(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
１．各成分の濃度をｍｇ／ｌで表して、以下の組成：
Ｌ-アラニン                                             ９．２
Ｌ-アルギニンＨＣＬ                                     ４２１．４
Ｌ-アスパラギン（無水）                                 １４．２
Ｌ-アスパラギン酸                                       ４．０
Ｌ-システインＨＣＬ．Ｈ2Ｏ                               ４２．０
Ｌ-グルタミン酸                                         １４．８
Ｌ-グルタミン                                           １７５４．４
グリシン                                                ７．６
Ｌ-ヒスチジンＨＣＬ．Ｈ2Ｏ                               ５０．０
Ｌ-イソロイシン                                         ６．０
Ｌ-ロイシン                                             １３１．２
Ｌ-リシンＨＣｌ                                         ５４．０
Ｌ-メチオニン                                           １３．５
Ｌ-フェニルアラニン                                     １０．０
Ｌ-プロリン                                             ３４．６
Ｌ-セリン                                               １２６．１
Ｌ-スレオニン                                           ２４．０
Ｌ-トリプトファン                                       ９．３
Ｌ-チロシン ２Ｎａ ２Ｈ2Ｏ                               １１．７
Ｌ-バリン                                               ７０．３
ビタミン類
ｄ-ビオチン                                             ０．０２
葉酸                                                    ０．８０
ニコチンアミド                                          ０．０４
Ｃａ Ｄ-パントテン酸塩                                  ０．３０
ピリドキシンＨＣｌ                                      ０．０６
リボフラビン                                            ０．０４
チアミンＨＣｌ                                          ０．３０
ビタミンＢ12                                              ０．４１
i-イノシトール                                          １８．０
プトレシン ２ＨＣｌ                                     ０．２０
ピルビン酸ナトリウム                                    ５５．０
チミジン                                                ０．７３
アデニン（ＨＣｌ）                                      ２４．０
ＤＬ-リポ酸                                             ０．２０
無機化合物
塩化ナトリウム                                          ６８００．０
ＫＣｌ                                                  １１２．０
Ｎａ2ＨＰＯ4                                              ２８４．０
ＣｕＳＯ4・５Ｈ2Ｏ                                        ０．００３
酢酸ナトリウム                                          ３００．０（無水）
Ｄ-グルコース                                           １０８０．０
ＨＥＰＥＳ（ピペラジン）                                ６６００．０
ホスホリルエタノールアミン                              ０．０６７６８
エタノールアミン                                        ０．０４６８４
硫酸ナトリウム                                          ３．４
炭酸水素ナトリウム                                      １１６０．０
ＦｅＳＯ4・７Ｈ2Ｏ                                        １．３９
ＭｇＣｌ2・６Ｈ2Ｏ                                        １２０．０
ＣａＣｌ2・２Ｈ2Ｏ                                 １３．０〜２２．０５
ＺｎＳＯ4・７Ｈ2Ｏ                                        ０．１４４
（ＮＨ4）6ＭＯ7Ｏ24.４Ｈ2Ｏ                                   ０．００１２０
Ｎａ2ＳｉＯ3・５Ｈ2Ｏ                                         ０．１４２
ＭｎＣｌ2・４Ｈ2Ｏ                                        ０．００００２
ＳｎＣｌ2・２Ｈ2Ｏ                                        ０．０００１１
ＮＨ4ＶＯ3                                              ０．０００５７
を有する複合栄養培地を含むことを特徴とする化粧品組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本願発明は、複合栄養培地、その適用、並びに、局所的に使用される組成物の製造のための使用、特に局所的な化粧学的使用に関する。
【０００２】
本願発明に係る組成物は、特に
− ビタミン類および微量元素類、並びに必須アミノ酸の両方について、最適化された栄養供給、
− 生理学的条件に近いｐＨおよびモル浸透圧
を付与することにより、皮膚に完全に適応した細胞外環境を得ることを可能にするものである。
【０００３】
一般的に言って、本願発明に従って、栄養試薬は、皮膚に関して生物学的適合性、バイオミメテックおよび生物学的利用可能性を備えた化合物を含む複合栄養培地からなる。
【０００４】
本願発明に従って採用された複合栄養培地は、それ自身上および水性媒体中において、ヒト表皮ケラチン細胞の接種物のin vitro培養において生存するのに適した組成を備えており、最初の継代においてヒト表皮ケラチン細胞の接種物の少なくとも一つのクローン増殖を含むが、繊維芽細胞等の生きた滋養基質(a living nourishing substrate)を含まない。
【０００５】
“生物学的適合性”とは、化合物が皮膚に対して無害である特性を意味すると解する。“バイオミメテック”とは、化合物が皮膚に自然の状態で存在することを意味する。“生物学的利用可能性”とは、in vitroおよびin vivoの両方において、ヒト表皮ケラチン細胞によって化合物が吸収される特性を意味すると解する。
【０００６】
当業者は、機械的な試験によって、例えば前記培地を用いてケラチン細胞のinvitro培養を行うことによって、本願発明の複合栄養培地を作製する立場にあり、その増殖は、例えば顕微鏡下で観察することができる。
【背景技術】
【０００７】
これに関して、ケラチン細胞のin vitro培養に適した培地が以下の文献に既に記載されており、生存能力と増殖は、現在使用されている試験で調べることができ、顕微鏡下で直接観察することができる。
− Boyce ST, Ham RG，決められたクローン培養および無血清連続培養における正常ヒト表皮ケラチン細胞のカルシウム制御された分化、J. Invest. Dermatol. 1983; 81; 33S-40S。
− Boyce ST, Ham RG，無血清培地における正常ヒト表皮ケラチン細胞の培養、冷凍貯蔵およびクローン生育、J. Tissue Culture Methods. 1985; 9; 83-93。
必要であれば、これらの文献の内容を本願明細書中に取り込む。
【非特許文献１】
J. Invest. Dermatol. 1983; 81; 33S-40S
【非特許文献２】
J. Tissue Culture Methods. 1985; 9; 83-93
【発明の開示】
【課題を解決するための手段】
【０００８】
本願発明に係る複合栄養培地は、アミノ酸類、一つ以上のビタミン類、および一つ以上の無機塩類を含む。
【０００９】
局所的使用のための本願発明の組成物は、人体の表面部と生物学的適合性を有する相を含み、その相では、少なくとも上記栄養培地が均一に分布している。
【００１０】
本願発明に係る組成物において、栄養試薬が分布された生物学的適合性を備えた相が、前記組成物の付形剤(excipient)、もしくはその一つの成分を構成することができる。
【００１１】
本願発明に係る栄養培地に存在する全ての化合物が水溶性であるので、局所的使用のための組成物を得るために、以下の二つの製剤方法を用いることができる。
１）本願発明に係る栄養培地を含んだ水性連続相：
− ポリサッカリドもしくはセルロースエーテル型の非イオン性水溶性ポリマー（高イオン強度の培地と適合するポリマー）で補助された水性ゲルの形態；
− 乳化されたシステムの形態（高イオン強度に耐える界面活性剤を用いた油中水型エマルション）；
− 化粧用漿液の形態。
【００１２】
２）油性連続相、本願発明に係る栄養培地を含む不連続相：
− 不連続相のイオン強度が、エマルションの不安定性を必然的に伴うという理解に基づいて、乳化された形態：しかしながら、より安定性の優れたラメラ(lamellar)もしくは円筒形相(cylindrical phases)、あるいは使用の直前に単に振るだけで再乳化される二相システムを調製することもできる。
− カプセル化：
*脂質相に分散されたポリサッカリド型の堅いカプセル、
*不連続相に分散された、ゼラチン型の柔らかいカプセル。
【００１３】
カプセル化輸送試薬としてのリポソームの使用は、水性連続相のリポソームゲルの形態をとることが考えられる。
【００１４】
本願発明に係る組成物は、化粧ベースとして提供することができる。栄養供給は、表皮細胞の存続、完全性およびバランスの維持の改善に対して顕著に有利である。特に、皮膚の主要な本質的性質が永続的ベース(a long-lasting basis)に維持されること、ダメージに対する耐性が増大すること、並びに、適切であれば、バランス状態への復帰を促進することを可能にする。
【００１５】
本願発明の他の主題は、上記のベースを含む化粧調製物であり、複合栄養培地が、ある活性体(an active principle)、もしくは増強可能な他の活性体の存在下における付形剤を構成する。
【００１６】
弱められた皮膚（刺激を受けた皮膚、あるいは脱水した皮膚、老化した皮膚等）に上記培地を使用することにより、皮膚を表皮の表面相の栄養価および水分に関して十分な状態に復帰させることができる。
【００１７】
本願発明の特徴、適用および利点は、以下の実施例１〜３および図１〜４に詳細に記載されている。
【００１８】
実施例１は、本願発明の組成物の製剤の例を与える。
実施例２は、以下の添付図面によって支持されるように、既知の培地と比較した際の本願発明の組成物の特性を示す。
図１は、特にIRVINE SCIENTIFICおよびGIBCO-BRLにより市販されるＭＣＤＢ１５３と称される標準的な商業的培地において３６時間培養した後のヒト表皮の断面図である。
図２は、緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）、すなわち細胞培養において通常用いられる平衡化された生理食塩水で３６時間培養した後のヒト表皮の断面図である。
図３は、以下の異なる培養時間
Ａ：１２時間後
Ｂ：２４時間後
Ｃ：３６時間後
における、実施例１に記載された本願発明の栄養培地において培養されたヒト表皮の断面図である。
実施例３は、本願発明の培地および標準培地で培養した形質転換細胞の増殖を示す図４に支持されており、標準的組成物と比較した本願発明の組成物による形質転換細胞の増殖刺激の欠如を示す。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１９】
実施例１：
本願発明の組成物の製剤
0003859708.tif 000002
0003859708.tif 000003
【００２０】
実施例２：
実施例１に記載された複合栄養培地の細胞適合性およびパフォーマンス特性を、単層のヒトケラチン細胞の培養において、並びに、in vitroで再構成されたヒト表皮において試験した。
【００２１】
実施例１記載の栄養培地は、それ自身を明らかにする最もわずかな細胞毒性効果もなしに、少なくとも３６時間生存するのに適した条件下で、単層でケラチン細胞を培養した。
対称的に、ＰＢＳ（リン酸緩衝生理食塩水、細胞培養に広く用いられる平衡化した生理食塩水）等の慣例的な生存溶液は、培養から１２時間後から細胞毒性を示す。
【００２２】
図３に一致して、本実施例に従う栄養培地は、３６時間接触させた後でさえ（図３Ｃ）、細胞毒性が現れることなく、最適な生存条件下で再構成された正常ヒト表皮を培養することができる。培養物は、基底の、棘の、乳房のおよび完全な正常角化細胞層、もしくは規則的かつ正常な層化を示した。
【００２３】
図３Ｃと、標準的塗商業的培地（特にIRVINE SCIENTIFICから市販されているＭＣＤＢ１５３）の使用を例証する図１とを比較すると、本願発明の培地のパフォーマンス特性が同等に良好であることが観察される。
【００２４】
対称的に、ＰＢＳの使用は、図２と一致して、多かれ少なかれ顕著な壊死の兆候を伴った、あるレベルの基底および棘の層における分化の末端相においてケラチン細胞の様相を誘導する。異なるケラチン細胞層の構造の完全な欠失を伴う表皮の全体的な分離も、注目される。
【００２５】
実施例３：形質転換した表皮細胞の増殖における本願発明の組成物の効果。
この研究に用いられた組成物は、培地１と称される培地を含む実施例１に記載されたものである。
【００２６】
ヒトケラチン細胞の自発的形質転換系の増殖における組成物１の効果を、標準培地（ＤＭＥＭ、ダルベッコ修飾表皮培地(Dulbeco Modified Epidermal Medium)＋ウシ胎児血清）で培養された細胞と比較することによって、４日間の培養にわたって試験した。
【００２７】
細胞を、最初に標準培地に接種し、この培地に接種して二日目まで生育させた。二日目に、一群の細胞を一つに分け、一方を標準培地で培養し、他方を培地１で培養した。
【００２８】
結果を図４に整理した。この図において、
【式１】
0003859708.tif 000004
で得られた曲線は本願発明の組成物に対応し、
【式２】
0003859708.tif 000005
で得られた曲線は標準培地の組成物に対応する。点は２重であり、カウントは４重である。この結果は、平均の標準誤差ＳＥＭについて修正されている。図中の矢印は、培養の第２日目の群の分割に対応する。
【００２９】
細胞の形態は、用いられた培地に対応して異なる。培地１で培養された細胞の形態は、ＧＩＢＣＯ-ＢＲＬ ＫＳＦＭ型（緩く結合し、舗装されたような外観がほとんどないような細胞）の表皮細胞用の準限定培地(a semi-defined medium)を用いて得られた形態と密接に類似している。
【００３０】
顕著な差異は、集密(confluence)になるまで（ここには示されていないが、６〜７日）、種々の培地に従って、この系の増殖において注目される。
組成物１が、形質転換されたケラチン細胞の増殖に刺激効果を与えないことが結論付けられる。
【図面の簡単な説明】
【００３１】
【図１】図１は、特にIRVINE SCIENTIFICおよびGIBCO-BRLにより市販されるＭＣＤＢ１５３と称される標準的な商業的培地において３６時間培養した後のヒト表皮の断面図である。
【図２】図２は、緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）、すなわち細胞培養において通常用いられる平衡化された生理食塩水で３６時間培養した後のヒト表皮の断面図である。
【図３】図３は、以下の異なる培養時間
Ａ：１２時間後
Ｂ：２４時間後
Ｃ：３６時間後
における、実施例１に記載された本願発明の栄養培地において培養されたヒト表皮の断面図である。
【図４】図４は、本願発明の培地および標準培地で培養した形質転換細胞の増殖を示す。
【図１】
0003859708.tif 000006
【図２】
0003859708.tif 000007
【図３】
0003859708.tif 000008
【図４】
0003859708.tif 000009