細胞の自己免疫破壊によるインスリン及びＣペプチドの欠乏により特徴付けられる。したがって、患者は、生命を維持するために外因性インスリンに依存する。例えば、遺伝的背景、環境要因及び一時的感染後の侵攻性の自己免疫反応といったいくつもの要因が疾患の病因にとって重要であり得る（Ａｋｅｒｂｌｏｍ  Ｈ  Ｋ  ｅｔ  ａｌ．：Ａｎｎｕａｌ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ  ２９（５）：３８３−３８５，（１９９７））。現在、インスリンを必要とする患者は、Ｃペプチドから分離された外因性インスリンを提供されており、したがって外因性Ｃペプチド療法を受けていない。対照的に、ほとんどの２型糖尿病の対象は、初期にはまだインスリン及びＣペプチドの両方を内因的に産生するが、一般に、他の組織の中でも骨格筋、脂肪組織及び肝臓においてインスリン抵抗性により特徴付けられる。
【００１０】
多くの１型及び末期２型糖尿病患者（もはやインスリン及びＣペプチドを産生しない）並びに他のインスリンを必要とする患者は結局、糖尿病の様々な長期血管合併症を発症して患い、これらは多くの場合、早期２型糖尿病（インスリン及びＣペプチドがなおも産生されるが、患者はインスリンに抵抗性である）よりもさらに重篤及び広がっている。例えば、網膜、腎臓及び神経を伴う微小血管合併症は１型糖尿病又は末期２型糖尿病の患者における罹患及び死亡の主要な原因であるが、一般に、インスリンに抵抗性の患者において著明ではないと考えられている。インスリンを必要とする糖尿病患者の長期合併症の発症においてＣペプチドの欠乏が役割を果たし得るという概念についてのサポートが増加しつつある。さらに、ヒト糖尿病モデル及び１型糖尿病患者におけるｉｎ  ｖｉｖｏの他にｉｎ  ｖｉｔｒｏ研究は、Ｃペプチドがホルモン活性を有することを実証している（Ｗａｈｒｅｎ  Ｊ  ｅｔ  ａｌ．：Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｐｈｙｓｉｏｌｏｇｙ  ２７８：Ｅ７５９−Ｅ７６８，（２０００）；Ｗａｈｒｅｎ  Ｊ  ｅｔ  ａｌ．：Ｉｎ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  Ｔｅｘｔｂｏｏｋ  ｏｆ  Ｄｉａｂｅｔｅｓ  Ｍｅｌｌｉｔｕｓ  Ｆｅｒｒａｎｎｉｎｎｉ  Ｅ，Ｚｉｍｍｅｔ  Ｐ，Ｄｅ  Ｆｒｏｎｚｏ  Ｒ  Ａ，Ｋｅｅｎ  Ｈ，Ｅｄｓ．Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ，（２００４），ｐ．１６５−１８２））。
【先行技術文献】
【特許文献】
【００１１】
【特許文献１】米国特許出願公開第２００２／０１０７１７５号明細書
【特許文献２】米国特許出願公開第２００６／０２３４９１４号明細書
【特許文献３】米国特許出願公開第２００７／００８２８４２号明細書
【非特許文献】
【００１２】
【非特許文献１】Ｃｈｅｎ  ａｔ  ａｌ．，Ｊ  Ｂｉｏｃｈｅｍ．２００２  Ｊｕｎ；１３１（６）：８５５−９
【非特許文献２】Ｓｈａｆｑａｔ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｅｌｌ  Ｍｏｌ  Ｌｉｆｅ  Ｓｃｉ．２００２  Ｊｕｌ；５９（７）：１１８５−９．
【非特許文献３】Ｊｏｎｅｓ  ａｎｄ  Ｈａｔｔｅｒｓｌｅｙ（Ｄｉａｂｅｔ  Ｍｅｄ．２０１３  Ｊｕｌ；３０（７）：８０３−１７）
【非特許文献４】Ｂｏ  ｅｔ  ａｌ．，（Ａｃｔａ  Ｄｉａｂｅｔｏｌ．２０００；３７（３）：１２５−９）
【非特許文献５】Ｉｄｏ  ｅｔ  ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ，１９９７，２７７（５３２５）：５６３−６
【非特許文献６】Ａｋｅｒｂｌｏｍ  Ｈ  Ｋ  ｅｔ  ａｌ．：Ａｎｎｕａｌ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ  ２９（５）：３８３−３８５，（１９９７）
【非特許文献７】Ｗａｈｒｅｎ  Ｊ  ｅｔ  ａｌ．：Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｐｈｙｓｉｏｌｏｇｙ  ２７８：Ｅ７５９−Ｅ７６８，（２０００）
【非特許文献８】Ｗａｈｒｅｎ  Ｊ  ｅｔ  ａｌ．：Ｉｎ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  Ｔｅｘｔｂｏｏｋ  ｏｆ  Ｄｉａｂｅｔｅｓ  Ｍｅｌｌｉｔｕｓ  Ｆｅｒｒａｎｎｉｎｎｉ  Ｅ，Ｚｉｍｍｅｔ  Ｐ，Ｄｅ  Ｆｒｏｎｚｏ  Ｒ  Ａ，Ｋｅｅｎ  Ｈ，Ｅｄｓ．Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ，（２００４），ｐ．１６５−１８２）
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【００１３】
驚くべきことに、本発明は、広く知られたインスリンと共に１：１の比で産生される小タンパク質であるＣペプチドによる、血管及びエラスチン修復に関与するタンパク質であるヒトエラスチン受容体のこれまで見過ごされてきたロック・アンド・キー（ｌｏｃｋ−ａｎｄ−ｋｅｙ）活性化により、ヒトのメタボリックシンドロームにおけるいわゆる炎症が増大することを示す。エラスチン受容体は、Ｃペプチド中及びその分解産物（ＰＧドメイン断片）中に見出されるアミノ酸のキーモチーフ（ＰＧドメイン）により活性化されるロックである。２つの間のこのロック・アンド・キー相互作用はこれまで誰にも発見されておらず、エラスチン受容体（エラスチンペプチド）の通常のキーのみならず、食後に血液中にグルコースが生じるたびにインスリンと共に産生されるペプチドであるＣペプチドがエラスチン受容体とロック・アンド・キー様式（ドック）で相互作用するという発見を活用して、メタボリックシンドロームの治療のための新規のペプチドの開発及びペプチドの使用における新規の進出が提供される。本発明は、ヒト疾患の治療において使用するためのヒトエラスチン受容体へのヒトＣペプチドの結合を調整（模倣、アゴナイズ又はアンタゴナイズ）することができる単離された及び合成ペプチドを提供する。
【００１４】
本発明は、ヒト疾患の治療、例えば、ヒト炎症の治療、並びに／又は１型糖尿病及び／若しくは末期２型糖尿病の治療、より好ましくは、微小血管合併症、好ましくは１型糖尿病及び／又は末期２型糖尿病に伴って見られる微小血管合併症の治療において使用するための単離された又は合成ペプチドであって、ペプチドが、少なくとも１つのヒトエラスチン受容体結合モチーフＧｘｘＰＧを有し、少なくとも１つのアミノ酸Ｑを有し、Ｇが１文字表記でアミノ酸グリシンを表し、Ｐがアミノ酸プロリンを表し、Ｑがアミノ酸グルタミンを表し、ｘが任意のアミノ酸を表し、ペプチドが５〜３０アミノ酸からなる、ペプチドを提供する。典型的に、本明細書において提供される好ましいペプチドは、配列番号１０、１１、１２、１３、１７、１８、１９、２０、１４、１５、１６、２１、２５、１７５、３、２２、２３、２６、１７６、２４、２７、２８、２９、４３、９３及び９４に列記されるペプチド、並びに配列番号１０、１１、１２、１３、１７、１８、１９、２０、１４、１５、１６、２１、２５、１７５、３、２２、２３、２６、１７６、２４、２７、２８、２９、４３、９３及び９４に列記されるペプチドに由来するレトロインベルソバリアントペプチドの群から選択される。注記：レトロインバースペプチドは、親のＬ配列の順序から反転した順序で集合したＤアミノ酸から構成され、したがって天然配列の全体的なトポロジーを維持している。グリシンの立体異性体は存在せず、ここで（及び例えばレトロインベルソＧｘｘＰ又はｘＧｘＰモチーフを有するレトロインベルソペプチドにおいて）Ｇはそうではないが、それに対してＬ、Ｐ及びＡなどの他のアミノ酸が、本明細書において提供されるレトロインベルソペプチドの全てＤアミノ酸の特徴に寄与する。本発明はまた、合成ペプチドであって、ヒトエラスチン受容体結合モチーフであるＧｘｘＰＧモチーフが少なくとも２回、好ましくは３回繰り返されており、任意選択的に前記繰返しがリンカーにより分離されており、そのようなリンカーが１つ以上のアミノ酸、例えば、グリシン、アラニン、ロイシン、バリン、イソロイシン又はグルタミンの群から選択される１つ以上のアミノ酸を含んでもよい、合成ペプチドも提供する。好ましい実施形態では、本発明は、細胞上のヒトエラスチン受容体と組み合わされることができ、ヒトエラスチン受容体へのヒトＣペプチドの結合により典型的に産生されるものと同じ生理学的活性を開始させることができるペプチドを提供する。本発明はまた、ヒト疾患の治療、例えば、ヒト炎症の治療、並びに／又は１型糖尿病及び／若しくは末期２型糖尿病の治療、より好ましくは、微小血管合併症、好ましくは１型糖尿病及び／又は末期２型糖尿病に伴って見られる微小血管合併症の治療において使用するためのそのような単離された又は合成ペプチドであって、ペプチドが、少なくとも１つのヒトエラスチン受容体結合モチーフＧｘｘＰＧを有し、少なくとも１つのアミノ酸Ｑを有し、Ｇが１文字表記でアミノ酸グリシンを表し、Ｐがアミノ酸プロリンを表し、Ｑがアミノ酸グルタミンを表し、ｘが任意のアミノ酸を表し、ペプチドが５〜２０アミノ酸からなる、ペプチドを提供する。典型的に、本明細書において提供される好ましいペプチドは、配列番号１４、１５、１６、２１、２５、１７５、３、２２、２３、２６、１７６、２４、２７、２８、２９、４３、９３及び９４に列記されるペプチド、並びに配列番号１４、１５、１６、２１、２５、１７５、３、２２、２３、２６、１７６、２４、２７、２８、２９、４３、９３及び９４に列記されるペプチドに由来するレトロインベルソバリアントペプチドの群から選択される。
【００１５】
好ましい実施形態では、本発明はまた、細胞上のヒトエラスチン受容体と組み合わされることができ、ヒトエラスチン受容体へのヒトＣペプチドの結合により典型的に産生されるものと同じ生理学的活性を開始させることができるペプチドを提供する。本発明はまた、ヒト疾患の治療、例えば、ヒト炎症の治療、並びに／又は１型糖尿病及び／若しくは末期２型糖尿病の治療、より好ましくは、微小血管合併症、好ましくは１型糖尿病及び／又は末期２型糖尿病に伴って見られる微小血管合併症の治療において使用するためのそのような単離された又は合成ペプチドであって、ペプチドが、少なくとも１つのヒトエラスチン受容体結合モチーフＧｘｘＰＧを有し、少なくとも１つのアミノ酸Ｑを有し、Ｇが１文字表記でアミノ酸グリシンを表し、Ｐがアミノ酸プロリンを表し、Ｑがアミノ酸グルタミンを表し、ｘが任意のアミノ酸を表し、ペプチドが５〜１５アミノ酸からなる、ペプチドを提供する。典型的に、本明細書において提供される好ましいペプチドは、配列番号３、２２、２３、２６、１７６、２４、２７、２８、２９、４３、９３及び９４に列記されるペプチド、並びに配列番号３、２２、２３、２６、１７６、２４、２７、２８、２９、４３、９３及び９４に列記されるペプチドに由来するレトロインベルソバリアントペプチドの群から選択される。
【００１６】
好ましい実施形態では、本発明はまた、細胞上のヒトエラスチン受容体と組み合わされることができ、ヒトエラスチン受容体へのヒトＣペプチドの結合により典型的に産生されるものと同じ生理学的活性を開始させることができるペプチドを提供する。本発明はまた、ヒト疾患の治療、例えば、ヒト炎症の治療、並びに／又は１型糖尿病及び／若しくは末期２型糖尿病の治療、より好ましくは、微小血管合併症、好ましくは１型糖尿病及び／又は末期２型糖尿病に伴って見られる微小血管合併症の治療において使用するためのそのような単離された又は合成ペプチドであって、ペプチドが、少なくとも１つのヒトエラスチン受容体結合モチーフＧｘｘＰＧを有し、少なくとも１つのアミノ酸Ｑを有し、Ｇが１文字表記でアミノ酸グリシンを表し、Ｐがアミノ酸プロリンを表し、Ｑがアミノ酸グルタミンを表し、ｘが任意のアミノ酸を表し、ペプチドが５〜１２アミノ酸からなる、ペプチドを提供する。典型的に、本明細書において提供される好ましいペプチドは、配列番号２４、２７、２８、２９、４３、９３及び９４に列記されるペプチド、並びに配列番号２４、２７、２８、２９、４３、９３及び９４に列記されるペプチドに由来するレトロインベルソバリアントペプチドの群から選択される。
【００１７】
好ましい実施形態では、本発明は、細胞上のヒトエラスチン受容体と組み合わされることができ、ヒトエラスチン受容体へのヒトＣペプチドの結合により典型的に産生されるものと同じ生理学的活性を開始させることができるペプチドを提供する。本発明はまた、ヒト疾患の治療、例えば、ヒト炎症の治療、並びに／又は１型糖尿病及び／若しくは末期２型糖尿病の治療、より好ましくは、微小血管合併症、好ましくは１型糖尿病及び／又は末期２型糖尿病に伴って見られる微小血管合併症の治療において使用するためのそのような単離された又は合成ペプチドであって、ペプチドが、少なくとも１つのヒトエラスチン受容体結合モチーフＧｘｘＰＧを有し、少なくとも１つのアミノ酸Ｑを有し、Ｇが１文字表記でアミノ酸グリシンを表し、Ｐがアミノ酸プロリンを表し、Ｑがアミノ酸グルタミンを表し、ｘが任意のアミノ酸を表し、ペプチドが５〜９アミノ酸からなる、ペプチドを提供する。典型的に、本明細書において提供される好ましいペプチドは、配列番号２９、４３、９３及び９４に列記されるペプチド、並びに配列番号２９、４３、９３及び９４に列記されるペプチドに由来するレトロインベルソバリアントペプチドの群から選択される。
【００１８】
別の好ましい実施形態では、本発明は、ヒトＣペプチドのＣペプチドのモチーフＧｘｘＰＧを通じたヒトエラスチン受容体への結合を阻害することができる（阻害する）ペプチドを提供し、より好ましい実施形態では、本発明は、ヒトＣペプチドの生理学的活性を低減させることができる（低減させる）ペプチドを提供する。特に、本発明は、ヒト疾患の治療、例えば、ヒトインスリン抵抗性の治療及び／又はヒト脂質異常症の治療、及び／又はヒト高血圧、及び／又はヒト大血管（ｍａｃｒｏｖａｓｃｕｌａｔ）合併症、好ましくは、動脈硬化症、アテローム性動脈硬化症、末梢動脈疾患及び／又は新規発症２型糖尿病において見られる合併症の治療において使用するための、少なくともモチーフＱＤＥＡ（配列番号３１）を有する単離された又は合成ペプチドであって、ペプチドが、ヒトエラスチン受容体へのヒトＣペプチドの結合を阻害し、ヒトＣペプチドの生理学的活性を低減させ、ペプチドが４〜４０アミノ酸からなる、ペプチドを提供する。典型的に、本明細書において提供される好ましいペプチドは、配列番号９９、１００、１０１、１３１、１０２、１０３、１０４、１０５、３１に列記されるペプチド及びこれらの機能的断片又はバリアント並びに配列番号９９、１００、１０１、１３１、１０２、１０３、１０４、１０５、３１に列記されるペプチドに由来するレトロインベルソバリアントペプチド及びこれらの機能的断片又はバリアントの群から選択される。機能的断片又はバリアントは、典型的に、ヒトＣペプチドのＣペプチドのモチーフＧｘｘＰＧを通じたヒトエラスチン受容体への結合を阻害するペプチドの能力を試験する本明細書において提供される走化性アッセイにおいて見出され、そのようなペプチドはヒトＣペプチドの走化活性を低減させることができる（低減させる）。
【００１９】
別の実施形態では、本発明はまた、ヒトＣペプチドのＣペプチドのモチーフＧｘｘＰＧを通じたヒトエラスチン受容体への結合を阻害することができる（阻害する）ペプチドを提供し、より好ましい実施形態では、本発明は、ヒトＣペプチドの生理学的活性を低減させることができる（低減させる）ペプチドを提供する。特に、本発明は、ヒト疾患の治療、例えば、ヒトインスリン抵抗性の治療及び／又はヒト脂質異常症の治療、及び／又はヒト高血圧、及び／又はヒト大血管（ｍａｃｒｏｖａｓｃｕｌａｔ）合併症、好ましくは、動脈硬化症、アテローム性動脈硬化症、末梢動脈疾患及び／又は新規発症２型糖尿病において見られる合併症の治療において使用するための、少なくともモチーフＱＤＥＡ（配列番号３１）を有する単離された又は合成ペプチドであって、ペプチドが、ヒトエラスチン受容体へのヒトＣペプチドの結合を阻害し、ヒトＣペプチドの生理学的活性を低減させ、ペプチドが４〜２０アミノ酸からなる、ペプチドを提供する。典型的に、本明細書において提供される好ましいペプチドは、配列番号１３１、１０２、１０３、１０４、１０５、３１に列記されるペプチド及びこれらの機能的断片又はバリアント、並びに配列番号１３１、１０２、１０３、１０４、１０５、３１に列記されるペプチドに由来するレトロインベルソバリアントペプチド及びこれらの機能的断片又はバリアントの群から選択される。
【００２０】
別の実施形態では、本発明はまた、ヒトＣペプチドのＣペプチドのモチーフＧｘｘＰＧを通じたヒトエラスチン受容体への結合を阻害することができる（阻害する）ペプチドを提供し、より好ましい実施形態では、本発明は、ヒトＣペプチドの生理学的活性を低減させることができる（低減させる）ペプチドを提供する。特に、本発明は、ヒト疾患の治療、例えば、ヒトインスリン抵抗性の治療及び／又はヒト脂質異常症の治療、及び／又はヒト高血圧、及び／又はヒト大血管（ｍａｃｒｏｖａｓｃｕｌａｔ）合併症、好ましくは、動脈硬化症、アテローム性動脈硬化症、末梢動脈疾患及び／又は新規発症２型糖尿病において見られる合併症の治療において使用するための、少なくともモチーフＱＤＥＡ（配列番号３１）を有する単離された又は合成ペプチドであって、ペプチドが、ヒトエラスチン受容体へのヒトＣペプチドの結合を阻害し、ヒトＣペプチドの生理学的活性を低減させ、ペプチドが４〜１５アミノ酸からなる、ペプチドを提供する。典型的に、本明細書において提供される好ましいペプチドは、配列番号１０３、１０４、１０５、３１に列記されるペプチド及びこれらの機能的断片又はバリアント、並びに配列番号１０３、１０４、１０５、３１に列記されるペプチドに由来するレトロインベルソバリアントペプチド及びこれらの機能的断片又はバリアントの群から選択される。
【００２１】
別の実施形態では、本発明はまた、ヒトＣペプチドのＣペプチドのモチーフＧｘｘＰＧを通じたヒトエラスチン受容体への結合を阻害することができる（阻害する）ペプチドを提供し、より好ましい実施形態では、本発明は、ヒトＣペプチドの生理学的活性を低減させることができる（低減させる）ペプチドを提供する。特に、本発明は、ヒト疾患の治療、例えば、ヒトインスリン抵抗性の治療及び／又はヒト脂質異常症の治療、及び／又はヒト高血圧、及び／又はヒト大血管（ｍａｃｒｏｖａｓｃｕｌａｔ）合併症、好ましくは、動脈硬化症、アテローム性動脈硬化症、末梢動脈疾患及び／又は新規発症２型糖尿病において見られる合併症の治療において使用するための、少なくともモチーフＱＤＥＡ（配列番号３１）を有する単離された又は合成ペプチドであって、ペプチドが、ヒトエラスチン受容体へのヒトＣペプチドの結合を阻害し、ヒトＣペプチドの生理学的活性を低減させ、ペプチドが４〜９アミノ酸からなる、ペプチドを提供する。典型的に、本明細書において提供される好ましいペプチドは、配列番号１０５、３１に列記されるペプチド及びこれらの機能的断片又はバリアント、並びに配列番号１０５、３１に列記されるペプチドに由来するレトロインベルソバリアントペプチド及びこれらの機能的断片又はバリアントの群から選択される。
【００２２】
本発明は、ヒト疾患の治療のためのヒトエラスチン受容体とのヒトＣペプチドの相互作用のペプチドアゴニスト及び／又はペプチドアンタゴニストの使用に関し、それに限定される。それをもって、本発明は、ヒト疾患におけるペプチドの使用の３つの分野を提供する。
【００２３】
薬物：抗炎症性ペプチドと称される本発明の第１の分野は、ヒト炎症性疾患に対抗する（制御し、低減させ又は治療する）ための薬物として使用するための任意のペプチド又はヒト炎症性疾患に対抗するための薬物の任意のペプチド成分又はヒト炎症性疾患に対抗するための薬物の調製において使用される任意のペプチドであって（この記載における対抗するは、一般に、治療する又は治療において使用するとしても同定される（ｉｎｄｅｎｔｉｆｉｅｄ））、ペプチドが、少なくとも１つのヒトエラスチン受容体結合モチーフＧｘｘＰ、又はそれと機能的に同等のｘＧｘＰを有し、少なくとも１つのアミノ酸Ｑを有し、及びＧが１文字表記でアミノ酸グリシンを表し、Ｐがアミノ酸プロリンを表し、Ｑがアミノ酸グルタミンを表し、ｘが任意のアミノ酸を表すものを意味する。一部の実施形態では、前記Ｑは、機能的に同等のＬ（ロイシン）により置換されていてもよい。好ましくは、この第１の分野の前記ペプチドは、少なくとも１つのヒトエラスチン受容体結合モチーフｘＧｘｘＰＧを有する。そのようなペプチドは、インスリンなどの抗糖尿病性組成物と共に与えられた時に、炎症状態、例えば、急性腎損傷、及び急性の全身性炎症状態、例えば、血管損傷に繋がり、多くの場合に（多臓器の）臓器不全により悪化する敗血症若しくは全身性炎症応答症候群（ＳＩＲＳ）、又は糖尿病を伴う炎症状態の治療において有用である。
【００２４】
薬物：Ｃペプチドアゴニストと称される本発明の第２の分野は、ヒト微小血管合併症を治療するための薬剤として使用するための任意のアゴニストペプチド又はヒト微小血管合併症を治療するための薬剤の任意のアゴニストペプチド成分又はヒト微小血管合併症を治療するための薬剤の調製において使用される任意のアゴニストペプチドであって、前記ペプチドが、少なくとも１つのヒトエラスチン受容体結合モチーフＧｘｘＰ、又はそれと機能的に同等のｘＧｘＰを有し、少なくとも１つのアミノ酸Ｑを有し、Ｇがアミノ酸グリシンを表し、Ｐがアミノ酸プロリンを表し、Ｑがアミノ酸グルタミンを表し、ｘが任意のアミノ酸を表し、及び細胞上のヒトエラスチン受容体と組み合わされることができ、ヒトエラスチン受容体へのヒトＣペプチドの結合により典型的に産生されるものと同じ生理学的活性を開始させることができるものを意味する。一部の実施形態では、前記Ｑは、機能的に同等のＬ（ロイシン）により置換されていてもよい。好ましくは、この第２の分野の前記ペプチドは、少なくとも１つのヒトエラスチン受容体結合モチーフｘＧｘｘＰＧを有する。そのようなペプチドは、インスリンなどの抗糖尿病性組成物と共に与えられた時に、炎症状態、例えば、急性腎損傷、及び急性の全身性炎症状態、例えば、血管損傷に繋がり、多くの場合に（多臓器の）臓器不全により悪化する敗血症若しくは全身性炎症応答症候群（ＳＩＲＳ）、又は糖尿病を伴う炎症状態の治療において有用である。
【００２５】
薬物：Ｃペプチドアンタゴニストと称される本発明の第３の分野は、ヒトインスリン抵抗性、脂質異常症、高血圧若しくは大血管性合併症を治療するための薬剤として使用するための任意のアンタゴニストペプチド又はヒトインスリン抵抗性、脂質異常症、高血圧若しくは大血管性合併症を治療するための薬剤の任意のアンタゴニストペプチド成分又はヒトインスリン抵抗性、脂質異常症、高血圧若しくは大血管性合併症を治療するための薬剤の調製において使用される任意のアンタゴニストペプチドであって、前記アンタゴニストペプチドが、ヒトＣペプチドのそのモチーフＧｘｘＰを通じたヒトエラスチン受容体への結合を阻害し、ヒトＣペプチドの生理学的活性を低減させるものを意味する。
【００２６】
本明細書において、ＰＧドメインを有するペプチド又はペプチド断片は、少なくとも１つのｘＧｘＰ、ＧｘｘＰ、ＧｘｘＰＧ又はｘＧｘＰＧモチーフを有するペプチドとして特に定義され、Ｇはグリシンであり、Ｐはプロリンであり、ｘは任意のアミノ酸であり、Ｐの後のアミノ酸は好ましくはＶＩＩＩ型ベータターンを可能とするものであり、該条件はＰのＣ末端側にＧが後続する場合に満たされる。本発明は、疾患を予防又は治療する方法であって、ヒトにエラスチン受容体をアゴナイズすることができるペプチドを提供することを含む、方法を提供する。本明細書において提供されるそのようなペプチドは、好ましくは、Ｃペプチドの断片及びその機能的同等物の群から選択される。
【００２７】
第１の実施形態では、本発明は、好ましくは、それを必要とするヒト対象の、特に、１型糖尿病を患っていると診断されたヒト対象における、最も好ましくは、前記対象がインスリンを用いた治療もされている場合の、ヒト炎症の治療において使用するためのペプチドであって、前記ペプチドが、好ましくは単離された及び／又は合成の、好ましくは非ペグ化の、本出願の図１に列記される、配列番号１７（ＥＡＥＤＬＱＶＧＱＶＥＬＧＧＧＰＧＡＧＳＬＱＰＬ）のヒト１〜２４、配列番号２０（ＤＬＱＶＧＱＶＥＬＧＧＧＰＧＡＧＳＬＱＰＬ）のヒト４〜２４、配列番号１７５（ＶＧＱＶＥＬＧＧＧＰＧＡＧＳＬＱＰＬ）のヒト７〜２４、配列番号１７６（ＥＬＧＧＧＰＧＡＧＳＬＱＰＬ）のヒト１１〜２４、配列番号１０（ＤＬＱＶＧＱＶＥＬＧＧＧＰＧＡＧＳＬＱＰＬＡＬＥＧＳＬＱ）のヒト４〜３１、配列番号１３（ＧＱＶＥＬＧＧＧＰＧＡＧＳＬＱＰＬＡＬＥＧＳＬＱ）のヒト８〜３１及び配列番号１４（ＬＧＧＧＰＧＡＧＳＬＱＰＬＡＬＥＧＳＬＱ）のヒト１２〜３１のＣペプチド断片の群から選択され、前記ペプチドが配列番号３８（ＧＧＧＰ）のＧｘｘＰモチーフを示し、及びラットにおいて３０ｍＭのグルコース誘導性の血管機能障害の有意な正常化（％）を示す、ペプチドを提供する。
【００２８】
また、本明細書において提供される、本出願の図１に列記されるペプチドに機能的に同等な、特に、１型糖尿病を患っていると診断されたヒト対象における、最も好ましくは、前記対象がインスリンを用いた治療もされている場合の、ヒト炎症の治療において使用するための、配列番号３８（ＧＧＧＰ）のモチーフを有するペプチドは、ヒトＣペプチド配列から誘導可能な配列番号１０（ＤＬＱＶＧＱＶＥＬＧＧＧＰＧＡＧＳＬＱＰＬＡＬＥＧＳＬＱ）の合成の及び単離されたペプチドである。また、本明細書において提供される、本出願の図１に列記されるペプチドに機能的に同等な、特に、１型糖尿病を患っていると診断されたヒト対象における、最も好ましくは、前記対象がインスリンを用いた治療もされている場合の、ヒト炎症の治療において使用するための、配列番号３８（ＧＧＧＰ）のモチーフを有するペプチドは、ヒトＣペプチド配列から得られ得る配列番号１１（ＬＱＶＧＱＶＥＬＧＧＧＰＧＡＧＳＬＱＰＬＡＬＥＧＳＬＱ）の合成の及び単離されたペプチドである。また、本明細書において提供される、本出願の図１に列記されるペプチドに機能的に同等な、特に、１型糖尿病を患っていると診断されたヒト対象における、最も好ましくは、前記対象がインスリンを用いた治療もされている場合の、最も好ましくは、前記対象がインスリンを用いた治療もされている場合の、ヒト炎症の治療において使用するための、配列番号３８（ＧＧＧＰ）のモチーフを有するペプチドは、ヒトＣペプチド配列から誘導可能な配列番号１２（ＶＧＱＶＥＬＧＧＧＰＧＡＧＳＬＱＰＬＡＬＥＧＳＬＱ）の合成の及び単離されたペプチドである。また、本明細書において提供される、本出願の図１に列記されるペプチドに機能的に同等な、特に、１型糖尿病を患っていると診断されたヒト対象における、最も好ましくは、前記対象がインスリンを用いた治療もされている場合の、ヒト炎症の治療において使用するための、配列番号３８（ＧＧＧＰ）のモチーフを有するペプチドは、ヒトＣペプチド配列から誘導可能な配列番号１３（ＧＱＶＥＬＧＧＧＰＧＡＧＳＬＱＰＬＡＬＥＧＳＬＱ）の合成の及び単離されたペプチドである。また、本明細書において提供される、本出願の図１に列記されるペプチドに機能的に同等な、特に、１型糖尿病を患っていると診断されたヒト対象における、最も好ましくは、前記対象がインスリンを用いた治療もされている場合の、ヒト炎症の治療において使用するための、配列番号３８（ＧＧＧＰ）のモチーフを有するペプチドは、ヒトＣペプチド配列から誘導可能な配列番号１４（ＬＧＧＧＰＧＡＧＳＬＱＰＬＡＬＥＧＳＬＱ）の合成の及び単離されたペプチドである。また、本明細書において提供される、本出願の図１に列記されるペプチドに機能的に同等な、特に、１型糖尿病を患っていると診断されたヒト対象における、最も好ましくは、前記対象がインスリンを用いた治療もされている場合の、ヒト炎症の治療において使用するための、配列番号３８（ＧＧＧＰ）のモチーフを有するペプチドは、ヒトＣペプチド配列から誘導可能な配列番号１５（ＶＧＱＶＥＬＧＧＧＰＧＡＧＳＬＱＰＬＡＬ）の合成の及び単離されたペプチドである。また、本明細書において提供される、本出願の図１に列記されるペプチドに機能的に同等な、特に、１型糖尿病を患っていると診断されたヒト対象における、最も好ましくは、前記対象がインスリンを用いた治療もされている場合の、ヒト炎症の治療において使用するための、配列番号３８（ＧＧＧＰ）のモチーフを有するペプチドは、ヒトＣペプチド配列から誘導可能な配列番号１６（ＥＶＧＱＶＥＬＧＧＧＰＧＡＧＳＬＱＰＬ）の合成の及び単離されたペプチドである。別の実施形態では、本明細書において提供される、本出願の図１に列記されるペプチドに機能的に同等な、特に、１型糖尿病を患っていると診断されたヒト対象における、最も好ましくは、前記対象がインスリンを用いた治療もされている場合の、ヒト炎症の治療において使用するために提供される、配列番号３８（ＧＧＧＰ）のモチーフを有するペプチドは、ヒトＣペプチド配列から誘導可能な配列番号１７（ＥＡＥＤＬＱＶＧＱＶＥＬＧＧＧＰＧＡＧＳＬＱＰＬＡＬ）の合成の及び単離されたペプチドである。別の実施形態では、本明細書において提供される、本出願の図１に列記されるペプチドに機能的に同等な、特に、１型糖尿病を患っていると診断されたヒト対象における、最も好ましくは、前記対象がインスリンを用いた治療もされている場合の、ヒト炎症の治療において使用するための、配列番号３８（ＧＧＧＰ）のモチーフを有するペプチドは、ヒトＣペプチド配列から誘導可能な配列番号１８（ＥＡＥＤＬＱＶＧＱＶＥＬＧＧＧＰＧＡＧＳＬＱＰＬ）の合成の及び単離されたペプチドである。別の実施形態では、本明細書において提供される、本出願の図１に列記されるペプチドに機能的に同等な、特に、１型糖尿病を患っていると診断されたヒト対象における、最も好ましくは、前記対象がインスリンを用いた治療もされている場合の、ヒト炎症の治療において使用するための、配列番号３８（ＧＧＧＰ）のモチーフを有するペプチドは、ヒトＣペプチド配列から誘導可能な配列番号１９（ＬＱＶＧＱＶＥＬＧＧＧＰＧＡＧＳＬＱＰＬＡＬ）の合成の及び単離されたペプチドである。別の実施形態では、本明細書において提供される、本出願の図１に列記されるペプチドに機能的に同等な、特に、１型糖尿病を患っていると診断されたヒト対象における、最も好ましくは、前記対象がインスリンを用いた治療もされている場合の、ヒト炎症の治療において使用するための、配列番号３８（ＧＧＧＰ）のモチーフを有するペプチドは、ヒトＣペプチド配列から誘導可能な配列番号２０（ＤＬＱＶＧＱＶＥＬＧＧＧＰＧＡＧＳＬＱＰＬ）の合成の及び単離されたペプチドである。別の実施形態では、本明細書において提供される、本出願の図１に列記されるペプチドに機能的に同等な、特に、１型糖尿病を患っていると診断されたヒト対象における、最も好ましくは、前記対象がインスリンを用いた治療もされている場合の、ヒト炎症の治療において使用するために提供される、配列番号３８（ＧＧＧＰ）のモチーフを有するペプチドは、ヒトＣペプチド配列から誘導可能な配列番号２１（ＬＱＶＧＱＶＥＬＧＧＧＰＧＡＧＳＬＱＰＬ）の合成の及び単離されたペプチドである。別の実施形態では、本明細書において提供される、本出願の図１に列記されるペプチドに機能的に同等な、特に、１型糖尿病を患っていると診断されたヒト対象における、最も好ましくは、前記対象がインスリンを用いた治療もされている場合の、ヒト炎症の治療において使用するための、配列番号３８（ＧＧＧＰ）のモチーフを有するペプチドは、ヒトＣペプチド配列から誘導可能な配列番号２２（ＬＧＧＧＰＧＡＧＳＬＱＰＬ）の合成の及び単離されたペプチドである。別の実施形態では、本明細書において提供される、本出願の図１に列記されるペプチドに機能的に同等な、特に、１型糖尿病を患っていると診断されたヒト対象における、最も好ましくは、前記対象がインスリンを用いた治療もされている場合の、ヒト炎症の治療において使用するための、配列番号３８（ＧＧＧＰ）のモチーフを有するペプチドは、ヒトＣペプチド配列から誘導可能な配列番号２３（ＶＧＱＶＥＬＧＧＧＰＧＡＧＳＬ）の合成の及び単離されたペプチドである。別の実施形態では、本明細書において提供される、本出願の図１に列記されるペプチドに機能的に同等な、特に、１型糖尿病を患っていると診断されたヒト対象における、最も好ましくは、前記対象がインスリンを用いた治療もされている場合の、ヒト炎症の治療において使用するための、配列番号３８（ＧＧＧＰ）のモチーフを有するペプチドは、ヒトＣペプチド配列から誘導可能な配列番号２４（ＧＧＧＰＧＡＧＳＬＱ）の合成の及び単離されたペプチドである。
【００２９】
本発明はまた、炎症及び組織修復を調整する特定の調節エレメントにおいて本明細書において同定される調節モデルエレメントペプチド又はその断片として本明細書において同定される、単離された及び／又は合成の、好ましくは非ペグ化の、ペプチドを提供する。本発明は、単離された及び／又は合成ペプチドであって、前記調節モデルエレメントペプチド又は断片が、好ましくは、ｘＧｘｘＰＧ又はｘｘＧｘＰＧモチーフを有し、好ましくは、例えば、本明細書の表３において同定されるタンパク質から誘導され得る、ペプチドを提供する。好ましい実施形態では、モデルエレメントは、それが少なくとも１つのＮ末端及び少なくとも１つのＣ末端の塩基性アミノ酸残基Ｒ（アルギニン）又はＫ（リシン）により隣接されている時に認識される。２つの隣接する塩基性残基を有しないエレメント内からのより小さい断片もまた炎症及び組織修復の調整において有用である。一実施形態では、本明細書において提供されるヒト炎症の治療において使用するための調節モデルエレメントペプチド断片は、ヒトＣＯＬ６Ａ３配列（ＵｎｉｐｒｏｔデータベースにおいてＣＯＬ６Ａ３は識別記号Ｐ１２１１１の下で公知であり、配列番号２５（ＦＲＡＡＰＬＱＧＭＬＰＧＬＬＡＰＬＲＴ）の配列は、おおよそ６０５〜６２６の位置からのアイソフォーム１における配列中に見出される）から誘導可能な配列番号２５（ＦＲＡＡＰＬＱＧＭＬＰＧＬＬＡＰＬＲＴ）の合成の及び単離されたペプチドである。前記ペプチドが、及びその断片も同様に、ヒト炎症の治療及び／又は組織修復において有用であることが本明細書において提供される。別の実施形態では、本明細書において提供されるヒト炎症の治療及び／又は組織修復において使用するための調節モデルエレメントペプチド断片は、ヒトＣＯＬ６Ａ３配列から誘導可能な配列番号２６（ＡＡＰＬＱＧＭＬＰＧＬＬＡＰＬ）の合成の及び単離されたペプチドである。別の実施形態では、本明細書において提供されるヒト炎症の治療及び／又は組織修復において使用するための調節モデルエレメントペプチド断片は、ヒトＣＯＬ６Ａ３配列から誘導可能な配列番号２７（ＬＱＧＭＬＰＧＬＬＡＰＬ）の合成の及び単離されたペプチドである。別の実施形態では、本明細書において提供されるヒト炎症の治療及び／又は組織修復において使用するための調節モデルエレメントペプチド断片は、ヒトＣＯＬ６Ａ３配列から誘導可能な配列番号２８（ＬＱＧＭＬＰＧＬＬＡ）の合成の及び単離されたペプチドである。別の実施形態では、本明細書において提供されるヒト炎症の治療及び／又は組織修復において使用するための調節モデルエレメントペプチド断片は、ヒトＣＯＬ６Ａ３配列から誘導可能な配列番号２９（ＬＱＧＭＬＰＧ）の合成の及び単離されたペプチドである。別の実施形態では、本明細書において提供されるヒト炎症の治療及び／又は組織修復において使用するための調節モデルエレメントペプチド断片は、ヒトＣＯＬ６Ａ３配列から誘導可能な配列番号３０（ＧＭＬＰＧＬＬＡ）の合成の及び単離されたペプチドである。
【００３０】
別の実施形態では、本明細書において提供されるヒト炎症の治療及び／又は組織修復において使用するための調節モデルエレメントペプチド断片は、ヒトヒトプロカルシトニン配列から誘導可能な配列番号１７７（ＣＧＮＬＳＴＣＭＬＧＴＹＴＱＤＦＮＫＦＨＴＦＰＱＴＡＩＧＶＧＡＰＧ）の合成の及び単離されたペプチドである。
【００３１】
別の実施形態では、本明細書において提供されるヒト炎症の治療及び／又は組織修復において使用するための調節モデルエレメントペプチド断片は、ヒトヒトプロカルシトニン配列から誘導可能な配列番号１７８（ＭＬＧＴＹＴＱＤＦＮＫＦＨＴＦＰＱＴＡＩＧＶＧＡＰＧ）の合成の及び単離されたペプチドである。
【００３２】
別の実施形態では、本明細書において提供されるヒト炎症の治療及び／又は組織修復において使用するための調節モデルエレメントペプチド断片は、ヒトヒトプロカルシトニン配列から誘導可能な配列番号１７９（ＦＮＫＦＨＴＦＰＱＴＡＩＧＶＧＡＰＧ）の合成の及び単離されたペプチドである。別の実施形態では、本明細書において提供されるヒト炎症の治療及び／又は組織修復において使用するための調節モデルエレメントペプチド断片は、ヒトヒトプロカルシトニン配列から誘導可能な配列番号１８０（ＦＰＱＴＡＩＧＶＧＡＰＧ）の合成の及び単離されたペプチドである。別の実施形態では、本明細書において提供されるヒト炎症の治療及び／又は組織修復において使用するための調節モデルエレメントペプチド断片は、ヒトヒトプロカルシトニン配列から誘導可能な配列番号１８１（ＡＩＧＶＧＡＰＧ）の合成の及び単離されたペプチドである。
【００３３】
別の実施形態では、本明細書において提供されるヒト炎症の治療及び／又は組織修復において使用するための調節モデルエレメントペプチド断片は、ヒトＮＴｐｒｏＢＮＰ配列から誘導可能な配列番号１８２（ＳＨＰＬＧＳＰＧＳＡＳＤＬＥＴＳＧＬＱＥＱ）の合成の及び単離されたペプチドである。別の実施形態では、本明細書において提供されるヒト炎症の治療及び／又は組織修復において使用するための調節モデルエレメントペプチド断片は、ヒトＮＴｐｒｏＢＮＰ配列から誘導可能な配列番号１８３（ＰＬＧＳＰＧＳＡＳＤＬＥＴＳＧＬＱＥＱ）の合成の及び単離されたペプチドである。別の実施形態では、本明細書において提供されるヒト炎症の治療及び／又は組織修復において使用するための調節モデルエレメントペプチド断片は、ヒトＮＴｐｒｏＢＮＰ配列から誘導可能な配列番号１８４（ＰＬＧＳＰＧＳＡＳＤＬＥＴＳ）の合成の及び単離されたペプチドである。別の実施形態では、本明細書において提供されるヒト炎症の治療及び／又は組織修復において使用するための調節モデルエレメントペプチド断片は、ヒトＮＴｐｒｏＢＮＰ配列から誘導可能な配列番号１８５（ＰＬＧＳＰＧＳＡＳ）の合成の及び単離されたペプチドである。別の実施形態では、本明細書において提供されるヒト炎症の治療及び／又は組織修復において使用するための調節モデルエレメントペプチド断片は、ヒトＮＴｐｒｏＢＮＰ配列から誘導可能な配列番号１８６（ＰＬＧＳＰＧ）の合成の及び単離されたペプチドである。別の実施形態では、本明細書において提供されるヒト炎症の治療及び／又は組織修復において使用するための調節モデルエレメントペプチド断片は、ヒトＰＯＭＣ配列から誘導可能な配列番号１８７（ＥＤＶＳＡＧＥＤＣＧＰＬＰＥＧＧＰＥＰＲＳＤＧＡＫＰＧＰＲＥＧ）の合成の及び単離されたペプチドである。別の実施形態では、本明細書において提供されるヒト炎症の治療及び／又は組織修復において使用するための調節モデルエレメントペプチド断片は、ヒトＰＯＭＣ配列から誘導可能な配列番号１８８（ＧＥＤＣＧＰＬＰＥＧＧＰＥＰＲＳＤＧＡＫＰＧＰＲＥＧ）の合成の及び単離されたペプチドである。別の実施形態では、本明細書において提供されるヒト炎症の治療及び／又は組織修復において使用するための調節モデルエレメントペプチド断片は、ヒトＰＯＭＣ配列から誘導可能な配列番号１８９（ＰＬＰＥＧＧＰＥＰＲＳＤＧＡＫＰＧＰＲＥＧ）の合成の及び単離されたペプチドである。別の実施形態では、本明細書において提供されるヒト炎症の治療及び／又は組織修復において使用するための調節モデルエレメントペプチド断片は、ヒトＰＯＭＣ配列から誘導可能な配列番号１９０（ＰＬＰＥＧＧＰＥＰＲＳＤＧＡＫＰＧ）の合成の及び単離されたペプチドである。別の実施形態では、本明細書において提供されるヒト炎症の治療及び／又は組織修復において使用するための調節モデルエレメントペプチド断片は、ヒトＰＯＭＣ配列から誘導可能な配列番号１９１（ＳＤＧＡＫＰＧ）の合成の及び単離されたペプチドである。
【００３４】
別の実施形態では、本明細書において提供されるヒト炎症の治療及び／又は組織修復において使用するための調節モデルエレメントペプチド断片は、ヒトパイリン配列から誘導可能な配列番号１９２（ＲＲＮＡＳＳＡＧＲＬＱＧＬＡＧＧＡＰＧＱＫＥＣＲ）の合成の及び単離されたペプチドである。前記ペプチドが、及びその断片も同様に、ヒト炎症の治療及び／又は組織修復において有用であることが本明細書において提供される。別の実施形態では、本明細書において提供されるヒト炎症の治療及び／又は組織修復において使用するための調節モデルエレメントペプチド断片は、ヒトパイリン配列から誘導可能な配列番号１９３（ＲＬＱＧＬＡＧＧＡＰＧＱＫＥＣＲ）の合成の及び単離されたペプチドである。別の実施形態では、本明細書において提供されるヒト炎症の治療及び／又は組織修復において使用するための調節モデルエレメントペプチド断片は、ヒトヒトパイリン（マレノストリン）配列から誘導可能な配列番号１９４（ＲＲＮＡＳＳＡＧＲＬＱＧＬＡＧＧＡＰＧＱ）の合成の及び単離されたペプチドである。
【００３５】
別の実施形態では、本明細書において提供されるヒト炎症の治療及び／又は組織修復において使用するための調節モデルエレメントペプチド断片は、ヒトパイリン配列から誘導可能な配列番号１９５（ＬＱＧＬＡＧＧＡＰＧＱ）の合成の及び単離されたペプチドである。別の実施形態では、本明細書において提供されるヒト炎症の治療及び／又は組織修復において使用するための調節モデルエレメントペプチド断片は、ヒトパイリン配列から誘導可能な配列番号１９６（ＡＧＧＡＰＧ）の合成の及び単離されたペプチドである。本発明はまた、４〜４０アミノ酸、好ましくは４〜２０、より好ましくは４〜１５、より好ましくは４〜１２、最も好ましくは４〜９アミノ酸からなるペプチドであって、少なくとも１つのＰＧドメイン、好ましくはｘＧｘＰ又はＧｘｘＰ、ＧｘｘＰＧ又はｘＧｘＰＧモチーフを含むペプチドのヒトにおける使用を提供する。
【００３６】
本発明はまた、疾患を予防又は治療する方法であって、Ｃペプチド及び／又はエラスチンペプチドの断片のエラスチン受容体への結合をアンタゴナイズし、遮断し、阻害し又は予防することができるペプチドをヒトに提供することを含む、方法を提供する。本発明はまた、前記ペプチド又は断片が、エラスチン受容体への結合を可能とする結合部位を含む、方法を提供する。本発明はまた、前記結合部位が、ＶＩＩＩ型ベータターンを可能とするアミノ酸配列モチーフＧｘｘＰを含む、方法を提供する。本発明はまた、前記結合部位がアミノ酸配列モチーフｘＧｘＰＧ又はＧｘｘＰＧを含む、方法を提供する。本発明はまた、前記結合部位がアミノ酸配列モチーフｘＧｘＰ又はＧｘｘＰを含み、前記ＰがＶＩＩＩ型ベータターンを可能とする、方法を提供する。本発明はまた、前記結合部位がアミノ酸配列モチーフＧｘｘＰＧを含む、方法を提供する。
【００３７】
本発明はまた、前記ペプチド断片が、エラスチン受容体への結合を可能とする結合部位を含む、方法を提供する。本発明はまた、前記結合部位が、ＶＩＩＩ型ベータターンを可能とするアミノ酸配列モチーフｘＧｘＰ又はＧｘｘＰを含む、方法を提供する。
【００３８】
本発明はまた、前記結合部位がアミノ酸配列モチーフｘＧｘＰＧ又はＧｘｘＰＧを含む、方法を提供する。
【００３９】
本発明はまた、前記ペプチドがＣペプチドのエラスチン受容体への結合を調整することを前記モチーフが可能とする組成物のヒトにおける使用を提供する。本発明はまた、４〜４０アミノ酸、好ましくは４〜２０、より好ましくは４〜１５、より好ましくは４〜１２、最も好ましくは４〜９アミノ酸からなるペプチドを含む医薬組成物のヒトにおける使用であって、ペプチドが配列番号３１（ＱＤＥＡ）のモチーフを含む、使用を提供する。
【００４０】
本発明はまた、ヒトの疾患を予防又は治療する方法であって、Ｃペプチド及び／又はエラスチンペプチドの断片の前記ヒトのエラスチン受容体への結合をアンタゴナイズし、遮断し、阻害し又は予防することができるペプチドを前記ヒトに提供することを含む、方法を提供する。ヒトの疾患を予防又は治療する方法の一実施形態において。前記ペプチド又は断片が、エラスチン受容体への結合を可能とするアミノ酸モチーフを含むことが最も好ましい。
【００４１】
本発明はまた、ヒトの疾患を予防又は治療する方法であって、前記ヒトのエラスチン受容体をアゴナイズすることができるペプチドを前記ヒトに提供することを含む、方法を提供する。
【００４２】
本発明はまた、４〜４０アミノ酸、好ましくは４〜２０、より好ましくは４〜１５、より好ましくは４〜１２、最も好ましくは４〜９アミノ酸からなるペプチドを含む組成物、好ましくは医薬組成物又は医薬のヒトにおける使用であって、ペプチドが少なくとも１つのｘＧｘＰ、ＧｘｘＰ、ＧｘｘＰＧ又はｘＧｘＰＧモチーフを含み、前記モチーフが、好ましくは、前記ペプチドがＣペプチドのエラスチン受容体への結合を調整することを可能とする、使用を提供する。好ましい実施形態では、前記組成物は、糖尿病の治療のため、好ましくは、内因性Ｃペプチドレベルが低い糖尿病、例えば、ヒトにおける１型糖尿病又は末期２型糖尿病を伴って見られる微小血管障害の治療又は予防のために調製される（ｐｒｅｐｅａｒｅｄ）。
【００４３】
本発明はまた、医薬、好ましくは、内因性Ｃペプチドレベルが低い糖尿病、例えば、１型糖尿病又は末期２型糖尿病を伴って見られる微小血管障害の治療又は予防のための医薬の製造のための、４〜４０アミノ酸、好ましくは４〜２０、より好ましくは４〜１５、より好ましくは４〜１２、最も好ましくは４〜９アミノ酸からなるペプチドの使用であって、ペプチドが少なくとも１つのｘＧｘＰ、ＧｘｘＰ、ＧｘｘＰＧ又はｘＧｘＰＧモチーフを含み、前記モチーフが、好ましくは、前記ペプチドがＣペプチドのエラスチン受容体への結合を調整することを可能とする、使用を提供する。
【００４４】
本発明はまた、好ましくは、本明細書で定義されるメタボリックシンドロームの状態の治療又は予防のための、好ましくは、心臓血管疾患又は大血管疾患又はアテローム性動脈硬化症などのアテローム性疾患又は動脈硬化症の治療又は予防のための、４〜４０アミノ酸、好ましくは４〜２０、より好ましくは４〜１５、より好ましくは４〜１２、最も好ましくは４〜９アミノ酸からなるペプチドを含む組成物、好ましくは医薬組成物又は医薬のヒトにおける使用であって、ペプチドが配列番号３１（ＱＤＥＡ）のモチーフを含み、好ましくは、前記モチーフが、前記ペプチドがＣペプチドのエラスチン受容体への結合を調整することを可能とする、使用を提供する。
【００４５】
本発明はまた、本明細書で定義されるメタボリックシンドロームの状態の治療又は予防のための、好ましくは、心臓血管疾患又は大血管疾患又はアテローム性動脈硬化症などのアテローム性疾患又は動脈硬化症の治療又は予防のための、４〜４０アミノ酸、好ましくは４〜２０、より好ましくは４〜１５、より好ましくは４〜１２、最も好ましくは４〜９アミノ酸からなるペプチドのヒトにおける使用であって、ペプチドが配列番号３１（ＱＤＥＡ）のモチーフを含み、好ましくは、前記モチーフが、前記ペプチドがＣペプチドのエラスチン受容体への結合を調整することを可能とする、使用を提供する。
【００４６】
本発明は、広く知られたインスリンと共に１：１の比で産生される小タンパク質であるＣペプチドによる、血管エラスチン修復に関与するタンパク質であるエラスチン受容体のこれまで見過ごされてきたロック・アンド・キー（ｌｏｃｋ−ａｎｄ−ｋｅｙ）活性化により、メタボリックシンドロームにおけるいわゆる炎症が増大することを示す。ヒトエラスチン受容体は、Ｃペプチド中及びその分解産物（ＧｘｘＰドメイン断片）中に見出されるアミノ酸のキーモチーフ（ＧｘｘＰドメイン）により活性化されるロックである。２つの間のこのロック・アンド・キー相互作用はこれまで誰にも発見されておらず、エラスチン受容体（エラスチンペプチド）の通常のキーのみならず、食後に血液中にグルコースが生じるたびにインスリンと共に産生されるペプチドであるＣペプチドがエラスチン受容体とロック・アンド・キー様式で相互作用するという発見を活用して、メタボリックシンドロームの治療のための新規のペプチドの開発における新規の進出が提供される。要約すると、本発明は、過剰な摂食が直接的に、メタボリックシンドロームのロックを解除するキーとしてＣペプチドのスイッチを入れるという洞察を提供する。毎日の過食は、血中のＣペプチドレベル（及びＧｘｘＰモチーフを含有するその切断断片）の毎日の増加を結果としてもたらす。エラスチン受容体は主に、エラスチンを産生する細胞及び血管を修復する細胞（合わせて血管細胞と呼ばれる）上に見出されるので、過剰なＣペプチド及びその断片によるエラスチン受容体の毎日のＧｘｘＰロック・アンド・キー活性化は、毎日為される血管損傷を結果としてもたらす。血管壁の３０％はエラスチンから構成され、炎症細胞は血管に対して為される損傷を絶えず修復するので、エラスチン修復の障害及び血管の炎症の惹起は、帰結なしのままであることはできない。実際、Ｃペプチド及びＧｘｘＰ断片による継続したエラスチン受容体活性化は、血管の過剰修復の状態を残し、この状態は、これまで炎症と呼ばれており、それ以外にアテローム性動脈硬化症と呼ばれており、メタボリックシンドロームの全ての状態の基礎となる活性化した炎症性の血管細胞を有する血管壁の肥厚により特徴付けられる状態である。長年にわたり、及び人により異なる徐々に起こる様式で、益々多くの損傷が様々な臓器（例えば、心臓、血管、膵臓、腎臓、脳）の脈管構造の弾性及び強度に対して起こり、これが一般にアテローム性動脈硬化症、高血圧及び脂質異常症に繋がり、最終的に、心臓血管疾患、２型糖尿病、慢性腎不全及び血管性認知症としての様々な発現に繋がる。
【００４７】
該発見は、毎日の過剰な摂食が慢性炎症とも呼ばれる血管の過剰修復をどのように結果としてもたらすのかを説明する。簡潔に述べれば、グルコース（糖）を含む食品を消費するたびにインスリン及びしたがってＣペプチドが産生され、多過ぎるグルコースを食するたびに益々多くのインスリン、及びしたがって益々多くの（過剰な）Ｃペプチドが産生される。過剰なエラスチン受容体活性化を引き起こし、炎症を伴う血管の過剰修復に繋がるモチーフＧｘｘＰのロックを解除するキーをなおも有するのはこの過剰なＣペプチド及びその断片である。毎日の過食は、Ｃペプチド及びそのＧｘｘＰ断片の過剰な産生を直接的に引き起こし、それが毎日足し合わさってエラスチン受容体誘導性の過剰修復となり、慢性の過剰修復及びいわゆる炎症、脂質異常症（ｄｉｓｌｉｐｉｄａｅｍｉａ）、高血圧に繋がり、最終的にはメタボリックシンドロームにおいて見られる健常でない血管に繋がる。この洞察と共に、該発見は、ＧｘｘＰロック・アンド・キー相互作用を遮断して、疾患、特に高血圧及びアテローム性動脈硬化症を予防するための製造物（免疫調整ペプチド（ｉｍｍｕｎｏｌａｔｏｒｙ  ｐｅｐｔｉｄｅｓ））を開発及び使用するための道を提供した。また、本発明は、座りがちの生活によるリスクの追加を説明する。簡潔に述べれば、筋肉の燃料として砂糖を含む食品を不健康的に摂取することを使用しないことにより、我々の身体が益々多くのインスリンを産生して肝臓が過剰な糖を脂肪に変化させることが促され、この脂肪が血液中に戻ってきて脂質異常症（ｄｉｓｌｉｐｉｄａｅｍｉａ）となり得る。ここでもまた、過剰なＣペプチドがインスリンと共に産生されて、ロック・アンド・キーによるエラスチン受容体活性化が発動され、記載した通りに脂肪代謝の調節解除にまで繋がる。第三に、本発明は、喫煙によるリスクの追加も説明する。簡潔に述べれば、喫煙（又は同様に、大気汚染）は、肺の弾性組織に損傷を引き起こし、それにより、エラスチン受容体活性化を引き起こすことが知られているＧｘｘＰモチーフ（本明細書においてエラスチンペプチドと呼ばれる）を有するエラスチンの断片を放出させる。したがって、喫煙は、ＧｘｘＰモチーフを有するより多くのペプチドをそのモチーフを有する既に循環しているＣペプチド断片に加える。食事誘導性のＣペプチドのこの蓄積及び喫煙誘導性のエラスチンペプチドは、喫煙し及び食事で多過ぎる糖を好き放題に摂っている人々において、悪化した過剰修復及びいわゆる炎症、及びしたがって悪化した心臓血管又は慢性腎臓疾患となるまで積み重なる。本発明は、異なる生活様式条件、過食、座りがちであること及び喫煙により引き起こされる疾患の間の未だに充分に分かっていない共通の原因的関係性を示している。本発明は、ＧｘｘＰロック・アンド・キー相互作用を遮断して疾患を予防するためのペプチドを提供する。Ｃペプチド及びエラスチンペプチドの両方、及びそれらの分解産物又は断片は、血中及び尿中で比較的安定である。インスリンは肝臓中で迅速に分解されて血液から消失するが、Ｃペプチド（及びＧｘｘＰモチーフを有する切断断片）の他にエラスチンペプチドは、血中ではるかに長い寿命を有し、腎臓によってのみ排出される。し���がって、食事をして新しいＣペプチドと共に新しいインスリンを産生するにせよ、喫煙を続けて肺のより多くのエラスチン分解を生じさせるにせよ、Ｃペプチド及びエラスチンペプチドのレベルが増大し、これが時間と共にエラスチン受容体のＧｘｘＰ媒介性の活性化を介して益々多くの血管損傷を引き起こす。Ｃペプチド及びエラスチンペプチドの両方のＧｘｘＰロック・アンド・キー相互作用は、本明細書において提供されるこれらの診断試験の結果に応じて疾患を予防するために適切なペプチドを用いて遮断され得る。また、本発明は、ＧｘｘＰ−受容体結合を刺激し（アゴニスト）又は阻害する（アンタゴニスト）ペプチドを提供する。アゴニストは、Ｃペプチドレベルが低い患者、例えば、１型糖尿病又は末期２型糖尿病を患っている人々において使用され得る。アンタゴニストは、Ｃペプチドレベルが高い患者、特に、メタボリックシンドロームを患っている又は患う傾向がある人々において使用され得る。
【００４８】
本発明はまた、メタボリックシンドローム又はインスリン抵抗性又は高血圧又はアテローム性動脈硬化症又は脂質異常症又は２型糖尿病又は関連する代謝障害をそれを患っている又はその治療若しくは予防を必要とするヒトにおいて治療又は予防する方法であって、Ｃペプチド／エラスチン結合タンパク質相互作用のアンタゴニストをヒトに投与することを含む、方法を提供する。さらなる実施形態では、前記方法は、Ｃペプチドの非存在下でインスリンをヒトに投与することをさらに含む。別の実施形態では、本発明は、メタボリックシンドローム又はインスリン抵抗性又は高血圧又はアテローム性動脈硬化症又は２型糖尿病又は代謝障害をそれを患っている又はその治療若しくは予防を必要とするヒトにおいて治療又は予防する方法であって、Ｃペプチド／エラスチン結合タンパク質相互作用のアンタゴニストをヒトに投与することを含み、アルファ−エノラーゼのアンタゴニストをヒトに投与することを追加的に含む、方法を提供する。さらなる実施形態では、前記方法は、Ｃペプチドの非存在下でインスリンをヒトに投与することをさらに含む。さらに別の実施形態では、本発明は、メタボリックシンドローム又はインスリン抵抗性又は高血圧又はアテローム性動脈硬化症又は２型糖尿病又は代謝障害をそれを患っている又はその治療若しくは予防を必要とするヒトにおいて治療又は予防する方法であって、Ｃペプチド／エラスチン結合タンパク質相互作用のアンタゴニストをヒトに投与することを含み、ＧＰＲ１４６のアンタゴニストをヒトに投与することを追加的に含む、方法を提供する。さらなる実施形態では、前記方法は、Ｃペプチドの非存在下でインスリンをヒトに投与することをさらに含む。
【００４９】
本発明はまた、Ｃペプチドのエラスチン受容体との結合若しくは相互作用を調整する剤としてのＣペプチドの単離された断片のヒトにおける使用、及び／又はＣペプチドのエラスチン受容体との結合若しくは相互作用を調整する剤としてのエラスチン受容体の単離された断片の使用を提供する。そのようなペプチド（断片又はバリアント）の例は、配列番号３２（ＬＧＧＧＰＧＡＧ）若しくはその断片、若しくは配列番号３３（ＬＡＧＧＰＧＡＧ）若しくはその断片を含むか、又は配列番号３４（ＬＧＧＧＰＧ）若しくは配列番号３５（ＬＡＧＧＰＧ）若しくはその断片を有するペプチドなどのペプチドを含み、好ましくは、ペプチド又は断片は、配列番号３６（ＬＧＧＧＰ）、配列番号３７（ＬＡＧＧＰ）、配列番号３８（ＧＧＧＰ）及び配列番号３９（ＧＡＧＰ）、又は配列番号３２（ＬＧＧＧＰＧＡＧ）若しくはその断片、若しくは配列番号３３（ＬＡＧＧＰＧＡＧ）若しくはその断片、若しくは配列番号３４（ＬＧＧＧＰＧ）若しくは配列番号３５（ＬＡＧＧＰＧ）若しくはその断片のレトロインベルソバリアントペプチドからなる群から選択され、好ましくは、ペプチド又は断片は、以下にさらに議論されるように、配列番号３６（ＬＧＧＧＰ）、配列番号３７（ＬＡＧＧＰ）、配列番号３８（ＧＧＧＰ）のレトロインベルソバリアントからなる群から選択される。
【００５０】
本発明はまた（ａｌｓ）、ヒト療法において使用するための、好ましくは、ヒト糖尿病及び／若しくはヒト糖尿病合併症の治療において使用するための、又は炎症活性を低減させるための、哺乳動物インスリンＣペプチドの断片に由来するペプチドを提供する。前記ペプチド又は断片は、２〜９アミノ酸長、より好ましくは３〜６アミノ酸長、最も好ましくは４〜５アミノ酸長であることが好ましい。本発明はまた（ａｌｓ）、哺乳動物インスリンＣペプチドの断片に由来するペプチドであって、該ペプチドが、配列番号３２（ＬＧＧＧＰＧＡＧ）若しくはその断片、若しくは配列番号３３（ＬＡＧＧＰＧＡＧ）若しくはその断片を含むか、又は配列番号３４（ＬＧＧＧＰＧ）若しくは配列番号３５（ＬＡＧＧＰＧ）若しくはその断片を有し、好ましくは、ペプチド又は断片が、配列番号３６（ＬＧＧＧＰ）、配列番号３７（ＬＡＧＧＰ）、配列番号３８（ＧＧＧＰ）及び配列番号３９（ＧＡＧＰ）からなる群から選択され、前記ペプチドが、エラスチン受容体型結合と相互作用する又は自然免疫細胞の炎症活性を調整する能力を有する、ペプチドを提供する。前記ペプチド又は断片は、２〜９アミノ酸長、より好ましくは３〜６アミノ酸長、最も好ましくは４〜５アミノ酸長であることが好ましい。本発明はまた（ａｌｓ）、哺乳動物インスリンＣペプチドの断片に本質的に相同的な単離された又は合成ペプチドであって、該ペプチドが、配列番号３２（ＬＧＧＧＰＧＡＧ）若しくはその断片、若しくは配列番号３３（ＬＡＧＧＰＧＡＧ）若しくはその断片を含むか、又は配列番号３４（ＬＧＧＧＰＧ）若しくは配列番号３５（ＬＡＧＧＰＧ）若しくはその断片を有し、好ましくは、ペプチド又は断片が、配列番号３６（ＬＧＧＧＰ）、配列番号３７（ＬＡＧＧＰ）、配列番号３８（ＧＧＧＰ）及び配列番号３９（ＧＡＧＰ）からなる群から選択され、前記ペプチドが、エラスチン受容体型結合と相互作用する又は自然免疫細胞の炎症活性を調整する能力を有する、ペプチドを提供する。前記ペプチド又は断片は、２〜９アミノ酸長、より好ましくは３〜６アミノ酸長、最も好ましくは４〜５アミノ酸長であることが好ましい。
【００５１】
本発明はまた、配列番号３２（ＬＧＧＧＰＧＡＧ）若しくはその断片、又は配列番号３３（ＬＡＧＧＰＧＡＧ）若しくはその断片、又は配列番号３４（ＬＧＧＧＰＧ）若しくは配列番号３５（ＬＡＧＧＰＧ）若しくはその断片のレトロインベルソバリアントであって、好ましくは、ペプチド又は断片が、配列番号３６（ＬＧＧＧＰ）、配列番号３７（ＬＡＧＧＰ）、配列番号３８（ＧＧＧＰ）又は配列番号３９（ＧＡＧＰ）のレトロインベルソバリアントからなる群から選択される、レトロインベルソバリアントを提供する。前記レトロインベルソバリアントペプチドは、２〜９アミノ酸長、より好ましくは３〜６アミノ酸長、最も好ましくは４〜５アミノ酸長であることが好ましい。
【００５２】
本発明はまた、配列番号３２（ＬＧＧＧＰＧＡＧ）若しくはその断片、若しくは配列番号３３（ＬＡＧＧＰＧＡＧ）若しくはその断片を含むか、又は配列番号３４（ＬＧＧＧＰＧ）若しくは配列番号３５（ＬＡＧＧＰＧ）若しくはその断片を有するペプチドのヒトにおける使用であって、好ましくは、ペプチド又は断片が、配列番号３６（ＬＧＧＧＰ）、配列番号３７（ＬＡＧＧＰ）、配列番号３８（ＧＧＧＰ）及び配列番号３９（ＧＡＧＰ）からなる群から選択され、前記ペプチド又は断片が、エラスチン受容体型結合と相互作用する又は自然免疫細胞の炎症活性を調整する能力を有し、使用が、少なくとも１つの薬学的に許容される担体又は賦形剤を伴う、使用を提供する。前記ペプチド又は断片は、２〜９アミノ酸長、より好ましくは３〜６アミノ酸長、最も好ましくは４〜５アミノ酸長であることが好ましい。好ましい実施形態では、前記ペプチドは、糖尿病、糖尿病合併症と戦うため、又は炎症状態を治療するために効果的な少なくとも１つの追加の活性剤、例えば、インスリン又はメトホルミンと組み合わせられ、及び／又は、追加の活性剤は、インターロイキン−１受容体アンタゴニスト若しくはインターロイキン−１に対する、好ましくはインターロイキン−１−ベータに対する抗体、又はアルファ−エノラーゼのアゴニスト若しくはＧＰＲ１４６のアゴニストである。
【００５３】
本発明はまた、配列番号３２（ＬＧＧＧＰＧＡＧ）若しくはその断片、又は配列番号３３（ＬＡＧＧＰＧＡＧ）若しくはその断片、又は配列番号３４（ＬＧＧＧＰＧ）若しくは配列番号３５（ＬＡＧＧＰＧ）若しくはその断片のレトロインベルソバリアントペプチドのヒトにおける使用であって、好ましくは、ペプチド又は断片が、配列番号３６（ＬＧＧＧＰ）、配列番号３７（ＬＡＧＧＰ）、配列番号３８（ＧＧＧＰ）及び配列番号３９（ＧＡＧＰ）のレトロインベルソバリアントからなる群から選択され、前記ペプチド又は断片が、エラスチン受容体型結合と相互作用する又は自然免疫細胞の炎症活性を調整する能力を有し、使用が、少なくとも１つの薬学的に許容される担体又は賦形剤を伴う、使用を提供する。前記ペプチド又は断片は、２〜９アミノ酸長、より好ましくは３〜６アミノ酸長、最も好ましくは４〜５アミノ酸長であることが好ましい。好ましい実施形態では、前記ペプチドは、糖尿病、糖尿病合併症と戦うため、又は炎症状態を治療するために効果的な少なくとも１つの追加の活性剤、例えば、インスリン又はメトホルミンと組み合わせられ、及び／又は、追加の活性剤は、インターロイキン−１受容体アンタゴニスト若しくはインターロイキン−１に対する、好ましくはインターロイキン−１−ベータに対する抗体、又はアルファ−エノラーゼのアゴニスト若しくはＧＰＲ１４６のアゴニストである。
【００５４】
本発明はまた、糖尿病、糖尿病合併症を治療するため、又は炎症活性を低減させるため又は糖尿病及び糖尿病合併症を治療するため若しくは炎症活性を低減させるための医薬を調製するための、配列番号３２（ＬＧＧＧＰＧＡＧ）若しくはその断片、若しくは配列番号３３（ＬＡＧＧＰＧＡＧ）若しくはその断片を含むか、又は配列番号３４（ＬＧＧＧＰＧ）若しくは配列番号３５（ＬＡＧＧＰＧ）若しくはその断片を有する少なくとも１つのペプチドの使用であって、好ましくは、ペプチド又は断片が、配列番号３６（ＬＧＧＧＰ）、配列番号３７（ＬＡＧＧＰ）、配列番号３８（ＧＧＧＰ）及び配列番号３９（ＧＡＧＰ）又は配列番号３２（ＬＧＧＧＰＧＡＧ）若しくはその断片、若しくは配列番号３３（ＬＡＧＧＰＧＡＧ）若しくはその断片、若しくは配列番号３４（ＬＧＧＧＰＧ）若しくは配列番号３５（ＬＡＧＧＰＧ）若しくはその断片のレトロインベルソバリアントからなる群から選択され、好ましくは、ペプチド又は断片が、配列番号３６（ＬＧＧＧＰ）、配列番号３７（ＬＡＧＧＰ）、配列番号３８（ＧＧＧＰ）又は配列番号３９（ＧＡＧＰ）のレトロインベルソバリアントからなる群から選択され、前記ペプチド若しくは断片又はバリアントが、エラスチン受容体型結合と相互作用する又は自然免疫細胞の炎症活性を調整する能力を有し、前記使用が、好ましくは、インスリン又はインターロイキン−１受容体アンタゴニスト又はインターロイキン−１に対する、好ましくはインターロイキン−１−ベータに対する抗体の使用をさらに含む、使用を提供する。好ましい実施形態では、前記医薬は、１型糖尿病、任意選択的に腎症、ニューロパチー若しくは網膜症を伴う１型糖尿病を治療するため又は晩期２型糖尿病合併症の発症を遅らせるために利用され、又は前記医薬は炎症状態を治療するために利用される。
【００５５】
本発明はまた、配列番号３２（ＬＧＧＧＰＧＡＧ）若しくはその断片、若しくは配列番号３３（ＬＡＧＧＰＧＡＧ）若しくはその断片の、又は配列番号３４（ＬＧＧＧＰＧ）若しくは配列番号３５（ＬＡＧＧＰＧ）若しくはその断片を有する少なくとも１つのペプチドを含有する製造物であって、好ましくは、ペプチド又は断片が、配列番号３６（ＬＧＧＧＰ）、配列番号３７（ＬＡＧＧＰ）、配列番号３８（ＧＧＧＰ）及び配列番号３９（ＧＡＧＰ）からなる群から選択され、前記ペプチド又は断片が、エラスチン受容体型結合と相互作用する又は自然免疫細胞の炎症活性を調整する能力を有し、又は製造物が、配列番号３２（ＬＧＧＧＰＧＡＧ）若しくはその断片、又は配列番号３３（ＬＡＧＧＰＧＡＧ）若しくはその断片、又は配列番号３４（ＬＧＧＧＰＧ）若しくは配列番号３５（ＬＡＧＧＰＧ）若しくはその断片のレトロインベルソバリアントを含有し、好ましくは、ペプチド又は断片が、配列番号３６（ＬＧＧＧＰ）、配列番号３７（ＬＡＧＧＰ）、配列番号３８（ＧＧＧＰ）又は配列番号３９（ＧＡＧＰ）のレトロインベルソバリアントからなる群から選択され、製造物が、糖尿病及び／又は糖尿病合併症の治療において同時の、別々の又は逐次的な使用のための組合せ調製物として糖尿病又は糖尿病合併症と戦うために効果的な少なくとも１つの追加の活性剤を含む、製造物を提供する。さらなる実施形態では、前記製造物は、微小血管疾患を治療するために効果的な少なくとも１つの追加の活性剤と共に提供される。本明細書において提供されるそのような製造物は、腎症を治療するため若しくは腎症を治療するための医薬を調製するため、又はニューロパチーを治療するため若しくはニューロパチーを治療するための医薬を調製するため、又は網膜症を治療するため若しくは網膜症を治療するための医薬を調製するために使用され得る。そのような製造物は、追加的に、血糖制御のための剤、好ましくは、インスリン又はインスリンと機能的に同等の抗糖尿病剤と共に使用又は提供されてよく、好ましくは、抗糖尿病剤は、通常のインスリン又はインスリン類似体、例えば、インスリンリスプロ、インスリングルリジン、インスリンアスパルト、インスリンデグルデク、インスリングラルギンを含み、又は抗糖尿病剤は、スルホニル尿素又はメグリチニド又はメトホルミンを含む。
【００５６】
本発明はまた、医薬の製造のためのｖ１４ペプチド（配列番号１３１）又はその誘導体（ｔｈｅｒｏｆ）などのペプチドの使用、又はヒトにおいて疾患を予防若しくは治療するためのそのペプチドの使用であって、前記ペプチドが、Ｃペプチド及びエラスチンペプチドの断片のエラスチン受容体への結合を遮断し、阻害し又は予防することができる、使用を提供する。好ましい実施形態では、本発明は、そのようなペプチド又はヒトにおいて疾患を予防若しくは治療するためのその使用（ｔｈｅｒｏｆ）であって、前記ペプチドが、Ｃペプチドの断片のエラスチン受容体への結合を遮断し、阻害し又は予防することができる、ペプチド又はその使用を提供する。
【００５７】
本発明はまた、疾患を予防又は治療する方法であって、Ｃペプチドの断片（好ましくは、配列番号４０（ＧＧＧＰＧ）の配列を含む断片）及びエラスチンペプチドの断片（好ましくは、配列番号４１（ＶＧＶＡＰＧ）の配列を含む断片）のエラスチン受容体への結合を遮断し、阻害し又は予防することができるペプチドをヒトに提供することを含み、好ましくは、前記ペプチド断片が、エラスチン受容体への結合を可能とする結合部位を含み、好ましくは、前記結合部位が、ＶＩＩＩ型ベータターンを可能とするアミノ酸配列モチーフＧｘｘＰを含み、好ましくは、前記部位がアミノ酸配列モチーフＧｘｘＰＧを含む、方法を提供する。
【００５８】
本明細書において提供される、好ましくは、前記部位がアミノ酸配列モチーフＧｘｘＰＧを含む、ＶＩＩＩ型ベータターンを可能とするアミノ酸配列モチーフＧｘｘＰを有する合成ペプチドは、インスリンなどの抗糖尿病性組成物と共に与えられた時に、炎症状態、例えば、急性腎損傷、及び急性の全身性炎症状態、例えば、血管損傷に繋がり、多くの場合に（多臓器の）臓器不全により悪化する敗血症若しくは全身性炎症応答症候群（ＳＩＲＳ）、又は糖尿病を伴う炎症状態の治療において有用である。本発明のさらなる実施形態では、本明細書において提供される、好ましくは、前記部位がアミノ酸配列モチーフＧｘｘＰＧを含む、ＶＩＩＩ型ベータターンを可能とするアミノ酸配列モチーフＧｘｘＰを有するペプチドは、酸耐性カプセル中にカプセル封入される。そのような（薬学的）カプセルは、ヒト及び動物への投与のための経口投薬形態として製薬分野において広く使用されている。本発明によるペプチドが充填されて、そのようなカプセルは、少なくとも１つ、好ましくは２つ又は３つのペンタペプチドモチーフＧｘｘＰＧ又はｘＧｘＰＧ（Ｇはグリシンであり、Ｐはプロリンであり、ｘは任意のアミノ酸である）を付された合成ペプチドの経腸投与のために有用であり、好ましくは、１つの位置ｘにおける少なくとも１つのアミノ酸は、グリシン、アラニン、ロイシン、バリン又はイソロイシンの群から選択され、前記ペプチドはまた、少なくとも１つのグルタミンを付される。そのような投与は、腸内皮細胞が再生を必要とするクローン病などの疾患を軽減又は治療するであろう。また、そのような投与は、過剰な放射線後に得られる胃腸損傷の治療において有用であろう。本明細書において提供される、好ましくは、前記部位がアミノ酸配列モチーフＧｘｘＰＧを含む、ＶＩＩＩ型ベータターンを可能とするアミノ酸配列モチーフＧｘｘＰを有するペプチドはまた、有利には、他の治療用免疫調整剤、例えば、免疫調整ペプチド、例えば、配列番号１（ＬＱＧＶ）、ＡＱＧ若しくは配列番号２（ＡＱＧＶ）を有するペプチド、又は他の免疫調整剤、例えば、ＴＮＦ−アルファ、ＩＬ−１若しくはＩＬ−６といったサイトカインに対する免疫調整抗体若しくはタンパク質と組み合わせられ得る。
【図面の簡単な説明】
【００５９】
【図１】Ｉｄｏ  ｅｔ  ａｌ．（Ｓｃｉｅｎｃｅ，１９９７  Ｊｕｌ  ２５；２７７（５３２５）：５６３−６）は、グルコース誘導性の血管機能障害を正常化する配列番号８（ＧＧＧＰＧＡＧ）のヒトＣペプチドの中央部分を示す。しかしながら、天然Ｃペプチドと同等の能力の反転した（レトロ）及び全てＤアミノ酸の（エナンチオ又はインベルソ）Ｃペプチドを発見して、彼らは、配列番号８（ＧＧＧＰＧＡＧ）の活性は受容体により媒介されないと結論付け、それにより、Ｃペプチドの受容体から遠ざける教示をしている。本明細書は、これとは反対が事実であることを示す。中央部分モチーフＧｘｘＰ（ヒト及びラットＣペプチドにおいて配列番号３８（ＧＧＧＰ）、反転したＣペプチドにおいて配列番号３９（ＧＡＧＰ）及びＤ型のＣペプチドにおいて立体化学的に同等のＰＧＡＧ）を有する全てのペプチドは血管機能障害を正常化するが、そのモチーフを有しないいずれのペプチドもそれを正常化しない。したがって、配列番号８（ＧＧＧＰＧＡＧ）におけるＥＢＰ結合モチーフＧｘｘＰは、血管機能障害を正常化するために必要及び充分である。それゆえ、ヒトＣペプチドは、ＥＲＣを介して血管修復を調整するＥＢＰのリガンドであると考えることができる。１００ｎＭのヒトＣペプチドの効果の平均パーセントとして有効性を表す。３０ｍＭのグルコースについて有意に異なる：＊Ｐ＜０．０５。  ペプチド中のＧｘｘＰモチーフは、ＶＩＩＩ型ベータターンコンファメーション（ｃｏｎｆｉｒｍａｔｉｏｎ）への接近を可能とする時にエラスチン受容体に結合し、この条件は、モチーフｘＧｘｘＰＧにより常に満たされると考えられる。  ＧｘｘＰモチーフ（配列番号３８（ＧＧＧＰ）又は配列番号３９（ＧＡＧＰ）、又は全てＬ体の配列番号３９（ＧＡＧＰ）と体積測定的に同等の全てＤ体のＰＧＡＧ）を有する全てのペプチドは血管機能障害の有意な正常化を示すが、該モチーフを有しないいずれのペプチドも有意な効果を示さず、エラスチン受容体結合モチーフＧｘｘＰがＣペプチドの生物学的活性を誘発するために必要及び充分であることを説明する。図はＩｄｏ  Ｙ，ｅｔ  ａｌ．Ｐｒｅｖｅｎｔｉｏｎ  ｏｆ  ｖａｓｃｕｌａｒ  ａｎｄ  ｎｅｕｒａｌ  ｄｙｓｆｕｎｃｔｉｏｎ  ｉｎ  ｄｉａｂｅｔｉｃ  ｒａｔｓ  ｂｙ  Ｃ−ｐｅｐｔｉｄｅ．Ｓｃｉｅｎｃｅ  １９９７；２７７：５６３−６６より採録した。
【図２】ＧｘｘＰ過剰に対するＧｘｘＰペプチドの欠乏の病理学的血管効果の要約した説明。
【図３】Ｖｉｎａ／Ａｕｔｏｄｏｃｋ及びＰｙＭＯＬを使用して様々なＧｘｘＰヘキサペプチドをエラスチン結合タンパク質（ＥＢＰ）のペプチド結合部位にドッキングした（１、２、３）。各ペプチドの結合コンフォメーションを上位２０のスコアリングポーズから選択した。ＥＢＰの相同性モデル（４）をドッキング手順における受容体として使用した。試験したペプチドは以下の通りであった：  配列番号４１（ＶＧＶＡＰＧ）（ＥＢＰのプロトタイプＧｘｘＰペプチドリガンド（４））  配列番号３４（ＬＧＧＧＰＧ）（ヒトＣペプチド（５）から選択）  配列番号４３（ＱＧＱＬＰＧ）（本明細書において提供される免疫調整ペプチド）  配列番号４４（ＰＧＡＹＰＧ）（ヒトガレクチン−３（６）から選択）  配列番号４５（ＱＧＶＬＰＡ）（ヒトベータ−ｈＣＧのループ２（７）から選択）  参考文献：  １  Ｔｒｏｔｔ，Ｏ  ＆  Ｏｌｓｏｎ，ＡＪ（２０１０）  ＡｕｔｏＤｏｃｋ  Ｖｉｎａ：ｉｍｐｒｏｖｉｎｇ  ｔｈｅ  ｓｐｅｅｄ  ａｎｄ  ａｃｃｕｒａｃｙ  ｏｆ  ｄｏｃｋｉｎｇ  ｗｉｔｈ  ａ  ｎｅｗ  ｓｃｏｒｉｎｇ  ｆｕｎｃｔｉｏｎ，ｅｆｆｉｃｉｅｎｔ  ｏｐｔｉｍｉｚａｔｉｏｎ  ａｎｄ  ｍｕｌｔｉｔｈｒｅａｄｉｎｇ，Ｊ  Ｃｏｍｐ  Ｃｈｅｍ  ３１：４５５−４６１．  ２  Ｓｅｅｌｉｇｅｒ，Ｄ  ＆  ｄｅ  Ｇｒｏｏｔ，ＢＬ（２０１０）  Ｌｉｇａｎｄ  ｄｏｃｋｉｎｇ  ａｎｄ  ｂｉｎｄｉｎｇ  ｓｉｔｅ  ａｎａｌｙｓｉｓ  ｗｉｔｈ  ＰｙＭＯＬ  ａｎｄ  Ａｕｔｏｄｏｃｋ／Ｖｉｎａ．Ｊ  Ｃｏｍｐｕｔ−Ａｉｄｅｄ  Ｍｏｌ  Ｄｅｓ  ２４：４１７−４２２．  ３  ｗｗｗ．ｐｙｍｏｌ．ｏｒｇ  ４  Ｂｌａｎｃｈｅｖｏｙｅ，  Ｃ  ｅｔ  ａｌ．（２０１３）  Ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎ  ｂｅｔｗｅｅｎ  ｔｈｅ  ｅｌａｓｔｉｎ  ｐｅｐｔｉｄｅ  ＶＧＶＡＰＧ  ａｎｄ  ｈｕｍａｎ  ｅｌａｓｔｉｎ  ｂｉｎｄｉｎｇ  ｐｒｏｔｅｉｎ，Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ  ２８８：１３１７−２８．  ５  Ｉｄｏ，Ｙ  ｅｔ  ａｌ．（１９９７）  Ｐｒｅｖｅｎｔｉｏｎ  ｏｆ  ｖａｓｃｕｌａｒ  ａｎｄ  ｎｅｕｒａｌ  ｄｙｓｆｕｎｃｔｉｏｎ  ｉｎ  ｄｉａｂｅｔｉｃ  ｒａｔｓ  ｂｙ  Ｃ−ｐｅｐｔｉｄｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２７７：５６３−６  ６  Ｄｅ  Ｂｏｅｒ，Ｒ  ｅｔ  ａｌ．（２０１１）  Ｐｌａｓｍａ  Ｇａｌｅｃｔｉｎ−３  Ｉｓ  Ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ  ｗｉｔｈ  Ｎｅａｒ−Ｔｅｒｍ  Ｒｅｈｏｓｐｉｔａｌｉｚａｔｉｏｎ  ｉｎ  Ｈｅａｒｔ  Ｆａｉｌｕｒｅ：Ａ  Ｍｅｔａ−Ａｎａｌｙｓｉｓ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｃａｒｄｉａｃ  Ｆａｉｌｕｒｅ  Ｖｏｌ  １７，Ｉｓｓｕｅ  ８，Ｓ９３  ７  Ｋｈａｎ，ＮＡ  ｅｔ  ａｌ．（２０１０）  Ｍｉｔｉｇａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｓｅｐｔｉｃ  ｓｈｏｃｋ  ｉｎ  ｍｉｃｅ  ａｎｄ  ｒｈｅｓｕｓ  ｍｏｎｋｅｙｓ  ｂｙ  ｈｕｍａｎ  ｃｈｏｒｉｏｎｉｃ  ｇｏｎａｄｏｔｒｏｐｈｉｎ−ｒｅｌａｔｅｄ  ｐｅｐｔｉｄｅｓ，Ｃｌｉｎ  Ｅｘｐ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  １６０：４６５−４７８  同様に、全てＤアミノ酸のペプチドＧＰＧＡＧもまた、配列番号４１（ＶＧＶＡＰＧ）のプロトタイプエラスチンペプチドにドッキングするために設計されたＥＢＰのモデルに適する。配列番号４０（ＧＧＧＰＧ）及び配列番号４６（ＧＡＧＰＧ）のＬ−アミノ酸ペプチドもまた該モデルに��する。ＥＢＰに関連する生物活性は、ＧＸＸＰペプチドがプロリン（Ｐ）においてＶＩＩＩ型ベータターンコンファメーション（ｃｏｎｆｉｒｍａｔｉｏｎ）をとることができるかどうかに依存すると考えられる。
【図４】メタボリックシンドローム、アテローム性動脈硬化症及び糖尿病における病態生理学的経路の概要。
【図５】この新しい観点は、アテローム性動脈硬化症及びインスリン抵抗性（ｒｅｓｉｓｔｅｎｃｅ）に伴う疾患（例えば、心臓血管疾患、卒中、末梢動脈疾患、認知症、慢性腎臓疾患及び糖尿病に繋がるベータ細胞不全）に対して新たな光をあてる。それは、糖及び喫煙だけでなく、食事（過剰なエラスチンを含む精製デンプン又は加工肉製品の過剰な摂取）、又は生活様式（スモッグへの曝露又は運動不足）の結果としてもたらされる様々な他の共存するリスク因子を結び付ける。本発明は、メタボリックシンドロームにおけるインスリン抵抗性、高血圧及び慢性軽度炎症又は血管過剰修復の原因としてＣペプチドによるエラスチン受容体活性化を提唱し、この症候群をインスリン抵抗性の他の条件、例えば、エラスチン由来のペプチドがエラスチン受容体を活性化させてインスリン抵抗性過剰修復を引き起こし得る喫煙及び特定の微細物質への曝露によるＣＯＰＤと結び付ける。
【発明を実施するための形態】
【００６０】
メタボリックシンドロームの制御のため並びにメタボリックシンドローム及び糖尿病における微小血管合併症に対する免疫調整ペプチドの開発のための新たな標的、すなわち、エラスチン受容体とのＣペプチドの相互作用が本明細書において提供される。本明細書は、メタボリックシンドローム及び糖尿病における微小血管合併症の原因に関する考えにおいて大きな飛躍を提供する。本出願は、医学界全体により見過ごされてきた事実である、ヒトＣペプチド中のカノニカルなエラスチン受容体結合モチーフ、ＧｘｘＰ又はｘＧｘｘＰＧの存在を記載する。その上、該モチーフは、既に１９９７年にその生物学的活性の中心として同定されたが、潜在的な受容体結合部位として拒絶されたＣペプチドの疎水性中央部分に位置する。本出願は、その拒絶が妥当でないことを示す。本発明は、メタボリックシンドロームにおけるインスリン抵抗性、高血圧及び慢性軽度過剰修復の原因としてＣペプチドによるエラスチン受容体活性化を提唱し、この症候群をインスリン抵抗性の他の条件、例えば、エラスチン由来のペプチドがエラスチン受容体を活性化させてインスリン抵抗性及び過剰修復を引き起こし得る喫煙及び特定の微細物質への曝露によるＣＯＰＤと結び付ける。
【００６１】
本明細書において提供される本発明のある特定の実施形態は、アンタゴニストペプチドの開発、メタボリックシンドロームの治療及び／又は予防のための方法を提供する。ある特定の実施形態では、アンタゴニストペプチドの開発、治療又は予防は、インスリン抵抗性、アテローム性動脈硬化症、心臓血管疾患、並びに／又は糖尿病に伴う微小及び大血管性病理のうちの１つ以上を標的とし得る。本明細書における全てのアミノ酸配列は、１文字表記で示される。Ｃペプチドは、膵臓の細胞によりインスリンと共に産生及び排出されるので、インスリンを産生する全ての哺乳動物において見出される。一般的なヒトＣペプチドのアミノ酸配列は配列番号１（ＥＡＥＤＬＱＶＧＱＶＥＬＧＧＧＰＧＡＧＳＬＱＰＬＡＬＥＧＳＬＱ）である。多様な種からのＣペプチドは、それらの疎水性中央部分（ヒトにおいて配列番号８（ＧＧＧＰＧＡＧ））内にエラスチン受容体結合モチーフを有することが本明細書において開示される。
【００６２】
Ｃペプチドの受容体がエラスチン結合タンパク質として本明細書において同定され、該タンパク質は、ＧＬＢ１遺伝子（Ｕｂｉｐｒｏｔ識別記号Ｐ１６２７８）によりコードされるベータガラクトシダーゼに由来する選択的にスプライシングされたガラクトシダーゼとしてエラスチン受容体複合体中に見出すことができる。遺伝子産物のアイソフォーム１はベータガラクトシダーゼ（ベータ−Ｇａｌ）に関する一方、アイソフォーム２は、選択的にスプライシングされたガラクトシダーゼ（Ｓ−Ｇａｌ）に関する。ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｐｉｐｈｕｍａｎ．ｅｕ／ｓｉｔｅ／ｈｏｍｅ．ｈｔｍｌ
【００６３】
ベータ−Ｇａｌ（アイソフォーム１）は、ガングリオシド、糖タンパク質及びグリコサミノグリカンからベータ結合末端ガラクトシル残基を切断し、主にリソソーム中に位置する。
【００６４】
アイソフォーム２（Ｓ−Ｇａｌ）はほとんど又は全くベータガラクトシダーゼ触媒活性を有しないが、細胞外弾性繊維の形成（弾性繊維形成）及び結合組織の発生において機能的役割を果たす。Ｓ−Ｇａｌは、線維芽細胞、平滑筋細胞、軟骨芽細胞、白血球及びある特定のがん細胞種上に発現される非インテグリン細胞表面受容体の主成分であるエラスチン結合タンパク質（ＥＢＰ）と同一であると考えられる。エラスチン産生細胞において、ＥＢＰは細胞内でトロポエラスチンと会合し、トロポエラスチンの分泌物及び弾性繊維へのそのアセンブリーを促進する再利用性分子シャペロンとして機能する。
【００６５】
ある特定の実施形態では、アンタゴニストペプチドは、Ｃペプチド又はエラスチン受容体のいずれかに結合してもよく、又はそれと相互作用してもよい。さらに、アンタゴニストは、Ｃペプチド中のエラスチン受容体結合モチーフ又はエラスチン受容体結合モチーフに結合するエラスチン受容体中の部位に結合してもよい。若しくは、アンタゴニストは、Ｃペプチド中のエラスチン受容体結合モチーフ又はエラスチン受容体結合モチーフに結合するエラスチン受容体中の部位の近位又は遠位の部位に結合してもよいが、Ｃペプチド／エラスチン受容体相互作用のアンタゴニストとしての作用を可能とする。このようにして、アンタゴニストは、Ｃペプチドとエラスチン受容体との相互作用に影響する場合がある一方エラスチンと他の結合パートナーとの相互作用に干渉しない。
【００６６】
メタボリックシンドローム又は関連する障害を患っている又は患っていると考えられるヒトを治療する方法も提供される。そのような方法は、典型的に、Ｃペプチドのエラスチン受容体との相互作用又は結合のアンタゴニストを合成又は単離すること及びアンタゴニストをヒトに提供することを含む。アンタゴニストは、薬理学的に許容される賦形剤と混合されてもよく、結果として生じる混合物は、メタボリックシンドローム若しくは関連する障害を治療するため、又はメタボリックシンドロームの予防のために適宜標識されてもよい。
【００６７】
メタボリックシンドローム又は関連する障害を患うリスクがあると考えられるヒトを治療する方法が開示される。そのような方法は、典型的に、Ｃペプチドのエラスチン受容体との相互作用又は結合のアンタゴニストを合成又は単離すること及びアンタゴニストをヒトに提供することを含む。アンタゴニストは、薬理学的に許容される賦形剤と混合されてもよく、結果として生じる混合物は、メタボリックシンドローム若しくは関連する障害を患うリスクがあると考えられるヒトのために適宜標識されてもよい。
【００６８】
２型糖尿病を患っている又は患っていると考えられるヒトを治療する方法が開示される。そのような方法は、典型的に、Ｃペプチドのエラスチン受容体との相互作用又は結合のアンタゴニストを合成又は単離すること及びアンタゴニストをヒトに提供することを含む。アンタゴニストは、薬理学的に許容される賦形剤と混合されてもよく、結果として生じる混合物は、２型糖尿病を治療するため、又は２型糖尿病の予防のために適宜標識されてもよい。
【００６９】
２型糖尿病を患うリスクがあると考えられるヒトを治療する方法が開示される。そのような方法は、典型的に、Ｃペプチドのエラスチン受容体との相互作用又は結合のアンタゴニストを合成又は単離すること及びアンタゴニストをヒトに提供することを含む。アンタゴニストは、薬理学的に許容される賦形剤と混合されてもよく、結果として生じる混合物は、２型糖尿病の治療又は予防のために適宜標識されてもよい。
【００７０】
機能に関する非限定的な理論として、ベータ細胞の損傷及び破壊は、１型糖尿病の原因だけでなく、１．５型及び２型糖尿病、同様にメタボリックシンドローム全体の発症においても見られ、インスリン抵抗性と共に見られる現象は膵ベータ細胞における初期事象に対して二次的又は並行したものである。ベータ細胞の損傷及び破壊は主にＣペプチドの過剰産生により引き起こされ、Ｃペプチドは、これらの細胞により分泌され、その周囲に沈着し、エラスチン受容体を有する細胞とのＣペプチドの相互作用によりベータ細胞及びランゲルハンス島の低グレード及び初期には異質性の慢性炎症に繋がり、該相互作用は、配列番号３２（ＬＧＧＧＰＧＡＧ）の疎水性中央部分への受容体の結合によりヒトＣペプチドにおいて媒介される。これらの初期事象の前、間又は後に、又はそれとの組合せで、及びＣペプチドの過剰産生が維持された時に、低グレード炎症は周囲組織に広がり、そこでもＣペプチドが沈着し、エラスチン受容体を有する細胞がまた刺激される。本明細書における実施形態は、Ｃペプチド／ＥＢＰ相互作用のアンタゴニスト及びＣペプチド／ＥＢＰ相互作用をアンタゴナイズするようにヒトを治療する方法を提供する。
【００７１】
さらなる実施形態では、ヒトＣペプチド（ＵＩｎｉｐｒｏｔ識別記号＞ｓｐ｜Ｐ０１３０８｜５７−８７）又は哺乳動物におけるその機能的同等物に由来するペプチドであって、ＧｘｘＰ又はｘＧｘＰモチーフ（Ｇはグリシンであり、Ｐはプロリンであり、ｘは任意のアミノ酸である）を含むオクタペプチド、ヘキサペプチド、ヘプタペプチド、ペンタペプチド又はテトラペプチド、及びｘＧｘＰ又はＧｘｘＰモチーフを含むオクタペプチド、ヘキサペプチド、ヘプタペプチド、ペンタペプチド又はテトラペプチドのレトロインベルソバリアントからなる、ペプチドが提供される。なお、グリシンの立体異性体は存在せず、本明細書においてＬ−グリシン及びＤ−グリシンの両方はグリシンを表す。非限定的な例として、ペプチドは、自動ペプチド合成装置（例えば、モデル９９０；Ｂｅｃｋｍａｎ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔ、Ｆｕｌｌｅｒｔｏｎ、ＣＡ）を用いて固相方法により合成されてもよい。ペプチドは、逆相高速液体クロマトグラフィー（例えば、Ｃａｐｃｅｌｌ  Ｐａｋ  Ｃ−１８、Ｓｈｉｓｅｉｄｏ、Ｔｏｋｙｏ、Ｊａｐａｎ）により精製されてもよい。ペプチドの配列は、質量分光計（例えば、Ｖｏｙａｇｅｒ、Ｌｉｎｅａｒ−ＤＥ／Ｋ、Ｐｒｅｓｅｐｔｉｖｅ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ、ＴＸ）を用いて確認されてもよい。
【００７２】
ヒトＣペプチドに由来するｘＧｘＰ又はＧｘｘＰモチーフを含む本明細書において提供される例示的なオクタペプチドは、配列番号３２（ＬＧＧＧＰＧＡＧ）のオクタペプチドであり、該オクタペプチドは、全体としてのヒトＣペプチド配列から選択され、その由来となるＣペプチドにおける８アミノ酸のストレッチにわたるその１００％の相同性を考慮してヒトでの使用のために非常によく適する。レトロインベルソバリアント、全てＤアミノ酸のペプチドＧＡＧＰＧＧＧＬ、及び全てＤアミノ酸のペプチドＧＡＧＰＧＧＧＬを含む最大で３０、好ましくは最大で２５、好ましくは最大で２０、好ましくは最大で１２、好ましくは最大で９アミノ酸のペプチド又はペプチド模倣物（ｐｅｐｔｉｄｏｍｅｔｉｃｓ）も提供される。注記：グリシンの立体異性体は存在せず、ここにおいて（及び例えばレトロインベルソＧｘｘＰ又はｘＧｘＰモチーフを有するレトロインベルソペプチドにおいて）Ｇはそうではないが、それに対して、Ｌ、Ｐ及びＡなどの他のアミノ酸が、本明細書において提供されるレトロインベルソペプチドの全てＤアミノ酸の特徴に寄与する。
【００７３】
ヒトＣペプチドに由来するｘＧｘＰ又はＧｘｘＰモチーフを含む本明細書において提供される例示的なヘキサペプチドは、配列番号８（ＧＧＧＰＧＡＧ）のヘキサペプチドであり、該ヘキサペプチドは、全体としてのヒトＣペプチド配列から選択され、その由来となるＣペプチドにおける７アミノ酸のストレッチにわたるその１００％の相同性を考慮してヒトでの使用のために非常によく適する。レトロインベルソバリアント、全てＤアミノ酸のペプチドＧＡＧＰＧＧＧ、及び全てＤアミノ酸のペプチドＧＡＧＰＧＧＧを含む最大で３０、好ましくは最大で２５、好ましくは最大で２０、好ましくは最大で１２、好ましくは最大で８アミノ酸のペプチド又はペプチド模倣物（ｐｅｐｔｉｄｏｍｅｔｉｃｓ）も提供される。
【００７４】
ヒトＣペプチドに由来するｘＧｘＰ又はＧｘｘＰモチーフを含む本明細書において提供される別の例示的なヘキサペプチドは、配列番号４７（ＬＧＧＧＰＧＡ）のヘプタペプチドであり、該ヘプタペプチドは、全体としてのヒトＣペプチド配列から選択され、その由来となるＣペプチドにおける７アミノ酸のストレッチにわたるその１００％の相同性を考慮してヒトでの使用のために非常によく適する。レトロインベルソバリアント、全てＤアミノ酸のペプチドＧＡＧＰＧＧＧ、及び全てＤアミノ酸のペプチドＡＧＰＧＧＧＬを含む最大で３０、好ましくは最大で２５、好ましくは最大で２０、好ましくは最大で１２、好ましくは最大で９、好ましくは最大で７アミノ酸のペプチド又はペプチド模倣物（ｐｅｐｔｉｄｏｍｅｔｉｃｓ）も提供される。
【００７５】
ヒトＣペプチドに由来するｘＧｘＰ又はＧｘｘＰモチーフを含む本明細書において提供される最も例示的なヘプタペプチドは、配列番号４８（ＧＧＰＧＡＧ）のヘキサペプチドであり、該ヘキサペプチドは、全体としてのヒトＣペプチド配列から選択され、その由来となるＣペプチドにおける６アミノ酸のストレッチにわたるその１００％の相同性を考慮してヒトでの使用のために非常によく適する。レトロインベルソバリアント、全てＤアミノ酸のペプチドＧＡＧＰＧＧ、及び全てＤアミノ酸のペプチドＧＡＧＰＧＧを含む最大で３０、好ましくは最大で２５、好ましくは最大で２０、好ましくは最大で１２、好ましくは最大で９、好ましくは最大で６アミノ酸のペプチド又はペプチド模倣物（ｐｅｐｔｉｄｏｍｅｔｉｃｓ）も提供される。
【００７６】
ヒトＣペプチドに由来するｘＧｘＰ又はＧｘｘＰモチーフを含む本明細書において提供される別の例示的なヘプタペプチドは、配列番号３４（ＬＧＧＧＰＧ）のヘプタペプチドであり、該ヘプタペプチドは、全体としてのヒトＣペプチド配列から選択され、その由来となるＣペプチドにおける６アミノ酸のストレッチにわたるその１００％の相同性を考慮してヒトでの使用のために非常によく適する。レトロインベルソバリアント、全てＤアミノ酸のペプチドＧＰＧＧＧＬ、及び全てＤアミノ酸のペプチドＧＰＧＧＧＬを含む最大で３０、好ましくは最大で２５、好ましくは最大で２０、好ましくは最大で１２、好ましくは最大で９、好ましくは最大で６アミノ酸のペプチド又はペプチド模倣物（ｐｅｐｔｉｄｏｍｅｔｉｃｓ）も提供される。
【００７７】
ヒトＣペプチドに由来するｘＧｘＰ又はＧｘｘＰモチーフを含む本明細書において提供される別の例示的なヘプタペプチドは、配列番号４９（ＧＧＧＰＧＡ）のヘキサペプチドであり、該ヘキサペプチドは、全体としてのヒトＣペプチド配列から選択され、その由来となるＣペプチドにおける６アミノ酸のストレッチにわたるその１００％の相同性を考慮してヒトでの使用のために非常によく適する。レトロインベルソバリアント、全てＤアミノ酸のペプチドＡＧＰＧＧＧ、及び全てＤアミノ酸のペプチドＡＧＰＧＧＧを含む最大で３０、好ましくは最大で２５、好ましくは最大で２０、好ましくは最大で１２、好ましくは最大で９、好ましくは最大で６アミノ酸のペプチド又はペプチド模倣物（ｐｅｐｔｉｄｏｍｅｔｉｃｓ）も提供される。
【００７８】
ヒトＣペプチドに由来するｘＧｘＰ又はＧｘｘＰモチーフを含む本明細書において提供される最も例示的なペンタペプチドは、配列番号４０（ＧＧＧＰＧ）のヘプタペプチドであり、該ヘプタペプチドは、全体としてのヒトＣペプチド配列から選択され、その由来となるＣペプチドにおける６アミノ酸のストレッチにわたるその１００％の相同性を考慮してヒトでの使用のために非常によく適する。レトロインベルソバリアント、全てＤアミノ酸のペプチドＧＰＧＧＧ、及び全てＤアミノ酸のペプチドＧＰＧＧＧを含む最大で３０、好ましくは最大で２５、好ましくは最大で２０、好ましくは最大で１２、好ましくは最大で９、好ましくは最大で５アミノ酸のペプチド又はペプチド模倣物（ｐｅｐｔｉｄｏｍｅｔｉｃｓ）も提供される。
【００７９】
別の例示的なペンタペプチドは、配列番号４６（ＧＡＧＰＧ）のペプチド、及び配列番号４６（ＧＡＧＰＧ）のペプチドを含む最大で３０、好ましくは最大で２５、好ましくは最大で２０、好ましくは最大で１２、好ましくは最大で９、好ましくは最大で５アミノ酸のペプチド又はペプチド模倣物（ｐｅｐｔｉｄｏｍｅｔｉｃｓ）である。
【００８０】
別の例示的なペンタペプチドは、レトロインベルソバリアント、全てＤアミノ酸のペプチドＧＰＧＡＧ、及び全てＤアミノ酸のペプチドＧＰＧＡＧを含む最大で３０、好ましくは最大で２５、好ましくは最大で２０、好ましくは最大で１２、好ましくは最大で９、好ましくは最大で５アミノ酸のペプチド又はペプチド模倣物（ｐｅｐｔｉｄｏｍｅｔｉｃｓ）も提供される。
【００８１】
ヒトＣペプチドに由来するｘＧｘＰ又はＧｘｘＰモチーフを含む本明細書において提供される最も例示的なテトラペプチドは、配列番号３８（ＧＧＧＰ）のテトラペプチドであり、該テトラペプチドは、全体としてのヒトＣペプチド配列から選択され、その由来となるＣペプチドにおける６アミノ酸のストレッチにわたるその１００％の相同性を考慮してヒトでの使用のために非常によく適する。レトロインベルソバリアント、全てＤアミノ酸のペプチドＰＧＧＧ、及び全てＤアミノ酸のペプチドＰＧＧＧを含む最大で３０、好ましくは最大で２５、好ましくは最大で２０、好ましくは最大で１２、好ましくは最大で９、好ましくは最大で４アミノ酸のペプチド又はペプチド模倣物（ｐｅｐｔｉｄｏｍｅｔｉｃｓ）も提供される。
【００８２】
ＧｘｘＰモチーフを含む本明細書において提供される別のテトラペプチドは配列番号３９（ＧＡＧＰ）のテトラペプチドである。レトロインベルソバリアント、全てＤアミノ酸のペプチドＰＧＡＧ、及び全てＤアミノ酸のペプチドＰＧＡＧを含む最大で３０、好ましくは最大で２５、好ましくは最大で２０、好ましくは最大で１２、好ましくは最大で９、好ましくは最大で４アミノ酸のペプチド又はペプチド模倣物（ｐｅｐｔｉｄｏｍｅｔｉｃｓ）も提供される。
【００８３】
ある特定の実施形態では、メタボリックシンドローム、好ましくは糖尿病の、好ましくは１型糖尿病の又は１型糖尿病に伴う腎症、ニューロパチー若しくは微小血管疾患のメタボリックシンドロームを治療するための、ヒトＣペプチド（ＵＩｎｉｐｒｏｔ識別記号＞ｓｐ｜Ｐ０１３０８｜５７−８７）又は哺乳動物におけるその機能的同等物に由来するペプチドの使用であって、ペプチドが、ＧｘｘＰ又はｘＧｘＰモチーフ（Ｇはグリシンであり、Ｐはプロリンであり、ｘは任意のアミノ酸である）を含むオクタペプチド、ヘキサペプチド、ヘプタペプチド、ペンタペプチド又はテトラペプチド、及びｘＧｘＰ又はＧｘｘＰモチーフを含むオクタペプチド、ヘキサペプチド、ヘプタペプチド、ペンタペプチド又はテトラペプチドのレトロインベルソバリアントからなる、使用が提供される。
【００８４】
そのため、ヒトの１型糖尿病を治療する方法が本明細書において提供される。そのような方法は、典型的に、ヒトＣペプチド（ＵＩｎｉｐｒｏｔ識別記号＞ｓｐ｜Ｐ０１３０８｜５７−８７）又は哺乳動物におけるその機能的同等物に由来するペプチドであって、ＧｘｘＰ又はｘＧｘＰモチーフ（Ｇはグリシンであり、Ｐはプロリンであり、ｘは任意のアミノ酸である）を含むオクタペプチド、ヘキサペプチド、ヘプタペプチド、ペンタペプチド又はテトラペプチド、及びｘＧｘＰ又はＧｘｘＰモチーフを含むオクタペプチド、ヘキサペプチド、ヘプタペプチド、ペンタペプチド又はテトラペプチドのレトロインベルソバリアントからなる、ペプチドをヒトに投与することを含む。ある特定の実施形態では、治療の方法は、腎症、ニューロパチー又は微小血管疾患が挙げられるがこれらに限定されない１型糖尿病に伴う１つ以上の病理のためのものであってもよい。
【００８５】
ある特定の実施形態では、メタボリックシンドローム、好ましくは糖尿病の、好ましくは１型糖尿病の又は１型糖尿病に伴う腎症、ニューロパチー若しくは微小血管疾患のメタボリックシンドロームを治療するための、ヒトＣペプチド（ＵＩｎｉｐｒｏｔ識別記号＞ｓｐ｜Ｐ０１３０８｜５７−８７）又は哺乳動物におけるその機能的同等物に由来するペプチドであって、ＧｘｘＰ又はｘＧｘＰモチーフ（Ｇはグリシンであり、Ｐはプロリンであり、ｘは任意のアミノ酸である）を含むオクタペプチド、ヘキサペプチド、ヘプタペプチド、ペンタペプチド又はテトラペプチド、及びｘＧｘＰ又はＧｘｘＰモチーフを含むオクタペプチド、ヘキサペプチド、ヘプタペプチド、ペンタペプチド又はテトラペプチドのレトロインベルソバリアントからなる、ペプチドが提供される。
【００８６】
メタボリックシンドローム、好ましくは糖尿病の、好ましくは１型糖尿病の又は１型糖尿病に伴う腎症、ニューロパチー若しくは微小血管疾患のメタボリックシンドロームを治療するための医薬を製造するための、ヒトＣペプチド（ＵＩｎｉｐｒｏｔ識別記号＞ｓｐ｜Ｐ０１３０８｜５７−８７）又は哺乳動物におけるその機能的同等物に由来するペプチドの使用であって、ペプチドが、ＧｘｘＰ又はｘＧｘＰモチーフ（Ｇはグリシンであり、Ｐはプロリンであり、ｘは任意のアミノ酸である）を含むオクタペプチド、ヘキサペプチド、ヘプタペプチド、ペンタペプチド又はテトラペプチド、及びｘＧｘＰ又はＧｘｘＰモチーフを含むオクタペプチド、ヘキサペプチド、ヘプタペプチド、ペンタペプチド又はテトラペプチドのレトロインベルソバリアントからなる、使用が提供される。
【００８７】
そのため、ヒトの１型糖尿病を治療するための医薬を製造する方法が本明細書において提供される。そのような方法は、典型的に、ヒトＣペプチド（ＵＩｎｉｐｒｏｔ識別記号＞ｓｐ｜Ｐ０１３０８｜５７−８７）又は哺乳動物におけるその機能的同等物に由来するペプチドであって、ＧｘｘＰ又はｘＧｘＰモチーフ（Ｇはグリシンであり、Ｐはプロリンであり、ｘは任意のアミノ酸である）を含むオクタペプチド、ヘキサペプチド、ヘプタペプチド、ペンタペプチド又はテトラペプチド、及びｘＧｘＰ又はＧｘｘＰモチーフを含むオクタペプチド、ヘキサペプチド、ヘプタペプチド、ペンタペプチド又はテトラペプチドのレトロインベルソバリアントからなる、ペプチドを合成又は単離することを含む。
【００８８】
ベータ細胞において、インスリンは、同じ前駆体分子であるプレプロインスリンからＣペプチドと共に産生される。インスリン及びＣペプチドの両方は血中に等量で排出され、それによりインスリンは、約５分の半減期を有して短い時間のみ周囲組織に作用することができる。しかしながら、Ｃペプチドは、３０分の半減期を有すると報告されており、血中においてはるかに長く循環する。Ｃペプチドの機能は長い間理解されていなかったが、炎症促進活性などの多くの活性が現在それに帰せられている。これらの炎症促進活性の原因は説明されていない。本明細書において提供されるように、Ｃペプチドの構造解析はエラスチン受容体結合モチーフの存在を明らかにし、特定の理論に縛られないが、これが炎症促進効果の原因である。
【００８９】
一般的なヒトＣペプチドのアミノ酸配列は配列番号１（ＥＡＥＤＬＱＶＧＱＶＥＬＧＧＧＰＧＡＧＳＬＱＰＬＡＬＥＧＳＬＱ）である。配列番号４２（ＥＬＧＧＧＰＧＡＧＳ）の中央部分は、追加のこれまで気付かれなかった特徴的なＰＧドメインを有し、これはＣペプチドのいわゆる炎症促進性の特徴を説明し、特に、２型糖尿病及びメタボリックシンドロームと共に見られる低グレード及び初期には異質性の慢性炎症（本明細書において血管過剰修復として同定される）を説明し、より特には、２型糖尿病の全体としての発症、病因を説明する。配列番号４２（ＥＬＧＧＧＰＧＡＧＳ）は、エラスチン結合タンパク質ＥＢＰと反応性のペプチドにおいて見出されるカノニカルなｘＧｘＰ、ＧｘｘＰ、ＧｘｘＰＧ及びｘＧｘＰＧ（ｘは任意のアミノ酸、好ましくは疎水性アミノ酸である）配列を有することが本明細書において認識される。リソソームのベータガラクトシダーゼのスプライシングされたバリアントであるエラスチン結合タンパク質（ＥＢＰ）は、例えば、気腫、動脈瘤及びがんの進行と関連付けられているエラスチンペプチドの一次受容体である。ＥＢＰにより認識される配列は、多数のマトリックスタンパク質中、顕著には、配列番号４１（ＶＧＶＡＰＧ）のモチーフが繰り返されるエラスチン中に見出されるＧｘｘＰコンセンサスパターンを共有する。本明細書において初めて、Ｃペプチドは、ＥＢＰ又はエラスチン受容体のリガンドとして認識される。Ｃペプチドはしたがって、細胞外マトリックス（ＥＣＭ）タンパク質に由来する公知のエラスチンペプチドが有する同じセットの走化性の、マトリックスメタロプロテイナーゼ（ＭＭＰ）を活性化させる、増殖活性及び低炎症活性又は血管修復活性を有する。この受容体相互作用は、糖尿病研究又は代謝障害研究の当業者によっても、ＥＣＭ又はエラスチンペプチド研究の当業者によっても、以前には公に認識されていなかった。
【００９０】
Ｃペプチド中の結合部位ＥＢＰを同定したので、Ｃペプチドによる血管修復又は低炎症性モジュレーションをこれより説明する。周細胞、平滑筋細胞、線維芽細胞、脂肪組織細胞、膵星細胞、及び他の結合組織細胞は、内皮細胞と共に、及び循環する自然免疫細胞、例えば白血球及び単球は、インターロイキン−１−ベータ媒介性の増殖及び低グレード炎症活性化によりＥＢＰのＧｘｘＰＧ含有タンパク質及びペプチドへの結合に応答し得る。ヒトプロテオームの解析は、複数のＧｘｘＰＧモチーフを有するタンパク質が細胞外マトリックス（ＥＣＭ）に高度に関連することを示す。複数のＧｘｘＰ、ｘＧｘＰ又はＧｘｘＰＧ部位を有するマトリックスタンパク質としては、フィブリリン−１、−２及び−３、エラスチン、フィブロネクチン、ラミニン並びにいくつものテネイシン及びコラーゲンが挙げられる。
【００９１】
第二に、循環する白血球及び単球は、ＧｘｘＰ、ｘＧｘＰ、ＧｘｘＰＧ又はｘＧｘＰＧ含有タンパク質及びペプチドに対して強い走化性を示し、したがってＣペプチドは、Ｃペプチドがどこに存在していてもそれらの細胞を引き付ける。
【００９２】
第三に、ＧｘｘＰ、ｘＧｘＰ、ｘＧｘＰＧ又はＧｘｘＰＧ含有タンパク質及びペプチドへのＥＢＰの結合は、細胞表面からのＥＢＰのシェディング及びインターロイキン−１−ベータに親和性を有するインターロイキン−Ｉ受容体の提示の増加と関連付けられており、Ｃペプチド沈着がどこに存在していようと、エンドサイトーシスの妨害又は継続的なインターロイキン−１−ベータ媒介性の増殖及び炎症活性化を可能とする。
【００９３】
第四に、ＧｘｘＰ又はＧｘｘＰＧ含有タンパク質及びペプチドへのＥＢＰの結合は、ノイラミニダーゼの活性化、及び、特に脂肪細胞及び肝細胞の、インスリン抵抗性を誘導するタンパク質からのシアル酸の放出と関連付けられている。
【００９４】
第五に、ＧｘｘＰ又はＧｘｘＰＧ含有タンパク質及びペプチドへの結合性ＥＢＰは、細胞表面からのＥＢＰのシェディング及びエンドセリン−１に対するタンパク質分解活性を有するＰＰＣＡの提示の減少と関連付けられており、それにより、ＰＰＣＡのタンパク質分解活性（ａｃｉｔｉｖｉｔｙ）の減少に起因するエンドセリン−１レベルの増加は、高血圧の増加を結果としてもたらす。
【００９５】
実施形態はまた、部分的には、Ｃペプチド又はＣペプチド断片に結合し、したがって様々な障害、例えば、メタボリックシンドローム及び糖尿病などの免疫障害と関連付けられるＣペプチド関連の生物活性を誘導する受容体型の同定に関する。本明細書に開示されるＣペプチド又はＣペプチド断片に結合し又はそれと相互作用するそのような受容体型は、エラスチンペプチドに結合することが公知の哺乳動物エラスチン受容体であり、これには、自然免疫細胞、細胞外マトリックス細胞、線維芽細胞、血管平滑筋細胞及びある特定の腫瘍細胞上に遍在的に見出される、ベータガラクトシダーゼのスプライシングされたバリアントとして同定された６７ｋＤａのエラスチン結合タンパク質（ＥＢＰ）、並びにその関連するホモログ及びアイソフォームなどのエラスチン受容体複合体が含まれるがこれらに限定されない。これもエラスチン結合タンパク質型の結合活性を有すると本明細書において理解される膵エラスターゼもまたこれらのモチーフに結合する。典型的には細胞外マトリックスタンパク質、例えば、エラスチン、ラミニン、ＩＶ型コラーゲン及びフィブリリン−１中のカノニカルなｘＧｘＰ、ＧｘｘＰ、ＧｘｘＰＧ及びｘＧｘＰＧ（ｘは任意のアミノ酸、好ましくは疎水性アミノ酸である）モチーフに結合するエラスチン結合タンパク質型、及びそのようなモチーフは、本明細書において初めてＣペプチド中に同定される。エラスチン結合タンパク質／エラスチンペプチド相互作用はまた、インテグリン及びガレクチン、ＥＢＰ、インテグリン及びガレクチン、及び本明細書において一般的にエラスチン結合タンパク質型と呼ばれるｘＧｘＰ、ＧｘｘＰ、ＧｘｘＰＧ及びｘＧｘＰＧモチーフに結合することができる他の受容体と共に見出すことができる。Ｃペプチドと相互作用して代謝障害及び免疫障害と関連付けられる生物学的応答の調整を促進する「エラスチン受容体」の同定は、次いで、以下に必ずしも限定されないが、様々な障害を治療するための方法、使用及び同定されたペプチドなどの追加の実施形態を実施する場合の価値のある必須成分を提供する。
【００９６】
ある特定の実施形態は、Ｃペプチド又はＣペプチド断片と相互作用して、腎症（ｎｅｐｈｒｏｐｈａｔｉｅｓ）及び１型糖尿病における内皮機能障害の軽減と関連付けられる抗炎症効果を促進するものとして本明細書に開示される「エラスチン結合タンパク質型」の受容体型のモジュレーターを同定する方法に関する。特に関心のあるモジュレーターは、エラスチン結合タンパク質型へのアゴニストとして作用するペプチドである。そのようなアゴニストは、１型糖尿病、又は後期２型糖尿病などの相対的又は絶対的なＣペプチド欠乏により特徴付けられる他の障害の治療において有用であり得る。理論により縛られるものではないが、そのようなペプチドは、細胞外マトリックス細胞又は白血球（例えば、線維芽細胞又は単球細胞）へのシグナルを媒介して、走化性及び増殖効果を引き起こす能力、例えば、白血球走化性又は平滑筋細胞若しくは線維芽細胞増殖を引き起こす能力を示す。アゴニストは、例えば、ＧｘｘＰ、ｘＧｘＰＧ、ＧｘｘＰｘ、ＧｘｘＰＧ、ｘＧｘｘＰ、ｘＧｘｘＰｘ、ｘＧｘｘＰＧモチーフを有するペプチド、例えば、配列番号３２（ＬＧＧＧＰＧＡＧ）、配列番号８（ＧＧＧＰＧＡＧ）、配列番号４９（ＧＧＧＰＧＡ）、配列番号３８（ＧＧＧＰ）、配列番号４０（ＧＧＧＰＧ）、配列番号４６（ＧＡＧＰＧ）、配列番号５０（ＧＧＧＰＥ）、配列番号５１（ＧＡＩＰＧ）、配列番号５２（ＧＧＶＰＧ）、配列番号５３（ＧＶＡＰＧ）、配列番号５４（ＹＴＴＧＫＬＰＹＧＹＧＰＧＧ）、配列番号５５（ＹＧＡＲＰＧＶＧＶＧＩＰ）、配列番号５６（ＰＧＦＧＡＶＰＧＡ）、配列番号５７（ＧＶＹＰＧ）、配列番号５８（ＧＦＧＰＧ）、配列番号５９（ＧＶＬＰＧ）、配列番号５１（ＧＡＩＰＧ）、配列番号６０（ＰＧＡＩＰＧ）、配列番号６１（ＰＧＡＶＧＰ）、配列番号６２（ＶＧＡＭＰＧ）、配列番号６３（ＶＧＳＬＰＧ）、配列番号６４（ＶＧＭＡＰＧ）、配列番号６５（ＶＰＧＶＧ）、配列番号６６（ＩＰＧＶＧ）、配列番号６３（ＶＧＳＬＰＧ）、配列番号４１（ＶＧＶＡＰＧ）、配列番号６７（ＶＧＶＰＧ）、配列番号６８（ＡＧＡＩＰＧ）、配列番号６９（ＶＰＧＶ）、配列番号７０（ＬＧＩＴＰＧ）、配列番号７１（ＧＤＮＰ）、配列番号７２（ＧＡＩＰ）、配列番号７３（ＧＫＶＰ）、配列番号７４（ＧＶＱＹ）、配列番号７５（ＧＶＬＰ）、配列番号７６（ＧＶＧＰ）、配列番号７７（ＧＦＧＰ）、配列番号７８（ＧＧＩＰ）、配列番号７９（ＧＶＡＰ）、配列番号８０（ＧＩＧＰ）、配列番号３９（ＧＡＧＰ）、配列番号８１（ＧＧＩＰＰ）、配列番号８２（ＧＱＦＰ）、配列番号８３（ＧＬＳＰ）、配列番号８４（ＧＰＱＰ）、配列番号８５（ＧＧＰＱＰ）、配列番号８６（ＧＰＱＰＧ）、配列番号８７（ＧＧＰＱＰＧ）、配列番号８８（ＧＩＰＰ）、配列番号８９（ＧＩＰＰＡ）、配列番号９０（ＧＧＩＰＰＡ）若しくは配列番号９１（ＧＧＹＰＧＡＳＹＰＧＡＹＰＧＱＡＰＰＧＡＹＰＧＱＡＰＰＧＡＹＰＧＡＰＧＡＹＰＧＡＰＡＰＧＶＹＰＧＰＰＳＧＰＧＡＹＰＳ）若しくは配列番号９２（ＧＧＹＰＧＡＳＹＰ）若しくは配列番号９３（ＧＡＹＰＧＱＡＰＰ）若しくは配列番号９４（ＧＡＹＰＧＱＡ）若しくは配列番号９５（ＧＡＹＰＧＡＰ）若しくは配列番号９６（ＧＡＹＰＧ）若しくは配列番号９７（ＡＰＡＰＧＶＹＰＧ）若しくは配列番号９８（ＧＡＹＰＳ）のペプチド又は又はこれらのレトロインベルソ若しくはそれ以外に機能的に関連するペプチドから選択することができる。理論により縛られるものではないが、そのようなアゴニストペプチドは、細胞外マトリックス細胞又は白血球（例えば、線維芽細胞又は単球細胞）へのシグナルを媒介して、走化性及び増殖効果を刺激する能力、例えば、白血球走化性又は平滑筋細胞若しくは線維芽細胞増殖を刺激する能力を示す。
【００９７】
特に関心のある別のモジュレーターは、エラスチン結合タンパク質型へのアンタゴニストとして作用するペプチドである。そのようなアンタゴニストは、２型糖尿病、又はメタボリックシンドロームの発症後のアテローム性動脈硬化症、関節リウマチ、大血管疾患及び心臓血管疾患などの相対的又は絶対的なＣペプチド過剰により特徴付けられる他の障害の治療又は予防において有用であり得る。有用なアンタゴニストは、ＧｘｘＰ、ｘＧｘＰＧ、ＧｘｘＰｘ、ＧｘｘＰＧ、ｘＧｘｘＰ、ｘＧｘｘＰｘ、ｘＧｘｘＰＧモチーフに結合するペプチド又は結合ドメイン、例えば、Ｖ３２又はＶ１４ペプチド（と一般的に呼ばれるもの）並びにこれらの機能的断片及びその機能的バリアント（ｔｈｅｒｏｆ）、例えば、配列番号９９（ＱＴＬＰＧＳＣＧＱＶＶＧＳＰＳＡＱＤＥＡＳＰＬＳＥＷＲＡＳＹＮＳＡＧＳＮＩＴＤＡ）、配列番号１００（ＬＰＧＳＣＧＱＶＶＧＳＰＳＡＱＤＥＡＳＰＬＳＥＷＲＡＳＹＮＳＡＧ）、配列番号１０１（ＶＶＧＳＰＳＡＱＤＥＡＳＰＬＳＥＷＲＡＳＹ）、配列番号１０２（ＶＶＧＳＰＳＡＱＤＥＡＳＰＬＳ）、配列番号１０３（ＰＳＡＱＤＥＡＳＰＬ）、配列番号１０４（ＳＰＳＡＱＤＥＡＳＰ）、配列番号１０５（ＡＱＤＥＡＳ）、配列番号１０６（ＰＳＡＱ）、配列番号１０７（ＳＡＱＤ）、配列番号１０８（ＤＥＡＳ）、配列番号３１（ＱＤＥＡ）、配列番号１０９（ＳＰＳＡ）、配列番号１１０（ＶＶＧＧＴＥＡＱＲＮＳＷＰＬＱ）、配列番号１１１（ＶＶＧＧＴＥＡＱＲＮＳＷＰＳＱ）、配列番号１１２（ＴＥＡＱＲＮＳＷＰ）、配列番号１１３（ＡＱＲＮ）、配列番号１１４（ＩＶＧＧＲＲＡＲＰＨＡＷＰＦＭ）、配列番号１１５（ＶＶＧＧＥＤＡＫＰＧＱＦＰＷＱ）、配列番号１１６（ＶＶＧＧＲＶＡＱＰＮＳＷＰＷＱ）、配列番号１１７（ＲＶＡＱＰＮＳＷ）、配列番号１１８（ＶＶＧＧＡＥＡＲＲＮＳＷＰＳＱ）、配列番号１１９（ＡＥＡＲＲＮＳＷ）、配列番号１２０（ＶＶＧＧＱＥＡＴＰＮＴＷＰＷＱ）、配列番号１２１（ＱＥＡＴＰＮＴＷ）、配列番号１２２（ＶＶＧＧＥＥＡＲＰＮＳＷＰＷＱ）、配列番号１２３（ＥＥＡＲＰＮＳＷ）、配列番号１２４（ＶＶＧＧＴＥＡＧＲＮＳＷＰＳＱ）、配列番号１２５（ＴＥＡＧＲＮＳＷＰ）、配列番号１２６（ＥＤＹＲＰＳＱＱＤＥＣＳＰＲＥ）、配列番号１２７（ＰＳＱＱＤＥＣＳＰ）、配列番号１２８（ＱＱＤＥＣ）、ＱＤＥ、又は関連するペプチド、例えば、上記に列記したＶ３２又はＶ１４ペプチドに由来するレトロインベルソバリアントペプチド並びにこれらの機能的断片及びその機能的バリアント（ｔｈｅｒｏｆ）から選択されてもよい。本明細書に開示されるそのようなレトロインベルソペプチドは、好ましくは、コアＤ−アミノ酸配列ＡＥＤＱを有し、例えば、レトロインベルソＶ１４ペプチドバリアントである全てＤ体のＬＰＳＡＥＤＱＡＳＰＳＧＶＶ又は全てＤ体のＰＳＡＥＤＱＡＳＰＳ又は全てＤ体のＷＥＳＬＰＳＡＥＤＱＡＳＰＳＧＶＶＱＧＣを有する。機能的断片又はバリアントは、典型的に、ヒトＣペプチドのＣペプチドのモチーフＧｘｘＰＧを通じたヒトエラスチン受容体への結合を阻害するペプチドの能力を試験する本明細書において提供される走化性アッセイにおいて見出され、そのようなペプチドはヒトＣペプチドの走化活性を低減させることができる（低減させる）。理論により縛られるものではないが、そのようなアンタゴニストペプチドは、細胞外マトリックス細胞又は白血球（例えば、線維芽細胞又は単球細胞）へのシグナルを調整して、走化性及び増殖効果を阻害する能力、例えば、白血球又は平滑筋細胞又は線維芽細胞増殖を阻害する能力を示す。
【００９８】
他の有用なアゴニスト又はアンタゴニストペプチドは、例えば、ヒトＥＢＰのエラスチン結合部位の相同性モデルを用いてｉｎ  ｓｉｌｉｃｏで見出され得る。Ｂｌａｎｃｈｅｖｏｙらは最近、このタンパク質の相同性モデルを構築し、このモデルにおける配列番号４１（ＶＧＶＡＰＧ）のドッキングを示した（Ｂｌａｎｃｈｅｖｏｙｅ  ｅｔ  ａｌ，ＩＮＴＥＲＡＣＴＩＯＮ  ＢＥＴＷＥＥＮ  ＴＨＥ  ＥＬＡＳＴＩＮ  ＰＥＰＴＩＤＥ  ＶＧＶＡＰＧ  ＡＮＤ  ＨＵＭＡＮ  ＥＬＡＳＴＩＮ  ＢＩＮＤＩＮＧ  ＰＲＯＴＥＩＮ，ｄｏｉ：１０．１０７４／ｊｂｃ．Ｍ１１２．４１９９２９  ｊｂｃ．Ｍ１１２．４１９９２９．；結合部位の関連する原子座標などのその内容は参照により本明細書に含められる）。
【００９９】
本開示はまた、エラスチン結合タンパク質型を活性化させるモジュレーター（例えば、エラスチン結合タンパク質型アゴニストペプチド）のヒトへの投与を通じた、本明細書に開示される１型糖尿病などのＣペプチド欠乏に関連する１つ以上の障害を治療する方法に関する。そのようなエラスチン結合タンパク質型アゴニストペプチドは、本明細書に記載される方法を通じて同定されてもよく、１型糖尿病が挙げられるがこれに限定されない障害の治療において有用である。特定の実施形態では、本明細書において提供されるそのようなエラスチン結合タンパク質アゴニストは、好ましくは、アルファ−エノラーゼのアゴニスト（例えば、配列番号１２９（ＬＡＬＥＧＳＬＱ）又は配列番号６（ＥＧＳＬＱ）のペンタペプチド又はこれらの機能的部分を含むペプチド）又はＧＰＲ１４６のアゴニストと共に使用されてもよい。本発明はまた、１型糖尿病又は相対的若しくは絶対的なＣペプチド欠乏を含む障害を治療するためのエラスチン結合タンパク質型のアゴニストの使用を提供し、有用なアゴニストは、ｘＧｘＰ、ＧｘｘＰ、ｘＧｘＰＧ、ＧｘｘＰｘ、ＧｘｘＰＧ、ｘＧｘｘＰ、ｘＧｘｘＰｘ、ｘＧｘｘＰＧモチーフを有するペプチド、例えば、配列番号３２（ＬＧＧＧＰＧＡＧ）、配列番号８（ＧＧＧＰＧＡＧ）、配列番号４９（ＧＧＧＰＧＡ）、配列番号３８（ＧＧＧＰ）、配列番号４０（ＧＧＧＰＧ）、配列番号４６（ＧＡＧＰＧ）、配列番号５０（ＧＧＧＰＥ）、配列番号５１（ＧＡＩＰＧ）、配列番号５２（ＧＧＶＰＧ）、配列番号５３（ＧＶＡＰＧ）、配列番号５４（ＹＴＴＧＫＬＰＹＧＹＧＰＧＧ）、配列番号５５（ＹＧＡＲＰＧＶＧＶＧＩＰ）、配列番号５６（ＰＧＦＧＡＶＰＧＡ）、配列番号５７（ＧＶＹＰＧ）、配列番号５８（ＧＦＧＰＧ）、配列番号５９（ＧＶＬＰＧ）、配列番号５１（ＧＡＩＰＧ）、配列番号６０（ＰＧＡＩＰＧ）、配列番号６１（ＰＧＡＶＧＰ）、配列番号６２（ＶＧＡＭＰＧ）、配列番号６３（ＶＧＳＬＰＧ）、配列番号６４（ＶＧＭＡＰＧ）、配列番号６５（ＶＰＧＶＧ）、配列番号６６（ＩＰＧＶＧ）、配列番号６３（ＶＧＳＬＰＧ）、配列番号４１（ＶＧＶＡＰＧ）、配列番号６７（ＶＧＶＰＧ）、配列番号６８（ＡＧＡＩＰＧ）、配列番号６９（ＶＰＧＶ）、配列番号７０（ＬＧＩＴＰＧ）、配列番号７１（ＧＤＮＰ）、配列番号７２（ＧＡＩＰ）、配列番号７３（ＧＫＶＰ）、配列番号７４（ＧＶＱＹ）、配列番号７５（ＧＶＬＰ）、配列番号７６（ＧＶＧＰ）、配列番号７７（ＧＦＧＰ）、配列番号７８（ＧＧＩＰ）、配列番号７９（ＧＶＡＰ）、配列番号８０（ＧＩＧＰ）、配列番号３９（ＧＡＧＰ）、配列番号８１（ＧＧＩＰＰ）、配列番号８２（ＧＱＦＰ）、配列番号８３（ＧＬＳＰ）、配列番号８４（ＧＰＱＰ）、配列番号８５（ＧＧＰＱＰ）、配列番号８６（ＧＰＱＰＧ）、配列番号８７（ＧＧＰＱＰＧ）、配列番号８８（ＧＩＰＰ）、配列番号８１（ＧＧＩＰＰ）、配列番号８９（ＧＩＰＰＡ）、配列番号９０（ＧＧＩＰＰＡ）のペプチド、又はペプチド、例えば、配列番号３２（ＬＧＧＧＰＧＡＧ）、配列番号８（ＧＧＧＰＧＡＧ）、配列番号４９（ＧＧＧＰＧＡ）、配列番号３８（ＧＧＧＰ）、配列番号４０（ＧＧＧＰＧ）、配列番号４６（ＧＡＧＰＧ）、配列番号５０（ＧＧＧＰＥ）、配列番号５１（ＧＡＩＰＧ）、配列番号５２（ＧＧＶＰＧ）、配列番号５３（ＧＶＡＰＧ）、配列番号５４（ＹＴＴＧＫＬＰＹＧＹＧＰＧＧ）、配列番号５５（ＹＧＡＲＰＧＶＧＶＧＩＰ）、配列番号５６（ＰＧＦＧＡＶＰＧＡ）、配列番号５７（ＧＶＹＰＧ）、配列番号５８（ＧＦＧＰＧ）、配列番号５９（ＧＶＬＰＧ）、配列番号５１（ＧＡＩＰＧ）、配列番号６０（ＰＧＡＩＰＧ）、配列番号６１（ＰＧＡＶＧＰ）、配列番号６２（ＶＧＡＭＰＧ）、配列番号６３（ＶＧＳＬＰＧ）、配列番号６４（ＶＧＭＡＰＧ）、配列番号６５（ＶＰＧＶＧ）、配列番号６６（ＩＰＧＶＧ）、配列番号６３（ＶＧＳＬＰＧ）、配列番号４１（ＶＧＶＡＰＧ）、配列番号６７（ＶＧＶＰＧ）、配列番号６８（ＡＧＡＩＰＧ）、配列番号６９（ＶＰＧＶ）、配列番号７０（ＬＧＩＴＰＧ）、配列番号７１（ＧＤＮＰ）、配列番号７２（ＧＡＩＰ）、配列番号７３（ＧＫＶＰ）、配列番号７４（ＧＶＱＹ）、配列番号７５（ＧＶＬＰ）、配列番号７６（ＧＶＧＰ）、配列番号７７（ＧＦＧＰ）、配列番号７８（ＧＧＩＰ）、配列番号７９（ＧＶＡＰ）、配列番号８０（ＧＩＧＰ）、配列番号３９（ＧＡＧＰ）、配列番号８１（ＧＧＩＰＰ）、配列番号８２（ＧＱＦＰ）、配列番号８３（ＧＬＳＰ）、配列番号８４（ＧＰＱＰ）、配列番号８５（ＧＧＰＱＰ）、配列番号８６（ＧＰＱＰＧ）、配列番号８７（ＧＧＰＱＰＧ）、配列番号８８（ＧＩＰＰ）、配列番号８１（ＧＧＩＰＰ）、配列番号８９（ＧＩＰＰＡ）、配列番号９０（ＧＧＩＰＰＡ）若しくは配列番号９１（ＧＧＹＰＧＡＳＹＰＧＡＹＰＧＱＡＰＰＧＡＹＰＧＱＡＰＰＧＡＹＰＧＡＰＧＡＹＰＧＡＰＡＰＧＶＹＰＧＰＰＳＧＰＧＡＹＰＳ）若しくは配列番号９２（ＧＧＹＰＧＡＳＹＰ）若しくは配列番号９３（ＧＡＹＰＧＱＡＰＰ）若しくは配列番号９４（ＧＡＹＰＧＱＡ）若しくは配列番号９５（ＧＡＹＰＧＡＰ）若しくは配列番号９６（ＧＡＹＰＧ）若しくは配列番号９７（ＡＰＡＰＧＶＹＰＧ）若しくは配列番号９８（ＧＡＹＰＳ）のペプチドのようなペプチドのレトロインベルソバリアント又は関連するペプチド（又はこれらのレトロインベルソバリアント）から選択することができる。
【０１００】
哺乳動物インスリンＣペプチドの断片に本質的に相同的な配列を有するペプチドのヒトにおける使用も提供され、ペプチドは、配列番号３２（ＬＧＧＧＰＧＡＧ）の配列若しくはその断片、又は配列番号３３（ＬＡＧＧＰＧＡＧ）の配列若しくはその断片を含み、及びエラスチン結合タンパク質型結合と相互作用し又は自然免疫細胞の炎症活性を調整する能力を有し、本発明は、好ましくは、配列番号３４（ＬＧＧＧＰＧ）若しくは配列番号３５（ＬＡＧＧＰＧ）の配列又はその断片を有する、最も好ましくはそれからなるペプチドを提供し、好ましくは、断片は、配列番号３６（ＬＧＧＧＰ）、配列番号３７（ＬＡＧＧＰ）、配列番号３８（ＧＧＧＰ）、配列番号１３０（ＡＧＧＰ）から選択され、これらは、例えば、インスリンとインターロイキン−１受容体アンタゴニストと組み合わせられてもよい。
【０１０１】
哺乳動物インスリンＣペプチドの断片に本質的に相同的な単離された又は合成ペプチドのヒトにおける使用も提供され、ペプチドは、配列番号３２（ＬＧＧＧＰＧＡＧ）の配列若しくはその断片、又は配列番号３３（ＬＡＧＧＰＧＡＧ）の配列若しくはその断片を含み、及びエラスチン結合タンパク質型結合と相互作用し又は自然免疫細胞の炎症活性を調整する能力を有し、ペプチドは、好ましくは、配列番号３４（ＬＧＧＧＰＧ）若しくは配列番号３５（ＬＡＧＧＰＧ）の配列又はその断片を有し、最も好ましくはそれからなり、好ましくは、断片は、配列番号３６（ＬＧＧＧＰ）、配列番号３７（ＬＡＧＧＰ）、配列番号３８（ＧＧＧＰ）、配列番号１３０（ＡＧＧＰ）から選択され、これらは、例えば、インスリンとインターロイキン−１受容体アンタゴニストと組み合わせられてもよい。
【０１０２】
Ｃペプチドの疎水性中央部分に関連するペプチド又は断片のレトロインベルソバリアントのヒトにおける使用も提供され、その例は、全てＤアミノ酸のペプチドＧＡＧＰＧＧＧＬ、ＧＡＧＰＧＧＡＬ、ＡＧＰＧＧＧＬ、ＧＰＧＧＧＰＡ、ＧＰＧＧＡＬ、ＧＰＧＧＧＬ、ＧＰＧＧＧ、ＧＰＧＡＧであり、これらは、例えば、インスリンとインターロイキン−１受容体アンタゴニストと組み合わせられて医薬組成物とされてもよい。好ましくは１型糖尿病（ｔｙｏｐｅ  １  ｄｉａｂｅｔｅｓ）における微小血管合併症の治療に使用するための、これらのレトロインベルソバリアントは、４〜８アミノ酸長であることが好ましい。これらのバリアントは、例えば、糖尿病及び／若しくは糖尿病合併症を治療するため、又は、例えば１型糖尿病における、炎症活性を低減させるために、本明細書において提供される。
【０１０３】
少なくとも１つの薬学的に許容される担体又は賦形剤と共に、全てＤアミノ酸のペプチドＧＡＧＰＧＧＧＬ、ＧＡＧＰＧＧＡＬ、ＡＧＰＧＧＧＬ、ＧＰＧＧＧＰＡ、ＧＰＧＧＡＬ、ＧＰＧＧＧＬ、ＧＰＧＧＧ、ＧＰＧＡＧの群から選択される少なくとも１つのペプチド又は断片を含む医薬組成物のヒトにおける使用も提供され、医薬は、糖尿病若しくは糖尿病合併症と戦うため又は炎症状態を治療するために効果的な少なくとも１つの追加の活性剤をさらに含んでもよく、例えば、追加の活性剤は、インスリン又はインターロイキン−１受容体アンタゴニスト又はインターロイキン−１に対する抗体、好ましくはインターロイキン−１−ベータに対する抗体である。これらの組成物のヒトにおける使用は、糖尿病及び糖尿病合併症の治療において使用するため又は炎症活性を低減させるために提供される。他の使用もまた提供され、それは例えば、医薬が１型糖尿病、任意選択的に、腎症、ニューロパチー又は網膜症を伴う１型糖尿病を治療するため又は後期２型糖尿病合併症の発症を遅らせるために使用されるものであり、又は医薬が炎症状態を治療するために使用されるものである。ペプチドは、糖尿病及び／又は糖尿病合併症の治療における同時の、別々の又は逐次的な使用のための組合せ調製物として糖尿病又は糖尿病合併症と戦うために効果的な少なくとも１つの追加の活性剤と共に使用されてもよく、又は関節リウマチに対して若しくは関節リウマチを治療するための医薬を調製するため、アテローム性動脈硬化症を治療するため若しくはアテローム性動脈硬化症を治療するための医薬を調製するため又は大血管疾患を治療するため若しくは大血管疾患を治療するための医薬を調製するため又は離断性骨軟骨炎（ｏｓｔｅｏｃｈｏｎｄｒｏｓｉｓ  ｄｉｓｓｅｃｃａｎｓ）を治療するため若しくは離断性骨軟骨炎を治療するための医薬を調製するため又は微小血管疾患を治療するため若しくは微小血管疾患を治療するための医薬を調製するため又はメタボリックシンドロームを治療するため若しくはメタボリックシンドロームを治療するための医薬を調製するため又は腎症を治療するため若しくは腎症を治療するための医薬を調製するため又はニューロパチーを治療するため若しくはニューロパチーを治療するための医薬を調製するため又は網膜症（ｒｅｔｉｎａｐａｔｈｙ）を治療するため若しくは網膜症を治療するための医薬を調製するため又はインターロイキン（ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎｅ）−１媒介性の炎症を治療するため若しくはインターロイキン−１媒介性の炎症を治療するための医薬を調製するために効果的な少なくとも１つの追加の活性剤と共に使用されてもよい。
【０１０４】
本開示はまた、Ｃペプチドに結合してその作用を遮断することによりエラスチン結合タンパク質型を直接的に、又は間接的に阻害するモジュレーター（例えば、エラスチン結合タンパク質型アンタゴニスト）の哺乳動物宿主（ヒトが挙げられるがそれに限定されない）への投与を通じて、本明細書に開示される通り、Ｃペプチド過剰に関連する１つ以上の障害、例えば、インスリン抵抗性、高血圧、アテローム性動脈硬化症及び早期段階の２型糖尿病を治療する方法に関する。そのようなエラスチン結合タンパク質型アンタゴニストは、メタボリックシンドローム、２型糖尿病及び関連する障害などの障害の治療において有用である。特定の実施形態では、本明細書において提供されるそのようなエラスチン結合タンパク質アンタゴニストは、好ましくは、アルファ−エノラーゼ又はＧＰＲ１４６のアンタゴニストと共に使用されてもよい。有用なエラスチン結合タンパク質アンタゴニストは、配列番号９９（ＱＴＬＰＧＳＣＧＱＶＶＧＳＰＳＡＱＤＥＡＳＰＬＳＥＷＲＡＳＹＮＳＡＧＳＮＩＴＤＡ）、配列番号１００（ＬＰＧＳＣＧＱＶＶＧＳＰＳＡＱＤＥＡＳＰＬＳＥＷＲＡＳＹＮＳＡＧ）、配列番号１０１（ＶＶＧＳＰＳＡＱＤＥＡＳＰＬＳＥＷＲＡＳＹ）、配列番号１０２（ＶＶＧＳＰＳＡＱＤＥＡＳＰＬＳ）、配列番号１０３（ＰＳＡＱＤＥＡＳＰＬ）、配列番号１０４（ＳＰＳＡＱＤＥＡＳＰ）、配列番号１０５（ＡＱＤＥＡＳ）、配列番号１０６（ＰＳＡＱ）、配列番号１０７（ＳＡＱＤ）、配列番号１０８（ＤＥＡＳ）、配列番号３１（ＱＤＥＡ）、配列番号１０９（ＳＰＳＡ）、配列番号１１０（ＶＶＧＧＴＥＡＱＲＮＳＷＰＬＱ）、配列番号１１１（ＶＶＧＧＴＥＡＱＲＮＳＷＰＳＱ）、配列番号１１２（ＴＥＡＱＲＮＳＷＰ）、配列番号１１３（ＡＱＲＮ）、配列番号１１４（ＩＶＧＧＲＲＡＲＰＨＡＷＰＦＭ）、配列番号１１５（ＶＶＧＧＥＤＡＫＰＧＱＦＰＷＱ）、配列番号１１６（ＶＶＧＧＲＶＡＱＰＮＳＷＰＷＱ）、配列番号１１７（ＲＶＡＱＰＮＳＷ）、配列番号１１８（ＶＶＧＧＡＥＡＲＲＮＳＷＰＳＱ）、配列番号１１９（ＡＥＡＲＲＮＳＷ）、配列番号１２０（ＶＶＧＧＱＥＡＴＰＮＴＷＰＷＱ）、配列番号１２１（ＱＥＡＴＰＮＴＷ）、配列番号１２２（ＶＶＧＧＥＥＡＲＰＮＳＷＰＷＱ）、配列番号１２３（ＥＥＡＲＰＮＳＷ）、配列番号１２４（ＶＶＧＧＴＥＡＧＲＮＳＷＰＳＱ）、配列番号１２５（ＴＥＡＧＲＮＳＷＰ）、配列番号１２６（ＥＤＹＲＰＳＱＱＤＥＣＳＰＲＥ）、配列番号１２７（ＰＳＱＱＤＥＣＳＰ）、配列番号１２８（ＱＱＤＥＣ）、ＱＤＥ、又はこれらのレトロインベルソ若しくはそれ以外に機能的に関連するペプチドなどのペプチドから選択することができる。
【０１０５】
例示的には、インターロイキン１受容体アンタゴニスト（ＩＬ−１Ｒａ）は組換えタンパク質（ｒＩＬ−１Ｒａ）、好ましくは組換えヒトタンパク質（ｒｈＩＬ−１Ｒａ）、好ましくはアナキンラである。
【０１０６】
本発明はまた、Ｃペプチドのエラスチン結合タンパク質との結合又は相互作用を調整する剤としてのＣペプチドの単離された断片のヒトにおける使用及びＣペプチドのエラスチン結合タンパク質との結合又は相互作用を調整する剤としてのエラスチン結合タンパク質の単離された断片の使用を提供する。
【０１０７】
ヒトの治療（ｔｒｅａｔｍｅｔ）のための組合せ薬剤に含まれる有用なアンタゴニストは、配列番号９９（ＱＴＬＰＧＳＣＧＱＶＶＧＳＰＳＡＱＤＥＡＳＰＬＳＥＷＲＡＳＹＮＳＡＧＳＮＩＴＤＡ）、配列番号１００（ＬＰＧＳＣＧＱＶＶＧＳＰＳＡＱＤＥＡＳＰＬＳＥＷＲＡＳＹＮＳＡＧ）、配列番号１０１（ＶＶＧＳＰＳＡＱＤＥＡＳＰＬＳＥＷＲＡＳＹ）、配列番号１０２（ＶＶＧＳＰＳＡＱＤＥＡＳＰＬＳ）、配列番号１０３（ＰＳＡＱＤＥＡＳＰＬ）、配列番号１０４（ＳＰＳＡＱＤＥＡＳＰ）、配列番号１０５（ＡＱＤＥＡＳ）、配列番号１０６（ＰＳＡＱ）、配列番号１０７（ＳＡＱＤ）、配列番号１０８（ＤＥＡＳ）、配列番号３１（ＱＤＥＡ）、配列番号１０９（ＳＰＳＡ）、配列番号１１０（ＶＶＧＧＴＥＡＱＲＮＳＷＰＬＱ）、配列番号１１１（ＶＶＧＧＴＥＡＱＲＮＳＷＰＳＱ）、配列番号１１２（ＴＥＡＱＲＮＳＷＰ）、配列番号１１３（ＡＱＲＮ）、配列番号１１４（ＩＶＧＧＲＲＡＲＰＨＡＷＰＦＭ）、配列番号１１５（ＶＶＧＧＥＤＡＫＰＧＱＦＰＷＱ）、配列番号１１６（ＶＶＧＧＲＶＡＱＰＮＳＷＰＷＱ）、配列番号１１７（ＲＶＡＱＰＮＳＷ）、配列番号１１８（ＶＶＧＧＡＥＡＲＲＮＳＷＰＳＱ）、配列番号１１９（ＡＥＡＲＲＮＳＷ）、配列番号１２０（ＶＶＧＧＱＥＡＴＰＮＴＷＰＷＱ）、配列番号１２１（ＱＥＡＴＰＮＴＷ）、配列番号１２２（ＶＶＧＧＥＥＡＲＰＮＳＷＰＷＱ）、配列番号１２３（ＥＥＡＲＰＮＳＷ）、配列番号１２４（ＶＶＧＧＴＥＡＧＲＮＳＷＰＳＱ）、配列番号１２５（ＴＥＡＧＲＮＳＷＰ）、配列番号１２６（ＥＤＹＲＰＳＱＱＤＥＣＳＰＲＥ）、配列番号１２７（ＰＳＱＱＤＥＣＳＰ）、配列番号１２８（ＱＱＤＥＣ）、ＱＤＥ、又は関連するペプチドなどのＧｘｘＰ、ｘＧｘＰＧ、ＧｘｘＰｘ、ＧｘｘＰＧ、ｘＧｘｘＰ、ｘＧｘｘＰｘ、ｘＧｘｘＰＧモチーフ結合ペプチドから選択することができ、またこれらは、例えば、インスリンと共にインターロイキン−１受容体アンタゴニスト共に医薬組成物中に組み合わせてもよい。
【０１０８】
詳細な説明
ヒトＣペプチドはヒトエラスチン受容体のリガンドであることが分かる。
【０１０９】
エラスチン受容体  細胞表面上又は細胞内部の化学基又は分子であって、アミノ酸モチーフＧｘｘＰを有するペプチドに対して親和性を有するものを意味し、ここで、Ｇは１文字表記でアミノ酸グリシンを表し、Ｐはアミノ酸プロリンを表し、ｘは任意のアミノ酸を表し、Ｐの後のアミノ酸は好ましくはＶＩＩＩ型ベータターンを可能とするものであり、該条件はＰのＣ末端側にＧが後続する場合に満たされ、前記エラスチン受容体はヒトにおいて、典型的に、識別記号Ｐ１６２７８−２の下でＧＬＢ１−アイソフォーム２として公的にアクセス可能なデータベースＵｎｉｐｒｏｔにおいて知られているエラスチン結合タンパク質により表される。
【０１１０】
Ｃペプチド  典型的に、インスリンと共に膵臓中でベータ細胞により産生されるペプチドを意味し、前記Ｃペプチドはヒトにおいて、識別記号Ｐ０１３０８−１、位置５７〜８７の下でＩＮＳ−アイソフォーム１として公的にアクセス可能なデータベースＵｎｉｐｒｏｔにおいて知られているペプチドにより表される。
【０１１１】
ヒトＣペプチドは、未熟なインスリンＡ鎖及びＢ鎖を接続し、成熟したインスリンと共に１：１の比で門脈循環中に分泌され、その生物学的活性の証拠が増加しているとはいえ、不活性であると伝統的に考えられてきた。過剰な食事において、過剰な血清Ｃペプチドが慢性低グレード炎症、インスリン抵抗性及び高血圧に繋がり、メタボリックシンドロームの原因となることを本発明者は示す。Ｃペプチドは、エラスチンペプチドのエラスチン受容体への結合に特異的なこれまで認識されていなかったｘＧｘｘＰＧモチーフを有し、前記受容体は組織炎症及び組織修復において様々な役割を果たすことを本発明者は示す。最近の発見は、この受容体が、いずれもメタボリックシンドロームに特徴的な、インスリン抵抗性、脂質異常症（ｄｉｓｌｉｐｉｄａｅｍｉａ）、高血圧及びアテローム発生を促進することを示す。この発見は、Ｃペプチドを注目させ、循環するエラスチン由来のペプチドがＣペプチドと組み合わされてエラスチン受容体媒介性のインスリン抵抗性及び炎症を刺激し得る時に、ＣＯＰＤなどのインスリン抵抗性の他の状態とメタボリックシンドロームを結び付ける。
【０１１２】
インスリン抵抗性
インスリン抵抗性（ＩＲ）はメタボリックシンドロームの中心である１，２。それは、アテローム硬化性心臓血管疾患及び２型糖尿病のような慢性炎症性の、生活様式、食事又は年齢に関連する状態の病因において極めて重要な位置を占める。メタボリックシンドロームの特徴は、ＩＲ、高血圧、脂質異常症、高インスリン血症及び耐糖能障害である。ＩＲの原因について不確実性が存在する。単純化された主要な見解１，３は、慢性低グレード炎症がＩＲ及びその後の高インスリン血症を推進すると主張し、これに反対すると思われる見解２は、高インスリン血症の増加がＩＲ及びその後の炎症を推進すると主張する。
【０１１３】
ヒトにおいて、過剰な食事において過剰な血清Ｃペプチドが慢性低グレード炎症の他にＩＲ及び高血圧を引き起こしてメタボリックシンドロームに繋がるが、Ｃペプチドはエラスチン受容体のリガンドとしてこれまで認識されていなかった。
【０１１４】
エラスチン受容体
ヒトエラスチン受容体４〜６は、白血球の走化性及びマトリックスメタロプロテイナーゼの活性化、内皮細胞遊走及び血管新生並びに線維芽細胞及び血管平滑筋細胞の増殖に関与する。該受容体は、組織損傷又は炎症後の肉芽組織において細胞外マトリックスの（タンパク質分解）断片により活性化され、組織修復に向けた何でも屋の仕事を遂行する。
【０１１５】
該受容体は、ヒトベータガラクトシダーゼの選択的にスプライシングされたバリアントからなる。それは、エラスチン及びフィブリリン−１などの細胞外マトリックスタンパク質（のタンパク質分解断片）中のヘキサペプチドｘ−Ｇｌｙ−ｘ−ｘ−Ｐｒｏ−Ｇｌｙ（ｘＧｘｘＰＧ）モチーフに結合する４。モチーフの最もよく知られた代表は、（トロポ）エラスチン中に見出される配列番号４１（ＶＧＶＡＰＧ）のヘキサペプチドであるが、一般にエラスチンペプチドと呼ばれるシグネチャー配列ｘＧｘｘＰＧに従う多くの他の生物学的に活性のペプチドがアゴニストとして報告されている４，５。生物学的活性のために必須の最小の配列はＧｘｘＰであり、ＰにおいてペプチドはＶＩＩＩ型ベータターンをとる５。受容体の結合部位に対応するＶ１４ペプチド（配列番号１３１（ＶＶＧＳＰＳＡＱＤＥＡＳＰＬ））は、エラスチンペプチド結合をアンタゴナイズするために使用される６。
【０１１６】
エラスチン受容体は、細胞表面上のノイラミニダーゼ（Ｎｅｕ−１）及び保護タンパク質−カテプシンＡ（ＰＰＣＡ）と複合体を形成する４。そのリガンドへの結合後、複合体は細胞中のエンドソーム区画内に移行し、多数の細胞応答を誘発する。マウスにおいて、エラスチンペプチドは、Ｎｅｕ−１を通じてアテローム性動脈硬化症を増強し７、Ｎｅｕ−１とインスリン受容体との相互作用によりＩＲを調節する８。さらに、マウスにおいて、ＰＰＣＡは弾性繊維のアセンブリー及びエンドセリン−１の不活性化のために必要とされ、エンドセリン−１の活性化の障害は高血圧を結果としてもたらす９。
【０１１７】
Ｃペプチド
本明細書において認識されるヒトＣペプチド（１配列番号１（ＥＡＥＤＬＱＶＧＱＶＥＬＧＧＧＰＧＡＧＳＬＱＰＬＡＬＥＧＳＬＱ）３１）はｘＧｘｘＰＧモチーフ（下線）を含有し、驚くべきことにエラスチン受容体のリガンドとしてそれを同定する。その発見の広範囲に及ぶ含意を以下に議論する。古典的に、Ｃペプチドは、インスリン遺伝子から膵ベータ細胞中で産生されるプレプロインスリン中のインスリンのＡ鎖及びＢ鎖を接続し、Ａ鎖、Ｂ鎖（Ａ  ｅｎ  Ｂ）のフォールディング及び結合を促進する。作用後、成熟したインスリン及びＣペプチドは門脈循環中に分泌される。質素な食事の下であっても過剰な食事の下であっても、インスリン及びＣペプチドは等モル濃度で産生及び分泌される。しかしながら、Ｃペプチドの血漿中半減期は約３０分であるのに対してインスリンの半減期は約４分であり１０、過剰な食事により、インスリンより高レベルの循環するＣペプチドが持続的に維持される。伝統的な見解は、循環するＣペプチドは本質的に不活性であり、そのより長い半減期のため、インスリン放出のサロゲートマーカーとして特に有用であると主張する。しかしながら、Ｃペプチドの生物学的機能を指摘する証拠が蓄積されつつある１１〜１４。マウスでの実験において過剰なＣペプチドは脈管系中及び糸球体周囲において炎症効果を誘発し、またＣペプチドは患者のアテローム硬化性病変中に沈着していることが判明している１５。空腹時血清Ｃペプチドレベルは、非糖尿病の成人における心臓血管及び全体の死の危険と有意に関係している１６。これらの最近の発見は、Ｃペプチドそれ自体の病態生理学的重要性を確立する。
【０１１８】
ペンタペプチド２７配列番号６（ＥＧＳＬＱ）３１
１つ目は、ペンタペプチド２７配列番号６（ＥＧＳＬＱ）３１に関し、これはヒトＣペプチドのＣ末端の５残基に対応し、全長ペプチドのいくつもの効果を模倣する。ペンタペプチドは、細胞膜結合Ｃペプチドに取って代わり、細胞内Ｃａ（２＋）を増加させ、ＭＡＰキナーゼシグナル伝達経路及びＮａ（＋），Ｋ（＋）−ＡＴＰアーゼを刺激する８。注記として、２７位のグルタミン酸は、Ｃペプチドによるアルファ−エノラーゼの活性化に必須であることが示されており１４、Ｃ末端ペンタペプチド部位がＣペプチドのアルファ−エノラーゼとの相互作用に関与し得ることを暗示している。
【０１１９】
中央部分１３配列番号８（ＧＧＧＰＧＡＧ）１９
第２の部位、並びに本出願が主に焦点を当てる１３配列番号８（ＧＧＧＰＧＡＧ）１９のヒトＣペプチドの中央部分は、血管機能障害に対するその効果を媒介するために不可欠なＣペプチドの構造的特徴をラットにおける皮膚チャンバー肉芽組織モデルにおいて調べた時に検出された１４。１３配列番号８（ＧＧＧＰＧＡＧ）１９は、Ｃペプチドの生物学的活性の中心であることが示された。しかしながら、合成のリバース配列（レトロ）及び全てＤ体のアミノ酸（エナンチオ）Ｃペプチドは天然Ｃペプチドと同等の能力を有することが判明したので、その時には１４、この中央部分の効果は非キラル相互作用に依拠しなければならないと結論付けられ、それにより、１３配列番号８（ＧＧＧＰＧＡＧ）１９に結合するいかなる可能な立体特異的受容体から遠ざける教示が為された。それ以来、この教示がＣペプチドに関する学識を支配してきた。しかしながら、ｘＧｘｘＰＧエラスチン受容体結合モチーフはＣペプチドの生物活性のある中央部分（１配列番号１（ＥＡＥＤＬＱＶＧＱＶＥＬＧＧＧＰＧＡＧＳＬＱＰＬＡＬＥＧＳＬＱ）３１）と重なり合い、肉芽組織における血管機能に対する効果と確固として関連付けられ、Ｃペプチドはエラスチン受容体の生物学的に活性のリガンドとして同定されることを本発明者はここに結論付ける。
【０１２０】
Ｃペプチド受容体
現在までに、確固としたＣペプチド受容体は分かっていない。ヒト細胞膜へのＣペプチドの結合研究１２は、少なくとも２つのＣペプチド／受容体複合体の存在を指し示しており、１つは高い親和性及び低いモビリティを有し、１つは低い親和性及び高いモビリティを有し、また最近の研究は、プラスミノーゲンの細胞表面受容体であるアルファ−エノラーゼ１７、又はＧＰＲ１４６１８は、Ｃペプチドのあり得る受容体候補として、脂質異常症と関連付けられる１９ことを示唆する。Ｃペプチド中の生物学的に活性の部位。少なくとも２つの生物学的に活性の部位がＣペプチド中に同定されている。
【０１２１】
非キラリティーは撤回される
驚くべきことに、参考文献１４を改めて検討すると、ｘＧｘｘＰＧモチーフもまた生物学的に活性のレトロＣペプチド（１配列番号１３６（ＱＬＳＧＥＬＡＬＰＱＬＳＧＡＧＰＧＧＧＬＥＶＱＧＶＱＬＤＥＡＥ）３１）中に存在する。また、生物学的に活性のエナンチオＣペプチド（Ｄ−−１ＥＡＥＤＬＱＶＧＱＶＥＬＧＧＧＰＧＡＧＳＬＱＰＬＡＬＥＧＳＬＱ３１）は、レトロ−エナンチオ配列Ｄ−−ＧＰＧＡＧＳとして隠されている該モチーフを有し、レトロ−エナンチオペプチドはそれらの親ペプチドと立体的にほぼ同一であり、異なるＮ末端及びＣ末端の終端であるが全体的な側鎖のトポロジーを維持する２０。これらの観察は非キラリティーの教示１４を撤回させ、その代わりに、前記モチーフを認識する受容体、すなわちエラスチン受容体へのこれらのペプチドの立体特異的結合を可能とする。
【０１２２】
Ｃペプチドはエラスチンペプチドの属の種である。
【０１２３】
さらに、ヒトＣペプチドの断片の追加の例が本明細書において提供され、また１４、中央部分のヘキサペプチド１２配列番号３４（ＬＧＧＧＰＧ）１７を有する全てはいずれも血管機能障害を予防したが、これに対してヘキサペプチドの中央部分が破壊された他のヒトＣペプチド断片は活性がないことが判明した。ヘキサペプチド（１２配列番号１３４（ＬＧＧＧＰＥ）１７）ＧｘｘＰモチーフ（Ｐは、生物学的活性のために必要とされるＶＩＩＩ型ベータターンを可能とする５）を含むラットＣペプチドもまた活性であることが判明したが、これに対してエラスチン結合モチーフにおいて必須のＰを含有しないブタＣペプチド（中央部分１２配列番号１３５（ＬＧＧＧＬＧ）１７）は活性がないことが判明した。注記として、ＧｘｘＰモチーフを有する１１個全てのＣペプチド（断片）は血管機能障害を予防したが、これに対して該モチーフを有しない５つ全ては予防せず、循環するＣペプチドの断片であっても、ＧｘｘＰモチーフ及びＶＩＩＩ型ベータターンが存在する限り、エラスチン受容体活性化に寄与し得ることを示す。ヒトＣペプチド及びそのｘＧｘｘＰＧ含有断片は、したがって、ペプチドのより大きいクラスの属の予想外の種、すなわちエラスチン受容体活性化が可能なエラスチンペプチドと考えることができ、過剰なＣペプチドはエラスチン受容体媒介性の組織修復に干渉して、慢性低グレード炎症、ＩＲ及び高血圧を調整し得る。インスリン抵抗性はメタボリックシンドロームを超えて広がっている。上記に基づいて、食事が過剰であり及びメタボリックシンドロームを発症する傾向があるヒトにおいて、過剰なＣペプチドがエラスチン受容体に結合して少なくとも３つの効果、すなわち、慢性低グレード炎症（むしろ、過剰な血管修復活性として見られる）、インスリン抵抗性及び高血圧を誘発することを本発明者は提起する。該発見は、メタボリックシンドロームと共に見られる状態を、喫煙により若しくは粒子状微細物質（スモッグ）への曝露により、又は妊娠及び成長などの生理的条件により引き起こされる、ＣＯＰＤなどの循環するエラスチン分解産物により恐らくは引き起こされ、Ｃペプチド及びエラスチン由来のペプチドの両方が増加した時に累積した病理を可能とする状態と結び付け、メタボリックシンドローム及びＩＲの他の生活様式又は年齢に関連する状態の原因に関する我々の理解における大幅な飛躍を提供する。エラスチンペプチド／エラスチン受容体の結合は、配列番号４１（ＶＧＶＡＰＧ）などの合成ペプチドについて実証されており、アンタゴニストＶ１４ペプチドにより阻害される４〜６。配列ＧｘｘＰを有して又は有さずに提供される合成のヒトＣペプチドバリアント又は断片を用いてこれらの試験を行って、結合の阻害を研究するための古典的エラスチン受容体アンタゴニストＶ１４ペプチドなど、結合を研究することが提供される。同様に、血管機能の皮膚チャンバー肉芽組織モデル１４においてＣペプチド試験を行うこと、又はアテローム性動脈硬化症、Ｎｅｕ−１媒介性のＩＲ若しくはＰＰＣＡ媒介性の高血圧の確立されたモデル７〜９において合成の、誘導可能に若しくは構成的に発現されるＣペプチドを試験することができる。例えば、古典的なボイデンチャンバー実験において、１％の血清培地中のＣＤ４＋免疫細胞の遊走の１００％の増加が１０ｎＭのＣペプチドによりｉｎ  ｖｉｔｒｏで実証され、このＣＤ４遊走はその後、１．３マイクロＭのＶ１４ペプチドにより５０％を超えて阻害され、アンタゴナイズされ及び減少し、エラスチン受容体アンタゴニストＶ１４ペプチドによるＣペプチド特異的生物学的活性の低減を具体的に実証した。
【０１２４】
本明細書に含まれる参考文献は参照により含められる。
【０１２５】
【表１】
2020507623.tif 000003
2020507623.tif 000004
【０１２６】
再びとなるが、我々は、過食した時に、膵臓のベータ細胞に継続的なグルコースシグナル伝達を提供してインスリンを産生させ、周囲の肝臓、筋肉及び脂肪細胞中に食品に由来する過剰なグルコースを宿させる。過剰に食事した時に、ベータ細胞からの絶えず増加したインスリン産生を必要とし、それと共にベータ細胞からのＣペプチドの絶えず増加した産生を必要とし、Ｃペプチド及びインスリンは等量で産生及び排出される。インスリンは約３〜４分の典型的な半減期を有するので、過剰なインスリンの条件は容易に対処され得る。しかしながら、Ｃペプチドは典型的には３０分を超えるはるかに長い半減期を有し、過剰なＣペプチド（及び部分的又は全体的に作用されていないプロインスリン）の沈着が、ベータ細胞及びランゲルハンス島の周囲、並びにまた血管の血管壁中に形成される。周細胞、平滑筋細胞、線維芽細胞、脂肪組織細胞、膵星細胞、及びその他は、内皮細胞と共に、及び恐らくは循環する白血球は、ＧｘｘＰＧを有するＣペプチドへのＥＢＰの結合に応答し、それにより、ランゲルハンス島のベータ細胞中及びその周囲において、インターロイキン−１−ベータ媒介性の増殖及びその後の低グレード炎症活性化を伴うマトリックスメタロプロテイナーゼ（ＭＭＰ）誘導性の加水分解を引き起こす。このようにＩＬ−１−ベータは組織炎症を推進し、この組織炎症は、ベータ細胞の機能的集団に影響し、並びにまたその後に、２型糖尿病においてインスリン感受性を推進し得る。ＣペプチドのＧｘｘＰＧ配列へのＥＢＰの結合は、細胞表面からのＥＢＰのシェディング及びインターロイキン−Ｉ受容体の提示の増加をさらに促進して、Ｃペプチドの沈着がどこに存在していようと、継続的なインターロイキン−１−ベータ媒介性の増殖及び炎症活性化を可能とすることがあり、これもまた２型糖尿病においてインスリン感受性を推進する。そのようにして発症した２型糖尿病又はメタボリックシンドロームの患者において膵臓におけるベータ細胞の損傷及び破壊が、それらの細胞による過剰なＣペプチド産生に続く。一般的にインスリン抵抗性として見られる現象は、多くの場合、膵ベータ細胞における初期事象に対して二次的なものであり、血管又は末梢Ｃペプチドの過負荷との線維芽細胞、平滑筋細胞、周細胞及び白血球の相互作用から生じる。
【０１２７】
Ｃペプチドは、そのＧＸＸＰＧ及びＸＧＸＰＧモチーフのエラスチン結合タンパク質との相互作用を介して走化活性及び生物活性の効果を発揮する。本発明者らは本出願において、Ｃペプチドはエラスチン結合タンパク質（ＥＢＰ）との相互作用を介して単球、周細胞、平滑筋細胞、線維芽細胞及び他の細胞に対して走化活性及び生物活性の影響を発揮することを教示する（Ｐｒｉｖｉｔｅｒａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．１９９８；２７３：６３１９−６３２６）。この受容体は、Ｃペプチド中に見出されるＧｌｙ−Ｘ−Ｘ−Ｐｒｏ−Ｇｌｙ（ＸＧＸＸＰＧ）又はＸ−Ｇｌｙ−Ｘ−Ｐｒｏ−Ｇｌｙ（ＸＧＸＰＧ）モチーフを認識し、Ｘは任意のアミノ酸、好ましくは疎水性アミノ酸であり得る。一般的にエラスチン結合タンパク質（ＥＢＰ）と呼ばれるこの受容体タンパク質の素性は、酵素的に不活性の、ベータガラクトシダーゼの選択的にスプライシングされたバリアントとして確立されている。ＥＢＰは、保護タンパク質／カテプシンＡ（ＰＰＣＡ）及びリソソームシアリダーゼ（ノイラミニダーゼ−１、Ｎｅｕ−１）と複合体を形成する。Ｃペプチドはインスリンと共に等モル濃度で放出されるがはるかに長い半減期を有するので、増加した食物摂取の結果としてのインスリン排出の増加は、いっそう高いＣペプチドレベルを結果としてもたらす。これはＣペプチドの過剰供給を引き起こし、Ｃペプチドの沈着がベータ細胞の周囲、さらには（微小）脈管系において観察され、そこでこれらのＣペプチドの沈着は、一般的にインスリン抵抗性と呼ばれるものに非常に典型的な低グレード炎症を引き起こす。ＥＢＰに結合するＧＸＸＰＧ及びＸＧＸＰＧモチーフは、血管及び結合組織細胞のインターロイキン−Ｉベータ媒介性の増殖を誘導する。
【０１２８】
周細胞、平滑筋細胞、線維芽細胞、脂肪組織細胞、膵星細胞、及びその他は、内皮細胞と共に、及び循環する白血球は、インターロイキン−１−ベータ媒介性の増殖及び低グレード炎症活性化によりＧｘｘＰＧ又はｘＧｘＰＧ含有タンパク質及びペプチドへのＥＢＰの結合に応答する。ヒトプロテオームの解析は、複数のＧｘｘＰＧ又はｘＧｘＰＧモチーフを有するタンパク質が細胞外マトリックス（ＥＣＭ）に高度に関連することを示す。複数のＧｘｘＰＧ又はｘＧｘＰＧ部位を有するマトリックスタンパク質としては、フィブリリン−１、−２及び−３、エラスチン、フィブロネクチン、ラミニン並びにいくつものテネイシン及びコラーゲンが挙げられる。
【０１２９】
最近の研究は、ＥＢＰ複合体のＮｅｕ−１成分が細胞活性化の誘発に関与することを示している。ＥＢＰは、様々な種類の白血球、間葉細胞、血管平滑筋細胞及び皮膚線維芽細胞などの多くの細胞種上に存在する。これに対して、ヒトエラスチン中の反復配列である配列番号４１（ＶＧＶＡＰＧ）のヘキサペプチドがこの受容体の最もよく認識されるリガンドであるが、Ｃペプチド、ガレクチン−３、ヒトコラーゲン６  Ａ３（ＣＯＬ６Ａ３、Ｕｎｉｐｒｏｔ識別記号Ｐ１２１１）中の配列番号２５（ＦＲＡＡＰＬＱＧＭＬＰＧＬＬＡＰＬＲＴ）のアミノ酸配列及びヒトコリオゴナドトロピン（ｈＣＧ）のベータ−２ループもまた本明細書においてＥＢＰに結合できるものとして認識される。配列番号４１（ＶＧＶＡＰＧ）に加えて、モチーフＧＸＸＰＧ又はＸＧＸＰＧ（Ｘは疎水性アミノ酸である）に従う（全てのエラスチン由来の）ペプチドはｉｎ  ｖｉｔｒｏで単球に対して走化性を示す（Ｂｉｓａｃｃｉａ  Ｆ，ｅｔ  ａｌ．，Ｉｎｔ．Ｊ．Ｐｅｐｔ．Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｒｅｓ．１９９４；４４：３３２−３４１，Ｃａｓｔｉｇｌｉｏｎｅ  Ｍｏｒｅｌｌｉ  ＭＡ，ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｐｅｐｔ．Ｒｅｓ．１９９７；４９：４９２−４９９）。以前には観察されていなかったが、これは注目に値し、何故ならば、霊長動物のＣペプチド配列は配列番号４１（ＶＧＶＡＰＧ）の配列を含有しないが、霊長動物のＣペプチドは、類似の活性を示す有意な量のＧＸＸＰ、ＧＸＸＰＧ及びＸＧＸＰＧモチーフの両方を含有するからである。ＣペプチドのＧｘｘＰ、ＧｘｘＰＧ及びｘＧｘＰＧの相互作用は、ＩＬ−１−ベータの関与を説明する。ＣペプチドのＧｘｘＰ、ＧｘｘＰＧ及びｘＧｘＰＧの相互作用は、糖尿病又は代謝障害研究の当業者の他に、エラスチンペプチド及び細胞外マトリックス（ＥＣＭ）研究の当業者にこれまで見過ごされてきた。この以前には観察されなかった事実は、例えば２型糖尿病を患っている患者の脂肪組織において見られるように、マクロファージ支配的な、ＩＬ−１−ベータ媒介性の慢性炎症性疾患過程を説明し、アテローム性動脈硬化症、糖尿病の初期において見られるような膵臓中のベータ細胞の周囲の直接的な膵島炎及び膵島周囲炎、並びに同様に過食の帰結として患者がＣペプチド過剰産生及びＣペプチド沈着を患うメタボリックシンドロームの多くの他の疾患発現を患っている患者の血管において見られる脈管内膜の肥厚及び平滑筋細胞増殖を説明する。ＣペプチドのＧｘｘＰ、ＧｘｘＰＧ及びｘＧｘＰＧの相互作用はまた、白血球の関与を説明する。加えて、ＩＬ−１−ベータのシグナル伝達は炎症促進性メディエーターの産生を結果としてもたらし、該メディエーターは、ベータ細胞及び局所的な自然免疫細胞においてフィードフォワードのオートクライン／パラクラインの様式で作用してこれらの効果を増幅し、この増幅は、循環する白血球がＧｘｘＰＧ又はｘＧｘＰＧ含有タンパク質及びペプチドに対して強い走化性を示すという事実により為され、したがってここでもまた、Ｃペプチドは、Ｃペプチドがどこに存在していようと、またＣペプチド過剰負荷又はさらにはＣペプチド沈着の状況においてそれらの細胞を引き付け、これが疾患を悪化させる。本明細書において指し示され��ように、Ｃペプチド及びその分解産物がＧｘｘＰＧ及びｘＧｘＰＧモチーフを介してマクロファージ支配的な慢性炎症性疾患過程を推進し得るという概念は、全ての種類の糖尿病の病因を解明し、冠動脈疾患、末梢血管疾患及び大動脈瘤などの脈管系に富んだ臓器及び組織において起こる全ての疾患に適用可能である。
【０１３０】
「ペプチド」により本発明者は、アミノ酸残基がペプチド（−ＣＯ−ＮＨ−）連結により連結された分子だけでなく、ペプチド結合が反転した機能的に同等の分子も含める。レトロインバースペプチドは、親のＬ配列の順序から反転した順序で集合したＤアミノ酸から構成され、したがって天然配列の全体的なトポロジーを維持している。そのようなレトロインベルソペプチド模倣物は、当該技術分野において公知の方法、例えば、Ｍｅｚｉｅｒｅ  ｅｔ  ａｌ．（１９９７）  Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５９，３２３０−３２３７及びＣａｒｖｅｒ  ｅｔ  ａｌ．（１９９７）  Ｂｉｏｐｏｌｙｍｅｒｓ．１９９７  Ａｐｒ  １５；４１（５）：５６９−９０（参照により本明細書に組み込まれる）に記載されている方法を使用して調製することができる。このアプローチは、側鎖の方向ではなく、骨格を伴う変更を含有する偽ペプチドを調製することを伴う。Ｍｅｚｉｅｒｅら及びＣａｒｖｅｒら（１９９７年）は、これらの偽ペプチドが有用であることを示している。レトロインバースペプチドは、タンパク質分解に対してはるかに耐性である。レトロインバーションは、ペプチド物質をタンパク質分解から保護する方法である。それは、ペプチド結合の方向を反転させることにより酵素加水分解を最も受けやすいペプチド結合のレトロインバーションを要する。「レトロインベルソペプチド」は、参照ペプチドの構造異性体であり、そのため、酵素加水分解により耐性でありながらそれらの生物学的活性を保存する。ペプチド模倣物は、ペプチドを模倣するように設計された小さいタンパク質様の鎖である。それらは典型的に、分子の特性を変化させるために既存のペプチドの修飾から生じる。例えば、それらは、分子の安定性又は生物学的活性を変化させる修飾から生じ得る（ペプチドの生物学的活性がキラルの場合にのみ有用）。化学合成されたペプチドは一般に、遊離のＮ及びＣ末端を有する。Ｎ末端アセチル化及びＣ末端アミド化はペプチドの全体的な電荷を低減させ、したがって、その全体的な溶解性が減少する可能性がある。しかしながら、ペプチドの安定性もまた増加し得る可能性があり、その理由は、末端のアセチル化／アミド化は天然タンパク質のより近い模倣を生成するからである。これらの修飾はペプチドの生物学的活性を増加させる可能性があり、それもまた本明細書において提供される。
【０１３１】
ペプチド合成
合成のＰＧドメイン又はＧｘｘＰ型ペプチド、例えば、配列番号４１（ＶＧＶＡＰＧ）、配列番号１３８（ＧＶＡＰＧＶ）、配列番号１３９（ＶＡＰＧＶＧ）、配列番号１４０（ＡＰＧＶＧＶ）、配列番号１４１（ＰＧＶＧＶＡ）、配列番号１４２（ＧＶＧＶＡＰ）、配列番号６０（ＰＧＡＩＰＧ）、配列番号１３７（ＬＧＴＩＰＧ）、配列番号３２（ＬＧＧＧＰＧＡＧ）、配列番号８（ＧＧＧＰＧＡＧ）、配列番号４９（ＧＧＧＰＧＡ）、配列番号３８（ＧＧＧＰ）、配列番号４０（ＧＧＧＰＧ）、配列番号４６（ＧＡＧＰＧ）、配列番号５０（ＧＧＧＰＥ）、配列番号５１（ＧＡＩＰＧ）、配列番号５２（ＧＧＶＰＧ）、配列番号５３（ＧＶＡＰＧ）、配列番号５４（ＹＴＴＧＫＬＰＹＧＹＧＰＧＧ）、配列番号５５（ＹＧＡＲＰＧＶＧＶＧＩＰ）、配列番号５６（ＰＧＦＧＡＶＰＧＡ）、配列番号５７（ＧＶＹＰＧ）、配列番号５８（ＧＦＧＰＧ）、配列番号５９（ＧＶＬＰＧ）、配列番号５１（ＧＡＩＰＧ）、配列番号６０（ＰＧＡＩＰＧ）、配列番号６１（ＰＧＡＶＧＰ）、配列番号６２（ＶＧＡＭＰＧ）、配列番号６３（ＶＧＳＬＰＧ）、配列番号６４（ＶＧＭＡＰＧ）、配列番号６５（ＶＰＧＶＧ）、配列番号６６（ＩＰＧＶＧ）、配列番号６３（ＶＧＳＬＰＧ）、配列番号４１（ＶＧＶＡＰＧ）、配列番号６７（ＶＧＶＰＧ）、配列番号６８（ＡＧＡＩＰＧ）、配列番号６９（ＶＰＧＶ）、配列番号７０（ＬＧＩＴＰＧ）、配列番号７１（ＧＤＮＰ）、配列番号７２（ＧＡＩＰ）、配列番号７３（ＧＫＶＰ）、配列番号７４（ＧＶＱＹ）、配列番号７５（ＧＶＬＰ）、配列番号７６（ＧＶＧＰ）、配列番号７７（ＧＦＧＰ）、配列番号７８（ＧＧＩＰ）、配列番号７９（ＧＶＡＰ）、配列番号８０（ＧＩＧＰ）、配列番号３９（ＧＡＧＰ）、配列番号８１（ＧＧＩＰＰ）、配列番号８２（ＧＱＦＰ）、配列番号８３（ＧＬＳＰ）、配列番号８４（ＧＰＱＰ）、配列番号８５（ＧＧＰＱＰ）、配列番号８６（ＧＰＱＰＧ）、配列番号８７（ＧＧＰＱＰＧ）、配列番号８８（ＧＩＰＰ）、配列番号８１（ＧＧＩＰＰ）、配列番号８９（ＧＩＰＰＡ）、配列番号９０（ＧＧＩＰＰＡ）又はこれらのレトロインベルソバリアントは、古典的な固相合成にしたがって合成される。ＰＧドメイン、特にモチーフＧｘｘＰを有するエラスチンペプチドと相互作用するＳ−Ｇａｌの配列を再現するペプチドであるＶ１４ペプチドはＮｅｏｓｙｓｔｅｍ（Ｓｔｒａｓｂｏｕｒｇ、Ｆｒａｎｃｅ）から得られる。若しくは、Ｖ１４ペプチド及びそのバリアントは、本明細書に記載される通りに合成される。ペプチドの純度は、高速液体クロマトグラフィー及び高速原子衝突質量分析により確認される。
【０１３２】
伝統的に、ペプチドは２〜５０アミノ酸からなる分子として定義され、これに対してタンパク質は５０以上のアミノ酸から構成される。加えて、ペプチドは、二次、三次及び四次構造として公知の複雑なコンフォメーションをとり得るタンパク質よりもうまく定義されていない構造をとる傾向がある。ペプチドとタンパク質との間で機能的な区別も為され得る。しかしながら、ペプチドは、少ないアミノ酸（例えば、２〜３０−５０）を有するペプチド、及び多くのアミノ酸（＞５０）を有するポリペプチドにさらに分けられることがある。タンパク質は、連結されて一緒になった１つ以上のポリペプチドから形成される。それゆえ、タンパク質は本質的に、非常に大きいペプチドである。実際、多くの研究者の他に、本出願は、ペプチド、又はそれ以外に比較的短いアミノ酸鎖を具体的に指すためにペプチドという用語を使用し、ポリペプチドという用語は、タンパク質、又は５０個より多い若しくはそれよりはるかに多くのアミノ酸の鎖を記載するために使用される。
【０１３３】
Ｃペプチド又はその断片（ｆｒａｇｍｅｎｔｓ  ｔｈｅｒｏｆ）を用いる培養細胞の処理
細胞を２４ウェルマイクロプレート又は３２ｍｍの直径のペトリ皿中に４５０個／ｍｍ２の密度でプレートし、２〜４日間培養するか、又は上記の通りの培養を行ってもよい。培養の２日目に、細胞を様々なＣペプチド（好ましくは表１から選択される）又はそのペプチド断片を用いて１日又は２日処理する。実験では、細胞をＣペプチド（１マイクロＭ）又はポリクローナル抗６７ｋＤａエラスチン受容体抗体（抗Ｓ−Ｇａｌ抗体）（１０ｎｇ／ｍｌ）の組合せを用いて２日間処理した。処理の終わりに、細胞をトリプシン処理し（０．２５％）、コールターカウンターを用いて細胞数を決定してもよい。チミジン取込みの決定のために、処理の最後の１８時間にわたり５０マイクロＣｉの［メチル−３Ｈ］チミジン（３．２ＴＢｑ／ｍｍｏｌ；Ａｍｅｒｓｈａｍ）を用いて細胞を標識する。取り込まれたチミジンを液体シンチレーション分光計（Ｂｅｃｋｍａｎ  ＬＳ９８００）を用いてトリクロロ酢酸沈殿性の数として決定する。Ｖ３２ペプチド若しくはＶ３２ペプチド断片又はＶ１４ペプチド若しくはＶ１４ペプチド断片を加えることにより結合をアンタゴナイズしてもよい。
【０１３４】
６７ｋＤａのエラスチン受容体の検出。細胞中の６７ｋＤａのエラスチン受容体を選択するため又はその存在を確認するために、細胞性ＲＮＡ及びエクソン２〜５の領域にわたる配列の上流及び下流のベータガラクトシダーゼｃＤＮＡ配列に対応する合成オリゴプライマーを使用して逆転写ポリメラーゼ連鎖反応を行う。９０℃で１分間の変性、５０℃で２分間のアニーリング及び７２℃で５分間の伸長の４０サイクルの反応をＤＮＡ  Ｔｈｅｒｍａｌ  Ｃｙｃｌｅｒ（Ｐｅｒｋｉｎ−Ｅｌｍｅｒ  Ｃｅｔｕｓ）において実行する。ポリメラーゼ連鎖反応生成物は、好ましくは、１％アガロースゲル上で分析される。
【０１３５】
本明細書におけるタンパク質又はペプチドの組成、構造及び機能の記載において、アミノ酸が参照される。本明細書において、アミノ酸残基は以下の略語を使用することにより表される。また、それ以外に明示的に指し示されなければ、ペプチド及びタンパク質のアミノ酸配列は、左の末端から右の末端へとＮ末端からＣ末端として同定され、Ｎ末端は最初の残基として同定される。Ａｌａ：アラニン残基；Ａｓｐ：アスパラギン酸残基；Ｇｌｕ：グルタミン酸残基；Ｐｈｅ：フェニルアラニン残基；Ｇｌｙ：グリシン残基；Ｈｉｓ：ヒスチジン残基；Ｉｌｅ：イソロイシン残基；Ｌｙｓ：リシン残基；Ｌｅｕ：ロイシン残基；Ｍｅｔ：メチオニン残基；Ａｓｎ：アスパラギン残基；Ｐｒｏ：プロリン残基；Ｇｌｎ：グルタミン残基；Ａｒｇ：アルギニン残基；Ｓｅｒ：セリン残基；Ｔｈｒ：スレオニン残基；Ｖａｌ：バリン残基；Ｔｒｐ：トリプトファン残基；Ｔｙｒ：チロシン残基；Ｃｙｓ：システイン残基。アミノ酸は、従来の１文字表記の略語により称されることもある；Ａ＝Ａｌａ；Ｔ＝Ｔｈｒ；Ｖ＝Ｖａｌ；Ｃ＝Ｃｙｓ；Ｌ＝Ｌｅｕ；Ｙ＝Ｔｙｒ；Ｉ＝Ｉｌｅ；Ｎ＝Ａｓｎ；Ｐ＝Ｐｒｏ；Ｑ＝Ｇｌｎ；Ｆ＝Ｐｈｅ；Ｄ＝Ａｓｐ；Ｗ＝Ｔｒｐ；Ｅ＝Ｇｌｕ；Ｍ＝Ｍｅｔ；Ｋ＝Ｌｙｓ；Ｇ＝Ｇｌｙ；Ｒ＝Ａｒｇ；Ｓ＝Ｓｅｒ；及びＨ＝Ｈｉｓ。
【０１３６】
概要１．エラスチン分解及びＧｘｘＰモチーフを有するエラスチンペプチドは血管疾患と関連付けられる。
【０１３７】
エラスチン由来のペプチド及びエラスチン受容体複合体（ＥＲＣ）に媒介される血管疾患
タンパク質分解により分解されたエラスチンペプチドによるＥＲＣの活性化は血管疾患と関連付けられる。
【０１３８】
−  Ｍａｔｒｉｘ  ａｇｅｉｎｇ  ａｎｄ  ｖａｓｃｕｌａｒ  ｉｍｐａｃｔｓ：ｆｏｃｕｓ  ｏｎ  ｅｌａｓｔｉｎ  ｆｒａｇｍｅｎｔａｔｉｏｎ．Ｄｕｃａ  Ｌ，ｅｔ  ａｌ；Ｃａｒｄｉｏｖａｓｃ  Ｒｅｓ．２０１６  Ｊｕｎ  １；１１０（３）：２９８−３０８．
−  Ｈｅｌｌｅｎｔｈａｌ  ＦＡ，Ｂｕｕｒｍａｎ  ＷＡ，Ｗｏｄｚｉｇ  ＷＫ，Ｓｃｈｕｒｉｎｋ  ＧＷ．Ｂｉｏｍａｒｋｅｒｓ  ｏｆ  ＡＡＡ  ｐｒｏｇｒｅｓｓｉｏｎ．Ｐａｒｔ  １：ｅｘｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒ  ｍａｔｒｉｘ  ｄｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ．Ｎａｔ  Ｒｅｖ  Ｃａｒｄｉｏｌ  ２００９；６：４６４−４７４．
−  Ｍｏｎｏｃｙｔｅ  ｃｈｅｍｏｔａｃｔｉｃ  ａｃｔｉｖｉｔｙ  ｉｎ  ｈｕｍａｎ  ａｂｄｏｍｉｎａｌ  ａｏｒｔｉｃ  ａｎｅｕｒｙｓｍｓ：ｒｏｌｅ  ｏｆ  ｅｌａｓｔｉｎ  ｄｅｇｒａｄａｔｉｏｎ−ｐｅｐｔｉｄｅｓ  ａｎｄ  ｔｈｅ  ６７−ｋＤ  ｃｅｌｌ  ｓｕｒｆａｃｅ  ｅｌａｓｔｉｎ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ．Ｈａｎｃｅ  ＫＡ，ｅｔ  ａｌ；Ｊ  Ｖａｓｃ  Ｓｕｒｇ  ２００２；３５：２５４−２６１．
−  Ｅｌａｓｔｉｎ  ｄｅｇｒａｄａｔｉｏｎ  ｉｓ  ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ  ｗｉｔｈ  ｐｒｏｇｒｅｓｓｉｖｅ  ａｏｒｔｉｃ  ｓｔｉｆｆｅｎｉｎｇ  ａｎｄ  ａｌｌ−ｃａｕｓｅ  ｍｏｒｔａｌｉｔｙ  ｉｎ  ｐｒｅｄｉａｌｙｓｉｓ  ｃｈｒｏｎｉｃ  ｋｉｄｎｅｙ  ｄｉｓｅａｓｅ．Ｓｍｉｔｈ  ＥＲ，ｅｔ  ａｌ；Ｈｙｐｅｒｔｅｎｓｉｏｎ．２０１２  Ｍａｙ；５９（５）：９７３−８
【０１３９】
プロトタイプの合成エラスチンペプチド、配列番号４１（ＶＧＶＡＰＧ）
配列番号４１（ＶＧＶＡＰＧ）のＥＲＣとの相互作用はアテローム性動脈硬化症を引き起こす可能性があり、マクロファージの走化性及び血管新生に関与することの証拠。
【０１４０】
−  Ｅｌａｓｔｉｎ−ｄｅｒｉｖｅｄ  ｐｅｐｔｉｄｅｓ  ｐｏｔｅｎｔｉａｔｅ  ａｔｈｅｒｏｓｃｌｅｒｏｓｉｓ  ｔｈｒｏｕｇｈ  ｔｈｅ  ｉｍｍｕｎｅ  Ｎｅｕ１−ＰＩ３Ｋγ  ｐａｔｈｗａｙ．Ｇａｙｒａｌ  Ｓ，ｅｔ  ａｌ；Ｃａｒｄｉｏｖａｓｃ  Ｒｅｓ．２０１４  Ａｐｒ  １；１０２（１）：１１８−２７．
−  Ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ  ｏｆ  ｍａｃｒｏｐｈａｇｅ  ｃｈｅｍｏｔａｘｉｓ  ｂｙ  ａｏｒｔｉｃ  ｅｘｔｒａｃｔｓ  ｆｒｏｍ  ｐａｔｉｅｎｔｓ  ｗｉｔｈ  Ｍａｒｆａｎ  ｓｙｎｄｒｏｍｅ  ｉｓ  ｒｅｌａｔｅｄ  ｔｏ  ｅｌａｓｔｉｎ  ｂｉｎｄｉｎｇ  ｐｒｏｔｅｉｎ．Ｇｕｏ  Ｇ，ｅｔ  ａｌ；ＰＬｏＳ  Ｏｎｅ．２０１１；６（５）：ｅ２０１３８．
−  Ｅｌａｓｔｉｎ−ｄｅｒｉｖｅｄ  ｐｅｐｔｉｄｅｓ  ｅｎｈａｎｃｅ  ａｎｇｉｏｇｅｎｅｓｉｓ  ｂｙ  ｐｒｏｍｏｔｉｎｇ  ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ  ｃｅｌｌ  ｍｉｇｒａｔｉｏｎ  ａｎｄ  ｔｕｂｕｌｏｇｅｎｅｓｉｓ  ｔｈｒｏｕｇｈ  ｕｐｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ  ｏｆ  ＭＴ１−ＭＭＰ．Ｒｏｂｉｎｅｔ  Ａ，ｅｔ  ａｌ；Ｊ  Ｃｅｌｌ  Ｓｃｉ．２００５  Ｊａｎ  １５；１１８（Ｐｔ  ２）：３４３−５６．
【０１４１】
タンパク質分解により分解された配列番号１４３（ＶＰＧＶＧＩＳＰＥＡ）及び配列番号１４４（ＧＶＡＰＧＩＧＰＧＧ）のエラスチンペプチド
【０１４２】
配列番号１４３（ＶＰＧＶＧＩＳＰＥＡ）及び配列番号１４４（ＧＶＡＰＧＩＧＰＧＧ）はヒトアテローム硬化性病変において局在していること及び配列番号１４４（ＧＶＡＰＧＩＧＰＧＧ）の血清レベルは急性心筋梗塞と関連付けられることの証拠。注記：以下の著者らのいずれも配列番号１４３（ＶＰＧＶＧＩＳＰＥＡ）及び配列番号１４４（ＧＶＡＰＧＩＧＰＧＧ）中のＧｘｘＰモチーフを認識していない
【０１４３】
−  Ａｃｕｔｅ  Ｍｙｏｃａｒｄｉａｌ  Ｉｎｆａｒｃｔｉｏｎ  ａｎｄ  Ｐｕｌｍｏｎａｒｙ  Ｄｉｓｅａｓｅｓ  Ｒｅｓｕｌｔ  ｉｎ  Ｔｗｏ  Ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ  Ｄｅｇｒａｄａｔｉｏｎ  Ｐｒｏｆｉｌｅｓ  ｏｆ  Ｅｌａｓｔｉｎ  ａｓ  Ｑｕａｎｔｉｆｉｅｄ  ｂｙ  Ｔｗｏ  Ｎｏｖｅｌ  ＥＬＩＳＡｓ．Ｓｋｊｏｔ−Ａｒｋｉｌ  Ｈ，ｅｔ  ａｌ；ＰＬｏＳ  Ｏｎｅ．２０１３  Ｊｕｎ  ２１；８（６）：ｅ６０９３６．
【０１４４】
ＥＲＣと相互作用し、生物学的活性を有する追加のエラスチン由来のペプチドは以下において大規模に議論されている：
【０１４５】
−  Ｄｅｇｒａｄａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｔｒｏｐｏｅｌａｓｔｉｎ  ｂｙ  ｍａｔｒｉｘ  ｍｅｔａｌｌｏｐｒｏｔｅｉｎａｓｅｓ−−ｃｌｅａｖａｇｅ  ｓｉｔｅ  ｓｐｅｃｉｆｉｃｉｔｉｅｓ  ａｎｄ  ｒｅｌｅａｓｅ  ｏｆ  ｍａｔｒｉｋｉｎｅｓ．Ｈｅｉｎｚ  Ａ，ｅｔ  ａｌ；ＦＥＢＳ  Ｊ．２０１０  Ａｐｒ；２７７（８）：１９３９−５６
【０１４６】
概要２．ＧｘｘＰモチーフを有し、血管疾患と関連付けられる非エラスチンペプチド。
【０１４７】
配列番号８（ＧＧＧＰＧＡＧ）の中央部分を有するＣペプチド
Ｃペプチドはヒトアテローム硬化性病変において局在し、マクロファージの走化性及び血管新生を誘導すること、Ｃペプチドはアテローム性動脈硬化症を引き起こし得ること並びにＣペプチドの血清レベルは全体的な、心臓血管の及び糖尿病の死亡と関連付けられることの証拠。Ｃペプチドの典型的な分解産物は、配列番号１４５（ＶＥＬＧＧＧＰＧＡＧＳＬＱＰ）、配列番号１４６（ＬＧＧＧＰＧＡＧＳＬＱＰ）及び配列番号１４７（ＬＧＧＧＰＧＡＧＳ）である。注記：以下の著者のいずれもＣペプチド中のＧｘｘＰモチーフを認識していない。
【０１４８】
−  Ｃ−ｐｅｐｔｉｄｅ  ｃｏｌｏｃａｌｉｚｅｓ  ｗｉｔｈ  ｍａｃｒｏｐｈａｇｅｓ  ｉｎ  ｅａｒｌｙ  ａｒｔｅｒｉｏｓｃｌｅｒｏｔｉｃ  ｌｅｓｉｏｎｓ  ｏｆ  ｄｉａｂｅｔｉｃ  ｓｕｂｊｅｃｔｓ  ａｎｄ  ｉｎｄｕｃｅｓ  ｍｏｎｏｃｙｔｅ  ｃｈｅｍｏｔａｘｉｓ  ｉｎ  ｖｉｔｒｏ．Ｍａｒｘ  Ｎ，ｅｔ  ａｌ；Ａｒｔｅｒｉｏｓｃｌｅｒ  Ｔｈｒｏｍｂ  Ｖａｓｃ  Ｂｉｏｌ．２００４  Ｍａｒ；２４（３）：５４０−５．
−  Ｐｒｏｉｎｓｕｌｉｎ  Ｃ−ｐｅｐｔｉｄｅ  ｐｒｅｖｅｎｔｓ  ｉｍｐａｉｒｅｄ  ｗｏｕｎｄ  ｈｅａｌｉｎｇ  ｂｙ  ａｃｔｉｖａｔｉｎｇ  ａｎｇｉｏｇｅｎｅｓｉｓ  ｉｎ  ｄｉａｂｅｔｅｓ．Ｌｉｍ  ＹＣ，ｅｔ  ａｌ；Ｊ  Ｉｎｖｅｓｔ  Ｄｅｒｍａｔｏｌ．２０１５  Ｊａｎ；１３５（１）：２６９−７８．
−  Ｃ−ｐｅｐｔｉｄｅ  ｐｒｏｍｏｔｅｓ  ｌｅｓｉｏｎ  ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ  ｉｎ  ａ  ｍｏｕｓｅ  ｍｏｄｅｌ  ｏｆ  ａｒｔｅｒｉｏｓｃｌｅｒｏｓｉｓ．Ｖａｓｉｃ  Ｄ，ｅｔ  ａｌ；Ｊ  Ｃｅｌｌ  Ｍｏｌ  Ｍｅｄ．２０１２  Ａｐｒ；１６（４）：９２７−３５．
−  Ｆａｓｔｉｎｇ  ｓｅｒｕｍ  Ｃ−ｐｅｐｔｉｄｅ  ｌｅｖｅｌｓ  ｐｒｅｄｉｃｔ  ｃａｒｄｉｏｖａｓｃｕｌａｒ  ａｎｄ  ｏｖｅｒａｌｌ  ｄｅａｔｈ  ｉｎ  ｎｏｎｄｉａｂｅｔｉｃ  ａｄｕｌｔｓ．Ｐａｔｅｌ  Ｎ，ｅｔ  ａｌ；Ｊ  Ａｍ  Ｈｅａｒｔ  Ａｓｓｏｃ．２０１２  Ｄｅｃ；１（６）：ｅ００３１５２．
−  Ｃ−ｐｅｐｔｉｄｅ  ｌｅｖｅｌｓ  ａｒｅ  ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ  ｗｉｔｈ  ｍｏｒｔａｌｉｔｙ  ａｎｄ  ｃａｒｄｉｏｖａｓｃｕｌａｒ  ｍｏｒｔａｌｉｔｙ  ｉｎ  ｐａｔｉｅｎｔｓ  ｕｎｄｅｒｇｏｉｎｇ  ａｎｇｉｏｇｒａｐｈｙ：ｔｈｅ  ＬＵＲＩＣ  ｓｔｕｄｙ．Ｍａｒｘ  Ｎ，ｅｔ  ａｌ；Ｄｉａｂｅｔｅｓ  Ｃａｒｅ．２０１３  Ｍａｒ；３６（３）：７０８−１４．
−  Ｓｅｒｕｍ  Ｃ−ｐｅｐｔｉｄｅ  ｌｅｖｅｌｓ  ａｎｄ  ｒｉｓｋ  ｏｆ  ｄｅａｔｈ  ａｍｏｎｇ  ａｄｕｌｔｓ  ｗｉｔｈｏｕｔ  ｄｉａｂｅｔｅｓ  ｍｅｌｌｉｔｕｓ．Ｍｉｎ  ＪＹ，Ｍｉｎ  ＫＢ．
ＣＭＡＪ．２０１３  Ｊｕｎ  １１；１８５（９）：Ｅ４０２−８．
−  Ｓｅｒｕｍ  Ｃ−ｐｅｐｔｉｄｅ  ｌｅｖｅｌｓ  ａｓ  ａｎ  ｉｎｄｅｐｅｎｄｅｎｔ  ｐｒｅｄｉｃｔｏｒ  ｏｆ  ｄｉａｂｅｔｅｓ  ｍｅｌｌｉｔｕｓ  ｍｏｒｔａｌｉｔｙ  ｉｎ  ｎｏｎ−ｄｉａｂｅｔｉｃ  ｉｎｄｉｖｉｄｕａｌｓ．Ｍｉｎ  ＪＹ，Ｍｉｎ  ＫＢ．Ｅｕｒ  Ｊ  Ｅｐｉｄｅｍｉｏｌ．２０１３  Ｓｅｐ；２８（９）：７７１−４．
【０１４９】
配列番号１４８（ＡＧＡＧＧＹＰＧＡＳＹＰＧＡＹＰＧＱＡＰＰＧＡＹＰＧＱＡＰＰＧＡＹＰＧＡＰＧＡＹＰＧＡＰＡＰＧＶＹＰＧＰＰＳＧ）のＮ末端「コラーゲン様ストレッチ」を有するガレクチン−３
ガレクチン−３の血漿レベルは心不全と関連付けられることの証拠。注記：以下の著者のいずれもガレクチン−３中のＧｘｘＰモチーフを認識していない。
【０１５０】
−  Ｇａｌｅｃｔｉｎ−３，ａ  ｎｏｖｅｌ  ｍａｒｋｅｒ  ｏｆ  ｍａｃｒｏｐｈａｇｅ  ａｃｔｉｖｉｔｙ，ｐｒｅｄｉｃｔｓ  ｏｕｔｃｏｍｅ  ｉｎ  ｐａｔｉｅｎｔｓ  ｗｉｔｈ  ｓｔａｂｌｅ  ｃｈｒｏｎｉｃ  ｈｅａｒｔ  ｆａｉｌｕｒｅ．Ｖａｎ  ｄｅｒ  Ｌｏｋ，Ｄ，  ｅｔ  ａｌ；Ｊ  Ａｍ  Ｃｏｌｌ  Ｃａｒｄｉｏｌ  ２００７  ４９Ｓｕｐｐｌ．Ａ  ９８Ａ［Ａｂｓｔｒａｃｔ］
−  Ｐｒｅｄｉｃｔｉｖｅ  ｖａｌｕｅ  ｏｆ  ｐｌａｓｍａ  ｇａｌｅｃｔｉｎ−３  ｌｅｖｅｌｓ  ｉｎ  ｈｅａｒｔ  ｆａｉｌｕｒｅ  ｗｉｔｈ  ｒｅｄｕｃｅｄ  ａｎｄ  ｐｒｅｓｅｒｖｅｄ  ｅｊｅｃｔｉｏｎ  ｆｒａｃｔｉｏｎ．ｄｅ  Ｂｏｅｒ  ＲＡ，ｅｔ  ａｌ；Ａｎｎ  Ｍｅｄ．２０１１  Ｆｅｂ；４３（１）：６０−８．
【０１５１】
配列番号１４９（ＥＧＦＥＰＧ）のモチーフを有するフィブリリニン−１（Ｆｉｂｒｉｌｌｉｎｉｎ−１）
配列番号１４９（ＥＧＦＥＰＧ）のＥＲＣとの相互作用はマクロファージの走化性に関与することの証拠。
【０１５２】
−  Ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ  ｏｆ  ｍａｃｒｏｐｈａｇｅ  ｃｈｅｍｏｔａｘｉｓ  ｂｙ  ａｏｒｔｉｃ  ｅｘｔｒａｃｔｓ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｍｇＲ  Ｍａｒｆａｎ  ｍｏｕｓｅ  ｍｏｄｅｌ  ａｎｄ  ａ  ＧｘｘＰＧ−ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ  ｆｉｂｒｉｌｌｉｎ−１  ｆｒａｇｍｅｎｔ．Ｇｕｏ  Ｇ，ｅｔ  ａｌ；Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ  ２００６；１１４：１８５５−１８６２．
【０１５３】
配列番号１３７（ＬＧＴＩＰＧ）のモチーフを有するラミニン
ラミニンは配列番号１３７（ＬＧＴＩＰＧ）のモチーフを介してＥＲＣと相互作用し、線維芽細胞及び腫瘍細胞の走化性を誘導することの証拠。
【０１５４】
−  Ｔｈｅ  ｅｌａｓｔｉｎ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ｓｈｏｗｓ  ｓｔｒｕｃｔｕｒａｌ  ａｎｄ  ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ  ｓｉｍｉｌａｒｉｔｉｅｓ  ｔｏ  ｔｈｅ  ６７−ｋＤａ  ｔｕｍｏｒ  ｃｅｌｌ  ｌａｍｉｎｉｎ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ．Ｍｅｃｈａｍ  ＲＰ  ｅｔ  ａｌ；Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ．１９８９  Ｏｃｔ  ５；２６４（２８）：１６６５２−７．
【０１５５】
【表２】
2020507623.tif 000005
2020507623.tif 000006
2020507623.tif 000007
表１：Ｃペプチド、種間比較及びアライメント
【０１５６】
【表３】
2020507623.tif 000008
表２  血管マトリックスタンパク質エラスチン及びフィブリリン中及びＣペプチド中のエラスチン受容体結合モチーフＧｘｘＰ（下線）の存在。ペプチドを各々の識別記号を用いて示し、アミノ酸をデータベースＵｎｉｐｒｏｔにおいて示される通りにナンバリングしている。
【０１５７】
ＥＲＣドッキング部位のさらなる（Ｆｕｒｔｈｅｒｔ）同定
エラスチン受容体複合体（ＥＲＣ）は、加齢又は喫煙後に細胞外マトリックス（ＥＣＭ）のタンパク質分解に由来する過剰なペプチドリガンドに結合することによりヒトの血管疾患を引き起こすと考えられている。本発明者らは今回、顕著なことに血管疾患のＣペプチド（高血中グルコースによりインスリンと共に誘導される）及びＮＴｐｒｏＢＮＰ（心筋細胞ストレス下で誘導される）の周知のバイオマーカー中に、新規のＥＲＣリガンドを同定した。本発明者らは、Ａ）ヒト血管疾患の中心的病因としてＥＲＣリガンドの蓄積を研究すること、Ｂ）いずれもヒト血管疾患を結果としてもたらし得る、リスクのある食事、生活様式及び加齢の蓄積から生じるＥＲＣリガンドについて試験することにより血管疾患リスクを早期に検出することを提案する。
【０１５８】
背景．ＥＲＣは、エラスチン結合タンパク質（ＥＢＰ）、保護タンパク質／カテプシンＡ及びノイラミニダーゼ−１の複合体であり、白血球、線維芽細胞及び平滑筋細胞上に見出される。ＥＲＣリガンドは結合モチーフｘＧｘｘＰＧ又はｘｘＧｘＰＧ（Ｇはグリシン、Ｐはプロリン、ｘは任意のアミノ酸である）、又はＶＩＩＩ型ベータターンをとる場合はｘＧｘｘＰｘを確認する（ｃｏｎｆｉｒｍ）。配列番号４１（ＶＧＶＡＰＧ）及びその他、例えば、配列番号１９７（ＹＧＹＧＰＧ）、配列番号１９８（ＹＧＡＲＰＧ）、配列番号１９９（ＦＧＡＶＰＧ）のプロトタイプＥＲＣリガンドは、エラスチン中の繰返し領域からのタンパク質分解により誘導される。他のものとしては、配列番号１４９（ＥＧＦＥＰＧ）（フィブリリン（ｆｉｂｒｉｌｉｎ））及び配列番号１３７（ＬＧＴＩＰＧ）（ラミニン）である。ＥＢＰは別々にガラクトシドに結合する。ＥＢＰに結合するＥＲＣリガンドは、Ｖ１４ペプチドによりアンタゴナイズされる。加齢又は喫煙によりエラスチンタンパク質分解から生成されるＥＲＣリガンドの循環レベルは、ヒトにおいてアテローム性動脈硬化症、動脈硬化、腹部大動脈瘤及び心筋梗塞と関連付けられており、ＥＲＣ媒介性の血管疾患の早期の診断、予防及び治療を調査する豊富な基礎を提供する。構造解析及び薬物候補開発のためにＥＢＰにおいてＥＲＣリガンドをドッキングさせるための複合のｉｎ  ｓｉｌｉｃｏモデルが利用可能である。ｉｎ  ｖｉｔｒｏのＥＲＣリガンド／ＥＢＰの構造機能相関は、白血球走化性、及び平滑筋細胞の増殖を試験することによりヒト細胞において研究することができる。ＥＲＣリガンドは、マウスにおいてアテローム性動脈硬化症及びインスリンへの抵抗性を誘導し、ＥＲＣ媒介性の血管疾患のｉｎ  ｖｉｖｏ研究を可能とする。
【０１５９】
非ＥＣＭタンパク質からタンパク質分解により誘導されるＥＲＣリガンドモチーフの同定
−  第１の発見はＣペプチドであり、これはプレプロインスリン遺伝子からのプロホルモン転換酵素切断（ＰＣ）により誘導され、インスリンと等モル量で排出されるペプチドである。Ｃペプチドは、配列番号３４（ＬＧＧＧＰＧ）のＥＲＣリガンドモチーフを有する。Ｉｄｏらはどのように、配列番号８（ＧＧＧＰＧＡＧ）のコアモチーフを有するＣペプチド断片がラットにおいてグルコース誘導性の血管機能障害を軽減するか、ＥＲＣリガンドモチーフを認識しないか。Ｃペプチドはマウスにおいてアテローム発生性であり、ヒト血管疾患の独立したマーカーであることが見出されている。したがって、Ｃペプチド中の配列番号３４（ＬＧＧＧＰＧ）の推定上のＥＲＣリガンドの発見は、ＥＲＣ媒介性の血管疾患を高循環性Ｃペプチドレベルに切に関連付ける。それは驚くべきことに、喫煙後の他に高グルコース又は高デンプンの食事後の血管疾患の共通の病因を提供し、両方の病因はＥＲＣの循環性のリガンドに原因として関連付けられる。
【０１６０】
−  第２の発見は、配列番号４４（ＰＧＡＹＰＧ）の推定上のＥＲＣリガンド繰返しモチーフを有する、タンパク質分解を受けやすいＮ末端ドメインを有する、ガレクチン−３である。ガレクチン−３は、ヒト血管疾患の他に、血管疾患の基礎となる肥満症の独立したマーカーである。ガレクチン−３及びＥＢＰはいずれもガラクトシドに結合し、マウスにおいてインスリン抵抗性の原因となるので、推定上のＥＲＣリガンド−受容体相互作用の次にＥＢＰへのガレクチン−３の第２の関係性を本発明者らは示唆する。
【０１６１】
−  第３の発見は、妊娠中に発現されるベータ絨毛性ゴナドトロピン（ベータ−ｈＣＧ）のループ２における配列番号４５（ＱＧＶＬＰＡ）のＥＲＣリガンドペプチドモチーフであり、このループは、ベータ−ｈＣＧからのタンパク質分解によりニックを入れられ、免疫調整及び血管新生に関与する。
【０１６２】
−  本発明者らは、ＥＢＰのｉｎ−ｓｉｌｉｃｏモデルにおいて、新たに発見された配列番号３４（ＬＧＧＧＰＧ）、配列番号４４（ＰＧＡＹＰＧ）及び配列番号４５（ＱＧＶＬＰＡ）、及びプロトタイプの配列番号４１（ＶＧＶＡＰＧ）をドッキングした。いずれもこの複合モデルにフィットする。また、事前のｉｎ−ｖｉｔｒｏの結果は、ＥＲＣ−アンタゴニストＶ１４ペプチドによるＣペプチドの生物活性の阻害を示す。
【０１６３】
−  本発明者らは次に、ＰＣ切断部位が密接に隣接するｘＧｘｘＰＧ又はｘｘＧｘＰＧモチーフを有するタンパク質のさらなる探索を行って、プロタンパク質から誘導し得るその調節（ｒｅｆｕｌａｔｏｒｙ）モデルエレメントｒｆ断片中のＥＲＣリガンドを同定した。本発明者らは、プロカルシトニン（ＰＣＴ）、アミノ末端プロ脳ナトリウム利尿ペプチド（ＮＴｐｒｏＢＮＰ）、プロオピオメラナコルチン（ｐｒｏ−ｏｐｉｏｍｅｌａｎａｃｏｒｔｉｎ）（ＰＯＭＣ）、コラーゲン６Ａ３（ＣＯＬ６Ａ３）及びパイリン中にそれぞれ配列番号２００（ＧＶＧＡＰＧ）、配列番号１８６（ＰＬＧＳＰＧ）、配列番号２０１（ＤＧＡＫＰＧ）、配列番号２０２（ＱＧＭＬＰＧ）及び配列番号１９６（ＡＧＧＡＰＧ）を見出した。ＰＣＴ及びＮＴｐｒｏＢＮＰはそれぞれ心不全と相関する。ＰＯＭＣは摂食挙動の調節に関し、ＣＯＬ６Ａ３は肥満症及びインスリン抵抗性における脂肪細胞機能に関する。パイリンは自然免疫に関する。
【０１６４】
【表４】
2020507623.tif 000009
2020507623.tif 000010
【０１６５】
本発明者らは、血管疾患の３つの周知の循環性バイオマーカーであるＣペプチド、アミノ末端プロＢ型ナトリウム利尿ペプチド（ＮＴ−ｐｒｏＢＮＰ）及びガレクチン−３、並びに他のものが、循環性のエラスチン由来ペプチド（ＥＤＰ）とのほとんど知られていないドッキング部位を共有することを発見した。このドッキング部位を通じて、ＥＤＰは、ヒト動脈系の全体を通じて細胞上に発現されるエラスチン受容体複合体（ＥＲＣ）を活性化させる。ＥＲＣは、エラスチン分解及び動脈壁リモデリングに寄与する。ＥＤＰによるＥＲＣの実験的活性化は、マウスにおいてインスリン抵抗性及びアテローム性動脈硬化症を誘導する。過剰なＥＤＰ／ＥＲＣのドッキングは、ヒト白血球の走化性及びヒト平滑筋細胞（ＳＭＣ）の増殖を引き起こし、ヒトにおいて動脈弾性の喪失、アテローム性動脈硬化症、動脈硬化の増加、腹部大動脈瘤及び心筋梗塞と関連付けられる。
【図１】
2020507623.tif 000011
【図２】
2020507623.tif 000012
【図３】
2020507623.tif 000013
【図４】
2020507623.tif 000014
【図５】
2020507623.tif 000015
【配列表】
2020507623000001.app
【国際調査報告】
2020507623.tif 000016
2020507623.tif 000017
2020507623.tif 000018
2020507623.tif 000019