(57)【要約】  尋常性ざ瘡の治療における活性剤としてのキシボルノールの使用が開示されている。前記キシボルノールは、尋常性ざ瘡の発症と悪化の主な原因となる細菌、すなわちプロピオニバクテリウム・アクネスなる細菌に対して、顕著な静菌作用及び殺菌作用を示した。また尋常性ざ瘡の治療に使用するための、キシボルノールと、薬学的又は美容的に許容される賦形剤を含む医薬組成物又は化粧品組成物も開示されている。【特許請求の範囲】
【請求項１】
活性剤として尋常性ざ瘡の治療に使用するための、キシボルノール。
【請求項２】
活性抗菌剤として尋常性ざ瘡の治療に使用するための、請求項１に記載のキシボルノール。
【請求項３】
活性抗炎症剤として尋常性ざ瘡の治療に使用するための、請求項１に記載のキシボルノール。
【請求項４】
活性抗菌剤としてプロピオニバクテリウム・アクネスに起因する感染症の治療に使用するための、キシボルノール。
【請求項５】
前記キシボルノールが、４，５−ジメチル−２−［（１Ｓ，２Ｒ，４Ｒ）−１，７，７−トリメチルビシクロ［２．２．１］ヘプタン−２−イル］フェノール又は４，５−ジメチル−２−［（１Ｒ，２Ｓ，４Ｓ）−１，７，７−トリメチルビシクロ［２．２．１］ヘプタン−２−イル］フェノールである、請求項１〜４のいずれか１項に記載のキシボルノール。
【請求項６】
前記キシボルノールが、４，５−ジメチル−２−［（１Ｓ、２Ｒ、４Ｒ）−１，７，７−トリメチルビシクロ［２．２．１］ヘプタン−２−イル］フェノールと４，５−ジメチル−２−［（１Ｒ、２Ｓ、４Ｓ）−１，７，７−トリメチルビシクロ［２．２．１］ヘプタン−２−イル］フェノールとの混合物である、請求項１〜４のいずれか１項に記載のキシボルノール。
【請求項７】
前記キシボルノールが、４，５−ジメチル−２−［（１Ｓ、２Ｒ、４Ｒ）−１，７，７−トリメチルビシクロ［２．２．１］ヘプタン−２−イル］フェノールと４，５−ジメチル−２−［（１Ｒ，２Ｓ，４Ｓ）−１，７，７−トリメチルビシクロ［２．２．１］ヘプタン−２−イル］フェノールとのラセミ混合物である、請求項６に記載のキシボルノール。
【請求項８】
尋常性ざ瘡の治療に使用するための医薬組成物又は化粧品組成物であって、
該組成物が、キシボルノールと、少なくとも１つの薬学的又は美容的に許容される賦形剤と、を含む医薬組成物又は化粧品組成物。
【請求項９】
プロピオニバクテリウム・アクネスに起因する感染症の治療に使用するための医薬組成物又は化粧品組成物であって、
該組成物が、キシボルノールと、少なくとも１つの薬学的又は美容的に許容される賦形剤と、を含む医薬組成物又は化粧品組成物。
【請求項１０】
外部局所、皮下、経皮又は経口経路を介して投与される、請求項８又は９に記載の医薬組成物又は化粧品組成物。
【請求項１１】
外部局所を介して投与される、請求項１０に記載の医薬組成物又は化粧品組成物。
【請求項１２】
溶液、ローション、エマルジョン、懸濁液、ゲル、軟膏、クリーム、ペースト、スプレー溶液、経皮パッチの形態である、請求項１１に記載の医薬組成物又は化粧品組成物。
【請求項１３】
組成物の２μｇ／ｍＬ〜５ｍｇ／ｍＬの濃度、好ましくは４μｇ／ｍＬ〜５ｍｇ／ｍＬの濃度、より好ましくは９μｇ／ｍＬ〜２．５ｍｇ／ｍＬの濃度のキシボルノールを含む、請求項１１又は１２に記載の医薬組成物又は化粧品組成物。
【請求項１４】
経口経路を介して投与される、請求項１０に記載の医薬組成物又は化粧品組成物。
【請求項１５】
経口経路を介して投与される医薬組成物又は化粧品組成物が、口腔内分散性固形製剤、ゲル、カプセル、錠剤、粉末、顆粒、溶液、懸濁液、乳液又はチンキ剤の形態である、請求項１４に記載の医薬組成物又は化粧品組成物。
【請求項１６】
少なくとも１０ｍｇ〜５００ｍｇのキシボルノールの単位用量、好ましくは少なくとも２００ｍｇ〜３００ｍｇのキシボルノールの単位用量、より好ましくは少なくとも２５０ｍｇのキシボルノールの単位用量を含む、請求項１４又は１５に記載の医薬組成物又は化粧品組成物。
【請求項１７】
経口経路を介して投与される医薬組成物又は化粧品組成物が、溶液、懸濁液、乳液、ゲル又はチンキ剤の形態である、請求項１４に記載の医薬組成物又は化粧品組成物。
【請求項１８】
１０ｍｇ／ｍＬ〜３５ｍｇ／ｍＬの濃度のキシボルノール、好ましくは２０ｍｇ／ｍＬ〜３０ｍｇ／ｍＬの濃度のキシボルノールを含む、請求項１７に記載の医薬組成物又は化粧品組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、尋常性ざ瘡の治療における活性剤としてのキシボルノールの使用に関する。
【背景技術】
【０００２】
尋常性ざ瘡は、世界中の青年期の若者及び若年成人の約８０〜８５％が罹患する良性の慢性皮膚疾患である。
【０００３】
それは、毛包及びそれに付随する皮脂腺の炎症過程によって特徴付けられる。症状は複数あり、面疱、丘疹及び膿疱から、小瘤、嚢胞、膿瘍及びフレグモーネなどのより有害な症状へと多岐にわたる。
【０００４】
審美的に侵襲性であるこの疾患を患う個人は、心理的なレベルでかなりの不快感をも経験する。最も深刻な影響を受けている個人の約１５〜２０％で、心理的不快感が、深刻な鬱病にまで発展する可能性があると推定されている。
【０００５】
尋常性ざ瘡の病因は複雑で多因子的である。それは疑いなく特定の微生物の特定の活動に関連しており、ライフスタイル、個人の遺伝的素因及び個人の一般的なホルモンの状態などの他の要因にも影響される。
【０００６】
特に、細菌プロピオニバクテリウム・アクネス（Ｐｒｏｐｉｏｎｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ａｃｎｅｓ）（グラム陽性、通性嫌気性細菌）は、尋常性ざ瘡の炎症過程の進行において基本的な役割を果たすことが証明されている。
【０００７】
実際、プロピオニバクテリウム・アクネスによって誘発される走化性因子は、毛嚢脂腺ユニットの単球、好中球及びリンパ球を引き付け、結果として炎症誘発性分子の放出を刺激する。
【０００８】
さらに、細菌は毛包による皮脂の産生を誘導し、ＴＯＬＬ様受容体２によって媒介されるＴＮＦ−α、ＩＬ−１β、ＩＬ−８及びＩＬ−１２などの炎症誘発性サイトカインの産生を刺激し、組織の損傷の一因となるリパーゼ、プロテアーゼ及びヒアルロニダーゼを産生する。
【０００９】
また多くの場合、プロピオニバクテリウム・アクネスの主な細菌作用に加えて、他の細菌、すなわち一般的には非病原性であり、通常はヒトの皮膚に片利共生しているが、（にきびの病的状態下では）臨時的に病原体に転換し、疾患の経過を悪化させ、複雑にする細菌の作用も観察されている。
【００１０】
プロピオニバクテリウム・アクネスはバイオフィルムを形成する能力もあり、この特性により、例えば、現在市販されているほとんどの抗生物質分子に対して前記細菌を特に耐性にする。
【００１１】
このように、尋常性ざ瘡の症状の多様性、生物学的メカニズムがまだ明確に定義されていないその病因の複雑さ、及びその進化が、特定の個人及びそのライフスタイルにも強く依存していることを考慮して、医師は現在、いくつかの治療方法を用いて疾患を治療することを目指している。
【００１２】
最も一般的な方法は、局所又は経口投与される抗生物質、局所又は経口投与されるレチノイド、経口投与される抗アンドロゲンホルモン、局所投与される抗微生物薬、局所投与される角質溶解剤、上記の治療の組み合わせ、及び最後に、上記の治療と組み合わせて多くの場合に使用される光線療法などの薬物療法の代替治療の使用を含む。
【００１３】
尋常性ざ瘡の局所的治療に最も一般的に使用される抗生物質には、クリンダマイシン及びエリスロマイシンが含まれる。
【００１４】
経口投与に最も一般的に使用されるものには、エリスロマイシン、テトラサイクリン、ドキシサイクリン、ミノサイクリン及びアジスロマイシンが含まれる。にきびの治療に単独で使用すると効果がないことが証明された広域抗生物質であるスルファメトキサゾールは、トリメトプリムと組み合わせて使用される。
【００１５】
それよりも、トレチノイン、イソトレチノイン及びアダパレンは、尋常性ざ瘡の局所治療に最も一般的に使用されるレチノイドであり、一方、イソトレチノインは経口投与に最も一般的に使用されるレチノイドである。
【００１６】
局所投与される最も一般的な抗微生物薬には、過酸化ベンゾイル、アゼライン酸及び亜鉛が含まれ、通常は酸化物、酢酸塩、硫酸塩七水和物、ピコリン酸塩、又はグルコン酸塩の形をしている。
【００１７】
最後に、角質溶解剤に関して、最も一般的に使用されるものには、サリチル酸、グリコール酸、ピルビン酸及びトリクロロ酢酸が含まれる。
【００１８】
複数の入手可能な医薬品、及びそれらの様々な作用特性を考慮して、臨床医は、疾患の段階及び治療される個人のタイプの両方に応じて、様々なタイプの治療方法を定義した。
【００１９】
特に一次治療として最も一般的に使用される治療方法は、通常、過酸化ベンゾイルなどの抗微生物剤と組み合わせたレチノイドである、局所投与される２つの異なる活性医薬成分の組み合わせの使用を含む。抗生物質の使用を減らし、それにより抗生物質耐性現象の発現を防ぐために、このタイプの方法も最初の例として好ましい。
【００２０】
しかし抗生物質を使用することが不可欠である場合、一般的なルールは、特定の抗生物質の投与量を減らすためにも、とにかくレチノイドや抗微生物薬などの他の分子と組み合わせてこれらの薬剤を処方することである。
【００２１】
しかしながら、上記のすべての治療薬にはいくつかの限界がある：抗菌薬は抗炎症活性を有さない。一方、レチノイドには特に催奇形性物質であるなどの深刻な副作用があり、そして抗生物質は炎症を軽減することなく、耐性現象の発現を引き起こす。
【００２２】
したがって、抗菌作用を有し、耐性誘導の可能性が低く、抗炎症作用を示す可能性もある新たな製品を開発する必要性が感じられる。
【００２３】
したがって、本発明の目的は、尋常性ざ瘡の治療のための、生物体に十分に許容もされる効果的な治療法を見出すことである。
【発明の概要】
【００２４】
前記目的は、驚くべきことに、尋常性ざ瘡の治療における活性剤としてのキシボルノールの使用により達成された。
【００２５】
別の態様では、本発明は、プロピオニバクテリウム・アクネスに起因する感染症の治療的処置に使用するための抗菌剤としてのキシボルノールの使用に関する。
【００２６】
さらなる態様では、本発明は、尋常性ざ瘡の治療に使用するための、キシボルノールと適切な薬学的又は美容的に許容される賦形剤を含む医薬組成物又は化粧品組成物に関する。
【００２７】
［発明の詳細な説明］
したがって本発明は、尋常性ざ瘡の治療における活性剤としてのキシボルノールの使用に関する。
【００２８】
キシボルノール、つまり３，４−ジメチル−６−イソボルニルフェノール（ＩＵＰＡＣ名：４，５−ジメチル−２−［１，７，７−トリメチルビシクロ［２．２．１］ヘプタン−２−イル］フェノール）は、ボルナンのフェノール誘導体であり、下記構造式で特徴付けられる：
【００２９】
【化１】
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【００３０】
本発明の目的のために、用語「キシボルノール」は、４，５−ジメチル−２−［１，７，７−トリメチルビシクロ［２．２．１］ヘプタン−２−イル］フェノールのすべての光学異性体、幾何異性体及び立体異性体並びにそれらの混合物（例えば、エナンチオマーの混合物、ラセミ体、及びジアステレオマーの混合物）、並びに、無定形及び結晶形、共結晶形を含むそのすべての多形形態、並びに、無水物、水和物及び溶媒和物、薬学的に許容される塩並びにそれらの混合物を含む。
【００３１】
本発明の一実施形態では、キシボルノールは、４，５−ジメチル−２−［（１Ｓ，２Ｒ，４Ｒ）−１，７，７−トリメチルビシクロ［２．２．１］ヘプタン−２−イル］フェノール又は４，５−ジメチル−２−［（１Ｒ，２Ｓ，４Ｓ）−１，７，７−トリメチルビシクロ［２．２．１］ヘプタン−２−イル］フェノールである。
【００３２】
２つの単一の立体異性体は、従来のエナンチオマー分離技術によって得られる：以下の例では、前記立体異性体は、Ｃｈｉｒａｌｐａｋ  ＡＤ−Ｈ，２５０ｘ２０ｍｍ，５μｍｅｄキラルカラムと、溶離液として９０：１０  ｎ−ヘキサン／イソプロパノール混合液を使用したクロマトグラフィー分離を用いて得られた。
【００３３】
本発明の別の実施形態では、キシボルノールは、４，５−ジメチル−２−［（１Ｓ，２Ｒ，４Ｒ）−１，７，７−トリメチルビシクロ［２．２．１］ヘプタン−２−イル］フェノールと４，５−ジメチル−２−［（１Ｒ，２Ｓ，４Ｓ）−１，７，７−トリメチルビシクロ［２．２．１］ヘプタン−２−イル］フェノールとの混合物である。
【００３４】
好ましい実施形態では、キシボルノールは、４，５−ジメチル−２−［（１Ｓ，２Ｒ，４Ｒ）−１，７，７−トリメチルビシクロ［２．２．１］ヘプタン−２−イル］フェノールと４，５−ジメチル−２−［（１Ｒ，２Ｓ，４Ｓ）−１，７，７−トリメチルビシクロ［２．２．１］ヘプタン−２−イル］フェノールとのラセミ体である。
【００３５】
以下に示す実施例から明らかになるように、キシボルノールは尋常性ざ瘡の治療に使用可能な活性剤であることが実証された。
【００３６】
特にキシボルノールは、尋常性ざ瘡の発症と悪化の主な原因となる細菌、すなわちプロピオニバクテリウム・アクネスなる細菌に対して、顕著な静菌作用及び殺菌作用を示した。
【００３７】
したがって、キシボルノールは、プロピオニバクテリウム・アクネスに起因する感染症の治療における抗菌剤として効果的に使用できる。
【００３８】
したがってキシボルノールは、特に、進行性黄斑メラニン欠乏症や化膿性汗腺炎（「アクネインバーサ（ａｃｎｅ  ｉｎｖｅｒｓａ）」としても知られる）などのプロピオニバクテリウム・アクネスに起因する感染症の治療における抗菌剤として効果的に使用することができる。さらに、キシボルノールは実験的にきびモデルで顕著な抗炎症作用も示しているため、尋常性ざ瘡の治療において、キシボルノールは抗炎症剤としても効果的に使用できる。
【００３９】
したがって、別の態様では、本発明は、尋常性ざ瘡の治療に使用するための、キシボルノール及び少なくとも１つの薬学的又は美容的に許容される賦形剤を含む医薬組成物又は化粧品組成物に関する。
【００４０】
さらなる態様では、本発明は、プロピオニバクテリウム・アクネスに起因する感染症の治療に使用するための、キシボルノール及び少なくとも１つの薬学的又は美容的に許容される賦形剤を含む医薬組成物又は化粧品組成物に関する。
【００４１】
本発明の一実施形態では、前記医薬組成物又は化粧品組成物は、４，５−ジメチル−２−［（１Ｓ、２Ｒ、４Ｒ）−１，７，７−トリメチルビシクロ［２．２．１］ヘプタン−２−イル］フェノール又は４，５−ジメチル−２−［（１Ｒ、２Ｓ、４Ｓ）−１，７，７−トリメチルビシクロ［２．２．１］ヘプタン−２−イル］フェノールを含む。
【００４２】
本発明のさらなる実施形態では、前記医薬組成物又は化粧品組成物は、４，５−ジメチル−２−［（１Ｓ，２Ｒ，４Ｒ）−１，７，７−トリメチルビシクロ［２．２．１］ヘプタン−２−イル］フェノールと４，５−ジメチル−２−［（１Ｒ，２Ｓ，４Ｓ）−１，７，７−トリメチルビシクロ［２．２．１］ヘプタン−２−イル］フェノールとの混合物を含む。
【００４３】
本発明のさらに別の実施形態では、前記医薬組成物又は化粧品組成物は、４，５−ジメチル−２−［（１Ｓ，２Ｒ，４Ｒ）−１，７，７−トリメチルビシクロ［２．２．１］ヘプタン−２−イル］フェノールと４，５−ジメチル−２−［（１Ｒ，２Ｓ，４Ｓ）−１，７，７−トリメチルビシクロ［２．２．１］ヘプタン−２−イル］フェノールとのラセミ体を含む。
【００４４】
前記医薬組成物又は化粧品組成物は、外部局所、皮下、経皮又は経口経路により投与することができる。
【００４５】
好ましい実施形態では、前記医薬組成物は、外部局所、皮下又は経皮経路により投与される。
【００４６】
医薬組成物又は化粧品組成物が外部局所、皮下又は経皮経路により投与される場合、それは溶液、ローション、エマルジョン、懸濁液、ゲル、軟膏、クリーム、ペースト、スプレー溶液、経皮パッチの形態であり、主な有効成分であるキシボルノールは、１つ以上の賦形剤に懸濁又は溶解されている。
【００４７】
これらの投与形態に適した賦形剤の例は、鉱油、流動パラフィン、白色ワセリン、プロピレングリコール、ポリオキシエチレン、ポリオキシプロピレン、乳化ワックス、ステアリルアルコール、イソステアリルアルコール、セチルステアリルアルコール、ステアリン酸、ステアリン酸グリセリル、ラウリルサルコシン酸ナトリウム、グリセリン、ジエチレングリコールモノエチルエーテル、ポリエチレングリコール、ポリエチレングリコールステアレート、デンプン、ヒドロキシプロピルセルロース、メチルセルロース、カルボポール、カルボマー、メチルパラベン、ポロキサマー４０７、マクロゴール４００、精製ベントナイト、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、プロピルパラベン、プロピオン酸ミリスチル、ジメチコン、二酸化チタン、アニオン性、カチオン性及び非イオン性界面活性剤、水、並びにそれらの混合物である。さらに組成物は、ｐＨ調整剤、防腐剤及び香味剤も含むことができる。
【００４８】
好ましくは、本発明の医薬組成物又は化粧品組成物は、外部局所経路により投与されるものである。
【００４９】
本発明の医薬組成物又は化粧品組成物が、外部局所、皮下、又は経皮経路により投与されるものであり、溶液、ローション、エマルジョン、懸濁液、ゲル、軟膏、クリーム、ペースト、スプレー溶液又は経皮パッチの形態である場合、前記組成物は、好ましくは組成物の２μｇ／ｍＬ〜５ｍｇ／ｍＬの濃度のキシボルノールを含み、より好ましくは組成物の４μｇ／ｍＬ〜５ｍｇ／ｍＬの濃度のキシボルノールを含み、さらにより好ましくは９μｇ／ｍＬ〜２．５ｍｇ／ｍＬの濃度のキシボルノールを含む。
【００５０】
さらに好ましい実施形態では、本発明の医薬組成物は経口経路により投与される。
【００５１】
医薬組成物又は化粧品組成物が経口経路で投与される場合、前記組成物は、好ましくは口腔内分散性固形製剤、ゲル、カプセル、錠剤、粉末、顆粒、溶液、懸濁液、乳液又はチンキ剤の形態である。
【００５２】
前記医薬組成物又は化粧品組成物が、錠剤又はカプセルの形態である場合、特に適切な賦形剤の例は、ラクトース、リン酸カルシウム、微結晶セルロース、エチルセルロース、デキストロース、フルクトース、マンニトール、ソルビトール、スクロース、キシリトール、デンプン、アルファ化デンプン、カルボキシメチルセルロースナトリウム、ゼラチン、ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、メチルセルロース、ポビドン、アルギン酸ナトリウム、ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸、タルク、コロイドシリカ及びそれらの混合物である。
【００５３】
前記医薬組成物又は化粧品組成物が水性懸濁液の形態である場合、特に適切な賦形剤の例は、ショ糖、サッカリンナトリウム、アスパルテーム、シクラミン酸ナトリウムなどの甘味料に加えて、グリセリン、ポリエチレングリコール、微結晶性セルロース、キサンタンガム、水、乳化剤及び再懸濁剤、防腐剤、ｐＨ調整剤、酸化防止剤、香料、着色料及びそれらの混合物である。
【００５４】
口腔内分散性固形製剤、ゲル、カプセル、錠剤、粉末、顆粒、溶液、懸濁液、乳液又はチンキ剤の形態で経口経路により投与される医薬組成物又は化粧品組成物は、好ましくは少なくとも１０ｍｇ〜５００ｍｇの範囲のキシボルノールの単位用量、好ましくは少なくとも２００ｍｇ〜３００ｍｇのキシボルノールの単位用量、さらにより好ましくは少なくとも２５０ｍｇのキシボルノールの単位用量を含む。
【００５５】
本発明のさらに好ましい実施形態では、溶液、懸濁液、エマルジョン、ゲル又はチンキ剤の形態で経口経路により投与される本発明の医薬組成物又は化粧品組成物は、１０ｍｇ／ｍＬ〜３５ｍｇ／ｍＬの濃度のキシボルノール、好ましくは２０ｍｇ／ｍＬ〜３０ｍｇ／ｍＬの濃度のキシボルノールを含む。
【００５６】
すべての上記の医薬組成物は、投与経路に応じて当技術分野で公知の方法を使用して調製することができる。
【実施例】
【００５７】
実施例１：プロピオニバクテリウム・アクネスに対するキシボルノールの有効性の評価
以下の実験の部には、プロピオニバクテリウム・アクネスに対するキシボルノールの抗菌特性、より具体的には４，５−ジメチル−２−［（１Ｓ，２Ｒ，４Ｒ）−１，７，７−トリメチルビシクロ［２．２．１］ヘプタン−２−イル］フェノールと４，５−ジメチル−２−［（１Ｒ，２Ｓ，４Ｓ）−１，７，７−トリメチルビシクロ［２．２．１］ヘプタン−２−イル］フェノールとのラセミ体の抗菌特性を実証するために実施された研究の結果が含まれる。
【００５８】
水溶液（ブロス及び寒天）で抗微生物試験を行うために、親油性分子である前記キシボルノールを親水性溶媒、より具体的にはイソプロパノールに溶解した。
【００５９】
プロピオニバクテリウム・アクネスの溶媒毒性試験
プロピオニバクテリウム・アクネスの増殖に対するキシボルノールの溶解に使用する溶媒の様々な濃度の影響の可能性を評価した。
【００６０】
試験は、各ウェルの培養培地に細菌を最終濃度５ｘ１０５細菌／ｍＬで添加した９６ウェルプレートで実施した。この最終濃度は、ＭｃＦａｒｌａｎｄ  ０．５標準を適切に希釈して得た。
【００６１】
イソプロパノールを含まない陽性対照との比較のために、試験では、最大１２００μｇ／ｍＬのキシボルノールを溶解できる４％イソプロパノールを使用した場合、溶媒によるプロピオニバクテリウム・アクネスの増殖に対する検出可能な影響はないことが示された。
【００６２】
プロピオニバクテリウム・アクネスに有効な最小発育阻止濃度（ＭＩＣ）及び最小殺菌濃度（ＭＢＣ）の決定
この試験では、プロピオニバクテリウム・アクネスの２つの菌株、Ｇｒｅａｔｈ菌株（ＡＴＣＣ−１１８２７）とＶＰＩ  ０３８９菌株（ＡＴＣＣ−６９１９）とを使用した。
【００６３】
クロストリジウム示差培地（ＣＤＢ、液体培地）及び強化クロストリジウム寒天（ＲＣＡ、固体培地）を培養に使用した。７．０ＬのＧＥＮＢＯＸ  ＪＡＲで得られた嫌気性条件下で増殖が起こった。
【００６４】
嫌気性条件は、Ａｎａｅｒｏｃｕｌｔ  Ａ製剤を活性化することによって得られ、嫌気性制御は微生物学用のＡＮＡＥＲＯＴＥＳＴストリップを使用して評価された。
【００６５】
プロピオニバクテリウム・アクネスを３７℃で７２時間インキュベートした。
【００６６】
プロピオニバクテリウム・アクネス株はＡＴＣＣバイアルから再活性化し、ＣＤＢ培地で再水和し、その後ＲＣＡプレートに播種した。
【００６７】
プロピオニバクテリウム・アクネスをブロスで培養するために、分離したコロニーを培養プレートから採取し、ＣＢＤ培地に接種した。
【００６８】
培養後、ＭｃＦａｒｌａｎｄ  ０．５標準を使用して細菌細胞の濃度を標準化した。
【００６９】
最小発育阻止濃度を確立するために、９６ウェルプレートを準備した。様々な濃度でキシボルノールを４％イソプロパノール溶液に溶解し、以下の表１に示す実験計画に従って試料を調製した。
【００７０】
【表１】
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【００７１】
Ｄ、Ｅ、Ｆ列のすべてのウェルとＨ列の左から最初の３つのウェルには、５ｘ１０５細菌／ｍＬの最終濃度でプロピオニバクテリウム・アクネスが含まれていた。Ａ、Ｂ及びＣ列には細菌培養物は含まれておらず、対応するＤ、Ｅ、Ｆ列の各三連のウェルの陰性対照であった。
【００７２】
Ｇ列（ウェル１、２、３）は陰性対照であり、培養培地のみを含み、細菌、キシボルノール又はイソプロパノールは含まなかった。
【００７３】
Ｈ列（ウェル１、２、３）は陽性対照であり、キシボルノール又はイソプロパノールを含まない細菌培養物を含んでいた。
【００７４】
表示のないウェルは空であった。
【００７５】
３７℃の嫌気性条件下でのインキュベーションの後、プレートの測定を７２時間後に行った。
【００７６】
６００ｎｍでのＯＤ（光学密度）の測定を含む、最初の分光光度計の測定値を得た。
【００７７】
上記のプレート上の細菌増殖の有無を強調するために、ＰｒｅｓｔｏＢｌｕｅも使用した。これはレサズリンベースの溶液であり、細胞の還元力を使用して細胞増殖を測定する。該溶液は青色であり、生きている細菌細胞と接触すると赤色に変わる。
【００７８】
ＰｒｅｓｔｏＢｌｕｅと共にプレートをインキュベートし、Ｖｉｃｔｏｒ３  Ｗａｌｌａｃマイクロプレートリーダーを使用して蛍光値を読み取った後、データを確認した。
【００７９】
結果
細菌の増殖が観察されたウェル（赤色）は、Ｄ、Ｅ、Ｆ列のウェル９、１０、１１、１２であった。すなわち当該ウェルでは、キシボルノールがそれぞれ４．６９μｇ／ｍＬ，２．３４μｇ／ｍＬ，１．１７μｇ／ｍＬ及び０μｇ／ｍＬの濃度で存在した。
【００８０】
予想された通り、Ｈ列のウェル１、２及び３でも細菌の増殖が観察された（細菌培養物のみを含む陽性対照）。
【００８１】
最小発育阻止濃度（ＭＩＣ）は、９．３７μｇ／ｍＬであった。
【００８２】
試験は３回繰り返し、結果は常に重ね合わせ可能であった。
【００８３】
最小殺菌濃度（ＭＢＣ）を決定するために、上記プレートの各ウェルから１０μｌの溶液を採取し、プレートのウェルに存在する４％イソプロパノールに同濃度のキシボルノールを含むＲＣＡプレートに植菌した。
【００８４】
またこの場合、以前に最小発育阻止濃度（ＭＩＣ）と呼ばれた同じ濃度（すなわち、９．３７μｇ／ｍＬ）では増殖が発生せず（ＭＢＣ）、一方、４．６９μｇ／ｍＬ濃度では陽性対照の増殖と同程度の極めて多い増殖が見られた。それは、ＭＩＣ及びＭＢＣが４．６９μｇ／ｍＬ〜９．３７μｇ／ｍＬの範囲であることを示唆している。
【００８５】
この最後の実験も３回繰り返され、完全に重ね合わせ可能な結果が得られた。
【００８６】
したがって実施された研究は、非常に効果的にプロピオニバクテリウム・アクネスに対するキシボルノールの抗菌特性を実証し、それにより、特に尋常性ざ瘡などのプロピオニバクテリウム・アクネスに起因する感染症の治療にキシボルノールを使用できる可能性を確認した。
【００８７】
実施例２：キシボルノールの皮膚耐性の評価
外部局所使用を目的とした剤形の製造に使用する溶液中のキシボルノールの使用可能な濃度を確立するために、「ｓｔａｎｄａｒｄ  ＯＥＣＤ  ＴＧ４０４，ｍｅｔｈｏｄ  Ｂ．４，Ａｎｎｅｘ  Ｖ，Ｄｉｒｅｃｔｉｖｅ  ６７／５４８／ＥＥＣ」に従って皮膚刺激性及び感作性の試験を実施した。
【００８８】
ＲＨＥ  ＥＰＩＳＫＩＮ人工表皮ユニットを試験に用いた。キットは２４の再構成表皮ユニットからなり、総面積０．３３ｃｍ２であった。
【００８９】
各ユニットは、その上に配置されたヒトケラチノサイトに由来する層状の分化した表皮を有するコラーゲンマトリックスから成っていた。
【００９０】
試験する物質を表皮と接触させて（４２’）、ユニットをＭＴＴ（３−（４，５−ジメチルチアゾール−２−イル）−２，５−ジフェニルテトラゾリウム臭化物）と共にインキュベートし、４２時間後に効果を評価した。ＭＴＴは、実験条件下では、代謝的に活性な細胞と接触するとホルマザンに還元され、着色した溶液が黄色から青色に変わる。得られた色はホルマザンの濃度、すなわち細胞の生存率に直接比例するので、ＭＴＴと共に３時間インキュベートした後、分光光度計（ＤＯ５７２〜６５０ｎｍ）を使用して光学濃度の読み取りを行った。
【００９１】
結果
実施された実験的試験により、キシボルノール、イソプロパノール及びＰＢＳ緩衝液（リン酸緩衝生理食塩水）を含む液体製剤では、５ｍｇ／ｍＬ未満、さらにより好ましくは２．５ｍｇ／ｍＬ未満の濃度でキシボルノールを含むものが表皮の刺激や感作を引き起こすことなく局所投与できることが示された。
【００９２】
実施例３：４，５−ジメチル−２−［（１Ｓ，２Ｒ，４Ｒ）−１，７，７−トリメチルビシクロ［２．２．１］ヘプタン−２−イル］フェノールと４，５−ジメチル−２−［（１Ｒ，２Ｓ，４Ｓ）−１，７，７−トリメチルビシクロ［２．２．１］ヘプタン−２−イル］フェノールとのラセミ体を含むローションの形態の医薬組成物の調製
４，５−ジメチル−２−［（１Ｓ，２Ｒ，４Ｒ）−１，７，７−トリメチルビシクロ［２．２．１］ヘプタン−２−イル］フェノールと４，５−ジメチル−２−［（１Ｒ，２Ｓ，４Ｓ）−１，７，７−トリメチルビシクロ［２．２．１］ヘプタン−２−イル］フェノールとのラセミ体の形のキシボルノールを含む１００ｇの局所用ローションを調製した。
【００９３】
ローションは、特に、以下の表２に挙げた成分を含んでいた。
【００９４】
【表２】
2020521746.tif 000004
【００９５】
調製
Ｐｏｌａｒｇｅｌ  ＮＦを約３０ｇの水に加え、急速に攪拌し、１５分間水和させた。
【００９６】
得られた混合物を大きなメッシュの篩を用いてふるいにかけ、ヒドロキシプロピルメチルセルロースを加え、塊がなくなるまで混合物を混合した。次に、パラベンを攪拌しながら添加し、それらが完全に溶解するまで約９０℃に加熱した。
【００９７】
別途、メチルパラベン、プロピルパラベン、ステアリン酸グリセリル、プロピレングリコール、プロピオン酸ミリスチル、ジメチコン及びヒドロキシプロピルメチルセルロースを、表に記載した量で、約５０ｇの水に混合した。
【００９８】
この第２の混合物をよく混合しながら、Ｐｏｌａｒｇｅｌ、ヒドロキシプロピルメチルセルロース及びパラベンを含む第１の混合物に加えた。
【００９９】
最後に、二酸化チタンとキシボルノールを最後の混合物に攪拌しながら加えた。こうしてローションの形態で得られた製剤は、尋常性ざ瘡の治療のために局所的に直接塗布することができた。
【０１００】
実施例４：４，５−ジメチル−２−［（１Ｓ，２Ｒ，４Ｒ）−１，７，７−トリメチルビシクロ［２．２．１］ヘプタン−２−イル］フェノールと４，５−ジメチル−２−［（１Ｒ，２Ｓ，４Ｓ）−１，７，７−トリメチルビシクロ［２．２．１］ヘプタン−２−イル］フェノールとのラセミ体を含むゲルの形態の医薬組成物の調製
４，５−ジメチル−２−［（１Ｓ，２Ｒ，４Ｒ）−１，７，７−トリメチルビシクロ［２．２．１］ヘプタン−２−イル］フェノールと４，５−ジメチル−２−［（１Ｒ，２Ｓ，４Ｓ）−１，７，７−トリメチルビシクロ［２．２．１］ヘプタン−２−イル］フェノールとのラセミ体の形のキシボルノールを含む１００ｇの局所用ゲルを調製した。
【０１０１】
ゲルは、特に、以下の表３に挙げた成分を含んでいた。
【０１０２】
【表３】
2020521746.tif 000005
【０１０３】
調製
ＰＯＬＯＸＡＭＥＲ４０７を、キシボルノール、Ｍａｃｒｏｇｏｌ４００及びプロピレングリコールの溶液に溶解し、約７０℃に加熱した後、精製水と混合し、気泡が完全になくなるまで冷却した。得られたゲルは、尋常性ざ瘡に罹患した患者の治療における局所用に投与することができる。
【０１０４】
実施例５：４，５−ジメチル−２−［（１Ｓ，２Ｒ，４Ｒ）−１，７，７−トリメチルビシクロ［２．２．１］ヘプタン−２−イル］フェノールと４，５−ジメチル−２−［（１Ｒ，２Ｓ，４Ｓ）−１，７，７−トリメチルビシクロ［２．２．１］ヘプタン−２−イル］フェノールとのラセミ体を含む軟膏の形態の医薬組成物の調製
４，５−ジメチル−２−［（１Ｓ，２Ｒ，４Ｒ）−１，７，７−トリメチルビシクロ［２．２．１］ヘプタン−２−イル］フェノールと４，５−ジメチル−２−［（１Ｒ，２Ｓ，４Ｓ）−１，７，７−トリメチルビシクロ［２．２．１］ヘプタン−２−イル］フェノールとのラセミ体の形のキシボルノールを含む１００ｇの局所用軟膏を調製した。
【０１０５】
軟膏は、特に、以下の表４に挙げた成分を含んでいた。
【０１０６】
【表４】
2020521746.tif 000006
【０１０７】
調製
流動パラフィンと白色ワセリンを１１５℃に加熱し、温度を少なくとも３時間維持した。次に混合物を混合し、続いて４０〜４５℃の温度に冷却した。
【０１０８】
該混合物のほんの一部を別に取った。
【０１０９】
残りの部分にキシボルノールを加え、完全に分散するまで攪拌した後、７４ミクロンの篩を用いてふるいにかけた。前もって別に取ったパラフィンとワセリンの混合物の一部もふるいにかけた。
【０１１０】
得られた混合物を２時間混合し、その後、凝縮現象を防ぐためにゆっくりと冷却した。
【０１１１】
こうして得られた冷却軟膏は、尋常性ざ瘡に罹患した患者の治療における局所用にすぐに使用することができた。
【０１１２】
実施例６：尋常性ざ瘡のマウスモデルにおけるキシボルノール局所投与の抗炎症効果の調査
本調査の目的は、プロピオニバクテリウム・アクネスによって誘発される尋常性ざ瘡に対するキシボルノールの抗炎症効果を、その微生物炎症作用を観察することにより実証することであった。
【０１１３】
実験には、以下の表５に示す実験計画に従ってグループ化された雌のＢａｌｂ／ｃ系マウスを使用した。
【０１１４】
【表５】
2020521746.tif 000007
【０１１５】
疑似群は、各耳に２５μｌのＤ−ＰＢＳ（Ｄｕｌｂｅｃｃｏリン酸緩衝生理食塩水）の皮内注射を受けたマウスで構成され、他の２つの群は、各耳に２５μｌの１０８ＣＦＵ（コロニー形成単位）のプロピオニバクテリウム・アクネスを含むＤ−ＰＢＳの皮内注射を受けたマウスで構成された。
【０１１６】
注射の翌日の時点：
−疑似群のマウスには処置は行なわなかった；
−対照群には、１日１回、連続７日間、細菌の接種部位に直接、有効成分を含まない製剤の局所投与（すなわち、３部のパラフィン油と２部の繊維状ワセリンからなる担体を使用）を行った；
−対照群には、１日１回、連続７日間、細菌の接種部位に直接、３部のパラフィン油と２部の繊維状ワセリンからなる担体中にキシボルノールを０．１％の濃度（０．７９  ｍｇ  ／  ｍＬに相当）で含む製剤の局所投与を行った。
【０１１７】
マウスは、最後の局所投与の２４時間後に処理した。
【０１１８】
キシボルノール処置の抗炎症効果は、剖検中にマウスから取り外した耳を用いて、耳ホモジネート上清中の炎症性サイトカインＩＬ−８のレベルを測定することにより検証した。
【０１１９】
結果
マウスの耳に存在する病変は、周囲のすべての組織を廃棄した後、外科的に除去し、重量を測定した。
【０１２０】
選択した試料の解剖は、ＭＡＣＳ  Ｍｉｌｔｅｎｙ  Ｂｉｏｔｅｃｈ（コード：ｎ．１３０−０９５−９２８）が提供する「Ｅｐｉｄｅｒｍｉｄｉｓ  ｄｉｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ  Ｋｉｔ  Ｍｏｕｓｅ」の指示に従って行った。
【０１２１】
各試料を、酵素Ｇを含む２ｍＬのＤｕｌｂｅｃｃｏリン酸緩衝生理食塩水（Ｄ−ＰＢＳ）を含む６ウェルプレートのウェルに移し、４℃で１６時間インキュベートした。
【０１２２】
翌日、外科用メスとピンセットを使用して試料を切り刻み、酵素Ｐと酵素Ａを含む３．９ｍＬの緩衝液Ｓを含むチューブに移し、３７℃で２０分間インキュベートした。次いで４ｍＬのＰＢ緩衝液を添加して、酵素活性を中断した。次に、崩壊を最適化するために、チューブを機械的攪拌にかけた。
【０１２３】
その後、溶解物を７０μｍフィルターでろ過し、溶出液を５０ｍＬチューブに回収した。次に、フィルターを１０ｍＬのＰＢ緩衝液で洗浄し、最後にチューブを室温で、３３００ｘｇで２０分間遠心分離した。
【０１２４】
最後に、各試料の上清４．５ｍＬを収集し、サイトカインのアッセイのために−８０℃の温度で保存した。
【０１２５】
サイトカインＩＬ−８アッセイは、ＥＬＩＳＡ（酵素結合免疫吸着アッセイ）用の市販キットを使用し、製造元の指示に従って行った。
【０１２６】
ＩＬ−８アッセイの結果（ｐｇ／ｍＬで表される平均濃度）を以下の表６に示す。
【０１２７】
【表６】
2020521746.tif 000008
【０１２８】
表６に示す結果から分かるように、０．１％のキシボルノールの投与は、対照群と比較してＩＬ−８レベルの有意な低下をもたらし、それによりキシボルノールの抗炎症特性を実証した。
【０１２９】
結論
結論において、上記のすべての試験は、キシボルノールが静菌剤及び殺菌剤としてプロピオニバクテリウム・アクネスに効果的であり、最小発育阻止濃度（ＭＩＣ）の実験的値が最小殺菌濃度（ＭＢＣ）の値と一致する（両者とも４．６９μｇ／ｍＬ〜９．３７μｇ／ｍＬの範囲内）ことを示している。
【０１３０】
したがって、キシボルノールは有効な抗菌剤である。その効力は、尋常性ざ瘡の治療に現在使用されている周知の抗生物質であるクリンダマイシンの効力に匹敵する。そして、キシボルノールを４μｇ／ｍＬ〜５ｍｇ／ｍＬの範囲、より好ましくは９μｇ／ｍＬ〜２．５ｍｇ／ｍＬの範囲の濃度で含む医薬品又は化粧品の形で局所投与することができる。
【０１３１】
さらに、ｉｎ  ｖｉｖｏ試験においてもキシボルノールの抗炎症作用が実証された。したがって、キシボルノールは、尋常性ざ瘡の治療に使用できる有効な活性抗菌剤及び抗炎症剤である。
【０１３２】
より一般的には、実施された試験により、キシボルノールは、プロピオニバクテリウム・アクネスに起因する感染症に効果的な抗菌剤及び抗炎症剤であり、したがって、特に、進行性黄斑メラニン欠乏症や化膿性汗腺炎（「アクネインバーサ（ａｃｎｅ  ｉｎｖｅｒｓａ）」としても知られる）を含むプロピオニバクテリウム・アクネスに起因するあらゆる疾患の治療に使用できることが実証された。
【０１３３】
好都合なことに、前記キシボルノールは、尋常性ざ瘡、進行性黄斑メラニン欠乏症又は化膿性汗腺炎を患う患者への局所投与用のローション、ゲル又は軟膏の形を有する医薬製剤として処方することもできる。
【国際調査報告】
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