(57)【要約】一般式（１）2002034250.tif 000007（式中、Ｒ１は水素原子または低級アルコキシ基を示し、Ｒ２はハロゲン原子またはニトロ基を示し、Ｒ３は水素原子またはハロゲン原子を示す）で表される２−フェノキシアニリン誘導体を含有する脂肪乳剤が開示されている。本発明により、疼痛を与えず、また、血管や注射部位等に損傷を与えることなく、下記２−フェノキシアニリン誘導体（１）を心臓や脳の標的組織に充分量を送達できる脂肪乳剤を提供することができる。【特許請求の範囲】
【請求項１】
一般式（１）
2002034250.tif 000006
（式中、Ｒ１は水素原子または低級アルコキシ基を示し、Ｒ２はハロゲン原子またはニトロ基を示し、Ｒ３は水素原子またはハロゲン原子を示す）で表される２−フェノキシアニリン誘導体を含有する脂肪乳剤。
【請求項２】
式（１）の２−フェノキシアニリン誘導体を１〜１０ｍｇ／ｍｌ含有する請求項第１項記載の脂肪乳剤。
【請求項３】
５〜３０質量％の油成分、１〜２０質量％の界面活性剤および水を含むものである請求項第１項または第２項記載の脂肪乳剤。
【請求項４】
脂肪乳剤を構成する油成分が、大豆油またはオリーブ油から選ばれたものである請求項第１項ないし第３項の何れかの項記載の脂肪乳剤。
【請求項５】
脂肪乳剤を構成する界面活性剤が、大豆レシチンおよび卵黄レシチンから選ばれたものである請求項第１項ないし第３項の何れかの項記載の脂肪乳剤。
【請求項６】
静脈内投与用のものである請求項第１項ないし第５項のいずれかの項記載の脂肪乳剤。
【請求項７】
虚血性疾患治療または予防用のものである請求項第１項ないし第６項の何れかの項記載の脂肪乳剤。
【請求項８】
虚血性心疾患、虚血性脳疾患あるいは虚血性腎疾患の治療または予防用のものである請求項第１項ないし第７項の何れかの項記載の脂肪乳剤。
【請求項９】
血栓溶解療法、血管形成術、冠動脈バイパス手術もしは臓器移植から選ばれる外科的処置時の細胞保護用のものである請求項第１項ないし第６項の何れかの項記載の脂肪乳剤。
【請求項１０】
請求項第１項ないし第９項の何れかの項記載の脂肪乳剤を含有する虚血性疾患治療または予防用薬剤。
【請求項１１】
請求項第１項ないし第９項の何れかの項記載の脂肪乳剤を含有する外科的処置時の細胞保護用薬剤。
【発明の詳細な説明】
技術分野
本発明は、２−フェノキシアニリン誘導体を含有する脂肪乳剤に関し、更に詳細には、２−フェノキシアニリン誘導体を高濃度に含有し、静脈内投与時の刺激が少なく、投与後、心臓、脳に適切な濃度の２−フェノキシアニリン誘導体を送達させることのできる脂肪乳剤に関する。
背景技術
本発明者らは先に、下記式（１）で示される２−フェノキシアニリン誘導体は、Ｎａ＋／Ｃａ２＋交換系を選択的に阻害し、虚血・再灌流後の細胞傷害の機序として重要視されている細胞内のＣａ２＋の過剰蓄積を抑制する薬剤として有用であり、心筋梗塞等の虚血性心疾患、脳梗塞等の虚血性脳疾患あるいは虚血性腎疾患等の治療、予防剤となしうることを見出し、特許出願を行った（特開平１１−１９３２６３号：ＷＯ９９／２０５９８）。
2002034250.tif 000002
（式中、Ｒ１は水素原子または低級アルコキシ基を示し、Ｒ２はハロゲン原子またはニトロ基を示し、Ｒ３は水素原子またはハロゲン原子を示す）
上記の２−フェノキシアニリン誘導体（１）の投与経路としては、静脈内投与が好ましいが、このものは水に極めて溶け難いものであり（０．００１ｍｇ／ｍｌ以下）、そのまま一般的な水性注射とすることは不可能と判断された。
従来、難水溶性薬物の溶解性を改善する手法としては、酸性塩やアルカリ金属またはアミン等のアルカリ塩とする方法、コソルベントを用いる方法、シクロデキストリンにより包接する方法等が知られており、これらの手法の一つまたは複数併用して溶解性を向上せしめることが一般的である。
上記の２−フェノキシアニリン誘導体（１）のうち、例えば、Ｒ１が４位エトキシ基、Ｒ２が５位フッ素原子、Ｒ３が２位フッ素原子である化合物（ＳＥＡ４００）も塩酸塩とすることで、プロピレングリコール／エタノール／生理食塩水＝３：１：１の混液に約５ｍｇ／ｍｌ溶解させることができ、また、２０％ヒドロキシプロピル−β−シクロデキストリンにも約５ｍｇ／ｍｌ溶解させることができた。
しかしながら、前者の手法による場合はプロピレングリコール、エタノールの溶剤量が多く、例えば、注射剤等として投与した場合は、投与時の疼痛および静脈炎等の傷害の発生が懸念される。また、後者の手法では溶液のｐＨが１．６と極端に低く、注射部位組織の損傷及び薬物の析出による血管傷害の発生が懸念された。
上記以外の手法としては、難水溶性薬物を油に溶解後、脂肪乳剤とする方法が知られており、この方法により薬物を高濃度で含有する注射剤が得られることが知られている。しかし、脂肪乳剤では、薬物を含む油粒子が肝、肺などの細網内皮系細胞に捕捉されやすく、当然薬物もこの部位に集積されると考えられるため、本発明の２−フェノキシアニリン誘導体（１）のように、肝や肺以外の部位、例えば心臓や脳などに到達し薬効が奏される薬物には不適切と考えられていた。
このように、疼痛を与えず、また、血管や注射部位等に損傷を与えることなく、２−フェノキシアニリン誘導体（１）を心臓や脳に到達せしめる手段は未だ知られていないのが現状であり、本発明の課題は、生体に対して作用が緩和な基剤により上記化合物を標的組織に充分量を送達できる手段を提供することにある。
発明の開示
本発明者らは、上記課題を解決するため、前記２−フェノキシアニリン誘導体（１）の性質に立ち返り検討を重ねた。そしてその結果、当該化合物は油に対し充分高い溶解性を有するものであるが、血液に対してはより高い親和性を示すことを知った。そして、２−フェノキシアニリン誘導体（１）を油に溶解し、脂肪乳剤としても、静脈投与後速やかに油粒子中から血液中に移動し、肝、肺などの部分に集積することがなく、心臓、脳に到達しうることを見出し、本発明を完成した。
すなわち本発明は、前記式（１）で表される２−フェノキシアニリン誘導体を含有する脂肪乳剤を提供するものである。
また本発明は、上記脂肪乳剤を含有する虚血性疾患治療・予防用薬剤および外科的処置時の細胞保護用薬剤を提供するものである。
発明を実施するためにの最良の形態
本発明の脂肪乳剤は、上記２−フェノキシアニリン誘導体（１）を脂肪乳剤の油粒子中に含有せしめることにより調製される。本発明の薬効成分である２−フェノキシアニリン誘導体（１）は、既に特開平１１−１９３２６３号に開示されているものであり、同公開公報の記載に従い製造することができる。
また、本発明の脂肪乳剤は、常法に従って、薬学的に許容される油成分および界面活性剤と、水とを使用して製造することができ、例えば、油成分を５〜３０質量％（以下、単に「％」で示す）、界面活性剤を１〜２０％および適量の水を用いて調製したものが好ましい。
上記脂肪乳剤において使用される油成分としては、薬学的に許容される天然の油脂の精製品及び中鎖脂肪酸トリグリセリドなどの合成油脂品を挙げることができるが、このうち植物油が好ましい。この植物油の例としては、大豆油、ゴマ油、菜種油、綿実油、紅花油、オリーブ油などを挙げることができ、特に、大豆油およびオリーブ油が好ましい。
また、界面活性剤としても、薬学的に許容される界面活性剤を使用することができるが、リン脂質がより好ましい。このリン脂質は、主としてホスファチジルコリン、ホスファチジルエタノールアミンからなり、これ以外のリン脂質として、ホスファチジルイノシトール、ホスファチジルセリン、スフィンゴミエリンなども含有するものであり、その好ましい例としては、大豆レシチンおよび卵黄レシチンを挙げることができる。なお、このリン脂質としては、有機溶媒による分画法等公知の方法によって精製された精製リン脂質を用いることが更に好ましい。
上記の脂肪乳剤中での２−フェノキシアニリン誘導体（１）の含量は、脂肪乳剤の投与形態や用途等により適宜増減でき、最大３０ｍｇ／ｍｌ程度まで含有させることが可能であるが、一般には脂肪乳剤中、１〜１０ｍｇ／ｍｌ程度であることが好ましい。
本発明の脂肪乳剤には、上記成分の他、必要に応じて注射剤へ添加可能な成分、例えば、乳化補助剤、安定化剤、高分子物質、等張化剤、ｐＨ調整剤等を添加することができる。
このうち乳化補助剤としては、炭素数１２〜２０の脂肪酸またはその塩、例えばオレイン酸、リノール酸及びこれらのナトリウム塩などが挙げられる。また、安定化剤としては、コレステロールやホスファチジン酸などを使用することができ、ホスファチジン酸を使用する場合は、脂肪乳剤中１％以下とすることが好ましい。
更に、非イオン性界面活性剤としてはモノオレイン酸ポリオキシエチレンソルビタンなどを挙げることができ、これらの配合量は脂肪乳剤中０．５〜２％程度とすることが好ましい。更にまた、等張化剤としては、例えば、グリセリン、ブドウ糖などを例示することができる。
かくして得られた本発明の脂肪乳剤は、例えば、静脈内投与用の注射剤や点滴用製剤として使用することができ、特に、虚血・再灌流後の細胞傷害の機序として重要視されている細胞内のＣａ２＋の過剰蓄積を抑制するために利用することができる。より具体的には、心筋梗塞等の虚血性心疾患、脳梗塞等の虚血性脳疾患あるいは虚血性腎疾患等の治療・予防剤として、あるいは血栓溶解療法、血管形成術、冠動脈バイパス手術、臓器移植等の外科的処置時の細胞保護のための薬剤として利用することができる。
本発明の脂肪乳剤が、有効であるのは、２−フェノキシアニリン誘導体（１）の特異な物性によるものである。すなわち、油成分中に溶解し、油成分と親和性の高い薬剤は、血中においても油粒子中にとどまり、その結果、肝、肺などの細網内皮系細胞に捕捉、蓄積される。これに対し、本発明の２−フェノキシアニリン誘導体（１）は油成分に対し充分高い溶解性を有するため、油成分中に高い濃度で配合した脂肪乳剤となし得るが、一旦静脈内に投与された後は、血液に対してより高い親和性を有することから、速やかに血中に放出され、血液の循環により標的部位である心臓や脳に到達するのである。
このように、本発明において、脂肪乳剤となるにもかかわらず、肝、肺などの細網内皮系細胞に捕捉されることに起因する薬物の蓄積が生じないのは、本発明の２−フェノキシアニリン誘導体（１）に特徴的な油成分および血液成分との相互作用に起因しているものであるが、当該化合物についてこのような性質を有することは従来全く知られておらず、また、他の薬剤についても報告のないことである。
実施例
以下、実施例及び試験例を挙げて本発明をさらに詳しく説明するが、本発明はこれら実施例等に何ら制約されるものではない。
実施例　１
（１）式中、Ｒ１４位エトキシ基、Ｒ２が５位フッ素原子、Ｒ３が２位フッ素原子である化合物（以下、「ＳＥＡ４００」という）５ｍｇを大豆油５００ｍｇに溶解後、卵黄レシチン６０ｍｇと混合する。これにグリセリン１２０ｍｇを添加後、注射用水を加え５ｍｌとする。本液を混合機により粗乳化し、さらに高圧乳化装置により、７．８４×１０７Ｐａ（８００ｋｇｆ／ｃｍ２）の圧力で３回乳化後、アンプルに充填した。これを高圧蒸気滅菌し、ＳＥＡ４００を１ｍｇ／ｍｌ含有する脂肪乳剤（注射剤）を得た。
実施例　２
ＳＥＡ４００、５ｇを大豆油１００ｇに溶解後、大豆レシチン１２ｇと混合する。これにグリセリン１０．５ｇを添加後、注射用水を加え５００ｍｌとする。本液を混合機により粗乳化し、さらに高圧乳化装置により、６．１２５×１０７Ｐａ（６２５ｋｇｆ／ｃｍ２）の圧力で１０回乳化後、アンプルに充填した。これを高圧蒸気滅菌し、ＳＥＡ４００を１０ｍｇ／ｍｌ含有する脂肪乳剤（注射剤）を得た。
実施例　３
ＳＥＡ４００に代え、（１）式中、Ｒ１が水素原子、Ｒ２が６位フッ素原子、Ｒ３が２位フッ素原子である化合物（以下、「ＳＥＡ４９５」という）を用い、以下実施例１と同様にしてＳＥＡ４９５を１ｍｇ／ｍｌ含有する脂肪乳剤（注射剤）を得た。
試験例　１
ラット体内動態試験（１）：
実施例１の注射剤をラットに１ｍｇ／ｋｇの用量で静脈内投与後、経時的に採血し、血漿中のＳＥＡ４００の濃度を下記条件のＬＣ／ＭＳ／ＭＳにより測定した。また、標的部位である心臓および脳でのＳＥＡ４００の濃度も測定した。その結果、図１に示すように、ＳＥＡ４００は析出のない良好な血漿中濃度推移を示した。また、ＳＥＡ４００は、図２および図３に示すように、標的部位である心臓および脳のいずれでも短時間で期待濃度（１００ｎｇ／ｍｌ）以上に達していた。
（ＬＣ／ＭＳ／ＭＳ条件）
2002034250.tif 000003
試験例　２
注射剤の物性試験：
実施例１および２の脂肪乳剤について、そのｐＨをｐＨメーターで、また粒子径を動的光散乱法で測定した。その結果を表１に示す。
（結　果）
2002034250.tif 000004
この結果から明らかなように、実施例１および２の製剤のｐＨはいずれも中性であり、それらの粒子径も十分小さく、生体への刺激はほとんどないと判断された。
試験例　３
ラット体内動態試験（２）：
実施例３の脂肪乳剤を用い、以下試験例１と同様にしてＳＥＡ４９５の体内動態を調べた。ＳＥＡ４９５の血漿中濃度推移を図４に、標的部位である心臓および脳でのＳＥＡ４９５の濃度を図５および図６に示す。なお、ＬＣ／ＭＳ／ＭＳ条件は、ＳＲＩでプレカーサーイオンがｍ／ｚ　３２８．０、娘イオンがｍ／ｚ　１０７．９である以外は、試験例１と同一である。
試験例　４
ラット中大脳動脈閉塞再開通モデル試験：
以下に示すモデル試験により、本発明脂肪乳剤の薬理作用を調べた。
（試験方法）
ＳＤラット（８週齢）を４群に分け、これらのラットを３％イソフルラン吸入にて麻酔導入後、仰臥位に固定し、２％イソフルランにて麻酔を維持した。直腸内に挿入した体温計測用プローブにより体温変化をモニターし、白熱灯を用いて手術中の体温を３７℃付近に維持した。フリームービングの状態で持続注入を行うため、カテーテルを大腿静脈内に留置した。右側総頸動脈、外頸動脈および内頸動脈を露出し、総頸動脈および外頸動脈を糸で結紮した。予めシリコンコーティングし、１９ｍｍの長さに切断した４号のナイロン糸（栓子）外頸動脈と内頸動脈の分岐部より挿入し、中大脳動脈を閉塞した。
上記４群のうち一つの群については、中大脳動脈閉塞直後に注射剤１で、ＳＥＡ４００が１ｍｇ／ｋｇとなるよう急速静注を行い、その後引き続きインフュージョンポンプを用いて静脈内に１ｍｇ／ｋｇ／ｈｒで２時間持続投与した（脂肪乳剤１投与群）。また、別の一群については、脂肪乳剤２で、ＳＥＡ４００が３ｍｇ／ｋｇとなるよう急速静注を行い、その後引き続きインフュージョンポンプを用いて静脈内に３ｍｇ／ｋｇ／ｈｒで２時間持続投与した（脂肪乳剤２投与群）。更に、他の２群については、脂肪乳剤基剤および生理食塩液を上記と同様の量で投与した（比較群および対照群）。
中大脳動脈閉塞２時間後に栓子を抜き、中大脳動脈の血流を再開通させた。一連の手術は３０分以内に終了した。中大脳動脈閉塞３０分後に神経症状（前肢の屈曲）を観察し、前肢の屈曲が確認できない動物は試験から除外した。また、脳摘出時にくも膜下出血が確認された動物も除外した。中大脳動脈閉塞２４時間後に動物を断頭し、脳を素早く摘出した。ティッシュチョッパーを用いて厚さ２ｍｍの脳切片を作製した。
脳切片は前頂（Ｂｒｅｇｍａ）前方４ｍｍ、前頂前方２ｍｍ、前頂上、前頂後方２ｍｍおよび前頂後方４ｍｍの冠状面が得られる位置とした。脳切片は、１％の２，３，５−トリフェニルテトラアゾリウムクロライド（ＴＴＣ）により染色し、写真撮影後、画像解析により梗塞面積および体積を求めた。この結果を表２に示す。
（使用脂肪乳剤）
脂肪乳剤　１：
ＳＥＡ４００、１ｇを大豆油５０ｇに添加後、卵黄レシチン６ｇと混合した。これにグリセリン１２ｇを添加後、注射用水を加え、５００ｍｌとした。この液を混合機により粗乳化し、さらに高圧乳化装置により、６．０７６×１０７Ｐａ（６２０ｋｇｆ／ｃｍ２）の圧力で１０回乳化後、アンプルに充填した。これを高圧蒸気滅菌し、ＳＥＡ４００を２ｍｇ／ｍｌ含有する脂肪乳剤を得た。当該脂肪乳剤に含まれる油粒子の平均粒子径は、２０５．９ｎｍであった。
脂肪乳剤　２：
ＳＥＡ４００、３．６ｇを大豆油６０ｇに添加後、卵黄レシチン７．２ｇと混合した。これにグリセリン１４．４ｇを添加後、注射用水を加え、６００ｍｌとした。この液を混合機により粗乳化し、さらに高圧乳化装置により、６．０７６×１０７Ｐａ（６２０ｋｇｆ／ｃｍ２）の圧力で１０回乳化後、アンプルに充填した。これを高圧蒸気滅菌し、ＳＥＡ４００を６ｍｇ／ｍｌ含有する脂肪乳剤を得た。当該脂肪乳剤に含まれる油粒子の平均粒子径は、１９０．１ｎｍであった。
（結　果）
2002034250.tif 000005
表２に示すように、脳梗塞体積はＳＥＡ４００により用量依存性に縮小し、その作用は３ｍｇ／ｋｇ＋３ｍｇ／ｋｇ／ｈｒの用量で統計学的に有意であった（Ｄｕｎｎｅｔｔの多重比較検定）。
本発明の脂肪乳剤によれば、各種虚血性疾患に有効な２−フェノキシアニリン誘導体（１）を、高濃度で、しかも疼痛や、血管や注射部位等に損傷を与えることなく投与することが可能となる。従って、本願発明は、心筋梗塞等の虚血性心疾患、脳梗塞等の虚血性脳疾患あるいは虚血性腎疾患等の治療、予防剤として、あるいは血栓溶解療法、血管形成術、冠動脈バイパス手術、臓器移植等の外科的処置時の細胞保護のための薬剤として極めて有用である。
【図面の簡単な説明】
第１図は、試験例１での、血漿中のＳＥＡ４００の濃度を測定した結果を示す図面である。
第２図は、試験例１における心臓でのＳＥＡ４００の濃度を測定した結果を示す図面。
第３図は、試験例１における脳でのＳＥＡ４００の濃度を測定した結果を示す図面である。
第４図は、試験例２での、血漿中のＳＥＡ４９５の濃度を測定した結果を示す図面である。
第５図は、試験例２における心臓でのＳＥＡ４９５の濃度を測定した結果を示す図面である。
第６図は、試験例２における脳でのＳＥＡ４９５の濃度を測定した結果を示す図面である。
【図１】
2002034250.tif 000008
【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【国際調査報告】
2002034250.tif 000014
2002034250.tif 000015
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