(57)【要約】Ｎ−［６−メトキシ−５−（２−メトキシフェノキシ）−２−（ピリミジン−２−イル）ピリミジン−４−イル］−２−フェニルエテンスルホンアミド又はその製薬学的に許容される塩の新規な用途。糖尿病患者における以下の特定症状の改善。（１）血糖上昇、（２）早期腎症併発後の血中脂質上昇、（３）早期腎症併発後の腎機能障害、（４）早期腎症併発後の尿中アルブミン排泄増加、（５）早期腎症併発後の糸球体過濾過、（６）慢性腎不全移行後の腎機能障害、（７）慢性腎不全移行後の尿中タンパク排泄増加。【特許請求の範囲】
【請求項１】
Ｎ−［６−メトキシ−５−（２−メトキシフェノキシ）−２−（ピリミジン−２−イル）ピリミジン−４−イル］−２−フェニルエテンスルホンアミド又はその製薬学的に許容される塩を有効成分として含有する糖尿病患者の以下の（１）〜（７）から選択される１つ以上の特定症状の改善用医薬組成物。
（１）血糖上昇
（２）早期腎症併発後の血中脂質上昇
（３）早期腎症併発後の腎機能障害
（４）早期腎症併発後の尿中アルブミン排泄増加
（５）早期腎症併発後の糸球体過濾過
（６）慢性腎不全移行後の腎機能障害
（７）慢性腎不全移行後の尿中タンパク排泄増加
【請求項２】
糖尿病患者の血糖上昇改善用医薬組成物である請求の範囲１記載の医薬組成物。
【請求項３】
早期腎症併発後の糖尿病患者の血中脂質上昇改善用医薬組成物である請求の範囲１記載の医薬組成物。
【請求項４】
早期腎症併発後の糖尿病患者の腎機能障害改善用医薬組成物である請求の範囲１記載の医薬組成物。
【請求項５】
早期腎症併発後の糖尿病患者の尿中アルブミン排泄増加改善用医薬組成物である請求の範囲４記載の医薬組成物。
【請求項６】
早期腎症併発後の糖尿病患者の糸球体過濾過改善用医薬組成物である請求の範囲４記載の医薬組成物。
【請求項７】
慢性腎不全移行後の糖尿病患者の腎機能障害改善用医薬組成物である請求の範囲１記載の医薬組成物。
【請求項８】
慢性腎不全移行後の糖尿病患者の尿中タンパク排泄増加改善用医薬組成物である請求の範囲７記載の医薬組成物。
【請求項９】
Ｎ−［６−メトキシ−５−（２−メトキシフェノキシ）−２−（ピリミジン−２−イル）ピリミジン−４−イル］−２−フェニルエテンスルホンアミド又はその製薬学的に許容される塩を有効成分として含有する糖尿病性腎症患者の腎機能障害改善用医薬組成物。
【請求項１０】
糖尿病性腎症患者の尿中アルブミン排泄増加改善用医薬組成物である請求の範囲９記載の医薬組成物。
【請求項１１】
糖尿病性腎症患者の糸球体過濾過改善用医薬組成物である請求の範囲９記載の医薬組成物。
【請求項１２】
Ｎ−［６−メトキシ−５−（２−メトキシフェノキシ）−２−（ピリミジン−２−イル）ピリミジン−４−イル］−２−フェニルエテンスルホンアミド又はその製薬学的に許容される塩を有効成分として含有するＥＴ誘発性早期腎症患者の腎機能障害改善用医薬組成物。
【請求項１３】
ＥＴ誘発性早期腎症患者の尿中アルブミン排泄増加改善用医薬組成物である請求の範囲１２記載の医薬組成物。
【請求項１４】
ＥＴ誘発性早期腎症患者の糸球体過濾過改善用医薬組成物である請求の範囲１２の医薬組成物。
【請求項１５】
Ｎ−［６−メトキシ−５−（２−メトキシフェノキシ）−２−（ピリミジン−２−イル）ピリミジン−４−イル］−２−フェニルエテンスルホンアミド又はその製薬学的に許容される塩を有効成分として含有する慢性腎不全患者の腎機能障害改善用医薬組成物。
【請求項１６】
慢性腎不全患者の尿中タンパク排泄増加改善用医薬組成物である請求の範囲１５記載の医薬組成物。
【請求項１７】
全身血圧を変化させない請求の範囲１〜請求の範囲１６に記載の医薬組成物。
【請求項１８】
経口投与剤である請求の範囲１〜請求の範囲１７に記載の医薬組成物。
【発明の詳細な説明】
技術分野
本発明は、Ｎ−［６−メトキシ−５−（２−メトキシフェノキシ）−２−（ピリミジン−２−イル）ピリミジン−４−イル］−２−フェニルエテンスルホンアミド又はその塩の新規な用途に係るものである。
背景技術
エンドセリン（以下、「ＥＴ」という。）はアミノ酸２１個よりなる内因性の生理活性ペプチドであり、アミノ酸配列がわずかに異なる、ＥＴ−１、ＥＴ−２及びＥＴ−３の３種のイソペプチドの存在が知られている。ＥＴは、標的細胞膜上のＥＴ受容体と結合することによりその生理活性を発現し、ＥＴ受容体としては、いままでに少なくとも、ＥＴＡ及びＥＴＢの２種のサブタイプが存在することが知られている。ＥＴＡ受容体はＥＴ−３よりもＥＴ−１及びＥＴ−２に対して高い親和性を示し、ＥＴＢ受容体はＥＴ−１、ＥＴ−２及びＥＴ−３に対して同等の親和性を示す。
Ｎ−［６−メトキシ−５−（２−メトキシフェノキシ）−２−（ピリミジン−２−イル）ピリミジン−４−イル］−２−フェニルエテンスルホンアミド（以下、「化合物Ａ」という。）又はその塩は、国際公開第９７／２２５９５号公報に開示されており、ＥＴＡ受容体に対するＥＴ−１の結合抑制作用、及びＥＴ−１誘発性の血管収縮・昇圧に対する抑制作用が具体的に開示されているが、それ以外の作用については具体的開示はない。その一方、ＥＴが関与している可能性が指摘されている疾患として、例えば、本態性高血圧、肺性高血圧、エリスロポエチン誘発高血圧、サイクロスポリンＡ誘発高血圧、気管支喘息、急性腎不全、慢性腎不全、糸球体腎炎、サイクロスポリン誘発腎不全、急性心筋梗塞、不安定狭心症、慢性心不全、主としてくも膜下出血後の脳血管れん縮、脳虚血障害、尿失禁、良性前立腺肥大、動脈硬化、レイノー症候群、糖尿病性末梢循環障害、糖尿病性腎症、子癇前症、早産、消化性かいよう、肝不全、リウマチ、ＰＴＣＡ後の再狭窄、慢性呼吸不全、慢性閉塞性肺疾患、肺性心、急性呼吸不全、肺水腫、阻血性肝障害、成人呼吸促迫症候群、間質性肺炎、肺繊維症、緑内障、変形性関節症、慢性関節リウマチ、肝硬変、炎症性腸疾患、癌等の多数の疾患名が挙げられている。
発明の開示
本発明者は、新規な治療薬の創製を目的として、化合物Ａ又はその塩のさらに具体的な疾患に対する治療可能性について鋭意検討を行った結果、意外にも化合物Ａ又はその塩が、前記国際公開第９７／２２５９５号公報に具体的に開示されていない、糖尿病の以下の特定症状を改善することを見出した。即ち、糖尿病における、（１）血糖上昇、（２）早期腎症併発後の血中脂質上昇、（３）早期腎症併発後の腎機能障害、（４）早期腎症併発後の尿中アルブミン排泄増加、（５）早期腎症併発後の糸球体過濾過、（６）慢性腎不全移行後の腎機能障害、（７）慢性腎不全移行後の尿中タンパク排泄増加である。
即ち、詳細には、化合物Ａ又はその塩は、後記試験例１に示すように、ストレプトゾトシン（ＳＴＺ）誘発糖尿病ラットにおいて、１ｍｇ／ｋｇ／ｄａｙ  ｐ．ｏ．でＳＴＺ投与による有意な血中グルコース濃度上昇、血中コレステロール濃度上昇及び血中トリグリセリド濃度上昇に対して有意な改善作用を示した。なお、血中コレステロール濃度又は血中トリグリセリド濃度の上昇は、腎機能障害によるアルブミン等のタンパク漏出の結果として、糖尿病の早期腎症併発時の病態によく認められる。
これらの改善作用は、上記国際公開第９７／２２５９５号公報には開示も示唆もされておらず、本発明者によって初めて見出された化合物Ａ又はその塩の新規な作用である。さらに、ＥＴＡ受容体拮抗作用を有する直鎖トリペプチド化合物であるＦＲ１３９３１７及び非ペプチド性ＥＴＡ／Ｂ受容体拮抗薬であるボセンタンは、ＳＴＺ誘発糖尿病ラットにおいて血漿グルコース濃度を変化させないこと（Ｐｒｏｇｒｅｓｓ  ｉｎ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，１５（１０），２１０８，１９９５、Ｋｉｄｎｅｙ  Ｉｎｔ．，５７（５），１８８２，２０００）、非ペプチド性ＥＴＡ受容体拮抗薬であるダルセンタンは１００ｍｇ／ｋｇ  ｐ．ｏ．において血中トリグリセリドレベルを低下させ（但し、ＳＴＺ誘発糖尿病ラットでトリグリセリドレベルは上がっておらず、コントロール群に比してトリグリセリドレベルが低下しているにすぎない）、血中グルコース濃度は変化させないこと（Ｊ．Ｐｈａｒｍ．Ｅｘｐ．Ｔｈｅｒ．，２９３（２），３５１，２０００）が報告されている。即ち、ＥＴ受容体拮抗薬における、糖尿病における血糖上昇の改善作用に関する報告、及び早期腎症併発後の糖尿病における血中脂質上昇の改善作用に関する報告はない。
また、化合物Ａ又はその塩は、後記試験例１に示すように、ＳＴＺ誘発糖尿病ラットにおいて、１ｍｇ／ｋｇ／ｄａｙ  ｐ．ｏ．でＳＴＺ投与により有意に増加した尿中アルブミン排泄に対する有意な改善作用、及びＳＴＺ投与による有意な糸球体過濾過に対する改善傾向、即ち、腎機能障害改善作用を示した。また、化合物Ａ又はその塩は、後記試験例２に示すように、慢性腎不全のモデル動物である５／６腎摘出ラットにおいて有意に増加した尿中タンパク排泄に対して、血圧に影響を与えることなく、１ｍｇ／ｋｇ／ｄａｙ  ｐ．ｏ．で有意な改善作用、即ち、腎機能障害改善作用を示した。
上記国際公開第９７／２２５９５号公報に記載されている、期待される多数の疾患名の一つとして、上記の早期腎症を併発した、あるいは慢性腎不全へ移行した糖尿病における腎機能障害改善作用に関連し、「糖尿病性腎症」「慢性腎不全」「急性腎不全」が挙げられているが、その裏付けは開示されておらず、尿中アルブミン排泄増加改善作用、糸球体過濾過改善作用、尿中タンパク排泄増加改善作用に関しては、全く記載されていない。さらに、上記ペプチド性ＦＲ１３９３１７の腹腔内持続注入が、ＳＴＺ誘発糖尿病性ラットにおいて微量アルブミン尿の軽減と腎糸球体の細胞外マトリックス遺伝子発現を抑制したとの報告（Ｄｉａｂｅｔｅｓ，４４，８９５−８９９，１９９５）はあるが、経口投与可能な非ペプチド性ＥＴ受容体拮抗剤に関しては、上記ダルセンタンが、本発明の有効成分に比べて極めて高用量である１００ｍｇ／ｋｇ／ｄａｙの１６０日間投与により、ＳＴＺ誘発糖尿病ラットの微量アルブミン尿を軽減させる傾向があること（Ｊ．Ｃａｒｄｉｏｖａｓｃ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．，３１（Ｓｕｐｐｌ  １），Ｓ４９２−Ｓ４９５，１９９８）が報告されているのみである。また、慢性腎不全は、進行性の慢性腎疾患の一つである糖尿病性腎症の最終臨床像としても捉えられ、糖尿病性腎症から慢性腎不全への移行後、透析療法期へと至る（腎と透析，４１，腎疾患治療マニュアル，１９１−１９３，１９９６臨増）が、ＥＴＡ受容体拮抗薬の経口投与が慢性腎不全の尿中タンパク排泄増加を改善したとの報告はない。
また、化合物Ａ又はその塩は、後記試験例３に示すように、１００ｍｇ／ｋｇ  ｐ．ｏ．の高用量投与においても、高血圧自然発症ラット（ＳＨＲ）の全身血圧を変化させることはなかった。
糖尿病性腎症の現行治療として、ＡＣＥ阻害剤やカルシウム拮抗剤等の降圧療法が行われているが、全身血行動態に影響を与える降圧剤は、血圧低下と共に腎灌流圧をも低下させるおそれがある。特に、腎機能低下例では、ＡＣＥ阻害薬による急性腎不全に対して注意が必要であるとされている（最新医学，４８（９），８４−９０，１９９３、治療学，３０（８），２７−３２，１９９６）。また、保存期慢性腎不全の薬物治療としてもＡＣＥ阻害剤の有用性が動物実験において示されているが、腎機能低下例での急性腎不全に対して臨床において特に注意が必要とされることから、末期腎不全へのＡＣＥ阻害剤の処方は制限される。なお、後記試験例２、即ち腎機能低下例への投与において、ＡＣＥ阻害剤であるエナラプリルを投与した群に２例の死亡例が観察されたが、本発明の有効成分を投与した群に死亡例は観察されなかった。
糖尿病患者や糖尿病モデル動物ではＥＴ−１産生が亢進しており、（Ｄｉａｂｅｔｏｌｏｇｉａ，３３，３０６−３１０，１９９０、Ｊ．Ｌａｂ．Ｃｌｉｎ．Ｍｅｄ．，１２２，１４９−１５６，１９９３）、腎症の重症度と血中ＥＴ−１濃度は相関している（Ｊｐｎ．Ｊ．Ｎｅｐｈｒｏｌ．，３８（Ｓｕｐｐｌ  １），１４１，１９９６）。また、ＥＴ−１は腎血管を含む血管内皮細胞及び腎糸球体、集合管等の腎臓局所において産生され（Ｋｉｄｎｅｙ  Ｉｎｔ．，４５，３３６−３４４，１９９４）、腎臓の細動脈（輸入並びに輸出細動脈）を収縮させること、腎糸球体メサンギウム細胞の収縮や増殖を引き起こすと共に、細胞外マトリックスを蓄積させること（血管と内皮，２（３），２９７−３０４，１９９２、Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．，８３，７０８−７１２，１９８９）、腎尿細管においてナトリウムや水の再吸収を抑制することも報告されている（医学のあゆみ，１７０（５），３９３−３９６，１９９４）。糸球体メサンギウム細胞の増殖はメサンギウム領域の拡大から糸球体硬化病変への進行の前段階であり、最終的な腎機能低下を招く一因となる。化合物Ａ又はその塩は、後記試験例４に示すように、ラット腎糸球体メサンギウム細胞のＥＴ−１による細胞増殖に対して抑制作用、即ち、ＥＴによって誘発される基質的変化を伴った腎機能障害、例えば、糖尿病性腎症、ＥＴ誘発性早期腎症、糖尿病性合併症の最終臨床像として捉えられる糸球体硬化病変を伴った慢性腎不全等、による腎機能障害の改善作用を示した。
即ち、本発明によれば、化合物Ａ又はその製薬学的に許容される塩を有効成分として含有する、糖尿病患者の以下の（１）〜（７）から選択される１つ以上の特定症状の改善用医薬組成物が提供される。
（１）血糖上昇
（２）早期腎症併発後の血中脂質上昇
（３）早期腎症併発後の腎機能障害
（４）早期腎症併発後の尿中アルブミン排泄増加
（５）早期腎症併発後の糸球体過濾過
（６）慢性腎不全移行後の腎機能障害
（７）慢性腎不全移行後の尿中タンパク排泄増加
詳細には、本発明によれば、化合物Ａ又はその製薬学的に許容される塩を有効成分として含有する、
糖尿病患者の血糖上昇改善用医薬組成物；
早期腎症併発後の糖尿病患者の血中脂質上昇改善用医薬組成物、腎機能障害改善用医薬組成物、尿中アルブミン排泄増加改善用医薬組成物である腎機能障害改善用医薬組成物及び／又は糸球体過濾過改善用医薬組成物である腎機能障害改善用医薬組成物；
慢性腎不全移行後の糖尿病患者の腎機能障害改善用医薬組成物及び／又は尿中タンパク排泄増加改善用医薬組成物である腎機能障害改善用医薬組成物；
糖尿病性腎症患者の腎機能障害改善用医薬組成物、尿中アルブミン排泄増加改善用医薬組成物である腎機能障害改善用医薬組成物及び／又は糸球体過濾過改善用医薬組成物である腎機能障害改善用医薬組成物；
ＥＴ誘発性早期腎症患者の腎機能障害改善用医薬組成物、尿中アルブミン排泄増加改善用医薬組成物である腎機能障害改善用医薬組成物及び／又は糸球体過濾過改善用医薬組成物である腎機能障害改善用医薬組成物；
慢性腎不全患者の腎機能障害改善用医薬組成物及び／又は尿中タンパク排泄増加改善用医薬組成物である腎機能障害改善用医薬組成物；が提供される。
また、本発明は、糖尿病患者の上記（１）〜（７）から選択される１つ以上の特定症状の改善剤の製造のための化合物Ａ又はその製薬学的に許容される塩の使用に関する。
詳細には、本発明は、
糖尿病患者の血糖上昇改善剤；
早期腎症併発後の糖尿病患者の血中脂質上昇改善剤、腎機能障害改善剤、尿中アルブミン排泄増加改善剤である腎機能障害改善剤及び／又は糸球体過濾過改善剤である腎機能障害改善剤；
慢性腎不全移行後の糖尿病患者の腎機能障害改善剤及び／又は尿中タンパク排泄増加改善剤である腎機能改善剤；
糖尿病性腎症患者の腎機能障害改善剤、尿中アルブミン排泄増加改善剤である腎機能障害改善剤及び／又は糸球体過濾過改善剤である腎機能障害改善剤；
ＥＴ誘発性早期腎症患者の腎機能障害改善剤、尿中アルブミン排泄増加改善剤である腎機能障害改善剤及び／又は糸球体過濾過改善剤である腎機能障害改善剤；
慢性腎不全患者の腎機能障害改善剤及び／又は尿中タンパク排泄増加改善剤である腎機能障害改善剤；の製造のための化合物Ａ又はその製薬学的に許容される塩の使用に関する。
また、本発明によれば、化合物Ａ又はその製薬学的に許容される塩の治療有効量を患者に投与することを含む、糖尿病患者の上記（１）〜（７）から選択される１つ以上の特定症状の改善方法が提供される。
詳細には、本発明によれば、化合物Ａ又はその製薬学的に許容される塩の治療有効量を患者に投与することを含む、
糖尿病患者の血糖上昇改善方法；
早期腎症併発後の糖尿病患者の血中脂質上昇改善方法、腎機能障害改善方法、尿中アルブミン排泄増加改善方法である腎機能障害改善方法及び／又は糸球体過濾過改善方法である腎機能障害改善方法；
慢性腎不全移行後の糖尿病患者の腎機能障害改善方法及び／又は尿中タンパク排泄増加改善方法である腎機能障害改善方法；
糖尿病性腎症患者の腎機能障害改善方法、尿中アルブミン排泄増加改善方法である腎機能障害改善方法及び／又は糸球体過濾過改善方法である腎機能障害改善方法；
ＥＴ誘発性早期腎症患者の腎機能障害改善方法、尿中アルブミン排泄増加改善方法である腎機能障害改善方法及び／又は糸球体過濾過改善方法である腎機能障害改善方法；
慢性腎不全患者の腎機能障害改善方法及び／又は尿中タンパク排泄増加改善方法である腎機能障害改善方法；が提供される。
なお、糖尿病性腎症の現行治療として行われている降圧療法では、全身血行動態に影響を与え、血圧低下とともに腎灌流圧の低下が危惧されるが、本発明の有効成分はそのような危惧がない程度しか全身血圧を変化させないため、そのような危惧のある患者に対しても投与可能である薬剤となりうる。さらに、本発明の有効成分は、特に経口吸収性に優れるため、優れた経口治療薬となりうる。
本発明をさらに詳細に説明すると次の通りである。
繁田らの平成３年度厚生省糖尿病調査研究報告書によれば、腎症はその進行に伴い、第１期（腎症前期）、第２期（早期腎症期）、第３期（顕性腎症期）、第４期（腎不全期）、第５期（透析療法期）に分類される。従って、本明細書において「早期腎症併発後の糖尿病患者」とは、糖尿病に併発した腎症が第２期以降にある患者を；「慢性腎不全移行後の糖尿病患者」とは、糖尿病に併発した腎症が第４期以降にある患者を；「ＥＴ誘発性早期腎症患者」とは、糖尿病等におけるＥＴの亢進を原因とした腎症が第２期以降にある患者を指す。
また、本明細書において「全身血圧を変化させない」とは、糖尿病性腎症の現行治療として行われている降圧療法では、全身血行動態に影響を与え、血圧低下とともに腎灌流圧の低下が危惧されるが、そのような危惧がない程度しか全身血圧を変化させないことを示す。従って、「全身血圧を変化させない腎機能障害改善用医薬組成物」とは、腎機能低下例等、急性腎不全を引き起こすことが危惧されるため、ＡＣＥ阻害剤等の投与が禁忌あるいは躊躇される場合においても投与可能な腎機能障害改善用医薬組成物を指す。
本発明の医薬の有効成分は、化合物Ａ又はその製薬学的に許容される塩である。かかる塩とは、前記国際公開第９７／２２５９５号公報に記載された塩が挙げられ、具体的には、塩酸、臭化水素酸、ヨウ化水素酸、硫酸、硝酸、リン酸等の無機酸や、ギ酸、酢酸、プロピオン酸、シュウ酸、マロン酸、コハク酸、フマル酸、マレイン酸、乳酸、リンゴ酸、酒石酸、クエン酸、メタンスルホン酸、エタンスルホン酸、アスパラギン酸又はグルタミン酸等の有機酸との酸付加塩、ナトリウム、カリウム、マグネシウム、カルシウム、アルミニウム等の無機塩基、メチルアミン、エチルアミン、エタノールアミン、リジン、オルニチン等の有機塩基との塩やアンモニウム塩等が挙げられる。特に好ましいものとしてカリウム塩が挙げられる。
また、本発明の有効成分には、各種異性体の混合物及びその単離されたもの、水和物、溶媒和物の全てが含まれる。また本発明有効成分は結晶多形を有する場合もあり、それら結晶形の全てを包含する。
これらの化合物は前記国際公開第９７／２２５９５号公報に記載された製法により、あるいはそれに準じて容易に入手可能である。
本発明の薬剤は、経口又は非経口投与に適した有機又は無機の担体、賦形剤、その他の添加剤を用いて、常法に従って、経口固形製剤、経口液状製剤又は注射剤として調製することができる。本発明の医薬の有効成分は優れた経口吸収性を有することから、本発明の薬剤は経口製剤に適する。最も好ましいのは患者が自ら容易に服用できかつ保存、持ち運びに便利な経口固形製剤である。
経口固形製剤としては、錠剤、散剤、細粒剤、顆粒剤、カプセル剤、丸剤、徐放剤等が用いられる。このような固体組成物においては、１種以上の活性物質が、少なくとも１種の不活性な希釈剤、例えば乳糖、マンニトール、ブドウ糖、ヒドロキシプロピルセルロース、微結晶セルロース、デンプン、コーンスターチ、ポリビニルピロリドン、メタケイ酸アルミン酸マグネシウム等と混合される。組成物は常法に従って、不活性な希釈剤以外の添加剤、例えばヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロースのような結合剤；ステアリン酸マグネシウム、ポリエチレングリコール、スターチ、タルクのような潤滑剤；繊維素グリコール酸カルシウム、カルメロースカルシウムのような崩壊剤；ラクトースのような安定化剤；グルタミン酸又はアスパラギン酸のような溶解補助剤；ポリエチレングリコールのような可塑剤；酸化チタン、タルク、黄色酸化鉄のような着色剤；を含有していてもよい。錠剤又は丸剤は必要によりショ糖、ゼラチン、寒天、ペクチン、ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロースフタレート等の糖衣又は胃溶性若しくは腸溶性のフィルムで被覆してもよい。
経口液状製剤は、薬剤学的に許容される乳濁剤、溶液剤、懸濁剤、シロップ剤、エリキシル剤等を含み、一般的に用いられる不活性な希釈剤、例えば精製水、エタノールを含む。この組成物は不活性な希釈剤以外に湿潤剤、懸濁剤のような補助剤、甘味剤、風味剤、芳香剤、防腐剤を含有していてもよい。
静脈注射、筋肉注射、皮下注射等の注射剤としては、無菌の水性又は非水性の溶液剤、懸濁剤、乳濁剤を含有する。水性の溶液剤、懸濁剤の希釈剤としては、例えば注射用蒸留水及び生理食塩水が含まれる。非水性の溶液剤、懸濁剤の希釈剤としては、例えばプロピレングリコール、ポリエチレングリコール、オリーブ油のような植物油、エタノールのようなアルコール類、ポリソルベート８０等がある。このような組成物は、さらに防腐剤、湿潤剤、乳化剤、分散剤、例えばラクトースのような安定剤、例えばグルタミン酸やアスパラギン酸のような溶解補助剤等のような補助剤を含んでいてもよい。これらは例えばバクテリア保留フィルターを通す濾過、殺菌剤の配合又は照射によって無菌化される。これらはまた無菌の固体組成物を製造し、使用前に無菌水又は無菌の注射用溶媒に溶解して使用することもできる。
本発明の有効成分化合物の投与量は、投与ルート、疾患の症状、投与対象の年齢、性別等を考慮して個々の場合に応じて適宜決定されるが、通常経口投与の場合成人１人当たり、有効成分約０．１〜１００ｍｇ／ｄａｙ、好ましくは１〜２０ｍｇ／ｄａｙであり、これを１〜２回に分けて投与することができる。
なお、本発明の薬剤は糖尿病の治療に用いられる他の薬剤と同時に又は時間をおいて併用することができる。例えば、本発明の薬剤を併用することが可能である薬剤として、インスリン、中性インスリン、無晶性インスリン亜鉛水性懸濁、二相性イソフェンインスリン水性懸濁、イソフェンインスリン水性懸濁、インスリン亜鉛水性懸濁、プロタミンインスリン亜鉛水性懸濁、結晶性インスリン亜鉛水性懸濁等のインスリン製剤；トルブタミド、グリクロピラミド、アセトヘキサミド、トラザミド、クロルプロパミド、グリベンクラミド、グリクラジド等のスルホニル尿素系薬剤；グリブゾール等のスルホンアミド系薬剤；塩酸メトホルミン、塩酸ブホルミン等のビアグナイト系薬剤；エパルレスタット等のアルドース還元酵素阻害剤；ボグリボース、アカルボース等のαグルコシダーゼ阻害剤；トログリタゾン、ピオグリタゾン等のインスリン抵抗性改善剤；メカセルミン等のソマトメジンＣ製剤；ナテグリニド等のその他血糖降下剤；ベラプロスト、アルプロスタジルアルファデックス、リポＰＧＥ１、リポプロストアルファデックス等のプロスタノイド関連薬；マレイン酸エナラプリル等のＡＣＥ阻害剤；牛車腎気丸等の漢方製剤；アンジオテンシンＩＩ受容体拮抗剤；トロンボキサン合成酵素阻害剤；ビタミンＢ製剤；カルシウム拮抗剤；利尿剤等が挙げられる。
発明を実施するための最良の形態
以下、実施例及び試験例に基づいて本発明をより詳細に説明するが、本発明はこれらの実施例等に限定されるものではない。なお、以下の実施例、試験例において用いられる化合物１は化合物Ａのカリウム塩を意味する。
実施例１：カプセル剤
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表１に示す成分を混合し、カプセルに充填してカプセル剤を製造した。
試験例１  ストレプトゾトシン（ＳＴＺ）誘発糖尿病ラットの血中パラメータ及び尿中パラメータに対する効果
（方法）
予め尿中アルブミン排泄に偏りのないよう５群に分けた９週齢のＷｉｓｔａｒ（Ｃｒｊ）ラットの４群にＳＴＺ（５０ｍｇ／ｋｇ）を静脈内投与した。ＳＴＺ投与の翌日より６週間にわたってコントロール群（ＳＴＺ−Ｃｏｎｔ．）には溶媒（０．５％メチルセルロース溶液（以下、０．５％ＭＣ））のみを、化合物１の低用量群（ＳＴＺ−低用量（０．１））には化合物１の０．１ｍｇ／ｋｇを、高用量群（ＳＴＺ−高用量（１））には化合物１の１ｍｇ／ｋｇを、ＡＣＥ阻害薬投与群（ＳＴＺ−Ｅｎａ．）にはマレイン酸エナラプリルの１０ｍｇ／ｋｇを、それぞれ１日１回連続経口投与した。一方、残る１群には生理食塩水を静脈内投与し、対照群（Ｓｈａｍ）として溶媒（０．５％ＭＣ）を連続経口投与した。投与開始２、４、６週間後に代謝ケージにて２４時間の採尿を実施して尿中パラメータを測定した。また２、４週間後は尾静脈より、６週間後は麻酔下に腹部大動脈より採血を実施して血中パラメータを測定した。
測定結果は平均値±誤差で示した。Ｓｈａｍ群とＳＴＺ−Ｃｏｎｔ．群の比較には対応のないｔ検定を行い、危険率５％未満の場合を有意差と見なした。またＳＴＺ投与ラットの薬物群間の比較には一元配置分散分析後にそれぞれ対応のない多重比較（ダネット検定）を行い、危険率５％未満の場合を有意差と見なした。
（結果）
▲１▼ＳＴＺ誘発糖尿病ラットの血中パラメータに対する作用
１）血糖
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表２に示すように、ＳＴＺ投与によって投与２週目から有意な血中グルコース濃度の上昇が観察された。投与開始６週間後において、ＳＴＺ−高用量（１）群では１ｍｇ／ｋｇという極めて低用量で、ＳＴＺ−Ｅｎａ．群と同等の血中グルコース濃度の低下が認められた。
従って、化合物１が、糖尿病における血糖上昇に対する改善作用を有することが示唆された。
２）血中脂質
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表３及び表４に示すように、ＳＴＺ投与によって投与４週目において有意な血中コレステロール濃度及び血中トリグリセリド濃度の上昇が観察された。ＳＴＺ−高用量（１）群では１ｍｇ／ｋｇという極めて低用量で、ＳＴＺ−Ｅｎａ．群と同等の血中コレステロール濃度及び血中トリグリセリド濃度の低下が認められた。
従って、血中コレステロール濃度又は血中トリグリセリド濃度が上昇しているということは、腎機能に何らかの障害があることを示し、上記モデルは早期腎症併発後の糖尿病の病態を表したモデルであると言えるため、化合物１が、早期腎症併発後の糖尿病の血中脂質上昇に対する改善作用を有することが示唆された。
▲２▼ＳＴＺ誘発糖尿病ラットの尿中パラメータに対する作用
１）尿中アルブミン
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表５に示すように、ＳＴＺ投与によって投与２週目から有意な尿中アルブミン排泄量（ＵＡＥ）の増加が観察された。化合物１は用量依存的に、投与開始２、４、６週間後のＵＡＥを減少させた。一方、ＳＴＺ−Ｅｎａ．群においてはＵＡＥ軽減作用が認められなかった。
従って、化合物１が、早期腎症併発後の糖尿病の尿中アルブミン排泄増加に対する改善作用を有することが示唆された。
２）クレアチニンクリアランス
2002080924.tif 000007
表６に示すように、ＳＴＺ投与によって投与２週目において有意なクレアチニンクリアランス（Ｃｃｒ）の上昇が認められ、糸球体過濾過状態（Ｈｙｐｅｒｆｉｌｔｒａｔｉｏｎ）が生じていた。４週目以降においては顕著なＣｃｒの上昇は認められなかった。ＳＴＺ−高用量（１）群では投与開始２週間後のＣｃｒの上昇が抑制される傾向があった。一方、ＳＴＺ−Ｅｎａ．群においてはＣｃｒの上昇が抑制される傾向も見られなかった。
従って、化合物１が、早期腎症併発後の糖尿病の糸球体過濾過に対する改善作用を有することが示唆された。
試験例２  ５／６腎臓摘出慢性腎不全（５／６Ｎｘ）ラットの腎機能に対する効果
（方法）
８週齢の雄性Ｗｉｓｔａｒラットを実験に使用した。ラットをペントバルビタール麻酔下で左腎の３分の２を切除し、その１週間後に右腎を全摘出した。５／６腎臓摘出２週間後にｔａｉｌ−ｃａｆｆ法を用いた収縮期血圧（ＳＢＰ）の測定と、代謝ケージ内での２４時間採尿による尿中タンパク排泄量測定を行い、各群に差が無いように群分けした（３群、各群ｎ＝９）。その後８週間にわたり、５／６Ｎｘ−Ｃｏｎｔ．群には溶媒（０．５％ＭＣ）を５ｍｌ／ｋｇの投与量で経口投与した。５／６Ｎｘ−化合物１群には化合物１の１ｍｇ／ｋｇ／ｄａｙを、５／６Ｎｘ−Ｅｎａ．群にはマレイン酸エナラプリルの１０ｍｇ／ｋｇ／ｄａｙをそれぞれ溶媒（０．５％ＭＣ）に溶解して、１日１回連続経口投与した。一方、開腹手術のみを行ったラットを対照群（Ｓｈａｍ）として溶媒（０．５％ＭＣ）のみを経口投与した。２週間おきに２４時間採尿を行い尿中タンパク排泄量を測定した。また４週間おきにＳＢＰの測定を行い、血圧に対する影響を検討した。
測定結果は平均値±誤差で示した。Ｓｈａｍ群と５／６Ｎｘ−Ｃｏｎｔ．群の比較には対応のないｔ検定を行い、危険率５％未満の場合を有意差と見なした。また５／６Ｎｘラットの薬物群間の比較には一元配置分散分析後にそれぞれ対応のない多重比較（ダネット検定）を行い、危険率５％未満の場合を有意差と見なした。
（結果）
▲１▼尿中タンパク排泄に対する効果
2002080924.tif 000008
表７に示すように、５／６Ｎｘ−Ｃｏｎｔ．群ではＳｈａｍ群に比べ尿中タンパク排泄量が有意に増加した。５／６Ｎｘ−Ｅｎａ．群では２週から８週にわたって尿中タンパク排泄量の増加が有意に抑制された。化合物１投与群では投与開始８週目に１ｍｇ／ｋｇという極めて低用量で尿中タンパク排泄量の増加が有意に抑制された。
従って、化合物１が、慢性腎不全移行後の糖尿病の尿中タンパク排泄増加に対する改善作用を有することが示唆された。
▲２▼血圧上昇に対する効果
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上記、表８に示すように、５／６Ｎｘ−Ｃｏｎｔ．群ではＳｈａｍ群に比べＳＢＰが有意に上昇した。５／６Ｎｘ−Ｅｎａ．群では著明な降圧作用が認められた。化合物１投与群ではＳＢＰ上昇の有意な抑制は認められなかった。
▲３▼腎機能低下例への投与における死亡率に対する効果
各群９例で検討を行い、試験期間中に５／６Ｎｘ−Ｅｎａ．群において２例の死亡例が認められたが、化合物１投与群における死亡例は観察されなかった。
試験例３  高血圧自然発症ラット（ＳＨＲ）の血圧に対する影響の検討試験
（方法）
雄性ＳＨＲ（星野試験動物、八潮）を１７〜１９週齢（体重２７６〜３５０ｇ）で使用した。ＳＨＲをペントバルビタール（６０ｍｇ／ｋｇ  ｉ．ｐ．）により麻酔し、ポリエチレンカニューレ（ＰＥ−５０）を左総頸動脈から挿入しその先端が大動脈弓に位置するように植え込んだ。カニューレの他端は背側頸部から体外へ導き出し、切開部位を外科的に縫合した。手術後の回復期を置き、個別ケージ内でＳＨＲの血圧及び心拍数を無麻酔・無拘束下で測定した。カニューレの他端はスウィーベル（ＰＬＹＭＯＵＴＨ  ＭＥＥＴＩＮＧ  ＰＡ、Ｉｎｓｔｅｃｈ  ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ）を介して圧トランスデューサー（ＡＰ−６０１Ｇ、日本光電）に接続し、心拍数は血圧の脈波で心拍計（ＡＴ−６０１Ｇ、日本光電）を駆動することにより測定した。薬物あるいは溶媒（０．５％ＭＣ）は経口ゾンデにて経口投与（５ｍｌ／ｋｇ）した。尚、収縮期血圧が１６０ｍｍＨｇ以上のＳＨＲを実験に用いた。測定結果は平均値±誤差で示した。
（結果）
図１に示すように、化合物１を３０ｍｇ／ｋｇあるいは１００ｍｇ／ｋｇ経口投与したところ、無麻酔・無拘束下のＳＨＲにおいて投与後２４時間まで血圧及び心拍数に対して影響を及ぼさなかった。
従って、糖尿病性腎症の現行治療として行われている降圧療法では、全身血行動態に影響を与え、血圧低下とともに腎灌流圧の低下が危惧されるが、化合物１はそのような危惧がない程度しか全身血圧を変化させず、腎機能低下例等、急性腎不全を引き起こすことが危惧されるため、ＡＣＥ阻害剤等の投与が禁忌あるいは躊躇される場合においても投与可能であることが示唆された。
試験例４  ラット腎糸球体メサンギウム細胞のＥＴ−１による細胞増殖に対する抑制効果
（方法）
▲１▼ラット腎メサンギウム細胞の培養
ラット腎メサンギウム細胞の培養は、既報の方法にて行った（Ｋｉｄｎｅｙ  Ｉｎｔ．，４２，８６０−８６６，１９９２）。即ち、７−１０週齢の雄性Ｗｉｓｔａｒラットから麻酔下に腎臓を摘出後、無菌的にｓｉｅｖｉｎｇ法にて単離した糸球体を９５％ａｉｒ、５％ＣＯ２、３７℃の条件下、ＲＰＭＩ−１６４０に血清・栄養因子等を含んだ培養液で培養し、均一なメサンギウム細胞を得た。その後約１週間に１度継代し、実験には４−１０代目の細胞を用いた。
▲２▼細胞増殖・肥大活性測定
細胞増殖活性測定には、ラット培養メサンギウム細胞を４８穴アッセイプレートで培養し５０％コンフルエントになった時点で、培養液中の栄養因子（ＩＴＳ）を除き胎児ウシ血清（ＦＣＳ）を２０％から０．５％に低下させた培養液で２日間培養し、細胞を静止期に同調させた。その後ＦＣＳ０．５％及びＩＴＳ存在下にＥＴ−１、ＥＴ−３及びＳ６ｃを添加して６９時間培養した。続いて培養液中にＡｌａｍａｒ  Ｂｌｕｅ試薬（ＩＷＡＫＩ）（５０ｍｌ／ｗｅｌｌ）を添加して３時間インキュベーションし、５７０／６００ｎｍでの吸光度を測定して標準曲線から細胞数を計測し、細胞増殖活性とした。
肥大活性測定には、Ａｌａｍａｒ  Ｂｌｕｅ試薬を用いた細胞増殖活性測定が終了した細胞をリン酸緩衝液で３回洗浄後、細胞に直接タンパク測定試薬（ＢｉｏＲａｄ）を添加し、５９５ｎｍでの吸光度を測定して検量線からタンパク含量を計測した。増殖活性測定で得られた細胞数から単位細胞数あたりのタンパク含量を求め、肥大活性とした。
ＥＴ−１による増殖促進作用に対する抑制作用の検討のため、化合物１を、ＥＴ−１を作用させる３０分前に培養液中に添加した。
▲３▼統計学的解析
結果は平均値±誤差で示した。増殖・肥大活性の有意差検定は一元配置分散分析後にペプチド濃度０値をコントロール群としてそれぞれ対応のない多重比較（ダネット検定）を行い、危険率５％未満の場合を有意差と見なした。
（結果）
▲１▼ラット培養メサンギウム細胞の増殖・肥大に対するＥＴの効果
図２及び図３に示すように、ＥＴ−１及びＥＴ−３は、ともにラット培養メサンギウム細胞の増殖及び肥大を、１０−１２〜１０−７Ｍの濃度において濃度依存的に促進した。いずれも１０−８Ｍでほぼ最大反応が得られたが、細胞増殖及び肥大促進活性はＥＴ−１の方がＥＴ−３より強力であった。ＥＴ−１及びＥＴ−３の細胞増殖及び肥大促進作用の濃度反応に差は認められず、両反応は平行して起こるものと考えられた。
▲２▼ラット培養メサンギウム細胞のＥＴ−１誘発増殖作用に対する効果
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上記、表９に示すように、化合物１はＥＴ−１  １０−８Ｍによるラット培養メサンギウム細胞の増殖を、１０−１１〜１０−８Ｍの濃度において濃度依存的に抑制した。
従って、化合物１が、ＥＴによって誘発される基質的変化を伴った腎機能障害、例えば、糖尿病性腎症、ＥＴ誘発性早期腎症、糖尿病性合併症の最終臨床像として捉えられる糸球体硬化病変を伴った慢性腎不全等による腎機能障害の改善に有効であることが示唆された。
産業上の利用可能性
本発明によれば、糖尿病患者の特定症状の改善用医薬組成物を提供することができる。即ち、糖尿病患者の血糖上昇改善用医薬組成物；早期腎症併発後の糖尿病患者の血中脂質上昇改善用医薬組成物；早期腎症併発後の糖尿病患者の腎機能障害改善用医薬組成物；慢性腎不全移行後の糖尿病患者の腎機能障害改善用医薬組成物；糖尿病性腎症患者の腎機能障害改善用医薬組成物；ＥＴ誘発性早期腎症患者の腎機能障害改善用医薬組成物；慢性腎不全患者の腎機能障害改善用医薬組成物を提供することができる。
殊に、上記の腎機能障害改善は、早期腎症併発後の糖尿病、糖尿病性腎症及び／又はＥＴ誘発性早期腎症に伴う尿中アルブミン排泄抑制及び／又は糸球体過濾過抑制、あるいは慢性腎不全移行後の糖尿病及び／又は慢性腎不全に伴う尿中タンパク排泄抑制により達成される。
さらに、糖尿病性腎症の現行治療として行われている降圧療法では、全身血行動態に影響を与え、血圧低下とともに腎灌流圧の低下が危惧されるが、そのような危惧がない程度しか全身血圧を変化させない上記の医薬組成物及び／又は経口吸収性に優れた上記の医薬組成物を提供することができる。
【図面の簡単な説明】
図１は、高血圧自然発症ラット（ＳＨＲ）における化合物Ａのカリウム塩（以下、「化合物１」という。）の平均血圧及び心拍数に対する作用を示すグラフである。
図２は、ＥＴ−１、ＥＴ−３、サラフォトキシンＳ６ｃ（以下、「Ｓ６ｃ」という。）によるラット培養メサンギウム細胞の増殖促進作用を示すグラフである。
図３は、ＥＴ−１、ＥＴ−３、Ｓ６ｃによるラット培養メサンギウム細胞の肥大促進作用を示すグラフである。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【国際調査報告】
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