(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
構造
0003862747.tif 000006
（式中、Rは-H、-CH3または-C2H5であり；R1およびR2は独立して、-H、-OH、-NH2、-OCH3、-C（CH3）3またはハロゲン原子であり；nは2〜6であり；XおよびX'は独立して、-Nまたは-NO2であり；YおよびY'は独立して、-N、-CHまたは-Hであり；そして二重点線は二重結合または結合なしを表わし；XまたはX'が-Nである場合、YまたはY'は-CHまたは-Nであり且つ二重点線は二重結合であり、そしてXまたはX'が-NO2である場合、YまたはY'は-Hであり且つ二重点線は結合なしであるようにある）を有する化合物。
【請求項２】
XおよびX'が-Nであり、YおよびY'が-CHであり、そしてRが-CH3である請求項1に記載の化合物。
【請求項３】
R1およびR2が-Hであり、nが3である請求項2に記載の化合物。
【請求項４】
R1およびR2が-Hであり、nが2である請求項2に記載の化合物。
【請求項５】
R1およびR2が-OCH3であり、nが3である請求項2に記載の化合物。
【請求項６】
R1およびR2が-OCH3であり、nが2である請求項2に記載の化合物。
【請求項７】
R1およびR2が-OHであり、nが3である請求項2に記載の化合物。
【請求項８】
R1およびR2が-C（CH3）3であり、nが3である請求項2に記載の化合物。
【請求項９】
R1が-Hであり、R2が-OCH3であり、nが3である請求項2に記載の化合物。
【請求項１０】
R1が-Hであり、R2が-C（CH3）3であり、そしてnが3である請求項2に記載の化合物。
【請求項１１】
Xが-Nであり、Yが-CHであり、X'が-Nであり、Y'が-Nであり、Rが-CH3であり、そしてnが3である請求項1に記載の化合物。
【請求項１２】
R1が-Hであり、R2が-Hである請求項11に記載の化合物。
【請求項１３】
R1が-Hであり、R2が-OHである請求項11に記載の化合物。
【請求項１４】
Xが-Nであり、Yが-CHであり、X'が-NO2であり、Y'が-Hであり、Rが-CH3であり、R1が-Hであり、R2が-OCH3であり、そしてnが3である請求項1に記載の化合物。
【請求項１５】
請求項1〜14のいずれか1項に記載の化合物および薬学的に許容しうる担体を含む、腫瘍性細胞増殖の治療のための薬剤組成物。
【請求項１６】
腫瘍性細胞増殖を治療するのに有効な量の請求項1〜14のいずれか1項に記載の化合物で、腫瘍性細胞増殖の治療を必要とする被験者における腫瘍性細胞増殖の治療のための薬剤組成物を製造するための請求項1〜14のいずれか1項に記載の化合物の使用方法。
【請求項１７】
前記量が1μg/kg〜100mg/kgである請求項16に記載の使用方法。
【請求項１８】
請求項1〜14のいずれか1項に記載の化合物によって標識された核酸。
【請求項１９】
試料中の核酸を検出する方法であって、該試料と請求項1〜14のいずれか1項に記載の上記化合物とを、該化合物が該核酸に対して結合可能な条件下で接触させ、蛍光発光を検出し、それによって該試料中の該核酸を検出することを含む上記方法。
【発明の詳細な説明】
発明の背景
最近、高い抗腫瘍活性を示す多数のアクリジンを基礎とする化合物が報告されている。コロディ（Ｃｈｏｌｏｄｙ）Ｗ．Ｍ．ら（１９９０）は、新規の種類の抗腫瘍性薬として５−［（アミノアルキル）アミノ］イミダゾ［４，５，１−ｄｅ］アクリジン−６−オンを記載している（Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．３３：４９〜５２（１９９０））。コロディ，Ｗ．Ｍ．ら（１９９０）はまた、潜在的抗腫瘍性薬として８−置換５−［（アミノアルキル）アミノ］−６Ｈ−ｖ−トリアゾロ［４，５，１−ｄｅ］アクリジン−６−オンを記載している（Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．３３：２８５２〜２８５６（１９９０））。コロディ，Ｗ．Ｍ．ら（１９９２）は、発色団で修飾された抗腫瘍性イミダゾアクリジノンの合成およびネズミ白血病に対するそれらの活性を記載している（Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．３５：３７８〜３８２（１９９２））。カプス（Ｃａｐｐｓ），Ｄ．Ｂ．らは、新規の種類の抗癌薬として２−（アミノアルキル）−５−ニトロピラゾロ［３，４，５−ｋｌ］アクリジンを記載している（Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．３５：４７７０〜４７７８（１９９２））。
上記化合物は、共通の構造的特徴として、（アミノアルキル）アミノ残基を有する一つの側鎖を有する四環式平面発色団を有する。ＤＮＡはこれらの化合物の最初の標的であり、そしてそれらはインターカレーション（intercalation）によってＤＮＡに結合すると考えられる。
二官能性化合物もまた、インターカレーションによってＤＮＡと相互作用するアクリジンおよび他の平面芳香族化合物の能力に基く潜在的抗腫瘍薬として研究されてきた。チェン（Ｃｈｅｎ），Ｔ．Ｋ．ら（１９７８）は、二官能性インターカレーターとしてジアクリジンを研究した（Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．２１：８６８〜８７４（１９７８））。ゴーゲイン（Ｇａｕｇａｉｎ），Ｂ．ら（１９７８）は、エチジウムホモ二量体およびアクリジンエチジウムヘテロ二量体の合成および立体配座性を記載している（Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  １７：５０７１〜５０７８（１９７８））。シンハ（Ｓｉｎｈａ），Ｂ．Ｋ．ら（１９７７）は、ビス（キナルジン）誘導体の合成および抗腫瘍性を記載している（Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．２０：１５２８〜１５３１（１９７７））。ロークス（Ｒｏｑｕｅｓ），Ｂ．Ｐ．ら（１９７９）は、ピリドカルバゾール二量体の抗白血病活性を記載している（Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．２８：１８１１〜１８１５（１９７９））。ペラペラト（Ｐｅｌａｐｒａｔ），Ｄ．ら（１９８０）は、潜在的抗腫瘍薬として７Ｈ−ピリドカルバゾール二量体を記載している（Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．２３：１３３６〜１３４３（１９８０））。ブラナ（Ｂｒａｎａ），Ｍ．Ｆ．ら（１９９３）は、抗腫瘍薬の一つの種類としてビス−ナフタルイミドを記載している（Ａｎｔｉ−Ｃａｎｃｅｒ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｓｉｇｎ  ８：２５７〜２６８（１９９３））。
核酸に対して適当なリンカーによって結合した２個の芳香族環系を有する二官能性インターカレーターの強い結合についての説明は与えられている（カネラキス（Ｃａｎｅｌｌａｋｉｓ），Ｅ．Ｓ．ら、Ｂｉｏｃｈｉｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ａｃｔａ  ４１８：２７７〜２８３（１９７６））。このような化合物はＤＮＡに対して高親和性を示すが、インターカレーションによるＤＮＡとのこの強い結合は、概して、抗腫瘍活性とは無関係であることが分かった。
平面発色団の物理化学的特性、結合鎖の性状（その長さ、剛さおよびイオン化状態）、結合の位置および他の因子などの多数の因子が、ＤＮＡとの結合およびこれらの化合物の生物学的作用に強く影響を及ぼしている。更に、ＤＮＡ結合親和性と細胞障害性との間には直接的相関関係がないことが分かった。
二官能性インターカレーターの群のそれらのインビボ抗腫瘍作用に関する構造−活性関係は不明のままであるので、このような活性を示すであろう構造を予想することは不可能である。僅かな構造的修飾は、薬剤の生物学的性質を激しく変化させることがある。したがって、目的は、高い抗腫瘍活性を有する、特に、特定の腫瘍に対して選択的に向けられる他の化合物を発見することである。
本発明は、新規の種類のアクリジンを基礎とするＤＮＡ二官能性インーカレーター（intercalators）および抗腫瘍性薬としてのそれらの使用に関する。該化合物はまた、ＤＮＡに対して結合した場合に蛍光を発するので、それらはＤＮＡの検出用検定に用いることもできる。
発明の概要
本発明は、構造
0003862747.tif 000002
（式中、Ｒは−Ｈ、−ＣＨ3または−Ｃ2Ｈ5であり；Ｒ１およびＲ２は独立して、−Ｈ、−ＯＨ、−ＮＨ2、−ＯＣＨ3、−Ｃ（ＣＨ3）3またはハロゲン原子であり；ｎは２〜６であり；ＸおよびＸ′は独立して、−Ｎまたは−ＮＯ2であり；ＹおよびＹ′は独立して、−Ｎ、−ＣＨまたは−Ｈであり；そして二重点線は二重結合または結合なしを表わし；ＸまたはＸ′が−Ｎである場合、ＹまたはＹ′は−ＣＨまたは−Ｎであり且つ二重点線は二重結合であり、そしてＸまたはＸ′が−ＮＯ2である場合、ＹまたはＹ′は−Ｈであり且つ二重点線は結合なしであるようにある）
を有する化合物を提供する。
本発明はまた、上記化合物および薬学的に許容しうる担体を含む薬剤組成物を提供する。
本発明は、更に、腫瘍性細胞増殖の治療を必要とする被験者の治療方法であって、腫瘍性細胞増殖を治療するのに有効な量の上記薬剤組成物を該被験者に対して投与することを含む上記方法を提供する。
最後に、本発明は、上記化合物によって標識された核酸および、試料中の核酸を検出する方法であって、該試料と上記化合物とを該化合物が該核酸に対して結合可能な条件下で接触させ、蛍光発光を検出し、それによって試料中の核酸を検出することを含む上記方法を提供する。
【図面の簡単な説明】
図１  対称性発色団化合物の合成の略図。
図２  非対称性発色団化合物の合成の略図。
図３Ａ、３Ｂ、３Ｃおよび３Ｄ  化合物ＷＭＣ−２６およびＷＭＣ−８の細胞障害性（ＧＩ50）の比較。図３Ａは、ＷＭＣ−２６の構造を示す。図３Ｂは、種々の細胞系におけるＷＭＣ−２６の細胞障害性を示す。図３Ｃは、ＷＭＣ−８の構造を示す。図３Ｄは、種々の細胞系におけるＷＭＣ−８の細胞障害性を示す。
図４  結腸腺癌ＨＣＴ−１１６に対する化合物ＷＭＣ−８（□）、ＷＭＣ−１２（◆）、ＷＭＣ−１８（○）、ＷＭＣ−２５（▲）およびＷＭＣ−２６（ｘ）の細胞障害性の比較。
図５  結腸腺癌ＨＣＴ−１１６に対する化合物ＷＭＣ−３５（□）、ＷＭＣ−３６（▲）、ＷＭＣ−３７（△）、ＷＭＣ−３９（■）、ＷＭＣ−４１（＋）およびＷＭＣ−４２
0003862747.tif 000003
の細胞障害性の比較。
発明の詳細な説明
本発明は、構造
0003862747.tif 000004
（式中、Ｒは−Ｈ、−ＣＨ3または−Ｃ2Ｈ5であり；Ｒ１およびＲ２は独立して、−Ｈ、−ＯＨ、−ＮＨ2、−ＯＣＨ3、−Ｃ（ＣＨ3）3またはハロゲン原子であり；ｎは２〜６であり；ＸおよびＸ′は独立して、−Ｎまたは−ＮＯ2であり；ＹおよびＹ′は独立して、−Ｎ、−ＣＨまたは−Ｈであり；そして二重点線は二重結合または結合なしを表わし；ＸまたはＸ′が−Ｎである場合、ＹまたはＹ′は−ＣＨまたは−Ｎであり且つ二重点線は二重結合であり、そしてＸまたはＸ′が−ＮＯ2である場合、ＹまたはＹ′は−Ｈであり且つ二重点線は結合なしであるようにある）
を有する化合物を提供する。
本発明の化合物は、遊離塩基またはそれらの薬学的に許容しうる酸付加塩の形で存在しうる。塩生成に適当な酸の例は、メタンスルホン酸、硫酸、塩酸、リン酸、酢酸、クエン酸、乳酸、アスコルビン酸、マレイン酸等である。好ましい実施態様において、本発明の化合物は、変化しうる程度まで水和されうるトリメタンスルホン酸塩などのメタンスルホン酸塩の形で存在している。
本発明はまた、上記化合物および薬学的に許容しうる担体を含む薬剤組成物を提供する。担体は、製剤の他の成分と相溶性であり且つそれらの受容者にとって有害でないという意味で「許容しうる」ものでなければならない。本化合物は、１種類またはそれ以上の薬学的に許容しうる希釈剤または担体、および場合により、それ自体治療的であってよく本発明の化合物と共力的である任意の他の成分と配合されていてよい。製剤中に存在する化合物の濃度は、担体の選択並びに望まれる結果に依存するであろう。
適当な薬剤担体の例としては、特に、ラクトース、スクロース、デンプン、タルク、ステアリン酸マグネシウム、結晶性セルロース、メチルセルロース、カルボキシメチルセルロース、グリセリン、アルギニン酸ナトリウム、アラビアゴム、散剤、食塩水、水がある。担体の選択は、投与経路に依存するであろう。製剤は、便宜上、単位剤形で与えられることができ、そして当該薬学技術分野において周知の方法により、活性化合物を懸濁液または溶液として、担体または希釈剤、および場合により、１種類またはそれ以上の補助成分、例えば、緩衝剤、着香剤、界面活性剤等と一緒にすることによって製造することができる。
静脈内、筋肉内、皮下または腹腔内投与用に、化合物は、受容者の血液と等張であるのが好ましい滅菌水溶液と混合される。このような製剤は、塩化ナトリウム、グリシン等のような生理学的に適合した物質を含み且つ生理学的条件に適合した緩衝ｐＨを有する水中に固体活性成分を溶解させて水溶液を作成し、そして該溶液を滅菌することによって製造することができる。製剤は、密封アンプルまたはバイアルなどの単位または多用量容器中に存在していてよい。
経口投与用には、製剤は、カプセル剤、錠剤、散剤、顆粒剤または懸濁剤として、慣用的な添加剤、例えば、ラクトース、マンニトール、トウモロコシデンプンまたはジャガイモデンプンと一緒に；結合剤、例えば、結晶性セルロース、セルロース誘導体、アラビアゴム（acacia）、トウモロコシデンプンまたはゼラチンと一緒に；崩壊剤、例えば、トウモロコシデンプン、ジャガイモデンプンまたはカルボキシメチルセルロースナトリウムと一緒に；および滑沢剤、例えば、タルクまたはステアリン酸マグネシウムと一緒に与えられうる。
非経口投与に適した製剤は、便宜上、等張になるのが好ましい活性化合物の滅菌水性製剤を含む。注射用製剤はまた、植物油、合成脂肪酸グリセリド、高級脂肪酸のエステルまたはプロピレングリコールなどの非水性溶媒中に化合物を懸濁させるかまたは乳化させることによって配合することができる。
本発明は、更に、腫瘍性細胞増殖の治療を必要とする被験者の治療方法であって、腫瘍性細胞増殖を治療するのに有効な量の上記薬剤組成物を該被験者に対して投与することを含む上記方法を提供する。
「治療」という用語は、腫瘍性細胞増殖の部分的または全体的阻害並びに腫瘍性細胞の部分的または全体的破壊を包含する。「被験者」という用語は、癌を有すると診断されたヒトまたは動物被験者を包含する。
投与は、経口、肛門、局所静脈内、皮下、筋肉内または腹腔内投与経路などの当業者に知られている手段によって行うことができる。
投与剤形および量は、既知の抗腫瘍治療または予防養生法を参照することにより容易に決定することができる。しかしながら、概して、化合物の投与量は約０．１μｇ／ｋｇ〜約１００ｍｇ／ｋｇの範囲内であろう。実際の用量は、投与経路、治療される個体の薬動学的性質並びに望まれる結果に依存するであろう。
最後に、本発明は、上記化合物によって標識された核酸、および試料中の核酸を検出する方法であって、該試料と上記化合物とを該化合物が該核酸に対して結合可能な条件下で接触させ、蛍光発光を検出し、それによって試料中の核酸を検出することを含む上記方法を提供する。
核酸は、ＤＮＡまたはＲＮＡであってよく、ＤＮＡが好ましい。試料は、核酸を含みうるいずれの試料であってもよい。蛍光発光は、当業者に知られている手段、例えば、倒立様式で操作する共焦点顕微鏡の使用によって検出することができる。
本発明を、発明の理解を助ける具体的な実施例を記載している以下の実験細部に記載するが、これは、いずれにしても、以下の請求の範囲に定義される本発明を制限すると解釈されるべきではない。
実験細部
材料および方法
用いられた溶媒は全て試薬等級であった。試薬は全てアルドリッチ・ケミカルズ（Ａｌｄｒｉｃｈ  Ｃｈｅｍｉｃａｌｓ）からかまたはフルカ（Ｆｌｕｋａ）から得られ、そして与えられたままで用いられた。融点は電熱キャピラリー融点装置で得られて、補正されていない。1Ｈ  ＮＭＲスペクトルは、５００ＭＨｚで操作するバリアン（Ｖａｒｉａｎ）ＶＸＲ−Ｓ分光計で記録された。化学シフトは、内部テストメチルシランから下方磁場のｐｐｍのδ単位として報告されている。用いられたＮＭＲ略号は以下の通りである。ｂｒ（幅広）、ｓ（一重線）、ｄ（二重線）、ｔ（三重線）、ｑｕ（四重線）、ｑｔ（五重線）およびｍ（多重線）。カップリング定数はＨｚで与えられている。原子記号で示された微量分析結果は理論値の±０．４％範囲内である。
化学合成
両方の発色団が同一である本発明の化合物は、図１で示された経路によって製造された。中間体クロロニトロアクリドン２ａ〜ｄは、従来記載されたように（カプス，Ｄ．Ｂ．ら、Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．３５：４７７０〜４７７８（１９９２）；レームステット（Ｌｅｈｍｓｔｅｄｔ），Ｋ．ら、Ｃｈｅｍ．Ｂｅｒｉｃｈｔｅ  ７０：１５２６〜１５３８（１９３７））、またはそれと同様の手順によって製造された。アクリドンを等量の適当なトリアミンと反応させて、ビスニトロアクリドン３を与えた後、それをギ酸およびラニー（Raney）合金と反応させて、最終ビスイミダゾアクリドン４を生成した。
非対称薬物は、図２にしたがって製造された。図１のクロロニトロアクリドン２と過剰のトリアミンとを、一置換生成物５を生成するように反応させた。この物質をイミダゾアクリドン誘導体６に変換するかまたは別のクロロニトロアクリドンと反応させて、非対称ビスアクリドン７を生成した。化合物６を、既知の方法（コロディ，Ｗ．Ｍ．ら、Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．３３：２８５２〜２８５６（１９９０））によって製造されたクロロトリアゾロアクリドンと反応させて化合物８を生成する（「インターカレーター」がＢである場合）かまたはクロロニトロアクリドンと反応させて誘導体８を生成した（「インターカレーター」がＣである場合）。ギ酸およびラニー合金による７の処理は、非対称ビスイミダゾアクリドン８を生成した（「インターカレーター」がＡである場合）。目標化合物４および８は、既知の手順によって上記の付加塩に容易に変換することができる遊離塩基として得られた。
本発明の化合物の合成の詳細な論及は以下の通りである。
２−［（４−ｔ−ブチルフェニル）アミノ］−６−クロロ−３−ニトロ安息香酸（１ｄ）の製造。
２，６−ジクロロ−３−ニトロ安息香酸（４．７２ｇ、０．０２モル）、４−tert−ブチルアニリン（４．４７ｇ、０．０３モル）、炭酸リチウム（１．４８ｇ、０．０２モル）および１−プロパノール（１０ｍＬ）の混合物を撹拌しながら２０時間還流させた。溶媒を蒸発させ、そして残留物に対して水（３０ｍＬ）およびベンゼン（５０ｍＬ）を加えた。混合物を水酸化ナトリウムによって強塩基にし、１時間撹拌した。橙色沈殿を濾過によって集め、ベンゼンおよびエーテルによって洗浄した。乾燥沈殿を水中に溶解させ、希塩酸によって酸性にした。得られた沈殿を集め、そしてアセトン−水から結晶化して、所望の生成物４．５５（６５％）、ｍｐ２０１〜２０４℃を生成した。分析（Ｃ31Ｈ27Ｎ7Ｏ6）Ｃ，Ｈ，Ｎ。
７−ｔ−ブチル−１−クロロ−４−ニトロ−９（１０Ｈ）−アクリジノン（２ｄ）の製造。
３ａ（３．４８５ｇ、０．０１モル）の１，２−ジクロロエタン（４０ｍＬ）中溶液に対して、ＰＯＣｌ3（１５ｍＬ、０．１６モル）を加え、４．５時間還流させた。溶媒を減圧下で除去した。残留物に対して、１，４−ジオキサン−水混合物（８：１）４０ｍＬを加え、濃塩酸によって酸性にし、そして撹拌しながら２時間還流させた。水（１００ｍＬ）を加え、沈殿を濾過によって集め、そしてＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド−水から結晶化して、所望の生成物３．１０６ｇ（９４％）、ｍｐ３００℃より上を生成した。分析（Ｃ31Ｈ27Ｎ7Ｏ6）Ｃ，Ｈ，Ｎ。
ビス（ニトロアクリドン）（３）の製造のための一般的な手順。
２，２′−ビス［４−ニトロ−９（１０Ｈ）−アクリジノン−１−イルアミノ］−Ｎ，Ｎ−ジエチルメチルアミン（３ａ）の製造。
１−クロロ−４−ニトロ−９（１０Ｈ）−アクリドン（１．０９８ｇ、０．００４モル）のジメチルスルホキシド（２０ｍＬ）中懸濁液に対して、トリエチルアミン（１ｍＬ）およびＮ2−メチルジエチレントリアミン（０．２３５ｇ、０．００２モル）を加え、８０℃で２時間撹拌した。水（２００ｍＬ）を加え、水酸化ナトリウム水溶液によって塩基性にし、そして２０分間撹拌した。沈殿を集め、水によって洗浄し、そしてＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド−水から結晶化させて、黄色の３ａ  １．０２１ｇ（８６％）、ｍｐ２６５〜２６７℃を得た。分析（Ｃ31Ｈ27Ｎ7Ｏ6）Ｃ，Ｈ，Ｎ。
３，３′−ビス［７−メトキシ−４−ニトロ−９（１０Ｈ）−アクリジノン−１−イルアミノ］−Ｎ−メチルジプロピルアミン（３ｄ）の製造。
１−クロロ−７−メトキシ−４−ニトロ−９（１０Ｈ）−アクリドン（１．２１８ｇ、０．００４モル）のジメチルスルホキシド（２０ｍＬ）中懸濁液に対して、トリエチルアミン（１ｍＬ）および３，３′−ジアミノ−Ｎ−メチルジプロピルアミン（０．３０５ｇ、０．００２１モル）を加え、８０℃で２時間撹拌した。水（２００ｍＬ）を加え、水酸化ナトリウム水溶液によって塩基性にし、そして２０分間撹拌した。沈殿を集め、水によって洗浄し、そしてＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド−水から結晶化させて、黄色の３ｄ  １．２０ｇ（９３％）、ｍｐ２５６〜２５９℃を得た。分析（Ｃ35Ｈ35Ｎ7Ｏ8）Ｃ，Ｈ，Ｎ。化合物３ｂ、３ｃ、３ｅおよび３ｆは同様の方法で得られた。
３ｂ：収率−８２％、ｍｐ２５４〜２５６℃。分析（Ｃ33Ｈ31Ｎ7Ｏ6）Ｃ，Ｈ，Ｎ。
３ｃ：収率−８８％、ｍｐ２６８〜２７０℃。分析（Ｃ33Ｈ31Ｎ7Ｏ8）Ｃ，Ｈ，Ｎ。
３ｅ：収率−７９％、ｍｐ２７５〜２７８℃。分析（Ｃ33Ｈ31Ｎ7Ｏ8）Ｃ，Ｈ，Ｎ。
３ｆ：収率−７４％、ｍｐ１９９〜２０２℃。分析（Ｃ41Ｈ47Ｎ7Ｏ6）Ｃ，Ｈ，Ｎ。
ビス（イミダゾアクリジノン（４）の製造のための一般的な手順）。ビス（ニトロアクリジノン）誘導体（３ａ〜ｆ）（０．００２モル）、ラニー合金３．０ｇおよび８８％ギ酸（３０ｍＬ）の混合物を激しく撹拌しながら３６時間還流させた。反応混合物に対してＭｅＯＨ（１００ｍＬ）を加え、触媒および無機塩を濾過によって除去し、ＭｅＯＨによって洗浄した。溶媒を減圧下において濾液から除去した。残留物を、メタンスルホン酸のＭｅＯＨ中１％混合物中において木炭と一緒に加熱することによって脱色した。木炭を濾過によって除去した。濾液を濃縮し、そしてアセトンまたはエーテルを加えることによって生成物を沈殿させた。沈殿を濾過によって集め、ＭｅＯＨ−エーテルから再結晶させた。乾燥塩を水中に溶解させ、水酸化ナトリウムによって（４ｅの場合、ＮＨ3水溶液によって）アルカリ性にして遊離塩基を沈殿させ、それを濾過によって集めた。生成物を適当な溶媒混合物から結晶化させた。これらの化合物の物理的データを表１に示す。分析：
４ｂ：1Ｈ  ＮＭＲ（Ｍｅ2ＳＯ−ｄ6）８．９８（ｓ，２Ｈ，Ｃ１−Ｈ），８．７４（ｔ，２Ｈ，Ａｒ−ＮＨ−ＣＨ2−），８．１７（ｄｄ，２Ｈ，Ｃ７−Ｈ），８．１６（ｄ，２Ｈ，Ｃ１０−Ｈ），７．７１（ｍ，２Ｈ，Ｃ９−Ｈ），７．６２（ｄ，２Ｈ，Ｊ＝８．９，Ｃ３−Ｈ），７．３６（ｍ，２Ｈ，Ｃ８−Ｈ），６．５０（ｄ，２Ｈ，Ｊ＝８．９，Ｃ４−Ｈ），３．３６（ｄｔ，４Ｈ，−ＮＨ−ＣＨ2−ＣＨ2−），２．５５（ｔ，４Ｈ，−ＣＨ2−ＣＨ2−ＮＣＨ3−），２．２８（ｓ，３Ｈ，−ＮＣＨ3−），１．９０（ｑｔ，４Ｈ，−ＣＨ2−ＣＨ2−ＣＨ2−）。
４ｂ・３ＣＨ3ＳＯ3Ｈ：1Ｈ  ＮＭＲ（Ｍｅ2ＳＯ−ｄ6）９．３６（ｍ，１Ｈ，−Ｎ+ＨＣＬＨ3−），９．３２（ｓ，２Ｈ，Ｃ１−Ｈ），８．８９（ｂｒ  ｓ，２Ｈ，Ｎ２+−Ｈ），８．３７（ｄ，２Ｈ，Ｃ７−Ｈ），８．３２（ｄｄ，２Ｈ，Ｃ１０−Ｈ），７．９９（ｄ，２Ｈ，Ｊ＝８．９，Ｃ３−Ｈ），７．８９（ｍ，２Ｈ，Ｃ９−Ｈ），７．５４（ｍ，２Ｈ，Ｃ８−Ｈ），６．８８（ｄ，２Ｈ，Ｊ＝８．９，Ｃ４−Ｈ），３．５２（ｔ，４Ｈ，−ＮＨ−ＣＨ2−ＣＨ2−），３．３３（ｍ，２Ｈ，−ＮＨ−ＣＨ2−Ｎ+ＨＣＨ3−），３．２３（ｍ，２Ｈ，−ＮＨ−ＣＨ2−Ｎ+ＨＣＨ3−），２．８６（ｄ，３Ｈ，−Ｎ+ＨＣＨ3−），２．３６（ｓ，９Ｈ，ＣＨ3ＳＯ3-），２．１０（ｍ，４Ｈ，−ＣＨ2−ＣＨ2−ＣＨ2−）。
４ｄ：1Ｈ  ＮＭＲ（Ｍｅ2ＳＯ−ｄ6）８．８５（ｓ，２Ｈ，Ｃ１−Ｈ），８．６９（ｔ，２Ｈ，Ａｒ−ＮＨ−ＣＨ2−），８．００（ｄ，２Ｈ，Ｊ＝８．９，Ｃ１０−Ｈ），７．５３（ｄ，２Ｈ，Ｊ＝３．０，Ｃ７−Ｈ），７．５３（ｄ，２Ｈ，Ｊ＝８．７，Ｃ３−Ｈ），７．２０（ｄｄ，２Ｈ，Ｊm＝３．０，Ｊo＝８．９，Ｃ９−Ｈ），６．３６（ｄ，２Ｈ，Ｊ＝８．７，Ｃ４−Ｈ），３．７９（ｓ，６Ｈ，ＣＨ3Ｏ−Ａｒ），３．３８（ｄｔ，４Ｈ，−ＮＨ−ＣＨ2ＣＨ2−），２．５６（ｔ，４Ｈ，−ＣＨ2−ＣＨ2−ＮＣＨ3−），２．２８（ｓ，３Ｈ，−ＮＣＨ3−），１．９１（ｑｔ，４Ｈ，−ＣＨ2−ＣＨ2−ＣＨ2−）。
４ｄ・３ＣＨ3ＳＯ3Ｈ：1Ｈ  ＮＭＲ（Ｍｅ2ＳＯ−ｄ6）９．３５（ｍ，１Ｈ，−Ｎ+ＨＣＨ3−），９．２６（ｓ，２Ｈ，Ｃ１−Ｈ），８．８５（ｂｒ  ｓ，２Ｈ，Ｎ２+−Ｈ），８．２６（ｄ，２Ｈ，Ｊ＝９．０，Ｃ１０−Ｈ），７．９４（ｄ，２Ｈ，Ｊ＝８．９，Ｃ３−Ｈ），７．６６（ｄ，２Ｈ，Ｊ＝３．０，Ｃ７−Ｈ），７．４４（ｄｄ，２Ｈ，Ｊm＝３．０，Ｊo＝８．９，Ｃ９−Ｈ），６．８２（ｄ，２Ｈ，Ｊ＝８．９，Ｃ９−Ｈ），３．８５（ｓ，６Ｈ，ＣＨ3Ｏ−Ａｒ），３．４８（ｔ，４Ｈ，−ＮＨ−ＣＨ2−ＣＨ2−），３．３４（ｍ，２Ｈ，−ＮＨ−ＣＨ2−Ｎ+ＨＣＨ3−），３．２０（ｍ，２Ｈ，−ＮＨＣＨ2−Ｎ+ＨＣＨ3−），２．８７（ｄ，３Ｈ，−Ｎ+ＨＣＨ3−），２．３５（ｓ，９Ｈ，−ＣＨ3ＳＯ3−），２．１０（ｍ，４Ｈ，−ＣＨ2−ＣＨ2ＣＨ2−）。
４ｆ：1Ｈ  ＮＭＲ（Ｍｅ2ＳＯ−ｄ6）８．９９（ｓ，２Ｈ，Ｃ１−Ｈ），８．７６（ｔ，２Ｈ，Ａｒ−ＮＨ−ＣＨ2−），８．２０（ｄ，２Ｈ，Ｊ＝２．４，Ｃ７−Ｈ），８．１２（ｄ，２Ｈ，Ｊ＝８．５，Ｃ１０−Ｈ），７．８２（ｄｄ，２Ｈ，Ｊm＝２．４，Ｊo＝８−５，Ｃ９−Ｈ），７．６２（ｄ，２Ｈ，Ｊ＝８．７，Ｃ３−Ｈ），６．５０（ｄ，２Ｈ，Ｊ＝８．７，Ｃ４−Ｈ），３．３６（ｄｔ，４Ｈ，−ＮＨ−ＣＨ2−ＣＨ2−），２．５４（ｔ，４Ｈ，−ＣＨ2ＣＨ2−ＮＣＨ3−），２．２７（ｓ，３Ｈ，−ＮＣＨ3−），１．８９（ｑｔ，４Ｈ，−ＣＨ2−ＣＨ2−ＣＨ2−），１．２９（ｓ，１８Ｈ，（ＣＨ3）3Ｃ−Ａｒ）。
１−［３−［Ｎ−（３−アミノプロピル）メチルアミノ］プロピル］アミノ−４−ニトロ−９（１０Ｈ）アクリジノン（５ａ）の製造。
１−クロロ−４−ニトロ−９（１０Ｈ）−アクリドン（２．７４７ｇ、０．０１モル）のジメチルスルホキシド（５０ｍＬ）中懸濁液に対して、３，３′−ジアミノ−Ｎ−メチルジプロピルアミン（５．８１ｇ、０．０４モル）を加え、室温で２時間撹拌した。水（２００ｍＬ）を加え、１０分間撹拌した。沈殿を濾過によって集め、水によって洗浄した。次に、それを水（１００ｍＬ）中に入れ、塩酸によって酸性にし、そして１５分間撹拌した。不溶物質を濾過によって分離した。溶液を水酸化ナトリウムによって塩基性にし、そしてクロロホルムによって生成物を抽出した。抽出物を乾燥させ、溶媒を蒸発させ、そして粗生成物をベンゼン−ヘキサンから結晶化させて、黄色の５ａ  ３．１ｇ（８１％）、ｍｐ１０９〜１１１℃を生成した。
分析（Ｃ20Ｈ25Ｎ5Ｏ3）Ｃ，Ｈ，Ｎ。1Ｈ  ＮＭＲ（Ｍｅ2ＳＯ−ｄ6）１１．８６（ｂｒ  ｓ，１Ｈ，Ｎ１０−Ｈ），８．３６（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝８．８，Ｃ３−Ｈ），８．２０（ｄｄ，１Ｈ，Ｃ８−Ｈ），７．９４（ｄ，１Ｈ，Ｃ５−Ｈ），７．７７（ｍ，１Ｈ，Ｃ６−Ｈ），７．４０（ｍ，１Ｈ，Ｃ７−Ｈ），６．５８（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝８．８，Ｃ２−Ｈ），３．４８（ｔ，２Ｈ，−ＮＨ−ＣＨ2−ＣＨ2−），２．５５（ｍ，２Ｈ，−ＣＨ2−ＣＨ2−ＮＨ2−），２．４２（ｔ，２Ｈ，−ＣＨ2−ＣＨ2−ＮＣＨ3−），２，３４（ｔ，２Ｈ，−ＮＣＨ3−ＣＨ2−ＣＨ2−），２．１６（ｓ，３Ｈ，−ＮＣＨ3−），１．８２（ｑｔ，２Ｈ，−ＣＨ2−ＣＨ2−ＣＨ2−），１．５０（ｑｔ，２Ｈ，−ＣＨ2−ＣＨ2ＣＨ2−）。化合物５ｂは同様の方法で得られた。収率８２％、ｍｐ１４０〜１４２℃。分析（Ｃ21Ｈ27Ｎ5Ｏ3）Ｃ，Ｈ，Ｎ。
５−［３−［Ｎ−（３−アミノプロピル）メチルアミノ］プロピル］アミノ−６Ｈ−イミダゾ［４，５，１−ｄｅ］アクリジン−６−オン（６ａ）の製造。
５ａ（１．５３４ｇ、０．００４モル）、ラニー合金３．０ｇおよび９６％ギ酸（４０ｍＬ）の混合物を激しく撹拌しながら２４時間還流させた。反応混合物に対してＭｅＯＨ（１００ｍＬ）を加え、触媒および無機塩を濾過によって除去し、ＭｅＯＨによって洗浄した。溶媒を減圧下において濾液から除去した。残留物に対して、ＭｅＯＨ−水（１：１）混合物１００ｍＬおよび濃塩酸３ｍＬを加え、溶液を６時間還流させた。溶媒を減圧下で蒸発させた。残留物をＭｅＯＨ中に溶解させ、塩化水素によって酸性にした。アセトンを加えることによって生成物を沈殿させ、濾過によって集め、そしてＭｅＯＨ−エーテルから結晶化させた。乾燥塩を水中に溶解させ、水酸化ナトリウムによってアルカリ性にして遊離塩基の油状沈殿を生成し、それをクロロホルムによって抽出した。抽出物を乾燥させ、溶媒を蒸発させ、そして生成物をベンゼン−ヘキサンから結晶化させて、黄色の６ａ  ０．９８８ｇ（６８％）、ｍｐ９７〜９９℃を生成した。
分析（Ｃ21Ｈ25Ｎ5Ｏ）Ｃ，Ｈ，Ｎ。1Ｈ  ＮＭＲ（Ｍｅ2ＳＯ−ｄ6）９．２１（ｓ，１Ｈ，Ｃ１−Ｈ），８．９１（ｔ，１Ｈ，−ＮＨ−ＣＨ2−），８．４２（ｍ，１Ｈ，Ｃ７−Ｈ），８．３９（ｍ，１Ｈ，Ｃ１０−Ｈ），８．００（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝８．８，Ｃ３−Ｈ），７．９３（ｍ，１Ｈ，Ｃ９−Ｈ），７．５９（ｍ，１Ｈ，Ｃ８−Ｈ），６．８５（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝８．８，Ｃ４−Ｈ），３．４５（ｔ，２Ｈ，−ＮＨ−ＣＨ2−ＣＨ2−），２．６１（ｔ，２Ｈ，−ＣＨ2−ＣＨ2−ＮＨ2），２．４３（ｔ，２Ｈ，−ＣＨ2−ＣＨ2−ＮＣＨ3−），２．３４（ｔ，２Ｈ，−ＮＣＨ3−ＣＨ2−ＣＨ2−），２．１７（ｓ，３Ｈ，−ＮＣＨ3−），１．８３（ｑｔ，２Ｈ，−ＣＨ2−ＣＨ2−ＣＨ2−），１．５１（ｑｔ，２Ｈ，−ＣＨ2−ＣＨ2ＣＨ2−）。
３−［７−メトキシ−４−ニトロ−９（１０Ｈ）−アクリジノン−１−イルアミノ］−３′−［４−ニトロ−９（１０Ｈ）アクリジノン−１−イルアミノ］−Ｎ−メチルジプロピルアミン（７ａ）の製造。
５ａ（０．７６８ｇ、０．００２モル）、１−クロロ−７−メトキシ−４−ニトロ−９（１０Ｈ）−アクリジノン（０．６１０ｇ、０．００２モル）、ジメチルスルホキシド（２０ｍＬ）およびトリエチルアミン（１ｍＬ）の混合物を７０℃で４時間撹拌した。反応混合物に対して水（２００ｍＬ）を加え、水酸化カリウムによってアルカリ性にし、そして１０分間撹拌した。沈殿を濾過によって集め、水によって洗浄した。粗生成物をＤＭＦ−水から結晶化させて、橙色の７ａ  １．２０ｇ（８６％）、ｍｐ１９２〜１９５℃を生成した。
分析（Ｃ34Ｈ33Ｎ7Ｏ7）Ｃ，Ｈ，Ｎ。1Ｈ  ＮＭＲ（Ｍｅ2ＳＯ−ｄ6）１２．１５（ｓ，１Ｈ，Ｎ１０−Ｈ），１２．０８（ｓ，１Ｈ，Ｎ１０−Ｈ），１１．７３（ｓ，１Ｈ，−ＮＨ−ＣＨ2−），１１．６１（ｓ，１Ｈ，−ＮＨ−ＣＨ2−），８．１１（ｄ，１Ｈ），８．０１（ｄ，１Ｈ），７．５５（ｍ，３Ｈ），７．２４（ｍ，１Ｈ），７．１９（ｍ，１Ｈ），７．０９（ｍ，１Ｈ），６．２７（ｄ，１Ｈ），６．１９（ｄ，１Ｈ），３．７２（ｓ，３Ｈ，−ＯＣＨ3），３．３７（ｍ，４Ｈ），２．５５（ｍ，４Ｈ），２．２５（ｓ，３Ｈ，−ＮＣＨ3−），１．８８（ｑｔ，４Ｈ，ＣＨ2−ＣＨ2−ＣＨ2−）。
３−［６Ｈ−イミダゾ［４，５，１−ｄｅ］アクリジン−６−オン−５−イルアミノ］−３′−［８−メトキシ−６Ｈ−イミダゾ［４，５，１−ｄｅ］アクリジン−６−オン−５−イルアミノ］−Ｎ−メチルジプロピルアミン（８ａ）の製造。
この化合物は、ビスイミダゾアクリジノン４の製造の一般的な手順にしたがって製造された。
分析：1Ｈ  ＮＭＲ（Ｍｅ2ＳＯ−ｄ6）：非置換発色団  ８．９６（ｓ，１Ｈ，Ｃ１−Ｈ），８．７５（ｔ，１Ｈ，−ＮＨ−ＣＨ2−），８．１７（ｄｄ，１Ｈ，Ｃ７−Ｈ），８．１６（ｄ，１Ｈ，Ｃ１０−Ｈ），７．７２（ｍ，１Ｈ，Ｃ９−Ｈ），７．６７（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝８．８，Ｃ３−Ｈ），７．３８（ｍ，１Ｈ，Ｃ８−Ｈ），６．５１（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝８．８，Ｃ４−Ｈ）；８−メトキシ発色団  ８．８７（ｓ，１Ｈ，Ｃ１−Ｈ），８．６６（ｔ，１Ｈ，−ＮＨ−ＣＨ2−），８．００（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝９．０，Ｃ１０−Ｈ），７．５１（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝３．０，Ｃ７−Ｈ），７．４６（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝８．９，Ｃ３−Ｈ），７．１７（ｄｄ，１Ｈ，Ｊm＝３．０，Ｊo＝９−０，Ｃ９−Ｈ），６．３２（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝８．９，Ｃ４−Ｈ），３．７５（ｓ，３Ｈ，−ＯＣＨ3；脂肪族プロトン  ３．３５（ｍ，２Ｈ，−ＮＨ−ＣＨ2−ＣＨ2−），３．２８（ｍ，２Ｈ，−ＮＨ−ＣＨ2−ＣＨ2−），２．５５（ｍ，４Ｈ，−ＣＨ2−ＣＨ2−ＮＣＨ3−），２．２８（ｓ，３Ｈ，−ＮＣＨ3−），１．９０（ｍ，４Ｈ，−ＣＨ2−ＣＨ2ＣＨ2−）。
３−［８−ヒドロキシ−６Ｈ−ｖ−トリアゾロ［４，５，１−ｄｅ］アクリジン−６−オン−５−イルアミノ］−３′−［６−Ｈ−イミダゾ［４，５，１−ｄｅ］アクリジン−６−オン−５−イルアミノ］−Ｎ−メチルジプロピルアミン（８ｄ）の製造。
６ａ（０．３６４ｇ、０．００１モル）、５−クロロ−８−ヒドロキシ−６−Ｈ−ｖ−トリアゾロ［４，５，１−ｄｅ］アクリジン−６−オン（０．２７２ｇ、０．００１モル）、ジメチルスルホキシド（８ｍＬ）およびトリエチルアミン（１ｍＬ）の混合物を７０℃で１２時間撹拌した。反応混合物に対して水（１００ｍＬ）を加え、沈殿を濾過によって集め、そして水によって洗浄した。粗生成物をＤＭＦ−水から結晶化させて、黄色の８ｄを生成した。
分析：1Ｈ  ＮＭＲ（Ｍｅ2ＳＯ−ｄ6）：イミダゾアクリドン発色団  ８．９３（ｓ，１Ｈ，Ｃ１−Ｈ），８．７３（ｔ，１Ｈ，−ＮＨ−ＣＨ2−），８．１３（ｄｄ，１Ｈ，Ｃ７−Ｈ），８．０９（ｄ，１Ｈ，Ｃ１０−Ｈ），７．６６（ｍ，１Ｈ，Ｃ９−Ｈ），７．６５（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝８．８，Ｃ３−Ｈ），７．３１（ｍ，１Ｈ，Ｃ８−Ｈ），６．５３（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝８．８，Ｃ４−Ｈ）；トリアゾロアクリドン発色団  １０．１７（ｂｒ  ｓ，１Ｈ，Ｃ８−Ｈ），９．１８（ｔ，１Ｈ，−ＮＨ−ＣＨ2−），８．０７（ｄ，１Ｈ，Ｃ１０−Ｈ），７．８２（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝９．２，Ｃ３−Ｈ），７．５５（ｄ，１Ｈ，Ｃ７−Ｈ），７．２３（ｄｄ，１Ｈ，Ｃ９−Ｈ），６．７１（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝９．２，Ｃ４−Ｈ）；脂肪族プロトン  ３．４５（ｄｔ，２Ｈ，−ＮＨ−ＣＨ2−ＣＨ2−），３．３６（ｄｔ，２Ｈ，−ＮＨ−ＣＨ2−ＣＨ2−），２．５５（ｍ，４Ｈ，−ＣＨ2−ＣＨ2−ＮＣＨ3−），２．２９（ｓ，３Ｈ，−ＮＣＨ3−），１．９０（ｑｔ，４Ｈ，−ＣＨ2−ＣＨ2−ＣＨ2−）。
３−［６Ｈ−イミダゾ［４，５，１−ｄｅ］アクリジン−６−オン−５−イルアミノ］−３′−［７−メトキシ−４−ニトロ−９（１０Ｈ）−アクリジノン−１−イルアミノ］−Ｎ−メチルジプロピルアミン（８ｅ）の製造。
この化合物は、６ａを５ａの代わりに用いたこと以外は７ａの製造について記載されたのと同様の方法で製造された。
コロニー生存検定
ヒト結腸癌細胞系ＨＣＴ−１１６（スケハン（Ｓｋｅｈａｎ），Ｐ．ら、Ｊ．Ｎａｔ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｉｎｓｔ．８２：１１０７〜１１１２（１９９０））は、アメリカン・タイプ・カルチャー・コレクション（Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｔｙｐｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ）（ロックビル、ＭＤ）から得られた。細胞を、１０％ウシ胎児血清を含むダルベッコ最小必須培地中において５％  ＣＯ2雰囲気中の３７℃でおよび完全湿度で慣例的に培養した。
検定は、単一細胞懸濁液を低密度で６ウェル培養皿中に播種すること、およびそれらを２４時間付着させ且つ増殖させることから成る。次に、化合物を、ＤＭＳＯ、食塩水または水中のストック溶液から種々の濃度で加え、そしてインキュベーター中において１時間反応させた。次に、細胞をリンスし、そして新鮮な培地を加え；４日ごとに培地を取替えながらコロニーを１週間増殖させた。ウェルをリンスし、細胞をメタノール中で固定し、そして標準法にしたがって１％クリスタルバイオレットによって染色した。
３０個より多数の細胞を含むコロニーを生存コロニーとして評点した。生存コロニーは、ストック希釈剤のみを与えられるが化合物は不含である対照コロニーの百分率として評価された。
結果
試験された本発明の化合物（ＷＭＣ番号によって示された構造）はいずれも、インビトロおよびインビボ両方で強い抗腫瘍活性を示した。６０種類のヒト腫瘍細胞系に対する細胞障害性についての標準的なＮＣＩインビトロ検定（スケハン，Ｐ．ら、Ｊ．Ｎａｔ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｉｎｓｔ．８２：１１０７〜１１１２（１９９０）；ボイド（Ｂｏｙｄ），Ｍ．Ｒ．ら、Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ  Ｏｎｃｏｌ．３：１〜１２（１９８９））は、少なくとも１個の非置換（Ｒ１＝Ｈ）イミダゾアクリドン環系と、６メチレン単位を有するリンカーとを含む化合物が、結腸腫瘍系に対する有意の選択性を示すことを示した。図３Ａ〜３Ｄは、両方の発色団が非置換（Ｒ1＝Ｈ）である化合物ＷＭＣ−２６およびその近似したジメトキシ（Ｒ1＝ＯＣＨ3）類似体ＷＭＣ−８のＧＩ50データの比較を示す。結腸腫瘍に対する選択毒性は、非置換発色団に起因するものであり、結腸腺癌ＨＣＴ−１１６についてのインビトロコロニー生存検定で確証された（図４および５を参照されたい）。化合物ＷＭＣ−２６の並外れた活性は注目されるべきであり、この腫瘍のＴ／Ｃ値はナノモルの範囲内である。これらの化合物のいくつかの高い細胞障害性にもかかわらず、ヌードマウスでの急性毒性は中程度であった。例えば、化合物ＷＭＣ−２６は、全用量６００ｍｇ／ｋｇに対して３日間連続して投与される２００ｍｇ／ｋｇ／日の用量で耐性であった。
本発明の化合物のほとんど全部は高度に蛍光性である。これらの化合物を培養中の生細胞に加えた場合、蛍光は細胞質を介して極めて急速に細胞核中へ転移する。これは、倒立様式で操作する共焦点顕微鏡を用いて最もよく可視化される。生細胞の核の強い蛍光染色により、本化合物は細胞周期進行中のクロマチン組織およびＤＮＡの挙動を研究するための生体染色剤として用いることができる、ということが示唆される。更に高い用量およびＷＭＣ−２６などの化合物に対する更に長い暴露は、細胞核のアポトーシス形態を生じた。したがって、これらの化合物は、アポトーシスの際のクロマチン組織の研究においても用いることができる。
本明細書中上述の全ての刊行物は本明細書中に参考文献としてそのまま援用される。
前述の発明は、明確にし且つ理解するためにある程度詳細に記載されたが、添付する請求の範囲における本発明の真の範囲から逸脱することなく、形式および詳細の種々の変更を行うことができることは、本開示を読むことによって当業者に理解されるであろう。
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【図１】
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【図２】
0003862747.tif 000008
【図３Ａ】
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【図３Ｃ】
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【図３Ｂ】
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【図３Ｄ】
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【図４】
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【図５】
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