(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
セサミン及び／又はエピセサミン並びにトコフェロールのみからなるアレルギー症状の予防又は改善剤。
【請求項２】
前記のトコフェロールがα−トコフェロールである、請求項１記載の予防又は改善剤。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【産業上の利用分野】
本発明は、ジオキサビシクロ［３．３．０］オクタン誘導体を有効成分とするアレルギー症状の予防又は改善剤、並びにジオキサビシクロ［３．３．０］オクタン誘導体又は該誘導体を主成分とする抽出物を含有するアレルギー症状の予防又は改善作用を有する飲食品、及びその製造方法に関するものである。
さらに本発明は、ジオキサビシクロ［３．３．０］オクタン誘導体と抗酸化剤を有効成分とするアレルギー症状の予防又は改善剤、並びにジオキサビシクロ［３．３．０］オクタン誘導体又は該誘導体を主成分とする抽出物と抗酸化剤を含有するアレルギー症状の予防又は改善作用を有する飲食品、及びその製造方法に関するものである。
【０００２】
【従来の技術】
種々の化学伝達物質が、肺やその他の組織から遊離され、気管支筋、肺血管等の平滑筋を収縮したり、皮膚血管の透過性を亢進するなどして、生体組織に障害を与えることにより、アレルギー性喘息、アレルギー性鼻炎、アトピー性疾患等が発症すると考えられている。このような化学伝達物質の中でもヒスタミン及びＳＲＳ−Ａ（slow-reacting release substance of anaphylaxis）は、最も重要視されている。近年、ＳＲＳ−Ａの本体がペプチドロイコトリエンＣ4 ，Ｄ4 ，Ｅ4 （ＬＴＣ4 ，ＬＴＤ4 ，ＬＴＥ4 ）であることが解明され、これらロイコトリエンのもつ多彩な生理作用及び病態との関連性が広範に研究されている。
【０００３】
そして、ＳＲＳ−Ａは、気管支喘息、アレルギー性鼻炎や皮膚炎、アトピー性皮膚炎、更に心筋梗塞などの虚血性疾患、心臓アナフィラキシー、エンドトキシンショック、乾癬などにもその関与が示唆されている。従って、ＳＲＳ−Ａの産生を抑えるかそれに拮抗する薬剤の開発が注目を集めている。また近年はアトピー性皮膚炎や花粉症等の各種アレルギー性疾患患者が増加しており、その治療が社会的な問題になっている。
【０００４】
しかし現在のところ対症療法に頼るところが大きく、アレルギー疾患の根本的治療につながる優れた治療薬が切望されながら、その開発は今尚暗中模索の域にあると言わざるを得ない。最近、抗ヒスタミン薬や、先のＳＲＳ−Ａの産生を抑えるかそれに拮抗する薬剤が種々開発されてきているが、副作用の面で十分とは言えない。そして難活例では副腎皮質ホルモン製剤が用いられているが、これとても、重篤な副作用がしばしば患者を悩ませ汎用すべき薬物ではありえない。
【０００５】
【発明が解決しようとする課題】
従って本発明は、安定性が高く、副作用が少ない新規なアレルギー症状の予防又は改善剤、並びにアレルギー症状の予防又は改善作用を有する飲食品及びその製造方法を提供しようとするものである。
【０００６】
【課題を解決するための手段】
本発明者等は、上記の目的を達成するため種々研究した結果、胡麻種子、胡麻粕又は胡麻油等から単離した、又は合成により得られたジオキサビシクロ［３．３．０］オクタン誘導体がアレルギー症状の予防又は改善に有効であること、さらに該誘導体と抗酸化剤との併用がアレルギー症状の予防又は改善に有効であることを見出し本発明を完成した。
【０００７】
従って本発明は、次の一般式（Ｉ）：
【化４】
0003818680.tif 000002
（式中、Ｒ1 ，Ｒ2 ，Ｒ3 ，Ｒ4 ，Ｒ5 、及びＲ6 はそれぞれ独立に水素原子又は炭素数１〜３のアルキル基であり、あるいはＲ1 とＲ2 、及び／又はＲ4 とＲ5 は一緒になってメチレン基もしくはエチレン基を表し、そしてｎ，ｍ、及びｌは０又は１を表す）で表わされるジオキサビシクロ［３．３．０］オクタン誘導体を有効成分として含有してなるアレルギー症状の予防又は改善剤を提供しようとするものである。
本発明はまた、該誘導体又はこれを主成分とする抽出物を添加してなる、アレルギー症状の予防又は改善作用を有する飲食品を提供しようとするものである。
さらに該誘導体を実質上含有しない飲食物に、該誘導体又はこれを主成分とする抽出物を添加することを特徴とするアレルギー症状の予防又は改善作用を有する飲食品、及びその製造方法を提供しようとするものである。
【０００８】
本発明はまた、次の一般式（Ｉ）：
【化５】
0003818680.tif 000003
（式中、Ｒ1 ，Ｒ2 ，Ｒ3 ，Ｒ4 ，Ｒ5 、及びＲ6 はそれぞれ独立に水素原子又は炭素数１〜３のアルキル基であり、あるいはＲ1 とＲ2 、及び／又はＲ4 とＲ5 は一緒になってメチレン基もしくはエチレン基を表し、そしてｎ，ｍ、及びｌは０又は１を表す）で表わされるジオキサビシクロ［３．３．０］オクタン誘導体と抗酸化剤を有効成分として含有してなるアレルギー症状の予防又は改善剤を提供しようとするものである。
本発明はまた、該誘導体又はこれを主成分とする抽出物と抗酸化剤を添加してなる、アレルギー症状の予防又は改善作用を有する飲食品を提供しようとするものである。
さらに該誘導体を実質上含有しない飲食物に、該誘導体又はこれを主成分とする抽出物と抗酸化剤を添加することを特徴とするアレルギー症状の予防又は改善作用を有する飲食品、及びその製造方法を提供しようとするものである。
【０００９】
【具体的な説明】
本発明の有効成分であるジオキサビシクロ［３．３．０］オクタン誘導体は、次の一般式（Ｉ）：
【化６】
0003818680.tif 000004
（式中、Ｒ1 ，Ｒ2 ，Ｒ3 ，Ｒ4 ，Ｒ5 、及びＲ6 はそれぞれ独立に水素原子又は炭素数１〜３のアルキル基であり、あるいはＲ1 とＲ2 、及び／又はＲ4 とＲ5 は一緒になってメチレン基もしくはエチレン基を表し、そしてｎ，ｍ、及びｌは０又は１を表す）で表わされる化合物であり、ここで、炭素数１〜３個のアルキル基とは、メチル基、エチル基、ｎ−プロピル基、イソプロピル基等を挙げることができる。
【００１０】
さらに具体的な化合物としては、セサミン、セサミノール、エピセサミン、エピセサミノール、セサモリン、２−（３，４−メチレンジオキシフェニル）−６−（３−メトキシ−４−ヒドロキシフェニル）−３，７−ジオキサビシクロ［３．３．０］オクタン、２，６−ビス−（３−メトキシ−４−ヒドロキシフェニル）−３，７−ジオキサビシクロ［３．３．０］オクタン、又は２−（３，４−メチレンジオキシフェニル）−６−（３−メトキシ−４−ヒドロキシフェノキシ）−３，７−ジオキサビシクロ［３．３．０］オクタン等を挙げることができる。これらの化合物は、配糖体の形であってもよく、またその光学異性体も本願発明に含まれる。
【００１１】
本発明では、前記ジオキサビシクロ［３．３．０］オクタン誘導体（以下「本発明の誘導体」という）を、単独で、又は２種以上を組み合わせて使用することができる。また本発明において本発明の誘導体は高純度精製品に限ったものではなく、前記ジオキサビシクロ［３．３．０］オクタン誘導体の１種又は複数種を主成分とする抽出物（以下、「本発明の誘導体を主成分とする抽出物」という）を単独で又は組み合わせて使用することができる。
本発明の誘導体を主成分とする抽出物は、本発明の誘導体を含有する天然物から常法に従って抽出することができる。本発明の誘導体を含有する天然物としては、胡麻油、胡麻粕、胡麻油製造過程の副産物、胡麻種子、五加皮、桐木、白果樹皮、ヒハツ、細辛等を挙げることができる。
また本発明の誘導体を主成分とする抽出物の、本発明の誘導体の含有量は０．１重量％以上、好ましくは１．０重量％以上、より好ましくは５．０重量％以上がよく、特にセサミンとエピセサミンの含有量の合計が、０．０５重量％以上、好ましくは０．５重量％以上、より好ましくは２．０重量％以上が望ましい。
【００１２】
例えば胡麻油から、本発明の誘導体を主成分とする抽出物を得るには、胡麻油とは実質的に非混和性であり且つ本発明の誘導体を抽出・溶解することができる種々の有機溶剤（例えばアセトン、メチルエチルケトン、ジエチルケトン、メタノール、エタノール等）を用いて抽出・濃縮することができる。
その一例として、胡麻油と上記溶剤のいずれかとを均一に混合した後、低温において静置し、遠心分離の常法に従って相分離を行い、溶剤画分から溶剤を蒸発除去することにより得る方法が挙げられ、さらに具体的には、胡麻油を２〜１０倍、好ましくは６〜８倍容量のアセトンに溶かした後、−８０℃で一晩放置し、その結果油成分が沈澱となり、濾過により得た濾液からアセトンを留去し、本発明の誘導体を主成分とする抽出物を得る。
【００１３】
また、胡麻油と熱メタノール又は熱エタノールとを混合した後、室温において静置し、溶剤画分から溶剤を蒸発除去することにより得る方法が挙げられ、さらに具体的には、胡麻油を２〜１０倍、好ましくは５〜７倍容量の熱メタノール（５０℃以上）又は熱エタノール（５０℃以上）で激しく混合した後、室温で静置、あるいは遠心分離等の常法に従って相分離を行い、溶剤画分から溶剤を留去して、本発明の誘導体を主成分とする抽出物を得る。
さらに、超臨界ガス抽出を利用して本発明の誘導体を主成分とする抽出物を得ることもできる。
【００１４】
用いる胡麻油は精製品であっても、また胡麻油の製造過程で脱色工程前のいずれの粗製品であってもよい。
また胡麻種子あるいは胡麻粕（脱脂胡麻種子、残油分８〜１０％）から、本発明の誘導体を主成分とする抽出物を得るには、胡麻種子あるいは胡麻粕を必要により破砕した後、任意の溶剤、例えば前述の胡麻油からの抽出において用いられているのと同じ溶剤を使用して常法により抽出することができる。抽出残渣を分離した後、抽出液から蒸発等により溶剤を除去することにより抽出物が得られる。
【００１５】
本発明の誘導体は、前述の方法等によって調製された胡麻油抽出物、胡麻粕抽出物あるいは胡麻種子抽出物から、カラムクロマトグラフィー、高速液体クロマトグラフィー、再結晶、蒸留、液々交流分配クロマトグラフィー等の常法に従って処理することにより目的の化合物を単離することができる。さらに具体的には、逆相カラム（５Ｃ18）、溶離液にメタノール／水（６０：４０）を使って、上記抽出物を高速液体クロマトグラフィーで分取し、溶媒を留去した後、得られた結晶をエタノールで再結晶化することでセサミン、エピセサミン、セサミノール、エピセサミノール、セサモリン、２−（３，４−メチレンジオキシフェニル）−６−（３−メトキシ−４−ヒドロキシフェニル）−３，７−ジオキサビシクロ［３．３．０］オクタン、２，６−ビス−（３−メトキシ−４−ヒドロキシフェニル）−３，７−ジオキサビシクロ［３．３．０］オクタン、又は２−（３，４−メチレンジオキシフェニル）−６−（３−メトキシ−４−ヒドロキシフェノキシ）−３，７−ジオキサビシクロ［３．３．０］オクタン等の本発明の誘導体が得られる。なお、本発明の誘導体や該誘導体を主成分とする抽出物を得る方法及び精製方法は、これらに限られるものではない。
【００１６】
また本発明の誘導体は、常法に従って合成により得ることもできる。
例えば、セサミン、エピセサミンについてはＢｅｒｏｚａらの方法〔Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．７８，１２４２（１９５６）〕で合成することができる他、ピノレシノール（一般式（Ｉ）においてＲ1 ＝Ｒ4 ＝Ｈ，Ｒ2 ＝Ｒ5 ＝ＣＨ3 ，ｎ＝ｍ＝１＝０）は、Ｆｒｅｕｎｄｅｎｂｅｒｇらの方法〔Ｃｈｅｍ．Ｂｅｒ．，８６，１１５７（１９５３）〕によって、シリンガレシノール（一般式（Ｉ）においてＲ1 ＝Ｒ4 ＝Ｈ，Ｒ2 ＝Ｒ3 ＝Ｒ5 ＝Ｒ4 ＝ＣＨ3 ，ｎ＝０，ｍ＝１＝１）は、Ｆｒｅｕｎｄｅｎｂｅｒｇらの方法〔Ｃｈｅｍ．Ｂｅｒ．，８８，１６（１９５５）〕によって合成することができる。
【００１７】
さらに本発明の誘導体又は該誘導体を主成分とする抽出物は、抗酸化剤と組み合わせて本発明の有効成分として使用することができる。抗酸化剤としては、例えばトコフェロール類、フラボン誘導体、フィロズルシン類、コウジ酸、没食子酸誘導体、カテキン類、フキ酸、ゴシポール、ピラジン誘導体、セサモール、グァヤコール、グァヤク脂、ｐ−クマリン酸、ノルジヒドログァヤレチック酸、ステロール類、テルペン類、核酸塩基類、カロチノイド類のような天然抗酸化剤、あるいはブチルヒドロキシアニソール（ＢＨＡ）、ブチルヒドロキシトルエン（ＢＨＴ）、モノタアシヤリ−ブチルヒドロキノン（ＴＢＨＱ）、４−ヒドロキシメチル−２，６−ジ−タアシャリ−ブチルフェノール（ＨＭＢＰ）に代表されるような合成抗酸化剤を挙げることができる。
【００１８】
抗酸化剤の中でも特にトコフェロール類が好ましく、トコフェロール類としては例えば、α−トコフェロール、β−トコフェロール、γ−トコフェロール、δ−トコフェロール、ε−トコフェロール、ξ−トコフェロール、η−トコフェロール又はトコフェロールエステル（酢酸トコフェロール等）等を挙げることができる。さらに、カロチノイド類では例えば、β−カロチン、カンタキサンチン、アスタキサンチン等を挙げることができる。
組み合わせにおいて、本発明の誘導体と抗酸化剤の割合については特に制限はないが、本発明の誘導体１重量部に対して抗酸化剤が０．００１重量部以上、１０００重量部以下が望ましい。さらに０．０１〜１００重量部の範囲が好ましく、０．０２９〜４０重量部の範囲がさらに好ましい。
【００１９】
本発明の有効成分、すなわち本発明の誘導体単独あるいは抗酸化剤との併用は、アレルゲンの吸収を阻害するＩｇＡのレベルを、またアレルゲンとＩｇＥとの反応を阻止するＩｇＧのレベルを増加させ、化学伝達物質（ヒスタミン、ＬＴＢ4 ，ＬＴＣ4 等) の遊離を抑えることにより、アレルギー症状の予防又は改善に有効であると考えられる。本発明の対象となるアレルギー症状とは、例えばアトピー性皮膚炎、青年期アトピー性皮膚炎、じんましん、接触皮膚炎、老人性皮膚炎、気管支喘息、アレルギー性鼻炎、花粉症、虚血性疾患、心臓アナフィラキシー、エンドトキシンショック、乾癬、薬物アレルギー、食物アレルギー、昆虫アレルギー等のアレルギー性疾患の症状を挙げることができる。また本発明において、症状の改善とは、広い意味で使用し、疾患の治療も包含する。
【００２０】
例えば花粉症の場合、鼻粘膜の表面から吸収された花粉（アレルゲン）が、マスト細胞に付着しているＩｇＥと反応する前に、本発明の有効成分の作用により粘膜中に高レベルで分布しているＩｇＧと結びつくため、アレルゲンとＩｇＥとの反応が阻止され、マスト細胞からのヒスタミン遊離が抑制され、アレルギー症状が軽減されるものと考えられる。
【００２１】
また食物アレルギーは、日常摂取している食物により引き起こされるアレルギーであって、食物がまず接触する場である消化器の症状（口腔粘膜腫脹、痒み感、悪心、嘔吐、腹痛、下痢）のほか、皮膚症状（湿疹、じんましん）、呼吸器症状（鼻アレルギー、気管支喘息）、泌尿器症状（頻尿、夜尿症）、神経症状（偏頭痛）などを引き起こす。アレルゲンとしては、卵、牛乳、大豆、ピーナッツ、チョコレート、小麦粉、魚介類、香料、保存料、着色料などの食品添加物、微生物、薬物などが挙げられる。気管支喘息児では最初に食物アレルギーによる湿疹が発症し、次に吸入性抗原による鼻アレルギーから気管支喘息に進行する。このような食物アレルギーの発症を回避するには、アレルゲンを摂取しないことが一番であるが、現実的ではない。
【００２２】
本発明の有効成分は、腸間膜のリンパ節で作られるＩｇＡのレベルを高め、腸管粘膜から吸収された食物（アレルゲン）がこのＩｇＡと吸着することにより、抗アレルギー作用を示すものと思われる。
【００２３】
本発明の誘導体を医薬品として用いる場合、投与形態は、経口投与または非経口投与が都合よく行われるものであればどのような剤形のものであってもよく、例えば注射液、輸液、散剤、顆粒剤、錠剤、カプセル剤、腸溶剤、トローチ、内用液剤、懸濁剤、乳剤、シロップ剤、外用液剤、湿布剤、点鼻剤、点耳剤、点眼剤、吸入剤、軟膏剤、ローション剤、坐剤等を挙げることができ、これらを症状に応じてそれぞれ単独で、または組み合わせて使用することができる。
【００２４】
これら各種製剤は、常法に従って目的に応じて主薬に賦形剤、結合剤、防腐剤、安定剤、崩壊剤、滑沢剤、矯味剤などの医薬の製剤技術分野において通常使用しうる既知の補助剤を用いて製剤化することができる。例えば注射剤を調製する場合、非イオン界面活性剤等の医薬品用の可溶化剤を利用することができ、さらに具体的には、本発明の誘導体を８０倍容量のＰＯＥ（６０）硬化ヒマシ油あるいはＰＯＥソルビタンモノオレート等の非イオン界面活性剤に加熱溶解させ、生理食塩水で希釈することで調製することができる。また必要に応じて適宜等張化剤、安定剤、防腐剤、無痛化剤を加えてもよい。
【００２５】
また外用剤としては基剤としてワセリン、パラフィン、油脂類、ラノリン、マクロゴール等を用い、通常の方法によって軟膏剤、クリーム剤等を調製することができる。またその投与量は、投与の目的や投与対象者の状況（性別、年齢、体重等）により異なるが、通常、成人に対して経口投与の場合、本発明の誘導体の総量として、１日あたり１mg〜１０ｇ、好ましくは１mg〜２ｇ、さらに好ましくは１mg〜２００mgの範囲で、また非経口投与の場合、本発明の誘導体の総量として、１日あたり０．１mg〜１ｇ、好ましくは０．１mg〜２００mg、さらに好ましくは０．１mg〜１００mgの範囲で適宜調節して投与することができる。
【００２６】
また本発明の誘導体を、抗酸化剤、特にトコフェロール類とともに投与する場合には、本発明の誘導体の投与量は、投与の目的や投与対象者の状況（性別、年齢、体重等）により異なるが、通常、成人に対して経口投与の場合、本発明の誘導体の総量として、１日あたり０．１mg〜２ｇ、好ましくは０．１mg〜５００mg、さらに好ましくは０．１mg〜１００mgの範囲で、また非経口投与の場合、本発明の誘導体の総量として、１日あたり０．０１mg〜２００mg、好ましくは０．０１mg〜５０mg、さらに好ましくは０．０１mg〜２０mgの範囲で、かつ本発明の誘導体と抗酸化剤との配合比率は、本発明の誘導体１重量部に対して抗酸化剤が０．００１〜１０００重量部、好ましくは０．０１〜１００重量部、さらに好ましくは０．０２９〜４０重量部の範囲で、適宜調節して投与することができる。本発明の誘導体と抗酸化剤、特にトコフェロール類とを併用することによって、アレルギー症状の予防又は改善の相乗効果が期待される。
【００２７】
本発明の誘導体は、従来の食品中より見出した化合物又はその類縁化合物であるので安全性の面からも優れているのは明らかである。また、７週令のＩＲＣ雄性マウスに対し、セサミン２．１４ｇ／ｄａｙ／Kgを２週間連続投与（経口投与）したところ、何ら異常な症状は認められなかったことからも明らかである。
【００２８】
本発明の誘導体又は該誘導体を主成分とする抽出物を飲食品として用いる場合、その形態は、上記医薬製剤の形態でもよく、また固形、あるいは液状の食品ないしは嗜好品、例えばパン、めん類、ごはん、菓子類（ビスケット、ケーキ、キャンデー、チョコレート、和菓子）、豆腐およびその加工品などの農産食品、清酒、薬用酒、みりん、食酢、醤油、味噌などの発酵食品、ドレッシング、マヨネーズ、マーガリン、ショートニング、食用油脂などの油脂食品、ヨーグルト、ハム、ベーコン、ソーセージなどの畜農食品、かまぼこ、揚げ天、はんぺんなどの水産食品、果汁飲料、清涼飲料、スポーツ飲料、アルコール飲料、茶などの飲料等の形態であってもよい。
【００２９】
また健康食品、機能性食品として用いる場合は、その形態は、上記医薬製剤や飲食品の形態でもよいが、例えば蛋白質（蛋白質源としてはアミノ酸バランスのとれた栄養価の高い乳蛋白質、大豆蛋白質、卵アルブミン等の蛋白質が最も広く使用されるが、これらの分解物、卵白のオリゴペプチド、大豆加水分解物等の他、アミノ酸単体の混合物も使用される）、糖類、脂肪、微量元素、ビタミン類、乳化剤、香料等が配合された自然流動食、半消化態栄養食および成分栄養食や、ドリンク剤等の加工形態であってもよい。
【００３０】
本発明の飲食品は、本発明の誘導体を実質的に含有しない食品原料を用いて、本発明の誘導体を実質的に含有しない飲食物を製造する際、本発明の誘導体又は該誘導体を主成分とする抽出物の所要量を適宜、加えて、一般の製造法により製造することができる。また本発明の誘導体又は該誘導体を主成分とする抽出物とともに抗酸化剤を加えて製造することもできる。これらの配合量はそれぞれ剤形、食品の形態性状により異なるが、一般には０．００１〜５０％が好ましいが特に限定されるものではない。また健康食品、機能性食品としての摂取は、アレルギー症状に対する予防や改善に用いられ、医師の食事箋に基づく栄養士の管理の下に、病院給食の調理の際に本発明の誘導体を実質的に含有しない任意の食品に、本発明の誘導体又は該誘導体を主成分とする抽出物を加え、その場で調整した機能性食品の形態で患者に与えることもできる。
【００３１】
本発明において、本発明の誘導体を実質的に含有しない飲食物とは、例えば胡麻等を原料としていない飲食物が挙げられるが、胡麻等を原料とする飲食物であっても、最終形態の飲食品における本発明の誘導体の含有量が微量であって、その飲食品の１日摂取量あたり、本発明の誘導体の含有量が０．１mg未満、好ましくは０．８mg以下のもの、あるいはその飲食品の１日摂取量あたり、セサミン、セサミノール、エピセサミン、エピセサミノール、セサモリン、２−（３，４−メチレンジオキシフェニル）−６−（３−メトキシ−４−ヒドロキシフェニル）−３，７−ジオキサビシクロ［３．３．０］オクタン、２，６−ビス−（３−メトキシ−４−ヒドロキシフェニル）−３，７−ジオキサビシクロ［３．３．０］オクタン、又は２−（３，４−メチレンジオキシフェニル）−６−（３−メトキシ−４−ヒドロキシフェノキシ）−３，７−ジオキサビシクロ［３．３．０］オクタンの総含有量が０．１mg未満、好ましくは０．８mg以下のものは、本発明の誘導体を実質的に含有しない飲食物に含まれる。
【００３２】
本発明の飲食品は、アレルギー症状に対する予防改善や健康維持を目的として、目安として１日あたり本発明の誘導体の総量が１mg〜１０ｇ、好ましくは１mg〜２ｇ、さらに好ましくは１mg〜２０mgの範囲で経口摂取されることが望ましい。
さらに本発明の飲食品において、本発明の誘導体又は該誘導体を主成分とする抽出物は、抗酸化剤、特にトコフェロール類とともに摂取する場合には、目安として１日あたり本発明の誘導体の総量が０．１mg〜２ｇ、好ましくは０．１mg〜５００mg、さらに好ましくは０．１mg〜１００mgの範囲で、かつ本発明の誘導体と抗酸化剤との配合比率は、本発明の誘導体１重量部に対して抗酸化剤が０．００１〜１０００重量部、好ましくは０．０１〜１００重量部、さらに好ましくは０．０２９〜４０重量部の範囲で、経口摂取されることが望ましい。本発明の誘導体と抗酸化剤、特にトコフェロール類とを併用することによって、アレルギー症状に対する予防改善や健康維持の相乗作用が期待される。
【００３３】
なお本発明の誘導体は実質的に含有しないが、抗酸化剤、特にトコフェロール類を含有している飲食物に、本発明の誘導体又は該誘導体を主成分とする抽出物を添加する場合には、最終形態の飲食品における本発明の誘導体と抗酸化剤の含有比率が、本発明の誘導体１重量部に対して抗酸化剤が０．００１〜１０００重量部、好ましくは０．０１〜１００重量部、さらに好ましくは０．０２９〜４０重量部の比率となるよう、本発明の誘導体又は該誘導体を主成分とする抽出物を添加することができる。この際、必要に応じ抗酸化剤をさらに添加することも可能である。
次に、実施例により、本発明をさらに具体的に説明する。
【００３４】
【実施例】
実施例１．
実験動物と飼料
４週令（平均体重９６ｇ）のＢｒｏｗｎ−Ｎｏｒｗａｙ（ＢＮ）系雄ラット（成和実験動物研究所）を１群８匹とし４群にわけた。ひとつのグループは２０％カゼイン、５％コーン油、５％セルロース、３．５％ミネラル混合物（ＡＩＮ−ＴＭ：アメリカ栄養研究所処方）、１％ビタミン混合物（ＡＩＮ−ＴＭ）、０．２％重酒石酸コリン、０．３％ＤＬ−メチオニン、１５％コーンスターチ及び５０％シュクロースからなる普通食で飼育した。そして、残りの３グループはシュクロースを減じて、０．５％セサミンあるいは０．５％α−トコフェロールを加えた飼料で、さらに０．５％セサミン及び０．５％α−トコフェロールを加えた飼料で、それぞれ飼育した。セサミンには、特開平３−２７３１９号公報記載の方法に従って精製したセサミンとエピセサミンの混合物（セサミン：５５．２％、エピセサミン：４４．４％、純度９９．６％）を使用した。３週間飼育後エーテル麻酔後、腹部大動脈より採血し、肺および脾臓を摘出した。
【００３５】
ロイコトリエンＣ4 の抽出と測定
ラットより摘出した肺組織中のロイコトリエンＣ4 （ＬＴＣ4 ）濃度は、常法に従ってラジオイムノアッセイにより定量した。
結果を図１に示す。このグラフから明らかな通り、ＬＴＣ4 含量はセサミンとトコフェロールの両者の投与により有意に低下した。
【００３６】
フローサイトメトリーによるＣＤ４+ （％），ＣＤ８+ （％）の解析
血液中のＣＤ４+ ，ＣＤ８+ 細胞の比率はフローサイトメーター（ＦＣＭ）を用いて測定した。ラットより摘出した脾臓を、ＲＰＭＩ１６４０培地を入れた５mlディッシュに移し、脾臓の脂肪を取り除いた後、その両端を切除し、残りの部分を３−４個に切断した。これらを新たに５mlのＲＰＭＩ１６４０培地の入ったディッシュに移し、スライドガラスですりつぶしてリンパ球を含む細胞を採取した。
【００３７】
これにリンパ球分離用密度勾配液（ＬＳＭ）４mlを入れて遠心分離し、得られたリンパ球層を吸引して分離し、ＲＰＭＩ１６４０培地に移した。この細胞懸濁液にウシ胎児血清（ＦＢＳ）１０mlを添加し、１×１０6 細胞／mlになるようにこの培地で希釈し、これを10mlディッシュに分注した。１０mlディッシュにリシン溶液を最終濃度（１×１０-4ng／ml〜１０ng／ml）になるように１００μｌ添加した。
【００３８】
４８時間後、培養液の一部を抗体量の測定のために採取し、残りの細胞懸濁液は十分にピペッティングした後１０mlのＲＰＭＩ１６４０培地を加えた遠心管に移し、１２００rpm で５分間遠心分離した。上清を捨て、新たに１．５mlのＲＰＭＩ１６４０を加えてよくピペッティングし、その中から１００μｌずつをマイクロチューブに分注した。
【００３９】
遠心分離後、上清は捨て、沈澱したリンパ球に２mlのＲＰＭＩ１６４０培地を加え、よくピペッティングしてマイクロチューブに１mlずつそれぞれ分注し、再度１２００rpm で５分間遠心分離した。上清は捨て、１０％非働化ＦＢＳ含有ＰＢＳを１００μｌ加え、さらに、抗ラットＣＤ4 −ＦＩＴＣ標識抗体、抗ラットＣＤ8 −ＰＥ標識抗体を５μｌずつ添加し、氷中で３０分間静置（１０分毎、攪拌）した。さらに１０％非働化ＦＢＳ／ＰＢＳを１ml加え、１２００rpm で５分間遠心分離し、再度、上清を捨て、同様の操作を行った。上清を捨て、４％パラホルムアルデヒド溶液とＰＢＳをそれぞれ０．５ml加えてよくピペッティングした（リンパ球の固定化）。各濃度のリシンを添加したリンパ球についてこれらの操作を行った。翌日これらの固定化したリンパ球について、フローサイトメトリー（ＦＣＭ）によりＣＤ４+ 細胞とＣＤ８+ 細胞の割合を測定した。結果を表１に示す。
【００４０】
【表１】
0003818680.tif 000005
表１から明らかな通り、脾臓リンパ球の免疫活性作用を有するヘルパ−Ｔ細胞（ＣＤ４+ ）は、セサミンの添加により有意に低下した。
【００４１】
ＥＬＩＳＡ（Enzyme-linked Immunosorbent Assay ）法による血清ＩｇＭ，ＩｇＡ，ＩｇＧ，ＩｇＥ量の測定：
前述のラットの腹部大動脈より採血した血液を用いた。
試薬は５０mM炭酸緩衝洗浄液（０．０５％Ｔｗｅｅｎ２０／ＰＢＳ  和光純薬）、ブロッキング剤（雪印乳業）、ＩｇＡ，ＩｇＭ，ＩｇＧの一次および二次抗体０．２Ｍクエン酸緩衝液（三徳化学）、ＡＢＴＳ溶液、基質溶液および反応停止液などを用いた。ＩｇＭ，ＩｇＡ，ＩｇＧに対する一次抗体を５０mM炭酸緩衝液（pH９．６）で１０００倍に希釈し、これを９６穴プレートに１００μＬずつ分注し、３７℃で１時間静置した。
【００４２】
洗浄液でプレートを３−４回洗浄後、４倍希釈ブロックエースを３００μＬずつ分注し、３７℃で１時間静置してブロッキングをおこなった。洗浄液でプレートを３−４回洗浄後ＩｇＭ，ＩｇＡ，ＩｇＧを含む培養上清を５０μＬずつ添加し、３７℃で１時間静置して反応させた。洗浄液でプレートを３−４回洗浄後、酵素標識抗ＩｇＭ，ＩｇＡ，ＩｇＧ二次抗体を９６穴プレートに１００μＬずつ分注し、３７℃で１時間静置した。
【００４３】
さらに洗浄液でプレートを３−４回洗浄後、基質液を９６穴プレートに１００μＬ各ウエルに添加し、３７℃で５−１５分間反応後、反応停止液を１００μＬずつ添加し、ＥＬＩＳＡ用マイクロプレート分光光度計を用いて各ウエルの４１５nmの吸光度を測定した。ＩｇＭ，ＩｇＡ，ＩｇＧ培養上清と並行し、ＩｇＭ，ＩｇＡ，ＩｇＧ標準溶液を添加し、その一次回帰直線から各培養液上澄み中のＩｇＭ，ＩｇＡ，ＩｇＧ量を定量した。
【００４４】
ＩｇＥ濃度の測定法は上記ＩｇＭ，ＩｇＡ，ＩｇＧ抗体濃度の測定方法とほぼ同一であるが、ビチオン標識抗ＩｇＥ抗体をプレートに１００μＬずつ分注した後、酵素標識アビジンを添加する、アビジン−ビチオン法を用いた。このプレートを３７℃で３０分間静置した。３〜４回洗浄後、基質液および反応停止液をそれぞれ添加、培養し、上記と同じようにＩｇＥ量を測定した。
【００４５】
結果を図２に示す。α−トコフェロール（α−Ｔｏｃ）食餌群では、アレルゲン吸収阻害因子であるＩｇＡのレベルを有意に増加させ、またセサミンとα−トコフェロール（Ｓｅｓ＋α−Ｔｏｃ）食餌群では、Ｉ型アレルギーの主役を演じるＩｇＥのレベルを有意に低下させた。これらのことから、セサミンおよびα−Ｔｏｃの併用が抗アレルギー的に働くことが示唆される。
【００４６】
考察
アレルギーを引き起こす化学伝達物質であるＬＴＣ4 の産生は、α−Ｔｏｃ食餌群及びＳｅｓ＋α−Ｔｏｃ食餌群で減少したが、セサミン（Ｓｅｓ）食餌群では増加した。またアレルギーを引き起こす別の化学伝達物質であるＰＧＥ２の産生に関しては、Ｓｅｓ食餌群及びα−Ｔｏｃ食餌群で減少傾向が見られたが、Ｓｅｓ＋α−Ｔｏｃ食餌群で増加した。これらの結果からセサミンとα−トコフェロールとは作用点が異なるが、アレルギー反応に対して抑制的に作用していることがわかる。さらにセサミンとα−トコフェロールを同時に投与することにより、両者の相乗作用が確認された。セサミンあるいはセサミンとα−トコフェロールなどの本発明の有効成分が免疫反応の中の一箇所に作用するのではなく、複数の反応を調節することにより、免疫反応の調節を行なっていることを示している。このようなアレルギー抑制因子を組み合わせて使用することにより、アレルギー疾患のアレルギー応答を減弱させ、健常人のアレルギー体質への移行を予防することが可能になるものと思われる。
【００４７】
実施例２
４週令（平均体重９６ｇ）のＢｒｏｗｎ−Ｎｏｒｗａｙ（ＢＮ）系雄ラットを１群８匹とし、６群に分けた。ひとつのグループは２０％カゼイン、５％コーン油、５％セルロース、３．５％ミネラル混合物（ＡＩＮ−ＴＮ）、１％ビタミン混合物（ＡＩＮ−ＴＭ）、０．２％重酒石酸コリン、０．３％ＤＬ−メチオニン、１５％コーンスターチ及び５０％シュクロースからなる普通食で飼育した。そして、残りの５グループはシュクロースを減じてすでに出願している特許（特開平１−２４３９９２）に従って、精製胡麻油より調製したセサミノール（化合物Ａ）、粗精製胡麻油より調製したセサモリン（化合物Ｂ）、又胡麻種子のアセトン抽出物より調製した２−（３，４−メチレンジオキシフェニル）−６−（３−メトキシ−４−ヒドロキシフェニル）−３，７−ジオキサビシクロ［３．３．０］オクタン（化合物Ｃ）、２，６−ビス（３−メトキシ−４−ヒドロキシフェニル）−３，７−ジオキサビシクロ［３．３．０］オクタン（化合物Ｄ）、２−（３，４−メチレンジオキシフェニル）−６−（３−メトキシ−４−ヒドロキシフェノキシ）−３，７−ジオキサビシクロ［３．３．０］オクタン（化合物Ｅ）をそれぞれ０．５％加え、さらに０．５％α−トコフェロールを加えた飼料で飼育した。３週間後、実施例１に従って、肺中のロイコトリエンＣ4 （ＬＴＣ4 ）濃度を調べた。普通食の肺中のＬＴＣ4 産生量が６２．７±３．９（mg／ｇ）に対して、化合物Ａ，Ｂ，Ｃ，Ｄ及びＥとα−トコフェロールを添加した飼料を与えることにより、それぞれ３２．１±４．６，３４．４±５．４，４０．２±３．８，４４．５±３．４，３９．７±４．７と有意に低下した。
【００４８】
実施例３
実験動物と飼料
４週令（平均体重１４７ｇ）のＳｐｒａｇｕｅ−Ｄａｗｌｅｙ（ＳＤ）系雄ラット（成和実験動物研究所）を１群６匹とし４群にわけた。ひとつのグループは２０％カゼイン、５％コーン油、５％セルロース、３．５％ミネラル混合物（ＡＩＮ−ＴＭ：アメリカ栄養研究所処方）、１％ビタミン混合物（ＡＩＮ−ＴＭ）、０．２％重酒石酸コリン、０．３％ＤＬ−メチオニン、１５％コーンスターチおよび５０％シュクロースからなる普通食で飼育した。そして、残りの３グループはシュクロースを減して、０．５％セサミンあるいは０．５％α−トコフェロールを加えた飼料で、さらに０．５％セサミン及び０．５％α−トコフェロールを加えた飼料でそれぞれ飼育した。セサミンは実施例１で使用したものを用いた。３週間飼育後エーテル麻酔後、腹部大動脈より採血し、肺および脾臓を摘出した。
【００４９】
ラットより摘出した肺および脾臓組織中のロイコトリエンＢ4 （ＬＴＢ4 ）およびロイコトリエンＣ4 （ＬＴＣ4 ）濃度は、常法に従ってラジオイムノアッセイにより定量した。さらに、血漿１．５mlを１Ｎ  ＨＣｌＯ4 １mlが入っている遠心管に入れ、混合した後、遠心（３０００rpm ，３０分）し、常法に従って、ヒスタミンを抽出、定量した。
【００５０】
結果を図３に示す。この図から明らかな通り脾臓組織中のＬＴＢ4 含量および血漿中のヒスタミン含量はセサミンとトコフェロールの投与により低下し、両者の投与により相加的に有意に低下した。また、肺組織中のＬＴＣ4 濃度はセサミンとトコフェロールの両者の投与により相乗的に有意に低下した。このようにセサミン単独あるいはセサミンとトコフェロールの組み合わせによりアレルギーに関与する化学伝達物質のレベルを有意に低下させた。
【００５１】
腸間膜リンパ節イムノグロブリン濃度の測定は、腸間膜リンパ節を切り取り、リンパ球をＲＰＭＩ１６４０培地（日水製薬株式会社）中で搾り出し、線維芽細胞を取り除くために３７℃で３０分間インキュベートした後、細胞浮遊液５mlにＬｙｍｐｈｏｌｙｔｅ−Ｒａｔ（Ｃｅｄａｒｌａｎｅ、カナダ）４mlを重ね、遠心（１５００ｘｇ，３０分）した。２相間のリンパ球層を回収し、ＲＰＭＩ１６４０培地で３回洗浄した。リンパ球は１０％胎児牛血清（ＦＢＳ，Ｉｎｔｅｒｇｅｎ社、アメリカ）／ＲＰＭＩ１６４０培地で培養した。腸間膜リンパ節リンパ球を２×１０6 細胞／mlに調製し、３７℃で６時間インキュベートした後、ＩｇＭ，ＩｇＡ，ＩｇＧ，ＩｇＥ量をエンザイムイムノアッセイで測定した。
【００５２】
結果を表２に示す。抗アレルギー性であるＩｇＡ量がセサミン投与により有意に上昇した。さらにアレルゲンとＩｇＥ抗体との反応を阻止するＩｇＧ量がセサミンとトコフェロールの両者の投与により相乗的に有意に上昇した。
以上のように、セサミンあるいはセサミンとトコフェロールを組み合わせることで、アレルギー症状の予防及び改善剤として使用することができる。
【表２】
0003818680.tif 000006
【００５３】
実施例４
バター製造工程の撹拌操作（チャーニング）でバターミルクが除かれたバター脂肪１００ｇに、セサミンとエピセサミンの混合物（セサミン：５１．３％、エピサセミン：４７．８％）を１．２ｇ、さらに酢酸トコフェロールを１．２ｇ加えて練圧操作（ワーキング）を行い、均等な組成として、本発明の有効成分を添加してなるアレルギー症状の予防又は改善作用を有するバターを得た。
【００５４】
実施例５
本発明の誘導体０．５ｇを無水ケイ酸２０．５ｇと混合し、これにトウモロコシデンプン７９ｇを加え、更に混合した。この混合物に１０％ハイドロキシプロピルセルロース・エタノール溶液１００mlを加え、常法通りねつ和し、押し出し、乾燥して顆粒剤を得た。
【００５５】
実施例６
セサミンとエピセサミンの混合物（セサミン：５１．３％、エピセサミン：４７．８％）３．５ｇ、酢酸トコフェロール０．５ｇを無水ケイ酸２０ｇと混合し、これに微結晶セルロース１０ｇ、ステアリン酸マグネシウム３．０ｇ、乳糖６０ｇを加え混合し、この混合物を単発式打錠機にて打錠し径７mm、重量１００mgの錠剤を製造した。
【００５６】
実施例７
本発明の誘導体２．５ｇを非イオン界面活性剤であるＴＯ−１０Ｍ（日光ケミカルズ）２００ｇに１２２℃で加熱溶解し、これに６０℃に加温した滅菌生理食塩水４．７９７５ｌを加えてよく撹拌し、これを無菌的にバイアルに分配し、密封して注射剤を製造した。
【００５７】
実施例８
ゼラチン１００重量部及び食添グリセリン３５重量部に水を加え５０〜６０℃で溶解し、粘度２００００cps のゼラチン皮膜を調製した。次に小麦胚芽油９５．１％、ビタミンＥ油２．９％、セサミン２％を混合し、内容物を調製した。これらを用いて、常法によりカプセル成型及び乾燥を行い、１粒あたり１８０mgの内容物を含有するソフトカプセルを製造した。該カプセル１粒中には、セサミンが３．６mg、α−トコフェロールが２．３４mg含まれていた。
【００５８】
臨床例１
アトピー性皮膚炎患者（５名）に、実施例６で調製した錠剤１錠を１日朝昼夕３回（１日あたりのジオキサビシクロ［３．３．０］オクタン誘導体の投与量は１０．８２mg、抗酸化剤の投与量は１．５５mg）、８週間経口投与し、その有効性を評価した。その結果、やや有効、有効、極めて有効と判断されるアトピー性皮膚炎患者に対する本発明による改善患者は３名であった。
【００５９】
臨床例２
アトピー性鼻炎患者（５名）に、実施例８で調製したカプセル１錠を１日朝昼夕３回（１日あたりのジオキサビシクロ［３．３．０］オクタン誘導体の投与量は１０．８mg、抗酸化剤の投与量は７．０２mg）、８週間経口投与し、その有効性を評価した。その結果、やや有効、有効、極めて有効と判断されるアトピー性鼻炎患者に対する本発明による改善患者は３名であった。
【００６０】
臨床例３
花粉症患者（５名）に、実施例８で調製したカプセル１錠を１日朝昼夕３回（１日あたりのジオキサビシクロ［３．３．０］オクタン誘導体の投与量は１０．８mg、抗酸化剤の投与量は７．０２mg）、８週間経口投与し、その有効性を評価した。その結果、やや有効、有効、極めて有効と判断されるアトピー性鼻炎患者に対する本発明による改善患者は２名であった。
【図面の簡単な説明】
【図１】図１は、ＢＮ系雄ラットにセサミン及び／又はトコフェロールを添加した飼料を与えた場合の肺組織中のＬＴＣ4 含量の相違を示すグラフである。
【図２】図２は、セサミン及び／又はトコフェロールを添加した飼料を投与したＢＮ系雄ラットの血清中のイムノグロブリンＩｇＡ，ＩｇＥ，ＩｇＧ及びＩｇＭの量を示すグラフである。
【図３】図３は、ＳＤ系雄ラットにセサミン及び／又はトコフェロールを添加した飼料を与えた場合の脾臓組織中のＬＴＢ4 含量の相違、肺組織中のＬＴＣ4 含量の相違、血漿中のヒスタミン濃度の相違を示すグラフである。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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