(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
下記一般式[I] で表される化合物またはその塩類。
【化１】
0003733457.tif 000012
［式中、Ｒ１  は水素原子、低級アルキル基、炭素原子数３〜８のシクロアルキル基またはフェニル基を示し、該フェニル基はハロゲン原子または低級アルキル基で置換されていてもよい。Ｒ２  は水素原子、低級アルキル基、フェニル低級アルキル基またはフェニル基を示す。Ａは低級アルキレン基を示す。］
【請求項２】
請求項１記載の化合物またはその塩類を有効成分とする医薬組成物。
【請求項３】
請求項１記載の化合物またはその塩類を有効成分とする房水流出改善剤。
【請求項４】
請求項１記載の化合物またはその塩類を有効成分とする眼圧下降剤。
【請求項５】
下記一般式[II]で表される化合物またはその塩類。
【化２】
0003733457.tif 000013
［式中、Ｒ１  は低級アルキル基、炭素原子数３〜８のシクロアルキル基またはフェニル基を示し、該フェニル基はハロゲン原子または低級アルキル基で置換されていてもよい。Ｒ２  は水素原子、低級アルキル基、フェニル低級アルキル基またはフェニル基を示す。Ａは低級アルキレン基を示す。］
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は緑内障の治療剤として有用な新規化合物に関するものである。
【０００２】
【従来の技術】
緑内障とは、一般的に眼圧が上昇することにより、視機能が障害を受ける疾患である。房水の流出は、眼圧上昇と密接な関係があり、房水の流出が妨げられると眼圧上昇を引き起こす。房水の大部分は、線維柱帯からシュレム管を通って眼球外に流れ出る。この線維柱帯における房水流出の抵抗を減弱させることによって房水の流出を亢進させることができる。線維柱帯を形成している細胞（線維柱帯細胞）はスルフヒドリル基を有しているが、そのスルフヒドリル基と反応する化合物を投与することにより、線維柱帯細胞に形態的変化を起こさせ、房水流出能を亢進することによって眼圧を下げる方法が報告されている（特公平７−１３０１３号公報参照）。この公告公報には、スルフヒドリル基と反応する化合物としてフェノキシ酢酸誘導体、特にエタクリン酸が好適な化合物として開示されている。
【０００３】
【発明が解決しようとする課題】
線維柱帯細胞に形態的変化を起こさせることにより眼圧を下げる方法は、緑内障の治療方法として非常に興味あるものである。しかし、そのような作用機序を有する薬物の研究はまだ多くはなされておらず、新たな薬物の創製研究は、緑内障治療剤の開発において非常に興味ある課題である。
【０００４】
【課題を解決するための手段】
そこで、本発明者等は、α，β−不飽和カルボニル基を有するフェノキシ酢酸誘導体であるエタクリン酸が線維柱帯細胞に形態的変化を起こさせ、眼圧を下げる効果を有することに着目し、種々の新規化合物を合成し、それらの線維柱帯細胞の形態に及ぼす効果を調べた。その結果、シクロヘキシル脂肪酸を基本構造とし、そのシクロヘキサン環の４位にα，β−不飽和カルボニル基を導入した新規シクロヘキシル脂肪酸誘導体が優れた効果を有することを見出し、本発明を完成した。
【０００５】
【発明の実施の形態】
本発明は下記一般式[I] で示される化合物およびその塩類（以下特記なき限り本発明化合物と総称する）並びにそれらを有効成分とする医薬組成物に関するものである。
【０００６】
【化３】
0003733457.tif 000002
【０００７】
［式中、Ｒ１  は水素原子、低級アルキル基、炭素原子数３〜８のシクロアルキル基またはフェニル基を示し、該フェニル基はハロゲン原子または低級アルキル基で置換されていてもよい。Ｒ２  は水素原子、低級アルキル基、フェニル低級アルキル基またはフェニル基を示す。Ａは低級アルキレン基を示す。］
【０００８】
上記で規定した基は、本明細書全体を通して以下の意味を有することとする。低級アルキル基とはメチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ブチル、イソブチル、t-ブチル、ペンチル、イソペンチル、ヘキシル、イソヘキシル、３，３−ジメチルブチル等の１〜６個の炭素原子を有する直鎖または分枝のアルキルを示す。
【０００９】
シクロアルキル基とはシクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロヘキシル、シクロペンチル、シクロオクチル等の３〜８個の炭素原子を有するシクロアルキルを示す。
【００１０】
フェニル基は、ハロゲン原子（フッ素原子、塩素原子、臭素原子等）または低級アルキル基で置換されていてもよい。
【００１１】
低級アルキレン基とはメチレン、エチレン、トリメチレン、テトラメチレン、ペンタメチレン、ヘキサメチレン、メチルメチレン、ジメチルメチレン、エチルメチレン、プロピルメチレン、ブチルメチレン、メチルエチレン、ジメチルエチレン、エチルエチレン、プロピルエチレン、メチルトリメチレン等の１〜６個の炭素原子を有する直鎖または分枝のアルキレンを示す。
【００１２】
Ｒ２  は水素原子、低級アルキル基、フェニル低級アルキル基またはフェニル基である。
【００１３】
本発明における塩類とは医薬として許容される塩であれば特に制限はなく、ナトリウム、カリウム、カルシウム等のアルカリ金属またはアルカリ土類金属との塩などが挙げられる。
【００１４】
また、本発明化合物に幾何異性体または光学異性体が存在する場合には、それらの異性体も本発明の範囲に含まれる。
【００１５】
尚、本発明化合物は溶媒和物、例えば水和物の形態をとっていてもよい。
【００１６】
本発明化合物の好ましい例としては、一般式[I] で示される化合物において、各基が下記のものである化合物またはその塩類が挙げられる；
(1a)Ｒ１  が低級アルキル基またはフェニル基から選択される基を示す；
(2a)Ｒ２  が水素原子を示す；および／または
(3a)Ａが直鎖の低級アルキレン基を示す。
すなわち、
・一般式[I] で示される化合物において、上記(1a)の化合物またはその塩類、
・一般式[I] で示される化合物において、上記(2a)の化合物またはその塩類、
・一般式[I] で示される化合物において、上記(3a)の化合物またはその塩類、および
・一般式[I] で示される化合物において、上記(1a)、(2a)および(3a)の２つ以上の組み合わせからなる化合物またはその塩類である。
【００１７】
すなわち、
・一般式[I] で示される化合物において、上記(1a)の化合物またはその塩類、
・一般式[I] で示される化合物において、上記(2a)の化合物またはその塩類、
・一般式[I] で示される化合物において、上記(3a)の化合物またはその塩類、および
・一般式[I] で示される化合物において、上記(1a)、(2a)および(3a)の２つ以上の組み合わせからなる化合物またはその塩類である。
【００１８】
本発明化合物のより好ましい例としては、一般式[I] で示される化合物において、各基が下記のものである化合物またはその塩類が挙げられる；
(1b)Ｒ1 がフェニル基を示す；および／または
(2b)Ａがエチレン基を示す。
【００１９】
すなわち、
・一般式[I] で示される化合物において、上記(1b)の化合物またはその塩類、
・一般式[I] で示される化合物において、上記(2b)の化合物またはその塩類、および
・一般式[I] で示される化合物において、上記(1b)および(2b)の組み合わせからなる化合物またはその塩類である。
【００２０】
本発明化合物の最も好ましい具体例としては、３−［４−（２−フェニルアクリロイル）シクロヘキシル］プロピオン酸およびその塩類が挙げられる。
【００２１】
【化４】
0003733457.tif 000003
【００２２】
本発明は、また、上記一般式[I] の化合物の合成中間体である下記一般式[II]で示される化合物およびその塩類に関するものでもある。式[I] 中、Ｒ１  は低級アルキル基、炭素原子数３〜８のシクロアルキル基またはフェニル基を示し、該フェニル基はハロゲン原子または低級アルキル基で置換されていてもよい。Ｒ２  は水素原子、低級アルキル基、フェニル低級アルキル基またはフェニル基を示す。Ａは低級アルキレン基を示す。
【００２３】
【化５】
0003733457.tif 000004
【００２４】
本発明化合物[I] の代表的な合成ルートを下記に示す。
【００２５】
【化６】
0003733457.tif 000005
【００２６】
但し、上記合成ルートは代表的なルートを例示するものであって、全ての方法を示すものではない。具体的合成方法の詳細は後述の実施例で説明する。
【００２７】
上記ルートの合成方法を以下に詳しく説明する。
【００２８】
カルボン酸誘導体[III] を塩化チオニルで処理して対応する酸塩化物[IV]とし、この酸塩化物をグリニャール試薬[V] と縮合させ式[II]で表される化合物を得る。この化合物[II]を２級アミン存在下パラホルムアルデヒドとマンニッヒ反応により縮合した後、脱離反応により本発明化合物[I] を得る。
【００２９】
上記合成方法において、反応物質が分子内にエステル基を有する場合、このエステル基は常法により遊離酸基とすることもできる。
【００３０】
本発明化合物は文献未知の新規化合物であるが、その化学構造的特徴は、シクロヘキシル脂肪酸のシクロヘキサン環の４位にα，β−不飽和カルボニル基を導入したところにある。
【００３１】
従来の技術の項で記載したように、エタクリン酸は線維柱帯細胞に形態的変化を起こさせ、房水流出能を亢進することによって眼圧を下げる効果があることが報告されている（特公平７−１３０１３号公報参照）。エタクリン酸は、α，β−不飽和カルボニル基を有するフェノキシ酢酸誘導体であるが、本発明者等はこのエタクリン酸の化学構造に着目し、鋭意研究した結果、そのフェノキシ酢酸構造をシクロヘキシル脂肪酸に変換してなる本発明化合物が優れた眼圧降下効果を発揮することを見出し、さらにα，β−不飽和カルボニル基のα位にフェニル基を導入してなる化合物は、より優れた効果を発揮することを見出した。
【００３２】
薬物の投与方法としては、活性体そのものを投与する方法と共に、生体内で分解し、活性体に変換される形、即ちプロドラッグの形で本発明化合物を投与する方法も汎用されている。本発明化合物においても、分子中に遊離酸に変換されるエステル基を含む場合、エステルをそのまま投与されてもよい。
【００３３】
本発明化合物の有用性を調べるべく、本発明化合物の線維柱帯細胞の形態に及ぼす作用を検討した。詳細については後述の薬理試験の項で示すが、本発明化合物を添加することによる線維柱帯細胞の形態変化を画像解析により検討した結果、本発明化合物は線維柱帯細胞に対し優れた細胞形態変化作用を示した。従って、本発明化合物は優れた眼圧下降作用を有すると考えられる。
【００３４】
本発明化合物は主として非経口投与されるが、経口でも投与することができる。投与剤型としては、点眼剤、注射剤、錠剤、カプセル剤、顆粒剤等が挙げられ、それらの製剤は汎用技術を用いて調製することができる。例えば、点眼剤は、塩化ナトリウム、濃グリセリンなどの等張化剤；リン酸ナトリウム、酢酸ナトリウムなどの緩衝化剤；ポリオキシエチレンソルビタンモノオレート、ステアリン酸ポリオキシ４０、ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油などの界面活性剤；クエン酸ナトリウム、エデト酸ナトリウムなどの安定化剤；塩化ベンザルコニウム、パラベンなどの防腐剤などを必要に応じて用い調製することができる。ｐＨは眼科製剤に許容される範囲内にあればよいが、４〜８の範囲が好ましい。また、錠剤、カプセル剤、顆粒剤等の経口剤は、必要に応じて、乳糖、デンプン、結晶セルロース、植物油等の増量剤；ステアリン酸マグネシウム、タルクなどの滑沢剤
；ヒドロキシプロピルセルロース、ポリビニルピロリドンなどの結合剤；カルボキシメチルセルロースカルシウムなどの崩壊剤；ヒドロキシプロピルメチルセルロース、マクロゴール、シリコン樹脂などのコーティング剤；ゼラチン皮膜剤を用いて調製することができる。
【００３５】
本発明化合物の投与量は症状、年令、剤型等によって適宜選択できるが、点眼剤であれば０．００１〜３％（ｗ／ｖ）のものを１日１回〜数回点眼すればよく、経口剤であれば通常１日当り１ｍｇ〜１０００ｍｇを１回または数回に分けて投与すればよい。
【００３６】
以下に、本発明化合物の製造例、製剤例および薬理試験の結果を示すが、これらの例は本発明をよりよく理解するためのものであり、本発明の範囲を限定するものではない。
【００３７】
【実施例】
［製造例］
参考例１
３−（４−カルボキシシクロヘキシル）プロピオン酸エチルエステル（参考化合物１−１）
【化７】
0003733457.tif 000006
【００３８】
窒素雰囲気下、４−カルボキシ桂皮酸エチルエステル（５．０ｇ）のエタノール（２３ｍｌ）−テトラヒドロフラン（２３ｍｌ）混合溶媒中の溶液に５％ロジウム／アルミナ（１．１ｇ）を加えたのち、水素雰囲気下（４．０ｋｇｆ／ｃｍ2 ）室温で４日間撹拌する。反応液をセライト濾過し、濾液を減圧濃縮し、標記化合物（参考化合物１−１）を得る。
【００３９】
ＩＲ（Ｆｉｌｍ，ｃｍ-1）２９３０，１７３５，１７０２，１１９６
【００４０】
実施例１
３−（４−ブチリルシクロヘキシル）プロピオン酸エチルエステル（化合物１−１）
【化８】
0003733457.tif 000007
【００４１】
窒素雰囲気下、３−（４−カルボキシシクロヘキシル）プロピオン酸エチルエステル（参考化合物１−１、２．０ｇ）のクロロホルム（４ｍｌ）溶液に塩化チオニル（３．２ｍｌ）を滴下したのち、ジメチルホルムアミド（１滴）を加え８０分間加熱還流する。反応液を減圧濃縮し、生成した酸クロライドを含む残留物を得る。窒素雰囲気下、残留物を無水テトラヒドロフラン（２６ｍｌ）に溶解し、ドライアイス／メタノールで冷却する。塩化プロピルマグネシウムの２．０Ｍテトラヒドロフラン溶液（４．４ｍｌ）を攪拌下に滴下する。滴下終了後１０分間ドライアイス／メタノールで冷却し、更に室温で３０分間撹拌を続ける。反応液に１０％クエン酸水溶液を加えたのち、エーテルで抽出する。有機層を水、飽和食塩水で洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥後減圧濃縮する。得られる残留物をシリカゲルカラムクロマトで精製し、標記化合物（化合物１−１、９００ｍｇ）を得る。
【００４２】
ＩＲ（Ｆｉｌｍ，ｃｍ-1）２９３１，１７３３，１７０８，１１７４
【００４３】
実施例１と同様の方法を用いて以下の化合物が得られる。
【００４４】
・３−［４−（フェニルアセチル）シクロヘキシル］プロピオン酸エチルエステル（化合物１−２）
【００４５】
ＩＲ（Ｆｉｌｍ，ｃｍ-1）２９２８，１７３２，１７１３，１６０２，１４９５，１４５３，１１７４
【００４６】
・３−［４−［（４−フルオロフェニル）アセチル］シクロヘキシル］プロピオン酸エチルエステル（化合物１−３）
【００４７】
・３−［４−（４−トリルアセチル）シクロヘキシル］プロピオン酸エチルエステル（化合物１−４）
【００４８】
・３−［４−（シクロヘキシルアセチル）シクロヘキシル］プロピオン酸エチルエステル（化合物１−５）
【００４９】
実施例２
３−（４−ブチリルシクロヘキシル）プロピオン酸（化合物２−１）
【化９】
0003733457.tif 000008
【００５０】
窒素雰囲気下、３−（４−ブチリルシクロヘキシル）プロピオン酸エチルエステル（化合物１−１、９００ｍｇ）のエタノール（１０ｍｌ）溶液に１Ｎ水酸化ナトリウム水溶液（７．１ｍｌ）を加え、全体を室温で１時間撹拌する。反応液を１Ｎ塩酸の添加により酸性とし、酢酸エチルで抽出する。有機層を飽和食塩水で洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥後減圧濃縮する。得られる析出物を濾取し、標記化合物（化合物２−１、３７３ｍｇ）を結晶として得る。
【００５１】
ｍｐ  ８２．５〜８７．０℃
ＩＲ（ＫＢｒ，ｃｍ-1）２９２４，１７０７，１４５０，１２８１，９４２
【００５２】
実施例２と同様の方法を用いて以下の化合物が得られる。
【００５３】
・３−［４−（フェニルアセチル）シクロヘキシル］プロピオン酸（化合物２−２）
ｍｐ  １１４．８〜１１８．３℃
ＩＲ（ＫＢｒ，ｃｍ-1）２９３２，１７０７，１６９７，１４９６，９６３
【００５４】
・３−［４−［（４−フルオロフェニル）アセチル］シクロヘキシル］プロピオン酸（化合物２−３）
【００５５】
・３−［４−（４−トリルアセチル）シクロヘキシル］プロピオン酸（化合物２−４）
【００５６】
・３−［４−（シクロヘキシルアセチル）シクロヘキシル］プロピオン酸（化合物２−５）
【００５７】
実施例３
３−［４−（２−エチルアクリロイル）シクロヘキシル］プロピオン酸（化合物３−１）
【化１０】
0003733457.tif 000009
【００５８】
３−（４−ブチリルシクロヘキシル）プロピオン酸（化合物２−１、５００ｍｇ）のジオキサン（４４ｍｌ）溶液を耐圧管に入れ、同溶液にパラホルムアルデヒド（２６５ｍｇ）、ジメチルアミン塩酸塩（７２１ｍｇ）、酢酸（２滴）および無水硫酸マグネシウム（３ｇ）を加えて全体を１２０℃に加熱しながら３日間撹拌する。放冷後、反応液を１０％クエン酸水溶液の添加により酸性とし酢酸エチルで抽出する。有機層を飽和食塩水で洗浄、無水硫酸マグネシウムで乾燥後減圧濃縮する。得られる残留物をシリカゲルカラムクロマトで精製し、標記化合物（化合物３−１、１３０ｍｇ）を結晶として得る。
【００５９】
ｍｐ  ８１．０〜８４．０℃
ＩＲ（ＫＢｒ，ｃｍ-1）２９３６，１６９９，１６６６，１４５４，１３００，９６４，９４７
【００６０】
実施例３と同様の方法を用いて以下の化合物が得られる。
【００６１】
・３−［４−（２−フェニルアクリロイル）シクロヘキシル］プロピオン酸（化合物３−２）
ｍｐ  １１３．５〜１１４．５℃
ＩＲ（ＫＢｒ，ｃｍ-1）２９３４，１６９５，１６６０，１５７２，９６２
【００６２】
・３−［４−［２−（４−フルオロフェニル）アクリロイル］シクロヘキシル］プロピオン酸（化合物３−３）
【００６３】
・３−［４−［２−（４−トリル）アクリロイル］シクロヘキシル］プロピオン酸（化合物３−４）
【００６４】
・３−［４−（２−シクロヘキシルアクリロイル）シクロヘキシル］プロピオン酸（化合物３−５）
【００６５】
［製剤例］
本発明化合物の点眼剤および経口剤の製剤例を以下に示す。
【００６６】
１）  点眼剤
１０ｍｌ中
本発明化合物                                        １ｍｇ
濃グリセリン                                    ２５０ｍｇ
ポリソルベート８０                              ２００ｍｇ
リン酸二水素ナトリウム二水和物                    ２０ｍｇ
１Ｎ水酸化ナトリウム                                  適量
１Ｎ塩酸                                              適量
滅菌精製水                                            適量
【００６７】
２）  錠剤
１００ｍｇ中
本発明化合物                                        １ｍｇ
乳糖                                          ６６．４ｍｇ
トウモロコシデンプン                              ２０ｍｇ
カルボキシメチルセルロース  カルシウム              ６ｍｇ
ヒドロキシプロピルセルロース                        ６ｍｇ
ステアリン酸マグネシウム                        ０．６ｍｇ
【００６８】
【発明の効果】
［薬理試験］
本発明化合物の緑内障に対する有用性を調べるため、本発明化合物が線維柱帯細胞の形態に及ぼす作用について検討した。
【００６９】
１）線維柱帯細胞の形態に及ぼす作用
薬物の培養線維柱帯細胞の形態に及ぼす作用を評価することで、房水流出を亢進させる作用を有する薬物を見出し得る可能性が報告されている（Invest. Ophthalmol. Vis. Sci., 33, 2631-2640 (1992)  ）。そこで上記文献に記載された 方法に準じて本発明化合物のウシ培養線維柱帯細胞の形態に及ぼす作用を検討した。
【００７０】
（実験方法）
本発明化合物を添加することによるウシ培養線維柱帯細胞の形態変化を、画像解析により定量評価した。
【００７１】
［細胞の調製］
ウシ胎児血清（１０％）、アンフォテリシンＢ（２．５μｇ／ｍｌ）およびゲンタマイシン（５０μｇ／ｍｌ）を添加したほ乳類細胞培養基本培地Ｄ−ＭＥＭ（Dulbecco′ s  Modified  Eagle Medium 、Gibco 社製）で培養したウシ線維柱帯細胞（継代数２〜５）を、後述の薬物処理２４時間前に、トリプシン−ＥＤＴＡ溶液（０．０５％トリプシン、０．５３ｍＭ  ＥＤＴＡ・４Ｎａ）で処理して、２４穴プレートに播種（１０4 cells ／well）した。後述の薬物処理１２時間前にリン酸緩衝生理食塩液による洗浄を行った後、培地をアンフォテリシンＢ（２．５μｇ／ｍｌ）およびゲンタマイシン（５０μｇ／ｍｌ）を添加したＤ−ＭＥＭ（以下培地Ａとする）に交換した。後述の薬物処理１時間前に、上記のように調製した細胞から細胞同士が接触していない細胞を選び実験に用いた。
【００７２】
［被験化合物溶液の調製］
被験化合物をジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）に溶解した後、得られた溶液に培地Ａを加えて全体を濾過滅菌し、さらに培地Ａを加えて被験化合物を所定の濃度に希釈した。この希釈液を５％炭酸ガス雰囲気下、後述の薬物処理１時間前から３７℃で１時間恒温保持して被験化合物溶液を調製した。
【００７３】
［測定方法］
まず、薬物処理１時間前の前記細胞を自動位置検出装置（well-scanner）を用いて写真撮影した。次いで、細胞の培地を被験化合物溶液に交換して細胞を薬物処理し、５％炭酸ガス雰囲気下、３７℃で３時間インキュベートした後、well-scannerを用いて薬物処理１時間前に撮影したのと同じ細胞を写真撮影した。
【００７４】
（画像解析）
撮影した細胞像を写真からＣＣＤカメラ（HAMAMATU社製）にて、画像解析システムに取り込んだ。取り込んだ細胞像の輪郭をトレースし、細胞像の面積を測定した。被験化合物の線維柱帯細胞に及ぼす形態変化の程度は、下記の面積変化率（％）で示す。
【００７５】
【式１】
0003733457.tif 000010
Ａ：薬物処理前の細胞面積
Ｂ：薬物処理後の細胞面積
【００７６】
（結果）
表１に試験結果の一例として、線維柱帯細胞の細胞面積を５０％縮小させるのに要した濃度（ＥＣ50）を示す。また、対照薬物としてエタクリン酸を用いた結果も合わせて示す。
【００７７】
【表１】
0003733457.tif 000011
【００７８】
表１から分かるように、本発明化合物は線維柱帯細胞に対し、優れた細胞形態変化作用を有することが認められる。これらの効果は、公知の比較対照薬物であるエタクリン酸に比べて格段に優れたものであった。
【００７９】
以上のことから、本発明化合物は優れた細胞形態変化作用を有しており、眼圧下降剤、即ち緑内障の治療剤として有用であることが認められる。