(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
設定した測定条件パラメータに従って光ビームを顕微鏡対物レンズで集光して細胞集団標本上を二次元走査し、上記光ビームによって励起された細胞からの光を検出器で検出し、検出器で検出した光電信号によって形成された走査画像データを取込み、上記走査画像データに対する画像処理によって上記細胞集団標本内の各細胞の細胞内成分量を測定して上記細胞集団内の個々の細胞の細胞データを得、上記細胞データを統計的データとして扱う走査型サイトメータにおいて、本測定以前に行なう仮測定に関し、
測定条件パラメータを設定する仮測定前初期設定手段と、
この仮測定前初期設定手段で得た測定条件パラメータに従って上記細胞集団標本上の本測定よりも広い範囲を高速に光ビームで二次元走査して上記細胞集団の統計的データを得る仮測定実行手段と、
この仮測定実行手段で得た統計的データに基づいて本測定に用いる測定条件パラメータを決定する決定手段とを有したことを特徴とする走査型サイトメータ。
【請求項２】
上記測定条件パラメータは上記検出器のゲインオフセットであり、
上記仮測定前初期設定手段は、上記本測定の測定範囲の大きさを設定した上で上記細胞集団標本の中の任意の細胞もしくは細胞領域を選択し、選択した細胞もしくは細胞領域の輝度データから上記検出器のゲインオフセットの初期値を決定し、
上記決定手段は、上記仮測定実行手段により得た上記細胞集団の統計的データを基にある特定の細胞を選択し、選択した細胞の輝度データから上記検出器のゲインオフセットの最適値を決定することを特徴とする請求項１記載の走査型サイトメータ。
【請求項３】
上記測定条件パラメータは測定範囲であり、上記仮測定前初期設定手段は、上記測定範囲の大きさを設定し、上記決定手段は、上記仮測定実行手段により得た上記細胞集団の統計的データを基に最適な測定範囲を決定することを特徴とする請求項１記載の走査型サイトメータ。
【請求項４】
上記測定条件パラメータは測定範囲であり、
上記仮測定前初期設定手段は、上記測定範囲を分割した小区画の大きさを設定し、上記決定手段は、上記仮測定実行手段により得た上記細胞集団の上記小区画毎の統計的データを基に測定範囲を決定することを特徴とする請求項１記載の走査型サイトメータ。
【請求項５】
上記測定条件パラメータは上記検出器のゲインオフセットであり、
上記仮測定前初期設定手段は、上記細胞集団標本の中の任意の細胞もしくは細胞領域を選択し、選択した細胞もしくは細胞領域の輝度データから上記検出器のゲインオフセットの初期値を決定することを特徴とする請求項１記載の走査型サイトメータ。
【請求項６】
上記測定条件パラメータは上記検出器のゲインオフセットであり、
上記決定手段は、上記仮測定実行手段により得た上記細胞集団の統計的データを基にある特定の細胞を選択し、選択した細胞の輝度データから上記検出器のゲインオフセットの最適値を決定することを特徴とする請求項１記載の走査型サイトメータ。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は、光ビームを顕微鏡対物レンズで集光して細胞集団標本上を二次元走査し、細胞からの光を検出してデータ処理する走査型サイトメータに関する。
【０００２】
【従来の技術】
従来より、蛍光色素で生化学的に標識された生物細胞集団の個々の細胞にレーザスポットを照射、励起し、個々の細胞の発する蛍光、あるいは散乱光を高速に測光し、測定結果を細胞集団の免疫特性、遺伝的特性、及び細胞増殖性を表わす統計的なデータとして解析し、提示する装置としてフローサイトメータがある。
【０００３】
このフローサイトメータは、レーザ及びこのレーザビームを集束させたスポットが固定され、このスポット上に単離浮遊液状態の細胞をジェット水流とともに流し測定する。このため、特定のデータに対応する細胞を探し出し、形態を観察すること、及び測定後に個々の細胞に対応する測定データを認識することは不可能である。
【０００４】
このフローサイトメータに対し、スライドガラス上の細胞集団をレーザ光による光ビームを集束させたスポットで走査し、この細胞集団の個々の細胞が発する蛍光や散乱光を検出し、データ処理する走査型サイトメータが開発され、特開平３−２５５３６５号公報「生物標本の複数の光学的特性を測定する方法及び装置」にも開示されている。
【０００５】
走査型サイトメータは、走査波形に従って駆動するスキャナによってレーザビームを偏向しながら走査ステージを移動することにより、スライドガラス上の細胞集団を走査する。レーザスポットに励起された細胞から発した蛍光及び散乱光は電気信号に変換され、スキャナの走査波形と共に出力されるデータ入力信号の論理に従って収集される。
【０００６】
走査型サイトメータは、走査して形成した画像を画像処理し、個々の細胞の蛍光値の総和、面積、最大蛍光値、走査ステージ上の座標、測定開始からの時間、一番近い細胞までの距離、外周、細胞内のスポット数などの測定データを抽出し、統計的に扱うことで、その結果をコンピュータなどのインタフェースにより測定者（以下「オペレータ」と称する）に提示する。
【０００７】
ただし、扱う細胞数が大量のために測定範囲も広範囲になり、一度にデータを収集することはできないため、測定範囲をストリップと称する小さな範囲に区切って測定することになる。
【０００８】
この走査型サイトメータが上記フローサイトメータと大きく異なる特徴としては、得られた統計的データから逆に注目したい個々の細胞を検索することが可能なリコール機能と称される機能を有している点である。
【０００９】
ところで、このような装置で測定を行なう場合、測定を行なう前に、測定条件パラメータの設定を行なわなければならない。この測定条件パラメータとしては、細胞から発した蛍光を電気信号に変換する光電子増倍管（ＰＭＴ）の印加電圧とオフセット調整電圧、散乱光を電気信号に変換するフォトダイオード（ＰＤ）のゲインオフセット、あるいは測定範囲などがある。これらの測定条件パラメータの設定は基本的にオペレータが行なうもので、オペレータの所望とする値、適切と判断した値を設定する。
【００１０】
ここで、従来の走査型サイトメータにおいて、例えば、ＰＭＴの印加電圧とオフセット調整電圧を設定する方法を図１６を用いて説明する。ＰＭＴの印加電圧、オフセット調整電圧を設定する方法には２通りの方法がある。
【００１１】
図１６（１）に示す第１の方法においては、まず、適当な初期値をもって一度測定を行ない、１ストリップ分の蛍光像を得る。得られた細胞の蛍光像上で細胞の発する蛍光輝度値とバックグランド輝度値を調べ、その輝度値が適切な値あるいは範囲からずれていたら、オペレータの判断でＰＭＴの印加電圧、オフセット調整電圧を設定し直す。このようにして測定、判断、再設定を何度か繰返して最適値を決定する。
【００１２】
図１６（２）に示す第２の方法においては、適当な初期値をもって任意の細胞集団上をレーザビームを偏向するだけで走査ステージは移動せずに１ライン走査し、測光する。このとき、１ラインの測光結果をリアルタイムにオペレータに提示できるようになっている。オペレータは、この測光結果を見ながら細胞から発する蛍光輝度値とバックグランド輝度値が適切な値となるか、あるいは適切な範囲内に納まるようにＰＭＴの印加電圧、オフセット調整電圧を試行錯誤して調整する。
【００１３】
また、従来の走査型サイトメータにおいて、測定範囲を設定する方法を図１７を用いて説明する。測定範囲を設定するにも２通りの方法がある。
図１７（１）に示す第１の方法は、オペレータが測定開始点と終了点の座標の数値を直接コンピュータにて入力する方法である。
【００１４】
図１７（２）に示す第２の方法は、オペレータが標本を観察しながら走査ステージを移動し、適当な位置で走査ステージを停止し、測定開始場所（点）を指定する。ついで、再び、標本を観察しながら走査ステージを移動し、適当な位置で走査ステージを停止し、測定終了場所（点）を指定する方法である。
【００１５】
【発明が解決しようとする課題】
ところが、ＰＭＴの印加電圧、オフセット調整電圧を従来の走査型サイトメータで設定する場合、以下の２つの不具合な点が発生する。
第１点目は、パラメータの設定をオペレータが何度か試行錯誤して行なうために時間と労力を費やしてしまう、という点である。
【００１６】
第２点目は、せいぜい１ストリップあるいは１ラインといった狭い範囲の細胞もしくは細胞集団の輝度データを基にパラメータを設定するので、実際の測定で広範囲の細胞データを得るのにそのパラメータが適切なものかどうかの保証がない、という点である。具体的には、例えば、細胞周期測定を行なうような場合に、１ライン走査で安定期にある細胞に対してＰＭＴの印加電圧、オフセット調整電圧を設定して実際の測定で分裂期にある細胞を測定したとする。ＤＮＡ量の違いにより、安定期にある細胞よりも分裂期にある細胞の方が発する蛍光量が多い。このため、安定期にある細胞に対して設定されたＰＭＴの印加電圧、オフセット調整電圧で分裂期にある細胞を測定すると、分裂期にある細胞の蛍光輝度値が測定レンジをオーバーしてしまう可能性があり、そうなると測定をやり直すことになる。
【００１７】
上記第１の不具合な点に対しては工業系、生物系の走査型顕微鏡における既存のＰＭＴの印加電圧、オフセット調整電圧の自動調整方法を用いれば解決することも可能であると考えられるが、上記第２の不具合な点は依然解決されないままである。
【００１８】
仮に上記第２の不具合な点を解決するために、既存のＰＭＴの印加電圧、オフセット調整電圧の自動調整法を、１ストリップあるいは１ラインといった狭い範囲ではなく、実際の測定範囲に適用したとしても、広範囲のためにパラメータを決定するのに時間がかかってしまう、という新たな問題が発生する。
【００１９】
また、測定範囲を従来の走査型サイトメータで設定する場合には、オペレータの標本上における測定範囲のとり方によっては、以下のような不具合な点が発生する。
【００２０】
すなわち、走査型サイトメータで観察する標本は、浮遊細胞液のスメア、組織細胞のタッチスメアなどスライドガラス上の蛍光染色細胞集団であり、人間の手で作製される。よって、サンプルプリパレーションの仕方によっては、スライドガラス上の細胞の分布が均一でなかったり、あるいは、蛍光染色にムラを生じることがある。
【００２１】
このような標本を測定する場合、従来のオペレータの主観に基づく判断による測定範囲の設定の仕方では、細胞測定効率や測定、解析の精度に影響を与える可能性がある。
【００２２】
なぜならば、従来の走査型サイトメータでは、オペレータはスライドガラス上の広範囲にわたる細胞集団の分布の状況や蛍光染色の均一の度合いまでは知り得ない。偶然に細胞の数が少ない領域や、細胞が重なり合って細胞集塊を形成している領域、及び蛍光染色ムラのある領域を測定範囲に設定する可能性もある。細胞の数が少ない領域を測定してしまうと、その分、測定効率が低下するし、細胞集塊が形成されるほど細胞が密集した場所も測定効率を劣化させる。また、蛍光染色ムラがある領域を測定すると個々の細胞の蛍光値の総和の分布がＤＮＡなどの細胞成分量だけでなく蛍光染色ムラにも依存してしまい、その分、サイトメータによる測定、解析結果にアーティファクトが混入することになるからである。
【００２３】
仮に、広範囲にわたる細胞集団の分布の状況や蛍光染色の均一の度合いを定量的に知ろうとしても、通常の測定と同様に行なっていたのでは膨大な時間がかかってしまうため、現実的ではない。
【００２４】
本発明は上記のような実情に鑑みてなされたもので、その目的とするところは、検出器のゲインオフセットや測定範囲といった測定条件パラメータを、広範囲の細胞データに基づいて自動設定することが可能な走査型サイトメータを提供することにある。
【００２５】
【課題を解決するための手段】
請求項１記載の発明は、設定した測定条件パラメータに従って光ビームを顕微鏡対物レンズで集光して細胞集団標本上を二次元走査し、上記光ビームによって励起された細胞からの光を検出器で検出し、検出器で検出した光電信号によって形成された走査画像データを取込み、上記走査画像データに対する画像処理によって上記細胞集団標本内の各細胞の細胞内成分量を測定して上記細胞集団内の個々の細胞の細胞データを得、上記細胞データを統計的データとして扱う走査型サイトメータにおいて、本測定以前に行なう仮測定に関し、測定条件パラメータを設定する仮測定前初期設定手段と、この仮測定前初期設定手段で得た測定条件パラメータに従って上記細胞集団標本上の本測定よりも広い範囲を高速に光ビームで二次元走査して上記細胞集団の統計的データを得る仮測定実行手段と、この仮測定実行手段で得た統計的データに基づいて本測定に用いる測定条件パラメータを決定する決定手段とを有したことを特徴とする。
【００２６】
このような構成とした結果、本測定の前に、仮測定、及び、測定条件パラメータを決定する際に必要となるパラメータ設定を行ない、その条件で仮測定を実施し、仮測定で得られた情報から測定パラメータを決定することができる。
【００２７】
請求項２記載の発明は、上記請求項１記載の発明において、上記測定条件パラメータは上記検出器のゲインオフセットであり、上記仮測定前初期設定手段は、上記本測定の測定範囲の大きさを設定した上で上記細胞集団標本の中の任意の細胞もしくは細胞領域を選択し、選択した細胞もしくは細胞領域の輝度データから上記検出器のゲインオフセットの初期値を決定し、上記決定手段は、上記仮測定実行手段により得た上記細胞集団の統計的データを基にある特定の細胞を選択し、選択した細胞の輝度データから上記検出器のゲインオフセットの最適値を決定することを特徴とする。
【００２８】
このような構成とした結果、上記請求項１記載の発明の作用に加えて、測定条件パラメータとして検出器のゲインオフセットを適用しており、検出器のゲインオフセットの最適値を自動的に決定することができる。
【００２９】
請求項３記載の発明は、上記請求項１記載の発明において、上記測定条件パラメータは測定範囲であり、上記仮測定前初期設定手段は、上記測定範囲の大きさを設定し、上記決定手段は、上記仮測定実行手段により得た上記細胞集団の統計的データを基に最適な測定範囲を決定することを特徴とする。
【００３０】
このような構成とした結果、上記請求項１記載の発明の作用に加えて、測定条件パラメータとして測定範囲を適用しているため、最適な測定範囲を自動的に決定することができる。
請求項４記載の発明は、上記請求項１の発明において、上記測定条件パラメータは測定範囲であり、上記仮測定前初期設定手段は、上記測定範囲を分割した小区画の大きさを設定し、上記決定手段は、上記仮測定実行手段により得た上記細胞集団の上記小区画毎の統計的データを基に測定範囲を決定することを特徴とする。
請求項５記載の発明は、上記請求項１の発明において、上記測定条件パラメータは上記検出器のゲインオフセットであり、上記仮測定前初期設定手段は、上記細胞集団標本の中の任意の細胞もしくは細胞領域を選択し、選択した細胞もしくは細胞領域の輝度データから上記検出器のゲインオフセットの初期値を決定することを特徴とする。
請求項６記載の発明は、上記請求項１の発明において、上記測定条件パラメータは上記検出器のゲインオフセットであり、上記決定手段は、上記仮測定実行手段により得た上記細胞集団の統計的データを基にある特定の細胞を選択し、選択した細胞の輝度データから上記検出器のゲインオフセットの最適値を決定することを特徴とする。
【００３１】
【発明の実施の形態】
（第１の実施の形態）
以下図面を参照して本発明の第１の実施の形態について説明する。
図１は本実施の形態に係る走査型サイトメータの機械的、光学的な構成を示すものである。同図で、レーザ光源１から出射されたレーザビームは、スポット投影レンズ１８で適宜集光された後、ダイクロイックミラー２で反射され、さらに図の紙面に直交する回転軸を中心に回転するガルバノミラー３で反射された後、瞳投影レンズ４で対物像面に結像し、その後、光路切替ミラー５に入射される。したがって、レーザビームは回転するガルバノミラー３の存在によって光路切替ミラー５の位置において紙面上の上下方向に走査される。
【００３２】
レーザビームは、光路切替ミラー５で反射された後、対物レンズ６に入射し、標本７上に結像される。よって、標本７上に結像されたレーザスポットは標本７面で紙面の左右方向に走査される。ガルバノミラー３による光学偏向手段でレーザビームを紙面の左右方向に走査すると同時に、走査ステージ１７を紙面に直交する方向に移動することにより、標本７面はレーザスポットにて二次元走査される。
【００３３】
標本７上の細胞に予め生化学的に標識された蛍光色素は、このレーザビーム（レーザスポット）によって励起されて蛍光を放射する。標本７からの蛍光は、前述した光路を逆に遡り、対物レンズ６、光路切替ミラー５、瞳投影レンズ４、ガルバノミラー３を経てダイクロイックミラー２を上方へ透過する。ダイクロイックミラー２を透過した蛍光はバリアフィルタ１３を透過して集光レンズ１４で光電子増倍管（ＰＭＴ）１５の受光面に集光される。
【００３４】
一方、標本７上の細胞によって散乱された散乱光は標本７を下方へ透過した光と共にコンデンサレンズ８で集光され、ビームスプリッタ９で反射された後にリングスリット１０に入射する。このリングスリット１０は、標本７からの透過光を遮光し、散乱光のみを通過させて、フォトダイオード（ＰＤ）１１の受光面へ入射させる。
【００３５】
以上説明した機械的及び光学的構成を有した走査型サイトメータにおいては、標本７上をレーザスポットで二次元走査し、この標本７からの蛍光及び散乱光は光電子増倍管１５及びフォトダイオード１１で検出される。
【００３６】
なお、上記図１においては、一種類の蛍光色素を用いる場合のみを示したが、新たにダイクロイックミラー２、バリアフィルタ１３、集合レンズ１４、ＰＭＴ１５を追加することによって、複数の蛍光色素からの波長の異なる蛍光を同時に検出することができる。
【００３７】
上記光路切替ミラー５は、レーザビームの光路に対して挿脱可能に設けられており、この光路切替ミラー５を光路から取り除くことにより、標本７の像を顕微鏡観察光学系１６へ導くことができる。
【００３８】
そして、透過照明光源１２や落射照明光源１９による照明を用いて通常の顕微鏡として用いることが可能である。その結果、オペレータは標本７の透過像や蛍光像を肉眼で顕微鏡観察し、あるいはＣＣＤカメラや写真撮影装置で顕微鏡撮影することができる。
【００３９】
次に上記走査型サイトメータの電気的構成について図２により説明する。
ここで取り上げる走査型サイトメータに組み込まれた回路構成においては、図示する如く第１乃至第３の３本のＰＭＴ１５ａ〜１５ｃから得られる各蛍光強度に対応する電気信号を画像データに変換する３つの信号処理回路２０ａ〜２０ｃと、ＰＤ１１から得られる散乱光強度に対応する電気信号を画像データに変換する信号処理回路２０ｄと、各信号処理回路２０ａ〜２０ｄから得られる画像データを処理して走査画像及び処理画像を作成するコンピュータ２２と、標本７上をレーザスポットで二次元走査させるための走査制御回路２３と、各信号処理回路２０ａ〜２０ｄ及び走査制御回路２３の動作を制御する本体制御部２４とで構成されている。
【００４０】
信号処理回路２０ａは本体制御部２４のＣＰＵバス３２に接続されている。そして、本体制御部２４のＣＰＵ３３は、ＣＰＵバス３２を介して上記第１のＰＭＴ１５ａのカソードへ信号処理回路２０ａ内部の図示しないＤ／Ａ変換器を介して電圧を印加して増倍率（ゲイン）を制御する。さらにＣＰＵ３３は、第１のＰＭＴ１５ａで検出した光電信号のオフセット調整電圧を信号処理回路２０ａ内部の図示しないＤ／Ａ変換器を介して光電気信号に印加する。
【００４１】
他の第２及び第３のＰＭＴ１５ｂ，１５ｃに対する信号処理回路２０ｂ，２０ｃは、上述した第１のＰＭＴ１５ａに対する信号処理回路２０ａと同一構成であるので説明を省略する。また、ＰＤ１１に対する信号処理回路２０ｄも他の上記信号処理回路２０ａ〜２０ｃとほぼ同一であるが、ＰＤ１１にはカソードへの電圧印加はないので、信号処理回路２０ｄにはカソード電圧印加用のＤ／Ａ変換器は備えられていない。
【００４２】
次に上記本体制御部２４及び走査制御回路２３の詳細な回路構成を説明する。本体制御部２４のＣＰＵバス３２には、上記ＣＰＵ３３とコンピュータ２２との間で各種通信を行なうためのＧＰＩＢインタフェース制御回路（ＧＰＩＢ  Ｉ／Ｆ）３６、上記走査ステージ１７の移動コントロールスイッチ群であるＲＣＵ３７、及び入出力回路（Ｉ／Ｏ）３８が接続されている。さらにＣＰＵバス３２には、走査ステージ１７をＸ軸、Ｙ軸方向へ移動させる２個のステッピングモータ（Ｍ）３９，４０の駆動回路４１，４２、ガルバノミラー３を駆動する波形を形成する波形発生回路４５が接続されている。波形発生回路４５によって生成された波形は、Ｄ／Ａ変換器４６を介してガルバノミラー３へ印加され、ガルバノミラー３は印加された電圧にしたがって駆動制御される。
【００４３】
したがって、本体制御部２４は走査制御回路２３を介して走査ステージ１７及びガルバノミラー３の動作を制御することによって、標本７上をレーザスポットで任意に二次元走査させることが可能となる。
【００４４】
さらに、ＲＣＵ３７は４方向（上下左右）キーがあり、オペレータが方向キーを押圧操作するとＣＰＵ３３にその内容が通知され、ＣＰＵ３３は通知内容にしたがってステッピングモータの駆動回路４１，４２に命令を発し、走査ステージ１７を移動する。走査ステージ１７の移動が終了するとＧＰＩＢ  Ｉ／Ｆ３６を介してコンピュータ２２にその内容を通知する。
【００４５】
したがって、オペレータはＲＣＵ３７によって走査ステージ１７を自由に操作することができ、コンピュータ２２はオペレータによる走査ステージ１７の操作が終了したことを知ることができる。
【００４６】
次に上記コンピュータ２２の詳細な回路構成を説明する。
このコンピュータ２２には、ＧＰＩＢ制御を行なうＧＰＩＢボード４７が設けられており、本体制御部２４側のＧＰＩＢ  Ｉ／Ｆ３６を介して本体制御部２４のＣＰＵ３３との間で通信をすることが可能である。これによりコンピュータ２２から本体制御部２４を介してステージ１７やガルバノミラー３の動作の開始、終了等の制御を行なうことができる。また、上述したようにＲＣＵ３７により走査ステージ１７の移動が行なわれたときは、本体制御部２４から通知を受けることができる。
【００４７】
ここで示す走査型サイトメータで用いるコンピュータ２２の拡張スロットには、第１及び第２の２枚のメモリボード４８ａ，４８ｂ、上述した１枚のＧＰＩＢボード４７、及び１枚のビデオボード４９が実装される。
【００４８】
これらメモリボード４８ａ，４８ｂにはそれぞれ２チャンネル分のメモリ回路が実装されている。そして、図示するように一方のメモリボード４８ａのチャンネル１（ＣＨ１）のメモリ回路に信号処理回路２０ａからの転送データが入力され、チャンネル２（ＣＨ２）のメモリ回路に信号処理回路２０ｂからの転送データが入力される。さらに、他方のメモリボード４８ｂのチャンネル３（ＣＨ３）のメモリ回路に信号処理回路２０ｃからの転送データが入力され、チャンネル４（ＣＨ４）のメモリ回路に信号処理回路２０ｄからの転送データが入力される。
【００４９】
さらに、これらメモリボード４８ａ，４８ｂの各１つのチャンネルは２つのバンクメモリで構成され、信号処理回路２０ａが一方のバンクにデータを転送中に、もう一方のバンクにコンピュータ２２がアクセスできるようになっている。
【００５０】
ＣＣＤカメラ１６ａは標本の透過像や蛍光像を観察するため顕微鏡に取り付けられたもので、このＣＣＤ１６ａからのビデオ信号はコンピュータ２２のビデオボード４９に入力され、コンピュータ２２のグラフィック画像と合成し、モニタディスプレイ５０に表示する。合成した顕微鏡画像はリアルタイム表示が可能で且つ顕微鏡画像上にコンピュータグラフィックをオーバレイ表示することが可能であるものとする。
【００５１】
コンピュータ２２にて表示する顕微鏡画像は最大で６４０×４８０ドットの画素に分解し、画面上の１画素がステージの移動座標系に変換すると何μｍになるかあらかじめ座標変換値として測定しておく。各細胞の位置座標データは走査ステージ１７上の座標系であるため、この座標変換値により顕微鏡画像上の座標値に変換することができる。座標変換値の測定方法としては、顕微鏡画面上に何か目標となる像を表示しておき、目標像を選択し画面上の座標を求め、既知で且つ目標像が画面内で移動する範囲の移動量で走査ステージ１７を移動し、同じ目標像を再度選択することで画面上の移動量と実際の走査ステージ１７の移動量から比を計算して求める。
【００５２】
また、上記図１に示す対物レンズ６の光軸を顕微鏡画像の中心に合わせることで走査ステージ１７と顕微鏡画像の位置関係を決定している。また、図１に示す対物レンズ６は交換可能で倍率を変えられるようにしている。上述の座標交換値は使用する対物レンズ６の倍率により異なるため、それぞれの対物レンズ６，６，‥‥の値をコンピュータ２２に記憶しておく。なお、対物レンズ６の倍率変更に伴い、走査ステージ１７の移動スピードが自動的に切り換わるようになっているものとする。
【００５３】
コンピュータ２２で使用している基本ソフトウェアとしては、表示画面中にウィンドウと称される任意の大きさの矩形の表示領域を表示し、その中に細胞データを統計的にグラフ表示したり、前記ＣＣＤカメラ１６ａのリアルタイム画像を表示することができるものを使用するものとし、本装置を制御するコンピュータ２２のアプリケーションソフトウェアは全てその基本ソフトウェア上で起動できるものとする。
【００５４】
次いで本実施の形態における走査型サイトメータの測定条件パラメータの設定手順について図３乃至図５を用いて説明する。
図３に示すように、本測定の前に行なわれる測定条件パラメータの設定に際しては、仮測定前初期設定（ステップ３０１）、仮測定の実行（ステップ３０２）、及び測定条件パラメータの決定（ステップ３０３）の３段階の手順からなる。
【００５５】
まず、仮測定前初期設定（ステップ３０１）においては、測定条件パラメータを含む仮測定の実行（ステップ３０２）に必要となるパラメータの初期値を設定する。この初期値の設定は、あらかじめコンピュータ２２のメモリ上に記憶されている値を設定し、あるいはオペレータが所望する値をコンピュータ２２にて設定し、あるいはある一連の処理によって決定される値を設定することができる。
【００５６】
次に対物レンズ６に低倍のものを選び、スライドガラス上に分布する細胞集団全体、もしくは少なくとも本測定における測定範囲よりも広い範囲に含まれる細胞集団を対象として仮測定を実行する（ステップ３０２）。
【００５７】
仮測定の実行（ステップ３０２）が始まると、図４に示すように横方向はガルバノミラー３の回転により、縦方向は走査ステージ１７の移動により標本７上をレーザスポットで二次元走査する。ただし、ガルバノミラー３で走査できる範囲からくる制限ととバンクメモリのメモリ容量による１回に収集できる走査画像データの大きさからくる制限とにより、測定範囲を幾つかのストリップに分けており、図５に示すように例えばストリップ１が終了するとストリップ２へ移り順次走査するようになっている。
【００５８】
このようにして標本７上をレーザスポットで二次元走査しながら、蛍光染色された細胞から発せられる蛍光量を光値電子増倍管１５ａ〜１５ｃにより、及び必要により合わせてその散乱光量をフォトダイオード１１により検出し、信号処理回路２０（２０ａ〜２０ｄ）を通して走査画像データを生成する。
【００５９】
その後、走査画像データからしきい値処理により細胞領域を抽出し、抽出された細胞領域毎に、個々の細胞の蛍光値の総和（Ｖａｌｕｅ値）、面積（Ａｒｅａ値）、最大蛍光値（Ｐｅａｋ値）、走査ステージ上の座標、一番近い細胞までの距離（最隣接細胞間距離）、外周、細胞内のスポット数、あるいは個々の細胞周辺のバックグランド輝度値の平均値などの特徴量を細胞データとして計算する。また、得られる細胞データの中から対象としている細胞が、複数の細胞が接触して一つとして認識されている細胞（マルチプルセル）かどうかの判断を行ない、そのような細胞を測定中または測定後に除去することもできる。ここで、マルチプルセルかどうかの判断は、まず、細胞領域内で蛍光値が最大値を示す座標を求める。次に、細胞領域を囲む矩形内で、最大値の座標点から８方向に画像データをトレースし、最大値以外の座標にピークが存在するトレースラインが一つでも存在すれば、マルチプルセルとする。
【００６０】
このようにして得られた各々の細胞データは自動的にコンピュータ２２のメモリ上に保存され、統計的データとして扱うことができるようになる。
ところで、対物レンズ６に低倍のものを選ぶのは、その分視野が広くなり、そりだけ一度にレーザスポットを走査できる範囲が広くなるからである。すなわち、高倍の対物レンズ６を用いるよりも低倍の対物レンズを用いた方が、広範囲を高速に測定することが可能となるからである。例えば、通常の本測定には２０倍の対物レンズを用い、事前の仮測定には４倍の対物レンズを用いたとすると、仮測定の測定面積は本測定の測定面積の２５倍となるので、仮測定では同じ時間で２５倍の領域を測定できることになり、これはつまり測定スピードが２５倍になったのと同様となる。
【００６１】
また、対物レンズ６に低倍のものを選ばずとも、図４に示すようにガルバノミラー３によりレーザの走査振幅を大きくし、走査ステージ１７の移動スピードを速くし、あるいは走査ステージ１７の移動スピードと連動してレーザの走査スピードを速くすることでも高速な測定が可能であるし、その状態で低倍の対物レンズを用いれば、より一層の高速測定が可能となる。
【００６２】
しかして、上述したような広範囲にわたる高速な走査のことをここでは「ラフスキャン」と称呼することにする。
そして、測定条件パラメータの決定（ステップ３０３）において、このようにして得られた広範囲にわたる細胞集団の統計的データを基にして、ある特定の条件に従った測定条件パラメータを自動的に決定する。
【００６３】
以上に示した本実施の形態による走査型サイトメータによれば、測定条件パラメータを決定するのに必要となる広範囲にわたる細胞集団の統計的データを短時間に得ることができ、そのデータを基にして測定条件パラメータの妥当性を判断、設定する作業を削減することができるようになる。
【００６４】
（第２の実施の形態）
以下図面を参照して本発明の第２の実施の形態に係る走査型サイトメータを説明する。
【００６５】
なお、本実施の形態による走査型サイトメータは、機械的、光学的、電気的な各構成に関しては上記図１及び図２で説明した第１の実施の形態と同様であるため、同一部分は同一符号を用いるものとしてその図示及び説明は省略する。
【００６６】
しかるに、本実施の形態による走査型サイトメータは、測定条件パラメータとしてＰＭＴの印加電圧、オフセット調整電圧あるいはＰＤのゲインオフセットといった光検出器のゲインオフセットを最適値に設定する場合のものである。ここでは、ＰＭＴの印加電圧、オフセット調整電圧の場合を想定して説明するが、ＰＤのゲインオフセットの場合でも同様である。
【００６７】
以下に本実施の形態による走査型サイトメータの測定条件パラメータの設定における手順について、図６乃至図９を用いて説明する。
図６に示すように、本実施の形態の測定条件パラメータの設定に際しては、本測定の測定範囲の大きさ、及びＰＭＴの印加電圧、オフセット調整電圧の初期値の設定（ステップ６０１）、仮測定の実行（ステップ６０２）、及び仮測定で得た統計的細胞データを基にＰＭＴの印加電圧、オフセット調整電圧の最適値の決定（ステップ６０３）の３段階の手順からなる。
【００６８】
最初に、仮測定前初期設定として、本測定の測定範囲の大きさ、及びＰＭＴの印加電圧ＨＶ、オフセット調整電圧ＯＳの初期値を設定する（ステップ６０１）。
【００６９】
まず、本測定の測定範囲の大きさ（縦×横）は、コンピュータ２２にてオペレータが所望の値を設定する。
次にＰＭＴの印加電圧ＨＶ、オフセット調整電圧ＯＳの初期値を設定するが、設定の仕方を図７、図８を用いて説明する。
【００７０】
まず、オペレータが、ＣＣＤカメラ１６ａにてスライドガラス上の標本を観察し、任意の細胞、もしくは近傍の細胞も含めた細胞領域を選択しておく（ステップ７０１）。
【００７１】
次に、電圧無印加状態（ＨＶ＝０）で輝度が０になるようにオフセット調整電圧ＯＳを調整する（ステップ７０２）。
具体的には、図７（２）に示すようにＰＭＴ１５の印加電圧ＨＶが０の状態（ステップＳ１）でオフセット調整電圧ＯＳのみを変化させながら（ステップＳ４）、測光のみを行なう（ステップＳ２）。この場合、標本に光ビームを照射する必要はない。
【００７２】
測定結果は、信号処理回路２０により輝度データＫに変換されるが、図８（１）にも示すように、この輝度データの一定時間の平均値Ｋａｖｅが最も０に近くなるようなオフセット調整電圧ＯＳをオフセット調整電圧の仮設定値ＯＳｚとする（ステップＳ３，Ｓ５）。
【００７３】
オフセット調整電圧ＯＳの変化のさせ方は、ここではオフセット調整電圧ＯＳの調整範囲の最小値ＯＳｍｉｎから１ずつ増加させていく方法をとったが、増加量は自由に変更可能である。また、調整範囲の最大値ＯＳｍａｘから減少させていってもよいし、あるいは２分探索法などの方法を用いてもよい。
【００７４】
また、ここでオフセット調整電圧ＯＳを変化させていった場合の輝度データの平均値Ｋａｖｅの変化の割合Ｃｋｏｓを計算しておく（ステップＳ６）。ここでは、オフセット調整電圧ＯＳ＝ＯＳｍｉｎのときの輝度データの平均値をＫａｖｅ（ＯＳｍｉｎ）とすると、
Ｃｋｏｓ＝Ｋａｖｅ（ＯＳｍｉｎ）／（ＯＳｍｉｎ−ＯＳｐｉｎｉ）
である。この係数は、後述する輝度ずれ処理（ステップ７０４）で用いる。
【００７５】
次に、印加電圧を調整して、印加電圧の初期値を決定する（ステップ７０３）。
具体的には、図７（３）に示すようにＰＭＴ１５のオフセット調整電圧ＯＳ＝ＯＳｚのまま（ステップＴ１）で印加電圧ＨＶのみを変化させながら（ステップＴ４）、選択された細胞もしくは細胞領域を含む小領域を光ビームで走査して測光する（ステップＴ２）。測光結果は、信号処理回路２０を通して輝度データＫとして得られる。いま、小領域を、一個の細胞を横断する１ラインだとすると、得られる輝度データは図８（２）のようになる。
【００７６】
得られた輝度データＫの最大値Ｋｍａｘと最小値Ｋｍｉｎの差「Ｋｍａｘ−Ｋｍｉｎ」が輝度有効レンジＫＲに最も近くなるような印加電圧ＨＶを印加電圧の初期値ＨＶｉｎｉとする（ステップＴ３，Ｔ５）。
【００７７】
印加電圧ＨＶの変化のさせ方は、ここでは、ＨＶ＝０から１ずつ増加させていく方法をとったが、増加量は自由に変更可能である。また、ＨＶ＝０から開始せずとも、ある値から開始して増加もしくは減少させていってもよいし、２分探索法などの方法を用いてもよい。
【００７８】
また、ここで選択された細胞を含む小領域とは、少なくとも選択された細胞もしくは細胞領域全体が含まれるような二次元（面）領域、あるいは選択された細胞もしくは細胞領域を横断、縦断、斜断するような一次元（線）領域のことである。
【００７９】
また、図８（２）に示すように輝度有効レンジＫＲとは、最大輝度適正値ＫＴｍａｘと最小輝度適正値ＫＴｍｉｎの差「ＫＴｍａｘ−ＫＴｍｉｎ」のことであり、輝度範囲のうち最大輝度適正値ＫＴｍａｘと最小輝度適正値ＫＴｍｉｎの間が測定の有効範囲になるということである。最大輝度適正値ＫＴｍａｘと最小輝度適正値ＫＴｍｉｎはあらかじめ設定しておく。ここでは、それぞれ、輝度範囲の最大値（ＫＭＡＸ）の半分と２０分の１に設定してあるが、この割合は自由に変更可能であり、また、オペレータの所望とする値でもよい。さらに、対象となる標本の種類によって経験的に決められた値を選択するようにしてもよい。
【００８０】
そして、ＰＭＴ１５の暗電流とバックグランド蛍光による輝度のずれをオフセット調整電圧により補正し、オフセット調整電圧の初期値を決定する（ステップ７０４）。
【００８１】
具体的には、図７（４）に示すように最大輝度適正値ＫＴｍａｘと最大輝度値Ｋｍａｘとのずれ、もしくは、図８（２）に示した最小輝度適正値ＫＴｍｉｎと最小輝度値Ｋｍｉｎとのずれを、上記ステップ７０２の処理で求めた係数Ｃｋｏｓを用いてオフセット調整電圧量に換算し、その値をオフセット調整電圧補正量としてオフセット調整電圧仮設定値ＯＳｚに加え、オフセット調整電圧の初期値ＯＳｉｎｉとする。すなわち、
ＯＳｉｎｉ＝ＯＳｚ＋（ＫＴｍａｘ−Ｋｍａｘ）／Ｃｋｏｓ
（あるいは、ＯＳｉｎｉ＝ＯＳｚ＋（ＫＴｍｉｎ−Ｋｍｉｎ）／Ｃｋｏｓ）である（Ｕ１）。
【００８２】
このようにして決定したＰＭＴの印加電圧、オフセット調整電圧の初期値を用いて、次にスライドガラス上に分布する細胞集団全体もしくは仮測定前初期設定において設定した測定範囲の大きさよりも広い範囲に含まれる細胞集団を対象として仮測定を実行する（ステップ６０２）。
【００８３】
仮測定の実行に関しては、上記第１の実施の形態と同様であるので、ここでは説明を省略する。
次に、仮測定を実行して得られた統計的細胞データを基にしてＰＭＴの印加電圧、オフセット調整電圧の最適値を決定する（ステップ６０３）。決定の仕方を図９を用いて説明する。
【００８４】
まず、仮測定で得られた統計的細胞データを基にして、ある条件によって限定される細胞集団、あるいは領域を抽出する（ステップ９０１）。
ここでは、例えば図９（２）に示すように仮測定の実行で得られた統計的細胞データから、ゴミや細胞集塊と細胞を区別するために分裂期にある細胞集団だけを抽出している（ステップＶ１）が、あるいは後述する第３の実施の形態で説明するように細胞分布の偏り、蛍光染色ムラが最小となるような領域を抽出するといったことも考えられる。このようなある特定の細胞集団あるいは領域の抽出は、コンピュータ２２にて自動で行なうことができるが、モニタディスプレイ５０上に必要な情報を表示したうえでオペレータが手動で行なうこともできる。
【００８５】
次に、このようにして抽出された細胞集団あるいは領域の中から、輝度データに関する条件により１乃至複数の細胞を選出し、上述したリコール機能を用いて測定領域まで移動する（ステップ９０２）。
【００８６】
ここでは、図９（３）に示すように蛍光輝度値が最大となるような細胞を１つ選出し（ステップＷ１）、リコール機能を用いて移動することにしているが（ステップＷ２）、蛍光輝度値が最大となる細胞Ａとバックグランド輝度値が最小となる細胞Ｂを選出してどちらかの細胞をリコールするようにしてもよい。
【００８７】
このようにして選択された１乃至複数の細胞に対して、その輝度データからＰＭＴの印加電圧、オフセット調整電圧の最適値を求める（ステップ９０３）。
この工程でのＰＭＴの印加電圧、オフセット調整電圧の求め方は、前述した図７（１）のＰＭＴの印加電圧、オフセット調整電圧の初期値を求める手順のうち、図９（４）に示すように電圧無印加状態での輝度０調整処理（ステップ７０２）と印加電圧調整処理（ステップ７０３）と輝度ずれ補正処理（ステップ７０４）を行なえばよい。
【００８８】
ただし、例えば、蛍光輝度値が最大となるような細胞Ａとバックグランド輝度値が最小となるような細胞Ｂ、というように複数の細胞を選択し、それらの細胞がそれらの細胞を含む小領域におさまらないような位置関係にあるとき、印加電圧調整処理（ステップ７０３）において、リコール機能でそれぞれの細胞に交互に移動しながら印加電圧を変化させ、スキャン、測光して細胞Ａの輝度データの最大値と細胞Ｂの輝度データの最小値との差を輝度有効レンジと比較していくような場合もある。
【００８９】
以上述べてきた方法により、検出器のゲインオフセットの最適値を決めることができる。
以上に示した本実施の形態によれば、検出器のゲインオフセットの最適値を自動で決定できるので、従来、標本７が変わったりするたびにオペレータが行なっていた検出器のゲインオフセットの設定に要する試行錯誤の時間及び手間を削減することができる。
【００９０】
また、仮測定で得られた統計的細胞データを基にある細胞集団あるいは領域を限定してから、検出器のゲインオフセットを決定するための基準となる細胞を選出することができるため、例えば、ゴミの発する蛍光に対して検出器のゲインオフセットを合わせてしまうというような事態を避けることができる。
【００９１】
（第３の実施の形態）
以下図面を参照して本発明の第３の実施の形態に係る走査型サイトメータを説明する。
【００９２】
なお、本実施の形態による走査型サイトメータは、機械的、光学的、電気的な各構成に関しては上記図１及び図２で説明した第１の実施の形態と同様であるため、同一部分は同一符号を用いるものとしてその図示及び説明は省略する。
【００９３】
しかるに、本実施の形態による走査型サイトメータは、細胞分布に偏りがあったり、蛍光染色にムラがあるような標本を測定する際に、測定条件パラメータとして測定範囲を設定するような場合のものである。
【００９４】
以下に本実施の形態による走査型サイトメータの測定条件パラメータの設定における手順について図１０乃至図１２を用いて説明する。
図１０に示すように、本実施の形態における測定条件パラメータの設定に際しては、測定範囲の大きさ（縦×横）の設定（ステップ１００１）、仮測定の実行（ステップ１００２）、及び仮測定で得た統計的細胞データを基に測定範囲の最適値の決定（ステップ１００３）の３段階の手順からなる。
【００９５】
まず、仮測定前初期設定として、測定範囲の大きさ（縦×横）をコンピュータ２２にてオペレータが所望の値を設定する（ステップ１００１）。
次に、スライドガラス上に分布する細胞集団全体もしくは仮測定前初期設定において設定した測定範囲の大きさよりも広い範囲に含まれる細胞集団を対象として仮測定を実行する（ステップ１００２）。
【００９６】
仮測定に関しては、上述した第１の実施の形態と同様であるので、ここでは説明を省略する。
次に、仮測定で得た統計的細胞データを基に測定範囲の最適値を決定する（ステップ１００３）。この決定の仕方を図１１及び図１２を用いて以下に説明する。
【００９７】
まず、図１２に示すように仮測定を実行して得られた各々の細胞の位置の情報から得られる細胞の分布を示す細胞分布平面１２０１上に、仮想測定範囲１２０２を設定する（ステップ１１０１）。この仮想測定範囲１２０２の大きさは、仮測定前初期設定にて設定された測定範囲の大きさに等しい。
【００９８】
そして、コンピュータ２２にてこの仮想測定範囲１２０２中に含まれるマルチプルセルでない細胞（シングルセル）の数と各シングルセルのＶａｌｕｅ値の標準偏差を計算しながら（ステップ１１０２）、細胞分布平面１２０１上の仮想測定範囲１２０２を移動させていく（１１０３）。細胞分布平面１１０１上の仮想測定範囲１２０２の移動の移動幅はストリップの間隔とする。この移動幅は、最隣接細胞間距離程度でも、また、仮想測定範囲の間隔でもよい。
【００９９】
このようにして仮測定で測定した全範囲に対して仮想測定範囲１２０２中に含まれるシングルセルの数と各シングルセルのＶａｌｕｅ値の標準偏差を求めていき、シングルセルの数がより多く、かつ、各シングルセルのＶａｌｕｅ値の標準偏差がより小さくなるような最適測定範囲を見つけ出し、それを、本測定における測定範囲に定める（ステップ１１０４）。
【０１００】
ここで、シングルセルの数がより多く、且つ各シングルセルのＶａｌｕｅ値の標準偏差がより小さくなるような最適測定範囲を見つけ出す方法として、本実施の形態では、シングルセルの数がその最大数の８０％以上となる仮想測定範囲のうち各シングルセルのＶａｌｕｅ値の標準偏差が最小となるような仮想測定範囲を最適測定範囲としている。また、他の方法として、各シングルセルのＶａｌｕｅ値の標準偏差がその最小値の１２０％以下となる仮想測定範囲のうちシングルセルの数が最大となるような仮想測定範囲を最適測定範囲とする方法も考えられる。なお、ここで、シングルセルの数や各シングルセルのＶａｌｕｅ値の標準偏差を規定するレベル（本実施の形態では８０％あるいは１２０％とした）は、当然ながら変更することができる。
【０１０１】
また、ここでは最適測定範囲の条件として、シングルセルの数がより多く、且つ各シングルセルのＶａｌｕｅ値の標準偏差がより小さいという条件を設定したが、シングルセルの数が最大となるような仮想測定範囲を最適測定範囲としてもよいし、各シングルセルのＶａｌｕｅ値の標準偏差が最小となるような仮想測定範囲を最適測定範囲としてもよい。
【０１０２】
また、ここでは細胞分布平面１２０１上に仮想測定範囲１２０２を設定した後の本測定の測定範囲の探索をコンピュータ２２が自動で行なったが、細胞分布平面１２０１上や仮想測定範囲１２０２をモニタディスプレイ５０上に表示し、その情報をオペレータが見て本測定の測定範囲を設定することもできる。このとき、仮想測定範囲１２０２中に含まれる細胞の数や各細胞のＶａｌｕｅ値の標準偏差などの情報をコンピュータ２２にて計算し、随時モニタディスプレイ５０上に表示してもよい。また、このときにコンピュータ２２にてオペレータが仮想測定範囲１２０２の大きさや位置を自由に変更、再設定することも可能である。
【０１０３】
以上に示した本実施の形態によれば、まず、オペレータが設定しなければならない測定条件パラメータ数を、上記第１の実施の形態で示した測定開始点Ｘ座標、Ｙ座標、測定終了点Ｘ座標、及びＹ座標の４つから、測定範囲の幅、及び高さの２つに減じることができる。また、細胞分布に偏りがあったり、細胞が重なり合って細胞集塊を形成していたり、蛍光染色にムラがあるような標本７を従来の走査型サイトメータにて測定する場合、シングルセルの数がより多く、且つ各シングルセルのＶａｌｕｅ値の標準偏差がより小さくなるような最適測定範囲をオペレータが見つけ出すには膨大な時間を費やさねばならず、事実上そのようなことは実行し得ないが、本実施の形態においては最適測定範囲をコンピュータによる自動探索でえることができるため、手間を要さず、且つ探索時間を大幅に削減することができる。
【０１０４】
したがって、最適測定範囲を本実施の形態の如く設定することにより、細胞測定効率が良くなり、なおかつ、蛍光染色ムラからくる細胞周期などの測定精度の劣化を防ぐことができる。
【０１０５】
（第４の実施の形態）
以下図面を参照して本発明の第４の実施の形態に係る走査型サイトメータを説明する。
【０１０６】
なお、本実施の形態による走査型サイトメータは、機械的、光学的、電気的な各構成に関しては上記図１及び図２で説明した第１の実施の形態と同様であるため、同一部分は同一符号を用いるものとしてその図示及び説明は省略する。
【０１０７】
しかるに、本実施の形態による走査型サイトメータは、蛍光染色にムラがあるような標本を測定する際に、測定条件パラメータとして測定範囲を設定するような場合のものである。
【０１０８】
以下に本実施の形態による走査型サイトメータの測定条件パラメータの設定における手順について図１３乃至図１５を用いて説明する。
図１３に示すように、本実施の形態における測定条件パラメータの設定に際しては、小区画の大きさを設定（ステップ１３０１）、仮測定の実行（ステップ１３０２）、及び仮測定で得た統計的細胞データを基に測定範囲の最適値の決定（ステップ１３０３）の３段階の手順からなる。
【０１０９】
まず、仮測定前初期設定として、小区画１５０２の大きさをコンピュータ２２にてオペレータが所望の値を設定する（ステップ１３０１）。
ここで、ガルバノミラー３で走査できる範囲とバンクメモリのメモリ容量による１回に収集できる走査画像データの大きさからくる制限により、走査観察の最小単位は１ストリップであり、このような場合には、この小区画１５０２の大きさは、最小でも１ストリップの大きさと等しく、大きさの指定を１ストリップの大きさの何倍かで指定するものとする。この場合、仮にこの小区画１５０２の大きさは１ストリップの大きさに等しい大きさに指定したこととする。しかし、１ストリップの制限がないような走査型サイトメータにおいては、小区画１５０２の大きさは１ストリップに規定されるものではなく、最小でも細胞集団の統計データが得られる程度の大きさであればよい。
【０１１０】
次に、スライドガラス上に分布する細胞集団全体もしくは仮測定前初期設定において設定した小区画１５０２の大きさよりも広い範囲に含まれる細胞集団を対象として仮測定を実行する（ステップ１３０２）。
【０１１１】
仮測定に関しては、上述した第１の実施の形態と同様であるので、ここでは説明を省略する。
次に、仮測定で得た統計的細胞データを基に測定範囲の最適値を決定する（ステップ１３０３）。この決定の仕方を図１４及び図１５を用いて以下に説明する。
【０１１２】
まず、図１４に示すように仮測定を実行して得られた各々の細胞の位置の情報から得られる細胞の分布を示す細胞分布平面１５０１上を、小区画１５０２で分割する（ステップ１４０１）。
【０１１３】
そして、コンピュータ２２にて、この小区画１５０２毎に含まれているシングルセルの数と各シングルセルのＶａｌｕｅ値の標準偏差を計算する（ステップ１４０２）。
【０１１４】
このようにして仮測定で測定した全小区画に対してシングルセルの数と各シングルセルのＶａｌｕｅ値の標準偏差を求めていき、シングルセルの数があるレベル以上存在し、かつ、各シングルセルのＶａｌｕｅ値の標準偏差があるレベル内におさまっているような小区画をすべて見つけ出し、それらを、本測定における測定範囲に定める（ステップ１４０３）。
【０１１５】
ここで、シングルセルの数がその最大数８０％以上となる小区画のうち、各シングルセルのＶａｌｕｅ値の標準偏差がその最小値の１２０％以下となるような小区画すべてを、本測定における測定範囲に定めているが、ここで設けたシングルセルの数や各シングルセルのＶａｌｕｅ値の標準偏差を規定する、上記８０％、１２０％といったレベルは当然ながら変更することができるものである。
【０１１６】
また、ここでは、細胞分布平面１５０１を小区画１５０２で分割した後の、本測定の測定範囲の探索をコンピュータ２２が自動で行なったが、細胞分布平面１５０１上や小区画１５０２をモニタディスプレイ５０上に表示し、その情報をオペレータが見て本測定の測定範囲を設定することもできる。このとき、小区画１５０２中に含まれる細胞の数や各細胞のＶａｌｕｅ値の標準偏差などの情報をコンピュータ２２にて計算し、随時モニタディスプレイ５０上に表示してもよい。また、このときにコンピュータ２２にてオペレータが小区画１５０２の大きさを自由に変更、再設定することも可能である。
【０１１７】
以上に示した本実施の形態によれば、まず、オペレータが設定しなければならない測定条件パラメータ数を、上記第１の実施の形態で示した測定開始点Ｘ座標、Ｙ座標、測定終了点Ｘ座標、及びＹ座標の４つから、小区画の大きさ（１ストリップの何倍であるか）の１つに減じることができる。また、蛍光染色にムラがあるような標本７を従来の走査型サイトメータにて測定する場合、シングルセルがある程度存在し、且つ各シングルセルの蛍光染色の度合いが均一となっているような場所を、オペレータがすべて見つけ出して測定範囲を決定するには膨大な時間を費やさねばならず、事実上そのようなことは実行し得ないが、本実施の形態においては最適測定範囲をコンピュータによる自動探索で得ることができるため、手間を要さず、且つ探索時間を大幅に削減することができる。
【０１１８】
したがって、測定範囲を本実施の形態の如く設定することにより、測定効率が良くなり、かつ、蛍光染色ムラからくる細胞周期などの測定精度の劣化を防ぐことができる。
【０１１９】
なお、本発明は上記第１乃至第４の実施の形態に限ることなく、その要旨を逸脱しない範囲内で種々変形して実施することが可能であるものとする。
請求項４記載の発明は、上記請求項１記載の発明において、上記測定条件パラメータは測定範囲であり、上記仮測定前初期設定手段は、上記測定範囲を分割した小区画の大きさを設定し、上記決定手段は、上記仮測定実行手段により得た上記細胞集団の上記小区画毎の統計的データを基に測定範囲を決定することを特徴とする。
【０１２０】
このような構成とした結果、上記請求項１記載の発明の作用に加えて、測定条件パラメータとして測定条件パラメータとして測定範囲を適用しており、複数の適切な測定範囲を自動的に決定することができる。
【０１２１】
【発明の効果】
請求項１記載の発明によれば、測定条件パラメータの最適値を決定するのに必要となる広範囲にわたる情報を短時間に得ることができるうえ、オペレータが測定条件パラメータの妥当性を判断、設定する作業を削減することができる。
【０１２２】
請求項２記載の発明によれば、上記請求項１記載の発明の効果に加えて、検出器のゲインオフセットの最適値を自動で決定できるので、従来、オペレータが行なっていた検出器のゲインオフセットの設定にかかる試行錯誤や手間を削減できる。また、仮測定で得られた情報をもとに、ある細胞集団あるいは領域を限定してから検出器のゲインオフセットを決定するための基準となる細胞を選出することができるため、設定された検出器のゲインオフセットの最適値としての信頼性を高められる。
【０１２３】
請求項３記載の発明によれば、上記請求項１記載の発明の効果に加えて、測定範囲の設定でオペレータが設定すべきパラメータ数が４つから２つに減る。さらに、その測定範囲を測定して得られるデータの信頼性、および、一貫性を高められるとともに、そのような最適な測定範囲をオペレータが探索する作業を削減できる。
【０１２４】
請求項４記載の発明によれば、上記請求項１記載の発明の効果に加えて、測定範囲の設定でオペレータが設定すべきパラメータ数が４つから１つに減る。さらに、適切な測定範囲をオペレータが探索する手間を削減できる上に、得られるデータの信頼性、及び一貫性を高めることができ、さらには一度の仮測定で複数の適切な測定範囲を抽出できるので、測定効率の向上にも寄与することができる。
【図面の簡単な説明】
【図１】本発明の第１の実施の形態に係る走査型サイトメータの機械的構成及び光学的構成を示す模式図。
【図２】同実施の形態に係る電気回路構成を示すブロック図。
【図３】同実施の形態に係る測定条件パラメータ設定手段を説明する流れ図。
【図４】同実施の形態に係るラフスキャンを説明する図。
【図５】同実施の形態に係る測定範囲のストリップへの分割と走査方法を示す図。
【図６】本発明の第２の実施の形態に係るＰＭＴの印加電圧、オフセット調整電圧の設定する手段を説明するフローチャート。
【図７】同実施の形態に係るＰＭＴの印加電圧、オフセット調整電圧の初期値の決定に要する工程を示すフローチャート。
【図８】同実施の形態に係るＰＭＴの印加電圧、オフセット調整電圧の初期値の決定に要する工程の説明を補足する図。
【図９】同実施の形態に係るＰＭＴの印加電圧、オフセット調整電圧の最適値の決定に要する工程を説明するフローチャート。
【図１０】本発明の第３の実施の形態に係る測定範囲の設定に要する手順を説明するフローチャート。
【図１１】同実施の形態に係る測定範囲の最適値決定に要する工程を説明するフローチャート。
【図１２】同実施の形態に係る細胞分布平面上の仮想測定範囲を説明する図。
【図１３】本発明の第４の実施の形態に係る測定範囲の設定に要する手順を説明するフローチャート。
【図１４】同実施の形態に係る測定範囲の決定に要する工程を説明するフローチャート。
【図１５】同実施の形態に係る細胞分布平面上の小区画を説明する図。
【図１６】従来の走査型サイトメータでＰＭＴの印加電圧、オフセット調整電圧を設定する方法を説明する図。
【図１７】従来の走査型サイトメータで測定範囲を設定する方法を説明する図。
【符号の説明】
１…レーザ光源
２…ダイクロイックミラー
３…ガルバノミラ−
４…瞳投影レンズ
５…光路切替えミラー
６…対物レンズ
７…標本
８…コンデンサレンズ
９…ビームスプリッタ
１０…リングスリット
１１…フォトダイオード（ＰＤ）
１２…透過照明光源
１３…バリアフィルタ
１４…集光レンズ
１５，１５ａ〜１５ｃ…光電子倍増管（ＰＭＴ）
１６…顕微鏡観察光学系
１６ａ…ＣＣＤカメラ
１７…走査ステージ
１８…スポット投影レンズ
１９…落射照明光源
２０ａ〜２０ｄ…信号処理回路
２２…コンピュータ
２３…走査制御回路
２４…本体制御部
３２…ＣＰＵバス
３３…ＣＰＵ
３６…ＧＰＩＢインターフェース制御回路（ＧＰＩＢ  Ｉ／Ｆ）
３７…ＲＣＵ
３８…入出力回路
３９，４０…ステッピングモータ
４１，４２…ステッピングモータ駆動回路
４５…波形発生回路
４６…Ｄ／Ａ変換機
４７…ＧＰＩＢボード
４８ａ，４８ｂ…メモリボード
４９…ビデオボード
５０…モニタディスプレイ
【図１】
0003735190.tif 000002
【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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【図１４】
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【図１５】
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【図１６】
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【図１７】
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