(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
下記一般式（I）で表されるフェニルジアジリン化合物。
【化１】
0003746181.tif 000011
（式中、Ｒ1は−ＮＨＰ1又は−ＣＯＸ1を表し、Ｒ2は、アルデヒド基、ヒドロキシ低級アルキル基、ハロゲン化低級アルキル基、フタルイミドオキシ低級アルキル基、又は−(ＣＨ2)x−Ｏ−ＮＨＰ1を表し、Ｐ1はアミノ保護基を表し、Ｘ1はアルコキシ基，ヒドロキシ基，又は−ＮＨＳＯ2−Ｘ2−ＣＯ−Ｘ3を表し、Ｘ2はアリーレン基又はアルキレン基を表し、Ｘ3はアルコキシ基又はヒドロキシ基を表し、ｍは１〜４の整数を表し、ｎは１〜６の整数を表し、ｘは１〜４の整数を表す。）
【請求項２】
下記一般式（II）で表されるビオチン化フェニルジアジリン化合物。
【化２】
0003746181.tif 000012
（式中、Ｒ3は、アミノ基、−ＮＨＰ1又はアミノ基の塩を表し、Ｐ1はアミノ保護基を表し、Ｙ1は−ＮＨ−又は−ＣＯＮＨＳＯ2−Ｘ2−ＣＯ−を表し、Ｘ2はアリーレン基又はアルキレン基を表し、Ｙ2はビオチン又はビオチン誘導体残基を表し、ｍは１〜４の整数を表し、ｎは１〜６の整数を表し、ｘは１〜４の整数を表す。）
【請求項３】
下記一般式（III）で表される請求項２記載のビオチン化フェニルジアジリン化合物。
【化３】
0003746181.tif 000013
（式中、Ｒ3は、アミノ基、−ＮＨＰ1又はアミノ基の塩を表し、Ｐ1はアミノ保護基を表し、ｍは１〜４の整数を表し、ｎは１〜６の整数を表し、ｘは１〜４の整数を表す。）
【請求項４】
下記一般式（IV）で表される請求項２記載のビオチン化フェニルジアジリン化合物。
【化４】
0003746181.tif 000014
（式中、Ｒ3は、アミノ基、−ＮＨＰ1又はアミノ基の塩を表し、Ｐ1はアミノ保護基を表し、ｍは１〜４の整数を表し、ｎは１〜６の整数を表し、Ｘ2はアリーレン基又はアルキレン基を表し、Ｚはヘテロ原子で中断されていてもよい炭素数１〜２０のアルキレン基を表し、ｘは１〜４の整数を表し、ｑは０又は１を表す。）
【請求項５】
下記一般式（V）で表される糖結合ビオチン化フェニルジアジリン化合物。
【化５】
0003746181.tif 000015
（式中、Ｒ4は、還元末端をもつ糖化合物の残基を表し、Ｙ1は−ＮＨ−又は−ＣＯＮＨＳＯ2−Ｘ2−ＣＯ−を表し、Ｘ2はアリーレン基又はアルキレン基を表し、Ｙ2はビオチン又はビオチン誘導体残基を表し、ｍは１〜４の整数を表し、ｎは１〜６の整数を表し、ｘは１〜４の整数を表す。）
【請求項６】
下記一般式（VI）で表される糖結合ビオチン化フェニルジアジリン化合物。
【化６】
0003746181.tif 000016
（式中、Ｒ4は、還元末端をもつ糖化合物の残基を表し、ｍは１〜４の整数を表し、ｎは１〜６の整数を表し、ｘは１〜４の整数を表す。）
【請求項７】
下記一般式（VII）で表される糖結合ビオチン化フェニルジアジリン化合物。
【化７】
0003746181.tif 000017
（式中、Ｒ4は、還元末端をもつ糖化合物の残基を表し、Ｘ2はアリーレン基又はアルキレン基を表し、Ｚはヘテロ原子で中断されていてもよい炭素数１〜２０のアルキレン基を表し、ｍは１〜４の整数を表し、ｎは１〜６の整数を表し、ｘは１〜４の整数を表し、ｑは０又は１を表す。）
【請求項８】
請求項２記載の一般式（II）で表されるビオチン化フェニルジアジリン化合物を含む光反応性標識試薬。但し、一般式(II)中、Ｒ3はアミノ基、又はアミノ基の塩を表す。
【請求項９】
請求項３記載の一般式（III）で表されるビオチン化フェニルジアジリン化合物を含む光反応性標識試薬。但し、一般式（III）中、Ｒ3はアミノ基、又はアミノ基の塩を表す。
【請求項１０】
請求項４記載の一般式（IV）で表されるビオチン化フェニルジアジリン化合物を含む光反応性標識試薬。但し、一般式（IV）中、Ｒ3はアミノ基、又はアミノ基の塩を表す。
【請求項１１】
請求項５記載の一般式（V）で表される糖結合ビオチン化フェニルジアジリン化合物を含む光親和性標識試薬。
【請求項１２】
請求項６記載の一般式（VI）で表される糖結合ビオチン化フェニルジアジリン化合物を含む光親和性標識試薬。
【請求項１３】
請求項７記載の一般式（VII）で表される糖結合ビオチン化フェニルジアジリン化合物を含む光親和性標識試薬。
【請求項１４】
上記一般式（II）で表されるビオチン化フェニルジアジリン化合物と還元末端を有する糖化合物を反応させ、該還元末端を有する糖化合物の還元末端のアルデヒド基と該ビオチン化フェニルジアジリン化合物のアミノ基とのシッフ塩基を形成させることを含む上記一般式（V）で表される糖結合ビオチン化フェニルジアジリン化合物の製造方法。
但し、一般式（II）中、Ｒ3は、アミノ基、又はアミノ基の塩を表す。
【請求項１５】
ビオチン化フェニルジアジリン化合物が上記一般式(III)で表され、糖結合ビオチン化フェニルジアジリン化合物が上記一般式(VI)で表される請求項１４記載の製造方法。
【請求項１６】
ビオチン化フェニルジアジリン化合物が上記一般式(IV)で表され、糖結合ビオチン化フェニルジアジリン化合物が上記一般式(VII)で表される請求項１４記載の製造方法。
【請求項１７】
上記一般式（V）で表される糖結合ビオチン化フェニルジアジリン化合物と糖受容体とを混合して該フェニルジアジリン化合物の糖化合物残基と糖受容体との特異的相互作用によって結合させるとともに、該混合物に光を照射し、該糖受容体の、一般式（V）の化合物に結合している糖化合物と相互作用をする部位に、一般式（V）の化合物を光反応により結合させ、該糖受容体を標識することからなる糖受容体の標識方法。
【請求項１８】
糖結合ビオチン化フェニルジアジリン化合物が上記一般式(VI)で表されることからなる請求項１７記載の糖受容体の標識方法。
【請求項１９】
糖結合ビオチン化フェニルジアジリン化合物が上記一般式(VII)で表されることからなる請求項１７記載の糖受容体の標識方法。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は、新規な光反応性フェニルジアジリン化合物、光反応性ビオチン化フェニルジアジリン化合物、及び光反応性糖結合ビオチン化フェニルジアジリン化合物に係わるものであり、更に、本発明は生体物質構造解析のプローブへの用途が期待される該光反応性ビオチン化フェニルジアジリン化合物からなる光反応性標識試薬、及び光反応性糖結合ビオチン化フェニルジアジリン化合物からなる光親和性標識試薬に係わるものである。
【０００２】
【従来技術】
光親和性標識試薬は、薬物あるいはリガンドと蛋白質との相互作用部位を解析できる有用なプローブとして知られている。蛋白質を光反応により標識する光反応基としてはアジド基が古くから知られていたが、より優れた光反応基としてジアジリン基が注目されてきている。薬物や生体物質由来のリガンドへのジアジリン基の導入は、一般にアミド結合やエステル結合により行われ、さらに微量検出のために放射性の誘導体に変換されている。
【０００３】
ごく最近になり、蛋白質の微量検出とアフィニティー精製を同時に実現するものとして、分子内に、スペーサー化合物を介してビオチン残基を有するフェニルジアジリン誘導体が開発され、例えば、生体物質由来のリガンドとしての糖化合物を該ジアジリン誘導体のカルボキシル基に結合させることにより非放射性の光親和性標識試薬の合成が可能であることが報告されている（有機合成化学協会誌、第56巻第7号、第581〜590頁(1998)；ファルマシア、Vol.34、No.8、第772〜776頁(1998)；Biochem.J.(1998)330、1209-1215）。しかし、この方法では、該ジアジリン誘導体に糖化合物を結合させる場合、該糖化合物に予めアミノ基を導入し、該ジアジリン誘導体が有するカルボキシル基と、ジシクロヘキシルカルボジイミド（ＤＣＣ）等の縮合剤の存在下で反応させることが必要であり、操作が煩雑であった。
一方、生体物質を特異的に修飾する方法として、オキシアミノ基の利用が注目されているが、該オキシアミノ基を光反応性化合物に導入し、糖化合物と結合させようとする試みは未だ成されていない。
【０００４】
【発明が解決しようとする課題】
本発明は、放射性標識を施す必要がない光反応性プローブへ導くことが可能な新規な光反応性ビオチン化フェニルジアジリン化合物を含む光反応性標識試薬、及び、糖と相互作用しうる蛋白質（糖受容体）などの生体高分子の機能や構造を研究するうえでの有用性が期待される非放射性の光反応性糖結合ビオチン化フェニルジアジリン化合物を含む光親和性標識試薬を提供することを目的とする。
本発明の更なる目的は、これらの標識試薬を構成するために有用な新規なビオチン化フェニルジアジリン化合物、及び糖結合ビオチン化フェニルジアジリン化合物、所望によりビオチン残基が切断性のスペーサーを介してフェニルジアジリン化合物と連結している該化合物、加えてこれらの化合物を取得するための合成中間体である新規なフェニルジアジリン化合物を提供すること、並びにこの新規糖結合ビオチン化フェニルジアジリン化合物の製法及び該化合物による糖受容体の標識方法を提供することにある。
【０００５】
【課題を解決するための手段】
本発明の要旨は、前記一般式（II）〜(IV)の少なくとも一つで表されるビオチン化フェニルジアジリン化合物、及びその合成中間体である前記一般式（I）で表されるフェニルジアジリン化合物、さらに、該一般式（II）〜(IV)の少なくとも一つから誘導され、各式に対応して前記一般式（V）〜(VII)の少なくとも一つで表される糖結合ビオチン化フェニルジアジリン化合物に存し、他の要旨は、該一般式（II）〜(IV)の少なくとも一つで表される化合物を含む光反応性標識試薬、及び該一般式（V）〜(VII)の少なくとも一つで表される糖結合ビオチン化フェニルジアジリン化合物からなる光親和性標識試薬に存する。
本発明の更なる要旨は、一般式（II）〜(IV)の少なくとも一つで表されるビオチン化フェニルジアジリン化合物に還元末端を有する糖化合物を反応させることよりなる、一般式（V）〜(VII)の少なくとも一つで表される糖結合ビオチン化フェニルジアジリン化合物の製造方法及びこれらの該糖結合ビオチン化フェニルジアジリン化合物を用いる糖受容体の標識方法に存する。
【０００６】
【発明の実施の形態】
本発明における光親和性標識試薬を構成する化合物を生成するための中間体化合物としては、本質的には糖受容体蛋白質を光反応により標識する光反応基としてのジアジリン基を有するトリフルオロメチルフェニルジアジリンを基本骨格とし、そのベンゼン核に糖などのリガンドが結合し得るアミノ基を有する基と標識化合物を有する基がそれぞれ結合したフェニルジアジリン誘導体であれば良い。詳しくは、該フェニルジアジリン誘導体において、アミノ基、アミノ基の塩、保護アミノ基等から選ばれる基はアルキレン基等のスペーサーを介してベンゼン核に結合し、且つリガンドとの結合能に及ぼすジアジリン型の光反応基による影響を少なくするために光反応基の結合位に対しP-位に結合している。
【０００７】
又、標識化合物を有する基は、ポリオキシエチレン基等を含む親水性スペーサーを介して標識化合物、例えばビオチンがベンゼン核に結合されている。その際、標識化合物、即ちビオチンはスペーサーの末端アミノ基を介してベンゼン核に結合することができる。一方、ビオチン化された糖受容体（ラベル化蛋白質）をアビジン固定化担体（固定化アビジン）を用いてアフィニティー精製し、再遊離・回収を所望する場合、分離・精製に通常使用される固定化アビジンとビオチンとの結合力が強く、ラベル化蛋白質の回収率が低下することがあるので、ラベル化蛋白質とビオチンを緩和な条件で切り離す事が出来るよう切断性を有するスペーサーを介して結合させるのが好ましく、例えば、アシルスルホンアミド等の切断性スペーサーを、ポリオキシエチレン基端に導入したスペーサーを介してビオチンをベンゼン核に連結させることが出来る。
【０００８】
本発明の上記一般式（II）で表される光反応性のビオチン化フェニルジアジリン化合物は、この誘導体を代表するものである。
本発明の下記一般式（I）で表される化合物は、該一般式（II）で表されるビオチン化フェニルジアジリン化合物を合成するための中間体であり、新規化合物である。
【０００９】
【化８】
0003746181.tif 000002
【００１０】
一般式（I）中、Ｒ1は−ＮＨＰ1又は−ＣＯＸ1を表し、Ｒ2は、アルデヒド基、ヒドロキシ低級アルキル基、ハロゲン化低級アルキル基、フタルイミドオキシ低級アルキル基、又は−(ＣＨ2)x−Ｏ−ＮＨＰ1を表し、Ｐ1はアミノ保護基を表し、Ｘ1はアルコキシ基，ヒドロキシ基，又は−ＮＨＳＯ2−Ｘ2−−ＣＯ−Ｘ3を表し、Ｘ2はアリーレン基又はアルキレン基を表し、Ｘ3はアルコキシ基又はヒドロキシ基を表し、ｍは１〜４、好ましくは１〜２の整数を表し、ｎは１〜６、好ましくは１〜４の整数を表し、ｘは１〜４、好ましくは１〜２の整数を表す。
【００１１】
本発明において、低級アルキル基とは、メチル、エチル、プロピル、ブチル等の炭素数１〜４のアルキル基を表し、直鎖状が好ましい。また、アルコキシ基としては、炭素数１〜６のアルコキシ基であり、例えばメトキシ基、エトキシ基、プロポキシ基、ブトキシ基、ペントキシ基等が挙げられる。アリーレン基としては、メチル基、エチル基等の置換基を有していてもよいフェニレン基、ナフチレン基等の炭素数５〜１４のアリーレン基が挙げられるが、フェニレン基が好ましい。アルキレン基としては、メチレン基、エチレン基、プロピレン基、ブチレン基等の炭素数１〜６のアルキレン基が挙げられ、直鎖状の基が好ましい。
アミノ保護基としては、ｔ−ブトキシカルボニル基、トリフルオロアセチル基、ベンジルオキシカルボニル基、ｐ−メトキシベンジルオキシカルボニル、ｐ−トルエンスルホニル基、９−フルオレニルメチルオキシカルボニル基、トリチル基、フタロイル基、ｏ−ニトロフェニルスルフェニル基、３−ニトロ−２−ピリジンスルフェニル基等が挙げられる。これらの内ｔ−ブトキシカルボニル基が簡便である。
【００１２】
本発明のビオチン化フェニルジアジリン化合物は、下記一般式（II）で表される化合物であり、上記一般式（I）の化合物をビオチン化し、所望によりＲ2をアミノオキシ低級アルキル基に変換することにより得られる。
【００１３】
【化９】
0003746181.tif 000003
【００１４】
一般式（II）中、Ｒ3は、アミノ基、−ＮＨＰ1又はアミノ基の塩を表し、Ｐ1はアミノ保護基を表し、ｍは１〜４、好ましくは１〜２の整数を表し、ｎは１〜６、好ましくは１〜４の整数を表し、ｘは１〜４、好ましくは１〜２の整数を表す。又、アミノ保護基は、上記一般式（I）におけるものと同義を表す。アミノ基の塩としては、塩酸、硫酸、硝酸、リン酸等の無機酸の塩、或いは酢酸、トリフルオロ酢酸、プロピオン酸、メタンスルホン酸等の有機酸の塩が挙げられる。これらの内、トリフルオロ酢酸は、一般式（V）の化合物を生成するのに有利である。
【００１５】
Ｙ1は−ＮＨ−又は−ＣＯＮＨＳＯ2−Ｘ2−ＣＯ−を表し、Ｘ2はアリーレン基又はアルキレン基を表し、Ｙ2はビオチン又はビオチン誘導体残基を表す。又、アリーレン基及びアルキレン基は上記一般式(I)におけるものと同義を表す。本発明でビオチン誘導体とは、ビオチンの末端基（−ＯＨ）がアミノ基又はカルボキシル基と反応し得る基に置き換わったビオチンを意味し、例えば、カルボキシル基と反応し得る基を有するものとして、(ビオチン)−ＮＨ−Ｚｑ−ＮＨ2で表される末端にアミノ基を有する化合物、好ましくはビオチンヒドラジドが挙げられる。
本発明の一般式(II)で示される化合物のより具体的な化合物は、下記一般式(III)及び(IV)で示される化合物である。
【００１６】
【化１０】
0003746181.tif 000004
一般式(III)中、Ｒ3、Ｐ1、ｍ、ｎ及びｘは、一般式(II)におけるものと同義を表す。
【００１７】
【化１１】
0003746181.tif 000005
一般式(IV)中、Ｒ3、Ｐ1、ｍ、ｎ及びｘは、上記一般式(II)におけるものと同義を表し、Ｘ2はアリーレン基又はアルキレン基を表し、上記一般式(I)におけるものと同義を表す。Ｚは、酸素、硫黄、窒素等のヘテロ原子で中断されていてもよい炭素数１〜２０のアルキレン基を表し、例えば、メチレン基、エチレン基、プロピレン基、（ポリ）オキシエチレン基等が挙げられる。ｑは０又は１を表す。
【００１８】
本発明の下記一般式(V)〜(VII)で表される、糖結合ビオチン化フェニルジアジリン化合物は、一般式（II）〜(IV)において、末端アミノ基或いはアミノ基の塩を有するビオチン化フェニルジアジリン化合物に、還元末端を有する糖化合物の還元末端のアルデヒド基を反応させることにより得られる化合物である。
【００１９】
【化１２】
0003746181.tif 000006
【００２０】
一般式(V)中、Ｒ4は、還元末端をもつ糖化合物の残基を表し、ｍは１〜４、好ましくは１〜２の整数を表し、ｎは１〜６、好ましくは１〜４の整数を表し、ｘは１〜４、好ましくは１〜２の整数を表す。Ｙ1は−ＮＨ−又は−ＣＯＮＨＳＯ2−Ｘ2−ＣＯ−を表し、Ｘ2はアリーレン基又はアルキレン基を表し、Ｙ2はビオチン又はビオチン誘導体残基を表し、上記一般式(II)におけるものと同義を表す。
本発明の下記一般式(VI)及び(VII)で示される化合物は、一般式(V)で示される化合物のより具体的な化合物である。
【００２１】
【化１３】
0003746181.tif 000007
一般式(VI)中、Ｒ4、ｍ、ｎ、ｘは上記一般式(V)におけるものと同義を表す。
【００２２】
【化１４】
0003746181.tif 000008
一般式（VII）中、Ｒ4、ｍ、ｎ、ｘ及びＸ2は、上記一般式(V)におけるものと同義を表し、Ｚ及びｑは、上記一般式(IV)におけるものと同義を表す。
一般式(VII)で示される化合物は、切断性スペーサーを有する糖結合ビオチン化フェニルジアジリン化合物であり、特にＸ2がフェニレン基、ｑ＝０の化合物は、ラベル蛋白質の分離・回収に有用な光親和性標識試薬を構成する化合物として好ましい。
【００２３】
一般式（II）〜(IV)で示される化合物と反応させる糖化合物としては、還元末端を持つ多糖類、オリゴ糖類、単糖類、例えば、ムチン型糖類、Asn型糖類、シアリル糖類、グリコサミノグリカン、ラクトサミン、N-アセチルラクトサミン、ラクトサミンオリゴ糖、シアリルラクトサミン、グルカン、マンナン、フルクタン、ガラクタン、ポリウロン酸、オリゴアミノ酸、ポリアミノ糖、ガラクトオリゴ糖などが挙げられる。Ｒ4のより具体的な例としては、N-アセチルラクトシル基、シアリル−α2-3-ラクトシル基、シアリル−α2-3-N-アセチルラクトサミニル基、ルイスX型三糖残基、シアリルルイスX型四糖残基、又はキトビオース残基が挙げられるが、下記模式図に示す結合が可能な糖化合物であればこれらに限定されない。即ち、本発明の一般式（II）で示される化合物において、Ｒ3がアミノ基又はアミノ基の塩である化合物と還元末端を有する糖化合物との結合は選択的で、その結合は以下のように示される。
【００２４】
【化１５】
0003746181.tif 000009
【００２５】
本発明の一般式(II)〜(IV)で示される化合物において、Ｒ3がアミノ基又はアミノ基の塩である化合物と、還元末端を有する糖化合物との反応はｐＨ依存性であり、該反応は弱酸性下有利に進行する。通常該反応はｐＨ１〜７で進行するが、好ましくは緩衝液を用いｐＨ４〜５に調整されて行われる。
本発明の一般式（II)〜(IV)で示される光反応性ビチオン化フェニルジアジリン化合物の一種は、そのフェニル骨格にスペーサーを介してオキシアミノ基が導入されている特徴を有し、このオキシアミノ基は、還元末端を有する糖化合物の還元末端のアルデヒド基と、糖鎖水酸基の保護などを特に必要とせず、また従来必要とされているＤＣＣ等の縮合剤も存在せしめることなく、単に糖化合物と混合するだけでシッフ塩基形成反応により結合し、一般式(V)〜(VII)で示される糖結合ビオチン化フェニルジアジリン化合物を生成する。そして、この化合物によって本発明の光親和性標識試薬を構成することができる。該試薬は、この化合物の機能を害さない限り、水、緩衝剤、安定化剤，塩等の添加物を含んでいてもよい。また、一般式(II)〜(IV)の化合物のオキシアミノ基は、アルデヒド基以外にケトン基、カルボキシル基とも結合し得るので、糖化合物がこれらの反応基を有する場合はその官能基とオキシアミノ基を反応させてもよい。
なお、光親和性標識試薬とは、広義には、光反応性基を有する化合物にリガンドを結合した標識試薬を指称するが、本明細書において「光親和性標識試薬」とは、光反応性糖受容体親和性標識試薬を意味するものとし、糖受容体とは糖と親和性を有する、すなわち糖との特異的な相互作用により糖に結合性を示す蛋白質を意味し、具体的には糖に特異的なレクチン、レセプター、酵素、抗体などを包含する。
【００２６】
本発明の光親和性標識試薬と種々の蛋白質を含む混合系において、該標識試薬の糖化合物と糖受容体との相互作用をおこなわせると同時又はその後に、光を照射すると、光親和性標識試薬の糖化合物に特異的に相互作用する蛋白質（糖受容体）の、該糖化合物との相互作用部位（アミノ酸）に該標識試薬のジアジリン基が光反応によりクロスリンクする。更に、このビオチンを含む該光親和性標識試薬でラベル化された蛋白質（ラベル化蛋白質）は、ビオチンを検出する自体公知の検出系によって高感度での検出が可能であり、アビジン、ストレプトアビジン等を担体に結合したアビジンカラムを利用することにより、アフィニティークロマトグラフィーによって目的蛋白質を容易に精製することが可能になる。更に、本発明においては、光親和性標識試薬を構成する糖化合物としてビオチンが切断性スペーサーを介して結合された化合物を適用することにより、アビジンカラムによるアフィニティークロマトグラフィーを行う際、緩和な条件でビオチン部分を容易に切り離すことができ、目的蛋白質を高い回収率で取得することが可能である。それ故、糖化合物を結合した本発明の光親和性標識試薬は、糖鎖関連蛋白質の構造及び機能解析に極めて有用なプローブ又は精製手段となることが期待されるのである。
【００２７】
本発明の一般式（II）で示され、オキシアミノ基をフェニル骨格に有する光反応性ビチオン化フェニルジアジリン化合物に、そのオキシアミノ基と選択的に反応する基、例えばアルデヒド基、ケトン基、カルボキシル基などを有するか、或いは必要に応じこれらの基が導入された薬物或いは糖化合物以外の生体由来成分をリガンドとして結合させることにより、広義な意味での光親和性標識試薬に誘導することもできる。そして、この試薬は、薬物あるいは糖化合物以外の生体由来物質に親和性を持つ蛋白質の構造及び機能解析のプローブとなり又単離精製も可能とする。この様にして、多種多様なリガンドを連接する手法で得ることができプローブライブラリーと、質量分析装置による超微量解析とを組み合わせる応用は、蛋白質機能の高速度・高精度解析への展望を開くものとして期待される。従って、一般式（II）で示される本発明化合物は極めて広範な有用性を有する化合物である。
【００２８】
本発明化合物の合成の一例を図１〜６に示す反応スキームに基づいて以下に説明する。
まず、図１に示す反応工程に従い、一般式（I）で示される本発明化合物、即ち、図中化合物(4)〜(7)の製造工程を説明する。
出発原料である化合物(1)、［2-メトキシ-4-(1-アジ-2,2,2-トリフルオロエチル）ベンズアルデヒド］は、橋本らの方法（M.Hashimoto,Y.Kanaoka,Y.Hatanaka,Heterocycles.46,119-122(1997))により調製することができる。
化合物(1)は、例えばジクロロメタンなどの溶媒中、不活性ガス雰囲気下、−２０℃付近でBBr3を作用させることにより化合物(2)を生成する。
生成した化合物(2)に、化合物(3)を無水炭酸カリウムなどの塩基及びBu4NIなどの相関移動触媒の存在下反応させることにより、化合物(4)を生成することができる。この反応は、ジメチルホルムアミド(DMF)中、不活性ガス雰囲気下、６０℃付近で行うことができる。なお、化合物(3)は、式Ｐ1ＮＨ(ＣＨ2)m（ＯＣ2Ｈ4）n−Ｂｒにおいて、m=n=2、Ｐ1がt-ブトキシカルボニル基である化合物であり、畑中らの方法（Y.Hatanaka,M.Hashimoto,Y.Kanaoka,Bioorg.Med.Chem.2,1367-1373(1994)）により調製することができる。
【００２９】
化合物(4)は、例えばエタノールなどの溶媒中、NaBH4により室温付近で還元して化合物(5)とすることができる。還元反応生成物は、精製処理することなく、次の反応工程に供することができる。
生成した化合物(5)は、四臭化炭素とトリフェニルホスフィンにより、例えばジクロルメタンなどの溶媒中でブロム化することにより、化合物(6)へと導く。この反応は、０℃付近に冷却して行うことが好ましい。
化合物(6)は、N-ヒドロキシフタルイミドと無水炭酸カリウムなどの塩基の存在下反応させることにより、化合物(7)を得ることができる。この反応は、ジメチルスルホキシド（DMSO）などの溶媒中、室温付近で行うことができる。
【００３０】
次いで、図２に則り、化合物(7)をビオチン化し、一般式（II）中、特に一般式(III)で示される本発明化合物、即ち、図中化合物(8)〜(10)の製造工程を説明する。
化合物(7)に、トリフルオロ酢酸を例えばジクロロメタンなどの有機溶媒中、０℃付近で作用させた後、トリエチルアミン（Et3N)などの有機塩基の存在下、例えばDMFなどの溶媒中、ビオチンのN-ヒドロキシスクシンイミドエステル（biotin-OSu）を室温付近で反応させることによりビオチン化した化合物(8)を得ることができる。
【００３１】
化合物(8)に、例えばメタノール溶媒中、無水ヒドラジンを室温付近で作用させることにより化合物(9)を生成することができるが、この化合物(9)はカラムクロマトグラフィーによる精製中に分解し易いので、精製処理することなく次の反応に用いることが好ましい。
化合物(8)とヒドラジンとの反応生成物である化合物(9)をそのまま、例えばクロロホルムとアセトニトリルとの混合溶媒中で、トリエチルアミンなどの有機塩基の存在下、ジ−ｔ−ブチルジカルボナート｛[(CH3)3 COCO]2O｝と室温付近で反応させることにより化合物(10)を得ることができる。
【００３２】
更に、図３及び４に示すように、上記工程で得たビオチン化フェニルジアジリン化合物に還元末端を有する糖化合物を導入し、一般式(V)中、特に一般式（VI）で示される本発明化合物、即ち化合物(12)〜(16)を生成することができる。
化合物(10)に、トリフルオロ酢酸を、例えばジクロロメタンなどの有機溶媒中、０℃付近で作用させることにより化合物(11)を得ることができる。生成した化合物(11)は、直ちに還元末端を有する各種の糖化合物と反応させて、それぞれの糖化合物の結合したビオチン化フェニルジアジリン化合物を得ることができる。例えば、化合物(11)を含水アセトニトリル中でN-アセチルラクトサミン（Galβ1-4ＧlcNAc）と３７℃付近で反応させることにより化合物(12)を取得することができる。同様に、シアリル-α2-3-ラクトース（NeuNAcα2-3Galβ1-4Glc）、シアリル-α2-3-N-アセチルラクトサミン（NeuNAcα2-3Galβ1-4GlcNAc）、ルイスX型三糖（Galβ1-4（Fucα1-3）GlcNAc）、またはシアリルルイスX型四糖（NeuNAcα2-3Galβ1-4（Fucα1-3）GlcNAc）と各々反応させることにより化合物(13)〜(16)をそれぞれ得ることができる。又、化合物(10)に作用させるトリフルオロ酢酸に代えて、塩酸／酢酸、塩酸／ジオキサン混合物等を使用し、無機酸の塩を生成することもできる。
【００３３】
次に、図５及び図６に示す反応工程に従い、一般式(I)で示される化合物、即ち、図中化合物(18)〜(20),(22)、(23)、(25)、(26)、一般式（IV）及び(VII)で示される切断性スペーサーを有する化合物、即ち、図中化合物(28)及び(30)、加えて一般式(VI)の化合物(29)の製造工程を説明する。
化合物(2)は、図１に示す工程により化合物(1)から合成する。化合物(2)に化合物(17)を無水炭酸カリウムなどの塩基及びBu4NIなどの相関移動触媒の存在下反応させることにより、化合物(18)を生成することができ、この反応は、ジメチルスルホキシド(DMSO)中、不活性ガス雰囲気下、６０℃付近で行うことができる。なお、化合物(18)は、一般式(I)において、Ｒ2がアルデヒド基、Ｒ1がＣＯＸ1で、Ｘ1がエトキシ基、m=1、n=３である化合物である。
【００３４】
一方、化合物(17)は以下のようにして合成出来る。即ち、2-[2-(2-クロロエトキシ)エトキシ]エタノールを水素化ナトリウムを含むトルエン溶媒中、−７０℃でブロム酢酸エチルと反応させ、得られた反応混合物から溶媒を留去して得た残渣をカラムクロマトグラフィーにより精製する。精製した残渣をＮ−メチルピロリドン等の溶媒に溶解した後、臭化エチル及び臭化ナトリウムを加えて65℃で反応させ、反応物から溶媒を留去後、更にカラムクロマトグラフィーにより精製する。
【００３５】
化合物(18)は、例えばエタノールなどの溶媒中、NaBH4により室温付近で還元して化合物(19)とすることができる。生成した化合物(19)は、四臭化炭素とトリフェニルホスフィンにより、例えばジクロルメタンなどの溶媒中でブロム化することにより、化合物(20)へと導かれる。この反応は、０℃付近に冷却して行うことが好ましい。
化合物(20)は、N-ヒドロキシカルバミン酸  t-ブチルエステル等のN-ヒドロキシカルバミン酸アルキルエステル（化合物21）と水素化ナトリウムなどの塩基の存在下反応させることにより、化合物(22)を得ることができる。この反応は、テトラヒドロフラン（THF）などの溶媒中、０℃付近で行うことができる。
【００３６】
化合物(22)は、例えばエタノールとアルカリ水溶液との混合溶媒中で加水分解することにより化合物(23)を生成する。化合物(23)とカルボニルジイミダゾールをTHF等の溶媒に溶解し、これにスペーサーに切断性を付与するための化合物であるスルファモイル安息香酸エステルなどの化合物(24)をジイソプロピルエチルアミンなどの有機塩基の存在下反応させ、化合物(25)に導く。
切断性を付与するために使用される化合物(24)は、本発明の標識試薬に結合している糖化合物の種類、並びに該糖化合物に特異的に相互作用する糖の受容体である蛋白質の種類等を考慮して適宜選択されるが、スルファモイル安息香酸エステルは、緩和な条件で切断され、且つ安定性も良いので好ましい。
【００３７】
化合物(25)は、例えばエタノールとアルカリ水溶液との混合溶媒中で加水分解することにより化合物(26)を生成し、化合物(26)をＮ−ヒドロキシスクシンイミドとカルボジイミド類（ＤＣＣ等）を反応させ活性エステルとした後、ビオチンヒドラジドである化合物(27)などビオチン誘導体を反応させてビオチン化し、切断性スペーサーを有するビオチン化フェニルジアジリン化合物(28)とする。
この化合物(28)に対し、前記図３及び図４に示す工程と同様にして糖化合物（キトビオース：GlcNAcβ1-4GlcNAc）を導入して切断性スペーサーを有する糖結合ビオチン化フェニルジアジリン化合物(30)を形成し、他方、前記化合物(11)に還元末端を有する糖化合物としてキトビオースを導入して、切断性スペーサーを有しない化合物(29)を生成する。
【００３８】
【実施例】
以下、本発明を実施例によりさらに詳細に説明するが、本発明はその要旨を超えない限り、これらの実施例に限定されるものではない。なお、実施例中、各化合物番号は、図１〜図６に記載の化合物番号に対応する。
【００３９】
実施例１  （化合物(1)  →  (2)）
化合物(1)3.66ｇ(0.015mol)を30mlのジクロロメタンに溶解し、アルゴンガス雰囲気下、-20℃でこの溶液にBBr33.76ｇ(0.015mol)をゆっくり滴下した。滴下後、溶液を０℃で１時間かくはんした後、水を０℃で加えた。反応混合物をジクロロメタンで抽出し、ジクロロメタン層を無水硫酸マグネシウムで乾燥後、溶媒を減圧留去し、残渣をシリカゲルカラム（溶離剤；ジクロロメタン：ヘキサン＝１：２）で精製して3.18ｇの白色固体として化合物(2)｛2-ヒドロキシ-4-[3-(トリフルオロメチル)-3H-ジアジリン-3-イル]ベンズアルデヒド｝を得た（収率：92%）。
IR(nujol):v=3170,1665cm-1;
1ＨＮＭＲ(400MHz,CDCl3,25℃):δ=11.05(s,1H),9.92(s,1H),7.60(d,J=8.0Hz,1H),6.78(d,J=8.0Hz,1H),6.77(br s,1H);
ＭＳ（ＥＩ+）：ｍ／ｚ（％）:230(38)[Ｍ+];
ＨＲＭＳ：Ｃ9Ｈ5Ｆ3Ｎ2Ｏ2 ［Ｍ+］＝230.0303(計算値),230.0291(実測値)
【００４０】
実施例２  （化合物(2)+(3)  →  (4)）
化合物(２）２．７６ｇ（０．０１２ｍｏｌ）、化合物（３)｛2-[2-(2-tert-ブトキシカルボニルアミノエトキシ)エトキシ]エチル ブロミド｝４．５０ｇ（０．０１４４ｍｏｌ）、無水炭酸カリウム１．６６ｇ（０．０１２ｍｏｌ）、Ｂｕ4ＮＩ５５４ｍｇ（１．５ｍｍｏｌ）、及びＤＭＦ１５ｍｌの混合物をアルゴンガス雰囲気下、６０℃に１４時間かくはんした。その後、反応混合物の溶媒を減圧留去し、得られた残渣に水を加え、酢酸エチルで抽出した。酢酸エチル層を水、０．１Ｎ  ＨＣ１、及び水で順次洗浄して無水硫酸マグネシウムで乾燥後、溶媒を減圧留去し、残渣をシリカゲルカラム（溶離剤；酢酸エチル：ヘキサン＝１：１）で精製して５．３３ｇの淡黄色油状物質として化合物（４)｛2-[2-[2-(2-tert-ブトキシカルボニルアミノエトキシ)エトキシ]エトキシ]-4-[3-(トリフルオロメチル)-3H-ジアジリン-3-イル]ベンズアルデヒド｝を得た（収率：９６％）。
1ＨＮＭＲ(400MHz,CDCl3,25℃):δ=10.5(s,1H),7.85(d,J=8.1Hz,1H),6.86(d,J=8.1Hz,1H),6.75(br s,1H),5.00(br,1H),4.27(t,J=4.8Hz,2H),3.92(t,J=4.8Hz,2H),3.7(m,2H),3.6(m,2H),3.54(t,J=5.1Hz,2H),3.3(m,2H),1.43(s,9H);
ＭＳ（ＦＡＢ+）：ｍ／ｚ（％）：484（84）［Ｍ＋Ｎａ］+，462（15）［Ｍ＋Ｈ］+；
ＨＲＭＳ：Ｃ20Ｈ27Ｆ3Ｎ3Ｏ6 ［Ｍ＋Ｈ］+＝462.1852(計算値),462.1874(実測値)
【００４１】
実施例３（化合物（４）→（５））
化合物（４）３．６９ｇ（８ｍｍｏ１）をエタノール４０ｍ１に溶解し、この溶液にＮａＢＨ4３０３ｍｇ（８ｍｍｏ１）をゆっくり加えた．反応混合物を室温で３０分かくはんした後、溶媒を減圧留去して得られた残渣に水を加え、０℃で１Ｎ  ＨＣｌを加えることによりｐＨ３付近に調節した後、酢酸エチルて抽出した。酢酸エチル層を水、飽和重曹水、及び飽和食塩水で順次洗浄して無水硫酸マグネシウムて乾燥後、溶媒を減圧留去し、淡黄色油状物質として粗化合物(５)｛2-[2-[2-(2-tert-ブトキシカルボニルアミノエトキシ)エトキシ]エトキシ]-4-[3-(トリフルオロメチル)-3H-ジアジリン-3-イル]ベンジルアルコール｝を得た。粗化合物（５）は更に精製することなく直ちに次の反応に用いた。
1ＨＮＭＲ(400MHz,CDCl3,25℃):δ=7.26(d,J=8.0Hz,1H),6.79(d,J=8.0Hz,1H),6.66(br s,1H),6.01(br,1H),5.02(br,1H),4.66(s,2H),4.22(t,J=4.8Hz,2H),3.84(t,J=4.8Hz,2H),3.7(m,2H),3.6(m,2H),3.51(t,J=5.1Hz,2H),3.3(m,2H),1.45(s,9H);
ＭＳ（ＦＡＢ+）:ｍ／ｚ（％）:486（100）［Ｍ＋Ｎａ］+，464（16）［Ｍ＋Ｈ］+;
ＨＲＭＳ：Ｃ20Ｈ29Ｆ3Ｎ3Ｏ6 ［Ｍ＋Ｈ］+＝464.2008(計算値),464.1997(実測値)
【００４２】
実施例４（化合物（５）→（６））
上記の方法で化合物（４）３．６９ｇ（８ｍｍｏ１）から得られた粗化合物（５）と四臭化炭素３．３２ｇ（０．０１ｍｏｌ）とを１６ｍｌのジクロロメタンに溶解し、０℃に冷却しながらトリフェニルホスフィン３．１５ｇ（０．０１２ｍｏｌ）をゆっくりと加えた。１０分後、無水炭酸カリウム１．６６ｇ（０．０１２ｍｏｌ）を反応混合物に加え、０℃でさらに３０分かくはんした。その後、反応混合物に水を加え、ジクロロメタンで抽出し、ジクロロメタン層を無水硫酸マグネシウムで乾燥後、溶媒を減圧留去し、残渣をシリカゲルカラム（溶離剤；酢酸エチル：ヘキサン＝１：１）で精製して３．６２ｇの淡黄色油状物質として化合物(６)｛2-[2-[2-(2-tert-ブトキシカルボニルアミノエトキシ)エトキシ]エトキシ]-4-[3-(トリフルオロメチル)-3H-ジアジリン-3-イル]ベンジルブロミド｝を得た（収率：８６％）。
1ＨＮＭＲ(400MHz,CDCl3,25℃):δ=7.35(d,J=8.1Hz,1H),6.77(d,J=8.1Hz,1H),6.65(br s,1H),5.00(br,1H),4.51(s,2H),4.21(t,J=4.8Hz,2H),3.91(t,J=4.8Hz,2H),3.75(m,2H),3.65(m,2H),3.55(t,J=5.1Hz,2H),3.3(m,2H),1.43(s,9H);
ＭＳ(ＦＡＢ+）:ｍ／ｚ(％):550（41）［Ｍ＋Ｎａ］+,548(40),528(12)［Ｍ＋Ｈ］+,526(11);
ＨＲＭＳ：(79Ｂｒ)Ｃ20Ｈ28ＢｒＦ3Ｎ3Ｏ5 ［Ｍ＋Ｈ］+＝526.1164(計算値),526.1193(実測値)
【００４３】
実施例５（化合物（６）→（７））
化合物（６）２．６３ｇ（５ｍｍｏｌ）、N-ヒドロキシフタルイミド９７９ｍｇ（６ｍｍｏｌ）、無水炭酸カリウム６９１ｍｇ（５ｍｍｏｌ）、及びDMSO１０ｍｌの混合物を室温で１２時間かくはんした。その後、反応混合物の溶媒をオイルポンプを用いて減圧留去し、得られた残渣に水を加え、酢酸エチルで抽出した。酢酸エチル層を水、ｌＮ  ＮａＯＨ及び飽和食塩水で順次洗浄して無水硫酸マグネシウムで乾燥後、溶媒を減圧留去し、残渣をシリカゲルカラム（溶離剤；ヘキサン：アセトン＝３：１）で精製して２．５９ｇの淡黄色油状物質として化合物(７)｛2-[2-[2-(2-tert-ブトキシカルボニルアミノエトキシ)エトキシ]エトキシ]-4-[3-(トリフルオロメチル)-3H-ジアジリン-3-イル]ベンジルオキシフタルイミド｝を得た（収率：８５％）。
1ＨＮＭＲ(400MHz,CDCl3,25℃):δ=7.82-7.73(AB,4H),7.54(d,J=7.9Hz,1H),6.81(d,J=7.9Hz,1H),6.66(br s,1H),5.27(s,2H),5.05(br,1H),4.15(t,J=4.8Hz,2H),3.86(t,J=4.8Hz,2H),3.7(m,2H),3.6(m,2H),3.54(t,J=5.2Hz,2H),3.3(m,2H),1.42(s,9H);
ＭＳ（ＦＡＢ+）:ｍ／ｚ（％）:631（100）［Ｍ＋Ｎａ］+,609(9)［Ｍ＋Ｈ］+;ＨＲＭＳ：Ｃ28Ｈ32Ｆ3Ｎ4Ｏ8 ［Ｍ＋Ｈ］+＝609.2172(計算値),609.2164(実測値)
【００４４】
実施例６（化合物（７）→（８））
化合物（７）３０４ｍｇ（０．５ｍｍｏｌ）をジクロロメタン０．５ｍｌに溶解し、０℃に冷却しながらトリフルオロ酢酸０．５ｍｌをゆっくりと加え、反応混合物を０℃で１時間かくはんした。溶媒を減圧留去して得られた残渣にトルエン１ｍｌを加え、減圧留去した。この操作を計３回繰り返し、残存する過剰のトリフルオロ酢酸を除いて得られる黄色油状残渣をＤＭＦ０．５ｍｌに溶解し、ビオチンＮ−ヒドロキシスクシンイミドエステル１７１ｍｇ（０．５ｍｍｏｌ）を２ｍｌのＤＭＦに溶解した溶液を加え、触媒量のトリエチルアミンの存在下反応混合物を室温で１４時間かくはんした。その後、溶媒を減庄留去し、得られた残渣をジクロロメタンとメタノール１：１の混合溶媒に溶解し、１Ｎ  ＮａＯＨ、飽和食塩水、０．１Ｎ  ＨＣｌ、及び飽和食塩水で順次洗浄して無水硫酸マグネシウムで乾燥後、溶媒を減圧留去し、残渣をシリカゲルカラム（溶離剤：クロロホルム：エタノール＝１０：１）で精製して３２０ｍｇの無色固体として化合物(８)｛2-[2-[2-(2-ビオチニルアミノエトキシ)エトキシ]エトキシ]-4-[3-(トリフルオロメチル)-3H-ジアジリン-3-イル]ベンジルオキシフタルイミド｝を得た（収率：８７％）。
1HNMR(400MHz,CDCl3,25℃):δ=7.83-7.73(AB,4H),7.53(d,J=7.9Hz,1H),6.84(s,1H),6.81(d,J=7.9Hz,1H),6.64(s,1H),6.61(s,1H),5.64(s,1H),5.26(s,2H),4.5(m,1H),4.3(m,1H),4.15(t,J=4.8Hz,2H),3.90(t,J=4.8Hz,2H),3.7(m,2H),3.65(m,2H),3.55(m,2H),3.4(br m,2H),3.1(m,1H),2.9(m,1H),2.72(d,J=12.5Hz,1H),2.19(t,J=7.5Hz,2H),1.8-1.6(m,4H),1.4(m,2H);
MS(FAB+):m/z(%):757(16),[M+Na]+,735(62)[M+H]+;
HRMS:C33H38F3N6O8S [M+H]+=735.2424(計算値),735.2458(実測値)
【００４５】
実施例７（化合物（８）→（９））
化合物（８）７３ｍｇ（０．１ｍｍｏｌ）を無水ヒドラジンの１Ｍメタノール溶液１ｍｌに溶解し、室温で３０分間反応させた。その後、溶媒を減圧留去して得られた残渣にトルエン１ｍｌを加え、減圧留去した。この操作を計３回繰り返し、残存する過剰のヒドラジンを除いて無色固体として粗化合物（９）を得た。粗化合物（９）は精製することなく直ちに次の反応に用いた。
【００４６】
実施例８（化合物：（９）→（１０））
上記の方法で化合物（８）７３ｍｇ（０．１ｍｍｏｌ）から得られた粗化合物（９）をクロロホルムとアセトニトリル１：１の混合溶媒１ｍｌに溶解し、［（ＣＨ3）3ＣＯＣＯ］2Ｏ  １０９ｍｇ（０．５ｍｍｏｌ）とトリエチルアミン５１ｍｇ（０．５ｍｍｏｌ）を加えて室温で１４時間反応させた。その後、溶媒を減圧留去し、残渣をシリカゲルカラム（溶離剤；クロロホルム：エタノール＝１０：１）で精製して６４ｍｇの無色固体として化含物(１０)｛2-[2-[2-(2-ビオチニルアミノエトキシ)エトキシ]エトキシ]-4-[3-(トリフルオロメチル)-3H-ジアジリン-3-イル]ベンジルオキシカルバミン酸  tert-ブチルエステル｝を得た（収率：９５％）。
1ＨＮＭＲ(400MHz,CDCl3,25℃):δ=8.31(s,1H),7.39(d,J=7.9Hz,1H),6.97(br,1H),6.81(d,J=7.9Hz,1H),6.64(s,1H),6.58(s,1H),5.66(s,1H),4.91(s,2H),4.5(m,1H),4.3(m,1H),4.16(t,J=4.5Hz,2H),3.87(t,J=4.5Hz,2H),3.7(m,2H),3.65(m,2H),3.55(m,2H),3.4(br m,2H),3.1(m,1H),2.9(m,1H),2.70(d,J=12.8Hz,1H),2.17(t,J=7.3Hz,2H),1.8-1.6(m,4H),1.45(s,9H),1.4(m,2H);
ＵＶ／ＶＩＳ（ＭｅＯＨ）:λmax（ε）＝360(400),283(2600);
ＭＳ（ＦＡＢ+）:ｍ／ｚ（％）:727(100),［Ｍ＋Ｎａ］+,705(12)［Ｍ＋Ｈ］+;ＨＲＭＳ：Ｃ30Ｈ44Ｆ3Ｎ6Ｏ8Ｓ ［Ｍ＋Ｈ］+＝705.2893(計算値),705.2853(実測値)
【００４７】
実施例９（化合物（１０）→（１１））
化合物（１０）７ｍｇ（０．０１ｍｍｏｌ）をジクロロメタン０．１ｍｌに溶解し、０℃に冷却しながらトリフルオロ酢酸０．１ｍｌをゆっくりと加え、０℃で１時間反応させた。その後、溶媒を減圧留去して得られた残渣にトルエン０．１ｍｌを加え、減圧留去した。この操作を計３回繰り返し、残存する過剰のトリフルオロ酢酸を除き、淡黄色固体として化合物（１１）を得た。化合物（１１）は精製することなく直ちに糖化合物類との縮合反応に用いた。
【００４８】
実施例１０（化合物（１１）→（１２））
上記の方法で化合物（１０）７ｍｇ（０．０１ｍｍｏｌ）から調製した粗化合物（１１）をアセトニトリル０．１ｍｌに溶解し、Ｎ−アセチルラクトサミン１．９ｍｇ（０．００５ｍｍｏｌ）の水溶液を加え、３７℃で４０時間反応させた。反応混合物をシリカゲルカラム（センシュー科学AQUASILＳＳ−１２５１−１２０、４．６ｆ  ｘ  ２５０ｍｍ）を用いてＨＰＬＣにより精製した。収量は、メタノール溶液のＵＶスペクトルを測定し、化合物（１１）のＵＶスペクトル（３６１ｎｍ（ｅ＝３８６））を基準として求め０．００３１ｍｍｏｌの化合物（１２）を得た。〈収率６３％）。
ＨＰＬＣ条件:90％aq.ＣＨ3ＣＮ→75％aq.ＣＨ3ＣＮ、２０min、１ｍｌ／min
ＭＳ（ＦＡＢ-）:m/z(%):968(64)［Ｍ−Ｈ］-;
ＨＲＭＳ;Ｃ39Ｈ57Ｆ3Ｎ7０16Ｓ（[Ｍ−Ｈ]-）:968.3535(計算値)、968.3586(実測値)
【００４９】
実施例１１（化合物（１１）→（１３））
実施例９の方法で化合物（１０）３．５ｍｇ（０．００５ｍｍｏｌ）から調製した化合物（１１）とシアリル−α２−３−ラクトース１．６ｍｇ（０．００２５ｍｍｏｌ）を実施例１０と同様の条件で反応させた。同様にＨＰＬＣ精製後０．００１２ｍｍｏｌの化合物（１３）を得た。（収率４８％）。
ＨＰＬＣ条件:95％aq.ＣＨ3ＣＮ→50％aq.ＣＨ3ＣＮ、１０min、１ｍｌ／min
Negative  ion  FAB-MS（３-nitrobenzylalcohol）ｍ／ｚ：１２１８[Ｍ−Ｈ]-ＨＲ-ＦＡＢ-ＭＳ （３-nitrobenzylalcohol）
Ｃ48Ｈ71Ｆ3Ｎ7Ｏ24Ｓ（[Ｍ‐Ｈ]-）：1218.4223(計算値)、1218.4257(実測値)
【００５０】
実施例１２（化合物（１１）→（１４））
実施例９の方法で化合物（１０）４．３ｍｇ（０．００６ｍｍｏｌ）から調製した化合物（１１）とシアリル−α２−３−Ｎ−アセチルラクトサミン（純度９５％）１．０ｍｇ（０．００１４ｍｍｏｌ）を実施例１０と同様の条件で反応させた。同様にＨＰＬＣ精製後０．０００８５ｍｍｏｌの化合物（１４）を得た。（収率６１％）。
ＨＰＬＣ条件:85%aq.ＣＨ3ＣＮ→70%aq.ＣＨ3ＣＮ、15ｍｉｎ、1ｍｌ/ｍｉｎ
Negative  ion  FAB-MS（３-nitrobenzylalcohol）ｍ／ｚ：１２５９[Ｍ−Ｈ]-ＨＲ-ＦＡＢ-ＭＳ （３-nitrobenzylalcohol）
Ｃ50Ｈ74Ｆ3Ｎ8Ｏ24Ｓ（[Ｍ−Ｈ]-）：1259.4489(計算値)、1259.4507(実測値)
【００５１】
実施例１３（化合物（１１）→（１５））
実施例９の方法で化合物（１０）ｌ．４ｍｇ（０．００２ｍｍｏｌ）から調製した化合物（ｌｌ）とルイスＸ型三糖０．５ｍｇ（０．０００９４ｍｍｏｌ）を実施例１０と同様の条件で反応させた。同様にＨＰＬＣ精製後  ０．０００７３ｍｍｏｌの化合物（１５）を得た。（収率７８％）。
HPLC条件:９０％ａｑ．CH3CN→７０％ａｑ．CH3CN、１５min、１ｍｌ／min
ＭＳ（ＦＡＢ-）:m/z(%):1114(47)［Ｍ−Ｈ］-;
ＨＲＭＳ; Ｃ45Ｈ66Ｆ3Ｎ7Ｏ20Ｓ（[Ｍ−Ｈ]-）:1114.4114(計算値)、1114.4163(実測値)
【００５２】
実施例１４（化合物（１１）→（１６））
実施例９の方法で化合物（１０）１．７ｍｇ（０．００２４ｍｍｏｌ）から調製した化合物（１１）とシアリルルイスＸ型四糖（純度９５％）１ｍｇ（０．００１２ｍｍｏｌ）を実施例１０と同様の条件で反応させた。同様にＨＰＬＣ精製後０．０００８５ｍｍｏｌの化含物（１６）を得た。（収率７１％）。
ＨＰＬＣ条件:85%aq.ＣＨ3ＣＮ→65%aq.ＣＨ3ＣＮ、１５min、１ｍｌ／min
ＭＳ（ＦＡＢ-）:m/z(%):1405(29)［Ｍ−Ｈ］-;
ＨＲＭＳ; Ｃ56Ｈ84Ｆ3Ｎ8Ｏ28Ｓ（[Ｍ−Ｈ]-）：1405.5068(計算値)、1405.5143(実測値)
【００５３】
参考例１  （レクチンの光親和性標識実験）
化合物（１２）〜化合物（１６）による光親和性標識実験は畑中ら（Y.Hatanaka、M.Hashimoto、H.Nishihara、H.Narimatsu、Y.Kanaoka、Carbohydr.Res.,294、95-108(1996)）の方法に準じて以下の通り行った。
０．１Ｍリン酸緩衝液、ｐＨ７.６中に、化合物（１２）〜化合物（１６）のいずれかの光親和性標識試薬（０．１ｍＭ）及びレクチン（サブユニット濃度０．１ｍＭ）、を含む光親和性標識試科を各０．０５ｍｌ調製した。別に対照試料として、化合物（１２）〜化合物（１６）のいずれかの光親和性標識試薬（０．１ｍＭ）、レクチン（サブユニットあたり０．１ｍＭ）、及び阻害剤０．１Ｍを含む０．１Ｍリン酸緩衝液、ｐＨ７．６を各0.05ml調製した。光親和性標識、レクチン、及び対照実験における阻害剤の組み合わせは、この順に以下の通りである。
【００５４】
化合物(12)  ヒママメレクチン(RCA)       N-アセチルラクトサミン
化合物(13)  小麦胚芽レクチン(WGA)       シアリル-α2-3-ラクトース
化合物(14)  イヌエンジュレクチン(MAL)   シアリル-α2-3-ラクトース
化合物(15)  ロータスレクチン(Lotus)     メチル-α-フコピラノシド
化合物(16)  イヌエンジュレクチン(MAL)   シアリル-α2-3-ラクトース
以上のようにして調製した、光親和性標識試薬試料及び対照試料を遮光下、２５℃で３０分間インキュベートした後、３０Ｗ長波長ＵＶランプ（フナコシ、XX-15）を用いて、上方５ｃｍの距離から、氷上０℃で１時間照射した。照射後の各試料は、常法に従い12%  SDS-ポリアクリルアミド電気泳動で分離後、PVDF膜に転写して化学発光解析により光標識バンドを検出した。対照実験により、光標識が阻害されることから、標識は各レクチンに特異的であることを確認した。結果を表−１に示す。
【００５５】
【表１】
0003746181.tif 000010
【００５６】
実施例１５（化合物（１７））
水素化ナトリウム８.０ｇ(６０%油状分散液 ０.２ｍｏｌ)をトルエン２００ｍｌに懸濁し、-７０℃で2-[2-(2-クロロエトキシ)エトキシ]エタノール３３.７ｇ(０.２ｍｏｌ)をゆっくり加えた。この混合物にブロム酢酸エチル３３.４ｇ(０.２ｍｏｌ)を-７０℃でゆっくり滴下し、３０分後反応混合物を室温に放置した。２時間後、反応混合物に０℃で酢酸を加えて中和後、溶媒を減圧留去し、残渣をシリカゲルカラム（溶離剤；酢酸エチル：ヘキサン＝３：２）で精製して３８.８ｇの無色油状物質を得た。これをＮ−メチル−２−ピロリドン２００ｍｌに溶解し、臭化エチル１６３ｇ(１.５ｍｏｌ)と臭化ナトリウム３.１ｇ(０.０３ｍｏｌ)を加えて６５℃に４８時間加熱した。溶媒を減圧留去して残渣をシリカゲルカラム（溶離剤；酢酸エチル：ヘキサン＝３：２）で精製して３２.３ｇの無色油状物質として化合物（１７)｛2-[2-(2-ブロムエトキシ)エトキシ]エトキシ酢酸エチル｝を得た（収率：７６％）。
1ＨＮＭＲ(400MHz,CDCl3,25℃):δ=1.28(3H,t,J=7.3Hz,-CH2-CH3),3.47(2H,t,J=6.3Hz,BrCH2),3.68-3.75(8H,m,O-CH2-),3.81(2H,t,J=6.3Hz,BrCH2CH2O),4.15(2H,s,O-CH2-CO-),4.23(2H,q,J=7.3Hz,-CH2-CH3)
【００５７】
実施例１６（化合物(２)+(１７)→(１８)）
化合物(２)４.６２ｇ(２０ｍｍｏｌ)、化合物(１７)７.１８ｇ(２４ｍｍｏｌ)、無水炭酸カリウム２.７６ｇ(２０ｍｍｏｌ)、Ｂｕ4ＮＩ  ７.３９ｇ(２０ｍｍｏｌ)、及びＤＭＳＯ ２０ｍｌの混合物をアルゴンガス雰囲気下、６０℃に１４時間撹拌した。その後、反応液に水を加え、酢酸エチルで抽出した。酢酸エチル層を水、０．１Ｎ  ＨＣｌ、及び水で順次洗浄して無水硫酸マグネシウムで乾燥後、溶媒を減圧留去し、残渣をシリカゲルカラム（溶離剤；ジエチルエーテル：ヘキサン＝３：１）で精製して６.５８ｇの淡黄色油状物質として化合物（１８）｛2-[2-[2-(2-(エトキシカルボニルメトキシ)エトキシ)エトキシ]エトキシ]-4-[3-(トリフルオロメチル)-3H-ジアジリン-3-イル]ベンズアルデヒド｝を得た（収率：７６％）。
1ＨＮＭＲ(400MHz,CDCl3,25℃):δ=1.28(3H,t,J=7.3Hz,-CH2-CH3),3.67-3.93(12H,m,O-CH2-),4.14(2H,s,O-CH2-CO-),4.20(2H,q,J=7.3Hz,-CH2-CH3),4.52(2H,s,Ph-CH2-),6.74(1H,s,Ph-H),6.85(1H,d,J=8.1Hz,Ph-H),7.84(1H,d,J=8.1Hz,Ph-H);
ＵＶ(ＥｔＯＨ)ｎｍ(ε):210(16,368),289.5(1,272)
【００５８】
実施例１７（化合物(１８)→(１９)）
化合物(１８)２.１７ｇ（５ｍｍｏｌ）を、エタノール１０ｍｌに溶解し、この溶液にＮａＢＨ4 １８９ｍｇ（５ｍｍｏｌ）をゆっくり加えた。反応混合物を室温で３０分撹拌した後、反応液に０℃で酢酸を加えることによりｐＨ３付近に調節した後溶媒を減圧留去し、残渣を酢酸エチルで抽出した。酢酸エチル層を０.１Ｎ ＨＣｌ、水、及び飽和食塩水で順次洗浄して無水硫酸マグネシウムで乾燥後、溶媒を減圧留去し、残渣をシリカゲルカラム（溶離剤；酢酸エチル：ヘキサン＝１：１）で精製して１.７２ｇの淡黄色油状物質として化合物（１９)｛2-[2-[2-(2-(エトキシカルボニルメトキシ)エトキシ)エトキシ]エトキシ]-4-[3-(トリフルオロメチル)-3H-ジアジリン-3-イル]ベンジルアルコール｝を得た（収率：７６％）。
1ＨＮＭＲ(400MHz,CDCl3,25℃):δ=1.28(3H,t,J=7.3Hz,-CH2-CH3),3.43-3.87(12H,m,O-CH2-),4.12(2H,s,O-CH2-CO-),4.20(2H,q,J=7.3Hz,-CH2-CH3),4.52(2H,s,Ph-CH2-),6.62(1H,s,Ph-H),6.79(1H,d,J=7.8Hz,Ph-H),7.30(1H,d,J=7.8Hz,Ph-H);
ＵＶ(ＥｔＯＨ)ｎｍ(ε):206.5(24,660),227(10,244),280(2,311)
【００５９】
実施例１８（化合物(１９)→(２０)）
化合物(１９)３.６０ｇ（８ｍｍｏｌ）と四臭化炭素３.３２ｇ（１０ｍｍｏｌ）とを、１６ｍｌのジクロロメタンに溶解し、０℃に冷却しながらトリフェニルホスフィン３.１５ｇ（１２ ｍｍｏｌ）をゆっくりと加えた。３０分後、反応混合物に水を加え、ジクロロメタンで抽出し、ジクロロメタン層を無水硫酸マグネシウムで乾燥後、溶媒を減圧留去し、残渣をシリカゲルカラム（溶離剤；酢酸エチル：ヘキサン＝１：１）で精製して３.３７ｇの淡黄色油状物質として化合物（２０）｛2-[2-[2-(2-(エトキシカルボニルメトキシ)エトキシ)エトキシ]エトキシ]-4-[3-(トリフルオロメチル)-3H-ジアジリン-3-イル]ベンジルブロミド｝を得た（収率：82％）。
1ＨＮＭＲ(400MHz,CDCl3,25℃):δ=1.28(3H,t,J=7.3Hz,-CH2-CH3),3.67-3.91(12H,m,O-CH2-),4.14(2H,s,O-CH2-CO-),4.20(2H,q,J=7.3Hz,-CH2-CH3),4.52(2H,s,Ph-CH2-),6.65(1H,s,Ph-H),6.77(1H,d,J=8.0Hz,Ph-H),7.35(1H,d,J=8.0Hz,Ph-H);
Positive ion FABMS (3-nitrobenzylalcohol)ｍ／ｚ：５３５（Ｍ＋Ｈ）+
ＵＶ(ＥｔＯＨ)ｎｍ(ε):209(23,783),238.5(8,873),290(2,927)
【００６０】
実施例１９（化合物（２０）＋（２１）→（２２））
水素化ナトリウム２１６ｍｇ（６０%油状分散液 ５.４ｍｍｏｌ）をＴＨＦ１０ｍｌに懸濁し、-２０℃に冷却しながらＮ-ヒドロキシカルバミン酸 tert-ブチル(２１)７１８ｍｇ（６ｍｍｏｌ）を加えた。１５分後、化合物(２０)２.３１ｇ（４．５ｍｍｏｌ）を−１５℃に冷却しながら加え、反応混合物を０℃で撹拌した。２時間後、反応液に０℃で１Ｎ ＨＣｌを加えることによりｐＨ３付近に調節した後、酢酸エチルで抽出した。酢酸エチル層を無水硫酸マグネシウムで乾燥後、溶媒を減圧留去し、残渣をシリカゲルカラム（溶離剤；ヘキサン：ジエチルエーテル＝１：１０）で精製して２.１１ｇの淡黄色油状物質として化合物（２２）｛2-[2-[2-[2-(エトキシカルボニルメトキシ)エトキシ]エトキシ]エトキシ]-4-[3-(トリフルオロメチル)-3H-ジアジリン-3-イル]ベンジルオキシカルバミン酸  tert-ブチルエステル｝を得た（収率：83％）。
1ＨＮＭＲ(400MHz,CDCl3,25℃):δ=1.28(3H,t,J=7.1Hz,-CH2-CH3),1.46(9H,s,C(CH3)3),3.67-3.88(12H,m,O-CH2-),4.12(2H,s,O-CH2-CO-),4.20(2H,q,J=7.1Hz,-CH2-CH3),4.91(2H,s,Ph-CH2-),6.65(1H,s,Ph-H),6.79(1H,d,J=8.0Hz,Ph-H),7.38(1H,d,J=8.0Hz,Ph-H),7.67(1H,s,NH);
Positive ion FABMS (3-nitrobenzylalcohol)ｍ／ｚ：５８８（Ｍ＋Ｈ）+
ＵＶ:２０７ｎｍ(ε３４０２９),２２８.５ｎｍ(ε１３２２８),２８０.５ｎｍ(ε２９５９)
【００６１】
実施例２０ （化合物（２２）→（２３））
化合物（２２）２．２６ｇ（４ｍｍｏｌ）を１Ｎ ＮａＯＨ ２０ｍｌとエタノール１８ｍｌの混合溶媒に溶かし、０℃で３０分間撹拌した。反応液に０℃で１Ｎ ＨＣｌを加えることによりｐＨ３付近に調節した後、溶媒を減圧留去し、残渣をシリカゲルカラム（溶離剤；クロロホルム：メタノール＝５：１）で精製して２．１ｇの淡黄色油状物質として化合物（２３）｛2-[2-[2-[2-(カルボキシメトキシ)エトキシ]エトキシ]エトキシ]-4-[3-(トリフルオロメチル)-3H-ジアジリン-3-イル]ベンジルオキシカルバミン酸  tert-ブチルエステル｝を得た（収率：98％）。
1ＨＮＭＲ(400MHz,CDCl3,25℃):δ=1.46(9H,s,C(CH3)3),3.69-3.90(12H,m,O-CH2-),4.13(2H,bs,O-CH2-CO-),4.91(2H,s,Ph-CH2-),6.65(1H,s,Ph-H),6.81(1H,d,J=7.8Hz,Ph-H),7.37(1H,d,J=7.8Hz,Ph-H),8.06(1H,bs,NH)
【００６２】
実施例２１ （化合物（２３）＋ （２４） →（２５））
化合物（２３）５３７ｍｇ（１ｍｍｏｌ）とカルボニルジイミダゾール １９４ｍｇ（１．２ｍｍｏｌ）を無水ＴＨＦ １ｍｌに溶解し、室温で撹拌しながらメチル スルファモイルベンゾエート（２４） ２５８ｍｇ（１．２ｍｍｏｌ）とジイソプロピルエチルアミン １５８ｍｇ（１．２ｍｍｏｌ）を加え、室温で１８時間反応させた。その後、溶媒を減圧留去して得られた残渣に水を加え、酢酸エチルで抽出した。酢酸エチル層を０．５Ｎ ＨＣｌ、飽和重曹水、及び飽和食塩水で順次洗浄して無水硫酸マグネシウムで乾燥後、溶媒を減圧留去し、残渣をシリカゲルカラム（溶離剤；酢酸エチル：エタノール＝１０：１）で精製して７３４ｍｇの淡黄色油状物質として化合物（２５）を得た（収率：74％）。
1ＨＮＭＲ(400MHz,CDCl3,25℃):δ=1.40(9H,s,-C(CH3)3),3.69-3.90(12H,m,O-CH2-),3.94(3H,s,CH3),4.2(2H,bs,O-CH2-CO-),5.02(2H,s,Ph-CH2-),6.67(1H,s,Ph-H),6.80(1H,d,J=7.8Hz,Ph-H),7.34(1H,d,J=7.8Hz,Ph-H),7.69(1H,s,NH),8.14(4H,s,Ph-H)
【００６３】
実施例２２ （化合物（２５）→（２６））
化合物（２５）１２０ｍｇ（０．１５ｍｍｏｌ）を１Ｎ ＮａＯＨ ０．７５ｍｌとエタノール３．５ｍｌの混合溶媒に溶かし、０℃で３０分間撹拌した。０℃に冷却しながら５Ｎ ＨＣｌ ０．１５ｍｌを加えてｐＨ３付近に調節した後、酢酸エチルで抽出した。酢酸エチル層を飽和食塩水で洗浄して無水硫酸マグネシウムで乾燥後、溶媒を減圧留去し、残渣をシリカゲルカラム（溶離剤；クロロホルム：メタノール＝５：１）で精製して９９ｍｇの淡黄色油状物質として化合物（２６）を得た（収率：８９％）。
1ＨＮＭＲ(400MHz,CDCl3,25℃):δ=1.43(9H,s,-C(CH3)3),3.68-4.10(12H,m,O-CH2-),4.23(2H,s,O-CH2-CO-),4.91(2H,s,Ph-CH2-),6.65(1H,s,Ph-H),6.77(1H,d,J=8.1Hz,Ph-H),7.35(1H,d,J=8.1Hz,Ph-H),8.17-8.23(4H,m,Ph-H),8.03(1H,bs,-NH)
【００６４】
実施例２３ （化合物（２６）＋（２７）→（２８））
化合物（２６）７２ｍｇ（０．１ｍｍｏｌ）をジクロロロメタン１ｍｌに溶解し、Ｎ−ヒドロキシスクシンイミド１３ｍｇ（０．１１ｍｍｏｌ）とＤＣＣ ２３ｍｇ （０．１１ｍｍｏｌ）を加え、室温で１時間撹拌した。溶媒を減圧留去し、残渣をＤＭＳＯ  １ｍｌに溶解し、ビオチンヒドラジド（２７）２６ｍｇ（０．１ｍｍｏｌ）を加えて室温で一夜攪拌した。反応液を直接シリカゲルカラム（溶離剤；クロロホルム：メタノール＝５：１）で精製して１０ｍｇの淡黄色固体として化合物（２８）を得た（収率：１０％）
Positive ion FABMS (3-nitrobenzylalcohol)  ｍ／ｚ：961（Ｍ＋Ｈ）+
【００６５】
実施例２４ （化合物（１１）→（２９））
実施例９の方法で化合物（１０）３．５ｍｇ（５μｍｏｌ）から調製した化合物（１１）とキトビオース  １．１ｍｇ（２．５μｍｏｌ）を実施例１０と同様な条件で反応させた。同様にＨＰＬＣ精製後、１．２μｍｏｌの化合物（２９)を得た（収率：４８％）。
ＨＰＬＣ条件：８５％  aq.ＣＨ3ＣＮ、１ml/min
Positive ion FABMS (3-nitrobenzylalcohol) ｍ／ｚ：1011（Ｍ＋Ｈ）+，1033（Ｍ＋Ｎａ）+
【００６６】
実施例２５ （化合物（２８）→（３０））
実施例９の方法で化合物（２８）９．６ｍｇ（１０μｍｏｌ）を脱保護し、キトビオース  ２．１ｍｇ（５μｍｏｌ）を実施例１０と同様な条件で反応させた。同様にＨＰＬＣ精製後、１．０μｍｏｌの化合物（３０)を得た（収率：２％）。
ＨＰＬＣ条件：90％  aq.ＣＨ3ＣＮ→80％ ａｑ.ＣＨ3ＣＮ  20min,１ml/min
Positive ion FABMS (3-nitrobenzylalcohol)ｍ/ｚ:1266(Ｍ+Ｈ)+,1288(Ｍ+Ｎａ)+
【００６７】
参考例２  （ＷＧＡの光親和性標識実験）
化合物(２９)、化合物(３０)の光親和性標識実験を参考例１と同様な方法で行った。 ０.１Ｍリン酸緩衝液、ｐＨ７.６中に、化合物(２９)及び化合物(３０)のいずれかの光親和性標識試薬（０.１ｍＭ）及びＷＧＡ（小麦胚芽レクチン(wheat germ agglutinin);サブユニット濃度０.１ｍＭ）、を含む光親和性標識試料を各０.０５ｍｌ調製した。別に対照試料として、化合物(２９)及び化合物(３０)のいずれかの光親和性標識試薬（０.１ｍＭ）、ＷＧＡ（サブユニット濃度０.１ｍＭ）、及びキトビオース０.１Ｍを含む０.１Ｍリン酸緩衝液、ｐＨ７．６を各０.０５ｍｌ調製した。
以上のようにして調製した、光親和性標識試薬試料及び対照試料を遮光下、２５℃で３０分間インキュベートした後、３０Ｗ  長波長ＵＶランプ（フナコシ、XX-15）を用いて、上方５ｃｍの距離から、氷上０℃で１時間照射した。照射後の各試料は、常法に従い12%  SDS-ポリアクリルアミド電気泳動で分離後、PVDF膜に転写して化学発光解析により光標識バンドを検出した。対照実験により、分子量２２ＫのＷＧＡバンドの光標識が阻害されることから、標識はＷＧＡに特異的であることを確認した。
【００６８】
スペーサーの切断は、照射後の各試料 １０μｌをとり、７Ｍグアニジン,ＥＤＴＡ ２Ｎａ、１０ｍＭを含む０.５Ｍトリス塩酸緩衝液、ｐＨ８.５、１０μｌに溶かし、０.７Ｍ ＤＴＴ １０μｌを加えて室温２時間反応させた。さらに、１Ｍ ヨード酢酸ナトリウム １０μｌを加えて室温４時間、さらに４Ｍ メルカプトエタノールを加えて５時間反応させた後、０.１Ｍリン酸緩衝液、ｐＨ７.６に対して透析した後、同様に電気泳動により解析した。切断反応後は、化合物(３０)によるＷＧＡラベルバンドの分子量２２Ｋが消失することにより、切断を確認した。
【００６９】
【発明の効果】
本発明の一般式(II)で示される化合物、特にオキシアミノ基およびその塩を有する上記化合物(11)は、還元末端を有する糖化合物に、特別の保護処理を施すことなく、一段階で反応して光反応基（ジアジリン）とビオチンを有する一般式(V)の糖結合フェニルジアジリン化合物を導くことができ、この一般式(V)の化合物は、光親和性標識試薬として、糖と相互作用する蛋白質（糖受容体）のビオチン標識に極めて有用である。しかも、該一般式(V)の化合物において、ビオチンが切断性スペーサーを介してフェニルジアリジン骨格に結合している化合物は、固定化アビジンからのラベル化した蛋白質の遊離・回収が容易である点で優れている。従って、一般式(II)の化合物は、光親和性標識試薬を簡便に製造するための安定した有用な化合物であり、この一般式(II)の化合物の合成中間体である、一般式(I)の化合物も有用性の高い物質である。
【図面の簡単な説明】
【図１】  本発明の一般式(I)化合物を合成する一例を示す反応スキームの概略図である。
【図２】  本発明の一般式(II)化合物を合成する一例を示す反応スキームの概略図である。
【図３】  本発明の一般式(Ｖ)化合物を合成する一例を示す反応スキームの概略図である。
【図４】  本発明の一般式(Ｖ)化合物を合成する一例を示す反応スキームの概略図である。
【図５】  本発明の一般式(I)化合物及び(IV)化合物を合成する一例を示す反応スキームの概略図である。
【図６】  本発明の一般式(Ｖ)化合物を合成する一例を示す反応スキームの概略図である。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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