(57)【要約】（＋）−Ｎ，Ｎ’−プロピレンジニコチンアミドまたはその薬学上許容しうる塩を有効成分として含有する脳循環障害治療剤。（＋）−Ｎ，Ｎ’−プロピレンジニコチンアミドまたはその薬学上許容しうる塩は、従来知られていた（±）−Ｎ，Ｎ’−プロピレンジニコチンアミド（ニカラベン）よりも優れた有用性と安全性を示す。【特許請求の範囲】
【請求項１】
（＋）−Ｎ，Ｎ’−プロピレンジニコチンアミドまたはその薬学上許容しうる塩を有効成分として含有することを特徴とする脳循環障害治療剤。
【請求項２】
注射剤であることを特徴とする請求項１記載の脳循環障害治療剤。
【請求項３】
（＋）−Ｎ，Ｎ’−プロピレンジニコチンアミドまたはその薬学上許容しうる塩の濃度が、０．１ｍｇ／ｍｌ〜１０００ｍｇ／ｍｌである請求項１記載の脳循環障害治療剤。
【請求項４】
脳循環障害が、急性期脳血管障害である請求項１記載の脳循環障害治療剤。
【請求項５】
急性期脳血管障害が、急性期の脳内出血、脳梗塞またはくも膜下出血である請求項４記載の脳循環障害治療剤。
【発明の詳細な説明】
技術分野
本発明は、（＋）−Ｎ，Ｎ’−プロピレンジニコチンアミドまたはその薬学上許容しうる塩を有効成分として含有する脳循環障害治療剤に関する。
背景技術
（±）−Ｎ，Ｎ’−プロピレンジニコチンアミド（一般名：ニカラベン）が急性期の脳循環障害治療剤として使用可能であることは知られている。例えば、くも膜下出血後の脳血管攣縮あるいは脳虚血後の浮腫の発生や神経細胞死に、フリーラジカルとその反応生成物である脂質過酸化物が関与することが知られているが、ニカラベンは、フリーラジカル、特に細胞毒性の強いヒドロキシラジカルを特異的に補足することから、脳循環障害治療剤として期待されている（特公昭６１−５５９１１）。また、ニカラベンは、臓器保存剤や放射線障害抑制剤等に有用であることも知られている（特開平７−１７８０１、特開平６−１４５０５７）。
ニカラベンには不斉炭素が１個あり、２種の光学異性体が存在するが、ニカラベンの有用性については、専らそのラセミ体を用いて検討されていた。従来、ニカラベンを光学異性体である（＋）−Ｎ，Ｎ’−プロピレンジニコチンアミドと（−）−Ｎ，Ｎ’−プロピレンジニコチンアミドに分割して、それらの各種動物種間での代謝の違いについての報告はある（シンポジウム「モレキュラー　キラリティ」平成４年４月、要旨集第２０９−２１３頁）が、薬効について検討されたことは無かった。
発明の開示
本発明者は、（＋）−Ｎ，Ｎ’−プロピレンジニコチンアミド、（−）−Ｎ，Ｎ’−プロピレンジニコチンアミドおよび（±）−Ｎ，Ｎ’−プロピレンジニコチンアミドの薬効についての違いを検討したところ、（＋）−Ｎ，Ｎ’−プロピレンジニコチンアミドが高活性を示すことを見出し、本発明を完成するに至った。
本発明は、（＋）−Ｎ，Ｎ’−プロピレンジニコチンアミドまたはその薬学上許容しうる塩を有効成分として含有することを特徴とする脳循環障害治療剤を提供する。
発明を実施するための最良の形態
本発明において用いる（＋）−Ｎ，Ｎ’−プロピレンジニコチンアミドは、例えば、特公昭６１−５５９１１号公報、特許第２８１５４３８号公報に記載された方法で合成された（±）−Ｎ，Ｎ’−プロピレンジニコチンアミド（ニカラベン）を、公知の方法に従って光学分割することによって得ることができる。また、（＋）−Ｎ，Ｎ’−プロピレンジニコチンアミドは、次の方法に従って得ることもできる。例えば、（±）−１，２−ジアミノプロパンと（＋）−酒石酸の塩を形成し、ジアステレオマーの溶解度の差を利用し、（＋）体の酒石酸塩と（−）体の酒石酸塩を精製する。次いで、（＋）体の酒石酸塩を水酸化カルシウムでフリーとし、水溶液のまま、ショッテンバウマン法にてニコチン酸クロリド塩酸塩と反応させビスニコチノイル化し、シリカゲルカラムクロマトグラフィー（１０％メタノール／トリクロロエチレン）や溶媒（エタノール、アセトン等）による再結晶等により精製することにより得られる。
また、（＋）−Ｎ，Ｎ’−プロピレンジニコチンアミドは薬学上許容しうる有機酸または無機酸と酸付加塩を形成することができ、これらの塩も本発明において用いることができる。このような酸付加塩としては、例えば塩酸塩、臭化水素塩、硫酸塩、リン酸塩、硝酸塩、シュウ酸塩、乳酸塩、酒石酸塩、酢酸塩、サリチル酸塩、安息香酸塩、ギ酸塩、プロピオン酸塩、ピバリン酸塩、ジエチル酸塩、マロン酸塩、コハク酸塩、ピメリン酸塩、フマル酸塩、マレイン酸塩、リンゴ酸塩、スルファミン酸塩、フェニルプロピオン酸塩、グルコン酸塩、アスコルビン酸塩、メタンスルホン酸塩、ｐ−トルエンスルホン酸塩、クエン酸塩、アジピン酸塩またはナフタリンジスルホン酸塩等があげられる。
本発明の脳循環障害治療剤を生体に投与する場合は、経口的にあるいは直腸内、皮下、髄腔内、静脈内、動脈内、経皮等の非経口的に投与することができるが、好ましくは静脈内あるいは髄腔内に投与するのがよい。生体に投与する場合、（＋）−Ｎ，Ｎ’−プロピレンジニコチンアミドまたはその塩は適当な剤型に製剤化して用いるのが好ましく、例えば、錠剤、散剤、顆粒剤、細粒剤、丸剤、カプセル剤、トローチ剤、チュワブル剤、液剤、乳剤、懸濁剤、坐剤、シロップ剤、ローション剤、軟膏剤、パップ剤等の製剤で用いることができる。これらの剤型に製剤化するには薬学上許容しうる適当な担体、賦形剤、添加剤等を用いて行うことができる。
本発明の脳循環障害治療剤を静脈内または髄腔内投与する際に好ましい剤型は液剤であり、液剤を調製するには、例えば、精製水、生理食塩水、エタノール・プロピレングリコール・グリセリン・ポリエチレングリコール等のアルコール類、トリアセチン等の溶媒を用いて行うことができる。このように調製した液剤は、例えば、乳酸リンゲル液、維持液、術後回復液、脱水補給液、点滴用生理食塩液等に希釈して用いることができる。このような製剤にはさらに防腐剤、湿潤剤、乳化剤、分散剤、安定剤のような補助剤を加えても良い。また懸濁剤として投与することも好ましい剤型の１つといえる。
また、錠剤、丸剤、散剤、顆粒剤、細粒剤、トローチ剤、チュアブル剤等の固形製剤を調製するには、例えば、重炭酸ナトリウム、炭酸カルシウム、デンプン、ショ糖、マンニトール、カルボキシメチルセルロース等の担体、ステアリン酸カルシウム、ステアリン酸マグネシウム、グリセリン等の添加剤を加えて常法により行うことができる。また、セルロースアセテートフタレート、ヒドロキシプロピルメチルセルロースフタレート、ポリビニルアルコールフタレート、スチレン−無水マレイン酸共重合体、メタクリル酸−メタクリル酸メチル共重合体等の腸溶性物質の有機溶媒あるいは水中溶液を吹き付けて、腸溶性被膜を施して、腸溶性製剤として製剤化することもできる。薬学上許容しうる担体には、その他通常、必要により用いられる補助剤、芳香剤、安定剤あるいは防腐剤を含む。
本発明において、（＋）−Ｎ，Ｎ’−プロピレンジニコチンアミドまたはその薬学上許容しうる塩の投与量は対象患者の状態、体型、体質、年齢、性別、また投与経路、剤型等に基づき適宜選択することができるが、一般に、製剤中濃度で０．１ｍｇ／ｍｌ〜１０００ｍｇ／ｍｌ、好ましくは、５ｍｇ／ｍｌ〜５００ｍｇ／ｍｌとなる範囲で用いられる。
実施例
以下に、本発明を実施例に基づいて更に詳しく説明するが、これらは本発明を何ら限定するものではない。
実施例１
要約：
スナネズミを用いて、両側総頸動脈を結紮／再灌流させて一過性全脳虚血モデルを作製し、ニカラベン（ラセミ体）、およびそれを構成する光学異性体である（＋）体と（−）体の海馬ＣＡＩでの、遅延型神経細胞死に対する有効性を検討した。麻酔下で両側総頸動脈を５分間結紮した後、再灌流させた。溶媒または被験物質は、頸静脈内から両側総頸動脈結紮１２０分後に、２００ｍｇ／２ｍＬ／ｋｇのｂｏｌｕｓ投与を行い、引き続き、６０ｍｇ／０．１ｍＬ／ｋｇ／ｂｏｄｙ／ｈｒの７日間の定速持続注入を行った。総頸動脈結紮７日後に動物を麻酔し、脳を摘出して定法に従いパラフィン固定し、海馬切片を作製して染色し、海馬ＣＡＩの生存神経細胞数を計測した。偽手術群および溶媒対照群の生存神経細胞数は、それぞれ１９６．７および１４．９　ｃｅｌｌｓ／ｍｍとなり、溶媒対照群では偽手術群と比較して顕著な神経細胞死が認められた。被験物質群では、（＋）、（−）およびニカラベンで生存神経細胞は、それぞれ３９．３、１７．３および２３．０ｃｅｌｌｓ／ｍｍとなり、溶媒対照群と比較して、（＋）体で生存神経細胞数の減少が有意に抑制された。このような結果から、ニカラベンの２つの光学異性体のうち、（＋）体のみが両側総頸動脈の５分間脳虚血／再灌流による海馬ＣＡＩでの遅延型神経細胞死に対して抑制効果を示し、脳保護作用を有することが確認された。
試験：
ニカラベン（（±）−Ｎ、Ｎ’−プロピレンジニコチンアミド）は、フリーラジカルの捕捉作用を有し、脳虚血あるいはくも膜下出血等の病態モデルで、脳梗塞巣の形成に対する抑制作用、脳血管攣縮抑制作用、あるいは神経症状の改善作用が確認されている。従って、ニカラベンは臨床での様々な原因に基づく脳循環障害、例えば脳内出血、脳梗塞、くも膜下出血、頭部外傷、脊髄損傷等の疾患における脳神経細胞の壊死、あるいはアポトーシスによる神経細胞の脱落に対する抑制効果が期待された。臨床試験を行った結果、くも膜下出血患者の神経症状の改善、並びに死亡率の抑制効果が確認された（下記参考文献１を参照）。
これらの試験は、すべてニカラベンを用いて実施された。ニカラベンは等量の（＋）体と（−）体の光学異性体により構成されているが、従来はそれぞれの光学異性体の生物活性については知られていなかった。
スナネズミ脳虚血モデルは、脳循環障害の治療薬開発の薬効試験系として汎用されている。そこで、この病態モデルでの虚血後に発生する遅延性の脳神経細胞死に対するニカラベン、（＋）体、（−）体の効果を比較検討した。試験には体重６０ｇ以上、１２週齢の雄性スナネズミ（ＳＰＦ動物）を用いた。一過性の全脳虚モデルは、Ｋｉｒｉｎｏの方法（下記参考文献２を参照）に準じて作製した。すなわち、動物はハロセン麻酔し、３７℃に保温して自然呼吸のまま背位に固定した。頸部正中切開して右側総頸静脈を剥離し、ポリエチレンチューブ製被験物質投与用カニューレ（ＰＥ−５０、Ｃｌａｙ　Ａｄａｍｓ）を挿入して固定し、カニューレの他端を背部に回して後頸部に出し、シリコンを詰めた注射針を付けて周囲皮膚に固定した。次ぎに、迷走神経を損傷させることなく両側総頸動脈を剥離し、動脈瘤用クリップを用いて５分間結紮した。結紮後クリップを外し、血液の再灌流を確認した。
１群１０例として、以下の５群構成とした。▲１▼偽手術群（生理食塩液２ｍＬ／ｋｇ＋０．１ｍＬ／ｂｏｄｙ／ｈｒ×７ｄａｙｓ）▲２▼溶媒対照群（生理食塩液２ｍＬ／ｋｇ＋０．１ｍＬ／ｂｏｄｙ／ｈｒ×７ｄａｙｓ）▲３▼（＋）体（２００ｍｇ／ｋｇ＋６０ｍｇ／ｋｇ／ｈｒ×７ｄａｙｓ）▲４▼（−）体（２００ｍｇ／ｋｇ＋６０ｍｇ／ｋｇ／ｈｒ×７ｄａｙｓ）▲５▼ニカラベン（２００ｍｇ／ｋｇ＋６０ｍｇ／ｋｇ／ｈｒ×７ｄａｙｓ）。
被験物質は、生理食塩液に溶解して投与した。また、臨床での薬物投与開始可能時間を想定して、両側総頸動脈閉塞より１２０分後に投与を開始した。頸静脈内に留置したポリエチレンカテーテルから、被験物質２００　ｍｇ／ｋｇを１０分間かけて静脈内投与し、その後引き続いて６０　ｍｇ／ｋｇ／ｈｒの持続注入を７日間行った。偽手術群および溶媒群には、同容量の生理食塩液を投与した。両側総頸動脈閉塞７日後にエーテル麻酔し、開胸して左心室にカニューレを挿入し、上行大動脈から生理食塩液で灌流し、脳を摘出した。定法に従い、脳をパラフィン固定し、ｂｒｅｇｍａより約１．５、１．７、１．９ｍｍ尾側の切片を、ニッスルおよびヘマトキシリン・エオジン染色した。海馬ＣＡＩの３視野を写真撮影し、画像解析ソフト（Ｉｍａｇｅ−Ｐｒｏ　Ｐｌｕｓ、Ｔｈｅ　Ｐｒｏｖｅｎ　Ｓｏｌｕｔｉｏｎ）を用いて、海馬ＣＡＩの各視野の長さ、および生存神経細胞数を計測して平均化し、平均値のｍｍ単位あたりの生存神経細胞数を算出した。
結果は平均値±標準誤差で示した。病態モデルの確認のため、偽手術群に対する溶媒対照群の比較を、ｔ検定による２群比較で実施した。溶媒対照群と被験物質群との比較のため、Ｄｕｎｎｅｔ法による多重比較検定を用いた。有意水準は両側５％とした。
測定視野における海馬ＣＡ１の生存神経細胞のｍｍ単位あたりの生存神経細胞数は、それぞれ１９６．７および１４．９となり、偽手術群と比較して、溶媒対照群で有意にかつ著明に減少していた（Ｐ＜０．００１、Ｓｔｕｄｅｎｔ　ｔ−ｔｅｓｔ）。これにより本病態モデルは、被験物質の遅延型神経細胞死に対する効果を評価できるモデルとして適切であることが確認された。
また、被験物質の各投与群では、測定視野における海馬ＣＡＩのｍｍ単位あたりの生存神経細胞数は、（＋）体、（−）体およびニカラベンでそれぞれ３９．３、１７．３および２２．９であり、溶媒対照群と比較して、（＋）体のみ有意に高値を示し（Ｐ＜０．０１、Ｄｕｎｎｅｔｔの多重比較）、（−）体には全く効果が認められなかった。因みに脳虚血溶媒対照群を基準（１００％）にして被験物質投与による生存神経細胞数の増加率を計算した結果、（＋）体では１６４％増加したのに対し、（−）体では１６％、ニカラベンでは５４％の増加にとどまった。海馬ＣＡＩの遅延型神経細胞死は、被験物質の（＋）体のみで統計的に有意に抑制されたことから、脳虚血障害の保護効果は、２つの光学異性体の中、（＋）体のみに存在し、（−）体は活性がないことが判明した。このことは、等量のこれら２つの光学異性体により構成されるラセミ体での成績が、両化合物のほぼ中間の活性を示したことからも裏付けられた。
以上より、ニカラベンを構成する２つの光学異性体間にはｉｎ　ｖｉｖｏの薬理活性に差があり、スナネズミの５分間の両側総頸動脈の結紮／再灌流による海馬ＣＡＩ域における遅延型神経細胞死に対しては、（＋）体のみが保護作用を有する事が新たに確認された。従って従来知られていたラセミ体のニカラベンの臨床上の有用性と安全性は、光学分割して得られる（＋）体では更に増加するであろう事が判明した。
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参考文献：
１．Ａｓａｎｏ，Ｔ．，Ｔａｋａｋｕｒａ，Ｋ．，Ｓａｎｏ，Ｋ．，Ｋｉｋｕｃｈｉ，Ｈ．，Ｎａｇａｉ，Ｈ．，Ｓａｉｔｏ，Ｉ．，Ｔａｍｕｒａ，Ａ．，Ｏｃｈｉａｉ，Ｃ．，Ｓａｓａｋｉ，Ｔ．：Ｅｆｆｅｃｔｓ　ｏｆ　ａ　ｈｙｄｒｏｘｙｌ　ｒａｄｉｃａｌ　ｓｃａｖｅｎｇｅｒ　ｏｎ　ｄｅｌａｙｅｄ　ｉｓｃｈｅｍｉｃ　ｎｅｕｒｏｌｏｇｉｃａｌ　ｄｅｆｉｃｉｔｓ　ｆｏｌｌｏｗｉｎｇ　ａｎｅｕｒｙｓｍａｌ　ｓｕｂａｒａｃｈｎｏｉｄ　ｈｅｍｏｒｒｈａｇｅ：ｒｅｓｕｌｔｓ　ｏｆ　ａ　ｍｕｌｔｉｃｅｎｔｅｒ，ｐｌａｃｅｂｏ−ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ　ｄｏｕｂｌｅ−ｂｌｉｎｄ　ｔｒｉａｌ，Ｊ．Ｎｅｕｒｏｓｕｒｇ　８４：７９２−８０３，１９９６
２．Ｋｉｒｉｎｏ，Ｔ．：Ｄｅｌａｙｅｄ　ｎｅｕｒｏｎａｌ　ｄｅａｔｈ　ｉｎ　ｔｈｅ　ｇｅｒｂｉｌ　ｈｉｐｐｏｃａｍｐｕｓ　ｆｏｌｌｏｗｉｎｇ　ｉｓｃｈｅｍｉａ，Ｂｒａｉｎ　Ｒｅｓｅａｒｃｈ　２３９，５７−６９，１９８２
産業上の利用の可能性
本発明の脳循環障害治療剤において有効成分として用いる（＋）−Ｎ，Ｎ’−プロピレンジニコチンアミドまたはその薬学上許容しうる塩は、従来知られていた（±）−Ｎ，Ｎ’−プロピレンジニコチンアミド（ニカラベン）よりも優れた有用性と安全性を示すことが判ったので、本発明は臨床面での応用が強く期待される。
【国際調査報告】
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