(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
一般式（Ｉ）
【化１】
0003828603.tif 000009
〔式中、Ｒは非置換または低級アルコシキ基もしくはニトロ基で置換されたフェニル基、またはピリジル基を表す〕で表されるピロリジノン誘導体またはその薬理学的に許容される塩を有効成分として含有する慢性関節リウマチ、敗血症、および潰瘍性大腸炎からなる群より選択される疾患を治療または予防するための医薬組成物。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明はピロリジノン誘導体を有効成分として含有するインターロイキン−１β（以下、「ＩＬ−１β」という）産生抑制剤、および腫瘍壊死因子α（以下、「ＴＮＦα」という）遊離抑制剤に関する。
【０００２】
【従来の技術】
ＩＬ−１βは主にマクロファージ、好中球などの免疫担当細胞から産生される蛋白質で、免疫応答の重要な因子である。さらには、炎症時においても中心的な役割を果たす因子として、または造血、内分泌、神経など多くの生体反応に関係する因子として知られている。
例えば近年、慢性関節リウマチなどの炎症性疾患との関係が明確化されており、慢性関節リウマチ患者の滑膜中にＩＬ−１βが検出され、また、関節液中のＩＬ−１β濃度が局所の炎症所見と相関することも報告されている。
【０００３】
また、下記の一般式（Ｉ）
【化２】
0003828603.tif 000002
〔式中、Ｒは非置換または低級アルコシキ基もしくはニトロ基で置換されたフェニル基、またはピリジル基を表す〕で示されるピロリジノン誘導体は植物成長調節剤、メタン醗酵促進剤および脳循環代謝改善剤等として知られている（特開昭６１−２２９８０１号、特開昭６１−２３０７９８号、特開平２−２２５４５８号等参照）が、そのＩＬ−１β産生抑制作用、およびＴＮＦ遊離抑制作用についてはこれまでに知られていない。
【０００４】
【発明が解決しようとする課題】
現在、慢性関節リウマチなどの炎症性疾患の治療には、ステロイド剤および非ステロイド系抗炎症剤が用いられている。ステロイド剤は各種の炎症性疾患における諸症状を顕著に改善するが、投与が長期化すると耐性化がおきること、消化器障害、皮膚障害、腎炎などの、ときには重篤である副作用が存在することが問題となっている。一方、非ステロイド系抗炎症剤は炎症症状を一時的に抑制するが、炎症性疾患を根本から治療するものではない。
このような状況においていくつかのＩＬ−１β産生抑制作用を有する化合物が炎症性疾患の治療薬として提案されているが、充分に満足できる化合物は得られていない。
そこでＩＬ−１βの産生を強力に抑制し、かつ安全性の高い化合物が求められていた。
【０００５】
【課題を解決するための手段】
本発明者らは鋭意研究の結果、前述のピロリジノン誘導体が優れたＩＬ−１β産生阻害作用、およびＴＮＦα遊離抑制作用を有しており、慢性関節リウマチ治療薬、敗血症治療薬として有用なものであることを見出して本発明を完成させたのである。
【０００６】
すなわち本発明は、下記一般式（I）
【化３】
0003828603.tif 000003
〔式中、Ｒは非置換または低級アルコキシ基もしくはニトロ基で置換されたフェニル基、またはピリジル基を表す〕で表されるピロリジノン誘導体またはその薬理学的に許容される塩を有効成分として含有する、ＩＬ−１β産生抑制剤、およびＴＮＦα遊離抑制剤に関するものであり、慢性関節リウマチ治療薬、敗血症治療薬として有用である。
【０００７】
前記一般式においてＲで示される低級アルコシキ基で置換されたフェニル基において、低級アルコシキ基とは炭素数１〜４の直鎖または分枝鎖のアルキルから誘導されるもの、例えばメトキシ基、エトキシ基、ｎ−プロポキシ基、ｉ−プロポキシ基、ｎ−ブトキシ基、ｉ−ブトキシ基、tert−ブトキシ基などが包含される。
【０００８】
一般式（Ｉ）で示されるピロリジノン誘導体として、例えば、以下に示される化合物が挙げられる。
１−シンナモイル−２−ピロリジノン（以下、「化合物１」という）、１−（ｏ−メトキシ−シンナモイル）−２−ピロリジノン（以下、「化合物２」という）、１−（ｍ−メトキシ−シンナモイル）−２−ピロリジノン（以下、「化合物３」という）、１−（ｐ−メトキシ−シンナモイル）−２−ピロリジノン（以下、「化合物４」という）、１−（３,４−ジメトキシ−シンナモイル）−２−ピロリジノン（以下、「化合物５」という）、１−（３,４,５−トリシンナモイル）−２−ピロリジノン（以下、「化合物６」という）、１−（ｏ−ニトロ−シンナモイル）−２−ピロリジノン（以下、「化合物７」という）、１−（ｍ−ニトロ−シンナモイル）−２−ピロリジノン（以下、「化合物８」という）、１−（ｐ−ニトロ−シンナモイル）−２−ピロリジノン（以下、「化合物９」という）、１−（２,４−ジニトロ−シンナモイル）−２−ピロリジノン「以下、「化合物１０」という）、１−（２,４,６−トリニトロ−シンナモイル）−２−ピロリジノン（以下、「化合物１１」という）、１−（３−（２−ピリジル）−アクリロイル）−２−ピロリジノン（以下、「化合物１２」という）、１−（３−（３−ピリジル）−アクリロイル）−２−ピロリジノン（以下、「化合物１３」という）、１−（３−（４−ピリジル）−アクリロイル）−２−ピロリジノン（以下、「化合物１４」という）。
これらのピロリジノン誘導体の構造を以下に示す。
【０００９】
【表１】
0003828603.tif 000004
【００１０】
上記一般式（Ｉ）で示されるピロリジノン誘導体は所望によって薬理学的に許容され得る酸との塩に変換されたものとして用いることができ、これらの塩を含有するＩＬ−１β産生抑制剤、およびＴＮＦα遊離抑制剤も本発明に包含される。
薬理学的に許容され得る酸としては、例えば塩酸、硫酸、臭化水素酸、リン酸などの鉱酸との塩；メタンスルホン酸、ベンゼンスルホン酸、ｐ−トルエンスルホン酸などの有機スルホン酸；酢酸、プロピオン酸、シュウ酸、コハク酸、マレイン酸、フマール酸、乳酸、酒石酸、リンゴ酸、クエン酸などの有機カルボン酸との塩などを挙げることができる。
【００１１】
本発明のＩＬ−１β産生抑制作用、およびＴＮＦα遊離抑制作用を有する一般式(Ｉ)で表されるピロリジノン誘導体は、その種類に応じて各種方法により製造できる。また、一般式(Ｉ)で表されるピロリジノン誘導体の塩は通常の塩形成反応により製造することができる。
このピロリジノン誘導体は、優れたＩＬ−１β産生抑制作用を有していること、しかも、低毒性であることから、慢性関節リウマチ、リウマチ様多発性関節炎、敗血症、全身性エリテマトーデス、全身性強皮症、ベーチェット病、結節性動脈周囲炎、潰瘍性大腸炎、活動性慢性肝炎、糸球体腎炎、変形性関節炎、痛風、アテローム硬化症、乾癬、アトピー性皮膚炎、骨粗鬆症などのＩＬ−１βが関与する疾患の予防または治療に有用である。
【００１２】
さらにこのピロリジノン誘導体はＴＮＦα遊離抑制作用を有することにより、ＴＮＦαが病態の進展に関与する疾患の予防または治療に有用である。これらの疾患には、例えば慢性関節リウマチ、リウマチ様多発性関節炎、敗血症、アトピー性皮膚炎等の前記のＩＬ−１βも関与する疾患、さらには後天性免疫不全症候群（ＡＩＤＳ）等が挙げられる。
【００１３】
このピロリジノン誘導体の有効な活性発現のための投与量は、通常、成人一人当たり１日５mgから６ｇであり、好ましくは、１０mgから３００mgである。この化合物の投与方法としては、例えば、経口投与、静脈内投与、皮下投与、筋肉内投与、直腸内投与、関節内投与などが挙げられるが、経口投与、関節内投与および静脈内投与が好ましい。
このピロリジノン誘導体は、任意慣用の製剤方法を用いて投与用に調製することができる。経口投与剤としては、例えば、錠剤、顆粒剤、粉末剤、硬カプセル剤、軟カプセル剤、経口用液体製剤などである。
【００１４】
経口投与用のために用いる錠剤およびカプセル剤等は、結合剤、例えば、デキストリン、ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、ポリビニルピロリドン、マクロゴールなど；賦形剤、例えば、乳糖、トウモロコシ澱粉、リン酸カルシウム、メタケイ酸アルミン酸マグネシウムなど；潤沢剤、例えば、ステアリン酸カルシウム、タルクなど；崩壊剤、例えば、カルボキシメチルセルロース、結晶セルロースなどのような慣用の成分を含有していてもよい。また、これらの製剤はこの技術分野において周知の方法でコーテイングしてもよい。
【００１５】
経口用液体製剤は、水性または油性の懸濁剤、乳剤、溶液、シロップ、エリキシル剤、その他であってもよく、または、使用する前に水もしくは他の適当なビヒクルで再溶解させる乾燥生成物であってもよい。このような液体製剤は普通に用いられる添加剤、例えば、懸濁化剤、例えば、ソルビットシロップ、カルボキシメチルセルロース、ゼラチン、ヒドロキシエチルセルロース、ステアリン酸アルミニウムゲル、水素添加食用油脂など；乳化剤、例えば、レシチン、モノオレイン酸グリセリド、アラビアゴムなど；非水溶性ビヒクル、例えば、パーム油、プロピレングリコール、エチルアルコールなど；防腐剤、例えば、p-ヒドロキシ安息香エチル、ソルビン酸などを含有していてもよい。
非経口投与用の剤型としては注射剤、坐剤などが考えられる。
注射剤は、必要によりｐＨ調製剤、緩衝剤、安定化剤、保存剤、可溶化剤などを添加し常法により調製される。
【００１６】
以下、実施例により本発明を具体的に説明する。なお、本発明はこれらの実施例により限定されるものではない。
【００１７】
【実施例】
実施例１  （ＩＬ−１β産生抑制作用の測定）
本発明のピロリジノン誘導体のＩＬ−１β産生抑制作用を以下の方法に従い測定した。
ＲＰＭＩ １６４０培地（バイオ ウィッターカー社製）に、１０v/v％の胎児牛血清、２ｍＭのグルタミン、５０μＭの２−メルカプトエタノール、６０μｇ／mlのペニシリンおよび１００μｇ／mlのストレプトマイシンを加えて混合し、これに、ヒト末梢血由来のＴＨＰ−１細胞（ＡＴＣＣ ＴＩＢ２０２）を加えて、懸濁させる。このＴＨＰ−１細胞の懸濁液を３７℃にて、酸素９５％および二酸化炭素５％の混合ガスの雰囲気下に維持し、継代培養する。
この継代培養した懸濁液の一部を、室温で１２００rpmで３分間遠心分離し、継代したＴＨＰ−１細胞を回収する。
【００１８】
次にＲＰＭＩ １６４０培地に２v/v％の胎児牛血清、２ｍＭのグルタミン、５０μＭの２−メルカプトエタノール、６０μｇ／mlのペニシリンおよび１００μｇ／mlのストレプトマイシンを加えて混合し、これに、前記の継代培養し回収したＴＨＰ−１細胞を最終濃度が３×１０6個／mlとなるように再懸濁させる。
この細胞再懸濁液を、０.５mlの容量ずつ２４ウェルの細胞培養用プレートに分注する。次いで、本発明のピロリジノン誘導体を特定の各濃度に溶解させたＤＭＳＯ溶液を各ウェルに２.５μlずつ添加する。該プレートを酸素９５％および二酸化炭素５％の混合ガスの雰囲気下で、３７℃にて１時間培養する。次いで、１２−ｏ−テトラデカノイルホルボール−１３−アセテート（以下、「ＰＭＡ」という）を最終濃度が２μｇ／mlとなるように、およびポリイノシン酸を最終濃度が２００μｇ／mlとなるように、それぞれ各ウェルに添加する。さらにこのプレートを酸素９５％および二酸化炭素５％の混合ガスの雰囲気下で、３７℃にて２４時間培養する。培養後、各ウェルからギルソン社のピペットマンにて上澄み液を回収し、上澄み液中のＩＬ−１β産生量をカイマン・ケミカル社のエンザイムイムノアッセイキットで測定する。
【００１９】
ピロリジノン誘導体の無添加時のＩＬ−１β産生量を１００とし、ＩＬ−１β産生量を５０％抑制する本発明の化合物の濃度をＩＣ50とし、その結果を以下にμＭ単位で示す。
【表２】
0003828603.tif 000005
【００２０】
実施例２（ＴＮＦα遊離抑制作用の測定）
本発明のピロリジノン誘導体のＴＮＦα遊離抑制作用を以下の方法に従い測定した。
ＲＰＭＩ １６４０培地（バイオ ウィッターカー社製）に、１０v/v％の胎児牛血清、２ｍＭのグルタミン、５０μＭの２−メルカプトエタノール、６０μｇ／mlのペニシリンおよび１００μｇ／mlのストレプトマイシンを加えて混合し、これにヒト末梢血由来のＴＨＰ−１細胞（ＡＴＣＣ ＴＩＢ２０２）を加えて、懸濁させる。このＴＨＰ−１細胞の懸濁液を３７℃にて、酸素９５％および二酸化炭素５％の混合ガスの雰囲気下に維持し、継代培養する。
この継代培養した懸濁液の一部を、室温で１２００rpmで３分間遠心分離し、継代培養したＴＨＰ−１細胞を回収する。
【００２１】
次にＲＰＭＩ １６４０培地に２v/v％の胎児牛血清、２ｍＭのグルタミン、５０μＭの２−メルカプトエタノール、６０μｇ／mlのペニシリンおよび１００μｇ／mlのストレプトマイシンを加えて混合し、これに、前記の継代培養し回収したＴＨＰ−１細胞を最終濃度が３×１０6個／mlとなるように再懸濁させる。
この細胞再懸濁液を、０.５mlの容量ずつ２４ウェルの細胞培養用プレートに分注し、３７℃にて１時間培養する。次いで、本発明のピロリジノン誘導体を特定の各濃度に溶解させたＤＭＳＯ溶液を各ウェルに２.５μlずつ添加する。該プレートを酸素９５％および二酸化炭素５％の混合ガスの雰囲気下で、３７℃にて１時間培養する。次いで、ＰＭＡを最終濃度が２μｇ／mlとなるように、および、ポリイノシン酸を最終濃度が２００μｇ／mlとなるように、それぞれ各ウェルに添加する。さらにこのプレートを酸素９５％および二酸化炭素５％の混合ガスの雰囲気下で、３７℃にて２４時間培養する。培養後、各ウェルからギルソン社のピペットマンにて上澄み液を回収し、上澄み液中のＴＮＦα遊離量をゼンザイム社のヒトＴＮＦαエライザキットを用いて測定する。
【００２２】
ピロリジノン誘導体の無添加時のＴＮＦα遊離量を１００とし、ＴＮＦα遊離量を５０％抑制する本発明の化合物の濃度をＩＣ50とし、その結果を以下にμＭ単位で示す。
【表３】
0003828603.tif 000006
【００２３】
実施例３（細胞毒性の有無の検討）
ピロリジノン誘導体の細胞毒性の有無を以下の方法に従い検討した。
ＲＰＭＩ １６４０培地（バイオ ウィッターカー社製）に、１０v/v％の胎児牛血清、２ｍＭのグルタミン、５０μＭの２−メルカプトエタノール、６０μｇ／mlのペニシリンおよび１００μｇ／mlのストレプトマイシンを加えて混合し、これにヒト末梢血由来のＴＨＰ−１細胞（ＡＴＣＣ ＴＩＢ２０２）を加えて、懸濁させる。このＴＨＰ−１細胞の懸濁液を３７℃にて、酸素９５％および二酸化炭素５％の混合ガスの雰囲気下に維持し、継代培養する。
この継代培養した懸濁液の一部を、室温で１２００rpmで３分間遠心分離し、継代培養したＴＨＰ−１細胞を回収する。
【００２４】
次にＲＰＭＩ １６４０培地に２v/v％の胎児牛血清、２ｍＭのグルタミン、５０μＭの２−メルカプトエタノール、６０μｇ／mlのペニシリンおよび１００μｇ／mlのストレプトマイシンを加えて混合し、これに、前記の継代培養し回収したＴＨＰ−１細胞を最終濃度が１×１０6個／mlとなるように再懸濁させる。
この細胞再懸濁液を、１mlの容量ずつ２４ウェルの細胞培養用プレートに分注する。次いで本発明のピロリジノン誘導体を特定の各濃度に溶解させたＤＭＳＯ溶液を各ウェルに５μlずつ添加する。該プレートを酸素９５％および二酸化炭素５％の混合ガスの雰囲気下、３７℃にて２４時間培養する。培養後、各ウェルに１００μｌのアラマー・ブルー(Alamar Blue; バイオソース社製）を添加し、さらに酸素９５％および二酸化炭素５％の混合ガスの雰囲気下、３７℃にて３時間培養する。
培養後、各ウェルからギルソン社のピペットマンにて上澄み液を回収し、上澄み液の５７０nmと６００nmの吸光度差を測定する。
試験するピロリジノン誘導体を含まないときの５７０nmと６００nmの吸光度差を基準とし、本発明のピロリジノン誘導体を添加した際の該吸光度差が、有意に減少したものを細胞毒性があるものとする。
本試験によれば５０μＭまでの濃度では本発明のピロリジノン誘導体に細胞毒性は認められなかった。
【００２５】
製剤例１  （錠剤）
錠剤１錠あたり下記の配合になるように製剤化を行なった。
化合物９                                              ２０mg
けい酸マグネシウム                                    ２０mg
乳糖                                                  ９８.５mg
ヒドロキシプロピルセルロース                            ７.５mg
ステアリン酸マグネシウム                                １mg
水素添加植物硬化油                                      ３mg
すなわち、化合物９、けい酸マグネシウム及び乳糖を混合し、これをヒドロキシプロピルセルロースを溶解したアルコール液で練合し、次いで適当な粒度に造粒し、乾燥、整粒後さらにステアリン酸マグネシウム及び水素添加植物硬化油を添加混合し均一な顆粒とした。次いでロータリー式打錠機により直径７.０mm、重量１５０mgおよび硬度６kgの錠剤を調製した。
【００２６】
製剤例２  （顆粒剤）
化合物９                                              １０mg
酸化マグネシウム                                      ４０mg
りん酸水素カルシウム                                  ３８mg
乳糖                                                  １０mg
ヒドロキシプロピルセルロース                          ２０mg
上記処方例中ヒドロキシプロピルセルロースを除いた各原料を混合した後、これにヒドロキシプロピルセルロースを含有するアルコール溶液を加えて練合し、押出造粒機により造粒し、乾燥して顆粒を得た。この顆粒を整粒して１２メッシュの篩を通過し、４８メッシュの篩上に残留するものを顆粒剤とした。
【００２７】
製剤例３  （シロップ剤）
0003828603.tif 000007
白糖、Ｄ−ソルビトール、パラオキシ安息香酸エチル、パラオキシ安息香酸プロピル及び化合物９を精製水（温水）６０ｇに溶解する。冷却後香味料を溶解したグリセリンおよび９６％エタノールの溶液を加える。次にこの混合物に精製水を加えて１００mlにする。
【００２８】
製剤例４  （注射液）
0003828603.tif 000008
炭酸水素ナトリウム、塩化ナトリウム及び化合物１２の塩酸塩を注射用水に加えて溶解し、全量を１０.０mlとし、注射液とした。
【００２９】
製剤例５  （坐剤）
化合物９                                                ２ｇ
マクロゴール４０００                                  ２０ｇ
グリセリン                                            ７８ｇ
化合物９をグリセリンに加えて溶解する。これに、マクロゴール４０００を加えて加温し溶解後、坐剤型に注入して冷却固化し１個あたり１.５ｇの坐剤を製造する。
【００３０】
【効果】
本発明のピロリジノン誘導体は、ＩＬ−１β産生抑制作用およびＴＮＦα遊離抑制作用を有しており、慢性関節リウマチ、敗血症などのＩＬ−１βおよび／またはＴＮＦαが関与する疾患の治療薬として有用である。