(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
不安症治療用医薬組成物を製造するための抗グルココルチコイドステロイドの使用であって、前記抗グルココルチコイドステロイドが、
式：
0003828926.tif 000009
［式中、Ｒ1は、Ｈ、ＣＨ3、非置換又はＯＨ若しくはハロゲン置換されたＣＨ2＝ＣＨ−ＣＨ2若しくはＣＨ≡Ｃ−ＣＨ2、又はアリール部分が任意に（Ｃ1−Ｃ6）アルキル、（Ｃ1−Ｃ6）アルコキシ、ＯＨ、ハロゲン若しくはＣＦ3で置換されてよい、アリール、アリールチオ若しくはアリールメチル基であるか、あるいはＲ1はＲ7と一緒に結合を形成し、
Ｒ2は、Ｈ、（Ｃ1−Ｃ6）アルキル、又は（Ｃ1−Ｃ6）アシル、（Ｃ1−Ｃ6）アルコキシ、（Ｃ1−Ｃ6）チオアルコキシ、−Ｏ−（ＣＨ2）n−Ｏ−（ここで、ｎは１又は２である）及び
0003828926.tif 000010
〔ここで、Ｘ及びＹはそれぞれ独立にＨ、又は（Ｃ1−Ｃ6）アルキル及び（Ｃ1−Ｃ6）アシルから選択された基である〕から選択された基で任意に置換されたアリール基であるか、あるいは、Ｒ2はＲ7と一緒に結合を形成し、
Ｒ3は（Ｃ1−Ｃ6）アルキルであり、
Ｒ4は、Ｈ、ＯＨ、（Ｃ1−Ｃ6）アルコキシ、（Ｃ1−Ｃ6）アシルオキシ、それぞれ、ヒドロキシ、オキソ、ハロゲン、アジド若しくはシアノで置換されてよい、（Ｃ1−Ｃ6）アルキル、（Ｃ1−Ｃ6）アルケニル及び（Ｃ1−Ｃ6）アルキニルから選択された基、又はフェニル基が任意に−Ｓ（Ｏ）m−（Ｃ1−Ｃ6）アルキル（ここで、ｍは１若しくは２である）若しくは
0003828926.tif 000011
〔ここで、Ｘ及びＹはそれぞれ独立に、Ｈ、又は（Ｃ1−Ｃ6）アルキル及び（Ｃ1−Ｃ6）アシルから選択された基であるか、あるいは、Ｘ及びＹはそれらが結合している窒素と一緒に環を形成する〕で置換されてよい−Ｃ≡Ｃ−フェニルであり、
Ｒ5は、ＯＨ、又はそれぞれ任意に、ヒドロキシ、（Ｃ1−Ｃ6）アルコキシ、（Ｃ1−Ｃ6）アシルオキシ若しくはハロゲンで置換されてよい、（Ｃ1−Ｃ6）アシルオキシ、（Ｃ1−Ｃ6）アルコキシ若しくは（Ｃ1−Ｃ6）アシルから選択された基であるか、あるいは
Ｒ4及びＲ5は、それらが結合している炭素原子と一緒に５員又は６員環系を形成し、
Ｒ6は、Ｈ、又はヒドロキシ若しくは（Ｃ1−Ｃ6）アルコキシで任意に置換されたメチルであり、
Ｒ7はＲ1又はＲ2との結合を形成する］
を有することを特徴とする、使用。
【請求項２】
前記ステロイドが、１１β−（４−ジメチルアミノフェニル）−１７β−ヒドロキシ−１７α−（プロプ−１−イニル）−エストラ−４，９−ジエン−３−オン（ＲＵ３８４８６）、（１１β，１７α）−１１，２１−ビス［４−（ジメチルアミノ）フェニル］−１７−ヒドロキシ−１９−ノルプレグナ−４，９−ジエン−２０−イン−３−オン、（１１β，１７α）−１１−［４−（ジメチルアミノ）フェニル］−１７−ヒドロキシ−２１−［４−（１−ピロリジニル）フェニル］−１９−ノルプレグナ−４，９−ジエン−２０−イン−３−オン、（１１β，１７α）−１１−（１，３−ベンゾジオキソル−５−イル）−２１−［４−（ジメチルアミノ）フェニル］−１７−ヒドロキシ−１９−ノルプレグナ−４，９−ジエン−２０−イン−３−オン、及び（１１β，１７α）−１１−［４−（ジメチルアミノ）フェニル］−１７−ヒドロキシ−２１−［４−（メチルスルホニル）フェニル］−１９−ノルプレグナ−４，９−ジエン−２０−イン−３−オンから選択されることを特徴とする請求項１に記載の使用。
【発明の詳細な説明】
本発明は、不安症治療用医薬組成物を製造するための抗グルココルチコイドステロイドの使用に関する。
抗グルココルチコイドステロイドは、グルココルチコイド受容体（ＧＲ）に対する親和性を示す、公知の一群のステロイド類であり、コルチゾールの作用を完全に又はかなりの程度低減させる。例えば、抗グルココルチコイド活性を有する１１β置換ステロイドがEP-A-190759号及びEP-A-57115号の各明細書に開示されている。抗グルココルチコイド活性を有する別のステロイドは、EP-A-188396号に開示されている１０β置換ステロイドである。
抗グルココルチコイドステロイドが不安寛解作用をも有し、該作用により、これらのステロイドが不安症の治療に有用であることが見いだされた。不安症は、例えば、一般的な不安、恐慌症（panic disorder）及び種々の離脱症状（参照：Diagnostic and Statistical Manual of Mental Disorders, 第３版、DSM-III, Washington, American Psychiatric Ass., 225-239ページ, 1980）を含むかなり適用範囲の広い概念である。
本発明の目的は、不安症の治療又は予防に用い得る医薬組成物を提供することである。
不安症の治療に用い得るステロイドは、WO 9303732号明細書から公知である。しかしこれらのステロイドは、ホルモン作用もグルココルチコイド受容体に対する親和性も有していない。その代わり、該ステロイドはＧＡＢＡ受容体／塩化物イオノホア錯体（chloride ionophore complex）を活性化する。前記刊行物には、不安症を治療又は予防するための抗グルココルチコイドステロイドの使用に関しては何のヒントも示唆も与えられていない。抗うつ活性は、De Kloetら（Neuroendocrinology, 47（1988）, 109-115）及びVeldhuisら（Eur. J. Pharmacol., 115（1985）211-217）により示唆された。しかし、抗うつ作用と不安寛解作用との間には何の関係もないので、不安の治療又は予防に対する抗グルココルチコイドステロイドの活性は何ら示唆されなかった。
リブリウム（librium）及びバリウム（valium）のようなベンゾジアゼピンは、不安症の治療に最も一般的に用いられている薬剤である。しかし、これらの化合物はステロイドではない。
本発明の好ましい実施態様において、本発明の抗グルココルチコイドステロイドは、式：
0003828926.tif 000002
［式中、Ｒ1は、Ｈ、ＣＨ3、非置換又はＯＨ若しくはハロゲン置換されたＣＨ2＝ＣＨ−ＣＨ2若しくはＣＨ≡Ｃ−ＣＨ2、又はそのアリール部分が任意に（Ｃ1−Ｃ6）アルキル、（Ｃ1−Ｃ6）アルコキシ、ＯＨ、ハロゲン若しくはＣＦ3で置換されてよい、アリール、アリールチオ若しくはアリールメチル基であるか、あるいはＲ1はＲ7と一緒に結合を形成し、
Ｒ2は、Ｈ、（Ｃ1−Ｃ6）アルキル、又は（Ｃ1−Ｃ6）アシル、（Ｃ1−Ｃ6）アルコキシ、（Ｃ1−Ｃ6）チオアルコキシ、−Ｏ−（ＣＨ2）n−Ｏ−（ここで、ｎは１又は２である）及び
0003828926.tif 000003
〔ここで、Ｘ及びＹはそれぞれ独立にＨ、又は（Ｃ1−Ｃ6）アルキル及び（Ｃ1−Ｃ6）アシルから選択された基である〕から選択された基で任意に置換されたアリール基であるか、あるいは、Ｒ2はＲ7と一緒に結合を形成し、
Ｒ3は（Ｃ1−Ｃ6）アルキルであり、
Ｒ4は、Ｈ、ＯＨ、（Ｃ1−Ｃ6）アルコキシ、（Ｃ1−Ｃ6）アシルオキシ、それぞれヒドロキシ、オキソ、ハロゲン、アジド若しくはシアノで置換されてよい、（Ｃ1−Ｃ6）アルキル、（Ｃ1−Ｃ6）アルケニル及び（Ｃ1−Ｃ6）アルキニルから選択された基、又はそのフェニル基が任意に−Ｓ（Ｏ）m−（Ｃ1−Ｃ6）アルキル（ここで、ｍは１若しくは２である）若しくは
0003828926.tif 000004
〔ここで、Ｘ及びＹはそれぞれ独立に、Ｈ、又は（Ｃ1−Ｃ6）アルキル及び（Ｃ1−Ｃ6）アシルから選択された基であるか、あるいは、Ｘ及びＹはそれらが結合している窒素と一緒に環を形成する〕で置換されてよい−Ｃ≡Ｃ−フェニルであり、
Ｒ5は、ＯＨ、又はそれぞれ任意に、ヒドロキシ、（Ｃ1−Ｃ6）アルコキシ、（Ｃ1−Ｃ6）アシルオキシ若しくはハロゲンで置換されてよい、（Ｃ1−Ｃ6）アシルオキシ、（Ｃ1−Ｃ6）アルコキシ若しくは（Ｃ1−Ｃ6）アシルから選択された基であるか、あるいは
Ｒ4及びＲ5は、それらが結合している炭素原子と一緒に５員又は６員環系を形成し、
Ｒ6は、Ｈ、又はヒドロキシ若しくは（Ｃ1−Ｃ6）アルコキシで任意に置換されたメチルであり、
Ｒ7は、Ｒ1又はＲ7と一緒に結合を形成する］
を有する１１β又は１０β置換ステロイドである。
より好ましい実施態様において、ステロイドは、上記式〔式中、Ｒ1はＲ7と一緒に結合を形成し、Ｒ2はパラ位置でアミノ基
0003828926.tif 000005
で置換されたフェニル基を表し、Ｒ3はメチル又はエチルであり、Ｒ4はプロプ−１−イニルであり、Ｒ5はヒドロキシであり、Ｒ6は、Ｈ，ヒドロキシメチル又はメトキシメチルである〕を有する。
特に、１１β−（４−ジメチルアミノフェニル）−１７β−ヒドロキシ−１７α−（プロプ−１−イニル）−エストラ−４，９−ジエン−３−オン（ＲＵ３８４８６）が好ましいステロイドである。
他の好ましいステロイドは、（１１β，１７α）−１１，２１−ビス［４−（ジメチルアミノ）フェニル］−１７−ヒドロキシ−１９−ノルプレグナ−４，９−ジエン−２０−イン−３−オン、（１１β，１７α）−１１−［４−（ジメチルアミノ）フェニル］−１７−ヒドロキシ−２１−［４−（１−ピロリジニル）フェニル］−１９−ノルプレグナ−４，９−ジエン−２０−イン−３−オン、（１１β，１７α）−１１−（１，３−ベンゾジオキソル−５−イル）−２１−［４−（ジメチルアミノ）フェニル］−１７−ヒドロキシ−１９−ノルプレグナ−４，９−ジエン−２０−イン−３−オン、及び（１１β，１７α）−１１−［４−（ジメチルアミノ）フェニル］−１７−ヒドロキシ−２１−［４−（メチルスルホニル）フェニル］−１９−ノルプレグナ−４，９−ジエン−２０−イン−３−オンである。
Ｒ1の定義におけるアリール基は、ベンゼン、ナフタレン、又はＮ、Ｏ及びＳから選択された１〜４個のヘテロ原子を含む５員若しくは６員へテロアリールから誘導され得る。アリール基はフェニルであるのが好ましい。
Ｒ2の定義におけるアリール基は、例えば、ベンゼン、ビフェニル、ナフタレン、アントラセン又はフェナントレンから誘導され得る。フェニル基が好ましい基である。特にパラ位置が
0003828926.tif 000006
基で置換されるか、又はメタ位置でＯＣＨ3若しくはＳＣＨ3で置換されたフェニル基が好ましい。
（Ｃ2−Ｃ6）アルキル基は、メチル、エチル、プロピル、ブチル、イソプロピル、ペンチル、イソペンチル、ヘキシル、ｔｅｒｔ−ブチルなどのような、１〜６個の炭素原子を有する分枝又は非分枝アルキル基である。１〜４個の炭素原子を有するアルキル基が好ましい。最も好ましいのはメチル基である。
（Ｃ2−Ｃ6）アルケニル基は、ビニル、２−プロペニル、１，３−ブタジエニルなどのような、２〜６個の炭素原子を有する分枝又は非分枝アルケニル基である。
（Ｃ1−Ｃ6）アルキニル基は、エチニル、プロピニル、ブチニルなどのような、２〜６個の炭素原子を有する分枝又は非分枝アルキニル基である。
（Ｃ1−Ｃ6）アルキリデン基は、エチリデン、プロピリデン、２−メチルプロピリデンなどのような、１〜６個の炭素原子を有する分枝又は非分枝アルキリデン基である。
（Ｃ1−Ｃ6）アルコキシ基は、そのアルキル部分が先に定義の（Ｃ1−Ｃ6）アルキル基であるアルコキシ基である。
（Ｃ1−Ｃ6）チオアルコキシ基は、そのアルキル部分が先に定義の（Ｃ1−Ｃ6）アルキル基である−Ｓ−アルキル基である。
アリールチオ基及びアリールメチル基は、そのアリール部分が、ベンゼン、ナフタレン、又はＮ、Ｏ及びＳから選択された１〜４個のヘテロ原子を含む５員又は６員ヘテロアリールから誘導されるアリールチオ基及びアリールメチル基である。好ましくはアリール部分はフェニルである。
（Ｃ1−Ｃ6）アシル基は、ホルミル、アセチル、プロピオニル、ブチリルなどのような、１〜６個の炭素原子を有する分枝又は非分枝アシル基である。
（Ｃ1−Ｃ6）アシルオキシ基は、ギ酸、酢酸、プロピオン酸などから誘導されたエステル基のような、１〜６個の炭素原子を有するカルボン酸から誘導された分枝又は非分枝酸エステル基である。
ハロゲンという用語は、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｆ又はＩを意味する。特にＦ及びＣｌが好ましいハロゲンである。
Ｘ及びＹが、それらが結合している窒素と一緒に環を形成する場合、該環は、飽和５員又は６員環であり、該環は、Ｎ、Ｏ及びＳから選択された第２のヘテロ原子を含んでいてよい。その例としては、ピロリジニル、ピペリジニル、ピペラジニル及びモルホリニルがある。
Ｒ4及びＲ5が一緒に５員又は６員環系を表す場合、該環系は、環中に５又は６個の原子を有する同素環式又は複素環式環であってよく、ステロイド骨格の１７位の炭素原子はこれらの５又は６個の原子の中の１つである。該環系は、環中に、酸素原子がステロイド骨格の１７位の炭素原子に結合している少なくとも１個の炭素原子を含むのが好ましい。特に、以下の構造を有する５員複素環式環系が好ましい：
0003828926.tif 000007
〔ここで、＊印がついている炭素原子はステロイド骨格の１７位の炭素原子であり、Ｘは、Ｈ2、［Ｈ，（Ｃ1−Ｃ6）アシルオキシ］、［Ｈ，（Ｃ1−Ｃ6）ヒドロカルビル］又は酸素である〕。（Ｃ1−Ｃ6）ヒドロカルビルとは、先に定義の（Ｃ1−Ｃ6）アルキル、（Ｃ1−Ｃ6）アルケニル又は（Ｃ1−Ｃ6）アルキニルのような、１〜６個の炭素原子を有する炭化水素基を意味する。
本発明の抗グルココルチコイドステロイドは、当該分野において公知の適当な方法、例えば、BE-A-862869号、DE-OS-3307143号、EP-A-188396号、EP-A-57115号の各明細書、及びJ. of Steroid Bioch. 31: 567-571 (1988)（これらの文献は本明細書に参照として組み込むものとする）に記載の方法により製造し得る。
本発明の抗グルココルチコイドステロイドは、経腸的（enterally）又は非経口的に投与でき、ヒトに対しては好ましくは１日あたりの投与量は、体重１kgにつき0.001〜10mgである。例えば、標準参照文献、Genarroら，Remington's Pharmaceutical Sciences（第18版, Mack Publishing Company, 1990, 特に第８部：Pharmaceutical preparations and their manufactureを参照されたい）に記載のような医薬上適当な助剤を混合したステロイドを、丸剤、錠剤のような固形剤型に圧縮するか、又はカプセル剤若しくは座薬に加工してもよい。医薬上適当な液体を用いて、該ステロイドを、溶液、懸濁液、エマルジョンの形態の注射用製剤として、又はスプレー例えば鼻内スプレーとしても適用し得る。投与単位、例えば錠剤の製造には、充填剤、着色剤、ポリマー結合剤などのような慣用添加剤を使用することができる。一般に、活性化合物の機能に干渉しない医薬上許容し得る任意の添加剤を用いてよい。
該組成物と共に投与し得る適当な担体には、適当量で用いられる、ラクトース、スターチ、セルロース誘導体など、又はそれらの混合物が含まれる。
以下の実施例により本発明を詳細に説明するが、本発明は該実施例には限定されない。
実施例１：ストレス誘発高体温の拮抗作用
直腸体温の測定はストレス反応を誘発し、該反応が体温を上昇させる。この体温の上昇は、不安寛解剤により阻害され得る。プラシーボ処理後の体温上昇の百分率で表される、薬剤処理後の体温上昇は、化合物の不安寛解作用を示すものである。動物に予めレセルピンを処理して体温を低下させておくと、ストレスにより誘発された体温上昇がより明らかになる。
１.１  動物
体重20〜30gの雄マウス〔Ｃｒｌ：ドイツのＣｈａｒｌｅｓ  ＲｉｖｅｒのＣＤ−１（ＩＣＲ）ＢＲ〕を用いた。該マウスを12時間の固定明暗サイクル下に温度調節された部屋（21〜23℃）に入れた。食物ペレット及び飲料用溶液は自由に摂らせた。
１.２  直腸温度の測定
ワセリングリースで滑らかにした電子温度計（Ellab TE3、Electrolaboratoriet, Copenhagen, Denmark）を用いて直腸で体温測定した。プローブを約2.5cmの深さまで挿入し、温度表示が一定になるまでそのままにした。
１.３  薬剤
用いた薬剤は、ＲＵ３８４８６；１１β−（４−ジメチルアミノフェニル）−１５α−ヒドロキシメチル−１７α−（プロプ−１−イニル）−１７β−ヒドロキシ−エストラ−４,９−ジエン−３−オン（Ａ）；１１β−（４−ジメチルアミノフェニル）−１５α−メトキシメチル−１７α−（プロプ−１−イニル）−１７β−ヒドロキシ−エストラ−４，９−ジエン−３−オン（Ｂ）；（１１β，１７α）−１１，２１−ビス［４−（ジメチルアミノ）フェニル］−１７−ヒドロキシ−１９−ノルプレグナ−４，９−ジエン−２０−イン−３−オン（Ｃ）；（１１β，１７α）−１１−［４−（ジメチルアミノ）フェニル］−１７−ヒドロキシ−２１−［４−（１−ピロリジニル）フェニル］−１９−ノルプレグナ−４，９−ジエン−２０−イン−３−オン（Ｄ）；（１１β，１７α）−１１−（１，３−ベンゾジオキソル−５−イル）−２１−［４−（ジメチルアミノ）フェニル］−１７−ヒドロキシ−１９−ノルプレグナ−４，９−ジエン−２０−イン−３−オン（Ｅ）；及び（１１β，１７α）−１１−［４−（ジメチルアミノ）フェニル］−１７−ヒドロキシ−２１−［４−（メチルスルホニル）−フェニル］−１９−ノルプレグナ−４，９−ジエン−２０−イン−３−オン（Ｆ）であった。薬剤は、0.32mg/kg〜32mg/kgの範囲の用量で用いた。比較のために、リブリウム及びバリウムを、１mg/kg、3.2mg/kg及び10mg/kgの用量で用いた。薬剤をｍｕｌｇｏｐｈｅｎ／ＮａＣｌに溶解し、10ml/kgの量で投与した。
１.４  手順
２mg/kg（皮下）のレセルピン〔モノアミン血圧降下剤（depletor）〕を用いてマウスを予備処理した。レセルピンは体温の低下を誘発した。17時間後、直腸で体温測定し、該体温を基準値とした。基準値測定の30分後、薬剤を皮下投与し、ｔ＝30、60、120、180及び240分に体温を測定した。ストレス反応によるｔ＝120分及びｔ＝240分における体温上昇がそれぞれｔ＝120分及びｔ＝240分におけるプラシーボの体温上昇の百分率で示された。これらの百分率を表１に示す。
0003828926.tif 000008
表１の結果からわかるように、抗グルココルチコイドステロイドは、体温の上昇をかなり低減させる。ストレス反応に関して認められた効果は、それぞれリブリウム及びバリウム処理から得られた効果に匹敵するものである。
実施例２：不安テスト
（Ｂｏｒｓｉｎｉ）不安テスト（Psychopharmacology 98: 207-211, 1989）は、同一の檻の動物の中で、最後に檻から出された動物は最初に出された動物に比べて体温が高いという事実に基づいている。該現象は、檻から出す動物の順序を逆にしても認められ、従って（既知又は未知）の事象についての期待に起因する不安状態を示するものと解釈され得る。認められた体温上昇は、不安寛解剤を投与することにより防止し得る。このテストは、化合物の不安寛解作用を示すのに有用である。
２.１  動物
体重20〜30gの雄のマウス〔Ｃｒｌ：ドイツ，Ｃｈａｒｌｅｓ  ＲｉｖｅｒのＣＤ−１（ＩＣＲ）ＢＲ〕を用いた。該マウスを12時間の固定明暗サイクル下に温度調節された部屋（21〜23℃）に入れた。全動物をｍａｃｒｏｌｏｎケージ中に、１ケージにつき10匹ずつ収容した。食物ペレット及び水は自由に摂らせた。実験の前に少なくとも14日間、動物を環境に順応させた。
２.２  温度測定
ワセリングリースで滑らかにした電子温度計（Ellab TE3、Electrolaboriet, Copenhagen, DK）を用い、直腸で体温測定した。プローブを約2.5cmの深さまで挿入し、温度表示が一定になるまでそのままにした。
２.３  薬剤
薬剤は、ＲＵ３８４８６を、3.2、10及び32mg/kgの用量で用いた。ＲＵ３８４８６をｍｕｌｇｏｐｈｅｎ/ＮａＣｌに溶解し、ｔ＝−30分に注射した。薬剤は10ml/kgの量で投与した。
２.４  手順
方法は、Ｂｏｒｓｉｎｉら（Psychopharmacology 98: 207-211、1989）により記載のものと類似であった。手短に言えば、ｔ＝０分に全てのマウスに皮下注射した。ｔ＝30分に、最初の３匹と最後の３匹の動物の体温測定をした。４〜７番目のマウスは檻から出しただけであった。さらに、10番目のマウスの活動力（behavioural activity）を行動観察により確認した。最後の３匹のマウスの平均体温から最初の３匹のマウスの平均体温を減算して効果を評価した。Ｍａｎｎ  Ｗｈｉｔｎｅｙ−Ｕテストを用いて、プラシーボと処理グループの比較を行った。
２.５  結果
ＲＵ３８４８６を3.2mg/kg投与すると、最初の３匹と最後の３匹のマウスとの体温差が著しく減少した。結果を図１に示す。
実施例３：恐怖により増強された驚愕の拮抗作用
恐怖により増強された驚愕（startle）は、不安寛解剤を評価するための周知のパラダイムである（Davis, Behavioral Neuroscience 100（1986）814-824）。このパラダイムにおいて、光と足部に受けるショックとを連関させるようにラットを訓練した。一般に突然音響ノイズを浴びせると、驚愕反応が誘発される。この反応は、該ノイズバースト（burst）を光の存在下に与えると増強される。この恐怖増強驚愕現象は、非鎮静用量範囲（non-sedative dose-range）の不安寛解剤により阻害され得る。
３.１  動物
体重275〜300gの雄ラット（Wistars, HSD/Cpb: Wu, Harlan Sprague Dawley, Zeist, オランダ）を用いた。該ラットを室温21〜23℃で５つのグループに分けて（40*40*17cmのケージ）収容した。それらのラットを通常の12時間明暗サイクル（６時に照明がつく）に暴露し、食物と水は自由に摂らせた。
３.２  驚愕反射の測定
用いた装置は、ＳＲＬＡＢシステム（San Diego Instruments, San Diego, CA, USA）であった。該システムは８個のびっくり箱から構成され、該びっくり箱にはそれぞれ、プレキシガラス管内の身体活動全体を検出するための圧電加速度計上に乗った円筒管が入っていた。刺激を与えた後、200ms間隔の間に反射振幅を測定した。動物の24cm上に取り付けられたラウドスピーカーから音響ノイズバースト（120dB）及びバックグラウンドノイズ（70dB）を与えた。
恐怖増強驚愕セッション（session）のために、Ｃｏｕｌｂｏｕｒｎ  Ａｎｉｍａｌショッカーにより電力供給されたステンレス鋼製のショックグリッドを各プレキシガラス管に入れた。
びっくり箱は防音になっており、互いに間隔を置いて配置された。テストのセッションとセッションの合間に、水と無香料セッケンを用いてケージを完全に清浄した。
３.３  薬剤
薬剤は、ＲＵ３８４８６を3.2mg/kgの用量で用いた。ＲＵ３８４８６をｍｕｌｇｏｐｈｅｎ／ＮａＣｌに溶解し、５ml/kgの量で投与した。
３.４  手順
２日間、ショックグリッドが装着されたびっくり箱にラットを入れておいた。３秒間の光信号を0.5秒間の１mAのショックと連関させた15回の試行セッションを行ってラットを訓練した。
３日目に、動物に前記化合物又はプラシーボを注射し、90分後にびっくり箱に入れた。動物は、５分間の環境順化期間（バックグラウンドノイズのみ）の後、60回の音響ノイズバースト（持続期間：25ms）を受けた。バーストとバーストの間に15sの間隔を置いた。データは５回の実験からなるブロックの平均を取った。
３.５  結果
ＲＵ３８４８６（3.2mg/kg）により恐怖により増強された驚愕の振幅が低減した。結果を図２に示す。
実施例４：
50mgのＲＵ３８４８６及び総重量120mgになるまでの添加剤（タルク、ポリビニルピロリドン及びステアリン酸マグネシウム）からなるＲＵ３８４８６ベースの不安症治療用医薬組成物を調製した。
実施例５：
（１１β，１７α）−１１，２１−ビス［４−（ジメチルアミノ）フェニル］−１７−ヒドロキシ−１９−ノルプレグナ−４，９−ジエン−２０−イン−３−オン
（ａ）270mlのテトラヒドロフラン（ＴＨＦ）と270mlのメタノールに溶解した27g（100mmol）のエストラ−４，９−ジエン−３，１７−ジオンを-10℃に冷却し、2.27g（60mmol）のホウ水素化ナトリウムで処理した。溶液を-10℃で30分間撹拌し、50％酢酸8mlを滴下して後処理が完了した。混合物を酢酸エチルで抽出し、有機層をブラインで洗浄し、無水硫酸マグネシウム上で脱水、瀘過、蒸発乾涸して、１７β−ヒドロキシ−エストル−４，９−ジエン−３−オン27.2gを得た。
（ｂ）得られた物質の25gを375mlのジクロロメタンに溶解し、125mlのエチレングリコール、75mlのトリメチルオルトホルメート及び250mgのｐ−トルエンスルホン酸を加え、混合物を20分間還流した。冷却後、飽和炭酸水素ナトリウム溶液200mlを加え、得られた混合物をジクロロメタンで抽出した。真空下に蒸発させ、次いで得られた油状物を、シリカゲルを用いるカラムクロマトグラフィーにかけて精製し、１７α−ヒドロキシ−エストラ−５（１０），９（１１）−ジエン−３−オン３−（環状１，２−エタンジイルアセタール）19.9gを油状物として得た。
（ｃ）19.9g（62.9mmol）の１７α−ヒドロキシ−エストラ−５（１０），９（１１）−ジエン−３−オン３−（環状１，２−エタンジイルアセタール）を400mlのジクロロメタンに溶解した。27.6g（336mmol）の酢酸ナトリウム、次いで36.2g（168mmol）のクロロクロム酸ピリジニウムを加え、混合物を周囲温度で撹拌した。２時間後、43.5mlの２−プロパノールを加え、１時間撹拌した。混合物をセライトを通して瀘過、蒸発させ、酢酸エチル（1350ml）と水（675ml）とに分配した。有機層を分離し、ブラインで洗浄、無水硫酸マグネシウムで脱水、瀘過した。蒸発させ、次いでシリカゲルを用いるカラムクロマトグラフィーにかけて精製し、エストラ−５（１０），９（１１）−ジエン−３，１７−ジオン３−（環状１，２−エタンジイルアセタール）10.9gを得た。融点：152℃。
（ｄ）13g（116.2mmol）のカリウムｔ−ブトキシド、55mlのＴＨＦ及び18.7mlの第三級ブタノールからなる混合物を不活性雰囲気下に０〜５℃に冷却した。該混合物にアセチレンを１時間通気し、次いで、50mlのＴＨＦに溶解した9.43g（30mmol）のエストラ−５（１０），９（１１）−ジエン−３，１７−ジオン３−（環状１，２−エタンジイルアセタール）を加えた。アセチレン雰囲気下に０〜５℃で1.5時間撹拌した。得られた混合物を飽和塩化アンモニウム水溶液に注いで後処理を完了し、次いで酢酸エチルで抽出した。有機層をブラインで洗浄し、無水硫酸マグネシウムで脱水し、瀘過、蒸発させて、１７α−エチニル−１７β−ヒドロキシ−エストラ−５（１０），９（１１）−ジエン−３−オン３−（環状１，２−エタンジイルアセタール）10.4gを得た。
（ｅ）10g（29.4mmol）の１７α−エチニル−１７β−ヒドロキシ−エストラ−５（１０），９（１１）−ジエン−３−オン３−（環状１，２−エタンジイルアセタール）を150mlのジクロロメタンに溶解した。次いで0.91mlのピリジン、2.84mlのトリフルオロアセトフェノン及び18.8mlの30％過酸化水素を加え、得られた２相系を室温で36時間激しく撹拌した。混合物を水に注ぎ、有機層を飽和チオ硫酸ナトリウム溶液で２度洗浄した。無水硫酸マグネシウムで脱水し、瀘過、蒸発させて、エポキシドの混合物からなる半固体塊を得た。トルエンですり砕いて、５α，１０α−エポキシ−１７α−エチニル−１７β−ヒドロキシ−エストル−９（１１）−エン−３−オン３−（環状１，２−エタンジイルアセタール）4.22gを得た。
（ｆ）1.49g（61mmol）のマグネシウム、30mlのＴＨＦ及び11.8g（58.9mmol）の４−ブロモ−Ｎ，Ｎ−ジメチルアニリンから調製された、ＴＨＦ中のｐ−ジメチルアミノフェニルマグネシウムブロミドの溶液に、158mgのＣｕＣｌを０〜５℃で加えた。０〜５℃で30分間撹拌した後、ＴＨＦ42ml中4.2gの５α，１０α−エポキシ−１７α−エチニル−１７β−ヒドロキシ−エストル−９（１１）−エン−３−オン３−（環状１，２−エタンジイルアセタール）を滴下した。周囲温度で2.5時間撹拌した後、溶液を飽和塩化アンモニウム溶液に注ぎ、酢酸エチルで抽出した。有機層を中性になるまで洗浄し、無水硫酸マグネシウムで脱水し、瀘過、真空下に蒸発させ、残渣を、シリカゲルを用いるクロマトグラフィーにかけた。これをエーテル／ヘプタンから結晶して、純粋な５α，１７β−ジヒドロキシ−１１β−［４−（Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノ）フェニル］−１７α−エチニル−エストル−９−エン−３−オン３−（環状１，２−エタンジイルアセタール）3.2gを得た。融点：198℃。
（ｇ）3.0g（6.3mmol）の５α，１７β−ジヒドロキシ−１１β−［４−（Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノ）フェニル］−１７α−エチニル−エストル−９−エン−３−オン３−（環状１，２−エタンジイルアセタール）を39mlのピロリジンに溶解した。次いで、1.26gの４−ブロモ−Ｎ，Ｎ−ジメチルアニリン（6.3mmol）、33mgの酢酸パラジウム（II）、33mgのヨウ化銅（Ｉ）及び99mgのトリフェニルホスフィンを加え、混合物を不活性雰囲気下に１時間還流させた。冷却後、混合物を50％塩化アンモニウム水溶液に注ぎ、酢酸エチルで抽出した。有機層をブラインで洗浄し、無水硫酸マグネシウムで脱水、瀘過、蒸発乾涸して、結晶質塊を得た。ジエチルエーテルですり砕いて、純粋な１１，２１−ビス［（ジメチルアミノ）−フェニル］−５α，１７β−ジヒドロキシ−プレグン−９−エン−２０−イン−３−オン３−（環状１，２−エタンジイルアセタール）2.45gを得た。融点：150℃。
（ｈ）2.45g（4.0mmol）の１１，２１−ビス［（ジメチルアミノ）−フェニル］−５α，１７β−ジヒドロキシ−プレグン−９−エン−２０−イン−３−オン３−（環状１，２−エタンジイルアセタール）を123mlのアセトンに溶解し、撹拌しながら６ＮのＨＣｌ4.9mlを加えた。周囲温度で30分間撹拌した後、混合物を炭酸水素ナトリウムで中和し、次いで、酢酸エチルで抽出した。有機層を中性になるまで洗浄し、無水硫酸マグネシウムで脱水し、瀘過、真空下に蒸発させた。残渣を、シリカゲルを用いるカラムクロマトグラフィーにかけて精製し、純粋な（１１β，１７α）−１１，２１−ビス［４−（ジメチルアミノ）フェニル］−１７−ヒドロキシ−１９−ノルプレグナ−４，９−ジエン−２０−イン−３−オン1.2gを得た。［α］20D＝-12°（ｃ＝１、クロロホルム）。
実施例６
Ｈｅｃｋカップリング反応に適切な出発物質を用いて（実施例５ｇの手順に従って）５α，１７β−ジヒドロキシ−１１β−［４−（Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノ）フェニル］−１７α−エチニル−エストル−９−エン−３−オン３−（環状１，２−エタンジイルアセタール）（実施例５ｆ参照）から以下の生成物を調製し、次いで実施例５ｈに記載のように酸性脱水及び脱保護した。
Ａ  ４−ブロモ−（１−ピロリジニル）ベンゼンを用い、前記反応により、［α］20D＝-19°（ｃ＝１、クロロホルム）の比旋光度を有する（１１β，１７α）−１１−［４−（ジメチルアミノ）フェニル］−１７−ヒドロキシ−２１−［４−（１−ピロリジニル）フェニル−１９−ノルプレグナ−４，９−ジエン−２０−イン−３−オンを得た。Ｂ  ４−ブロモ−（メチルスルホニル）ベンゼンを用い、前記反応により、［α］20D＝-23°（ｃ＝0.5、ジオキサン）の比旋光度を有する（１１β，１７α）−１１−［４−（ジメチルアミノ）フェニル］−１７−ヒドロキシ−２１−［４−（メチルスルホニル）フェニル−１９−ノルプレグナ−４，９−ジエン−２０−イン−３−オンを得た。
実施例７
実施例５ｆに記載の手順に従って、３，４−メチレンジオキソ−フェニルマグネシウムブロミドと５α，１０α−エポキシ−１７α−エチニル−１７β−ヒドロキシ−エストル−９（１１）−エン−３−オン３−（環状１，２−エタンジイルアセタール）とのＣｕ触媒グリニャール反応により、５α，１７β−ジヒドロキシ−１７α−エチニル−１１β−（１，３−ベンゾオキソル−５−イル）−エストル−９−エン−３−オン３−（環状１，２−エタンジイルアセタール）を得た。融点：155℃。
４−ブロモ−Ｎ，Ｎ−ジメチルアニリンを用い、Ｈｅｃｋカップリング反応（実施例５ｇの手順に従って）を行い、次いで実施例５ｈに記載のように酸性脱水及び脱保護して、［α］20D＝-63°（ｃ＝１、クロロホルム）の比旋光度を有する（１１β，１７α）−１１−（１，３−ベンゾジオキソル−５−イル）−２１−［４−（ジメチルアミノ）フェニル］−１７−ヒドロキシ−１９−ノルプレグナ−４，９−ジエン−２０−イン−３−オンを調製した。
【図１】
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【図２】
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