(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
スキンケアのための化粧用組成物であって、
（ａ）１０００Ｄａ以下のググリピドの低分子量画分の抗皮脂剤０．０００１重量％から１０重量％、および
（ｂ）化粧用として許容可能な賦形剤を含む化粧用組成物。
【請求項２】
脂性肌状態を軽減または予防する化粧方法であって、
（ａ）１０００Ｄａ以下のググリピドの低分子量画分の抗皮脂剤０．０００１重量％から１０重量％、および
（ｂ）化粧用として許容可能な賦形剤を含む組成物を皮膚に塗布することを含む方法。
【請求項３】
皮脂細胞からの皮脂分泌を減少または予防する化粧方法であって、
（ａ）１０００Ｄａ以下のググリピドの低分子量画分の抗皮脂剤０．０００１重量％から１０重量％、および
（ｂ）化粧用として許容可能な賦形剤を含む組成物を皮膚に塗布することを含む方法。
【請求項４】
フリーラジカル活性から皮膚を保護する化粧方法であって、
（ａ）１０００Ｄａ以下のググリピドの低分子量画分の抗皮脂剤０．０００１重量％から１０重量％、および
（ｂ）化粧用として許容可能な賦形剤を含む組成物を皮膚に塗布することを含む方法。
【請求項５】
ググリピドをコミフォーラ・ムクル（Ｃｏｍｍｉｐｈｏｒａ．ｍｕｋｕｌ）から得る、請求の範囲第２、３または４項の方法。
【請求項６】
脂性肌状態の軽減または予防、およびフリーラジカルからの皮膚保護を同時に行うための化粧用組成物であって、ググリピド、ググリピドのアルコール性画分、ググリピドの低分子量画分およびその混合物からなる群から選択される抗酸化／抗皮脂剤を含む化粧用組成物。
【発明の詳細な説明】
発明の分野
本発明は、皮脂細胞からの皮脂分泌を抑制または予防するためと、脂性肌状態を抑制または予防するためと、およびフリーラジカル活性から皮膚を保護するための方法および組成物に関する。
発明の背景
皮脂は、皮脂細胞（ｓｅｂａｃｙｔｅ）（皮膚の皮脂腺の細胞）によって産生され、次いで、皮表に分泌される皮膚油である。皮表上の過剰量の皮脂は、「脂性肌」として知られる状態をもたらす。脂性肌には、てらてらとして、望ましくない外観および不快な触覚を伴う。過剰な皮脂分泌の抑制を試みる多くの方法および組成物があるが、いずれも全体的に満足な結果は得られていない。
皮膚中のフリーラジカルの生成は、皮脂分泌と関連していないように思われる。自然の代謝経路の一部として、皮膚で低濃度のフリーラジカルが生成される。フリーラジカルの濃度は、ＵＶ照射およびその他の環境オキシダント、例えば汚染およびたばこの煙に応じて増加する。フリーラジカル濃度の増加は、皮膚細胞中の脂質の過酸化反応および細胞傷害を引き起こし、堅さおよび弾性の喪失、しわ、褪色、加齢斑および乾燥を伴う皮膚の早発性老化をもたらす。ビタミンＥ（アルファ−トコフェロール）などの抗酸化剤は、皮膚中のフリーラジカル濃度を低下させる。
２つ以上の利益をもたらす化粧用活性成分は、製造者および消費者のいずれから見ても極めて望ましい。
グガル（ｇｕｇｇａｌ）は、Ｃｏｍｍｉｐｈｏｒａ  ｍｕｋｕｌまたはＣｏｍｍｉｐｈｏｒａ  Ｗｉｇｈｔｉｉという植物のゴム／樹脂から得られる。グガルは、テルペン類、ステロール類、エステル類および高級アルコール類の複雑な混合物を含有する。樹脂の酢酸エチル抽出物は、「ググリピド（ｇｕｇｕｌｉｐｉｄ）」または「グガル脂質」として知られる油性の樹脂状物質である。ググリピドは、肥満および上昇したコレステロール値の治療に医薬として用いられてきた。ググリピドの医薬活性は、２種類の既知ケトン性ステロイド（ググルステロン（ｇｕｇｇｕｌｓｔｅｒｏｎｅ））によるものである。
Ｂｏｍｂａｒｄｅｌｌｉ他（米国特許５，２７３，７４７）は、ググリピドおよびそのググルステロンを豊富に含む画分の抗炎症活性、および良性前立腺肥大および座瘡の治療におけるそれらの使用を開示している。これに関して、皮脂産生の増加は座瘡の形成をもたらす多くの要因の１つであるが、抗座瘡剤は必ずしも抗皮脂活性を有しないことに注意をすることが重要である。例えば、過酸化ベンゾイルおよびサリチル酸は確立された抗座瘡剤であるが、皮脂産生を低下させない。Ｃｕｎｌｉｆｆｅ、他「Ｔｏｐｉｃａｌ  Ｂｅｎｚｏｙｌ  Ｐｅｒｏｘｉｄｅ  Ｉｎｃｒｅａｓｅｓ  Ｔｈｅ  Ｓｅｂｕｍ  Ｅｘｃｒｅｔｉｏｎ  Ｒａｔｅ  Ｉｎ  Ｐａｔｉｅｎｔｓ  Ｗｉｔｈ  Ａｃｎｅ」、Ｂｒｉｔｉｓｈ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｄｅｒｍａｔｏｌｏｇｙ、１０９巻、５７７〜５７９ページ、１９８３年；Ｗｉｌｌｉａｍ  Ｊ．Ｃｕｎｌｉｆｆｅ、「Ａｃｎｅ」、２５６ページ、Ｍａｒｔｉｎ  Ｄｕｎｉｔｚ  Ｌｔｄ．、１９８９年を参照されたい。下記の比較実施例３も参照されたい。さらに、Ｂｏｍｂａｒｄｅｌｌｉによって記述されているググルステロンを豊富に含む画分は、酢酸エチルによって得られたが、分子量によって化合物を分離していない。対照的に、本発明では、アルコール性画分および／または低分子量画分を用いるのが好ましい。
Ｂｉｓｓｅｔｔ他（米国特許４，８４７，０７１および４，８４７，０６９）およびＰｉａｚｚａ他（米国特許５，５２１，２２３）は、天然の抗炎症剤としてグガルを含有する光防護およびしわ防止の組成物を開示している。抗酸化経路によって抗炎症性を示す化合物もあるが、抗炎症機構のすべてが抗酸化媒介ではなく、抗酸化機構のすべてが抗炎症媒介でもない。言い換えれば、抗炎症および抗酸化作用はかならずしも互いに随伴するものではない。
上述の技術分野は、抗皮脂および抗酸化活性双方を含む作用物質の必要性に対処していない。この技術分野はグガルまたはググリピドまたはその画分の抗皮脂または抗酸化活性のいずれも開示していない。さらに、ググリピドの画分に関する限り、当技術分野はググルステロンを豊富に含む（酢酸エチル）画分の調製および使用しか開示していない。アルコール性画分または低分子量画分の調製、使用および活性は開示されていない。
発明の概要
第１の態様において、本発明には、化粧用として許容可能な賦形剤中にググリピドおよび／またはそのアルコール性画分および／またはその低分子量画分を含む組成物を皮膚に塗布することによって、脂性肌状態、特に顔面領域の抑制または予防する化粧方法が含まれる。
本発明の第２の態様には、化粧用として許容可能な賦形剤中にググリピドおよび／またはそのアルコール性画分および／またはその低分子量画分を含む組成物を皮膚に塗布することによって、皮脂細胞からの皮脂分泌を減少させる、予防するまたは抑制する化粧方法が含まれる。
本発明の別の態様は、化粧用として許容可能な賦形剤中にググリピドおよび／またはそのアルコール性画分および／またはその低分子量画分を含む組成物を皮膚に塗布することによって、フリーラジカル活性から皮膚を保護する（すなわち、皮膚中の酸化ストレスを軽減する）化粧方法である。
さらに、本発明の別の態様は、ググリピドおよび／またはそのアルコール性画分および／またはその低分子量画分の単一活性作用物質を用い、皮脂分泌を抑制または予防すると同時に、フリーラジカル損傷から皮膚を保護する化粧方法である。
さらに本発明は、ググリピドおよび／またはそのアルコール性画分および／またはその低分子量画分の使用を提供し、脂性肌状態の抑制または予防、皮膚中の皮脂細胞からの皮脂分泌の減少、予防または抑制、および／またはフリーラジカル活性からの皮膚の保護（すなわち、皮膚中の酸化ストレスの軽減）において、これらの作用物質を含む化粧用組成物の使用も提供する。
さらに本発明は、ググリピドおよび／またはそのアルコール性画分および／またはその低分子量画分の使用を提供し、脂性肌状態の抑制または予防と同時にフリーラジカル傷害からの皮膚の保護における、これらの作用物質を含む化粧用組成物の使用も提供する。
さらに、本発明の別の態様は、ググリピドのアルコール性画分の製造方法である。
さらに、本発明の別の態様は、スキンケアのための化粧用組成物、すなわち、化粧用として許容可能な賦形剤中にググリピドのアルコール性画分または低分子量画分を含む組成物である。
本発明の方法および組成物は、皮脂細胞からの皮脂分泌の抑制、皮脂抑制の改善および皮膚の手ざわりの改善をもたらし、てらてらおよびねばねばを予防すると同時に、皮膚がフリーラジカル活性で損傷するのを予防し、それによってしわおよび老化した皮膚の外観を軽減し、皮膚色の改善、光老化皮膚の外観の改善、皮膚の輝きおよび透明感および仕上げの改善、および全体に健康で若々しい皮膚の外観をもたらす。
発明の詳細な説明
本明細書中で用いるように、「皮膚」という用語には、顔面、頸、胸、背中、および頭の皮膚が含まれる。
ググリピドおよびその非ググルステロン画分：
本明細書中で用いる「ググリピド」という用語は、Ｃ．ｍｕｋｕｌまたはＣ．ｗｉｇｈｔｉｉという木から得られるゴム／樹脂グガルの酢酸エチル抽出物を意味する。本明細書中で用いる「アルコール性画分」という用語は、ググリピドの高極性、非水性画分を意味する。アルコール性画分は、ググリピドの非石油エーテル画分であることが好ましい。
皮質分泌を抑制し、脂性肌を抑制し、および／またはフリーラジカルから皮膚を保護する発明の方法は、ググリピドおよび／またはそのアルコール性画分および／またはその低分子量画分を用いる。本発明の一部として、ググリピドおよび／またはそのアルコール性画分および／またはその低分子量画分は、スキンケアに二重の恩恵、すなわち抗皮脂および抗酸化活性双方をもたらすまれな性質を有することが分かった。Ｃ．ｍｕｋｕｌのグガルの水性抽出物は、Ｃ．ｍｕｋｕｌのグガルの酢酸エチル抽出物で観察される抗皮脂および／または抗酸化活性をほとんどまたはまったく有していないことが分かった。ググリピドの抗皮脂および／または抗酸化活性は、Ｂｏｍｂａｒｄｅｌｌｉによって記述されたググルステロン豊富な酢酸エチル画分ではなく、ググリピドのアルコール性画分または低分子量画分に濃縮されていることも分かった。
さらに、ググリピドの低分子量画分は、ググリピドのいずれの画分、アルコール性画分または高分子量画分よりも粘性が低く、色調もよいことから、製剤化が容易であることが分かった。低分子量画分は、アルコール性画分に比べて高収率で得ることができる。
ググリピドは、下記の供給元から入手することができる；
Ｃ．ｍｕｋｕｌ抽出物；
Ｉｎｄｅｎａ（８０  Ｅ  Ｒｏｕｔｅ  ４、Ｐａｒａｍｕｓ、ＮＪ、０７６５２）
Ｐｔ．Ｃｏｓｍｅｔｉｑｕｅ  Ｊａｖａ、Ｂｏｇａｒ（Ｃａｍｐｏ  Ｒ＆Ｄ、Ｓｉｎｇａｐｏｒｅ）（Ｃ．ｗｉｇｈｔｉｉ抽出物も入手可能）。
本発明の方法および組成物は、０．０００１から１０重量％、好ましくは０．００１から３重量％、最も好ましくは０．０１から２重量％のググリピドまたはググリピドのアルコール性画分および／または低分子量画分を用いることができる。
アルコール性画分を用いるときに有利なのは、ググリピドより少ない量で、より多量のググリピド自体によって得られるのと同様の活性を得ることができることである。
アルコール性画分は、ググリピドまたは、好ましくは、ググリピドの非石油エーテル画分を分離する（例えば、高極性、非水性溶媒による抽出または溶離）ことにより得ることができる。代表的な適当な溶媒は、アルコール類、好ましくは短鎖（すなわち、６炭素原子未満）アルコール類、すなわち、メタノール、エタノール、プロパノール、イソプロパノール、ブタノール、２−ブタノール、１−ペンタノール、２−ペンタノール、３−ペンタノール、１−ヘキサノールである。得られた画分は、例えば、蒸発または凍結乾燥で乾燥し、活性量を濃縮することが好ましい。本発明または組成物に用いるアルコール性画分は、通常、画分の９９重量％未満のアルコールを含むが、２５％未満が好ましく、５％未満が最も好ましい。
アルコール性画分は、Ｂｏｍｂａｒｄｅｌｌｉによって記述されたシスググルステロン（ググルステロンＥとしても知られている）をほとんど、あるいは全く含まない。本発明の一部として、予想と違い、シス−ググルステロンは、抗酸化または抗皮脂活性のいずれももたらさないことが分かった。したがって、ググリピドの抗皮脂および／または抗酸化活性は、シス−ググルステロン以外の活性化合物によるもので、ググリピドのアルコール性画分に濃縮されていることが分かる。本発明によるアルコール性画分は、画分に対して０．１重量％未満のシス−ググルステロンを含み、０．０５重量％未満のシス−ググルステロンであることが好ましい。画分中のググルステロン量は、ＨＰＬＣ、質量分析法またはＴＬＣでチェックすることができる。
低分子量画分は、ググリピドを極性溶媒中に分散または溶解することによって得られる。代表的な適当な溶媒は、アルコール類、好ましくは短鎖（すなわち、６炭素原子未満）アルコール類、すなわち、メタノール、エタノール、プロパノール、イソプロパノール、ブタノール、２−ブタノール、１−ペンタノール、２−ペンタノール、３−ペンタノール、１−ヘキサノールである。次いで、これを限外ろ過により分離し、１，０００Ｄａ以下の画分、好ましくは８００Ｄａ以下および最適には５００Ｄａ以下の画分を得ることができる。次いで、例えば、緩やかな加熱／蒸気浴により、窒素中で溶媒を蒸発させることができる。
本発明の好ましい実施形態において、ググリピドの低分子量画分を用い、製剤化が非常に容易になる（色の改善および低粘度）。低分子量画分は、アルコール性画分よりも高収率で得られる。
化粧用として許容可能な賦形剤：
本発明による組成物は、組成物が皮膚に塗布されたとき容易に分布するように、ググリピドおよび／またはアルコール性画分および／またはその低分子量画分の希釈剤、分散剤または担体として組成物中で働く化粧用として許容可能な賦形剤も含む。
賦形剤は、水性、無水またはエマルジョンとすることができる。組成物は、水性またはエマルジョン、特に油中水型または水中油型エマルジョンであることが好ましい。水が存在するとき、その量は５から９９重量％の範囲にあり、２０から７０重量％が好ましく、３５から６０重量％が最も望ましい。
水とともに、比較的揮発性の溶媒も、本発明の組成物中で担体として機能することができる。１価Ｃ1〜Ｃ3アルカノール類が最も好ましい。このようなアルカノール類には、エチルアルコール、メチルアルコールおよびイソプロピルアルコールが含まれる。１価アルカノールの量は、１から７０重量％の範囲にあり、１０から５０重量％が好ましく、１５から４０重量％が最も望ましい。ググリピドのアルコール性画分のアルコール含有量は、これらの量には含まれない。
皮膚軟化剤も化粧用として許容可能な担体として機能することができる。これらはシリコーン油および合成エステル類の形とすることができる。皮膚軟化剤の量は、０．１から５０重量％の範囲とすることができ、１および２０重量％の間が好ましい。
シリコーン油は、揮発性および非揮発性の種類に分けることができる。本明細書中で用いる「揮発性」という用語は、常温で測定可能な蒸気圧を有する物質を意味する。揮発性シリコーン油は、３から９個、好ましくは４から５個のケイ素原子を含む環状または直鎖ポリジメチルシロキサン類から選択するのが好ましい。直鎖揮発性シリコーン材料は通常、２５℃で５センチストーク未満の粘度を有し、一方、環状材料は通常、１０センチストーク未満の粘度を有する。皮膚軟化剤材料として有用な非揮発性シリコーン油には、ポリアルキルシロキサン類、ポリアルキルアリールシロキサン類およびポリエーテルシロキサン共重合体が含まれる。本明細書中で有用な本質的に非揮発性のポリアルキルシロキサン類には、例えば、２５℃で５から１００，０００センチストークの粘度を有するポリジメチルシロキサン類が含まれる。本組成物に有用な好ましい非揮発性皮膚軟化剤には、１０から４００センチストークの粘度を有するポリジメチルシロキサン類がある。
エステル皮膚軟化剤としては、
（１）１０から２０個の炭素原子を有する脂肪酸のアルケニルまたはアルキルエステル類。その例には、ネオペンタン酸イソアラキジル、イソノナン酸イソノニル、ミリスチン酸オレイル、ステアリン酸オレイル、およびオレイン酸オレイルが含まれる。
（２）エトキシル化脂肪アルコール類の脂肪酸エステルなどのエーテル−エステル類。
（３）多価アルコールエステル類。エチレングリコールモノおよびジ脂肪酸エステル類、ジエチレングリコールモノおよびジ脂肪酸エステル類、ポリエチレングリコール（２００〜６０００）モノおよびジ脂肪酸エステル類、プロピレングリコールモノおよびジ脂肪酸エステル類、ポリプロピレングリコール２０００モノオレイン酸エステル、ポリプロピレングリコール２０００モノステアリン酸エステル、エトキシル化プロピレングリコールモノステアリン酸エステル、グリセリルモノおよびジ脂肪酸エステル類、ポリグリセロールポリ脂肪酸エステル類、エトキシル化グリセリルモノステアリン酸エステル、１，３−ブチレングリコールモノステアリン酸エステル、１，３−ブチレングリコールジステアリン酸エステル、ポリオキシエチレンポリオール脂肪酸エステル、ソルビタン脂肪酸エステル類、およびポリオキシエチレンソルビタン脂肪酸エステル類が、満足のいく多価アルコールエステル類である。
（４）蜜ろう、鯨ろう、ミリスチン酸ミリスチル、ステアリン酸ステアリルおよびベヘン酸アラキジル。
（５）コレステロール脂肪酸エステル類を例とするステロールエステル類。
１０から３０個の炭素原子を有する脂肪酸も、本発明の組成物の化粧用として許容可能な担体として含むことができる。この範疇の例には、ペラルゴン酸、ラウリル酸、ミリスチン酸、パルミチン酸、ステアリン酸、イソステアリン酸、ヒドロキシステアリン酸、オレイン酸、リノール酸、リシノレイン酸、アラキドン酸、ベヘン酸およびエルカ酸がある。
多価アルコールタイプの湿潤剤も、本発明の組成物中の化粧用として許容可能な担体またはその一部として用いることができる。皮膚軟化剤の有効性を増す湿潤助剤は、鱗屑化を減少し、厚くなった鱗屑の除去を促進し、皮膚感触を改善する。代表的な多価アルコール類には、グリセロール、ポリアルキレングリコール類およびより好ましくは、プロピレングリコール、ジプロピレングリコール、ポリプロピレングリコール、ポリエチレングリコールおよびその誘導体類、ソルビトール、ヒドロキシプロピルソルビトール、ヘキシレングリコール、１，３−ブチレングリコール、１，２，６−ヘキサントリオール、エトキシル化グリセロール、プロポキシル化グリセロールおよびその混合物を含むアルキレンポリオール類およびそれらの誘導体類が含まれる。最良の結果を得るためには、湿潤剤はプロピレングリコールであることが好ましい。湿潤剤の量は、組成物の０．５から３０重量％の間のどこかの範囲にあり、１および１５重量％の間であることが好ましい。
増粘剤も、本発明による組成物の化粧用として許容可能な担体の一部として用いることができる。代表的な増粘剤には、架橋アクリル酸エステル類（例えば、Ｃａｒｂｏｐｏｌ  ９８２）、疎水性修飾アクリル酸エステル類（例えば、Ｃａｒｂｏｐｏｌ  １３８２）、セルロース性誘導体類および天然ゴム類が含まれる。有用なセルロース性誘導体類には、ナトリウムカルボキシメチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシエチルセルロース、エチルセルロースおよびヒドロキシメチルセルロースがある。本発明に適当な天然ゴム類には、グアー、キサンタン、菌核、カラゲナン、ペクチンおよびこれらのゴム類の組合せが含まれる。増粘剤の量は、０．０００１から５重量％の範囲とすることができ、通常０．００１から１重量％であり、０．０１から０．５重量％が最も望ましい。
水、溶媒類、シリコーン類、エステル類、脂肪酸類、湿潤剤および／または増粘剤全体で、１から９９．９重量％、好ましくは８０から９９重量％の量で、化粧用として許容可能な担体を構成する。
任意選択の皮膚に有益な材料および化粧用助剤：
油および油状材料が、エマルジョンとともに存在し、用いる乳化剤の平均親水−親油バランス（ＨＬＢ）に大きく左右されて油中水型または水中油型エマルジョンを与えることができる。
界面活性剤も、本発明の化粧用組成物中に存在することができる。界面活性剤の全濃度は、組成物の０．１から４０重量％の範囲にあり、１から２０重量％が好ましく、１から５重量％が最も望ましい。界面活性剤は、陰イオン性、非イオン性、陽イオン性および両性活性剤からなる群から選択することができる。特に好ましい非イオン性界面活性剤は、疎水物質１モル当たり２から１００モルのエチレンオキシドまたはプロピレンオキシドと縮合したＣ10〜Ｃ20脂肪アルコールまたは脂肪酸疎水物質を有する界面活性剤；２から２０モルのアルキレンオキシドと縮合したＣ2〜Ｃ10アルキルフェノール類；エチレングリコールのモノおよびジ脂肪酸エステル類；脂肪酸モノグリセリド；ソルビタン、モノおよびジＣ8〜Ｃ20脂肪酸類；ブロック共重合体（エチレンオキシド／プロピレンオキシド）；およびポリオキシエチレンソルビタンならびにその組合せである。アルキルポリグリコシド類および糖類脂肪酸アミド類（例えば、メチルグルコンアミド類）も適当な非イオン性界面活性剤である。好ましい陰イオン性界面活性剤には、セッケン、アルキルエーテル硫酸塩およびスルホン酸塩類、アルキル硫酸塩類およびスルホン酸塩類、アルキルベンゼンスルホン酸塩類、アルキルおよびジアルキルスルホコハク酸塩、Ｃ8〜Ｃ20アシルイセチオン酸塩、アシルグルタミン酸塩、Ｃ8〜Ｃ20アルキルエーテルリン酸塩およびその組合せが含まれる。
様々なタイプの他の活性成分が本発明の化粧用組成物中に存在してもよい。活性成分は、皮膚軟化剤以外、および単に組成物の物理的特性を改善する成分以外の皮膚に有益な作用物質と定義される。この範疇に限定されないが、一般的例には、抗座瘡剤、追加の抗皮脂剤、および日焼け止めが含まれる。
抗座瘡剤には、過酸化ベンゾイル（２０重量％まで含むことができる）、レチノイド類（通常、０．０２５％〜０．０５％）、サリチル酸（通常２重量％まで）、およびイオウ（８重量％まで）含まれるが、これらに限定されるものではない。
他の抗皮脂活性成分を含むことができるが、１０重量％までの量のサリチル酸トリデシル（または亜鉛ピリフィオン（ｐｙｒｉｐｈｉｏｎｅ））が最も好ましい。
レチノールまたはそのエステル類が含まれ、様々な恩恵を皮膚にもたらすことができる。適当なレチノールエステル類には、レチノールパルミチン酸エステル、レチノール酢酸エステル、およびレチノールリノール酸エステルが含まれる。特にレチノールリノール酸エステルが好ましく、追加の抗皮脂活性および老化防止の恩恵をもたらす。レチノールおよび／またはレチノールエステル類の量は、組成物の０．００１から３重量％の範囲にあり、０．００１から０．５重量％が好ましい。
最高の抗皮脂活性、老化防止および／または最も望ましい健康に見える皮膚をもたらすためには、活性成分（ググリピドおよび／またはアルコール性画分および／またはその低分子量画分）と、トリデシルサリチル酸エステル、リノール酸レチニルおよびその混合物の組合せが特に好ましい。
日焼け止めには、紫外光線を阻止するために用いられる通常の材料が含まれる。化合物の例には、ＰＡＢＡ、ケイ皮酸エステルおよびサリチル酸エステルの誘導体類がある。例えば、メトキシケイ皮酸オクチルおよび２−ヒドロキシ−４−メトキシベンゾフェノン（オキシベンゾンとして知られている）を用いることができる。メトキシケイ皮酸オクチルおよび２−ヒドロキシ−４−メトキシベンゾフェノンは、それぞれ、Ｐａｒｓｏｌ  ＭＣＸおよびベンゾフェノン−３の登録商標で市販されている。組成物に用いる日焼け止めの正確な量は、太陽のＵＶ照射からどの程度保護するのが望ましいかによって異なる。
組成物を潜在的に有害な微生物の増殖から守るため、保存剤を本発明の組成物中に含むこともできる。適当な保存剤には、ｐ−ヒドロキシ安息香酸のアルキルエステル類、ヒダントイン誘導体類、プロピオン酸塩、および種々の４級アンモニウム化合物類が含まれる。本発明の特に好ましい保存剤は、メチルパラベン、プロピルパラベン、フェノキシエタノールおよびベンジルアルコールである。保存剤は通常、組成物の０．１から２重量％の範囲の量で用いる。
散剤を本発明の化粧用組成物に組み込むこともできる。これらの散剤には、チョーク、タルク、カオリン、デンプン、スメクタイト粘土、化学修飾したケイ酸アルミニウムマグネシウム、有機修飾したモンモリロナイト粘土、水和ケイ酸アルミニウム、ヒュームドシリカ、アルミニウムデンプンオクテニルコハク酸エステルおよびその混合物が含まれる。
他の付加少量成分も化粧用組成物に組み入れることができる。これらの成分には、着色剤、乳白剤および香料が含まれてもよい。これらの他の付加少量成分の量は、組成物の０．００１から２０重量％の間のどこかの範囲にあってよい。
組成物の用途：
本発明による組成物は、主にヒトの皮膚への局所塗布のための製品を意図しており、特に、脂性肌の抑制または予防、皮膚の輝きおよび透明感および仕上げの改善、およびしわがより、乾燥し、老化または光老化した皮膚の外観を予防または軽減するための作用物質を意図している。
使用に際しては、一定量の組成物、例えば１から１００ｍｌを、適当な容器またはアプリケータから皮膚の露出部に塗布し、必要ならば、次いで、手または指または適当な器具を用いて皮膚に広げおよび／または擦り込む。
製品の形および包装：
本発明の局所皮膚組成物は、任意の形、例えば、化粧水、流動性クリーム、またはクリームとして処方することができる。組成物は、その粘性および消費者の意図する用途に合った適当な容器に包装することができる。例えば、化粧水および流動性クリームは、ビンまたはロールボールアプリケータまたは噴射剤発射エーロゾル器具または指先の操作に適したポンプを備えた容器に包装することができる。組成物がクリームのときには、変形不可能なビン、またはチューブなどの絞り出し容器、または蓋つきビンに簡便に保存することができる。したがって、本発明は、本明細書中で定義する化粧用として許容可能な組成物を含む密閉容器も提供する。
組成物は、参照により本明細書中で援用する米国特許Ｎｏ．５，０６３，０５７に記載のようにカプセル剤中に含まれてもよい。
下記の具体的実施例によって本発明をさらに説明するが、本発明がこれに限定されるものではない。
本明細書中および付録の請求の範囲で指示されるすべての部、百分率および割合は別に記載のない限り組成物の重量に対するものである。
実施例１
この実施例は、ググリピドを極性の高さの順で各画分に分別する手順（手順Ａ）およびググリピドの低分子量画分を得る手順（手順Ｂ）を示す。
手順Ａ
材料：
ググリピド（Ｌｏｔ  Ｎｏ．４２９４１、Ｌｉｐｏ  Ｃｈｅｍｉｃａｌｓ  Ｉｎｃ．Ｐａｔｅｒｓｏｎ  ＮＪ）
中圧カラム（内径５ｃｍ×長さ６２ｃｍ）。
シリカ（ゲル、Ｍｅｒｃｋ）、Ａｌｄｒｉｃｈ、Ｃａｔ  ｎｏ．２２，７１９−６、Ｇｒａｄｅ  ９３８５，２３０，４００、メッシュ６０Ａ。
ＴＬＣ  プレート、ＬＨＰ−ｋｋ  ２０×１０ｃｃ  Ｌｏｔ＃００４９６６、Ｃａｔ＃  ４８０５−７１１  Ｗｈａｔｍａｎ。
ヘキサン、ＨＰＬＣ用（Ｆｉｓｈｅｒ）
酢酸エチル、ＨＰＬＣ用（Ｆｉｓｈｅｒ）
メタノール、ＨＰＬＣ用（Ｆｉｓｈｅｒ）
クロロホルム、ＨＰＬＣ用（Ｆｉｓｈｅｒ）
リン酸（Ｆｉｓｈｅｒ）
硫酸銅  ＣｕＳＯ4（Ｆｉｓｈｅｒ）
石油エーテル（Ｆｉｓｈｅｒ）
ビーカー（４００ｍｌ）２４個
シンチレーションバイアル
毛細管（５μｌ）
メスシリンダ（２０００ｍｌ）２個
展開皿１個
オーブン（Ｎａｐｃｏ  ４２０型）１個
加熱／撹拌プレート１枚
丸底フラスコ（５００ｍｌ）２個
ロータリエバポレータ
水（Ｍｉｌｌｉ−Ｑ水）
方法：
１．ググリピド５．０６７２ｇを５００ｍｌの丸底フラスコに量りとる。
（Ａ）ググリピドを酢酸エチル１００ｍｌに溶かす（スラリとする）。
（Ｂ）ロータリエバポレータを用いて酢酸エチルを留去した。
（Ｃ）フラスコに石油エーテル３５０ｍｌを加えた。
（Ｄ）混合物を一昼夜撹拌した。
２．中圧カラムにシリカ（Ｍｅｒｃｋ）を７５％充填し、ヘキサン／酢酸エチル（１０：１比）７００ｍｌで洗浄することによりカラムを調製した。
３．撹拌プレートからフラスコを取り去り、石油エーテルを５００ｍｌの丸底フラスコにデカントした。
（Ａ）ロータリエバポレータを用い、約３ｍｌが残るまで石油エーテルを留去した。
（Ｂ）残りの３ｍｌを、風袋重量を予め記録したシンチレーションバイアルに定量的に移した。
（Ｃ）試料をフード中で蒸発乾固した。
（Ｄ）最終重量を記録し、試料にラベルを貼った（石油エーテル非極性画分＃１）。
４．石油エーテル抽出物から残った残渣を酢酸エチル５０ｍｌに溶かし、これをガラス製パスツールピペットを用いて中圧カラムに移した。
５．７：１比のヘキサン／酢酸エチル８００ｍｌにより、画分２をカラムから溶離した。
６．５：１比のヘキサン／酢酸エチルにより画分３〜５を溶離した。各画分は、約２００ｍｌである。
７．２：１比のヘキサン／酢酸エチル１５００ｍｌにより画分６〜１２を溶離した。
８．１：１比のヘキサン／酢酸エチル２０００ｍｌにより、カラムから画分１３〜１９を溶離した。
９．１：２比のヘキサン／酢酸エチル３０００ｍｌにより画分２０〜２９を溶離した。
１０．１：３比のヘキサン／酢酸エチル２０００ｍｌにより画分３０〜３７を溶離した。
１１．１００％酢酸エチルにより画分３８〜４１を溶離した。
１２．１００％メタノールにより画分４２を溶離した（１０００ｍｌ）。
１３．１００％メタノールにより画分４３および４４を溶離した（１０００ｍｌ）。
１４．すべての画分を、蒸気浴を用いて約１０ｍｌ以下に蒸発させ、シンチレーションバイアルに移した。
１５．画分１〜４４を薄層クロマトグラフィ（ＴＬＣ）で分析した。
（Ａ）ＴＬＣプレートは、９：１比のクロロホルム／メタノールを用いて展開した。
（Ｂ）ＴＬＣプレートは、８％リン酸中の１０％硫酸銅で染色した。
１６．ＴＬＣ結果が不十分なため、画分２６〜３９を濃縮し、再分析した。
１７．ＴＬＣプロフィルが類似する画分を合わせた。下記の画分を合わせた。
画分９、１０、および１１
画分１３、および１４
画分１６、１７、および１８
画分１９、および２０
画分２２、２３、および２４
画分４０、４１、および４２（しかし、画分４０および４１の体積は極めて少ないため、画分４２が９９％を占める）
１８．画分２６〜３９、および合わせた画分を、ＴＬＣにより再分析した。
１９．ＴＬＣプロフィルが類似する画分を合わせた。
画分２６、および２７
画分３０、３１、および３２
画分３４、および３５
２０．残りの画分をフード中で蒸発乾固した。合計１８個の試料画分が得られた。
２１．ＴＬＣによりなんらスポットの見られない画分は廃棄した。
結果：
ググリピド５．０６ｇ（３５０ｍｌ石油エーテル）から出発し、石油エーテル可溶画分として画分１（１．７４６９ｇ）が得られた。石油エーテルに不溶の画分は、酢酸エチル５０ｍｌに溶かし、シリカカラム（内径５ｃｍ×長さ６２ｃｍ）に移し、極性を高めるような溶媒割合で溶離した。その結果、さらに４３個の画分が得られた。ＴＬＣの類似性に基づき、いくつかの画分を合わせた。画分２６〜２９は、極めてわずかな物質しか含んでいなかったため、ＴＬＣ結果を得るために濃縮しなければならなかった。ＴＬＣプレート上に多数のバンドが見られ、大部分の画分が数種類の化合物を含むことが明らかであった。いくつかの画分は、他よりもさらに濃縮し、ＴＬＣプレート上に強いバンドが見えるようにした。１８の画分が得られた。
画分４３および４４は、メタノール抽出液のみを含む唯一の画分であった。画分４２はメタノールにより溶離したが、画分４０および４１（酢酸エチルにより溶離したが、極めて少量であった）と混合した。画分４２は実際、９９％の画分４２および約１％の画分４０および４１を含んでいた。画分４４は、アルコール性画分の最後の部分であるため、画分４２および４３に比べて活性成分の含有量はかなり少なかった。
手順Ｂ
ググリピドの低分子量画分の調製に際しては、全ググリピドを５０，０００ＭＷフィルターに通した。ろ液を集め、１０，０００ＭＷフィルターに通した。続いて、５０００ＭＷおよび５００ＭＷフィルターに通した。高速薄層クロマトグラフィによる各画分の分析から、各画分の持ち越しは明らかであた。言い換えると、５００ＭＷろ液に存在する化合物は、他の画分に認められた。しかし、５０，０００ＭＷろ液中に存在する成分は、以下のＭＷろ液中には認められなかった。より大きな、おそらく重合性の成分の捕捉がろ過効率を妨げたと考えられる。
第２の実験においては、全ググリピドを５００ＭＷフィルタのみに通した。第２の実験を以下より詳細に説明する。第２の実験から得られた低分子量画分を以下の実施例で用いた。
材料
１０％全ググルステロンに規格化されたググリピド（Ｌｏｔ  ＃４２９４１−３８２８５）はＩｎｄｅｎａ（商標）（Ｓｅａｔｔｌｅ、ＷＡ）より、ＨＰＬＣ用メタノールはＦｉｓｃｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ（Ｆａｉｒ  Ｌａｗｎ、ＮＪ）より入手した。限外ろ過ユニットは、５０ｍＬのＡｍｉｃｏｎ  ８０５０とした。限外ろ過セルおよび膜は、ＹＣ０５  ５００Ｄａカットオフフィルタ（Ｃａｔ．Ｎｏ．１３０２２）であり、いずれもＭｉｌｌｉｐｏｒｅ（Ｂｅｄｆｏｒｄ、ＭＡ）より入手した。ろ過セルに圧力を供給するために使用する空気タンクは、Ｆｉｓｃｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ  ＦＳ−７００窒素圧力ゲージを備えたＴ（トール）サイズ窒素タンクとした。圧力ゲージは、最高圧力３５ｐｓｉが得られるように常に予め設定し、次いで、必要に応じて増加させた。ろ過ユニット自体は、７５ｐｓｉ以上の圧力で安全に操作することはできない。
５００Ｄａカットオフフィルタは潜在的に誤差、すなわち＋３００Ｄａを有していることに注意しなければならない。したがって、用いたフィルタは、約８００Ｄａまでの分子を通過させることになる。
フィルタ調製：
ＹＣ０５フィルタは、Ｍｉｌｌｉ−Ｑ水１．０Ｌを含む１．０Ｌのビーカー中に３０分間（最終的に試料と接する光沢面を下にして）浮遊させることによって調製した。次いで、フィルタをろ過ユニットのフィルタ支持体に取り付け（光沢面を上にして）、密閉用ゴム製「Ｏ」リングをきちんとはめた。ろ過ユニットの溶媒保持容器をフィルタ保持体の上方に置き、次いでロック用プレートを指で一杯に締めて取り付けた。
ググリピド試料をろ過する前に、ＨＰＬＣ用メタノール２５から３０ｍＬで膜を洗浄した。目盛り付き５０ｍＬトランスファピペットによりアルコールを加え、磁気撹拌器具を溶媒保持領域の内部に設置した。次いで、ろ過ユニットの上部を付けて撹拌器具が適度に動くようにし、ユニット全体を金属製保持ブラケット内に置いた。次いで装置全体を磁気撹拌プレート上に置き、窒素タンクからのラインを接続した。
窒素タンクに通ずる主バルブを開け（３５ｐｓｉを送るように予め設定）、磁気撹拌プレートを４に設定して（設定スケールは１［遅］から６［速］まで）動作させた。メタノールが膜を通して流れ、溶出ラインに流出し始めたら、圧力を徐々に最大５５ｐｓｉまで上げ、３から４ｍＬ／ｍｉｎの最終流量を維持した。膜を完全に乾固してはならないとされているので、フィルタ膜上に１から２ｍＬの溶媒が残っている時点でメタノール洗浄を終了した。所望のところまで溶媒が減少した時点でタンクに通ずるバルブを閉め、次いで、放出バルブによってろ過セルから圧力を抜いた。
ググリピドのろ過：
ググリピド抽出物は、指定のＨＰＬＣ用メタノールを用い、ググリピドの最終濃度が６．５％（Ｗ／Ｖ）となるように溶かした。１０〜１５分後、ググリピドは溶媒に溶け、透明で、（アイスティーに似た）やや褐色の溶液が得られた。放置すると、細かいタルク様の白色沈殿が容器の底に薄い皮膜を形成しているのが観察された。溶液を緩やかに旋回させると、沈殿によって溶液がわずかに不透明になったが、溶液を数分かき混ぜずにおくと溶液は再び透明になった。
フィルタを調製するために用いたのと同一の方法を、ググリピドのろ過にも用いた。試料を取り出す際に溶液を激しく撹拌し、溶液および沈殿の代表的なアリコートが取り出せるようにした。目盛り付きトランスファピペットにより、合わせて５０ｍＬを溶媒保持容器に送り、前に略述したようにユニットを組み立て直した。ググリピドをろ過するために用いた最高圧は、５５ｐｓｉを超えなかった。試料が１〜２ｍＬまで減少したところでシステムの圧力を抜き、純粋メタノール２５ｍＬを溶媒保持容器に導入した。次いで、同一時点でフィルタに通し、メタノール１５ｍＬで再び繰り返した。
すべての溶出液を同じ容器に集め（約９０ｍＬ）低分子量画分とした。保持された物質（溶媒保持室内またはフィルタ自体の上に残っている）は、フィルタおよび保持容器をメタノールで完全に洗浄して集めた。次いで、これらの物質を一緒にして、高分子量画分物質とした。
両画分を含む容器を、Ｒｅａｃｔｉ−ｖａｐＩＩＩ窒素乾燥室を備えたＰｉｅｒｃｅ  Ｒｅａｃｔｉ−ｔｈｅｒｍＩＩＩ加熱モジュール上に置いた。２ｐｓｉの一定した窒素流中で徐々に熱をかけて、２０分で最高４〜５に設定した（設定範囲は、１［低］から１０［高］）。試料が完全に乾固するまでこの条件を維持した。容器を室温まで冷却させた後、試料を少量のメタノールに再溶解し、質量測定用の予め風袋を測定した試験管に定量的に移した。
ググリピドの８４％が低分子量画分に回収された。
回収された画分の異なる特性：
アルコール性の高分子量および低分子量画分の物理的特性は、まったく異なることが分かった。高分子量画分は、出発材料のググリピドに似ており、黒いタール様の色で、室温では固体である。アルコール性画分は、濃褐色で、室温で固体である。低分子量画分は、黄金色／黄褐色で、粘性は高いが、室温で一定の流動的性質を持っている。
実施例２
この実施例は、ググリピドおよびその様々な画分の皮脂抑制のｉｎ  ｖｉｔｒｏ分析を報告する。
ｉｎ  ｖｉｔｒｏ  皮脂細胞脂肪生成分析：
ヒト皮脂腺を男性（６０歳）の鼻から分離し、液内組織培養手法（Ｂａｊｏｒ他、Ｊ．Ｉｎｖｅｓｔ．Ｄｅｒｍａｔｏｌ．、１０２巻、５６４ページ、１９９４年）を用いて培養した。これらの皮脂細胞には、成熟したヒトの皮脂に特徴的な細胞内脂質小滴が蓄積されている。
採取し継代した皮脂細胞を、４８ウエル組織培養プレートの各ウエルに加え、７．５％ＣＯ2の存在下、３７℃で１０日間インキュベートした。実験日に増殖培地を除去し、皮脂細胞をリン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）で３回洗浄した。０．５ｍｌの新たなＰＢＳを各ウエルに加え、さらに表１に示すような様々の濃度で被験作用物質１０μｌを加えた。各試料について、３つのウエルを用いた。対照は、ＰＢＳ、親油性化合物を可溶化するために用いたジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）、およびエストロゲン様活性を有する化合物であるフェノールレッド（フェノールレッドは皮脂分泌を減少させるので、皮脂細胞分析の完全さを立証するために対照として用いた）で構成した。培養液を３７℃／７．５％ＣＯ2で３０分間インキュベートした。14Ｃ標識酢酸（Ａｍｅｒｓｈａｍ、ナトリウム塩、比活性５６ｍＣｉ／ｍｍｏｌ）を５０ｍＭ酢酸ナトリウム緩衝液に加えて放射活性標識を調製した。次いで、５０μｌを、皮脂細胞および被験作用物質を含む各ウエルに加えた。培養液を４時間インキュベーターに戻した。その後で、皮脂細胞を新たなＰＢＳで３回洗浄し、結合していない活性成分または放射活性標識を除去した。培養した皮脂細胞に残存する放射活性標識は、Ｂｅｃｋｍａｎシンチレーションカウンタを用いてカウントした。結果は、対象（ＤＭＳＯ）と比較した減少％として表した。
画分がシス−ググルステロンを含んでいたかどうかを測定するため、各画分の試料を、各１０×１０ｃｍの高速シリカゲルプレートの下方左隅に塗布した。試料をまず、ヘキサン：酢酸エチル（５０：５０）の移動相中で９ｃｍまで展開し、風乾して９０度回転し、次いでクロロホルム：メタノール（９５：５）中で９ｃｍ展開した。プレートを乾燥し、１０％硫酸銅／８％リン酸溶液に浸し、１８５℃で１０分間加熱した。シス−ググルステロンの標準品（Ｓｔｅｒａｌｏｉｄｓ、Ｉｎｃ．）を対照として用いた。
得られた結果を表１に要約する。
0003749265.tif 000002
*ｐ＜０．０１で、対照（ＤＭＳＯ）と比較して統計学的に有意な結果（スチューデント式テストを用いて計算）
1「？」は、クロマトグラムで類似の領域に移動するがシス−ググルステロンかどうか明らかではない（異なる色に着色した）ことを示す。存在量は極めて少なかった。
表１における結果の分析は、試験した最低濃度で行うのが最も意味がある。なぜならば、高濃度では、ｉｎ  ｖｉｔｒｏにおける皮脂細胞の生存能が損なわれることもあるからである。また、高濃度では、非アルコール性画分中に存在するわずかな高皮脂活性さえ比較的高活性をもたらすことも考えられる。表１の結果から、試験した最低濃度（０．００５％）において、画分４２および４３（アルコール性画分）が皮脂産生の抑制において最も活性な画分であることは明らかである。これらの画分は、シス−ググルステロンを含まないように思われる。画分４２および４３と比較して画分４４の活性が低下しているのは、おそらく、画分４４がアルコール画分の最後の部分であることから活性物質の濃度が低下したためと思われる。
ｉｎ  ｖｉｔｒｏ皮脂細胞分析を、Ｃ．ｗｉｇｈｔｉｉの油可溶抽出物について繰り返した。得られた結果は、表１Ａに要約する。
0003749265.tif 000003
表１Ａから、油溶性のＣ．ｗｉｇｈｔｉｉ抽出物も皮脂分泌を減少させたことを見てとることができる。
低分子量画分（「低ＭＷ画分」）による次の実験では、ｉｎ  ｖｉｔｒｏ皮脂細胞プロトコルに次の変更を行った。低分子量画分は、皮脂細胞を含む各ウエルに１μｌおよび５μｌ加えた。各試験試料に対して４つウエルを用いた。対照は、ＤＭＳＯおよび内部陽性対照として全ググリピドで構成した。得られた結果を、表１Ｂに要約する。
0003749265.tif 000004
低分子量画分が優れた抗皮脂活性を有していることは明らかである。高分子量画分を試験したときに、皮脂分泌に同様な減少が得られた。しかし、低分子量画分の使用は、ググリピドまたはアルコール性画分または高分子量画分のいずれよりも容易に製剤化できるという点で有利である。低分子量画分は、粘性が低く、濃褐色／黒色ではなく黄金色／黄褐色を有する。アルコール性画分に比べさらに有利なことは、この低分子量画分が、アルコール性画分より高収率で得られることである。
比較実施例３
実施例２に記載した皮脂細胞分析を、表２に示す様々な化合物で繰り返した。表２の化合物はすべて、本発明の範囲外にある。
得られた結果を表２に要約する。負の値は皮脂産生の増加を示す。
0003749265.tif 000005
表２の結果は、皮脂細胞分析が皮脂抑制を測定するための妥当で信頼できる試験であることを証明している。なぜならば、エストラジオール（エストロジェン様化合物）は、他の典拠から予想されるように皮脂抑制をもたらし、他方、ジヒドロテストステロン（アンドロジェン）は、他の典拠から予想されるように実際皮脂産生を増加させたからである。既知の抗座瘡剤であるサリチル酸は、皮脂産生を阻害しないことから、抗座瘡剤が必ずしも抗皮脂活性を有しないことを示している。シス−ググルステロンは皮脂分泌を減少させず、これは、ググリピドおよびそのアルコール性または低分子量画分中の抗皮脂活性をもたらす活性成分がシス−ググルステロンではないことを示している。
実施例４
この実施例では、ググリピドおよびその様々な画分の抗酸化活性の化学分析およびｉｎ  ｖｉｔｒｏ分析を報告する。
化学分析：
化学分析では、表３に示す様々な被験化合物の抗酸化活性を測定する（低ＭＷ画分を１．６７％および０．１７％で試験した以外、０．０８％の濃度で試験した）。２，２′アジノ−ジ［３−エチルベンズチアロインスルホン酸塩］（６．１μｍｏｌ／ｌ）およびメトミオグロビン（６１０μｍｏｌ／ｌ）は、リン酸緩衝生理食塩水（５ｍｍｏｌ／ｌ、ｐＨ７．４）中に可溶化した。次いで、被験物質を加え、基質である過酸化水素（２５０μｍｏｌ／ｌ）の添加前および添加後に７３４ｎｍにおける吸光度を測定した。吸光度のある基質からは、初期の吸光度を差し引いた。これは、被験化合物自体に起因する吸光度のずれを防ぐためである。吸光度の経時変化を多数の時点で調べた。結果は、試験試薬の代わりに脱イオン水を用いた以外はすべての分析成分を含む対照（１００％酸化）と比較した％酸化として表した。大きな数は、酸化を防ぐことはなく、抗酸化が不十分であることを意味する。ビタミンＥの水溶性形であるＴｒｏｌｏｘ（Ｈｏｆｆｍａｎ−ＬａＲｏｃｈｅの登録商標）の抗酸化活性を測定し、この試験の妥当性を確立した。ＴｒｏｌｏｘはＡｌｄｒｉｃｈから購入した（２．５ｍｍｏｌ／ｌ）。Ｃ．ｗｉｇｈｔｉｉ（親油性抽出物）はＣａｍｐｏから入手した。
得られた結果を表３に要約する。
0003749265.tif 000006
*ｐ＜０．０５（水対照と比較して統計学的に有意）：ｐ値は、ロータス１−２−３スチューデントのｔ検定を用いて決定した。
表３の結果は、全ググリピドおよび画分４２〜４４が最も良好な抗酸化活性を有し、画分４３は最高の活性を有していることを示している。シス−ググルステロンの抗酸化活性は極めて低く、ググリピドまたはググリピドのアルコール性画分に抗酸化活性をもたらすのはシス−ググルステロンではなく、他の活性成分であることを示している。Ｃ．ｗｉｇｈｔｉｉおよびＣ．ｍｕｋｕｌの水性抽出物はいずれも、有意な抗酸化活性を持たない。上述の化学分析では、抗炎症経路ではなく直接フリーラジカルクエンチングを介して得られる抗酸化活性を測定している。この分析は、ググリピドおよびそのアルコール性画分が、直接フリーラジカルクエンチングにより抗酸化として作用することを立証している。
上記の化学分析を別の実験で繰り返し、低分子量画分を試験した。得られた結果を表３Ａに要約する。
0003749265.tif 000007
表３Ａの結果から、低分子量画分が、試験したいずれの濃度においても優れた抗酸化活性を有することは明らかである。
一般に、化学的に測定した抗酸化能力は、ｉｎ  ｖｉｔｒｏのケラチン生成細胞結果と相関する（下記表４を参照）。
ｉｎ  ｖｉｔｒｏ抗酸化分析：
脂質過酸化反応は、植物および動物類のいずれにも起きる細胞損傷の確立された機構である。膜脂質を含む不飽和脂肪酸類の開裂は、アルデヒド類などの副生成物の生成をもたらす。アルデヒド性副生成物であるマロンジアルデヒド（ＭＤＡ）および４−ヒドロキシアルケナール類は、脂質過酸化反応の便利なマーカーとして役立つ。
細胞培養：
新生児の包皮から単離したヒトケラチン生成細胞は、０．０９ｍＭカルシウム存在下、完全培地（ＤＭＥ＋ｆ−１２、１Ｍ  Ｈｅｐｅｓ、アデニン、ヒドロコルチゾン、コレラ毒素、インスリン、ＥＧＦ、ＦＢＳ、およびＰｅｎｎ−Ｓｔｒｅｐ）中で、マイトマイシン処理Ｔ３Ｔマウス線維芽細胞の培養層上で増殖させた。トリプシンで処理した後、ケラチン生成細胞は、０．０９ｍＭカルシウムを含む完全ＫＳＦＭ（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓから入手したケラチン生成細胞無血清培地）１０００μＬ中、１２ウエル組織培養プレート（Ｃｏｓｔａｒ）にウエル当たり１５×１０3個の細胞で播種した。
９６時間のインキュベーション後、培地を除去し、表４に示すＫＳＦＭ中０．０１％の被験作用物質とともに新たな培地を加えた。被験作用物質とともに４８時間のインキュベーションを行った後、培地を再び除去し、１ｍＭ過酸化水素を含むリン酸緩衝生理食塩水１ｍｌを各ウエルに加えた。次いで、硫酸第一鉄１ｍＭを加えて酸化反応を開始させた。この酸化混合物を９０分インキュベーション後、ＢＨＴを添加することにより酸化反応を停止した。次いで、プレートを−７０℃に保存して次の分析を待った。
脂質過酸化反応生成物は、酸化ストレスのマーカーとして測定し、増殖の原因となる細胞ＤＮＡの量に対し正規化した。
ＤＮＡ分析：
プレートを冷凍庫から取り出し、培地を吸引した。プレートを３回凍結破断した。Ｈｏｅｃｈｓｔ染料（最終濃度１０ｇ／ｍＬ）を各ウエルに加え、プレートを暗所でインキュベートした。１５分のインキュベーション後、プレートを蛍光光度計（励起３６０ｎｍおよび放射４６０ｎｍ）で読みとった。
脂質過酸化反応：
ＰＢＳ中で酸化された細胞を含む培養ウエルの表面をかきとり、２００Ｌの試料を得た。色原体のＮ−メチル−２−フェニルインドールは、４５℃の酸の中で試験試料と反応する。与えられた条件で、ＭＤＡあるいは４−ヒドロキシアルケナール１分子は、２分子の試薬と反応し、５８６ｎｍに最大吸光度を持つ安定な発色団を生成する。結果は、（未処理細胞の吸光度＝１００％脂質酸化反応）／ＤＮＡ吸光度として表した。未処理の細胞（抗酸化なし）は１００％＋／−１０．１の過酸化反応を有していた。アルファ−トコフェロールを陽性対照として用いた。
得られた結果を表４に要約する。
0003749265.tif 000008
ｐ値はロータス１−２−３スチューデントのｔ検定を用いて決定した。
*ｐ＜０．０５（未処理細胞と比較して統計学的に有意）
表４の結果は、ググリピドおよび画分４２〜４４（アルコール性画分）が、化学分析から予想されるような抗酸化活性を有していたことを示している。アルコール性画分４２〜４４が、アルファ−トコフェロールの抗酸化活性に近い、最も高い抗酸化活性を有した。Ｃ．ｗｉｇｈｔｉｉは、抗酸化活性も有していなかった。化学分析ではわずかな活性を有するに過ぎなかった他の画分にも、良好な抗酸化活性を有するものがあった。ｉｎ  ｖｉｔｒｏ過酸化反応分析で試験した濃度は、比較的高く、すなわち、皮脂細胞分析で試験した最低濃度の２倍に相当することに注意すべきである。低濃度では、様々な画分の活性の違いがよりはっきりと観察されたものと考えられる。画分４２および４３と比較して画分４４の活性が低下した原因は、画分４４がアルコール性画分の最後の部分であるため、各活性成分の濃度が低いためである。前述のように、いずれの場合も、ググリピドおよびそのアルコール性画分が抗酸化活性を示した。
表４の結果は、抗酸化活性をもたらすためには、Ｃ．ｗｉｇｈｔｉｉから得られるグガルではなくＣ．ｍｕｋｕｌから得られるググリピドを用いることが重要であることを示している。
実施例１〜４において、ググリピドの画分を試験した場合、アルコール性および低分子量画分が最高の抗皮脂および抗酸化活性を有していた。Ｃ．ｍｕｋｕｌから得られるググリピドおよびＣ．ｍｕｋｕｌから得られるググリピドのアルコール性および低分子量画分は、最も望ましい二重の抗皮脂および抗酸化活性を有していた。
実施例５
試験製品：
ググリピドを含有するトナーを以下のように処方した：
0003749265.tif 000009
対象者：脂性肌であると自己申告したパネリストを、皮脂計（ｓｅｂｕｍｅｔｅｒ）を用いて参加のためのスクリーニングを行った。女性の年齢は１８および５５歳の範囲であった。この群から、部位スコア平均（３回の皮脂計読みとり値）が１５０以上と定義される脂性肌の必要条件を満たす１１名の女性が選ばれ、５週間の製品評価に参加した。
試験の前１週間から試験期間中、局所用座瘡医療（例えば、Ｒｅｔｉｎ  Ａ、アルファヒドロキシ／果実酸製品、アルコール性トナー類、およびパック類／剥脱剤）の使用を禁止した。
試験条件：試験環境は、７３±１ＥＦの室温、および４５±１０％の相対湿度を維持するように設定した。
手順：５週間にわたり、週１回、毎日２回（第１週を除く）パネリストを評価した。基準値の結果を得るために用いた初回の評価の後、合計３週間顔の半面に試験製品を用い、続く１週間は復帰（処置なし）とするようにパネリストを指導した。評価日には、パネリストは洗顔し、ＡＭ評価時間前少なくとも３時間は試験トナーを用いないこととした。また、評価期間中は一日中前額部のメークアップをしないこととした。パネリストは、すべての評価時間中手をあけておき、試験日の期間を通していかなる場合にも試験部位に触れたり、こすったり、または乱すことをしないことに同意することとした。
各評価期間（８：３０から１１：３０）が始まる少なくとも３時間前に、パネリストはいつも使用している洗顔剤／セッケンで額を洗った。眉の線の直上の前額部に、約１８ｃｍ2の試験部位領域を定めた。分割前額部デザインを用い、各試験部位領域内で皮脂計（Ｃｏｕｒａｇｅ  ａｎｄ  Ｋａｈａｚａｋａ製、Ｋｏｌｎ、Ｇｅｒｍａｎｙ、＃ＳＭ８１０型）による読み取りを３回行い、各パネリストの朝値とした。１０Ｎの一定圧力をかけながら、皮脂計カセットを皮膚と接触させて３０秒間保持した。３０秒経過すると器具が信号音を発し、カセットを読み取りのため装置に戻す。１秒たって測定値が装置に表示される。部位あたりさらに２回の読み取りを行い、その平均をパネリストのＡＭスコアとして用いる。次いで、パネリストの脂性の程度に基づき、左／右部位塗布のバランスをとって製品を塗布した。使用説明書のコード４２６、８８１または５０２で試験部位領域を処置した。追加の皮脂計読み取りを処置後５時間に得た。
処置：試験製品の塗布は、毎日１から２回行った。無作為化された半顔デザインで綿ボールを用いて適当量の製品を塗布するものであった。
分析：解読および分類されたデータは、ロータス１２３およびＳＡＳソフトウエアを用いて分析した。各評価時間に各処置群から得られたデータセットについて対応のあるｔ検定（処置−未処置）を行った。
得られた結果を表５に要約する。
0003749265.tif 000010
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結果：ググリピドで処置した部位は、すべての時間で未処置の部位よりも低い値を示した。ググリピドで処置した部位の平均スコアは１８３および２４２の間の範囲にあり（基準値＝２２７）、未処置部位の平均スコアは１９７および２６３の間の範囲にあった（基準値＝２２５）。各評価時間の処置から未処置を減じた対のある比較によれば、ググリピドを含むトナーを用いた群における２週目のＰＭ値だけが、ゼロに比べて統計学的（ｐ＜０．０５）有意差があり、１週目のＰＭ値がかろうじて（ｐ＜０．１０）有意を示した。統計学的有意の欠如は、データの大きな変動およびパネリスト数が少ないことによるものと思われる。
結論：ググリピドを含むトナーを皮脂産生が増加している女性の皮膚に塗布すると、未処置の対象部位に比べ、処置部位の皮脂レベルに一様な低下がもたらされる。
実施例６〜９は、本発明による局所用組成物を例示する。組成物は、従来の方法で製造することができる。組成物は、化粧用途に適している。組成物は、特に、脂性、しわのある、老化および／または光老化の皮膚への塗布に適しており、外観（輝き、透明感、仕上がり）およびその感触を改善し、ならびに脂性またはその悪化を予防または遅らせるために健康な皮膚に塗布することにも適している。
実施例６
以下は、本発明を規定する請求の範囲にある代表的な抗皮脂および抗酸化組成物である。
皮脂コントロール化粧水
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実施例７
つけたままにしておく美顔エマルジョン組成物は、従来の混合技術を用い、下記の成分を混合することにより調製する。
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このエマルジョンは、皮脂分泌の抑制をもたらし、フリーラジカル傷害から皮膚を保護するのに適している。
実施例８
リーブオン美顔エマルジョン組成物は、従来の混合技術を用い、下記の成分を混合することにより調製する。
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実施例９
以下は、本発明を規定する請求の範囲にある代表的な抗皮脂および抗酸化組成物の追加実施例である：
実施例９Ａ：スキンクリーム（水中油型）
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実施例９Ｂ：スキンクリーム（水中油型）
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実施例９Ｃ：スキンクリーム（水中油型）
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実施例９Ｄ：マイクロエマルジョン
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実施例９Ｅ：スキンクリーム（油中水型）
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実施例９Ｆ：無水乳漿
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実施例９Ｇ：日焼け止めローション（水中油型）
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本明細書中に例示および記載された本発明の具体的な形は、代表的なものだけを意図していることを理解されたい。本開示による明確な教示を逸脱することなく、本明細書中で示唆されているがそれらに限定されない変更を例示の実施形態中で行うことができる。したがって、本発明の全範囲を決める際には、以下に付属する請求の範囲を参照されたい。