(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
シンビジウム病害の発病抑制機能を有する弱病原性フザリウム菌である、フザリウム・サブグルチナンス（Fusarium subglutinans）ＨＰＦ−１（受託番号ＦＥＲＭ Ｐ−１８２６６）からなることを特徴とする微生物。
【請求項２】
シンビジウム病害の発病抑制機能を有する弱病原性フザリウム菌である、フザリウム・サブグルチナンス（Fusarium subglutinans）ＨＰＦ−１（受託番号ＦＥＲＭ Ｐ−１８２６６）の菌体をシンビジウムに噴霧接種することを特徴とするシンビジウム病害の発病抑制方法。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明の属する技術分野】
この発明は、シンビジウムに発生するシンビジウム病害の発病抑制機能を有する微生物、およびこれを使用するシンビジウム病害の発病抑制方法に関するものである。
【０００２】
【従来の技術】
シンビジウムに発生する病害に対する防除法としては、株の廃棄などによる耕種的防除が従来の対策である。化学農薬の使用は、シンビジウムに対して農薬登録がないために使用できない。
しかしながら、生産農家では、シンビジウム黄斑病等の防除に病原菌がフザリウム菌という理由などから、ベノミル剤や銅剤を使用している。ところが、ベノミル剤は高率にベノミル剤耐性菌が発生しており、ほとんど防除効果がない。また銅剤は薬害が発生し、シンビジウムの商品価値を極端に低下させる。したがって実用上防除の決め手がないのが現状である。
【０００３】
第２に、近年、無農薬栽培が望まれている中において、農薬に代わる安全で有効な病害防除として有望視されている生物防除方法がある。これは植物に有用で無害な、自然界に存在する微生物を利用するものである。
【０００４】
実際には、バチルス属菌、シュ−ドモナス属菌、トリコデルマ属菌等が知られ、土壌伝染性病原菌に対する拮抗微生物として土壌病害を防除することがわかっている。また非病原性フザリウム（Fusarium）菌が病害に対して抵抗性を植物に付与する作用で、病害防除作用があることが知られている。それらの一部は、実際に微生物製剤として販売されている。
【０００５】
【発明が解決しようとする課題】
ところで、フザリウム菌については、非病原性フザリウム菌が交差防御作用により、一般的に植物に病害抵抗性を付与することは知られている。そして種々の土壌病害について、どの非病原性フザリウム菌に防除、抑制作用が存在するか否かを確認する作業が行なわれている。
しかしながら、いまだかつて弱病原性フザリウム菌によるシンビジウム病害の発病抑制については、何ら試みられていないのが現状である。
【０００６】
そこで、本発明者は下記の方法により、シンビジウム黄斑病やシンビジウム腐敗病を防除、抑制する弱病原性フザリウム菌の検索をした。
ａ）シンビジウム黄斑病が多発していたハウスの感受性品種の中から病徴が認められない外観上健全な株を選び、この菌について組織内分離を行ない、フザリウム菌を得た。
ｂ）上記のようにして得たフザリウム菌の菌体をシンビジウムの株全体に噴霧し、３日間放置した。
ｃ）その後シンビジウム黄斑病菌の菌体を噴霧接種し、シンビジウム黄斑病の発病を抑制するフザリウム菌を得た。
【０００７】
得た弱病原性フザリウム菌は、シンビジウム黄斑病（黄斑系統菌、黒斑系統菌）のみならず、シンビジウム腐敗病に対する高い発病抑制作用を備えていた。このように菌体の茎葉への感染によって、茎葉病害(黄斑病)および根部病害（腐敗病）が同時に防除できる弱病原性フザリウム菌は、いままで存在しなかったのである。
また、上記菌体は極めて長期間（デ−タでは７ヶ月間、実際には生育終了時までと考えられる）の発病抑制作用を発揮することができるものであった。したがって、１回の菌体の接種のみでほぼ生育終了まで発病抑制作用が有効であり、接種を複数回繰り返す必要がないため、確実で非常に効率的な病害の防除を行なうことができる。
【０００８】
【課題を解決するための手段】
この発明のシンビジウム病害の発病抑制機能を有する弱病原性フザリウム菌からなる微生物は、フザリウム・サブグルチナンス（Fusarium subglutinans）に属することを特徴とするものである。
【０００９】
またこの発明のシンビジウム病害の発病抑制機能を有する弱病原性フザリウム菌からなる微生物がフザリウム・サブグルチナンス（Fusarium subglutinans）ＨＰＦ−１（ＦＥＲＭ Ｐ−１８２６６）であることをも特徴とするものである。
【００１０】
この発明のシンビジウム病害の発病抑制方法は、フザリウム・サブグルチナンス（Fusarium subglutinans）の菌体をシンビジウムに噴霧接種することを特徴とするものである。
【００１１】
またこの発明のシンビジウム病害の発病抑制方法は、菌体がフザリウム・サブグルチナンス（Fusarium subglutinans）ＨＰＦ−１（ＦＥＲＭ Ｐ−１８２６６）であることをも特徴とするものである。
【００１２】
上記菌株は、後述するように、ＰＤＡ平板培地（グルコ−ス添加ジャガイモ煎汁寒天培地，Potato−dextrose−agar）で２５℃、２週間培養後にコロニー形状を観察したところ、紫色の色素を産出していた。またＢＬＢ照射下において、ＳＮＡ培地（Spezielle−Nahstoffarmer−agar）で２５℃、５８日間培養後に形態的特徴を光学顕微鏡下で観察したところ、大型分生子がやや鎌型からほぼ直線で、小型分生子は卵形から長円形で、常に分生子柄上に擬頭を形成した。フィアライドは、モノフィアライドが主体で、ポリフィアライドがしばしば見られ、フザリウム・サブグルチナンス（Fusarium subglutinans (Nelsonら、1983）)
と同定された。
【００１３】
ここで分離した菌株は、フザリウム・サブグルチナンス ＨＰＦ−１と命名し、これを産業技術総合研究所生命工学工業技術研究所に平成１３年３月１９日付けで寄託したところ、受託番号ＦＥＲＭ Ｐ−１８２６６として受託された。
【００１４】
この発明は、フザリウム・サブグルチナンスのこのような優れたシンビジウム黄斑病、シンビジウム腐敗病の発病抑制作用を利用した生菌を提供するものである。
【００１５】
このフザリウム・サブグルチナンスの生菌を植物に施用する方法としてはメリクロン苗の茎葉や根部に噴霧接種することが好ましい。もちろん、リ−ドの発生した成株やフラスコ内の苗に噴霧接種してもよい。
【００１６】
【発明の実施の形態】
以下この発明のシンビジウム病害の発病抑制機能を有する微生物、およびこれを使用するシンビジウム病害の発病抑制方法の実施の形態について、実施例を用いて詳細に説明する。ただし、この発明はこれらに限定されるものではない。
【００１７】
【実施例１】
「黄斑病に対する発病抑制効果」
［弱病原性Fusarium subglutinans ＨＰＦ−1の前接種法］
本菌株は、ジャガイモ煎汁液体培地で２７℃、３日間振とう培養し、菌糸片を除いた芽胞状単胞の菌体（bud−cell）あるいはジャガイモ煎汁寒天培地で２５℃、２週間培養した分生子を懸濁液として前接種に用いた。前接種は、本葉３〜４枚の一年生メリクロン株全体に噴霧接種した。
［供試品種および黄斑病菌の接種］
シンビジウムの葉に黄斑を形成するFusarium proliferatum race Yを黄斑感受性品種の「ラブリバニー‘ロミオ’」に、黒斑を形成するFusarium proliferatum race Bを黒斑感受性品種の「グレートフラワー‘ヴィーナス’」に、これらの芽胞状単胞の菌体（bud−cell）あるいはジャガイモ煎汁寒天培地で２５℃、２週間培養した分生子を懸濁液をそれぞれの株全体に噴霧接種する方法を用いた。弱病原性フザリウム菌（ＨＰＦ−1菌）を株全体に噴霧接種した１１日後に、黄斑病菌（黄斑系統菌、黒斑系統菌）を噴霧接種し、黄斑病菌接種２３日後に発病調査をした。
得た発病抑制効果について表１に示す。
【表１】
弱病原性フザリウム菌とシンビジウム黄斑病の噴霧接種濃度の違いによる発病抑制効果への影響
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結果）弱病原性フザリウム菌の前接種により、シンビジウム黄斑病菌の接種濃度に関係なく、発病抑制効果が認められた。
【００１８】
【実施例２】
「腐敗病に対する発病抑制効果」
弱病原性フザリウム菌を株全体に噴霧接種した１１日後に、腐敗病菌を土壌接種した。調査は、萎凋株が認められ始めた腐敗病菌接種90日後に行った。
表２に発病抑制期間のデ−タを示す。
【表２】
病原力が異なる腐敗病菌接種条件下での弱病原性フザリウム菌前接種によるシンビジウム腐敗病の発病抑制効果
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結果）供試した腐敗菌の病原力の差は発病度で約２倍ほど異なったが、どちらの菌株でも弱病原性フザリウム菌の前接種により、防除価で約60以上の高い発病抑制効果が認められた。
【００１９】
【実施例３】
「発病抑制期間」
弱病原性フザリウム菌（ＨＰＦ−1）処理区の苗は試験区設置前に弱病原性フザリウムを噴霧接種により感染させ、無処理区の苗は未感染のまま用いた。管理は、農家慣行のハウスに設置し、慣行栽培とした。試験区のほぼ中央に黄斑感受性品種には黄斑罹病株を、黒斑感受性品種には黒斑罹病株を５株ずつ伝染源として配置した。調査は、毎月中旬に全株全葉について発病の有無を調べ、発病葉率を求め、次式から防除価を算出した。なお、
防除価＝（慣行区発病葉率−処理区発病葉率）×100／ 慣行区発病葉率
である。得た結果を図１に示す。
結果）黒斑病徴は１１月の無処理区で発病葉率が２０．７％と多発し、 ＨＰＦ−1処理区の発病抑制効果は試験期間を通して認められ、１１月中旬の防除価で ８７．９であった。黄斑は１１月の無処理区でも発病葉率が４％と少発生のため区間差は明確にはならなかったが、ＨＰＦ−1処理区では調査期間を通して防除価で５０程度の発病抑制効果が認められた。
このことから、弱病原性フザリウム菌を感染させた苗は、すくなくとも７ヶ月以上の長期にわたり、黄斑病の発病を抑制ができることが明らかになった。
【００２０】
「シンビジウムおよび数種作物に対する病原性」
１）ＨＰＦ−1菌のシンビジウムに対する病原性
シンビジウムへ接種した後は、３０％遮光したガラスハウス内で半年間栽培し、リード葉が４〜５枚発生しはじめた株を用いて発病調査を行った。調査は葉の表裏について、葉基部から1cm、10cm、20cm、30cmの部位における黒褐色斑の30個当たりの大きさと1cm2当たりの数について行った。
シンビジウムではメリクロン葉およびリ−ド葉に肉眼でようやく見られる黒褐色の不整形小斑が認められた。黒褐色不整形小斑の大きさはメリクロン葉では基部から１cmの部位において、Lovely Banny ‘Romeo'では0.09〜0.30×0.06〜0.30mm、Great Flower ‘Venus'では0.03〜0.21×0.03〜0.15mmであった。1cm2当たりの個数は、メリクロン葉で多く、メリクロン葉の基部から１cmの部位では、Lovely Banny ‘Romeo'が0〜192個、Great Flower ‘Venus'が0〜86個であった。
不整形小斑は葉表が葉裏より多く、葉先にいくに従って小さくなった。不整形小斑は、接種時に発生していなかった止葉やリード葉にも認められ、接種時以降に自然感染したものと考えられた。
結果）以上のことから、本菌はシンビジウムに対し極めて小さな黒斑を生じ、病原性が認められたが、肉眼でようやく見える程度であり、実用上問題はない。また、一度の接種により、その後発生した葉に感染し、株全体が感染することが明らかとなった。
このことは、弱病原性フザリウム菌の発病抑制作用が非常に長期間有効に機能することを意味している。
２）ＨＰＦ−1菌の数種作物に対する病原性
次に、ＨＰＦ−1菌のシンビジウム以外の数種作物に対する病原性について調査した結果を表３に示す。
接種方法）供試作物は、イネ（日本晴）、イチゴ（女峰）、 パフィオペディルム（Golden Acres×Lovely Yard、Overraeus×Lovely Yard）、オドントグロッサム（ Lovely Morning‘Sayaka’）、ジゴペタラム（ B.G.White‘Bogie’、Redvale‘Fire kiss’）、エピデンドルム（Cosmo Dream Color）を用いた。イネは、種籾を塩水選後、浸漬催芽をする際に、イネばか苗病菌を対照として各菌株のbud−cell濃度１×106cell/mlの菌液に２５℃、２４時間、浸漬接種した。緑化後１７日間は野外で栽培し、徒長苗が認められる第４葉期にイネばか苗病の特徴である徒長株、枯死株、矮化株について調査した。
イチゴは、ランナーの発生し始めた２年生親株に、イチゴ先枯病菌（栃木農試分譲）を対照として各菌株のbud−cellを濃度１×107cell/mlで噴霧し、２５℃、RH100％、３日間静置した。接種後は野外栽培し、接種１７日後にイチゴ先枯病菌の特徴であるランナーの褐変、葉の黄化枯死について調査した。
アスパラガスは、播種後３０日の実生苗の株元に、アスパラガス株腐病菌を対照として土壌フスマ油粕培地(８：２：１v/v)で１８日間２５℃で培養した各菌株の培養物１g/鉢を地際部周囲に接種した。接種３８日後に地際部の茎および根の褐変腐敗について調査した。
ラン科作物は、弱病原性Fusarium subglutinans ＨＰＦ−1のbud−cellを濃度１×107)cell/mlに調整し、ハンドスプレーで株全体に噴霧接種し、２５〜２６℃、湿度１００％の条件で３日間、静置した。接種後はガラス温室内で栽培し、６１日後に発病調査を行った。対照菌株として、黄斑病菌を用いた。
【表３】
ＨＰＦ−1の数種作物に対する病原性
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結果）イネばか苗病菌では徒長株および枯死株が多発したが、ＨＰＦ−１では徒長株および枯死株の発生は見られなかった。ＨＰＦ−１菌はイネに対して病原性が認められなかった。
イチゴ先枯病菌ではランナ−の先端が褐変し、葉縁の黄化褐変が認められたが、ＨＰＦ−1菌ではランナ−および葉に褐変はなく、イチゴする対し病原性は認められなかった。
アスパラガス株腐病菌では茎の褐変、新芽の腐敗、根の褐変が認められたが、ＨＰＦ−1では褐変および腐敗はなく、アスパラガスに対する病原性は認められなかった。
ラン科では、パフィオペディルム、オドンチオダおよびエピデンドラムが無処理と同様に発病が認められなかった。しかし、ジゴペタラムの噴霧接種では、中央が淡黄色で周囲が水浸状に盛り上がるシンビジウム黄斑病の黄斑病徴と同様な症状を呈した。
【００２１】
表４に、シンビジウム黄斑病および腐敗病に対する発病抑制菌の形態的特徴を示す。
【表４】
シンビジウム黄斑病および腐敗病に対する発病抑制菌の形態的特徴
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コロニー形状は、ＰＤＡ平板培地で２５℃、２週間培養後に観察した。形態的特徴は、ＢＬＢ照射下においてＳＮＡ培地で２５℃、５８日で培養したものを光学顕微鏡下で観察した。その結果、本菌は、コロニー形態および菌の形態的特徴からFusarium subglutinans（Nelsonら、1983）と同定された。
【００２２】
【発明の効果】
この発明のシンビジウム病害の発病抑制機能を有する弱病原性フザリウム菌からなる微生物およびシンビジウム病害の発病抑制方法によれば、シンビジウム病害の発病を確実に抑制することができ、しかも農薬に代わる安全で有効な病害防除を行うことができるようになった。
【図面の簡単な説明】
【図１】慣行栽培における弱病原性フザリウム菌によるシンビジウ黄斑病の発病抑制効果を示すグラフである。
【図１】
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