(57)【要約】下式（１）2002059141.tif 000027（式中、例えば、ｎは０〜６の整数であり、Ａｒは置換されていてもよく他の環と縮合していてもよい芳香環であり、Ｒ１は置換されていてもよい直鎖または分岐鎖状の低級アルキル基であり、Ｒ２は置換されていてもよい直鎖または分岐鎖状の低級アルキル基であり、Ｒ３は置換されていてもよい直鎖もしくは分岐鎖状の低級アルキル基であり、Ｘはアミノ基、ヒドロキシ基または低級アルコキシ基である。）で表されるペプチド誘導体は、平滑筋収縮作用を有する。
2002059141.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
下式（１）
2002059141.tif 000023
（式中、
ｎは０〜６の整数であり、
Ａｒは置換されていてもよく他の環と縮合していてもよい芳香環または置換されていてもよく他の環と縮合していてもよい複素環であり、
Ｒ１は置換されていてもよい直鎖または分岐鎖状の低級アルキル基であり、
Ｒ２は置換されていてもよい直鎖または分岐鎖状の低級アルキル基であり、
Ｒ３は水素原子または置換されていてもよい直鎖もしくは分岐鎖状の低級アルキル基であり、
Ｘはアミノ基、ヒドロキシ基または低級アルコキシ基であり、
また、Ｘがアミノ基である場合、Ｘのアミノ基はＲ２の低級アルキル基と一緒になって環を形成してもよい。）
で表されるペプチド誘導体。
【請求項２】
下式（２）
2002059141.tif 000024
（式中、
ｎは０〜１の整数であり、
Ｒ１は置換されていてもよい直鎖または分岐鎖状の低級アルキル基であり、
Ｒ２は置換されていてもよい直鎖または分岐鎖状の低級アルキル基であり、
Ｒ３は水素原子または直鎖もしくは分岐鎖状の低級アルキル基であり、
Ｘはアミノ基であり、
また、Ｘのアミノ基はＲ２の低級アルキル基と一緒になって環を形成してもよい。）
で表されるペプチド誘導体。
【請求項３】
下式（３）
2002059141.tif 000025
（式中、Ｒ１は置換されていてもよい直鎖または分岐鎖状の低級アルキル基である）
で表されるペプチド誘導体。
【請求項４】
下式（４）
2002059141.tif 000026
（式中、Ｒ１は置換されていてもよい直鎖または分岐鎖状の低級アルキル基である）
で表されるペプチド誘導体。
【請求項５】
Ｒ１が置換されていない直鎖もしくは分岐鎖状の低級アルキル基またはヒドロキシ基で置換された直鎖もしくは分岐鎖状の低級アルキル基である、請求項１〜４のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項６】
請求項１〜５のいずれか１項記載の化合物を１種または２種以上、および薬学的に許容される担体を含む薬学的組成物。
【発明の詳細な説明】
技術分野
本発明は、平滑筋収縮作用を有する新規なペプチド誘導体に関する。
背景技術
モチリンは、２２個のアミノ酸残基を有する単一鎖ペプチドであり、様々な種類の動物の消化管（ＧＩ）粘膜における内分泌細胞から単離された（文献１）（Ｉｔｏ，Ｚ．Ｍｏｔｉｌｉｎ  ａｎｄ  ＣｌｉｎｉｃａｌＡｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ．Ｐｅｐｔｉｄｅｓ１９９７，１８，５９３−６０８）。モチリンの生物学的な機能はまだ十分に確認されていないが、モチリンは多くの種類の動物におけるＧＩ運動を刺激することが知られていた（前掲書）。
１９７３年にブタモチリン（ｐＭＴＬ）のアミノ酸配列が初めて確認された（ＦＶＰＩＦ  ＴＹＧＥＬ  ＱＲＭＱＥ  ＫＥＲＮＫ  ＧＱ）（文献２および３）（Ｂｒｏｗｎ，Ｊ．Ｃ．；  Ｃｏｏｋ，Ｍ．Ａ．；  Ｄｒｙｂｕｒｇｈ，Ｊ．Ｒ．  Ｍｏｔｉｌｉｎ，ａ  Ｇａｓｔｒｉｃ  Ｍｏｔｏｒ  ＡｃｔｉｖｉｔｙＳｔｉｍｕｌａｔｉｎｇ  Ｐｏｌｙｐｅｐｔｉｄｅ：  Ｔｈｅ  Ｃｏｍｐｌｅｔｅ  Ａｍｉｎｏ  Ａｃｉｄ  Ｓｅｑｕｅｎｃｅ．  Ｃａｎ．Ｊ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．，１９７３，５１，５３３−５３７．Ｓｃｈｕｂｅｒｔ，Ｈ．；  Ｂｒｏｗｎ，Ｊ．  Ｃｏｒｒｅｃｔｉｏｎ  ｔｏ  Ａｍｉｎｏ  Ａｃｉｄ  Ｓｅｑｕｅｎｃｅ  ｏｆ  Ｐｏｒｃｉｎｅ  Ｍｏｔｉｌｉｎ．  Ｃａｎ．Ｊ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．，１９７４，５２，７−８．）。ヒトのモチリンは１９８５年に確認され、ブタのモチリンと同じであるが、イヌのモチリンとは７番目、８番目、１２番目、１３番目および１４番目の５つの残基が異なることが見出された（文献１および４）。
モチリンと幾つかのＧＩ症状（初期満腹（ｅａｒｌｙ  ｓａｔｉｅｔｙ）、腹部膨満（ａｂｄｏｍｉｎａｌ  ｄｉｓｔｅｎｓｉｏｎ）、吐き気、嘔吐および食欲不振）との生理学的関連が示唆されている。モチリン類似化合物（文献５−７）およびエリスロマイシン誘導体（文献８−１０）のようなモチリンアゴニストがこのような症状に有効であることが既に示唆されていた。しかし、モチリンレセプター（ＭＴＬ−Ｒ）に結合した後のモチリンアゴニスト作用の詳細なメカニズムは未だ解明されていなかった。モチリンの生物学的および生理学的メカニズムを解明し、モチリンに関係する疾患の治療に応用するため、低分子のモチリンアゴニストの発見が望まれていた。
本発明者らが報告したｐＭＴＬの構造活性相関（ＳＡＲ）において（文献１１）、Ｎ末端部分がその作用（ａｇｏｎｉｓｍ）にとって重要な役割を果たしていることが示唆された。
発明の開示
これらのことから、本発明者らは、Ｎ末端の小ペプチドでもアゴニスト作用を有することになると仮定した。本発明者らは、モチリンのＮ末端部分のテトラペプチドの収縮効果の増大を目的として、テトラペプチドの修飾に努力を集中した。その結果、本発明者らは、式１で表される新規なテトラペプチドのモチリンアゴニストを合成することに成功した。本発明は、この知見に基づいて完成したものである。
本発明は、下式（１）
2002059141.tif 000003
（式中、
ｎは０〜６の整数であり、
Ａｒは置換されていてもよく他の環と縮合していてもよい芳香環または置換されていてもよく他の環と縮合していてもよい複素環であり、
Ｒ１は置換されていてもよい直鎖または分岐鎖状の低級アルキル基であり、
Ｒ２は置換されていてもよい直鎖または分岐鎖状の低級アルキル基であり、
Ｒ３は水素原子または置換されていてもよい直鎖もしくは分岐鎖状の低級アルキル基であり、
Ｘはアミノ基、ヒドロキシ基または低級アルコキシ基であり、
また、Ｘがアミノ基である場合、Ｘのアミノ基はＲ２の低級アルキル基と一緒になって環を形成してもよい。）
で表されるペプチド誘導体を提供する。
また、本発明は、下式（２）
2002059141.tif 000004
（式中、
ｎは０〜１の整数であり、
Ｒ１は置換されていてもよい直鎖または分岐鎖状の低級アルキル基であり、
Ｒ２は置換されていてもよい直鎖または分岐鎖状の低級アルキル基であり、
Ｒ３は水素原子または直鎖もしくは分岐鎖状の低級アルキル基であり、
Ｘはアミノ基であり、
また、Ｘのアミノ基はＲ２の低級アルキル基と一緒になって環を形成してもよい。）
で表されるペプチド誘導体を提供する。
さらに、本発明は、下式（３）
2002059141.tif 000005
（式中、Ｒ１は置換されていてもよい直鎖または分岐鎖状の低級アルキル基である）
で表されるペプチド誘導体を提供する。
さらに加えて、本発明は、下式（４）
2002059141.tif 000006
（式中、Ｒ１は置換されていてもよい直鎖または分岐鎖状の低級アルキル基である）
で表されるペプチド誘導体を提供する。
また、本発明は、上記式（１）〜（４）で表される化合物を１種または２種以上、および薬剤学的に許容される担体を含む薬剤組成物を提供する。
発明を実施するための最良の形態
本発明において、低級アルキル基の炭素数は１〜８である。本発明において、置換されていてもよい直鎖または分岐鎖状の低級アルキル基に関して、置換基を有する直鎖または分岐鎖状の低級アルキル基の置換基の位置および数は特に限定されず、任意の１以上の炭素原子に置換基を有することができる。また、同一の炭素原子が２以上の同一若しくは異なる置換基を有していてもよい。
置換基の種類は特に限定されないが、例えば、ヒドロキシ基、アルキル基で炭素数１〜６の１個若しくは２個のアルキル基で置換されていてもよいアミノ基、カルボキシル基等が挙げられる。特に好ましい置換基はヒドロキシ基である。
本発明において、置換基を有しない好ましい直鎖または分岐鎖状の低級アルキル基としては、例えば、メチル基、エチル基、ｎ−プロピル基、イソプロピル基、ｎ−ブチル基、イソブチル基、ｓｅｃ−ブチル基、ｔｅｒｔ−ブチル基、ｎ−ペンチル基、ｎ−ヘキシル基、ｎ−オクチル基等が挙げられる。
本発明において、置換基を有する好ましい直鎖または分岐鎖状の低級アルキル基としては、ヒドロキシメチル基、１−ヒドロキシエチル基、２−ヒドロキシエチル基、３−ヒドロキシ−ｎ−プロピル基、４−ヒドロキシ−ｎ−ブチル基等を例示することができる。
以下に本発明のペプチド誘導体の一般合成法を記す。
一般合成法
本発明のペプチド誘導体は、たとえば「ペプチド合成の基礎と実験」（丸善：１９８５年）等に記載された、固相若しくは液相による方法（固相法若しくは液相法）により合成される。
インドール環の２‘位チオアルキル化は、インドール環に、トリクロロ酢酸、塩酸、酢酸などの酸類、酢酸ナトリウム等の酸金属類、トリエチルアミン等の塩基類、等の存在下、非存在下で、塩化チオアルキル等のハロゲン化チオアルキル化合物を反応することにより、
もしくは、Ｎ−ブロモサクシイミド等のハロゲン化試薬の存在下、スルフヒドリルアルキル化合物を反応することにより、
もしくは、酢酸水銀、銀トリフラート等の重金属化合物存在下、スルフヒドリルアルキル化合物やビスアルキルジスルフィド化合物を反応することによって、行うことができる。
溶媒は、テトラヒドロフラン（ＴＨＦ）、クロロホルム、ジオキサン、メタノール、ジクロルメタン等の有機溶媒、もしくは、酢酸、トリフルオロ酢酸（ＴＦＡ）等の酸類等、当該化合物が溶解しうる溶媒であればよい。
望ましい反応条件としては、トリフルオロ酢酸中にて、銀トリフラート存在下、ビスアルキルジスルフィド化合物またはアルキルチオールまたはアルキルチオハライドとの反応が挙げられる（下記反応図式１を参照）。
反応図式１
2002059141.tif 000007
（上記反応図式において、Ｒ１は置換されていてもよい直鎖または分岐鎖の低級アルキル基を表し、Ｒ２は置換されていてもよい直鎖または分岐鎖状の低級アルキル基を表し、Ｒ３は水素原子または置換されていてもよい直鎖もしくは分岐鎖状の低級アルキル基を表し、Ｘはアミノ基、ヒドロキシ基または低級アルコシキ基を表し、ｈａｌｏｇｅｎはフッ素、塩素、臭素またはヨウ素を表し、
また、Ｘがアミノ基である場合、Ｘのアミノ基はＲ２の低級アルキル基と一緒になって環を形成してもよい。）
固相法（文献１６および１７）によるペプチドの合成は、例えば、ＭＢＨＡ−樹脂上でＮα−Ｂｏｃ（Ｎα−ｔ−ブチルオキシカルボニル）基若しくはＮα−Ｆｍｏｃ（Ｎα−９−フルオレニルメチルオキシカルボニル）基を用いて行なうことができる（文献１８および１９）。
Ｎα−Ｂｏｃ基に関しては、次の保護アミノ酸を結合する前に、３３−５０％（ｖ／ｖ）トリフルオロ酢酸（ＴＦＡ）／ジクロロメタン（ＤＣＭ）溶液を用いてＮα−Ｂｏｃ基の脱保護を行なう。アシル化種（ａｃｙｌａｔｉｎｇ  ｓｐｅｃｉｅｓ）としては予め調製したＮα−Ｂｏｃアミノ酸対称酸無水物を利用することができる。アミノ酸対称酸無水物は、０．５当量のジシクロヘキシルカルボジイミド（ＤＣＣ）をＤＣＭに溶解した１．０当量のＮα−Ｂｏｃアミノ酸と反応させることにより得られる。
Ｎα−Ｆｍｏｃ基に関しては、次の保護アミノ酸を結合する前に、２０％（ｖ／ｖ）ピペリジン／Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）溶液を用いてＮα−Ｆｍｏｃ基を除去する。すべてのＮα−Ｆｍｏｃアミノ酸はＮ−ヒドロキシベンゾトリアゾール（ＨＯＢｔ）を用いてそのペンタフルオロフェニル（Ｐｆｐ）エステルとして結合することができる。
結合反応の完了はカイザー試験（Ｋａｉｓｅｒ  ｔｅｓｔ）（文献２０）により確かめる。上述の固相法により合成されたペプチドは、側鎖を保護している基に依存して、ＴＦＡ／トリメチルシリルトリフラート（ＴＭＳＯＴｆ）／ｍ−クレゾール／チオアニソール（１００：２８．６：７．４７：１６．７；ｖ／ｖ）またはＴＦＡ／ＴＭＳＯＴｆ／ｍ−クレゾール／チオアニソール／エタンジチオール（１００：１２：６．５：１５：５；ｖ／ｖ）を用いて０℃若しくは室温で１−４時間処理することによって、同時に脱保護し、樹脂から回収する。Ｔｒｐのインドール環の修飾は対応するジスルフィドを用いて銀トリフラートの存在下で行なう（反応図式２を参照）。
反応図式２
2002059141.tif 000008
（上記反応図式２において、ｎは０〜６の整数を表し、
Ａｒは置換されていてもよく他の環と縮合していてもよい芳香環または置換されていてもよく他の環と縮合していてもよい複素環を表し、
Ｒ１は置換されていてもよい直鎖または分岐鎖状の低級アルキル基を表し、Ｒ２は置換されていてもよい直鎖または分岐鎖状の低級アルキル基を表し、Ｒ３は水素原子または置換されていてもよい直鎖もしくは分岐鎖状の低級アルキル基を表し、
Ｘはアミノ基、ヒドロキシ基または低級アルコシキ基を表し、
また、Ｘがアミノ基である場合、Ｘのアミノ基はＲ２の低級アルキル基と一緒になって環を形成してもよい。）
粗ペプチドは次いで、アセトニトリルに溶解した０．１％水性ＴＦＡのリニアグラジエント（ｌｉｎｅａｒ  ｇｒａｄｉｅｎｔ）を用いて溶離する分取逆相高速液体クロマトグラフィー（ＲＰ−ＨＰＬＣ）によって精製する。分析ＲＰ−ＨＰＬＣにより均質であると認められたペプチドフラクションは一緒にし、濃縮し、そして凍結乾燥する。このようにして得られたペプチドはＮＭＲおよび質量分析計（ＦＡＢ−ＭＳ）等によって構造確認を行う事ができる（以下の表３を参照）。
本発明のペプチド誘導体を１種または２種以上、および薬学的に許容し得る希釈剤、湿潤剤、乳化剤、分散剤、補助剤、防腐剤、緩衝剤、結合剤、安定剤などの担体を適宜含む薬学的組成物として、目的とする投与経路に応じ、適当な任意の形態にして投与することができる。
実施例
以下に本発明の実施例を示すが、本発明はこれらの実施例に何ら限定されるものではない。
使用材料
Ｎα−Ｆｍｏｃアミノ酸、またはそのＰｆｐエステル、および固相合成用樹脂はＭｉｌｌｉＧｅｎ／Ｂｉｏｓｅａｒｃｈ（Ｂｕｒｌｉｎｇｔｏｎ，ＭＡ）または渡辺化学（Ｗａｔａｎａｂｅ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ）（日本）のいずれかから購入した。ＴＦＡ、ＴＭＳＯＴｆ、１，３−ジイソプロピルカルボジイミド（ＤＩＣ）およびＨＯＢｔは渡辺化学（Ｗａｔａｎａｂｅ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ）（日本）から購入した。ジ−ｎ−プロピルジスルフィド、ｎ−オクチルジチオジグリコール酸、トリフルオロメタンスルホン酸銀、トリエチルアミン、ＮＨ４Ｆ、２−メルカプトエタノール、ｍ−クレゾール、エタンジチオールおよびチオアニソールは東京化成工業（Ｔｏｋｙｏ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｉｎｄｕｓｔｒｙ）（日本）から購入した。ジメチルジスルフィドは半井テスク（Ｎａｋａｒａｉ  Ｔｅｓｑｕｅ（日本）から購入した。ＤＭＦ、ジクロロメタン（ＤＣＭ）およびＮ−メチル−２−ピロリジノン（ＮＭＰ）は国産化学（Ｋｏｋｕｓａｎ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ）（日本）から購入した。メタノール、ジエチルエーテル、ｎ−ヘキサン、ＮａＯＨおよび酢酸は純正化学（Ｊｕｎｓｅｉ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ）（日本）から購入した。ＨＰＬＣ用アセトニトリルおよび水は関東化学（Ｋａｎｔｏ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ）（日本）または純正化学（Ｊｕｎｓｅｉ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ）（日本）から購入した。
固相ペプチド合成
ペプチドはＦｍｏｃ固相合成法に従って合成した（文献１６及び１７）。反応は震盪機によって実施した。
ペプチド精製
粗ペプチドはＲＰ−ＨＰＬＣによって精製した。このＲＰ−ＨＰＬＣは、Ｃ１８  ＹＭＣ−Ｐａｃｋ  Ｓ−３４３−１５（ＹＭＣ、日本）、１５μｍ、１２０オングストローム、２０×２５０ｍｍを用いた、分取ＨＰＬＣ（Ｗａｔｅｒｓ  ｓｅｍｉ−ｐｒｅｐ  ｓｙｅｔｅｍ）を用いて行ない、一定濃度のＴＦＡ（０．１％、ｖ／ｖ）を含む水中でリニアアセトニトリルグラジエント（ｌｉｎｅａｒａｃｅｔｏｎｉｔｒｉｌｅ  ｇｒａｄｉｅｎｔ）（０−６０％）を用い、１０ｍｌ／分の流速で６０分間にわたって溶離した。分析ＨＰＬＣによって精製されたペプチドのフラクションを凍結乾燥し、得られた粉末はそれらの生物学的アッセイまで−２０℃以下で保存した。
ペプチド分析
最終生成物の純度は、２つの異なるカラムとリニアグラジエント溶媒による方式で日立Ｄ−７０００ＨＰＬＣシステムを使用してＲＰ−ＨＰＬＣにより確認した。一方の溶媒システム（Ａ）は、ＹＭＣ−Ｐａｃｋ  Ａ−３０２分析カラム（４．６×１５０ｍｍ、１２０オングストローム，５μｍ粒子サイズ、ＹＭＣ、日本）を用いて、１ｍｌ／分の速度で２５分間にわたって１００：０〜３０：７０（０．１％水性ＴＦＡ：０．１％ＴＦＡ含有アセトニトリル）まで変化させた。他方の溶媒システム（Ｂ）は、μ  ＢＯＮＤＡＳＰＨＥＲＥ  ５μ  Ｃ１８  ３００オングストローム（３．９×１５０ｍｍ、Ｗａｔｅｒｓ）を用いて、１０ｍｌ／分の速度で２５分間にわたって１００：０〜３０：７０または１００：０〜２：９８（０．１％水性ＴＦＡ：メタノール）まで変化させた。
ＮＭＲは、ＪＥＯＬ  ＪＮＭ−Ａ５００、Ｖａｒｉａｎ  Ｍｅｒｃｕｒｙ  ３００、およびＪＥＯＬ  ＪＮＭ−ＥＸ２７０上で実施した。スペクトルは、ＤＭＳＯ−ｄ６で測定した。化合物の分子量は、ＦＡＢ−ＭＳ（ＶＧ７０−２５０ＳＥＱ，ＶＧ  Ａｎａｌｙｔｉｃａｌ，英国）により測定した。値はＭＨ＋で示した。
参考例１：Ｈ−Ｐｈｅ−Ｖａｌ−Ｔｒｐ−Ｉｌｅ−ＮＨ２の合成
２０％（ｖ／ｖ）ピペリジン／ＤＭＦ溶液でＭＢＨＡ−樹脂（０．７９ｍｍｏｌ／ｇ；３．４１８ｇ）を２回処理し、ＤＭＦで８回洗浄した。次いでＮα−Ｆｍｏｃ−Ｉｌｅ−ＯＰｆｐ（３．５当量）加えて、それからＨＯＢｔ（３．５当量）を加えた。結合反応混合物を震盪機上で室温で３時間震盪した。次いで樹脂をＤＭＦで６回洗浄した。続いて対応するＮα−Ｆｍｏｃアミノ酸Ｐｆｐエステル（Ｎα−Ｆｍｏｃ−Ｔｒｐ−ＯＰｆｐ、Ｎα−Ｆｍｏｃ−Ｖａｌ−ＯＰｆｐ、Ｎα−Ｆｍｏｃ−Ｐｈｅ−ＯＰｆｐ）を順次結合し、ペプチド鎖を伸長した。各結合サイクルにおいて次のような操作を行なった。
（１）２０％（ｖ／ｖ）ピペリジン／ＤＭＦ溶液による３０分間の処理を２回実施。
（２）ＤＭＦによる８回の洗浄。
（３）アミノ酸活性エステルの結合。
（４）ＤＭＦによる６回の洗浄。
最後のアミノ酸を上記の通り結合した後、以下の工程を付加した。
（５）２０％（ｖ／ｖ）ピペリジン／ＤＭＦ溶液による３０分間の処理を２回実施。
（６）ＤＭＦによる８回の洗浄。
ペプチド鎖の伸長は、Ｎα−Ｆｍｏｃアミノ酸Ｐｆｐエステル（３当量）とＨＯＢｔ（３当量）とを用いＤＭＦ中で行なった。すべての結合反応は震盪機上で室温下３−３０時間震盪することで行なった。最後のＮα−Ｆｍｏｃ基の脱保護の後に、ペプチド樹脂をメタノールで洗浄し、真空乾燥して、Ｈ−Ｐｈｅ−Ｖａｌ−Ｔｒｐ−Ｉｌｅ−ＭＢＨＡ−樹脂（４．７２５ｇ）を得た。
このペプチド−樹脂をＴＦＡ／ＴＭＳＯＴｆ／ｍ−クレゾール／チオアニソール／エタンジチオール（１００：１２：６．５：１５：５；ｖ／ｖ）を用いて、０℃で２時間および室温で更に２時間処理した。溶液を濾過し、冷ジエチルエーテル（５００ｍｌ）およびｎ−ヘキサン（１５００ｍｌ）に滴下した。沈殿したペプチドを遠心分離によって集め、ジエチルエーテルとｎ−ヘキサン（１：３）で洗浄し、乾燥した。残渣を０℃でメタノール（１０ｍｌ）および水（６ｍｌ）中で２−メルカプトエタノール（０．２ｍｌ）で処理した。得られた溶液を０．５時間かけてトリエチルアミンでｐＨ８．０に調整し、次いで、酢酸を用いてｐＨ４．０まで酸性化した。粗ペプチドを分取ＨＰＬＣによって精製した。この分取ＨＰＬＣは、０．１％水性ＴＦＡに対して０−６０％の０．１％ＴＦＡ含有アセトニトリルのリニアグラジエントを用い、１０ｍｌ／分の流速で６０分間にわたって行なった。凍結乾燥した生成物は白色の非晶質固体であった。
収量：０．１３４ｇ（９％）
１Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）δ０．８３（１２Ｈ，ｍ，４×ＣＨ３），１．０６，１．３７（２Ｈ，ｍｍ，ＣＨ２），１．６５（１Ｈ，ｍ，ＣＨ），１．９８（１Ｈ，ｍ，ＣＨ），２．７２−３．２４（４Ｈ，ｍ，２×ＣＨ２），４．１３（２Ｈ，ｍ，２×ＣＨ），４．２９（１Ｈ，ｍ，ＣＨ），４．６７（１Ｈ，ｍ，ＣＨ），６．９４−７．３０（１０Ｈ，ｍ，ａｒｏｍａｔｉｃ−Ｈ），７．６２（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝６．９Ｈｚ，ＮＨ），８．２５（２Ｈ，ｍ，２×ＮＨ），８．３５（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝９．２Ｈｚ，ＮＨ）
実施例１：Ｈ−Ｐｈｅ−Ｖａｌ−Ｔｒｐ（２’−ＳＣＨ２ＣＨ２ＯＨ）−Ｉｌｅ−ＮＨ２（１）の合成
2002059141.tif 000009
または
2002059141.tif 000010
参考例１の化合物（Ｈ−Ｐｈｅ−Ｖａｌ−Ｔｒｐ−Ｉｌｅ−ＮＨ２）（０．１９１ｇ，０．３３９ｍｍｏｌ）を氷冷下でビス−（２−アセトキシ−エチル）−ジスルフィド（０．８２ｇ，３．４４ｍｍｏｌ）のＴＦＡ（２０ｍｌ）溶液に加え、その後トリフルオロメタンスルホン酸銀塩（０．８４４９ｇ，３．２９ｍｍｏｌ）を加えた。この溶液を氷冷下で８時間、室温で１２０時間撹拌した。減圧下で溶媒を除去し、残渣をメタノール（１０ｍｌ）中に溶解した。この溶液を１Ｎ−ＮａＯＨ水溶液で０．５時間かけてｐＨ９に調整して濾過し、次いで酢酸を用いてｐＨ４に酸性化した。減圧下で溶媒を除去し、得られた残渣をＲＰ−ＨＰＬＣで精製した。凍結乾燥した生成物は白色の非晶質固体であった。
収量：０．１０８ｇ（５０％）
１Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）δ０．８０（１２Ｈ，ｍ，４×ＣＨ３），１．０３，１．３８（２Ｈ，ｍｍ，ＣＨ２），１．６６（１Ｈ，ｍ，ＣＨ），１．９２（１Ｈ，ｍ，ＣＨ），２．７７，２．８７（４Ｈ，ｍｍ，２×ＣＨ２），３．０４，３．２０（２Ｈ，ｄｄ，ｄｄ，Ｊ＝５．９，８．３，１４．２Ｈｚ，ＣＨ２），３．４７（２Ｈ，ｍ，ＣＨ２），４．１２（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝７．３，８．６Ｈｚ，ＣＨ），４．２６（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝６．９，８．２Ｈｚ，ＣＨ），４．６８（１Ｈ，ｄｔ，Ｊ＝６．６，７．９Ｈｚ，ＣＨ），４．９１（１Ｈ，ｔ，Ｊ＝５．６Ｈｚ，ＣＨ），６．９５（２Ｈ，ｍ，ａｒｏｍａｔｉｃ−Ｈ），７．０３（１Ｈ，ｔ，Ｊ＝７．４Ｈｚ，ａｒｏｍａｔｉｃ−Ｈ），７．１２（５Ｈ，ｓ，ａｒｏｍａｔｉｃ−Ｈ），７．２０（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝７．６Ｈｚ，ａｒｏｍａｔｉｃ−Ｈ），７．６６（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．９Ｈｚ，ＮＨ），７．６９（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝７．９Ｈｚ，ＮＨ），８．１９（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝７．９Ｈｚ，ＮＨ），８．４０（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．９Ｈｚ，ＮＨ）
実施例２：Ｈ−Ｐｈｅ−Ｖａｌ−Ｔｒｐ（２’−ＳＣＨ３）−Ｉｌｅ−ＮＨ２（２）の合成
2002059141.tif 000011
または
2002059141.tif 000012
参考例１の化合物（Ｈ−Ｐｈｅ−Ｖａｌ−Ｔｒｐ−Ｉｌｅ−ＮＨ２）（０．５８９ｇ，１．０５ｍｍｏｌ）を氷冷下でジメチルジスルフィド（１．０２８ｇ，１０．９ｍｍｏｌ）のＴＦＡ（２０ｍｌ）溶液に加え、その後トリフルオロメタンスルホン酸銀塩（１．３０８ｇ，５．０９ｍｍｏｌ）を加えた。この溶液を冷ジエチルエーテル（４００ｍｌ）およびｎ−ヘキサン（１００ｍｌ）に滴下した。沈殿したペプチドを遠心分離によって集め、ジエチルエーテルで洗浄した。残渣をメタノール（３０ｍｌ），酢酸（３０ｍｌ）および水（２０ｍｌ）に溶かし、ジチオスレイトール（０．８ｇ）を加え１時間処理した。沈殿物を遠心分離によって除去した。減圧下で溶媒を除去し、得られた残渣を分取ＲＰ−ＨＰＬＣによって精製した。凍結乾燥した生成物は白色の非晶質固体であった。
収量：０．３２２ｇ（４３％）
１Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）δ０．８１（１２Ｈ，ｍ，４×ＣＨ３），１．０３，１．３４（２Ｈ，ｍｍ，ＣＨ２），１．６４（１Ｈ，ｍ，ＣＨ），１．９３（１Ｈ，ｍ，ＣＨ），２．４０（３Ｈ，ｓ，ＣＨ３），２．８７（２Ｈ，ｍ，ＣＨ２），３．０３，３．２４（２Ｈ，ｄｄ，ｄｄ，Ｊ＝６．３，８．０，１３．９Ｈｚ，ＣＨ２），４．１２（２Ｈ，ｍ，２×ＣＨ），４．２３（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝６．９，８．３Ｈｚ，ＣＨ），４．６９（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝７．１，１４．４Ｈｚ，ＣＨ），６．９９−７．０６（４Ｈ，ｍ，ａｒｏｍａｔｉｃ−Ｈ），７．１７（５Ｈ，ｍ，ａｒｏｍａｔｉｃ−Ｈ），７．６０（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．９Ｈｚ，ＮＨ），７．６７（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝７．９Ｈｚ，ＮＨ），８．２１（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝７．９Ｈｚ，ＮＨ），８．４４（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．９Ｈｚ，ＮＨ）
実施例３：Ｈ−Ｐｈｅ−Ｖａｌ−Ｔｒｐ（２’−ＳＣＨ２ＣＨ２ＣＨ３）−Ｉｌｅ−ＮＨ２（３）の合成
2002059141.tif 000013
または
2002059141.tif 000014
標題の化合物は、参考例１の化合物（Ｈ−Ｐｈｅ−Ｖａｌ−Ｔｒｐ−Ｉｌｅ−ＮＨ２）（０．５９２ｇ，１．０５ｍｍｏｌ）およびジ−ｎ−プロピルジスルフィドから実施例２に記載された方法に従い合成された。
収量：０．３６９ｇ（４７％）
１Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）δ０．７６（１２Ｈ，ｍ，４×ＣＨ３），０．９３（３Ｈ，ｔ，Ｊ＝７．３Ｈｚ，ＣＨ３），１．０５，１．４１（２Ｈ，ｍｍ，ＣＨ２），１．４８（２Ｈ，ｓｉｘ，Ｊ＝７．３Ｈｚ，ＣＨ２），１．６４（１Ｈ，ｍ，ＣＨ），１．９５（１Ｈ，ｍ，ＣＨ），２．７９−２．９５（４Ｈ，ｍ，２×ＣＨ２），３．０４，３．２６（２Ｈ，ｄｄ，ｄｄ，Ｊ＝６．３，８．０，１４．２Ｈｚ，ＣＨ２），４．１２（２Ｈ，ｍ，２×ＣＨ），４．３３（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝７．３，８．２Ｈｚ，ＣＨ），４．６６（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝７．３，１４．９Ｈｚ，ＣＨ），６．９０−７．０６（４Ｈ，ｍ，ａｒｏｍａｔｉｃ−Ｈ），７．１７（５Ｈ，ｍ，ａｒｏｍａｔｉｃ−Ｈ），７．５５（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．９Ｈｚ，ＮＨ），７．６６（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝７．６Ｈｚ，ＮＨ），８．１９（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．２Ｈｚ，ＮＨ），８．４４（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．９Ｈｚ，ＮＨ）
実施例４：Ｈ−Ｐｈｅ−Ｖａｌ−Ｔｒｐ（２’−ＳＣＨ２ＣＨ２ＮＭｅ２）−Ｉｌｅ−ＮＨ２（４）の合成
2002059141.tif 000015
標題の化合物は、参考例１の化合物（Ｈ−Ｐｈｅ−Ｖａｌ−Ｔｒｐ−Ｉｌｅ−ＮＨ２）（０．５９２ｇ，１．０５ｍｍｏｌ）およびＮ，Ｎ，Ｎ‘，Ｎ’−テトラメチルシスタミン（文献２１）から実施例２に記載された方法に従い合成された。
収量：０．５８９ｇ（６３％）
１Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）δ０．８２（１２Ｈ，ｍ，４×ＣＨ３），１．０２，１．３８（２Ｈ，ｍｍ，ＣＨ２），１．６５（１Ｈ，ｍ，ＣＨ），１．９４（１Ｈ，ｍ，ＣＨ），２．７７（６Ｈ，ｓ，２×ＣＨ３），２．８７−３．００（６Ｈ，ｍ，３×ＣＨ２），４．１１（２Ｈ，ｍ，２×ＣＨ），４．２７（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝６．８，８．４Ｈｚ，ＣＨ），４．７３（１Ｈ，ｄｔ，Ｊ＝７．６，６．８Ｈｚ，ＣＨ），６．９１−７．２７（９Ｈ，ｍ，ａｒｏｍａｔｉｃ−Ｈ），７．６９（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝９．２Ｈｚ，ＮＨ），７．７４（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．２Ｈｚ，ＮＨ），８．２８（１Ｈ，ｍ，ＮＨ），８．４５（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．９Ｈｚ，ＮＨ）
実施例５：Ｈ−Ｐｈｅ−Ｖａｌ−Ｔｒｐ（２’−ＳＣＨ２ＣＯＯＨ）−Ｉｌｅ−ＮＨ２（５）の合成
2002059141.tif 000016
標題の化合物は、参考例１の化合物（Ｈ−Ｐｈｅ−Ｖａｌ−Ｔｒｐ−Ｉｌｅ−ＮＨ２）（０．５８４ｇ，１．０４ｍｍｏｌ）およびジチオジグリコール酸から実施例２に記載された方法に従い合成された。
収量：０．３３５ｇ（４２％）
１Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）δ０．７９（１２Ｈ，ｍ，４×ＣＨ３），１．００，１．３９（２Ｈ，ｍｍ，ＣＨ２），１．６６（１Ｈ，ｍ，ＣＨ），１．９１（１Ｈ，ｍ，ＣＨ），２．８１，２．９３（２Ｈ，ｄｄ，ｄｄ，Ｊ＝４．６，８．３，１４．２Ｈｚ，ＣＨ２），３．０９，３．２０（２Ｈ，ｄｄ，ｄｄ，Ｊ＝５．９，８．３，１４．２Ｈｚ，ＣＨ２），３．６３（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝１．７Ｈｚ，ＣＨ２），４．１１（２Ｈ，ｍ，２×ＣＨ），４．２５（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝６．９，８．２Ｈｚ，ＣＨ），４．７１（１Ｈ，ｄｔ，Ｊ＝６．９，７．４Ｈｚ，ＣＨ）６．９０−７．２３（９Ｈ，ｍ，ａｒｏｍａｔｉｃ−Ｈ），７．６５（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１０．２Ｈｚ，ＮＨ），７．６８（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．６Ｈｚ，ＮＨ），８．１２（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．２Ｈｚ，ＮＨ），８．５１（１Ｈ，ｂｒ，ＮＨ）
上記実施例１〜５で製造されたペプチド誘導体の物性データ（ＨＰＬＣによる保持時間およびＦＡＢ−ＭＳ）を表１に示す。
2002059141.tif 000017
2002059141.tif 000018
参考例２：Ｈ−Ｐｈｅ−ｃ［−Ｎε−Ｌｙｓ−Ｔｒｐ−βＡｌａ−］の固相ペプチド合成
アルコキシベンジルアルコール−樹脂（０．７８ｍｍｏｌ／ｇ；３．４１ｇ）をＤＭＦ中に入れて、一晩中膨潤させた。Ｎα−Ｆｍｏｃ−βＡｌａ−ＯＨ（８当量）をＤＭＦで溶解し、この溶液にＤＩＣ（４当量）を加えた。ＤＭＡＰ（１当量）をＤＭＦで溶解した。このアミノ酸／ＤＩＣ溶液およびＤＭＡＰ溶液をＤＭＦ中で樹脂に加えて、ゆっくりと震盪し、そして室温で一晩中放置した。
この樹脂をＤＭＦで２回、メタノールで２回、酢酸で２回、メタノールで２回、そしてＤＭＦで３回洗浄した。続いて対応するＮα−Ｆｍｏｃアミノ酸Ｐｆｐエステル（Ｎα−Ｆｍｏｃ−Ｔｒｐ−ＯＰｆｐ、Ｎα−Ｆｍｏｃ−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）−ＯＰｆｐ、Ｎα−Ｆｍｏｃ−Ｐｈｅ−ＯＰｆｐ）を順次結合させ、ペプチド鎖を伸長した。各結合サイクルにおいて次のような操作を行なった。
（１）２０％（ｖ／ｖ）ピペリジン／ＤＭＦ溶液による３０分間の処理を２回実施。
（２）ＤＭＦによる６回の洗浄。
（３）アミノ酸活性エステルの結合。
（４）ＤＭＦによる６回の洗浄。
ペプチド鎖の伸長は、Ｎα−Ｆｍｏｃアミノ酸Ｐｆｐエステル（２．５当量）とＨＯＢｔ（２．５当量）とを用いＤＭＦ中で行なった。すべての結合反応は震盪機上で室温下３−１２時間震盪することで行なった。最後のＮα−Ｆｍｏｃアミノ酸の結合の後に、ペプチド樹脂をメタノールで洗浄し、真空乾燥して、保護されたＦｍｏｃ−Ｐｈｅ−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）−Ｔｒｐ−βＡｌａ−樹脂（５．９３ｇ）を得た。
この保護されたペプチド−樹脂をＴＦＡ／アニソール／エタンジチオール（９４：５：１；ｖ／ｖ）を用いて、０℃で３時間処理した。溶液を濾過し、減圧濃縮し、過剰の冷ジエチルエーテルに滴下した。沈殿したペプチドを濾過し、ジエチルエーテルで洗浄し、乾燥した。このペプチドをＤＭＦ（３Ｌ）およびピリジン（３Ｌ）で溶解し、Ｂｏｐ試薬を添加して、室温で２４時間放置した。減圧下で溶媒を除去し、残渣に水を加えた。濾過により沈殿物を集め、水で洗浄して、乾燥した。こうして得られたＦｍｏｃ−環状ペプチドは２０％（ｖ／ｖ）ピペリジン／ＤＭＦ溶液で室温下０．５時間処理し、Ｆｍｏｃ基を除去した。溶媒を減圧下で除去し得られた粗ペプチドを分取ＨＰＬＣによって精製した。この分取ＨＰＬＣは、０．１％水性ＴＦＡに対して０．１％ＴＦＡ含有アセトニトリルのリニアグラジエントを用い、１０ｍｌ／分の流速で６０分間にわたって行なった。凍結乾燥した生成物は白色の非晶質固体（０．１３３ｇ）であった。
総括収率：５７％
ＦＡＢ−ＭＳ：５３３．２８７６，
ＨＰＬＣ  ＲＴ：（Ａ）１３．３６（９８％），（Ｂ）１８．２９（１００％）
実施例６：Ｈ−Ｐｈｅ−ｃ［−Ｎε−Ｌｙｓ−Ｔｒｐ（２’−ＳＣＨ２ＣＨ２ＯＨ）−βＡｌａ−］（６）の合成
2002059141.tif 000019
または
2002059141.tif 000020
Ｈ−Ｐｈｅ−ｃ［−Ｎε−Ｌｙｓ−Ｔｒｐ（２’−ＳＣＨ２ＣＨ２ＯＨ）−βＡｌａ−］は、Ｈ−Ｐｈｅ−ｃ［−Ｎε−Ｌｙｓ−Ｔｒｐ−βＡｌａ−］（参考例２）から実施例１に記載した方法と同様な方法で合成した。
収量：１０４ｍｇ（収率：２２％）
ＦＡＢ−ＭＳ：６０９．２８５９，
ＨＰＬＣ  ＲＴ：（Ａ）１３．３３（９６％），（Ｂ）１８．７３（１００％）
試験例
以下に、本発明化合物を用いた２つの試験内容（レセプター結合試験および収縮試験）並びにその結果を記す。
試験内容
下記試験においては、表１に示す合成ペプチドが、ＭＴＬ−Ｒに対する結合活性およびウサギ平滑筋収縮活性について試験された。
１．レセプター結合試験
雄性日本白色家兎（約３ｋｇ）を用いた、ＭＴＬ−Ｒに対する結合試験は、Ｂｏｒｍａｎｓ  ｅｔ  ａｌ．によって発表された方法（文献２２）をわずかに改変し実施した。ウサギをチオペンタールナトリウム（３０ｍｇ／ｋｇ，静脈注射）で麻酔した後に、放血し安楽死させた。その後、上部小腸（約５０ｃｍ）を速やかに摘出し、氷冷した０．９％生理食塩液中で夾雑物を除去した。５０ｍＭＴｒｉｓ−ＨＣｌ緩衝液（ｐＨ＝７．４）中で、結合組織および粘膜を除去し平滑筋層を得た。５０ｍＭのＴｒｉｓ−ＨＣｌ緩衝液（ｐＨ＝７．４）中でテーパー型ホモゲナイザー（Ｗｈｅａｔｅｎ，Ｍｉｌｌｖｉｌｌｅ，ＮＪ）を用い、２０００ｒｐｍの速度で約３０秒間、平滑筋組織をホモゲナイズした。得られた懸濁液を１５００ｒｐｍで５分間遠心分離し、上澄を捨て沈殿に新鮮な緩衝液を加え洗浄した。このホモゲナイズの操作を２回行い、沈殿を回収した。得られた沈殿を５０ｍＭ  Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ緩衝液（ｐＨ＝８．０、ＭｇＣｌ２１０ｍＭおよび、１．５％  ウシ血清アルブミンを添加）に再度懸濁させたものを試料として以下の結合試験を行った。以上の操作は全て氷冷下で行った。試料（約１．０ｍｇ蛋白質／アッセイ）を２５ｐＭの１２５Ｉ−ｐＭＴＬ（比活性、３３−６６ｋＢｑ／ｐｍｏｌ）および各種濃度の被検化合物とともに２５℃で１２０分間インキュベートした。インキュベーション後に、氷冷した緩衝液を加え反応を停止させ、１５００ｒｐｍで５分間遠心分離し、遊離の１２５Ｉ−ＭＴＬを除去した。得られた沈殿を氷冷緩衝液で２回洗浄したものの放射活性を、ガンマカウンター（ＡＲＣ−３００、アロカ、東京、日本）で測定した。１２５Ｉ−ｐＭＴＬの結合を５０％に減弱させる各被検化合物の濃度をＩＣ５０とし、ＭＴＬ−Ｒ結合活性の指標とした。
２．収縮試験
雄性日本白色家兎（約３ｋｇ）を用いた。このウサギをチオペンタールナトリウム（３０ｍｇ／ｋｇ，静脈注射）麻酔下で、放血し安楽死させた後、上部小腸を速やかに摘出した。十二指腸を改良型クレブス液（組成（単位ｍＭ）：ＮａＣｌ  １２０．０，ＫＣｌ  ４．７，ＣａＣｌ２２．４，ＫＨ２ＰＯ４１．０，ＭｇＳＯ４１．２，ＮａＨＣＯ３２４．５およびグルコース５．６（ｐＨ＝７．４））中で洗浄し、腸間膜などの結合組織を除去し、長軸に沿って切り、およそ長さ１０ｍｍ、幅３ｍｍの標本を作成した。混合物ガス（９５％Ｏ２：５％ＣＯ２）を通気した２８℃の改良型クレブス液で満たした１０ｍｌのマグヌス管中に、この標本を懸垂した（文献２４）。１．０ｇの荷重を加え、等張性の収縮反応を、トランスデューサー（ＭＥ−４０１２、Ｍｅｄｉｃａｌ  Ｅｌｅｃｔｒｏｎｉｃｓ  Ｃｏ．，東京）で測定し、記録器（Ｔｙｐｅ  ３０６６、Ｙｏｋｏｇａｗａ−Ｄｅｃｓ、東京）で記録した。１００μＭのＡＣｈに対し安定した収縮が得られることを確認した後に、被検化合物の検討を行った。被検化合物は低濃度から累積的に添加した。各被検化合物の収縮活性は、１００μＭのＡＣｈによって誘発される収縮力に対する百分率で表し、５０％の収縮をを与える添加濃度をＥＣ５０として表した。
試験結果
上記２つの試験結果を表２および表３に示す。
2002059141.tif 000021
2002059141.tif 000022
重要なことは、実施例１、２、３、および６の化合物がいずれも収縮試験に関しては効力を示しており（これらの化合物のＥＣ５０は、それぞれ、１４．２、５８．１、３３．２、および６３．０μＭである）、Ｎ−末端テトラペプチドはｉｎ  ｖｉｔｒｏでモチリンアゴニストとして作用し得ることが立証された。収縮作用に関して活性を有する実施例１、２、３および６の誘導体の構造的特徴は、トリプトファン環上における脂肪族側鎖の存在である。
産業上の利用の可能性
本発明の新規なテトラペプチド誘導体は、モチリンレセプターに対する結合活性を有し、ウサギの平滑筋を収縮させる作用を有するので、モチリンが関連する疾患の治療に応用することが期待される。
文献リスト
（１）  Ｉｔｏｈ，Ｚ．  Ｍｏｔｉｌｉｎ  ａｎｄ  Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ．Ｐｅｐｔｉｄｅｓ  １９９７，１８，５９３−６０８．
（２）  Ｂｒｏｗｎ，Ｊ．Ｃ．；Ｃｏｏｋ，Ｍ．Ａ．；Ｄｒｙｂｕｒｇｈ，Ｊ．Ｒ．  Ｍｏｔｉｌｉｎ，ａ  Ｇａｓｔｒｉｃ  Ｍｏｔｏｒ  Ａｃｔｉｖｉｔｙ  Ｓｔｉｍｕｌａｔｉｎｇ  Ｐｏｌｙｐｅｐｔｉｄｅ：Ｔｈｅ  Ｃｏｍｐｌｅｔｅ  Ａｍｉｎｏ  Ａｃｉｄ  Ｓｅｑｕｅｎｃｅ．Ｃａｎ．Ｊ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．，１９７３，５１，５３３−５３７．
（３）  Ｓｃｈｕｂｅｒｔ，Ｈ．；Ｂｒｏｗｎ，Ｊ．  Ｃｏｒｒｅｃｔｉｏｎ  ｔｏ  Ａｍｉｎｏ  Ａｃｉｄ  Ｓｅｑｕｅｎｃｅ  ｏｆ  Ｐｏｒｃｉｎｅ  Ｍｏｔｉｌｉｎ．Ｃａｎ．Ｊ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．１９７４，５２，７−８．
（４）  ＭｃＩｎｔｏｓｃｈ，Ｃ．Ｈ．Ｓ．；Ｂｒｏｗｎ，Ｊ．Ｃ．  Ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ  ａｎｄ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ  ｏｆ  Ｐｏｒｃｉｎｅ  ａｎｄ  Ｃａｎｉｎｅ  Ｍｏｔｉｌｉｎｓ  ａｎｄ  Ｅｖｉｄｅｎｃｅ  ｆｏｒ  ｔｈｅ  Ｅｘｉｓｔｅｎｃｅ  ｏｆ  Ｍｏｔｉｌｉｎ  ｉｎ  Ｏｔｈｅｒ  Ｓｐｅｃｉｅｓ．Ｉｎ  Ｍｏｔｉｌｉｎ  Ｉｔｏｈ，Ｚ．，Ｅｄ；Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ：Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ，１９９０；ｐｐ  １３−３０．
（５）  Ｋｉｔａｚａｗａ，Ｔ．；Ｉｃｈｉｋａｗａ，Ｓ．；Ｙｏｋｏｙａｍａ，Ｔ．；Ｉｓｈｉｉ，Ａ．；Ｓｈｕｔｏ，Ｋ．  Ｓｔｉｍｕｌａｔｉｎｇ  ａｃｔｉｏｎ  ｏｆ  ＫＷ−５１３９  （Ｌｅｕ１３−ｍｏｔｉｌｉｎ）  ｏｎ  ｇａｓｔｒｏｉｎｔｅｓｔｉｎａｌ  ｍｏｔｉｌｉｔｙ  ｉｎ  ｔｈｅ  ｒａｂｂｉｔ．Ｂｒ．Ｊ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．１９９４，１１１，２８８−２９４．
（６）  Ｋｉｔａｚａｗａ，Ｔ．；Ｔａｎｅｉｋｅ，Ｔ．；Ｏｈｇａ，Ａ．  Ｅｘｃｉｔａｔｏｒｙ  Ａｃｔｉｏｎ  ｏｆ  ［Ｌｅｕ１３］Ｍｏｔｉｌｉｎ  ｏｎ  ｔｈｅ  Ｇａｓｔｒｏｉｎｔｅｓｔｉｎａｌ  Ｓｍｏｏｔｈ  Ｍｕｓｃｌｅ  Ｉｓｏｌａｔｅｄ  Ｆｒｏｍ  ｔｈｅ  Ｃｈｉｃｋｅｎ．Ｐｅｐｔｉｄｅｓ  １９９５，１６，１２４３−１２５２．
（７）  Ａｓｓｃｈｅ，Ｇ．Ｖ．；Ｄｅｐｏｏｒｔｅｒｅ，Ｉ．；Ｔｈｉｊｓ，Ｔ．；Ｊａｎｓｓｅｎｓ，Ｊ．Ｊ．；Ｐｅｅｔｅｒｓ，Ｔ．Ｌ．  Ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ−ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ  ｓｔｉｍｕｌａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｃｈｏｌｉｎｅｒｇｉｃ  ｍｏｔｏｒ  ｎｅｒｖｅｓ  ｏｒ  ｓｍｏｏｔｈ  ｍｕｓｃｌｅ  ｂｙ  ［Ｎｌｅ１３］ｍｏｔｉｌｉｎ  ｉｎ  ｔｈｅ  ｉｓｏｌａｔｅｄ  ｒａｂｂｉｔ  ｇａｓｔｒｉｃ  ａｎｔｒｕｍ．Ｅｕｒ．Ｊ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．１９９７，３３７，２６７−２７４．
（８）  Ｓｈｉｂａ，Ｙ．；Ｍｉｚｕｍｏｔｏ，Ａ．；Ｓａｔｏｈ，Ｍ．；Ｉｎｕｉ，Ａ．；Ｉｔｏｈ，Ｚ．  Ｅｆｆｅｃｔ  ｏｆ  Ｎｏｎｐｅｐｔｉｄｅ  Ｍｏｔｉｌｉｎ  Ａｇｏｎｉｓｔ  ＥＭ５２３  ｏｎ  Ｒｅｌｅａｓｅ  ｏｆ  Ｇｕｔ  ａｎｄ  Ｐａｎｃｒｅａｔｉｃ  Ｈｏｒｍｏｎｅｓ  ｉｎ  Ｃｏｎｓｃｉｏｕｓ  Ｄｏｇｓ．Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌｏｇｙ  １９９６，１１０，２４１−２５０．
（９）  Ｙａｍａｄａ，Ｋ．；Ｃｈｅｎ，Ｓ．；Ａｂｄｕｌｌａｈ，Ｎ．Ａ．；Ｔａｎａｋａ，Ｍ．；Ｉｔｏ  Ｙ．；Ｉｎｏｕｅ，Ｒ．  Ｅｌｅｃｔｒｏｐｈｙｓｉｏｌｏｇｉｃａｌ．ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ  ｏｆ  ａ  ｍｏｔｉｌｉｎ  ａｇｏｎｉｓｔ，ＧＭ６１１，ｏｎ  ｒａｂｂｉｔ  ｄｕｏｄｅｎａｌ  ｓｍｏｏｔｈ  ｍｕｓｃｌｅ．Ａｍ．Ｊ．Ｐｈｙｓｉｏｌ．１９９６，２７１，Ｇ１００３−Ｇ１０１６．
（１０）  Ｖｅｒｈａｇｅｎ，Ｍ．Ａ．；Ｓａｍｓｏｍ，Ｍ．；Ｍａｓｅ，Ｂ．；Ｇｅｙｐｅｎｓ，Ｂ．Ｊ．；Ｇｈｏｏｓ，Ｂ．Ｊ．；Ｓｍｏｕｔ，Ａ．Ｊ．Ｅｆｆｅｃｔｓ  ｏｆ  ａ  ｎｅｗ  ｍｏｔｉｌｉｄｅ，ＡＢＴ−２２９，ｏｎ  ｇａｓｔｒｉｃ  ｅｍｐｔｙｉｎｇ  ａｎｄ  ｐｏｓｔｐｒａｎｄｉａｌ  ａｎｔｒｏｃｌｕｏｄｅｎａｌ  ｍｏｔｉｌｉｔｙ  ｉｎ  ｈｅａｌｔｈｙ  ｖｏｌｕｎｔｅｅｒｓ．Ａｌｉｍｅｎｔ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．Ｔｈｅｒ．１９９７，１１，１０７７−１０８６．
（１１）  Ｈａｒａｍｕｒａ，Ｍ．；Ｔｓｕｚｕｋｉ，Ｋ．；Ｏｋａｍａｃｈｉ，Ａ．；Ｙｏｇｏ，Ｋ．；Ｉｋｕｔａ，Ｍ．；Ｋｏｚｏｎｏ，Ｔ．；Ｔａｋａｎａｓｈｉ，Ｈ．；Ｍｕｒａｙａｍａ，Ｅ．  Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ−Ａｃｔｉｖｉｔｙ  Ｓｔｕｄｙ  ｏｆ  Ｉｎｔａｃｔ  ｐｏｒｃｉｎｅ  Ｍｏｔｉｌｉｎ．Ｃｈｅｍ．Ｐｈａｒｎｉ．Ｂｕｌｌ．１９９９，４７，１５５５−１５５９．
（１６）  Ｔｈｅ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ  ｏｆ  Ｐｅｐｔｉｄｅ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ；Ｂｏｄａｎｓｋｙ，Ｍ．，Ｂｏｄａｎｓｋｙ，Ａ．，Ｅｄｓ．；Ｓｐｒｉｎｇｅｒ−Ｖｅｒｌａｇ：Ｂｅｒｌｉｎ，Ｈｅｉｄｅｌｂｅｒｇ，１９８４．
（１７）  Ｓｔｅｗａｒｔ，Ｊ．Ｍ．；Ｙｏｕｎｇ，Ｊ．Ｄ．  Ｓｏｌｉｄ  Ｐｈａｓｅ  Ｐｅｐｔｉｄｅ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ；２ｎｄ  ｅｄ．，Ｐｉｅｒｃｅ  ＣｈｅｍｉｃａｌＣｏ．：Ｒｏｃｋｆｏｒｄ，ＩＬ，１９８４．
（１８）  Ｍａｔｓｕｅｄａ，Ｇ．Ｒ．；Ｓｔｅｗａｒｔ，Ｊ．Ｍ．  Ａ  ｐ−Ｍｅｔｈｙｌｂｅｎｚｈｙｄｒｙｌａｍｉｎｅ  Ｒｅｓｉｎ  ｆｏｒ  Ｉｍｐｒｏｖｅｄ  Ｓｏｌｉｄ−Ｐｈａｓｅ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ  ｏｆ  Ｐｅｐｔｉｄｅ  Ａｍｉｄｅｓ．Ｐｅｐｔｉｄｅｓ  １９８１，２，４５−５０．
（１９）  Ｃａｒｐｉｎｏ，Ｌ．Ａ．；Ｈａｎ，Ｇ．Ｙ．  Ｔｈｅ  ９−Ｆｌｕｏｒｅｎｙｌｍｅｔｈｏｘｙｃａｒｂｏｎｙｌ  Ａｍｉｎｏ−Ｐｒｏｔｅｃｔｉｎｇ  Ｇｒｏｕｐ．Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｌｉｅｍ．１９７２，３７，３４０４−３４０９．
（２０）  Ｋａｉｓｅｒ，Ｅ．；Ｃｏｌｅｓｃｏｔｔ，Ｒ．Ｌ．；Ｂｒｏｓｓｉｎｇｅｒ，Ｃ．Ｄ．；Ｃｏｏｋ，Ｐ．Ｉ．  Ｃｏｌｏｒ  ｔｅｓｔ  ｆｏｒ  ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ  ｏｆ  ｆｒｅｅ  ｔｅｒｍｉｎａｌ  ａｍｉｎｏ  ｇｒｏｕｐｓ  ｉｎ  ｔｈｅ  ｓｏｌｉｄ−ｐｈａｓｅ  ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ  ｏｆ  ｐｅｐｔｉｄｅｓ．Ａｎａｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．１９７０，３４，５９５−５９８．
（２１）  Ｌｏｉｂｎｅｒ，Ｈ．；Ｐｒｕｃｈｎｅｒ，Ａ．；Ｓｔｕｔｚ，Ａ．Ｒｅｄｕｋｔｉｖｅ  Ｍｅｔｈｙｌｉｅｒｕｎｇ  Ｐｒｉｍａｒｅｒ  ｕｎｄ  Ｓｅｋｕｎｄａｒｅｒ  Ａｍｉｎｅ  ｍｉｔ  Ｈｉｌｆｅ  ｖｏｎ  Ｆｏｒｍａｌｄｅｈｙｄ  ｕｎｄ  Ｓａｌｚｅｎ  Ｄｅｒ  Ｐｈｏｓｐｈｏｒｉｇｅｎ  Ｓａｕｒｅ．Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ  Ｌｅｔｔ．１９８４，２５，２５３５−２５３６．
（２２）  Ｂｏｒｍａｎｓ，Ｖ．；Ｐｅｅｔｅｒｓ，Ｔ．Ｌ．；Ｖａｎｔｒａｐｐｅｎ，Ｇ．  Ｍｏｔｉｌｉｎ  ｒｅｃｅｐｔｏｒｓ  ｉｎ  ｒａｂｂｉｔ  ｓｔｏｍａｃｈ  ａｎｄ  ｓｍａｌｌ  ｉｎｔｅｓｔｉｎｅ．Ｒｅｇｕｌ．Ｐｅｐｔ．１９８６，１５，１４３−１５３．
（２４）  Ａｄａｃｈｉ，Ｈ．；Ｔｏｄａ，Ｈ，；Ｈａｙａｓｈｉ，Ｓ．；Ｎｏｇｕｃｈｉ，Ｍ．；Ｓｕｚｕｋａ，Ｔ．；Ｔｏｒｉｚｕｋａ，Ｋ．；Ｙａｊｉｍａ，Ｈ．；Ｋｏｄａｍａ，Ｋ．  Ｍｅｃｈａｎｉｓｍ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｅｘｃｉｔａｔｏｒｙ  ａｃｔｉｏｎ  ｏｆ  ｍｏｔｉｌｉｎ  ｏｎ  ｉｓｏｌａｔｅｄ  ｒａｂｂｉｔ  ｉｎｔｅｓｔｉｎｅ．Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌｏｇｙ  １９８１，８０，７８３−７８８．
【国際調査報告】
2002059141.tif 000028
2002059141.tif 000029
2002059141.tif 000030