(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
Ｒ（＋）−またはＲＳ（±）−７−ヒドロキシ−２−（Ｎ，Ｎ−ジプロピルアミノ）テトラリンを有効成分とする嘔吐誘発剤。
【請求項２】
Ｒ（＋）−またはＲＳ（±）−７−ヒドロキシ−２−（Ｎ，Ｎ−ジプロピルアミノ）テトラリンを、該薬物に感受性のヒト以外の哺乳動物に投与することを特徴とする嘔吐誘発方法。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【産業上の利用分野】
本発明は、薬理作用機序の解明に、或いは薬物のスクリーニングに有用なドパミンＤ3 受容体に対する選択的作動薬を有効成分とする嘔吐誘発剤、及びドパミンＤ3 受容体に対する選択的作動薬を、該薬物に感受性のヒト以外の哺乳動物に投与することを特徴とする嘔吐誘発方法に関する。
【０００２】
【従来の技術】
近年の分子生物学の革命的な発展に伴い、神経伝達物質受容体のサブタイプが相次いで発見されている。ドパミン受容体に関しては現在Ｄ1 ，Ｄ2 ，Ｄ3 ，Ｄ4 及びＤ5 の５つのサブタイプが知られている。これらのサブタイプのうち、Ｄ3 受容体は大脳辺縁系に分布していることから、Ｄ3 受容体が認知，情動機能のドパミンによる調節を媒介している新しい部位であることが示唆されている。更に、Ｄ3 受容体を発現させたＣＨＯ細胞を用いた結合実験の結果は、Ｄ3 受容体が抗精神病薬の治療効果に重要な関与を示す受容体である可能性を示唆している。しかしながら、Ｄ3 受容体が嘔吐発現に関与するか否かについては知られていない〔例えば、神経精神薬理，16, 25 (1994); Trends Pharmacol. Sci., 15, 264 (1994)参照〕。
【０００３】
最近、ＲＳ(±)−７−ヒドロキシ−２−（Ｎ，Ｎ−ジプロピルアミノ）テトラリン（以下「ＲＳ(±)−７−ＯＨ−ＤＰＡＴ」と略することもある）が transfectedセルラインで発現させたドパミンＤ3 受容体に対して選択的で高い親和性を示す作動薬であると報告され、特にＲ(＋)エナンチオマーがＤ3 受容体に対する選択性の高い異性体であると示唆されている〔例えば、Eur. J. Pharmacol., 239, 269 (1993)；同誌, 249, R9 (1993) 参照〕。
【０００４】
【発明が解決しようとする課題】
本発明者らは、ドパミン受容体拮抗作用を有する制吐剤の研究過程で、Ｄ3 受容体に対する選択的作動薬であるＲ(＋)−及びＲＳ(±)−７−ＯＨ−ＤＰＡＴの嘔吐誘発作用を見いだし、更に研究を続けた結果、本発明を完成した。
【０００５】
【課題を解決するための手段】
本発明によれば、(1) ドパミンＤ3 受容体に対する選択的作動薬を有効成分とする嘔吐誘発剤、(2) ドパミンＤ3 受容体に対する選択的作動薬を、該薬物に感受性のヒト以外の哺乳動物に投与することを特徴とする嘔吐誘発方法、及び(3) ドパミンＤ3 受容体に対する選択的作動薬を、該薬物に感受性のヒト以外の哺乳動物に投与することを特徴とするドパミンＤ3 受容体に対する拮抗薬のスクリーニング方法が提供される。
【０００６】
「ドパミンＤ3 受容体に対する選択的作動薬」（以下「Ｄ3 受容体の選択的作動薬」と略することもある）とは、Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 89, 8155 (1992) に記載の方法又はこれと同等の方法でドパミン受容体のサブタイプに対する親和性を測定した場合、Ｄ3 受容体に対して、他のドパミン受容体（Ｄ1 ，Ｄ2 ，Ｄ4 及びＤ5 受容体）に比べて50倍以上高い親和性を示す作動薬を意味し、例えばＲ(＋)−及びＲＳ(±)−７−ＯＨ−ＤＰＡＴが挙げられる。
【０００７】
「ドパミンＤ3 受容体に対する選択的作動薬に感受性を示すヒト以外の哺乳動物」とは、ドパミンＤ3 受容体に対する選択的作動薬の投与により嘔吐が誘発されるヒト以外の哺乳動物を意味し、例えばイヌ，ネコ，フェレットが挙げられるが、イヌ，フェレットが好ましく、殊にフェレットが好ましい。
【０００８】
Ｄ3 受容体の選択的作動薬の投与方法は、非経口投与が好ましく、例えば静脈内投与，腹腔内投与，皮下投与，脳室内投与が挙げられるが、皮下投与，脳室内投与が好ましく、殊に皮下投与が好ましい。
【０００９】
Ｄ3 受容体の選択的作動薬は、生理食塩液又は水に溶解して投与するのが好ましく、必要に応じて酸付加塩の形で適用するか、或いは乳酸等の溶解補助剤を用いて溶解度を調整して投与される。
【００１０】
Ｄ3 受容体の選択的作動薬の投与量は、該薬物又は対象哺乳動物の種類，投与方法等により異なり、最適投与量は常法、例えば後記試験例１〜３におけるＲ(＋)−及びＲＳ(±)−７−ＯＨ−ＤＰＡＴ（化合物Ａ及びＦ）の場合のように段階的に増量した各投与量での嘔吐誘発状態を観察・記録することにより求めることができる。
【００１１】
例えば、Ｒ(＋)−７−ＯＨ−ＤＰＡＴ0.1 〜1.0mg/kgの皮下投与は、フェレット及びイヌにおいて30分以内に再現性よく嘔吐を誘発する。第４脳室内投与の場合は、フェレットにおいて0.3 〜1.0 μg の投与量で15分以内に再現性よく嘔吐を誘発する。
【００１２】
ドパミンＤ3 受容体に対する選択的作動薬であるＲ(＋)−７−ＯＨ−ＤＰＡＴにより誘発される嘔吐は、後記試験例４及び５の結果から、延髄の最後野に局在するドパミンＤ3 受容体を介して現れると考えられるので、この嘔吐を予防する薬物は、Ｄ3 受容体拮抗作用を有すると考えられる。したがって、ドパミンＤ3 受容体に対する選択的作動薬により誘発される嘔吐を対象化合物が予防するか否かを試験することにより、該化合物がＤ3 受容体拮抗作用を有するか否かを知ることができる。
【００１３】
この目的でのＲ(＋)−７−ＯＨ−ＤＰＡＴの投与量及び投与方法としては、イヌ，フェレットとも約0.1 〜約0.5mg/kgの皮下投与が好ましく、特に約0.3mg/kgの皮下投与が好ましい。定量的評価のための項目としてはフェレットの場合、嘔吐発現までの潜時，空嘔吐（胃内容物の吐出を伴わない嘔吐様の動作）回数及び嘔吐回数のいずれもが適当であり、イヌの場合、嘔吐発現までの潜時及び嘔吐回数が適当である。
【００１４】
【実施例】
以下に試験例及び実施例を挙げて本発明を更に具体例に説明するが、本発明はこれら試験例及び実施例に限定されるものではない。なお、試験例１〜５はドパミンＤ3 受容体に対する選択的作動薬の嘔吐誘発作用について説明するものである。
【００１５】
試験例及び実施例で使用したフェレットは全て、体重1.0 〜1.6 kgの雄性フェレット（Marshall Res. Animal Inc. から購入）で、実験前に一夜絶食させたのち使用した。試験例及び実施例で使用した薬物は以下の通りで、化合物Ａ，Ｂ及びＦは臭化水素酸塩の形で、化合物Ｃ，Ｄ，Ｅ及びＪは塩酸塩の形で用いた。また、化合物Ａ，Ｂ，Ｄ，Ｅ，Ｆ，Ｇ及びＪは生理食塩液に、化合物Ｃは精製水に、化合物Ｈ及びＩは0.1 ％乳酸／生理食塩液に溶解して用いた。
【００１６】
化合物Ａ：Ｒ(＋)−７−ＯＨ−ＤＰＡＴ（選択的なＤ3 受容体作動薬）、
化合物Ｂ：Ｓ(−)−７−ＯＨ−ＤＰＡＴ（化合物Ａの鏡像体）、
化合物Ｃ：アポモルヒネ（Ｄ2 及びＤ3 受容体作動薬）、
化合物Ｄ：(−)−キンピロール（quinpirole）（Ｄ2 及びＤ3 受容体作動薬）、
化合物Ｅ：ＳＫＦ３８３９３（選択的なＤ1 受容体作動薬）、
化合物Ｆ：ＲＳ(±)−７−ＯＨ−ＤＰＡＴ（化合物Ａのラセミ体）、
化合物Ｇ：Ｓ(−)−エチクロプリド（Ｄ2 及びＤ3 受容体拮抗薬）、
化合物Ｈ：ドンペリドン（Ｄ2 及びＤ3 受容体拮抗薬）、
化合物Ｉ：クロザピン（選択的なＤ4 受容体拮抗薬）、及び
化合物Ｊ：ＳＣＨ２３３９０（選択的なＤ1 受容体拮抗薬）。
【００１７】
また、試験に使用した薬物の投与量は全て遊離塩基としての重量で示した。試験例及び実施例における嘔吐発現までの潜時，空嘔吐回数及び嘔吐回数は、平均値±標準誤差で示し、これら群間の比較はMann-WhitneyのＵ検定を用いて行った。
【００１８】
試験例１――
フェレットにおけるドパミン作動薬皮下投与の嘔吐誘発効果：−
【００１９】
種々のドパミン作動薬をフェレットに２ml／kgの割合で皮下投与したのち30分間観察し、嘔吐発現までの潜時，空嘔吐及び嘔吐の回数を記録した。結果を表１に示す。
【００２０】
また、１群９匹のフェレットにおけるＲ(＋)−７−ＯＨ−ＤＰＡＴ（化合物Ａ）の0.3 mg/kg 皮下投与により誘発される空嘔吐及び嘔吐の頻度の時間的分布を図１に示す。図中の垂線は標準誤差を表す。
【００２１】
【表１】
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【００２２】
表１から明らかなように、Ｒ(＋)−７−ＯＨ−ＤＰＡＴ（化合物Ａ）は、0.03〜1.0 mg/kg の皮下投与で用量依存的に嘔吐を誘発した。また、図１から明らかなように、化合物Ａの皮下投与後５〜10分の間に嘔吐が最高頻度で誘発されたが、25分後には空嘔吐も嘔吐も認められなかった。
【００２３】
化合物Ａの場合と異なり、Ｓ(−)−７−ＯＨ−ＤＰＡＴ（化合物Ｂ）の場合は、1.0 mg/kg の高用量でも空嘔吐も嘔吐も誘発されなかった。
【００２４】
アポモルヒネ（化合物Ｃ）は、0.1 〜1.0 mg/kg で空嘔吐及び嘔吐を誘発したが、その効果は用量依存的ではなかった。即ち、0.3 mg/kg では全例で空嘔吐及び嘔吐が認められたが、高用量の1.0 mg/kg では５匹中３匹に嘔吐が認められたにすぎなかった。
【００２５】
(−)−キンピロール（化合物Ｄ）は、化合物Ａよりも弱いものの、0.03〜1.0 mg/kg で用量依存的に嘔吐を誘発した。
【００２６】
他方、ドパミンＤ1 受容体作動薬であるＳＫＦ３８３９３（化合物Ｅ）は、1.0 mg/kg の高用量でも全例で空嘔吐も嘔吐も誘発しなかった。
【００２７】
以上総合すると、選択的なＤ3 受容体作動薬であるＲ(＋)−７−ＯＨ−ＤＰＡＴは、フェレットにおいて、Ｄ2 受容体に対しても作用するアポモルヒネや(−)−キンピロールよりも鋭敏な嘔吐誘発作用を示すことが分かる。
【００２８】
試験例２――
イヌにおけるドパミン作動薬皮下投与の嘔吐誘発効果：−
【００２９】
体重８〜15kgの雄性ビーグル犬を実験前に一夜絶食させたのち使用した。
【００３０】
種々のドパミン作動薬をビーグル犬に0.3ml/kgの割合で皮下投与したのち60分間観察し、嘔吐発現までの潜時及び嘔吐回数を記録した。結果を表２及び３に示す。
【００３１】
【表２】
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【００３２】
【表３】
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【００３３】
表２及び３から明らかなように、試験に使用した各ドパミン作動薬のイヌにおける嘔吐誘発効果はフェレットの場合に類似している。Ｒ(＋)−７−ＯＨ−ＤＰＡＴ（化合物Ａ）は、(−)−キンピロール（化合物Ｄ）よりも幾分弱いものの、アポモルヒネ（化合物Ｃ）よりも幾分強い嘔吐誘発効果を有する一方、ＲＳ(±)−７−ＯＨ−ＤＰＡＴ（化合物Ｆ）は化合物Ｃよりも幾分弱い嘔吐誘発効果を有することが分かる。
【００３４】
試験例３――
フェレットにおけるＲ(＋)−７−ＯＨ−ＤＰＡＴ脳室内投与の嘔吐誘発効果：−
【００３５】
（第４脳室内薬物投与用カニューレの装着）――
フェレットをペントバルビタールナトリウム（35〜40 mg/kg，腹腔内投与）で麻酔し、脳定位固定装置（stereotaxic apparatus) に置いた。頭蓋骨を露出させ、第４脳室（最後野の１mm上部）内にガイドカニューレ（23ゲージのステンレス管，長さ22mm）を右側脳の定位に固定できるように小さな孔を開けた。この領域の座標は、前頂（bregma）より17.00 mm後，正中線より4.00mm右，頭蓋骨表面の垂直軸から20°の傾きで深さ13.00 mmであった。カニューレは、ステンレスのネジと歯科用セメントにより頭蓋骨に固定した。
【００３６】
（第４脳室内投与による嘔吐の誘発）――
実験は手術後少なくとも３日あけて行った。注射用カニューレ（27ゲージ，長さ23mm）を用い、試験化合物の生理食塩液10μl を１分間にわたってゆっくりと投与した。投与後、15分間観察し、嘔吐発現までの潜時並びに空嘔吐及び嘔吐の回数を記録した。結果を表４に示す。
【００３７】
【表４】
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【００３８】
表４から明らかなように、生理食塩液のみを投与した対照群では全例で空嘔吐も嘔吐も誘発されなかった。Ｒ(＋)−７−ＯＨ−ＤＰＡＴ（化合物Ａ）は、0.1 〜１.0μg の第４脳室内投与で、投与後１〜２分以内に空嘔吐及び嘔吐を誘発し、その効果は10〜12分間持続した。
【００３９】
これに対して、Ｓ(−)−７−ＯＨ−ＤＰＡＴ（化合物Ｂ）は10μg の高用量で、５匹中１匹のみにわずかな空嘔吐を誘発し、嘔吐症状は認められなかった。
【００４０】
(−)−キンピロール（化合物Ｄ）は、1.0 〜10μg の用量で空嘔吐及び嘔吐を誘発したが、その効力は化合物Ａよりも弱いものであった。
【００４１】
試験例４――
フェレットにおけるＲ(＋)−７−ＯＨ−ＤＰＡＴ誘発嘔吐に対する迷走神経切除の効果：−
【００４２】
迷走神経切除はHawthow らの方法〔Quart. J. Exp. Physiol., 73, 7 (1988)参照〕に準じて行った。フェレットをペントバルビタールナトリウム（35〜45mg/kg,腹腔内投与）で麻酔し、横隔膜上の食道に沿って走る背側迷走神経枝を切除した。手術の影響を除くために７〜14日経過後に実験に使用した。
【００４３】
１群４匹の迷走神経切除フェレット又は偽手術実施フェレットにＲ(＋)−７−ＯＨ−ＤＰＡＴ（化合物Ａ）0.3 mg/kg を皮下投与後、30分間観察し、嘔吐発現までの潜時，空嘔吐回数及び嘔吐回数を記録した。
【００４４】
結果を図２に示す。図中の垂線は標準誤差を表す。
【００４５】
図２から明らかなように、迷走神経切除フェレットにおいて、化合物Ａは0.3mg/kgの皮下投与で嘔吐を誘発し、嘔吐発現までの潜時は3.1±1.3 分であり、空嘔吐及び嘔吐回数はそれぞれ17.1±3.6 回及び4.14±1.18回であった。これらの値は、偽手術実施フェレットについての値に対して有意差を示さなかった。
【００４６】
試験例５――
フェレットにおけるＲ(＋)−７−ＯＨ−ＤＰＡＴ誘発嘔吐に対する最後野破壊の効果：−
【００４７】
最後野の破壊は、Jovanovic-Micic らの方法〔Eur. J. Pharmacol., 272, 21 (1995) 参照〕等に従って電気的に行った。フェレットをペントバルビタールナトリウム（35〜45mg/kg,腹腔内投与）で麻酔後、病巣形成装置（Lesion Producing Device; Stoelting Co., シカゴ）を用いて最後野に１分間4.5 mAの電流を通じた。手術の影響を除くために10日経過後に実験に使用した。
【００４８】
最後野破壊フェレット（５匹）又は偽手術実施フェレット（７匹）にＲ(＋)−７−ＯＨ−ＤＰＡＴ（化合物Ａ）0.3mg/kgを皮下投与後、30分間観察し、嘔吐発現までの潜時，空嘔吐回数及び嘔吐回数を記録した。
【００４９】
結果を図３に示す。図中の垂線は標準誤差を表し、* 及び**は、それぞれｐ＜0.05及びｐ＜0.01で偽手術フェレット群に比べて有意差のあることを示す。
【００５０】
図３から明らかなように、最後野を破壊したフェレットでは、化合物Ａ（0.3mg/kg，皮下投与）により誘発される空嘔吐及び嘔吐は著しく減少し、嘔吐発現までの潜時並びに空嘔吐及び嘔吐回数はそれぞれ21.7±5.4 分，1.6±1.0 回，0.20±0.20回であった。これらの値は偽手術実施フェレットについての値に比べて有意に異なった。
【００５１】
上記試験例１〜５の結果から、Ｒ(＋)−又はＲＳ(±)−７−ＯＨ−ＤＰＡＴにより誘発される嘔吐は延髄の最後野に局在するドパミンＤ3 受容体を介するものであると考えられる。
【００５２】
実施例１――
フェレットにおけるＲ(＋)−７−ＯＨ−ＤＰＡＴ誘発嘔吐に対するドパミン拮抗薬の効果：−
【００５３】
ドパミン拮抗薬であるＳ(−)−エチクロプリド（化合物Ｇ）又はドンペリドン（化合物Ｈ）の所定用量をフェレットに皮下投与し、30分後にＲ(＋)−７−ＯＨ−ＤＰＡＴ0.3 mg/kg を皮下投与した。その後フェレットを30分間観察し、嘔吐発現までの潜時並びに空嘔吐及び嘔吐の回数を記録した。結果を表５に示す。
【００５４】
【表５】
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【００５５】
表５から明らかなように、Ｓ(−)−エチクロプリド（化合物Ｇ）は、0.3 〜10μg/kgの皮下投与で用量依存的にＲ(＋)−７−ＯＨ−ＤＰＡＴ誘発嘔吐を予防した。即ち、嘔吐発現までの潜時を延長させ、空嘔吐及び嘔吐回数を減少させ、嘔吐回数を50％抑制する用量（ＩＤ50値）は1.4 μg/kgであった。
【００５６】
ドンペリドン（化合物Ｈ）もまた３〜100μg/kg で用量依存的にＲ(＋)−７−ＯＨ−ＤＰＡＴ誘発嘔吐を抑制し、ＩＤ50値は2.6 μg/kgであった。
【００５７】
ここに得られた化合物Ｇ及びＨのＩＤ50値はこれらの化合物のドパミンＤ3 受容体拮抗作用を反映していると考えられる。
【００５８】
実施例２――
イヌにおけるＲ(＋)−７−ＯＨ−ＤＰＡＴ誘発嘔吐に対するドパミン拮抗薬の効果：−
【００５９】
体重８〜15kgの雄性ビーグル犬を実験前に一夜絶食させたのち使用した。
【００６０】
ドパミン拮抗薬であるＳ(−)−エチクロプリド（化合物Ｇ），クロザピン（化合物Ｉ）又はＳＣＨ２３３９０（化合物Ｊ）の所定用量をビーグル犬に皮下投与し、30分後にＲ(＋)−７−ＯＨ−ＤＰＡＴ0.3 mg/kg を皮下投与した。その後60分にわたってビーグル犬を観察し、嘔吐発現までの潜時及び嘔吐回数を記録した。結果を表６に示す。
【００６１】
【表６】
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【００６２】
表６から明らかなように、Ｓ(−)−エチクロプリド（化合物Ｇ）は、0.01〜1.0mg/kgの皮下投与で用量依存的にＲ(＋)−７−ＯＨ−ＤＰＡＴ誘発嘔吐を予防した。即ち、嘔吐発現までの潜時を延長させ、嘔吐回数を減少させ、そのＩＤ50値は0.019 mg/kg であった。
【００６３】
一方、ドパミンＤ4 受容体拮抗薬であるクロザピン（化合物Ｉ）及びＤ1 受容体拮抗薬であるＳＣＨ２３３９０（化合物Ｊ）はＲ(＋)−７−ＯＨ−ＤＰＡＴ誘発嘔吐を有意には抑制しなかった。
【００６４】
実施例３――
フェレットにおけるＲ(＋)−７−ＯＨ−ＤＰＡＴ誘発嘔吐に対するＳ(−)−エチクロプリド（脳室内投与）の拮抗効果：−
【００６５】
試験例３と同様の操作によりＳ(−)−エチクロプリド（化合物Ｇ）の所定用量をフェレットの第４脳室内に投与し、その３分後にＲ(＋)−７−ＯＨ−ＤＰＡＴ（化合物Ａ）0.3mg/kgを皮下投与した。その後フェレットを30分間観察し、嘔吐発現までの潜時並びに空嘔吐及び嘔吐の回数を記録した。
【００６６】
結果を図４に示す。図中の垂線は標準誤差を表し、**はｐ＜0.01で対照群に比べて有意差のあることを示す。
【００６７】
図４から明らかなように、化合物Ｇは0.01〜1.0 μg の用量で用量依存的にＲ(＋)−７−ＯＨ−ＤＰＡＴにより誘発される空嘔吐及び嘔吐を予防し、そのＩＤ50値は8.9 ngであった。
【００６８】
【発明の効果】
ドパミンＤ3 受容体に対する選択的作動薬は、該薬物に感受性のヒト以外の哺乳動物（例えば、イヌ，フェレット）において用量依存的に嘔吐を誘発し、この嘔吐は延髄の最後野に局在するＤ3 受容体を介して現れることから、この性質を利用してＤ3 受容体に対する拮抗薬を簡単にスクリーニングすることができる。
【図面の簡単な説明】
【図１】フェレットにおけるＲ(＋)−７−ＯＨ−ＤＰＡＴ0.3mg/kg皮下投与により誘発される空嘔吐及び嘔吐の時間的分布を示したグラフである。
【図２】迷走神経切除フェレットにＲ(＋)−７−ＯＨ−ＤＰＡＴ0.3mg/kg皮下投与後の嘔吐発現までの潜時，空嘔吐回数及び嘔吐回数を示したグラフである。
【図３】最後野破壊フェレットにＲ(＋)−７−ＯＨ−ＤＰＡＴ0.3mg/kg皮下投与後の嘔吐発現までの潜時，空嘔吐回数及び嘔吐回数を示したグラフである。
【図４】フェレットにおけるＲ(＋)−７−ＯＨ−ＤＰＡＴ0.3mg/kg皮下投与により誘発される嘔吐に対するＳ(−)−エチクロプリド第４脳室内投与の効果を示したグラフである。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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