(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
ＨＭＧ−ＣｏＡレダクターゼインヒビターのアミンとの塩であって、前記アミンが、ｔｅｒｔ−ブチルアミン、ｔｅｒｔ−アミルアミン、（±）−１，２−ジメチルプロピルアミン、３−（２−アミノエチルアミノ）−プロピルアミン、Ｎ，Ｎ’−ジイソプロピル−エチレンジアミン、Ｎ，Ｎ’−ジエチル−エチレンジアミン、Ｎ−メチル−１，３−プロパンジアミン、Ｎ−メチルエチレンジアミン及びｓｅｃ−ブチルアミンからなる群から選択されることを特徴とするＨＭＧ−ＣｏＡレダクターゼインヒビターのアミンとの塩。
【請求項２】
前記ＨＭＧ−ＣｏＡレダクターゼインヒビターが、メバスタチン、プラバスタチン、ロバスタチン、シンバスタチン、フルバスタチン及びアトルバスタチンからなる群から選択されることを特徴とする請求項１記載のＨＭＧ−ＣｏＡレダクターゼインヒビターのアミンとの塩。
【請求項３】
前記ＨＭＧ−ＣｏＡレダクターゼインヒビターのアミンとの塩が、
メバスタチンのｔｅｒｔ−ブチルアミンとの塩、ロバスタチンのｔｅｒｔ−ブチルアミンとの塩、並びにプラバスタチンの（±）−１，２−ジメチルプロピルアミン、ｔｅｒｔ−ブチルアミン、ｔｅｒｔ−アミルアミン、３−（２−アミノエチルアミノ）−プロピルアミ、Ｎ，Ｎ’−ジイソプロピル−エチレンジアミン、Ｎ，Ｎ’−ジエチル−エチレンジアミン、Ｎ−メチル−１，３−プロパンジアミン、Ｎ−メチルエチレンジアミン及びｓｅｃ−ブチルアミンのいずれか１のアミンとの塩からなる群から選択されることを特徴とする請求項１記載のＨＭＧ−ＣｏＡレダクターゼインヒビターのアミンとの塩。
【請求項４】
ＨＭＧ−ＣｏＡレダクターゼインヒビターのアミンとの塩の製造方法であって、
前記アミンをＨＭＧ−ＣｏＡレダクターゼインヒビターの粗培地に加えること、並びに
前記アミンがｔｅｒｔ−ブチルアミン、ｔｅｒｔ−アミルアミン、（±）−１，２−ジメチルプロピルアミン、３−（２−アミノエチルアミノ）−プロピルアミン、Ｎ，Ｎ’−ジイソプロピル−エチレンジアミン、Ｎ，Ｎ’−ジエチル−エチレンジアミン、Ｎ−メチル−１，３−プロパンジアミン、Ｎ−メチルエチレンジアミン及びｓｅｃ−ブチルアミンからなる群から選択されること
を特徴とするＨＭＧ−ＣｏＡレダクターゼインヒビターのアミンとの塩の製造方法。
【請求項５】
前記ＨＭＧ−ＣｏＡレダクターゼインヒビターが、メバスタチン、プラバスタチン、ロバスタチン、シンバスタチン、フルバスタチン及びアトルバスタチンからなる群から選択されることを特徴とする請求項４記載のＨＭＧ−ＣｏＡレダクターゼインヒビターのアミンとの塩の製造方法。
【請求項６】
前記ＨＭＧ−ＣｏＡレダクターゼインヒビターのアミンとの塩が、
メバスタチンのｔｅｒｔ−ブチルアミンとの塩、ロバスタチンのｔｅｒｔ−ブチルアミンとの塩、並びにプラバスタチンの（±）−１，２−ジメチルプロピルアミン、ｔｅｒｔ−ブチルアミン、ｔｅｒｔ−アミルアミン、３−（２−アミノエチルアミノ）−プロピルアミ、Ｎ，Ｎ’−ジイソプロピル−エチレンジアミン、Ｎ，Ｎ’−ジエチル−エチレンジアミン、Ｎ−メチル−１，３−プロパンジアミン、Ｎ−メチルエチレンジアミン及びｓｅｃ−ブチルアミンのいずれか１のアミンとの塩からなる群から選択されることを特徴とする請求項４記載のＨＭＧ−ＣｏＡレダクターゼインヒビターのアミンとの塩の製造方法。
【請求項７】
以下の工程：
ａ）ＨＭＧ−ＣｏＡレダクターゼインヒビターを含む培地とアミンとを接触させる工程、
ｂ）任意：結晶化核を公知の技術により形成する工程、
ｃ）晶出した結晶を濾過する工程、
ｄ）前記結晶を有機溶媒で洗浄する工程、及び
ｅ）前記結晶を乾燥する工程
を含むことを特徴とする請求項４ないし６のいずれか１項記載のＨＭＧ−ＣｏＡレダクターゼインヒビターのアミンとの塩の製造方法。
【発明の詳細な説明】
〔技術分野〕
ロバスタチン(lovastatin)、プラバスタチン(pravastatin) 、メバスタチン(mevastatin)、アトルバスタチン(atorvastatin)、ならびにそれらの誘導体およびアナログはＨＭＧ−ＣｏＡレダクターゼインヒビターとして知られているものの例であり、抗高コレステロール血症薬(antihypercholesterolemic agent)として使用されている。それらの大部分は、Aspergillus 、Monascus、Nocardia、Amycolatopsis 、Mucor またはPenicillium 属に属する種として同定された異なる種の微生物を使用する発酵によりバイオテクノロジーで製造され、そのいくつかは、化学合成法を使用する、つまり半合成物質から導かれる発酵生成物を処理することによって得られるか、またはそれらは全化学合成の生成物である。
【０００１】
本発明は、特定のアミンとのＨＭＧ−ＣｏＡレダクターゼインヒビターの塩を介してＨＭＧ−ＣｏＡレダクターゼインヒビターの単離および／または精製のための新規の産業的プロセスに関する。本発明は、バイオテクノロジーでの（微生物学的）プロセスにより製造される物質の場合には発酵ブイヨンから、または半合成または全化学合成により製造される物質の場合には反応混合物から、ＨＭＧ−ＣｏＡレダクターゼインヒビターの純粋なアミン塩を得ることができる。アミンとの塩を形成する工程は、ＨＭＧ−ＣｏＡレダクターゼインヒビターまたはＨＭＧ−ＣｏＡレダクターゼインヒビターの前駆体物質の単離および／または精製するためのプロセスの工程の中の１工程である。本明細書で記載されるアミンは、ＨＭＧ−ＣｏＡレダクターゼインヒビターまたはＨＭＧ−ＣｏＡレダクターゼインヒビターの前駆体のバイオテクノロジーでの修飾のためのプロセスにおける培地の組成における塩の形成のために非常に有用である。従って、形成された塩は、半合成誘導体およびそのアナログの調製のための出発物質または中間体として用いることができ、もしくは文献に公知の簡単な技術を使用することにより、必要であれば、薬学的に受容可能な塩およびラクトン形態のそれぞれに転化することができる。
【０００２】
〔先行技術〕
特許および技術文献で公知である抗高コレステロール血症薬の単離および精製のためのプロセスは、抽出、クロマトグラフィー、ラクトニセーション（分子内ラクトン化）および結晶化法の種々の組み合わせを含む。さらに、これらのいくつかは、種々の塩を介する単離および精製を含む。ＵＳ特許第４，３４２，７６７号および同４，３１９，１３９号では、ロバスタチン（カルボン酸塩形態）のアンモニウム塩が、発酵培地から抽出された有機層から直接単離される。同特許においては、エチレンジアミン、テトラメチルアンモニウム、カリウムおよびＮ−メチルグルカミン塩の調製ならびにＬ−リジン、Ｌ−アルギニンおよびＬ−オルニチンのような種々のアミノ酸の塩も記載されている。前記塩は、既に精製された物質から調製され、そして単離または精製のプロセスにおけるそれらの使用のための選択には、言及していない。ＧＢ２０５５１００Ａはまた、ロバスタチンのナトリウム塩およびカルシウム塩の形成を記載し、メタノールの抽出、分取液体逆相クロマトグラフィーの２工程、メタノールからの結晶化およびエタノールからの再結晶の工程の２工程、ならびに水酸化ナトリウムまたは水酸化カルシウムの水溶液を用いる塩への転化を含む。しかしながら、種々のクロマトグラフィー法を含むことのない、記載された方法は、本発明を用いることにより得られる生成物と同等の純度の生成物をもたらさない。ＵＳ特許第４，３４６，２２７号は、プラバスタチンのナトリウム塩の調製のためのプロセスを開示し、クロマトグラフィー技術も使用されるが、最終生成物は、ラージスケール製造操作における経済的なプロセスではない凍結乾燥後にのみ得られる。ＥＰ６５，８３５は、最終生成物としてテトラヒドロ−Ｍ−４またはテトラヒドロ−ＩｓｏＭ−４のＬ−オルニチンおよびｔ−オクチルアミン塩の調製を開示し（ここで、４Ｍは特定のＨＭＧ−ＣｏＡレダクターゼインヒビターを示し、Ｍ−４およびＩｓｏＭ−４は６−および３−ビフェニル環の位置で加水分解された異性体をそれぞれ示し、そして「テトラヒドロ」は完全に水素化された縮合ビフェニル環系を意味する）、これらは、行われた単離を介する中間体としてではなく、それぞれ精製されたナトリウム塩から調製される。テトラヒドロ−Ｍ−４またはＩｓｏＭ−４のアンモニア、アミノ酸または有機アミンとの他の塩もまた、最終生成物として考えられ、オクチルアミン、２−エチルヘキシルアミン、ベンジルアミン、α−メチル−ベンジルアミン、フェネチルアミン、ジベンジルアミン、Ｎ−メチルベンジルアミン、Ｎ，Ｎ−ジメチルベンジルアミン、Ｎ，Ｎ−ジエチルベンジルアミン、Ｎ−エチル−Ｎ−メチルベンジルアミン、トリベンジルアミン、シクロペンチルアミン、シクロヘキシルアミン、シクロヘプチルアミン、Ｎ−メチルシクロペンチルアミン、Ｎ−エチルシクロヘキシルアミン、Ｎ−エチルシクロヘプチルアミン、ジシクロヘキシルアミン、Ｎ，Ｎ−ジメチルシクロペンチルアミン、Ｎ，Ｎ−ジメチルシクロヘキシルアミン、Ｎ，Ｎ−ジエチルシクロヘプチルアミン、ピロリジン、Ｎ−メチルピロリジン、ピペリジン、Ｎ−メチルピペリジン、およびモリホリンを含む。ＧＢ２０７３１９９Ａはまた、既に単離されたラクト���形態の物質からＨＭＧ−ＣｏＡレダクターゼインヒビターの種々の塩の調製を開示する。ＵＳ特許第５，７６３，６５３号および同５，７６３，６４６号は、ロバスタチンのシクロプロピルアミンアミドおよびｎ−ブチルアミンアミドの調製、ならびにシンバスタチンの化学半合成のプロセスにおけるそれらの使用を開示する。ＵＳ特許第５，４０３，８６０号は、ＭＬ−２３６Ａ、ＭＬ−２３６Ｂ、ＭＢ−５３０ＡおよびＭＢ−５３０Ｂから誘導された誘導体である、ＨＭＧ−ＣｏＡレダクターゼインヒビターのオクタヒドロナフタレンオキシム誘導体のアミン塩を最終生成物として開示する。最終アミン塩としては、ｔ−オクチルアミン、ジベンジルアミン、ジシクロヘキシルアミン、モルホリン、Ｄ−フェニルグリシンアルキルエステルおよびＤ−グルコサミン塩が言及される。
【０００３】
〔技術的問題〕
産業においては、製造の合理化および製造プロセスの短縮に対する、ならびに最少量の高価な出発原料または中間物質の使用に対する絶え間ない要求がある。現在まで、ＨＭＧ−ＣｏＡレダクターゼインヒビターの場合における最終精製物の単離は多段プロセスであり、ここで各工程では損失する割合が増すため、最終収率はめったに６０％を越えない結果となる。さらに、ラクトン形態の生成物またはナトリウム塩へ転化したラクトンは、半合成のプロセス（例えば、シンバスタチンを調製するプロセスにおいて）または生化学的転化（例えば、プラバスタチンの調製するためのプロセスにおいて）における出発物質として使用される。ラクトンの調製は、ＨＭＧ−ＣｏＡレダクターゼインヒビターの調製における最も経済的でない工程の１つであり、なぜなら、酸からラクトン形態へのおよび必要に応じてさらに塩への転化中の損失が２０％を越えるからである。従って、転化中の少ない損失、低コスト、およびそれ自体技術的に簡単な調製で、十分な純度にした出発物質および／または中間物質に対する絶え間ない要求がある。
【０００４】
〔発明の説明〕
開発および調査において、本発明者らは、驚くべきことにＨＭＧ−ＣｏＡレダクターゼインヒビターが特定のアミンとの塩を形成し、これが一旦形成された母液から結晶化することを見出した。驚くべきことに、高純度の所望のＨＭＧ−ＣｏＡレダクターゼインヒビターのアミン塩の結晶を、大量の不純物および所望でないＨＭＧ−ＣｏＡレダクターゼインヒビターアナログを含む液体から得ることができることを見出した。ＵＳ特許第５，４０３，８６０号では、以下に言及する物質（Ｉａ）を調製するためのプロセスにおいて、出発または中間物質としてＨＭＧ−ＣｏＡレダクターゼインヒビターの塩を用いた場合、低収率で得られることを記述しているのに対して、本発明者らは、驚くべきことに、本発明によるＨＭＧ−ＣｏＡレダクターゼインヒビターのアミン塩を用いた場合、調製したＨＭＧ−ＣｏＡレダクターゼインヒビターの収率および純度はラクトン形態のＨＭＧ−ＣｏＡレダクターゼインヒビターを用いた場合と等しいかそれ以上であることを見出した。
例示式Ｉａ
【０００５】
【化１０】
0003834203.tif 000002
【０００６】
Ｒ1 ：ＣＨ3 ，ＣＨ2 ＯＨ，ＯＨ
ａおよびｂ：両方とも二重結合であってもよく、それらの一方が単結合であってもよく、両方とも単結合であってもよい。
【０００７】
さらに、本発明者らは、驚くべきことに、ＨＭＧ−ＣｏＡレダクターゼインヒビターのバイオテクノロジーでの修飾のためのプロセスにおいて、発酵溶液から誘導する培地におけるＨＭＧ−ＣｏＡレダクターゼインヒビターのアミン塩の形成が、周知の受け入れられている文献に記載されるような単なる金属塩と比較して、簡単な結晶化によりＨＭＧ−ＣｏＡレダクターゼインヒビターの単離および／または精製のための有効な手段を提供することを発見した。従って、本明細書に記載されているアミンおよびＨＭＧ−ＣｏＡレダクターゼインヒビターと容易に塩を形成するアミンは、ＨＭＧ−ＣｏＡレダクターゼインヒビターの単離および／または精製のための補助物質または加工助剤として特に適切である。さらに、それらは、ＨＭＧ−ＣｏＡレダクターゼインヒビターの半合成調製あるいはバイオテクノロジーでの修飾についての出発物質または中間体として、そしてさらに、薬学的に受容可能な塩またはそれぞれＨＭＧ−ＣｏＡレダクターゼインヒビターのラクトン形態に転化するために、うまく使用される。従って、本発明のＨＭＧ−ＣｏＡレダクターゼインヒビターの新規のアミン塩もまた、同様に非常に有用である。
【０００８】
本発明は、以下を提供する：
ａ）請求項１に記載されるＨＭＧ−ＣｏＡレダクターゼインヒビターの有機アミンとの新規な塩であって、ここで、これら特定の塩は、上記のような種々の文脈において記載されるアミン塩のほかの先行技術に記載されるアミン塩を除く。
ｂ）請求項４に記載されるＨＭＧ−ＣｏＡレダクターゼインヒビターのアミンとの塩の調製のためのプロセス。
ｃ）請求項８に記載される種々のプロセスにおける加工助剤または出発物質または中間物質としてのＨＭＧ−ＣｏＡレダクターゼインヒビターのアミンとの塩の使用。
ｄ）請求項１１に記載されるＨＭＧ−ＣｏＡレダクターゼインヒビターのアミン塩からの／を介する純粋なＨＭＧ−ＣｏＡレダクターゼインヒビターを調製するプロセス。
ｅ）請求項１３に記載されるＨＭＧ−ＣｏＡレダクターゼインヒビターのアミン塩を出発物質として用いるＨＭＧ−ＣｏＡレダクターゼインヒビターを半合成調製するプロセス。
ｆ）請求項１５に記載される培地の成分の１つがＨＭＧ−ＣｏＡレダクターゼインヒビターのアミン塩であるＨＭＧ−ＣｏＡレダクターゼインヒビターをバイオテクノロジーで修飾するプロセス。
ｇ）請求項１７に記載されるＨＭＧ−ＣｏＡレダクターゼインヒビターのアミン塩をＨＭＧ−ＣｏＡレダクターゼインヒビターの薬学的に受容可能な塩へ転化するプロセス。および、
ｈ）請求項２０に記載されるＨＭＧ−ＣｏＡレダクターゼインヒビターのアミン塩をラクトン形態のＨＭＧ−ＣｏＡレダクターゼインヒビターへ転化するプロセス。
【０００９】
ＨＭＧ−ＣｏＡレダクターゼインヒビターとの塩を形成するために本発明で用いられるアミンは、以下の式ＩおよびＩＩの有機アミンからなる群から選択される：
（ａ）
【００１０】
【化１１】
0003834203.tif 000003
【００１１】
ここで、
ａ１）Ｒ1 ，Ｒ2 ，Ｒ3 およびＲ4 は独立して以下を表す：
・水素原子
・１から８個の炭素原子を有する直鎖または分枝鎖アルキル基、または
・３から８個の炭素原子を有するシクロアルキル基、または
・アルキル基がメチルまたはエチルであり、そしてアリール基がフェニルであるアリールアルキル基、これは、必要に応じてアルキル基が１から４個の炭素原子を有するアルキルであるＮ−アルキルまたはＮ，Ｎ−ジアルキル基により置換される、または
・必要に応じて１つ以上の置換基で置換されるアリールアルキル基、
・２から４個の炭素原子を有するヒドロキシアルキル基、または
・２から４個の炭素原子を有するアミノアルキル基、これは、必要に応じてアルキル基が１から４個の炭素原子を有するアルキルであるＮ−アルキルまたはＮ，Ｎ−ジアルキルによって置換される；
Ｘは水素原子、ヒドロキシル基、ハロゲンまたはメチル基を表す；
ｍおよびｎは、独立して０から５の整数を表す；または、
ａ２）ＮＲ1 Ｒ2 またはＮＲ3 Ｒ4 は、３から７個のメチレン基を有するヘテロ環を示し、これらの基の１つは、必要に応じて酸素または硫黄原子またはイミン基によって置換される；Ｘ、ｍおよびｎは、上記と同様に定義される；
（ｂ）
【００１２】
【化１２】
0003834203.tif 000004
【００１３】
ここで、
ｂ１）Ｒ’1 、Ｒ’2 およびＲ’3 は、同じであるかまたは異なり、水素、アルキル、アルケニル、アミノ−あるいはヒドロキシ−あるいはアルコキシ−置換アルキルまたはアルケニル、もしくは置換アミノ−置換アルキルまたはアルケニルを表し、ただし、Ｒ’1 、Ｒ’2 およびＲ’3 は同時に水素ではない；または
ｂ２）Ｒ’1 およびＲ’2 、ならびに必要に応じてＲ’3 は、窒素原子一緒になって、環のメンバーとして上記窒素原子を含み、そして必要に応じてさらなるヘテロ原子を含む置換ヘテロ環系を必要に応じて形成し、そしてＲ’3 が環系の部分ではない場合、Ｒ’3 は独立して水素、アルキル、アルケニル、アミノ−あるいはヒドロキシ−あるいはアルコキシ−置換アルキル、または置換アミノ−置換アルキルから選択される；または
ｂ３）Ｒ’1 は必要に応じて一般式ＩＩＩの置換環式基である。
【００１４】
Ｒ’−（ＣＨＲ’4 ）m −              ＩＩＩ
ここで、ｍは０または１から５の整数であり、Ｒ’は必要に応じて環内に３から８個の炭素原子を有する置換脂肪族炭化水素環系であり、Ｒ’4 は水素、またはアルキル、アミノ−あるいはヒドロキシ−あるいはアルコキシ−置換アルキル、または置換アミノ−置換アルキル、または上記で定義したＲ’1 と同じ一般式の基である；Ｒ’2 およびＲ’3 は、Ｒ’1 と同じか、または水素、アルキル、アルケニル、アミノ−あるいはヒドロキシ−あるいはアルコキシ−置換アルキル、もしくは置換アミノ−置換アルキルまたはアルケニルである；または
ｂ４）Ｒ’1 は、必要に応じて一般式ＩＶの置換アリール基である：
【００１５】
【化１３】
0003834203.tif 000005
【００１６】
ここで、Ｒ’5 は、水素かまたは１つ以上の置換基であり、そしてｍは０または１から５の整数である；そしてＲ’2 およびＲ’3 は、独立して水素、アルキル、アミノ−あるいはヒドロキシ−あるいはアルコキシ−置換アルキル、または置換アミノ−置換アルキル、または一般式Ｒ’1 と同様の基であってよい。
【００１７】
明白に明示されていない置換基は、たとえばハロゲン、ヒドロキシル基、１から４個の炭素原子を有するアルキル、１から４個の炭素原子を有するアシルオキシル、１から４個の炭素原子を有するアシロキシルおよび１から４個の炭素原子を有するエステル化したカルボキシルのような、通常「不活性」な置換基である。
【００１８】
ＨＭＧ−ＣｏＡレダクターゼインヒビターとの塩を形成するアミンの有利な例は、以下である：（±）−１，２−ジメチルプロピルアミン、３−（２−アミノエチルアミノ）−プロピルアミン、ｎ−ブチルアミン、第２級ブチルアミン、第３級ブチルアミン（ＴＢＡ）、ジブチルアミン、第３級アミルアミン、シクロペンチルアミン、シクロヘキシルアミン、シクロヘプチルアミン、ジシクロヘキシルアミン（ＤＣＨＡ）、Ｎ−メチルシクロヘキシルアミン、Ｎ，Ｎ’−ジイソプロピルエチレンジアミン（ＤＩＰＥＤＡ）、Ｎ，Ｎ’−ジエチレンジアミン、Ｎ−メチル−１，３−プロパンジアミン、Ｎ−メチルエチレンジアミン、Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチル−１，２−ジアミノエタン、Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチル−１，４−ジアミノブタン、Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチル−１，６−ジアミノヘキサン、１，２−ジピペリジンエタン、ジピペリジンメタン、２−アミノ−３，３−ジメチルブタン、Ｎ，Ｎ−ジメチルシクロヘキシルアミン、ネオペンチルアミン、アダマンチルアミン、Ｎ，Ｎ−ジエチルシクロヘキシルアミン、Ｎ−イソプロピルシクロヘキシルアミン、Ｎ−メチルシクロヘキシルアミン、シクロブチルアミンおよびノルボリルアミン。好ましくは、低毒性および低コストを組み合わせた結晶化効率の点から、アミンは、ｎ−ブチルアミン、第２級ブチルアミン、ＴＢＡ、ジブチルアミン、第３級アミルアミン、シクロヘキシルアミン、ＤＣＨＡ、Ｎ−メチルシクロヘキシルアミン、およびＤＩＰＥＤＡからなる群から選択される。アミンは、特に、ＴＡＢ、ＤＩＰＥＤＡ、ＤＣＨＡおよびＮ−メチルシクロヘキシルアミンからなる群から選択される。
【００１９】
上記に記載されるアミンは、精製効率の点からアンモニアとの塩を介する直接単離の上で有利である。さらに、より大きな有機基を有するアミン、および特にバルキーな基を有するアミンは、一般的に、小さな有機基を有するアミンと比較した場合、より容易な結晶化を示し、そして望まない副生成物との塩の形成が広がるのをより少なくする。従って、第２級および第３級炭素原子を有する、または環式炭化水素構造（芳香族または脂肪族のいずれか）を有する少なくとも１つの炭化水素残基を有するアミン、および有機ジアミンは、本発明に特に適している。
【００２０】
ＨＭＧ−ＣｏＡレダクターゼインヒビターのいかなる型も、本発明により使用することができる。メバスタチン、プラバスタチン、ロバスタチン、シンバスタチン、フルバスタチンおよびアトルバスタチンからなる群から選択されるこれらのＨＭＧ−ＣｏＡレダクターゼインヒビターは、良好な結果を示し、そして特に好ましい。
【００２１】
所望のＨＭＧ−ＣｏＡレダクターゼインヒビターを単離および精製するために、アミン塩は、それぞれのＨＭＧ−ＣｏＡレダクターゼインヒビターの粗培地から直接最も効率的に形成される。この粗培地は、通常バイオテクノロジーでのプロセスの結果としての発酵ブイヨンからか、または半合成あるいは全合成の結果としての反応混合物から誘導され、そして通常望まない副生成物および不純物とともに所望のＨＭＧ−ＣｏＡレダクターゼインヒビターを含む。粗培地は、好ましくは、酸形態のＨＭＧ−ＣｏＡレダクターゼインヒビターを含み、そしてアミン塩の形成を粗培地にアミンを単に加えることによって達成することができる。粗培地は、有機相、または有機相あるいは水相の混合物であってよく、純粋ではないＨＭＧ−ＣｏＡレダクターゼインヒビターは、例えば酢酸エチル、エーテルまたアセトニトリルのような有機溶媒中に存在する。酢酸エチルは、有機溶媒として好ましい。バイオテクノロジーでの処理の後、有機相における粗培地を、好ましくは、上記有機溶媒へＨＭＧ−ＣｏＡレダクターゼインヒビターを抽出する工程を含むプロセスによって発酵ブイヨンから得る。
【００２２】
ＨＭＧ−ＣｏＡレダクターゼインヒビターのアミン塩を調製するプロセスは、以下の工程を含み得る：
ａ）好ましくは有機溶媒中で酸形態であるＨＭＧ−ＣｏＡレダクターゼインヒビターを含む培地を、少なくとも１つの上記のアミンと接触させる工程、
ｂ）任意：公知の技術により結晶化核を形成する工程、
ｃ）晶出した結晶を濾過する工程、
ｄ）有機溶媒で結晶を洗浄する工程、および
ｅ）結晶を乾燥する工程。
【００２３】
用語「接触させる」は、酸性を有する物質とアルカリ性を有する物質から塩を調製する公知の技術を含む。結晶化は、好ましくは０と３０℃との間の温度で行い、より好ましくは４と２２℃との間の温度で行う。
【００２４】
用語「有機溶媒」は、酢酸エチル、酢酸ブチル、エーテルおよびアセトニトリルような産業で用いられる有機溶媒を意味し、それらの水混合物を含む。
【００２５】
上記のアミンは、ＨＭＧ−ＣｏＡレダクターゼインヒビターと効率的に塩を形成するので、それらは、精製された形態でＨＭＧ−ＣｏＡレダクターゼインヒビターを調製するプロセスにおいて補助物質または加工助剤としても特に適している。従って、前もって単離されたＨＭＧ−ＣｏＡレダクターゼインヒビターを、より高い純度で得ることができる。精製された形態は、通常結晶化によって調製される。従って、本発明は、ＨＭＧ−ＣｏＡレダクターゼインヒビターの単離および／または精製するプロセスを提供する。
【００２６】
本発明のさらなる面において、上記の塩は、修飾された形態、薬学的に活性な塩の形態またはラクトン形態であるＨＭＧ−ＣｏＡレダクターゼインヒビターを調製するプロセスにおいて、出発物質または中間物質として適切に用いられる。特に、修飾された形態は、化学的修飾またはバイオテクノロジーでの修飾によって得られ、この修飾は、当業者に公知である。薬学的に活性な塩は、好ましくは、例えばナトリウム塩またカルシウム塩のような金属塩である。
【００２７】
この点について、用語「ＨＭＧ−ＣｏＡレダクターゼインヒビターを半合成調製するプロセス」とは、ＨＭＧ−ＣｏＡレダクターゼインヒビターの公知の化学的修飾を用いるＨＭＧ−ＣｏＡレダクターゼインヒビターの調製を意味する。このようなプロセスの例は、出発物質としてのロバスタチンからのシンバスタチンの半合成である。最も好ましくは、ロバスタチンのＴＢＡ塩を、出発物質として用いる。
【００２８】
さらに、用語「ＨＭＧ−ＣｏＡレダクターゼインヒビターをバイオテクノロジーで修飾するプロセス」は、ＨＭＧ−ＣｏＡレダクターゼインヒビターを修飾するための微生物または酵素系(enzymatic system)を用いるＨＭＧ−ＣｏＡレダクターゼインヒビターの調製を意味する。このようなプロセスの例は、メバスタチンのプラバスタチンへのバイオテクノロジーでの転化である。アミン塩は、好ましくは、ＴＢＡ塩である。
【００２９】
さらに、用語「ＨＭＧ−ＣｏＡレダクターゼインヒビターのアミン塩のＨＭＧ−ＣｏＡレダクターゼインヒビターの薬学的に受容可能な塩へ転化するプロセス」は、公知の方法の１つによってＨＭＧ−ＣｏＡレダクターゼインヒビターの調製のためのプロセスを含み、ここで、ＨＭＧ−ＣｏＡレダクターゼインヒビターのアミン塩が、出発物質として用いられる。転化された塩の特定の例は、プラバスタチンおよびフルバスタチンのナトリウム塩、ならびにアトルバスタチンのカルシウム塩である。
【００３０】
さらに、用語「ＨＭＧ−ＣｏＡレダクターゼインヒビターのアミン塩のラクトン形態のＨＭＧ−ＣｏＡレダクターゼインヒビターへの転化」は、公知の方法の１つによるラクトン形態のＨＭＧ−ＣｏＡレダクターゼインヒビターを調製するプロセスを含み、ここで、ＨＭＧ−ＣｏＡレダクターゼインヒビターのアミン塩は出発物質として用いられる。ラクトン形態に転化したＨＭＧ−ＣｏＡレダクターゼインヒビターの例は、ロバスタチン、メバスタチンまたはシンバスタチンである。
【００３１】
本発明を以下に説明するが、以下の実施例に限定されるものではない。
【００３２】
〔実施例〕
（実施例１）
メバスタチンの遊離酸の調製と、その第３級ブチルアミン（ＴＢＡ）との塩への転化
メバスタチン（２００ｇ）を、３０％体積／体積（ｖ／ｖ）アセトニトリル水溶液（２５００ｍｌ）に懸濁し、３当量のトリエチルアミンを加え、その混合物を８０℃に加熱し、３０分間攪拌した。反応が終了した後、アセトニトリルを蒸発させ、残った溶液をリン酸でｐＨ４に酸性化し、酢酸エチル（２×１０００ｍｌ）で抽出した。プールした抽出物を、３０ｇの硫酸ナトリウムを加えることにより乾燥し、乾燥剤を濾別し、溶液を濃縮した（９５０ｍｌ）。ＴＢＡ（１．５当量）を溶液に加え、結晶化を８℃で３０分行った。形成した結晶を濾別し、酢酸エチル（２×１００ｍｌ）で洗浄し、続いて４０℃で１５時間乾燥した。得られた結晶（メバスタチンのＴＢＡ塩２１５ｇ）は、白色であり、ＨＰＬＣ純度は９６．８％であった。加水分解および結晶の収率は、９１％であった。
【００３３】
（実施例２）
メバスタチンのＴＢＡ塩からのメバスタチンのナトリウム塩の調製
実施例１に開示されるプロセスによって得られたメバスタチンのＴＢＡ塩（１ｇ）を、３ｍｌのエタノール（９６％ｖ／ｖ）に溶解し、水酸化ナトリウム（エタノール中の４０ｇ／Ｌ）を加えた。得られた混合物を、酢酸エチル（６０ｍｌ）中で沈殿させた。８℃で結晶化（３０分）した後、結晶を濾別し、酢酸エチルで洗浄し、乾燥した。生成物は、淡い褐色のメバスタチンのナトリウム塩の結晶（０．６５ｇ）であり、ＨＰＬＣ純度は９８％であった。
【００３４】
（実施例３）
発酵ブイヨンからのロバスタチンのＴＢＡ塩の単離
微生物Aspergillus terreus ATCC 20544を用いる発酵によって得られ、１ｇ／Ｌのロバスタチン含量を有する発酵ブイヨン（１６０Ｌ）を、発酵槽からタンク（４００Ｌ）に移し、ｐＨを１Ｍ水酸化ナトリウム溶液の添加により１０に調整した。１０分間激しく攪拌した後、ブイヨンのｐＨを１Ｍ硫酸溶液を加えることにより９に減らし、バイオマスを濾別した。得られた濾液を１Ｍの硫酸溶液で６．５のｐＨ値に酸性化し、１６０Ｌの酢酸エチルを加えた。続いて、このスラリーを２０分間攪拌した。水相および酢酸エチル相を抽出遠心分離(extraction centrifuge) により分離し、酢酸エチル抽出物を１４Ｌの量まで回転蒸発器(rotavapor) で濃縮した。濃縮した酢酸エチル抽出物中の遊離酸の形態のロバスタチンの濃度は、１０．１ｇ／Ｌであった。酢酸エチル（８００ｍｌ）中の遊離酸の形態の得られたロバスタチン溶液（ＨＰＬＣ純度７２．７％）に、１．０５当量のＴＢＡを加えた。結晶が晶出した後、結晶を濾別し、酢酸エチル（２×５０ｍｌ）で洗浄し、真空オーブンで３５℃で２４時間乾燥した。収量：９９．２％のＨＰＬＣ純度を有するロバスタチンのＴＢＡ塩の結晶８．０６ｇ。
【００３５】
（実施例４）
第３級アミルアミンとのロバスタチンの塩の調製
ロバスタチン（５ｇ）を実施例１に開示される加水分解のためのプロセスに従って処理し、ロバスタチンのナトリウム塩（４．８ｇ）を調製し、１００ｍｌの水に溶解した。ｐＨをリン酸（１０％水溶液）で４に調整し、形成されたロバスタチンの遊離酸を水相から酢酸エチル（２×１００ｍｌ）へ抽出した。プールした酢酸エチル抽出物を硫酸ナトリウムで乾燥し、溶液を濾過し、約１００ｍｌまで濃縮した。上記の様式で調製されたこの溶液（約１００ｍｌ）に、１．０５当量の第３級アミルアミンを加えた。結晶が晶出した後、結晶を濾別し、酢酸エチル（２×１０ｍｌ）で洗浄し、真空オーブン（３５℃、２４時間）で乾燥した。収量：９８．６％のＨＰＬＣ純度を有する第３級アミルアミン塩の結晶４．８ｇ。
【００３６】
（実施例５）
遊離酸形態のプラバスタチンの調製およびその（±）−１，２−ジメチルプロピルアミン塩への転化
Ｎａ塩の形態のプラバスタチン（１１ｇ、ＨＰＬＣ純度９７．２％）を、水（１００ｍｌ）に溶解し、ｐＨをリン酸（１０％水溶液）で４に調整した。得られた遊離酸を水相から酢酸エチル（２×１００ｍｌ）に抽出した。プールした酢酸エチル抽出物を硫酸ナトリウムで乾燥し、この溶液を濾過し、約１００ｍｌの量まで濃縮した。
【００３７】
このように得られた濃縮物（９ｍｌ）に、１．５当量の（±）−１，２−ジメチルプロピルアミンを加えた。結晶が晶出した後、結晶を濾別し、酢酸エチル（２×１０ｍｌ）で洗浄し、真空オーブンで３５℃で乾燥した。収量：９８．２８％のＨＰＬＣ純度で黄色の結晶。
【００３８】
（実施例６−１３）
プラバスタチンの遊離酸形態の実施例５に記載したようなアミン塩形態への転化を他のアミンで繰り返した。
【００３９】
使用したアミンおよび結果を以下の表に示す：
【００４０】
【表１】
0003834203.tif 000006
【００４１】
（実施例１４）
プラバスタチンの第２級ブチルアミンとの塩の、プラバスタチンの粗ナトリウム塩からの調製
実施例５に記載のプロセスに従い、遊離酸形態のプラバスタチンを、プラバスタチンのナトリウム塩（ＨＰＬＣ純度８３．６％）から調製した。さらに、プラバスタチンの第２級ブチルアミンとの塩を実施例５に記載のプロセスにより調製した。９７．３％のＨＰＬＣ純度を有する白色結晶が得られた。
【００４２】
（実施例１５）
プラバスタチンのＴＢＡ塩からのプラバスタチンのナトリウム塩の調製（１）
実施例１２で得られたような８．９ｇのプラバスタチンのＴＢＡ塩を２２ｍｌのエタノール（９６％）に溶解し、続いて４５０ｍｌの酢酸エチル中で沈殿させた。８℃で６０分間結晶化を行い、形成された結晶を濾別し、５０ｍｌの酢酸エチルで２回洗浄し、４０℃で５時間乾燥した。上記の様式で得られた再結晶したプラバスタチンのＴＢＡ塩の１ｇを、５ｍｌの０．４３ＮのＮａＯＨのエタノール溶液に溶解し、６０ｍｌのエタノールで沈殿させた。８℃で３０分後、形成した結晶を濾別し、乾燥した。形成したプラバスタチンのナトリウム塩の結晶（０．７５ｇ）は暗黄色であった。
【００４３】
（実施例１６）
プラバスタチンのＴＢＡ塩からのプラバスタチンのナトリウム塩の調製（２）
実施例１５に記載のプロセスを繰り返し、ここでは再結晶したプラバスタチンのＴＢＡ塩の１ｇを、０．４３ＮのＮａＯＨのエタノール溶液の代わりに３ｍｌの水に溶解し、続いて炭酸ナトリウム水溶液（当量）を加えた。得られた溶液を５ｍｌのエタノールで希釈し、結果のナトリウム塩を酢酸エチルで沈殿させた。８℃で３０分後、形成した結晶を濾別し、乾燥した。形成したプラバスタチンのナトリウム塩（０．６５ｇ）は、黄色であった。
【００４４】
（実施例１７）
メバスタチンのＴＢＡ塩からのプラバスタチンの調製
（製造のための接種材料の調製）
微生物Amycolatopsis orientalis ATCC 19795 のコロニーを、滅菌したポッター(poter) に移し、ホモジナイズ（均一化）した。得られたコロニーを寒天スロープ(agar slope)に移し、７〜１４日間、２６℃〜３０℃で恒温槽でインキュベートした。その間、寒天スロープの表面は、均一な(homogeneous) 、折り畳まれたみ(folded)、平滑な(smooth)、白から淡い灰色がかった青の菌糸の培養物(culture) により繁殖される。さらに、１０ｍｌの滅菌水を寒天スロープに注ぎ、培養物をピペットで擦り落とし、内容物をポッターに移した。次いで、得られた培養物の一部（０．５〜１ｍｌ）を、栄養培地に接種した。
寒天スロープおよびペトリ皿の調製のための寒天培地：
【００４５】
【表２】
0003834203.tif 000007
【００４６】
（発酵の栄養相）
１０日間２６℃〜３０℃でスロープで増殖したおよび上記の方法に従い調製された接種材料を、５０ｍｌの栄養培地を含む５００ｍｌエルレンマイヤーフラスコに接種した。２８℃において２２０ｒｐｍで２４時間振とうした後、培養物を発酵培地に移した。
栄養培地：
【００４７】
【表３】
0003834203.tif 000008
【００４８】
（メバスタチンのＴＢＡ塩のプラバスタチンへの転化）
上記の方法に従って調製した培養物をいれた１５個のエルレンマイヤーフラスコの内容物を用いて、３０Ｌの発酵培地を有する発酵槽（５０Ｌ）に接種した。２０時間の発酵後、メバスタチンのＴＢＡ塩とグルコースの溶液（１２００ｇのグルコースと７０ｇのメバスタチンのＴＢＡ塩（メバスタチンのアッセイ：８０％）を５Ｌの水に溶解した）を流速２ｍｌ／分で培地に連続的に加えた。発酵中、培地の７０％の酸素飽和を３００〜６００ｒｐｍの間の周波数で攪拌することにより維持した。発酵ブイヨン中のプラバスタチンの濃度の分析は、２４℃と３０℃との間の温度での７６時間の発酵後、発酵ブイヨン中のプラバスタチンの全最終濃度が、メバスタチンのプラバスタチンへの４０％の転化を示す、ブイヨンの６９０ｇ／ｋｇとなることを示した。
発酵培地：
【００４９】
【表４】
0003834203.tif 000009
【００５０】
全ての原料は、水道水に溶解し、そしてｐＨを７．４に調整した。
【００５１】
（実施例１８）
シンバスタチンのＴＢＡ塩の調製
シンバスタチン（１．９５ｇ）を５０ｍｌの３０％（ｖ／ｖ）アセトニトリルに懸濁し、トリエチルアミン（１ｍｌ）を加え、そして溶液を７０℃で２０分間加熱した。反応の終了後、アセトニトリルを溶液から蒸発させ、残りの溶液をリン酸でｐＨ４まで酸性化した。酸形態のシンバスタチンを、酢酸エチル（２×５０ｍｌ）に抽出し、プールした抽出物を２ｇの硫酸ナトリウムで乾燥した。乾燥剤を濾別し、酢酸エチル溶液を２０ｍｌまで濃縮した。溶液に、１．０５当量のＴＢＡを加え、結晶化を８℃で１時間行った。生成物を濾別し、４０℃で１時間乾燥した。収量：シンバスタチンのＴＢＡ塩の２ｇ。
【００５２】
（実施例１９）
シンバスタチンのＴＢＡ塩のシンバスタチンラクトンへの転化
実施例１８に記載のプロセスにより得られたシンバスタチンのＴＢＡ塩（１，６ｇ）を、水（３６ｍｌ）に溶解し、ついで、この溶液をリン酸水溶液でｐＨ３．７に酸性化し、酸形態のシンバスタチンを、酢酸エチル（２×５０ｍｌ）に抽出した。プールした抽出物を、硫酸ナトリウム（２ｇ）で乾燥し、乾燥剤を濾別した。酢酸エチル溶液を２０ｍｌまで濃縮した。この溶液にトリフルオロ酢酸（０．５ｍｌ）を加え、反応混合物を５０℃で２５分加熱した。反応の終了後、酢酸エチル溶液を炭酸水素アンモニウムの５％（ｗ／ｗ）水溶液で抽出した。有機相を硫酸ナトリウム（２ｇ）で乾燥し、乾燥剤を濾別し、酢酸エチル溶液を４ｍｌまで濃縮した。結晶化を８℃で１時間行った。次いで、生成物を濾別し、４０℃で１時間乾燥した。収量：酸形態のシンバスタチンの０．９ｇ。
【００５３】
（実施例２０）
シンバシタチンの遊離酸の調製
シンバスタチン（２０ｇ）を水（８０ｍｌ）と８ＭのＫＯＨ（１８ｍｌ）の混合物に溶解した。この溶液を窒素雰囲気下で２時間室温で攪拌した。その後、１２０ｍｌの酢酸エチルを加え、そしてｐＨを５％のＨＣｌ水溶液で２〜３に調整した。酢酸エチル相を、水（１００ｍｌ）、５％ＨＣｌ水溶液および５％ＮａＣｌ水溶液（５０ｍｌ）の混合物で洗浄した。次いで、得られた酢酸エチル相を、２０ｇの無水ＭｇＳＯ4 の添加して３時間乾燥し、濾過した。
【００５４】
アミン塩の調製
その後、１８ｍｌのＮ−メチルシクロヘキシルアミンを酢酸エチル相に加えた。０℃と５℃とに間の温度で２日後、シンバスタチンＮ−メチルシクロヘキシルアミン塩の結晶が形成した。得られた結晶を濾別し、２０ｍｌの酢酸エチル、４０ｍｌの酢酸エチル／ｎ−ヘプタン（１：１）および４０ｍｌのペンタンで洗浄した。収量：シンバシタチンのＮ−メチルシクロヘキシルアミン塩の２０．５ｇ。出発のシンバスタチンから計算した収率は、７９％であった。
【００５５】
同じ結果が、シクロヘキシルアミンでも得られた。（同じ方法を使用して）
（実施例２１）
精製した形態のプラバスタチンの調製
Ｎａ塩の形態のプラバスタチン（３０ｇ、ＨＰＬＣ純度９０．２％）を、水（１００ｍｌ）に溶解し、ｐＨをＨＣｌ（１０％水溶液）で３に調整した。得られた遊離酸を水相から酢酸エチル（３×２００ｍｌ）に抽出した。プールした酢酸エチル抽出物を硫酸ナトリウムで乾燥し、この溶液を濾過し、そして７．６０４ｇのＮ−メチルシクヘキシルアミンを加えた（激しく攪拌しながら１滴ずつ）。結晶が晶出した後、結晶を濾別し、酢酸エチル／メタノールの混合物から再結晶した。収量：９９．２８％のＨＰＬＣ純度を有するプラバスタチンＮ−メチルシクロヘキシルアミン塩の結晶の２１ｇであった。
【００５６】
（実施例２２）
アトルバスタチンの遊離酸の調製
アトルバスタチンのカルシウム塩（３ｇ）を１００ｍｌの水に懸濁した。ｐＨをリン酸で４に調整し、その後、アトルバスタチンの遊離酸を酢酸エチル（３×１００ｍｌ）で抽出した。合わせた酢酸エチル抽出物を乾燥し、遊離酸形態のアトルバスタチンを含む２．７ｇのオイルを得た。
【００５７】
アミン塩の調製
１ｇの遊離酸形態のアトルバスタチンを、アセトニトリル（１００ｍｌ）に溶解し、１．１モル当量のＴＢＡを加えた。得られた混合物を３０ｍｌまで濃縮し、そして８℃で４時間後、アトルバスタチンのＴＢＡ塩は結晶化した。白色の沈殿を濾別し、ロータリーエバポレーターで乾燥した。収量：アトルバスタチンのＴＢＡ塩１ｇ。
【００５８】
（実施例２３）
１ｇの遊離酸形態のアトルバスタチンをメタノール（２０ｍｌ）に溶解し、５０ｍｌのｎ−ヘキサン中の１．１モル当量のジシクロヘキシルアミン（ＤＣＨＡ）を加えた。８℃で４時間後、アトルバスタチンのＤＣＨＡ塩が結晶化した。白色沈殿を濾別し、ロータリーエバポレータで乾燥した。収量：アトルバスタチンのＤＣＨＡ塩の１．１ｇ。