(57)【要約】本発明は、繁殖能力に優れ、腎癌発症までに要する期間が短く、また、ヒトの腎癌の組織型を示す遺伝性の腎癌を自然発症するラットを提供することを目的とする。具体的には、本発明は、１０番染色体上に存在するＴｓｃ２遺伝子よりもテロメア側に位置する優性遺伝子の変異によって腎癌を遺伝的に発症するラット、該ラットを用いた抗癌作用を有する物質又は癌の発生を予防する物質の選択方法、及び腎癌を遺伝的に発症させる機能を有する、１０番染色体上に存在するＴｓｃ２遺伝子よりもテロメア側に位置するラット遺伝子を提供する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
１０番染色体上に存在するＴｓｃ２遺伝子よりもテロメア側に位置する優性遺伝子の変異によって腎癌を遺伝的に発症するラット。
【請求項２】
優性遺伝子がＴｓｃ２遺伝子よりも約２５〜２７ｃＭ程度テロメア側に位置する請求項１に記載のラット。
【請求項３】
優性遺伝子がＴｓｃ２遺伝子よりも約２６ｃＭ程度テロメア側に位置する請求項２に記載のラット。
【請求項４】
変異尿細管の発生、尿細管の過形成の発現、尿細管の腺腫の発現という経過を経て、生後１年以内に腎癌に至る遺伝形質を有する請求項１〜３のいずれかに記載のラット。
【請求項５】
変異尿細管、尿細管の過形成、尿細管の腺腫又は腎癌を構成する細胞が、淡明細胞を含む請求項４に記載のラット。
【請求項６】
下記の遺伝形質を有する請求項１〜５のいずれかに記載のラット：
（ａ）生後約３〜４週齢より組織学的に変異尿細管が発生し、
（ｂ）生後約４〜８週齢より尿細管の過形成又は尿細管の腺腫或いはその両方が発現し、
（ｃ）生後約１３〜２６週齢より腎癌が発現する。
【請求項７】
Ｓｐｒａｇｕｅ−Ｄａｗｌｅｙ（ＳＤ）系より確立された請求項１〜６のいずれかに記載のラット。
【請求項８】
変異尿細管の発生、尿細管の過形成の発現、尿細管の腺腫の発現という経過を経て、生後１年以内に腎癌に至るという特性を有するラットであって、受託番号ＦＥＲＭ  ＢＰ−８１５２のもの又は上記特性を有する変異体。
【請求項９】
請求項１〜８のいずれかに記載のラットに被検物質を投与して、被検物質の抗癌作用を評価することを含む抗癌作用を有する物質の選択方法。
【請求項１０】
請求項９に記載の選択方法によって選ばれる抗癌作用を有する物質。
【請求項１１】
請求項１〜８のいずれかに記載のラットに被検物質を投与して、被検物質の癌の発生を予防する作用を評価することを含む癌の発生を予防する物質の選択方法。
【請求項１２】
請求項１１に記載の選択方法によって選ばれる癌の発生を予防する物質。
【請求項１３】
腎癌を遺伝的に発症させる機能を有する１０番染色体上に存在するＴｓｃ２遺伝子よりもテロメア側に位置するラット遺伝子。
【請求項１４】
Ｔｓｃ２遺伝子よりも約２５〜２７ｃＭ程度テロメア側に位置する請求項１３に記載の遺伝子。
【請求項１５】
Ｔｓｃ２遺伝子よりも約２６ｃＭ程度テロメア側に位置する請求項１４に記載の遺伝子。
【発明の詳細な説明】
技術分野
本発明は、腎癌を遺伝的に発症するラット（以下「遺伝性腎癌発症ラット」という場合がある。）及びその病因遺伝子に関するものである。更に詳しくは、本発明はヒト腎癌の原因解明、腎癌の発生予防および腎癌治療薬の開発に有用な腎癌発症ラットに関する。
背景技術
ある疾患の治療の開発には、一般的にはその病状を呈する疾患モデル動物が必要である。腎癌の治療薬の開発は、腎癌細胞を腎臓に移植させて腎癌発症ラットを作製するのは困難であるため、通常、腎癌細胞を皮下移植等した動物を用いて行っているのが現状である。しかしながら、このような実験動物を用いることは生理的な条件を満たしていないという問題がある。
腎癌発症動物としては、現在、“Ｅｋｅｒラット”が知られている（Ｅｋｅｒ，Ｒ．ａｎｄ  Ｍｏｓｓｉｇｅ，Ｊ．：Ｎａｔｕｒｅ，１８９，８５８−８５９（１９６１））。しかしながら、Ｅｋｅｒラットは、生後２〜３ヶ月になって漸く前腫瘍性病変である変異尿細管が発生し（Ｈｉｎｏ，Ｏ．ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｇ．Ｅｘｐ．Ｔｕｍｏｒ  Ｒｅｓ．，３５，９５−１０８，１９９９）、腎癌が発生するのは１年齢後であり（Ｈｉｎｏ，Ｏ．ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，９０：３２７−３３１，１９９３）、発症までにかなりの時間を要する。また、Ｅｋｅｒラットの病理組織像は、好酸性細胞、中染性細胞、好塩基性細胞及びオンコサイト様細胞に分類され、ヒトの腎癌に多くみられる淡明細胞はみられず（Ｅｋｅｒ，Ｒ．ｅｔ  ａｌ．，Ｄｉａｇｎ．Ｈｉｓｔｏｐａｔｈｏｌ．，４，９９−１１０（１９８１））、必ずしもＥｋｅｒラットを用いることがヒトの腎癌を反映しているとはいえなかった。また、Ｅｋｅｒラットの腎癌の病因遺伝子は１０番染色体上のＴｓｃ２遺伝子であることが判明しているが（Ｈｉｎｏ，Ｏ．ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍｕｎ．，２０３：１３０２−１３０８，１９９４，Ｋｏｂａｙａｓｈｉ，Ｔ．ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ  Ｇｅｎｅｔｉｃｓ，９：７０−７４，１９９５）、実際ヒトの腎癌ではＴｓｃ２遺伝子の変異は確認されていない。
発明の開示
本発明は、繁殖能力に優れ、腎癌発症までに要する期間が短く、また、ヒトの腎癌の組織型（ｐｈｅｎｏｔｙｐｅ）を示す遺伝性の腎癌を自然発症するラットを提供することを目的とする。
本発明者らは、鋭意研究を進めた結果、Ｓｐｒａｇｕｅ−Ｄａｗｌｅｙ（ＳＤ）系ラットを飼育している中で、腎癌を発症するラットを発見し、該ラットについて系統の育成及び特性の検索を行った結果、該ラットを安定的に供給する方法を確立し、更に、上記腎癌を発症させる病因遺伝子が、従来から知られていた腎癌抑制遺伝子とは異なるものであるとの知見を得、本発明を完成した。
すなわち、本発明は、以下の発明を提供するものである。
１．  １０番染色体上に存在するＴｓｃ２遺伝子よりもテロメア側に位置する優性遺伝子の変異によって腎癌を遺伝的に発症するラット。
２．  優性遺伝子がＴｓｃ２遺伝子よりも約２５〜２７ｃＭ程度テロメア側に位置する上記１に記載のラット。
３．  優性遺伝子がＴｓｃ２遺伝子よりも約２６ｃＭ程度テロメア側に位置する上記２に記載のラット。
４．  変異尿細管の発生、尿細管の過形成の発現、尿細管の腺腫の発現という経過を経て、生後１年以内に腎癌に至る遺伝形質を有する上記１〜３のいずれかに記載のラット。
５．  変異尿細管、尿細管の過形成、尿細管の腺腫又は腎癌を構成する細胞が、淡明細胞を含む上記４に記載のラット。
６．  下記の遺伝形質を有する上記１〜５のいずれかに記載のラット：
（ａ）生後約３〜４週齢より組織学的に変異尿細管が発生し、
（ｂ）生後約４〜８週齢より尿細管の過形成又は尿細管の腺腫或いはその両方が発現し、
（ｃ）生後約１３〜２６週齢より腎癌が発現する。
７．  Ｓｐｒａｇｕｅ−Ｄａｗｌｅｙ（ＳＤ）系より確立された上記１〜６のいずれかに記載のラット。
８．  変異尿細管の発生、尿細管の過形成の発現、尿細管の腺腫の発現という経過を経て、生後１年以内に腎癌に至るという特性を有するラットであって、受託番号ＦＥＲＭ  ＢＰ−８１５２のもの又は上記特性を有する変異体。
９．  上記１〜８のいずれかに記載のラットに被検物質を投与して、被検物質の抗癌作用を評価することを含む抗癌作用を有する物質の選択方法。
１０．  上記９に記載の選択方法によって選ばれる抗癌作用を有する物質。
１１．  上記１〜８のいずれかに記載のラットに被検物質を投与して、被検物質の癌の発生を予防する作用を評価することを含む癌の発生を予防する物質の選択方法。
１２．  上記１１に記載の選択方法によって選ばれる癌の発生を予防する物質。
１３．  腎癌を遺伝的に発症させる機能を有する１０番染色体上に存在するＴｓｃ２遺伝子よりもテロメア側に位置するラット遺伝子。
１４．  Ｔｓｃ２遺伝子よりも約２５〜２７ｃＭ程度テロメア側に位置する上記１３に記載の遺伝子。
１５．  Ｔｓｃ２遺伝子よりも約２６ｃＭ程度テロメア側に位置する上記１４に記載の遺伝子。
発明を実施するための最良の形態
以下、本発明について具体的に開示する。
本発明ラットの由来
本発明者らは、日本クレア株式会社から購入したＳＤ系ラット、より具体的にはＪｃｌ：ＳＤラットの集団を育成している中に、尿細管の過形成、尿細管の腺腫又は腎癌或いはこれらの混在病変が多発性に見られた若年性のラットがいることを発見した。
そこで、本発明者らは、家系調査を実施したところ、この異常が常染色体の優性の遺伝形式をとると推定し、系統の維持を図りながら該ラットを繁殖させた。
繁殖
具体的には、まず、上記の雌性ラットと、正常なＪｃｌ：ＳＤ雄性ラットを交配させ、１５匹の産児を得、更に兄妹交配を行った。
その結果、腎癌を発症すると考えられるラットと腎癌を発症しないと考えられるラット（正常ラット）の間に生まれた産児は、約２分の１の割合で前腫瘍性病変（変異尿細管、尿細管の過形成）又は腫瘍性病変（尿細管の腺腫、腎癌）を発症した。
また、腎癌を発症すると考えられる雄性ラットと雌性ラットとを交配させて得られた産児は、約３分の２の割合で尿細管上皮由来の前腫瘍性病変（変異尿細管、尿細管の過形成）又は腫瘍性病変（尿細管の腺腫、腎癌）を発症した。また、同様の雌性ラットを帝王切開することにより死亡胚数を確認したところ、妊娠１２日前後に胚の約４分の１が死亡していることを確認した。
したがって、これらの交配成績から本発明のラットにおける腎癌の発生はメンデルの法則に従う単一遺伝子の常染色体の優性遺伝形式をとり、病因遺伝子のホモ接合体（変異型）は胚致死の転帰をとると考えられた。ここに、本発明者らは、本発明のラットの育成及び系統の維持に成功した。
系統の維持
本発明のラットの維持は、腎癌を発症すると考えられるラット（本発明のラット）と、ＳＤ系（好ましくはＪｃｌ：ＳＤ）のラットを交配させることによって、系統を維持することができる。例えば、上述のごとく、腎癌を発症すると考えられる雄性ラットと、ＳＤ系（好ましくはＪｃｌ：ＳＤ）の雌性ラットを交配させることによって、系統を維持することができる。該ラットの交配は同腹が好ましいが、同腹に限定されない。また該雌性ラットは腎癌を発症すると考えられるラットであってもよいし、発症しないラットであってもよい。
具体的には、約１０週齢時に開腹手術することにより尿細管の前腫瘍性病変ないし腫瘍性病変を確認した本発明の雄性ラット１匹と、約１０週齢の同腹或いは他の本発明ラットから得られた雌性ラット１又は２匹を一時期同居させることにより交配し、妊娠を確認後個別のケージで飼育させ、雌性ラットに分娩、哺育させる。
本発明の雄性ラットと正常の雌性ラットとを交配して得られる産児数は約１２匹であり、Ｊｃｌ：ＳＤラット同士の交配で得られる産児数とほぼ一致しており、ほぼ１００％が離乳に至る。本発明ラットの繁殖成績は極めてよく、安定した継代維持が可能である。
本発明者らが発見した上記雌性ラットをＦ０とし、Ｆ７まで系統の維持を行った結果、以下に示す形質をメンデルの法則に従って、安定して伝達させるのを確認できた。
この方法によって、本発明のラットの系統を維持し、かつ一定の割合で産児を得ることができる。
本発明のラットはＳＤ系ラットであるため、繁殖能力が高く、より実用的なラットである。
病因遺伝子の解明
本発明者らは、本発明のラットの病因遺伝子を探索すべく、まず、腎癌に関連すると考えられている既知の病因遺伝子の変異を、本発明のラットが有しているかを検討した。まず、本発明のラットのＤＮＡを抽出し、Ｓｏｕｔｈｅｒｎ  Ｂｌｏｔｔｉｎｇ、Ｎｏｒｔｈｅｒｎ  Ｂｌｏｔｔｉｎｇ及びＳＳＣＰ法を用いて調べた結果、ヒトの腎癌を合併する結節性硬化症の病因遺伝子であるＴｓｃ１、Ｔｓｃ２遺伝子、ｖｏｎ  Ｈｉｐｐｅｌ−Ｌｉｎｄａｕ病の病因遺伝子のＶＨＬ遺伝子、及び癌遺伝子のｃ−Ｍｅｔ遺伝子において変異が認められず、本願発明の病因遺伝子は、ヒトの腎癌を合併する結節性硬化症の病因遺伝子であるＴｓｃ１（染色体３番）、Ｔｓｃ２遺伝子（染色体１０番）、ｖｏｎ  Ｈｉｐｐｅｌ−Ｌｉｎｄａｕ病の病因遺伝子のＶＨＬ遺伝子（染色体４番）、及び癌遺伝子のｃ−Ｍｅｔ遺伝子（染色体４番）とは異なることが判明した。
そこで、本発明者らは、ＢＮラットを用いた戻し交配ラット１１３例を作製し、そのＤＮＡを抽出し、リンケージ解析により、本発明のラットの病因遺伝子を探索した。その結果、染色体１０番、具体的には、Ｔｓｃ２遺伝子よりもテロメア側、より具体的には、Ｔｓｃ２遺伝子から約２５〜２７ｃＭ（センチモルガン）程度、更に具体的には約２６ｃＭ程度、更に特定的には約２５．７ｃＭテロメア側の位置に局在することが明らかとなった。
Ｔｓｃ２遺伝子とは、Ｅｋｅｒラットの腎癌発症の病因遺伝子であり（Ｈｉｎｏ，Ｏ．ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍｕｎ．，２０３：１３０２−１３０８，１９９４，Ｋｏｂａｙａｓｈｉ，Ｔ．ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ  Ｇｅｎｅｔｉｃｓ，９：７０−７４，１９９５）、ラットの１０番染色体の１０ｑ１２に位置し、その大きさはｃＤＮＡとして約５３７５ｂｐ（但しａｌｔｅｒｎａｔｉｖｅ  ｓｐｌｉｃｉｎｇ後の長さであって、ｅｘｏｎ２５とｅｘｏｎ３１を除いた大きさである。）であって、約１９０ｋＤのタンパク質をコードすると考えられている（Ｋｏｂａｙａｓｈｉ，Ｔ．ｅｔ  ａｌ．，Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．，２３：２６０８−２６１３，１９９５）。
病態特性
本発明のラットにおける腎癌の病態は、次のような特性によって特徴づけられる。
本明細書における腎癌とは、腎腫瘍のうち尿細管上皮由来の悪性腫瘍を意味し、腎細胞癌ともいわれるものである。この腎癌は前腫瘍性病変である変異尿細管、尿細管の過形成から始まり、腫瘍性病変である腺腫を経て発生する。
本発明においては、週齢は、出生日を生後０日として、生後０〜６日を０週齢と定義する。同様に生後７〜１３日を１週齢と定義する。
前腫瘍性病変及び腫瘍性病変発生時期
（ａ）変異尿細管の発生時期
生後約３週齢より、具体的には３〜４週齢より前腫瘍性病変である変異尿細管が認められる。具体的には、変異尿細管は、ヘマトキシリン・エオジン染色で好酸性または非染色性の細胞質を有する上皮から構成される単一の尿細管で、細胞数増加を伴わない。
（ｂ）尿細管の過形成又は尿細管の腺腫あるいはその両方の発生時期
生後約４〜８週齢より、前腫瘍性病変である尿細管の過形成又は腫瘍性病変である尿細管の腺腫或いはその両方が認められる。具体的には、尿細管の過形成及び尿細管の腺腫は、ともにヘマトキシリン・エオジン染色で好酸性または非染色性の細胞質を有する上皮から構成され、尿細管の過形成の場合は、管状構造を示し、細胞数増加により管腔拡張あるいは上皮の多層化を伴う。一方、尿細管の腺腫の場合には、細胞数増加がより著しく、そのために円形あるいは不整形を呈し、周囲正常組織への圧排像を伴う。その増殖形態は、充実性、管状、シスト状、乳頭状、あるいはその混在型を示す。
（ｃ）腎癌の発生時期
本発明のラットは、生後１年以内に腎癌に至るという特徴を有するものである。具体的には、生後６ヶ月以内、より具体的には、生後１３〜２６週齢より腎癌が認められる。具体的には、腎癌は、腺腫に比べて腫瘍が大型で、有糸分裂像が多く認められ、さらに、細胞異型が強く、腫瘍内に出血・壊死巣を伴うこともある。
本発明ラットの腎癌の病理組織的所見は、以下のとおりである。
病理組織像
変異尿細管、尿細管の過形成、尿細管の腺腫又は腎癌を構成する細胞には、淡明細胞が含まれ、具体的には主として淡明細胞及び好酸性細胞からなる。淡明細胞とは、ヘマトキシリン・エオジン染色で非染色の細胞質をもつ細胞であり、また、好酸性細胞とは、ヘマトキシリン・エオジン染色で好酸性顆粒状細胞質をもつ細胞である。
Ｅｋｅｒラットとの対比
症状の発生開始時期および病理組織像について、既に公知のＥｋｅｒラットと本発明のラットとを対比する。
2003017757.tif 000002
本発明ラット及び本発明遺伝子の特徴
上述のごとく、本発明のラットは、１０番染色体上に存在するＥｋｅｒラットの腎癌の病因遺伝子であるＴｓｃ２遺伝子よりもテロメア側に位置する優性遺伝子の変異によって腎癌を遺伝的に発症するラットである。本明細書中で使用する用語「優性遺伝子」とは、メンデルの法則に従う単一遺伝子の常染色体の優性遺伝形式をとる遺伝子をいう。その優性遺伝子は、１０番染色体の長腕に位置し、具体的には、１０番染色体上に位置するＴｓｃ２遺伝子よりも約２５〜２７ｃＭ程度、より具体的には、約２６ｃＭ程度テロメア側に位置し、以下の実施例に示すごとく、１１３例の戻し交配ラットを用いた結果、Ｔｓｃ２遺伝子より約２５．７ｃＭテロメア側に位置することが判明している。
本発明のラットは、変異尿細管の発生、尿細管の過形成の発現、尿細管の腺腫の発現という経過を経て、生後１年以内に腎癌に至る遺伝形質を有する。また、上記変異尿細管、尿細管の過形成、尿細管の腺腫又は腎癌を構成する細胞は、ヒトの腎癌でみられる淡明細胞を含み、具体的には主としてヒトの腎癌でみられる淡明細胞及びヒトの腎癌でみられる顆粒細胞に相当すると考えられる好酸性細胞からなるという特徴を有している。上記遺伝形質は、より具体的には、
（ａ）生後約３〜４週齢より組織学的に変異尿細管が発生し、
（ｂ）生後約４〜８週齢より尿細管の過形成又は尿細管の腺腫或いはその両方が発現し、
（ｃ）生後約１３〜２６週齢より腎癌が発現する
という特徴を有する。
本発明のラットは、Ｓｐｒａｇｕｅ−Ｄａｗｌｅｙ（ＳＤ）系より確立したものであるが、より具体的には、日本クレア株式会社でクローズドコロニーとしたＪｃｌ：ＳＤラットから確立したものである。
この遺伝形質が上記優性遺伝子によって遺伝され、該優性遺伝子が本発明ラットの腎癌発症の病因遺伝子である。該遺伝子は、これまで既知の腎癌の病因遺伝子と考えられているものとは異なる新規な遺伝子であり、遺伝子の機能は、以下の実施例に示すごとく癌抑制遺伝子であると考えられる。また、該遺伝子のホモ接合体（変異型）は胚致死となる。
本発明者らは、以下の実施例に示すごとく、該病因遺伝子の連鎖地図を明確にした。該病因遺伝子の単離、同定には、種々の方法が知られているが、例えば、当該領域の遺伝子を単離し、Ｓｏｕｔｈｅｒｎ  ｂｌｏｔ、Ｎｏｒｔｈｅｒｎ  ｂｌｏｔ及び塩基配列決定を行い、変異があるかどうか調べることによってその病因遺伝子を決定することができる。
本発明は、本明細書記載の腎癌を遺伝的に発症するラット（例えば、本明細書に記載される遺伝子に変異を有するラット）、好ましくは、受託番号ＦＥＲＭ  ＢＰ−８１５２のラット又はそれと同様の特性を有する変異体、最も好ましくは、受託番号ＦＥＲＭ  ＢＰ−８１５２のラットを提供する。受託番号ＦＥＲＭ  ＢＰ−８１５２のラットと同様の特性を有する変異体は、受託番号ＦＥＲＭ  ＢＰ−８１５２のラットに由来し、かつ本明細書に記載されるような腎癌を遺伝的に発症する任意のラットを包含する。例えば、受託番号ＦＥＲＭ  ＢＰ−８１５２のラットを、任意のラット（例えば、ＳＤ系ラット、ＢＮラット、Ｆｉｓｃｈｅｒ  ３４４ラット等、好ましくは、ＳＤ系ラット、より好ましくは、Ｊｃｌ：ＳＤラット）と交配させて得られるラットもまた、本明細書記載の腎癌を遺伝的に発症する限り、上記変異体に該当する。また、本明細書中に開示したラット（例えば、受託番号ＦＥＲＭ  ＢＰ−８１５２のラット）に加え、例えば、別の遺伝子を新たに導入した変異体も、本明細書記載の腎癌を遺伝的に発症する限り、本発明のラットに包含される。このような動物の作製法は、当該分野で周知である。変異体が本発明のラットと同様の特性を有するかどうかは、本明細書記載の腎癌を遺伝的に発症するか否かによって、例えば、後述の「本発明のラットであることの確認」に記載の方法によって確認することができる。
繁殖及び育成の環境
本発明ラットは、通常のＳＤ系ラットと同様な飼育条件で繁殖、育成させることができる。より具体的には、例えば、温度２１〜２５℃、湿度４５〜６５％、換気回数２０回／時間、照明時間１２時間（午前６時〜午後６時）に設定された動物室で、金属製ケージに個別に収容して飼育した。餌は市販の固形基礎飼料を自由摂取させ、飲料水は水道水を給水ビンにより自由摂取させることで育成することができる。
本発明のラットであることの確認
本発明ラットであることの確認は、本明細書中に記載の特性を有するラットであるか否かによって判断される。本発明ラットに該当するか否かは、当該分野で周知の方法により確認することができる。例えば、本発明ラットであることの確認のひとつとしては、生後１０週齢以降に麻酔下で開腹手術を実施して、尿細管の前腫瘍性病変又は腫瘍性病変を確認することによって行うことができる。具体的には、腎臓に白色結節あるいはシストを肉眼的に観察することによって行うことができる。
その後、術部を縫合することによってその後の実験に供させることができる。
本発明の選択方法
ａ．抗癌作用を有する物質、癌の発生を予防する物質の選択方法
本発明のラットを用いることによって、抗癌（好ましくは、抗腎癌）作用を有する物質、または癌（好ましくは、腎癌）の発生を予防する物質を評価することができる。被検物質は、通常、本発明のラットに、変異尿細管が発生する前、多段階的に腎癌へ進行しているとき、または腎癌発生後に投与することができる。被検物質としては、例えば、タンパク質、ペプチド、糖質、核酸、脂質、合成有機化合物等が挙げられるがこれらに限定されるものではない。また、該被検物質として、医薬品、食品等を用いることもできる。投与方法は、経口投与または非経口投与である。非経口投与方法としては、例えば、静脈内投与、皮下投与、腹腔内投与等が例示できる。被検物質の投与量は、対象となる被検物質の種類、投与方法、投与対象となる本発明のラットの体重等に応じて、適宜設定される。各被検物質は、投与方法に適した剤形で投与され、必要に応じて、製剤化成分、例えば、安定剤、増粘剤等と混合して投与される。投与期間は、数日〜数週間、数ヶ月、さらには１年以上に及んでもよく、投与頻度は、１日当たり１回でも１日当たり数回でもよく、あるいは数日の間隔を空けて投与してもよい。また、被検物質が食品の場合には、餌に混ぜて自由に摂取させてもよいし、餌とは別にして与えることによりその給餌量を適宜設定してもよい。
抗癌（好ましくは、抗腎癌）作用を有する物質を選択する場合には、例えば、変異尿細管が発生した後、多段階的に腎癌へ進行しているとき、または腎癌発生後の段階に被検物質を投与することによって、変異尿細管から過形成に移行する段階を抑える等の各段階への進行を抑えるもの、腎癌を小さくするもの等を抗癌作用を有する物質として選択することができる。特定の被検物質が抗癌（好ましくは、抗腎癌）作用を有するか否かを判定するために必要とされる試験期間は、数日から数週間、数ヶ月、さらには１年以上に及んでもよく特に制限されないが、より短い試験期間で抗癌作用を有する物質が好ましい。
癌（好ましくは、腎癌）の発生を予防する物質を選択する場合には、例えば、変異尿細管が発生する前の段階に被検物質を投与することによって、変異尿細管の発生や、腎癌の発生を抑制するものを癌の発生を予防する物質として選択することができる。特定の被検物質が癌（好ましくは、腎癌）の発生を抑制するか否かを判定するために必要とされる試験期間は、数日から数週間、数ヶ月、さらには１年以上に及んでもよく特に制限されないが、より長い試験期間にわたって癌の発生を抑制する物質が好ましい。
上述のごとく、本発明のラットを用いれば、抗癌（好ましくは、抗腎癌）作用を有する物質を選択できるだけでなく、癌（好ましくは、腎癌）の発生を未然に防ぐ物質を選択することができ、本発明は、そのような物質も包含するものである。
ｂ．癌の診断用マーカー、早期発見用マーカー候補となる物質の選択方法
また、本発明のラットを用いて、癌（好ましくは、腎癌）の診断用マーカー候補又は早期発見用マーカー候補となる物質を選択することができる。
一実施態様において、癌の診断用マーカー候補となる物質を選択する方法は、以下の工程を含む：
（ａ）本発明のラットの生物試料中における特定の物質の濃度を測定する工程、
（ｂ）対照ラットの生物試料中における該物質の濃度を測定する工程、
（ｃ）上記工程（ａ）で測定された物質の濃度と上記工程（ｂ）で測定された該物質の濃度とを比較し、該物質が癌（好ましくは、腎癌）の診断用マーカー候補となるか否かを評価する工程。
上記方法では、本発明のラットとしては、好ましくは、腎癌発症後のラットが用いられ、また、対照ラットとしては、例えば、腎癌発症前の本発明のラット又は正常なＳＤ系ラット（好ましくは、Ｊｃｌ：ＳＤラット）を用いることができる。また、生物試料としては、例えば、血液、血清、血漿、尿、糞便、涙液、汗、唾液、脳脊髄液、リンパ液等が挙げられるがこれらに限定されない。また、生物試料中の特定の物質としては、例えば、タンパク質、ペプチド、糖質、ホルモン、脂質、低分子水溶性化合物、低分子脂溶性化合物等が挙げられるがこれらに限定されない。上記方法における測定は、例えば、高速液体クロマトグラフィー、ガスクロマトグラフィー、質量分析、免疫学的手法（例えば、ＥＬＩＳＡ）等を用いて行なうことができる。なお、測定の結果、本発明のラット又は対照ラットのいずれかの生物試料中で特定の物質の存在が認められない場合（即ち、その濃度を測定できない場合）には、他方の生物試料中で該物質を検出できればよい。このような場合にも上記比較が行なわれ、癌の診断用マーカー候補としての妥当性が評価される。具体的には、上記方法における評価は、測定対象の物質が、以下の（ｉ）〜（ｉｖ）のいずれかに該当するか否かによって行なわれ、この物質が、以下の（ｉ）〜（ｉｖ）のいずれかに該当する場合に、癌（好ましくは、腎癌）の診断用マーカー候補として選択される：
（ｉ）対照ラットの生物試料中における特定の物質の濃度に対し、本発明のラットの生物試料中で有意に増加した濃度を示す物質、
（ｉｉ）対照ラットの生物試料中における特定の物質の濃度に対し、本発明のラットの生物試料中で有意に低下した濃度を示す物質、
（ｉｉｉ）対照ラットの生物試料中には認められないが、本発明のラットの生物試料中に認められる物質、あるいは
（ｉｖ）対照ラットの生物試料中には認められるが、本発明のラットの生物試料中に認められない物質。
なお、特定の物質が生物試料中に「認められない」とは、その物質が生物試料中に実際に存在しない場合のみならず、その物質の存在量が測定手段の検出限界以下である場合をも含む。
上記方法により、この癌（好ましくは、腎癌）の診断用マーカーとなる物質が明らかとなれば、癌が疑われるヒトから生物学的試料を採取し、その中に含まれる特定の物質をモニターすることによって、癌（好ましくは、腎癌）の診断が可能になるため、本方法は非常に有用である。また、このタイプの癌に特有な診断用マーカーとなる物質が明らかになれば、例えば、癌（好ましくは、腎癌）の治療において薬剤を投与する前に癌のタイプを分類し、このタイプの癌に有効な特定の薬剤を選択して投与することが可能になるため、本方法は非常に有用である。
また、本発明は、癌の早期発見用マーカー候補となる物質を選択する方法を提供する。一実施態様において、癌の早期発見用マーカー候補となる物質を選択する方法は、以下の工程を含む：
（ａ’）本発明のラットの生物試料中における特定の物質の濃度を測定する工程、
（ｂ’）対照ラットの生物試料中における該物質の濃度を測定する工程、
（ｃ’）上記工程（ａ’）で測定された物質の濃度と上記工程（ｂ’）で測定された該物質の濃度とを比較し、該物質が癌（好ましくは、腎癌）の早期発見用マーカー候補となるか否かを評価する工程。
上記方法の工程（ａ’）では、本発明のラットとして、いかなる週齢の本発明ラットをも用いることができる。また、上記方法の工程（ｂ’）では、対照ラットとして、例えば、正常なＳＤ系ラット（好ましくは、Ｊｃｌ：ＳＤラット）又は工程（ａ’）で用いられたラットと異なる週齢の本発明ラットを用いることができる。従って、腎癌発症前の異なる週齢の本発明ラットを、上記工程（ａ’）及び（ｂ’）でそれぞれ用いることができる。例えば、生後約３週齢前のラット（即ち、異常な表現型を呈する前のラット）及び生後約３〜４週齢のラット、又は生後約３週齢前のラット及び生後約４〜８週齢のラットを、上記工程（ａ’）及び（ｂ’）でそれぞれ用いることもできる。生物試料及びその中に含まれる特定の物質としては上記と同様のものを挙げることができ、また、比較又は測定手段についても上記と同様のものを用いることができる。なお、測定の結果、本発明のラット又は対照ラットのいずれかの生物試料中で特定の物質の存在が認められない場合（即ち、その濃度を測定できない場合）には、他方の生物試料中で該物質を検出できればよい。このような場合にも上記比較が行なわれ、癌の早期発見用マーカー候補としての妥当性が評価される。具体的には、上記方法における評価は、測定対象の物質が、以下の（ｉ’）〜（ｉｖ’）のいずれかに該当するか否かによって行なわれ、この物質が、以下の（ｉ’）〜（ｉｖ’）のいずれかに該当する場合に、癌（好ましくは、腎癌）の早期発見用マーカー候補として選択される：
（ｉ’）対照ラットの生物試料中における特定の物質の濃度に対し、本発明のラットの生物試料中で有意に増加した濃度を示す物質、
（ｉｉ’）対照ラットの生物試料中における特定の物質の濃度に対し、本発明のラットの生物試料中で有意に低下した濃度を示す物質、
（ｉｉｉ’）対照ラットの生物試料中には認められないが、本発明のラットの生物試料中に認められる物質、あるいは
（ｉｖ’）対照ラットの生物試料中には認められるが、本発明のラットの生物試料中に認められない物質。
なお、特定の物質が生物試料中に「認められない」とは、その物質が生物試料中に実際に存在しない場合のみならず、その物質の存在量が測定手段の検出限界以下である場合をも含む。
上記方法により、癌（好ましくは、腎癌）の早期発見用マーカーとなる物質が明らかとなれば、定期的に、癌の発症リスクが高いヒト（例えば、遺伝性の素因のあるヒト等）から生物試料を採取し、その中に含まれる特定の物質をモニターすることによって、癌（好ましくは、腎癌）の早期発見が可能になるため、本方法は非常に有用である。
本発明は、上記のようにして選択された、癌（好ましくは、腎癌）の診断用マーカー候補又は早期発見用マーカー候補となる物質もまた包含する。
なお、本発明によるラットは、本発明者らによって、大阪府吹田市江の木町３３番９４号に住所を有する大日本製薬株式会社総合研究所、及び、東京都豊島区上池袋１丁目３７番１号に住所を有する財団法人癌研究会癌研究所実験病理部において、継代維持されている。この動物は、要求があれば、特許出願人より提供される。
また、この受精卵は、日本国茨城県つくば市東１丁目１番地１中央第６に住所を有する独立行政法人産業技術総合研究所特許生物寄託センターに２００２年８月１４日に寄託した（受託番号ＦＥＲＭ  ＢＰ−８１５２）。
実施例
以下に、実施例によって、本発明を更に詳細に説明する。
尚、各ラットは、温度２１〜２５℃、湿度４５〜６５％、換気回数２０回／時間、照明時間１２時間（午前６時〜午後６時）に設定された動物室で、金属製ケージに個別に収容して飼育した。餌は市販の固形基礎飼料（ＣＲ−ＬＰＦ、オリエンタル酵母工業株式会社）を自由摂取させ、飲料水は水道水を給水ビンにより自由摂取させた。
実施例１：  本発明のラットの作出及び継代維持
本発明のラットは、ＳＤ系ラット中に発見されたものである。具体的には、本発明者らは、日本クレア株式会社から購入したＳＤ系ラット（Ｊｃｌ：ＳＤラット）の集団を育成している中に尿細管の過形成、尿細管の腺腫又は腎癌或いはこれらの混在病変が多発性に見られた若年性の雌性ラットがいることを発見した。
１）そこで、まず、上記雌性ラットを用いて家系調査を行った。具体的には、該ラット（４１週齢）をＦ０として正常なＪｃｌ：ＳＤ雄性ラット（１６週齢）を、金属ケージ内に一時期同居させることによって交配させた。その後、雌雄性ラットを個別の金属製ケージに戻し、雌性ラットに出産させることによって１５匹の産児（Ｆ１）を得た。
２）次に、上記Ｆ１を用いて継代をすすめた。具体的には、生後１０週齢時にペントバルビタールナトリウム麻酔下で実施した開腹手術によって、尿細管の前腫瘍性病変又は腫瘍性病変を確認された雄性ラットを本発明のラットであるとし、個別のケージに収容されている雌性ラットと一時期同居させることによって交配させた。
妊娠の成立は、膣スメア中に精子が存在することによって判定し、精子が確認された日を妊娠０日とした。その後、雌性ラットを個別のケージに戻した。
その後、各雌性ラットに出産させ、各雌性ラットには、３〜４週齢まで、産児を育てさせ、４週齢後の離乳の時期に、各産児も各１匹づつ金属ケージに入れ、上記に記載の育成条件で育てた。以下、Ｆ３及びＦ６まで継代した結果を示す。尚、雌性ラットが正常なＳＤ系ラットであるか本発明のラットであるかは、最終的に病理組織学的検査を行うことによって確認した。
その結果、本発明の雄性ラットと正常な雌性ラットを交配して得られた産児を、最終的に病理組織学的検査を行い評価した結果、以下のような結果が得られた。
2003017757.tif 000003
また、本発明の雌雄性ラットどうしを交配させて得られた産児についての検査結果を下記表３に示す。
2003017757.tif 000004
３）更に、本発明の雌雄性ラット（ともにＦ１世代２組、Ｆ２世代４組）を交配させた雌性ラット（６匹）を、帝王切開し、死亡胚数と生存胚数を確認した。
その結果、胚数１０６匹中、死亡胚数が２６匹であり、２４．５％の割合で死亡していた。
これらの結果より、本発明のラットにおける腎癌の発生は、メンデルの法則に従う単一遺伝子の常染色体の優性遺伝形式をとり、病因遺伝子のホモ接合体（変異型）は胚致死の転帰をとると考えられ、本発明のラットの育成及び維持の実用化に成功した。
実施例２：本発明ラットの腎臓の病理学的な経過観察
１）Ｆ２のラットを用いて、腎臓の病理学的な経過観察を行った。具体的には、Ｆ１の雄性ラットと新たに購入した正常なＪｃｌ：ＳＤ雌性ラットを交配させて得られた各ラットを、０、１、２、３、４、６及び８週齢の時点で、１３〜３１匹の範囲でペントバルビタール麻酔下にて放血にて安楽死させ、腎臓を肉眼的に観察した後、該腎臓を採取した。採取した腎臓を１０％中性緩衝ホルマリンに固定し、矢状面で切り出した後、常法に従い、Ｈ．Ｅ．染色標本を作製し、病変の有無を鏡検した。更に、左右腎臓の尿細管病変を変異尿細管、ならびに尿細管の過形成、尿細管の腺腫、及び腎癌に分類した。
結果を以下に示す。
2003017757.tif 000005
２）第８週齢までには、腎癌の病変は観察されなかったので、次に、下記の週齢において各ラットを、ペントバルビタール麻酔下にて放血にて安楽死させ、腎臓を肉眼的に観察した後、腎臓を採取し鏡検した。いずれかの病変が観察されたラットの結果を以下に示す。
2003017757.tif 000006
３）上記各段階で得られた腎臓の病変を組織学的により詳細に観察した。前腫瘍性病変又は腫瘍性病変は主に皮質に両側性かつ多発性に観察された。これらの病変を構成する尿細管上皮は、多くの例では好酸性の顆粒状細胞質と小型の核を持つ好酸性細胞あるいはヘマトキシリン・エオジン染色標本では非染色の細胞質と小型の円形核を持つ淡明細胞のいずれかに分類されたが、好酸性細胞と淡明細胞が混在した病変もしばしばみられた。
４）上記１）〜３）の結果より尿細管上皮の腫瘍性病変の発生時期を検討した結果、３週齢より変異尿細管が初期病変として現れ、４週齢より過形成が、更に８週齢より尿細管の腺腫がみられた。また、生後１３〜２６週齢より尿細管の癌である腎癌が認められた。
実施例３：  本発明ラットの病因遺伝子の探索
ヒトの腎癌を合併する結節性硬化症の病因遺伝子であるＴｓｃ１、Ｔｓｃ２遺伝子、ｖｏｎ  Ｈｉｐｐｅｌ−Ｌｉｎｄａｕ病の病因遺伝子のＶＨＬ遺伝子、及び癌遺伝子のｃ−Ｍｅｔ遺伝子が、本発明ラットの病因遺伝子であるかどうかを検討した。
まず、本発明ラットの雌性ラット（Ｆ０）の腫瘍と尾を、２％ＳＤＳ／プロテイナーゼＫ（５００μｇ／ｍｌ）を用いて消化し、更にフェノールを用いてＤＮＡを抽出した。
Ｔｓｃ１、Ｔｓｃ２遺伝子及びＶＨＬ遺伝子については、Ｓｏｕｔｈｅｒｎ  ｂｌｏｔ、Ｎｏｒｔｈｅｒｎ  ｂｌｏｔ及びＳＳＣＰ解析を行い、ｃ−Ｍｅｔ遺伝子については、ＳＳＣＰ解析を行った。これら方法に必要な各遺伝子の配列は、Ｓａｔａｋｅ，Ｎ．，ｅｔ  ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．，５９：８４９−８５５，１９９９に従って行った。
その結果、いずれの遺伝子も変異が認められなかった。
実施例４：  本発明ラットの病因遺伝子の探索
（１）本発明のラットの遺伝子を、ＢＮ（Ｂｒｏｗｎ  Ｎｏｒｗａｙ）ラットを用い、図１に示すような戻し交配ラット１１３匹を作製した。
まず、生後約１０週齢時にペントバルビタールナトリウム麻酔下で実施した開腹手術によって、腎臓に肉眼的にシストあるいは白色結節が確認された雄性ラットを本発明の雄性ラットであるとし切開部位を縫合した後、個別のケージに収容されているＢＮ雌性ラット（日本チャールスリバー株式会社、１１週齢）と一時期同居させることによって交配させた。
妊娠の成立は、膣スメア中に精子が存在することによって判定し、精子が確認された日を妊娠０日とした。その後、雌性ラットと雄性ラットを個別ケージに戻した。
その後、ＢＮ雌性ラットに出産させ、各雌性ラットには、３〜４週齢まで、産児を育てさせ、離乳時に、各産児も各１〜２匹づつ金属製ケージに入れ、上記に記載の育成条件で育てた。
更に、上記と同様に生後約１０週齢時にペントバルビタールナトリウム麻酔下で実施した開腹手術によって、腎臓に肉眼的にシストあるいは白色結節が確認された雄性ラットを切開部位を縫合した後、個別のケージに収容されている新たに購入したＢＮ雌性ラット（購入先：日本チャールスリバー株式会社、１１週齢）と一時期同居させることによって交配させた。
その結果、１１３匹の産児が生まれ、１３週齢の時点で病理組織学的検査により、腎癌ラット（♂：３０，♀：３３）とＢＮラット（♂：２４，♀：２６）とに分けた（腎癌ラット：約５６％、ＢＮラット約４４％）。
（２）戻し交配ラット１１３匹の尾から実施例３と同様にしてＤＮＡを抽出し、ラット染色体１０番に局在する多型性を示すＤＮＡマーカーを用いて表現型と遺伝子型を調べ、連鎖解析を実施し、連鎖地図を作成した。
マイクロサテライトＤＮＡマーカーとして、
ｉ）Ｔｓｃ２遺伝子（Ｋｏｂａｙａｓｈｉ，Ｔ．ｅｔ  ａｌ．，Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．，２３：２６０８−２６１３，１９９５）
ｉｉ）ＲＲ２４マーカー（Ｈｉｎｏ，Ｏ．ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍｕｎ．，２０３：１３０２−１３０８，１９９４）
ｉｉｉ）ＩＬ−３遺伝子（同上）
ｉｖ）ＬＬＧＬ１遺伝子（ｈｔｔｐ：／／ｒａｔｍａｐ．ｉｎｓ．ｕ−ｔｏｋｙｏ．ａｃ．ｊｐ／  ＯＬＥＴＦ  ＰＲＯＪＥＣＴ）
ｖ）ＭＹＨＳＥ遺伝子（Ｓｅｒｉｋａｗａ，Ｔ．ｅｔ  ａｌ．，Ｇｅｎｅｔｉｃｓ  １３１：７０１−７２１（１９９２））及び４つのマーカー（Ｎｏ．１、Ｎｏ．３、Ｎｏ．１５及びＮｏ．１６（この番号付けは発明者が便宜上つけたものである。））を選択した。これらマーカーは、１０番染色体上（１０ｑ）に位置するものであり、ＯＬＥＴＦ  ＰＲＯＪＥＣＴ（ｈｔｔｐ：／／ｒａｔｍａｐ．ｉｎｓ．ｕ−ｔｏｋｙｏ．ａｃ．ｊｐ／）に開示されているものである。Ｎｏ．１、Ｎｏ．３、Ｎｏ．１５及びＮｏ．１６のマーカーを検索するためのプライマーは、各々、配列番号１及び２（Ｎｏ．１）、配列番号３及び４（Ｎｏ．３）、配列番号５及び６（Ｎｏ．１５）、及び配列番号７及び８（Ｎｏ．１６）のものを用いた。
上記プライマー、及びこれらのプライマーを用い得られたリンケージ解析の結果を下記に示す。
プライマーの配列：
2003017757.tif 000007
2003017757.tif 000008
2003017757.tif 000009
その結果、本発明の病因遺伝子は、染色体第１０番にあることが判明し、具体的には、Ｔｓｃ２遺伝子よりもテロメア側、より具体的には、Ｔｓｃ２遺伝子から約２５．７ｃＭテロメア側辺りにあることが判明した。上記データから解析したマッピングを図２に示す。
（３）さらに、本発明ラットの病因遺伝子座の近傍にあるマイクロサテライトマーカー（ＭＹＨＳＥ）を用いた本発明のラット腎腫瘍部と非腫瘍部との解析を行った。具体的には、本発明ラットの腎腫瘍部と尾のＤＮＡを実施例３と同様にして抽出し、ＭＹＨＳＥマーカーを用いてＰＣＲによって増幅させ、ヘテロ接合性の消失（ＬＯＨ：ｌｏｓｓ  ｏｆ  ｈｅｔｅｒｏｚｙｇｏｓｉｔｙ）を調べた。
その結果、本発明ラット４例中３例にＬＯＨ（ヘテロ接合性の消失）が認められ、ラットの病因遺伝子は癌抑制遺伝子と考えられた。
実施例５：  受精卵の調製及び凍結保存
本発明のラットの受精卵は、以下のようにして調製し保存することができる。
（１）まず、約１０〜１２週齢のＪｃｌ：ＳＤ雌性ラットの膣スメア像を観察することによって適当な交配時期を選び、本発明の雄性ラット（８〜２６週齢）と一時期同居させることによって自然交配させる。膣スメア像により膣内の精子を確認した雌性ラットから、交配の翌日にエーテル麻酔下で子宮を摘出する。子宮摘出後、雌性ラットを放血により安楽死させる。
（２）取り出した子宮から卵管を切り離し、１ｍｌ注射筒と３０Ｇ注射針を用いてＦＣＳを含有する培地で卵管を還流し、２細胞期胚を回収する。回収した２細胞期胚を上記培地を入れた凍結保存チューブに移し入れ、更に、ＤＭＳＯを含有する培地を２分間隔で添加し、１０分間凍結保存チューブを静置させる。
（３）冷却媒体としてアルコールバスを使用したプログラムフリーザーを用いて、「緩慢法」により凍結させる。例えば、０℃で１０分間静置させ、凍結保存チューブ内の温度を０℃にする。更に冷却させることによって、凍結保存チューブが−７℃になった時点で、液体窒素で冷却した植氷針を凍結保存チューブ内の液面に近づけ、液面がシャーベット状に白く凍った時点で蓋をし、直ちにアルコールバスに戻して−３０℃まで冷却する。
（４）凍結保存チューブを液体窒素内に投入し、−１９６℃で凍結保存する。
産業上の利用の可能性
本発明のラットは、以下に示すように有用な特徴を有し、それらに基づく種々の効果を有するものである。
（１）本発明のラットは、優性遺伝によって、当該形質を子孫に伝えることができ、また、繁殖能力も高い。従って、生産性が高いという点で極めて有用である。また、体外受精によって受精卵の大量生産が可能である。
（２）本発明のラットは、従来知られていたＥｋｅｒラットに比して早期に腎癌を発症するため、飼育時間が短くてすみ、ヒトの腎癌の予防、治療、診断方法及びこれに関する薬物の開発等を進める上で、貴重な病態モデルとなる。
（３）ヒトの腎癌の細胞は、主として淡明細胞と顆粒細胞から構成されている。一方、本発明ラットの腎癌の細胞は、淡明細胞を含み、具体的には、主として淡明細胞及び好酸性細胞で構成されている。これらの細胞分類のうち、ラットにみられる好酸性細胞は好酸性顆粒を有するという点から、ヒトの顆粒細胞に相当すると思われる。従って、特にヒトにおける腎癌の予防、治療、診断及びそれらに関わる薬物の開発に非常に有用である。
（４）ヒトにおける腎細胞癌は尿細管上皮由来と考えられ、腎の悪性腫瘍の大部分を占める（癌の病理組織アトラス、１９９５年、北川知行編著、南江堂発行）。また、ヒトでは遺伝性に腎癌が発生する場合があることが知られており、ＶＨＬ病及びＨＰＲＣならびに腎癌を併発する結節性硬化症が報告されている。本発明のラットの腎癌も遺伝性であり、また、尿細管上皮由来である。従って、本発明のラットを用いて医薬品等の開発をすることは、従来用いられている発癌剤投与により作製したモデルラット或いは癌を移植したヌードマウスを用いることに比して、よりヒトの腎癌発生に生理的に類似するという点で非常に有利である。
本出願は、日本で出願された特願２００１−２５２２８３を基礎としており、その内容は本明細書中に全て包含されるものである。
【配列表】
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2003017757.tif 000011
2003017757.tif 000012
【図面の簡単な説明】
図１は、本発明のラットとＢｒｏｗｎ  Ｎｏｒｗａｙラット（以下、「ＢＮラット」という。）との戻し交配ラットの作製を示す図である。
図２は、ＢＮラットを用いた本発明のラットの戻し交配ラットによる連鎖解析の結果から得られたマッピング図を示す。
【図１】
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【図２】
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【手続補正書】
【提出日】平成15年6月27日(2003.6.27)
【手続補正１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】特許請求の範囲
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
１０番染色体上に存在するＴｓｃ２遺伝子よりもテロメア側に位置する優性遺伝子の変異によって腎癌を遺伝的に発症するラット。
【請求項２】
優性遺伝子がＴｓｃ２遺伝子よりも約２５〜２７ｃＭ程度テロメア側に位置する請求項１に記載のラット。
【請求項３】
優性遺伝子がＴｓｃ２遺伝子よりも約２６ｃＭ程度テロメア側に位置する請求項２に記載のラット。
【請求項４】
変異尿細管の発生、尿細管の過形成の発現、尿細管の腺腫の発現という経過を経て、生後１年以内に腎癌に至る遺伝形質を有する請求項１〜３のいずれかに記載のラット。
【請求項５】
変異尿細管、尿細管の過形成、尿細管の腺腫又は腎癌を構成する細胞が、淡明細胞を含む請求項４に記載のラット。
【請求項６】
下記の遺伝形質を有する請求項１〜５のいずれかに記載のラット：
（ａ）生後約３〜４週齢より組織学的に変異尿細管が発生し、
（ｂ）生後約４〜８週齢より尿細管の過形成又は尿細管の腺腫或いはその両方が発現し、
（ｃ）生後約１３〜２６週齢より腎癌が発現する。
【請求項７】
Ｓｐｒａｇｕｅ−Ｄａｗｌｅｙ（ＳＤ）系より確立された請求項１〜６のいずれかに記載のラット。
【請求項８】
変異尿細管の発生、尿細管の過形成の発現、尿細管の腺腫の発現という経過を経て、生後１年以内に腎癌に至るという特性を有するラットであって、受託番号ＦＥＲＭ  ＢＰ−８１５２のもの。
【請求項９】
変異尿細管の発生、尿細管の過形成の発現、尿細管の腺腫の発現という経過を経て、生後１年以内に腎癌に至るという特性を有するラットであって、受託番号ＦＥＲＭ  ＢＰ−８１５２の変異体。
【請求項１０】
請求項１〜７のいずれかに記載のラットの受精卵。
【請求項１１】
請求項８記載のラットの受精卵。
【請求項１２】
請求項９記載のラットの受精卵。
【請求項１３】
請求項１〜９のいずれかに記載のラットに被検物質を投与して、被検物質の抗癌作用を評価することを含む抗癌作用を有する物質の選択方法。
【請求項１４】
請求項１３に記載の選択方法によって選ばれる抗癌作用を有する物質。
【請求項１５】
請求項１〜９のいずれかに記載のラットに被検物質を投与して、被検物質の癌の発生を予防する作用を評価することを含む癌の発生を予防する物質の選択方法。
【請求項１６】
請求項１５に記載の選択方法によって選ばれる癌の発生を予防する物質。
【請求項１７】
以下の工程を含む、癌の診断用マーカー候補又は早期発見用マーカー候補となる物質を選択する方法：
（ａ）請求項１〜９のいずれかに記載のラットの生物試料中における特定の物質の濃度を測定する工程、
（ｂ）対照ラットの生物試料中における該物質の濃度を測定する工程、
（ｃ）工程（ａ）で測定された物質の濃度と工程（ｂ）で測定された該物質の濃度とを比較し、該物質が癌の診断用マーカー候補又は早期発見用マーカー候補となるか否かを評価する工程。
【請求項１８】
請求項１７に記載の選択方法によって選ばれる癌の診断用マーカー候補又は早期発見用マーカー候補となる物質。
【請求項１９】
腎癌を遺伝的に発症させる機能を有する１０番染色体上に存在するＴｓｃ２遺伝子よりもテロメア側に位置するラット遺伝子。
【請求項２０】
Ｔｓｃ２遺伝子よりも約２５〜２７ｃＭ程度テロメア側に位置する請求項１９に記載の遺伝子。
【請求項２１】
Ｔｓｃ２遺伝子よりも約２６ｃＭ程度テロメア側に位置する請求項２０に記載の遺伝子。
【国際調査報告】
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