(57)【要約】本発明は、ヒドロキシプロリンのＮ−アシル化誘導体またはその塩を有効成分として含有する関節炎の予防剤、飲食品、食品添加剤、動物用飼料、および飼料添加剤、関節炎の予防剤の製造のためのヒドロキシプロリンのＮ−アシル化誘導体またはその塩の使用、ならびにヒドロキシプロリンのＮ−アシル化誘導体またはその塩を投与することを特徴とする関節炎の予防方法に関する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
ヒドロキシプロリンのＮ−アシル化誘導体またはその塩を有効成分として含有する関節炎の予防剤。
【請求項２】
ヒドロキシプロリンが、シス−４−ヒドロキシ−Ｌ−プロリン、シス−４−ヒドロキシ−Ｄ−プロリン、シス−３−ヒドロキシ−Ｌ−プロリン、シス−３−ヒドロキシ−Ｄ−プロリン、トランス−４−ヒドロキシ−Ｌ−プロリン、トランス−４−ヒドロキシ−Ｄ−プロリン、トランス−３−ヒドロキシ−Ｌ−プロリンおよびトランス−３−ヒドロキシ−Ｄ−プロリンからなる群より選ばれるヒドロキシプロリンである請求項１記載の関節炎の予防剤。
【請求項３】
ヒドロキシプロリンのＮ−アシル化誘導体のアシル部分が、炭素数２〜２３のアシルである請求項１または２記載の関節炎の予防剤。
【請求項４】
ヒドロキシプロリンのＮ−アシル化誘導体がＮ−アセチルヒドロキシプロリンである請求項１〜３いずれか１項に記載の関節炎の予防剤。
【請求項５】
関節炎が慢性関節リウマチである請求項１〜４いずれか１項に記載の関節炎の予防剤。
【請求項６】
ヒドロキシプロリンのＮ−アシル化誘導体またはその塩を含有する飲食品または動物用飼料。
【請求項７】
ヒドロキシプロリンが、シス−４−ヒドロキシ−Ｌ−プロリン、シス−４−ヒドロキシ−Ｄ−プロリン、シス−３−ヒドロキシ−Ｌ−プロリン、シス−３−ヒドロキシ−Ｄ−プロリン、トランス−４−ヒドロキシ−Ｌ−プロリン、トランス−４−ヒドロキシ−Ｄ−プロリン、トランス−３−ヒドロキシ−Ｌ−プロリンおよびトランス−３−ヒドロキシ−Ｄ−プロリンからなる群より選ばれるヒドロキシプロリンである請求項６記載の飲食品または動物用飼料。
【請求項８】
ヒドロキシプロリンのＮ−アシル化誘導体のアシル部分が、炭素数２〜２３のアシルである請求項６または７記載の飲食品または動物用飼料。
【請求項９】
ヒドロキシプロリンのＮ−アシル化誘導体がＮ−アセチルヒドロキシプロリンである請求項６〜８いずれか１項に記載の飲食品または動物用飼料。
【請求項１０】
ヒドロキシプロリンのＮ−アシル化誘導体またはその塩を含有する食品添加剤または飼料添加剤。
【請求項１１】
ヒドロキシプロリンが、シス−４−ヒドロキシ−Ｌ−プロリン、シス−４−ヒドロキシ−Ｄ−プロリン、シス−３−ヒドロキシ−Ｌ−プロリン、シス−３−ヒドロキシ−Ｄ−プロリン、トランス−４−ヒドロキシ−Ｌ−プロリン、トランス−４−ヒドロキシ−Ｄ−プロリン、トランス−３−ヒドロキシ−Ｌ−プロリンおよびトランス−３−ヒドロキシ−Ｄ−プロリンからなる群より選ばれるヒドロキシプロリンである請求項１０記載の食品添加剤または飼料添加剤。
【請求項１２】
ヒドロキシプロリンのＮ−アシル化誘導体のアシル部分が、炭素数２〜２３のアシルである請求項１０または１１記載の食品添加剤または飼料添加剤。
【請求項１３】
ヒドロキシプロリンのＮ−アシル化誘導体がＮ−アセチルヒドロキシプロリンである請求項１０〜１２いずれか１項に記載の食品添加剤または飼料添加剤。
【請求項１４】
関節炎の予防剤の製造のためのヒドロキシプロリンのＮ−アシル化誘導体またはその塩の使用。
【請求項１５】
ヒドロキシプロリンのＮ−アシル化誘導体またはその塩を投与することを特徴とする関節炎の予防方法。
【発明の詳細な説明】
技術分野
本発明は、関節炎の予防剤、飲食品、食品添加剤、動物用飼料および飼料添加剤、ならびにこれらを用いる関節炎の予防方法に関する。
背景枝術
生活習慣の変化、社会の高齢化に伴い、関節炎は今後増加するものと予想される。
Ｎ−アセチルヒドロキシプロリンは、抗炎症作用を示す化学物質として知られている（ＵＳＰ　３，８９１，７６５、ＵＳＰ　３，９３２，６３８、特公昭４７−４３９４７号公報）。
関節炎モデル動物に関節炎を惹起させた後にＮ−アセチルヒドロキシプロリンを投与すると、関節炎の悪化を防止できることが知られている〔Ｊ．Ｄｒｕｇ．Ｄｅｖ．，３，１３５−１４２（１９９０）。また、Ｎ−アセチルヒドロキシプロリンは耳、尾の全身性損傷等には治療効果を示すが、関節の軟骨損傷には効果を示さないことが知られている〔Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌ　Ｒｅｓｅａｒｃｈ，３３，３６７−３７３（１９９６）〕。
しかしながら、Ｎ−アセチルヒドロキシプロリン等のヒドロキシプロリンのＮ−アシル化誘導体が関節炎の予防効果を示すことはこれまでに知られていない。
発明の開示
本発明の目的は、ヒドロキシプロリンのＮ−アシル化誘導体またはその塩を有効成分として含有する関節炎の予防剤、飲食品、食品添加剤、動物用飼料および飼料添加剤、ならびにこれらを用いる関節炎の予防方法を提供することにある。
本発明は、以下の（１）〜（１５）に関する。
（１）　ヒドロキシプロリンのＮ−アシル化誘導体またはその塩を有効成分として含有する関節炎の予防剤。
（２）　ヒドロキシプロリンが、シス−４−ヒドロキシ−Ｌ−プロリン、シス−４−ヒドロキシ−Ｄ−プロリン、シス−３−ヒドロキシ−Ｌ−プロリン、シス−３−ヒドロキシ−Ｄ−プロリン、トランス−４−ヒドロキシ−Ｌ−プロリン、トランス−４−ヒドロキシ−Ｄ−プロリン、トランス−３−ヒドロキシ−Ｌ−プロリンおよびトランス−３−ヒドロキシ−Ｄ−プロリンからなる群より選ばれるヒドロキシプロリンである上記（１）の関節炎の予防剤。
（３）　ヒドロキシプロリンのＮ−アシル化誘導体のアシル部分が、炭素数２〜２３のアシルである上記（１）または（２）の関節炎の予防剤。
（４）　ヒドロキシプロリンのＮ−アシル化誘導体がＮ−アセチルヒドロキシプロリンである上記（１）〜（３）いずれか１つの関節炎の予防剤。
（５）　関節炎が慢性関節リウマチである上記（１）〜（４）いずれか１つの関節炎の予防剤。
（６）　ヒドロキシプロリンのＮ−アシル化誘導体またはその塩を含有する飲食品または動物用飼料。
（７）　ヒドロキシプロリンが、シス−４−ヒドロキシ−Ｌ−プロリン、シス−４−ヒドロキシ−Ｄ−プロリン、シス−３−ヒドロキシ−Ｌ−プロリン、シス−３−ヒドロキシ−Ｄ−プロリン、トランス−４−ヒドロキシ−Ｌ−プロリン、トランス−４−ヒドロキシ−Ｄ−プロリン、トランス−３−ヒドロキシ−Ｌ−プロリンおよびトランス−３−ヒドロキシ−Ｄ−プロリンからなる群より選ばれるヒドロキシプロリンである上記（６）の飲食品または動物用飼料。
（８）　ヒドロキシプロリンのＮ−アシル化誘導体のアシル部分が、炭素数２〜２３のアシルである上記（６）または（７）の飲食品または動物用飼料。
（９）　ヒドロキシプロリンのＮ−アシル化誘導体がＮ−アセチルヒドロキシプロリンである上記（６）〜（８）いずれか１つの飲食品または動物用飼料。
（１０）　ヒドロキシプロリンのＮ−アシル化誘導体またはその塩を含有する食品添加剤または飼料添加剤。
（１１）　ヒドロキシプロリンが、シス−４−ヒドロキシ−Ｌ−プロリン、シス−４−ヒドロキシ−Ｄ−プロリン、シス−３−ヒドロキシ−Ｌ−プロリン、シス−３−ヒドロキシ−Ｄ−プロリン、トランス−４−ヒドロキシ−Ｌ−プロリン、トランス−４−ヒドロキシ−Ｄ−プロリン、トランス−３−ヒドロキシ−Ｌ−プロリンおよびトランス−３−ヒドロキシ−Ｄ−プロリンからなる群より選ばれるヒドロキシプロリンである上記（１０）の食品添加剤または飼料添加剤。
（１２）　ヒドロキシプロリンのＮ−アシル化誘導体のアシル部分が、炭素数２〜２３のアシルである上記（１０）または（１１）の食品添加剤または飼料添加剤。
（１３）　ヒドロキシプロリンのＮ−アシル化誘導体がＮ−アセチルヒドロキシプロリンである上記（１０）〜（１２）いずれか１つの食品添加剤または飼料添加剤。
（１４）　関節炎の予防剤の製造のためのヒドロキシプロリンのＮ−アシル化誘導体またはその塩の使用。
（１５）　ヒドロキシプロリンのＮ−アシル化誘導体またはその塩を投与することを特徴とする関節炎の予防方法。
ヒドロキシプロリンは、コラーゲン中の主要構成アミノ酸成分として、また、エラスチンの構成アミノ酸成分として自然界に広く存在する。天然に存在するヒドロキシプロリンとしては、プロリンがＤ体であるかＬ体であるか、水酸基の位置が３位か４位か、およびその立体異性体がシス体であるかトランス体であるかによって、８種類の立体異性体が知られている。具体的には、シス−４−ヒドロキシ−Ｌ−プロリン、シス−４−ヒドロキシ−Ｄ−プロリン、シス−３−ヒドロキシ−Ｌ−プロリン、シス−３−ヒドロキシ−Ｄ−プロリン、トランス−４−ヒドロキシ−Ｌ−プロリン、トランス−４−ヒドロキシ−Ｄ−プロリン、トランス−３−ヒドロキシ−Ｌ−プロリンおよびトランス−３−ヒドロキシ−Ｄ−プロリン等があげられる。本発明では、いずれのヒドロキシプロリンも用いることができるが、トランス−４−ヒドロキシ−Ｌ−プロリンが好ましく用いられる。
ヒドロキシプロリンは、ブタやウシ等の動物由来のコラーゲンを酸加水分解し、常法により精製して取得することができるが、微生物を用いて製造したヒドロキシプロリンがより好適に用いられる。
微生物としては、アミコラトプシス（Ａｍｙｃｏｌａｔｏｐｓｉｓ）属、ダクチロスポランジウム（Ｄａｃｔｙｌｏｓｐｏｒａｎｇｉｕｍ）属およびストレプトマイセス（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ）属から選ばれる属に属する微生物または該微生物由来のプロリン３位水酸化酵素またはプロリン４位水酸化酵素遺伝子を導入された微生物等を用いることができる。
アミコラトプシス属、ダクチロスポランジウム属およびストレプトマイセス属から選ばれる属に属する微生物由来のプロリン３位水酸化酵素またはプロリン４位水酸化酵素遺伝子の微生物への導入は、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ　Ｃｌｏｎｉｎｇ，Ａ　Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ　Ｍａｎｕａｌ，Ｓｅｃｏｎｄ　Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｃｏｌｄ　Ｓｐｒｉｎｇ　Ｈａｒｂｏｒ　Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ　Ｐｒｅｓｓ（１９８９）、Ｃｕｒｒｅｎｔ　Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ　ｉｎ　Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ　Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｊｏｈｎ　Ｗｉｌｅｙ　＆　Ｓｏｎｓ（１９８７−１９９７）等に記載された方法に準じて行うことができる。
また、例えば、トランス−４−ヒドロキシ−Ｌ−プロリンは、アミコラトプシス属またはダクチロスポランジウム属に属する微生物より単離したプロリン４位水酸化酵素（特開平７−３１３１７９号公報）を用いて製造することができ、また、シス−３−ヒドロキシ−Ｌ−プロリンは、ストレプトマイセス属に属する微生物より単離したプロリン３位水酸化酵素（特開平７−３２２８８５号公報）を用いて製造することもできる〔バイオインダストリー，１４，３１（１９９７）〕。
本発明で用いるヒドロキシプロリンのＮ−アシル化誘導体のアシル部分としては、例えば、炭素数２〜２３の直鎖または分岐状のアシルがあげられ、より具体的には、アセチル、プロピオニル、ブチリル、イソブチリル、バレリル、ヘキサノイル、ヘプタノイル、オクタノイル、デカノイル、エイコサノイル等があげられるが、中でも、アセチル、プロピオニルが好ましい。
ヒドロキシプロリンのＮ−アシル化誘導体は、公知の方法により製造することができる。
即ち、好ましくは炭素数１〜２２のアルキル基を有する脂肪酸の活性誘導体（酸無水物、酸塩化物等）を用い、ヒドロキシプロリンを水性媒体中または有機溶媒中でＮ−アシル化することにより調製できる。
得られたヒドロキシプロリンのＮ−アシル化誘導体は、結晶化、クロマトグラフィー等の通常の精製法を用いて精製することができる。
ヒドロキシプロリンのＮ−アシル化誘導体の塩における塩としては、ナトリウム塩、カリウム塩等のアルカリ金属塩、マグネシウム塩、カルシウム塩等のアルカリ土類金属塩、アンモニウム、テトラメチルアンモニウム等のアンモニウム塩、モルホリン、ピペリジン等の付加した有機アミン付加塩等があげられる。
本発明が適用できる関節炎としては、クラミジア関節炎、慢性吸収性関節炎、腸疾患性関節炎、淋菌性関節炎、痛風関節炎、ジャクー関節炎、若年性関節炎、ライム関節炎、アルカプトン尿性関節炎、化膿性関節炎、変形性関節症、肩関節周囲炎（いわゆる五十肩）、過度の運動負荷による関節炎、慢性関節リウマチ等のいずれであってもよいが、とくに慢性関節リウマチに有効である。
本発明の関節炎の予防剤、飲食品、動物用飼料、食品添加剤および飼料添加剤、ならびにこれらを用いるヒトまたは非ヒト動物の関節炎の予防方法について以下に示す。
（ａ）ヒドロキシプロリンのＮ−アシル化誘導体またはその塩を有効成分として含有する関節炎の予防剤、および該予防剤を用いるヒトまたは非ヒト動物の関節炎の予防方法
本発明の関節炎の予防剤は、ヒドロキシプロリンのＮ−アシル化誘導体またはその塩を有効成分として含有する。
本発明の関節炎の予防剤には、ヒドロキシプロリンのＮ−アシル化誘導体またはその塩に関節炎の予防に有効な任意の他の成分（以下、単に、他の有効成分ともいう）を添加し混合したものも包含される。
他の有効成分としては、例えば、ホウ素、カルシウム、クロム、銅、マグネシウム、マンガン、セレン、シリコン、亜鉛、Ｓ−アデノシルメチオニン、コラーゲン、コラーゲン加水分解物、ゼラチン、ゼラチン加水分解物、ブロメライン、トリプシン、キモトリプシン、パパイン、ルチン、カロチノイド、フラボノイド、抗酸化ビタミン、γ−リノレン酸、エイコサペンタエン酸、ボスウェリア、カプサイシン、キャッツクロー、デビルズクロー、フィーバーフュー、ショウガ、ネトルス、ナイアシアミド、サメ軟骨、ターメリック、クルクミン、アミノ糖およびグリコサミノグリカン等の精製物、含有物または抽出物があげられる。
本発明の関節炎の予防剤は、ヒドロキシプロリンのＮ−アシル化誘導体またはその塩、および必要に応じて上記他の有効成分を薬理学的に許容される一種もしくはそれ以上の担体と一緒に混合し、製剤学の技術分野においてよく知られている任意の方法により製造される。
本発明の関節炎の予防剤の投与経路は、関節炎の予防に際して効果的なものを使用するのが望ましく、経口または、例えば静脈内などの非経口をあげることができる。
投与形態としては、例えば、錠剤、カプセル剤、注射済、点滴剤、シロップ剤、舌下錠、各種クリーム剤、坐剤等があげられる。
経口投与に適当な、例えばシロップ剤のような液体調製物は、水、蔗糖、ソルビット、果糖などの糖類、ポリエチレングリコール、プロピレングリコールなどのグリコール類、ごま油、オリーブ油、大豆油などの油類、ｐ−ヒドロキシ安息香酸エステル類などの防腐剤、ストロベリーフレーバー、ペパーミントなどのフレーバー類などを使用して製造できる。また、錠剤、散剤および顆粒剤などは、乳糖、ブドウ糖、蔗糖、マンニットなどの賦形剤、澱粉、アルギン酸ナトリウムなどの崩壊剤、ステアリン酸マグネシウム、タルクなどの滑沢剤、ポリビニールアルコール、ヒドロキシプロピルセルロース、ゼラチンなどの結合剤、脂肪酸エステルなどの界面活性剤、グリセリンなどの可塑剤などを用いて製造できる。
非経口投与に適当な製剤は、好ましくは受容者の血液と等張である活性化合物を含む滅菌水性剤からなる。例えば、注射剤の場合は、塩溶液、ブドウ糖溶液または塩水とブドウ糖溶液の混合物からなる担体などを用いて注射用の溶液を調製する。
また、これら非経口剤においても、経口剤で例示した希釈剤、防腐剤、フレーバー類、賦形剤、崩壊剤、滑沢剤、結合剤、界面活性剤、可塑剤などから選択される１種もしくはそれ以上の補助成分を添加することもできる。
本発明の関節炎の予防剤中のヒドロキシプロリンのＮ−アシル化誘導体またはその塩の含有量は、本発明の関節炎の予防剤１ｇ当たり１〜１０００ｍｇ、好ましくは１０〜５００ｍｇ、とりわけ好ましくは１００〜２００ｍｇである。
本発明の関節炎の予防剤の投与量及び投与回数は、投与形態、年齢、体重、症状等により異なる。
経口投与の場合、ヒドロキシプロリンのＮ−アシル化誘導体またはその塩として、成人一人当たり１〜５０００ｍｇ、好ましくは１０〜１０００ｍｇ、とりわけ好ましくは１００〜５００ｍｇを一日一回ないし数回投与する。
静脈内投与などの非経口投与の場合、ヒドロキシプロリンのＮ−アシル化誘導体またはその塩として、成人一人当り０．５〜５０００ｍｇ、好ましくは５〜１０００ｍｇ、とりわけ好ましくは５０〜５００ｍｇを一日一回ないし数回投与する。
本発明の関節炎の予防剤を日常的に投与することにより、関節炎を予防することができる。
本発明において「関節炎を予防する」とは、日常的に下記（ｂ）で説明する本発明の飲食品、動物用飼料、食品添加剤、飼料添加剤、または上記予防剤を摂取することで、関節炎の発症を完全に防ぐ、発症率を低減させる、または発症時の症状を抑制する、などの効果を及ぼすことをいう。
すなわち、関節炎の予防は、関節炎が発症した後に薬剤を投与することにより、症状の緩和もしく治癒を行う、関節炎の治療と明確に区別されるものである。
なお、本発明の関節炎の予防剤は、ヒトだけでなく、ヒト以外の動物（非ヒト動物）に対しても使用することができる。非ヒト動物に対して使用する場合の投与量は、ヒドロキシプロリンのＮ−アシル化誘導体またはその塩として、０．０２〜１００ｍｇ／ｋｇ、好ましくは０．２〜２０ｍｇ／ｋｇ、とりわけ好ましくは２〜１０ｍｇ／ｋｇである。
（ｂ）ヒドロキシプロリンのＮ−アシル化誘導体またはその塩を含有する飲食品、動物用飼料、食品添加剤および飼料添加剤、ならびにこれらを用いるヒトまたは非ヒト動物の関節炎の予防方法
本発明の飲食品は、飲食品中にヒドロキシプロリンのＮ−アシル化誘導体またはその塩を添加することにより得られる飲食品である。
本発明の食品添加剤を添加してなる飲食品も本発明の飲食品に包含される。
また、飲食品中にヒドロキシプロリンのＮ−アシル化誘導体またはその塩の他に上記（ａ）で述べた他の有効成分を添加することにより得られる飲食品も本発明の飲食品に包含される。
本発明の飲食品は、ヒドロキシプロリンのＮ−アシル化誘導体またはその塩を添加する以外は一般的な飲食品の製造方法を用いることにより、加工製造することができる。
本発明の飲食品は、ジュース類、清涼飲料水、茶類、乳酸菌飲料、発酵乳、冷菓、バター、チーズ、ヨーグルト、加工乳、脱脂乳等の乳製品、ハム、ソーセージ、ハンバーグ等の畜肉製品、蒲鉾、竹輪、さつま揚げ等の魚肉練り製品、だし巻き、卵豆腐等の卵製品、クッキー、ゼリー、チューインガム、キャンデー、スナック菓子等の菓子類、パン類、麺類、漬物類、燻製品、干物、佃煮、塩蔵品、スープ類、調味料等、いずれの形態のものであってもよい。
また、本発明の飲食品は、例えば粉末食品、シート状食品、瓶詰め食品、缶詰食品、レトルト食品、カプセル食品、タブレット状食品、流動食品、ドリンク剤等の形態のものであってもよい。
本発明の飲食品は、関節炎を予防する効果を有する健康食品または機能性食品として用いることができる。
本発明の飲食品は、例えば、飲料または錠剤の場合は、ヒドロキシプロリンのＮ−アシル化誘導体またはその塩に、必要により他の有効成分、添加剤等を加えた後、適当量の水に溶解あるいは分散させるか、または錠剤化して調製することができる。また、例えばアメ、ドロップ、チョコレート、ゼリー、ビスケット、クッキー等の菓子類は、常法に従い、ヒドロキシプロリンのＮ−アシル化誘導体またはその塩に、必要により他の有効成分、添加剤等、さらに必要により適当な担体、例えば小麦粉、米粉、澱粉、コーンスターチ、大豆等を加え、適宜の形態に賦形して調製することができる。
また、本発明の飲食品は、例えば流動層造粒、攪拌造粒、押し出し造粒、転動造粒、気流造粒、圧縮成形造粒、解砕造粒、噴霧造粒、噴射造粒等の造粒方法、パンコーティング、流動層コーティング、ドライコーティング等のコーティング方法、パフドライ、過剰水蒸気法、フォームマット方法、マイクロ波加熱方法等の膨化方法、押出造粒機やエキストルーダー等の押出方法等を用いて製造することもできる。
本発明の食品添加剤は、上記（ａ）で述べた経口剤と同様な方法により調製することができる。食品添加剤は、通常、必要に応じて他の食品添加物を混合または溶解し、例えば粉末、顆粒、ペレット、錠剤、各種液剤の形態に加工製造することができる。
本発明の飲食品または食品添加剤には、一般的に飲食品に用いられる食品添加物、例えば甘味料、着色料、保存料、増粘安定剤、酸化防止剤、発色料、漂白料、防かび剤、ガムベース、苦味料、酵素、光沢剤、酸味料、調味料、乳化剤、強化剤、製造用剤、香料、香辛料抽出物等が添加されてもよい。
本発明の飲食品中には、ヒドロキシプロリンのＮ−アシル化誘導体もしくはその塩、または他の有効成分は、該飲食品の形態により異なるが、通常成人に対して一日あたり、それぞれ１〜５０００ｍｇ、好ましくは１０〜１０００ｍｇ、とりわけ好ましくは１００〜５００ｍｇの摂取量となるように添加される。
該飲食品は、１日に１回または数回に分けて摂取すればよい。
該飲食品を日常的に摂取することにより、関節炎を予防することができる。
本発明の動物用飼料は、ヒドロキシプロリンのＮ−アシル化誘導体またはその塩を添加した動物用飼料である。該動物用飼料にさらに上記飲食品の項で述べた他の有効成分を添加した動物用飼料も本発明の動物用飼料に包含される。上記（ａ）で述べた他の有効成分を添加してもよい。
本発明の動物用飼料は非ヒト動物、好ましくはヒト以外の哺乳類、鳥類、爬虫類、両生類、魚類等の脊椎動物の関節炎を予防する飼料であればいずれでもよく、例えば、イヌ、ネコ、ウサギ、ネズミ等のペット用飼料、ペットフード、ウシ、ブタ等の家畜用飼料、ニワトリ、七面鳥等の家禽用飼料、トカゲ、ワニ、イグアナ等の爬虫類用飼料、カエル、イモリ等の両生類用飼料、タイ、ハマチ等の養殖用飼料等があげられる。
本発明の動物用飼料は、関節炎を予防する効果を有する動物用健康補助飼料として用いることができる。
本発明の動物用飼料は、飼料中にヒドロキシプロリンのＮ−アシル化誘導体またはその塩、他の有効成分、あるいは本発明の飼料添加剤を添加する以外は、一般的な飼料の製造方法を用いることにより加工製造することができる。
飼料としては、穀物類、そうこう類、植物性油かす類、動物性飼料、その他の飼料、精製品、またはこれらの混合物等があげられる。
穀物類としては、例えばマイロ、小麦、大麦、えん麦、らい麦、玄米、そば、あわ、きび、ひえ、とうもろこし、大豆等があげられる。
そうこう類としては、例えば米ぬか、脱脂米ぬか、ふすま、末粉、小麦、胚芽、麦ぬか、ペレット、トウモロコシぬか、トウモロコシ胚芽等があげられる。
植物性油かす類としては、例えば大豆油かす、きな粉、亜麻仁油かす、綿実油かす、落花生油かす、サフラワー油かす、やし油かす、パーム油かす、胡麻油かす、ひまわり油かす、菜種油かす、カポック油かす、芥子油かす等があげられる。
動物性飼料としては、例えば北洋ミール、輸入ミール、ホールミール、沿岸ミール等の魚粉、フィッシュソルブル、肉粉、肉骨粉、血粉、分解毛、骨粉、家畜用処理副産物、フェザーミール、蚕よう、脱脂粉乳、カゼイン、乾燥ホエー等があげられる。
その他の飼料としては、アルファルファ、ヘイキューブ、アルファルファリーフミール、ニセアカシア粉末等の植物茎葉類、コーングルテン、ミール、コーングルテンフィード、コーンステープリカー等のトウモロコシ加工工業副産物、デンプン等のデンプン加工品、酵母、ビールかす、麦芽根、アルコールかす、しょう油かす等の発酵工業産物、柑橘加工かす、豆腐かす、コーヒーかす、ココアかす等の農産製造副産物、キャッサバ、そら豆、グアミール、海藻、オキアミ、スピルリナ、クロレラ、鉱物等があげられる。
精製品としては、カゼイン、アルブミン等のタンパク質、アミノ酸、スターチ、セルロース、蔗糖、グルコース等の糖質、ミネラル、ビタミン等があげられる。
本発明の動物用飼料は、例えば流動層造粒、攪拌造粒、押し出し造粒、転動造粒、気流造粒、圧縮成形造粒、解砕造粒、噴霧造粒、噴射造粒等の造粒方法、パンコーティング、流動層コーティング、ドライコーティング等のコーティング方法、パフドライ、過剰水蒸気法、フォームマット方法、マイクロ波加熱方法等の膨化方法、押出造粒機やエキストルーダー等の押出方法等を用いて製造することもできる。
本発明の飼料添加剤は、上記（ａ）で述べた経口剤と同様な方法により調製することができる。飼料添加剤は、通常、必要に応じて他の飼料添加物を混合または溶解し、例えば粉末、顆粒、ペレット、錠剤、各種液剤の形態に加工製造される。
本発明の動物用飼料中には、ヒドロキシプロリンのＮ−アシル化誘導体もしくはその塩、または他の有効成分は、摂取形態、摂取非ヒト動物の種類、該非ヒト動物の年齢、体重等に応じて異なるが、通常それぞれ０．０２〜１００ｍｇ／ｋｇ、好ましくは０．２〜２０ｍｇ／ｋｇ、とりわけ好ましくは２〜１０ｍｇ／ｋｇの摂取量となるように添加される。
該動物用飼料は、１日に１回または数回に分けて非ヒト動物に摂取させる。また、本発明の飼料添加剤を、非ヒト動物を対象とした関節炎の予防用動物用経口剤として、上記飼料の摂取量および摂取期間と、それぞれ同じ投与量および投与期間で投与してもよい。
以下に、本発明の試験例として、ヒドロキシプロリンのＮ−アシル化誘導体による関節炎の予防効果を調べた試験例を示す。
試験例１：２型コラーゲン関節炎マウスにおけるＮ−アセチルヒドロキシプロリンの効果
ＤＢＡ／１Ｊマウス（チャールスリバー社製）は、２型コラーゲンを２回投与すると関節炎が惹起されることが知られている。
オスの６週齢のＤＢＡ／１Ｊマウス（チャールスリバー社製）に、１回目の２型コラーゲン投与として、２型コラーゲン（コラーゲン技術研修会社製）とＦｒｅｕｎｄ’ｓ　ｃｏｍｐｌｅｔｅ　ａｄｊｕｖａｎｔ（ヤトロン社製）を等量ずつ混合しホモジナイザーでエマルション化した溶液を１匹あたり１００μｌ皮内投与した。
１回目の２型コラーゲン投与の２１日後に、２回目の２型コラーゲン投与として、同様に２型コラーゲンとＦｒｅｕｎｄ’ｓ　ｃｏｍｐｌｅｔｅ　ａｄｊｕｖａｎｔを等量ずつ混合しホモジナイザーでエマルション化した溶液を、１匹あたり１００μｌ皮内投与した。以上のようにしてマウスに関節炎を惹起した。
１回目の２型コラーゲン投与日から、マウスにＮ−アセチルヒドロキシプロリン（協和発酵工業社製）を、それぞれ０．０２、０．１および０．５％（重量％、以下同じ）添加した粉末飼料ＣＥ−２（日本クレア社製）を与えて飼育した。また、コントロールとして、マウスに何も添加していない粉末飼料ＣＥ−２を与え飼育した。１回目の２型コラーゲン投与から２３日目、２７日目、３０日目、３３日目、３６日目、４０日目、および４２日目に、関節炎の発症の程度を以下のような指標によってスコアリングした。
マウスの１本の手または足につき、０点：無症状、１点：指１本はれ、あるいは手（足）首の（軽度の）はれ、２点：指１〜３本はれ、あるいは手（足）首のはれ、３点：指３〜５本はれ＋手（足）首のはれ、４点：指全部はれ＋手（足）首のはれ、として０点〜４点でスコアリングした。マウス１匹について手足合計４本のスコアの合計点、すなわち０点〜１６点でスコアリングした。それぞれの条件につき、それぞれ２０匹のマウスについて調べた。
結果を第１表に示した。表中の数字は各処理条件におけるスコアを示し、平均値±標準誤差（Ｎ＝２０）で示した。
なお、表中で無処理は、２型コラーゲン処理を行っていないことを示す。
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第１表に示されるとおり、Ｎ−アセチルヒドロキシプロリンを０．５％添加した粉末飼料ＣＥ−２を摂取したマウスのスコアは、Ｎ−アセチルヒドロキシプロリンを添加しない粉末飼料を摂取したマウス（コントロール）のスコアに比べて有意に低く、Ｎ−アセチルヒドロキシプロリンの添加により関節炎スコアの上昇を抑制できることが示された。
同様に、Ｎ−アセチルヒドロキシプロリンを０．０２％および０．１％添加した粉末飼料ＣＥ−２を摂取したマウスにおいても、何も添加していない粉末飼料ＣＥ−２を摂取したマウスと比較して、関節炎スコアの上昇が抑制される傾向が認められた。
以上のことから、関節炎発症前に、あらかじめ、Ｎ−アセチルヒドロキシプロリンを摂取することによって関節炎の発症を抑制できることが明らかとなった。
以下、本発明の実施例を示す。
発明を実施するための最良の形態
下記実施例ではＮ−アセチルヒドロキシプロリン、グルコサミン、およびコンドロイチン硫酸は、それぞれ協和発酵工業社製、ミヤコ化学社製、およびマルハ化学社製のものを用いた。
実施例１
下記の第２表に示した組成に従い成分を混合した後、打錠機（畑製作所製、ＨＴ−ＡＰ１５ＳＳ−Ｕ型）で打錠し、直径８ｍｍ、重量２００ｍｇの錠剤を製造した。
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実施例２
下記の第３表に示した組成に従い成分を混合した後、打錠機（畑製作所、ＨＴ−ＡＰ１５ＳＳ−Ｕ型）で打錠し、直径８ｍｍ、重量２００ｍｇの錠剤を製造した。
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実施例３
下記の第４表に示した組成に従い成分を混合した後、打錠機（畑製作所、ＨＴ−ＡＰ１５ＳＳ−Ｕ型）で打錠し、直径８ｍｍ、重量２００ｍｇの錠剤を製造した。
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実施例４
下記の第５表に示した組成に従い成分を混合した後、打錠機（畑製作所、ＨＴ−ＡＰ１５ＳＳ−Ｕ型）で打錠し、直径８ｍｍ、重量２００ｍｇの錠剤を製造した。
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実施例５
下記の第６表に示した組成に従いドッグフードを製造した。
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実施例６
下記の第７表に示した配合により飲料を製造する。
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上記配合物２０ｇを水１８０ｍｌに分散させて飲料にする。
実施例７
下記の第８表に示した配合により清涼飲料水（１０本分）を製造する。
水にて１０００ｍｌとする。
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実施例８
下記の第９表に示した配合物を水１０００ｍｌにて溶出し、茶飲料１０００ｍｌを製造する。
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実施例９
下記の第１０表に示した配合で常法によりクッキー（３０個分）を製造する。
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実施例１０
下記の第１１表に示した配合で常法により食パン（４斤分）を製造する。
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実施例１１
下記の第１２表に示した配合で常法によりチューインガム（３０個分）を製造する。
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実施例１２
下記の第１３表に示した配合で常法によりキャンディー（２０個分）を製造する。
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実施例１３
下記の第１４表に示した配合で常法によりマーマレードを製造する。
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実施例１４
下記の第１５表に示した処方で、下記の方法によりハードカプセル剤（１カプセルあたり３６０ｍｇ）を製造する。
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Ｎ−アセチルヒドロキシプロリン２５０ｍｇに乳糖６０ｍｇおよびコーンスターチ３０ｍｇを添加して混合し、これにヒドロキシプロピルセルロース２０ｍｇの水溶液を添加して練合する。次いで、押し出し造粒機を用いて、常法により顆粒を製造する。この顆粒をゼラチンハードカプセルに充填することにより、ハードカプセル剤を製造する。
実施例１５
下記の第１６表に示した処方で、下記の方法によりソフトカプセル剤（１カプセルあたり１７０ｍｇ）を製造する。
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大豆油１２０ｍｇにＮ−アセチルヒドロキシプロリン２５ｍｇおよびグルコサミン２５ｍｇを添加して混合する。次いで、ロータリー・ダイズ式自動成型機を用いて、常法に従い、ソフトカプセルに充填することにより、ソフトカプセル剤を製造する。
産業上の利用可能性
本発明により、ヒドロキシプロリンのＮ−アシル化誘導体またはその塩を有効成分として含有する関節炎の予防剤、飲食品、食品添加剤、動物用飼料および飼料添加剤、ならびにこれらを用いるヒトまたは非ヒト動物の関節炎の予防方法を提供することができる。
【国際調査報告】
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