(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
家禽、魚類又は甲殻類の飼料中に１種又はそれ以上のカロテノイドを含有することによる、家禽の卵黄、外皮及び／又は皮下脂肪或いは魚類又は甲殻類の肉及び／又は外皮の着色方法であって前記のカロテノイドが２´−デヒドロプレクタニアキサンチン、１−ヒドロキシ−３，４−ジデヒドロ−１，２−ジヒドロ−Ψ，Ψ−カロテン−２−オン、デスメチルスフェロイデノン、スフェロイデノン、５´−ヒドロキシ−５´，６´−ジヒドロ−４´−アポ−β−カロテン−６´−オン、１´−ヒドロキシ−３´，４´−ジデヒドロ−１´，２´−ジヒドロ−β，Ψ−カロテン−４，２´−ジオン及び５´−ヒドロキシ−５´，６´−ジヒドロ−４´−アポ−β−カロテン−４，６´−ジオンであることを特徴とする方法。
【請求項２】
家禽、魚類又は甲殻類用であり、そして家禽の卵黄、肉、外皮及び／又は皮下脂肪或いは魚類又は甲殻類の肉及び／又は外皮の着色を意図したカロテノイド強化飼料であって、２´−デヒドロプレクタニアキサンチン、１−ヒドロキシ−３，４−ジデヒドロ−１，２−ジヒドロ−Ψ，Ψ−カロテン−２−オン、デスメチルスフェロイデノン、スフェロイデノン、５´−ヒドロキシ−５´，６´−ジヒドロ−４´−アポ−β−カロテン−６´−オン、１´−ヒドロキシ−３´，４´−ジデヒドロ−１´，２´−ジヒドロ−β，Ψ−カロテン−４，２´−ジオン及び５´−ヒドロキシ−５´，６´−ジヒドロ−４´−アポ−β−カロテン−４，６´−ジオンのうち１種類又はそれ以上をカロテノイドとして有効量含有することを特徴とするカロテノイド強化飼料。
【請求項３】
家禽、魚類又は甲殻類用のプレミックス又は飼料中に組み込むための１種又はそれ以上のカロテノイドを含有する粒状物であって、２´−デヒドロプレクタニアキサンチン、１−ヒドロキシ−３，４−ジデヒドロ−１，２−ジヒドロ−Ψ，Ψ−カロテン−２−オン、デスメチルスフェロイデノン、スフェロイデノン、５´−ヒドロキシ−５´，６´−ジヒドロ−４´−アポ−β−カロテン−６´−オン、１´−ヒドロキシ−３´，４´−ジデヒドロ−１´，２´−ジヒドロ−β，Ψ−カロテン−４，２´−ジオン及び５´−ヒドロキシ−５´，６´−ジヒドロ−４´−アポ−β−カロテン−４，６´−ジオンのうち１種またはそれ以上のカロテノイドを、１重量パーセントから２０重量パーセント含有することを特徴とする粒状物。
【請求項４】
家禽、魚類及び甲殻類用飼料中に組み込むための１種またはそれ以上のカロテノイドを含有するプレミックスであって、２´−デヒドロプレクタニアキサンチン、１−ヒドロキシ−３，４−ジデヒドロ−１，２−ジヒドロ−Ψ，Ψ−カロテン−２−オン、デスメチルスフェロイデノン、スフェロイデノン、５´−ヒドロキシ−５´，６´−ジヒドロ−４´−アポ−β−カロテン−６´−オン、１´−ヒドロキシ−３´，４´−ジデヒドロ−１´，２´−ジヒドロ−β，Ψ−カロテン−４，２´−ジオン及び５´−ヒドロキシ−５´，６´−ジヒドロ−４´−アポ−β−カロテン−４，６´−ジオンの内１種またはそれ以上をカルテノイドとして、０．００１重量パーセントから１５重量パーセント含有することを特徴とするプレミックス。
【請求項５】
１−ヒドロキシ−３，４−ジデヒドロ−１，２−ジヒドロ−Ψ，Ψ−カロテン−２−オン、５´−ヒドロキシ−５´，６´−ジヒドロ−４´−アポ−β−カロテン−６´−オン又は５´−ヒドロキシ−５´，６´−ジヒドロ−４´−アポ−β−カロテン−４，６´−ジオンのカロテノイド。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
カロテノイド類は植物及び動物の世界に豊富に存在し、又ある場合には合成法により生成されて来た天然色素であることは周知である。さらに合成により生成されたカロテノイド類は自然界に存在するとは思われない。多くの重要なカロテノイド類が、特にエチルβ−アポ−８´−カロテノエイト、シトラナキサンチン、カンタキサンチン及びアスタキサンチンのカロチノイドの場合に、食品及び飼料産業、例えば卵黄、家禽、魚類及び甲殻類の着色用の顔料として使用されている。この目的のために、例えば、家禽の皮、脚及び嘴、及び魚類及び甲殻類の皮、鱗及び甲の如き動物の外皮、適宜に家禽の皮下脂肪及び魚類及び甲殻類の肉の色彩であれ、卵（黄身）の如き動物性生産物の色彩であれ、その色彩の視覚的印象をより高め美的により受容性のあるものにする方法として、該動物の飼料中にカロテノイド色素が添加されている。着色の増強は多くの他の因子の中で下記の３項の条件に左右される。すなわち関与するカロテノイド類の特定の光を吸収する共役二重結合系、カロテノイド強化飼料摂取後そのカロテノイドが動物の体内に吸収される容易度（沈着率）及び目的とする、動物の体組織又は生産物中のカロテノイド又は他の代謝物の濃度、に左右される。しかし、その選ばれたカロテノイドの構造の知見からは、この使用分野における顔料としてどの程度有効に作用するか予測することは不可能である。関連するその他の因子には、このような飼料が晒される正常な条件下で貯蔵された場合、動物の飼料中でのカロテノイドの安定性（例えば、空気酸化、光、温度及び湿度に対して）が挙げられる。
【０００２】
家禽については、食用鳥の外皮と卵黄に対して受容しうる濃度と質を有する着色法が要望される。例えば、卵黄の色を濃くする物質の使用は、消費者が色素で濃色にした（特に濃い黄金系黄色に）卵黄を好むため、一般に推奨されている。商品の質を評価する際、目に見える外観は実に重要である。例えば、ブロイラー及び観賞用の鳥はその鳥の外皮、特に皮、脚及び嘴が、またブロイラーの場合には皮下脂肪もまた、着色の一定の基準を満たしていると、世界の多くの国々で、より美的に容認される。低繊維、高エネルギー飼料を与えるため色素の濃い家禽や卵黄の生産を困難にしている、近代的集中家禽飼育法における飼料草消費の減少のために、補助的色素投与の必要性が今日特に高まっている。
【０００３】
魚類の肉及び外皮（特にいろいろな種の鱒及び鮭の）並びに甲殻類（例えば、蟹、ロブスター及び海老）の肉及び甲皮の着色もまた、食用生産物を消費者に対してより魅力的にするという目的で、魚類及び甲殻類にカロテノイド強化飼料製品を与えることにより達成されていることも周知である。
【０００４】
ここに、下記に明記するいくつかのカロテノイド類は、この目的にこれまで使用されて来たカロテノイド類よりも、前述の利用法における色素として驚異すべき程より有効であることが発見された。本発明によれば、家禽の卵黄、外皮及び／又は皮下脂肪、並びに魚類及び甲殻類の肉及び／又は外皮を、該家禽、魚類又は甲殻類の飼料中に１種又はそれ以上のカロテノイドを含めることにより着色する方法であって、前記のカロテノイド類が２´−デヒドロプレクタニアキサンチン、１−ヒドロキシ−３，４−ジデヒドロ−１，２−ジヒドロ−Ψ，Ψ−カロテン−２−オン、デスメチルスフェロイデノン、スフェロイデノン、５´−ヒドロキシ−５´，６´−ジヒドロ−４´−アポ−β−カロテン−６´−オン、１´−ヒドロキシ−３´，４´−ジデヒドロ−１´，２´−ジヒドロ−β，Ψ−カロテン−４，２´−ジオン及び５´−ヒドロキシ−５´，６´−ジヒドロ−４´−アポ−β−カロテン−４，６´−ジオンであることを特徴とする方法が提供される。
【０００５】
本発明はまた、家禽の卵黄、外皮及び／又は皮下脂肪、並びに魚類及び甲殻類の肉及び／又は外皮の着色を目標とする家禽、魚類又は甲殻類用のカロテノイド強化飼料であって、２´−デヒドロプレクタニアキサンチン、１−ヒドロキシ−３，４−ジデヒドロ−１，２−ジヒドロ−Ψ，Ψ−カロテン−２−オン、デスメチルスフェロイデノン、スフェロイデノン、５´−ヒドロキシ−５´，６´−ジヒドロ−４´−アポ−β−カロテン−６´−オン、１´−ヒドロキシ−３´，４´−ジデヒドロ−１´，２´−ジヒドロ−β，Ψ−カロテン−４，２´−ジオン及び５´−ヒドロキシ−５´，６´−ジヒドロ−４´−アポ−β−カロテン−４，６´−ジオンの１種またはそれ以上のカロテノイドとして、有効量を含有するカロテノイド強化飼料も提供する。
【０００６】
本法で使用可能なカルテノイド類及び本発明のカロテノイド強化飼料は、第１、第３及び第４番目に記述されたカロテノイド類の場合には、それら自体知られておりまた実際に自然界に存在している。第２及び第５から第７番目に記載されたカロテノイド類は新規の化合物である。以上７種のカロテノイドは下記の構造式で表され、そのうち既知の３種についてはその存在及び／又は化学的合成法に関する関連文献を各々の式の後の括弧内に記述する。
【０００７】
２´−デヒドロプレクタニアキサンチン
【０００８】
【化１】
0003751035.tif 000002
【０００９】
［Arpin et al.,Phytochem.6.995-1005(1967) ］
１−ヒドロキシ−３，４−ジデヒドロ−１，２−ジヒドロ−Ψ，Ψ−カロテン−２−オン
【００１０】
【化２】
0003751035.tif 000003
【００１１】
デスメチルスフェロイデノン
【００１２】
【化３】
0003751035.tif 000004
【００１３】
［Britton et al.,FEBS Lett.110,47(1980) ］
スフェロイデノン
【００１４】
【化４】
0003751035.tif 000005
【００１５】
［Manchand et al.,Tetr.Lett.1966,989;Barber et al.,J.Chem.Soc.C1966,  2166］
５´−ヒドロキシ−５´，６´−ジヒドロ−４´−アポ−β−カロテン−６´−オン
【００１６】
【化５】
0003751035.tif 000006
【００１７】
１´−ヒドロキシ−３´，４´−ジデヒドロ−１´，２´−ジヒドロ−β，Ψ−カロテン−４，２´−ジオン
【００１８】
【化６】
0003751035.tif 000007
【００１９】
５´−ヒドロキシ−５´，６´−ジヒドロ−４´−アポ−β−カロテン−４，６´−ジオン
【００２０】
【化７】
0003751035.tif 000008
【００２１】
前記の化学式から、すべてのカロテノイド類は、スフェロイデノンを除くと、先端に２−ヒドロキシ−２−メチル−プロピオニル基［- ＣＯＣ（ＣＨ3 ）2 ＯＨ］を特徴とすることが認められるであろう。スフェロイデノンは先端基として、相当するメチル基、すなわち２−メトキシ−２−メチル−プロピオニル基［- ＣＯＣ（ＣＨ3 ）2 ＯＣＨ3 ］を特徴とする。既知のカロテノイド類についての文献（特許文献も含めて）にはどこにも、これまで該カロテノイド類を前述の用途に、例えば卵黄の色を増強するために顔料として利用することができる、ということは記述されていない。
【００２２】
４種の新規カルテノイド類は、適宜の出発物質から、同様な構造を有するカロテノイド類を生成する方法と類似の方法で生成することができる。すなわち、第一番目のカロテノイド、１−ヒドロキシ−３，４−ジデヒドロ−１，２−ジヒドロ−Ψ，Ψ−カロテン−２−オンは、デメチルスフェロイデノン生成法に類似した方法で、すなわち４´−アポ−Ψ−カロテン−４´−アールを３−ヒドロキシ−３−メチル−２−ブタノンと縮合させることにより生成することができる。５´−ヒドロキシ−５´，６´−ジヒドロ−４´−アポ−β−カロテン−６´−オン、１´−ヒドロキシ−３´，４´−ジデヒドロ−１´，２´−ジヒドロ−β，Ψ−カロテン−４，２´−ジオン及び５´−ヒドロキシ−５´，６´−ジヒドロ−４´−アポ−β−カロテン−４，６´−ジオンの場合には、それぞれ適宜なアルデヒドすなわち、８´−アポ−β−カロテナール、４−オキソ−４´−アポ−β−カロテン−４´−アール及び４−オキソ−８´−アポ−β−カロテン−８´−アールを、３−ヒドロキシ−３−メチル−２−ブタノンと縮合させる。
【００２３】
該アルデヒドそのものは適宜の低級アルデヒドを（３，７−ジメチル−８−オキソ−２，４，６−オクタトリエニル）トリフェニルフォスフォニウム・クロライドのアセタールとともに、塩基を触媒にしたウィテッヒ反応（Wittig reaction）により、次いで該ウィテッヒ反応生成物中のアセタール基を酸を触媒にして分解することにより，慣習的に生成することができる。これは後述の実施例５中で４´−アポ−Ψ−カロテン−４´−アールについて具体的に説明する。
【００２４】
一般にアルデヒドと３−ヒドロキシ−３−メチル−２−ブタノンの縮合反応は、それぞれ低級アルカノール、特にメタノール、エタノール、ｎ−プロパノール、イソプロパノール又はブタノールのような極性溶媒中で適切に実行される。ケトン反応体である３−ヒドロキシ−３−メチル−２−ブタノンそれ自体も又同時に本反応の溶媒として働く。更に、該反応は一般に約０℃から約１００℃の範囲の温度において、特に室温から反応混合物の還流温度の間が好ましく、又むしろ水酸化ナトリウム、水酸化カリウム、アルカリ金属アルコレート（例えば、ナトリウムエタノレート）又はトリエチルアミンの水酸物のような塩基の存在下で行われる。アルゴンのような不活性ガス雰囲気中で反応させることにより空気を除去することが推奨される。生成物がシス／トランス（Ｚ／Ｅ）体の混合物である場合には、目的の（全Ｅの）生成物は低級アルカン（ｎ−ヘプタンが望ましいが）中で該混合物を加熱することにより生成される。本方法はそのようなカロテノイドの異性化に用いられる常法である。
【００２５】
本発明方法を実行するために適する場合には、該カロテノイドが家禽、魚類又は甲殻類の飼料を介して投与され、この状況下で着色増強の原因となるカロテノイドが自然の方法で適宜な動物に摂取される。適宜の飼料には又家禽の卵黄、外皮及び／又は皮下脂肪、並びに魚類及び甲殻類の肉及び／又は外皮の正常の色素の素となる他のカロテノイド類が含まれていてもよい。添加したカロテノイド類（その化学名と構造式が上述された７種のカロテノイドのうち１種又はそれ以上の）の飼料中の含有量は概してカロテノイド強化飼料の総重量当たり０．１ppm から１５０ppm （mg/kg 又は０．０００００１重量％から０．０１５重量％）の範囲内にある。家禽の飼料、特に産卵用雌鳥及びブロイラーの飼料では添加カロテノイドの含有量は０．２５ppm から２０ppm の範囲にあるのが好ましく、魚類又は甲殻類の飼料の場合にはこの含有量は２．５ppm から１５０ppm の範囲にあるのが好ましい。
【００２６】
本発明によると家禽、魚類又は甲殻類の飼料の成分は他の点では常用される物で良いし、その飼料も物理的混合、ペレット化、押し出し、ミクロカプセル化、噴霧等の常法により製造され得る。この製造過程のどこかで、７種のカロテノイドのうち１種又はそれ以上のカロテノイド（例えば、２´−デヒドロプレクタニアキサンチン）が添加される。家禽飼料の常用成分として、（それぞれいずれの場合でも少なくとも１０重量パーセント）、通常、適宜にひいて粉にしたり粉砕した状態の、たとえば小麦、玉葱、バーレイ麦、モロコシ、オート麦、米及び／又は大豆ミールが含まれる。その他少量（５重量パーセントまで又はある場合には１重量パーセント以下のこともある）の成分として、例えば、魚、肉及び／又は骨のミール、小麦のふすま、藁、酵母、加水分解した脂肪、獣脂、ラード、石灰、塩、メチオニンプレミックス、ミネラルプレミックス、ビタミンプレミックス及び／又は抗固化剤等が含まれる。本発明によると、どんな家禽飼料でもそれを製造するために、７種のうち１種又はそれ以上のカロテノイド類で強化することが出来る。本発明の典型的な魚類又は甲殻類の飼料には、添加したカロテノイド類の他に、主要蛋白質源として魚ミール、小麦と骨のミール、大豆ミール、小麦粉、加熱澱粉、酵母、魚油、大豆油、大豆レシチン、メチオニン、ビタミン類、ミネラル類が含まれる。飼料中の蛋白質、脂質及び炭水化物含有量はそれぞれ４０−５０重量％、１５−３０重量％及び１０重量％である。
【００２７】
家禽、魚類又は甲殻飼料に組み込むための、７種の内から選ばれたカロテノイド類又はカロテノイド混合物は、いわゆるプレミックス中に小粒子の形態で混合され、次いで飼料に添加される。該粒状物それ自体は、本発明のさらなる態様を示しているのだが、カロテノイド類の他にゼラチン及び炭水化物の澱粉被膜されたマトリックス、１種又はそれ以上のエトキシキン及び／又はアスコルビルパルミテイトのような抗酸化剤を含有する。
【００２８】
小粒状物は、一般に活性成分として２´−デヒドロプレクタニアキサンチン、１−ヒドロキシ−３，４−ジデヒドロ−１，２−ジヒドロ−Ψ，Ψ−カロテン−２−オン、デスメチルスフェロイデノン、スフェロイデノン、５´−ヒドロキシ−５´，６´−ジヒドロ−４´−アポ−β−カロテン−６´−オン、１´−ヒドロキシ−３´，４´−ジデヒドロ−１´，２´−ジヒドロ−β，Ψ−カロテン−４，２´−ジオン及び５´−ヒドロキシ−５´，６´−ジヒドロ−４´−アポ−β−カロテン−４，６´−ジオンのうち１種又はそれ以上を、１重量パーセントから２０重量パーセント含有し、一方プレミックスは一般にそれらを活性成分として、０．００１重量パーセントから１５重量パーセント含有する。
【００２９】
本発明は更に７種の該カロテノイド類のうち１種又はそれ以上を、家禽の卵黄、外皮及び／又は皮下脂肪、並びに魚類及び甲殻類の肉及び／又は外皮の着色方法に使用することも含んでいる。
【００３０】
入手可能なデータにもとずくと、本発明の各種態様には２´−デヒドロプレクタニアキサンチンの使用が好ましく、次いでデスメチルスフェロイデノン又はスフェロイデノンの使用が好ましい。更なるこれらの態様に解釈は産卵用雌鳥類の卵黄の着色に応用することが好ましい。
【００３１】
【実施例】
本発明を以下の実施例により具体的に説明する：
実施例１
これまで卵黄の着色用に使用されたと報告されたことがない４種のカロテノイド、すなわち２´−デヒドロプレクタニアキサンチン、１−ヒドロキシ−３，４−ジデヒドロ−１，２−ジヒドロ−Ψ，Ψ−カロテン−２−オン、デスメチルスフェロイデノン、スフェロイデノン（本実施例及び以下の実施例において、それぞれをカロテノイドＡ，Ｂ，Ｃ，及びＤと称する）を、産卵用雌鳥を使用した一次スクリーニングにおいて、それらの卵黄着色の効能について評価し、そして同様な条件下で既知の着色性カロテノイドのカンタキサンチン（“正対照”）と比較した。
【００３２】
４種のカロテノイドをそれぞれ下記の組成を有する粒状物として調製した：
0003751035.tif 000009
次いで各カロテノイドＡからカロテノイドＤ及びカンタキサンチンの粒状物を、テストカロテノイドの飼料中含有量（含有濃度）がそれぞれ１０mg/kg となるように、低カロチノイド基礎飼料に配合した。各々の場合に、通常濃度の補助ビタミン類とともに、カロテノイドＡ，カロテノイドＢ又はカンタキサンチンで強化された基礎飼料には更に0.70ppm から1.40ppm のルテイン及び0.20ppm から0.50ppm のゼアキサンチンを含有させ、カロテノイドＣ，カロテノイドＤ又はカンタキサンチンで強化された基礎飼料には更に0.85ppm から1.20ppm のルテイン及び0.20ppm から0.35ppm のゼアキサンチンを含有させた。該低カロテノイド基礎飼料の組成を下記の表１及び表２に示す。
【００３３】
0003751035.tif 000010
0003751035.tif 000011
【００３４】
0003751035.tif 000012
混合されたカロテノイドＡからカロテノイドＤ及びカンタキサンチンはＨＰＬＣにより飼料中の含有量が確認された。
【００３５】
テストに使用された産卵用雌鳥は３段バタリー中で個々個のケージにいれて飼育された。カロテノイドＡ、カロテノイドＢ及び比較のために使用されたカンタキサンチンの場合には、生後４２週齢のイサブラウン(Isa Brown) 種の雌鳥７２羽を使用し、各３羽から成る同型グループ６群を、３種の内の１種のカロテノイドを含有したそれぞれの飼料群及びカロテノイドを含有しない飼料群（負の対照、すなわちテストカロテノイドを含有しない基礎飼料）に割り当てた。状況はカロテノイドＣ及びカロテノイドＤと適宜のカンタキサンチンについても同様であるが、ここでは生後６１週のローマンＬＳＬ雌鳥各６羽からなる同型グループ４群を使用したので雌鳥の総数は９６羽となる。
【００３６】
実際の実験の前に、既存の卵黄の色素を薄くするために、雌鳥に上述の低カロテノイド基礎飼料を与えた。次いで、該雌鳥に、３週間の実験期間中、テストカロテノイドで強化されたか、又はこのカロテノイドを含有しない（負の対照）同様な低カロテノイド基礎飼料を与えた。粉餌状の該飼料と水は“無制限に”与えられた。雌鳥の産卵能力を毎週１回観察し、１羽につき最後の卵２個を実験室の測定用に収集した。
【００３７】
着色効能は、卵黄中のカロテノイド沈着量の測定、並びに写真の資料及び反射率による色素測定値（ＣＩＥ  Ｙｘｙシステム）を伴った色素描写によって評価した。反射率測定はガードナーＸＬ比色計を用いて行い、測定された三刺激値を主波長とスペルトル飽和値のＣＩＥシステムに変換した。〔J.P.Vuilleumier,“ロッシェの卵黄色素扇”−卵黄の色判定用の器具（The "Roche Yolk Color Fan"-An Instrument for Measuring Yolk Color),Poultry Science 48 767-779(1969)参照〕。反射率測定値からの主波長とスペクトル飽和値をＡＮＯＶＡプログラム（ＳＡＳ，1985）を用いて分散量の分析を行った。処理方法間の誤差を算定するためダンカンの多重範囲テスト（アルファ＝０．０５）を用いた。収集した卵黄中のテストカロテノイド濃度を示すカロテノイド沈着量は、投与前の飼料中カロテノイド濃度測定に使用されたものと同様のＨＰＬＣ法により測定され、飼料中に元来混合されていたカロテノイド量の定量を行った。
【００３８】
その結果（平均値）を下記の表３と表４に示す：
0003751035.tif 000013
その結果すべての４種のカロテノイド及びカンタキサンチンは卵黄の着色に有意な効果を与えたことを示す。カロテノイドＡ（２´−デヒドロプレクタニアキサンチン）は卵黄に、578.1nm から626.7nm の主波長の増強から示される、強いカルミン赤着色を示した。そのスペクトル飽和値は僅かだが、卵黄のカルテノイド濃度は著しく高かった（24.1ppm ）。カルテノイドＢ（１−ヒドロキシ−３，４−ジデヒドロ−１，２−ジヒドロ−Ψ，Ψ−カロテン−２−オン）は沈着量と色素飽和値が限られているため卵黄を淡いピンク色に着色したが、主波長を612.7nm に高めた。カルテノイドＣ（デスメチルスフェロイデノン）とカルテノイドＤ（スフェロイデノン）は、卵黄を赤色に着色し主波長（575.8 nmからそれぞれ599.5nm と596.3nm に）及びスペクトル飽和値（0.477 からそれぞれ0.777 と0.782 に）を著しく増加し、良好な有効性を示した。該カロテノイド類は卵黄への沈着も容易であった（20.75ppm及び17.23ppm）。この場合に正対照として用いられたカンタキサンチンは卵黄を赤−橙色に着色した。カロテノイドＣ及びカロテノイドＤの値に比して、その主波長は著しく低く（589.9nm ）、スペクトル飽和値はより高く（0.853 ）そして卵黄への沈着量はより高かった（25.25ppm）。
【００３９】
実施例２
実施例１の記載と同様の方法を用いて、デスメチルスフェロイデノン（以後“カロテノイドＣ”と名付ける）と、正対照としてカンタンキサンチンを、産卵用雌鳥の一次選別において、卵黄の着色効果につき、エチルβ−アポ−８´−カロテノエイト（“アポエステル”）の基礎濃度４ppm と共に投与し、それぞれ１ppm 、２ppm 及び４ppm と段階付けた濃度で評価した。各々の例で個々のカロテノイドは低カロテノイド基礎飼料中に混合する前に、上述の濃度に粒状物として処方された。該粒状物は適宜、デスメチルスフェロイデノンを６．１重量パーセント、又はカンタキサンチンを１０．４重量パーセント、又はアポエステルを１１．３重量パーセント含有し、該重量パーセントは分光光度測定値で確認された。ルテインを０．７０−１．４０ppm 及びゼアキサンチンを０．２０−０．５０ppm 並びに通常濃度の補助ビタミン類を含有する低カロテノイド基礎飼料の組成を以下の表５に示す：
0003751035.tif 000014
混合したカルテノイドの飼料中の含有量はＨＰＬＣにより確認された。
【００４０】
テストに使用された産卵用雌鳥は３段バタリー中で個々のケージにいれて飼育された。生後４０週齢のイサブラウン(Isa Brown) 種の雌鳥７２羽を使用し、各３羽から成る同型グループ４群を、上述の特定のカロテノイド配合物を与えられたおのおのの飼料群に割り当てた。
【００４１】
実際の実験の前に、既存の卵黄色素を減少するために、雌鳥に上述の低カロテノイド基礎飼料を与えた。次いで、３週間のテスト期間中、テスト用カロテノイド配合物を添加された、同様の低カロテノイド基礎飼料をこの雌鳥に与えた。粉餌状の該飼料及び水は“無制限に”与えられた。雌鳥の産卵能力を毎週１回観察し、１羽につき最後の卵各２個を実験室での測定用に収集した。
【００４２】
実施例１と同様に、着色効果は、卵黄中のカロテノイド沈着量の測定、並びに写真の資料及び反射率による色素測定値を伴った色素描写によって評価した。反射率測定については、卵黄の色素は従来のＣＩＥ色素三角法（Ｙｘｙシステム）を用いるか最新のＣＩＥＬＡＢシステムにより測定された。更に各同型グループから収集された卵黄の色素はロッシュの卵黄色素扇１９８９（ＲＹＣＦ）を用いて評価された。詳細は実施例１を参照。
【００４３】
結果（平均値）を以下の表６及び表７に示す：
0003751035.tif 000015
0003751035.tif 000016
結果によりカロテノイドＣ（デスメチルスフェロイデノン）はカンタキサンチンと同程度に卵黄中に沈着したが、卵黄の着色効果についてはカンタキサンチンよりも著しく強力な作用を示した。カロテノイドＣとアポエステルの配合によってもたらされた着色作用は非常に望ましい黄橙色であった。
【００４４】
実施例３
実施例１記載と同様な方法を用いて、２´−デヒドロプレクタニアキサンチン（以後“カロテノイドＡ”と呼ぶ）と、３種の正対照としてカンタキサンチン、シトラナキサンチン及びエチル４´−アポ−β−カロテン−４´−オエイト（ニューロスポラキサンチン  エチルエステル）を、産卵用雌鳥の一次選別において卵黄着色効果につき、エチル−β−アポ−８´−カロテノエイト（“アポエステル”）の基礎濃度４ppm とともに、カロテノイドＡを０．５ppm ，１ppm 及び２ppm の段階的濃度で又は、３種の正対照のどれかを１ppm ，２ppm 及び４ppm 投与して評価した。各々の例で個々のカロテノイドは低カロテノイド基礎飼料中に混合する前に上述の濃度に粒状物として処方された。該粒状物には適宜、２´−デヒドロプレクタニアキサンチンを６．５重量パーセント、又はカンタキサンチンを１０．０重量パーセント、又はシトラナキサンチンを１１．１重量パーセント、又はニューロスポラキサンチン  エチルエステルを６．４重量パーセント、又はアポエステルを１０．４パーセント含有し、該重量パーセントは分光光度測定値により確認された。ルテインを０．７０−１．４０ppm 及びゼアキサンチンを０．２０−０．５０ppm 並びに通常濃度の補助ビタミン類を含有する低カロテノイド基礎飼料の組成を以下の表８に示す：
0003751035.tif 000017
0003751035.tif 000018
混合されたカロテノイドの飼料中含有量はＨＰＬＣにより確認された。
【００４５】
試験に使用された産卵用雌鳥は３段のバタリー中で個々のケージ内で飼育された。生後７２週齢のイサブラウン雌鳥１４４羽を使用し、それぞれ３羽ずつの同型グループ４組を上述の特定のカロテノイド混合飼料群に割り当てた。
【００４６】
実際の試験の前に、雌鳥は既存の卵黄色素を減少させるために、上述の低カロテノイド基礎飼料を与えられた。次いで３週間の試験期間中、該雌鳥はテストカロテノイド混合物を添加された、同様の低カロテノイド基礎飼料を与えられた。粉餌状の飼料と水は“無制限に”与えられた。雌鳥の産卵能力は毎週１回観察し、雌鳥１羽につき最後の卵各２個を実験室測定用に収集した。
【００４７】
実施例１と同様に、着色効果は卵黄中のカロテノイド沈着量並びに、写真資料及び反射光測定値を伴う色素描写により判定された。反射光の測定に関しては、卵黄の色を従来の方法のＣＩＥ色彩三角法（Ｙｘｙシステム）又は最新式のＣＩＥＬＡＢシステムを使用して測定された。更に、各同型グループから収集した卵黄の色はロッシェの卵黄色素扇１９８９（ＲＹＣＦ）により評価した。詳細は実施例１を参照。
【００４８】
結果（平均値）は以下の表９及び表１０に示す：
0003751035.tif 000019
0003751035.tif 000020
0003751035.tif 000021
表９及び表１０に示された結果によると、カロテノイドＡ（２´−デヒドロプレクタニアキサンチン）はカンタキサンチン、シトラナキサンチン又はニューロスポラキサンチンエチルエステルに比して卵黄に遥かに濃い赤色を与えるカロテノイドであることを明らかに示している。パラメーターとして主波長を利用すると、例えば０．５ppm 及び１ppm におけるテストでの効果はニューロスポラキサンチンエチルエステルの効果のおよそ４倍、またカンタキサンチンの効力の約７倍効力があった。
【００４９】
実施例４
５´−ヒドロキシ−５´６´−ジヒドロ−４´−アポ−β−カロテン−６´−オンの製法
メタノール２００ｍｌ中に８´−アポ−β−カロテナール１２．５ｇ（３０ｍｍｏｌ）を溶解した溶液をアルゴン雰囲気下の室温で、４．５ｃｍのＴｅｆｌｏｎ（商標）の攪拌翼、温度計及び強力な冷却器を備えた７５０ｍｌ用４口反応フラスコに入れる。次いで該溶液に３−ヒドロキシ−３−メチル−２−ブタノン２０ｍｌ（純度９５％、１８０ｍｍｏｌ）を添加し、更に攪拌しながら３０分以内に水４０ｍｌに水酸化ナトリウム２ｇ（５０ｍｍｏｌ）を溶解した溶液を添加する。この際、該添加は滴下により行う。生成される懸濁液に更にメタノール１００ｍｌを添加し、次いで全体を油浴で４０℃に加熱すると暗色の溶液が得られる。約４８時間後に本反応は薄層クロマトグラフィーにより実質上終結したことを確認する。反応溶液を氷酢酸３．１５ｍｌ（５０ｍｍｏｌ）で中和し緩徐に室温まで冷却すると、暗色の結晶が沈殿する。沈殿を促進するために該溶液を更に氷冷する。２時間後に反応物を濾過し、収集した沈殿物を冷却メタノール１００ｍｌで洗浄する。
【００５０】
該沈殿物を塩化メチレンとヘキサンの混合物から晶出すると、目的の５´−ヒドロキシ−５´６´−ジヒドロ−４´−アポ−β−カロテン−６´−オンがほとんど黒色の結晶として得られる。これを濾過し、ヘキサンで洗浄し２０ｍｂａｒの減圧下で４０℃で乾燥する。製品の収量は１３．５７ｇ（理論収率の８３％）である。Ｍ．ｐ．１７９−１８０℃
実施例５
（全Ｅ）−１−ヒドロキシ−３，４−ジデヒドロ−１，２−ジヒドロ−Ψ，Ψ−カロテン−２−オンの製法
トリメチルオルソフォルメイト１．８０ｇ（１７ｍｍｏｌ）及び１％（ｗ／ｖ）ｐ−トルエンスルフォン酸のメタノール溶液０．４ｍｌを、メタノール３０ｍｌ中に（３，７−ジメチル−８−オキソ−２，４，６−オクタトリエニル）トリフェニルフォスフォニウムクロライド６．３４ｇ（１４。２ｍｍｏｌ）を溶解した溶液に添加する。該混合物をアルゴン下で１1/2 時間室温で攪拌し、次いでピリジン０．２ｍｌを加えて急冷する。ここで（３，７−ジメチル−８−オキソ−２，４，６−オクタトリエニル）−トリフェニルフォスフォニウムクロライドのジメチルアセタールが生成される。次いで該混合物に、（全Ｅ）−１２´−アポ−Ψ−カロテン−１２´−アル〔Hengartner etal.,Helv.Chim.Acta 75,1848(1992) の方法に従って生成される〕４．３１ｇ（１２．３ｍｍｏｌ）を塩化メチレン５０ｍｌに溶解した溶液を添加し、それを−２０℃に冷却する。メタノール５ｍｌに金属ナトリウム３６３ｍｇ（１５．８ｍｍｏｌ）を溶解することにより生成される、新規に生成されたナトリウムメトキサイド溶液を−２０℃で３０分かけて添加し、該混合物を室温で２時間攪拌し、次いで氷水１０ｍｌ中に濃硫酸０．８ｍｌを溶解した水溶液で酸化する。該混合物を２０分間攪拌し、次いで塩化メチレン５０ｍｌと氷水６０ｍｌに混合する。この有機層を重炭酸ナトリウム水溶液及び塩水で洗浄し、乾燥濃縮する。残渣を塩化メチレン８０ｍｌ中に溶解する。次いで該塩化メチレンを同時にメタノール３２０ｍｌを添加しながら回転蒸発器を用いて留去する。該溶液を０℃で１時間攪拌後、生成する暗赤色の結晶を濾過乾燥すると、（全Ｅ）−４´−アポ−Ψ−カロテン−４´−アルｍ．ｐ．166-167 ℃４．８５ｇ（理論収率の８２％）が得られる。
【００５１】
３−ヒドロキシ−３−メチル−２−ブタノン８．９４ｇ（８７ｍｍｏｌ）をアルゴン下で、メタノール１４ｍｌ中に水酸化カリウム１．５４ｇ（２３ｍｍｏｌ）を溶解した溶液（８６％）中に添加する。次いで塩化メチレン５０ｍｌ中（全Ｅ）−４´−アポ−Ψ−カロテン−４´−アル４．２２ｇ（８．７ｍｍｏｌ）を溶解した溶液を１０℃で３０分間かけて添加する。該混合物を室温で６４時間攪拌し、次いで酢酸１．６ｍｌで中和する。該塩化メチレンを、メタノール７０ｍｌを同時に添加しながら、回転蒸留器で留去する。生成懸濁液を濾過し、該濾過固形物をメタノールで洗浄乾燥する。塩化メチレン／メタノール（溶媒交換）で再結晶すると（全Ｅ）−１−ヒドロキシ−３，４−ジデヒドロ−１，２−ジヒドロ−Ψ，Ψ−カロテン−２−オン４．１０ｇ（理論収率の８３％）が暗紫色の結晶ｍ．ｐ．１９９℃として得られる。
【００５２】
実施例６
（全Ｅ）−１´−ヒドロキシ−３´，４´−ジデヒドロ−１´，２´−ジヒドロ−β，Ψ−カロテン−４，２´−ジオンの製法
プロパノール２０ｍｌ中に４−オキソ−４´−アポ−β−カロテン−４´−アル２．８２ｇ（５．６８ｍｍｏｌ），３−ヒドロキシ−３−メチル−２−ブタノン１．２２ｍｌ／１．１５９ｇ（１１．３７ｍｍｏｌ）及び９モルの水酸化カリウム水溶液０．６３ｍｌ（５．６８ｍｍｏｌＫＯＨ）を溶解した混合液を油浴により７３−７５℃に加熱する。該温度で２時間後、薄層クロマトグラフィーにより反応が終結したことを確認する。
【００５３】
冷却した混合物を水層が中和されるまで、塩化メチレン及び１規定硫酸少量を含有する氷水の２相溶媒系により抽出する。該２相を分離後、有機相を無水硫酸ナトリウムで乾燥し次いで減圧蒸留により濃縮する。生成した暗赤色の油を、溶離剤としてジエチルエーテルとヘキサンの２：１の混合液を用いてシリカゲルによるクロマトグラフィーにかける。カロテノイド生成物を含有する画分を混合し減圧蒸留すると暗赤色残渣が得られ、次いで該残渣をヘプタン中で１００℃で約１６時間加熱することにより異性化される。次いで該溶液を０℃に冷却し、生成した暗赤色の結晶（１．５０ｇ；理論収率の４６％）を濾取する。生成物、１´−ヒドロキシ−３´，４´−ジデヒドロ−１´，２´−ジヒドロ−β，Ψ−カロテン−４，２´−ジオンは１８１−１８２℃の融点、及びＨＰＬＣ；ＵＶ／ＶＩＳ（ヘキサン＋１％ＣＨ2 Ｃｌ2 ＋１％Ｃ2 Ｈ5 ＯＨ）：５０１ｎｍ（ε＝１５４，０００）によると（全Ｅ）の含有率９２％を有する。
【００５４】
実施例７
（全−Ｅ−）５´−ヒドロキシ−５´，６´−ジヒドロ−４´−アポ−β−カロテン−４，６´−ジオンの製法
プロパノール２０ｍｌ中に４−オキソ−８´−アポ−β−カロテン８´−アル２．１５ｇ（５ｍｍｏｌ）を懸濁した懸濁液に、９モルの水酸化カリウム水溶液（５ｍｍｏｌＫＯＨ）０．５５ｍｌ中に３−ヒドロキシ−３−メチル−２−ブタノン１．０２ｇ（１０ｍｍｏｌ）を溶解した溶液を添加し、該混合物を油浴中で７２−７４℃に加熱する。元来不均一な混合物が２０分間の加熱で均一になり、約４５分以内に結晶し始める。
【００５５】
次いで該混合物を約０−５℃に冷却、濾過し、該結晶をメタノール、水（濾液が中性になるまで）、メタノール及びヘキサンで順次洗浄し３０℃で減圧乾燥する。本製法により（全−Ｅ−）５´−ヒドロキシ−５´，６´−ジヒドロ−４´−アポ−β−カロテン−４，６´−ジオン１．９４ｇ（理論収率の７５％）ｍ．ｐ．１８９−１９１℃が得られ、ＨＰＬＣによると約９９％の純度で得られる。