【手続補正書】
【提出日】平成30年9月27日(2018.9.27)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
標的生物学的粒子の検出のための方法であって、
発色性ポリマードット（Ｐドット）を、流体および該標的生物学的粒子を含む生物学的試料に付着させる工程；
該流体を光源で照射する工程；および
該Ｐドットからの発光を検出する工程
を包含し、該Ｐドットが、
発色性ポリマー；および
疎水性部分および親水性部分を含む両親媒性分子であって、該親水性部分は、１つ以上の反応性官能基を含み、該発色性ポリマーに対する該両親媒性分子の重量比が、１％〜５０％の範囲内である、両親媒性分子
を含む、方法。
【請求項２】
前記標的生物学的粒子が、ウイルスである、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記標的生物学的粒子が、細胞である、請求項１に記載の方法。
【請求項４】
前記標的生物学的粒子が、細胞の内部に見出されるタンパク質、または細胞の表面上に見出されるタンパク質であり、前記Ｐドットを前記標的生物学的粒子に付着させる工程が、該タンパク質を該Ｐドットで標識する工程を含む、請求項１に記載の方法。
【請求項５】
前記細胞の表面上に見出されるタンパク質が、該細胞の表面上に存在する受容体であり、前記Ｐドットを前記標的生物学的粒子に付着させる工程が、該受容体を該Ｐドットで標識する工程を含む、請求項４に記載の方法。
【請求項６】
前記Ｐドットを前記生物学的試料に付着させる工程が、前記１つ以上の反応性官能基のうちのある反応性官能基を、ポリペプチド、核酸、抗体、またはアプタマーに付着させる工程を含む、請求項１〜５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項７】
前記両親媒性分子が、両親媒性ポリマーである、請求項１〜６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項８】
前記発色性ポリマーに対する前記両親媒性ポリマーの重量比が、４０％以下である、請求項７に記載の方法。
【請求項９】
前記両親媒性ポリマーが、両親媒性櫛型ポリマーである、請求項７に記載の方法。
【請求項１０】
前記両親媒性櫛型ポリマーが、ポリスチレンベースの櫛型ポリマーまたはポリ（メチルメタクリレート）ベースの櫛型ポリマーである、請求項９に記載の方法。
【請求項１１】
前記両親媒性ポリマーが、両親媒性コポリマーである、請求項７〜１０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１２】
前記両親媒性ポリマーが、ポリ（スチレン−コ−無水マレイン酸）、ポリエチレングリコール−グラフトポリスチレン（ＰＳ−ＰＥＧ）、またはカルボキシル基で官能化されたエチレンオキシドでグラフト化されたポリスチレン（ＰＳ−ＰＥＧ−ＣＯＯＨ）である、請求項７に記載の方法。
【請求項１３】
前記両親媒性分子が、脂質を含む、請求項１〜６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１４】
前記両親媒性分子の前記親水性部分が、ポリアルキレングリコールを含む、請求項１に記載の方法。
【請求項１５】
前記両親媒性ポリマーの前記親水性部分が、ポリアルキレングリコールを含む、請求項７に記載の方法。
【請求項１６】
前記ポリアルキレングリコールが、ポリエチレングリコールを含む、請求項１５に記載の方法。
【請求項１７】
前記疎水性部分が、疎水性相互作用によって前記発色性ポリマー内に物理的に包埋される、請求項１〜１６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１８】
前記Ｐドットが、発色性ポリマーの配合物を含む、請求項１〜１７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１９】
前記Ｐドットが、前記生物学的粒子と前記１つ以上の反応性官能基との間の生体直交型反応を介して該生物学的粒子に結合している、請求項１〜１８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２０】
前記生体直交型反応が、クリックケミストリー反応である、請求項１９に記載の方法。
【請求項２１】
前記生物学的粒子が、合成または天然タンパク質、糖タンパク質、抗体、アプタマー、ポリペプチド、アミノ酸、核酸、炭水化物、脂質、脂肪酸およびその組合せからなる群から選択される分子を含む、請求項１〜２０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２２】
前記Ｐドットからの発光を検出する工程が、該Ｐドットからの蛍光を検出する工程を含む、請求項１〜２１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２３】
前記Ｐドットからの蛍光を検出する工程が、フローサイトメトリーまたは蛍光活性化細胞選別法を含む、請求項２２に記載の方法。
【請求項２４】
前記Ｐドットを画像処理する工程をさらに包含する、請求項１〜２３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２５】
前記Ｐドットを画像処理する工程が、蛍光顕微鏡画像処理を含む、請求項２４に記載の方法。
【請求項２６】
生物学的分子の検出のための方法であって、
発色性ポリマードット（Ｐドット）を生物学的分子に付着させる工程；および
フローサイトメトリー、蛍光活性化選別法、免疫蛍光法、免疫組織化学、蛍光顕微鏡画像処理、または蛍光多重化のうちの１つ以上を使用して該生物学的分子に付着した該Ｐドットを検出する工程
を包含し、
該Ｐドットが、化学的会合によりコアに結合される１つ以上の反応性官能基を含むキャップおよび発色性ポリマーを含むコアを含む、方法。
【請求項２７】
前記化学的会合が、共有結合、イオン結合、水素結合または金属リガンド結合を含む、請求項２６に記載の方法。
【請求項２８】
前記発色性ポリマーが、フルオレンポリマー、フェニレンビニレンポリマー、フェニレンポリマー、フェニレンエチニレンポリマー、ベンゾチアジアゾールポリマー、チオフェンポリマー、カルバゾールフルオレンポリマー、またはホウ素−ジピロメテンベースのポリマー、あるいはその誘導体またはコポリマーである、請求項１、２６、または２７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２９】
前記発色性ポリマーが、有機色素または金属錯体と共有結合される、請求項２７または２８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３０】
前記検出が、フローサイトメトリーまたは蛍光活性化選別法によって実行される、請求項２６〜２９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３１】
前記生物学的分子が、細胞の内部に見出されるタンパク質、または細胞の表面上に見出されるタンパク質である、請求項２６〜３０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３２】
前記細胞の表面上に見出されるタンパク質が、該細胞の表面上に存在する受容体である、請求項３１に記載の方法。
【請求項３３】
前記Ｐドットが、発色性ポリマーの配合物を含む、請求項２６〜３２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３４】
前記Ｐドットが、前記生物学的分子と前記１つ以上の反応性官能基との間の生体直交型反応を介して該生物学的分子に結合している、請求項２６〜３３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３５】
前記生体直交型反応が、クリックケミストリー反応である、請求項３４に記載の方法。
【請求項３６】
前記生物学的分子が、合成または天然タンパク質、糖タンパク質、抗体、アプタマー、ポリペプチド、アミノ酸、核酸、炭水化物、脂質、脂肪酸およびその組合せからなる群から選択される分子を含む、請求項２６〜３５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３７】
前記検出工程が、前記Ｐドットを光で照射して発光させ、該Ｐドットからの発光を検出する工程を含む、請求項２６〜３６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３８】
前記発光が、蛍光発光である、請求項３７に記載の方法。
【請求項３９】
前記１つ以上の反応性官能基のそれぞれが、カルボキシル、アミノ、メルカプト、アジド、アルキニル、歪みアルキニル、アルケニル、歪みアルケニル、ジエニル、シクロオクチニル、アルデヒド、ヒドロキシル、カルボニル、スルフェート、スルホネート、ホスフェート、シアネート、スクシンイミジルエステル、その置換された基、およびその誘導された基からなる群から選択される、請求項２６〜３８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４０】
前記Ｐドットが、両親媒性分子をさらに含む、請求項２６〜３９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４１】
前記両親媒性分子が、疎水性部分および親水性部分を含み、該親水性部分が、ポリアルキレングリコールを含む、請求項４０に記載の方法。
【請求項４２】
前記両親媒性分子が、脂質を含む、請求項４０〜４１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４３】
前記両親媒性分子が、両親媒性ポリマーである、請求項４０に記載の方法。
【請求項４４】
非プロトン溶媒中で溶媒和化される１つ以上の反応性官能基と結合される前記両親媒性ポリマーおよび前記発色性ポリマーの混合物を、プロトン溶媒を含む溶液中に導入することによって前記Ｐドットを形成する工程をさらに包含する、請求項４３に記載の方法。
【請求項４５】
前記発色性ポリマーが、半導体ポリマーである、請求項１〜４４のいずれかに記載の方法。