(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
３０〜７０％の水分を含む含水レシチンを原料として用いて、これにホスフォリパーゼＡ1 またはＡ2 からなる加水分解酵素を作用させてリゾレシチンを生成せしめた後、得られたリゾレシチン生成液に対して、該生成液中の水分の１〜４倍容量となる割合のアセトンを加えて攪拌することにより、リゾレシチン部を浮揚せしめるか、或いは該水分の５倍容量以上のアセトンを加えて攪拌することにより、リゾレシチン部を沈降せしめて、分離し、次いでかかるリゾレシチン部に対して、アセトンにて繰返し抽出を行なうことにより、前記リゾレシチンの生成反応において副生した遊離脂肪酸や原料由来の脂溶性不純物を分離、除去せしめることを特徴とする植物性リゾレシチンの製造法。
【請求項２】
前記含水レシチンが、植物油の脱ガム工程で発生する含水ガム質である請求項１記載の植物性リゾレシチンの製造法。
【請求項３】
前記含水レシチンが、ペースト状レシチンを加水したものである請求項１記載の植物性リゾレシチンの製造法。
【請求項４】
前記含水レシチンに対して、前記酵素の至適ｐＨとなるように、アルカリ性水溶液、酸性水溶液または緩衝液を添加せしめて、前記酵素反応を行なわしめる請求項１乃至請求項３の何れかに記載の植物性リゾレシチンの製造法。
【請求項５】
前記リゾレシチンを生成せしめた後、前記アセトンの配合に先立ち、得られたリゾレシチン生成液に対して失活処理を施すことを特徴とする請求項１乃至請求項４の何れかに記載の植物性リゾレシチンの製造法。
【請求項６】
前記リゾレシチンを生成せしめた後、得られたリゾレシチン生成液に対して失活処理を施すことなく、そのまま、前記アセトンの配合を行なうことを特徴とする請求項１乃至請求項４の何れかに記載の植物性リゾレシチンの製造法。
【請求項７】
前記アセトンによる繰返し抽出の後、得られたリゾレシチン生成物を非極性有機溶剤にて抽出処理することにより、高純度のリゾレシチン生成物を得ることを特徴とする請求項１乃至請求項６の何れかに記載の植物性リゾレシチンの製造法。
【請求項８】
前記アセトンによる繰返し抽出の後、得られたリゾレシチン生成物をアルコールまたは含水アルコールにて抽出し、アルコール可溶部からリゾホスファチジルコリンを主成分とする画分を取り出す一方、アルコール不溶部からリゾホスファチジルエタノールアミンやリゾホスファチジルイノシトール、リゾホスファチジン酸を含む画分を得ることを特徴とする請求項１乃至請求項７の何れかに記載の植物性リゾレシチンの製造法。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【技術分野】
本発明は、植物性リゾレシチンの製造法に係り、特に、着色度が低く且つ風味の良い、高品質な植物性リゾレシチンを、高い収率で得ることの出来る方法に関するものである。
【０００２】
【背景技術】
植物由来のリゾレシチン、例えば大豆リゾレシチンは、大豆レシチン（１，２−ジアシルグリセロリン脂質）に加水したものに、加水分解酵素としてホスフォリパーゼＡ1 またはＡ2 を作用させて、かかるリン脂質の脂肪酸部を部分加水分解し、２−モノアシルグリセロリン脂質、または１−モノアシルグリセロリン脂質に改質したものを意味しているが、そのような大豆リゾレシチンは、通常の大豆レシチンに比べて、▲１▼Ｏ／Ｗ乳化性が強い、▲２▼酸性下及び塩類存在下でのエマルジョン安定性が高い、▲３▼蛋白質との結合や澱粉との結合能でも優れた効果を発揮する、▲４▼離型作用も優れている、等の特徴を有しているところから、近年、その需要が高まっている。
【０００３】
ところで、かかる大豆リゾレシチンの原料として用いられる大豆レシチンは、先ず、大豆原油を濾過し、次いで６０℃〜８０℃に加温した状態で水を２〜３重量％加えて攪拌した後、沈殿した含水ガム質（水和レシチン）たる沈殿部を遠心分離によって分離する脱ガム工程を経由し、更に、その後、その得られた含水ガム質を減圧下において加熱、乾燥することにより、リン脂質分：６０〜６５％、中性脂肪：３５〜４０％、及び微量の遊離脂肪酸とステロール類からなる組成のペースト状レシチンとして、製造されている。そして、大豆リゾレシチンは、通常、この大豆レシチン（ペースト状レシチン）に再度加水した後、ホスフォリパーゼＡ1 またはＡ2 からなる加水分解酵素を作用させて、各リン脂質の所定の脂肪酸エステル部分を加水分解せしめ、そしてその反応終了後に、加温して酵素を失活せしめ、更に、減圧下において加熱、乾燥した後、脱酵素の目的で濾過を行なって、製造されているのである。
【０００４】
しかしながら、このような大豆リゾレシチンで代表される植物由来のリゾレシチンの需要が高まるにつれ、従来からのリゾレシチンの色調、風味、臭気が問題視されるようになってきているのである。そして、それらの問題を軽減させるために、酵素反応時に遊離される脂肪酸や原料由来の中性脂肪、ステロール類等を除くために、アセトンを用いた抽出操作にて脱脂してなる、脱脂製品が開発され、その需要が急激に高まっているが、そのような脱脂製品は、上記の問題を充分に解決するものではなかったのである。
【０００５】
すなわち、リゾレシチンの着色と風味の劣化は、先ず、原料たるレシチンが前述した加熱、乾燥工程において加熱されることによって惹き起こされているのである。要するに、レシチンは、熱に弱く、加熱により容易に着色するため、含水ガム質の濃縮乾燥工程において着色を伴うことが避けられず、また風味も同様に劣化してしまうようになるのである。また、リゾレシチンも、同様に熱に弱いため、加水分解の後、酵素の失活工程や再度の加熱、乾燥工程を経由するために、着色と風味の劣化は避けられない問題として残っているのである。なお、その対策として、乾燥工程における減圧度を上昇せしめて、より低い温度下にて水分蒸発を行ない、リゾレシチンの着色及び風味の劣化を抑制することが考えられるのであるが、それには限度があったのであり、また脱酵素のために、濾過の採用が避けられず、工程的にも煩雑さを伴うものとなるのである。
【０００６】
【解決課題】
ここにおいて、本発明は、かかる事情を背景にして為されたものであって、その解決課題とするところは、着色度が低く且つ風味の良い、高品質な植物性リゾレシチンを高い収率で得る方法を提供することにある。
【０００７】
【解決手段】
そして、本発明にあっては、そのような課題を解決するべく、３０〜７０％の水分を含む含水レシチンを原料として用いて、これにホスフォリパーゼＡ1 またはＡ2 からなる加水分解酵素を作用させてリゾレシチンを生成せしめた後、得られたリゾレシチン生成液に対して、該生成液中の水分の１〜４倍容量となる割合のアセトンを加えて攪拌することにより、リゾレシチン部を浮揚せしめるか、或いは該水分の５倍容量以上のアセトンを加えて攪拌することにより、リゾレシチン部を沈降せしめて、分離し、次いでかかるリゾレシチン部に対して、アセトンにて繰返し抽出を行なうことにより、前記リゾレシチンの生成反応において副生した遊離脂肪酸や原料由来の脂溶性不純物を分離、除去せしめることを特徴とする植物性リゾレシチンの製造法を、その要旨とするものである。
【０００８】
このように、本発明手法は、含水レシチンに対して所定の酵素を添加せしめ、その酵素分解を行ない、得られた分解液（生成したリゾレシチン類を含むリン脂質混合物の水溶液）に対して直接にアセトン処理を施すようにしたものであり、かかる酵素分解によるリゾレシチン生成液に対して、上述の如き特定量においてアセトンを加えることにより、リゾレシチンを上層或いは下層に集め、そしてその集積されたリゾレシチン部を水相部から分離せしめることにより、リゾレシチンが水相部と共に廃棄されることを回避し、以てリゾレシチンの損失を極めて少なくして、リゾレシチン部を取り出し得るようにしたところに、大きな特徴を有しているのである。けだし、レシチンに比べて、それをリゾ化したものは、親水性が著しく増し、このため、そのリゾレシチンを含む水溶液に対してアセトン抽出を行なっても、特公平５−４３７１０号公報に示されるレシチンの場合のような結果は得られないのではないかと考えられたのであるが、本発明者らが敢えて検討を加えたところ、レシチンの場合とは水分に対するアセトンの配合量においてやや異なるものの、リゾレシチンが水溶液から効果的に分離され得るという予期せぬ事実が見出されたからである。
【０００９】
従って、かかる本発明手法によれば、従来の手法に比べて、リゾレシチンの収率を落とすことがないために、製品のコストアップを招くことがないことに加えて、従来法における二度の加熱濃縮工程を省略し得、或いはその回数を軽減することが出来、また酵素除去のための加熱失活工程や、粘度低下のため加温が必要な濾過工程も、必須とするものではないところから、熱による着色や臭い、味等の風味の劣化が極力抑制され、以て高品質のリゾレシチンを高い収率で得ることが出来るのである。
【００１０】
ところで、かくの如き本発明手法においては、前記含水レシチンとして、植物油の脱ガム工程で発生する含水ガム質が有利に用いられ、これによって、従来法における二度の加熱濃縮工程の採用が全く回避され得るという利点が生じるが、また、本発明にあっては、通常の市販レシチン、換言すればかかる含水ガム質を加熱、濃縮して得られるペースト状レシチンを用い、それを加水したものを、含水レシチンとして利用することも可能である。このようなペースト状レシチンを加水したものを含水レシチンとして用いても、従来法における酵素分解後の加熱濃縮工程を省略することが出来、これによって、少なくとも一度の熱履歴を回避し得るところから、得られるリゾレシチンの着色を抑制し、また風味の劣化も抑制することが出来るのである。
【００１１】
また、本発明に従う植物性リゾレシチンの製造法にあっては、含水レシチンに所定の酵素を添加してリゾレシチンを生成せしめた後、かかる酵素による更なる分解反応の進行を阻止する等のために、前記したアセトンの配合によるリゾレシチン部の分離操作に先立ち、得られたリゾレシチン生成液に対して、失活処理を施しても、何等差し支えないが、特に、本発明にあっては、アセトン処理によって酵素除去が効果的に為され得ることとなるところから、かかる失活処理を施すことなく、含水レシチンの酵素分解にて得られたリゾレシチン生成液をそのまま用いて、それに前記アセトンの配合によるリゾレシチン部の分離操作を施すことが、有利に採用され、これによって、高温での加熱による酵素失活の工程が有利に省略され得て、リゾレシチンの着色や風味の劣化をより一層効果的に軽減することが出来るのである。
【００１２】
さらに、本発明の望ましい態様の一つによれば、前記アセトンによる繰返し抽出の後、得られたリゾレシチン生成物を、非極性有機溶剤にて抽出処理することにより、高純度のリゾレシチン生成物の粉末を得ることからなる手法が、採用されることとなる。このような非極性有機溶媒による抽出処理にて、レシチン生成物中の不純物が、効果的に分離され得ることとなるところから、不純物の多い含水ガム質やペースト状レシチン加水物等の含水レシチンをそのまま用いて、本発明に従うリゾレシチンの生成、分離処理を実施することが、可能である。
【００１３】
更にまた、本発明に従う植物性リゾレシチンの製造法の別の態様によれば、前記アセトンによる繰返し抽出の後、得られたリゾレシチン生成物をアルコールまたは含水アルコールにて抽出し、アルコール可溶部からはリゾホスファチジルコリンを主成分とする画分を取り出す一方、アルコール不溶部からはリゾホスファチジルエタノールアミンやリゾホスファチジルイノシトール、リゾホスファチジン酸を含む画分を得ることからなる手法が採用され、これによって、リン脂質のリゾ化物の混合物として得られるリゾレシチン生成物から、各リゾ化物へ有利に分画され得ることとなる。
【００１４】
【発明の実施の形態】
ところで、かくの如き本発明に従う手法において、原料として用いられる含水レシチンには、リン脂質の混合物であるレシチンの含水物であれば、何れも使用可能であるが、本発明にあっては、一般に、植物油の通常の脱ガム工程（植物原油→濾過→加水→ガム質分離）で発生する含水ガム質が有利に用いられるものであり、また、そのような含水ガム質を加熱濃縮して得られる、通常の市販のペースト状レシチンに対して加水を行なったものも、そのような市販のペースト状レシチンの入手が容易であるところから、本発明における含水レシチンとして、有利に用いられることとなる。尤も、工程の簡略化に加えて、熱による着色や風味の劣化を極力抑制する上において、前記した含水ガム質の使用が推奨されるのである。なお、かかる含水レシチンは、一般に３０〜７０％程度の水分を含むものである。
【００１５】
そして、そのような含水レシチンは、所定の各種植物油から得られるものであるが、生産量の面から入手の容易な大豆油が一般的に用いられ、それより、目的とする含水レシチンが得られることとなる。勿論、そのような大豆油の他にも、菜種油、コーン油等の他の植物油の原油を利用することが出来ることは、言うまでもないところである。なお、それらの原油の中には、ハイオレイック・サフラワー油、パーム油、パーム核油等の、不飽和脂肪酸としてオレイン酸が主として含まれる植物レシチンを与えるものが含まれ、それは、ポリエン酸の多い大豆レシチンに比べて、抗酸化能が遙かに優れるという特徴を有している。而して、それらのオレイン酸リッチな植物レシチンは、特に用途開発が未開拓なこともあって、粗油の段階で濾過されず、そのまま加水して、脱ガムされているのが現状であって、そのために、不純物の多い含水ガム質等の含水レシチンを与えるものであるが、本発明によれば、そのような不純物の多い含水レシチンを用いても、高純度のリゾレシチン生成物を得ることが出来るのである。
【００１６】
本発明は、このような含水レシチンに対して、加水分解酵素としてホスフォリパーゼＡ1 またはＡ2 を添加せしめ、かかる酵素の加水分解作用にて、レシチン（リン脂質の混合物）から、目的とするリゾレシチン、具体的にはリン脂質を構成するホスファチジルコリン、ホスファチジルエタノールアミン、ホスファチジルイノシトール、ホスファチジン酸から、それぞれ、対応するリゾ体を生成せしめるのであるが、その際の酵素の添加量、更には酵素反応によるリゾレシチンの生成条件は、含水レシチンやその溶液のｐＨ、酵素の種類や純度等によって適宜に設定されることとなる。なお、かかる酵素によるリゾレシチンの生成反応は、例えば、水分が３０〜７０重量％程度の含水レシチンを、ｐＨ未調整のまま、３０℃〜６０℃程度、好ましくは５０℃〜５５℃程度に加温し、また、所定の酵素をレシチン（リン脂質の混合物）量に対して、一般に０．０３〜０．１重量％程度添加せしめ、そして１２〜６０時間程度、好ましくは２４〜５０時間程度、攪拌を続けることにより、行なわれることとなる。
【００１７】
なお、かかる酵素の作用によるリゾレシチンの生成反応は、原料レシチンの主要成分の一つであるホスファチジルコリンの分解率が６０％以上、好ましくは８０％以上である（生成物の酸価としては６０〜６２程度となる）ことを、薄層クロマトグラフィ法等によって確認するまで続行せしめられることとなる。そして、そのようなホスファチジルコリンの分解率が６０％以上、好ましくは８０％以上であることが確認された後、リゾレシチンの生成液には、水酸化ナトリウム水溶液等のアルカリ水溶液が添加されて、その酸価が、一般に５０以下、好ましくは４５以下に調節され、更に、必要に応じて、通常、８０〜１００℃×２０〜５０分、好ましくは８５〜９０℃×３０分程度の加熱による失活処理が施される。なお、上記アルカリ水溶液の添加は、レシチンの酵素分解にて生じる脂肪酸による生成液の酸性化を阻止（中和）するものであり、そしてそのような中和にて、リン脂質成分の分解を阻止することにある。また、用いる酵素によって至適ｐＨが異なることから、酵素反応の進行中において、酸素水溶液、アルカリ性水溶液、或いは各種の緩衝液を加えて、酵素反応を調整することも、有利に採用されることとなる。
【００１８】
また、上記のような失活処理にて、リゾレシチン生成液中における酵素の作用が、効果的に阻止され得ることとなるのであるが、本発明にあっては、後のアセトン処理によって、用いられた酵素が効果的に除去されることとなるために、そのような酵素失活の工程を有利に省略せしめ得るのである。けだし、用いられる酵素（ホスフォリパーゼＡ1 、Ａ2 ）が水溶性であるために、本発明では、最初のアセトン配合によるリゾレシチン部の分離操作にて、大部分の水が除去され、更に引き続きアセトンによる繰返しの抽出操作にて、水分がアセトン側に移行することとなるところから、そのような水分除去によって同時に酵素も除去されることとなるために、得られる高純度リゾレシチン生成物中には、酵素が殆ど残存することがないからである。
【００１９】
因みに、本発明者らが、かかる酵素除去の効果を確かめるために、含水レシチンを所定の酵素にて加水分解して得られる酵素分解リゾレシチン水溶液、換言すればリゾレシチンの生成液に対して、加熱による酵素失活処理を施すことなく、そのような酵素分解処理の施されたままの酵素分解リゾレシチン水溶液をアセトン処理し、得られた粉末状の高純度リゾレシチン生成物を、通常の酵素処理していないレシチンのアセトン処理で得られる粉末状の高純度レシチンに対して、１：１の比率で混合してなる混合物に、加水を行ない、５０〜５５℃に加温して、２４時間攪拌を続け、薄層クロマトグラフィ法により、ホスファチジルコリンの残存量を調べたところ、添加した高純度レシチンのホスファチジルコリン量が、そのまま維持されていることが明らかとなったのであり、このことから、本発明におけるアセトン処理にて、リゾレシチン生成物から酵素除去が効果的に為されていることは明らかであり、それ故に、そのような酵素失活の工程の省略にて、リゾレシチンの着色や風味の劣化の抑制に著しく寄与せしめ得るのである。
【００２０】
そして、本発明にあっては、上述の如き所定の加水分解酵素を含水レシチンに添加せしめて、酵素分解して得られるリゾレシチンの生成液に対して、そこに含有されている水分量の１〜４倍容量、若しくは５倍容量以上のアセトンを配合せしめることによって、リゾレシチン部がそのような配合物の上層若しくは下層に集まり、水相部から分離するようにするのである。即ち、本発明者らによる検討の結果、リゾ化によってレシチンよりも遙かに親水性が増したリゾレシチンにあっても、それを含む水溶液である酵素分解リゾレシチン水溶液（リゾレシチン生成液）に対して、アセトンを含有水分の１〜４倍容量加えると、リゾレシチン部が上層に浮かび、下層の水相部と明確に区分されることが見出されたのであり、また、その含有水分の５倍容量以上のアセトンを加えた場合にあっては、上記の場合とは異なり、リゾレシチン部が下層に沈み、上層の水相部と明確に区分され得ることが見出されたのである。
【００２１】
これに対して、そのような酵素分解リゾレシチン水溶液に対して、その水分量の１倍容量未満のアセトンを加えた場合には、層分離は惹起され得ず、またその水分量の４倍容量よりは多く、５倍容量よりも少ない割合のアセトンを加えた場合には、不明瞭な三層が形成され、時間と共に、上層の一部が中間層及び下層に移行し、層の区分が明確でなくなるようになるのであり、そのために、リゾレシチン部を収率よく集めることが出来ず、リゾレシチン部を高収率で取り出すことが出来ないのである。因みに、そのような三層中の下層のみ、または上層のみを分離して、アセトン処理を行ない、粉末状のリゾレシチンを取り出したところ、何れの場合も３０％〜５０％程度の収率となり、そのような三層分離の状態では、リゾレシチンが限定された層に集中せずに分散していることが確認されたのである。
【００２２】
なお、このような酵素処理後のリゾレシチン生成液において、リゾレシチン部を浮揚或いは沈殿せしめるために配合されるアセトンは、通常用いられる蒸留アセトンであることが好ましいが、含水アセトンであっても、何等差し支えない。尤も、本発明において、含水レシチンに対して配合されるアセトン量は、総水分量に対して規定されるため、含水アセトンを用いる場合には、含水レシチン中の水分量に含水アセトン中の水分量を加えた全ての水分（合計水分量）に対して、含水アセトン中のアセトン量を規定する必要があることは言うまでもないところである。
【００２３】
次いで、本発明は、かかる所定量のアセトンの配合によって、リゾレシチン生成液から取り出されたリゾレシチン部に対して、アセトンによる繰返し抽出を行なうものであり、これによって、リゾレシチンの生成反応において副生した遊離の脂肪酸や原料由来の脂溶性不純物（油分）等が分離、除去せしめられ、また残留水分も同時に除去され、以て高純度のリゾレシチン生成物（リゾレシチン類を含むリン脂質混合物）が粉末形態において得られることとなる。なお、そのようなリゾレシチン部に対するアセトン処理は、従来のアセトンを用いた抽出処理と同様にして行なうことが出来、またリゾレシチン部からの脱水や脱脂が完全に行なわれ得るように、加えられるアセトン量や処理回数が適宜に定められることとなるが、分離されたリゾレシチン部に対して、アセトン抽出を行なうのは、脱脂のみならず、脱水をも兼ねることを意図するものであるところから、リゾレシチン部に対して、一般に１倍容量以上、好ましくは３〜５倍容量のアセトンを用いて、前記したアセトン抽出処理を実施することが望ましい。また、リゾレシチンが、その原料であるレシチンに比べて吸水性が強いところから、その脱水を効率的に行なうためにも、水を含まない蒸留アセトンを用いることが推奨される。
【００２４】
ところで、このようなアセトン抽出処理にて得られるリゾレシチン生成物の粉末は、一般に高純度のものであるが、前述せるように、オレイン酸リッチな植物レシチンにあっては、粗油の段階で濾過されず、そのまま加水して、脱ガムされたものが用いられることとなるところから、そのような植物性レシチンから得られる含水レシチンは、また、アセトン抽出処理にても除去し得ない不純物を含有するものであって、そのために、本発明においては、そのような不純物を含む含水レシチンを用いて得られたリゾレシチン生成物に対しては、所定の非極性有機溶剤、例えばペンタン、ヘキサン、ヘプタン、オクタン等の炭素数が５〜８程度の飽和炭化水素にて抽出処理することにより、そのような不純物を溶出除去して、高純度のリゾレシチン生成物とする手法が、有利に採用されることとなる。また、酵素反応時に各種の緩衝液を添加した場合にも、構成塩類が効果的に除去され得ることとなるのである。
【００２５】
また、上記の如くリゾレシチン部をアセトン抽出処理して得られるリゾレシチン生成物は、原料レシチンを構成するリン脂質の混合物に対応して、リン脂質成分のリゾ化されたものや、未リゾ化リン脂質成分、更にはホスフォリパーゼＡ1 やＡ2 ではリゾ化されないリン脂質成分の混合物として得られるものであるところから、本発明にあっては、そのようなリゾレシチン生成物に対して、更にメタノール、エタノール、プロパノール、イソプロパノールの如きＣ1 〜Ｃ3 アルコール、またはそのようなアルコールに１〜１０重量％程度の水が含有せしめられてなる含水アルコールによる抽出処理が施され、そしてそのアルコール可溶部からリゾホスファチジルコリンを主成分とする画分が取り出される一方、アルコール不溶部からはリゾホスファチジルエタノールアミンやリゾホスファチジルイノシトール、リゾホスファチジン酸を含む画分が得られるようにした手法が、有利に採用され、これによって各リン脂質成分のリゾ体を有利に分離せしめ得るのである。
【００２６】
なお、かくの如き本発明に従う植物性リゾレシチンの製造法において、リゾレシチン生成液に対する所定量のアセトンの配合にて、上層或いは下層に集積したレシチン部を水相部から分離して取り出したり、得られたリゾレシチン部に対するアセトン抽出処理、更にはアルコールまたは含水アルコールによる抽出処理や非極性有機溶剤による抽出処理における固液分離には、通常の静置法、遠心分離法等の公知の各種の分離操作が適宜に採用されることとなる。
【００２７】
【実施例】
以下に、本発明の幾つかの実施例を示し、本発明を更に具体的に明らかにすることとするが、本発明が、そのような実施例の記載によって、何等の制約をも受けるものでないことは、言うまでもないところである。また、本発明には、以下の実施例の他にも、更には上記の具体的記述以外にも、本発明の趣旨を逸脱しない限りにおいて、当業者の知識に基づいて種々なる変更、修正、改良等を加え得るものであることが、理解されるべきである。
【００２８】
なお、以下の実施例における百分率は、何れも、重量基準で示されるものであり、また、使用したアセトンは蒸留アセトンであり、更に、リン脂質及びそのリゾ化物の略称として、ＰＣ：ホスファチジルコリン、ＰＥ：ホスファチジルエタノールアミン、ＰＩ：ホスファチジルイノシトール、ＰＡ：ホスファチジン酸、ＬＰＣ：リゾホスファチジルコリン、ＬＰＥ：リゾホスファチジルエタノールアミン、ＬＰＡ：リゾホスファチジン酸を使用した。
【００２９】
実施例  １
大豆油の脱ガム工程において得られる含水ガム質である、水分５０％の含水レシチン（リン脂質の混合物）を用い、その１．２ｋｇを５０〜５５℃に加温せしめ、攪拌しながら、加水分解酵素：ホスフォリパーゼＡ2 である、レシターゼ１０Ｌ（ノボ・ノルディスク社製、１１０００ユニット／ｍｌ）：０．２ｍｌを加え、２４時間の酵素反応を行なって、日本油化学会編「基準油脂分析試験法」４．２．１．−１９９６「酸価」に基づいて測定して得られる反応生成物の酸価が６０に達した時点で、５Ｎ水酸化ナトリウム水溶液：４０ｍｌを加え、かかる酸価を４５以下にした後、更に加水して、総量を１．２ｋｇとした後、加熱して、温度を８５〜９０℃に上昇せしめ、その温度下において３０分間保持することにより、酵素の失活を行なって、目的とするリゾレシチン水溶液を得た。
【００３０】
次いで、上記で得られたリゾレシチン水溶液を用い、その３００ｇにアセトン：３００ｍｌ（リゾレシチン水溶液中の水分量に対して略２倍容量に相当する）を加えて、攪拌することにより、リゾレシチン部を浮揚せしめて、水相部より分離させた。そして、この上層（リゾレシチン部）と下層（水相部）の二層に分離された混合液から、下層の水相部を除くことによって、上層のリゾレシチン部を取り出し、それを１回当り７００ｍｌのアセトンを用いて５回抽出処理することにより、かかるリゾレシチン部に含まれる遊離脂肪酸（リゾレシチンの生成反応において副生したもの）や、原料由来の中性脂肪、ステロール類等の油分、更には残留水分を溶出、除去せしめた後、そのようなアセトン抽出処理の施されたリゾレシチン部から、残留アセトンを減圧下において除去することにより、粉末状の高純度リゾレシチン生成物：６４ｇを得た。
【００３１】
実施例  ２
実施例１において得られたリゾレシチン水溶液を用い、その３００ｇにアセトン：９００ｍｌ（リゾレシチン水溶液中の水分量の約６倍容量に相当する）を加えて、攪拌することにより、リゾレシチン部を沈殿せしめた。そして、その沈殿したリゾレシチン部の上に位置する水相部（上層）を除去することにより、リゾレシチン部を取り出し、それを１回当り７００ｍｌのアセトンにて５回抽出処理して、脂肪酸や油分、更には残留水分等を除去せしめた後、このアセトン処理の施されたリゾレシチン部から残留アセトンを減圧下において除去せしめることにより、粉末状の高純度リゾレシチン生成物６２．７ｇを得た。
【００３２】
比較例  １
上記の実施例１において得られたリゾレシチン水溶液を用い、その３００ｇを減圧下で乾燥することにより、ペースト状リゾレシチンと為した後、このペースト状リゾレシチンに、１％相当量のセライト（濾過助剤）を加えて、加温下、減圧で、濾紙濾過を行ない、１４５ｇのペースト状リゾレシチン生成物を得た。次いで、このペースト状リゾレシチン生成物に対して、１回当り７００ｍｌのアセトンを用いて、５回繰返し抽出処理を施し、更に、そのアセトン処理の施されたリゾレシチン生成物から残留アセトンを減圧下において除去せしめることにより、粉末状の高純度リゾレシチン生成物６６．７ｇを得た。
【００３３】
比較例  ２
上記の実施例１において得られたリゾレシチン水溶液の３００ｇに、アセトン６７５ｍｌ（リゾレシチン水溶液中の水分量の４．５倍容量に相当する）を加えて、混合攪拌したところ、その混合液は、上層、中間層、及び下層の三層に分離した。そして、かかる分離の後、上層のものが少しずつ下層に移行し、境界面が明確でなくなるところから、その分離直後に上層のみを取り分け、それを１回当り７００ｍｌのアセトンにて５回抽出処理した後、得られたリゾレシチン部から残留アセトンを減圧下において除去せしめることによって、粉末状の高純度リゾレシチン生成物３０．５ｇを得た。
【００３４】
−評  価−
上記の実施例１、２及び比較例１、２において得られた各種の高純度リゾレシチン生成物粉末について、日本油化学会編「基準油脂分析試験法」１９９６年版に従って、アセトン可溶分、主要なリン脂質組成、着色度を調べ、その結果を収量及び収率と共に、下記表１に示した。なお、アセトン可溶分は、リゾレシチン生成物の純度を示すものであり、その値が小さい程、高純度であることを示している。
【００３５】
【表１】
0003853464.tif 000002
0003853464.tif 000003
【００３６】
かかる表１の結果から明らかなように、本発明手法に従う実施例１、２にあっては、従来からの濾過法に従う比較例１に比べて、収率が９４〜９６％となっており、これは、比較例２の収率に比べて、著しく高いことが認められる。また、リゾレシチンの純度を示すアセトン可溶分やリン脂質組成は、実施例１、２と比較例１との間に差異は殆ど認められないが、着色度の指標である赤色値（Ｒ）が、乾燥工程を経た比較例１では２１と高いのに対して、実施例１、２では、１１〜１２と低くなり、得られるリン脂質生成物の着色度に顕著な差異が認められた。更に、実施例１、２において得られたリゾレシチン生成物は、従来からの濾過法を採用した比較例１に比べて、臭気の点において格段の優位性を示し、また従来から経験的に知られている「着色度の低いものが風味において優れている」とのことからして、上記の如く着色度の少ない実施例１、２のリゾレシチン生成物が、風味の点においても優れていることは、明らかである。
【００３７】
実施例  ３
水分６０％の含水大豆レシチンの１ｋｇを、５０〜５５℃に加温し、攪拌しながら、ホスフォリパーゼＡ2 （加水分解酵素）として、レシターゼ１０Ｌを０．１５ｍｌ加えて、２４時間酵素反応を行ない、酸価が６０に達した時点で、更に５Ｎ水酸化ナトリウム水溶液を２６ｍｌ加え、酸価を４５以下にした後、酵素の失活工程を経由させることなく、直ちに、アセトンの１．２リットル（酵素反応生成液中の水分の２倍容量に相当する）を加えて、攪拌することにより、リゾレシチン部を浮揚せしめた後、下層の水層を除き、得られたリゾレシチン部に対して、１回当り３リットルのアセトンを用いて、５回の抽出処理を施した。その後、このアセトン処理の施されたリゾレシチン部から、残留アセトンを減圧下において除去せしめて、粉末状の高純度リゾレシチン生成物１７５ｇ（歩留り：原料大豆レシチンの４３．８％）を得た。この得られた高純度リゾレシチン生成物を粉末Ａとする。
【００３８】
一方、水分４０％の含水大豆レシチンを用い、その１ｋｇを５０〜５５℃に加温し、攪拌しながら、加水分解酵素としてのホスフォリパーゼＡ1 （三共株式会社製、１５５ユニット／１ｍｇ）：３０ｍｇを少量の水に溶かしてなる溶液を加えて、４８時間の酵素反応を行ない、酸価が６０に達した時点で、５Ｎ水酸化ナトリウム水溶液３０ｍｌを加えて、酸価を４５以下にした後、酵素の失活工程を経ることなく、そのまま、アセトン：２．４リットル（酵素分解生成液中の水分の６倍容量に相当する）を加えて、攪拌することにより、リゾレシチン部を沈殿せしめた後、上層の水相部を除き、得られたリゾレシチン部について、１回当り３リットルのアセトンを用いて、６回の抽出処理を行なった。そして、このアセトン処理の施されたリゾレシチン部から、残留アセトンを減圧下において除去することにより、粉末状の高純度リゾレシチン生成物を２４５ｇ（歩留り：原料大豆レシチンの４０．８％）得た。なお、ここで用いたホスフォリパーゼＡ1 は、前記したレシターゼ１０Ｌ（ホスフォリパーゼＡ2 ）では酵素分解を受けないＰＩも分解することとなるところから、収量が減少していることが認められるのである。また、ここで得られた高純度リゾレシチン生成物を粉末Ｂとする。
【００３９】
以上の二つの実験で得られた粉末Ａ、Ｂについて、それぞれ、前記したロビボンド法にて、着色度を測定したところ、その赤色値（Ｒ）は、何れも、６〜７であり、実施例１及び２における赤色値１１〜１２（表１参照）と比べて、着色度の顕著な差異が認められ、また、風味も一段と優れたものとなっていることを認めた。これは、本実施例では酵素の不活性化のための加熱を行なっていないことによるものと考えられるのである。
【００４０】
また、上記の粉末Ａ、Ｂを用い、その各１０ｇを、それぞれ、粉末状の高純度大豆レシチン（通常のペースト状大豆レシチンをアセトン処理して得られたもの）の１０ｇと混合し、更に、５０ｍｌの水を加えて溶液状とした後、５０〜５５℃に加温し、攪拌下において５０時間保持した後、それぞれの混合溶液中の各リン脂質の組成を調べ、その結果を加温前のリン脂質組成と共に、下記表２に示した。
【００４１】
【表２】
0003853464.tif 000004
【００４２】
この表２の結果から明らかなように、粉末Ａ、Ｂの混合品とも、加温後の各リン脂質の含有量は若干低くなるが、それは、長時間の加温によるリン脂質の分解に基づくことが、粉末Ａの混合品におけるＰＩの分析値からも推察されるのである。即ち、ホスフォリパーゼＡ2 （レシターゼ１０Ｌ）では、ＰＩは酵素分解されないことから、理論上はＰＩの値が保持されるのであるが、実際には、ＰＩの値も加温後においては、若干低くなっているのである。而して、何れにしても、何れの混合品にあっても、各リン脂質の残存酵素による急激な減少は認められないのであり、それ故に本発明に従うアセトン処理は、用いられる酵素（ホスフォリパーゼＡ1 、Ａ2 ）が水溶性であることに基因して、その効果的な脱酵素手段であることを示しているのである。
【００４３】
実施例  ４
原油の濾過を施していない、水分７０％の含水サフラワーレシチンを用い、その１ｋｇを５０〜５５℃に加温した後、攪拌しながら、加水分解酵素として、前記したレシターゼ１０Ｌを０．１２ｍｌ加え、そして、２４時間酵素反応を行なって、酸価が６０に達した時点で、５Ｎ水酸化ナトリウム水溶液を２５ｍｌ加えて、酸価を４５以下に低下せしめることにより、目的とするリゾレシチンの生成液を得た。
【００４４】
次いで、かかるリゾレシチンの生成液に対して、アセトンの４．２リットル（リゾレシチン生成液中の水分の約６倍容量に相当する）を加えて、攪拌することにより、リゾレシチン部を沈殿せしめた後、上層の水相部を除き、得られたリゾレシチン部に対して、１回当り３リットルのアセトンにて、６回の抽出処理を施し、更にその後、このアセトン処理の施されたリゾレシチン部から、残留アセトンを減圧下において除去することにより、粉末状のリゾレシチン生成物１３０ｇを得た。このリゾレシチン生成物のトルエン不溶部は２．５％であり、原油の濾過を行なわないことに由来するリン脂質以外の不純物が含まれていることが認められ、そのままでは、トルエン不溶部は０．５％以下であるとする、リゾレシチン生成物の規格外となり、商品化することが出来ないのである。
【００４５】
そこで、上記のリゾレシチン生成物粉末の４０ｇを、ｎ−ヘキサンの２００ｍｌに溶解し、濾紙濾過を行なった後、減圧下においてヘキサンを除去して、得られた３８．５ｇの精製リゾレシチン生成物は、そのトルエン不溶部が０．０８％であって、前記の規格に充分合致する高純度のものとなった。
【００４６】
また、上記の規格外のリゾレシチン生成物粉末の４０ｇを、エタノールの１２０ｍｌで３回抽出処理した後、上澄みのエタノール部のみ集め、減圧下でエタノールを除去することにより、ＬＰＣを主成分とする画分（８ｇ；ＬＰＣ含有量＝６２％）を得た。このもののトルエン不溶部は、０．１％であり、従ってエタノール抽出の場合においては、濾過を行なわなくても、上澄み液を集め、溶媒（エタノール）の除去を行なえば、高純度の分画品を得ることが出来るのである。
【００４７】
さらに、前記のｎ−ヘキサン抽出にて得られた高純度のリゾレシチン生成物を用い、その６０ｇをエタノール：２００ｍｌで３回抽出処理することにより、エタノール可溶部とエタノール不溶部に分けた。そして、得られたエタノール可溶部を濃縮乾燥することにより、ＬＰＣを主成分とする画分：１１ｇ（ＬＰＣ含有量＝６５％）を、またエタノール不溶部を乾燥して、ＬＰＥ、ＬＰＡ等を含む画分４５ｇを得た。
【００４８】
このように、原油濾過を行なわず、不純物の多い含水ガム質等の含水レシチンを原料としても、酵素処理及びアセトン処理の後、ｎ−ヘキサンの如き、非極性有機溶剤やエタノールのような極性有機溶剤を用いて抽出処理することにより、或いはそれらの溶剤を用いた抽出処理を組み合わせて適用することにより、高純度のリゾレシチン生成物或いはリゾレシチンの分画品を得ることが出来るのである。
【００４９】
【発明の効果】
以上の説明から明らかなように、本発明は、植物性の含水レシチンに対して、ホスフォリパーゼＡ1 またはＡ2 を作用させて、リゾレシチンに改質し、そしてこのリゾレシチンを含む水溶液に対して、所定量のアセトンを加えて、リゾレシチン部を浮揚若しくは沈殿せしめて分離し、更に、その分離されたリゾレシチン部に対してアセトンで繰り返して抽出することにより、粉末状のリゾレシチン生成物を得るものであって、そのようなリゾレシチン生成物が、従来品に比較して、着色度が著しく低い上に、臭い、味等の風味も極めて良好なものであり、そのため、一般食品工業分野は勿論のこと、化粧品の分野においても、利用価値の高いものとなったところに、本発明の大きな技術的意義が存するのである。
【００５０】
また、本発明に従う製造手法は、従来の手法に比べて、リゾレシチン生成物の収率を落とすことがないために、製品のコストアップを招くことがなく、かえって、濃縮乾燥工程、酵素失活工程、濾過工程を省略することも可能であるところから、そのような工程の省略によって、設備費を低減することが出来ると共に、生産サイクルを高め得る利点も内在しているのである。
【００５１】
さらに、本発明手法によれば、植物原油から濾過を行なうことなく得られた、不純物の多い含水レシチンを原料として用い、それから、高純度のリゾレシチン生成物や分画品を得ることも出来るところから、未利用のレシチン、特にハイオレイックなレシチンから、目的とするリゾレシチン生成物を得ることも可能となり、そのため、抗酸化性に優れたリゾレシチン生成物も得られることとなり、以てレシチンの多角的な利用を図り得ることとなったのである。