(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
有機酸の存在下で、無機カルシウム塩及び／又は有機酸カルシウム塩、無機リン酸塩、ホスホペプチドを混合し、pHを 5.5以上に調整することにより得られる、カルシウムとホスホペプチドとがミセル状の複合体を形成しており、かつカルシウム含量が８％以上であることを特徴とする高分子型カルシウム・ホスホペプチド複合体。
【請求項２】
有機酸の存在下で、無機カルシウム塩及び／又は有機酸カルシウム塩、無機リン酸塩、ホスホペプチドを混合し、pHを 5.5以上に調整することによって、カルシウムとホスホペプチドとのミセル状の複合体を形成させることを特徴とするカルシウム含量が８％以上である高分子型カルシウム・ホスホペプチド複合体の製造法。
【請求項３】
無機カルシウム塩及び／又は有機酸カルシウム塩、無機リン酸塩、ホスホペプチドのモル比が、10：１〜20：１〜20になるよう混合することを特徴とする請求項２記載の高分子型カルシウム・ホスホペプチド複合体の製造法。
【請求項４】
請求項２又は３記載の製造過程にて、さらにカルシウム塩とマグネシウム塩のモル比が、50:1〜50になるように無機マグネシウム塩及び／又は有機マグネシウム塩を添加することを特徴とする高分子型カルシウム・ホスホペプチド複合体の製造法。
【請求項５】
複合体を形成させた後、凍結乾燥又は噴霧乾燥により粉末化する請求項２乃至４のいずれかに記載の高分子型カルシウム・ホスホペプチド複合体の製造法。
【請求項６】
請求項１記載の高分子型カルシウム・ホスホペプチド複合体を有効成分とするカルシウム剤。
【請求項７】
請求項１記載の高分子型カルシウム・ホスホペプチド複合体を配合してカルシウムを強化した医薬、飲食品又は飼料。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は、カルシウムとホスホペプチドとが複合体を形成している高分子型カルシウム・ホスホペプチド複合体に関する。また、本発明は、無機カルシウム塩及び／又は有機酸カルシウム塩、無機リン酸塩、ホスホペプチドを混合し、あるpH条件で、カルシウムとホスホペプチドとの複合体を形成させる高分子型カルシウム・ホスホペプチド複合体の製造法に関する。さらに、本発明は、このような高分子型カルシウム・ホスホペプチド複合体のカルシウム剤としての利用、あるいは、カルシウム強化医薬、飲食品又は飼料への利用に関する。
本発明の高分子型カルシウム・ホスホペプチド複合体は、カルシウムの生体内での吸収性や利用性に優れているという特徴を有すると共に、中性域のpHで水可溶性であり、粉末化しても溶解性が良好であるという特徴を有するので、カルシウム剤として、種々の医薬、飲食品、飼料等に利用することができる。
【０００２】
【従来の技術】
近年、人口の高齢化に伴い、骨粗鬆症、骨折、あるいは腰痛等、種々の骨疾患を患う者が増加する傾向にある。これは、カルシウムの摂取量不足やカルシウムの吸収能力低下、あるいは閉経後のホルモンのアンバランス等が原因であるといわれている。このような高齢化に伴う骨疾患を予防するには、成長期から老年期にかけての全てのライフステージにおいて、生体内での吸収性の良好なカルシウムをできるだけ多く摂取する必要があるといわれているが、その一方では日本人の平均的な食習慣では、十分な量のカルシウムを摂取することは非常に難しいとされており、我が国におけるカルシウムの摂取量は、厚生省の国民栄養調査にも示されているように、ここ20年間横ばい状態で所要量を満たしていない現状にある。
【０００３】
このような状況から、カルシウムの摂取量をできるだけ増加させようとする種々の試みがなされており、例えば炭酸カルシウム、リン酸カルシウム、乳酸カルシウム、グルコン酸カルシウム等のカルシウム塩や牛骨、卵殻、サンゴ、ウニ殻等から精製した天然カルシウム、あるいは乳由来のカルシウム等を有効成分とするカルシウム剤、そしてこれらのカルシウム剤を配合してカルシウムを強化した飲食品等が実用化されるに至っている。上記した炭酸カルシウム、リン酸カルシウム、乳酸カルシウム、グルコン酸カルシウム等のカルシウム塩や牛骨、卵殻、サンゴ、ウニ殻等から精製した天然カルシウム等は、生体内での吸収性や利用性は劣るものの、安価で大量に入手できるという利点を有している。また、乳由来のカルシウムについては、特に生体内での吸収性や利用性に優れているという報告がなされている（日本栄養・食糧学会誌, vol.43, pp.437-443, 1990；応用薬理, vol.42, pp.245-253, 1991) 。また、乳由来のカルシウム中、約70％を占めるといわれているカゼイン結合性カルシウム及びコロイド状カルシウムが、乳由来の他のカルシウムに比べ、生体内での吸収性や利用性に優れているという報告がなされている(Nutr. Rep. Int., vol.21, p.6738, 1980) 。
【０００４】
さらに、本発明者らは、カゼイン結合性カルシウム及びコロイド状カルシウムを有効成分とする乳由来のカルシウム剤を提案し（特開平6-125740号公報）、この乳由来のカルシウム剤が、生体内での利用性に特に優れているということも報告した（日本栄養・食糧学会誌, vol.47, pp.385-390, 1994) 。
しかし、さらに、研究を進めたところ、カゼイン結合性カルシウム及びコロイド状カルシウムを有効成分とする乳由来のカルシウム剤は、炭酸カルシウム、リン酸カルシウム、乳酸カルシウム、グルコン酸カルシウム等のカルシウム塩や牛骨、卵殻、サンゴ、ウニ殻等から精製した天然カルシウム等に比べ、生体内での吸収性や利用性に優れているという特徴を有しているものの、中性域のpHでは水不溶性のカルシウムとなり、牛乳の形態でカルシウムを摂取するよりも生体内での吸収性や利用性の点で劣ることが判明した。すなわち、生体におけるカルシウム吸収の中心部位である小腸のpHは中性域であるため、カゼイン結合性カルシウム及びコロイド状カルシウムを有効成分とする乳由来のカルシウム剤は、水不溶性のカルシウム塩を形成し、その結果、牛乳の形態でカルシウムを摂取する場合よりも吸収効率が低下する。
【０００５】
また、カゼイン結合性カルシウム及びコロイド状カルシウムを有効成分とする乳由来のカルシウム剤については、保存性を高める目的で、噴霧乾燥や凍結乾燥等の処理により粉末化される。しかし、この粉末化されたカゼイン結合性カルシウム及びコロイド状カルシウムを有効成分とする乳由来のカルシウム剤は、中性域のpHで溶解性が悪く、このカルシウム剤を各種飲料やドリンク剤等に配合した場合、カルシウムが液面に浮上したり、強制撹拌等によりカルシウムを分散させても沈澱を生じるといった問題があった。
【０００６】
【発明が解決しようとする課題】
本発明者らは、飲食品等にも配合することができる生体内での吸収性及び利用性の高いカルシウム剤を求め、研究開発を進める中で、上述したカゼイン結合性カルシウム及びコロイド状カルシウムを有効成分とする乳由来のカルシウム剤の欠点、すなわち、中性域のpHで水不溶性となったり、粉末の溶解性が劣るという問題を解決するべく、鋭意研究を行ってきた。その結果、あるpH条件で、無機カルシウム塩や有機酸カルシウム塩に無機リン酸塩を加え、さらに有機酸を加えて調製した溶液に、ホスホペプチドを加えて混合することにより、カルシウムとホスホペプチドとが複合体を形成することを見出した。この複合体は、中性域のpHでも水可溶性であり、また、粉末化しても溶解性が良好であり、さらに、生体内での吸収性及び利用性も高く、医薬、飲食品及び飼料等に配合するカルシウム剤として非常に優れているということを見出し、本発明を完成するに至った。したがって、本発明は、中性域のpHで水可溶性であり、粉末としても溶解性が良好であって、かつ生体内での吸収性及び利用性が優れている新規な高分子型カルシウム・ホスホペプチド複合体及びその製造法を提供することを課題とする。また、本発明は、このような性質を有する高分子型カルシウム・ホスホペプチド複合体を有効成分とするカルシウム剤、あるいは、このような性質を有する高分子型カルシウム・ホスホペプチド複合体を配合してカルシウムを強化した医薬、飲食品及び飼料を提供することを課題とする。
【０００７】
【課題を解決するための手段】
本発明は、カルシウムとホスホペプチドとが複合体を形成している高分子型カルシウム・ホスホペプチド複合体に関する。この複合体は、例えば無機カルシウム塩や有機酸カルシウム塩に無機リン酸塩を加え、さらに、有機酸を加えて調製した溶液に、ホスホペプチドを加えて混合し、pHを 5.5以上に調整することにより得ることができる。また、本発明は、無機カルシウム塩及び／又は有機酸カルシウム塩、無機リン酸塩、ホスホペプチドを混合し、pHを 5.5以上に調整して、カルシウムとホスホペプチドとの複合体を形成させる高分子型カルシウム・ホスホペプチド複合体の製造法に関する。このようにして製造された複合体は、液状であるので、膜処理して脱塩濃縮しても良いし、また、凍結乾燥や噴霧乾燥して粉末化しても良い。さらに、本発明は、このような高分子型カルシウム・ホスホペプチド複合体を有効成分とするカルシウム剤、あるいは、このような高分子型カルシウム・ホスホペプチド複合体を配合してカルシウムを強化した医薬、飲食品又は飼料に関する。
【０００８】
本発明では、(1) 炭酸カルシウム、塩化カルシウム、第一リン酸カルシウム、第二リン酸カルシウム、第三リン酸カルシウム、硫酸カルシウム等の無機カルシウム塩及び／又はクエン酸カルシウム、グルコン酸カルシウム、乳酸カルシウム等の有機酸カルシウム塩、(2) 第一リン酸カリウム、第二リン酸カリウム、第三リン酸カリウム、第一リン酸ナトリウム、第二リン酸ナトリウム、第三リン酸ナトリウム、第一リン酸カルシウム、第二リン酸カルシウム、第三リン酸カルシウム等の無機リン酸塩、(3) 牛乳、山羊乳、水牛乳、羊乳等の哺乳動物の乳中のカゼインから調製したリン酸基を有するアミノ酸を含有する蛋白質や卵黄由来の蛋白質であるホスビチン等をトリプシン等の蛋白質分解酵素で加水分解することにより得られるペプチド、ホスホセリン、ホスホスレオニン、ホスホヒスチジン等のホスホペプチド、(4) 必要に応じて、酢酸、乳酸、クエン酸等の有機酸やそれらの塩を混合し、pHを 5.5以上に調整して、カルシウムとホスホペプチドとの複合体を形成させ、高分子型カルシウム・ホスホペプチド複合体を得る。なお、有機酸やそれらの塩を加えることは、必ずしも必要ではないが、溶液中のカルシウムの安定性を維持するために、有機酸やそれらの塩を加えることが望ましい。
【０００９】
本発明では、リン酸基を有するアミノ酸を含有するペプチドをホスホペプチドと称する。
従来より、カゼインホスホペプチド等のホスホペプチドが知られており、例えば、カルシウムとカゼインホスホペプチドとを結合させたカルシウム−カゼインホスホペプチド調製物等が提案されている（特開平8-242773号公報）が、このカルシウム−カゼインホスホペプチド調製物等では、カルシウム−ホスホペプチドの単量体として存在しており、牛乳中に見られるようなミセル状の複合体は形成されておらず、しかもカルシウム含量が５〜８％と低いものとなっているのに対し、本発明の高分子型カルシウム・ホスホペプチド複合体では、ミセル状の複合体が形成されており、しかもカルシウム含量が８％以上と高いものとなっている。したがって、本発明の高分子型カルシウム・ホスホペプチド複合体は、従来より知られているカルシウム−カゼインホスホペプチド調製物等のカルシウム−ホスホペプチドとは、全く異なる物質である。
【００１０】
乳中のカゼインからホスホペプチドを調製する方法について例示すると、全乳や脱脂乳にレンネットを加えて調製したレンネットカゼイン、あるいは、全乳や脱脂乳に酸を加えて調製した酸カゼインを水に懸濁し、pHを 6.0〜9.0 に調整した後、蛋白質分解酵素のトリプシンをカゼイン重量に対し 0.001〜２％加え、15〜60℃で約５分〜 100時間程度加水分解する。反応終了後、反応液に塩酸等の無機酸や酢酸、乳酸、クエン酸等の有機酸を加えながら、pHを 4.6程度に調整した後、デカンター等により上清と沈澱とに分離する。そして、回収した上清に、 2％程度の塩化カルシウムと５倍量程度のエタノールを加えた後、遠心分離して沈澱を回収することにより、高純度のホスホペプチドを得ることができる。また、 Onoらが提案したカゼインミセルからのホスホペプチド調製法(Biosci. Biotech. Biochem., vol.58, pp.1376-1380, 1994；Biosci. Biotech. Biochem., vol.59, pp.510-511, 1995)にしたがってカゼインミセルから調製したホスホペプチドであっても用いることができる。なお、本発明において使用可能なホスホペプチドとして、明治ＣＰＰ（明治製菓製）やＣＣＰ（太陽化学製）等が市販されている。また、本発明では、これらのホスホペプチドに、ＥＤＴＡ等のキレート剤を加えて透析膜で処理することにより脱カルシウム化したホスホペプチドを使用することもできる。
【００１１】
【発明の実施の形態】
本発明のカルシウムとホスホペプチドとが複合体を形成した高分子型カルシウム・ホスホペプチド複合体は、例えば無機カルシウム塩及び／又は有機酸カルシウム塩、無機リン酸塩とホスホペプチドをモル比で10：１〜20：１〜20になるよう混合し、さらに必要に応じて、カルシウムに対しモル比で１〜10：１〜２になるよう有機酸を加え、pHを 5.5以上に調整することにより得ることができる。
また、本発明において、塩化マグネシウム、硫酸マグネシウム、酸化マグネシウム、炭酸マグネシウム等の無機マグネシウム塩及び／又はクエン酸マグネシウム、グルコン酸マグネシウム等の有機酸マグネシウム塩を添加することによりカルシウムとホススホペプチドの複合体の形性能が増すので、より高純度の高分子型カルシウム・ホスホペプチド複合体を得ることができる。この際、カルシウム塩とマグネシウム塩のモル比が50：１〜50になるように添加することにより、純度を高めることが可能となる。
なお、無機カルシウム塩及び／又は有機酸カルシウム塩、無機リン酸塩、ホスホペプチド、さらに必要に応じて有機酸、無機マグネシウム塩及び／又は有機酸マグネシウム塩を混合する方法については、特に制限はないが、不溶物が生じないよう注意する必要がある。もしも、無機カルシウム塩及び／又は有機酸カルシウム塩、無機リン酸塩、ホスホペプチド、さらに必要に応じて有機酸、無機マグネシウム塩及び／又は有機酸マグネシウム塩を混合するに際して、不溶物が生じるような場合には、無機カルシウム塩及び／又は有機酸カルシウム塩、無機リン酸塩、無機マグネシウム塩及び／又は有機酸マグネシウム塩を予め溶液に懸濁し、塩酸等の無機酸塩や有機酸塩を加えながら、pHを酸性条件として可溶化した後、ホスホペプチドを加えて混合すると良い。
【００１２】
また、本発明の高分子型カルシウム・ホスホペプチド複合体は、必要に応じ、エバポレーターや限外濾過膜、精密濾過膜等で処理することにより得られる濃縮液として使用し、あるいは、噴霧乾燥や凍結乾燥することにより得られる粉末として使用すれば良い。なお、限外濾過膜、精密濾過膜等の膜で処理することにより、より高純度の高分子型カルシウム・ホスホペプチド複合体を得ることができる。
このようにして得られた高分子型カルシウム・ホスホペプチド複合体は、リン酸化されたアミノ酸のリン酸基を介してホスホペプチドとカルシウムとが複合体（架橋構造）を形成したものであり、カルシウムの生体内での吸収性や利用性に優れているという特徴を有すると共に、中性域のpHで水可溶性であり、粉末化しても溶解性が良好であるという特徴を有している。
なお、本発明の高分子型カルシウム・ホスホペプチド複合体を使用するに際しては、カルシウムやホスホペプチド単量体等が共存していても構わない。
【００１３】
本発明の高分子型カルシウム・ホスホペプチド複合体は、生体内での吸収性及び利用性の良好なカルシウム強化剤として、そのまま使用することができる。また、本発明の高分子型カルシウム・ホスホペプチド複合体は、錠剤、顆粒剤、液剤等の経口投与に適した医薬としたり、乳飲料、チーズ、ジュース、ゼリー、パン、麺、スープ、ソーセージ等の飲食品に配合したり、飼料添加物、配合飼料、ペットフード等の飼料に配合して使用することができる。
なお、日本人成人の一日当たりのカルシウム所要量は 600mgであるが、現状のカルシウム摂取量は 550mg程度であるから、カルシウムの摂取不足を補うためには、成人の場合、本発明の高分子型カルシウム・ホスホペプチド複合体を一日当たり1g (カルシウム量として約100mg)以上、好ましくは、5g以上 (カルシウム量として約500mg)以上摂取することが望ましい。
次に、実施例及び試験例を示し、本発明をさらに詳しく説明する。
【００１４】
【参考例１】
生乳を遠心分離して調製した脱脂乳 100 lに酸を加えてpH 4.6とし、酸カゼインを得た。次に、pH 7.0として酸カゼインを水に溶解した溶液 50 l に、トリプシン 25gを加え、40℃、４時間反応させた。反応終了後、直ちにpHを 4.6に調整し、生じた沈澱を遠心分離して除去し、上清を回収した。そして、この上清に、 2.0％の塩化カルシウムと５倍量のエタノールを加えて撹拌、混合した後、遠心分離することによりホスホペプチドを含む沈澱物を回収し、凍結乾燥してホスホペプチド粉末とした。
【００１５】
【実施例１】
参考例１で得られたホスホペプチド粉末 0.6kgを水に溶解した水溶液に、pHを 6.7に制御しながら、1M塩化カルシウム 5 l、1Mリン酸水素二カリウム 3.2 l及び1Mクエン酸 1 lを加えて全量 100 lの水溶液を調製し、凍結乾燥して、白色の高分子型カルシウム・ホスホペプチド複合体粉末 1.9kgを得た。この高分子型カルシウム・ホスホペプチド複合体の成分組成を表１に示す。
なお、括弧内の数値は、モル含量を示す。
【００１６】
【表１】
────────────────────
カルシウム      10.0％ (0.25mol/100g)
無機リン         4.9％ (0.16mol/100g)
有機リン         1.0％ (0.03mol/100g)
有機酸           9.8％ (0.05mol/100g)
────────────────────
【００１７】
【実施例２】
リン酸水素カルシウム・２水和物 500g 、炭酸カルシウム100g及びグルコン酸200gを水 50 l に懸濁させた後、塩酸でpHを 3.0に調整して完全に溶解した。次に、この水溶液に明治ＣＰＰ III (明治製菓製）800gを加えて充分撹拌、混合した後、pHを 7.0に調整した。そして、この水溶液をロータリーエバポレーターで減圧濃縮し、噴霧乾燥して、白色の高分子型カルシウム・ホスホペプチド複合体粉末 1.5kgを得た。この高分子型カルシウム・ホスホペプチド複合体の成分組成を表２に示す。
なお、括弧内の数値は、モル含量を示す。
【００１８】
【表２】
────────────────────
カルシウム      12.2％ (0.30mol/100g)
無機リン         5.5％ (0.18mol/100g)
有機リン         1.2％ (0.04mol/100g)
有機酸          13.0％ (0.07mol/100g)
────────────────────
【００１９】
【比較例１】
まず、pHを 6.7に制御しながら、1M塩化カルシウム 5 l、1Mリン酸水素二カリウム 3.2 l及び1Mクエン酸 1 lを加えて全量 100 lの水溶液を調製した。次に、生じた沈澱も含め、この水溶液を凍結乾燥して、白色のカルシウム含有粉末 1.3kgを得た。
なお、このカルシウム含有粉末中のカルシウム含量は15％であった。
【００２０】
【比較例２】
乳酸カゼイン４kgを6.6M尿素溶液41kgに加えて溶解した後、水16.5kgを加えて尿素濃度を4.6Mとし、遠心分離して上清を得た。この上清に水20kgを加えて尿素濃度を3.3Mとし、遠心分離して上清を得た。この上清に水65kgを加えて尿素濃度1.7Mとした後、pHを 4.7に調整し、遠心分離して回収した沈澱を4.6M尿素溶液20kgに加えて再度溶解した。さらに、加水して尿素濃度を3.3Mとし、遠心分離して上清を得た。この上清に加水して尿素濃度を1.7Mとした後、pHを 4.7に調整し、遠心分離して回収した沈澱を洗浄して自然乾燥させ、βカゼインを得た。
このβカゼイン400gを蒸留水3,800gに加えて溶解し、pHを 8.0に調整した後、トリプシン 400mgを加え、pHを 8.0に維持しながら37℃で24時間加水分解した。反応終了後、反応混合液のpHを 4.6に調整し、遠心分離して上清を得た。この上清に1M塩化カルシウム溶液 170mlを加えて混合し、さらに、エタノール 8,370mlを加えて混合した。そして遠心分離して生成した沈澱を回収し、凍結乾燥してβカゼインホスホペプチドを得た。
このβカゼインホスホペプチドを 5.0重量％の濃度になるよう水に溶解し、この水溶液500gに活性化した陽イオン交換樹脂115.0gを加えて混合した後、水溶液のpHが2.05となった時点で陽イオン交換樹脂を濾過して除去した。そして、凍結乾燥して脱金属イオン化したβカゼインホスホペプチドを得た。
この脱金属イオン化したβカゼインホスホペプチド 20gをイオン交換水に懸濁した懸濁液400gに、水酸化カルシウム3.0gを加えて混合し、凍結乾燥してカルシウム−βカゼインホスホペプチド粉末 20gを得た。
このカルシウム−βカゼインホスホペプチド粉末中のカルシウム含量は 7.0％であった。
【００２１】
【試験例１】
実施例１及び実施例２で得られた各高分子型カルシウム・ホスホペプチド複合体粉末について、中性域のpHにおける溶解性を調べた。対照として、比較例１で得られたカルシウム含有粉末についても、同様の試験を行った。
各試料をカルシウム濃度が300mg/100ml になるよう脱イオン水で溶解し、十分撹拌した後、遠心分離 (2,000rpm、５分間) して、上清中に含まれるカルシウム濃度を測定した。そして、次の式でカルシウム可溶化率を算出した。
カルシウム可溶化率（％）＝上清中に含まれるカルシウム濃度(mg/100ml)/300(mg/100ml)×100
その結果を表３に示す。
【００２２】
【表３】
0003742523.tif 000002
【００２３】
これによると、実施例１及び実施例２で得られたそれぞれのカルシウム・ホスホペプチド複合体中のカルシウムは、完全に可溶化されており、比較例１で得られたカルシウム含有粉末中のカルシウムに比べて非常に優れた溶解性を有していることが判った。
【００２４】
【試験例２】
実施例１及び実施例２で得られた各高分子型カルシウム・ホスホペプチド複合体粉末について、10週齢ＳＤ系雄ラットを用い、生体内での吸収性を調べた。
対照として、比較例１で得られたカルシウム含有粉末及び比較例２で得られたカルシウム−βカゼインホスホペプチド粉末についても、同様の試験を行った。
実験群は１群６匹とし、カルシウム含量が 10mg/mlになるよう調整した各試料の懸濁液を24時間絶食したラットにゾンデで経口投与した。なお、試料投与に際しては、リン及びマグネシウムの含量について同じになるよう調整し、またホスホペプチド及び有機酸の含量についても、同じになるようホスホペプチド及びクエン酸で調整した。試料の投与を開始して４時間後、ラットの胃及び腸を摘出し、それぞれをそのまま灰化した。そして、次の式で生体内におけるカルシウムの消化吸収量を算出した。
（生体内におけるカルシウムの消化吸収量）＝｛（投与したカルシウム量）−（胃及び腸に残存していたカルシウム量）｝
その結果を表４に示す。
なお、括弧内の数値は標準偏差を示す。また、a は、対照１に対して有意差(p<0.05)があることを示し、b は、対照２に対して有意差(p<0.05)があることを示す。
【００２５】
【表４】
0003742523.tif 000003
【００２６】
これによると、実施例１及び実施例２で得られた各高分子型カルシウム・ホスホペプチド複合体中のカルシウムは、ホスホペプチドと複合体を形成していない比較例１で得られたカルシウム含有粉末よりも生体内での吸収性が良好であり、さらに単量体としてホスホペプチドと結合している比較例２で得られたカルシウム−βカゼインホスホペプチド粉末よりも生体内でも吸収性が良好であることが判った。
【００２７】
【試験例３】
実施例１及び実施例２で得られた各高分子型カルシウム・ホスホペプチド複合体 3.37gを純水１mlに溶解し、ＨＰＬＣに供して分析した。また、有機リン濃度が７mMになるよう調整した各高分子型カルシウム・ホスホペプチド複合体の水溶液１mlに、ＥＤＴＡ−Ｎａ2 ・２水和物５mg及びＥＤＴＡ−Ｎａ4 ・４水和物８mgを加えて、複合体を解離させたものについても、同様にしてＨＰＬＣに供して分析した。ＨＰＬＣカラムは、 TSK-GEL G 3000SW (7.5mm×60cm) を用い、流速 0.7ml/minとして、流出液を235 nmでモニターした。
その結果を図１に示す。
なお、図１中のＡ〜Ｄは、次のＨＰＬＣチャートを示す。
Ａ：実施例１で得られた高分子型カルシウム・ホスホペプチド複合体
Ｂ：実施例１で得られた高分子型カルシウム・ホスホペプチド複合体をＥＤＴＡ処理して解離させたもの
Ｃ：実施例２で得られた高分子型カルシウム・ホスホペプチド複合体
Ｄ：実施例２で得られた高分子型カルシウム・ホスホペプチド複合体をＥＤＴＡ処理して解離させたもの
これによると、遊離したホスホペプチドのピーク(II)とは別の位置に、各高分子型カルシウム・ホスホペプチド複合体のブロード状ピーク(I) が確認された。また、各高分子型カルシウム・ホスホペプチド複合体をＥＤＴＡ処理して複合体を解離させると、各高分子型カルシウム・ホスホペプチド複合体のブロード状ピーク(I) は消失し、遊離したホスホペプチドのピーク(II)がメインとなった。
これらのことから、高分子型カルシウム・ホスホペプチド複合体の形成が確認できる。
【００２８】
【試験例４】
参考例１で得られたホスホペプチド粉末0.6 kgを水に溶解した水溶液に、pHwo6.7 に制御しながら、1M塩化カルシウム5l（最終濃度は50mM）、1Mリン酸水素二カリウム3.2l、1Mクエン酸1lを加え、さらに1M塩化マグネシウム又は1Mグルコン酸マグネシウムをそれぞれ0l、0.1l、1l、3l、5l、（最終濃度はそれぞれ0mM、1mM、10mM、30mM、50mM）加えて全量100lの水溶液を10種類調製した。
なお、調製した水溶液を分画分子量2000の限外濾過膜で処理して得られる濾液には、ホスホペプチドと複合体を形成しない遊離のカルシウムやマグネシウム等が含まれているので、調製した水溶液中及び限外濾液中のカルシウム濃度を測定し、それらのカルシウム濃度の差をホスホペプチドと架橋を形成した複合体カルシウム濃度とした。同様に、複合体マグネシウム濃度も算出した。
その結果を表５に示す。
【００２９】
【表５】
0003742523.tif 000004
【００３０】
これによると、塩化マグネシウム又はグルコン酸マグネシウムを添加することにより複合体カルシウム濃度が上昇することが確認された。すなわち、無機マグネシウム塩又は有機酸マグネシウム塩を添加することにより、カルシウムとホスホペプチドとの複合体の形成が促進され、複合体の純度が高まることが確かめられた。またその効果は、各マグネシウム濃度が１mM〜50mMの範囲すべてで認められた。すなわち、カルシウム塩とマグネシウム塩のモル比が50：１〜50になるようにすることにより、複合体の純度を高めることが可能となった。また、調製したすべての水溶液のカルシウム可溶化率は全て100%であった。
なお、マグネシウム塩の添加の濃度に応じて、カルシウム・ホスペプチド複合体中にマグネシウムも取り込まれることも確認された。
【００３１】
【実施例３】
実施例１で得られた高分子型カルシウム・ホスホペプチド複合体粉末を使用し、表６に示す配合でカルシウムを強化した錠剤を製造した。
なお、この錠剤100g中にはカルシウム5gが含まれていた。
【００３２】
【表６】
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実施例１で得られた複合体粉末      50.0（重量％）
含水結晶ぶどう糖                  48.5
シュガーエステル                   1.0
香料                               0.5
──────────────────────────
【００３３】
【実施例４】
生乳 100ml当たりの添加量が1gになるように実施例１で得られた高分子型カルシウム・ホスホペプチド複合体粉末を加え、 120kg/cm2の圧力でホモゲナイズした後、 120℃で４秒間加熱殺菌して、カルシウムを強化した牛乳を製造した。
なお、この牛乳100g中にはカルシウム 200mgが含まれていた。
【００３４】
【実施例５】
実施例１で得られた高分子型カルシウム・ホスホペプチド複合体粉末を使用し、表７に示す配合でカルシウムを強化したイヌ飼育用飼料（ドッグフード）を製造した。
なお、この飼料100g中にはカルシウム 700mgが含まれていた。
【００３５】
【表７】
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大豆粕                            11（重量％）
脱脂粉乳                          14
大豆油                             4
コーン油                           2
パーム油                           2
とうもろこし澱粉                  30
小麦粉                            15
ふすま                             8
ビタミン混合物                     2
ミネラル混合物                     5
セルロース                         2
実施例１で得られた複合体粉末       5
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【００３６】
【発明の効果】
本発明の高分子型カルシウムとホスホペプチドとが複合体を形成している高分子型カルシウム・ホスホペプチド複合体は、中性域のpHで水可溶性であり、また、粉末化しても溶解性が優れているという特徴を有している。さらに、本発明の高分子型カルシウム・ホスホペプチド複合体は、生体内での吸収性や利用性に優れているという特徴も有する。
したがって、本発明の高分子型カルシウム・ホスホペプチド複合体は、カルシウム剤として、医薬、飲食品、あるいは飼料に配合し、カルシウムを強化することができる。そして、骨粗鬆症、骨折、リュウマチ、関節炎、腰痛等、種々の骨疾患の予防や治療に有用である。
【図面の簡単な説明】
【図１】試験例３における各高分子型カルシウム・ホスホペプチド複合体、及びこれらの複合体をＥＤＴＡ処理して解離させたもののＨＰＬＣ分析結果を示す。
【図１】
0003742523.tif 000005