(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
パラフィンもしくは他のコンパウンドにて包埋された固形試料または切断刃を固形試料の薄切厚さに対応する量だけ移動させる送り工程と、前記切断刃によって前記固形試料を薄切する薄切工程と、前記薄切片を顕微鏡観察用のスライドガラスに乗せる工程と、前記パラフィンもしくはコンパウンドを溶融させる脱パラフィン工程と、染色、封入を行う染色・封入工程とを施す組織観察用の薄切片試料を作製する方法において、
（ａ）前記薄切工程前に、次に薄切片となる固形試料面に脱パラフィン工程の際に用いる溶剤に溶融する材質の薄切補助部材を密着固定させる密着固定工程と、
（ｂ）この状態で薄切工程を行い、前記薄切補助部材に密着固定した薄切片を作製する工程と、
（ｃ）前記薄切片を前記顕微鏡観察用のスライドガラスに乗せた後、脱パラフィン工程と、染色・封入工程を施すことを特徴とする組織観察用薄切片試料作製方法。
【請求項２】
請求項１記載の組織観察用薄切片試料作製方法において、前記薄切補助部材は表面基材および粘着剤からなる粘着性のシートであることを特徴とする組織観察用薄切片試料作製方法。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は、理科学試料分析や生体試料の顕微鏡観察などの医療分析において用いられるミクロトーム（固形試料または切断刃を希望切断厚さに対応する量だけ移動させた後、切断刃によって固形試料を切断し、薄切片を作製する装置）を用いた組織観察用の薄切片試料作製方法に関するものである。
【０００２】
【従来の技術】
従来、組織観察用の薄切片試料作製工程において、固形試料の薄切作業はミクロトームを用いて作業者が行っている。固形試料には、主として生体試料をパラフィンや他のコンパウンドで包埋したものが用いられ、これを薄切し、薄切片を作製する。この薄切工程において重要かつ困難な作業に、薄切中および薄切工程終了後の薄切片のハンドリングがある。
【０００３】
図４は従来の組織観察用の薄切片試料作製工程図である。
以下、その組織観察用の薄切片試料作製方法について説明する。
（１）まず、図４（ａ）に示すように、送り工程が終了した後の薄切工程で切断刃１をＡの方向へ送り、固形試料２の薄切を開始する。
（２）次に、図４（ｂ）に示すように、作業者は片手で切断刃１を移動させながら、もう一方の手で、この時生成される薄切片４の切れ始めに、水分を含ませた非常に細い筆などの治具３（他に紙製の小さい短冊に水分を含ませたものや、先端を鋭利に削った木製の鉛筆状の治具などが使用される）の先端部を接触させる。
【０００４】
（３）次に、図４（ｃ）に示すように、そのまま切断刃１を移動させる速度と同じ速度で薄切片４に接触させた治具３を動かしながら薄切を終了させることにより、薄切終了時には一端が治具３に接触した状態の薄切片４を取り出すことができる。
そして、取り出した薄切片４をガラス製のスライドガラスに乗せる（一般的には取り出した薄切片の皺や縮みを伸ばす目的で、一度水面に浮かべた後、スライドガラスですくい取るのだが、どちらにしろ薄切片をある定まった場所へ移動させる工程が存在することに変わりはない）。
【０００５】
次に、薄切片４をスライドガラスに密着させる目的で、６０℃程度の温度に保たれた伸展器上に数時間放置する。そして、脱パラフィン・染色・封入工程を経て組織観察用の薄切片試料が出来上がる。
【０００６】
【発明が解決しようとする課題】
しかしながら、上記した従来の薄切片試料の作製工程においては、以下に挙げる問題点がある。
薄切工程において作業者は片手で切断刃を、もう一方の手で薄切片取り出し用の治具を同時に操作しなければならず、この状況下で非常に薄い切片の切れ始めの一定の場所に、これもまた小さな治具の先端を正確に接触させるには高度な技術、熟練度かつ集中力を必要とする。この時、治具先端の薄切片への押しつけ力が大きすぎると薄切片が破れたり、皺になったりするという不具合が生じる。
【０００７】
また、切断刃は固形試料の薄切を開始したら常に一定の速度で移動させなければならないため〔切断刃の移動速度（薄切速度）を変化させると薄切片の厚さむらや形状（皺、縮み）のバラツキの原因となる〕、この治具先端を薄切片の切り始めに接触させるという作業は、切断刃を停止させることなく行わなければならない。
【０００８】
仮に、薄切片の切れ始めに上手く治具の先端を接触させることに成功しても、両方の手の移動速度が同じでなければ薄切片が破れてしまう。
最後に、取り出した薄切片をスライドガラス上など他の場所に移動させる際も慎重に行わなければ、風や衝撃などにより、薄切片が破れる恐れがある。
これらの一連の高度な技術を身につけること、かつ連続したものでは数百枚にも及ぶ切り出し作業の間中、集中力を維持することは非常に困難である。
【０００９】
そして、前述したように、薄切工程で切り出された薄切片はスライドガラス上に伸展後、脱パラフィン・染色・封入の各工程を経なければならず、前述した薄切補助部材を使用した方法では、染色工程時に前記薄切補助部材が障害となり、染色液が十分に薄切片全体に行き渡らず、結果として染色むらや染色不十分などの不具合発生の原因となる。
【００１０】
本発明は、上記問題点を除去し、薄切の際に、薄切片に生じる皺、縮み、破れなどの不具合の発生を抑え、高度な技術を持った熟練者でなくても、容易に安定した品質の薄切片の切り出しを行うことができ、薄切片試料の作製効率の向上を図ることができる組織観察用薄切片試料作製方法を提供することを目的とする。
【００１１】
【課題を解決するための手段】
本発明は、上記目的を達成するために、
〔１〕パラフィンもしくは他のコンパウンドにて包埋された固形試料または切断刃を固形試料の薄切厚さに対応する量だけ移動させる送り工程と、前記切断刃によって前記固形試料を薄切する薄切工程と、前記薄切片を顕微鏡観察用のスライドガラスに乗せる工程と、前記パラフィンもしくはコンパウンドを溶融させる脱パラフィン工程と、染色、封入を行う染色・封入工程とを施す組織観察用の薄切片試料を作製する方法において、前記薄切工程前に、次に薄切片となる固形試料面に脱パラフィン工程の際に用いる溶剤に溶融する材質の薄切補助部材を密着固定させる密着固定工程と、この状態で薄切工程を行い、前記薄切補助部材に密着固定した薄切片を作製する工程と、前記薄切片を前記顕微鏡観察用のスライドガラスに乗せた後、脱パラフィン工程、染色・封入工程を施すようにしたものである。
【００１２】
〔２〕上記（１）記載の組織観察用の薄切片試料作製方法において、前記薄切補助部材は、表面基材および粘着剤からなる粘着性のシートである。
本発明によれば、上記のように構成したので、薄切の際に、薄切片に生じる皺、縮み、破れなどの不具合の発生を抑え、高度な技術を持った熟練者でなくても容易に安定した品質の薄切片の切り出しを行うことができる。
【００１３】
加えて切り出した薄切片をスライドガラスに乗せる際にも、薄切片が破損することがなくなり、薄切片作製作業を自動化する上でも効果的な方法となる。
また、薄切補助部材に、脱パラフィン工程時に使用するキシレン、アルコール、水のいずれかに溶融する材質のものを使用し、染色工程時に薄切補助部材が存在するために起こり得る不具合の発生を抑えることが可能となり、最終的には顕微鏡観察などに用いられる薄切片試料の作製効率の向上が期待できる。
【００１４】
【発明の実施の形態】
以下、本発明の実施の形態について図面を参照しながら詳細に説明する。
図１は本発明の実施例を示す組織観察用の薄切片試料作製の工程中、送り工程と薄切工程を示す図、図２はスライドガラス上に乗せた薄切補助部材に密着固定した薄切片を示す図（薄切補助部材に粘着性のシートを使用した例）、図３は脱パラフィン工程を示す図である。
【００１５】
従来のミクロトームは、送り工程のための移動軸および薄切工程のための移動軸を、固形試料１２側に取り付けるか、または切断刃１１側に取り付けるかという相違点はあるが、送り工程および薄切工程時の切断刃１１と固形試料１２の相対的な動きはどちらを移動させても同じなので、今回は送り工程では固形試料１２を薄切工程では切断刃１１を移動させることにしている。
【００１６】
まず、固形試料１２をＢの方向へ送り（送り工程：図示していないが、Ｂの方向のみに動作可能な案内面とアクチュエータを具備する）、その後、薄切補助部材１５を、次に薄切片となる固形試料面１６に密着固定させる。この際、図１中点線にて示す密着固定装置１７を用いると装置の自動化を図ることができる。ここでは、薄切補助部材１５の材質、構造および薄切補助部材１５を固形試料面１６に密着固定させる方法については省略する。
【００１７】
この方法としては、本願発明者等によって、特願平７−２５９０１１号「薄切片の作製方法およびそのための装置」、特願平８−９１１８６号「薄切片作業装置の薄切補助部材の貼り付け方法及びその装置」、特願平８−９１１８７号「薄切片の作製方法およびそのための装置」、特願平８−２２６２２９号「薄切片作業装置及びその薄切補助部材の電極への電圧印加方法」に既に提案されている。
【００１８】
なお、前述した送り工程と薄切補助部材１５の固形試料面１６への密着固定工程の順序は逆になっても差し支えない。
次に、切断刃１１をＡの方向へ送る（薄切工程：送り工程と同様、Ａの方向のみに動作可能な案内面とアクチュエータを具備する）ことにより、固形試料１２を薄切し、薄切補助部材１５に密着固定した薄切片を取り出すことができる。
【００１９】
次に、薄切補助部材として粘着性シートを用いた場合を例に挙げて説明する。
図２（ａ）は、前記薄切補助部材１５に密着固定した薄切片１４をスライドガラス１８に乗せた状態を示す。図２（ｂ）〔図２（ａ）のＣ−Ｃ線断面図〕に示すように、薄切補助部材１５は表面基材１５Ａと粘着剤１５Ｂで構成され、薄切片１４をスライドガラス１８側にした状態でスライドガラス１８上に乗せる。この際、図２（ｃ）に示すように、従来の技術の項で述べたように、水２１を塗布したスライドガラス１８上に薄切補助部材１５と密着固定した薄切片１４を乗せると、次に行う伸展工程で薄切片１４とスライドガラス１８を強固に密着することができる。
【００２０】
次に、伸展工程を終えた薄切片試料は、染色を施す前にパラフィンを取り除く脱パラフィン工程へと移る。
ここでは、脱パラフィン工程時に用いられる液体（有機溶媒、水、薬品等）の詳細種類及び浸けておく時間等は省略するが、図３（ａ）では一般的な脱パラフィン工程時に用いられるキシレン２２，アルコール２３，水２４の入った槽３１，３２，３３に、スライドガラス１８と密着固定した薄切片１４が順次浸され、脱パラフィンが進められていることを示している。そして、この脱パラフィン工程に用いられる液体に、薄切補助部材〔図２（ｂ）に示す例では表面基材１５Ａと粘着剤１５Ｂに相当）が溶融し、脱パラフィン工程終了時には図３（ｂ）に示すように、薄切片１４のみがスライドガラス１８に密着固定した状態となる。なお、図３（ｃ）は図３（ｂ）のＤ−Ｄ線断面図である。
【００２１】
その後、希望する染色液で染色を行う染色工程、封入剤を滴下した後カバーガラスをかぶせる封入工程を経て、組織観察用の薄切片試料が出来上がるのだが、ここでは染色工程と封入工程の詳細説明は省略する。
また、薄切前の生体試料は前述したようにパラフィンで包埋されたものや、水溶性のコンパウンドで包埋されたもの（主として凍結）に大別される。染色工程前の脱パラフィン工程時において、パラフィン包埋された前者の場合は一般的にキシレン、アルコール、水を使用し、水溶性のコンパウンド包埋された後者の場合は水（場合によってはアルコールも）を使用する。
【００２２】
どちらの場合も水を使用するため、薄切補助部材が水に溶融するものであれば、どちらにも適用が可能であるが、キシレンに溶融する薄切補助部材を使用した場合、水溶性コンパンウンドには不適である。しかし、顕微鏡組織観察を行うための生体試料は、パラフィン包埋されている場合が多いため、使用する薄切補助部材材にはキシレンに溶融する材質のものでも十分効果的である。
【００２３】
また、本発明は上記実施例に限定されるものではなく、本発明の趣旨に基づいて種々の変形が可能であり、これらを本発明の範囲から排除するものではない。
【００２４】
【発明の効果】
以上、詳細に説明したように、本発明によれば、以下のような効果を奏することができる。
（Ａ）切断工程の前に、次に薄切片となる固形試料面に薄いシート状部材を接着し、その後切断することにより、切断の際に薄切片に生じる皺、縮み、破れなどの不具合の発生を抑え、高度な技術を持った熟練者でなくても、容易に安定した品質の薄切片の切り出しを行うことが可能である。
【００２５】
（Ｂ）両手を同時に使う必要がなくなる上に、切断された薄切片は切断工程前に接着したシート状部材と一体になっているため、破れ難く、非常に取り扱い易い。これは薄切片作製作業を自動化するうえでも効果的な方法となる。
（Ｃ）薄切補助部材に脱パラフィン工程時に使用するキシレン、アルコール、水のいずれかに溶融する材質のものを使用しているため、薄切補助部材は脱パラフィン工程時に溶解してしまうため、染色工程で、薄切補助部材が存在するために起こり得る不具合の発生を抑えることが可能となり、最終的には顕微鏡観察などに用いられる薄切片試料の作製効率の向上を図ることができる。
【図面の簡単な説明】
【図１】本発明の実施例を示す組織観察用の薄切片試料作製の工程中、送り工程と薄切工程を示す図である。
【図２】本発明の実施例を示すスライドガラス上に乗せた薄切補助部材に密着固定した薄切片を示す図である。
【図３】本発明の実施例を示す脱パラフィン工程を示す図である。
【図４】従来の組織観察用の薄切片試料作製工程図である。
【符号の説明】
１１    切断刃
１２    固形試料
１４    薄切片
１５    薄切補助部材
１５Ａ    表面基材
１５Ｂ    粘着剤
１６    固形試料面
１７    密着固定装置
１８    スライドガラス
２１，２４    水
２２    キシレン
２３    アルコール
３１，３２，３３    槽
【図１】
0003801697.tif 000002
【図２】
0003801697.tif 000003
【図３】
0003801697.tif 000004
【図４】
0003801697.tif 000005