(57)【要約】  グルコース依存性インスリン分泌刺激ペプチド（ＧＩＰ）受容体のアンタゴニストであり、拮抗性を維持しながら半減期を増大させるための少なくとも１つの脂肪酸分子を含む、ＧＩＰ由来ペプチド類似体ＧＩＰ５−３０およびＧＩＰ３−３０を開示する。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
式１（ｈＧＩＰ５−３０、配列番号１）：
【化１】
2020521784.tif 000055
ここで、前記ペプチドが、Ｎ末端にジペプチドＥ−Ｇを任意選択的にさらに含み（ｈＧＩＰ３−３０、配列番号２）、
または配列番号１および配列番号２のうちのいずれか１つと少なくとも７５％の配列同一性を有する機能的バリアント
のグルコース依存性インスリン分泌刺激ペプチド（ＧＩＰ）類似体であって、
ここで、前記ペプチドが、配列番号１および配列番号２のうちのいずれか１つ、または配列番号１および配列番号２のうちのいずれか１つと少なくとも７５％の配列同一性を有する機能的バリアントの１つまたは複数のアミノ酸残基での少なくとも１つの脂肪酸分子の付着によって修飾されており、
但し、前記少なくとも１つの脂肪酸分子が、配列番号１および配列番号２のうちのいずれか１つ、または配列番号１および配列番号２のうちのいずれか１つと少なくとも７５％の配列同一性を有する機能的バリアントの３０位のアミノ酸残基に付着していないことを条件とする、グルコース依存性インスリン分泌刺激ペプチド（ＧＩＰ）類似体。
【請求項２】
前記ペプチドがＣ末端で任意選択的にアミド化されたＴＦＩＳＤＹＳＩＡＭＤＫＩＨＱＱＤＦＶＮＷＬＬＡＱＫ（ｈＧＩＰ５−３０、配列番号１）、
または配列番号１と少なくとも７５％の配列同一性を有する機能的バリアントであって、ここで、前記ペプチドが、配列番号１、または配列番号１と少なくとも７５％の配列同一性を有する機能的バリアントの１つまたは複数のアミノ酸残基での少なくとも１つの脂肪酸分子の付着によって修飾されており、
但し、前記少なくとも１つの脂肪酸分子が、配列番号１、または配列番号１と少なくとも７５％の配列同一性を有する機能的バリアントの３０位のアミノ酸残基に付着していないことを条件とする、請求項１に記載のＧＩＰペプチド類似体。
【請求項３】
前記ペプチドがＣ末端で任意選択的にアミド化されたＥＧＴＦＩＳＤＹＳＩＡＭＤＫＩＨＱＱＤＦＶＮＷＬＬＡＱＫ（ｈＧＩＰ３−３０、配列番号２）、
または配列番号２と少なくとも７５％の配列同一性を有する機能的バリアントであって、
ここで、前記ペプチドが、配列番号２、または配列番号２と少なくとも７５％の配列同一性を有する機能的バリアントの１つまたは複数のアミノ酸残基での少なくとも１つの脂肪酸分子の付着によって修飾されており、
但し、前記少なくとも１つの脂肪酸分子が、配列番号２、または配列番号２と少なくとも７５％の配列同一性を有する機能的バリアントの３０位のアミノ酸残基に付着していないことを条件とする、請求項１に記載のＧＩＰペプチド類似体。
【請求項４】
前記少なくとも１つの脂肪酸分子が、配列番号２の３位のＮ末端アミノ酸残基に付着していない、例えば、配列番号２の３位のＮ末端Ｅに付着していない、請求項３に記載のＧＩＰペプチド類似体。
【請求項５】
配列番号２の３位のＥ（Ｇｌｕ）が、ｐＧｌｕ（ピログルタミン酸）と置換されている、請求項３および４のいずれか１項に記載のＧＩＰペプチド類似体。
【請求項６】
前記機能的バリアントが、配列番号１および配列番号２のうちのいずれか１つと少なくとも８０％の配列同一性（少なくとも８５％の配列同一性など、少なくとも９０％の配列同一性など、少なくとも９５％の配列同一性など）を有する、先行請求項のいずれか１項に記載のＧＩＰペプチド類似体。
【請求項７】
前記機能的バリアントが、前記バリアントペプチドと対応する未変性ＧＩＰペプチドとの間に１〜６つの個別のアミノ酸置換（１つの個別のアミノ酸置換など、例えば、２つの個別のアミノ酸置換、３つの個別のアミノ酸置換など、例えば、４つの個別のアミノ酸置換、５つの個別のアミノ酸置換など、例えば、個別の６つのアミノ酸置換）を有する、先行請求項のいずれか１項に記載のＧＩＰペプチド類似体。
【請求項８】
前記配列番号１もしくは配列番号２、またはその機能的バリアントの３０位のＫが、任意のアミノ酸に置換されている（保存的アミノ酸置換など、Ｒ、Ａ、およびＥからなる群から選択されるアミノ酸との置換など）、先行請求項のいずれか１項に記載のＧＩＰペプチド類似体。
【請求項９】
前記配列番号１もしくは配列番号２、またはその機能的バリアントの１６位のＫが、任意のアミノ酸に置換されている（保存的アミノ酸置換など、Ｒ、Ａ、およびＥからなる群から選択されるアミノ酸との置換など）、先行請求項のいずれか１項に記載のＧＩＰペプチド類似体。
【請求項１０】
前記配列番号１もしくは配列番号２、またはその機能的バリアントの１６位のＫが、１６位のＫが脂肪酸分子への付着によって修飾されないときに、任意のアミノ酸と置換されている、先行請求項のいずれか１項に記載のＧＩＰペプチド類似体。
【請求項１１】
前記配列番号１もしくは配列番号２、またはその機能的バリアントの１６位のＫおよび３０位のＫが、任意のアミノ酸と各々が置換されている（保存的アミノ酸置換など、Ｒ、Ａ、およびＥからなる群から選択されるアミノ酸との置換など）、先行請求項のいずれか１項に記載のＧＩＰペプチド類似体。
【請求項１２】
前記配列番号１もしくは配列番号２、またはその機能的バリアントの１４位のＭが、任意のアミノ酸と置換されている（Ｌ、Ｓ、Ｋ、ノルロイシン（Ｎｌｅ）、またはメトキシニン（Ｍｏｘ）との置換など）、先行請求項のいずれか１項に記載のＧＩＰペプチド類似体。
【請求項１３】
前記配列番号１もしくは配列番号２、またはその機能的バリアントの１５位のＤが、任意のアミノ酸と置換されている（Ｅ、Ａ、Ｋ、およびＯｒｎからなる群から選択されるアミノ酸との置換など）、先行請求項のいずれか１項に記載のＧＩＰペプチド類似体。
【請求項１４】
前記配列番号１もしくは配列番号２、またはその機能的バリアントの１８位のＨが、任意のアミノ酸と置換されている（Ａ、Ｒ、Ｋ、およびＯｒｎからなる群から選択されるアミノ酸との置換など）、先行請求項のいずれか１項に記載のＧＩＰペプチド類似体。
【請求項１５】
脂肪酸分子が、配列番号１またはそのバリアントの５〜２９位のうちのいずれか１つのアミノ酸残基に付着しており；そして／または脂肪酸分子が、配列番号２またはそのバリアントの４〜２９位のうちのいずれか１つのアミノ酸残基に付着している、先行請求項のいずれかに記載のＧＩＰペプチド類似体。
【請求項１６】
脂肪酸分子が、配列番号１またはその機能的バリアントの５位、６位、７位、８位、９位、１０位、１１位、１２位、１３位、１４位、１５位、１６位、１７位、１８位、１９位、２０位、２１位、２２位、２３位、２４位、２５位、２６位、２７位、２８位、または２９位のアミノ酸残基に付着している、先行請求項のいずれかに記載のＧＩＰペプチド類似体。
【請求項１７】
脂肪酸分子が、配列番号２またはその機能的バリアントの４位、５位、６位、７位、８位、９位、１０位、１１位、１２位、１３位、１４位、１５位、１６位、１７位、１８位、１９位、２０位、２１位、２２位、２３位、２４位、２５位、２６位、２７位、２８位、または２９位のアミノ酸残基に付着している、先行請求項のいずれかに記載のＧＩＰペプチド類似体。
【請求項１８】
前記少なくとも１つの脂肪酸分子が、配列番号１および配列番号２のうちのいずれか１つ、またはその機能的バリアントの中央領域内の１つまたは複数のアミノ酸残基に付着している（配列番号１および配列番号２のうちのいずれか１つ、またはその機能的バリアントの１１〜２１位のうちのいずれか１つの１つまたは複数のアミノ酸残基への接着など）、先行請求項のいずれかに記載のＧＩＰペプチド類似体。
【請求項１９】
前記少なくとも１つの脂肪酸分子が、配列番号１および配列番号２のうちのいずれか１つ、またはその機能的バリアントのＮ末端領域の１つまたは複数のアミノ酸残基に付着しており、但し、前記少なくとも１つの脂肪酸分子が、配列番号２の３位のアミノ酸残基に付着していないものとする（配列番号１またはその機能的バリアントの５〜１０位のうちのいずれか１つの１つまたは複数のアミノ酸残基への接着などまたは配列番号２またはその機能的バリアントの４〜１０位のうちのいずれか１つの１つまたは複数のアミノ酸残基への接着など）、先行請求項のいずれかに記載のＧＩＰペプチド類似体。
【請求項２０】
前記少なくとも１つの脂肪酸分子が、配列番号１および配列番号２のうちのいずれか１つ、またはその機能的バリアントのＣ末端領域の１つまたは複数のアミノ酸残基に付着しており、但し、前記少なくとも１つの脂肪酸分子が、配列番号１および配列番号２のうちのいずれか１つの３０位のアミノ酸残基に付着していないことを条件とする（配列番号１および配列番号２のうちのいずれか１つ、またはその機能的バリアントの２２〜２９位のうちのいずれか１つの１つまたは複数のアミノ酸残基への付着など）、先行請求項のいずれかに記載のＧＩＰペプチド類似体。
【請求項２１】
脂肪酸分子が、配列番号１および配列番号２のうちのいずれか１つ、または少なくとも１つのＫ残基を含むその機能的バリアントのＫ残基のε−アミノ基に付着している、先行請求項のいずれかに記載のＧＩＰペプチド類似体。
【請求項２２】
前記脂肪酸分子が、配列番号１および配列番号２のうちのいずれか１つ、または少なくとも１つのＯｒｎ残基を含むそのバリアントのＯｒｎ残基のδ−アミノ基に付着している、先行請求項のいずれかに記載のＧＩＰペプチド類似体。
【請求項２３】
脂肪酸分子が付着しているアミノ酸残基が、最Ｎ末端アミノ酸残基（配列番号１、またはそのバリアントの最Ｎ末端アミノ酸残基など）である、先行請求項のいずれかに記載のＧＩＰペプチド類似体。
【請求項２４】
前記脂肪酸分子が、Ｎ末端アミノ酸残基のα−アミノ基に付着している（配列番号１、またはその機能的バリアントの５位のＮ末端アミノ酸残基への付着など、配列番号１の５位のＴへの付着など）、先行請求項のいずれかに記載のＧＩＰペプチド類似体。
【請求項２５】
脂肪酸分子が、配列番号１および配列番号２のうちのいずれか１つ、またはその機能的バリアントの１６位のアミノ酸残基の側鎖アミノ基に付着している（配列番号１および配列番号２のうちのいずれか１つ、またはその機能的バリアントの１６位のＫへの付着など）、先行請求項のいずれかに記載のＧＩＰペプチド類似体。
【請求項２６】
脂肪酸分子が、配列番号１および配列番号２のうちのいずれか１つ、またはそのバリアントの１８位のアミノ酸残基の側鎖アミノ基に付着しており、ここで、１８位のＨが、配列番号１および配列番号２のうちのいずれか１つ中のＫまたはＯｒｎと置換されている、先行請求項のいずれかに記載のＧＩＰペプチド類似体。
【請求項２７】
脂肪酸分子が、配列番号１および配列番号２のうちのいずれか１つ、またはそのバリアントの１１位のアミノ酸残基の側鎖アミノ基に付着しており、ここで、１１位のＳが、配列番号１および配列番号２のうちのいずれか１つ中のＫまたはＯｒｎと置換されている、先行請求項のいずれかに記載のＧＩＰペプチド類似体。
【請求項２８】
脂肪酸分子が、配列番号１および配列番号２のうちのいずれか１つ、またはそのバリアントの１２位のアミノ酸残基の側鎖アミノ基に付着しており、ここで、１２位のＩが、配列番号１および配列番号２のうちのいずれか１つ中のＫまたはＯｒｎと置換されている、先行請求項のいずれかに記載のＧＩＰペプチド類似体。
【請求項２９】
脂肪酸分子が、配列番号１および配列番号２のうちのいずれか１つ、またはそのバリアントの１３位のアミノ酸残基の側鎖アミノ基に付着しており、ここで、１３位のＡが、配列番号１および配列番号２のうちのいずれか１つ中のＫまたはＯｒｎと置換されている、先行請求項のいずれかに記載のＧＩＰペプチド類似体。
【請求項３０】
脂肪酸分子が、配列番号１および配列番号２のうちのいずれか１つ、またはそのバリアントの７位のアミノ酸残基の側鎖アミノ基に付着しており、ここで、７位のＩが、配列番号１および配列番号２のうちのいずれか１つ中のＫまたはＯｒｎと置換されている、先行請求項のいずれかに記載のＧＩＰペプチド類似体。
【請求項３１】
脂肪酸分子が、配列番号１および配列番号２のうちのいずれか１つ、またはそのバリアントの９位のアミノ酸残基の側鎖アミノ基に付着しており、ここで、９位のＤが、配列番号１および配列番号２のうちのいずれか１つ中のＫまたはＯｒｎと置換されている、先行請求項のいずれかに記載のＧＩＰペプチド類似体。
【請求項３２】
脂肪酸分子が、配列番号１および配列番号２のうちのいずれか１つ、またはそのバリアントの２１位のアミノ酸残基の側鎖アミノ基に付着しており、ここで、２１位のＤが、配列番号１および配列番号２のうちのいずれか１つ中のＫまたはＯｒｎと置換されている、先行請求項のいずれかに記載のＧＩＰペプチド類似体。
【請求項３３】
脂肪酸分子が、配列番号２、またはそのバリアントの５位のアミノ酸残基の側鎖アミノ基に付着しており、ここで、５位のＴが、配列番号２中のＫまたはＯｒｎと置換されている、先行請求項のいずれかに記載のＧＩＰペプチド類似体。
【請求項３４】
脂肪酸分子が、配列番号２、またはそのバリアントの１５位のアミノ酸残基の側鎖アミノ基に付着しており、ここで、１５位のＤが、配列番号２中のＫまたはＯｒｎと置換されている、先行請求項のいずれかに記載のＧＩＰペプチド類似体。
【請求項３５】
脂肪酸分子が、配列番号２、またはそのバリアントの２０位のアミノ酸残基の側鎖アミノ基に付着しており、ここで、２０位のＱが、配列番号２中のＫまたはＯｒｎと置換されている、先行請求項のいずれかに記載のＧＩＰペプチド類似体。
【請求項３６】
配列番号１および配列番号２のうちのいずれか１つ、またはその機能的バリアントの１６位のＫおよび／または３０位のＫが、配列番号１および配列番号２のうちのいずれか１つ、またはその機能的バリアントの１６位および３０位以外の位置のアミノ酸残基に脂肪酸分子が付着するときに、任意のアミノ酸と個別に置換されている、先行請求項のいずれかに記載のＧＩＰペプチド類似体。
【請求項３７】
前記ペプチドが、配列番号１および配列番号２のうちのいずれか１つ、またはその機能的バリアントの１つのアミノ酸残基での１つの脂肪酸分子の付着によって修飾されている、先行請求項のいずれかに記載のＧＩＰペプチド類似体。
【請求項３８】
前記ペプチドが１つ以下のＫアミノ酸残基を含み、ここで、Ｋアミノ酸残基が脂肪酸分子の付着によって修飾されている、先行請求項のいずれかに記載のＧＩＰペプチド類似体。
【請求項３９】
前記ペプチドが１つ以下のＯｒｎアミノ酸残基を含み、ここで、Ｏｒｎアミノ酸残基が脂肪酸分子の付着によって修飾されている、先行請求項のいずれかに記載のＧＩＰペプチド類似体。
【請求項４０】
前記脂肪酸分子が直鎖脂肪酸である、先行請求項のいずれかに記載のＧＩＰペプチド類似体。
【請求項４１】
前記脂肪酸分子が分枝鎖脂肪酸である、先行請求項のいずれかに記載のＧＩＰペプチド類似体。
【請求項４２】
前記脂肪酸分子が、１つの脂肪酸を含むモノアシル脂肪酸分子である、先行請求項のいずれかに記載のＧＩＰペプチド類似体。
【請求項４３】
前記脂肪酸分子がジアシル脂肪酸分子である、先行請求項のいずれかに記載のＧＩＰペプチド類似体。
【請求項４４】
前記脂肪酸分子が、式ＣＨ３（ＣＨ２）ｎＣＯ−（式中、ｎは、４〜２４の整数である）のアシル基を含む、先行請求項のいずれかに記載のＧＩＰペプチド類似体。
【請求項４５】
前記脂肪酸分子が、ＣＨ３（ＣＨ２）６ＣＯ−、ＣＨ３（ＣＨ２）８ＣＯ−、ＣＨ３（ＣＨ２）１０ＣＯ−、ＣＨ３（ＣＨ２）１２ＣＯ−、ＣＨ３（ＣＨ２）１４ＣＯ−、ＣＨ３（ＣＨ２）１６ＣＯ−、ＣＨ３（ＣＨ２）１８ＣＯ−、ＣＨ３（ＣＨ２）２０ＣＯ−、およびＣＨ３（ＣＨ２）２２ＣＯ−からなる群から選択される１つまたは複数のアシル基を含む、先行請求項のいずれかに記載のＧＩＰペプチド類似体。
【請求項４６】
前記脂肪酸分子が、ＣＨ３（ＣＨ２）１０ＣＯ−（ラウリル、Ｃ１２）、ＣＨ３（ＣＨ２）１２ＣＯ−（ミリストイル、Ｃ１４）、ＣＨ３（ＣＨ２）１４ＣＯ−（パルミトイル、Ｃ１６）、およびＣＨ３（ＣＨ２）１６ＣＯ−（ステアリル、Ｃ１８）からなる群から選択されるアシル基を含む、先行請求項のいずれかに記載のＧＩＰペプチド類似体。
【請求項４７】
前記脂肪酸分子が、ＣＨ３（ＣＨ２）１０ＣＯ−（ラウリル、Ｃ１２）、ＣＨ３（ＣＨ２）１２ＣＯ−（ミリストイル、Ｃ１４）、ＣＨ３（ＣＨ２）１４ＣＯ−（パルミトイル、Ｃ１６）、およびＣＨ３（ＣＨ２）１６ＣＯ−（ステアリル、Ｃ１８）からなる群から個別に選択される２つのアシル基を含む、先行請求項のいずれかに記載のＧＩＰペプチド類似体。
【請求項４８】
前記脂肪酸分子が、式ＣＯＯＨ（ＣＨ２）ｎＣＯ−（ジカルボン酸）（式中、ｎは、４〜２４の整数である）のアシル基を含む、先行請求項のいずれかに記載のＧＩＰペプチド類似体。
【請求項４９】
前記脂肪酸分子が、ＣＯＯＨ（ＣＨ２）１４ＣＯ−、ＣＯＯＨ（ＣＨ２）１６ＣＯ−、ＣＯＯＨ（ＣＨ２）１８ＣＯ−、およびＣＯＯＨ（ＣＨ２）２０ＣＯ−からなる群から選択されるアシル基を含む、先行請求項のいずれかに記載のＧＩＰペプチド類似体。
【請求項５０】
前記脂肪酸分子が、アミノ酸残基に直接付着している、先行請求項のいずれかに記載のＧＩＰペプチド類似体。
【請求項５１】
前記脂肪酸分子が、スペーサーを介してアミノ酸残基に付着している、先行請求項のいずれかに記載のＧＩＰペプチド類似体。
【請求項５２】
前記脂肪酸分子が、スペーサーのカルボキシル基が脂肪酸分子のアミノ基とのアミド結合を形成するように前記スペーサーを介してアミノ酸残基に付着している、先行請求項のいずれかに記載のＧＩＰペプチド類似体。
【請求項５３】
前記スペーサーが、以下：
ａ．１つまたは複数のα，ω−アミノ酸、
ｂ．コハク酸、Ｌｙｓ、Ｇｌｕ、Ａｓｐからなる群から選択される１つまたは複数のアミノ酸、
ｃ．４−Ａｂｕ、
ｄ．γ−アミノ酪酸
ｅ．ジペプチド、Ｃ末端アミノ酸残基が、Ｌｙｓ、Ｈｉｓ、またはＴｒｐ、好ましくはＬｙｓであり、Ｎ末端アミノ酸残基が、Ａｌａ、Ａｒｇ、Ａｓｐ、Ａｓｎ、Ｇｌｙ、Ｇｌｕ、Ｇｌｎ、Ｉｌｅ、Ｌｅｕ、Ｖａｌ、Ｐｈｅ、およびＰｒｏからなる群から選択されるジペプチドなど（Ｇｌｙ−Ｌｙｓなど）、
ｆ．γ−アミノブタノイル（γ−アミノ酪酸）、γ−グルタミル（γ−グルタミン酸）、β−アスパラギル、β−アラニル、およびグリシルのうちの１つまたは複数、ならびに
ｇ．［γ−グルタミン酸−８−アミノ−３，６−ジオキサオクタン酸］ｎ（γＧｌｕ−ＡＥＥＡｃｎ，）（式中、ｎは１と５０との間の整数（１〜２、２〜３、３〜４、４〜５、５〜６、６〜７、７〜８、８〜９、９〜１０、１０〜１１、１１〜１２、１２〜１３、１３〜１４、１４〜１５、１５〜２０、２０〜２５、２５〜３０、３０〜３５、３５〜４０、４０〜４５、４５〜５０の間の整数など）である）
からなる群から個別に選択される１つまたは複数の部分を含む、先行請求項のいずれかに記載のＧＩＰペプチド類似体。
【請求項５４】
前記ペプチドが、ＴＦＩＳＤＹＸ１１Ｘ１２Ｘ１３Ｘ１４Ｘ１５Ｘ１６ＩＸ１８ＱＱＤＦＶＮＷＬＬＡＱＸ３０（配列番号３）（式中、
Ｘ１１は、Ｓ、Ｋ、およびＯｒｎからなる群から選択され、
Ｘ１２は、Ｉ、Ｋ、およびＯｒｎからなる群から選択され、
Ｘ１３は、Ａ、Ｋ、およびＯｒｎからなる群から選択され、
Ｘ１４は、Ｍ、Ｋ、Ｌ、Ｓ、Ｎｌｅ、およびＭｏｘからなる群から選択され、
Ｘ１５は、Ｄ、Ｅ、Ａ、Ｋ、およびＯｒｎからなる群から選択され、
Ｘ１６は、Ｋ、Ｒ、Ａ、およびＥからなる群から選択され、
Ｘ１８は、Ｈ、Ａ、Ｒ、Ｋ、およびＯｒｎからなる群から選択され、そして
Ｘ３０は、Ｋ、Ｒ、Ａ、およびＥからなる群から選択される）、
または前記配列と少なくとも７５％の配列同一性を有するその機能的バリアントであり、
ここで、前記ペプチドが、前記配列の１つまたは複数のアミノ酸残基での少なくとも１つの脂肪酸分子の付着によって修飾されており、但し、前記少なくとも１つの脂肪酸分子がＸ３０に付着していないことを条件とする、先行請求項のいずれかに記載のＧＩＰペプチド類似体。
【請求項５５】
前記ペプチドが、以下：
【化２】
2020521784.tif 000056
2020521784.tif 000057
2020521784.tif 000058
からなる群から選択され、
ここで、前記ペプチドが、１つまたは複数のアミノ酸残基での少なくとも１つの脂肪酸分子の付着（１つのアミノ酸残基での１つの脂肪酸分子の付着など）によって修飾されており、但し、前記少なくとも１つの脂肪酸分子が、３０位のアミノ酸残基に付着していないことを条件とする、先行請求項のいずれかに記載のＧＩＰペプチド類似体。
【請求項５６】
前記ペプチドが、ＥＧＴＦＩＳＤＹ  Ｘ１１Ｘ１２Ｘ１３Ｘ１４Ｘ１５Ｘ１６ＩＸ１８ＱＱＤＦＶＮＷＬＬＡＱＸ３０（配列番号４）（式中、
Ｘ１１は、Ｓ、Ｋ、およびＯｒｎからなる群から選択され、
Ｘ１２は、Ｉ、Ｋ、およびＯｒｎからなる群から選択され、
Ｘ１３は、Ａ、Ｋ、およびＯｒｎからなる群から選択され、
Ｘ１４は、Ｍ、Ｋ、Ｌ、Ｓ、Ｎｌｅ、およびＭｏｘからなる群から選択され、
Ｘ１５は、Ｄ、Ｅ、Ａ、Ｋ、およびＯｒｎからなる群から選択され、
Ｘ１６は、Ｋ、Ｒ、Ａ、およびＥからなる群から選択され、
Ｘ１８は、Ｈ、Ａ、Ｒ、Ｋ、およびＯｒｎからなる群から選択され、そして
Ｘ３０は、Ｋ、Ｒ、Ａ、およびＥからなる群から選択される）
または前記配列と少なくとも７５％の配列同一性を有するその機能的バリアントであり、
ここで、前記ペプチドが、前記配列の１つまたは複数のアミノ酸残基での少なくとも１つの脂肪酸分子の付着によって修飾されており、但し、前記少なくとも１つの脂肪酸分子がＸ３０に付着していないことを条件とする、先行請求項のいずれかに記載のＧＩＰペプチド類似体。
【請求項５７】
前記ペプチドが、以下：
【化３】
2020521784.tif 000059
2020521784.tif 000060
2020521784.tif 000061
からなる群から選択され、
ここで、前記ペプチドが、１つまたは複数のアミノ酸残基での少なくとも１つの脂肪酸分子の付着（１つのアミノ酸残基での１つの脂肪酸分子の付着など）によって修飾されており、但し、前記少なくとも１つの脂肪酸分子が、３０位のアミノ酸残基に付着していないことを条件とする、先行請求項のいずれかに記載のＧＩＰペプチド類似体。
【請求項５８】
以下：
【化４】
2020521784.tif 000062
2020521784.tif 000063
2020521784.tif 000064
またはその機能的バリアントからなる群から選択され、
ここで、前記脂肪酸が、直接付着しているか、本明細書中に定義のリンカー／スペーサーを介して付着している、先行請求項のいずれかに記載のＧＩＰペプチド類似体。
【請求項５９】
前記ペプチドのＣ末端がアミド化（−ＮＨ２）されている、先行請求項のいずれかに記載のＧＩＰペプチド類似体。
【請求項６０】
前記ペプチドがｈＧＩＰ受容体のアンタゴニストである、先行請求項のいずれかに記載のＧＩＰペプチド類似体。
【請求項６１】
ｉ）ＧＩＰ誘導性グルカゴン分泌、ｉｉ）ＧＩＰ誘導性インスリン分泌、ｉｉｉ）ＧＩＰ誘導性ソマトスタチン分泌、ｉｖ）ＧＩＰ誘導性グルコース摂取、ｖ）ＧＩＰ誘導性の脂肪酸合成および／または脂肪酸取り込み、ｖｉ）高いか増加したＧＩＰＲの発現または活性、ｖｉｉ）食後ＧＩＰ放出、ｖｉｉｉ）遊離脂肪酸および／またはトリグリセリドの血清レベル、ｉｘ）ＧＩＰ誘導性の骨吸収の低下のうちの１つまたは複数を抑制または低下させる方法で用いる、先行請求項のいずれかに記載のＧＩＰペプチド類似体。
【請求項６２】
代謝症候群、肥満、過体重、肥満関連障害、前糖尿病（空腹時血糖値異常）、真性糖尿病（Ｉ型および２型）、糖尿病関連障害、インスリン抵抗性、空腹時血糖値の上昇（高血糖）、空腹時血清トリグリセリド（ＶＬＤＬトリグリセリド）レベルの上昇、高密度リポタンパク質（ＨＤＬ）レベルの低下、脂肪酸代謝障害、心血管疾患、血圧上昇、およびアテローム性動脈硬化症からなる群から選択される容態を処置する方法で用いる、先行請求項のいずれかに記載のＧＩＰペプチド類似体。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
技術分野
本発明は、ＧＩＰ受容体のアンタゴニストであり、ＧＩＰペプチドおよび拮抗性を維持しながら半減期を増大させるために付着させた少なくとも１つの脂肪酸分子を含むグルコース依存性インスリン分泌刺激ペプチド（ＧＩＰ）由来ペプチド類似体に関する。
【背景技術】
【０００２】
背景
グルコース依存性インスリン分泌刺激ペプチド（ＧＩＰ）は、食事後の腸のＫ細胞から分泌されるホルモンである１。その姉妹ホルモンであるグルカゴン様ペプチド１（ＧＬＰ−１）と同様に、ＧＩＰは強力なインスリン分泌促進物である２。ＧＬＰ−１のグルカゴン分泌抑制効果と対照的に３、４、ＧＩＰは、一定の条件下でグルカゴン放出特性を示すことが示されている（３、５〜１３）。げっ歯類ＧＩＰＲ（ＧＩＰ受容体）と脂肪過多症との間に関連があることで、ＧＩＰの生物学を理解しようとする機運が高まった１４〜２１。ヒトでは、明確ではないが、脂肪代謝におけるＧＩＰの役割についての同様の証拠があり、脂肪組織におけるＧＩＰＲ発現２２、高ＢＭＩとＧＩＰレベルの増加との間の関連２２、２３、脂肪組織の血流の増加、および高インスリンおよび高グルコースの状態におけるＧＩＰ投与後のＴＡＧ（トリアシルグリセロール）沈着２４、減量中の肥満児において認められる基礎ＧＩＰレベルおよび食後ＧＩＰレベルの減少２５、ならびに高脂肪食を摂取した健康な若年男性において認められた絶食ＧＩＰレベルの増加２６によって証明されている。
【０００３】
したがって、ＧＬＰ−１受容体アンタゴニスト（エキセンジン（９−３９）２７、２８）の発見後にＧＬＰ−１の理解を深めた研究者による一般的な需要に加えて、抗肥満剤としての可能性から、強力なＧＩＰＲアンタゴニストの開発にさらに注目が集まっている。ＧＩＰの機能を拮抗するための多数の異なるストラテジー（例えば、小分子受容体アンタゴニスト２９、ＧＩＰに対する免疫化３０〜３２、拮抗性を有するＧＩＰ分子の種々の短縮物および変異物３３〜３９、および最近ではＧＩＰＲに対する強力なアンタゴニスト抗体４０）が試みられている。
【０００４】
生理学的条件下で、４２アミノ酸ホルモンであるＧＩＰは、酵素ジペプチジルペプチダーゼ４（ＤＰＰ−４）によって分解され、ＧＩＰ分子の３位が切断されてＧＩＰ３−４２を生成する。合成ブタＧＩＰ３−４２は、生理学的濃度でブタの膵臓または還流したラットの膵臓においてアンタゴニスト特性を示さなかったが、ｉｎ  ｖｉｔｒｏでは、ヒトＧＩＰＲを拮抗した４１。多数のペプチドホルモンは、翻訳後修飾されて異なる長さおよびアミノ酸修飾を有する種々の生物学的形態になる４２、４３。したがって、ＧＩＰ１−３０が翻訳後プロセシングの結果として生成され４４、ＧＩＰＲのアゴニストである３３、４５ことが示されている。ＧＩＰ１−３０がヒトの循環中に分泌される場合、ＤＰＰ−４によって触媒される切断によってＧＩＰ３−３０が得られるであろう。
【０００５】
米国特許７，８７５，５８７号は、ＤＰＰ−４による分解耐性が増強されたＧＩＰ（１−４２）由来のＧＩＰ受容体アンタゴニスト、ならびにインスリン抵抗性および肥満の処置のためのその使用が開示されている。ＷＯ２００４／０６７５４８号では、ＤＰＰ−４代謝産物を、ファルマコフォアの共有結合によって、ペプチド代謝産物に関連する半減期を延長し、切断されたペプチドの、未変性ペプチド（ＧＩＰが含まれる）と同様の生物学的活性が保持されるように修飾している。ＷＯ２０１２／０５５７７０号は、容易に切断され、かつＧＩＰＲアンタゴニスト効果を有する内因性代謝産物としてのＧＩＰ（３−４２）、およびＧＩＰＲアゴニスト活性を有する短縮ＧＩＰ類似体の例としてのＧＩＰ（２−３０）を開示している。ＷＯ１９９８／２４４６４号は、アンタゴニストＧＩＰ（７−３０）を開示している。
【０００６】
ＷＯ２０１６／０３４１８６号およびＨａｎｓｅｎら、２０１６は、アンタゴニストＧＩＰ（３−３０）およびＧＩＰ（５−３０）を開示している。Ｐａｔｈａｋら、２０１５は、エキセンジン（１−３９）由来の９−アミノ酸Ｃｅｘおよびパルミトイル修飾されたリジン−残基でＣ末端が修飾されたＧＩＰ（３−３０）を開示している。
【０００７】
ｉｎ  ｖｉｖｏでの作用期間を延長するためのＧＬＰ−１化合物の構造修飾のために種々の異なるアプローチが使用されてきた。これらのプローチには、アミノ酸残基への親油性置換基の導入（ＷＯ９６／２９３４２号およびＷＯ９８／０８８７１号）およびアシル化ＧＬＰ−１アナログ（ＷＯ００／３４３３１号）が含まれる。ＷＯ０２／４６２２７号は、ｉｎ  ｖｉｖｏ半減期を延長するためにヒト血清アルブミンに融合したＧＬＰ−１およびエキセンジン−４アナログを開示している。
【発明の概要】
【０００８】
概要
本発明者らは、その非常に強力なＧＩＰＲ拮抗性を保持しながらペプチド半減期（Ｔ１／２）を増大させるように脂肪酸アシル化によって修飾されたＧＩＰ（３−３０）およびＧＩＰ（５−３０）のＧＩＰペプチド類似体を同定した。驚いたことに、ＧＩＰＲ拮抗性を保持しながらＧＩＰ（３−３０）およびＧＩＰ（５−３０）のＣ末端の３０位をアシル化することはできない。
【０００９】
１つの態様では、本発明は、式１：ＴＦＩＳＤＹＳＩＡＭＤＫＩＨＱＱＤＦＶＮＷＬＬＡＱＫ（ｈＧＩＰ５−３０、配列番号１）もしくは式２：ＥＧＴＦＩＳＤＹＳＩＡＭＤＫＩＨＱＱＤＦＶＮＷＬＬＡＱＫ（ｈＧＩＰ３−３０、配列番号２）、
または配列番号１および配列番号２のうちのいずれか１つと少なくとも７５％の配列同一性を有する機能的バリアント
のグルコース依存性インスリン分泌刺激ペプチド（ＧＩＰ）類似体であって、
ここで、前述のペプチドが、配列番号１および配列番号２のうちのいずれか１つ、または配列番号１および配列番号２のうちのいずれか１つと少なくとも７５％の配列同一性を有する機能的バリアントの１つまたは複数のアミノ酸残基での少なくとも１つの脂肪酸分子の付着によって修飾されており、
但し、前述の少なくとも１つの脂肪酸分子が、配列番号１および配列番号２のうちのいずれか１つ、または配列番号１および配列番号２のうちのいずれか１つと少なくとも７５％の配列同一性を有する機能的バリアントの３０位のアミノ酸残基に付着していないことを条件とする、グルコース依存性インスリン分泌刺激ペプチド（ＧＩＰ）類似体に関する。
【００１０】
別の態様では、本発明は、医薬品としてのかかるＧＩＰペプチド類似体の使用に関する。
【００１１】
さらに別の態様では、本発明は、ＧＩＰ受容体を拮抗するか、代謝障害（または代謝症候群）（肥満、過体重、真性糖尿病、インスリン抵抗性、および脂肪酸代謝障害など）を処置する方法におけるかかるＧＩＰペプチド類似体の使用に関する。他の態様では、本発明は、癌を処置する方法に関する。他の態様では、本発明は、骨量／骨密度障害を処置する方法に関する。
【図面の簡単な説明】
【００１２】
【図１】図１．ＧＩＰ（５−３０）ＮＨ２の５位から３０位までをＣ１６−二価酸でカップリングしたリジン（Ｌｙｓ）スキャンは、非常に強力で長時間作用するＧＩＰ受容体アンタゴニストを開発するのに非常に強力な脂質化部位を示す。ヒトＧＩＰ受容体を発現する一過性にトランスフェクトしたＣＯＳ−７細胞におけるｃＡＭＰ蓄積を、リジンに対してＣ１６−二価酸とカップリングしたｌｙｓスキャニングしたＧＩＰ（５−３０）ＮＨ２とのインキュベーション後に評価した。
【図２】ＧＩＰ（３−３０）ＮＨ２の５位から３０位までをＣ１６−二価酸でカップリングしたリジン（Ｌｙｓ）スキャンは、非常に強力で長時間作用するＧＩＰ受容体アンタゴニストを開発するのに非常に強力な脂質化部位を示す。ヒトＧＩＰ受容体を発現する一過性にトランスフェクトしたＣＯＳ−７細胞におけるｃＡＭＰ蓄積を、リジンに対してＣ１６−二価酸とカップリングしたｌｙｓスキャニングしたＧＩＰ（３−３０）ＮＨ２とのインキュベーション後に評価した。
【図３】リンカーの付加（ペプチドに脂肪酸を連結した分子）により、拮抗性プロフィールが改善される。ヒトＧＩＰ受容体を発現する一過性にトランスフェクトしたＣＯＳ−７細胞におけるｃＡＭＰ蓄積を、リンカーを有する異なる脂質化類似体とのインキュベーション後に評価した。アンタゴニストの用量−応答曲線を、脂質化類似体の濃度を増加させて最大受容体活性化の５０〜８０％に対応する一定量の未変性ＧＩＰ（１−４２）を阻害することによって作成した。曲線を、平均±ＳＥＭ（ｎ＝２）として示す。
【図４】脂質化は、ＧＩＰ類似体の排出半減期（Ｔ１／２）を増加させる。ブタにおける脂質化ＧＩＰ（３−３０）ＮＨ２類似体ＡＴ１１７および非脂質化ＧＩＰ（３−３０）ＮＨ２の皮下投与。その後に、血液試料を、表示の時点で中心静脈カテーテルから回収した。ＧＩＰ（３−３０）ＮＨ２およびＡＴ１１７の量を、インハウス放射免疫アッセイを使用して測定した。
【発明を実施するための形態】
【００１３】
定義
用語「親和性」は、受容体とそのリガンド（複数可）との間の結合強度を指す。この文脈では、ペプチドアンタゴニストのその結合部位に対する親和性（Ｋｉ）は、アゴニスト活性の阻害期間を決定づけるであろう。アンタゴニストの親和性を、機能研究におけるシルド回帰を使用するか、１）Ｃｈｅｎｇ−Ｐｒｕｓｏｆｆの式を使用した競合的結合実験、２）Ｓｃａｔｃｈａｒｄの式を使用した飽和結合実験、または３）オン速度およびオフ速度（それぞれ、ＫｏｎおよびＫｏｆｆ）を決定する動態研究のような放射性リガンド結合研究によって実験的に決定することができる。
【００１４】
用語「ＩＣ５０」は、半数阻害濃度（ＩＣ５０）を表し、これは、特定の生物学的機能または生化学的機能の阻害における物質の有効性の尺度である。この定量的尺度は、どの程度の特定の薬物または他の物質（例えば、アンタゴニスト）が所与の生物学的過程（または過程の構成要素、すなわち、酵素、細胞、細胞受容体、または微生物）を半分阻害するために必要であるかを示す。ＩＣ５０は、薬力学的研究におけるアンタゴニストの薬効力の尺度として一般に使用される。ＩＣ５０は、ｉｎ  ｖｉｔｒｏでの５０％阻害に必要な薬物の濃度を表す。この文脈では、ＩＣ５０値はまた、５０％の放射性標識リガンドが受容体から解離する薬物の濃度を指すことができ、これは、競合結合実験で行った薬物親和性の特徴づけである。
【００１５】
この文脈における用語「アゴニスト」は、受容体に結合して活性化することができるペプチドを指す。
【００１６】
この文脈における用語「アンタゴニスト」は、受容体に結合してアゴニスト媒介応答を遮断するか低下させることができる本明細書中に定義のＧＩＰペプチド類似体を指す。アンタゴニストは、通常、受容体への結合の際に生物学的応答自体を誘発しない。アンタゴニストは同族受容体に対して親和性を有するが有効性がなく、結合することによって受容体でのアゴニストまたはインバースアゴニストの相互作用を破壊し、機能を阻害するであろう。アンタゴニストは、受容体上の活性（オルソステリック）部位またはアロステリック部位への結合によってその効果を媒介するか、通常は受容体活性の生物学的制御に関与しない固有の結合部位で相互作用し得る。アンタゴニスト活性は、アンタゴニスト−受容体複合体の寿命に応じて、同様に、アンタゴニスト−受容体結合の性質に応じて、可逆または不可逆であり得る。ほとんどの薬物アンタゴニストは、典型的には、受容体上の構造が定義された結合部位での内因性リガンドまたは基質との競合によってその効力を発揮する。アンタゴニストは、競合性、非競合性、不競合性、サイレントなアンタゴニスト、部分アゴニスト、またはインバースアゴニストであり得る。
【００１７】
競合性アンタゴニスト（克服性アンタゴニストとしても公知）は、内因性リガンドまたはアゴニストと同一の結合部位（すなわち、活性部位）で受容体に可逆的に結合するが、受容体を活性化しない。したがって、アゴニストおよびアンタゴニストは、受容体上の同一の結合部位を「競合する」。結合した時点で、アンタゴニストは、アゴニスト結合を遮断する。受容体の活性レベルは、各分子の部位に対する相対親和性およびその相対濃度によって決定される。高濃度の競合性アンタゴニストは、アンタゴニストが占める受容体の比率を増加させるであろう；同程度の結合部位占有を得るためには、より高い濃度のアゴニストが必要とされるであろう。
【００１８】
用語「非競合性アンタゴニズム」（無克服性または非克服性アンタゴニズムとも呼ばれる）は、機能的に類似の結果をもたらす以下の２つの異なる現象を説明する：アンタゴニストが受容体の活性部位に結合する現象、およびアンタゴニストが受容体のアロステリック部位に結合する現象。最大応答を達成するが、最大応答の規模に影響を及ぼさないために必要なアゴニストの量に影響を及ぼす競合性アンタゴニストと異なり、非競合性アンタゴニストは、任意の量のアゴニストによって達成され得る最大応答の規模を低下させる。
【００１９】
用語「サイレントアンタゴニスト」は、受容体を活性化するための内因活性を全く持たない競合的受容体アンタゴニストを指す。
【００２０】
用語「部分的アゴニスト」は、所与の受容体で、最大受容体占有後に誘発する機能的応答の大きさが異なり得るアゴニストを指す。部分的アゴニストは、完全アゴニストと受容体占有を競合し、それにより、完全アゴニストのみで認められる受容体活性化と比較して正味の受容体活性化が減少するので、部分的アゴニストは完全アゴニスト（またはより効果的なアゴニスト）の存在下で競合性アンタゴニストとして作用することができる。
【００２１】
用語「インバースアゴニスト」は、アンタゴニストの効果と類似する効果を有するが、異なる一連の下流生物学的応答を引き起こすアゴニストを指す。内因活性または基本活性を示す構成性に活性な受容体は、インバースアゴニストを有することができ、古典的なアンタゴニストのようにアゴニストの結合効果を遮断するだけでなく、受容体の基本活性も阻害する。
【００２２】
用語「個体」は、脊椎動物、特に、哺乳動物種のメンバー、好ましくは、ヒトが含まれる霊長類を指す。本明細書中で使用される場合、「被験体」および「個体」を、互換的に使用することができる。
【００２３】
「単離されたペプチド」は、自然界でポリペプチドと会合している夾雑する細胞成分（炭水化物、脂質、または他のタンパク質性不純物など）を本質的に含まない、その天然の、典型的には、細胞、環境の成分から分離および／または回収されたペプチドである。典型的には、単離されたペプチドの調製物は、高度に精製された形態（すなわち、少なくとも純度約８０％、少なくとも純度約９０％、少なくとも純度約９５％、純度９５％超、または純度９９％超）のペプチドを含む。用語「単離された」は、代替的な物理的形態（二量体、四量体、または代替的にグリコシル化されているか誘導された形態など）の同一のペプチドの存在を排除しない。
【００２４】
「アミノ酸残基」は、ペプチド結合またはペプチド結合と異なる結合によって連結された天然または非天然のアミノ酸残基であり得る。アミノ酸残基は、Ｄ−立体配置またはＬ−立体配置であり得る。アミノ酸残基は、１つの炭素原子、また炭素原子鎖を含む中央部分によって分離されたアミノ末端部分（ＮＨ２）およびカルボキシ末端部分（ＣＯＯＨ）を含み、前述の１つの炭素原子、また炭素原子鎖のうちの少なくとも１つが、少なくとも１つの側鎖または官能基を含む。ＮＨ２は、アミノ酸またはペプチドのアミノ末端に存在するアミノ基を指し、ＣＯＯＨは、アミノ酸またはペプチドのカルボキシ末端に存在するカルボキシ基を指す。アミノ酸という総称は、天然および非天然のアミノ酸の両方を含む。Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，２４３：３５５２−５９（１９６９）に列挙され、３７Ｃ．Ｆ．Ｒ．、１．８２２（ｂ）（２）項で採用された標準的な命名法の天然アミノ酸は、以下に列挙したアミノ酸群に属する：Ｙ、Ｇ、Ｆ、Ｍ、Ａ、Ｓ、Ｉ、Ｌ、Ｔ、Ｖ、Ｐ、Ｋ、Ｈ、Ｑ、Ｅ、Ｗ、Ｒ、Ｄ、Ｎ、およびＣ。非天然アミノ酸は、直前に列挙していないアミノ酸である。また、非天然アミノ酸残基には、修飾されたアミノ酸残基、Ｌ−アミノ酸残基、およびＤ−アミノ酸残基の立体異性体が含まれるが、これらに限定されない。
【００２５】
「等価なアミノ酸残基」は、ポリペプチドの構造および／または機能性を実質的に変化させることなくポリペプチド中で別のアミノ酸残基と置換することができるアミノ酸残基を指す。したがって、等価なアミノ酸は、側鎖の嵩高さ、側鎖の極性（極性または非極性）、疎水性（疎水性または親水性）、ｐＨ（酸性、中性、または塩基性）、および炭素分子の側鎖構成（芳香族／脂肪族）などの類似の性質を有する。そのようなものとして、「等価なアミノ酸残基」を、「保存的アミノ酸置換」と見なすことができる。
【００２６】
本明細書中に適用される用語「等価なアミノ酸置換」の意味の範囲内で、１つの実施形態では、以下に示すアミノ酸群内の１つのアミノ酸を別のアミノ酸に置換することができる：
ｉ）極性側鎖を有するアミノ酸（Ａｓｐ、Ｇｌｕ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、Ｈｉｓ、Ａｓｎ、Ｇｌｎ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｔｙｒ、およびＣｙｓ）
ｉｉ）非極性側鎖を有するアミノ酸（Ｇｌｙ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｈｅ、Ｔｒｐ、Ｐｒｏ、およびＭｅｔ）
ｉｉｉ）脂肪族側鎖を有するアミノ酸（Ｇｌｙ、Ａｌａ  Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ）
ｉｖ）環状側鎖を有するアミノ酸（Ｐｈｅ、Ｔｙｒ、Ｔｒｐ、Ｈｉｓ、Ｐｒｏ）
ｖ）芳香族側鎖を有するアミノ酸（Ｐｈｅ、Ｔｙｒ、Ｔｒｐ）
ｖｉ）酸性側鎖を有するアミノ酸（Ａｓｐ、Ｇｌｕ）
ｖｉｉ）塩基性側鎖を有するアミノ酸（Ｌｙｓ、Ａｒｇ、Ｈｉｓ）
ｖｉｉｉ）アミド側鎖を有するアミノ酸（Ａｓｎ、Ｇｌｎ）
ｉｘ）ヒドロキシ側鎖を有するアミノ酸（Ｓｅｒ、Ｔｈｒ）
ｘ）硫黄含有側鎖を有するアミノ酸（Ｃｙｓ、Ｍｅｔ）、
ｘｉ）中性で弱疎水性のアミノ酸（Ｐｒｏ、Ａｌａ、Ｇｌｙ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ）
ｘｉｉ）親水性で酸性のアミノ酸（Ｇｌｎ、Ａｓｎ、Ｇｌｕ、Ａｓｐ）、および
ｘｉｉｉ）疎水性アミノ酸（Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｖａｌ）
【００２７】
Ｌ型またはＤ型（光学異性体）が特定されていない場合、問題のアミノ酸は天然のＬ型（Ｐｕｒｅ  ＆  Ａｐｐｌ．Ｃｈｅｍ．Ｖｏｌ．（５６（５）ｐｐ  ５９５−６２４（１９８４）を参照のこと）またはＤ型を有し、その結果、形成されるペプチドは、Ｌ型、Ｄ型、または一連の混合されたＬ型およびＤ型のアミノ酸を構成し得ると理解すべきである。
【００２８】
ペプチドの「機能的バリアント」は、機能的バリアントが起源とするペプチドと同一の機能を本質的に果たすことができるペプチドである。特に、機能的バリアントは、機能的バリアントが起源とするペプチドと同一の分子に本質的に結合することができる。
【００２９】
「生物活性剤」（すなわち、生物学的に活性な物質／薬剤）は、ｉｎ  ｖｉｖｏまたはｉｎ  ｖｉｔｒｏで証明することができるいくらかの薬理学的な、しばしば、有益な影響をもたらす任意の薬剤、薬物、化合物、物質の組成物、または混合物である。生物活性剤は、本明細書中に定義のＧＩＰペプチド類似体およびこれらを含む化合物または組成物を指す。本明細書中で使用される場合、この用語には、個体に局所的効果または全身効果をもたらす任意の生理学的にまたは薬理学的に活性な物質がさらに含まれる。
【００３０】
本明細書中で使用される用語「薬物」および「医薬品」には、人体または動物の身体で局所的または全身に作用する生物学的に、生理学的に、または薬理学的に活性な物質が含まれる。
【００３１】
本明細書中で使用される用語「処置（ｔｒｅａｔｍｅｎｔ）」および「処置（ｔｒｅａｔｉｎｇ）」は、容態、疾患、または障害と戦うことを目的とした患者の管理およびケアを指す。この用語は、患者が罹患している所与の容態の処置の全範囲が含まれることを意図し、以下の目的のためのペプチドまたは組成物の投与などの治癒的療法、予防的または防止的療法、および改善的または緩和的療法を同様に指す：症状または合併症の改善または軽減；容態の進行の遅延、臨床症状、疾患、または障害の部分的停止；容態、疾患、または障害の治癒または消失；容態または症状の回復または緩和、および寛解（部分的または全体のいずれか）（検出可能または検出不可能）；および／または容態、疾患、または障害の罹患の防止または罹患リスクの低下、ここで、「防止（ｐｒｅｖｅｎｔｉｎｇ）」または「防止（ｐｒｅｖｅｎｔｉｏｎ）」は、容態、疾患、または障害の発症を妨害するための患者の管理およびケアを指すと理解すべきであり、症状または合併症を防止するかその発症リスクを低下させるための活性化合物の投与が含まれる。用語「緩和」およびその異形は、本明細書中で使用される場合、本発明の組成物を投与しない場合と比較して、生理学的容態または症状の範囲および／または望ましくない出現を減少させ、そして／または進行の経時変化を遅延または延長させることを意味する。
【００３２】
処置すべき個体は、好ましくは、哺乳動物、特に、ヒトである。しかし、マウス、ラット、イヌ、ネコ、ウシ、ウマ、ヒツジ、およびブタなどの動物の処置も本発明に含まれる。
【００３３】
「必要とする個体」は、本開示から利益を得ることができる個体を指す。１つの実施形態では、前述の必要とする個体は、罹患個体であり、ここで、前述の疾患は、代謝性疾患または障害（肥満または糖尿病、骨密度障害または癌など）であり得る。
【００３４】
本発明の処置は、予防的、回復的、および／または治癒的であり得る。
【００３５】
生物活性剤の「薬理学的に有効な量」、「薬学的に有効な量」、または「生理学的に有効な量」は、かかる組成物を投与したときに期待される生理学的応答が得られるように処置すべき個体内の血流または作用部位（例えば、肺、胃系、結腸直腸系、前立腺など）内に所望のレベルの活性薬剤を提供するのに必要な本明細書中に記載の医薬組成物中に存在する生物活性剤の量である。この文脈における生物活性剤は、本明細書中に開示のＧＩＰペプチド類似体を指す。
【００３６】
本明細書中で使用される「同時投与（ｃｏ−ａｄｍｉｎｉｓｔｅｒｉｎｇ）」または「同時投与（ｃｏ−ａｄｍｉｎｉｓｔｒａｔｉｏｎ）」は、１つまたは複数の本発明のＧＩＰペプチド類似体および最新の医薬組成物の投与を指す。少なくとも２つの成分を、個別に、逐次、または同時に投与することができる。
【００３７】
詳細な説明
ＧＩＰは、胃抑制ペプチド（またはポリペプチド）としても公知のグルコース依存性インスリン分泌刺激ポリペプチドを指す。本明細書中で使用される場合、略語ＧＩＰまたはｈＧＩＰは、ヒトＧＩＰである（Ｕｎｉｐｒｏｔ受入番号Ｐ０９６８１）。ＧＩＰは、１５３−アミノ酸プロタンパク質に由来し、生物学的に活性な４２−アミノ酸ペプチドとして循環している。ＧＩＰは、十二指腸および胃腸管の空腸の粘膜のＫ細胞によって合成される。
【００３８】
ＧＩＰＲ（またはＧＩＰ受容体）は、胃抑制ポリペプチド受容体を指す。これらの７回膜貫通タンパク質は、少なくとも、膵臓内のβ細胞上で見出される。本明細書中で使用される場合、略語ＧＩＰＲまたはｈＧＩＰＲは、ヒトＧＩＰＲ（Ｕｎｉｐｒｏｔ受入番号Ｐ４８５４６）である。
【００３９】
本発明者らは、ＧＩＰＲのアンタゴニストであり、驚くべき拮抗性を保持しながら半減期およびｉｎ  ｖｉｖｏ安定性を増加させるようにアシル化されたＧＩＰペプチドを同定した。これにより、種々の治療適用において潜在的に有用となる。
【００４０】
ＧＩＰペプチド
本発明は、ＧＩＰＲ拮抗性を有するＧＩＰ（未変性またはバリアント）のペプチドフラグメント、およびＧＩＰＲ拮抗性を保持しながら前述のペプチドの半減期を増大させるために付着した１つまたは複数の脂肪酸を含むＧＩＰペプチド類似体に関する。
【００４１】
１つの態様は、式１（ｈＧＩＰ５−３０、配列番号１）：
【化１】
2020521784.tif 000002
ここで、前述のペプチドが、Ｎ末端にジペプチドＥ−Ｇを任意選択的にさらに含み（ｈＧＩＰ３−３０、配列番号２）、
または配列番号１および配列番号２のうちのいずれか１つと少なくとも７５％の配列同一性を有する機能的バリアントのグルコース依存性インスリン分泌刺激ペプチド（ＧＩＰ）類似体であって、
ここで、前述のペプチドが、配列番号１および配列番号２のうちのいずれか１つ、または配列番号１および配列番号２のうちのいずれか１つと少なくとも７５％の配列同一性を有する機能的バリアントの１つまたは複数のアミノ酸残基での少なくとも１つの脂肪酸分子の付着によって修飾されており、
但し、前述の少なくとも１つの脂肪酸分子が、配列番号１および配列番号２のうちのいずれか１つ、または配列番号１および配列番号２のうちのいずれか１つと少なくとも７５％の配列同一性を有する機能的バリアントの３０位のアミノ酸残基に付着していないことを条件とする、グルコース依存性インスリン分泌刺激ペプチド（ＧＩＰ）類似体を提供することである。
【００４２】
１つの態様はまた、式１（ｈＧＩＰ５−３０、配列番号１）：
【化２】
2020521784.tif 000003
および式２（ｈＧＩＰ３−３０、配列番号２）：
【化３】
2020521784.tif 000004
または配列番号１および配列番号２のうちのいずれか１つと少なくとも７５％の配列同一性を有する機能的バリアント
からなる群から選択されるグルコース依存性インスリン分泌刺激ペプチド（ＧＩＰ）類似体であって、
ここで、前述のペプチドが、配列番号１および配列番号２のうちのいずれか１つ、または配列番号１および配列番号２のうちのいずれか１つと少なくとも７５％の配列同一性を有する機能的バリアントの１つまたは複数のアミノ酸残基での少なくとも１つの脂肪酸分子の付着によって修飾されており、
但し、前述の少なくとも１つの脂肪酸分子が、配列番号１および配列番号２のうちのいずれか１つ、または配列番号１および配列番号２のうちのいずれか１つと少なくとも７５％の配列同一性を有する機能的バリアントの３０位のアミノ酸残基に付着していないことを条件とする、グルコース依存性インスリン分泌刺激ペプチド（ＧＩＰ）類似体を提供することである。
【００４３】
１つの実施形態では、前述のペプチド、すなわち、ＧＩＰペプチド類似体は、Ｃ末端がアミド化されている（−ＮＨ２）。
【００４４】
１つの実施形態では、前述の少なくとも１つの脂肪酸分子は、配列番号１および配列番号２のうちのいずれか１つの３０位のＬｙｓ（Ｋ）残基に付着していない。
【００４５】
１つの実施形態では、前述の少なくとも１つの脂肪酸分子は、配列番号１および配列番号２のうちのいずれか１つの３０位のアミノ酸残基に付着しておらず、ここで、前述の３０位のアミノ酸残基は、Ｒ、Ａ、およびＥからなる群から選択されるアミノ酸と置換されている。
【００４６】
１つの実施形態では、
−任意選択的にＣ末端がアミド化（−ＮＨ２）されている、ＴＦＩＳＤＹＳＩＡＭＤＫＩＨＱＱＤＦＶＮＷＬＬＡＱＫ（ｈＧＩＰ５−３０、配列番号１）およびＥＧＴＦＩＳＤＹＳＩＡＭＤＫＩＨＱＱＤＦＶＮＷＬＬＡＱＫ（ｈＧＩＰ３−３０、配列番号２）からなる群から選択されるペプチド、
または配列番号１および配列番号２のうちのいずれか１つと少なくとも７５％の配列同一性を有する機能的バリアント、ならびに
−配列番号１および配列番号２のうちのいずれか１つ、または配列番号１および配列番号２のうちのいずれか１つと少なくとも７５％の配列同一性を有する機能的バリアントの１つまたは複数のアミノ酸残基に付着した少なくとも１つの脂肪酸分子
を含むグルコース依存性インスリン分泌刺激ペプチド（ＧＩＰ）類似体であって、
但し、前述の少なくとも１つの脂肪酸分子が、配列番号１および配列番号２のうちのいずれか１つ、または配列番号１および配列番号２のうちのいずれか１つと少なくとも７５％の配列同一性を有する機能的バリアントの３０位のアミノ酸残基に付着していないことを条件とする、グルコース依存性インスリン分泌刺激ペプチド（ＧＩＰ）類似体を提供する。
【００４７】
１つの実施形態では、
−ＴＦＩＳＤＹＳＩＡＭＤＫＩＨＱＱＤＦＶＮＷＬＬＡＱＫ（ｈＧＩＰ５−３０、配列番号１）からなるか、ＥＧＴＦＩＳＤＹＳＩＡＭＤＫＩＨＱＱＤＦＶＮＷＬＬＡＱＫ（ｈＧＩＰ３−３０、配列番号２）からなるペプチド、
または配列番号１および配列番号２のうちのいずれか１つと少なくとも７５％の配列同一性を有する機能的バリアント、および
−配列番号１および配列番号２のうちのいずれか１つ、または配列番号１および配列番号２のうちのいずれか１つと少なくとも７５％の配列同一性を有する機能的バリアントの１つまたは複数のアミノ酸残基に付着した少なくとも１つの脂肪酸分子
を含むグルコース依存性インスリン分泌刺激ペプチド（ＧＩＰ）類似体であって、
但し、前述の少なくとも１つの脂肪酸分子が、配列番号１および配列番号２のうちのいずれか１つ、または配列番号１および配列番号２のうちのいずれか１つと少なくとも７５％の配列同一性を有する機能的バリアントの３０位のアミノ酸残基に付着していないことを条件とする、グルコース依存性インスリン分泌刺激ペプチド（ＧＩＰ）類似体を提供する。
【００４８】
１つの態様はまた、式１（ｈＧＩＰ６−３０、配列番号１４７）：
【化４】
2020521784.tif 000005
ここで、前述のペプチドが、
−Ｎ末端にペプチドＴ（ｈＧＩＰ５−３０、配列番号１）、
−Ｎ末端にジペプチドＧ−Ｔ（ｈＧＩＰ４−３０、配列番号１４８）、
−Ｎ末端にトリペプチドＥ−Ｇ−Ｔ（ｈＧＩＰ３−３０、配列番号２）
を任意選択的にさらに含み、
または配列番号１、配列番号２、配列番号１４７、または配列番号１４８のうちのいずれか１つと少なくとも７５％の配列同一性を有する機能的バリアント
のグルコース依存性インスリン分泌刺激ペプチド（ＧＩＰ）類似体であって、
ここで、前述のペプチドが、配列番号１、配列番号２、配列番号１４７、または配列番号１４８のうちのいずれか１つ、または配列番号１、配列番号２、配列番号１４７、または配列番号１４８のうちのいずれか１つと少なくとも７５％の配列同一性有する機能的バリアントの１つまたは複数のアミノ酸残基での少なくとも１つの脂肪酸分子の付着によって修飾されており、
但し、前述の少なくとも１つの脂肪酸分子が、配列番号１、配列番号２、配列番号１４７、または配列番号１４８のうちのいずれか１つ、または配列番号１、配列番号２、配列番号１４７、または配列番号１４８のうちのいずれか１つと少なくとも７５％の配列同一性有する機能的バリアントの３０位のアミノ酸残基に付着していないことを条件とする、グルコース依存性インスリン分泌刺激ペプチド（ＧＩＰ）類似体を提供することである。
【００４９】
したがって、１つの実施形態では、以下：
ＴＦＩＳＤＹＳＩＡＭＤＫＩＨＱＱＤＦＶＮＷＬＬＡＱＫ（ｈＧＩＰ５−３０、配列番号１）、
ＥＧＴＦＩＳＤＹＳＩＡＭＤＫＩＨＱＱＤＦＶＮＷＬＬＡＱＫ（ｈＧＩＰ３−３０、配列番号２）、
ＦＩＳＤＹＳＩＡＭＤＫＩＨＱＱＤＦＶＮＷＬＬＡＱＫ（ｈＧＩＰ６−３０、配列番号１４７）、および
ＧＴＦＩＳＤＹＳＩＡＭＤＫＩＨＱＱＤＦＶＮＷＬＬＡＱＫ（ｈＧＩＰ４−３０、配列番号１４８）、
または配列番号１、配列番号２、配列番号１４７、または配列番号１４８のうちのいずれか１つと少なくとも７５％の配列同一性有する機能的バリアント
からなる群から選択されるグルコース依存性インスリン分泌刺激ペプチド（ＧＩＰ）類似体であって、
ここで、前述のペプチドが、配列番号１、配列番号２、配列番号１４７、または配列番号１４８のうちのいずれか１つ、または配列番号１、配列番号２、配列番号１４７、または配列番号１４８のうちのいずれか１つと少なくとも７５％の配列同一性有する機能的バリアントの１つまたは複数のアミノ酸残基での少なくとも１つの脂肪酸分子の付着によって修飾されており、
但し、前述の少なくとも１つの脂肪酸分子が、配列番号１、配列番号２、配列番号１４７、または配列番号１４８のうちのいずれか１つ、または配列番号１、配列番号２、配列番号１４７、または配列番号１４８のうちのいずれか１つと少なくとも７５％の配列同一性有する機能的バリアントの３０位のアミノ酸残基に付着していないことを条件とする、グルコース依存性インスリン分泌刺激ペプチド（ＧＩＰ）類似体を開示する。
【００５０】
機能的バリアント−機能性
本明細書全体で定義のグルコース依存性インスリン分泌刺激ペプチド（ＧＩＰ）類似体は、ペプチド配列（配列番号１または配列番号２、およびそのバリアント）および少なくとも１つの脂肪酸分子を含む。
【００５１】
用語「ペプチド」および「単離されたペプチド」を、本明細書中で互換的に使用することができる。用語「バリアント」および「機能的バリアント」を、本明細書中で互換的に使用することができる。本明細書中に定義のペプチドには、未変性ペプチド配列が含まれ、前述のペプチドの定義のアミノ酸配列の機能的バリアントも含まれる。
【００５２】
１つの実施形態では、ＴＦＩＳＤＹＳＩＡＭＤＫＩＨＱＱＤＦＶＮＷＬＬＡＱＫ（ｈＧＩＰ５−３０、配列番号１）、
ここで、前述のペプチドが、Ｎ末端にジペプチドＥＧを任意選択的にさらに含み（ｈＧＩＰ３−３０、配列番号２）、
または配列番号１および配列番号２のうちのいずれか１つと少なくとも７５％の配列同一性を有する機能的バリアント
のグルコース依存性インスリン分泌刺激ペプチド（ＧＩＰ）類似体であって、
ここで、前述のペプチドが、配列番号１および配列番号２のうちのいずれか１つ、または配列番号１および配列番号２のうちのいずれか１つと少なくとも７５％の配列同一性を有する機能的バリアントの１つまたは複数のアミノ酸残基での少なくとも１つの脂肪酸分子の付着によって修飾されており、
但し、前述の少なくとも１つの脂肪酸分子が、配列番号１および配列番号２のうちのいずれか１つ、または配列番号１および配列番号２のうちのいずれか１つと少なくとも７５％の配列同一性を有する機能的バリアントの３０位のアミノ酸残基に付着していないことを条件とし、そして
ここで、前述のペプチドが、ＧＩＰＲに結合し、そして／または拮抗することができる、グルコース依存性インスリン分泌刺激ペプチド（ＧＩＰ）類似体を提供する。
【００５３】
１つの実施形態では、ＧＩＰペプチド類似体は、ＧＩＰＲに結合することができる。１つの実施形態では、ＧＩＰペプチド類似体は、ＧＩＰＲを拮抗することができる。１つの実施形態では、ＧＩＰペプチド類似体は、ＧＩＰＲに結合して、これを拮抗することができる。いくつかの実施形態では、ＧＩＰＲは、ヒトＧＩＰＲ（Ｕｎｉｐｒｏｔ受入番号Ｐ４８５４６）、マウスＧＩＰＲ（Ｕｎｉｐｒｏｔ受入番号Ｑ０Ｐ５４３）、ラットＧＩＰＲ（Ｕｎｉｐｒｏｔ受入番号Ｐ４３２１９）、イヌＧＩＰＲ（Ｕｎｉｐｒｏｔ受入番号Ｅ２ＲＩＫ５）、ブタＧＩＰＲ（Ｕｎｉｐｒｏｔ受入番号Ｉ３ＬＮＤ８）、および／またはアカゲザルＧＩＰＲ（Ｕｎｉｐｒｏｔ受入番号Ａ０Ａ１Ｄ５ＱＤＭ０）（霊長類）である。
【００５４】
１つの実施形態では、本明細書中に開示のＧＩＰペプチド類似体は、ｈＧＩＰ受容体のアンタゴニストである。
【００５５】
１つの実施形態では、本明細書中に開示のＧＩＰペプチド類似体は、ｈＧＩＰ受容体の競合性アンタゴニストである。
【００５６】
「ペプチド」またはそれに伴う「ＧＩＰペプチド類似体」について言及するとき、この用語は、ペプチド類似体自体についての言及、および本明細書中に定義の治療方法で用いるペプチド類似体についての言及についても含むであろう。
【００５７】
本発明のＧＩＰペプチド類似体のペプチドの機能的バリアントは、前述のペプチド配列の機能的等価物である（すなわち、これらのバリアントは、未変性ペプチド配列に関連する少なくともいくつかの効果を保持している）。
【００５８】
１つの実施形態では、配列番号１または配列番号２（または配列番号１４７もしくは配列番号１４８）から選択されるペプチドの機能的バリアントは、未変性ペプチドまたは前述のバリアントが由来するペプチドと同一の生物学的活性または能力を保持している。１つの実施形態では、本明細書中に定義のペプチドおよびその機能的バリアントは、以下のうちの１つまたは複数が可能である：１つまたは複数のＧＩＰＲに結合すること；１つまたは複数のＧＩＰＲを拮抗すること；ＧＩＰ１−４２および／またはＧＩＰ１−３０を１つまたは複数のＧＩＰＲから解離させること；ＧＩＰ１−４２および／またはＧＩＰ１−３０よりも所与のＧＩＰＲに対してより高いか、同等か、より低い親和性を有すること；未変性ＧＩＰ、ＧＩＰ１−４２、および／またはＧＩＰ１−３０によって誘導されたソマトスタチン分泌を拮抗すること；未変性ＧＩＰ、ＧＩＰ１−４２、および／またはＧＩＰ１−３０によって誘導されたインスリン分泌を拮抗すること；および未変性ＧＩＰ、ＧＩＰ１−４２、および／またはＧＩＰ１−３０によって誘導されたグルカゴン分泌を拮抗すること。
【００５９】
１つの実施形態では、ペプチドおよびその機能的バリアントは、ｈＧＩＰＲ（Ｕｎｉｐｒｏｔ受入番号Ｐ４８５４６）、ｒＧＩＰＲ（Ｕｎｉｐｒｏｔ受入番号Ｐ４３２１９）、ｍＧＩＰＲ（Ｕｎｉｐｒｏｔ受入番号Ｑ０Ｐ５４３）、イヌＧＩＰＲ（Ｕｎｉｐｒｏｔ受入番号Ｅ２ＲＩＫ５）、ブタＧＩＰＲ（Ｕｎｉｐｒｏｔ受入番号Ｉ３ＬＮＤ８）、およびアカゲザルＧＩＰＲ（Ｕｎｉｐｒｏｔ受入番号Ａ０Ａ１Ｄ５ＱＤＭ０）（霊長類）のうちの１つまたは複数に結合することができる（または結合する）。
【００６０】
１つの実施形態では、ペプチドおよびその機能的バリアントは、ｉ）ＧＩＰ誘導性グルカゴン分泌、ｉｉ）ＧＩＰ誘導性インスリン分泌、ｉｉｉ）ＧＩＰ誘導性ソマトスタチン分泌、ｉｖ）ＧＩＰ誘導性グルコース摂取、ｖ）ＧＩＰ誘導性の脂肪酸合成および／または脂肪酸取り込み、ｖｉ）高いか増加したＧＩＰＲの発現または活性、ならびにｖｉｉ）食後のＧＩＰの放出（食後ＧＩＰ放出）のうちの１つまたは複数を抑制（低下、拮抗）することができる。
【００６１】
機能的バリアント−変異体
１つの実施形態では、本明細書中に定義の配列番号１および配列番号２の機能的バリアントは、配列番号１および配列番号２のうちのいずれか１つと少なくとも７５％の配列同一性を有する。「同一性」および「配列同一性」を、本明細書中で互換的に使用することができる。
【００６２】
別の実施形態では、前述の機能的バリアントは、配列番号１および配列番号２のうちのいずれか１つと少なくとも８０％の配列同一性を有する。
【００６３】
さらに別の実施形態では、前述の機能的バリアントは、配列番号１および配列番号２のうちのいずれか１つと少なくとも８５％の配列同一性を有する。
【００６４】
１つの実施形態では、前述の機能的バリアントは、配列番号１および配列番号２のうちのいずれか１つと少なくとも９０％の配列同一性を有する。
【００６５】
別の実施形態では、前述の機能的バリアントは、配列番号１および配列番号２のうちのいずれか１つと少なくとも９５％の配列同一性を有する。
【００６６】
別の実施形態では、前述の機能的バリアントは、配列番号１４７および配列番号１４８のうちのいずれか１つと少なくとも８０％の配列同一性、少なくとも８５％の配列同一性、少なくとも９０％の配列同一性、または少なくとも９５％の配列同一性を有する。
【００６７】
１つの実施形態では、前述の機能的バリアントは、配列番号１および配列番号２のうちのいずれか１つと７５％〜８０％の配列同一性（配列番号１および配列番号２のうちのいずれか１つと８０％〜８５％の配列同一性など、８５％〜９０％の配列同一性など、９０％〜９５％の配列同一性など）を有する。
【００６８】
１つの実施形態では、ＴＦＩＳＤＹＳＩＡＭＤＫＩＨＱＱＤＦＶＮＷＬＬＡＱＫ（ｈＧＩＰ５−３０、配列番号１）、
ここで、前述のペプチドが、Ｎ末端にジペプチドＥＧを任意選択的にさらに含み（ｈＧＩＰ３−３０、配列番号２）、
または１〜６つの個別のアミノ酸置換を有する配列番号１および配列番号２のうちのいずれか１つの機能的バリアント
のグルコース依存性インスリン分泌刺激ペプチド（ＧＩＰ）類似体であって、
ここで、前述のペプチドが、配列番号１および配列番号２のうちのいずれか１つ、または配列番号１および配列番号２のうちのいずれか１つと少なくとも７５％の配列同一性を有する機能的バリアントの１つまたは複数のアミノ酸残基での少なくとも１つの脂肪酸分子の付着によって修飾されており、
但し、前述の少なくとも１つの脂肪酸分子が、配列番号１および配列番号２のうちのいずれか１つ、または配列番号１および配列番号２のうちのいずれか１つと少なくとも７５％の配列同一性を有する機能的バリアントの３０位のアミノ酸残基に付着していないことを条件とする、グルコース依存性インスリン分泌刺激ペプチド（ＧＩＰ）類似体を提供する。
【００６９】
本明細書中で使用される１つの個別のアミノ酸置換は、配列番号１および配列番号２のうちのいずれか１つの任意の他の特徴（例えば、他のアミノ酸置換または脂肪酸修飾）とは独立して置換される、配列番号１および配列番号２のうちのいずれか１つの任意の１つの特定の位置でのアミノ酸置換と理解される。
【００７０】
１つの実施形態では、前述の配列番号１および配列番号２のうちのいずれか１つの機能的バリアントは、配列番号１および配列番号２のうちのいずれか１つの対応する部分または位置（またはバリアントと対応する未変性ＧＩＰペプチドとの間）と比較して、１〜６つの個別のアミノ酸置換（１〜２、２〜３、３〜４、４〜５、または５〜６つの個別のアミノ酸置換など）を有する。
【００７１】
１つの実施形態では、前述の配列番号１４７および配列番号１４８のうちのいずれか１つの機能的バリアントは、配列番号１４７および配列番号１４８のうちのいずれか１つの対応する部分または位置（またはバリアントと対応する未変性ＧＩＰペプチドとの間）と比較して、１〜６つの個別のアミノ酸置換（１〜２、２〜３、３〜４、４〜５、または５〜６つの個別のアミノ酸置換など）を有する。
【００７２】
１つの実施形態では、前述の配列番号１および配列番号２のうちのいずれか１つの機能的バリアントは、１つの個別のアミノ酸置換を有する。１つの実施形態では、前述の配列番号１および配列番号２のうちのいずれか１つの機能的バリアントは、１つ以下の個別のアミノ酸置換を有する。
【００７３】
１つの実施形態では、前述の配列番号１および配列番号２のうちのいずれか１つの機能的バリアントは、２つの個別のアミノ酸置換を有する。１つの実施形態では、前述の配列番号１および配列番号２のうちのいずれか１つの機能的バリアントは、２つ以下の個別のアミノ酸置換を有する。
【００７４】
１つの実施形態では、前述の配列番号１および配列番号２のうちのいずれか１つの機能的バリアントは、３つの個別のアミノ酸置換を有する。１つの実施形態では、前述の配列番号１および配列番号２のうちのいずれか１つの機能的バリアントは、３つ以下の個別のアミノ酸置換を有する。
【００７５】
１つの実施形態では、前述の配列番号１および配列番号２のうちのいずれか１つの機能的バリアントは、４つの個別のアミノ酸置換を有する。１つの実施形態では、前述の配列番号１および配列番号２のうちのいずれか１つの機能的バリアントは、４つ以下の個別のアミノ酸置換を有する。
【００７６】
１つの実施形態では、前述の配列番号１および配列番号２のうちのいずれか１つの機能的バリアントは、５つの個別のアミノ酸置換を有する。１つの実施形態では、前述の配列番号１および配列番号２のうちのいずれか１つの機能的バリアントは、５つ以下の個別のアミノ酸置換を有する。
【００７７】
１つの実施形態では、前述の配列番号１および配列番号２のうちのいずれか１つの機能的バリアントは、６つの個別のアミノ酸置換を有する。１つの実施形態では、前述の配列番号１および配列番号２のうちのいずれか１つの機能的バリアントは、６つ以下の個別のアミノ酸置換を有する。
【００７８】
１つの実施形態では、前述のアミノ酸置換のうちの１つまたは複数またはその全ては、保存的アミノ酸置換（または同義置換）である。保存的置換は、アミノ酸の側鎖が類似の生化学的性質を有し、したがって、ペプチドの機能に影響を及ぼさないアミノ酸の置換である。
【００７９】
一般的なアミノ酸の間の、例えば、「保存的アミノ酸置換」を、以下の各群内のアミノ酸の間の置換によって例示することもできる：（１）グリシン、アラニン、バリン、ロイシン、およびイソロイシン、（２）フェニルアラニン、チロシン、およびトリプトファン、（３）セリンおよびトレオニン、（４）アスパラギン酸塩およびグルタミン酸塩、（５）グルタミンおよびアスパラギン、ならびに（６）リジン、アルギニン、およびヒスチジン。
【００８０】
１つの実施形態では、本発明のペプチドのセリン残基は、Ｇｌｎ、Ａｓｎ、およびＴｈｒ（極性無電荷側鎖を有する全てのアミノ酸）からなる群から選択されるアミノ酸と置換されている；前述とは独立して、グリシン残基（Ｇｌｙ）は、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、およびＩｌｅからなる群から選択されるアミノ酸と置換されている；前述とは独立して、アルギニン残基（Ａｒｇ）は、ＬｙｓおよびＨｉｓ（全て正電荷の側鎖を有する）からなる群から選択されるアミノ酸と置換されている；前述とは独立して、リジン残基（Ｌｙｓ）は、ＡｒｇおよびＨｉｓからなる群から選択されるアミノ酸と置換されている；前述とは独立して、メチオニン残基（Ｍｅｔ）は、Ｌｅｕ、Ｐｒｏ、Ｉｌｅ、Ｖａｌ、Ｐｈｅ、Ｔｙｒ、およびＴｒｐ（全て疎水性側鎖を有する）からなる群から選択されるアミノ酸と置換されている；前述とは独立して、グルタミン残基（Ｇｌｎ）は、Ａｓｐ、Ｇｌｕ、およびＡｓｎからなる群から選択されるアミノ酸と置換されている；前述とは独立して、アラニン残基（Ａｌａ）は、Ｇｌｙ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、およびＩｌｅからなる群から選択されるアミノ酸と置換されている。
【００８１】
本明細書中に開示の特定のアミノ酸置換は、ＫからＲ、ＥからＤ、ＬからＭ、ＱからＥ、ＩからＶ、ＩからＬ、ＡからＳ、ＹからＷ、ＫからＱ、ＳからＴ、ＮからＳ、ＭからＬ、およびＱからＲである。
【００８２】
アミノ酸配列間の同一性を、ＢＬＯＳＵＭ３０、ＢＬＯＳＵＭ４０、ＢＬＯＳＵＭ４５、ＢＬＯＳＵＭ５０、ＢＬＯＳＵＭ５５、ＢＬＯＳＵＭ６０、ＢＬＯＳＵＭ６２、ＢＬＯＳＵＭ６５、ＢＬＯＳＵＭ７０、ＢＬＯＳＵＭ７５、ＢＬＯＳＵＭ８０、ＢＬＯＳＵＭ８５、またはＢＬＯＳＵＭ９０などの周知のアルゴリズムを使用するか、比較すべき２つのペプチド配列中の対応する位置に存在する特異的アミノ酸の単純比較によって計算することができる。
【００８３】
相同性を、同一性／配列同一性の同義語として使用することができる。
【００８４】
別の実施形態では、本明細書中に定義の機能的バリアントには、アルキルアミノ酸がアルキルアミノ酸に置換され、芳香族アミノ酸が芳香族アミノ酸に置換され、硫黄含有アミノ酸が硫黄含有アミノ酸に置換され、ヒドロキシ含有アミノ酸がヒドロキシ含有アミノ酸に置換され、酸性アミノ酸が酸性アミノ酸に置換され、塩基性アミノ酸が塩基性アミノ酸に置換され、そして／または、二塩基性モノカルボン酸アミノ酸が二塩基性モノカルボン酸アミノ酸に置換された配列が含まれる。
【００８５】
得られたバリアントが機能を保持する限り、保存的置換を、配列番号１および配列番号２のうちのいずれか１つから選択されるペプチドの任意の１つまたは複数の位置に導入することができる。しかし、１つまたは複数の位置に非保存的置換を導入することが望ましい可能性もある（非同義置換）。
【００８６】
１つの実施形態における配列番号１および配列番号２のうちのいずれか１つから選択されるペプチドのバリアントが形成される非保存的置換は、ｉ）極性が実質的に異なるアミノ酸残基の置換（例えば、非極性側鎖を有する残基（Ａｌａ、Ｌｅｕ、Ｐｒｏ、Ｔｒｐ、Ｖａｌ、Ｉｌｅ、Ｌｅｕ、Ｐｈｅ、またはＭｅｔ）への極性側鎖を有する残基（Ｇｌｙ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｃｙｓ、Ｔｙｒ、Ａｓｎ、またはＧｌｎなど）または荷電アミノ酸（Ａｓｐ、Ｇｌｕ、Ａｒｇ、またはＬｙｓなど）の置換、または荷電残基または極性残基への非極性残基の置換）；および／またはｉｉ）ペプチド骨格の配向に及ぼす影響が実質的に異なるアミノ酸残基の置換（ＰｒｏまたはＧｌｙの別の残基への置換またはその逆など）；および／またはｉｉｉ）電荷が実質的に異なるアミノ酸残基の置換（例えば、負電荷の残基（ＧｌｕまたはＡｓｐなど）への正電荷の残基（Ｌｙｓ、Ｈｉｓ、またはＡｒｇなど）の置換（およびその逆））；および／またはｉｖ）立体的な嵩高さが実質的に異なるアミノ酸残基の置換（例えば、嵩高い残基（Ｈｉｓ、Ｔｒｐ、Ｐｈｅ、またはＴｙｒなど）への小さな側鎖を有する残基（例えば、Ａｌａ、Ｇｌｙ、またはＳｅｒ）の置換（およびその逆））を含む。
【００８７】
アミノ酸を、１つの実施形態では、その疎水性親水性値およびアミノ酸側鎖置換基の相対的類似性（電荷およびサイズなどが含まれる）に基づいて置換することができる。
【００８８】
本明細書中に定義のペプチドまたはその機能的バリアント対応物は、タンパク新生アミノ酸または天然アミノ酸（すなわち、ポリペプチド内に天然に組み込まれた２２アミノ酸）を含む。これらのうちで、２０アミノ酸は、普遍的遺伝暗号によってコードされ、残りの２アミノ酸（セレノシステイン（Ｓｅｃ、Ｕ）およびピロリジン（Ｐｙｌ、Ｏ））は、固有の合成機序によってタンパク質内に組み込まれる。
【００８９】
１つの実施形態において本明細書中に定義のペプチドは、１つまたは複数の天然に存在しないアミノ酸残基（非天然アミノ酸、非タンパク質新生アミノ酸、または非標準的アミノ酸）を含む。天然に存在しないアミノ酸には、例えば、制限されないが、β−２−ナフチル−アラニン、トランス−３−メチルプロリン、２，４−メタノプロリン、シス−４−ヒドロキシプロリン、オルニチン（Ｏｒｎ）、トランス−４−ヒドロキシプロリン、Ｎ−メチルグリシン、アロ−トレオニン、メチルトレオニン、ヒドロキシエチルシステイン、ヒドロキシエチルホモシステイン、ニトログルタミン（ｎｉｔｒｏｇｌｕｔａｍｎｉｎｅ）、ホモグルタミン、ピペコリン酸、チアゾリジンカルボン酸、デヒドロプロリン、３−および４−メチルプロリン、３，３−ジメチルプロリン、ｔｅｒｔ−ロイシン、ノルロイシン（Ｎｌｅ）、メトキシニン（Ｍｏｘ）、ノルバリン、２−アザフェニルアラニン、３−アザフェニルアラニン、４−アザフェニルアラニン、および４−フルオロフェニルアラニンが含まれる。
【００９０】
１つの実施形態では、アミノ酸Ｍｅｔは、酸化耐性アミノ酸類似体（例えば、その水素結合特性ではなく、疎水性相互作用に重要なアミノ酸側鎖の長さを保持するノルロイシン（Ｎｌｅ）；またはメトキシニン（Ｍｏｘ）（Ｎｌｅと比較してＭｅｔの電子特性により酷似する非標準アミノ酸）と置換されている。
【００９１】
本明細書中に定義の任意のアミノ酸は、Ｌ−またはＤ−立体配置であり得る。何も特定されていない場合、好ましくはＬ−異性体を指す。
【００９２】
標準および／または非標準アミノ酸を、ペプチド結合（直鎖ペプチドが形成される）によって、または非ペプチド結合（例えば、アミノ酸の可変側鎖を介して）によって連結することができる。好ましくは、本明細書中に定義のペプチドのアミノ酸は、ペプチド結合によって連結されている。
【００９３】
ペプチドという用語はまた、当該分野で公知のように、化学反応または酵素触媒反応によって導入された翻訳後修飾を含む。これらには、１つまたは複数のアミノ酸残基のアセチル化、リン酸化、メチル化、グルコシル化、糖化、アミド化、ヒドロキシル化、脱イミノ化、脱アミド、カルバミル化、および硫酸化が含まれ、公知のプロテイナーゼ（リソソームカテプシン（ｋａｔｈｅｐｓｉｎ）が含まれ、カルパイン、セクレターゼ、およびマトリックス−メタロプロテイナーゼも含まれる）によるタンパク質分解性修飾も含まれる。
【００９４】
１つの好ましい実施形態では、配列番号１および配列番号２またはその機能的バリアントからなる群から選択されるペプチドは、アミド化されている（Ｃ末端アミド化（−ＮＨ２）など）。その１つの例示的な実施形態では、ペプチドは、脂肪酸分子も含むｈＧＩＰ（５−３０）−ＮＨ２もしくはｈＧＩＰ（３−３０）−ＮＨ２、またはそのバリアントである。
【００９５】
１つの実施形態では、配列番号１および配列番号２またはその機能的バリアントからなる群から選択されるペプチドは、アセチル化されている（Ｎ末端アセチル化など）。
【００９６】
また、ペプチドの機能的等価物は、ユビキチン化、標識化（例えば、放射性核種、種々の酵素での標識化など）、ペグ化（ポリエチレングリコールでの誘導体化）、またはヒトタンパク質で通常は生じない（非タンパク新生）オルニチンなどのアミノ酸の挿入（または化学合成による置換）などの化学修飾物を含み得る。
【００９７】
立体的に類似する化合物を、ペプチド構造の重要部分を模倣するように製剤化することができる。当業者に公知のモデリング技術および化学的設計技術によって製剤化することができる。例えば、エステル化および他のアルキル化を使用して、例えばジ−アルギニンペプチド骨格のアミノ末端を、テトラペプチド構造を模倣するように修飾することができる。全てのかかる立体的に類似する構築物が本発明の範囲内であると理解されるであろう。Ｎ末端およびＣ末端がアルキル化およびエステル化されたペプチドも、本発明の範囲内に含まれる。
【００９８】
１つの実施形態では、配列番号１および配列番号２のうちのいずれか１つの機能的バリアントは、Ｎ、Ｑ、およびＴからなる群から選択されるアミノ酸がＤ、Ｅ、およびＳからなる群から選択されるアミノ酸と置換されているバリアントである。１つの実施形態では、かかるアミノ酸置換は、得られたペプチドの溶解性を増加させる。
【００９９】
１つの実施形態では、配列番号１および配列番号２のうちのいずれか１つの機能的バリアントは、３０位のＫが任意のアミノ酸と置換されているバリアントである。
【０１００】
本明細書中で使用される任意のアミノ酸は、本明細書中に定義の天然に存在するアミノ酸および天然に存在しないアミノ酸の両方を指す。
【０１０１】
１つの実施形態では、配列番号１および配列番号２のうちのいずれか１つの機能的バリアントは、３０位のＫが保存的アミノ酸置換で置換されているバリアントである。
【０１０２】
１つの実施形態では、配列番号１および配列番号２のうちのいずれか１つの機能的バリアントは、疎水性アミノ酸が親水性アミノ酸と置換されているバリアントである。
【０１０３】
１つの実施形態では、配列番号１および配列番号２のうちのいずれか１つの機能的バリアントは、３０位のＫが親水性アミノ酸と置換されているバリアントである。
【０１０４】
１つの実施形態では、配列番号１および配列番号２のうちのいずれか１つの機能的バリアントは、３０位のＫがＤ、Ｅ、Ｓ、Ｒ、およびＡからなる群から選択されるアミノ酸（Ｒ、Ａ、およびＥからなる群から選択されるアミノ酸など）と置換されているバリアントである。
【０１０５】
１つの実施形態では、配列番号１および配列番号２のうちのいずれか１つの機能的バリアントは、３０位のＫが脂肪酸分子の付着によって修飾されていないときに３０位のＫが任意のアミノ酸と置換されているバリアントである。
【０１０６】
１つの実施形態では、配列番号１および配列番号２のうちのいずれか１つの機能的バリアントは、１６位のＫが任意のアミノ酸と置換されているバリアントである。
【０１０７】
１つの実施形態では、配列番号１および配列番号２のうちのいずれか１つの機能的バリアントは、１６位のＫが保存的アミノ酸置換で置換されているバリアントである。
【０１０８】
１つの実施形態では、配列番号１および配列番号２のうちのいずれか１つの機能的バリアントは、１６位のＫが、Ｄ、Ｅ、Ｓ、Ｒ、およびＡからなる群から選択されるアミノ酸（Ｒ、Ａ、およびＥからなる群から選択されるアミノ酸など）と置換されているバリアントである。
【０１０９】
１つの実施形態では、配列番号１および配列番号２のうちのいずれか１つの機能的バリアントは、１６位のＫが脂肪酸分子の付着によって修飾されていないときに１６位のＫが任意のアミノ酸と置換されているバリアントである。
【０１１０】
１つの実施形態では、配列番号１および配列番号２のうちのいずれか１つの機能的バリアントは、１６位のＫおよび３０位のＫの両方が、任意のアミノ酸と置換されている（保存的アミノ酸置換など、Ｄ、Ｅ、Ｓ、Ｒ、およびＡからなる群から選択されるアミノ酸との置換など、Ｒ、Ａ、およびＥからなる群から選択されるアミノ酸との置換など）バリアントである。
【０１１１】
１つの実施形態では、配列番号１および配列番号２のうちのいずれか１つの機能的バリアントは、１４位のＭが任意のアミノ酸と置換されている（Ｌ、Ｓ、Ｋ、ノルロイシン（Ｎｌｅ）、またはメトキシニン（Ｍｏｘ）との置換など）バリアントである。
【０１１２】
１つの実施形態では、配列番号１および配列番号２のうちのいずれか１つの機能的バリアントは、１５位のＤが任意のアミノ酸と置換されているバリアントである。
【０１１３】
１つの実施形態では、配列番号１および配列番号２のうちのいずれか１つの機能的バリアントは、１５位のＤが保存的アミノ酸置換で置換されているバリアントである。
【０１１４】
１つの実施形態では、配列番号１および配列番号２のうちのいずれか１つの機能的バリアントは、１５位のＤがＥ、Ａ、Ｏｒｎ、およびＫからなる群から選択されるアミノ酸と置換されているバリアントである。
【０１１５】
１つの実施形態では、配列番号１および配列番号２のうちのいずれか１つの機能的バリアントは、１８位のＨが任意のアミノ酸と置換されているバリアントである。
【０１１６】
１つの実施形態では、配列番号１および配列番号２のうちのいずれか１つの機能的バリアントは、１８位のＨが保存的アミノ酸置換で置換されているバリアントである。
【０１１７】
１つの実施形態では、配列番号１および配列番号２のうちのいずれか１つの機能的バリアントは、１８位のＨが、Ａ、Ｒ、Ｏｒｎ、およびＫからなる群から選択されるアミノ酸と置換されているバリアントである。
【０１１８】
１つの実施形態では、配列番号１および配列番号２のうちのいずれか１つの機能的バリアントは、１１位のＳがＯｒｎおよびＫからなる群から選択されるアミノ酸と置換されているバリアントである。
【０１１９】
１つの実施形態では、配列番号１および配列番号２のうちのいずれか１つの機能的バリアントは、１２位のＩがＯｒｎおよびＫからなる群から選択されるアミノ酸と置換されているバリアントである。
【０１２０】
１つの実施形態では、配列番号１および配列番号２のうちのいずれか１つの機能的バリアントは、１３位のＡがＯｒｎおよびＫからなる群から選択されるアミノ酸と置換されているバリアントである。
【０１２１】
１つの実施形態では、配列番号１および配列番号２のうちのいずれか１つの機能的バリアントは、１１位（Ｓｅｒ）、１２位（Ｉｌｅ）、１３位（Ａｌａ）、１４位（Ｍｅｔ）、１５位（Ａｓｐ）、１６位（Ｌｙｓ）、１８位（Ｈｉｓ）、および３０位（Ｌｙｓ）のうちの１つまたは複数にアミノ酸置換（保存的および非保存的アミノ酸置換が含まれる）を有する（含む）バリアントである。
【０１２２】
１つの実施形態では、配列番号１および配列番号２のうちのいずれか１つの機能的バリアントは、１つまたは複数のアミノ酸残基がオルニチンと置換されているバリアントである。１つの実施形態では、Ｌｙｓ残基との置換に関して言及している本明細書中に定義のバリアントを、Ｏｒｎ残基と同様に置換することができる。ＬｙｓおよびＯｒｎの両方を、これらの側鎖アミノ基（それぞれε−またはδ−アミノ基）上で修飾することができる。
【０１２３】
１つの実施形態では、配列番号１および配列番号２のうちのいずれか１つの機能的バリアントは、１つまたは複数のアミノ酸残基がオルニチンと置換されており、ここで、脂肪酸分子が前述のオルニチン残基に付着しているバリアントである。
【０１２４】
１つの実施形態では、配列番号１および配列番号２のうちのいずれか１つの機能的バリアントは、１つのアミノ酸残基がオルニチンと置換されているバリアントである。
【０１２５】
１つの実施形態では、配列番号２の機能的バリアントは、３位のＥ（Ｇｌｕ）がｐＧｌｕ（ピログルタミン酸）と置換されているバリアントである。
【０１２６】
１つの実施形態では、ペプチドは天然に存在しない。
【０１２７】
１つの実施形態では、ペプチドは合成である。
【０１２８】
１つの実施形態では、ペプチドは、単離されたペプチドである。
【０１２９】
ＧＩＰ（５−３０）ペプチド
１つの実施形態では、ペプチドが、配列ＴＦＩＳＤＹＸ１１Ｘ１２Ｘ１３Ｘ１４Ｘ１５Ｘ１６ＩＸ１８ＱＱＤＦＶＮＷＬＬＡＱＸ３０（配列番号３）（式中、
Ｘ１１は、Ｓ、Ｋ、およびＯｒｎからなる群から選択され、
Ｘ１２は、Ｉ、Ｋ、およびＯｒｎからなる群から選択され、
Ｘ１３は、Ａ、Ｋ、およびＯｒｎからなる群から選択され、
Ｘ１４は、Ｍ、Ｋ、Ｌ、Ｓ、Ｎｌｅ、およびＭｏｘからなる群から選択され、
Ｘ１５は、Ｄ、Ｅ、Ａ、Ｋ、およびＯｒｎからなる群から選択され、
Ｘ１６は、Ｋ、Ｒ、Ａ、およびＥからなる群から選択され、
Ｘ１８は、Ｈ、Ａ、Ｒ、Ｋ、およびＯｒｎからなる群から選択され、そして
Ｘ３０は、Ｋ、Ｒ、Ａ、およびＥからなる群から選択される）
または前述の配列と少なくとも７５％の配列同一性を有するその機能的バリアントを有するＧＩＰペプチド類似体であって、
ここで、前述のペプチドが、前述の配列の１つまたは複数のアミノ酸残基での少なくとも１つの脂肪酸分子の付着によって修飾されており、但し、前述の少なくとも１つの脂肪酸分子がＸ３０に付着していないことを条件とする、ＧＩＰペプチド類似体を提供する。
【０１３０】
１つの実施形態では、本発明のＧＩＰペプチド類似体のペプチドは、以下：
【化５】
2020521784.tif 000006
2020521784.tif 000007
2020521784.tif 000008
からなる群から選択され、
ここで、前述のペプチドが、１つまたは複数のアミノ酸残基での少なくとも１つの脂肪酸分子の付着（１つのアミノ酸残基での１つの脂肪酸分子の付着など）によって修飾され、但し、前述の少なくとも１つの脂肪酸分子が、３０位のアミノ酸残基に付着していない（３０位のアミノ酸残基ＫまたはＲに付着していないなど）ことを条件とする。
【０１３１】
１つの実施形態では、脂肪酸分子は、配列番号１およびそのバリアントの５〜２９位内のＫ残基に付着している。１つの実施形態では脂肪酸分子は、Ｎ末端アミノ酸残基（すなわち、配列番号１の５位のＴ残基）に付着している。
【０１３２】
１つの実施形態では、前述のペプチドのＣ末端がアミド化（−ＮＨ２）されている。
【０１３３】
ＧＩＰ（３−３０）ペプチド
１つの実施形態では、ペプチドが、配列ＥＧＴＦＩＳＤＹ  Ｘ１１Ｘ１２Ｘ１３Ｘ１４Ｘ１５Ｘ１６ＩＸ１８ＱＱＤＦＶＮＷＬＬＡＱＸ３０（配列番号４）（式中、
Ｘ１１は、Ｓ、Ｋ、およびＯｒｎからなる群から選択され、
Ｘ１２は、Ｉ、Ｋ、およびＯｒｎからなる群から選択され、
Ｘ１３は、Ａ、Ｋ、およびＯｒｎからなる群から選択され、
Ｘ１４は、Ｍ、Ｋ、Ｌ、Ｓ、Ｎｌｅ、およびＭｏｘからなる群から選択され、
Ｘ１５は、Ｄ、Ｅ、Ａ、Ｋ、およびＯｒｎからなる群から選択され、
Ｘ１６は、Ｋ、Ｒ、Ａ、およびＥからなる群から選択され、
Ｘ１８は、Ｈ、Ａ、Ｒ、Ｋ、およびＯｒｎからなる群から選択され、そして
Ｘ３０は、Ｋ、Ｒ、Ａ、およびＥからなる群から選択される）
または前述の配列と少なくとも７５％の配列同一性を有するその機能的バリアントを有するＧＩＰペプチド類似体であって、
ここで、前述のペプチドが、前述の配列の１つまたは複数のアミノ酸残基での少なくとも１つの脂肪酸分子の付着によって修飾されており、但し、前述の少なくとも１つの脂肪酸分子がＸ３０に付着していないことを条件とする、ＧＩＰペプチド類似体を提供する。
【０１３４】
１つの実施形態では、本発明のＧＩＰペプチド類似体のペプチドは、以下：
【化６】
2020521784.tif 000009
2020521784.tif 000010
2020521784.tif 000011
からなる群から選択され、
ここで、前述のペプチドが、１つまたは複数のアミノ酸残基での少なくとも１つの脂肪酸分子の付着（１つのアミノ酸残基での１つの脂肪酸分子の付着など）によって修飾され、但し、前述の少なくとも１つの脂肪酸分子が、３０位のアミノ酸残基に付着していない（３０位のアミノ酸残基ＫまたはＲに付着していないなど）ことを条件とする。
【０１３５】
１つの実施形態では脂肪酸分子は、配列番号２およびそのバリアントの４〜２９位内のＫ残基に付着している。
【０１３６】
１つの実施形態では、前述のペプチドのＣ末端がアミド化（−ＮＨ２）されている。
【０１３７】
脂肪酸分子の付着
１つの実施形態では、Ｃ末端で任意選択的にアミド化されたペプチド配列ＴＦＩＳＤＹＳＩＡＭＤＫＩＨＱＱＤＦＶＮＷＬＬＡＱＫ（ｈＧＩＰ５−３０、配列番号１）、または配列番号１と少なくとも７５％の配列同一性を有する機能的バリアントを含むか、からなるグルコース依存性インスリン分泌刺激ペプチド（ＧＩＰ）類似体であって、
ここで、前述のペプチドが、配列番号１、またはその機能的バリアントの１つまたは複数のアミノ酸残基での少なくとも１つの脂肪酸分子の付着によって修飾されており、但し、前述の少なくとも１つの脂肪酸分子が配列番号１の３０位のアミノ酸残基に付着していないか、配列番号１と少なくとも７５％の配列同一性を有する機能的バリアントの３０位のアミノ酸残基に付着していないことを条件とする、グルコース依存性インスリン分泌刺激ペプチド（ＧＩＰ）類似体を提供する。
【０１３８】
別の実施形態では、Ｃ末端で任意選択的にアミド化されたペプチド配列ＥＧＴＦＩＳＤＹＳＩＡＭＤＫＩＨＱＱＤＦＶＮＷＬＬＡＱＫ（ｈＧＩＰ３−３０、配列番号２）、または配列番号２と少なくとも７５％の配列同一性を有する機能的バリアントを含むか、からなるグルコース依存性インスリン分泌刺激ペプチド（ＧＩＰ）類似体であって、
ここで、前述のペプチドが、配列番号２、またはその機能的バリアントの１つまたは複数のアミノ酸残基での少なくとも１つの脂肪酸分子の付着によって修飾されており、但し、前述の少なくとも１つの脂肪酸分子が配列番号２の３０位のアミノ酸残基に付着していないか、配列番号２と少なくとも７５％の配列同一性を有する機能的バリアントの３０位のアミノ酸残基に付着していないことを条件とする、グルコース依存性インスリン分泌刺激ペプチド（ＧＩＰ）類似体を提供する。
【０１３９】
１つの実施形態では、前述の少なくとも１つの脂肪酸分子は、配列番号２の３位のＮ末端アミノ酸残基に付着していない（配列番号２の３位のＮ末端Ｅに付着していないなど）。
【０１４０】
１つの実施形態では、脂肪酸分子は、配列番号１またはそのバリアントの５〜２９位のうちのいずれか１つのアミノ酸残基に付着している。
【０１４１】
１つの実施形態では、脂肪酸分子は、配列番号２またはそのバリアントの４〜２９位のうちのいずれか１つのアミノ酸残基に付着している。
【０１４２】
１つの実施形態では、脂肪酸分子は、配列番号１４７またはそのバリアントの６〜２９位のうちのいずれか１つのアミノ酸残基に付着している。
【０１４３】
１つの実施形態では、脂肪酸分子は、配列番号１４８またはそのバリアントの４〜２９位のうちのいずれか１つのアミノ酸残基に付着している。
【０１４４】
１つの実施形態では、脂肪酸分子は、配列番号１、またはその機能的バリアントの５位、６位、７位、８位、９位、１０位、１１位、１２位、１３位、１４位、１５位、１６位、１７位、１８位、１９位、２０位、２１位、２２位、２３位、２４位、２５位、２６位、２７位、２８位、または２９位のアミノ酸残基に付着している。
【０１４５】
１つの実施形態では、脂肪酸分子は、配列番号２、またはその機能的バリアントの４位、５位、６位、７位、８位、９位、１０位、１１位、１２位、１３位、１４位、１５位、１６位、１７位、１８位、１９位、２０位、２１位、２２位、２３位、２４位、２５位、２６位、２７位、２８位、または２９位のアミノ酸残基に付着している。
【０１４６】
１つの実施形態では、脂肪酸分子は、配列番号１４７、またはその機能的バリアントの６位、７位、８位、９位、１０位、１１位、１２位、１３位、１４位、１５位、１６位、１７位、１８位、１９位、２０位、２１位、２２位、２３位、２４位、２５位、２６位、２７位、２８位、または２９位のアミノ酸残基に付着している。
【０１４７】
１つの実施形態では、少なくとも１つの脂肪酸分子は、配列番号１および配列番号２のうちのいずれか１つ、またはその機能的バリアントの中央領域内の１つまたは複数のアミノ酸残基に付着している。
【０１４８】
１つの実施形態では、少なくとも１つの脂肪酸分子は、配列番号１および配列番号２のうちのいずれか１つ、またはその機能的バリアントの１１〜２１位のうちのいずれか１つの１つまたは複数のアミノ酸残基に付着している。
【０１４９】
１つの実施形態では、少なくとも１つの脂肪酸分子は、配列番号１および配列番号２のうちのいずれか１つ、またはその機能的バリアントの１１〜１２、１２〜１３、１３〜１４、１４〜１５、１５〜１６、１６〜１７、１７〜１８、１８〜１９、１９〜２０、または２０〜２１位のうちのいずれか１つの１つまたは複数のアミノ酸残基に付着している。
【０１５０】
１つの実施形態では、少なくとも１つの脂肪酸分子は、配列番号１および配列番号２のうちのいずれか１つ、またはその機能的バリアントの１１、１２、および１３位のうちのいずれか１つの１つまたは複数のアミノ酸残基に付着している。
【０１５１】
１つの実施形態では、前述の少なくとも１つの脂肪酸分子は、配列番号１および配列番号２のうちのいずれか１つ、またはその機能的バリアントのＮ末端領域の１つまたは複数のアミノ酸残基に付着しており、但し、前述の少なくとも１つの脂肪酸分子が、配列番号２の３位のアミノ酸残基に付着していないものとする。
【０１５２】
１つの実施形態では、前述の少なくとも１つの脂肪酸分子は、配列番号１またはその機能的バリアントの５〜１０位のうちのいずれか１つの１つまたは複数のアミノ酸残基に付着している。
【０１５３】
１つの実施形態では、前述の少なくとも１つの脂肪酸分子は、配列番号１またはその機能的バリアントの５〜６、６〜７、７〜８、８〜９、または９〜１０位のうちのいずれか１つの１つまたは複数のアミノ酸残基に付着している。
【０１５４】
１つの実施形態では、前述の少なくとも１つの脂肪酸分子は、配列番号２またはその機能的バリアントの４〜１０位のうちのいずれか１つの１つまたは複数のアミノ酸残基に付着している。
【０１５５】
１つの実施形態では、前述の少なくとも１つの脂肪酸分子は、配列番号２またはその機能的バリアントの４〜５、５〜６、６〜７、６〜８、８〜９、または９〜１０位のうちのいずれか１つの１つまたは複数のアミノ酸残基に付着している。
【０１５６】
１つの実施形態では、前述の少なくとも１つの脂肪酸分子は、配列番号１および配列番号２のうちのいずれか１つ、またはその機能的バリアントのＣ末端領域の１つまたは複数のアミノ酸残基に付着しており、但し、前述の少なくとも１つの脂肪酸分子が、配列番号１および配列番号２のうちのいずれか１つの３０位のアミノ酸残基に付着していないことを条件とする。
【０１５７】
１つの実施形態では、前述の少なくとも１つの脂肪酸分子は、配列番号１および配列番号２のうちのいずれか１つ、またはその機能的バリアントの２２〜２９位のうちのいずれか１つの１つまたは複数のアミノ酸残基に付着している。
【０１５８】
１つの実施形態では、前述の少なくとも１つの脂肪酸分子は、配列番号１および配列番号２のうちのいずれか１つ、またはその機能的バリアントの２２〜２３、２３〜２４、２４〜２５、２５〜２６、２６〜２７、２７〜２８、または２８〜２９位のうちのいずれか１つの１つまたは複数のアミノ酸残基に付着している。
【０１５９】
１つの実施形態では、脂肪酸分子は、側鎖アミノ−アルキル基（−ＣｎＨ２ｎＮＨ２）を有する１つまたは複数のアミノ酸残基に付着している。
【０１６０】
１つの実施形態では、脂肪酸分子は、側鎖アミノ基（ＮＨ２）を有する１つまたは複数のアミノ酸残基に付着している。
【０１６１】
１つの実施形態では、脂肪酸分子は、アミノ酸残基の側鎖アミノ基に付着している。
【０１６２】
１つの実施形態では、脂肪酸分子は、リジン残基（Ｌｙｓ、Ｋ）のε（イプシロン）側鎖アミノ基に付着している。
【０１６３】
１つの実施形態では、脂肪酸分子は、オルニチン残基（Ｏｒｎ）のδ（デルタ）側鎖アミノ基に付着している。
【０１６４】
１つの実施形態では、脂肪酸分子が付着しているアミノ酸残基は、ＬｙｓおよびＯｒｎからなる群から選択される。
【０１６５】
１つの実施形態では、脂肪酸分子が付着しているアミノ酸残基はＬｙｓである。
【０１６６】
１つの実施形態では脂肪酸分子は、Ｏｒｎアミノ酸残基を含む配列番号１および配列番号２のうちのいずれか１つの機能的バリアントのＯｒｎ残基のδ−アミノ基に付着している。
【０１６７】
１つの実施形態では脂肪酸分子は、配列番号１および配列番号２のうちのいずれか１つ、またはそのバリアントのＫ残基のε−アミノ基に付着している。
【０１６８】
１つの実施形態では、脂肪酸分子が付着しているアミノ酸残基は、最Ｎ末端アミノ酸残基（配列番号１、またはそのバリアントの最Ｎ末端アミノ酸残基など）である。
【０１６９】
１つの実施形態では、前述の脂肪酸分子は、Ｎ末端アミノ酸残基のα−アミノ基に付着している。１つの実施形態では、前述の脂肪酸分子は、配列番号１、またはその機能的バリアントの５位のＮ末端アミノ酸残基に付着している。１つの実施形態では、前述の脂肪酸分子は、配列番号１、またはその機能的バリアントの５位のＴに付着している。
【０１７０】
１つの実施形態では、脂肪酸分子は、配列番号１および配列番号２のうちのいずれか１つ、またはその機能的バリアントの１６位のアミノ酸残基に付着している。
【０１７１】
１つの実施形態では、脂肪酸分子は、配列番号１および配列番号２のうちのいずれか１つ、またはその機能的バリアントの１６位のＫに付着している（配列番号１および配列番号２のうちのいずれか１つ、またはその機能的バリアントの１６位のＫのε−アミノ基への付着など）。
【０１７２】
１つの実施形態では、脂肪酸分子は、配列番号１および配列番号２のうちのいずれか１つ、またはそのバリアントの１８位のアミノ酸残基に付着しており、ここで、１８位のＨは、配列番号１および配列番号２のうちのいずれか１つ中のＫ（またはＯｒｎ）と置換されている。
【０１７３】
１つの実施形態では、脂肪酸分子は、配列番号１および配列番号２のうちのいずれか１つ、またはそのバリアントの１８位のＫのε−アミノ基に付着している。
【０１７４】
１つの実施形態では、脂肪酸分子は、
【化７】
2020521784.tif 000012
またはその機能的バリアント
から選択されるペプチドの１８位のＫのε−アミノ基に付着している。
【０１７５】
１つの実施形態では、脂肪酸分子は、配列番号１および配列番号２、またはその機能的バリアントのうちのいずれか１つの位置のＫ残基のε−アミノ基に付着している。
【０１７６】
１つの実施形態では、脂肪酸分子は、
【化８】
2020521784.tif 000013
またはその機能的バリアント
から選択されるペプチドの１８位のＯｒｎのδ−アミノ基に付着している。
【０１７７】
１つの実施形態では、配列番号１および配列番号２のうちのいずれか１つ、またはその機能的バリアントの１６位のＫ、および／または３０位のＫは、配列番号１および配列番号２のうちのいずれか１つ、またはその機能的バリアントの１６位および３０位以外の位置のアミノ酸残基に脂肪酸分子が付着するときに、任意のアミノ酸と個別に置換されている。
【０１７８】
１つの実施形態では、脂肪酸分子は、
【化９】
2020521784.tif 000014
またはその機能的バリアント
から選択されるペプチドの１５位のＫのε−アミノ基に付着している。
【０１７９】
１つの実施形態では、脂肪酸分子は、
【化１０】
2020521784.tif 000015
またはその機能的バリアント
から選択されるペプチドの１５位のＯｒｎのδ−アミノ基に付着している。
【０１８０】
１つの実施形態では、脂肪酸分子は、
【化１１】
2020521784.tif 000016
またはその機能的バリアント
から選択されるペプチドの１１位のＫのε−アミノ基に付着している。
【０１８１】
１つの実施形態では、脂肪酸分子は、
【化１２】
2020521784.tif 000017
またはその機能的バリアントから選択されるペプチドの１１位のＯｒｎのδ−アミノ基に付着している。
【０１８２】
１つの実施形態では、脂肪酸分子は、
【化１３】
2020521784.tif 000018
またはその機能的バリアント
から選択されるペプチドの１２位のＫのε−アミノ基に付着している。
【０１８３】
１つの実施形態では、脂肪酸分子は、
【化１４】
2020521784.tif 000019
またはその機能的バリアント
から選択されるペプチドの１２位のＯｒｎのδ−アミノ基に付着している。
【０１８４】
１つの実施形態では、脂肪酸分子は、
【化１５】
2020521784.tif 000020
またはその機能的バリアントから選択されるペプチドの１３位のＫのε−アミノ基に付着している。
【０１８５】
１つの実施形態では、脂肪酸分子は、
【化１６】
2020521784.tif 000021
またはその機能的バリアント
から選択されるペプチドの１３位のＯｒｎのδ−アミノ基に付着している。
【０１８６】
１つの実施形態では、脂肪酸分子は、配列番号１および配列番号２のうちのいずれか１つ、またはそのバリアントの９位のアミノ酸残基に付着しており、ここで、９位のＤが、配列番号１および配列番号２のうちのいずれか１つ中のＫまたはＯｒｎと置換されている。
【０１８７】
１つの実施形態では、脂肪酸分子は、
【化１７】
2020521784.tif 000022
またはその機能的バリアント
から選択されるペプチドの９位のＫのε−アミノ基に付着している。
【０１８８】
１つの実施形態では、脂肪酸分子は、
【化１８】
2020521784.tif 000023
またはその機能的バリアント
から選択されるペプチドの９位のＯｒｎのδ−アミノ基に付着している。
【０１８９】
１つの実施形態では、脂肪酸分子は、配列番号１および配列番号２のうちのいずれか１つ、またはそのバリアントの２１位のアミノ酸残基に付着しており、ここで、２１位のＤが、配列番号１および配列番号２のうちのいずれか１つ中のＫまたはＯｒｎと置換されている。
【０１９０】
１つの実施形態では、脂肪酸分子は、
【化１９】
2020521784.tif 000024
またはその機能的バリアント
から選択されるペプチドの２１位のＫのε−アミノ基に付着している。
【０１９１】
１つの実施形態では、脂肪酸分子は、
【化２０】
2020521784.tif 000025
またはその機能的バリアント
から選択されるペプチドの２１位のＯｒｎのδ−アミノ基に付着している。
【０１９２】
１つの実施形態では、脂肪酸分子は、配列番号２、またはそのバリアントの５位のアミノ酸残基に付着しており、ここで、５位のＴが、配列番号２中のＫまたはＯｒｎと置換されている。
【０１９３】
１つの実施形態では、脂肪酸分子は、配列
【化２１】
2020521784.tif 000026
またはその機能的バリアントのペプチドの５位のＫのε−アミノ基に付着している。
【０１９４】
１つの実施形態では、脂肪酸分子は、配列
【化２２】
2020521784.tif 000027
またはその機能的バリアントのペプチドの５位のＯｒｎのδ−アミノ基に付着している。
【０１９５】
１つの実施形態では、脂肪酸分子は、配列番号２、またはそのバリアントの１５位のアミノ酸残基に付着しており、ここで、１５位のＤが、配列番号２中のＫまたはＯｒｎと置換されている。
【０１９６】
１つの実施形態では、脂肪酸分子は、配列
【化２３】
2020521784.tif 000028
またはその機能的バリアントのペプチドの１５位のＫのε−アミノ基に付着している。
【０１９７】
１つの実施形態では、脂肪酸分子は、配列
【化２４】
2020521784.tif 000029
またはその機能的バリアントのペプチドの１５位のＯｒｎのδ−アミノ基に付着している。
【０１９８】
１つの実施形態では、脂肪酸分子は、配列番号２、またはそのバリアントの２０位のアミノ酸残基に置換しており、ここで、２０位のＱが、配列番号２中のＫまたはＯｒｎと置換されている。
【０１９９】
１つの実施形態では、脂肪酸分子は、配列
【化２５】
2020521784.tif 000030
またはその機能的バリアント
のペプチドの２０位のＫのε−アミノ基に付着している。
【０２００】
１つの実施形態では、脂肪酸分子は、配列
【化２６】
2020521784.tif 000031
またはその機能的バリアントのペプチドの２０位のＯｒｎのδ−アミノ基に付着している。
【０２０１】
１つの実施形態では、前述のペプチドは、配列番号１および配列番号２のうちのいずれか１つ、またはその機能的バリアントの１つの（単一の）アミノ酸残基での１つの（ａ）（１つの（ｏｎｅ））脂肪酸分子の付着によって修飾されている。
【０２０２】
１つの実施形態では、ＧＩＰペプチド類似体のペプチドは、１つ以下のＫアミノ酸残基を含み、ここで、Ｋアミノ酸残基は、Ｋのε−アミノ基への脂肪酸分子の付着によって修飾されている。
【０２０３】
１つの実施形態では、本開示の脂肪酸分子は直鎖脂肪酸である。
【０２０４】
１つの実施形態では、本開示の脂肪酸分子は分枝鎖脂肪酸である。
【０２０５】
１つの実施形態では、本開示の脂肪酸分子は、１つの脂肪酸を含むモノアシル脂肪酸分子である。
【０２０６】
１つの実施形態では、本開示の脂肪酸分子はジアシル脂肪酸分子である。
【０２０７】
１つの実施形態では、本開示の脂肪酸分子は２つの脂肪酸を含むジアシル脂肪酸分子である。
【０２０８】
１つの実施形態では、本開示の脂肪酸分子は、２つのカルボキシル官能基を含むジアシル脂肪酸分子である。
【０２０９】
１つの実施形態では、本開示の脂肪酸分子は、式ＣＨ３（ＣＨ２）ｎＣＯ−（式中、ｎは４〜２４の整数である）のアシル基を含む。
【０２１０】
１つの実施形態では、前述の脂肪酸分子は、ＣＨ３（ＣＨ２）６ＣＯ−、ＣＨ３（ＣＨ２）８ＣＯ−、ＣＨ３（ＣＨ２）１０ＣＯ−、ＣＨ３（ＣＨ２）１２ＣＯ−、ＣＨ３（ＣＨ２）１４ＣＯ−、ＣＨ３（ＣＨ２）１６ＣＯ−、ＣＨ３（ＣＨ２）１８ＣＯ−、ＣＨ３（ＣＨ２）２０ＣＯ−、およびＣＨ３（ＣＨ２）２２ＣＯ−からなる群から選択されるアシル基を含む。
【０２１１】
１つの実施形態では、前述の脂肪酸分子は、ＣＨ３（ＣＨ２）１０ＣＯ−（ラウリル、Ｃ１２）、ＣＨ３（ＣＨ２）１２ＣＯ−（ミリストイル、Ｃ１４）、ＣＨ３（ＣＨ２）１４ＣＯ−（パルミトイル、Ｃ１６）、およびＣＨ３（ＣＨ２）１６ＣＯ−（ステアリル、Ｃ１８）からなる群から選択されるアシル基を含む。
【０２１２】
１つの実施形態では、前述の脂肪酸分子は、ＣＨ３（ＣＨ２）１０ＣＯ−（ラウリル、Ｃ１２）、ＣＨ３（ＣＨ２）１２ＣＯ−（ミリストイル、Ｃ１４）、ＣＨ３（ＣＨ２）１４ＣＯ−（パルミトイル、Ｃ１６）、およびＣＨ３（ＣＨ２）１６ＣＯ−（ステアリル、Ｃ１８）からなる群から選択されるモノアシル脂肪酸である。
【０２１３】
１つの実施形態では、前述の脂肪酸分子は、ＣＨ３（ＣＨ２）１０ＣＯ−（ラウリル、Ｃ１２）、ＣＨ３（ＣＨ２）１２ＣＯ−（ミリストイル、Ｃ１４）、ＣＨ３（ＣＨ２）１４ＣＯ−（パルミトイル、Ｃ１６）、およびＣＨ３（ＣＨ２）１６ＣＯ−（ステアリル、Ｃ１８）からなる群から各々選択される２つの脂肪酸を含む。
【０２１４】
１つの実施形態では、前述の脂肪酸分子は、式ＣＯＯＨ（ＣＨ２）ｎＣＯ−（ジカルボン酸）（式中、ｎは、４〜２４の整数である）のアシル基を含む。
【０２１５】
１つの実施形態では、前述の脂肪酸分子は、ＣＯＯＨ（ＣＨ２）１４ＣＯ−、ＣＯＯＨ（ＣＨ２）１６ＣＯ−、ＣＯＯＨ（ＣＨ２）１８ＣＯ−、およびＣＯＯＨ（ＣＨ２）２０ＣＯ−からなる群から選択されるアシル基を含む。
【０２１６】
１つの実施形態では、前述の脂肪酸分子は、Ｃ１２、Ｃ１４、Ｃ１６、およびＣ１８から選択される。
【０２１７】
１つの実施形態では、前述の脂肪酸分子は、Ｃ１４二価酸、Ｃ１６二価酸、およびＣ１８二価酸から選択される。
【０２１８】
１つの実施形態では、前述の脂肪酸分子はパルミトイルである。
【０２１９】
１つの実施形態では、前述の脂肪酸分子は１，１６−ヘキサデカン二酸／ヘキサデカン二酸である。
【０２２０】
１つの実施形態では、前述の脂肪酸分子はステアリルである。
【０２２１】
１つの実施形態では、前述の脂肪酸分子は１，１８−オクタデカン二酸／オクタデカン二酸である。
【０２２２】
脂肪酸分子のカルボキシル基がアミノ酸残基のアミノ基とアミド結合を形成するような方法で、脂肪酸分子をアミノ酸残基に付着することができる。
【０２２３】
本明細書中のペプチドへの脂肪酸分子の付着は、直接または間接的に（すなわち、リンカーまたはスペーサーを介して）生じ得る。
【０２２４】
１つの実施形態では、本開示の脂肪酸分子は、アミノ酸残基に直接付着している。
【０２２５】
１つの実施形態では、本開示の脂肪酸分子は、アミノ酸残基のα−アミノ基に直接付着しており、ここで、前述のアミノ酸残基はＮ末端アミノ酸残基である。
【０２２６】
１つの実施形態では、本開示の脂肪酸分子は、Ｌｙｓ残基のε−アミノ基に直接付着している。
【０２２７】
１つの実施形態では、本開示の脂肪酸分子は、Ｏｒｎ残基のδ−アミノ基に直接付着している。
【０２２８】
１つの実施形態では、本開示の脂肪酸分子は、リンカーまたはスペーサーを介してアミノ酸残基に付着している。１つの実施形態では、本開示の脂肪酸分子は、リンカーまたはスペーサーを介してアミノ酸残基のα−アミノ基に付着しており、ここで、前述のアミノ酸残基はＮ末端アミノ酸残基である。
【０２２９】
１つの実施形態では、本開示の脂肪酸分子は、リンカーまたはスペーサーを介してＬｙｓ残基のε−アミノ基に付着している。
【０２３０】
１つの実施形態では、本開示の脂肪酸分子は、リンカーまたはスペーサーを介してＯｒｎ残基のδ−アミノ基に付着している。
【０２３１】
１つの実施形態では、スペーサーのカルボキシル基が脂肪酸分子のアミノ基とアミド結合を形成するような方法で、脂肪酸分子を、スペーサー（またはリンカー）を用いてアミノ酸残基に付着することができる。
【０２３２】
１つの実施形態では、スペーサーは、α，ω−アミノ酸である。適切なスペーサーの例は、コハク酸、Ｌｙｓ、Ｇｌｕ、もしくはＡｓｐ、またはジペプチド（Ｇｌｙ−Ｌｙｓなど）である。スペーサーがコハク酸であるとき、その一方のカルボキシル基はアミノ酸残基のアミノ基とアミド結合を形成することができ、その他方のカルボキシル基は脂肪酸分子のアミノ基とアミド結合を形成することができる。スペーサーがＬｙｓ、Ｇｌｕ、またはＡｓｐであるとき、そのカルボキシル基はアミノ酸残基のアミノ基とアミド結合を形成することができ、そのアミノ基は脂肪酸分子のカルボキシル基とアミド結合を形成することができる。スペーサーとしてＬｙｓを使用するとき、さらなるスペーサーを、場合によっては、Ｌｙｓのε−アミノ基と脂肪酸分子との間に挿入することができる。１つの実施形態では、かかるさらなるスペーサーは、Ｌｙｓのε−アミノ基および脂肪酸分子中に存在するアミノ基とアミド結合を形成するコハク酸である。他のスペーサーは、Ｎε−（γ−Ｌ−グルタミル）、Ｎε−（β−Ｌ−アスパラギル）、Ｎε−グリシル、およびＮε−（α−（γ−アミノブタノイル））である。
【０２３３】
１つの実施形態では、スペーサーは親水性リンカーである。１つの実施形態では、スペーサーは非天然アミノ酸親水性リンカーである。
【０２３４】
１つの実施形態では、スペーサーは、γ−アミノブタノイル（γ−アミノ酪酸）、γ−グルタミル（γ−グルタミン酸）、β−アスパラギル、β−アラニル、およびグリシルからなる群から選択される。１つの実施形態では、スペーサーは、γ−アミノブタノイル（γ−アミノ酪酸）、γ−グルタミル（γ−グルタミン酸）、β−アスパラギル、β−アラニル、およびグリシルのうちの１つまたは複数を含む。
【０２３５】
１つの実施形態では、スペーサーは、個別のスペーサー部分の反復である。１つの実施形態では、スペーサーは、同一のスペーサー部分の反復である。１つの実施形態では、スペーサーは、異なるスペーサー部分の反復である。
【０２３６】
１つの実施形態では、スペーサーは、γ−グルタミン酸−８−アミノ−３，６−ジオキサオクタン酸（γ−Ｇｌｕ）−ＡＥＥＡｃ）、またはその反復である。
【０２３７】
１つの実施形態では、スペーサーは、γ−グルタミン酸−８−アミノ−３，６−ジオキサオクタン酸（γ−Ｇｌｕ）−ＡＥＥＡｃｎ）の１つまたは複数の反復を含む。
【０２３８】
１つの実施形態では、スペーサーは、［γ−グルタミン酸−８−アミノ−３，６−ジオキサオクタン酸］ｎ（γ−Ｇｌｕ）−ＡＥＥＡｃｎ）（式中、ｎは１と５０との間の整数である）である。
【０２３９】
１つの実施形態では、スペーサーは、［γ−グルタミン酸−８−アミノ−３，６−ジオキサオクタン酸］ｎ（γ−Ｇｌｕ）−ＡＥＥＡｃｎ）（式中、ｎは１と５０との間の整数（１〜２、２〜３、３〜４、４〜５、５〜６、６〜７、７〜８、８〜９、９〜１０、１０〜１１、１１〜１２、１２〜１３、１３〜１４、１４〜１５、１５〜２０、２０〜２５、２５〜３０、３０〜３５、３５〜４０、４０〜４５、４５〜５０の間の整数など）である）である。
【０２４０】
１つの実施形態では、スペーサーは、［γ−グルタミン酸−８−アミノ−３，６−ジオキサオクタン酸］ｎ（γ−Ｇｌｕ）−ＡＥＥＡｃｎ）（式中、ｎは、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、および５０からなる群から選択される整数である）である。１つの実施形態では、スペーサーは、Ｃｙｓを除くアミノ酸残基である。１つの実施形態では、スペーサーは４−Ａｂｕである。１つの実施形態では、スペーサーは、γ−アミノ酪酸（ｙ−ａｍｉｎｏｂｕｔｕｒｉｃ  ａｃｉｄ）である。
【０２４１】
別の実施形態では、スペーサーは、ジペプチド（Ｃ末端アミノ酸残基がＬｙｓ、Ｈｉｓ、またはＴｒｐ、好ましくはＬｙｓであり、Ｎ末端アミノ酸残基が、Ａｌａ、Ａｒｇ、Ａｓｐ、Ａｓｎ、Ｇｌｙ、Ｇｌｕ、Ｇｌｎ、Ｉｌｅ、Ｌｅｕ、Ｖａｌ、Ｐｈｅ、およびＰｒｏからなる群から選択されるジペプチドなど）である。１つの実施形態ではジペプチドスペーサーは、Ｇｌｙ−Ｌｙｓである。
【０２４２】
１つの実施形態では、スペーサーは、γ−アミノブタノイル（γ−アミノ酪酸）、γ−グルタミル（γ−グルタミン酸）、β−アスパラギル、β−アラニル、およびグリシルからなる群から選択される１つまたは複数の部分を含む。１つの実施形態では、スペーサーは、γ−アミノブタノイル（γ−アミノ酪酸）、γ−グルタミル（γ−グルタミン酸）、β−アスパラギル、β−アラニル、グリシル、γ−グルタミン酸−８−アミノ−３，６−ジオキサオクタン酸（γ−Ｇｌｕ−ＡＥＥＡｃｎ、式中、ｎは、１と５０との間の整数である）、Ｃｙｓを除くアミノ酸残基、４−Ａｂｕ、γ−アミノ酪酸（ｙ−ａｍｉｎｏｂｕｔｕｒｉｃ  ａｃｉｄ）、およびジペプチドのうちの１つまたは複数を含む。
【０２４３】
別の実施形態では、スペーサーは、１〜７つのメチレン基、好ましくは２つのメチレン基を有する非分枝アルカンα，ω−ジカルボン酸基であり、スペーサーは、親ペプチドのアミノ基と脂肪酸分子のアミノ基との間に架橋を形成する。
【０２４４】
脂肪酸を有するＧＩＰ（５−３０）ペプチド
１つの実施形態では、本明細書中に定義のＧＩＰ類似体は、以下：
【化２７】
2020521784.tif 000032
2020521784.tif 000033
またはその機能的バリアント
からなる群から選択され、
ここで、前述の脂肪酸が、直接付着しているか、本明細書中に定義のリンカー／スペーサーを介して付着している。
【０２４５】
Ｃ１２は脂肪酸ＣＨ３（ＣＨ２）１０ＣＯ−（ラウリル）であり；Ｃ１４は脂肪酸ＣＨ３（ＣＨ２）１２ＣＯ−（ミリストイル）であり；Ｃ１６は脂肪酸ＣＨ３（ＣＨ２）１４ＣＯ−（パルミトイル（ｐａｌｍｉｔｏｙ））であり、Ｃ１８は脂肪酸ＣＨ３（ＣＨ２）１６ＣＯ−（ステアリル）であるということになる。接尾辞「−二価酸」は、脂肪酸分子がジアシル脂肪酸分子であることを意味する。かかる接尾辞がない場合は、モノアシル脂肪酸分子を指す。
【０２４６】
１つの実施形態では、前述のペプチドのＣ末端がアミド化（−ＮＨ２）されている。
【０２４７】
１つの実施形態では、ＧＩＰ類似体は、以下：
ｈＧＩＰ（５−３０）ＮＨ２［Ｈ１８Ｋ］−Ｃ１６／Ｋ１８＋γ−グルタミン酸、
ｈＧＩＰ（５−３０）ＮＨ２［Ｈ１８Ｋ］−Ｃ１６／Ｋ１８＋γ−アミノ酪酸（ｙ−ａｍｉｎｏｂｕｔｕｒｉｃ  ａｃｉｄ）、
ｈＧＩＰ（５−３０）ＮＨ２［Ｈ１８Ｋ］−Ｃ１６／Ｋ１８＋β−アラニン、および
ｈＧＩＰ（５−３０）ＮＨ２［Ｈ１８Ｋ］−Ｃ１６／Ｋ１８＋γ−グルタミン酸＋８−アミノ−３，６−ジオキサオクタン酸の１つまたは複数の反復からなる群から選択される。
【０２４８】
１つの実施形態では、ＧＩＰ類似体は、以下：
ｈＧＩＰ（５−３０）ＮＨ２［Ｈ１８Ｋ］−Ｃ１６−二価酸／Ｋ１８＋γ−グルタミン酸、
ｈＧＩＰ（５−３０）ＮＨ２［Ｈ１８Ｋ］−Ｃ１６−二価酸／Ｋ１８＋γ−アミノ酪酸（ｙ−ａｍｉｎｏｂｕｔｕｒｉｃ  ａｃｉｄ）、
ｈＧＩＰ（５−３０）ＮＨ２［Ｈ１８Ｋ］−Ｃ１６−二価酸／Ｋ１８＋β−アラニン、および
ｈＧＩＰ（５−３０）ＮＨ２［Ｈ１８Ｋ］−Ｃ１６−二価酸／Ｋ１８＋γ−グルタミン酸＋８−アミノ−３，６−ジオキサオクタン酸の１つまたは複数の反復からなる群から選択される。
【０２４９】
脂肪酸を有するＧＩＰ（３−３０）ペプチド
１つの実施形態では、本明細書中に定義のＧＩＰ類似体は、以下：
【化２８】
2020521784.tif 000034
またはその機能的バリアント
からなる群から選択され、
ここで、前述の脂肪酸が、直接付着しているか、本明細書中に定義のリンカー／スペーサーを介して付着している。
【０２５０】
１つの実施形態では、前述のペプチドのＣ末端がアミド化（−ＮＨ２）されている。
【０２５１】
１つの実施形態では、ＧＩＰ類似体は、以下：
ＡＴ１６４［ｈＧＩＰ（３−３０）ＮＨ２［Ｈ１８Ｋ］−Ｃ１６／Ｋ１８＋γ−グルタミン酸］、
ＡＴ１６５［ｈＧＩＰ（３−３０）ＮＨ２［Ｈ１８Ｋ］−Ｃ１６／Ｋ１８＋γ−アミノ酪酸（ｙ−ａｍｉｎｏｂｕｔｕｒｉｃ  ａｃｉｄ）］、
ＡＴ１６６［ｈＧＩＰ（３−３０）ＮＨ２［Ｈ１８Ｋ］−Ｃ１６／Ｋ１８＋β−アラニン］、および
ＡＴ１６７［ｈＧＩＰ（３−３０）ＮＨ２［Ｈ１８Ｋ］−Ｃ１６／Ｋ１８＋γ−グルタミン酸＋８−アミノ−３，６−ジオキサオクタン酸の１つまたは複数の反復］からなる群から選択される。
【０２５２】
１つの実施形態では、ＧＩＰ類似体は、以下：
［ｈＧＩＰ（３−３０）ＮＨ２［Ｈ１８Ｋ］−Ｃ１６−二価酸／Ｋ１８＋γ−グルタミン酸］、
［ｈＧＩＰ（３−３０）ＮＨ２［Ｈ１８Ｋ］−Ｃ１６−二価酸／Ｋ１８＋γ−アミノ酪酸（ｙ−ａｍｉｎｏｂｕｔｕｒｉｃ  ａｃｉｄ）］、
［ｈＧＩＰ（３−３０）ＮＨ２［Ｈ１８Ｋ］−Ｃ１６−二価酸／Ｋ１８＋β−アラニン］、および
［ｈＧＩＰ（３−３０）ＮＨ２［Ｈ１８Ｋ］−Ｃ１６−二価酸／Ｋ１８＋γ−グルタミン酸＋８−アミノ−３，６−ジオキサオクタン酸の１つまたは複数の反復からなる群から選択される。
【０２５３】
化合物
さらなる態様は、本明細書中に定義のペプチドを含むか、これからなる化合物を提供することである。１つの実施形態では、前述の化合物は、ペプチド単量体（すなわち、１コピーのペプチドを含む）として製剤化されるのに対して、別の実施形態では、前述の化合物は、ペプチド多量体として製剤化される。
【０２５４】
多量体化合物
１つの実施形態では、本開示のペプチドは、多量体として製剤化される。多量体は、複数のペプチド単量体を含むか、これらからなるタンパク質である。多量体は、通常は非共有結合で相互に保持された複数の分子の凝集体である。この定義は、多量体を、共有結合で相互に保持された一連の単量体であるポリマーと区別している。
【０２５５】
本開示のペプチド配列は、１つの実施形態では、化学結合によるか、リンカー基を介して本開示の別の（同一または同一でない）ペプチド配列に接続している。いくつかの実施形態では、本開示のペプチドは、単量体のオリゴマーまたは多量体として製剤化され、ここで、各単量体は本開示にしたがって定義されたペプチド配列である。
【０２５６】
したがって、本開示によれば、多量体化合物は、１つの実施形態では、２つ以上の本開示のペプチド配列を含むポリマーであり、前述のペプチド配列は同一であるか同一ではなく、ここで、２つ以上のペプチド配列のうちの少なくとも１つが本開示のペプチドである。好ましくは、両方のペプチド配列が本開示のペプチドである。
【０２５７】
１つの実施形態では、多量体化合物は、２つの本開示のペプチドを含む二量体であり、前述の２つのペプチドは相互に同一であるか異なる。
【０２５８】
別の実施形態では、多量体化合物は、３つの本開示のペプチドを含む三量体であり、前述のペプチドは相互に同一であるか異なる。
【０２５９】
別の実施形態では、多量体化合物は、４つの本開示のペプチドを含む四量体であり、前述のペプチドは相互に同一であるか異なる。
【０２６０】
１つの実施形態では、多量体化合物は、デンドリマー（四量体デンドリマーまたは八量体デンドリマーなど）である。デンドリマーは、繰り返し分岐し、ほぼ球状の大分子であり、典型的にはコアの周囲が対称であり、しばしば、球状三次元形態を取る。
【０２６１】
本開示のデンドリマーは、４個のペプチド、８個のペプチド、１６個のペプチド、または３２個のペプチドを含み得る。１つの特定の実施形態では、前述のデンドリマーは、４個のペプチド（すなわち、四量体デンドリマー）または８個のペプチド（八量体デンドリマー）を含む。
【０２６２】
いくつかの特定の実施形態では、多量体化合物は、２つの同一の本発明のアミノ酸配列を含むか（二量体）、前述の化合物は、本開示のアミノ酸配列の４つの同一のコピーを含む（四量体デンドリマー）。
【０２６３】
本開示の多量体は、１つの実施形態では、ペプチド結合またはリンカー基を介した２つ以上のペプチド二量体の連結によって作製される。１つの実施形態では、多量体は、リジン残基などのリジン骨格に連結しているか（各々のペプチド鎖が単一のリジン残基に連結している）、ポリマー担体（例えば、タンパク質担体）にカップリングしている。前述のリンカー基は、１つの実施形態では、複数のリジン残基を含む（３個、７個、１５個、またはそれを超えるリジン残基を含むリジンベースのデンドリマー構造などで認められる複数のリジン残基を有するコア部分など）。しかし、当業者に公知のペプチド単量体の任意の他の連結を想定することができる。
【０２６４】
連結は、１つの実施形態では、ペプチド単量体のＮ末端および／またはＣ末端で生じる。
【０２６５】
１つの実施形態では、Ａ）１つまたは複数の、式１（ｈＧＩＰ５−３０、配列番号１）：
【化２９】
2020521784.tif 000035
ここで、前述のペプチドが、Ｎ末端にジペプチドＥ−Ｇを任意選択的にさらに含み（ｈＧＩＰ３−３０、配列番号２）、
または配列番号１および配列番号２のうちのいずれか１つと少なくとも７５％の配列同一性を有する機能的バリアントの
グルコース依存性インスリン分泌刺激ペプチド（ＧＩＰ）類似体であって、
ここで、前述のペプチドが、配列番号１および配列番号２のうちのいずれか１つ、または配列番号１および配列番号２のうちのいずれか１つと少なくとも７５％の配列同一性を有する機能的バリアントの１つまたは複数のアミノ酸残基での少なくとも１つの脂肪酸分子の付着によって修飾されており、
但し、前述の少なくとも１つの脂肪酸分子が、配列番号１および配列番号２のうちのいずれか１つ、または配列番号１および配列番号２のうちのいずれか１つと少なくとも７５％の配列同一性を有する機能的バリアントの３０位のアミノ酸残基に付着していないことを条件とする、グルコース依存性インスリン分泌刺激ペプチド（ＧＩＰ）類似体、および
Ｂ）任意選択的な１つまたは複数のリンカー基
からなる多量体化合物を提供する。
【０２６６】
アンタゴニスト特性および親和性の判定
ペプチドがＧＩＰＲのアンタゴニストであるかどうかを判定するために、例えば、ペプチドのＩＣ５０を決定することによって、当該分野で公知の方法を使用することができる。用量−応答曲線を構築することおよびアゴニスト活性の逆行に及ぼす異なる濃度のペプチドの影響を試験することによってこれを行うことができる。アゴニストは、ＧＩＰ１−４２（例えば、ｈＧＩＰ−１−４２またはｈＧＩＰ１−３０）であり得る。ＧＩＰＲは、ｈＧＩＰＲ、ｒＧＩＰＲ、ｍＧＩＰＲ、イヌＧＩＰＲ、ブタＧＩＰＲ、またはアカゲザルＧＩＰＲであり得る。所与のアンタゴニストについてのＩＣ５０値を、アゴニストの生物学的最大応答の半分を阻害するために必要な濃度を決定することによって計算することができる。ペプチドがアンタゴニストであるかどうかを判定する方法は、実施例４に記載されているが、当該分野で公知の他の方法も使用することができる。例えば、漸増濃度のＧＩＰ由来ペプチドを使用したｈＧＩＰ１−４２ｃＡＭＰ用量−応答曲線においてＳｃｈｉｌｄプロット解析を行うことができる。このような方法で、アンタゴニスト活性のタイプを判定することもできる。
【０２６７】
ＧＩＰＲに対するペプチドの親和性（すなわち、ペプチドがどれくらい効率的に所与のＧＩＰ１−４２（例えば、ｈＧＩＰ１−４２）を解離することができるのか）を測定するために、異種競合結合実験を行うことができる。これらの競合結合実験を、当該分野で公知の方法によって行うことができる。例えば、ＧＩＰ１−４２を、例えば１２５Ｉで放射性標識することができる。他の適切な同位体が当業者に公知である。
【０２６８】
処置方法
医薬品として使用するための、本明細書中に定義のペプチドまたは前述のペプチドを含む組成物を提供することも１つの態様である。
【０２６９】
１つの実施形態では、医薬品として使用するための、式１（ｈＧＩＰ５−３０、配列番号１）：
【化３０】
2020521784.tif 000036
ここで、前述のペプチドが、Ｎ末端にジペプチドＥ−Ｇを任意選択的にさらに含み（ｈＧＩＰ３−３０、配列番号２）、
または配列番号１および配列番号２のうちのいずれか１つと少なくとも７５％の配列同一性を有する機能的バリアント
のグルコース依存性インスリン分泌刺激ペプチド（ＧＩＰ）類似体であって、
ここで、前述のペプチドが、配列番号１および配列番号２のうちのいずれか１つ、または配列番号１および配列番号２のうちのいずれか１つと少なくとも７５％の配列同一性を有する機能的バリアントの１つまたは複数のアミノ酸残基での少なくとも１つの脂肪酸分子の付着によって修飾されており、
但し、前述の少なくとも１つの脂肪酸分子が、配列番号１および配列番号２のうちのいずれか１つ、または配列番号１および配列番号２のうちのいずれか１つと少なくとも７５％の配列同一性を有する機能的バリアントの３０位のアミノ酸残基に付着していないことを条件とする、グルコース依存性インスリン分泌刺激ペプチド（ＧＩＰ）類似体を提供する。
【０２７０】
別の実施形態では、ｉ）ＧＩＰ誘導性グルカゴン分泌、ｉｉ）ＧＩＰ誘導性インスリン分泌、ｉｉｉ）ＧＩＰ誘導性ソマトスタチン分泌、ｉｖ）ＧＩＰ誘導性グルコース摂取、ｖ）ＧＩＰ誘導性の脂肪酸合成および／または脂肪酸取り込み、ｖｉ）高いか増加したＧＩＰＲの発現または活性、ｖｉｉ）食後ＧＩＰ放出、ｖｉｉｉ）遊離脂肪酸および／またはトリグリセリドの血清レベル、ｉｘ）ＧＩＰ誘導性の骨吸収の低下のうちの１つまたは複数を抑制または低下させる方法で用いる、式１（ｈＧＩＰ５−３０、配列番号１）：
【化３１】
2020521784.tif 000037
ここで、前述のペプチドが、Ｎ末端にジペプチドＥ−Ｇを任意選択的にさらに含み（ｈＧＩＰ３−３０、配列番号２）、
または配列番号１および配列番号２のうちのいずれか１つと少なくとも７５％の配列同一性を有する機能的バリアント
のグルコース依存性インスリン分泌刺激ペプチド（ＧＩＰ）類似体であって、
ここで、前述のペプチドが、配列番号１および配列番号２のうちのいずれか１つ、または配列番号１および配列番号２のうちのいずれか１つと少なくとも７５％の配列同一性を有する機能的バリアントの１つまたは複数のアミノ酸残基での少なくとも１つの脂肪酸分子の付着によって修飾されており、
但し、前述の少なくとも１つの脂肪酸分子が、配列番号１および配列番号２のうちのいずれか１つ、または配列番号１および配列番号２のうちのいずれか１つと少なくとも７５％の配列同一性を有する機能的バリアントの３０位のアミノ酸残基に付着していないことを条件とする、グルコース依存性インスリン分泌刺激ペプチド（ＧＩＰ）類似体を提供する。
【０２７１】
別の実施形態では、代謝症候群、肥満、過体重、肥満関連障害、前糖尿病（空腹時血糖値異常）、真性糖尿病（Ｉ型および２型）、糖尿病関連障害、インスリン抵抗性、空腹時血糖値の上昇（高血糖）、空腹時血清トリグリセリド（ＶＬＤＬトリグリセリド）レベルの上昇、高密度リポタンパク質（ＨＤＬ）レベルの低下、脂肪酸代謝障害、心血管疾患、血圧上昇、およびアテローム性動脈硬化症からなる群から選択される容態を処置する方法で用いる、式１（ｈＧＩＰ５−３０、配列番号１）：
【化３２】
2020521784.tif 000038
ここで、前述のペプチドが、Ｎ末端にジペプチドＥ−Ｇを任意選択的にさらに含み（ｈＧＩＰ３−３０、配列番号２）、
または配列番号１および配列番号２のうちのいずれか１つと少なくとも７５％の配列同一性を有する機能的バリアント
のグルコース依存性インスリン分泌刺激ペプチド（ＧＩＰ）類似体であって、
ここで、前述のペプチドが、配列番号１および配列番号２のうちのいずれか１つ、または配列番号１および配列番号２のうちのいずれか１つと少なくとも７５％の配列同一性を有する機能的バリアントの１つまたは複数のアミノ酸残基での少なくとも１つの脂肪酸分子の付着によって修飾されており、
但し、前述の少なくとも１つの脂肪酸分子が、配列番号１および配列番号２のうちのいずれか１つ、または配列番号１および配列番号２のうちのいずれか１つと少なくとも７５％の配列同一性を有する機能的バリアントの３０位のアミノ酸残基に付着していないことを条件とする、グルコース依存性インスリン分泌刺激ペプチド（ＧＩＰ）類似体を提供する。
【０２７２】
１つの特定の実施形態では、肥満を処置する方法で用いる本明細書中に定義のペプチドを提供する。
【０２７３】
１つの特定の実施形態では、真性糖尿病（真性糖尿病Ｉ型およびＩＩ型が含まれる）を処置する方法で用いる本明細書中に定義のペプチドを提供する。
【０２７４】
１つの特定の実施形態では、インスリン抵抗性を処置する方法で用いる本明細書中に定義のペプチドを提供する。
【０２７５】
別の実施形態では、体重減少を誘導する方法で用いる、式１（ｈＧＩＰ５−３０、配列番号１）：
【化３３】
2020521784.tif 000039
ここで、前述のペプチドが、Ｎ末端にジペプチドＥ−Ｇを任意選択的にさらに含み（ｈＧＩＰ３−３０、配列番号２）、
または配列番号１および配列番号２のうちのいずれか１つと少なくとも７５％の配列同一性を有する機能的バリアント
のグルコース依存性インスリン分泌刺激ペプチド（ＧＩＰ）類似体であって、
ここで、前述のペプチドが、配列番号１および配列番号２のうちのいずれか１つ、または配列番号１および配列番号２のうちのいずれか１つと少なくとも７５％の配列同一性を有する機能的バリアントの１つまたは複数のアミノ酸残基での少なくとも１つの脂肪酸分子の付着によって修飾されており、
但し、前述の少なくとも１つの脂肪酸分子が、配列番号１および配列番号２のうちのいずれか１つ、または配列番号１および配列番号２のうちのいずれか１つと少なくとも７５％の配列同一性を有する機能的バリアントの３０位のアミノ酸残基に付着していないことを条件とする、グルコース依存性インスリン分泌刺激ペプチド（ＧＩＰ）類似体を提供する。
【０２７６】
さらなる態様は、癌を処置するための方法で用いる本明細書中に定義のペプチドを提供することである。
【０２７７】
１つの実施形態では、癌は、結腸癌、神経内分泌癌、および副腎腺腫からなる群から選択される。
【０２７８】
１つのさらなる態様は、骨密度障害（または骨量障害）を処置する方法で用いる本明細書中に定義のペプチドを提供することである。
【０２７９】
１つの実施形態では、骨細胞の活性を阻害する方法で用いる本明細書中に定義のペプチドを提供する。１つの実施形態では、ＧＩＰ誘導性の骨吸収の食後低下を阻害（または拮抗）する方法で用いる本明細書中に定義のペプチドを提供する。１つの実施形態では、骨の癌を処置する方法で用いる本明細書中に定義のペプチドを提供する。
【０２８０】
１つの実施形態では、骨密度（または骨量）障害は、骨粗鬆症、低骨密度および／または骨量の低下を特徴とする障害、高骨密度および／または骨量の増加ならびに骨粗鬆症を特徴とする障害からなる群から選択される。
【０２８１】
１つのさらなる態様は、障害の態様を特徴づけるか試験する方法、および／または障害に関連するヒトの生理学の態様を特徴づけるか試験する方法で用いる本明細書中に定義のＧＩＰペプチド類似体であって、ここで、前述の障害が、１つの実施形態では、代謝障害または代謝症候群（肥満、真性糖尿病、インスリン抵抗性、または脂肪酸代謝障害など）から選択される、ＧＩＰペプチド類似体を提供することである。他の態様では、本発明は、癌（結腸癌または副腎腺腫など）を処置する方法に関する。他の態様では、本発明は、高骨密度および／もしくは骨量の増加または骨粗鬆症を特徴とする骨密度障害を処置する方法に関する。他の態様では、本発明は、アテローム性動脈硬化症を処置する方法に関する。
【０２８２】
別の実施形態では、
−代謝症候群、肥満、過体重、肥満関連障害、前糖尿病（空腹時血糖値異常）、真性糖尿病（Ｉ型および２型）、糖尿病関連障害、インスリン抵抗性、空腹時血糖値の上昇（高血糖）、空腹時血清トリグリセリド（ＶＬＤＬトリグリセリド）レベルの上昇、高密度リポタンパク質（ＨＤＬ）レベルの低下、脂肪酸代謝障害、心血管疾患、血圧上昇、およびアテローム性動脈硬化症からなる群から選択される容態を処置するため、または
−体重減少を誘導ため、または
−癌（結腸癌、神経内分泌癌、および副腎腺腫が含まれるが、これらに限定されない）を処置するため、または
−骨密度障害（骨粗鬆症、低骨密度および／または骨量の低下を特徴とする障害、高骨密度および／もしくは骨量の増加または骨粗鬆症を特徴とする障害が含まれるが、これらに限定されない）を処置するための医薬品の製造における、式１（ｈＧＩＰ５−３０、配列番号１）：
【化３４】
2020521784.tif 000040
ここで、前述のペプチドが、Ｎ末端にジペプチドＥ−Ｇを任意選択的にさらに含み（ｈＧＩＰ３−３０、配列番号２）、
または配列番号１および配列番号２のうちのいずれか１つと少なくとも７５％の配列同一性を有する機能的バリアント
のグルコース依存性インスリン分泌刺激ペプチド（ＧＩＰ）類似体であって、
ここで、前述のペプチドが、配列番号１および配列番号２のうちのいずれか１つ、または配列番号１および配列番号２のうちのいずれか１つと少なくとも７５％の配列同一性を有する機能的バリアントの１つまたは複数のアミノ酸残基での少なくとも１つの脂肪酸分子の付着によって修飾されており、
但し、前述の少なくとも１つの脂肪酸分子が、配列番号１および配列番号２のうちのいずれか１つ、または配列番号１および配列番号２のうちのいずれか１つと少なくとも７５％の配列同一性を有する機能的バリアントの３０位のアミノ酸残基に付着していないことを条件とする、
グルコース依存性インスリン分泌刺激ペプチド（ＧＩＰ）類似体の使用を提供する。
【０２８３】
代謝症候群（肥満、過体重、真性糖尿病、インスリン抵抗性、または脂肪酸代謝障害など）；癌（結腸癌または副腎腺腫など）；骨密度障害（高骨密度および／または骨量の増加を特徴とする骨密度障害など）；またはアテローム性動脈硬化症を処置する方法であって、有効量の本明細書中に定義のペプチドを必要とする個体に投与する工程を含む方法も提供する。
【０２８４】
本明細書中で言及している必要とする個体は、本開示のペプチドまたは医薬組成物の投与から恩恵を受け得る個体である。かかる個体は、代謝障害（肥満、過体重、糖尿病、インスリン抵抗性、または脂肪酸代謝障害など）、癌（結腸癌または副腎腺腫など）、骨密度障害を罹患し得るか、罹患リスクがあり得る。個体は、任意のヒト（男性または女性）、乳児、中年、または高齢者であり得る。個体において処置または防止すべき障害は、個体の年齢、個体の全身健康、個体の処置に使用される薬物療法、および個体が代謝障害（肥満、過体重、糖尿病、インスリン抵抗性、または脂肪酸代謝障害など）、癌（結腸癌または副腎腺腫など）、アテローム性動脈硬化症、骨密度障害を有し得るか、引き起こし得る疾患または障害の病歴を有するかどうかに関連し得る。いくつかの実施形態では、処置すべき障害は、ＧＩＰ誘導性グルカゴン分泌、ＧＩＰ誘導性インスリン分泌、ＧＩＰ誘導性ソマトスタチン分泌、ＧＩＰ誘導性グルコース摂取、ＧＩＰ誘導性の脂肪酸合成および／または脂肪酸取り込み、ＧＩＰＲの高発現および／または高活性、食後ＧＩＰ放出に関連し；ここで、用語「高い」は、処置を必要としない個体で認められた対応レベルより高いレベルを指すと解釈すべきである。
【０２８５】
調製方法（ペプチド）
本開示のペプチドを、当該分野で公知の任意の方法によって調製することができる。したがって、ＧＩＰ由来ペプチドを、標準的なペプチド調製技術（溶液合成またはＭｅｒｒｉｆｉｅｌｄタイプの固相合成など）によって調製することができる。
【０２８６】
１つの実施形態では、本明細書中に定義のペプチドは、天然に存在するタンパク質である未変性ＧＩＰに由来する天然に存在しないペプチド（ＧＩＰ１−４２など）である。
【０２８７】
１つの実施形態では、本開示のペプチドは、その天然に存在する供給源（血清など）から精製されている。タンパク質精製は、複雑な混合物から単一のタンパク質型を単離することを意図する一連のプロセスである。出発物質は、通常、生物組織である。精製プロセスにおける種々の工程は、タンパク質が閉じ込められているマトリックスからタンパク質を取り出し、混合物のタンパク質部分と非タンパク質部分とを分離し、最後に、所望のタンパク質を他の全てのタンパク質から分離することができる。分離工程は、（例えば）タンパク質のサイズ、物理化学的性質、結合親和性、および生物学的活性の相違を活用することができる。
【０２８８】
１つの実施形態では、本開示のペプチドは、合成によって作製されるか生成される。
【０２８９】
ペプチドの合成による生成方法は、当該分野で周知である。合成ペプチドの生成についての詳細な説明および実践的な助言を、Ｓｙｎｔｈｅｔｉｃ  Ｐｅｐｔｉｄｅｓ：Ａ  Ｕｓｅｒ’ｓ  Ｇｕｉｄｅ（Ａｄｖａｎｃｅｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ），Ｇｒａｎｔ  Ｇ．Ａ．ｅｄ．，Ｏｘｆｏｒｄ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  Ｐｒｅｓｓ，２００２またはＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｆｏｒｍｕｌａｔｉｏｎ：Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ  ｏｆ  Ｐｅｐｔｉｄｅｓ  ａｎｄ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ，Ｆｒｏｋｊａｅｒ  ａｎｄ  Ｈｏｖｇａａｒｄ  ｅｄｓ．，Ｔａｙｌｏｒ  ａｎｄ  Ｆｒａｎｃｉｓ，１９９９で見出すことができる。
【０２９０】
１つの実施形態では、本発明のペプチドまたはペプチド配列は合成によって、特に、配列補助的ペプチド合成（ＳＡＰＳ）法、溶液合成、固相ペプチド合成（ＳＰＰＳ）（Ｍｅｒｒｉｆｉｅｌｄタイプの固相合成など）、組換え技術（宿主細胞での発現を指示することができる第２の核酸と作動可能に会合されたペプチドをコードする第１の核酸配列を含む宿主細胞よる産生）、または酵素合成によって生成される。これらは、当業者に周知である。
【０２９１】
ペプチドを、Ｎ−ａ−アミノ保護基としての９−フルオレニルメチルオキシカルボニル（Ｆｍｏｃ）またはｔｅｒｔ−ブチルオキシカルボニル（Ｂｏｃ）、および側鎖官能性に適切な一般的保護基を使用して、バッチ式または完全に自動化されたペプチド合成のいずれかで合成することができる。
【０２９２】
逆相ＨＰＬＣなどによる精製後、ペプチドを、例えば、環状またはＣ末端もしくはＮ末端を修飾したイソ型を得るためにさらに処理することができる。環状化および末端修飾の方法は、当該分野で周知である。
【０２９３】
本発明のペプチドを、単量体または多量体（二量体または四量体など）として合成することができる。
【０２９４】
医薬組成物および製剤
本開示の生物活性剤が未処理化学物質（ペプチド）として投与可能である一方で、本開示の生物活性剤を医薬製剤の形態で提供することが好ましいことがある。かかる医薬製剤を、医薬組成物、薬学的に許容され得る組成物、または薬学的に安全な組成物と呼ぶことができる。
【０２９５】
したがって、本発明の生物活性剤、またはその薬学的に許容され得る塩もしくはエステル、ならびに薬学的に許容され得る担体、賦形剤、および／もしくは希釈剤を含む医薬製剤をさらに提供する。医薬製剤を、例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｙ  ２００５，Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ，Ｗｉｌｌｉａｍｓ  ＆  Ｗｉｌｋｉｎｓに記載の従来の技術によって調製することができる。
【０２９６】
調製することができる本ペプチド化合物の薬学的に許容され得る塩も、本発明の対象とされることが意図される。これらの塩は、薬学的使用への適用においてが許容され得る塩であろう。このことは、前述の塩が親化合物の生物学的活性を保持すること、および、前述の塩が疾患処置におけるその適用および使用において副作用や有害作用を生じないことを意味する。
【０２９７】
薬学的に許容され得る塩は、標準的な様式で調製される。親化合物が塩基である場合、親化合物は適切な溶媒中にて過剰量の有機酸または無機酸で処理される。親化合物が酸である場合、親化合物は適切な溶媒中にて無機塩基または有機塩基で処理される。
【０２９８】
本明細書中に開示のペプチド化合物を、そのアルカリ金属塩またはアルカリ土類金属塩の形態で、薬学的に許容され得る担体または希釈剤と並行して、同時に、または一緒に、特に好ましくは、その医薬組成物の形態で、経口、直腸、または非経口（皮下が含まれる）経路によって、有効量を投与することができる。
【０２９９】
本発明の医薬組成物で用いる薬学的に許容され得る酸付加塩の例には、鉱酸（塩酸、臭化水素酸、リン酸、メタリン酸、硝酸、および硫酸など）および有機酸（例えば、酒石酸、酢酸、クエン酸、リンゴ酸、乳酸、フマル酸、安息香酸、グリコール酸、グルコン酸、コハク酸、ｐ−トルエンスルホン酸、およびアリールスルホン酸など）に由来する酸付加塩が含まれる。
【０３００】
特定の実施形態では、本開示のペプチドは、酢酸塩またはＴＦＡ（トリフルオロ酢酸）塩として製剤化される。
【０３０１】
投与および投薬量
本開示によれば、本明細書中に定義のペプチドまたはペプチドを含む組成物を、薬学的に有効量用量または治療有効量で処置を必要とする個体に投与する。投薬量の要件は、使用される特定の薬物の組成、投与経路、および処置される特定の被験体によって変化し、これらは、障害の重症度および種類ならびに被験体の体重および全身状態に依存する。ペプチド化合物の個別の投薬の最適な量および間隔が処置される容態の性質および程度、投与の形態、経路、および部位、ならびに処置される特定の患者によって決定され、かかる最適性を従来の技術によって決定することができることも当業者に認識されるであろう。最適な処置クール（すなわち、定義した日数で１日あたりに投与される化合物の服薬数）を従来の一連の処置決定試験を使用して確認することができることも当業者に認識されるであろう。
【０３０２】
１つの実施形態では、生物活性剤を、少なくとも１日１回（１日１回など、１日２回など、１日３回など、１日４回など、１日５回など）投与する。
【０３０３】
一用量を、断続的に、すなわち複数の間隔で投与することもでき、それにより、一用量は毎日投与されない。むしろ、１つまたは複数の用量を、２日毎、３日毎、４日毎、５日毎、６日毎、１週間毎、２週間毎、３週間毎、４週間毎、５週間毎、６週間毎に、または前述の範囲内の複数の間隔（２〜４週間毎、または４〜６週間毎など）で投与することができる。
【０３０４】
１つの実施形態では、生物活性剤を、少なくとも３００００ｐｍｏｌ／ｋｇ／日（少なくとも６００００ｐｍｏｌ／ｋｇ／日など、少なくとも７２０００ｐｍｏｌ／ｋｇ／日など、少なくとも９００００ｐｍｏｌ／ｋｇ／日など、少なくとも１２００００ｐｍｏｌ／ｋｇ／日など、少なくとも１５００００ｐｍｏｌ／ｋｇ／日など、少なくとも３００００ｐｍｏｌ／ｋｇ／日など、好ましくは少なくとも６００００ｐｍｏｌ／ｋｇ／日など）の用量で投与する。特定の実施形態では、生物活性剤を、７２０００ｐｍｏｌ／ｋｇ／日の投薬量で投与する。
【０３０５】
１つの実施形態では、生物活性剤を、３００００ｐｍｏｌ／ｋｇ〜４００００ｐｍｏｌ／ｋｇ（４００００ｐｍｏｌ／ｋｇ〜５００００ｐｍｏｌ／ｋｇなど、５００００ｐｍｏｌ／ｋｇ〜６００００ｐｍｏｌ／ｋｇなど、６００００ｐｍｏｌ／ｋｇ〜７００００ｐｍｏｌ／ｋｇなど、７００００ｐｍｏｌ／ｋｇ〜８００００ｐｍｏｌ／ｋｇなど、８００００ｐｍｏｌ／ｋｇ〜９００００ｐｍｏｌ／ｋｇなど、９００００ｐｍｏｌ／ｋｇ〜１０００００ｐｍｏｌ／ｋｇなど、１０００００ｐｍｏｌ／ｋｇ〜１１００００ｐｍｏｌ／ｋｇなど、１１００００ｐｍｏｌ／ｋｇ〜１２００００ｐｍｏｌ／ｋｇなど）の一日投薬量で投与する。特定の実施形態では、生物活性剤はペプチドであり、６００００ｐｍｏｌ／ｋｇまたは７２０００ｐｍｏｌ／ｋｇの一日用量で投与する。
【０３０６】
１つの実施形態では、生物活性剤を、注入によって投与する。１つの実施形態では、生物活性剤はペプチドであり、少なくとも１５分間（少なくとも２０分間など、少なくとも３０分間など、少なくとも４０分間など、少なくとも５０分間など、少なくとも６０分間など、少なくとも９０分間など、少なくとも１２０分間など、好ましくは６０分間など）の持続期間にわたって注入する。
【０３０７】
１つの実施形態では、生物活性剤を、１５分間と１２０分間との間（１５分間と２０分間との間など、２０分間と３０分間との間など、３０分間と４０分間との間など、４０分間と５０分間との間など、５０分間と６０分間との間など、６０分間と９０分間との間など、９０分間と１２０分間との間など）の持続期間にわたって投与する。
【０３０８】
１つの実施形態では、生物活性剤を、６０分間の持続期間にわたって１日１回、または３０分間の持続期間にわたって１日２回、または２０分間の持続期間にわたって１日３回、または１５分間の持続期間にわたって１日４回、または１２分間の持続期間にわたって１日５回投与し、ここで、持続期間は、個別の投与の持続期間である。
【０３０９】
１つの実施形態では、生物活性剤を、少なくとも５００ｐｍｏｌ／ｋｇ／分（少なくとも１０００ｐｍｏｌ／ｋｇ／分など、少なくとも１２００ｐｍｏｌ／ｋｇ／分など、少なくとも１５００ｐｍｏｌ／ｋｇ／分など、少なくとも２０００ｐｍｏｌ／ｋｇ／分など、少なくとも２５００ｐｍｏｌ／ｋｇ／分など、少なくとも５０００ｐｍｏｌ／ｋｇ／分など）の投薬量で投与する。
【０３１０】
当業者は、１日の投与数を増加させる場合、結果的に各投与で投与すべき用量が減少され得ることを承知している。同様に、各投与の持続期間が減少される場合、結果的に投薬量を増加させることができる。
【０３１１】
投与すべき生物活性剤は、本開示のペプチドである。好ましい実施形態では、ペプチドは、配列番号１または配列番号２、または配列番号１および配列番号２のうちのいずれか１つと少なくとも７５％の配列同一性を有する機能的バリアントであり、ここで、前述のペプチドは、配列番号１および配列番号２のうちのいずれか１つ、またはその機能的バリアントの１つまたは複数のアミノ酸残基での少なくとも１つの脂肪酸分子の付着によって修飾されており、但し、前述の少なくとも１つの脂肪酸分子が、配列番号１および配列番号２のうちのいずれか１つの３０位のアミノ酸残基に付着していないことを条件とする。
【０３１２】
１つの実施形態では、生物活性剤を、１つまたは複数のさらなる有効成分と共に投与する。これらの他の成分は、薬学的活性であり得る。いくつかの実施形態では、生物活性剤は、上記定義のペプチドであり、他の成分は、ｈＧＩＰ１−４２またはそのバリアントである。
【０３１３】
投与経路
好ましい投与経路が処置すべき被験体の全身状態および年齢、処置すべき容態の性質、処置すべき組織の体内の位置、ならびに選択される有効成分に依存すると認識されるであろう。
【０３１４】
全身処置
本開示の全身処置のために、投与経路は、最終的に所望の作用部位を標的にするために生物活性剤を血流内に導入することができる。
【０３１５】
かかる投与経路は、任意の適切な経路（腸内経路（経口、直腸、鼻腔内、肺、口内、舌下、経皮、槽内、および腹腔内への投与が含まれる）、および／または非経口経路（皮下、筋肉内、髄腔内、脳内、静脈内、および皮内への投与が含まれる）など）である。
【０３１６】
非経口投与
非経口投与は、経口／腸内経路ではない任意の投与経路であり、それにより、医薬品の肝臓内の初回通過分解が回避される。したがって、非経口投与には、任意の注射および注入、例えば、ボーラス注射または連続注入（静脈内投与、筋肉内投与、または皮下投与など）が含まれる。さらに、非経口投与には、吸入および局所投与が含まれる。
【０３１７】
したがって、生物活性剤を、生物学的に活性な物質が投与される動物の任意の粘膜、例えば、鼻、膣、眼、口腔、生殖管、肺、胃腸管、または直腸、好ましくは鼻または口腔の粘膜を通過するように局所投与することができ、したがって、非経口投与には、口内、舌下、鼻、直腸、膣、および腹腔内への投与ならびに吸入または点滴注入（ｉｎｓｔａｌｌａｔｉｏｎ）による肺および気管支への投与も含まれ得る。また、薬剤を、皮膚を通過させるために局所投与することができる。
【０３１８】
局所処置
本発明の生物活性剤を、１つの実施形態では、局所処置として使用することができる（すなわち、作用部位（複数可）に直接導入することができる）。したがって、生物活性剤を、皮膚または粘膜に直接適用することができるか、生物活性剤を、作用部位内に、例えば、罹患組織内または罹患組織に直接通じる終動脈に注射することができる。これらの投与形態は、血液脳関門を回避することが好ましい。
【０３１９】
キットオブパーツ
本開示はまた、上記の生物活性剤のうちの１つまたは複数および少なくとも１つの追加のまたはさらなる成分（１つまたは複数の第２の有効成分など）を含むキットオブパーツに関する。
【０３２０】
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３４．  Ｔｓｅｎｇ  ＣＣ，  Ｋｉｅｆｆｅｒ  ＴＪ，  Ｊａｒｂｏｅ  ＬＡ，  Ｕｓｄｉｎ  ＴＢ，  Ｗｏｌｆｅ  ＭＭ．  Ｐｏｓｔｐｒａｎｄｉａｌ  ｓｔｉｍｕｌａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｉｎｓｕｌｉｎ  ｒｅｌｅａｓｅ  ｂｙ  ｇｌｕｃｏｓｅ−ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ  ｉｎｓｕｌｉｎｏｔｒｏｐｉｃ  ｐｏｌｙｐｅｐｔｉｄｅ  （ＧＩＰ）．  Ｅｆｆｅｃｔ  ｏｆ  ａ  ｓｐｅｃｉｆｉｃ  ｇｌｕｃｏｓｅ−ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ  ｉｎｓｕｌｉｎｏｔｒｏｐｉｃ  ｐｏｌｙｐｅｐｔｉｄｅ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ａｎｔａｇｏｎｉｓｔ  ｉｎ  ｔｈｅ  ｒａｔ．  Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ｉｎｖｅｓｔ  １９９６；９８（１１）：２４４０−２４４５．
３５．  Ｉｒｗｉｎ  Ｎ，  Ｇｒｅｅｎ  ＢＤ，  Ｐａｒｋｅｒ  ＪＣ，  Ｇａｕｌｔ  ＶＡ，  Ｏ’Ｈａｒｔｅ  ＦＰＭ，  Ｆｌａｔｔ  ＰＲ．  Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  ａｃｔｉｖｉｔｙ  ａｎｄ  ａｎｔｉｄｉａｂｅｔｉｃ  ｐｏｔｅｎｔｉａｌ  ｏｆ  ｓｙｎｔｈｅｔｉｃ  ｆｒａｇｍｅｎｔ  ｐｅｐｔｉｄｅｓ  ｏｆ  ｇｌｕｃｏｓｅ−ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ  ｉｎｓｕｌｉｎｏｔｒｏｐｉｃ  ｐｏｌｙｐｅｐｔｉｄｅ，  ＧＩＰ（１−１６）  ａｎｄ  （Ｐｒｏ３）ＧＩＰ（１−１６）．  Ｒｅｇｕｌａｔｏｒｙ  Ｐｅｐｔｉｄｅｓ  ２００６；１３５（１ＧＣｏ２）：４５−５３．
３６．  Ｋｅｒｒ  ＢＤ，  Ｆｌａｔｔ  ＡＪＳ，  Ｆｌａｔｔ  ＰＲ，  Ｇａｕｌｔ  ＶＡ．  Ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ  ａｎｄ  ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  ａｃｔｉｏｎｓ  ｏｆ  Ｎ−ｔｅｒｍｉｎａｌ  ｔｒｕｎｃａｔｅｄ  ｆｏｒｍｓ  ｏｆ  ｇｌｕｃｏｓｅ−ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ  ｉｎｓｕｌｉｎｏｔｒｏｐｉｃ  ｐｏｌｙｐｅｐｔｉｄｅ．  Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ  ａｎｄ  Ｂｉｏｐｈｙｓｉｃａｌ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｃｏｍｍｕｎｉｃａｔｉｏｎｓ  ２０１１；４０４（３）：８７０−８７６．
３７．  Ｇｅｌｌｉｎｇ  ＲＷ，  Ｃｏｙ  ＤＨ，  Ｐｅｄｅｒｓｏｎ  ＲＡ  ｅｔ  ａｌ．  ＧＩＰ（６−３０ａｍｉｄｅ）  ｃｏｎｔａｉｎｓ  ｔｈｅ  ｈｉｇｈ  ａｆｆｉｎｉｔｙ  ｂｉｎｄｉｎｇ  ｒｅｇｉｏｎ  ｏｆ  ＧＩＰ  ａｎｄ  ｉｓ  ａ  ｐｏｔｅｎｔ  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ  ｏｆ  ＧＩＰ１−４２  ａｃｔｉｏｎ  ｉｎ  ｖｉｔｒｏ．  Ｒｅｇｕｌａｔｏｒｙ  Ｐｅｐｔｉｄｅｓ  １９９７；６９（３）：１５１−１５４．
３８．  Ｄｅａｃｏｎ  ＣＦＰ．  ＧＩＰ−（３−４２）  ｄｏｅｓ  ｎｏｔ  ａｎｔａｇｏｎｉｚｅ  ｉｎｓｕｌｉｎｏｔｒｏｐｉｃ  ｅｆｆｅｃｔｓ  ｏｆ  ＧＩＰ  ａｔ  ｐｈｙｓｉｏｌｏｇｉｃａｌ  ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｓ．  Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｐｈｙｓｉｏｌｏｇｙ  −  Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌｏｇｙ  ａｎｄ  Ｍｅｔａｂｏｌｉｓｍ  ２００６；２９１（３）：Ｅ４６８−Ｅ４７５．
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４１．  Ｄｅａｃｏｎ  ＣＦ，  Ｐｌａｍｂｏｅｃｋ  Ａ，  Ｒｏｓｅｎｋｉｌｄｅ  ＭＭ，  ｄｅ  Ｈｅｅｒ  Ｊ，  Ｈｏｌｓｔ  ＪＪ．  ＧＩＰ−（３−４２）  ｄｏｅｓ  ｎｏｔ  ａｎｔａｇｏｎｉｚｅ  ｉｎｓｕｌｉｎｏｔｒｏｐｉｃ  ｅｆｆｅｃｔｓ  ｏｆ  ＧＩＰ  ａｔ  ｐｈｙｓｉｏｌｏｇｉｃａｌ  ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｓ．  Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｐｈｙｓｉｏｌｏｇｙ  −  Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌｏｇｙ  ａｎｄ  Ｍｅｔａｂｏｌｉｓｍ  ２００６；２９１（３）：Ｅ４６８−Ｅ４７５．
４２．  Ｇｏｅｔｚｅ  ＪＰ，  Ｈｕｎｔｅｒ  Ｉ，  Ｌｉｐｐｅｒｔ  ＳＫ，  Ｂａｒｄｒａｍ  Ｌ，  Ｒｅｈｆｅｌｄ  ＪＦ．  Ｐｒｏｃｅｓｓｉｎｇ−ｉｎｄｅｐｅｎｄｅｎｔ  ａｎａｌｙｓｉｓ  ｏｆ  ｐｅｐｔｉｄｅ  ｈｏｒｍｏｎｅｓ  ａｎｄ  ｐｒｏｈｏｒｍｏｎｅｓ  ｉｎ  ｐｌａｓｍａ．  Ｆｒｏｎｔ  Ｂｉｏｓｃｉ  ２０１２；１７：１８０４−１８１５．
４３．  Ｇｏｅｔｚｅ  ＪＰ，  Ｒｅｈｆｅｌｄ  ＪＦ．  Ｐｅｐｔｉｄｅ  ｈｏｒｍｏｎｅｓ  ａｎｄ  ｔｈｅｉｒ  ｐｒｏｈｏｒｍｏｎｅｓ  ａｓ  ｂｉｏｍａｒｋｅｒｓ．  Ｂｉｏｍａｒｋｅｒｓ  Ｍｅｄ  ２００９；３（４）：３３５−３３８．
４４．  Ｆｕｊｉｔａ  Ｙ，  Ａｓａｄｉ  Ａ，  Ｙａｎｇ  ＧＫ，  Ｋｗｏｋ  ＹＮ，  Ｋｉｅｆｆｅｒ  ＴＪ．  Ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｌ  ｐｒｏｃｅｓｓｉｎｇ  ｏｆ  ｐｒｏ−ｇｌｕｃｏｓｅ−ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ  ｉｎｓｕｌｉｎｏｔｒｏｐｉｃ  ｐｏｌｙｐｅｐｔｉｄｅ  ｉｎ  ｇｕｔ．  Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｐｈｙｓｉｏｌｏｇｙ  −  Ｇａｓｔｒｏｉｎｔｅｓｔｉｎａｌ  ａｎｄ  Ｌｉｖｅｒ  Ｐｈｙｓｉｏｌｏｇｙ  ２０１０；２９８（５）：Ｇ６０８−Ｇ６１４．
４５．  Ｗｉｄｅｎｍａｉｅｒ  ＳＢ，  Ｋｉｍ  ＳＪ，  Ｙａｎｇ  ＧＫ  ｅｔ  ａｌ．  Ａ  ＧＩＰ  Ｒｅｃｅｐｔｏｒ  Ａｇｏｎｉｓｔ  Ｅｘｈｉｂｉｔｓ  ｂｅｔａ−Ｃｅｌｌ  Ａｎｔｉ−Ａｐｏｐｔｏｔｉｃ  Ａｃｔｉｏｎｓ  ｉｎ  Ｒａｔ  Ｍｏｄｅｌｓ  ｏｆ  Ｄｉａｂｅｔｅｓ  Ｒｅｓｕｌｔｉｎｇ  ｉｎ  Ｉｍｐｒｏｖｅｄ  ｂｅｔａ−Ｃｅｌｌ  Ｆｕｎｃｔｉｏｎ  ａｎｄ  Ｇｌｙｃｅｍｉｃ  Ｃｏｎｔｒｏｌ．  ＰＬｏＳ  ＯＮＥ  ２０１０；５（３）：ｅ９５９０．
４６．  Ｇｒａｈａｍ  ＦＬ，  ｖａｎ  ｄｅｒ  Ｅｂ  ＡＪ．  Ａ  ｎｅｗ  ｔｅｃｈｎｉｑｕｅ  ｆｏｒ  ｔｈｅ  ａｓｓａｙ  ｏｆ  ｉｎｆｅｃｔｉｖｉｔｙ  ｏｆ  ｈｕｍａｎ  ａｄｅｎｏｖｉｒｕｓ  ５  ＤＮＡ．  Ｖｉｒｏｌｏｇｙ  １９７３；５２（２）：４５６−４６７．
４７．  Ｋｉｓｓｏｗ  Ｈ，  Ｈａｒｔｍａｎｎ  Ｂ，  Ｈｏｌｓｔ  ＪＪ  ｅｔ  ａｌ．  Ｇｌｕｃａｇｏｎ−ｌｉｋｅ  ｐｅｐｔｉｄｅ−１  （ＧＬＰ−１）  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ａｇｏｎｉｓｍ  ｏｒ  ＤＰＰ−４  ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ  ｄｏｅｓ  ｎｏｔ  ａｃｃｅｌｅｒａｔｅ  ｎｅｏｐｌａｓｉａ  ｉｎ  ｃａｒｃｉｎｏｇｅｎ  ｔｒｅａｔｅｄ  ｍｉｃｅ．  Ｒｅｇｕｌａｔｏｒｙ  Ｐｅｐｔｉｄｅｓ  ２０１２；１７９（１ＧＣｏ３）：９１−１００．
４８．  Ｈｏｅｊｂｅｒｇ  ＰＶ，  Ｖｉｌｓｂｏｅｌｌ  Ｔ，  Ｒａｂｏｅｌ  Ｒ  ｅｔ  ａｌ．  Ｆｏｕｒ  ｗｅｅｋｓ  ｏｆ  ｎｅａｒ−ｎｏｒｍａｌｉｓａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｂｌｏｏｄ  ｇｌｕｃｏｓｅ  ｉｍｐｒｏｖｅｓ  ｔｈｅ  ｉｎｓｕｌｉｎ  ｒｅｓｐｏｎｓｅ  ｔｏ  ｇｌｕｃａｇｏｎ−ｌｉｋｅ  ｐｅｐｔｉｄｅ−１  ａｎｄ  ｇｌｕｃｏｓｅ−ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ  ｉｎｓｕｌｉｎｏｔｒｏｐｉｃ  ｐｏｌｙｐｅｐｔｉｄｅ  ｉｎ  ｐａｔｉｅｎｔｓ  ｗｉｔｈ  ｔｙｐｅ  ２  ｄｉａｂｅｔｅｓ．  Ｄｉａｂｅｔｏｌｏｇｉａ  ２００９；５２（２）：１９９−２０７．
ＤＥＢＬＡＳＩ，  Ａ．，  Ｏ’ＲＥＩＬＬＹ，  Ｋ．  ＆  ＭＯＴＵＬＳＫＹ，  Ｈ．  Ｊ．  １９８９．  Ｃａｌｃｕｌａｔｉｎｇ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ｎｕｍｂｅｒ  ｆｒｏｍ  ｂｉｎｄｉｎｇ  ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔｓ  ｕｓｉｎｇ  ｓａｍｅ  ｃｏｍｐｏｕｎｄ  ａｓ  ｒａｄｉｏｌｉｇａｎｄ  ａｎｄ  ｃｏｍｐｅｔｉｔｏｒ．  Ｔｒｅｎｄｓ  ｉｎ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，  １０，  ２２７−２２９．
ＬＡＺＡＲＥＮＯ，  Ｓ．  ＆  ＢＩＲＤＳＡＬＬ，  Ｎ．  Ｊ．  １９９３．  Ｅｓｔｉｍａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｃｏｍｐｅｔｉｔｉｖｅ  ａｎｔａｇｏｎｉｓｔ  ａｆｆｉｎｉｔｙ  ｆｒｏｍ  ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ  ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ  ｃｕｒｖｅｓ  ｕｓｉｎｇ  ｔｈｅ  Ｇａｄｄｕｍ，  Ｓｃｈｉｌｄ  ａｎｄ  Ｃｈｅｎｇ−Ｐｒｕｓｏｆｆ  ｅｑｕａｔｉｏｎｓ．  Ｂｒ  Ｊ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌ，  １０９，  １１１０−９．
ＲＯＳＥＮＫＩＬＤＥ，  Ｍ．  Ｍ．，  ＣＡＨＩＲ，  Ｍ．，  ＧＥＴＨＥＲ，  Ｕ．，  ＨＪＯＲＴＨ，  Ｓ．  Ａ．  ＆  ＳＣＨＷＡＲＴＺ，  Ｔ．  Ｗ．  １９９４．  Ｍｕｔａｔｉｏｎｓ  ａｌｏｎｇ  ｔｒａｎｓｍｅｍｂｒａｎｅ  ｓｅｇｍｅｎｔ  ＩＩ  ｏｆ  ｔｈｅ  ＮＫ−１  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ａｆｆｅｃｔ  ｓｕｂｓｔａｎｃｅ  Ｐ  ｃｏｍｐｅｔｉｔｉｏｎ  ｗｉｔｈ  ｎｏｎ−ｐｅｐｔｉｄｅ  ａｎｔａｇｏｎｉｓｔｓ  ｂｕｔ  ｎｏｔ  ｓｕｂｓｔａｎｃｅ  Ｐ  ｂｉｎｄｉｎｇ．  Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ，  ２６９，  ２８１６０−４．
ＨＯＬＳＴ，  Ｊ．  Ｊ．  ＆  ＢＥＲＳＡＮＩ，  Ｍ．  １９９１．  １  −  Ａｓｓａｙｓ  ｆｏｒ  Ｐｅｐｔｉｄｅ  Ｐｒｏｄｕｃｔｓ  ｏｆ  Ｓｏｍａｔｏｓｔａｔｉｎ  Ｇｅｎｅ  Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ．  Ｉｎ：  ＣＯＮＮ，  Ｐ．  Ｍ．  （ｅｄ．）  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｎｅｕｒｏｓｃｉｅｎｃｅｓ．  Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ．
ＰＡＴＨＡＫ，  Ｖ．，  ＧＡＵＬＴ，  Ｖ．  Ａ．，  ＦＬＡＴＴ，  Ｐ．  Ｒ．  ＆  ＩＲＷＩＮ，  Ｎ．  ２０１５．  Ａｎｔａｇｏｎｉｓｍ  ｏｆ  ｇａｓｔｒｉｃ  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ  ｐｏｌｙｐｅｐｔｉｄｅ  （ＧＩＰ）  ｂｙ  ｐａｌｍｉｔｏｙｌａｔｉｏｎ  ｏｆ  ＧＩＰ  ａｎａｌｏｇｕｅｓ  ｗｉｔｈ  Ｎ−  ａｎｄ  Ｃ−ｔｅｒｍｉｎａｌ  ｍｏｄｉｆｉｃａｔｉｏｎｓ  ｉｍｐｒｏｖｅｓ  ｏｂｅｓｉｔｙ  ａｎｄ  ｍｅｔａｂｏｌｉｃ  ｃｏｎｔｒｏｌ  ｉｎ  ｈｉｇｈ  ｆａｔ  ｆｅｄ  ｍｉｃｅ．  Ｍｏｌ  Ｃｅｌｌ  Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ，  ４０１，  １２０−９．
ＨＡＮＳＥＮ  ＬＳ，  ＳＰＡＲＲＥ−ＵＬＲＩＣＨ  ＡＨ，  ＣＨＲＩＳＴＥＮＳＥＮ  Ｍ，  ＫＮＯＰ  ＦＫ，  ＨＡＲＴＭＡＮＮ  Ｂ，  ＨＯＬＳＴ  ＪＪ  ＆  ＲＯＳＥＮＫＩＬＤＥ  Ｍ．  Ｎ−ｔｅｒｍｉｎａｌｌｙ  ａｎｄ  Ｃ−ｔｅｒｍｉｎａｌｌｙ  ｔｒｕｎｃａｔｅｄ  ｆｏｒｍｓ  ｏｆ  ｇｌｕｃｏｓｅ−ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ  ｉｎｓｕｌｉｎｏｔｒｏｐｉｃ  ｐｏｌｙｐｅｐｔｉｄｅ  ａｒｅ  ｈｉｇｈ−ａｆｆｉｎｉｔｙ  ｃｏｍｐｅｔｉｔｉｖｅ  ａｎｔａｇｏｎｉｓｔｓ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｈｕｍａｎ  ＧＩＰ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ．Ｂｒｉｔｉｓｈ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ  （２０１６）  １７３，  ８２６−８３８．
【０３２１】
実施例
本実施例は、以下の結論を支持している：
１）ヒトＧＩＰ（３−３０）ＮＨ２の拮抗性は、中央領域内の脂質化（脂肪酸アシル）後に保存されるが、３位および３０位では保存されない
２）ヒトＧＩＰ（５−３０）ＮＨ２の拮抗性は、Ｎ末端（５位）および中央領域での脂質化（脂肪酸アシル）後に保存されるが、３０位では保存されない
３）いくつかのアシル化部位は、ＧＩＰ（３−３０）ＮＨ２およびＧＩＰ（５−３０）ＮＨ２の両方に対して大きな可能性を示す
４）リンカー（脂肪酸をペプチドに連結する分子）の付加により、拮抗性プロフィールを改善することができる
５）脂質化がＧＩＰ類似体のアルブミン結合を増加させる
６）脂質化がＧＩＰ類似体の排出半減期を増加させる
【０３２２】
材料および方法
ＧＩＰ（３−３０）ペプチドおよびＧＩＰ（５−３０）ペプチド自体の生成および作用は、ＷＯ２０１６／０３４１８６号に開示されている。
【０３２３】
材料
ヒトＧＩＰ（１−４２）を、Ｂａｃｈｅｍ，Ｂｕｂｅｎｄｏｒｆ，Ｓｗｉｔｚｅｒｌａｎｄ（Ｈ５６４５）から購入し、残りのリガンドの合成をＣａｓｌｏ（商標），Ｌｙｎｇｂｙ，Ｄｅｎｍａｒｋ  ａｎｄ  Ａｌｍａｃ  Ｇｒｏｕｐ，Ｃｒａｉｇａｖｏｎ，Ｕｎｉｔｅｄ  Ｋｉｎｇｄｏｍに依頼した。ヒトＧＩＰ受容体のｃＤＮＡを、Ｏｒｉｇｅｎｅ，Ｒｏｃｋｖｉｌｌｅ，Ｍａｒｙｌａｎｄ，ＵＳＡ（ＳＣ１１０９０６）から購入し、ｐＣＭＶ−Ｓｃｒｉｐｔベクターにクローン化した。ヨウ化ヒトＧＩＰ（１−４２）を、ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ  Ｌｉｆｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｓｋｏｖｌｕｎｄｅ，Ｄｅｎｍａｒｋ（ＮＥＸ４０２０２５ＵＣ）から購入した。
【０３２４】
動物
ＬＹＨ／ＬＹＤ系統のブタまたはミニブタを、Ｆａｃｕｌｔｙ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ  ａｎｄ  Ｍｅｄｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓの動物施設に収容した。
【０３２５】
トランスフェクションおよび組織培養
ＣＯＳ−７細胞を、１０％ウシ胎児血清、２ｍＭグルタミン、１８０単位／ｍｌペニシリン、および４５ｇ／ｍｌストレプトマイシンを補足したダルベッコ改変イーグル培地１８８５中にて１０％ＣＯ２および３７℃で培養した。ｃＡＭＰ蓄積および競合結合のためのＣＯＳ−７細胞の一過性トランスフェクションを、クロロキンを使用した硫酸カルシウム沈降法を使用して行った４６〜４７。
【０３２６】
ｃＡＭＰアッセイ
ヒトＧＩＰ受容体を発現する一過性にトランスフェクトしたＣＯＳ−７細胞を、白色９６ウェルプレート中に３．５＊１０４／ウェルの密度で播種した。翌日に、細胞をＨｅｐｅｓ緩衝生理食塩水（ＨＢＳ）で２回洗浄し、ＨＢＳおよび１ｍＭ  ３−イソブチル−１−メチルキサンチン（ＩＢＭＸ）と３７℃で３０分間インキュベートした。作動性を試験するために、リガンドを添加し、３７℃で３０分間インキュベートした。拮抗性を試験するために、細胞をアンタゴニストと１０分間プレインキュベートし、その後にアゴニストを添加し、次いで、さらに２０分間インキュベートした。ＨｉｔＨｕｎｔｅｒ（商標）ｃＡＭＰ  ＸＳアッセイ（ＤｉｓｃｏｖｅＲｘ）を、製造者の説明書にしたがって実施した。
【０３２７】
１２５Ｉ−ヒトＧＩＰ競合結合アッセイ
ヒトＧＩＰ受容体を発現する一過性にトランスフェクトしたＣＯＳ−７細胞を、トランスフェクションの翌日に、添加した放射性リガンドが５〜１０％特異的に結合する細胞数／ウェルを使用して透明９６ウェルプレートに播種した。翌日に、細胞を、１５〜４０ｐＭ  １２５Ｉ−ヒトＧＩＰならびに漸増濃度の非標識リガンドを５０ｍＭ  Ｈｅｐｅｓ緩衝液（ｐＨ７．２）中にて２％ＨＳＡの存在下および非存在下で使用した４℃で３時間の競合結合によってアッセイした。インキュベーション後、細胞を、氷冷結合緩衝液（＋／−２％ＨＳＡ）で２回洗浄し、１％ＳＤＳを含む２００ｍＭ  ＮａＯＨを使用して３０分間溶解した。非特異的結合を、非トランスフェクション細胞への放射性リガンドの結合として決定した。
【０３２８】
ブタで評価した排出半減期（Ｔ１／２）
ブタに、脂質化したＧＩＰ（３−３０）ＮＨ２類似体のうちの１つ（化合物ＡＴ１１７）（１〜１０ｎｍｏｌ／ｋｇ、総体積２〜６ｍＬ）を皮下投与し、その後に皮下投与前および５７時間後までの１０〜１８の血液試料を、中心静脈カテーテルから採取した。試料採取の間にカテーテルを生理食塩水およびヘパリンでフラッシングした。冷ＥＤＴＡ管に採血し、遠心分離し、血漿を分析するまで−２０℃に保持した。実験を完了したとき、動物を屠殺するであろう。
【０３２９】
ホルモン分析
ブタ由来の血液試料中の脂質化したＧＩＰ（３−３０）ＮＨ２類似体またはＧＩＰ（５−３０）ＮＨ２類似体の濃度を、ＲＩＡによって分析した。類似体の免疫反応力を、ＧＩＰ（１−３０）ＮＨ２の中央領域またはＧＩＰ（３−３０）ＮＨ２のアミド化したＣ末端のいずれかに特異的なウサギで惹起した抗血清Ａｂ９５２３４、Ａｂ９５２３５、Ａｂ９５２３６、インハウスポリクローナル抗体を使用して判定した。
【０３３０】
データ解析
ＩＣ５０値、ＥＣ５０値、およびＫｉ値を、非線形回帰によって決定した。ＧｒａｐｈＰａｄ  Ｐｒｉｓｍ  ６．０ソフトウェア（ＧｒａｐｈＰａｄ，Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ，Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ，ＵＳＡ）およびＭｉｃｒｏｓｏｆｔ  Ｅｘｃｅｌ（商標）を使用してこれらの決定を行った。Ｋｉ値は、相同競合結合研究における結合部位の１クラスについての式およびＣｈｅｎｇ  Ｐｒｕｓｓｏｆｆの式にそれぞれ基づいていた（ＤｅＢｌａｓｉら，１９８９）。ＨＳＡ結合可能性を判定するために、親和性（ＩＣ５０によって決定）の倍率変化を、ＩＣ５０（＋ＨＳＡ）／ＩＣ５０（−ＨＳＡ）として計算した。
【０３３１】
実施例１−ヒトＧＩＰ（３−３０）ＮＨ２の拮抗性は、選択したアミノ酸位置、例えば中央領域での脂質化後に保存されるが、３位および３０位では保存されない
本発明者らは、ヒトおよびブタにおけるＧＩＰ（３−３０）ＮＨ２の半減期（Ｔ１／２）が７．５分であることを以前に示していた。長時間作用性ＧＩＰ受容体アンタゴニストを開発するために、ＧＩＰ（３−３０）ＮＨ２を、異なる長さの脂肪酸（Ｃ１２〜Ｃ１８、Ｃ１６二価酸）を用いて異なる領域で脂質化した。特に、ＧＩＰ（３−３０）ＮＨ２を、Ｎ末端、１６位もしくは３０位の天然に存在するリジン、または脂質化前にＧＩＰ（３−３０）ＮＨ２をリジンに置換した後者のアミノ酸位置のいずれかで脂質化した（図１および表１）。化合物の作動性プロフィールおよび拮抗性プロフィールの両方を、ヒトＧＩＰ受容体を発現する一過性にトランスフェクトしたＣＯＳ−７細胞で行ったｃＡＭＰ蓄積実験で試験した。これらの脂質化した類似体が脂質化後にその拮抗性を依然として保持しているかどうかを調査するために、前述の類似体が最大活性化の５０〜８０％に相当するＧＩＰ媒介性ｃＡＭＰ応答を阻害する能力を試験した。さらに、選択した類似体について、本発明者らは、化合物がヒトアルブミン（ＨＳＡ）に結合する能力の代用評価として２％ヒトアルブミンの非存在下および存在下での類似体の親和性を測定した。血漿中のアルブミンへの結合が排出を減少させるので、ＨＡＳに結合する能力が増加することは、ｉｎ  ｖｉｖｏでＴ１／２を増加させる可能性があると評価されるであろう。
【０３３２】
【表１】
2020521784.tif 000041
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2020521784.tif 000043
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【０３３３】
【表２】
2020521784.tif 000045
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2020521784.tif 000047
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【０３３４】
【表３】
2020521784.tif 000049
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【０３３５】
以下の表（表３ｂ）は、試験した各ペプチドについての２％ＨＳＡの非存在下および存在下での親和性の倍率変化および拮抗性効力の初期データをまとめている：
【０３３６】
【表４】
2020521784.tif 000051
【０３３７】
結果：
ＧＩＰ（３−３０）ＮＨ２のＮ末端の脂質化は、親和性を減少させ、これは、脂質の長さの増加（ＧＩＰ（３−３０）ＮＨ２と比較した親和性の減少倍率については、表１を参照のこと）および作動性傾向の増加に起因する拮抗性プロフィールの完全な消滅と相関した（表１）。Ｃ末端の脂質化について同一のパターンが認められた（図１および表１）。また、脂質化した類似体の親和性は、ＧＩＰ（３−３０）ＮＨ２と比較して劇的に減少し、アゴニズム傾向の増加が認められたので、非常に強力な拮抗性プロフィールは得られなかった。他方では、ＧＩＰ（３−３０）ＮＨ２の５、７、９、１１位、および中央領域（１５位〜２１位）の脂質化により、驚いたことに、高い効力のＧＩＰ受容体アンタゴニストが得られた（図１および表１）。５、７、９、１１、１５、１７、１９、２０、および２１位で脂質化した類似体についての拮抗性効力は、それぞれ、１４、３３、２２、６９、５３、９３、１３２、３６、および４９ｎＭであった。ＡＴ１０５、ＡＴ１１１、ＡＴ１１４、ＡＴ１６２、およびＡＴ３７０を１６位で脂質化し、対応する拮抗性効力は、それぞれ、２４、２２、２９、２６、および２５ｎＭであった一方で、１８位については、全ての脂質化した類似体は、ＧＩＰ（３−３０）ＮＨ２と比較して拮抗性効力が改善された（ＡＴ１１６、ＡＴ１１７、ＡＴ１４３、ＡＴ１５８、ＡＴ１５９、およびＡＴ１６０についてのＩＣ５０値は、それぞれ、１２、１５、１５、５、６、および３８ｎＭ）（図１）。これは、３位および３０位はＧＩＰ（３−３０）ＮＨ２の脂質化の有用性は低いのに対して、他の領域および特に１８位の脂質化により、非常に強いＧＩＰ受容体アンタゴニストが得られることを明確に示す。
【０３３８】
実施例２−ヒトＧＩＰ（５−３０）ＮＨ２の拮抗性は、Ｎ末端（５位）および中央領域での脂質化後に保存されるが、３０位では保存されない
ＧＩＰ（３−３０）ＮＨ２で行ったように、長時間作用性ＧＩＰ受容体アンタゴニストを開発するために、ＧＩＰ（５−３０）ＮＨ２を、異なる長さの脂肪酸（Ｃ１２〜Ｃ１８、Ｃ１４−Ｃ１８二価酸）を用いて異なる領域で脂質化した。脂質化したＧＩＰ（３−３０）ＮＨ２類似体と同様に、脂質化後のその拮抗性を、ヒトＧＩＰ受容体を発現する一過性にトランスフェクトしたＣＯＳ−７細胞で行った最大活性化の５０〜８０％に相当するＧＩＰ媒介性ｃＡＭＰ応答を阻害する能力を研究することによって試験した。さらに、本発明者らは、化合物がヒトアルブミン（ＨＳＡ）に結合する能力の代用評価として２％ヒトアルブミンの非存在下および存在下での選択した類似体の親和性を測定した（表３）。上記の表３ｂは、試験した各ペプチドについての２％ＨＳＡの非存在下および存在下での親和性の倍率変化および拮抗性効力の初期データをまとめている。
【０３３９】
結果：
ＧＩＰ（３−３０）ＮＨ２のＮ末端の脂質化と対照的に、ＧＩＰ（５−３０）ＮＨ２のＮ末端の脂質化の際にほとんどの類似体について拮抗性が保存された（表１）。ＡＴ１１８、ＡＴ１２１、およびＡＴ２９３についての拮抗性効力は、それぞれ、２９、５４、および１４ｎｍであった。
【０３４０】
脂質化された類似体の多くは、ＧＩＰ（３−３０）ＮＨ２と比較して親和性が減少し、その拮抗性効力も同様に減少した。ＡＴ１３３、ＡＴ１３５、およびＡＴ１３８は、ＧＩＰ媒介性ｃＡＭＰ応答を拮抗できなかった。対照的に、ＡＴ１１８、ＡＴ１２１、ＡＴ１３６、およびＡＴ１３７は、ＧＩＰ（３−３０）ＮＨ２と同一範囲の親和性を有し、阻害効力を有する非常に強いアンタゴニストであった。ＧＩＰ（３−３０）ＮＨ２と同様に、ＧＩＰ（５−３０）ＮＨ２のＣ末端（３０位）の脂質化は、拮抗性プロフィールを消滅するか、ＧＩＰ媒介性ｃＡＭＰ応答の阻害能力を非常に減少させる（表１）。
【０３４１】
中央領域（１６位および１８位）を脂質化したＧＩＰ（５−３０）ＮＨ２類似体は、いくつかのバリアントがＧＩＰ（５−３０）ＮＨ２の拮抗性プロフィールと比較して驚くべき改善を示したので（ＧＩＰ（５−３０）ＮＨ２のＩＣ５０値２５．８ｎＭと比較して、ＡＴ１１９、ＡＴ１５６、およびＡＴ１５７のＩＣ５０値は、２６、１２、および７ｎｍ）、印象的な拮抗性を示した。
【０３４２】
まとめると、これは、３０位はアンタゴニズムを必要とする場合にＧＩＰ（５−３０）ＮＨ２の脂質化に最適ではないが、他の領域（Ｎ末端領域中の位置が含まれる）は拮抗性プロフィールが保持され、さらには改善されることを示す。
【０３４３】
実施例３−ＧＩＰ（５−３０）ＮＨ２中のいくつかのアシル化部位は大きな可能性を示す
ＧＩＰ（３−３０）ＮＨ２について行ったように（実施例１を参照のこと）、ＧＩＰ（５−３０）ＮＨ２中の最適なアシル化部位を同定するために、Ｃ１６−二価酸をカップリングしたペプチド全体にわたってリジン（Ｌｙｓ）スキャンを行った。類似体の作動性プロフィールおよび拮抗性プロフィールの両方を、ヒトＧＩＰ受容体を発現する一過性にトランスフェクトしたＣＯＳ−７細胞で行ったｃＡＭＰ蓄積実験で試験した。脂質化したバリアントが単独でｃＡＭＰ応答を誘導する能力によって作動性を研究したのに対して、最大活性化の５０〜８０％に相当するＧＩＰ媒介性ｃＡＭＰ応答を阻害する能力によって拮抗性を研究した。さらに、本発明者らは、ｉｎ  ｖｉｖｏでＴ１／２を増加させる可能性の評価として脂質化したバリアントのヒトアルブミン（ＨＳＡ）への結合能力を測定した。
【０３４４】
結果：
全ての試験したバリアントは、ＧＩＰ媒介性ｃＡＭＰ応答を阻害することができ、１０μＭでの最大活性が３２％である内因性のｃＡＭＰ活性が低いバリアントはほんの一部であった（表１）。ＧＩＰ（５−３０）ＮＨ２と比較して、５、１１、１２、１３、１８、２１位で脂質化した類似体の拮抗性効力が改善された（それぞれ、１４、１０、２３、１７、１２、および１６ｎＭ）。ＡＴ１７３、ＡＴ１７４、ＡＴ１７５、およびＡＴ１８１で最高の拮抗性効力が認められ、これらは全てＧＩＰ（５−３０）ＮＨ２の拮抗性効力を凌いでいた。異なる類似体のＨＳＡへの結合能力を調査したとき、ペプチド中の脂質化位置が重要な役割を果たすことが認められた。脂質化部位に依存して、ＩＣ５０値は、２％ＨＳＡの存在下および非存在で異なり、倍率の相違は１．６〜８．３の範囲であった（表３）。７、９、１１、１３、および２１位での脂質化（それぞれ、ＡＴ１６９、ＡＴ１７１、ＡＴ１７３、ＡＴ１７５、およびＡＴ１８１）は、２％ＨＳＡの存在下と非存在下との間のＩＣ５０値の倍率変化が最も高く、値はそれぞれ５．８、８．３、７．４、７．８、および５．２であった。７、９、１１、１２、１３、１８、および２１位での脂質化で最良の拮抗性効力を有する類似体が得られ、これは、これらの脂質化部位が非常に強力な長時間作用性ＧＩＰ受容体アンタゴニストの開発のための非常に有望な脂質化部位であることを明確に示していた。
【０３４５】
以下の表（表４）は、ＧＩＰ（５−３０）ＮＨ２由来の拮抗性の初期データを倍率変化と共にまとめている（２％ＨＳＡの存在下および非存在下での結合研究に由来するＩＣ５０値ならびに対応する倍率変化の計算値）：
【０３４６】
【表５】
2020521784.tif 000052
2020521784.tif 000053
【０３４７】
実施例４−リンカー（脂肪酸をペプチドに連結する分子）の付加は拮抗性プロフィールを改善させる
本発明者らは、本発明者らの有望なアンタゴニストの１つ（ＡＴ１１７）のペプチドを脂肪酸に連結する小さな異なる分子を付加した。リンカーは、解離を容易にする可能性を潜在的に増加させることができる。拮抗性を、ヒトＧＩＰ受容体を発現する一過性にトランスフェクトしたＣＯＳ−７細胞で行った最大活性化の５０〜８０％に相当するＧＩＰ媒介性ｃＡＭＰ応答を阻害する能力を研究することによって試験した。
【０３４８】
結果：
ＡＴ１６４（リンカーはγ−グルタミン酸）およびＡＴ１６７（リンカーは８−アミノ−３，６−ジオキサオクタン酸、γ−アミノ酪酸（ａｍｉｎｏｂｕｔｕｒｉｃ  ａｃｉｄ）、およびβ−アラニン）は、これらの類似体が濃度２００μＭで可溶であったので、溶解性が改善された一方で、ＡＴ１６６（リンカーはγ−アミノ酪酸（ａｍｉｎｏｂｕｔｕｒｉｃ  ａｃｉｄ））およびＡＴ１６７（リンカーはβ−アラニン）は６３．２μＭの濃度しか得ることができないことが認められた。さらに、全ての類似体の拮抗性プロフィールがＧＩＰ（３−３０）ＮＨ２と比較して改善され（図３）、効力が２．９倍〜１４．８倍増加した（表５）ことが認められた。要約すれば、この分析により、脂質化部位への特定のリンカーの付加により驚くべき高い拮抗性効力を有するＧＩＰ受容体アンタゴニストが得られることが確認された。
【０３４９】
【表６】
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【０３５０】
実施例５−脂質化がＧＩＰ類似体のアルブミン結合を増加させる
ＧＩＰ受容体アンタゴニストの脂質化の要点は、より長いＴ１／２を達成することである。前述のように、本発明者らは、ｉｎ  ｖｉｖｏでＴ１／２を増加させる可能性を評価するために、脂質化した類似体がヒト血清アルブミン（ＨＳＡ）に結合する能力を使用した。２％ＨＳＡの非存在下および存在下でヒトＧＩＰ受容体を一過性に発現するＣＯＳ−７細胞で異種競合結合を行った。
【０３５１】
結果：
表１、２、および３で認められるように、いくつかの脂質化した類似体は、ＡＴ１１７およびＡＴ１３６の両方について親和性が１５．７倍まで変化するので、アルブミン結合力が非常に高い。
【０３５２】
実施例６−脂質化がＧＩＰ類似体の排出半減期を増加させる
脂質化がＴ１／２にどのような影響を及ぼすのかを評価するために、本発明者らは、ブタにおけるＡＴ１１７、ＡＴ１５９、およびＡＴ１７５のＴ１／２を測定した。総体積２〜６ｍＬで１〜１０ｎｍｏｌ／ｋｇの皮下投与によってこれを行い、その後にＡＴ１１７の投与１５分前から投与５７時間後までの時点で血液試料を採取した。図４に示すように、本発明者らは、ヒトにおけるＧＩＰ（３−３０）ＮＨ２のＴ１／２が７．５分であることを以前に決定していた。
【０３５３】
結果：
脂質化により、Ｔ１／２が、ＡＴ１１７については８時間（図４）、ＡＴ１５９およびＡＴ１７５については６時間（表３）に増加した。それ故、脂質化は、ＧＩＰペプチドの薬物動態学的プロフィールを改善するのに有効なストラテジーであり、したがって、長時間作用性ＧＩＰ受容体アンタゴニストを開発することができる。
【０３５４】
実施例７−ペプチド合成のプロトコール
全てのペプチドを、初期ローディング０．３５ｍｍｏｌ／ｇでのＲｉｎｋアミドＭＢＨＡ樹脂を使用したＦｍｏｃベースの手作業の固相ペプチド合成によって調製した。Ｎα保護のためのＦｍｏｃ基を、２０％ピペリジンを含むＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）での８分間の処理およびその後の同一試薬での１０分間の第２の処置によって切断した。Ｆｍｏｃ切断後、ペプチド−樹脂を、ＤＭＦ（×６）で洗浄した。次いで、次の残基を、ＤＩＰＣ／ＨＯＢｔカップリングプロトコール（Ｆｍｏｃ−アミノ酸（３当量）、ＤＩＰＣ（３当量）、およびＨＯＢｔ（３当量））を使用して組み込んだ。穏やかな撹拌（１時間）およびＤＭＦ（×６）での洗浄後、ペプチド−樹脂の一部をＫａｉｓｅｒ試験に供した。Ｋａｉｓｅｒ試験が正の結果を示す場合、再カップリングを行った（Ｆｍｏｃ−アミノ酸（２当量）、ＨＡＴＵ（２当量）、およびＤＩＥＡ（４当量））。全ペプチドのための工程を、ペプチド配列が終了するまで繰り返した。ペプチド配列の終了後にペプチドをアシル化したが、ペプチドは依然として樹脂に結合していた。
【０３５５】
ロット番号：Ｐ１７０１１７−０１−０８：
配列：（１，１６−ヘキサデカン二酸）−ＴＦＩＳＤＹＳＩＡＭＤＫＩＨＱＱＤＦＶＮＷＬＬＡＱＫ−ＮＨ２
【０３５６】
脂肪酸の抱合方法：
最後のＮ末端Ｎ−Ｆｍｏｃを除去後、Ｎ末端アミノ基を、３当量のＨＡＴＵおよび６当量のＤＩＰＥＡの存在下での３当量の１，１６−ヘキサデカン二酸の処理によってアシル化した。
【０３５７】
ロット番号：Ｐ２９０７１６−０１−１０Ｂ
配列：ＥＧＴＦＩＳＤＹＳＩＡＭＤＫＩ−Ｋ（Ｐａｌｍ）−ＱＱＤＦＶＮＷＬＬＡＱＫ−ＮＨ２
ロット番号：Ｐ２８０３１７−０１−２２
配列：ＴＦＩＳＤＹＳＩＡＭＤＫＩ−Ｋ（１，１６−ヘキサデカン二酸）−ＱＱＤＦＶＮＷＬＬＡＱＫ−ＮＨ２
ロット番号：Ｐ２９０７１６−０１−１６
配列：ＴＦＩＳＤＹＳＩＡＭＤＫＩＨＱＱＤＦＶＮＷＬＬＡＱＫ（Ｐａｌｍ）−ＮＨ２
ロット番号：Ｐ２８０３１７−０１−３０
配列：ＥＧＴＦＩＳＤＹＳＩＡＭＤＫＩ−Ｋ［（γ−Ｇｌｕ）−Ｐａｌｍ］−ＱＱＤＦＶＮＷＬＬＡＱＫ−ＮＨ２
ロット番号：Ｐ２８０３１７−０１−３１
配列：ＥＧＴＦＩＳＤＹＳＩＡＭＤＫＩ−Ｋ［（４−Ａｂｕ）−Ｐａｌｍ］−ＱＱＤＦＶＮＷＬＬＡＱＫ−ＮＨ２
ロット番号：Ｐ２８０３１７−０１−３２
配列：ＥＧＴＦＩＳＤＹＳＩＡＭＤＫＩ−Ｋ［（β−Ａｌａ）−Ｐａｌｍ］−ＱＱＤＦＶＮＷＬＬＡＱＫ−ＮＨ２
ロット番号：Ｐ２８０３１７−０１−３３
配列：ＥＧＴＦＩＳＤＹＳＩＡＭＤＫＩ−Ｋ［（γ−Ｇｌｕ）−ＡＥＥＡｃ−Ｐａｌｍ］−ＱＱＤＦＶＮＷＬＬＡＱＫ−ＮＨ２
【０３５８】
脂肪酸の抱合方法：
Ｄｄｅ保護側鎖を有するリジンを、アシル化位置での固相ペプチド合成のために使用した。ペプチド鎖の集合後、Ｎ末端アミノ基を、６当量のＤＩＰＥＡの存在下で３当量のＢｏｃ２Ｏによってキャッピングした。次いで、保護基Ｄｄｅを、２％ヒドラジン／ＤＭＦ（ｖ／ｖ）での処理によって除去した。
【０３５９】
ロット番号Ｐ２９０７１６−０１−１０ＢおよびＰ２９０７１６−０１−１６について：
３当量のパルミトイルクロリドを、６当量のＤＩＰＥＡの存在下でのパルミトイル化のために使用した。Ｐ２８０３１７−０１−２２について、３当量の１，１６−ヘキサデカン二酸をＨＡＴＵ／ＤＩＰＥＡによって活性化し、次いで、リジンの側鎖に抱合した。
【０３６０】
ロット番号Ｐ２８０３１７−０１−３０／３１／３２／３３について：
Ｆｍｏｃ−γ−Ｇｌｕ（ｔＢｕ）−ＯＨまたはＦｍｏｃ−４−Ａｂｕ−ＯＨまたはＦｍｏｃ−β−Ａｌａ−ＯＨまたはＦｍｏｃ−ＡＥＥＡｃ−ＯＨを、ＤＩＣ／ＨＯＢＴの標準的なプロトコールを使用してＬｙｓの側鎖に抱合した。次いで、これらの非天然アミノ酸のＮ末端アミノ基を、６当量のＤＩＰＥＡの存在下での３当量のパルミトイルクロリドの処理によってパルミトイル化した。
【０３６１】
全ペプチドを、最後に、ＴＦＡによって樹脂から放出させ、残存する保護基も放出させた。ペプチドを、分取ＨＰＬＣを使用して精製し、分析ＨＰＬＣおよびＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ質量分析によって品質を管理した。
【図１】
2020521784.tif 000065
【図２】
2020521784.tif 000066
【図３−１】
2020521784.tif 000067
【図３−２】
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【図４】
2020521784.tif 000069
【手続補正書】
【提出日】令和2年1月29日(2020.1.29)
【手続補正１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】配列表
【補正方法】追加
【補正の内容】
【配列表】
2020521784000001.app
【国際調査報告】
2020521784.tif 000070
2020521784.tif 000071
2020521784.tif 000072
2020521784.tif 000073
2020521784.tif 000074