(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
アデノシン作動性化合物およびカテコールアミン化合物を含む、鎮痛、麻酔、代謝障害保護、虚血保護、心臓保護、呼吸循環系保護、ストレス減少、又は神経保護のための医薬組成物であって、
当該アデノシン作動性化合物およびカテコールアミン化合物は医薬的に許容できる担体中に同時に存在し、
当該アデノシン作動性化合物が、アデノシン、５’−Ｎ−エチルカルボキシアミドアデノシン、Ｒ（−）Ｎ6−（２−フェニルイソプロピル）アデノシン、２−クロロアデノシン、Ｎ6−シクロペンチルアデノシン、Ｎ6−シクロヘキシルアデノシン、および燐酸化アデノシンから成る群から選ばれ、
当該カテコールアミン化合物が、エピネフリン、ノルエピネフリン、ドーパミン、ドブタミン、およびフェニレフリンから成る群から選ばれる、上記医薬組成物。
【請求項２】
当該アデノシン作動性化合物がアデノシンまたは燐酸化アデノシンである請求項１記載の組成物。
【請求項３】
当該アデノシン作動性化合物がアデノシンである請求項１記載の組成物であって；さらに、
当該カテコールアミン化合物がノルエピネフリンであるとき、当該組成物が、重量で１のノルエピネフリンに対して重量で２５から２０００のアデノシンを含み；
当該カテコールアミン化合物がエピネフリンであるとき、当該組成物が、重量で１のエピネフリンに対して重量で５０から４０００のアデノシンを含み；
当該カテコールアミン化合物がフェニレフリンであるとき、当該組成物が、重量で１のフェニレフリンに対して重量で１０から２００のアデノシンを含み；さらに、
当該カテコールアミン化合物がドーパミンであるとき、当該組成物が、重量で１のドーパミンに対して重量で２から５のアデノシンを含む上記組成物。
【請求項４】
さらに、アデノシン作動性化合物の作用増強剤を含み、当該作用増強剤が、ペンゾジアゼピン、ジピリダモール、デオキシコフォルマイシン、エリスロ−９−（２−ヒドロキシ−３−ノニル）アデノシン、５−アミノ−４−イミダゾールカルボキサミド（ＡＩＣＡ）リボシド、オピオイド、カリウムチャンネル開放物質、エトミデート、プロポフォール、アドレナリン作動性α2作用薬、バルビツレート、および非ステロイド性抗炎症剤から成る群から選ばれる請求項１または２または３記載の組成物。
【請求項５】
静脈内投与形態にある請求項１〜４のいずれか１項記載の組成物。
【発明の詳細な説明】
関連出願
本出願は、１９９３年１１月２４日に出願された特許出願０８／１５８０１２号の部分継続出願であり、さらに本出願は、参考文献として本明細書に含まれる特許出願０８／０８３２１４号と関連する。特許出願０８／０８３２１４号は、特許出願０７／７５６４８０号の部分継続出願であり、後者は特許出願０７／５２１５２９号の部分継続出願である。
発明の分野
本発明は医薬組成物およびその投与方法に関するものであり、特にプリン含有組成物およびその投与方法に関するものである。別の観点ではこの発明はカテコールアミン含有組成物およびその投与方法に関するものである。
発明の背景
プリン化合物はほ乳類生物の細胞内および細胞外にあり、生体の代謝において生命維持の役割を果している。ほ乳類系におけるプリン化合物の一般的な性質を示す例として、プリンのひとつであるヌクレオシドアデノシンがある。これは、６０年以上前に冠状動脈の平滑筋を弛緩させ、房室伝導を減らすことが報告されている。さらにアデノシンには抗侵害作用があり、最近では麻酔においても有用であることも示されている。アデノシンの多彩な作用には、循環器系、神経系、呼吸器系、胃腸系、腎および生殖器系への作用のみらず血球、脂肪細胞、免疫系に対しての作用がある。これまでに上室性頻脈に対する処置として、極微量（０．０１−０．２５ｍｇ／ｋｇ）のアデノシンの静脈内投与が示唆されている。０．２ｍｇ／ｋｇ／ｍｉｎまでのアデノシンの約６分間にわたる持続静脈内投与についても心臓血管造影画像診断で有用性が示唆されている。同様に、リン酸化アデノシンヌクレオシドまたはアデノシンヌクレオチドについても麻酔効果を有する点でその有用性が知られている（リン酸化ヌクレオシドはヌクレオチドである）。麻酔時のアデノシン化合物の使用は、同時出願中の米国特許出願第０８／０８３２１４号（表題はアデノシン化合物の治療的使用（Therapeutic Use of Adenosine Compounds）でより詳細に検討されている。特許出願第０８／０８３２１４号に記載されている方法には、ほ乳類に対して５ｍｇ／ｋｇ／ｍｉｎ以内のアデノシンまたはＡＴＰの持続静注投与することによって、麻酔状態が大きく改善されることが示されている。その投与量は手術の刺激にともなって変動する循環器系の変化に応じて調節することになっている。使用される投与量では麻酔効果は徐々に現われるが、注意深く患者をモニターする必要がある。緩徐な麻酔導入は投与するアデノシンが低量であるためであるが、麻酔効果をより早く発現するために投与量を増すことは安全ではないと考えられていた。
プリン化合物の効果は細胞表面のプリン化合物に特異的なレセプターを介して生じると考えられいる。化合物とレセプターに依存しているが、それらの結合は可逆的であり、多彩な作用を有している。さらに、ある化合物は他の化合物と競合しなから一つ以上のレセプターと結合すると考えられている。生物学的フィードバックといわれる過程においては、特異的レセプターに最初に化合物が結合する、または化合物が存在していると、生体からはその化合物の作用に拮抗する別の物質が産生される。たとえば、内因性物質であるカテコールアミン（ノルエピネフリン、エピネフリン、ドーパミンなど）は、ストレスを受ける状況に反応して神経末端および副腎から産生され、分泌されることがあるが、内因性に産生・分泌されたわずかなカテコールアミンは心拍数の増加と血管収縮をおこす。このことがわずかな量のアデノシンおよびＡＴＰを産生させ、別のレセプターを介した機構によって、カテコールアミンの増加によって生じた作用に拮抗すると考えられている。
ドルーリーとツェント−ギオルギー（Drury & Szent-Gyorgyi）が、１９２９年に循環器系機能に対するアデノシンの生理学的作用を報告して以来、プリン化合物に関する重要な研究がされてきた。プリン  レセプターが分類され、アデノシン、アデノシン三リン酸（ＡＴＰ）が内因性の保護因子であることが証明されてきた。いくつかのプリン化合物は極めて有益な生理学的能力を有しているが、先に述べた一般的性質や作用はそれらを治療用に使用することを困難にしがちである。言い換えれば、プリン化合物のほ乳類への投与は患者の状態および投与量に依存して、望ましい作用と望ましくない作用の両方を有していることになる。
さらに、アデノシンのようなプリン化合物は効果的な細胞外レベルを保つように投与するとその濃度では有毒であると考えられるので、アデノシンの単独投与は有用でないかまたは治療としての使用が限定されると考えられてきた。それゆえに、薬理学者は局所のアデノシンの細胞外レベルを高める試みを以下のようにしてきた。ａ）アデノシンの細胞内への輸送を特異的にブロックする試薬を用いてアデノシンの取り込みを抑制する。ｂ）アデノシンの代謝分解を防止する。ｃ）アデノシン  レセプターに特異的に結合するアデノシン同族体の使用。ｄ）アデノシンの前駆体であるＡＩＣＡリボシドの使用があげられる。この前駆体については多くの文献および特許のテーマとなっている（米国特許第５０８２８２９号、同５１３２２９１号、同５１８７１６２号、同５２００５２５号、同５２３６９０８号）。しかし、以上の試みはいまだに使用に際しての大きな短所を有している。代謝阻害剤および取り込み阻害剤による方法は、プリン化合物を産生する組織の能力に限界があること、さらに、アデノシン作用薬にはこれらの薬剤に関連して低血圧および徐脈などの相当な全身的副作用があるため、非常に大きな制限がある。よって、基礎科学および医薬研究における多数の集中的な試みにもかかわらず、副作用を生じないでプリン  レセプターを完全に活性化させ、治療薬として用いることができる薬剤の開発は今日までほとんど成功しなかった。それゆえ、今まで虚血性障害の防止または処置後の有効な医療措置はなかったことになる。
プリン化合物およびプリン  レセプター作用薬に関する他の情報については以下の文献を参照のこと：Elyら、"Protective Effects of Adenosine in Myocardial Ischemia"（心筋虚血におけるアデノシンの保護作用）、Circulation 85:893-904(1992);Millerら、"Therapeutic Potential for Adenosine Receptor Activation in Ischemic Brain Injury"（虚血性脳障害におけるアデノシン  レセプター活性化の潜在的治療効果）、J.Neurotrauma 9:563-77(1992);Williams,"Adenosine Receptors as Drug Targets:Fulfilling the Promise?"（薬剤の標的としてのアデノシン  レセプター:目標は達成するか？）、Jacobsonら編、「Purine in Cellular Signaling:Targets for New Drugs（細胞性信号としてのプリン：新薬の標的）」から、ニューヨーク、Springer-Verlag（1990）（特に175ページ参照）；Lawsonら、"Preconditioning:State of the Art Myocaridial Protection"（プレコンディショニング：心筋保護の状態）、Cardiovascular Research 27:542-50(1993);Rudolphi,"Manipulation of Purinergic Tone as Mechanism for Controlling Ischemic Brain Damage"（虚血性脳障害制御機構としてのプリンによるマニブレーション）、J.W.Phillis編、「Adenosine and Adenie Nucleotides as Regulators of Cellular Function」（細胞性機能の調節物質としてのアデノシンおよびアデニンヌクレオシド）」から、Boca Raton,CRC Press(1991);R.Berne,"Adenosine-a Cardioprotective and Therapeutic Agents"（アデノシン−心臓保護および治療剤）、Cardiovascular Research 27:2(1993);Phillisら、"Roles of Adenosine and Adenie Nucleotides in the Central Nervous System"（アデノシンおよびアデニンヌクレオシドの中枢神経系における役割）、Dalyら編「Physiology and Pharmacology of Adenosine Derivatives」（アデノシン誘導体の生理学と薬理学）」から、Raven Press,ニューヨーク（1983）;Galinanes,"Should Adenosine Continue To Be Ignored As A Cardioprotective Agent In Cardiac Operations?"（心臓手術における心臓保護剤としてアデノシンは軽視され続けるべきか？）、Journal of Thoracic and Cadiovascular Surgery 105:180-183(1993);Jacobsonら、"Novel Therapeutics Acting Via Purine Receptors"（プリン  レセプターを介して作用する新規治療薬）、Biochemical Pharmacology 41:1399-1410(1991);英国特許第７９７２３７号；米国特許第４５１４４０５号；同４５９０１８０号；同４６０５６４４号；同４６７３５６３号；同４８８０７８３号；同４８８０９１８号；同５０４９３７２号；同５０７０８７７号；同５１０４８５９号；Davalら、"Physiological and Pharmacological Priperties of Adenosine Therapeutic Implications"（アデノシン治療薬としての生理学的、薬理学的意義）、Life Sciences 49:1435-1453(1991);Dubyakら編、「Biological Actions of Extracellular ATP（細胞外ＡＴＰの生物学的作用）」ニューヨーク科学アカデミー紀要、603巻、ニューヨーク、N.Y.Academy of Sciences(1990);Imaiら編、「Role of Adenosine and Adenine Nucleotides in the Biological System.Metabolism,Release,Transport,Receptors,Transduction Mechanisms and Biological Actions（生物系におけるアデノシンおよびアデニンヌクレオシドの役割、代謝、分泌、輸送、レセプター、誘発メカニズムおよび生物学的作用）」、アムステルダム、Elsevier(1991);Ribeiro編、「Adenosine Receptors in the Nervous System（神経系のアデノシン  レセプター）」、ロンドン、Taylor & Francis(1989);Williams編、「Adenosine and Adenosine Receptors（アデノシンとアデノシン  レセプター）」、Clifton,N.J.The Humana Press(1990);Tsuchidaら、"Pretreatment with the adenosine Ａ1 selective a gonist,2-chloro-N6-cyclopentyladenosine(CCPA),causes a sustained limitation of infarct size in rabitts"（アデノシンＡ1��択性作用薬、２−クロロ−Ｎ6−シクロペンチルアデノシン（ＣＣＰＡ）は、兎の梗塞の大きさを持続的に制限する）、Cardiovascular Research 27:652-66(1993);Fukunagaら、"Hypotensive effects of adenosine and adenosine triphosphate compared with sodium nitoroprusside"（ニトロプルシドナトリウムと比較したアデノシンおよびアデノシン三リン酸の血圧低下作用）、Anesthesia and Analgesia 61:273-278(1982);Fukunagaら、"Effects of in travenously administerd adenosine and ATP on halothane MAC and its reversal by aminophylline in rabbits"（兎のハロタンＭＡＣに対する静注アデノシンおよびＡＴＰの効果およびアミノフィリンによる抵抗）、Anesthesiology 71:A260(1989);Druryら、"The physiological activity of adenine compounds with special reference to their action upon the mammalian heart"（ほ乳類の心臓に対する特殊な作用に関連したアデニン化合物の生理学的作用）、Journal of Physiology(London)68:213-37(1929);Olssonら、"Cardiovascular purinoceptors"（循環器系のプリノセプター）、Physiological Reviews 70:761-809(1990);Downeyら編、"Spotlight on the cardioprotective properties of adenosine"（アデノシンの心臓保護特性に対する関心）、Cardiovascular Research ２７巻、１号全体(1993);Rudolphiら、"Neuroprotective role of adenosine in cerebral ischemia"（脳虚血におけるアデノシンの神経保護の役割）、Trends in Pharmacological Sciences 13:439-45(1992);Williams,"Purinergic pharmaceuticals for 1990s"（1990年代のプリン作動性医薬）、Nucleosides & Nucleotides 10:1087-99(1991);米国特許第５０８２８２９号；同５１３２２９１号；５１８７１６２号；同５２００５２５号；同５２３６９０８号；Homeisterら、"Combined adenosine and lidocaine administration limits myocardial reperfusion injury"（アデノシンとリドカインの組合わせ投与は心筋の再潅流障害を軽減する）、Circulation 82:595-608(1990);K.Mullane "Acadesine:the prototype adenosine regulating agent for reducing myocardial ischemic injury"（アカデシン:心筋虚血傷害を減少させるアデノシンプロトタイプ）、Cardiovascular Research 27:43-7(1993);Van Belle H "Nucleoside transport inhibition:a therapeutic approach to cardioprotection via adenosine?"（ヌクレオシド輸送の抑制：アデノシンによる心臓保護の治療的アプローチ）、Cardiovascular Research 27:68-76(1993)。これらの文献は全て参照により本明細書に含まれる。
治療薬としてプリン化合物を使用する際の最も大きな問題は、おそらく期待する効果を得るための必要な十分量を患者に使用すると、期待しないまたしばしば致死的でもある副作用が発生してしまうことである。たとえばアデノシンは虚血による脳のダメージに対して生体の防御に不可欠な役割を果たしていることはよく知られており、さらに心筋の虚血の前および再潅流時に投与された時には心筋の保護作用があることも報告されてきているが、アデノシンまたはＡ1に選択的な作用薬の静脈内投与は著明な血圧低下を引き起こすことがわかっている（Ａ1はほ乳類の生体にあるアデノシン  レセプターの一つといわれている）。もう一つの例としては、ほ乳類の麻酔には大量のアデノシンまたはＡＴＰが必要であるが、その麻酔効果の必要量を投与した場合、非常に慎重な管理（患者のバイタルサインの適切な監視に基づいたアデノシンの投与速度量の調節）または患者の生命機能の危険度に応じて即座に拮抗する薬剤を投与しなければ、患者は死に至る可能性はある。麻酔導入に十分量のアデノシンまたはアデノシン同族体の大量投与によって望まない副作用を拮抗するために、たとえ、前もってもしくは後でもその薬剤を準備したとしても、生体機能への危険性の可能性がある。患者の生理学的経過に作用するこの“pendulum effect”が患者の血圧、心拍数、呼吸など、それ以外にもバイタルサインに大きな変化をもたらし、プリン化合物を治療に使用することを躊躇させている。
そのために、プリン化合物を望ましい効果がでる十分量をより容易で安全に投与でき、かつ、その投与量で通常発生する望まない作用がでないような、プリン組成物が必要である。プリン化合物投与による望まない作用に対する拮抗しようとした、これまでのほとんどの試みはレセプターに特異的なアンタゴニストの使用によるものである。さらに、プリン化合物投与による望まない作用を拮抗する薬剤は、プリン化合物と構造と機能が異なるため、プリン化合物との同時に投与することまたは生体外で組合わせることはできず、治療用には安全に使用できないと考えられてきた。
発明の要旨
簡潔にさらに一般的にいえば、本発明はプリン組成物とその投与方法に関するものであり、それによるとプリン化合物に拮抗薬を組合わせることによって相乗的でかつ期待以上の利点が得られる、また、患者の生体機能に対するpendulum効果または極端な変化は大幅に軽減し、プリン化合物投与で今まで危険で、致死的であった望ましくない作用がおこるとされていた大量投与が安全にでき、望ましくない作用を軽減する一方で、望ましい効果が生じる。
よって、本発明はプリン組成物とその投与方法を目的とするものである。プリン組成物はプリン化合物と拮抗薬からなる。プリン化合物は拮抗薬の投与がなければ、ほ乳類に望ましい効果が現われる量を投与すると、望ましくない作用も一緒に出現するが、拮抗薬を投与前にプリン化合物の必要量と組合せると、プリン化合物の望ましくない作用を軽減する。
好ましい実施例では、プリン化合物は望ましい効果、たとえば中枢神経系の抑制、神経保護作用、自律神経系の調節または抑制、心筋保護作用、呼吸機能維持、鎮痛／麻酔作用などがあり、望ましくない作用、たとえば血圧低下、心伝導抑制なども生じるが、生体外で拮抗薬と組合せることによって、その組合せ物が投与された際にはプリン化合物の望ましい効果はそのままで、望ましくない作用を軽減する。本発明による組成物は投与前に十分な時間バッチ式で調剤してもよく、または例えば、患者に入れる前に、静注セットに付いている適当な接続部で混合してもよく、組成物の成分を同時に投与してもよい。好ましい実施例ではプリン化合物はアデノシン、アデノシン同族体、リン酸化アデノシン、リン酸化アデノシン同族体のいづれかから選んで拮抗薬と組合せ、拮抗薬はエピネフリン、ノルエピネフリン、ドーパミン、ドブタミンおよびフェニレフリンなどのカテコールアミン化合物である。
別の観点から、プリン組成物はプリン化合物、拮抗薬およびプリン化合物の作用を増強する薬剤、さらに中枢神経抑制剤が組合せられる。作用を増強する薬剤はプリン化合物の細胞内への取り込みを抑制するもの、プリン化合物を代謝または分解する内因性酵素の活性を抑制するもの、アデノシンの分泌を増強するもの、またはそれらの組合せたものを使用すればよい。作用増強剤として、たとえば取り込みを抑制するものとしてはジピリダモールなど、アデノシン分解酵素の抑制剤としてはデオキシコホルマイシン、エリスロ−２−ヒドロキシ−３−ノニルアデノシンなど、前駆体ではＡＩＣＡリボシドなど、中枢神経抑制剤としてはベンゾジアゼピン（ジアゼパム、ミダゾラム、フルマゼニルなど）、オピオイド（モルフィン、フェンタニールおよびスフェンタニルなど）、バルビツレート（チオペンタール、メトヘキシタール、エトミデート、プロピフォールなど）、アドレナリン作動性α2作用薬（クロニジン、デキスメデトミジンなど）、あるいは非ステロイド性抗炎症剤（アスピリン、イブプロフェン、ケトロラックなど）を組合せるとよい。
別の観点では、本発明はこの組成物の多彩な効果が他の薬剤と協調することによって、相乗的な効果を生み出すことの発見に通じる。本組成物は抗生物質、解熱剤、抗ウィルス剤、抗癌剤、解毒剤、化学療法剤、カリウムチャンネル開放剤などの他の薬剤の担体として使用することができる。本組成物の血流調節剤としての効果は選択的に病的な組織または臓器に作用し、他の薬剤の望ましい効果を同様に増強することができる。たとえば、オピオイドやベンゾジアゼピンなどの望ましい効果は増強し、一方では副作用およびこれらの薬剤の望ましくない作用は拮抗する可能性がある。このように、様々な薬剤との今後使用すると本組成物は触媒のように働く可能性がある。たとえば、発明に沿った方法と組成物によると、オピオイドとベンゾジアゼピンによって生じる呼吸抑制は拮抗され、鎮痛および鎮静などの有益な効果は強化される可能性がある。
別の観点では、本発明は以前には危険であり、致死的な副作用をおこすと考えられていた極めて大量のカテコールアミン化合物を拮抗薬と投与前に組合せることによって、投与可能にするという発見にも通じる。この組合せ投与によると、カテコールアミン化合物は効果的な量の投与によって、望ましい効果を生じ、一方では、ほ乳類に望ましくない作用は軽減する。好ましい実施例では、カテコールアミン化合物は望ましい効果が生じ、カテコールアミン化合物が単独で使用された際に生じる一つまたはそれ以上の望ましくない作用を軽減するように、プリン化合物とカテコールアミン化合物は組合わされる。
別の観点では、プリン化合物またはカテコールアミン化合物をお互いに拮抗薬として適切な比率で組合せることによって、安全にほ乳類に大量投与できることは、驚くべき発見である。たとえば、投与前にあらかじめ決められた比率で組合せることによって、過去に可能であると考えられていた投与量以上のより大量のプリン化合物とカテコールアミン化合物がほ乳類にできるということである。本発明による医薬組成物において、拮抗薬として、プリン化合物とカテコールアミン化合物の適切な比率は数回の日常的試験を行うことによって、同業者にはすぐに決定することができる。この試験は、プリン化合物または拮抗薬としてのカテコールアミン化合物の比率または量を変化させながら投与し、注目すべきバイタルサイン（血圧、心拍数、呼吸など）を測定することによって行われる。
非制限的な実施例では、まず低用量（たとえば安全であるとわかっている量）のプリン化合物を拮抗薬と組合せて、その比率を変化させると、望ましい効果を生じ、望ましくない作用を軽減しはじめる適切な比率を決定することができる。それから、投与量を増加させ、望ましい効果を保ちつつ、望ましくない作用を最小限にするように、拮抗薬に対するプリン化合物の比率を調整する。好ましい実施例では、プリン組成物は重量で約２５から２０００のアデノシンと重量で１のノルエピネフリンを組合せたプリン組成物は、ほ乳類に対して望ましい効果を生じ、望ましくない作用を軽減するように投与することができる。この場合、もし組成物にノルエピネフリンがなければ、望ましくない作用ははるかに強く生じるであろう。非制限的な他の実施例では、重量で約５０から約４０００のアデノシンと重量で１のエピネフリンの組合せた組成物、重量で約１０から約２００のアデノシンと重量で１のフェニレフリンの組合せた組成物、および重量で約２から約５のアデノシンと重量で１のドーパミンの組合わせた組成物を含む。前述の組成物はアデノシンの量をいろいろと変化させることができる。
本発明によるとカテコールアミン組成物はカテコールアミン化合物を拮抗薬と組合せ、望ましい効果を得、望ましくない作用を最小限にする適切な量および比率を決定することによって、形成することができる。
同じ原理をより長い作用を持っているアデノシン同族体の使用に対しても適用することができる。この場合、長時間作用のカテコールアミン化合物を組成物に組合わせることができる。あるいは拮抗するカテコールアミン化合物を別個に１回もしくはそれ以上にわけて段階的に投与することもできるが、アデノシン同族体とカテコールアミン化合物の組合せ物の最初の投与後に、しばらくして持続静注することが望ましい。さらに、組成物は消化管もしくは消化器から吸収され、容易に摂取（経口的、経腸的）できるように添加物とともに製剤化できる。
一般に、同業者には、カテコールアミン化合物またはプリン化合物と拮抗薬との比率は、患者の状態、バイタルサイン、治療目的（たとえば低血圧、徐脈の患者には正常血圧の患者に対してよりもアデノシンを少なくする必要があるだろうし、高血圧、頻脈の患者には同じ効果を出すのに、より多くのアデノシンが必要であろう。）に応じて、調製することができる。同様に投与量は期待する効果と患者の生理・病理学的状態によって左右されるだろう。本発明の組成物は、医薬的に許容できる担体と組合せて作り、標準的な手順および注意にしたがって保存することができる。本発明は治療の目的で効果的にプリン  レセプターを活性化させるプリン組成物の使用の道を開くものである。
本発明はプリン化合物とカテコールアミン化合物の使用の範囲を広げ、大量の治療的使用の先駆であり、同時にプリン化合物またはカテコールアミン化合物に拮抗薬を組合せることによって新しい、有用なプリンとカテコールアミン化合物の組成物使用の先駆である。たとえば本発明にしたがって調製されたプリン組成物は、現在の麻酔法よりもさらに迅速で、より安全な麻酔導入および鎮痛効果を得るための必要量を投与することができる。さらに、本発明によるプリン組成物の投与は中枢神経系の抑制効果、自律神経系の調節効果、循環器系、呼吸器系に対して、代謝の恒常性を保つのと同様に、調節効果があることがわかってきている。この組成物は心臓の保護、神経系の保護、肺の保護、代謝の恒常性の維持、鎮静、麻酔、下熱、高血圧に対する処置、そして重要臓器の虚血つまり低酸素状態の予防さらに処置に対して使用することができる可能性がある。
本発明はさらに、次に示す詳細な説明と非制限的な実施例によって詳述される。
【図面の簡単な説明】
図１（ａ）−（ｄ）は、カテコールアミン単独、アデノシン単独、またはアデノシンとカテコールアミンの種々の組合せを１回静脈内投与した後、時間経過とともに記録した血圧（ｍｍＨｇ）である。
図２（ａ）−（ｂ）は、アデノシン単独、ノルエピネフリン単独、またはアデノシンとノルエピネフリンの種々の組合せを兎に１回静脈内投与した際の血圧（ｍｍＨｇ）の時間経過である。
図３は、アデノシン、カテコールアミンおよびベンゾジアゼピンの混合物の投与前および投与後における、尾部電気刺激（ＥＴＳ）に反応する鎮静閾値および抗侵害閾値を示している。
図４（ａ）は、ＡＴＰおよびノルエピネフリンの１回静脈内投与の血圧への影響を、時間経過とともに示している。
図４（ｂ）は、ノルエピネフリンと大量のＡＴＰをあらかじめ組合せておき、その溶液を投与した際の血圧変動効果の軽減を、時間経過とともに示している。
図５は、ジアゼパム（２ｍｇ／ｋｇ）およびＡＣ（ＮＥ：０．８ｍｇ／ｋｇとＡＴＰ：２００ｍｇ／ｋｇとの組合せ）を投与した際の鎮静効果および鎮痛効果の持続を示している。
図６（ａ）−（ｊ）は、ａ）生理食塩水、ｂ）ＡＣ（ＡＴＰ：１００ｍｇ／ｋｇとＮＥ０．２ｍｇ／ｋｇ）で前処置した２群に大量のフェンタニールを投与した際の循環および呼吸機能、代謝の評価を示している。
図７（ａ）−（ｄ）は、本発明のアデノシン／カテコールアミン組成物の投与されている場合とされていない場合での心臓への毒性刺激としてのノルエピネフリンを投与した際の肺水腫および死亡率を表しており、本発明のアデノシン／カテコールアミン組成物の心肺保護作用を示している。
図８（ａ）−（ｂ）は、本発明のアデノシン／カテコールアミンまたはＡＴＰ／カテコールアミン組成物の投与されている場合とされていない場合での、心臓への毒性刺激としてのエピネフリンを投与した際の肺水腫および死亡率を表しており、本発明のアデノシン／カテコールアミン組成物の心肺保護作用を示している。
図９は、ストレスによる代謝性アシドーシスに対する、本発明のアデノシン／カテコールアミン組成物の投与の効果、および代謝の恒常性維持および虚血に対する保護効果を示しているものである。
図１０は、より作用時間の長いアデノシン同族体（Ｒ−ＰＩＡ）のノルエピネフリンとの初回投与とその後のノルエピネフリン投与時に経時的な血圧の記録であり、本発明による長時間作用のアデノシン同族体とカテコールアミン化合物との投与方法を示している。
図１１は、より作用時間の長いアデノシン同族体（Ｒ−ＰＩＡ）のノルエピネフリンとの初回投与とその後のノルエピネフリン投与時の経時的な血圧の記録であり、本発明による長時間作用のアデノシン同族体とカテコールアミン化合物との別の投与方法を示している。
図１２は、より作用時間の長いアデノシン同族体（ＮＥＣＡ）のノルエピネフリンとの初回投与とその後ノルエピネフリン投与の経時的な血圧の記録であり、本発明による長時間作用のアデノシン同族体とカテコールアミン化合物との別の投与方法を示している。
好ましい実施例の詳細な説明
驚くべきことに、プリン化合物とその拮抗薬とは構造および機能が異なっているにもかかわらず、同時に投与した際、または生体外で一緒に組合わせて投与した際に、同様の薬理学的動態を示し、それによって、プリン化合物単独投与の際にみられる望まない作用が一緒に投与された拮抗薬によって相殺されてしまうことが見いだされることになる。さらに驚くことに、生体外で拮抗薬と組合わされたプリンの組合せ物は生体外、生体内においても、不利な反応を生じることはなく、さらによりよい結果が達成されることが見いだされた。実際、２つの強力な拮抗し合う物質が同時に投与された際に、もしくは生体外で組合せた場合に、このような予測できない相乗的効果があらわれ、生物学的に意義ある効果であることは驚くべきことである。本開示の目的のためにはプリン化合物はプリン官能基を含む化合物（非限定的な例として、アデノシン）、プリン同族体などの化合物であり、ほ乳類に対して望ましい効果（プリン作用）を誘発するために十分な量を投与した際に、少なくとも一つの望ましい効果と少なくとも一つの望ましくない作用とを有するプリン  レセプター作用薬のことであると定義される。カテコールアミン化合物は本明細書ではカテコールアミン（非限定的な例として、ノルエピネフリン）、カテコールアミン同族体、またはほ乳類に対して望ましい効果（カテコールアミン作用）を誘発するために十分な量を投与した際に、少なくとも一つの望ましい効果と少なくとも一つの望ましくない作用を有するカテコールアミン  レセプター作用薬のことであると定義される。
拮抗薬はほ乳類にプリン化合物またはカテコールアミン化合物の有効量を投与することによって、生じる望ましくない効果を軽減することができる薬剤であると定義される。以下で使用する、“ＡＣ”という用語は、アデノシン、アデノシン同族体、またはリン酸化アデノシン同族体とカテコールアミン化合物の組合せ物または同時投与を意味し、“ＡＣＢ”とＡＣとベンゾジアゼピンとの組合せ物の使用を意味している。
図に示し、また上記で述べたように、本発明は医学に極めて大きな利点をもたらし、新しいプリン療法とアドレナリン療法の幕開けである。その一部は、今まで投与可能と考えられていたプリン化合物とカテコールアミン化合物の量をより大きくし、ほ乳類に対して望ましい効果を得るまで安全に投与でき、今までではその投与量で発生していた望ましくない作用を少なくとも一つは軽減することができる、という点に起因している。血圧（ＢＰ）を記録した図１に示されているように、アデノシンのようなプリン化合物またはノルエピネフリンのようなカテコールアミン化合物は単独投与では患者の生体機能に重篤な変化をもたらす。本明細書では患者の状態を説明するのに主として血圧を用いているが、本発明の利点を説明するために、同時に他の生体機能もモニターできる点は注目するところである。たとえば、血圧に加えて、他の患者の生体機能を評価するために、心電図（ＥＫＧ）、呼吸数（ＲＲ）、心拍数（回／分、ＢＰＭ）、体温、血液ガス分析値（呼吸状態の指標としてのＰａＣＯ2およびＰａＯ2代謝の状態の指標としてｐＨおよび過剰塩基（ＢＥ））などをモニターすることができる。
本発明によって、望ましい効果を得るために十分な用量のプリン化合物またはカテコールアミン化合物を投与する際に生じる重篤な副作用を軽減することによって、プリン化合物とカテコールアミン化合物の治療的使用が可能になる。本発明にしたがって調製された組成物を投与することによって、患者の生体機能における望ましくない急激な変化を軽減または弱めることは、以下の非制限的な実施例によって明らかである。
同業者が本発明にしたがって形成される組成物における、プリン化合物とカテコールアミン化合物の適切な比率を決定する方法に関する非制限的な実施例として、以下にその過程を示す：プリン化合物を投与による望ましい効果は、ほ乳類には望ましくない作用を及ぼす量のプリン化合物を投与することによって、得ることができる。たとえば、アデノシンは患者に十分量を投与することによって麻酔つまりは鎮痛効果をもたらすことができる。しかし、ほ乳類に麻酔／鎮痛効果を得るのに十分な量のアデノシンの投与は同時に重篤な血圧低下と心伝導障害をもたらすことになるだろう。これは血圧の記録および心拍数（ＥＫＧ）モニターによって知ることができる。その際の血圧低下と心伝導障害は患者の重要臓器に不可逆的なダメージを起こすには十分な程度であり、死に至る場合もありうるほどである。それゆえ、まず最初に、患者に投与するためのプリン化合物の組成物における、アデノシンと拮抗薬の適切な比率を決定する必要がある。これをするためには、プリン化合物と拮抗薬の比率（たとえばアデノシンとカテコールアミンの比率）を変化させて、組成物を投与する際には、投与前と投与中の患者の重要な生体機能、たとえば心拍数および血圧はモニターしておく。
最初に、危険な副作用が現れないとされているごく少量のプリン化合物を、これも副作用がでないとされている少量の拮抗薬と組合せて投与するべきである。それからプリン化合物と拮抗薬との比率を重要な生体機能の急激な変動を軽減するように調節していく。その後、プリン化合物と拮抗薬の組合せ量を徐々に増加させ、患者の重要な生体機能が安定するようにプリン化合物と拮抗薬の比率を調製していけばよい。
プリン化合物とカテコールアミン化合物はヒトと兎では、生理学的な反応が類似しているために、兎はプリン化合物と拮抗薬またはカテコールアミン化合物と拮抗薬をヒトに投与する際の組成物の適切な比率に関して、理想的な情報源になる。同業者には投与量と比率が目的とする治療によって、さらに個々の患者によって変わることはすぐに理解されるだろう。いずれの薬剤を投与する場合もそうであるように、同業者は他の薬剤または治療を受けている患者に、本発明にしたがった組成物を投与する際には危険な反応を最小限にするために通常の方法にしたがうであろう。参照：Gilmanら編、Goodman & Gilman's.The Pharmacological Basis of Therapeutics（治療の薬理学的基礎）、第９版、ニューヨーク、Pergamon Press(1990);Ketzung編、Basic and Clinical Pharmacology（薬理学の基礎と臨床）、第５版、ノーウォーク、Appelton & Lange(1992)。
本発明の組成物は医薬的に許容できる担体とともに投与することができ、さらに、プリン化合物またはカテコールアミン化合物の有益な作用を高めるか、もしくは延長させることができる作用増強剤と組合せてもよい。禁忌がある場合、本発明の組成物を投与する医師の判断で投与量を調節してもよいが、プリン化合物、カテコールアミン化合物、または拮抗薬を場合によっては追加投与してもよい。
アデノシンのようなプリン化合物の投与後に頭痛、紅潮、狭心症様胸部痛などの不快症状を訴えた患者がいたことが報告されている。このような不快症状を最小限にするために、中枢神経系（ＣＮＳ）の抑制剤を患者に投与するか、または本発明にしたがって作られたプリン組成物あるいはカテコールアミン組成物にＣＮＳ抑制剤を組合せてもよい。適切なＣＮＳ抑制剤にはベンゾジアゼピン、オピオイド、バルビツレート、およびプロポフォールなどがある。
好ましい実施例では、アデノシン化合物はアデノシンの作用増強剤と組合せることができる。作用増強剤にはアデノシンの細胞内への取り込みを抑制する薬剤（ジピリダモール、ジラゼップ、ベンゾジアゼピンなど）、アデノシン分解酵素の抑制剤（デオキシコホルマイシン、エリスロ−２−ヒドロキシ−３−ノニルアデノシン）などがある。このように、追加の実施例では拮抗薬と組合わされたプリン化合物またはカテコールアミン化合物はそれぞれの作用増強剤とも組合わされる。さらに別の実施例では、拮抗薬と組合わされたプリン化合物またはカテコールアミン化合物はＣＮＳ抑制剤とも組合わされる。また別の実施例ではプリン化合物は拮抗薬、ＣＮＳ抑制剤およびプリン化合物の作用増強剤と組合わされる。なお、別の実施例ではカテコールアミン化合物は拮抗薬、ＣＮＳ抑制剤およびカテコールアミン化合物の作用増強剤と組合わされる。
カテコールアミン化合物のような拮抗薬と組合わされたアデノシンなどのプリン化合物投与による保護作用についても、フェンタニールのようなオピオイドをほ乳類に大量投与することによって生じる重篤な呼吸抑制および痙攣の発生に対して、本発明にしたがって調製されたプリン組成物を投与することで、明らかにされている。本研究によるプリン組成物の投与は有害な刺激に対しても、鎮静および鎮痛作用を増強することによって、ほ乳類を保護する。その際、過剰なカテコールアミンレベルや疼痛などのストレス状態によって通常悪影響をうける、循環器系および代謝機能に対して保護作用がある。
図１０−１２を参考にすれば、カテコールアミン化合物を拮抗薬としてプリン化合物に組合せて投与する本発明での方法は、最初にプリン化合物とカテコールアミン化合物を拮抗薬として組合せて投与し、その後さらにカテコールアミン化合物を拮抗薬として１回またはそれ以上分けて追加で持続投与するものである。本発明で、組成物およびこの方法で使用することができるアデノシン同族体は５’−Ｎ−エチルカルボキシアミドアデノシン（ＮＥＣＡ）、Ｒ（−）Ｎ6−（２−フェニルイソプロピル）アデノシン（Ｒ−ＰＩＡ）、２−クロロアデノシン（２−ＣＡＤＯ）、Ｎ6−シクロヘキシルアデノシン（ＣＨＡ）などがある。これらのアデノシン同族体はアデノシンよりも体内での作用時間が長く、特にアデノシンと同時投与されるノルエピネフリンのような代表的なカテコールアミン化合物よりも効果が長い。そのため、アデノシン同族体とカテコールアミン化合物との同時投与は、アデノシン同族体の効果が投与中止後も続くために、選んだカテコールアミン化合物は少なくとも１度は追加投与することが賢明である。最初の組合せ物投与後に、拮抗薬としてカテコールアミン化合物を選択し、追加投与する場合には、別に持続投与することが望ましい。好ましい実施例ではカテコールアミン化合物の追加の投与はアデノシン同族体が徐々に代謝されるにしたがい、段階的に時間をかけて徐々に減量する。
本発明のプリン組成物およびカテコールアミン組成物をほ乳類に投与する際の有益な効果は、以下の非制限的な実施例によって詳述される。
実施例１
アデノシン−カテコールアミン（AC）の組合せの静脈内投与の循環作用
材料と方法：
薬剤：アデノシンとATP（アデノシン5'-３リン酸２ナトリウム塩）は協和発酵工業株式会社，東京，日本，から得て，標準的な生理食塩水で溶解した．重酒石酸ノルエピネフリン注射液(Levophed)はWinthrop Pharmaceuticalsから，塩酸ミダゾラムはRoche Laboratoriesから得た。
無投薬の健康な体重2.5〜2.7kgのNew Zealand White系兎（雄性および雌性）で研究した。兎を選択したのは，これらの薬剤や方法がいかにヒトに作用するかについて，兎が優れた目安となるからである。麻酔は最初にフェースマスクでハロタン３〜４％と酸素によって導入し，自発呼吸で放置した。すべての兎に気管切開を行い，内径3.5mmのカフ付き小児用気管内チューブを気管内に挿管した。ついでハロタンの吸入濃度を減少させ，実験準備中は1.5〜２％のハロタンと酸素で維持した。気管切開と大腿動脈のカットダウンを行う際には，リドカイン（1%溶液）を局所に浸潤させた。薬剤および輪液投与のためと採血のため，耳の辺縁の静脈と中央の動脈に22Ｇと24Ｇのプラスチックカテーテルを挿入した。静脈路を確保した後，輸液維持のために乳酸リンゲル液を5ml/kg/hrの速度で開始した。大腿動脈はポリエチレンカテーテル(PE120)を挿入し，中心部の動脈圧の測定のために先端を胸部大動脈の中央部付近に留置した。カテーテルを固定し，皮膚を閉鎖した。心拍数は経皮的な２誘導の心電図から連統的にモニターし，Hewlett Packard 78304Aのポリグラフに接続してHewlett Packard 78172Aのレコーダーに記録した。体温は直腸プローベで連続的にモニターし，加熱ランプによって38.5〜39.5℃の間に維持した。
実験準備終了後，ハロタンを切って兎を自然な生理的体位で懸垂し，兎の頭と四肢が自由に動かせるようにした。ハロタン麻酔から完全に覚醒した後，無麻酔の動物で以下のような対照の測定を行った：収縮期圧（SBP），拡張期圧（DBP），平均動脈圧（MAP），呼吸数（RR），心拍数（HR），体温（BT），動脈血血液ガス：PaCO2，PaO2，pH，過剰塩基（BE）。血液ガスはRadiometer ABL30分析装置で測定した。
結果と結論：
アデノシン−カテコールアミン（AC）の組合せのそれぞれの最適な濃度比を決定するため，様々な濃度のアデノシン（A）溶液とカテコールアミン（C）を別々に投与し，その後アデノシンとカテコールアミンの比率を変化させた混合液をin vivoの実験動物モデルで調べた。これらの実験の結果を図１，２に示した。図はプリンの溶液やカテコールアミン，あるいはプリンとカテコールアミンの様々な比率の混合液の投与からの経時的な血圧への影響を示している。
これらの過程は図１(a)〜(d)に示すように，それぞれの動物にアデノシンとカテコールアミンの混合比率を変えて何回か繰り返して行った。図１(a)はプリンとカテコールアミンを投与して得た６種類の異なった記録であり，(a)1はノルエピネフリン20μg，(a)2はアデノシン5mg，(a)3はアデノシン10mg，(a)4はアデノシン20mg，(a)5はアデノシン40mg，(a)6はアデノシン20mgである。図1(b)は20mgのアデノシンに様々な量のカテコールアミンを混合した溶液を投与した時の４種類の記録であり，(b)1はノルエピネフリンが1/250（すなわち，20mgアデノシンに対して0.08mgノルエピネフリン），(b)2はノルエピネフリンが1/500，(b)3はノルエピネフリンが1/1000，(b)4はノルエピネフリンが1/2000である。図1(c)は20mgのアデノシンに様々な量のカテコールアミンを混合した溶液を投与した時の４種類の記録であり，(c)1はエピネフリンが1/500，(c)2はエピネフリンが1/1000，(c)3はエピネフリンが1/2000，(c)4はエピネフリンが1/4000である。図1(d)は20mgのアデノシンに様々な量のカテコールアミンを混合した溶液を投与した時の４種類の記録であり，(d)1はフェニレフリンが1/25，(d)2はフェニレフリンが1/50，(d)3はフェニレフリンが1/100，(d)4はフェニレフリンが1/200である。比率は重量比である。
図２(a)は血圧への影響の記録であり，(a)1はアデノシン10mg/kg，(a)2はアデノシン10mg/kgとノルエピネフリン0.01mg/kgの混合液（アデノシン，ノルエピネフリン比；1000：１），(a)3はノルエピネフリン0.01mg/kgである。図２(b)はアデノシン100mg/kgとノルエピネフリン0.1mg/kg（アデノシン，ノルエピネフリン比；1000：1）の混合液を投与した時の血圧への影響の記録である。
それぞれの動物について適当な濃度比を決定した後に，大量のAC混合液を投与し，投与中の血圧変動を調べた（図２(b)）。一連の９回の実験を兎の実験モデルで行い，血圧変化が最小となるようなAC濃度比を見積もって決定し，アデノシンとカテコールアミンの量と濃度を様々に変化させた溶液の有効性を検討した。AC投与中および投与後の兎の呼吸循環系のバイタルサインを連続的にモニターした。表１にアデノシンと４種類の異なったカテコールアミンの混合液で９羽の兎において血圧変化が最小となるような濃度比を示した。
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これらのin vivoの検討によって，プリン化合物と拮抗薬のそれぞれの組合せにおいて血圧の変動を最小とするような濃度比を決定することができる。図２(a)はアデノシン（ADO），ノルエピネフリン（NE）およびそれらの混合液（AC）を注射した時の血圧の変化を示す。記録は，アデノシン単独（10mg/kg，(a)1）を投与すると著明な血圧低下が発現することを示している。同様に，ノルエピネフリン単独（0.01mg/kg，(a)3）では高度の血圧上昇をきたす。しかも，同量のアデノシン（10mg/kg）とノルエピネフリン（0.01mg/kg）（アデノシン，ノルエピネフリン比；1000：1）を投与前にin vitroで混合しておけば血圧の変動（上昇と低下）は最小である。図２(b)の血圧記録は約10分間にわたって大量のAC（ADO:100mg/kg，NE:0.1mg/kg，アデノシン，ノルエピネフリン比；1000：1）を静脈より緩徐に投与した際の哺乳類の血圧の安定性を示している。
表２は自発呼吸下の兎においてACB（アデノシン−カテコールアミン−ベンゾジアゼピン）の静脈内投与前後の循環，呼吸，代謝のデータをまとめたものである（本例で用いられたベンゾジアゼピンはミダゾラムであり，ミダゾラムはアデノシン取り込みの阻害薬としてばかりでなく，中枢神経系抑制薬として作用する）。
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表２から分るように，大量のアデノシン：117±41mg/kg，ノルエピネフリン：0.106±0.051mg/kgとミダゾラム：1.05±0.43mg/kgが動物の循環，呼吸，代謝のすべてのパラメータにおいて最小の変化を起こした。これらのデータと図２(a)，(b)の記録から，大量のアデノシンとノルエピネフリンを一定の比率に基づいてin vitroで混合すれば，心血管系，呼吸系および代謝系への悪影響を起こすことなく希望する効果（鎮痛，鎮静など）を発現させるために，安全に投与することができることが明確に示された。
前述した例で示した実験モデルは健康な正常血圧の動物の血圧変化を検討するために設定した。しかし，本法ないしその概念はヒトにも，特にプリン化合物とカテコールアミン化合物のヒトへの投与量に関するよく知られた作用の観点から，同様に当てはまると考えられる。
加えて，大量のアデノシンやATPを適切な量のカテコールアミンと共に投与するすることができ，少量のアデノシンやATPをそれのみで緩徐に静注するよりも速やかに希望する効果，すなわち麻酔作用をもたらすことができる。またさらに驚くべきことには，アデノシンやATPなどのプリン化合物の麻酔作用に必要な量での血管拡張作用は，プリン化合物が有効な血中濃度を維持している間のみ持続するが，鎮痛作用などのようないくつかの作用はより長時間持続する。このように，今回の組成に基づいたプリン混合液を麻酔導入のために投与された患者は，術後に鎮痛薬を全く，またはほとんど必要としないかもしれない。更に，今回の組成に基づいたプリン混合液の投与は外傷（手術時のような）に対する反応としての内因性のカテコールアミンの放出を減少させる。従って，今回の組成に基づいたプリン混合液の投与によって，麻酔科医が術中の内因性カテコールアミンに基づいた反応の抑制薬を投与する必要性が減ると思われる。
実施例２
ACB（アデノシン−カテコールアミン−ベンゾジアゼピン）投与による中枢神経系（CNS）の抑制
外因性に投与されたアデノシン，アデノシン同族体およびアデニンヌクレオチドの広範なCNS抑制効果についてはよく報告されており，抗侵害作用，痛み感覚の減少，に関連した効果は詳細に検討されている。アデノシンの血圧低下作用という大きな問題が全身投与を難しくし，治療薬としての可能性を狭めていると考えられている。従って，本研究ではACBの静脈内投与が重篤な血圧低下を来すことなく鎮静，鎮痛効果などの中枢神経系抑制作用を発現することができるか否かを検討した。
材料と方法：
無投薬の健康なNew Zealand White系兎（雄性および雌性）で研究した。動物は例１のように準備した。鎮静および抗侵害作用は例１で述べた方法（同時係属アメリカ出願である第08／083,214号に記載）によって検討した。この方法はアデノシン化合物の鎮痛および麻酔作用を検討し鑑別するのに適している。
それぞれの兎の剃毛した尾の基部に一対の刺激用針電極を装着した。動物を懸垂し，ハロタン麻酔から完全に覚醒させた後，神経刺激装置（Grass S48刺激装置）によって電流（侵害刺激）を通電した。加えて，従来から行われているTail clamp（麻酔作用の標準的な試験方法）を行った。対照値を測定，記録した。他の薬剤は全く使用せず，動物は器械的な補助なしに自発呼吸で100%酸素を吸入した。血圧の変化を連続的にモニターし，記録した。神経行動学的な反応，すなわち鎮静の程度，覚醒反応（開眼と頭部挙上），抗侵害反応（合目的な逃避行動）を注意深く観察し，実験中を通じて記録した。
大量のACB（アデノシン：100mg/kg，ノルエピネフリン：0.1mg/kg，ミダゾラム：1mg/kg）を約10分間かけて緩徐に耳の末梢静脈に静注した。20分後に３種類の電気刺激，２Hz，５Hzおよび50Hz，を兎に与えた。電圧の強度を変化させることにより，それぞれの検討の際に２種類の行動反応を記録した：a)頭部挙上（HL），開眼と頭部の挙上で示される覚醒反応（催眠／鎮静の指標），とb)合目的な逃避行動，走りだそうとしたり侵害刺激からの逃避行動（EM）を試みる（鎮痛の指標）。侵害刺激は30分ごとに行い，鎮静と侵害の刺激の閾値を記録した。同時に，血圧（BP），心拍数（HR），心電図，呼吸数（RR），血液ガス（PaCO2，PaO2）と血液pHおよび過剰塩基（BE）を記録した。
結果と結論：
ACB投与により，図２(b)に示したアデノシン100mg/kgとノルエピネフリン0.1mg/kgという同量投与による血圧変化と同様な最小の血圧の変化が発現した。加えて，電気刺激に対して鎮静（HL）反応閾値が上昇したことで示されるように，動物はすべて鎮静された。鎮静（HL）閾値と同様に抗侵害（EM）閾値もACBの投与後に３種類の電気刺激のすべてで上昇した。動物はTail clampにも反応せず，強力な中枢神経抑制作用を示している。更に，このような鎮静，鎮痛効果は図３に示すように投与後少なくとも３時間は持続した。３種類すべての電気刺激（２Hz，５Hz，50Hz）において，ACB混合液の投与後に逃避行動と頭部挙上の両者の閾値は上昇した。
図４(a)は経時的な血圧変化（mmHg）であり，左から右にアデノシン３リン酸（ATP）0.1mg/kg，ATP 1.0mg/kg，ATP 10mg/kgとノルエピネフリン（NE）10μg/kgの一回投与時を示している。図４(b)は2mg/kgのジアゼパム（鎮静薬）投与10分後に非常に大量のAC（ATP：200mg/kg，ノルエピネフリン：0.67mg/kg）を持続静注した際の血圧の記録である。ATPとカテコールアミンの混合液もACと表わす。総量で200mg/kgのATPと0.67mg/kgのノルエピネフリンをAC（ATP，ノルエピネフリン比；300：１）の持続静注で投与した。ACの持続静注はATP 100μg/kg/minの速度で投与を開始し，徐々に3200μg/kg/minまで増加させて30分間維持した後，徐々に減少させて静注を終了した。このことは，大量のATPとノルエピネフリンを本法に基づいてin vitroで混合した溶液は，長時間にわたって様々な投与速度で安定した血圧を維持しながら投与することが可能であることを示している。
図４(a)で示した血圧記録はATPやノルエピネフリンを単独で投与した際の血圧変動を示している。ATPの0.1，1.0および10mg/kg投与は量依存性に血圧を低下させることに注意してほしい。同様に，少量のノルエピネフリン（0.01mg/kg）が血圧の著明な上昇を引き起こす。しかしながら，図４(b)ではATPやNEを別々に投与した時には起きるであろう血圧変動が小さくなっているのがわかる。そして，ACの組合せを投与した際には，極めて大量のATPとNEであるにもかかわらず，血圧変化は最小である。
図５は，ジアゼパム（2mg/kg）とAC（ATP：200mg/kgとNE：0.67mg/kgの組合せ）を投与した後に鎮痛効果が少なくとも５時間持続することを示している。図５において縦軸は電気刺激に対する鎮静，鎮痛の閾値をボルト(V)で表わしている。横軸は時間経過を分で表わし，同時に薬剤を投与した時期を示している。ACは60分間持続静注で投与した。図５では，フルマゼニル，ジアゼパムの拮抗薬，を投与したにもかかわらず，AC投与後に鎮静，鎮痛効果が５時間以上持続することを示している。アミノフィリンは逃避行動（EM）抗侵害応答を完全には拮抗しなかったが，頭部挙上（HL）覚醒応答閾値を低下させた。
心血管系，呼吸系，および代謝系の変化を表３に示した。
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本研究は，ACやACと鎮静薬との併用が肉体的な不快感やあるいは低血圧などを起こすことなく鎮静，鎮痛などのCNS抑制効果を発揮し，呼吸抑制や代謝への悪影響を起こすこともなく効果的に投与できることを示している。
実施例３
自発呼吸下の兎にACを前処置として投与することによる大量オピオイドに起因した呼吸循環系および代謝系障害の防止
大量のオピオイドの投与は開心術では最もしばしば用いられる麻酔方法である。しかしながら，合成オピオイド（フェンタニール，スフェンタニル，アルフェンタニルなど）の大量投与は中枢神経系に対して痙攣誘発性であり。交感神経系および副交感神経系（迷走神経）の活動性を高めて著明な血漿カテコールアミンの増加を引き起こす。加えて，オピオイドは著明な呼吸抑制や虚血性心電図変化，出血性肺うっ血，左室不全など重篤な心肺機能異常のサインを引き起こすこともある。一方，外因性に投与したアデノシンは呼吸を刺激することが報告され，また強力な鎮痛効果を持つことが認められている。著者らは，もし十分に大量のAC（アデノシン−ノルエピネフリン）を安全に投与することができれば，これが前述したような大量オピオイドの欠点から哺乳類を保護することができるのではないだろうかと仮定した。従って，本研究ではACの静脈内投与が大量のフェンタニール投与による心肺，代謝系の異常から守れるか否かを検討した。
材料と方法：
実験の準備は例１と同様に行った。気管切開と血管へのカニュレーションを行った兎を懸垂した。動物は２群に分け，それぞれ４羽で行った。兎は(a)生理食塩水，あるいは(b)AC（ATP：100mg/kgとNE：0.2mg/kgの組合せ）が投与された。大量のフェンタニール：100μg/kg（Janssen Pharmaceutica,N.J.）を２度にわたって投与した。初回の投与は生理食塩水かACによる前処置10分後に行い，２回目は40分後に行った。心血管系と血液ガスのデータは前処置薬の投与直後とフェンタニール投与５，10，20および30分後に記録した。同時に，神経行動学的および侵害刺激閾値は例２と同様にTail clampと尾部電気刺激で評価した。
結果と結論：
データは図６(a)-(h)にまとめた。初回のFent（フェンタニール：100μg/kg）は前処置aかbの10分後に投与し，２回目のFentは40分後に投与した。Cont1とCont2は薬剤投与前のコントロールを示す。図６(a)はMAP：平均動脈圧；(b)はHR：心拍数；(c)はPaCO2：動脈血炭酸ガス分圧；(d)はPaO2：動脈血酸素分圧を示す。6(c)，6(d)に示したようにフェンタニール投与は著明な呼吸抑制を起こし，結果として進行的なPaCO2の上昇とPaO2の低下を招いた。２回目のフェンタニール投与後に呼吸抑制が著明になった時，6(e)のようにAC前処置群では突然呼吸数が増加し，6(c)および6(d)のようにPaCO2の低下とPaO2の上昇が起きた。一方，6(g)，6(h)にみられるように代謝系パラメータのPHとBE：過剰塩基が改善した。
図６(a)-(b)からわかるように，ACの組合せを投与した動物の方が生理食塩水を投与した動物よりもフェンタニール注射による血圧と心拍数の変動が抑制された。痙攣の重篤度と筋強直の程度はAC群の方が生理食塩水群よりも軽度であった（図6(i)-(j)参照）。電気刺激とTail clampで与えた侵害刺激に対する閾値の応答はAC群の方が高かった。これらの結果はACの組合せの前処置が大量オピオイド（フェンタニールなど）によってもたらされる呼吸循環系および代謝系障害から患者を保護するという有益な効果を持っていることを示している。加えて，ACは痙攣から神経系を保護する。
実施例４
AC（アデノシン−カテコールアミン）組合せの心肺保護効果
アデノシンの生体防護作用ないしホメオスタシス維持作用は広く受入れられている。心筋虚血の防護における内因性および外因性のアデノシンの役割について，広範な研究が行われている。アデノシンレセプターの活性化を介した保護作用はアデノシン投与によって発現させ得る。しかし，有益な効果を得ようとしてアデノシンを大量に投与すると，副作用の厚い壁によって阻まれ，アデノシン投与に基づいた現実的な治療方法が行えない。著者らは，開発したACの組合せが，アデノシンやカテコールアミンを単独で投与した際の望ましくない副作用を少なくする一方で，心や肺への有益な効果を発現するのに有効な量の投与を可能にするのではないかと考えた。
カテコールアミン誘発性の心筋壊死の病理学的背景は多くの研究の主題である。過量のカテコールアミンの心毒性はよく知られている。実験動物にカテコールアミンを長時間にわたって持続静注したり過量投与したりすると心筋機能異常や虚血性病変，壊死や更には出血性肺うっ血，肺水腫，ついには死を引き起こす。この実験モデルは様々な薬剤の保護作用を証明するために広く受入れられており，心筋虚血や心筋梗塞，肺うっ血を含む症候群に臨床的な関連性がある。オピオイドは外科的ストレスに対する心血管系応答を抑制すると信じられている。カテコールアミンの心肺への有害な作用はオピオイドによって抑制されると思われている。そこで，スフェンタニルのようなオピオイドの大量投与が人工心肺下の手術で一般的に行われている。本研究は，今回のACBの組合せが大量のカテコールアミン負荷兎における心筋障害，肺水腫および死の発生を予防できるか否かを検討するために行った。その効果はスフェンタニルの効果と比較した。
材料と方法：
薬剤：
プロトコルA：ACB（アデノシン−カテコールアミン−ベンゾジアゼピン）組合せ：A=アデノシン：100mg/kg，C=ノルエピネフリン：0.1mg/kg，B=ミダゾラム：1mg/kg，スフェンタニル：15μg/kg（Janssen Pharmaceutica,Titusville,N.J.）。
プロトコルB：アデノシンないしATPに対するエピネフリンの比は1/160 8-PT（8-フェニルテオフィリン）25mg/kg（Research Biochemicals International,Natick,MA）。
無投薬の健康な体重2.5〜2.7kgのNew Zealand White系兎を雌雄の別なく研究した。実験準備は例１のように行った。準備と気管切開を行い，すべてのモニターを装着した兎を懸垂し，対照値として循環系，血液ガス，および代謝系パラメータを測定した。実験は２種類行った。プロトコルAでは，今回の組合せACの保護作用をスフェンタニルおよび生理食塩水（対象）のそれと比較し，プロトコルBでは生理食塩水（対象）および8-PTのそれと比較した。また，カテコールアミン（ノルエピネフリン（NE）とエピネフリン（Epi））との副作用をin vivoの動物実験モデルで検討した。これは心筋毒性を発現するような前述のカテコールアミンの大量を耳介の静脈から持続静注することによって行った。薬剤の静注は自発呼吸下の兎に緩徐に行い，スフェンタニル群のみ調節呼吸で維持した。Travenol Flo-Gard 8000インフュージョンポンプを用い，カテコールアミン，NEとEpiはそれぞれ２および３時間耳介静脈から持続静注した。
プロトコルA：
本研究は２群に分けて行い，両群とも心筋毒性物質として大量のノルエピネフリン（NE）を２時間持続静注した。Ｉ群では兎に20μg/kg/minのNEを負荷し，II群では兎に40μg/kg/minのNEを負荷した。両群とも，動物はa)生理食塩水，b)スフェンタニル，c)ACB組合せ（各群n=6）に分けた。すべての薬剤（生理食塩水，スフェンタニル，ACB組合せ）はNE持続静注開始前の前処置薬として投与した。ミダゾラムは薬剤投与時の不快感による興奮を避げるために動物を鎮静させる目的で投与した。
プロトコルB：
本研究では動物は心筋毒性物質として10μg/kg/minのEpiを投与された。AC群とATPC群では，エピネフリンはアデノシンやATPと1/160の比率で混合した。混合液は３時間持続静注した。静注開始時には投与量は心血管系反応に応じて調節し，徐々に増加した。動物は，a)生理食塩水（n=6），b)8-PT（n=6），c)AC（アデノシン／エピネフリン，n=8），d)A TPC（ATP／エピネフリン，n=2）に分けた。内因性アデノシンを拮抗するために8-PT（8-フェニルテオフィリン），アデノシンレセプター拮抗薬を使用した。
結果と結論：
プロトコルAの結果を図７(a)-(d)にまとめた。図７(a)と(b)は死亡率を示し，図７(c)と(d)は肺水腫（PE）発生率を示している。20μg/kg/minのNEを負荷したＩ群の兎は図７(a)と(c)にまとめ，40μg/kg/minのNEを負荷したII群の兎は図７(b)と(d)にまとめてある。40μg/kg/minのNEを負荷したII群の兎をまとめた図７(b)と(d)において，スフェンタニル群では6/6，100％，生理食塩水群では5/6，83％，ACB群では2/7，28％が３時間以内に死亡した。20μg/kg/minのNEを負荷したＩ群の兎をまとめた図７(a)において，ACBを前処置したすべての（100%）動物は２時間生存し，150分後に１羽が死亡した。180分以内の生理食塩水群の死亡率は3/6（50%）であり，スフェンタニル群の死亡率は4/6（67%）であった。同様に肺うっ血と肺水腫を起こした動物はACB投与群に比較して生理食塩水群やスフェンタニル群の方がはるかに多かった（図７(c)-(d)）。血液ガスのデータは生理食塩水群とスフェンタニル群で進行性に悪化した。しかし，ACB群の生存例では血液ガスと代謝系の変化は認められなかった。
動物に大量のEpiを負荷したプロトコルBの結果は図８(a)-(b)にまとめた。図８(a)は死亡率を，図８(b)は肺水腫（PE）発生率を示す。図８(a)と(b)でわかるように，8-PT群と生理食塩水群では，30-60分以内に約70%の兎が肺水腫を発生し，死亡した。一方，今回のACないしATPC組合せ投与群では，動物のほぼすべてにおいて肺水腫の発生と死亡が効果的に抑制された。心筋と肺の虚血性侵襲は心電図や血液ガスの変化にみられるようなカテコールアミン誘発性の障害や死亡と関連しているように思われた。前述の結果から。今回のAC，ACB，あるいはATPC組合せの投与は両方のプロトコルにおいて心血管系障害や死亡と同様に肺うっ血や肺水腫を著明に減少させることが明らかとなった。今回の組合せは，大量のカテコールアミン負荷によって起こる急性の侵襲の大きい心毒性に対して心と肺を効果的に保護した。
実施例５
AC組合せ投与による代謝系のホメオスタシスの維持と虚血の予防
内部環境の恒常性を維持するために必要な生体の応答であるホメオスタシスは生存のために必須である。生体の内部環境の維持は緩衝系の大きな機能であり，酸素運搬と好気的代謝の十分な維持は細胞機能の統合のための柱である。好気的代謝が障害され，緩衝系の因子の比率が変化すると，酸塩基平衡異常が発現する。細胞外液における乳酸蓄積は酸素の供給と代謝性の需要のアンバランスに起因している。乳酸アシドーシスは組織の低酸素症および酸化性代謝の障害と関連している。正常状態では酸素を利用してグルコースからATPを産生する組織は，酸素が利用不可能な状況ではエネルギー効率の悪い解糖経路に依存するようになる。従って嫌気的な状態では乳酸産生が増加し，乳酸は容易に細胞膜を通過するので，血中の乳酸濃度が増加する。このことが，血中乳酸を組織の虚血／低酸素症の指標とする論拠である。現実的な指標は，動脈血採血によって測定した過剰塩基（BE）で表現した水素イオンのレベルである。
乳酸アシドーシスは，外科的にせよ偶発的にせよ，身体の重篤な外傷のような強度の侵襲によってもたらされた過剰なストレスを含むような種々の病理学的な状態と関連している代謝障害である。乳酸増加の程度はストレスの重篤度と直接に相関しているように思われる。更に，乳酸の増加はストレスによる交感神経系の活動性の増加やカテコールアミン放出の増加を反映している可能性がある。このように，過剰な乳酸の応答は不安や低血圧，重篤な外傷など様々なストレスの後に起こる交感神経系の活動性に直接に関連していると信じられている。交感神経系の活動性の程度と，それに引き続いて起こる内因性のカテコールアミンの放出は，エピネフリンとノルエピネフリンの両者が血中乳酸のレベルを増加させ，多くの組織／臓器で嫌気的解糖を亢進させることからみられる反応に直接的に影響する。これらの考えは，交感神経系の活動性やカテコールアミンの放出に強く依存している虚血，低酸素症，麻酔，手術，出血，外傷やショックなどに対する反応を考える時に特に重要である。
手術侵襲のような刺激によってもたらされる強度のストレスは急性の内分泌，ホルモンおよび心血管系の異常を引き起こす。例えば，腹部手術中の内臓の牽引や操作はストレスに対する一般的な生体の応答に加えて著明な循環カテコールアミンの増加や腸間膜の血管収縮，胃腸の血流減少を引き起こし，種々の内臓において虚血−再潅流障害を発生させて臓器機能の異常と乳酸レベルの上昇（乳酸アシドーシス）を起こすことが知られている。著者らは強度の交感神経系の活性化，カテコールアミンの放出，および一過性ではあっても内臓の臓器／組織に虚血／再潅流障害を引き起こすであろう著明な血管収縮などの前述した状況と類似した状態を作り出すことができる実験モデルを計画した。これは，腹腔内に強い電気刺激を与えることによってもたらされる。侵害刺激に対するストレス反応は更に酸素需要の増加を招き，酸素の需要／供給バランスを悪化させる。非常に重症の患者や外傷や外科手術のような強いストレスを受ける患者を評価するために，血液ガス／酸塩基平衡の測定が有用な指標となることがよく認められている。例えば，血中乳酸レベルの増加は，しばしば臨床家に適切なモニターと救命に必要な処置を速やかに行う必要性を認識させる。
アデノシンは，アデノシンレセプターの活性化を介して，組織の外場や低酸素症，虚血などに対する応答の際に報復的な代謝物として機能するようなホメオスタシスを維持する役割を果すと思われている。このような状況では，組織のアデノシンのレベルはATPの分解によって著明に上昇する。アデノシンの抗アドレナリン作用が有害な交感神経系の活性化を抑制するのに有用であり，アデノシンを投与することが意味のあるであろうことも同様に信じられている。従って，著者らは今回開発したAC（アデノシン／ノルエピネフリン）の組合せが腸管における強い侵害刺激に起因した代謝異常を弱め，また防止するか否か，そして腸間膜の血管収縮を起こし，虚血−再潅流障害をもたらすような交感神経系の応答を抑制するか否かを検討した。
材料と方法
薬剤：AC（アデノシン／ノルエピネフリン  比率：800/1生理食塩水に溶解），AC持続静注，アデノシン400μg/kg/min；8-フェニルテオフィリン（8-PT）：25mg/kg；グリベンクラミド：15mg/kg。
実験準備は例１のように行った。準備と気管切開を行い，すべてのモニターを装着した兎を懸垂した。この状態では，動物を拘束することなく行動学的応答を容易に観察できる。心血管系，呼吸系および代謝系のモニターを装着した。ついで対照の測定値を得た。心電図と循環動態の変化は実験中持続的にモニターした。加えて，侵害刺激の前後に間欠的に血液ガスと代謝系の変化を観察した。電気刺激は20分間隔で与えた（３回）。図９に示したように，３群の兎を研究した：a)AC群（n=5），b)生理食塩水（n=7），c)8-PT＋グリベンクラミド群（n=5）。c群では，8-PTとグリベンクラミドはアデノシンの内因性放出を抑制し，ATP感受性カリウムチャンネルへの効果を阻害するために使用した。8-PTはアデノシンレセプター拮抗薬であり，グリベンクラミドはATP依存性カリウムチャンネルの遮断薬である。c群では，8-PTを最初に投与し，15分後にグリベンクラミドを投与した．３群とも（a，b，c），全実験経過を通じて麻酔は1.4%のイソフルランで維持した。a群とb群では，侵害性内臓電気刺激（EVS）はAC（アデノシン，400μg/kg/min）か生理食塩水の１時間の持続静注の後に与えた。AC持続静注は実験の刺激中継続して行った（EVS ♯1-♯3）。電流は直腸内に約10-13cm挿入した電極を介して神経刺激装置から与えた。電流は事前に決定した50Hz，80Vの強度のものを40秒間通電した。体動のような行動学的応答と循環系の反応を注意深くモニ夕一し，記録した。血液ガスは刺激直後とその後５分ごとに測定した。
結果と結論：
1.4%のイソフルランで麻酔されているという事実にもかかわらず，強い電流が通電されると血圧，心拍数の著明な上昇が起こり，動物は過換気した。動物は，特に生理食塩水群と8-PT＋グリベンクラミド群で激しく体動した。一方，これらの行動学的および循環反応はAC群では著明に抑制された。図９からわかるように，代謝性アシドーシス（BEの低下）は，内因性のアデノシンの放出とATP感受性カリウムチャンネルの活性が阻害されている8-TP＋グリベンクラミド群では特に進行性に悪化，増悪していた。これらの動物の代謝系の状態は，各刺激の後の時間経過とともに進行性に悪くなっていった（図９）。そして，c群のすべての動物は最終的に死亡した。これと対照的に，AC群の代謝系の異常（BEの低下）は最小であり，病理学的な変化を来さなかった。最後の刺激（EVS ♯3）の20分後にはA C群のすべての動物は正常範囲内に復した。
この結果は，今回のACの組合せの静脈内投与が，強度の侵害刺激による過剰な交感神経系の活動性と腸間膜の血管収縮を効果的に抑制し，重篤なストレス状況下におかれた動物の代謝障害を大幅に弱め得ることを示している。従って，内臓臓器／組織において外傷とそれに引き続いた虚血−再灌流障害に対する防御機構が働くと結論できる。
前述した例は，外傷性の刺激と過剰な内臓血管収縮に起因したと思われる臓器／組織の虚血−再灌流障害を間接的に評価したものであるが，本法は虚血／低酸素障害に陥ったすべての組織／臓器に当てはまり得るものと期待される。加えて，ACの組合せは乳酸アシドーシスが一般的でかつその原因が代謝性需要に見合わない不十分な組織潅流であるような非常に重症の患者でも有用であることが期待される。今回の組合せは偶発的な外傷の後に起こった代謝性の調節を援助するために有用であるかもしれない。本法はまた，ICUにおける患者の全身の回復を速めるのに有用である可能性がある。本法は更に，他の状況，もちろんこればかりに限られないが，すなわち脳いっ血，in vivoの臓器保護と移植，外傷と不十分な循環動態に起因したショック，代謝異常に起因した様々な病理学的状態などにも応用可能であることが期待される。
実施例６
アデノシン同族体（R-PIA）とカテコールアミン混合液の静脈内投与
New Zealand White系兎を例１と同様に準備し，実験中麻酔はイソフルラン1.4%で維持した。最初に５mgのアデノシン同族体R（-）N6-（2-phenylisopropyl）adenosine（R-PIA）と0.1mgのノルエピネフリン（NE）を静脈内に10分以上かけて混合投与した。投与中止後約100mmHgあった血圧は徐々に低下した。ノルエピネフリンの分解代謝がR-PIAの代謝より速いことにより低血圧が亢進された。この低血圧治療のため，ノルエピネフリン４μg/kg/minを約５分間追加投与し血圧を75-80mmHgに維持した後，ノルエピネフリン投与量を２μg/kg/minとし血圧を正常値近くに安定維持した。最初のR-PIAとノルエピネフリンの混合液投与と，その後の追加ノルエピネフリンの段階的投与による血圧の変化の記録は図10に示した。
実施例７
アデノシン同族体（R-PIA）とカテコールアミン混合液の静脈内投与
New Zealand White系兎を例１と同様に準備し，1.4%イソフルランによる麻酔下で実験を行った。アデノシン同族体であるＲ(-)N6-(2-phenylisopropyl)adenosine(R-PIA)5.0mgとノルエピネフリン0.1mgとの混合液を，例６と同様に最初に約13分以上かけて静脈内に持続投与を行った。例６とは異なり，最初の混合液投与のほぼ中間の時点から，別にノルエピネフリン（ＮＥ）を４μg/kg/minの速度で持続追加投与を始め，血圧が安定するまで約10分間投与を続けた。さらに，２μg/kg/minまで投与速度を下げ，血圧が正常なレベルの近くで安定するように維持した。R-PIAとノルエピネフリンの初回の混合投与と段階的なノルエピネフリンの追加持続投与との併用による血圧の結果を図11に示す。
実施例８
アデノシン同族体（NECA）とカテコールアミン混合液の静脈内投与
New Zealand White系兎を例１と同様に準備し，実験中の麻酔はイソフルラン1.4%で維持した。最初に1.25mgのアデノシン同族体5'-N-ethylcarboxamidoadenosine(NECA)と0.2mgのノルエピネフリン（NE）を静脈内に13分以上かけて混合投与した。その後60μg/kg/minのノルエピネフリン追加投与を開始し，血圧を正常状態に維持した。NECAとノルエピネフリン混合液投与と，引き続いて行った追加ノルエピネフリンの段階的投与の血圧の変化の記録を図12に示す。
本発明の原理および代表的な実施例を本明細書で考察したが、一方、本発明の範囲から外れることなく、多くの変形および修飾を本発明に加えることが可能である。
【図１（ａ）】
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【図１（ｂ）】
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【図１（ｃ）】
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【図１（ｄ）】
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【図２（ａ）】
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【図２（ｂ）】
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【図３】
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【図４（ａ）】
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【図４（ｂ）】
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【図５】
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【図６（ａ）】
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【図６（ｂ）】
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【図６（ｃ）】
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【図６（ｄ）】
0003836128.tif 000018
【図６（ｅ）】
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【図６（ｆ）】
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【図６（ｇ）】
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【図６（ｈ）】
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【図６（ｉ）】
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【図６（ｊ）】
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【図７（ａ）】
0003836128.tif 000025
【図７（ｂ）】
0003836128.tif 000026
【図７（ｃ）】
0003836128.tif 000027
【図７（ｄ）】
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【図８（ａ）】
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【図８（ｂ）】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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