(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
下記の式１で示されるセサミノール３配糖体１００重量部当たり、セサミノール１分子にグルコース１分子がグルコシド結合したセサミノールモノグルコシド及びセサミノール１分子にグルコース２分子がグルコシド結合したセサミノールジグルコシドから選ばれる１種又は２種以上を４０〜１５０重量部の割合で含有するセサミノール配糖体組成物を有効成分とすることを特徴とする抗酸化剤。
【式１】
0003797700.tif 000006
【請求項２】
セサミノールモノグルコシドが下記の式２で示されるセサミノール２’−Ｏ−β−Ｄ−グルコピラノシドである請求項１記載の抗酸化剤。
【式２】
0003797700.tif 000007
【請求項３】
セサミノールジグルコシドが下記の式３で示されるセサミノール２’−Ｏ−β−Ｄ−グルコピラノシル（１→２）−β−Ｄ−グルコピラノシドである請求項１又は２記載の抗酸化剤。
【式３】
0003797700.tif 000008
【請求項４】
セサミノール配糖体組成物が、セサミノール３配糖体、セサミノールモノグルコシド及びセサミノールジグルコシドを含有するものである請求項１〜３のいずれか一つの項記載の抗酸化剤。
【請求項５】
脂質を含む水系媒体中に請求項１〜４のいずれか一つの項記載の抗酸化剤を共存させることを特徴とする水系媒体中の脂質の酸化防止方法。
【請求項６】
脂質１ｇ当たり、抗酸化剤を該抗酸化剤に含まれるアグリコンとして１〜２００μＭの割合で共存させる請求項５記載の水系媒体中の脂質の酸化防止方法。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は抗酸化剤、更に詳しくは特定のセサミノール配糖体組成物を有効成分とする抗酸化剤及びこれを用いる水系媒体中の脂質の酸化防止方法に関する。
【０００２】
【従来の技術】
従来、胡麻種子中には、天然抗酸化剤としてセサミノール、セサモリノール、ピノレジノール等のリグナン類が存在することが知られている（特開昭６２−５８１、特開昭５９−１５７０８６、特開昭５９−１５７１７３）。しかし、これらはいずれも油溶性（非水溶性）であり、水系媒体中の脂質の酸化を防止するには水中に乳化若しくは分散させることが必要であるため、実際のところ、その使用が厄介で制約されるという問題がある。別に、水に溶解性を有する天然抗酸化剤として、セサミノール分子中のフェノール性水酸基とグルコースとがグルコシド結合したセサミノール配糖体が知られている（特開昭６２−２３８２８７、農芸化学会誌６７巻１２号，１６９３〜１７００頁，１９９３年、同誌６９巻６号，７０３〜７０５頁，１９９５年）。かかるセサミノール配糖体には、構造の確定したものとして、セサミノール２’−Ｏ−β−Ｄ−グルコピラノシドで示されるセサミノールモノグルコシド、セサミノール２’−Ｏ−β−Ｄ−グルコピラノシル（１→２）−β−Ｄ−グルコピラノシドで示されるセサミノールジグルコシド（特開平６−３０６０９３）及びセサミノール２’−Ｏ−β−Ｄ−グルコピラノシル（１→２）−Ｏ−［β−Ｄ−グルコピラノシル（１→６）］−β−Ｄ−グルコピラノシド{ヒトケミストリー（ phytochemistry ）３５巻３号,７７３〜７７６頁，１９９４年｝で示されるセサミノール３配糖体が知られている。これらのセサミノール配糖体は、油溶性のセサミノールと対比すると、水系媒体中で相応の抗酸化活性を示すが、１）セサミノールモノグルコシドは水に対する溶解性が低く、水系媒体中では抗酸化活性が発現し難い、２）セサミノールジグルコシドは水に対する溶解性はセサミノールモノグルコシドよりも若干優れているが、依然として水系媒体中では抗酸化活性の発現が不十分である、３）セサミノール３配糖体は分子中に占める抗酸化活性を示す本体であるアグリコンとしてのセサミノールの含有割合が相対的に低いため、見掛け使用量を多くしないと充分な抗酸化活性が得られない、という欠点を有する。
【０００３】
【発明が解決しようとする課題】
本発明が解決しようとする課題は、従来のセサミノール配糖体のそれぞれ単独では、水に対する溶解性が低かったり、或は分子中に占めるセサミノールの含有割合が低いため、少量の使用で水系媒体中における充分な抗酸化活性を得ることができない点である。
【０００４】
【課題を解決するための手段】
しかして本発明者らは、叙上の如き従来の課題を解決するべく鋭意研究した結果、特定構造のセサミノール３配糖体にセサミノールモノグルコシド及び／又はセサミノールジグルコシドを所定割合で併用すると、これらが相乗効果を発現し、所期の目的を達成し得ることを見出した。
【０００５】
すなわち本発明は、下記の式１で示されるセサミノール３配糖体１００重量部当たり、セサミノール１分子にグルコース１分子がグルコシド結合したセサミノールモノグルコシド及びセサミノール１分子にグルコース２分子がグルコシド結合したセサミノールジグルコシドから選ばれる１種又は２種以上を４０〜１５０重量部の割合で含有するセサミノール配糖体組成物を有効成分とすることを特徴とする抗酸化剤及びこれを用いる水系媒体中の脂質の酸化防止方法に係る。
【０００６】
【式１】
0003797700.tif 000002
【０００７】
式１で示されるセサミノール３配糖体はセサミノール２’−Ｏ−β−Ｄ−グルコピラノシル（１→２）−Ｏ−［β−Ｄ−グルコピラノシル（１→６）］−β−Ｄ−グルコピラノシドである。このセサミノール３配糖体は勝崎らの開示した方法｛ヒトケミストリー（ phytochemistry ）３５巻３号,７７３〜７７６頁，１９９４年｝によって得ることができる。すなわち脱脂され、そして破砕されたゴマ種子を８０％エタノール水を用いて抽出し、その抽出物をシリカゲルカラムを用いて分画し、更にＯＤＳカラムを用いた液体クロマトグラフィーに供して分取することができる。
【０００８】
上記のセサミノール３配糖体に含有させるものはセサミノール１分子にグルコース１分子がグルコシド結合したセサミノールモノグルコシド及びセサミノール１分子にグルコース２分子がグルコシド結合したセサミノールジグルコシドから選ばれる１種又は２種以上である。本発明は、かかるセサミノールモノグルコシドやセサミノールジグルコシドにおいて、そのグルコシド結合の位置や立体構造を特に制限するものではないが、セサミノールモノグルコシドとして、その構造の確定した下記の式２で示されるセサミノール２’−Ｏ−β−Ｄ−グルコピラノシドを用い、またセサミノールジグルコシドとして、その構造の確定した下記の式３で示されるセサミノール２’−Ｏ−β−Ｄ−グルコピラノシル（１→２）−β−Ｄ−グルコピラノシドを用いるのが有利である。
【０００９】
【式２】
0003797700.tif 000003
【００１０】
【式３】
0003797700.tif 000004
【００１１】
上記の構造の確定したセサミノールモノグルコシドやセサミノールジグルコシドは特開平６−３０６０９３号公報に開示された方法を用いて得ることができる。すなわち、破砕され、そして脱脂されたゴマ種子を水溶性溶媒を用いて抽出し、その抽出物をβ−グルコシダーゼで処理し、更にこの処理物を水溶性溶媒を用いて液体クロマトグラフィーに供して、セサミノールモノグルコシド及びセサミノールジグルコシドをそれぞれ含有する区分を分画することによって得ることができる。
【００１２】
本発明のセサミノール配糖体組成物は、セサミノール３配糖体に対して、１）セサミノールモノグルコシドを含有するもの、２）セサミノールジグルコシドを含有するもの、３）セサミノールモノグルコシド及びセサミノールジグルコシドの双方を含有するもの、以上の１）〜３）を包含する。
【００１３】
本発明のセサミノール配糖体組成物は、セサミノール３配糖体１００重量部当たり、セサミノールモノグルコシド及びセサミノールジグルコシドから選ばれる１種又は２種以上を４０〜１５０重量部の割合で含有するものである。また本発明によれば、セサミノール３配糖体にセサミノールモノグルコシド及びセサミノールジグルコシドの双方を含有するものが好ましい。
【００１４】
本発明のセサミノール配糖体組成物は、その理由は明らかでないが、それを構成するセサミノール配糖体をそれぞれ単独で用いる場合よりも、水系媒体中における抗酸化活性が高く、より具体的には少量の使用で水系媒体中の脂質の酸化を有効に防止する。
【００１５】
本発明のセサミノール配糖体組成物を用いて水系媒体中の脂質の酸化を防止するには、セサミノール配糖体組成物を該水系媒体中へ共存させればよい。この場合、該水系媒体中に米コウジ、大豆コウジ、枯草菌等の菌体が産生する酵素類や生体内酵素類のうちでグルコピラノシド結合を加水分解し得るような酵素類が存在すると、脂質の酸化をより有効に防止できる。
【００１６】
水系媒体中に脂質が含まれる系としては、水系媒体中に油脂類が乳化分散している系（牛乳、豆乳）、魚肉、豚肉、牛肉等の生食肉組織系、ハム、ソーセージ等の食肉加工品等、更には各種の生体組織が挙げられる。
【００１７】
本発明は本発明のセサミノール配糖体組成物を水系媒体中に共存させる量について特に制限するものではないが、その量は通常、該水系媒体中に含まれる脂質１ｇ当たり本発明のセサミノール配糖体に含まれるアグリコン換算として１〜２００μＭである。
【００１８】
本発明は本発明のセサミノール配糖体組成物を水系媒体中に共存させる方法について特に制限するものではない。例えば、食肉加工品、ヨーグルト、豆乳等の加工食品に対してはその原料の混練時若しくは製品に直接添加することができ、また生体組織に対しては経口服用することができる。
【００１９】
【発明の実施の形態】
本発明に係る抗酸化剤は以上説明したようなセサミノール配糖体組成物を有効成分とするものであるが、かかるセサミノール配糖体組成物としては次の１）〜５）が好適例として挙げられる。
１）セサミノール２’−Ｏ−β−Ｄ−グルコピラノシル（１→２）−Ｏ−［β−Ｄ−グルコピラノシル（１→６）］−β−Ｄ−グルコピラノシド（セサミノール３配糖体，以下これをＳ−３とする）／セサミノール２’−Ｏ−β−Ｄ−グルコピラノシル（１→２）−β−Ｄ−グルコピラノシド（セサミノールジグルコシド，以下これをＳ−２とする）／セサミノール２’−Ｏ−β−Ｄ−グルコピラノシド（セサミノールモノグルコシド，以下これをＳ−１とする）＝１００／７５／２５（重量比）の割合から成るセサミノール配糖体組成物。
２）Ｓ−３／Ｓ−２＝１００／１００（重量比）の割合から成るセサミノール配糖体組成物。
３）Ｓ−３／Ｓ−１＝１００／１００（重量比）の割合から成るセサミノール配糖体組成物。
４）Ｓ−３／Ｓ−２／Ｓ−１＝１００／３０／２０（重量比）の割合から成るセサミノール配糖体組成物。
５）Ｓ−３／Ｓ−２／Ｓ−１＝１００／１００／４０（重量比）の割合から成るセサミノール配糖体組成物。
【００２０】
また本発明に係る抗酸化剤を用いる水系媒体中の脂質の酸化防止方法としては、次の６）が挙げられる。
６）前記した１）〜５）のいずれかのセサミノール配糖体組成物を、豆乳５００mlに対し、該セサミノール配糖体組成物に含まれるアグリコンであるセサミノール換算で５０μＭ相当量となるよう加える方法。
【００２１】
【実施例】
以下、実施例及び比較例を挙げて本発明の構成及び効果をより具体的にするが、本発明が該実施例に限定されるというものではない。
試験区分１（セサミノール配糖体の調製）
・セサミノール３配糖体の調製
中国産胡麻種子２５０ｇをすりつぶしてフラスコに採り、ヘキサン１リットルを加えて室温で５時間撹拌した後、濾過した。この操作を更に２回繰り返し、固形物を室温で通風乾燥して、脱脂胡麻種子１１５ｇ得た。この脱脂胡麻種子１１５ｇをフラスコに採り、エタノール７３６ｇ及び水１８４ｇを加えて、室温で１５時間撹拌した後、濾過して、濾液３５５ｇを得た。この濾液を４０℃以下の温度で減圧下に８０ｇまで濃縮し、更に凍結乾燥して、抽出物２．７ｇを得た。この抽出物０．５ｇを８０％エタノール水溶液に溶解し、ポリスチレンゲル（商品名アンバーライトＸＡＤ−２、ロームアンドハース社製）を充填したガラス製カラムの上部より流入して、ポリスチレンゲルに吸着させた。そして移動相として、水７５mlから始めて、２０％メタノール水溶液７５ml、４０％メタノール水溶液７５ml、６０％メタノール水溶液７５ml、８０％メタノール水溶液７５ml、メタノール７５mlと順次流し、６０％メタノール水溶液で溶出した溶出液を集め、濃縮した。この濃縮物を下記の条件で液体クロマトグラフィーを用いて更に分画した。
固定相：デベロシルＯＤＳ−５（商品名、野村化学社製）
カラム径：２０mm
カラム長：２５０mm
移動相：メタノール／水＝１／１（ｖ／ｖ）
移動相流量：２．５ml／分
検出：ＵＶ２８０ｎｍ
ここで保持時間１５〜１７分で流出する区分を回収した後、４０℃以下の温度で減圧下に濃縮し、更に凍結乾燥して、固状体１９．０mgを得た。かくして得られた固状体が前記の式１で示される、セサミノール２’−Ｏ−β−Ｄ−グリコピラノシル（１→２）−Ｏ−［β−Ｄ−グルコピラノシル（１→６）］−β−Ｄ−グルコピラノシドであることを以下の各種分析結果により確定した。
【００２２】
分析結果
１）マススペクトル
［Ｍ−Ｈ]-；ｍ／ｚ８５５
２）紫外線吸収スペクトル
λｍａｘ（ｌｏｇε）；２９０ｎｍ（３．８２），２３６ｎｍ（３．８０）  ３）比旋光度［α]D；−９．７５
４）1ＨＮＭＲδケミカルシフト（帰属水素）
２．８８（Ｈ−１），４．６５（Ｈ−２），３．７６（Ｈ−４ａ），４．１６（Ｈ−４ｅ），２．８８（Ｈ−５），５．１６（Ｈ−６），３．９８（Ｈ−８ａ），４．１６（Ｈ−８ｅ），６．９１（Ｈ−３’），６．７５（Ｈ−６’），６．７５（Ｈ−２”），６．７７（Ｈ−５”）６．７５（Ｈ−６”），５．８７（−Ｏ−ＣＨ2−Ｏ−），５．９１（−Ｏ−ＣＨ2−Ｏ−），５．１９（Ｇ１），３．８４（Ｇ２），３．８１（Ｇ３），３．５０（Ｇ４），３．７２（Ｇ５），３．８０（Ｇ６ａ），４．０９（Ｇ６ｂ），４．８５（Ｇ１’），３．２９（Ｇ２’）３．４８（Ｇ３’），３．４０（Ｇ４’），３．３０（Ｇ５’），３．５８（Ｇ６ａ’），３．６５（Ｇ６ｂ’），４．３９（Ｇ１”），３．２１（Ｇ２”），３．３９（Ｇ３”），３．２９（Ｇ４”），３．１７（Ｇ５”），３．６０（Ｇ６ａ”），３．６２（Ｇ６ｂ”）
５）13ＣＮＭＲδケミカルシフト（帰属炭素）
５５．４（Ｃ−１），８３．０（Ｃ−２），７３．５（Ｃ−４），５５．４（Ｃ−５），８７．４（Ｃ−６），７４．５（Ｃ−８），１２５．４（Ｃ−１’），１５０．０（Ｃ−２’），１００．４（Ｃ−３’），１４９．４（Ｃ−４’）１４４．８（Ｃ−５’），１０７．５（Ｃ−６’），１３６．３（Ｃ−１”），１０８．８（Ｃ−２”），１４９．６（Ｃ−３”），１４９．０（Ｃ−４”），１１０．５（Ｃ−５”），１２２．０（Ｃ−６”），１０３．４（−Ｏ−ＣＨ2−Ｏ−），１０３．４（−Ｏ−ＣＨ2−Ｏ−），１０１．１（Ｇ１），８２．４（Ｇ２），７７．７（Ｇ３），７１．４（Ｇ４），７７．４（Ｇ５），７０．５（Ｇ６），１０３．９（Ｇ１’），７６．０（Ｇ２’），７７．７（Ｇ３’），７１．４（Ｇ４’），７８．０（Ｇ５’），６３．０（Ｇ６’），１０４．７（Ｇ１”），７５．３（Ｇ２”），７７．９（Ｇ３”），７１．８（Ｇ４”），７８．１（Ｇ５”），６２．４（Ｇ６”）
【００２３】
・セサミノールモノグルコシドの調製
セサミノールモノグルコシドとして、特開平６−３０６０９３号公報記載の方法によって、セサミノール２’−０−β−Ｄ−グリコピラノシドを調製した。
【００２４】
・セサミノールジグルコシドの調製
セサミノールジグルコシドとして、特開平６−３０６０９３号公報記載の方法によって、セサミノール２’−０−β−Ｄ−グリコピラノシル（１→２）−β−Ｄ−グルコピラノシドを調製した。
【００２５】
試験区分２（セサミノール配糖体組成物の調製）
試験区分１で得られたセサミノール３配糖体、セサミノールジグルコシド及びセサミノールモノグルコシドをそれぞれエタノールに溶解し、アグリコンであるセサミノール換算濃度が１ｍＭ／１００mlエタノールとなるようにした。この場合、それぞれセサミノール３配糖体０．８５６ｇ／１００mlエタノール（以下これをＡとする）、セサミノールジグルコシド０．６９４ｇ／１００mlエタノール（以下これをＢとする）及びセサミノールモノグルコシド０．５３２ｇ／１００mlエタノール（以下これをＣとする）であった。
【００２６】
・実施例１
Ａ、Ｂ及びＣを用いて、Ａ／Ｂ／Ｃ＝１００／９３／４０（容量比）の割合で混合し、セサミノール３配糖体／セサミノールジグルコシド／セサミノールモノグルコシド＝１００／７５／２５（重量比）の割合から成る、セサミノール換算濃度が１ｍＭ／１００mlエタノールの、セサミノール配糖体組成物のエタノール溶液を調製した。
【００２７】
・実施例２
Ａ及びＣを用いて、Ａ／Ｃ＝１００／１６１（容量比）の割合で混合し、セサミノール３配糖体／セサミノールモノグルコシド＝１００／１００（重量比）の割合から成る、セサミノール換算濃度が１ｍＭ／１００mlエタノールの、セサミノール配糖体組成物のエタノール溶液を調製した。
【００２８】
・実施例３
Ａ及びＢを用いて、Ａ／Ｂ＝１００／１２３（容量比）の割合で混合し、セサミノール３配糖体／セサミノールジグルコシド＝１００／１００（重量比）の割合から成る、セサミノール換算濃度が１ｍＭ／１００mlエタノールの、セサミノール配糖体組成物のエタノール溶液を調製した。
【００２９】
・実施例４
Ａ、Ｂ及びＣを用いて、Ａ／Ｂ／Ｃ＝１００／３７／３２（容量比）の割合で混合し、セサミノール３配糖体／セサミノールジグルコシド／セサミノールモノグルコシド＝１００／３０／２０（重量比）の割合から成る、セサミノール換算濃度が１ｍＭ／１００mlエタノールの、セサミノール配糖体組成物のエタノール溶液を調製した。
【００３０】
・実施例５
Ａ、Ｂ及びＣを用いて、Ａ／Ｂ／Ｃ＝１００／１２３／６４（容量比）の割合で混合し、セサミノール３配糖体／セサミノールジグルコシド／セサミノールモノグルコシド＝１００／１００／４０（重量比）の割合から成る、セサミノール換算濃度が１ｍＭ／１００mlエタノールの、セサミノール配糖体組成物のエタノール溶液を調製した。
【００３１】
・比較例１〜３
比較例１としてＡ、比較例２としてＢ及び比較例３としてＣを用いた。これらはいずれも、セサミノール配糖体組成物を構成するセサミノール配糖体のそれぞれ単独をエタノールに溶解したものである。
【００３２】
・比較例４
Ａ及びＢを用いて、Ａ／Ｂ＝１００／６（容量比）の割合で混合し、セサミノール３配糖体／セサミノールジグルコシド＝１００／５（重量比）の割合から成る、セサミノール換算濃度が１ｍＭ／１００mlエタノールの、セサミノール配糖体組成物のエタノール溶液を調製した。
【００３３】
・比較例５
Ａ及びＣを用いて、Ａ／Ｃ＝１００／９０１（容量比）の割合で混合し、セサミノール３配糖体／セサミノールモノグルコシド＝１００／５６０（重量比）の割合から成る、セサミノール換算濃度が１ｍＭ／１００mlエタノールの、セサミノール配糖体組成物のエタノール溶液を調製した。
【００３４】
・比較例６
セサミノールの１ｍＭ／１００mlエタノール溶液を調製した。
【００３５】
試験区分３（抗酸化活性の評価）
１リットルのビーカーに豆乳５００mlを投入し、これに添加区分として試験区分２で調製した試料のエタノール溶液をアグリコンであるセサミノール換算で５０μＭ相当量となるよう加え、４０℃に保温して、３時間空気をバブリングした。同様に無添加区分の豆乳にも空気をバブリングした。空気をバブリングした後、スクリューキャップ付き試験管に豆乳０．１mlを採り、これにｔ−ブチルハイドロパーオキサイド水溶液（２．１６mg／ml）０．０５mlを加え、３７℃で２０分間振とうし、更に２０％トリクロロ酢酸水溶液１ml及び０．６７％チオバルビツール酸水溶液２mlを加えて、１００℃で１０分間加熱し、発色させて、３５００ｒｐｍで１５分間遠心分離を行い、その上澄み液について波長５３２ｎｍの吸光度を測定し、下記の式４で発色度を算出した。結果を表１に示した。上澄み液の発色程度は過酸化脂質の生成度に依存し、したがって発色度が低い程、脂質の酸化防止に有効であることを示す。
【００３６】
【式４】
発色度＝（添加区分の上澄み液の吸光度／無添加区分の上澄み液の吸光度）×１００
【００３７】
【表１】
0003797700.tif 000005
【００３８】
表１において、
Ｓ−３：セサミノール３配糖体
Ｓ−２：セサミノールジグルコシド
Ｓ−１：サミノールモノグルコシド
Ｓ：セサミノール
実施例１〜５及び比較例１〜６：添加区分
比較例７：無添加区分
【００３９】
【発明の効果】
既に明らかなように、以上説明した本発明には、セサミノール配糖体をそれぞれ単独で用いる場合よりも、水系媒体中における抗酸化活性が高く、より具体的には少量の使用で水系媒体中の脂質の酸化を防止できるという効果がある。