(57)【要約】被験者に投与した物質又はその分解若しくは代謝産物の血中への移行量及び／又は体外への排出量を測定することによって膵外分泌機能を診断するための製剤であって、前記物質はキャリアーに保持されており、膵外分泌機能に関連のある因子の作用により前記物質が前記キャリアーから放出されることを特徴とする前記製剤。
2002020061.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
被験者に投与した物質又はその分解若しくは代謝産物の血中への移行量及び／又は体外への排出量を測定することによって膵外分泌機能を診断するための製剤であって、前記物質はキャリアーに保持されており、膵外分泌機能に関連のある因子の作用により前記物質が前記キャリアーから放出されることを特徴とする前記製剤。
【請求項２】
膵外分泌機能に関連のある因子が膵外分泌酵素である請求項１記載の製剤。
【請求項３】
膵外分泌機能に関連のある因子が腸内溶液のｐＨである請求項１記載の製剤。
【請求項４】
薬剤がキャリアーに保持されており、膵プロテアーゼの作用により前記薬剤が前記キャリアーから放出されることを特徴とする薬物送達システム。
【請求項５】
薬剤がキャリアーに保持されており、膵プロテアーゼの作用により前記薬剤が前記キャリアーから放出されることを特徴とする製剤。
【発明の詳細な説明】
技術分野
本発明は、膵外分泌機能診断のための製剤、薬物送達システムおよび腸溶性製剤に関する。
背景技術
膵外分泌機能検査は慢性膵炎、急性膵炎、膵臓癌等の膵臓疾患の診断に有用な検査法である。また、病態の把握や投薬管理、疾患の予後の評価にも有用な検査法である（総説  Ａｒｖａｎｉｔａｋｉｓ  ａｎｄ  Ｃｏｏｋｅ．Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌｏｇｙ  ７４：９３２（１９７８）、Ｎｉｅｄｅｒａｕ  ａｎｄ  Ｇｒｅｎｄｅｌｌ．Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌｏｇｙ  ８８：１９７３（１９８５）、Ｇｏｌｄｂｅｒｇ．Ｂｕｌｌ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．Ｍｅｄ．１５：１（１９９０）、Ｌａｎｋｉｓｃｈ．Ｉｎｔ．Ｊ．Ｐａｎｃｒｅａｔｏｌｏｇｙ  １４：９（１９９３）、Ｂａｎｋ  ａｎｄ  Ｃｈｏｗ  Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌｏｇｉｓｔ  ２：２２４（１９９４）、Ｓｔｅｅｒ  ｅｔ  ａｌ．Ｎｅｗ  Ｅｎｇ．Ｊ．Ｍｅｄ．３３２：１４８２（１９９５））。
膵外分泌機能検査の標準検査法とされているのは、ゾンデを口から十二指腸まで挿入し十二指腸液を採取する検査法で、現在ではセクレチンを静脈内投与することにより膵液の分泌を誘起してから採取するセクレチン試験が一般的である。この方法は直接膵液の量や成分を分析することから正確度が高い。しかしながら、被験者の負担が非常に大きいため、繰返し試験やスクリーニング試験として用いることのできる検査法ではない。また、験者にも技術的熟練が要求されるため、一部の医療機関でしか実施できない検査法である。さらに、Ｘ線透視下でゾンデの位置を確認しながら十二指腸液を採取するため、Ｘ線被曝の問題もある。
このため、繰返し試験やスクリーニング試験には、ゾンデの挿入を必要としない簡易法が用いられている。現在実施されている方法は主に以下に述べる４検査法である。
１  膵臓から分泌されるキモトリプシンの合成基質ＢＴ−ＰＡＢＡ（Ｎ−ｂｅｎｚｏｙｌ  Ｌ−ｔｙｒｏｓｙｌ  Ｐ−ａｍｉｎｏｂｅｎｚｏｉｃ  ａｃｉｄ）を経口投与しキモトリプシンによる分解産物であるＰＡＢＡ（Ｐ−ａｍｉｎｏｂｅｎｚｏｉｃ  ａｃｉｄ）の尿中排泄率を測定するＰＦＤ試験。
２  膵臓から分泌されるコレステロールエステルハイドロラーゼ、エステラーゼの合成基質ＦＤＬ（Ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｉｎ  ｄｉｌａｕｒａｔｅ）を経口投与し、分解産物であるＦｌｕｏｒｅｓｃｅｉｎの尿中排泄率あるいは血中濃度を測定するＰＬＴ試験。
３  糞便中のキモトリプシンの定量を行う糞便中キモトリプシン試験。
４  糞便中のエラスターゼの定量を行う糞便中エラスターゼ試験。
しかしながら、いずれの検査法も感度が低く、軽度の膵外分泌機能低下を検出することができない。
さらにＰＦＤ試験、ＰＬＴ試験は検査に長時間を要するため、通院患者に頻繁に実施することはできないし、健康診断等で実施するには適当でない。
この問題を解決するために、これまでに多くの簡易膵外分泌機能検査法が検討されて来ており、１３Ｃ−標識化合物を投与して呼気中の１３ＣＯ２濃度の増加を測定する１３Ｃ−呼気テストの適用も試みられてきた。
１  リパーゼの基質となる１３Ｃ−標識Ｌｉｐｉｄや１３Ｃ−標識Ｍｉｘｅｄ  Ｔｒｉｇｌｙｃｅｒｉｄｅを投与する１３Ｃ−呼気テスト（Ｃｈｅｎ  ｅｔ  ａｌ．Ｊ．Ｎｕｃｌｅａｒ  Ｍｅｄ．１５：１１２５（１９７４）、Ｗａｔｋｉｎｓ  ｅｔ  ａｌ．Ｊ．Ｌａｂ．Ｃｌｉｎ．Ｍｅｄ．９０：４２２（１９７７）、Ｇｈｏｏｓ  ｅｔ  ａｌ．Ｄｉｇｅｓｔｉｏｎ  ２２：２３９（１９８１）、Ｊｏｈｎ，ＳＧ．Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌｏｇｙ  ８３：４４（１９８２）、Ｗａｔｋｉｎｓ  ｅｔ  ａｌ．Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌｏｇｙ  ８２：９１１（１９８２）、Ｂｅｎｉｎｉ  ｅｔ  ａｌ．Ｄｉｇｅｓｔｉｏｎ  ２９：９１（１９８４）、Ｊｏｎｅｓ  ｅｔ  ａｌ．Ｊ．Ｌａｂ．Ｃｌｉｎ．Ｍｅｄ．１０５：６４７（１９８５）、Ｋｎｏｂｌａｃｈ  ｅｔ  ａｌ．Ｍｏｎａｔｓｓｃｈｒ  Ｋｉｎｄｅｒｈｅｉｌｋｄ  １３６：２６（１９８８）、Ｖａｎｔｒａｐｐｅｎ  ｅｔ  ａｌ．Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌｏｇｙ  ９６：１１２６（１９８９）、Ｍｕｒｐｈｙ  ｅｔ  ａｌ．Ａｒｃｈ．Ｄｉｓｅａｓｅ  ｉｎ  Ｃｈｉｌｄｈｏｏｄ  ６５：５７４（１９９０）、Ｋａｔｏ  ｅｔ  ａｌ．Ａｍ．Ｊ．Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌ．８８：６４（１９９３）、ＭｃＣｌｅａｎ  ｅｔ  ａｌ．Ａｒｃｈ．Ｄｉｓｅａｓｅ  ｉｎ  Ｃｈｉｌｄｈｏｏｄ  ６９：３６６（１９９３）、Ｊａｋｏｂｓ  ｅｔ  ａｌ．Ｅｕｒ．Ｊ．Ｐｅｄｉａｔｒ．１５６：Ｓ７８（１９９７）、Ｋａｌｉｖｉａｎａｋｉｓ  ｅｔ  ａｌ．Ｅｕｒ．Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．２７：４３４（１９９７））。
２  コレステロールエステラーゼ、リパーゼの基質となる１３Ｃ−標識Ｃｈｏｌｅｓｔｅｒｏｌ  ｅｓｔｅｒを投与する１３Ｃ−呼気テスト（Ｍｕｎｄｌｏｓ  ｅｔ  ａｌ．Ｐｅｄｉａｔｒｉｃ  Ｒｅｓ．２２：２５７（１９８７）、Ｃｏｌｅ  ｅｔ  ａｌ．Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌｏｇｙ  ９３：１３７２（１９８７）、Ｍｕｎｄｌｏｓ  ｅｔ  ａｌ．Ｇｕｔ  ３１：１３２４（１９９０））。
３  アミラーゼの基質となる１３Ｃ−標識Ｓｔａｒｃｈを投与する１３Ｃ−呼気テスト（Ｈｉｅｌｅ  ｅｔ  ａｌ．Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌｏｇｙ  ９６：５０３（１９８９）、Ｄｅｗｉｔ  ｅｔ  ａｌ．Ｐｅｄｉａｔｒｉｃ  Ｒｅｓ．３２：４５（１９９２）、Ｚ．Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌ．３５：１８７（１９９７））。
４  プロテアーゼの基質となる１３Ｃ−Ｅｎｒｉｃｈｅｄ  Ｅｇｇ  Ｐｒｏｔｅｉｎ（鶏に１３Ｃ−Ｌｅｕｃｉｎｅを食べさせることで１３Ｃ−濃度を、天然存在比１．１ａｔｍ％から１．４ａｔｍ％まで濃縮したタンパク質）を投与する１３Ｃ−呼気テスト（Ｙ．Ｇｈｏｏｓ．１３ＣＯ２−Ｂｒｅａｔｈ  Ｔｅｓｔｓ  ａｔ  ｔｈｅ  ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ″Ｄｉｇｅｓｔｉｏｎ−Ａｂｓｏｒｐｔｉｏｎ″．Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  Ｈｏｓｐｉｔａｌ  Ｇａｓｔｈｕｉｓｂｅｒｇ，Ｌｅｕｖｅｎ，Ｂｅｌｇｉｕｍ．（１９９６））。
５１３Ｃ標識ペプチド（特開２０００−０５３６９７）、１３Ｃ標識フルオレセインエステル化合物（特開２０００−１５９７７３）、１３Ｃ標識オリゴ糖あるいはサイクロデキストリン／１３Ｃ標識化合物包接化合物（特開２０００−１５９８１０）を投与する呼気テスト。
しかしながら、１〜４についてはこれらも感度が低いこと、検査に長時間を要することなどの理由から臨床応用されるに至ってはいない。また、５については、用いる１３Ｃ標識化合物が現状では高価である。
かかる状況下、被験者への負担が小さく、安価で、かつ結果が短時間で得られる簡易膵外分泌機能検査法の開発が望まれるところである。
従って、本発明は、被験者への負担が小さく、安価で、かつ結果が即時に精度よく得られる感度の高い簡易膵外分泌機能検査を可能にする膵外分泌機能診断のための製剤を提供することを目的とする。
また、本発明は、新規な薬物送達システム及び腸溶性製剤を提供することも目的とする。
発明の開示
本発明者らは、膵外分泌酵素の基質からなるキャリアーに化合物を保持させた製剤を用いれば、膵外分泌酵素が作用した場合に、キャリアーの分解が起こって、化合物の放出速度が加速されることを利用して、膵外分泌機能検査を行うことができることを見出し、本発明を完成するに到った。
すなわち、本発明は、被験者に投与した物質又はその分解若しくは代謝産物の血中への移行量及び／又は体外への排出量を測定することによって膵外分泌機能を診断するための製剤であって、前記物質はキャリアーに保持されており、膵外分泌機能に関連のある因子の作用により前記物質が前記キャリアーから放出されることを特徴とする前記製剤を提供する。
また、本発明は、薬剤がキャリアーに保持されており、膵プロテアーゼの作用により前記薬剤が前記キャリアーから放出されることを特徴とする薬物送達システムを提供する。この薬物送達システムは、小腸上部を薬剤の標的部位とすることができる。
さらに、本発明は、薬剤がキャリアーに保持されており、膵プロテアーゼの作用により前記薬剤が前記キャリアーから放出されることを特徴とする製剤を提供する。この製剤は、腸溶性製剤として使用することができる。
本明細書において、「キャリアー」とは、被験者や患者に投与した種々の単体や化合物などの物質を製剤中に保持する役割、及び／又は安定化する役割、及び／又は生体内の目的とする部位へ運ぶ役割を果たすものを意味する。これには、固化卵白、脂質、多糖、デンプンゲル、アルブミンなどの高分子の支持体、錠剤、カプセル剤、散剤、顆粒剤などの粒子性の製剤、赤血球、リポタンパク質などの生体由来の物質などが含まれる。
「保持」とは、たもちつづけることをいう。物質がキャリアーに保持される態様として、物質がキャリアー中に分散及び／又は封入されていること、物質がキャリアーに吸着されていること、物質がキャリアーに結合していることなどを挙げることができる。
「分散」とは、ある物質が他の媒質中に細粒として存在していることをいう。細粒の大きさの程度は様々であり、細粒は、粗粒子（１μｍ以上）、コロイド（１μｍ〜１ｎｍ）、分子（１０ｎｍ以下）として存在しうる。ある物質がキャリアー中に分散されている態様として、ある物質がキャリアーの構成するマトリックス（例えば、高分子マトリックス）中に含有されること、ある物質の分子又は粒子がキャリアーを構成する物質の分子内又は分子間に存在すること、キャリアーを構成する物質の１個又は複数個の分子が形成する空隙中にある物質の分子又は粒子が存在することなどを例示することができる。
「封入」とは、中に入れて封じることをいう。封入の態様として、ある物質をマイクロカプセル内に内包させること、外皮で被覆すること、タンパクが金属イオンを内包することなどを例示することができる。
「吸着」とは、ある物質が二相の界面に濃縮されていることをいう。吸着の態様としては、ある物質が他の物質で構成されたマトリックス（例えば高分子マトリックス）表面にイオン結合などにより濃縮されていることなどを例示することができる。
「結合」とは、ある物質がキャリアーにエステル結合をはじめとする共有結合により結合することを含む概念である。タンパク質中のカルボキシル基にエタノールがエステル結合しているアルブミン−エチルエステル微粒子などを例示することができる。アルブミンに結合させる物質は、アルブミンのカルボキシル基あるいは水酸基とのエステル結合が可能で、遊離したときに無害、かつ定量可能な化合物なら何でもよく、エタノールをはじめとする人体に無害なアルコール類、ぎ酸、酢酸、プロピオン酸、ピルビン酸、安息香酸などの有機酸、グルコースをはじめとする糖類、アラニンをはじめとするアミノ酸を例示することができる。
「膵外分泌機能に関連のある因子」とは、膵外分泌機能に関与・貢献する物質や環境要因を意味し、これには、膵外分泌酵素（プロテアーゼ、リパーゼ、アミラーゼなど）、腸内溶液のｐＨ、炭酸水素イオン、ナトリウムイオン、塩素イオン、カルシウムイオン、腸内溶液量などが含まれる。
「薬剤」とは、医薬用途に用いられる種々の単体及び化合物をいう。
「腸溶性」とは、胃内で溶解又は崩壊することがなく、腸に達して初めて溶解又は崩壊するか、あるいは胃内での溶解又は崩壊の程度は小さいが、腸に達するとその程度が大きくなる性質をいう。
以下、本発明を詳細に説明する。
本発明の膵外分泌機能診断剤は、被験者に投与した物質又はその分解若しくは代謝産物の血中への移行量及び／又は体外への排出量を測定することによって膵外分泌機能を診断するための製剤である。被験者に投与する物質（以下、「投与物質」という）は、キャリアーに保持されている（例えば、キャリアー中に分散及び／又は封入されているか、キャリアーに吸着されているか、キャリアーに結合している）。キャリアーは、膵外分泌機能に関連のある因子の作用により、キャリアーに保持されている物質を放出する。本発明の一態様では、膵外分泌機能に関連のある因子の作用により、キャリアーの構造の変化（例えば、キャリアーを構成する物質の分解・溶解、キャリアーを構成する物質の構造変化・分子間距離の変化など）、キャリアー表面の性質の変化などが起こり、その結果、キャリアーに保持されている物質が放出される。
例えば、本発明の膵外分泌機能診断剤は、膵外分泌酵素により分解されるか、あるいは膵臓からの重炭酸イオンの分泌により上昇した腸内溶液のｐＨで溶解する物質から構成されるキャリアーに任意の物質が保持された構造をもつ。このような診断剤を被験者に経口投与すると、膵外分泌機能が低下している場合には、キャリアーの分解・溶解速度が減少し、キャリアーに保持されていた物質の放出速度が低下する。放出された物質は腸で吸収され、血中に移行し、そのままの形で、あるいはその分解・代謝産物が尿中あるいは呼気中に排出される。放出された物質あるいはその分解・代謝産物の血中、尿中、あるいは呼気中の一定時間後の量やその経時変化を比較することにより膵外分泌機能低下の診断をおこなう。
キャリアーは、例えば、膵外分泌酵素（プロテアーゼ、リパーゼ、アミラーゼ）によって分解される物質（基質）、腸内溶液のｐＨ（例えば、ｐＨ４．５〜８．５）で溶解する物質から構成されるとよい。検査対象の膵外分泌酵素の種類に応じて、その基質となる物質を選択するとよい。
プロテアーゼによって分解される物質は、アミド結合、ペプチド結合を含む物質であればよく、具体的にはタンパク質（卵白、ゼラチン、ポリ−Ｌ−リジン、アルブミンなど）、ペプチド、ポリペプチド、架橋ペプチド、プロテオグリカンなどが挙げられる。リパーゼによって分解される物質は、トリグリセリド、ジグリセリドなどのエステル結合を含む物質であればよく、具体的には脂質（グリセリンモノ脂肪酸エステル、グリセリンジ脂肪酸エステルなど）などが挙げられる。このうち、グリセリンモノカプリレート、グリセリンモノステアレート、ポリエチレングリコールモノステアレートが好ましい。アミラーゼによって分解される物質は、α−１，４グルコシド結合を含む物質であればよく、具体的には多糖（デンプン、アミロース、アミロペクチン、デキストリンなど）、架橋オリゴ糖などが挙げられる。
腸内溶液のｐＨで溶解する物質は、一般的に腸溶性製剤に用いられている化合物であればよく、具体的には、酢酸フタル酸セルロース、カルボキシメチルエチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロースフタレート、ヒドロキシプロピルメチルセルロースアセテートサクシネート、メタアクリル酸コポリマーＬ、メタアクリル酸コポリマーＬＤ、メタアクリル酸コポリマーＳ、セラックが挙げられる。
上記に挙げた物質は単独で用いてもよいし、複数種を混合して用いてもよい。また、いずれも上記に具体的に挙げた物質に限られない。
投与物質は、化合物であっても単体であってもよく、その物質自体、あるいは、その分解・代謝産物の血中への移行量又は体外への排出量（例えば、尿中・呼気中への排出量）の測定が可能である限り、その種類は限定されない。
血中への移行量を測定する場合は、投与物質自身、あるいは、その分解・代謝産物が消化管腔から血中に速やかに移行するものであるとよい。また、全血・血清・血漿を、そのまま、あるいは、脱抱合などの前処理、分離・精製操作を行った後に、比色法、蛍光光度法、電気化学的方法、放射化学・核化学的方法などにより、投与物質自身、あるいは、その分解・代謝産物を直接的に定量ができる物質であるとよい。投与物質自身、あるいは、その分解・代謝産物自身を直接定量できなくても、酵素的に、あるいは、呈色試薬、酸化還元試薬などを用いて、比色法、蛍光光度法、電気化学的方法などで定量可能な物質に変換することで間接的に定量できるものであってもよい。
具体的には、投与物質自身、あるいは、その分解・代謝産物を直接的に比色定量可能な物質としては発色団を有するインドシアニングリーン、ブロモサルファレイン、ニュートッラルレッド、フェノールスルホンフタレイン、インジゴカルミンなどが挙げられ、蛍光光度法で直接的に定量可能な物質としてはフルオレセイン、カルセイン、ローダミンなど蛍光物質が挙げられ、電気化学的方法によって直接的に定量可能な物質としてはフェロセンカルボン酸、アスコルビン酸、リチウムイオン、グルタチオンなどの酸化還元物質が挙げられ、放射化学・核化学的方法によって直接的に定量可能な物質としては放射性同位体、安定同位体による標識化合物などを挙げることができるが、これらに限定されるものではない。また、間接的に比色定量可能な物質としてはｐ−アミノ安息香酸、４−アミノアンチピリン、ヨウ化ナトリウム、カフェイン、キシロース、エタノールをはじめとするアルコール類、ぎ酸、酢酸、プロピオン酸、ピルビン酸、安息香酸などの有機酸、グルコースをはじめとする糖類などが挙げられ、蛍光光度法で間接的に定量可能な物質としてはフルオレセインジ酢酸などが挙げられ、電気化学的方法によって間接的に定量可能な物質としてはガラクトース、Ｄ−アミノ酸、グリコール酸などを挙げることができるが、これらに限定されるものではない。
尿中への排出量を測定する場合は、投与物質自身、あるいは、その分解・代謝産物が速やかに尿中に排出されるものであるとよい。また、尿を、そのまま、あるいは、脱抱合などの前処理、分離・精製操作を行った後に、比色法、蛍光光度法、電気化学的方法、放射化学・核化学的方法などにより、投与物質自身、あるいは、その分解・代謝産物を直接的に定量ができる物質であるとよい。投与物質自身、あるいは、その分解・代謝産物自身を直接定量できなくても、酵素的に、あるいは、呈色試薬、酸化還元試薬などを用いて、比色法、蛍光光度法、電気化学的方法などで定量可能な物質に変換することで間接的に定量できるものであってもよい。
具体的には、投与物質自身、あるいは、その分解・代謝産物を直接的に比色定量可能な物質としては発色団を有するフェノールスルホンフタレイン、インジゴカルミンなどが挙げられ、蛍光光度法で直接的に定量可能な物質としてはフルオレセイン、カルセイン、ローダミンなど蛍光物質が挙げられ、電気化学的方法によって直接的に定量可能な物質としてはフェロセンカルボン酸、アスコルビン酸、リチウムイオンなどの酸化還元物質が挙げられ、放射化学・核化学的方法によって直接的に定量可能な物質としては放射性同位体、安定同位体による標識化合物などを挙げることができるが、これらに限定されるものではない。また、間接的に比色定量可能な物質としてはｐ−アミノ安息香酸、４−アミノアンチピリン、ヨウ化ナトリウム、カフェイン、キシロース、エタノールをはじめとするアルコール類、ぎ酸、酢酸、プロピオン酸、ピルビン酸、安息香酸などの有機酸、グルコースをはじめとする糖類などが挙げられ、蛍光光度法で間接的に定量可能な物質としてはフルオレセインジ酢酸などが挙げられ、電気化学的方法によって間接的に定量可能な物質としてはガラクトース、Ｄ−アミノ酸、グリコール酸などを挙げることができるが、これらに限定されるものではない。
呼気中への排出量を測定する場合は、投与物質自身、あるいは、その分解・代謝産物が揮発性物質であるか、炭酸ガス、アンモニアなどまで速やかに分解・代謝されるものであるとよい。また、呼気を、そのまま、あるいは、捕集・濃縮などの前処理、分離・精製操作を行った後に、比色法、蛍光光度法、電気化学的方法、放射化学・核化学的方法などにより、投与物質自身、あるいは、その分解・代謝産物を直接的に定量ができる物質であればよい。投与物質自身、あるいは、その分解・代謝産物自身を直接定量できなくても、酵素的に、あるいは、呈色試薬、酸化還元試薬などを用いて、比色法、蛍光光度法、電気化学的方法などで定量可能な物質に変換することで間接的に定量できるものであってもよい。
投与物質自身、あるいは、その分解・代謝産物を放射化学・核化学的方法によって直接的に定量可能な物質としては、１４Ｃなどの放射性同位体、１３Ｃ、１５Ｎなどの安定同位体による標識化合物などが挙げられる。具体的には、１３Ｃ標識ＮａＨＣＯ３、１３Ｃ標識ぎ酸、１３Ｃ標識酢酸、１３Ｃ標識プロピオン酸、１３Ｃ標識乳酸、１３Ｃ標識酪酸、１３Ｃ標識ピルビン酸、１３Ｃ標識安息香酸などの有機酸や、１３Ｃ標識アラニンをはじめとする１３Ｃ標識アミノ酸、１３Ｃ標識グルコースなどの１３Ｃ標識糖類、１３Ｃ標識エタノールをはじめとする１３Ｃ標識アルコール類などを挙げることができるが、これらに限定されるものではない。
本発明の膵外分泌機能診断剤は、胃で変化することなく腸に到達せしめるような経口剤（錠剤、カプセル剤、散剤、顆粒剤、液剤等）に製剤化されたものであるとよい。望ましくは、マイクロカプセル又はマイクロスフェアーが水中に懸濁又は乳化している液状の製剤である。製剤を製造するための製剤添加物として、公知の種々の賦形剤、補助剤及び添加剤を用いることができる。例えば、賦形剤としては、糖類（乳糖、白糖、ブドウ糖、マンニトール）、デンプン（バレイショ、コムギ、トウモロコシ）、無機物（炭酸カルシウム、硫酸カルシウム、炭酸水素ナトリウム、塩化ナトリウム）、結晶セルロース、植物末（カンゾウ末、ゲンチア末）などが挙げられる。結合剤としては、デンプンのり、アラビアゴム、ゼラチン、アルギン酸ナトリウム、メチルセルロース、エチルセルロース、ポリビニルピロリドン、ポリビニルアルコール、ヒドロキシプロピルセルロース、カルメロースなどを挙げることができる。崩壊剤としては、デンプン、寒天、ゼラチン末、結晶セルロース、ナトリウムカルボキシメチルセルロース、カルシウムカルボキシメチルセルロース、炭酸カルシウム、炭酸水素ナトリウム、アルギン酸ナトリウムなどを挙げることができる。滑沢剤としては、ステアリン酸マグネシウム、タルク、水素添加植物油、マクロゴール、シリコーン油などが挙げられる。また、懸濁化剤としては、アラビアゴム、アルギン酸ナトリウム、メチルセルロース、ナトリウムカルボキシメチルセルロース、ポリビニルピロリドン、ポリソルベート８０、トラガント、モノステアリン酸アルミニウムなどを挙げることができる。乳化剤としては、アラビアゴム、コレステロール、ステアリン酸ポリオキシル４０、セスキオレイン酸ソルビタン、ポリソルベート８０、ラウリル硫酸ナトリウムなどを挙げることができる。この他に、精製水、界面活性剤などを用いてもよい。
本発明の膵外分泌機能診断剤の剤形の一態様として、高分子マトリックスに投与物質を保持させた製剤を挙げることができる。高分子マトリックスを形成する材料としては、膵外分泌機能に関連のある因子の作用によりマトリックスの構造が変化して、物質を放出できるものを選択するとよく、前述の膵外分泌酵素によって分解される物質、腸内溶液のｐＨで溶解する物質などを挙げることができる。また、高分子マトリックスに投与物質を保持させた製剤をさらに腸溶性コーティングで被覆してもよい。
別の一態様として、投与物質を含有するコア（芯）が外皮で被覆されている製剤を挙げることができる。外皮を形成する材料としては、膵外分泌機能に関連のある因子の作用により外皮の構造が変化して、投与物質を放出できるものを選択すればよく、前述の膵外分泌酵素によって分解される物質、腸内溶液のｐＨで溶解する物質などを挙げることができる。それら複数種を層状に重ねて外皮を形成することもできる。また、投与物質を含有するコアが外皮で被覆されている製剤をさらに腸溶性コーティングで被覆してもよい。コアは、錠剤、カプセル剤、顆粒剤であってもよい。
上記の高分子マトリックスに投与物質を保持させた製剤又は投与物質を含有するコアが外皮で被覆されている製剤の粒径は、２ｎｍ〜２０ｍｍであるとよく、好ましくは、１μｍ〜８ｍｍ、より好ましくは、１μｍ〜５００μｍである。また、これらの製剤の胃内容排出速度を上げるために、比重の大きい物質（例えば、金など）、アルカリ剤（例えば、炭酸水素ナトリウムなど）や胃排出を促進する成分（例えば、メトクロプラミドなど）を添加したり、製剤の表面を親水化処理してもよい。
上記の高分子マトリックスに投与物質を保持させた製剤又は投与物質を含有するコアが外皮で被覆されている製剤はマイクロカプセル化されて、水中に懸濁又は乳化しているとよい。マイクロカプセル化された製剤の製法は、公知であり、例えば、Ｐａｔｒｉｃ  Ｖ．Ｄｅａｓｙ，Ｍｉｃｒｏｅｎｃａｐｓｕｌａｔｉｏｎ  ａｎｄ  Ｒｅｌａｔｅｄ  Ｄｒｕｇ  Ｐｒｏｃｅｓｓ，Ｍａｒｃｅｌ  Ｄｅｋｋｅｒ  Ｉｎｃ．，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ（１９８４）、米国特許第４，０６１，２５４号、同４，８１８，５４２号、同５，０１９，４００号、同５，２７１，９６１号、Ｗａｋｉｙａｍａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｈｅｍ．Ｐｈａｒｍ．Ｂｕｌｌ．，２９，３３６３−６８（１９８１）などに記載されている。
あるいはまた、上記の高分子マトリックスに投与物質を保持させた製剤又は投与物質を含有するコアが外皮で被覆されている製剤をさらにカプセル内に充填してもよい。この場合、カプセル自体が腸溶性であることが好ましい。
投与物質の製剤中における含量は、製剤の種類により異なるが、通常、１〜９９重量％、好ましくは１〜１０重量％である。
上記の製剤は、小腸上部を標的部位とする薬物送達システム及び腸溶性製剤として利用することもできる。
本発明の膵外分泌機能診断剤を用いる膵外分泌機能検査は、本発明の膵外分泌機能診断剤を経口投与し、一定時間後の、投与物質自体またはその分解・代謝産物の血中への移行量または体外への排出量（例えば、尿中・呼気中への排出量）、あるいは投与後一定時間までの血中への移行量または体外への排出量の積算または経時変化（立ち上がりの傾き、傾きの変化、ピークの時間等）の測定データから膵外分泌機能の診断を行う。
測定方法は、測定対象（血液、尿、呼気）および投与物質に応じて選択され、比色定量法、蛍光定量法、質量分析法、ＮＭＲ（核磁気共鳴）法、ＨＰＬＣ法、ガスクロマトグラフィー、ガスクロマトグラフ−質量分析法（ＧＣ−ＭＳ）、光電音響分光法、ＧＭ計数管法、液体シンチレーション法、固体シンチレーション法、オートラジオグラフィー、電離箱法などで行うことができる。
具体的には、血中への移行量を測定する場合には、採血した血液をそのまま測定してもよいし、分離・前処理などの操作を施した血液を測定してもよい。例えば、蛍光化合物を含有する診断剤を投与し、一定時間後に採血をおこない、血清あるいは血漿を調製し、蛍光強度を比較することなどによりおこなう。あるいは、色素を含有する診断剤を投与する場合には、一定時間後に採血をおこない血清あるいは血漿中の色素濃度を分光光度計などで測定してもよいし、また、採血することなく皮膚上から血液中の色素量を測定してもよい。
また、尿を試料とする場合には、比色定量法、蛍光定量法、質量分析法、ＮＭＲ（核磁気共鳴）法、ＨＰＬＣ法、ガスクロマトグラフィー等で行うことができる。尿をそのまま測定してもよいし、分離・前処理などの操作を施した尿を測定してもよい。例えば、蛍光化合物を含有する診断剤を投与し、一定時間後に採尿をおこない、尿中の蛍光強度を比較することなどによりおこなう。あるいは、色素を含有する診断剤を投与する場合には、一定時間後に採尿をおこない尿中の色素濃度を分光光度計などで測定することによりおこなう。
呼気中への排出量を測定する場合で、たとえば１３Ｃ標識化合物を含有する診断剤を用いる際には、その測定を１３ＣＯ２のガスクロマトグラフ−質量分析法（ＧＣ−ＭＳ）、赤外分光法、質量分析法、光電音響分光法、ＮＭＲ（核磁気共鳴）法等で行うことができる。また１４Ｃ標識化合物を含有する診断剤を用いる際には、呼気を直接あるいは溶媒等にＣＯ２をトラップした後、ＧＭ計数管、液体シンチレーションカウンター、固体シンチレーションカウンター、オートラジオグラフィー、電離箱法などで測定を行うことができる。
本発明の膵外分泌機能診断剤を被験者に投与する前に、試験食等を投与して、膵外分泌酵素の分泌を誘起しておいてもよく、また、試験食と共に投与してもよい。
本発明の膵外分泌機能診断剤に含まれる投与物質の量は、投与による試料中の検出対象物質（投与物質自体、あるいはその分解・代謝産物）の増加を確認できる量が必要であり、患者の年齢、体重、検査目的により異なるが、例えば１回当たりの投与量は成人の場合、１〜２０００ｍｇ／ｋｇ体重程度である。
本発明で提供される薬物送達システムおよび腸溶性製剤では、十二指腸以降の消化管において吸収されるように薬剤を到達せしめることができる。したがって、胃で胃酸・酵素などにより分解されると不都合な薬剤、あるいは胃で吸収されると障害を起こすような薬剤の送達に有用である。このような薬剤の例として、溶性ピロリン酸第二鉄などの鉄剤、ビフィズス菌製剤、ビサコジルおよびセンノサイドなどの便秘薬、アスピリンなどが挙げられる。
また、本発明で提供される薬物送達システムおよび腸溶性製剤では、十二指腸以降の消化管において吸収されるように薬剤を到達せしめる特性により、薬剤の放出に徐放性をもたせることができるため、放出時間の遅れを利用した薬剤の副作用の抑制・効果の持続化が可能である。このような薬剤の例として、ピンドロール、セファレキシンなどセフェム系抗生剤、マレイン酸クロルフェニラミン、グリセオフルビン、エトレチナートなどが挙げられる。
本明細書は、本願の優先権の基礎である特願２０００−２７２１１６号の明細書および／または図面に記載される内容を包含する。
発明を実施するための最良の形態
以下に、本発明を実施例により具体的に説明するが、本発明の範囲はこれらに何ら影響されることはない。
〔実施例１〕
トリパンブルーを包含する固化卵白を、トリプシン添加バッファーおよびバッファーに浸漬し、トリパンブルー溶出の経時変化を比較した。
１−１  方法
卵白に少量のトリパンブルーを加え、泡立てないようによくかき混ぜ溶解した。濃紺色になった卵白を透析チューブ（径５ｍｍ、ＭＷＣＯ  １２〜１４０００）に注入し、０．４％トリパンブルー溶液中で湯煎し固化させた。７，８分後、透析膜を切断してはがし、径５ｍｍ×長さ２５ｍｍの円柱状の固化卵白を２本調製した。
１本を、▲１▼２００ｍＭ  Ｐｉｐｅｓ−Ｋ（ｐＨ７．０）１５ｍＬ、他方を▲２▼０．１％トリプシン含２００ｍＭ  Ｐｉｐｅｓ−Ｋ（ｐＨ７．０）１５ｍＬに浸漬した。
経時的に溶液を２００μＬずつサンプリングし、トリパンブルーの溶出量をマイクロプレートリーダー（モレキュラーデバイス社製）で５９０ｎｍの吸収を測定することでモニターした。
１−２  結果
浸漬開始後４０分で▲１▼５０ｍＭ  Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ（ｐＨ８．０）５ｍＬではＡｂｓ  ５９０ｎｍが０．０５６であったのに対して、▲２▼トリプシン添加では０．０９９と、トリプシン添加によってトリパンブルーの溶出がブランクに比して加速された（図１）。さらに浸漬開始後１６５分では▲１▼５０ｍＭ  Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ（ｐＨ８．０）５ｍＬではＡｂｓ  ５９０ｎｍが０．０９２であったのに対して、▲２▼トリプシン添加では０．３３８と、顕著な差が認められた。
〔実施例２〕
トリパンブルーを包含するデンプンゲルを、十二指腸液添加バッファー、アミラーゼ添加バッファーおよびバッファーに浸漬し、トリパンブルー溶出の経時変化を比較した。
２−１  方法
電気泳動用水解デンプン（ＷＡＫＯ）を０．１６％トリパンブルー溶液（０．３５％ＮａＣｌ）に１０％になるように加え、攪拌しながら加熱した。粘性がでて、透明になった溶液をディスポーザブル・メスピペット（直径４ｍｍ）に泡を立てないように吸い取り冷水中で固めた。１時間の冷却後、ゲル化したデンプンを押し出し、径４ｍｍ×長さ１０ｍｍの円柱状のデンプンゲルを３本調製した。
▲１▼５０ｍＭ  Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ（ｐＨ８．０）５ｍＬ、▲２▼５０ｍＭ  Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ（ｐＨ８．０）５ｍＬに３４４Ｕ／Ｌ  アミラーゼ溶液１ｍＬを添加した溶液、▲３▼５０ｍＭ  Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ（ｐＨ８．０）５ｍＬに十二指腸抽出液１ｍＬを添加した溶液にそれぞれ浸漬した。
経時的に溶液を２００μＬずつサンプリングし、トリパンブルー溶出量をマイクロプレートリーダー（モレキュラーデバイス社製）で５９０ｎｍの吸収を測定することでモニターした。
なお、十二指腸抽出液は、一晩絶食したＷｉｓｔａｒ（オス）８週齢ラットの十二指腸を摘出・切開し、５０ｍＭ  Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ（ｐＨ８．０）１ｍＬに加え、ボルテックス・ミキサーで攪拌したのち、組織を取り除くことで得た。
２−２  結果
浸漬開始後３０分で▲１▼５０ｍＭ  Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ（ｐＨ８．０）５ｍＬではＡｂｓ  ５９０ｎｍが０．１６５であったのに対して、▲２▼アミラーゼ添加では０．１９８、さらに▲３▼十二指腸液添加では０．３４６と、アミラーゼ添加および十二指腸抽出液添加によってトリパンブルーの溶出がブランクに比して加速された（図２）。
〔実施例３〕
慢性膵炎ラットと対照ラットに１３Ｃ−ＮａＨＣＯ３およびフルオレセインを包含する固化卵白を麻酔下で十二指腸内に投与し、呼気ＣＯ２中の１３ＣＯ２濃度の経時変化および血中・尿中フルオレセイン濃度を比較した。
３−１方法
１３Ｃ−ＮａＨＣＯ３（マストレース社製）４０ｍｇ、フルオレセイン３．２ｍｇを１ｍＬの蒸留水に溶解し、卵白７ｍＬを加えた。泡立てないようにゆっくりとピペッティングで混和した。チェンバースライド（ヌンク社製、Ｃａｔ＃１７７４５３）に流し込み、８０℃で１５分間加熱して１３Ｃ−ＮａＨＣＯ３およびフルオレセイン包含卵白を固化させた。放置冷却の後、ディスポーザブル・メスピペット（径４ｍｍ）で打ち抜き、体積２００μＬの円柱状の固化卵白を得た。
慢性膵炎ラットの作成はＭｕｎｄｌｏｓらの方法（Ｍｕｎｄｌｏｓ  ｅｔ  ａｌ．Ｐａｎｃｒｅａｓ  １：２９（１９８６））に従い、５週齢のＷｉｓｔｅｒ系雄性ラットの膵管へオレイン酸を注入し、３週間飼育した。また、腹部正中切開を実施したラットを対照とした。
一晩絶食した８週齢の慢性膵炎ラット、および対照ラットを、麻酔下で仰向けに固定した。ストロークポンプ［バリアブル・ストロークポンプＶＳ−５００、（株）柴田科学工業］を用いて呼気を約１００〜３００ｍｌ／ｍｉｎの速度で吸引し、そのまま１３ＣＯ２アナライザーＥＸ−１３０Ｓ［（株）日本分光］のフローセルに導入した。ラットホルダーとストロークポンプの間にはパーマピュアドライヤー（ＭＤ−０５０−１２Ｐ、Ｐｅｒｍａ  Ｐｕｒｅ  ＩＮＣ．）を設置して呼気中の水蒸気を除去した。炭酸ガス濃度が安定した状態で、１３Ｃ−ＮａＨＣＯ３およびフルオレセイン包含固化卵白２００μＬを十二指腸内に投与した。吸引呼気中の炭酸ガス濃度は３±０．５％に維持した。
１３ＣＯ２アナライザーから出力されるデータはＡＤ変換した後パーソナルコンピュータ（Ａｐｐｌｅ  Ｐｏｗｅｒ  Ｍａｃｉｎｔｏｓｈ  ８５００）に取込み、データ処理ソフトウェア  Ｌａｂ  ＶＩＥＷ（Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ）を用いて５秒間隔で１００ｍｓｅｃ毎１０点のデータを積算平均し、１３Ｃａｔｏｍ％、Δ１３Ｃ（‰）、炭酸ガス濃度（％）に変換することで連続測定１３Ｃ−呼気テストを行った。変換したデータはリアルタイムで画面表示した後、ハードディスク中に保存した。
尚、Δ１３Ｃ（‰）は各時点の呼気ＣＯ２中の１３Ｃ濃度（１３Ｃｔｍｉｎ）とＣＯ２標準ガスの１３Ｃ濃度（１３Ｃｓｔｄ）から下式により算出した。
Δ１３Ｃ（‰）＝｛（１３Ｃｔｍｉｎ−１３Ｃ０ｍｉｎ）／１３Ｃｓｔｄ｝×１０００
２０分間の呼気テスト後、採血・採尿を行なった。血液には１／６量の３．８％クエン酸ナトリウム溶液を加え、１００００ｇで２０分間遠心し上清に血漿を得た。
得られた血漿中のフルオレセイン量を大阪医大誌５２（２）：２７−３５に従い測定した。血漿５０μＬに０．５Ｎ  ＫＯＨエタノール溶液４００μＬを加え、７０℃で１時間加熱した後、冷却し、０．１５Ｍ  ＭｇＳＯ４を８００μＬ加え１００００ｇで５分間遠心した上清中のフルオレセイン量を蛍光マイクロプレートリーダー（モレキュラーデバイス社製）で測定した（励起波長；４８５ｎｍ、蛍光波長；５３８ｎｍ、試料添加量２００μＬ／ウェル）。また、未処理の血漿中のフルオレセイン量も蛍光マイクロプレートリーダー（モレキュラーデバイス社製）で測定した。
尿中のフルオレセイン量はＡｒｃｈｉｖｅｓ  ｏｆ  Ｄｉｓｅａｓｅ  ｉｎ  Ｃｈｉｌｄｈｏｏｄ（１９８６）６１：５７３に従い測定した。尿５０μＬに０．１Ｎ  ＮａＯＨ４５０μＬを加え、７０℃で１０分加熱した後、フルオレセイン量を蛍光マイクロプレートリーダー（モレキュラーデバイス社製）で測定した（励起波長；４８５ｎｍ、蛍光波長；５３８ｎｍ、試料添加量２００μＬ／ウェル）。
３−２結果
投与後５分以降のΔ１３Ｃ（‰）値の増加を下式により算出した。
Δ１３Ｃ（‰）値増加量
＝Δ１３Ｃ（‰）ｔｍｉｎ−Δ１３Ｃ（‰）５ｍｉｎ
その経時変化を比較したところ、慢性膵炎ラットの５分以降のΔ１３Ｃ（‰）値増加量は対照ラットよりも小さかった（図３）。投与後１０分におけるΔ１３Ｃ（‰）値増加量は、対照ラット（ｎ＝３）では９．１‰であったのに対して慢性膵炎ラット（ｎ＝３）では３．９‰と低下していた。また投与後２０分におけるΔ１３Ｃ（‰）値の増加量も対照ラットの−９．５‰に対して慢性膵炎ラットでは−１３‰と慢性膵炎ラットで低下していた。
また、投与２０分後の脱抱合処理した血漿中のフルオレセイン濃度（蛍光強度）は慢性膵炎ラット（ｎ＝３）で２．１６ＲＦＵに対して対照ラット（ｎ＝３）で２．６９ＲＦＵと慢性膵炎ラットで低下していた。未処理の血漿中のフルオレセイン濃度（蛍光強度）も、慢性膵炎ラット（ｎ＝３）で２０．１８ＲＦＵに対して対照ラット（ｎ＝３）で２９．４３ＲＦＵと慢性膵炎ラットで低下していた。投与２０分後の尿中フルオレセイン濃度（蛍光強度）も同様に慢性膵炎ラット（ｎ＝３）で１．５３ＲＦＵに対して対照ラット（ｎ＝３）で４．０５ＲＦＵと慢性膵炎ラットで低下していた。
以上より、卵白担体に１３Ｃ−ＮａＨＣＯ３およびフルオレセインを包含させて投与することにより、膵外分泌機能低下の診断が可能であることが示された。
〔実施例４〕
慢性膵炎ラットと対照ラットに［１−１３Ｃ］アラニンおよびフルオレセインを包含するデンプンゲルを麻酔下で十二指腸から投与し、呼気ＣＯ２中の１３ＣＯ２濃度の経時変化および血中・尿中フルオレセイン濃度を比較した。
４−１  方法
電気泳動用水解デンプン（ＷＡＫＯ）０．５ｇ、［１−１３Ｃ］アラニン（マストレース社製）４０ｍｇ、フルオレセイン３ｍｇを５０ｍＭホウ酸バッファー（ｐＨ８．５）５ｍＬに加え、湯煎で加熱しながら攪拌した。粘性がでて、透明になった溶液を先端を切断したインスリン用シリンジ（テルモ社製、０．５ｍＬ用）に泡を立てないように約３００μＬ吸い取り、放置冷却でゲル化させた後、ゲル化したデンプンがシリンジ中で１５０μＬになるよう、切断した。
以下、実施例３と同様に行った。
４−２  結果
慢性膵炎ラットのΔ１３Ｃ（‰）値は対照ラットよりも小さかった（図４）。投与後５分におけるΔ１３Ｃ（‰）値は、対照ラット（ｎ＝３）で４２．２‰に対して慢性膵炎ラット（ｎ＝２）で３２．３‰と低下していた。
また、投与２０分後の血漿中のフルオレセイン濃度（蛍光強度）は慢性膵炎ラット（ｎ＝１）で６．６７ＲＦＵに対して対照ラット（ｎ＝３）で９．３３ＲＦＵと、慢性膵炎ラットで低下していた。投与２０分後の尿中フルオレセイン濃度（蛍光強度）も同様に慢性膵炎ラット（ｎ＝２）で４．１４ＲＦＵに対して対照ラット（ｎ＝２）で６０．５０ＲＦＵと明らかに慢性膵炎ラットで低下していた。
以上より、デンプンゲル担体に［１−１３Ｃ］アラニンおよびフルオレセインを包含させて投与することにより、膵外分泌機能低下の診断が可能であることが示された。
〔実施例５〕
アルブミン−エチルエステルの微粒子を作製し、健常および慢性膵炎ラットの十二指腸液に加え、微粒子から遊離されるエタノールの濃度の経時変化を比較した。
５−１  方法
アルゴン雰囲気下で、０℃に冷却したエタノール（和光）１００ｍＬに、塩化チオニル（和光）２６ｍＬをゆっくりと滴下し、１０分間攪拌した後、室温まで昇温した。室温になった溶液にヒト血清アルブミン（和光）６．６４ｇを加え、２４時間攪拌した。反応溶液をろ過し、残さを窒素ガスで乾燥させ、アルブミン−エチルエステル７．６４５３ｇを得た。
次に、Ｇａｌｌｏ（１９８４）らの方法（Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃｓ  Ｖｏｌ．２２（１９８４）ｐｐ．６３−７４）により、アルブミン−エチルエステルの微粒子を作製した。１３．３％アルブミン−エチルエステル０．５ｍＬを３０ｍＬオリーブ油に加え氷中で冷やしながらソニケーション（１２５Ｗ）を２分間おこなった。５０ｍＬシリンジに移し、１２５℃に加温したオリーブ油１００ｍＬに、１〜２滴／秒の速さで滴下した。１０分間１５００ｒｐｍで攪拌した後、１．５時間放置、室温まで冷却した。エーテル６０ｍＬを加え、攪拌した後、３０００ｇで１５分間遠心分離した。得られた沈殿に２５ｍＬエーテルを加え、ソニケーションで懸濁させた後、３０００ｇで１５分間遠心分離した。同じ操作をもう一回繰り返した後、得られた沈殿をエーテル１０ｍＬに再懸濁し、室温のドラフト内に放置し、エーテルを除去した。
得られたアルブミン−エチルエステルの微粒子の懸濁液（１０ｍｇ／ｍｌ  ｉｎ  Ｄ．Ｗ．）２５μＬにアルコール脱水素酵素（シグマ）１５０Ｕ／ｍＬ  ｉｎ  ３６０ｍＭ  リン酸バッファー（ｐＨ７．８）５０μＬ、呈色試薬（３８ｍＭ  ＮＡＤ、１．０ｍＭ  ニトロテトラゾリウムブルー、０．１ｍＭ  １−メトキシＰＭＳ、８８ｍＭ  酢酸ナトリウム）１００μＬおよび十二指腸液５μＬを添加し、マイクロプレート中３７℃で反応させた。十二指腸液の代わりに蒸留水を加えた反応をブランクとした。エタノールの遊離量をマイクロプレートリーダー（モレキュラーデバイス社製）で５６０ｎｍの吸収を経時的に測定することでモニターした。
十二指腸液は健常および慢性膵炎ラットの十二指腸を摘出・切開し、５０ｍＭ炭酸バッファー２ｍＬ中に浸漬した後、１００００ｇで１５分間遠心分離して得た。
５−２  結果
十二指腸液添加後２分で、健常ラットの十二指腸液を加えたサンプルのエタノール遊離が慢性膵炎ラットの十二指腸液を添加したサンプルに比して加速された（図５）。さらに十二指腸液添加後１０分では健常ラットの十二指腸液添加では５６０ｎｍの吸収が０．１５６であったのに対して、慢性膵炎ラットの十二指腸液添加では０．０８６と、差が認められた。
本明細書で引用した全ての刊行物、特許および特許出願をそのまま参考として本明細書にとり入れるものとする。
産業上の利用可能性
本発明の膵外分泌機能診断のための製剤により、被験者への負担が小さく、安価で、かつ結果が短時間で得られる簡易膵外分泌機能検査が可能となった。この検査法は、集団検診や人間ドッグでの膵炎のスクリーニング検査、さらに、慢性膵炎の重症度の判定、未だに死亡率の高い（３０％）劇症膵炎の重症化予知、膵炎の成因の診断、膵臓癌の早期診断にも利用できる。また、一般外来患者の診察において、膵炎を否定する診断法としても有用である。
さらに、上記の製剤は、小腸上部を標的部位とする薬物送達システム及び腸溶性製剤として利用することもできる。
【図面の簡単な説明】
図１は、トリパンブルー包含固化卵白からのトリパンブルー溶出（５９０ｎｍ吸収）の経時変化を示す。
図２は、トリパンブルー包含デンプンゲルからのトリパンブルー溶出（５９０ｎｍ吸収）の経時変化を示す。
図３は、１３Ｃ−ＮａＨＣＯ３包含固化卵白投与後５分以降のΔ１３Ｃ（‰）の増加の経時変化を示す。
図４は、［１−１３Ｃ］アラニン包含デンプンゲル投与後のΔ１３Ｃ（‰）の経時変化を示す。
図５は、アルブミン−エチルエステルの微粒子からのエタノールの遊離（５６０ｎｍ吸収）の経時変化を示す。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【国際調査報告】
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2002020061.tif 000009
2002020061.tif 000010