(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
イグサ品種のうち品種「ひのみどり」に特異的に存在しないゲノムDNAの塩基配列を含むゲノムDNA断片であって、イグサ品種のうち品種「下増田在来品種」、「千丁在来品種」、「あさなぎ」、「せとなみ」、「ふくなみ」、「文政在来品種」、「いそなみ」、「きよなみ」、「筑後みどり」、「岡山３号」、「くまがわ」、「高須在来品種」、「さざなみ」、「しらぬい」、「岡山F系」、「岡山みどり」のいずれかの品種について下記（ａ）から（ｅ）の工程を、順次行うことによってゲノムDNA断片を分画し、二次元電気泳動の一次元目において1050から1100bp、二次元目において450から500bpと推定されるゲノムDNA断片。
（ａ）6塩基（TCCGGA）を認識切断する制限酵素BspEIによりゲノムDNAを切断する工程
（ｂ）ゲノムDNAの切断末端を標識する工程
（ｃ）ゲノムDNA断片を一次元電気泳動により分画する工程
（ｄ）6塩基（GAATTC）を認識切断する制限酵素EcoRIによりゲノムDNA断片を切断する工程
（ｅ）ゲノムDNA断片のバンド群を二次元電気泳動により分画する工程
【請求項２】
イグサが品種「ひのみどり」であるか否かを識別する方法であって、品種識別を行うことを望むイグサにおいて、イグサ品種のうち品種「ひのみどり」に特異的に存在しないゲノムDNA断片の検出を、下記（ａ）から（ｅ）に記載の工程を含む二次元電気泳動により行い、二次元電気泳動の一次元目において1050から1100bp、二次元目において450から500bpと推定されるゲノムDNA断片を検出することを特徴とする方法。
（ａ）6塩基（TCCGGA）を認識切断する制限酵素BspEIによりゲノムDNAを切断する工程
（ｂ）ゲノムDNAの切断末端を標識する工程
（ｃ）ゲノムDNA断片を一次元電気泳動により分画する工程
（ｄ）6塩基（GAATTC）を認識切断する制限酵素EcoRIによりゲノムDNA断片を切断する工程
（ｅ）ゲノムDNA断片のバンド群を二次元電気泳動により分画する工程
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は、イグサ主要栽培品種のうち、最も優良な品質を持ち産業価値の高い品種「ひのみどり」と他の品種を識別するためのDNAマーカーおよび該マーカーを標的としてイグサ主要栽培品種から品種「ひのみどり」を識別する方法に関する。
【０００２】
【従来の技術】
イグサは主に栄養繁殖で増殖・栽培されており、これまで育成された品種は、栄養系品種である。
【０００３】
従来、イグサの品種特性は茎長（草丈）、茎の太さ、幹茎色（茎の色）、茎数（一株あたりの茎の数）、花序着生率（着花の頻度）、先枯程度（先端部分の枯れの程度）など産業上の品質に関わる特徴で表されてきた。しかし、これらの特性は量的形質であって、生育環境の変化に応じてそれらの形質も変化するため、一定の栽培環境における品種の特徴を説明することはできても、確実に品種を識別するマーカーとしては利用できなかった。このため、いったん入手経路が不確実になるとどの品種であるのか断定することは困難であった。その結果、いくつかの品種が混ざって製品の均一性が失われたり、あるいは優良品種の盗難、不法栽培を防止・規制することができなかった。
【０００４】
近年の分子生物学的技術の適用に関しては、九州農業試験場と熊本県農業研究センターい業研究所が平成9〜10年に「RAPD法によるイグサ品種識別」について共同研究を行った。しかし、DNA多型率が極めて低い結果となり、実用的な品種識別マーカーは全く得られなかった。このため、イグサの品種を識別することは極めて困難であった。
【０００５】
【発明が解決しようとする課題】
本発明は、このような状況に鑑みてなされたものであり、その目的は、イグサの品種識別に利用しうるDNAマーカーを同定し、イグサ産業における品種識別の判断材料を提供することにある。
【０００６】
【課題を解決するための手段】
本発明者らは、上記課題を解決すべく鋭意研究を行った結果、イグサ主要栽培品種17品種を制限酵素ランドマークゲノムスキャニング法（RLGS法；特許第2794047号公報参照）に供することにより、これら品種のゲノムDNA断片の中から、優良イグサ品種「ひのみどり」に特異的なDNA断片を同定することに成功した。本発明者らにより同定された、このようなDNA断片に含まれる特異的な塩基配列は、イグサ品種から品種「ひのみどり」を識別するための重要なDNAマーカーとなる。特に、制限酵素BspEIとEcoRIを用いた二次元電気泳動の一次元目において約1050から1100bp、二次元目において約450から500bpの分子量と推定されるゲノムDNA断片（図1矢印）は、その特異性が顕著である（品種「ひのみどり」では検出されず、他のイグサ品種では明確に検出された）ことから、イグサ品種識別のためのDNAマーカーとして好適である。本発明は、世界で初めてイグサ品種の識別に成功しうるDNAマーカーを同定したものである。
【０００７】
即ち、本発明は、イグサ主要栽培品種のうち、最も優良な品質を持ち産業価値の高い品種「ひのみどり」と他の品種を識別するためのDNAマーカーおよび該マーカーを標的としてイグサ主要栽培品種から品種「ひのみどり」を識別する方法に関し、より詳しくは、下記（１）から（１０）に記載の発明を提供するものである。
（１）  イグサ品種のうち品種「ひのみどり」に特異的に存在しない若しくは存在するゲノムDNAの塩基配列を含むゲノムDNA断片。
（２）  各イグサ品種について、下記（ａ）から（ｅ）の工程を、順次行うことによってゲノムDNA断片を分画し、各イグサ品種における分画されたDNA断片のバンドを比較することにより同定された、（１）に記載のゲノムDNA断片。
（ａ）6塩基（TCCGGA）を認識切断する制限酵素BspEIによりゲノムDNAを切断する工程
（ｂ）ゲノムDNAの切断末端を標識する工程
（ｃ）ゲノムDNA断片を一次元電気泳動により分画する工程
（ｄ）6塩基（GAATTC）を認識切断する制限酵素EcoRIによりゲノムDNA断片を切断する工程
（ｅ）ゲノムDNA断片のバンド群を二次元電気泳動により分画する工程
（３）  （２）に記載のDNA断片であって、二次元電気泳動の一次元目において約1050から1100bp、二次元目において約450から500bpの分子量と推定されるゲノムDNA断片。
（４）  イグサが品種「ひのみどり」であるか否かを識別する方法であって、品種識別を行うことを望むイグサにおいて、イグサ品種のうち品種「ひのみどり」に特異的に存在しない若しくは存在するゲノムDNAの塩基配列または該塩基配列に対応するcDNAの塩基配列を検出することを特徴とする方法。
（５）  品種「ひのみどり」に特異的に存在しない若しくは存在する塩基配列の検出を、二次元電気泳動において（２）に記載のゲノムDNA断片を検出することにより行う、（４）に記載の方法。
（６）  品種「ひのみどり」に特異的に存在しない若しくは存在する塩基配列の検出を、二次元電気泳動において（３）に記載のゲノムDNA断片を検出することにより行う、（４）に記載の方法。
（７）  品種「ひのみどり」に特異的に存在しない若しくは存在する塩基配列の検出を、下記工程により行う、（４）に記載の方法。
（ａ）品種「ひのみどり」に特異的に存在しない若しくは存在する塩基配列に特異的にハイブリダイズするオリゴヌクレオチドをプライマーとして、品種識別を行うことを望むイグサ由来のゲノムDNAまたはmRNAを鋳型に、ポリメラーゼ連鎖反応を行う工程
（ｂ）該ポリメラーゼ連鎖反応による増幅産物を検出する工程
（８）  品種「ひのみどり」に特異的に存在しない若しくは存在する塩基配列の検出を、下記工程により行う、（４）に記載の方法。
（ａ）品種「ひのみどり」に特異的に存在しない若しくは存在する塩基配列を挟み込むように設計された一対のオリゴヌクレオチドをプライマーとして、品種識別を行うことを望むイグサ由来のゲノムDNAまたはmRNAを鋳型に、ポリメラーゼ連鎖反応を行う工程
（ｂ）該ポリメラーゼ連鎖反応による増幅産物を検出する工程
（９）  さらに、増幅産物の塩基配列を決定する工程を含む、（８）に記載の方法。
（１０）  イグサが品種「ひのみどり」であるか否かを識別するためのキットであって、下記（ａ）または（ｂ）を含むキット。
（ａ）イグサ品種のうち品種「ひのみどり」に特異的に存在しない若しくは存在する塩基配列に特異的にハイブリダイズするオリゴヌクレオチド
（ｂ）イグサ品種のうち品種「ひのみどり」に特異的に存在しない若しくは存在する塩基配列を挟み込むように設計された一対のオリゴヌクレオチド
【０００８】
【発明の実施の形態】
本発明は、イグサ品種のうち品種「ひのみどり」に特異的なゲノムDNAの塩基配列を含むゲノムDNA断片を提供する。本発明のゲノムDNA断片は、品種「ひのみどり」に特異的に存在しない塩基配列を含むものであっても、品種「ひのみどり」に特異的に存在する塩基配列を含むものであってもよい。このようなゲノムDNA断片は、例えば、RLGS法により同定することができる。RLGS法は、下記（ａ）から（ｅ）の工程を、順次行うことによってゲノムDNA断片を分画する方法である。
（ａ）第一の制限酵素によりゲノムDNAを切断する工程
（ｂ）ゲノムDNAの切断末端を標識する工程
（ｃ）ゲノムDNA断片を一次元電気泳動により分画する工程
（ｄ）第二の制限酵素によりゲノムDNA断片を切断する工程
（ｅ）ゲノムDNA断片のバンド群を二次元電気泳動により分画する工程
【０００９】
RLGS法については、公報（特許第2794047号公報）の記載の準じて実施することができる。
【００１０】
本発明のゲノムDNA断片の好ましい態様の一つは、第一の制限酵素として6塩基（TCCGGA）を認識切断する制限酵素BspEIを、第二の制限酵素として6塩基（GAATTC）を認識切断する制限酵素EcoRI）を利用したRLGS法により同定されるゲノムDNA断片である。即ち、各イグサ品種について、上記酵素を利用したRLGS法を実施することによってゲノムDNA断片を分画し、各イグサ品種における分画されたDNA断片のバンドを比較することにより同定されたゲノムDNA断片である。
【００１１】
本発明のゲノムDNA断片の最も好ましい態様の一つは、上記RLGS法により同定されたDNA断片であって、二次元電気泳動の一次元目において約1050から1100bp、二次元目において約450から500bpの分子量と推定されるゲノムDNA断片である（図中の矢印）。このゲノムDNA断片は、品種「ひのみどり」では検出されず、他のイグサ品種では明確に検出される。従って、このゲノムDNAに含まれる塩基配列は、イグサ品種識別のための優れたDNAマーカーとなる。
【００１２】
本発明は、また、イグサが品種「ひのみどり」であるか否かを識別する方法を提供する。この方法は、イグサ品種のうち品種「ひのみどり」に特異的な塩基配列を標的とするものであり、より詳しくは、品種識別を行うことを望むイグサにおいて、イグサ品種のうち品種「ひのみどり」に特異的に存在しない若しくは存在するゲノムDNAの塩基配列または該塩基配列に対応するcDNAの塩基配列を検出することを特徴とするものである。
【００１３】
本発明の品種「ひのみどり」の識別方法の一つの態様は、上記RLGS法を利用した方法である。即ち、品種識別を行うことを望むイグサを制限酵素BspEIおよび制限酵素EcoRIを利用したRLGS法に供し、あらかじめ同定されている品種「ひのみどり」に特異的なゲノムDNA断片の存在の有無を検出する。この検出の結果、該ゲノムDNA断片の存在の有無が品種「ひのみどり」と同様であれば、品種識別の対象としたイグサは、品種「ひのみどり」であると判定される。一方、ゲノムDNA断片の存在の有無が品種「ひのみどり」と異なれば、品種識別の対象としたイグサは、品種「ひのみどり」ではないと判定される。
【００１４】
このRLGS法において、検出の対象とするゲノムDNA断片としては、上記した二次元電気泳動の一次元目において約1050から1100bp、二次元目において約450から500bpの分子量と推定されるゲノムDNA断片が好ましい。品種識別の対象としたイグサにおいて、このDNA断片が検出されなければ、このイグサは、品種「ひのみどり」であると判定され、逆に、このDNA断片が検出されれば、品種「ひのみどり」ではないと判定される。
【００１５】
本発明の品種「ひのみどり」の識別方法における他の一つの態様は、ポリメラーゼ連鎖反応を利用した方法である。ポリメラーゼ連鎖反応を利用した方法の一つは、品種「ひのみどり」に特異的に存在しない若しくは存在する塩基配列に特異的なプライマーを用いる方法であり、他の一つは、品種「ひのみどり」に特異的に存在しない若しくは存在する塩基配列を挟み込むように設計された一対のプライマーを用いる方法である。
【００１６】
前者の方法においては、まず、品種「ひのみどり」に特異的に存在しない若しくは存在する塩基配列に特異的にハイブリダイズするオリゴヌクレオチドをプライマーとして、品種識別を行うことを望むイグサ由来のゲノムDNAまたはmRNAを鋳型に、ポリメラーゼ連鎖反応を行い、次いで、該ポリメラーゼ連鎖反応による増幅産物を検出する。このような設計のプライマーを用いたポリメラーゼ連鎖法によれば、品種識別の対象となるイグサにおいて、品種「ひのみどり」に特異的に存在しない若しくは存在する塩基配列が存在する場合のみ、ポリメラーゼ連鎖反応の増幅産物が検出される。従って、この増幅産物の有無を検出することにより、品種識別の対象となるイグサが、品種「ひのみどり」であるか否かを判定することができる。
【００１７】
DNAマーカーがゲノムDNAのエクソン中に存在する場合には、mRNAを鋳型としたRT-PCRを利用することも可能である。また、Taqman（量的PCR検出）システム（Roche社）を利用すれば、蛍光により増幅産物の有無を検出することが可能である。このシステムによれば、電気泳動の手間も省けるため短時間で品種識別を行うことが可能であり、税関や植物検疫の検査への実用化に好適である。
【００１８】
後者の方法においては、まず、品種「ひのみどり」に特異的に存在しない若しくは存在する塩基配列を挟み込むように設計された一対のオリゴヌクレオチドをプライマーとして、品種識別を行うことを望むイグサ由来のゲノムDNAまたはmRNAを鋳型に、ポリメラーゼ連鎖反応を行い、次いで、該ポリメラーゼ連鎖反応による増幅産物を検出する。品種「ひのみどり」と他のイグサ品種との塩基配列の相違が、塩基配列の長さに影響を与える場合（即ち、塩基の欠失または付加である場合）には、この方法で検出される増幅産物の分子量が、品種「ひのみどり」と他の品種とで異なる。従って、このようなDNAマーカーを利用すれば、増幅産物の分子量を測定することにより、品種識別の対象となるイグサが、品種「ひのみどり」であるか否かを判定することができる。この方法においても、DNAマーカーがゲノムDNAのエクソン中に存在する場合には、mRNAを鋳型としたRT-PCRを利用することも可能である。
【００１９】
この方法においては、さらに、増幅産物の塩基配列を決定する工程を含むことができる。これにより、品種識別の対象となるイグサが、品種「ひのみどり」であるか否かを、塩基配列を基に直接的かつ確実に判別することが可能となる。
【００２０】
また、本発明は、イグサが品種「ひのみどり」であるか否かを識別するためのキットを提供する。本発明のキットには、（ａ）イグサ品種のうち品種「ひのみどり」に特異的に存在しない若しくは存在する塩基配列に特異的にハイブリダイズするオリゴヌクレオチド、または（ｂ）イグサ品種のうち品種「ひのみどり」に特異的に存在しない若しくは存在する塩基配列を挟み込むように設計された一対のオリゴヌクレオチド、を評品として含むことができる。
【００２１】
（ａ）のオリゴヌクレオチドとしては、品種「ひのみどり」に特異的に存在しない若しくは存在する塩基配列にポリメラーゼ連鎖反応によるDNAの増幅が生じる程度にハイブリダイズし、かつ、該塩基配列を有しない鋳型核酸にはポリメラーゼ連鎖反応によるDNAの増幅が生じる程度にハイブリダイズしないものであれば、特に制限はない。このような設計のオリゴヌクレオチドは、プライマー対の少なくとも一方であればよい。このようなオリゴヌクレオチドとしては、例えば、3'末端側が、品種「ひのみどり」に特異的に存在しない若しくは存在する塩基配列に相補的な塩基配列であるオリゴヌクレオチドを例示することができる。
【００２２】
（ｂ）のオリゴヌクレオチドとしては、品種「ひのみどり」に特異的に存在しない若しくは存在する塩基配列を含む鋳型核酸からはこれら塩基配列を含む増幅産物を、該塩基配列を含まない鋳型核酸からは、該塩基配列を含まない対応する増幅産物を生じさせるものであれば、特に制限はない。このようなオリゴヌクレオチドとしては、二本鎖である鋳型DNAのそれぞれの鎖においてDNAマーカー領域の5'側にハイブリダイズする一対のオリゴヌクレオチドを例示することができる。
【００２３】
また、イグサが品種「ひのみどり」であるか否かの識別を上記のようなDNAレベルだけでなく、タンパク質レベルで行うことも考えられる。即ち、DNAマーカーがゲノムDNAの遺伝子コード領域に存在する場合には、品種「ひのみどり」と他のイグサ品種との塩基配列の相違は、タンパク質のアミノ酸配列の相違になる（但し、コドンの縮重により塩基配列の相違の場合は除く）。従って、このようなタンパク質のアミノ酸配列の相違を指標にイグサ品種の識別を行うことも可能である。タンパク質レベルにおけるイグサ品種の識別は、例えば、このアミノ酸配列の相違を特異的に認識する抗体を利用したウェスタンブロッティング法やELISA法などの公知の方法を利用することができる。
【００２４】
【実施例】
以下、実施例により本発明をより詳細に説明するが、本発明は、これら実施例に制限されるものではない。
[実施例１]   イグサの品種識別に利用しうるDNAマーカーの同定
（１）  試料の調製
イグサの粉砕物0.1gに臭化セチルトリメチルアンモニウム（CTAB）緩衝液〔１％CTAB、0.05g/lプロテイナーゼＫ、0.1〜0.5M EDTA（エチレンジアミン四酢酸二ナトリウム）、0.5％ SDS（ドデシル硫酸ナトリウム）、20mg  PVPP（ポリビニルポリピロリドン）、0.05M トリス−塩酸 pH8.0〕0.5mlを添加して、56℃で30分間保温した。つぎにPCI処理として、0.5mlのPCI（0.25mlフェノール、0.24mlクロロホルム、0.01mlイソアミルアルコール）を添加して、20分間振揺混合した。さらにCIA処理として、15,000rpm、10℃で10分間超遠心分離した後、1mlのCIA（0.96mlクロロホルム、0.04mlイソアミルアルコール）を添加して10分間振揺混合した。15,000rpm、10℃で10分間超遠心分離した後、イソプロパノール沈澱によりゲノムDNAを濃縮洗浄して乾燥し、0.2g/lになるようにRNaseA（リボ核酸分解酵素A）緩衝液（7g/l RNaseA、10mM トリス−塩酸pH7.9、50mM 塩化ナトリウム 10mM 塩化マグネシウム、1mM ジチオスレイトール）に溶解して、37℃で2時間保温した。そして、該PCI処理、該CIA処理を行い、10℃で10分間超遠心分離した後、エタノール沈殿を行いDNAを乾燥させた。
【００２５】
（２）  ゲノムDNAを DNAポリメラーゼにより修復する工程
上記工程により得られたゲノムDNAを用いて下記の反応液組成を調製し、37℃で20分間反応させた。ゲノムDNA 0.06μg をDNAポリメラーゼ用緩衝液（2.5単位 DNAポリメラーゼ、0.4μM dNTP、1mM ジチオスレイトール、50mM トリス−塩酸pH9.0、50mM 塩化ナトリウム、10mM 塩化マグネシウム）に溶解した。その後65℃で30分間反応させて反応を終了させた。
【００２６】
（３）  BspEIによりゲノムDNAを切断する工程
上記工程により得られたゲノムDNAを用いて下記の反応液組成を調製し、37℃で2時間反応させた。ゲノムDNA 0.06μgにBspEI緩衝液（20単位BspEI、50mM トリス−塩酸pH7.9、100mM 塩化ナトリウム 10mM 塩化マグネシウム、1mM ジチオトレイトール）を10μl添加した。
【００２７】
（４）  ゲノムDNAの切断末端を標識する工程
上記工程により得られたゲノムDNAを用いて下記の反応液組成を調製し、37℃で30分間反応させた。ゲノムDNA 0.06μlに1μl ［α-32P］dGTP (10mCi/ml)、1μl ［α-32P］dCTP (10mCi/ml)、及び標識用緩衝液（10単位 DNAポリメラーゼ、1mM ジチオトレイトール）を8μl添加した。
【００２８】
（５）ゲノムDNA断片を一次元電気泳動により分画する工程
0.8％アガロースゲル（直径2.5mm、長さ60cm）のキャピラリーのウェル部（直径2.5mm、深さ1cm）に、ゲノムDNAを0.06μg添加後、230Vの電圧で24時間泳動した。アガロースは１D緩衝液(0.1M トリスアセテート pH8.0、40mM ソディウムアセテート 3mM EDTA, 36mM 塩化ナトリウム)に溶解して調製した。尚、電気泳動用緩衝液として、１D緩衝液を使用した。
【００２９】
（６）EcoRIによりゲノムDNA断片を切断する工程
上記工程により得られたゲノムDNAのバンド群を有するゲルを、下記の反応液組成に浸し、37℃で2時間反応させた。1500単位のEcoRIを含むEcoRI緩衝液（50mM トリス−塩酸pH7.9、100mM 塩化ナトリウム 10mM 塩化マグネシウム、1mM ジチオトレイトール）に浸した。
【００３０】
（７）ゲノムDNA断片のバンド群を二次元電気泳動により分画する工程
上記工程を経た泳動済ゲルを、２D緩衝液で2回洗浄し、2枚のガラス板で挟み作成された５％ポリアクリルアミドゲル（46cm幅×43cm高×1mm厚）の上にアガロースゲルの泳動方向とポリアクリルアミドゲルの上端縁とが平行になるように載置した。これらゲルの間隙を接続用0.8％アガロースゲルで満たして固化させ、アガロースゲルとポリアクリルアミドゲルとを接続した。150Vの電圧で24時間泳動した。
【００３１】
電気泳動用緩衝液として、２D緩衝液(0.05M Tris-塩酸pH7.5、0.062M ホウ酸、1mM EDTA)を使用した。５％ポリアクリルアミドゲルは、アクリルアミド：ビスアクリルアミドを29:1の割合で混合し、２D緩衝液に溶解し、0.07％過硫酸アンモニウム、0.027％N,N,N',N'-テトラメチルエチレンジアミンを添加してゲル化させた。接続用0.8％アガロースゲルは、２D緩衝液に溶解して調整した。
【００３２】
泳動終了後、泳動済のゲル（アガロースゲルとポリアクリルアミドゲルとが接続したもの）を、瀘紙（商品名:3MM、ワァットマン社製）に密着乾燥させた。この乾燥ゲルをイメージングプレート（商品名BAS2000、富士フィルム社製）に密着させ、１日間暗室中で静置した。
【００３３】
この感光したイメージングプレートのオートラジオグラムを図１から１８に示す。尚、図中、矢印は「ひのみどり」品種で特異的に消失するスポットの位置を示し、このスポットはひのみどり以外の16品種では検出された。
【００３４】
【発明の効果】
本発明により、世界で初めて、イグサの主要品種を識別するためのDNAマーカーが提供された。また、該DNAマーカーを指標としたイグサ品種の識別方法が提供された。本発明のイグサ品種の識別方法は、DNA情報の品種間での違いを反映しているため、従来のような量的形質で識別する方法とは異なり、イグサの生育環境に影響されることはない。また、簡単に再現性の高い結果が得られるので、品種識別の誤認の可能性が低く、正確な品種判定ができる。さらに、DNAマーカーの情報によって設計されたPCRプライマーを用いることで、より簡便・高速な検査方法を安価に実施することが可能となる。従って、本発明は、イグサの品種識別に多大な貢献をしうるものである。
【図面の簡単な説明】
【図１】  ひのみどりのゲノムDNAを二次元電気泳動法により分画した結果を示すオートラジオグラムの写真である。「ひのみどり」品種では、スポット「BspEI-EcoRI(1070,480)」が検出されない（矢印）。
【図２】  下増田在来品種のゲノムDNAを二次元電気泳動法により分画した結果を示すオートラジオグラムの写真である。スポット「BspEI-EcoRI(1070,480)」が検出される（矢印）。
【図３】  千丁在来品種のゲノムDNAを二次元電気泳動法により分画した結果を示すオートラジオグラムの写真である。スポット「BspEI-EcoRI(1070,480)」が検出される（矢印）。
【図４】  あさなぎのゲノムDNAを二次元電気泳動法により分画した結果を示すオートラジオグラムの写真である。スポット「BspEI-EcoRI(1070,480)」が検出される（矢印）。
【図５】  せとなみのゲノムDNAを二次元電気泳動法により分画した結果を示すオートラジオグラムの写真である。スポット「BspEI-EcoRI(1070,480)」が検出される（矢印）。
【図６】  ふくなみのゲノムDNAを二次元電気泳動法により分画した結果を示すオートラジオグラムの写真である。スポット「BspEI-EcoRI(1070,480)」が検出される（矢印）。
【図７】  文政在来品種のゲノムDNAを二次元電気泳動法により分画した結果を示すオートラジオグラムの写真である。スポット「BspEI-EcoRI(1070,480)」が検出される（矢印）。
【図８】  いそなみのゲノムDNAを二次元電気泳動法により分画した結果を示すオートラジオグラムの写真である。スポット「BspEI-EcoRI(1070,480)」が検出される（矢印）。
【図９】  きよなみのゲノムDNAを二次元電気泳動法により分画した結果を示すオートラジオグラムの写真である。スポット「BspEI-EcoRI(1070,480)」が検出される（矢印）。
【図１０】  筑後みどりのゲノムDNAを二次元電気泳動法により分画した結果を示すオートラジオグラムの写真である。スポット「BspEI-EcoRI(1070,480)」が検出される（矢印）。
【図１１】  岡山3号のゲノムDNAを二次元電気泳動法により分画した結果を示すオートラジオグラムの写真である。スポット「BspEI-EcoRI(1070,480)」が検出される（矢印）。
【図１２】  くまがわのゲノムDNAを二次元電気泳動法により分画した結果を示すオートラジオグラムの写真である。スポット「BspEI-EcoRI(1070,480)」が検出される（矢印）。
【図１３】  高須在来品種のゲノムDNAを二次元電気泳動法により分画した結果を示すオートラジオグラムの写真である。スポット「BspEI-EcoRI(1070,480)」が検出される（矢印）。
【図１４】  さざなみのゲノムDNAを二次元電気泳動法により分画した結果を示すオートラジオグラムの写真である。スポット「BspEI-EcoRI(1070,480)」が検出される（矢印）。
【図１５】  しらぬいのゲノムDNAを二次元電気泳動法により分画した結果を示すオートラジオグラムの写真である。スポット「BspEI-EcoRI(1070,480)」が検出される（矢印）。
【図１６】  岡山F系のゲノムDNAを二次元電気泳動法により分画した結果を示すオートラジオグラムの写真である。スポット「BspEI-EcoRI(1070,480)」が検出される（矢印）。
【図１７】  岡山みどりのゲノムDNAを二次元電気泳動法により分画した結果を示すオートラジオグラムの写真である。スポット「BspEI-EcoRI(1070,480)」が検出される（矢印）。
【図１８】  イグサ主要品種１７品種のゲノムDNAを二次元電気泳動法により分画した結果を示すオートラジオグラムの写真である。スポット「BspEI-EcoRI(1070,480)」付近を拡大した。スポット「BspEI-EcoRI(1070,480)」が「ひのみどり」品種に特異的に検出さない（矢印）。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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【図１４】
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【図１５】
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【図１６】
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【図１７】
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【図１８】
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