(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
次式（Ｉ）のヌクレオシド一リン酸誘導体
0003802057.tif 000011
（式中、
Ｒ1は１〜20個の炭素原子を有する直鎖状又は枝分れした飽和又は不飽和アルキル鎖であり、任意的にハロゲン、Ｃ1−Ｃ6アルコキシ、Ｃ1−Ｃ6アルキルメルカプト、Ｃ1−Ｃ6アルコキシカルボニル、Ｃ1−Ｃ6アルキルスルフィニル又はＣ1−Ｃ6アルキルスルホニル基により一又は多置換されており；
Ｒ2は水素であるか、又はハロゲン、Ｃ1−Ｃ6アルコキシ、Ｃ1−Ｃ6アルキルメルカプト、Ｃ1−Ｃ6アルコキシカルボニルもしくはＣ1−Ｃ6アルキルスルホニル基により任意的に一もしくは多置換された１〜20個の炭素原子を有する直鎖状もしくは枝分れした飽和もしくは不飽和アルキル鎖であり；
Ｘは硫黄、スルフィニル又はスルホニル基を表わし；
Ｙは酸素原子を表わし；そして
ヌクレオシド部分が以下の群：
６−メルカプトプリン−９−β−Ｄ−リボフラノシド、５−フルオロウリジン、イノシン、５−メチルウリジン、２′，３′−ジデスオキシ−２′，３′−ジフルオロチミジン、５−クロロウリジン、５−トリフルオロメチルウリジン、５−エチニルウリジン、５−エチニルシチジン、５−プロペ−１−エニルウリジン、５−プロペ−２−エニルウリジン、アデノシン、グアノシン、２，６−ジアミノプリン−９−β−Ｄ−リボフラノシド、２−アミノ−６−メルカプトプリン−９−β−Ｄ−リボフラノシド、２−アミノ−６−メチルメルカプトプリン−９−β−Ｄ−リボフラノシド、２−アミノ−６−クロロプリン−９−β−Ｄ−リボフラノシド、２′−デスオキシ−２′−アミノアデノシン、２′−デスオキシ−２′−アジドアデノシン、２′−デスオキシ−２′−アジドシチジン、２−クロロアデノシン、２−フルオロアデノシン、３′−デスオキシ−５−フルオロアデノシン、６−メチルメルカプトプリン−９−β−Ｄ−リボフラノシド、２−ブロモアデノシン、２−フルオロ−２′−デスオキシアデノシン；
より選ばれる）、
その互変異性体、その光学活性体又はラセミ体、又はその無機酸もしくは有機酸又は塩基の生理学的に許容される塩。
【請求項２】
Ｒ1がＣ1−Ｃ6アルコキシ又はＣ1−Ｃ6アルキルメルカプト基により置換されていることのある直鎖状のＣ8−Ｃ15アルキル基を表わすことを特徴とする、請求項１記載の式Ｉのヌクレオシド一リン酸誘導体。
【請求項３】
Ｒ2がＣ1−Ｃ6アルコキシ又はＣ1−Ｃ6アルキルメルカプト基により更に置換されていることのある直鎖状のＣ8−Ｃ15アルキル基を表わすことを特徴とする、請求項１又は２記載の式Ｉのヌクレオシド一リン酸誘導体。
【請求項４】
Ｒ1が直鎖状のＣ9−Ｃ13アルキル基を表わし、それは任意的にメトキシ、エトキシ、ブトキシ、ヘキシルオキシ、メチルメルカプト、エチルメルカプト、プロピルメルカプト、ブチルメルカプトもしくはヘキシルメルカプト残基により更に置換されており；
Ｒ2が直鎖状のＣ8−Ｃ14アルキル基を表わし、それは任意的にメトキシ、エトキシ、プロポキシ、ブトキシ、ヘキシルオキシ、メチルメルカプト、エチルメルカプト、ブチルメルカプトもしくはヘキシルメルカプト残基により更に置換されている；
請求項１〜３のいずれか１項記載の式Ｉのヌクレオシド一リン酸誘導体。
【請求項５】
（５−フルオロウリジン）−５′−リン酸（３−ドデシルメルカプト−２−デシルオキシ）プロピルエステル；
（６−メルカプトプリン−９−β−Ｄ−リボフラノシド）−５′−リン酸（３−ドデシルメルカプト−２−デシルオキシ）プロピルエステル；
（６−メチルメルカプトプリン−９−β−Ｄ−リボフラノシド）−５′−リン酸（３−ドデシルメルカプト−２−デシルオキシ）プロピルエステル；
並びにそれらのナトリウム塩から選ばれる、請求項１〜４のいずれか１項記載の式Ｉのヌクレオシド一リン酸誘導体。
【請求項６】
請求項１〜５のいずれか１項記載の式Ｉの化合物少なくとも一種、及び薬理補助剤又はビヒクルを含む腫瘍の処置のための薬剤。
【発明の詳細な説明】
本発明は一般式（Ｉ）の脂質エステル残基の新規のヌクレオシド一リン酸誘導体
0003802057.tif 000002
（式中、
Ｒ1は１〜20個の炭素原子を有する直鎖状又は枝分れした飽和又は不飽和アルキル鎖であってよく、任意的にハロゲン、Ｃ1−Ｃ6アルコキシ、Ｃ1−Ｃ6アルキルメルカプト、Ｃ1−Ｃ6アルコキシカルボニル、Ｃ1−Ｃ6アルキルスルフィニル又はＣ1−Ｃ6アルキルスルホニル基により一又は多置換されており；
Ｒ2は水素であるか、又はハロゲン、Ｃ1−Ｃ6アルコキシ、Ｃ1−Ｃ6アルキルメルカプト、Ｃ1−Ｃ6アルコキシカルボニルもしくはＣ1−Ｃ6アルキルスルホニル基により任意的に一もしくは多置換された１〜20個の炭素原子を有する直鎖状もしくは枝分れした飽和もしくは不飽和アルキル鎖であってよく；
Ｒ3は水素、ヒドロキシ、アジド、アミノ、シアノ又はハロゲンを表わし；
Ｒ4はヒドロキシ、アジド、アミノ、シアノ又はハロゲンを表わし；
Ｒ5は水素、ヒドロキシ、アジド、アミノ、シアノ又はハロゲンを表わし；
Ｘは結合、酸素、硫黄、スルフィニル又はスルホニル基を表わし；
Ｙは結合、酸素又は硫黄原子を表わし；
Ｂは次式III（ａ〜ｄ）のプリン及び／又はピリミジン塩基を表わし；
0003802057.tif 000003
ここで、
Ｒ6は水素；ハロゲンにより置換されていることのある１〜６個の炭素原子を有するアルキル鎖；任意的にハロゲンにより置換されている２〜６個の炭素原子を有するアルケニル及び／又はアルキニル残基；又はハロゲンであってよく；
Ｒ6′は水素原子であるか、又はベンジルもしくはフェニルチオ残基であってよく；
Ｒ7は水素；ハロゲンにより置換されていることのある１〜６個の炭素原子を有するアルキル鎖；又はハロゲンであってよく；
Ｒ8は水素、１〜６個の炭素原子を有するアルキル鎖、ハロゲン又はヒドロキシもしくはアミノ基であってよく；
Ｒ9は水素、アミノ基又はハロゲン原子であってよく；そして
Ｒ10は水素、ハロゲン、メルカプト、ヒドロキシ、Ｃ1−Ｃ6アルコキシ、Ｃ1−Ｃ6アルキルメルカプト、又はアミノ基であってＣ1−Ｃ6アルキル、Ｃ1−Ｃ6アルコキシ、ヒドロキシ−Ｃ2−Ｃ6アルキル及び／もしくはＣ3−Ｃ6シクロアルキルにより一もしくは二置換されていることのある基、アリール、ヘトアリール、アラルキル又はヘトアリールアルキル基（任意的にアリール又はヘトアリール残基において、１又は複数個のメルカプト、ヒドロキシ、Ｃ1−Ｃ6アルコキシもしくはＣ1−Ｃ6アルキル基又はハロゲンにより置換されている）；又はモノ−もしくはジ−アルキルもしくはアルコキシ基により任意的に置換されたＣ2−Ｃ6アルケニルであってよく；
ただしＲ3又はＲ5残基のうちの少なくとも一方が水素であることを条件にする）
その互変異性体、並びに無機酸及び有機酸及び／又は塩基のその生理学的に許容される塩、更にはその製造方法、並びに前記化合物を含む薬剤に関する。
これら一般式Ｉの化合物は不斉炭素原子を含むため、本発明は同様に前記化合物の全ての光学活性形態及びラセミ混合物に関する。
J.Biol.Chem.265,6112(1990)及びEP 0,350,287号には抗ウィルス剤としてのリポヌクレオチドの調製及び利用が記載されている。しかしながら、それにおいて一般的なヌクレオシド、例えばAZT(アジドチミジン)及びddc(２′，３′−ジデオキシシチジン)に結合したジミリストイルホスファチジル及びジパルミトイルホスファチジル残基のみが、その脂肪酸エステル構造を含み、研究及び合成されている。
J.Med,Chem.33,1380(1990)には抗腫瘍活性を有し、且つ腫瘍学において有用でありうるチオエーテル脂質とシチジン二リン酸塩とのヌクレオシドコンジュゲートが記載されている。Chem.Pharm.Bull.36,209(1988)には、抗白血病活性を有する５′−（３−sn−ホスファチジル）ヌクレオシド、並びにトランスフェラーゼ活性をもつホスホリパーゼＤの存在下での対応のヌクレオシド及びホスホコリンからのその酵素的合成が記載されている。同様に、J.Med.Chem.34,1408(1991)には抗HIV-1活性を有するヌクレオシドコンジュゲートが記載され、それは脂質部分のsn-2位においてメトキシ又はエトキシにより置換されている。特許出願WO 92／03462号には抗ウィルス活性を有す、特にHIV感染症の処置のためのチオエーテル脂質コンジュゲートが記載されている。
本発明の化合物は有用な薬理特性を有する。特に、これらは悪性腫瘍、例えば悪性疾患、新生物、癌腫、肉腫又は腫瘍治療中の白血病の治療及び予防において適切である。更に、本化合物は免疫抑制活性を示し、それ故これらはリウマチ様関節炎、全身エリテマトーデス、慢性移植−宿主病、多発性硬化症等の如き器官特異的もしくは全身系の自己免疫疾患の治療、又は同種異系もしくは半同種異系移植拒絶例えば腎臓、肝臓、肺、心臓等のそれを阻止するうえで採用されうる。更に、この化合物は抗ウィルス、抗レトロウィルス又は抗腫瘍活性を有し、それ故ウィルス及び癌遺伝子誘導型／原因型疾患（例えばAIDS等）の予防及び治療にも適する。悪性腫瘍の処置において今までに採用されている化合物と比べ、本発明に係る化合物は強い効能又は低い毒性を有し、それ故幅広い治療域をもつ。このため、これらの化合物を含む薬剤の投与を長期間にわたり連続的に行うことができる点でこれらは有利であり、そして製剤の撤退又は投与の中止（これは腫瘍治療において今までに採用されている細胞障害剤に関して日常的であるか、又はその所望されない副作用に基づき不可欠である）を回避できる。
本発明に係る化合物はこれらの欠点に悩まされることがない。その作用は免疫抑制的又は抗腫瘍的であり、薬理学的に関連する用量において非特異的な細胞障害作用がない。
同様に、本発明の化合物及びその薬理製剤は上記の病気の処置及び予防用のその他の薬剤と組合せて利用できうる。このような他の薬剤の例には例えば有糸分裂阻害剤、例えばコルシチン、ミトポドジド、ビンブラスチン、アルキル化性細胞増殖抑制剤、例えばシクロホスファミド、メルファラン、ミレラン又はシスプラチン、抗代謝剤、例えば葉酸拮抗剤（メトキトレキセート）、並びにプリン及びピリミジン塩基の拮抗剤（メルカプトプリン、５−フルオロウリジン、シタラビン）、細胞増殖抑制活性抗生物質、例えばアントラサイクリン（例えばドキソルビシン、ダウノルビシン）、ホルモン、例えばフォスフェストロール、タモキシフェン、その他の細胞増殖抑制／細胞障害活性化学治療剤及びその他の免疫抑制薬（例えばシクロスポリン、FK506、ラパミシン、デソキシスペルグアリン等）が含まれる。
とりわけ、考えられる一般式Ｉの化合物の塩はリン酸基のアルカリ、アルカリ土類及びアンモニウム塩である。アルカリ塩として好ましいのはリチウム、ナトリウム及びカリウム塩である。アルカリ土類塩として考えられるのは特にマグネシウム及びカルシウムである。本発明に従うと、アンモニウム塩は、１〜４個の炭素原子を有するアルキル残基及び／又はアラルキル残基により４個まで置換されていることのあるアンモニウムイオンを含むものと理解される。ここで、これらの置換基は同一でも異なるものでもよい。
一般式Ｉの化合物は塩基性基、特にアミノ基を含んでよく、それは適当な無機又は有機酸により酸付加塩へと変換されうる。従って、可能な酸は特に塩酸、臭酸、硫酸、リン酸、フマル酸、コハク酸、酒石酸、クエン酸、乳酸、マレイン酸又はメタンスルホン酸である。
一般式Ｉにおいて、Ｒ1は好ましくは直鎖状のＣ8−Ｃ15アルキル基を表わし、それは更にＣ1−Ｃ6アルコキシ又はＣ1−Ｃ6アルキルメルカプト基により置換されていてよい。より詳しくは、Ｒ1はノニル、デシル、ウンデシル、ドデシル、トリデシル又はテトラデシル基を表わす。好ましくは、Ｒ1のＣ1−Ｃ6アルコキシ置換基としてメトキシ、エトキシ、ブトキシ及びヘキシルオキシ基が考えられる。Ｒ1がＣ1−Ｃ6アルキルメルカプト残基により置換されている場合、それは特にメチルメルカプト、エチルメルカプト、プロピルメルカプト、ブチルメルカプト及びヘキシルメルカプト残基と解される。
好ましくは、Ｒ2は直鎖状のＣ8−Ｃ15アルキル基を表わし、これは更にＣ1−Ｃ6アルコキシ又はＣ1−Ｃ6アルキルメルカプト基により置換されていてよい。より詳しくは、Ｒ2はオクチル、ノニル、デシル、ウンデシル、ドデシル、トリデシル又はテトラデシル基を表わす。好ましくは、メトキシ、エトキシ、プロポキシ、ブトキシ及びヘキシルオキシ基がＲ2のＣ1−Ｃ6アルコキシ置換基として好適である。Ｒ2がＣ1−Ｃ6アルキルメルカプト残基により置換されている場合、それは特にメチルメルカプト、エチルメルカプト、ブチルメルカプト及びヘキシルメルカプト残基と解される。
好ましくは、Ｘは硫黄、スルフィニル又はスルホニルであり、そしてＹは酸素である。
同様に、Ｘ及びＹが結合を表わし、Ｒ2が水素であり、そしてＲ1がＣ1−Ｃ6アルコキシ又はＣ1−Ｃ6アルキルメルカプトにより任意的に置換されたＣ1−Ｃ20アルキル鎖を表わしている化合物が好ましい。
好ましくは、Ｒ5は水素、アジド、シアノ又はハロゲン、例えばフッ素、塩素もしくは臭素を表わす。
好ましくは、Ｒ3及びＲ4はそれぞれヒドロキシ又はシアノもしくはアジド基を表わすか、又はハロゲン原子、例えばフッ素、塩素、臭素もしくはヨウ素を表わし、ここでそれらの残基は同一でも異なるものであってもよい。
特に好ましいのはＲ5が水素原子であり、そしてＲ3及びＲ4がヒドロキシ、シアノ、アジド又はフッ素である化合物である。
一般式（III）の塩基において、残基Ｒ6及びＲ7は水素原子、メチル、トリフルオロメチル、エチル、プロピルもしくはブチル残基を表わすか、又はハロゲン原子、例えばフッ素、塩素、臭素もしくはヨウ素、並びにハロゲンにより置換されていることのあるアルケニル及び／又はアルキニル基を表わす。
Ｒ6及びＲ7について特に好ましいのは水素原子、メチル、トリフルオロメチル又はエチル残基、及びフッ素、塩素又は臭素原子、及び／又はハロゲンにより任置換的に置換されたビニル、プロペニル、エチニル又はプロピニル残基である。
好ましくは、残基Ｒ8は水素原子、メチル、エチル、プロピル又はブチル残基、アミノ基、又はハロゲン原子、例えばフッ素、塩素、臭素もしくはヨウ素、好ましくは塩素又はヨウ素である。
好ましくはＲ10は水素、フッ素、塩素もしくは臭素原子、Ｃ1−Ｃ6アルコキシ基、より詳しくはメトキシ、エトキシ、プロポキシ、ブトキシもしくはヘキシルオキシ基、メルカプト残基、Ｃ1−Ｃ6アルキルメルカプト基、より詳しくはメチルメルカプト、エチルメルカプト、ブチルメルカプトもしくはヘキシルメルカプト基であるか、又はアミノ基（これはＣ1−Ｃ6アルキル基、例えばメチル、エチル、ブチルもしくはヘキシル基により、ヒドロキシＣ2−Ｃ6アルキル基、例えばヒドロキシエチル、ヒドロキシプロピル、ヒドロキシブチルもしくはヒドロキシエチル基により、Ｃ3−Ｃ6シクロアルキル残基、例えばシクロプロピル、シクロペンチルもしくはシクロヘキシル残基により、アリール、好ましくはフェニルにより、アラルキル残基、例えば特に１もしくは複数個のヒドロキシもしくはメトキシ基によって任意的に置換されたベンジルにより、Ｃ1−Ｃ6アルキル基、例えばメチル、エチル、プロピル、ブチルもしくはヘキシル基により、又はハロゲン原子、例えばフッ素、塩素もしくは臭素により一又は二置換されていることがある）を表わす。同様に、そのアミノ基はヘトアリールアルキル又はヘテアリール残基、例えば特にチエニル、フリル又はピリジル残基により置換されていることがある。好ましくは、ヘトアリール残基はチエニルメチル、フリルメチル又はピリジルメチル残基と解される。
好ましくは、以下のヌクレオシドが式（Ｉ）の脂質−ヌクレオチドコンジュゲートを調製するためのカップリング成分として適当である。
６−メルカプト−９−β−Ｄ−リボフラノシド
５−フルオロウリジン
イノシン
５−メチルウリジン
２′，３′−ジデスオキシ−２′，３′−ジフルオロチミジン
５−クロロウリジン
５−トリフルオロメチルウリジン
５−エチニルウリジン
５−エチニルシチジン
５−プロペ−１−エニルウリジン
５−プロペ−２−エニルウリジン
アデノシン
グアノシン
２，６−ジアミノプリン−９−β−Ｄ−リボフラノシド
２−アミノ−６−メルカプトプリン−９−β−Ｄ−リボフラノシド
２−アミノ−６−メルカプトメチルプリン−９−β−Ｄ−リボフラノシド
２−アミノ−６−クロロプリン−９−β−Ｄ−リボフラノシド
２′−デスオキシ−２′−アミノアデノシン
２′−デスオキシ−２′−アジドアデノシン
２′−デスオキシ−２′−アジドシチジン
２′−デスオキシ−５−フルオロウリジン
２−クロロアデノシン
２−ブロモアデノシン
３′−デスオキシ−３′−フルオロアデノシン
６−メチルメルカプトプリン−９−β−Ｄ−リボフラノシド
２−フルオロアデノシン
２−フルオロ−２′−デスオキシアデノシン
一般式（Ｉ）の化合物は次のようにして調製されうる：
１．一般式Ｖの化合物
0003802057.tif 000004
（式中、Ｒ1，Ｒ2，Ｘ及びＹは上記の意味を有する）を一般式VIの化合物
0003802057.tif 000005
（式中、Ｒ3，Ｒ4，Ｒ5及びＢは上記の意味を有するか、又は当業者に公知の酸素保護基により保護されたヒドロキシ基を表わす）と、
活性化性酸クロリド、例えば２，４，６−トリイソプロピルベンゼンスルホン酸クロリド及び第三窒素塩基、例えばピリジン又はルチジンの存在下で、不活性溶媒、例えばトルエンの中で、又は直接無水ピリジンの中で反応させ、そして任意的に加水分解にかけ、ヌクレオシド化学において慣用の手順に従って酸素保護基を外す；又は
２．一般式VIIの化合物
0003802057.tif 000006
（式中、Ｒ1，Ｒ2，Ｘ及びＹは上記の意味を有する）を一般式VIの化合物（式中、Ｒ3，Ｒ4，Ｒ5及びＢは上記の意味を有する）と、ストレプトマイセス（Streptomyces）由来のホスホリパーゼＤの存在下で、不活性溶媒、例えばクロロホルムの中で、適当な緩衝剤の存在下で反応させ、そして任意的に反応にかけ、ヌクレオシド化学において慣用の手順に従って酸素保護基を外す。
一般式Ｖ及びVIIの化合物の調製はLipids 22,947(1987)及びJ.Med.Chem.34,1377(1991)に類似して実施される。
一般式VIの化合物の調製は、例えばEP-A-0,286,028号及びWO 90／08147号に記載されている。記載のヌクレオシドの一部は商業的に入手できる化合物である。
式Ｉに類似の化合物がEP-A-0,350,287号に記載されている。その中で、グリセロールの対応の１，２−ジエステルが記載されている。
ウィルス感染症の処置のための式Ｉの化合物を含む薬剤は腸内又は非経口ルートにより液体又は固体形態で服用されうる。ここで、一般的な服用形態、例えば錠剤、カプセル、コート化錠剤、シロップ、溶液又は懸濁物が考えられる。好ましくは、水が注射媒体として用いられ、注射溶液に一般的な安定化剤、溶解剤及び緩衝剤の如き添加剤を含む。かかる添加剤は例えば酒石酸塩及びクエン酸塩、エタノール、錯形成剤、例えばエチレンジアミン四酢酸及びその無毒な塩、粘度調節用高分子量ポリマー、例えば液体ポリエチレンオキシドである。注射溶液のための液体ビヒクルは無菌である必要があり、そして好ましくはアンプルの中に充填する。固体担体、例えばデンプン、ラクトース、マンニトール、メチルセルロース、タルク、高分散型珪酸、高分子量脂肪酸、例えばステアリン酸、ゼラチン、アガー・アガー、リン酸カルシウム、ステアリン酸マグネシウム、動物性及び植物性脂肪、固体高分子量ポリマー、例えばポリエチレングリコール等である。所望するなら、経口服用に適する製剤は風味料又は甘味料を含みうる。
用量は様々な要因、例えば服用の態様、種、年齢又は個体の症状に依存しうる。好都合には、本発明に係る化合物は１日当り及び体重kg当り0.1〜100mg、好ましくは0.2〜80mgの量で服用される。一日の用量を２〜５回の服用に分けることが好ましくは、各服用につき0.5〜500mgの活性成分含有量を有する錠剤を投与する。同様に、この錠剤は徐放性を有してよく、服用の回数は１日当り１〜３回に減る。徐放錠剤の活性成分含有量は２〜1000mgであってよい。この活性成分は連続点滴により投与してもよく、この場合１日当り５〜1000mgの量が通常十分である。
実施例に記載の化合物に加えて、以下の式Ｉの化合物が本発明の意義において可能である：
１．（５−クロロウリジン）−５′−リン酸（３−ドデシルメルカプト−２−デシルオキシ）プロピルエステル
２．（５−トリフルオロメチルウリジン）−５′−リン酸（３−ドデシルメルカプト−２−デシルオキシ）プロピルエステル
３．（６−メルカプトプリン−９−β−Ｄ−リボフラノシド）−５′−リン酸（３−ドデシルメルカプト−２−デシルオキシ）プロピルエステル
４．（５−フルオロウリジン）−５′−リン酸（３−ドデシルメルカプト−２−デシルオキシ）プロピルエステル
５．（５−プロペ−１−エニルウリジン）−５′−リン酸（３−ドデシルメルカプト−２−デシルオキシ）プロピルエステル
６．（５−エチニルシチジン）−５′−リン酸（３−ドデシルメルカプト−２−デシルオキシ）プロピルエステル
７．（２−アミノ−６−メルカプトプリン−９−β−Ｄ−リボフラノシド）−５′−リン酸（３−ドデシルメルカプト−２−デシルオキシ）プロピルエステル
８．（２，６−ジアミノプリン−９−β−Ｄ−リボフラノシド）−５′−リン酸（３−ドデシルメルカプト−２−デシルオキシ）プロピルエステル
９．（５−プロペ−２−エニルウリジン）−５′−リン酸（３−ドデシルメルカプト−２−デシルオキシ）プロピルエステル
10．（５−フルオロウリジン）−５′−リン酸（３−ドデシルスルホニル−２−デシルオキシ）プロピルエステル
11．（５−クロロウリジン）−５′−リン酸（３−ドデシルスルホニル−２−デシルオキシ）プロピルエステル
12．（６−メルカプトプリン−９−β−Ｄ−リボフラノシド）−５′−リン酸（３−ドデシルスルホニル−２−デシルオキシ）プロピルエステル
13．（５−フルオロウリジン）−５′−リン酸（３−ドデシルオキシ−２−デシルオキシ）プロピルエステル
14．（６−メルカプトプリン−９−β−Ｄ−リボフラノシド）−５′−リン酸（３−ドデシルオキシ−２−デシルオキシ）プロピルエステル
15．（５−フルオロウリジン）−５′−リン酸（３−ドデシルメルカプト−２−デシルメルカプト）プロピルエステル
16．（５−フルオロウリジン）−５′−リン酸（３−ウンデシルメルカプト−２−ウンデシルオキシ）プロピルエステル
17．（５−トリフルオロメチルウリジン）−５′−リン酸（３−ウンデシルメルカプト−２−ウンデシルオキシ）プロピルエステル
18．（６−メルカプトプリン−９−β−Ｄ−リボフラノシド）−５′−リン酸（３−ウンデシルメルカプト−２−ウンデシルオキシ）プロピルエステル
19．（５−トリフルオロメチルウリジン）−５′−リン酸（３−デシルメルカプト−２−ドデシルオキシ）プロピルエステル
20．（５−フルオロウリジン）−５′−リン酸（３−ウンデシルメルカプト−２−ドデシルオキシ）プロピルエステル
21．（５−トリフルオロメチルウリジン）−５′−リン酸（３−ウンデシルメルカプト−２−デシルオキシ）プロピルエステル
22．（６−メルカプトプリン−９−β−Ｄ−リボフラノシド）−５′−リン酸（３−テトラデシルメルカプト−２−デシルオキシ）プロピルエステル
23．（５−フルオロウリジン）−５′−リン酸（３−トリデシルメルカプト−２−デシルオキシ）プロピルエステル
24．（２−フルオロアデノシン）−５′−リン酸（３−ドデシルメルカプト−２−デシルオキシ）プロピルエステル
25．（２−デスオキシ−２−フルオロアデノシン）−５′−リン酸（３−ドデシルメルカプト−２−デシルオキシ）プロピルエステル
26．（６−メルカプトプリン）−９−β−Ｄ−リボフラノシド）−５′−リン酸ドデシルエステル
27．（５−フルオロウリジン）−５′−リン酸ヘキサデシルエステル
28．（５−トリフルオロメチルウリジン）−５′−リン酸エイソコシルエステル
29．（５−フルオロウリジン）−５′−リン酸ドデシルエステル
30．（６−メルカプトプリン−９−β−Ｄ−リボフラノシド）−５′−リン酸ドデシルエステル
実施例１
（５−フルオロウリジン）−５′−リン酸（３−ドデシルメルカプト−２−デシルオキシ）プロピルエステル
3.6ｇ（6.1mmole）のリン酸（３−ドデシルメルカプト−２−デシルオキシ）プロピルエステルを30mlの無水ピリジンで２回処理し、そしてエバポレーションにより濃縮した。その残査を30mlの無水ピリジンに溶かし、2.76ｇ（9.1mmole）の２，４，６−トリイソプロピルベンゼンスルホン酸クロリドで窒素下で処理し、そして室温で30分撹拌した。次いで1.60ｇ（6.1mmole）の５−フルオロウリジン(Fluka)を加え、そしてその装填物をＮ2下で24時間放置した。
加水分解を15mlの水を利用して行い、その混合物を更に室温で２時間撹拌し、真空のもとで溶媒を除去し、そして少量のトルエンを用いて２回ストリッピングにかけた。その残査をLiChroprep（登録商標）RP-18でのクロマトグラフィーにより溶出剤として７／１のメタノール／水からメタノールに至る線形勾配を用いて精製した。その収量は3.1ｇ（理論量の69％）である；油状。Ｒf＝0.24（CH2Cl2／MeOH  ８／２）；Ｒf＝0.55（CH2Cl2／MeOH／H2O  6.5／2.5／0.4）；Merck 5715 TLCプレート、シリカゲル60Ｆ。
リン酸（３−ドデシルメルカプト−２−デシルオキシ）プロピルエステルをWO 92／03462に記載の通りにして調製した。
実施例２
（６−メルカプトプリン−９−β−Ｄ−リボフラノシド）−５′−リン酸（３−ドデシルメルカプト−２−デシルオキシ）プロピルエステル
6.2ｇ(12.5mmole)のリン酸（３−ドデシルメルカプト−２−デシルオキシ）プロピルエステルを実施例１に記載の通り5.7ｇ（18.75mmole）の２，４，６−トリイソプロピルベンゼンスルホン酸クロリド、次いで3.55ｇ（11.25mmole）の６−メルカプトプリン−９−β−Ｄ−リボフラノシドで処理し、そして24時間後、これを水で加水分解した。
次いで、15mlの水中の2.85ｇの酢酸カルシウムをその中に滴下し、コンジュゲートの粗カルシウム塩を沈殿させた。沈澱物をアセトンと共に（１／10）長時間撹拌後、６ｇのアモルファス粗生成物が得られ、HPLCに従い72面積％を有していた。
カルシウム塩を350mlのメタノールの中に懸濁し、Na+形態の150ｇのAmberlite IR 120で処理し、そして２日間撹拌した。
その後、イオン交換体を除去し、濾液をエバポレーションし、そしてその残査をLiChroprep（登録商標）RP-18での５／１から９／１に至るメタノール／水の線形勾配によるカラムクロマトグラフィーにより精製した。生成物含有画分を真空エバポレーションし、そしてその残査をアセトンと共に撹拌し、そして乾かした。収量：3.52ｇ（理論量の41％）。
DC：Ｒf＝0.45（イソプロパノール／酢酸ブチル／濃アンモニア／水  50／30／５／15）。
実施例３
（６−メルカプトプリン−９−β−Ｄ−リボフラノシド）−５′−リン酸（３−ドデシルメルカプト−２−デシルオキシ）プロピルエステルナトリウム塩
実施例２に類似して、400mlの無水ピリジン中の41.4ｇのリン酸（３−ドデシルメルカプト−２−デシルオキシ）プロピルエステルを42.9ｇの２，４，６−トリイソプロピルベンゼンスルホン酸クロリド、次いで23.7ｇの６−メルカプトプリン−９−β−Ｄ−リボフラノシドと反応させた。加水分解及び160mlの水の中での25ｇの酢酸カルシウムによる沈殿の後に吸引濾過した粗カルシウム塩を500mlのMTBと250mlの２ＮのHCl間で分配させ、そして有機相の中で完全に溶解するまで撹拌した。その有機相を分離し、飽和塩化ナトリウム溶液で洗い、そしてロータリーエバポレーターで濃縮した。その残査を80ｇのLiChroprep RP-18に載せ（粗生成物のMTB溶液をRP-18で処理し、エバポレーションして乾かす）、そしてRP-18上のプレカラムで少しずつ分離させた。各時、3.7ｌのメタノール、400mlの水、３mlの氷酢酸及び２ｇの酢酸ナトリウムの混合物が溶出剤を担った。生成物を含む画分を合わせ、所望の化合物を100mlの水の中に20ｇの酢酸カルシウムを添加することにより沈殿させ、そして吸引濾過した。収量：32ｇ（理論量の43％）。
カルシウム塩を250mlのMTBの中に懸濁し、振盪することにより80mlの２ＮのHClで抽出し、そしてその有機相を飽和塩化ナトリウム溶液で２回洗った。溶媒の除去後、その残査を200mlのトルエンに溶かし、そして30％のナトリウムメチレート溶液を有するFriscolyt電極に対してpH７に調整した。ナトリウム塩を200mlのアセトンの中に撹拌することにより沈殿させ、吸引濾過し、そして真空ドライオーブンの中で乾かした。収量：29ｇ（理論量の37％）。
Ｒf値：0.18（シリカゲル；溶出剤；イソプロパノール／酢酸ブチル／水／濃アンモニア  50／30／15／５）。
実施例４
（６−メルカプトプリン−９−β−Ｄ−リボフラノシド）−５′−リン酸（３−ドデシルメルカプト−２−デシルオキシ）プロピルエステルナトリウム塩
実施例３に類似して、粗コンジュゲートを40ｇの６−メルカプトプリン−９−β−Ｄ−リボフラノシドから調製した。この粗生成物をDIOL相を有するカラム（直径４cm；長さ25cm）（254nmで検出；溶出剤：メタノール／MTB  10／４）で８ｇづつ用いることによりカラムクロマトグラフィーにより精製した。適用したサンプルは溶出剤の中で完全に溶けた。種々の分離物の生成物含有画分を合わせ、エバポレーションし、そして実施例３に記載のトルエン及びアセトンからのナトリウム塩と同様に沈殿させた。収量：64.5ｇ（理論量の51％）。
Ｒf値：0.85（DIOL相；溶出剤：メタノール。
実施例５
（６−メチルメルカプトプリン−９−β−Ｄ−リボフラノシド）−５′−リン酸（３−ドデシルメルカプト−２−デシルオキシ）プロピルエステルナトリウム塩
実施例１に類似して、14.9ｇの６−メチルメルカプトプリン９−β−Ｄ−リボフラノシド(50mmole)を、250mlの無水ピリジン中の27.3ｇのリン酸（３−ドデシルメルカプト−２−デシルオキシ）プロピルエステル及び25ｇの２，４，６−トリイソプロピルベンゼンスルホン酸クロリドから調製した混合無水物を反応させ、加水分解し、そしてエバポレーションにより濃縮した。実施例３に類似して、粗生成物（HPLC：67面積％）をRP-18でのクロマトグラフィーにより精製し、カルシウム塩として沈殿させ、そして二ナトリウム塩に変換させた。収量：15.2ｇ（理論量の38％）。
Ｒf値：0.22（シリカゲル；溶出剤：イソプロパノール／酢酸ブチル／水／濃アンモニア  50／30／15／５）。
実施例６
（５−フルオロウリジン）−５′−リン酸（３−ドデシルメルカプト−２−デシルオキシ）プロピルエステルナトリウム塩
実施例１に類似して、50ｇの５−フルオロウリジンを粗コンジュゲートに変換させ、実施例３に記載の通りにしてカルシウム塩として沈殿させ、次いで遊離酸に変換させ、実施例４に類似しての溶出剤として10／４のメタノール／MTBを用いるDIOL相でのクロマトグラフィーにより粗生成物として精製した。実施例３に記載の通りにして、調製したナトリウム塩は90％の収率で単離された。
Ｒf値：0.35（DIOLプレート；溶出剤：メタノール／MTB  10／４）。
実施例７
CFU-E及びCFU-GMアッセイでのアザチオプリン、６−メルカプトプリン（6-MP）、６−メルカプトプリンリボシド、BM 92.0729及びドキソルビシンについてのIC50値（μｇ／ml）
この表は、コロニー形成単位／赤血球(CFU-E)及びコロニー形成単位／顆粒球−マクロファージ（CFU-GM）を含むマウス骨髄乾細胞に対するインビトロ細胞障害能に関する６−メルカプトプリンリボシド  エーテル脂質コンジュゲートBM92.0729と対比させたアザチオプリン、６−メルカプトプリン（6-MP）及び６−メルカプトプリンリボシドに関するIC50値（mg／ml）を示す。細胞増殖抑制／細胞障害性化合物ドキソルビシンも対照物質として含ませた。化合物は全て３−６通りの濃度依存式実験で試験し、試験した濃度につき少なくとも二重又は三重インキュベーションを行った。
その結果からわかる通り、BM 92.0700は試験した他の全ての化合物、特に６−メルカプトプリンリボシドと比べ、骨髄幹細胞によって非常に良く寛容された。
CFU-E及びCFU-GMアッセイでのアザチオプリン、６−メルカプトプリン（6-MP）、６−メルカプトプリンリボシド、BM 92.0729及びドキソルビンについてのIC50値（μｇ／ml）a
0003802057.tif 000007
実施例８
雌のバルブ／ｃマウスにおけるBM 92.0729、アザチオプリン、６−メルカプトプリン及び６−メルカプトプリンリボシドの骨髄障害性：日＋４（Exp.930740）
Exp.930740は４日間連続して（０日目〜３日目）一日回p.o.処理した雌のバルブ／ｃマウスにおけるインビボでのBM 92.0729、アザチオプリン、６−メルカプトプリン及び６−メルカプトプリンリボシドの骨髄障害性を示す。動物を４日目に殺し、そして骨髄細胞充実性（細胞数／大腿骨）を決定した。この結果は、６−メルカプトプリンリボシドエーテル脂質コンジュゲートBM 92.0729に関しては試験した最大用量、即ち100mg・kg-1・日-1（これはモルベースで30mg・kg-1・日-1の６−メルカプトプリンリボシドに相当する）まで骨髄障害がないことを示した。この化合物は、エーテル脂質コンジュゲートBM 92.0729と異なり、ある骨髄充実性において明確な用量−依存性低下を示した。同一の発見がアザチオプリン及び６−メルカプトプリンを含むその他の物質に関して得られた。
雌のバルブ／ｃマウスにおけるBM 92.0729、アザチオプリン、６−メルカプトプリン及び６−メルカプトプリンリボシドの骨髄障害性：日＋４（Exp.930740）
0003802057.tif 000008
実施例９
雌のバルブ／ｃマウスにおけるBM 92.0729、アザチオプリン、６−メルカプトプリン、６−メルカプトプリンリボシド及びシクロスポリンＡの骨髄障害性：日＋４（Exp.940026）。
Exp.940026はExp.930740（実施例８）で得られた結果を再現することを狙いとする実験である。この実験において、シクロスポリンＡも対照化合物として含ませた。Exp.940026の結果はインビボでExp.930740で得られた結果を確証した。
雌のバルブ／ｃマウスにおけるBM 92.0729、アザチオプリン、６−メルカプトプリン、６−メルカプトプリンリボシド及びシクロスポリンＡの骨髄障害性：日＋４（Exp.940026）
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実施例10
CFU-E及びCFU-GMアッセイにおけるBM 92.0700及び5-FUの骨髄障害性（μＭ）
添付書類４に示している表はCFU-E及びCFU-GMアッセイにおけるインビトロでの骨髄障害についての５−フルオロウリジン（5-FU）及び５FU-エーテル脂質コンジュゲートBM 92.0700に関する平均IC50値である。アッセイ条件については、添付書類１の詳細を参照されたい。
このデーターは、５−フルオロウリジンBM92.0700が、5-FU自体と比べ、赤血球及び顆粒球／マクロファージ骨髄幹細胞に対してそれぞれ610分の１及び238分の１弱い毒性であることを示す。
CFU-E及びCFU-GMアッセイにおけるBM 92.0700及び5-FUの骨髄障害性（μＭ）
0003802057.tif 000010
実施例11
インビボでのL1210白血病に対するBM 92.0700（図１）及び5-U（図２）の影響：生存期間。
０日目にマウスにL1210白血病細胞を接種し（ｎ＝10匹の動物／グループ）、そして０日目（＋１ｈ）〜41日目（６週間）、図１及び２にそれぞれ示している週サイクルで１日１回処理した。
添付書類６に示すコントロール及び処置グループの生存曲線から、5-FUは、論文に報告されている通り、非常に狭い有効用量プロフィールをもつことが明らかである。即ち、用量を高めると、例えば２×10／５×0.1mg・kg-1・日-1から２×10／５×0.3mg・kg-1・日-1又はそれより高い用量に高めると、低い生存率を招いてしまう。
反対に、5-FUエーテル脂質コンジュゲートBM 92.0700ではコントロールＩおよびIIと比べ（図１）生存期間の明確な用量・依存性増大が得られ、BM 92.0700のその当モル用量は標準化合物と比べてこの白血病モデルにおいて一層明らかに有効であることを示唆した。
BM 92.0700が一層有効であり（図１及び２）、且つ骨髄細胞に対してはるかに毒性が弱いことを考慮すると、BM 92.0700は標準細胞増殖抑制5-FUと比べてはるかに高い治療指数／比を有すると考えられうる。
【図１】
0003802057.tif 000012
【図２】
0003802057.tif 000013