(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
西洋人参からなる生薬及びその抽出物を有効成分とするアルドースレダクターゼ阻害剤。
【請求項２】
前記西洋人参は、高圧蒸気処理により修治されていることを特徴とする請求項１記載のアルドースレダクターゼ阻害剤。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明の属する技術分野】
西洋人参からなる生薬及びその抽出物、並びにこれらを有効成分とする食品、医薬部外品及び医薬品並びにこれらの組成物に関する。
【０００２】
【従来の技術】
近年、糖尿病有病率は、増加傾向にあり、平成９年度に行われた厚生省「糖尿病実態調査」によれば、我が国において糖尿病が強く疑われる人は、約６９０万人、糖尿病の可能性を否定できない人を含めると、１３７０万人と推計されている。また、糖尿病は、一般的に網膜症、腎症又は末梢神経障害といった合併症を引き起こすことが知られている。また、悪性新生物、すなわち悪性腫瘍は、依然として我が国において死因の第一位である。
【０００３】
ところで、糖尿病の治療剤としては、種々のものが開発されており、西洋人参を始めとするいくつかの生薬に血糖降下作用があることが報告されている。これら生薬の血糖調節作用は、一般的に緩和であり、急激な血糖降下による意識障害を起こす可能性が少ない。
【０００４】
【発明が解決しようとする課題】
しかしながら、その反面、効果を得るために比較的大量にこれら生薬を摂取する必要があるため、これら生薬は、特に嚥下能に乏しい老齢者や小児にとって服用し難いものとなっている。また、大量の生薬の摂取は、例えば甘草の持続的な過剰摂取による偽アルドステロン症の発症といった副作用を引き起こす原因ともなる。
【０００５】
そこで、本発明は、糖尿病状態の改善作用が増強された新たな抗糖尿病作用を有する生薬及びその抽出物、並びに食品、医薬部外品及び医薬品並びにこれらの組成物を提供することを第１の目的とする。
【０００６】
また、近年、アルドースレグターゼ阻害剤が網膜症、腎症又は末梢神経障害といった糖尿病合併症の予防や治療に効果を有することが報告されている。そこで、本発明は、新たなアルドースレグターゼ阻害作用を有する生薬及びその抽出物、並びに食品、医薬部外品及び医薬品並びにこれらの組成物を提供することを第２の目的とする。
【０００７】
さらに、腫瘍細胞の増殖抑制剤についても、種々のものが開発されているが、有効で、かつ副作用の少ないものの開発が望まれており、また、セルフメディケーションの観点から、腫瘍細胞増殖抑制あるいは腫瘍細胞の除去作用を有し、発癌を未然に防ぐような食品や医薬部外品の開発も望まれている。そこで、本発明は、新たな抗腫瘍作用を有する食品、医薬部外品及び医薬品並びにこれらの組成物を提供することを第３の目的とする。
【０００８】
【課題を解決するための手段】
本発明者は、以上の目的を達成するために、鋭意研究を重ねた結果、西洋人参を高圧蒸気処理によって修治することによって、糖尿病状態の改善や悪性腫瘍の増殖抑制に効果的であることを見出した。
【０００９】
【発明の実施の形態】
すなわち、本発明は、高圧蒸気処理した西洋人参からなる生薬及びその抽出物であり、また、前記生薬及びその抽出物を有効成分とする食品、医薬部外品及び医薬品並びにこれらの組成物である。
【００１０】
本発明に係る食品、医薬部外品及び医薬品並びにこれらの組成物は、抗糖尿病作用を有し、また抗腫瘍作用を有する。
【００１１】
さらに、本発明者は、西洋人参からなる生薬及びその抽出物が、アルドースレダクターゼ阻害作用を有することを見出した。すなわち、本発明は、西洋人参からなる生薬及びその抽出物を有効成分とするアルドースレダクターゼ阻害作用を有する食品、医薬部外品及び医薬品並びにこれらの組成物である。アルドースレダクターゼ阻害作用を有する食品、医薬部外品及び医薬品並びにこれらの組成物において、前記西洋人参は、高圧蒸気処理により修治されていることが好ましく、高圧蒸気処理することより、アルドースレダクターゼ阻害作用を増強させることができる。
【００１２】
本発明に係る生薬及びその抽出物、食品、医薬部外品及び医薬品並びにこれらの組成物において、前記西洋人参は、アメリカ人参（学名Ｐａｎａｘ  ｑｕｉｎｑｕｅｆｏｌｉｕｍ  Ｌ．）の根を乾燥したもので、別名洋参、広東人参、花旗参などと呼ばれるものである。
【００１３】
本発明に係る生薬及びその抽出物、食品、医薬部外品及び医薬品並びにこれらの組成物において、生薬又はその抽出物に施される高圧蒸気処理は、高圧蒸気滅菌器内で１０５〜１４５℃又は０．２〜３．５ｋｇｆ／ｃｍ2で１０〜３００分間処理されていることが好ましく、特に１２１℃又は１．０〜１．５ｋｇｆ／ｃｍ2で３０分以上処理されていることが好ましい。本発明に係る生薬及びその抽出物、食品、医薬部外品及び医薬品並びにこれらの組成物において、西洋人参を高圧蒸気処理している場合、その抽出物は、高圧蒸気処理した西洋人参の抽出物を意味する。
【００１４】
本発明に係る医薬品又はその組成物としては、抗糖尿病剤、アルドースレダクターゼ阻害剤又は抗腫瘍剤などがあり、液剤、粉剤、粒剤、カプセル剤、錠剤の形で経口投与される。本発明に係る医薬品は、糖尿病や悪性腫瘍の治療あるいは予防に用いられる他、糖尿病合併症（網膜症、腎症、末梢神経障害）や糖尿病に起因する高血圧、アテローム性動脈硬化症、心疾患、脳卒中の予防のために用いることができる。医薬品としてヒトに適用する場合、その服薬量は、朝鮮人参の一般薬としての服薬量である一日当たり１〜６ｇ（原生薬換算）程度が好ましい。
【００１５】
また、本発明に係る食品又はその組成物としては、例えばお茶、ジュースなどの飲料、水、ゼリー、飴、チョコレート、チューインガム、栄養補助食品などがある。また、本発明に係る食品は、健康食品（機能性食品、健康補助食品）などが含まれ、その場合、液剤、粉剤、粒剤、カプセル剤、錠剤の形で製造される。
【００１６】
さらに、本発明に係る医薬部外品又はその組成物としては、例えばのど清涼剤、健胃清涼剤、ビタミン含有保健剤などがあり、液剤、粉剤、粒剤、カプセル剤、錠剤の形で製造される。
【００１７】
【実施例】
次に、本発明に係る西洋人参からなる生薬及びその抽出物、並びにこれらを有効成分とする食品、医薬部外品及び医薬品並びにこれらの組成物の実施例について説明するが、本発明の内容は、以下の実施例によって限定されるものではない。
【００１８】
先ず、西洋人参粉末（北アメリカ産）を高温蒸気滅菌器（（株）トミー精工製、ＢＳ−２３５）によって１２１℃で、３０分、１時間、２時間又は４時間高圧蒸気処理し（１．０〜１．５ｋｇｆ／ｃｍ2）、次いでデシケータ（シルカゲル）内で室温下減圧乾燥させた後、粉砕して実施例１（３０分）、実施例２（１時間）、実施例３（２時間）及び実施例４（４時間）に係る西洋人参粉末を得た。また、比較例１として高圧蒸気処理がされていない西洋人参粉末、及び比較例２として０．５％カルボキシメチルセルロース（ＣＭＣ）水溶液を用意した。なお、比較例１に係る西洋人参粉末は、実験例２においては、本発明の実施例５とする。
【００１９】
実験例１
先ず、シプロヘプタジン投与糖尿病ラットにおける耐糖能に対する高圧蒸気処理した西洋人参の作用について実験を行った。ウィスター系雄性ラットに被験薬として実施例１に係る高圧蒸気処理した西洋人参粉末１ｇ／１０ｍｌ、比較例１に係る西洋人参粉末１ｇ／１０ｍｌ又は比較例２に係る０．５％ＣＭＣをそれぞれ１０ｍｌ／ｋｇと、塩酸シプロヘプタジン（ペリアクチン錠、萬有製薬）４５ｍｇ／ｋｇとを１日１回、２週間、各々の間隔を２時間以上あけて経口投与した。投与終了後１日後、一晩絶食させたラットに被験薬として実施例１に係る高圧蒸気処理した西洋人参粉末１ｇ／１０ｍｌ、比較例１に係る西洋人参粉末１ｇ／１０ｍｌ又は比較例２に係る０．５％ＣＭＣをそれぞれ１０ｍｌ／ｋｇ投与し、その３０分後に４０％グルコース溶液を４ｇ／ｋｇ経口投与した。それぞれの被験薬投与前、グルコース投与６０分後及びグルコース投与１２０分後にそれぞれ頸静脈より採血し、グルコースオキシダーゼ法により血糖値を測定した。その結果を表１に示す。
【００２０】
【表１】
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【００２１】
表１に示すように実施例１に係る高圧蒸気処理された西洋人参の投与群が、１ｇ／ｋｇを２週間連続投与することによって、グルコース負荷による血糖上昇を抑えることができることが分かった。すなわち、実施例１に係る高圧蒸気処理した西洋人参の投与群は、最終日のグルコース投与前の血糖値からの１２０分後における変化率において比較例１に係る西洋人参の投与群及び比較例２に係るＣＭＣの投与群に対して有意な効果を得ることができたことが分かる。
【００２２】
実験例２
次に、ウシレンズアルドースレダクターゼ活性に対する作用に関する実験を行った。実験例２においては、実験例１の比較例１に係る西洋人参を実施例５とする。牛の眼球よりレンズを取り出し、ホモジナイザー（ＰＯＬＹＴＲＯＮ、ＰＴ１／３５、Ｋｉｎｅｍａｔｉｃａ）を用いて、レンズの３倍量の冷蒸留水で均一化（ホモジナイズ）した。この均一化されたものを冷却遠心器（ＳＣＲ２０ＢＡ、日立製作所製）を用いて、１００００×ｇ、１５分間、３℃で遠心分離し、その上清を採取した。この上清に硫酸アンモニウムを４０％飽和、５０％飽和、７５％飽和になるように順次加え、最終的に生じた沈殿物を遠心分離（１００００×ｇ、１５分間、３℃）によって採取し、それを少量の０．０６７５Ｍの燐酸塩類緩衝液（ｐＨ６．２）に溶解させ、これをウシレンズアルドースレダクターゼ分画とした。
【００２３】
０．０６７５Ｍの燐酸塩類緩衝液（ｐＨ６．２）に０．０７３ｍＭのＮＡＤＰＨ（ニコチンアミドアデニンジヌクレオチドリン酸還元型）、０．３Ｍの硫酸アンモニウム、４〜５Ｕに相当するウシレンズアルドースレダクターゼ分画（酵素１Ｕは１分間に吸光度値が０．００１低下する量）、及び被験薬として実施例１乃至５に係る西洋人参を入れ、最後に基質（１ｍＭのｄｌ―グリセルアルデヒド又は２００ｍＭのＤ―グルコース）を加え、２５℃で反応させた。基質添加直後及び５分後の３４０ｎｍにおける吸光度を分光光度計によって測定した。アルドースレダクターゼ阻害率は、以下の数１に当てはめることにより算出した。西洋人参粉末は、５０％エタノールを含む０．０６７５Ｍの燐酸塩類緩衝液（ｐＨ６．２）によって懸濁し、可溶成分を添加した。その結果を表２及び表３に示した。
【００２４】
【数１】
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【００２５】
【表２】
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【００２６】
【表３】
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【００２７】
表２及び３に示すように、高圧蒸気処理された実施例１乃至４に係る西洋人参及び高圧蒸気処理されていない実施例５に係る西洋人参いずれも濃度依存的にアルドースレダクターゼを阻害し、その作用は、高圧蒸気処理により増強することが分かる。すなわち、酵素活性の５０％阻害濃度（ＩＣ50）で比較した場合、４時間の高圧蒸気処理でｄｌ−グリセルアルデヒドを基質とした場合、８．１６倍、ｄ−グルコースを基質とした場合、５．０２倍アルドースレダクターゼ阻害作用が増強することが分かる。また、図１に示すように、アルドースレダクターゼ阻害作用の増強は、１２１℃、３０分間の高圧蒸気処理で十分に認められ、高圧蒸気処理の時間が長くなることにより、さらに増強することが明らかとなった。このことは、高圧蒸気処理した西洋人参が、動物の血糖値上昇を導くことなく、逆に耐糖能を改善させたという実験例１の結果とあわせ考えると、高圧蒸気処理が西洋人参の抗糖尿病作用を強める方向に変化させることが分かる。
【００２８】
実験例３
次に、ラット赤血球におけるソルビトール蓄積に対する作用について実験を行った。先ず、ウィスター系雄性ラットより採血した血液より赤血球を分離し、Ｋｒｅｂｓ−Ｒｉｎｇｅｒ液によって２回洗浄（懸濁−遠心分離）した。次に、血球計数器（ＭＥＫ−４３００、日本光電工業（株）製）によってヘマトクリット値を算出し、Ｋｒｅｂｓ−Ｒｉｎｇｅｒ液を加えて５０％赤血球懸濁液を調製した。次に、１５０ｍＭのグルコース含有Ｋｒｅｂｓ−Ｒｉｎｇｅｒ液を混合ガス（９５％Ｏ2−５ＣＯ2）にて平衡にした液体０．２５ｍｌに、５０％赤血球懸濁液０．５ｍｌ、及び被験薬として実施例４又は比較例１に係る西洋人参をそれぞれ０．０２ｍｌ加えて３７℃で１８０分間反応させた後、直ちに氷冷し、遠心分離（２０００ｒｐｍ、５ｍｉｎ、４℃）後上清を除き、赤血球をさらに冷生理食塩水にて２回洗浄した。赤血球層に１０％過塩素酸０．５ｍｌを加えて振り混ぜ、除蛋白後遠心分離し、その上清を２．５Ｍの炭酸カリウムによって中和し、さらに遠心分離後上清を取り、その０．５ｍｌに０．２ｍＭのＮＡＤ（ニコチンアミドアデニンジヌクレオチド）、０．６４Ｕのソルビトールデヒドロゲナーゼを含む０．０５Ｍのグリシン緩衝液（ｐＨ９．４）１ｍｌを加えて、３７℃で２５分間反応させた。分光蛍光光度計（６５０−４０・（株）日立製作所製）によって反応液の蛍光を測定した（励起波長３６６ｎｍ、吸収波長４５２ｎｍ）。反応液中のソルビトール濃度は、既知量のソルビトール溶液０．５ｍｌを同様に反応させ、得られた蛍光強度から作成した検量線により求めた。被験薬物のソルビトール蓄積阻害率は、被験薬物の代わりにその調製溶媒を加えて、被験薬物を加えた場合と同様に操作して得られたソルビトール量（１００％蓄積量：Ａ）と、１５０ｍＭのグルコース含有Ｋｒｅｂｓ−Ｒｉｎｇｅｒ液の代わりに５ｍＭのグルコース含有Ｋｒｅｂｓ−Ｒｉｎｇｅｒ液を用い、被験薬物を加えた場合と同様に操作して得られたソルビトール量（０％蓄積量：Ｂ、ただし、同条件にて被験薬物を加えた場合の値をＢ１、調製溶媒を加えた場合の値をＢ２とした）を数２に当てはめることにより算出した。西洋人参粉末は、５０％エタノールを含むＫｒｅｂｓ−Ｒｉｎｇｅｒ液によって懸濁し、可溶成分を添加した。その結果を表４に示す。
【００２９】
【数２】
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【００３０】
【表４】
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【００３１】
表４から明らかなように、ラット赤血球におけるソルビトールの蓄積に対し、比較例１に係る高圧蒸気処理がされていない西洋人参は、顕著な抑制作用を示さなかったものの、実施例４に係る高圧蒸気処理がされている西洋人参は、顕著な抑制作用を示したことが分かる。
【００３２】
実験例４
次に、高圧蒸気処理がされた西洋人参の単回投与毒性試験を行った。先ず、一晩絶食させた６週齢のｄｄＹ系マウス（雌雄）に実施例４もしくは比較例１に係る西洋人参粉末をそれぞれ２ｇ／ｋｇ、又は比較例２に係る０．５％ＣＭＣ２０ｍｌ／ｋｇを経口投与し、経時的に症状観察を行った。すなわち、投与当日は、投与前及び投与６時間後まで経時的に生死及び一般状態を観察し、投与１日後より適宜、午前中に体重測定及び一般症状（体位、意識、行動、呼吸、体表変化、体温）、各部の外的状態、神経学的観察（歩行、反射、筋緊張、振戦、痙攣等）、排泄（量、性状）について観察を行った。投与１４日後にマウスを安楽死させ、剖検を行い、臓器湿重量及び臓器の肉眼的変化の有無を記録した。観察臓器は、脳（大脳）、胸腺、肺、心臓、脾臓、肝臓、副腎、腎臓、精巣（雄）、卵巣（雌）、子宮（雌）について行った。体重測定及び相対臓器重量の結果を表５乃至８に示す。
【００３３】
【表５】
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【００３４】
【表６】
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【００３５】
【表７】
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【００３６】
【表８】
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【００３７】
西洋人参は、高圧蒸気処理の有無に拘らず、マウスに２ｇ／ｋｇを投与しても、死亡例は観察されず、一般症状にも影響を与えなかった。また、表５乃至８から明らかなように、西洋人参は、高圧蒸気処理の有無に拘らず、マウス体重増加及び相対臓器重量に対して影響を与えることはなかった。これらの結果から、西洋人参を高圧蒸気処理しても、新たな悪性物質が生成する可能性は低いものと考えられる。
【００３８】
実験例５
次に、マウスＢ１６黒色腫細胞の増殖に対する作用について実験を行った。先ず、６ｃｍのプラスチックシャーレに２％の牛胎児血清、５０ＩＵ／ｍｌのペニシリン及び５０μｇ／ｍｌのストレプトマイシンを含むＬｅｉｂｏｖｉｔｚ‘ｓＬ−１５とＨａｍ’ｓＦ−１０の混合培地（７：３）を加え、これにマウスＢ１６黒色腫細胞（理研細胞バンクより購入し、本願出願人が継代したもの）を１×１０5個加え、３７℃、５％ＣＯ2条件下で２４時間培養後、培養液一定量を採取し、同量の被験薬液（５０％エタノールを含有する培養液にて懸濁）を加えて更に３日間培養し、細胞数を計数盤によって計測した。生細胞の剥離は、０．０１％トリプシンを含む燐酸塩類緩衝液（ｐＨ７．２、１Ｌ中にＮａＣｌ８ｇ、ＫＣｌ０．２ｇ、Ｎａ2ＨＰＯ4１．１５ｇ、ＫＨ2ＰＯ4０．２ｇを含む）を用いて行い、生細胞の割合はトリパンブルー法により確認した。結果を表９及び図２に示す。
【００３９】
【表９】
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【００４０】
表９から明らかなように、比較例１に係る無処理の西洋人参は、３００μｇ／ｍｌでもＢ１６黒色腫細胞の増殖に対して殆ど影響を与えない一方で、実施例１乃至４に係る高圧蒸気処理された西洋人参は濃度依存的にＢ１６黒色腫細胞の増殖を抑制した。また、図２から明らかなように、その作用は、処理時間の延長により、さらに増強することが明らかとなった。
【００４１】
【発明の効果】
以上のように、本発明によれば、西洋人参を高圧蒸気処理することにより、悪性を増強することなく抗糖尿病作用及び坑腫瘍作用が増強された新たな食品、医薬部外品又は医薬品を提供することができる。また、本発明によれば、西洋人参を有効成分とすることによりアルドースレダクターゼ阻害作用が増強された新たな食品、医薬部外品又は医薬品を提供することができる。これらのことから、従来の西洋人参又は西洋人参を有効成分とする食品、医薬部外品又は医薬品よりも、少量の摂取で所望の効果を得ることができることを示している。
【図面の簡単な説明】
【図１】西洋人参のウシレンズアルドースレダクターゼ阻害作用に及ぼす高圧蒸気処理（１２１℃）時間の影響を示すグラフである。横軸は、高圧蒸気処理時間を表し、縦軸は、酵素活性を５０％阻害するのに要した西洋人参の濃度を表している。
【図２】西洋人参のマウスＢ１６黒色腫細胞の増殖抑制作用に及ぼす高圧蒸気処理（１２１℃）時間の影響を示すグラフである。横軸は、高圧蒸気処理時間を表し、縦軸は、被験薬（１５０μｇ／ｍｌ）添加３日後のＢ１６黒色腫細胞数を表している。
【図１】
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【図２】
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