(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
下記式（化１）で示される新規複合糖ペプチド。
【化１】
0003741495.tif 000002
（式中、Ｒ1 はＡｌａ−Ｓｅｒ−Ｔｈｒ−Ｔｈｒ−Ｔｈｒ、Ｔｈｒ−ＴｈｒあるいはＤ−Ａｌａ−Ｓｅｒ−Ｔｈｒ−Ｔｈｒ−Ｔｈｒからなるペプチド残基を示し、Ｘは、Ｈ、９−フルオレニルメチルオキシカルボニル（Ｆｍｏｃ）基、第３ブチルオキシカルボニル（Ｂｏｃ）基、３−ニトロ−２−ピリジンスルフェニル（Ｎｐｙｓ）基、ベンジルオキシカルボニル（Ｚ）基あるいはダンシル（ＤＮＳ）基からなるＮ末端αアミノ基の保護基、またＹはＯＨあるいはＮＨ2である。Ｒ2 は、複合型糖鎖、高マンノース型糖鎖あるいは混成型糖鎖を示す。）
【請求項２】
（化１）の化合物のＲ2 で示される糖鎖が、（ＮｅｕＡｃ）2（Ｇａｌ）2（ＧｌｃＮＡｃ）2（Ｍａｎ）3（ＧｌｃＮＡｃ）1 あるいは（Ｇａｌ）2（ＧｌｃＮＡｃ）2（Ｍａｎ）3（ＧｌｃＮＡｃ）1 からなる複合型糖鎖、あるいは（Ｍａｎ）6（ＧｌｃＮＡｃ）1 からなる高マンノース型糖鎖である請求項１に記載の化合物。但し、ＭａｎはＤ−マンノース、ＧｌｃＮＡｃはＮ−アセチル−Ｄ−グルコサミン、ＮｅｕＡｃはＮ−アセチルノイラミン酸、ＧａｌはＤ−ガラクトースを示す。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は、新規生理活性複合糖ペプチド、およびその製造法に関する。本発明は医薬に応用される。
【０００２】
【従来の技術】
糖質および複合糖質は生物の細胞、体液等に存在し、細胞の基質認識や細胞−細胞間の認識等に深く関わっている。エリスロポエチンやティシュープラスミノーゲンアクチベーター等のタンパク質あるいはヒト絨毛性性腺刺激ホルモン（ｈＣＧ）等のペプチドホルモンには糖鎖を持つものが知られ、それら糖鎖は基質認識と共に生体内物質の吸収分解等の代謝の速度に関係している。これら糖タンパク質あるいは糖ペプチドでは糖鎖が通常Ｎ結合型糖鎖として、ペプチド鎖のアスパラギン（Ａｓｎ）にＮ−アセチルグルコサミン（ＧｌｃＮＡｃ）を介して結合している。
【０００３】
タンパク質あるいは生理活性ペプチドの糖鎖を別の糖鎖に換えたり、あるいは元々糖鎖のないタンパク質あるいは生理活性ペプチドに糖鎖を付与することにより、生理機能の強化や生理活性の改変に役立つことが期待される。
【０００４】
ＨＩＶウィルス感染により発症する後天性免疫不全症即ちエイズ感染症は今や深刻な社会問題化しつつある。
【０００５】
その活療法として、アジドチミジンやジデオキシイノシン（ＤＤＩ）等の核酸系医薬が使われるが完治に至らず、また蛋白分解酵素阻害剤やワクチン等が開発されているがまだ実用化に至っていない。
【０００６】
ＨＩＶウィルスの感染成立には外膜糖タンパク質のＧＰ−１２０が関与し、そのタンパク質の中の部分ペプチドがＨＩＶウィルスの細胞膜レセプター（ＣＤ４）への結合を阻害し、感染の阻止作用のあることが見い出された。即ち、Ｃ．Ｂ．パート（C. B. Pert）ら［プロシーディング  オブ  ナショナル  アカデミーオブ  サイエンス（Proc. Natl. Acad. Sci.）、第８３巻、第９２５４〜９２５８頁（１９８６）］はＨ−Ａｌａ−Ｓｅｒ−Ｔｈｒ−Ｔｈｒ−Ｔｈｒ−Ａｓｎ−Ｔｙｒ−Ｔｈｒ−ＯＨ（ＡｌａはＬ−アラニン、ＳｅｒはＬ−セリン、ＴｈｒはＬ−トレオニン、ＡｓｎはＬ−アスパラギンまたＴｙｒはＬ−チロシンを示す）からなる「ペプチド−Ｔ」と称する８つのアミノ酸からなるペプチド（オクタペプチド）が抗ＨＩＶ活性を示すことを報告した。
【０００７】
次いで、ペプチド−Ｔの抗ＨＩＶ活性にはＨ−Ｔｈｒ−Ｔｈｒ−Ａｓｎ−Ｔｙｒ−Ｔｈｒ−ＯＨの５つのアミノ酸からなるペンタペプチドで有効なことがＭ．Ｒ．ラフ（M. R. Ruff）ら［フェブス  レター（FEBS Letter）、第２１１巻、第１７〜２２頁（１９８７）］により示された。
【０００８】
更に、生体内での安定性と薬効の向上を目指してＮ末端のＡｌａをＤ−体のアラニン（Ｄ−Ａｌａ）にまたＣ末端のカルボン酸をアミド（ＮＨ2）化したアナログ［Ｄ−Ａｌａ1］ペプチドＴアミドがＣ．Ｃ．スミス(C. C. Smith)ら［ドラッグ  デベロップメント  リサーチ(Drug Develop. Res.)、第１５巻、第３７１〜３７９頁（１９８８）］により合成され，ＡＩＤＳ治療薬としての臨床試験が行われている「Ｔ．Ｅ．ラムダーレ(T. E. Ramdale)ら［フェブス  レター(FEBS Letters)、第３３３巻、第２１７〜２２２頁（１９９３）］」。
【０００９】
生理活性ペプチドを医薬として用いる場合、体液中の分解酵素による分解等により、その有効性が著しく損なわれることが多い。ペプチド−Ｔも血液中で分解され易い。
【００１０】
血液中での安定性を高める方法として糖鎖を付与することが有効と考えられる。Ｌ．アージ（L. Urge）ら［バイオケミカル  バイオフィジカル  リサーチ  コミュニケーション（Biochem. Biophys. Res. Commun.）、第１８４巻、第１１２５〜１１３２頁（１９９２）］はペプチド−ＴのＡｓｎ残基に単糖（ＧｌｃＮＡｃ）を付与し、Ｍ．Ｌ．ポウェル（M. L. Powell）ら［ファーマスーティカルリサーチ（Pharmaceut. Res.）、第１０巻、第１２６８〜１２９３頁（１９９３）］がヒト血清中での安定性を調べたが、単糖の安定性に対する効果は小さいかほとんど認められなかった。
【００１１】
単糖でなく糖鎖を結合することにより安定性を改善することが期待される。しかし糖鎖を化学的に合成することは困難であり、エンドグリコシダーゼ等の酵素により天然由来の糖鎖ブロックを転移させる方法が考えられる。
【００１２】
エンドグリコシダーゼを用いた糖鎖転移反応としては、竹川ら［特開平５−６４５９４号（１９９３）］およびＫ．タケガワ（K. Takegawa）ら［ジャーナルオブ  バイオロジカル  ケミストリー（J. Biol. Chem.）、第２７０巻、第３０９４〜３０９９頁（１９９５）］がアルスロバクター  プロトホルミエ（Arthrobacter protophormiae）由来のエンド−β−Ｎ−アセチルグルコサミニダーゼ（エンド−Ａ）による糖質への糖鎖転移反応を、また、Ｋ．ヤマモト（K. Yamamoto）ら［バイオケミカル  バイオフィジカル  リサーチ  コミュニケーション（Biochem. Biophys. Res. Commun.）、第２０３巻、第２４４〜２５２頁（１９９４）］および栃倉ら［特開平７−５９５８７号（１９９５）］はムコール  ヒエマリス（Mucor hiemalis）由来のエンド−Ｍによる糖質への糖鎖転移反応を報告した。また、羽田ら［特願平７−２０３９４５号（１９９５）］はＧｌｃＮＡｃ残基を有する合成基質への糖鎖転移反応を発明した。
【００１３】
【発明が解決しようとする課題】
生理活性ペプチドは酵素による分解を受け易いために目的臓器に到達しなかったり、半減期が短くすぐに有効濃度以下になってしまうことが多く、医薬として用いる場合に大きな問題となる。ペプチド−Ｔの場合にも血液中で酵素分解を受け易く、壊変を受け難くすることが必要である。
【００１４】
ペプチド−Ｔに糖鎖を付与した糖ペプチドにすることにより、安定化の目的を達することが期待できる。
【００１５】
ペプチド−ＴのＡｓｎ残基にＧｌｃＮＡｃを結合した糖ペプチド（ＧｌｃＮＡｃ−Ａｓｎ−ペプチド）を化学的に合成し、エンドグリコシダーゼによる糖鎖転移反応を用いる酵素法により、Ａｓｎに結合したＧｌｃＮＡｃ残基に糖鎖を転移させて新しい複合糖ペプチドを合成できる。即ち、本発明の目的はこのような方法により合成された（化１）に示すペプチド−Ｔの糖鎖誘導体を提供するものである。
【化１】
【００１６】
【課題を解決するための手段】
本発明を概説すれば、本発明は１）（化２）に示すＧｌｃＮＡｃ残基を結合させたペプチド−Ｔ誘導体の合成と、２）（化２）に示すＧｌｃＮＡｃ残基を有するペプチド−Ｔ誘導体への酵素エンドグリコシダーゼによる糖鎖の転移反応による（化１）に示す複合糖ペプチドの合成の２つの構成からなる。
【００１７】
下記式（化２）
【化２】
（式中、Ｒ1 はＡｌａ−Ｓｅｒ−Ｔｈｒ−Ｔｈｒ−Ｔｈｒ、Ｔｈｒ−ＴｈｒあるいはＤ−Ａｌａ−Ｓｅｒ−Ｔｈｒ−Ｔｈｒ−Ｔｈｒからなるペプチド残基を示し、Ｘは、Ｈ、９−フルオレニルメチルオキシカルボニル（Ｆｍｏｃ）基、第３ブチルオキシカルボニル（Ｂｏｃ）基、３−ニトロ−２−ピリジンスルフェニル（Ｎｐｙｓ）基、ベンジルオキシカルボニル（Ｚ）基あるいはダンシル（ＤＮＳ）基からなるＮ末端αアミノ基の保護基、またＹはＯＨあるいはＮＨ2である。）に示すＧｌｃＮＡｃ残基を有するペプチド−Ｔ誘導体の合成は如何なる方法によってもよいが、例えばＴ．イナヅ（T. Inazu）ら［ペプチド  ケミストリー  １９９３（Peptide Chemistry 1993 ）、第１０１〜１０４頁（１９９４）］あるいはＴ．イナヅ（T. Inazu）ら［ペプチド  ケミストリー  １９９５（Peptide Chemistry 1995 ）、第６１〜６４頁（１９９６）］の報告した方法に準じて固相合成法により合成される。
【００１８】
ＧｌｃＮＡｃ残基を有するオクタペプチド［Ｈ−Ａｌａ−Ｓｅｒ−Ｔｈｒ−Ｔｈｒ−Ｔｈｒ−Ａｓｎ（ＧｌｃＮＡｃ）−Ｔｙｒ−Ｔｈｒ−ＯＨ］の合成を例にとると、例えば９−フルオレニルメチルオキシカルボニル（Ｆｍｏｃ）基等によりＮ末端αアミノ基を保護したアスパラギン酸とＧｌｃＮＡｃのアジドからＦｍｏｃ−Ａｓｎ−ＧｌｃＮＡｃ誘導体を合成してＦｍｏｃ−Ａｓｎの代わりに用い、Ｆｍｏｃストラテジーに従って縮合にジメチルホスフィン酸混合酸無水物法を用いるペプチドの固相合成を展開する。樹脂から切り出し、ＡｓｎにＧｌｃＮＡｃ残基が結合したオクタペプチド［Ｆｍｏｃ−Ａｌａ−Ｓｅｒ−Ｔｈｒ−Ｔｈｒ−Ｔｈｒ−Ａｓｎ（ＧｌｃＮＡｃ）−Ｔｙｒ−Ｔｈｒ−ＯＨ］が合成される。予めピペラジンを用いる常法により保護基を外した後に切り出すとＮ末端が遊離のＧｌｃＮＡｃ残基を有するオクタペプチドが得られる。ペプチド合成をアミノ酸５個つないだ段階で終えるとペンタペプチド例えば［Ｆｍｏｃ−Ｔｈｒ−Ｔｈｒ−Ａｓｎ（ＧｌｃＮＡｃ）−Ｔｙｒ−Ｔｈｒ−ＯＨ］が合成される。αアミノ基を第３ブチルオキシカルボニル（Ｂｏｃ）基、３−ニトロ−２−ピリジンスルフェニル（Ｎｐｙｓ）基あるいはベンジルオキシカルボニル（Ｚ）基で保護したアミノ酸を用いる合成法に依った場合には各々に対応するＮ末端アミノ基を保護したペプチドが合成され、保護基を外すと遊離型のペプチドが得られる。
【００１９】
ＧｌｃＮＡｃ残基を有し、Ｄ−体のアラニン（Ｄ−Ａｌａ）およびＣ末端アミノ酸（Ｔｈｒ）がアミドからなるオクタペプチド［Ｈ−Ｄ−Ａｌａ−Ｓｅｒ−Ｔｈｒ−Ｔｈｒ−Ｔｈｒ−Ａｓｎ（ＧｌｃＮＡｃ）−Ｔｙｒ−Ｔｈｒ−ＮＨ2］の合成は、Ａｌａの代わりにＤ−Ａｌａを、またアミドペプチド用の樹脂を用いて先のオクタペプチドと同様に合成した。
【００２０】
Ｎ末端アミノ酸のαアミノ基の保護基は糖鎖転移反応後に常法により外すか、あるいは予め保護基を外して遊離型にした後に糖鎖転移反応に供するが、通常後者の方法がとられる。
【００２１】
本発明の第２の構成は、ＧｌｃＮＡｃ残基を有するペプチドへの糖鎖供与体からのエンドグリコシダーゼによる糖鎖の転移反応による付加である。
【００２２】
本発明に用いるエンドグリコシダーゼとしては、エンド−β−Ｎ−アセチルグルコサミニダーゼ（ＥＣ３．２．１．９６）であり、例えば、ムコ−ル  ヒエマリス（Mucor hiemalis）由来のエンド−Ｍやアルスロバクター  プロトホルミエ（Arthrobacter protophormie）由来のエンド−Ａ等が用いられる。該酵素は下記式（式１）：
Ｒ−ＧｌｃＮＡｃ−ＧｌｃＮＡｃ−Ａｓｎ−（ペプチドまたはタンパク質）（式１）
（式中Ｒは複合糖鎖を示す）のアスパラギン（Ａｓｎ）結合型糖鎖のアセチルキトビオース部分（ＧｌｃＮＡｃ−ＧｌｃＮＡｃ）の間を加水分解するが、この時に糖鎖受容体である（化２）に示すＧｌｃＮＡｃ残基を有するペプチドを存在させると、受容体に糖鎖（Ｒ−ＧｌｃＮＡｃ）部分が転移し、（化１）に示す目的物質が合成される。
【００２３】
（化２）に示す糖鎖受容体は、ペプチドの両末端が遊離の形（Ｘ＝Ｈ、Ｙ＝ＯＨあるいはＮＨ2）あるいはペプチドのＮ末端αアミノ基が保護された型のいずれも糖鎖転移反応に供することが出来る。
【００２４】
糖鎖供与体としては複合型糖鎖、高マンノース型複合型糖鎖あるいは混成型糖鎖を持つ糖質を用いることにより各々に対応する糖鎖を持った（化１）に示す目的物質を得ることが出来る。
【００２５】
酵素反応系で重要な点は、反応を酵素律速条件下で行うことおよび糖鎖供与体と受容体の仕込濃度を著しく高めることである。与酵素量を制限しつつ両基質を高濃度に仕込むことにより、糖鎖転移反応が促進され副反応が抑えられて反応収率は飛躍的に向上する。
【００２６】
本発明に用いる糖鎖供与体としては、シアル酸を含有する複合型糖鎖は、例えばヒトトランスフェリンや牛フェツイン等からプロナーゼ等のプロテアーゼ処理とセファデックスＧ−２５によるゲルろ過を繰り返して調製される。シアリダーゼ処理等によりシアル酸を外せばアシアロ複合型糖鎖が調製される。高マンノース型糖鎖は例えば卵白アルブミン等から同様に処理した後にＤｏｗｅｘ５０イオン交換樹脂により精製して調製される。酵素的あるいは化学的に修飾された糖鎖、あるいは化学合成された糖鎖も用いることができる。
【００２７】
本発明の反応は、基質の糖鎖供与体、糖鎖受容体および酵素のエンドグリコシダーゼを緩衝溶液中で混合することにより行われる。糖鎖供与体の濃度を１０ｍＭ以上、望ましくは１５〜７５ｍＭ、糖鎖受容体の濃度を２．５ｍＭ以上、望ましくは７．５〜３５ｍＭになるように加える。酵素量は５００Ｕ／モル（供与体）以下、望ましくは８０〜４００Ｕ／モル（供与体）程度に制限し、例えば、エンド−Ｍの場合、２〜１０ｍＵ／ｍｌ程度の量で用いる。緩衝液としては、ｐＨ５〜８程度、濃度２５〜２００ｍＭ、望ましくは５０〜１００ｍＭの適当な緩衝液が用いられる。エンド−Ｍの場合、通常ｐＨ５．５〜６．５、濃度５０〜１００ｍＭの酢酸あるいはリン酸緩衝液中で反応が行われる。
【００２８】
反応温度は通常、室温〜５０℃程度、好ましくは３０〜４０℃で行われ、反応時間は１〜２４時間である。例えば、エンド−Ｍ酵素の場合、通常、３７℃で１〜１８時間程度反応が行われる。
【００２９】
酵素反応液中の反応精製物の分析は通常、高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）により行われる。例えば、Ｃ18の逆相系（ＯＤＳ）カラムを用い、０．１％のトリフルオロ酢酸（ＴＦＡ）を含む水−アセトニトリル系溶媒で展開し、ＤＮＳ化誘導体の場合には蛍光吸収（励起波長３２０ｎｍ、吸収波長５４０ｎｍ）、Ｆｍｏｃ，ＮｐｙｓあるいはＺ誘導体の場合には２５４ｎｍの紫外吸収、また遊離型あるいはＢｏｃ誘導体の場合には２１４ｎｍの紫外末端吸収により検出される。
【００３０】
生成した複合糖ペプチドは公知の手段に従って反応終了液から容易に分離精製することが出来る。例えば、ゲルろ過カラムクロマトグラフィー、イオン交換樹脂カラムクロマトグラフィー、レクチンカラムクロマトグラフィー、高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）等により反応終了液から反応生成物の複合糖ペプチドを分離し、更に濃縮、脱塩、凍結乾燥等を行えばよい。
【００３１】
【実施例】
以下に実施例をあげて本発明を更に具体的に説明するが、本発明はこれらに限定されるものではない。
【００３２】
【実施例１】
複合糖鎖を有するオクタペプチドのＤＮＳ化誘導体の合成：
（１）ＧｌｃＮＡｃを結合させたオクタペプチドのダンシル（ＤＮＳ）化誘導体［ＤＮＳ−Ａｌａ−Ｓｅｒ−Ｔｈｒ−Ｔｈｒ−Ｔｈｒ−Ａｓｎ（ＧｌｃＮＡｃ）−Ｔｙｒ−Ｔｈｒ−ＯＨ］の調製：Ｆｍｏｃ−Ｔｈｒ（Ｂｕt）−Ｏ−アルコキシベンジル型樹脂（Ｔｈｒ含量；０．４５ｍｍｏｌ／ｇ）０．０２ｇを固相ペプチド合成装置の反応容器に取り、次に示すスケジュールに従い、Ｆｍｏｃ−Ｔｙｒ（Ｂｕt）−ＯＨ，Ｆｍｏｃ−Ａｓｎ（ＧｌｃＮＡｃ）−ＯＨ，Ｆｍｏｃ−Ｔｈｒ−ＯＨ，Ｆｍｏｃ−Ｔｈｒ−ＯＨ，Ｆｍｏｃ−Ｔｈｒ−ＯＨ，Ｆｍｏｃ−Ｓｅｒ−ＯＨ，ＤＮＳ−Ａｌａ−ＯＨを順次反応させた。なお、各保護アミノ酸はそれぞれ２当量を使用し、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）中Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン存在下、塩化ジメチルホスフィノチオイルと反応させ、対応するジメチルチオホスフィン酸混合酸無水物の溶液として加えた。
【００３３】
（２）固相合成スケジュール（ＤＭＦ：２ｍｌ）は以下の通りであった：１）ＤＭＦ  １分  ３回、２）２０％ピペリジン／ＤＭＦ溶液  ３分  ２回、３）２０％ピペリジン／ＤＭＦ溶液  ２０分  １回、４）ＤＭＦ  １分  ６回、５）保護アミノ酸ジメチルチオホスフィン酸混合酸無水物及びＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン／ＤＭＦ溶液  ６０分  １回、６）以上１）〜５）の工程を繰り返す。
【００３４】
得られた保護オクタ糖ペプチド樹脂を減圧下乾燥させた後、トリフルオロ酢酸（ＴＦＡ）、フェノール、水、チオアニソール、エタンジチオール（８２．５：５：５：５：２．５）からなる混合溶液４ｍｌを加え、３０分攪拌した。樹脂を濾別し、トリフルオロ酢酸で洗浄後、濾液と洗液を減圧濃縮した。残渣にエーテル（３０〜５０ｍｌ）を加え、析出する白色沈澱を遠心分離した。この操作を繰り返し、粗糖ペプチド７．２０ｍｇを得た。得られた粗糖ペプチドを高速液体クロマトグラフィー［Ｉｎｅｒｔｓｉｌ  Ｃ18、０．１％ＴＦＡ／５％〜３５％（３０分）アセトニトリル水溶液］で分取した。得られた分画を凍結乾燥すると、目的とするＤＮＳ−Ａｌａ−Ｓｅｒ−Ｔｈｒ−Ｔｈｒ−Ｔｈｒ−Ａｓｎ（ＧｌｃＮＡｃ）−Ｔｙｒ−Ｔｈｒ−ＯＨが３．２２ｍｇ得られた。構造はＭＡＬＤＩ−ＴＯＦＭＳ（［Ｍ−Ｈ］-１２９３）、ＮＭＲにより確認した。
【００３５】
（２）糖鎖供与体の調製：ヒトトランスフェリン（生化学工業）をプロナーゼ処理、セファデックスＧ−２５ゲルろ過を繰り返してＡｓｎ残基のみを有するシアロ糖ペプチド［ＴＦ−ＳＧＰ，（ＮｅｕＡｃ）2（Ｇａｌ）2（ＧｌｃＮＡｃ）2（Ｍａｎ）3（ＧｌｃＮＡｃ）2−Ａｓｎ  （分子量２３３８）］を調製した。ヒトトランスフェリン由来シアロ糖ペプチド（ＴＦ−ＳＧＰ）をシアリダーゼ処理してシアル酸を除いたアシアロ糖ペプチド［ＴＦ−ＡＳＧＰ、（Ｇａｌ）2（ＧｌｃＮＡｃ）2（Ｍａｎ）3（ＧｌｃＮＡｃ）2−Ａｓｎ  （分子量１７５６）］を調製した。卵白アルブミンをプロナーゼ処理、セファデックスＧ−２５ゲルろ過、更にＤｏｗｅｘ５０イオン交換クロマトにより分離精製して、マンノース６個からなる高マンノース型糖ペプチド［Ｍ6ＧＰ；（Ｍａｎ）6（ＧｌｃＮＡｃ）2−Ａｓｎ（分子量１５１１）］を調製した。
【００３６】
（３）糖鎖転移反応：シアロ糖ペプチド（ＴＦ−ＳＧＰ）、アシアロ糖ペプチド（ＴＦ−ＡＳＧＰ）あるいは高マンノース型糖ペプチド（Ｍ6ＧＰ）１μｍｏｌ（終濃度２５ｍＭ）とＤＮＳ−Ａｌａ−Ｓｅｒ−Ｔｈｒ−Ｔｈｒ−Ｔｈｒ−Ａｓｎ（ＧｌｃＮＡｃ）−Ｔｙｒ−Ｔｈｒ−ＯＨ  ４００ｎｍｏｌ（同１０ｍＭ）を０．０８ＭのＥＤＴＡ液を含む０．１Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ６．２５）２４μｌに溶解し、エンド−Ｍ  １６０μＵを含む酵素溶液１６μｌを加え、３７℃で１時間反応させた。反応停止後反応液を蒸留水で１ｍｌに希釈して、反応生成物をＨＰＬＣ［Ｉｎｅｒｔｓｉｌ  ＯＤＳ−２カラム（φ４．６ｘ１５０ｍｍ）、０．１％ＴＦＡ／５％〜３０％（３０分）アセトニトリル水溶液  ０．５ｍｌ／分］で蛍光吸収により分析した。シアロ糖ペプチド（ＴＦ−ＳＧＰ）、アシアロ糖ペプチド（ＴＦ−ＡＳＧＰ）あるいは高マンノース型糖ペプチド（Ｍ6ＧＰ）から糖鎖受容体オクタペプチドのＤＮＳ化誘導体への糖鎖転移反応生成物がＨＰＬＣ分析の保持時間、各１０．０分、１１．８分および１２．５分（糖鎖受容体オクタペプチドのＤＮＳ化誘導体１８．９分）のピークとして検出され、その収率（対糖鎖受容体）は各９．９％、３．３％および２．０％であった。
【００３７】
（４）反応生成物の単離と同定：糖鎖転移反応生成物に対応するをＨＰＬＣ分析のピークを分取により単離し、質量分析にかけた。ＭＡＬＤＩ  ＴＯＦＭＳ分析で、ｍ／ｚ［Ｍ−Ｈ］-各３３０３、２７１６および２４７０に主ピークが認められ、各々、シアロ複合型糖鎖の転移したＤＮＳ−Ａｌａ−Ｓｅｒ−Ｔｈｒ−Ｔｈｒ−Ｔｈｒ−Ａｓｎ［（ＮｅｕＡｃ）2（Ｇａｌ）2（ＧｌｃＮＡｃ）2（Ｍａｎ）3（ＧｌｃＮＡｃ）2］−Ｔｙｒ−Ｔｈｒ−ＯＨ（分子量  ３２９７）、アシアロ複合型糖鎖の転移したＤＮＳ−Ａｌａ−Ｓｅｒ−Ｔｈｒ−Ｔｈｒ−Ｔｈｒ−Ａｓｎ［（Ｇａｌ）2（ＧｌｃＮＡｃ）2（Ｍａｎ）3（ＧｌｃＮＡｃ）2］−Ｔｙｒ−Ｔｈｒ−ＯＨ（分子量  ２７１５）および高マンノース型糖鎖の転移したＤＮＳ−Ａｌａ−Ｓｅｒ−Ｔｈｒ−Ｔｈｒ−Ｔｈｒ−Ａｓｎ［（Ｍａｎ）6（ＧｌｃＮＡｃ）2］−Ｔｙｒ−Ｔｈｒ−ＯＨ（分子量  ２４７０）であることが確認された。
【００３８】
【実施例２】
複合糖鎖を有するオクタペプチドのＦｍｏｃ誘導体の合成：
（１）ＧｌｃＮＡｃを結合させたオクタペプチドのＦｍｏｃ誘導体［Ｆｍｏｃ−Ａｌａ−Ｓｅｒ−Ｔｈｒ−Ｔｈｒ−Ｔｈｒ−Ａｓｎ（ＧｌｃＮＡｃ）−Ｔｙｒ−Ｔｈｒ−ＯＨ］の調製：ＤＮＳ−Ａｌａ−ＯＨの代わりにＦｍｏｃ−Ａｌａ−ＯＨを用い、実施例１と同様にペプチド合成反応を行ったところ、目的とするＦｍｏｃ−Ａｌａ−Ｓｅｒ−Ｔｈｒ−Ｔｈｒ−Ｔｈｒ−Ａｓｎ（ＧｌｃＮＡｃ）−Ｔｙｒ−Ｔｈｒ−ＯＨが３．７ｍｇ得られた。構造はＭＡＬＤＩ−ＴＯＦＭＳ（［Ｍ−Ｈ］-１２８２）、ＮＭＲにより確認した。
【００３９】
（２）糖鎖転移反応：実施例１で調製したシアロ糖ペプチド（ＴＦ−ＳＧＰ）を用い、Ｆｍｏｃ−Ａｌａ−Ｓｅｒ−Ｔｈｒ−Ｔｈｒ−Ｔｈｒ−Ａｓｎ（ＧｌｃＮＡｃ）−Ｔｙｒ−Ｔｈｒ−ＯＨを糖鎖受容体として実施例１と同様に反応させた。反応停止後、反応生成物をＨＰＬＣ［Ｉｎｅｒｔｓｉｌ  ＯＤＳ−２カラム、０．１％ＴＦＡ／２０％〜４５％（３０分）アセトニトリル水溶液  １ｍｌ／分］で紫外吸収（２５４ｎｍ）により分析した。転移反応生成物をＨＰＬＣ分取により単離し、ＭＡＬＤＩ  ＴＯＦＭＳ質量分析の結果、ｍ／ｚ［Ｍ−Ｈ］-３２８７にシグナルが観測され、シアロ複合型糖鎖がＦｍｏｃ−Ａｌａ−Ｓｅｒ−Ｔｈｒ−Ｔｈｒ−Ｔｈｒ−Ａｓｎ（ＧｌｃＮＡｃ）−Ｔｙｒ−Ｔｈｒ−ＯＨに転移した化合物［Ｆｍｏｃ−Ａｌａ−Ｓｅｒ−Ｔｈｒ−Ｔｈｒ−Ｔｈｒ−Ａｓｎ［（ＮｅｕＡｃ）2（Ｇａｌ）2（ＧｌｃＮＡｃ）2（Ｍａｎ）3（ＧｌｃＮＡｃ）2］−Ｔｙｒ−Ｔｈｒ−ＯＨ］（分子量３２８６）であることが確認された。Ｎ末端の保護基Ｆｍｏｃは常法によりピペリジン処理により外し、シアロ複合糖鎖を有する遊離のオクタペプチドを得た。
【００４０】
【実施例３】
複合糖鎖を有するオクタペプチドの合成：
（１）ＧｌｃＮＡｃを結合させたＮ末端が遊離のオクタペプチド［Ｈ−Ａｌａ−Ｓｅｒ−Ｔｈｒ−Ｔｈｒ−Ｔｈｒ−Ａｓｎ（ＧｌｃＮＡｃ）−Ｔｙｒ−Ｔｈｒ−ＯＨ］の調製：実施例２で合成したペプチドのＮ末端のＦｍｏｃ保護基を予めピペリジン処理により外した後に樹脂から切り出して目的とするＨ−Ａｌａ−Ｓｅｒ−Ｔｈｒ−Ｔｈｒ−Ｔｈｒ−Ａｓｎ（ＧｌｃＮＡｃ）−Ｔｙｒ−Ｔｈｒ−ＯＨを得た。構造はＭＡＬＤＩ−ＴＯＦＭＳ（［Ｍ−Ｈ］-１０６１）、ＮＭＲにより確認した。
【００４１】
（２）糖鎖転移反応：糖鎖供与体としてシアロ糖ペプチド（ＴＦ−ＳＧＰ）、アシアロ糖ペプチド（ＴＦ−ＡＳＧＰ）あるいは高マンノース型糖ペプチド（Ｍ6ＧＰ）を用い、Ｈ−Ａｌａ−Ｓｅｒ−Ｔｈｒ−Ｔｈｒ−Ｔｈｒ−Ａｓｎ（ＧｌｃＮＡｃ）−Ｔｙｒ−Ｔｈｒ−ＯＨを糖鎖受容体として実施例１と同様に反応させた。反応生成物をＨＰＬＣ（Ｉｎｅｒｔｓｉｌ  ＯＤＳ−２カラム、０．１％ＴＦＡ／１２％アセトニトリル、１ｍｌ／分）で紫外末端吸収（２１４ｎｍ）により分析し各々に対応する糖鎖転移反応生成物のピークを検出した。
【００４２】
（３）反応生成物の単離と同定：各糖鎖転移反応生成物に対応するをＨＰＬＣ分析のピークを分取により単離し、ＭＡＬＤＩ  ＴＯＦＭＳ質量分析の結果、ｍ／ｚ［Ｍ−Ｈ］-各３０６５、２４８２および２２３６に主ピークが認められ、各々、シアロ複合型糖鎖の転移したＨ−Ａｌａ−Ｓｅｒ−Ｔｈｒ−Ｔｈｒ−Ｔｈｒ−Ａｓｎ［（ＮｅｕＡｃ）2（Ｇａｌ）2（ＧｌｃＮＡｃ）2（Ｍａｎ）3（ＧｌｃＮＡｃ）2］−Ｔｙｒ−Ｔｈｒ−ＯＨ（分子量  ３０６４）、アシアロ複合型糖鎖の転移したＨ−Ａｌａ−Ｓｅｒ−Ｔｈｒ−Ｔｈｒ−Ｔｈｒ−Ａｓｎ［（Ｇａｌ）2（ＧｌｃＮＡｃ）2（Ｍａｎ）3（ＧｌｃＮＡｃ）2］−Ｔｙｒ−Ｔｈｒ−ＯＨ（分子量  ２４８２）および高マンノース型糖鎖の転移したＨ−Ａｌａ−Ｓｅｒ−Ｔｈｒ−Ｔｈｒ−Ｔｈｒ−Ａｓｎ［（Ｍａｎ）6（ＧｌｃＮＡｃ）2］−Ｔｙｒ−Ｔｈｒ−ＯＨ（分子量  ２２３７）であることが確認された。
【００４３】
【実施例４】
複合糖鎖を有するペンタペプチドのＦｍｏｃ誘導体の合成：
（１）ＧｌｃＮＡｃを結合させたペンタペプチドのＦｍｏｃ誘導体［Ｆｍｏｃ−Ｔｈｒ−Ｔｈｒ−Ａｓｎ（ＧｌｃＮＡｃ）−Ｔｙｒ−Ｔｈｒ−ＯＨ］の調製：実施例１と同様に、Ｆｍｏｃ−Ｔｙｒ（Ｂｕt）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｓｎ（ＧｌｃＮＡｃ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｔｈｒ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｔｈｒ−ＯＨ、と反応させたところで、樹脂を取り出した。以下の樹脂からの切り出しも実施例１と同様に行い、目的とするＦｍｏｃ−Ｔｈｒ−Ｔｈｒ−Ｔｈｒ−Ａｓｎ（ＧｌｃＮＡｃ）−Ｔｙｒ−Ｔｈｒ−ＯＨが４．３ｍｇ得られた。構造はＭＡＬＤＩ−ＴＯＦＭＳ（［Ｍ−Ｈ］-１０２７）、ＮＭＲにより確認した。
【００４４】
（２）糖鎖転移反応：糖鎖供与体として実施例１で調製したシアロ糖ペプチド（ＴＦ−ＳＧＰ）、アシアロ糖ペプチド（ＴＦ−ＡＳＧＰ）あるいは高マンノース型糖ペプチド（Ｍ6ＧＰ）を用い、Ｆｍｏｃ−Ｔｈｒ−Ｔｈｒ−Ａｓｎ（ＧｌｃＮＡｃ）−Ｔｙｒ−Ｔｈｒ−ＯＨを糖鎖受容体として実施例１と同様の条件（但し、ＥＤＴＡのみ３／５倍濃度）で反応させた。反応生成物をＨＰＬＣ（実施例２と同一条件）で紫外吸収（２５４ｎｍ）により分析した。シアロ糖ペプチド（ＴＦ−ＳＧＰ）、アシアロ糖ペプチド（ＴＦ−ＡＳＧＰ）あるいは高マンノース型糖ペプチド（Ｍ6ＧＰ）から糖鎖受容体ペンタペプチドのＦｍｏｃ誘導体への糖鎖転移反応生成物がＨＰＬＣ分析の保持時間、各１８．９分、１９．６分および２０．０分（糖鎖受容体ペンタペプチドのＦｍｏｃ誘導体２３．８分）のピークとして検出され、その収率（対糖鎖受容体）は各４．３％、２．６％および１．６％であった。
【００４５】
（３）反応生成物の単離と同定：糖鎖転移反応生成物に対応するをＨＰＬＣ分析のピークを分取により単離し、質量分析にかけた。ＭＡＬＤＩ  ＴＯＦＭＳ分析で、ｍ／ｚ［Ｍ−Ｈ］-各３０２７、２４４３および２２１９に主ピークが認められ、各々、シアロ複合型糖鎖の転移したＦｍｏｃ−Ｔｈｒ−Ｔｈｒ−Ａｓｎ［（ＮｅｕＡｃ）2（Ｇａｌ）2（ＧｌｃＮＡｃ）2（Ｍａｎ）3（ＧｌｃＮＡｃ）2］−Ｔｙｒ−Ｔｈｒ−ＯＨ（分子量  ３０２７）、アシアロ複合型糖鎖の転移したＦｍｏｃ−Ｔｈｒ−Ｔｈｒ−Ａｓｎ［（Ｇａｌ）2（ＧｌｃＮＡｃ）2（Ｍａｎ）3（ＧｌｃＮＡｃ）2］−Ｔｙｒ−Ｔｈｒ−ＯＨ（分子量  ２４４４）および高マンノース型糖鎖の転移したＦｍｏｃ−Ｔｈｒ−Ｔｈｒ−Ａｓｎ［（Ｍａｎ）6（ＧｌｃＮＡｃ）2］−Ｔｙｒ−Ｔｈｒ−ＯＨ（分子量  ２２００）であることが確認された。
【００４６】
【実施例５】
複合糖鎖を有するペンタペプチドの合成：
（１）ＧｌｃＮＡｃを結合させたＮ末端が遊離のペンタペプチド［Ｈ−Ｔｈｒ−Ｔｈｒ−Ａｓｎ（ＧｌｃＮＡｃ）−Ｔｙｒ−Ｔｈｒ−ＯＨ］の調製：実施例４で合成したペプチドのＮ末端のＦｍｏｃ保護基を予めピペリジン処理により外した後に樹脂から切り出して目的とするＨ−Ｔｈｒ−Ｔｈｒ−Ａｓｎ（ＧｌｃＮＡｃ）−Ｔｙｒ−Ｔｈｒ−ＯＨを得た。構造はＭＡＬＤＩ−ＴＯＦＭＳ（［Ｍ−Ｈ］-８０１）、ＮＭＲにより確認した。
【００４７】
（２）糖鎖転移反応：糖鎖供与体としてシアロ糖ペプチド（ＴＦ−ＳＧＰ）、アシアロ糖ペプチド（ＴＦ−ＡＳＧＰ）あるいは高マンノース型糖ペプチド（Ｍ6ＧＰ）を用い、Ｈ−Ｔｈｒ−Ｔｈｒ−Ａｓｎ（ＧｌｃＮＡｃ）−Ｔｙｒ−Ｔｈｒ−ＯＨを糖鎖受容体として実施例４と同様に反応させた。反応生成物をＨＰＬＣ（実施例３と同一条件）で紫外末端吸収（２１４ｎｍ）により分析し各々に対応する糖鎖転移反応生成物のピークを検出した。
【００４８】
（３）反応生成物の単離と同定：各糖鎖転移反応生成物に対応するをＨＰＬＣ分析のピークを分取により単離し、ＭＡＬＤＩ  ＴＯＦＭＳ質量分析の結果、 ｍ／ｚ［Ｍ−Ｈ］-各２８０８、２２２４および１９７８に主ピークが認められ、各々、シアロ複合型糖鎖の転移したＨ−Ｔｈｒ−Ｔｈｒ−Ａｓｎ［（ＮｅｕＡｃ）2（Ｇａｌ）2（ＧｌｃＮＡｃ）2（Ｍａｎ）3（ＧｌｃＮＡｃ）2］−Ｔｙｒ−Ｔｈｒ−ＯＨ（分子量  ２８０５）、アシアロ複合型糖鎖の転移したＨ−Ｔｈｒ−Ｔｈｒ−Ａｓｎ［（Ｇａｌ）2（ＧｌｃＮＡｃ）2（Ｍａｎ）3（ＧｌｃＮＡｃ）2］−Ｔｙｒ−Ｔｈｒ−ＯＨ（分子量  ２２２３）および高マンノース型糖鎖の転移したＨ−Ｔｈｒ−Ｔｈｒ−Ａｓｎ［（Ｍａｎ）6（ＧｌｃＮＡｃ）2］−Ｔｙｒ−Ｔｈｒ−ＯＨ（分子量  １９７８）であることが確認された。
【００４９】
【実施例６】
複合型糖鎖を有するオクタペプチドのＮｐｙｓ、ＺあるいはＢｏｃ誘導体の合成：
（１）ＧｌｃＮＡｃ残基を有するオクタペプチドのＮｐｙｓ、ＺあるいはＢｏｃ誘導体の合成：ＧｌｃＮＡｃ残基を有するオクタペプチドのＮｐｙｓ、Ｚ誘導体は、Ｆｍｏｃ−Ａｌａ−ＯＨの代わりにＮｐｙｓ−Ａｌａ−ＯＨあるいはＺ−Ａｌａ−ＯＨを用いて、実施例１と同様の手法により合成した。Ｎｐｙｓ誘導体の場合、樹脂からの切り出しは１０％フェノール含有ＴＦＡ溶液に依った。Ｂｏｃ誘導体の場合には、Ｂｏｃアミノ酸を用いる常法により合成した。
【００５０】
（２）糖鎖転移反応：これらオクタペプチド誘導体を用い、糖鎖供与体としてシアロ糖ペプチドを実施例１と同様の条件で反応させたところそれぞれに対応するシアロ複合型糖鎖を有するオクタペプチドの生成を認めた。
【００５１】
【実施例７】
複合糖鎖を有する［Ｄ−Ａｌａ1］ペプチドＴアミド誘導体の合成：
（１）ＧｌｃＮＡｃを結合させた［Ｄ−Ａｌａ1］ペプチドＴアミド誘導体［Ｈ−Ｄ−Ａｌａ−Ｓｅｒ−Ｔｈｒ−Ｔｈｒ−Ｔｈｒ−Ａｓｎ（ＧｌｃＮＡｃ）−Ｔｙｒ−Ｔｈｒ−ＮＨ2］の調製：Ｆｍｏｃ−Ｔｈｒ−ＮＨ−型樹脂（Ｔｈｒ含量；０．３７５ｍｍｏｌ／ｇ）２６７ｍｇを固相ペプチド合成装置の反応容器に取り、Ｆｍｏｃ−Ｔｙｒ（Ｂｕt）−ＯＨ，Ｆｍｏｃ−Ａｓｎ（ＧｌｃＮＡｃ）−ＯＨ，Ｆｍｏｃ−Ｔｈｒ−ＯＨ，Ｆｍｏｃ−Ｔｈｒ−ＯＨ，Ｆｍｏｃ−Ｔｈｒ−ＯＨ，Ｆｍｏｃ−Ｓｅｒ−ＯＨ，Ｂｏｃ−Ｄ−Ａｌａ−ＯＨを順次反応させた。なお、各保護アミノ酸はそれぞれ２当量を使用し、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）中Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン存在下、塩化ジメチルホスフィノチオイルと反応させ、対応するジメチルチオホスフィン酸混合酸無水物の溶液として加えた。アニソールとトリフルオロ酢酸（ＴＦＡ）を加え、２時間反応させて樹脂からの切り出しとＢｏｃ基の脱保護を行い、樹脂を濾別し、濾液を減圧濃縮して、粗製糖ペプチド１２３ｍｇを得た。得られた粗製糖ペプチドを高速液体クロマトグラフィー［Ｉｎｅｒｔｓｉｌ  Ｃ18、０．１％ＴＦＡ／５％〜３５％（３０分）アセトニトリル水溶液］で分取した。得られた分画を凍結乾燥して目的とするＨ−Ｄ−Ａｌａ−Ｓｅｒ−Ｔｈｒ−Ｔｈｒ−Ｔｈｒ−Ａｓｎ（ＧｌｃＮＡｃ）−Ｔｙｒ−Ｔｈｒ−ＮＨ2を３６．４ｍｇ得た。構造はＭＡＬＤＩ−ＴＯＦＭＳ（［Ｍ＋Ｈ］+１０６３．８、分子量１０６０．１）、ＮＭＲおよびアミノ酸組成分析により確認した。
【００５２】
（２）糖鎖転移反応：糖鎖供与体としてシアロ糖ペプチド（ＴＦ−ＳＧＰ）、アシアロ糖ペプチド（ＴＦ−ＡＳＧＰ）あるいは高マンノース型糖ペプチド（Ｍ6ＧＰ）を用い、Ｈ−Ｄ−Ａｌａ−Ｓｅｒ−Ｔｈｒ−Ｔｈｒ−Ｔｈｒ−Ａｓｎ（ＧｌｃＮＡｃ）−Ｔｙｒ−Ｔｈｒ−ＮＨ2を糖鎖受容体として実施例１と同様に６時間反応させた。反応生成物をＨＰＬＣ［Ｍｉｇｈｔｙｓｉｌ  ＲＰ−１８カラム、φ６．０ｘ２５０ｍｍ（関東化学）、０．１％ＴＦＡ／５％〜１７％アセトニトリル水溶液（３０分）、１．２ｍｌ／分］で紫外末端吸収（２１４ｎｍ）により分析し各々に対応する糖鎖転移反応生成物のピークを検出した。シアロ糖ペプチド（ＴＦ−ＳＧＰ）、アシアロ糖ペプチド（ＴＦ−ＡＳＧＰ）あるいは高マンノース型糖ペプチド（Ｍ6ＧＰ）から糖鎖受容体［Ｄ−Ａｌａ1］ペプチドＴアミド誘導体への糖鎖転移反応生成物がＨＰＬＣ分析の保持時間、各１６．６分、１７．３分および１７．６分（糖鎖受容体［Ｄ−Ａｌａ1］ペプチドＴアミド誘導体２０．０分）のピークとして検出され、その反応収率（対糖鎖受容体）は各１７．７％、６．６％および４．６％であった。
【００５３】
（３）反応生成物の単離と同定：各糖鎖転移反応生成物に対応するをＨＰＬＣ分析のピークを分取により単離し、各々のＭＡＬＤＩ  ＴＯＦＭＳ質量分析を行った。その結果、シアロ糖ペプチド（ＴＦ−ＳＧＰ）からの転移生成物はｍ／ｚ２７９３．５にシアル酸（ＮｅｕＡｃ）の１個外れたもののＮａ体［Ｍ−ＮｅｕＡｃ＋Ｎａ］+に相当するピークが認められ、これをシアリダーゼ処理するとｍ／ｚ２５２２．１にアシアロ体の［Ｍ＋Ｋ］+に相当するピークが認められ、シアロ複合型糖鎖の転移したＨ−Ｄ−Ａｌａ−Ｓｅｒ−Ｔｈｒ−Ｔｈｒ−Ｔｈｒ−Ａｓｎ［（ＮｅｕＡｃ）2（Ｇａｌ）2（ＧｌｃＮＡｃ）2（Ｍａｎ）3（ＧｌｃＮＡｃ）2］−Ｔｙｒ−Ｔｈｒ−ＮＨ2（分子量  ３０６２．９）であることが確認され、またアシアロ糖ペプチド（ＴＦ−ＡＳＧＰ）からの転移生成物はｍ／ｚ２５０５．５に［Ｍ＋Ｎａ］+に相当するピークが認められ、アシアロ複合型糖鎖の転移したＨ−Ｄ−Ａｌａ−Ｓｅｒ−Ｔｈｒ−Ｔｈｒ−Ｔｈｒ−Ａｓｎ［（Ｇａｌ）2（ＧｌｃＮＡｃ）2（Ｍａｎ）3（ＧｌｃＮＡｃ）2］−Ｔｙｒ−Ｔｈｒ−ＮＨ2（分子量  ２４８０．４）であることが確認された。また、高マンノース型糖鎖（Ｍ6ＧＰ）からの転移生成物はｍ／ｚ２２５５．７に［Ｍ＋Ｎａ］+に相当するピークが認められ、高マンノース型糖鎖の転移したＨ−Ｄ−Ａｌａ−Ｓｅｒ−Ｔｈｒ−Ｔｈｒ−Ｔｈｒ−Ａｓｎ［（Ｍａｎ）6（ＧｌｃＮＡｃ）2］−Ｔｙｒ−Ｔｈｒ−ＮＨ2（分子量  ２２３６．１）であることが確認された。
【００５４】
【発明の効果】
抗エイズ（抗ＨＩＶ）活性ペプチドであるペプチドーＴのＡｓｎ残基にＧｌｃＮＡｃを付与し、エンドグリコシダーゼによる糖鎖転移反応により合成した複合糖鎖を持つペプチドーＴは血液中での酵素分解等に対して安定化や薬理作用の改善に寄与し、医薬として用いる場合に有効である。この手法は生理活性ペプチドの安定性や薬理作用の改善に利用される。