(57)【要約】３’−デオキシ−３’−フルオロウリジン誘導体及び１−（３’−デオキシ−３’−フルオロ−β−Ｌ−リボフラノシル）ウラシル誘導体を有効成分として含有する副作用の少ない優れたＣ型肝炎治療剤。【特許請求の範囲】
【請求項１】
下記一般式（Ｉ）
2002051425.tif 000009
〔式中、Ｒ１は水素原子、ハロゲン原子、アルキル基、ハロゲン置換アルキル基、ヒドロキシアルキル基、アミノアルキル基、アミノ基、ホルミル基、シアノ基または無置換もしくは修飾されたベンジル基を示す。Ｚは炭素原子または窒素原子を示し、Ｚが炭素原子を示す時、Ｒ２は水素原子、ハロゲン原子、ホルミル基またはシアノ基を示す。Ｒ３は水酸基または式
2002051425.tif 000010
（式中、ｎは１、２または３を示す。）を示す。Ｘ、Ｙはそれぞれ独立して酸素原子または硫黄原子を示す。〕で表される３’−デオキシ−３’−フルオロウリジン誘導体、その塩およびそれらの水和物または溶媒和物から選ばれる化合物を有効成分として含有するＣ型肝炎治療剤。
【請求項２】
３’−デオキシ−３’−フルオロウリジン誘導体が、３’−デオキシ−３’−フルオロウリジン、３’−デオキシ−５，３’−ジフルオロウリジン、３’−デオキシ−３’−フルオロ−５−メチルウリジン、３’−デオキシ−３’−フルオロ−５−シアノウリジン、３’−デオキシ−３’−フルオロ−５−トリフロロメチルウリジン、３’−デオキシ−３’−フルオロ−５−ブロモウリジン、３’−デオキシ−３’−フルオロ−６−アザウリジン、３’−デオキシ−３’−フルオロ−２−チオウリジン、３’−デオキシ−３’−フルオロ−４−チオウリジン、３’−デオキシ−３’−フルオロウリジン　５’−トリフォスフェート、３’−デオキシ−５，３’−ジフルオロウリジン　５’−トリフォスフェート、３’−デオキシ−３’−フルオロ−５−メチルウリジン　５’−トリフォスフェート、３’−デオキシ−３’−フルオロ−５−シアノウリジン　５’−トリフォスフェート、３’−デオキシ−３’−フルオロ−５−トリフロロメチルウリジン　５’−トリフォスフェート、３’−デオキシ−３’−フルオロ−５−ブロモウリジン　５’−トリフォスフェート、３’−デオキシ−３’−フルオロ−６−アザウリジン　５’−トリフォスフェート、３’−デオキシ−３’−フルオロ−２−チオウリジン　５’−トリフォスフェートまたは３’−デオキシ−３’−フルオロ−４−チオウリジン　５’−トリフォスフェートのいずれかである請求項１記載のＣ型肝炎治療剤。
【請求項３】
３’−デオキシ−３’−フルオロウリジン誘導体導体が、３’−デオキシ−３’−フルオロウリジン、３’−デオキシ−５，３’−ジフルオロウリジン、３’−デオキシ−３’−フルオロ−５−メチルウリジン、３’−デオキシ−３’−フルオロウリジン　５’−トリフォスフェート、３’−デオキシ−５，３’−ジフルオロウリジン　５’−トリフォスフェートまたは３’−デオキシ−３’−フルオロ−５−メチルウリジン　５’−トリフォスフェートのいずれかである請求項１記載のＣ型肝炎治療剤。
【請求項４】
３’−デオキシ−３’−フルオロウリジン誘導体が、３’−デオキシ−３’−フルオロウリジン、３’−デオキシ−５，３’−ジフルオロウリジンまたは３’−デオキシ−３’−フルオロ−５−メチルウリジンのいずれかである請求項１記載のＣ型肝炎治療剤。
【請求項５】
３’−デオキシ−３’−フルオロウリジン誘導体が、３’−デオキシ−３’−フルオロウリジンである請求項１記載のＣ型肝炎治療剤。
【請求項６】
下記一般式（ＩＩ）
2002051425.tif 000011
〔式中、Ｒ１は水素原子、ハロゲン原子、アルキル基、ハロゲン置換アルキル基、ヒドロキシアルキル基、アミノアルキル基、アミノ基、ホルミル基、シアノ基または無置換もしくは修飾されたベンジル基を示す。Ｚは炭素原子または窒素原子を示し、Ｚが炭素原子を示す時、Ｒ２は水素原子、ハロゲン原子、ホルミル基またはシアノ基を示す。Ｒ３は水酸基または式
2002051425.tif 000012
（式中、ｎは１、２または３を示す。）を示す。Ｘ、Ｙはそれぞれ独立して酸素原子または硫黄原子を示す。〕で表される１−（３’−デオキシ−３’−フルオロ−β−Ｌ−リボフラノシル）ウラシル誘導体、その塩およびそれらの水和物または溶媒和物から選ばれる化合物。
【請求項７】
１−（３’−デオキシ−３’−フルオロ−β−Ｌ−リボフラノシル）ウラシル誘導体が、１−（３’−デオキシ−３’−フルオロ−β−Ｌ−リボフラノシル）ウラシル、１−（３’−デオキシ−５、３’−ジフルオロ−β−Ｌ−リボフラノシル）ウラシル、１−（３’−デオキシ−３’−フルオロ−５−メチル−β−Ｌ−リボフラノシル）ウラシル、１−（３’−デオキシ−３’−フルオロ−β−Ｌ−リボフラノシル）ウラシル　５’−トリフォスフェート、１−（３’−デオキシ−５、３’−ジフルオロ−β−Ｌ−リボフラノシル）ウラシル　５’−トリフォスフェートまたは１−（３’−デオキシ−３’−フルオロ−５−メチル−β−Ｌ−リボフラノシル）ウラシル　５’−トリフォスフェートのいずれかである請求項６に記載の化合物。
【請求項８】
１−（３’−デオキシ−３’−フルオロ−β−Ｌ−リボフラノシル）ウラシル誘導体が、１−（３’−デオキシ−３’−フルオロ−β−Ｌ−リボフラノシル）ウラシル、１−（３’−デオキシ−５、３’−ジフルオロ−β−Ｌ−リボフラノシル）ウラシル、１−（３’−デオキシ−３’−フルオロ−５−メチル−β−Ｌ−リボフラノシル）ウラシルのいずれかである請求項６に記載の化合物。
【請求項９】
１−（３’−デオキシ−３’−フルオロ−β−Ｌ−リボフラノシル）ウラシル誘導体が、１−（３’−デオキシ−３’−フルオロ−β−Ｌ−リボフラノシル）ウラシルである請求項６に記載の化合物。
【請求項１０】
請求項６から９のいずれかに記載の化合物を有効成分として含有するＣ型肝炎治療剤。
【発明の詳細な説明】
技術分野
本発明は、Ｃ型肝炎治療剤に関し、更に詳しくは、特定構造の３’−デオキシ−３’−フルオロウリジン誘導体及び１−（３’−デオキシ−３’−フルオロ−β−Ｌ−リボフラノシル）ウラシル誘導体を有効成分とするＣ型肝炎治療剤に関する。
背景技術
１９８９年米国Ｃｈｉｒｏｎ社によりＣ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）が発見されてより、慢性肝疾患に対する認識は一変した。従来非Ａ非Ｂ、あるいはアルコール性肝炎とされていたものの多くが、ＨＣＶ感染により引き起こされるＣ型肝炎であることが判明し、その実体が次々に明らかになってきた。そして、Ｃ型肝炎は重篤な症状を示しにくい反面、大半が慢性化し着実に進展し、長い時間をかけて高率に肝癌を発生するということもはっきりしてきた。
臨床成果としては、早速、ＨＣＶ抗体による輸血のスクリーニングが開始され、輸血後肝炎は激減した。また、インターフェロンの有効性が示され、一部は治癒が見込まれるようになった。しかし、その有効性は３０％程度にすぎず、また、重篤なうつ症状をはじめとする副作用などが報告されている。最近では、抗ウイルス剤であるリバビリンと併用することにより、有効性が示されてはいるものの十分満足のいく治療法とはいえない。
また、ＨＣＶは＋鎖の一本鎖ＲＮＡをゲノムにもつフラビウイルスであり、ＲＮＡ依存ＲＮＡポリメラーゼにより増殖するウイルスである。このＨＣＶのＲＮＡ依存ＲＮＡポリメラーゼを人のＲＮＡポリメラーゼを阻害することなく、特異的に阻害することにより、ＨＣＶの増殖をおさえ、Ｃ型肝炎の効果的な治療法の道を開くと考えられる。しかしながら、未だにかかる有効な阻害剤は見出されていない。
一方、３’−デオキシ−３’−フルオロウリジンは、１９７５年、Ｇ．Ｋｏｗｏｌｌｉｋらによりその合成が初めて報告された（Ｇ．Ｋｏｗｏｌｌｉｋ　ｅｔ　ａｌ．，Ｊ．Ｃａｒｂｏｈｙｄｒａｔｅ．Ｎｕｃｌｅｏｓｉｄｅｓ．Ｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓ，２（３），１９１−１９５（１９７５））。その後、種々の合成法が報告されている（Ｈｅｍａｎｔ　Ｋ．Ｍｉｓｒａ　ｅｔ　ａｌ．Ｊ．Ｈｅｔｅｒｏｃｙｃｌｉｃ　Ｃｈｅｍ．，２１，７７３（１９８４）、特開昭６２−８１３９７号公報、Ｌ．Ａｌｄｅｒ　ｅｔ　ａｌ．，Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ　ａｎｄ　Ｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔａｌ　Ｍａｓｓ　Ｓｐｅｃｔｒｏｍｅｔｒｙ，Ｖｏｌ．１３，２１７−２２１（１９８６），Ａ．Ｖａｎ　Ａｅｒｓｃｈｏｔ　ｅｔ　ａｌ．Ａｎｔｉｖｉｒａｌ　Ｒｅｓｅａｒｃｈ，１２，１３３（１９８９）Ｉｇｏｒ　Ａ．Ｍｉｋｈａｉｌｏｐｕｌｏ，ｅｔ．ａｌ．，ＦＥＢＳ．Ｖｏｌ．２５０，Ｎｏ．２　１３９（１９８９）ａｎｄ　Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．３４，２１９５（１９９１））。
そして、その薬理的作用に関しても種々の報告がなされており、Ａ．Ｖａｎ　Ａｅｒｓｃｈｏｔ　ｅｔ　ａｌ．，Ａｎｔｉｖｉｒａｌ　Ｒｅｓｅａｒｃｈ，１２，１３３（１９８９），Ｉｇｏｒ　Ａ．Ｍｉｋｈａｉｌｏｐｕｌｏ，ｅｔ．ａｌ．，ＦＥＢＳ．Ｖｏｌ．２５０，Ｎｏ．２　１３９（１９８９）ａｎｄ　Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．３４，２１９５（１９９１）にも本発明治療剤の有効成分のひとつである３’−デオキシ−３’−フルオロウリジンが抗ウイルス活性を示すことが記載されてはいるものの、Ｃ型肝炎ウイルス近縁ウイルス（＋鎖の一本鎖ＲＮＡをゲノムにもつウイルス）に対する阻害活性は低く、抗ＨＣＶ作用の示唆はなされていない。
また、本発明治療剤の有効成分のひとつである３’−デオキシ−５，３’−ジフルオロウリジンについては、特開昭６２−８１３９７号公報及び特開昭６２−２４２６２４号公報に合成法等が記載されてはいるが、これらから、抗ＨＣＶ作用が期待される情報はない。
発明の開示
本発明者らは、副作用の少ない、優れたＣ型肝炎治療剤を提供するために鋭意検討した結果、３’−デオキシ−３’−フルオロウリジン誘導体及び１−（３’−デオキシ−３’−フルオロ−β−Ｌ−リボフラノシル）ウラシル誘導体が、人のＲＮＡポリメラーゼを阻害することなくＨＣＶのＲＮＡ依存ＲＮＡポリメラーゼに選択的な酵素阻害作用を有することを見出し、本発明を完成するに至った。
すなわち本発明によれば、下記一般式（Ｉ）
2002051425.tif 000002
〔式中、Ｒ１は水素原子、ハロゲン原子、アルキル基、ハロゲン置換アルキル基、ヒドロキシアルキル基、アミノアルキル基、アミノ基、ホルミル基、シアノ基または無置換もしくは修飾されたベンジル基を示す。Ｚは炭素原子または窒素原子を示し、Ｚが炭素原子を示す時、Ｒ２は水素原子、ハロゲン原子、ホルミル基またはシアノ基を示す。Ｒ３は水酸基または式
2002051425.tif 000003
（式中、ｎは１、２または３を示す。）を示す。Ｘ、Ｙはそれぞれ独立して酸素原子または硫黄原子を示す。〕で表される３’−デオキシ−３’−フルオロウリジン誘導体、その塩およびそれらの水和物または溶媒和物から選ばれる化合物を有効成分として含有するＣ型肝炎治療剤；下記一般式（ＩＩ）
2002051425.tif 000004
〔式中、Ｒ１は水素原子、ハロゲン原子、アルキル基、ハロゲン置換アルキル基、ヒドロキシアルキル基、アミノアルキル基、アミノ基、ホルミル基、シアノ基または無置換もしくは修飾されたベンジル基を示す。Ｚは炭素原子または窒素原子を示し、Ｚが炭素原子を示す時、Ｒ２は水素原子、ハロゲン原子、ホルミル基またはシアノ基を示す。Ｒ３は水酸基または式
2002051425.tif 000005
（式中、ｎは１、２または３を示す。）を示す。Ｘ、Ｙは酸素原子または硫黄原子を示す。〕で表される１−（３’−デオキシ−３’−フルオロ−β−Ｌ−リボフラノシル）ウラシル誘導体、その塩およびそれらの水和物または溶媒和物から選ばれる化合物；該化合物を有効成分として含有するＣ型肝炎治療剤が提供される。
発明を実施するための最良の形態
本発明の化合物としては、下記一般式（Ｉ）及び下記一般式（ＩＩ）で表される化合物が挙げられる。
2002051425.tif 000006
上記一般式（Ｉ）及び上記一般式（ＩＩ）において、Ｒ１は水素原子、ハロゲン原子、アルキル基、ハロゲン置換アルキル基、ヒドロキシアルキル基、アミノアルキル基、アミノ基、ホルミル基、シアノ基または無置換もしくは修飾されたベンジル基を示す。Ｚは炭素原子または窒素原子を示し、Ｚが炭素原子を示す時、Ｒ２は水素原子、ハロゲン原子、ホルミル基またはシアノ基を示す。Ｒ１及びＲ２の置換基の定義中、ハロゲン原子としては、フッ素原子、クロル原子、ブロム原子またはヨウ素原子等が挙げられ、アルキル基としては、炭素数１から６のアルキル基等が挙げられ、好ましくはメチル基、エチル基、ノルマルプロピル基またはイソプロピル基等の炭素数１から３のアルキル基等が挙げられ、アミノアルキル基としては、４−アミノブチル基、３−アミノプロピル基、２−アミノエチル基またはアミノメチル基等が挙げられる。また、ベンジル基の修飾基としては、ハロゲン原子、アルキル基、ハロゲン置換アルキル基、ヒドロキシアルキル基、アミノアルキル基、アミノ基、ホルミル基、シアノ基等が挙げられ、それらの例は上述の通りである。
Ｒ３は水酸基または式
2002051425.tif 000007
（式中、ｎは１、２または３を示す。）であり、Ｘ、Ｙはそれぞれ独立して酸素原子または硫黄原子である。
上記一般式（Ｉ）で表される３’−デオキシ−３’−フルオロウリジン誘導体及び上記一般式（ＩＩ）で表される１−（３’−デオキシ−３’−フルオロ−β−Ｌ−リボフラノシル）ウラシル誘導体の具体例としては、たとえば次の化合物が挙げられる。
上記一般式（Ｉ）で表される３’−デオキシ−３’−フルオロウリジン誘導体としては、３’−デオキシ−３’−フルオロウリジン、３’−デオキシ−５，３’−ジフルオロウリジン、３’−デオキシ−３’−フルオロ−５−メチルウリジン、３’−デオキシ−３’−フルオロ−５−シアノウリジン、３’−デオキシ−３’−フルオロ−５−トリフロロメチルウリジン、３’−デオキシ−３’−フルオロ−５−ブロモウリジン、３’−デオキシ−３’−フルオロ−６−アザウリジン、３’−デオキシ−３’−フルオロ−２−チオウリジン、３’−デオキシ−３’−フルオロ−４−チオウリジン、３’−デオキシ−３’−フルオロウリジン５’−トリフォスフェート、３’−デオキシ−５，３’−ジフルオロウリジン　５’−トリフォスフェート、３’−デオキシ−３’−フルオロ−５−メチルウリジン　５’−トリフォスフェート、３’−デオキシ−３’−フルオロ−５−シアノウリジン　５’−トリフォスフェート、３’−デオキシ−３’−フルオロ−５−トリフロロメチルウリジン５’−トリフォスフェート、３’−デオキシ−３’−フルオロ−５−ブロモウリジン　５’−トリフォスフェート、３’−デオキシ−３’−フルオロ−６−アザウリジン　５’−トリフォスフェート、３’−デオキシ−３’−フルオロ−２−チオウリジン　５’−トリフォスフェート、３’−デオキシ−３’−フルオロ−４−チオウリジン　５’−トリフォスフェートが挙げられ、好ましい化合物としては、３’−デオキシ−３’−フルオロウリジン、３’−デオキシ−５，３’−ジフルオロウリジン、３’−デオキシ−３’−フルオロ−５−メチルウリジン、３’−デオキシ−３’−フルオロウリジン　５’−トリフォスフェート、３’−デオキシ−５，３’−ジフルオロウリジン　５’−トリフォスフェート、３’−デオキシ−３’−フルオロ−５−メチルウリジン　５’−トリフォスフェートが挙げられ、特に好ましい化合物としては、３’−デオキシ−３’−フルオロウリジン、３’−デオキシ−５，３’−ジフルオロウリジン、３’−デオキシ−３’−フルオロ−５−メチルウリジンが挙げられ、最も好ましい化合物としては３’−デオキシ−３’−フルオロウリジンが挙げられる。
上記一般式（ＩＩ）で表される１−（３’−デオキシ−３’−フルオロ−β−Ｌ−リボフラノシル）ウラシル誘導体としては、１−（３’−デオキシ−３’−フルオロ−β−Ｌ−リボフラノシル）ウラシル、１−（３’−デオキシ−５、３’−ジフルオロ−β−Ｌ−リボフラノシル）ウラシル、１−（３’−デオキシ−３’−フルオロ−５−メチル−β−Ｌ−リボフラノシル）ウラシル、１−（３’−デオキシ−３’−フルオロ−β−Ｌ−リボフラノシル）ウラシル　５’−トリフォスフェート、１−（３’−デオキシ−５、３’−ジフルオロ−β−Ｌ−リボフラノシル）ウラシル　５’−トリフォスフェート，１−（３’−デオキシ−３’−フルオロ−５−メチル−β−Ｌ−リボフラノシル）ウラシル　５’−トリフォスフェートが挙げられ、好ましい化合物としては、１−（３’−デオキシ−３’−フルオロ−β−Ｌ−リボフラノシル）ウラシル、１−（３’−デオキシ−５、３’−ジフルオロ−β−Ｌ−リボフラノシル）ウラシル、１−（３’−デオキシ−３’−フルオロ−５−メチル−β−Ｌ−リボフラノシル）ウラシルが挙げられ、特に好ましい化合物としては、１−（３’−デオキシ−３’−フルオロ−β−Ｌ−リボフラノシル）ウラシルが挙げられる。
本発明における有効成分である上記一般式（Ｉ）で表される３’−デオキシ−３’−フルオロウリジン誘導体のうち、３’−デオキシ−３’−フルオロウリジン、３’−デオキシ−５，３’−ジフルオロウリジン、３’−デオキシ−３’−フルオロ−５−メチルウリジンは、Ｈｅｍａｎｔ　Ｋ．Ｍｉｓｒａ　ｅｔ　ａｌ．，Ｊ．Ｈｅｔｅｒｏｃｙｃｌｉｃ　Ｃｈｅｍ．，２１，７７３（１９８４）．，野依ら（特開昭６２−８１３９７号公報）、Ｌ．Ａｌｄｅｒ　ｅｔ　ａｌ．，Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ　ａｎｄ　Ｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔａｌ　Ｍａｓｓ　Ｓｐｅｃｔｒｏｍｅｔｒｙ，Ｖｏｌ．１３，２１７−２２１（１９８６），Ａ．Ｖａｎ　Ａｅｒｓｃｈｏｔ　ｅｔ　ａｌ．，Ａｎｔｉｖｉｒａｌ　Ｒｅｓｅａｒｃｈ，１２，１３３（１９８９）Ｉｇｏｒ　Ａ．Ｍｉｋｈａｉｌｏｐｕｌｏ，ｅｔ．ａｌ．，Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．３４，２１９５（１９９１）に記載された公知の化合物であり、同情報に従い製造することができる。これらの化合物以外の上記一般式（Ｉ）で表される３’−デオキシ−３’−フルオロウリジン誘導体についても同様に、同情報を基にして製造することが可能である。また、上記一般式（ＩＩ）で表される１−（３’−デオキシ−３’−フルオロ−β−Ｌ−リボフラノシル）ウラシル誘導体は、上記公知化合物Ｄ体の鏡像体Ｌ体であり、同情報に従い糖の原料をＬ−キシロースにすることにより製造することもできる。
上記一般式（Ｉ）で表される３’−デオキシ−３’−フルオロウリジン誘導体及び上記一般式（ＩＩ）で表される１−（３’−デオキシ−３’−フルオロ−β−Ｌ−リボフラノシル）ウラシル誘導体は、生理学的に許容される塩に形成されることができる。塩としては、例えばアルカリ金属塩、アルカリ土類金属塩、アンモニウム塩またはアルキルアンモニウム塩等を挙げることができる。
また、上記一般式（Ｉ）で表される３’−デオキシ−３’−フルオロウリジン誘導体及び上記一般式（ＩＩ）で表される１−（３’−デオキシ−３’−フルオロ−β−Ｌ−リボフラノシル）ウラシル誘導体及びそれらの塩は、任意にそれらの水和物または溶媒和物に形成されることができる。溶媒和物としては、例えばメタノール、エタノール、イソプロパノール、アセトン、酢酸エチル、塩化メチレン等を挙げることができる。
上記の塩及びそれらの水和物または溶媒和物も本発明における有効成分の範囲に包含される。
上記一般式（Ｉ）で表される３’−デオキシ−３’−フルオロウリジン誘導体及び上記一般式（ＩＩ）で表される１−（３’−デオキシ−３’−フルオロ−β−Ｌ−リボフラノシル）ウラシル誘導体は、抗ウイルス作用、抗ＲＮＡウイルス作用、抗Ｃ型肝炎ウイルス作用をもつ化合物であり、Ｃ型肝炎治療剤として用いることができる。
本発明のＣ型肝炎治療剤は、上記有効成分自体をそのまま用いても良いが、汎用の製剤用添加物を用いて上記有効成分を含む医薬組成物を製造して用いることが好ましい。医薬組成物の剤型としては、錠剤、カプセル剤、細粒剤、丸剤、トローチ剤、液剤、注射剤、坐剤、軟膏剤または貼付剤等を挙げることができる。これらは経口的（舌下投与を含む）または非経口的に投与することができる。
経口用の医薬組成物は、混合、充填または打錠等の従来汎用の方法により製造することができる。また反復配合操作を用いて、多量の充填剤を使用した医薬組成物中に有効成分を分布させてもよい。
例えば、経口投与に用いられる錠剤またはカプセル剤は単位投与物として提供されることが好ましく、結合剤、充填剤、希釈剤、打錠剤、滑沢剤、崩壊剤、着色剤、香味剤または湿潤剤等の通常使用される製剤担体を含有していてもよい。錠剤は、当業界において周知の方法に従って、例えばコーティング剤を用いてコーティング錠としてもよい。
好ましい充填剤としては、セルロース、マンニトールまたはラクトース等を挙げることができる。さらに製剤用添加剤として、でん粉、ポリビニルピロリドンまたはナトリウムでん粉グリコラート等のでん粉誘導体等の崩壊剤や、ウラリル硫酸ナトリウム等の滑沢剤などを用いることができる。
経口用の液剤形態の医薬組成物としては、例えば、水性もしくは油性懸濁液、溶液、エマルジョン、シロップ剤、エリキシル剤または使用前に水もしくは適当な媒体により再溶解され得る乾燥医薬組成物などが挙げられる。
このような液剤には、通常の添加物、例えばソルビトール、シロップ、メチルース、ステアリン酸アルミニウムゲルまたは水素化食用脂肪等の沈殿防止剤；レシチン、ソルビタンモノオレエートまたはアラビアゴム等の乳化剤；アーモンド油、精留ココナッツ油またはグリセリンエステル等の油状エステル；プロピレングリコールまたはエチルアルコールのような（食用油も包含し得る）非水性媒体；ｐ−ヒドロキシ安息香酸のメチルエステル、エチルエステル若しくはプロピルエステルまたはソルビン酸等の保存剤；さらに必要に応じて通常の香味剤または着色剤などを配合することができる。
非経口投与に適する医薬組成物としては、上記の有効成分および滅菌媒体を含有する液体状の医薬組成物、座薬または貼付剤などが挙げられる。例えば、媒体および濃度に応じて有効成分を懸濁、溶解または乳化させることができ、例えば、非経口用の溶液状組成物は、好ましくは有効成分を媒体に溶解させて滅菌濾過し、次に適当なバイアルまたはアンプルに充填して密封することにより製造することができる。安定性を高めるために、水溶液状の組成物を調整した後、凍結乾燥により水分を除去してもよい。
非経口用の懸濁剤は、上記の非経口用の溶液状組成物と実質的に同様の方法で製造されるが、例えば、有効成分を媒体に懸濁し、エチレンオキサイドなどを用いて滅菌し、更に滅菌媒体中に懸濁させることによって製造することができる。懸濁剤などの製造にあたり、有効成分が製剤中で均一に分布するように、必要に応じて界面活性剤や湿潤剤等を添加してもよい。その他の形態の医薬品組成物も当業者に周知の方法で製造でき、本発明の医薬の一態様である医薬品組成物の形態および製造方法は上記のものに限定されることはない。
上記経口用の医薬組成物（例えば錠剤、カプセル剤、細粒剤等の場合）は、通常５〜９５％重量、好ましくは２５〜９０％重量の有効成分を含み、非経口用の医薬組成物（例えば注射剤の場合）は、通常０．５〜２０％重量、好ましくは１〜１０％重量の有効成分を含有する。
本発明の治療剤はＨＣＶに起因する肝炎の治療に有用である。本発明の治療剤の投与量は、患者の年齢、健康状態、体重、疾患の重篤度、同時に行う治療・処置の種類や頻度、所望の効果の性質等により適宜決定すればよい。一般的には、成人１回あたりの投与量を、有効成分量として０．０１〜５０ｍｇ／ｋｇ体重、好ましくは１〜３０ｍｇ／ｋｇ体重として、一日あたり１回ないしは数回投与すればよい。
実施例
以下、本発明を合成例及び実施例によりさらに具体的に説明するが、下記の合成例及び実施例は本発明についての具体的認識を得る一助とみなすべきものであり、本発明の範囲は下記の合成例及び実施例により何ら限定されるものではない。
＜合成例１＞　３’−デオキシ−３’−フルオロウリジンの合成
下記の実施例２で使用した３’−デオキシ−３’−フルオロウリジンは、Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．３４，２１９５（１９９１）の合成例に従って製造した。
１Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ　３．５−３．７（ｍ，２Ｈ，Ｈ−５’）４．０５−４．２５（ｍ，１Ｈ，Ｈ−４’）４．１−４．３（ｍ，１Ｈ，Ｈ−２’）４．９３（ｄｄ，Ｊ＝４．２Ｈｚ，５４．９Ｈｚ，１Ｈ，Ｈ−３’）５．２６（ｔ，Ｊ＝５．１Ｈｚ，１Ｈ，５’ＯＨ）５．７０（ｄ，，Ｊ＝８．１Ｈｚ，１Ｈ，Ｈ−５）５．８３（ｄ，Ｊ＝６．３Ｈｚ，１Ｈ，２’ＯＨ）５．８７（ｄ，Ｊ＝７．８Ｈｚ，１Ｈ，Ｈ−１’）７．８１（ｄ，１Ｈ，Ｈ−６）１１．３５（ｂｒ−ｓ，ＮＨ）
＜合成例２＞　３’−デオキシ−５，３’−ジフルオロウリジンの合成
下記の実施例２で使用した３’−デオキシ−５，３’−ジフルオロウリジンは、Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．３４，２１９５（１９９１）の合成例に従って製造した。
５−フルオロウラシル（２９ｍｇ）のアセトニトリル溶液（０．６ｍＬ）に、ビストリメチルシリルアセトアミド（１３５μＬ）を加え、１時間攪拌し、反応液が透明になってから、１−Ｏ−アセチル−２，５−ジ−Ｏ−ベンゾイル−３−デオキシ−３−フルオロ−α、β−Ｄ−リボフラノシル（８９ｍｇ）のアセトニトリル（１ｍＬ）の溶液を加えた。反応系を氷零下、四塩化すず（３４μＬ）加え、加熱還流攪拌を８時間行った。反応系を冷水に注かし、酢酸エチルにて抽出し、硫酸マグネシウムにて乾燥後、濾過、濃縮し、残さ８０ｍｇをえた。これを、１Ｍ−アンモニウム−メタノールに溶解し、室温にて１２０時間攪拌した。反応系を濃縮し、ジエチルエーテルにてけん洗し、表題化合物（２１ｍｇ）を得た。
１Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ　３．５−３．７（ｍ，２Ｈ，Ｈ−５’）４．０５−４．２５（ｍ，１Ｈ，Ｈ−４’）４．１−４．３（ｍ，１Ｈ，Ｈ−２’）４．９４（ｄｄ，Ｊ＝４．１Ｈｚ，５４．５Ｈｚ，１Ｈ，Ｈ−３’）５．４０（ｂｒ−ｓ，１Ｈ，２’ＯＨ）５．８５（ｄ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，１Ｈ，Ｈ−１’）７．９４（ｄ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，１Ｈ，Ｈ−６）
＜合成例３＞　３’−デオキシ−３’−フルオロ−５−メチルウリジンの合成
合成例２の５−フロロウラシルの代わりに、５−メチルウラシルを用いた他は同様にして、目的化合物を得た。
１Ｈ−ＮＭＲ　２７０ＭＨｚ（ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ　ｐｐｍ　１．７７（ｓ，３Ｈ，ＣＨ３）３．５０−３．７０（ｍ，２Ｈ，Ｈ−５’）４．０５−４．２５（ｍ，１Ｈ，Ｈ−４’）４．１０−４．３０（ｍ，１Ｈ，Ｈ−２’）４．９３（ｄｄ，Ｊ＝４．３Ｈｚ，５４．８Ｈｚ，１Ｈ，Ｈ−３’）５．２８（ｔ，Ｊ＝５．１Ｈｚ，１Ｈ，５’ＯＨ）５．７９（ｄ，Ｊ＝６．３Ｈｚ，１Ｈ，２’ＯＨ）５．８７（ｄ，Ｊ＝８．１Ｈｚ，１Ｈ，Ｈ−１’）７．６７（ｓ，１Ｈ，Ｈ−６）１１．３７（ｂｒ−ｓ，１Ｈ，ＮＨ）
＜合成例４＞　３’−デオキシ−３’−フルオロ−５−シアノウリジンの合成
合成例２の５−フロロウラシルの代わりに、５−シアノウラシルを用いた他は同様にして、目的化合物を得た。
１Ｈ−ＮＭＲ　２７０ＭＨｚ（ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ　ｐｐｍ　３．５０−３．７０（ｍ，２Ｈ，Ｈ−５’）４．０５−４．２５（ｍ，１Ｈ，Ｈ−４’）４．１０−４．３０（ｍ，１Ｈ，Ｈ−２’）４．９９（ｄ，Ｊ＝５６．１Ｈｚ，１Ｈ，Ｈ−３’）５．４９（ｔ，Ｊ＝４．４Ｈｚ，１Ｈ，５’ＯＨ）５．８４（ｄ，Ｊ＝６．４Ｈｚ，１Ｈ，１’−Ｈ）５．９１（ｄ，Ｊ＝５．４Ｈｚ，１Ｈ，２’ＯＨ）８．７８（ｓ，１Ｈ，Ｈ−６）１２．１５（ｂｒ−ｓ，１Ｈ，ＮＨ）．ＩＲ：２２３８ｃｍ−１（Ｃ≡Ｎ）
＜合成例５＞　３’−デオキシ−３’−フルオロ−５−トリフロロメチルウリジンの合成
合成例２の５−フロロウラシルの代わりに、５−トリフロロメチルウラシルを用いた他は同様にして、目的化合物を得た。
１Ｈ−ＮＭＲ　２７０ＭＨｚ（ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ　ｐｐｍ　３．５０−３．７０（ｍ，２Ｈ，Ｈ−５’）４．０５−４．２５（ｍ，１Ｈ，Ｈ−４’）４．１０−４．３０（ｍ，１Ｈ，Ｈ−２’）４．９９（ｄｄ，Ｊ＝２．８Ｈｚ，５３．８Ｈｚ，１Ｈ，Ｈ−３’）５．５０（ｂｒ−ｓ，１Ｈ，５’ＯＨ）５．８４（ｂｒ−ｓ，１Ｈ，２’ＯＨ）５．９０（ｄ，Ｊ＝６．８Ｈｚ，１Ｈ，１’−Ｈ，）８．６８（ｓ，１Ｈ，Ｈ−６）１０．９５（ｂｒ−ｓ，１Ｈ，ＮＨ）
＜合成例６＞　３’−デオキシ−３’−フルオロ−５−ブロモウリジンの合成
合成例２の５−フロロウラシルの代わりに、５−ブロモウラシルを用いた他は同様にして、目的化合物を得た。
１Ｈ−ＮＭＲ　２７０ＭＨｚ（ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ　ｐｐｍ　３．５０−３．７０（ｍ，２Ｈ，Ｈ−５’）４．１０−４．２５（ｍ，１Ｈ，Ｈ−４’）４．１０−４．３０（ｍ，１Ｈ，Ｈ−２’）４．９６（ｄｄ，Ｊ＝３．６Ｈｚ，５４．１Ｈｚ，１Ｈ，Ｈ−３’）５．４２（ｂｒ−ｓ，１Ｈ，５’ＯＨ）５．８６（ｂｒ−ｓ，１Ｈ，２’ＯＨ）５．８８（ｄ，Ｊ＝６．８Ｈｚ，１Ｈ，１’−Ｈ）８．３４（ｓ，１Ｈ，Ｈ−６）
＜合成例７＞　３’−デオキシ−３’−フルオロ−６−アザウリジンの合成
合成例２の５−フロロウラシルの代わりに、６−アザモウラシルを用いた他は同様にして、目的化合物を得た。
１Ｈ−ＮＭＲ　２７０ＭＨｚ（ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ　ｐｐｍ　３．２８−３．５０（ｍ，２Ｈ，Ｈ−５’）４．００−４．１６（ｍ，１Ｈ，Ｈ−４’）４．４０−４．６２（ｍ，１Ｈ，Ｈ−２’）４．８９（ｔ，Ｊ＝５．１Ｈｚ，１Ｈ，５’ＯＨ）５．００（ｄｄ，Ｊ＝４．３Ｈｚ，５４．１Ｈｚ，１Ｈ，Ｈ−３’）５．７７（ｄ，Ｊ＝６．１Ｈｚ，１Ｈ，２’ＯＨ）５．９１（ｄ，Ｊ＝６．８Ｈｚ，１Ｈ，１’−Ｈ）７．６１（ｓ，１Ｈ，Ｈ−６）１２．３３（ｂｒ−ｓ，１Ｈ，ＮＨ）
＜合成例８＞　３’−デオキシ−３’−フルオロ−２−チオウリジンの合成
合成例２の５−フロロウラシルの代わりに、２−チオウラシルを用いた他は同様にして、目的化合物を得た。
１Ｈ−ＮＭＲ　２７０ＭＨｚ（ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ　ｐｐｍ　３．５０−３．７０（ｍ，２Ｈ，Ｈ−５’）４．１５−４．２５（ｍ，１Ｈ，Ｈ−４’）４．２０−４．３０（ｍ，１Ｈ，Ｈ−２’）４．９６（ｄｄ，Ｊ＝４．５Ｈｚ，５３．６Ｈｚ，１Ｈ，Ｈ−３’）５．３８（ｔ，Ｊ＝４．９Ｈｚ，１Ｈ，５’ＯＨ）５．８６（ｄ，Ｊ＝６．１Ｈｚ，１Ｈ，２’ＯＨ）６．０６（ｄ，Ｊ＝８．１Ｈｚ，１Ｈ，５−Ｈ）６．８９（ｄ，７．３Ｈｚ　１Ｈ，１’−Ｈ）８．０１（ｄ，Ｊ＝８．１Ｈｚ，１Ｈ，Ｈ−６）１２．６９（ｂｒ−ｓ，１Ｈ，ＮＨ）．　ＵＶ：λ　ｍａｘ　２７８ｎｍ
＜合成例９＞　３’−デオキシ−３’−フルオロ−４−チオウリジンの合成
合成例２の５−フロロウラシルの代わりに、４−チオウラシルを用いた他は同様にして、目的化合物を得た。
１Ｈ−ＮＭＲ　３００ＭＨｚ（ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ　ｐｐｍ　３．５−３．７（ｍ，２Ｈ，Ｈ−５’）４．１７−４．２６（ｍ，１Ｈ，Ｈ−４’）４．２０−４．３０（ｍ，１Ｈ，Ｈ−２’）５．００（ｄｄ，Ｊ＝４．１Ｈｚ，５８．５Ｈｚ，１Ｈ，Ｈ−３’）５．３１（ｂｒ，１Ｈ，５’ＯＨ）５．８６（ｄ，Ｊ＝６．１Ｈｚ，１Ｈ，２’ＯＨ）５．８９（ｄ，７．７Ｈｚ　１Ｈ，１’−Ｈ）６．４０（ｄ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，１Ｈ，５−Ｈ）７．７５（ｄ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，１Ｈ，Ｈ−６）１２．７９（ｂｒ，１Ｈ，ＮＨ）．　ＵＶ：λ　ｍａｘ　３２７ｎｍ
＜合成例１０＞　１−（３’−デオキシ−３’−フルオロ−β−Ｌ−リボフラノシル）ウラシルの合成
１−（３’−デオキシ−３’−フルオロ−β−Ｌ−リボフラノシル）ウラシルは、特開昭６２−８１３９７およびＪ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．３４，２１９５（１９９１）の合成例に従ってＬ−キシロース（東京化成）を原料に製造した。
１Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ　３．５−３．７（ｍ，２Ｈ，Ｈ−５’）４．０５−４．２５（ｍ，１Ｈ，Ｈ−４’）４．１−４．３（ｍ，１Ｈ，Ｈ−２’）４．９３（ｄｄ，Ｊ＝４．２Ｈｚ，５４．９Ｈｚ，１Ｈ，Ｈ−３’）５．２６（ｔ，Ｊ＝５．１Ｈｚ，１Ｈ，５’ＯＨ）５．７０（ｄ，，Ｊ＝８．１Ｈｚ，１Ｈ，Ｈ−５）５．８３（ｄ，Ｊ＝６．３Ｈｚ，１Ｈ，２’ＯＨ）５．８７（ｄ，Ｊ＝７．８Ｈｚ，１Ｈ，Ｈ−１’）７．８１（ｄ，１Ｈ，Ｈ−６）１１．２５（ｂｒ−ｓ，ＮＨ）
比旋光度：［α］Ｄ２６＝＋４２．７０（Ｃ＝０．３，ＤＭＳＯ）
＜合成例１１＞　１−（３’−デオキシ−５、３’−ジフルオロ−β−Ｌ−リボフラノシル）ウラシルの合成
下記の実施例２で使用した１−（３’−デオキシ−５、３’−ジフルオロ−β−Ｌ−リボフラノシル）ウラシルは、特開昭６２−８１３９７およびＪ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．３４，２１９５（１９９１）の合成例に従ってＬ−キシロース（東京化成）を原料に製造した。
５−フルオロウラシル（３７ｍｇ）のアセトニトリル溶液（１．０ｍＬ）に、ビストリメチルシリルアセトアミド（１７２μＬ）を加え、１時間攪拌し、反応液が透明になってから、１−Ｏ−アセチル−２，５−ジ−Ｏ−ベンゾイル−３−デオキシ−３−フルオロ−α、β−Ｌ−リボフラノシル（１１３ｍｇ）のアセトニトリル（１ｍＬ）の溶液を加えた。反応系を氷零下、四塩化すず（４３μＬ）加え、加熱還流攪拌を８時間行った。反応系を冷水に注かし、酢酸エチルにて抽出し、硫酸マグネシウムにて乾燥後、濾過、濃縮し、残さ１５９ｍｇをえた。シリカゲルカラムクロマトグラフィーにて精製し１１９ｍｇを得た。これを、１Ｍ−アンモニウム−メタノールに溶解し、室温にて１５時間攪拌した。反応系を濃縮し、ジエチルエーテルにてけん洗し、表題化合物（１６ｍｇ）を得た。
１Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ　３．５−３．７（ｍ，２Ｈ，Ｈ−５’）４．０５−４．２５（ｍ，１Ｈ，Ｈ−４’）４．１−４．３（ｍ，１Ｈ，Ｈ−２’）４．９４（ｄｄ，Ｊ＝４．１Ｈｚ，５４．５Ｈｚ，１Ｈ，Ｈ−３’）５．４０（ｂｒ−ｓ，１Ｈ，２’ＯＨ）５．８５（ｄ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，１Ｈ，Ｈ−１’）７．９４（ｄ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，１Ｈ，Ｈ−６）
なお、合成例１から合成例１１を含むウリジン誘導体は、生体内で、モノ燐酸、ジ燐酸をへてトリ燐酸化されていると言われているので、以下にウリジン誘導体及びＬ−ウリジン誘導体のトリ燐酸体を合成した。
＜合成例１２＞　３’−デオキシ−３’−フルオロウリジン　５’−トリフォスフェートの合成
Ｄ．Ｂｒｏｏｍらの方法（Ｊ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．，Ｃｈｅｍ．Ｃｏｍｍｕｎ．，１２７６−１２７７（１９９１））に準じて合成した。３’−デオキシ−３’−フルオロウリジン４ｍｇをトリエチルフォスフェート１３０μＬに溶かし、氷冷下トリノルマルブチルアミン２２μＬとオキシ塩化燐７．３μＬを加え、１時間攪拌した。反応をイオン交換型ＨＰＬＣにてチェックし、モノ燐酸体が主成分に成るまでトリノルマルブチルアミンとオキシ塩化燐を適量加える事を繰り返した。この反応液に、ピロ燐酸トリノルマルブチルアンモニウム（２６０μｍｏｌ）のＤＭＦ（３９０μＬ）溶液と、トリノルマルブチルアミン７８μＬを加え、氷冷下さらに１時間攪拌した。０．１Ｍトリエチルアンモニウムビカーボネート水溶液（２．６ｍＬ）を加え反応を止め、ＤＥＡＥセルロースカラムにて目的物を分離し、凍結乾燥後、一定濃度に成る様水に溶かした。
３１Ｐ−ＮＭＲ（ｓｔａｎｄａｒｄ：Ｈ２Ｐ０４，Ｄ２０）δ　−８．９６（ｄｄ），−２１．９２（ｔ）
＜合成例１３＞　３’−デオキシ−５，３’−ジフルオロウリジン　５’−トリフォスフェートの合成
合成例１２と同様の方法にて、表題化合物を合成した。
３１Ｐ−ＮＭＲ（ｓｔａｎｄａｒｄ：Ｈ２Ｐ０４，Ｄ２０）δ　−１０．３４（ｄｄ），−２０．１７（ｔ）
＜合成例１４＞　３’−デオキシ−３’−フルオロ−５−メチルウリジン　５’−トリフォスフェートの合成
合成例１２と同様の方法にて、表題化合物を合成した。
３１Ｐ−ＮＭＲ（ｓｔａｎｄａｒｄ：Ｈ２Ｐ０４，Ｄ２０）δ　ｐｐｍ　−９．４１（ｄｄ），−２２．２７（ｔ）
＜合成例１５＞　３’−デオキシ−３’−フルオロ−５−シアノウリジン　５’−トリフォスフェートの合成
合成例１２と同様の方法にて、表題化合物を合成した。
３１Ｐ−ＮＭＲ（ｓｔａｎｄａｒｄ：Ｈ２Ｐ０４，Ｄ２０）δ　ｐｐｍ　−７．７４（ｄ），−１０．７１（ｄ），−２１．３８（ｔ）
＜合成例１６＞　３’−デオキシ−３’−フルオロ−５−トリフロロメチルウリジン　５’−トリフォスフェートの合成
合成例１２と同様の方法にて、表題化合物を合成した。
３１Ｐ−ＮＭＲ（ｓｔａｎｄａｒｄ：Ｈ２Ｐ０４，Ｄ２０）δ　ｐｐｍ　−６．９９（ｄ），−１１．０４（ｄ），−１９．９８（ｔ）
＜合成例１７＞　３’−デオキシ−３’−フルオロ−５−ブロモウリジン　５’−トリフォスフェートの合成
合成例１２と同様の方法にて、表題化合物を合成した。
３１Ｐ−ＮＭＲ（ｓｔａｎｄａｒｄ：Ｈ２Ｐ０４，Ｄ２０）δ　ｐｐｍ　−９．２３（ｄ），−１０．９４（ｄ），−２１．９５（ｔ）
＜合成例１８＞　３’−デオキシ−３’−フルオロ−６−アザウリジン　５’−トリフォスフェートの合成
合成例１２と同様の方法にて、表題化合物を合成した。
３１Ｐ−ＮＭＲ（ｓｔａｎｄａｒｄ：Ｈ２Ｐ０４，Ｄ２０）δ　ｐｐｍ　−９．７１（ｄ），−１０．７５（ｄ），−２２．２４（ｔ）
＜合成例１９＞　３’−デオキシ−３’−フルオロ−２−チオウリジン　５’−トリフォスフェートの合成
合成例１２と同様の方法にて、表題化合物を合成した。
３１Ｐ−ＮＭＲ（ｓｔａｎｄａｒｄ：Ｈ２Ｐ０４，Ｄ２０）δ　ｐｐｍ　−９．４４（ｄ），−１０．７９（ｄ），−２１．９６（ｔ）
＜合成例２０＞　３’−デオキシ−３’−フルオロ−４−チオウリジン　５’−トリフォスフェートの合成
合成例１２と同様の方法にて、表題化合物を合成した。
３１Ｐ−ＮＭＲ（ｓｔａｎｄａｒｄ：Ｈ２Ｐ０４，Ｄ２０）δ　ｐｐｍ　−７．９１（ｄ），−１０．６０（ｄ），−２１．２０（ｔ）
＜合成例２１＞　１−（３’−デオキシ−３’−フルオロ−β−Ｌ−リボフラノシル）ウラシル　５’−トリフォスフェートの合成
合成例１２と同様の方法にて、表題化合物を合成した。
３１Ｐ−ＮＭＲ（ｓｔａｎｄａｒｄ：Ｈ２Ｐ０４，Ｄ２０）δ　−７．４６（ｄｄ），−２１．７６（ｔ）
＜合成例２２＞　１−（３’−デオキシ−５、３’−フルオロ−β−Ｌ−リボフラノシル）ウラシル　５’−トリフォスフェートの合成
合成例１２と同様の方法にて、表題化合物を合成した。
３１Ｐ−ＮＭＲ（ｓｔａｎｄａｒｄ：Ｈ２Ｐ０４，Ｄ２０）δ　−９．４９（ｄｄ），−２０．６２（ｔ）
＜実施例１＞　Ｈｅｐａｔｉｔｉｓ　Ｃ　ｖｉｒｕｓ（ＨＣＶ）ＲＮＡポリメラーゼ活性阻害効果
上記合成例１２、合成例１３、合成例１９、合成例２１及び合成例２２の化合物のＨＣＶＲＮＡポリメラーゼ活性阻害効果を以下の方法で測定した。
ＨＣＶＲＮＡポリメラーゼの発現・精製は、公知の方法（Ｖ．Ｌｏｈｍａｎ　ｅｔ　ａｌ．，ＶＩＲＯＬＯＧＹ，２４９，１０８−１１８，１９９８）に従った。
精製ＨＣＶＲＮＡポリメラーゼ２００ｎｇを、２０ｍＭ　Ｔｒｉｓ−Ｃｌ（ｐＨ７．５）、５ｍＭ　ＭｇＣｌ２、２５ｍＭ　ＫＣｌ、１０ｕＭ　ＵＴＰ（Ｕｒｉｄｉｎｅ−ｔｒｉｐｈｏｓｐｈａｔｅ：ウリジン３リン酸）、０．２５Ｃｉ／ｍｌ［α−３２Ｐ］ＵＴＰ（Ａｍｅｒｓｈａｍ　ＰＢ１０２０３）を含む水溶液５０ｕｌ中で、鋳型ＲＮＡとして１００ｎｇ／ｍｌ　ｐｏｌｙ（Ａ）ＲＮＡ（ポリアデニンＲＮＡ）及びプライマーＲＮＡとして２５ｎｇ／ｍｌ　１５−ｍｅｒ　ｏｌｉｇｏ（Ｕ）ＲＮＡ（１５塩基のオリゴウリジン　ＴＡＫＡＲＡ　Ｓｈｕｚｏ）と混和した後、合成例１２、合成例１３、合成例１９、合成例２１又は合成例２２の化合物を添加し、３０℃で３０分間ＲＮＡ合成反応を行った。
反応後溶液中のＲＮＡをＤＥ８１ペーパー（Ｗｈａｔｔｍａｎ）に吸着させた後、合成ＲＮＡ中に取り込まれなかった［α−３２Ｐ］ＵＴＰを０．５Ｍリン酸緩衝液で洗い流し、ＤＥ８１ペーパー上の合成ＲＮＡ中に取り込まれた［α−３２Ｐ］ＵＴＰを液体シンチレーションカウンターで定量した。
合成例１２、合成例１３、合成例１９、合成例２１及び合成例２２の化合物の阻害能は、ＨＣＶＲＮＡポリメラーゼを入れない陰性対照を０％、化合物を入れない陽性対照を１００％としたときの５０％阻害濃度で表した。
2002051425.tif 000008
＜実施例２＞　Ｈｅｐａｔｉｔｉｓ　Ｃ　ｖｉｒｕｓ（ＨＣＶ）増殖阻害効果
上記合成例１、合成例２、合成例１０及び合成例１１の化合物のＨＣＶ増殖阻害効果を以下の方法で測定した。
抗ＨＣＶ増殖阻害活性測定は公知の方法（Ｋａｔｏ，Ｎ．ｅｔ．ａｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｓ．Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍｕｎ．２０６，８６３−８６９，１９９５）に従った。
ヒトＴ細胞由来細胞であるＭＴ−２Ｃ細胞（Ｋａｔｏ，Ｎ．ｅｔ．ａｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｓ．Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍｕｎ．２０６，８６３−８６９，１９９５）を、ＦＢＳ（Ｆｏｅｔａｌ　Ｂｏｖｉｎｅ　Ｓｅｒｕｍ，Ｇｉｂｃｏ−ＢＲＬ　１００８２−１４７）を１０％加えたＲＰＭＩ１６４０培地（Ｇｉｂｃｏ−ＢＲＬ　１１８７５−１０１）で培養した。培養したＭＴ−２Ｃ細胞（１Ｘ１０６個）を、ＥＤＴＡ（エチレンジアミン４酢酸）を最終濃度５ｍＭとなるように加えたＦ−１２培地（Ｇｉｂｃｏ−ＢＲＬ　１１０５９−０２９）２００ｕｌに懸濁し、Ｃ型肝炎患者血清２０μｌを加えて２時間、３７℃で感染した。感染後、ＰＢＳ（Ｐｈｏｓｐｈａｔｅ　ｂｕｆｆｅｒｅｄ　ｓａｌｉｎｅ）１ｍｌで３回洗浄し、ＦＢＳ１０％を加えたＲＰＭＩ培地６ｍｌに懸濁、４８ｗｅｌｌ培養プレートにまき、ＣＯ２インキュベーターで３２℃、３日間培養した。
ＤＭＳＯ（Ｄｉｍｅｔｈｙｌ　Ｓｕｌｆｏｘｉｄｅ）に溶解した合成例１、合成例２、合成例１０、又は合成例１１の化合物を培地の１０００分の１量加えて３日間培養し、同化合物濃度に調整した培地を各ｗｅｌｌ倍量ずつ加えて更に４日間培養した。各検体毎に細胞を回収し、すべての細胞ＲＮＡを精製した。ＲＮＡ精製にはＩＳＯＧＥＮ（ニッポンジーン　３１１−０２５０１）を用いた。精製ＲＮＡ中のＨＣＶＲＮＡゲノムを定量するために以下の操作を行った。
１μｇの精製ＲＮＡを用いて全量２０ｕｌで３７℃で１時間、逆転写反応を行い、続けて１００℃で３０分、逆転写酵素不活化処理を行った。逆転写酵素としてはＳｕｐｅｒＳｃｒｉｐｔＴＭＩＩ（Ｇｉｂｃｏ　ＢＲＬ　１８０６４−０１４）、プライマーにはＨＣＶ−Ｊ株（Ｋａｔｏ，Ｎ．ｅｔ．ａｌ．Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ８７，９５２４−９５２８，１９９０）の塩基番号３１７番から３３６番の配列に相補的な２０塩基のｏｌｉｇｏＤＮＡ（Ｇｉｂｃｏ　ＢＲＬ）を用いた。
逆転写反応産物を滅菌蒸留水で３倍・１０倍・３０倍・１００倍に希釈した。希釈した逆転写反応産物３μｌを用いて、全量５０μｌで第一次ＰＣＲ（Ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ　Ｃｈａｉｎ　Ｒｅａｃｔｉｏｎ）反応（９４℃　１分、５８℃　４５秒、７２℃　１分を３４サイクル、９４℃　１分、５８℃　１分４０秒、７２℃　８分を１サイクル）を行った。ＤＮＡ合成酵素としてはＥＸ−Ｔａｑ（ＴＡＫＡＲＡ　ＲＲ００１Ａ）、プライマーとしてはＨＣＶ−Ｊ株の塩基番号７１番から９０番の配列の２０塩基ｏｌｉｇｏＤＮＡ（Ｇｉｂｃｏ　ＢＲＬ）及び塩基番号３１７番から３３６番の配列に相補的な２０塩基ｏｌｉｇｏＤＮＡ（Ｇｉｂｃｏ　ＢＲＬ）を用いた。
第一次ＰＣＲ反応産物２μｌを用いて、全量５０μｌで第二次ＰＣＲ反応（９４℃　１分、５８℃　４５秒、７２℃　１分を３４サイクル、９４℃　１分、５８℃　１分４０秒、７２℃　８分を１サイクル）を行った。ＤＮＡ合成酵素としてはＥＸ−Ｔａｑ（ＴＡＫＡＲＡ）、プライマーとしてはＨＣＶ−Ｊ株の塩基番号１２２番から１４１番の配列の２０塩基ｏｌｉｇｏＤＮＡ（Ｇｉｂｃｏ　ＢＲＬ）及び塩基番号２４６番から２６５番の配列に相補的な２０塩基ｏｌｉｇｏＤＮＡ（Ｇｉｂｃｏ　ＢＲＬ）を用いた。
第二次ＰＣＲ反応産物５μｌを３％　アガロースゲルで電気泳動し、エチジウムブロマイドで染色してＤＮＡ断片を検出した。
その結果、図１に示すように、化合物を入れない陰性対照−検体１）、２）が、３０倍または１００倍希釈までＨＣＶゲノムが検出できるのに対して、合成例１の化合物を加えた検体では、０．１μＭ添加−検体３）、４）で１０倍または３０倍まで、１．０μＭ添加−検体５）、６）で３倍または１０倍まで、１０μＭ添加−検体７）、８）で３倍までまたは３倍で検出されず、とＨＣＶゲノム検出限界希釈度が、化合物濃度に応じて低下していくことがわかった。また、合成例２の化合物を加えた検体でも、１．０μＭ添加−検体９）、１０）で１０倍または３０倍まで、１０μＭ添加−検体１１）、１２）で３倍までまたは３倍で検出されず、とＨＣＶゲノム検出限界希釈度が、化合物濃度に応じて低下していくことがわかった。このとき、各検体の全ＲＮＡ収量にほとんど変化はなかったことより、これらの化合物は細胞を傷害することなく、細胞内でのＨＣＶの増殖を阻害していると考えられた。
また、図２に示すように、化合物を入れない陰性対照−検体１）、２）、３）、４）が、１０倍または３０倍希釈までＨＣＶゲノムが検出できるのに対して、合成例１０の化合物を加えた検体１μＭ添加−検体５）、６）、１０μＭ添加−検体７）、８）及び合成例１１の化合物を加えた検体１μＭ添加−検体９）、１０）、１０μＭ添加−検体１１）、１２）ではそれぞれ１０倍希釈の１検体を除いてはＨＣＶゲノムが検出されなかった。このとき、各検体の全ＲＮＡ収量にほとんど変化はなかったことより、これらの化合物は細胞を傷害することなく、細胞内でのＨＣＶの増殖を阻害していると考えられた。
産業上の利用可能性
本発明によれば、ＨＣＶに起因するＣ型肝炎治療を目的とした、副作用の少ない優れたＣ型肝炎治療剤が提供される。
なお、本出願は、日本特許出願　特願２０００−３９４６２０号、特願２００１−２３５４２号、及び特願２００１−１０５５８５号を優先権主張して出願されたものである。
【図面の簡単な説明】
第１図は、合成例１の化合物を添加した検体、合成例２の化合物を添加した検体、本発明の化合物を添加しない検体の「ＨＣＶゲノム検出限界希釈度（倍）」を表す電気泳動写真、及び「細胞の全ＲＮＡ量（μｇ）」を示す。
第２図は、合成例１０の化合物を添加した検体、合成例１１の化合物を添加した検体、本発明の化合物を添加しない検体の「ＨＣＶゲノム検出限界希釈度（倍）」を表す電気泳動写真、及び「細胞の全ＲＮＡ量（μｇ）」を示す。
【図１】
2002051425.tif 000013
【図２】
2002051425.tif 000014
【国際調査報告】
2002051425.tif 000015
2002051425.tif 000016
2002051425.tif 000017