(57)【要約】本発明は、注射剤等の医薬として有用な高品質の以下のセフェム化合物（Ｉ）の硫酸塩、その溶媒和物、またはそれらの結晶を提供する。
2002088147.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
式：
2002088147.tif 000022
で示される化合物（Ｉ）の硫酸塩またはその溶媒和物。
【請求項２】
１硫酸塩水和物である請求項１記載の化合物。
【請求項３】
１硫酸塩１〜７水和物である、請求項１または２記載の化合物。
【請求項４】
１硫酸塩１〜５水和物である、請求項１または２記載の化合物。
【請求項５】
１硫酸塩１〜３水和物である、請求項１または２記載の化合物。
【請求項６】
請求項１〜５のいずれかに記載の化合物の結晶。
【請求項７】
粉末Ｘ線回折パターンにおいて、面間隔（ｄ）が、１０．０４、９．６５、５．１３、４．５１、４．１８、３．５８、３．４２、３．３５、および２．９８（単位：Å）に主なピークを示す、請求項６記載の結晶。
【請求項８】
化合物（Ｉ）の１硫酸塩７水和物である、請求項７記載の結晶。
【請求項９】
粉末Ｘ線回折パターンにおいて、面間隔（ｄ）が、１６．６６、９．５２、８．３６、７．２６、４．７６、４．５５、４．１８、３．６７、３．６４、３．６１、３．３９、および３．３４（単位：Å）に主なピークを示す、請求項６記載の結晶。
【請求項１０】
化合物（Ｉ）の１硫酸塩６水和物である、請求項９記載の結晶。
【請求項１１】
粉末Ｘ線回折パターンにおいて、面間隔（ｄ）が、９．７５、９．４２、４．５６、４．１７、３．６９、３．６１、３．４１、および３．３４（単位：Å）に主なピークを示す、請求項６記載の結晶。
【請求項１２】
化合物（Ｉ）の１硫酸塩５水和物である、請求項１１記載の結晶。
【請求項１３】
粉末Ｘ線回折パターンにおいて、面間隔（ｄ）が、９．７１、９．３６、７．３６、４．９９、４．７０、４．５５、４．１７、３．９２、３．６７、３．６１、および３．４０（単位：Å）に主なピークを示す、請求項６記載の結晶。
【請求項１４】
化合物（Ｉ）の１硫酸塩４水和物である、請求項１３記載の結晶。
【請求項１５】
粉末Ｘ線回折パターンにおいて、面間隔（ｄ）が、１６．７９、９．８０、７．７２、５．７５、４．５７、４．１９、４．１３、３．６９、３．６２、３．４２、３．３５および２．９６（単位：Å）に主なピークを示す、請求項６記載の結晶。
【請求項１６】
化合物（Ｉ）の１硫酸塩３水和物である、請求項１５記載の結晶。
【請求項１７】
粉末Ｘ線回折パターンにおいて、面間隔（ｄ）が、１６．６６、９．５２、８．３２、７．６０、４．５８、４．１７、４．０８、３．７１、３．６２、３．４０、３．３３および２．９５（単位：Å）に主なピークを示す、請求項６記載の結晶。
【請求項１８】
化合物（Ｉ）の１硫酸塩１水和物である、請求項１７記載の結晶。
【請求項１９】
粉末Ｘ線回折パターンにおいて、面間隔（ｄ）が、１６．６０、９．４２、４．５４、４．１３、３．５９、３．３８、３．３１、２．９４および２．９２（単位：Å）に主なピークを示す、請求項６記載の結晶。
【請求項２０】
化合物（Ｉ）の１硫酸塩２水和物である、請求項１９記載の結晶。
【請求項２１】
粉末Ｘ線回折パターンにおいて、面間隔（ｄ）が、７．７０、５．４８、５．１２、４．２６、３．９３、３．８５、３．５３、３．４２、および３．０８（単位：Å）に主なピークを示す、請求項１記載の結晶。
【請求項２２】
化合物（Ｉ）の１硫酸塩無水物である、請求項２１記載の結晶。
【請求項２３】
請求項１〜２２のいずれかに記載の化合物（Ｉ）の硫酸塩、その溶媒和物、結晶、またはそれらの混合物を含有する医薬組成物。
【請求項２４】
抗菌剤である請求項２３記載の医薬組成物。
【請求項２５】
注射剤である請求項２３記載の医薬組成物。
【請求項２６】
請求項１記載の化合物（Ｉ）の０．５硫酸塩またはその溶媒和物に硫酸を反応させる工程を包含する、請求項１〜２２のいずれかに記載の化合物（Ｉ）の硫酸塩、その溶媒和物、結晶、またはそれらの混合物の製造方法。
【請求項２７】
請求項１記載の化合物（Ｉ）の０．５硫酸塩またはその溶媒和物。
【請求項２８】
請求項１記載の化合物（Ｉ）の１塩酸塩を硫酸と反応させる工程を包含する、請求項１〜２２のいずれかに記載の化合物（Ｉ）の硫酸塩、その溶媒和物、結晶またはそれらの混合物の製造方法。
【発明の詳細な説明】
技術分野
本発明は、抗菌剤等の医薬として有用なセフェム化合物の硫酸塩、その溶媒和物またはそれらの結晶、およびその製造方法に関する。
背景技術
一般にセフェム化合物を医薬、特に注射剤として開発するためには、極めて高品質のものが要求され、より好ましくは結晶として単離する必要があった。
本発明に係るセフェム化合物は式：
2002088147.tif 000003
で示される（以下、化合物（Ｉ）という）。その対応塩酸塩はＷＯ００／３２６０６号の実施例６−２に記載されている。しかし該塩酸塩は非結晶としてしか単離されていない。即ち化合物（Ｉ）の結晶化についてはこれまで何ら報告されていない。
化合物（Ｉ）を医薬、特に注射剤として開発するために、より高品質の状態で単離する必要があった。好ましくは、化合物（Ｉ）またはその塩をより安定な結晶として単離する必要があった。
発明の開示
本発明者らは鋭意検討した結果、化合物（Ｉ）を硫酸塩またはその溶媒和物として単離すれば、保存安定性のよい高品質のものが得られることを見出した。また硫酸塩にすれば安定な結晶として単離されることも見出し、以下に示す本発明を完成した。
（１）式：
2002088147.tif 000004
で示される化合物（Ｉ）の硫酸塩またはその溶媒和物。
（２）１硫酸塩水和物である上記（１）記載の化合物。
（３）１硫酸塩１〜７水和物である、上記（１）または（２）記載の化合物。
（４）１硫酸塩１〜５水和物である、上記（１）または（２）記載の化合物。
（５）１硫酸塩１〜３水和物である、上記（１）または（２）記載の化合物。
（６）上記（１）〜（５）のいずれかに記載の化合物の結晶。
（７）粉末Ｘ線回折パターンにおいて、面間隔（ｄ）が、１０．０４、９．６５、５．１３、４．５１、４．１８、３．５８、３．４２、３．３５、および２．９８（単位：Å）に主なピークを示す、上記（６）記載の結晶。
（８）化合物（Ｉ）の１硫酸塩７水和物である、上記（７）記載の結晶。
（９）粉末Ｘ線回折パターンにおいて、面間隔（ｄ）が、１６．６６、９．５２、８．３６、７．２６、４．７６、４．５５、４．１８、３．６７、３．６４、３．６１、３．３９、および３．３４（単位：Å）に主なピークを示す、上記（６）記載の結晶。
（１０）化合物（Ｉ）の１硫酸塩６水和物である、上記（９）記載の結晶。
（１１）粉末Ｘ線回折パターンにおいて、面間隔（ｄ）が、９．７５、９．４２、４．５６、４．１７、３．６９、３．６１、３．４１、および３．３４（単位：Å）に主なピークを示す、上記（６）記載の結晶。
（１２）化合物（Ｉ）の１硫酸塩５水和物である、上記（１１）記載の結晶。
（１３）粉末Ｘ線回折パターンにおいて、面間隔（ｄ）が、９．７１、９．３６、７．３６、４．９９、４．７０、４．５５、４．１７、３．９２、３．６７、３．６１、および３．４０（単位：Å）に主なピークを示す、上記（６）記載の結晶。
（１４）化合物（Ｉ）の１硫酸塩４水和物である、上記（１３）記載の結晶。
（１５）粉末Ｘ線回折パターンにおいて、面間隔（ｄ）が、１６．７９、９．８０、７．７２、５．７５、４．５７、４．１９、４．１３、３．６９、３．６２、３．４２、３．３５および２．９６（単位：Å）に主なピークを示す、上記（６）記載の結晶。
（１６）化合物（Ｉ）の１硫酸塩３水和物である、上記（１５）記載の結晶。
（１７）粉末Ｘ線回折パターンにおいて、面間隔（ｄ）が、１６．６６、９．５２、８．３２、７．６０、４．５８、４．１７、４．０８、３．７１、３．６２、３．４０、３．３３および２．９５（単位：Å）に主なピークを示す、上記（６）記載の結晶。
（１８）化合物（Ｉ）の１硫酸塩１水和物である、上記（１７）記載の結晶。
（１９）粉末Ｘ線回折パターンにおいて、面間隔（ｄ）が、１６．６０、９．４２、４．５４、４．１３、３．５９、３．３８、３．３１、２．９４および２．９２（単位：Å）に主なピークを示す、上記（６）記載の結晶。
（２０）化合物（Ｉ）の１硫酸塩２水和物である、上記（１９）記載の結晶。
（２１）粉末Ｘ線回折パターンにおいて、面間隔（ｄ）が、７．７０、５．４８、５．１２、４．２６、３．９３、３．８５、３．５３、３．４２、および３．０８（単位：Å）に主なピークを示す、上記（１）記載の結晶。
（２２）化合物（Ｉ）の１硫酸塩無水物である、上記（２１）記載の結晶。
（２３）上記（１）〜（２２）のいずれかに記載の化合物（Ｉ）の硫酸塩、その溶媒和物、結晶、またはそれらの混合物を含有する医薬組成物。
（２４）抗菌剤である上記（２３）記載の医薬組成物。
（２５）注射剤である上記（２３）記載の医薬組成物。
（２６）上記（１）記載の化合物（Ｉ）の０．５硫酸塩またはその溶媒和物に硫酸を反応させる工程を包含する、上記（１）〜（２２）のいずれかに記載の化合物（Ｉ）の硫酸塩、その溶媒和物、結晶、またはそれらの混合物の製造方法。
（２７）上記（１）記載の化合物（Ｉ）の０．５硫酸塩またはその溶媒和物。
（２８）上記（１）記載の化合物（Ｉ）の１塩酸塩を硫酸と反応させる工程を包含する、上記（１）〜（２２）のいずれかに記載の化合物（Ｉ）の硫酸塩、その溶媒和物、結晶またはそれらの混合物の製造方法。
発明を実施するための最良の形態
化合物（Ｉ）の硫酸塩における硫酸の数は必ずしも限定されないが、好ましくは０．５または１であり、特に好ましくは１である。０．５硫酸塩は１硫酸塩の製造中間体としても有用である。
上記硫酸塩は溶媒和物であってもよい。該溶媒としては、水、有機溶媒（例：アルコール（例：エタノール、イソプロパノール等）、テトラヒドロフラン、アセトン、ジオキサン）またはその混合物等が挙げられる。
溶媒和数は、製造方法、保存条件等により異なり必ずしも限定されないが、医薬品として使用する場合には有機溶媒の含量は少ない方が好ましい。該溶媒和物は、好ましくは水和物である。水和数は、好ましくは１〜７、より好ましくは１〜５、さらに好ましくは１〜４または１〜３である。また化合物（Ｉ）の硫酸塩は、好ましくは１硫酸塩無水物である。
化合物（Ｉ）の硫酸塩または溶媒和物は、結晶でも非結晶でもよいが、好ましくは結晶であり、特に１硫酸塩の水和物または無水物の結晶が好ましい。該結晶としては、各粉末Ｘ線回折パターンが、少なくとも以下の値付近に主ピークを示す結晶が例示され、便宜上これらを以下、Ａ〜Ｈ型結晶という。本発明が提供する結晶は、好ましくは特定の粉末Ｘ線回折パターンを示す単一の結晶であるが、その混合物であってもよい。
Ａ型：  面間隔（ｄ）＝１０．０４、９．６５、５．１３、４．５１、４．１８、３．５８、３．４２、３．３５、および２．９８（単位：Å）
Ｂ型：  面間隔（ｄ）＝１６．６６、９．５２、８．３６、７．２６、４．７６、４．５５、４．１８、３．６７、３．６４、３．６１、３．３９、および３．３４（単位：Å）
Ｃ型：  面間隔（ｄ）＝９．７５、９．４２、４．５６、４．１７、３．６９、３．６１、３．４１、および３．３４（単位：Å）
Ｄ型：  面間隔（ｄ）＝９．７１、９．３６、７．３６、４．９９、４．７０、４．５５、４．１７、３．９２、３．６７、３．６１、および３．４０（単位：Å）
Ｅ型：  面間隔（ｄ）＝１６．７９、９．８０、７．７２、５．７５、４．５７、４．１９、４．１３、３．６９、３．６２、３．４２、３．３５および２．９６（単位：Å）
Ｆ型：  面間隔（ｄ）＝１６．６６、９．５２、８．３２、７．６０、４．５８、４．１７、４．０８、３．７１、３．６２、３．４０、３．３３および２．９５（単位：Å）
Ｇ型：  面間隔（ｄ）＝１６．６０、９．４２、４．５４、４．１３、３．５９、３．３８、３．３１、２．９４および２．９２（単位：Å）
Ｈ型：  面間隔（ｄ）＝７．７０、５．４８、５．１２、４．２６、３．９３、３．８５、３．５３、３．４２、および３．０８（単位：Å）
（Ｘ線測定条件：ＣｕＫα線（波長λ＝１．５４Å）、管電圧４０ｋＶ、管電流４０ｍＡ；２ｄｓｉｎθ＝ｎλ（ｎは整数、θは回折角））
なお上記面間隔（ｄ）値は、各結晶のＸ線ピークのうち、相対強度の強い主なピークを選択したものであり、各結晶構造は必ずしもこれらの値だけによって限定されるものではない。即ち、これら以外のピークが含まれていてもよい。また一般に結晶をＸ線回折により測定した場合、そのピークは、測定機器、測定条件、付着溶媒の存在等により、多少の測定誤差を生じることもある。例えば、面間隔（ｄ）の値として、±０．２程度の測定誤差が生ずる場合があり、非常に精密な設備を使用した場合でも、±０．０１〜±０．１程度の測定誤差が生ずる場合がある。よって、各結晶構造の同定に当たっては多少の誤差も考慮されるべきであり、実質的に上記と同様のＸ線パターンによって特徴付けられる結晶はすべて本発明の範囲内である。
上記各結晶は、結晶溶媒または付着溶媒として前記溶媒を含有していてもよいが、好ましくは有機溶媒を含有していてもよい水和物結晶であるか、または無水物結晶である。水和物の水和数は必ずしも限定されないが、好ましくは１〜８または１〜７水和物、より好ましくは１〜５水和物、さらに好ましくは１〜４または１〜３水和物である。特に各結晶の好ましい態様においては、Ａ型は化合物（Ｉ）の１硫酸塩の７水和物結晶であり、同様にＢ型は６水和物、Ｃ型は５水和物、Ｄ型は４水和物、Ｅ型は３水和物、Ｆ型は１水和物、およびＧ型は２水和物であり得る。これらの結晶は湿度、測定条件等によって少量の付着水を含んでいてもよい。またＨ型結晶は、好ましくは無水物結晶である。
化合物（Ｉ）の硫酸塩、その溶媒和物、それらの結晶、またはそれらの混合物の製造方法は特に限定されないが、好ましくは以下に示す方法に準じて製造すればよい。１硫酸塩の製法を例示する。
（方法１）
2002088147.tif 000005
（第１工程）
化合物（Ｉ）の保護体である化合物（ＩＩ）（式中、Ｒ１は水素またはアミノ保護基；Ｒ２はカルボキシ保護基；Ｒ３は水素またはアミノ保護基；Ｘはハロゲン等のカウンターイオン）の酸性溶液（好ましくは、ギ酸または酢酸溶液）中に、氷冷下、硫酸（好ましい濃度は、約６０〜９８％）を化合物（ＩＩ）に対して約１０〜３０モル当量、より好ましくは約１５〜２０モル当量、数分〜数十分かけて滴下し、同温度で数分〜数時間攪拌する。この反応液を好ましくは約０〜−２０℃に冷却した有機溶媒、好ましくは、イソプロパノール、アセトン、エタノール、またはそれらの混合液中に注ぐことにより、化合物（Ｉ）の０．５硫酸塩である上記化合物（ＩＩＩ）を析出させる。原料の化合物（ＩＩ）は、ＷＯ００／３２６０６号に記載の方法に準じて合成すればよい。各置換基は好ましくは、Ｒ１およびＲ３がアミノ保護基（例：ｔ−ブトキシカルボニル等）、Ｒ２がカルボキシ保護基（例：ｐ−メトキシベンジル等）、ＸがＣｌ、Ｂｒ、Ｉ等である。
本工程により、化合物（ＩＩ）の脱保護と硫酸塩形成が一工程で完了する。
（第２工程）
上記化合物（ＩＩＩ）の水溶液に、好ましくは、０℃〜室温、より好ましくは約３〜１０℃にて、化合物（ＩＩＩ）に対して好ましくは約０．５〜１．０モル当量、より好ましくは約０．５〜０．６モル当量の硫酸（好ましい濃度は約１０〜６０％）と有機溶媒（例：テトロヒドロフラン等）を加えることによって、化合物（Ｉ）の１硫酸塩である化合物（ＩＶ）を析出させる。このとき化合物（ＩＶ）が結晶として析出しにくい場合には、まず不溶物を濾取後、一定時間静置し、および／または種晶を添加して結晶化させればよい。得られた析出物を所望により乾燥することにより、化合物（ＩＶ）を好ましくは結晶として単離することができる。化合物（ＩＶ）の水和数は、析出条件、湿度、乾燥条件等により異なり必ずしも限定されないが、例えば５〜７水和物等として得られる。
化合物（ＩＩＩ）はこのように、化合物（Ｉ）の１硫酸塩の製造用中間体として有用であるが、それ自身を医薬活性成分として使用してもよい。
（方法２）化合物（Ｉ）の１塩酸塩を、所望により塩基（例：ＮａＯＨ）と反応させた後、硫酸と反応させることによって、化合物（Ｉ）の１硫酸塩が得られる。
好ましくは、化合物（Ｉ）の１塩酸塩と硫酸水を数分から数時間反応させる。この反応液を、展開液に硫酸を使用してクロマト処理する。流出液を好ましくはｐＨ４〜６に調製後濾別し、濾液を減圧濃縮後、アルコールに注ぐことにより、化合物（Ｉ）の０．５硫酸塩が得られる。これを上記第２工程と同様に処理することにより、化合物（Ｉ）の１硫酸塩が得られる。
化合物（Ｉ）の硫酸塩またはその結晶は、各種水和物であってもよい。水和数は、以下のように再結晶や乾燥の条件等を変えることにより適宜調節可能である。
再結晶用溶媒としては、水、有機溶媒（例：アルコール、アセトン、テトラヒドロフラン、ジオキサン等）またはその混液が例示される。
乾燥条件の一般的な範囲は、例えば温度：約１０〜５０℃、好ましくは約２０〜４０℃、圧力：約０〜１００ｍｍＨｇ、好ましくは約１〜６０ｍｍＨｇ、時間：約１分〜２４時間、好ましくは約１〜１０時間である。具体例を以下に示す。
（例１）７〜８水和物結晶を所望により加温して一旦水に溶かした後、約０〜１０℃で数日静置させ、所望により数分〜数時間攪拌後、さらに静置させて得られる結晶を、減圧乾燥（例：約１０〜２０ｍｍＨｇ，室温付近，約１〜３時間）することにより５水和物に変換できる。さらに５水和物を長時間、減圧乾燥（例：約１０〜２０ｍｍＨｇ，室温付近，約７〜２０時間）することにより４水和物に変換できる。
（例２）７〜８水和物結晶を所望により加温して一旦水に溶かした後、約０〜２０℃に冷却する。これに有機溶媒（例：テトラヒドロフラン等）を添加し、約３〜２０℃で数時間〜数日静置させ、これに再度同様の有機溶媒と所望により硫酸を少量添加することにより晶析させる。この結晶を減圧乾燥（例：約１０〜２０ｍｍＨｇ，室温付近，約１〜３時間）することにより６水和物に変換できる。６水和物結晶はさらに乾燥することにより４〜５水和物結晶に変換できる。
（例３）６水和物結晶を減圧乾燥することにより３水和物結晶（乾燥条件：約１５〜１８ｍｍＨｇ，室温付近，約４〜５時間）、１水和物（乾燥条件：約２〜４ｍｍＨｇ，室温付近，約３〜５時間）、および２水和物（乾燥条件：約５〜１５ｍｍＨｇ，室温付近，約１〜５時間）に変換できる。
（例４）水和物結晶は加熱乾燥（乾燥条件：約８０℃以上）あるいは室温下では高真空下で減圧乾燥することにより無水和物結晶（乾燥条件：約１ｍｍＨｇ以下，室温付近，約２時間以上）に変換できる。
本発明はさらに、前記化合物（Ｉ）の硫酸塩、その溶媒和物もしくは結晶、またはそれらの混合物を有効成分として含有する医薬組成物を提供する。該医薬組成物は、好ましくは抗菌剤である。また医薬組成物の剤形としては、錠剤、顆粒剤、カプセル剤、注射剤等が例示されるが、好ましくは注射剤である。また本発明は、前記化合物（Ｉ）の硫酸塩、その溶媒和物もしくは結晶、またはそれらの混合物を有効成分として投与する、感染症の予防または治療方法、または抗菌剤を製造するためのそれらの使用を提供する。
化合物（Ｉ）の硫酸塩、その溶媒和物、またはそれらの結晶は、保存安定性が高く、また水溶性が高く（＞１００ｍｇ／ｍｌ）、水に溶解した場合でもほとんどまたは全く濁りが観察されない。これらの特性は、対応の塩酸塩等と比較した場合に顕著な差が見られる。よって化合物（Ｉ）の硫酸塩、その溶媒和物、またはそれらの結晶は特に注射剤の有効成分として適しており、粉末充填製剤または凍結乾燥製剤等として調製できる。
上記医薬組成物は適宜、医薬品用添加剤（例：賦形剤、崩壊剤、溶解剤、乳化剤、安定化剤等）を含有していてもよい。特に注射剤として使用する場合には、蒸留水や生理食塩水等と共に、ｐＨ調節用の塩基（例：炭酸ナトリウム、アミノ酸（例：アルギニン等）を配合してもよい。
化合物（Ｉ）の硫酸塩、その溶媒和物もしくは結晶、またはそれらの混合物の投与量は、患者の年齢や疾患の種類・状態等により異なるが、通常、患者の体重１ｋｇ当たり、約０．１〜１００ｍｇ／日、好ましくは約０．５〜５０ｍｇ／日を、所望により１日２〜４回に分割して経口または非経口的に投与すればよい。
実施例
以下に実施例、試験例を示す。粉末Ｘ線回折パターンは図に示し、その代表的なピーク値は表に記載した。これらは何ら本発明を限定するものではない。
（略号）
Ｍｅ：メチル；Ｅｔ：エチル；Ｂｏｃ：ｔ−ブトキシカルボニル；ＰＭＢ：ｐ−メトキシベンジル；ＤＭＦ：ジメチルホルムアミド；ｉＰｒＯＨ：イソプロピルアルコール；ＴＨＦ：テトラヒドロフラン；ＭｅＣＮ：アセトニトリル
実施例１  ０．５硫酸塩の合成
（方法１）
2002088147.tif 000006
イミダゾピリジン２（２８．９８ｇ，９９．８１ｍＭｏｌ）とクロライド１（８１．２ｇ，純度８２％，１ｅｑ）のＤＭＦ９２ｍｌ溶液にＮａＢｒ（２０．５８ｇ，２ｅｑ）を加えて５℃で３．５日攪拌した。この懸濁液を５％ＮａＣｌ水溶液に注いで析出粉末を濾取し、ＮａＣｌ水，水で順次洗浄後、減圧乾燥して四級塩３をＢｒ塩とＣｌ塩の混合物（１７３．１ｇ）として得た。
元素分析  Ｃ３７Ｈ４５Ｎ１０Ｏ８Ｓ２Ｃ１０．２Ｂｒ０．８Ｈ２Ｏとして
計算値：Ｃ：４８．７８％，Ｈ：５．２０％，Ｎ：１５．３８％，Ｓ：７．０４％，Ｃｌ：０．７８％，Ｂｒ：７．０２％
実測値：Ｃ：４８．６６％，Ｈ：５．２０％，Ｎ：１５．２４％，Ｓ：７．０６％，Ｃｌ：１．１０％，Ｂｒ：７．１４％
化合物３の９８％ギ酸２２０ｍｌ溶液に氷冷下６２％硫酸５１１ｍｌを１５分で滴下して加え、同温度で１時間懸濁攪拌した。これを−２０℃に冷却した９．５ＬのｉＰｒＯＨ／アセトン（８．５／１）に注ぎ析出粉末を濾取し、ｉＰｒＯＨ、アセトンで順次洗浄後、減圧乾燥して粗製の４を得た。これを水に溶解してＨＰ−２０ＳＳダイヤイオン樹脂クロマト（三菱化学（株）製）にかけ、０．００１Ｎ  Ｈ２ＳＯ４〜０．００１Ｎ  Ｈ２ＳＯ４／ＭｅＣＮ（９６／４）で展開して約８Ｌの流出液を集めた。これにポリ（４−ビニルピリジン）を加えてＰＨ４．５に調製して濾別後、約６００ｍｌまで減圧濃縮後、凍結乾燥に付し、０．５硫酸塩４（非晶質，３１．３ｇ，収率約４３％）を得た。
元素分析  Ｃ２４Ｈ２８Ｎ１０Ｏ５Ｓ２・０．５４Ｈ２ＳＯ４・４．６Ｈ２Ｏとして
計算値：Ｃ，３９．１４；Ｈ，５．２４；Ｎ，１９．０２；Ｓ，１１．０６
実験値：Ｃ，３９．２２；Ｈ，５．１８；Ｎ，１９．２２；Ｓ，１０．８８（％）
（方法２）
2002088147.tif 000007
氷冷攪拌下の２Ｎ  Ｈ２ＳＯ４  ２５ｍｌにＷＯ００／３２６０６号の実施例６−２に記載の塩酸塩６  ３．５ｇを加えて１５分攪拌する。これを２５０ｍｌのＨＰ−２０ＳＳ樹脂クロマト（三菱ダイヤイオン）にかけ、０．００１Ｎ  Ｈ２ＳＯ４で展開して流出液を集める。これにポリ（４−ビニルピリジン）を加えてＰＨ４．７に調製後濾別し、この濾液を減圧濃縮後ｉＰｒＯＨに注いで析出粉末を濾取し、洗浄後、減圧乾燥して０．５硫酸塩４を得る。
実施例２  １硫酸塩７水和物結晶の合成
上記化合物４４ｇ（５．４ｍＭｏｌ）の水１２ｍｌ溶液に１０℃冷却下１０Ｎ  Ｈ２ＳＯ４  ０．６５ｍｌとＴＨＦ１３ｍｌを加え、微量の不溶物を濾別後一週間静置した。析出晶を濾取後、約１５ｍｍＨｇ減圧下室温で１．５時間乾燥し、１硫酸塩である化合物５（１．６７ｇ）を７水和物結晶として得た。
元素分析  Ｃ２４Ｈ２８Ｎ１０Ｏ５Ｓ２・Ｈ２ＳＯ４・７Ｈ２Ｏとして
計算値：Ｃ，３４．９５；Ｈ，５．３８；Ｎ，１６．９８；Ｓ，１１．６６
実験値：Ｃ，３４．６７；Ｈ，５．３０；Ｎ，１７．１６；Ｓ，１１．７２（％）
１Ｈ−ＮＭＲ（Ｄ２Ｏ）δ：１．３０（３Ｈ，ｔ，Ｊ＝７．５Ｈｚ），２．４２（２Ｈ，ｍ），２．７４（３Ｈ，ｓ），３．１６（２Ｈ，ｔ  ｌｉｋｅ，Ｊ＝８．１Ｈｚ），３．３４  ａｎｄ  ３．６４（２Ｈ，ＡＢｑ，Ｊ＝１８．３Ｈｚ），４．３３（２Ｈ，ｑ，Ｊ＝７．５Ｈｚ），４．６５（２Ｈ，ｔ  ｌｉｋｅ，Ｊ＝７．５Ｈｚ），５．２５（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝４．８Ｈｚ），５．７１  ａｎｄ  ５．９４（２Ｈ，ＡＢｑ，Ｊ＝１５Ｈｚ），５．８７（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝４．８Ｈｚ），７．８９（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝８．１Ｈｚ  ａｎｄ  ６．６Ｈｚ），８．８２（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．１Ｈｚ），８．８６（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝６．６Ｈｚ），８．８９（１Ｈ，ｓ）．
ｍｐ（ｄｅｃ．）：＞２００℃
粉末Ｘ線：Ａ型（参照：図１および表１）
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実施例３  １硫酸塩７水和物の再結晶
実施例２の１硫酸塩７水和物結晶（２０．６ｇ）を水７８ｍｌに加温溶解後、アセトン５９ｍｌと１Ｎ  Ｈ２ＳＯ４  ２．５ｍｌを加えて微量の不溶物を濾別後１３℃に冷却し、再度アセトン４０ｍｌを追加した後、一晩静置した。さらに、４℃で５時間攪拌後一晩静置し、結晶を濾取した。水／アセトンで洗浄後約１５ｍｍＨｇ減圧下室温で２時間乾燥し、５の７水和物結晶（１２．７ｇ，約６２％）を得た。本結晶は実施例２の結晶と同様のＸ線ピークを示した。
ＫＦ水分値  Ｃ２４Ｈ２８Ｎ１０Ｏ５Ｓ２・Ｈ２ＳＯ４・７．４Ｈ２Ｏとして
計算値：１６．０２、実験値：１６．０５（％）．
実施例４  １硫酸塩６水和物結晶の調製
実施例３の１硫酸塩７水和物５．８９ｇに注射用蒸留水２４ｍｌを加えて４３℃で加温溶解後ミクロフィルターで濾過し、６ｍｌの水で洗浄後１７℃に冷却した。これにＴＨＦ２６ｍｌを加えて１０℃で２２時間さらに４℃で一晩静置後、再びＴＨＦ２２ｍｌと２ＮＨ２ＳＯ４を少量追加して一晩静置後結晶を濾取した。これを２ｍｌの氷冷した水／ＴＨＦ（１：１．６，１：３）で順次洗浄後１６ｍｍＨｇ減圧下室温で２時間乾燥して化合物（Ｉ）の１硫酸塩６水和物結晶（４．７３ｇ，８２％）を得た。
ＫＦ水分値  Ｃ２４Ｈ２８Ｎ１０Ｏ５Ｓ２・Ｈ２ＳＯ４・６．２Ｈ２Ｏとして
計算値：１３．７８、実験値：１３．８８（％）．
粉末Ｘ線：Ｂ型（参照：図２および表２）
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実施例５  １硫酸塩５水和物結晶の調製
実施例３の１硫酸塩７水和物６．０ｇに注射用蒸留水２４ｍｌを加え３５℃加温溶解後ミクロフィルターで濾過して２ｍｌの水で洗浄した。この水溶液に少量の結晶種を加えて１０℃で三日静置、さらに４℃で３時間攪拌後一晩静置して結晶を濾取した。これを１ｍｌの冷水ついで１ｍｌの水／ＥｔＯＨ（４：１，２：１，１：１，１：２，１：９）で順次洗浄後、約１５ｍｍＨｇ減圧下室温で１．５時間乾燥して化合物（Ｉ）の１硫酸塩５水和物結晶２．４ｇを得た。
ＫＦ水分値  Ｃ２４Ｈ２８Ｎ１０Ｏ５Ｓ２・Ｈ２ＳＯ４・５Ｈ２Ｏとして
計算値：１１．４２、実験値：１１．４６（％）．
１３Ｃ−ＮＭＲ（Ｄ２Ｏ）δ：１６．５９，２８．４５，２８．８４，３５．５４，４６．２４，４８．５９，５７．２７，６０．１５，６１．５９，７５．０２，１１９．２９，１２２．４９，１３１．８１，１３３．９５，１３４．９８，１４１．１１，１４８．９７，１５０．９７，１５３．５０，１６３．５３，１６６．６４，１６６．９７，１６８．８７，１８７．００．
固体１３Ｃ−ＮＭＲ：外部標準：Ｈｅｘａｍｅｔｈｙｌ  ｂｅｎｚｅｎｅ  ８１７．３ｐｐｍ（乾燥窒素気流中で試料を調製）δ：１３．７２，１６．２９，３４．０６，４４．９４，５８．２５，７３．６４，１２０．８０，１２４．７３，１２６．８７，１２８．２３，１３１．８２，１４０．６６，１４６．３４，１４８．７７，１６１．０１，１６６．２０，１６８．４８，１８５．０４．
粉末Ｘ線：Ｃ型（参照：図３および表３）
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実施例６  １硫酸塩４水和物結晶の調製
（１）実施例４で得られた１硫酸塩６水和物結晶４．５９ｇを１５ｍｍＨｇ減圧下室温で２１時間乾燥し、化合物（Ｉ）の１硫酸塩４水和物結晶４．４０ｇを得た。
ＫＦ水分値  Ｃ２４Ｈ２８Ｎ１０Ｏ５Ｓ２・Ｈ２ＳＯ４・４．３Ｈ２Ｏとして
計算値：９．９８、実験値：９．９８（％）．
固体１３Ｃ−ＮＭＲ（乾燥窒素気流中で試料を調製）δ：１３．６１，２４．７４，３３．９１，４５．０８，５６．１５，５８．２９，７３．６８，１２０．６９，１２３．９０，１２６．８１，１３１．１３，１４０．３１，１４５．９４，１４８．８１，１６２．５０，１６６．１０，１６８．５７，１８４．８４．
ＩＲ（Ｎｕｊｏｌ）（乾燥窒素気流中で試料を調製）ｃｍ−１：
３３４６〜３０８９，２７３０，２５２１〜２４５７，１８８０，１７５９，１６８７，１６３３，１５８５，１５５４，１５１８，１２６７，１２１５，１１４７，１０６１，９３５，８１８．
粉末Ｘ線：Ｄ型（参照：図４および表４）
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（２）実施例５で得られた１硫酸塩５水和物２．２２ｇを５０〜３０ｍｍＨｇ減圧下室温で２時間さらに２０ｍｍＨｇ減圧下９．５時間乾燥し、化合物（Ｉ）の１硫酸塩４水和物結晶を得た。
ＫＦ水分値  Ｃ２４Ｈ２８Ｎ１０Ｏ５Ｓ２・Ｈ２ＳＯ４・４．４Ｈ２Ｏとして
計算値：１０．１９、実験値：１０．２２（％）．
固体１３Ｃ−ＮＭＲ：外部標準：Ｈｅｘａｍｅｔｈｙｌ  ｂｅｎｚｅｎｅ  ８１７．３ｐｐｍ（乾燥窒素気流中で試料を調製）δ：１３．６６，１７．６４，１９，２４，２４．１０，３２．６０，３４，４９，４５．２７，５５．９６，５８．６８，６９．６０，７３．２４，１２０．５０，１２４．０９，１２８．７０，１３０．３５，１３２．０５，１３９．２４，１４６．６２，１４９．０５，１６１．１４，１６２．７０，１６６．０５，１６８．５７，１８５．０８．
ＩＲ（Ｎｕｊｏｌ）（乾燥窒素気流中で試料を調製）ｃｍ−１：３３４４〜３０２９，２７３３，２５２４〜２４６７，１８７６，１７５９，１６８７，１６３３，１５８５，１５５４，１５１８，１２６９，１２１５，１１４９，１０６１，９３７，８１８．
ｍｐ（ｄｅｃ．）：＞２００℃
粉末Ｘ線：Ｄ型（参照：図５および表５）
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実施例７  １硫酸塩３水和物結晶の調製
実施例４と同様にして得られた１硫酸塩６水和物結晶８．５０ｇを１６ｍｍＨｇ減圧下室温で３．５時間乾燥し、化合物（Ｉ）の１硫酸塩３水和物結晶７．９４ｇを得た。当該結晶については単結晶Ｘ線解析によっても構造確認した。
元素分析  Ｃ２４Ｈ２８Ｎ１０Ｏ５Ｓ２・Ｈ２ＳＯ４・３Ｈ２Ｏとして
計算値：Ｃ，３８．２９；Ｈ，４．８２；Ｎ，１８．６１；Ｓ，１２．７８
実験値：Ｃ，３８．１４；Ｈ，４．８４；Ｎ，１８．６４；Ｓ，１２．６６（％）
ＫＦ水分値  計算値：７．１８、実験値：７．７７（％）．
固体１３Ｃ−ＮＭＲ：外部標準：Ｈｅｘａｍｅｔｈｙｌ  ｂｅｎｚｅｎｅ  ８１７．３ｐｐｍ（乾燥窒素気流中で試料を調製）δ：１３．６７，１７．６５，１９，３５，２３．８２，３２．４６，３４，４５，４５．１８，５５．９２，５８．５４，６９．７６，７３．１１，１２０．１７，１２４．３４，１２８．９５，１３０．１７，１３２．０１，１３９．３５，１４９．１１，１６１．０５，１６６．０１，１６８．６３，１８４．９０．
ＩＲ（Ｎｕｊｏｌ）ｃｍ−１：（乾燥窒素気流中で試料調製）３３５３，３１９９，２５０９，１８７８，１７６１，１６８４，１６３３，１５５４，１３２７，１１４９，１１１８，１０３６，９３７，６０９．
粉末Ｘ線：Ｅ型（参照：図６および表６），乾燥窒素気流中で試料調製。
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実施例８  １硫酸塩１水和物結晶の調製
実施例４と同様にして得られた１硫酸塩６水和物結晶１６．０ｇを３ｍｍＨｇ減圧下２６℃で４時間乾燥し、化合物（Ｉ）の１硫酸塩１水和物結晶１４．１５ｇを得た。
元素分析  Ｃ２４Ｈ２８Ｎ１０Ｏ５Ｓ２・Ｈ２ＳＯ４・１Ｈ２Ｏとして
計算値：Ｃ，４０．２２；Ｈ，４．５０；Ｎ，１９．５４；Ｓ，１３．４２
実験値：Ｃ，３９．８２；Ｈ，４．６４；Ｎ，１９．４９；Ｓ，１３．５０（％）
ＫＦ水分値  計算値：２．５１、実験値：４．０７（％）．
粉末Ｘ線：Ｆ型（参照：図７および表７），乾燥窒素気流中で試料調製。
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固体１３Ｃ−ＮＭＲ：外部標準：Ｈｅｘａｍｅｔｈｙｌ  ｂｅｎｚｅｎｅ  ８１７．３ｐｐｍ（乾燥窒素気流中で試料を調製）δ：１３．２３，１７．０７，１８．２８，２５．０３，３４．５５，４６．３５，５８．３０，７３．８４，１１６．９６，１１９．３９，１２５．９９，１３２．０６，１３４．４４，１３８．９６，１４７．２６，１４８．７２，１６０．７６，１６９．３１，１８４．１７．
実施例９  １硫酸塩２水和物結晶の調製
実施例４と同様にして得られた１硫酸塩６水和物結晶１３．９６ｇを１０ｍｍＨｇ減圧下２６℃で３．７５時間乾燥し、化合物（Ｉ）の１硫酸塩２水和物結晶１２．７２ｇを得た。
元素分析  Ｃ２４Ｈ２８Ｎ１０Ｏ５Ｓ２・Ｈ２ＳＯ４・２．１Ｈ２Ｏとして
計算値：Ｃ，３９．１４；Ｈ，４．６８；Ｎ，１９．０２；Ｓ，１３．０６
実験値：Ｃ，３９．１８；Ｈ，４．６４；Ｎ，１９．１０；Ｓ，１３．１７（％）
ＫＦ水分値  計算値：５．１４、実験値：５．１９（％）．
固体１３Ｃ−ＮＭＲ：外部標準：Ｈｅｘａｍｅｔｈｙｌ  ｂｅｎｚｅｎｅ  ８１７．３ｐｐｍ（乾燥窒素気流中で試料を調製）δ：１４．８７，１６．９１，２６．６２，３４．８８，４６．３９，５８．３４，７３．２０，１２０．３５，１２１．５６，１２４．３３，１２９．１９，１３１．８１，１３９．１９，１４８．６１，１６０．９０，１６８．８６，１８４．７４．
粉末Ｘ線：Ｇ型（参照：図８および表８），乾燥窒素気流中で試料調製。
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実施例１０  １硫酸塩無水物結晶の調製
実施例４に準じて得られた１硫酸塩５．６水和物結晶４．０ｇ（ＫＦ水分値１３％）を１ｍｍＨｇ以下で減圧下、室温で２０時間乾燥し、化合物（Ｉ）の１硫酸塩無水物結晶３．５ｇを得た。
ＫＦ水分値  計算値：０、実験値：０．０８（％）．
粉末Ｘ線：Ｈ型（参照：図９および表９），乾燥窒素気流中で試料調製。
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試験例１
上記実施例で得られた結晶をバイアル瓶に充填し、４０℃加速安定性試験を行って残存率を調べた。また水溶解状態での濁り具合も調べた。
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本発明の硫酸塩結晶は、長期間、高い保存安定性を示し、また水溶解状態においてほとんど濁りは観察されなかった。
試験例２
実施例９で得られた化合物（Ｉ）の１硫酸塩結晶をバイアル瓶に充填し、４０℃加速安定性試験を行って残存率を調べた。また水溶解状態での濁り具合も調べた。対照として、ＷＯ００／３２６０６号の実施例６−２に記載の方法に準じて得られた化合物（Ｉ）の１塩酸塩（非結晶，ＫＦ  １．７％，０．６  Ｈ２Ｏ）の凍結乾燥品を使用した。
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本発明の化合物（Ｉ）の硫酸塩は、対照の塩酸塩に比べて、長期間、高い保存安定性を示し、変色等の外観変化も生じなかった。また水溶解状態においても濁りは観察されなかった。よって、本発明の硫酸塩は、特に注射剤等として使用する上で、対応の塩酸塩よりも有利である。
試験例３
実施例１０で得られた結晶をバイアル瓶に充填し、４０℃加速安定性試験を行って残存率を調べた。また水溶解状態での濁り具合も調べた。
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本発明の硫酸塩無水物結晶は、長期間、高い保存安定性を示し、また水溶解状態においてほとんど濁りは観察されなかった。
製剤例１
実施例７で得られた化合物（Ｉ）の１硫酸塩とｐＨ調整用の塩基を蒸留水に溶解させることにより、注射液を調製する。
産業上の利用可能性
本発明のセフェム化合物の硫酸塩、その溶媒和物またはそれらの結晶は、長期間高い保存安定性を有し、極めて高品質である。よって、抗菌剤等の医薬、特に注射剤の活性成分として使用される。また本発明の製造方法によれば、それらの化合物を高収率、高純度で効率よく工業的に製造することが可能である。
【図面の簡単な説明】
（図１）実施例２で得られた結晶の粉末Ｘ線回折のグラフである。縦軸はピーク強度（単位：ｃｐｓ）、横軸は回折角２θ（単位：°）を表わす。
（図２）実施例４で得られた結晶の粉末Ｘ線回折のグラフである。
（図３）実施例５で得られた結晶の粉末Ｘ線回折のグラフである。
（図４）実施例６（１）で得られた結晶の粉末Ｘ線回折のグラフである。
（図５）実施例６（２）で得られた結晶の粉末Ｘ線回折のグラフである。
（図６）実施例７で得られた結晶の粉末Ｘ線回折のグラフである。
（図７）実施例８で得られた結晶の粉末Ｘ線回折のグラフである。
（図８）実施例９で得られた結晶の粉末Ｘ線回折のグラフである。
（図９）実施例１０で得られた結晶の粉末Ｘ線回折のグラフである。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【国際調査報告】
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