(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
容器の少なくとも一部が気体透過性プラスチック材料によって形成され、該気体透過性プラスチック材料の酸素透過係数が５０×１０-11ｍｌ（Ｏ2）・ｃｍ／（ｃｍ2・ｓｅｃ・ｍｍＨｇ）以上である細胞培養用容器。
【請求項２】
気体透過性プラスチック材料が非多孔性である請求項１記載の細胞培養用容器。
【請求項３】
気体透過性プラスチック材料が透明性を有する請求項１または２記載の細胞培養用容器。
【請求項４】
気体透過性プラスチック材料がシリコン含有モノマーを含む重合成分を重合させてなるポリマーである請求項１、２または３記載の細胞培養用容器。
【請求項５】
シリコン含有モノマーがシリコン含有（メタ）アクリレートおよび／またはシリコン含有スチレン誘導体である請求項４記載の細胞培養用容器。
【請求項６】
シリコン含有（メタ）アクリレートが、一般式（Ｉ）：
【化１】
0003761676.tif 000012
（式中、Ｒは水素原子またはメチル基、ｎは１〜３の整数、ｍは２〜４の整数を示す）で表わされるシリコン含有（メタ）アクリレートである請求項５記載の細胞培養用容器。
【請求項７】
シリコン含有スチレン誘導体が一般式（II）：
【化２】
0003761676.tif 000013
（式中、ｐは２〜１５の整数、ｑは０または１、ｒは２〜１５の整数を示す）で表わされるシリコン含有スチレン誘導体である請求項５記載の細胞培養用容器。
【請求項８】
気体透過性プラスチック材料が培養細胞の接着面に用いられてなる請求項１、２、３、４、５、６または７記載の細胞培養用容器。
【請求項９】
気体透過性プラスチック材料が親水化されたものである請求項１、２、３、４、５、６、７または８記載の細胞培養用容器。
【請求項１０】
気体透過性プラスチック材料がプラズマ処理により親水化されたものである請求項９記載の細胞培養用容器。
【請求項１１】
細胞培養用容器が密閉構造である請求項１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０記載の細胞培養用容器。
【請求項１２】
細胞培養用容器の少なくとも一部に供給口を設けた請求項１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０または１１記載の細胞培養用容器。
【請求項１３】
細胞培養用容器の少なくとも一部に排出口を設けた請求項１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１または１２記載の細胞培養用容器。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は、細胞培養用容器に関する。さらに詳しくは、酸素供給の装置などを必要とせずに、細胞の代謝に必要な酸素などの気体を定常的かつ充分に供給することができ、細菌汚染がなく、輸送も簡便な細胞培養用容器に関する。
【０００２】
【従来の技術】
通常細胞培養を行なう際には、細胞の代謝に必要な酸素を供給することが不可欠である。そのため従来では、細胞培養を行なうための容器として細胞培養用フラスコやペトリ皿などが用いられてきた。前者の細胞培養用フラスコでは、酸素の供給および細胞の代謝による培地ｐＨの変化を緩和するための５％程度の炭酸ガスの供給のために、蓋をゆるめて通気を確保することが一般的な方法であった。また、後者のペトリ皿を用いる細胞培養では、蓋をかぶせたとき本体と蓋のあいだに僅かな隙間を形成するよう設計することにより通気が確保されていた。
【０００３】
しかしながら、これらの方法では細菌汚染をしばしば招くため、最近ではポリエチレンファイバー製のフィルター３２などが使用され、図１に示すような細胞培養用フラスコ３０が開発され、通気を確保するために一般に使用されている。
【０００４】
一方、従来技術では培養系内を密閉しなければならないばあい、すなわち容器内を培地で満たし気体を加えられないようなばあいにはほとんど対処できず、また容器内を培地で満たして輸送するばあいには、できるだけ短時間で輸送しなければならなかった。また、図２に示されるようなローラーボトル２０を用いた大量培養においては、蓋２１にガス交換のために設置されたフィルター２２に培地が付着して滲みでたり、そこから細菌汚染をおこしたりするという不都合が生じた。
【０００５】
さらに細胞の大量培養を行なうようなばあいには、酸素を充分に供給するため酸素供給の装置が必要であった。
【０００６】
【発明が解決しようとする課題】
本発明は、前記従来技術に鑑みてなされたものであり、酸素供給の装置などを必要とせずに、細胞の代謝に必要な酸素などの気体を定常的かつ充分に供給することができ、細菌汚染がなく、輸送も簡便な細胞培養用容器を提供することを目的とする。
【０００７】
【課題を解決するための手段】
本発明は、容器の少なくとも一部が気体透過性プラスチック材料によって形成された細胞培養用容器に関する。
【０００８】
【発明の実施の形態】
本発明の細胞培養用容器は、前記したように、容器の少なくとも一部が気体透過性プラスチック材料で形成されたものである。
【０００９】
本明細書における気体透過性プラスチック材料とは酸素透過係数が１×10-11ｍｌ（Ｏ2）・ｃｍ／（ｃｍ2・ｓｅｃ・ｍｍＨｇ）以上を有する高分子材料を意味する。
【００１０】
前記気体透過性プラスチック材料としては、気体透過性にすぐれ、かつ強度を高めるという理由から、たとえばコンタクトレンズ材料を好適に使用することができ、そのなかでもシリコン含有モノマーを含む重合成分を重合させてなるポリマーやシリコーンラバーなど、とくにシリコン含有（メタ）アクリレートおよび／またはシリコン含有スチレン誘導体を含む重合成分を重合させてなるポリマーが好ましく例示される。
【００１１】
また前記気体透過性プラスチック材料は、細胞培養用容器内の細胞を観察できる程度に、透明性を有することが好ましい。
【００１２】
なお、本明細書における「〜（メタ）アクリレート」とは、「〜アクリレートおよび／または〜メタクリレート」を意味し、そのほかの（メタ）アクリレート誘導体についても同様である。
【００１３】
前記シリコン含有モノマーとしては、前記シリコン含有（メタ）アクリレートおよびシリコン含有スチレン誘導体のほかにも、たとえばシリコン含有ウレタンマクロモノマーなどがあげられ、これらは単独でまたは２種以上を混合して用いることができる。
【００１４】
前記シリコン含有（メタ）アクリレートとしては、たとえば一般式（Ｉ）：
【００１５】
【化３】
0003761676.tif 000002
【００１６】
（式中、Ｒは水素原子またはメチル基、ｎは１〜３の整数、ｍは１〜４の整数を示す）で表わされるシリコン含有（メタ）アクリレートが好ましく例示される。
【００１７】
前記シリコン含有（メタ）アクリレートの代表例としては、たとえばトリメチルシロキシジメチルシリルメチル（メタ）アクリレート、トリメチルシロキシジメチルシリルプロピル（メタ）アクリレート、メチルビス（トリメチルシロキシ）シリルプロピル（メタ）アクリレート、トリス（トリメチルシロキシ）シリルプロピル（メタ）アクリレート、モノ［メチルビス（トリメチルシロキシ）シロキシ］ビス（トリメチルシロキシ）シリルプロピル（メタ）アクリレート、トリス［メチルビス（トリメチルシロキシ）シロキシ］シリルプロピル（メタ）アクリレート、メチルビス（トリメチルシロキシ）シリルプロピルグリセリル（メタ）アクリレート、トリス（トリメチルシロキシ）シリルプロピルグリセリル（メタ）アクリレート、モノ［メチルビス（トリメチルシロキシ）シロキシ］ビス（トリメチルシロキシ）シリルプロピルグリセリル（メタ）アクリレート、トリメチルシリルエチルテトラメチルジシロキシプロピルグリセリル（メタ）アクリレート、トリメチルシリルメチル（メタ）アクリレート、トリメチルシリルプロピル（メタ）アクリレート、トリメチルシリルプロピルグリセリル（メタ）アクリレート、トリメチルシロキシジメチルシリルプロピルグリセリル（メタ）アクリレート、メチルビス（トリメチルシロキシ）シリルエチルテトラメチルジシロキシメチル（メタ）アクリレート、テトラメチルトリイソプロピルシクロテトラシロキサニルプロピル（メタ）アクリレート、テトラメチルトリプロピルシクロテトラシロキシビス（トリメチルシロキシ）シリルプロピル（メタ）アクリレートなどがあげられ、これらは単独でまたは２種以上を混合して用いることができる。
【００１８】
前記シリコン含有スチレン誘導体としては、たとえば一般式（II）：
【００１９】
【化４】
0003761676.tif 000003
【００２０】
（式中、ｐは１〜１５の整数、ｑは０または１、ｒは１〜１５の整数を示す（ただし、ｑ＝０かつｒ＝１のばあいを除く））で表わされるシリコン含有スチレン誘導体が好ましく例示される。
【００２１】
前記一般式（II）で表わされるシリコン含有スチレン誘導体の代表例としては、たとえばトリス（トリメチルシロキシ）シリルスチレン、ビス（トリメチルシロキシ）メチルシリルスチレン、（トリメチルシロキシ）ジメチルシリルスチレン、トリス（トリメチルシロキシ）シロキシジメチルシリルスチレン、［ビス（トリメチルシロキシ）メチルシロキシ］ジメチルシリルスチレン、ヘプタメチルトリシロキサニルスチレン、ノナメチルテトラシロキサニルスチレン、ペンタデカメチルヘプタシロキサニルスチレン、ヘンエイコサメチルデカシロキサニルスチレン、ヘプタコサメチルトリデカシロキサニルスチレン、トリメチルシロキシペンタメチルジシロキシメチルシリルスチレン、トリス（ペンタメチルジシロキシ）シリルスチレン、トリス（トリメチルシロキシ）シロキシビス（トリメチルシロキシ）シリルスチレン、ビス（ヘプタメチルトリシロキシ）メチルシリルスチレン、トリス［メチルビス（トリメチルシロキシ）シロキシ］シリルスチレン、トリメチルシロキシビス［トリス（トリメチルシロキシ）シロキシ］シリルスチレン、ノナメチルテトラシロキシウンデシルメチルペンタシロキシメチルシリルスチレン、トリス［トリス（トリメチルシロキシ）シロキシ］シリルスチレン、トリス（トリメチルシロキシヘキサメチル）テトラシロキシトリス（トリメチルシロキシ）シロキシトリメチルシロキシシリルスチレン、ノナキス（トリメチルシロキシ）テトラシロキサニルスチレン、ビス（トリデカメチルヘキサシロキシ）メチルシリルスチレンなどがあげられ、これらは単独でまたは２種以上を混合して用いることができる。
【００２２】
前記シリコン含有ウレタンマクロモノマーの代表例としては、たとえば式(III)：
【００２３】
【化５】
0003761676.tif 000004
【００２４】
で表わされるウレタン結合含有ポリシロキサンマクロモノマー、式：
【００２５】
【化６】
0003761676.tif 000005
【００２６】
で表わされるポリシロキサンマクロモノマーなどの一般式：
Ａ1 −Ｕ1 −Ｓ1 −Ｕ2 −Ａ2 
（式中、Ａ1 は一般式：
Ｙ21−Ｒ31−
（式中、Ｙ21はアクリロイルオキシ基、メタクリロイルオキシ基、ビニル基またはアリル基、Ｒ31は炭素数２〜６の直鎖または分岐鎖を有するアルキレン基を示す）で表わされる基；
Ａ2 は一般式：
−Ｒ34−Ｙ22
（式中、Ｙ22はアクリロイルオキシ基、メタクリロイルオキシ基、ビニル基またはアリル基、Ｒ34は炭素数２〜６の直鎖または分岐鎖を有するアルキレン基を示す）で表わされる基；
Ｕ1 は一般式：
−Ｘ21−Ｅ21−Ｘ25−Ｒ32−
（式中、Ｘ21は共有結合、酸素原子または炭素数１〜６のアルキレングリコール基、Ｅ21は−ＣＯＮＨ−基（ただし、このばあい、Ｘ21は共有結合であり、Ｅ21はＸ25とウレタン結合を形成している）または飽和もしくは不飽和脂肪族系、脂環式系および芳香族系の群から選ばれたジイソシアネート由来の２価の基（ただし、このばあい、Ｘ21は酸素原子または炭素数１〜６のアルキレングリコール基であり、Ｅ21はＸ21およびＸ25のあいだでウレタン結合を形成している）；Ｘ25は酸素原子または炭素数１〜６のアルキレングリコール基；Ｒ32は炭素数１〜６の直鎖または分岐鎖を有するアルキレン基を示す）で表わされる基；
Ｓ1 は一般式：
【００２７】
【化７】
0003761676.tif 000006
【００２８】
（式中、Ｒ23、Ｒ24、Ｒ25、Ｒ26、Ｒ27およびＲ28はそれぞれ独立して炭素数１〜６のアルキル基、フッ素置換されたアルキル基またはフェニル基、Ｋは１〜５０の整数、Ｌは０〜（５０−Ｋ）を満たす整数である）で表わされる基；
Ｕ2 は一般式：
−Ｒ33−Ｘ26−Ｅ22−Ｘ22−
（式中、Ｒ33は炭素数１〜６の直鎖または分岐鎖を有するアルキレン基、Ｘ22は共有結合、酸素原子または炭素数１〜６のアルキレングリコール基、Ｘ26は酸素原子または炭素数１〜６のアルキレングリコール基、Ｅ22は−ＣＯＮＨ−基（ただし、このばあい、Ｘ22は共有結合であり、Ｅ22はＸ26とウレタン結合を形成している）または飽和もしくは不飽和脂肪族系、脂環式系および芳香族系の群から選ばれたジイソシアネート由来の２価の基（ただし、このばあい、Ｘ22は酸素原子または炭素数１〜６のアルキレングリコール基であり、Ｅ22はＸ22およびＸ26のあいだでウレタン結合を形成している）で表わされる基を示す）で表わされる重合性基が１個または２個のウレタン結合を介してシロキサン主鎖に結合しているポリシロキサンマクロモノマーなどのポリシロキサンマクロモノマーなどがあげられる。
【００２９】
前記シリコン含有モノマーの量は、良好な気体透過性の付与のためには、重合成分全量１００部（重量部、以下同様）に対して１部以上、好ましくは５部以上とすることが望ましく、材料の強度付与のためには、重合成分全量１００部に対して９９．９部以下、好ましくは９５部以下とすることが望ましい。
【００３０】
さらに前記気体透過性プラスチック材料をうるための重合成分には、前記シリコン含有モノマー以外にも、たとえばフッ素含有モノマー、硬度調節モノマー、親水性モノマー、架橋性モノマーなどの通常コンタクトレンズ材料に用いられる重合性モノマーが含まれていてもよい。
【００３１】
前記フッ素含有モノマーとしては、たとえばフッ素含有（メタ）アクリレート、フッ素含有スチレン誘導体などがあげられる。
【００３２】
前記フッ素含有（メタ）アクリレートの代表例としては、たとえばトリフルオロメチル（メタ）アクリレート、２，２，２−トリフルオロエチル（メタ）アクリレート、２，２，３，３−テトラフルオロプロピル（メタ）アクリレート、２，２，３，３−テトラフルオロ−ｔ−ペンチル（メタ）アクリレート、２，２，３，４，４，４−ヘキサフルオロブチル（メタ）アクリレート、２，２，３，４，４，４−ヘキサフルオロ−ｔ−ヘキシル（メタ）アクリレート、２，３，４，５，５，５−ヘキサフルオロ−２，４−ビス（トリフルオロメチル）ペンチル（メタ）アクリレート、２，２，３，３，４，４−ヘキサフルオロブチル（メタ）アクリレート、２，２，２，２′，２′，２′−ヘキサフルオロイソプロピル（メタ）アクリレート、２，２，３，３，４，４，４−ヘプタフルオロブチル（メタ）アクリレート、２，２，３，３，４，４，５，５−オクタフルオロペンチル（メタ）アクリレート、２，２，３，３，４，４，５，５，５−ノナフルオロペンチル（メタ）アクリレート、２，２，３，３，４，４，５，５，６，６，７，７−ドデカフルオロヘプチル（メタ）アクリレート、３，３，４，４，５，５，６，６，７，７，８，８−ドデカフルオロオクチル（メタ）アクリレート、３，３，４，４，５，５，６，６，７，７，８，８，８−トリデカフルオロオクチル（メタ）アクリレート、２，２，３，３，４，４，５，５，６，６，７，７，７−トリデカフルオロヘプチル（メタ）アクリレート、３，３，４，４，５，５，６，６，７，７，８，８，９，９，１０，１０−ヘキサデカフルオロデシル（メタ）アクリレート、３，３，４，４，５，５，６，６，７，７，８，８，９，９，１０，１０，１０−ヘプタデカフルオロデシル（メタ）アクリレート、３，３，４，４，５，５，６，６，７，７，８，８，９，９，１０，１０，１１，１１−オクタデカフルオロウンデシル（メタ）アクリレート、３，３，４，４，５，５，６，６，７，７，８，８，９，９，１０，１０，１１，１１，１１−ノナデカフルオロウンデシル（メタ）アクリレート、３，３，４，４，５，５，６，６，７，７，８，８，９，９，１０，１０，１１，１１，１２，１２−エイコサフルオロドデシル（メタ）アクリレートなどがあげられ、これらは単独でまたは２種以上を混合して用いることができる。
【００３３】
前記フッ素含有スチレン誘導体の代表例としては、たとえば２，２，２−トリフルオロエチルスチレン、２，２，３，３−テトラフルオロプロピルスチレン、２，２，３，３−テトラフルオロ−ｔ−ペンチルスチレン、２，２，３，４，４，４−ヘキサフルオロブチルスチレン、２，２，３，４，４，４−ヘキサフルオロ−ｔ−ヘキシルスチレン、２，２，３，３，４，４−ヘキサフルオロブチルスチレン、２，２，２，２′，２′，２′−ヘキサフルオロイソプロピルスチレン、２，２，３，３，４，４，４−ヘプタフルオロブチルスチレン、２，２，３，３，４，４，５，５−オクタフルオロペンチルスチレン、２，２，３，３，４，４，５，５，５−ノナフルオロペンチルスチレン、４−ビニルベンジル−２′，２′，２′−トリフルオロエチルエーテル、４−ビニルベンジル−３′，３′，３′−トリフルオロプロピルエーテル、４−ビニルベンジル−４′，４′，４′−トリフルオロブチルエーテル、４−ビニルベンジル−２′，２′，３′，３′，３′−ペンタフルオロプロピルエーテル、４−ビニルベンジル−２′，２′，３′，３′，４′，４′，４′−ヘプタフルオロブチルエーテル、４−ビニルベンジル−３′，３′，４′，４′，５′，５′，６′，６′，６′−ノナフルオロヘキシルエーテル、４−ビニルベンジル−３′，３′，４′，４′，５′，５′，６′，６′，７′，７′，８′，８′，９′，９′，１０′，１０′，１０′−ヘプタデカフルオロデシルエーテルなどがあげられ、これらは単独でまたは２種以上を混合して用いることができる。
【００３４】
前記硬度調節モノマーとしては、たとえばアルキル（メタ）アクリレート、アルキルスチレン誘導体、スチレンなどがあげられる。
【００３５】
前記アルキル（メタ）アクリレートの代表例としては、たとえばメチル（メタ）アクリレート、エチル（メタ）アクリレート、イソプロピル（メタ）アクリレート、ｎ−プロピル（メタ）アクリレート、イソブチル（メタ）アクリレート、ｎ−ブチル（メタ）アクリレート、２−エチルヘキシル（メタ）アクリレート、ｎ−オクチル（メタ）アクリレート、ｎ−デシル（メタ）アクリレート、ｎ−ドデシル（メタ）アクリレート、ｔ−ブチル（メタ）アクリレート、ペンチル（メタ）アクリレート、ｔ−ペンチル（メタ）アクリレート、ヘキシル（メタ）アクリレート、ヘプチル（メタ）アクリレート、ノニル（メタ）アクリレート、ステアリル（メタ）アクリレート、シクロペンチル（メタ）アクリレート、シクロヘキシル（メタ）アクリレートなどの直鎖状、分岐鎖状または環状のアルキル（メタ）アクリレート；たとえば２−エトキシエチル（メタ）アクリレート、３−エトキシプロピル（メタ）アクリレート、２−メトキシエチル（メタ）アクリレート、３−メトキシプロピル（メタ）アクリレートなどのアルコキシアルキル（メタ）アクリレート；たとえばエチルチオエチル（メタ）アクリレート、メチルチオエチル（メタ）アクリレートなどのアルキルチオアルキル（メタ）アクリレートなどがあげられる。
【００３６】
前記アルキルスチレン誘導体の代表例としては、たとえばα−メチルスチレン；メチルスチレン、エチルスチレン、プロピルスチレン、ブチルスチレン、t-ブチルスチレン、イソブチルスチレン、ペンチルスチレンなどのアルキルスチレン；メチル−α−メチルスチレン、エチル−α−メチルスチレン、プロピル−α−メチルスチレン、ブチル−α−メチルスチレン、ｔ−ブチル−α−メチルスチレン、イソブチル−α−メチルスチレン、ペンチル−α−メチルスチレンなどのアルキル−α−メチルスチレンなどがあげられる。
【００３７】
前記親水性モノマーとしては、たとえば水酸基、アミド基、カルボキシル基、アミノ基、グリコール残基、ピロリドン骨格などを有するモノマーがあげられる。
【００３８】
前記親水性モノマーの代表例としては、たとえばヒドロキシエチル（メタ）アクリレート、ヒドロキシプロピル（メタ）アクリレート、ヒドロキシブチル（メタ）アクリレート、ジヒドロキシプロピル（メタ）アクリレート、ジヒドロキシブチル（メタ）アクリレート、ジエチレングリコールモノ（メタ）アクリレート、トリエチレングリコールモノ（メタ）アクリレート、プロピレングリコールモノ（メタ）アクリレート、ジプロピレングリコールモノ（メタ）アクリレートなどの水酸基含有（メタ）アクリレート；（メタ）アクリル酸；（メタ）アクリルアミド、Ｎ−メチル（メタ）アクリルアミド、Ｎ−エチル（メタ）アクリルアミド、Ｎ，Ｎ−ジメチル（メタ）アクリルアミド、Ｎ，Ｎ−ジエチル（メタ）アクリルアミド、Ｎ，Ｎ−メチルエチル（メタ）アクリルアミドなどの（メタ）アクリルアミドモノマー；Ｎ−ビニルピロリドン、Ｎ−ビニルピペリドン、Ｎ−ビニルカプロラクタム、Ｎ−ビニルカプリルラクタムなどのビニルラクタム；アミノエチル（メタ）アクリレート、Ｎ−メチルアミノエチル（メタ）アクリレート、Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノエチル（メタ）アクリレート、２−ブチルアミノエチル（メタ）アクリレートなどのアミノアルキル（メタ）アクリレート；メトキシエチル（メタ）アクリレート、エトキシエチル（メタ）アクリレート、メトキシジエチレングリコール（メタ）アクリレートなどのアルコキシ基含有（メタ）アクリレート；無水マレイン酸；マレイン酸；フマル酸；フマル酸誘導体；アミノスチレン；ヒドロキシスチレンなどがあげられ、これらは単独でまたは２種以上を混合して用いることができる。
【００３９】
前記架橋性モノマーの代表例としては、たとえばエチレングリコールジ（メタ）アクリレート、ジエチレングリコールジ（メタ）アクリレート、トリエチレングリコールジ（メタ）アクリレート、プロピレングリコールジ（メタ）アクリレート、ジプロピレングリコールジ（メタ）アクリレート、ジアリルフマレート、アリル（メタ）アクリレート、ビニル（メタ）アクリレート、トリメチロールプロパントリ（メタ）アクリレート、メタクリロイルオキシエチル（メタ）アクリレート、ジビニルベンゼン、ジアリルフタレートアジピン酸ジアリル、トリアリルジイソシアネート、α−メチレン−Ｎ−ビニルピロリドン、４−ビニルベンジル（メタ）アクリレート、３−ビニルベンジル（メタ）アクリレート、２，２−ビス（（メタ）アクリロイルオキシフェニル）ヘキサフルオロプロパン、２，２−ビス（（メタ）アクリロイルオキシフェニル）プロパン、１，４−ビス（２−（メタ）アクリロイルオキシヘキサフルオロイソプロピル）ベンゼン、１，３−ビス（２−（メタ）アクリロイルオキシヘキサフルオロイソプロピル）ベンゼン、１，２−ビス（２−（メタ）アクリロイルオキシヘキサフルオロイソプロピル）ベンゼン、１，４−ビス（２−（メタ）アクリロイルオキシイソプロピル）ベンゼン、１，３−ビス（２−（メタ）アクリロイルオキシイソプロピル）ベンゼン、１，２−ビス（２−（メタ）アクリロイルオキシイソプロピル）ベンゼンなどがあげられ、これらは単独でまたは２種以上を混合して用いることができる。
【００４０】
前記重合性モノマーの量は、たとえば前記シリコン含有モノマーとあわせて重合成分全量が１００重量％となるように適宜調整すればよい。すなわち、かかる重合性モノマーの量は、重合成分全量１００部に対して０部以上、好ましくは５部以上とすることが望ましく、また重合成分全量１００部に対して９９部以下、好ましくは９５部以下とすることが望ましい。
【００４１】
なお、前記重合性モノマーのなかでも、架橋性モノマーを用いるばあい、かかる架橋性モノマーの量は、機械的強度の向上効果をおよび耐久性の付与効果を充分に発現させるためには、重合成分全量１００部に対して０部以上、好ましくは０．０５部以上であることが望ましく、また気体透過性プラスチック材料が脆くなるおそれをなくすためには、重合成分全量１００部に対して１０部以下、好ましくは５部以下であることが望ましい。
【００４２】
前記気体透過性プラスチック材料を構成するポリマーをうるために重合成分を重合させる際には、通常の重合方法を採用すればよく、たとえば重合成分にラジカル重合開始剤を配合したのち、室温〜約１３０℃の温度範囲で徐々に加熱する方法や、マイクロ波、紫外線、放射線（γ線）などの電磁波を照射して行なう方法などがあげられる。なお、加熱重合させるばあいには、段階的に昇温させてもよい。また、重合は塊状重合法によってなされてもよく、溶媒などを用いた溶液重合法によってなされてもよく、またそのほかの方法によってなされてもよい。
【００４３】
前記ラジカル重合開始剤の代表例としては、たとえばアゾビスイソブチロニトリル（以下、ＡＩＢＮという）、アゾビスジメチルバレロニトリル、ベンゾイルパーオキサイド、ｔ−ブチルハイドロパーオキサイド、クメンハイドロパーオキサイドなどがあげられ、これらは単独でまたは２種以上を混合して用いることができる。なお、光線などを利用して重合させるばあいには、光重合開始剤や増感剤をさらに添加することが好ましい。また、前記重合開始剤や増感剤の量は、重合成分全量１００部に対して０．００２〜２部、なかんづく０．０１〜１部であることが好ましい。
【００４４】
つぎに、前記のごとくえられたポリマーを細胞培養用容器の少なくとも一部を形成する気体透過性プラスチック材料に成形する。
【００４５】
前記気体透過性プラスチック材料の成形方法にはとくに限定がなく、当業者が通常行なっている成形方法を採用することができる。かかる成形方法としては、たとえば切削加工法などがある。切削加工法とは、適当な型または容器中で前記のごとく重合を行ない、たとえば棒状、ブロック状、板状などの素材（ポリマー）をえたのち、切削加工などの機械的加工により所望の形状に加工する方法である。
【００４６】
かくしてえられた気体透過性プラスチック材料はどのような形状でもよく、気体透過性の観点からはフィルム形状が好ましい。
【００４７】
たとえばフィルム形状としたばあい、その厚さは、気体透過性プラスチック材料の強度付与のためには、０．０１ｍｍ以上、好ましくは０．１ｍｍ以上であることが望ましく、良好な気体透過性の付与のためには、５０ｍｍ以下、好ましくは３０ｍｍ以下であることが望ましい。
【００４８】
また、気体透過性プラスチック材料は、非多孔性であることが望ましい。
【００４９】
ここでいう、多孔性とは、プラスチック材料に固定的（物理的、空間的）な孔が存在する状態をいい、非多孔性とは、固定的な孔が存在せず、高分子鎖の振動によって生じる統計的空隙（自由体積）が存在する状態をいう。非多孔性プラスチック材料は、具体的には、気体のプラスチック材料への溶解と拡散によって気体を透過させる働きを有するものである。
【００５０】
多孔性のものは、その孔により、光学的に不透明になるので望ましくない。
【００５１】
さらに、細胞培養の際の細胞の良好な接着性の付与のためには、気体透過性プラスチック材料は、その表面が親水化されたものであることが好ましい。前記親水化の方法としては、たとえばプラズマ処理する方法、親水化液に浸漬する方法、化学反応させる方法またはこれらを組み合わせた方法などの方法があげられるが、とくにすぐれた親水性および耐久性を付与するためには、プラズマ処理する方法が好ましい。
【００５２】
なお、本発明において、前記気体透過性プラスチック材料を親水化させるばあい、かかる気体透過性プラスチック材料は、重合成分を重合させてえられた、たとえばブロック状、板状、丸棒状などの所望の形状に加工されていないポリマーであってもよく、該ポリマーから切削加工法などによってえられた、たとえば前記フィルム形状のものであってもよい。
【００５３】
前記プラズマ処理は、通常、圧力０．１〜１ｔｏｒｒのガス雰囲気下、たとえば酸素、水素、窒素、アルゴン、ヘリウム、アンモニア、一酸化炭素、二酸化炭素、メタン、エタン、プロパンなどのガス雰囲気下で行なうことが望ましい。
【００５４】
また、プラズマ処理を施すための装置としては、高周波、低周波などの発振器を備えた真空チャンバーを用いることが好ましい。なかでも、高周波による処理が好ましく、通常１３．５６ＭＨｚのものが用いられる。また、通常出力は１０〜５５Ｗ、処理時間は３秒〜５分であることが望ましい。
【００５５】
前記親水化液に浸漬する方法は、たとえば重クロム酸カリウム硫酸溶液、希薄なコラーゲン水溶液、ヘパリン水溶液などに浸漬してコーティングさせる方法、特開平８−１３６８６７号公報記載の光反応性基を有する親水性ポリマーの水溶液に浸漬させたのち、前記水溶液を介して光線を照射することを特徴とする親水化処理法、特願平９−１０２２５号明細書記載の塩酸、硫酸、リン酸、酢酸、蟻酸、トリフルオロ酢酸などの種々の有機酸または無機酸に浸漬する酸処理の方法などの方法を採用することが望ましい。また、浸漬したのちに前記プラズマ処理を行なってもよい。
【００５６】
前記化学反応させる方法は、アミノ基を有するメトキシシラン、たとえばアミノプロピルメトキシシラン（信越化学工業（株）製、ＬＳ−１４２０）と反応させて親水化させる方法を採用することが望ましい。
【００５７】
本発明において、前記気体透過性プラスチック材料は容器本体を構成していてもよく、また細胞培養用容器全体を構成していてもよい。さらに前記気体透過性プラスチック材料は培養細胞の接着面を形成していてもよく、たとえば単層培養のばあいには細胞が付着して増殖する面（たとえば容器の底面（図３の１）など）、懸濁培養のばあいには浮遊細胞が接着する面（たとえば容器本体２、容器の底面（図３の１）など）を構成することが望ましい。
【００５８】
なお、前記気体透過性プラスチック材料が設けられる面積は、細胞の代謝に必要な酸素などを充分に供給するためには、細胞培養用容器の全表面積に対して１％以上であることが望ましく、良好に大量の細胞を培養させるためには、細胞培養用容器の全表面積に対して１００％以下であることが望ましい。
【００５９】
また、前記気体透過性プラスチック材料が細胞培養用容器全体を構成していないばあい、かかる気体透過性プラスチック材料から形成されていない部分の材質は、培養条件（培地のｐＨなど）によって変性したり、成分が溶け出したりせず、細胞培養に影響を及ぼさないもの、また滅菌にも耐えうるものであればとくに限定はないが、たとえばアクリル樹脂、スチレン（スチロール）、ポリカーボネート、ポリプロピレン、ポリスチレン、ＡＢＳ、ＢＳ、ＴＰＸなどを用いることができる。
【００６０】
つぎに、図３および４を参照しながら、本発明の細胞培養用容器を詳細に説明する。図３は本発明の細胞培養用容器の一実施態様を示す概略説明図、図４は図３に示す細胞培養用容器にさらに培地供給ユニット９および培地を排出したり培地上清や細胞を採取するためのユニット１０を接続した状態を示す概略説明図である。
【００６１】
本発明の細胞培養用容器は、通常の細胞培養を行なうために適した形態であればどのような形態でもよいが、密閉構造であることが好ましい。本明細書における密閉構造とは通常の細胞培養を行なうために充分な通気はできるが、容器内の液体が滲みでたり外部の液体が混入したりしないような構造を意味する。前記構造は、たとえば酸素、炭酸ガスなどの通気は可能であるが容器内の培地が滲みでたり、そこから細菌汚染をおこしたりしないような構造を意味する。
【００６２】
図３に示される細胞培養用容器は、気体透過性プラスチック材料１、容器本体２、上部リング３および下部リング４から構成される。図４に示される細胞培養用容器は前記気体透過性プラスチック材料１、容器本体２、上部リング３および下部リング４に加えて供給口５、排出口６、供給管７、排出管８、培地供給ユニット９および培地を排出したり培地上清や細胞を採取するためのユニット１０から構成されている。
【００６３】
前記容器本体２、上部リング３および下部リング４は、たとえばアクリル樹脂、スチレン（スチロール）、ポリカーボネート、ポリプロピレン、ポリスチレン、ＡＢＳ、ＢＳ、ＴＰＸ製であればよい。
【００６４】
容器本体２への気体透過性プラスチック材料１の設置は、たとえば容器本体２の下部開口を気体透過性プラスチック材料１で覆い、ついで下部リング４を用いて気体透過性プラスチック材料１を容器本体２に固定し、細胞懸濁液および培地を入れたのち、容器本体２の上部開口を気体透過性プラスチック材料１で覆い、ついで上部リング３を用いて気体透過性プラスチック材料１を容器本体２に固定することにより水密とする手順で行なえばよい。
【００６５】
また、細胞培養用容器の少なくとも一部に、培地交換ができるように培地を供給する供給口５を設けてもよい。
【００６６】
前記供給口５を設けるばあいには、図４に示すように供給管７を介して培地供給ユニット９を接続するとよい。
【００６７】
前記培地供給ユニット９は、たとえばシリコーン製チューブ、セルロースアセテート製フィルター、ポンプおよび供給する培地の入った容器などからなる。
【００６８】
またさらに、細胞培養用容器の少なくとも一部に、培地を排出したり培養上清や細胞を採取するための排出口６を設けてもよい。
【００６９】
前記排出口６を設けるばあいには、図４に示すように排出管８を介して培地を排出したり培養上清や細胞を採取するためのユニット１０を接続するとよい。
【００７０】
前記培地を排出したり培養上清や細胞を採取するためのユニット１０は、たとえばシリコーン製チューブ、セルロースアセテート製フィルターおよび排出した培地、培養上清や細胞などを入れるための容器などからなる。
【００７１】
本発明による細胞培養用容器は、通常行なわれる細胞培養方法に用いることができ、前記培養方法としては、たとえば単層培養、浮遊細胞の静置培養または振盪培養、半固形培養、大量培養、重層化培養などの方法があげられる。
【００７２】
前記細胞培養により培養される細胞は、通常の動物細胞や植物細胞であればよく、前記培養細胞としては、たとえば線維芽細胞（３Ｔ３細胞など）、哺乳動物皮膚由来表皮細胞または線維芽細胞、メラノサイト、メンケル細胞、血管内皮細胞、ハイブリドーマなどがあげられる。
【００７３】
前記細胞培養に用いられる培地は、通常の細胞培養に用いられる液体培地、半固形培地、固形培地であればよく、培養の目的、培養する細胞などに応じて選択される。
【００７４】
また、本発明による細胞培養容器の滅菌は各部材を接続する前または接続したのちに行なってもよく、前記滅菌方法としては、たとえばエチレンオキサイドガスによるガス滅菌、紫外線、γ線またはＸ線などによる放射線滅菌などがあげられる。
【００７５】
【実施例】
つぎに、本発明の細胞培養用容器を実施例にもとづいてさらに詳細に説明するが、本発明はかかる実施例のみに限定されるものではない。
【００７６】
実施例１
アクリル樹脂を加工し、容器本体２（直径６０ｍｍ、高さ１５ｍｍ）をえた。つぎに気体透過性プラスチック材料のための重合成分として
0003761676.tif 000007
を混合し、溶解させて試験管に入れ、恒温水槽中にて３０℃で１６時間、４０℃で２４時間、５０℃で８時間重合させ、つぎに循環乾燥器中にて５０℃で５時間重合させ、５０℃から１０℃／１．５時間の昇温速度で１２０℃まで加熱重合させ、さらに１２０℃で１時間重合させたのち、室温まで徐冷して透明な棒状の気体透過性プラスチック材料をえた。これを常法により厚さ０．４ｍｍおよび直径５９ｍｍのフィルム形状に切削、研磨した。作製したフィルム形状の気体透過性プラスチック材料を酸素雰囲気下で、０．８ｔｏｒｒ、５０Ｗで３分間プラズマ処理した。
【００７７】
つぎに、容器本体２の下部開口に気体透過性プラスチック材料１を設置し、下部リングで留め、この上に気体透過性プラスチック材料１と上部リング３を軽くネジをしめて組みつける手順でフィルム形状の気体透過性プラスチック材料を容器本体に接続し、図３に示す細胞培養用容器を作製した。作製した容器をエチレンオキサイドガス滅菌し、充分にエアレーションした。
【００７８】
実施例２
気体透過性プラスチック材料の重合成分として
トリス（トリメチルシロキシ）シリルスチレン              １００部
Ｖ−６５                                                ０．１部
を用いたほかは、実施例１と同様にして厚さ０．４ｍｍおよび直径５９ｍｍのフィルム形状の気体透過性プラスチック材料を作製し、プラズマ処理を施し、これを用いて図３に示す細胞培養用容器を作製した。
【００７９】
実施例３
気体透過性プラスチック材料の重合成分として
トリス（トリメチルシロキシ）シリルプロピルメタクリレート  ４２．５部
トリフルオロメチルメタクリレート                              ４０部
メチルメタクリレート                                            ５部
メタクリル酸                                                    ５部
エチレングリコールジメタクリレート                          ７．５部
Ｖ−６５                                                    ０．１部
を用いたほかは、実施例１と同様にして厚さ０．４ｍｍおよび直径５９ｍｍのフィルム形状の気体透過性プラスチック材料を作製し、プラズマ処理を施し、これを用いて図３に示す細胞培養用容器を作製した。
【００８０】
実施例４
気体透過性プラスチック材料の重合成分として、
0003761676.tif 000008
を用いたほかは、実施例１と同様にして厚さ０．４ｍｍおよび直径５９ｍｍのフィルム形状の気体透過性プラスチック材料を作製し、プラズマ処理を施し、これを用いて図３に示す細胞培養用容器を作製した。
【００８１】
【化８】
0003761676.tif 000009
【００８２】
実施例５
実施例１で製造した細胞培養用容器へ、さらに培地供給ユニット９および培地を排出するユニット１０を接続したほかは、実施例１と同様にして図４に示す細胞培養用容器を作製した（図３参照）。
【００８３】
比較例１
メチルメタクリレート                                      ９７部
エチレングリコールジメタクリレート                          ３部
ＡＩＢＮ                                                ０．１部
を重合成分とし非気体透過性プラスチック材料を製造し、これを気体透過性プラスチック材料のかわりに用いたほかは、実施例１と同様にして図３に示す細胞培養用容器を作製した。
【００８４】
つぎに、実施例１〜４および比較例１でえられたフィルム形状の気体透過性または非気体透過性プラスチック材料を試験片として酸素透過係数および接触角を以下の方法にしたがって測定した。その結果を表１に示す。
【００８５】
（イ）酸素透過係数
理科精機工業（株）製の製科研式フィルム酸素透過率計を用い、３５℃の生理食塩水中にて試験片の酸素透過係数を測定した。なお、酸素透過係数の単位は、ｍｌ（Ｏ2）・ｃｍ／（ｃｍ2・ｓｅｃ・ｍｍＨｇ）である。
【００８６】
（ロ）接触角
ゴニオメータを用い、温度２５℃にて液滴法によって接触角（度）を測定した。
【００８７】
【表１】
0003761676.tif 000010
【００８８】
表１に示したように、実施例１〜４において製造された気体透過性プラスチック材料は、酸素透過係数が５０×１０-11〜５００×１０-11ｍｌ（Ｏ2）・ｃｍ／（ｃｍ2・ｓｅｃ・ｍｍＨｇ）と大きく酸素透過性にすぐれ、また接触角が１５〜６０度と小さく親水性にすぐれたものであることがわかる。
【００８９】
試験例１〜６
（１）細胞培養
実施例１〜３および比較例１で製造したフィルム形状の気体透過性または非気体透過性プラスチック材料によって形成された細胞培養用容器に各々１０％ウシ胎仔血清（以下、ＦＢＳという）を含むダルベッコ変法イーグル最小必須培地（以下、ＤＭＥＭという、ライフテックオリエンタル社製）で調製した３Ｔ３細胞（大日本製薬（株）より入手）の懸濁液を５×１０3個／ｃｍ2となるよう播種し、前記培地を容器に満たし気泡が入らないように密閉した。
【００９０】
これを５％炭酸ガスインキュベータ中に静置し、３７℃で１４４時間、細胞培養を行なった。
【００９１】
ここで用いた３Ｔ３細胞は、通常の容器（カタログ番号１７８８９１、ヌンク社製）中で培養したものである。
【００９２】
（２）細胞採取
容器内の培地を除去したのち、容器をハンクス液ですすぎ、０．２５ｗ／ｖ％トリプシン溶液（和光純薬工業（株）製）１ｍｌを容器に滴下してトリプシン処理した。そののち、培養した細胞を採取し、１０％ＦＢＳを含むＤＭＥＭで懸濁し、生細胞数をトリパンブルー色素排除法で計測した。その結果を表２に示す。
【００９３】
【表２】
0003761676.tif 000011
【００９４】
表２に示したように、培養後の生細胞数は比較例１で製造した細胞培養用容器を用いたばあいが６×１０4個／ｃｍ2であったのに対し実施例１〜３で製造した細胞培養用容器を用いたばあいの方が２１×１０4〜３５×１０4個／ｃｍ2と大きく、良好に細胞培養を行なえたことがわかる。
【００９５】
【発明の効果】
本発明によれば、細胞の代謝に必要な酸素などの気体を定常的に供給することができ、これにより密閉された容器内においても細胞培養を行なうことができる。さらに、培地を満たした容器内において長時間細胞を維持できることから輸送も簡便になる。
【００９６】
また、ローラーボトルによる細胞の大量培養ではメンブレンフィルターを付したキャップを用いなくても充分な酸素供給が可能になるため、メンブレンフィルターを付したキャップの汚染がなくなる。また、大量細胞培養に用いる容器の一部または全部を気体透過性材料とすることで、気体供給装置を組み込む必要がなくなり、安価で簡便に細胞培養することができる。
【００９７】
さらに、気体透過性プラスチック材料としてシリコン含有モノマーを用いるばあい、強度が高まるので、扱いが非常に簡便になる。
【図面の簡単な説明】
【図１】従来の細胞培養用容器の説明図である。
【図２】従来の細胞培養用容器の説明図である。
【図３】本発明の細胞培養用容器の一実施態様を示す概略説明図である。
【図４】図３に示す細胞培養用容器に培地供給ユニット９を接続した状態を示す概略説明図である。
【符号の説明】
１  気体透過性プラスチック材料
２  容器本体
３  上部リング
４  下部リング
５  供給口
６  排出口
７  培地供給管
８  培地排出管
９  培地供給ユニット
１０  培地を排出したり培地上清や細胞を採取するためのユニット
【図１】
0003761676.tif 000014
【図２】
0003761676.tif 000015
【図３】
0003761676.tif 000016
【図４】
0003761676.tif 000017