(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
アゾール系抗真菌物質１部（重量）に対してラクトフェリンが１００部〜３２，０００部（重量）の割合で含有することを特徴とする抗真菌剤。
【請求項２】
アゾール系抗真菌物質が、クロトリマゾール、ケトコナゾール、ラノコナゾール、イトラコナゾール又はこれらの混合物である請求項１に記載の抗真菌剤。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【産業上の利用分野】
本発明は、アゾール系抗真菌物質及びラクトフェリンを有効成分として含有し、低濃度で強い抗真菌作用を呈する抗真菌剤に関するものであり、更に詳しくは、本発明は、アゾール系抗真菌物質と哺乳動物の主として乳汁中に存在する生理活性蛋白質であるラクトフェリンとを併用することにより、従来のアゾール系抗真菌剤と比較してその有効成分の使用量を顕著に低減することを可能とすると共に、少用量で強い抗真菌効果が得られ、副作用が少なく、耐性菌の出現頻度を低下させることが可能な新規抗真菌剤に関する。
【０００２】
【従来の技術】
表在性真菌症は、起因菌の侵襲が表皮、毛髪、爪等の角化組織、口腔、膣等の皮膚に隣接する粘膜部位に限定される疾患と定義され、発生頻度が最も高い疾患である。代表的な表在性真菌症の一つとして知られている皮膚糸状菌症（白癬）の発症率は、全人口の１０％以上にも及び、しかもその再発又は再感染を反復する症例も多数認められ、その病態も足白癬、体部白癬、股部白癬等多様な病態が知られている。
【０００３】
他の代表的な表在性真菌症としては、カンジダ症が知られている。カンジダ症については、例えば、口腔カンジダ症、食道・腸管カンジダ症、外陰膣カンジダ症等の疾患が、カンジダ属真菌の侵襲によって惹起され、その他にも、腎盂腎炎、間擦疹、指間びらん症、爪囲爪炎、膀胱炎等のカンジダ症も多く知られている。また、腸管でのカンジダ属真菌の異常増殖がアトピー性皮膚炎の原因になっていることも報告されている（アレルギーの臨床、第１１巻、第７６８〜７７２ページ、１９９１年）。
【０００４】
一方、近年、重篤な深在性真菌症が急激に増加しているが、その背景には、広域抗生物質、抗癌剤、臓器移植における免疫抑制剤、経口避妊薬等多くの薬剤の投与及び高カロリー輸液、留置カテーテル等の使用、更には、エイズ疾患等易感染状態にある患者の急増等の問題があり、それらが、臨床上の大きな問題となっている。
【０００５】
従来、内用抗真菌剤として真菌症の治療に使用される抗真菌剤は、ポリエン系のアムホテリシンＢ、フルオロピリジン系のフルシトシン、イミダゾール系（アゾール系）のミコナゾール及びトリアゾール系（アゾール系）のフルコナゾールの４剤のみであったが、１９９３年９月にアゾール系のイトラコナゾールが市販された。
【０００６】
これらの抗真菌剤の対象となる病原真菌の種類と薬剤感受性は、それぞれの抗真菌剤によって異なるが、これらの対象となる病原真菌の種類は、例えば、カンジダ属、クリプトコッカス属、アスペルギルス属、トリコフィトン属、マラセチア属、コキディオイデス属等が代表的なものである。
【０００７】
アゾール系として総称される抗真菌物質は、イミダゾール環又はトリアゾール環を有し、生物活性においても類似の性状を示している。これらの抗真菌剤は、特に真菌細胞の小胞体に局在するエルゴステロール合成経路におけるステロール・Ｃ−１４脱メチル反応に対する反応障害が、その抗真菌活性の作用機序となっている点で共通している。
【０００８】
従来、もっぱら単独製剤として用いられているこのような内用抗真菌剤の使用の現状は、アゾール剤の占有率が大きい。アゾール剤がこのように常用されているのは、アムホテリシンＢ及びフルシトシンと比較して比較的安全性が高いこと、耐性菌が出現し難いこと等の利点によるものである。しかしながら、最大の占有率を有するフクコナゾール（アゾール系抗真菌剤）についても、カンジダ症及びクリプトコッカス症に対する有効率の高さに比較して、アスペルギルス症に対する有効率が低いことが報告されている（化学療法の領域、第１０巻、第１７〜２６ページ、１９９４年）。
【０００９】
一般にアゾール剤は静菌的に作用するので、患者の感染抵抗力が著しく低下している場合又は侵襲性の重篤な感染が惹起されている場合には奏効し難いとされている（化学療法の領域、第１０巻、第１７〜２６ページ、１９９４年）。このように、現在のアゾール剤には、殺菌的作用が存在しないため、比較的多量の薬剤の長期間投与が必要とされている（化学療法の領域、第１０巻、第１７〜２６ページ、１９９４年）。従って、このような抗真菌剤については、それらの長期大量投与による肝障害、腎障害、下痢、嘔吐等の副作用の発生が、臨床上問題とされており、更に、それらの長期投与によってもたらされる真菌症原因菌の薬剤耐性化の問題が危惧されている。
【００１０】
一方、ラクトフェリンは生体の有する抗菌性蛋白質であり、真菌類に対しても抗菌性を発揮することが知られている［インフェクション・アンド・イミュニティー(Infection and Immunity)、第６０巻、第４６０４〜４６１１ページ、１９９２年］。ラクトフェリンは、病原菌感染による急性炎症時などに生体内において多量に合成される生体蛋白質として重要な役割を有することが知られているが、例えば、ウシ・ラクトフェリンは、牛乳中にごく微量含まれる生理活性蛋白質の一つであって、その抗菌活性は、生体内における生理活性レベルのものであることから、例えば、従来のアゾール系抗真菌剤等の公知の抗菌剤と比較した場合には、その抗菌活性はほとんど比較にならない低いレベルのものと称しても過言ではない。従来、抗菌剤とラクトフェリンとの組み合わせとしては、ベータラクタム系抗生物質とウシ・ラクトフェリンとを含む医薬組成物について報告されている（特開平３−１８１４２１号公報）が、これは、あくまでベータラクタム系抗生物質に関するものであって、従来、アゾール系抗真菌剤がラクトフェリンとの関係で論じられた例は全くなく、また、アゾール系抗真菌剤とラクトフェリンとを組み合わせることにより抗真菌活性が増強されることについてはこれまで知られておらず、報告も皆無である。
このような従来技術の情況から、前記アゾール系抗真菌剤等について、少量の使用で殺菌的作用を有する抗真菌剤、すなわち、副作用が少なく、かつ強い抗真菌作用を有する抗真菌剤の開発が待望されていた。
【００１１】
【発明が解決しようとする課題】
本発明者らは、前記従来技術に鑑みて新規な抗真菌剤について鋭意研究を行った結果、アゾール系抗真菌物質にラクトフェリンを添加することにより、アゾール系抗真菌剤が、従来の用量よりもはるかに少用量で、強い抗真菌活性を発揮することを見い出し、本発明を完成した。
【００１２】
本発明の目的は、少用量で有効であり、副作用が少なく、耐性菌の出現頻度が少ない抗真菌剤を提供することである。
【００１３】
【課題を解決するための手段】
前記課題を解決する本発明は、アゾール系抗真菌物質１部（重量）に対してラクトフェリンが１００部〜３２，０００部（重量）の割合で含有する抗真菌剤であり、アゾール系抗真菌物質が、クロトリマゾール、ケトコナゾール、ラノコナゾール、イトラコナゾール又はこれらの混合物であることを望ましい態様としてもいる。
【００１４】
次に本発明について詳述する。
本発明に使用するアゾール系抗真菌物質は、従来からアゾール系抗真菌剤として用いられているアゾール系抗真菌物質のいずれでもよいが、特に、クロトリマゾール、ケトコナゾール又はイトラコナゾールが好ましいものとして例示される。
【００１５】
本発明に用いられるラクトフェリン（lactoferrin ）は、牛乳、人乳、その他の乳から常法により調製したもの、遺伝子工学的に製造されるラクトフェリン相同標品等から調製したもの、又はその塩等を用いることができるが、その純度は９０％（重量。以下吸光度の表示を除き、特に断りのない限り同じ）以上であることが好ましく、純度９５％以上が特に好ましい。また金属を結合していないアポラクトフェリン、鉄、亜鉛等の金属を結合したホロラクトフェリンであってもよく、ラクトフェリンであれば、その種類は特に限定されない。
【００１６】
本発明の抗真菌剤は、後記する試験例から明らかなとおり、アゾール系抗真菌物質１部（重量。以下同じ）に対して少なくとも１００部、望ましくは２，０００〜３２，０００部、の割合でラクトフェリンが配合されている場合に、ラクトフェリンの併用効果が奏される。ラクトフェリンの配合量が１００部未満の場合は、ラクトフェリンの併用による抗真菌効果の増強が認められず、３２，０００部を超える場合は、ラクトフェリンの増加による抗真菌効果の増強が認められない。
【００１７】
本発明の抗真菌剤は、常法により、錠剤、顆粒剤、液剤、及び粉剤などに製剤化することが可能であり、公知の方法により経口剤、注射剤、膣剤、トローチ剤、軟膏、ローション剤等に加工することができ、これらを使用する場合、これに含有されている公知の抗真菌剤の投与方法と同様にして投与することができる。また、本発明の抗真菌剤の用量は、後記する試験例から明らかなとおり、従来のアゾール系抗真菌剤の用量の１／４又は１／１６以下であっても、従来のアゾール系抗真菌剤と同等又はそれ以上の抗真菌活性を有する、という、従来技術からは予期し得ない格別顕著な併用効果が得られる。本発明の抗真菌剤中の有効成分の含量は、アゾール系抗真菌物質が少なくとも３．１ｎｇ／ｍｌ、ラクトフェリンが少なくとも１０μｇ／ｍｌである。
ラクトフェリンは、食品として摂取されている牛乳等の一成分であり、また食品としても利用されるものであり、それ自体、全く毒性を示さず、本発明によれば、当該ラクトフェリンを併用することにより、副作用が問題とされる従来の抗真菌剤の使用量を顕著に低減することが可能であり、これにより、安全な抗真菌剤を提供することができる。上記抗真菌剤の使用量の低減効果は、ラクトフェリンを共存させた場合にはじめて得られるアゾール系抗真菌物質に特有のものであり、これまで報告されていない新規なものである。
【００１８】
次に試験例を示して本発明を更に詳述する。
試験例１
１）試料の調製
アゾール系抗真菌物質としてケトコナゾール（シグマ社製）を使用し、これをジメチルスルフォキサイド（ナカライテスク社製）に溶解した。ウシ・ラクトフェリン（森永乳業社製）は蒸留水に溶解し、滅菌濾過を行った。
【００１９】
２）試験方法
試験管にサブロー・デキストロース・ブロス（１％ペプトン、２％グルコース）を試験培地として１ｍｌ秤取し、培地１ｍｌ当たり表１に示す濃度でケトコナゾールを添加し、対照試料（単用）とした。一方、前記ブロスを試験培地として１ｍｌ秤取し、試験薬剤として、培地１ｍｌ当たり１００μｇの割合でラクトフェリンを添加し、更に表１に示す濃度でケトコナゾールを添加し、試験試料（併用）とした。
【００２０】
試験菌としてカンジダ・アルビカンス（Candida albicans) ＴＩＭＭ１７６８株（帝京大学医真菌センターから入手）を寒天スラントから掻き取り、これを、最終菌濃度約１０5 ／ｍｌの割合で前記各試料に添加し、３７℃で１７時間培養し、のち６３０ｎｍで吸光度を測定し、菌の増殖率を判定した。
菌の増殖率の判定は、試験薬剤を添加しなかった試験管の示す吸光度を１００％としたとき、吸光度が２５％より大きい試験管を増殖（＋）、２５％以下の試験管を未増殖（−）と判定し、それを、表１に示した。
【００２１】
３）試験結果
この試験の結果は表１に示すとおりである。表１から明らかなように、ウシ・ラクトフェリン１００μｇ／ｍｌ単独では菌の増殖を抑制し得なかった。一方、ケトコナゾール単独では５０ｎｇ／ｍｌで菌の増殖を抑制したが、ウシ・ラクトフェリン１００μｇ／ｍｌが共存することによって、菌の増殖を抑制するのに必要なケトコナゾール量は３．１ｎｇ／ｍｌ（対象試料の１／１６）にまで低減した。このことは、ラクトフェリンを共存させることによって、アゾール系抗真菌剤の使用量を顕著に低減できる程度に抗真菌活性を増強し得ることを示す。尚、真菌及びラクトフェリンの種類を変更して試験したが、ほぼ同様の結果が得られた。
【００２２】
【表１】
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【００２３】
試験例２
１）試料の調製
アゾール系抗真菌物質としてクロトリマゾール（シグマ社製）を用いたことを除き、試験例１と同一の方法により試料を調製した。
【００２４】
２）試験方法
試験例１と同一の方法によって試験を行った。
【００２５】
３）試験結果
この試験の結果は表２に示すとおりである。表２から明らかなように、ウシ・ラクトフェリン１００μｇ／ｍｌ単独では菌の増殖を抑制し得なかった。一方、クロトリマゾール単独では５０ｎｇ／ｍｌで菌の増殖を抑制したが、ウシ・ラクトフェリン１００μｇ／ｍｌが共存することによって、菌の増殖を抑制するのに必要なクロトリマゾール量は１２．５ｎｇ／ｍｌ（１／４）にまで低減した。このことは、ラクトフェリンを共存させることによって、アゾール系抗真菌剤の使用量を顕著に低減できる程度に抗真菌活性を増強できることを示す。真菌及びラクトフェリンの種類を変更して試験したが、ほぼ同様の結果が得られた。
【００２６】
【表２】
0003849988.tif 000003
【００２７】
試験例３
１）試料の調製
アゾール系抗真菌物質としてイトリゾール（登録商標。ヤンセン協和社製）のカプセル５０から精製したイトラコナゾールを用いたことを除き、試験例１と同一の方法により試料を調製した。
【００２８】
２）試験方法
試験例１と同一の方法によって試験を行った。
【００２９】
３）試験結果
この試験の結果は表３に示すとおりである。表３から明らかなように、ウシ・ラクトフェリン１００μｇ／ｍｌ単独では菌の増殖を抑制し得なかった。一方、イトラコナゾール単独では５０ｎｇ／ｍｌで菌の増殖を抑制したが、ウシ・ラクトフェリン１００μｇ／ｍｌが共存することによって、菌の増殖を抑制するのに必要なイトラコナゾール量は１２．５ｎｇ／ｍｌ（１／４）にまで低減した。このことは、ラクトフェリンを共存させることによって、アゾール系抗真菌剤の使用量を顕著に低減できる程度に抗真菌活性を増強できることを示す。真菌及びラクトフェリンの種類を変更して試験したが、ほぼ同様の結果が得られた。
【００３０】
【表３】
0003849988.tif 000004
【００３１】
試験例４
１）試料の調製
アゾール系抗真菌物質としてアスタット（登録商標。ツムラ社製）液から精製したラノコナゾールを用いたこと及びラノコナゾールの濃度を試験培地１ｍｌ当たり２００μｇとした試料を調製したことを除き、試験例１と同一の方法により試料を調製した。
【００３２】
２）試験方法
試験例１と同一の方法によって試験を行った。
【００３３】
３）試験結果
この試験の結果は表４に示すとおりである。表４から明らかなように、ウシ・ラクトフェリン１００μｇ／ｍｌ単独では菌の増殖を抑制し得なかった。一方、ラノコナゾール単独では２００ｎｇ／ｍｌで菌の増殖を抑制したが、ウシ・ラクトフェリン１００μｇ／ｍｌが共存することによって、菌の増殖を抑制するのに必要なラノコナゾール量は５０ｎｇ／ｍｌ（１／４）にまで低減した。このことは、ラクトフェリンを共存させることによって、アゾール系抗真菌剤の使用量を顕著に低減できる程度に抗真菌活性を増強できることを示す。真菌及びラクトフェリンの種類を変更して試験したが、ほぼ同様の結果が得られた。
【００３４】
【表４】
0003849988.tif 000005
【００３５】
試験例５
１）試料の調製
アゾール系抗真菌物質としてクロトリマゾール（シグマ社製）を用いたこと及びヒト・ラクトフェリン（シグマ社製）を用いたことを除き、試験例１と同一の方法により試料を調製した。
【００３６】
２）試験方法
試験例１と同一の方法によって試験を行った。
【００３７】
３）試験結果
この試験結果は表５に示すとおりである。表５から明らかなように、ヒト・ラクトフェリン１００μｇ／ｍｌ単独では菌の増殖を抑制し得なかった。一方、クロトリマゾール単独では５０ｎｇ／ｍｌで菌の増殖を抑制したが、ヒト・ラクトフェリン１００μｇ／ｍｌが共存することによって、菌の増殖を抑制するのに必要なクロトリマゾール量は１２．５ｎｇ／ｍｌ（１／４）にまで低減した。このことは、ラクトフェリンを共存させることによって、アゾール系抗真菌剤の使用量を顕著に低減できる程度に抗真菌活性を増強できることを示す。真菌及びラクトフェリンの種類を変更して試験したが、ほぼ同様の結果が得られた。
【００３８】
【表５】
0003849988.tif 000006
【００３９】
試験例６
１）試料の調製
アゾール系抗真菌物質としてクロトリマゾール（シグマ社製）を用いたこと及びウシ・アポラクトフェリン（森永乳業社製）を用いたことを除き、試験例１と同一の方法により試料を調製した。
【００４０】
２）試験方法
試験例１と同一の方法によって試験を行った。
【００４１】
３）試験結果
この試験の結果は表６に示すとおりである。表６から明らかなように、ウシ・アポラクトフェリン１００μｇ／ｍｌ単独では菌の増殖を抑制し得なかった。一方、クロトリマゾール単独では５０ｎｇ／ｍｌで菌の増殖を抑制したが、ウシ・アポラクトフェリン１００μｇ／ｍｌが共存することによって、菌の増殖を抑制するのに必要なクロトリマゾール量は３．１ｎｇ／ｍｌ（１／１６）にまで低減した。このことは、ラクトフェリンを共存させることによって、アゾール系抗真菌剤の使用量を顕著に低減できる程度に抗真菌活性を増強できることを示す。真菌及びラクトフェリンの種類を変更して試験したが、ほぼ同様の結果が得られた。
【００４２】
【表６】
0003849988.tif 000007
【００４３】
試験例７
１）試料の調製
ウシ・鉄飽和ラクトフェリン（森永乳業社製）を用いたことを除き、試験例６と同一の方法により試料を調製した。
【００４４】
２）試験方法
試験例１と同一の方法によって試験を行った。
【００４５】
３）試験結果
この試験の結果は表７に示すとおりである。表７から明らかなように、ウシ・鉄飽和ラクトフェリン１００μｇ／ｍｌ単独では菌の増殖を抑制し得なかった。一方、クロトリマゾール単独では５０ｎｇ／ｍｌで菌の増殖を抑制したが、ウシ・鉄飽和ラクトフェリン１００μｇ／ｍｌが共存することによって、菌の増殖を抑制するのに必要なクロトリマゾール量は１２．５ｎｇ／ｍｌ（１／４）にまで低減した。このことは、ラクトフェリンを共存させることによって、アゾール系抗真菌剤の使用量を顕著に低減できる程度に抗真菌活性を増強できることを示す。真菌及びラクトフェリンの種類を変更して試験したが、ほぼ同様の結果が得られた。
【００４６】
【表７】
0003849988.tif 000008
【００４７】
試験例８
１）試料の調製
ウシ・ラクトフェリン（森永乳業社製）を用いたこと及びクロトリマゾールの濃度を試験培地１ｍｌ当たり２００μｇとした試料を調製したことを除き、試験例６と同一の方法により試料を調製した。
【００４８】
２）試験の方法
試験菌としてトリコフィトン・メンタグロファイテス（Trichophyton mentagrophytes)ＴＩＭＭ１１８９株（帝京大学医真菌センターから入手）の胞子を寒天スラントから掻き取り、これを、最終胞子濃度約１０4 ／ｍｌの割合で試験培地に添加し、２７℃で４日間培養したことを除き、試験例１と同様の方法によって試験した。
【００４９】
３）試験結果
この試験の結果は表８に示すとおりである。表８から明らかなように、ウシ・ラクトフェリン１００μｇ／ｍｌ単独では菌の増殖を抑制し得なかった。一方、クロトリマゾール単独では２００ｎｇ／ｍｌで菌の増殖を抑制したが、ウシ・ラクトフェリン１００μｇ／ｍｌが共存することによって、菌の増殖を抑制するのに必要なクロトリマゾール量は５０ｎｇ／ｍｌ（１／４）にまで低減した。このことは、ラクトフェリンを共存させることによって、アゾール系抗真菌剤の使用量を顕著に低減できる程度に抗真菌活性を増強できることを示す。真菌及びラクトフェリンの種類を変更して試験したが、ほぼ同様の結果が得られた。
【００５０】
【表８】
0003849988.tif 000009
【００５１】
【実施例】
次に実施例により本発明を更に具体的に説明するが、本発明は以下の実施例により何ら限定されるものではない。
実施例１
ケトコナゾール（シグマ社製）１ｍｇに対してウシ・ラクトフェリン（森永乳業社製）１０ｇの割合で混合し、内服用抗真菌剤を製造した。
【００５２】
実施例２
注射用水（大塚製薬社製）１０ｍｌに、ケトコナゾール（シグマ社製）１ｍｇ、ヒト・ラクトフェリン（シグマ社製）１ｇ及び塩化ナトリウム（和光純薬社製）１００ｍｇの割合で溶解し、ｐＨを７に調整し、濾過滅菌し、１ｍｌずつアンプルに充填し、注射用の抗真菌剤１０本を得た。
【００５３】
実施例３
ウシ・アポラクトフェリン（森永乳業社製）１０ｇ、パラオキシ安息香酸メチル（ナカライテスク社製）０．１ｇ、パラオキシ安息香酸プロピル（ナカライテスク社製）０．１ｇ、プロピレングリコール（ナカライテスク社製）１２ｇ、精製水２７．８ｇを加温しながら撹袢溶解した。別に予め、クロトリマゾール（シグマ社製）５ｍｇ、白色ワセリン（ナカライテスク社製）２５ｇ、ステアリルアルコール（ナカライテスク社製）２０ｇ、ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油（ナカライテスク社製）４ｇ、モノステアリン酸グリセリン（ナカライテスク社製）１ｇを加温しながら撹袢混合した溶液を前記溶液に添加し、ホモミキサーを用いて乳化し、Ｏ／Ｗ型クリームを調製し、１０ｇずつアルミチューブに充填し、外用抗真菌剤１０個を得た。
【００５４】
【発明の効果】
以上詳述したとおり、本発明は、アゾール系抗真菌物質及びラクトフェリンを有効成分として含有する抗真菌剤であり、本発明により奏せられる効果は次のとおりである。
１）本発明の抗真菌剤は、少用量で強い抗真菌効果を有するので、種々の真菌症の治療剤として使用できる。
２）本発明の抗真菌剤は、消化管内でのカンジダ菌の異常増殖の阻止手段としても、安全に使用できる。
３）本発明の抗真菌剤は、副作用が少なく、耐性菌の出現頻度が低下する。
４）本発明によれば、抗真菌作用を示さない低濃度レベルのラクトフェリンの併用で、アゾール系抗真菌剤の使用量を顕著に低減することができる。