(57)【要約】セレノプロテインＰおよび／または当該蛋白質のペプチドもしくは当該ペプチド群を主要構成成分とする新規な免疫異常性疾患予防および治療剤が提供される。本発明による免疫異常性疾患予防および治療剤は、慢性関節リウマチや多発性硬化症によって代表される自己免疫疾患および気管支喘息によって代表されるアレルギー疾患に対して好適に使用できる。【特許請求の範囲】
【請求項１】
セレノプロテインＰおよび／または当該蛋白質のＣ末端側ペプチドもしくは当該ペプチド群を主要構成成分とする免疫異常性疾患予防および治療剤。
【請求項２】
前記蛋白質のＣ末端側ペプチドもしくは当該ペプチド群が、セレノプロテインＰのＣ末端側２６０位アミノ酸から３６２位アミノ酸までのアミノ酸配列、１もしくは数個のアミノ酸が欠失、置換もしくは付加された当該アミノ酸配列、前記いずれかのアミノ酸配列の部分配列または前記アミノ酸配列をその一部に含有するアミノ酸配列を有する細胞障害抑制活性を示すペプチドまたは当該ペプチド群である、請求項１記載の免疫異常性疾患予防および治療剤。
【請求項３】
前記蛋白質のＣ末端側ペプチドもしくは当該ペプチド群が、次式：
2002076493.tif 000010
および／または
2002076493.tif 000011
（式中、Ｘａａはセレノシステインを表す）
で表されるアミノ酸配列、１もしくは数個のアミノ酸が欠失、置換もしくは付加された当該アミノ酸配列、前記いずれかのアミノ酸配列の部分配列または前記いずれかのアミノ酸配列をその一部に含有するアミノ酸配列を有するペプチドまたは当該ペプチド群である請求項１または請求項２記載の免疫異常性疾患予防および治療剤。
【請求項４】
免疫異常性疾患が自己免疫疾患である、請求項１から請求項３のいずれかに記載の免疫異常性疾患予防および治療剤。
【請求項５】
自己免疫疾患が慢性関節リウマチまたは多発性硬化症である請求項４に記載の免疫異常性疾患予防および治療剤。
【請求項６】
免疫異常性疾患がアレルギー疾患である、請求項１から請求項３のいずれかに記載の免疫異常性疾患予防および治療剤。
【請求項７】
アレルギー疾患が気管支喘息である、請求項６に記載の免疫異常性疾患予防および治療剤。
【発明の詳細な説明】
技術分野
本願発明は、医療用医薬品の分野に属する新規な免疫異常性疾患の予防・治療用薬剤に関する。さらに詳細には、血漿蛋白質の一種であるセレノプロテインＰを、好適には当該セレノプロテインＰのＣ末端側ペプチドもしくは当該ペプチド群を有効成分として含有する慢性関節リウマチ、多発性硬化症に代表される自己免疫疾患、および気管支喘息に代表されるアレルギー疾患等の免疫異常性疾患の予防・治療用薬剤に関する。
背景技術
免疫系は、本来外界からの有害な異物の侵入に対する生体の防御機構として存在する。しかし、時にはこの免疫系の働きが結果的に生体に有害であることがあり、これをアレルギーと呼んでいる。このようなアレルギーが原因となって引き起こされる疾患を免疫異常性疾患と呼ぶ。
一般的には、外界からの異物に対する過敏な生体反応を起こす疾患をアレルギー疾患と呼び、例えば、ＩからＩＶ型までが知られている。Ｉ型アレルギーは、ＩｇＥ抗体が関与する反応であり、気管支喘息、一部のじんま疹、アレルギー性鼻炎およびアナフィラキシーなどがその代表的疾患である。ＩＩ型アレルギーは、細胞傷害型の反応であり、自己免疫性溶血性貧血、グッドパスチャー症候群などがこの反応により起こる疾患である。ＩＩＩ型アレルギーは、免疫複合体と補体が関与する反応である。血清病、糸球体腎炎、ループス腎炎、過敏性肺臓炎、アルチュス反応、ヤーリッシ・ヘルクスハイマー反応などがこの例である。ＩＶ型アレルギーは抗原により感作されたＴ細胞による反応である。この反応の代表はツベルクリン反応である。このＩＶ型アレルギーによる疾患は薬品などによる接触性皮膚炎、結核性空洞の形成、結節核型らいの肉芽腫様皮膚炎などがある。
生体は、外界からの異物に対するのみならず、自己の成分に対してもアレルギー反応を起こす。これを自己アレルギーと呼ぶが、これをもとにある病態が生じた時には、自己免疫疾患と呼ぶ。自己免疫疾患は、全身性の疾患であるが、臓器特異性のない疾患と、特異性のある疾患の２つに大別される。
臓器特異的自己免疫疾患には、橋本甲状腺炎（慢性甲状腺炎）、原発性粘液水腫、甲状腺中毒症（甲状腺剤中毒症）、悪性貧血、グッドパスチャー症候群、急性進行性糸球体腎炎、重症筋無力症、尋常性天疱瘡、水疱性類天疱瘡、インスリン抵抗性糖尿病、若年性糖尿病、アジソン病、萎縮性胃炎（自己免疫性萎縮性胃炎）、男性不妊症、早発性更年期、水晶体原性ぶどう膜炎、交感性脈炎、多発性硬化症（ｍｕｌｔｉｐｌｅ  ｓｃｌｅｒｏｓｉｓ；以下、ＭＳと呼称することがある）、潰瘍性大腸炎、原発性胆汁性肝硬変、慢性活動性肝炎、自己免疫性溶血性貧血、発作性血色素尿症（発作性ヘモグロビン尿症）、特発性血小板減少性紫斑病、シェーグレン症候群がある。
臓器非特異的自己免疫疾患には、慢性関節リウマチ（Ｒｈｅｕｍａｔｏｉｄ  ａｒｔｈｒｉｔｉｓ；以下、ＲＡと呼称することがある）、全身性エリテマトーデス、円板状エリテマトーデス、多発性筋炎、強（鞏）皮症、混合結合組織病がある。
このような自己免疫疾患には、多彩な自己抗体や自己抗原感作リンパ球が存在する。それらが実際に組織障害とどのように関連しているかが重要な問題であり、ほとんどの疾患で、自己抗体単独、補体依存性、食細胞依存性、Ｋ細胞依存性に、組織障害を起こしていることが実験的にも証明されている。
例えば、慢性関節リウマチ等の臓器非特異的自己免疫疾患、および多発性硬化症、潰瘍性大腸炎のような臓器特異的自己免疫疾患は、通常は免疫学的寛容の状態にある自己の抗原に対して応答するＴ細胞が、何らかの原因で自己の組織内で活性化され自己の抗原と応答するようになり、これが持続的な炎症反応となって組織に障害を与えることに起因する。この場合、抗原は自己の関節の成分であるＩＩ型コラーゲン、髄鞘や消化管粘膜の主成分である。以上、「医学大辞典」（ＣＤ−ＲＯＭ版、南山堂）の記述を引用し、免疫異常性疾患を概説した。
これら疾患の患者数は毎年、僅かながら増加しているにも拘わらず、今なお有効な治療薬や予防方法は見出されていない（山村雄一、岸本忠三、ロバート・Ａ・グッド編：薬剤による免疫不全、「免疫科学」、９巻、ｐ．２８５〜２８９、（１９８４））。現在、これらの疾患の治療には、胸腺摘出術の他、サラゾピリン、５−アミノサリチル酸、アザチオプリン、６−ＭＰ、トラニラスト、メトトレキサート、シクロスポリンＡおよびメトロニダゾール等の薬物療法が対症療法的に行われている［市川陽一ら：慢性関節リウマチにおけるメトトレキサートおよびサラゾスルファピリジン長期投与例の検討、リウマチ、３５巻、ｐ．６６３〜６７０、（１９９５）；柏崎禎夫：慢性関節リウマチに対するオーラノフィンとメトトレキシサートによる併用療法の検討、リウマチ、３６巻、ｐ．５２８〜５４４、（１９９６）；古谷武文ら：慢性関節リウマチにおける低用量メトトレキシレート療法の有害事象、リウマチ、３６巻、ｐ．７４６〜７５２、（１９９６）；渡辺言夫：若年性関節リウマチの薬物療法、リウマチ、３６巻、ｐ．６７０〜６７５、（１９９６）；八倉隆保：免疫抑制療法・自己免疫疾患の治療  総合臨床、３０巻、ｐ．３３５８、（１９８１）；都外川新ら：慢性関節リウマチにおけるメトトレキシサート療法の検討−有効性のより高い投与法を求めて−、リウマチ、３７巻、ｐ．６８１〜６８７（１９９７）］。
発明の開示
（発明が解決しようとする技術的課題）
しかしながら、これらは根治的な療法とは言えず、むしろ長期服用による重篤な副作用の原因ともなり、より有効な予防・治療薬、治療法の開発が望まれている。このような状況は自己免疫疾患に限らずアレルギー疾患にも認められ、免疫異常性疾患における種々の免疫異常による障害を改善するためには、現在開発もしくは使用されている既知の物質以外の物質で、炎症反応時の細胞障害の抑制やその障害に対する抵抗性を付与することが重要であり、細胞にとって悪条件下で生じる細胞死を抑制する物質、細胞内抗酸化能を上昇させる物質が必要とされ、より効果の高い新規な免疫異常性疾患治療剤が切望されている。
（その解決方法）
上述の状況の下、本願発明者等は先に、血液成分由来の蛋白質であるセレノプロテインＰに、そしてより好適な態様として当該セレノプロテインＰのＣ末端側ペプチドに、従来報告されていなかった細胞死抑制活性が認められることを見出し、この知見を基に特許出願した（ＰＣＴ／ＪＰ９９／０６３２２）。さらに、本願発明者等は、新たな免疫異常性疾患の診断薬、予防および治療薬を供すべく鋭意研究した結果、驚くべきことに従来試みられることのなかった前記セレノプロテインＰまたはそのＣ末端側ペプチドもしくは当該ペプチド群が、モデル動物での実際の生体内投与によって、免疫異常性疾患の症状改善剤として人間その他の動物に充分に適応できる事実を見出し、この知見に基づいて本願発明を完成するに至った。
すなわち、本願発明は、セレノプロテインＰおよび／または当該蛋白質のＣ末端側ペプチドもしくは当該ペプチド群を主要構成成分とする免疫異常性疾患予防および治療剤に関する。
本願発明の好ましい態様において、前記蛋白質のＣ末端側ペプチドもしくは当該ペプチド群は、セレノプロテインＰのＣ末端側１０３アミノ酸配列、１もしくは数個のアミノ酸が欠失、置換もしくは付加された当該アミノ酸配列、前記いずれかのアミノ酸配列の部分配列または前記アミノ酸配列をその一部に含有するアミノ酸配列を有するペプチドまたは当該ペプチド群である。
本願発明のさらに好ましい態様において、前記蛋白質のＣ末端側ペプチドもしくは当該ペプチド群は、次式、
2002076493.tif 000002
および／または
2002076493.tif 000003
（式中、Ｘａａはセレノシステインを表す）
で表されるアミノ酸配列、１もしくは数個のアミノ酸が欠失、置換もしくは付加された当該アミノ酸配列、前記いずれかのアミノ酸配列の部分配列または前記いずれかのアミノ酸配列をその一部に含有するアミノ酸配列を有するペプチドまたは当該ペプチド群である。
発明を実施するための最良の形態
セレノプロテインＰは１９７７年にグルタチオンペロキシダーゼ（ｇｌｕｔａｔｈｉｏｎｅ  ｐｅｒｏｘｉｄａｓｅ）とは異なるセレン含有蛋白質として確認され、１９８２年にセレンがセレノシステイン（ｓｅｌｅｎｏｃｙｓｔｅｉｎｅ）の形態で取り込まれていることが明らかにされた。さらに、１９９１年にセレノプロテインＰのｃＤＮＡのクローニングにより全長のアミノ酸配列が明らかにされ、その結果、当該蛋白質は最大１０個のセレノシステインを含む可能性等が示された（Ｈｉｌｌ  Ｋ．Ｅ．およびＢｕｒｋ  Ｒ．Ｆ．，Ｂｉｏｍｅｄ．Ｅｎｖｉｒｏｎ．Ｓｃｉ．，１０，ｐ．１９８−２０８（１９９７））。セレノプロテインＰの機能はほとんど不明であったが、最近、ｉｎ  ｖｉｔｒｏの系でｐｈｏｓｐｈｏｌｉｐｉｄ  ｈｙｄｒｏｐｅｒｏｘｉｄｅやｐｅｒｏｘｙｎｉｔｒｉｔｅの還元活性、神経細胞のｓｕｒｖｉｖａｌ  ｐｒｏｍｏｔｉｎｇｆａｃｔｏｒとしての作用が見出されている。
具体的な事例として、慢性関節リウマチの疾患モデルであるマウスコラーゲン誘導関節炎（ｃｏｌｌａｇｅｎ−ｉｎｄｕｃｅｄ  ａｒｔｈｒｉｔｉｓ；以下、ＣＩＡと呼称する）を用いたセレノプロテインＰの腹腔内投与実験において、セレノプロテインＰ投与群に関節炎の発症と増悪を抑制すること、多発性硬化症の疾患モデルである実験的アレルギー性脳脊髄炎（ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ  ａｌｌｅｒｇｉｃ  ｅｎｃｅｐｈａｌｏｍｙｅｌｉｔｉｓ；以下、ＥＡＥと呼称する）を用いたセレノプロテインＰの腹腔内投与実験において、セレノプロテインＰ投与群に運動機能障害の発症と増悪を抑制すること、さらに気管支喘息モデルでセレノプロテインＰの静脈内投与によって気管支収縮を抑制することが判明し、免疫異常性疾患に対する発症抑制作用と症状改善作用をセレノプロテインＰが有していることが示された。
本願発明はこのセレノプロテインＰの新たな薬効に関するものであり、本願発明の免疫異常性疾患治療剤の本態はセレノプロテインＰである。さらに詳細には、セレノプロテインＰの中のセレンを含むセレノシステインに特徴があり、このアミノ酸が免疫異常性疾患の症状改善作用の中心アミノ酸であると思われる。本願発明者等は、先の特許出願において、血液成分由来の蛋白質であるセレノプロテインＰのＣ末端側ペプチド断片に従来報告されていなかった細胞死抑制活性が認められることを開示した。この活性にも、含有されるセレノシステインが関与していることが明らかである。従って、セレノシステインを含み細胞死抑制活性を持つ蛋白質および／またはペプチド群は、免疫異常性疾患の症状改善剤の候補となりうる。
そもそも、本願発明に関係するセレンは、微量必須元素の一つであり、それが欠乏した場合には心筋症などを伴う重篤な欠乏症が知られている。また、無血清培養の培地に亜セレン酸ナトリウムの添加が必須であることから、セレンが細胞レベルでの生存維持・増殖に必須であることが示されている。しかし、セレン化合物が毒物指定されていることからわかるように、有効量と危険量の幅、つまり安全域の濃度幅が狭く、適量以上のセレン化合物は一般的には細胞にとって毒性を示し、逆に細胞死を誘導する。例えば、セレンの急性中毒症状として、顔面蒼白、神経症状、神経障害、皮膚炎、胃腸障害などが知られている。また、細胞培養にセレノシステインの２量体であるセレノシスチンを添加すると、単独ではかなり強い毒性を示す。これに対して、本願発明の好適な態様であるセレノプロテインＰ、セレノプロテインＰのＣ末端側断片は、その構造中に９〜１０個のセレノシステインを含むにも拘わらず、強い毒性は観察されなかった。このことから、本発明の薬効作用を示すセレノプロテインＰの特徴として、セレノシステインを含み、なおかつ毒性が減弱していることが重要と思われる。本願発明のペプチドまたは当該ペプチド群は、毒性の低減というセレン化合物に対する命題を克服するのみならず、予期し得ない免疫異常性疾患の症状改善作用をもたらすことを可能とするものである。
ここで用いられるセレノプロテインＰに特段の制約はなく、所望の免疫異常性疾患の症状改善活性を有するものであれば如何なる分子形態のものをも包含する。すなわち、完全分子型セレノプロテインＰをはじめ種々の分子形態のものが対象となり得る。この中で、好適な態様はセレノプロテインＰのＣ末端側ペプチドもしくは当該ペプチド群であり、中でもＣ末端側１０３個（２６０位から３６２位
2002076493.tif 000004
Ｘａａはセレノシステインを表す）（配列番号３）のアミノ酸配列または当該アミノ酸配列のうち１もしくは数個のアミノ酸が欠失、置換もしくは付加されたアミノ酸配列または、前記いずれかのアミノ酸配列の部分配列または前記アミノ酸配列を含有するアミノ酸配列を有するペプチドまたは当該ペプチド群は、とりわけ好適な態様として推奨され得る。
なお、本願明細書で用いる「当該ペプチド群」とはセレノプロテインＰのアミノ酸配列に由来し、少なくとも１個のセレノシステインを含むペプチドで、当該アミノ酸配列のうち１もしくは数個のアミノ酸が欠失、置換もしくは付加されたアミノ酸配列を含み、糖鎖の有無、荷電の相違、断片化の多様性等に起因する微細構造の異なるペプチドの集合体を意味する。すなわち、本願発明のセレノプロテインＰおよびペプチド群とはセレノプロテインＰのアミノ酸配列に由来し、細胞障害抑制活性を有するものであればその分子形態に特段の制約はなく、これらには完全分子型のセレノプロテインＰをはじめこれに起因するＣ末端側ペプチド等が含まれる。このような本願発明のペプチドは、ペプチド合成機を用いて常法に従って調製することもできるし、また、本願発明のペプチドをリード物質として、化学合成物をデザインすることも可能である。
本願発明に使用されるセレノプロテインＰまたは当該蛋白質に由来するペプチドもしくはペプチド群を製造する方法は特に限定されるものではないが、例えばヒト血液より分離する方法、または遺伝子組換え技術により製造することができる。本願発明に使用される免疫異常性疾患治療剤の主要構成成分となるセレノプロテインＰまたは当該蛋白質に由来するペプチドもしくはペプチド群は、一般的な酵素類よりも熱、変性剤、幅広いｐＨ、血中のプロテアーゼに対して安定であるため、これを精製同定するに際しては、一つの態様として、血漿を出発原料とし種々のクロマトグラフィー工程、例えば、ヘパリンクロマトグラフィー、陽イオン交換クロマトグラフィー、陰イオン交換クロマトグラフィー、疎水クロマトグラフィー、ゲル濾過クロマトグラフィー、逆相クロマトグラフィー、ハイドロキシアパタイトクロマトグラフィー、抗体カラム等の各種アフィニティーカラムクロマトグラフィー等、適用可能な種々の担体を用いた分画方法の他、硫酸アンモニウム沈殿分画、分子量膜分画、等電点分画、電気泳動分画等、種々の分画法が利用可能である。これらの分画法を組み合わせることにより、所望のセレノプロテインＰまたはペプチドもしくはペプチド群を分画することが可能である。その望ましい組み合わせの一例を調製例１に示す。
本願発明では、有効成分としての当該蛋白質またはペプチドもしくはペプチド群と公知の適当な賦形剤を組み合わせ、公知の方法で本願発明の免疫異常性疾患の症状改善剤とすることができる。本願発明の症状改善剤の有効投与量は、投与対象者の年齢、症状および重症度などにより変動し、最終的には医師の意図により変動する。薬効は投与方法には依存しないが、皮下、皮内、腹腔への投与、血管内への単回（ボーラス）投与あるいは点滴投与などが最適である。また、分子量の小さなペプチド群の場合は、経口投与や経皮投与なども可能である。
本願発明の投与対象は、免疫異常性疾患であれば特に限定されることはないが、慢性関節リウマチ、多発性硬化症に代表される自己抗原に対する過敏な反応に基づく自己免疫疾患に分類されるもの、さらには気管支喘息に代表される外来抗原に対する過敏な反応に基づくアレルギー疾患に分類されるものが最適対象と考えられる。免疫異常性疾患治療剤として本願発明のセレノプロテインＰまたはこれに由来するペプチドもしくはペプチド群を主要構成成分として含有する薬剤を使用する場合、本薬剤を単独で投与することもできるし、他の治療薬剤との併用投与も効果を増大させるための有効な手段として期待できる。
以下、調製例および実施例に沿って本願発明をさらに詳細に説明するが、これらは本願発明の範囲を何ら限定するものではない。なお、以下に示す調製例および実施例では、特に断りのない限り、和光純薬、宝酒造、東洋紡およびＮｅｗ  Ｅｎｇｌａｎｄ  ＢｉｏＬａｂｓ社、ファルマシヤ社、バイオラド社、シグマ社、ギブコＢＲＬ社製の試薬を使用した。
調製例１
（セレノプロテインＰ断片に対する抗体結合担体（抗ＳｅＰ抗体カラム）を用いたセレノプロテインＰ断片の精製）
血漿中のヘパリンセファロース結合画分を２Ｍ硫酸アンモニウムにより沈殿させ、その沈殿画分に対して５倍以上の２０ｍＭＴｒｉｓ（ｐＨ８．０）により沈殿を溶解させた。この溶液に存在するセレノプロテインＰを抗ＳｅＰ抗体カラムに結合させ、ＰＢＳで洗浄した。その後４Ｍ尿素を含有する２０ｍＭクエン酸バッファーによりセレノプロテインＰを溶出し、２０ｍＭクエン酸バッファーで平衡化した陽イオン交換体（Ｍａｃｒｏｐｒｅｐ  Ｈｉｇｈ  Ｓ：ＢｉｏＲａｄ）に結合させた。これを塩化ナトリウムによる塩濃度勾配溶出を行ない、細胞死抑制活性を示す画分を回収した。この時、全長のセレノプロテインＰを得ることが可能であるが、蛋白あたりの細胞死抑制活性は明らかに弱い値を示した。本方法では、短時間の精製が可能であるため、蛋白あたりの細胞死抑制活性の強いセレノプロテインＰ断片を得ることができた。ここで得られた断片もまた、糖鎖の有無、分子間結合の有無、内部切断の有無などにより種々のサイズの分子種を含む混合画分であり、非還元電気泳動で１０〜３０ｋＤａのサイズを示すセレノプロテインＰ断片群であった。
実施例１
（細胞障害抑制活性）
細胞障害抑制活性のアッセイ系に使用するＤａｍｉ細胞（Ｇｒｅｅｎｂｅｒｇ  Ｓ．Ｍ．ら、Ｂｌｏｏｄ  ｖｏｌ．７２，ｐ．１９６８−１９７７（１９８８）に記載）を用いて、アッセイ培地（５０％ＰＢＳ／ＳＡ／０．０３％ＨＳＡ（ＳＩＧＭＡ社製））またはＳＡ／０．０５％脱脂肪酸ＢＳＡ（ＷＡＫＯ社）／４μＭの長鎖多価脂肪酸（アラキドン酸、リノール酸またはリノレン酸等）により２回洗浄しで３×１０４細胞／ｍｌになるように懸濁後、得られた細胞懸濁液をサンプル添加ウェルのみ２００μｌ、段階希釈のためのウェルには１００μｌずつを９６ウエルプレートに分注した。サンプル添加ウェルにアッセイ試料として調製例１で得られたセレノプロテインＰ断片、およびセレノシスチン、セレノメチオニン、エブセレン、亜セレン酸ナトリウムについて同一濃度の溶液を調製し、それらを２μｌ添加し撹拌後、１００μｌ細胞懸濁液が入ったウェルに対して段階希釈した。そして、３７℃のＣＯ２インキュベーターで４〜５日間培養し細胞の生死を判定した。
その結果、調製例１で精製したセレノプロテインＰ断片以外に、その断片より
2002076493.tif 000005
性にとってセレノシステインが重要であることが示された。
実施例２
（コラーゲン誘導関節炎でのセレノプロテインＰの評価）
セレノプロテインＰの慢性関節リウマチに対する治療効果を調べるために、コラーゲン誘導関節炎（ＣＩＡ）で薬効評価した。ＣＩＡは、ＤＢＡ／１マウスにウシＩＩ型コラーゲンをフロイント完全アジュバントとともに２００μｇ／マウスで尾部皮内投与し、さらに３週間後にウシＩＩ型コラーゲンをフロイント不完全アジュバントとともに２００μｇ／マウスでマウス腹腔内投与（ブースター）する方法で行なった。調製例１に従って調製したセレノプロテインＰをブースター直後から２００μｇ／マウス／３〜４日で腹腔内に投与した。ブースター後５日目から関節炎の発症とその重症度を経時的に観察し、コントロールとしてセレノプロテインＰを投与していない免疫＋ブースターのみのマウスと比較した。その結果、図１に示すように、発症の遅延と重症度の軽減効果が認められた。
実施例３
（マウス実験的アレルギー性脳脊髄炎（ＥＡＥ））
セレノプロテインＰの免疫異常性疾患による運動障害に及ぼす影響を麻痺の度合いで確認するために、マウスＥＡＥでのセレノプロテインＰ投与実験をを行った。動物として、ＳＪＬ／ＪＯｒＩＩＣｒｊ、メス、１４週令（日本チャールズリバー）を用い、免疫原としてｍｙｅｌｉｎ  ｐｒｏｔｅｏｌｉｐｉｄ  ｐｒｏｔｅｉｎ（ＰＬＰ）ｓｙｎｔｈｅｔｉｃ  ｐｅｐｔｉｄｅ  １３９−１５１（アミノ酸配列：Ｈｉｓ  Ｓｅｒ  Ｌｅｕ  Ｇｌｙ  Ｌｙｓ  Ｔｒｐ  Ｌｅｕ  Ｇｌｙ  Ｈｉｓ  Ｐｒｏ  Ａｓｐ  Ｌｙｓ  Ｐｈｅ）（配列番号６）を２５ｍｇ／マウスで、フロイント完全アジュバントＨ３７Ｒａ（４００ｍｇ／マウス）と百日咳菌毒素（Ｌｉｓｔ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ社製；２００ｎｇ／マウス）とともに尾根部２箇所に皮内投与した。
１群１３匹で、セレノプロテインＰを発症前日（８日目）から１３日目まで毎日、０．５ｍｇ／ｈｅａｄで腹腔内投与した。対象として同様にＳａｌｉｎｅを腹腔投与した。発症後、その麻痺の程度を表２に示すスコアで毎日判定し、評価した。
2002076493.tif 000006
その結果、図２に示すように、セレノプロテインＰ投与群に、発症の抑制と重症度の軽減効果が認められた。さらに、１０日目の発症率を比較すると、生理食塩水投与群は１３匹中１２匹が発症しているにもかかわらず、セレノプロテインＰ投与群では１３匹中４匹しか発症していない。このことから、セレノプロテインＰには免疫異常性疾患における発症の抑制効果と運動機能障害の軽減効果があることが示された。
実施例４
（モルモット受動感作気管支喘息モデル）
セレノプロテインＰのアレルギー疾患に対する効果を見るために、モルモット受動感作気管支喘息モデルで投与実験を行なった。実験２４時間前に抗卵白アルブミン家兎血清（ＣＨＥＭＩＣＯＮ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  Ｉｎｃ）をモルモット（日本エスエルシー）に体重１００ｇ当たり０．１ｍＬの割合で投与した。セレノプロテインＰ（０．０３μｇ／ｋｇ／分）および陰性対照として生理食塩水を卵白アルブミン（Ｇｒａｄｅ  ＩＩＩ，Ｓｉｇｍａ）を投与する１時間前より頚静脈から投与速度０．４ｍＬ／ｋｇ／分で持続投与した。陽性対照薬としてメピラミン（マレイン酸ピリルアミン（ＩＣＮ））を抗原投与５分前に１ｍｇ／ｍｌ／ｋｇを静脈内投与した。気道収縮測定は、気管にＹ字型気管カニューレを挿入して、送気量４ｍＬ／ｓｔｒｏｋｅ、４０  ｓｔｒｏｋｅｓ／分の割合で人工呼吸を陽圧的に行ない、気道への送気圧を圧トランスジューサーを介して記録した。被験薬の投与終了から５分後、卵白アルブミン１．０ｍｇ／ｍＬの生理食塩溶液をモルモットの体重１００ｇ当たり０．１ｍＬの割合で総頚静脈から注射して気道アナフィラキシーを惹起させ、この時の呼吸流量の変化を３０分間記録した。
メピラミンを投与した２例の結果は、図４に示したように、生理食塩水を５分前に投与したコントロール（図３）に比べ明らかな反応の抑制が認められた。また、セレノプロテインＰを投与した２例の結果も、図５に示すように、メピラミン同様に陰性対照に比べ明らかな抑制活性を示した。これらのことから、セレノプロテインＰには免疫異常性疾患の一態様であるアレルギー疾患に有効であることが示された。
【配列表】
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【図面の簡単な説明】
図１はコラーゲン誘導関節炎に対するセレノプロテインＰ投与による治療効果を示す図である。縦軸は被験マウスの重症度、横軸はブースターからの経過日数を示す。
図２はマウスＥＡＥにおける運動障害に対するセレノプロテインＰの改善効果を示す図である。縦軸は被験マウスの重症度、横軸は免疫からの経過日数を示す。
図３はモルモット受動感作気管支喘息モデルに対する生理食塩水の作用を示す図である。縦軸は気道抵抗の程度（μＶ）を横軸は経過時間（分）を示す。
図４はモルモット受動感作気管支喘息モデルに対するメピラミンの改善効果を示す図である。縦軸は気道抵抗の程度（μＶ）を横軸は経過時間（分）を示す。
図５はモルモット受動感作気管支喘息モデルに対するセレノプロテインＰの改善効果を示す図である。縦軸は気道抵抗の程度（μＶ）を横軸は経過時間（分）を示す。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【国際調査報告】
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