(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
下記式（１）；
【化１】
0003742602.tif 000004
(式中、ｎは１〜１２の整数を表す)で表される還元型補酵素Ｑを含有する補酵素Ｑの溶液であって、補酵素Ｑをリポソームで被覆することによって還元型補酵素Ｑを酸化に対して安定に維持することを特徴とし、かつ、リポソームが精製大豆レシチン及び／又はホスファチジルコリンを用いて調製されたものであることを特徴とする補酵素Ｑの溶液。
【請求項２】
下記式（１）；
【化２】
0003742602.tif 000005
(式中、ｎは１〜１２の整数を表す)で表される還元型補酵素Ｑを含有する補酵素Ｑの溶液であって、補酵素Ｑを界面活性剤、又は、精製大豆レシチン及び／又はホスファチジルコリンにより可溶化若しくは乳化することによって還元型補酵素Ｑを酸化に対して安定に維持することを特徴とする補酵素Ｑの溶液。
【請求項３】
還元型補酵素Ｑを補酵素Ｑ全量の２０重量％以上含有する請求項１又は２記載の溶液。
【請求項４】
還元型補酵素Ｑを補酵素Ｑ全量の４０重量％以上含有する請求項１又は２記載の溶液。
【請求項５】
補酵素Ｑの濃度が０．０００１〜５０重量％である請求項１又は２記載の溶液。
【請求項６】
補酵素Ｑが補酵素Ｑ１０である請求項１又は２記載の溶液。
【請求項７】
リポソーム膜の構成成分としてステロールを含む請求項１記載の溶液。
【請求項８】
精製大豆レシチン及び／又はホスファチジルコリンを用いて乳化された乳化液である請求項２記載の溶液。
【請求項９】
界面活性剤を用いて補酵素Ｑが可溶化もしくは乳化された請求項２記載の溶液。
【請求項１０】
界面活性剤が、カルボン酸塩型アニオン界面活性剤、スルホン酸塩型アニオン界面活性剤、硫酸エステル塩型アニオン界面活性剤、リン酸エステル塩型アニオン界面活性剤、アミン塩型カチオン界面活性剤、四級アンモニウム塩型カチオン界面活性剤、アミノカルボン酸塩型両性界面活性剤、カルボキシベタイン型両性界面活性剤、硫酸エステル型両性界面活性剤、スルホン酸型両性界面活性剤、エーテル型非イオン界面活性剤、エーテルエステル型非イオン界面活性剤、エステル型非イオン界面活性剤、ブロックポリマー型非イオン界面活性剤、含窒素非イオン界面活性剤、天然界面活性剤、タンパク質加水分解物の誘導体である界面活性剤、高分子界面活性剤、チタン及びケイ素を含む界面活性剤、並びに、フッ化炭素系界面活性剤からなる群より選択される少なくとも１つである請求項９記載の溶液。
【請求項１１】
界面活性剤がポリソルベートまたはポリオキシエチレン硬化ヒマシ油である請求項１０記載の溶液。
【請求項１２】
界面活性剤の濃度が１重量％未満である請求項９記載の溶液。
【請求項１３】
界面活性剤の濃度が１〜２０重量％である請求項９記載の溶液。
【請求項１４】
医療品に用いられる請求項１〜１３のいずれかに記載の溶液。
【請求項１５】
食品、食品用組成物または飲料に用いられる請求項１〜１３のいずれかに記載の溶液。
【請求項１６】
肥料に用いられる請求項１〜１３のいずれかに記載の溶液。
【請求項１７】
化粧品に用いられる請求項１〜１３のいずれかに記載の溶液。
【請求項１８】
飼料に用いられる請求項１〜１３のいずれかに記載の溶液。
【請求項１９】
抗酸化剤に用いられる請求項１〜１３のいずれかに記載の溶液。
【請求項２０】
注射剤、補液、液剤、点眼剤、点鼻剤、点耳剤、経口剤、皮膚用剤、頭皮用剤または保存溶液に用いられる請求項１４に記載の溶液。
【請求項２１】
皮膚用剤または頭皮用剤に用いられる請求項１４に記載の溶液。
【請求項２２】
皮膚用剤または頭皮用剤に用いられる請求項１７に記載の溶液。
【請求項２３】
還元型補酵素Ｑを精製大豆レシチン及び／又はホスファチジルコリンから調製されるリポソームで被覆することを特徴とする、還元型補酵素Ｑの安定化方法。
【請求項２４】
還元型補酵素Ｑを界面活性剤により可溶化若しくは乳化することを特徴とする、還元型補酵素Ｑの安定化方法。
【請求項２５】
還元型補酵素Ｑを精製大豆レシチン及び／又はホスファチジルコリンにより可溶化若しくは乳化することを特徴とする、還元型補酵素Ｑの安定化方法。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は、還元型補酵素Ｑを構成成分とする溶液に関し、特に還元型補酵素Ｑを酸化に対して安定に維持できる溶液に関する。
【０００２】
【従来の技術】
補酵素Ｑは、細菌から哺乳動物まで広く生体に分布する必須成分であり、生体内の細胞中におけるミトコンドリアの電子伝達系構成成分として知られている。補酵素Ｑは、ミトコンドリア内において酸化と還元を繰り返すことで、電子伝達系における伝達成分としての機能を担っているほか、還元型補酵素Ｑは抗酸化作用をもつことが知られている。ヒトでは、補酵素Ｑの側鎖が繰り返し構造を１０個持つ、補酵素Ｑ１０が主成分であり、生体内においては通常４０〜９０％程度が還元型で存在している。補酵素Ｑの生理的作用としては、ミトコンドリア賦活作用によるエネルギー生産の活性化、心機能の活性化、細胞膜の安定化効果、抗酸化作用による細胞の保護効果などが挙げられている。
【０００３】
補酵素Ｑは種々の用途での使用が知られており、例えば、酸化型補酵素Ｑ１０はその心臓に対する効果から鬱血性心不全薬として用いられている。医薬用途以外でも、ビタミン類同様、栄養剤、栄養補助剤として経口的に使用されている。しかし、補酵素Ｑは脂溶性が強く水に溶けにくいため、実際の用途は経口剤および皮膚用剤のみしか知られていなかった。
【０００４】
近年、血中の酸化ストレスの増加による疾患の増悪が種々報告されるようになった。代表的なものとして、動脈硬化、糖尿病合併症などが挙げられる。これらの疾患では、血液中に存在する種々の酸化ストレスによる脂質変性などにより、疾患の発生あるいは増悪が起こっている。このような酸化ストレスによる影響を減少させるためには抗酸化剤の投与による抗酸化能の賦活が有効である。脂質過酸化の抑制により有効であると考えられる脂溶性の抗酸化物質の代表的な化合物であるビタミンＥは抗酸化物質として疾患の予防などに幅広く用いられている。近年、ビタミンＥの抗酸化活性を充分に発揮させるためには還元型補酵素Ｑ１０の共存が重要であることが報告され（Ｂｏｗｒｙ等、１９９３、Ｊ．Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｓｏｃｉｅｔｙ、１１５、６０２９−６０４４）、脂溶性抗酸化物質としてビタミンＥと共に、補酵素Ｑの重要性が明らかになりつつある。
【０００５】
還元型補酵素Ｑはそれ自身でも強い抗酸化作用を持つため、可溶化して血中に充分量の還元型補酵素Ｑを送り込むことにより、血中の抗酸化活性を効果的に増加させることが可能となる。血中の抗酸化活性を増加させることは、虚血再還流時の血管障害、動脈硬化の再狭窄防止、脳梗塞後の血管障害の防止、動脈効果の予防、糖尿病の合併症の予防など活性酸素種によって増悪が示唆されている多くの疾患に対して幅広い有用性が考えられる。更に、新たな補給形態として点滴により体内へ送りこむことにより、経口による摂取ができない重症患者あるいは脳疾患患者への補酵素Ｑの供給が可能となる。このように補酵素Ｑを可溶化することは多くのメリットを生み出すことが予想される。
【０００６】
補酵素Ｑには酸化型と還元型が知られており、酸化型補酵素Ｑ１０（ユビデカレノンまたはユビキノン）の可溶化方法に関しては従来から数多くの研究が行われてきた。酸化型補酵素Ｑ１０の可溶化方法としては、リポソームによる被覆、界面活性剤あるいは油脂による懸濁など種々の方法が報告されている（特開平５−１８６３４０号公報、特開平７−６９８７４号公報、特表２０００−５１０８４１号公報）が、実用に供された例は少ない。その理由のひとつとして、酸化型補酵素Ｑ１０が抗酸化活性を示すためには還元酵素などによって還元型に変換される必要があるが、血中には還元酵素が存在しないため注射などによる投与では血中の酸化ストレスに対する抗酸化活性が期待できないことが挙げられる。一方、還元型補酵素Ｑ１０はそれ自体が抗酸化活性を有することから、上記のような疾患に対する有用性が大いに期待できる物質ではあるが、酸化を受けやすく不安定であるという欠点があり実用には供しえなかった。還元型補酵素Ｑ１０のリポソーム被覆体を酸化還元酵素などの研究のために作製したという研究報告はあるが（Ｋｉｓｈｉ等、１９９９、ＢｉｏＦａｃｔｏｒｓ、１０、１３１−１３８）、用いられているリポソームは実験毎の用時調製例であり、安定的に還元型補酵素Ｑを維持できる可溶化方法については全く知られていなかった。
【０００７】
【発明が解決しようとする課題】
本発明は、安定的に還元型補酵素Ｑを含有する水溶液を提供することを目的とするものである。
【０００８】
【課題を解決するための手段】
本発明者等は上記の課題を克服するために研究を行った結果、還元型補酵素Ｑを安定に維持するために適した溶液の組成を見出し、本発明を完成するに至った。即ち本発明は、還元型補酵素Ｑを含有する補酵素Ｑの溶液であって、還元型補酵素Ｑを酸化に対して安定に維持できるリポソーム溶液、あるいは界面活性剤及び／又は油脂による溶液または乳化液溶液である。
本発明の溶液は、医療品、食品、食品用組成物、飲料、肥料、化粧品、飼料、または、抗酸化剤に用いることができる。医療品として、具体的には、注射剤、補液、液剤、点眼剤、点鼻剤、点耳剤、経口剤、皮膚用剤、頭皮用剤、または、保存溶液に用いることができる。これらの医療品は、ヒトのほか、イヌ、ネコ、ウサギ、ラット、マウス、ウシ、ウマ、ブタ等の動物に用いることができる。
また本発明は、還元型補酵素Ｑをリン脂質及び／又は糖脂質から調製されるリポソームで被覆することからなる還元型補酵素Ｑの安定化方法でもある。
さらに本発明は、還元型補酵素Ｑを界面活性剤及び／又は油脂により可溶化若しくは乳化することからなる還元型補酵素Ｑの安定化方法でもある。
さらに本発明は、還元型補酵素Ｑをリン脂質及び／又は糖脂質により可溶化若しくは乳化することを特徴とする、還元型補酵素Ｑの安定化方法でもある。
以下で本発明を詳述する。
【０００９】
【発明の実施の形態】
補酵素Ｑは、下記式（１）；
【００１０】
【化３】
0003742602.tif 000002
【００１１】
（式中、ｎは１〜１２の整数を表す）および下記式（２）；
【００１２】
【化４】
0003742602.tif 000003
【００１３】
（式中、ｎは１〜１２の整数を表す）で表され、式（１）は還元型補酵素Ｑを表し、式（２）は酸化型補酵素Ｑを表す。
【００１４】
本発明で用いる補酵素Ｑは、式（１）で表される還元型補酵素Ｑを含有し、補酵素Ｑ全量中、還元型補酵素Ｑを２０重量％以上含有するのが好ましく、４０重量％以上含有するのがより好ましい。上限は１００重量％以下であればよく、好ましくは１００重量％未満であり、より好ましくは９８重量％以下である。補酵素Ｑ中の還元型補酵素Ｑの割合については、我々は、還元型補酵素Ｑ１０を用いた経口組成物の投与による血中補酵素Ｑ１０の増加効果は、還元型補酵素Ｑ１０が２０重量％以上含有された場合にみられ、４０重量％以上含有された場合により強くなることを見出している（特開平１０−１０９９３３号公報）。
【００１５】
上記還元型補酵素Ｑを得る方法としては特に限定されず、例えば、合成、発酵、天然物からの抽出等の従来公知の方法により補酵素Ｑを得た後、クロマトグラフィーにより流出液中の還元型補酵素Ｑ区分を濃縮する方法などを採用することが出来る。この場合には、必要に応じて上記補酵素Ｑに対し、水素化ほう素ナトリウム、亜ジチオン酸ナトリウム(ハイドロサルファイトナトリウム)等の一般的な還元剤を添加し、常法により上記補酵素Ｑ中に含まれる酸化型補酵素Ｑを還元して還元型補酵素Ｑとした後にクロマトグラフィーによる濃縮を行っても良い。また、既存の高純度補酵素Ｑに上記還元剤を作用させる方法によっても得ることが出来る。
【００１６】
本発明で使用できる補酵素Ｑは、前記式（１）および（２）で表されるように、側鎖の繰り返し単位（式中ｎ）が１〜１２のものを使用することが出来るが、なかでも側鎖繰り返し単位が１０のもの、すなわち補酵素Ｑ１０が特に好適に使用できる。
【００１７】
本発明の溶液を得る方法としては特に限定されず、例えば、還元型補酵素Ｑを含有する補酵素Ｑを、適当な基剤を用いてリポソームで被覆し可溶化することにより得ることができる。あるいは、適当な界面活性剤及び／又は油脂によって可溶化もしくは乳化することによっても得ることができる。
【００１８】
リポソームの基剤として用いる脂質としては、リン脂質、糖脂質が好適に使用できる。
【００１９】
リン脂質としては、卵黄レシチン、精製大豆レシチン、ホスファチジルコリン、ホスファチジルエタノールアミン、ホスファチジルセリン、スフィンゴミエリン、ジセチルリン酸、ステアリルアミン、ホスファチジルグリセロール、ホスファチジン酸、ホスファチジルイノシトールアミン、カルジオリピン、セラミドホスホリルエタノールアミン、セラミドホスホリルグリセロール、およびこれらの混合物等の物質が使用できるが、ホスファチジルコリン含量が高いものが好ましく、精製大豆レシチンがより好適である。精製大豆レシチン中のホスファチジルコリン含量としては、０．０１重量％以上が好ましく、０．１重量％以上がより好ましい。また、本発明の溶液にはホスファチジルコリンを別途添加することも、還元型補酵素Ｑの安定性の観点から好ましい。
【００２０】
糖脂質としてはジガラクトシルジグリセリド、ガラクトシルジグリセリド硫酸エステル、ガラクトシルセラミド、ガラクトシルセラミド硫酸エルテル、ラクトシルセラミド、ガングリオシドＧ７、ガングリオシドＧ６、ガングリオシドＧ４、ジガラクトシルセラミド、およびこれらの混合物を用いることができる。
【００２１】
補酵素Ｑと、リン脂質または糖脂質の組成比については、補酵素Ｑの１モルに対して、通常、リン脂質または糖脂質が１モル以上存在すればよいが、１０モル以上存在するのがより好ましい。それ以下でもよい。
【００２２】
なお、基剤にステロールを添加してもよい。添加量は、リン脂質あるいは糖脂質に対して１／５重量が好ましい量の上限であり、１／１０重量が更に好ましい。ステロールとしては、コレステロールが最も好ましいが、その他のステロールを使用してもよい。
【００２３】
本発明の溶液における補酵素Ｑの含有量としては、溶液の用途にもよるが、好ましい量の下限は０．０００１重量％であり、好ましい上限は５０重量％である。より好ましい量の下限は０．００１重量％であり、より好ましい量の上限は３０重量％、さらに好ましい量の下限は０．０１重量％、さらに好ましい量の上限は１５重量％である。
【００２４】
リポソームによる被覆は当業者周知の方法で行うことができ、例えば、クロロホルム、エタノール等の溶媒に溶解させた還元型補酵素Ｑとリン脂質の混合物を、溶媒を蒸発乾固させた後、適当な緩衝液中で超音波処理等によって分散させることにより調製することができる。上記操作は、一般的には還元型補酵素Ｑおよび脂質の酸化を抑えるため、窒素等の不活性ガス雰囲気下に低温（例えば４℃）で行うのが好ましい。
【００２５】
次に、界面活性剤及び／又は油脂を用いた可溶化もしくは乳化について説明する。
界面活性剤あるいは油脂は、一般に用いられている製品を使用することができる。例えば界面活性剤としては、カルボン酸塩型アニオン界面活性剤、スルホン酸塩型アニオン界面活性剤、硫酸エステル塩型アニオン界面活性剤、リン酸エステル塩型アニオン界面活性剤等のアニオン界面活性剤；アミン塩型カチオン界面活性剤、四級アンモニウム塩型カチオン界面活性剤等のカチオン界面活性剤；アミノカルボン酸塩型両性界面活性剤、カルボキシベタイン型両性界面活性剤、硫酸エステル型両性界面活性剤、スルホン酸型両性界面活性剤等の両性界面活性剤；エーテル型非イオン界面活性剤、エーテルエステル型非イオン界面活性剤、エステル型非イオン界面活性剤、ブロックポリマー型非イオン界面活性剤、含窒素非イオン界面活性剤等の非イオン界面活性剤；天然界面活性剤、タンパク質加水分解物の誘導体である界面活性剤、高分子界面活性剤、チタン及びケイ素を含む界面活性剤、並びに、フッ化炭素系界面活性剤等のその他の界面活性剤などを用いることができる。油脂としては、動物油脂、植物油脂等の天然油脂が挙げられ、具体的には、アボガド油、アーモンド油、ウイキョウ油、エゴマ油、オリーブ油、オレンジ油、オレンジラファー油、ゴマ油、カカオ油脂、カミツレ油、カロット油、キューカンバー油、牛脂、牛脂脂肪酸、ココナッツ油、サフラワー油、ザクロ油、ザクロ脂肪酸、大豆油、ツバキ油、コーン油（トウモロコシ油）、ナタネ油、ハッカ油、パーシック油、ヒマシ油、綿実油、落花生油、タートル油、ミンク油、卵黄油、カカオ油、パーム油、パーム核油、モクロウ、ヤシ油、豚脂、乳脂、またはこれら油脂類の水素添加物（硬化油等）などを用いることができる。上記の油脂を乳化に使用する際の濃度としては、通常、０．０１〜４０重量％である。
【００２６】
界面活性剤として、好ましくは、非イオン界面活性剤であり、より好ましくは、Ｔｗｅｅｎ８０等のポリソルベート系界面活性剤やＨＣＯ６０等のポリオキシエチレン硬化ヒマシ油である。本発明の溶液における上記界面活性剤の濃度は、通常、０．０１〜２０重量％であり、還元型補酵素Ｑの酸化防止の観点からは１重量％未満が好ましく、０．１重量％以下がさらに好ましい。但し、界面活性剤溶液と還元型補酵素Ｑ１０粉末を別個にパックし、溶液を用事調製して使用するなど保存による酸化を考慮しなくてよい場合、また、保存期間が非常に短期間である場合、あるいは気密容器中で脱酸素剤などを共存させて無酸素条件での保存を行う場合などでは、１重量％以上の界面活性剤による溶液或いは乳化液の作製は可能である。補酵素Ｑの含有量は、先述のリポソームによる被覆の場合と同様である。
【００２７】
上記のようにして調製される溶液には、更に、薬剤学的に許容されている他の製剤素材を常法により適宜添加混合してもよい。添加しうる製剤素材としては特に限定されず、例えば、乳化剤、緊張化剤、緩衝剤、溶解補助剤、矯臭剤、防腐剤、安定化剤、抗酸化剤などが挙げられる。
【００２８】
本発明による溶液組成物の保存方法としては、特に限定されず、低温保存、密閉容器による嫌気的保存、遮光保存などを用いることができる。
【００２９】
上記のようにして調製される本発明の溶液は、冷蔵あるいは室温で保存した際に、還元型補酵素Ｑを酸化に対して安定に維持することができる。ここでいう「安定に維持できる」とは、溶液の用途と目的によっても異なるが、例えば、還元型補酵素Ｑの残存率が保存開始時の濃度の８０％以上であることを表す。この割合を維持できる期間としては、１週間以上が好ましく、更に好ましくは１ヶ月以上、もっとも好ましくは１年間以上である。
【００３０】
本発明による還元型補酵素Ｑを含有する溶液は、医療用、化粧用、食品用、園芸用、酪農用など広い範囲で使用できる。具体的な形態としては注射剤、輸液、液剤、点眼剤、内服用液剤、ローション剤、ヘヤートニック、化粧用乳液、スプレー液、エアロゾル、ドリンク液、液体肥料、保存用溶液などが挙げられ、医療用としては更に臓器移植時の保存用溶液などとして用いることも出来る。更に、上記の形態は動物、魚介類用として用いてもよく、飼料として用いてもよい。また、抗酸化溶液として肉、魚など生鮮食品の保存用に用いることもできる。
【００３１】
【実施例】
以下に実施例及び調製例を揚げて本発明を更に詳しく説明するが、本発明はこれら実施例および調製例のみに限定されるものではない。
【００３２】
（実施例１）還元型補酵素Ｑ１０含有リポソーム中の還元型補酵素Ｑ１０の酸化安定性に対するレシチンの影響
レシチンとして卵黄レシチン（和光純薬工業製）および精製大豆レシチンであるレシノールＳ１０およびレシノールＳ１０ＥＸ（日本ケミカルズ製）を用いた。レシノールＳ１０はホスファチジルコリン含量が２５〜３０重量％であるのに対し、レシノールＳ１０ＥＸはホスファチジルコリンが９５重量％以上の含量である。これらのレシチンを用い、以下のようにして、還元型補酵素Ｑ１０含有リポソームを作製した。即ち、補酵素Ｑ１０(酸化型：還元型＝５：９５（重量比）)のエタノール溶液（１ｍｇ／ｍｌ）にレシチンのクロロホルム溶液（３．２ｍｇ／ｍｌ）を加え、共に溶解させた。エバポレーターにて溶媒を完全に減圧除去した後、ＨＥＰＥＳ緩衝液（５０ｍＭ、ｐＨ７．４）を加え、振盪することにより脂質フィルムを分散させ乳白色の懸濁液を作製した。窒素気流下、３０分間、４℃で超音波処理することでリポソームを作製し、遠心で巨大分子を除去した。操作中の還元型補酵素Ｑ１０の酸化を防ぐため、これらの操作は出来うる限り迅速に行った。
【００３３】
リポソーム中の還元型補酵素Ｑ１０の酸化安定性をＨＰＬＣにて評価した。
作製直後の、０．０５％還元型補酵素Ｑ１０含有リポソーム中の還元型補酵素Ｑ１０の比率は、卵黄レシチンでは約９０重量％、精製大豆レシチン（レシノールＳ１０、レシノールＳ１０ＥＸ）では約９５重量％であり、卵黄レシチンではリポソーム作製時に若干の酸化を受けるが、精製大豆レシチンでは、リポソーム作製時に殆ど酸化を受けないことが判った。
【００３４】
これらのリポソームを空気中で保存した時の保存温度による還元型補酵素Ｑ１０の酸化への影響を調べた。その結果を図１〜３に示した。値は、ｎ＝２の平均値である。
【００３５】
冷蔵条件（４℃）、３０日保存では、全てのレシチンで作製したリポソームにおいて、還元型補酵素Ｑ１０は９０％以上維持されていたが、保存６０日後では、レシノールＳ１０およびレシノールＳ１０ＥＸで作製したリポソームでは、還元型補酵素Ｑ１０は殆ど酸化されなかったが、卵黄レシチンを用いたリポソームでは約２５％が酸化を受けていた（図１）。
【００３６】
２３℃で保存したリポソームでは、保存３０日後では、レシノールＳ１０およびレシノールＳ１０ＥＸで作製したリポソームでは、９０％以上が還元型で維持されており、卵黄レシチンによるリポソームでも８０％以上が還元型で維持されていた。しかし、保存６０日後においては、レシノールＳ１０では還元型補酵素Ｑ１０が９０％以上残存していたが、レシノールＳ１０ＥＸでは約３５％が、卵黄レシチンでは約５５％が酸化を受けていた（図２）。
【００３７】
４０℃の加温条件では、卵黄レシチンは２１日後に殆どが酸化を受けた。また、レシノールＳ１０では保存２週間後には約半分に低下し、３０日後には還元型補酵素Ｑ１０の残存量は約２０％であった。レシノールＳ１０ＥＸを用いたリポソームでは、３０日後でも約７０％が還元型として残存していた（図３）。
【００３８】
以上の結果、卵黄レシチンに比較して、精製大豆レシチンであるレシノールが還元型補酵素Ｑ１０リポソームの基剤としてより適している事が明らかになった。精製大豆レシチンの中でも、ホスファチジルコリン含量が高いレシノールＳ１０ＥＸが４０℃でより安定であったが、２５℃では、レシノールＳ１０がより有用性が高く、用いる製品の保存条件により、これらの精製大豆レシチンを使い分けることでより安定な保存期間を得ることが出来る。また、長期保存が必要な用途では、精製大豆レシチン、特にホスファチジルコリン含量が高いものが基剤として優れているが、短期的な保存でよい場合には、卵黄レシチンでリポソームを作製することも可能である。
【００３９】
（実施例３）還元型補酵素Ｑ１０の界面活性剤による可溶化溶液の安定性
還元型補酵素Ｑ１０の界面活性剤による溶液を以下の方法にて作製し、保存下での酸化安定性を評価した。界面活性剤として、ポリソルベート８０（Ｔｗｅｅｎ８０）あるいはポリオキシエチレン硬化ヒマシ油（ＨＣＯ６０）を用い、それぞれの１重量％あるいは０．１重量％水溶液を作製した。これらの溶液に還元型補酵素Ｑ１０を終濃度０．０５重量％になるように加えて溶液とした。この溶液の２３℃、空気中保存での還元型補酵素Ｑ１０の酸化安定性に対する界面活性剤濃度の影響を図４に示した。値はｎ＝２の平均値である。還元型補酵素Ｑ１０の酸化安定性は、界面活性剤の濃度に強く影響され、低濃度で作製した溶液がより安定性が高いことが明らかになった。本試験の結果、界面活性剤濃度が０．１重量％であれば、還元型補酵素Ｑ１０は、２３℃保存で約１ヶ月は安定に保存できることが判った。しかし、界面活性剤濃度が１重量％であった場合には、１週間は安定に保存できたが、その後、急速に酸化を受けることが判った。従って、界面活性剤で溶液あるいは乳化液を作製する場合は、使用する界面活性剤の濃度を低くすることで、より保存期間の長い溶液が作製できる。１重量％以上の界面活性剤での溶液あるいは乳化液は、用事調製、短期間の保存、あるいは完全な嫌気条件での密閉などの条件を課することにより利用することができる。
【００４０】
（実施例４）還元型補酵素Ｑ１０の安定性に対する油脂の影響
還元型補酵素Ｑ１０と油脂をそれぞれ６０℃に加熱し、溶解した還元型補酵素Ｑ１０を油脂に混合することで、還元型補酵素Ｑ１０の１重量％油脂溶液を作製した。作製した溶液を、空気下、４０℃で保存し、保存中の還元型補酵素Ｑ１０の残存率をＨＰＬＣにて定量した。その結果を図５に示した。今回評価した６種類の油脂のうち、コーン油、大豆油、ゴマ油は、強い安定化作用を示し、サフラワー油、オリーブ油、ヒマシ油の安定化効果は弱いことが判った。
【００４１】
（調製例１）注射剤
精製大豆レシチン              ０．３重量％
エタノール                    ６．５重量％
マクロゴール４００            ５．０重量％
ソルビトール                  ４．５重量％
還元型補酵素Ｑ                ０．１重量％
注射用蒸留水              １００．０重量％に
【００４２】
（調製例２）乳化液
大豆油                      １０．０重量％
グリセリン                    ２．５重量％
ホスファチジルコリン          １．２重量％
還元型補酵素Ｑ                ０．１重量％
精製水                    １００．０重量％に
【００４３】
（調製例３）乳化液
Ｔｗｅｅｎ８０                １．０重量％
グリセリン                  １２．５重量％
ホスファチジルコリン          １．２重量％
還元型補酵素Ｑ１０              ０．１重量％
精製水                    １００．０重量％に
【００４４】
（調製例４）化粧水
精製大豆レシチン              ０．２重量％
スクワラン                    ０．１重量％
エタノール                  １４．０重量％
グリセリン                    ４．０重量％
還元型補酵素Ｑ                ０．１重量％
精製水                    １００．０重量％に
【００４５】
【発明の効果】
本発明により抗酸化物質あるいは栄養補助成分として有用性の高い還元型補酵素Ｑの液剤を供給できる。
【図面の簡単な説明】
【図１】３種類のレシチンにより作製したリポソーム中の還元型補酵素Ｑ１０の、４℃での酸化安定性を示したグラフである。縦軸は作製時に対する還元型補酵素Ｑ１０の残存率を％で表し、横軸は保存日数を表す。値はｎ＝２の平均値である。
【図２】３種類のレシチンにより作製したリポソーム中の還元型補酵素Ｑ１０の、２３℃での酸化安定性を示したグラフである。縦軸は作製時に対する還元型補酵素Ｑ１０の残存率を％で表し、横軸は保存日数を表す。値はｎ＝２の平均値である。
【図３】３種類のレシチンにより作製したリポソーム中の還元型補酵素Ｑ１０の、４０℃での酸化安定性を示したグラフである。縦軸は作製時に対する還元型補酵素Ｑ１０の残存率を％で表し、横軸は保存日数を表す。値はｎ＝２の平均値である。
【図４】２種類の界面活性剤による還元型補酵素Ｑ１０溶液の２３℃での酸化安定性に対する界面活性剤濃度の影響を示したグラフである。縦軸は作製時に対する還元型補酵素Ｑ１０の残存量を示し、横軸は保存日数を表す。値はｎ＝２の平均値である。
【図５】６種類の油脂による還元型補酵素Ｑ１０溶液の４０℃での酸化安定性を示したグラフである。縦軸は作製時に対する還元型補酵素Ｑ１０の残存量を示し、横軸は保存日数を表す。値はｎ＝２の平均値である。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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