(57)【要約】疎水性多孔質膜などを簡便に親水化処理することにより、血中の赤血球、白血球、血小板などの血球の付着を大幅に抑制した親水化膜、および親水化処理方法を提供する。血液との接触部位が疎水性である医療用具を界面活性作用を有する物質の溶液に浸漬させた後に、該界面活性剤が溶解可能な溶媒で洗浄を行い、血液接触部の表面に該界面活性作用を有する物質を極微量吸着させることにより、血中の赤血球、白血球、血小板などの血球の付着を大幅に抑制することを特徴とした親水化処理疎水性多孔質膜、および親水化方法に関する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
疎水性多孔質膜の表面に、界面活性作用を有する物質が該膜の乾燥重量（ｇ）当たり０．０２ｍｇ〜２５０ｍｇ吸着していることを特徴とする医療用親水化多孔質膜。
【請求項２】
界面活性作用を有する物質が数平均分子量５００〜８，０００である請求の範囲第１項記載の親水化多孔質膜。
【請求項３】
界面活性作用を有する物質が非イオン性界面活性剤である請求の範囲第１項または２項記載の親水化多孔質膜。
【請求項４】
非イオン性界面活性剤がポリオキシエチレンソルビタン系の界面活性剤である請求の範囲第３項記載の親水化多孔質膜。
【請求項５】
ポリオキシエチレンソルビタン系の界面活性剤が、ポリオキシエチレンソルビタンモノラウレート、ポリオキシエチレンソルビタンモノパルミテート、ポリオキシエチレンソルビタンモノステアレート、ポリオキシエチレンソルビタントリステアレート、ポリオキシエチレンソルビタンモノオレエートのいずれか１つ、またはその組み合わせである請求の範囲第４項記載の親水化多孔質膜。
【請求項６】
界面活性作用を有する物質が、精製卵黄レシチン、高度精製卵黄レシチン、または精製大豆レシチンである請求の範囲第１項記載の親水化多孔質膜。
【請求項７】
界面活性作用を有する物質が、ポリオキシエチレン硬化ひまし油である請求の範囲第１項記載の親水化多孔質膜。
【請求項８】
疎水性多孔質膜がポリスルホンを主要構成成分とすることを特徴とする請求の範囲第１項、第２項、第３項、第４項、第５項、第６項、または第７項記載の親水化多孔質膜。
【請求項９】
疎水性表面を有する医療用具の親水化処理方法であって、疎水性の血液接触部位を界面活性作用を有する物質の溶液に浸漬させ、該疎水性表面に該界面活性作用を有する物質を単位乾燥重量（ｇ）当たり０．０２ｍｇ〜２５０ｍｇ吸着せしめることを特徴とする親水化処理方法。
【請求項１０】
疎水性の血液接触部が多孔質膜である請求の範囲第９項記載の親水化処理方法。
【請求項１１】
前記膜を界面活性作用を有する物質の溶液に浸漬させた後に、界面活性作用を有する物質が溶解可能な溶媒で洗浄を行い、余剰の該界面活性作用を有する物質を溶出させることを特徴とする請求の範囲第９項記載の親水化処理方法。
【請求項１２】
疎水性多孔質膜の親水化処理方法であって、少なくとも血液を該膜中に流入させるための血液流入部、および該膜に流入された血液を流出させるための血液流出部からなるハウジング中に該膜を収納した後に、界面活性作用を有する物質の溶液を該ハウジング中に通液させ、該膜の表面に該界面活性作用を有する物質をハウジング内の膜の単位乾燥重量（ｇ）当たり０．０２ｍｇ〜２５０ｍｇ吸着せしめることを特徴とする親水化処理方法。
【請求項１３】
前記界面活性作用を有する物質の溶液を前記ハウジング中に通液した後に、該界面活性作用を有する物質が溶解可能な溶媒で洗浄を行い、余剰の該界面活性作用を有する物質を溶出させることを特徴とする請求の範囲第１２項記載の親水化処理方法。
【請求項１４】
界面活性作用を有する物質が数平均分子量５００〜８，０００である請求の範囲第９項、第１０項、第１１項、第１２項、または第１３項記載の親水化処理方法。
【請求項１５】
界面活性作用を有する物質が非イオン性界面活性剤である請求の範囲第９項、第１０項、第１１項、第１２項、第１３項、または第１４項記載の親水化処理方法。
【請求項１６】
非イオン性界面活性剤がポリオキシエチレンソルビタン系の界面活性剤である請求の範囲第１５項記載の親水化処理方法。
【請求項１７】
ポリオキシエチレンソルビタン系の界面活性剤が、ポリオキシエチレンソルビタンモノラウレート、ポリオキシエチレンソルビタンモノパルミテート、ポリオキシエチレンソルビタンモノステアレート、ポリオキシエチレンソルビタントリステアレート、ポリオキシエチレンソルビタンモノオレエートのいずれか一つ、またはその組み合わせである請求の範囲第１６項記載の親水化処理方法。
【請求項１８】
界面活性作用を有する物質が、精製卵黄レシチン、高度精製卵黄レシチン、または精製大豆レシチンである請求の範囲第９項、第１０項、第１１項、第１２項、または第１３項記載の親水化処理方法。
【請求項１９】
界面活性作用を有する物質が、ポリオキシエチレン硬化ひまし油である請求の範囲第９項、第１０項、第１１項、第１２項、または第１３項記載の親水化処理方法。
【請求項２０】
疎水性多孔質膜がポリスルホンを主要構成成分とすることを特徴とする請求の範囲第９項、第１０項、第１１項、第１２項、第１３項、第１４項、第１５項、第１６項、第１７項、第１８項、または第１９項記載の親水化処理方法。
【発明の詳細な説明】
技術分野
本発明は疎水性膜を親水化処理することにより、血球（特に血小板）との相互作用を軽減し高い血液適合性を賦与した膜、および親水化処理方法に関する。さらに具体的には、血漿分離膜、二重血漿濾過膜、血液濾過膜、透析膜などとして好適に使用し得る親水化膜、および血液との接触部位が疎水性である医療用具において、血液と接触する疎水性部位を親水化処理する方法に関する。
背景技術
疎水性膜は、一般的に膜強度が強い、乾式保存が可能であるなどの長所がある反面、濾過性能が低い、タンパク質の吸着が生じ易い、血液適合性が低いなどの欠点が指摘されている。そこで古くから疎水性膜の親水化に関する技術開発が試みられてきた。代表的な方法としては、（１）疎水性膜にグリセリンなどの難揮発性の水溶性多価アルコールを吸着させる方法。（２）疎水性膜にポリエチレングリコール、ポリビニルピロリドン、ポリビニルアルコールなどの水溶性高分子物質を吸着させる方法（特開昭６３−３１５０１号公報など）。（３）疎水性膜に親水性高分子を固定化する方法。疎水性膜の表面にアクリルアミドなどの親水性モノマーを化学的に結合させる方法（特開平２−５９０３２号公報など）。（４）含水状態で膜に放射線を照射することで親水性高分子を架橋不溶化することにより膜に固定化する方法（特開平４−３００６３６号公報など）。膜を乾燥状態で熱処理することにより、親水性高分子を不溶化し固定化する方法（特開平９−１０３６６４号公報など）。（５）疎水性膜の表面をスルホン化する方法（特開昭６３−５４４５２号公報など）。（６）ポリエチレングリコールやポリビニルピロリドンなどの親水性高分子物質と、疎水性ポリマードープとの混合物から膜をつくる方法（特開昭６１−９３８０１号公報など）。（７）アルカリ水溶液（ＮａＯＨ、ＫＯＨなど）処理により膜表面に親水基を付与する方法（特開昭５８−９３７３４号公報など）。（８）疎水性多孔質膜をアルコールに浸漬した後、水溶性ポリマー水溶液で処理、乾燥後、熱処理や放射線などで不溶化処理する方法（特公昭５４−１７９７８号公報など）などが知られている。
これらのうち、前記（１）〜（３）の方法は、一般的に疎水性の膜を親水化する方法として古くから当業者に知られているが、容易に予想されるように、各方法において用いられる親水性付与剤は一度水に接触させると疎水性膜から脱離してしまい、その親水性が失われているという欠点がある。またその用途によってはこれら親水性付与剤が濾液に混入することが忌避される場合もある。前記（２）が改良された方法としては、前記（２）の方法を行った後にさらに放射線を照射したり、加熱処理を施してこれらの親水性付与剤が水に溶け難くし、膜から脱離し難くする方法が提案されているが、膜強度の低下や効果が未だ充分に満足し得る程度のものではないなどの問題がある。
また、前記（４）および（５）の方法には、疎水性膜の親水性がほぼ永久に維持されるとともに、ろ液に親水性付与剤が溶出しないという長所があるものの、その処理方法は比較的煩雑で非経済的であるという欠点がある。
さらに前記（６）の方法も古くから知られているが、疎水性膜中の親水性高分子物質の残留状態を調整することが難しく、経時的に濾過特性が変化したり、徐々に親水性高分子物質が溶出するなどの問題がある。前記（７）の方法に関しても処理する素材が限定される、アルカリ水溶液処理により膜強度が低下するなどの問題がある。前記（８）の方法に関しても、不溶化処理時の乾燥や熱処理、放射線照射などにより膜強度が低下するなどの問題がある。
このように、上記した従来技術では濾液中に親水性付与剤が通常溶出し、これを防止するには煩雑で非経済的な処理方法を採らなければならず、すぐれた親水化処理膜を得ることは困難であった。さらにこれら技術は、親水化処理することにより透水性を向上させることが主目的であり、血液（特に血球）との相互作用まで言及しているものは少ない。膜を親水化処理すると同時に高い血液適合性を付与する方法として、ヘパリンなど抗凝固作用を有する多糖類をコーティングする方法や、ポリエチレングリコールなどを共有結合して化学的に固定化する方法が挙げられるが、いずれも煩雑であり効果も不十分である。また安全面、コスト面など未だ満足の行くものは得られていない。親水化処理にともなう膜素材の劣化、強度低下などを誘起せずに、高い血液適合性、安全性を有し、かつ簡便で経済的な親水化処理方法、および親水化膜は得られていないのが現状である。
発明の開示
疎水性膜を親水化処理した膜と血球（特に血小板）との相互作用、および膜への親水化剤の固定化方法に関し鋭意研究を行った結果、数平均分子量５００〜８，０００の界面活性作用を有する物質（親水化剤）と疎水性膜を接触させた後に、乾燥、加温、電子線照射や架橋などの固定化処理を行うことなく、親水化剤を溶解した溶媒あるいは溶解可能な溶媒で充分に洗浄を行い、溶出可能な親水化剤を脱離させ、実質的に親水化剤を極少量膜に吸着させることにより、親水化剤の溶出がなく、かつ血球（特に血小板）との相互作用が驚くべきほど低くなり、膜に高い血液適合性を簡便に、しかも低コストで付与することが可能であることを見出し、本発明を完成するに至った。
すなわち本発明は、疎水性多孔質膜の表面に、界面活性作用を有する物質が該膜の乾燥重量（ｇ）当たり０．０２ｍｇ〜２５０ｍｇ吸着していることを特徴とする医療用親水化多孔質膜に関する。
好適な実施態様においては、前記界面活性作用を有する物質が数平均分子量５００〜８，０００である親水化多孔質膜である。
好適な実施態様においては、前記界面活性作用を有する物質が非イオン性界面活性剤である親水化多孔質膜である。
好適な実施態様においては、前記界面活性作用を有する物質がポリオキシエチレンソルビタン系の界面活性剤である親水化多孔質膜である。
好適な実施態様においては、前記ポリオキシエチレンソルビタン系の界面活性剤が、ポリオキシエチレンソルビタンモノラウレート、ポリオキシエチレンソルビタンモノパルミテート、ポリオキシエチレンソルビタンモノステアレート、ポリオキシエチレンソルビタントリステアレート、ポリオキシエチレンソルビタンモノオレエートのいずれか１つ、またはその組み合わせである親水化多孔質膜である。
好適な実施態様においては、前記界面活性作用を有する物質が、精製卵黄レシチン、高度精製卵黄レシチン、または精製大豆レシチンである親水化多孔質膜である。
好適な実施態様においては、前記界面活性作用を有する物質が、ポリオキシエチレン硬化ひまし油である親水化多孔質膜である。
好適な実施態様においては、前記疎水性多孔質膜がポリスルホンを主要構成成分とすることを特徴とする親水化多孔質膜である。
さらに本発明は、疎水性表面を有する医療用具の親水化処理方法であって、疎水性の血液接触部位を界面活性作用を有する物質の溶液に浸漬させ、該疎水性表面に該界面活性作用を有する物質を単位乾燥重量（ｇ）当たり０．０２ｍｇ〜２５０ｍｇ吸着せしめることを特徴とする親水化処理方法に関する。
好適な実施態様においては、前記疎水性の血液接触部が多孔質膜である親水化処理方法である。
好適な実施態様においては、前記膜を界面活性作用を有する物質の溶液に浸漬させた後に、界面活性作用を有する物質が溶解可能な溶媒で洗浄を行い、余剰の該界面活性作用を有する物質を溶出させることを特徴とする親水化処理方法である。
さらに本発明は、疎水性多孔質膜の親水化処理方法であって、少なくとも血液を該膜中に流入させるための血液流入部、および該膜に流入された血液を流出させるための血液流出部からなるハウジング中に該膜を収納した後に、界面活性作用を有する物質の溶液を該ハウジング中に通液させ、該膜の表面に該界面活性作用を有する物質をハウジング内の膜の単位乾燥重量（ｇ）当たり０．０２ｍｇ〜２５０ｍｇ吸着せしめることを特徴とする親水化処理方法である。
好適な実施態様においては、前記界面活性作用を有する物質の溶液を前記ハウジング中に通液した後に、該界面活性作用を有する物質が溶解可能な溶媒で洗浄を行い、余剰の該界面活性作用を有する物質を溶出させることを特徴とする親水化処理方法である。
好適な実施態様においては、前記界面活性作用を有する物質が、数平均分子量５００〜８，０００である親水化処理方法である。
好適な実施態様においては、前記界面活性作用を有する物質が非イオン性界面活性剤である親水化処理方法である。
好適な実施態様においては、前記非イオン性界面活性剤がポリオキシエチレンソルビタン系の界面活性剤である親水化処理方法である。
好適な実施態様においては、前記ポリオキシエチレンソルビタン系の界面活性剤が、ポリオキシエチレンソルビタンモノラウレート、ポリオキシエチレンソルビタンモノパルミテート、ポリオキシエチレンソルビタンモノステアレート、ポリオキシエチレンソルビタントリステアレート、ポリオキシエチレンソルビタンモノオレエートのいずれか一つ、またはその組み合わせである親水化処理方法である。
好適な実施態様においては、前記界面活性作用を有する物質が、精製卵黄レシチン、高度精製卵黄レシチン、または精製大豆レシチンである親水化処理方法である。
好適な実施態様においては、前記界面活性作用を有する物質が、ポリオキシエチレン硬化ひまし油である親水化処理方法である。
好適な実施態様においては、前記疎水性多孔質膜がポリスルホンを主要構成成分とすることを特徴とする親水化処理方法である。
発明を実施するための最良の形態
本発明においては、親水化剤として、界面活性作用を有する物質を使用する。界面活性作用を有する物質として、非イオン性の界面活性剤、レシチン、ポリオキシエチレン硬化ひまし油、エデト酸ナトリウム、セスキオレイン酸ソルビタン、Ｄ−ソルビトール、デヒドロコール酸、グリセリン、Ｄ−マンニトール、酒石酸、プロピレングリコール、マクロゴール、ラノリンアルコール、メチルセルロースなどが挙げられる。これらの中で特に、非イオン性の界面活性剤、レシチン、ポリオキシエチレン硬化ひまし油などが静脈注射用製剤の分散剤として一般的に使用されており、血液中での毒性が特に低い点から好ましい。非イオン性の界面活性剤としては、多価アルコール脂肪酸エステル系とポリオキシエチレン系とに大別される。多価アルコール脂肪酸エステル系の界面活性剤としては、ステアリン酸グリセリンエステル系、ソルビタン脂肪酸エステル、ソルビタンアシルエステルなどが挙げられる。またポリオキシエチレン系の界面活性剤としては、ポリオキシエチレンアルコールエーテル、ポリオキシエチレンセチルエーテル、ポリオキシエチレンアシルエステルなどが挙げられ、ポリオキシエチレンソルビタン系の界面活性剤としては、ポリオキシエチレンソルビタンアシルエステル、ポリオキシエチレンソルビタンモノラウレート、ポリオキシエチレンソルビタンモノパルミテート、ポリオキシエチレンソルビタンモノステアレート、ポリオキシエチレンソルビタントリステアレート、ポリオキシエチレンソルビタンモノオレエートなどが挙げられる。これらは各々単独、または組み合わせで用いることができる。
これら界面活性剤は、膜の親水化処理にともなう膜の目詰まりの防止や、洗浄効率などの点で数平均分子量５００〜８，０００が好ましい。また万一溶出しても、人体に影響を及ぼさないことが一般的に認められている低毒性のものが好ましい。そのような界面活性剤として、静脈注射用製剤に使用実績が高いポリオキシエチレン系の界面活性剤が好ましい。より好ましくは、ポリオキシエチレンソルビタン系の界面活性剤であるポリオキシエチレンソルビタンモノオレエートが挙げられる。また静脈注射用製剤に使用実績がある精製卵黄レシチン、高度精製卵黄レシチン、精製大豆レシチンなども血液中での毒性が特に低い点から好ましい。同様に低毒性の界面活性作用を有する物質として、ポリオキシエチレン硬化ひまし油、ポリオキシエチレン硬化ひまし油１０、ポリオキシエチレン硬化ひまし油４０、ポリオキシエチレン硬化ひまし油５０、ポリオキシエチレン硬化ひまし油６０なども好ましいが、中でもより毒性が低いポリオキシエチレン硬化ひまし油６０がより好ましい。本発明は、これらの親水化剤に限定されず、また２種以上の組み合わせも可能である。
親水化処理にあたり、親水化剤を溶解した溶液の温度は、４℃〜７０℃で疎水性膜に接触させることが好ましい。生産の効率性からより好ましくは、４℃〜５０℃である。親水化剤の濃度は、０．００１％（Ｗ／Ｗ）〜１０％（Ｗ／Ｗ）が好ましい。洗浄の効率化から０．００１％（Ｗ／Ｗ）〜１％（Ｗ／Ｗ）がより好ましい。また充分な血小板粘着抑制効果を得るためには、０．００５％（Ｗ／Ｗ）〜１％（Ｗ／Ｗ）がさらに好ましい。
親水化剤と疎水性膜の接触時間は、膜を親水化剤の中に短時間浸漬させるだけでも良いが、充分な血小板粘着抑制効果を得るためには、１分〜２時間以内が好ましい。親水化剤の膜への吸着安定性などの点からより好ましくは２分〜１．５時間以内である。さらに余剰親水化剤の洗浄効率の面から２分〜６０分以内が好ましい。ここで浸漬時間が１分以内であると、吸着量が不十分であり、血小板粘着抑制効果が低くなる傾向があり、２時間以上であると、平衡吸着量に達しているため、それ以上吸着させても血小板粘着抑制効果は変わらない。また、膜の洗浄時間が長くなるなど製造上の効率面で不利となる傾向がある。
親水化剤と疎水性膜の接触方法としては、膜を親水化剤の中に浸漬させる方法、浸漬させ振とうする方法、さらに流入部と流出部からなるハウジング中に該膜を収納した後に、親水化剤を該ハウジング中に通過させることにより親水化剤と疎水性膜を接触させる方法などがあげられる。
親水化剤と疎水性膜を接触させた後、親水化剤が溶解可能な溶媒にて前記疎水性膜を洗浄するのが好ましい。
親水化剤を溶解する溶媒としては、水、電解質を含む水溶液（生理的食塩水、リン酸緩衝液などの緩衝液類）、エタノール、温エタノール、メタノールなどのアルコール類、ピリジン、クロロホルム、シクロヘキサン、エチルアセテート、もしくはトルエン、またはこれらの混合溶媒を用いることができる。特に親水化処理を行う素材への影響や、溶媒の後処理、安全性、またはコスト面などの点から、水や電解質を含む水溶液を用いることが好ましい。
そして全有機炭素（ＴＯＣ）濃度の測定など（ＪＩＳ　Ｋ　０５５１）で、洗浄が充分に行われたことを確認することができる（例えばＴＯＣ値＝０）。
親水化剤の吸着量は、間接的には上記全有機炭素（ＴＯＣ）法にて求めることができる。すなわち親水化処理後の親水化剤溶液のＴＯＣ値、および膜の洗浄液のＴＯＣ値から求めた親水化剤量を、処理前の親水化剤を溶解した溶液のＴＯＣ値より求めた親水化剤量より差し引くことで求めることが出来る。また非イオン性界面活性剤については、テトラチオシアナトコバルト（ＩＩ）酸アンモニウムを用いた定量（ＪＩＳ　Ｋ　３３６３）の改良法（三浦ら：テトラチオシアナトコバルト（ＩＩ）酸アンモニウムを用いる微量非イオン界面活性剤の抽出／吸光光度定量（１９８９）分析化学）などで直接定量化することも可能である。
親水化剤の吸着量は、疎水性膜の単位乾燥重量（ｇ）当たり、０．０２ｍｇ〜２５０ｍｇである。親水化剤の吸着量が０．０２ｍｇ以下であると、充分な血小板粘着抑制効果が得られない傾向があり、また、２５０ｍｇ以上であると、膜の洗浄に時間や大量の洗浄液を要し非効率となる傾向がある。血球の付着を抑制するには、０．１ｍｇ〜２５０ｍｇが好ましく、親水化剤の血液への溶出の抑制面から０．１ｍｇ〜１２５ｍｇがさらに好ましい。一方、血球の付着抑制効果の点から０．５ｍｇ〜１２５ｍｇがより好ましく、充分な親水化剤の溶出抑制、血球の付着抑制効果などの安全面から１．０ｍｇ〜８０ｍｇがさらに好ましい。また親水化剤による処理時間の短縮、親水化剤吸着後の洗浄時間、洗浄量の軽減など生産効率の点から２．０ｍｇ〜５０ｍｇがさらに好ましい。
なお本発明に用いられる疎水性膜の形状は特に限定されず、中空糸状、管状、平膜状などが挙げられる。またその素材は、吸着した親水化剤を充分に洗浄しても、極微量安定的に吸着することが可能であるポリスルホン、ポリエチレン、ポリプロピレン、ポリスチレン、ポリカーボネート、ポリウレタン、ポリメチルメタクリレートなど比較的疎水性が高い高分子が好ましい。なかでも、極微量吸着した親水化剤の吸着安定性が高い点でポリスルホンが特に好ましいが、本発明はこれら素材に限定されるものではない。前記疎水性膜は多孔質であることが極微量吸着した親水化剤により血小板粘着抑制効果を発現するのに好ましい形態である
前記疎水性膜の平均孔径は０．０３μｍ〜１０μｍであることが好ましい。０．０３μｍより小さいと洗浄に時間がかかるとともに、未洗浄の親水化剤が多くなる傾向にあり、１０μｍより大きいと膜の構造上、強度的に弱くなる傾向がある。
また形状が中空糸状のものであり、かつ多孔質膜の場合は、その平均孔径が、親水化剤の洗浄効率の点から０．０５μｍより大きく、また充分な膜強度を維持するために４μｍ以下のものが好ましい。またここでいう疎水性多孔質膜の表面とは、血液と接触する部分のみをいうわけではなく、親水化剤と接触可能な全ての表面をいう。また吸着状態は、単分子レベルの均一的な吸着から、不均一な吸着、局在化した吸着、凝集状態で吸着しているものまで特に限定するものではない。これら親水化剤の吸着状態の確認方法としては、例えば蛍光標識した親水化剤を吸着させた後に、蛍光顕微鏡、あるいは共焦点レーザー顕微鏡などによる確認、また直接的な方法としては、高分解能の走査型電子顕微鏡や原子間力顕微鏡などによる確認方法があげられる。
実施例１
〔ポリスルホンシートの作製〕
Ｐ−１７００ポリスルホン（帝人アモコ（株））をＮ−メチルピロリドン（ＮＭＰ）にそれぞれ約２０％（Ｗ／Ｖ）入れ、１２０℃にてポリスルホンを溶解し、ポリスルホン均一ドープを得た。
上記ドープ中に、ガラス管を浸漬した後に、ゆっくりとガラス管を引き上げ、凝固浴（蒸留水）中に浸漬し、ポリスルホンを凝固させた。ガラス管より凝固したポリスルホンを脱離し、長さ４×４ｍｍの正方形に切断し、ポリスルホンシートを作製した。ここで得られた多孔質ポリスルホン膜の平均孔径は０．１μｍから５μｍである。つぎにサンプル管（１００ｍｌ用）に逆浸透水（以下、ＲＯ水と称す）４０ｍｌおよび該ポリスルホンシートを入れ、９０℃で３０分熱処理を行った後にデカンテーション洗浄を行った。本操作を合計３回繰り返した後に、さらに室温でＲＯ水４０ｍｌにてデカンテーション洗浄を５回繰り返すことによりポリスルホンシートの洗浄を行った。
〔親水化処理〕
前記ポリスルホンシート（４×４ｍｍ）１２０枚をサンプル管（３０ｍｌ用）に入れ、ポリオキシエチレンアルコールエーテル系の非イオン性界面活性剤であるポリオキシエチレンセチルエーテル（Ｂｒｉｊ５８、分子量１，１００）を１％（Ｗ／Ｖ）溶解したＲＯ水を１５ｍｌ添加し、２０℃にて３０分、１００回／分にて振とうを行うことにより親水化処理を行った。
振とう後、ＲＯ水１５ｍｌにて５回デカンテーション洗浄を行った後、さらにＲＯ水１５ｍｌ中にて３０分間振とうした後にデカンテーション洗浄を行った。本操作を合計３回繰り返した。
つぎにポリスルホンシートを吸わないように、ピペッターでＲＯ水を取り除き、新たなＲＯ水を１５ｍｌ追加し３０分間振とうした後に、上澄みのＴＯＣ測定を実施し、ＴＯＣ値がゼロになるまで本操作を繰り返し親水化剤の洗浄を行った（表１）。最後に１２１℃、２０分間高圧蒸気滅菌を行った後に上清のＴＯＣ測定を行った（表１）。
ポリスルホンシート洗浄後のＴＯＣ値は、ゼロであり充分に洗浄されていることがわかる。また高圧蒸気滅菌後の上清のＴＯＣ値も５ｐｐｍ未満であり、親水化剤の溶出は起こっていないことがわかる（表１）。
このときのポリオキシエチレンセチルエーテルの前記膜への吸着量は、２１（ｍｇ／膜の乾燥重量ｇ）であった。
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〔血液との相互作用〕
このポリスルホンシートを合計３３枚用意し、ＰＰ製のチューブ（６ｍｌ用、Ｆａｌｃｏｎ　２０６３）に入れた。つぎにヘパリンを添加した生理食塩液（ヘパリン濃度２ＩＵ／ｍｌ）５ｍｌを添加し、撹拌後上清を除去した。同様にヘパリン化生理食塩液を入れ、本操作を合計３回行い膜の洗浄を行った。上清を十分に除去し、健常人ボランティアより採血（２ＩＵ／ｍｌのヘパリンで抗凝固）した血液を１．５ｍｌ添加し、ゆっくり転倒混和を行った。つぎに３７℃の恒温水槽中にいれ、振とう数７０回／分にて４０分間振とうを行った。所定時間後、血液をＰＰ製のチューブ（６ｍｌ用、Ｆａｌｃｏｎ　２０６３）に１ｍｌ入れ血球数を血球カウンター（Ｍｉｃｒｏｃｅｌｌ　Ｃｏｕｎｔｅｒ　ＣＣ−１８０シスメックス（株））にて測定し、その結果を表２に示した。
参考例１
ポリスルホンシートを入れない以外は、実施例１と同様の方法に従って血液との相互作用を評価し、血球数を求めた。
比較例１
親水化剤処理を行っていないＰ−１７００ポリスルホンシートを用いた以外は、実施例１と同様の方法に従って血液との相互作用を評価し、その結果を表２に示した。
比較例２
代表的な親水化剤としてエチレンビニルアルコール（ＥＶＡＬ、日本合成化学（株）、分子量約５，０００）を用いた以外は、実施例１と同様の方法に従って血液との相互作用を評価し、その結果を表２に示した。
比較例３
代表的な親水化剤としてポリビニルピロリドン（ＰＶＰ、和光純薬（株）、分子量約８，０００）を用いた以外は、実施例１と同様の方法に従って血液との相互作用を評価し、その結果を表２に示した。
実施例２
Ｐ−３５００ポリスルホン（帝人アモコ（株））を用いた以外は、実施例１と同様の方法でポリスルホンシート（平均孔径０．０９μｍ〜４μｍ）を作製し、ポリオキシエチレンアルコールエーテル系の非イオン性界面活性剤であるポリオキシエチレンセチルエーテル（Ｂｒｉｊ５８）にて親水化処理を行い、血液との相互作用評価、および血球数の測定を行い、その結果を表２に示した。
このときのポリオキシエチレンセチルエーテルの前記膜への吸着量は、２６（ｍｇ／膜の乾燥重量ｇ）であった。
比較例４
親水化剤処理を行っていないＰ−３５００ポリスルホンシートを用いた以外は、実施例１と同様の方法に従って血液との相互作用を評価し、その結果を表２に示した。
比較例５
代表的な親水化剤としてエチレンビニルアルコール（ＥＶＡＬ）を用いた以外は、実施例２と同様の方法に従って親水化シートを作製し、実施例１と同様の方法で血液との相互作用を評価し、その結果を表２に示した。
比較例６
代表的な親水化剤としてポリビニルピロリドン（ＰＶＰ）を用いた以外は、実施例２と同様の方法に従って親水化シートを作製し、実施例１と同様の方法で血液との相互作用を評価し、その結果を表２に示した。
測定した血球数は参考例に近いほど、血球とポリスルホンシートとの相互作用が低く、血球数が少なくなるほど両者間の相互作用が高く、血球の付着や凝集などが起こっていることを意味する。表２に示したように、赤血球数、白血球数ともに実施例、比較例間で１０％以内の変動にとどまり、赤血球、白血球の付着はほとんど起こっていないことがわかる。
また血小板に関しては、実施例１、２記載の親水化剤、および親水化処理方法で調整したポリスルホンシートに対する血小板数が、参考例値に最も近く、血小板の付着が大幅に抑制されていることがわかる（表２）。一方、未処理ポリスルホンシート（比較例１、４）、および一般的な親水化剤で処理した比較例（比較例２、３、５、６）では、血小板数の低下率が大きく、血小板との相互作用が高いことがわかる（表２）。
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実施例３
〔親水化処理〕
非イオン性界面活性剤であるポリオキシエチレンソルビタンモノオレエート（Ｔｗｅｅｎ８０、日光ケミカル（株）、分子量１，６１１）をＲＯ水に１％（Ｗ／Ｖ）溶解し、三角フラスコに１０００ｍｌ入れた（水溶液温度２０℃）。つぎにポリスルホン製血漿分離膜（サルフラックス−０８、鐘淵化学工業（株））内の水（ＱＢ側：血液流入出側、ＱＦ側：膜外側の血漿側共）を全量抜き出し、ローラーポンプを用い流速約１００（ｍｌ／分）で上記Ｔｗｅｅｎ８０溶液をアップフローでＱＢ側に１分間流した。つぎにＱＢ側を鉗子で止めＱＦ側に同様にＴｗｅｅｎ８０溶液を１分間流した。ＱＢ側の鉗子を外し、ＱＢ＝ＱＦ＝５０（ｍｌ／分）で上記Ｔｗｅｅｎ８０溶液をさらに５分間循環した。
つぎにミリポアフィルター０．２２μｍ（型番；ＭＣＧＬ　４０Ｓ０３）を通した純水をＱＢ側より１４０（ｍｌ／分）で通水（通水後ブロー）し、ＱＦ側より７０（ｍｌ／分）でブローすることにより洗浄を行った。ブロー液をＱＢ側・ＱＦ側それぞれで経時サンプリングを行いＴＯＣ測定を実施し、ＴＯＣ値がゼロになるまで洗浄を続けた（表３）。
洗浄終了後の血漿分離膜は、γ線滅菌（５０ＫＧｙ）を実施し充填液を滅菌後溶出試験用にサンプリングし、テトラチオシアナトコバルト（ＩＩ）酸アンモニウムを用いた定量（ＪＩＳ　Ｋ３３６３）の改良法にて測定を行った（表３）。このときのＴｗｅｅｎ８０の膜への吸着量は、２７（ｍｇ／膜の乾燥重量ｇ）であった。
γ線滅菌後のＴｗｅｅｎ８０の抽出は、上記膜２本当たり５００ｍｌの生理食塩液を用い、温度４０℃にてＱＢ側１３０ｍｌ／分、ＱＦ側３０ｍｌ／分で２時間循環を行った。抽出液はエバポレーターにて濃縮後、テトラチオシアナトコバルト（ＩＩ）酸アンモニウムを用いた定量（ＪＩＳ　Ｋ３３６３）の改良法にて測定を行った（表３）。
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〔血液との相互作用〕
この血漿分離膜の内部より膜を切り出し、長さ１ｃｍに膜を切断したものを５０本用意した。さらに血液が膜内面に十分接触できるように膜を長さ方向（縦方向）に２分割した（計１００本）。該膜をＰＰ製のチューブ（６ｍｌ用、Ｆａｌｃｏｎ　２０６３）に入れた。ヘパリンを添加した生理食塩液（ヘパリン濃度２ＩＵ／ｍｌ）５ｍｌを添加し、撹拌後上清を除去した。再度ヘパリン添加生理食塩液を入れ、同様の操作を合計３回繰り返すことにより膜の洗浄を行った。上清を十分に除去した後に、健常人ボランティアより採血（２ＩＵ／ｍｌのヘパリンで抗凝固）した血液を１．５ｍｌ添加し、ゆっくり転倒混和を行った。つぎに３７℃の恒温水槽中にいれ、振とう数７０回／分にて４０分間振とうを行った。所定時間後、血液をＰＰ製のチューブ（６ｍｌ用、Ｆａｌｃｏｎ　２０６３）に１ｍｌ入れ血球数を血球カウンター（Ｍｉｃｒｏｃｅｌｌ　Ｃｏｕｎｔｅｒ　ＣＣ−１８０　シスメックス（株））にて測定した。
実施例４
非イオン性界面活性剤であるポリオキシエチレンソルビタンモノラウレート（Ｔｗｅｅｎ２０、日光ケミカル（株）、分子量約１，０００）を用いた以外は、実施例３と同様の方法で処理・評価を行い、その結果を表４に示した。
このときのポリオキシエチレンソルビタンモノラウレートの前記膜への吸着量は、１９（ｍｇ／膜の乾燥重量ｇ）であった。
実施例５
親水化剤として精製卵黄レシチン（和光純薬（株）、分子量約１，０００）を用いた以外は、実施例３と同様の方法で処理・評価を行い、その結果を表４に示した。
このときの精製卵黄レシチンの前記膜への吸着量は、３３（ｍｇ／膜の乾燥重量ｇ）であった。
実施例６
親水化剤としてポリオキシエチレン硬化ひまし油６０（和光純薬（株）、分子量約６００）を用いた以外は、実施例３と同様の方法で処理・評価を行い、その結果を表４に示した。
このときのポリオキシエチレン硬化ひまし油６０の前記膜への吸着量は、４８（ｍｇ／膜の乾燥重量ｇ）であった。
参考例２
ポリスルホン膜を入れない以外は、実施例３と同様の方法で処理・評価を行い、その結果を表４に示した。
比較例７
実施例３で用いたポリスルホン膜を親水化剤処理せずにそのまま使用した以外は、実施例３と同様の方法で処理・評価を行い、その結果を表４に示した。
比較例８
ポリエチレングリコール（和光純薬（株）、分子量８，０００）を用いた以外は、実施例３と同様の方法で処理・評価を行い、その結果を表４に示した。
比較例９
ポリプロピレングリコール（旭硝子（株）、分子量４，０００）を用いた以外は、実施例３と同様の方法で処理・評価を行い、その結果を表４に示した。
赤血球の付着率に関しては、実施例、比較例ともに低く１０％未満であり、ほとんど付着していないことがわかる（表４）。
白血球に関しては、比較例が約１５％〜３０％の付着率を示したのに対し、実施例では約１０％〜１５％の付着率に留まり、白血球の付着を抑制する効果が認められた（表４）。
血小板に関しては、実施例３、４、５、６ともに５％未満の付着率であり、血小板の膜への付着は著しく抑制されていることがわかる（表４）。一方、未処理ポリスルホン膜（比較例７）、および現在使用されている一般的な親水化剤で処理した比較例（比較例８、９）では、血小板数は著しく減少し、膜への付着が大きいことがわかる（表４）。
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以上のことから、数平均分子量５００〜８，０００の界面活性作用を有する物質を吸着させ、充分に洗浄し実質的に膜に極微量吸着させるという非常に簡便で、低コストな方法で、オートクレーブ滅菌やγ線滅菌後においても高い血球の付着抑制効果を発現させることが可能になった。
産業上の利用可能性
本発明によれば、膜の劣化や強度低下を起こさず、低コストで簡便に親水化処理することが可能になり、かつ白血球や血小板の付着を大幅に抑制することが可能になった。その結果、これまで血球の付着などの問題で使用に制限があった医療用器具などを含め、安定した通血が可能となった。また親水化処理後は、乾燥した状態でも、生理食塩液や蒸留水などと接触させたいずれの状態でも保存が可能であり、オートクレーブやγ線照射による滅菌後においても、高い血液適合性を長期に渡り維持することが可能となった。
【国際調査報告】
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