(57)【要約】本発明は、ホスファチジルコリンを用い、それに一定量のホスファチジルエタノールアミンを添加し、最終製剤のｐＨを調節６から８とする事により、安定で品質の高いエブセレン含有エマルション製剤を得ることができる。【特許請求の範囲】
【請求項１】
エブセレン、油脂、ホスファチジルコリン及びホスファチジルエタノールアミンを含み、ｐＨが６から８のエマルション製剤。
【請求項２】
ｐＨが６．５から７．５である請求項１記載のエマルション製剤。
【請求項３】
ホスファチジルエタノールアミンとホスファチジルコリンの比がホスファチジルエタノールアミン：ホスファチジルコリン＝０．１：９９．９〜１０：９０（重量比）である請求項１から２のいずれか一項に記載のエマルション製剤。
【請求項４】
ホスファチジルエタノールアミンとホスファチジルコリンの比がホスファチジルエタノールアミン：ホスファチジルコリン＝０．１：９９．９〜５：９５（重量比）である請求項１から２のいずれか一項に記載のエマルション製剤。
【請求項５】
油脂がトリグリセリドである請求項１から４のいずれか一項に記載のエマルション製剤。
【請求項６】
油脂が大豆油である請求項１から４のいずれか一項に記載のエマルション製剤。
【請求項７】
製剤が滅菌製剤である請求項１から６のいずれか一項に記載のエマルション製剤。
【発明の詳細な説明】
技術分野
良好な安定性や品質を有するエブセレン含有エマルション製剤に関する。
背景技術
エブセレンは下記の構造式
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を有する化合物で、脳障害の予防及び治療剤（特開平１−１３１１１３号公報参照）として現在開発が進められている。
エブセレンは水への溶解度が極めて低い化合物であり、注射剤として開発するために、有機溶媒にエブセレンを溶解して製剤化していたが、当該製剤を注射するために水又は生理食塩水で希釈するとエブセレンの結晶が析出してきてしまうという問題があった。そこで、エブセレンを１種若しくは数種の天然又は合成リン脂質との混合により安定な水溶液を得る方法（特開平２−２５０８７６号公報参照）が考え出されたが、エブセレンが分解したり、二層に分離してしまったり、あるいは得られた製剤が変色してしまうことがあった。
従来の製剤は、安定性が低く品質の面で満足できるものではなかった。
発明の開示
そこで、本発明者らは鋭意検討した結果、ホスファチジルコリン（以下、ＰＣと表すこともある。）を用い、それに一定量のホスファチジルエタノールアミン（以下、ＰＥと表すこともある。）を添加し、最終製剤のｐＨを調節６から８とする事により、安定で品質の高いエブセレン含有エマルション製剤を得ることができることを見出し、本発明を完成した。
ホスファチジルコリンはレシチン由来のものが好ましく、レシチンとしては卵黄レシチン、大豆レシチン等が挙げられ、中でも卵黄レシチン等が好ましい。
本発明においては、ＰＣに代えて、レシチンを用いることも可能であるが、その場合にはレシチン中のホスファチジルコリンの含量は、９０％以上が好ましく、より好ましくは９８％以上である。
ホスファチジルコリンとホスファチジルエタノールアミンの比は、通常はホスファチジルエタノールアミン：ホスファチジルコリン＝０．１：９９．９〜１０：９０（重量比）、好ましくはホスファチジルエタノールアミン：ホスファチジルコリン＝０．１：９９．９〜５：９５である。また、最終製剤中のレシチンの濃度は、０．５〜４％である。
用いる油脂としては、大豆油、トウモロコシ油、落花生油、サフラワー油、オリブ油、ゴマ油、ヒマシ油、綿実油、カカオ脂、硬化油、牛脂、卵黄油、中鎖脂肪酸トリグリセリド等のトリグリセリドが好ましい。中でも、大豆油、トウモロコシ油、サフラワー油等の植物油が好ましく、特に大豆油が好ましい。
油脂の含量は、通常はエマルション製剤１００ｍＬあたり１ｇから４０ｇ、好ましくは５ｇから３０ｇである。
製剤のｐＨは、６から８が好ましく、より好ましくは６．５から７．５である。ｐＨは、水酸化ナトリウム、ジエタノールアミン、トリエタノールアミン、トロメタミン、グリシン、アンモニア等で調整すればよい。
エブセレンの含量は、用いる油脂によるが、通常、油脂１ｍｌに対し０．１から２ｍｇであり、最終製剤中の濃度は０．０１から０．２％である。
本発明の製剤は、等張にしなくてもよいが、マンニトール、ガラクトース、グルコース、イノシトール、乳糖およびショ糖等の糖、グリセリン、プロピレングリコール、ブチレングリコールおよびエチレングリコール等の多価アルコール、塩化ナトリウム等の等張化剤を用いて等張にしてもよい。
また、製剤化にあたり、適当な添加剤を用いることができ、添加剤としては、ビタミンＣ、ビタミンＥ、ＢＨＴ、亜硫酸ナトリウム等の抗酸化剤、リゾレシチン、オレイン酸、ステアリン酸、デキストリン、シクロデキストリン等の安定化剤、塩酸プロカイン等の無痛化剤等が挙げられる。
本発明にかかるエマルションの粒子径については、肝毒性等の毒性の観点から、１００ｎｍから３００ｎｍが好ましい。
本発明のエマルション製剤は以下のような工程で調整できる。
ホスファチジルコリン及びホスファチジルエタノールアミンを分散若しくは溶解した油脂にエブセレンを溶解、あるいはエブセレンを溶解した油脂にホスファチジルコリン及びホスファチジルエタノールアミンを分散若しくは溶解させる。得られる溶液に、水又はグリセリン等の添加剤を溶解した水溶液を加えホモジナイザー等で粗乳化し、ｐＨを調整後、高圧乳化機あるいは高圧噴射型乳化機で本乳化させる。得られたエマルションのｐＨを調整した後、分注・滅菌することにより、目的のＯ／Ｗ型エマルション製剤を得ることができる。
滅菌法としては、濾過滅菌あるいは加熱滅菌を使用することができる。濾過滅菌の場合には、エマルション製剤のｐＨは６から８とすればよい。また、加熱滅菌の場合には、滅菌前のｐＨは８から９とすればよく、これを滅菌することにより目的のｐＨ６から８のエマルション製剤とすることができる。
発明を実施するための最良の形態
実施例１
▲１▼　濃グリセリン５０ｇを正確に量りとり、注射用蒸留水を加えて全量２０００ｍＬとした。
▲２▼　卵黄レシチン（ホスファチジルコリン含量９８％）１．４８５ｇ及びホスファチジルエタノールアミン０．０１５ｇをナスコルに量りとり、これにクロロホルムを加えて溶解した。次にクロロホルムをエバポレーターにて留去し、デシケーター中にて一晩減圧乾燥して、脂質混合物を得た。
▲３▼　一方、エブセレン０．２ｇと大豆油５０ｇを別の容器に量りとり、オートクレーブ処理（１２１℃、２０分）することによりエブセレンを完全に大豆油中に溶解した。
▲４▼　▲２▼で調製した脂質混合物に、▲１▼で調製した２．５％グリセリン水溶液１４７ｍＬを加え、ＴＫホモミクサー（特殊機化工業（株）製）を用いて１０分間乳化した（粗乳化Ｉ）。
▲５▼　この液に▲３▼のエブセレンの大豆油溶液を徐々に加え、更に１０分間乳化した（粗乳化ＩＩ）。得られた液を室温にもどした後、ｐＨを９．０３に調整した。ｐＨ調整後、マイクロフルイダイザー（Ｍｉｃｒｏｆｌｕｉｄｉｃｓ　Ｃｏ．）を用いて、パス回数２５回で本乳化（コイル部は氷水冷却）を行った後、再度ｐＨを調整した（ｐＨ８．９７）。
▲６▼　ｐＨ調整後、ガラスバイアルに１０ｍＬずつ分注して、１２１℃２０分の条件で滅菌を行い、本願発明のエブセレンを含むＯ／Ｗ型エマルション製剤を得た。
実施例２
大豆油に代えてミグリオールを使用し、表１に記載した成分、量及び条件で、上記製法に準じて調製した。粗乳化ＩＩ終了時にはｐＨを８．９５、マイクロフルイダイザーで本乳化後はｐＨを８．７６に調整した
参考例１
大豆油に代えてミグリオールを使用し、ホスファチジルエタノールアミンを使用しないで、表１に記載した成分、量及び条件で、上記製法に準じて調製した。比較例１から５
表１に記載した成分、量及び条件で、上記製法に準じ比較例１から３を製造した。また、特開平２−２５０８７６号公報の例１４に記載された方法に準じて比較例４及び５を表１に記載した成分、量及び条件で製造した。
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１）ＰＣ：ホスファチジルコリン、２）ＰＥ：ホスファチジルエタノールアミン製剤の物性値の測定方法
外観
製剤を目視により観察した。
主薬含量測定
ＨＰＬＣ法による測定
［ＨＰＬＣ条件］
移動相：リン酸緩衝液（ｐＨ２．５）／アセトニトリル／メタノール＝５／５／３
検出器：ＪＡＳＣＯ　８７５ＵＶ
検出波長：２６２ｎｍ
カラム温度：４０℃付近の一定温度
流速：０．８ｍＬ
注入量：１０μＬ
測定時間：３５分
カラム：ＹＭＣ−Ｐａｃｋ　ＯＤＳ−ＡＭ（栄伸ケミカル社製）
ＡＭ−３０２　１５０ｍｍ×４．６ｍｍＩ．Ｄ．
ガードカラム：ＹＭＣ−Ｇｕａｒｄ　ｐａｃｋ　ＯＤＳ−ＡＭ（栄伸ケミカル社製）
ＢＢＣ−４−ＯＤＳ−５−ＡＭ
１０ｍｍ×４．０ｍｍＩ．Ｄ．
［試料調製法］
エブセレン標準原液及び内部標準液（ＩＳ）の調製
エブセレン５０ｍｇとＩＳ（２，４，５−トリクロロアニリン）１００ｍｇを別々に量りとり、イソプロパノールでそれぞれ正確に５０ｍＬとした。
試料溶液の調製
▲１▼　予めイソプロパノール約４０ｍＬをメスフラスコに入れておき、これにエマルジョン製剤１ｍＬを正確に採り、用いたホールピペットをメスフラスコ内のイソプロパノールで数回共洗いした。
▲２▼　▲１▼のメスフラスコにＩＳ１ｍＬを正確に量り、イソプロパノールで正確に５０ｍＬとした。
▲３▼　▲２▼で調製した液２ｍＬを正確に量り、移動相２ｍＬを正確に加えて振盪混和した。
▲４▼　▲３▼で調製した液を０．４５μｍ　ＨＶフィルターで濾過し、試料溶液とした。
標準溶液の調製
▲１▼　予めイソプロパノール約４０ｍＬをメスフラスコに入れておき、プラセボ製剤（エブセレンを含有しないエマルション製剤）１ｍＬを正確に採り、用いたホールピペットをメスフラスコ内のイソプロパノールで数回共洗いした。
▲２▼　▲１▼のメスフラスコに標準原液１ｍＬとＩＳ１ｍＬを正確に量り、イソプロパノールで正確に５０ｍＬとした。
▲３▼　▲２▼の溶液２ｍＬを正確に量り、移動相２ｍＬを正確に加えて振盪混和した。▲４▼　▲３▼で調製した液を０．４５μｍ　ＨＶフィルターで濾過し、標準溶液とした。
粒子径
５％グルコースで製剤を適宜希釈し測定した。
測定器：Ｐａｒｔｉｃｌｅ　Ｓｉｚｉｎｇ　Ｓｙｓｔｅｍｓ，３８０ＺＬＳ（ＮＩＣＯＭＰ社）
ｐＨ
製剤原液をそのまま測定した。
測定器：Φ４５ｐＨ　Ｍｅｔｅｒ（ＢＥＣＫＭＡＮ社）
結果
実施例及び比較例により得られたエマルション製剤につき、上記の評価項目について、観察・測定した結果を表２に示した。
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３）：分解ピークが認められた。
４）：二層分離前の試料のデータ
上記表２から明らかなように、ホスファチジルコリン含量が高い卵黄レシチンを使用し、製剤中にホスファチジルエタノールアミンを含有し、ｐＨが６から８の製剤は、粒子径の小さな白色懸濁のエマルションとなった。なお、油脂としてミグリオールを使用すると、ホスファチジルエタノールアミンを使用しなくても白色懸濁のエマルションを得ることができるが、ホスファチジルエタノールアミンを使用した製剤に比べ粒子径が大きくなってしまった（参考例１）。
これに対して、ホスファチジルコリン含量が低い（８３％）卵黄レシチンを使用すると（比較例３及び５）、調製された製剤の外観が褐色懸濁となってしまった。
一方、ホスファチジルエタノールアミンを使用しないと（比較例１）、二層分離してしまい、エマルションとならなかった。
そして、ｐＨを調整しないと（比較例２及び４）、二層分離してしまい、エマルションとならなかった。
産業上の利用可能性
本発明の製剤は、エマルションとして安定性に優れ、また、加熱滅菌後でもエマルションとしての優れた安定性を有し、エマルション製剤として優れたものである。
【国際調査報告】
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