(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
鮭から抽出したコラーゲンと、ヘチマとアマチャヅルの雑種細胞抽出物を含有することを特徴とするコラーゲン生成促進剤。
【請求項２】
魚由来のコラーゲンと、ヘチマとアマチャヅルの雑種細胞抽出物を含有することを特徴とする抗老化用化粧料。
【請求項３】
魚由来のコラーゲンの平均分子量が２００〜１，５００であることを特徴とする請求項２記載の抗老化用化粧料。
【請求項４】
魚由来のコラーゲンと、ヘチマとアマチャヅルの雑種細胞抽出物をあわせた配合量が、乾固物に換算して本発明化粧料の全量中、０．００００１〜１０重量％である請求項２〜３のいずれか一項記載の抗老化用化粧料。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は、マリンコラーゲンと、ヘチマとアマチャヅルの雑種細胞抽出物を配合したコラーゲン生成促進剤および抗老化用化粧料に関するものである。
【０００２】
【従来の技術】
皮膚の老化現象のひとつとして、シワの発生や弾力性の低下があげられるが、これには真皮構成成分であるコラーゲンの減少が大きく影響することが知られている。そのため、コラーゲンを配合した数多くの化粧料やコラーゲン生成促進物質を配合した化粧料が開発されている。
【０００３】
【発明が解決しようとする課題】
しかし、コラーゲンを配合した従来の化粧料は一時的な保湿効果はあるものの、真皮中のコラーゲン量を根本的に改善するものではなかった。また、コラーゲン生成促進物質を配合した化粧料の効果も十分ではなく、より効果のあるものが望まれていた。そこで、コラーゲン生成促進剤を組み合わせて化粧料に配合することにより、真皮コラーゲン量の減少をより効果的に抑制し、シワの発生や弾力性の低下を抑制できることを見出し、本発明に至ったものである。
【０００４】
【課題を解決するための手段】
本発明は、マリンコラーゲンと、ヘチマとアマチャヅルの雑種細胞抽出物を配合することを特徴とする化粧料である。本発明でいうマリンコラーゲンは、魚（例えば、鮭、金目鯛、平目、鱈、鰯、鮪等）の皮、浮袋等から得られるコラーゲンである。すなわち、本願明細書に記載されているマリンコラーゲンは魚由来のコラーゲンを示している。最近ではマリンコラーゲンは保湿剤として使用されるようになってきているが、従来多用されているウシ由来のコラーゲンに比べ、マリンコラーゲンはほとんど研究されていなかった。今回、マリンコラーゲンにコラーゲン生成促進効果があることを見出した。さらに、加水分解による低分子のマリンコラーゲンにより高い効果のあることを見出した。また本発明は、コハク化コラーゲンやフタル化コラーゲン等の修飾したマリンコラーゲンも含む。
【０００５】
また、ヘチマとアマチャヅルの雑種細胞抽出物には、セリンプロテアーゼ阻害効果によってコラーゲンの分解を抑制し、肌の老化を防ぐことは知られている（特開平１１−１２４３２５）が、コラーゲン生成促進効果があることは全く知られていない。
【０００６】
マリンコラーゲンにコラーゲン生成促進効果のあることを見出し、さらに効果を高めるために研究した結果、マリンコラーゲンと、ヘチマとアマチャヅルの雑種細胞抽出物を併用することにより、特に顕著な効果を発揮することを見出した。さらに、平均分子量２００〜１，５００の低分子マリンコラーゲンと、ヘチマとアマチャヅルの雑種細胞抽出物を併用することにより、より高い効果を発揮することを見出した。
【０００７】
本発明で用いるマリンコラーゲンの抽出・精製は、通常公知の方法を用いて行うことができる。具体的には、例えば魚皮を粉砕した後に水洗し、酸或いはアルカリ溶液による抽出、ペプシン、トリプシンやヒアロニダーゼ等の酵素により抽出し、塩析や透析の公知の精製手段を施して、平均分子量３０万程度のコラーゲン溶液を得ることができる。このコラーゲン溶液は、抽出した溶液のまま用いても良く、必要に応じて、濃縮、希釈、濾過等の処理および活性炭等による脱色、脱臭処理をして用いても良い。
さらに、このコラーゲン溶液に通常公知の方法でコラゲナーゼを加えることによって、分子量２００〜１，５００程度のコラーゲンペプチドにすることが可能である。
平均分子量に関わらず、こうして得られたコラーゲン溶液にコハク酸やフタル酸等を反応させて化学修飾した、コハク化コラーゲンやフタル化コラーゲンなどのマリンコラーゲンを使用することもできる。
【０００８】
こうして得られたマリンコラーゲンは、濃縮乾固、噴霧乾燥、凍結乾燥等の処理を行い、乾燥物として用いても良い。
【０００９】
上記のマリンコラーゲンは、単独で用いても良いし、２種以上の混合物として用いても良い。
【００１０】
ヘチマとアマチャヅルの雑種細胞抽出物は特開平０１−４４２９７の方法により作出した雑種細胞カルスを用いることができる。
【００１１】
ヘチマとアマチャヅルの雑種細胞のカルスは特開平０１−４４２９７の方法により作出した雑種細胞カルス（Ｆ３、Ｆ４、Ｆ５、Ｆ６）を単独で用いても良いし、２種以上の混合物として用いても良い。
【００１２】
ヘチマとアマチャヅルの雑種細胞を抽出する溶媒としては、水以外に、例えば、低級アルコール類（メタノール、エタノール、１−プロパノール、２−プロパノール、１−ブタノール、２−ブタノール等）、液状多価アルコール（グリセリン、プロピレングリコール、１，３−ブチレングリコール等）、ケトン類（アセトン、メチルエチルケトン等）、アセトニトリル、エステル類（酢酸エチル、酢酸ブチル等）、炭化水素類（ヘキサン、ヘプタン、流動パラフィン等）、エーテル類（エチルエーテル、プロピルエーテル、テトラヒドロフラン等）が挙げられる。好ましくは、水、低級アルコールおよび液状多価アルコールが良く、特に好ましくは、水、エタノール、プロピレングリコールおよび１，３−ブチレングリコールが良い。これらの溶媒は一種でも二種以上を混合して用いても良い。
【００１３】
本発明に用いるマリンコラーゲンと、ヘチマとアマチャヅルの雑種細胞抽出物をあわせた配合量は、乾固物に換算して本発明化粧料の全量中、０．００００１〜１０重量％の配合が良い。０．００００１重量％未満では十分な効果は望めない。１０重量％を越えて配合した場合、効果の増強はなく不経済である。また、添加の方法については、予め加えておいても、製造途中に添加してもよく、作業性を考えて適宜選択すれば良い。
【００１４】
本発明の化粧料には、マリンコラーゲンと、ヘチマとアマチャヅルの雑種細胞抽出物の効果を損なわない範囲内で、通常の化粧料に用いられる成分である油脂類、ロウ類、炭化水素類、脂肪酸類、アルコール類、エステル類、界面活性剤、金属石鹸、pH調整剤、防腐剤、香料、保湿剤、粉体、紫外線吸収剤、増粘剤、色素、酸化防止剤、キレート剤等の成分を配合することができる。
【００１５】
本発明の抗老化用化粧料には、化粧水、乳液、クリーム、美容液、パック、ゲル剤、洗浄剤、浴用剤、ファンデーション、口紅、アイシャドウ等が挙げられる。
【００１６】
【実施例】
以下に、本発明を実施例により詳しく説明する。ただし、本発明の技術的範囲がこれらの製造例等によって限定されるものではない。実施例に示す配合量の部とは重量部を示し、％は重量％を示す。
【００１７】
製造例１：鮭の皮由来のマリンコラーゲン
鮭の皮１ｋｇを用い、通常公知の方法により得られたコラーゲン溶液を濃縮、希釈、濾過等の処理および活性炭等による脱色、脱臭処理を施し、抽出した溶液を凍結乾燥処理し、平均分子量３０万のコラーゲン粉末１４０ｇを得た。
さらに、上記コラーゲン粉末に熱水を加えゼラチンに変性させ、通常公知の方法でコラゲナーゼを加えて加水分解したコラーゲンペプチド溶液を凍結乾燥処理し、低分子のコラーゲンペプチド粉末１３５ｇを得た。
【００１８】
製造例２：ヘチマとアマチャヅルの雑種細胞５０％エタノール抽出物
ヘチマとアマチャヅルの雑種細胞（Ｆ５）１００ｇに１，０００ｍＬの５０％エタノールを加え、常温で７日間抽出した後、ろ過し、その濾液を濃縮し、乾固して、ヘチマとアマチャヅルの雑種細胞５０％エタノール抽出物７ｇを得た。
【００１９】
実施例  美容液
マリンコラーゲンと、ヘチマとアマチャヅルの雑種細胞抽出物の配合量を変化させることによって、表１〜２に示す美容液１〜５、比較例１〜２をつくることができる。
【００２０】
【表１】
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【００２１】
【表２】
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【００２２】
［製造方法］表１〜２とも、成分１〜７及び１２と、成分８〜１１をそれぞれ均一に溶解し、両者を混合して調整する。
【００２３】
【発明の効果】
次に、本発明の効果を詳細に説明するため、実験例を挙げる。
【００２４】
実験例１  コラーゲン生成促進作用
試験には、供試細胞としてヒト皮膚線維芽細胞（６歳男子由来、継代数６）を用い、培地としてＥａｇｌｅ’ｓ  ＭＥＭを用いた。コラーゲン生成量の測定は、コラーゲンタンパク中への３Ｈ−プロリンの取り込みを指標として行った。９６穴プレート（Ｆａｌｃｏｎ３０７２）にヒト皮膚線維芽細胞を２５，０００ｃｅｌｌｓ／ｗｅｌｌ播種し、１０％ＦＣＳを含むＥａｇｌｅ’ｓ  ＭＥＭにて、３７度、５％ＣＯ２条件下で４日間培養した。この間に細胞は、コンフルエントの状態となった。次に、本発明のマリンコラーゲン（製造例１；平均分子量１００、平均分子量２００、平均分子量５００、平均分子量１，５００、平均分子量３，０００、平均分子量３０万）、ヘチマとアマチャヅルの雑種細胞抽出物（製造例２）、マリンコラーゲン（製造例１；平均分子量１００、平均分子量２００、平均分子量５００、平均分子量１，５００、平均分子量３，０００、平均分子量３０万）＋ヘチマとアマチャヅルの雑種細胞抽出物（製造例２）を各々最終濃度５μｇ／ｍｌとなるように調整した無血清のＥａｇｌｅ’ｓ  ＭＥＭ（５０μｇ／ｍｌ  Ｌ−アスコルビン酸、５０μｇ／ｍｌ  β−アミノプロピオニトリル、１８.５ＫＢｑ  ３Ｈ―プロリン含有）に交換し、２４時間培養した。その後、直ちに各ｗｅｌｌにペプシン溶液を加えインキュベーションした後、３Ｈ―プロリン標識されたコラーゲンを抽出した。塩析により精製した後、コラーゲンタンパク中の放射活性を液体シンチレーションカウンター（Ｂｅｃｋｍａｎ  ＬＳ  ５８０１）により測定した。各試料とも５ｗｅｌｌずつ測定し、生成量は平均値±標準偏差で示した。また、試料無添加のものをコントロールとして用いた。
【００２５】
【表３】
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【００２６】
表３に示したように、本発明のマリンコラーゲン＋ヘチマとアマチャヅルの雑種細胞抽出物はヒト皮膚線維芽細胞のコラーゲン生成を有意に促進した。単なるマリンコラーゲン、ヘチマとアマチャヅルの雑種細胞抽出物単独よりマリンコラーゲンと、ヘチマとアマチャヅルの雑種細胞抽出物を併用することにより効果の向上が見られた。また、マリンコラーゲンは、コラーゲン生成促進効果のあるウシ由来のコラーゲンと比べ、単独の場合でも、ヘチマとアマチャヅルの雑種細胞抽出物を併用した場合でもヒト皮膚線維芽細胞のコラーゲン生成をより促進した。また、マリンコラーゲンと、ヘチマとアマチャヅルの雑種細胞抽出物を併用した場合、平均分子量３０万の高分子マリンコラーゲンに比べ、平均分子量２００〜１，５００の低分子マリンコラーゲンは、ヒト皮膚線維芽細胞のコラーゲン生成をより促進した。
【００２７】
実験例２  弾力改善試験１
表１で示した実施例の美容液１と比較例１〜２の美容液を用いて、弾力改善試験を実施した。試験は、健康な女性３０人（３７〜４４才）を対象に３ヶ月行った。被験者を１０人ずつ３群に分け、Ｉ群は美容液１、ＩＩ群は比較例１、ＩＩＩ群は比較例２を使用することとした。使用前に測定した肌の弾力をコントロールとし、使用後の肌の弾力と比較した。肌の弾力は、キュートメーター（Ｃｏｕｒａｇｅ＋Ｋｈａｚａｋａ社製）を用いて測定した。
【００２８】
肌の弾力の測定結果を表４に示した。この表から美容液１は優れた弾力改善効果を有していることが認められた。
【００２９】
【表４】
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【００３０】
表４に示すように、マリンコラーゲンと、ヘチマとアマチャヅルの雑種細胞抽出物を併用することによってマリンコラーゲン、ヘチマとアマチャヅルの雑種細胞抽出物単独で配合したときより効果が高くなることが認められた。
【００３１】
実験例３  弾力改善試験２
表２に示した実施例の美容液１〜５の美容液を用いて、弾力改善試験を実施した。試験は、健康な女性５０人（３４〜４２才）を対象に３ヶ月行った。被験者を１０人ずつ５群にわけ、Ｉ群は美容液１、ＩＩ群は美容液２、ＩＩＩ群は美容液３、ＩＶ群は美容液４、Ｖ群は美容液５を使用することとした。試験は実験例２  弾力改善試験１と同様の方法で実施した。
【００３２】
【表５】
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【００３３】
表５に示すように、マリンコラーゲンと、ヘチマとアマチャヅルの雑種細胞抽出物をあわせた配合量が乾固物に換算して本発明化粧料の全量中、０．００００１重量％以上になるとき、より効果が高くなることが認められた。
【００３４】
実験例４  使用試験
表１に示した実施例の美容液１と比較例１〜２の美容液を用いて、しわ、たるみ、肌の弾力について、アンケート調査を行って老化防止効果を評価した。試験は、実験例２と同様、健康な女性６０人（３５〜４５才）を対象に３ヶ月行った。被験者を２０人ずつ３群に分け、Ｉ群は美容液１、ＩＩ群は比較例１、ＩＩＩ群は比較例２を使用することとした。アンケートの評価基準は、使用前に比べて有効なものを「優」、やや有効なものを「良」、わずかに有効なものを「可」、無効なものを「不可」として評価した。アンケートの結果を表６に示した。この表から実施例のマリンコラーゲンと、ヘチマとアマチャヅルの雑種細胞抽出物を併用する美容液１は優れた老化防止効果を有していることが認められた。
【００３５】
【表６】
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