(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
下記一般式（Ｉ）で表されるテルペノイド化合物。
【化１】
0003839082.tif 000006
但し、（Ｉ）式中Ｒ1は水素原子又は水酸基を表し、Ｒ2は水酸基及び／又は短鎖長アルコキシル基を有してもよい芳香環を表す。また、点線の結合はあってもなくてもよいが、これらのうちＲ1に結合する結合線を除く点線の結合の少なくとも１箇所は結合が存在するものとする。
【請求項２】
一般式（Ｉ）で表されるテルペノイド化合物が化２で表される１−（７−ヒドロキシ−３，７−ジメチル−オクタン−２，５−ｔｒａｎｓ−ジエン−１−イル）−３−Ｏ−（６−デオキシ−α−Ｌ−マンノピラノシル−β−Ｄ−グルコシラノシド−４−（３−（４−ヒドロキシフェニル）−２−ｔｒａｎｓ−プロペネート又は、化３で表される１−（１−（３，７−ジメチル−オクタン−２，６−ｔｒａｎｓ−ジエン−１−イル）−３−Ｏ−（６−デオキシ−α−Ｌ−マンノピラノシル−β−Ｄ−グルコシラノシド−４−（３−（４−ヒドロキシフェニル）−２−ｔｒａｎｓ−プロペネートである請求項１記載のテルペノイド化合物。
【化２】
0003839082.tif 000007
【化３】
0003839082.tif 000008
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は、新規テルペノイド化合物に関し、詳しくは、医薬、食品、化粧料等の用途に用いることが期待される新規なテルペノイド化合物に関する。
【０００２】
【従来の技術】
テルペノイド化合物とは、イソプレンを構成単位とする（Ｃ5Ｈ8）ｎの組成の炭化水素及びこれらを前駆物質として導かれると考えられるアルコール、アルデヒド、ケトン、カルボン酸等の含酸素化合物並びにこれらと不飽和度を異にする一群の有機化合物の総称である。テルペノイド化合物の大部分は植物体に存在し、稀に動物体にも存在する。この様な起源動植物から、水蒸気蒸留や有機溶媒による抽出等の方法でテルペノイド化合物を含有する成分を抽出し、必要に応じて更にこれらを精製してテルペノイド化合物を単離し、香料原料、医薬、食品、化学工業原料等として利用することは、従来より広く行われている。
【０００３】
例えば、中国生薬は全てが天然物由来であり、多数の中国生薬が優れた薬効を有する薬剤として使用されているが、これらから、さらにより薬効の高い単一成分の一種としてテルペノイド化合物が単離精製されて医薬、食品、化粧料等の分野で利用されている。しかし、起源動植物からテルペノイド化合物を含有する成分を抽出することは比較的容易に行えるものの、これらの抽出物から機能性の高い単一テルペノイド化合物を分離精製することは困難な場合が多く、有用性は期待されていても、いまだ、単離されていないテルペノイド化合物も多数存在するのが現状である。
【０００４】
【発明が解決しようとする課題】
本発明は、上記観点からなされたものであり、安全性や薬効が確認されている中国生薬の抽出物より医薬、食品、化粧料等の用途に用いることが期待される新規なテルペノイド化合物を単離することを課題とする。
【０００５】
【課題を解決するための手段】
本発明者らは、上記課題を解決するために各種中国生薬の抽出物から新規なテルペノイド化合物を単離すべく鋭意研究を重ねた結果、苦丁茶の極性溶媒抽出物から下記一般式（Ｉ）で表される新規なテルペノイド化合物を単離することに成功し、本発明を完成した。
【０００６】
すなわち本発明は、下記一般式（Ｉ）で表されるテルペノイド化合物である。
【０００７】
【化４】
0003839082.tif 000002
【０００８】
但し、（Ｉ）式中Ｒ1は水素原子又は水酸基を表し、Ｒ2は水酸基及び／又は短鎖長アルコキシル基を有してもよい芳香環を表す。また、点線の結合はあってもなくてもよいが、これらのうちＲ1に結合する結合線を除く点線の結合の少なくとも１箇所は結合が存在するものとする。
【０００９】
ここで、上記一般式（Ｉ）中のＲ2は、水酸基及び／又は短鎖長アルコキシル基を有してもよい芳香環を表すが、短鎖長アルコキシル基とは炭素数１〜６程度のアルコキシル基をいい、Ｒ2として具体的には、フェニル基、ヒドロキシフェニル基、メトキシフェニル基やｔ−ブトキシフェニル基などのアルコキシフェニル基、ヒドロキシメトキシフェニル基やｔ−ブトキシヒドロキシフェニル基などのアルコキシヒドロキシフェニル基、ジメトキシフェニル基やビス（ｔ−ブトキシ）フェニル基などのジアルコキシフェニル基等を挙げることができる。
【００１０】
また、一般式（Ｉ）のテルペノイド化合物として、具体的には、化５で表される１−（７−ヒドロキシ−３，７−ジメチル−オクタン−２，５−ｔｒａｎｓ−ジエン−１−イル）−３−Ｏ−（６−デオキシ−α−Ｌ−マンノピラノシル−β−Ｄ−グルコシラノシド−４−（３−（４−ヒドロキシフェニル）−２−ｔｒａｎｓ−プロペネート、化６で表される１−（１−（３，７−ジメチル−オクタン−２，６−ｔｒａｎｓ−ジエン−１−イル）−３−Ｏ−（６−デオキシ−α−Ｌ−マンノピラノシル−β−Ｄ−グルコシラノシド−４−（３−（４−ヒドロキシフェニル）−２−ｔｒａｎｓ−プロペネート等が挙げられる。
【００１１】
【化５】
0003839082.tif 000003
【００１２】
【化６】
0003839082.tif 000004
【００１３】
なお、上記本発明の新規テルペノイド化合物の範疇には、上記一般式（Ｉ）で表されるテルペノイド化合物のナトリウム、カリウムなどのアルカリ金属塩、カルシウムやマグネシウムなどのアルカリ土類金属塩、トリエチルアミンやトリエタノールアミンなどの有機アミン塩、リジンやアルギニンなどの塩基性アミノ酸塩等の塩類も含まれるものである。
【００１４】
上記本発明の新規テルペノイド化合物は、具体的には、雲南苦丁茶、四川苦丁茶等の苦丁茶を極性溶媒で抽出し、抽出物をシリカゲル、ＯＤＳ、イオン交換樹脂等を充填したカラムを用いて各画分に分画し、これらについてマススペクトルや核磁気共鳴スペクトル等の測定を行って同定することにより得られる。
【００１５】
【発明の実施の形態】
上記本発明の新規テルペノイド化合物は、上述のように苦丁茶の極性溶媒抽出物から得られるが、以下にその方法について説明する。
【００１６】
原料として用いられる苦丁茶としては、雲南苦丁茶（リグストラム  プルプラセンス）、四川苦丁茶（リグストラム  ペドンクラレ）等が挙げられる。これらは、モクセイ科イボタノキ属の植物であり、中国雲南地方や四川地方で消炎、抗疲労などの効能があるとされ古くから用いられている中国生薬である。これらの入手は、中華材料店等を通して容易に可能である。植物体の使用部位としては、特段の限定はないが、入手がしやすく、本発明のテルペノイド化合物の含有量が多いことが確認されている葉部を用いるのが好ましい。また、抽出に際して必要に応じて、これらの植物体に、切断、乾燥、粉砕等の前処理を施しても構わない。
【００１７】
抽出に用いる極性溶剤としては、水、メタノールやエタノール等のアルコール類、ジエチルエーテルやテトラヒドロフラン等のエーテル類、クロロホルムや塩化メチレン等のハロゲン化炭化水素類、アセトンやメチルエチルケトン等のケトン類、アセトニトリル等のニトリル類等が好適に例示できる。これらは一種を単独で用いても、二種以上を混合して用いてもよい。より好ましい抽出溶媒は、安全性上問題の少ない、水あるいはアルコール類である。
【００１８】
また、抽出は、植物体或いはその加工物に対して１〜１０倍量の抽出溶媒を加え、室温であれば数日、抽出溶媒の沸点付近の温度であれば数時間、浸漬する等の方法で行われる。必要に応じて撹拌を加えることもできる。
【００１９】
この様にして得られた抽出物は、必要に応じて濾過等による不溶物除去、溶媒の溜去等の処理が施された後、通常の方法に従って、シリカゲル、ＯＤＳ、イオン交換樹脂等のカラムクロマトグラフィーで順次分画精製され、これらの画分から本発明のテルペノイド化合物を単離する。
【００２０】
具体例として、雲南苦丁茶の水抽出物をダイアイオンＨＰ−２０（三菱化成製）を充填したカラムに流した後、このカラムに水、２０％エタノール水溶液、エタノールを順次流し吸着物を溶出させ、得られたエタノールフラクションについて溶媒を溜去後、これをシリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶出溶媒；クロロホルム：メタノール＝１００：０→５０：５０）、ＯＤＳカラムを装着した分取高速液体クロマトグラフィー（溶出溶媒：３５％アセトニトリル水溶液及び５０％メタノール水溶液）で精製することにより、１−（７−ヒドロキシ−３，７−ジメチル−オクタン−２，５−ｔｒａｎｓ−ジエン−１−イル）−３−Ｏ−（６−デオキシ−α−Ｌ−マンノピラノシル−β−Ｄ−グルコシラノシド−４−（３−（４−ヒドロキシフェニル）−２−ｔｒａｎｓ−プロペネート、及び１−（１−（３，７−ジメチル−オクタン−２，６−ｔｒａｎｓ−ジエン−１−イル）−３−Ｏ−（６−デオキシ−α−Ｌ−マンノピラノシル−β−Ｄ−グルコシラノシド−４−（３−（４−ヒドロキシフェニル）−２−ｔｒａｎｓ−プロペネートが得られる。
【００２１】
【実施例】
以下に本発明の実施例を説明する。
雲南苦丁茶１００ｇに水１Ｌを加え、９０℃で３時間加熱した後、濾過により不溶物を除去した。得られた抽出液をダイアイオンＨＰ−２０（三菱化成製）を充填したカラムに流した後、このカラムに水、２０％エタノール、エタノールを順次３Ｌづつ流し吸着物を溶出させた。この内のエタノールのフラクションについてエタノールを溜去させた後、シリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶出溶媒；クロロホルム：メタノール＝１００：０→５０：５０）、ＯＤＳカラムを装着した分取高速液体クロマトグラフィー（溶出溶媒：３５％アセトニトリル水溶液及び５０％メタノール水溶液）で精製し、１−（７−ヒドロキシ−３，７−ジメチル−オクタン−２，５−ｔｒａｎｓ−ジエン−１−イル）−３−Ｏ−（６−デオキシ−α−Ｌ−マンノピラノシル−β−Ｄ−グルコシラノシド−４−（３−（４−ヒドロキシフェニル）−２−ｔｒａｎｓ−プロペネート（化合物１）を１９０ｍｇ、１−（１−（３，７−ジメチル−オクタン−２，６−ｔｒａｎｓ−ジエン−１−イル）−３−Ｏ−（６−デオキシ−α−Ｌ−マンノピラノシル−β−Ｄ−グルコシラノシド−４−（３−（４−ヒドロキシフェニル）−２−ｔｒａｎｓ−プロペネート（化合物２）を２８０ｍｇ得た。得られた化合物１及び化合物２のＦＡＢ−ＭＳ、ＮＭＲ測定結果を以下に示す。
【００２２】
（化合物１）
ＦＡＢ−ＭＳ：６４７［Ｍ＋Ｎａ］+
1Ｈ−ＮＭＲ（δｐｐｍ；ＣＤ3ＯＤ）
1.09(3H d) 1.28(6H s) 1.69(3H s) 2.75(2H brd) 3.29(1H t) 3.40(1H dd)
3.52(1H m) 3.57(1H m) 3.58(1H dd) 3.56-3.62(2H m) 3.82(1H t)
3.92(1H dd) 4.27(1H br dd) 4.37(1H d) 4.38(1H br dd) 4.92(1H t)
5.20(1H d) 5.43(1H m) 5.61(1H dd) 5.64(1H dd) 6.33(1H d) 6.81(2H d)
7.46(2H d) 7.66(1H d)
13Ｃ−ＮＭＲ（δｐｐｍ；ＣＤ3ＯＤ）
16.6 18.4 30.0 43.2 62.4 66.6 70.4 70.7 71.1 72.1 72.3 73.8 76.1 81.6
102.8 102.9 114.8 116.9 122.1 125.3 127.0 131.3 141.0 141.2 161.6 168.3
【００２３】
（化合物２）
ＦＡＢ−ＭＳ：６３１［Ｍ＋Ｎａ］+
1Ｈ−ＮＭＲ（δｐｐｍ；ＣＤ3ＯＤ）
1.08(3H d) 1.62(3H s) 1.69(6H s) 2.10(4H brd) 3.35(2H m) 3.58(5H m)
3.82(1H t) 3.92(1H dd) 4.31(2H m) 4.38(1H d) 4.38(1H d) 4.90(1H m)
5.12(1H br t) 5.19(1H d) 5.38(1H t) 6.34(1H d) 6.81(2H d) 7.47(2H d)
7.66(1H d)
13Ｃ−ＮＭＲ（δｐｐｍ；ＣＤ3ＯＤ）
16.5 17.8 18.4 25.9 27.4 40.6 62.4 66.5 70.4 70.6 72.0 72.3 73.7 76.1
81.6 102.5 103.0 114.8 116.8 121.4 125.1 127.1 131.3 132.5 142.0 147.6
161.4 168.2
【００２４】
＜本発明の新規テルペノイド化合物の有する作用＞
本発明で得られた新規テルペノイド化合物の有する生体作用としてコレステロールアシルトランスフェラーゼ活性（ＡＣＡＴ）阻害作用の測定を行い、これにより、本発明の新規テルペノイド化合物の有用性を示す。すなわち、本発明の新規テルペノイド化合物として、上記実施例で得られた化合物１及び化合物２を用い、以下の方法でＡＣＡＴ阻害作用を測定した。
【００２５】
チューブに８０μＭのウシ血清アルブミン水溶液４μｌ、２ｍＭジチオスレイトール水溶液０．８μｌ、１５０ｍＭリン酸２水素１カリウムバッファー（ｐＨ７）８μｌ、１２０μｇ／８μｌのラット肝ミクロソーム水分散液８μｌ、１００μＭの［１−14Ｃ］オレオイルＣｏＡ水溶液５μｌ、水１５．２μｌ、検体（表１に示す各種最終濃度となるように化合物１又は２を添加した水溶液）４μｌを秤込み、３０℃で５分間インキュベートした後、これにメタノール２００μｌ、コレステリルオレート１００μｇ、［７−14Ｃ］コレステリルオレート２μｌ、ヘキサン９００μｌを順次加え混合した。この混合液からヘキサン相０．６ｍｌを採取し窒素ガスで乾固した後、これをクロロホルムに溶かし薄層クロマトグラフ板にスポットして石油エーテル：ジエチルエーテル：酢酸＝８５：１５：３で展開した。これにより分画されたコレステリルオレートを沃素で発色させ、切りとり液体シンチレーターで放射線量を測定して、生成したコレステリルオレート量を算出した。
【００２６】
また、上記測定において検体の替わりに同量の水を加えた以外は全く同様の測定を行いコントロールのコレステリルオレート量を求め、次式からＡＣＡＴ阻害値（％）を算出した。結果を表１に示す。
【００２７】
【数１】
ＡＣＡＴ阻害値（％）＝（コントロールのコレステリルオレート量−検体存在時のコレステリルオレート量）×１００／コントロールのコレステリルオレート量
【００２８】
【表１】
0003839082.tif 000005
【００２９】
更に、非線形直線回帰式より、表１の結果をもとに化合物１のＩＣ50を算出したところ２．８８×１０-3Ｍであった。これらの結果より本発明の新規テルペノイド化合物はＡＣＡＴ阻害作用に優れることがわかる。
【００３０】
【発明の効果】
本発明の新規テルペノイド化合物は、安全性や薬効が確認されている苦丁茶の抽出物より単離されたものであり、医薬、食品、化粧料等の用途に用いることが期待できる。