(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
シュードモナス・チコリ（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ｃｉｃｈｏｒｉｉ）を病原菌とする腐敗病に対し防除能を有するシュードモナス属フルオレセンスＧ７０９０株。
【請求項２】
請求項１に記載のシュードモナス属フルオレセンスＧ７０９０株を植物に処理することを特徴とする、シュードモナス・チコリ（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ｃｉｃｈｏｒｉｉ）を病原菌とする腐敗病の防除方法。
【請求項３】
腐敗病の病原菌であるシュードモナス・チコリ（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ｃｉｃｈｏｒｉｉ）に対し拮抗能を有する、シュードモナス属フルオレセンスＧ７０９０株を有効成分とする腐敗病の防除のための微生物農薬組成物。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は、シュードモナス・チコリ（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ｃｉｃｈｏｒｉｉ）を病原菌とするレタス等の腐敗病の防除方法に関する。また、シュードモナス・チコリ（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ｃｉｃｈｏｒｉｉ）に対する拮抗能を有する学名シュードモナス  フルオレセンス（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｓ）に属する新菌株、および、この菌株を生きたままレタスに散布することによりシュードモナス・チコリによるレタス等の腐敗病を防除する方法に関するものである。
【０００２】
【発明が解決しようとする課題】
従来よりシュードモナス・チコリ（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ｃｉｃｈｏｒｉｉ）に属する細菌には、レタスやチコリなどの作物に甚大な病害を生じることが知られている。
【０００３】
シュードモナス・チコリによる病害は、細菌病害として知られており、レタスに多大な損害を与えているにもかかわらず、有効かつ安全な防除方法があまりないのが現状である。従来の細菌病全般に対する防除方法としては、例えば、硫酸銅剤、塩基性塩化銅など銅剤やストレプトマイシン等の抗生物質があるが、効果が充分でない上に、使用条件によっては薬害や葉の汚れの恐れがある。また、有用な微生物をも殺してしまうなどの環境上の問題の問題がある。
【０００４】
シュードモナス属細菌を用いて植物病害を防除する方法は、いくつかの作物病害において、特許出願されている。例えば、ナス科植物の青枯病（特開平６−９３２５号公報、特開平６−８６６６８号公報、特公平６−１７２９１号公報）、イネ苗立枯病（特開平４−１０４７８３号公報）、ポトリチス属およびペニシリウム属の植物病原菌に起因する植物病害（特開平４−７７４０５号公報）、グラム陽性細菌起因の植物病害（特開平５−３１０５２１号公報）、フザリウム属菌に起因する植物病害（特公平６−６５２３号公報）などをシュードモナス属細菌により防除することができることが報告されている。しかし、シュードモナス・チコリを病原菌とするレタス等の腐敗病については、シュードモナス  フルオレセンス（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｓ）による防除は報告されていない。
【０００５】
本発明は、シュードモナス・チコリによるレタス等の腐敗病に対して高い拮抗性を有するシュードモナス  フルオレセンス細菌を提供し、さらに、その細菌を有効成分とする腐敗病の防除のための微生物農薬組成物、および、その細菌により植物を処理することによるレタス等の腐敗病の防除方法を提供するものである。
【０００６】
【課題を解決するための手段】
本発明者らは、シュードモナス属フルオレセンス細菌に属するシュードモナスフルオレセンス  Ｇ７０９０菌株（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｓ  Ｇ７０９０）がシュードモナス・チコリによるレタス腐敗病を効果的に防除することを見出し、本発明に至った。
【０００７】
すなわち、本発明は、病原菌シュードモナス・チコリ細菌に対して拮抗能を有するシュードモナス属フルオレセンス細菌に属するシュードモナス  フルオレセンス  Ｇ７０９０菌株（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｓ  Ｇ７０９０）により植物を処理することを特徴とする腐敗病の防除方法である。
【０００８】
また、本発明は、シュードモナス・チコリ（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ｃｉｃｈｏｒｉｉ）を病原菌とする腐敗病に対し防除能を有するシュードモナス属フルオレセンスＧ７０９０株である。
【０００９】
さらに、本発明は、レタス等の腐敗病の病原菌であるシュードモナス・チコリ（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ｃｉｃｈｏｒｉｉ）に対し拮抗能を有するシュードモナス属フルオレセンス（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｓ）Ｇ７０９０株を有効成分とする腐敗病の防除のための微生物農薬組成物である。
【００１０】
本発明を適用する腐敗病は、シュードモナス・チコリを病原菌とする腐敗病である。例えば、レタス、チコリなどの腐敗病であるが、これらに限定されない。
【００１１】
本発明の菌株の採取方法は次の通りである。
【００１２】
レタス植物体の中から病原菌シュードモナス・チコリ細菌に対して拮抗性のある細菌を探索するために、まず、採取した検定菌を培養した細菌懸濁液にレタス葉を一定時間浸漬し、風乾後、病原菌シュードモナス・チコリの所定濃度の細菌懸濁液を噴霧接種し、その後７２時間２５℃に置き、腐敗の程度を調べた。数多くの採取細菌を検討した結果、複数の病原菌シュードモナス・チコリ細菌に対して強い抗菌活性を有するシュードモナス  フルオレセンス細菌として、シュードモナス  フルオレセンス  Ｇ７０９０（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｓ  Ｇ７０９０）、シュードモナス  フルオレセンス  Ｂ８０３５（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｓ  Ｂ８０３５）、シュードモナス  フルオレセンス  Ｅ１１０５（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｓ  Ｅ１１０５）を得ることができた。特にシュードモナス  フルオレセンス  Ｇ７０９０菌株（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｓ  Ｇ７０９０）は高い防除効果が認められた。この得られたシュードモナス  フルオレセンス  Ｇ７０９０菌株細菌の菌学的性質は、以下の通りである。
0003752125.tif 000002
0003752125.tif 000003
上記の菌学的性質を有する菌株を、「バージェイズ・マニュアル・オブ・システマティツク・バクテリオロジー（ｂｅｒｇｅｙ’ｓ  Ｍａｎｕａｌ  ｏｆ  Ｓｙｓｔｅｍａｔｉｃ  Ｂａｃｔｅｒｉｏｌｏｇｙ），第１巻、１９８４年」に基づき検索すると、グラム陰性桿菌であること、好気的に生育すること、オキシダーゼ活性が陽性であることなどの性質より、本菌株は、シュードモナス（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ）属に属するものであり、さらにシュードモナス  フルオレセンス（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｓ）の性質を有することがわかった。したがって、本菌株は、シュードモナス  フルオレセンス  Ｇ７０９０（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｓ  Ｇ７０９０）と命名し、平成１２年３月１日に工業技術院生命工学工業技術研究所に寄託し、ＦＥＲＭ  Ｐ−１７７６３（生技研菌寄Ｐ−１７７６３）として受託されている。
【００１３】
次に、本発明の内容について述べる。
【００１４】
まず、上記の本発明のシュードモナス  フルオレセンス  Ｇ７０９０（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｓ  Ｇ７０９０）を適当な培地で培養する。ここで使用する培地は、菌株が増殖するものであれば特に限定されるものではなく、通常使用されている培地を使用すればよい。培養して菌株を増殖させた後、遠心分離もしくは膜濃縮により集菌を行い、保護剤と混合し、凍結乾燥した後、本菌株を含む粉状もしくは粒状の微生物農薬として作成することができる。保護剤としては、グルコース、フルクトース、シュークロースおよびトレハロースなどの糖類の１つもしくは複数の混合物を用いることができる。
【００１５】
一方、本発明のシュードモナス  フルオレセンス  Ｇ７０９０（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｓ  Ｇ７０９０）を同様に培養後、しかるべき担体と混合し、粉剤もしくは粒剤からなる微生物農薬組成物とすることもできる。この場合の担体には、タルク、クレー、炭酸カルシウム、ケイソウ土などの鉱物性粉末や、ピートモス、さらには、ポリビニルアルコールなどの高分子化合物、ザンサンゴムやアルギン酸などの天然高分子化合物などがある。
【００１６】
次に本発明のシュードモナス  フルオレセンス  Ｇ７０９０（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｓ  Ｇ７０９０）を有効成分とする微生物農薬の使用方法を述べる。
【００１７】
本発明のシュードモナス  フルオレセンス  Ｇ７０９０（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｓ  Ｇ７０９０）は、レタスなどの腐敗病の対象となる作物の葉や茎などに存在することにより、抗菌剤としての効果を示す。したがって、水に懸濁させ、苗全体に散布することにより植物体に定着させることが可能となり、シュードモナス・チコリによる腐敗病を防除することができる。このように本菌株を有効成分とする微生物農薬による簡単な処理方法により、シュードモナス・チコリによる腐敗病を防除することが可能となった。
【００１８】
以下、本発明の実施の形態を実施例により具体的に説明するが、本発明は以下の実施例に限定されるものではない。
【００１９】
【実施例】
〔実施例１〕
シュードモナス  フルオレセンス  Ｇ７０９０（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｓ  Ｇ７０９０）、シュードモナス  フルオレセンス  Ｂ８０３５（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｓ  Ｂ８０３５）、シュードモナス  フルオレセンス  Ｅ１１０５（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｓ  Ｅ１１０５）の３菌株について、シュードモナス・チコリに対する抗菌性を測定した。ＹＰＤＡ培地（ペプトン０．６ｇ、デキストロース３．０ｇ、酵母エキス３．０ｇ、寒天１５ｇ、水１Ｌ、ｐＨ７．２）上での対峙培養法で抗菌性を調べた。結果を表１に示す。
【００２０】
【表１】
0003752125.tif 000004
【００２１】
〔実施例２〕
レタス葉身部を直径１３ｍｍのコルクボーラーで打ち抜いたディスクをシュードモナス  フルオレセンス  Ｇ７０９０（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｓ  Ｇ７０９０）、シュードモナス  フルオレセンス  Ｂ８０３５（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｓ  Ｂ８０３５）、シュードモナス  フルオレセンス  Ｅ１１０５（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｓ  Ｅ１１０５）の３菌株、各菌密度１×１０8  ｃｆｕ／ｍｌの懸濁液に３０分間浸漬した。対照薬剤処理区（アグレプト水和剤２０００倍希釈）は同様に、所定濃度の薬液にレタス葉ディスクを浸漬処理した。風乾後、病原菌シュードモナス・チコリ  ＰＣＬ−２００１（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ｃｉｃｈｏｒｉｉ  ＰＣＬ−２００１）、菌密度１×１０7  ｃｆｕ／ｍｌの懸濁液を上記ディスクに噴霧接種し、２５℃の恒温槽内で７２時間静置した。１菌株につきレタス葉ディスク１８片を供試した。発病程度は、腐敗病班の面積により以下のように判定し、発病度及び防除価を算出した。表２に結果を示す。シュードモナスフルオレセンス（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｓ）３菌株はいずれもレタス葉ディスク検定において発病抑制効果が認められた。特にシュードモナス  フルオレセンス  Ｇ７０９０（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｓ  Ｇ７０９０）は防除価９２．７％で対照薬剤処理区と同程度の高い発病抑制効果が認められた。
【００２２】
【表２】
0003752125.tif 000005
【００２３】
〔実施例３〕
レタス葉をシュードモナス  フルオレセンス  Ｇ７０９０（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｓ  Ｇ７０９０）、シュードモナス  フルオレセンス  Ｂ８０３５（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｓ  Ｂ８０３５）、シュードモナス  フルオレセンス  Ｅ１１０５（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｓ  Ｅ１１０５）の３菌株、各菌密度１×１０8  ｃｆｕ／ｍｌの懸濁液を充分量噴霧接種し、プラスチックトレイ上に静置した。対照薬剤処理区（アグレプト水和剤２０００倍希釈）は、同様に所定濃度の薬液をレタス葉に噴霧した。高湿度を保持した恒温槽内で、２５℃、２４時間静置後、病原菌シュードモナス・チコリ（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ｃｉｃｈｏｒｉｉ）、菌密度２×１０6  ｃｆｕ／ｍｌの懸濁液をレタス葉に噴霧接種した。さらに２５℃の恒温槽で７２時間静置した。１菌株につきレタス葉３葉を供試した。発病程度は、腐敗病班の面積により以下のように判定し、発病度及び防除価を算出した。表３に結果を示す。シュードモナス  フルオレセンス（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｓ）３菌株はいずれもレタス葉ディスク検定において発病抑制効果が認められた。特にシュードモナス  フルオレセンス  Ｇ７０９０（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｓ  Ｇ７０９０）は対照薬剤処理区と同程度の高い発病抑制効果が認められた。
【００２４】
【表３】
0003752125.tif 000006
【００２５】
〔実施例４〕
圃場に栽培したレタス（品種シナノサマー）に、シュードモナス  フルオレセンス  Ｇ７０９０（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｓ  Ｇ７０９０）を菌密度１×１０8  ｃｆｕ／ｍｌに希釈して３００Ｌ／１０アールの割合で散布した。３日後に病原菌シュードモナス・チコリ  ＰＣＬ７０１株（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ｃｉｃｈｏｒｉｉ）を、菌密度１×１０8  ｃｆｕ／ｍｌの濃度で散布した。その後、２週間後に発病調査した。病原菌のみの無処理区及び市販農薬区（Ｚボルド−５００倍希釈）と比較した。表４に結果を示す。防除価は、５７．６％であった。
【００２６】
【表４】
0003752125.tif 000007
【００２７】
〔実施例５〕
圃場に栽培したレタス（品種サクセス）に、シュードモナス  フルオレセンスＧ７０９０（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｓ  Ｇ７０９０）を菌密度１×１０8  ｃｆｕ／ｍｌに希釈して３００Ｌ／１０アールの割合で散布した。４日後に病原菌シュードモナス・チコリ  ＰＣＬ７０１株（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ｃｉｃｈｏｒｉｉ）を、菌密度５×１０7  ｃｆｕ／ｍｌの濃度で散布した。２日後にシュードモナス  フルオレセンス  Ｇ７０９０を１回目と同様に散布した。その後、２週間後に発病調査した。病原菌のみの無処理区及び市販農薬区（Ｚボルド−５００倍希釈）と比較した。表５に結果を示す。防除価は、６６．１％であった。
【００２８】
【表５】
0003752125.tif 000008
【００２９】
【発明の効果】
本発明により、植物細菌病であるシュードモナス・チコリによる病害を効果的に防除することが可能となった。本発明では、生きた細菌を、いわゆる生物防除策として用いる方法であり、しかも薬害がなく、安全な植物病害の防除方法を提供するものである。