(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
殺ウイルス成分として、肝炎Ｂ型ウイルスを不活性化する0.05〜３重量％の濃度のクエン酸水溶液を熱に弱い医療器具並びに装置，それらの部品類，透析機やそれらの表面に接触させることを特徴とする消毒方法。
【請求項２】
クエン酸水溶液が、付加成分として、更に、乳酸，リンゴ酸及び／又は酒石酸を含有する請求項１に記載の消毒方法。
【請求項３】
水溶液が、0.4〜0.6重量％の濃度のクエン酸水溶液である請求項１又は２に記載の消毒方法。
【請求項４】
前記付加成分が、クエン酸含有量に関して５〜20重量％、好ましくは、約10重量％の濃度で存在する請求項２に記載の消毒方法。
【請求項５】
クエン酸水溶液を、肝炎ウイルス、特に、肝炎Ｂ型ウイルスで汚染された、特に、熱に弱い医療器具並びに装置，それらの部品類，透析機やそれら表面に20〜75℃の温度で少なくとも５分間、接触させる請求項１に記載の消毒方法。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【産業上の利用分野】
本発明は、バクテリア、バクテリア胞子、レギオネレ、ニューモフィラ菌ならびに肝炎ウイルス、特に肝炎Ｂ型ウイルスで汚染された非耐熱性医療機器、装置ならびにその部品の有効な消毒剤に関するものである。
【０００２】
本発明は、さらにバクテリアおよび肝炎ウイルス、特に肝炎Ｂ型ウイルスで汚染された特に非耐熱性医療機器、装置ならびにその部品の表面を消毒する方法に関するものである。
【０００３】
【従来の技術】
肝炎Ｂ型ウイルスを熱だけで不活性化するには、100 ℃で10分間の加熱時間が、また肝炎Ａ型ウイルスでは98℃で１分間の加熱が必要であることが知られている。（参照；  Ｋ．Ｈ．バルホイザ  ”殺菌、消毒、保存の実施”４版 1988．ゲオルク  チーメ刊、シュトゥットガルト／ニューヨーク、75頁以下（表31））さらに、バクテリアは60℃で既に不活性化されることが知られている。比較的高温度と長時間を必要とする消毒法は、例えば透析装置の様な合成樹脂製の非耐熱性装置には役に立たない。現在の装置、機器の消毒は３％ホルマリン溶液で少なくとも６時間行われ、その後好ましくない添加剤の吸着を減少させる目的で合成樹脂表面を綿密に洗浄しなければならない（前記Ｋ．Ｈ．バルホイザ76頁参照）。消毒剤ホルムアルデヒドの環境汚染と毒性は別として消毒剤の残留は受け入れられない。
【０００４】
1.5重量％クエン酸水溶液に20℃で、又は0.4重量％水溶液に60℃で約５分間曝すことによって、ＤＮＡポリメラーゼでは検出されないレベルに肝炎Ｂ型ウイルスの活性が低減することが見出された。牛のパルボウイルス（BPV,Sp.ハーデン）は、化学消毒に対して強い抵抗性を有することがすでに知られている。高温では有効な酢酸，プロピオン酸，クエン酸や蟻酸も、30℃の温度で３％の濃度を用い６時間では効果がなかった。（Hyg.andMed.15（1990）313−317頁参照）。更に、肝炎Ａ型ウイルス及び肝炎Ｂ型ウイルスは、酸性のペーハー領域では認められなかった。（Ｋ．Ｈ.バルホイザ,上記文献79／80頁参照）。
【０００５】
【発明が解決しようとする課題】
本発明は、例えば透析装置の様な非耐熱性医療機器、装置ならびにその部品を肝炎ウイルス、特に肝炎Ｂ型ウイルスおよびバクテリアに対して、できる限り短時間、低温度で効力を発揮する環境にやさしい消毒剤を提供しようとするものである。
【０００６】
本発明の他の課題は、新しい臨床の適用範囲を開拓し、同時に新しい使用分野でできる限り短時間とできる限り低温でも例えば透析器のような非耐熱性医療機器の消毒に著しく有効な消毒方法を提供することである。特に臨床領域ではこれまで消毒液の使用は効果的でも感染の危険が非常に大きいため報告されていなかった。
周知の通り、透析分野における肝炎感染は、まさに重大な問題になっている。
【０００７】
【課題を解決するための手段】
本発明の消毒剤は、バクテリアおよび肝炎ウイルス、特に肝炎Ｂ型で汚染された透析装置や非耐熱性医療機器、装置ならびにその部品の消毒液に有効であり、ウイルス作用物質としてのクエン酸の含有することが特徴である。
【０００８】
この新しい消毒剤は、今まで使用されていたホルムアルデヒド含有の消毒剤に比べて環境にやさしい点で優れている：とりわけそれは本質的に時間と低温の場合により短時間と比較的低温で消毒できる。
【０００９】
本発明は、バクテリア及び／又は肝炎ウイルス、特に、肝炎Ｂ型ウイルスで汚染された熱に侵され易い医療器具及び装置並びにそれらの部品類の表面を消毒する方法を包含する。肝炎ウイルスを不活性化するこの方法においては、それらの表面は、殺ウイルスに有効な濃度のクエン酸含有水溶液で約20℃〜75℃の温度に約１〜５分間処理される。
【００１０】
本発明による消毒成分の特に好ましい具体例においては、殺ウイルス作用物質として、0.05〜３重量％、好ましくは0.2〜2.5重量％、特に、0.4〜0.6重量％のクエン酸濃度が好適に用いられる。
【００１１】
消毒作用は、温度と作用時間の増加と共に増大するので、クエン酸濃度の前記上限を用いると、短い処理時間、例えば、５〜10分及び低い温度、例えば、雰囲気温度を利用することが可能である。他方、下限濃度を利用すると、より高い温度、好適には60℃、及びより長い接触曝し時間（15分あるいはそれ以上）が必要である。
【００１２】
その他の酸、特にリンゴ酸、乳酸および／または酒石酸を加えると、クエン酸の作用を改良できる。それに加えてバクテリア、ウイルスによる抵抗の可能性が妨げられる。さらに結晶化の傾向が抑圧される。これらの酸はクエン酸成分の５〜 20wt.％、特に約 10wt.％に設定される。
【００１３】
本発明の消毒剤は、目的に応じて自由な酸濃度で使用され、特別な実施態様では 50wt.％の含有量が優れている。使用場所によって無菌の脱イオン水を用いて、例えば２ wt.％の低い濃度に希釈される。
別の望ましい実施態様では約クエン酸 21wt. ％、乳酸２wt. ％とリンゴ酸２wt. ％の含有量が優れている。
【００１４】
下記の実施例で立証されたように、クエン酸 1.5％ wt.水溶液は、５分の作用時間と20℃の作用温度で完全な不活性化が可能である。そのため、本発明による消毒方法は、汚染された表面を20〜75℃、特に20℃の場合、最低５分、好ましくは５分間に、最低1.5wt.％好ましくは 1.5 wt.％のクエン酸水溶液と接触させればよい点で優れている。本発明のその他の課題は、バクテリア胞子を不活性化するためクエン酸含有消毒液を使用することである。消毒剤はその他のレギオネレ・ニューモフィラ菌の不活性化にも使用される。
【００１５】
次に実施例をあげて本発明を詳細に説明する。パーセント表示は特記のない限り重要比を示す。
【００１６】
【実施例】
実施例１
Ａ  試験方法
クエン酸２％溶液中の肝炎ウイルスの試験は、20℃と75℃場合のけん濁試験で実施される。
【００１７】
Ｂ  背景
肝炎Ｂ型ウイルス（ＨＢＶ）に関するビトロ培養システムは、これまで行われていないので、ＨＢＶ感染性の決定に次のＤＮＡポリメラーゼを用いる試験をした。ＤＮＡポリメラーゼは、ウイルスの構造的完全さの良い目印を与えるので、その感染性の間接的目印として役立つ。
【００１８】
Ｃ  デーン粒子懸濁液の調整
使用するデーン粒子を濃縮し、部分的に清浄化するために、慢性のHBsAg（肝炎Ｂ型表面抗原）保菌者からの血清240ml並びにHBcAg（肝炎Ｂ型コア抗原）及びＤＮＡの検出液をＳＷタイプのローターを用いて4℃で25,000rpm，16時間遠心分離した。沈殿物を0.1Ｍ燐酸塩緩衝剤２ml中に0.1％（W／V）の血清アルブミンと共に入れ、サッカロースの20％（W／W）溶液４mlと混和した。次いで、タイプ60のＴＩローターで50,000rpm，２時間遠心分離を行った。傾斜濾過後、デーン粒子を0.1Ｍトリス緩衝剤（pH7.4）中に採取した。デーン粒子の濃度測定法として、Kaplanらの方法（J.Virol.12（1973）995頁参照）によりＤＮＡポリメラーゼ活性の測定を行った。４つのデオキシリボ核酸トリホスフェート全てを加えたのち、液体シンチレーション計数管で放射能を検出して新たに合成されたＤＮＡを測定した。
【００１９】
デーン粒子は、肝炎Ｂ型ウイルスの呼称であって、おそらく、ウイルスそのものである。よりコンパクトなコアは原子キャプシドで、ＨＢｃＡｇを含み生体マトリクス中に免疫蛍光透視法で検出できる。
【００２０】
次の検査では消毒剤として入手可能なクエン酸（メルク社の市販製品、型式244 ）を２倍の蒸留水で溶解して得たクエン酸２ wt.％水溶液が使われた。
２ wt.％の溶液のｐＨ値は 2.2であった。
【００２１】
消毒剤検査は、試験材料をポリアロマー試験管に入れ、連邦厚生省およびドイツウイルス病対策協会の指導要項に従って20℃と75℃の水浴で実施した。試験には、消毒剤としてデーン粒子浮遊１重量部、0.01Ｍトリス緩衝溶液１容量部およびクエン酸２ wt.％溶液８容量部から成るものを使用した。
【００２２】
アルブミンを加える試験では、トリス緩衝溶液を、牛の血清アルブミン溶液（ベリンガベルク社のＢＳＡ）または牛の胎児の血清（ベーリンゲル、マンハイム社のＦＫＳ）の２％液に取り替えた。
【００２３】
更に、この方法によって、用いられる消毒物質によるＤＮＡポリメラーゼ試験における非特異性を決定するために、ウイルスを添加しないで測定をおこなった。
【００２４】
コントロールとして、1.75重量％のホルムアルデヒド溶液（pH7.0）を用いた。この溶液は、ＤＮＡポリメラーゼテストにおいて、以前に、反‐HBV効力を示したものである。
【００２５】
作用時間が経過後直ちに、希釈によって消毒剤の作用を停止させるため 2.4ｍｌの0.01Ｍトリス緩衝溶液で薄めた。その後、サッカーローズ20 wt.％溶液２ｍｌで積層した。続いて、型式ＳＷ60Ｔｉローターの遠心分離器で４℃、50,000rpm で２時間遠心分離を行った。残留物を静かに取り除き、乾燥器で乾燥した後、沈殿物を50μｌの0.01Ｍトリス溶液で再び浮遊させ、この試験でＤＮＳポリメラーゼの活性度を求める為に25μｌを使用した。
【００２６】
さらに試験に従って60℃のクエン酸 0.4 wt.％溶液と60℃でクエン酸0.6wt.％、乳酸0.06 wt.％、リンゴ酸0.006wt.％の混合液を消毒剤に添加した。
【００２７】
消毒剤としてクエン酸水溶液を用いて、部分純化したデーン粒子を使用して実施した不活性化試験の結果は、表１および２に、また比較例としてホルムアルデヒド1.75 wt.％水溶液で実施した試験は表３に示されている。使用したデーン粒子のけん濁液を、この溶液 100μｌが毎分約20,000カウント(cpm）になるように調節した。これは試験物のＨＢＳ濃度が＝108 デーン粒子になることを保証する。
【００２８】
【表１】
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【００２９】
【表２】
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【００３０】
表１は消毒剤としてクエン酸２％ wt.溶液を本発明に従って使用した場合の試験結果を示している。また結果を速度的に立証するため5.15分と30分後に行った。ＨＢＶ活性度の減少に関する初期データとしてトリス緩衝溶液の存在で得られた値を使用した。ウイルスを含まない沈殿物によってこのシステムに対するクエン酸の影響の可能性が調査され、それによってこの方式による立証性の糸口が定義された。クエン酸２ wt.％の溶液を用いて、サンプルとして３個の抜き取り沈殿物は毎分10.10 、および12カウントの値を示した。
【００３１】
表１は、すでに５分経過後、トリス緩衝液を使用しウイルス無しで実施したサンプル中にカウントが見られることを示している、これは、ＤＮＳポリメラーゼ試験では認められなかったウイルスの活性度の最低ラインの値である。この結果は試験サンプル中にアルブミンが存在しているサンプルにも当てはまる。
【００３２】
消毒剤の影響と温度の処理の意味とを分けて試験するために、さらに試験を実施した。その際に20℃でクエン酸２ wt.％溶液の効力と消毒剤を加えない温度の影響を調査した。その結果は表２に示してある。
【００３３】
この表からクエン酸 1.5 wt.％の溶液は20℃で、既に初期のウイルス滴を決定的に沈殿させる状態にあることが認められる。ここでは５分後でも、対照範囲にある、それでバックグラウンドを表すカウント数を知ることができた。それに反して、ＤＮＳポリメラーゼ試験でウイルスの活性を完全に取り除くには、75℃の温度の影響だけでは不十分であることが確かめられた。また５分と15分との作用時間後でも、クエン酸添加のときより、かなり高い値になることが判った。最高のカウント値は牛の胎児の血清の存在中に見出されたことは興味がある。
【００３４】
前の試験で、連邦厚生省およびドイツウイルス病対策協会（ＤＶＶ）の指導要項による化学的消毒剤のウイルスに対する効力検査に用いられているホルムアルデヒド 0.75wt.％溶液は、60分間内にＨＢＶ滴を明らかに減少する状態でないのがわかったので、不活性化試験では、比較のため1.75％のホルムアルデヒドを用いた。
【００３５】
ホルムアルデヒド比較試験の結果は表３に示されている。このことからＤＮＳポリメラーゼ試験で測定するように、ＨＢＶ活性を完全に除去するには、時間を60分かけなければならないことが明らかである。この時間後に、24のカウント値になった。これはウイルス無しで測定された値である。
【００３６】
【表３】
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【００３７】
表４には、クエン酸0.4wt.％溶液、およびクエン酸0.6wt.％、リンゴ酸 0.006wt. ％と乳酸 0.06wt.％との混合液による60℃の試験結果が示されている。
【００３８】
【表４】
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【００３９】
実施例２
Ａ  試験方法
有効成分含量が0.25、0.5 、1.0 および1.5wt.％で、有効成分の 80wt.％がクエン酸で、そのつど成分の10％はリンゴ酸ならびに乳酸である消毒剤を用いて、ドイツ人間医学協会の規定にしたがって50℃、60℃、70℃の場合の定量けん濁試験で消毒剤の消毒特性を公開の目的で実施した。
【００４０】
レギオネレ・ニューモフィラ菌ＳＧ１に対する殺菌性を試験した。不活性化に使用した混合液は、トゥイーン３％、サポニン３％、ヒスシチジイン 0.1％、シスタイン 0.1％であった。培養基としてＢＣＹＥ−アルファー寒天を用いた。培養はＣＯ2 雰囲気で35℃の場合14日間行った。
【００４１】
Ｂ  結果
この一連の試験の結果は表５に示されている。消毒剤は50℃以上の温度を選んだ場合、選んだ添加剤の濃度に依存して、レギオネレ菌に対して効果的であることが判る。ドイツ人間医学協会の要求に応ずるには、低濃度でも70℃で十分である。
【００４２】
【表５】
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【００４３】
実施例３
Ａ  試験方法
実施例２の試験方法を用いて活性物質を0.5 、1.0 および1.5wt.％含む消毒液の胞子消毒性を試験した。クエン酸 80wt.％と、リンゴ酸 10wt.％と乳酸10wt. ％とで構成した。胞子の特性は３種の温度、すなわち73℃、83℃、93℃でドイツ人間医学協会の定量拡散試験法にしたがって水浴でBac. subtilis ATcc 6051 に関して試験した。出発物質の胞子カウントはｍｌ当り9.80 log. ユニットであった。したがって不活性混合物はトゥイーン80.3％、サポニン 0.1％、ヒスシチジン 0.1％と、シスタイン 0.1％とであった。
【００４４】
Ｂ  結果
消毒剤の胞子に対する試験結果は表６に示されている。この表から本発明の消毒剤がバクテリア胞子に対しても93℃できわめて有効であることが判る。
【００４５】
【表６】
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