(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
ラブドシンを高濃度で含有し、かつ着色成分の混入の少ない延命草抽出液の製造方法であって、
(a)延命草を、エタノール濃度が０〜５０(v/v)％のエタノール水溶液で抽出して一次抽出液を得；
(b)この一次抽出液を２０容積％以下に濃縮して得た残渣に水、次いでエタノールを加え、得られるエタノール水溶液のエタノール濃度が６０〜９０(v/v)％になるように調製し、析出する沈殿物を除去して延命草抽出液を得る；
ことからなる方法。
【請求項２】
工程(a)で用いるエタノール水溶液のエタノール濃度が０〜２０(v/v)％である請求項１に記載の方法。
【請求項３】
工程(b)において一次抽出液を１０容積％以下に濃縮する請求項１に記載の方法。
【請求項４】
工程(b)で調製するエタノール水溶液のエタノール濃度が６０〜８０(v/v)％である請求項１に記載の方法。
【請求項５】
工程(b)において、一次抽出液の濃縮残渣にエタノールを加えてエタノール濃度を９０(v/v)％以上とし、これを静置した後に上清を除去して沈殿物を得る工程を追加し、この沈殿物について水とエタノールによる処理を続ける請求項１に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【産業上の利用分野】
本発明は、ラブドシンを高濃度で含有し、かつ着色成分の混入の少ない延命草抽出液の製造方法に関する。
【０００２】
【従来の技術】
「延命草」は、別名「ヒキオコシ」とも呼ばれ、広く漢方薬、民間薬に使われている生薬である。この延命草の抽出物について、胃液分泌抑制作用、抗腫瘍作用、抗菌作用などが既に知られており、延命草から水あるいはアルコールなどの有機溶媒により抽出液あるいはその有効成分を得る方法が種々検討され開示されている[特開昭４８−５９１０など]。
【０００３】
「ラブドシン(Ｒabdosiin)」は、延命草あるいはＭacrolimia euchromaなどの植物中に含まれる成分の１つであり、優れた活性酸素ラジカル消去作用を有し、活性酸素に起因する各種疾患の治療薬として、例えば抗老化薬、抗動脈硬化薬および抗炎症薬として有用であることが既に報告されている[特願平６−１７８１０５、特願平６−１７８１１０など]。
【０００４】
このラブドシンを延命草などの植物から抽出する場合、従来の方法ではラブドシンを高濃度に含有する抽出液を調製することができない。また、このラブドシンを延命草より分離および精製する方法が学術文献[Phytochemistry, Vol.28, No.9, 2447-2450,(1989)]にて報告されているが、有機溶媒による抽出工程やカラムクロマト精製の工程などを含み、その製法はかなり複雑かつ特殊な装置などを必要とする。
【０００５】
【発明が解決しようとする課題】
本発明者らは、優れた薬理作用を有するラブドシンを医薬、化粧品、食品などに広範に適用すべく、ラブドシンを高濃度に含有し、かつ着色成分の混入の少ない延命草抽出液を、特殊な装置を用いることなく簡便に製造する方法を提供することを技術的課題とした。
【０００６】
【課題を解決するための手段】
上記の課題は以下の抽出方法により解決することができた。即ち、本発明はラブドシンを高濃度で含有し、かつ着色成分の混入の少ない延命草抽出液の製造方法であって、
(a)延命草を、エタノール濃度が０〜５０(v/v)％のエタノール水溶液で抽出して一次抽出液を得；
(b)この一次抽出液を２０容積％以下に濃縮して得た残渣に水、次いでエタノールを加え、得られるエタノール水溶液のエタノール濃度が６０〜９０(v/v)％になるように調製し、析出する沈殿物を除去して延命草抽出液を得る；
ことからなる方法を提供するものである。
【０００７】
本発明の方法において用いる延命草としては、例えばヒキオコシ、クロバナヒキオコシ、カメバヒキオコシなどを挙げることができる。また、ラブドシンを多く含む植物部位としては茎(軸)が挙げられる。茎を適当に処理して細片化したものを使うのが望ましい。延命草は生のまま用いてもよく、また、乾燥した状態で用いてもよい。特に乾燥品として市販されている生薬「延命草」(葉および茎)を用いることができる。
【０００８】
エタノール水溶液による抽出により、目的の延命草抽出液を効率よく製造する際には、
１）ラブドシンの溶出または回収効率の高いエタノール濃度；および
２）抽出液の着色の原因となる褐色成分(ＯＤ440に特異吸収)と緑色成分(ＯＤ665に特異吸収)の混入の低減、および混入したこれら成分の効率的な除去が可能なエタノール濃度；
を選択することが重要である。
【０００９】
本発明者らは、延命草の一次抽出に用いるエタノール水溶液、ならびに一次抽出液の濃縮残渣の溶解および不溶性成分の除去に用いるエタノール水溶液の最適エタノール濃度を検討した。その結果、後記実施例２および３に示すように、
１）延命草の一次抽出に用いるエタノール水溶液のエタノール濃度は、０〜５０(v/v)％、好ましくは０〜２０(v/v)％の範囲内にあるのが良く；そして
２）一次抽出液の濃縮残渣の溶解および不溶性成分の除去に用いるエタノール水溶液のエタノール濃度は、６０〜９０(v/v)％、好ましくは６０〜８０(v/v)％の範囲内にあるのが良い；
ことがわかった。即ち、上記２種類のエタノール水溶液をそれぞれの操作に用いることにより、ラブドシンを高濃度で含有し、かつ着色成分の混入の少ない延命草抽出液を製造し得ることがわかった。
【００１０】
上記の工程(a)で用いるエタノール水溶液の量は、延命草の全重量に対して２〜３０倍量、好ましくは５〜１５倍量であってよい。抽出は、室温で行ってもよく、また、目的成分の溶出を速やかにするために還流冷却器を装着した装置中で加熱下に行ってもよい。抽出圧は常圧であってよく、抽出時間は抽出温度により異なるが通常は１〜４８時間の範囲内である。また、抽出を数回繰り返して目的成分の収量を上げてもよい。目的成分の溶出後、不溶性の抽出残渣を濾過などの通常の手段で取り除き、一次抽出液を得る。
【００１１】
上記の工程(b)における一次抽出液の濃縮は、通常の減圧濃縮装置などにより、その容積がもとの抽出液の容積の２０容積％以下、好ましくは１０容積％以下になるように行う。
このようにして得た濃縮残渣に水を加えて溶解し、次いでエタノールを加えて所望のエタノール濃度にする。濃縮残渣に対して用いる水とエタノールの合計量は、濃縮残渣の重量の２〜３０倍量、好ましくは５〜１０倍量であってよい。この溶液を好ましくは４℃〜室温にて１５時間以上静置し、析出する沈澱物を除去して目的の延命草抽出液を得る。
【００１２】
さらに本発明者らは、工程(b)において、一次抽出液を濃縮した後の残渣にエタノールを加えてエタノール濃度を９０(v/v)％以上とし、これを好ましくは４℃〜室温にて１５時間以上静置し、次いで上清を除去して沈殿物を得る工程を追加し、この沈殿物について工程(b)の水とエタノールによる処理を続けると、さらに良好な結果が得られることを見い出した。従って、本発明方法の好ましい態様においては、工程(b)に上記の追加の工程を加える。
【００１３】
【実施例】
以下に実施例を挙げて本発明をさらに詳しく説明するが、本発明はこれら実施例に限定されるものではない。
実施例１
延命草[高砂薬業(株)]の茎(２００g)をミキサーにて破砕し、これに５０(v/v)％エタノール水(１.４Ｌ)を加え、室温にて２４時間撹拌することにより抽出を行った。次いで、濾過によって不溶性残渣を除去し、残渣を５０(v/v)％エタノール水(０.５Ｌ)で洗浄した。このようにして一次抽出液(１.４Ｌ)を得た。
この一次抽出液を５０mlまで減圧濃縮し、エタノール(４５０ml)を加え、室温にて２４時間静置した。次いで、上清をデカンテーションにて除去し、ペースト状の沈殿を得た。
このペースト状の沈澱に蒸留水(６０ml)を加えて再溶解した。この水溶液に、さらにエタノール(２４０ml)を加え、室温にて２４時間静置した。上清をデカンテーションにて回収し、延命草抽出液(３００ml)を得た。
上記のようにして得た一次抽出液および延命草抽出液に含まれるラブドシンの濃度をＨＰＬＣにて以下の条件で測定した。
カラム：μＢondaspher Ｃ18, ５μm, ３.９φ×１５０mm(ウォーターズ社製)
移動相：ＣＨ3ＣＮ：２％酢酸水溶液＝１５：８５
流速：１ml/min
検出：ＵＶ，２８０nm
カラム温度：３０℃
この測定結果を、ラブドシン収率(一次抽出液中のラブドシン含有量を１００として、最終延命草抽出液中のラブドシン収率を表示)とともに以下の表１に示す。
【表１】
0003761600.tif 000002
【００１４】
実施例２
ラブドシンの含有率が高く、かつ抽出液の着色の原因となる褐色成分(ＯＤ440に特異吸収)および緑色成分(ＯＤ665に特異吸収)の含有率が低い一次抽出液を得るために、一次抽出に用いるエタノール水溶液の最適エタノール濃度を検討した。
延命草の茎(１０g)を種々濃度のエタノール水溶液を用いて還流下に１時間加熱することにより抽出し、ラブドシンと褐色成分および緑色成分の溶出を調べた。この結果を図１および図２に示す。
これらの図から、ラブドシンの溶出はエタノール水溶液のエタノール濃度が０〜５０(v/v)％、好ましくは０〜２０(v/v)％のときに高いことが明らかである。また、これらのエタノール濃度の範囲では、褐色成分(ＯＤ440)については比較的溶出度が高いが、緑色成分(ＯＤ665)についてはその溶出がかなり抑えられることが明らかである。
【００１５】
実施例３
ラブドシンの回収率が高く、かつ褐色成分および緑色成分の混入が少ない延命草抽出液を得るために、延命草の一次抽出液の濃縮残渣の溶解および不溶性成分の除去に用いるエタノール水溶液の最適エタノール濃度を検討した。
延命草の茎(１０g)を１０(v/v)％エタノール水溶液(１００ml)を用いて還流下に１時間加熱することにより抽出した。得られた一次抽出液(１００ml)を減圧濃縮し、その残渣に水、次いでエタノールを加えて種々濃度のエタノール水溶液(１００ml)に調製した。次いで、不溶性成分を除去し、上清に含まれるラブドシンと褐色成分および緑色成分の量を調べた。この結果を図３および図４に示す。ラブドシンは、一次抽出液(１００ml)中のラブドシン含有量を１００として、最終上清中のラブドシン回収％として表示した。
これらの図から、ラブドシンの回収および褐色成分(ＯＤ440)および緑色成分(ＯＤ665)の除去は、エタノール水溶液中のエタノール濃度が６０〜９０(v/v)％、好ましくは６０〜８０(v/v)％のときに良好であることが明らかである。
【図面の簡単な説明】
【図１】  延命草(茎)を種々濃度のエタノール水溶液を用いて一次抽出したときのラブドシンと褐色成分(ＯＤ440)の溶出を示すグラフである。
【図２】  延命草(茎)を種々濃度のエタノール水溶液を用いて一次抽出したときのラブドシンと緑色成分(ＯＤ665)の溶出を示すグラフである。
【図３】  延命草の一次抽出液の濃縮残渣を種々濃度のエタノール水溶液となるように調製し、溶解および不溶性成分除去を行ったときの上清中のラブドシンと褐色成分(ＯＤ440)の溶出を示すグラフである。
【図４】  延命草の一次抽出液の濃縮残渣を種々濃度のエタノール水溶液となるように調製し、溶解および不溶性成分除去を行ったときの上清中のラブドシンと緑色成分(ＯＤ665)の溶出を示すグラフである。
【図１】
0003761600.tif 000003
【図２】
0003761600.tif 000004
【図３】
0003761600.tif 000005
【図４】
0003761600.tif 000006