(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
式１
【化１】
0003762868.tif 000032
の化合物又はその塩。
（式中、
R1はヒドロキシ又はアミノであり、
R2は水素、ハロ、(C1-4)アルキル又は(C1-4)アルコキシであり、
R3は水素、ハロ、(C1-4)アルキル、(C1-4)アルコキシ、アミノ又はアジドであり、
R4はR2と同じ意味を有し、
R5は水素又は(C1-4)アルキルであり、かつ
Ｒは(C1-7)アルキル、(C3-6)シクロアルキル、｛フェニル(C1-7)アルキル｝、｛
フェニル(C1-7)アルコキシ｝、｛｛(単環式複素環)-｛(C1-7)アルコキシ｝｝、CH(W)C(O)｛O-(C1-4)アルキル｝（式中、Ｗは水素又は(C1-7)アルキルである）、又は
【化２】
0003762868.tif 000033
（式中、Ｙは水素又は(C1-7)アルキルであり、かつＺは(C1-7)アルキル、(C3-6)シクロアルキル、｛(C3-6)シクロアルキル｝-｛(C1-7)アルキル｝、フェニル(C1-7)
アルキルもしくは｛｛(単環式複素環)-｛(C1-7)アルキル｝｝であり、又は
Ｙ及びＺはそれらが結合されている窒素原子と一緒になって、1-ピロリジニル、1-ピペリジニル、4-モルホリニルもしくは1-(4-メチルピペラジニルを表す)
であり、
但し、(1)Ｒがここに定義されたCH(W)C(O)｛O-(C1-4)アルキル｝である場合、R5は水素であり、また(2)R2、R3及びR4の少なくとも一つが水素以外である）
【請求項２】
R1がヒドロキシである請求の範囲第１項記載の化合物。
【請求項３】
R2が水素又はハロである請求の範囲第１項記載の化合物。
【請求項４】
R2が水素又はクロロである請求の範囲第１項記載の化合物。
【請求項５】
R2が水素である請求の範囲第１項記載の化合物。
【請求項６】
R3が水素、クロロ、メチル、メトキシ、アミノ又はアジドである請求の範囲第１項記載の化合物。
【請求項７】
R3がメチル、メトキシ、アミノ又はアジドである請求の範囲第１項記載の化合物。
【請求項８】
R4が水素又はハロである請求の範囲第１項記載の化合物。
【請求項９】
R4が水素、クロロ又はヨードである請求の範囲第１項記載の化合物。
【請求項１０】
R5が水素又はメチルである請求の範囲第１項記載の化合物。
【請求項１１】
R5が水素である請求の範囲第１項記載の化合物。
【請求項１２】
Ｒがメチル、エチル、プロピル、ブチル、ペンチル、ヘキシル、シクロペンチル、シクロヘキシル、フェニルメチル、2-フェニルエチル、フェニルメトキシ、2-フェニルエトキシ、2-、3-又は4-ピリジニルメトキシ、2-(2-、3-又は4-ピリジニル)エトキシ、CH2C(O)｛O-｛(C1-4)アルキル｝｝、CH｛(C1-7)アルキル｝C(O)｛O(C1-4)アルキル｝、(C1-7)アルキルアミノ、シクロペンチルアミノ、シクロヘキシルアミノ、（シクロヘキシルメチル）アミノ、(2-シクロヘキ
シルエチル)アミノ、（フェニルメチル）アミノ、(2-フェニルエチル)アミノ、2-(3-又は(4-ピリジルメチル)アミノ又は2-(2-、(3-もしくは(4-ピリジルエチル)アミノである請求の範囲第１項記載の化合物。
【請求項１３】
Ｒがペンチル、ヘキシル、シクロヘキシル、フェニルメチル、2-フェニルエチル、フェニルメトキシ、2-、3-もしくは4-ピリジニルメトキシ、CH2C(O)OCH2CH3、CH(CH2CH2CH2CH3)C(O)OCH2CH3、エチルアミノ、プロピル
アミノ、ブチルアミノ、シクロヘキシルアミノ、（シクロヘキシルメチル）アミノ、(2-シクロヘキシルエチル)アミノ、（フェニルメチル）アミノ、(2-フェニ
ルエチル)アミノ、又は(2-、(3-もしくは(4-ピリジルメチル)アミノ、或いは2-(2-、(3-、もしくは(4-ピリジニルエチル)アミノである請求の範囲第１項記載の
化合物。
【請求項１４】
有効量の請求の範囲第１項記載の化合物、及び医薬上許される担体又は助剤を含むことを特徴とする、ヘルペスウイルスを伴う疾患又は症状の治療又は予防のための医薬組成物。
【請求項１５】
請求の範囲第１項記載の化合物を含む、哺乳類のヘルペスウイルス感染症の治療用の医薬組成物。
【請求項１６】
さらに付加的な抗ウイルス薬を含む請求の範囲第１５項記載の医薬組成物。
【請求項１７】
付加的な抗ウイルス薬がアサイクロバー、ペンシクロバー、ファムシクロバー、バラシクロバー及びガンシクロバーから選ばれる請求の範囲第１６項記載の医薬組成物。
【請求項１８】
ヘルペスウイルスで感染された細胞を請求の範囲第１項記載の化合物にインビトロで暴露することを特徴とするヘルペスウイルス複製の抑制方法。
【請求項１９】
【化３】
0003762868.tif 000034
から選ばれた化合物、又はその塩。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
（技術分野）
本発明はヘルペスプライマーゼ酵素を抑制することによるヘルペス複製の抑制方法及び哺乳類のヘルペス感染症の治療方法に関する。好ましい実施態様において、本発明はヘルペスヘリカーゼ-プライマーゼ酵素のプライマーゼ活性を抑制する化合物に関する。また、本発明はこれらの化合物を含む医薬組成物、並びにこれらの化合物の使用方法及び製造方法に関する。
【０００２】
（背景技術）
ヘルペスウイルスはヒト及び動物が患う広範囲の疾患の原因物質である。例えば、単純ヘルペスウイルス、型１及び２（HSV-1及びHSV-2）は夫々唇ヘルペス及び性器病変の原因である。水痘帯状ヘルペスウイルス(VZV)は水痘及び帯状ヘルペスを引き起こし、またヒトサイトメガロウイルス(HCMV)は免疫低下した個体の日和見感染症の主要な原因である。
ヘルペスウイルスはウイルスDNA複製を直接媒介する酵素をコードする複合二本鎖DNAウイルスである。７種のDNA複製関連ポリペプチドがヒトヘルペスウイルス複製に必要とされる。これらの７種のポリペプチドのうちの６種が全ての研究されたヒトヘルペスウイルスにわたって高度の相同性を示す。これらの６種のポリペプチドは、ウイルスにより発現された時に、ヘテロダイマーのDNA依存性DNAポリメラーゼ、モノマーの一本鎖DNA結合タンパク質、及びDNA依存性ATPase活性、ヘリカーゼ活性及びプライマーゼ活性を示すヘテロトリマーのヘリカーゼ-プライマーゼ複合体を含む。７番目のDNA複製関連ポリペプチドは配列又は機能の保存を示さず、溶菌ウイルス複製の開始に関係している。
【０００３】
７種のヘルペスウイルス特異性DNA複製タンパク質の夫々の機能によらずに、ヘルペスウイルス染色体複製は開始又は増殖しないであろう。これはHSV-1におけるDNA複製について二つの方法で実証されていた。第一に、温度感受性HSV-1株が発生され、これらの株内の相補グループが７種のHSV DNA複製遺伝子について１対１の対応でマッピングされた。更に、単一DNA複製遺伝子を含む組換えDNAプラスミドを利用した一時的複製アッセイは７種の遺伝子の夫々の存在がHSV-1のDNA複製開始点を含むテスタープラスミドの有効な複製に必要とされることを判明した。
【０００４】
更に最近では、その他のヘルペスウイルス（即ち、エプスタイン・バールウイルス、サイトメガロウイルス及び水痘帯状ヘルペスウイルス）のDNA複製遺伝子が配列決定された。これらの遺伝子配列はHSV-1 DNA複製遺伝子に殆ど相同性である。更に、エプスタイン・バールウイルス又はサイトメガロウイルスの溶菌DNA複製開始点を含む一時的複製アッセイがそれらの同一性を確認した。水痘帯状ヘルペスウイルス（HSV-1に最も密接に関連したヒトヘルペスウイルス）では、DNA複製遺伝子がHSV-1に高度に相同性（アミノ酸レベルで>50％）であり、２種のウイルス染色体で同じ相対位置に存在することがわかった。水痘帯状ヘルペスウイルスDNA複製遺伝子に関するフォローアップ分析が現在まで提示されていなかったが、おそらく水痘帯状ヘルペスウイルスとHSV-1のDNA複製プログラムの相違が存在しないようである。
以上から、ヒトDNA複製タンパク質はHSV-1コードされた酵素を置換することができないことが明らかである。そうでなければ、温度感受性ウイルスポリペプチドがヒト相対物により相補され、欠損ウイルスが高温でさえも増殖し、複製し続けていたであろう。同様に、一時的複製アッセイでは、ヒトタンパク質が７種のヘルペスウイルスコードされたポリペプチドのいずれかを相補することができたならば、これらのヘルペスウイルスDNA複製特異性遺伝子の夫々の存在についての絶対的依存性が観察されなかったであろう。それ故、これらのウイルスコードされたタンパク質の活性の抑制がヘルペスウイルス複製を阻止する有効な方法に相当する。
【０００５】
ヘルペスプライマーゼ酵素はヘルペスウイルスDNA複製プログラムに重要な役割を果たす。ヘルペスプライマーゼをコードする遺伝子が複製に必須であるだけでなく、既知のヘルペスウイルスの範囲にわたって高度に保存されるという観察は、ウイルス染色体複製を媒介する際のこの酵素の重要性を強調する。
ヘリカーゼ-プライマーゼ複合体では、３種のポリペプチドのうちの２種（例えば、HSV-1のUL5遺伝子及びUL52遺伝子の発現産物）が二重らせんDNA巻き戻しの触媒作用（ヘリカーゼ）及びRNAプライマー生合成（プライマーゼ）を促進する。UL8遺伝子によりコードされた第三のポリペプチドはプライマーゼ活性をモジュレートすることが明らかである。集合されたヘリカーゼ-プライマーゼ酵素複合体はヘルペスウイルスDNA複製の開始段階及び増殖段階の両方で機能する。それはヘルペスDNAポリメラーゼによる全ての新しいDNA合成の開始に必要なRNAプライマーの合成を担う。更に、DNA複製が進行するために、二重らせんウイルス染色体DNAは最初に一本鎖複製中間体に巻き戻される必要がある。何とならば、ヘルペスウイルスDNAポリメラーゼは完全二重らせんDNAに対し不活性であるからである。また、ヘリカーゼ-プライマーゼはこの重要なDNA巻き戻しイベントを担う。
【０００６】
既知の抗ヘルペス療法はヘルペスヘリカーゼ-プライマーゼのプライマーゼ活性を抑制することに集中していなかった。現在まで最も広く使用される抗ヘルペス薬はプリンヌクレオシド類似体及びピリミジンヌクレオシド類似体、例えば、アサイクロバー及びガンシクロバーである。これらのヌクレオシド類似体は成長しているDNAストランドへのそれらのとり込みによりウイルスDNAの複製を抑制する。HSV-1増殖のヌクレオシド類似体をベースとするインヒビターはごく制限された成功と判明し、一般に大半の患者の再発性感染症を治療するのに有益ではない。加えて、水痘帯状ヘルペスウイルス又はサイトメガロウイルスの如きその他のヘルペスウイルスによるヒトの感染はヌクレオシドに基づく療法に応答を殆ど又は全く示さない。
ヌクレオシドに基づく療法による広いスペクトルの抗ヘルペスウイルス活性の欠如は驚くべきではない。何とならば、これらの化合物は間接的な生物学的メカニズムにより作用するからである。ヌクレオシド類似体は最初にウイルスコードされたチミジンキナーゼ酵素によりヌクレオシドモノホスフェートに活性化される必要がある。HSV及び水痘帯状ヘルペスウイルスのみがチミジンキナーゼ酵素をコードすることが指摘されるべきである。これは、ヌクレオシドに基づく療法をその他のヒトヘルペスウイルスの治療に採用し得ないことを一部説明し得る。初期のリン酸化後に、ヌクレオシド類似体モノホスフェートはその作用の前にヒトコードされた酵素によりトリホスフェートに更にリン酸化される必要がある。最終的に、トリリン酸化ヌクレオシド類似体がウイルスゲノム複製中にナセントDNA鎖にとり込まれ、それによりヘルペスDNAポリメラーゼによるそのDNA鎖の伸長を抑制する。
【０００７】
ヌクレオシドに基づく療法の最終とり込み工程は“競合的”と特徴付けられていた。何とならば、ヘルペスDNAポリメラーゼが活性化ヌクレオシド薬対通常のデオキシヌクレオシドトリホスフェートに関する優先性を示さないからである。しかしながら、DNAポリメラーゼの作用はヘルペスウイルスDNA複製について速度制限的と考えられないので、ヘルペスウイルス感染症の治療におけるヌクレオシド誘導化合物の実用性は必ず制限される。それ故、ヘルペスウイルス感染症を治療するための有効な安全な治療薬に対する要望が絶えず存在している。
N-(カルボニルフェニル)ベンズアミド誘導体を開示している文献として、以下のものが挙げられる。
A.A. Patchettら, カナダ特許第793,882号（1968年９月３日）、
R.A. Coburnら, 米国特許第4,358,443号（1982年11月９日）、
P.R. Andrewsら, Australian Journal of Chemistry, 1988, 41, 493、
W.A. Harrisonら, 欧州特許出願第497816号（1995年５月17日）、
H. Setoiら, PCT特許出願WO 96/41795（1996年12月27日公開）、
M. Tengら, PCT特許出願WO 97/19062（1997年５月29日）、
J.M. Bernardon, PCT特許出願WO 98/34909（1998年８月13日公開）、及び
W.A. Harrisonら, 米国特許第5,693,827号（1997年12月２日）。
【０００８】
（発明の開示）
第一の局面において、本発明は式１
【０００９】
【化４】
0003762868.tif 000002
【００１０】
の化合物を提供する。
式中、
R1はヒドロキシ又はアミノであり、
R2は水素、ハロ、(C1-4)アルキル又は(C1-4)アルコキシであり、
R3は水素、ハロ、(C1-4)アルキル、(C1-4)アルコキシ、アミノ又はアジドであり、
R4はR2と同じ意味を有し、
R5は水素又は(C1-4)アルキルであり、かつ
Ｒは(C1-7)アルキル、(C3-6)シクロアルキル、{フェニル(C1-7)アルキル}、{フェニル(C1-7)アルコキシ}、{{(単環式複素環)-{(C1-7)アルコキシ}}、CH(W)C(O){O-(C1-4)アルキル}（式中、Ｗは水素又は(C1-7)アルキルである）、又は
【００１１】
【化５】
0003762868.tif 000003
【００１２】
（式中、Ｙは水素又は(C1-7)アルキルであり、かつＺは(C1-7)アルキル、(C3-6)シクロアルキル、{(C3-6)シクロアルキル}-{(C1-7)アルキル}、フェニル(C1-7)アルキルもしくは{{(単環式複素環)-{(C1-7)アルキル}}であり、又は
Ｙ及びＺはそれらが結合されている窒素原子と一緒になって、1-ピロリジニル、1-ピペリジニル、4-モルホリニルもしくは1-(4-メチルピペラジニルを表す)
であり、
但し、(1)Ｒがここに定義されたCH(W)C(O){O-(C1-4)アルキル}である場合、R5は水素であり、また(2)R2、R3及びR4の少なくとも一つが水素以外である。
【００１３】
化合物の好ましい群は
R1がヒドロキシ又はアミノであり、
R2が水素又はハロであり、
R3が水素、ハロ、(C1-4)アルキル、(C1-4)アルコキシ、アミノ又はアジドであり、
R4が水素又はハロであり、
R5が水素又は(C1-4)アルキルであり、かつ
Ｒが(C1-7)アルキル、(C3-6)シクロアルキル、フェニル{(C1-7)アルキル}、{フェニル(C1-7)アルコキシ}、{(単環式複素環){(C1-7)アルコキシ}}、CH(W)C(O)-{O-(C1-4)アルキル}（式中、Ｗは水素又は(C1-7)アルキルである）、又は
【００１４】
【化６】
0003762868.tif 000004
【００１５】
（式中、Ｙは水素であり、かつＺは(C1-7)アルキル、(C3-6)シクロアルキル、{(C3-6)シクロアルキル}-{(C1-7)アルキル}、フェニル{(C1-7)アルキル}もしくは{(単環式複素環)-{(C1-7)アルキル}であり、又は
Ｙ及びＺはそれらが結合されている窒素原子と一緒になって1-ピロリジニル、1-ピペリジニル、4-モルホリニルもしくは1-(4-メチルピペラジニルを表す)
である式１により表される。
【００１６】
化合物の更に好ましい群は
R1がヒドロキシ又はアミノであり、
R2が水素又はクロロであり、
R3が水素、クロロ、メチル、メトキシ、アミノ又はアジドであり、
R4が水素、クロロ又はヨードであり、
R5が水素又はメチルであり、かつ
Ｒがメチル、エチル、プロピル、ブチル、ペンチル、ヘキシル、シクロペンチル、シクロヘキシル、フェニルメチル、2-フェニルエチル、フェニルメトキシ、2-フェニルエトキシ、2-、3-又は4-ピリジニルメトキシ、2-(2-、3-又は4-ピリジニル)エトキシ、CH2C(O){O-{(C1-4)アルキル}}、CH{(C1-7)アルキル}C(O){O(C1-4)アルキル}、(C1-7)アルキルアミノ、シクロペンチルアミノ、シクロヘキシルアミノ、（シクロヘキシルメチル）アミノ、(2-シクロヘキシルエチル)アミノ、（フェニルメチル）アミノ、(2-フェニルエチル)アミノ、2-(3-又は(4-ピリジルメチル)アミノ又は2-(2-、(3-もしくは(4-ピリジルエチル)アミノである式１により表される。
【００１７】
化合物の最も好ましい群は
R1がヒドロキシであり、
R2が水素であり、
R3がメチル、メトキシ、アミノ又はアジドであり、
R4が水素、クロロ又はヨードであり、
R5が水素であり、かつ
Ｒがペンチル、ヘキシル、シクロヘキシル、フェニルメチル、2-フェニルエチル、フェニルメトキシ、2-、3-もしくは4-ピリジニルメトキシ、CH2C(O)OCH2CH3、CH(CH2CH2CH2CH3)C(O)OCH2CH3、エチルアミノ、プロピルアミノ、ブチルアミノ、シクロヘキシルアミノ、（シクロヘキシルメチル）アミノ、(2-シクロヘキシルエチル)アミノ、（フェニルメチル）アミノ、(2-フェニルエチル)アミノ、又は(2-、(3-もしくは(4-ピリジルメチル)アミノ、或いは2-(2-、(3-、もしくは(4-ピリジニルエチル)アミノである式１により表される。
本発明の更に別の目的は本発明の方法に有益な化合物及びこれらの化合物を含む医薬組成物を提供することである。
本発明の別の目的は本発明の化合物の調製方法を提供することである。
本発明の更に別の目的は本発明の化合物を含む医薬組成物及びこれらの医薬組成物を使用して哺乳類のヘルペス感染症を治療する方法を提供することである。
【００１８】
（発明を実施するための最良の形態）
本明細書に記載された発明はヘルペス複製の非ヌクレオシドをベースとするインヒビター、即ち、N-(3-カルボニルフェニル)ベンズアミド誘導体を提供することにより、既知の抗ヘルペス薬と関連する制限を解消する。理論に束縛されないが、本発明の化合物はヘルペスウイルスDNA複製におけるおそらく速度制限プロセス：ヘルペスプライマーゼ酵素の作用に干渉する際に直接作用するものと考えられる。更に、ヘルペスウイルスプライマーゼ酵素はヒトヘルペスウイルスにわたって保存されるので、本発明の化合物はHSV及び水痘帯状ヘルペスウイルスを含むその他のヘルペスウイルス、そしてまたヌクレオシド非応答性ヘルペス感染症及びヌクレオシド耐性ヘルペス感染症に対し有効である。
本明細書に使用されるように、以下の定義が特にことわらない限り適用される。
本明細書に使用される“ヘルペス”という用語はHSV-1のヘルペスプライマーゼをコードするヘルペスウイルス、及びHSV-1のヘルペスプライマーゼと相同のヘルペスプライマーゼをコードするヘルペスウイルスを表す。ウイルスのヘルペスファミリーとして、HSV-1、HSV-2、水痘帯状ヘルペスウイルス及びエプスタイン・バールウイルスが挙げられるが、これらに限定されない。
【００１９】
本明細書に使用される“ハロ”という用語はブロモ、クロロ、フルオロ又はヨードから選ばれたハロ基を意味する。
本明細書に単独又は別の基と組み合わせて使用される“(C1-4)アルキル”という用語は１〜４個の炭素原子を含むアルキル基を意味し、メチル、エチル、プロピル及び1-メチルエチル、ブチル、1-メチルプロピル、2-メチルプロピル並びに1,1-ジメチルエチルが挙げられる。
本明細書に使用される“(C1-7)アルキル”という用語は１〜７個の炭素原子を含む直鎖アルキル基及び分岐鎖アルキル基を意味し、エチル、ブチル、1-メチルプロピル、1-エチルプロピル、2,2-ジメチルプロピル、1-エチルブチル、2-エチル-2-メチルブチル、2-エチルブチル、1-プロピルブチル、2-プロピルブチル等が挙げられる。
本明細書に単独又は別の基と組み合わせて使用される“(C3-6)シクロアルキル”という用語は３〜６個の炭素原子を含む飽和環状炭化水素基を意味し、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル及びシクロヘキシルが挙げられる。
本明細書に使用される“(C1-4)アルコキシ”という用語は１〜４個の炭素原子を含む直鎖アルコキシ基及び３〜４個の炭素原子を含む分岐鎖アルコキシ基を意味し、メトキシ、エトキシ、プロポキシ、1-メチルエトキシ、ブトキシ及び1,1-ジメチルエトキシが挙げられる。後者の基はtert-ブトキシとして普通知られている。
【００２０】
本明細書に単独又は別の基と組み合わせて使用される“(C1-7)アルコキシ”という用語は１〜７個の炭素原子を含む直鎖アルコキシ基及び３〜７個の炭素原子を含む分岐鎖アルコキシ基を意味し、前節に記載されたアルコキシ基だけでなく、ペンチルオキシ、ヘキシルオキシ、1-プロピルブトキシ等が挙げられる。
本明細書に使用される“アミノ”という用語は式-NH2のアミノ基を意味する。本明細書に使用される“(C1-7)アルキルアミノ”という用語は１〜７個の炭素原子を含むアルキルアミノ基を意味し、メチルアミノ、プロピルアミノ、(1-メチルエチル)アミノ及び(2-メチルブチル)アミノが挙げられる。
【００２１】
本明細書に使用される“単環式複素環”という用語は５員又は６員飽和又は不飽和複素環からの水素の除去により誘導された１価の基を意味する。前記５員複素環は４個までの窒素原子を含んでもよく（例えば、テトラゾリル）、又は前記の５員又は６員複素環は窒素、酸素及び硫黄から選ばれた１〜３個のヘテロ原子を含んでもよい。必要により、複素環は１個又は２個の置換基、例えば、N-オキシド、(C1-4)アルキル、フェニル(C1-4)アルキル、(C1-4)アルコキシ、ハロ、アミノ又は(C1-7)アルキルアミノを有してもよい。好適な複素環及び必要により置換されていてもよい複素環の例として、ピロリジン、テトラヒドロフラン、チアゾリジン、ピロール、1H-イミダゾール、1-メチル-1H-イミダゾール、ピラゾール、フラン、チオフェン、オキサゾール、イソオキサゾール、チアゾール、2-メチルチアゾール、2-アミノチアゾール、2-(メチルアミノ)-チアゾール、ピペリジン、1-メチルピペリジン、1-メチルピペラジン、1,4-ジオキサン、モルホリン、ピリジン及びピリジンN-オキシドが挙げられる。
本明細書に使用される“医薬上許される担体”又は“獣医薬上許される担体”という用語は成分に悪影響しない活性成分用の無毒性の一般に不活性のビヒクルを意味する。
“有効量”という用語は抗ウイルス薬の抗ウイルス量、即ち、ウイルスに対しin vivoで有効であるのに充分な薬剤の量を意味する。
【００２２】
化合物の調製方法
本発明の化合物は種々の通常の方法により調製し得る。幾つかのこのような方法の記載が通常の書籍、例えば、“Annual Reports in Organic Synthesis 1996”, P.M. Weintraubら編集, Academic Press, Inc., San Diego, CA, USA, 1996（及びその先の年間論文）、“Vogel's Textbook of Practical Organic Chemistry”, 第５編, B.S. Furnissら編集, Longman Group Limited, Essex, UK, 1989、及び“Comprehensive Organic Synthesis”, B.M. Trost及びI. Fleming編集, Pergamon Press, Oxford, UK, 1991, 1-8巻に見られる。
Ｒが(C1-7)アルキル、(C3-6)シクロアルキル、フェニル又はフェニル(C1-7)アルキルである式１の化合物の調製方法がスキーム１により表され、RAは(C1-7)アルキル又はフェニル{(C1-7)アルキル}であり、R1Aは(C1-4)アルコキシ又はニトロであり、R2及びR4は夫々水素、ハロ、(C1-4)アルキル又は(C1-4)アルコキシであり、R3Aは水素、ハロ、(C1-4)アルキル、(C1-4)アルキル、ニトロ又はアジドであり、かつRBは(C1-7)アルキル、(C3-6)シクロアルキル、フェニル又はフェニル{(C1-7)アルキル}である。
スキーム１
【００２３】
【化７】
0003762868.tif 000005
【００２４】
スキーム１を参照して、式２の置換安息香酸をその相当する酸クロリド2aに変換し、後者をトリエチルアミンの如き酸脱除剤の存在下で式３のアミノベンゾエートと反応させて式４のベンゾイルアミノベンゾエートを得る。後者の化合物を塩基性加水分解剤（例えば、水酸化ナトリウム水溶液）に暴露して式５の相当する安息香酸誘導体を得る。その後、安息香酸誘導体５をカップリング剤の存在下でN,O-ジメチルヒドロキシルアミンとカップリングして式６の相当するN-メトキシ-N-メチルベンズアミドを得る。順に、N-メトキシ-N-メチルベンズアミドをS. Nahm及びS.M. Weinreb, Tetrahedron Letters, 1981, 22, 3815のアシル化方法に従って式RB-Mg-(ハロ)の適当なグリニアール試薬又は式RB-Li（式中、RBは(C1-7)アルキル、(C3-6)シクロアルキル、フェニル又はフェニル{(C1-7)アルキル}である）の有機リチウム試薬と反応させて式７の相当するベンゾイルアミノベンゾイル誘導体を得る。
続いてR1Aのアルコキシ（存在する場合）を不活性溶媒、例えば、二塩化メチレン、ベンゼンもしくは四塩化炭素中で塩化アルミニウムでエーテル開裂し、又はR1A及び／又はR3Aのニトロ基（存在する場合）をウィルキンソン触媒、即ち、H.R. Brinkman, Synthetic Communications, 1996, 26, 973により記載されたRhCl(PPh3)3の存在下でベンゼン又はトルエンの如き不活性芳香族溶媒中で適当な還元剤、好ましくはトリエチルシランで還元して式７のベンゾイルアミノベンゾイル誘導体を式１の相当する所望の化合物（式中、Ｒが(C1-7)アルキル、(C3-6)シクロアルキル、フェニル又はフェニル{(C1-7)アルキル}であり、かつR1及びR3が本明細書に定義されたとおりである）に変換する。
【００２５】
式５の安息香酸誘導体とN,O-ジメチルヒドロキシルアミンのカップリングをカップリング剤の存在下でその他の反応体の遊離アミノ基との一種の反応体の遊離カルボキシルの古典的脱水カップリングにより行なって連結アミド結合を形成する。このようなカップリング剤の記載がペプチド化学に関する一般書籍、例えば、M. Bodanszky,“Peptide Chemistry”, 第２改訂版, Springer-Verlag, Berlin, Germany, 1993に見られる。好適なカップリング剤の例はN,N'-ジシクロヘキシル-カルボジイミド、N,N'-ジシクロヘキシルカルボジイミドの存在下の1-ヒドロキシベンゾトリアゾール又はN-エチル-N'-{(3-ジメチルアミノ)プロピル}カルボジイミドである。極めて実用的かつ有益なカップリング剤は市販の（ベンゾトリアゾール-1-イルオキシ）トリ（ジメチルアミノ）ホスホニウムヘキサフルオロホスフェートそれ自体又は1-ヒドロキシベンゾトリアゾールの存在下のその物質である。更に別の極めて実用的かつ有益なカップリング剤は市販の2-(1H-ベンゾトリアゾール-1-イル)-N,N,N',N'-テトラメチル-ウロニウムテトラフルオロボレートである。
そのカップリング反応を不活性溶媒、例えば、ジクロロメタン、ジメチルホルムアミド、テトラヒドロフラン又はアセトニトリル中で行なう。塩基、例えば、三級アミン、例えば、ジイソプロピルエチルアミン又はN-メチルモルホリンが添加されてもよい。反応温度は通常０℃〜50℃の範囲であり、反応時間は通常15分〜24時間の範囲である。
【００２６】
また、R5が水素である式６のN-メトキシ-N-メチルベンズアミドは通常の方法により容易に（二級アミドの位置で）N-アルキル化されてR5が(C1-7)アルキルである式６の相当するN-メトキシ-N-メチルアミドを生じ得る。
次いで後者のN-アルキル化アミド誘導体は式６→７→１により表される工程順序により前記の式１の相当する化合物に変換し得る。
Ｒがヒドロキシであり、かつR1がヒドロキシである式１の化合物の調製方法は既に記載された様式でR1Aが(C1-4)アルコキシである式５の適当な安息香酸の塩化アルミニウムによるエーテルの開裂を伴ってＲがヒドロキシであり、かつR1がヒドロキシである式１の相当する化合物を得る。
Ｒが(C1-7)アルコキシ又はフェニル{(C1-7)アルコキシ}であり、かつR1及び／又はR3がアミノである式１の化合物は既に記載されたニトロ基還元方法に従ってR1及び／又はR3がニトロである式４の相当するベンゾイルアミノベンゾエートを還元してＲが(C1-7)アルコキシ又はフェニル{(C1-7)アルコキシ}であり、かつR1及び／又はR3がアミノである式１の相当する化合物を得ることにより調製し得る。
ＲがCH(W)C(O){O-(C1-4)アルキル}（式中、Ｗは水素又は(C1-4)アルキルである）である式１の化合物の調製方法はスキーム２により表され、WAは(C1-4)アルキルであり、RCは(C1-4)アルコキシであり、かつR1A、R2、R3A及びR4は本明細書に定義されたとおりである。
スキーム２
【００２７】
【化８】
0003762868.tif 000006
【００２８】
スキーム２を参照して、式８のニトロ-β-ケトエステルを接触水素化（例えば、Pd/BaSO4の存在下のH2）にかけて式９のアミノ-β-ケト酸を得、これを順に酸脱除剤、例えば、トリエチルアミンの存在下で酸クロリド2aと反応させて式10のβ-ケトエステルを得る。
その後、後者のβ-ケトエステルに関して、このような開裂及び還元について上記した様式でR1A(C1-4)アルコキシ基（存在する場合）をエーテル開裂し、又はR1A及び／又はR3Aニトロ基（存在する場合）を還元してＲがCH2C(O)(O-(C1-4)アルキル)であり、かつR1が夫々ヒドロキシ又はアミノである式１の所望の化合物を得る。
同様に、８→11（Ｃアルキル化による）→12→13→式１の相当する化合物の化合物順序により示される経路に従って、ＲがCH{(C1-7)アルキル}C(O){O-(C1-4)アルキル}であり、かつR1がヒドロキシ又はアミノである式１の所望の化合物が得られる。
ＲがCH{(C1-7)アルキル}C(O){O-(C1-4)アルキル}であり、かつR1がヒドロキシである式１の化合物を得るための先のスキームの変化がスキーム３に示される。
スキーム３
【００２９】
【化９】
0003762868.tif 000007
【００３０】
スキーム３を参照して、主要工程は(a)水素化ナトリウムの存在下の1-ブロモ-2-ブテンによるβ-ケトエステル14のアルキル化、(b)中間体15のニトロ基及び側鎖二重結合の還元、及び(c)中間体16と保護されていない（遊離）ヒドロキシルを有するサリチル酸誘導体17のカップリングである。この変化が以下の実験に詳しく記載される。また、水酸化リチウムによる化合物18の処理、続いて酸加水分解が式１の化合物（式中、Ｒがペンチルであり、R1がヒドロキシであり、R2及びR4が夫々水素であり、かつR3がクロロである）を生じることがこの点で注目に値する。以下の実験を参照のこと。
Ｒが
【００３１】
【化１０】
0003762868.tif 000008
【００３２】
（式中、Ｙは水素又は(C1-7)アルキルであり、かつＺは(C1-7)アルキル、(C1-6)シクロアルキル、{(C3-6)シクロアルキル}{(C1-7)アルキル}、フェニル(C1-7)アルキル又は{（単環式複素環）アルキル}であり、又はＹ及びＺはそれらが結合されている窒素原子と一緒になって1-ピロリジニル、1-ピペリジニル、4-モルホリニルもしくは1-(4-メチルピペラジニル)を表す）
である式１の化合物の調製方法がスキーム４により表し得る。この場合、
【００３３】
【化１１】
0003762868.tif 000009
【００３４】
、R1A、R2、R3A及びR4は本明細書に定義されたとおりである。
スキーム４
【００３５】
【化１２】
0003762868.tif 000010
【００３６】
スキーム４によれば、式５の安息香酸誘導体をカップリング剤の存在下で式
【００３７】
【化１３】
0003762868.tif 000011
【００３８】
（式中、Ｙ及びＺは本明細書に定義されたとおりである）
の適当なアミンと反応させて式19の相当するベンゾイルアミノベンズアミドを得る。続いて、R1Aに(C1-4)アルコキシ基を有する式19の化合物について、その化合物を前記エーテル開裂条件（即ち、室温の不活性溶媒中の塩化アルミニウム）に暴露してＲが本明細書に定義された
【００３９】
【化１４】
0003762868.tif 000012
【００４０】
であり、かつR1がヒドロキシである式１の相当する化合物を得、又はR1A及び／又はR3Aにニトロ基を有する式19の化合物について、その化合物を前記ニトロ還元方法にかけ、即ち、トリエチルシラン及びRhCl(PPh3)3と反応させてＲが本明細書に定義された
【００４１】
【化１５】
0003762868.tif 000013
【００４２】
であり、かつR1がアミノであり、かつR3が本明細書に定義されたとおりである式１の相当する化合物を得る。
先の方法の出発物質は知られており、又は既知の化合物から容易に調製し得る。式２の置換安息香酸及び式３のアミノベンゾエート（又はそれらの相当する酸）の幾つかはアルドリッチ・ケミカル社（ミルウォーキー、WI、USA）から入手し得る。
上記化学反応は本発明の化合物の調製についてのそれらの最も広い適用に関して一般に開示される。時折、これらの反応は開示された範囲内に含まれる夫々の化合物について記載されたように適用されないかもしれない。これが生じる化合物は当業者により容易に認められるであろう。全てのこのような場合において、反応は当業者に知られている改良、例えば、妨害する基の保護、別の試薬への変化、反応条件の改良、又はR3Aがニトロである適当な中間体を使用し、ニトロ基を還元してR3がアミノである式１の相当する化合物を最終的に得ることによるR3がアミノである式１の化合物の調製のような本明細書の実施例に示された改良により成功裏に行ない得る。
所望により、塩基性窒素原子を有する式１の化合物は酸付加塩の形態で得られる。このような塩は式１の化合物の生物学的均等物と考えられる。治療適用について、医薬上許される塩を使用することが好ましい。このような塩の例は塩酸、硫酸、リン酸、ギ酸、酢酸又はクエン酸を用いて生成された塩である。
【００４３】
抗ヘルペス活性
式１の化合物の抗ウイルス活性は単純ヘルペスウイルス型１及び２(HSV-1及びHSV-2)だけでなく、アサイクロバー耐性単純ヘルペスウイルス及びガンシクロバー耐性サイトメガロウイルスの複製に関する化合物の抑制効果を示す生化学的操作、微生物学的操作及び生物学的操作により実証し得る。
式１の化合物に関する抗ヘルペス活性を実証するための生化学的操作が以下に実施例に記載される。この特別なアッセイは試験化合物がウイルスDNA複製に必須の酵素であるHSV-1プライマーゼを抑制する能力の評価に基づく。
in vitro技術及び細胞培養技術を伴うヘルペスウイルス複製に関する式１の化合物の抑制効果を実証するための方法が実施例に記載される。
式１の化合物の治療効果は実験動物、例えば、皮膚のHSV-1感染症の局所治療についての無毛マウスモデル（P.H. Leeら, International Journal of Pharmaceutics, 1993, 93, 139）、(HSV-2)誘発ゲニタリスマウスモデル（R.W. Sidewellら, Chemotherapy, 1990, 36, 58）、及びマウスサイトメガロウイルスで感染されたBALB/Cマウスモデル（D.L. Barnardら, Antiviral Res., 1993, 22, 77、及びJ. Neytsら, Journal of Medical Virology, 1992, 37, 67）で実証し得る。
【００４４】
式１の化合物、又はその治療上許される酸付加塩の一種が抗ウイルス薬として使用される場合、それは一種以上の医薬上許される担体（その比率は化合物の溶解性及び化学的性質、投与の選ばれた経路及び通常の生物学的慣例により決められる）を含むビヒクル中で温血動物、例えば、ヒト、ブタ又はウマに経口投与、局所投与又は全身投与される。経口投与について、化合物又はその治療上許される塩は夫々医薬上許される担体中に約25〜500mgの範囲の所定の量の活性成分を含む単位投薬形態、例えば、カプセル又は錠剤中に製剤化し得る。局所投与について、化合物は0.1〜５％、好ましくは0.5〜５％の活性薬剤を含む医薬上許されるビヒクル中で製剤化し得る。このような製剤は溶液、クリーム又はローションの形態であってもよい。
非経口投与について、式１の化合物は医薬上許されるビヒクル又は担体を含む組成物中で静脈内注射、皮下注射又は筋肉内注射により投与される。注射による投与について、無菌の水性ビヒクル（これはまた緩衝剤又は防腐剤の如きその他の溶質だけでなく、溶液を等張にするのに充分な量の医薬上許される塩又はグルコースを含んでもよい）中の溶液中の化合物を使用することが好ましい。
【００４５】
上記製剤化に適したビヒクル又は担体が通常の医薬書籍、例えば、“Remington's The Science and Practice of Pharmacy”, 第19編, Mack Publishing Company, Easton, Penn., 1995、又は“Pharmaceutical Dosage Forms And Drugs Delivery Systems”, 第６編, H.C. Anselら編集, Williams＆Wilkins, Baltimore, Maryland, 1995に記載されている。
化合物の投薬量は投与の形態及び選ばれた特別な活性薬剤により変化するであろう。更に、それは治療中の特別な宿主により変化するであろう。一般に、治療はその状況下の最適の効果に達するまで小さい増分で開始される。一般に、式１の化合物は一般に有害又は有毒な副作用を生じないで抗ウイルス有効な結果を与える濃度レベルで投与されることが最も望ましい。
経口投与について、化合物又は治療上許される塩は毎日体重1kg当り10〜200mgの範囲、好ましくは1kg当り25〜150mgの範囲で投与される。
局所適用について、式１の化合物は感染領域を覆うのに充分な量で体の感染領域、例えば、皮膚、眼、性器又は口腔の一部に好適な製剤中で局所投与される。その治療は、病変が治癒するまで、例えば、４〜６時間毎に繰り返されるべきである。
【００４６】
眼内投与について、式１の化合物は好適な製剤中で局所投与又は眼内投与（注射又は移植体）される。例えば、好適な製剤中に化合物を含む移植体が小さい切除により眼の後区域に手術により入れられる。
全身投与に関して、式１の化合物は毎日体重1kg当り10mg〜150mgの投薬量で投与されるが、上記変化が生じるであろう。しかしながら、毎日体重1kg当り約10mg〜100mgの範囲である投薬レベルが有効な結果を得るために使用されることが最も望ましい。
先に開示された製剤はヘルペスウイルス感染症を治療するのに有効かつ比較的安全な薬物であることが示されるが、有益な結果を得るためのその他の抗ウイルス薬剤又は物質とのこれらの製剤の可能な同時の投与がまた含まれる。このようなその他の抗ウイルス薬物又は薬剤として、抗ウイルスヌクレオシド、例えば、アサイクロバー、ペンシクロバー、ファムシクロバー、バラシクロバー及びガンシクロバー、並びに抗ウイルス表面活性剤又は抗ウイルスインターフェロン、例えば、米国特許第4,507,281号（1985年３月26日）にS.S. Asculai及びF. Rappにより開示されたものが挙げられる。
以下の実施例は本発明を更に説明し、教示する。温度は℃で示される。溶液％又は比は特にことわらない限り容積対容積関係を表す。核磁気共鳴スペクトルをブルカー400 MHzスペクトロメーターで記録した。化学シフト（δ）はppmで報告される。実施例に使用した略号又は記号として、ATP：アデノシン三リン酸；Bu：ブチル；i-Pr2Net：ジイソプロピルエチルアミン；DMF：ジメチルホルムアミド；DMSO：ジメチルスルホキシド；Et：エチル；EtOAc：酢酸エチル；Et2O：ジエチルエーテル；Et3N：トリエチルアミン；ESI/MS：電子噴霧イオン化質量分析；mAb：モノクローナル抗体；Me：メチル；MeOH：メタノール；PFU：プラーク形成単位；Ph：フェニル；Pr：プロピル；TBTU：2-(1H-ベンゾトリアゾール-1-イル)-N,N,N',N'-テトラメチルウロニウムテトラフルオロボレート；THF：テトラヒドロフランが挙げられる。
【００４７】
（実施例）
実施例１
N-ブチル-N-メチル-3-{(4-クロロ-2-ヒドロキシベンゾイル)アミノ}ベンズアミド（１：R1=OH、R2、R4及びR5=H、R3=ClかつR=N(Me)Bu）
【００４８】
【化１６】
0003762868.tif 000014
【００４９】
(a)エチル3-{(4-クロロ-2-メトキシベンゾイル)アミノ}ベンゾエート（４：R1=OMe、R2及びR4=H、R3=Cl、R5=HかつR=OEt）
【００５０】
【化１７】
0003762868.tif 000015
【００５１】
CH2Cl2（107ml）中の4-クロロ-2-メトキシ安息香酸（10.0g、53.6ミリモル）、塩化オキサリル（8.84g、69.7ミリモル）及びDMF（50μL）の懸濁液を25℃で２時間撹拌した。得られる透明溶液を減圧で濃縮した。CH2Cl2（107ml）中の残留粗塩化アシル（107ml）に、エチル3-アミノベンゾエート（8.85g、53.6ミリモル）及びEt3N（10.8g、107ミリモル）を25℃で５分間にわたって添加した。その混合物を25℃で24時間撹拌した。得られる懸濁液をEtOAc（350ml）で希釈し、得られる溶液を1N HCl 水溶液(2x150ml)、飽和NaHCO3水溶液（2x150ml）及び食塩水(150ml)で連続して洗浄した。有機層を乾燥させ（MgSO4）、濾過し、減圧で濃縮して式４の所望のベンゾイルアミノベンゾエート（17.4g、収率97％）をベージュ色の固体として得た。
1H NMR (DMSO-d6) δ 10.31 (s, 1H), 8.40 (ブロード s, 1H), 7.94 (ブロード d, J = 7.9 Hz, 1H), 7.69 (dt, J = 7.9, 1.2 Hz, 1H), 7.62 (d, J = 8.2 Hz, 1H), 7.49 (t, J = 7.9 Hz, 1H), 7.28 (d, J =1.9 Hz, 1H), 7.13 (dd, J = 8.2, 1.9 Hz, 1H), 4.33 (q, J = 7.0 Hz, 2H), 3.92 (s, 3H), 1.33 (t, J = 7.0 Hz, 3H).
(b)3-{(4-クロロ-2-メトキシベンゾイル)アミノ}安息香酸（５：R1=OMe、R2及びR4=H、R3=ClかつR5=H）
【００５２】
【化１８】
0003762868.tif 000016
【００５３】
THF(75ml)及びMeOH(50ml)中のエチル3-{(4-クロロ-2-メトキシベンゾイル)アミノ}ベンゾエート（12.2g、36.5ミリモル）、1N NaOH 水溶液(55ml、55ミリモル)の溶液を25℃で６時間撹拌した。水(50ml)を添加し、THF/MeOH溶媒の殆どを減圧で除去した。水(100ml)及びEt2O（50ml）を添加し、相を分離した。水層を1N HCl水溶液の添加により酸性(pH<2)にし、EtOAc（300ml）を添加した。式５の不溶性安息香酸誘導体を濾過により回収した。濾液の有機相を減圧で濃縮した。残渣をTHF(40ml)に溶解し、水(300ml)に注いだ。得られる懸濁液を濾過して安息香酸誘導体の追加の部分を得た（２画分について合計10.4g、収率93％）。
1H NMR (DMSO-d6) δ 11.60 (ブロード s, 1H), 10.27 (s, 1H), 8.37 (ブロード s, 1H), 7.91 (ブロード d, J = 7.9 Hz, 1H), 7.67 (dt, J = 7.9, 1.3 Hz, 1H), 7.63 (d, J = 8.3 Hz, 1H), 7.46 (t, J = 7.9 Hz, 1H), 7.28 (d, J = 1.9 Hz, 1H), 7.13 (dd, J = 8.3, 1.9 Hz, 1H), 3.92 (s, 3H).
(c)N-ブチル-N-メチル-3-{(4-クロロ-2-メトキシベンゾイル)アミノ}ベンズアミド（７：R1=OMe、R2、R4及びR5=H、R3=ClかつR=N(Me)Bu）
【００５４】
【化１９】
0003762868.tif 000017
【００５５】
25℃のDMF(2.0ml)中の3-{(4-クロロ-2-メトキシベンゾイル)アミノ}安息香酸(0.30g、0.98ミリモル)、N-ブチル-N-メチルアミン(103mg、1.18ミリモル)及びi-Pr2NEt（380mg、2.94ミリモル）の溶液に、TBTU（315mg、0.98ミリモル）を添加した。その混合物を25℃で1.5時間撹拌した。混合物をEtOAc（80ml）で希釈した。得られる溶液を1N HCl水溶液(2x30ml)、飽和NaHCO3水溶液(2x30ml)、水(30ml)及び食塩水(30ml)で洗浄し、乾燥させ（MgSO4）、濾過し、減圧で濃縮して式７の所望のベンゾイルアミノベンゾイル誘導体（354mg、収率96％）を黄色の油-フォームとして得た。
1H NMR (DMSO-d6) δ.(回転異性体の1:1 混合物) 10.20 (s, 1H), 7.77 (s, 1H), 7.72 (d, J = 7.8 Hz, 1H), 7.63 (d, J = 8.3 Hz, 1H), 7.39 (t, J = 7.8 Hz, 1H), 7.28 (d, J = 1.9 Hz, 1H), 7.13 (dd, J = 8.3, 1.9 Hz, 1H), 7.03-7.09 (m, 1H), 3.92 (s, 3H), 3.44, 3.19 (2 ブロード s, 2H), 2.94, 2.88 ( 2 ブロード s, 3H), 1.62-1.45 (m, 2H), 1.40-1.27, 1.17-1.05 (2m, 2H), 0.99-0.88, 0.81-0.71 (2m, 3H).
【００５６】
(d)N-ブチル-N-メチル-3-{(4-クロロ-2-ヒドロキシベンゾイル)アミノ}ベンズアミド（この実施例の式１の標題化合物）
AlCl3（307mg、2.30ミリモル）を25℃のCH2Cl2(3.7ml)中のN-ブチル-N-メチル-3-{(4-クロロ-2-メトキシベンゾイル)アミノ}ベンズアミド(345mg、0.92ミリモル)の溶液に添加した。その混合物を25℃に17時間保った。次いで混合物をEtOAc（75ml）と1N HCl水溶液(50ml)の間に分配した。有機層を乾燥させ(MgSO4)、濾過し、減圧で濃縮した。残渣をフラッシュクロマトグラフィー（10-40μシリカゲル、EtOAc：ヘキサン、1:1）により精製して標題化合物（272mg、収率82％）を白色のフォームとして得た。
1H NMR (DMSO-d6) δ (回転異性体の1:1 混合物) 11.97 (s, 1H), 10.43 (s, 1H), 7.92 (d, J = 8.9 Hz, 1H), 7.79-7.74 (m, 1H), 7.74-7.67 (m, 1H), 7.42 (t, J = 7.8 Hz, 1H), 7.14-7.09 (m, 1H), 7.05-7.03 (m, 2H), 3.50-3.40, 3.26-3.15 (2m, 2H), 3.30 (s, 3H), 2.95, 2.89 (2s, 3H), 1.62-1.44 (m, 2H), 1.40-1.04 (m, 2H), 1.00-0.89, 0.81-0.69 (2m, 3H); MS (ESI) m/z 361/363 (MH)+.
実施例２
4-クロロ-2-ヒドロキシ-N-{3-(1-オキソヘキシル)フェニル}ベンズアミド（１：R1=OH、R2、R4及びR5=H、R3=ClかつR=-(CH2)4Me）
【００５７】
【化２０】
0003762868.tif 000018
【００５８】
(a)3-{(4-クロロ-2-メトキシベンゾイル)アミノ}-N-メトキシ-N-メチルベンズアミド（６：R1=OMe、R2、R4及びR5=H、かつR3=Cl）
【００５９】
【化２１】
0003762868.tif 000019
【００６０】
TBTU（4.73g、14.7ミリモル）を25℃のDMF(29ml)中の3-{(4-クロロ-2-メトキシベンゾイル)アミノ}安息香酸(4.50g、14.7ミリモル)、N,O-ジメチルヒドロキシルアミン塩酸塩(1.72g、17.7ミリモル)及びi-Pr2NEt (7.60g、58.9ミリモル)の溶液に添加した。その反応混合物を25℃で2.5時間撹拌した。混合物をEtOAc(200ml)で希釈した。得られる溶液を1N HCl水溶液(2x75ml)、水(2x75ml)、飽和NaHCO3水溶液(2x75ml)及び食塩水(75ml)で連続して洗浄し、次いで乾燥させ(MgSO4)、濾過し、減圧で濃縮して式６の相当するN-メトキシ-N-メチルベンズアミド(4.32g、収率84％)を白色の固体として得た。
1H NMR (DMSO-d6) ｆ１１δ 10.23 (s, 1H), 7.99 (ブロード s, 1H), 7.79 (ブロード d, J = 7.9 Hz, 1H), 7.63 (d, J = 8.2 Hz, 1H), 7.41 (t, J = 7.9 Hz, 1H), 7.29 (dt, J = 7.9, 1.3 Hz, 1H), 7.28 (d, J = 1.9 Hz, 1H), 7.13 (dd, J = 8.2 Hz, 1.9 Hz, 1H), 3.92 (s, 3H), 3.57 (s, 3H), 3.26 (s, 3H).
【００６１】
(b)4-クロロ-2-ヒドロキシ-N-{2-(1-オキソヘキシル)フェニル}ベンズアミド（この実施例の式１の標題化合物）
Et2O中のn-ペンチルマグネシウムブロミドの2.0Mの溶液（12.1ml、24.2ミリモル）を25℃のTHF(48ml)中の3-{(4-クロロ-2-メトキシベンゾイル)アミノ}-N-メトキシ-N-メチルベンズアミド(1.69g、4.84ミリモル)の溶液に５分間にわたって添加した。その混合物を25℃で１時間撹拌し、1N HCl水溶液(15ml)を添加した。その混合物をEtOAc（200ml）と1N HCl水溶液(50ml)の間で分配した。有機層を水(50ml)及び食塩水(50ml)で連続して洗浄し、次いで乾燥させ(MgSO4)、濾過し、減圧で濃縮した。残渣をCH2Cl2(19ml)に溶解し、AlCl3（1.61g、12.1ミリモル）をその溶液に25℃で添加した。２時間後に、AlCl3の第二の部分(1.61g、12.1ミリモル)をその混合物に添加した。その反応混合物を更に2.5時間撹拌し、その後に1N HCl水溶液(25ml)を添加した。その混合物をEtOAc（250ml）と1N HCl水溶液(50ml)の間で分配した。有機層を食塩水(50ml)で洗浄し、乾燥させ(MgSO4)、減圧で濃縮した。残渣をフラッシュクロマトグラフィー（10-40μシリカゲル、ヘキサン：EtOAc、6:1）により精製して標題化合物(1.05g、収率63％)をベージュ色の固体として得た。
1H NMR (DMSO-d6) δ 11.98 (s, 1H), 10.53 (s, 1H), 8.29 (ブロード s, 1H), 7.96 (ブロード d, J = 7.9 Hz, 1H), 7.94 (d, J = 8.9 Hz, 1H), 7.75 (ブロード d, J = 7.9 Hz, 1H), 7.52 (t, J = 7.9 Hz, 1H), 7.05-7.03 (m, 2H), 3.00 (t, J = 7.1 Hz, 2H), 1.63 (五重線, J = 7.1 Hz, 2H), 1.36-1.28 (m, 4H), 0.88 (t, J = 6.7 Hz, 3H); MS (ESI) m/z 368/370 (MNa)+; 分析 C19H20NO3Clとしての計算値: C, 64.26; H, 5.07; N, 4.41.  実測値: C, 64.12; H, 4.74; N, 4.33.
【００６２】
実施例３
エチルα-ブチル-3-{(4-クロロ-2-ヒドロキシベンゾイル)アミノ}-β-オキソベンゼンプロパノエート（１：R1=OH、R2、R4及びR5=H、R3=ClかつR=CH(C(O)OEt)(CH2)3Me）
【００６３】
【化２２】
0003762868.tif 000020
【００６４】
(a)エチルα-(2-ブテニル)-3-ニトロ-β-オキソベンゼンプロパノエート
【００６５】
【化２３】
0003762868.tif 000021
【００６６】
鉱油中のNaHの60％分散液(917mg、22.9ミリモル)を穏やかな還流を維持するような速度でTHF(50ml)中のエチル3-ニトロ-β-オキソベンゼンプロパノエート(5.00g、21.1ミリモル)の溶液に20分間にわたって添加した。その混合物を25℃で30分間撹拌し、THF(15ml)中のクロチルブロミド(2.95g、21.9ミリモル)の溶液を50分間にわたって添加した。その反応混合物を25℃で45分間撹拌し、次いで16時間にわたって加熱、還流した。ヘキサン(100ml)をその冷却混合物に添加した。得られる懸濁液を濾過し、濾液を減圧で濃縮した。残渣をEtOAcに溶解し、得られる溶液を10％のクエン酸水溶液(2x)、飽和NaHCO3水溶液(2x)及び食塩水で洗浄し、次いで乾燥させ(MgSO4)、減圧で濃縮した。残渣をフラッシュクロマトグラフィー（40-63μシリカゲル、ヘキサン：EtOAc、9:1）により精製してエチルα-(2-ブテニル)-3-ニトロ-β-オキソベンゼンプロパノエート(4.60g、収率75％)を得た。
1H NMR (CDCl3) δ 8.83 (dd, J = 2.2, 1.2 Hz, 1H), 8.46 (ddd, J = 7.9, 2.2, 1.2 Hz, 1H), 8.31 (dt, J = 7.9, 1.2 Hz, 1H), 7.70 (t, J = 7.9 Hz, 1H), 5.61-5.52 (m, 1H), 5.39-5.37 (m, 1H), 4.35 (t, J = 7.2 Hz, 1H), 4.17, 4.14 (2q, J = 7.0, 7.0 Hz, 2H), 2.77 (ブロード t, J = 7.2 Hz, 2H), 1.62 (dd, J = 6.4, 1.3 Hz, 3H), 1.19 (t, J = 7.0 Hz, 3H).
(b)エチル3-アミノ-α-ブチル-β-オキソベンゼンプロパノエート
【００６７】
【化２４】
0003762868.tif 000022
【００６８】
1,4-ジオキサン(12ml)中のエチルα-(2-ブテニル)-3-ニトロ-β-オキソベンゼンプロパノエート(411mg、1.41ミリモル)の溶液を水素雰囲気（１気圧）下でPd/BaSO4（225mg＋5.5時間後に150mgを添加した）の存在下で25℃で8.5時間撹拌した。その懸濁液を濾過（50μフィルター）し、濾液を減圧で濃縮した。残渣をフラッシュクロマトグラフィー（40-63μシリカゲル、ヘキサン：EtOAc、3:1）により精製してエチル3-アミノ-α-ブチル-β-オキソベンゼンプロピオネート(242mg、収率65％)を得た。
1H NMR (CDCl3) δ 7.31 (ブロード d, J = 7.3 Hz, 1H), 7.27-7.23 (m, 3H), 6.88 (ブロード d, J = 7.3 Hz, 1H), 4.22 (t, J = 7.2 Hz, 1H), 4.15, 4.14 (2q, J = 6.7, 6.7 Hz, 2H), 3.81 (ブロード s, 2H), 2.02-1.94 (m, 2H), 1.41-1.30 (m, 4H), 1.18 (t, J = 7.0 Hz, 3H), 0.89 (t, J = 6.7 Hz, 3H).
【００６９】
(c)エチルα-ブチル-3-{(4-クロロ-2-ヒドロキシベンゾイル)アミノ}-β-オキソベンゼンプロパノエート（この実施例の式１の標題化合物）
CH2Cl2(5.0ml)中の4-クロロサリチル酸(109mg、0.63ミリモル)及び塩化オキサリル(175mg、1.38ミリモル)の溶液を25℃で１時間撹拌した。その混合物を減圧で濃縮した。残渣をCH2Cl2(3.0ml)に溶解した。CH2Cl2(5.0ml)中のエチル3-アミノ-α-ブチル-β-オキソベンゼンプロパノエート(133mg、0.51ミリモル)の溶液、続いてEt3N(152mg、1.51ミリモル)を添加した。その反応混合物を25℃で20時間撹拌した。混合物を減圧で濃縮し、残渣をEtOAcに溶解した。得られる溶液を飽和NaHCO3水溶液(2x)及び食塩水で洗浄し、次いで乾燥させ(MgSO4)、濾過し、減圧で濃縮した。残渣をフラッシュクロマトグラフィー（40-63μシリカゲル、ヘキサン：EtOAc、4:1）により精製してこの実施例の標題化合物(100mg、収率48％)を白色の固体として得た。mp83-88℃。
1H NMR (CDCl3) δ; 12.00 (ブロード s, 1H), 8.50 (s, 1H), 8.11 (t, J = 1.4 Hz, 1H), 7.96 (dd, J = 7.9, 1.4 Hz, 1H), 7.77 (dd, J = 8.6 Hz, 1H), 7.48 (t, J = 7.9 Hz, 1H), 7.03 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 6.87 (dd, J = 8.6, 2.0 Hz, 1H), 4.28 (t, J = 7.1 Hz, 1H), 4.15 (q, J = 7.0 Hz, 2H), 2.02-1.94 (m, 2H), 1.36-1.28 (m, 4H), 1.18 (t, J = 7.0 Hz, 3H), 0.88 (t, J = 7.0 Hz, 3H); MS (ESI) 418/420 (MH)+.
実施例４
4-クロロ-2-ヒドロキシ-N-{3-(1-オキソヘキシル)フェニル}ベンズアミド
【００７０】
【化２５】
0003762868.tif 000023
【００７１】
THF(3.0ml)及び水(1.5ml)中のエチルα-ブチル-3-〔(4-クロロ-2-ヒドロキシベンゾイル)アミノ〕-β-オキソベンゼンプロパノエート(32.0mg、77.0μモル)及びLiOH・H2O（11.0mg、0.26ミリモル）の溶液を48時間にわたって55℃に加熱した。その混合物を水とEtOAcの間で分配した。水層を10％のクエン酸水溶液で酸性にし、次いでEtOAcで抽出した。合わせた有機層を乾燥させ(MgSO4)、濾過し、減圧で濃縮した。残渣を逆相HPLC（ワットマン・パーチシル（登録商標）ODS-3 C18 10μ、22x500mm；0-80％MeCN＋0.06％TFA/水＋0.06％TFA）により精製して標題化合物（16.0mg、収率60％）を白色の固体として得た。mp 134-136℃；実施例２の生成物と同じ。
【００７２】
実施例５
下記の二つのアッセイ（i及びii）を使用して抗ヘルペス活性を評価した。
i)HSV-1ヘリカーゼ-プライマーゼDNAプライマーゼアッセイ
UL-5発現バキュロウイルスがUL5(K103A)を発現するように変化された以外は、プライマーゼアッセイに使用されるHSV-1ヘリカーゼ-プライマーゼ酵素を記載されたようにして発現し、単離した（M.S. Dodsonら, J. Biol. Chem. 1989, 264, 20835; S. Drachevaら, J. Biol. Chem. 1995, 270, 14148）。得られる変化された酵素は検出できるヘリカーゼ、DNA依存性ATPase、又はATPase活性を含んでいなかった。しかしながら、DNAプライマーゼ活性は野生型酵素に対し増大された。
アッセイ：DNAプライマーゼ活性をUL5(K103A)ヘリカーゼ-プライマーゼホロ酵素による新たに合成されたプライマーへの〔3H〕GTPのとり込みにより測定した。ψ×174 一本鎖DNA〔D.J. Teneyら, J. Biol. Chem. 1995, 270, 9129-9136〕の好ましいプライミング部位から誘導された50-mer一本鎖DNAオリゴヌクレオチド5'-CTTCTTCGGT TCCGACTAC CCCTCCCGAC TGCCTATGAT GTTTATCCTT T G-3'OH （配列番号１）を鋳型として使用してアッセイを行なった。その反応混合物（60μl）は20mMトリス-HCl pH 8.0、5mM塩化マグネシウム、1mM DTT、0.01％CHAPS、夫々100μMのATP、GTP、CTP、10μM〔ビオチン〕UTP、１μCi〔3H〕GTP（比活性30.8Ci/ミリモル）、50-mer鋳型１μg及び45μg/mlのUL5(K103A)変化されたヘリカーゼ-プライマーゼホロ酵素を含んでいた。これらのサンプルを循環水浴中で34℃で45分間インキュベートし、反応を20μlの0.5M EDTA pH 8の添加により停止した。次いで、反応混合物50μlを固定アビジンビーズ（ピアス）40μlを含むミリポア濾過プレート（MHVB N45、0.45μm）に移した。ミクロプレートシェーカーで室温で30分間インキュベートした後、ウェルを300μlの洗浄緩衝液（50mMの4-(2-ヒドロキシエチル)-1-ピペラジンエタンスルホン酸(HEPES) pH 7.5及び0.5M NaCl）で５回洗浄し、フィルタープレートを吸引して乾燥させた。100μlのミクロシント（登録商標）20（キャンベラ-パッカード・カナダ、ミシサウガ、オンタリオ、カナダ）を夫々のウェルに添加した後、トップカウント（登録商標）を使用して夫々のウェルの放射能をカウントした。
【００７３】
IC50測定
全ての場合に、化合物を３倍連続希釈で試験し、結果をインヒビターを含まない対照反応と較べて抑制％として表した。SASソフトウェア（SASインスティチュート、キャリイ、ノースカロライナ、USA）を使用して、IC50（即ち、酵素活性の50％抑制を生じたインヒビター濃度）値を投薬量-応答曲線から測定した。ヒル式に基づく非線形回帰分析（M. Dixon及びE.C. Webb Enzymes, Academic Press: New York, NY, USA, 1979）を抑制％-濃度データに適用した。
ii)細胞培養中の単純ヘルペスウイルス(HSV-1)複製の抑制
アッセイ：BHK-21細胞クローン13(ATCC CCL10)を８％(v/v)ウシ胎児血清（FBS、ギブコ・カナダ社）を補給したα-MEM培地（ギブコ・カナダ社、バーリントン、オンタリオ、カナダ）とともに850cm2ローラーびん（2x107細胞/びん）中で２日間インキュベートした。細胞をトリプシン処理し、次いで新しい培地100μl中の3,000の細胞を96ウェル・ミクロタイタ・プレートの夫々のウェルに移した。細胞を３日の期間にわたって37℃でインキュベートしてウェル当り50,000の細胞の密度に達した。細胞を２％の熱不活化FBSを補給したα-MEM100μlで２回洗浄し、同培地100μl中で1-2時間インキュベートした。
その後、細胞を２％の熱不活化FBSを補給したα-MEM50μl中のHSV-1株Ｆ又はKOS（感染多重度＝0.05PFU/細胞）で感染させた。37℃におけるウイルス吸収の１時間後に、培地を除去し、細胞を２％の熱不活化FBSを補給したα-MEM（2x100μl）で洗浄した。細胞を２％の熱不活化FBSを補給したα-MEM培地中の適当な濃度の試験試薬100μlとともに、又はその試薬を用いないでインキュベートした。37℃で24時間のインキュベーション後に、ウイルス複製の程度をELISAアッセイ、例えば、HSV-1の後期糖タンパク質Ｃを検出する下記のアッセイにより測定した。
【００７４】
細胞をミクロタイタ・プレート中で30分間にわたって室温で食塩加リン酸緩衝液中の0.063％のグルタルアルデヒド100μlで固定した。次いでミクロタイタ・プレートをカゼインブロッキング溶液で１回洗浄し、１時間にわたって室温で同溶液200μlでブロックした。その後、HSV-1の糖タンパク質Ｃを認識するmAb C11（E. Trybalaら, Journal of General Virology, 1994, 75, 743を参照のこと）100μlを２時間にわたって室温で夫々のウェルに添加した。プレートを0.05％のポリオキシエチレン(20)ソルビタンモノオレエートを含む食塩加リン酸緩衝液で３回洗浄した。細胞を100μlのヒツジ抗マウスIgGホースラディッシュ・ペルオキシダーゼとともに１時間にわたって室温で暗所でインキュベートした。
【００７５】
プレートを上記食塩加リン酸緩衝液製剤200μlで３回洗浄し、次いで0.1Mクエン酸ナトリウム溶液（pH 4.5）で１回洗浄した。その後、オルトフェニレンジアミン二塩酸塩（OPD、ギブコ・カナダ社）100μlを夫々のウェルに添加した。プレートを30分間にわたって暗所でミクロプレート・シェーカーで撹拌した。ミクロプレート・スペクトロフォトメーターを使用して、発色を450nmで監視した。
SASを使用してウイルス複製の抑制％を計算し、EC50値を生じた。
化合物に関するアッセイi及びiiからの結果を表３に記録する。アッセイiに関する結果を見出しHSV-1、IC50（μM）の下に表す。アッセイiiに関する結果を見出しHSV-1、EC50（μM）の下に表す。両方の場合、カテゴリー“Ａ”は約１μM未満のIC50又はEC50を有する化合物を含む。カテゴリー“Ｂ”は約1-100μMの範囲内にあるIC50又はEC50を有する化合物を含み、またカテゴリー“Ｃ”は約100μMより大きいIC50又はEC50を有する化合物を含む。
【００７６】
【表１】
0003762868.tif 000024
【００７７】
【表２】
0003762868.tif 000025
【００７８】
【表３】
0003762868.tif 000026
【００７９】
【表４】
0003762868.tif 000027
【００８０】
【表５】
0003762868.tif 000028
【００８１】
【表６】
0003762868.tif 000029
【００８２】
【表７】
0003762868.tif 000030
【００８３】
【配列表】
0003762868.tif 000031