(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
下記一般式（１）で示されるアミジン誘導体。
【化１】
0003770706.tif 000010
式（１）中、Ａは芳香環であり、Ｒ1、Ｒ2、Ｒ3、Ｒ4は同一または異なって水素（但し、Ｒ1、Ｒ2、Ｒ3、Ｒ4がすべて水素の場合は除く）、炭素数８〜２５のアルキル基またはアルケニル基である。Ｘ、Ｙは同一または異なってＯまたはＳであり、ｐ、ｑは同一または異なって０または１、ｌ、ｍ、ｎは同一または異なって０または１から６までの自然数を示す（但し、ｐ＝ｍ＝ｑ＝ｎ＝０であってＲ１またはＲ２、Ｒ３またはＲ４のそれぞれ一方が水素の場合は除く）。
【請求項２】
下記一般式（２）で示されるアミジン誘導体。
【化２】
0003770706.tif 000011
式（２）中、Ａは芳香環であり、Ｒ1、Ｒ2は同一または異なって水素（但し、Ｒ1、Ｒ2が共に水素の場合は除く）、炭素数８〜２５のアルキル基またはアルケニル基である。ＸはＯまたはＳであり、ｐは０または１、ｌ、ｍは同一または異なって０または１から６までの自然数を示す。
【請求項３】
請求項１または請求項２に記載のアミジン誘導体を構成成分とする薬物担体。
【請求項４】
前記の担体の内部に診断および／または治療するための薬物を封入してなる請求項３に記載の薬物担体。
【請求項５】
前記の担体の径が０.０２〜２５０μｍの大きさである請求項３乃至請求項４に記載の薬物担体。
【請求項６】
前記の担体がリポソームから構成される請求項３乃至請求項５に記載の薬物担体。
【請求項７】
前記の担体がリン脂質あるいはその誘導体、および／またはリン脂質以外の脂質あるいはその誘導体、および／または安定化剤、および／または酸化防止剤、および／またはその他の表面修飾剤を含有する請求項３乃至請求項６に記載の薬物担体。
【請求項８】
前記の診断および／または治療するための薬物が、核酸、ポリヌクレオチド、遺伝子およびその類縁体である請求項３乃至請求項７に記載の薬物担体。
【請求項９】
前記の診断および／または治療するための薬物が、抗癌剤、抗生物質、酵素剤、酵素阻害剤、抗酸化剤、脂質取り込み阻害剤、ホルモン剤、抗炎症剤、ステロイド剤，血管拡張剤、アンジオテンシン変換酵素阻害剤、アンジオテンシン受容体拮抗剤、平滑筋細胞の増殖・遊走阻害剤、血小板凝集阻害剤、抗凝固剤、ケミカルメデイエーターの遊離抑制剤、血管内皮細胞の増殖または抑制剤、アルドース還元酵素阻害剤、メサンギウム細胞増殖阻害剤、リポキシゲナーゼ阻害剤、免疫抑制剤、免疫賦活剤、抗ウイルス剤、メイラード反応抑制剤、アミロイドーシス阻害剤、ＮＯＳ阻害剤、ＡＧＥｓ阻害剤あるいはラジカルスカベンチャーである請求項３乃至請求項７に記載の薬物担体。
【請求項１０】
前記の診断および／または治療するための薬物が、グリコサミノグリカンおよびその誘導体である請求項３乃至請求項７に記載の薬物担体。
【請求項１１】
前記の診断および／または治療するための薬物が、オリゴおよび／または多糖、およびそれらの誘導体である請求項３乃至請求項７に記載の薬物担体。
【請求項１２】
前記の診断および／または治療するための薬物が、タンパク質またはペプチドである請求項３乃至請求項７に記載の薬物担体。
【請求項１３】
前記の診断および／または治療するための薬物が、Ｘ線造影剤、放射性同位元素標識核医学診断薬、核磁気共鳴診断用診断薬等の各種体内診断薬である請求項３乃至請求項７に記載の薬物担体。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は、新規なアミジン誘導体およびそれを構成成分とする薬物担体に関するものである。
【０００２】
【従来の技術】
近年、リポソーム、エマルジョン、リピッドマイクロスフェアなどの閉鎖小包を薬物担体としてドラッグデリバリーシステム（以下、ＤＤＳと称す）に応用しようとする研究が盛んに行われている。これら閉鎖小包は一般的にリン脂質あるいはその誘導体、またはステロールやリン脂質以外の脂質等を基本膜構成成分として調製される、しかしながら、これら基本構成成分のみでは、閉鎖小包同士の凝集、体内における滞留性の低下などの実際に応用していく上での様々な困難を克服することはできなかった。さらに、実際にＤＤＳ製剤として目的の部位に薬物を到達させることは非常に困難であった。
【０００３】
そこで、薬物封入率の向上および閉鎖小包の細胞接着性の向上を目的として、ステアリルアミン等のカチオン化脂質を少量配合することにより、閉鎖小包体の表面を生理的ｐＨ範囲でカチオン化する試みも行われている。カチオン性のリポソームの用途の一つにはＤＮＡの細胞中への移動、すなわち、トランスフェクションを促進することが知られているが、さらに導入効率、発現率、安全性の高いものが切望されている。しかし、カチオン化脂質として選択できる脂質は限られており、安全性が高く、高機能を発現する薬物担体用カチオン化脂質の開発が強く望まれている。現在のところ、公知のカチオン化脂質としては、例えば米国特許第４８９７３５５号、米国特許第５３３４７６１号、日本特許公報特開平２−２９２２４６号、日本特許公報特開平４−１０８３９１号が報告されているが十分な効果は得られていない。
【０００４】
一方、本発明のアミジン誘導体と類似の化学構造を有する化合物は、例えば J.Med.Chem.,12,1049-52(1969)、J.Med.Chem.17,1160-1167(1974)に報告されているが、薬物担体機能については一切記載されていない。
【０００５】
【発明が解決しようとする課題】
従って、薬物、 ＤＮＡ、ペプチドおよびタンパク質を目的の部位、例えば肺ガン、肝ガン、腎ガン、膵ガン、肺炎、肝炎、腎炎、リンパ腫、血管内皮損傷部位などの患部に確実に、効率良くかつ安全に薬物のターゲッティングが行え、ＤＤＳ療法に有効な薬物担体の開発が強く望まれている。
【０００６】
従って本発明の目的は、核酸、ポリヌクレオチド、遺伝子およびその類縁体を細胞へ効率良くしかも安全にトランスフェクションを行える薬物担体、およびそれを形成し得るカチオン化脂質を提供することである。また本発明の目的は薬物、ペプチドおよびタンパク質を目的の部位に効果的に送達する薬物担体、およびそれを形成しうるカチオン化脂質および薬物担体を提供することである。
【０００７】
【課題を解決するための手段】
１．本発明は下記一般式（１）で示されるアミジン誘導体である。
【０００８】
【化３】
0003770706.tif 000002
【０００９】
式（１）中、Ａは芳香環であり、Ｒ1、Ｒ2、Ｒ3、Ｒ4は同一または異なって水素（但し、Ｒ1、Ｒ2、Ｒ3、Ｒ4がすべて水素の場合は除く）、炭素数８〜２５のアルキル基またはアルケニル基である。Ｘ、Ｙは同一または異なってＯまたはＳであり、ｐ、ｑは同一または異なって０または１、ｌ、ｍ、ｎは同一または異なって０または１から６までの自然数を示す（但し、ｐ＝ｍ＝ｑ＝ｎ＝０であってＲ１またはＲ２、Ｒ３またはＲ４のそれぞれ一方が水素の場合は除く）。
【００１０】
２．本発明は、下記一般式（２）で示されるアミジン誘導体である。
【００１１】
【化４】
0003770706.tif 000003
【００１２】
式（２）中、Ａは芳香環であり、Ｒ1、Ｒ2は同一または異なって水素（但し、Ｒ1、Ｒ2が共に水素の場合は除く）、炭素数８〜２５のアルキル基またはアルケニル基である。ＸはＯまたはＳであり、ｐは０または１、ｌ、ｍは同一または異なって０または１から６までの自然数を示す。
【００１３】
３．本発明は、上記１または２に記載のアミジン誘導体を構成成分とする薬物担体である。
４．本発明は、前記の担体の内部に診断および／または治療するための薬物を封入してなる上記３に記載の薬物担体である。
【００１４】
５．本発明は、前記の担体の径が０.０２〜２５０μｍの大きさである上記３乃至４に記載の薬物担体である。
６．本発明は、前記の担体がリポソームから構成される上記３乃至５に記載の薬物担体である。
【００１５】
７．本発明は、前記の担体がリン脂質あるいはその誘導体、および／またはリン脂質以外の脂質あるいはその誘導体、および／または安定化剤、および／または酸化防止剤、および／またはその他の表面修飾剤を含有する上記３乃至６に記載の薬物担体である。
８．本発明は、前記の診断および／または治療するための薬物が、核酸、ポリヌクレオチド、遺伝子およびその類縁体である上記３乃至７に記載の薬物担体である。
【００１６】
９．本発明は、前記の診断および／または治療するための薬物が、抗癌剤、抗生物質、酵素剤、酵素阻害剤、抗酸化剤、脂質取り込み阻害剤、ホルモン剤、抗炎症剤、ステロイド剤，血管拡張剤、アンジオテンシン変換酵素阻害剤、アンジオテンシン受容体拮抗剤、平滑筋細胞の増殖・遊走阻害剤、血小板凝集阻害剤、抗凝固剤、ケミカルメデイエーターの遊離抑制剤、血管内皮細胞の増殖または抑制剤、アルドース還元酵素阻害剤、メサンギウム細胞増殖阻害剤、リポキシゲナーゼ阻害剤、免疫抑制剤、免疫賦活剤、抗ウイルス剤、メイラード反応抑制剤、アミロイドーシス阻害剤、ＮＯＳ阻害剤、ＡＧＥｓ阻害剤あるいはラジカルスカベンチャーである上記３乃至７に記載の薬物担体である。
【００１７】
１０．本発明は、前記の診断および／または治療するための薬物が、グリコサミノグリカンおよびその誘導体である上記３乃至７に記載の薬物担体である。
１１．本発明は、前記の診断および／または治療するための薬物が、オリゴおよび／または多糖、およびそれらの誘導体である上記３乃至７に記載の薬物担体である。
【００１８】
１２．本発明は、前記の診断および／または治療するための薬物が、タンパク質またはペプチドである上記３乃至７に記載の薬物担体である。
１３．本発明は、前記の診断および／または治療するための薬物が、Ｘ線造影剤、放射性同位元素標識核医学診断薬、核磁気共鳴診断用診断薬等の各種体内診断薬である上記３乃至７に記載の薬物担体である。
【００１９】
【発明の実施の形態】
本発明の一般式（１）及び（２）に示す化合物はいずれも新規化合物であり、その合成経路の例を下記に示す。但し、本発明の合成方法はこれらに限定されるものでない。下記一般式（３）又は（４）で表わされる化合物のＣＮの部位をアミジノ基に変換することによって製造することができる。
【００２０】
【化５】
0003770706.tif 000004
【００２１】
式（３）中、Ａは芳香環であり、Ｒ1、Ｒ2、Ｒ3、Ｒ4は同一または異なって水素（但し、Ｒ1、Ｒ2、Ｒ3、Ｒ4がすべて水素の場合は除く）、炭素数８〜２５のアルキル基またはアルケニル基である。Ｘ、Ｙは同一または異なってＯまたはＳであり、ｐ、ｑは同一または異なって０または１、ｌ、ｍ、ｎは同一または異なって０または１から６までの自然数を示す（但し、ｐ＝ｍ＝ｑ＝ｎ＝０であってＲ１またはＲ２、Ｒ３またはＲ４のそれぞれ一方が水素の場合は除く）。
【００２２】
【化６】
一般式（４）
0003770706.tif 000005
【００２３】
式（４）中、Ａは芳香環であり、Ｒ1、Ｒ2は同一または異なって水素（但し、Ｒ1、Ｒ2が共に水素の場合は除く）、炭素数８〜２５のアルキル基またはアルケニル基である。ＸはＯまたはＳであり、ｐは０または１、ｌ、ｍは同一または異なって０または１から６までの自然数を示す。
【００２４】
このように製造されるアミジン誘導体は、公知の分離、精製手段（例えば、クロマトグラフィー、再結晶）などにより単離採取することができる。
【００２５】
本発明の担体は、粒径が０.０２〜２５０μｍ、とりわけ０.０５〜０.４μｍの大きさが好ましい。また、構造としては様々な形態が考えられ、限定する必要はないが、特にその内部に薬物を高濃度封入することのできる潜在的機能を有する、例えば巨大分子、微集合体、微粒子、微小球、ナノ小球、リポソームおよびエマルジョンの中より少なくとも一つ以上からなることが最も望ましい。
【００２６】
本発明において、薬物担体の構成成分としては、上記の形態を形成できるものであれば特にその配合に限定する必要はないが、その安全性や、生体内における安定性を考慮すると、リン脂質あるいはその誘導体、リン脂質以外の脂質あるいはその誘導体、または安定化剤、酸化防止剤、その他の表面修飾剤の配合が望ましい。
【００２７】
リン脂質の例としては、ホスファチジルコリン（＝レシチン）、ホスファジルグリセロール、ホスファチジン酸、ホスファチジルコリン、ホスファチジルエタノールアミン、ホスファチジルセリン、ホスファチジルイノシトール、スフィンゴミエリン、カルジオリビン等の天然あるいは合成のリン脂質、またはこれらを常法にしたがって水素添加したもの等を挙げることができる。
【００２８】
安定化剤の例としては、膜流動性を低下させるコレステロールなどのステロール、あるいはグリセロール、シュクロースなどの糖類が挙げられる。
酸化防止剤の例としては、アスコルビン酸、尿酸あるいはトコフェロール同族体例えばビタミンＥなどが挙げられる。トコフェロールには、α、β、γ、δの４個の異性体が存在するが本発明においてはいずれも使用できる。
【００２９】
その他の表面修飾剤の例としては、親水性高分子やグルクロン酸、シアル酸、デキストランなどの水溶性多糖類の誘導体が挙げられる。
前記の親水性高分子の例としては、ポリエチレングリコール、デキストラン、プルラン、フィコール、ポリビニルアルコール、スチレン−無水マレイン酸交互共重合体、ジビニルエーテル−無水マレイン酸交互共重合体、合成ポリアミノ酸、アミロース、アミロペクチン、キトサン、マンナン、シクロデキストリン、ペクチン、カラギーナンなどが挙げられる。その中でもポリエチレングリコールは血中滞留性を向上させる効果が顕著である。
【００３０】
また前記の親水性高分子は、長鎖脂肪族アルコール、ステロール、ポリオキシプロピレンアルキル、またはグリセリン脂肪酸エステル等の疎水性化合物と結合させた誘導体を用いることによって、疎水性化合物部位を薬物担体（例えばリポソーム）の膜へ安定に挿入することができる。そのことにより、薬物担体表面に親水性高分子を存在させることができる。本発明において具体的に用いることができる親水性高分子誘導体の例としては、ポリエチレングリコール−フォスファチジルエタノールアミン等が挙げられる。
【００３１】
本発明において、薬物担体に封入する薬剤としては、診断および／または治療の目的に応じて薬学的に許容し得る薬理的活性物質、生理的活性物質または診断用物質を用いることができる。
封入する薬剤の性質としては、基本的にはどの物質においても問題ないが、担体の表面が陽電荷を持つ特徴から、電気的に中性あるいはアニオン性である物質の方が高封入率が期待できる。
【００３２】
封入する治療するための薬剤の種類としては、薬物担体の形成を損ねない限り特に限定されるものではない。具体的には、核酸、ポリヌクレオチド、遺伝子およびその類縁体、抗癌剤、抗生物質、酵素剤、抗酸化剤、脂質取り込み阻害剤、ホルモン剤、抗炎症剤、ステロイド剤、血管拡張剤、アンジオテンシン変換酵素阻害剤、アンジオテンシン受容体拮抗剤、平滑筋細胞の増殖・遊走阻害剤、血小板凝集阻害剤、抗凝固剤、ケミカルメデイエーターの遊離阻害剤、血管内皮細胞の増殖促進または抑制剤、アルドース還元酵素阻害剤、メサンギウム細胞増殖阻害剤、リポキシゲナーゼ阻害剤、免疫抑制剤、免疫賦活剤、抗ウイルス剤、メイラード反応抑制剤、アミロイドーシス阻害剤、一酸化窒素合成阻害剤、Advanced glycation endproducts阻害剤、ラジカルスカベンチャー、タンパク質、ペプチド等が挙げられる。
【００３３】
例えば、抗癌剤の例としては、シクロホスファミド、イホスファミド、塩酸ナイトロジェンマスタード−Ｎ−オキシド、チオテパ、ブルスファン、カルボコン、塩酸ニムスチン、ラニムスチン、メルファラン、トシル酸インプロスルファン、ダカルバジン、塩酸プロカルバジン、シタラビン、シタラビンオクスファート、エノシタビン、メルカプトプリン、チオイノシン、フルオロウラシル、ドキシフルリジン、テガフール、メトトレキサート、カルモフール、ヒドロキシカルバミド、硫酸ビンクリスチン、硫酸ビンブラスチン、硫酸ビンデシン、エトポシド、クロモマイシンＡ3、塩酸ダウノルビシン、塩酸ドキソルビシン、塩酸アラクルビシン、ピラルビシン、塩酸エピルビシン、ダクチノマイシン、塩酸ミトキサントロン、塩酸ブレオマイシン、硫酸ペプロマイシン、マイトマイシンＣ、ネオカルノスタチン、Ｌ−アスパラギナーゼ、アセグラトンミトプロニトール、デキストラン硫酸ナトリウム、酢酸オクトレオチド、シスプラチン、カルボプラチン、クエン酸タモキシフェン、酢酸メドロキシプロゲステロン、リン酸エストラムスチンナトリウム、酢酸ゴセレリン、酢酸リュープロレリン、塩酸イリノテカンなどが挙げられる。
【００３４】
抗生物質の例としては、ベンジルペニシリンカリウム、ベンジルペニシリンベンザチン、フェノキシメチルペニシリンカリウム、フェネチシリンカリウム、クロキサシリンナトリウム、フルクロキサシリンナトリウム、アンピシリン、トシル酸スルタミシリン、塩酸バカンピシリン、塩酸タランピシリン、レナンピシリン、ヘタシリンカリウム、シクラシリン、アモキシシリン、塩酸ピブメシリナム、アスポキシシリン、カルベニシリンナトリウム、カリンダシリンナトリウム、スルベニシリンナトリウム、チカルシリンナトリウム、ピペラシリンナトリウム、セファロリジン、セファロチンナトリウム、セファゾリンナトリウム、セファピリンナトリウム、セフラジン、セファレキシン、セファトリジンプロピレングリコール、セフロキサジン、セファクロル、セファドロキシル、塩酸セフォチアム、塩酸セフォチアムヘキセチル、セフロキシムナトリウム、セフロキシムアキセチル、セファマンドールナトリウム、セフジニル、塩酸セフェタメトピポキシル、セフチプテン、セフメタゾールナトリウム、セフォキシチンナトリウム、セフォテタンナトリウム、セフミノクスナトリウム、セフプペラゾンナトリウム、セフピラミドナトリウム、セフスロジンナトリウム、セフォタキシムナトリウム、セフォペラゾンナトリウム、セフチゾキシムナトリウム、塩酸セフメノキシム、セフトリアキソンナトリウム、セフタジジム、セフピミゾールナトリウム、セフィキシム、セフテラムピポキシル、セフゾナムナトリウム、セフポドキシプロキセチル、セフォジジム、硫酸セフピロム、ラタモキセフナトリウム、フロモキセフナトリウム、イミペネム、シラスタチンナトリウム、アズトレオナム、カルモナムナトリウム、硫酸ステレプトマイシン、硫酸カナマイシン、硫酸フラジオマイシン、硫酸アミカシン、硫酸ゲンタマイシン、硫酸パロモマイシン、硫酸ペカナマイシン、硫酸リポスタマイシン、硫酸ジベカシン、トブラマイシン、硫酸シソマイシン、硫酸ミスロノマイシン、硫酸アストロマイシン、硫酸ネチルマイシン、硫酸イセパマイシン、硫酸アルベカシン、エリスロマイシン、キタサマイシン、アセチルキタサマイシン、リン酸オレアンドマイシン、ジョサマイシン、アセチルスピラマイシン、ミデカマイシン、酢酸ミデカマイシン、ロキタマイシン、ロキシスロマイシン、クラリスロマイシン、塩酸テトラサイクリン、塩酸オキシテトラサイクリン、メタリン酸テトラサイクリン、塩酸デメチルクロルテトラサイクリン、ロリテトラサイクリン、塩酸ドキシサイクリン、塩酸ミノサイクリン、クロラムフェニコール、コハク酸クロラムフェニコールナトリウム、パルミチン酸クロラムフェニコール、チアンフェニコール、塩酸アミノ酢酸チアンフェニコール、硫酸コリスチン、コリスチンメタンスルホン酸ナトリウム、硫酸ポリミキシンＢ、バシトラシン、塩酸バンコマイシン、塩酸リンコマイシン、クリンダマイシン、塩酸スペクチノマイシン、ホスホマイシンナトリウム、ホスホマイシンカルシウムなどが挙げられる。
【００３５】
酵素剤の例としては、キモトリプシン、結晶トリプシン、ストレプトキナーゼ・ストレプトドルナーゼ、ヒアルロニダーゼ、ウロキナーゼ、ナサルプラーゼ、アルテプラーゼ、塩化リゾチーム、セミアルカリプロティナーゼ、セラペプターゼ、チソキナーゼ、デュテプラーゼ、バトロキソビン、プロナーゼ、プロメラインなどが挙げられる。
抗酸化剤の例としては、トコフェロール、アスコルビン酸、尿酸などが挙げられる。
【００３６】
抗炎症剤の例としては、サリチル酸コリン、サザピリン、サリチル酸ナトリウム、アスピリン、ジフルニサル、フルフェナム酸、メフェナム酸、フロクタフェニン、トルフェナム酸、ジクロフェナクナトリム、トルメチンナトリウム、スリンダク、フェンブフェン、フェルビナクエチル、インドメタシン、インドメタシンファルネシル、アセメタシン、マレイン酸プログルメタシン、アンフェナクナトリウム、ナブメトン、イブプロフェン、フルルビプロフェン、フルルビプロフェンアキセチル、ケトプロフェン、ナプロキセン、プロチジン酸、プラノプロフェン、フェノプロフェンカルシウム、チアプロフェン酸、オキサプロジン、ロキソプロフェンナトリウム、アルミノプロフェン、ザルトプロフェン、フェニルブタゾン、クロフェゾン、ケトフェニルブタゾン、ピロキシカム、テノキシカム、アンピロキシカム、塩酸チアラミド、塩酸チノリジン、塩酸ベンジダミン、エピリゾール、エルモファゾンなどが挙げられる。
【００３７】
ステロイド剤の例としては酢酸コルチゾン、ヒドロコルチゾン（リン酸エステル、酢酸塩）、酪酸ヒドロコルチゾン、コハク酸ヒドロコルチゾンナトリウム、プレドニゾロン（アセテート、サクシネート、第三級ブチル酢酸エステル、リン酸エステル）、メチルプレドニゾロン（アセテート）、コハク酸メチルプレドニゾロンナトリウム、トリアムシノロン、トリアムシノロンアセトニド（酢酸トリアムシノロン）、デキサメタゾン（リン酸エステル、酢酸塩、リン酸ナトリウム塩、硫酸エステル）、パルミチン酸デキサメタゾン、ベタメタゾン（リン酸塩、２ナトリウム塩）、酢酸パラメタゾン、酢酸フルドロコルチゾン、酢酸ハロプレドン、プロピオン酸クロベタゾール、ハルシノニド、プロピオン酸ベクロメタゾン、吉草酸ベタメタゾン、酢酸ベタメタゾン、酢酸コルチゾンなどが挙げられる。
【００３８】
アンジオテンシン変換酵素阻害剤の例としては、アラセプリル、塩酸イミダプリル、塩酸テモカプリル、塩酸デラプリル、塩酸ベナゼプリル、カプトプリル、シラザプリル、マレイン酸エナラプリル、リシノプリルなどが挙げられる。
血管拡張剤の例としては、テオフィリン、ジプロフィリン、プロキシフィリン、アミノフィリン、コリンテオフィリン、プロスタグランジン、プロスタグランジン誘導体、アルプロスタジルアルファデクス、アルプロスタジル、リマプロストアルファデクス、パパベリン、シクランデラート、シンナリジン、フマル酸ベンシクラン、マレイン酸シネパジド、塩酸ジラゼプ、トラピジル、塩酸ジフェニドール、ニコチン酸、イノシトールヘキサニコチネート、クエン酸ニカメタート、酒石酸ニコチニックアルコール、ニコチン酸トコフェロール、ヘプロニカート、塩酸イソクスプリン、硫酸バメタン、塩酸トラリゾン、メシル酸ジヒドロエルゴトキシン、酒石酸イフェンプロジル、塩酸モキシシリト、ニセルゴリン、塩酸ニカルジピン、ニルバジピン、ニフェジピン、塩酸ベニジピン、塩酸ジルチアゼム、ニソルジピン、ニトレンジピン、塩酸マニジピン、塩酸バルニジピン、塩酸エホニジピン、塩酸ベラパミル、塩酸トリメタジジン、カプトプリル、マレイン酸エナラプリル、アラセプリル、塩酸デラプリル、シラザプリル、リシノプリル、塩酸ベナゼプリル、塩酸ヒドララジン、塩酸トドララジン、ブドララジン、カドララジン、インダパミド、塩酸カルボクロメン、エフロキサート、塩酸エタフェノン塩酸オキシフェドリン、ニコランジル、亜硝酸アミル、硝酸イソソルビドなどが挙げられる。
【００３９】
平滑筋細胞遊走・増殖抑制剤の例としては、ヘパリンナトリウム、ダルテパリンナトリウム（低分子ヘパリン）、ヘパリンカルシウム、デキストラン硫酸などが挙げられる。
血小板凝集阻害剤の例としては、塩酸チクロピジン、シロスタゾール、イコサペント酸エチル、ベラプロストナトリウム、塩酸サルプグレラート、バトロキソビン、ジピリダモールなどが挙げられる。
【００４０】
抗凝固剤の例としては、ヘパリンナトリウム、ダルテパリンナトリウム（低分子ヘパリン）、ヘパリンカルシウム、デキストラン硫酸、ワルファリンカリウム、アルガトロバンなどが挙げられる。
ケミカルメディエーター遊離抑制剤の例としては、トラニラスト、フマル酸ケトフェチン、塩酸アゼラスチン、オキサトミド、アンレキサノクス、レピリナストなどが挙げられる。
免疫抑制剤の例としては、シクロスポリンなどが挙げられる。
抗ウイルス剤の例としては、アシクロビル、ガンシクロビル、ジダノシン、ジドブジン、ソリブジン、ビダラビンなどが挙げられる。
【００４１】
また、封入する診断するための薬剤の種類としては、薬物担体の形成を損ねない限り特に限定されるものではない。具体的には、Ｘ線造影剤、放射性同位元素標識核医学診断薬、核磁気共鳴診断用診断薬等が挙げられる。例えば、 Ｘ線造影剤の例としては、アミドトリゾ酸メグルミン、イオタラム酸ナトリウム、イオタラム酸メグルミン、ガストログラフィン、ヨーダミドメグルミン、リピオドールウルトラフルイド、アジピオドンメグルミン、イオキサグル酸、イオトロクス酸メグルミン、イオトロラン、イオパノ酸、イオパミドール、イオヘキソール、イオベルソール、イオポダートナトリウム、イオメプロール、イソペーク、ヨードキサム酸などが挙げられる。
【００４２】
本発明の薬物担体は常法によって容易に得ることができるが、その一例を以下に示す。フラスコ内に一般式（１）又は（２）で示されるアミジン誘導体およびリン脂質等の他の担体構成成分を、クロロホルム等の有機溶媒により混合し、有機溶媒を留去後に真空乾燥することによりフラスコ内壁に薄膜を形成させる。次に、当該フラスコ内に薬物を加え、激しく攪拌することにより、リポソーム分散液を得る。得られたリポソーム分散液を遠心分離し、上清をデカンテーションし封入されなかった薬物を除去することにより、薬物担体を分散液として得ることができる。また、上記の各構成成分を混合し、高圧吐出型乳化機により高圧吐出させることにより得ることもできる。
【００４３】
【実施例】
次に実施例、試験例を挙げて本発明をさらに詳しく説明する。
（実施例１）
３,５−ビス（（Ｎ−ドデシルカルバモイル）メトキシ）ベンゼンカルボキシアミジンの合成
３,５−ジヒドロキシベンゾニトリル０.６７ｇ、 Ｎ−ドデシル−２−クロロアセトアミド２.６１ｇ、炭酸カリウム１.５２ｇ及びＮ,Ｎ−ジメチルホルムアミド（２５ml）溶液を６０℃で５時間加熱攪拌した。反応溶液を水にあけ、結晶を濾取し、水、メタノールで洗浄し、無色の結晶として３,５−ビス（（Ｎ−ドデシルカルバモイル）メトキシ）ベンゼンカルボニトリル２.２２ｇを得た。
【００４４】
先に得た３,５−ビス（（Ｎ−ドデシルカルバモイル）メトキシ）ベンゼンカルボニトリル１.７６ｇをエタノール（１００ml）−ベンゼン（１５０ml）−クロロホルム（５０ml）の混合溶液に、氷冷下に１時間塩化水素ガスを導入した。減圧下に溶媒を留去し３,５−ビス（（Ｎ−ドデシルカルバモイル）メトキシ）-α-エトキシ-α-イミノトルエン塩酸塩を得た。これをクロロホルム（１６０ml）−メタノール（８０ml）の混合溶液に溶解し、氷冷下に３０分間アンモニアガスを導入した後、７時間加熱還流した。減圧下に溶媒を留去して得られた固体からクロロホルム不溶物を除去して、クロロホルムを減圧留去した。残渣をシリカゲルクロマトグラフィーに付し、５％メタノール−クロロホルム溶出画分より無色結晶として３,５−ビス（（Ｎ−ドデシルカルバモイル）メトキシ）ベンゼンカルボキシアミジン１.２２ｇを得た。このものの機器分析データは下記式（５）の構造を支持する。
【００４５】
1Ｈ−ｎｍｒ（ＣＤＣｌ3）  δ（ｐｐｍ）：７.２５（２Ｈ，ｓ），６.７１（１Ｈ，ｓ），４.５８（４Ｈ，ｓ），３.２８−３.２１（４Ｈ，ｍ），１.５２（４Ｈ，ｓ），１.３３−１.１９（３６Ｈ，ｍ），０.８７（６Ｈ，ｔ，Ｊ＝６.８Ｈｚ）
融点：２０２−２０４℃
【００４６】
【化６】
0003770706.tif 000006
【００４７】
（実施例２）
４−（Ｎ,Ｎ−ジオクタデシルカルボモイル）ベンゼンカルボキシアミジンの合成
４−シアノベンゾイルクロライド１６６mg、Ｎ,Ｎ−ジオクタデシルアミン５２２mgとトリエチルアミン１１１mgの塩化メチレン（２０ml）溶液を室温で３時間攪拌した。反応溶液に水を加えクロロホルム抽出し、有機層を順に希アルカリ、水で洗い、無水硫酸マグネシウムで乾燥し、減圧下に濃縮した残渣をシリカゲルクロマトグラフィーに付し、クロロホルム溶出画分よりＮ,Ｎ−ジオクタデシル−４−シアノベンズアミド６００mgを得た（収率９２、無色結晶）。
【００４８】
先に得たＮ,Ｎ−ジオクタデシル−４−シアノベンズアミド１.３０ｇをエタノール（１００ml）−ベンゼン（１５０ml）の混合溶媒に、氷冷下に３０分間塩化水素ガスを導入した。減圧下に溶媒を留去し（４−（エトキシイミノメチル）フェニル）−Ｎ,Ｎ−ジオクタデシルアミド塩酸塩を得た。これをクロロホルム（１６０ml）−メタノール（８０ml）の混合溶液に溶解し、氷冷下に３０分間アンモニアガスを導入した後、８時間加熱還流した。減圧下に溶媒を留去して得られた固体からクロロホルム不溶物を除去して、クロロホルムを減圧留去した。残渣をシリカゲルクロマトグラフィーに付し、５％メタノール-クロロホルム溶出画分より４−（Ｎ,Ｎ−ジオクタデシルカルボモイル）ベンゼンカルボキシアミジン９１０mgを得た（収率68％、無色結晶）。このものの機器分析データは下記式（６）の構造を支持する。
【００４９】
1Ｈ−ｎｍｒ（ＣＤＣｌ3）  δ（ｐｐｍ）：７.９６（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝８.０Ｈｚ），７.３５（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝８.０Ｈｚ），３.４９−３.３８（２Ｈ，ｍ），３.１７−３.０６（２Ｈ，ｍ），１.７０−１.０１（６４Ｈ，ｍ），０.８８（６Ｈ，ｔ，Ｊ＝６.４Ｈｚ）
融点：１６８−１６９℃
【００５０】
【化７】
0003770706.tif 000007
【００５１】
（実施例３）
実施例１、２で合成したアミジン誘導体を膜構成成分として含有するリポソームを下記の通りに調製した。
アミジン誘導体を３μＭ、ジパルミトイルフォスファチジルコリン（ＤＰＰＣ）を２１μＭ、コレステロールを６μＭを、容量１０mlのナス型フラスコに秤りとり、１mlのクロロホルムにて完全に溶解した。エバポレータによりクロロホルムを減圧留去してフラスコ内壁に脂質薄膜を形成する。次いで０.５μＭのカルセインを含む１０mMＴｒｉｓ-ＨＣｌ緩衝液１mlをフラスコに加え、激しく振とう攪拌することにより、リポソーム（ＭＬＶ）分散液を得た。
【００５２】
（試験例１）
カルセインの封入率の測定
カルセインのリポソームへの封入率は、次のように求めた。５０倍に希釈したリポソーム懸濁液４０μｌを２.０mlの１０ｍＭＴｒｉｓ−ＨＣｌ緩衝液に添加し、蛍光強度を測定する（励起波長４９０ｎｍ、蛍光波長５３０ｎｍ）。この時の蛍光強度をＦｔとする。つぎに１０ｍＭＣｏＣｌ2水溶液を２０μｌ添加しリポソームに封入されなかったカルセインを消光させ、リポソームの内部に封入されたカルセインの蛍光を測定する。この時の蛍光強度をＦｉｎとする。さらに２０％ＴｒｉｔｏｎＸ−１００溶液を２０μｌ添加することにより、リポソームを破壊し、すべてのカルセインをＣｏ2+と結合させ消光させる。この時の蛍光強度を、Ｆｑとする。リポソームの保持効率は以下の式にて計算される。
【００５３】
保持効率（％）＝（Ｆｉｎ−Ｆｑ×ｒ）／（Ｆｔ−Ｆｑ×ｒ）×１００
【００５４】
式中のｒは、リポソーム懸濁液および薬物の添加に伴う反応液の体積変化を補正した値で本実験ではｒ＝（２.０＋０.０４＋０.０２＋０.０２）／２.０＝１.０４である。結果を表１に示す。
【００５５】
【表１】
0003770706.tif 000008
【００５６】
（実施例４）
実施例１、２で合成したアミジン誘導体膜構成成分として含有するリポソームを下記の通りに調製した。
アミジン誘導体を１０μＭ、ジラウロイルホスファチジルコリン（ＤＬＰＣ）を２０μＭ、ジオレオイルホスファチジルエタノールアミン（ＤＯＰＥ）２０μＭを秤りとり、１mlのクロロホルム溶液とする。
【００５７】
クロロホルム溶液の２０μlを容量１０mlのナス型フラスコに取りさらに１mlのクロロホルムを加えた。エバポレータによりクロロホルムを減圧留去してフラスコ内壁に脂質薄膜を形成した。次いで、β-galactosodase の遺伝子を組み込んだプラスミドｐｃＤＮＡ／Ａｍｐ（Invitrogen社）２０μｇを溶解した水溶液１mlをフラスコ内に加え、激しく振とう攪拌することによりＤＮＡ封入リポソームを得た。
【００５８】
（試験例２）
細胞の調製とトランスフェクション
細胞：大日本製薬株式会社より購入した、Ｃｏｓ−１細胞（ATCC No. CRL-1650）を１０％牛胎児血清（FCS）を含むIscove's modified Dulbecco's medium（IMDM）を用いて５％ＣＯ2，９５％Ｏ2，３７℃のインキュベータ中で継代培養した。
トランスフェクション：１０％ＦＣＳ  ＩＭＤＭ培地（１ml）を添加した、６穴マルチウェルプレートに約２×１０4のＣｏｓ−１細胞を加え細胞培養を行った。約２４時間培養後にＦＣＳを含まない新鮮培地と交換し、０.２μｇのＤＮＡを含むリポソーム懸濁液を加える。１６時間培養後、１０％ＦＣＳ  ＩＭＤＭ培地にて培地交換し、さらに４８時間培養した。細胞を、ホルムアルデヒドで固定し、β-galactosidaseの基質である、5-bromo-4chloro-3-indolyl-β-galactopyranoside（X-gal）を加え、β-galactosidaseを発現した細胞を同定した。発色した細胞の全体に対する割合は、画像処理により測定した。結果を表２に示す。
【００５９】
【表２】
0003770706.tif 000009
【００６０】
（急性毒性）
ＩＣＲ系雄性マウス（５週齢）を用いて経口投与により急性毒性試験を行った結果、本発明の化合物のＬＤ50はいずれも３２０mg/kg以上であり有効性に比べて高い安全性が確認された。
【００６１】
【発明の効果】
上述した通り、本発明により新規アミジン誘導体が供給される。本発明のアミジン誘導体を構成成分とする薬物担体は試験例に示されるように、従来の薬物担体に比べ細胞への導入効率が高いことが明らかである。このような特徴から、薬学的に許容し得る薬理的活性物質、生理的活性物質または診断用物質を封入させた本発明の薬物担体は、治療および診断という目的に対して非常に効果的である。