(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
基板上に載置され細胞を有する標本に対してレーザビームを照射して前記細胞部分以外の不要な前記標本部分を前記基板上から取り除き、両端に各開口部を有する筒状体を用い、前記筒状体における一方の前記開口部の中に前記細胞部分を入れて前記筒状体を前記基板上に設置し、前記基板と前記筒状体とにより形成される容器内に剥離剤を注入して前記細胞部分を前記基板から剥離し、前記剥離剤中に浮遊する前記細胞部分を採取することを特徴とする細胞単離方法。
【請求項２】
基板上に載置され細胞を有する標本に対してレーザビームを照射して前記細胞部分以外の不要な前記標本部分を前記基板上から取り除き、両端に各開口部を有する筒状体を用い、前記筒状体における一方の前記開口部の中に前記細胞部分を入れて前記筒状体を前記基板上に設置し、前記基板と前記筒状体とにより形成される容器内に前記細胞中に存在する試料を溶出する溶液を注入し、前記溶液中に溶出した前記試料を採取することを特徴とする細胞単離方法。
【請求項３】
基板上に載置され細胞を有する標本に対してレーザビームを照射して前記細胞部分以外の不要な前記標本部分を変質し、両端に各開口部を有する筒状体を用い、前記筒状体における一方の前記開口部の中に前記細胞部分を入れて前記筒状体を前記基板上に設置し、前記基板と前記筒状体とにより形成される容器内に剥離剤を注入して前記細胞部分を前記基板から剥離し、前記剥離剤中に浮遊する前記細胞部分を採取することを特徴とする細胞単離方法。
【請求項４】
基板上に載置され細胞を有する標本に対してレーザビームを照射して前記細胞部分以外の不要な前記標本部分を変質し、両端に各開口部を有する筒状体を用い、前記筒状体における一方の前記開口部の中に前記細胞部分を入れて前記筒状体を前記基板上に設置し、前記基板と前記筒状体とにより形成される容器内に前記細胞中に存在する試料を溶出する溶液を注入し、前記溶液中に溶出した前記試料を採取することを特徴とする細胞単離方法。
【請求項５】
不要な前記標本部分に照射して前記標本部分を前記基板上から取り除く前記レーザビームのエネルギは、不要な前記標本部分を前記基板から完全に吹き飛ばす程度に設定されることを特徴とする請求項１又は２記載の細胞単離方法。
【請求項６】
不要な前記標本部分に前記レーザビームを照射して前記標本部分を前記基板から取り除く場合、前記標本に向ってエアーを吹き付けて前記標本から飛び散る破片を飛ばし、かつ前記標本から飛ばされた前記破片を吸引することを特徴とする請求項１又は２記載の細胞単離方法。
【請求項７】
前記剥離剤は、有機溶媒であることを特徴とする請求項１又は３項記載の細胞単離方法。
【請求項８】
前記剥離剤中に浮遊する前記細胞の採取は、前記剥離剤中の前記細胞をスポイト、ピペット又はシリンジにより吸引し、前記基板と前記筒状体とにより形成される容器とは別の容器内に前記スポイト、前記ピペット又は前記シリンジの中の前記細胞を移し替えることを特徴とする請求項１又は３項記載の細胞単離方法。
【請求項９】
前記溶液中に溶出した前記試料の採取は、前記溶液中の前記試料をスポイト、ピペット又はシリンジにより吸引し、前記基板と前記筒状体とにより形成される容器とは別の容器内に前記スポイト、前記ピペット又は前記シリンジの中の前記試料を移し替えることを特徴とする請求項２又は４項記載の細胞単離方法。
【請求項１０】
前記溶液により前記試料として少なくともＤＮＡ、ＲＮＡ又は蛋白を前記細胞から抽出することを特徴とする請求項２又は４項記載の細胞単離方法。
【請求項１１】
前記レーザビームの波長は、紫外領域に設定されたことを特徴とする請求項１乃至４のうちいずれか１項記載の細胞単離方法。
【請求項１２】
前記筒状体は、ガラス、金属又はプラスチックからなることを特徴とする請求項１乃至４のうちいずれか１項記載の細胞単離方法。
【請求項１３】
前記筒状体は、一方の前記開口部に樹脂により形成された薄膜を貼り付けたことを特徴とする請求項１乃至４のうちいずれか１項記載の細胞単離方法。
【請求項１４】
前記筒状体は、前記基板上に液密に立設されることを特徴とする請求項１乃至４のうちいずれか１項記載の細胞単離方法。
【請求項１５】
前記筒状体は、前記基板上に接着剤により固定されることを特徴とする請求項１乃至４のうちいずれか１項記載の細胞単離方法。
【請求項１６】
前記筒状体は、前記基板との間を前記筒状体の前記開口部に塗布されたグリースにより塞ぐことを特徴とする請求項１乃至４のうちいずれか１項記載の細胞単離方法。
【請求項１７】
前記標本に蛍光色素を塗布して前記細胞を染色し、前記標本に紫外光を照射して前記染色された前記細胞の前記蛍光色素を発光させ、前記発光した前記細胞を観察して前記採取する前記細胞を決定することを特徴とする請求項１乃至４のうちいずれか１項記載の細胞単離方法。
【請求項１８】
標本の像を拡大する顕微鏡とレーザビームを出力するレーザヘッドとは、前記顕微鏡の光軸と前記レーザヘッドから出力される前記レーザビームの光軸とを一致して設け、前記レーザヘッドから出力される前記レーザビームの光軸と同軸上に指標用の光を指標用光源から出力し、前記顕微鏡により拡大された前記標本像及び前記標本上に照射された前記指標用の光を撮像装置により撮像して前記標本像及び前記指標用の光を表示装置により表示し、前記表示装置に表示された前記標本像及び前記指標用の光を観察しながら前記レーザビームを前記標本上に走査し、採取したい前記細胞部分以外の不要な前記標本部分を前記基板から取り除く、又は採取したい前記細胞部分以外の不要な前記標本部分を変質することを特徴とする請求項１乃至４のうちいずれか１項記載の細胞単離方法。
【請求項１９】
不要な前記標本部分を変質する前記レーザビームのエネルギは、不要な前記標本部分を前記基板から取り除くときのレーザビームのエネルギよりも低く設定されることを特徴とする請求項３又は４記載の細胞単離方法。
【請求項２０】
前記レーザビーム径は変更可能であり、不要な前記標本部分を取り除く場合、前記細胞部分に隣接する不要な前記標本部分に照射する前記レーザビーム径を前記細胞部分の大きさよりも小さい第１の径に設定し、前記細胞部分から所定距離だけ離れた不要な前記標本部分に照射する前記レーザビーム径を前記第１の径よりも大きな第２の径に設定することを特徴とする請求項１又は２記載の細胞単離方法。
【請求項２１】
前記レーザビーム径は変更可能であり、不要な前記標本部分を変質する場合、前記細胞部分に隣接する不要な前記標本部分に照射する前記レーザビーム径を前記細胞部分の大きさよりも小さい第１の径に設定し、前記細胞部分から所定距離だけ離れた不要な前記標本部分に照射する前記レーザビーム径を前記第１の径よりも大きな第２の径に設定されることを特徴とする請求項３又は４記載の細胞単離方法。
【請求項２２】
基板上に載置され細胞を有する標本に対して紫外光を照射して前記細胞部分以外の不要な前記標本部分を変質し、両端に各開口部を有する筒状体を用い、前記筒状体における一方の前記開口部の中に前記細胞部分を入れて前記筒状体を前記基板上に設置し、前記基板と前記筒状体とにより形成される容器内に剥離剤を注入して前記細胞部分を前記基板から剥離し、前記剥離剤中に浮遊する前記細胞部分を採取することを特徴とする細胞単離方法。
【請求項２３】
基板上に載置され細胞を有する標本に対して紫外光を照射して前記細胞部分以外の不要な前記標本部分を変質し、両端に各開口部を有する筒状体を用い、前記筒状体における一方の前記開口部の中に前記細胞部分を入れて前記筒状体を前記基板上に設置し、前記基板と前記筒状体とにより形成される容器内に前記細胞中に存在する試料を溶出する溶液を注入し、前記溶液中に溶出した前記試料を採取することを特徴とする細胞単離方法。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は、基板上の標本の中から解析しようとする特定の細胞又は細胞集団を選別し、分離取得するための細胞又は細胞内の解析対象試料を単離する細胞単離方法に関する。
【０００２】
【従来の技術】
遺伝子の機能を解析しようとする研究は、現在最も関心の高いものである。遺伝子機能の解析の研究は、標本中から細胞を取得する。遺伝子機能の解析のための試料は、細胞中から直接採取される。細胞又は試料を採取する装置は、各種開発されて使用されている。
【０００３】
標本の切片から細胞を採取する各種細胞採取方法について説明する。
【０００４】
（１）切片状の標本が薄膜プレート上に固定される。切片状の標本は、例えば遺伝子の機能などを解析するために採取したい細胞を有する。紫外線波長領域のレーザビーム（ＵＶレーザビーム）が細胞の輪郭に沿って薄膜プレート上に照射される。これにより、標本中の採取したい細胞が薄膜プレートと共に切り離される。
【０００５】
次に、薄膜プレートに対してフォーカスのずれたＵＶレーザビームが切り離し部分に照射される。これにより、標本中の切り離し部分が飛ばされる。この結果、採取する細胞が取得される。例えば特許文献１が挙げられる。
【０００６】
（２）転写フィルムを張り付けた採取用の透明キャップが用いられる。透明キャップは、採取したい細胞を有する標本上に載置される。標本中の採取したい細胞を有する部分にＩＲレーザビームが透明キャップを透過して照射される。これにより、転写フィルム面に採取したい細胞部分が付着する。例えば特許文献２、３、４が挙げられる。
【０００７】
（３）標本がフィルム上に張り付けられる。フィルム上で標本を貼り付けた面が下方に向けられる。この状態で、上方からＵＶレーザビームが細胞の輪郭に沿って照射される。これにより、採取する細胞の周囲が切り取られる。
【０００８】
次に、ＵＶレーザビームがフィルムに照射される。これにより採取する細胞は、フィルムから離れて下方にセットされた受皿に落とし込まれる。例えば特許文献５、６が挙げられる。
【０００９】
【特許文献１】
米国特許５９９８１２９号公報
【００１０】
【特許文献２】
特開２０００−２６６６４９号公報
【００１１】
【特許文献３】
特表２００１−５１９８９８号公報
【００１２】
【特許文献４】
特表２００２−５０３３４５号公報
【００１３】
【特許文献５】
特開２００２−１７４７７８号公報
【００１４】
【特許文献６】
特開２００２−１５６３１６号公報
【００１５】
【発明が解決しようとする課題】
しかしながら、(１)の方法は、採取したい細胞を薄膜プレートと共に切り離した後、フォーカスのずれたＵＶレーザビームを照射して切り離し部分を飛ばす。このため、採取すべき細胞がどこに行ったか分からなくなる。細胞を紛失することが多々ある。又、ＵＶレーザビームによる細胞の変質も予想される。
【００１６】
又、採取した細胞にゴミなどの異物が混入しやすい。標本を事前に薄膜プレート上に固定する必要がある。このため、細胞の採取作業は、手間を必要とし、面倒である。
【００１７】
（２）の方法は、透明キャップを透過してＩＲレーザビームを標本中の採取したい細胞に照射する。このため、採取したい細胞に照射するＩＲレーザビームのスポット径を小さくできない。ＩＲレーザビームのスポット径は、採取したい細胞の大きさよりも大きくなる場合もある。採取したい細胞の大きさよりも大きなスポット径のレーザビームを照射すると、採取したい細胞と共に、その周囲の不必要な細胞も転写フィルム面に付着する。例えば１０ミクロンのスポット径で５ミクロン以下の極小の細胞を採取する場合、周囲の不必要な細胞も転写フィルム面に付着する。
【００１８】
転写フィルム面に採取する細胞を付着させるので、細胞の渇き具合などによっては、細胞を転写フィルム面に具合よく付着できず、細胞の採取ができないこともある。濡れた状態の細胞の採取は不可能である。細胞の転写フィルム面に対する付着は、細胞の渇き具合などの細胞の条件に影響される。換言すれば、細胞を採取可能になるためには、細胞の条件に限定される。
【００１９】
標本に照射するＩＲレーザビームの出力を大きくすると、細胞部分を転写フィルム面に付着させて細胞を採取する効率がよくなる。その反面、ＩＲレーザビームの出力を大きくすると、細胞が焼けてしまう。
【００２０】
（３）の方法は、ＵＶレーザビームの照射により採取する細胞部分を下方にセットされた受皿に落とし込む。このため、採取すべき細胞がどこに行ったか分からなくなる。又、取得した細胞にゴミなどの異物が混入しやすい。ＵＶレーザビームによる細胞の変質も予想される。
【００２１】
以上のような問題点を纏めると、
（ａ）採取したい細胞を採取するのに時間がかかる。そのうえ採取時に細胞が紛失しやすい。
【００２２】
（ｂ）小さな細胞の取得が難しい。標本の乾燥状態などから採取可能な細胞が限定される。
【００２３】
（ｃ）ＵＶレーザビームによる細胞の変質などの原因で十分な品質の細胞が多量に短時間で取得できない。
【００２４】
そこで本発明は、採取したい細胞を確実に、しかも効率よく採取できる細胞単離方法を提供することを目的とする
【００２５】
【課題を解決するための手段】
本発明は、基板上に載置され細胞を有する標本に対してレーザビームを照射して細胞部分以外の不要な標本部分を基板上から取り除き、両端に各開口部を有する筒状体を用い、筒状体における一方の開口部の中に細胞部分を入れて筒状体を前記基板上に設置し、基板と筒状体とにより形成される容器内に剥離剤を注入して細胞部分を基板から剥離し、剥離剤中に浮遊する細胞部分を採取する細胞単離方法である。
【００２６】
本発明は、基板上に載置され細胞を有する標本に対してレーザビームを照射して細胞部分以外の不要な標本部分を基板上から取り除き、両端に各開口部を有する筒状体を用い、筒状体における一方の開口部の中に細胞部分を入れて筒状体を基板上に設置し、基板と筒状体とにより形成される容器内に細胞中に存在する試料を溶出する溶液を注入し、溶液中に溶出した試料を採取する細胞又は細胞内の解析対象試料を単離する細胞単離方法である。
【００２７】
本発明は、基板上に載置され細胞を有する標本に対してレーザビームを照射して細胞部分以外の不要な標本部分を変質し、両端に各開口部を有する筒状体を用い、筒状体における一方の開口部の中に細胞部分を入れて筒状体を基板上に設置し、基板と筒状体とにより形成される容器内に剥離剤を注入して細胞部分を基板から剥離し、剥離剤中に浮遊する細胞部分を採取する細胞単離方法である。
【００２８】
本発明は、基板上に載置され細胞を有する標本に対して紫外光を照射して細胞部分以外の不要な標本部分を変質し、両端に各開口部を有する筒状体を用い、筒状体における一方の開口部の中に細胞部分を入れて筒状体を基板上に設置し、基板と筒状体とにより形成される容器内に剥離剤を注入して細胞部分を基板から剥離し、剥離剤中に浮遊する細胞部分を採取する細胞又は細胞内の解析対象試料を単離する細胞単離方法である。
【００２９】
【発明の実施の形態】
以下、本発明の第１の実施の形態を図面に従い説明する。
【００３０】
図１は本発明の細胞取得方法に用いる倒立型顕微鏡の構成図である。照明用光源１は、例えばハロゲンランプを用いる。照明用光源１は、可視光線を出力する。視野絞り２、開口絞り３及びダイクロイックミラー４が照明用光源１から出力される可視光線の光路上に設けられている。
【００３１】
視野絞り２及び開口絞り３は、一般的な顕微鏡の光学系を構成する。ダイクロイックミラー４は、可視光線を光軸ｐの下方に向って反射する。
【００３２】
レーザ用対物レンズ５がダイクロイックミラー４の反射光路（光軸ｐ）上に設けられている。レーザ用対物レンズ５は、照明用光源１から出力された可視光線を集光して標本７に照射する。レーザ用対物レンズ５は、コンデンサレンズとして機能する。
【００３３】
ステージ６は、ダイクロイックミラー４の反射光路上に設けられている。ステージ６上に標本７を載せるスライドガラス８が載置されている。ステージ６は、Ｘ方向とＹ方向との各モータ６ａ、６ｂを有する。ステージ６は、Ｘ方向のモータ６ａの駆動によりＸ方向に移動する。ステージ６は、Ｙ方向のモータ６ｂの駆動によりＹ方向に移動する。ステージ駆動部９は、Ｘ方向とＹ方向との各モータ６ａ、６ｂを駆動する。
【００３４】
標本７は、組織切片や培養細胞などで例えば遺伝子機能の解析に用いられる。細胞の核などを蛍光染色して蛍光観察しながら細胞を取得する場合、標本７は、予め蛍光色素を塗布されている。
【００３５】
観察用対物レンズ１０、ダイクロイックミラー１１、ＵＶバリアフィルタ１２、結像レンズ１３及びハーフミラー１４が標本７を透過する光軸ｐ上に設けられている。
【００３６】
ＣＣＤカメラ１５は、ハーフミラー１４の反射光路上に設けられている。ＣＣＤカメラ１５は、ハーフミラー１４を介して結像レンズ１３の結像位置に配置されている。ＣＣＤカメラ１５は、結像レンズ１３により結像された像を撮像して画像信号を出力する。
【００３７】
画像処理及びステージ制御装置１６は、ＣＣＤカメラ１５から出力された画像信号を入力し、画像信号を画像処理して画像データを取得し、画像データをディスプレイ１７に表示する。
【００３８】
画像処理及びステージ制御装置１６は、キーボート及びマウスなどの操作部１８を接続する。操作部１８は、観察者によるステージ６の移動方向及び移動量の操作を受け、この操作指令を発生する。画像処理及びステージ制御装置１６は、操作部１８からの操作指令を受け、操作指令に従ったステージ６の移動制御信号をステージ駆動部９に送出する。
【００３９】
ミラー１９がハーフミラー１４の透過光路上に設けられている。リレーレンズ２０、ＵＶカットフィルタ２１及び接眼レンズ２２がミラー１９の反射光路上に設けられている。
【００４０】
一方、ＵＶレーザヘッド２３がレーザ用対物レンズ５及びダイクロイックミラー４を通る光軸ｐ上に設けられている。ＵＶレーザヘッド２３とダイクロイックミラー４との間の光軸ｐ上にＵＶ結像レンズ２４が設けられている。
【００４１】
ＵＶレーザヘッド２３は、レーザ光源２３ａを有する。ＵＶレーザヘッド２３は、紫外領域の波長のレーザビームを出力する。ＵＶレーザヘッド２３から出力されるレーザビームは、標本７中に有する複数の細胞のうち採取したい細胞以外の不必要な細胞をスライドガラス８上から取り除く。
【００４２】
ＵＶレーザヘッド２３から出力されるレーザビームのエネルギは、スライドガラス８上の不必要な細胞をスライドガラス８上から取り除く程度に設定されている。
【００４３】
ＵＶレーザヘッド２３は、可変スリット２５及びＬＥＤ２６を有する。可変スリット２５は、例えば円形又は四辺形の開口部を有する。可変スリット２５は、開口部の径の大きさを可変可能である。可変スリット２５は、ＵＶレーザヘッド２３から出力されるレーザビームのスポット径を可変する。
【００４４】
ＬＥＤ２６は、ＬＥＤ光を出力する。ＬＥＤ光は、可視光線の波長の光、例えば赤色の可視光である。
【００４５】
ダイクロイックミラー２７がＬＥＤ光の光路上に設けられている。ダイクロイックミラー２７は、ＬＥＤ２６から出力されたＬＥＤ光をＵＶレーザヘッド２３から出力されるレーザビームの光軸ｐ上に向けて反射する。
【００４６】
これにより、ＬＥＤ光は、ＬＥＤ光とＵＶレーザビームの波長に対して透過性を持つダイクロイックミラー２７を通過し、標本７におけるレーザビームの照射位置と同一位置に照射される。標本７上に照射された赤色のＬＥＤ光は、標本７上に照射するレーザビームの照射位置を表示する。
【００４７】
蛍光励起用光源２８及びＵＶバンドパスフィルタ２９がダイクロイックミラー１１の反射光路上に設けられている。蛍光励起用光源２８は、ステージ６の下方に設けられている。蛍光励起用光源２８は、紫外光を出力する。蛍光励起用光源２８は、例えば水銀ランプである。
【００４８】
蛍光励起用光源２８から出力される紫外光は、ＵＶバンドパスフィルタ２９を透過し、ダイクロイックミラー１１で反射し、観察用対物レンズ１０を通って標本７に照射される。蛍光励起用光源２８から出力される紫外光は、標本７に予め塗布された蛍光色素を励起する。
【００４９】
エアーブロー３０は、ステージ６の斜め上方に設けられている。エアーブロー３０は、ステージ６上に載置されている標本７に向ってエアーを吹き付ける。標本７における不必要な細胞をスライドガラス８上から取り除く場合、不必要な細胞の破片が発生する。不必要な細胞の破片は、エアーブロー３０により吹き付けられるエアーによってスライドガラス８上から吹き飛ばされる。
【００５０】
エアー吸引機３１は、ステージ６の斜め上方に設けられている。エアー吸引機３１は、例えばステージ６上の標本７を介してエアーブロー３０と対峙する。エアー吸引機３１は、エアーを吸引し、エアーブロー３０のエアー吹き付けによって飛ばされた細胞の破片を吸引する。
【００５１】
次に、標本７中に存在する細胞の採取方法について説明する。
【００５２】
標本７がスライドガラス８上に載置される。スライドガラス８は、ステージ６上に載置される。
【００５３】
照明用光源１は、可視光線を出力する。可視光線は、視野絞り２、開口絞り３を通り、ダイクロイックミラー４で反射し、レーザ用対物レンズ５を通して標本７に照射される。標本７に照射された可視光線の一部は、標本７を透過する。
【００５４】
標本７を透過した光は、観察用対物レンズ１０を通り、ダイクロイックミラー１１、ＵＶバリアフィルタ１２を透過し、結像レンズ１３により結像される。
【００５５】
ＣＣＤカメラ１５は、ハーフミラー１４を介して結像レンズ１３により結像された標本７の拡大像を撮像して画像信号を出力する。
【００５６】
画像処理及びステージ制御装置１６は、ＣＣＤカメラ１５から出力された画像信号を入力し、画像信号を画像処理して画像データを取得し、画像データをディスプレイ１７に表示する。
【００５７】
これと共に、結像レンズ１３により結像された標本７の像は、ミラー１９で反射し、リレーレンズ２０、ＵＶカットフィルタ２１を通って接眼レンズ２２に入射する。観察者は、接眼レンズ２２を覗くことにより拡大された標本７の像を目視観察する。
【００５８】
観察者は、ディスプレス１７に表示される標本７の拡大像又は接眼レンズ２２を覗いて標本７の拡大像を観察しながら標本７中から採取したい細胞を決定する。
【００５９】
標本７中から細胞ａを採取する場合、図２に示す筒体４０を用いる。筒体４０は、例えばプラスチックや金属、ガラス材料からなる。筒体４０は、円筒形状に形成され、両端に円形の各開口部を形成する。筒体４０の径は、採取する細胞ａよりも大きければよい。筒体４０のサイズは、一例として外径４〜１１ｍｍ、内径３〜１０ｍｍ、長さ５〜１０ｍｍである。筒体４０のサイズは、一例のサイズよりも小さいものもある。
【００６０】
標本７が筒体４０の内径よりも大きければ、採取する細胞ａを有する標本部分ｄをトリミングする。筒体４０の開口部の形状が円形であれば、図３に示すように標本７中の採取した細胞ａを有する標本部分ｄを円形にトリミングする。標本７が筒体４０の内径よりも小さければ、トリミングの必要はない。
【００６１】
筒体４０は、円形の各開口部を有するものに限らず、他の形状の開口部を有するものでもよい。例えば、筒体４０の開口部の形状が四辺形状の場合、トリミングする標本部分ｄの形状は、図４に示すように標本７中の採取する細胞ａを有する四辺形状になる。
【００６２】
採取する細胞ａを有する標本部分ｄのトリミングについて説明する。
【００６３】
ＵＶレーザヘッド２１の可変スリット２２は、例えば円形の開口部を用いる。可変スリット２２は、スリット径を例えば図２に示すように筒体４０の壁の厚さＳ１と略同等のスポット径ｓ１になるように設定する。
【００６４】
一方、ＬＥＤ２６から赤色のＬＥＤ光が出力される。ＬＥＤ光は、ダイクロイックミラー２７で反射し、可変スリット２５に入射する。ＬＥＤ光は、可変スリット２５の開口部を通過することにより、スポット径ｓ１の円形のＬＥＤ光に成形される。
【００６５】
スポット径ｓ１のＬＥＤ光は、ＵＶ結像レンズ２４、レーザ用対物レンズ５を通して標本７に照射される。このときダイクロイックミラー４を透過したスポット径ｓ１のＬＥＤ光は、ＵＶレーザヘッド２３から出力されるレーザビームの光軸ｐ上に進行する。スポット径ｓ１のＬＥＤ光は、標本７におけるレーザビームの照射位置と同一位置を赤色で照射する。
【００６６】
ＣＣＤカメラ１５は、標本７の拡大像を撮像して画像信号を出力する。画像処理及びステージ制御装置１６は、ＣＣＤカメラ１５から出力された画像信号を入力し、画像信号を画像処理して画像データを取得し、赤色のスポット径ｓ１のＬＥＤ光の照射された標本７の画像データをディスプレイ１７に表示する。
【００６７】
観察者は、ディスプレス１５に表示されている標本７を観察しながら標本部分ｄを残し、標本部分ｄの周囲の標本７の部分をスライドガラス８上から取り除くレーザビームの照射ルートＲ１を決定する。
【００６８】
レーザビームの照射ルートＲ１は、円形の開口部の筒体４０を用いる場合、図３に示すように円形である。レーザビームの照射ルートＲ１は、四辺形の開口部の筒体４０を用いる場合、図４に示すように四辺形である。
【００６９】
次に、ＵＶレーザヘッド２３は、例えば１ショット毎にレーザビームを出力する。レーザビームのエネルギは、スライドガラス８上の不必要な標本部分ｄの外周部分をスライドガラス８上から取り除く程度に設定されている。なお、レーザビームのエネルギは、周囲環境に多少の湿気があっても採取したい細胞ａ以外の不要部分を完全に吹き飛ばす程度に設定することが好ましい。
【００７０】
レーザビームは、ＵＶ結像レンズ２４、ダイクロイックミラー４、レーザ用対物レンズ５を通って標本７の照射ルートＲ１上に照射される。
【００７１】
観察者は、ディスプレス１７に表示される標本７上のＬＥＤ光の照射位置又は接眼レンズ２２を覗いてＬＥＤ光の照射位置を確認する。観察者は、ＬＥＤ光の照射位置を照射ルートＲ１上になるように確認しながらキーボート及びマウスなどの操作部１８を操作する。
【００７２】
画像処理及びステージ制御装置１６は、操作部１８からのステージ６の移動方向及び移動量の操作に応じた操作指令を受け、操作指令に従ったステージ６の移動制御信号をステージ駆動部９に送出する。
【００７３】
ステージ６は、例えば１ショットのレーザビーム毎に、標本７上のＬＥＤ光の照射位置を照射ルートＲ１上になるようにＸＹ方向に移動する。ステージ６のＸＹ方向の移動により１ショット毎のレーザビームは、それぞれ標本７上の照射ルートＲ１上に移動しながら照射される。
【００７４】
レーザビームの照射された照射ルートＲ１上の標本７の各部分は、それぞれスライドガラス８上から取り除かれる。これにより、図３に示すように採取する細胞ａを有する標本部分ｄが円形にトリミングされる。又、図４に示すように採取する細胞ａを有する標本部分ｄが四辺形にトリミングされる。
【００７５】
なお、各照射ルートＲ１、Ｒ２のＸＹ座標位置は、予め画像処理及びステージ制御装置１６に記憶させてもよい。すなわち、レーザビームの各照射ルートＲ１、Ｒ２が決定された後、標本７上にＬＥＤ光を照射する。観察者は、操作部１８を操作してステージ６をＸＹ方向に移動し、ＬＥＤ光を照射ルートＲ１、Ｒ２に従って移動させる。
【００７６】
このとき、画像処理及びステージ制御装置１６は、操作部１８からのステージ６の移動方向及び移動量を読み取り、これら移動方向及び移動量からステージ６の照射ルートＲ１、Ｒ２のＸＹ座標位置を算出する。画像処理及びステージ制御装置１６は、算出した照射ルートＲ１、Ｒ２のＸＹ座標位置を内部メモリに記憶する。
【００７７】
画像処理及びステージ制御装置１６は、内部メモリに記憶された各照射ルートＲ１、Ｒ２のＸＹ座標位置を読み出し、このＸＹ座標位置に従ってステージ６の移動制御信号をステージ駆動部９に送出する。
【００７８】
ステージ６は、自動的にレーザビームの照射位置を照射ルートＲ１、Ｒ２上にするようにＸＹ方向に移動する。これと共にＵＶレーザヘッド２３は、所定期間毎に１ショットのレーザビームを出力する。
【００７９】
レーザビームの照射された照射ルートＲ１、Ｒ２上の標本７の部分は、スライドガラス８上から取り除かれる。これにより、図３に示すように採取する細胞ａを有する標本部分ｄが自動的に円形にトリミングされる。又、図４に示すように採取する細胞ａを有する標本部分ｄが自動的に四辺形にトリミングされる。
【００８０】
レーザビームを標本７に照射すると、標本７の破片が切り取られる。切り取られた破片は、例えばスライドガラス８の上方に飛び散る。
【００８１】
エアーブロー３０は、スライドガラス８の上方にエアー吹き付ける。スライドガラス８の上方に飛び散る標本７の破片は、エアーブロー３０から吹き付けられたエアーによってスライドガラス８の上方から飛ばされる。
【００８２】
エアー吸引機３１は、エアーを吸引し、エアーブロー３０のエアー吹き付けによって飛ばされた標本７の破片を吸引する。
【００８３】
これにより、スライドガラス８の上方に飛び散る標本７の破片は、スライドガラス８上から除去される。
【００８４】
標本部分ｄのトリミングは、次の方法で行ってもよい。
【００８５】
予め標本７は、蛍光色素により塗布される。
【００８６】
蛍光励起用光源２８は、紫外光を放射する。蛍光励起用光源２８から放射された紫外光は、ＵＶバンドパスフィルタ２９を透過してダイクロイックミラー１１に入射する。紫外光は、ダイクロイックミラー１１で上方に反射し、観察用対物レンズ１０を通して標本７に照射される。標本７に塗布された蛍光色素は、励起されて発光する。
【００８７】
標本７からの蛍光は、観察用対物レンズ１０からダイクロイックミラー１１、ＵＶバリアフィルタ１２を透過し、結像レンズ１３により結像される。
【００８８】
ＣＣＤカメラ１５は、標本７の拡大像及び蛍光を撮像して画像信号を出力する。画像処理及びステージ制御装置１６は、ＣＣＤカメラ１５から出力された画像信号を入力し、画像信号を画像処理して画像データを取得し、蛍光を発する標本７の画像データをディスプレイ１７に表示する。
【００８９】
これと同時に、標本７の像及び蛍光は、ミラー１９で反射し、リレーレンズ２０、ＵＶカットフィルタ２１を通って接眼レンズ２２に入射する。これにより、観察者は、接眼レンズ２２を覗くことにより蛍光を発する標本７の拡大像を目視観察する。
【００９０】
観察者は、ディスプレス１７に表示される標本７の拡大像及び蛍光、又は接眼レンズ２２を覗いて標本７の拡大像及び蛍光を観察する。観察者は、標本７の拡大像及び蛍光を観察しながら標本７中から採取したい細胞ａを決定できる。
【００９１】
標本７に塗布された蛍光色素が発光するので、可視光線を用いた場合と比較して採取したい細胞ａは、さらに決定し易い。コンピュータを使った画像認識により、採取したい細胞ａを自動で選択することも可能である。
【００９２】
次に、採取したい細胞ａを有する標本ｄから採取したい細胞ａだけを残し、それ以外の細胞を除去する手順について図８を参照して説明する。
【００９３】
可変スリット２５は、開口部の径の大きさを最大にする。可変スリット２５は、ＵＶレーザヘッド２３から出力されるレーザビームのスポット径を大きくする。図８に示すように採取したい細胞ａから離れた細胞ａは、大きなスポット径ｓ２のレーザビームにより照射される。
【００９４】
次に、可変スリット２５は、開口部の径の大きさを小さくする。採取したい細胞ａの周りは、小さなスポット径ｓ３のレーザビームにより丁寧に、すなわち細胞ａの周り沿って正確に照射する。採取したい細胞ａだけが残る。
【００９５】
次に、図２に示す筒体４０が用意される。接着剤４１が筒体４０の一方の開口部に塗布される。筒体４０とスライドガラス８などの基板との接着は、剥離又は抽出のための溶液によって影響を受けない例えばグリース、パラフィン又は各種接着剤を用いる。予め接着剤を塗布した使い捨ての厚手のシール又は筒体を用いてもよい。
【００９６】
筒体４０は、一方の開口部を下方に向けてスライドガラス８の上面に垂直に立設される。筒体４０をスライドガラス８の上面に立設する場合、細胞ａを有する標本部分ｄが一方の開口部内に入れられる。
【００９７】
次に、筒体４０は、スライドガラス８側に対して軽く押し付けられる。これにより、筒体４０とスライドガラス８との接着は、確実な状態になる。接着剤４１が硬化すると、筒体４０とスライドガラス８とによって液密の容器が形成される。筒体４０及びスライドガラス８は、ステージ６上から取り外される。
【００９８】
次に、剥離剤４２が図５に示すように筒体４０とスライドガラス８とにより形成される容器内に注入される。剥離剤４２は、例えばキシレンなどの有機溶媒又は界面活性剤などである。剥離剤４２は、スライドガラス８からの細胞ａの剥離を促進する。図６はスライドガラス８から剥離された細胞ａを示す。剥離された細胞ａは、剥離剤４２中に浮遊する。
【００９９】
次に、剥離剤４２中に浮遊する細胞ａは、剥離剤４２と共にスポイトなどにより吸引される。スポイトにより吸引された細胞ａは、新しい別の容器などに移し替えられる。この結果、細胞ａの採取が終了する。
【０１００】
このように上記第１の実施の形態であれば、筒体４０の開口部の内径よりも小さい標本部分ｄを開口部内に入れて筒体４０をスライドガラス８上に立設し、筒体４０とスライドガラス８との間を接着剤４１により液密に形成し、筒体４０とスライドガラス８とにより形成される容器内に剥離剤４２を注入し、採取したい細胞ａをスライドガラス８から剥離して剥離剤４２中に浮遊させて採取する。
【０１０１】
従って、標本７に有する採取すべき細胞ａを確実に採取できる。これにより、従来のように細胞ａがどこに行ったか分らなくなることがない。細胞ａを紛失することを皆無にできる。採取した細胞ａにゴミなどの異物が混入するようなことも確実に防止できる。
【０１０２】
上記第１の実施の形態は、最初にスライドガラス８上に標本７を載置するので、従来のように特殊な薄膜プレートやフィルムを一切使用しない。薄膜プレートやフィルムへの標本７の貼り付け作業などを無くすことができる。これにより、上記第１の実施の形態は、細胞ａの採取作業を簡単化できかつ効率よくできる。しかも経済的にも有利である。
【０１０３】
上記第１の実施の形態は、従来における細胞採取用の透明キャップなどを用いないので、レーザビームのスポット径を小さくできる。よって、採取したい細胞ａが極小であっても、採取したい細胞ａを残し、それ以外の細胞にレーザビームを照射することができる。
【０１０４】
上記第１の実施の形態は、転写フィルムなどの特殊なものを使用しない。よって、作業の手間が省け、消耗品の費用も削減できる。
【０１０５】
一般に、細胞や細胞に含まれる遺伝子などの機能を解析する場合は、目的とする細胞以外の細胞又はその遺伝子の混入を減らして試料の純度を高めることが要求される。又、標本切片から必要な細胞を選択して取得するのに時間が掛かるので、細胞取得の効率化が求められている。
【０１０６】
これに対して上記第１の実施の形態によれば、不必要な細胞を除去して必要な細胞のみを一度に多数取得できるので、高純度の試料が効率的に取得できる。
【０１０７】
上記第１の実施の形態は、筒体４０中に剥離剤４２を注入し、採取したい細胞ａをスライドガラス８から剥離させて剥離剤４２中に浮遊させて採取する。この細胞採取方法は、細胞ａの核の形状をできるだけ保持することを必要とする研究、例えばフローサイトメトリーなどの解析に有効である。
【０１０８】
上記第１の実施の形態は、適宜変形して実施できる。
【０１０９】
例えば、筒体４０とスライドガラス８の間は、必ずしも接着剤４１を使用しなくともよい。接着剤４１を使用しない場合は、例えば筒体４０の開口部に薄くグリースを塗ってもよい。これにより、剥離剤４２が筒体４０とスライドガラス８の間から漏れないようにしてもよい。
【０１１０】
筒体４０の材質は、ガラス製に限らず、プラスチック又は金属製のものなど他の材料を用いたものも適用できる。
【０１１１】
又、図９に示すように筒体４０の片側の開口部には、薄い樹脂により形成された透明フィルム６０を貼り付けたものも使用できる。この場合、剥離液／抽出液６１の注入・回収は、例えばスポイト、ピペット、シリンジ６２などを用いる。
【０１１２】
次に、透明フィルム６０を剥がし、剥離液／抽出液６１を筒体４０内に注入する。
【０１１３】
次に、透明フィルム６０により密閉した状態で剥離液／抽出液６１を反応させる。
【０１１４】
この後、透明フィルム６０を剥がし、例えばスポイト、ピペット、シリンジ６２などにより溶液を回収する。
【０１１５】
このようにすると筒体４０内への異物の混入を防止できる。
【０１１６】
上記第１の実施の形態は、例えばフローサイトメトリーなどの解析に有効であることを述べた。これに対して、例えば核酸（ＤＮＡ、ＲＮＡ）や蛋白の解析などの研究がある。この研究は、スライドガラス８からの細胞ａの剥離を必要としない。
【０１１７】
すなわち、図２に示すようにスライドガラス８上に筒体４０を接着固定する。次に、スライドガラス８をステージ６から取り外す。
【０１１８】
次に、図５に示すように筒体４０中に剥離剤４２に代えて細胞ａ中から直接採取目的とする試料、例えば核酸（ＤＮＡ、ＲＮＡ）や蛋白を抽出する溶液を注入する。この溶液は、例えば核酸抽出キットとして市販されているものなどを利用できる。
【０１１９】
溶液中に例えば核酸（ＤＮＡ、ＲＮＡ）や蛋白などの試料が溶出すると、上記第１の実施の形態と同様に、スポイトなどで溶液中に溶出された試料を吸引し、新しい別の容器などに移し替える。
【０１２０】
このように採取した例えば核酸（ＤＮＡ、ＲＮＡ）や蛋白を用いて、これら例えば核酸（ＤＮＡ、ＲＮＡ）や蛋白の解析ができる。
【０１２１】
次に、本発明の第２の実施の形態について説明する。なお、図１と同一部分には同一部号を付してその詳しい説明は省略する。
【０１２２】
図７は本発明の細胞取得方法に用いる倒立型顕微鏡の構成図である。ＵＶレーザヘッド２３は、紫外領域の波長のレーザビームを出力する。ＵＶレーザヘッド２３から出力されるレーザビームは、標本７中に有する複数の細胞のうち採取したい細胞ａを残し、採取したい細胞ａ以外の不必要な標本部分を変質するエネルギに設定される。不必要な標本部分の変質は、核酸の断片化などにより、核酸又は細胞の基本的特性を変化させることである。
【０１２３】
ステージ６は、測長部５０を有する。測長部５０は、ステージ６のＸＹ方向に移動するＸＹ座標を測定し、ＸＹ座標測定信号を出力する。
【０１２４】
画像処理及びステージ制御装置１６は、測長部５０から出力されたＸＹ座標測定信号を入力し、ＸＹ座標測定信号から標本７に照射されるレーザビームの照射位置を算出する。
【０１２５】
画像処理及びステージ制御装置１６は、ＣＣＤカメラ１５から出力された画像信号を画像処理して標本７の画像データを取得し、かつ画像データ中にレーザビームの照射位置を示す色付け表示部の画像データを重ね合わせる。色付け表示部は、例えば赤色が好ましい。
【０１２６】
画像処理及びステージ制御装置１６は、標本７の画像データとレーザビームの照射位置を示す色付け表示部の画像データとを重ね合わせてディスプレイ１７に表示する。
【０１２７】
次に、標本７中に存在する細胞ａの採取方法について説明する。
【０１２８】
上記第１の実施の形態と同様に、観察者は、ディスプレス１７に表示される標本７の拡大像又は接眼レンズ２２を覗いて標本７の拡大像を観察しながら例えば図８に示す標本７中から採取したい各細胞ａを決定する。
【０１２９】
次に、標本７中の採取すべき各細胞ａを残し、それ以外の細胞にレーザビームを照射する。
【０１３０】
採取したい細胞ａから離れた細胞は、大きなスポット径ｓ２でレーザビームを照射する。
【０１３１】
次に、可変スリット２５により小さなスポット径ｓ３にして、採取したい細胞ａの周りを丁寧に、すなわち細胞ａの周り沿って正確に照射して採取したい細胞ａだけを残す。
【０１３２】
上記第１の実施の形態では、レーザスポット径の大きさを可変スリット２５により調整したが、本第２の実施の形態では、不要な細胞の核酸を断片化するだけのレーザエネルギを有すればよい。核酸を断片化するレーザエネルギは、細胞ごと取り除くエネルギよりも小さい。これにより、レーザヘッド２３に代って水銀ランプなどを用いて不要な細胞の核酸を断片化させ、核酸又は細胞の基本的特性を変化させることが可能である。又、レーザ用対物レンズ５は、低倍率のものに切り換えてレーザスポット径を大きくすることができる。
【０１３３】
レーザ用対物レンズ５は、例えば低倍率の５倍程度に切り換える。
【０１３４】
一方、測長部５０は、ステージ６のＸＹ方向に移動するＸＹ座標を測定し、ＸＹ座標測定信号を出力する。
【０１３５】
画像処理及びステージ制御装置１６は、測長部５０から出力されたＸＹ座標測定信号を入力し、ＸＹ座標測定信号から標本７に照射されるレーザビームの照射位置を算出する。
【０１３６】
画像処理及びステージ制御装置１６は、ＣＣＤカメラ１５から出力された画像信号を画像処理して標本７の画像データを取得し、この画像データとレーザビームの照射位置を示す例えば赤色の色付け表示部の画像データとを重ね合わせる。
【０１３７】
画像処理及びステージ制御装置１６は、標本７の画像データとレーザビームの照射位置を示す色付け表示部の画像データとを重ね合わせてディスプレイ１７に表示する。
【０１３８】
観察者は、操作部１８を操作し、ディスプレス１７に表示されている標本７の画像とレーザビームの照射位置を示す色付け表示部とを確認しながら、スポット径ｓ２のレーザビームの照射位置を各細胞ａの周辺部分に１ショット毎に移動させる。
【０１３９】
スポット径ｓ２のレーザビームの照射は、各細胞ａの周囲の標本７に対して行う。なお、図８においてスポット径ｓ２のレーザビームの照射位置を全て図示することはしていない。
【０１４０】
スポット径ｓ２のレーザビームの照射された標本７の部分は、核酸などの断片化により核酸又は細胞の基本特性が変化する。
【０１４１】
次に、ＵＶレーザヘッド２１の可変スリット２２は、円形の開口部の径を例えば図８に示すように細胞ａよりも小さいスリット幅Ｓ３に設定する。これにより、標本７上に照射されるレーザビームのスポット径はｓ３になる。
【０１４２】
なお、レーザ用対物レンズ５を高倍率例えば倍率５０倍程度に切り換え、レーザ用対物レンズ５の前方にＮＤフィルタを配置してもよい。
【０１４３】
観察者は、ディスプレス１７に表示されている標本７を観察しながら各細胞ａを残し、各細胞ａに隣接する周囲の標本７を変質させるレーザビームの各照射ルートＲ３、Ｒ４を決定する。
【０１４４】
観察者は、ディスプレス１７に表示される標本７の画像とレーザビームの照射位置を示す色付け表示部を確認しながら、レーザビームの照射位置を照射ルートＲ３又はＲ４上になるように操作部１８を操作する。
【０１４５】
画像処理及びステージ制御装置１６は、操作部１８からのステージ６の移動方向及び移動量の操作に応じた操作指令を受け、操作指令に従ったステージ６の移動制御信号をステージ駆動部９に送出する。
【０１４６】
これにより、ステージ６は、例えば１ショットのレーザビーム毎に、照射ルートＲ２又はＲ３上になるようにＸＹ方向に移動する。
【０１４７】
ＵＶレーザヘッド２３から例えば１ショット毎にレーザビームが出力されると、レーザビームは、ＵＶ結像レンズ２４、ダイクロイックミラー４、レーザ用対物レンズ５を通って照射ルートＲ３上に照射され、続いて照射ルートＲ４上に照射される。なお、レーザビームは、照射ルートＲ４上に照射し、続いて照射ルートＲ３上に照射してもよい。
【０１４８】
レーザビームのエネルギは、各細胞ａに隣接する周囲の標本７を変質させる程度に設定されている。従って、レーザビームの照射された各照射ルートＲ３、Ｒ４上の標本７の部分は、核酸などの断片化により核酸又は細胞の基本特性が変化する。
【０１４９】
なお、各照射ルートＲ３、Ｒ４のＸＹ座標位置は、予め画像処理及びステージ制御装置１６に記憶させてもよい。すなわち、レーザビームの各照射ルートＲ３、Ｒ４が決定された後、観察者は、操作部１８を操作してステージ６をＸＹ方向に移動し、レーザビームの照射位置を示す色付け表示部を各照射ルートＲ３、Ｒ４毎に従ってそれぞれ移動させる。
【０１５０】
このとき、画像処理及びステージ制御装置１６は、操作部１８からのステージ６の移動方向及び移動量を読み取り、これら移動方向及び移動量からステージ６の各照射ルートＲ３、Ｒ４毎のＸＹ座標位置をそれぞれ算出する。画像処理及びステージ制御装置１６は、算出した各照射ルートＲ３、Ｒ４毎のＸＹ座標位置を内部メモリに記憶する。
【０１５１】
画像処理及びステージ制御装置１６は、内部メモリに記憶された各照射ルートＲ３、Ｒ４毎のＸＹ座標位置を読み出し、このＸＹ座標位置に従ってステージ６の移動制御信号をステージ駆動部９に送出する。
【０１５２】
ステージ６は、自動的にレーザビームの照射位置を各照射ルートＲ３、Ｒ４毎にそれぞれＸＹ方向に移動する。これと共にＵＶレーザヘッド２３は、所定期間毎に１ショットのレーザビームを出力する。
【０１５３】
これにより、各照射ルートＲ３、Ｒ４上の標本７の部分は、自動的にレーザビームの照射を受けて細胞内の核酸などの断片化により、核酸又は細胞の基本的特性が変化する。
【０１５４】
次に、上記第１の実施の形態と同様に、図２に示す筒体４０が用意される。筒体４０は、スライドガラス８上に接着固定される。
【０１５５】
次に、図５に示すように筒体４０中に細胞ａ中から試料、例えば核酸（ＤＮＡ、ＲＮＡ）や蛋白を抽出する溶液が注入される。
【０１５６】
溶液中に例えば核酸（ＤＮＡ、ＲＮＡ）や蛋白などの試料が溶出すると、試料は、スポイトなどにより吸引され、新しい別の容器などに移し替えられる。
【０１５７】
一方、細胞ａをスライドガラス８上から剥離する場合、図２に示すように筒体４０は、接着剤４１によりスライドガラス８上に接着固定される。
【０１５８】
次に、剥離剤４２が図５に示すように筒体４０とスライドガラス８とにより形成される容器内に注入される。剥離剤４２は、図６に示すようにスライドガラス８からの細胞ａの剥離を促進する。
【０１５９】
次に、剥離剤４２中に浮遊する細胞ａは、剥離剤４２と共にスポイトなどにより吸引される。スポイトにより吸引された細胞ａは、新しい別の容器などに移し替えられる。この結果、細胞ａの採取が終了する。
【０１６０】
このように上記第２の実施の形態によれば、標本７における採取したい細胞ａ以外の不要な標本部分ｄに対してレーザビームを照射し、不要な標本部分ｄの核酸などを断片化させ、核酸又は細胞の基本特性を変化させる。
【０１６１】
この後、筒体４０中に細胞ａ中から試料、例えば核酸（ＤＮＡ、ＲＮＡ）や蛋白を抽出する溶液を注入し、例えば核酸（ＤＮＡ、ＲＮＡ）や蛋白などの試料を溶出する。又、筒体４０とスライドガラス８とにより形成される容器内に剥離剤４２を注入し、採取したい細胞ａをスライドガラス８から剥離して剥離剤４２中に浮遊させて採取する。
【０１６２】
このように第２の実施の形態は、レーザビームを照射して不要な標本部分ｄの細胞の核酸などを断片化し、核酸又は細胞の基本特性を変化させるので、主に生の標本７から例えば核酸（ＤＮＡ、ＲＮＡ）や蛋白などの試料を抽出する場合に有効である。
【０１６３】
生の標本は、水分を含んでいる。生の標本７にエネルギの大きいレーザビームを照射すると、標本７中の水分の沸騰により標本７がカットできない。
【０１６４】
これに対して第２の実施の形態におけるレーザビームのエネルギは、不要な標本部分ｄの核酸などを断片化させ、核酸又は細胞の基本特性を変化させるのに必要なエネルギである。レーザビームのエネルギは、実験結果として例えばＤＮＡの断片化の場合には、波長２６６ｎｍで、６０μｍ四方の正方形の面積に対して０．０７５ｍＪを得ている。なお、レーザビームのエネルギは、０．０７５ｍＪよりも小さくても核酸などを断片化し、核酸又は細胞の基本特性を変化させることを可能とする。
【０１６５】
採取するに必要な細胞ａ以外の不要な標本部分を変質する場合、先ず、各細胞ａの周りの不要な標本部分ｄに大きなスポット径ｓ２のレーザビームを照射し、次に、各細胞ａに隣接する周囲の不要な標本部分ｄに小さいスポット径ｓ３のレーザビームを照射する。これにより、不要な標本部分ｄに照射するレーザビームの回数を少なくできる。広い領域の不要な標本部分ｄの変質が短時間でできる。
【０１６６】
上記第１の実施の形態のように不要な標本部分ｄをスライドガラス８上から飛ばす場合、レーザ用対物レンズ５は、一般的に倍率５０倍程度を用いる。これに対して上記第２の実施の形態は、倍率５倍程度のレーザ用対物レンズ５を用いればよい。これにより、上記第２の実施の形態は、倍率５０倍のレーザ用対物レンズ５を用いた場合と比較して、レーザビームのスポット領域を１００倍に広げることができる。
【０１６７】
不要な標本部分ｄの細胞を変質するので、レーザビームを標本７に照射したときに標本７の破片が飛び散ることはない。これにより、エアーブロー３０及びエアー吸引機３１は、不要になる。
【０１６８】
ディスプレイ１７には、標本７の画像データ中にレーザビームの照射位置を示す例えば赤色の色付け表示部の画像データを重ね合わせて表示する。観察者は、ディスプレイ１７の画像を確認しながら標本７にレーザビームを照射できる。これにより、採取する細胞ａに隣接する周囲及びその他の不要な標本部分ｄを確実に変質できる。
【０１６９】
上記第２の実施の形態では、レーザビームのエネルギを細胞を変質する程度に設定しているが、光源として例えば、水銀ランプ又はキセノンランプを用いてもよい。水銀ランプ又はキセノンランプから放射される光を細胞に照射しても、核酸などを断片化し、核酸又は細胞の基本特性を変化させることは可能である。
【０１７０】
なお、本発明は、上記第１及び第２の実施の形態に限定されるものでなく、実施段階ではその要旨を逸脱しない範囲で種々に変形することが可能である。
【０１７１】
さらに、上記実施形態には、種々の段階の発明が含まれており、開示されている複数の構成要件における適宜な組み合わせにより種々の発明が抽出できる。例えば、実施形態に示されている全構成要件から幾つかの構成要件が削除されても、発明が解決しようとする課題の欄で述べた課題が解決でき、発明の効果の欄で述べられている効果が得られる場合には、この構成要件が削除された構成が発明として抽出できる。
【０１７２】
【発明の効果】
以上詳記したように本発明によれば、採取したい細胞を確実に、しかも効率よく採取できる細胞単離方法を提供できる。
【図面の簡単な説明】
【図１】本発明の細胞単離方法の第１の実施の形態に用いる倒立型顕微鏡の構成図。
【図２】本発明の第１の実施の形態における細胞の採取に用いる筒体を示す図。
【図３】本発明の第１及び第２の実施の形態における細胞のトリミングを示す図。
【図４】本発明の第１及び第２の実施の形態における細胞のトリミングを示す図。
【図５】本発明の第１及び第２の実施の形態における剥離剤の注入を示す図。
【図６】本発明の第１及び第２の実施の形態における細胞の剥離した状態を示す図。
【図７】本発明の細胞取得方法の第２の実施の形態に用いる倒立型顕微鏡の構成図。
【図８】本発明の第１及び第２の実施の形態における不要な細胞へのレーザ照射を示す図。
【図９】本発明の第１及び第２の実施の形態における細胞の採取方法の一例を示す図。
【符号の説明】
１：照明用光源、２：視野絞り、３：開口絞り、４：ダイクロイックミラー、５：レーザ用対物レンズ、６：ステージ、７：標本、８：スライドガラス、６ａ，６ｂ：モータ、９：ステージ駆動部、１０：観察用対物レンズ、１１：ダイクロイックミラー、１２：ＵＶバリアフィルタ、１３：結像レンズ、１４：ハーフミラー、１５：ＣＣＤカメラ、１６：画像処理及びステージ制御装置、１７：ディスプレイ、１８：操作部、１９：ミラー、２０：リレーレンズ、２１：ＵＶカットフィルタ、２２：接眼レンズ、２３：ＵＶレーザヘッド、２４：ＵＶ結像レンズ、２３ａ：レーザ光源、２５：可変スリット、２６：ＬＥＤ、２７：ダイクロイックミラー、２８：蛍光励起用光源、２９：ＵＶバンドパスフィルタ、３０：エアーブロー、３１：エアー吸引機、４０：筒体、４１：接着剤、４２：剥離剤、５０：測長部、６０：透明フィルム、６１：剥離液／抽出液、６２：スポイト，ピペット，シリンジ。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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