(57)【要約】本発明は、ヒドロキシプロリンのＮ−アシル化誘導体またはその塩、ならびにアミノ糖もしくはその塩および／またはグリコサミノグリカンもしくはその塩を有効成分として含有する医薬、飲食品、食品添加剤、動物用飼料、および飼料添加剤、関節炎の予防剤または治療剤の製造のためのヒドロキシプロリンのＮ−アシル化誘導体またはその塩の使用、ならびにヒドロキシプロリンのＮ−アシル化誘導体またはその塩、ならびにアミノ糖もしくはその塩および／またはグリコサミノグリカンもしくはその塩を投与することを特徴とする関節炎の予防方法または治療方法に関する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
ヒドロキシプロリンのＮ−アシル化誘導体またはその塩、ならびにアミノ糖もしくはその塩および／またはグリコサミノグリカンもしくはその塩を含有する医薬。
【請求項２】
ヒドロキシプロリンが、シス−４−ヒドロキシ−Ｌ−プロリン、シス−４−ヒドロキシ−Ｄ−プロリン、シス−３−ヒドロキシ−Ｌ−プロリン、シス−３−ヒドロキシ−Ｄ−プロリン、トランス−４−ヒドロキシ−Ｌ−プロリン、トランス−４−ヒドロキシ−Ｄ−プロリン、トランス−３−ヒドロキシ−Ｌ−プロリンおよびトランス−３−ヒドロキシ−Ｄ−プロリンからなる群より選ばれるヒドロキシプロリンである請求項１記載の医薬。
【請求項３】
ヒドロキシプロリンのＮ−アシル化誘導体のアシル部分が、炭素数２〜２３のアシルである請求項１または２記載の医薬。
【請求項４】
ヒドロキシプロリンのＮ−アシル化誘導体がＮ−アセチルヒドロキシプロリンである請求項１〜３いずれか１項に記載の医薬。
【請求項５】
アミノ糖が、グルコサミンまたはその塩である請求項１〜４いずれか１項に記載の医薬。
【請求項６】
グリコサミノグリカンが、コンドロイチン硫酸またはその塩である請求項１〜５いずれか１項に記載の医薬。
【請求項７】
医薬が、関節炎の予防または治療のための医薬である請求項１〜６いずれか１項に記載の医薬。
【請求項８】
関節炎が、慢性関節リウマチである請求項７記載の医薬。
【請求項９】
ヒドロキシプロリンのＮ−アシル化誘導体またはその塩、ならびにアミノ糖もしくはその塩および／またはグリコサミノグリカンもしくはその塩を含有する飲食品または動物用飼料。
【請求項１０】
ヒドロキシプロリンが、シス−４−ヒドロキシ−Ｌ−プロリン、シス−４−ヒドロキシ−Ｄ−プロリン、シス−３−ヒドロキシ−Ｌ−プロリン、シス−３−ヒドロキシ−Ｄ−プロリン、トランス−４−ヒドロキシ−Ｌ−プロリン、トランス−４−ヒドロキシ−Ｄ−プロリン、トランス−３−ヒドロキシ−Ｌ−プロリンおよびトランス−３−ヒドロキシ−Ｄ−プロリンからなる群より選ばれるヒドロキシプロリンである請求項９記載の飲食品または動物用飼料。
【請求項１１】
ヒドロキシプロリンのＮ−アシル化誘導体のアシル部分が、炭素数２〜２３のアシルである請求項９または１０記載の飲食品または動物用飼料。
【請求項１２】
ヒドロキシプロリンのＮ−アシル化誘導体がＮ−アセチルヒドロキシプロリンである請求項９〜１１いずれか１項に記載の飲食品または動物用飼料。
【請求項１３】
アミノ糖が、グルコサミンまたはその塩である請求項９〜１２いずれか１項に記載の飲食品または動物用飼料。
【請求項１４】
グリコサミノグリカンが、コンドロイチン硫酸またはその塩である請求項９〜１３いずれか１項に記載の飲食品または動物用飼料。
【請求項１５】
ヒドロキシプロリンのＮ−アシル化誘導体またはその塩、ならびにアミノ糖もしくはその塩および／またはグリコサミノグリカンもしくはその塩を含有する食品添加剤または飼料添加剤。
【請求項１６】
ヒドロキシプロリンが、シス−４−ヒドロキシ−Ｌ−プロリン、シス−４−ヒドロキシ−Ｄ−プロリン、シス−３−ヒドロキシ−Ｌ−プロリン、シス−３−ヒドロキシ−Ｄ−プロリン、トランス−４−ヒドロキシ−Ｌ−プロリン、トランス−４−ヒドロキシ−Ｄ−プロリン、トランス−３−ヒドロキシ−Ｌ−プロリンおよびトランス−３−ヒドロキシ−Ｄ−プロリンからなる群より選ばれるヒドロキシプロリンである請求項１５記載の食品添加剤または飼料添加剤。
【請求項１７】
ヒドロキシプロリンのＮ−アシル化誘導体のアシル部分が、炭素数２〜２３のアシルである請求項１５または１６記載の食品添加剤または飼料添加剤。
【請求項１８】
ヒドロキシプロリンのＮ−アシル化誘導体がＮ−アセチルヒドロキシプロリンである請求項１５〜１７いずれか１項に記載の食品添加剤または飼料添加剤。
【請求項１９】
アミノ糖が、グルコサミンまたはその塩である請求項１５〜１８いずれか１項に記載の食品添加剤または飼料添加剤。
【請求項２０】
グリコサミノグリカンが、コンドロイチン硫酸またはその塩である請求項１５〜１９いずれか１項に記載の食品添加剤または飼料添加剤。
【請求項２１】
関節炎の予防剤または治療剤の製造のためのヒドロキシプロリンのＮ−アシル化誘導体またはその塩、ならびにアミノ糖もしくはその塩および／またはグリコサミノグリカンもしくはその塩の使用。
【請求項２２】
ヒドロキシプロリンのＮ−アシル化誘導体またはその塩、ならびにアミノ糖もしくはその塩および／またはグリコサミノグリカンもしくはその塩を投与することを特徴とするヒトまたは非ヒト動物の関節炎の予防方法または治療方法。
【発明の詳細な説明】
技術分野
本発明は、関節炎の予防または治療に効果を有する医薬、飲食品、食品添加剤、動物用飼料、および飼料添加剤に関する。
背景技術
生活習慣の変化、社会の高齢化に伴い、関節炎は今後増加するものと予想される。
Ｎ−アセチルヒドロキシプロリンは、抗炎症作用を示す化学物質として知られている（ＵＳＰ３，８９１，７６５、ＵＳＰ３，９３２，６３８、特公昭４７−４３９４７号公報）。
関節炎モデル動物に関節炎を惹起した後にＮ−アセチルヒドロキシプロリンを投与すると、関節炎の悪化を防止できることが知られている〔Ｊ．Ｄｒｕｇ．Ｄｅｖ．，３，１３５−１４２（１９９０）〕。また、Ｎ−アセチルヒドロキシプロリンは耳、尾の全身性損傷等には治療効果を示すが、関節の軟骨損傷には効果を示さないことが知られている〔Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌ　Ｒｅｓｅａｒｃｈ，３３，３６７−３７３（１９９６）〕。
しかしながら、Ｎ−アセチルヒドロキシプロリン等のヒドロキシプロリンのＮ−アシル化誘導体が関節炎の予防効果を示すことはこれまでに知られていない。
また、軟骨の構成成分である、コンドロイチン、グルコサミン等に関節炎治療効果があることは知られているが（ＷＯ９４／２２４５３）、これにヒドロキシプロリンのＮ−アシル化誘導体を添加した組成物は知られていない。
発明の開示
本発明の目的は、関節炎の予防または治療に効果を有する医薬、飲食品、食品添加剤、動物用飼料および飼料添加剤、ならびにこれらを用いるヒトまたは非ヒト動物の関節炎の予防方法または治療方法を提供することにある。
本発明は、以下の（１）〜（２２）に関する。
（１）　ヒドロキシプロリンのＮ−アシル化誘導体またはその塩、ならびにアミノ糖もしくはその塩および／またはグリコサミノグリカンもしくはその塩を含有する医薬。
（２）　ヒドロキシプロリンが、シス−４−ヒドロキシ−Ｌ−プロリン、シス−４−ヒドロキシ−Ｄ−プロリン、シス−３−ヒドロキシ−Ｌ−プロリン、シス−３−ヒドロキシ−Ｄ−プロリン、トランス−４−ヒドロキシ−Ｌ−プロリン、トランス−４−ヒドロキシ−Ｄ−プロリン、トランス−３−ヒドロキシ−Ｌ−プロリンおよびトランス−３−ヒドロキシ−Ｄ−プロリンからなる群より選ばれるヒドロキシプロリンである上記（１）の医薬。
（３）　ヒドロキシプロリンのＮ−アシル化誘導体のアシル部分が、炭素数２〜２３のアシルである上記（１）または（２）の医薬。
（４）　ヒドロキシプロリンのＮ−アシル化誘導体がＮ−アセチルヒドロキシプロリンである上記（１）〜（３）いずれか１つの医薬。
（５）　アミノ糖が、グルコサミンまたはその塩である上記（１）〜（４）いずれか１つの医薬。
（６）　グリコサミノグリカンが、コンドロイチン硫酸またはその塩である上記（１）〜（５）いずれか１つの医薬。
（７）　医薬が、関節炎の予防または治療のための医薬である上記（１）〜（６）いずれか１つの医薬。
（８）　関節炎が、慢性関節リウマチである上記（７）の医薬。
（９）　ヒドロキシプロリンのＮ−アシル化誘導体またはその塩、ならびにアミノ糖もしくはその塩および／またはグリコサミノグリカンもしくはその塩を含有する飲食品または動物用飼料。
（１０）　ヒドロキシプロリンが、シス−４−ヒドロキシ−Ｌ−プロリン、シス−４−ヒドロキシ−Ｄ−プロリン、シス−３−ヒドロキシ−Ｌ−プロリン、シス−３−ヒドロキシ−Ｄ−プロリン、トランス−４−ヒドロキシ−Ｌ−プロリン、トランス−４−ヒドロキシ−Ｄ−プロリン、トランス−３−ヒドロキシ−Ｌ−プロリンおよびトランス−３−ヒドロキシ−Ｄ−プロリンからなる群より選ばれるヒドロキシプロリンである上記（９）の飲食品または動物用飼料。
（１１）　ヒドロキシプロリンのＮ−アシル化誘導体のアシル部分が、炭素数２〜２３のアシルである上記（９）または（１０）の飲食品または動物用飼料。
（１２）　ヒドロキシプロリンのＮ−アシル化誘導体がＮ−アセチルヒドロキシプロリンである上記（９）〜（１１）いずれか１つの飲食品または動物用飼料。
（１３）　アミノ糖が、グルコサミンまたはその塩である上記（９）〜（１２）いずれか１つの飲食品または動物用飼料。
（１４）　グリコサミノグリカンが、コンドロイチン硫酸またはその塩である上記（９）〜（１３）いずれか１つの飲食品または動物用飼料。
（１５）　ヒドロキシプロリンのＮ−アシル化誘導体またはその塩、ならびにアミノ糖もしくはその塩および／またはグリコサミノグリカンもしくはその塩を含有する食品添加剤または飼料添加剤。
（１６）　ヒドロキシプロリンが、シス−４−ヒドロキシ−Ｌ−プロリン、シス−４−ヒドロキシ−Ｄ−プロリン、シス−３−ヒドロキシ−Ｌ−プロリン、シス−３−ヒドロキシ−Ｄ−プロリン、トランス−４−ヒドロキシ−Ｌ−プロリン、トランス−４−ヒドロキシ−Ｄ−プロリン、トランス−３−ヒドロキシ−Ｌ−プロリンおよびトランス−３−ヒドロキシ−Ｄ−プロリンからなる群より選ばれるヒドロキシプロリンである上記（１５）の食品添加剤または飼料添加剤。
（１７）　ヒドロキシプロリンのＮ−アシル化誘導体のアシル部分が、炭素数２〜２３のアシルである上記（１５）または（１６）の食品添加剤または飼料添加剤。
（１８）　ヒドロキシプロリンのＮ−アシル化誘導体がＮ−アセチルヒドロキシプロリンである上記（１５）〜（１７）いずれか１つの食品添加剤または飼料添加剤。
（１９）　アミノ糖が、グルコサミンまたはその塩である上記（１５）〜（１８）いずれか１つの食品添加剤または飼料添加剤。
（２０）　グリコサミノグリカンが、コンドロイチン硫酸またはその塩である上記（１５）〜（１９）いずれか１つの食品添加剤または飼料添加剤。
（２１）　関節炎の予防剤または治療剤の製造のためのヒドロキシプロリンのＮ−アシル化誘導体またはその塩、ならびにアミノ糖もしくはその塩および／またはグリコサミノグリカンもしくはその塩の使用。
（２２）　ヒドロキシプロリンのＮ−アシル化誘導体またはその塩、ならびにアミノ糖もしくはその塩および／またはグリコサミノグリカンもしくはその塩を投与することを特徴とするヒトまたは非ヒト動物の関節炎の予防方法または治療方法。
ヒドロキシプロリンは、コラーゲン中の主要構成アミノ酸成分として、また、エラスチンの構成アミノ酸成分として自然界に広く存在する。天然に存在するヒドロキシプロリンとしては、プロリンがＤ体であるかＬ体であるか、水酸基の位置が３位か４位か、およびその立体異性体がシス体であるかトランス体であるかによって、８種類の立体異性体が知られている。具体的には、シス−４−ヒドロキシ−Ｌ−プロリン、シス−４−ヒドロキシ−Ｄ−プロリン、シス−３−ヒドロキシ−Ｌ−プロリン、シス−３−ヒドロキシ−Ｄ−プロリン、トランス−４−ヒドロキシ−Ｌ−プロリン、トランス−４−ヒドロキシ−Ｄ−プロリン、トランス−３−ヒドロキシ−Ｌ−プロリンおよびトランス−３−ヒドロキシ−Ｄ−プロリン等があげられる。
本発明においては、いずれのヒドロキシプロリンも用いることができるが、トランス−４−ヒドロキシ−Ｌ−プロリンが好ましく用いられる。
ヒドロキシプロリンは、ブタやウシ等の動物由来のコラーゲンを酸加水分解し、常法により精製して取得することができるが、微生物を用いて製造したヒドロキシプロリンが好ましく用いられる。
微生物としては、アミコラトプシス（Ａｍｙｃｏｌａｔｏｐｓｉｓ）属、ダクチロスポランジウム（Ｄａｃｔｙｌｏｓｐｏｒａｎｇｉｕｍ）属およびストレプトマイセス（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ）属から選ばれる属に属する微生物または該微生物由来のプロリン３位水酸化酵素またはプロリン４位水酸化酵素遺伝子を導入された微生物等を用いることができる。
アミコラトプシス属、ダクチロスポランジウム属およびストレプトマイセス属から選ばれる属に属する微生物由来のプロリン３位水酸化酵素またはプロリン４位水酸化酵素遺伝子の微生物への導入は、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ　Ｃｌｏｎｉｎｇ，Ａ　Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ　Ｍａｎｕａｌ，Ｓｅｃｏｎｄ　Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｃｏｌｄ　Ｓｐｒｉｎｇ　Ｈａｒｂｏｒ　Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ　Ｐｒｅｓｓ（１９８９）、Ｃｕｒｒｅｎｔ　Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ　ｉｎ　Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ　Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｊｏｈｎ　Ｗｉｌｅｙ　＆　Ｓｏｎｓ（１９８７−１９９７）等に記載された方法に準じて行うことができる。
また、例えば、トランス−４−ヒドロキシ−Ｌ−プロリンは、アミコラトプシス属またはダクチロスポランジウム属に属する微生物より単離したプロリン４位水酸化酵素（特開平７−３１３１７９号公報）を用いて製造することができ、また、シス−３−ヒドロキシ−Ｌ−プロリンは、ストレプトマイセス属に属する微生物より単離したプロリン３位水酸化酵素（特開平７−３２２８８５号公報）を用いて製造することもできる〔バイオインダストリー，１４，３１（１９９７）〕。
本発明で用いるヒドロキシプロリンのＮ−アシル化誘導体のアシル部分としては、例えば、炭素数２〜２３の直鎖または分岐状のアシルがあげられ、より具体的には、アセチル、プロピオニル、ブチリル、イソブチリル、バレリル、ヘキサノイル、ヘプタノイル、オクタノイル、デカノイル、エイコサノイル等があげられるが、中でも、アセチル、プロピオニルが好ましい。
ヒドロキシプロリンのＮ−アシル化誘導体は、公知の方法により製造することができる。
即ち、好ましくは炭素数１〜２２のアルキル基を有する脂肪酸の活性誘導体（酸無水物、酸塩化物等）を用い、ヒドロキシプロリンを水性媒体中または有機溶媒中でＮ−アシル化することにより調製できる。
得られたヒドロキシプロリンのＮ−アシル化誘導体は、結晶化、クロマトグラフィー等の通常の精製法を用いて精製することができる。
ヒドロキシプロリンのＮ−アシル化誘導体の塩における塩としては、ナトリウム塩、カリウム塩等のアルカリ金属塩、マグネシウム塩、カルシウム塩等のアルカリ土類金属塩、アンモニウム、テトラメチルアンモニウム等のアンモニウム塩、モルホリン、ピペリジン等の付加した有機アミン付加塩等があげられる。
本発明においてアミノ糖またはその塩としては、例えば、グルコサミン、ガラクトサミン、ノイラミン酸、Ｎ−アセチルグルコサミン、Ｎ−アセチルガラクトサミン、Ｎ−アセチルノイラミン酸、Ｎ−グリコリルノイラミン酸、またはこれらの塩があげられるが、グルコサミンまたはその塩が好ましく用いられる。アミノ糖の塩としては、例えば、塩酸塩、硫酸塩、リン酸塩等があげられる。
グルコサミンは、例えば、甲殻類の殻を脱タンパク質、脱灰分して得られるキチンを濃塩酸で加水分解、脱アセチルし、脱色し、ろ過し、濃縮し、分離し、洗浄し、乾燥して得られるものを用いてもよいし、市販のもの（例えば、グルコサミンＫＨＦ：協和ハイフーズ社製）を用いてもよい。
グルコサミンの塩における塩としては、例えば、塩酸塩、硫酸塩（例えばグルコサミン６−硫酸）、リン酸塩（例えば、グルコサミン６−リン酸）などがあげられる。
ガラクトサミンは、大型動物の気管、鼻などの軟骨、軟骨魚の軟骨などより調製したコンドロイチン硫酸を酸加水分解し、分解物よりイオン交換クロマトグラフィーなどの方法で分離精製して得られるものを用いてもよいし、市販のものを用いてもよい。
ガラクトサミンの塩における塩としては、例えば、塩酸塩、硫酸塩（例えば、ガラクトサミン６−硫酸）、リン酸塩（例えば、ガラクトサミン６−リン酸）などがあげられる。
ノイラミン酸はそのアシル化誘導体であるＮ−アセチルノイラミン酸やＮ−グリコリル体であるＮ−グリコリルノイラミン酸として市販されているものを用いることができる。
本発明において、グリコサミノグリカンとしては、ヒアルロン酸、コンドロイチン、コンドロイチン硫酸、ケラタン硫酸、ヘパリン、ヘパラン硫酸、デルマタン硫酸、またはそれらの塩があげられるが、コンドロイチン硫酸またはその塩が好ましく用いられる。
グリコサミノグリカンの塩としては、ナトリウム塩、カリウム塩、カルシウム塩等があげられる。
コンドロイチン硫酸の塩としては、ナトリウム塩、カリウム塩、カルシウム塩があげられるが、ナトリウム塩が通常用いられる。
コンドロイチン硫酸は、軟骨を中心に一般に動物の結合組織に分布するムコ多糖類の一種であり、組織中では、蛋白質と結合し、プロテオグリカンとして存在する。
コンドロイチン硫酸は、精製したものを用いてもよいし、プロテオグリカンあるいは軟骨抽出物あるいは乾燥軟骨粉末の形態で用いてもよい。
コンドロイチン硫酸をプロテオグリカンの形態で得るには、例えば、サメ、クジラなどの水産動物、牛、豚などの哺乳動物または鳥等の軟骨を原料とし、中性塩法、アルカリ法、酵素法、オートクレーブ法などの公知の方法に従って抽出し、脂肪・固形分などを除去した後、乾燥すればよい。また、脂肪・固形分を除去した後、更に蛋白分解酵素を用いて除蛋白処理し、アルコール沈殿による公知の方法に従って精製すれば、コンドロイチン硫酸またはその塩を精製された状態で得ることができる。
グリコサミノグリカンまたはその塩としては、市販されているヒアルロン酸、コンドロイチン、コンドロイチン硫酸、コンドロイチン塩酸、ケラタン硫酸、ヘパリン、ヘパラン硫酸、デルマタン硫酸、またはこれらの塩を用いてもよい。
本発明の医薬、飲食品、動物用飼料、食品添加剤および飼料添加剤、ならびにこれらを用いるヒトまたは非ヒト動物の関節炎の予防方法または治療方法について以下に示す。
なお、本発明が適用できる関節炎としては、クラミジア関節炎、慢性吸収性関節炎、腸疾患性関節炎、淋菌性関節炎、痛風関節炎、ジャクー関節炎、若年性関節炎、ライム関節炎、アルカプトン尿性関節炎、化膿性関節炎、変形性関節症、肩関節周囲炎（いわゆる五十肩）、過度の運動負荷による関節炎、慢性関節リウマチ等のいずれであってもよいが、とくに慢性関節リウマチに有効である。
（ａ）ヒドロキシプロリンのＮ−アシル化誘導体またはその塩、ならびにアミノ糖もしくはその塩および／またはグリコサミノグリカンもしくはその塩を有効成分として含有する医薬、および該医薬を用いるヒトまたは非ヒト動物の関節炎の予防方法または治療方法
本発明の医薬は、ヒドロキシプロリンのＮ−アシル化誘導体またはその塩、ならびにアミノ糖もしくはその塩および／またはグリコサミノグリカンもしくはその塩をその有効成分として含有する医薬であればいずれでもよいが、好ましくは関節炎の予防剤または治療剤として用いられる。
本発明の医薬は、ヒドロキシプロリンのＮ−アシル化誘導体またはその塩、ならびにアミノ糖もしくはその塩および／またはグリコサミノグリカンもしくはその塩の他に関節炎の予防または治療に有効な任意の他の成分を含有していてもよい。
関節炎の予防または治療に有効な他の成分（以下、単に他の有効成分ともいう）としては、例えば、ホウ素、カルシウム、クロム、銅、マグネシウム、マンガン、セレン、シリコン、亜鉛、Ｓ−アデノシルメチオニン、コラーゲン、コラーゲン加水分解物、ゼラチン、ゼラチン加水分解物、ブロメライン、トリプシン、キモトリプシン、パパイン、ルチン、カロチノイド、フラボノイド、抗酸化ビタミン、γ−リノレン酸、エイコサペンタエン酸、ボスウェリア、カプサイシン、キャッツクロー、デビルズクロー、フィーバーフュー、ショウガ、ネトルス、ナイアシアミド、サメ軟骨、ターメリックおよびクルクミン等の精製物、含有物または抽出物があげられる。
本発明の医薬は、ヒドロキシプロリンのＮ−アシル化誘導体またはその塩、ならびにアミノ糖もしくはその塩および／またはグリコサミノグリカンもしくはその塩、必要に応じて他の有効成分を薬理学的に許容される一種もしくはそれ以上の担体と一緒に混合し、製剤学の技術分野においてよく知られている任意の方法により製造される。
本発明の医薬の投与経路は、関節炎の予防または治療に際して効果的なものを使用するのが望ましく、経口または、例えば静脈内などの非経口をあげることができる。
投与形態としては、例えば、錠剤、カプセル剤、注射剤、点滴剤、シロップ剤、舌下錠、各種クリーム剤、坐剤等があげられる。
経口投与に適当な、例えばシロップ剤のような液体調製物は、水、蔗糖、ソルビット、果糖などの糖類、ポリエチレングリコール、プロピレングリコールなどのグリコール類、ごま油、オリーブ油、大豆油などの油類、ｐ−ヒドロキシ安息香酸エステル類などの防腐剤、ストロベリーフレーバー、ペパーミントなどのフレーバー類などを使用して製造できる。また、錠剤、散剤および顆粒剤などは、乳糖、ブドウ糖、蔗糖、マンニットなどの賦形剤、澱粉、アルギン酸ナトリウムなどの崩壊剤、ステアリン酸マグネシウム、タルクなどの滑沢剤、ポリビニールアルコール、ヒドロキシプロピルセルロース、ゼラチンなどの結合剤、脂肪酸エステルなどの界面活性剤、グリセリンなどの可塑剤などを用いて製造できる。
非経口投与に適当な製剤は、好ましくは受容者の血液と等張である活性化合物を含む滅菌水性剤からなる。例えば、注射剤の場合は、塩溶液、ブドウ糖溶液または塩水とブドウ糖溶液の混合物からなる担体などを用いて注射用の溶液を調製する。
また、これら非経口剤においても、経口剤で例示した希釈剤、防腐剤、フレーバー類、賦形剤、崩壊剤、滑沢剤、結合剤、界面活性剤、可塑剤などから選択される１種もしくはそれ以上の補助成分を添加することができる。
本発明の医薬中のヒドロキシプロリンのＮ−アシル化誘導体またはその塩の含有量は、本発明の医薬１ｇ当たり１〜１０００ｍｇ、好ましくは１０〜５００ｍｇ、とりわけ好ましくは１００〜２００ｍｇである。
また、本発明の医薬中のアミノ糖もしくはその塩およびグリコサミノグリカンもしくはその塩の含有量は、少なくとも、そのいずれか一方が本発明の医薬１ｇ当たり１〜１０００ｍｇ、好ましくは１０〜５００ｍｇ、とりわけ好ましくは１００〜２００ｍｇ含有されていればいずれの量であってもよい。
本発明の医薬におけるヒドロキシプロリンのＮ−アシル化誘導体またはその塩とアミノ糖もしくはその塩および／またはグリコサミノグリカンもしくはその塩との組成比は、重量比で１：１００〜１００：１、好ましくは１：５０〜５０：１、とりわけ好ましくは１０：１〜１：１０である。
本発明の医薬を投与する場合の投与量および投与回数は、投与形態、年齢、体重、症状等により異なる。
経口投与の場合、ヒドロキシプロリンのＮ−アシル化誘導体またはその塩とアミノ糖もしくはその塩および／またはグリコサミノグリカンもしくはその塩として、それぞれ成人一人当たり１〜５０００ｍｇ、好ましくは１０〜１０００ｍｇ、とりわけ好ましくは１００〜５００ｍｇを一日一回ないし数回投与する。
静脈内投与などの非経口投与の場合、ヒドロキシプロリンのＮ−アシル化誘導体またはその塩とアミノ糖もしくはその塩および／またはグリコサミノグリカンもしくはその塩として、それぞれ成人一人当り０．５〜５０００ｍｇ、好ましくは５〜１０００ｍｇ、とりわけ好ましくは５０〜５００ｍｇを一日一回ないし数回投与する。
本発明の医薬を日常的に投与することにより、関節炎を予防することができる。
既に関節炎が発症している場合は、該医薬を日常的に投与することにより、関節炎を治療することができる。投与期間は、通常は１週間から１０年間、好ましくは１ヶ月から５年間である。
なお、本発明において「関節炎を予防する」とは、日常的に下記（ｂ）で述べる本発明の飲食品、動物用飼料、食品添加剤、飼料添加剤、または上記医薬を摂取することで、関節炎の発症を完全に防ぐ、発症率を低減させる、または発症時の症状を抑制する、などの効果を及ぼすことをいう。
一方、本発明において「関節炎を治療する」とは、関節炎が発症した後に上記医薬を投与することにより症状の緩和もしくは治癒を行う、などの効果を及ぼすことをいう。
なお、本発明の医薬は、ヒトたけでなく、ヒト以外の動物（非ヒト動物）に対しても使用することができる。非ヒト動物に使用する場合の投与量は、投与する非ヒト動物の体重１ｋｇあたり、ヒドロキシプロリンのＮ−アシル化誘導体またはその塩とアミノ糖もしくはその塩および／またはグリコサミノグリカンもしくはその塩として、それぞれ０．０２〜１００ｍｇ、好ましくは０．２〜２０ｍｇ、とりわけ好ましくは２〜１０ｍｇである。
上記医薬の有効成分は、各有効成分が効力を有する時間内であれば、必ずしも同時に投与されなくてもよい。
また、上記医薬は、ヒドロキシプロリンのＮ−アシル化誘導体またはその塩、アミノ糖もしくはその塩および／またはグリコサミノグリカンもしくはその塩を同一の製剤に含有するように調製してもよいが、キット形態の製剤として調製してもよい。
本発明においてキット形態の製剤（以下、単にキットともいう）とは、ヒドロキシプロリンのＮ−アシル化誘導体またはその塩、アミノ糖もしくはその塩およびグリコサミノグリカンもしくはその塩から選ばれる物質を、単独であるいは組み合わせて、薬理学的に許容される一種もしくはそれ以上の担体と一緒に混合し、常法により製造される２種以上の製剤であり、かついずれかの製剤中にヒドロキシプロリンのＮ−アシル化誘導体またはその塩を有効成分として含有するものをいう。
キットを構成する製剤の組み合わせとしては、例えば、ヒドロキシプロリンのＮ−アシル化誘導体またはその塩を含有する製剤とアミノ糖もしくはその塩を含有する製剤との組み合わせ、ヒドロキシプロリンのＮ−アシル化誘導体またはその塩を含有する製剤とグリコサミノグリカンもしくはその塩を含有する製剤との組み合わせ、ヒドロキシプロリンのＮ−アシル化誘導体またはその塩を含有する製剤とアミノ糖もしくはその塩を含有する製剤とグリコサミノグリカンもしくはその塩を含有する製剤との組み合わせ、ヒドロキシプロリンのＮ−アシル化誘導体またはその塩を含有する製剤とアミノ糖もしくはその塩およびグリコサミノグリカンもしくはその塩を含有する製剤との組み合わせ、等をあげることができるが、これらに限定されない。
キットに含まれる各製剤は、それぞれ別個に存在する形態であれば、いずれの状態で存在してもよい。例えば、それぞれの製剤が別個に包装されていてもよいし、同一の容器内に混在されていてもよい。
キット形態の製剤の投与にあたっては、各製剤を同時に投与してもよいし、別々に投与してもよい。
別々に投与する場合は、製剤中の有効成分が体内で高い効力を有する時間内に投与することが望ましい。例えば、１回の投与につき、８時間以内、好ましくは２時間以内に全ての製剤を投与する。
キット形態の製剤の投与量は、該製剤中の各有効成分の１日あたりの投与総量が、上述した各成分の１日あたりの投与量になるように設定する。
（ｂ）ヒドロキシプロリンのＮ−アシル化誘導体またはその塩、ならびにアミノ糖もしくはその塩および／またはグリコサミノグリカンもしくはその塩を含有する飲食品、動物用飼料、食品添加剤、および飼料添加剤、ならびにこれらを用いるヒトまたは非ヒト動物の関節炎の予防方法もしくは治療方法
本発明の飲食品は、飲食品中にヒドロキシプロリンのＮ−アシル化誘導体またはその塩、ならびにアミノ糖もしくはその塩および／またはグリコサミノグリカンもしくはその塩を添加することにより得られる飲食品である。
本発明の食品添加剤を添加してなる飲食品も本発明の飲食品に包含される。
また、本発明の飲食品には、ヒドロキシプロリンのＮ−アシル化誘導体またはその塩、ならびにアミノ糖もしくはその塩および／またはグリコサミノグリカンもしくはその塩の他に上記（ａ）で説明した他の有効成分が添加されていてもよい。
本発明の飲食品は、ヒドロキシプロリンのＮ−アシル化誘導体またはその塩、ならびにアミノ糖もしくはその塩および／またはグリコサミノグリカンもしくはその塩、または必要に応じて他の有効成分を添加する以外は一般的な飲食品の製造方法を用いることにより、製造することができる。
本発明の飲食品は、ジュース類、清涼飲料水、茶類、乳酸菌飲料、発酵乳、冷菓、バター、チーズ、ヨーグルト、加工乳、脱脂乳等の乳製品、ハム、ソーセージ、ハンバーグ等の畜肉製品、蒲鉾、竹輪、さつま揚げ等の魚肉練り製品、だし巻き、卵豆腐等の卵製品、クッキー、ゼリー、チューインガム、キャンデー、スナック菓子等の菓子類、パン類、麺類、漬物類、燻製品、干物、佃煮、塩蔵品、スープ類、調味料等、いずれの形態のものであってもよい。
また、本発明の飲食品は、例えば粉末食品、シート状食品、瓶詰め食品、缶詰食品、レトルト食品、カプセル食品、タブレット状食品、流動食品、ドリンク剤等の形態のものであってもよい。
本発明の飲食品は、関節炎を予防または治療する効果を有する健康食品または機能性食品として用いることができる。
本発明の飲食品は、例えば、飲料または錠剤の場合は、ヒドロキシプロリンのＮ−アシル化誘導体またはその塩、ならびにアミノ糖もしくはその塩および／またはグリコサミノグリカンもしくはその塩に、必要により他の有効成分、添加剤等を加えた後、適当量の水に溶解あるいは分散させるか、または錠剤化して調製することができる。また、例えばアメ、ドロップ、チョコレート、ゼリー、ビスケット、クッキー等の菓子類は、常法に従い、ヒドロキシプロリンのＮ−アシル化誘導体またはその塩、ならびにアミノ糖もしくはその塩および／またはグリコサミノグリカンもしくはその塩に、必要により他の有効成分、添加剤等、さらに必要により適当な担体、例えば小麦粉、米粉、澱粉、コーンスターチ、大豆等を加え、適宜の形態に賦形して調製することができる。
また、本発明の飲食品は、例えば流動層造粒、攪拌造粒、押し出し造粒、転動造粒、気流造粒、圧縮成形造粒、解砕造粒、噴霧造粒、噴射造粒等の造粒方法、パンコーティング、流動層コーティング、ドライコーティング等のコーティング方法、パフドライ、過剰水蒸気法、フォームマット方法、マイクロ波加熱方法等の膨化方法、押出造粒機やエキストルーダー等の押出方法等を用いて製造することもできる。
本発明の食品添加剤は、上記（ａ）で説明した経口剤と同様な方法により調製することができる。食品添加剤は、通常、必要に応じて他の食品添加物を混合または溶解し、例えば粉末、顆粒、ペレット、錠剤、各種液剤の形態に加工製造することができる。
本発明の飲食品または食品添加剤には、一般的に飲食品に用いられる食品添加物、例えば甘味料、着色料、保存料、増粘安定剤、酸化防止剤、発色料、漂白料、防かび剤、ガムベース、苦味料、酵素、光沢剤、酸味料、調味料、乳化剤、強化剤、製造用剤、香料、香辛料抽出物等が添加されてもよい。
本発明の飲食品中には、ヒドロキシプロリンのＮ−アシル化誘導体またはその塩、ならびにアミノ糖もしくはその塩および／またはグリコサミノグリカンもしくはその塩は、該飲食品の形態により異なるが、通常、成人に対して一日あたり、それぞれ１〜５０００ｍｇ、好ましくは１０〜１０００ｍｇ、とりわけ好ましくは１００〜５００ｍｇの摂取量となるよう添加される。
該飲食品は、１日に１回または数回に分けて摂取すればよい。
本発明の飲食品中の、ヒドロキシプロリンのＮ−アシル化誘導体またはその塩とアミノ糖もしくはその塩および／またはグリコサミノグリカンもしくはその塩の組成比は、重量比で１：１００〜１００：１、好ましくは１：５０〜５０：１、とりわけ好ましくは１０：１〜１：１０である。
摂取期間は、通常は１週間から１０年間、好ましくは１ヶ月から５年間である。
本発明の飲食品は、本発明の医薬と同様に、ヒドロキシプロリンのＮ−アシル化誘導体またはその塩、アミノ糖もしくはその塩および／またはグリコサミノグリカンもしくはその塩を、同一の飲食品に含有するように製造してもよいが、飲食品セットとして製造してもよい。
飲食品セットの組み合わせとしては、例えば、ヒドロキシプロリンのＮ−アシル化誘導体またはその塩を含有する飲食品とアミノ糖もしくはその塩を含有する飲食品との組み合わせ、ヒドロキシプロリンのＮ−アシル化誘導体またはその塩を含有する飲食品とグリコサミノグリカンもしくはその塩を含有する飲食品との組み合わせ、ヒドロキシプロリンのＮ−アシル化誘導体またはその塩を含有する飲食品とアミノ糖もしくはその塩を含有する飲食品とグリコサミノグリカンもしくはその塩を含有する飲食品との組み合わせ、ヒドロキシプロリンのＮ−アシル化誘導体またはその塩を含有する飲食品とアミノ糖もしくはその塩およびグリコサミノグリカンもしくはその塩を含有する飲食品との組み合わせ、等をあげることができるが、これらに限定されない。
飲食品セットに含まれる各飲食品は、それぞれ別個に存在する形態であれば、いずれの状態で存在してもよい。例えば、それぞれの飲食品が別個に包装されていてもよいし、同一の容器内に混在されていてもよい。
飲食品セットの摂取にあたっては、各飲食品を同時に摂取してもよいし、別々に摂取してもよい。
別々に摂取する場合は、飲食品中の有効成分が体内で高い効力を有する時間内に摂取することが望ましい。例えば、１回の摂取につき、８時間以内、好ましくは２時間以内に全ての飲食品を摂取する。
飲食品セットの摂取量は、該飲食品中の各有効成分の１日あたりの摂取量が、上述した各成分の１日あたりの摂取量になるように設定する。
本発明の動物用飼料は、ヒドロキシプロリンのＮ−アシル化誘導体またはその塩、ならびにアミノ糖もしくはその塩および／またはグリコサミノグリカンもしくはその塩を添加した動物用飼料である。必要により、上記（ａ）で述べた他の有効成分を添加してもよい。
本発明の動物用飼料は、非ヒト動物、好ましくはヒト以外の哺乳類、鳥類、爬虫類、両生類、魚類等の脊椎動物の関節炎を予防または治療する飼料であればいずれでもよく、例えば、イヌ、ネコ、ウサギ、ネズミ等のペット用飼料、ペットフード、ウシ、ブタ等の家畜用飼料、ニワトリ、七面鳥等の家禽用飼料、トカゲ、ワニ、イグアナ等の爬虫類用飼料、カエル、イモリ等の両生類用飼料、タイ、ハマチ等の養殖用飼料等があげられる。
本発明の動物用飼料は、関節炎を予防または治療する効果を有する動物用健康補助飼料として用いることができる。
本発明の動物用飼料は、飼料中にヒドロキシプロリンのＮ−アシル化誘導体またはその塩、ならびにアミノ糖もしくはその塩および／またはグリコサミノグリカンもしくはその塩、必要により、他の有効成分、あるいは本発明の飼料添加剤を添加する以外は、一般的な飼料の製造方法を用いることにより加工製造することができる。
飼料としては、穀物類、そうこう類、植物性油かす類、動物性飼料、その他の飼料、精製品、またはこれらの混合物等があげられる。
穀物類としては、例えばマイロ、小麦、大麦、えん麦、らい麦、玄米、そば、あわ、きび、ひえ、とうもろこし、大豆等があげられる。
そうこう類としては、例えば米ぬか、脱脂米ぬか、ふすま、末粉、小麦、胚芽、麦ぬか、ペレット、トウモロコシぬか、トウモロコシ胚芽等があげられる。
植物性油かす類としては、例えば大豆油かす、きな粉、亜麻仁油かす、綿実油かす、落花生油かす、サフラワー油かす、やし油かす、パーム油かす、胡麻油かす、ひまわり油かす、菜種油かす、カポック油かす、芥子油かす等があげられる。
動物性飼料としては、例えば北洋ミール、輸入ミール、ホールミール、沿岸ミール等の魚粉、フィッシュソルブル、肉粉、肉骨粉、血粉、分解毛、骨粉、家畜用処理副産物、フェザーミール、蚕よう、脱脂粉乳、カゼイン、乾燥ホエー等があげられる。
その他の飼料としては、アルファルファ、ヘイキューブ、アルファルファリーフミール、ニセアカシア粉末等の植物茎葉類、コーングルテン、ミール、コーングルテンフィード、コーンステープリカー等のトウモロコシ加工工業副産物、デンプン等のデンプン加工品、酵母、ビールかす、麦芽根、アルコールかす、しょう油かす等の発酵工業産物、柑橘加工かす、豆腐かす、コーヒーかす、ココアかす等の農産製造副産物、キャッサバ、そら豆、グアミール、海藻、オキアミ、スピルリナ、クロレラ、鉱物等があげられる。
精製品としては、カゼイン、アルブミン等のタンパク質、アミノ酸、スターチ、セルロース、蔗糖、グルコース等の糖質、ミネラル、ビタミン等があげられる。
本発明の動物用飼料は、例えば流動層造粒、攪拌造粒、押し出し造粒、転動造粒、気流造粒、圧縮成形造粒、解砕造粒、噴霧造粒、噴射造粒等の造粒方法、パンコーティング、流動層コーティング、ドライコーティング等のコーティング方法、パフドライ、過剰水蒸気法、フォームマット方法、マイクロ波加熱方法等の膨化方法、押出造粒機やエキストルーダー等の押出方法等を用いて製造することもできる。
本発明の飼料添加剤は、上記（ａ）において述べた経口剤と同様な方法により調製することができる。飼料添加剤は、通常、必要に応じて他の飼料添加物を混合または溶解し、例えば粉末、顆粒、ペレット、錠剤、各種液剤の形態に加工製造される。
本発明の動物用飼料中のヒドロキシプロリンのＮ−アシル化誘導体またはその塩、ならびにアミノ糖もしくはその塩および／またはグリコサミノグリカンもしくはその塩は、摂取形態、摂取させる非ヒト動物の種類、該非ヒト動物の年齢、体重等に応じて異なるが、通常、それぞれ０．０２〜１００ｍｇ／ｋｇ、好ましくは０．２〜２０ｍｇ／ｋｇ、とりわけ好ましくは２〜１０ｍｇ／ｋｇの摂取量となるように添加される。
該動物用飼料は、１日に１回または数回に分けて摂食させる。また、本発明の飼料添加剤を、非ヒト動物を対象とした関節炎の予防または治療用非ヒト動物用経口剤として、上記飼料の摂取量および摂取期間と、それぞれ同じ投与量および投与期間で投与してもよい。
摂取させる期間は摂取させる非ヒト動物により異なり特に限定はないが、通常は一週間から５年間、好ましくは２週間から２年間である。
本発明の動物用飼料は、本発明の医薬と同様に、ヒドロキシプロリンのＮ−アシル化誘導体またはその塩、アミノ糖もしくはその塩および／またはグリコサミノグリカンもしくはその塩を同一の動物用飼料に含有するように製造してもよいが、飼料セットとして製造してもよい。
飼料セットの組み合わせとしては、例えば、ヒドロキシプロリンのＮ−アシル化誘導体またはその塩を含有する動物用飼料とアミノ糖もしくはその塩を含有する動物用飼料との組み合わせ、ヒドロキシプロリンのＮ−アシル化誘導体またはその塩を含有する動物用飼料とグリコサミノグリカンもしくはその塩を含有する動物用飼料との組み合わせ、ヒドロキシプロリンのＮ−アシル化誘導体またはその塩を含有する動物用飼料とアミノ糖もしくはその塩を含有する動物用飼料とグリコサミノグリカンもしくはその塩を含有する動物用飼料との組み合わせ、ヒドロキシプロリンのＮ−アシル化誘導体またはその塩を含有する動物用飼料とアミノ糖もしくはその塩およびグリコサミノグリカンもしくはその塩を含有する動物用飼料との組み合わせ、等をあげることができるが、これらに限定されない。
飼料セットに含まれる各動物用飼料は、それぞれ別個に存在する形態であれば、いずれの状態で存在してもよい。例えば、それぞれの動物用飼料が別個に包装されていてもよいし、同一の容器内に混在されていてもよい。
該動物用飼料の摂取にあたっては、それぞれの動物用飼料を同時に摂取させてもよいし、別々に摂取させてもよい。
別々に摂取させる場合は、動物用飼料中の有効成分が体内で高い効力を有する時間内に投与することが望ましい。例えば、１回の摂取につき、８時間以内、好ましくは２時間以内に全ての飲食品を摂取する。
飼料セットの摂取量は、該動物用飼料の各有効成分の１日あたりの摂取量が、上述した各成分の１日あたりの摂取量になるように設定する。
以下に、本発明の試験例を示す。
なお、下記試験例中では特に断らない限り、ＤＢＡ／１Ｊマウスはチャールスリバー社製、粉末飼料ＣＥ−２は日本クレア社製、Ｎ−アセチルヒドロキシプロリンは協和発酵工業社製、グルコサミンはＤ−グルコサミン硫酸２ＮａＣｌ（ミヤコ化学株式会社製）、コンドロイチンはコンドロイチン硫酸ナトリウム（マルハ化学株式会社製）を用いた。
また、実施例中での添加物の量は全て重量％を示す。
試験例１：２型コラーゲン関節炎マウスにおけるＮ−アセチルヒドロキシプロリンおよびグルコサミンの効果
ＤＢＡ／１Ｊマウスは、２型コラーゲンを２回投与すると関節炎が惹起されることが知られている。
オスの６週齢のＤＢＡ／１Ｊマウスに、１回目の２型コラーゲン投与として、２型コラーゲン（コラーゲン技術研修会社製）とＦｒｅｕｎｄ’ｓ　ｃｏｍｐｌｅｔｅ　ａｄｊｕｖａｎｔ（ヤトロン社製）を等量ずつ混合しホモジナイザーでエマルション化した溶液を、１匹あたり１００μｌ皮内投与した。
１回目の２型コラーゲン投与の２１日後に、２回目の２型コラーゲン投与として、同様に２型コラーゲンとＦｒｅｕｎｄ’ｓ　ｃｏｍｐｌｅｔｅ　ａｄｊｕｖａｎｔを等量ずつ混合しホモジナイザーでエマルション化した溶液を１匹あたり１００μｌ皮内投与した。以上のようにしてマウスに関節炎を惹起した。
１回目の２型コラーゲン投与日からマウスに、それぞれ、コントロールとして何も添加していない粉末飼料ＣＥ−２、Ｎ−アセチルヒドロキシプロリン（第１−１および第１−２表中ではＡｃＨＹＰと表記）を０．１％含有した粉末飼料ＣＥ−２、グルコサミン（Ｄ−グルコサミン硫酸２ＮａＣｌ）を０．１％含有した粉末飼料ＣＥ−２、Ｎ−アセチルヒドロキシプロリン０．０５％およびグルコサミンを０．０５％含有した粉末飼料ＣＥ−２をそれぞれマウスに摂取させた。１回目の２型コラーゲン投与から２４日目、２８日目、３１日目、３４日目、３８日目および４２日目に、関節炎の発症の程度を以下のような指標によってスコアリングした。
マウスの１本の手または足につき、０点：無症状、１点：指１本はれ、あるいは手（足）首のはれ（軽度）、２点：指１〜３本はれ、あるいは手（足）首のはれ、３点：指３〜５本はれ＋手（足）首のはれ、４点：指全部はれ＋手（足）首のはれ、として０点〜４点でスコアリングした。マウス１匹について手足合計４本のスコアの合計点、すなわち０点〜１６点でスコアリングした。
各条件につき、それぞれ２０匹のマウスについて調べた。
結果を第１−１表および第１−２表に示す。第１−２表は第１−１表の続きである。
表中の数字は各処理条件におけるスコアを示し、平均値±標準誤差（Ｎ＝２０）で示す。
なお、表中で無処理は、２型コラーゲンを投与していないことを、コントロールは、飼料中に何も添加していない飼料を摂取させたことを示す。
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第１−１表および第１−２表に示されるとおり、飼料にグルコサミンを０．１％、またはＮ−アセチルヒドロキシプロリンを０．１％添加した場合に、飼料中に何も添加していない場合（コントロール）に比べてスコアの低下が認められた。
さらに、グルコサミンとＮ−アセチルヒドロキシプロリンを０．０５％ずつ飼料中に添加した場合には、グルコサミンを０．１％、またはＮ−アセチルヒドロキシプロリンを０．１％添加した場合に比べて大きなスコアの低下が認められた。
試験例２：２型コラーゲン関節炎マウスにおけるＮ−アセチルヒドロキシプロリンおよびコンドロイチンの効果
上記試験例１においてグルコサミンの代わりにコンドロイチンを用いて同様な実験を行った。
すなわち、１回目の２型コラーゲン投与の２１日後に、２回目の２型コラーゲン投与として、試験例１と同様に２型コラーゲンとＦｒｅｕｎｄ’ｓ　ｃｏｍｐｌｅｔｅ　ａｄｊｕｖａｎｔを等量ずつ混合しホモジナイザーでエマルション化した溶液を、１匹あたり１００μｌ皮内投与した。以上のようにしてマウスに関節炎を惹起した。
１回目の２型コラーゲン投与日からマウスに、それぞれ、コントロールとして何も添加していない粉末飼料ＣＥ−２、Ｎ−アセチルヒドロキシプロリン（第２−１表および第２−２表中ではＡｃＨＹＰと表記）を０．１％含有した粉末飼料ＣＥ−２、コンドロイチン）を０．１％含有した粉末飼料ＣＥ−２、およびＮ−アセチルヒドロキシプロリン０．０５％およびコンドロイチンを０．０５％含有した粉末飼料ＣＥ−２をそれぞれマウスに摂取させた。１回目の２型コラーゲン投与から２３日目、２７日目、３０日目、３３日目、３６日目、４０日目および４２日目に、関節炎の発症の程度を上記試験例１の指標に従ってスコアリングした。
各条件につき、それぞれ２０匹のマウスについて調べた。
結果を第２−１表および第２−２表に示す。第２−２表は第２−１表の続きである。表中の数字は各処理条件におけるスコアを示し、平均値±標準誤差（Ｎ＝２０）で示す。
なお、表中で無処理は、２型コラーゲンを投与していないことを、コントロールは、飼料中に何も添加していない飼料を摂取させたことを示す。
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第２−１表および第２−２表に示されるとおり、Ｎ−アセチルヒドロキシプロリンを０．１％添加した場合、２７日目以降のいずれの日においても、飼料中に何も添加していない場合（コントロール）に比べてスコアの低下が認められた。
飼料にコンドロイチンを０．１％添加した場合には、コントロールに比べて３３日目までは若干のスコアの低下が認められたが、３６日目以降はスコアの低下はほとんど認められなかった。
一方、コンドロイチンとＮ−アセチルヒドロキシプロリンを０．０５％ずつ飼料中に添加した場合は、コントロールに比べて２７日目以降のいずれの日においてもスコアの低下が認められた。該スコアの低下は、コンドロイチンを０．１％、またはＮ−アセチルヒドロキシプロリンを０．１％それぞれ単独で添加した場合に比べて大きかった。
試験例３：２型コラーゲン関節炎マウスにおけるＮ−アセチルヒドロキシプロリン、グルコサミンおよびコンドロイチンの効果
上記試験例１においてグルコサミンの代わりにグルコサミンおよびコンドロイチンを用いて同様な実験を行った。
すなわち、１回目の２型コラーゲン投与の２１日後に、２回目の２型コラーゲン投与として、試験例１と同様に２型コラーゲンとＦｒｅｕｎｄ’ｓ　ｃｏｍｐｌｅｔｅ　ａｄｊｕｖａｎｔを等量ずつ混合しホモジナイザーでエマルション化した溶液を、１匹あたり１００μｌ皮内投与した。以上のようにしてマウスに関節炎を惹起した。
１回目の２型コラーゲン投与日からマウスに、それぞれ、コントロールとして何も添加していない粉末飼料ＣＥ−２、Ｎ−アセチルヒドロキシプロリン（第３−１表および第３−２表中ではＡｃＨＹＰと表記）を０．０５％含有した粉末飼料ＣＥ−２、Ｎ−アセチルヒドロキシプロリンを０．０５％およびコンドロイチンを０．０５％含有した粉末飼料ＣＥ−２、Ｎ−アセチルヒドロキシプロリンを０．０５％、グルコサミンを０．０５％およびコンドロイチンを０．０５％含有した粉末飼料ＣＥ−２をそれぞれマウスに摂取させた。１回目の２型コラーゲン投与から２４日目、２８日目、３１日目、３５日目、３８日目、および４２日目に、関節炎の発症の程度を上記試験例１の指標に従ってスコアリングした。
各条件につき、それぞれ２０匹のマウスについて調べた。
結果を第３−１表および第３−２表に示す。第３−２表は第３−１表の続きである。表中の数字は各処理条件におけるスコアを示し、平均値±標準誤差（Ｎ＝２０）で示す。
なお、表中で無処理は、２型コラーゲンを投与していないことを、コントロールは、飼料中に何も添加していない飼料を摂取させたことを示す。
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第３−１表および第３−２表に示されるとおり、Ｎ−アセチルヒドロキシプロリンを０．０５％添加した場合、および飼料にグルコサミン硫酸およびコンドロイチンを０．０５％ずつ添加した場合、２４日目以降のいずれの日においても、飼料中に何も添加していない場合（コントロール）に比べてスコアの低下はほとんど認められなかった。
一方、グルコサミンとコンドロイチンとＮ−アセチルヒドロキシプロリンを０．０５％ずつ飼料中に添加した場合は、コントロールに比べて２４日目以降のいずれの日においてもスコアの低下が認められた。
試験例４：２型コラーゲン関節炎マウスにおけるＮ−アセチルヒドロキシプロリンおよびグルコサミン＋コンドロイチンの効果
試験例１と同様に、１回目の２型コラーゲン投与の２１日後に、２回目の２型コラーゲン投与として、試験例１と同様に２型コラーゲンとＦｒｅｕｎｄ’ｓ　ｃｏｍｐｌｅｔｅ　ａｄｊｕｖａｎｔを等量ずつ混合しホモジナイザーでエマルション化した溶液を、１匹あたり１００μｌ皮内投与した。以上のようにしてマウスに関節炎を惹起した。
１回目の２型コラーゲン投与日から２８日目以降、マウスに、それぞれ、コントロールとして何も添加していない粉末飼料ＣＥ−２、Ｎ−アセチルヒドロキシプロリン（第４−１表および第４−２表中ではＡｃＨＹＰと表記）を０．１％含有した粉末飼料ＣＥ−２、グルコサミンを０．１％含有した粉末飼料ＣＥ−２、Ｎ−アセチルヒドロキシプロリンを０．０５％およびグルコサミンを０．０５％含有した粉末飼料ＣＥ−２、グルコサミンを０．０５％およびコンドロイチンを０．０５％含有した粉末飼料ＣＥ−２、およびＮ−アセチルヒドロキシプロリンを０．０５％、グルコサミンを０．０２５％ならびにコンドロイチンを０．０２５％含有した粉末飼料ＣＥ−２をそれぞれマウスに摂取させた。１回目の２型コラーゲン投与から２８日目、３３日目、３６日目、３９日目、および４２日目に、関節炎の発症の程度を上記試験例１の指標に従ってスコアリングした。
各条件につき、それぞれ１０匹のマウスについて調べた。
結果を第４−１表および第４−２表に示す。第４−２表は第４−１表の続きである。表中の数字は各処理条件におけるスコアを示し、平均値±標準誤差（Ｎ＝１０）で示す。
なお、表中で無処理は、２型コラーゲンを投与していないことを、コントロールは、飼料中に何も添加していない飼料を摂取させることを示す。
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第４−１表および第４−２表に示されるとおり、飼料中にＮ−アセチルヒドロキシプロリンを０．１％添加した場合、およびグルコサミンを０．１％添加した場合、３３日目以降のいずれの日においても、コントロールに比べて若干のスコアの低下が認められた。
飼料中にグルコサミンおよびコンドロイチンを０．０５％ずつ添加した場合、３３日目以降にはいずれの日においても、コントロールに比べて若干のスコアの低下が認められた。
一方、Ｎ−アセチルヒドロキシプロリンを０．０５％ならびにグルコサミンを０．０５％飼料中に添加した場合、ならびにＮ−アセチルヒドロキシプロリンを０．０５％、グルコサミンを０．０２５％、およびコンドロイチンを０．０２５％飼料中に添加した場合は、コントロールに比べて３３日目以降のいずれの日においてもコントロールに比べてスコアの低下が大きかった。
以下、本発明の実施例を示す。
発明を実施するための最良の形態
下記実施例中では特に断らない限り、Ｎ−アセチルヒドロキシプロリンは協和発酵工業社製、グルコサミンはＤ−グルコサミン硫酸２ＮａＣｌ（ミヤコ化学株式会社製）、コンドロイチンはコンドロイチン硫酸ナトリウム（マルハ化学株式会社製）を用いた。
実施例１
下記の第５表に示した組成に従い成分を混合した後、打錠機（畑製作所製、ＨＴ−ＡＰ１５ＳＳ−Ｕ型）で打錠し、直径８ｍｍ、重量２００ｍｇの錠剤を製造する。
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実施例２
下記の第６表に示した組成に従い成分を混合した後、打錠機（畑製作所、ＨＴ−ＡＰ１５ＳＳ−Ｕ型）で打錠し、直径８ｍｍ、重量２００ｍｇの錠剤を製造した。
2002055074.tif 000011
実施例３
下記の第７表に示した組成に従い成分を混合した後、打錠機（畑製作所、ＨＴ−ＡＰ１５ＳＳ−Ｕ型）で打錠し、直径８ｍｍ、重量２００ｍｇの錠剤を製造した。
2002055074.tif 000012
実施例４
下記の第８表に示した組成に従い成分を混合した後、打錠機（畑製作所、ＨＴ−ＡＰ１５ＳＳ−Ｕ型）で打錠し、直径８ｍｍ、重量２００ｍｇの錠剤を製造した。
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実施例５
下記の第９表に示した組成に従いドッグフードを製造する。
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実施例６
下記の第１０表に示した配合により飲料を製造する。
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上記配合物２０ｇを水１８０ｍｌに分散させて飲料にする。
実施例７
下記の第１１表に示した配合により清涼飲料水（１０本分）を製造する。
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水にて１０００ｍｌとする。
実施例８
下記の第１２表に示した配合したものを水１０００ｍｌにて溶出し、茶飲料１０００ｍｌを製造する。
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実施例９
下記の第１３表に示した配合で常法によりクッキー（３０個分）を製造する。
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実施例１０
下記の第１４表に示した配合で常法により食パン（４斤分）を製造する。
2002055074.tif 000019
実施例１１
下記の第１５表に示した配合で常法によりチューインガム（３０個分）を製造する。
2002055074.tif 000020
実施例１２
下記の第１６表に示した配合で常法によりキャンデー（２０個分）を製造する。
2002055074.tif 000021
実施例１３
下記の第１７表に示した配合で常法によりマーマレードを製造する。
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実施例１４
下記の第１８表に示した処方で下記の方法によりハードカプセル剤（１カプセルあたり３６０ｍｇ）を製造する。
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Ｎ−アセチルヒドロキシプロリン２５０ｍｇ、グルコサミン２５０ｍｇに乳糖６０ｍｇおよびコーンスターチ３０ｍｇを添加して混合し、これにヒドロキシプロピルセルロース２０ｍｇの水溶液を添加して練合する。次いで、押し出し造粒機を用いて、常法により顆粒を製造する。この顆粒をゼラチンハードカプセルに充填することにより、ハードカプセル剤を製造する。
実施例１５
下記の第１９表に示した処方で下記の方法によりソフトカプセル剤（１カプセルあたり１７０ｍｇ）を製造する。
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大豆油１２０ｍｇにＮ−アセチルヒドロキシプロリン２５ｍｇおよびグルコサミン２５ｍｇを添加して混合する。次いで、ロータリー・ダイズ式自動成型機を用いて、常法に従い、ソフトカプセルに充填することにより、ソフトカプセル剤を製造する。
実施例１６
下記の第２０表に示した組成に従い成分を混合した後、打錠機（畑製作所製、ＨＴ−ＡＰ１５ＳＳ−Ｕ型）で打錠し、直径８ｍｍ、重量２００ｍｇの錠剤を製造する。
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一方、下記の第２１表に示した組成に従い成分を混合した後、打錠機（畑製作所製、ＨＴ−ＡＰ１５ＳＳ−Ｕ型）で打錠し、直径８ｍｍ、重量２００ｍｇの錠剤を製造する。
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さらに、下記の第２２表に示した組成に従い成分を混合した後、打錠機（畑製作所製、ＨＴ−ＡＰ１５ＳＳ−Ｕ型）で打錠し、直径８ｍｍ、重量２００ｍｇの錠剤を製造する。
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これらの錠剤を、それぞれ別々のプラスチック容器にシリカゲルと共に詰めて密封する。これらのプラスチック容器を同一の紙箱に同封する。
産業上の利用可能性
本発明により、関節炎の予防または治療に効果を有する医薬、飲食品、食品添加剤、動物用飼料および飼料添加剤、ならびにこれらを用いるヒトまたは非ヒト動物の関節炎の予防方法または治療方法を提供することができる。
【国際調査報告】
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