(57)【要約】エンドモルフィン−１およびエンドモルフィン−２の、２位のアミノ酸Ｐｒｏを１−アミノシクロプロパンカルボン酸と置換することにより、オピオイド受容体に強い親和性と選択性を有し、鎮痛、抗不安、緊張緩和などの生理活性と、タンパク質分解酵素抵抗性を有する新規エンドモルフィン誘導体を得ることに成功した。【特許請求の範囲】
【請求項１】
一般式〔Ｉ〕
【化１】
2002102833.tif 000009
（式中ＹはＴｒｐ、ＰｈｅまたはＤ／Ｌ−２′，６′−ジメチルフェニルアラニンを示す。）
で表されるエンドモルフィン誘導体又はその生理学的に許容される塩。
【請求項２】
一般式〔Ｉ〕中、ＹがＴｒｐである請求項１記載のエンドモルフィン誘導体又はその生理学的に許容される塩。
【請求項３】
一般式〔Ｉ〕中、ＹがＰｈｅである請求項１記載のエンドモルフィン誘導体又はその生理学的に許容される塩。
【請求項４】
一般式〔Ｉ〕中、ＹがＤ／Ｌ−２′，６′−ジメチルフェニルアラニンである請求項１記載のエンドモルフィン誘導体又はその生理学的に許容される塩。
【請求項５】
請求項１記載の一般式〔Ｉ〕で表されるエンドモルフィン誘導体又はその生理学的に許容される塩を含有してなる医薬。
【請求項６】
鎮痛剤である請求項５記載の医薬。
【請求項７】
請求項１〜４のいずれかに記載のエンドモルフィン誘導体又はその生理学的に許容される塩および製薬学的に許容される担体を含有する医薬組成物。
【発明の詳細な説明】
技術分野
本発明は、鎮痛、抗不安、緊張緩和などの生理活性を有する新規エンドモルフィン誘導体又はその生理学的に許容される塩並びにその誘導体およびその生理学的に許容される塩を含有してなる医薬に関する。
背景技術
モルヒネをはじめとするアヘンアルカロイドについては古くから鎮痛作用や陶酔感などの精神作用を有することが知られていた。
１９７１年Ｇｏｌｄｓｔｅｉｎらは、哺乳動物の神経組織中にモルヒネと特異的に結合する受容体、オピオイド受容体が存在することを明らかにした〔Ａ．Ｇｏｌｄｓｔｅｉｎ，Ｌ．Ｉ．Ｌｏｗｎｅｙ  ａｎｄ  Ｂ．Ｋ．Ｐａｌ，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．，６８，１７４２（１９７１）〕。
そして、１９７５年には、Ｈｕｇｈｅｓらにより、脳内のモルヒネ受容体と特異的に結合する内因性リガンド、メチオニンエンケファリンおよびロイシンエンケファリンの２種のペンタペプチドが発見された〔Ｊ．Ｈｕｇｈｅｓ，Ｔ．Ｗ．Ｓｍｉｔｈ，Ｈ．Ｗ．Ｋｏｓｔｅｒｌｉｔｚ，Ｌ．Ａ．Ｆｏｔｈｅｒｇｉｌｌ，Ｂ．Ａ．Ｍｏｒｇａｎ  ａｎｄ  Ｒ．Ｈ．Ｍｏｒｒｉｓ，Ｎａｔｕｒｅ，２５８，５７７（１９７５）〕。１９７９年には、Ｇｏｌｄｓｔｅｉｎらが、ブタの下垂体からオピオイド受容体と特異的に結合するダイノルフィンを単離した〔Ａ．Ｇｏｌｄｓｔｅｉｎ，Ｓ．Ｔａｃｈｉｂａｎａ，Ｌ．Ｉ．Ｌｏｗｎｅｙ，Ｍ．Ｈｕｎｋａｐｉｌｌｅｒ  ａｎｄ  Ｌ．Ｈｏｏｄ，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．，７６，６６６６（１９７９）〕。それ以来多くの内因性オピオイドペプチドが、下垂体、脳、副腎髄質、消化管を含む末梢組織などに存在することが明らかにされた。
オピオイド受容体は主として、μ、δ、κのサブタイプに分類されている。δ受容体はエンケファリン、κ受容体はダイノルフィンが内因性アゴニストとして同定されている。
μ受容体のアゴニストとしてはモルヒネが最強のものであるが、その内因性アゴニストが１９９７年、Ｚａｄｉｎａらによってウシの脳から発見され、エンドモルフィン−１（Ｔｙｒ−Ｐｒｏ−Ｔｒｐ−Ｐｈｅ−ＮＨ２）とエンドモルフィン−２（Ｔｙｒ−Ｐｒｏ−Ｐｈｅ−Ｐｈｅ−ＮＨ２）と命名された〔Ｊ．Ｅ．Ｚａｄｉｎａ，Ｌ．Ｈａｃｋｌｅｒ，Ｌ．Ｊ．Ｇｅ  ａｎｄ  Ａ．Ｊ．Ｋａｓｔｉｎ，Ｎａｔｕｒｅ，３８６，４９９（１９９７）〕。
これらのエンドモルフィンは同年、同グループによりヒトの脳からも単離された〔Ｌ．Ｈａｃｋｌｅｒ，Ｊ．Ｅ．Ｚａｄｉｎａ，Ｌ．Ｊ．Ｇｅ  ａｎｄ  Ａ．Ｊ．Ｋａｓｔｉｎ，Ｐｅｐｔｉｄｅｓ，１８，１６３５（１９９７）〕。
エンドモルフィン−１のμ受容体に対する選択性はκ受容体に比べ１５０００倍以上であり、また、エンドモルフィン−２はδ受容体に比べ１３０００倍以上であり、マウスにおける鎮痛作用も強力で長時間持続すると報告され〔Ｊ．Ｅ．Ｚａｄｉｎａ，Ｌ．Ｈａｃｋｌｅｒ，Ｌ．Ｊ．Ｇｅ  ａｎｄ  Ａ．Ｊ．Ｋａｓｔｉｎ，Ｎａｔｕｒｅ，３８６，４９９（１９９７）〕、非常に注目されると同時に活発な研究が展開されている。
エンドルモルフィン−１とエンドモルフィン−２はともに類似した鎮痛活性を持ち、動脈の血圧を減少させる〔Ｈ．Ｃ．Ｃｈａｍｐｉｏｎ，Ｊ．Ｅ．Ｚａｄｉｎａ，Ａ．Ｊ．Ｋａｓｔｉｎ，Ｌ．Ｈａｃｋｌｅｒ，Ｌ．Ｊ．Ｇｅ，Ｐ．Ｊ．Ｋａｄｏｗｉｔｚ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍｕｎ．，２３５，５６７（１９９７）；Ｙ．Ｒ．Ｙａｎｇ，Ｔ．Ｈ．Ｃｈｉｕ，Ｃ．Ｌ．Ｃｈｅｎ，Ｅｕｒ．Ｊ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．，３７２，２２９（１９９９）〕。
ＤＭＳＯ中と水中で、エンドモルフィン−１がとっている構造は、Ｐｒｏのアミド部分が、シス型：トランス型＝２５：７５で存在している〔Ｂ．Ｌ．Ｐｏｄｌｏｇａｒ，Ｍ．Ｇ．Ｐａｔｅｒｌｉｎｉ，Ｄ．Ｍ．Ｆｅｒｇｕｓｏｎ，Ｇ．Ｃ．Ｌｅｏ，Ｄ．Ａ．Ｄｅｍｅｔｅｒ，Ｆ．Ｋ．Ｂｒｏｗｎ，Ａ．Ｂ．Ｒｅｉｔａ，ＦＥＢＳ  Ｌｅｔｔ．，４３９，１２（１９９８）〕。
エンドモルフィン−２のアナローグとしては、岡田らにより、Ｈ−Ｔｙｒ−Ｐｒｏ−Ｐｈｅ−ＮＨ−２−アダマンチルが報告されている。
これはμ受容体に対する親和性が、Ｋｉ＝６．５９±０．０６ｎＭ、δ受容体の親和性のμ受容体に対する選択性、Ｋｉ（δ）／Ｋｉ（μ）＝８４４という高い値を示している（Ｙ．Ｓｈｉｍｉｚｕ，Ｍ．Ｔａｋａｈａｓｈｉ，Ａ．Ｆｕｋｕｍｉｚｕ，Ｙ．Ｔｓｕｄａ，Ｓ．Ｄ．Ｂｒｙａｎｔ，Ｌ．Ｈ．Ｌａｚａｒｕｓ  ａｎｄ  Ｙ．Ｏｋａｄａ，Ｐｅｐｔｉｄｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  １９９８，１９７（１９９９））。
同グループは、Ｔｙｒ−Ｐｒｏ−Ｐｈｅ−ＮＨ−１−ナフチルがさらに高活性、高選択性を示すことを明らかにした。即ち、μ受容体に対する親和性が、Ｋｉ＝２．４１±０．５ｎＭ、δ受容体に対する親和性が、Ｋｉ＝３６３４±１２６５ｎＭであり、δ受容体の親和性のμ受容体に対する選択性が、Ｋｉ（δ）／Ｋｉ（μ）＝１５０７というさらに高い値を示した（Ｍ．Ｔａｋａｈａｓｈｉ，Ａ．Ｆｕｋｕｍｉｚｕ，Ｙ．Ｓｈｉｍｉｚｕ，Ｙ．Ｔｓｕｄａ，Ｔ．Ｙｏｋｏｉ，Ｓ．Ｄ．Ｂｒｙａｎｔ，Ｌ．Ｈ．Ｌａｚａｒｕｓ  ａｎｄ  Ｙ．Ｏｋａｄａ，Ｐｅｐｔｉｄｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  １９９９，４３７（２０００））。
下東らは、エンドモルフィン−１およびエンドモルフィン−２アナローグのオピオイド受容体との結合における芳香環の寄与について検討した。エンドモルフィン−２の３位のフェニル基を種々の置換基に換えて検討した結果、２，３，４，５，６−ペンタフルオロフェニルアラニン（（Ｆ５）Ｐｈｅ）に置換したアナローグ［（Ｆ５）Ｐｈｅ３−エンドモルフィン−２］が、天然物に匹敵する高い受容体結合活性を維持していることを見出した（Ｔ．Ｈｏｎｄａ，Ｄ．Ｓｈｉｇｅｈｉｒｏ，Ｎ．Ｓｈｉｒａｓｕ，Ｙ．Ｃｈｕｍａｎ，Ｔ．Ｆｕｊｉｔａ，Ｔ．Ｎｏｓｅ  ａｎｄ  Ｙ．Ｓｈｉｍｏｈｉｇａｓｈｉ，Ｐｅｐｔｉｄｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  １９９９，４２９（２０００））。また、佐々木らは、エンドモルフィン−２の３位のＰｈｅをＬ−Ｄｍｐ（２′，６′−ジメチルフェニルアラニン）に置換したアナローグを合成し、μ受容体に対する親和性が天然物の約２０倍強くなったと報告した（Ｙ．Ｓａｓａｋｉ，Ａ．Ａｍｂｏ，Ｈ．Ｍｕｒａｓｅ，Ｍ．Ｈｉｒａｂｕｋｉ，Ｈ．Ｏｕｃｈｉ  ａｎｄ  Ｙ．Ｙａｍａｍｏｔｏ，Ｐｅｐｔｉｄｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２０００，１１７（２００１））。
ところで、異常アミノ酸であるα，α−二置換グリシンは、立体配座固定因子として様々な生理活性ペプチドに導入する研究が行われている。
すなわち、生理活性ペプチドの作用機構は、受容体との結合において、ある特定のコンホメーションが保たれ、複合体を形成し、活性を発現すると考えられており、その活性型コンホメーションを固定するビルディング・ブロックとしてα，α−二置換グリシンの立体配座固定因子としての性質を利用することが試みられているのである。
発明の開示
本発明者は、このα，α−二置換グリシン及びそれを含むペプチドの合成と、その立体化学及びペプチドの生理活性への影響について研究を重ねてきたが、今回エンドモルフィン−１及びエンドモルフィン−２にα，α−二置換グリシンを導入し、得られたペプチドのコンホメーション、タンパク質分解酵素に対する抵抗性、生理活性の強弱、オピオイド受容体の各サブタイプへの親和性、選択性などについて綿密な検討を行い、それらの医薬としての可能性を探った。
さらに、エンドモルフィン−２にα，α−二置換グリシンを導入するとともに３位のＰｈｅをＤ体またはＬ体（Ｄ／Ｌ）の２′，６′−ジメチルフェニルアラニン（Ｄ／Ｌ−Ｄｍｐ３と表記することがある。）に置換したものについても医薬としての可能性を検討した。
その結果、エンドモルフィン−１及びエンドモルフィン−２の２位のアミノ酸であるＰｒｏをα，α−二置換グリシンの１種である１−アミノシクロプロパンカルボン酸（Ａｃ３ｃ２と表記することがある。）に置換した新規ペプチドが、強い生理活性、μ受容体に対する高い親和性及び選択性を示し、且つタンパク質分解酵素に対して強い抵抗性を示すことが判明した。本発明はこれらの知見を基にして完成されたものである。
すなわち、本発明は、
（１）一般式〔Ｉ〕
2002102833.tif 000002
（式中ＹはＴｒｐ、ＰｈｅまたはＤ／Ｌ−２′，６′−ジメチルフェニルアラニンを示す。）
で表されるエンドモルフィン誘導体又はその生理学的に許容される塩、
（２）一般式〔Ｉ〕中、ＹがＴｒｐである（１）記載のエンドモルフィン誘導体又はその生理学的に許容される塩、
（３）一般式〔Ｉ〕中、ＹがＰｈｅである（１）記載のエンドモルフィン誘導体又はその生理学的に許容される塩、
（４）一般式〔Ｉ〕中、ＹがＤ／Ｌ−２′，６′−ジメチルフェニルアラニンである（１）記載のエンドモルフィン誘導体又はその生理学的に許容される塩、
（５）（１）記載の一般式〔Ｉ〕で表されるエンドモルフィン誘導体又はその生理学的に許容される塩を含有してなる医薬、
（６）鎮痛剤である（５）記載の医薬、および
（７）上記（１）〜（４）のいずれかに記載のエンドモルフィン誘導体又はその生理学的に許容される塩および製薬学的に許容される担体を含有する医薬組成物である。
一般式〔Ｉ〕で表される化合物の１つは、
（１）Ｔｙｒ−Ａｃ３ｃ−Ｔｒｐ−Ｐｈｅ−ＮＨ２
で示される新規化合物で、本明細書において［Ａｃ３ｃ２］−エンドモルフィン−１と表記する。
他の１つの化合物は、
（２）Ｔｙｒ−Ａｃ３ｃ−Ｐｈｅ−Ｐｈｅ−ＮＨ２
で示される新規化合物で、本明細書において［Ａｃ３ｃ２］−エンドモルフィン−２と表記する。
さらに他の化合物は、
（３）Ｔｙｒ−Ａｃ３ｃ−Ｄ／Ｌ−Ｄｍｐ−Ｐｈｅ−ＮＨ２
で示される新規化合物である。なお本明細書において実施例の製造工程で分離されたジアステレオマーの結晶ＡおよびＢから生成されるものを、それぞれ［Ａｃ３ｃ２，Ｄｍｐ（Ａ）３］−エンドモルフィン−２および［Ａｃ３ｃ２，Ｄｍｐ（Ｂ）３］−エンドモルフィン−２とも表記する。
本発明の化合物は、公知のペプチド合成法に準じて製造する事ができる。例えば、下記一般反応式により液相法を用いてＮ端伸張法で製造することができる。
2002102833.tif 000003
なお上記反応式および本明細書における各記号の意義は次の通りである。
Ｙ：Ｔｒｐ、ＰｈｅまたはＤ／Ｌ−２′，６′−ジメチルフェニルアラニン
Ａ：アミノ基の保護基（ベンジルオキシカルボニル（Ｚ）、ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル（Ｂｏｃ））
Ｂｚｌ：ベンジル基
ＥＤＣ：１−エチル−３−（３−ジメチルアミノプロピル）−カルボジイミド
ＥＤＣ・ＨＣｌ：１−エチル−３−（３−ジメチルアミノプロピル）−カルボジイミド塩酸塩
ＨＯＢｔ：１−ヒドロキシベンゾトリアゾール
Ｚ−ＯＳｕ：Ｎ−（ベンジルオキシカルボニル）スクシンイミド
ＴＥＡ：トリエチルアミン
ＤＭＦ：Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド
ＭｅＯＨ：メタノール
ＥｔＯＨ：エタノール
ＢｕＯＨ：１−ブタノール
ＡｃＯＥｔ：酢酸エチル
Ｅｔ２Ｏ：ジエチルエーテル
ＴＨＦ：テトラヒドロフラン
ＡｃＯＨ：酢酸
ＣＨＣｌ３：クロロホルム
ＨＣｌ：塩酸
ＨＢｒ：臭化水素酸
Ｐｄ−Ｃ：パラジウム−炭素
ＴＦＡ：トリフルオロ酢酸
ＤＭＳＯ：ジメチルスルホキシド
上記式中、カップリングには例えばＥＤＣ−ＨＯＢｔ法などを、脱保護には例えばＨＢｒ／ＡｃＯＨまたは接触水素化分解法などを用いることができる。
本発明の新規エンドモルフィン誘導体は、そのまま、あるいは、生理学的に許容される塩として、使用することができる。生理学的に許容される塩としては、例えば、塩酸、硫酸、炭酸などの鉱酸の塩、酢酸、クエン酸などの有機酸の塩が挙げられる。
本発明の新規エンドモルフィン誘導体及び生理学的に許容される塩は、オピオイド受容体のアゴニストであり、したがって、鎮痛、抗不安、緊張緩和などモルヒネが使用される全ての医薬用途への使用が可能である。
本発明のエンドモルフィン誘導体及び生理学的に許容される塩を含有する医薬は、全身的または局所的に投与され得る。全身的には経口投与の他、静脈内注射、皮下注射、筋肉内注射などの非経口法で投与され得る。局所的には鼻内、眼内などに投与される。
本発明のエンドモルフィン誘導体及び生理学的に許容される塩を含有する医薬の製剤形態としては、粉末、顆粒、錠剤、カプセル剤、坐剤などの固形剤、およびシロップ剤、注射剤、点眼剤、点鼻剤などの液剤などが挙げられる。
ヒトに経口的に投与される製剤としては、たとえば粉、顆粒、錠剤、カプセル剤、シロップ剤および液剤などが挙げられる。製剤が粉末、顆粒、錠剤などとして製造される場合、固形製剤を製造するのに好適な任意の製薬担体、たとえば賦形剤（デンプン、トウモロコシデンプン、ブドウ糖、果糖、白糖など）、滑沢剤（ステアリン酸マグネシウムなど）、崩壊剤（デンプン、結晶セルロースなど）、結合剤（デンプン、アラビアゴムなど）などを用いることができ、適当なコーティング剤（ゼラチン、白糖、アラビアゴム、カルナバロウなど）、腸溶性コーティング剤（例えば酢酸フタル酸セルロース、メタアクリル酸コポリマー、ヒドロキシプロピルセルロースフタレート、カルボキシメチルエチルセルロースなど）などで剤皮を施してもよい。さらに、持続性製剤のためのコーティング剤として、例えばヒドロキシプロピルメチルセルロース、エチルセルロース、ヒドロキシメチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、ポリオキシエチレングリコール、ツイーン８０、プルロニックＦ６８、セルロースアセテートフタレート、ヒドロキシプロピルメチルセルロースフタレート、ヒドロキシメチルセルロースアセテートサクシネート、オイドラギット（ローム社製、ドイツ，メタアクリル酸・アクリル酸共重合）などが用いられる。カプセル剤とする場合には、適当な賦形剤、例えば流動性と滑沢性を向上させるためのステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸カルシウム、タルク、軽質無水ケイ酸など、また加圧流動性のための結晶セルロースや乳糖などの他、上記崩壊剤などを適宜添加したものを均等に混和または、粒状、若しくは粒状としたものに適当な上記コーティング剤で剤皮を施したものを充填するか、適当なカプセル基剤（ゼラチンなど）にグリセリンまたはソルビトールなど加えて塑性を増したカプセル基剤で被包成形することもできる。
これらカプセル剤には必要に応じて、着色剤、保存剤〔二酸化イオウ、パラベン類（パラオキシ安息香酸メチル、エチル、プロピルエステル）など〕などを加えることができる。カプセル剤は通常のカプセルの他、腸溶コーティングカプセル、胃内抵抗性カプセル、放出制御カプセルとすることもできる。腸溶性カプセルとする場合、腸溶性コーティング剤でコーティングした顆粒等を通常のカプセルに充填または、カプセル自身を腸溶性コーティング剤でコーティング、もしくは腸溶性高分子を基剤として成形することができる。また、製剤がシロップや液剤として製造される場合、たとえば安定剤（エデト酸ナトリウムなど）、懸濁化剤（アラビアゴム、カルメロースなど）、矯味剤（単シロップ、ブドウ糖など）、芳香剤などを適宜に選択して使用することができる。
非経口的に製造される製剤としては、注射剤、点眼剤、点鼻剤、坐剤などが挙げられる。製剤が注射剤として製造される場合、たとえば溶剤（注射用蒸留水など）、安定化剤（エデト酸ナトリウムなど）、等張化剤（塩化ナトリウム、グリセリン、マンニトールなど）、ｐＨ調整剤（塩酸、クエン酸、水酸化ナトリウムなど）、懸濁化剤（メチルセルロース、カルボキシルメチルセルロースナトリウムなど）を用いることができ、坐剤として製造される場合、たとえば坐剤基剤（カカオ脂、マクロゴールなど）などを適宜に選択して使用することができる。局所用製剤としては、たとえば点眼剤、点鼻剤および眼軟膏などが挙げられる。これら局所用製剤には本発明化合物に加えて、たとえば溶剤（生理食塩水、精製水など）、緩衝剤（ホウ酸、ホウ砂、酢酸ナトリウム、クエン酸緩衝剤、リン酸緩衝剤など）、等張化剤（塩化ナトリウム、グリセリン、マンニトールなど）、安定化剤（エデト酸ナトリウム、クエン酸など）、保存剤（塩化ベンザルコニウムなどの４級アンモニウム塩類、パラベン類、クロロブタノール、ソルビン酸など）ｐＨ調整剤（塩酸、水酸化ナトリウムなど）、懸濁化剤（ヒドロキシプロピルメチルセルロース、ヒドロキシメチルセルロース、カルボキシメチルセルロースナトリウム、メチルセルロースなど）、界面活性剤（ポリソルベート８０、ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油など）、乳化剤（ポリビニルピロリドンなど）、軟膏基剤（ワセリン、ラノリンなど）などの公知の化合物を適宜に選択して使用することができる。
本発明の新規エンドモルフィン誘導体及び生理学的に許容される塩を含む医薬は、低毒性で、動物とりわけ哺乳動物（例えば、ヒト、イヌ、ウサギ、ラット、マウスなど）のモルヒネが使用される全ての疾患の予防または治療に有利に使用される。
人への投与量は、年令、体重、一般的健康状態、性別、食事、投与時間、投与方法、排泄速度、薬物の組み合わせ、患者のその時に治療を行っている病状の程度に応じ、それらあるいはその他の要因を考慮して決められる。
例えば、本発明の化合物を鎮痛剤として成人（体重５０Ｋｇ）に経口投与または静脈注射する場合は、１回０．１〜２０ｍｇ、好ましくは、１〜１０ｍｇを１日１〜３回、経口持続製剤の場合は、１日１〜２０ｍｇ程度である。
なお、本明細書において、アミノ酸を略号で表示する場合、ＩＵＰＡＣ−ＩＵＢ  Ｃｏｍｍｉｓｉｏｎ  ｏｎ  Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｎｏｍｅｎｃｌａｔｕｒｅによる略号あるいは当該分野における慣用略号に基づいており、その例を下記する。またアミノ酸に関し光学異性体があり得る場合は、特に明示しなければＬ体を示すものとする。
Ｐｈｅ：フェニルアラニン
Ｔｙｒ：チロシン
Ｔｒｐ：トリプトファン
Ｐｒｏ：プロリン
Ｘａａ：１−アミノシクロプロパンカルボン酸またはＤ／Ｌ−２′，６′−ジメチルフェニルアラニン
本願明細書の配列表の配列番号は、以下の配列を示す。
〔配列番号：１〕エンドモルフィン−１のアミノ酸配列。
〔配列番号：２〕エンドモルフィン−２のアミノ酸配列。
〔配列番号：３〕［Ａｃ３ｃ２］−エンドモルフィン−１のアミノ酸配列。
〔配列番号：４〕［Ａｃ３ｃ２］−エンドモルフィン−２のアミノ酸配列。
〔配列番号：５〕［Ａｃ３ｃ２，Ｄｍｐ３］−エンドモルフィン−２のアミノ酸配列。
発明を実施するための最良の形態
以下に実施例、製剤例、試験例を挙げて本発明をより具体的に説明する。
実施例１
［Ａｃ３ｃ２］−エンドモルフィン−２の合成
１−１  Ｚ−Ａｃ３ｃの合成
Ａｃ３ｃ  ３．０４ｇ（３０ｍｍｏｌ）を水１５ｍＬに溶解させ、ＴＥＡ  ６．１６ｇ（６１ｍｍｏｌ）を加え、ジオキサン３０ｍＬに溶解させたＺ−ＯＳｕ  １０．０ｇ（４０ｍｍｏｌ）を加え、常温で攪拌した。４日後ＴＬＣ［展開溶媒；ＣＨＣｌ３−ＭｅＯＨ−ＡｃｏＨ（９５：１５：３）］で反応終了を確認した。減圧濃縮後、ＡｃＯＥｔ  １００ｍＬを加え、６Ｎ−ＨＣｌで水層をｐＨ２にし、ＡｃＯＥｔ（５０ｍＬｘ２）で抽出を行った。水（５０ｍＬｘ１）、飽和食塩水（４０ｍＬｘ２）で順次洗浄を行い、無水硫酸ナトリウムで乾燥後、これを濾別、減圧濃縮し白色粗結晶８．３４ｇ（１１８％）を得た。ＡｃＯＥｔから再結晶し、Ｚ−Ａｃ３ｃを得た。
収量５．９８ｇ，収率８４．５％，融点１５２−１５３℃．
１Ｈ−ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ（ｐｐｍ）＝０．９９（ｑ，２Ｈ，Ｊ＝４．５Ｈｚ，Ａｃ３ｃ−βＣＨ２），１．３０（ｑ，２Ｈ，Ｊ＝４．４Ｈｚ，Ａｃ３ｃ−βＣＨ２），５．００（ｓ，２Ｈ，Ｚ−ＣＨ２），７．３４（ｓ，５Ｈ，Ｚ−ａｒｏｍ），７．８８（ｓ，１Ｈ，Ａｃ３ｃ−ＮＨ），１２．４（ｂｒ，１Ｈ，Ａｃ３ｃ−ＯＨ）．
１−２  Ｚ−Ｐｈｅ−ＮＨ２の合成
滴下漏斗と温度計を備えた二口フラスコにＺ−Ｐｈｅ  ２９．９ｇ（０．１０ｍｏｌ）および無水ＴＨＦ  ３００ｍＬを入れ、ＴＥＡ  １１．６ｇ（０．１１ｍｏｌ）を加え攪拌し、氷−食塩浴で−１５〜−１０℃を保ちながらエチルクロロホルメート１２．４ｇ（０．１１ｍｏｌ）を滴下した。その後も−１５℃を３０分間保った。次に２５％アンモニア水４０ｍＬを少しずつ加え、常温下で２２時間攪拌した。これを減圧濃縮し、水２００ｍＬを加え、結晶を濾別し、水洗を行い、乾燥させ、白色粗結晶３０．２ｇ（１０１％）を得た。これをＭｅＯＨ−Ｅｔ２Ｏから再結晶して、Ｚ−Ｐｈｅ−ＮＨ２を得た。
収量２０．４ｇ，収率６８．５％，融点１６４−１６５℃，［α］Ｄ２５−５．９°（ｃ１．０，ＭｅＯＨ）．
１Ｈ−ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ（ｐｐｍ）＝２．７３（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝１０．５Ｈｚ，Ｊ＝１３．８Ｈｚ，Ｐｈｅ−βＣＨ２），２．９８（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝４．４Ｈｚ，Ｊ＝１３．６Ｈｚ，Ｐｈｅ−βＣＨ２），４．１３−４．２１（ｍ，１Ｈ，Ｐｈｅ−αＣＨ），４．９３（ｓ，２Ｈ，Ｚ−ＣＨ２），７．０６−７．４６（ｍ，１３Ｈ，Ｚ−ａｒｏｍ，Ｐｈｅ−ａｒｏｍ，Ｐｈｅ−ＮＨ，ａｍｉｄｅ）．
１−３  Ｚ−Ｐｈｅ−ＮＨ２のＺ基の除去
Ｚ−Ｐｈｅ−ＮＨ２  １１．４ｇ（３８ｍｍｏｌ）に２５％ＨＢｒ／ＡｃＯＨ  ４０．４ｇを加えた。１０分後、ＴＬＣ［展開溶媒；ＣＨＣｌ３−ＭｅＯＨ−ＡｃＯＨ（９５：１５：３）］によりＺ基の除去を確認後、無水Ｅｔ２Ｏを加えて一晩おき、無水Ｅｔ２Ｏで洗浄してから乾燥させ、白色粗結晶１１．４ｇ（９９．８％）を得た。これを無水ＭｅＯＨ−無水Ｅｔ２Ｏから再結晶をし、Ｐｈｅ−ＮＨ２・ＨＢｒを得た。
収量８．５７ｇ，収率９１．６％，融点２３８℃（ｄｅｃ），［α］Ｄ２５＋１８．８°（ｃ１．０，ＭｅＯＨ）．
１Ｈ−ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ（ｐｐｍ）＝２．９７（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝７．６Ｈｚ，Ｊ＝１４．０Ｈｚ，Ｐｈｅ−βＣＨ２），３．０９（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝６．０Ｈｚ，Ｊ＝１３．８Ｈｚ，Ｐｈｅ−βＣＨ２），３．９６（ｑ，１Ｈ，Ｊ＝６．３Ｈｚ，Ｐｈｅ−αＣＨ），７．２３−７．３６（ｍ，５Ｈ，Ｐｈｅ−ａｒｏｍ），７．５６（ｓ，１Ｈ，ａｍｉｄｅ），７．９０（ｓ，１Ｈ，ａｍｉｄｅ），８．１０（ｓ，３Ｈ，Ｂｒ−・＋ＮＨ３）．
１−４  Ｚ−Ｐｈｅ−Ｐｈｅ−ＮＨ２の合成
Ｚ−Ｐｈｅ  ９．５５ｇ（３２ｍｍｏｌ）、Ｐｈｅ−ＮＨ２・ＨＢｒ  ７．８０ｇ（３２ｍｍｏｌ）およびＨＯＢｔ  ４．４ｇ（３２ｍｍｏｌ）をＤＭＦ  ９６ｍＬに溶解し、ＴＥＡ  ４．０ｇ（４０ｍｍｏｌ）を加え、氷冷し、ＥＤＣ・ＨＣｌ  ６．８ｇ（３５ｍｍｏｌ）を加え、１時間攪拌後常温に戻して、さらに２日間攪拌した。減圧濃縮後、ＡｃＯＥｔ  ３００ｍＬを加えた。この際結晶が析出するが、懸濁したまま洗浄操作をした。１Ｎ−ＨＣｌ（３０ｍＬｘ５）、１Ｎ−炭酸水素ナトリウム水溶液（３０ｍＬｘ５）、水（３０ｍＬｘ１）、飽和食塩水（３０ｍＬｘ２）で順次洗浄を行い、析出している白色結晶を濾別し、無水硫酸ナトリウムで乾燥後、これを濾別、減圧濃縮し、得られた結晶を先に析出していた結晶とあわせて［１５．７ｇ（１１０％）］、ＭｅＯＨから再結晶して、Ｚ−Ｐｈｅ−Ｐｈｅ−ＮＨ２を得た。
収量１１．４ｇ，収率８０．１％，融点２２５−２２６．５℃，［α］Ｄ２５−３１．７°（ｃ１．０，ＤＭＦ）．
１Ｈ−ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ（ｐｐｍ）＝２．６２−３．０４（ｍ，４Ｈ，Ｐｈｅ−βＣＨ２ｘ２），４．１８−４．２５（ｍ，１Ｈ，Ｐｈｅ１−αＣＨ），４．４２−４．４９（ｍ，１Ｈ，Ｐｈｅ２−αＣＨ），４．９２（ｓ，２Ｈ，Ｚ−ＣＨ２），７．１０−７．３２（ｍ，１７Ｈ，Ｚ−ａｒｏｍ，Ｐｈｅ−ａｒｏｍｘ２，ａｍｉｄｅ），７．４８（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，Ｐｈｅ１−ＮＨ），８．０２（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝８．１Ｈｚ，Ｐｈｅ２−ＮＨ）．
１−５  Ｚ−Ｐｈｅ−Ｐｈｅ−ＮＨ２のＺ基の除去
Ｚ−Ｐｈｅ−Ｐｈｅ−ＮＨ２  ７．０５ｇ（１６ｍｍｏｌ）に２５％ＨＢｒ／ＡｃＯＨ  ２３．２ｇを加えよく混ぜ合わせた。１．５時間後、ＴＬＣ［展開溶媒；ＣＨＣｌ３−ＭｅＯＨ−ＡｃＯＨ（９５：１５：３）］によりＺ基の除去を確認し、無水Ｅｔ２Ｏを加えてデカンテーションを行い、得られた固体を一端乾燥させ、これを無水ＭｅＯＨ−無水Ｅｔ２Ｏで再沈殿して、Ｐｈｅ−Ｐｈｅ−ＮＨ２・ＨＢｒを得た。
収量６．１６ｇ，収率９９．６％，融点２４５℃（ｄｅｃ）．
１Ｈ−ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ（ｐｐｍ）＝２．８２−３．１６（ｍ，４Ｈ，Ｐｈｅ−βＣＨ２ｘ２），４．０２（ｂｒ，１Ｈ，Ｐｈｅ１−αＣＨ），４．４７−４．５４（ｍ，１Ｈ，Ｐｈｅ２−αＣＨ），７．１６（ｓ，１Ｈ，ａｍｉｄｅ），７．１８−７．３３（ｍ，１０Ｈ，Ｐｈｅ−ａｒｏｍｘ２），７．５５（ｓ，１Ｈ，ａｍｉｄｅ），８．０４（ｓ，３Ｈ，Ｂｒ−・＋ＮＨ３），８．７５（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝８．１Ｈｚ，Ｐｈｅ２−ＮＨ）．
１−６  Ｚ−Ａｃ３ｃ−Ｐｈｅ−Ｐｈｅ−ＮＨ２の合成
Ｚ−Ａｃ３ｃ  ０．８２５ｇ（３．５ｍｍｏｌ）、Ｐｈｅ−Ｐｈｅ−ＮＨ２・ＨＢｒ  １．３９ｇ（３．５ｍｍｏｌ）およびＨＯＢｔ  ０．５０ｇ（３．７ｍｍｏｌ）をＤＭＦ  １３ｍＬに溶解し、ＴＥＡ  ０．４０ｇ（３．９ｍｍｏｌ）を加え、氷冷し、ＥＤＣ・ＨＣｌ  ０．７６ｇ（４．０ｍｍｏｌ）を加え、１時間攪拌後常温に戻して、さらに６日間攪拌した。減圧濃縮後、ＡｃＯＥｔ  ４００ｍＬを加え、１Ｎ−ＨＣｌ（４０ｍＬｘ５）、１Ｎ−炭酸水素ナトリウム水溶液（４０ｍＬｘ５）、水（４０ｍＬｘ１）、飽和食塩水（４０ｍＬｘ２）で順次洗浄を行い、無水硫酸ナトリウムで乾燥後、これを濾別、減圧濃縮し、粗生成物１．８５ｇ（９９．６％）を得た。これをＭｅＯＨから再結晶し、Ｚ−Ａｃ３ｃ−Ｐｈｅ−Ｐｈｅ−ＮＨ２を得た。
収量１．３８ｇ，収率７４．７％，融点２０２−２０３℃，［α］Ｄ２５−２９．４°（ｃ１．０，ＭｅＯＨ）．
１Ｈ−ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ（ｐｐｍ）＝０．８３−０．９３（ｍ，２Ｈ，Ａｃ３ｃ−βＣＨ２），１．１１−１．２２（ｍ，２Ｈ，Ａｃ３ｃ−βＣＨ２），２．７８−３．０５（ｍ，４Ｈ，Ｐｈｅ−βＣＨ２ｘ２），４．３８−４．４９（ｍ，２Ｈ，Ｐｈｅ−αＣＨｘ２），５．０２（ｓ，２Ｈ，Ｚ−ＣＨ２），７．１０−７．３４（ｍ，１７Ｈ，Ｚ−ａｒｏｍ，Ｐｈｅ−ａｒｏｍｘ２，ａｍｉｄｅ），７．５１（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝７．８Ｈｚ，Ｐｈｅ２−ＮＨ），７．９５（ｓ，１Ｈ，Ａｃ３ｃ−ＮＨ），８．１３（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝８．７Ｈｚ，Ｐｈｅ３−ＮＨ）．
１−７  Ｚ−Ａｃ３ｃ−Ｐｈｅ−Ｐｈｅ−ＮＨ２のＺ基の除去
Ｚ−Ａｃ３ｃ−Ｐｈｅ−Ｐｈｅ−ＮＨ２  １．０３ｇ（２．０ｍｍｏｌ）に２５％ＨＢｒ／ＡｃＯＨ  ４．０ｇを加え、１．５時間後、ＴＬＣ［展開溶媒；ＣＨＣｌ３−ＭｅＯＨ−ＡｃＯＨ（９５：１５：３）］によりＺ基の除去を確認し、無水Ｅｔ２Ｏを加えてデカンテーションを行い、得られた固体を一端乾燥させ、無水ＭｅＯＨ−無水Ｅｔ２Ｏで再沈殿して、Ａｃ３ｃ−Ｐｈｅ−Ｐｈｅ−ＮＨ２・ＨＢｒを得た。
収量１．０３ｇ，収率１００％，融点１４７℃（ｄｅｃ）．
１Ｈ−ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ（ｐｐｍ）＝１．０５−１．２３（ｍ，３Ｈ，Ａｃ３ｃ−βＣＨ２），１．４４−１．５２（ｍ，１Ｈ，Ａｃ３ｃ−βＣＨ２），２．６９−３．０３（ｍ，４Ｈ，Ｐｈｅ−βＣＨ２ｘ２），４．４２−４．６０（ｍ，２Ｈ，Ｐｈｅ−αＣＨｘ２），７．１０（ｓ，１Ｈ，ａｍｉｄｅ），７．１７−７．３０（ｍ，１０Ｈ，Ｐｈｅ−ａｒｏｍｘ２），７．４５（ｓ，１Ｈ，ａｍｉｄｅ），７．７０（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，Ｐｈｅ２−ＮＨ），８．１６（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝７．８Ｈｚ，Ｐｈｅ３−ＮＨ），８．３４（ｔ，３Ｈ，Ｊ＝１２．９Ｈｚ，Ｂｒ−・＋ＮＨ３）．
１−８  Ｚ−Ｔｙｒ（Ｂｚｌ）−Ａｃ３ｃ−Ｐｈｅ−Ｐｈｅ−ＮＨ２の合成
Ｚ−Ｔｙｒ（Ｂｚｌ）０．８１０ｇ（２．０ｍｍｏｌ）、Ａｃ３ｃ−Ｐｈｅ−Ｐｈｅ−ＮＨ２・ＨＢｒ  １．０３ｇ（２．０ｍｍｏｌ）およびＨＯＢｔ  ０．２７ｇ（２．０ｍｍｏｌ）をＤＭＦ  １２ｍＬに溶解し、ＴＥＡ  ０．２２ｇ（２．２ｍｍｏｌ）を加え、氷冷し、ＥＤＣ・ＨＣｌ  ０．４２ｇ（２．２ｍｍｏｌ）を加えた。１時間攪拌後常温に戻して、さらに５日間攪拌した。減圧濃縮後、ＡｃＯＥｔ  ５００ｍＬを加え、１Ｎ−ＨＣｌ（５０ｍＬｘ５）、１Ｎ−炭酸水素ナトリウム水溶液（５０ｍＬｘ５）、水（５０ｍＬｘ１）、飽和食塩水（５０ｍＬｘ２）で順次洗浄を行い、無水硫酸ナトリウムで乾燥後、これを濾別、減圧濃縮し、粗結晶１．５２ｇ（９７．４％）を得た。これを［ＭｅＯＨ−ＡｃＯＥｔ（４：７）］から再結晶し、Ｚ−Ｔｙｒ（Ｂｚｌ）−Ａｃ３ｃ−Ｐｈｅ−Ｐｈｅ−ＮＨ２を得た。
収量９５９ｍｇ，収率６１．４％，融点２０７−２０９℃，［α］Ｄ２５−２１．２°（ｃ１．０，ＤＭＦ）．
１Ｈ−ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ（ｐｐｍ）＝０．５６−０．７３（ｍ，２Ｈ，Ａｃ３ｃ−βＣＨ２），１．０５−１．１８（ｍ，２Ｈ，Ａｃ３ｃ−βＣＨ２），２．６８−３．０３（ｍ，６Ｈ，Ｔｙｒ−βＣＨ２，Ｐｈｅ−βＣＨ２ｘ２），４．０２−４．１１（ｍ，１Ｈ，Ｔｙｒ−αＣＨ），４．３３−４．４２（ｍ，２Ｈ，Ｐｈｅ−αＣＨｘ２），４．８９，４．９９（ＡＢｑ，２Ｈ，Ｊ＝１２．５Ｈｚ，Ｚ−ＣＨ２），５．０５（ｓ，２Ｈ，Ｂｚｌ−ＣＨ２），６．８８（ｄ，２Ｈ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，Ｔｙｒ−３，５−Ｈ），７．０８−７．４３（ｍ，２５Ｈ，Ｚ−ａｒｏｍ，Ｂｚｌ−ａｒｏｍ，Ｐｈｅ−ａｒｏｍｘ２，Ｔｙｒ−２，６−Ｈ，ａｍｉｄｅ，Ｔｙｒ−ＮＨ），７．６７（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝６．０Ｈｚ，Ｐｈｅ３−ＮＨ），７．９６（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝７．８Ｈｚ，Ｐｈｅ４−ＮＨ），８．６７（ｓ，１Ｈ，Ａｃ３ｃ−ＮＨ）．
１−９  Ｚ−Ｔｙｒ（Ｂｚｌ）−Ａｃ３ｃ−Ｐｈｅ−Ｐｈｅ−ＮＨ２のＺ基とＢｚｌ基の除去
Ｚ−Ｔｙｒ（Ｂｚｌ）−Ａｃ３ｃ−Ｐｈｅ−Ｐｈｅ−ＮＨ２  １９９ｍｇ（０．２６ｍｍｏｌ）をＤＭＦ  ２ｍＬおよびＢｕＯＨ  １ｍＬに溶解し、１０％Ｐｄ−Ｃ  ４０ｍｇを加えて水素気流を流しながら攪拌した。６時間後、ＴＬＣ［展開溶媒；ＣＨＣｌ３−ＭｅＯＨ（２：１）］で反応終了を確認し、Ｐｄ−Ｃを濾別後、減圧濃縮し粗生成物１２９ｍｇ（９４．２％）を得た。これをＰＴＬＣ［展開溶媒；ＣＨＣｌ３−ＭｅＯＨ（６：１）］により精製し、［Ａｃ３ｃ２］−エンドモルフィン−２を得た。
収量９０．９ｍｇ，収率６６．３％，無定形固体，［α］Ｄ２５−２６．９°（ｃ０．２，ＤＭＦ）．
１Ｈ−ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ（ｐｐｍ）＝０．６９−１．２２（ｍ，４Ｈ，Ａｃ３ｃ−βＣＨ２ｘ２），１．７６（ｂｒ，２Ｈ，Ｔｙｒ−ＮＨ２），２．４２−２．４８（ｍ，１Ｈ，Ｔｙｒ−βＣＨ２），２．６８（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝５．５Ｈｚ，Ｊ＝１３．０Ｈｚ，Ｔｙｒ−βＣＨ２），２．８０−３．０４（ｍ，４Ｈ，Ｐｈｅ−βＣＨ２ｘ２），３．３８−３．４７（ｍ，１Ｈ，Ｔｙｒ−αＣＨ），４．３４−４．４２（ｍ，２Ｈ，Ｐｈｅ−αＣＨｘ２），６．６３（ｄ，２Ｈ，Ｊ＝８．１Ｈｚ，Ｔｙｒ−３，５−Ｈ），６．９３（ｄ，２Ｈ，Ｊ＝７．８Ｈｚ，Ｔｙｒ−２，６−Ｈ），７．１０−７．２８（ｍ，１２Ｈ，Ｐｈｅ−ａｒｏｍｘ２，ａｍｉｄｅ），７．４４（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，Ｐｈｅ３−ＮＨ），８．０５（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，Ｐｈｅ４−ＮＨ），８．３０（ｓ，１Ｈ，Ａｃ３ｃ−ＮＨ），９．１７（ｓ，１Ｈ，Ｔｙｒ−ＯＨ）．
実施例２
［Ａｃ３ｃ２］−エンドモルフィン−１の合成
２−１  Ｚ−Ｔｒｐ−Ｐｈｅ−ＮＨ２の合成
Ｚ−Ｔｒｐ  ３．４０ｇ（１０ｍｍｏｌ）、Ｐｈｅ−ＮＨ２・ＨＢｒ  ２．４４ｇ（１０ｍｍｏｌ）およびＨＯＢｔ  １．６５ｇ（１２ｍｍｏｌ）をＤＭＦ  ２５ｍＬに溶解し、ＴＥＡ  １．５ｍＬ（１１ｍｍｏｌ）を加え、氷冷し、ＥＤＣ  ２ｍＬ（１１ｍｍｏｌ）を加え、１時間攪拌後常温に戻して、さらに一日攪拌した。減圧濃縮後、ＡｃＯＥｔ  ３００ｍＬを加えた。この際、結晶が析出するが、懸濁したまま、洗浄操作をした。１Ｎ−ＨＣｌ（３０ｍＬｘ５）、１Ｎ−炭酸水素ナトリウム水溶液（３０ｍＬｘ５）、水（３０ｍＬｘ１）、飽和食塩水（３０ｍＬｘ２）の順序で洗浄を行い、析出している結晶をろ別し、これを乾燥させてＺ−Ｔｒｐ−Ｐｈｅ−ＮＨ２を得た。
収量４．４３ｇ，収率９１．５％，融点２１４−２１４．５℃，［α］Ｄ２５−４８．９°（ｃ１．０，ＤＭＦ）．
１Ｈ−ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ（ｐｐｍ）＝２．７８−３．０４（ｍ，４Ｈ，Ｔｒｐ−βＣＨ２，Ｐｈｅ−βＣＨ２），４．２０−４．２７（ｍ，１Ｈ，Ｔｒｐ−αＣＨ），４．４３−４．５１（ｍ，１Ｈ，Ｐｈｅ−αＣＨ），４．９２（ｓ，２Ｈ，Ｚ−ＣＨ２），６．９３−７．５８（ｍ，１８Ｈ，Ｚ−ａｒｏｍ，Ｔｒｐ  Ｉｎｄ−ＣＨｘ５，Ｐｈｅ−ａｒｏｍ，ａｍｉｄｅ，Ｔｒｐ−ＮＨ），７．９９（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，Ｐｈｅ−ＮＨ），１０．７９（ｓ，１Ｈ，Ｔｒｐ  Ｉｎｄ−ＮＨ）．
２−２  Ｚ−Ｔｒｐ−Ｐｈｅ−ＮＨ２のＺ基の除去
Ｚ−Ｔｒｐ−Ｐｈｅ−ＮＨ２  ３．８７ｇ（８ｍｍｏｌ）をＤＭＦ  ２５ｍＬに溶解し、５％Ｐｄ−Ｃ  ８５０ｍｇを加えて水素気流を流しながら攪拌した。２時間後、ＴＬＣ［展開溶媒；ＣＨＣｌ３−ＭｅＯＨ−ＡｃＯＨ（９５：１５：３）］で反応終了を確認し、Ｐｄ−Ｃを濾別後、減圧濃縮し、Ｔｒｐ−Ｐｈｅ−ＮＨ２を得た。
収量２．８ｇ，収率１００％，融点１６２℃（ｄｅｃ）．
２−３  Ｚ−Ａｃ３ｃ−Ｔｒｐ−Ｐｈｅ−ＮＨ２の合成
Ｚ−Ａｃ３ｃ  ７０５ｍｇ（３ｍｍｏｌ）、Ｈ−Ｔｒｐ−Ｐｈｅ−ＮＨ２  １．０５ｇ（３ｍｍｏｌ）およびＨＯＢｔ  ４６０ｍｇ（３．４ｍｍｏｌ）をＤＭＦ  ５ｍＬに溶解し、氷冷し、ＥＤＣ  ６００μＬ（３．４ｍｍｏｌ）を加え、１時間攪拌後常温に戻して、さらに２日間攪拌した。減圧濃縮後、ＡｃＯＥｔ  １００ｍＬを加え、１Ｎ−ＨＣｌ（１０ｍＬｘ５）、１Ｎ−炭酸水素ナトリウム水溶液（１０ｍＬｘ５）、水（１０ｍＬｘ２）、飽和食塩水（１０ｍＬｘ２）の順序で洗浄を行い、無水硫酸ナトリウムで乾燥後、これを濾別、減圧濃縮し、Ｚ−Ａｃ３ｃ−Ｔｒｐ−Ｐｈｅ−ＮＨ２を得た。
収量１．６１ｇ，収率９５．０％，融点１１５−１１７℃，［α］Ｄ２５−３７．８°（ｃ１．０，ＭｅＯＨ）．
１Ｈ−ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ（ｐｐｍ）＝０．８４−１．２５（ｍ，４Ｈ，Ａｃ３ｃ−βＣＨ２ｘ２），２．７９−３．０８（ｍ，４Ｈ，Ｔｒｐ−βＣＨ２，Ｐｈｅ−βＣＨ２），４．３７−４．５０（ｍ，２Ｈ，Ｔｒｐ−αＣＨ，Ｐｈｅ−αＣＨ），５．０１（ｓ，２Ｈ，Ｚ−ＣＨ２），６．９２−７．３９（ｍ，１６Ｈ，Ｚ−ａｒｏｍ，Ｔｒｐ  Ｉｎｄ−ＣＨｘ４，Ｐｈｅ−ａｒｏｍ，ａｍｉｄｅ），７．４９（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝７．８Ｈｚ，Ｔｒｐ  Ｉｎｄ−ＣＨ），７．６１（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝７．８Ｈｚ，Ｔｒｐ−ＮＨ），７．９３（ｓ，１Ｈ，Ａｃ３ｃ−ＮＨ），８．０１（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝７．８Ｈｚ，Ｐｈｅ−ＮＨ），１０．８０（ｓ，１Ｈ，Ｔｒｐ  Ｉｎｄ−ＮＨ）．
２−４  Ｚ−Ａｃ３ｃ−Ｔｒｐ−Ｐｈｅ−ＮＨ２のＺ基の除去
Ｚ−Ａｃ３ｃ−Ｔｒｐ−Ｐｈｅ−ＮＨ２  １．１６ｇ（２ｍｍｏｌ）をＤＭＦ  ８ｍＬおよびＭｅＯＨ  ８ｍＬに溶解し、５％Ｐｄ−Ｃ  ２６０ｍｇを加えて水素気流を流しながら攪拌した。５時間後、ＴＬＣ［展開溶媒ＣＨＣｌ３−ＭｅＯＨ−ＡｃＯＨ（９５：１５：３）］で反応終了を確認し、Ｐｄ−Ｃを濾別後、減圧濃縮し、Ａｃ３ｃ−Ｔｒｐ−Ｐｈｅ−ＮＨ２を得た。
収量１．２ｇ，収率１００％，油状物．
２−５  Ｚ−Ｔｙｒ（Ｂｚｌ）−Ａｃ３ｃ−Ｔｒｐ−Ｐｈｅ−ＮＨ２の合成
Ｚ−Ｔｙｒ（Ｂｚｌ）８１７ｍｇ（２ｍｍｏｌ）、Ｈ−Ａｃ３ｃ−Ｔｒｐ−Ｐｈｅ−ＮＨ２  １．２ｇ（２ｍｍｏｌ）およびＨＯＢｔ  ３２７ｍｇ（２．４ｍｍｏｌ）をＤＭＦ  ４ｍＬに溶解し、氷冷し、ＥＤＣ  ４００μＬ（２．２ｍｍｏｌ）を加え、１時間攪拌後常温に戻して、さらに５日間攪拌した。減圧濃縮後、ＡｃＯＥｔ  １００ｍＬを加え、１Ｎ−ＨＣｌ（１０ｍＬｘ５）、１Ｎ−炭酸水素ナトリウム水溶液（１０ｍＬｘ５）、水（１０ｍＬｘ２）、飽和食塩水（１０ｍＬｘ２）の順序で洗浄を行い、無水硫酸ナトリウムで乾燥後、これを濾別、減圧濃縮し、粗生成物１．２２ｇ（７３．１％）を得た。一部をＰＴＬＣ［展開溶媒；トルエン−アセトン（１：１）］で精製し、Ｚ−Ｔｙｒ（Ｂｚｌ）−Ａｃ３ｃ−Ｔｒｐ−Ｐｈｅ−ＮＨ２を得た。
換算収量５１６ｍｇ，換算収率３０．９％，無定形固体，［α］Ｄ２５＋１．９°（ｃ１．０，ＭｅＯＨ）．
１Ｈ−ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ（ｐｐｍ）＝０．５４−０．７３（ｍ，２Ｈ，Ａｃ３ｃ−βＣＨ２），１．０８−１．１９（ｍ，２Ｈ，Ａｃ３ｃ−βＣＨ２），２．７４−３．１３（ｍ，６Ｈ，Ｔｙｒ−βＣＨ２，Ｔｒｐ−βＣＨ２，Ｐｈｅ−βＣＨ２），３．９８−４．０９（ｍ，１Ｈ，Ｔｙｒ−αＣＨ），４．３３−４．４１（ｍ，２Ｈ，Ｔｒｐ−αＣＨ，Ｐｈｅ−αＣＨ），４．７６，４．９３（ＡＢｑ，２Ｈ，Ｊ＝１２．３Ｈｚ，Ｚ−ＣＨ２），５．０５（ｓ，２Ｈ，Ｂｚｌ−ＣＨ２），６．８８（ｄ，２Ｈ，Ｊ＝８．１Ｈｚ，Ｔｙｒ−３，５−Ｈ），６．９０−７．４６（ｍ，２４Ｈ，Ｚ−ａｒｏｍ，Ｂｚｌ−ａｒｏｍ，Ｔｒｐ  Ｉｎｄ−ＣＨｘ５，Ｐｈｅ−ａｒｏｍ，Ｔｙｒ−２，６−Ｈ，ａｍｉｄｅ），７．５４（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，Ｔｒｐ−ＮＨ），７．７１（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝６．０Ｈｚ，Ｔｙｒ−ＮＨ），７．８４（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝８．７Ｈｚ，Ｐｈｅ−ＮＨ），８．７１（ｓ，１Ｈ，Ａｃ３ｃ−ＮＨ），１０．７９（ｓ，１Ｈ，Ｔｒｐ  Ｉｎｄ−ＮＨ）．
２−６  Ｚ−Ｔｙｒ（Ｂｚｌ）−Ａｃ３ｃ−Ｔｒｐ−Ｐｈｅ−ＮＨ２のＺ基とＢｚｌ基の除去
Ｚ−Ｔｙｒ（Ｂｚｌ）−Ａｃ３ｃ−Ｔｒｐ−Ｐｈｅ−ＮＨ２  １９１ｍｇ（０．２３ｍｍｏｌ）をＤＭＦ  ２ｍＬに溶解させ、１０％Ｐｄ−Ｃ  ４２ｍｇを加えて水素気流を流しながら攪拌した。８時間後、ＴＬＣ［展開溶媒；ＣＨＣｌ３−ＭｅＯＨ（２：１）］で反応終了を確認し、Ｐｄ−Ｃを濾別後、減圧濃縮し粗生成物２１７ｍｇ（１５８％）を得た。これをＰＴＬＣ［展開溶媒；ＣＨＣｌ３−ＭｅＯＨ（６：１），二回反復展開］により精製し、減圧濃縮し、［Ａｃ３ｃ２］−エンドモルフィン−１を得た。
収量１４１ｍｇ，収率９９．０％，［α］Ｄ２５−１３．８°（ｃ０．２，ＭｅＯＨ）．
１Ｈ−ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ（ｐｐｍ）＝０．６４−０．７３（ｍ，２Ｈ，Ａｃ３ｃ−βＣＨ２），１．１２−１．１８（ｍ，２Ｈ，Ａｃ３ｃ−βＣＨ２），１．６６（ｂｒ，２Ｈ，Ｔｙｒ−ＮＨ２），２．４６（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝５．７Ｈｚ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，Ｔｙｒ−βＣＨ２），２．６９（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝５．７Ｈｚ，Ｊ＝１３．５Ｈｚ，Ｔｙｒ−βＣＨ２），２．８１−３．０９（ｍ，４Ｈ，Ｔｒｐ−βＣＨ２，Ｐｈｅ−βＣＨ２），３．２８（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，Ｔｙｒ−αＣＨ），４．３４−４．４１（ｍ，２Ｈ，Ｔｒｐ−αＣＨ，Ｐｈｅ−αＣＨ），６．６３（ｄ，２Ｈ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，Ｔｙｒ−３，５−Ｈ），６．９３（ｄ，２Ｈ，Ｊ＝８．１Ｈｚ，Ｔｙｒ−２，６−Ｈ），６．９６−７．２９（ｍ，１１Ｈ，Ｔｒｐ  Ｉｎｄ−ＣＨｘ４，Ｐｈｅ−ａｒｏｍ，ａｍｉｄｅ），７．４５（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝７．８Ｈｚ，Ｔｒｐ  Ｉｎｄ−ＣＨ），７．４７（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝７．８Ｈｚ，Ｔｒｐ−ＮＨ），７．９４（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝８．１Ｈｚ，Ｐｈｅ−ＮＨ），８．３０（ｂｒ，１Ｈ，Ａｃ３ｃ−ＮＨ），９．１５（ｓ，１Ｈ，Ｔｙｒ−ＯＨ），１０．７８（ｓ，１Ｈ，Ｔｒｐ  Ｉｎｄ−ＮＨ）．
実施例３
Ａｃ３ｃ２およびＤ／Ｌ−２′，６′−ジメチルフェニルアラニン（Ｄ／Ｌ−Ｄｍｐ３）を含むエンドモルフィン・アナローグの合成
３−１  Ｂｏｃ−Ｄ／Ｌ−Ｄｍｐ−Ｐｈｅ−ＮＨ２の合成
Ｂｏｃ−ＤＬ−Ｄｍｐ  １．４６ｇ（５ｍｍｏｌ）、Ｐｈｅ−ＮＨ２・ＨＢｒ  １．３１ｇ（５ｍｍｏｌ）およびＨＯＢｔ  ７９２ｍｇ（５．２ｍｍｏｌ）をＤＭＦ  １２ｍＬ、ＴＥＡ  ７８０ｍｇ（５．５ｍｍｏｌ）に溶解させ、氷冷しＥＤＣ  １．１５μＬ（５．５ｍｍｏｌ）を加え、１時間攪拌後常温に戻して、さらに２日間攪拌した。減圧濃縮後、ＡｃＯＥｔ  ３００ｍＬを加えた。この際、結晶が析出するが、懸濁したまま、洗浄操作をした。１０％クエン酸（３０ｍＬｘ５）、１Ｎ−ＮａＨＣＯ３（３０ｍＬｘ５）、水（３０ｍＬｘ２）、飽和食塩水（３０ｍＬｘ２）の順序で洗浄を行い、減圧濃縮して粗結晶を得た。収量１．７９ｇ、収率８１．８％。それをＭｅＯＨから分別結晶することによりジアステレオマーの結晶（Ａ）および（Ｂ）を分離した。純度は逆相ＨＰＬＣ（条件１）で測定した。
ＨＰＬＣ測定条件（条件１）
ｃｏｌｕｍｎ：ＤＥＶＥＬＯＳＩＬ  １００−５Ｃ１８（φ４．６ｍｍｘ１５０ｍｍ）
ｍｏｂｉｌｅ  ｐｈａｓｅ：７０％ＭｅＯＨ
ｃｏｌｕｍｎ  ｔｅｍｐ：３０℃
ｆｌｏｗ  ｒａｔｅ：１．０ｍＬ／ｍｉｎ
ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ：ＵＶ  ａｔ  ２５４ｎｍ
結晶Ａ．収率４１０ｍｇ，収量１８．７％，融点１６４−１６５℃．
ＨＰＬＣ（条件１）：ｔ１＝７．８２ｍｉｎ（ｔ０＝１．７１ｍｉｎ），（Ａ：Ｂ＝９７．８：２．２）
１Ｈ−ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ（ｐｐｍ）＝１．２４（ｓ，９Ｈ，Ｂｏｃ−ＣＨ３ｘ３），２．２１（ｓ，６Ｈ，Ｄｍｐ−ＣＨ３ｘ２），２．６０−２．７３（ｍ，２Ｈ，Ｄｍｐ−βＣＨ２），２．７９（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝９．０Ｈｚ／Ｊ＝１３．６Ｈｚ，Ｐｈｅ−βＣＨ２），３．００（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝４．６Ｈｚ／Ｊ＝１３．６Ｈｚ，Ｐｈｅ−βＣＨ２），４．０１−４．１５（ｍ，１Ｈ，Ｄｍｐ−αＣＨ），４．４４−４．５１（ｍ，１Ｈ，Ｐｈｅ−αＣＨ），６．５６（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝８．１Ｈｚ，Ｄｍｐ−ＮＨ），６．９１−７．２９（ｍ，１０Ｈ，Ｄｍｐ−ａｒｏｍ，Ｐｈｅ−ａｒｏｍ，ａｍｉｄｅ），７．４７（ｓ，１Ｈ，ａｍｉｄｅ），７．８１（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，Ｐｈｅ−ＮＨ）．
結晶Ｂ．収率８３０ｍｇ，収量３７．９％，融点２０９−２１１℃．
ＨＰＬＣ（条件１）：ｔ１＝９．７９ｍｉｎ（ｔ０＝１．７２ｍｉｎ），（Ａ：Ｂ＝０：１００）
１Ｈ−ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ（ｐｐｍ）＝１．０２（ｓ，９Ｈ，Ｂｏｃ−ＣＨ３ｘ３），２．２０（ｓ，６Ｈ，Ｄｍｐ−ＣＨ３ｘ２），２．６０−２．９４（ｍ，４Ｈ，Ｄｍｐ−βＣＨ２，Ｐｈｅ−βＣＨ２），４．０８−４．１９（ｍ，１Ｈ，Ｄｍｐ−αＣＨ），４．２４−４．４４（ｍ，１Ｈ，Ｐｈｅ−αＣＨ），６．８８−７．００（ｍ，３Ｈ，Ｄｍｐ−ａｒｏｍ），７．０６−７．２０（ｍ，７Ｈ，Ｐｈｅ−ａｒｏｍ，Ｄｍｐ−ＮＨ，ａｍｉｄｅ），７．３４（ｓ，１Ｈ，ａｍｉｄｅ），７．９４（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝８．７Ｈｚ，Ｐｈｅ−ＮＨ）．
以下、得られたジペプチドのジアステレオマーのＡおよびＢに含まれるＤｍｐを、それぞれＤｍｐ（Ａ）およびＤｍｐ（Ｂ）と表わすことにする。
３−２  Ｂｏｃ−Ｄｍｐ（Ａ）／Ｄｍｐ（Ｂ）−Ｐｈｅ−ＮＨ２のＢｏｃ基の除去
Ａ．Ｂｏｃ−Ｄｍｐ（Ａ）−Ｐｈｅ−ＮＨ２  ４０５ｍｇ（０．９３ｍｍｏｌ）に４Ｎ−ＨＣｌ／ＡｃＯＥｔ  ４ｍＬを加えよく混ぜ合わせた。１０分後、寒天状となった。その後、ＴＬＣ［ＣＨＣｌ３−ＭｅＯＨ−ＡｃＯＨ（９５：１５：３）］により反応終了を確認し、減圧濃縮し、乾燥して目的物を得た。
収量２４２ｍｇ、収率１０４％、無定形固体。
１Ｈ−ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ（ｐｐｍ）＝２．２３（ｓ，６Ｈ，Ｄｍｐ−ＣＨ３ｘ２），２．７７−３．１４（ｍ，４Ｈ，Ｐｈｅ−βＣＨ２，Ｄｍｐ−βＣＨ２），３．９２−３．９８（ｍ，１Ｈ，Ｄｍｐ−αＣＨ），４．３４（ｑ，１Ｈ，Ｊ＝６．８Ｈｚ，Ｐｈｅ−αＣＨ），６．９０−７．２７（ｍ，１０Ｈ，Ｄｍｐ−ａｒｏｍ，６Ｈ，Ｐｈｅ−ａｒｏｍ，ａｍｉｄｅ），８．３４（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝８．１Ｈｚ，Ｐｈｅ−ＮＨ），８．５２（ｓ，３Ｈ，Ｃｌ−．＋ＮＨ３）．
Ｂ．Ｂｏｃ−Ｄｍｐ（Ｂ）−Ｐｈｅ−ＮＨ２  ５６８ｍｇ（１．２９ｍｍｏｌ）に４Ｎ−ＨＣｌ／ＡｃＯＥｔ  ４ｍＬを加えよく混ぜ合わせた。Ａ．と同様の処理をした。
収量５４６ｍｇ、収率１１２％、無定形固体。
１Ｈ−ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ（ｐｐｍ）＝２．２７（ｓ，６Ｈ，Ｄｍｐ−ＣＨ３ｘ２），２．７７−３．１４（ｍ，４Ｈ，Ｐｈｅ−βＣＨ２，Ｄｍｐ−βＣＨ２），３．９８−４．０６（ｍ，１Ｈ，Ｄｍｐ−αＣＨ），４．４１（ｑ，１Ｈ，Ｊ＝６．２Ｈｚ，Ｐｈｅ−αＣＨ），６．９０−７．３０（ｍ，１０Ｈ，Ｄｍｐ−ａｒｏｍ，Ｐｈｅ−ａｒｏｍ，ａｍｉｄｅ），８．４２（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝８．７Ｈｚ，Ｐｈｅ−ＮＨ），８．５６（ｓ，３Ｈ，Ｃｌ−．＋ＮＨ３）．
３−３  Ａｃ３ｃ−Ｄｍｐ（Ａ）／Ｄｍｐ（Ｂ）−Ｐｈｅ−ＮＨ２の合成
Ａ．Ｚ−Ａｃ３ｃ  １４１ｍｇ（０．７０ｍｍｏｌ）、Ｄｍｐ（Ａ）−Ｐｈｅ−ＮＨ２・ＨＣｌ  ２３５ｍｇ（０．６９ｍｍｏｌ）、およびＨＯＢｔ  １０２ｍｇ（０．７６ｍｍｏｌ）をＤＭＦ  ３ｍＬに溶解し、ＴＥＡ  １１０μＬ（０．７５ｍｍｏｌ）を加え、氷冷し、ＥＤＣ  １６０ｍｇ（０．７５ｍｍｏｌ）を加え、１時間攪拌後常温に戻して、さらに５日間攪拌した。減圧濃縮後、ＡｃＯＥｔ  １００ｍＬを加え、１Ｎ−ＨＣｌ（１０ｍＬｘ５）、１Ｎ−ＮａＨＣＯ３（１０ｍＬｘ５）、水（１０ｍＬｘ２）、飽和食塩水（１０ｍＬｘ２）の順序で洗浄を行い、無水硫酸ナトリウムで乾燥後、これを濾別、減圧濃縮し、粗生成物を得た。ＴＬＣ［トルエン−アセトン（１：１）およびヘキサン−ＡｃＯＥｔ（１：４）］で１スポットだったため、次の反応にそのまま利用した。
収量２９１ｍｇ、収率７５．４％、無定形固体。
１Ｈ−ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ（ｐｐｍ）＝０．８８（ｓ，２Ｈ，Ａｃ３ｃ−βＣＨ２），１．１１−１．２２（ｍ，２Ｈ，Ａｃ３ｃ−βＣＨ２），２．２０（ｓ，６Ｈ，Ｄｍｐ−ＣＨ３ｘ２），２．７６−３．０４（ｍ，４Ｈ，Ｄｍｐ−βＣＨ２，Ｐｈｅ−βＣＨ２），４．３６−４．４０（ｍ，２Ｈ，Ｄｍｐ−αＣＨ，Ｐｈｅ−αＣＨ），５．０４（ｓ，２Ｈ，Ｚ−ＣＨ２），６．８８−６．９４（ｍ，３Ｈ，Ｄｍｐ−ａｒｏｍ），７．０４（ｓ，１Ｈ，ａｍｉｄｅ），７．１６−７．３７（ｍ，１１Ｈ，Ｚ−ａｒｏｍ，Ｐｈｅ−ａｒｏｍ，ａｍｉｄｅ），７．６０（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝８．１Ｈｚ，Ｄｍｐ−ＮＨ），７．８９（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝８．１Ｈｚ，Ｐｈｅ−ＮＨ），７．９７（ｓ，１Ｈ，Ａｃ３ｃ−ＮＨ）．
Ｂ．Ｚ−Ａｃ３ｃ  ３５２ｍｇ（１．５０ｍｍｏｌ）、Ｄｍｐ（Ｂ）−Ｐｈｅ−ＮＨ２・ＨＣｌ  ５４６ｍｇ（１．４５ｍｍｏｌ）、およびＨＯＢｔ  ２０２ｍｇ（１．５２ｍｍｏｌ）をＤＭＦ  ２ｍＬに溶解し、ＴＥＡ  ２１０μＬ（１．５０ｍｍｏｌ）を加え、氷冷し、ＥＤＣ  ３１５ｍｇ（１．５０ｍｍｏｌ）を加え、１時間撹拌後、常温に戻して、さらに４日間撹拌した。減圧濃縮後、ＡｃＯＥｔ  １００ｍＬを加え、１Ｎ−ＨＣｌ（１０ｍＬｘ５）、１Ｎ−ＮａＨＣＯ３（１０ｍＬｘ５）、水（１０ｍＬｘ２）、飽和食塩水（１０ｍＬｘ２）の順に洗浄を行い、無水硫酸ナトリウムで乾燥した。その後、乾燥剤を濾別し、減圧濃縮して、粗生成物を得た。ＴＬＣ［トルエン−アセトン（１：１）およびヘキサン−ＡｃＯＥｔ（１：４）］で１スポットだったため、次の反応にそのまま利用した。
収量７９７ｍｇ、収率９８．６％、無定形固体。
１Ｈ−ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ（ｐｐｍ）＝０．８２−１．２２（ｍ，４Ｈ，Ａｃ３ｃ−βＣＨ２ｘ２），２．２４（ｓ，６Ｈ，Ｄｍｐ−ＣＨ３ｘ２），２．６９−２．８０  ｍ，２Ｈ，Ｄｍｐ−βＣＨ２），２．９０−３．０３（ｍ，２Ｈ，Ｐｈｅ−βＣＨ２），４．２２−４．３９（ｍ，２Ｈ，Ｄｍｐ−αＣＨ，Ｐｈｅ−αＣＨ），４．９９，５．０８（ＡＢｑ，２Ｈ，Ｊ＝１２．８Ｈｚ，Ｚ−ＣＨ２），６．８８−６．９５（ｍ，３Ｈ，Ｄｍｐ−ａｒｏｍ），７．１１−７．３８（ｍ，１２Ｈ，Ｚ−ａｒｏｍ，Ｐｈｅ−ａｒｏｍ，ａｍｉｄｅ），７．７９（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，Ｄｍｐ−ＮＨ），８．０３（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝９．０Ｈｚ，Ｐｈｅ−ＮＨ），８．０９（ｓ，１Ｈ，Ａｃ３ｃ−ＮＨ）．
３−４  Ｚ−Ａｃ３ｃ−Ｄｍｐ（Ａ）／Ｄｍｐ（Ｂ）−Ｐｈｅ−ＮＨ２のＺ基の除去
Ａ．Ｚ−Ａｃ３ｃ−Ｄｍｐ（Ａ）−Ｐｈｅ−ＮＨ２  ２９１ｍｇ（０．５２ｍｍｏｌ）をＭｅＯＨ  １０ｍＬに溶解し、５％Ｐｄ−Ｃ  ８０ｍｇを加えて水素気流を流しながら攪拌した。４時間後、ＴＬＣ［ＣＨＣｌ３−ＭｅＯＨ−ＡｃＯＨ（９５：１５：３）］で反応終了を確認し、Ｐｄ−Ｃを濾別後、減圧濃縮し粗生成物１９６ｍｇを得た。これをＰＴＬＣ［ＣＨＣｌ３−ＭｅＯＨ（１５：１），六回反復展開］により精製した。
ＨＰＬＣ測定条件（条件２）
ｃｏｌｕｍｎ：ＤＥＶＥＬＯＳＩＬ  ＯＤＳ−５（φ４．６ｍｍｘ１５０ｍｍ）
ｍｏｂｉｌｅ  ｐｈａｓｅ：５０％ＭｅＯＨ
ｃｏｌｕｍｎ  ｔｅｍｐ：５０℃
ｆｌｏｗ  ｒａｔｅ：１．０ｍＬ／ｍｉｎ
ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ：ＵＶ  ａｔ  ２５４ｎｍ
収量１０１．２ｍｇ、収率８７．２％、無定形固体。
ＨＰＬＣ（条件２）：ｔ１＝８．６２ｍｉｎ（ｔ０＝１．７２ｍｉｎ）。
１Ｈ−ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ（ｐｐｍ）＝０．７０−１．０１（ｍ，４Ｈ，Ａｃ３ｃ−βＣＨ２ｘ２），２．２６（ｓ，６Ｈ，Ｄｍｐ−ＣＨ３ｘ２），２．６７−３．３１（ｍ，４Ｈ，Ｄｍｐ−βＣＨ２，Ｐｈｅ−βＣＨ２），４．３５−４．４５（ｍ，２Ｈ，Ｄｍｐ−αＣＨ，Ｐｈｅ−αＣＨ），６．８９−６．９５（ｍ，３Ｈ，Ｄｍｐ−ａｒｏｍ），６．９９／７．０３（ｓ／ｓ，２Ｈ，ａｍｉｄｅ），７．１５−７．２６（ｍ，５Ｈ，Ｐｈｅ−ａｒｏｍ），８．０７（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝８．７Ｈｚ，Ｄｍｐ−ＮＨ），８．１６（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，Ｐｈｅ−ＮＨ）．
Ｂ．Ｚ−Ａｃ３ｃ−Ｄｍｐ（Ｂ）−Ｐｈｅ−ＮＨ２  ５４６ｍｇ（１．４３ｍｍｏｌ）をＭｅＯＨ  １０ｍＬに溶解し、５％Ｐｄ−Ｃ  １８０ｍｇを加えて水素気流を流しながら攪拌した。４時間後、ＴＬＣ［ＣＨＣｌ３−ＭｅＯＨ−ＡｃＯＨ（９５：１５：３）］で反応終了を確認し、Ｐｄ−Ｃを濾別後、減圧濃縮し粗生成物４８３ｍｇを得た。これをＰＴＬＣ［ＣＨＣｌ３−ＭｅＯＨ（１５：１），六回反復展開］により行った。
収量２０６ｍｇ、収率３２．９％、無定形固体。
ＨＰＬＣ（条件２）：ｔ１＝１０．７５ｍｉｎ（ｔ０＝１．７２ｍｉｎ）。
１Ｈ−ＮＮＲ（３００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ（ｐｐｍ）＝０．６４−０．８３／０．９３−０．９６（ｍ／ｍ，４Ｈ，Ａｃ３ｃ−βＣＨ２ｘ２），２．２５（ｓ，６Ｈ，Ｄｍｐ−ＣＨ３ｘ２），２．６２−２．７６（ｍ，３Ｈ，Ｄｍｐ−βＣＨ２，Ｐｈｅ−βＣＨ２），２．８７（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝４．５Ｈｚ，Ｊ＝４．８Ｈｚ，Ｐｈｅ−βＣＨ２），４．３１−４．４８（ｍ，２Ｈ，Ｄｍｐ−αＣＨ，Ｐｈｅ−αＣＨ），６．８９−６．９８（ｍ，３Ｈ，Ｄｍｐ−ａｒｏｍ），７．０７−７．２４（ｍ，６Ｈ，ａｍｉｄｅ，Ｐｈｅ−ａｒｏｍ），７．３６（ｓ，１Ｈ，ａｍｉｄｅ），８．２１（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝８．１Ｈｚ，Ｄｍｐ−ＮＨ），８．２９（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝８．７Ｈｚ，Ｐｈｅ−ＮＨ）．
３−５  Ｚ−Ｔｙｒ（Ｂｚｌ）−Ａｃ３ｃ−Ｄｍｐ（Ａ）／Ｄｍｐ（Ｂ）−Ｐｈｅ−ＮＨ２の合成
Ａ．Ｚ−Ｔｙｒ（Ｂｚｌ）１０１ｍｇ（０．２５ｍｍｏｌ）、Ａｃ３ｃ−Ｄｍｐ（Ａ）−Ｐｈｅ−ＮＨ２  ９９ｍｇ（０．２３ｍｍｏｌ）およびＨＯＢｔ  ４０ｍｇ（０．３０ｍｍｏｌ）をＤＭＦ  ２ｍＬに溶解し、氷冷し、ＥＤＣ  ６１ｍｇ（０．３０ｍｍｏｌ）を加え、１時間攪拌後常温に戻して、さらに５日間攪拌した。Ｚ−Ａｃ３ｃ−Ｄｍｐ（Ａ）／Ｄｍｐ（Ｂ）−Ｐｈｅ−ＮＨ２の場合と同様に処理し、粗結晶２０２ｍｇを得た。これをＭｅＯＨから再結晶した。
収量６９．８ｍｇ、収率３７．５％、ｍｐ１９７−１９８℃。
ＨＰＬＣ（条件１）：ｔ１＝１１．９８ｍｉｎ（ｔ０＝１．７２ｍｉｎ）。
１Ｈ−ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ（ｐｐｍ）＝０．４８−０．７３（ｍ，２Ｈ，Ａｃ３ｃ−βＣＨ２），１．０９−１．１４（ｍ，２Ｈ，Ａｃ３ｃ−βＣＨ２），２．１４（ｓ，６Ｈ，Ｄｍｐ−ＣＨ３ｘ２），２．７０−２．８７（ｍ，４Ｈ，Ｔｙｒ−βＣＨ２，Ｄｍｐ−βＣＨ２），２．９５−３．０６（ｍ，２Ｈ，Ｐｈｅ−βＣＨ２），４．０４−４．１２（ｍ，１Ｈ，Ｔｙｒ−αＣＨ），４．２３−４．３４（ｍ，２Ｈ，Ｄｍｐ−αＣＨ，Ｐｈｅ−αＣＨ），４．９４，４．９９（ＡＢｑ，２Ｈ，Ｊ＝１２．６Ｈｚ，Ｚ−ＣＨ２），５．０５（ｓ，２Ｈ，Ｂｚｌ−ＣＨ２），６．７１／６．９９（ｓ／ｓ，２Ｈ，ａｍｉｄｅ），６．８５−６．９４（ｍ，５Ｈ，Ｔｙｒ−３，５−Ｈ，Ｄｍｐ−ａｒｏｍ），７．１１−７．４３（ｍ，１５Ｈ，Ｚ−ａｒｏｍ，Ｂｚｌ−ａｒｏｍ，Ｐｈｅ−ａｒｏｍ，Ｔｙｒ−２，６−Ｈ），７．４８（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝８．１Ｈｚ，Ｐｈｅ−ＮＨ），７．６７（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝６．６Ｈｚ，Ｔｙｒ−ＮＨ），７．８０（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝８．７Ｈｚ，Ｄｍｐ−ＮＨ），８．７０（ｓ，１Ｈ，Ａｃ３ｃ−ＮＨ）．
Ｂ．Ｚ−Ｔｙｒ（Ｂｚｌ）２０３ｍｇ（０．５０ｍｍｏｌ）、Ａｃ３ｃ−Ｄｍｐ（Ｂ）−Ｐｈｅ−ＮＨ２  ２０６ｍｇ（０．４７ｍｍｏｌ）およびＨＯＢｔ  ８０ｍｇ（０．６０ｍｍｏｌ）をＤＭＦ  ３ｍＬに溶解し、氷冷し、ＥＤＣ  １２０ｍＬ（０．６０ｍｍｏｌ）を加え、１時間攪拌後常温に戻して、さらに５日間攪拌した。Ａ．の場合と同様に処理したが結晶化しなかった。
収量１９６ｍｇ、収率４７．３％、無定形固体。
ＨＰＬＣ（条件１）：ｔ１＝１６．０６ｍｉｎ（ｔ０＝１．６９ｍｉｎ）。
１Ｈ−ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ（ｐｐｍ）＝０．５７−０．６９（ｍ，２Ｈ，Ａｃ３ｃ−βＣＨ２），１．０５−１．１８（ｍ，２Ｈ，Ａｃ３ｃ−βＣＨ２），２．２０（ｓ，６Ｈ，Ｄｍｐ−ＣＨ３ｘ２），２．７１−２．９２（ｍ，５Ｈ，Ｔｙｒ−βＣＨ２，Ｄｍｐ−βＣＨ２，Ｐｈｅ−βＣＨ２），２．９７−３．０２（ｍ，１Ｈ，Ｐｈｅ−βＣＨ２），４．０２−４．１３（ｍ，１Ｈ，Ｔｙｒ−αＣＨ），４．２４−４．３４（ｍ，２Ｈ，Ｄｍｐ−αＣＨ，Ｐｈｅ−αＣＨ），４．９６，５．０５（ＡＢｑ，２Ｈ，Ｊ＝１２．５Ｈｚ，Ｚ−ＣＨ２），５．０１（ｓ，２Ｈ，Ｂｚｌ−ＣＨ２），６．８７−６．９６（ｍ，５Ｈ，Ｔｙｒ−３，５−Ｈ，Ｄｍｐ−ａｒｏｍ），７．０４（ｓ，１Ｈ，ａｍｉｄｅ），７．１１−７．４２（ｍ，１８Ｈ，Ｚ−ａｒｏｍ，Ｂｚｌ−ａｒｏｍ，Ｐｈｅ−ａｒｏｍ，Ｔｙｒ−２，６−Ｈ，ａｍｉｄｅ），７．６８−７．７２（ｍ，１Ｈ，Ｐｈｅ−ＮＨ），７．７４（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝５．７Ｈｚ，Ｔｙｒ−ＮＨ），７．８１（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝１２．８Ｈｚ，Ｄｍｐ−ＮＨ），８．７８（ｓ，１Ｈ，Ａｃ３ｃ−ＮＨ）．
３−６  Ｚ−Ｔｙｒ（Ｂｚｌ）−Ａｃ３ｃ−Ｄｍｐ（Ａ）／Ｄｍｐ（Ｂ）−Ｐｈｅ−ＮＨ２のＺ基とＢｚｌ基の除去
Ａ．Ｚ−Ｔｙｒ（Ｂｚｌ）−Ａｃ３ｃ−Ｄｍｐ（Ａ）−Ｐｈｅ−ＮＨ２  ５２ｍｇ（０．０６ｍｍｏｌ）をＤＭＦ  ２ｍＬおよびＭｅＯＨ２ｍＬに溶解し、１０％Ｐｄ−Ｃ  ２０ｍｇを加えて水素気流を流しながら攪拌した。６時間後、ＴＬＣ［ＣＨＣｌ３−ＭｅＯＨ（５：１）］で反応終了を確認し、Ｐｄ−Ｃを濾別後、減圧濃縮し粗生成物３３．６ｍｇを得た。これをＰＴＬＣ［ＣＨＣｌ３−ＭｅＯＨ（５：１）］により精製した。
ＨＰＬＣ測定条件（条件３）
ｃｏｌｕｍｎ：ＤＥＶＥＬＯＳＩＬ  １００−５Ｃ１８（φ４．６ｍｍｘ１５０ｍｍ）
ｍｏｂｉｌｅ  ｐｈａｓｅ：５０％ＭｅＯＨ
ｃｏｌｕｍｎ  ｔｅｍｐ：３０℃
ｆｌｏｗ  ｒａｔｅ：１．０ｍＬ／ｍｉｎ
ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ：ＵＶ  ａｔ  ２５４ｎｍ
収量１２．８ｍｇ、収率３６．５％、無定形固体。［α］Ｄ２５−２７．３°（ｃ０．１，ＤＭＦ）．
ＨＰＬＣ（条件３）：ｔ１＝５．７７ｍｉｎ（ｔ０＝１．７３ｍｉｎ）。
質量分析；Ｆｏｕｎｄ：６０８．２６５、Ｃａｌｃｄ  ｆｏｒ（Ｃ３３Ｈ３９Ｎ５Ｏ５＋Ｎａ）＋：６０８．２８４。
１Ｈ−ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ（ｐｐｍ）＝０．６３−０．８８（ｍ，２Ｈ，Ａｃ３ｃ−βＣＨ２），１．０２−１．１４（ｍ，２Ｈ，Ａｃ３ｃ−βＣＨ２），１．２２−１．３２（ｍ，２Ｈ，Ｔｙｒ−ＮＨ２），２．１６（ｓ，６Ｈ，Ｄｍｐ−ＣＨ３ｘ２），２．５０−２．５２（ｍ，１Ｈ，Ｔｙｒ−βＣＨ２），２．７２−２．８６（ｍ，３Ｈ，Ｔｙｒ−βＣＨ２，Ｄｍｐ−βＣＨ２），２．９０−３．２５（ｍ，２Ｈ，Ｐｈｅ−βＣＨ２），４．２３−４．３７（ｍ，２Ｈ，Ｄｍｐ−αＣＨ，Ｐｈｅ−αＣＨ），６．６３（ｄ，２Ｈ，Ｊ＝６．３Ｈｚ，Ｔｙｒ−３，５−Ｈ），６．８７−６．９７（ｍ，５Ｈ，Ｔｙｒ−２，６−Ｈ，Ｄｍｐ−ａｒｏｍ），７．０３（ｓ，１Ｈ，ａｍｉｄｅ），７．１７−７．２４（ｍ，６Ｈ，Ｐｈｅ−ａｒｏｍ，ａｍｉｄｅ），７．５３（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝７．８Ｈｚ，Ｐｈｅ−ＮＨ），７．８１（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝８．１Ｈｚ，Ｄｍｐ−ＮＨ），８．４０（ｂｒ，１Ｈ，Ｔｙｒ−ＯＨ），９．１７（ｓ，１Ｈ，Ａｃ３ｃ−ＮＨ）．
Ｂ．Ｚ−Ｔｙｒ（Ｂｚｌ）−Ａｃ３ｃ−Ｄｍｐ（Ｂ）−Ｐｈｅ−ＮＨ２  １８０ｍｇ（０．２２ｍｍｏｌ）をＤＭＦ  ２ｍＬおよびＭｅＯＨ  ２ｍＬに溶解し、１０％Ｐｄ−Ｃ  ６４ｍｇを加えて水素気流を流しながら攪拌した。６時間後、ＴＬＣ［ＣＨＣｌ３−ＭｅＯＨ（５：１）］で反応終了を確認し、Ｐｄ−Ｃを濾別後、減圧濃縮し粗生成物９９ｍｇを得た。これをＰＴＬＣ［ＣＨＣｌ３−ＭｅＯＨ（５：１）］により精製した。
収量４８ｍｇ、収率３７．９％、無定形固体。［α］Ｄ２５−２２．２°（ｃ０．１、ＤＭＦ）。
ＨＰＬＣ（条件３）：ｔ１＝１０．４５ｍｉｎ（ｔ０＝１．７３ｍｉｎ）。
質量分析；Ｆｏｕｎｄ：６０８．２６１、Ｃａｌｃｄ  ｆｏｒ（Ｃ３３Ｈ３９Ｎ５Ｏ５＋Ｎａ）＋：６０８．２８４。
１Ｈ−ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ（ｐｐｍ）＝０．５３−０．７３（ｍ，２Ｈ，Ａｃ３ｃ−βＣＨ２），１．０９−１．１４（ｍ，２Ｈ，Ａｃ３ｃ−βＣＨ２），１．１７−１．２２（ｍ，２Ｈ，Ｔｙｒ−ＮＨ２），２．２０（ｓ，６Ｈ，Ｄｍｐ−ＣＨ３ｘ２），２．５０−２．５４（ｍ，１Ｈ，Ｔｙｒ−βＣＨ２）２．７２−２．８２（ｍ，３Ｈ，Ｔｙｒ−βＣＨ２，Ｄｍｐ−βＣＨ２），２．９４−３．０３（ｍ，２Ｈ，Ｐｈｅ−βＣＨ２），４．２３−４．３０（ｍ，２Ｈ，Ｄｍｐ−αＣＨ，Ｐｈｅ−αＣＨ），６．６３（ｄ，２Ｈ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，Ｔｙｒ−３，５−Ｈ）６．８７−６．９８（ｍ，５Ｈ，Ｔｙｒ−２，６−Ｈ，Ｄｍｐ−ａｒｏｍ），７．１２−７．１８（ｍ，６Ｈ，Ｐｈｅ−ａｒｏｍ，ａｍｉｄｅ），７．２８（ｓ，１Ｈ，ａｍｉｄｅ），７．６８（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝８．７Ｈｚ，Ｐｈｅ−ＮＨ），７．８８（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，Ｄｍｐ−ＮＨ），８．４９（ｂｒ，１Ｈ，Ｔｙｒ−ＯＨ），９．１６（ｓ，１Ｈ，Ａｃ３ｃ−ＮＨ）．
製剤例１  注射剤
［Ａｃ３ｃ２］−エンドモルフィン−２    ０．２ｇ
塩化ナトリウム                          ０．９ｇ
水酸化ナトリウム／塩酸                  適量（ｐＨ５．０）
注射用蒸留水                            全量  １００ｍＬ
以上の成分を常法により混和溶解して注射剤とする。これを２ｍＬのガラスアンプルに分注し、密封する。
製剤例２  錠剤
［Ａｃ３ｃ２］−エンドモルフィン−１    ０．８ｇ
トウモロコシデンプン                    １２ｇ
乳糖                                    ２７．２ｇ
ステアリン酸マグネシウム                ０．４ｇ
［Ａｃ３ｃ２］−エンドモルフィン−１、乳糖およびトウモロコシデンプンを加えてよく混和し、湿性錠剤調製法に準じて打錠用顆粒とする。ステアリン酸マグネシウムを加えて打錠し、錠剤４００錠とする。錠剤は、腸溶性コーティング剤（メタアクリル酸コポリマー）でコーティングする。
製剤例３  点眼剤
［Ａｃ３ｃ２］−エンドモルフィン−２    ２００ｍｇ
ホウ酸                                  ７００ｍｇ
ホウ砂                                  適量
塩化ナトリウム                          ５００ｍｇ
エデト酸ナトリウム                      ０．０５ｍｇ
塩化ベンザルコニウム                    ０．００５ｍｇ
滅菌精製水                              全量  １００ｍＬ
以上の成分を常法により混和して点眼剤とする。
試験例１
カルボキシペプチターゼＹによる酵素分解
エンドモルフィン−１、エンドモルフィン−２、［Ａｃ３ｃ２］−エンドモルフィン−１および［Ａｃ３ｃ２］−エンドモルフィン−２のカルボキシペプチターゼＹによる半減期を測定した。
測定法
ペプチドを５０ｍＭ  Ｔｒｉｓ・ＨＣｌ（ｐＨ７．４）緩衝液に溶かし、最終濃度を１ｍＭにした。それぞれにカルボキシペプチターゼＹを５０ｍＭ  Ｔｒｉｓ・ＨＣｌ（ｐＨ７．４）緩衝液に溶かした。
１０００μＬの５０ｍＭ  Ｔｒｉｓ・ＨＣｌ（ｐＨ７．４）緩衝液に２００μＬのペプチド溶液を加え、３０分間３７℃に保持した後、それぞれの酵素を加えた。
定めた時間毎に２０μＬずつ反応液を取り、２０μＬの０．１Ｍ  ＨＣｌを加えて反応を止めた。
これをＨＰＬＣで分析し、面積比からペプチド断片の含まれる割合を求めた。
ＨＰＬＣの測定はグラジエント溶離法を用いた。移動相には、Ａ液：０．０２％ＴＦＡを含む水とＢ液：０．０２％ＴＦＡを含むアセトニトリルを用いた。はじめはＡ液１００％から始め、２０分間でＢ液を５０％まで増やした。固定相にＯＤＳカラム（Ｗａｋｏｓｉｌ−ＩＩ：φ４．６ｍｍｘ２５０ｍｍ）を用い、流速０．８ｍＬ／ｍｉｎ、検出２５４ｎｍ、カラム温度３７℃で行った。
以上の操作で、２回の再現性を確認した。
半減期は、一次反応であるものとして求めた。
試験結果１
【表１】
2002102833.tif 000004
［Ａｃ３ｃ２］−エンドモルフィン−２はエンドモルフィン−２の８倍の半減期を有しており［Ａｃ３ｃ２］−エンドモルフィン−１はエンドモルフィン−１の３倍の半減期を示し、いずれもエンドモルフィン−２およびエンドモルフィン−１に対してかなり高い酵素分解抵抗性を示した。
試験例２
ペプチドの受容体結合試験１
エンドモルフィン−１、エンドモルフィン−２、［Ａｃ３ｃ２］−エンドモルフィン−１および［Ａｃ３ｃ２］−エンドモルフィン−２のそれぞれについて、放射性リガンド受容体結合分析による受容体結合試験を行った。
試験方法
よく冷えた１０ｍＭ  Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ緩衝液中において、ラットの脳を均質化し、４℃で１５分間４０，０００ｇ／ｍｉｎで遠心分離した。上澄みは捨てた。得られたペレットは、はじめと同量のＴｒｉｓ−ＨＣｌ緩衝液中に再び懸濁させ、均質化したのち遠心分離した。この洗浄プロセスを二回繰り返した。
生じるペレットは最後に、Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ緩衝液（２４ｍＬ）に懸濁させ、この５００ｍＬ膜調製液を最終体積２ｍＬで結合試験に用いた。
Ｔｙｒ−Ｄ−Ａｌａ−Ｇｌｙ−ＭｅＰｈｅ−Ｇｌｙ−ｏｌ（［３Ｈ］ＤＡＧＯ）（１．８０ＴＢｑ／ｍｍｏｌ；Ｎｅｗ  Ｅｎｇｌａｎｄ  Ｎｕｃｌｅａｒ，Ｂｏｓｔｏｎ，Ｍａｓｓ．ＵＳＡ），Ｔｙｒ−Ｄ−Ａｌａ−Ｐｈｅ−Ｇｌｕ−Ｖａｌ−Ｖａｌ−Ｇｌｙ−ＮＨ２（［３Ｈ］ＤＥＬ）（１．８５−３．１８ＴＢｑ／ｍｍｏｌ；Ａｍｅｒｓｈａｍ  Ｐｈａｒｍａｃｉａ  Ｂｉｏｔｅｃｈ）がそれぞれ、μとδオピオイド受容体に対する選択的なトレーサーとして最終濃度０．２５ｎＭで用いた。培養は、０．１％の牛の血清アルブミンを含む５０ｍＭ  Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ緩衝液（ｐＨ７．５）中で２５℃で６０分間行った。Ｂａｃｉｔｒａｃｉｎ（１００ｍｇ／ｍＬ）を酵素阻害物質として加えた。
培養後、遊離したリガンドを、Ｗｈａｔｍａｎｎ  ＧＦ／Ｂガラスファイバーフィルターによりろ過することによって、結合している放射性リガンド膜から分離した。フィルターは、Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ緩衝液の４ｍＬで二回洗浄した。
投与応答曲線（Ｄｏｓｅ−ｒｅｓｐｏｎｓｅ  ｃｕｒｖｅｓ）を、７〜１０回の投与を行って作成し、その結果をコンピュータプログラム〔Ａ．Ｄｅ  Ｌｅａｎ，Ｐ．Ｊ．Ｍｕｎｓｏｎ  ａｎｄ  Ｄ．Ｒｏｄｂａｒｄ，Ａｍ．Ｊ．Ｐｈｙｓｉｏｌ．，２３５，Ｅ９７（１９７８）〕により解析した。
データは、ラベル化リガンド［３Ｈ］ＤＡＧＯと［３Ｈ］ＤＥＬの結合を非ラベル化リガンド濃度と関係づけるロジスティック曲線の最小自乗法処理をおこなった。
この分析結果は、３回の独立した実験をした平均である。
試験結果２
エンドモルフィン−１、エンドモルフィン−２、［Ａｃ３ｃ２］−エンドモルフィン−１および［Ａｃ３ｃ２］−エンドモルフィン−２の受容体結合率の５０％の値からＩＣ５０を求め、それを〔表２〕に示した。
【表２】
2002102833.tif 000005
［Ａｃ３ｃ２］−エンドモルフィン−１および［Ａｃ３ｃ２］−エンドモルフィン−２はμ受容体に対してエンドモルフィン−１およびエンドモルフィン−２より、それぞれ約３倍および約６倍強い活性を示した。［Ａｃ３ｃ２］−エンドモルフィン−１および［Ａｃ３ｃ２］エンドモルフィン−２のδ受容体に対するμ受容体選択性は、それぞれ約１，４００倍および約７００倍の選択性があった。α，α−二置換グリシン−残基のみの置換によりこのような非常に高活性、高選択性のアナローグを得ることができたことは、Ａｃ３ｃによるコンホメーションの固定化が受容体との結合に適したコンホメーションをとらせていると考えられる。
試験例３
ペプチドの受容体結合試験２
試験例２と同様にして［Ａｃ３ｃ２，Ｄｍｐ（Ａ）３］−エンドモルフィン−２および［Ａｃ３ｃ２，Ｄｍｐ（Ｂ）３］−エンドモルフィン−２の受容体結合率の５０％の値からＩＣ５０を求め、それを〔表３〕に示した。対照としてエンドモルフィン−２を用いた。
2002102833.tif 000006
［Ａｃ３ｃ２，Ｄｍｐ（Ａ）３］−エンドモルフィン−２はμ受容体に対しエンドモルフィン−２とほぼ同様の活性を示し、［Ａｃ３ｃ２，Ｄｍｐ（Ｂ）３］−エンドモルフィン−２は、μ受容体に対しエンドモルフィン−２の１／３の活性を示した。
また［Ａｃ３ｃ２，Ｄｍｐ（Ａ）３］−エンドモルフィン−２および［Ａｃ３ｃ２，Ｄｍｐ（Ｂ）３］−エンドモルフィン−２のδ受容体に対するμ受容体選択性は、それぞれ１２２０倍、１６７倍であった。
産業上の利用可能性
本発明の新規エンドモルフィン誘導体は、オピオイド受容体のうち、特にμ受容体に強い親和性と選択性を有しており、従って鎮痛、抗不安、緊張緩和などの生理活性を有している。しかも、その２位に１−アミノシクロプロパンカルボン酸という、立体配座固定因子が導入されているので、ペプチドに望ましいコンホメーションを採らせることができ、タンパク質分解酵素による分解に抵抗を示し、また、強い生理活性を発揮する。
【配列表】
2002102833.tif 000007
2002102833.tif 000008
【国際調査報告】
2002102833.tif 000010
2002102833.tif 000011
2002102833.tif 000012