(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
抗凝血物質に拮抗するためにプロトロンビンを含有する医薬。
【請求項２】
プロトロンビンが常法によりまたは遺伝子操作により調製されるプロトロンビンの活性断片または変種を意味する請求項１記載の医薬。
【請求項３】
プロトロンビンを治療対象患者の体重１kgあたり１〜２０００国際単位（IU）の濃度で含有する請求項１記載の医薬。
【請求項４】
プロトロンビン濃度が治療対象患者の体重１kgあたり１０〜１０００IU／kgである請求項３記載の医薬。
【請求項５】
抗凝血物質に拮抗するための請求項１記載の医薬の調製方法。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
本発明は、抗凝血物質に対する解毒剤に関する。
凝血は血漿タンパク質および細胞が関与する複雑なプロセスである。創傷閉鎖の形成は損傷表面への血小板の迅速な付着およびカスケード様反応シーケンスで順次活性化される接触因子およびプロテアーゼによって開始される。この事象の進行により、就中フィブリンを形成するフィブリノーゲンの活性化を触媒するトロンビンが生産される。
【０００２】
ファクターVIIIおよびＶなどのタンパク質は促進物質としてこの系の効率に貢献している。プロティンＣ系に加えて、関与するプロテアーゼの阻害物質が、創傷閉鎖が生起している間過剰反応が避けられるように、凝血プロセスを本質的に調節している。この精緻に調節された平衡が乱れるとフィブリン沈着や血栓形成を招き得る。知られるように、この結果生じる血管閉塞は多くの病理生理学的プロセス、例えばとりわけ心筋梗塞の原因である。この問題は、しばしば術後合併症となる血栓症のリスク増大を受けやすい患者にあっては特に重要である。
【０００３】
これらの病理生理学的プロセスを防止するために様々なアプローチがとられている。すなわち、臨床実務では血栓の形成を防止するため、あるいはその溶解（血栓溶解）を支援するために、凝血事象に様々な仕方で介入する抗凝血物質がしばしば用いられている。血小板機能（凝集、付着および活性化並びに活性化生成物の合成および分泌）を低下させたり防止したりすることのほかに、参画凝血プロテアーゼの、特にトロンボプラスチン／ファクターVIIａ複合体の、ファクターＸａの、そして特にトロンビン（ファクターIIａ）の阻害剤が現在研究されそして適用されつつある。
【０００４】
ヒルジンはもともと医用ヒル（Hirudo medicinalis）の唾液腺から単離されたが、これはトロンビンのとりわけ特異的かつ強力な阻害剤である。この間に、ヒルジンのバラエティーに富む様々な変種、類縁物質（analogs）、断片および変異物質（mutants）が知られるようになり、またそれらの適性について研究されている。ヒルジンは天然型では硫酸化されているが、非硫酸化型でも有益な生物学的活性が保持されていることがわかっている。その結果、ヒルジンまたはその誘導体は遺伝子操作により都合よく調製することができる。
【０００５】
抗凝血物質はまた、ヘパリン、およびその断片および変種のほかトロンビンおよび他の凝血プロテアーゼ、例えばファクターＸａ、の触媒活性を阻害する合成阻害剤を包含する。これらの成分はまた、血栓症または前血栓症性の合併症の予防および／または治療に用いることもできる。ヘパリンまたはビタミンＫアンタゴニストのような臨床的に確立された物質は効果が不十分であったり、あるいは望ましくなかったりまた症例によっては深刻な副作用を示すという不十分な状況を反映して、一段と特異的かつ強力な抗凝血物質および抗血栓剤が探究されている。現在、ヒルジンは凝血カスケードの他の酵素には干渉しない最も強力な既知のトロンビン阻害剤である。今日までヒルジンについては、脈拍、呼吸、血圧、血小板数またはフィブリノーゲンまたはヘモグロビン含量に対する認め得べき副作用が全く観察されていない。このため、ヒルジンは好ましい抗凝血物質である。
【０００６】
抗凝血物質または抗血栓剤の患者への使用は当然ながら出血傾向を高めるというリスクを伴うが、これは極端な状況にあっては、例えば使用または用量が不適正であったりした場合に、コントロールのない出血につながり得る。このような状況での望ましくない出血傾向に対抗し得るために、患者の血漿から、その構成（分子量および構造）がそれを可能とする一部の物質を透析によって迅速に除去することができる。しかしながら適切な装置が無かったりあるいは他の理由でこれを為し得ない場合には解毒剤を利用できるようにしなければならない。
【０００７】
一部の物質または調製物は既に解毒剤として提案されている。すなわち、トロンビン類およびそれらのブロックされた変種は一定のヒルジン−中和効果を示す。しかしながら、一方において、抗凝血物質を用いて治療中の患者への活性トロンビンの使用は一般に禁忌であり、また他方において、共有結合を行う低分子量阻害剤を用いて不活性トロンビンを調製することはこれらの物質の毒性故に問題がある。加えて、これらの複合体が抗原作用を有することがあるかどうかについての経験がない。これらの複合体は、それらの性質故に、低分子量（合成）抗トロンビン物質または抗血栓剤の中和に適していない。プロトロンビンが活性化されてトロンビンを形成する際に短時間生成する中間体であるメイゾトロンビンは一定のアンタゴニスト能を有しているが、それは速やかに生体内でトロンビンに変化することができ、そのままでは一般に禁忌である。
【０００８】
適切なモデルを用いたヒルジン解毒剤としてのファクターVIIの研究は満足のいく結果を与えなかった。欧州特許出願ＥＰＡ ８９.８１０７３３.９はファクターVIIIまたはファクターVIIIの断片の、抗凝血物質に対する解毒剤としての使用を記載している。血中ファクターVIII濃度を高める物質、例えばデスモプレッシン（Mannucci, P.M., Progress in Haemostasis and Thrombosis, 8 (1986), pp. 19-45）を使用できることも知られている。
しかしながら、これらの解毒剤はすべての適用分野に十分適しているというわけではないことから、抗凝血物質、抗血栓剤および血小板アンタゴニストに対するより効果的であってしかも副作用のほとんどない解毒剤を利用可能にする必要が依然として存在している。
【０００９】
本出願の範囲内において、抗凝血または抗血栓物質とは、グリコサミノグリカンおよび硫酸化ポリサッカライド、例えばヘパリン類、特に未分画で低分子量（ＬＭＷ）のペントサンポリサルフェート、ヘパランサルフェート、デルマタンサルフェートまたはコンドロイチンサルフェート、そして更にはヒルジン類およびそれらの断片、例えばヒルゲン（J. Biol. Chem. 265 (1990), 13484-13487; EP-A-0 333 356）、類縁物質または変異物質、例えばHirulogR (WO 92/13952）、結合（coupled）ヒルジン類、例えばＰＥＧ−ヒルジンまたはヒルトニン類、トロンボプラスチン／ファクターVIIａ複合体の、ファクターＸａのまたはトロンビンの天然または合成阻害剤、プロティンＣ系の成分、すなわち活性化プロティンＣ、ファクターＳおよびトロンボモジュリン、フィブリン凝集または架橋の阻害剤、ビタミンＫアンタゴニスト群からの物質、血小板活性化および／または血小板凝集または血小板付着に対し作用する物質、例えば特にフィブリノーゲン受容体アンタゴニスト、または線維素溶解の内生能力を高めることができる物質、例えば特にＰＡＩ−１阻害剤、またはプラスミノーゲンアクチベーター阻害剤の合成および分泌の刺激剤を意味し、従って間接的な抗血栓作用を有する。
【００１０】
前記の結合ヒルジン類、例えば、ＰＥＧ−ヒルジン、に対する適切な解毒剤を提供することが極めて重要である。何故ならばこれらの結合ヒルジンは生物体からの除去に困難を伴うからである。
驚くべきことにプロトロンビン（ファクターII）が抗凝血物に対する解毒剤として極めて効果的であることが見出された。
【００１１】
本発明は従って、抗凝血物質に拮抗するためのプロトロンビン含有医薬であって、これら抗凝血物質はグリコサミノグリカンおよび硫酸化ポリサッカライド、更にはヒルジン類、およびそれらの断片、類縁物質または変異物質、トロンボプラスチン／ファクターVIIａ複合体の、ファクターＸａのまたはトロンビンの天然または合成阻害剤、プロティンＣ系の成分、すなわち活性化プロティンＣ、プロティンＳおよびトロンボモジュリン、フィブリン凝集または架橋の阻害剤、ビタミンＫアンタゴニスト群からの物質、血小板活性化および／または血小板凝集および血小板付着に対し作用する物質、例えば特にフィブリノーゲン受容体アンタゴニスト、または線維素溶解の内生能力を高めることができる物質、例えば特にＰＡＩ−１阻害剤またはプラスミノーゲンアクチベーター阻害剤の合成および分泌の刺激剤より成る群より選択することができる。
【００１２】
本発明の範囲内において、プロトロンビンはさらに、常法により、あるいは特に遺伝子操作により調製できる活性断片または変種を意味する。
本発明による医薬において、プロトロンビンは治療対象患者の体重１kgあたり１〜２０００国際単位（IU）の濃度で用いられ、そして１０〜１０００IU／kgの濃度が特に好ましい。
本発明は更に、プロトロンビンの抗凝血物質に対する解毒剤としての使用に関する。
本発明は更に、抗凝血物質に拮抗するためのプロトロンビン含有医薬の調製方法に関する。
本発明を更に次の実施例により説明する。
【００１３】
【実施例】
２０μｇ／mlのヒルジンを添加した標準ヒト血漿（ＳＨＰ）についてプロトロンビン（Ｆ II）の拮抗作用をａＰＴＴ試験で調べた。表に示される凝血時間はプロトロンビンの有効さを実証している。
【表１】
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