(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
一般式（１）
【化１】
0003755049.tif 000008
（式中、Ｘは塩素原子，臭素原子又はヨウ素原子、Ｒは低級アルキル基、＊は不斉炭素原子を示す。）で示される２−ハロ−２−フルオロシクロプロパンカルボン酸エステル類を、該エステル類のシス体に対して不斉加水分解能を有するエステラーゼを用いて不斉加水分解することを特徴とする、一般式（２）
【化２】
0003755049.tif 000009
（式中、Ｘ、＊はそれぞれ前記と同じ意味を示す。）で示される２−ハロ−２−フルオロシクロプロパンカルボン酸のシス体の光学活性体の製造方法。
【請求項２】
エステラーゼが、アルスロバクター属、アスペルギルス属、アルカリゲネス属、アクロモバクター属、クロモバクテリウム属、リゾプス属、キャンディダ属、ムコール属、ノカルディア属、コリネバクテリウム属、ペディオコッカス属、エンテロバクター属、シュードモナス属、ミクロコッカス属、バシルス属、ラクトバシルス属、トリコデルマ属、サッカロミセス属、ロドトルラ属、クリプトコッカス属、トルロプシス属、ピヒア属、ペニシリウム属、オーレオバシディウム属、アクチノムコール属、ストレプトミセス属及びハンゼヌラ属からなる群から選択されるいずれかの属に属する微生物、または動植物に起源するものであることを特徴とする請求項１に記載の製造方法。
【請求項３】
エステラーゼが、アルスロバクター属、アスペルギルス属、アルカリゲネス属、アクロモバクター属、クロモバクテリウム属、リゾプス属、キャンディダ属、ムコール属、ノカルディア属、コリネバクテリウム属、ペディオコッカス属、シュードモナス属又はバシルス属のいずれかに属する微生物が生産するエステラーゼであることを特徴とする請求項１に記載の製造方法。
【請求項４】
エステラーゼが、アルスロバクター属、クロモバクテリウム属、キャンディダ属、ノカルディア属、コリネバクテリウム属、ペディオコッカス属、シュードモナス属又はバシルス属のいずれかに属する微生物が生産するエステラーゼであることを特徴とする請求項１に記載の製造方法。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は２−ハロ−２−フルオロシクロプロパンカルボン酸の光学活性体の製造方法に関する。詳細には、２−ハロ−２−フルオロシクロプロパンカルボン酸エステル類に対して不斉加水分解能を有するエステラーゼを用いて、該エステル類から２−ハロ−２−フルオロシクロプロパンカルボン酸の１種の光学活性体を高い選択性をもって製造する方法に関する。
【０００２】
【従来の技術】
２−ハロ−２−フルオロシクロプロパンカルボン酸の光学活性体は、医薬・農薬などの中間体として有用な化合物である。
【０００３】
従来より２−ハロ−２−フルオロシクロプロパンカルボン酸の製造方法として、例えばビニルハロゲナイド類およびジアゾ酢酸エステル類を反応させる方法（特開平６−９４９９号公報）などによって得られた２−ハロ−２−フルオロシクロプロパンカルボン酸エステル類を、アルカリもしくは酸を用いて加水分解する方法などが知られている。しかしながら、かかる方法に用いられる２−ハロ−２−フルオロシクロプロパンカルボン酸エステル類は、その２つの不斉炭素原子を不斉中心とする４種類の光学活性体の全てを含む光学不活性なものであるため、その加水分解物である２−ハロ−２−フルオロシクロプロパンカルボン酸も光学不活性なものとして得られる。従って、目的とする２−ハロ−２−フルオロシクロプロパンカルボン酸の光学活性体を得るには、かかる光学不活性なカルボン酸を更に光学分割する必要があった。
【０００４】
このような状況のもとで、従来から２−ハロ−２−フルオロシクロプロパンカルボン酸の特定の光学活性体を簡便に取得する方法の開発が待望されていた。
【０００５】
【発明が解決しようとする課題】
本発明は、２−ハロ−２−フルオロシクロプロパンカルボン酸エステル類を出発原料として、高い選択性をもって特定の２−ハロ−２−フルオロシクロプロパンカルボン酸の光学活性体を製造する生化学的な方法を提供することを目的とする。
【０００６】
【課題を解決するための手段】
本発明者らは、上記課題を解決すべく鋭意研究を重ねていたところ、ある特定のエステラーゼを用いて２−ハロ−２−フルオロシクロプロパンカルボン酸エステル類を加水分解することによってかかる課題が解決することを見いだした。
【０００７】
即ち、本発明は、特定のエステラーゼが、２−ハロ−２−フルオロシクロプロパンカルボン酸エステル類に含まれる特定の光学活性体に特異的に作用して加水分解することにより、２−ハロ−２−フルオロシクロプロパンカルボン酸の特定の光学活性体を生成するという知見に基づいて完成されたものである。言い換えれば、本発明は、一般式（１）で示される２−ハロ−２−フルオロシクロプロパンカルボン酸エステル類に対して特異的な不斉加水分解能を有する酵素の新たな性質の発見に基づく。
【０００８】
なお、本発明で「不斉加水分解」とは、２−ハロ−２−フルオロシクロプロパンカルボン酸エステル類のうち特定の光学活性体に、エステラーゼが立体特異性をもって作用し、当該光学活性体をその不斉構造を維持しながら優先的もしくは選択的に加水分解することを意味するものである。
【０００９】
本発明は、一般式（１）
【００１０】
【化４】
0003755049.tif 000002
【００１１】
（式中、Ｘは塩素原子，臭素原子またはヨウ素原子、Ｒは低級アルキル基、＊は不斉炭素原子を示す。）
で示される２−ハロ−２−フルオロシクロプロパンカルボン酸エステル類を、該エステル類に対して不斉加水分解能を有するエステラーゼを用いて不斉加水分解することを特徴とする一般式（２）
【００１２】
【化５】
0003755049.tif 000003
【００１３】
（式中、Ｘ、＊はそれぞれ前記と同じ意味を示す。）
で示される２−ハロ−２−フルオロシクロプロパンカルボン酸のうちの光学活性体の製造方法を提供するものである。
【００１４】
また、本発明は、上記エステラーゼが、２−ハロ−２−フルオロシクロプロパンカルボン酸エステル類（１）のシス体に対して不斉加水分解能を有するエステラーゼであることを特徴とする、２−ハロ−２−フルオロシクロプロパンカルボン酸のシス体の光学活性体の製造方法を提供するものである。
【００１５】
ここで、２−ハロ−２−フルオロシクロプロパンカルボン酸エステル類のシス体とは、具体的に（１Ｓ，２Ｒ）−２−ハロ−２−フルオロシクロプロパンカルボン酸エステル又は（１Ｒ，２Ｓ）−２−ハロ−２−フルオロシクロプロパンカルボン酸エステルであり、２−ハロ−２−フルオロシクロプロパンカルボン酸のシス体（シス  ２−ハロ−２−フルオロシクロプロパンカルボン酸ともいう。）とは、具体的に（１Ｓ，２Ｒ）−２−ハロ−２−フルオロシクロプロパンカルボン酸又は（１Ｒ，２Ｓ）−２−ハロ−２−フルオロシクロプロパンカルボン酸である。
【００１６】
更に、本発明は、エステラーゼとして、アルスロバクター属、アスペルギルス属、アルカリゲネス属、アクロモバクター属、クロモバクテリウム属、リゾプス属、キャンディダ属、ムコール属、ノカルディア属、コリネバクテリウム属、ペディオコッカス属、エンテロバクター属、シュードモナス属、ミクロコッカス属、バシルス属、ラクトバシルス属、トリコデルマ属、サッカロミセス属、ロドトルラ属、クリプトコッカス属、トルロプシス属、ピヒア属、ペニシリウム属、オーレオバシディウム属、アクチノムコール属、ストレプトミセス属及びハンゼヌラ属からなる群から選択されるいずれかの属に属する微生物、または動植物に起源するエステラーゼを使用することを特徴とする２−ハロ−２−フルオロシクロプロパンカルボン酸の光学活性体を製造する方法である。
【００１７】
【発明の実施の形態】
本発明の出発原料として用いられる一般式（１）の２−ハロ−２−フルオロシクロプロパンカルボン酸エステル類において、置換基Ｒで示される低級アルキル基としては、例えばメチル基、エチル基、プロピル基、ブチル基、ペンチル基などの炭素原子数１〜６のアルキル基などが挙げられる。なお、アルキル基は直鎖状、分枝状、環状のいずれであってもよい。また、置換基Ｘとは塩素原子、臭素原子、ヨウ素原子のいずれかであるが、通常は入手のし易さの点で、塩素原子が好ましく用いられる。
【００１８】
具体的には、２−ハロ−２−フルオロシクロプロパンカルボン酸エステル類としては、例えば２−クロロ−２−フルオロシクロプロパンカルボン酸メチル、２−ブロモ−２−フルオロシクロプロパンカルボン酸メチル、２−ヨード−２−フルオロシクロプロパンカルボン酸メチルおよび上記各化合物におけるメチル基がエチル基、プロピル基、ブチル基に置換してなる化合物などが挙げられる。
【００１９】
これらの２−ハロ−２−フルオロシクロプロパンカルボン酸エステル類には、４種類の光学活性体、すなわち（１Ｓ，２Ｒ）体、（１Ｒ，２Ｓ）体、（１Ｒ，２Ｒ）体および（１Ｓ，２Ｓ）体が存在するが、本発明の出発原料としてはこれら光学活性体の２種以上を任意の割合で含むものが用いられ、例えばこれらの光学活性体の全てを含む光学不活性な２−ハロ−２−フルオロシクロプロパンカルボン酸エステル類を用いてもよいし、該エステル類から任意の光学活性体の一部ないしは全てを分離した後の光学活性な混合物を用いてもよい。ここで光学不活性な２−ハロ−２−フルオロシクロプロパンカルボン酸エステル類は、例えば前記の特開平６−９４９９号公報に記載されるような公知の方法によって容易に製造することができる。
【００２０】
本発明で用いられるエステラーゼは、２−ハロ−２−フルオロシクロプロパンカルボン酸エステル類に対して不斉加水分解能を有するものであれば特に制限されず、現在公知もしくは将来使用され得る微生物起源のエステラーゼ、動植物起源のエステラーゼなどが広く挙げられる。
【００２１】
具体的には、微生物起源のエステラーゼとしては、例えばアルスロバクター属、アスペルギルス属、アルカリゲネス属、アクロモバクター属、クロモバクテリウム属、リゾプス属、キャンディダ属、ムコール属、ノカルディア属、コリネバクテリウム属、ペディオコッカス属、エンテロバクター属、シュードモナス属、ミクロコッカス属、バシルス属、ラクトバシルス属、トリコデルマ属、サッカロミセス属、ロドトルラ属、クリプトコッカス属、トルロプシス属、ピヒア属、ペニシリウム属、オーレオバシディウム属、アクチノムコール属、ストレプトミセス属またはハンゼヌラ属などに属する微生物に由来するエステラーゼ、又はこれらの微生物が有するエステラーゼ遺伝子が導入されることによって形質転換された組換え微生物が産生するエステラーゼなどが挙げられる。
【００２２】
これらの中でも一般的には、アルスロバクター属、アスペルギルス属、アルカリゲネス属、アクロモバクター属、クロモバクテリウム属、リゾプス属、キャンディダ属、ムコール属、ノカルディア属、ブレビバクテリウム属、ペディオコッカス属、シュードモナス属又はバシルス属に属する微生物が生産するエステラーゼが適し、好ましくは、アルスロバクター属、クロモバクテリウム属、キャンディダ属、ノカルディア属、コリネバクテリウム属、ペディオコッカス属、シュードモナス属又はバシルス属に属する微生物が生産するエステラーゼが適する。
【００２３】
これらの微生物はいずれも通常の方法、例えば滅菌した液体培地に該微生物を接種し、２０〜４０℃で往復振とう培養する方法などによって容易に液体培養することができる。また、必要に応じて固体培養してもよい。
【００２４】
動植物起源のエステラーゼとしては、例えばステアプシン、パンクレアチン、ブタ肝臓エステラーゼ、小麦胚芽（Wheat Germ）エステラーゼなどが挙げられる。
【００２５】
これらのエステラーゼは、市販品であってもよい。例えば、微生物起源のエステラーゼの市販品としてはシュードモナス・セパシアのリパーゼ（リパーゼＰＳ、天野製薬社製）、アスペルギルス属のリパーゼ（リパーゼＡＰ、天野製薬社製）、ムコール属のリパーゼ（リパーゼＭ、天野製薬社製）、キャンディダ・シリンドラッセのリパーゼ（リパーゼＭＹ、名糖産業社製）、アクロモバクター属のリパーゼ（リパーゼＡＬ、名糖産業社製）、アルスロバクター属のリパーゼ（リパーゼＡＵ、住友化学社製）、クロモバクテリウム・ビスコサムのリパーゼ（リパーゼ、東洋醸造社製）、リゾプス・デレマのリパーゼ（タリパーゼ、田辺製薬社製）、リゾプス属のリパーゼ（リパーゼサイケン、大阪細菌研究所製）、キャンディダ・アンタークティカのエステラーゼ（ノボイザム４３５、ノボルディスク社製）などが挙げられる。また動植物起源のエステラーゼの市販品としては、小麦胚芽エステラーゼ（リパーゼ  タイプ１、シグマ社製）などが挙げられる。
【００２６】
本発明において使用されるエステラーゼは、その純度により制限されるものではなく精製エステラーゼ、粗製エステラーゼのいずれをも使用することができる。従って、前述の微生物等を培養して得た培養物、培養濾液、菌体、菌体懸濁液、菌体抽出物などのエステラーゼ含有物あるいはそれらの処理物、例えば該エステラーゼ含有物を通常の方法によって樹脂等に固定化したもの等をそのまま用いることもできる。
【００２７】
エステラーゼは、目的とする２−ハロ−２−フルオロシクロプロパンカルボン酸の光学活性体の種類に応じて適宜選択される。また、エステラーゼの使用量は反応時間の遅延や選択性の低下が起こらないように適宜選択され、例えばエステラーゼとして上記したような市販品を用いる場合には、２−ハロ−２−フルオロシクロプロパンカルボン酸エステル類１００重量部に対して通常０．１〜１０重量部の範囲である。
【００２８】
不斉加水分解に際しては、２−ハロ−２−フルオロシクロプロパンカルボン酸エステル類とエステラーゼが適当な条件下で共存する状態であればよく、例えば簡便には、溶媒中で２−ハロ−２−フルオロシクロプロパンカルボン酸エステル類およびエステラーゼを混合する方法が挙げられるが、エステラーゼを樹脂などに固定化して用いることもできる。
【００２９】
ここで溶媒としては、無機酸塩又は有機酸塩類の緩衝溶液が広く使用される。具体的には、リン酸ナトリウム水溶液、リン酸カリウム水溶液などの無機塩類の緩衝溶液、酢酸ナトリウム水溶液、クエン酸ナトリウム水溶液などの有機酸塩類の緩衝溶液などが例示される。その濃度は特に制限されないが、通常０．０１〜２Ｍ、好ましくは０．０５〜０．５Ｍの範囲である。かかる溶媒の使用量は２−ハロ−２−フルオロシクロプロパンカルボン酸エステル類に対して通常１〜１００重量倍の範囲であることが好ましい。
【００３０】
また、反応に際して反応系内に非エステル系有機溶媒や、非エステル系界面活性剤などが添加されていてもよい。
【００３１】
反応温度は、低すぎると反応速度が低下し、高すぎるとエステラーゼの活性が低下する傾向にあるため、通常１０〜６５℃、好ましくは２０〜５０℃の範囲である。
【００３２】
反応系内のｐＨは、それが低すぎるとエステラーゼの活性の低下や目的とする光学活性体の収率が低下し、またそれが高すぎると目的とする光学活性体の収率が低下するため、通常はｐＨ４〜９の範囲、好ましくは各エステラーゼの反応最適ｐＨの付近である。
【００３３】
かかる不斉加水分解によって、原料として用いる各種の光学活性体の混合物からなる２−ハロ−２−フルオロシクロプロパンカルボン酸エステル類に含まれる特定の光学活性体が優先的にもしくは選択的に加水分解されて、２−ハロ−２−フルオロシクロプロパンカルボン酸の特定の光学活性体が生成する。
【００３４】
即ち本発明によれば、１種の２−ハロ−２−フルオロシクロプロパンカルボン酸の光学活性体、即ち（１Ｓ，２Ｒ）体、（１Ｒ，２Ｓ）体、（１Ｒ，２Ｒ）体、または（１Ｓ，２Ｓ）体のいずれかをそれぞれ高い選択性をもって特異的に製造することができる。かかる光学活性体としては、具体的には（１Ｓ，２Ｒ）−２−クロロ−２−フルオロシクロプロパンカルボン酸、（１Ｓ，２Ｒ）−２−ブロモ−２−フルオロシクロプロパンカルボン酸、（１Ｓ，２Ｒ）−２−ヨード−２−フルオロシクロプロパンカルボン酸が、また上記各化合物における（１Ｓ，２Ｒ）がそれぞれ（１Ｒ，２Ｓ）、（１Ｒ，２Ｒ）又は（１Ｓ，２Ｓ）に置き換えられてなる各化合物の（１Ｒ，２Ｓ）体、（１Ｒ，２Ｒ）体又は（１Ｓ，２Ｓ）体が挙げられる。
【００３５】
なお、以下において２−ハロ−２−フルオロシクロプロパンカルボン酸エステル類またはその加水分解物である２−ハロ−２−フルオロシクロプロパンカルボン酸の光学活性体の（１Ｒ，２Ｒ）体および（１Ｓ，２Ｓ）体をそれらのトランス体と呼び、前述するように（１Ｓ，２Ｒ）体および（１Ｒ，２Ｓ）体をそれらのシス体と呼ぶ。
【００３６】
本発明の方法で製造される２−ハロ−２−フルオロシクロプロパンカルボン酸の光学活性体は、反応後の反応混合物から通常の方法、例えば、生成した２−ハロ−２−フルオロシクロプロパンカルボン酸の光学活性体が塩を形成して水層に溶解している状態で、メチル−ｔ−ブチルエーテルなどの水に不溶の有機溶媒を用いる洗浄によって未反応の２−ハロ−２−フルオロシクロプロパンカルボン酸エステル類を除去したのち、塩酸などの酸を加えて系内を酸性とし、次いでメチル−ｔ−ブチルエーテルなどの水に不溶の有機溶媒を用いて抽出処理して、得られた有機層を濃縮する方法などによって容易に取り出すことができる。また、得られた２−ハロ−２−フルオロシクロプロパンカルボン酸の光学活性体は、更に精留、再結晶などの通常の方法によって精製されてもよい。
【００３７】
【発明の効果】
本発明の方法によれば、光学活性体の混合物からなる２−ハロ−２−フルオロシクロプロパンカルボン酸エステル類から、高い選択性をもって２−ハロ−２−フルオロシクロプロパンカルボン酸の特定の光学活性体を製造することができる。
【００３８】
【実施例】
以下、実施例により本発明をより詳細に説明するが、本発明はこれら実施例に限定されるものではない。
【００３９】
なお、実施例において用いた微生物はいずれも財団法人大阪醗酵研究所（ＩＦＯ、Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ  ｆｏｒ  Ｆｅｒｍｅｎｔａｔｉｏｎ  ，Ｏｓａｋａ）、Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｔｙｐｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ（ＡＴＣＣ）、理化学研究所微生物系統保存施設（ＪＣＭ、Ｊａｐａｎ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｍｉｃｒｏｏｒｇａｎｉｓｍｓ）、東京大学応用微生物研究所微生物微細藻類総合センター（ＩＡＭ）に保存されており、これらの保存機関より入手することができる。
【００４０】
実施例１
５００ｍｌ肩付きフラスコに液体培地〔加糖ブイヨン培地（水１リットルにグルコース１０ｇ、ペプトン５ｇ、肉エキス５ｇ、食塩３ｇを溶解し、ｐＨ７．２とした。）〕１００ｍｌを入れ、て殺菌したのち、微生物〔アルスロバクター・ラモサス（ＩＦＯ  １２９５８）〕を斜面培養から２白金耳接種し、３０℃で８０時間往復振とう培養して、培養液を得た。
【００４１】
この培養液から遠心分離によって集菌し、蒸留水で２回洗浄したのち、０．１Ｍリン酸緩衝液（水酸化ナトリウムを加えてｐＨ７．０に調整した。）３０ｍｌに懸濁させて、菌体懸濁液を得た。
【００４２】
この菌体懸濁液を超音波細胞破砕装置で処理して菌体を破砕し、遠心分離によって菌体破片を分離除去して、粗製エステラーゼ液を得た。
【００４３】
この粗製エステラーゼ液０．０５ｇを、窒素雰囲気下、３５℃で、０．２Ｍリン酸緩衝水溶液  ６０ｇ（水酸化ナトリウムを加えてｐＨ７．０に調整した。）に加えて同温度下で３０分間撹拌したのち、２−クロロ−２−フルオロシクロプロパンカルボン酸エチル〔純度９７％、シス体／トランス体比＝５７．７／４２．３、（１Ｓ，２Ｒ）体／（１Ｒ，２Ｓ）体比＝５０／５０〕１ｇを注加して、同温度下でさらに２時間撹拌した。
【００４４】
その後、メチル−ｔ−ブチルエーテル２０ｍｌおよび水２０ｍｌを加え、析出した固形物を濾別し、有機層を除去して水層を得た。次いで、この水層に濃塩酸を加えてそのｐＨを２としたのち、メチル−ｔ−ブチルエーテル２０ｍｌを用いて抽出し、得られた有機層を濃縮して、２−クロロ−２−フルオロシクロプロパンカルボン酸（淡黄色粘稠液体、収率３７．１％）を得た。
【００４５】
この２−クロロ−２−フルオロシクロプロパンカルボン酸の収率およびシス体／トランス体比は、これを常法に従って２−クロロ−２−フルオロシクロプロパンカルボン酸ベンジルエステルに誘導した後、ガスクロマトグラフ分析によって求めた。また、（１Ｓ，２Ｒ）体／（１Ｒ，２Ｓ）体比は光学活性カラム（スミキラルＯＡ−６０００、住化分析センター社製）を用いる高速液体クロマトグラフ分析（展開液：２ｍＭ硫酸銅水溶液に酢酸を加えてｐＨ４．８〜５に調整した水溶液）によって求めた。分析結果を表１に示す。
【００４６】
実施例２〜５
実施例１で得た粗製エステラーゼ液に代えて、表１に記載の微生物を用いて実施例１と同様に操作して得た菌体懸濁液を用いる以外は実施例１と同様に操作して、２−クロロ−２−フルオロシクロプロパンカルボン酸を得た。このものの分析結果を表１に示す。
【００４７】
【表１】
0003755049.tif 000004
【００４８】
実施例６〜８
微生物の粗製エステラーゼ液に代えて表２に記載の微生物起源のエステラーゼをそれぞれ０．０５ｇを用いる以外は実施例１と同様に操作して、２−クロロ−２−フルオロシクロプロパンカルボン酸を得た。このものの分析結果を表２に示す。
【００４９】
【表２】
0003755049.tif 000005
【００５０】
実施例９
微生物の粗製エステラーゼ液に代えて動植物起源のエステラーゼ（リパーゼタイプ１、シグマ社製）を０．０５ｇを用いる以外は実施例１と同様に操作して、２−クロロ−２−フルオロシクロプロパンカルボン酸を得た。結果を表３に示す。
【００５１】
【表３】
0003755049.tif 000006
【００５２】
実施例１０〜１３
表４記載の各菌体をブイヨン培地５０ｍｌ中、３０℃で２４時間培養して遠心分離にて培地を除いた後、菌体を凍結乾燥して表４記載の各菌体の凍結乾燥菌体を得た。
【００５３】
１ｇの２−クロロ−２−フルオロシクロプロパンカルボン酸エチルを０．１Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ７．０；１００ｍｌ）に懸濁し、更に凍結乾燥菌体０．０５ｇを加えて静かに撹拌した。反応液のｐＨはカルボン酸の生成により低下するため、１Ｎ  ＮａＯＨを添加することによりｐＨ７付近に保った。４時間後、反応液に酢酸エチル１００ｍｌを加えた後、セライトろ過を行い菌体を除いた。有機層を分離した後、水層を更に酢酸エチルで２回洗浄した。次に水層をｐＨ２に調整した（１０％ＨＣｌを使用）後、酢酸エチル１００ｍｌで３回抽出した。抽出液を乾燥した後、溶媒を留去することにより、目的のカルボン酸（２−クロロ−２−フルオロシクロプロパンカルボン酸）を得た。
【００５４】
得られたカルボン酸のシス／トランス体比は、カルボン酸をジアゾメタン処理してメチルエステルに変換した後、以下の条件下でガスクロマトグラフィーを行うことにより分析した。
【００５５】
使用カラム：ＴＣ−ＷＡＸ  ３０ｍ×０．２５ｍｍ（ＧＬサイエンス）
温      度：９０℃（オーブン）
１２０℃（検出器）
２００℃（注入）
流      速：１．０ｍｌ／分
得られたカルボン酸は、ｎ−Ｂｕ3ＳｎＨ／ＡＩＢＮで塩素原子を還元して２−フルオロシクロプロパンカルボン酸とし、さらにジアゾメタン処理によってメチルエステルに誘導して光学純度を算出した。
【００５６】
・光学異性体の分析条件（ガスクロマトクラフィー）
使用カラム：ＣＰ−Ｃｙｃｌｏｄｅｘｔｒｉｎ−β−２３６Ｍ
２５ｍ×０．２５ｍｍ（ＧＬサイエンス）
温      度：７０℃（オーブン）
１００℃（検出器）
２００℃（注入）
流      速：１．０ｍｌ／分
結果を表４に示す。
【００５７】
【表４】
0003755049.tif 000007