(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
炭酸水素カリウムおよび炭酸水素ナトリウムのうちの少くとも１種のみのメディエーターを含有する水性媒体と活性酸素種もしくは活性酸素種を生成する物質とを共存させた系において、活性酸素を消去することのできる物質の候補を存在させて、微弱可視光の発光の有無を観測し、微弱発光が検出させた場合には前記候補は活性酸素消去能を持つ物質であると同定することを特徴とする微弱発光検出による活性酸素消去系の検索方法。
【請求項２】
メディエーターは、炭酸水素アルカリ金属塩であることを特徴とする請求項１の活性酸素消去系の検索方法。
【請求項３】
活性酸素種もしくは活性酸素種を生成する物質として、過酸化水素およびハイドロペルオキシカーボン類のうちの少くとも１種を共存させることを特徴とする請求項１または２の活性酸素消去系の検索方法。
【請求項４】
微弱可視光の発光の有無を、回折格子またはフィルター型高感度多波長解析装置により観測することを特徴とする請求項１ないし３のいずれかの活性酸素消去系の検索方法。
【請求項５】
微弱可視光の発光の有無を、ケミルミネッセンスアナライザーまたはＣＣＤカメラにより観測することを特徴とする請求項１ないし３のいずれかの活性酸素消去系の検索方法。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明の属する技術分野】
この出願の発明は、微弱発光検出による活性酸素消去系の検索方法に関するものである。
【０００２】
【従来の技術と発明の課題】
従来より、飲食品に含有されている活性酸素成分がＤＮＡを損傷することが知られている。そしてこのＤＮＡ損傷に対し、活性酸素消去物質を添加することが検討され、そのための有効な活性酸素消去物質の検索が進められてきてもいる。
【０００３】
しかしながら、活性酸素成分の作用と活性酸素消去物質成分の作用との機序については以前としてその解明は不充分であることから、飲食品に含有されている活性酸素成分によるＤＮＡ損傷を抑止することのできる方策は確立されていないのが実情である。
【０００４】
その大きな要因としては、活性酸素成分の作用と活性酸素消去物質との相互作用についてこれを検出することができていないことがあった。
【０００５】
このような状況において、この出願の発明者らは、活性酸素成分の作用と活性酸素消去物質との相互作用を活性酸素消去発光の現象により検知するとの方法を確立してきた。この方法は、飲食品の安全性をより高めるための重要な検知、分析の手段を提供するものとしてある。
【０００６】
発明者らの発光現象に基づく検知、分析の方法においては、活性酸素種（Ｘ）と活性酸素消去物質（Ｙ）の存在系にある種の物質（Ｚ）が加わると活性酸素消去発光が起こることが見出されている。この発光は、活性酸素が消去される際のエネルギーが光に変換されたものであることが明らかにされている。そして、このようなＸＹＺ系活性酸素消去発光の現象は、物質（Ｚ）をメディエーターとする基本的で普遍的な現象であることが明らかにされてきている。
【０００７】
このようなＸＹＺ系については、たとえば次の表１に例示したように、活性酸素消去物質（Ｙ）としては、没食子酸、カテキン類、アントシアニン類、その他のフラボノイド類が見出されてきており、またメディエーター（Ｚ）については、アセトアルデヒド、ＤＤＭＰサポニン類、ヘムタンパク質、ノンヘムタンパク質が見出されている。
【０００８】
【表１】
0003773412.tif 000002
【０００９】
しかしながら、ＤＮＡ損傷をもたらす活性酸素種（Ｘ）による作用を防止するための活性酸素消去物質（Ｙ）とメディエーター（Ｚ）の系についてはその確定はいまだに充分ではない。このため、加工飲食品を健康、保健の観点から見直すことに、微弱発光検出の方法は必ずしもその利用が進んでいないのが実情である。
【００１０】
特に、加工食品の見直しのためには、活性酸素消去物質（Ｙ）を検索するための手段としてのメディエーター（Ｚ）について、これまでに見出されているものは、その入手や取扱いが必ずしも容易でないという問題があった。
【００１１】
そこで、この出願の発明は、より簡便に取扱うことができ、入手が容易であって、微弱発光の検出も比較的容易なメディエーターによって活性酸素消去物質を検索することのできる新しい方法を提供することを課題としている。
【００１２】
この出願の発明は、上記の課題を解決するものとして、第１には、炭酸水素カリウムおよび炭酸水素ナトリウムのうちの少くとも１種のみのメディエーターを含有する水性媒体と活性酸素種もしくは活性酸素種を生成する物質とを共存させた系において、活性酸素を消去することのできる物質の候補を存在させて、微弱可視光の発光の有無を観測し、微弱発光が検出させた場合には前記候補は活性酸素消去能を持つ物質であると同定することを特徴とする微弱発光検出による活性酸素消去系の検索方法を提供する。
【００１３】
また、この出願の発明は、第２には、メディエーターは、炭酸水素アルカリ金属塩であることを特徴とする上記の活性酸素消去系の検索方法を提供し、第３には、メディエーターはアセトアルデヒドの水溶液として用いることを特徴とする活性酸素消去系の検索方法を提供する。
【００１４】
そして、この出願の発明は、第４には、活性酸素種もしくは活性酸素種を生成する物質として、過酸化水素およびハイドロペルオキシカーボン類のうちの少くとも１種を共存させることを特徴とする上記のいずれかの活性酸素消去系の検索方法を提供する。
【００１５】
さらに、この出願の発明は、第５には、微弱可視光の発光の有無を、回折格子またはフィルター型高感度多波長解析装置により観測することを特徴とする上記の活性酸素消去系の検索方法を提供し、第６には、微弱可視光の発光の有無を、ケミルミネッセンスアナライザーまたはＣＣＤカメラにより観測することを特徴とする上記の活性酸素消去系の検索方法を提供する。
【００１６】
【発明の実施の形態】
この出願の発明は、上記のとおりの特徴をもつものであるが、以下にその実施の形態について説明する。
【００１７】
前記のとおりのこの出願の発明においては、活性酸素種を共存させた系において発光のメディエーターとしての炭酸塩、炭酸水素カリウムおよび炭酸水素ナトリウムのうちの少くとも１種を用いて、水性媒体中において微弱発光の有無を観察することで、活性酸素消去物質（Ｙ）を検索することを本質的な特徴としている。このメディエーター成分は、従来より知られているアセトアルデヒド、ＤＤＭＰサポニン、ヘムタンパク質等の有機物質とは異って、無機質の炭酸塩、たとえば、炭酸水素カリウムあるいは炭酸水素ナトリウムとして利用できるため、その入手、取扱いははるかに容易であって、しかも後処理における環境への負荷も小さいという特徴を有している。
【００１８】
そしてなによりも、これらの塩類は、メディエーター（Ｚ）として、活性酸素種（Ｘ）と活性酸素消去物質（Ｙ）の存在系において発光の不可欠な成分要素であって、ＸＹＺ系発光を可能としているものである。
【００１９】
この出願の発明における炭酸塩には、炭酸水素塩が当然に含まれる。また、リン酸塩、亜リン酸塩も含まれる。そして、この発明の上記塩類は、アルカリ金属塩やアルカリ土類金属塩、その他の金属塩、あるいはアンモニウム塩等として用いられてもよい。
【００２０】
なかでも、メディエーターとしての発光機能の点において、炭酸水素アルカリ金属塩が好ましいものとして例示することができる。
【００２１】
この出願の発明においては、これらの塩類は、水溶液として水性媒体中で使用できる。有機溶媒の使用が必須とされていないことが特徴でもある。その使用量については、塩類の種類によっても相違するが、たとえば、水媒体１ｍｌに対して０．５ｍｇ以下の割合でもよい。活性酸素消去物質（Ｙ）の検索のために以上の塩類メディエーター（Ｚ）に共存させる活性酸素種（Ｘ）は各種であってよく、また、上記のメディエーター成分としての炭酸水素カリウム（ＫＨＣＯ3）や炭酸水素ナトリウム（ＮａｌｌＣＯ3）等のこの発明の塩類には、アセトアルデヒド、ＤＤＭＰサポニン、ラクトフェリン、ヘムタンパク質、ノンヘムタンパク質等の従来より知られているメディエーター成分の１種または２種以上を併用して、微弱発光についての相乗的効果や増幅効果を奏するようにしてもよい。
【００２２】
ただ、この出願の発明においてはこのような併用は必須ではない。共存させる活性酸素種（Ｘ）または活性酸素種（Ｘ）を生成する物質としては、たとえば過酸化水素（Ｈ2Ｏ2）をはじめ、脂肪酸類、糖類、アミノ酸類、塩基類等やこれに由来するハイドロペルオキシカーボン類の各種のものであってよい。
【００２３】
この出願の発明においては、以上のとおりのメディエーター（Ｚ）と活性酸素種（Ｘ）またはこれを生成する物質との共存系に、活性酸素を消去する物質の候補を存在させて、微弱発光の有無により活性酸素消去能を同定することになるが、この場合の上記候補は、化学構造が知られている物質であってもよいし、化学構造未知の物質、あるいは天然物や、飲食品そのものであってもよい。
【００２４】
この場合、上記候補については、これまでに知られている各種の物質を参照することができる。たとえば、没食子酸、カテキン、フラボン類等の公知の活性酸素消去物質を基礎として、これを分子構造デザインによって改変することで、新しい活性酸素消去物質を検索創案することが可能となる。あるいは、各種の飲食品について微弱発光の有無を検討することで、有益な飲食品やこれに含有されている活性酸素消去物質同定の可能性を得ることができる。
【００２５】
たとえば、飲食品の種類によってあらかじめ前記の活性酸素消去物質（Ｙ）を有しているものがある。このことは、前記Ｘ成分とＺ成分との添加によって微弱発光が検出されることでわかる。そこで、この場合には、Ｚ成分としてのメディエーターの種類や添加量をさらに検討すればよい。成分Ｙをあらかじめ含有している飲食品においては乾燥や加熱で容易にＸＹ系が生成する。
【００２６】
Ｙ成分を含有していない飲食品でも、食材等としての組み合わせによってＸＹ系が成立することが多い。
【００２７】
微弱発光の確認については、回折格子またはフィルター型高感度多波長解析装置により、あるいは、ケミルミネッセンスアナライザーやＣＣＤ等の高感度ＶＩＭカメラがこの発明において好適に使用される。
【００２８】
そこで、以下の実施例においては、上記塩類をメディエーターとするこの発明の検索方法が有効であることをモデル試験として説明する。
【００２９】
もちろん、この出願の発明は、以下の例によって何ら限定されることはない。
【００３０】
【実施例】
実施例１
活性酸素種（Ｘ）：２％過酸化水素水溶液、活性酸素消去物質（Ｙ）：飽和没食子酸水溶液、そして、各種の炭酸塩を２％アセトアルデヒド水溶液に添加した物質を用いてＣＣＤカメラにより微弱発光を検出した。
【００３１】
その結果、ＫＨＣＯ3、ＮａＨＣＯ3の場合については明瞭な微弱発光が確認された。特に炭酸水素カリウム（ＫＨＣＯ3）の場合には、４００〜８００ｎｍの可視光での発光は顕著であった。
実施例２
カテキンを含有しているほうじ茶、抹茶およびインスタントコーヒーの各々について、２％アセトアルデヒドへ炭酸水素カリウム（ＫＨＣＯ3）を添加した。いずれの場合にも微弱発光が確認された。
実施例３
実施例１において、アセトアルデヒドを使用することなく、炭酸水素カリウム（ＫＨＣＯ3）の１．０％水溶液を用いた。
【００３２】
同様に微弱発光が確認された。
実施例４
実施例１において、炭酸水素カリウム（ＫＨＣＯ3）に代えて、炭酸水素ナトリウム（ＮａＨＣＯ3）を用いた。
【００３３】
その結果、５％以上の濃度において微弱発光が確認された。
実施例５
微弱発光の検出確認のために、ＸＹＺ系微弱発光の標準成分として、Ｘ：１９６ｍＭ  Ｈ2Ｏ2（過酸化水素）水溶液、Ｙ：飽和没食子酸水溶液、Ｚ：ＫＨＣＯ3を飽和させた水溶液、を用意し、次の四種の組合わせを調整した。
【００３４】
ＹＺ、ＸＺ、ＸＹ、Ｘ
これらの四種の調整液のいずれについてもＣＣＤカメラにより観察したが発光現象は全く確認されなかった。
【００３５】
次いで、ビールと第四級アミン型イオン交換樹脂を、蟻酸の１０Ｎ水溶液を用いて溶出処理し、得られた蟻酸溶出液を、前記のとおりの四種の調整液、ＹＺ、ＸＺ、ＸＹおよびＸの各々に滴下してＣＣＤカメラにより観察した。図１に例示したとおり、ＸＺ調整液の場合についての微弱発光が検出確認された。他の調整液の場合には微弱発光は全く確認されなかった。
【００３６】
この結果から、蟻酸溶出処理によって、ビール由来のＹ成分、すなわち抗酸化成分のみが溶出分離され、ＸＺ調整液との混合によってＸＹＺ系微弱発光を生じさせていることがわかる。
【００３７】
このようにして、ビール由来の抗酸化成分の存在（Ｙ）が、この発明の方法によって検索された。
【００３８】
【発明の効果】
以上詳しく説明したとおり、この出願の発明によって、より簡便に取扱うことができ、入手が容易であって、微弱発光の検出も比較的容易なメディエーターによって活性酸素消去物質を検索することができる。
【図面の簡単な説明】
【図１】この発明の実施例の結果を例示した写真図である。
【図１】
0003773412.tif 000003