(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
溶液１ｌあたり５〜１００ｍｍｏｌのＣｌＯ2-の含量を有する等張液からなる化学的に安定化された亜塩素酸塩マトリックスを含有するＨＩＶ感染の腸管外治療のための医薬。
【請求項２】
前記の溶液が５０〜８０ｍｍｏｌ／ｌのＣｌＯ2-の含量を有する請求項１記載の医薬。
【請求項３】
前記の溶液を注射剤溶液として、または大容量に希釈して注入剤溶液として使用する請求項１または２記載の医薬。
【請求項４】
前記の亜塩素酸塩マトリックスを、亜塩素酸溶液を次亜塩素酸塩で酸化させ、および過ホウ酸塩または過炭酸塩と反応させて製造する請求項１から３までのいずれか１項記載の医薬。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【産業上の利用分野】
本発明は、化学的に安定な亜塩素酸塩マトリックスを、等張液の形で含有するＨＩＶ感染の治療のための医薬に関する。
【０００２】
【従来の技術】
ＨＩＶ感染とは、以後、ＨＩＶウィルスの多様な亜種であると解され、これは行われた統計によると進行中である。この専門分野の著しい努力にもかかわらず、完全に有効な治療薬を見出すことは今まで成功していなかった。ＡＺＴまたはＤＤＩのような今まで公知の薬剤は、特にウィルスに感染した細胞に作用し、この細胞はそれにより殺され、この感染をさらに進行させないが、このような細胞の破裂により血管中に放出されたウィルスに対して効果がなく、このウィルスは蔓延および他の細胞の新たな感染を引き起こしてしまう。
【０００３】
【発明が解決しようとする課題】
従って、本発明の課題は、患者の血液および身体に悪影響を及ぼさずに、血液中のＨＩＶウィルスを失活させる薬剤を見出すことであった。
【０００４】
【課題を解決するための手段】
意想外に、前記の課題は、請求項１中に記載された特徴部、および請求項２項以下に記載された特徴部により解決される。
【０００５】
酸性溶液中の亜塩素酸ナトリウムまたは亜塩素酸カリウムの溶液が、二酸化塩素および塩化物の形成下で不均等化することは公知である。この亜塩素酸塩および同様に形成された二酸化塩素は、表面および溶液の殺菌化の際の有効な殺微生物剤として公知である。しかし、亜塩素酸塩溶液の腸管外適用の際の使用は、それが著しく毒性であるため禁止されている。
【０００６】
Sarin et al., New England Journal of Medicine, 313, 1416 (1985)から、試験管内でＨＴＬＶ  ＩＩＩ−（ＨＩＶ）ウイルスの細胞培養を亜塩素酸ナトリウム０．２３％と乳酸１．２６％との２００倍に希釈した溶液を用いて処理することが、このウィルスを失活させることは公知である。
【０００７】
さらに、米国特許第５０１９４０２号明細書から、二酸化塩素、または亜塩素酸塩、弱酸性緩衝液および熱活性化サッカリドからなる二酸化塩素を遊離する混合物を含有する溶液が、赤血球を含有するようなもの、つまり、白血球、血小板、および凝固因子およびグロブリンを除いた保存用血液の殺菌のために使用できることは公知である。完全血液においては、明らかに、赤血球が試験された微生物よりもより速く攻撃されるため、相応する消毒作用は生じない。従って、この薬剤も腸管外適用のために適していない。
【０００８】
ドイツ連邦共和国特許出願公開第３２１３３８９号および米国特許第４２９６１０３号明細書から、外用または経口治療的使用のために適した化学的に安定化された亜塩素酸塩マトリックスは公知である。多様な細菌感染のほかに、ウィルス感染、単純ヘルペス（Herpes simplex）および水痘帯状ヘルペス（Herpes zoster）の外用治療もこの方法で可能であると判断される。しかし、ＨＩＶ感染の治療のための静脈内適用はこの方法では不可能である。
【０００９】
欧州特許第０２００１５５号明細書から、さらに、静脈内および周囲手術投与のための化学的に安定化された亜塩素酸塩マトリックスの水溶液は公知である。この薬剤は、カンジダ−アルビカンス（Candida Albicans）感染の際に有効であることが判明した。
【００１０】
欧州特許第０２００１５７号明細書から、寄生虫、真菌、バクテリア、ウィルスおよび／またはマイコプラズマにより引き起こされる感染状態の際に、静脈内および／または局所的適用のための安定化された亜塩素酸塩マトリックスは公知である。この効果は、感染直後の亜塩素酸塩錯体の１回だけの有効投与により達成される貪食細胞刺激により説明される。ウィルス感染の制圧は、この明細書において実例的に記載がなく、作用原理の理由からも不可能であると思われる。
【００１１】
従って、たとえばドイツ連邦共和国特許出願公開第３２１３３８９号明細書および米国特許第４２９６１０３号明細書に従って製造された適当な濃度での適当な亜塩素酸塩マトリックスの静脈内適用で、ＨＩＶウィルスを血液中で直接制圧できることは特に意想外であり、これは、血液中に検出されるウイルスの急速な、著しい減少により裏付けることができる。血清中のウィルス濃度は、公知のように、ウィルス特異的なｐ２４抗原に対抗する抗体を用いてカプリングさせることにより測定される。
【００１２】
期待どおりに、この効果は濃度依存であると実証される。新規感染の著しい阻害は、試験管内で既に５μｍｏｌ／ｌで確認され、１５０μｍｏｌ／ｌの濃度は実際に完全な阻害を引き起こす。１００μｍｏｌ／ｌを上回る濃度は、長い期間において、細胞毒障害を引き起こしてしまうため、１０〜１００、有利に約４０〜８０、特に５０μｍｏｌ／ｌの濃度が有利である。生体内では、体重に応じて投与しなければならず、その際、血液中でのこの作用物質の継続的分解のために、規則的な間隔でこの薬剤を新たに投与しなければならない。
【００１３】
【実施例】
試験記録
次の試験においてＷＦ１０として表わされた亜塩素酸マトリックスは、ドイツ連邦共和国特許第３２１３３８９号明細書の例１により製造され、食塩の等張液もしくは相応する培養基で、試験において記載された濃度まで希釈した。
【００１４】
試験管内試験
ＷＦ１０のヒト細胞系統におけるＨＩＶ増殖に関する効果を調査するために、感染力（ＴＣＩＤ５０）、逆転写酵素（ＲＴ）の活性およびＨＩＶ抗原ｐ２４の形成を調査した。
【００１５】
方法
ＨＩＶ−１により持続的に感染されたヒトＴ−リンパ腫細胞（モルト−４、クローン−８−細胞）を、ＦＣＳ１０％、Ｌ−グルタミン酸および抗生物質が添加されているＲＰＭＩ−１６４０培養基を用いて培養した。同様の方法で、ＨＩＶ−１により持続的に感染されたヒト単球マクロファージ細胞Ｕ９３７および一次単核血液細胞（ＰＷＭＣ）が調査される。
【００１６】
ＨＩＶ−逆転写酵素の活性の測定のために、放射性に標識されたヌクレオチドの組み込みに基づく標準酵素調査系を用いて培養上澄液１ｍｌを調査した。この測定は、この物質のＨＩＶ感染の増殖への可能な影響に関して指示する。
【００１７】
ＨＩＶ−核抗原ｐ２４の濃度は、上澄液中で、エリザ法により内標準を含有する市販のキット（Abbot）を用いて行われる。次の表中の濃度は、培養液１ｍｌ当たりのｎｇで表わされている。この試験において、この場合、感染性ＨＩＶウイルスまたは失活化ＨＩＶウイルスからなるｐ２４抗原の間で区別されない。
【００１８】
ＨＩＶ（ＴＣＩＤ５０）の感染性は、ＨＩＶ含有溶液に、短時間の間に感染性ＨＩＶ−１により殺される高感度ＭＴ４−細胞（American Tissue Collection）を添加することにより測定し、これは細胞群体の形成される増殖により示される。殺された細胞はそのＤＮＡ中にチミジンを組み込まず、従って、溶液から分離された細胞ＤＮＡのチミジン組み込みの強さもしくはそれにより引き起こされる放射能から生き残っている細胞の量を推定することができるため、この細胞変成効果は、さらに3Ｈ−チミジンの組み込み速度により測定される。
【００１９】
この試験は技術的に公知であるため、詳細な記載は省く。
【００２０】
ＷＦ１０の存在でのＨＩＶの増殖
ＨＩＶ−１で持続的に感染された２×１０6個のモルト４／８細胞を、２ｍｌの培養基中で２４時間、多様な濃度のＷＦ１０の存在で、ヘモグロビンの添加または非添加で、２４個のカップの培養プレート上でインキュベートした（表１）。
【００２１】
第１図および第１ａ図から、５．７〜５２μｍｏｌの調査された濃度に対してＴＣＩＤ５０／ｌは、対照と明確に異ならない。ＷＦ１０は、従って、細胞定着ＨＩＶ−ＩまたはＨＩＶ−ＩＩに関して効果がない。
【００２２】
ＷＦ１０でインキュベートした後の未定着ＨＩＶの感染性
遊離ＨＩＶ粒子に関するＷＦ１０による可能な失活を調査するために、表２中に記載されたＷＦ１０−希釈物および−対照溶液を、相応するＨＩＶ−親溶液と共に記載された時間でインキュベートした。この結果は第２図および第２ａ図中に示した。
【００２３】
ＷＦ１０は試験した濃度において、ＨＩＶウィルスは有効に阻害されたことが示された。
【００２４】
ＷＦ１０の存在でＨＩＶを用いた細胞の新規感染
次の実験において、ＨＩＶで感染後の細胞培養中でのウィルスの増殖を測定した。モルト４／８−細胞の培養基は、ＨＩＶ−１−親溶液を用いて異なる希釈度で感染された。この培養基を、それぞれ２日後に交換し、上澄液中のＭＴ４−細胞での感染度を測定した。溶液が作用物質（ＷＦ１０、ＡＺＴまたはＤＤＩまたはこれらの組み合せ）を含有する限り、これは培養基にその交換の際に相応する濃度でそれぞれ再び添加された。
【００２５】
生体内実験
本発明による医薬を、急性ＨＩＶ感染の患者の小集団で既に試験した。この目的で、患者は０．５ｍｌ／ｋｇ体重のＷＦ１０を、６０ｍｍｏｌ／ｌのＣｌＯ2の濃度で、それぞれ１週の連続する５日間注射し、２週間中断し、次いでｐ２４−抗原濃度を測定し、同じサイクルでの処理を１〜３回継続した。
【００２６】
結果は第３表に記載した。
【００２７】
相応してＷＦ１０で治療した４人のＨＩＶ−１感染患者において、ｐ２４抗原の血清濃度に関する影響は、基準＝１００％として治療前の値に関して表３ならびに第３図に記載した。全ての他の場合には、長期の治療期間にわたっても維持される著しく急速な、急激な減少が認められた。例外は、ｐ２４−ＡＧに関して本来著しく低い滴定量を有していた患者ＬＳの場合に生じ、その際、この滴定量はまず上昇し、３０日後にやっと再度明らかに減少した。ｐ２４抗原の滴定は血清中のウィルスの濃度に対して測定するため、この判定から、ＷＦ１０が血清中の未定着のウィルスを攻撃し、失活させ、従って、まだ損傷したいな細胞の新規感染を阻害できることが推知される。
【００２８】
さらに、ＷＦ１０を用いた治療の間の身体の免疫防御のために重要なＴ細胞およびＮＫ細胞の濃度を測定した。免疫防御のために重要な細胞の数は、９週間の治療時間の後で上昇し始め、つまりＷＦ１０により長期免疫を刺激することができることが示された。ＷＦ１０の投与の際に観察された、血清中のｐ２４抗原濃度の短期間の減少は、この機構に基づいても説明することができず、これは、ＷＦ１０と、遊離した未定着のウィルスとの直接の相互作用が生じることが指摘される。この試験結果は第４図および第５図に記載した。
【００２９】
【表１】
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【００３０】
【表２】
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【００３１】
【表３】
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【図面の簡単な説明】
【図１】細胞定着ＨＩＶ−ＩまたはＨＩＶ−ＩＩに関するＷＦ１０の効果。
【図２】細胞未定着ＨＩＶ−ＩまたはＨＩＶ−ＩＩに関するＷＦ１０の効果。
【図３】ＷＦ１０で治療したＨＩＶ−１感染患者のｐ２４抗原の血清濃度に関する影響。
【図４】ＷＦ１０投与の際のＴ細胞の濃度。
【図５】ＷＦ１０投与の際のＮＫ細胞の濃度。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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