(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
熟地黄の３０％以上のエタノール抽出エキスを有効成分として含有することを特徴とする赤血球変形能こう進剤。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【産業上の利用分野】
本発明は、赤血球変形能こう進作用、造血作用及び線溶系活性化作用を介して静脈血流を増加する熟地黄のエタノール抽出エキスを有効成分として含有することを特徴とする血流改善剤に関する。
【０００２】
【従来の技術】
地黄は、ゴマノハグサ科のＲｅｈｍａｎｎｉａ  ｇｌｕｔｉｎｏｓａまたはその他同属植物の根をそのままあるいは蒸したものとされ、中国では古くから修治法の違いにより、生地黄（生の根を日陰の砂に貯えたもの）、乾地黄（根を陽乾したもの）、熟地黄（酒に浸し蒸して乾燥したもの）と称されている。それぞれ漢方的には薬効を異にしている。特に、熟地黄は虚労、老化現象の改善薬として漢方処方に配剤されてきた重要な漢薬である。
【０００３】
熟地黄の成分は、ｓａｃｃａｒｉｄｅ成分に関し、生地黄に多く含まれるｓｔａｃｈｙｏｓｅの含量が低く、ｍａｎｎｉｎｏｔｒｉｏｓｅの含量が高いとの報告がある（久保ら  第２１回分析討論会にて発表）。
【０００４】
【発明が解決しようとする課題】
本発明者らは、虚弱体質、疲労、冷え症、肩こりなどの末梢循環不全による疾患の改善、治療に有効で、安全性の高い薬剤を広く天然界から探索し、有用な医薬品等に供する目的で検討を行った。
【０００５】
【課題を解決するための手段】
本発明者らは、地黄の種々の抽出エキスを検討した結果、熟地黄のエタノール抽出エキスが赤血球変形能をこう進させ、造血作用を有し、且つ線溶系活性化作用を有することを見いだし、更にその知見に基づいて発明を完成した。
【０００６】
即ち、本発明は、熟地黄の３０％以上のエタノール抽出エキスを有効成分として含有することを特徴とする赤血球変形能こう進剤、及び熟地黄の３０％以上のエタノール抽出エキスを有効成分として含有することを特徴とする、赤血球変形能をこう進することによる血流改善剤である。
【０００７】
本発明の熟地黄とは、ゴマノハグサ科ジオウの根塊を酒にて蒸したもの、あるいは乾燥し、酒を加えた後に日干しする過程を繰り返して作ったものである。第１２改正日本薬局方のものあるいは中国産のものを使用することができる。
【０００８】
本発明のエタノール抽出エキスは、３０％以上のエタノールを含有した水溶液で抽出するエキスであるが、好ましくは３０％〜５０％のエタノールを含有した水溶液で抽出するエキスである。
【０００９】
本発明の熟地黄のエキスは、一般の抽出方法によって得られる。即ち、熟地黄を細切後、１０倍量の３０％以上のエタノールで抽出し濾過し、その濾液を減圧下でエタノールを留去後、抽出エキスを得る。
【００１０】
このようにして、得られるエキスは、そのままあるいは必要に応じて他の公知の添加剤、例えば、賦形剤、崩壊剤、結合剤、滑沢剤、抗酸化剤、コーティング剤、着色剤、矯味矯臭剤、界面活性剤、可塑剤などを混合して常法により、顆粒剤、散剤、カプセル剤、錠剤、ドライシロップ剤、液剤などの経口製剤とすることができる。
【００１１】
賦形剤としては、たとえばマンニトール、キシリトール、ソルビトール、ブドウ糖、白糖、乳糖、結晶セルロース、結晶セルロース・カルボキシメチルセルロースナトリウム、リン酸水素カルシウム、コムギデンプン、コメデンプン、トウモロコシデンプン、バレイショデンプン、カルボキシメチルスターチナトリウム、デキストリン、αーシクロデキストリン、βーシクロデキストリン、カルボキシビニルポリマー、軽質無水ケイ酸、酸化チタン、メタケイ酸アルミン酸マグネシウム、ポリエチレングリコール、中鎖脂肪酸トリグリセリドなどが挙げられる。
【００１２】
崩壊剤としては、低置換度ヒドロキシプロピルセルロース、カルボキシメチルセルロース、カルボキシメチルセルロースカルシウム、カルボキシメチルセルロースナトリウム、クロスカルメロースナトリウム・Ａ型（アクチゾル）、デンプン、結晶セルロース、ヒドロキシプロピルスターチ、部分アルファー化デンプンなどが挙げられる。
【００１３】
結合剤としては、たとえばメチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、ポリビニールピロリドン、ゼラチン、アラビアゴム、エチルセルロース、ポリビニルアルコール、プルラン、アルファー化デンプン、寒天、タラガント、アルギン酸ナトリウム、アルギン酸プロピレングリコールエステルなどが挙げられる。
【００１４】
滑沢剤としては、たとえばステアリン酸、ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸カルシウム、ステアリン酸ポリオキシル、セタノール、タルク、硬化油、ショ糖脂肪酸エステル、ジメチルポリシロキサン、マイクロクリスタリンワックス、ミツロウ、サラシミツロウなどが挙げられる。
【００１５】
抗酸化剤としては、たとえばジブチルヒドロキシトルエン（ＢＨＴ）、没食子酸プロピル、ブチルヒドロキシアニソール（ＢＨＡ）、α−トコフェロール、クエン酸などが挙げられる。
【００１６】
コーティング剤としては、たとえばヒドロキシプロピルメチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、メチルセルロース、エチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロースフタレート、ヒドロキシプロピルメチルセルロースアセテートサクシネート、カルボキシメチルエチルセルロース、酢酸フタル酸セルロース、ポリビニルアセタールジエチルアミノアセテート、アミノアルキルメタアクリレートコポリマー、ヒドロキシプロピルメチルセルロースアセテートサクシネート、メタアクリル酸コポリマー、セルロースアセテートトリメリテート（ＣＡＴ）、ポリビニルアセテートフタレート、セラックなどが挙げられる。
【００１７】
着色剤としては、たとえばタール色素、酸化チタンなどが挙げられる。
【００１８】
矯味矯臭剤としては、クエン酸、アジピン酸、アスコルビン酸、メントールなどが挙げられる。
【００１９】
界面活性剤としては、たとえばポリオキシエチレン硬化ヒマシ油、モノステアリン酸グリセリン、モノステアリン酸ソルビタン、モノパルミチン酸ソルビタン、モノラウリン酸ソルビタン、ポリオキシエチレンポリオキシプロピレンブロックコポリマー、ポリソルベート類、ラウリル硫酸ナトリウム、マクロゴール類、ショ糖脂肪酸エステルなどが挙げられる。
【００２０】
可塑剤としては、クエン酸トリエチル、トリアセチン、セタノールなどが挙げられる。
【００２１】
ドリンク剤の場合、必要に応じて他の生理活性成分、生薬、ミネラル、ビタミン、ホルモン、栄養成分、香料などを混合することにより、嗜好性をもたせることもできる。
【００２２】
これらの医薬品として、許容される添加物はいずれも、一般的に製剤に用いられるものが使用できる。
【００２３】
本発明の血流改善剤の有効成分である熟地黄の３０％〜５０％のエタノール抽出エキスは、原生薬換算量として一日０．１ｇ〜３０ｇ用いる。特に一日１ｇ〜１０ｇ用いることが好ましい。
【００２４】
【発明の効果】
本発明の血流改善剤の有効成分である熟地黄の３０％〜５０％のエタノール抽出エキスは、血球成分の中で最も血流量に影響を及ぼすものの一つである赤血球変形能を高め、造血作用を有し、アジュバント関節炎ラットに惹起される赤血球変形能の低下、貧血の発現、血管、皮膚での結合組織の増殖を有意に抑制し、線溶系活性化作用を有し、その結果静脈血流を増加するので、虚弱体質、疲労、冷え症、肩こりなどの末梢循環不全による疾患の改善、治療に有効である。
【００２５】
【実施例】
本発明の処方例および試験例を挙げ、更に具体的に示す。
0003861295.tif 000002
【００２６】
0003861295.tif 000003
【００２７】
0003861295.tif 000004
【００２８】
0003861295.tif 000005
【００２９】
0003861295.tif 000006
【００３０】
0003861295.tif 000007
【００３１】
0003861295.tif 000008
【００３２】
試験例１〔赤血球変形能に及ぼす影響〕
（検体）
検体１；北京産熟地黄を細切後、１０倍量の水で、８０℃、２時間、２回加熱抽出し、熱時濾過した。凍結乾燥にて水を留去後、水抽出エキスを得、被検体に供した。なお、北京産熟地黄水エキスの収率は６０．４％であった。
【００３３】
検体２；北京産熟地黄を細切後、１０倍量の１０％エタノールで検体１と同様に抽出、濾過した。減圧下でエタノールを留去後、凍結乾燥し、得られたエキスを被検体に供した（収率；５８．１％）。
【００３４】
検体３；検体２の１０％エタノールを２０％エタノールで抽出した以外は同様にして得られたエキス（収率；５８．３％）
検体４；検体２の１０％エタノールを３０％エタノールで抽出した以外は同様にして得られたエキス（収率；６０．５％）
検体５；検体２の１０％エタノールを４０％エタノールで抽出した以外は同様にして得られたエキス（収率；５９．９％）
検体６；検体２の１０％エタノールを５０％エタノールで抽出した以外は同様にして得られたエキス（収率；５９．３％）
検体７；検体２の１０％エタノールを９９．８％エタノールで抽出した以外は同様にして得られたエキス（収率；６．２％）
【００３５】
（試験方法）
Ｈ．Ｌ．ＲｅｉｄらのＪ．Ｃｌｉｎ．Ｐａｔｈ．，第２９巻，第８５５頁（１９７６年）に記載に準じて行った。
【００３６】
即ち、ウイスター系雄性ラット（１群１０匹）に各検体を２００ｍｇ／ｋｇ、７日間連日経口投与し、その最終投与１時間後にペントバルビタール（４４．２ｍｇ／ｋｇ）麻酔下、腹部大静脈から採血した。
【００３７】
この血液から遠心分離により赤血球を分離し、得られた赤血球浮遊液（ヘマトリット値２０％）を１０ｃｍＨ2Ｏの陰圧で吸引し、赤血球浮遊液１．０ｍｌが ポアサイズ３μｍのフィルターを通過するのに要する時間（秒）を測定し、赤血球変形能の指標とした。
（結果）結果を表１に示す。
【００３８】
【表１】
0003861295.tif 000009
【００３９】
コントロール；検体無投与ラット群、＊；Ｐ＜０．０５（コントロール値との比較）。
【００４０】
検体４〜７投与で有効であった。
【００４１】
試験例２
（検体）
試験例１の検体６を用いた。
（ａ；正常ラットによる試験方法）
試験例１と同様にして行った。
（結果）結果を表２に示す。
【００４２】
【表２】
0003861295.tif 000010
【００４３】
コントロール；検体無投与ラット群、＊ｐ＜０．０５（コントロール値との比較）
検体６は、５０および２００ｍｇ／ｋｇの投与量で赤血球変形能をこう進した。
【００４４】
（ｂ；アジュバント関節炎ラットによる試験方法）
Ｈ．ＮａｋａｍｕｒａらのＪ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．Ｅｘｐ．Ｔｈｅｒ．，第２１１巻，第２０頁（１９７９年）に準じ行った。
【００４５】
すなわち、ＳＤ系雄性ラット（１群１２匹）にアジュバント関節炎を惹起し、その３０日後にペントバルビタール麻酔下で腹部大静脈から採血し、遠心分離により赤血球を得た後、赤血球変形能を測定した。なお、アジュバント関節炎は、乾燥結核死菌体（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｂｕｔｙｒｉｃｕｍ）を粉砕した後、鉱物油にて１％懸濁とし、滅菌したもの（アジュバント）をＳＤ系雄性ラットの右後肢足蹠および尾部の皮内に注射して惹起した。被検体はアジュバント関節炎惹起日より連日投与を行った。
（結果）結果を表３に示す。
【００４６】
【表３】
0003861295.tif 000011
【００４７】
コントロール１；検体無投与正常ラット群、コントロール２；検体無投与アジュバント関節炎ラット群、＊；Ｐ＜０．０５（コントロール２値との比較）
検体６投与は、アジュバント関節炎の随伴症状である赤血球変形能の低下を回復させ、その回復率は２００ｍｇ／ｋｇの投与量で６２．０％であった。
【００４８】
試験例３〔造血系に及ぼす影響〕
（検体）
試験例２（ａ）と同様。
（ａ；正常ラットによる血液像の測定法）
ウイスター系雄性ラット（１群９〜１０匹）に被検体（水に懸濁）を１日１回７日間経口投与し、その最終投与１時間後にペントバルビタール（４４．２ｍｇ）麻酔下で後大静脈より採血した。赤血球数は自動計測法（多項目自動血球分析装置  NE-8000、東亜医用電子）により、網赤血球数をアルゴンレーザーを用い たフローサイトメトリー法（自動網赤血球測定装置  R-1000、東亜医用電子）により測定した。
（結果）結果を表４に示す。
【００４９】
【表４】
0003861295.tif 000012
【００５０】
コントロール；検体無投与ラット群、＊；Ｐ＜０．０５（コントロール値との比較）
【００５１】
（ｂ；アジュバント関節炎ラットによる血液像の測定法）
ＳＤ系雄性ラット（１群１２匹）にアジュバント関節炎を惹起し、その３０日後にペントバルビタール麻酔下で腹部大静脈から採血した。赤血球数は自動計測法（多項目自動血球分析装置  NE-8000、東亜医用電子）により、網赤血球数を アルゴンレーザーを用いたフローサイトメトリー法（自動網赤血球測定装置  R-1000、東亜医用電子）により測定した。
（結果）結果を表５に示す。
【００５２】
【表５】
0003861295.tif 000013
【００５３】
コントロール１；検体無投与ラット群、コントロール２；検体無投与アジュバント関節炎ラット群、＊；Ｐ＜０．０５，＊＊；Ｐ＜０．０１（コントロール２値との比較）、検体６投与は、アジュバントによる赤血球数の低下を抑制した。
【００５４】
試験例４〔線溶系に及ぼす影響〕
（検体）
試験例２（ａ）と同様。
（ａ；正常ラットによるユーグロブリン溶解時間の測定法）
ウイスター系雄性ラット（１群７〜８匹）に被検体（水に懸濁）を１日１回７日間経口投与し、その最終投与１時間後にペントバルビタール（４４．２ｍｇ）麻酔下で後大静脈より採血した。その血液に３．８％クエン酸ナトリウムを１／１０量加え、４℃、１８００ｇ、１０分間遠心分離して得た血しょうを用いて、ユーログロブリン溶解時間（ＥＬＴ）を  Ｋ．Ｎ．ＫａｕｌｌａらのＪ．Ｃｌｉｎ．Ｐａｔｈ．，第２９巻，第１０４頁（１９５８年）に準じて測定した。
【００５５】
即ち、血しょう０．７ｍｌに氷冷０．０１６％酢酸を加えてｐＨ５．５〜５．７に調整し、４℃、３０分間放置した。生じた沈渣を１８００ｇ、１０分間遠心分離し、血しょうユーログロブリン画分を１／１５Ｎリン酸緩衝液０．７ｍｌに溶解した後、トロンビン溶液（１２５Ｕ／ｍｌ）０．０４ｍｌを加えて凝固させた。  ３７℃でインキュベーションしてフィブリンの凝固塊が完全に溶解するまでの時間を測定し、ＥＬＴとした。
（結果）結果を表６に示す。
【００５６】
【表６】
0003861295.tif 000014
【００５７】
コントロール；検体無投与ラット群．
【００５８】
（ｂ；アジュバント関節炎ラットによるユーグロブリン溶解時間の測定法）
ＳＤ系雄性ラット（１群１２匹）にアジュバント関節炎を惹起し、その３０日後にペントバルビタール麻酔下で腹部大静脈から採血し、遠心分離により得た血しょうを用いて、ユーログロブリン溶解時間（ＥＬＴ）を試験例４（ａ）と同様な方法にて測定した。
（結果）結果を表７に示す。
【００５９】
【表７】
0003861295.tif 000015
【００６０】
コントロール１；検体無投与ラット群、コントロール２；検体無投与アジュバント関節炎ラット群、＊；Ｐ＜０．０５、＊＊；Ｐ＜０．０１（コントロール２値との比較）
【００６１】
試験例５〔結合組織に及ぼす影響〕
（検体）
試験例２（ａ）と同様。
（実験方法）
ＳＤ系雄性ラット（１群１２匹）にアジュバント関節炎を惹起し、その３０日後にペントバルビタール麻酔下で、胸部大動脈、腹部皮膚（正中線の中央付近で、正中線から約５ｍｍ離れた部位）を摘出し、各組織中の結合組織増殖の指標としてヒドロキシプロリン量をＷｏｓｓｎｅｒの方法（Ａｒｃｈ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．、第９３巻、４４０頁、１９６１年）で測定した
即ち、湿重量を精秤した各組織を６Ｎ塩酸溶液にて１３０℃、３時間加水分解し、濾過後、その濾液を水酸化ナトリウム溶液にて中和したものを試料溶液とした。この溶液２ｍｌに０．０５ＭクロラミンＴ溶液１．０ｍｌを加え、２０分間室温放置した後、３．１５Ｍ過塩素酸溶液１．０ｍｌを添加し、反応を停止した。反応停止５分後に、さらに２０％ ρ−ジメチルアミノベンズアルデヒド溶液 １．０ｍｌを加え、６０℃で２０分間インキュベートした後、測定波長５７７ｎｍにおける吸光度を測定し、既知濃度のヒドロキシプロリン検量線から各組織のヒドロキシプロリン量を求めた。
（結果）結果を表８に示す。
【００６２】
【表８】
0003861295.tif 000016
【００６３】
コントロール１；検体無投与ラット群、コントロール２；検体無投与アジュバント関節炎ラット群、＊；Ｐ＜０．０５、＊＊；Ｐ＜０．０１（コントロール２値との比較）、検体６投与は、アジュバント関節炎に伴う、胸部大動脈および腹部皮膚の結合組織の増加を抑制した。