(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
台湾産の杉林渓高山茶及び／又は白豪烏龍の茶葉及び／又は茎の熱水抽出物を有効成分として含有することを特徴とするメチシリン耐性黄色ブドウ球菌抗菌剤。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は、ヒト及び家畜，ペット等に対して病原性を有するブドウ球菌（Staphylococcus属）のうち、院内感染の病因菌として問題となっているメチシリン耐性黄色ブドウ球菌（methicillin resistant Staphylococcus aureus、以下ＭＲＳＡという）に対して抗菌作用を発揮する抗菌剤に関するものである。
【０００２】
【従来の技術】
ブドウ球菌は、ヒト及び動物における各種炎症、例えば皮膚化膿症，結膜炎，副鼻腔炎，中耳炎，膀胱炎，肺炎，骨髄炎，関節炎，内臓膿瘍の起炎菌として知られている。中でも黄色ブドウ球菌（Staphylococcus aureus）はヒト及び動物の化膿症の重要な原因菌であり、その産生する腸管毒エンテロトキシンにより食中毒の原因菌ともなるものである。近年では特に、多種類の抗生物質に対して耐性を示すＭＲＳＡによる院内感染または菌交代症による重篤な腸炎が問題となっている。
【０００３】
ＭＲＳＡはその名の通り、抗生物質メチシリンに耐性のある黄色ブドウ球菌である。即ち、黄色ブドウ球菌に対し、強力な抗菌作用を有するメチシリン骨格の薬剤（例えばペニシリン系やセファロスポリン系薬剤等）に対し、耐性を獲得したのがＭＲＳＡである。
【０００４】
ＭＲＳＡは、全てのペニシリン系薬剤；第一、第二、第三世代と呼ばれる全てのセフェム系薬剤；モノバクタム系薬剤；カルバペネム系薬剤等、市販されている全てのβ-ラクタム薬に対して広範な薬剤耐性を発揮する。更に、ニューキノロン系薬剤にも耐性を示すことが知られている。最近では、ＭＲＳＡによる感染症の治療目的で使用されていたバンコマイシンにも耐性の菌が出現したことが報告される等、ＭＲＳＡに有効な抗菌剤の提供が益々切望されている。
【０００５】
更にＭＲＳＡは、多剤耐性を示すのみならず、病原性が極めて強く発現される場合がある。特に感染に対して抵抗力の弱くなった易感染患者へのＭＲＳＡ感染が深刻な問題となっている。例えば白血病や癌等で免疫不全状態に陥った患者、高度熱傷患者、寝たきり老人や未熟児等の重篤患者がＭＲＳＡに感染したときには、治癒が極めて困難であるのが実情である。
【０００６】
【発明が解決しようとする課題】
本発明は上記事情に着目してなされたものであり、その目的は、ＭＲＳＡに対して有効な抗菌作用を発揮する抗菌剤を提供することにある。
【０００７】
【課題を解決するための手段】
上記課題を達成し得た本発明のメチシリン耐性黄色ブドウ球菌抗菌剤は、有効成分として、台湾原産の杉林渓高山茶及び／又は白豪烏龍の茶葉及び／又は茎から抽出される熱水抽出物を含有するところに要旨を有するものである。
【０００８】
【発明の実施の形態】
本発明者らは、ブドウ球菌、とりわけＭＲＳＡに対して有効な抗菌作用を発揮し得る抗菌剤を提供すべく、特に茶に着目して鋭意検討してきた。具体的には、日本原産の茶葉３５種、台湾原産の茶葉１５種、中国原産の茶葉５種を用い、ＭＲＳＡを含め種々のブドウ球菌に対する抗菌作用を詳細に調べた。その結果、台湾原産の杉林渓高山茶及び白豪烏龍の二種類の茶葉及び／又は茎が、ブドウ球菌、なかでもＭＲＳＡの生育を極めて有効に阻止し得ることを見出し、本発明を完成した。
【０００９】
一般に茶は、ツバキ科に属する茶樹の若芽（葉）を採取して調製されたものであり、製法により、不発酵茶（緑茶）、半発酵茶（ウーロン茶等）、発酵茶（紅茶）に大別される。更に、製法や原料の種類、形等によって、例えば半発酵茶は烏龍茶と包種茶に大別される。
【００１０】
茶は、その優雅な香りと味のため、嗜好飲料として好まれるのみならず、様々な生理作用を有することが知られている。例えば茶葉中に大量に含まれるカテキン（タンニン）は、抗癌作用や老化防止作用、血中コレステロール濃度の低下作用等を有することが知られている。
【００１１】
最近の研究によれば、茶の中に含まれるカテキンの有用性が盛んにアピールされ、例えば、ある日本茶の浸出液は、猛毒性の病原性大腸菌Ｏ１５７を殺菌し、ベロ毒素も解毒する作用があるなどの報告がされている。本発明者らもカテキンに着目し、ブドウ球菌、特にＭＲＳＡに対する抗菌作用があるのではないかと検討してみたが、濃度の高いカテキン単味では、所望の抗菌効果は得られないことが分かった。
【００１２】
更にカテキンの含有量に留意しつつ、種々の茶を検討してみたが、カテキンとブドウ球菌抗菌作用の間に有為な相関関係は認められなかった。例えば日本の緑茶は、比較的低温度の湯を注いで飲用するので、苦味成分であるカテキン等は茶の中に比較的多量に溶出する。また、焙茶は、煎茶を焙煎したものであるが、焙煎によってカテキン類が減少してしまう。更に、烏龍茶、包種茶の半発酵茶は、沸騰した熱湯を注ぎ、３〜５分蒸らしてから飲用するため、カテキン類は緑茶の半分以下に減少する。この様にカテキン類含有量の異なる種々の茶についてＭＲＳＡに対する抗菌作用を調べてみたところ、前述の如くカテキン量が少ないと考えられている烏龍茶であっても、台湾産の白豪烏龍の茶葉を飲用すると、優れた抗菌作用が得られることが分かった。これに対し、台湾産の凍頂烏龍では、ＭＲＳＡに対する抗菌作用は得られなかった。一方、台湾産の杉林渓高山茶は烏龍茶として使用されるが、これも上記白豪烏龍と同様、優れた抗菌作用を示すことが分かった。従って、本発明による抗菌作用は、必ずしもカテキンだけの作用によるものではないことが伺える。
【００１３】
ちなみに本発明に用いる２種の茶葉につき、カテキン量を調べたところ、非常に少ないか殆ど検出することができなかった。例えば白豪烏龍の場合、この茶葉及び／又は茎１５ｇを９０℃の水６５０ｍＬに浸した後、室温で３０秒間放置し、濾過した濾液中のカテキン量を、ＦＯＬＩＮ−ＤＥＮＩＳ法により測定したところ、カテキン（タンニン酸として検出される）は検出されなかった（検出限界０．０１ｇ／１００ｇ）。一方、杉林渓高山茶についても同様の方法で測定したところ、タンニン酸として僅かに０．０３ｇ／１００ｇ検出されたに過ぎなかった。
【００１４】
本発明に用いた上記の台湾産の茶葉が何故、ＭＲＳＡに対し、極めて優れた抗菌作用を発揮し得るのかは詳細には不明であるが、少なくとも上記基礎実験から、従来より茶葉中の薬効成分と考えられていたカテキン単独では、ＭＲＳＡを始めとするブドウ球菌抗菌作用は認められないことを考慮すれば、台湾の土壌や気候、栽培条件、茶葉中の有効成分等が複雑に絡み合って所望の抗菌作用を示したものと思料される。
【００１５】
ここで、本発明に用いられる茶について説明する。
【００１６】
まず、白豪烏龍は、台湾でしか生産されていない［製造元：新華茶行（有）］発酵度が約６０〜７０％の青茶（烏龍茶）であり、紅茶に近いタイプの烏龍茶として知られている。半発酵茶のうち茶芽より製造したものは白豪烏龍しかなく、通常の半発酵茶に比べ、発酵度が高いという特徴がある。上記茶芽は、心芽が肥大なものが好ましく、主に青心大有、台茶１７号、白毛猴等の茶樹が用いられる。主な産地は、台湾の新竹北埔、苗栗、頭分等である。上記白豪烏龍を調製するに当たっては、まず、茶葉及び／又は茎を長時間弱い陽射しに曝し、茶芽がやや白くなるまで萎縮して茎の表皮が皺状に縮んだ時点で室内に移行し、香りが出るまで撹拌する。次いで、得られた茶芽を低温で炒め、濡らした布で覆った後、粉々にならない程度に揉んでから、約９０℃の熱風で乾燥することにより得られる。
【００１７】
また、杉林渓高山茶は、台湾中央山脈の杉林渓（主な産地は、嘉義縣、南投縣等）で栽培されている発酵度約１５〜３０％の青茶（烏龍茶）であり、主に半球型烏龍（例えば青心烏龍）の茶樹が用いられる。高山栽培による影響で茶葉の色は青緑色を呈しており、苦味や渋みは殆ど無く、喉に香りがいつまでも残る余韻を呈する良質な香茶として知られている。製造方法は通常の烏龍茶と同じであり、弱い陽射しに曝した後、室内に移して撹拌し、発酵させた後、炒茶、加熱、揉捻、乾燥の各工程を経て得られる。具体的には、新華茶行（有）で製造されたものを用いればよい。
【００１８】
本発明の抗菌剤は、有効成分として、上記の茶葉及び/又は茎の熱水抽出物を含有するものである。所望の抗菌効果を得る為には、上記熱水抽出物の濃度を、概ね、約２〜１５％、好ましくは２〜１０％に調整することが推奨される。後記する実施例からも明らかな通り、上記熱水抽出物の濃度を高くすればする程、抗菌作用も上昇する傾向にあるが、服用のし易さ等とのバランスも考慮すれば、通常は、約２〜１０ｇの茶葉に対し、約１００ｃｃのお湯を注いで調整することが推奨される。例えば茶パックとして使用する場合、１パック当たり２．５ｇずつ若しくは５．０ｇずつ詰め、これに６５〜９５℃のお湯を約１００ｃｃ注いで服用することが好ましい。この様な濃度に調整した熱水抽出物は、１回当たり、約１．２〜２．０ｃｃ／ｋｇを、一日３〜４回服用することが推奨される。
【００１９】
本発明では、上述した台湾産の杉林渓高山茶及び白豪烏龍の茶葉及び／又は茎の熱水抽出物を、夫々、単独で使用しても良いし、２種を併用しても構わない。両者を併用するときには、合計含有量が上記範囲になる様、概ね等量ずつ使用することが好ましい。勿論、この量に制限する趣旨では決してなく、所望の抗菌作用が得られる範囲で、被験者の状態、性別、体重等に応じて、含有量を適切に調整することができる。
【００２０】
また、上記抗菌剤には、本発明の作用を損なわない範囲で、ビタミンＣ，ビタミンＥ，ビタミンＫ，葉酸、甘味料、賦型剤、安定化剤等を適宜含有することも可能である。
【００２１】
本発明の抗菌剤はブドウ球菌、即ちStaphylococcus属に属する細菌、例えばＭＲＳＡを含む黄色ブドウ球菌（S. aureus），表皮ブドウ球菌（S. epidermidis），腐生ブドウ球菌（S. saprophyticus）等に広く適用されるが、なかでも特に、MRSAに対し、極めて強力な抗菌作用を発揮する。
【００２２】
以下、実施例に基づいてこの発明を詳細に述べる。ただし、下記実施例はこの発明を制限するものではなく、前・後記の趣旨を逸脱しない範囲で変更実施することは全てこの発明の技術範囲に包含される。
【００２３】
【実施例】
実施例１：種々の台湾産茶及び中国産烏龍茶を用いたＭＲＳＡに対する感受性試験
表１に示す種々の台湾産茶、及び表２に示す種々の中国産烏龍茶を用い、以下の試験に供した。
【００２４】
まず、メチシリン耐性黄色ブドウ球菌（ＭＲＳＡ）を栄養培地内で増殖培養した後、ハロー試験（Halo test）、即ちペーパーディスク感受性試験に供した。具体的には、昭和ディスク製直径８mmのディスクに、表１及び２に示す各濃度の茶を浸み込ませた。各菌コロニーから釣菌したものを平板培地に塗沫し、その上に上記ディスクを３個所セットし、３７℃のふ卵器で２４〜４８時間培養した後、発育阻止円の幅を測定した。その結果を表１に示す。
【００２５】
【表１】
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【００２６】
【表２】
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【００２７】
これらの結果より、表に示す多種類の台湾産茶葉及び中国産茶葉のうち、２．５％の極く低濃度濃度であっても、ＭＲＳＡに対して優れた抗菌作用を発揮したのは、白豪烏龍の茶葉及び杉林渓高山茶の茶葉のみであることが分かる。
【００２８】
これに対し、他の茶葉については抗菌作用は殆ど認められず、１２．５〜１５．０％と、極めて高濃度に調整した場合にのみ、僅かに抗菌作用を示したに過ぎなかった。
【００２９】
尚、表には示していないが、ＭＲＳＡ以外の他のブドウ球菌についても、同様の試験結果が得られたことを実験により確認している。
【００３０】
実施例２：各種菌に対する杉林渓高山茶の感受性試験
（１）供試菌
供試菌として、メチシリン耐性黄色ブドウ球菌（ＭＲＳＡ），黄色ブドウ球菌（Staphylococcus aureus野生株、およびStaphylococcus aureus 209P），表皮ブドウ球菌（Staphylococcus epidermidis、およびStaphylococcus haemolyticus），腐生ブドウ球菌（Staphylococcus saprophyticus）のブドウ球菌；その他に、Streptococcus pneumoniae，Streptococcus agalactiaeの連鎖球菌；Enterococcus faealisの連鎖腸球菌；更に、Escehrichia coli大腸菌，enterohemohemorrhagic E. coli（O157）；Salmonella enteritidis，Salmonella thyphimuriumなどのサルモネラ菌等合計１３菌種を使用した。
【００３１】
（２）試験方法
上記供試菌を予め、各菌種毎に共通の最適栄養培地内で増殖培養したこと以外は、前述した実施例１と同様にして感受性試験に供した。その結果を表３に示す。
【００３２】
【表３】
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【００３３】
表３より、杉林渓高山茶の茶葉を用いれば、ブドウ球菌、なかでもＭＲＳＡに対して極めて優れた抗菌作用を示すことが分かった。同一の茶葉抽出物における抗菌作用を比較すると一目瞭然であるが、ブドウ球菌の標準株２０９Ｐや野生株に対する阻止円幅よりも、ＭＲＳＡに対する阻止円幅は極めて大きかった。
【００３４】
これに対し、ブドウ球菌以外の他の菌種については抗菌作用は殆ど認められず、高濃度に高めた場合にのみ、僅かに抗菌作用を示したに過ぎなかった。
【００３５】
尚、参考までに、ブドウ球菌のうちＭＲＳＡ、黄色ブドウ球菌（Staphylococcus aureus野生株、およびStaphylococcus aureus 209P）、並びにO157に対する阻止円の結果を示す写真を図１に示す。
【００３６】
実施例３：白豪烏龍の各菌種に対する感受性試験
実施例２において、杉林渓高山茶の代わりに白豪烏龍を用いたこと以外は実施例２と同様の感受性試験を行った。得られた結果を表４に示す。
【００３７】
【表４】
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【００３８】
表４より、白豪烏龍の茶葉を用いた場合にも、ブドウ球菌に対し、優れた抗菌作用を発揮した。杉林渓高山茶の場合と同様、ＭＲＳＡに対する抗菌作用が極めて強く観察された。
【００３９】
参考までに、ブドウ球菌のうちＭＲＳＡ、黄色ブドウ球菌（Staphylococcus aureus野生株、およびStaphylococcus aureus 209P）、並びにO157に対する阻止円の結果を示す写真を図２に示す。
【００４０】
実施例４：殺菌効果確認試験（in vitro試験）
本発明に用いられる杉林渓高山茶及び白豪烏龍が、ブドウ球菌に対する殺菌作用を有するか否かを最終的に確認する目的で、生菌浮遊液に夫々の台湾産茶葉液を加え、一定時間後に菌が死滅するかどうか調べた。
【００４１】
詳細には、表３に示す三種の由来株ＭＲＳＡ浮遊液５ｃｃを容れた各試験管に、杉林渓高山茶葉／白豪烏龍茶葉の５％溶液を５ｃｃ加えた後、３７℃のふ卵器内に２４時間放置した後、遠心分離し、沈渣を採取してスタヒロコッカスNo.１１０培地に塗抹した。更に、上記ふ卵器で２４時間培養し、コロニーが発生しなかったときには「−」と判定した。
【００４２】
得られた結果を表５に併記する。
【００４３】
【表５】
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【００４４】
表５より、台湾産の杉林渓高山茶・白豪烏龍の茶葉抽出物を添加した場合はいずれも、コロニーの発生が全く観察されなかったことから、各ＭＲＳＡ菌株の死滅が確認された。
【００４５】
実施例５：殺菌効果確認試験（in vivo試験）
本発明抗菌剤による殺菌作用を更に実証すべく、上記のin vitro試験に加え、ラットを用いたin vivo試験を行った。
【００４６】
詳細には、ＳＰＦ由来のＳＤ系成熟健康雄性ラット合計２４匹を４匹／群に分け、表６に示す三種のＭＲＳＡ菌浮遊液を５ｃｃ／匹ずつラット用ゾンデ針で直接胃内投与した。投与後３０分経過してから、各台湾産の５．０％茶葉抽出物を５ｃｃ／匹ずつ同様に胃内投与した。２４〜４８時間経過後、採取した糞便から釣菌し、スタヒロコッカスNo.１１０培地に塗抹して３７℃のふ卵器に２４〜４８時間培養した。発生したコロニーについてはグラム染色を施し、鏡検してブドウ球菌であるかどうかを観察した。その結果を表６に併記する。尚、本実験を行う前に、実験に供したラットの糞便中にはブドウ球菌は存在していないことを確認している。
【００４７】
【表６】
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【００４８】
表６より、いずれの台湾産の茶葉抽出物においても、コロニーの発生が全く観察されなかったことから、各ＭＲＳＡ菌株の死滅が確認された。
【００４９】
【発明の効果】
本発明は上記の様に構成されており、ブドウ球菌、特にＭＲＳＡに対して、極めて顕著な抗菌作用を示す抗菌剤を提供することができた。本発明の抗菌剤は、上述した２種の茶葉／茎から抽出される熱水抽出液を使用しているので、副作用もなく、安全且つ手軽に服用できる抗菌剤として極めて有用である。
【図面の簡単な説明】
【図１】実施例２において、ＭＲＳＡ、黄色ブドウ球菌（Staphylococcus aureus野生株、およびStaphylococcus aureus 209P）、及びO157に対する阻止円の結果を示す写真である。
【図２】実施例３において、ＭＲＳＡ、黄色ブドウ球菌（Staphylococcus aureus野生株、およびStaphylococcus aureus 209P）、及びO157に対する阻止円の結果を示す写真である。
【図１】
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【図２】
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