(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
式（Ｉ）
【化１】
0003804090.tif 000020
［式Ｉ中、Ｒ1は、式（ＩＩ）−１〜（ＩＩ）−６
【化２】
0003804090.tif 000021
のいずれかで表される官能基を示す。］で表されるピリジン誘導体またはその塩。
【請求項２】
式（ＩＩＩ）
【化３】
0003804090.tif 000022
［式ＩＩＩ中、Ｒ2はアミノ基または式（ＩＶ）−１〜（ＩＶ）−５
【化４】
0003804090.tif 000023
のいずれかで表される官能基を示す。］で表されるピリジン誘導体またはその塩。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【産業上の利用分野】
本発明は神経栄養因子作用を有するピリジン誘導体およびその塩に関する。
【０００２】
【従来の技術】
近年増えつつあるアルツハイマー型老年痴呆においては、大脳基底核神経細胞であるアセチルコリン作動性神経の変性、脱落が、記憶障害、知的活動低下に深く係わっていることが示唆されている［ウィットホース（Ｗｉｔｅｈｏｒｓｅ）ら、サイエンス（Ｓｃｉｅｎｃｅ）第２１５巻、第１２３７頁（１９８２年）］。
【０００３】
ＮＧＦは、繊維切断による中枢性アセチルコリン作動性神経の変性、脱落を抑制すること［コーシング（Ｋｏｒｓｉｎｇ）ら、ニューロサイエンス  レター（Ｎｅｕｒｏｓｃｉｅｎｃｅ  Ｌｅｔｔ．）第６６巻、第１７５頁（１９８６年）］及び老齢ラットの迷路学習障害を改善すると共にアセチルコリン作動性神経細胞の萎縮を抑制することが報告されている［茂野  卓ら、医学のあゆみ  第１４５巻、第５７９頁（１９８６年）］。これらのことはＮＧＦがアルツハイマー型老年痴呆の治療薬となりうることを示している。
【０００４】
さらには、ＮＧＦは、脳虚血スナネズミの海馬神経細胞死を防ぐことも確かめられており、脳卒中後遺症治療薬としても有用であると考えられる。
【０００５】
一方、ＮＧＦは、末梢神経損傷の回復を早める作用を持っており、末梢神経障害治療薬としても有用であることが明らかにされている。
【０００６】
ＮＧＦの他にも、神経細胞の生存・機能維持作用あるいは変性修復活性を示す生体成分が数多く見つかっており、神経栄養因子と呼ばれている。従って、これら神経栄養因子は、神経細胞変性に伴う中枢性神経障害及び末梢神経障害の治療剤として有用であると考えられる。
【０００７】
【発明が解決しようとする課題】
神経栄養因子と呼ばれる生体成分は、ＮＧＦも含めそのいずれもがタンパク質である。タンパク質は中枢性神経障害治療薬として用いる際、その物状から判断して、直接脳室内投与が必要となることが予想され、実用上問題が多い。
【０００８】
従って、より簡単な投与方法が可能な神経栄養因子作用を持つ低分子化合物の治療薬が望まれている。
【０００９】
本発明の目的は、神経栄養因子作用を有する新規な化合物を提供することにある。
【００１０】
【課題を解決するための手段】
本発明者らは、前記目的の達成のために多数の化合物について種々検討した結果、ある種のピリジン誘導体が、神経栄養因子作用を有する化合物であることを見いだし本発明を完成するに至った。
【００１１】
すなわち、本発明は、式
【００１２】
【化５】
0003804090.tif 000002
【００１３】
［式中、Ｒ1は、式（ＩＩ）−１〜（ＩＩ）−６
【００１４】
【化６】
0003804090.tif 000003
【００１５】
のいずれかで表される官能基を示す。］で表されるピリジン誘導体またはその塩、および式
【００１６】
【化７】
0003804090.tif 000004
【００１７】
［式中、Ｒ2はアミノ基または式（ＩＶ）−１〜（ＩＶ）−５
【００１８】
【化８】
0003804090.tif 000005
【００１９】
のいずれかで表される官能基を示す。］で表されるピリジン誘導体またはその塩である。
【００２０】
本発明において、ピリジン誘導体の塩とは、薬理学的により許容されるものを意味し、塩酸、硫酸、リン酸、硝酸などの鉱酸との塩、あるいはクエン酸、コハク酸、酒石酸、メタンスルホン酸などの有機酸との塩があげられる。
【００２１】
本発明の化合物は、例えば以下に示す方法に従って製造することができる。
【００２２】
すなわち、まず式
【００２３】
【化９】
0003804090.tif 000006
【００２４】
［式中、Ｒ3はメチル基、カルボキシル基、またはアセトアミド基を示す。］で表される化合物と式
【００２５】
【化１０】
0003804090.tif 000007
【００２６】
［式中、Ｒ4は水素原子、カルボキシル基、またはアセトアミド基を示す。］で表される化合物とを、アルカリの存在下にて縮合させることにより式
【００２７】
【化１１】
0003804090.tif 000008
【００２８】
［式中、Ｒ3、Ｒ4は前記と同意義である。］で表される化合物を得ることができる。
【００２９】
ここで、縮合反応で使用するアルカリとしては、水酸化カリウム、水酸化ナトリウム、ナトリウムメトキシド、カリウムｔ−ブトキシド、炭酸カリウム、炭酸ナトリウム、炭酸水素ナトリウム、炭酸水素カリウムなどがある。
【００３０】
反応溶媒は、メタノール、エタノール、ｎ−プロパノール、イソプロパノール、ｔ−ブタノールなどを、単独又は水を添加して用いることができる。反応温度は、０℃から使用する溶媒の沸点までで適宜選択可能である。
【００３１】
次いで、式（ＶＩＩ）の化合物と式
【００３２】
【化１２】
0003804090.tif 000009
【００３３】
で表される化合物とを、酢酸アンモニウムの存在下反応させることにより式
【００３４】
【化１３】
0003804090.tif 000010
【００３５】
［式中、Ｒ3、Ｒ4は前記と同意義である。］で表される化合物を得ることができる。ここで、酢酸アンモニウムは、式（ＶＩＩ）の化合物の１〜１０倍モル量を使用し、反応溶媒は、メタノール、エタノール、ｎ−プロパノール、イソプロパノール、ｔ−ブタノール、酢酸などを用いることができる。反応温度は、室温から使用する溶媒の沸点までで適宜選択可能である。
【００３６】
ここで
１）式（Ｉ）において、Ｒ1が式（ＩＩ）−１〜（ＩＩ）−４に示すいずれかの官能基である化合物、および、式（ＩＩＩ）においてＲ2が式（ＩＶ）−１〜（ＩＶ）−３に示すいずれかで表される官能基である化合物は以下のようにして製造することができる。
【００３７】
すなわち、まず上記の方法で得た式
【００３８】
【化１４】
0003804090.tif 000011
【００３９】
［式中、Ｒ3'がカルボキシル基の時は、Ｒ4'は水素原子を示し、Ｒ3'がメチル基の時は、Ｒ4'はカルボキシル基を示す。］で表されるピリジン誘導体に、ハロゲン化剤を作用させて酸ハライドとし、これに対応するアミンまたはアルコールを反応させることにより得ることができる。ここでハロゲン化剤としては、例えば塩化チオニル、五塩化リン、オキシ塩化リン、塩化オキサリル、臭化チオニル、三臭化リンなどを用いることができる。
【００４０】
２）式（Ｉ）において、Ｒ1が式（ＩＩ）−５および（ＩＩ）−６で表されるいずれかの官能基である化合物および式（ＩＩＩ）において、Ｒ2がアミノ基または式（ＩＶ）−４および（ＩＶ）−５のいずれかで表される官能基である化合物は以下のようにして製造することができる。
【００４１】
すなわち、まず上記の方法で得た式
【００４２】
【化１５】
0003804090.tif 000012
【００４３】
［式中、Ｒ3''がアセトアミド基の時は、Ｒ4''は水素原子を示し、Ｒ3''がメチル基の時は、Ｒ4''はアセトアミド基を示す。］で表されるピリジン誘導体のアセトアミド基を、酸、又はアルカリ存在下、加水分解することによりに、アミノ基を持つ化合物を得ることができ、次いでクロロアセチルクロライドと反応させてアミド化し、これに対応するアミンを反応させることにより本発明化合物を得ることができる。
【００４４】
【発明の実施の形態】
本発明のピリジン誘導体は、経口または非経口的に投与される。投与量は薬物によってそれぞれ異なるが、１日当り成人に対し、1〜1000ｍｇが適当である。
【００４５】
経口投与する場合は、賦形剤、崩壊剤、結合剤、滑沢剤、坑酸化剤、コーティング剤、着色剤、矯味矯臭剤、界面活性剤、可塑剤などを混合して、顆粒剤、散剤、カプセル剤、錠剤として投与され、非経口投与する場合は、注射剤、点滴剤および坐剤で投与され得る。
【００４６】
上記製剤化するに際しては、通常の製剤化の方法が使用できる。
【００４７】
【発明の効果】
ＮＧＦは、ある種の神経細胞の生存・機能維持を担っており、変性修復・保護作用を有している。本発明のピリジン誘導体は、培養大脳皮質神経細胞の生存延長活性を示している。従って、本発明のピリジン誘導体は、生体内で、直接、あるいは間接に神経細胞に働き、神経変性に伴う神経障害の改善・治療効果を示すことが期待される。例えば、外傷性、アルコールや抗癌剤などの薬剤性、炎症性、糖尿病などに見られる代謝性、さらには特発性の末梢性神経変性に伴う症状・疾患の改善・治療剤として用いることができる。
【００４８】
また、中枢性神経変性に伴う症状・疾患、例えば、アルツハイマー型及び脳血管性痴呆、ダウン症候群、パーキンソン病、ハンチントン舞踏病、脳虚血・脳梗塞・脳出血・頭部外傷などの後遺症、健忘症、脊髄性神経麻ひ症などの改善・治療剤としても用いることができる。
【００４９】
【実施例】
以下、実施例、参考例及び試験例をあげて本発明を更に詳細に説明する。
【００５０】
表１〜３に本実施例のピリジン誘導体の構造式を示す。
【００５１】
【表１】
0003804090.tif 000013
【００５２】
【表２】
0003804090.tif 000014
【００５３】
【表３】
0003804090.tif 000015
【００５４】
参考例１
（Ｅ）−３−（４−カルボキシフェニル）−１−フェニル−２−プロペン−１−オン
アセトフェノン８．００ｇ、テレフタルアルデヒド酸１０．００ｇ及びエタノール４０ｍｌの混合物に、０℃撹拌下、水酸化カリウム４．１０ｇを５０ｍｌの水に溶解した溶液を適下し、さらに０〜１０℃で６時間撹拌した。
【００５５】
反応終了後、３Ｎ塩酸を加えて酸性にし、得られた生成物を濾取した。エタノールで再結晶することにより標記化合物１１．９３ｇを得た。
【００５６】
アセトフェノンと相当するアルデヒドを用い、実質的に参考例１と同様にして以下の化合物を得た。
【００５７】
（Ｅ）−３−（３−カルボキシフェニル）−１−フェニル−２−プロペン−１−オン
（Ｅ）−１−（３−カルボキシフェニル）−３−（４−メチルフェニル）−２−プロペン−１−オン
（Ｅ）−１−（４−カルボキシフェニル）−３−（４−メチルフェニル）−２−プロペン−１−オン
（Ｅ）−３−（４−アセトアミドフェニル）−１−フェニル−２−プロペン−１−オン
（Ｅ）−１−（３−アセトアミドフェニル）−３−（４−メチルフェニル）−２−プロペン−１−オン
（Ｅ）−１−（４−アセトアミドフェニル）−３−（４−メチルフェニル）−２−プロペン−１−オン。
【００５８】
参考例２
４−（４−カルボキシフェニル）−２，６−ジフェニルピリジン
参考例１で得た（Ｅ）−３−（４−カルボキシフェニル）−１−フェニル−２−プロペン−１−オン５．００ｇ、フェナシルピリジニウムブロマイド５．５１ｇ及び酢酸アンモニウム７．６３ｇに、メタノール４０ｍｌを加え、１２時間還流した。冷却後、生成物を濾取し、エタノールで再結晶することにより標記化合物３．９０ｇを得た。
【００５９】
（Ｅ）−３−（４−カルボキシフェニル）−１−フェニル−２−プロペン−１−オンの代わりに相当するα，β−不飽和ケトンを用いて、実質的に参考例２と同様にして以下の化合物を得た。
【００６０】
４−（３−カルボキシフェニル）−２，６−ジフェニルピリジン
２−（３−カルボキシフェニル）−４−（４−メチルフェニル）−６−フェニルピリジン
２−（４−カルボキシフェニル）−４−（４−メチルフェニル）−６−フェニルピリジン
４−（４−アセトアミドフェニル）−２，６−ジフェニルピリジン
２−（３−アセトアミドフェニル）−４−（４−メチルフェニル）−６−フェニルピリジン
２−（４−アセトアミドフェニル）−４−（４−メチルフェニル）−６−フェニルピリジン。
【００６１】
参考例３
４−（４−アミノフェニル）−２，６−ジフェニルピリジン
参考例２を参考にして得た４−（４−アセトアミドフェニル）−２，６−ジフェニルピリジン１．５０ｇに、水酸化ナトリウム１．５０ｇ、エタノール１００ｍｌ及び水１０ｍｌを加え、４６時間還流した。冷却後、水を１００ｍｌ加え、得られた生成物を濾取し、エタノールで再結晶することにより標記化合物１．１７ｇを得た。
【００６２】
実施例１
Ｎ−［２−（ジメチルアミノ）エチル］−４−（２，６−ジフェニル−４−ピリジル）ベンズアミド（化合物５）
参考例２で得た４−（４−カルボキシフェニル）−２，６−ジフェニルピリジン１．００ｇをトルエン５０ｍｌに溶解し、塩化チオニル０．６２ｍｌを加え、２時間還流した。減圧下、トルエンと過剰の塩化チオニルを留去し、酸クロリドを得た。これにクロロホルム５０ｍｌを加え、氷冷撹拌下、Ｎ，Ｎ−ジメチルエチレンジアミン０．３４ｍｌのクロロホルム１０ｍｌ溶液を滴下し、さらに室温で３０分間撹拌した。
【００６３】
この反応液を飽和重曹水、水、飽和食塩水の順で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥した。溶媒を減圧下留去し、残査を酢酸エチル−ヘキサンで再結晶することにより標記化合物０．６５ｇを得た。
【００６４】
ｍ．ｐ．１４３．５〜１４４．０℃。
【００６５】
４−（４−カルボキシフェニル）−２，６−ジフェニルピリジンとＮ，Ｎ−ジメチルエチレンジアミンの代わりに、相当するカルボキシル基を持つピリジン誘導体とアミンを用いて、実質的に実施例１と同様にして以下の化合物を得た。
【００６６】
Ｎ−［２−（ジメチルアミノ）エチル］−３−（２，６−ジフェニル−４−ピリジル）ベンズアミド（化合物１）
ｍ．ｐ．１６２．５〜１６４．５℃。
【００６７】
Ｎ−［３−（ジメチルアミノ）プロピル］−３−（２，６−ジフェニル−４−ピリジル）ベンズアミド（化合物３）
ｍ．ｐ．１４３．０〜１４５．０℃。
【００６８】
Ｎ−［３−（ジメチルアミノ）プロピル］−４−（２，６−ジフェニル−４−ピリジル）ベンズアミド（化合物７）
ｍ．ｐ．１００．０〜１０２．０℃。
【００６９】
Ｎ−［２−（ジメチルアミノ）エチル］−４−［４−（４−メチルフェニル）−６−フェニル−２−ピリジル］ベンズアミド（化合物１７）
ｍ．ｐ．１４９．７〜１５０．６℃。
【００７０】
４−（４−メチルフェニル）−２−［４−（４−メチルピペラジン−１−イルカルボニル）フェニル］−６−フェニルピリジン（化合物１９）
ｍ．ｐ．１３３．０〜１３４．５℃。
【００７１】
実施例２
２−（ジメチルアミノ）エチル＝４−（２，６−ジフェニル−４−ピリジル）ベンゾート（化合物９）
参考例２で得た４−（４−カルボキシフェニル）−２，６−ジフェニルピリジン０．６０ｇをトルエン５０ｍｌに溶解し、塩化チオニル０．３７ｍｌを加え、５時間還流した。減圧下、トルエンと過剰の塩化チオニルを留去し、酸クロリドを得た。  これにクロロホルム２０ｍｌを加え、氷冷撹拌下、Ｎ，Ｎ−ジメチルエタノールアミン０．１９ｍｌのクロロホルム５ｍｌ溶液を滴下し、さらに室温で１７時間撹拌した。
【００７２】
この反応液を飽和重曹水、水、飽和食塩水の順で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥した。溶媒を減圧下留去し、残査をカラムクロマトグラフィー（展開溶媒；ジクロロメタン：メタノール＝２０：１）で精製することにより標記化合物０．４１ｇを得た。
【００７３】
ｍ．ｐ．１０４．７〜１０５．７℃。
【００７４】
４−（４−カルボキシフェニル）−２，６−ジフェニルピリジンとＮ，Ｎ−ジメチルエタノールアミンの代わりに、相当するカルボキシル基を持つピリジン誘導体とＮ，Ｎ−ジアルキルエタノールアミンを用いて、実質的に実施例２と同様にして以下の化合物を得た。
【００７５】
２−（ジエチルアミノ）エチル＝４−（２，６−ジフェニル−４−ピリジル）ベンゾート（化合物１１）
ｍ．ｐ．２０７．０〜２０９．０℃（分解）。
【００７６】
２−（ジメチルアミノ）エチル＝４−［４−（４−メチルフェニル）−６−フェニル−２−ピリジル］ベンゾート（化合物２１）
ｍ．ｐ．１１７．２〜１１８．８℃。
【００７７】
実施例３
２−（４−アミノフェニル）−４−（４−メチルフェニル）−６−フェニルピリジン（化合物２８）
参考例２を参考にして得た２−（４−アセトアミドフェニル）−４−（４−メチルフェニル）−６−フェニルピリジン３．０５ｇに、３Ｎ塩酸７０ｍｌを加え、２時間還流した。
【００７８】
冷却後、１０％水酸化ナトリウム水溶液を加えてアルカリ性とし、酢酸エチルで抽出した。水、飽和食塩水の順で洗浄後、無水硫酸ナトリウムで乾燥した。溶媒を減圧下留去し、残査を酢酸エチル−ｎ−ヘキサンで再結晶することにより標記化合物２．２６ｇを得た。
【００７９】
ｍ．ｐ．１３７．０〜１３９．０℃。
【００８０】
２−（４−アセトアミドフェニル）−４−（４−メチルフェニル）−６−フェニルピリジンの代わりに、相当するアセトアミド基を持つピリジン誘導体を用いて、実質的に実施例３と同様にして以下の化合物を得た。
【００８１】
２−（３−アミノフェニル）−４−（４−メチルフェニル）−６−フェニルピリジン（化合物２３）
ｍ．ｐ．１３２．５〜１３４．０℃。
【００８２】
実施例４
２−ジメチルアミノ−Ｎ−［４−（２，６−ジフェニル−４−ピリジル）フェニル］アセトアミド（化合物１３）
（１）参考例３で得た４−（４−アミノフェニル）−２，６−ジフェニルピリジン１．３０ｇに、クロロホルム５０ｍｌを加え、氷冷撹拌下、クロロアセチルクロライド０．３２ｍｌのクロロホルム１０ｍｌ溶液を滴下し、さらに室温で１時間撹拌した。
【００８３】
この反応液を飽和重曹水、水、飽和食塩水の順で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥した。溶媒を減圧下留去し、残査を酢酸エチル−ｎ−ヘキサンで再結晶することにより２−クロロ−Ｎ−［４−（２，６−ジフェニル−４−ピリジル）フェニル］アセトアミド１．３３ｇを得た。
【００８４】
ｍ．ｐ．２１４．５〜２１５．２℃。
【００８５】
（２）上記で得た２−クロロ−Ｎ−［４−（２，６−ジフェニル−４−ピリジル）フェニル］アセトアミド０．８７ｇをメタノール５０ｍｌに溶解し、５０％ジメチルアミン水溶液２．２９ｍｌを加え、７時間還流した。溶媒を減圧下留去し、残査に飽和重曹水を加え、酢酸エチルで抽出した。
【００８６】
水、飽和食塩水の順で洗浄後、無水硫酸ナトリウムで乾燥した。溶媒を減圧下留去し、残査を酢酸エチル−ｎ−ヘキサンで再結晶することにより標記化合物０．８１ｇを得た。
【００８７】
ｍ．ｐ．１７３．５〜１７４．９℃。
【００８８】
４−（４−アミノフェニル）−２，６−ジフェニルピリジンとジメチルアミンの代わりに、相当するアミノ基を持つピリジン誘導体とアミンを用いて、実質的に実施例４と同様にして以下の化合物を得た。
【００８９】
２−ジメチルアミノ−Ｎ−［［３−［４−（４−メチルフェニル）−６−フェニル−２−ピリジル］フェニル］アセトアミド（化合物２４）
ｍ．ｐ．１１８．０〜１２０．０℃。
【００９０】
２−ジメチルアミノ−Ｎ−［［４−［４−（４−メチルフェニル）−６−フェニル−２−ピリジル］フェニル］アセトアミド（化合物２９）
ｍ．ｐ．１３０．８〜１３２．８℃。
【００９１】
２−ジエチルアミノ−Ｎ−［４−（２，６−ジフェニル−４−ピリジル）フェニル］アセトアミド（化合物１５）。
【００９２】
1Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3）  δ（ｐｐｍ）；１．１３（６Ｈ，ｔ，Ｊ＝７．１Ｈｚ）、２．６９（４Ｈ，ｑｕａｒｔ．，Ｊ＝７．２Ｈｚ）、３．２０（２Ｈ，ｓ）、７．４１〜７．５７（６Ｈ，ｍ）、７．７６（４Ｈ，ｓ）、７．８８（２Ｈ，ｓ）、８．１７〜８．２３（４Ｈ，ｍ）、９．５７（１Ｈ，ｂｒ．ｓ）。
【００９３】
ＭＳ（ＥＩ）  ４３５（Ｍ+）。
【００９４】
２−ジエチルアミノ−Ｎ−［［３−［４−（４−メチルフェニル）−６−フェニル−２−ピリジル］フェニル］アセトアミド（化合物２６）。
【００９５】
1Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3）  δ（ｐｐｍ）；１．１３（６Ｈ，ｔ，Ｊ＝７．１Ｈｚ）、２．４５（３Ｈ，ｓ）、２．６９（４Ｈ，ｑｕａｒｔ．，Ｊ＝７．２Ｈｚ）、３．２０（２Ｈ，ｓ）、７．３２〜８．３０（１５Ｈ，ｍ）、９．５３（１Ｈ，ｂｒ．ｓ）。
【００９６】
ＭＳ（ＣＩ）  ４５０（Ｍ＋１）。
【００９７】
実施例５
Ｎ−［２−（ジメチルアミノ）エチル］−４−（２，６−ジフェニル−４−ピリジル）ベンズアミド＝二塩酸塩（化合物６）
実施例１で得たＮ−［２−（ジメチルアミノ）エチル］−４−（２，６−ジフェニル−４−ピリジル）ベンズアミド０．５０ｇ、酢酸エチル３０ｍｌの混合物に、撹拌下４Ｎ塩酸−酢酸エチル溶液１．５０ｍｌを加え、室温で１０分間撹拌した。得られた結晶を濾取することにより標記化合物０．４６ｇを得た。
【００９８】
ｍ．ｐ．２５０．０〜２５１．５℃（分解）。
【００９９】
Ｎ−［２−（ジメチルアミノ）エチル］−４−（２，６−ジフェニル−４−ピリジル）ベンズアミドの代わりに、相当するピリジン誘導体を用いて、実質的に実施例５と同様にして以下の化合物を得た。
【０１００】
Ｎ−［２−（ジメチルアミノ）エチル］−３−（２，６−ジフェニル−４−ピリジル）ベンズアミド＝二塩酸塩（化合物２）
ｍ．ｐ．１３５．０〜１３７．０℃。
【０１０１】
Ｎ−［３−（ジメチルアミノ）プロピル］−３−（２，６−ジフェニル−４−ピリジル）ベンズアミド＝二塩酸塩（化合物４）
ｍ．ｐ．１１９．０〜１２１．０℃。
【０１０２】
Ｎ−［３−（ジメチルアミノ）プロピル］−４−（２，６−ジフェニル−４−ピリジル）ベンズアミド＝二塩酸塩（化合物８）
ｍ．ｐ．２４２．０〜２４４．０℃。
【０１０３】
２−（ジメチルアミノ）エチル＝４−（２，６−ジフェニル−４−ピリジル）ベンゾート＝二塩酸塩（化合物１０）
ｍ．ｐ．２０３．０〜２０５．０℃。
【０１０４】
２−（ジエチルアミノ）エチル＝４−（２，６−ジフェニル−４−ピリジル）ベンゾート＝二塩酸塩（化合物１２）
ｍ．ｐ．２０４．０〜２０６．０℃。
【０１０５】
２−ジメチルアミノ−Ｎ−［４−（２，６−ジフェニル−４−ピリジル）フェニル］アセトアミド＝二塩酸塩（化合物１４）
ｍ．ｐ．２３２．０〜２３４．０℃。
【０１０６】
1Ｈ  ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ6）  δ（ｐｐｍ）；２．９１（６Ｈ，ｄ，Ｊ＝３．５Ｈｚ），４．２５（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝３．９Ｈｚ），７．４５−７．６２（６Ｈ，ｍ），７．８６（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．８Ｈｚ），８．１２（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．６Ｈｚ），８．２１（２Ｈ，ｓ），８．３３（４Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝８．０，１．５Ｈｚ）１０．１３（１Ｈ，ｂｒｓ），１１．２５（１Ｈ，ｓ）。
【０１０７】
ＭＳ（ＥＩ）；４０７（Ｍ+−２ＨＣｌ）。
【０１０８】
２−ジエチルアミノ−Ｎ−［４−（２，６−ジフェニル−４−ピリジル）フェニル］アセトアミド＝二塩酸塩（化合物１６）
ｍ．ｐ．２３６．０〜２３８．０℃。
【０１０９】
Ｎ−［２−（ジメチルアミノ）エチル］−４−［４−（４−メチルフェニル）−６−フェニル−２−ピリジル］ベンズアミド＝二塩酸塩（化合物１８）
ｍ．ｐ．２２１．０〜２２３．０℃。
【０１１０】
４−（４−メチルフェニル）−２−［４−（４−メチルピペラジン−１−イルカルボニル）フェニル］−６−フェニルピリジン＝二塩酸塩（化合物２０）
ｍ．ｐ．１６７．０〜１６９．０℃。
【０１１１】
２−（ジメチルアミノ）エチル＝４−［４−（４−メチルフェニル）−６−フェニル−２−ピリジル］ベンゾート＝塩酸塩（化合物２２）
ｍ．ｐ．１０６．０〜１０８．０℃。
【０１１２】
２−ジメチルアミノ−Ｎ−［［３−［４−（４−メチルフェニル）−６−フェニル−２−ピリジル］フェニル］アセトアミド＝二塩酸塩（化合物２５）
ｍ．ｐ．１４３．０〜１４５．０℃。
【０１１３】
２−ジエチルアミノ−Ｎ−［［３−［４−（４−メチルフェニル）−６−フェニル−２−ピリジル］フェニル］アセトアミド＝二塩酸塩（化合物２７）
ｍ．ｐ．１２３．０〜１２５．０℃。
【０１１４】
２−ジメチルアミノ−Ｎ−［［４−［４−（４−メチルフェニル）−６−フェニル−２−ピリジル］フェニル］アセトアミド＝二塩酸塩（化合物３０）
ｍ．ｐ．２５７．０〜２５９．０℃。
【０１１５】
試験例１［神経栄養因子作用試験］
神経栄養因子作用は、以下の方法を用いて評価した。
【０１１６】
（検体）
表１〜３に示した各化合物をＤＭＳＯに溶解し、濃度を２ｍｇ／ｍｌ〜１０ｍｇ／ｍｌとした。
【０１１７】
（試験細胞）
胎生１８日ラット大脳皮質由来神経細胞
（試験方法）
試験細胞を、２０％牛胎児血清を含有するダルベッコの最少必須培地（ギブコ社製）及びハムＦ−１２培地（ギブコ社製）を等量混合したＤＦ培地にて、３．２×１０6細胞／ｍｌに調製し、ポリエチレンイミンを塗布した２４孔プレ− ト（培養孔あたりの面積２cm2、コーニング社製）へ、０．５ｍｌ／孔ずつまき 、３７℃、５％ＣＯ2 で培養した。
【０１１８】
２４時間後、培地を除き、新たに各種濃度の検体、５μｇ／ｍｌトランスフェリン、５μｇ／ｍｌインスリン、２０ｐｍｏｌｅ／ｍｌプロゲステロンを含有する無血清の上記ＤＦ培地０．５ｍｌ／孔を加えた。ここで、本発明化合物はＤＭＳＯに溶解し、最終濃度が下記表４，５に示す各種濃度となるように添加した。
【０１１９】
なお、比較として、ＤＭＳＯのみを加えた培地も調製した。
【０１２０】
この段階で、同じプレートを２枚用意した。各種培地にて７２時間培養後、１枚のプレートに対しＮ2−Ｏ2−ＣＯ2インキュベーター（タバイ社製，ＢＮＰ−１ ００型）により、酸素濃度を最低設定濃度の１％に下げ４時間培養する低酸素負荷を施した。
【０１２１】
もう１枚のプレートは負荷をかけずに、５％ＣＯ2、９５％Ａirの まま培養を続けた。さらに４８時間培養し、生細胞数を定量した。培地を除き、Ｆｌｕｏｒｅｓｃｉｅｎ  Ｄｉａｃｅｔａｔｅ（ＦＤＡ）試薬を作用させた。リン酸緩衝液（ｐＨ７．４）で洗浄後、蛍光強度（Ｅｘ４８５／Ｅｍ５３０）を測定した（ミリポア社製，ＣｙｔｏＦｌｏｕｒTM２３００）。
【０１２２】
本発明化合物の神経栄養因子活性は、対照（ＤＭＳＯ添加）の蛍光強度を１．０としたときの比で表した。
【０１２３】
（結果）
結果を表４，５に示す。
【０１２４】
【表４】
0003804090.tif 000016
【０１２５】
【表５】
0003804090.tif 000017
【０１２６】
試験例２［スナネズミ脳虚血による遅発性神経細胞死に対する作用試験］
脳虚血により生じる神経細胞障害の抑制作用を、スナネズミ両側総頚動脈閉塞モデルを用いて評価した。
【０１２７】
（実験動物）
体重６０〜９０ｇ雄性スナネズミ（新日本動物、埼玉、日本）を用いた。
【０１２８】
（試験方法）
スナネズミはエーテルで軽度に麻酔し、背位に固定した。キシロカインで局部浸潤麻酔後、両側総頚動脈を頚部正中線を切開して露出し注意深く近傍の迷走神経から剥離した。動脈を動脈瘤クリップで３分間止め、その後クリップをはずし皮膚を縫合した。偽手術群は両側総頚動脈を閉塞しないこと以外は同様に処置した。３分間脳虚血の７日後に動物をエーテル麻酔し脳を１０％ホルマリン緩衝液で左心室から潅流した。
【０１２９】
海馬領域は３〜４ｍｍの厚さのスライスとして冠状に切り出し、パラフィン包埋後切片を作成した。スライスはヘマトキシリン＆エオジンで染色した。虚血性細胞障害は０〜３の４段階に分けて評価した。
【０１３０】
０（−）：正常神経細胞、１（＋）：数個の神経細胞障害（１つかあるいは数個の神経細胞の障害）、２（＋＋）：多数の神経細胞の障害、３（＋＋＋）：ほとんどの神経細胞の障害。
【０１３１】
（検体）
検体は水に溶解し、虚血終了直後に、１０ｍｇ／ｋｇを腹腔内投与した。
【０１３２】
（結果）
偽手術群のスナネズミ海馬ＣＡ１神経細胞は全く障害を受けていないが、３分間両側総頚動脈閉塞モデルでは、海馬ＣＡ１神経細胞は光学顕微鏡所見で明らかに障害されていた。
【０１３３】
しかし、海馬ＣＡ１神経細胞の崩壊と消失は、本発明の化合物を腹腔内投与することにより抑制された。結果を表６に示す。
【０１３４】
【表６】
0003804090.tif 000018
【０１３５】
試験例３［ラット中大脳動脈閉塞モデルの脳梗塞巣面積に対する作用］
（検体）
化合物１４と対照検体１〔ＷＯ９４／１４４４０記載の化合物６，４’−（４−メチルフェニル）−２，２’：６’，２”−テルピリジン＝三塩酸塩〕を用いた。
【０１３６】
対照検体１の構造式
【０１３７】
【化１６】
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【０１３８】
（試験法）
ＳＨＲＳＰラット（♂、１２〜２０週令）をハロセン吸入にて麻酔導入し、動物の体温を３７℃前後に保った。側臥位に固定し、硬膜を切開して中大脳動脈本幹をｒｈｉｎａｌ  ｆｉｓｓｕｒｅの０.７〜１ｍｍ背側で電気凝固・切断した。同時に、ｉｎｆｕｓｉｏｎ  ｐｕｍｐ を装着させ、被験化合物をそれぞれ１，１０ｍｇ／ｋｇ／ｈで尾静脈より４時間持続注入した。コントロ−ル群として溶媒群を設定した。手術から７日後に１０％ホルマリン溶液にて固定後、脳を摘出し連続切片を作製した。脳切片は、ヘマトキシリン＆エオジンにて染色後、梗塞巣として画像解析装置により面積を求め全脳面積に対する梗塞の比率を算出した。
【０１３９】
（結果）
図１に示した通り、対照検体１には梗塞巣縮小作用は見られなかったが、化合物１４は用量依存的にコントロ−ル群に対して有意な梗塞巣縮小作用を示した。
【０１４０】
試験例４［被験化合物投与時の症状観察］
（試験法）
対照検体１，化合物１４を試験例３と同じ系統のラットにそれぞれ１０，４０ｍｇ／ｋｇで静脈内注射しその時発現する症状を観察した。
【０１４１】
（結果）
対照検体１では両用量共に鎮静症状を呈したが、化合物１４では症状に変化が見られなかった。
【図面の簡単な説明】
【図１】化合物１４と対照検体１のラット中大脳動脈閉塞モデルの脳梗塞巣面積に対する作用を示す。
【図１】
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