(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
111Ｉｎ、67Ｇａ、169Ｙｂ、201Ｔｌ、90Ｙ、67Ｃｕ、169Ｅｒ、143Ｐｒ、109Ｐｄ、165Ｄｙ、32Ｐ、142Ｐｒ、177Ｌｕ、166Ｈｏ、153Ｓｍ、131Ｉ、89Ｓｒ、105Ｒｈ、212Ｂｉ、241Ａｍ及び255Ｆｍからなる群より選択された放射性核種で標識することのできるペプチドと、
ゲンチジン酸、ゲンチシルアルコール、これらの水溶性の塩、エステル、誘導体、およびこれらの混合物からなる群より選択された第１の安定剤と
を含有する、自己放射線分解に安定な、111Ｉｎ、67Ｇａ、169Ｙｂ、201Ｔｌ、90Ｙ、67Ｃｕ、169Ｅｒ、143Ｐｒ、109Ｐｄ、165Ｄｙ、32Ｐ、142Ｐｒ、177Ｌｕ、166Ｈｏ、153Ｓｍ、131Ｉ、89Ｓｒ、105Ｒｈ、212Ｂｉ、241Ａｍ及び255Ｆｍからなる群より選択された放射性核種で標識されたペプチドを製造するための組成物。
【請求項２】
前記放射性核種は、111Ｉｎ、67Ｇａ、169Ｙｂ、90Ｙ、169Ｅｒ、165Ｄｙ、177Ｌｕ、166Ｈｏ及び153Ｓｍからなる群より選択された請求の範囲第１項記載の組成物。
【請求項３】
前記放射性核種は、111Ｉｎ、67Ｇａ、90Ｙ、177Ｌｕ、166Ｈｏ及び153Ｓｍからなる群より選択された請求の範囲第１項記載の組成物。
【請求項４】
ペプチドは二官能性キレートの使用により放射性核種で標識できる請求の範囲第１項記載の組成物。
【請求項５】
ペプチドはペプチドの直接標識により放射性核種で標識できる請求の範囲第１項記載の組成物。
【請求項６】
ペプチドは放射性核種のペプチドとの共有結合により放射性核種で標識できる請求の範囲第１項記載の組成物。
【請求項７】
さらに第２の安定剤を含有する請求の範囲第１項記載の組成物。
【請求項８】
第２の安定剤はイノシトールを含む請求の範囲第７項記載の組成物。
【請求項９】
第２の安定剤はアスコルビン酸を含む請求の範囲第７項記載の組成物。
【請求項１０】
さらに緩衝剤を含有する請求の範囲第１項記載の組成物。
【請求項１１】
組成物は凍結乾燥キットの形態である請求の範囲第１項記載の組成物。
【請求項１２】
ペプチドは放射性核種で標識される請求の範囲第１項記載の組成物。
【請求項１３】
組成物は液状配合物である請求の範囲第１２項記載の組成物。
【請求項１４】
111Ｉｎ、67Ｇａ、169Ｙｂ、201Ｔｌ、90Ｙ、67Ｃｕ、169Ｅｒ、143Ｐｒ、109Ｐｄ、165Ｄｙ、32Ｐ、142Ｐｒ、177Ｌｕ、166Ｈｏ、153Ｓｍ、131Ｉ、89Ｓｒ、105Ｒｈ、212Ｂｉ、241Ａｍ及び255Ｆｍからなる群より選択された放射性核種で標識することのできるタンパク質と、
ゲンチジン酸、ゲンチシルアルコール、これらの水溶性の塩、エステル、誘導体、およびこれらの混合物からなる群より選択された第１の安定剤と
を含有する、自己放射線分解に安定な、111Ｉｎ、67Ｇａ、169Ｙｂ、201Ｔｌ、90Ｙ、67Ｃｕ、169Ｅｒ、143Ｐｒ、109Ｐｄ、165Ｄｙ、32Ｐ、142Ｐｒ、177Ｌｕ、166Ｈｏ、153Ｓｍ、131Ｉ、89Ｓｒ、105Ｒｈ、212Ｂｉ、241Ａｍ及び255Ｆｍからなる群より選択された放射性核種で標識されたタンパク質を製造するための組成物。
【請求項１５】
前記放射性核種は、111Ｉｎ、67Ｇａ、169Ｙｂ、90Ｙ、169Ｅｒ、165Ｄｙ、177Ｌｕ、166Ｈｏ及び153Ｓｍからなる群より選択された請求の範囲第１４項記載の組成物。
【請求項１６】
前記放射性核種は、111Ｉｎ、67Ｇａ、90Ｙ、177Ｌｕ、166Ｈｏ及び153Ｓｍからなる群より選択された請求の範囲第１４項記載の組成物。
【請求項１７】
タンパク質は二官能性キレートの使用により放射性核種で標識できる請求の範囲第１４項記載の組成物。
【請求項１８】
タンパク質はペプチドの直接標識により放射性核種で標識できる請求の範囲第１４項記載の組成物。
【請求項１９】
タンパク質は放射性核種のペプチドとの共有結合により放射性核種で標識できる請求の範囲第１４項記載の組成物。
【請求項２０】
さらに第２の安定剤を含有する請求の範囲第１４項記載の組成物。
【請求項２１】
第２の安定剤はイノシトールを含む請求の範囲第２０項記載の組成物。
【請求項２２】
第２の安定剤はアスコルビン酸を含む請求の範囲第２０項記載の組成物。
【請求項２３】
さらに緩衝剤を含有する請求の範囲第１４項記載の組成物。
【請求項２４】
組成物は凍結乾燥キットの形態である請求の範囲第１４項記載の組成物。
【請求項２５】
タンパク質は放射性核種で標識される請求の範囲第１４項記載の組成物。
【請求項２６】
組成物は液状配合物である請求の範囲第２５項記載の組成物。
【請求項２７】
所定量のＤＴＰＡ−オクトレオチドと、
ゲンチジン酸、ゲンチシルアルコール、これらの水溶性の塩、エステル、誘導体、およびこれらの混合物からなる群より選択された安定剤と
を含有する、自己放射線分解に安定な、111Ｉｎ、67Ｇａ、169Ｙｂ、201Ｔｌ、90Ｙ、67Ｃｕ、169Ｅｒ、143Ｐｒ、109Ｐｄ、165Ｄｙ、32Ｐ、142Ｐｒ、177Ｌｕ、166Ｈｏ、153Ｓｍ、131Ｉ、89Ｓｒ、105Ｒｈ、212Ｂｉ、241Ａｍ及び255Ｆｍからなる群より選択された放射性核種で標識されたオクトレオチド製剤を製造するための組成物。
【請求項２８】
前記放射性核種は、111Ｉｎ、67Ｇａ、169Ｙｂ、90Ｙ、169Ｅｒ、165Ｄｙ、177Ｌｕ、166Ｈｏ及び153Ｓｍからなる群より選択された請求の範囲第２７項記載の組成物。
【請求項２９】
前記放射性核種は、111Ｉｎ、67Ｇａ、90Ｙ、177Ｌｕ、166Ｈｏ及び153Ｓｍからなる群より選択された請求の範囲第２７項記載の組成物。
【請求項３０】
さらに第２の安定剤を含有する請求の範囲第２７項記載の組成物。
【請求項３１】
第２の安定剤はイノシトールを含む請求の範囲第３０項記載の組成物。
【請求項３２】
第２の安定剤はアスコルビン酸を含む請求の範囲第３０項記載の組成物。
【請求項３３】
さらに緩衝剤を含有する請求の範囲第３０項記載の組成物。
【請求項３４】
組成物は凍結乾燥キットの形態である請求の範囲第３３項記載の組成物。
【請求項３５】
ＤＴＰＡ−オクトレオチドは111Ｉｎで標識される請求の範囲第３３項記載の組成物。
【請求項３６】
組成物は液状配合物である請求の範囲第３５項記載の組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は放射性医薬組成物用安定剤に関する。さらに詳しくは、ゲンチジン酸およびその誘導体のような安定剤は単独でまたは他の安定剤と共に、放射性標識ペプチドおよびタンパク質の自己放射線分解（ａｕｔｏｒａｄｉｏｌｙｓｉｓ）を抑制するのに使用される。
【背景技術】
【０００２】
放射性標識組成物の治療および診断における用途の数は絶えず増加している。このような用途は一般に、適当な放射性標識組成物の生物的被験体への導入を含む。異常、病気などの存在を診断し、突き止めるために、放射線の検出および映像化を利用することができる。ある場合、放射性標識組成物は治療的放射線の放射のため特定の組織または生物学的受容体を局在化する、または捜し出すよう設計されうる。
【０００３】
一般に、放射性標識組成物は放射性核種；問題の特定器官を標的にするよう設計された担体、放射性核種を担体に固定する各種の補助剤；患者への注入または患者による吸引に適した水のような賦形剤；生理的緩衝剤および塩などを含有する。
【０００４】
ある種の放射性医薬製剤は安定剤を要することが知られている。例えば、テクネチウム−９９ｍおよびレニウム−１８６組成物は酸素があると不安定であり、テクネチウムまたはレニウムを使用可能な酸化状態に維持するのに酸化防止剤または還元剤のような安定剤を要する。テクネチウム−９９ｍおよびレニウム−１８６組成物に使用される典型的な還元剤は例えば第１スズ、第１鉄および第１クロムの塩である。アスコルビン酸、α−アスコルビン酸、ゲンチジン酸、還元酸、エリトルビン酸、Ｐ−アミノ安息香酸、４−ヒドロキシ安息香酸、ニコチン酸、ニコチンアミドおよび２，５−ジヒドロキシ−１，４−ベンゼンジスルホン酸のような他の添加剤が放射性核種または還元剤の酸化を抑制するのに含まれることがある。
111Ｉｎ、90Ｙおよび67Ｇａのような他の放射性核種は安定な酸化状態で存在するため、それらの有用な酸化状態を維持するのに安定剤は不要である。
【０００５】
何年もの間、炎症、深部静脈血栓症またはガンのような病気を診断し、治療するためのホルモン、比較的大型の粒子のアルブミン（“ＭＡＡ”）、ヒト血清アルブミン（“ＨＳＡ”）、単クローン性抗体または単クローン性抗体断片のような放射性標識タンパク質の製造への関心が増えている。ある場合において、標識タンパク質の自己放射線分解が観察されている。自己放射線分解を抑制または防止するために、専門家はＨＳＡを組成物に加えること〔例えば、Ｒ．Ａ．Ｊ．ＫｉｓｈｏｒｅらのＩｎｔ．Ｊ．Ｒａｄｉａｔ．Ａｐｐｌ．Ｉｎｓｔｒｕｍ．，パートＢ、第１３巻、第４号、第４５７頁〜第４５９頁（１９８６年）の「沃素化単クローン性抗体製剤の自己放射線分解」を参照〕、または製造および投与の間、放射性医薬組成物を冷凍状態に維持すること〔例えば、Ｒ．Ｌ．ＷａｈｌらのＪ．Ｎｕｃ，Ｍｅｄ．，第３１巻、第１号、第８４頁〜第８９頁（１９９０年）の「放射性同位体クローン性抗体の自己放射線分解の低温貯蔵による抑制」を参照］を提案している。自己放射線分解を防止するためのこれらの技術はしばしば、多くの放射性標識ペプチドおよびタンパク質を使用した時に有効または実用的でない。
【０００６】
最近、診断および治療用の幾つかの新規ペプチドが単離され、合成的に開発されている。このようなペプチドの１つはオクトレオチドとして知られており、米国特許第４，３９５，４０３号に記載されているオクタペプチドソマトスクチン類似体である。オクトレオチドは様々なヒトの腫瘍のソマトスタチン受容体に対して非常に高い結合親和性を有する。放射性核種と錯体を形成することのできる適当なキレート化剤とオクトレオチドを結合することにより、ソマトスタチン受容体を有する腫瘍を効果的に映像化する放射性標識オクトレオチドを生成することが可能になった。キレート化基を含有するソマトスタチン類似体は英国特許公報第２，２２５，５７９号に記載されている。
【０００７】
放射性標識ペプチドの潜在的な有用性にも関わらず、これらは非常に自己放射性分解性であることがわかっている。本明細書において、「自己放射線分解」なる用語はペプチドと結合した放射性同位体からの放射線の作用によるペプチドの化学分解を包含する。自己放射線分解は放射性同位体から出た放射線による水または賦形剤中のヒドロキシ基のような遊離基の生成によって起こると考える者もいる。
【発明の開示】
【０００８】
上記から当該技術分野においては安定な放射性標識ペプチドおよびタンパク質組成物が必要であることが理解されよう。したがって、放射性標識ペプチドおよびタンパク質の自己放射線分解を実質的に抑制する安定化剤を提供することは当該技術分野において有意な進歩となるであろう。
【０００９】
ペプチドおよびタンパク質の自己放射線分解を実質的に抑制するためのこのような組成物は本明細書に開示されている。
【００１０】
本発明は安定な放射性標識ペプチドおよびタンパク質製剤を製造するための組成物を提供する。本発明において使用される安定剤は放射性標識ペプチドおよびタンパク質の自己放射線分解を実質的に抑制することができる。99mＴｃのような放射性同位体の酸化を防止するのに有効な安定剤は必ずしもペプチドおよびタンパク質の自己放射線分解を防止するのに有効でないことがわかった。同様に、ＨＳＡの添加または凍結のようなタンパク質の自己放射線分解を防止するのに使用される安定剤および技術は多くの場合有効または実用的でないことがわかった。したがって、本発明はペプチドおよびタンパク質の自己放射線分解を実質的に抑制する安定剤を含む組成物に関する。
【００１１】
ゲンチジン酸およびその誘導体はペプチドおよびタンパク質の自己放射線分解を抑制するのに非常に有効であることがわかった。ゲンチジン酸およびその誘導体はまた、自己放射線分解を抑制するためにイノシトールおよびアスコルビン酸のような他の安定剤と共に使用してもよい。
【００１２】
本発明はペプチドおよびタンパク質の自己放射線分解を実質的に抑制する安定剤を含む組成物に関する。ペプチドおよびタンパク質の自己放射線分解を抑制するのに非常に有効な安定剤の１群はゲンチジン酸およびその誘導体である。本発明の安定剤を必要とする放射性標識ペプチドおよびタンパク質には診断および治療用途を有するペプチドおよびタンパク質が含まれる。
【００１３】
ゲンチジン酸（すなわち、２，５−ジヒドロキシ安息香酸）は商業的に入手でき、また当該技術分野において知られている幾つかの方法によって製造できる。ゲンチジン酸の誘導体にはゲンチジン酸の薬学的に許容しうる塩およびエステル、並びにゲンチシルアルコールが含まれる。適当なゲンチジン酸誘導体の例は米国特許第４，４９７，７４４号および第４，２３２，０００号（参考文献として本明細書に組込まれる）に記載されている。
【００１４】
放射性標識ペプチドの自己放射線分解を抑制するために、イノシトールおよびアスコルビン酸のような他の安定剤をゲンチジン酸またはその誘導体と組合せて使用してもよい。
【００１５】
ゲンチジン酸の薬学的に許容しうる塩およびエステル、並びにゲンチシルアルコールは、米国特許第４，４９７，７４４号および第４，２３２，０００号に記載されている技術のような当該技術分野において知られている標準的な中和およびエステル化法によって製造することができる。実際に、本発明における使用に適したゲンチジン酸の塩およびエステルはそれらの溶解度に従って選択することができる。可溶性ゲンチジン酸塩には可溶性のアルカリ金属、アルカリ土類金属、重金属およびアンモニウム塩が含まれる。ナトリウム、リチウムおよびカリウムのようなアルカリ金属塩は非常に可溶性であり、好ましい。カルシウムおよびマグネシウムのようなアルカリ土類金属ゲンチジン酸塩はあまり可能性ではないが本発明における使用に適している。
【００１６】
本発明においては、ペプチドの自己放射線分解をひき起こしうる広範囲の放射性同位体を使用することができる。このような放射線同位体にはγ線、β線およびα線放射体が含まれる。
【００１７】
適当なγ線放射体には診断技術に有用な放射性核種が含まれる。幾つかの典型的なγ線を放射する放射性核種の例は67Ｇａ、111Ｉｎ、99mＴｃ、169Ｙｂ、125Ｉ、123Ｉおよび201Ｔｌである。β線を放射することのできる放射性核種の例には90Ｙ、67Ｃｕ、186Ｒｅ、188Ｒｅ、169Ｅｒ、121Ｓｎ、127Ｔｅ、143Ｐｒ、198Ａｕ、109Ｐｄ、165Ｄｙ、32Ｐ、142Ｐｒ、177Ｌｕ、166Ｈｏ、153Ｓｍ、90Ｙ、131Ｉ、89Ｓｒおよび105Ｒｈのような治療用として有用なものが含まれる。典型的なα線放射体には212Ｂｉ、211Ａｔ、241Ａｍおよび255Ｆｍが含まれる。
【００１８】
ペプチドおよびタンパク質の放射性標識は当該技術分野において知られている種々の方法を用いて行なうことができる。例えば、ペプチドは二官能性キレートの使用、直線標識またはアミノ酸側鎖の特定の官能基との共有結合により標識できる。二官能性キレートの使用は放射性核種の錯化するキレートのペプチドまたはタンパク質との共有結合を包含する。可能な二官能性キレートにはＤＴＰＡおよびＮ3Ｓリガンドが含まれる。ＤＴＰＡは米国特許第４，４７９，９３０号（参考文献として本明細書に組込まれる）に記載の二環式二無水物法によってペプチドまたはタンパク質に結合することができる。Ｎ3Ｓリガンドは米国特許第４，９６５，３９２号および欧州特許公報Ｎｏ．０２８４０７１（参考文献として本明細書に組込まれる）に記載の方法によってペプチドまたはタンパク質に結合することができる。
【００１９】
直接標識においては、放射性核種はペプチドまたはタンパク質に存在するアミノ酸側鎖の官能基と結合する。放射性核種はまた、還元ジスルフィド結合を含有するペプチドまたはタンパク質のような還元形態のペプチドまたはタンパク質と結合しうる。当該技術分野において知られている直接標識の１例は米国特許第４，８７７，８６８号（参考文献として本明細書に組込まれる）に記載されている。
【００２０】
ペプチドおよびタンパク質を標識するためのよく知られている他の技術は放射性核種をアミノ酸側鎖のある特定の官能基と共有結合すること、例えばチロシン残基のフエノール基への沃素の導入を包含する。
【００２１】
放射性医薬製剤を製造するための商品は一般に凍結乾燥（フリーズドライ）“キット”または液状配合物として提供される。凍結乾燥キットは当該技術分野においてよく知られている。本発明において、凍結乾燥キットはクエン酸、酢酸または酒石酸ナトリウムのようなトランスファーリガンド；使用する放射性同位体に応じて還元剤；イノシトールまたはラクトースのような増量剤；標識対象ペプチドまたはタンパク質；および１種以上のゲンチジン酸安定剤を含有してもよい。また、本明細書に記載の配合物に他の安定剤を加えてもよい。放射性同位体は患者に投与する直前に凍結乾燥キットに加えられる。
【００２２】
液状配合物は通常、放射性同位体で標識されたペプチドまたはタンパク質を含有する。本発明において、液状配合物はまた、配合物を安定化するための１種以上のゲンチジン酸誘導体を含有する。安定性を改善するため、イノシトールおよびアスコルビン酸のような他の安定剤もまた配合物に加えることができる。溶液がオートクレーブ処理される場合、安定性を改善するためポリソルベート８０のような界面活性剤および所望のイオン強度を与える塩溶液もまた加えることができる。溶液は酸素を除去する必要がある場合もある。
【００２３】
本発明の放射性標識組成物は常法に従って非経口的に、好ましくは静脈内的に、注射可能な製剤溶液または懸濁液の形態で投与することができる。
【００２４】
本発明の治療法を行なう際の投与量はもちろん治療対象の症状、例えば腫瘍の量、使用する特定のキレート、放射性同位体の半減期および所望の治療に応じて変化する。一般に、投与量は各臓器に対する放射能分布および観測標的吸収量に基づいて計算される。
【発明を実施するための最良の形態】
【００２５】
以下の実施例を用いて本発明をさらに詳しく説明する。これらの実施例は単なる例示であり、本発明の態様を限定するものではない。
［実施例］
［実施例１］クエン酸塩の添加による111Ｉｎで標識されたＤＴＰＡ−オクトレオチドの製造
１０μｇのＤＴＰＡ−オクトレオチド（Ｎ−〔３，６，９，９−テトラキス（カルボキシメチル）−３，６，９−トリアザノナノイル〕−Ｄ−フェニルアラニル−Ｌ−ヘキシスチル−Ｌ−フェニルアラニル−Ｄ−トリプトフィル−Ｌ−リシル−Ｌ−トレオニル−Ｌ−ヘミシスチル−Ｌ−トレオニノール環状（２→７）ジスルフィド（分子量−１３９４．６０ｇ／モル）、５．６ｍｇのクエン酸三ナトリウムニ水和物および０．４ｍｇのクエン酸一水和物を含有する凍結乾燥キットに４．７０ｍＣｉの111Ｉｎを含有する１．０ｍｌの０．０２Ｍ  ＨＣｌを加えた。溶液のｐＨは４．５であった。溶液を室温で保持し、逆相ＨＰＬＣおよびベックマン１７０ラジオメーターを用いて111Ｉｎ  ＤＴＰＡ−オクトレオチドの量を観察した。ＨＰＬＣ法はハミルトンＰＲＰ−１カラム（２５ｃｍ×４．１ｍｍ、１０ミクロン）および勾配系を使用し、勾配は１００％Ａ（Ａ＝１０：９０／エタノール：水、１０ｍＭリン酸テトラブチルアンモニウム、ｐＨ３）から４３：５７／Ａ：Ｂ（Ｂ＝５０：５０／エタノール：水、１０ｍＭリン酸テトラブチルアンモニウム、ｐＨ３）まで１０分間にわたって直線的に変化させ、１５分間４３：５７／Ａ、Ｂに保持し、次いで１０分間にわたって１００％Ｂまで直線的に変化させた。流速は１．５ｍｌ／分であった。111Ｉｎ  ＤＴＰＡ−オクトレオチドの保持時間は３０分であった。
111Ｉｎで標識されたペプチドの純度は再生直後で８７％であり、再生１０時間後で５０％であった。
【００２６】
［実施例２］クエン酸塩およびイノシトールの添加による111Ｉｎで標識されたＤＴＰＡ−オクトレオチドの製造
１０μｇのＤＴＰＡ−オクトレオチド（Ｎ−〔３，６，９，９−テトラキス（カルボキシメチル）−３，６，９−トリアザノナノイル〕−Ｄ−フェニルアラニル−Ｌ−ヘミシスチル−Ｌ−フェニルアラニル−Ｄ−トリプトフィル−Ｌ−リシル−Ｌ−トレオニル−Ｌ−ヘミシスチル−Ｌ−トレオニノール環状（２→７）ジスルフィド（分子量＝１３９４．６０ｇ／モル）、５．６ｍｇのクエン酸三ナトリウムニ水和物、０．４ｍｇのクエン酸一水和物および１．０ｍｇのイノシトールを含有する凍結乾燥キットに６．０４ｍＣｉの111Ｉｎを含有する１．０ｍｌの０．０２Ｍ  ＨＣｌを加えた。溶液のｐＨは４．５であった。溶液を室温で保持し、逆相ＨＰＬＣおよびベックマン１７０ラジオメーターを用いて111Ｉｎ  ＤＴＰＡ−オクトレオチドの量を観察した。ＨＰＬＣ法はハミルトンＰＲＰ−１カラム（２５ｃｍ×４．１ｍｍ、１０ミクロン）および勾配系を使用し、勾配は１００％Ａ（Ａ＝１０：９０／エタノール：水、１０ｍＭリン酸テトラブチルアンモニウム、ｐＨ３）から１００％Ｂ（Ｂ＝５０：５０／エタノール：水、１０ｍＭリン酸テトラブチルアンモニウム、ｐＨ３）まで６０分間にわたって直線的に変化させた。流速は１．５ｍｌ／分であった。111Ｉｎ  ＤＴＰＡ−オクトレオチドの保持時間は４４〜４５分であった。
111Ｉｎで標識されたペプチドの純度は再生直後で９４％であり、再生２４時間後で７３．５％であった。
【００２７】
［実施例３］クエン酸塩、イノシトールおよびアスコルビン酸の添加による111Ｉｎで標識されたＤＴＰＡ−オクトレオチドの製造
１０μｇのＤＴＰＡ−オクトレオチド（Ｎ−〔３，６，９，９−テトラキス（カルボキシメチル）−３，６，９−トリアザノナノイル〕−Ｄ−フェニルアラニル−Ｌ−ヘミシスチル−Ｌ−フェニルアラニル−Ｄ−トリプトフィル−Ｌ−リシル−Ｌ−トレオニル−Ｌ−ヘミシスチル−Ｌ−トレオニノール環状（２→７）ジスルフィド（分子量＝１３９４．６０ｇ／モル）、５．６ｍｇのクエン酸三ナトリウムニ水和物および０．４ｍｇのクエン酸一水和物を含有する凍結乾燥キットに１．０ｍｇのイノシトール、８．８ｍｇのアスコルビン酸、９．９ｍｇのアスコルビン酸ナトリウムおよび５．０５ｍＣｉの111Ｉｎを含有する１、０ｍｌの０．０２Ｍ  ＨＣｌを加えた。溶液のｐＨは４．０であった。溶液を室温で保持し、逆相ＨＰＬＣおよびベックマン１７０ラジオメーターを用いて111Ｉｎ  ＤＴＰＡ−オクトレオチドの量を観察した。ＨＰＬＣ法はハミルトンＰＲＰ−１カラム（２５ｃｍ×４．１ｍｍ、１０ミクロン）および勾配系を使用し、勾配は１００％Ａ（Ａ＝１０：９０／エタノール：水、１０ｍＭリン酸テトラブチルアンモニウム、ｐＨ３）から１００％Ｂ（Ｂ＝５０：５０／エタノール：水、１０ｍＭリン酸テトラブチルアンモニウム、ｐＨ３）まで３５分間にわたって直線的に変化させた。流速は１．５ｍｌ／分であった。111ＩｎＤＴＰＡ−オクトレオチドの保持時間は３０分であった。
111Ｉｎで標識されたペプチドの純度は再生直後で９４％であり、再生２２時間後で８６％であった。
【００２８】
［実施例４］クエン酸塩、イノシトールおよびゲンチジン酸の添加による111Ｉｎで標識されたＤＴＰＡ−オクトレオチドの製造
１０μｇのＤＴＰＡ−オクトレオチド（Ｎ−〔３，６，９，９−テトラキス（カルボキシメチル）−３，６，９−トリアザノナノイル〕−Ｄ−フェニルアラニル−Ｌ−ヘミシスチル−Ｌ−フェニルアラニル−Ｄ−トリプトフィル−Ｌ−リシル−Ｌ−トレオニル−Ｌ−ヘミシスチル−Ｌ−トレオニノール環状（２→７）ジスルフィド（分子量＝１３９４．６０ｇ／モル）、５．６ｍｇのクエン酸三ナトリウムニ水和物および０．４ｍｇのクエン酸一水和物を含有する凍結乾燥キットに１．０ｍｇのイノシトール、１．５ｍｇゲンチジン酸および５．４０ｍＣｉの111Ｉｎを含有する１．０ｍｌの０．０２Ｍ  ＨＣｌを加えた。溶液のｐＨは４．０であった。溶液を室温で保持し、逆相ＨＰＬＣおよびベックマン１７０ラジオメーターを用いて111Ｉｎ  ＤＴＰＡ−オクトレオチドの量を観察した。ＨＰＬＣ法はハミルトンＰＲＰ−１カラム（２５ｃｍ×４．１ｍｍ、１０ミクロン）および勾配系を使用し、勾配は１００％Ａ（Ａ＝１０：９０／エタノール：水、１０ｍＭリン酸テトラブチルアンモニウム、ｐＨ３）から１００％Ｂ（Ｂ＝５０：５０／エタノール：水、１０ｍＭリン酸テトラブチルアンモニウム、ｐＨ３）まで６０分間にわたって直線的に変化させた。流速は１．５ｍｌ／分であった。111Ｉｎ  ＤＴＰＡ−オクトレオチドの保持時間は４４〜４５分であった。
111Ｉｎで標識されたペプチドの純度は再生直後で９４％であり、再生４８時間後で９４％であった。
【００２９】
［実施例５］ゲンチジン酸の添加による111Ｉｎで標識されたＤＴＰＡ−オクトレオチドの製造
１０μｌの水中における１０μｇのＤＴＰＡ−オクトレオチド（Ｎ−〔３，６，９，９−テトラキス（カルボキシメチル）−３，６，９−トリアザノナノイル〕−Ｄ−フェニルアラニル−Ｌ−ヘミシスチル−Ｌ−フェニルアラニル−Ｄ−トリプトフィル−Ｌ−リシル−Ｌ−トレオニル−Ｌ−ヘミシスチル−Ｌ−トレオニノール環状（２→７）ジスルフィド（分子量＝１３９４．６０ｇ／モル）を含有するバイアルに２．３ｍｇのゲンチジン酸および４１．４ｍｇのゲンチジン酸ナトリウムニ水和物からなる１ｍｌの脱気ストック溶液、並びに４．６６ｍＣｉの111Ｉｎを含有する２５μｌの０．０２Ｍ  ＨＣｌを加えた。溶液のｐＨは４．２であった。溶液を室温で保持し、逆相ＨＰＬＣおよびベックマン１７０ラジオメーターを用いて111Ｉｎ  ＤＴＰＡ−オクトレオチドの量を観察した。ＨＰＬＣ法はハミルトンＰＲＰ−１カラム（１５ｃｍ×４．１ｍｍ、１０ミクロン）を使用し、そして移動相Ａ（Ａ＝２０：１０：７０／アセトニトリル：エタノール：水、１０ｍＭリン酸テトラブチルアンモニウム、ｐＨ３）を用いて９分間溶離し、次いで移動相Ｂ（Ｂ＝５０：１０：４０／アセトニトリル：エタノール：水、１０ｍＭリン酸テトラブチルアンモニウム、ｐＨ３）を用いて９〜１５分間溶離した。流速は１．２ｍｌ／分であった。111Ｉｎ  ＤＴＰＡ−オクトレオチドの保持時間は９〜１０分であった。
111Ｉｎで標識されたペプチドの純度は再生直後で９７％であり、再生７２時間後で９７％であった。
【００３０】
［実施例６］酢酸塩およびニコチン酸の添加による111Ｉｎで標識されたＤＴＰＡ−オクトレオチドの製造
１０μｇのＤＴＰＡ−オクトレオチド（Ｎ−〔３，６，９，９−テトラキス（カルボキシメチル）−３，６，９−トリアザノナノイル〕−Ｄ−フェニルアラニル−Ｌ−ヘミシスチル−Ｌ−フェニルアラニル−Ｄ−トリプトフィル−Ｌ−リシル−Ｌ−トレオニル−Ｌ−ヘミシスチル−Ｌ−トレオニノール環状（２→７）ジスルフィド（分子量＝１３９４．６０ｇ／モル）および酢酸塩緩衝剤（ｐＨ４）を含有する凍結乾燥キットに１２．３ｍｇのニコチン酸および２．４５ｍＣｉの111Ｉｎを含有する１．０ｍｌの０．０２Ｍ  ＨＣｌを加えた。溶液のｐＨは３．８であった。溶液を室温で保持し、逆相ＨＰＬＣおよびベックマン１７０ラジオメーターを用いて111Ｉｎ  ＤＴＰＡ−オクトレオチドの量を観察した。ＨＰＬＣ法はハミルトンＰＲＰ−１カラム（２５ｃｍ×４．１ｍｍ、１０ミクロン）および勾配系を使用し、勾配は１００％Ａ（Ａ＝１０：９０／エタノール：水、１０ｍＭリン酸テトラブチルアンモニウム、ｐＨ３）から１００％Ｂ（Ｂ＝５０：５０／エタノール：水、１０ｍＭリン酸テトラブチルアンモニウム、ｐＨ３）まで６０分間にわたって直線的に変化させた。流速は１．５ｍｌ／分であった。111Ｉｎ  ＤＴＰＡ−オクトレオチドの保持時間は４４〜４５分であった。
111Ｉｎで標識されたペプチドの純度は再生直後で９０％であり、再生２４時間後で８０％であった。
【００３１】
［実施例７］クエン酸塩、イノシトールおよびレゾルシノールの添加による111Ｉｎで標識されたＤＴＰＡ−オクトレオチドの製造
１０μｇのＤＴＰＡ−オクトレオチド（Ｎ−〔３，６，９，９−テトラキス（カルボキシメチル）−３，６，９−１−リアザノナノイル〕−Ｄ−フェニルアラニル−Ｌ−ヘキシスチル−Ｌ−フェニルアラニル−Ｄ−トリブトフィル−Ｌ−リシル−Ｌ−トレオニル−Ｌ−ヘミシスチル−Ｌ−トレオニノール環状（２→７）ジスルフィド（分子量＝１３９４．６０ｇ／モル）、５．６ｍｇのクエン酸三ナトリウムニ水和物および０．４ｍｇのクエン酸一水和物を含有する凍結乾燥キットに１．０ｍｇのイノシトール、１１ｍｇのレゾルシノールおよび５．１７ｍＣｉの111Ｉｎを含有する１．０ｍｌの０．０２Ｍ  ＨＣｌを加えた。溶液のｐＨは４．５であった。溶液を室温で保持し、逆相ＨＰＬＣおよびベックマン１７０ラジオメーターを用いて111Ｉｎ  ＤＴＰＡ−オクトレオチドの量を観察した。ＨＰＬＣ法はハミルトンＰＲＰ−１カラム（２５ｃｍ×４．１ｍｍ、１０ミクロン）および勾配系を使用し、勾配は１００％Ａ（Ａ＝１０：９０／エタノール：水、１０ｍＭリン酸テトラブチルアンモニウム、ｐＨ３）から４３：５７／Ａ：Ｂ（Ｂ＝５０：５０／エタノール：水、１０ｍＭリン酸テトラブチルアンモニウム、ｐＨ３）まで１０分間にわたって直線的に変化させ、１５分間４３：５７／Ａ：Ｂに保持し、次いで１０分間にわたって１００％Ｂまで直線的に変化させた。流速は１．５ｍｌ／分であった。111Ｉｎ  ＤＴＰＡ−オクトレオチドの保持時間は３０分であった。
111Ｉｎで標識されたペプチドの純度は再生直後で８１％（さらに、６％の111Ｉｎトランスファーリガンド錯体）であり、再生１２０時間後で８７％であった。
【００３２】
実施例１〜７の結果を表１に示す。これらの結果は単独の、または他の安定剤と組合せたゲンチジン酸が放射性標識ペプチドの放射線分解を防止するのに非常に有効であることを示している。
【表１】
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【００３３】
［実施例８］123Ｉで標識されたＬＨ−ＲＨの製造
この製造は揮発性の沃素を吸着する木炭フイルターを備えた通風のよいヒュームフードを用いて行なわれる。
１．５ｍｌのポリエチレン管に、７０μｌの緩衝剤Ａ（Ａ＝１５０ｍＭのリン酸ナトリウム、ｐＨ７．４）、０．１Ｍ酢酸中における１０μｌの０．１ｍＭ  ＬＨ−ＲＨ溶液（デス−ｇｌｙ10、〔Ｄ−ａｌａ6〕−ＬＨ−ＲＨエチルアミド）および５μｌの０．０１Ｍ  ＮａＯＨ中における５ｍＣｉの123Ｉを加える。１０μｌのクロラミンＴ溶液（０．５ｍｇのクロラミンＴ／１ｍｌの緩衝剤Ａ）をペプチド溶液に加えることにより反応を開始し、そしてクロラミンＴを加えるために使用されるピペットで反応混合物を注意深く吸引して排出することにより混合する。１分後、１００μｌのメタ重亜硫酸ナトリウム溶液（１ｍｇのメタ重亜硫酸ナトリウム／１ｍｌの緩衝剤Ａ）を加えて反応を終了させ、そして反応混合物を上記のようにピペットで混合する。反応混合物をフードの中で数分間保持して揮発性の沃素を反応バイアルからフードの中に排出する。
【００３４】
溶液をＰＤ−１０カラム（Ｇ−２５ＭセファデックスＰＤ−１０カラム；Ｐｈａｒｍａｃｉａ  ＬＫＢ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ社製）に付し、ＰＢＳ（ｐＨ７．４）で溶離し、そして０．５ｍｌのフラクションを集める。123Ｉで標識されたＬＨ−ＲＨはフラクション６および７に存在し、その後これらを合一する。この溶液の半分は２ｍｇのゲンチジン酸を含有する別のバイアルに移す。
【００３５】
123Ｉ  ＬＨ−ＲＨ溶液を室温で保持し、そして逆相ＨＰＬＣおよびベックマン１７０ラジオメーターを使用して沃素化ペプチドの量および遊離の沃素の量を観察する。ＨＰＬＣ法はハミルトンＰＲＰ−３カラム（１５ｃｍ×４．１ｍｍ、１０ミクロン）および勾配系を使用し、勾配を１００％Ａ（Ａ＝１５：８５／アセトニトリル：水、６ｍＭ  ＨＣｌ）から１００％Ｂ（Ｂ＝５０：５０／アセトニトリル：水、６ｍＭ  ＨＣｌ）まで３０分間にわたって変化させて溶離する。この系の空隙率（ｖｏｉｄｖｏｌｕｍｅ）において遊離の沃化物が溶離し、他方123Ｉ  ＬＨ−ＲＨは保持され、より長い保持時間を有する。ゲンチジン酸安定剤の存在しない、放射性標識ペプチドを含む溶液はＨＰＬＣ分析測定により溶液中の遊離沃化物の量が増加するため、明らかに自己放射線分解により分解していることがわかる。
【００３６】
［実施例９］186Ｒｅで標識されたＮ3  Ｓ−ＮＲ−Ｌｕ−１０の製造
ＮＲ−Ｌｕ−１０単クローン性抗体（ＮｅｏＲｘ社製）はＮｅｏＲｘ社で開発され、米国特許第４，９６５，３９２号および欧州特許公報Ｎｏ．０２８４０７１に記載の予め生成したキレート体を使用して186Ｒｅで標識される。186Ｒｅ錯体を生成するために使用されるリガンドは〔Ｎ−（Ｓ−エトキシエチルメルカプト）アセチルアミノ）アジポイルグリシル〕グリシンのテトラフルオロフェニルエステルである。生成した186Ｒｅ錯体は186Ｒｅがリガンドの３個の窒素と１個の硫黄原子と配位結合しているため、186Ｒｅ−Ｎ3Ｓ錯体と称せられる。186Ｒｅ錯体は１ｍｇの塩化第１スズ、１０ｍｇのゲンチジン酸および２５０ｍｇのクエン酸からなる０．５ｍｌの脱酸素ストック溶液と共にパージした１０ｍｌのバイアルに含まれる０．５ｍｌの186Ｒｅベルレネート（４００ｍＣｉ、４ｍＣｉ／μｇＲｅ）を還元することにより生成される。溶液は室温で１５分間保持する。この溶液に１ｍｇのリガンド／１ｍｌのイソプロパノールのストック溶液０．２ｍｌを加える。溶液を８０℃で１５分間加熱する。
【００３７】
186Ｒｅ−Ｎ3Ｓ錯体を含有するバイアルに、１．０ｍｌのＰＢＳ中における２５ｍｇのタンパク質の溶液を加える。溶液のｐＨを０．２Ｍ炭酸ナトリウム緩衝剤でｐＨ９〜９．５に調整する。溶液を室温で１５分間インキュベートする。典型的な結合率は５０％であり、この反応は２００ｍＣｉの186Ｒｅ／２５ｍｇのＮＲ−Ｌｕ−１０の比放射能で186Ｒｅ−Ｎ3Ｓ−ＮＲ−Ｌｕ−１０を生成する。
【００３８】
186Ｒｅ−Ｎ3Ｓ−ＮＲ−Ｌｕ−１０はＰＤ−１０カラム（Ｇ−２５ＭセファデックスＰＤ−１０カラム；Ｐｈａｒｍａｃｉａ  ＬＫＢ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ社製）を使用し、ＰＢＳ（ｐＨ７，４）で溶離し、そして０．５ｍｌのフラクションを集めることにより精製する。186Ｒｅ−Ｎ3Ｓ−ＮＲ−Ｌｕ−１０はフラクション６および７に溶出し、その後これらを合一する。この溶液の半分を１０ｍｇのゲンチジン酸を含有するバイアルに移す。
【００３９】
標識タンパク質を室温で保持し、そしてゲル透過カラム（ゾルバックスＧＦ−２５０；９．４ｍｍ×２５．０ｃｍ；ＤｕＰｏｎｔ社製）を用いたＨＰＬＣを使用し、１ｍｌ／分の流速で０．１Ｍリン酸塩、０．１％硫酸ドデシルナトリウム（ｐＨ６．７）の移動相で溶離することにより186Ｒｅ−Ｎ3Ｓ−ＮＲ−Ｌｕ−１０の純度を観察する。標識された単クローン性抗体の自己放射線分解による分解の存在は186Ｒｅ−Ｎ3Ｓ−ＮＲ−Ｌｕ−１０単クローン性抗体のピークに対応しないＨＰＬＣピークの出現により検出される。ゲンチジン酸を含まない溶液中では放射線分解が生じる。
【００４０】
本発明の精神または本質的な特徴から逸脱することなく、本発明を他の特定の形態で具体化できる。上記の態様はすべて単なる実例であり、本発明を制限するものではない。したがって、本発明の範囲は上記の記載よりもむしろ請求の範囲に記載の発明によって示される。請求の範囲に記載の発明の定義および等個物の範囲内の変形はすべて本発明の範囲内に包含される。