(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
蛍光色素で標識された検体に励起光を照射し、該励起光の照射により前記検体から発生した蛍光を平行光束とし、該平行光束の中央部の光束を遮光部材で遮光して、該平行光束の周辺部のみを直進させた後ピンホールに集光し、該ピンホールを通過した前記蛍光を検出することを特徴とする光計測方法。
【請求項２】
蛍光色素で標識された検体等に励起光を照射する照射手段と、該励起光の照射により前記検体から発生した蛍光を平行光束とする第１の光学部材と、該平行光束の中央部の光束を遮光部材で遮光して、該平行光束の周辺部のみを直進させる手段と、前記平行光束の周辺部を集光する第２の光学部材と、該集光された前記光束の集光点に配設されたピンホールと、該ピンホールを通過した前記蛍光を検出する検出器とを備えたことを特徴とする光計測装置。
【請求項３】
前記平行光束の周辺部のみを直進させる手段が、前記第２の光学部材と一体になっているものであることを特徴とする請求項２記載の光計測装置。
【請求項４】
前記平行光束の周辺部のみを直進させる手段が、交換可能であることを特徴とする請求項２または３記載の光計測装置。
【請求項５】
蛍光色素で標識された検体に励起光を照射し、該励起光の照射により前記検体から発生した蛍光を平行光束とし、該平行光束の中央部の光束を分散させて、該平行光束の周辺部のみを直進させた後ピンホールに集光し、該ピンホールを通過した前記蛍光を検出することを特徴とする光計測方法。
【請求項６】
蛍光色素で標識された検体等に励起光を照射する照射手段と、該励起光の照射により前記検体から発生した蛍光を平行光束とする第１の光学部材と、該平行光束の中央部の光束を分散させて、該平行光束の周辺部のみを直進させる手段と、前記平行光束の周辺部を集光する第２の光学部材と、該集光された前記光束の集光点に配設されたピンホールと、該ピンホールを通過した前記蛍光を検出する検出器とを備えたことを特徴とする光計測装置。
【請求項７】
前記平行光束の周辺部のみを直進させる手段が、前記平行光束の中央部の光束を分散させる光学部材であることを特徴とする請求項６記載の光計測装置。
【請求項８】
前記平行光束の周辺部のみを直進させる手段が、前記第２の光学部材と一体になっているものであることを特徴とする請求項６または７記載の光計測装置。
【請求項９】
前記平行光束の周辺部のみを直進させる手段が、交換可能であることを特徴とする請求項６から８のいずれか１項記載の光計測装置。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は、光計測方法および装置に関し、詳細には励起光の照射により、蛍光色素で標識された検体等から発生する蛍光を検出する光計測方法および装置に関するものである。
【０００２】
【従来の技術】
近年、遺伝子工学分野における技術が急速に発展し、１０万個にも及ぶと考えられているヒトゲノムの塩基配列を解読することを１つの目的とするヒトゲノムプロジェクトが展開されている。
【０００３】
一方、各種遺伝子疾患に影響を与えているＤＮＡに関する研究も進んでおり、その１つの方法としてマイクロアレイ技術が注目されている。
【０００４】
このマイクロアレイ技術は、既に解読されている多数の異なるｃＤＮＡ（特異的結合物質の一例）を基板となるスライドガラス上の１．８×１．８（ｃｍ）の範囲にドットサイズ５０〜１５０（μｍ）のスポットとして約６４００個並べたマイクロアレイと称するもの、またはｃＤＮＡをナイロンメンブレンフィルタ上の８×１２（ｃｍ）、７×５（ｃｍ）または２２×２２（ｃｍ）の範囲にドットサイズ約０．５〜１（ｍｍ）のスポットとしてそれぞれ５８８個、５０００個、２７０００個並べたマクロアレイと称するもの、あるいは合成オリゴヌクレオチドをシリコン基板上の１．２８×１．２８（ｃｍ）の範囲にドットサイズ５０（μｍ）のスポットとして約６４０００個並べたＤＮＡチップと称するもの等を用いた技術である（上記マイクロアレイ、マクロアレイおよびＤＮＡチップ等を相称して本件では「ＤＮＡアレイ」と称することとする。）。
【０００５】
すなわち、蛍光色素ａで標識された健常者の細胞から取り出したＤＮＡの検体Ａをピペット等でこのＤＮＡアレイ上の各ｃＤＮＡに滴下して、検体ＡとｃＤＮＡとをハイブリダイズさせる。このハイブリタイズの処理の後にＤＮＡアレイは所定の溶液で処理され、ｃＤＮＡとハイブリタイズされなかった検体Ａは各スポットから除去され、ｃＤＮＡとハイブリタイズされた検体Ａは各スポットに残される。そして、上記処理が施されたＤＮＡアレイ上の各検体のスポット（以後検体スポットと呼ぶ）に、蛍光色素ａを励起する励起光Ｌａを相対的に走査して、この励起光Ｌａの照射により発生した蛍光の検出結果を表す標識信号を得る。
【０００６】
上記と同様の処理を、蛍光色素ｂで標識された遺伝子疾患を有する者の細胞から取り出したＤＮＡの検体Ｂに関しても行い、励起光Ｌｂの照射により発生した蛍光の検出結果を表す標識信号を得、各検体スポット毎に検体Ａの各検体スポットから得られた標識信号と検体Ｂの各検体スポットから得られた標識信号との比の値を求める。
【０００７】
これらの標識信号の比の値は、異常のあるＤＮＡが滴下された検体スポットほど大きくなる（あるいは小さくなる）ことから、各検体スポットにおける標識信号の比の値が大きい方から順に例えば５０箇所分の標識信号の比の値を、その信号が得られた検体スポットと対応付ける表として読み取り、この表に基づいて異常のあるＤＮＡが特定される。
【０００８】
なお、担体上の各検体スポットから発せられる蛍光を検出する光学系には空間分解能が高く焦点深度が浅い共焦点光学系が多く用いられているので、共焦点光学系の焦点位置に一致させたＤＮＡアレイ上の検体スポットへの励起光の照射により検体スポットから発せられた蛍光を前記共焦点光学系の他方の焦点位置に配設されたピンホールを通過させて検出することにより、上記検体スポット以外の位置で発生した蛍光等のノイズを除去することができる。
【０００９】
【発明が解決しようとする課題】
しかしながら、ＤＮＡアレイ上の各検体スポットの厚さは１ミクロン以下と非常に薄く、励起光が照射されると検体スポットのみならず、検体スポットと密着してこの検体スポットを保持している担体にも強い励起光が照射され、この励起光が照射された担体を形成する成分からも蛍光が発生することがある。この、測定対象ではない担体から発生した蛍光は、検体スポットから発生する蛍光の光路とほぼ等しい光路を進むので、ピンホールによっても十分に除くことができず、検出スポットから発生した蛍光と共に検出器に入射し検出されてしまうことになる。
【００１０】
すなわち、本来の測定対象である検体スポットから発生した蛍光に、担体から発生した測定対象ではない蛍光が混入し、多くのノイズを含む蛍光となり、このノイズを多く含む蛍光が検出されると、各検体スポットから発生する蛍光の強度を高い精度で検出することが困難になる。
【００１１】
なお、この種の課題はＤＮＡアレイの技術に限らず、励起光が照射された検出対象となる被検物（以下総称して検体という）の１点から発せられる蛍光のみを測定対象とする他の光計測装置にも共通する課題である。
【００１２】
本発明は、上記の事情に鑑みてなされたものであり、測定対象となる検体以外から発生した蛍光の検出器への入射を低減し、検出される蛍光のＳ／Ｎ比を高めることにより、信頼性の高い計測結果を得ることができる光計測方法および装置を提供することを目的とするものである。
【００１３】
【課題を解決するための手段】
本発明の光計測方法は、蛍光色素で標識された検体等に励起光を照射し、この励起光の照射により検体等から発生した蛍光を平行光束とし、この平行光束の中央部の光束を遮光部材で遮光して、平行光束の周辺部のみを直進させた後ピンホールに集光し、ピンホールを通過した蛍光を検出することを特徴とするものである。
本発明の他の光計測方法は、蛍光色素で標識された検体等に励起光を照射し、この励起光の照射により検体等から発生した蛍光を平行光束とし、この平行光束の中央部の光束を分散させて、平行光束の周辺部のみを直進させた後ピンホールに集光し、ピンホールを通過した蛍光を検出することを特徴とするものである。
【００１４】
本発明の光計測装置は、蛍光色素で標識された検体等に励起光を照射する照射手段と、該励起光の照射により前記検体から発生した蛍光を平行光束とする第１の光学部材と、該平行光束の中央部の光束を遮光部材で遮光して、該平行光束の周辺部のみを直進させる手段と、前記平行光束の周辺部を集光する第２の光学部材と、該集光された前記光束の集光点に配設されたピンホールと、該ピンホールを通過した前記蛍光を検出する検出器とを備えたことを特徴とするものである。
前記平行光束の周辺部のみを直進させる手段は、第２の光学部材と一体化したり交換可能としたりすることができる。
本発明の他の光計測装置は、蛍光色素で標識された検体等に励起光を照射する照射手段と、該励起光の照射により前記検体から発生した蛍光を平行光束とする第１の光学部材と、該平行光束の中央部の光束を分散させて、該平行光束の周辺部のみを直進させる手段と、前記平行光束の周辺部を集光する第２の光学部材と、該集光された前記光束の集光点に配設されたピンホールと、該ピンホールを通過した前記蛍光を検出する検出器とを備えたことを特徴とするものである。
前記平行光束の周辺部のみを直進させる手段は、平行光束の中央部の光束を分散させる凸レンズまたは凹レンズ、あるいは光拡散板等の光学部材とすることができ、さらにこれらの手段は、第２の光学部材と一体化したり交換可能としたりすることができる。
【００１５】
【発明の効果】
本発明の光計測方法および装置によれば、励起光の照射により、担体に付着させた検体スポットから発生した蛍光を第１の光学部材により平行光束とし、この平行光束の中央部の光束を屈折または分散させて平行光束の光路から除き、周辺部の光束のみを第２の光学部材に入射させ集光させてピンホールを通過させることにより蛍光を検出するので、検体スポットの前後に配された担体等から発生する測定対象外の蛍光がノイズとして検出される割合を少なくすることができる。
【００１６】
すなわち、上記ピンホールの径が理想的に極めて小さければこのピンホールを通過することができる光束は、検体スポットから発光し、光軸に平行に進み第２の光学部材の焦点位置に配されたピンホールに収束する光だけであるからノイズはないが、実際のピンホールには製作上の機械的誤差および組み立て上の位置決め誤差等があるので、極端にピンホール径を小さくすると、検体スポットから発生する測定対象となる蛍光もピンホールによってカットされてしまう。ところが、ピンホールＰｈの前後に収束する光束の中で、担体から発生する光は入射角度が浅い光束（光軸と成す角度が小さい光束）なので、第１と第２の光学部材との間に光束の中央部を遮光する手段を配設すれば、主に上記入射角度が浅い光を遮光できるので、検体スポットから発生しピンホールＰｈを通過する蛍光の強度の減少に比して、担体から発生しピンホールＰｈを通過する、入射角度が浅い、測定対象外の蛍光の強度が大きく減少し、検出される蛍光の強度に占める検体スポットから発生する蛍光の割合が相対的に大きくなる。従って、本来の測定対象である検体スポットから発生する蛍光を高Ｓ／Ｎ比で検出することができる。
【００１７】
【発明の実施の形態】
以下、本発明の光計測方法を実施する光計測装置を適用したＤＮＡアレイ読取装置の具体的な実施の形態について図を参照して説明する。
【００１８】
図１は、本発明の実施の形態であるＤＮＡアレイ読取装置を示す斜視図、図２は図１に示したＤＮＡアレイ読取装置による読取対象となるＤＮＡアレイ試験片１０の斜視図、図３は図２のＩ−Ｉ位置における断面図である。
【００１９】
ＤＮＡアレイ試験片１０は、スライドガラスからなる坦体１１の表面Ｂａに、複数の既知のｃＤＮＡ（特異的結合物質の一例）と蛍光色素で標識されたＤＮＡとをハイブリタイズさせ、所定の溶液で処理された検体スポット（以下検体スポットＫｓｐと呼ぶ）をマトリクス状に配置したものであり、坦体１１の厚さは１ｍｍ程度であり、坦体１１上に配置される検体スポットＫｓｐの厚さは１μｍ以下、スポット径は３０〜１００μｍ、各スポットの間隔は３００μｍ程度となっている。
【００２０】
ＤＮＡアレイ読取装置１００は、図１に示すようにレーザ光源４０から発せられた励起光Ｌｅをダイクロイックミラー５４により反射させてＤＮＡアレイ試験片１０に配された検体スポットに第１集光レンズ５１を通して照射し、該励起光の照射により検体スポットから発生した蛍光Ｋｅを、共焦点光学系を形成する第１集光レンズ５１および第２集光レンズ５２を介して検出器７０に入射させ検出する構成となっている。
【００２１】
ＤＮＡアレイ試験片１０の下方に配置された共焦点光学系の光軸上には第１集光レンズ５１、ダイクロイックミラー５４、中央部に光を遮光する領域を備えた中央光束遮光板６０、第２集光レンズ５２、ピンホール板５３およびフォトマルチプライヤからなる検出器７０がこの順に配設され、第２集光レンズ５２側の焦点にはピンホール板５３のピンホールＰｈが、また第１集光レンズ５１側の焦点にはＤＮＡアレイ試験片１０上の検体スポットＫｓｐが一致するように配置されており、さらにピンホールＰｈを通過した蛍光を受光する位置に検出器７０が配置されている。
【００２２】
なお、中央光束遮光板６０は、図４（ａ）の平面図、および図４（ｂ）の側面図に示されるように平板ガラス６１の中央部に黒アルマイト処理をした円盤６２を接着したものであり、第１集光レンズ５１と第２集光レンズ５２との間に配設され、第１集光レンズ５１から第２集光レンズ５２に向う光束の中央部を遮光し周辺部の光束のみを通過させる。また、上記ダイクロイックミラー５４は検体から発せられる蛍光Ｋｅを透過させ励起光Ｌｅを反射させる波長特性を備えている。
【００２３】
検体スポットＫｓｐを励起させる波長領域の励起光Ｌｅを平行光束として射出するレーザ光源４０は、この射出された平行光束が、ダイクロイックミラー５４によって検体スポット側に反射され共焦点光学系の光軸に同軸となるように配設されている。
【００２４】
ＤＮＡアレイ試験片１０が載置されるステージ３０には、ステージ３０をＸ−Ｙの方向（図１参照）に２次元状に可動させるステッピングモータ２１、２２が配設され、これらのステッピングモータ２１、２２には共焦点光学系を形成する第１集光レンズ５１側の焦点に検体スポットＫｓｐを順次移送するように各所定の位置を入力する座標コントローラ８０が接続されている。
【００２５】
ここで、座標コントローラ８０により第１および第２のステッピングモータ２１，２２に対して入力される所定の位置とは、ＤＮＡアレイ試験片１０におけるマトリクス状の全ての検体スポットＫｓｐの位置を意味する。
【００２６】
次にＤＮＡアレイ読取装置の作用について説明する。まず始めにＤＮＡアレイ試験片１０が、ステージ３０上の決められた位置に載置される。このとき、ＤＮＡアレイ試験片１０上の検体スポットの各位置を、ステージ３０上のＸ軸方向およびＹ軸方向の座標に対応付けるように各検体スポットの位置の座標を座標コントローラ８０に記憶させる。各ステッピングモータ２１，２２は、座標コントローラ８０に記憶された座標に基づいて、ＤＮＡアレイ試験片１０上の最初の検体スポットＫｓｐ（１，１）の位置に励起光Ｌｅが照射されるように、ステージ３０をＸ−Ｙ平面内に移動させ位置決めする。
【００２７】
ステージ３０のセッティングが完了すると励起光Ｌｅがレーザ光源４０から射出され、ダイクロイックミラー５４により反射され第１集光レンズ５１によって検体スポットＫｓｐ（１，１）上に集光され、励起光Ｌｅが照射された検体スポットＫｓｐ（１，１）から発生した蛍光Ｋｅは、第１集光レンズ５１によって平行光束とされダイクロイックミラー５４を透過する（このとき蛍光Ｋｅに混入する励起光Ｌｅはダイクロイックミラー５４によって反射され検出器に向かう光路から除去される）。ダイクロイックミラー５４を透過した平行光束は中央光束遮光板６０によって中央部の光束が遮光され周辺部の光束のみが第２集光レンズ５２によって集光されピンホールＰｈを通過して検出器７０に入射し、検出器７０によってその強度が検出され外部の処理装置２００に出力される。
【００２８】
外部の処理装置２００には、座標コントローラ８０から出力された検体スポットＫｓｐ（１，１）の位置と検出器７０から出力された蛍光の強度値とが入力され対応づけられて記憶される。
【００２９】
ここで、中央光束遮光板に関する作用の詳細を説明する。図５（ａ）〜（ｃ）に示すようにＤＮＡアレイ読取装置の光学系を簡略化し、共焦点光学系９０を第１集光レンズ９１と第２集光レンズ９２によって形成する。この共焦点光学系の光軸をＺ軸とし、第１集光レンズ９１側の焦点位置をＺｐおよび第２集光レンズ９２側の焦点位置をＺｑとしてピンホールＰｈ１をＺｑの位置に一致させるようにピンホール板９３を配設する。
【００３０】
図５（ｂ）に示すようにＺｐに点光源Ｔｇを配置すると、点光源Ｔｇから発せられる光Ｌｉは第１集光レンズ９１によって平行光束とされ、この平行光束は集光Ｎ１レンズによってピンホールＰｈ１に集光されてピンホールＰｈ１を通過する。
【００３１】
次に点光源ＴｇをＺ軸に沿って点Ｚｐの位置から−の方向のに移動し図５（ａ）に示すようにＺｐ-1の位置に移動すると、点光源Ｔｇから発せられた光Ｌｉは集光Ｍ１レンズによって平行光束とはならずに収束する光束となり第２集光レンズ９２によってピンホールＰｈ１のＺ軸方向マイナス側の点Ｚｑ-1に集光されピンホールＰｈ１を通過する。このとき点Ｚｑ-1に集光される光Ｌｉの中で入射角度が浅い光束（光軸と成す角度が小さい光束）のみが選択的にピンホールＰｈ１を通過するので、点Ｚｐ-1から発生し第１集光レンズ９１および第２集光レンズ９２を経由してピンホールＰｈ１通過する光束の径は細くなり、開口角も小さくなる。
【００３２】
また反対に、点光源ＴｇをＺ軸に沿ってＺｐの位置から＋の方向に移動し、図５（ｃ）に示すようにＺｐ+1の位置に移動すると、点光源Ｔｇから発せられた光Ｌｉは集光Ｍ１レンズによって発散する光束となり集光Ｎ１レンズによってピンホールＰｈ１のＺ軸方向プラス側の点Ｚｑ+1に集光される。このとき上記と同様に点Ｚｑ+1に集光される光Ｌｉの中で入射角度が浅い光束（光軸と成す角度が小さい光束）のみが選択的にピンホールＰｈ１を通過するので、点Ｚｐ+1から発生し第１集光レンズ９１および第２集光レンズ９２を経由してピンホールＰｈ１を通過する光束の径は細くなり、開口角も小さくなる。
【００３３】
上記点光源Ｔｇの位置とピンホールＰｈ１を通過する光Ｌｉの強度との関係は、図５（ｄ）の曲線ＫＲ（ｚ）に示すような深度応答曲線となり、点光源Ｔｇの位置がＺｏから離れるに従いその強度が減少し、点光源Ｔｇの位置をＺ軸のマイナスの方向に移動させた場合の方がプラス方向に移動させた場合に比してピンホールに入射する光量がより大きく減少する。
【００３４】
ここで、図６（ａ）〜（ｃ）に示すように上記共焦点光学系９０の第１集光レンズ９１と第２集光レンズ９２との間に中央光束遮光板９５を配設すると、中央部の光束は遮光され周辺部の光束のみがピンホールを通過するようになる。従って、点光源ＴｇがＺｐ、Ｚｐ+1、Ｚｐ-1のどの位置にあっても中央光束遮光板９５が配設されていない場合より検出される蛍光の強度値が減少するが、その減少の割合は点光源Ｔｇの位置によって異なり、図６（ｄ）の深度応答曲線ＫＳ（ｚ）に示すように点光源Ｔｇの位置をＺ軸のマイナスの方向に移動させた場合の方がプラス方向に移動させた場合に比してピンホールに入射する光量がより極端に減少する。
【００３５】
すなわち、図７に示すようにＺｐから発生する測定対象となる蛍光ｖと、Ｚｐ以外の位置から発生するノイズとなる蛍光ｗとが同時に発生するような場合には、ピンホールＰｈ１を通過する全強度（蛍光ｖの強度＋蛍光ｗの強度）に含まれる測定対象となる蛍光ｖの強度の割合は、中央光束遮光板９５が配設された場合の方が大きくなり、測定対象となる蛍光ｖをより高いＳ／Ｎ比で検出することができる。特に焦点位置ＺｐのＺ軸方向マイナス側から発生するノイズとなる蛍光Ｗを遮断する効果は極めて高い。
【００３６】
上記のことをＤＮＡアレイ読取装置に対応させて説明する。図８に示すように、レーザ光源４０から射出された励起光Ｌｅはダイクロイックミラー５４によって反射され第１集光レンズ５１によって担体１１に保持された検体スポットＫｓｐに集光されるが、一部の励起光Ｌｅは検体スポットＫｓｐを透過して担体の内部も照射する。励起光Ｌｅが照射された検体スポットＫｓｐ近傍の担体、例えば点Ｐからは測定対象ではないノイズとなる蛍光ｗ（以後、担体蛍光ｗと呼ぶ）が発生し、検体スポットＫｓｐから発生した測定対象となる蛍光ｖ（以後、検体蛍光ｖと呼ぶ）と共に第１集光レンズ５１によって概略平行光束とされダイクロイックミラー５４を透過する。ダイクロイックミラー５４を透過した検体蛍光ｖと担体蛍光ｗは第２集光レンズ５２によって集光されピンホールＰｈを通過し検出器７０によってその強度が検出される。このときノイズとなる担体蛍光ｗの光量の多くはピンホール板５３によって検出器７０への入射が阻止されるが光軸Ｚ上の検体スポットＫｓｐの後方に位置する担体から発生し光軸に沿った光路を進む担体蛍光ｗはピンホールＰｈを通過しノイズとして検出される。ここで、中央光束遮光板６０を第１集光レンズ５１と第２集光レンズ５２の間に挿入すると、前記のようにノイズとなる担体蛍光ｗの強度を測定対象である検体蛍光ｖの強度より大きな割合で減少させることができるので検出器７０で検出される蛍光の強度に含まれるノイズの割合は減少する。
【００３７】
最初の検体スポットＫｓｐ（１，１）における計測が終了すると、座標コントローラ８０から次の計測位置がステッピングモータ２１，２２に入力され、検体スポットＫｓｐ（２，１）に励起光Ｌｅが照射されるようにＤＮＡアレイ試験片１０は移動される。そしてこの検体スポットＫｓｐ（２，１）に励起光Ｌｅが照射され、最初の検体スポットＫｓｐ（１，１）を計測したときと同様の計測が行われ、その結果は前記と同様に外部の処理装置２００に記憶される。なお、上記計測においては各検体スポットＫｓｐから発生する蛍光の相対的な強度を検出すればよいので、検出される蛍光の強度の絶対値が中央光束遮光板の挿入によって減少しても計測精度を劣化させることはない。
【００３８】
以上の操作を繰り返すことにより、ＤＮＡアレイ試験片１０上の全ての検体スポットＫｓｐを計測し、処理装置２００にこれらの全ての検体スポットＫｓｐの位置と検体スポットから発生した蛍光の強度の値とが対応付けられて記憶される。さらに蛍光色素ｂで標識されたＤＮＡの検体ＢとｃＤＮＡとをハイブリダイズさせ所定の溶液で処理されたＤＮＡアレイ試験片に関しても同様の計測が行われ、これらの対応関係に基づいて、周知のようにＤＮＡ発現解析等が行われる。
【００３９】
また、中央光束遮光板６０の中央の遮光領域は、光が完全に遮光されなくても透過光量を減衰させる領域であればよく、金属薄膜を蒸着したもの、あるいは光を拡散するように粗面加工したもの等であってもよい。また、その構造は、例えば図９（ａ）に示すようにリング６３の中央部の遮光板６２を３本の支柱６４で支持する等の構造であってもよい。
【００４０】
また、中央光束遮光板６０は、図９（ｂ）、（ｃ）に示すように平板ガラス６１の中央に凸部もしくは凹部を設け、ピンホールＰｈに向う光を途中で屈折させ、分散させて光路から除外する遮光領域を備えた光学部材とすることもできる。
【００４１】
また、中央光束遮光板６０を交換可能に配設することにより、中央部の遮光領域の大きさを変える等、各計測内容に適した検出形態を整えることによりさらにＳ／Ｎ比の高い検出を行うことができる。
【００４２】
また、図９（ｄ）に示すように第２集光レンズ５２の中央部に凸部を設ける等、前記の遮光手段を第２集光レンズ５２の中央部に一体に形成することにより上記と同等の効果を得ることができる。
【００４３】
上記のように本発明による光計測方法および装置によれば、測定対象となる検体以外から発生した蛍光の検出器への入射を低減し、検出される蛍光のＳ／Ｎ比を高めることにより、信頼性の高い計測結果を得ることができる。
【図面の簡単な説明】
【図１】本発明のＤＮＡアレイ読取装置の一実施形態を示す図
【図２】ＤＮＡアレイ読取装置に使用されるＤＮＡアレイ試験片を示す図
【図３】ＤＮＡアレイ試験の断面図
【図４】中央光束遮光板の構造を示す図
【図５】検体スポットの前後から発生しピンホールに入射する蛍光の光路を説明する図
【図６】検体スポットの前後から発生しピンホールに入射する蛍光の強度を減衰させる効果を説明する図
【図７】中央光束遮光板の有無による測定対象外の蛍光の混入割合の差を説明する図
【図８】測定対象外の蛍光の検出光路への混入を減少させる説明図
【図９】中央光束遮光板の例
【符号の説明】
１０    ＤＮＡアレイ試験片
１１    坦体
２１    ステッピングモータ
２２    ステッピングモータ
３０    ステージ
４０    レーザ光源
５１    第１集光レンズ
５２    第２集光レンズ
５３    ピンホール板
５４    ダイクロイックミラー
６０    中央光束遮光板
７０    検出器
８０    座標コントローラ
１００    ＤＮＡアレイ読取装置
Ｌｅ    励起光
Ｋｅ    蛍光
Ｋｓｐ    検体スポット
Ｐｈ    ピンホール
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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