(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
下記一般式（Ｉ）で表される末端にガラクトースを含む２糖化合物。
【化１】
0003772204.tif 000019
［式中、Yは炭素原子数１６〜２０の長鎖炭化水素基である。］
【請求項２】
下記一般式（III）で表される化合物と下記一般式（IV)で表される化合物を反応させて前記一般式（Ｉ）で表される末端にガラクトースを含む２糖化合物を製造する方法。
【化２】
0003772204.tif 000020
（式中、Ｒ１は、置換基を有していても良いアルアルキル基又はアリール基であり、また、Ｒ２は、アシル基、アルアルキル基又はアリール基である。Ｘは、ハロゲン原子、トリクロロアセトイミデート基、アシル基又は水酸基を示す。）
【化３】
0003772204.tif 000021
（式中、Ｒ３〜Ｒ５は、同一でも異なっていても良く、それぞれ水素原子、アシル基又はアルアルキル基であり、また、Ｒ６は水素原子、アシル基、アルアルキル基又は３個のS i−Ｃ結合を持つシリル基である。ただし、Ｒ４とＲ５又はＲ５とＲ６は、それぞれ共同してアセタールを形成しても良い。Ｙは、前記したと同意義を有する。）
【請求項３】
下記一般式（II）で表される末端にガラクトースを含む３糖化合物。
【化４】
0003772204.tif 000022
（式中、Ｙは、前記したと同意義を有する。）
【請求項４】
一般式（III）で表される化合物と下記一般式（Ｖ)で表される化合物を反応させて前記一般式（II）で表される末端にガラクトースを含む２糖化合物を製造する方法。
【化５】
0003772204.tif 000023
（式中、Ｒ３〜Ｒ６及びＹは、前記したと同意義を有し、Ｒ７は水素原子、アシル基又はアルアルキル基である。）
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は、病原菌等の菌類やそれらから産生する毒素等と結合可能な糖類化合物に関するものであり、さらに詳しくは、病原性大腸菌やベロ毒素などの有害タンパク質と結合可能な２糖(Ga2)及び３糖(Gb3)化合物、それらの製造方法、及びそれらの化合物を製造するための中間体に関する。
【０００２】
【従来の技術】
最近、生体の細胞表層に存在する糖鎖が、ウイルス感染、細菌感染あるいはホルモンや毒素との結合に深く関係していることが次第に明らかになってきた。例えば、天然では、病原性大腸菌O-157やベロ毒素は、Gala1→4Galb1→4Glc(Gb3) 又はGala1→4Galb1(Ga2)の構造を有する糖鎖に結合することが知られている(J.Biol.Chem., 262, 8834 (1987); 262, 17088 (1987))。  また、本発明者らは、先に、O-157及びベロ毒素を効果的に捕捉する、分子内にGb3構造を有する新規なグリコポリマー合成するとともに、このポリマーはベロ毒素に対して中和毒性を有することを実証してきた(Tetrahedron Letters, 39, 8681 (1998); Bioorganic and Medicinal Chem., 7, 2053 (1999))。さらに、Gb3を有するデンドリマー（球状分枝高分子化合物）が合成されている(Tetrahedron Lett., 40, 7839(1999))。
一方、糖とレクチン蛋白質との相互作用の解析に、水晶発振子(ＱＣＭ)法や表面プラズモン共鳴(ＳＰＲ)法を用いて行うことが知られており（Chem. Lett., 1998, 399 (1998)、Carbohydrate Research, 312, 209-217 (1998)）、また、そのＱＣＭ法及びＳＰＲ法に使用される測定装置は市販されている。
【０００３】
【発明が解決しようとする課題】
本発明の目的は、ある種の化合物が病原菌類やそれらが生産する毒素類と結合することを利用して、高感度で迅速に定性・定量分析を可能とする新規な糖類化合物、その製造方法及びその糖類化合物を製造するための中間体を提供することにある。
【０００４】
【課題を解決するための手段】
本発明者らは、特定の化学構造を持つ糖類化合物について鋭意検討を重ねた結果、下記一般式(Ｉ)又は(II)で表される還元末端側に長鎖炭化水素を有する２糖或いは３糖誘導体を合成することに成功し、得られた糖誘導体は、病原菌類やそれらが生産する毒素類と結合するため、それらの検出に使用できることを見出し、本発明を完成するに至った。
すなわち、本発明の末端にガラクトースを含む２糖化合物は、次の一般式（Ｉ）で表されるものである。
【０００５】
【化７】
0003772204.tif 000002
［式中、Yは炭素原子数８〜５０の長鎖炭化水素基又は−Ｃ６Ｈ５−ＮＨＲ’（ここで、Ｒ’は炭化水素基又はアシル基である。）で示されるＮ−置換フェニル基である。］
また、本発明の末端にガラクトースを含む３糖化合物は、次の一般式（II）で表されるものである。
【０００６】
【化８】
0003772204.tif 000003
（式中、Ｙは、前記したと同意義を有する。）
【０００７】
【発明の実施の形態】
以下、本発明について詳細に説明する。
本発明における前記一般式（Ｉ）で表される２糖化合物は、ガラビオシル(Ga2)
糖鎖誘導体であり、また、前記一般式（II）で表される３糖化合物は、グロボトリアオシル(Gb3)糖鎖誘導体である。これらの化合物は、いずれも分子末端にガラクトースを持つとともに、その還元末端側には長鎖炭化水素を持つ新規化合物であって、病原菌類やそれらの生産する毒素類と容易に結合して病原菌類や毒素類を高い感度で検出できることから、それらの定性分析及び定量分析に有効に使用できるものである。
【０００８】
本発明の一般式（Ｉ）及び一般式（II）で表される糖化合物において、Ｙは長鎖炭化水素基であり、その炭化水素鎖としては、直鎖状でも分岐状でも良く、また、飽和炭化水素でも二重結合或いは三重結合を有する不飽和炭化水素でも良く、その炭素原子数は１６〜２０のものであり、具体的には、ヘキサデシル、オクタデシル、エイコシル等が挙げられる。
【０００９】
本発明の２糖化合物及び３糖化合物は、下記一般式（III）
【化９】
0003772204.tif 000004
（式中、Ｒ１は、置換基を有していても良いアルアルキル基又はアリール基であり、また、Ｒ２は、アシル基、アルアルキル基又はアリール基である。Ｘは、ハロゲン原子、トリクロロアセトイミデート基、アシル基又は水酸基を示す。）で表されるガラクトース誘導体を用いて製造することができる。
【００１０】
一般式（III）において、Ｒ１としては、ベンジル、フェニルエチル、メチルベンジル等のアルアルキル基、４−メチルベンジル、４−メトキシベンジル等の置換基を持つアルアルキル基、、等のアリール基が挙げられる。また、Ｒ２としては、アセチル、ベンゾイル等のアシル基、ベンジル、フェニルエチル、メチルベンジル等のアルアルキル基、アリール、２−メチルアリール等のアリール基が挙げられる。
さらに、Ｘとしては、塩素原子、臭素原子、フッ素原子等のハロゲン原子、トリクロロアセトイミデート基、アセチル、ベンゾイル等のアシル基、水酸基が挙げられる。
【００１１】
まず、本発明の化合物の製造原料として用いられる一般式（III）で表される前記ガラクトース誘導体の合成法について図面１を参照して説明する。
テトラベンジルガラクトース１（CAS  No.  53081-25-7）を、文献(J. Chem. Soc., 1965, 1419 (1965))に従い、塩化チオニルと反応させることにより、ＸがＣｌであるガラクトース誘導体２を得ることができる。この場合、反応時間を短縮して化学収率を向上させるにはＤＭＦを加えることが好ましい。Ｒ１及びＲ２が、ベンジル基に代えてアリール基のものを用いても良い。
【００１２】
ＸがＢｒであるブロム体４は、次の２通りの方法により合成できる。
（１）テトラベンジルガラクトース１を、無水酢酸、ピリジン中のジメチルアミノピリジン、トリエチルアミンの存在又は無存在下に、アセチル化を行うことにより、Ｒ１＝Ｒ２＝ベンジル、Ｘ＝アセチルである誘導体３が得られる。無水酢酸の代わりに塩化ベンゾイルを用いても良い（Ｘ＝ベンゾイル）。これらの反応は、通常−２０〜１００℃、５分〜７日間程度である。続いて、臭化水素−酢酸溶液中で臭素化を行うことにより、テトラベンジルブロモガラクトース４が得られる。この反応温度は−２０℃〜５０℃、反応時間は５分〜１日程度である。
（２）テトラベンジルガラクトース１を、過塩素酸、無水酢酸、臭素、赤リンの存在下において、一段階でテトラベンジルブロモガラクトース４へと導くことができる。この温度は−３０℃〜４５℃、反応時間は３０分〜１日である。
【００１３】
ＸがＦであるフッ素体としては、市販のテトラベンジルフルオロガラクトース５を用いるか、化合物１をジエチルアミノイオウトリフルオリドで処理する（反応条件、−２０℃〜５０℃、５分〜３日）か、又は上記のブロム体４をアセトニトリル中、フッ化銀を用いて反応させることにより、テトラベンジルフルオロガラクトース５を得ることができる（−２０℃〜８０℃、３０分〜５日）。
上記の他、Ｒ１＝ベンジル、Ｒ２＝アセチル、Ｘ＝Ｆの場合は、公知の方法（Tetrahedron Letters, 39, 8681 (1998);Bioorganic and Medicinal Chem., 7, 2053 (1999)）によっても得ることができる。
【００１４】
本発明の２糖化合物は、上記した一般式（III）の化合物と下記一般式（IV)で表される化合物を反応させることにより得られる。
【化１０】
0003772204.tif 000005
（式中、Ｒ３〜Ｒ５は、同一でも異なっていても良く、それぞれ水素原子、アシル基又はアルアルキル基であり、また、Ｒ６は水素原子、アシル基、アルアルキル基又は３個のS i−Ｃ結合を持つシリル基である。ただし、Ｒ４とＲ５又はＲ５とＲ６は、それぞれ共同してアセタールを形成しても良い。Ｙは、前記したと同意義を有する。）
【００１５】
また、本発明の３糖化合物は、上記した一般式（III）と下記一般式（Ｖ)で表される化合物を反応させることにより得られる。
【化１１】
0003772204.tif 000006
（式中、Ｒ３〜Ｒ６及びＹは、前記したと同意義を有し、Ｒ７は水素原子、アシル基又はアルアルキル基である。）
【００１６】
一般式（IV)及び（Ｖ)において、Ｒ３〜Ｒ５としては、水素原子、アセチル或いはベンゾイル等のアシル基、ベンジル等のアルアルキル基が挙げられるが、それらは同一のものでも異なっているものでも良い。 また、Ｒ６は水素原子、アセチル或いはベンゾイル等のアシル基、ベンジル等のアルアルキル基、tert−ブチルジメチルシリル或いはトリフェニルシリル等の３個のS i−Ｃ結合を持つシリル基が挙げられる。
さらに、Ｒ４とＲ５又はＲ５とＲ６は、結合してイソプロピロデン基、シクロヘキシリデン基等のようなアセタールを形成していても良い。Ｒ４とＲ５が結合してアセタールを形成している場合には、Ｒ３とＲ４は、それぞれベンジル基であることが最も好ましく、また、Ｒ５とＲ６が結合してアセタールを形成している場合には、Ｒ３とＲ４は、それぞれベンジル基であることが最も好ましい。
Ｒ７は水素原子、アセチル或いはベンゾイル等のアシル基、ベンジル等のアルアルキル基が挙げられる。Ｙは、前述したと同じである。
【００１７】
次に、一般式（IV)で表される化合物の合成法について説明する。
図２中のペンタアセチルガラクトース７（CAS  No.  4163-60-4）を、トリメチルシリルトリフレート、tert-ブチルジメチルシリルトリフレート、トリフリックアシッド、ボロントリフルオリド・ジメチルエーテル錯体等のルイス酸の存在下、対応する長鎖炭化水素からなる脂肪族アルコール(Y−OH）と反応させるとも得られる（Ｙは対応する脂肪族アルコールであって、炭素原子数１８程度の長鎖アルキレンが好ましい）。その溶媒としては、エーテル、トルエン、ベンゼン、塩化メチレン、クロロホルム、アセトニトリル、ニトロメタン等を用いて、反応温度−１００〜８０℃、反応時間５分〜５日で行う。
【００１８】
その別法としては、市販のアセトブロモガラクトース９（CAS  No.  3068-32-4）を用いて（化合物９は、化合物を用いて化合物４の合成と類似の方法で合成できる。）、シルバートリフレート、炭酸銀、酸化銀、シアン化水銀(II)、臭化水銀(II)の存在下、対応するアルコール(Y−OH）と反応させても化合物８を得ることができる。そのＹとしては、前記した炭素数からなる長鎖炭化水素基、たとえば、-(CH2)n-CH3,-(CH2)x-(CH=CH)y-(CH2)z-CH3,-(CH2)x-(CH≡CH)y-(CH2)z-CH3の式に対応するものが好ましい。この反応条件は上記と同じである。次に、塩基性条件下、つまりNaOMe-MeOH,NaOH-H2O,MeOH-H2O-NaOMe,MeOH-H2O-NaOHを用いて脱保護を行い、Ｒ３〜Ｒ６＝ＯＨ、Ｙ＝炭素原子数１６〜２０の長鎖アルキルの誘導体１１を得る。
【００１９】
次に、図３に見られるように、化合物１１の３位及び４位の２つの水酸基をアセタール化して化合物１２を得る。この反応は、まず、アセトン（無水）、ジメトキシプロパン等のアセタール供給源とともに、酸性触媒の存在下に反応させる。酸触媒としては、カンファースルホン酸(CSA）、ｐ−トルエンスルホン酸（ｐＴｓＯＨ）、ピリジニウムｐ−トルエンスルホン酸（ＰＰＴＳ）、塩化トリメチルシリル（ＴＭＳＣｌ）、イオン交換樹脂（Ｈ＋型）等が用いられる。その溶媒としては、無溶媒（つまり、アセタール供給源としてのアセトン、ジメトキシプロパン及び両混合溶媒のみ）、又はジメチルホルムアミド等が用いられ、反応温度は通常０〜１３０℃、反応時間は通常５分〜５日程度である。
【００２０】
次に、化合物１２を、臭化ベンジル、水素化ナトリウムとともに、ＤＭＦ又はＴＨＦ中でベンジル化を行い、化合物１３へと導く。ベンジルエーテルの代わりにベンゾイルエステルでも良い。この反応は、化合物３のベンゾイルエステル合成の場合と同様にして行うことができる。この化合物１３を酸処理すると化合物１４を得る。この酸処理には、カンファースルホン酸（ＣＳＡ）、ｐ−トルエンスルホン酸、ピリジニウムｐ−トルエンスルホン酸（ＰＰＴＳ）、酢酸、硫酸、塩酸、イオン交換樹脂（Ｈ＋型）、トリフルオロ酢酸（ＴＦＡ）等の酸を用いることができる。この溶媒としては、通常メタノール、エタノール、メタノール-塩化メチレン、水等が用いられ、反応温度は−２０〜８０℃、反応時間は通常５分〜３日程度である。
【００２１】
化合物１４は、酸化ジブチルスズ或いは酸化ビストリブチルスズとともに、ベンゼン或いはトルエン（必要に応じて、メタノール、エタノール、テトラヒドロフラン及びジメチルホルムアミド等の親水性溶媒の存在下）とともに加熱還流を行いながら、反応により生成する水を除去する。その後、溶媒を留去させた後、臭化ベンジル、塩化ベンジルとともに、テトラブチルアンモニウムブロミド、テトラブチルアンモニウムクロリドの存在下、ＴＨＦ、トルエン、ベンゼン、ＤＭＦ、ジメチルスルフォキシド（ＤＭＳＯ）中で反応させると３位のみがベンジル化された化合物１５が得られる。反応温度は０〜８０℃、反応時間は通常５分〜１週間である。
【００２２】
化合物１５を得る別のルートは次のとおりである。まず、化合物１１の４位と６位にヘミアセタール基を導入して化合物１６へと導く。このヘミアセタール化は、ベンズアルデヒド、ベンズアルデヒドジメチルアセタールなどとともに酸触媒の存在下行うことができる。酸触媒としては、アセタール化を行う時（１２への変換時）の酸触媒に加えて塩化亜鉛なども通常用いられる。溶媒としては、アセタール化を行うときに用いるものと同様であるが、場合によっては溶媒を添加しないこともある。反応時間、反応温度ともに先のアセタール化の条件と同様である。化合物１６から化合物１５への変換は、化合物１３→１４→１５の変換と同様の方法により行うことができる。なお、化合物１７をボラン、ボラン・トリメチルアミン錯体、塩化アルミニウム、ソディウムシアノボロヒドリド(NaBH3CN)−塩化水素とともに、還元的にアセタールを解列させることにより化合物１５へと導くこともできる。この溶媒としては、エーテル、ＴＨＦ、ベンゼン、トルエン等が用いられる。この反応温度は−２０〜８０℃、反応時間は５分〜３日である。
【００２３】
上記の方法等で製造された化合物１５を含む下記一般式（VI）で表される化合物は、本発明の２糖化合物及び３糖化合物を製造するための重要な中間体である。
【化１２】
0003772204.tif 000007
式中において、Ａは、水酸基の保護基であれば制限されるものではないが、なかでも、アセチル、ベンゾイル等のアシル基、ベンジル等のアルアルキル基が好ましい。また、Ｙは前記したと同意義である。
【００２４】
図１及び図３に見るように、このようにして合成した化合物１５と先に示した化合物２，４、５のいずれか１個の化合物とを、シルバートリフレート(AgOTf)、炭酸銀、酸化銀、シアン化水銀(II)、臭化水銀(II)の存在下、反応させると化合物１９を得ることができる。また、化合物１５と化合物３又は６とを、トリメチルシリルトリフレート、tert-ブチルジメチルシリルトリフレート、トリフリックアシッド、ボロントリフルオリド・ジメチルエーテル錯体等のルイス酸で処理しても化合物１９を得ることができる。
【００２５】
さらに、化合物１９から保護基を脱離させることにより、２糖化合物である化合物２０を得ることができる。化合物１９から化合物２０への変換は、パラジウム、パラジウム−炭素、水酸化パラジウム等とともに、水素の存在下で接触還元を行う。この溶媒としては、通常メタノール、エタノール、ｔ−ブチルアルコール、水、テトラヒドロフラン、ジエチルエーテル、塩化メチレン、クロロホルム、トルエン、酢酸エステル、ジオキサン、ジメチルホルムアミド、酢酸及びこれらの混液などが用いられ、反応温度は通常０〜１００℃、反応時間は通常５分間〜１０日程度、圧力は１〜１００気圧である。この他に、バーチ還元（金属ナトリウム、液体アンモニウム）のよっても同様に達成可能である。
また、本発明の３糖化合物は、上記した２糖化合物の合成法に準じて同様に製造することができる。
【００２６】
本発明の糖類化合物は、病原性大腸菌O-157等の病原菌及びそれらが生産するベロ毒素等の毒性タンパク質と容易に結合するものであるから、それらの菌や毒素を含む検体を 水晶発振子(ＱＣＭ)法や表面プラズモン共鳴(ＳＰＲ)法を用いて検査する際に有用なものである。
【００２７】
【実施例】
以下、実施例等により本発明を具体的に説明するが、これらにより本発明の内容は何ら限定されるものではない。
実施例１
ここでは、図１〜図４を参照して２糖化合物の具体的な合成例を示す。なお、以下、表示の煩雑さを避けるため、それぞれの化合物は、場合によっては単に各図に示す化合物番号のみで示す。
【００２８】
［合成例］
７→８の合成
100mLナスフラスコに1,2,3,4,6-ペンタ-O-アセチル-D-ガラクトース７ 3.00g(7.69mmoL)を採り、トルエン50mLで3回共沸させた。次に、1-オクタデカノール3.12g(11.53mmoL)、活性化モレキュラーシーブ4A 3g及び乾燥トルエン 45mLを加えて窒素下室温において１時間磁気撹拌した。反応系を氷浴により0℃に冷却してからトリメチルシリルトリフルオロメタンスルホネート1.7mL(9.22mmoL)を小型の滴下ロートにより滴下した。次いで、0℃において１.8時間磁気撹拌した。その後、トリエチルアミン12.9mLを加えてしばらくの間磁気撹拌した後、反応を停止させた。次に、酢酸エチルで洗いながらセライトでろ過し、濃縮した。さらに、シリカゲルカラム（粉末体積：734mL；展開溶媒：トルエン：酢酸エチル＝４：１）に添加して精製し、溶媒を留去させた。
得られた８の粗精製物 3.95gを300mLナスフラスコに採り、t-ブチルジメチルシリルクロライド 734mg(4.87mmoL)、ジメチルアミノピリジンのスパーテル１杯分及び乾燥ピリジン 9mLを加え、40℃の油浴中において１.8時間磁気撹拌した。その後、メタノール 15mLを加えてしばらくの間磁気撹拌し、反応を停止させた。次に、シリカゲルカラム（粉末体積：364mL；展開溶媒：トルエン：酢酸エチル＝４：１）に添加して精製し、溶媒を留去させて８を得た。収量：1.59g。収率：34%。（８においてＹ＝C18H37)
0003772204.tif 000008
【００２９】
８→１１の合成
100mLナスフラスコに８ の900mg(1.50mmoL)を採り、メタノール 5mL及びテトラヒドロフラン 15mLを加えて溶解させた。次に、28%ナトリウムメトキシド − メタノール溶液を反応系がpH＝9になるまで加えた。これを40 ℃の油浴中において2時間磁気撹拌し、次いで、イオン交換樹脂Dowex 50（Ｈ＋型）を反応系がpH＝7になるまで加えることで反応を停止させた。その後、メタノールで洗いながら吸引ろ過してDowex 50を除いて、濃縮した。次に、シリカゲルカラム（粉末体積：130mL；展開溶媒：クロロホルム：メタノール＝１０：１）に添加して精製し、溶媒を留去させて１１を得た。収量：319mg。収率：49%。
0003772204.tif 000009
【００３０】
１１→１２の合成
100mLナスフラスコに１１  417mg(0.96mmoL)を採り、テトラヒドロフラン  5mLを加えて溶解させた。その溶液に、乾燥アセトン 50mL、2,2-ジメトキシプロパン 0.5ml及び(±)-10-カンファースルホン酸 66mg(30moL%)を加えて、室温で１日、40 ℃の油浴中において19時間磁気撹拌した。トリエチルアミン 0.4mLを加えてしばらくの間磁気撹拌した後、反応を停止させた。次に、濃縮し、シリカゲルカラム（粉末体積：90mL；展開溶媒：トルエン：酢酸エチル＝１：１）に添加して精製し、溶媒を留去させて１２を得た。収量：318mg。収率：70%。
0003772204.tif 000010
【００３１】
１２→１３の合成
30mLナスフラスコに１２  314mg(0.66mmoL)を採り、乾燥ジメチルホルムアミド 2mLを加えて溶解させた。次に、水素化ナトリウム  64mg(2.66mmoL)及びベンジルブロミド 0.32mL(2.66mmoL)を加えて、塩化カルシウム管を取り付けて室温で2時間磁気撹拌した。さらに、メタノール 1.1mLを加えてしばらくの間磁気撹拌し、水素化ナトリウム及びベンジルブロミドをクエンチした。次に、濃縮し、シリカゲルカラム（粉末体積：90mL；展開溶媒：トルエン：酢酸エチル＝１５：１）に添加して精製し、溶媒を留去させて１３を得た。収量：413mg。収率：96%。
0003772204.tif 000011
【００３２】
１３→１４の合成
30mLナスフラスコに１３  379mg(0.58mmoL)を採り、メタノール 20mL及びジクロロメタン 4mLを加えて溶解させた。これに(±)-10-カンファースルホン酸  70mg(0.30mmoL)を加え、反応系をpH＝1にした。その反応系に塩化カルシウム管を取り付けて室温で22.5時間磁気撹拌した。その後、トリエチルアミン 0.4mLを加えてしばらくの間磁気撹拌した後、反応を停止させた。次に、これを濃縮し、酢酸エチル 400mLで希釈した。500mL分液ロートを用いて飽和炭酸水素ナトリウム水溶液 100mL X １回及び飽和塩化ナトリウム水溶液 100mL X １回で洗浄し、硫酸マグネシウムを加えて脱水した。これをろ過して濃縮し、シリカゲルカラム（粉末体積：80mL；展開溶媒：トルエン：酢酸エチル＝２：１）に添加して精製し、溶媒を留去させて１４を得た。収量：328mg。収率：92%。
0003772204.tif 000012
【００３３】
１４→１５の合成
30mLナスフラスコに１４  202mg(0.33mmoL)を採り、ジ-n-ブチルチンオキシド  98mg(0.40mmoL)及び乾燥ベンゼン 30mLを加えた。これにディーンスターク、冷却管及び窒素を充填した風船を取り付け、系中を窒素置換した後、120℃の油浴中において磁気撹拌し、ディーンスタークに溜まった水及びベンゼンを排出した。さらに、乾燥ベンゼン30mLを加えて５時間環流させ、３０〜４５分毎にディーンスタークに溜まった水及びベンゼンを排出し、乾燥ベンゼン 20mLを加えた。溶液量が約1mLになった状態で、油浴を離して反応系を室温まで冷却させてから、ベンジルブロミド 118 mL(0.99mmoL)及びテトラブチルアンモニウムブロミド 53mg(0.16mmoL)を加えた。これに冷却管及び塩化カルシウム管を取り付けて、80℃の油浴中において0.75時間磁気撹拌した。油浴を離して反応系を室温まで冷却させ、クロロホルム 200mLで希釈した。これを300mL分液ロートを用いて飽和炭酸水素ナトリウム水溶液 100mL X １回及び水 100mL X １回で洗浄し、硫酸マグネシウムを加えて脱水した。これをろ過して濃縮し、シリカゲルカラム（粉末体積：80mL；展開溶媒：トルエン：酢酸エチル＝１０：１）に添加して精製し、溶媒を留去させて１５を得た。収量：235mg。収率：>99%。
0003772204.tif 000013
【００３４】
１１→１６の合成
30mLナスフラスコに１１  212mg(0.49mmoL)を採り、テトラヒドロフラン  1.5mL及びアセトニトリル 5mLを加えて溶解させた。この溶液に(±)-10-カンファースルホン酸  11mg(0.05mmoL)及びベンズアルデヒドジメチルアセタール  0.2mL(1.33mmoL)を加え、窒素雰囲気下50℃の油浴中において8時間、室温で64時間磁気撹拌した。その後、酢酸エチル 200mLで希釈し、300mL分液ロートに移してトリエチルアミン 1mLを加えてよく混ぜることで反応を停止させた。さらに、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液及び飽和塩化ナトリウム水溶液の混合物 50mL X １回及び飽和塩化ナトリウム水溶液 50mL X １回で洗浄し、硫酸マグネシウムを加えて脱水した。これをろ過して濃縮し、シリカゲルカラム（粉末体積：200mL；展開溶媒：クロロホルム：メタノール＝２０：１）に添加して精製し、溶媒を留去させて１６を得た。  収量：161mg。収率：63%。粗生成物分画の収量：130mg。収率：51%。
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【００３５】
１６→１７の合成
30mLナスフラスコに１６  265mg(0.51mmoL)を採り、乾燥ジメチルホルムアミド 2mLを加えて溶解させた。この溶液に水素化ナトリウム 49mg(2.04mmoL)およびベンジルブロミド 0.24mL(2.04mmoL)を加えて、塩化カルシウム管を取り付けて室温で2時間磁気撹拌した。さらに、メタノール 0.8mLを加えてしばらくの間磁気撹拌し、水素化ナトリウム及びベンジルブロミドをクエンチした。これを濃縮し、シリカゲルカラム（粉末体積：90mL；展開溶媒：トルエン：酢酸エチル＝１５：１）に添加して精製し、溶媒を留去させて１７を得た。収量：284mg。収率：79%。
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【００３６】
１７→１８の合成
30mLナスフラスコに１７  292mg(0.42mmoL)を採り、メタノール 20mL及びジクロロメタン 6mLを加えて溶解させた。この溶液に(±)-10-カンファースルホン酸  68mg(0.29mmoL)を加え、反応系をpH＝1にした。これに塩化カルシウム管を取り付けて室温で22.5時間磁気撹拌した。さらに、トリエチルアミン 0.4mLを加えてしばらくの間磁気撹拌することで反応を停止させた。これを濃縮し、酢酸エチル 400mLで希釈した。500mL分液ロートを用いて飽和炭酸水素ナトリウム水溶液 100mL X １回、および飽和塩化ナトリウム水溶液 100mL X １回で洗浄し、硫酸マグネシウムを加えて脱水した。これをろ過して濃縮し、シリカゲルカラム（粉末体積：60mL；展開溶媒：トルエン：酢酸エチル＝１：１）に添加して精製し、溶媒を留去させて１８を得た。収量：242mg。収率：94%。
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【００３７】
１５＋２→１９の合成
20mL２口ナスフラスコに１５  80mg(0.11mmoL)を採り、トルエン 3mL X 3回共沸させ、溶媒を留去させた。これにシルバートリフルオロメタンスルホネート 96mg(0.37mmoL)及び活性化モレキュラーシーブ4A 100mgを加えた。その後、脱気してから窒素置換する操作を３回繰り返し、乾燥ジエチルエーテル 1.5mLを加えて窒素を流しながら室温において２時間磁気撹拌した。
別の20mL２口ナスフラスコにテトラベンジルガラクトース２ 104mg(0.19mmoL)を採り、トルエン 3mL X 3回共沸させ、溶媒を留去させ脱気してから窒素置換する操作を３回繰り返し、乾燥ジエチルエーテル 1.5mLを加えた。これをセプタムで栓をした5mL滴下ロートから、氷浴により 0℃に冷却した反応系内にゆっくり加えた。これに窒素を流しながら氷浴により 0℃に冷却しながら２時間磁気撹拌した。その後、トリエチルアミン 0.52mLを加えてしばらくの間磁気撹拌することで反応を停止させた。これをセライトろ過して酢酸エチル 200mLで希釈し、300mL分液ロートを用いて飽和炭酸水素ナトリウム水溶液 50mL X １回及び飽和塩化ナトリウム水溶液 50mL X １回で洗浄し、硫酸マグネシウムを加えて脱水した。これをろ過して濃縮し、シリカゲルカラム（粉末体積：200mL；展開溶媒：トルエン：酢酸エチル＝１５：１）に添加して精製し、溶媒を留去させて、ベンジル基で保護された２糖化合物である１９を得た。
収量：54mg。収率：39%。
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【００３８】
１９→２０の合成
100mLナスフラスコに１９  68mg(0.055mmoL)を採り、メタノール 3mL及び酢酸エチル 25mLを加えて溶解させた。これを脱気してから窒素置換する操作を３回繰り返し、パラジウムブラック  スパーテル３杯分を加え脱気してから水素置換する操作を３回繰り返した。水素の充填されたガスバックを取り付けた状態で、50〜60℃の油浴中において19時間磁気撹拌した。窒素下においてメタノールで洗浄しながらセライトろ過して濃縮し、シリカゲルカラム（粉末体積：60mL；展開溶媒：クロロホルム：メタノール＝２：１）に添加して精製し、溶媒を留去させることにより目的生成物である２糖化合物２０を得た。
収量：27mg。収率：82%。
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【００３９】
【発明の効果】
本発明の糖化合物は、ＱＣＭ又はＳＰＲ法と併用することにより、病原性大腸菌及びベロ毒素等の有害物質と容易に結合するものであるから、それらの検出に有用であり、また、高感度で迅速な定性・定量分析に有益なものである。
【図面の簡単な説明】
【図１】本発明の糖類化合物のそれぞれの製造工程を示すスキームである。
【図２】本発明の糖類化合物のそれぞれの製造工程を示すスキームである。
【図３】本発明の糖類化合物のそれぞれの製造工程を示すスキームである。
【図４】本発明の糖類化合物のそれぞれの製造工程を示すスキームである。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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