(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
生体組織用縫合糸に下記式〔Ｉ〕
【化１】
0003786501.tif 000006
で示されるペプチドが含有されていることを特徴とするペプチド含有生体組織用縫合糸。
【請求項２】
生体組織用縫合糸が生分解性縫合糸であることを特徴とする請求項１記載のペプチド含有生体組織用縫合糸。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は生体組織用縫合糸に関する。
【０００２】
【従来の技術】
外科手術などにおいて、皮膚、臓器、血管などの創部の閉鎖・接合は、最も基本的な手技のひとつであり、現在では、糸による縫合が一般的になっている。縫合糸は創傷を接合させ、癒合しやすい条件をつくるために用いられる。創部の閉鎖・接合に縫合糸を用いる場合、適度な張力に耐えうる生物学的適合性のよい縫合糸にて行うことが考えられ、いくつかの縫合糸が臨床的に用いられている。特に生体内で吸収される吸収性縫合糸は吸収後縫合部位は異物を残すことなく通常の状態に回復するため、近年ではほとんどの体内手術においては吸収性縫合糸が用いられるようになっている。
【０００３】
現在使用されている吸収性縫合糸には羊の腸を再生し、コラーゲン部分をアルカリ湿潤状態で練って脱脂してモノフィラメントとした古い伝統をもつカットグットがある。また、腸を再生した縫合糸としてクロミックガットもある。合成品としてはポリエステルの一種であり加水分解性を有するポリグリコール酸を溶融紡糸して細い糸としたポリグリコール酸系合成品（ＰＧＡ系）がある。また、ポリグリコール酸とポリ乳酸との共重合体を繊維化したＰＧＡ−ＰＬＡ共重合系、ポリジオキサノンをモノフィラメントなどにしたものもある（「キチン，キトサンハンドブック」、キチン，キトサン研究会編、技報堂出版株式会社発行、３４３〜３４４頁、１９９５年２月２５日発行；「生体適合材料＜その機能と応用＞」、編著者  筏  義人他、（財）日本規格協会発行、１２２〜１２７頁、１９９３年３月５日発行）。
【０００４】
【発明が解決しようとする課題】
上記のように、生体組織用縫合糸として、適度な張力に耐え、組織障害がなく生物学的適合性がよい縫合糸が求められている。しかしながら、従来から用いられている縫合糸は強度が低いため、術後に縫合不全などを起こしたり、生体組織に対し生体毒性を示し、組織の創傷治癒を妨げるという問題点もある。これまでに、より積極的に創傷治癒を促進するという作用を有する生体組織用縫合糸はなく、創傷治癒を促進させ、より縫合力を高める生体組織用縫合糸が望まれている。本発明は上記問題点を解決するものであり、その目的は、より高い創傷治癒促進作用を有すると共に、より高い組織縫合効果をもつ生体組織用縫合糸を提供することにある。
【０００５】
【課題を解決するための手段】
本発明の請求項１記載のペプチド含有生体組織用縫合糸は、生体組織用縫合糸に下記式〔Ｉ〕
【化２】
0003786501.tif 000002
で示されるペプチドが含有されていることを特徴とする。
【０００６】
本発明の請求項２記載のペプチド含有生体組織用縫合糸は、生体組織用縫合糸が生分解性縫合糸であることを特徴とする請求項１記載のペプチド含有生体組織用縫合糸である。
【０００７】
本発明で用いられる上記ペプチドは、ストレプトマイセス属に属する該ペプチド生産菌株、例えば、放線菌ストレプトマイセス・ノビリス（Streptomyces nobilis、以下「Ｓ．ノビリス」と略記する）を培養し、得られた培養液または同液の乾固物もしくは培養菌体から有機溶剤によって抽出された抽出物を、各種カラムクロマトグラフィーに付し、目的物を含むカラムクロマトグラフィー画分を再結晶処理することにより得られる。
【０００８】
上記ペプチドを生産する放線菌Ｓ．ノビリスは、公的保存機関から入手可能であり、たとえば理化学研究所の保存菌（ＪＣＭ４２７４）（これは米国においてＡＴＣＣ１９２５２およびオランダにおいてＣＢＳ１９８．６５としても保存）などの菌が使用できる。
【０００９】
上記ペプチドを得る方法は、例えば、本発明者らが先に国際出願したＷＯ９６／１２７３２号公報に記載の方法によって得られる。
【００１０】
本発明で用いられる生体組織用縫合糸としては、従来から生体組織用縫合糸として使用されてきたもののいずれも使用可能であり、例えば、ポリエステル系、ポリプロピレン系、ポリアミド系、ポリテトラフルオロエチレン系などの縫合糸やＰＧＡ系縫合糸、ＰＧＡ−ＰＬＡ系縫合糸、ポリジオキサノン系縫合糸、キチン・キトサン系縫合糸などが挙げられるが、特に限定されるものではない。生体組織用縫合糸が生分解性縫合糸である場合には、創傷の癒合後に吸収されるため、体内異物として残存しないことが生体にとって好ましいときに特に適している。生分解性縫合糸としては、羊や牛の腸をよってモノフィラメント状に加工したカットグットやＰＧＡ系縫合糸、ＰＧＡ−ＰＬＡ系縫合糸、ポリジオキサノン系縫合糸、キチン・キトサン系縫合糸などが挙げられるが、生分解性を有する縫合糸であれば特に限定されるものではない。
【００１１】
本発明のペプチド含有生体組織用縫合糸に含有すべき上記ペプチドの量は、特に限定されず広範囲に適宜選択されるが、ペプチド含有生体組織用縫合糸中またはペプチド含有生体組織用縫合糸上に、好ましくは、１０-7〜１０重量％の範囲である。
【００１２】
【作用】
本発明で用いられるペプチドは、肉芽形成作用があり、創傷治癒作用を有すると共に、強い抗菌活性も有することが知られている。このペプチドを生体組織用縫合糸に含有させることにより、より高い創傷治癒促進作用を有すると共に、より高い組織縫合効果をもつ生体組織用縫合糸が得られた。
【００１３】
【発明の実施の形態】
参考例１
理化学研究所から入手した放線菌Ｓ．ノビリス（ＪＣＭ４２７４）を、酵母エキス０．２％（ｗ／ｖ）添加澱粉・アンモニウム培地５０ｍｌを含む５００ｍｌ容坂口スラスコ５本で、２６℃、１５０ｒｐｍ、１２０時間振盪培養（前々培養）した。続いて同培地１２リットルを含む２０リットル容ジャーファメンターに前々培養菌液２４０ｍｌを接種し、２６℃、４１０ｒｐｍ、通気量４リットル／分で２４時間培養（前培養）した。さらに澱粉・アンモニウム培地（蒸留水１００ｍｌ中に可溶性澱粉を１ｇ、リン酸水素二カリウムを０．０５ｇ、塩化アンモニウムを０．０５ｇ含む）１４０リットルを含む２００リットル容ジャーファメンターに、前培養菌液１２リットルを接種し、２６℃、２４時間種培養した。
【００１４】
さらに澱粉・アンモニウム培地１４００リットルを含む２０００リットル容タンクに、種培養菌液１４０リットルを接種し、２６℃、１４０ｒｐｍ、通気量７００リットル／分、ｐＨ７．５で７日間培養した。
【００１５】
培養終了後、濾過により菌体を濾別した。このようにして得られた菌体６．３４ｋｇ（湿重量）のうち、菌体１ｋｇ（湿重量）にジクロロメタン３リットルを加え、室温で１５時間攪拌後、菌体を濾別し、菌体抽出液を得た。菌体については、同操作を３回繰り返した。得られた菌体抽出液を濃縮後、シリカゲル担体１２０ｇに吸着させた。本吸着シリカゲル担体をシリカゲルカラムにより精製した。
【００１６】
シリカゲル担体８００ｇを充填した径８．０ｃｍのカラムに上記抽出物吸着担体約１２０ｇをチャージし、シリカゲルカラムを作成した。このシリカゲルカラムを下記の条件を用いて精製を行なった。溶出溶剤として、ａ）ヘキサン：酢酸エチル＝４：６を４リットル、ｂ）酢酸エチルを３．５リットル、ｃ）メタノールを２リットルを、この順に流速５００ｍｌ／時間で流した。分画は、溶剤組成を変更する毎に行い、特に酢酸エチルの溶出画分は５００ｍｌずつ分画した（従って、酢酸エチルについては、溶出画分数は合計７画分となる）。
【００１７】
上記の各溶出画分について、それぞれ、ＯＤＳ−８０ＴＭ、内径４．６ｍｍ×長さ２５．０ｃｍの東ソー社製のカラムを用いたＨＰＬＣ（日立社製、ポンプＬ−６０００、Ｌ−６２００、検出器Ｌ−３０００、カラムオーブン６５５Ａ−５２）によって、検出波長２１０ｎｍ、カラム温度４０℃、流速１ｍｌ／分の条件で、溶離液として水：アセトニトリル＝３：７を用いて、純度を確認した。
【００１８】
上記のＨＰＬＣによる純度確認において、リテンションタイムが１２〜１５分で溶出されるピーク面積が、全溶出ピーク面積の８０％以上を占めることが確認されたシリカゲルカラム溶出画分を合わせ、同一画分とした。本画分を濃縮乾固後、メタノール−ジクロロメタン系を用いて繰り返し再結晶を行い、柱状結晶３．５ｇを得た。
【００１９】
この物質の構造は、種々の機器分析データよりＷＯ９６／１２７３２号公報に記載された物質と同一であり、式〔Ｉ〕であると決定した。
【００２０】
構造分析データ
上記で得られた物質の機器分析データを以下に示す。
【００２１】
0003786501.tif 000003
【００２２】
0003786501.tif 000004
【００２３】
３．アミノ酸分析
加水分解物としてＤ−セリン、Ｌ−アラニンおよびＤ−Ｎ−メチル−フェニルアラニンが認められた。
【００２４】
（実施例１）
参考例１で得られたペプチド１００ｍｇをエタノール（ナカライテスク社製）５０ｍｌに溶解した。ＰＧＡ系縫合糸であるＤａｖｉｓ＆Ｇｒｅｃｋ社製、商品名「Ｄｅｘｏｎ」の１．０ｇをこの溶液に浸漬した後、取り出した。風乾後、上記縫合糸の重量増加は５ｍｇであった。
【００２５】
（実施例２）
参考例１で得られたペプチド１００ｍｇをエタノール（ナカライテスク社製）５０ｍｌに溶解した。ＰＧＡ系縫合糸であるＥｔｈｉｃｏｎ社製、商品名「Ｖｉｃｒｙｌ」の１．０ｇをこの溶液に浸漬した後、取り出した。風乾後、上記縫合糸の重量増加は４ｍｇであった。
【００２６】
（実施例３）
参考例１で得られたペプチド１００ｍｇをエタノール（ナカライテスク社製）５０ｍｌに溶解した。ポリジオキサノン系縫合糸であるＥｔｈｉｃｏｎ社製、商品名「ＰＤＳ」の１．０ｇをこの溶液に浸漬した後、取り出した。風乾後、上記縫合糸の重量増加は３ｍｇであった。
【００２７】
（比較例１〜３）
以下の耐抗張力試験のコントロールとしては、参考例１で得られたペプチド溶液に浸漬しなかった生体組織用縫合糸のみを用いた。すなわち、Ｄａｖｉｓ＆Ｇｒｅｃｋ社製、商品名「Ｄｅｘｏｎ」を比較例１、Ｅｔｈｉｃｏｎ社製、商品名「Ｖｉｃｒｙｌ」を比較例２、Ｅｔｈｉｃｏｎ社製、商品名「ＰＤＳ」を比較例３とした。
【００２８】
性能評価
実施例１〜３のペプチド含有生体組織用縫合糸および比較例１〜３の生体組織用縫合糸について、以下の方法により性能評価した。
【００２９】
１０週齢のウイスター系ラットの背部を毛刈りし、背部正中線に垂直な方向にメスで長さ２ｃｍの切創を作成した。各実施例、比較例の縫合糸を用いて、この切創部を等間隔で５ケ所縫合して傷を修復させた。この処置の２週間後にラットを犠牲死させ、切創中央部から左右に１ｃｍ幅の短冊状の皮膚切片を切り取った。レオメーターを用いて切創部の耐抗張力（ｇ／ｃｍ）を測定した。それぞれの実施例および比較例について５匹のラットを用いて行い、耐抗張力（ｇ／ｃｍ）はこれらラットについて得られた値の平均値を取った。結果を表１に示した。
【００３０】
【表１】
0003786501.tif 000005
【００３１】
表１より、実施例１のペプチド含有生体組織用縫合糸を投与した群では、比較例１の生体組織用縫合糸を投与した群よりも、耐抗張力が大きく上昇したことが分かる。実施例２と比較例２、および実施例３と比較例３の関係においても同じことが言える。
【００３２】
【発明の効果】
本発明の請求項１記載の発明の構成は、上記の通りであり、本発明によれば、より高い創傷治癒促進作用を有すると共に、より高い組織縫合効果をもつ生体組織用縫合糸を提供する。
【００３３】
本発明の請求項２記載の発明の構成は、上記の通りであり、本発明によれば、上記と同様の効果を奏するとともに、生体組織用縫合糸が生分解性であるので吸収後癒合部位に異物を残すことがなく、より高い創傷治癒作用を発揮する生体組織用縫合糸を提供する。