(57)【要約】リガンドと受容体の結合性の測定方法において、リガンドと受容体を結合させる工程を、その表面のあらかじめ定められた領域に複数の異なるリガンド又は受容体が固定化された板状担体と、空隙形成用部材を介して当該板状担体と当該担体の上部を覆う被覆担体との間に形成された空隙に、当該空隙端より板状担体に固定化された物質に結合性を有する物質を含有する溶液を毛細管現象で注入して行うことを特徴とするリガンドと受容体の結合性の測定方法。
2001044814.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
リガンドと受容体の結合性の測定方法において、リガンドと受容体を結合させる工程を、その表面のあらかじめ定められた領域に複数の異なるリガンド又は受容体が固定化された板状担体と、空隙形成用部材を介して当該板状担体と当該担体の上部を覆う被覆担体との間に形成された空隙に、当該空隙端より板状担体に固定化された物質に結合性を有する物質を含有する溶液を毛細管現象で注入して行うことを特徴とするリガンドと受容体の結合性の測定方法。
【請求項２】
板状担体に固定化された物質に結合性を有する物質を含有する溶液を注入する際に生じる気泡を空隙形成用部材を介して当該板状担体と当該担体の上部を覆う被覆担体との間に形成された空隙の側面から除去することを特徴とする請求項１記載のリガンドと受容体の結合性の測定方法。
【請求項３】
空隙の容量が、２００μｌ以下であることを特徴とする請求項１又は２記載のリガンドと受容体の結合性の測定方法。
【請求項４】
空隙形成用部材を介して当該板状担体と当該担体の上部を覆う被覆担体との間に形成された空隙の厚さが、３００μｍ以下であることを特徴とする請求項１〜３のいずれか１項に記載のリガンドと受容体の結合性の測定方法。
【請求項５】
空隙形成用部材の担体への接触面積が、２．０ｃｍ２以下であることを特徴とする請求項１〜４のいずれか１項に記載のリガンドと受容体の結合性の測定方法。
【請求項６】
リガンドが核酸、ペプチド、蛋白、抗体、糖質、糖鎖、又は細胞である請求項１〜５のいずれか１項に記載のリガンドと受容体の結合性の測定方法。
【請求項７】
受容体が核酸、ペプチド、蛋白、抗体、糖質、糖鎖、又は細胞である請求項１〜６のいずれか１項に記載のリガンドと受容体の結合性の測定方法。
【請求項８】
被覆担体が、空隙形成用部材を保持した被覆担体である請求項１〜７のいずれか１項に記載のリガンドと受容体の結合性の測定方法。
【請求項９】
板状担体が、空隙形成用部材を保持した板状担体である請求項１〜７のいずれか１項に記載のリガンドと受容体の結合性の測定方法。
【請求項１０】
担体表面のあらかじめ定められた領域に複数の異なるリガンド又は受容体が固定化された板状担体と、空隙形成用部材を介して当該板状担体と当該担体の上部を覆う被覆担体との間に空隙を形成するための空隙形成用部材を保持することを特徴とする被覆担体。
【請求項１１】
担体表面のあらかじめ定められた領域に複数の異なるリガンド又は受容体が固定化された板状担体と、空隙形成用部材を介して当該板状担体と当該担体の上部を覆う被覆担体との間に空隙を形成するための空隙形成用部材を保持することを特徴とする板状担体。
【請求項１２】
板状担体に固定化された物質に結合性を有する物質を含有する溶液を注入する際に生じる気泡が、空隙形成用部材を介して当該板状担体と当該担体の上部を覆う被覆担体との間に形成された空隙の側面から除去されるような形状になることを特徴とする請求項１１又は１２記載の被覆担体と板状担体。
【請求項１３】
空隙の容量が、２００μｌ以下であることを特徴とする請求項１２記載の被覆担体と板状担体。
【請求項１４】
空隙形成用部材を介して当該板状担体と当該担体の上部を覆う被覆担体との間に形成された空隙の厚さが、３００μｍ以下であることを特徴とする請求項１２又は１３に記載の被覆担体と板状担体。
【請求項１５】
空隙形成用部材の担体への接触面積が、２．０ｃｍ２以下であることを特徴とする請求項１２〜１４のいずれか１項に記載の被覆担体と板状担体。
【発明の詳細な説明】
技術分野
本発明は、生化学の分野で有用なリガンドとその受容体の結合に関する情報を安定した状態で得るための測定方法、及び当該測定方法に使用する担体に関する。
背景技術
近年、マイクロアレイ、ｉｎ　ｓｉｔｕハイブリダイゼーション等で、固相担体に固定化されたターゲットと液中にある試料、例えばリガンドと受容体との結合あるいは親和性を試す実験がよく行われるようになってきた。そのような中で、反応中に試料溶液が乾燥するのを防ぐためと、ターゲットが固定化された担体表面と均一に試料溶液が接触するように被覆担体、例えばカバーガラスをかける。
このカバーガラスをかけるステップにおいては、先に試料溶液を固相担体上に滴下しておき、カバーを静かに載せる方法が通常であるが、その際に気泡が入ってしまうと、気泡がある部分は試料とターゲットが接触しておらず、正確な結果が得られない。しかし、気泡を入れずにカバーをかけることは非常に困難で、一度、気泡が入ってしまった場合、カバーを外し、かけ直してもそのことにより、固相担体表面が乾いたり、傷が付いたり、固定してあったターゲットがずれたりすることが起こる。つまり、一度、気泡が入るとその後、修正を加えても、正確な結果が得られないことが多い。例えば、上記カバーガラスとして、ＭＥＲＧＥＮ社のｓｅｌｆ−ｓｅａｌ　ｈｙｂｒｉｄｉｚａｔｉｏｎ　ｃｈａｍｂｅｒがあるが、該製品は正方形の形状のカバー部分の周囲を空隙形成のために約０．５ｍｍ程度の厚さのパッキン状のものが付着した形状で、上記試料溶液を注入する目的で、直径約１ｍｍ程度の穴が該カバーの角に対角線上に２個あいているものである。このカバーガラスを使用する場合、該カバーガラスの四方を空隙形成用部材で囲んでいるためかなり慎重にカバーガラスをかけ、ハイブリダイズ処理後にも同様に取り外す必要性がある。また、試料溶液を注入する際においても一方の穴から添加された試料溶液がもう一方の穴まで到着した時点で該溶液の移動が止まってしまい、問題の気泡を追い出すことが困難な場合がある。さらに、該カバーガラスでは、空隙の容量が大きく、約２００μｌの試料溶液が必要である。
別法としては、固相担体表面にカバーガラスをかけておき、その後、横から試料溶液を毛細管現象で注入することもできるが、この方法で注入しても、カバーガラスあるいは、固相担体の材質、固相担体の表面の状況、あるいは、表面に付着した汚れ、ごみ等により、気泡が混入しやすくなり、簡単に気泡を混入させずに、試料溶液を注入することは困難である。
このように、従来のカバーガラスではいろいろな問題をかかえており、容易に気泡を除去でき、しかも試料溶液量を必要最小限にできる空隙形成用部材保持担体が求められていた。
発明の目的
本発明の目的は、上記した作業手順において、固相担体と被覆担体の間への試料溶液の注入において、簡単な操作で気泡を入れず、均一な条件下でリガンドと受容体の結合性を測定する作業を実行でき、正確な結果が得られる方法、及び当該測定方法に使用する器具を開発し、提供することにある。
発明の概要
本発明を概説すれば、本発明の第１の発明は、リガンドと受容体の結合性の測定方法において、リガンドと受容体を結合させる工程を、その表面のあらかじめ定められた領域に複数の異なるリガンド又は受容体が固定化された板状担体と、空隙形成用部材を介して当該板状担体と当該担体の上部を覆う被覆担体との間に形成された空隙に、当該空隙端より板状担体に固定化された物質に結合性を有する物質を含有する溶液を毛細管現象で注入して行うことを特徴とするリガンドと受容体の結合性の測定方法に関する。
本発明の第１の発明において、板状担体に固定化された物質に結合性を有する物質を含有する溶液を注入する際に生じる気泡を空隙形成用部材を介して当該板状担体と当該担体の上部を覆う被覆担体との間に形成された空隙の側面から除去されることが好ましい。また、上記空隙の容量は、２００μｌ以下であることが好ましく、空隙形成用部材を介して当該板状担体と当該担体の上部を覆う被覆担体との間に形成された空隙の厚さが、３００μｍ以下が好適である。さらに、空隙形成用部材の担体への接触面積が、２．０ｃｍ２以下であることが好ましい。
本発明の第１の発明において、リガンドは、核酸、ペプチド、蛋白、抗体、糖質、糖鎖、又は細胞が好適に使用できる。また、受容体は、核酸、ペプチド、蛋白、抗体、糖質、糖鎖、又は細胞が好適に使用できる。
本発明の第１の発明において、被覆担体が、空隙形成用部材を保持した被覆担体であってもよい。あるいは、板状担体が、空隙形成用部材を保持した板状担体であってもよい。
本発明の第２の発明は、担体表面のあらかじめ定められた領域に複数の異なるリガンド又は受容体が固定化された板状担体と、空隙形成用部材を介して当該板状担体と当該担体の上部を覆う被覆担体との間に空隙を形成するための空隙形成用部材を保持することを特徴とする被覆担体に関する。
本発明の第３の発明は、担体表面のあらかじめ定められた領域に複数の異なるリガンド又は受容体が固定化された板状担体と、空隙形成用部材を介して当該板状担体と当該担体の上部を覆う被覆担体との間に空隙を形成するための空隙形成用部材を保持することを特徴とする板状担体に関する。
本発明の第２の発明あるいは第３の発明において、板状担体に固定化された物質に結合性を有する物質を含有する溶液を注入する際に生じる気泡が、空隙形成用部材を介して当該板状担体と当該担体の上部を覆う被覆担体との間に形成された空隙の側面から除去されるような形状になるような被覆担体と板状担体の組み合わせが好適に使用できる。また、該空隙の容量は、、２００μｌ以下であることが好ましく、空隙形成用部材を介して当該板状担体と当該担体の上部を覆う被覆担体との間に形成された空隙の厚さが、３００μｍ以下であることが好ましい。さらに、当該空隙形成用部材の担体への接触面積が、２．０ｃｍ２以下にすることが好ましい。
発明の詳細な説明
本発明において、リガンドとは、特定の受容体により認識、結合される分子であれば特に限定はなく、例えば核酸、ペプチド、蛋白、抗体、糖質、糖鎖、又は細胞等である。
リガンドの例には、細胞膜受容体に対するアゴニスト及びアンタゴニスト、毒素（ｔｏｘｉｎ及びｖｅｎｏｍ）、ウイルスエピトープ、ホルモン（例えば、ペプチドホルモン、ステロイドホルモン等）、ホルモン受容体、ペプチド、酵素、酵素基質、補因子、薬物、レクチン、糖、オリゴヌクレオチド、ポリヌクレオチド、核酸、オリゴサッカライド、蛋白質、及びモノクローナル抗体が含まれる。
本発明において受容体とは、当該リガンドに結合性を示すものであれば特に限定はなく、天然分子でも人工分子でも良い。例えば核酸、ペプチド、蛋白、抗体、糖質、糖鎖、細胞、蛋白質、例えば酵素、細胞表面蛋白質（レセプター）、糖蛋白質、モノクローナル抗体等である。
すなわち、本発明においてリガンドと当該リガンドに結合性を有する受容体の接触表面特性は相互に相補的である。
本発明において担体とは、非多孔性で、表面がなめらかな構造を有する材料であればよく、特に限定はされないが、例えば、カバーガラス、スライドガラス等のガラスあるいは透明なプラスチック等のポリマーが好適に使用できる。すなわち、試料溶液を保持できるものであれば特に限定はされない。
本発明において、板状担体と被覆担体との間に試料溶液を毛細管現象により注入するための空隙を形成するための空隙形成用部材は、板状担体、あるいは、被覆担体の少なくともどちらか一方に保持されていればよく、形成される空隙の少なくともその一端が開放されていれば良い。空隙形成用部材の材質及び保持方法は特に限定はなく、リガンドと受容体の結合反応中に溶出したり、蛍光を発したりしないものであれば良い。特に限定はされないがテフロン等が好適に使用できる。
本発明において空隙の容量とは、特に限定はされないが、例えば、板状担体と被覆担体との間に形成される空隙の容量のことを言う。該空隙は、リガンドあるいは受容体が固定化された、あらかじめ定められた領域を含むことが好ましい。
当該空隙形成用部材は板状担体又は被覆担体に付加されいても良く、一体形成されていても良い。
すなわち、板状担体に固定化された物質に結合性を有する物質を含有する溶液を注入する際に生じる気泡が、空隙形成用部材を介して当該板状担体と当該担体の上部を覆う被覆担体との間に形成された空隙の側面から除去されるような形状になるような被覆担体と板状担体の組み合わせになればよく、空隙形成用部材の形状及び該部材が板状担体あるいは被覆担体のいずれに保持されていてもよい。
本発明の空隙形成用部材によって形成される空隙の容量は、上記溶液と接触させようとする担体上の領域の面積４．８４ｃｍ２当り、好ましくは２００μｌ以下、さらに好ましくは１００μｌ以下、特に好ましくは５０μｌ以下である。また、空隙形成用部材を介して当該板状担体と当該担体の上部を覆う被覆担体との間に形成された空隙の厚さは、好ましくは１〜３００μｍの範囲、更に好ましくは３〜１００μｍの範囲、特に好ましくは、５〜６０μｍの範囲である。さらに、当該空隙形成用部材の担体への接触面積は、上記溶液と接触させようとする担体上の領域の面積４．８４ｃｍ２当り、好ましくは２．０ｃｍ２以下、さらに好ましくは１．５ｃｍ２以下、特に好ましくは、１．３ｃｍ２以下である。
本発明に使用する板状担体としては、リガンドと受容体の結合性を測定するために使用されているものであれば限定は無いが、例えばリガンドが固定化されたスライドガラスを好適に使用することができる。
また、被覆担体としては、固相担体上でリガンドと受容体の結合反応を行う際に使用されるものであれば限定はないが、例えば上記リガンドが固定化されたスライドガラスを被覆するためのカバーガラスを好適に使用することができる。
また空隙形成用部材を介して形成される空隙は、板状担体上に被覆担体を載せた状態で空隙の少なくとも一端から毛細管現象で試料溶液が注入できれば特に限定は無い。
なお板状担体、及び被覆担体の材質、大きさ等は、特に限定は無くリガンドと受容体の結合性を測定する工程において、本発明の目的に適合するものであれば何でもよい。
本発明の好適な例として、テフロン印刷により、カバーガラスにテフロンを空隙形成用部材として付加した被覆担体が例示される。テフロン印刷は通常ガラス表面に行う方法で行えば良く、リガンドと受容対の結合反応中に空隙形成用部材が溶出したり、溶出した部材が蛍光を発しなければ、その方法に特に限定はない。またテフロン印刷により、スライドガラスにテフロンを空隙形成用部材として付加した板状担体も提供される。またテフロン膜を板状担体と被覆担体の間に挟み、空隙形成用部材として使用することも本発明に包含される。
カバーガラスのテフロン印刷パターンの例を図１に示す。すなわち図１は本発明の空隙形成用部材を保持した被覆担体を示す図である。図中黒塗り部分がテフロン印刷部分である。また、本発明に使用される空隙形成用部材の厚さに関する摸式図を図２に示す。すなわち図２は、被覆担体と板状担体を側面から見た図であり、図中黒塗り部分が空隙形成用部材である。また、Ａは空隙形成用部材のない場合であり、Ｂは空隙形成用部材のある場合を示す。
本発明により、板状担体と被覆担体との間に、空隙形成用部材を介した空隙が形成され、当該空隙の端より板状担体に固定化された物質に結合性を有する物質を含有する試料溶液を毛細管現象で注入することが可能となり、当該結合反応を効率よく行うための、適度な空隙を設けることが可能になった。
また本発明の板状担体、被覆担体、空隙形成用部材からなるリガンドと受容体の結合反応用容器を用いることにより、形成される空隙に試料溶液を毛細管現象で注入することが可能になり、液を滴下してからカバーをかける従来方法で問題となっていた気泡の混入を簡単に確実に防ぐことができるようになった。
さらに、空隙のない通常の被覆担体、例えばカバーガラスを先に置いておいて横から試料溶液を注入する方法で問題となる被覆担体、あるいは板状担体の表面の状況、あるいは、表面に付着した汚れ、ごみ等の影響も受けることなく、板状担体と被覆担体との間に形成される空隙に、試料溶液を毛細管現象で注入することが可能となった。
特に板状担体と被覆担体との間に、空隙形成用部材を介した空隙が形成され、当該空隙の端より板状担体に固定化された物質に結合性を有する物質を含有する試料溶液を毛細管現象で注入する際に生じる気泡を除去する際に、上記空隙形成用部材の側面から除去することができるため、従来の被覆担体の表面に設けられた孔から除去するよりも簡単に行えるという利点を有する。
また、本発明の空隙形成用部材保持担体は、担体との接触面積が必要最小限であるため、空隙を形成する際にＤＮＡアレイ表面を傷つけることが少ないという利点を有する。特に、接触面積が少ないため、空隙への試料溶液の拡散が、カバーガラス四方全体をスペーサーで囲んだ物に対して効率的であるという利点を有する。
さらに、本発明の空隙形成用部材保持担体は、接着物質がついていないため、空隙形成時に被覆担体の設置位置を容易に修正することができる。
本発明のリガンドと受容体の結合性の測定方法において、上記空隙形成用部材保持担体を用いることにより、リガンドと受容体を結合させる工程を、その表面のあらかじめ定められた領域に複数の異なるリガンド又は受容体が固定化された板状担体と、空隙形成用部材を介して当該板状担体と当該担体の上部を覆う被覆担体との間に形成された空隙に、当該空隙端より板状担体に固定化された物質に結合性を有する物質を含有する溶液を毛細管現象で注入して行うことができる。
また、板状担体に固定化された物質に結合性を有する物質を含有する溶液を注入する際に生じる気泡を空隙形成用部材を介して当該板状担体と当該担体の上部を覆う被覆担体との間に形成された空隙の側面から容易に除去することができるため、ＤＮＡチップ取り扱い初心者においても、失敗することなく試料溶液をＤＮＡチップに注入することができる。さらに、本発明の空隙形成用部材保持担体を用いることにより、リガンドと受容体との結合性の測定において、試料溶液量を少なくすることができるため、ハイブリダイゼーション後に強いシグナルをえることができる。
以上のことから、リガンドと受容体との結合親和性実験において、誰にでも安定して確実な結果が得られる方法と容器を提供できるようになった。
実施例
以下に実施例をもって更に詳細に本発明を説明するが、本発明は実施例の範囲に限定されるものではない。
実施例１
図１に示したパターンのように、スクリーン印刷ハンドブック、第２版、１９９２年（日本スクリーン印刷技術協会）記載のスクリーン版印刷法でカバーガラス（松浪硝子工業社製）にテフロン印刷することにより、空隙形成用部材を付加したカバーガラス（２２ｍｍ×２２ｍｍ及び２２ｍｍ×４３ｍｍ）を作製した。
またスライドガラス（松浪硝子工業社製）の、図１に対応する位置にテフロン印刷を行い、空隙形成用部材を付加したスライドガラスを作成した。
実施例２
実施例１で作製した空隙形成用部材付きカバーガラス（図１中Ｂで示される）、部材の付加されていないカバーガラス（松浪硝子工業社製）、及び市販のＤＮＡマイクロアレイ（ＣｙａｎｏＣＨＩＰ　Ｖｅｒｓｉｏｎ　１．０：宝酒造社製）を用い、実際にハイブリダイゼーションの実験を行った。なお、カバーガラスのサイズは２２×４３ｍｍである。
被検液はラン藻ＰＣＣ６８０３を、明条件下で培養し、全ＲＮＡを常法により抽出し、得られたＲＮＡをテンプレートとし、蛍光標識した基質ヌクレオチド存在下で逆転写反応を行い、蛍光標識プローブを作成した。蛍光標識プローブは水に溶解後、ハイブリダイゼーションに供した。
その実験において、ハイブリダイズのステップで、上記ＤＮＡマイクロアレイにハイブリダイズ溶液を約２０μｌ滴下後、通常のカバーガラスをかぶせる方法と、先に厚さ２０μｍ及び７０μｍの空隙形成用部材付きカバーガラスを、上記ＤＮＡマイクロアレイに接地させた後、厚さ２０μｍの場合は３０μｌ、７０μｍの場合は７０μｌのハイブリダイズ溶液を注入する方法で比較した。
その結果、空隙形成用部材付きカバーガラスを用いる方法では、全く気泡が混入せず、操作も簡単で、非常にバックグラウンドの少ない、高感度な結果が得られた。
それに対し、通常のカバーグラスを用いた、通常の方法では、気泡が混入し、操作をやり直す必要が生じた。さらに、得られる結果も、解析が不可能になるものも多かった。
特にＤＮＡマイクロアレイ取扱の初心者１０人で、上記の方法の比較を行ったところ、１０人中９人が通常の方法では、気泡が混入した。
それに対して、スペーサー付きカバーガラスを用いる方法では、１０人中８人が気泡を混入することなくハイブリダイズ溶液を注入することが出来た。
以上の結果より、空隙形成用部材を付加した被覆担体を用いることにより、従来困難であった、リガンドと受容体の結合反応を均一な系で効率よく行えることが確認された。また空隙形成用部材が付加されたスライドガラスを用いてＤＮＡマイクロアレイを作成し、カバーガラスとの間に形成される空隙に、ハイブリダイズ溶液を注入したところ、気泡の形成頻度は極めて低く、効率の良いハイブリダイズ条件を設定することができた。
実施例３
（１）市販のＤＮＡマイクロアレイ（Ｈｕｍａｎ　Ｃａｎｃｅｒ　ＣＨＩＰ　Ｖｅｒ．２．０：宝酒造社製）及び実施例１で作製した空隙形成用保持部材付きスライドガラスを用い、実施例１で作製した空隙形成用部材付きカバーガラス、部材の付加されていないカバーガラス（松浪硝子工業社製）及び市販のＳｅｌｆ−Ｓｅａｌ　Ｈｙｂｒｉｄｉｚａｔｉｏｎ　Ｃｈａｍｂｅｒ　＆　Ｃｏｖｅｒ　Ｄｏｔｓ（ＭＥＲＧＥＮ社製）についてハイブリダイゼーションの比較実験を行った。
被検液は、ＨＬ６０細胞（大日本製薬社製）を培養し、該培養液から細胞を回収後、トリゾール試薬（Ｇｉｂｃｏ　ＢＲＬ社製）を用いて全ＲＮＡを抽出した。得られたＲＮＡをテンプレートとし、ＲＮＡ　Ｆｌｕｏｒｅｓｅｎｃｅ　Ｌａｂｅｌｉｎｇ　Ｃｏｒｅ　Ｋｉｔを用いて、蛍光標識した基質ヌクレオチド存在下で逆転写反応を行い、蛍光標識プローブを作成した。蛍光標識プローブは水に溶解後、ハイブリダイゼーションに供した。
カバーガラスの評価法については、実施例２と同様の方法を用いた。
その結果、実施例１で作製した空隙形成用部材付きカバーガラスを用いる方法では、全く気泡が混入せず、操作も簡単で、非常にバックグラウンドの少ない、高感度な結果が得られた。一方、ＭＥＲＧＥＮ社製カバーガラスを用いた場合は、気泡がカバーガラスから除去できない場合があった。このことから、気泡を除去する場合においては、被覆担体の上面から除去するよりも、空隙形成用部材により形成された空隙の側面から除去するほうが良いことが確認できた。さらに通常のカバーグラスを用いた場合では、気泡が混入し、操作をやり直す必要が生じた。さらに、得られる結果も、解析が不可能になるものも多かった。
また、ハイブリダイゼーションに用いる試料溶液量については、該溶液の接触する担体の面積が４．８４ｃｍ２の場合、空隙形成用部材がないカバーガラスを使用するときは１０μｌ、ＭＥＲＧＥＮ社カバーガラスを使用するときは２００μｌ、実施例１で作製した厚さ２０μｍの空隙形成用部材付きカバーガラスを使用したときは１５μｌであった。
また、実施例２記載のようなＤＮＡマイクロアレイ取扱の初心者１０人をパネラーとした比較実験においてもＭＥＲＧＥＮ社製スライドグラスを使用した場合、１０人中６人において、気泡が混入した。
それに対して、本発明の空隙形成用部材保持担体を使用した場合では、１０人中８人が気泡を混入することなくハイブリダイズ溶液を注入することが出来た。以上の結果より、空隙形成用部材を付加した被覆担体を用いることにより、従来困難であった、リガンドと受容体の結合反応を均一な系で効率よく行えることが確認された。また空隙形成用部材が付加されたスライドガラスを用いてＤＮＡマイクロアレイを作成し、カバーガラスとの間に形成される空隙に、ハイブリダイズ溶液を注入したところ、気泡の形成頻度は極めて低く、効率の良いハイブリダイズ条件を設定することができた。
実施例４
空隙形成用部材保持担体について検討した。該担体は、図２Ｂに示されるように、ハイブリ溶液の接触面積が４．８４ｃｍ２及び９．４６ｃｍ２の場合で、空隙形成用部材の厚さを０〜５００μｍの範囲で調整したものを用いた。空隙形成用部材の高さ以外の実験条件は、実施例３と同様に行った。
その結果、空隙形成用部材の厚さが、３００μｍ以下、特に１００μｍ以下の範囲で、気泡の除去が容易にでき、しかも試料検体とのハイブリダイゼーションが良好であった。
また、空隙形成用部材により形成された空隙の容量をハイブリ液量から解析したところ、ハイブリ液濃度（試料溶液濃度）を高くし、ハイブリ液量が少ないほど得られるシグナル強度は強くなることが確認できた。ハイブリ溶液の接触面積が４．８４ｃｍ２（２２×２２ｍｍ）で、使用液量が１０〜５０μｌの範囲、また接触面積が９．４６ｃｍ２（２２×４３ｍｍ）で使用液量が２０〜１００μｌの範囲が特に得られるシグナル強度の観点から有効であり、上記容量になるように空隙を調整することがよいことが確認できた。
さらに、空隙形成部材が被覆担体あるいは板状担体に接触している面積については、上記空隙の容量となるように調整すればよく、ハイブリ溶液の接触面積が４．８４ｃｍ２の場合、０．９ｃｍ２以下、接触面積が９．４６ｃｍ２の場合、１．３ｃｍ２以下で良好な結果が得られた。
以上のことから、本発明の空隙形成用保持担体は、ＤＮＡチップのハイブリダイゼーションにおいて有用であることが確認できた。
産業上の利用の可能性
本発明により、高密度リガンドアレイを用いて、受容体の検出を再現性良く、行うための、板状担体、被覆担体、及び空隙形成用部材からなる容器が提供され、当該容器を用いることによる、簡便で効率的なリガンドと受容体の結合性の測定方法が提供される。
【図面の簡単な説明】
図１：本発明の空隙形成用部材を保持した被覆担体を示す平面図である。
図２：本発明の空隙形成用部材を保持した被覆担体を示す側面図である。
【図１】
2001044814.tif 000003
【図２】
2001044814.tif 000004
【国際調査報告】
2001044814.tif 000005
2001044814.tif 000006