(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
式１で表されるアスコルビン酸誘導体またはその塩。
【化１】
0003781877.tif 000009
ただし、式１中のＲ１〜Ｒ４は以下の意味を示す。
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３，Ｒ４：同一であっても異なっていてもよく、それぞれ独立して、水素原子、水酸基の保護基、または下式Ａで表される基であり、Ｒ１〜Ｒ４の少なくとも１つは下式Ａで表される基。
Ｘ−Ｑ１−・・・式Ａ
ただし、式Ａ中のＸ、Ｑ１は以下の意味を表す。
Ｘ：グリセロールの２位が水酸基であるリゾレシチンにおける２位の水酸基から水素原子を除いた残基。
Ｑ１：−ＣＯ（ＣＨ２）ｎＣＯ−（ｎは２〜１０の整数を意味する。）
【請求項２】
Ｒ1 が式Ａで表される基であり、かつ、Ｒ2 、Ｒ3 、およびＲ4 が水素原子である請求項１記載のアスコルビン酸誘導体またはその塩。
【請求項３】
式Ａで表される基が式Ａ1 で表される基である請求項１または２記載のアスコルビン酸誘導体またはその塩。
Ｘ−ＣＯ（ＣＨ2 ）n ＣＯ−・・・式Ａ1
ただし、式Ａ1 中のＸ、ｎは以下の意味を示す。
Ｘ：式Ａにおける意味と同じ意味。
ｎ：２以上の整数。
【請求項４】
ｎが２〜１０の整数である、請求項３記載のアスコルビン酸誘導体またはその塩。
【請求項５】
ｎが３である請求項３記載のアスコルビン酸誘導体またはその塩。
【請求項６】
請求項１、２、３、４、または５記載のアスコルビン酸誘導体またはその塩を有効成分として含む医薬。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は、癌転移抑制作用、窒素酸化物産生抑制作用などの薬理活性を有するアスコルビン酸誘導体またはその塩、またはこれを有効成分とする医薬に関する。
【０００２】
【従来の技術】
アスコルビン酸は天然に広く存在するビタミンの一種であり、活性酸素消去作用、あるいは細胞の分化・増殖制御作用などの種々の生理活性を有する化合物である。医学の分野では、アスコルビン酸を、活性酸素除去剤（たとえば、炎症、変形性関節炎、慢性関節リュウマチ、紫外線照射による障害、未熟児酸素網膜症、白内障、緑内障、制癌剤の副作用、虚血部分への血流再環流に伴う障害、脳卒中、心筋梗塞、エンドトキシンショックなどの障害に対する治療薬、臓器移植の際の臓器保存剤等。）、または癌治療剤として用いることが期待されている。
【０００３】
アスコルビン酸は、培養細胞に試験管内で投与した場合は前述の効果を示すが、生体に投与した場合には、化学的安定性、細胞内移行性の低さゆえに期待された効果を発揮しない問題があった。この問題を解決する提案として、アスコルビン酸の水酸基部分をアルキル基またはアシル基などで修飾して脂溶性を上げることにより、効果を高める提案がある。
【０００４】
一方、近年、薬物の効果を高め、副作用を減らす試みとして、ドラッグデリバリーシステム（ＤＤＳ）が注目されている。ＤＤＳとは、薬物を必要なときに必要とされる場所に送り届けるシステムであり、薬物の効果を増大し、副作用を軽減できる。
【０００５】
ＤＤＳに用いられるキャリアとしては種々のものが知られており、たとえば、リポソームやリピッドマイクロスフェアなどが挙げられる。リポソームは、天然に存在するレシチンやコレステロールなどの脂質を有機溶媒に溶解して、超音波処理などにより水に拡散させ、これに薬物を封入したものである。リピッドマイクロスフェアは、大豆油をレシチンとともに水に懸濁したものであり、レシチンがその表面にあり、内部に薬物が封入されたものである。リポソームやリピッドマイクロスフェアを用いたＤＤＳにおいては、薬物は主に物理的な結合により内部に封入されている。
【０００６】
【発明が解決しようとする課題】
しかし、リポソームをキャリアとするＤＤＳは、安定性、および水溶性薬物の封入効率に問題がある。また、リピッドマイクロスフェアをキャリアとするＤＤＳでは、封入する薬物が脂溶性である必要があり、アスコルビン酸のような水溶性薬物への応用には問題があった。また、アスコルビン酸の水酸基部分を修飾して脂溶性を上げる方法は、溶解性が低下し、実際には充分量を投与できない欠点があった。
【０００７】
【課題を解決するための手段】
本発明者らは、上記の問題を解決するアスコルビン酸誘導体を見いだすために種々検討を行った結果、アスコルビン酸をリゾレシチン誘導体によりＤＤＳ化した化合物が優れた癌転移抑制作用、活性酸素除去作用が得られることを見いだした。
【０００８】
すなわち本発明は、式１で表されるアスコルビン酸誘導体またはその塩、またはこれを有効成分として含む医薬、を提供する。
【０００９】
【化２】
0003781877.tif 000002
【００１０】
ただし、式１中のＲ1 〜Ｒ4 は以下の意味を示す。
Ｒ1 、Ｒ2 、Ｒ3 、Ｒ4 ：同一であっても異なっていてもよく、それぞれ独立して、水素原子、水酸基の保護基、または下式Ａで表される基であり、Ｒ1 〜Ｒ4 の少なくとも１つは下式Ａで表される基。
Ｘ−Ｑ1 −・・・式Ａ
ただし、式Ａ中のＸ、Ｑ1 は以下の意味を示す。
Ｘ：グリセロールの２位が水酸基であるリゾレシチンにおける２位の水酸基から水素原子を除いた残基。
Ｑ1 ：化学的橋かけ。
【００１１】
【発明の実施の形態】
本明細書におけるハロゲン原子とは、フッ素原子、塩素原子、臭素原子、またはヨウ素原子をいう。
式１中のＲ1 〜Ｒ4 が水酸基の保護基である場合、該保護基としてはトリオルガノシリル基（トリオルガノシリル基中の有機基としては、アルキル基、アリール基、またはアルアルキル基等が挙げられる。）、アシル基、アルアルキル基等が挙げられる。さらに、水酸基の保護基としては、トリメチルシリル基、トリエチルシリル基、ｔ−ブチルジメチルシリル基、ｔ−ブチルジフェニルシリル基、アセチル基、ベンゾイル基、ベンジル基、トリチル基、メトキシトリチル基、ジメトキシトリチル基等が好ましい。
【００１２】
また、水酸基の保護基は、２個の水酸基を同時に保護する保護基であってもよい。２個の水酸基を同時に保護する保護基としては、環状アセタール、環状ケタール、環状シリルエーテル、環状カーボネート、環状ボロネート等のジオールの一般的な保護基として公知の基が挙げられる。さらに、２個の水酸基を同時に保護する保護基としては、メチレン基、エチリデン基、イソプロピリデン基、ブチリデン基、ベンジリデン基、１，１，３，３−テトライソプロピル−１，３−ジシロキサニリデン基、環状カーボネート、環状ボロネート等が挙げられる。
【００１３】
また、式Ａ中のＱ1 は化学的橋かけを示す。化学的橋かけはアスコルビン酸にリゾレシチン残基（たとえば、以下の式Ｂで表される基）を結合させる反応を行ったあとに形成される、アスコルビン酸とリゾレシチン残基を連結する２価有機基である。
【００１４】
アスコルビン酸にリゾレシチン残基を結合させる反応としては、エステル結合を形成させる反応が好ましいことからＱ1 は−ＣＯ−が末端に存在する２価有機基であるのが好ましく、特に−ＣＯ−Ｒ20−ＣＯ−または−ＣＯ−Ｒ21−ＣＯ−ＮＨ−Ｒ22−ＣＯ−（ただし、Ｒ20、Ｒ21、およびＲ22は、それぞれ同一であっても異なっていてもよくアルキレン基を示す。）が好ましく、とりわけ−ＣＯ−Ｒ20−ＣＯ−が好ましい。さらに−ＣＯ−Ｒ20−ＣＯ−はＲ20が直鎖アルキレン基である場合が好ましく、とりわけ−ＣＯ（ＣＨ2 ）n ＣＯ−（ただし、ｎは２以上の整数）である場合が好ましい。ｎは２〜１０の整数が好ましく、とりわけ３であるのが好ましい。
【００１５】
式Ａ中のＸは、グリセロールの２位が水酸基であるリゾレシチンの２位の水酸基の水素原子を除いた残基を示し、該残基としては、下式Ｂで表される基が挙げられる。
【００１６】
【化３】
0003781877.tif 000003
【００１７】
式Ｂ中のＲ10はアシル基、すなわち、カルボキシル基含有化合物からカルボキシル基中の水酸基を除いた残基であり、脂肪酸から水酸基を除いた残基が好ましい。Ｒ10は、炭素数８〜３０の飽和脂肪酸または不飽和脂肪酸の末端カルボキシル基から水酸基を除いた残基が好ましく、特に炭素数１４〜２２の飽和脂肪酸残基または炭素数１４〜２２の不飽和脂肪酸残基が好ましく、とりわけミリストイル基、パルミトイル基、ステアロイル基、オレオイル基、またはリノレイル基が好ましい。
【００１８】
アスコルビン酸誘導体（式１）の塩としては、アルカリ金属塩、アルカリ土類金属塩、または置換または非置換のアンモニウム塩が好ましく、アルカリ金属塩としては、ナトリウム塩、カリウム塩が好ましく、アルカリ土類金属塩としてはマグネシウム塩、カルシウム塩が好ましく、アンモニウム塩としては、トリエチルアンモニウム塩、シクロヘキシルアンモニウム塩が好ましい。
【００１９】
アスコルビン酸誘導体（式１）中には、少なくとも３つの不斉炭素原子［Ｒ2 Ｏ−が結合する炭素原子、−ＣＨ（ＯＲ2 ）ＣＨ2 （ＯＲ1 ）が結合する炭素原子、および式Ｂ中−ＣＨ2 ＯＲ10が結合する炭素原子］が存在しうる。これらの炭素原子に結合する置換基の絶対配置は特に限定されず、ＲまたはＳのいずれであってもよい。また、本発明のアスコルビン酸誘導体（式１）は、絶対配置が異なるこれらの異性体の２種以上の混合物であってもよい。
【００２０】
本発明のアスコルビン酸誘導体またはその塩は、Ｒ1 、Ｒ2 、Ｒ3 およびＲ4 の少なくとも１つが式Ａで表される基である。そしてその１つのみが式Ａで表される基であるのが好ましく、特にＲ1 が式Ａで表される基であるのが好ましい。また、式Ａで表される基である場合以外のＲ1 、Ｒ2 、Ｒ3 およびＲ4 は、水素原子であるのが好ましい。
【００２１】
本発明のアスコルビン酸誘導体またはその塩としては、下式で表される化合物またはその塩が好ましい。ただし、下式中のＡは式Ａで表される基を示し、式Ａ1 で表される基が好ましい。
【００２２】
【化４】
0003781877.tif 000004
【００２３】
本発明のアスコルビン酸誘導体（式１）の製造方法としては、アスコルビン酸中の水酸基を少なくとも１個の水酸基が残るように保護基で保護した化合物（以下、該化合物を保護されたアスコルビン酸誘導体と記す。）を用意し、つぎに、該保護されたアスコルビン酸誘導体中に残った水酸基に下式３で表されるリゾレシチン誘導体を反応させる方法が挙げられる。
Ｚ−Ｑ1 −Ｘ・・・式３
【００２４】
ただし、式３中のＸおよびＱ1 は、式Ａにおける意味と同じである。また、Ｚは水酸基、ハロゲン原子、または、カルボキシル基と反応して活性エステルを形成しうる水酸基含有化合物から水酸基の水素原子を除いた残基（以下、該残基を「活性エステル残基」と記載する。）を表す。
【００２５】
該活性エステル残基としては、ｐ−ニトロフェノール、１，３，５−トリクロロフェノール、ペンタフルオロフェノール、ペンタクロロフェノール、２，４−ジニトロフェノール、Ｎ−ヒドロキシスクシンイミド、Ｎ−ヒドロキシピペリジン、Ｎ−ヒドロキシ−５−ノルボルネン−２，３−ジカルボン酸イミド、８−ヒドロキシキノリン、２−ヒドロキシピリジン等の水酸基含有化合物から、水酸基の水素原子を除いた残基が挙げられる。
【００２６】
アスコルビン酸誘導体（式１）の製造方法の具体例としては、式３中のＺの種類により、以下の製造方法ＡおよびＢが挙げられる。
なお、以下の製造方法における非プロトン性溶媒としては、クロロホルム、塩化メチレン、四塩化炭素、ベンゼン、トルエン、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド、Ｎ，Ｎ−ジメチルアセトアミド、ジメチルスルホキシド、ジオキサン、アセトニトリル等が挙げられる。
また、有機塩基としては、ピリジン、ピペリジン、トリエチルアミン、４−ジメチルアミノピリジン、４−ピペリジノピリジン、Ｎ−メチルモルホリン、４−モルホリノピリジン等が挙げられる。
【００２７】
［製造方法Ａ］Ｚが水酸基である場合のリゾレシチン誘導体（下式３a ）を用いたアスコルビン酸誘導体の製造方法
製造方法Ａとしては、非プロトン性溶媒中で縮合剤の存在下で、保護されたアスコルビン酸誘導体とリゾレシチン誘導体（式３a ）とを反応させてアスコルビン酸誘導体（式１）とする方法が挙げられる。ただし、式３a 中のＱ1 およびＸは、上記と同じ意味を示す。
ＨＯ−Ｑ1 −Ｘ・・・式３a
【００２８】
縮合剤としては、ジエチルカルボジイミド、ジイソプロピルカルボジイミド、ジシクロヘキシルカルボジイミド、１−エチル−３−（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド、ジフェニルホスホリルアジドなどが挙げられる。また、上記の反応は、−２０℃〜非プロトン性溶媒の還流温度の範囲内で行うのが好ましい。
【００２９】
［製造方法Ｂ］Ｚがハロゲン原子、または、活性エステル残基である場合のリゾレシチン誘導体（下式３b ）を用いたアスコルビン酸誘導体の製造方法
非プロトン性溶媒中で、保護されたアスコルビン酸誘導体とリゾレシチン誘導体（式３b ）とを直接反応させてアスコルビン酸誘導体（式１）とする方法が挙げられる。ただし下式中のＱ1 は上記と同じ意味を示し、Ｚ1 はハロゲン原子、または、活性エステル残基を示す。
Ｚ1 −Ｑ1 −Ｘ・・・式３b
【００３０】
反応は−２０℃〜非プロトン性溶溶媒還流温度の範囲内で行うのが好ましい。また、反応系には必要に応じて有機塩基を存在させてもよい。有機塩基としては、トリエチルアミン、ピリジン、ピペリジン、Ｎ−メチルモルホリン、４−ジメチルアミノピリジン、４−モルホリノピリジン等が挙げられる。
【００３１】
アスコルビン酸誘導体の塩は、上記の方法で得たアスコルビン酸誘導体を、重炭酸ナトリウム、重炭酸カリウム等の重炭酸塩、炭酸マグネシウム、炭酸カルシウム等の炭酸塩、または炭酸−トリエチルアミン緩衝液等の炭酸−アミン系緩衝液で処理することにより容易に得られる。
【００３２】
上記の製造方法において用いられるリゾレシチン誘導体（式３）は、公知の方法により得られる。これらのリゾレシチン誘導体（式３）のうち、好ましい態様であるＱ1 が−ＣＯ（ＣＨ2 ）n ＣＯ−（ただし、ｎは上記と同じ意味を示す。）である場合のリゾレシチン誘導体（下式３Ａ）は、Ｚの構造により下記［方法イ］〜［方法ニ］により合成できる。
Ｘ−ＣＯ（ＣＨ2 ）n ＣＯ−Ｚ・・・式３A
【００３３】
［方法イ］Ｚが水酸基である式３A で表される化合物の製造方法（その１）
非プロトン性溶媒中で、下式４で表される酸無水物をＨ−Ｘで表されるリゾレシチンに反応させる方法。ただし、Ｘおよびｎは、上記と同じ意味を示す。
上記の反応温度は、−２０℃〜非プロトン性溶媒還流温度の範囲内が好ましい。また、方法イの反応系中には、必要に応じて有機塩基を共存させてもよい。
【００３４】
【化５】
0003781877.tif 000005
【００３５】
［方法ロ］Ｚが水酸基である式３A で表される化合物の製造方法（その２）
下式５で表されるジカルボン酸ハーフエステル無水物を非プロトン性溶媒中でＨ−Ｘ（ただし、Ｘは式Ａにおける意味と同じ意味。）で表されるリゾレシチンに反応させた後に、カルボン酸の保護基を除去する方法。
【００３６】
ただし、式５におけるｎは、式Ａにおける意味と同じ意味を示す。Ｚ’はカルボキシル基の保護基であり、アルキル基、メトキシメチル基、ベンジル基、フェナシル基、ｔ−ブチルジメチルシリル基、トリエチルシリル基、およびトリメチルシリル基等が挙げられる。
反応温度は、−２０℃〜非プロトン性溶媒還流温度の範囲内が好ましい。また、反応系中には有機塩基を存在させてもよい。
［Ｚ' −ＯＣＯ（ＣＨ2 ）n ＣＯ］2 Ｏ・・・式５
【００３７】
なお、式５で表されるジカルボン酸ハーフエステル無水物は、目的化合物に対応するカルボン酸ハーフエステルを、ベンゼン、トルエン、クロロホルム、ジクロロメタン、テトラヒドロフランなどの溶媒中で、カルボジイミドと混合して反応させることにより合成できる。カルボジイミドとしては、たとえばジエチルカルボジイミド、ジイソプロピルカルボジイミド、ジシクロヘキシルカルボジイミド、１−エチル−３−（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミドなどが用いられる。カルボン酸ハーフエステルとカルボジイミドとの反応の温度は、−２０℃〜溶媒還流温度の範囲であるのが好ましい。
【００３８】
［方法ハ］Ｚがハロゲン原子である式３A で表される化合物の製造方法
方法イにより得られるＺが水酸基であるリゾレシチン誘導体を原料として、非プロトン性溶媒中でハロゲン化チオニル、オキシハロゲン化リンなどのハロゲン化試薬を作用させる方法。
反応温度は、−２０℃〜非プロトン性溶媒還流温度の範囲内が好ましい。また、反応系中には有機塩基を存在させてもよい。
【００３９】
［方法ニ］Ｚが活性エステル残基である式３A で表される化合物の製造方法
方法イにより得られるＺが水酸基であるリゾレシチン誘導体を原料として、非プロトン性溶媒中で、水酸基含有化合物に縮合剤を作用させる方法。
反応温度は、−２０℃〜非プロトン性溶媒還流温度の範囲内が好ましい。また、反応系中には有機塩基を存在させてもよい。
【００４０】
水酸基含有化合物としては、Ｚの説明中に記載した水酸基含有化合物が挙げられる。縮合剤としては、ジエチルカルボジイミド、ジイソプロピルカルボジイミド、ジシクロヘキシルカルボジイミド、１−エチル−３−（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド、ジフェニルホスホリルアジド等が挙げられる。
【００４１】
本発明におけるアスコルビン酸誘導体（式１）またはその塩は、優れた化学的安定性、細胞内移行性を発揮することから、アスコルビン酸の効果を強化しうる優れた化合物である。本発明の、アスコルビン酸誘導体（式１）またはその塩は、これを有効成分として含む医薬として使用するのが好ましい。
【００４２】
医薬として用いる場合の、アスコルビン酸誘導体（式１）またはその塩の製剤の形態としては、注射剤、直腸吸収剤、経鼻吸収剤等が挙げられる。注射剤としては、たとえば、本有効成分を緩衝剤、等張化剤、ｐＨ調節剤、安定化剤と適量に溶解した注射用蒸留水に溶解し、除菌フィルタを通して無菌化したものをアンプルに分注するか、バイアル瓶に分注して凍結乾燥することにより調製される。
【００４３】
【実施例】
［合成例１］９−ベンジルオキシカルボニル−１−ノナン酸無水物の合成
９−ベンジルオキシカルボニル−１−ノナン酸１５ｇ（５１ｍｍｏｌ）をベンゼン５０ｍｌに溶解させ、０℃に冷却し、１，３−ジシクロヘキシルカルボジイミド（ＤＣＣ）５．８ｇ（２８ｍｍｏｌ）を加え、室温で１５時間撹拌した。不溶物をセライトで濾過し、減圧下濃縮して標記化合物を得た。
【００４４】
［合成例２］２−（９−ベンジルオキシカルボニルノナノイル）リゾレシチンの合成
グリセロールの２位が水酸基であるリゾレシチン［ただし、該リゾレシチンのＲ10に該当する基はパルミトイル基である］３ｇ（５．９ｍｍｏｌ）のクロロホルム−ピリジン（８０ｍｌ／２０ｍｌ）懸濁液に、Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノピリジン（ＤＭＡＰ）２．１６ｇ（１７．７ｍｍｏｌ）と、合成例１で得た９−ベンジルオキシカルボニル−１−ノナン酸無水物１０．０ｇ（４．４ｍｍｏｌ）とを加え、６０℃で１５時間撹拌した。その後反応液を減圧下濃縮し、残渣にクロロホルム／メタノール／水＝４／５／１の混合物１０ｍｌを加えて溶解し、同液にて平衡化したイオン交換カラム（商品名：Ｄｏｗｅｘ  ５０Ｗ−Ｘ８）に通した。溶媒を減圧下濃縮した後、残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィにより精製し、標記化合物３．９１ｇ（５．０ｍｍｏｌ、８５％）を得た。
【００４５】
1Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3 ）δ（ｐｐｍ）：０．８４（ｔ，３Ｈ），１．２０（ｂｒ  ｓ），１．５０−１．７０（ｂｒ  ｓ，６Ｈ），２．２０−２．４０（ｂｒ  ｓ，６Ｈ），３．３８（ｓ，９Ｈ），３．８０−４．００（ｍ，４Ｈ），４．２０−４．４０（ｍ，４Ｈ），５．１０（ｓ，２Ｈ），５．２０（ｍ，１Ｈ），７．３０（ｍ，５Ｈ）．
【００４６】
［合成例３］２−（９−ヒドロキシカルボニルノナノイル）リゾレシチンの合成合成例２で得た２−（９−ベンジルオキシカルボニルノナノイル）リゾレシチン３．９１ｇ（５．００ｍｍｏｌ）をメタノール−水（２２５ｍｌ／２５ｍｌ）の混合溶媒に溶解し、水酸化パラジウム３．０ｇを加えた。水素置換後、１気圧下１５時間室温で撹拌した。反応液をセライト濾過した後、溶媒を減圧下濃縮し、残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィにより精製し、標記化合物２．３７ｇ（３．４１ｍｍｏｌ、６１％）を得た。
【００４７】
［合成例４］２−（９−ヒドロキシカルボニルノナノイル）リゾレシチン活性エステル体の合成
合成例３で得た２−（９−ヒドロキシカルボニルノナノイル）リゾレシチン２．０ｇ（２．９８ｍｍｏｌ）をジクロロメタン５０ｍｌに溶解して０℃に冷却し、Ｎ−ヒドロキシスクシンイミド３４３ｍｇ（２．９８ｍｍｏｌ）、テトラゾール２０９ｍｇ（２．９８ｍｍｏｌ）を加えた。つぎに、ＤＣＣ（７６９ｍｇ、３．７３ｍｍｏｌ）−ジクロロメタン（８ｍｌ）溶液をゆっくり滴下し、室温で１５時間撹拌した。不溶物をセライトで濾過し、活性エステル体のジクロロメタン溶液を得た。
【００４８】
［合成例５］２−（４−ヒドロキシカルボニルブチロイル）リゾレシチンの合成９−ベンジルオキシカルボニル−１−ノナン酸無水物の代わりにグルタル酸無水物を用い、合成例２と同様にして標記化合物を合成した。ただし、精製はＯＤＳ（オクタデシルシラン）を充填したカラムにより行った。
【００４９】
1Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3 ）δ（ｐｐｍ）：０．８４（ｔ，３Ｈ），１．２０（ｂｒ  ｓ），１．５２−１．６０（ｂｒ  ｓ，２Ｈ），１．８０−１．９５（ｍ，２Ｈ），２．２０−２．４２（ｍ，６Ｈ），３．３５（ｓ，９Ｈ），３．７８（ｍ，４Ｈ），３．９０−４．３５（ｍ，４Ｈ），５．２０（ｍ，１Ｈ）．
【００５０】
［合成例６］２−（４−ヒドロキシカルボニルブチロイル）リゾレシチン活性エステル体の合成
合成例５で得た２−（４−ヒドロキシカルボニルブチロイル）リゾレシチンを用いて合成例４と同様の方法で合成した。
【００５１】
［合成例７］２，３−Ｏ−ジベンジル−５，６−Ｏ−イソプロピリデン−Ｌ−アスコルビン酸の合成
５，６−Ｏ−イソプロピリデン−Ｌ−アスコルビン酸９．８ｇ（４５ｍｍｏｌ）をＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド−テトラヒドロフラン（９ｍｌ／２１ｍｌ）混液に溶解し、炭酸カリウム６．３ｇ（４５ｍｍｏｌ）を加えて、１５分間撹拌後にベンジルブロミド１０．９ｍｌ（４５ｍｍｏｌ）を氷冷下で滴下し、室温で１６時間撹拌した。反応液に水２７ｍｌ、２Ｎ−塩酸溶液２２．５ｍｌを加え、酢酸エチルで抽出した。酢酸エチル層を集めて、硫酸ナトリウムで乾燥後濾過し、減圧下濃縮した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィで精製し、標記化合物１０．０ｇ（２８．１ｍｍｏｌ，６２％）を得た。
【００５２】
［合成例８］２，３−Ｏ−ジベンジル−Ｌ−アスコルビン酸の合成
合成例７で得た２，３−Ｏ−ジベンジル−５，６−Ｏ−イソプロピリデン−Ｌ−アスコルビン酸３９６ｍｇ（１ｍｍｏｌ）をエタノール６ｍｌ、水１ｍｌに溶解し、２Ｎ−塩酸水溶液１ｍｌを加え、８０℃で２時間撹拌した。反応液を減圧下濃縮し、標記化合物３５６ｍｇ（１ｍｍｏｌ、１００％）を得た。
【００５３】
1Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3 ）δ（ｐｐｍ）：２．３０（ｂｒ  ｓ，２Ｈ），３．７８（ｍ，２Ｈ），３．９２（ｍ，１Ｈ），４．６９（ｄ，１Ｈ），５．０８−５．２３（ｍ，４Ｈ），７．２３−７．４１（ｍ，１０Ｈ）．
【００５４】
［実施例１］２，３−Ｏ−ジベンジル−６−Ｏ−（１−Ｏ−パルミトイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホリルコリン−２−Ｏ−カルボニルブチリル）−Ｌ−アスコルビン酸の合成
【００５５】
合成例５で得た２−（４−ヒドロキシカルボニルブチロイル）リゾレシチン６１０ｍｇ（１ｍｍｏｌ）をクロロホルム４ｍｌに溶解し、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド０．１ｍｌ、塩化チオニル０．１１ｍｌを加え、室温で１５時間撹拌した後に、減圧下溶媒を留去した。残渣をクロロホルム４ｍｌに溶解し、合成例８で得た２，３−Ｏ−ジベンジル−Ｌ−アスコルビン酸３５６ｍｇ（１ｍｍｏｌ) をクロロホルム４ｍｌに溶解した溶液に滴下し、室温で１５時間撹拌した。反応液を減圧下濃縮し、残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィで精製し、下式で表される標記化合物４５０ｍｇ（０．４７ｍｍｏｌ，４７．５％）を得た。
【００５６】
1Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3 ）δ（ｐｐｍ）：０．８９（ｔ，３Ｈ），１．２７（ｓ，２８Ｈ），１．５６（ｍ，２Ｈ），１．９０（ｍ，２Ｈ），２．２３−２．５３（ｍ，６Ｈ），３．２４（ｓ，９Ｈ），３．６６（ｍ，２Ｈ），３．９３（ｍ，１Ｈ），４．０４−４．４６（ｍ，８Ｈ），４．６５（ｄ，１Ｈ），４．９６−５．２７（ｍ，５Ｈ）７．２２−７．３８（ｍ，１０Ｈ）．
【００５７】
【化６】
0003781877.tif 000006
【００５８】
［実施例２］６−Ｏ−（１−Ｏ−パルミトイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホリルコリン−２−Ｏ−カルボニルブチリル）−Ｌ−アスコルビン酸の合成
【００５９】
実施例１で得た化合物４５０ｍｇ（０．４７ｍｍｏｌ）にエタノール１２ｍｌを加えて溶解し、１０％Ｐｄ−Ｃの２０ｍｇを加え、水素置換後、１気圧下１５時間室温で撹拌した。反応液をセライト濾過した後に減圧下溶媒を留去し、下式で表される標記化合物３２０ｍｇ（０．４２ｍｍｏｌ，８８．７％）を得た。
【００６０】
1Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤ3 ＯＤ）δ（ｐｐｍ）：０．８９（ｔ、３Ｈ），１．２９（ｓ，２８Ｈ），１．５８（ｍ，２Ｈ），１．８８（ｍ，２Ｈ），２．２８−２．４５（ｍ，６Ｈ），３．２５（ｓ，９Ｈ），３．７２−４．４５（ｍ，１２Ｈ），５．２７（ｍ，１Ｈ）．
【００６１】
【化７】
0003781877.tif 000007
【００６２】
［実施例３］マウス癌転移に及ぼす実施例２の化合物の効果
Ｂａｌｂ／ｃメス６週齢マウスを用い、２×１０4 ｃｅｌｌｓ／０．１ｍｌに調製したＭｅｔｈ  Ａマウス癌細胞を、１匹当たり０．１ｍｌ静脈内投与した。さらに、被験薬剤として、実施例２で合成したアスコルビン酸誘導体、対照薬剤としてアスコルビン酸誘導体をそれぞれ注射用生理食塩水に溶解したものを調製し、注射用生理食塩水投与群を対照として試験を行った。
【００６３】
投与量は、実施例２で得たアスコルビン酸誘導体１３ｍｇ（０．０１７ｍｍｏｌ）／ｋｇ、同４４ｍｇ（０．０５７ｍｍｏｌ）／ｋｇ、同１３０ｍｇ（０．１７０ｍｍｏｌ）／ｋｇ、アスコルビン酸１０ｍｇ（０．０５７ｍｍｏｌ）／ｋｇ、同３０ｍｇ（０．１７０ｍｍｏｌ）／ｋｇ、とした。これらは、それぞれＭｅｔｈ  Ａマウス癌細胞の投与１５分前に静脈内投与した。投与２週間後に肺を摘出し、肺表面に見られる転移癌結節数を実体顕微鏡を用いて計数した。
【００６４】
転移癌結節数を、Ｍａｎｎ−ＷｈｉｔｎｅｙのＵ検定により統計学的に処理し、有意差検定を行った。また、下式により抑制率を求めた。結果を表１に示す。抑制率（％）＝［（対照群の転移癌結節数−薬剤投与群の転移癌結節数）／（対照群の転移癌結節数）］×１００
【００６５】
【表１】
0003781877.tif 000008
【００６６】
［実施例４］エンドトキシン（ＬＰＳ）投与に伴う窒素酸化物（ＮＯx ）上昇に及ぼすアスコルビン酸誘導体の効果
Ｂａｌｂ／ｃメス６週齢マウスを用い、被験薬剤として、生理食塩水（対照群）、実施例２で得たアスコルビン酸誘導体の注射用生理食塩水に溶解物を用意し、それぞれ、静脈内に投与した。投与量は実施例２のアスコルビン酸誘導体量を１３０ｍｇ／ｋｇとした。投与５分後にエンドトキシン（ＬＰＳ）量２０ｍｇ／ｋｇを静脈内投与した。
【００６７】
ＬＰＳ投与２時間および６時間後に、心臓採血を行い、血漿における窒素酸化物濃度の測定を行った。また、同様に脱血後肺ホモジネートを作成し、肺における窒素酸化物濃度を測定した。
窒素酸化物濃度を、Ｍａｎｎ−ＷｈｉｔｎｅｙのＵ検定により統計学的に処理し、有意差検定を行った。結果を図１および図２に示す。
【００６８】
【発明の効果】
（１）実施例３の結果から明らかであるように、本発明のアスコルビン酸誘導体投与群（０．０５７ｍｍｏｌ／ｋｇ、０．１７ｍｍｏｌ／ｋｇ）は、対照群（非投与群）に対して、ｐ＜０．０５、ｐ＜０．０１で、転移癌結節数に有意差が認められた。また、同投与量（０．１７ｍｍｏｌ／ｋｇ）のアスコルビン酸と比較した場合においても、ｐ＜０．００１で転移癌結節数に有意差が認められた。以上の結果より、本発明のアスコルビン酸誘導体は、マウス癌転移を有意に抑制する効果があると認められた。
【００６９】
（２）実施例４の結果から明らかであるように、本発明のアスコルビン酸誘導体投与群（１３０ｍｇ／ｋｇ）は、血漿および肺臓の両方において、対照群（非投与群）に対して、ｐ＜０．００１で窒素酸化物（ＮＯx ）濃度に有意差が認められた。
以上の結果より、本発明のアスコルビン酸誘導体はエンドトキシンを用いたマウス血漿および、肺臓における窒素酸化物濃度増加に対して有意な抑制効果があると認められた。
【図面の簡単な説明】
【図１】ＬＰＳ投与に伴うマウス血漿中の窒素酸化物（ＮＯx ）上昇に及ぼすアスコルビン酸誘導体の効果の評価結果を示す図。
【図２】ＬＰＳ投与に伴うマウス肺臓中の窒素酸化物（ＮＯx ）上昇に及ぼすアスコルビン酸誘導体の効果の評価結果を示す図。
【図１】
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【図２】
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