【手続補正書】
【提出日】平成30年10月30日(2018.10.30)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
高度に精製されたアデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）ベクター製剤を製造するための製造方法であって、前記製造方法は、
ａ）組換えＡＡＶベクター粒子を含む細胞及び細胞上清を採取する工程と、
ｂ）工程（ａ）において採取した前記細胞及び細胞上清を接線流ろ過を用いて濃縮して濃縮採集物を作成する工程と、
ｃ）工程（ｂ）において作成した前記濃縮採集物を顕微溶液化によって前記細胞を溶解して溶解物を作成する工程と、
ｄ）工程（ｃ）において作成した溶解物を濾過して浄化された溶解物を作成する工程と、
ｅ）イオン交換カラムクロマトグラフィーによって工程（ｄ）において作成した浄化された溶解物を精製して、組換えＡＡＶベクター粒子を含むカラム溶出液を作成し、さらに、任意に、に接線流ろ過によって前記カラム溶出液を濃縮して濃縮されたカラム溶出液を作成する工程と、
ｆ）工程（ｅ）において作成したカラム溶出液又は濃縮されたカラム溶出液と塩化セシウムとを混合して混合物を作成し、さらに、当該混合物を勾配超遠心分離にかけて、空カプシドＡＡＶベクター粒子及び他のＡＡＶベクター関連不純物から真正（ｂｏｎａ  ｆｉｄｅ）ＡＡＶベクター粒子を実質的に分離する工程と、
ｇ）工程ｆ）に続いてウイルス粒子を回収し、さらに、接線流ろ過によって同一の緩衝液交換を受けさせる工程と、
ｈ）界面活性剤と共に工程（ｇ）において作成した真正ＡＡＶベクター粒子を製剤化してＡＡＶベクター製剤を作成する工程と、
ｉ）工程（ｈ）において作成したＡＡＶベクター製剤を濾過して、前記高度に精製されたＡＡＶベクター製剤中のＡＡＶベクター粒子の少なくとも９０％が真正ＡＡＶベクター粒子である、高度に精製されたＡＡＶベクター製剤を作成する工程と、
を有する製造方法。
【請求項２】
請求項１記載の高度に精製されたＡＡＶベクター製剤の製造方法において、前記真正ＡＡＶベクター粒子は、約１００ｍｇ／ｍＬの濃度で存在する、製造方法。
【請求項３】
請求項１記載の高度に精製されたＡＡＶベクター製剤の製造方法において、工程ｉ）の前記真正ＡＡＶベクター粒子は、１ｍＬあたり１０15粒子の濃度で存在する、製造方法。
【請求項４】
請求項１記載の高度に精製されたＡＡＶベクター製剤の製造方法において、工程ｉ）の前記真正ＡＡＶベクター粒子は１ｍＬあたり１０16粒子の濃度で存在する、製造方法。
【請求項５】
請求項１記載の高度に精製されたＡＡＶベクター製剤の製造方法において、工程ｉ）の前記ＡＡＶベクター粒子は１ｍＬあたり１０17粒子の濃度で存在する、方法。
【請求項６】
請求項１記載の高度に精製されたＡＡＶベクター製剤の製造方法において、前記真正ＡＡＶベクター粒子は、ＡＡＶ１、ＡＡＶ２、ＡＡＶ５、ＡＡＶ６、ＡＡＶ８およびＡＡＶ９からなる群から選択されるＡＡＶに由来する、製造方法。
【請求項７】
薬学的に許容可能な担体中に、請求項１記載の方法を使用して精製された真正ＡＡＶベクター粒子を有し、前記真正ＡＡＶベクター粒子が１ｍＬあたり１０15粒子の濃度で存在するＡＡＶベクター製剤。
【請求項８】
請求項１記載の高度に精製されたＡＡＶベクター製剤の製造方法において、前記真正ＡＡＶベクター粒子は、ｓｉＲＮＡ、アンチセンス分子、ｍｉＲＮＡ、リボザイム、およびｓｈＲＮＡからなる群から選択される核酸をコードする導入遺伝子を含む、製造方法。
【請求項９】
請求項１記載の高度に精製されたＡＡＶベクター製剤の製造方法において、前記真正ＡＡＶベクター粒子は、インスリン、グルカゴン、成長ホルモン（ＧＨ）、副甲状腺ホルモン（ＰＴＨ）、成長ホルモン放出因子（ＧＲＦ）、卵胞刺激ホルモン（ＦＳＨ）、黄体形成ホルモン（ＬＨ）、ヒト絨毛性腺刺激ホルモン（ｈＣＧ）、血管内皮成長因子（ＶＥＧＦ）、アンギオポエチン、アンギオスタチン、顆粒球コロニー刺激因子（ＧＣＳＦ）、エリトロポエチン（ＥＰＯ）、結合組織成長因子（ＣＴＧＦ）、塩基性線維芽細胞成長因子（ｂＦＧＦ）、酸性線維芽細胞成長因子（ａＦＧＦ）、上皮成長因子（ＥＧＦ）、形質転換成長因子α（ＴＧＦα）、血小板由来成長因子（ＰＤＧＦ）、インスリン成長因子ＩおよびＩＩ（ＩＧＦ−ＩおよびＩＧＦ−ＩＩ）、ＴＧＦβ、アクチビン、インヒビン、骨形態形成タンパク質（ＢＭＰ）、神経成長因子（ＮＧＦ）、脳由来神経栄養因子（ＢＤＮＦ）、ニュートロフィンＮＴ−３およびＮＴ４／５、毛様体神経栄養因子（ＣＮＴＦ）、グリア細胞株由来神経栄養因子（ＧＤＮＦ）、ニュールツリン、アグリン、ネトリン−１およびネトリン−２、肝細胞成長因子、エフリン、ノギン、ソニックヘッジホッグ、およびチロシン水酸化酵素からなる群から選択される遺伝子産物をコードする導入遺伝子を含む
、製造方法。
【請求項１０】
請求項１記載の高度に精製されたＡＡＶベクター製剤の製造方法において、前記真正ＡＡＶベクター粒子は、トロンボポエチン（ＴＰＯ）、インターロイキン（ＩＬ１からＩＬ−１７）、単球走化性タンパク質、白血病抑制因子、顆粒球−マクロファージコロニー刺激因子、Ｆａｓリガンド、腫瘍壊死因子αおよびβ、インターフェロンα、βおよびγ、幹細胞因子、ｆｌｋ−２／ｆｌｔ３リガンド、ＩｇＧ、ＩｇＭ、ＩｇＡ、ＩｇＤおよびＩｇＥ、キメラ免疫グロブリン、ヒト化抗体、一本鎖抗体、Ｔ細胞受容体、キメラＴ細胞受容体、一本鎖Ｔ細胞受容体、クラスＩおよびクラスＩＩ  ＭＨＣ分子からなる群から選択される遺伝子産物をコードする導入遺伝子である、方法。
【請求項１１】
請求項１記載の高度に精製されたＡＡＶベクター製剤の製造方法において、前記真正ＡＡＶベクター粒子は、カルバモイル合成酵素Ｉ、オルニチン・トランスカルバミラーゼ、アルギニノコハク酸合成酵素、アルギニノコハク酸分解酵素、アルギナーゼ、フマリルアセト酢酸ヒドラーゼ、フェニルアラニン水酸化酵素、アルファ−１  アンチトリプシン、グルコース−６−ホスファターゼ、ポルホビリノゲン・デアミナーゼ、第Ｖ因子、第ＶＩＩＩ因子、第ＩＸ因子、シスタチオニンβ合成酵素、側鎖ケト酸デカルボキシラーゼ、アルブミン、イソバレリルＣｏＡ脱水素酵素、プロピオニルＣｏＡカルボキシラーゼ、メチルマロニルＣｏＡムターゼ、グルタリルＣｏＡ脱水素酵素、インスリン、ベータ−グルコシダーゼ、ピルビン酸カルボキシラーゼ、肝臓ホスホリラーゼ、ホスホリラーゼキナーゼ、グリシンデカルボキシラーゼ、ＲＰＥ６５、Ｈ−タンパク質、Ｔ−タンパク質、嚢胞性線維症膜コンダクタンス制御因子（ＣＦＴＲ）配列、ジストロフィンｃＤＮＡ配列からなる群から選択された、代謝の先天的異常の修正に有用なタンパク質をコードする核酸を有する導入遺伝子を含む、製造方法。
【請求項１２】
請求項１１記載の高度に精製されたＡＡＶベクター製剤の製造方法において、前記遺伝子産物は、第ＶＩＩＩ因子または第ＩＸ因子である、製造方法。
【請求項１３】
請求項１記載の高度に精製されたＡＡＶベクター製剤の製造方法において、工程（ｆ）中に空のカプシド画分を回収する工程を含む、製造方法。
【請求項１４】
請求項１記載の高度に精製されたＡＡＶベクター製剤の製造方法において、前記空のカプシドが、工程（ｉ）の濾過物中に１０重量％以下の量で存在する、製造方法。
【請求項１５】
請求項１記載の高度に精製されたＡＡＶベクター製剤の製造方法において、
前記真正ＡＡＶベクター粒子が、工程（ｉ）の濾過物中に９５重量％以下の量で存在する、製造方法。
【請求項１６】
請求項１記載の高度に精製されたＡＡＶベクター製剤の製造方法において、前記空のカプシドが、工程（ｉ）の濾過物中に５重量％以下の量で存在する、製造方法。
【請求項１７】
請求項１記載の高度に精製されたＡＡＶベクター製剤の製造方法において、工程（ｆ）における前記遠心分離が１つのステップで行われる、製造方法。
【請求項１８】
請求項１記載の高度に精製されたＡＡＶベクター製剤の製造方法において、工程（ｆ）における前記遠心分離が密度勾配超遠心分離である、製造方法。
【請求項１９】
請求項１記載の高度に精製されたＡＡＶベクター製剤の製造方法において、工程（ｅ）におけるカラム溶出液が、接線流ろ過によって前記カラム溶出液を濃縮されて、濃縮されたカラム溶出液を生成する、製造方法。
【請求項２０】
請求項１記載の高度に精製されたＡＡＶベクター製剤の製造方法において、工程（ｃ）において作成した溶解物にヌクレアーゼを加える工程をさらに含む、製造方法。
【請求項２１】
高度に精製されたアデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）ベクター製剤を製造するための製造方法であって、前記製造方法は、
ａ）組換えＡＡＶベクター粒子を含む細胞及び細胞上清を採取する工程と、
ｂ）工程（ａ）において採取した前記細胞及び細胞上清を接線流ろ過を用いて濃縮して濃縮採集物を作成する工程と、
ｃ）工程（ｂ）において作成した前記濃縮採集物を顕微溶液化によって前記細胞を溶解して溶解物を作成する工程と、
ｄ）工程（ｃ）において作成した溶解物を濾過して浄化された溶解物を作成する工程と、
ｅ）イオン交換カラムクロマトグラフィーによって工程（ｄ）において作成した浄化された溶解物を精製して、組換えＡＡＶベクター粒子を含むカラム溶出液を作成し、さらに、任意に、接線流ろ過によって前記カラム溶出液を濃縮して濃縮されたカラム溶出液を作成する工程と、
ｆ）工程（ｅ）において作成したカラム溶出液又は濃縮されたカラム溶出液と塩化セシウムとを混合して混合物を作成する工程と、
ｇ）工程ｆ）の混合物を１回の勾配超遠心分離にかけて、空カプシドＡＡＶベクター粒子及び他のＡＡＶベクター関連不純物から、真正（ｂｏｎａ  ｆｉｄｅ）ＡＡＶベクター粒子を実質的に分離する工程と、
ｈ）工程ｇ）において分離された真正ＡＡＶベクター粒子を回収し、前記回収した真正ＡＡＶベクター粒子を接線流ろ過による緩衝液交換に供する工程と、
ｉ）界面活性剤と共に、工程（ｇ）において作成した真正ＡＡＶベクター粒子を製剤化して、ＡＡＶベクター製剤を作成する工程と、
ｊ）工程（ｉ）において作成したＡＡＶベクター製剤を濾過して、高度に精製されたＡＡＶベクター製剤を作成する工程であって、前記高度に精製されたＡＡＶベクター製剤中のＡＡＶベクター粒子の少なくとも９０％が真正ＡＡＶベクター粒子であり、かつ、前記真正ＡＡＶベクター粒子が、高度に精製されたＡＡＶベクター製剤中に１ｍＬあたり１０15粒子の濃度で存在する工程と、を有する方法。