(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
下記式（Ｉ）で表されるイソクマリン誘導体または適当な場合にはその塩。
式（Ｉ）：
【化１】
0003757024.tif 000024
式中、Ａは水素または低級アルキル基を示し、Ｂは水素原子または低級アルキルシリル、アシルおよび置換されていてもよいアルコキシメチルからなる群より選ばれる水酸基の保護基を示し、Ｒ1はＮ−モノ−もしくはジ−アルキル置換されていてもよいカルバモイル基またはカルボキシル基を示し、Ｒ2およびＲ3は、相互に独立して、水素、低級アルキル基またはアリール−低級アルキル基を示し、ここでアリール部分は、場合によって１個以上の置換基で置換されていてもよく、あるいはＲ2とＲ3は、それらが結合する炭素原子と一緒になって、３〜７員のいずれかの脂環式環を形成するＣ2-6アルキレン基を示すが、但し、Ａが低級アルキル基で、Ｒ2およびＲ3が同時に水素原子を示すか、または一方が水素原子で、他方が低級アルキル基を示す場合には、Ｒ1はカルボキシル基以外の基である。
【請求項２】
Ａが水素原子または低級アルキル基であり、Ｂが水素原子であり、Ｒ1がカルボキシル基またはＮ−モノ−もしくはジ−低級アルキル置換されていてもよいカルバモイル基である請求項１記載の化合物。
【請求項３】
下記式（I）で表されるイソクマリン誘導体の中間体。
式（Ｉ）：
【化１】
0003757024.tif 000025
式中、Ａは低級アルキル基を示し、Ｂは低級アルキルシリル、アシルおよび置換されていてもよいアルコキシメチルからなる群より選ばれる水酸基の保護基を示し、Ｒ1はシアノ基を表し、Ｒ2およびＲ3は、相互に独立して、水素、低級アルキル基またはアリール−低級アルキル基を示し、ここでアリール部分は、場合によって１個以上の置換基で置換されていてもよく、あるいはＲ2とＲ3は、それらが結合する炭素原子と一緒になって、３〜７員のいずれかの脂環式環を形成するＣ2-6アルキレン基を示すが、但し、Ｒ2およびＲ3が同時に水素原子を示すか、または一方が水素原子で、他方が低級アルキル基を示す場合の化合物は除く。
【請求項４】
請求項２記載の化合物を有効成分として含む医薬製剤。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は、イソクマリン誘導体類およびそれらを含む医薬製剤に関する。
【０００２】
【従来の技術】
イソクマリン誘導体、特に式
【０００３】
【化２】
0003757024.tif 000002
【０００４】
で表される、３−ヒドロキシメチル−６−メトキシ−８−ヒドロキシ−１Ｈ−２−ベンゾピラン−１−オンは、ストレプトバーチシリウム ユーロシディクム（Streptoverticillium eurocidicum）が産生する化合物として、初めて見い出され、各種動物細胞および人癌細胞に対する増殖阻害活性を示す抗生物質ＭＩ４３−３７Ｆ１１として注目されている（特開平３−２１７７号）。その後、前記抗生物質ＭＩ４３−３７Ｆ１１（以下、ＭＩ４３と略記する）の化学合成方法について研究され、イソクマリン骨格の３位にベンジルオキシメチルやハロゲン化メチル基のような脱離基含有メチル基を有するイソクマリン誘導体等が中間体として、（特開平４−１１２８８４号）、また前記の３位に式
【０００５】
【化３】
0003757024.tif 000003
【０００６】
（ここで、Ｒ3およびＲ4は各々独立に置換または未置換アルキル基、アルコキシ、アルカノイルオキシ、モノ−もしくはジ−置換アミノ、フェニルチオ、またはＮ3などの基を有するイソクマリン誘導体がＭＩ４３と同様な薬理活性を示す化合物として（特開平５−９７８４１号）提供されてきた。
【０００７】
一方、ＭＩ４３は、経口投与でラットのアジュバント関節炎およびマウスのコラーゲン誘発関節塩を有意に抑制することから、免疫調節剤としての使用も提案されている（特開平６−１８３９６６号）。また、これらの疾患に対してさらに優れた効能を有するイソクマリン誘導体として、イソクマリン骨格の３位に基−ＣＨＲＣＯＯＨ（ここで、Ｒは水素原子または低級アルキル基である）が結合した化合物も提案されている（特開平８−１７６１３８号）。
【０００８】
【発明が解決しようとする課題】
上記特開平８−１７６１３８号公報に記載された化合物は、殊に生物学的利用能にも優れている点で興味深いものであるが、さらなる優れた効能を有する化合物に対する欲求は依然として存在する。したがって、本発明の目的は、上記公報に記載の化合物以外の上記疾患に優れた効能を示す化合物を提供することにある。
【０００９】
【課題を解決するための手段】
本発明者らは、例えば、特開平８−１７６１３８号公報に記載されたイソクマリン誘導体の基−ＣＨＲＣＯＯＨ（ここで、Ｒは低級アルキル基である）のメチン（−ＣＨ＝）部分がより嵩高い置換基を有する化合物も、ある一定の薬理活性を示すとともに、既知イソクマリン誘導体と異なる生体内動態を示すことを見い出した。また、かかる化合物を効率よく製造するための新規合成中間体も見い出した。
【００１０】
したがって、本発明によれば、下記式（Ｉ）で表されるイソクマリン誘導体および、適当な場合にはそれらの塩が提供される。
【００１１】
式（Ｉ）：
【００１２】
【化４】
0003757024.tif 000004
【００１３】
式中、Ａは水素原子または低級アルキル基を示し、Ｂは水素原子または水酸基の保護基を示し、Ｒ1はシアノ基、Ｎ−モノ−もしくはジ−アルキル置換されていてもよいカルバモイル基またはカルボキシル基を示し、Ｒ2およびＲ3は、相互に独立して、水素、低級アルキルまたはアリール−低級アルキルを示し、ここでアリール部分は、場合によって１個以上の置換基で置換されていてもよく、あるいはＲ2とＲ3は、それらが結合する炭素原子と一緒になって、３〜７員のいずれかの脂環式環を形成するＣ2-6アルキレン基を示すが、但し、Ａがメチル基で、Ｒ2およびＲ3が同時に水素原子を示すか、または一方が水素原子で、他方が低級アルキル基を示す場合には、Ｒ1はシアノ基またはカルボキシル基以外の基である。
【００１４】
これらのうち、Ａが水素原子または低級アルキル基であり、Ｂが水素原子であり、Ｒ1がカルボキシル基またはＮ−モノ−もしくはジ−低級アルキル置換されていてもよいカルバモイル基である、式（Ｉ）の化合物は、例えば、優れた血管新生阻害活性を有する。一方、Ａが低級アルキル基であり、Ｂが水酸基の保護基であり、そしてＲ1がシアノ基である、式（Ｉ）の化合物は、上記生物活性を示す化合物の合成中間体として有用である。
【００１５】
【発明の具体的な記載】
本発明のイソクマリン誘導体を特定するのに用いる、低級アルキル基は、炭素数１〜６個の直鎖もしくは分枝のアルキル基を意味し、具体的なものとしては、メチル、エチル、ｎ−もしくはｉｓｏ−プロピル、ｎ−、ｉｓｏ−、ｓｅｃ−もしくはｔ−ブチル、ｎ−ペンチル、イソアミル、およびｎ−ヘキシル基などが挙げられる。
【００１６】
アリール−低級アルキル基は、上記低級アルキル基がアリール基、好ましくはフェニル基により置換されている基を意味し、このアリール基は、場合によって、ハロゲン、好ましくは塩素、臭素、フッ素、水酸基、低級アルキル基、カルボキシル基、ニトロ基、アミノ基から選ばれる同一もしくは異なる置換基１個以上、好ましくは１個もしくは２個により置換されていてもよい。
【００１７】
水酸基の保護基は、低級アルキルシリル（例えば、ｔ−ブチルジメチルシリル、トリメチルシリル等）、アシル（例えば、アセチル、プロピオニル、ベンゾイル等）、置換されていてもよいアルコキシメチル（例えば、メトキシメチル、メトキシエトキシメチル、ベンジルオキシメチル等）をはじめとする有機合成化学の分野で水酸基の保護基として使用できるいかなる基も包含される。
【００１８】
カルバモイル基（−ＣＯＮＨ2）は、場合によって、Ｎ−モノ−もしくはジ−低級アルキル置換されていてもよく、ジ−低級アルキル置換されている場合の低級アルキル基は、同一もしくは異なる基であってもよい。
【００１９】
以上の各基が組み合わさった本発明に従うイソクマリン誘導体の具体的なものとしては、限定されるものでないが、次表Ｉで表されるものを挙げることができる。
【００２０】
【表１】
0003757024.tif 000005
【００２１】
【表２】
0003757024.tif 000006
【００２３】
【表４】
0003757024.tif 000007
【００２４】
【表５】
0003757024.tif 000008
【００２５】
【表６】
0003757024.tif 000009
【００２６】
【表７】
0003757024.tif 000010
【００２７】
【表８】
0003757024.tif 000011
【００２８】
【表９】
0003757024.tif 000012
【００２９】
上記式（Ｉ）のＲ1がカルボキシル基を示す化合物と塩基性化合物との塩形態で提供することができる。これらの塩としては本発明の目的に沿う限り、何如なる塩であってもよい。しかし、好ましくは、通常のカルボキシル基含有薬物の製薬学的に許容される塩を生成するのに用いられる塩基性化合物との塩が好ましい。具体的な塩としては、リチウム、ナトリウムおよびカリウムなどのアルカリ金属、カルシウムおよびマグネシウムなどのアルカリ土類金属、ならびにメチルアミン、エチルアミン、ジメチルアミン、トリメチルアミン、トリエチルアミン、ピリジン、ピペラジンおよびピペリジンなどの有機塩基との塩が挙げられる。
【００３０】
上記式（Ｉ）で表される活性化合物は、例えば、特開平８−１７６１３８号公報に記載の方法またはその変法に従って得られる。
【００３１】
【化５】
0003757024.tif 000013
【００３２】
を出発原料にし、代表的な具体例については後述方法またはその変法によって、シアノメチル基メチル部分に１もしくは２個の低級アルキル基、１もしくは２個のアリール−低級アルキル基またはアルキレン鎖を導入し、本発明に従う合成中間体を生成した後、シアノ基を加水分解することによって得ることができる。
【００３３】
上記の本発明に従う化合物またはその製薬学的に許容される塩は、詳細には後述するように、例えば、コラーゲン誘発関節炎に対する抑制作用を示し、慢性関節リウマチ、全身性エリテマトーデス、全身性硬化症、結節性動脈周囲炎、潰瘍性大腸炎および若年性糖尿病などの自己免疫疾患あるいは悪性腫瘍、重症感染症など、主として、免疫調節作用の異常に随伴する疾患の予防または治療に使用できるものと思われる。
【００３４】
また、例えば、マウス背部皮下法において腫瘍細胞が誘導する血管新生の阻害作用を示し、主として、血管新生に随伴する疾患、例えば悪性固形腫瘍の増殖と転移、糖尿病性網膜症、各種慢性炎症、乾癬、角膜移植に伴う血管新生、さらに動脈硬化の予防および治療にも適用できるものと思われる。
【００３５】
その上、本発明の化合物は、免疫調節作用を有することが知られているＭＩ４３に比べて、生体内で高い安定性を示し、殊に経口投与において、有意に高い生体内安定性をはじめとする、優れた生物学的利用能を示す。しかも、毒性も殆ど見られず、有効かつ安全に使用することができる。
【００３６】
本発明の化合物は、それら単独で、例えば、免疫調節作用の異常または血管新生に随伴する疾患の予防または治療用の医薬製剤とすることもできるが、好ましくは製薬学的に許容される助剤と組み合わせて使用することができる。かかる助剤としては、当該技術分野で常用されている、充填剤、増量剤、結合剤、保湿剤、崩壊剤、崩壊抑制剤、表面活性剤、滑沢剤などの希釈剤あるいは賦形剤を挙げることができる。この医薬製剤としては各種の剤形がその治療目的に応じて選択でき、その代表的なものとしては錠剤、丸剤、散剤、液剤、懸濁シロップ剤、乳剤、顆粒剤、カプセル剤、坐剤、注射剤（液剤、懸濁剤など）などを挙げられる。また、本発明に従う化合物の作用を発揮される際の特に好適な投与経路は、経口投与に認められるので、上記の剤形のうち、経口投与用の剤形を好ましいものとして提供できる。
【００３７】
錠剤の形態に成型するに際しては、担体として公知のものを広く使用でき、例えば乳糖、白糖、塩化ナトリウム、ぶどう糖、尿素、澱粉、炭酸カルシウム、カオリン、結晶セルロース、ケイ酸などの賦形剤、水、エタノール、プロパノール、単シロップ、ぶどう糖液、澱粉液、ゼラチン溶液、カルボキシメチルセルロース、セラック、メチルセルロース、リン酸カリウム、ポリビニルピロリドンなどの結合剤、乾燥澱粉、アルギン酸ナトリウム、寒天末、ラミナラン末、炭酸水素ナトリウム、炭酸カルシウム、ポリオキシエチレンソルビタン脂肪酸エステル類、ラウリル硫酸ナトリウム、ステアリン酸モノグリセリド、澱粉、乳糖などの崩壊剤、白糖、カカオバター、水素添加油などの崩壊抑制剤、第四級アンモニウム塩基、ラウリル硫酸ナトリウムなどの吸収促進剤、グリセリン、澱粉などの保湿剤、澱粉、乳糖、カオリン、ベントナイト、コロイド状ケイ酸などの吸着剤、精製タルク、ステアリン酸塩、ホウ酸末、ポリエチレングリコールなどの滑沢剤などを使用できる。
【００３８】
さらに錠剤は必要に応じて通常の剤皮を施した錠剤、例えば糖衣錠、ゼラチン被包錠、フィルムコーティング錠、二重錠、多層錠とすることができる。丸剤の形態に成型するに際しては、担体としてこの分野で従来公知のものを広く使用でき、例えばぶどう糖、乳糖、澱粉、カカオバター、硬化植物油、カオリン、タルクなどの賦形剤、アラビアゴム末、トラガント末、ゼラチン、エタノールなどの結合剤、ラミナラン、寒天などの崩壊剤などを使用できる。
【００３９】
坐剤の形態に成型するに際しては、担体としてこの分野で従来公知のものを広く使用でき、ポリエチレングリコール、カカオバター、高級アルコール高級アルコールのエステル類、ゼラチン、半合成グリセリドなどを挙げることができる。注射剤として調製される場合は、液剤および懸濁剤は殺菌され、かつ血液と等張であるものが好ましく、これら液剤、懸濁剤の形態に調製するに際しては、希釈剤としてこの分野において常用されているものが全て使用でき、例えば水、エタノール、プロピレングリコール、エトキシ化イソステアリルアルコール、ポリオキシ化イソステアリルアルコール、ポリオキシエチレンソルビタン脂肪酸エステル類を使用することができる。なお、この場合等張性の溶液を調製するに十分な量の塩化ナトリウム、ぶどう糖あるいはグリセリンを該製剤中に含有させてもよく、また通常の溶解補助剤、緩衝剤、無痛化剤などを使用してもよい。また経口投与用には必要に応じて着色剤、保存剤、香料、風味剤、甘味剤などや他の医薬品を該製剤中に含有させてもよい。
【００４０】
本発明に従う医薬製剤に含められる本発明の上記化合物の量は特に限定されず、広範囲に選択されるが、通常、錠剤、顆粒剤、カプセル剤などの固形剤の場合は、全組成物の１〜７０重量％、このましくは５〜５０重量％であり、液剤、注射剤、懸濁剤などの液剤の場合は、０.１〜１０重量％である。
【００４１】
本発明の化合物の投与方法は、特に制限はなく、各種製剤形態、患者の年齢、性別、その他の条件、疾患の程度などに応じた方法で投与される。例えば、錠剤、丸剤、液剤、懸濁シロップ剤、乳剤、顆粒剤およびカプセル剤の場合には経口投与される。上述したように、経口投与が好ましいが、注射剤の場合には単独でまたはぶどう糖、アミノ酸などの通常の補液と混合して静脈内投与し、さらに必要に応じて単独で筋肉内、皮内、皮下もしくは腹腔内投与してもよい。坐剤の場合には、直腸内投与される。
【００４２】
本発明の化合物の投与量は、用法、患者の年齢、性別、その他の条件、疾患の程度などにより適宜増減することができるが、投与された動物の生体内で薬理学的に有効なレベルを達成できるように、例えば、経口投与の場合、１日当り０.３〜３００ｍｇ／ｋｇ体重、非経口投与の場合、０.０３〜３０ｍｇ／ｋｇ体重が適当である。
【００４３】
本発明に従う化合物のうち、化合物１を、３０ｍｇ／ｋｇ体重でＤＢＡ／１Ｊ雄性マウス７匹に経口投与したが、死亡した個体はなく、また毒性症状を示す個体も全く認められなかった。このことより、本発明で使用する化合物は、急性毒性を全く示さないと思われる。また、同じく化合物１を上記マウス７匹に２０ｍｇ／ｋｇ／日で３週間経口投与したが、死亡個体はなく、毒性症状を示す個体も全く認められなかった。このように、本発明の化合物は、亜急性毒性も殆ど示さない。また、その他の本発明に従う化合物も、同様の性状を示すことが推定できるように、式（Ｉ）で表される本発明の化合物は極めて安全に使用することができる。
【００４４】
さらに、具体的には後述するように、本発明に従う化合物は、慢性関節リウマチのモデル動物や血管新生試験用のモデル動物を使用する試験において、著効を示す。また、具体的には後述するように、本発明に従う化合物は、マウスに経口投与した場合、時間にわたり高い血中濃度を示し、特に、経口投与剤としても優れた特性を有する。
【００４５】
【実施例】
以下、本発明を具体例を挙げてさらに詳細に説明するが、本発明をこれらの態様に限定することを意図するものでない。
【００４６】
例１（参考）：８−ｔ−ブチルジメチルシリルオキシ−３−シアノメチル−６−メトキシ−１Ｈ−２−ベンゾピラン−１−オンの製造
【００４７】
【化６】
0003757024.tif 000014
【００４８】
３−シアノメチル−８−ヒドロキシ−６−メトキシ−１Ｈ−２−ベンゾピラン−１−オン１９.２０ｇ（８３.１１ｍｍｏｌ）をＮ,Ｎ’−ジメチルホルムアミド１６０ｍｌに溶解し、０℃に冷却後、イミダゾール１１.９０ｇ（１７５.１６ｍｍｏｌ）、ｔ−ブチルジメチルシリルクロリド２１.１４ｇ（１４０.１３ｍｍｏｌ）を加え、そのまま２時間撹拌した。反応液に水を３００ｍｌ加え、トルエン４００ｍｌ−酢酸エチル２００ｍｌの混合溶媒で２回抽出した。有機層を水（１００ｍｌ）、飽和食塩水（２００ｍｌ）で洗浄した後、減圧下に溶媒を留去した。残留物にエタノールを２００ｍｌ加え、加熱溶解後、室温で１３時間撹拌し、生じた結晶を濾別することにより標記化合物を２１.６２ｇ得た。
【００４９】
1Ｈ-ＮＭＲ(ＣＤＣｌ3)；δ ６.４６(１Ｈ,ｓ), ６.４５(２Ｈ,ｓ), ３.８７(３Ｈ,ｓ), ３.５９(２Ｈ,ｄ,Ｊ＝１.４Ｈｚ)，１.０５(９Ｈ,ｓ), ０.２７(６Ｈ,ｓ)
例２：２−（８−ヒドロキシ−６−メトキシ−１Ｈ−２−ベンゾピラン−１−オン−３−イル）−２−メチルプロピオン酸の製造
【００５０】
【化７】
0003757024.tif 000015
【００５１】
８−ｔ−ブチルジメチルシリルオキシ−３−シアノメチル−６−メトキシ−１Ｈ−２−ベンゾピラン−１−オン４００ｍｇ（１.１６ｍｍｏｌ）をテトラヒドロフラン４ｍｌに溶解し、−３０℃に冷却した後、６０％油状水素化ナトリウムを１１６ｍｇ（２.９０ｍｍｏｌ）、ヨウ化メチルを４４０μｌ（６.９６ｍｍｏｌ）加え、そのまま１時間撹拌した。反応液を酢酸エチル１００ｍｌに希釈し、水、飽和食塩水で洗浄した。無水硫酸ナトリウムにて脱水乾燥後、減圧下に溶媒を留去した。残留物をシリカゲルカラムに供して精製し、８−ｔ−ブチルジメチルシリルオキシ−３−シアノジメチルメチル−６−メトキシ−１Ｈ−２−ベンゾピラン−１−オンを３６９ｍｇ得た。
【００５２】
得られた８−ｔ−ブチルジメチルシリルオキシ−３−シアノジメチルメチル−６−メトキシ−１Ｈ−２−ベンゾピラン−１−オン３６９ｍｇを酢酸４ｍｌに溶解し、濃塩酸４ｍｌを加え、７０℃で１５時間撹拌した。反応液に水を１５ｍｌ加え、室温で１５分間撹拌し、析出した結晶を濾別した。得られた結晶２１９ｍｇをエタノール１０ｍｌに溶解し、活性炭を１００ｍｇ加え、５０℃で１時間撹拌した。活性炭を除き、減圧下に溶媒を留去した。残留物をエタノール４ｍｌに溶解し、ヘキサン９ｍｌを加えて室温で撹拌し、析出した結晶を濾別することにより標記化合物を１２６ｍｇ得た。
【００５３】
1Ｈ-ＮＭＲ(ＤＭＳＯ-ｄ6) ;δ １０.８７(１Ｈ,ｓ), ６.７４(１Ｈ,ｓ), ６.７１(１Ｈ,ｄ,Ｊ＝２.２Ｈｚ), ６.５５(１Ｈ,ｄ,Ｊ＝２.２Ｈｚ)，３.８６(３Ｈ,ｓ), １.４５(６Ｈ,ｓ)
例３：２−（８−ヒドロキシ−６−メトキシ−１Ｈ−２-ベンゾピラン−１−オン−３−イル）−３−フェニルプロピオン酸の製造
【００５４】
【化８】
0003757024.tif 000016
【００５５】
８−ｔ−ブチルジメチルシリルオキシ−３−シアノメチル−６−メトキシ−１Ｈ−２−ベンゾピラン−１−オン５００ｍｇ（１.４５ｍｍｏｌ）をジクロロメタン２ｍｌに溶解し、１Ｎ水酸化ナトリウム水溶液を２ｍｌ加え、０℃に冷却した後、ｎ−テトラブチルアンモニウムブロミドを１１７ｍｇ（０.３６ｍｍｏｌ）、ベンジルブロミドを１８０μｌ（１.４５ｍｍｏｌ）加え、そのまま１５分間激しく撹拌した。反応液を酢酸エチル５０ｍｌに希釈し、水、飽和食塩水で洗浄した。無水硫酸ナトリウムにて脱水乾燥後、減圧下に溶媒を留去した。残留物をシリカゲルカラムに供して精製し、３−ベンジルシアノメチル−８−ｔ−ブチルジメチルシリルオキシ−６−メトキシ−１Ｈ−２−ベンゾピラン−１−オンを１２４ｍｇ得た。
【００５６】
上記の方法にて得られた３−ベンジルシアノメチル−８−ｔ−ブチルジメチルシリルオキシ−６−メトキシ−１Ｈ−２−ベンゾピラン−１−オン２９２ｍｇ（０.６７ｍｍｏｌ）を酢酸２ｍｌに溶解し、濃塩酸２ｍｌを加え、７０℃で１６時間撹拌した。反応液に水を１０ｍｌ加え、室温で撹拌し、析出した結晶を濾別した。得られた結晶２０３ｍｇをエタノール１０ｍｌに溶解し、活性炭を１００ｍｇ加え、５０℃で１時間撹拌した。活性炭を濾去した後、減圧下に溶媒を留去して標題化合物を１９１ｍｇ得た。
【００５７】
1Ｈ-ＮＭＲ(ＤＭＳＯ-ｄ6) ;δ １１.２２(１Ｈ,ｓ), ７.１２-７.２７(５Ｈ,ｍ), ６.５９(１Ｈ,ｄ,Ｊ＝２.２Ｈｚ), ６.５８(１Ｈ,ｓ)，６.５４(１Ｈ,ｄ,Ｊ＝２.２Ｈｚ), ３.９３(１Ｈ,ｔ,Ｊ＝７.３Ｈｚ,８,１Ｈｚ), ３.８３(３Ｈ,ｓ), ３.２６(１Ｈ,ｄｄ,Ｊ＝６.６Ｈｚ,１４.０Ｈｚ)，３.０８(１Ｈ,ｄｄ,Ｊ＝８.８Ｈｚ,１４.０Ｈｚ)
例４：２−（８−ヒドロキシ−６−メトキシ−１Ｈ−２−ベンゾピラン−１−オン−３−イル）プロピオナミドの製造
【００５８】
【化９】
0003757024.tif 000017
【００５９】
８−ｔ−ブチルジメチルシリルオキシ−３−シアノメチル−６−メトキシ−１Ｈ−２−ベンゾピラン−１−オン２.６４ｇ（７.６５ｍｍｏｌ）をジクロロメタン３０ｍｌに溶解し、１Ｎ水酸化ナトリウム水溶液を３０ｍｌ加え、０℃に冷却した後、ｎ−テトラブチルアンモニウムブロミドを６３５ｍｇ（１.９１ｍｍｏｌ）、ヨウ化メチルを２.１ｍｌ（３０.６０ｍｍｏｌ）加え、そのまま１時間激しく撹拌した。ジクロロメタン層を無水硫酸ナトリウムにて脱水乾燥後、減圧下に溶媒を留去した。残留物をシリカゲルカラムに供して精製し、８−ｔ−ブチルジメチルシリルオキシ−３−シアノメチルメチル−６−メトキシ−１Ｈ−２−ベンゾピラン−１−オンを１.０６ｇ得た。
【００６０】
８−ｔ−ブチルジメチルシリルオキシ−３−シアノメチルメチル−６−メトキシ−１Ｈ−２−ベンゾピラン−１−オン５３１ｍｇ（１.４８ｍｍｏｌ）をジオキサン１０ｍｌに溶解し、濃塩酸１０ｍｌを加え、５０℃で２.５時間撹拌した。反応液を酢酸エチル１００ｍｌに希釈し、水、飽和食塩水で洗浄した。無水硫酸ナトリウムにて脱水乾燥した後、減圧下に溶媒を留去した。残留物をシリカゲルカラムに供して精製し、標題化合物を３３４ｍｇ得た。
【００６１】
1Ｈ-ＮＭＲ(ＣＤＣｌ3) ;δ １０.９３(１Ｈ,ｓ), ６.５０(１Ｈ,ｄ,Ｊ＝２.２Ｈｚ), ６.４０(１Ｈ,ｓ), ６.３８(１Ｈ,ｄ,Ｊ＝２.２Ｈｚ)，５.９０(１Ｈ,ｓ), ５.５６(１Ｈ,ｓ), ３.８７(３Ｈ,ｓ), ３.４７(１Ｈ,ｑ,Ｊ＝６.６Ｈｚ),１.５４(３Ｈ,ｄ,Ｊ＝６.６Ｈｚ)
例５：２−（８−ヒドロキシ−６−メトキシ−１Ｈ−２−ベンゾピラン−１−オン−３−イル)−２−ジプロピルペンタナミドの製造
【００６２】
【化１０】
0003757024.tif 000018
【００６３】
８−ｔ−ブチルジメチルシリルオキシ−３−シアノメチル−６−メトキシ−１Ｈ−２−ベンゾピラン−１−オン５００ｍｇ（１.４５ｍｍｏｌ）をテトラヒドロフラン３ｍｌに溶解し、−３０℃に冷却した後、６０％油状水素化ナトリウムを１７４ｍｇ（４.３５ｍｍｏｌ）、ｎ−ヨウ化プロピルを１.５ｍｌ（１１.６０ｍｍｏｌ）加え、そのまま１.５時間撹拌した。反応液を酢酸エチル１００ｍｌに希釈し、水、飽和食塩水で洗浄した。無水硫酸ナトリウムにて脱水乾燥後、減圧下に溶媒を留去した。残留物をシリカゲルカラムに供して精製し、８−ｔ−ブチルジメチルシリルオキシ−３−ジプロピルシアノメチル−６−メトキシ−１Ｈ−２−ベンゾピラン−１−オンを１８９ｍｇ得た。
【００６４】
上記の方法にて得られた８−ｔ−ブチルジメチルシリルオキシ−３−ジプロピルシアノメチル−６−メトキシ−１Ｈ−２−ベンゾピラン−１−オン３４６ｍｇ（０.７１ｍｍｏｌ）を酢酸２ｍｌに溶解し、濃硫酸２ｍｌを加え、７０℃で１６時間撹拌した。反応液に酢酸エチル５０ｍｌに希釈し、水、飽和食塩水で洗浄した。無水硫酸ナトリウムにて脱水乾燥後、減圧下に溶媒を留去した。残留物をシリカゲルカラムに供して精製し、標題化合物を２０１ｍｇ得た。
【００６５】
1Ｈ-ＮＭＲ(ＣＤＣｌ3) ;δ ６.５０(１Ｈ,ｄ,Ｊ＝２.２Ｈｚ), ６.４３(１Ｈ,ｓ), ６.３９(１Ｈ,ｄ,Ｊ＝２.２Ｈｚ), ５.７３(１Ｈ,ｂｒｓ)，５.４８(１Ｈ,ｂｒｓ), ３.８７(３Ｈ,ｓ)，１.８７-１.９９(４Ｈ,ｍ), １.１８-１.３３(４Ｈ,ｍ), ０.９７(３Ｈ,ｔ,Ｊ＝６.０Ｈｚ)
例６：２−（８−ヒドロキシ−６−メトキシ−１Ｈ−２−ベンゾピラン−１−オン−３−イル）−３−ジフェニルメチルプロピオナミドの製造
【００６６】
【化１１】
0003757024.tif 000019
【００６７】
８−ｔ−ブチルジメチルシリルオキシ−３−シアノメチル−６−メトキシ−１Ｈ−２−ベンゾピラン−１−オン３００ｍｇ（０.８７ｍｍｏｌ）をテトラヒドロフラン２ｍｌに溶解し、−３０℃に冷却した後、６０％油状水素化ナトリウムを８７ｍｇ（２.１７ｍｍｏｌ）、ベンジルブロミドを８５０ｍｌ（１１.６０ｍｍｏｌ）加え、そのまま０.５時間撹拌した。反応液を酢酸エチル５０ｍｌに希釈し、水、飽和食塩水で洗浄した。無水硫酸ナトリウムにて脱水乾燥後、減圧下に溶媒を留去した。残留物をシリカゲルカラムに供して精製し、８−ｔ−ブチルジメチルシリルオキシ−３−シアノジベンジルメチル−６−メトキシ−１Ｈ−２−ベンゾピラン−１−オンを３９５ｍｇ得た。
【００６８】
得られた８−ｔ−ブチルジメチルシリルオキシ−３−シアノジベンジルメチル−６−メトキシ−１Ｈ−２−ベンゾピラン−１−オン３９５ｍｇ（０.７１ｍｍｏｌ）を酢酸２ｍｌに溶解し、濃硫酸２ｍｌを加え、７０℃で１６時間撹拌した。反応液ヲ酢酸エチル５０ｍｌに希釈し、水、飽和食塩水で洗浄した。無水硫酸ナトリウムにて脱水乾燥後、減圧下に溶媒を留去した。残留物をシリカゲルカラムに供して精製し、標題化合物を２５８ｍｇ得た。
【００６９】
1Ｈ-ＮＭＲ(ＣＤＣｌ3) ;δ １０.９７(１Ｈ,ｓ), ７.１４-７.２４(１０Ｈ,ｍ), ６.５１(１Ｈ,ｄ,Ｊ＝２.２Ｈｚ), ６.２５(１Ｈ,ｓ)，６.２３(１Ｈ,ｄ,Ｊ＝２.２Ｈｚ), ５.６０(２Ｈ,ｂｒｓ), ３.８４(３Ｈ,ｓ), ３.３４(２Ｈ,ｄ,Ｊ＝１４.０Ｈｚ), ３.２９(２Ｈ,ｄ,Ｊ＝１３.２Ｈｚ)
例７：２−（８−ヒドロキシ−６−メトキシ−１Ｈ−２−ベンゾピラン−１−オン−３−イル）−２−シクロプロパンアセタミドの製造
【００７０】
【化１２】
0003757024.tif 000020
【００７１】
８−ｔ−ブチルジメチルシリルオキシ−３−シアノメチル−６−メトキシ−１Ｈ−２−ベンゾピラン−１−オン１００ｍｇ（０.２９ｍｍｏｌ）をテトラヒドロフラン１ｍｌに溶解し、−３０℃に冷却した後、６０％油状水素化ナトリウムを２９ｍｇ（０.７３ｍｍｏｌ）加え、さらに１,３−ジヨードプロパンを４０ｍｌ（０.３５ｍｍｏｌ）加え、そのまま１時間撹拌した。反応液を酢酸エチル５０ｍｌに希釈し、水、飽和食塩水で洗浄した。無水硫酸ナトリウムにて脱水乾燥後、減圧下に溶媒を留去した。残留物をシリカゲルカラムに供して精製し、８−ｔ−ブチルジメチルシリルオキシ−３−シアノシクロプロピルメチル−６−メトキシ−１Ｈ−２−ベンゾピラン−１−オンを１５.７ｍｇ得た。
【００７２】
上記の方法にて得られた８−ｔ−ブチルジメチルシリルオキシ−３−シアノシクロプロピルメチル−６−メトキシ−１Ｈ−２−ベンゾピラン−１−オン１９ｍｇを酢酸１.５ｍｌに溶解し、硫酸０.５ｍｌを加えて、７０℃で１６時間撹拌した。反応液を酢酸エチル２５ｍｌに希釈し、水、飽和食塩水で洗浄した。無水硫酸ナトリウムにて脱水乾燥後、減圧下に溶媒を留去した。残留物を分取ＴＬＣに供して精製し、標題化合物を１０ｍｇ得た。
【００７３】
1Ｈ-ＮＭＲ(ＣＤＣｌ3) δ:１０.９４(１Ｈ,ｓ), ６.５０(１Ｈ,ｄ,Ｊ＝２.２Ｈｚ), ６.４５(１Ｈ,ｓ), ６.３９(１Ｈ,ｄ,Ｊ＝２.２Ｈｚ)，５.８３(１Ｈ,ｓ), ５.５８(１Ｈ,ｓ), ３.８８(３Ｈ,ｓ), ２.７２-２.７９(２Ｈ,ｍ), ２.４８-２.５５(２Ｈ,ｍ), １.９８-２.０９(２Ｈ,ｍ)
例８：２−（６,８−ヒドロキシ−１Ｈ−２−ベンゾピラン−１−オン−３−イル）プロピオン酸の製造
【００７４】
【化１３】
0003757024.tif 000021
【００７５】
例４の方法に従って得られた８−ｔ−ブチルジメチルシリルオキシ−３−シアノメチルメチル−６−メトキシ−１Ｈ−２−ベンゾピラン−１−オン２８０ｍｇ（０.７８ｍｍｏｌ）を無水ジクロロメタン１６ｍｌに溶解し、０℃に冷却後、１Ｎ三臭化ボロン溶液を４ｍｌ加え、室温で４８時間撹拌した。反応液をジクロロメタン５０ｍｌに希釈し、水、飽和食塩水で洗浄した。無水硫酸ナトリウムにて脱水乾燥後、減圧下に溶媒を留去した。残留物をシリカゲルカラムに供して精製し、３−シアノメチルメチル−６,８−ヒドロキシ−１Ｈ−２−ベンゾピラン-１−オンを１１６ｍｇ得た。
【００７６】
上記の方法にて得られた３−シアノメチルメチル−６,８−ヒドロキシ−１Ｈ−２−ベンゾピラン−１−オン１８６ｍｇ（０.８１ｍｍｏｌ）を酢酸２ｍｌに溶解し、濃塩酸を２ｍｌ加え、７０℃で１６時間撹拌した。反応液を酢酸エチル５０ｍｌに希釈し、水、飽和食塩水にて洗浄した。無水硫酸ナトリウムにて脱水乾燥後、減圧下に溶媒を留去した。残留物をシリカゲルカラムに供して精製し、標題化合物を５４ｍｇ得た。
【００７７】
1Ｈ-ＮＭＲ(ＤＭＳＯ-ｄ6) ;δ １０.８８(２Ｈ,ｓ), ６.６２(１Ｈ,ｓ), ６.４３(１Ｈ,ｄ,Ｊ＝２.２Ｈｚ), ６.３５(１Ｈ,ｄ,Ｊ＝１.５Ｈｚ)，３.６５(１Ｈ,ｑ,Ｊ＝７.３Ｈｚ), １.３８(３Ｈ,ｄ,Ｊ＝７.３Ｈｚ)
例９：２−（６,８−ジヒドロキシ−１Ｈ−２−ベンゾピラン−１−オン−３−イル）−２−メチルプロピオン酸の製造
【００７８】
【化１４】
0003757024.tif 000022
【００７９】
例２の方法に従って得られた８−ｔ−ブチルジメチルシリルオキシ−３−シアノジメチルメチル−６−メトキシ−１Ｈ−２−ベンゾピラン−１−オン１７８ｍｇ（０.４８ｍｍｏｌ）を無水ジクロロメタン８ｍｌに溶解し、０℃に冷却後、１Ｎ三臭化ボロン溶液を２ｍｌ加え、室温で１９時間撹拌した。１９時間後、１Ｎ三臭化ボロン溶液を２ｍｌ加え、さらに２４時間撹拌した。反応液を塩化メチレン１００ｍｌに希釈し、水、飽和食塩水で洗浄し、無水硫酸ナトリウムにて脱水乾燥後、減圧下に溶媒を留去した。残留物をシリカゲルカラムに供して精製し、３−シアノジメチルメチル−６,８−ヒドロキシ−１Ｈ−２−ベンゾピラン−１−オンを９３ｍｇ得た。
【００８０】
得られた３−シアノジメチルメチル−６,８−ヒドロキシ−１Ｈ−２−ベンゾピラン−１−オン９３ｍｇ（０.３８ｍｍｏｌ）を酢酸２ｍｌに溶解し、濃塩酸を２ｍｌ加え、７０℃で１６時間撹拌した。反応液を酢酸エチル５０ｍｌに希釈し、水、飽和食塩水にて洗浄した。無水硫酸ナトリウムにて脱水乾燥後、減圧下に溶媒を留去し、標題化合物を９０ｍｇ得た。
【００８１】
1Ｈ-ＮＭＲ(ＤＭＳＯ-ｄ6) ;δ １０.９０(１Ｈ,ｓ), １０.８６(１Ｈ,ｓ), ６.６８(１Ｈ,ｓ), ６.４８(１Ｈ,ｄ,Ｊ＝２.２Ｈｚ)，６.３５(１Ｈ,ｄ,Ｊ＝２.２Ｈｚ), １.４４(６Ｈ,ｓ)
例１０：マウス背部皮下法を用いる血管新生阻害作用
本発明に従う化合物が優れた薬理活性を有することの例証の一端として、以下にマウスを用いる血管新生阻害試験について記述する。
【００８２】
試験方法は、マウス背部皮下法により、マウス移植腫瘍Ｓ１８０が誘導する腫瘍血管新生に対する本発明の化合物１の抑制効果を検討した。すなわち、ミリポアリングの両面にポアサイズ０.４５μｍのミリポアフィルターを貼って作成したチャンバー内に１×１０7個のＳ１８０細胞を注入した。注入口を塞いだ後、このチャンバーをＩＣＲ系雌性マウス（９〜１０週齢）の背部皮下に作成したエアーサック内に移植した。被検化合物および溶媒対照の０.５％カルボキシメチルセルロース溶液を移植当日から５日間経口投与した。移植５日目に皮膚を剥離し、皮膚側のチャンバー接触部分にリングと同形の内径１０ｍｍのＯリングをおき、実体顕微鏡下にて観察し、さらに写真撮影を行った。
得られた写真より血管新生の強度を腫瘍血管に特有な長さ３ｍｍ以上の屈曲した血管の数に基づいて０、１、２、３の４段階に分け、下記基準に基づいてスコア化した。
【００８３】
スコア
０：腫瘍血管の数が０
１：腫瘍血管の数が１本
２：腫瘍血管の数が２本
３：腫瘍血管の数が３本以上
結果を下記表ＩＩに示す。
【００８４】
【表１０】
0003757024.tif 000023
【００８５】
上記表より、化合物１は１０ｍｇ／ｋｇの経口投与で、マウス背部皮下法において腫瘍細胞Ｓ１８０が誘導する血管新生を有意に阻害することがわかる。
【００８６】
【発明の効果】
本発明によれば、製薬学的組成物、例えば血管新生阻害剤の従来のイソクマリン誘導体とは異なる生体内動態を示す有効成分として利用できる新規イソクマリン誘導体が提供される。また、これらの誘導体を効率的に製造するための新規合成中間体も提供される。