(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
下記1)〜4)を満たし、50℃で２週間保存した後に、胞子の残存率が12.2％以上であることを特徴とする有胞子乳酸菌を含有する液剤。
1)バチルス コアグランス（Bacillus coagulans) の胞子を 1.0×103 個／ml以上を含むこと
2)浸透圧が0.699〜1.5 Osmol ／kgの範囲に入ること
3)ｐＨが2.7 〜4.5 の範囲にあること
4)還元麦芽糖水飴及び／又はショ糖を含むこと
【請求項２】
糖アルコールを含むことを特徴とする請求項１記載の液剤。
【請求項３】
抗酸化剤を含むことを特徴とする請求項１又は２記載の液剤。
【請求項４】
発酵乳を含むことを特徴とする請求項１〜３の何れか１項記載の液剤。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は有胞子乳酸菌を含有する液剤に関する。
【０００２】
【従来の技術及び発明が解決しようとする課題】
最近、“体質改善をねらった健康指向の食品”、特に腸の環境改善効果を目指した商品への要望が高まってきている。例えば、ある種の乳酸菌又はビフィズス菌は継続的飲用すると腸内菌叢を改善するので、それにより健康を増進する研究が活発化している。しかし、乳酸菌は一般に寿命が短く、特に乾燥条件下ではその生存率は極めて低い。また健康増進効果を得るには、胃液及び胆汁酸による影響をのがれて腸管に達する必要性がある。そこで多くのメーカーは、耐酸性乳酸菌の利用、腸溶性カプセルを用いた導入方法を採用しはじめている。
一方、有胞子乳酸菌〔バチルス  コアグランス（Bacillus coagulans) 〕は、一般的な乳酸菌と異なり、一定の条件下で乾燥にも熱や酸にも非常に強く、腸内で発芽して活発に増殖する特性を有し、各種食品へ応用されている。
しかし、有胞子乳酸菌は、胞子が発芽せずに成熟胞子のままでいてこそ、耐熱性等に優れるものであり、一旦発芽し発芽胞子（発芽胞子は更に栄養細胞へと変化する）となると、耐熱性、耐薬品性等が失われる。
そこで、有胞子乳酸菌の安定化（胞子を発芽させずに成熟胞子のまま維持すること）について種々検討された結果、粉末の状態では極めて安定で、１年以上にわたり一定の菌数を保持することが知られている。しかし、水系で安定に保持する方法は未だ提案されてない。
即ち、有胞子乳酸菌は生理食塩水や糖水溶液に保存しても、経時的に死滅菌数が増加し、各種飲料等への応用ができない。
更に、有胞子乳酸菌の胞子を液剤に配合する場合、胞子の安定性の低さが食品や医薬品の商品設計上大きな問題点であった。例えば、低ｐＨの条件下では、胞子発芽後、栄養細胞に発育し、その後死滅する問題があった。
【０００３】
【課題を解決するための手段】
本発明者らは上記課題を解決すべく鋭意検討した結果、低ｐＨ条件下で液剤の浸透圧を制御することにより、液剤中で胞子の発芽を抑制し、胞子の形態を安定に保持する技術を見出し、本発明を完成した。
即ち、本発明は、
下記1)〜4)を満たし、50℃で２週間保存した後に、胞子の残存率が12.2％以上であることを特徴とする有胞子乳酸菌を含有する液剤である。
1)バチルス コアグランス（Bacillus coagulans) の胞子を 1.0×103 個／ml以上を含むこと
2)浸透圧が0.699〜1.5 Osmol ／kgの範囲に入ること
3)ｐＨが2.7 〜4.5 の範囲にあること
4)還元麦芽糖水飴及び／又はショ糖を含むこと
【０００４】
【発明の実施の形態】
以下、本発明について詳細に説明する。
胞子の発芽は、胞子表面から水が侵入した際に、溶解しているカルシウムイオン、マグネシウムイオンなどの２価金属イオンにより誘発される（細菌の解剖：水島昭二、三浦謹一郎著、講談社サイエンティフィック出版、１９７９年）。本発明者らは、胞子の周りの浸透圧を上げる、すなわち胞子の表面にかかる圧力を上げることにより、外からの水の進入を少なくし発芽を抑制する方法を見出した。浸透圧とは、厳密には希薄溶液で取り扱うことのできる定義である。溶質濃度が高い液剤の場合、一見、浸透圧を適用することが困難であると考えられるが、本発明者らは浸透圧と有胞子乳酸菌の胞子残存率の間には正の相関関係があることを知見した。浸透圧は、水に溶解する分子（溶質）の数に比例することから、溶質の量が多いと浸透圧は高い関係が生じる。
液剤の浸透圧を上げるには、塩類、糖類などの水可溶性成分を添加すれば良い。塩類としては、ナトリウム、カリウム、マグネシウム、カルシウムなどの金属を含む塩類、乳性ミネラル、有機酸塩類などが挙げられる。糖類としては、グルコースなどの単糖、ショ糖などの二糖、オリゴ糖、多糖類、糖アルコール類が挙げられる。また、蛋白質、アミノ酸、ペプチドなども用い得る。
上記オリゴ糖としては、フラクトオリゴ糖、イソマルトオリゴ糖、キシロオリゴ糖、乳果オリゴ糖などを用い得る。
糖アルコールとしては、エリスリトール、キシリトール、マルチトール、ソルビトールなどが挙げられる。糖アルコールは、バチルス・コアグランスにより資化されず、保存時の発芽抑制効果があり、好適である。
【０００５】
本発明において、浸透圧は、フォーゲル社（独）の氷点降下法を利用した浸透圧計（機種名  ＯＭ８０２）で測定した。
本発明においては、液剤の浸透圧は0.3 〜1.5 Osmol ／kgの範囲に入ることが必要であり、好ましくは0.4 〜1.0 Osmol ／kgの範囲である。0.3 Osmol ／kg以上であれば、胞子の安定性が向上する。しかし、1.5 Osmol ／kgを越えると液剤としての味のバランスを失い、商品の価値が失われる。
【０００６】
また、本発明では、液剤のｐＨは2.7 〜4.5 の範囲が必要であり、好ましくは3.2 〜4.0 、特に好ましくは3.3 〜3.8 の範囲である。ｐＨが上記範囲内にあれば、胞子の発芽が比較的起こりにくく、また高温殺菌を要しないので、風味の良い液剤が得られる。
【０００７】
本発明の液剤は、液状の食品および医薬品に適用できる。例えば、食品では乳酸菌飲料、清涼飲料、ゼリー状飲料、スープ類、プリンやゼリーなどのデザート類、ポーション類、果汁、野菜ジュース、アイスクリーム、乳化食品などが挙げられる。医薬品では、一般的にドリンク剤として表現される液剤、シロップ剤、ドライシロップ剤、乳剤、エキス剤、煎剤などに用いられる。但し、液状の形態であればこれに記載される限りではない。
【０００８】
上記食品および医薬品の流通は、冷凍、チルド、常温の３つのタイプに限られ、飲料の保存はこれらの温度に対応することが望まれる。本品は、有胞子乳酸菌を含むため、凍結すると死滅する恐れがある。このため、保存はチルドおよび常温が好ましい。しかし、チルドでの流通および保存の場合は、輸送や保存に関るランニングコストが多大となることから、工業的有用性を考慮して、常温での保存が好ましい。
【０００９】
本発明において、例えば１本１リットルの液剤を想定した場合、液剤中に 1.0×103 個／mlの濃度になるようにBacillus Coagulanse の胞子を配合すると、正味胞子数は 1.0×106 個／本となる。この量を含むことにより、腸の環境改善効果が得られる。好ましくは、 1.0×104 〜 1.0×108 個／ml、特に好ましくは 1.0×105 〜 1.0×107 個／mlの濃度で配合する。
本発明の液剤は、50℃で２週間保存した後の胞子残存率が１％以上である。
本発明において、胞子残存率は以下のように測定した。
飲料のベース配合を85℃に30分間さらし、殺菌した。これに、予め85℃で10分間加熱処理した有胞子乳酸菌胞子懸濁液を無菌状態下で 1.0×103 個／ml以上になるように添加した。これを50℃の恒温室で保存し、２週間後の残存率を測定した。即ち、２週間後に0.5ml ずつサンプリングし、4.5ml の滅菌した50mMリン酸バッファー（ｐＨ７）で希釈後、80℃で30分加熱後冷却し、ＢＣＰ寒天培地（日水製薬（株））に塗沫し、50℃で２日培養後、生じたコロニー数より胞子の残存率を求めた。
50℃で２週間の保存は加速試験であり、常温で保存した場合の約１年４ヶ月に相当する。常温で６ヶ月間保存した後の胞子残存率は、１％以上であることが好ましく、特に10％以上、より好ましくは50％以上である。
【００１０】
本発明において、有胞子乳酸菌は市販品だけでなく、自然界より新たに単離されたもの、または市販品より選抜育種または変異育種したものも使用できる。
【００１１】
本発明の液剤には、保存中に起こる成分の酸化劣化を抑制する目的で、抗酸化剤を添加できる。中でも、ビタミンＥ、β−カロチンなどの脂溶性の抗酸化剤は、胞子安定化合効果を有し好適である。
【００１２】
また、本発明の液剤には、風味向上から醗酵乳の添加が望ましい。醗酵乳は、脱脂粉乳、全脂粉乳、生乳、乳蛋白質の中の１種及び２種以上を含む原料をラクトバチルス属および／又はビフィズス属を用いて醗酵させて調製する。醗酵乳は、殺菌醗酵乳、生菌を含む醗酵乳、メイラード反応生成物を含む醗酵乳（褐変醗酵乳）等のタイプがあるが、中でも、殺菌醗酵乳の使用が好ましい。また、乳清成分を原料にした醗酵液や醗酵エキスも用い得る。
【００１３】
本発明の液剤には、その他、香料、ヨーグルトフレーバー、果実系フレーバー、安定化剤、ペクチンなどの多糖類なども添加できる。
【００１４】
【実施例】
以下、実施例により本発明を更に具体的に説明する。
実施例１〜７、比較例１〜２
表１に示す処方の液剤に、ラクリス（三共（株）製、登録商標）粉末より単離した有胞子乳酸菌を表１に示す量添加した。そのｐＨ（乳酸、クエン酸で調整）と浸透圧を表１に併せて示す。
この液剤について、前記方法により、50℃で２週間保存した後の胞子の残存率を測定した結果も表１に併せて示す。
実施例８、比較例３〜４
表２に示す処方の液剤を用いた以外は前記実施例と同様に試験を行った。結果を表２に示す。
【００１５】
【表１】
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【００１６】
【表２】
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