(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
アポリポ蛋白Ａ-１を含有する溶液または画分に対して夾雑するウイルス不活化のための加熱処理を行なうに際して、カオトロピック物質および金属キレート剤から選ばれる安定化剤を単独で、または組み合わせて共存させることを特徴とするアポリポ蛋白Ａ-１の加熱処理法。
【請求項２】
カオトロピック物質が塩酸グアニジン、チオシアン酸ナトリウム、および尿素より選ばれる請求項１記載のアポリポ蛋白Ａ-１の加熱処理法。
【請求項３】
安定化剤としてカオトロピック物質を０.１〜８.０Ｍの濃度で共存させる請求項１もしくは請求項２記載のアポリポ蛋白Ａ-１の加熱処理法。
【請求項４】
金属キレート剤がエチレンジアミン四酢酸（以下、ＥＤＴＡ）、エチレングリコールビス（２-アミノエチルエーテル）四酢酸（以下、ＥＧＴＡ）、ニトリロ三酢酸より選ばれる請求項１記載のアポリポ蛋白Ａ-１の加熱処理法。
【請求項５】
金属キレート剤がＥＤＴＡである請求項４記載のアポリポ蛋白Ａ-１の加熱処理法。
以上
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【産業上の利用分野】
本発明は、血漿分画製剤の加熱処理法に関する。さらに詳細にはアポリポ蛋白Ａ-１含有物の夾雑ウイルス不活化のための加熱処理法に関する。
【０００２】
【従来の技術並びに発明が解決しようとする課題】
近年我が国では、食事をはじめとする生活習慣の欧米化に伴い、３０〜４０歳代の動脈硬化に起因した虚血性心疾患の発症増加が問題となっている。動脈硬化は病理学的には粥状硬化症、Monskeberg型硬化症、細動脈硬化症の３つの病型に分類され、なかでも粥状硬化症は、虚血性心疾患の基礎病変となっている。
【０００３】
血中には様々な蛋白が含まれており、生命活動の維持に必要な各種の機能を担っている。なかでも脂質代謝に深く関与している蛋白としてリポ蛋白がある。リポ蛋白は、リン脂質、コレステロール、トリグリセリドなどの血漿に不溶性の脂質とアポリポ蛋白と呼ばれる蛋白とが結合し、脂質蛋白複合体粒子として存在している。通常、その比重により超低比重リポ蛋白(ＶＬＤＬ：ｄ＜1.006)、中間比重リポ蛋白(ＩＤＬ：1.006＜ｄ＜1.019)、低比重リポ蛋白(ＬＤＬ：1.019＜ｄ＜1.063)、高比重リポ蛋白(ＨＤＬ：1.063＜ｄ＜1.21)に分類され超遠心分離法により分画される。
肝臓で合成、分泌されたＶＬＤＬは血中において酵素リポ蛋白リパーゼ(ＬＰＬ)の作用により分解され、ＩＤＬ、ＬＤＬへと異化された形態で末梢組織にコレステロールを供給する。前述の粥状動脈硬化病変を成立させる原因の一つとしては、この脂質代謝の異常に伴って変性したＬＤＬの末梢組織への蓄積が考えられている。すなわち、粥状動脈硬化病変はエステル化されたコレステロールを蓄積した泡沫細胞を特徴としている。この泡沫細胞は、血管内皮細胞下に浸潤した単球由来のマクロファージが主体であり、マクロファージはレセプター(スカベンジャ−レセプター)を介して変性したＬＤＬを取り込み、これをライソゾームで分解する。その結果、マクロファージ内にコレステロールが放出され、さらに酵素アシルＣｏＡ：コレステロールアシルトランスフェラーゼ(ＡＣＡＴ)の作用を受けエステル化した形でコレステロールを蓄積(泡沫化)し、泡沫細胞を形成する。
【０００４】
これとは逆に末梢組織から肝臓にコレステロールを運ぶ経路(コレステロール逆転送経路)が存在し、この経路で主要な役割を担っているリポ蛋白がＨＤＬであり、動脈硬化進展に対して抑制的に働くと考えられている。さらに、疫学的調査からも虚血性心疾患の発症頻度とＨＤＬコレステロールとの間には逆相関関係が見られ、ＨＤＬが抗動脈硬化作用を有していると考えられている。
【０００５】
ＨＤＬの抗動脈硬化作用は、酵素レシチン・コレステロールアシルトランスフェラーゼ(ＬＣＡＴ)を活性化させ、末梢組織に蓄積しているコレステロールをエステル化された形態(コレステリルエステル)で粒子内に取り込み、逆転送経路にて肝臓へ運搬することに依っている。この酵素ＬＣＡＴの活性化に寄与しているのはＨＤＬの主要構成蛋白であるアポリポ蛋白Ａ-１である。最近になって、E.M.Rubinらは、ＨＤＬが実際に粥状硬化症の危険性を減少させることを示した(ネイチャー: Nature ３５３ ,ｐ.２６５〜２６７(1991年))。彼らは、ヒトＨＤＬの主要構成蛋白であるアポリポ蛋白Ａ-１の遺伝子を遺伝的に粥状硬化症を起こしやすいマウスに導入したところ、そのトランスジェニックマウスでは、完全な粥状硬化症になる前に出現する脂肪斑組織の退縮が起こったことを報告している。  このことからＨＤＬの主要構成蛋白であるアポリポ蛋白Ａ-１が動脈硬化の治療、すなわち虚血性心疾患治療薬として有効となりうることが示唆される。
【０００６】
従来より、血中総コレステロールを低下させる様々な薬物(高脂血症治療薬)が虚血性心疾患発症予防薬として広く用いられている。しかしながら、これらの薬物は長期にわたって服用する必要があり、その副作用は避けられないものであった。また、虚血性心疾患の根本的な治療、すなわち冠状動脈に発生した動脈硬化を退縮させる作用は観られていない。このような状況下、アポリポ蛋白Ａ-１は、先に記したように動脈硬化を退縮させる作用を有しており、これからの虚血性心疾患治療の分野において大いに期待されるものである。
【０００７】
ところで、アポリポ蛋白Ａ-１を虚血性心疾患の治療薬として製剤化する上では、それが血漿由来の蛋白であり血漿分画製剤として位置付けられることから、血液由来のウイルス(肝炎、ＨＩＶ等)感染を防ぐために加熱などによるウイルス不活化処理を施さなければならない。血漿蛋白製剤、特にアルブミンについては６０℃、１０時間の加熱処理を施すことにより、製剤中の血漿蛋白を変性させることなく夾雑ウイルスの感染性を阻止し得ることが見い出され、この条件での夾雑ウイルスの不活化法が一般化している。しかしながら、この６０℃、１０時間の加熱処理の方法を応用できる物質は、この処理に対して物質自体が安定でなければならない。
【０００８】
しかるに、本発明の対象物であるアポリポ蛋白Ａ-１は、その分子軸に対して表側には極性アミノ酸(親水性)が、裏側には非極性アミノ酸(疎水性)が分布するような両親媒性ヘリックス構造をとっており水溶液中では濃度依存的に自己会合(self association)をし、凝集体を形成することが知られている。また、加熱によっても自己会合を引き起こし、一旦凝集体を形成するとそのままでは元に戻らない非可逆的な会合である。それ故、ウイルスの不活化を目的として溶液状態でアポリポ蛋白Ａ-１を加熱処理するにあたっては加熱による凝集体の形成を抑制し、活性低下を低減するような条件で行われなければならない。
【０００９】
【課題を解決するための手段】
本発明は、動脈硬化の進展抑制および退縮に関与しているＨＤＬの主要構成蛋白であるアポリポ蛋白Ａ-１を熱に対して安定化し、加熱処理することによりその製剤の使用に際して肝炎、ＨＩＶ等のウイルス伝播の可能性を排除する目的を有するものである。従来、上記の目的を伴うアポリポ蛋白Ａ-１の夾雑ウイルス加熱不活化法に関する報告は見い出されていない。
本発明者らは、アポリポ蛋白Ａ-１に対して、夾雑ウイルスの加熱不活化処理に際し、安定化剤としてカオトロピック物質、糖類または金属キレート剤を単独で、または組み合わせて用いた時にその熱安定化が顕著に高められることを見いだし、この新知見に基づいて本発明を完成した。
【００１０】
本発明は、アポリポ蛋白Ａ-１を含有する溶液または画分中の混入が危惧される伝播性ウイルスを不活化する際に、上記溶液または画分を、安定化剤としてカオトロピック物質、糖類または金属キレート剤を単独でまたは組み合わせて共存させ加熱処理することを特徴とする。具体的には３０〜１００℃で１分〜２０時間加熱する際に、カオトロピック物質を０.１〜８.０Ｍの濃度で、糖類を４０％(Ｗ／Ｗ)以上の濃度で、または金属キレート剤を単独または組み合わせて共存させる。本発明で用いられるカオトロピック物質としては塩酸グアニジン、チオシアン酸ナトリウム、尿素が、糖類としてはグルコース、キシロース、フルクトース等の単糖類、シュクロース、トレハロース、ラクトース等の二糖類が、金属キレート剤としてはエチレンジアミン四酢酸(ＥＤＴＡ)、エチレングリコールビス(２-アミノエチルエーテル)四酢酸(ＥＧＴＡ)、ニトリロ三酢酸、エチレンジアミン・ジ(ｏ-ヒドロキシフェニル酢酸)等の水に溶け易いキレート剤がそれぞれ例示され、このうち塩酸グアニジン、シュクロース、ＥＤＴＡは好適な態様であるが、これらに限定されるものではない。さらに、アルギニン、ヒスチジン、リジン、ロイシン等のアミノ酸もしくはこれらの塩、並びに塩化ナトリウムの併用により上述の安定化効果がさらに増長されることが期待される。
本発明の対象であるアポリポ蛋白Ａ-１は主としてヒト血漿中に含まれており、ヒト血漿を出発物質として分離精製する方法はすでに知られている(超遠心を用いた方法: Havel,R.J. et al., ジャーナル オブ クリニカル インベスティゲーション:J. Clin. Invest.,３４, ｐ.１３４５〜１３５３(１９５５), Scanu,A., ジャーナル オブ リピド リサーチ:J.Lipid Res.,７, ｐ.２９５〜３０６(１９６６), イオン交換クロマト法: Edelstein,C. et al., ジャーナル オブ バイオロジカル ケミストリー:J. Biol. Chem.,２４７, ｐ.５８４２〜５８４９(１９７２), 疎水クロマト法: Carson, S.D. バイオキミカ エト バイオフィジカ アクタ:Biochim. Biophys. Acta,７５０, ｐ.３１７〜３２１(１９８２), Poss, S.E. et al., アナリティカル バイオケミストリー:Anal. Biochem.,１４９,ｐ.１６６〜１６８(１９８５))が、本発明においてはいかなる精製法を用いようとも、標品についての特別な制約はない。加熱不活化処理の対象となる溶液のｐＨは一般的に５.０〜１０.０、好ましくは６.０〜８.０であり、アポリポ蛋白Ａ-１の溶液または画分中の含量は、０.１〜３０ｍｇ／ｍｌ程度が好ましい。
【００１１】
加熱によるアポリポ蛋白Ａ-１の安定性を判断する指標としては、アポリポ蛋白の生物学的活性の一つと考えられている下記のリン脂質結合能およびマクロファージを用いた抗泡沫化能を用いた。なお、安定性の確認に使用した標品は、加熱不活化処理後、透析により前述の安定化剤を除去したものを用いた。
リン脂質結合能はアポリポ蛋白Ａ-１がその構造の特徴である両親媒性ヘリックス構造に起因するリン脂質との結合能力のことであり、詳細についてはH.J.Pownallらの論文(バイオケミストリー:Biochemistry １８,ｐ.５７４〜５７９,(1979年))に記載されている。その測定原理は、ジミリストイルフォスファチジルコリン(ＤＭＰＣ)／コレステロールリポソームにアポリポ蛋白Ａ-１を添加することによる濁度の減少を測定するものである。
【００１２】
濁度の減少は、ＤＭＰＣ／コレステロールリポソームにアポリポ蛋白Ａ-１を添加することで、アポリポ蛋白Ａ-１とＤＭＰＣとの間に結合が起こり、より小粒子のリポソームが形成されることから観察されるものである。
本発明に記載されている安定化方法によるアポリポ蛋白Ａ-１の加熱不活化処理においては、加熱の前後におけるアポリポ蛋白Ａ-１のリン脂質結合能測定の結果、加熱によるリン脂質結合能の低下を効果的に抑制することができた。
【００１３】
マクロファージを用いたアポリポ蛋白Ａ-１の抗泡沫化能は、アポリポ蛋白Ａ-１が、マクロファージによる変性ＬＤＬ(アセチルＬＤＬ)の取り込みをどれだけ抑制しているかという指標である。測定方法についての詳細は、宮崎らの論文(Miyazaki,A. et al., バイオキミカ エト バイオフィジカ アクタ:Biochim. Biophys. Acta, １０８２,ｐ.１４３〜１５１(１９９１);Miyazaki,A. et al., ジャーナル オブ バイオロジカル ケミストリー:J. Biol.Chem., ２６９,ｐ.５２６４〜５２６９(１９９４))に記載されている。本発明に記載されている安定化方法による加熱不活化処理法ではアポリポ蛋白Ａ-１は加熱の前後において抗泡沫化能の低下を抑制し、加熱前と同等の結果を得るものもあった。
【００１４】
本願発明においては、夾雑ウイルスの不活化のモデルとして種々の形態を有するいくつかのウイルスを選択して効果を試験管内で確認した。一本鎖ＤＮＡウイルスでエンベロープを持たないブタパルボウイルス、一本鎖ＲＮＡウイルスでエンベロープを持たないポリオ-Ｉウイルス、さらに一本鎖ＲＮＡウイルスでエンベロープを有するシンドビスウイルスの３種を用いた。所定のウイルス含量を有するそれぞれのウイルス浮遊液を安定化剤を含有するアポリポ蛋白Ａ-１溶液に添加し、加熱処理を施した後に、標品中のウイルス感染価を測定した。ウイルス不活化の測定は、ポリオ、シンドビスウイルスに対してはＶｅｒｏ細胞、ブタパルボウイルスに対してはＥＳＫ細胞を用いて、５０％感染価(ＴＣＩＤ50)を指標として行なった。その結果、本発明の加熱不活化処理によって、アポリポ蛋白Ａ-１の活性を保持する条件において、上記のモデルウイルスに対して充分な不活化効果をもたらすことが確認された。
【００１５】
さらに、本発明による加熱を施されたアポリポ蛋白Ａ-１は、高脂食(高コレステロール食)を負荷したウサギに静脈内注射することにより、冠状動脈の動脈硬化進展抑制作用を有することが確認された。よって、このアポリポ蛋白Ａ-１は血液由来のウイルス感染の危険性を低減し、動脈硬化の治療薬あるいは動脈硬化抑制剤として極めて安全に臨床的に用い得ることが期待される。
【００１６】
【発明の作用並びに効果】
本発明によってもたらされるアポリポ蛋白Ａ-１の加熱によるウイルス不活化法は、アポリポ蛋白Ａ-１を熱に対して安定化し、かつ、加熱不活化処理後のその製剤の使用に際しては、肝炎、ＡＩＤＳ等の感染の可能性を排除する極めて有用なものである。
その加熱条件は、アポリポ蛋白Ａ-１を含有している溶液に、塩酸グアニジン、チオシアン酸ナトリウム等のカオトロピック剤を０.１〜８.０Ｍの濃度で、シュクロース等の糖類を４０％(Ｗ／Ｗ)以上の濃度で、またはＥＤＴＡ等の金属キレート剤を単独または組み合わせて共存させ、３０〜１００℃で１分〜２０時間加熱するというものであり、加熱によるアポリポ蛋白Ａ-１の生物活性であるリン脂質結合能や抗泡沫化能の低下は有意に抑制された。なお、上記の加熱条件下で、夾雑するウイルスの不活化が実際上問題視されない程度に達成されることも確認された。
さらに、上記条件にて加熱を施されたアポリポ蛋白Ａ-１には、抗動脈硬化作用が保持されているということも、ウサギを用いた動物実験で確認された。よって、本発明による方法で加熱されたアポリポ蛋白Ａ-１は、心臓血管系疾患及び心臓手術後疾患の予防あるいは治療の目的に使用することが可能である。
【００１７】
以下に、試験例並びに実施例を挙げて本発明を具体的に説明するが、本発明はこれらの例に何等限定されるものではない。
【００１８】
【実施例】
実施例１
(アポリポ蛋白Ａ-１の調製)
R.J.Havelらの超遠心法により、血漿からＨＤＬ画分を採取した。まず血漿を30,000rpmで１時間遠心後、表面のクリーム層(カイロミクロン)を除去した。残りの血漿に塩化ナトリウムを添加し比重を1.063に合わせ、これを30,000rpmで一昼夜遠心し上層(ＶＬＤＬ、ＬＤＬ)を除去し、さらに残りの血漿に臭化ナトリウムを添加し比重を1.21に調整した後、再度30,000rpmにて一昼夜遠心した。遠心終了後、上層(ＨＤＬ)を採取し、この画分をエタノール／エチルエーテル(EtOH／Ether＝３／２)混合溶液、及びエチルエーテルのみにて脂質分を脱脂後、窒素気流中で乾燥させアポリポ蛋白Ａ-１の粉末を調製した。この粉末を、３Ｍ塩酸グアニジン溶液に溶解させ、蒸留水にて透析しアポリポ蛋白Ａ-１溶液を調製した。
【００１９】
実施例２
(液状加熱)
実施例１に従って調製されたアポリポ蛋白Ａ-１溶液に各種安定化剤を単独あるいは組み合わせて共存させ、液状加熱を施した。実験には、１０mg/mlのアポリポ蛋白Ａ-１を含有する水溶液１０mlを使用し、各種安定化剤を所定の濃度添加後、所定の条件下での加熱処理を施した。安定化剤を除去して、下記に示すリン脂質結合能、抗泡沫化能を指標として、加熱処理前に対する活性の残存率(加熱前の値を１００とした比率での加熱後の値)を求めた。その成績については、以下に表で示す。
【００２０】
(リン脂質結合能の測定)
ＤＭＰＣ／コレステロールリポソームの調製は、まず、２０mg/mlＤＭＰＣのクロロホルム溶液を１mlおよび１０mg/mlコレステロールのクロロホルム溶液を７９.４μlの割合で混合し、最終的に７モル％のコレステロール濃度に調整した。この溶液から、なす型フラスコを用いて窒素気流中で溶媒のクロロホルムを除き、さらに減圧下で残存する溶媒を完全に除去して、フラスコ中にＤＭＰＣ／コレステロールの薄膜を形成させた。この薄膜に緩衝液(８.５％臭化カリウム／０.０１％アジ化ナトリウム／０.０１％ＥＤＴＡ／０.０１Ｍ トリス(ヒドロキシメチル)アミノメタン、ｐＨ７.４)を１ｍｌ添加し、超音波を用いて懸濁させ２０mgＤＭＰＣ／７モル％ コレステロールのリポソーム溶液を調製した。このリポソーム溶液を上述の緩衝液にて４０倍に希釈し、０.５mgＤＭＰＣ／コレステロールリポソームとし、これをリン脂質結合能測定に用いる基質溶液とした。
【００２１】
測定は２３℃において基質溶液３mlに、アポリポ蛋白Ａ-１濃度が２mg/mlとなるように調整したサンプルを１５０μl添加し、溶液の濁度の減少を吸光度３２５nmで３０分間追跡することにより行なった。この３０分後の濁度の値からリン脂質結合能を求めた。
【００２２】
(抗泡沫化能の測定)
ラットの腹腔マクロファージ(３×１０6)を２５μg/mlのアセチルＬＤＬと同時に２５０μg/mlのアポリポ蛋白Ａ-１を添加して１８時間インキュベート後、宮崎等の方法によってマクロファージ中のコレステリルエステルの量を定量し、アポリポ蛋白Ａ-１によるマクロファージの泡沫化抑制効果(抗泡沫化能)を求めた。
【００２３】
▲１▼安定化剤非共存の場合
安定化剤非共存下の場合、６０℃、２時間の加熱で既にアポリポ蛋白Ａ-１の活性の７０％以上が損失することが判明した。また、アポリポ蛋白Ａ-１の活性の指標としたリン脂質結合能および抗泡沫化能との間には、ほぼ相関した結果が得られることも判った(表１参照)。
【００２４】
【表１】
0003802090.tif 000002
【００２５】
▲２▼カオトロピック剤
アポリポ蛋白Ａ-１の加熱処理に対して、チオシアン酸ナトリウム、塩酸グアニジン並びに尿素等のカオトロピック剤が顕著な安定化効果をもたらすことが判明した(表２参照)。
【００２６】
【表２】
0003802090.tif 000003
【００２７】
▲３▼安定化効果に及ぼすカオトロピック物質濃度の検討
塩酸グアニジンについて０.４〜５.０Ｍの濃度域で、またチオシアン酸ナトリウムについては０.５〜３.０Ｍの濃度域で良好な安定化効果が観察された(表３参照)。
【００２８】
【表３】
0003802090.tif 000004
【００２９】
▲４▼糖、糖アルコール類
アポリポ蛋白Ａ-１の加熱処理に対して、比較的高濃度の単糖類もしくはシュクロース等の二糖類を共存させた場合に顕著な安定化効果をもたらすことが判明した。とりわけ二糖類の効果は大きかった。一方、マンニトールで代表される糖アルコールでは大きな効果は認められなかった(表４、表５参照)。
【００３０】
【表４】
0003802090.tif 000005
【００３１】
【表５】
0003802090.tif 000006
【００３２】
▲５▼安定化効果に及ぼす糖濃度の検討
４０％(Ｗ／Ｗ)以上の高濃度域においてシュクロースはアポリポ蛋白Ａ-１に対する顕著な安定化効果をもたらした(表６参照)。
【００３３】
【表６】
0003802090.tif 000007
【００３４】
▲６▼金属キレート剤
金属キレート剤について、１０ｍＭ程度の比較的低濃度の金属キレート剤にアポリポ蛋白Ａ-１に対する安定化効果を有することが判った。なお、ＥＤＴＡの単独の共存の場合、５０ｍＭ以上の高濃度域では期待される安定化効果を奏することはなかった(表７参照)。
【００３５】
【表７】
0003802090.tif 000008
【００３６】
▲７▼ 安定化剤混合系
前出の安定化剤を組み合わせることによっても良好な安定化効果が観察された(表８参照)。
【００３７】
【表８】
0003802090.tif 000009
【００３８】
実施例３
(ウイルス不活化効果)
手順: アポリポ蛋白Ａ-１を１０mg／ml含有する水溶液に、組成が５ミリモル／ｌのエチレンジアミン四酢酸二ナトリウム(ＥＤＴＡ)、５０ミリモル／ｌのトリス(ヒドロキシメチル)アミノメタン(Ｔｒｉｓ)、０.１モル／ｌの塩化ナトリウム、３モル／ｌの塩酸グアニジン、ｐＨ７.６となるように添加剤を加え、完全に溶解した。この溶液をガラス製バイアル瓶に分注し、ポリオ-Ｉ(強毒)、シンドビス、豚パルボウイルスを単独で添加し、６０℃で２０時間、経時的に水浴中にて加熱処理を施し、加熱後サンプルのウイルス感染価を測定した。培養細胞には、Ｖｅｒｏ細胞(ポリオ、シンドビス)、ＥＳＫ細胞(豚パルボ)を用い、さらに対照として２０％アルブミン製剤に豚パルボウイルスを添加し、６０℃、２０時間の加熱を行なった。
【００３９】
結果: ポリオ-Ｉ、シンドビスウイルスは、上記条件下で５時間の加熱により完全に不活化された。また熱抵抗性の豚パルボウイルスについては、臨床経験上、ウイルス伝播の危険性がないことが認められている２０％アルブミン製剤と比較して、同等の不活化効果が得られた(表９参照)。
【００４０】
【表９】
0003802090.tif 000010
【００４１】
実施例４
(ウサギでの動物実験)
手順: ０.５％コレステロール食(日本農産)を１５週間、ニュージーランドホワイト種のウサギ(体重２〜２.５Ｋｇ:雄)に給餌し、その後正常食(日本農産)に切り替え、それと同時に非加熱及び本発明による方法で加熱されたアポリポ蛋白Ａ-１を静脈内に投与した。投与量は、週１回に４０ｍｇで４ヵ月間投与し、投与終了後、解剖し胸腹大動脈及び冠状動脈の動脈硬化病変部位の面積を非投与群と比較することで、効果の検討を行なった。
【００４２】
結果: 胸腹大動脈、冠状動脈共にアポリポ蛋白Ａ-１投与群では非投与群に比べて、有意に病変面積が小さく、さらに投与前と比べても病変面積は小さく、アポリポ蛋白Ａ-１の動脈硬化退縮・抑制作用が確認された(表１０参照)。また、非加熱及び加熱を施したアポリポ蛋白Ａ-１の間には、その効果に関しての差は認められず、加熱によるアポリポ蛋白Ａ-１の抗動脈硬化作用の低下は観られなかった。
【００４３】
【表１０】
0003802090.tif 000011