(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
式（Ｉ）
【化１】
0003839256.tif 000013
（上記式中、
Ｒ１は、Ｃ１〜４アルキル、Ｃ３〜４シクロアルキル、Ｃ１〜４ヒドロキシアルキル、およびＣ１〜４ハロアルキルから選択される）
の化合物、またはその塩若しくは溶媒和物。
【請求項２】
Ｓ−［（Ｒ）−２−（１−イミノエチルアミノ）プロピル］−Ｌ−システイン、
Ｓ−［（Ｓ）−２−（１−イミノエチルアミノ）プロピル］−Ｌ−システイン、
Ｓ−［（Ｒ／Ｓ）−２−（１−イミノエチルアミノ）プロピル］−Ｌ−システイン、
Ｓ−［（Ｒ）−２−（１−イミノエチルアミノ）プロピル］−Ｄ−システイン、
Ｓ−［（Ｓ）−２−（１−イミノエチルアミノ）プロピル］−Ｄ−システイン、
Ｓ−［（Ｒ／Ｓ）−２−（１−イミノエチルアミノ）プロピル］−Ｄ−システイン、
Ｓ−［（Ｒ／Ｓ）−２−（１−イミノエチルアミノ）ブチル］−Ｌ−システイン、
Ｓ−［（Ｒ／Ｓ）−２−（１−イミノエチルアミノ，２−シクロプロピル）エチル］−Ｌ−システイン、および
Ｓ−［（Ｒ／Ｓ）−２−（１−イミノエチルアミノ，３−ヒドロキシ）プロピル］−Ｌ−システイン、
から選択される、式（Ｉ）の化合物、またはその塩若しくは溶媒和物。
【請求項３】
Ｓ−［（Ｒ）−２−（１−イミノエチルアミノ）プロピル］−Ｌ−システインである式（Ｉ）の化合物、またはその塩若しくは溶媒和物。
【請求項４】
医療に使用するための、請求項１〜３のいずれか１項に記載の式（Ｉ）の化合物、またはその薬学上許容可能な塩若しくは溶媒和物。
【請求項５】
請求項１〜３のいずれか１項に記載の式（Ｉ）の化合物、またはその薬学上許容可能な塩若しくは溶媒和物を含んでなる、医薬組成物。
【請求項６】
薬学上許容可能なキャリアーまたは賦形剤を更に含んでなる、請求項５に記載の医薬組成物。
【請求項７】
１種以上の他の治療成分を含んでなる、請求項５または６に記載の医薬組成物。
【請求項８】
酸化窒素シンターゼの阻害剤が示唆される臨床疾患の予防または治療に用いられる、請求項５、６、または７に記載の医薬組成物。
【請求項９】
疾患が、炎症性疾患、ショック状態、免疫障害、消化管運動性の障害、中枢神経系の疾患、および急性または慢性苦痛から選択される、請求項８に記載の医薬組成物。
【請求項１０】
疾患が、関節炎、喘息、腸閉塞、偏頭痛、慢性閉塞性肺疾患、および過敏性腸症候群から選択される、請求項８に記載の医薬組成物。
【請求項１１】
酸化窒素シンターゼの阻害剤が示唆されるヒトのような哺乳類の臨床疾患の予防または治療を目的とする医薬品の製造における、請求項１〜３のいずれか１項に記載の式（Ｉ）の化合物、またはその薬学上許容可能な塩若しくは溶媒和物の使用。
【請求項１２】
臨床疾患が関節炎、喘息、腸閉塞、および偏頭痛から選択される、請求項１１に記載の使用。
【請求項１３】
式（Ｉ）の化合物、またはその塩若しくは溶媒和物の製造法であって、
(i)  式（II）
【化２】
0003839256.tif 000014
（式中、Ｒ１は上記で定義したとおりである）の化合物、またはその光学異性体、塩または保護誘導体（ここで、保護誘導体は、アミノ基が第三ブトキシカルボニルで保護された、および／または酸基がＣ１−４アルキルエステルとして保護された、式（ＩＩ）の化合物を意味する）と、式（III）
【化３】
0003839256.tif 000015
（式中、Ｌは脱離基である）の化合物、またはその塩との反応の後、任意の順序での下記の段階
(ii)  場合によっては、いずれかの保護基の除去、
(iii)  場合によっては、光学異性体の混合物からの光学異性体の分離、
(iv)  場合によっては、生成物のその相当する塩または溶媒和物への転換
を含んでなる、方法。
【請求項１４】
式（II）
【化２】
0003839256.tif 000016
（式中、Ｒ１は上記で定義したとおりである）の化合物、またはその光学異性体、塩または保護誘導体（ここで、保護誘導体は、アミノ基が第三ブトキシカルボニルで保護された、および／または酸基がＣ１−４アルキルエステルとして保護された、式（ＩＩ）の化合物を意味する）。
【請求項１５】
（Ｒ，Ｒ）−第三ブチル−２Ｎ−第三ブトキシカルボニル−６Ｎ−（１−イミノエチル）−２，６−ジアミノ−５−メチル−４−チオヘキサノエート、
（Ｒ，Ｓ）−第三ブチル−２Ｎ−第三ブトキシカルボニル−６Ｎ−（１−イミノエチル）−２，６−ジアミノ−５−メチル−４−チオヘキサノエート、
（Ｓ，Ｓ）−第三ブチル−２Ｎ−第三ブトキシカルボニル−６Ｎ−（１−イミノエチル）−２，６−ジアミノ−５−メチル−４−チオヘキサノエート、
（Ｓ，Ｒ）−第三ブチル−２Ｎ−第三ブトキシカルボニル−６Ｎ−（１−イミノエチル）−２，６−ジアミノ−５−メチル−４−チオヘキサノエート、
（Ｒ，Ｒ／Ｓ）−第三ブチル−２Ｎ−第三ブトキシカルボニル−６Ｎ−（１−イミノエチル）−２，６−ジアミノ−５−エチル−４−チオヘキサノエート、
（Ｒ，Ｒ／Ｓ）−第三ブチル−２Ｎ−第三ブトキシカルボニル−６Ｎ−（１−イミノエチル）−２，６−ジアミノ−５−ブトキシメチル−４−チオヘキサノエート、および
（Ｒ，Ｒ／Ｓ）−第三ブチル−２Ｎ−第三ブトキシカルボニル−６Ｎ−（１−イミノエチル）−２，６−ジアミノ−５−シクロプロピル−４−チオヘキサノエート
から選択される、請求項１に記載の式（Ｉ）の化合物の保護誘導体、またはその塩若しくは溶媒和物。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
本発明は、新規なアミジノ化合物、それらの製造法、それらを含む医薬組成物、および治療におけるそれらの使用、特に誘導的酸化窒素シンターゼの選択的阻害剤としてのそれらの使用に関する。
【０００２】
酸化窒素は可溶性グアニル酸シクラーゼ酵素の内在性刺激因子であり、多くの生物学的作用に関与している。過剰な酸化窒素の産生は、敗血症ショックおよび多くの炎症性疾患など多数の疾患に関与するとも考えられている。Ｌ−アルギニンから酸化窒素の生化学的合成は、酵素ＮＯシンターゼによって触媒される。多数のＮＯシンターゼの阻害剤が、治療での使用の目的で記載され、提案されている。
【０００３】
更に最近には、内皮性ＮＯシンターゼ（ｅＮＯＳ）および／またはニューロン性ＮＯシンターゼ（ｎＮＯＳ）よりも誘導的ＮＯシンターゼ（ｉＮＯＳ）に選択性を示すＮＯシンターゼ阻害剤を提供することが、この分野における目的となっていた。
【０００４】
例えば、ＷＯ９３／１３０５５号明細書には、式
0003839256.tif 000002
（上記式中、
Ｒ１はＣ１〜６の直鎖または分岐鎖アルキル基、Ｃ２〜６アルケニル基、Ｃ２〜６アルキニル基、Ｃ３〜６シクロアルキル基、またはＣ３〜６シクロアルキルＣ１〜６アルキル基であり、
Ｑは３〜６個の炭素原子を有しかつ場合によっては１個以上のＣ１〜３アルキル基によって置換されていてもよいアルキレン、アルケニレンまたはアルキニレン基、
式−（ＣＨ２）ｐＸ（ＣＨ２）ｑ−（式中、ｐは２または３であり、ｑは１または２であり、ＸはＳ（Ｏ）ｘ（但し、ｘは０、１または２）、ＯまたはＮＲ２（但し、Ｒ２はＨまたはＣ１〜６アルキル）である）の基、または
式−（ＣＨ２）ｒＡ（ＣＨ２）ｓ−（式中、ｒは０、１または２であり、ｓは０、１または２であり、Ａは場合によってはＣ１〜６アルキル、Ｃ１〜６アルコキシ、ヒドロキシ、ハロ、ニトロ、シアノ、トリフルオロＣ１〜６アルキル、アミノ、Ｃ１〜６アルキルアミノ、またはジＣ１〜６アルキルアミノのような１個以上の適当な置換基によって置換されていてもよい３〜６員の炭素環または複素環である）の選択的なＮＯシンターゼ阻害剤、およびその塩、および薬学上許容可能なエステルおよびアミドが記載されている。
【０００５】
同時係属国際出願ＷＯ９８／３０５３７号明細書に、誘導的酸化窒素シンターゼの選択的阻害剤であるある種のアミジノ化合物も記載されている。
【０００６】
本発明者らは、選択的ｉＮＯＳ阻害剤であると同時に、半減期が比較的長く、イン・ビボで投与するときには経口バイオアベイラビリティを有し、比較的廉価な出発材料から調製することができるなどの利点を示す新規なクラスの化合物を見出した。
【０００７】
従って、本発明によれば、式（Ｉ）
【化１】
0003839256.tif 000003
（上記式中、
Ｒ１は、Ｃ１〜４アルキル、Ｃ３〜４シクロアルキル、Ｃ１〜４ヒドロキシアルキル、およびＣ１〜４ハロアルキルから選択される）
の化合物、またはその塩、溶媒和物または生理学的機能性誘導体が提供される。
【０００８】
式（Ｉ）において、Ｒ１は好ましくはＣ１〜４アルキルであり、最も好ましくはメチルである。
【０００９】
式（Ｉ）の化合物は、２個のキラル中心を有し、すなわちＲ１置換基を有する炭素とアミノ酸基における不整中心を有する。式（Ｉ）は、実質的に純粋な形態でのまたは任意の比率で混合したあらゆる光学異性体を包含するものとする。好ましい態様では、基Ｒ１を有する炭素はＲ配置である。最も好ましい態様では、アミノ酸は天然のＬ配置であり、基Ｒ１を有する炭素はＲ配置である。本明細書を通じて、分子内の２個のキラル中心の立体化学が示される場合には、第一の配置はアミノ酸のα炭素に関し、第二の配置はＲ１置換基を有する炭素に関するものであり、例えば（Ｒ，Ｓ）と命名された立体化学はアミノ酸α炭素で（Ｒ）−立体化学、およびＲ１置換基を有する炭素で（Ｓ）−立体化学を意味する。
【００１０】
従って、もう一つの態様では、本発明は、
Ｓ−［（Ｒ）−２−（１−イミノエチルアミノ）プロピル］−Ｌ−システイン、
Ｓ−［（Ｓ）−２−（１−イミノエチルアミノ）プロピル］−Ｌ−システイン、
Ｓ−［（Ｒ／Ｓ）−２−（１−イミノエチルアミノ）プロピル］−Ｌ−システイン、
Ｓ−［（Ｒ）−２−（１−イミノエチルアミノ）プロピル］−Ｄ−システイン、
Ｓ−［（Ｓ）−２−（１−イミノエチルアミノ）プロピル］−Ｄ−システイン、
Ｓ−［（Ｒ／Ｓ）−２−（１−イミノエチルアミノ）プロピル］−Ｄ−システイン、
Ｓ−［（Ｒ／Ｓ）−２−（１−イミノエチルアミノ）ブチル］−Ｌ−システイン、
Ｓ−［（Ｒ／Ｓ）−２−（１−イミノエチルアミノ，２−シクロプロピル）エチル］−Ｌ−システイン、および
Ｓ−［（Ｒ／Ｓ）−２−（１−イミノエチルアミノ，３−ヒドロキシ）プロピル］−Ｌ−システイン、
から選択される化合物、およびその塩、溶媒和物または生理学的機能性誘導体を提供する。
【００１１】
好ましい態様では、本発明は、Ｓ−［（Ｒ）−２−（１−イミノエチルアミノ）プロピル］−Ｌ−システイン、またはその塩、溶媒和物または生理学的機能性誘導体を提供する。特に好ましい態様では、本発明は、Ｓ−［（Ｒ）−２−（１−イミノエチルアミノ）プロピル］−Ｌ−システイン、またはその塩を提供する。
【００１２】
本発明は、本明細書に記載されている特定および好ましい基の総ての組合せを包含することを理解すべきである。
【００１３】
医薬品に使用するのに適当な式（Ｉ）の化合物の塩および溶媒和物は、対イオンまたは会合した溶媒が薬学上許容可能であるものである。しかしながら、薬学上許容可能でない対イオンまたは会合溶媒を有する塩および溶媒和物は、本発明の範囲内にあり、例えば式（Ｉ）の他の化合物、およびそれらの薬学上許容可能な塩、溶媒和物、および生理学的機能性誘導体の製造における中間体として使用される。
【００１４】
「生理学的機能性誘導体」という用語は、例えば体内で式（Ｉ）の遊離化合物に転換し得ることによってこれと同一の生理学的機能性を有する式（Ｉ）の化合物の化学的誘導体を意味する。本発明によれば、生理学的機能性誘導体の例としては、エステル、アミドおよびカルバメート、好ましくはエステルおよびアミドが挙げられる。
【００１５】
本発明による適当な塩としては、有機および無機塩または塩基を用いて形成されるものが挙げられる。薬学上許容可能な酸付加塩としては、塩酸、臭化水素酸、硫酸、クエン酸、酒石酸、リン酸、乳酸、ピルビン酸、酢酸、トリフルオロ酢酸、コハク酸、シュウ酸、フマル酸、マレイン酸、オキザロ酢酸、メタンスルホン酸、エタンスルホン酸、ｐ−トルエンスルホン酸、ベンゼンスルホン酸、およびイセチオン酸から形成されるものが挙げられる。薬学上許容可能な塩基塩としては、アンモニウム塩、ナトリウムおよびカリウム塩のようなアルカリ金属塩、カルシウムおよびマグネシウム塩のようなアルカリ土類金属塩、およびジシクロヘキシルアミンおよびＮ−メチル−Ｄ−グルタミンのような有機塩基との塩が挙げられる。
【００１６】
式（Ｉ）の化合物の薬学上許容可能なエステルおよびアミドは、Ｃ１〜６アルキル、アリール、アリールＣ１〜６アルキル、またはアミノ酸エステルまたはアミドに転換される酸基を有することができる。式（Ｉ）の化合物の薬学上許容可能なアミドおよびカルバメートは、Ｃ１〜６アルキル、アリール、アリールＣ１〜６アルキル、またはアミノ酸アミドまたはカルバメートに転換されるアミノ基を有することができる。
【００１７】
上記のように、式（Ｉ）の化合物は、下記のＮＯＳ阻害分析法で示されるようにＮＯシンターゼの阻害剤である。
【００１８】
従って、式（Ｉ）の化合物およびそれらの薬学上許容可能な塩、溶媒和物および生理学的機能性誘導体は、ＮＯシンターゼ、特にｉＮＯＳのシンターゼが示唆される臨床疾患の予防および治療に用いられる。このような疾患としては、炎症性疾患、ショック状態、免疫障害、消化管運動性の障害が挙げられる。式（Ｉ）の化合物、およびその薬学上許容可能な塩、溶媒和物および生理学的機能性誘導体は、偏頭痛のような中枢神経系の疾患の予防および治療に用いることもできる。
【００１９】
ショック状態とは、敗血症ショック、出血性ショック、外傷性ショック、または劇症肝炎性機能不全またはＴＮＦ、ＩＬ−１およびＩＬ−２のようなサイトカインを用いる療法またはサイトカイン誘導剤、例えば５，６−ジメチルキサンテノン酢酸を用いる療法によって引起されるショックのようなＮＯの過剰生産から生じるものを意味する。
【００２０】
炎症性疾患および免疫障害の例としては、関節の疾患、特に関節炎（例えば、慢性関節リウマチ、変形性関節症、人工関節不全）、または消化管（例えば、潰瘍性大腸炎、クローン病、および他の炎症性腸疾患、胃炎および感染によって起こる粘膜炎症、非ステロイド系抗炎症薬によって引起される腸症）、肺（例えば、成人呼吸促進症候群、喘息、嚢胞性線維症、または慢性の閉塞性肺疾患）、心臓（例えば、心筋炎）、神経組織（例えば、多発性硬化症）、膵臓（例えば、真性糖尿病およびその合併症）、腎臓（例えば、球体腎炎）、皮膚（例えば、皮膚炎、乾癬、湿疹、蕁麻疹）、目（例えば、緑内障）、並びに移植臓器（例えば、拒絶反応）、多臓器疾患（例えば、全身性エリテマトーデス）、およびウイルスまたは細菌感染症の炎症性後遺症のものが挙げられる。ｉＮＯＳ阻害剤は、特に感染した哺乳類での細菌量を減少することによる細菌感染症（例えば、肺炎）の予防または治療に用いることができる証拠もある。
【００２１】
更に、アテローム性硬化症および引き続く低酸素性または虚血性障害（再灌流を伴うまたはのない）、例えば脳または虚血性心疾患におけるｉＮＯＳによるＮＯの過剰生成の証拠がある。
【００２２】
消化管運動性の障害としては、腸閉塞、例えば術後腸閉塞および敗血症中腸閉塞が挙げられる。
【００２３】
中枢神経系の疾患とは、ＮＯの過剰生成が関与する疾患、例えば偏頭痛、精神病、不安、精神分裂病、睡眠障害、脳虚血、ＣＮＳ障害、癲癇、多発性硬化症、ＡＩＤＳ痴呆、慢性神経変性疾患（例えば、レーヴィ小体痴呆、ハンチングトン病、パーキンソン病、アルツハイマー病）、および急性および慢性苦痛、非アドレナリン作動性非コリン作動性神経が関与することがある疾患、例えばプリアピスム、肥満症および過食症を意味する。
【００２４】
急性苦痛の例としては、骨格筋痛、術後痛、および手術痛が挙げられる。慢性苦痛の例としては、慢性炎症性苦痛（例えば、慢性関節リウマチおよび変形性関節症）、ニューロパシー性苦痛（例えば、ヘルペス後神経痛、糖尿病に関連した糖尿病性ニューロパシー、三叉神経痛、機能性腸障害(functional bowel disorders)、例えば過敏性腸症候群、非心臓性胸部痛、および交感神経性持続痛(sympathetically maintained pain)、および癌および線維筋肉痛(fibromyalgia)に関連した苦痛が挙げられる。
更に、ＮＯシンターゼの阻害は、ＨＩＶ感染に関連したリンパ球損失の防止、放射線療法の際の腫瘍の放射線感受性の増加、および腫瘍成長、腫瘍進行、新脈管形成および転移の減少に有利であることがある。
【００２５】
従って、本発明は、酸化窒素シンターゼの阻害剤、例えばｉＮＯＳ阻害剤が示唆されるヒトのような哺乳類での臨床疾患の予防または治療法であって、式（Ｉ）の化合物、またはその薬学上許容可能な塩、溶媒和物または生理学的機能性誘導体の治療上有効量の投与を含んでなる、方法を提供する。特に、本発明は、関節炎または喘息のような炎症性および／または免疫障害の予防または治療法を提供する。好ましい態様では、本発明は、関節炎、喘息、腸閉塞、および偏頭痛から選択される臨床疾患の予防または治療法を提供する。もう一つの態様では、本発明は、細菌感染症の予防または治療法を提供する。
【００２６】
あるいは、医療に使用するための、特に酸化窒素シンターゼの阻害剤、例えばｉＮＯＳ阻害剤が示唆されるヒトなどの哺乳類の臨床疾患の予防または治療に使用するための式（Ｉ）の化合物、またはその薬学上許容可能な塩、溶媒和物または生理学的機能性誘導体も提供される。特に、関節炎または喘息のような炎症性および／または免疫疾患の予防または治療のための式（Ｉ）の化合物、またはその薬学上許容可能な塩、溶媒和物または生理学的機能性誘導体が提供される。好ましい態様では、関節炎、喘息、腸閉塞、および偏頭痛の予防または治療のための式（Ｉ）の化合物、またはその薬学上許容可能な塩、溶媒和物または生理学的機能性誘導体が提供される。もう一つの態様では、細菌感染症の予防または治療のための式（Ｉ）の化合物、またはその薬学上許容可能な塩、溶媒和物または生理学的機能性誘導体が提供される。
【００２７】
治療効果を得るのに必要な式（Ｉ）の化合物、またはその薬学上許容可能な塩、溶媒和物または生理学的機能性誘導体の量は、特定の化合物、投与経路、試料を受ける患者、および治療を行う特定の障害または疾患によって変化するのは勿論である。本発明の化合物は、１日当たり０．１〜１５００mg/kg、好ましくは１日当たり０．１〜５００mg/kgの用量で経口または注射により投与することができる。成人についての用量範囲は、一般に５mg〜３５ｇ／日であり、好ましくは５mg〜２ｇ／日である。不連続単位で提供される錠剤または他の投与形態は、好都合には例えば５mg〜５００mg、通常は約１０mg〜２００mgを含む単位の投薬量または複数のこの投薬量で有効な本発明の化合物の量を含む。
【００２８】
式（Ｉ）の化合物、またはその薬学上許容可能な塩、溶媒和物または生理学的機能性誘導体を単独で投与することが可能であるが、これを医薬処方物として提供するのが好ましい。
【００２９】
従って、本発明は、式（Ｉ）の化合物、またはその薬学上許容可能な塩、溶媒和物または生理学的機能性誘導体、および薬学上許容可能なキャリヤーまたは賦形剤、および場合によっては１種類以上の他の治療成分を含んでなる、医薬処方物も提供する。
【００３０】
本発明は、酸化窒素シンターゼの阻害剤、例えばｉＮＯＳ阻害剤が示唆される臨床疾患、例えば炎症性および／または免疫障害、例えば関節炎または喘息の予防または治療を目的とする医薬品の製造における、式（Ｉ）の化合物、またはその薬学上許容可能な塩、溶媒和物または生理学的機能性誘導体の使用も提供する。好ましい態様では、関節炎、喘息、腸閉塞、および偏頭痛から選択される臨床疾患の予防または治療のための医薬品の製造における、式（Ｉ）の化合物、またはその薬学上許容可能な塩、溶媒和物または生理学的機能性誘導体の使用を提供する。もう一つの態様では、細菌感染症の予防または治療のための医薬品の製造における、式（Ｉ）の化合物、またはその薬学上許容可能な塩、溶媒和物または生理学的機能性誘導体の使用を提供する。
【００３１】
以後、「活性成分」という用語は、式（Ｉ）の化合物、またはその薬学上許容可能な塩、溶媒和物または生理学的機能性誘導体を意味する。
【００３２】
処方物としては、経口、非経口（皮下、皮内、筋肉内、静脈内および動脈内など）、吸入（様々な種類の計量加圧したエアゾール、噴霧器、または注入器によって生成することができる粒状微粉またはミストなど）、直腸および局所（皮膚、口腔、舌下および眼内など）投与が挙げられるが、最適経路は、例えば患者の状態および疾患によって変化することがある。処方物は、好都合には単位投薬量形態で提供することができ、薬学の技術分野で周知の方法のいずれかによって調製することができる。総ての方法は、活性成分を１種類以上の修飾成分を構成するキャリヤーと関連付ける段階を包含する。一般に、処方物は、活性成分を液体キャリヤーまたは微細に分割した固形キャリヤー、または両方と均一かつ緊密に関連付け、次に生成物を所望な処方物に形成することによって調製される。
【００３３】
経口投与に適する本発明の処方物は、所定量の活性成分をそれぞれ含むカプセル、カシェ剤または錠剤のような不連続単位として、粉末または顆粒として、水性液体または非水性液体の溶液または懸濁液として、または水中油型液体エマルションまたは油中水型液体エマルションとして提供することができる。活性成分は、口腔、舐剤またはペーストとして提供することもできる。
【００３４】
錠剤は、場合によっては１種類以上の修飾成分と共に圧縮または成形によって製造することができる。圧縮錠剤は、適当な装置で粉末または顆粒のような自由流動性形態の活性成分を、場合によっては結合剤、滑沢剤、不活性希釈剤、潤滑界面活性剤または分散剤と混合して圧縮することによって調製することができる。成形錠剤は、適当な装置で不活性な液体希釈剤で加湿した粉末状化合物の混合物を整形することによって製造することができる。錠剤は、場合によってはコーティングを施したりまたは刻み目を入れることができ、その中の活性成分が徐放または制御放出されるように処方することができる。
【００３５】
非経口投与用の処方物としては、酸化防止剤、緩衝液、静菌剤、および投与しようとする患者の血液と等張性の処方物を生成する溶質を含むことができる水性および非水性の滅菌注射溶液、および懸濁剤および増粘剤を含むことができる水性および非水性の滅菌懸濁液が挙げられる。処方物は、単位用量または複数回用量容器、例えば密封アンプルおよびバイアルで提供することができ、また使用直前に食塩水または注射用水などの滅菌液体キャリヤーを加えるだけでよい凍結乾燥（親液化）条件で保存することができる。上記した種類の滅菌粉末、顆粒および錠剤から即席注射溶液および懸濁液を調製することができる。
【００３６】
直腸投与用の処方物は、カカオ脂またはポリエチレングリコールのような通常のキャリヤーを用いる座薬として提供することができる。
【００３７】
口内、例えば口腔または舌下に局所投与用の処方物としては、スクロースおよびアラビアゴムまたはトラガカントゴムのような風味付けした基剤中に活性成分を含んでなるロゼンジ、およびゼラチンおよびグリセリンまたはスクロースおよびアラビアゴムのような基剤中に活性成分を含んでなるトローチが挙げられる。
【００３８】
好ましい単位投薬量処方物は、上記に引用したとおり、活性成分の有効用量、またはその適当な分量を含むものである。
【００３９】
特に上記した成分の他に、本発明の処方物は、当該処方物の種類に関して当該技術分野で一般に用いられている他の薬剤を含むことができ、例えば経口投与に適する処方物は香味料を含むことができる。
【００４０】
本発明のもう一つの態様によれば、式（Ｉ）の化合物、またはその塩、溶媒和物または生理学的機能性誘導体の製造法であって、
(i)  式（II）
【化２】
0003839256.tif 000004
（式中、Ｒ１は上記で定義したとおりである）の化合物、またはその光学異性体、塩または保護誘導体と、式（III）
【化３】
0003839256.tif 000005
（式中、Ｌは脱離基であり、最も好ましくはＣ１〜６アルコキシ基、例えばエトキシ、またはアルキルチオ、アラールキルチオまたはアリールチオ基、例えばベンジルチオまたは１−または２−ナフチルメチルチオ基である）の化合物、またはその塩との反応の後、任意の順序での下記の段階
(ii)  場合によっては、いずれかの保護基の除去、
(iii)  場合によっては、光学異性体の混合物からの光学異性体の分離、
(iv)  場合によっては、生成物のその相当する塩、溶媒和物または生理学的機能性誘導体への転換
を含んでなる、方法を提供する。
【００４１】
ＬがＣ１〜６アルコキシ基であるときには、上記段階(i)の反応はアルカリ性ｐＨ、例えばｐＨ８〜１１、好ましくはｐＨ１０．５、および低温、例えば−５℃〜２０℃、好ましくは０〜５℃で溶液中で行うことができる。Ｌがアルキルチオ、アラールキルチオまたはアリールチオ基であるときには、反応は有機溶媒、例えばテトラヒドロフランまたはエタノールのようなＣ１〜４アルコール中で中温、例えば１０〜４０℃で、好ましくは周囲温度で行うことができる。
【００４２】
式（III）の化合物およびその塩は市販されているか、または例えばShearer et al., Tetrahedron Letters, 1997, 38, 179-182に記載のように、当業者に周知の有機化学の方法によって調製することができる。
【００４３】
式（II）の化合物、およびその塩および保護誘導体は、式（IV）
【化４】
0003839256.tif 000006
の化合物、またはその保護誘導体から、式（Ｖ）
【化５】
0003839256.tif 000007
（式中、Ｒ１は上記で定義したとおりであり、Ｌ１は脱離基、例えばブロモのようなハロ、またはトルエンスルホニルのようなアルキル、アリールまたはアラールキルスルホネートエステルである）の化合物、またはその保護誘導体とカップリングすることによって調製することができる。
【００４４】
式（IV）の化合物の保護誘導体、例えばＮ−第三ブトキシカルボニルシステイン第三ブチルエステルは、１，８−ジアザビシクロ［５．４．０］ウンデカ−７−エンのような塩基または当業者によって認められる同様な薬剤によって伝達される反応において適当な有機溶媒（例えば、トルエン）中で様々な条件下でしき（Ｖ）の化合物と反応させることができる。
【００４５】
あるいは、式（II）の化合物、およびその塩および保護誘導体は、式（VI）
【化６】
0003839256.tif 000008
（式中、Ｒ１は上記で定義したとおりである）の化合物、またはその保護誘導体の還元（例えば、金属水素化物錯体を用いて）によって調製することができる。
【００４６】
式（VI）の化合物は、Yanagisawa et al., J. Med. Chem., 39(11), 1984-91 (1987)およびHassner and Dehaen, J. Org. Chem., 55, 5505-5510 (1990)によって記載されているのと類似の方法によって調製することができる。従って、式（IV）の化合物またはその保護誘導体（例えば、アミノ基が第三ブトキシのようなアシル基で保護し、カルボン酸基を第三ブチルエステルのようなエステルとして保護する場合）を、ニトロメタンおよび適当なアルデヒドＲ１ＣＨＯ（式中、Ｒ１は上記で定義したとおりである）と、ピペリジンの存在下にて反応させると、式（VI）のニトロ化合物またはその保護誘導体を生成する。
【００４７】
式（II）の化合物またはその保護誘導体を、式（VII）
【化７】
0003839256.tif 000009
（式中、Ｒ１は上記で定義したとおりである）の化合物またはその保護誘導体を式（VIII）
【化８】
0003839256.tif 000010
のアジリジン、またはその保護誘導体と反応させる、例えばアミンを第三ブトキシカルボニルのようなアシル基で保護し、酸をＣ１〜４アルキルエステルのようなエステルとして保護することによって調製することもできる。式（VII）および（VIII）の化合物の反応は、ＢＦ３（ＯＥｔ）２のようなルイス酸の存在下にてクロロホルムのような不活性溶媒中で行うことができる。
【００４８】
式（IV）、（Ｖ）、（VII）および（VIII）の化合物、およびそれらの保護誘導体は市販されているか、または当業者に周知の有機化学の方法によって調製することができる。
【００４９】
式（Ｉ）の化合物の調製に用いられる保護基は、例えばこれらの基の除去の方法も記載されている「有機合成における保護基(Protective Groups in Organic Synthesis)」, Theodora W Green著，第２版（John Wiley and Sons, 1991）に記載の方法を用いて通常の方法で用いることができる。
【００５０】
上記の反応において、第一アミンは、第三ブトキシカルボニルまたはベンジルオキシカルボニル基のような、酸性条件下で塩酸または臭化水素酸で処理することによって、または水素化分解によって除去することができるアシル基を用いて好ましく保護される。
【００５１】
当業者によって理解されるように、このような保護基の使用としては、式（II）の化合物中のアミノ基の直交保護(orthogonal protection)によって一方のキノキサリン存在下でもう一方の基の選択的除去を促進することによって、単一のアミノ官能基の選択的官能化を行うことができるようにすることが挙げられる。例えば、ベンジルオキシカルボニル基は、水素化分解によって選択的に除去することができる。当業者であれば、Theodora W Green（上記参照）に記載の従来の手段によって利用可能な適当な他の直交保護法も評価するであろう。
【００５２】
本発明の鏡像異性体化合物は、(a)相当する「ラセミ混合物」の化合物の分離、例えばキラルクロマトグラフィーカラム、酵素分割法または適当なジアステレオ異性体の製造および分離によって、または(b)上記の方法により適当なキラル中間体からの直接合成によって得ることができる。
【００５３】
場合によっては、式（Ｉ）の化合物の相当する塩への転換を、適当な酸または塩基との反応によって好都合に行うことができる。場合によっては、式（Ｉ）の化合物の相当する溶媒和物または生理学的機能性誘導体への転換は、当業者に知られている方法によって行うことができる。
【００５４】
もう一つの態様によれば、本発明は、式（Ｉ）の化合物の調製の新規な中間体、例えば上記のような式（II）の化合物、またはその光学異性体、塩または保護誘導体、特に
（Ｒ，Ｒ）−第三ブチル−２Ｎ−第三ブトキシカルボニル−２，６−ジアミノ−５−メチル−４−チオヘキサノエート、
（Ｒ，Ｓ）−第三ブチル−２Ｎ−第三ブトキシカルボニル−２，６−ジアミノ−５−メチル−４−チオヘキサノエート、
（Ｓ，Ｓ）−第三ブチル−２Ｎ−第三ブトキシカルボニル−２，６−ジアミノ−５−メチル−４−チオヘキサノエート、
（Ｓ，Ｒ）−第三ブチル−２Ｎ−第三ブトキシカルボニル−２，６−ジアミノ−５−メチル−４−チオヘキサノエート、
（Ｒ，Ｒ／Ｓ）−第三ブチル−２Ｎ−第三ブトキシカルボニル−２，６−ジアミノ−５−エチル−４−チオヘキサノエート、
（Ｒ，Ｒ／Ｓ）−第三ブチル−２Ｎ−第三ブトキシカルボニル−２，６−ジアミノ−５−ブトキシメチル−４−チオヘキサノエート、
（Ｒ，Ｒ／Ｓ）−第三ブチル−２Ｎ−第三ブトキシカルボニル−２，６−ジアミノ−５−シクロプロピル−４−チオヘキサノエート、
（Ｒ，Ｒ）−第三ブチル−２Ｎ−第三ブトキシカルボニル−６Ｎ−ベンジルオキシカルボニル−２，６−ジアミノ−５−メチル−４−チオヘキサノエート、
（Ｒ，Ｓ）−第三ブチル−２Ｎ−第三ブトキシカルボニル−６Ｎ−ベンジルオキシカルボニル−２，６−ジアミノ−５−メチル−４−チオヘキサノエート、
（Ｓ，Ｓ）−第三ブチル−２Ｎ−第三ブトキシカルボニル−６Ｎ−ベンジルオキシカルボニル−２，６−ジアミノ−５−メチル−４−チオヘキサノエート、
（Ｓ，Ｒ）−第三ブチル−２Ｎ−第三ブトキシカルボニル−６Ｎ−ベンジルオキシカルボニル−２，６−ジアミノ−５−メチル−４−チオヘキサノエート、
（Ｒ，Ｒ／Ｓ）−第三ブチル−２Ｎ−第三ブトキシカルボニル−６Ｎ−ベンジルオキシカルボニル−２，６−ジアミノ−５−エチル−４−チオヘキサノエート、および
（Ｒ，Ｒ／Ｓ）−第三ブチル−２Ｎ−第三ブトキシカルボニル−６Ｎ−ベンジルオキシカルボニル−２，６−ジアミノ−５−ブトキシメチル−４−チオヘキサノエート、
から選択される化合物を提供する。
【００５５】
本発明の特定の態様によれば、式（II）の化合物は、
（Ｒ，Ｒ）−第三ブチル−２Ｎ−第三ブトキシカルボニル−２，６−ジアミノ−５−メチル−４−チオヘキサノエート、および
（Ｒ，Ｒ）−第三ブチル−２Ｎ−第三ブトキシカルボニル−６Ｎ−ベンジルオキシカルボニル−２，６−ジアミノ−５−メチル−４−チオヘキサノエート、
から選択される。
【００５６】
式（VI）の化合物のある種の保護誘導体、特に（Ｒ，Ｒ／Ｓ）−第三ブチル−２Ｎ−第三ブトキシカルボニル−２，６−ジアミノ−５−シクロプロピル−４−チオヘキサノエートは、式（II）の化合物の調製の中間体としても有用である。
【００５７】
式（Ｉ）の化合物のある種の保護誘導体、特に
（Ｒ，Ｒ）−第三ブチル−２Ｎ−第三ブトキシカルボニル−６Ｎ−（１−イミノエチル）−２，６−ジアミノ−５−メチル−４−チオヘキサノエート、
（Ｒ，Ｓ）−第三ブチル−２Ｎ−第三ブトキシカルボニル−６Ｎ−（１−イミノエチル）−２，６−ジアミノ−５−メチル−４−チオヘキサノエート、
（Ｓ，Ｓ）−第三ブチル−２Ｎ−第三ブトキシカルボニル−６Ｎ−（１−イミノエチル）−２，６−ジアミノ−５−メチル−４−チオヘキサノエート、
（Ｓ，Ｒ）−第三ブチル−２Ｎ−第三ブトキシカルボニル−６Ｎ−（１−イミノエチル）−２，６−ジアミノ−５−メチル−４−チオヘキサノエート、
（Ｒ，Ｒ／Ｓ）−第三ブチル−２Ｎ−第三ブトキシカルボニル−６Ｎ−（１−イミノエチル）−２，６−ジアミノ−５−エチル−４−チオヘキサノエート、
（Ｒ，Ｒ／Ｓ）−第三ブチル−２Ｎ−第三ブトキシカルボニル−６Ｎ−（１−イミノエチル）−２，６−ジアミノ−５−ブトキシメチル−４−チオヘキサノエート、および
（Ｒ，Ｒ／Ｓ）−第三ブチル−２Ｎ−第三ブトキシカルボニル−６Ｎ−（１−イミノエチル）−２，６−ジアミノ−５−シクロプロピル−４−チオヘキサノエート
から選択される化合物、およびその塩および溶媒和物は、式（Ｉ）の化合物の調製の中間体としても有用である。
【００５８】
本発明の特定の態様では、式（Ｉ）の保護誘導体は、（Ｒ，Ｒ）−第三ブチル−２Ｎ−第三ブトキシカルボニル−６Ｎ−（１−イミノエチル）−２，６−ジアミノ−５−メチル−４−チオヘキサノエート、またはその塩または溶媒和物である。
【００５９】
本発明を更によく理解するため、下記の例によって説明する。
【００６０】
合成例
例１
（Ｒ，Ｒ）−６Ｎ−（１−イミノエチル）−２，６−ジアミノ−５−メチル−４−チオヘキサノエート二塩酸塩、または
Ｓ［（Ｒ）−２−（１−イミノエチルアミノ）プロピル］−Ｌ−システイン二塩酸塩の合成
(a)  （Ｒ，Ｒ）−第三ブチル−２Ｎ−第三ブトキシカルボニル−６Ｎ−ベンジルオキシカルボニル−２，６−ジアミノ−５−メチル−４−チオヘキサノエート
Ｎ−第三ブトキシカルボニルシステイン第三ブチルエステル（７．２６ｇ，２６．２ミリモル）(Oisen et al., J. Med. Chem., 1985, 50 (22), 4332-4336)を乾燥トルエン（１００ml）に溶解したものに、（Ｓ）−Ｎ−ベンジルオキシカルボニル＝１−アミノプロパン−２−オールトシレート（９．５１ｇ，２６．２ミリモル）および１，８−ジアザビシクロ［５．４．０］ウンデカ−７−エン（３．９０ml，２６．２ミリモル）を加え、混合物を６０℃窒素下にて一晩激しく攪拌した。混合物を酢酸エチルおよび１Ｎ  ＨＣｌ水溶液それぞれ２５０mlに分配した。追加の有機抽出物を合わせ、これらの抽出物を重炭酸ナトリウム水溶液、水、および塩水で洗浄した後、乾燥して、蒸発させた。カラムクロマトグラフィーにより精製し、標記化合物を無色油状生成物として得て、これを結晶化し、長時間放置して、白色固形生成物を得た。
【００６１】
ＬＣ／電子スプレー質量スペクトル，ＲＴ４．９３分，Ｍ＋Ｈ４６９（１００％），Ｍ＋ＮＨ４＋４８６（７０％）。
１Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）δＨ：１．２７（３Ｈ，ｄ，Ｍｅ），１．４４および１．４７（それぞれ９Ｈ，ｓ，ＣＭｅ３），２．９２（３Ｈ，ｍ，３−Ｈ，５−Ｈ），３．２３および３．３８（それぞれ１Ｈ，ｍ，６−Ｈ），４．３９（１Ｈ，ｂｒｍ，２−Ｈ），５．１１（２Ｈ，ｓ，ＣＨ２Ｐｈ），５．３１および５．４２（それぞれ１Ｈ，ｂｒ，ＮＨ），７．３４（５Ｈ，ｍ，Ａｒ−Ｈ）。
円偏光二色性スペクトル（ＭｅＣＮ）
２１０（＋０．４２）および２３３（〜０．１１）nm。
【００６２】
(b)  （Ｒ，Ｒ）−第三ブチル−２Ｎ−第三ブトキシカルボニル−２，６−ジアミノ−５−メチル−４−チオヘキサノエート
（Ｒ，Ｒ）−第三ブチル−２Ｎ−第三ブトキシカルボニル−６Ｎ−ベンジルオキシカルボニル−２，６−ジアミノ−５−メチル−４−チオヘキサノエート（５ｇ）を脱気して窒素置換したエタノール１２０mlに溶解したものに水酸化パラジウム／活性炭（２０％，Degussa type E101 NE/W, 水と１：１）２．５ｇを加えた後、ギ酸アンモニウム（１０ｇ）を加えた。次に、溶液を加熱し、１時間還流した後、冷却して、ハイフロで濾過し、水性エタノールで十分に洗浄した。これを蒸発させ、残渣を短いシリカカラムを流下させ、９０：１０：０．５クロロホルム：メタノール：８８０アンモニアで溶出し、蒸発させて油状生成物を得て、これを直接次の段階に用いた。
【００６３】
ＬＣ／電子スプレー質量スペクトル，ＲＴ２．４０分，Ｍ＋Ｈ３３５（１００％），２７９（６０％）。
【００６４】
(c)  （Ｒ，Ｒ）−第三ブチル−２Ｎ−第三ブトキシカルボニル−６Ｎ−（１−イミノエチル）−２，６−ジアミノ−５−メチル−４−チオヘキサノエート塩酸塩
Ｓ−（１−ナフチルメチル）チオアセトイミデート塩酸塩（３．１０ｇ，１２．３ミリモル）を、（Ｒ，Ｒ）−第三ブチル−２Ｎ−第三ブトキシカルボニル−６Ｎ−２，６−ジアミノ−５−メチル−４−チオヘキサノエート（２．７５ｇ）をエタノール（５０ml）に溶解したものに窒素下にて加え、溶液を室温で１４時間攪拌した。溶媒を蒸発させ、残渣をエーテルおよび水それぞれ５０mlに分配させた後、エーテルで２回洗浄し、逆抽出した水溶液を合わせて蒸発させ、粗製の白色無定形ペーストを得て、これを直接次の段階に用いた。
【００６５】
サーモスプレー質量スペクトル，Ｍ＋Ｈ３７６（１００％），２７６（１２％）。
１Ｈ  ＮＭＲ（Ｄ２Ｏ）δＨ：１．２８（３Ｈ，ｄ，Ｍｅ），１．３９および１．４２（それぞれ９Ｈ，ｓ，ＣＭｅ３），２．２１（３Ｈ，ｓ，ＣＨ３），３．０１（３Ｈ，ｍ，３−Ｈ，５−Ｈ），３．３７（２Ｈ，ｍ，６−Ｈ），４．１８（１Ｈ，ｔ，２−Ｈ）。
【００６６】
(d)  （Ｒ，Ｒ）−６Ｎ−（１−イミノエチル）−２，６−ジアミノ−５−メチル−４−チオヘキサノエート二塩酸塩、または
Ｓ−［（Ｒ）−２−（１−イミノエチルアミノ）プロピル］−Ｌ−システイン二塩酸塩
（Ｒ，Ｒ）−第三ブチル−２Ｎ−第三ブトキシカルボニル−６Ｎ−（１−イミノエチル）−２，６−ジアミノ−５−メチル−４−チオヘキサノエート塩酸塩を、４Ｎ塩酸／ジオキサン２０mlを加えて溶解し、速やかに生成した懸濁液を窒素下にて一晩激しく攪拌した。エーテル５０mlを加え、液体を粘稠なガム状生成物から傾瀉によって除去した。エーテルで粉砕して、標記化合物を無定形吸湿性白色固形生成物として得た。
【００６７】
電子スプレー質量スペクトル，Ｍ＋Ｈ２２０（１００％）。
１Ｈ  ＮＭＲ（Ｄ２Ｏ）δＨ：１．３７（３Ｈ，ｄ，Ｍｅ），２．２５（３Ｈ，ｓ，ＣＨ３），３．２３（３Ｈ，ｍ，３−Ｈ，５−Ｈ），３．４７（２Ｈ，ｍ，６−Ｈ），４．２４（１Ｈ，ｔ，２−Ｈ）（回転異性体形態によるシグナルの幾分の重複がある点に留意）。
１３Ｃ  ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）δＣ；１８．９０（ｑ，Ｍｅ），３０．１３（ｔ，３−Ｃ），３８．８３（ｄ，５−Ｃ），４７．４３（ｔ，６−Ｃ），５２．２０（ｄ，２−Ｃ），１６５．０（ｓ，Ｎ＝Ｃ−Ｎ），１７０．０（ｓ，ＣＯ２Ｈ）。
円偏光二色性スペクトル（Ｈ２Ｏ）
１９９（＋１．３８）および２２３（−０．７７）nm。
【００６８】
例２
（Ｒ，Ｓ）−６Ｎ−（１−イミノエチル）−２，６−ジアミノ−５−メチル−４−チオヘキサノエート二塩酸塩、または
Ｓ−［（Ｓ）−２−（１−イミノエチルアミノ）プロピル］−Ｌ−システイン二塩酸塩
手続きおよび方法は、アルキル化段階において、保護したＬ−システインを、例１の（Ｓ）−鏡像異性体の代わりに（Ｒ）−Ｎ−ベンジルオキシカルボニル＝１−アミノプロパン−２−オールトシレートと反応させたこと以外は、例１で用いたものと同じであった。
【００６９】
電子スプレー質量スペクトル，Ｍ＋Ｈ２２０（１００％）。
１Ｈ  ＮＭＲ（Ｄ２Ｏ）δＨ：１．４０（３Ｈ，ｄ，Ｍｅ），２．２５（３Ｈ，ｓ，ＣＨ３），３．３０（３Ｈ，ｍ，３−Ｈ，５−Ｈ），３．４５（２Ｈ，ｍ，６−Ｈ），４．２５（１Ｈ，ｔ，２−Ｈ），（回転異性体形態によるシグナルの幾分の重複がある点に留意）。
【００７０】
例３
（Ｓ，Ｓ）−６Ｎ−（１−イミノエチル）−２，６−ジアミノ−５−メチル−４−チオヘキサノエート二塩酸塩、または
Ｓ−［（Ｓ）−２−（１−イミノエチルアミノ）プロピル］−Ｄ−システイン二塩酸塩の合成
手続きおよび方法は、アルキル化段階において、鏡像異性体性の保護したＤ−システインを、（Ｒ）−Ｎ−ベンジルオキシカルボニル＝１−アミノプロパン−２−オールトシレートと反応させたこと以外は、例１で用いたものと同じであった。
【００７１】
生成物スペクトルは、
円偏光二色性スペクトル（Ｈ２Ｏ）
１９９（−１．０５）および２２４（＋０．６６）nm
を除き、例１の化合物のスペクトルと同一であった。
【００７２】
例４
（Ｓ，Ｒ）−６Ｎ−（１−イミノエチル）−２，６−ジアミノ−５−メチル−４−チオヘキサノエート二塩酸塩、または
Ｓ−［（Ｒ）−２−（１−イミノエチルアミノ）プロピル］−Ｄ−システイン二塩酸塩の合成
手続きおよび方法は、アルキル化段階において、鏡像異性体性の保護したＤ−システインを、（Ｓ）−Ｎ−ベンジルオキシカルボニル＝１−アミノプロパン−２−オールトシレートと反応させたこと以外は、例１で用いたものと同じであった。
【００７３】
電子スプレー質量スペクトル，Ｍ＋Ｈ２２０（１００％）。
１Ｈ  ＮＭＲ（Ｄ２Ｏ）δＨ：１．４０（３Ｈ，ｄ，Ｍｅ），２．２５（３Ｈ，ｓ，ＣＨ３），３．３０（３Ｈ，ｍ，３−Ｈ，５−Ｈ），３．４５（２Ｈ，ｍ，６−Ｈ），４．２５（１Ｈ，ｔ，２−Ｈ）。
【００７４】
例５
（Ｒ，Ｒ／Ｓ）−６Ｎ−（１−イミノエチル）−２，６−ジアミノ−５−メチル−４−チオヘキサノエート二塩酸塩、または
Ｓ−［（Ｒ／Ｓ）−２−（１−イミノエチルアミノ）ブチル］−Ｌ−システイン二塩酸塩の合成
手続きおよび方法は、アルキル化段階において、保護したＬ−システインを、例１の１−アミノプロパン−２−オール誘導体の代わりに（Ｒ／Ｓ）−Ｎ−ベンジルオキシカルボニル＝１−アミノブタン−２−オールトシレートと反応させ、実質的に標記化合物のエピマー混合物である生成物を得たこと以外は、例１で用いたものと同じであった。
【００７５】
電子スプレー質量スペクトル，Ｍ＋Ｈ２３４（１００％）。
【００７６】
例６
（Ｒ，Ｒ／Ｓ）−６Ｎ−（１−イミノエチル）−２，６−ジアミノ−５−ヒドロキシメチル−４−チオヘキサノエート二塩酸塩、または
Ｓ−［（Ｒ／Ｓ）−２−（１−イミノエチルアミノ，３−ヒドロキシ）プロピル］−Ｌ−システイン二塩酸塩の合成
手続きおよび方法は、アルキル化段階において、保護したＬ−システインを、例１の１−アミノプロパン−２−オール誘導体の代わりに（Ｒ／Ｓ）−Ｎ−ベンジルオキシカルボニル−３−第三ブトキシ−１−アミノプロパン−２−オールトシレートと反応させたこと以外は、例１で用いたものと同じであった。これにより、脱保護段階において第三ブチルエーテル実質的に標記化合物のエピマー混合物である生成物を得て、付随して脱保護段階において第三ブチルエーテルを得た。
【００７７】
電子スプレー質量スペクトル，Ｍ＋Ｈ２３６（１００％）。
【００７８】
例７
Ｓ−［（Ｒ／Ｓ）−２−（１−イミノエチルアミノ，２−シクロプロピル）エチル］−Ｌ−システイン二塩酸塩、または
Ｓ−［（Ｒ／Ｓ）−２−（１−イミノエチルアミノ，２−シクロプロピル）エチル］−Ｌ−システイン二塩酸塩の合成
a)  （Ｒ，Ｒ／Ｓ）−第三ブチル−２Ｎ−第三ブトキシカルボニル−２−アミノ−５−シクロプロピル−６−ニトロ−４−チオヘキサノエート
保護したＬ−システインを、Hassner and Dehaen, J. Org. Chem., 55, 5505-5510 (1990)に記載の条件を用いてニトロメタン、ピペリジンおよびシクロプロパンカルボキシアルデヒドと反応させて、標記化合物を無色油状生成物として得た。
１Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）δＨ；０．４０および０．６８（それぞれ２Ｈ，ｍ，シクロプロピル−Ｈ），０．８９（１Ｈ，ｍ，シクロプロピル−Ｈ），１．４６および１．４８（それぞれ９Ｈ，ｓ，ＣＭｅ３），２．８１，３．００および３．１０（それぞれ１Ｈ，ｍ，３−Ｈ，５−Ｈ），４．４１（１Ｈ，ｂｒｍ，２−Ｈ），４．５８（２Ｈ，ｍ，６−Ｈ），５．３４（１Ｈ，ｂｒ，ＮＨ）。
【００７９】
b)  （Ｒ，Ｒ／Ｓ）−第三ブチル−２Ｎ−第三ブトキシカルボニル−２，６−ジアミノ−５−シクロプロピル−４−チオヘキサノエート
段階a)からの中間体のニトロ基を、Nagarajan and Ganem, J. Org. Chem., 51, 4856-4861 (1990)に記載の方法に準じてメタノール中で混合物塩化ニッケル／水素化ホウ素ナトリウムを用いて還元した。シリカゲル固相抽出の後、油状生成物を回収し、これを直接次の段階に用いた。
【００８０】
c)  （Ｒ，Ｒ／Ｓ）−第三ブチル−２Ｎ−第三ブトキシカルボニル−６Ｎ−（１−イミノエチル）−２，６−ジアミノ−５−シクロプロピル−４−チオヘキサノエートの合成
上記の還元段階b)からの生成物（４７mg，０．１３ミリモル）を、例１の段階c)に記載されているようにＳ−（１−ナフチルメチル）チオアセトイミデート塩酸塩（７２mg）と反応させ、粗製の白色フォーム状生成物を得た。
１Ｈ  ＮＭＲ（Ｄ２Ｏ）δＨ；０．０５および０．３４（それぞれ２Ｈ，ｍ，シクロプロピル−Ｈ），０．５９（１Ｈ，ｍ，シクロプロピル−Ｈ），１．０９および１．１２（それぞれ９Ｈ，ｓ，ＣＭｅ３），１．９２（３Ｈ，ｓ，Ｍｅ），２．０５（１Ｈ，ｍ，５−Ｈ），２．７０（２Ｈ，ｍ，３−Ｈ），３．２５（２Ｈ，ｍ，６−Ｈ），３．８９（１Ｈ，ｍ，２−Ｈ）。
電子スプレー質量スペクトル，Ｍ＋Ｈ４０２（５０％）。
【００８１】
d)  Ｓ−［（Ｒ／Ｓ）−２−（１−イミノエチルアミノ，２−シクロプロピル）エチル］−Ｌ−システイン二塩酸塩、または
Ｓ−［（Ｒ／Ｓ）−２−（１−イミノエチルアミノ，２−シクロプロピル）エチル］−Ｌ−システイン二塩酸塩の合成
（Ｒ，Ｒ／Ｓ）−第三ブチル−２Ｎ−第三ブトキシカルボニル−６Ｎ−（１−イミノエチル）−２，６−ジアミノ−５−シクロプロピル−４−チオヘキサノエートの脱保護を、ジオキサン中で４Ｎ  ＨＣｌを用いて行った。生成物であるＣ−５のエピマーの混合物を、水で溶出したＣ−１８固相抽出の後吸湿性のガラス状固形生成物として単離した。
１Ｈ  ＮＭＲ（Ｄ２Ｏ）δＨ；０．２９および０．５８（それぞれ２Ｈ，ｍ，シクロプロピル−Ｈ），０．８２（１Ｈ，ｍ，シクロプロピル−Ｈ），２．１４（３Ｈ，ｓ，Ｍｅ），２．３４（１Ｈ，ｍ，５−Ｈ），３．１２（２Ｈ，ｍ，３−Ｈ），３．４８（２Ｈ，ｍ，６−Ｈ），３．８９（１Ｈ，ｍ，２−Ｈ）。
電子スプレー質量スペクトル，Ｍ＋Ｈ２４６（１００％）。
【００８２】
生物学的活性
１．  単離したヒトｉＮＯＳの阻害
精製したヒトｉＮＯＳの阻害は、Charles et al.著の酵素学の方法(Methods in Enzymology), 1996, Vol. 268, 449-460の章「ヒト酸化窒素シンターゼアイソザイムの発現」に記載のヒトｉＮＯＳの調製を用いて測定することができる。活性は、分子生物学の方法(Methods in Molecular Biology), 1998, Vol. 100, 237-242, 酸化窒素プロトコール(Nitric Oxide Protocols), M.A. Titheradge監修, Humana Press, Totowa NJのR.G. Knowles and J. Dawson 著「ヒトＮＯＳアイソフォームのマイクロタイタープレート分析法(A Microtitreplate Assay of Human NOS Isoforms)を用いて観察することができる。
【００８３】
【表１】
0003839256.tif 000011
【００８４】
２．  ラット大動脈輪におけるｅＮＯＳおよびｉＮＯＳの阻害
ラット大動脈輪におけるインシテューでのｅＮＯＳおよびｉＮＯＳの阻害を、ＮＯシンターゼ阻害によって引起される輪緊張の増加を測定することによって評価した。基礎緊張（ｅＮＯＳを反映）の検討のため、完全な内皮を用いる胸大動脈の輪を以前に記載したようにして調製し(Rees et al. (1989) Br. J. Pharmol., 96, 418-424)、閾値濃度のフェニレフリンの存在下にて阻害剤について累積濃度曲線を得た（ＥＤ１０≒１０ｎＭ）。誘導した平滑筋緊張（ｉＮＯＳを反映）の検討については、内皮を剥いだ輪を以前に記載したように(Rees et al. (1990) Biochem. Biophys. Res. Commun., 173, 541-547)約ＥＤ９０のフェニレフリンの存在下にて６時間ＬＰＳ（S. typhosaから０．１μl/ml）に暴露した。この時間中に、ｉＮＯＳ誘導により、緊張が段階的に喪失した。次に、この阻害剤について、累積的濃度曲線を得た。
【００８５】
結果を、下表に示す
0003839256.tif 000012
【００８６】
３．  ラットの皮質スライスにおけるｎＮＯＳの発現
ラット脳スライスにおけるｎＮＯＳに対する化合物の効果をFurfine et al. (1994) J. Biol. Chem., 269, 26677-26683およびLizasoain et al. (1995) J. Neurochem., 64, 636-642およびLizasoain et al. (1995) J. Neurochem., 64, 636-642に記載の方法で測定した。
【００８７】
ＫＣｌ（５４ｍＭ）によって刺激されたＮＯ合成を、化合物または高ＫＣｌの非存在下で１時間予備インキュベーションした後、Mcllwainで切断した（０．２mm×０．２mm）ラット大脳皮質スライスで３７℃で２時間にわたる１４Ｃ−アルギニンから１４Ｃ−シトルリンへの転換によって測定した。
【００８８】
例１の化合物は、ＩＣ５０が＞８０μＭであり、ｉＮＯＳ対ｎＮＯＳについての選択性は約＞３００倍であった。
【００８９】
４．  ｉＮＯＳ阻害剤化合物の経口バイオアベイラビリティの測定法
動物試験：
ラット（時間点当たり３匹）に、試験化合物の水溶液を静脈内（１０mg/kg）および経口（５０mg/kg）投与した。血液試料を投与後時間間隔を置いて採取し、血漿を遠心分離によって調製した。試料は、分析を行うまで−２０℃で保存した。
【００９０】
血漿中の化合物の分析
血漿（５０μl）を除タンパクし、化合物を第四アンモニウム試薬で誘導体形成した。次に、試料をＨＰＬＣ系に注入し、化合物濃度を質量スペクトル分析検出法を用いて測定した。
【００９１】
薬物動態分析
上記の方法によって得た血漿濃度を薬物動態ソフトウエアパッケージ（ＰＫＣＡＬ  ｖ  １．２ｓ）に入れ、データーを非区画法(non-compartmental method)を用いて適合させた。化合物の経口バイオアベイラビリティを、経口プロフィールについてソフトウエアで算出した曲線下面積（ＡＵＣ）値を静脈内プロフィールについてのＡＵＣと比較することによって測定した。半減期は、静脈内プロフィールの境界相時点を適合することによって得た。
【００９２】
例１の化合物は、経口バイオアベイラビリティが＞９０％であり、半減期が２〜４時間であることが分かった。