(57)【要約】本発明は、マトリカリア（Ｍａｔｒｉｃａｒｉａ）属またはアンテミス（Ａｎｔｈｅｍｉｓ）属に属する植物の植物体または該植物体の抽出物を有効成分として含有する、鎮痒または抗掻痒活性を有する経口剤、飲食品、飼料、食品添加剤または飼料添加剤に関する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
マトリカリア（Ｍａｔｒｉｃａｒｉａ）属またはアンテミス（Ａｎｔｈｅｍｉｓ）属に属する植物の植物体または該植物体の抽出物を有効成分として含有する、鎮痒または抗掻痒活性を有する経口剤。
【請求項２】
マトリカリア属またはアンテミス属に属する植物がカミツレである、請求の範囲１記載の経口剤。
【請求項３】
マトリカリア属またはアンテミス属に属する植物が、ドイツカミツレ（Ｍａｔｒｉｃａｒｉａ  ｃｈａｍｏｍｉｌｌａ  ＬＩＮＮＡＥＵＳ）またはローマカミツレ（Ａｎｔｈｅｍｉｓ  ｎｏｂｉｌｉｓＬ．）である、請求の範囲１記載の経口剤。
【請求項４】
抽出物が溶媒抽出物または超臨界流体抽出物である、請求の範囲１〜３のいずれかに記載の経口剤。
【請求項５】
溶媒抽出物が、水性媒体、１価脂肪族アルコール、酢酸アルキル、脂肪族ケトン、脂肪族炭化水素および脂環式炭化水素から選ばれる１以上の溶媒によって抽出される物質である、請求の範囲４記載の経口剤。
【請求項６】
溶媒抽出物が、水、メタノール、エタノール、酢酸エチル、アセトン、ヘキサンおよびシクロヘキサンから選ばれる１以上の溶媒によって抽出される物質である、請求の範囲４記載の経口剤。
【請求項７】
超臨界流体抽出物が超臨界二酸化炭素によって抽出される物質である、請求の範囲４記載の経口剤。
【請求項８】
アトピー性皮膚炎または花粉症に由来する痒みに対する鎮痒または抗掻痒活性を有する、請求の範囲１〜７のいずれかに記載の経口剤。
【請求項９】
マトリカリア属またはアンテミス属に属する植物の植物体または該植物体の抽出物を添加してなる飲食品または飼料。
【請求項１０】
マトリカリア属またはアンテミス属に属する植物がカミツレである、請求の範囲９記載の飲食品または飼料。
【請求項１１】
マトリカリア属またはアンテミス属に属する植物が、ドイツカミツレまたはローマカミツレである、請求の範囲９記載の飲食品または飼料。
【請求項１２】
抽出物が溶媒抽出物または超臨界流体抽出物である、請求の範囲９〜１１のいずれかに記載の飲食品または飼料。
【請求項１３】
溶媒抽出物が、水性媒体、１価脂肪族アルコール、酢酸アルキル、脂肪族ケトン、脂肪族炭化水素および脂環式炭化水素から選ばれる１以上の溶媒によって抽出される物質である、請求の範囲１２記載の飲食品または飼料。
【請求項１４】
溶媒抽出物が、水、メタノール、エタノール、酢酸エチル、アセトン、ヘキサンおよびシクロヘキサンから選ばれる１以上の溶媒によって抽出される物質である、請求の範囲１２記載の飲食品または飼料。
【請求項１５】
超臨界流体抽出物が超臨界二酸化炭素によって抽出される物質である、請求の範囲１２記載の飲食品または飼料。
【請求項１６】
アトピー性皮膚炎または花粉症に由来する痒みに対する鎮痒または抗掻痒活性を有する、請求の範囲９〜１５のいずれかに記載の飲食品または飼料。
【請求項１７】
マトリカリア属またはアンテミス属に属する植物の植物体または該植物体の抽出物を有効成分として含有する、鎮痒または抗掻痒活性を有する食品添加剤または飼料添加剤。
【請求項１８】
マトリカリア属またはアンテミス属に属する植物がカミツレである、請求の範囲１７記載の食品添加剤または飼料添加剤。
【請求項１９】
マトリカリア属またはアンテミス属に属する植物が、ドイツカミツレまたはローマカミツレである、請求の範囲１７記載の食品添加剤または飼料添加剤。
【請求項２０】
抽出物が溶媒抽出物または超臨界流体抽出物である、請求の範囲１７〜１９のいずれかに記載の食品添加剤または飼料添加剤。
【請求項２１】
溶媒抽出物が、水性媒体、１価脂肪族アルコール、酢酸アルキル、脂肪族ケトン、脂肪族炭化水素および脂環式炭化水素から選ばれる１以上の溶媒によって抽出される物質である、請求の範囲２０記載の食品添加剤または飼料添加剤。
【請求項２２】
溶媒抽出物が、水、メタノール、エタノール、酢酸エチル、アセトン、ヘキサン、シクロヘキサンから選ばれる１以上の溶媒によって抽出される物質である、請求の範囲２０記載の食品添加剤または飼料添加剤。
【請求項２３】
超臨界流体抽出物が超臨界二酸化炭素によって抽出される物質である、請求の範囲２０記載の食品添加剤または飼料添加剤。
【請求項２４】
アトピー性皮膚炎または花粉症に由来する痒みに対する鎮痒または抗掻痒活性を有する、請求の範囲１７〜２３のいずれかに記載の食品添加剤または飼料添加剤。
【請求項２５】
鎮痒または抗掻痒活性を有する経口剤の製造のためのマトリカリア属またはアンテミス属に属する植物の植物体または該植物体の抽出物の使用。
【請求項２６】
マトリカリア属またはアンテミス属に属する植物の植物体または該植物体の抽出物を経口投与することを特徴とする、掻痒症の治療方法。
【発明の詳細な説明】
技術分野
本発明は、鎮痒または抗掻痒活性を有する経口剤、飲食品または飼料に関する。
背景技術
掻痒は、知覚神経を介して知覚されると考えられている。すなわち、掻痒は、限局性ないし汎発性のちくちくする感じなどの痛みとは異なる自発的に生ずる皮膚粘膜の感じ、疼痛の変形したものといわれており、軽度の持続性刺激が加わる場合に、知覚神経から脊髄後根、脊髄前側索、視床を経て大脳皮質に伝わり、掻痒として知覚される。
掻痒は種々の原因が皮膚の知覚神経終末板、特に表皮下神経叢に分布するＣ−繊維神経レセプターを、軽度にしかも持続的に刺激することによって起こると考えられており、さらに大脳中枢部の視床、皮質で認識される中枢性のものもある（医学大辞典、“皮膚掻痒症”の項、南山堂、１９９８）。
抗掻痒、すなわち痒みを治療する方法としては、一般に、抗ヒスタミン剤や化学伝達物質遊離抑制薬で痒みをコントロールしながら、原疾患を治療する方法が知られている。その他、痒みの治療方法としては、例えば炎症を抑えるための副腎皮質ホルモンの投与、心因性の原因を抑えるための鎮静薬の投与、乾燥した皮膚のための保湿剤の外用などが知られている（医学大辞典、「そう痒」の項、南山堂、１９９８）。
一方、汎発性の痒み、特にアトピー性皮膚炎での痒みについては、抗ヒスタミン剤では完全に解消できない難治性の痒みが残ることが知られている。この痒みによる患部の掻破がドライスキンや炎症を誘発することがあり、これが症状を悪化・慢性化させる大きな原因になると考えられている。
アトピー性皮膚炎は、発汗、掻破、摩擦などの外的刺激によって容易に増悪することが知られ（檜垣祐子、実験医学別冊  メディカル用語ライブラリー「アレルギー」、第１２８−１２９頁、１９９６）、また痒みが最も重要な治療目標となっている（西岡  清、「アトピー性皮膚炎テキスト」、第５４−５７頁、南江堂、１９９５）。
アトピー性皮膚炎の治療剤として、抗ヒスタミン・抗アレルギー剤、抗炎症剤、保湿剤、抗菌剤、抗酸化剤などが知られている。
しかし、アトピー性皮膚炎において生じる掻痒を完全に抑えることのできる医薬品や食品は知られていない。
キク科のマトリカリア（Ｍａｔｒｉｃａｒｉａ）属に属する植物であるドイツカミツレ（Ｍａｔｒｉｃａｒｉａ  ｃｈａｍｏｍｉｌｌａ  ＬＩＮＮＡＥＵＳ；Ｍａｔｒｉｃａｒｉａ  ｒｅｃｕｔｉｔａ  Ｌ．またはＣｈａｍｏｍｉｌｌａ  ｒｅｃｕｔｉｔａ（Ｌ．）ＲＡＵＳＣＨＥＲＴともいう）や、アンテミス（Ａｎｔｈｅｍｉｓ）属に属する植物であるローマカミツレ（Ａｎｔｈｅｍｉｓ  ｎｏｂｉｌｉｓ  Ｌ．；Ｃｈａｍａｅｍｅｌｕｍ  ｎｏｂｉｌｅ（Ｌ．）ＡＬＬＩＯＮＩともいう）には、以下の薬理作用、効能効果が知られている。
ヨーロッパでは古くから風邪、頭痛、下痢にはカミツレ（カモミールともいう）の花に熱湯を注いでカミツレ・ティーを飲む風習がある。中国ではカミツレを母菊、欧薬菊と称し、花や全草が感冒やリウマチの疼痛に用いられている（原色牧野和漢薬草大図鑑、三橋博監修、第５６８頁、北隆館）。特に、乾燥した頭状花は、抗炎症、鎮痙、駆風薬として用いられている。胃病には芳香性苦味健胃薬として有効であり、胆嚢と胃の分泌を促進して食欲を増進し、多量に用いると催吐薬になることが知られている。
また、カミツレ抽出物を含有し、健康増進に有効な健康飲料が知られている（特許第２１２４２３７号）。さらに、経口剤としては、例えば３α−ヒドロキシステロイドデヒドロゲナーゼもしくはヒアルロニダーゼに対して阻害活性を有する、カミツレ等のハーブの粉末または抽出物を含有してなる抗炎症用組成物が知られている（特開平３−１４５４３０号）。
一方、カミツレ抽出物は、化粧品に利用されている生薬として一般的なものであり、ツヤやハリを与えたり、抜け毛を防ぐ目的でシャンプー、リンス等に、かさつきや炎症を起こしやすい皮膚の鎮静の目的でクリーム、化粧水等の基礎化粧料に、創傷治癒促進、痔や慢性の湿疹の痒みを抑える目的で浴剤に、それぞれ用いられている（’９５漢方・生薬利用ビジネス、第９０−９１頁、シーエムシー、１９９５）。
また、カミツレ抽出物を含有してなる外用剤としては、例えば抗体産生抑制作用および肌柔軟化作用を有するアトピー性皮膚炎等の症状緩和に好適な浴用剤（特開平９−１００２３６号）ならびにカミツレ抽出物およびセファランチンを有効成分として含有してなるフケ、かゆみに有効な養毛料（特公平６−６５２５号）等が知られている。
しかし、経口摂取によるカミツレの鎮痒または抗掻痒作用については知られていない。
発明の開示
本発明の目的は、鎮痒または抗掻痒活性、例えばアトピー性皮膚炎による皮膚の痒み、花粉症による目の痒み、乾燥肌による皮膚の痒み等の慢性かつ難治性の痒みを緩和し、掻破による症状の悪化を防止する活性を有する、経口剤、飲食品、飼料、食品添加剤または飼料添加剤を提供することにある。
本発明は、下記（１）〜（２６）に関する。
（１）マトリカリア（Ｍａｔｒｉｃａｒｉａ）属またはアンテミス（Ａｎｔｈｅｍｉｓ）属に属する植物の植物体または該植物体の抽出物を有効成分として含有する、鎮痒または抗掻痒活性を有する経口剤。
（２）マトリカリア属またはアンテミス属に属する植物がカミツレである、（１）記載の経口剤。
（３）マトリカリア属またはアンテミス属に属する植物が、ドイツカミツレ（Ｍａｔｒｉｃａｒｉａ  ｃｈａｍｏｍｉｌｌａ  ＬＩＮＮＡＥＵＳ）またはローマカミツレ（Ａｎｔｈｅｍｉｓ  ｎｏｂｉｌｉｓＬ．）である、（１）記載の経口剤。
（４）抽出物が溶媒抽出物または超臨界流体抽出物である、（１）〜（３）のいずれかの経口剤。
（５）溶媒抽出物が、水性媒体、１価脂肪族アルコール、酢酸アルキル、脂肪族ケトン、脂肪族炭化水素および脂環式炭化水素から選ばれる１以上の溶媒によって抽出される物質である、（４）記載の経口剤。
（６）溶媒抽出物が、水、メタノール、エタノール、酢酸エチル、アセトン、ヘキサンおよびシクロヘキサンから選ばれる１以上の溶媒によって抽出される物質である、（４）記載の経口剤。
（７）超臨界流体抽出物が超臨界二酸化炭素によって抽出される物質である、（４）記載の経口剤。
（８）アトピー性皮膚炎または花粉症に由来する痒みに対する鎮痒または抗掻痒活性を有する、（１）〜（７）のいずれかに記載の経口剤。
（９）マトリカリア属またはアンテミス属に属する植物の植物体または該植物体の抽出物を添加してなる飲食品または飼料。
（１０）マトリカリア属またはアンテミス属に属する植物がカミツレである、（９）記載の飲食品または飼料。
（１１）マトリカリア属またはアンテミス属に属する植物が、ドイツカミツレまたはローマカミツレである、（９）記載の飲食品または飼料。
（１２）抽出物が溶媒抽出物または超臨界流体抽出物である、（９）〜（１１）のいずれかに記載の飲食品または飼料。
（１３）溶媒抽出物が、水性媒体、１価脂肪族アルコール、酢酸アルキル、脂肪族ケトン、脂肪族炭化水素および脂環式炭化水素から選ばれる１以上の溶媒によって抽出される物質である、（１２）記載の飲食品または飼料。
（１４）溶媒抽出物が、水、メタノール、エタノール、酢酸エチル、アセトン、ヘキサンおよびシクロヘキサンから選ばれる１以上の溶媒によって抽出される物質である、（１２）記載の飲食品または飼料。
（１５）超臨界流体抽出物が超臨界二酸化炭素によって抽出される物質である、（１２）記載の飲食品または飼料。
（１６）アトピー性皮膚炎または花粉症に由来する痒みに対する鎮痒または抗掻痒活性を有する、（９）〜（１５）のいずれかに記載の飲食品または飼料。
（１７）マトリカリア属またはアンテミス属に属する植物の植物体または該植物体の抽出物を有効成分として含有する、鎮痒または抗掻痒活性を有する食品添加剤または飼料添加剤。
（１８）マトリカリア属またはアンテミス属に属する植物がカミツレである、（１７）記載の食品添加剤または飼料添加剤。
（１９）マトリカリア属またはアンテミス属に属する植物が、ドイツカミツレまたはローマカミツレである、（１７）記載の食品添加剤または飼料添加剤。
（２０）抽出物が溶媒抽出物または超臨界流体抽出物である、（１７）〜（１９）のいずれかに記載の食品添加剤または飼料添加剤。
（２１）溶媒抽出物が、水性媒体、１価脂肪族アルコール、酢酸アルキル、脂肪族ケトン、脂肪族炭化水素および脂環式炭化水素から選ばれる１以上の溶媒によって抽出される物質である、（２０）記載の食品添加剤または飼料添加剤。
（２２）溶媒抽出物が、水、メタノール、エタノール、酢酸エチル、アセトン、ヘキサンおよびシクロヘキサンから選ばれる１以上の溶媒によって抽出される物質である、（２０）記載の食品添加剤または飼料添加剤。
（２３）超臨界流体抽出物が超臨界二酸化炭素によって抽出される物質である、（２０）記載の食品添加剤または飼料添加剤。
（２４）アトピー性皮膚炎または花粉症に由来する痒みに対する鎮痒または抗掻痒活性を有する、（１７）〜（２３）のいずれかに記載の食品添加剤または飼料添加剤。
（２５）鎮痒または抗掻痒活性を有する経口剤の製造のためのマトリカリア属またはアンテミス属に属する植物の植物体または該植物体の抽出物の使用。
（２６）マトリカリア属またはアンテミス属に属する植物の植物体または該植物体の抽出物を経口投与することを特徴とする、掻痒症の治療方法。
本発明の植物としては、マトリカリア属またはアンテミス属に属する植物であればいずれも用いられるが、カミツレに分類される植物が好適に用いられる。
マトリカリア属に属する植物としては、ドイツカミツレ（Ｍａｔｒｉｃａｒｉａ  ｃｈａｍｏｍｉｌｌａ  ＬＩＮＮＡＥＵＳ）、イヌカミツレ（Ｍ．ｉｎｏｄｏｒａＬ．）、オロシャギク（Ｍ．ｍａｔｒｉｃａｒｉｏｉｄｅｓ（Ｌｅｓｓ．）Ｐｏｒｔｅｒ）、シカギク（Ｍ．ｔｅｔｒａｇｏｎｏｓｐｅｒｍａ（Ｆｒ．Ｓｃｈｍ．）Ｈａｒａ  ｅｔ  Ｋｉｔａｍ．）等の、カミツレがあげられる。
アンテミス属に属する植物としては、ローマカミツレ（Ａｎｔｈｅｍｉｓ  ｎｏｂｉｌｉｓ  Ｌ．）、キゾメカミツレ（Ａ．ａｒｖｅｎｓｉｓ  Ｌ．）、コウヤカミツレ（Ａ．ｔｉｎｃｔｏｒｉａ  Ｌ．）等のカミツレがあげられる。
マトリカリア属またはアンテミス属に属する植物のうち、ドイツカミツレ、ローマカミツレが好適に用いられ、ドイツカミツレが特に好適に用いられる。
本発明の植物体としては、例えば野生の植物体、栽培により得られる植物体または組織培養等の培養により得られる植物体の全体、または花、果実、種子、葉、枝、茎、根等の器官などいずれを用いてもよいが、花、特に頭状花が好適に用いられる。また、培養された細胞、カルス、器官等を植物体として用いてもよい。
本発明の植物体は、該植物体をそのまま用いてもよく、該植物体を物理化学的処理または生物学的処理をして得られる処理物として用いてもよい。
物理化学的処理としては、天日乾燥、通風乾燥、凍結乾燥等による乾燥処理、ブレンダー、ホモジナイザー、ボールミル等による粉砕処理などがあげられ、物理化学的処理物としては、乾燥処理物、粉砕処理物等があげられる。
生物学的処理としては、細菌、酵母等による発酵処理などがあげられ、生物学的処理物としては発酵処理物等があげられる。
本発明の植物体の抽出物としては、該植物体から、溶媒抽出、超臨界流体抽出等、植物体から物質を抽出する方法によって取得できる抽出物があげられる。
溶媒抽出に用いる溶媒としては、鎮痒または抗掻痒活性を有する成分を抽出できる溶媒であれば、例えば水性媒体、有機溶媒等いずれでもよい。また、溶媒は単独で用いてもよいし、複数を組み合わせた混合溶媒として用いてもよい。
水性媒体としては、例えば、水、精製水、脱イオン水、蒸留水等があげられる。
有機溶媒としては、例えばメタノール、エタノール、１−ブタノール、１−プロパノール、２−ブタノール、２−プロパノール等の１価脂肪族アルコール、エチレングリコール、プロピレングリコール等の２価脂肪族アルコール、グリセリン等の２価アルコール、酢酸メチル、酢酸エチル等の酢酸アルキル、アセトン、エチルメチルケトン等の脂肪族ケトン、ジメチルエーテル、ジエチルエーテル等の脂肪族エーテル、ヘキサン、ヘプタン、石油エーテル等の脂肪族炭化水素、シクロヘキサン等の脂環式炭化水素、トルエン、ベンゼン等の芳香族炭化水素、クロロホルム、ジクロロメタン、１，１，１，２−テトラフルオロエタン、１，１，２−トリクロロエテン等のハロゲン化脂肪族炭化水素、ゴマ油、トウモロコシ油、オリーブ油、綿実油等の食用油脂、メタン、エタン、プロパン、プロピレン、ブタン、ブチレン等の液化脂肪族炭化水素、ジメチルスルフォキシド等、鎮痒または抗掻痒活性を有する物質が抽出される溶媒であれば、いずれを用いてもよい。
有機溶媒としては、酢酸エチル等の酢酸アルキル、エタノール等の１価脂肪族アルコール、アセトン等の脂肪族ケトンが好ましく、経口投与の観点からはエタノールを用いることがより好ましい。
混合溶媒としては、例えば含水１価アルコールが好ましく、含水率としては、９０％（ｖ／ｖ）以下であることが好ましく、５０％（ｖ／ｖ）以下であることがより好ましい。
溶媒抽出は、撹拌機、超音波発生器、還流抽出器、ソックスレー抽出器等、通常の溶媒抽出で使用される機器が用いられる。
溶媒抽出に用いられる溶媒量は、特に制限はないが、例えば植物体１重量部に対して溶媒を０．１〜１００００重量部、好ましくは１〜１０００重量部、さらに好ましくは５〜１００重量部を用いて行う。抽出温度は、溶媒の融点以上、沸点以下の温度であれば、特に制限はないが、水性媒体では０〜１００℃が好ましく、２０〜８０℃がより好ましく、有機溶媒では０〜１０００℃が好ましく、２０〜８０℃がより好ましい。抽出時間は、特に制限はないが、１分間〜１年間が好ましく、３０分間〜１週間がより好ましい。
溶媒抽出が終了した後、得られた抽出液を、沈降分離、ケーク濾過、清澄濾過、遠心濾過、遠心沈降、圧搾、分離、フィルタープレス等の固液分離方法を用いて、好ましくは濾過により、抽出液を取得し、これを抽出物としてもよい。また、該固液分離方法によって得られた抽出残渣を、抽出溶媒でさらに抽出し、これを抽出物としてもよい。
超臨界流体抽出（単に超臨界抽出ともいう）については、抽剤流体を単独で用いてもよいが、抽剤流体にエントレーナーを混合したものを用いてもよい。
抽剤流体としては、二酸化炭素、アンモニア、メタノール、エタノール、イソプロピルアルコール、エタン、プロパン、ブタン、ペンタン、ヘキサン、ジメチルブタン、ベンゼン、ジクロロジフルオロメタン、ジクロロフルオロメタン、トリクロロフルオロメタン、ジクロロテトラフルオロメタン、クロロトリフルオロメタン、ジエチルエーテル、エチルメチルエーテル、ヘキサン、一酸化二窒素等、いずれの超臨界流体を用いてもよいが、超臨界二酸化炭素が好適に用いられる。
なお、本発明において、超臨界流体（超臨界ガスともいう）とは、臨界温度および臨界圧力を超えた状態にある流体のことをいう。
エントレーナーとしては、メタノール、エタノール等の１価脂肪族アルコール、水、含水１価脂肪族アルコール、アセトンまたはヘキサン等、いずれも用いることができるが、特にエタノールが好適に用いられる。エントレーナーの添加量としては、０．１〜５０％（ｗ／ｗ）であることが好ましく、１〜２０％（ｗ／ｗ）であることがより好ましい。
超臨界流体抽出に用いられる抽剤流体量は、特に制限はないが、例えば植物体１重量部に対して、積算量として５〜１０００重量部、好ましくは２０〜５０重量部の抽剤流体が用いられる。また、必要に応じて、抽剤流体を循環させてもよい。
超臨界流体抽出に用いられるエントレーナー量は、特に制限はないが、例えば超臨界流体１重量部に対して、積算量として０．００１〜１００重量部、好ましくは１〜２０重量部である。
超臨界流体抽出には、超臨界流体抽出装置が用いられる。
超臨界流体抽出に用いられる抽出槽温度および抽出槽圧力は、それぞれ臨界温度および臨界圧力を超えていなければならないが、上限に関しては特に制限はない。
臨界温度および臨界圧力は化合物の種類によって異なるが、例えば二酸化炭素の場合、抽出槽温度は、３１．０６〜１０００℃が好ましく、３１．１〜６０℃がより好ましく、抽出槽圧力は、７２．９〜５０００ａｔｍが好ましく、７５〜１０００ａｔｍがより好ましい。分離槽圧力は、特に制限はないが、１〜５０００ａｔｍが好ましく、１〜１０００ａｔｍがより好ましい。
超臨界流体抽出に用いられる分離槽温度は、特に制限はないが、−２７３．１６〜１０００℃が好ましく、−８０〜２００℃がより好ましい。抽出時間は、特に制限はないが、１分間〜１００時間が好ましく、２０分間〜５時間がより好ましい。
超臨界流体抽出の終了後、分離槽の温度や圧力、充填剤などを変更することによって、抽出液を取得することができる。抽出物の分離方法としては、例えば、等温・減圧法、等温・気液分離法、等圧・加熱怯、等圧・冷却法、吸着法等があげられる。抽出物は、分離操作が終了した後、分離槽内に固形物あるいは液状物として、またエントレーナーを使用した場合はエントレーナー溶液として、取得することができる。
本発明における植物体の抽出物は、植物体から溶媒抽出、超臨界流体分離等の抽出方法により取得した抽出物を、さらに固液分離方法、濃縮または乾燥方法、精製方法等を用いて処理したものであってもよい。
固液分離方法としては、例えば沈降分離、ケーク濾過、清澄濾過、遠心濾過、遠心沈降、圧搾分離、フィルタープレスによる方法等があげられる。
濃縮または乾燥方法としては、加熱濃縮、凍結濃縮、逆浸透濃縮、減圧濃縮、凍結乾燥、自然乾燥、熱風乾燥、通風乾燥、送風乾燥、噴霧乾燥、減圧乾燥、天日乾燥、真空乾燥、スプレードライ、流動層乾燥、泡沫層乾燥、ドラムドライヤーなどの皮膜乾燥法、超音波乾燥法、電磁波乾燥法等の乾燥方法があげられ、減圧濃縮法、スプレードライ方法、凍結乾燥方法が好適に用いられる。
上記抽出物を必要に応じて溶媒に溶解させた後、膜分離法、液体膜分離法、溶媒分配法、分画法等の精製方法を用いて、抽出物中の鎮痒または抗掻痒活性を有する成分の濃度を高めたり、不要物を除去してもよい。
溶媒分配法としては、例えば、水性媒体と有機溶媒とによる液々抽出法、コロイドを含む液体による水性二相分配法があげられ、分液ロートや向流分配装置等を用いて実施することができる。
分画法としては、例えば、分配クロマトグラフィー、吸着クロマトグラフィー、イオン交換クロマトグラフィー、アフィニティクロマトグラフィー、ゲルクロマトグラフィー、透析等があげられる。このうち、ダイヤイオンＨＰ−２０（三菱化学社製）、セファデクスＬＨ−２０（ファルマシア社製）、コスモシール１４０  Ｃ１８−ＯＰＮ（ナカライテスク社製）等の疎水性吸着レジン、シリカゲル６０（ナカライテスク社製）等の親水性吸着レジンを担体とし、水性媒体、メタノール、アセトン、酢酸エチル、クロロホルム、トルエン、ヘキサン等を溶媒とする吸着クロマトグラフィーが好適に用いられる。
本発明の植物体の抽出物の調製に際しては、鎮痒または抗掻痒活性を有する成分を失活させないために、例えば抗酸化剤、保存剤等の添加、加熱温度の調整などがなされてもよい。
本発明の経口剤は、本発明の植物体または該植物体の抽出物を有効成分として含有し、必要に応じて薬理学的に許容される一種もしくはそれ以上の担体、さらに必要に応じて他の治療のための有効成分を含有していてもよい。
本発明の経口剤は、本発明の植物体または該植物体の抽出物を必要に応じ担体と一緒に混合し、製剤学の技術分野においてよく知られている任意の方法により製造される。
投与する剤形としては、錠剤、散剤、顆粒剤、丸剤、カプセル剤、懸濁剤、乳剤、エリキシル剤、シロップ剤、液剤、浸剤・煎剤、エキス剤、チンキ剤、流エキス剤等があげられる。浸剤・煎剤、エキス剤、チンキ剤、流エキス剤等は、マトリカリア属またはアンテミス属に属する植物の植物体の、例えば水、エタノールまたは水とエタノールの混合液、超臨界二酸化炭素等で抽出された抽出物をそのまま、または濃縮することによって調製できるので、経口剤として好適に用いられる。
本発明の経口剤を製剤化する際には、賦形剤、結合剤、崩壊剤、滑沢剤、分散剤、懸濁剤、乳化剤、希釈剤、緩衝剤、抗酸化剤、細菌抑制剤等の添加剤を用いることができる。
経口剤の剤形が、錠剤、散剤、顆粒剤等の場合には、乳糖、白糖、ブドウ糖、蔗糖、マンニトール、ソルビトール等の糖類、バレイショ、コムギ、トウモロコシ等の澱粉、炭酸カルシウム、硫酸カルシウム、炭酸水素ナトリウム、塩化ナトリウム等の無機物、カンゾウ末、ゲンチアナ末等の植物末等の賦形剤、澱粉、寒天、ゼラチン末、結晶セルロース、カルメロースナトリウム、カルメロースカルシウム、炭酸カルシウム、炭酸水素ナトリウム、アルギン酸ナトリウム等の崩壊剤、ステアリン酸マグネシウム、タルク、水素添加植物油、マクロゴール、シリコン油等の滑沢剤、ポリビニールアルコール、ヒドロキシプロピルセルロース、メチルセルロース、エチルセルロース、カルメロース、ゼラチン、澱粉のり液等の結合剤、脂肪酸エステル等の界面活性剤、グリセリン等の可塑剤などを添加して、製剤化することができる。
経口剤の剤形がシロップ剤等の液体調製物である場合は、水、蔗糖、ソルビトール、果糖等の糖類、ポリエチレングリコール、プロピレングリコール等のグリコール類、ごま油、オリーブ油、大豆油等の油類、ｐ−ヒドロキシ安息香酸エステル類等の防腐剤、ストロベリーフレーバー、ペパーミント等のフレーバー類などを添加して、製剤化することができる。
本発明の経口剤のヒトへの投与量は、投与形態、症状の程度、患者の年齢、体重等に応じて異なるが、通常成人に対し一日あたりマトリカリア属またはアンテミス属に属する植物の植物体の乾物重として、０．１〜５０００ｇ、好ましくは１〜５００ｇであり、１日に１回または数回に分けて投与する。なお、植物体の抽出物の場合は、上記範囲の乾物重である植物体から得られた抽出物を投与すればよい。投与期間は、特に限定はないが、通常１日間〜１年間、好ましくは１週間〜３ケ月間である。
本発明の経口剤の動物への投与量は、投与形態、投与動物の種類、該動物の年齢、体重等に応じて異なるが、通常マトリカリア属またはアンテミス属に属する植物の植物体の乾物重として、１日当たり０．１ｍｇ〜１５０ｇ／ｋｇ、好ましくは１ｍｇ〜１５ｇ／ｋｇであり、１日に１回または数回に分けて投与する。なお、植物体の抽出物の場合は、上記範囲の乾物重である植物体から得られる抽出物を投与すればよい。摂取期間は、特に限定はないが、通常は１日間〜１年間、好ましくは１週間〜３ケ月間である。
本発明の経口剤は、他のステロイド剤、抗ヒスタミン剤、抗アレルギー剤等の抗炎症剤と併用してもよい。特に、ステロイド剤と併用するとより強力な鎮痒または抗掻痒効果が得られる。
ステロイド剤としては、プレドニゾロン、コルチゾール、デキサメタゾン、ベタメタゾン等の糖質ステロイド剤、フルドロコルチゾン、アルドステン等の塩類ステロイド剤などが用いられるが、糖質ステロイド剤が好適に用いられる。
本発明の食品添加剤は、本発明の経口剤と同様な方法により調製することができる。食品添加剤は、通常、必要に応じて他の食品添加物を混合または溶解し、例えば粉末、顆粒、ペレット、錠剤、各種液剤の形態に加工製造することができる。
本発明の飲食品は、飲食品中にマトリカリア属またはアンテミス属に属する植物の植物体、該植物体の抽出物または本発明の食品添加剤を添加する以外は、一般的な飲食品の製造方法を用いることにより、加工製造することができる。
本発明の飲食品は、例えば流動層造粒、攪拌造粒、押し出し造粒、転動造粒、気流造粒、圧縮成形造粒、解砕造粒、噴霧造粒、噴射造粒等の造粒方法、パンコーティング、流動層コーティング、ドライコーティング等のコーティング方法、パフドライ、過剰水蒸気法、フォームマット方法、マイクロ波加熱方法等の膨化方法、押出造粒機やエキストルーダー等の押出方法等を用いて製造することもできる。
本発明の飲食品は、ジュース類、清涼飲料水、茶類、乳酸菌飲料、発酵乳、冷菓、バター、チーズ、ヨーグルト、加工乳、脱脂乳等の乳製品、ハム、ソーセージ、ハンバーグ等の畜肉製品、蒲鉾、竹輪、さつま揚げ等の魚肉練り製品、だし巻き、卵豆腐等の卵製品、クッキー、ゼリー、チューインガム、キャンデー、スナック菓子等の菓子類、パン類、麺類、漬物類、燻製品、干物、佃煮、塩蔵品、スープ類、調味料等、いずれの形態のものであってもよい。
また、本発明の飲食品は、例えば粉末食品、シート状食品、瓶詰め食品、缶詰食品、レトルト食品、カプセル食品、タブレット状食品、流動食品、ドリンク剤等の形態のものであってもよい。
本発明の飲食品は、鎮痒または抗掻痒活性を有する健康食品または機能性食品等の飲食品として用いることができる。
本発明の飲食品または食品添加剤には、一般的に飲食品に用いられる食品添加物、例えば甘味料、着色料、保存料、増粘安定剤、酸化防止剤、発色料、漂白料、防かび剤、ガムベース、苦味料、酵素、光沢剤、酸味料、調味料、乳化剤、強化剤、製造用剤、香料、香辛料抽出物等が添加されてもよい。
本発明の飲食品中へのマトリカリア属またはアンテミス属に属する植物の植物体、該植物体の抽出物または食品添加剤の添加量は、飲食品の種類、当該飲食品の摂取により期待する効果等に応じて適宜選択されるが、マトリカリア属またはアンテミス属に属する植物の植物体の乾物重として、通常は０．１〜１００％、好ましくは１〜１００％、さらに好ましくは１０〜１００％含有するように添加される。なお、植物体の抽出物の場合は、上記範囲の乾物重である植物体から得られた抽出物を投与すればよい。
本発明の飲食品の摂取量は、摂取形態、摂取者の年齢、体重等に応じて異なるが、通常成人に対し一日あたリマトリカリア属またはアンテミス属に属する植物の植物体の乾物重として、０．１〜５０００ｇ、好ましくは１〜５００ｇであり、１日に１回または数回に分けて摂取する。なお、植物体の抽出物の場合は、上記範囲の乾物重である植物体から得られた抽出物を摂取すればよい。摂取期間は、特に限定はないが、通常は１日間〜１年間、好ましくは１週間〜３ケ月間である。
本発明の飼料添加剤は、本発明の経口剤と同様な方法により調製することができる。飼料添加剤は、通常、必要に応じて他の飼料添加物を混合または溶解し、例えば粉末、顆粒、ペレット、錠剤、各種液剤の形態に加工製造される。
本発明の飼料としては、哺乳類、鳥類、爬虫類、両生類、魚類等の動物に対して鎮痒または抗掻痒活性を有する飼料であれば、例えばイヌ、ネコ、ウサギ、ネズミ等のペット用飼料、ウシ、ブタ等の家畜用飼料、ニワトリ、七面鳥等の家禽用飼料、タイ、ハマチ等の養殖魚用飼料、トカゲ、ワニ、イグアナ等の爬虫類用飼料、カエル等の両生類用飼料等、いずれの飼料であってもよい。
本発明の飼料は、飼料中にマトリカリア属またはアンテミス属に属する植物の植物体または該植物体の抽出物、あるいは本発明の飼料添加剤を添加する以外は、一般的な飼料の製造方法を用いることにより加工製造することができる。
飼料としては、穀物類、そうこう類、植物性油かす類、動物性飼料、その他の飼料、精製品、またはこれらの混合物等があげられる。
穀物類としては、例えばマイロ、小麦、大麦、えん麦、らい麦、玄米、そば、あわ、きび、ひえ、とうもろこし、大豆等があげられる。
そうこう類としては、例えば米ぬか、脱脂米ぬか、ふすま、末粉、小麦、胚芽、麦ぬか、ペレット、トウモロコシぬか、トウモロコシ胚芽等があげられる。
植物性油かす類としては、例えば大豆油かす、きな粉、亜麻仁油かす、綿実油かす、落花生油かす、サフラワー油かす、やし油かす、パーム油かす、胡麻油かす、ひまわり油かす、菜種油かす、カポック油かす、芥子油かす等があげられる。
動物性飼料としては、例えば北洋ミール、輸入ミール、ホールミール、沿岸ミール等の魚粉、フィッシュソルブル、肉粉、肉骨粉、血粉、分解毛、骨粉、家畜用処理副産物、フェザーミール、蚕よう、脱脂粉乳、カゼイン、乾燥ホエー等があげられる。
その他の飼料としては、アルファルファ、ヘイキューブ、アルファルファリーフミール、ニセアカシア粉末等の植物茎葉類、コーングルデン、ミール、コーングルテンフィード、コーンステープリカー等のトウモロコシ加工工業副産物、デンプン等のデンプン加工品、酵母、ビールかす、麦芽根、アルコールかす、しょう油かす等の発酵工業産物、柑橘加工かす、豆腐かす、コーヒーかす、ココアかす等の農産製造副産物、キャッサバ、そら豆、グアミール、海藻、オキアミ、スピルリナ、クロレラ、鉱物等があげられる。
精製品としては、カゼイン、アルブミン等のタンパク質、アミノ酸、スターチ、セルロース、蔗糖、グルコース等の糖質、ミネラル、ビタミン等があげられる。
本発明の飼料は、例えば流動層造粒、攪拌造粒、押し出し造粒、転動造粒、気流造粒、圧縮成形造粒、解砕造粒、噴霧造粒、噴射造粒等の造粒方法、パンコーティング、流動層コーティング、ドライコーティング等のコーティング方法、パフドライ、過剰水蒸気法、フォームマット方法、マイクロ波加熱方法等の膨化方法、押出造粒機やエキストルーダー等の押出方法等を用いて製造することもできる。
本発明の飼料中へのマトリカリア属またはアンテミス属に属する植物の植物体、該植物体の抽出物または飼料添加剤の添加量は、飼料の種類、当該飼料の摂食により期待する効果等に応じて適宜選択されるが、マトリカリア属またはアンテミス属に属する植物の植物体の乾物重として、通常は０．１〜１００％、好ましくは１〜１００％、さらに好ましくは１０〜１００％含有するように添加される。
本発明の飼料の摂取量は、摂取形態、摂取動物の種類、該動物の年齢、体重等に応じて異なるが、通常マトリカリア属またはアンテミス属に属する植物の植物体の乾物重として、１日当たり０．１ｍｇ〜１５０ｇ／ｋｇ、好ましくは１ｍｇ〜１５ｇ／ｋｇであり、１日に１回または数回に分けて摂取させる。なお、植物体の抽出物の場合は、上記範囲の乾物重である植物体から得られる抽出物を摂取させればよい。摂取期間は、特に限定はないが、通常は１日間〜１年間、好ましくは１週間〜３ケ月間である。
以下に試験例を示す。
試験例１  引掻き行動抑制効果（１）
実施例５で調製されたカミツレ抽出物の１００％（ｖ／ｖ）メタノール分画物（以下、単にカミツレ抽出物の分画物ともいう）を溶剤［ジメチルスルホキシド（以下、ＤＭＳＯと略記する）：ポリオキシエチレンソルビタンモノオレアート：生理食塩水＝１：１：８］に２５ｍｇ／ｍｌとなるよう溶解した液を用いて、１６頭のｄｄＹマウス（４−５週齢、体重約２０ｇ、雄性、日本ＳＬＣ社より購入）の腹腔内に、カミツレ抽出物の分画物を１００ｍｇ／ｋｇ投与した。カミツレ抽出物のメタノール分画物の投与２０分後に、１６頭中８頭のマウスにＣｏｍｐｏｕｎｄ４８／８０（Ｓｉｇｍａ社製）を生理食塩水に０．１２５ｍｇ／ｍｌとなるよう溶解した液を用いて、マウス吻側背部皮下にＣｏｍｐｏｕｎｄ４８／８０を０．５ｍｇ／ｋｇ（２０μｇ／頭）投与し、投与後３０分間のマウスの引掻き行動を観察した。また、残りの８頭に関して、受動型赤外線センサーを利用したスーパーメックス自発運動測定システム（室町機械社製）を用いて、自発運動量に及ぼす影響を観察した。
また、カミツレ抽出物の分画物の溶解液に代えて溶剤（ＤＭＳＯ：ポリオキシエチレンソルビタンモノオレアート：生理食塩水＝１：１：８）のみを投与する以外は上記と同様にして、それぞれ８頭のマウスの引掻き行動および自発運動量を観察した。
なお、マウスは、標準飼料（マウス・ラット・ハムスター飼育繁殖用固形飼料ＣＥ−２の粉末タイプ：日本クレア社製）を自由摂取させて７日間以上予備飼育し、環境に順化させた後に試験を行った。飼育は、温度２２±２℃、湿度３５±１５％、明周期１２時間／暗周期１２時間の条件に維持した飼育室にて、再生紙床敷ＰＣ（日本クレア社製）を敷いたプラスチックケージ（幅２１ｃｍ×奥行き３１ｃｍ×高さ１４ｃｍ：夏目製作所社製）に１頭／ケージで行った。
結果を第１表に示す。なお、測定結果は、平均値±標準誤差（Ｎ＝８）で示し、両群間の比較検定にはｔ−検定を行い、危険率５％未満をもって有意差ありとした。
2002045733.tif 000002
第１表に示されるとおり、自発運動量に関しては、両群間で有意な差は認められなかったが、引掻き行動回数は、カミツレ抽出物の分画物を腹腔内投与した群では、溶剤（ＤＭＳＯ：ポリオキシエチレンソルビタンモノオレアート：生理食塩水＝１：１：８）のみを投与した群に比べ、引掻き回数は７１．２％有意（ｐ＜０．０１）に抑制されていた。このようにカミツレ抽出物の分画物を投与することにより自発運動量に影響することなく、引掻き行動回数が抑制されることから、カミツレ抽出物の分画物は痒みを抑制する効果のあることが判明した。
試験例２  引掻き行動抑制効果（２）
ｄｄＹマウス（４−５週齢、雄性、日本ＳＬＣ社）１２頭に、標準飼料（マウス・ラット・ハムスター飼育繁殖用固形飼料ＣＥ−２の粉末タイプ：日本クレア社製）を自由摂取させて３日間予備飼育し、１日間絶食させた後、以下の摂食試験を行った。
６頭のマウスに、実施例５で調製されたカミツレ抽出物の分画物を１％（ｗ／ｗ）含有する標準飼料を自由摂取させて１週間飼育した後、試験例１と同様の方法により、マウスにＣｏｍｐｏｕｎｄ４８／８０を０．５ｍｇ／ｋｇ投与し、投与後３０分間の引掻き行動を観察した。
また、カミツレ抽出物の分画物を１％（ｗ／ｗ）含有する標準飼料（以下、カミツレ抽出物の分画物含有飼料という）に代えて標準飼料のみを自由摂食させる以外は上記と同様にして、６頭のマウスの引掻き行動を観察した。
飼育は、温度２２±２℃、湿度３５±１５％、明周期１２時間／暗周期１２時間の条件に維持した飼育室にて、再生紙床敷ＰＣ（日本クレア社製）を敷いたプラスチックケージ（幅１２．５ｃｍ×奥行き２０ｃｍ×高さ１１ｃｍ：夏目製作所社製）に１頭／ケージで行った。飼育期間中、マウスには飼料および水道水を自由摂取させた。なお、床敷きの交換は１週間に１回とした。
結果を第２表に示す。なお、測定結果は、平均値±標準誤差（Ｎ＝６）で示し、両群間の比較検定にはｔ−検定を行い、危険率５％未満をもって有意差ありとした。
2002045733.tif 000003
第２表に示されるとおり、カミツレ抽出物の分画物含有飼料摂食群は、標準飼料摂食群に比べて、飼育期間中における体重増加量で有意差は認められなかったが、引掻き行動では６３．３％抑制されていた（Ｐ＜０．０２で有意）。
試験例３  引掻き行動抑制効果（３）
ｄｄＹマウス（４−５週齢、雄性、日本ＳＬＣ社）３３頭に、標準飼料（マウス・ラット・ハムスター飼育繁殖用固形飼料ＣＥ−２の粉末タイプ：日本クレア社製）を自由摂取させて３日間予備飼育し、１日間絶食させた後、以下の摂食試験を行った。なお、試験例２と同じ条件でマウスの飼育を行った。
６頭のマウスに、実施例１で調製したカミツレの水抽出物を７．７％（ｗ／ｗ）（カミツレ末換算で３０％（ｗ／ｗ）相当）含有する標準飼料（以下、ＭＣＨＷ含有飼料という）を自由摂取させて１１日間飼育した。その後、試験例１と同様の方法により、それぞれの群のマウスにＣｏｍｐｏｕｎｄ４８／８０を０．７５ｍｇ／ｋｇ投与し、投与後３０分間のマウスの引掻き行動を観察した。
また、ＭＣＨＷ含有飼料に代えて、実施例１で調製したカミツレの酢酸エチル抽出物を１．２％（ｗ／ｗ）（カミツレ末換算で３０％（ｗ／ｗ）相当）含有する標準飼料（以下、ＭＣＥＡ含有飼料という）、市販のカミツレ精油（カモミール油、小川香料社製）を１％（ｗ／ｗ）（カミツレ末換算で３０％（ｗ／ｗ）相当以上）含有する飼料（以下、ＭＣＥＯ含有飼料という）および標準飼料のみを、それぞれ自由摂食させる以外は上記と同様にして、６頭（標準飼料摂取群のみ１５頭）のマウスの引掻き行動を観察した。
なお、測定結果は、平均値±標準誤差（Ｎ＝６−１５）で示し、各飼料摂食群と標準食群間の比較検定にはＤｕｎｎｅｔｔ法を行い、危険率５％未満をもって有意差ありとした。
試験期間中の体重増加量に関する結果を第３表に示す。
2002045733.tif 000004
第３表に示されるとおり、ＭＣＨＷ含有飼料摂食群、ＭＣＥＡ含有飼料摂食群、ＭＣＥＯ含有飼料摂食群、および標準飼料摂食群の間で、試験期間中の体重増加量には有意差はなかった。
引掻き行動回数に関する結果を第４表に示す。
2002045733.tif 000005
第４表に示されるとおり、ＭＣＥＡ含有飼料摂取群のみで、引掻き行動が標準飼料摂取群に比べて４５．５％抑制されていた（Ｐ＜０．０１で有意）。ＭＣＨＷ含有飼料摂取群は標準飼料摂取群に比べて、有意差は認められなかったが、引掻き行動が２６．７％抑制されていた。
試験例４  引掻き行動抑制効果（４）
ｄｄＹマウス（４．５週齢、雄性、日本ＳＬＣ社）５６頭に、標準飼料（マウス・ラット・ハムスター飼育繁殖用固形飼料ＣＥ−２の粉末タイプ：日本クレア社製）を自由摂取させて３日間予備飼育した後に、１日間絶食させた後、以下の摂食試験を行った。なお、マウスの飼育は試験例２と同じ条件で行った。
１６頭のマウスに、実施例１５で調製したカミツレのエタノール抽出物を３．９％（ｗ／ｗ）（カミツレ末換算で３０％（ｗ／ｗ）相当）含有する標準飼料（以下、ＭＣＥｔ含有飼料という）を自由摂取させて１０日間飼育した。その後、試験例１と同様の方法により、マウスにＣｏｍｐｏｕｎｄ４８／８０を０．５０ｍｇ／ｋｇ投与し、３０分間の引掻き行動を観察した。
また、ＭＣＥｔ含有飼料に代えて、実施例１６で調製したカミツレのエタノール抽出物の酢酸エチル分配物を１．９％（ｗ／ｗ）（カミツレ末換算で３０％（ｗ／ｗ）相当）含有する標準飼料（以下、ＭＣＥＥ含有飼料という）および標準飼料のみを、それぞれ１６頭および２４頭のマウスに自由摂食させる以外は上記と同様にして、マウスの引掻き行動を観察した。
なお、測定結果は、平均値±標準誤差（Ｎ＝１６−２４）で示し、各飼料摂食群と標準食群間の比較検定にはＤｕｎｎｅｔｔ法を行い、危険率５％未満をもって有意差ありとした。
マウスの引掻き行動回数および引掻き行動測定時の体重増加量を第５表に示す。
2002045733.tif 000006
第５表に示されるとおり、ＭＣＥＥ含有飼料摂食群では標準飼料摂食群に比べて、引掻き行動が４２．９％抑制されていた（Ｐ＜０．０１で有意）。これに対し、各摂取群の間において体重増加量に有意差は認められなかった。
試験例５  引掻き行動抑制効果（５）
ｄｄＹマウス（４．５週齢、雄性、日本ＳＬＣ社）５７頭に、標準飼料（マウス・ラット・ハムスター飼育繁殖用固形飼料ＣＥ−２の粉末タイプ：日本クレア社製）を自由摂取させて３日間予備飼育し、１日間絶食させた後、以下の摂食試験を行った。なお、マウスの飼育は試験例２と同じ条件で行った。
１３頭のマウスに、実施例８で調製したカミツレの超臨界抽出物を０．７０％（ｗ／ｗ）（カミツレ末換算で３０％（ｗ／ｗ）相当）含有する標準飼料（以下、ＭＣＳＣ１含有飼料という）を自由摂取させて１０日間飼育した。その後、試験例１と同様の方法により、マウスにＣｏｍｐｏｕｎｄ４８／８０を０．５０ｍｇ／ｋｇ投与し、投与後３０分間の引掻き行動を観察した。
また、ＭＣＳＣ１含有飼料に代えて、実施例９で調製したカミツレの超臨界抽出物を０．９４％（ｗ／ｗ）（カミツレ末換算で３０％（ｗ／ｗ）相当）含有する標準飼料（以下、ＭＣＳＣ２含有飼料という）、実施例１０で調製したカミツレの超臨界抽出物を１．０５％（ｗ／ｗ）（カミツレ末換算で３０％（ｗ／ｗ）相当）含有する標準飼料（以下、ＭＣＳＣ３含有飼料という）、実施例１１で調製したカミツレの超臨界抽出物を１．２０％（ｗ／ｗ）（カミツレ末換算で３０％（ｗ／ｗ）相当）含有する標準飼料（以下、ＭＣＳＣ４含有飼料という）および標準飼料のみを、それぞれ１３頭、７頭、７頭および１７頭のマウスに自由摂食させる以外は上記と同様にして、マウスの引掻き行動を観察した。
なお、測定結果は、平均値±標準誤差（Ｎ＝７−１７）で示し、各飼料摂食群と標準食群間の比較検定にはＤｕｎｎｅｔｔ法を行い、危険率５％未満をもって有意差ありとした。
マウスの引掻き行動回数および引掻き行動測定時の体重増加量を第６表に示す。
2002045733.tif 000007
第６表に示されるとおり、ＭＣＳＣ３含有飼料摂食群は標準飼料摂食群に比べて、引掻き行動が５３．６％抑制されていた（Ｐ＜０．０５で有意）。また、ＭＣＳＣ１、ＭＣＳＣ２およびＭＣＳＣ４含有飼料摂食群は標準飼料摂食群に比べて、有意差は認められなかったが、引掻き行動が約３０％抑制されていた。これに対し、摂取群の間において飼育期間中の体重増加量に有意差は認められなかった。
試験例６  引掻き行動抑制効果（６）
ｄｄＹマウス（４−５週齢、雄性、日本ＳＬＣ社）２７頭に、標準飼料（マウス・ラット・ハムスター飼育繁殖用固形飼料ＣＥ−２の粉末タイプ：日本クレア社製）を自由摂取させて３日間飼育し、１日間絶食させた後、以下の摂食試験を行った。
９頭のマウスに、実施例６で調製したカミツレの酢酸エチル抽出物を０．４１％（ｗ／ｗ）（カミツレ末換算で１０％（ｗ／ｗ）相当）含有する標準飼料（以下、０．４１％ＭＣＥＡ含有飼料という）を自由摂取させて１１日間飼育した。その後、試験例１と同様の方法により、マウスにＣｏｍｐｏｕｎｄ４８／８０を０．５０ｍｇ／ｋｇ投与し、３０分間の引掻き行動を観察した。
また、０．４１％ＭＣＥＡ含有飼料に代えて、ＭＣＥＡを１．２４％（ｗ／ｗ）（カミツレ末換算で３０％（ｗ／ｗ）相当）含有する標準飼料（以下、１．２４％ＭＣＥＡ含有飼料という）および標準飼料のみを、それぞれ自由摂取させる以外は上記と同様にして、マウスの引掻き行動を観察した。
なお、測定結果は、平均値±標準誤差（Ｎ＝７−９）で示し、各飼料摂食群と標準食群間の比較検定にはＤｕｎｎｅｔｔ法を行い、危険率５％未満をもって有意差ありとした。
マウスの引掻き行動回数および飼育期間中の体重増加量を第７表に示す。
2002045733.tif 000008
第７表に示されるとおり、１．２４％ＭＣＥＡ含有飼料摂食群では標準飼料摂食群に比べて、引掻き行動が３１．１％抑制されていた（Ｐ＜０．０５で有意）。これに対し、摂取群の間において、試験終了時の体重増加量に有意差は認められなかった。
試験例７  引掻き行動抑制効果（７）
ｄｄＹマウス（４−５週齢、雄性、日本ＳＬＣ社）４３頭に、標準飼料（マウス・ラット・ハムスター飼育繁殖用固形飼料ＣＥ−２の粉末タイプ：日本クレア社製）を自由摂取させて３日間飼育し、１日間絶食させた後、以下の摂食試験を行った。
８頭のマウスに、実施例１７で調製したエタノール抽出物酢酸エチル分配物を２．０１％（ｗ／ｗ）（カミツレ末換算で３０％（ｗ／ｗ）相当）含有する標準飼料（以下、エタノール抽出物酢酸エチル分配物含有飼料という）を自由摂取させて１０日間飼育した。その後、試験例１と同様の方法により、Ｃｏｍｐｏｕｎｄ４８／８０を１６．３μｇ／頭（下記標準飼料摂食群への０．５０ｍｇ／ｋｇの投与量に相当する）投与し、投与後３０分間の引掻き行動を観察した。
また、エタノール抽出物酢酸エチル分配物含有飼料に代えて、実施例１８で調製した水抽出残渣エタノール抽出物を５．６４％（ｗ／ｗ）（カミツレ末換算で３０％（ｗ／ｗ）相当）含有する標準飼料（以下、水抽出残渣エタノール抽出物含有飼料という）、温水抽出残渣エタノール抽出物（Ｉ）を５．０９％（ｗ／ｗ）（カミツレ末換算で３０％（ｗ／ｗ）相当）含有する標準飼料（以下、温水抽出残渣エタノール抽出物（Ｉ）含有飼料という）、温水抽出残渣エタノール抽出物（ＩＩ）を３．６５％（ｗ／ｗ）（カミツレ末換算で３０％（ｗ／ｗ）相当）含有する標準飼料（以下、温水抽出残渣エタノール抽出物（ＩＩ）含有飼料という）および標準飼料のみを、それぞれ自由摂取させる以外は上記と同様にして、マウスの引掻き行動を観察した。
なお、測定結果は、平均値±標準誤差（Ｎ＝８、標準飼料群のみＮ＝１１）で示し、各飼料摂食群と標準食群間の比較検定にはＤｕｎｎｅｔｔ法を行い、危険率５％未満をもって有意差ありとした。
マウスの引掻き行動回数および飼育期間中の体重増加量を第８表に示す。
2002045733.tif 000009
第８表に示されるとおり、エタノール抽出物酢酸エチル分配物含有飼料摂食群では標準飼料摂食群に比べて、引掻き行動が４６．０％抑制されていた（Ｐ＜０．０５で有意）。水抽出残渣エタノール抽出物含有飼料、温水抽出残渣エタノール抽出物含有飼料（Ｉ）および（ＩＩ）でも、有意差は認められなかったが、標準飼料摂食群に比べて、それぞれ３５．４％、３８．９％および２９．８％の引掻き行動の抑制が認められた。一方、温水抽出残渣エタノール抽出物含有飼料（Ｉ）および（ＩＩ）摂取群では、標準飼料摂食群に比べて体重増加量に有意差は認められなかった。水抽出残渣エタノール抽出物含有飼料摂取群では、標準飼料摂食群に比べて体重増加量は有意に低下していたが、その差は２．７ｇとそれほど大きくなく、試験実施時の体重はそれぞれ、３０．０±１．８ｇおよび３２．５±１．７ｇであった。
試験例８  引掻き行動抑制効果（８）
ｄｄＹマウス（４−５週齢、雄性、日本ＳＬＣ社）２０頭に、標準飼料（マウス・ラット・ハムスター飼育繁殖用固形飼料ＣＥ−２の粉末タイプ：日本クレア社製）を自由摂取させて３日間予備飼育した後に、１日間絶食させた後、以下の摂食試験を行った。
８頭のマウスに、カミツレの５０％エタノール抽出物（ＣＨＡＭＯＬＩＬＬＡＥ  ＦＬＯＲＥＸＴＲ．Ｓ．ＳＩＣＣ、Ｐｒｏｄｕｃｔ  Ｎｏ．０８５７４２、Ｆｌａｃｈｓｍａｎｎ社製）を５％（ｗ／ｗ）含有する標準飼料を自由摂取させて１０日間飼育した後、試験例１と同様の方法により、マウスにＣｏｍｐｏｕｎｄ４８／８０を２５．４μｇ／頭投与し、投与後３０分間の引掻き行動を観察した。
また、カミツレ５０％エタノール抽出物を５％（ｗ／ｗ）含有する標準飼料（以下、カミツレ抽出物含有飼料という）に代えて標準飼料のみを自由摂食させる以外は上記と同様にして、１２頭のマウスの引掻き行動を観察した。
飼育は、温度２２±２℃、湿度３５±１５％、明周期１２時間／暗周期１２時間の条件に維持した飼育室にて、床敷（ペーパークリーン、三協ラボサービス社製）を敷いたプラスチックケージ（幅１２．５ｃｍ×奥行き２０ｃｍ×高さ１１ｃｍ：夏目製作所社製）に１頭／ケージで行った。飼育期間中、マウスには飼料および水道水を自由摂取させた。なお、床敷きの交換は３日間に１回とした。
結果を第９表に示す。なお、測定結果は、平均値±標準誤差（Ｎ＝８−１２）で示し、両群間の比較検定にはｔ−検定を行い、危険率５％未満をもって有意差ありとした。
2002045733.tif 000010
第９表に示されるとおり、カミツレ抽出物含有飼料摂食群は標準飼料摂食群に比べて、有意差は認められなかったが、引掻き行動が２７．０％抑制されていた。なお、カミツレ抽出物含有飼料摂食群は、標準飼料摂食群に比べて、飼育期間中における体重増加量で有意差は認められなかった。
試験例９  引掻き行動抑制効果（９）
ｄｄＹマウス（４−５週齢、雄性、日本ＳＬＣ社より購入）２４頭に、標準飼料（マウス・ラット・ハムスター飼育繁殖用固形飼料ＣＥ−２の粉末タイプ：日本クレア社製）を自由摂取させて３日間以上予備飼育し、環境に順化させた後に以下の試験を行った。
２４頭のマウスに、実施例１で調製したカミツレの酢酸エチル抽出物を溶剤（エタノール：ポリオキシエチレンソルビタンモノオレアート：生理食塩水＝１：１：８）に１５ｍｇ／ｍｌとなるよう溶解した液として、カミツレ抽出物の分画物を３００ｍｇ／ｋｇ経口投与した。カミツレの酢酸エチル抽出物の投与２時間後に、Ｃｏｍｐｏｕｎｄ４８／８０（Ｓｉｇｍａ社製）を生理食塩水に０．２ｍｇ／ｍｌとなるよう溶解した液を用いて、マウス吻側背部皮下にＣｏｍｐｏｕｎｄ４８／８０を２０μｇ／部位投与し、投与後３０分間のマウスの引掻き行動を観察した。
また、カミツレの酢酸エチル抽出物の溶解液に代えて溶剤のみを投与する以外は上記と同様にして、２４頭のマウスの引掻き行動を観察した。
飼育は、温度２２±２℃、湿度３５±１５％、明周期１２時間／暗周期１２時間の条件に維持した飼育室にて、再生紙床敷ＰＣ（日本クレア社製）を敷いたプラスチックケージ（幅２１ｃｍ×奥行き３１ｃｍ×高さ１４ｃｍ：夏目製作所社製）に６−７頭／ケージで行った。
結果を第１０表に示す。なお、測定結果は、平均値±標準誤差（Ｎ＝２４）で示し、両群間の比較検定にはｔ−検定を行い、危険率５％未満をもって有意差ありとした。
2002045733.tif 000011
第１０表に示されるとおり、カミツレの酢酸エチル抽出物を経口投与した群では、溶剤のみを投与した群に比べて、引掻き行動が３９．６％に抑制されていた（ｐ＜０．０１で有意）。
試験例１０  アトピー性皮膚炎軽減効果（１）
ＮＣ／Ｎｇａマウス（アトピー性皮膚炎自然発症モデル：三協ラボサービス社製）は、通常の環境下で飼育繁殖させるとマウスケクイダニが付着し、長期飼育することによって皮膚炎を自然発症し、また多くの面でヒトの病態に近いモデル動物と考えられている。
そこで、ＮＣ／Ｎｇａマウス（６週齢、雄性）に、標準飼料（マウス・ラット・ハムスター飼育繁殖用固形飼料ＣＥ−２の粉末タイプ：日本クレア社製）を自由摂取させて３日間予備飼育し、１日間絶食させた後、以下の摂食試験を行った。
８頭のＮＣ／Ｎｇａマウスを、２群に分割し、このうち一群は標準飼料摂取群とし、残りの一群をカミツレ末を３０％（ｗ／ｗ）含有する標準飼料（以下、カミツレ末含有飼料ともいう）摂取群とした。なお、カミツレ末含有飼料は、カミツレ（Ｌｏｔ．５３９２２０、高砂薬業社製）の乾燥物を粉砕機（Ｒｏｔｏｒ  Ｓｐｅｅｄ  Ｍｉｌｌ，Ｐｕｌｖｅｒｉｓｅｔｔｅ１４：ＦＲＩＴＳＣＨ社製）で微細粉末化してカミツレ末とし、これを３０％（ｗ／ｗ）含有するように標準飼料と均一に混合することにより調製した。
飼育は、通常の環境下、すなわち温度２２±２℃、湿度３５±１５％、明周期１２時間／暗周期１２時間の条件に維持した飼育室にて、再生紙床敷ＰＣ（日本クレア社製）を敷いたプラスチックケージ（幅２１ｃｍ×奥行き３１ｃｍ×高さ１４ｃｍ、夏目製作所：社製）に２頭／ケージで行った。飼育期間中、マウスには飼料および水道水を自由摂取させた。なお、床敷きの交換は週に１回とした。
通常の環境下で飼育すると、飼育開始後３〜６週間で引掻き行動に起因する掻き傷や出血、脱毛等が認められた。最終的に１５．５週齢（１０８日齢）まで飼育を続けた。
飼育終了後、引掻き行動の指標として皮膚症状のスコアを計測した。皮膚症状は、アトピー性皮膚炎の臨床症状の評価基準に基づき、「発赤・出血」、「浮腫」、「擦傷・潰瘍」、「痂皮形成・乾燥」および「脱毛」の５つの項目について、第１２表に示されるとおり、無症状、軽症、中等症、重度の４段階に分類し、それぞれ０〜３点にスコア化した。
結果を第１１表に示す。
2002045733.tif 000012
第１１表に示されるとおり、スコア合計１５点（５項目×各３点）中、標準飼料摂取群の平均スコア合計８．２、カミツレ末含有飼料摂取群の平均スコア合計６．５で、カミツレ末の摂取による皮膚症状の軽減化傾向が認められた。
なお、標準飼料摂取群の平均餌摂取量は５．７ｇ、試験終了時の平均体重は２６．６ｇであったのに対し、カミツレ末含有飼料摂取群の平均摂取量は５．５ｇ、試験終了時の平均体重は２５．３ｇであり、餌摂取量と平均体重で両群の間において大差はなかった。
また、カミツレ末含有飼料摂取群について、飼育試験終了時に採取した血液を室温で３０分間放置した後に、４℃、１０，０００ｇで５分間遠心分離して血清を採取し、トランスアミナーゼ測定用キット（トランスアミナーゼＣＩＩ−テストワコー（ＰＯＰ・ＴＯＯＳ法）：和光純薬社製）を用いて定法に従い、肝障害の指標であるグルタミン酸オキサロ酢酸トランスアミナーゼ（以下、ＧＯＴと略記する）およびグルタミン酸ピルビン酸トランスアミナーゼ（以下、ＧＰＴと略記する）を測定した。なお、酵素活性は、ＩＵ（国際単位）／Ｌ＝カルメン（Ｋａｒｍｅｎ）単位×０．４８２として算出した。
その結果、血清中のＧＯＴおよびＧＰＴはそれぞれ約３０ＩＵ／Ｌおよび約１５ＩＵ／Ｌと、いずれも正常値の範囲内であり、カミツレ末を摂取したマウスで肝障害は認められなかった。
試験例１１  アトピー性皮膚炎軽減効果（２）
１群当たりのＮＣ／Ｎｇａマウスの頭数を標準飼料群で８頭、カミツレ末含有飼料摂取群で８頭とし、９９日齢まで飼育を続ける以外は、試験例１０と同様の方法により試験を行った。
飼育終了後、引掻き行動の指標として皮膚症状のスコアを計測した。
なお、アトピー性皮膚炎の臨床症状の評価基準は、試験例１０で用いた評価基準からＮＣ／Ｎｇａマウスの系に適したものに改変した。すなわち、試験例１０で用いた評価基準のうち、「発赤・出血」は浮腫や擦傷・潰瘍と識別し難いこと、「痂皮形成・乾燥」はヒトと異なりマウスでは軽微であることから、これらを基準から除き、代わりに引掻きによる症状が最も顕著に表され、かつ定量的な評価が可能である「耳介浮腫」および「耳裂傷」を基準に加えた。そして、「耳介浮腫（耳介厚）」、「耳裂傷（耳介への引掻き傷）」、「浮腫（耳介以外）」、「擦傷・潰瘍（耳介以外）」および「脱毛」の５つの項目について、皮膚症状を第１１表に示されるとおり、無症状、軽症、中等症、重度の４段階に分類し、それぞれ０〜３点にスコア化した。
結果を第１２表に示す。なお、測定結果は、平均値±標準誤差（Ｎ＝８）で示し、両群間の比較検定にはｔ−検定を行い、危険率５％未満をもって有意とした。
2002045733.tif 000013
第１２表に示されるとおり、スコア合計１５点（５項目×各３点）中、標準飼料摂取群の平均スコア合計８．１、カミツレ末含有飼料摂取群の平均スコア合計５．０で、カミツレの摂取により皮膚症状に関するスコアの全般的な低減が確認でき、特に耳浮腫と耳以外の浮腫に関しては、有意な低減効果（それぞれ、Ｐ＜０．０１、Ｐ＜０．０５）が認められた。
なお、付着しているマウスケクイダニを顕微鏡下で観察したところ、カミツレ末含有飼料摂取群と標準食摂取群は、ともに数十匹／頭以上のダニの付着が認められ、両者の間に大きな差違は認められなかった。
アトピー皮膚炎患者やＮＣ／Ｎｇａマウスでは血清中のＩｇＥ量の上昇に伴って皮膚症状が悪化することが知られていることから、カミツレの抗アレルギー作用を検討する目的で、試験開始前と試験終了時にＮＣ／Ｎｇａマウスの血中ＩｇＥ値を測定した。
その結果、皮膚炎を発症する前（試験開始前）ではＮＣ／Ｎｇａマウスの血中ＩｇＥ値は、３．６±１．４ｍｇ／ｍｌであったのに対し、試験終了時では標準飼料群で７５．２±１７．４ｍｇ／ｍｌ、カミツレ末含有食群で９３．７±３７．０ｍｇ／ｍｌといずれも高ＩｇＥ値を示し、両者の間には大きな差違は認められなかった。
試験例１２  接触性皮膚炎抑制効果
ＮＣ／Ｎｇａ  ＴｎｄＣｒｊマウス（ＳＰＦ（ｓｐｅｃｉｆｉｃ  ｐａｔｈｏｇｅｎ−ｆｒｅｅ）：日本チャールズ・リバー社で飼育繁殖されたＮＣ／Ｎｇａマウス）は、通常の環境下に飼育繁殖させるだけでは、皮膚炎を全く自然発症しないが、容易に皮膚炎を生じ易いアトピー体質を有するアトピー性皮膚炎の自然発症モデル動物である。
そこで、ＮＣ／Ｎｇａ  ＴｎｄＣｒｊマウスを用いた塩化ピクリル（Ｐｉｃｒｙｌ  Ｃｈｌｏｒｉｄｅ：以下、ＰＣｌと略記する）により誘発される接触皮膚炎モデル試験を、Ｋｉｔａｇａｋｉらの方法（Ｊ．Ｉｎｖｅｓｔ．Ｄｅｒｍａｔｏｌ．１０５：７４９−７５５，１９９５）の方法および大森らの方法（Ｆｏｌｉａ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．Ｊａｐａｎ  ８０：２６１−２７０，１９８０）を参考にして、以下のとおり行った。
８頭のＮＣ／Ｎｇａ  ＴｎｄＣｒｊマウスを２群に分割し、このうち１群は標準飼料摂取群とし、残りの１群をカミツレ末を３０％（ｗ／ｗ）含有する標準飼料（以下、カミツレ末含有飼料ともいう）摂取群とした。なお、カミツレ末含有飼料は、試験例１０と同様な方法により調製した。
試験例１０と同様な方法により１０週間飼育した後、オリーブ油に溶解した１％（ｗ／ｖ）ＰＣｌ  ２０μｌをマウスの耳朶に塗布（ＰＣｌ初回塗布）して、炎症反応を誘発させた。ＰＣｌ初回塗布の直前および２４時間後（ＰＣｌ塗布１日後）の耳朶の厚さをデジタル式ノギス（Ｄｉｇｉｍａｔｉｃ  Ｃａｌｉｐｅｒ，Ｍｉｔｓｕｔｏｙｏ  Ｃｏ．Ｌｔｄ．）にて測定した。
また、オリーブ油に溶解した１％（ｗ／ｖ）ＰＣｌ  ２０μｌをマウスの耳朶に１、２、５および７日後に再度塗布した。以上５回の反復塗布をしてから５日間経過後（ＰＣｌの初回塗布の１２日後）に耳朶の厚さを測定した。なお、耳朶厚増加量は下式により算出し、平均±標準誤差で示した。
耳朶厚増加量＝ＰＣｌ初回塗布の１日（２４時間）後または１２日後の耳朶の厚さ−ＰＣｌ初回塗布の直前の耳朶の厚さ
結果を第１３表に示す。
2002045733.tif 000014
第１３表に示されるとおり、カミツレ末含有飼料の摂取により、ＰＣｌ初回塗布の１日後に耳朶炎症の抑制傾向が認められ、反復塗布１２日後には有意な抑制効果が認められた（ｔ−検定、Ｐ＜０．０５で有意）。
試験例１４  引掻き行動抑制効果
２，４−ジニトロフルオロベンゼン（２，４−Ｄｉｎｉｔｒｏｆｌｕｏｒｏｂｅｎｚｅｎｅ：以下、ＤＮＦＢと略記する）を予め抗ＤＮＰモノクロナールＩｇＥで感作したマウスの耳朶に塗布すると、感覚神経よりサブスタンスＰ（Ｓｕｂｓｔａｎｃｅ  Ｐ）やニューロキニンＡ（Ｎｅｕｒｏｋｉｎｉｎ  Ａ）等が放出され、引掻き行動が誘発されることが知られている。これに対し、ＮＣ／Ｎｇａ  ＴｎｄＣｒｊマウスでは予め抗ＤＮＰモノクロナールＩｇＥで感作しなくても、ＤＮＦＢ塗布による顕著な引掻き行動の誘発が認められる。そこで、ＮＣ／Ｎｇａ  ＴｎｄＣｒｊマウスを用いたＤＮＦＢにより誘発される引掻き行動モデル試験を、Ｖｅｒｏｎｅｓｉらの方法（Ｔｏｘｉｃｏｌｏｇｙ  ａｎｄ  Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ，１３５，２５８−２６７（１９９５））を参考にして、以下のとおり行った。
１０頭のＮＣ／Ｎｇａ  ＴｎｄＣｒｊマウスを標準飼料摂取群６頭とカミツレ末を３０％（ｗ／ｗ）含有する標準飼料（以下、カミツレ末含有飼料ともいう）摂取群４頭とに分割した。なお、カミツレ末含有飼料は、試験例９と同様な方法により調製した。
試験例１０と同様な方法により１０週間飼育した後、アセトン：オリーブ油＝４：１の割合で混合した溶液に溶解した０．７５％（ｗ／ｖ）ＤＮＦＢ  ５μｌをマウスの両耳朶に塗布し、塗布後０、３０、６０、９０、１２０分後にそれぞれ１０分間ずつ引掻き行動の回数を計測した。なお、測定結果は、平均±標準誤差で示した。
結果を第１４表に示す。
2002045733.tif 000015
第１４表に示されるとおり、いずれの時間帯においてもカミツレ末含有飼料の摂取によりＤＮＦＢで誘発される引掻き行動が抑制されていたが、特に９０−１００分および１２０−１３０分では有意な抑制効果が認められた（ｔ−検定、Ｐ＜０．０５で有意）。
試験例１４  知覚神経刺激抑制効果
カプサイシンは、知覚神経Ａδ−繊維、Ｃ−繊維に特異的に作用し、疼痛や痒み、炎症を誘発することが知られている（Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｒｅｖｉｅｗｓ，４３，１４３−２０１（１９９１））。このため、鎮痒または抗掻痒活性を有する物質は、カプサイシンによる知覚神経刺激を特異的に抑制する素材としてスクリーニングすることができる。
一方、モルモット気管支平滑筋は、知覚神経刺激によって気管支内に分布する知覚神経からサブスタンスＰ等の神経ペプチド（Ｎｅｕｒｏｐｅｐｔｉｄｅ：以下、ＮＰと略記する）が遊離し、これが気管支平滑筋上のＮＰ受容体に結合するか、副交感神経刺激によって副交感神経からアセチルコリン（Ａｃｔｙｌｃｈｏｌｉｎｅ：以下、Ａｃｈと略記する）が放出され、これが気管支平滑筋上のＡｃｈ受容体に結合するか、いずれかにより収縮することが知られている。
そこで、モルモット気管支切片を用いた知覚神経刺激抑制試験を、Ｋｏｂａｙａｓｈｉらの方法（Ｐｌａｎｔａ  Ｍｅｄｉｃａ，６６，５２６−５３０（２０００））に準拠し、以下のとおり行った。
Ｈａｒｔｌｅｙ雌モルモット（日本チャールズリバー社より購入）８週齢、体重４２０〜４７０ｇの頚動脈を切断・放血して速やかに左右の気管支を摘出し、直径約２〜３ｍｍ、長さ１．５〜２ｍｍのリング状切片を４つ調製した。気管支切片は、直ちに１１９ｍｍｏｌ／Ｌ塩化ナトリウム、４．７ｍｍｏｌ／Ｌ塩化カリウム、２．５ｍｍｏｌ／Ｌ塩化カルシウム、１．２ｍｍｏｌ／Ｌリン酸二水素カリウム、１．２ｍｍｏｌ／Ｌ硫酸マグネシウム、２５ｍｍｏｌ／Ｌ炭酸水素ナトリウム、１１．７ｍｍｏｌ／ＬグルコースからなるＫｒｅｂｓ−Ｈｅｎｓｅｌｅｉｔ液を満たしたマグヌス装置（マイクロ・イージーマグヌスＵＣ−２型、２ｍｌ  標本槽×４：いわしや岸本医科産業製）の標本槽中に浸漬した。なお、Ｋｒｅｂｓ−Ｈｅｎｓｅｌｅｉｔ液には、気管支におけるプロスタグランジン類の生成を抑制する目的で５μｍｏｌ／Ｌインドメタシン（Ｉｎｄｏｍｅｔｈａｃｉｎ：フナコシ社製）を添加し、９５％酸素および５％二酸化炭素からなる混合ガスを通気しながら、３７℃に保った。気管支切片は、標本槽内のフックに固定し、０．３ｇ前後の張力をかけ、２０〜３０分間放置して、張力変化が認められなくなるまで安定化した。なお、張力は、圧トランスデューサー（アイソメトリックトランスデューサーＵＭ−２０３、いわしや岸本医科産業社製）により電気信号に変換して測定した。気管支切片が安定化すると張力を０．１５ｇに調整し、電気パルス刺激（１０Ｈｚ、３５Ｖ、０．１μｓｅｃ×８０回）を与えて、二相性の収縮、すなわち一時的なＡｃｈ性収縮および持続的なＮＰ性収縮が起こることを確認し、再び栄養液で洗浄、安定化し、以下の試験に使用した。
気管支切片に副交感神経刺激剤としてＡｃｈの合成誘導体であるカルバコールを２μｍｏｌ／Ｌ添加し、切片の最大収縮力を測定した。
次に、Ａｃｈ性収縮を測定した後、切片を洗浄し、実施例５で調製されたドイツカミツレ抽出物の分画物をＤＭＳＯに溶解したものを１００ｍｇ／ｍｌとなるように添加し、３７℃で１５分間インキュベートした後、知覚神経刺激剤としてカプサイシンを２μｍｏｌ／Ｌ（２μｍｏｌ／Ｌカルバコールと同等の最大収縮力を示す濃度）添加し、直ちにＮＰ性の気管支収縮率を測定した。
また、カプサイシンに代えてカルバコールを２μｍｏｌ／Ｌ添加する以外は上記と同様の方法によりＡｃｈ性の気管支収縮率を測定した。
なお、気管支収縮率は、カミツレ抽出物の分画物で前処理した後のカプサイシンまたはカルバコールによる収縮力を、試験開始前に測定した切片の最大収縮力で除することにより算出した。また、測定結果は、平均値±標準誤差（Ｎ＝４）で示し、カプサイシン誘発収縮抑制作用およびカルバコール性収縮抑制作用間の比較検定はｔ−検定で行い、危険率５％未満をもって有意差ありとした。
結果を第１５表に示す。
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第１５表に示されるとおり、カミツレ抽出物の分画物は、モルモット気管支切片のカプサイシン誘発収縮、すなわち知覚神経刺激を特異的に抑制した（Ｐ＜０．０５で有意）。
試験例１５  くしゃみ反応および鼻掻き行動に対する抑制効果
花粉症性の鼻炎など慢性の鼻炎では、くしゃみや鼻水のみでなく、咽喉の奥や鼻腔の奥に痒みを生じることが多い。また、くしゃみは、痒みと同様に、鼻腔内の知覚神経を軽度に刺激することによって引き起こされる。
そこで、カプサイシン誘発モルモット鼻炎モデルにおけるくしゃみ反応および鼻掻き行動に対する抑制効果の確認試験を、以下のとおり行った。
Ｈａｒｔｌｅｙ系モルモット（５−６週齢、雄性、日本ＳＬＣ社より購入）１０頭は、温度１９〜２５℃、湿度３０〜７０％、明周期１２時間／暗周期１２時間の条件に維持した環境下、市販の固型飼料ラボＧスタンダード（Ｇ−２−Ａ：日本農産工業社製）および飲料水を自由摂取させて５日間以上予備飼育し、環境に順化させた後に、以下の試験を行った。
カミツレの５０％エタノール抽出物（ＣＨＡＭＯＬＩＬＬＡＥ  ＦＬＯＲ  ＥＸＴＲ．Ｓ．ＳＩＣＣ、Ｐｒｏｄｕｃｔ  Ｎｏ．０８５７４２、Ｆｌａｃｈｓｍａｎｎ社製）を溶剤（ＤＭＳＯ：ポリオキシエチレンソルビタンモノオレアート：生理食塩水＝１：１：８）に２５ｍｇ／ｍｌとなるよう溶解した液を用いて、Ｈａｒｔｌｅｙ系モルモットの腹腔内に、カミツレの５０％エタノール抽出液を１００ｍｇ／ｋｇ投与した。カミツレの５０％エタノール抽出物の投与１時間後に、１ｍｍｏｌ／Ｌカプサイシン溶液（エタノールを５％（ｖ／ｖ）およびポリオキシエチレンソルビタンモノオレアートを５％（ｖ／ｖ）含有する生理食塩水に溶解）５０μＬを右側鼻腔内投与して反応を惹起した。鼻腔内投与後３０分間に出現したくしゃみ反応と鼻掻き反応の回数を肉眼的観察により計測し、記録した（カミツレ抽出物投与群）。
また、カミツレの５０％エタノール抽出物の溶解液に代えて溶剤のみを腹腔内投与する以外は上記と同様にして、１０頭のモルモットのくしゃみ反応と鼻掻き反応を肉眼的観察により計測し、記録した（対照群）。
さらに、１ｍｍｏｌ／Ｌカプサイシン溶液に代えてエタノールを５％（ｖ／ｖ）およびポリオキシエチレンソルビタンモノオレアートを５％（ｖ／ｖ）含有する生理食塩水５０μＬを右側鼻腔内投与し、投与後３０分間に出現したくしゃみ反応と鼻掻き反応の回数を肉眼的観察により計測し、記録した（偽刺激群）。
結果を第１６表に示す。なお、測定結果は、平均値±標準誤差（Ｎ＝１０）で示した。統計解析は統計解析ソフトＳＡＳ（Ｒｅｌｅａｓｅ  ６．１２，ＳＡＳ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ社製）を用い、データが離散変数であるためノンパラメトリツク検定法を用い、二群間（偽刺激群と対照群、対照群とカミツレ抽出物投与群）の比較はＷｉｌｃｏｘｏｎの順位和検定で行い、危険率５％未満をもって有意差ありとした。
また、カミツレ抽出物投与群での抑制率は以下の式に従って算出した。
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2002045733.tif 000018
第１６表に示されるとおり、正常モルモットに溶剤のみ投与した群ではカプサイシン刺激によりくしゃみ反応および鼻掻き反応が、偽刺激群に比して、ともに有意に誘発（ｐ＜０．００１）された。正常モルモットでのカプサイシン誘発反応に対し、カミツレの５０％エタノール抽出物を腹腔内に投与した群では、溶剤のみを投与した群（対照群）に比べ、くしゃみ反応を有意に抑制（４３％抑制；ｐ＜０．０５）され、鼻掻き行動も有意ではないが４６％抑制された。
試験例１６  ペット動物での引掻き行動抑制効果
実施例３１で調製したカミツレのエタノール抽出物を含む散剤を、アトピー性皮膚炎、粟粒性皮膚炎、膿皮症、湿疹、舐性皮膚炎、慢性皮膚炎、急性皮膚炎など掻痒を伴う種々の皮膚炎を発症した第１７表に示される２２頭の患犬に、５日間〜１０５日間、１頭当たり０．５〜３．８８ｇまたは体重１０ｋｇ当たり０．５ｇを毎日摂取させた。
2002045733.tif 000019
第１８表に示される投与日数と投与量にて、カミツレのエタノール抽出物を含む散剤を、各患犬に経口投与した。なお、表中の番号は、第１８表に記載された患犬の番号に対応するものである。
表中の番号が４〜１４および１９〜２２の患犬１５頭にカミツレのエタノール抽出物を含む散剤を単独で経口投与した。
表中の番号が１〜３、１５および１６の患犬５頭は、いずれもステロイド剤であるプレドニゾロン（ＰＳ；ヒト用の内服用製剤）を１錠（有効成分は５ｍｇ）／日ずつ単独で投与して治療を続けても明瞭な治療効果が得られなかった犬であるが、これらにカミツレのエタノール抽出物を含む散剤とプレドニゾロンとを併用して経口投与した。
また、表中の番号が１７および１８の膿皮症と診断された患犬２頭には、カミツレのエタノール抽出物を含む散剤を経口投与するとともに、内服用のニューキノロン系抗菌剤（ビクタス）を併用して投与した。
病勢は、発赤、腫脹、浸出液、脱毛、掻痒感の５項目をチェック項目とし、それぞれを総合して、重症、中症、軽症、無症状の４段階に判別した。
また、投与効果は、発赤、腫脹、浸出液、脱毛、掻痒感の５項目をチェック項目とし、獣医師が治療期間中の各項目の変動を総合し、著効、有効、やや有用、無効、悪化の５段階により、抗掻痒に関する効果の判定を行った。
結果を第１８表に示す。
2002045733.tif 000020
第１８表に記載された投与効果につき、カミツレのエタノール抽出物を経口投与した患犬（２２頭）についての抗掻痒に関する有効性を第１９表に、カミツレのエタノール抽出物を単独で経口投与した患犬（１５頭）についての抗掻痒に関する有効性を第２０表に、カミツレのエタノール抽出物とプレドニゾロンとを併用して経口投与した患犬（５頭）についての抗掻痒に関する有効性を第２１表に、それぞれ示す。
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第１９〜２１表に示されるとおり、単独で痒みを伴う皮膚炎を罹患した犬に対して、カミツレのエタノール抽出物を単独で経口投与しても、プレドニゾロンと併用して経口投与しても、抗掻痒に関して効果が認められた。
また、第２１表に示されるとおり、プレドニゾロン単独では明瞭な治療効果が得られなかった重症の皮膚炎に罹患した犬に対しても、カミツレのエタノール抽出物を含む散剤を併用して経口投与することにより、著効例が１例、有効例が１例、中症の皮膚炎にも有効な結果が２例得られ、カミツレ抽出物とプレドニゾロンとを併用して経口投与した場合の有効性が確認された。
以下に実施例を示す。
発明を実施するための最良の形態
実施例１
乾燥したドイツカミツレ（Ｌｏｔ．５３９２２０：高砂薬業社製）の粗末３５０ｇに蒸留水７リットルを加え、超音波発生器（Ｕｌｔｒａｓｏｎｉｃ  Ｃｌｅａｎｅｒ，Ｍｏｄｅｌ  ＳＵＰ−２０：柴田（株）社製）を用いて、７０℃で３時間抽出した。この操作を２回繰り返し、これを濾布（ミラクロース：ヘキスト社製）で濾過し、１４リットル分の抽出液を得た。残渣をさらに蒸留水３リットルで洗浄した。得られた抽出液および洗浄液を合わせ、エバポレーター（東京理化器械社製）を用いて減圧下で濃縮した後、凍結乾燥することにより、カミツレの水抽出物８９．４ｇを得た。
蒸留水に代えて酢酸エチルを用いる以外は、上記と同様な操作を行い、カミツレの酢酸エチル抽出物１４ｇを得た。
実施例２
実施例１の水抽出物の調製の際に、最後の操作で得られる残渣に１００％（ｖ／ｖ）エタノールを６リットル加え、超音波処理しながら３時間抽出した。この操作を２回繰り返し、約１４リットル分の抽出液を得た。該抽出液をエバポレーター（東京理化器械社製）を用いて濃縮乾固することにより、カミツレの水抽出残渣のエタノール抽出物３１．８ｇを得た。
実施例３
エタノール代えてアセトンを用いる以外は実施例２と同様な操作を行い、カミツレの水抽出残渣のアセトン抽出物４０ｇを得た。
実施例４
乾燥したドイツカミツレ（Ｌｏｔ．５３９２２０：高砂薬業社製）の粗末１ｋｇに蒸留水２０リットルを加え、攪拌しながら７０℃で３０分間抽出した。この操作を２回繰り返し、これをミラクロースで濾過し、４０リットル分の抽出液を得た。残渣をさらに蒸留水１０リットルで洗浄した。得られた抽出液および洗浄液を合わせて、減圧下に濃縮した後、凍結乾燥することにより、カミツレの水抽出物２２０ｇを得た。
蒸留水に代えてエタノールおよび酢酸エチルをそれぞれ用いる以外は、上記と同様な操作を行い、エタノール抽出物１００ｇおよび酢酸エチル抽出物３０ｇをそれぞれ得た。
実施例５
ドイツカミツレ（頭状花、Ｌｏｔ．５３９２２０：高砂薬業社製）１ｋｇに７０％（ｖ／ｖ）アセトン２０リットルを加えて、攪拌装置（駆動部：スクローラーＳＣＲ−１２０、攪拌羽根：トルネード用攪拌羽根Ｔ−８０、井内盛栄堂社製）を用いて、室温で６日間攪拌し抽出を行った。抽出液をミラクロースで濾過し、抽出液を得た。残渣に１００％（ｖ／ｖ）アセトン１８リットルを加え、同様に４日間攪拌を行って抽出した。これら２回分の抽出液を合わせ、減圧下でアセトンを留去した後、疎水性吸着レジン（ダイヤイオンＨＰ−２０、２リットル：三菱化学社製）を充填したカラムに通塔し、活性成分を吸着させた。吸着された抽出物を蒸留水で洗浄後、３３％（ｖ／ｖ）メタノール、６６％（ｖ／ｖ）メタノール、１００％（ｖ／ｖ）メタノール、１００％（ｖ／ｖ）アセトンをそれぞれ２ベッドボリューム分ずつ順次溶出し、減圧乾固した。活性画分として、１００％（ｖ／ｖ）メタノール−２画分１１．９ｇ（１．２％（ｗ／ｗ））および１００％（ｖ／ｖ）アセトン−１画分２０．２ｇ（２．０％（ｗ／ｗ））を取得し、それぞれ含水アセトンカミツレ抽出物の１００％（ｖ／ｖ）メタノール分画物および１００％（ｖ／ｖ）アセトン分画物とした。
実施例６
ドイツカミツレ（頭状花、Ｌｏｔ．４４９２２２：高砂薬業社製）４５０ｇを、実施例１と同様の方法を用いて酢酸エチルで抽出し、該抽出液を減圧乾固することにより、カミツレの酢酸エチル抽出物１８．６６ｇを得た。
実施例７
ドイツカミツレ（頭状花、Ｌｏｔ．４４９２２２：高砂薬業社製）５００ｇを、実施例１と同様の方法を用いてシクロヘキサンで抽出し、該抽出液を減圧乾固することにより、カミツレのシクロヘキサン抽出物２０．０ｇを得た。
実施例８
ドイツカミツレ（頭状花：志平商店製）をドライオーブン（Ｃｏｎｓｔａｎｔ  Ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ  Ｏｖｅｎ，ＤＮ６３Ｈ：ヤマト科学社製）を用い、４０℃で１２時間、６０℃で３時間乾燥させた。得られた乾燥物１ｋｇをフードプロセッサー（ＰＲＯ  ＣＨＥＦ  ＦＯＯＤ  ＰＲＯＣＥＳＳＥＲ，ＰＳ−３００Ｓ：中部工機（株）社製）を用いて粗く粉砕した。得られたカミツレ粗末５７６．９ｇを超臨界抽出装置（三菱化工機製）の抽出槽（容量４Ｌ）に充填し、抽出槽圧力３０Ｍｐａ、抽出槽温度４０℃、分離槽圧力４Ｍｐａ、抽出槽４０℃の条件下、２時間で積算量として１９．１ｋｇの二酸化炭素を循環させて抽出を行った。その結果、カミツレの超臨界抽出物２４．８ｇを得た。
実施例９
エントレーナーとして２．２％（ｗ／ｗ）のエタノールを添加する以外は、実施例８と同様の方法を用いて、カミツレの超臨界抽出物を以下のとおり調製した。
ドライオーブン（Ｃｏｎｓｔａｎｔ  Ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ  Ｏｖｅｎ，ＤＮ６３Ｈ：ヤマト科学社製）を用い、４０℃で１２時間、６０℃で３時間乾燥したドイツカミツレ（頭状花、志平商店製）１ｋｇをフードプロセッサー（ＰＲＯ  ＣＨＥＦ  ＦＯＯＤ  ＰＲＯＣＥＳＳＥＲ，ＰＳ−３００Ｓ：中部工機（株）社製）で粗く粉砕した。得られたカミツレ粗末５２７．３ｇを超臨界抽出装置（三菱化工機社製）の抽出槽（容量４Ｌ）に充填し、抽出槽圧力３０Ｍｐａ、抽出槽温度４０℃、分離槽圧力４Ｍｐａ、分離槽温度４０℃の条件下、２時間で積算量として１８．５ｋｇの二酸化炭素を循環させつつ、積算量４１０ｇのエタノールを添加して抽出を行った。得られた抽出物を減圧乾固し、カミツレの超臨界抽出物１３．３８ｇを得た。
実施例１０
エントレーナーとして６．５％（ｗ／ｗ）のエタノールを添加する以外は、実施例８と同様の方法を用いて、カミツレの超臨界抽出物を以下のとおり調製した。
ドライオーブン（Ｃｏｎｓｔａｎｔ  Ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ  Ｏｖｅｎ，ＤＮ６３Ｈ：ヤマト科学社製）を用い、６０℃で８時間乾燥したドイツカミツレ（頭状花：志平商店製）０．６ｋｇをフードプロセッサー（ＰＲＯ  ＣＨＥＦ  ＦＯＯＤ  ＰＲＯＣＥＳＳＥＲ，ＰＳ−３００Ｓ：中部工機社製）で粗く粉砕した。得られたカミツレ粗末５６９．８ｇを超臨界抽出装置（三菱化工機社製）の抽出槽（容量４Ｌ）に充填し、抽出槽圧力３０Ｍｐａ、抽出槽温度４０℃、分離槽圧力４Ｍｐａ、分離槽温度４０℃の条件下、２時間で積算量として１６．０ｋｇの二酸化炭素を循環させつつ積算量１０４２．３ｇのエタノールを添加して抽出を行った。得られた抽出物を減圧乾固し、カミツレの超臨界抽出物１６．５４ｇを得た。
実施例１１
エントレーナーとして８８．２３％（ｗ／ｗ）エタノール水溶液を７．６％（ｗ／ｗ）添加以外は、実施例８と同様の方法を用いて、カミツレの超臨界抽出物を以下のとおり調製した。
ドライオーブンを用い、６０℃で８時間乾燥したドイツカミツレ（頭状花：志平商店製）０．６ｋｇをフードプロセッサーで粗く粉砕した。得られたカミツレ粗末５８２．４ｇを超臨界抽出装置（三菱化工機社製）の抽出槽（容量４Ｌ）に充填し、抽出槽圧力３０Ｍｐａ、抽出槽温度４０℃、分離槽圧力４Ｍｐａ、分離槽温度４０℃の条件下、２時間で積算量として１４．３ｋｇの二酸化炭素を循環させつつ積算量１２２８．７ｇのエタノール水溶液を添加して抽出を行った。得られた抽出物を減圧乾固し、カミツレの超臨界抽出物２３．３ｇを得た。
実施例１２
ローマカミツレ（頭状花：志平商店製）５００ｇをフードプロセッサーで粗く粉砕した。これに蒸留水１０リットルを加え、３時間超音波処理により抽出した。この操作を２回繰り返し、２０リットル分の抽出液を得た。得られた抽出液を、エバポレーターを用いて濃縮した後、凍結乾燥することにより、カミツレの水抽出物１５０ｇを得た。
蒸留水１０リットルに代えてエタノール１０リットルおよび酢酸エチル１０リットルをそれぞれ加える以外は上記方法を用いて、カミツレのエタノール抽出物１１５ｇおよび酢酸エチル抽出物６４ｇをそれぞれ得た。
実施例１３
ローマカミツレ（頭状花：志平商店製）１ｋｇをフードプロセッサーで粗く粉砕した。これに沸騰した蒸留水２０リットルを加えて３０分間抽出した後、濾過した。得られた抽出液をエバポレーターを用いて濃縮した後、凍結乾燥することにより、ローマカミツレの水抽出物２５０ｇを得た。
実施例１４
カミツレ抽出物の分画物を、以下の方法により調製した。
ローマカミツレ（頭状花：志平商店製）１ｋｇをフードプロセッサーで粗く粉砕した。これに７０％（ｖ／ｖ）アセトンを１０リットル加えて一夜冷浸後、超音波処理を１時間を行って抽出液を得た。
抽出液をミラクロースで濾取し、残渣に７０％（ｖ／ｖ）アセトンを１０リットル加え、上記と同様にして抽出液を得た。２回目の７０％（ｖ／ｖ）アセトン抽出液をミラクロースで濾取した後、残渣に１００％（ｖ／ｖ）アセトンを１０リットル加えて一夜冷浸後、超音波処理を１時間行って抽出液を得た。この操作を再び繰り返し、抽出液を得た。これら４回分の抽出液を合わせ、減圧下でアセトンを留去した後、疎水性吸着レジン（ダイヤイオンＨＰ−２０：三菱化学社製）１．４リットルを充填したカラムに通塔し、活性成分を吸着させた。
カラムを蒸留水で洗浄後、３３％（ｖ／ｖ）メタノール、６６％（ｖ／ｖ）メタノール、１００％（ｖ／ｖ）メタノール、１００％（ｖ／ｖ）アセトンをそれぞれ２ベッドボリューム分ずつ加え、吸着された活性成分を順次溶出、分画した後、各々濃縮乾固し、活性画分として、１００％（ｖ／ｖ）メタノール溶出画分および１００％（ｖ／ｖ）アセトン溶出画分を取得し、それぞれをエバポレーターを用いて濃縮乾固することにより、カミツレ抽出物の分画物とした。
実施例１５
乾燥したドイツカミツレ（頭状花：志平商店製）の粗末１．８ｋｇに対し、エタノール３６リットルを加え、超音波発生器（Ｕｌｔｒａｓｏｎｉｃ  Ｃｌｅａｎｅｒ，Ｍｏｄｅｌ  ＳＵＰ−２０：柴田（株）社製）を用いて、５８℃で３時間抽出した。この操作を計３回繰り返し、これを濾布（ミラクロース：ヘキスト社製）で濾過し、１０８リットル分の抽出液を得た。残渣をさらにエタノール１２リットルで洗浄した。得られた該抽出液および洗浄液を合わせ、減圧下に濃縮乾燥することにより、カミツレのエタノール抽出物２３５ｇを得た。
実施例１６
実施例１５で得られたエタノール抽出物５４．８ｇを乳鉢に取り、これに少量の蒸留水および酢酸エチルを加えて磨り潰すようにして溶解した後、分液ロートに移し、蒸留水０．６リットルおよび酢酸エチル０．６リットルを加えて十分振盪後、静置して溶媒分配した。得られた水層を酢酸エチルで２回洗浄した後、酢酸エチル層を合せ、エバポレーターを用いて減圧乾固することにより、カミツレのエタノール抽出物の酢酸エチル分配物２６．４５ｇを得た。
実施例１７
乾燥したドイツカミツレ（頭状花：志平商店製）末０．４ｋｇに対し、エタノールを１６リットル加え、攪拌装置（駆動部：スクローラーＳＣＲ−１２０、攪拌羽根：トルネード用攪拌羽根Ｔ−８０、井内盛栄堂社製）を用いて、４０℃で１４時間抽出した。この操作を合計３回繰り返し、これを濾布（ミラクロース：ヘキスト社製）で濾過し、２４リットル分の抽出液を得た。残渣をさらにエタノール２リットルで洗浄した。得られた該抽出液および洗浄液を合わせ、減圧下に濃縮した後、凍結乾燥することにより、カミツレのエタノール抽出物６１．７３ｇを得た。
得られたエタノール抽出物６０．１９ｇを乳鉢に取り、これに少量の蒸留水および酢酸エチルを加えて磨り潰すようにして溶解した後、容量２リットルの分液ロートに移し、蒸留水０．７リットルおよび酢酸エチル０．７リットルを加えて６０分間振盪後、不溶物をブフナーロート（定性濾紙Ｎｏ．２、アドバンテック東洋）で濾過した後、静置して溶媒分配し、酢酸エチル層を得た。水層はさらに酢酸エチル０．７リットルで２回洗浄した。得られた全ての酢酸エチル層を合わせ、エバポレーターを用いて濃縮乾固することにより、カミツレのエタノール抽出物酢酸エチル分配物２６．１７ｇを得た。
実施例１８
乾燥したドイツカミツレ（頭状花：志平商店製）末０．２ｋｇに対し、蒸留水６リットルを加え、攪拌装置（駆動部：スクローラーＳＣＲ−１２０、攪拌羽根：トルネード用攪拌羽根Ｔ−８０、井内盛栄堂社製）を用いて、２５℃で３０分間抽出した。得られた抽出残渣にエタノール４リットルを加え、攪拌装置（駆動部：スクローラーＳＣＲ−１２０、攪拌羽根：トルネード用攪拌羽根Ｔ−８０、井内盛栄堂社製）を用いて、４０℃で１４時間抽出した。この操作をさらに２回繰り返し、これを濾布（ミラクロース：ヘキスト社製）で濾過し、１２リットル分の抽出液を得た。残渣をさらにエタノール２リットルで洗浄した。得られた該抽出液および洗浄液を合わせ、減圧乾固することにより、カミツレの水抽出残渣エタノール抽出物３７．６ｇを得た。
２５℃蒸留水で３０分間抽出することに代えて、４０℃蒸留水で３０分間抽出する、および４０℃蒸留水で３時間抽出すること以外は、上記と同様な操作を行い、カミツレの温水抽出残渣エタノール抽出物（Ｉ）３３．９ｇおよびカミツレの温水抽出残渣エタノール抽出物（ＩＩ）２４．３ｇをそれぞれ得た。
実施例１９
次の配合により飲料を製造する。
実施例１で製造したカミツレの水抽出物                        ４９ｇ
パインデックス＃３（松谷化学社製）                          ４９ｇ
ピロリン酸第２鉄（鉄源）                                      ０．１ｇ
ホスカルＥＦＣ（カルシウム源：日興ファインプロダクツ社製）    １ｇ
ビタミンミックス（メルク社製）                                １ｇ
上記配合物２０ｇを水１８０ｍｌに分散させて飲料にする。
実施例２０
次の配合により清涼飲料水（１０本分）を製造する。
実施例２で製造したカミツレのエタノール抽出物      ３０ｇ
ビタミンＣ                                          １ｇ
ビタミンＢ１                                        ５ｍｇ
ビタミンＢ２                                      １０ｍｇ
ビタミンＢ６                                      ２５ｍｇ
液糖                                            １５０ｇ
クエン酸                                            ３ｇ
香料                                                １ｇ
水にて１０００ｍｌとする。
実施例２１
次の配合により茶飲料１０００ｍｌを製造する。
実施例１２で製造したカミツレのエタノール抽出物    ３０ｇ
茶葉                                              １５ｇ
水１０００ｍｌにて溶出する。
実施例２２
次の配合で常法によりクッキー（３０個分）を製造する。
実施例１５で製造したカミツレのエタノール抽出物    ３０ｇ
薄力粉                                          １００ｇ
澱粉                                              ７４ｇ
水                                                １４ｇ
ベーキングパウダー                              小さじ２
塩                                              小さじ１／２
卵                                                  １個
バター                                            ８０ｇ
牛乳                                            大さじ２
ハチミツ                                            少量
実施例２３
次の配合で常法により食パン（４斤分）を製造する。
実施例４で製造したカミツレのエタノール抽出物  ６０ｇ
強力粉                                          １ｋｇ
砂糖                                          ５０ｇ
食塩                                          ２０ｇ
脱脂粉乳                                      ２０ｇ
ショートニング                                ６０ｇ
イースト（生）                                ３０ｇ
イーストフード                                  １ｇ
水                                          ６５０ｇ
実施例２４
次の配合で常法によりチューインガム（３０個分）を製造する。
実施例１０で製造したカミツレの超臨界抽出物    １ｇ
ガムベース                                  ２５ｇ
砂糖                                        ６３ｇ
水飴                                        １０ｇ
香料                                          １ｇ
実施例２５
次の配合で常法によりキャンディー（２０個分）を製造する。
実施例１１で製造したカミツレの超臨界抽出物    １ｇ
砂糖                                        ８０ｇ
水飴                                        ２０ｇ
香料                                          ０．１ｇ
実施例２６
次の配合で常法によりマーマレードを製造する。
実施例１２で製造したカミツレの水抽出物    ７ｇ
夏みかんの皮                          ５００ｇ
砂糖                                  ２００ｇ
夏みかんの果汁                          １個分
実施例２７
次の処方で常法により錠剤（１錠あたり３００ｍｇ）を製造する。
実施例４で製造したカミツレの水抽出物  １５０ｍｇ
乳糖                                    ９０ｍｇ
コーンスターチ                          ３０ｍｇ
合成ケイ酸アルミニウム                  １２ｍｇ
カルボキシメチルセルロースカルシウム    １５ｍｇ
ステアリン酸マグネシウム                  ３ｍｇ
実施例２８
次の処方で常法により散剤（１包あたり１０００ｍｇ）を製造する。
実施例４で製造したカミツレのエタノール抽出物  ５００ｍｇ
乳糖                                          ３００ｍｇ
コーンスターチ                                ２００ｍｇ
実施例２９
次の処方でハードカプセル剤（１カプセルあたり３６０ｍｇ）を製造する。
実施例９で製造したカミツレの超臨界抽出物    ２５０ｍｇ
乳糖                                          ６０ｍｇ
コーンスターチ                                ３０ｍｇ
ヒドロキシプロピルセルロース                  ２０ｍｇ
実施例９で製造したカミツレの超臨界抽出物２５０ｍｇに乳糖６０ｍｇおよびコーンスターチ３０ｍｇを添加して混合し、これにヒドロキシプロピルセルロース２０ｍｇの水溶液を添加して練合する。次いで、押し出し造粒機を用いて、常法により顆粒を製造する。この顆粒をゼラチンハードカプセルに充填することにより、ハードカプセル剤を製造する。
実施例３０
次の処方でソフトカプセル剤（１カプセルあたり１７０ｍｇ）を製造する。
実施例１０で製造したカミツレの超臨界抽出物  ５０ｇ
大豆油                                    １２０ｍｇ
大豆油１２０ｍｇに実施例１０で製造したカミツレの超臨界抽出物５０ｍｇを添加して混合する。次いで、ロータリー・ダイズ式自動成型機を用いて、常法に従い、ソフトカプセルに充填することにより、ソフトカプセル剤を製造する。
実施例３１
カミツレの５０％エタノール抽出物（ＣＨＡＭＯＬＩＬＬＡＥ  ＦＬＯＲ  ＥＸＴＲ．Ｓ．ＳＩＣＣ、Ｐｒｏｄｕｃｔ  Ｎｏ．０８５７４２、Ｆｌａｃｈｓｍａｎｎ社製）２ｋｇに軽質無水ケイ酸６ｇを吸湿防止剤として添加して十分混合した後、０．５ｇずつラミネート包装で分包して、散剤を製造した。
実施例３２
カミツレの５０％エタノール抽出物（ＣＨＡＭＯＬＩＬＬＡＥ  ＦＬＯＲ  ＥＸＴＲ．Ｓ．ＳＩＣＣ、Ｐｒｏｄｕｃｔ  Ｎｏ．０８５７４２、Ｆｌａｃｈｓｍａｎｎ社製）５ｋｇに、微結晶性セルロース３．７ｋｇ、ステアリン酸マグネシウム０．５ｋｇ、タルカム０．７５ｋｇ、シリカエーロゲル０．０５ｋｇを添加して十分混合した後、０．５ｇずつラミネート包装で分包して、散剤を製造した。
産業上の利用可能性
本発明によれば、鎮痒または抗掻痒活性を有する経口剤、飲食品、飼料、食品添加剤または飼料添加剤を提供することができる。