(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
式Ｉ
グリコシル−Y-W(R)n-X-C(=Y)−ドラッグ (Ｉ)
の化合物。
上記式において、
グリコシルは、アルファ−またはベータ−Ｏ−グリコシド的に結合したＤ−グルクロニル、Ｄ−グルコピラノシル、Ｄ−ガラクトピラノシル、Ｎ−アセチル−Ｄ−グルコサミニル、Ｎ−アセチル−Ｄ−ガラクトサミニル、Ｄ−マンノピラノシル、またはＬ−フコピラノシル基であり、
Ｗは、芳香族基であり、
置換分Ｒは、独立してまたは全く同じに、Ｈ、ニトロ、または塩素であり、
ｎは、整数であり、
Ｘは、ＮＨ、メチレンアミノまたはメチレン（Ｃ1〜Ｃ4）−アルキルアミノであり、
Ｙは、Ｏであり、そして
ドラッグは、ヒドロキシルを経て結合されたドキソルビシン、４′−エピドキソルビシン、４′−デオキシドキソルビシン、ダウノルビシン、またはイダルビシンである。
【請求項２】
Ｗが、フェニル基またはポリ置換されたフェニル基であり、
置換分Ｒが、独立してまたは全く同じにＨ、ニトロ、または塩素であり、
ｎが、１〜４であり、そして
Ｘ、Ｙ、グリコシル、およびドラッグが、請求項１において定義した通りである請求項１記載の化合物。
【請求項３】
Ｗが、フェニル基またはモノ置換されたフェニル基であり、
一つのＲは、ニトロ、または塩素であり、そして他が水素であり、そして
Ｘ、Ｙ、グリコシル、およびドラッグが、請求項１において定義した通りである請求項２記載の化合物。
【請求項４】
ドラッグが、ヒドロキシルを経て結合されたドキソルビシン、４′−エピドキソルビシン、または４′−デオキシドキソルビシンである請求項１記載の化合物。
【請求項５】
１４−Ｏ−〔４−（ベータ−Ｄ−グルクロニルオキシ）−３−ニトロベンジルアミノカルボニル〕ドキソルビシン。
【請求項６】
腫瘍、または炎症疾患の治療のための医薬であって、式Ｉ
グリコシル−Y-W(R)n-X-C(=Y)−ドラッグ (Ｉ)
〔式中、グリコシルは、アルファ−またはベータ−Ｏ−グリコシド的に結合したＤ−グルクロニル、Ｄ−グルコピラノシル、Ｄ−ガラクトピラノシル、Ｎ−アセチル−Ｄ−グルコサミニル、Ｎ−アセチル−Ｄ−ガラクトサミニル、Ｄ−マンノピラノシル、またはＬ−フコピラノシル基であり、
Ｗは、芳香族基であり、
置換分Ｒは、独立してまたは全く同じに、Ｈ、ニトロ、または塩素であり、
ｎは、整数であり、
Ｘは、ＮＨ、メチレンアミノまたはメチレン（Ｃ1〜Ｃ4）−アルキルアミノであり、
Ｙは、Ｏであり、そして
ドラッグは、ヒドロキシルを経て結合されたドキソルビシン、４′−エピドキソルビシン、４′−デオキシドキソルビシン、ダウノルビシン、またはイダルビシンである〕
の化合物を含有する医薬。
【請求項７】
ドラッグが、ヒドロキシルを経て結合されたドキソルビシン、４′−エピドキソルビシン、または４′−デオキシドキソルビシンである請求項６記載の医薬。
【請求項８】
Ｗは、フェニル基、またはポリ置換されたフェニル基であり、
置換分Ｒは、独立してまたは全く同じに、Ｈ、ニトロ、または塩素であり、
ｎが、１〜４であり、そして
Ｘ、Ｙ、グリコシルおよびドラッグが、請求項６において定義した通りである請求項６記載の医薬。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
本発明は、グリコシル−スペーサー−ドラッグ化合物（プロドラッグ）、該化合物の製法および医薬としての該化合物の使用に関するものである。
【０００２】
悪性腫瘍、炎症性疾患または自己免疫疾患の治療は、治療剤の不十分な効能のほかに、普通はげしい副作用と関係がある。この欠点は、主に、使用される薬剤の生体内選択性が余りに低いという事実により説明することができる。すなわち、多くの場合において、薬剤の試験管内の薬理学的性質の有利性は、生体内において確認することはできない。
【０００３】
広範囲にわたる成功はなかったけれども、研究者等は、長年この問題にかかわった。一つの研究方向は、生体内でプロドラッグに代謝されそして次にこのプロドラッグが酵素によって部位−特異的に開裂されて薬剤を与える物質の製造および使用に関するものである。すなわち、Sweeneyおよび共同研究者等（Cancer Research 31, 477-478、1971）は、動物の悪性腫瘍の治療に対して、生体内で不活性ミコフェノール酸グルクロニドに代謝されるミコフェノール酸を使用した。腫瘍生長に対して観察された作用は、該研究者等によって、腫瘍の細胞外、すなわち腫瘍細胞膜上に存在するグルクロニダーゼによるグルクロン酸の酵素的除去、次いで腫瘍細胞へのミコフェノール酸の吸収によるものであることが説明されている。同一の概念に基づく治療の試みが、Young等（Cancer 38, 1887-1895, 1976）によって、臨床試験でアニリンマスタードを使用して実施された。彼等は、腫瘍患者を処理し、患者の腫瘍をアニリンマスタードを使用して高いｐ−グルクロニダーゼレベルに対して試験した。彼等の仮説によれば、アニリンマスタードは、肝臓内でヒドロキシル化次いでグルクロニド化されそして腫瘍上においてｐ−グルクロニダーゼにより毒性のヒドロキシアニリンマスタードに開裂されるはずである。しかしながら、治療的結果は、むしろ失望させるものであった。
【０００４】
他の研究方向は、さらに一歩進んだものでありそして例えばアニリンマスタードメチルグルクロネートまたは６−メルカプトプリングルクロニドの化学的製造を伴うものであった。しかしながら、これらのプロドラッグは、生体内使用の点において有効である低度な無毒化を示すにすぎない。より有利な性質は、日本の研究グループからの５−フルオロウラシルＯ−Ｐ−Ｄ−グルクロニド（ＦＵＯＧ）または５−フルオロウラシルＮ−グルクロニド（ＦＵＮＧ）化合物により示される（Baba等、Gann, 69, 283-284、1978）。５−フルオロウラシルのグルクロニド化は、ＬＤ５０を５−ＦＵに対する２００mg／kgから相当するグルクロニドに対する５,０００mg／kgに増大する。しかしながら、明瞭な作用は、マウスの乳癌の処理においてＦＵＯＧを使用して１０回の静脈内投与およびグルコース酸性化後においてのみ得られた。しかしながら、処理は、腫瘍片の移植後２４時間のような早い時間に開始され、この時間においては、確実にまだ確立された腫瘍のことを言うことはできないということを強調しなければならない。おそらく、移植中の組織損傷に起因して、リソソームグルクロニダーゼが腫瘍中に放出されそしてグルコース処理と関連したpH減少と組み合わされて、生体内活性を招くものと思われる。しかしながら、臨床情況に対するこのモデルの適切性は疑わしい。現在まで治療剤がこれらの化合物から得られていない事実は、これらの化合物の生体内活性が低いことを示す。
【０００５】
カツエンレンボーゲン（Katzenellenbogen）研究グループ（WO81／01145）は、グルクロニル−ドラッグの代りにペプチド−スペーサー−ドラッグの合成からプロドラッグの活性度の改善を期待した。この場合に使用されるべく意図された活性酵素は、腫瘍−関連フイブリン溶解または凝結プロテアーゼ、例えばプラスミンまたはプラスミノゲン活性化剤である。生体内の薬理学的活性は、Journal of Medicinal Chemistry 24, 479-480（1981）におけるWO81／01145に記載されているドキソルビシン−またはアラビノシルシトシン−スペーサー−ペプチドにおいては示されないそしてこの薬理学的活性は試験管内ではプロテアーゼにより活性化することができる。これらの化合物の選択的生体内活性の欠乏は、ヒト体内における上述したプロテアーゼの遍在する細胞外の存在についての我々の現在の知識があれば、説明することができる。
【０００６】
グルコース酸性化との組み合わせにおいてさえも、グルクロン酸を含有するプロドラッグが非常にうまく使用されないことについての上記引用文献における多数の指摘にもかかわらず（Baba, T. 等、Gann 69, 283-284、1978）、Rubinは、１９８４年に米国特許（No. 4,481,195）を得、この特許において、腫瘍の酸性化および正常な組織のアルカリ化後のグルクロン酸−ドラッグ化合物の使用を提案している。臨床的な成功をもって使用することのできる治療剤は、まだこの発明から出現しないように思われる。
【０００７】
さらに、エステラーゼにより開裂できる酪酸プロドラッグが記載されている。しかしながら、生体内でプロドラッグから遊離された酪酸の治療作用は、標準の細胞増殖抑制剤（シスプラチン）より劣っている。
【０００８】
これまで説明した研究は、すべて、内因性の酵素によるプロドラッグの活性化に基づいている。しかしながら、この原理により達成できる生体内治療作用は、標準化学療法よりすぐれていることは思われない。
【０００９】
上述した研究方向（内因性酵素によるプロドラッグ活性化）とは別に、標的組織に外因性抗体−酵素接合体を前もって限局化（prelocalization）した後、標的組織においてプロドラッグを選択的に細胞毒性薬剤に開裂すべく試みた新しい研究方向が開発された（Philpott等、Surgery 74, 51, 1973；Cancer Res. 34, 2159, 1974）。Bagshawe（WO 88／07378）は、Philpottの研究を基にして、腫瘍の治療のためのプロドラッグと組み合わされた外因性抗体−酵素接合体の使用を提案した。Bagshaweは、抗体−酵素接合体として細菌カルボキシペプチダーゼＧ２に化学的に結合したマウスのモノクローナル抗体をそしてプロドラッグとしてグルタミルマスタードを使用した。Senter（USP 4,975,278）は、アルカリ性ホスファターゼまたはペニシリンＶアミダーゼに化学的に結合されたマウスのモノクローナル抗体からなる抗体−酵素接合体とエトポシドホスフェトおよびＮ−（ｐ−ヒドロキシフェノキシアセチル）アドリアマイシンまたはプロドラッグとの組み合わせを記載している。両者の系（BagshaweおよびSenter）は、使用される抗体−酵素接合体が外因性でありそしてその結果高度に免疫抗原性であるという不利点を有している。これは、多数の治療サイクルにおいて同じ患者に反復して使用することができる可能性はおそらくないことを意味する。さらに、Senter系は、ホスファターゼがヒトの血液中にかなりな量で存在し、プロドラッグの全身的活性化があるという不利点を有する。
【００１０】
これらの欠点の結果、Bosslet等（Br. J. Cancer 65, 234-238、1992）は、抗−ＣＥＡ抗体のヒトに適用できるＦ(ａｂ′)２フラグメントおよびヒトのｐ−グルクロニダーゼからなりそして酵素的に活性であり、腫瘍選択性を有し、グルクロニル−ドラッグ（Florent等, Int. Carbohydr. Symposium p. 297, Abstract A262, Paris, 1992；Gesson等, Int. Carbohydr. Symposium p. 298, Abstract A263, Paris, 1992；Andrianomenjanahary等, Int. Carbohydr. Symposium p. 299, Abstract A264, Paris, 1992）を開裂することができそして現時点の知識状態によれば殆ど免疫抗原性を有していない融合蛋白質（fusion protein）を製造した。
【００１１】
この融合蛋白質から最適に開裂されるべく企図された化合物の合成研究および生体内薬理学的試験中に、本発明者等は、意外にも、この融合蛋白質の前もっての投与なしに、炎症プロセスおよび自己免疫疾患において、顕著な割合の崩壊細胞を有する腫瘍において非常に効率的に開裂される物質を見出した。
【００１２】
この場合において、化合物は、健康な個人においては原則的に細胞の内側に存在するが、上述した病態生理学的条件下においては局所的な細胞外に存在する酵素によって活性化される。
【００１３】
これらの化合物は、一般式グリコシル−スペーサー−ドラッグ（グリコシル基およびスペーサーは、生理学的または病態生理学的条件下でドラッグを開裂することができる）を有している。これらの化合物の性質は、一般に、ポリ−、オリゴ−またはモノ−グリコシル基が酵素的加水分解により開裂されそしてそれからスペーサーが化学的加水分解的に自然に開裂されるような性質である。ドラッグ（薬剤）は、生物学的作用を有する化学物質、特に医薬ならびに追加的なヒドロキシル、アミノまたはイミノ基を導入することにより得られたその誘導体を意味する。
【００１４】
本発明は、この型の化合物および該化合物の使用に関するものである。
【００１５】
本発明は、特に式Ｉ
グリコシル−Y〔-C(=Y)-X-〕p-W(R)n-X-C(=Y)−ドラッグ    (Ｉ)
のグリコシル−スペーサードラッグに関するものである。
【００１６】
上記式において、
グリコシルは、酵素的に開裂できる多糖、オリゴ糖または単糖であり、
Ｗは、共役二重結合を有する芳香族またはヘテロ芳香族または脂肪族基または好ましくは５〜２０個の炭素原子および０〜４個のヘテロ原子（ヘテロ原子はＮ、ＯまたはＳを意味する）を有する、グリコシルの除去後環化する、アミノ酸誘導体基であり、該Ｗ基に対しては、置換分Ｒが結合していてもよく、
Ｒは、独立してまたは全く同じに、Ｈ、メチル、メトキシ、カルボキシル、メチルオキシカルボニル、ＣＮ、ヒドロキシル、ニトロ、弗素、塩素、臭素、スルホ、スルファモイルまたは（Ｃ1〜Ｃ4）−アルキルスルファモイルであり、
ｐは、０または１であり、
ｎは、整数であり、
Ｘは、Ｏ、ＮＨ、メチレンオキシ、メチレンアミノまたはメチレン（Ｃ1〜Ｃ4）−アルキルアミノであり、
Ｙは、ＯまたはＮＨであり、そして
【００１７】
ドラッグ（drug）は、ヒドロキシル、アミノまたはイミノ基を経て結合しそして生物学的作用を有する化合物、好ましくは医薬、特に好ましくは、ヒドロキシルを経て結合しているアントラサイクリン、またはｐ＝０である場合は、非−３′−アミノ基、好ましくはドキソルビシン、４′−エピドキソルビシン、４−または４′−デオキシドキソルビシン、または好ましくはエトポシド、Ｎ,Ｎ−ビス（２−クロロエチル）−４−ヒドロキシアニリン、４−ヒドロキシシクロホスファミド、ビンデシン、ビンブラスチン、ビンクリスチン、テルフェナジン、テルブタリン、フェノテロール、サルブタモール、ムスカリン、オキシフェンブタゾン、サリチル酸、ｐ−アミノサリチル酸、５−フルオロウラシル、５−フルオロシチジン、５−フルオロウリジン、Ｎ−{４−［Ｎ−（２,４−ジアミノプテリジン−６−イルメチル）−Ｎ−メチルアミノ］ベンゾイル}−Ｌ−グルタミン酸、ジクロフェナック、フルフェナム酸、４−メチルアミノフェナゾン、テオフィリン、ニフェジピン、マイトマイシンＣ、マイトキサントロン、カンプトテシン、ｍ−ＡＭＳＡ、パクリタキセル、ノコダゾール、コルヒシン、シクロホスファミド、ラチエルマイシン、シスプラチン、メルファラン、ブレオマイシン、ナイトロジエンマスタード、ホスホラミドマスタード、クエルセチン、ゲニスティン、Ｎ−［２−（２,５−ジヒドロキシフェニル）エテニル］メタンアミド、チルホスチン、ロヒッキン誘導体（(−)−シス−５,７−ジヒドロキシ−２−（２−クロロフェニル）−８−〔４−（３−ヒドロキシ−１−メチル）−ピペリジニル〕−４Ｈ−１−ベンゾピラン−４−オン；ＥＰ８９１１９７１０.５）、レチノイン酸、酪酸、ホルボールエステル、ＤＭＳＯ、アクラルビシン、プロゲステロン、ブセレリン、タモキシフェン、ミフェプリストン、オナプリストン、Ｎ−（４−アミノブチル）−５−クロロ−２−ナフタレンスルホンアミド、ピリジニルオキサゾール−２−オン、キノリル−オキサゾール−２−オン、イソキノリル−オキサゾール−２−オン、スタウロスポリン、エタノールアミン、ベラパミル、ホルスコリン、１,９−ジデオキシホルスコリン、キニン、キニジン、レセルピン、メチル１８−Ｏ−（３,５−ジメトキシ−４−ヒドロキシベンゾイル）レセルペート、ロニダミン、ブチオニン−スルホキシミン、ジエチルジチオカルバメート、シクロスポリンＡ、アザチオプリン、クロラムブシル、Ｎ−（４−トリフルオロメチルフェニル）−２−シアノ−３−ヒドロキシクロトンアミド（ＷＯ９１／１７７４８）、１５−デオキシスペルグアリン、ＦＫ５０６、イブプロフェン、インドメタシン、アスピリン、スルファサラジン、ペニシラミン、クロロキン、デキサメタゾン、プレドニソロン、リドカイン、プロパフェノン、プロカイン、メフェナム酸、パラセタモール、４−アミノフェナゾン、ムスコシン、オルシプレナリン、イソプレナリン、アミロリド、ｐ−ニトロフェニルグアニジノベンゾエートまたはさらに１個または２個以上のヒドロキシル、アミノまたはイミノ基により置換されたそれらの化合物の誘導体からなる群から選択された化合物である。
【００１８】
式Ｉの好ましい化合物は、
Ｗがフェニル基またはポリ置換されたフェニル基であり、
置換分Ｒが、独立してまたは全く同じに、Ｈ、メチル、メトキシ、カルボキシル、メチルオキシカルボニル、ＣＮ、ヒドロキシル、ニトロ、弗素、塩素、臭素、スルホ、スルファモイルまたは（Ｃ1〜Ｃ4）−アルキルスルファモイルであり、
ｐが０または１であり、
ｎが１〜４であり、
Ｘが、Ｏ、ＮＨ、メチレンオキシ、メチレンアミノまたはメチレン（Ｃ1〜Ｃ4）−アルキルアミノであり、
Ｙが、ＯまたはＮＨであり、そして
ドラッグが上述したような化合物である化合物である。
【００１９】
式Ｉの特に好ましい化合物は、
グリコシルが、多糖、オリゴ糖または単糖、特に、アルファ−またはベータ−Ｏ−グリコシド的に結合したＤ−グルクロニル、Ｄ−グルコピラノシル、Ｄ−ガラクトピラノシル、Ｎ−アセチル−Ｄ−グルコサミニル、Ｎ−アセチル−Ｄ−ガラクトサミニル、Ｄ−マンノピラノシルまたはＬ−フコピラノシル基であり、
Ｗが、フェニル基またはモノ置換されたフェニル基であり、
置換分Ｒの一つが、メトキシ、メチルオキシカルボニル、ＣＮ、ヒドロキシル、ニトロ、弗素、塩素、臭素、スルホまたはスルファモイルでありそして他のものが水素であり、
Ｘが、Ｏ、ＮＨ、メチレンオキシ、メチレンアミノまたはメチレン−メチルアミノであり、
Ｙが、ＯまたはＮＨであり、そして
ドラッグが上述したような化合物である化合物である。
【００２０】
本発明の好ましい実施化は、次の化合物である：
グリコシル基が酵素的加水分解により開裂できるものであり、スペーサーが化学的加水分解により自然に開裂できるものであり、ドラッグが医薬または追加的なヒドロキシル、アミノまたはイミノ基を導入することにより得られたドラッグそれ自体よりもより親水性でありそして生体内でドラッグそれ自体より低い毒性反応を与える該医薬の誘導体の１種であり、ドラッグが薬理学的に活性な物質であり、ドラッグが追加的に１個または２個以上のヒドロキシル、アミノまたはイミノ基により置換されそして腫瘍生長を減速するものであり、ドラッグが標準の細胞増殖抑制剤であり、ドラッグが代謝拮抗物質であり、ドラッグが５−フルオロウラシル、５−フルオロシチジン、５−フルオロウリジン、シトシン、アラビノシドまたはＮ−{４−［Ｎ−（２,４−ジアミノプテリジン−６−イルメチル）−Ｎ−メチルアミノ］ベンゾイル}−Ｌ−グルタミン酸であり、ドラッグがＤＮＡに介在する物質であり、ドラッグがドキソルビシン、ダウノルビジン、イダルビシン、エピルビシンまたはミトキサントロンであり、ドラッグがトポイソメラーゼＩ＋IIを阻害するものであり、ドラッグがカンプトテシン、エトポシドまたはＭ−ＡＭＳＡであり、ドラッグがタブリン阻害剤であり、ドラッグがビンクリスチン、ビンブラスチン、ビンデシン、パクリタキセル、ノコダゾール、コルヒシンまたはエトポシドであり、ドラッグがアルキル化剤であり、ドラッグがシクロホスファミド、ミトマイシンＣ、ラチエルマイシン、シスプラチン、ホスホラミド、マスタード、メルファラン、ブレオマイシン、ナイドロジエンマスタードまたはＮ,Ｎ−ビス（２−クロロエチル）−４−ヒドロキシアニリンであり、ドラッグがネオカルシノスタチン、カリチエアミシン、ダイネミシンまたはエスペラミシンＡであり、ドラッグがリボソームを不活性化する化合物であり、ドラッグがベルカリンＡであり、ドラッグがチロシンホスホキナーゼ阻害剤であり、ドラッグがクエルセチン、ゲニスティン、Ｎ−［２−（２,５−ジヒドロキシフェニル）エテニル］メタンアミド、チルホスチンまたはロヒッキン誘導体であり、ドラッグが分化誘導剤（differentiation inducer）であり、ドラッグがレチン酸、酪酸、ホルボールエステル、ＤＭＳＯまたはアクラルビシンであり、ドラッグがホルモン、ホルモンアゴニストまたはホルモンアンタゴニストであり、ドラッグがプロゲステロン、ブセレリン、タモキシフェン、ミフェプリストンまたはオナプリストンであり、ドラッグが細胞増殖抑制剤に対する多面発現抵抗性を変化する物質であり、ドラッグがカルモジュリン阻害剤であり、ドラッグがプロタインキナーゼＣ阻害剤であり、ドラッグがｐ−グリコプロタイン阻害剤であり、ドラッグがミトコンドリア的に結合するヘキソキナーゼの調節剤であり、ドラッグがｐ−グルタミルシステインシンセターゼまたはグルタチオンＳ−トランスフェラーゼの阻害剤であり、ドラッグがスーパーオキシドジスムターゼの阻害剤であり、ドラッグが分裂する細胞の細胞核中のＭＡｂ Ｋｉ６７により定義される増殖−関連蛋白質の阻害剤であり、ドラッグが免疫抑制作用を有する物質であり、ドラッグが標準の免疫抑制剤であり、ドラッグがマクロライドであり、ドラッグがシクロ��ポリンＡ、ラパマイシン、ＦＫ５０６であり、ドラッグがアザチオプリン、Ｎ−{４−［Ｎ−（２,４−ジアミノプテリジン−６−イルメチル）−Ｎ−メチルアミノ］ベンゾイル−Ｌ−グルタミン酸、シクロホスファミドまたはコラムブシルであり、ドラッグが抗炎症作用を有する物質であり、ドラッグが非ステロイド性抗炎症物質であり、ドラッグが徐々に作用する抗リウマチ性薬剤であり、ドラッグがステロイドであり、ドラッグが抗炎症作用、鎮痛作用または解熱作用を有する物質であり、ドラッグが有機酸の誘導体であり、ドラッグが非酸性の鎮痛剤／抗炎症剤であり、ドラッグがオキシフェンブタゾンであり、ドラッグが局所麻酔薬であり、ドラッグが抗不整脈剤であり、ドラッグがＣａ++アンタゴニストであり、ドラッグが抗ヒスタミン剤であり、ドラッグがホスホジエステラーゼの阻害剤であり、ドラッグが副交感神経作動剤であり、ドラッグが交感神経作動剤であり、ドラッグがヒトウロキナーゼに対する阻害作用を有する物質である化合物；およびさらに、
【００２１】
グルコシル基がアルファ−またはベータ−Ｏ−グリコシド的に結合したＤ−グルクロニル、Ｄ−グルコピラノシル、Ｄ−ガラクトピラノシル、Ｎ−アセチル−Ｄ−グルコサミニル、Ｎ−アセチル−Ｄ−ガラクトサミニル、Ｄ−マンノピラノシルまたはＬ−フコピラノシル基である化合物、または
４′−Ｏ−〔４−（アルファ−Ｄ−グルコピラノシルオキシ）フェニルアミノカルボニル〕エトポシド、
４′−Ｏ−〔４−（ベータ−Ｄ−グルコピラノシルオキシ）フェニルアミノカルボニル〕エトポシド、
４′−Ｏ−〔４−（アルファ−Ｄ−ガラクトピラノシルオキシ）フェニルアミノカルボニル〕エトポシド、
４′−Ｏ−〔４−（ベータ−Ｄ−グルクロニルオキシ）フェニルアミノカルボニル〕エトポシド、
４′−Ｏ−〔４−（ベータ−Ｄ−グルクロニルオキシ）−３−ニトロベンジルアミノカルボニル〕エトポシド、
４′−Ｏ−〔４−（ベータ−Ｄ−グルクロニルオキシ）−３−クロロベンジルアミノカルボニル〕エトポシド、
【００２２】
１−Ｎ−〔４−（ベータ−Ｄ−グルクロニルオキシ）ベンジルオキシカルボニル〕ミトマイシンＣ、
１４−Ｏ−〔４−（ベータ−Ｄ−グルクロニルオキシ）−３−ニトロベンジルアミノカルボニル〕ドキソルビシン、
４−Ｏ−〔４−（ベータ−Ｄ−グルクロニルオキシ）ベンジルアミノカルボニル〕−４−ヒドロキシ−Ｎ,Ｎ−ビス（２−クロロエチル）アニリン、
４−Ｏ−〔４−（ベータ−Ｄ−グルクロニルオキシ）ベンジルアミノカルボニル〕テルフェナジン、
３′−Ｏ−〔４−（ベータ−Ｄ−グルクロニルオキシ）ベンジルアミノカルボニル〕テルブタリン、
３′−Ｏ−〔４−ベータ−Ｄ−グルクロニルオキシ）ベンジルアミノカルボニル〕フェノテロール、
１″−Ｏ−〔４−（ベータ−Ｄ−グルクロニルオキシ）ベンジルアミノカルボニル〕サルブタモール、
３−Ｏ−〔４−（ベータ−Ｄ−グルクロニルオキシ）ベンジルアミノカルボニル〕ムスカリン、
４′−Ｏ−〔４−（ベータ−Ｄ−グルクロニルオキシ）ベンジルアミノカルボニル〕オキシフェンブタゾン、
【００２３】
２−Ｏ−〔４−（ベータ−Ｄ−グルクロニルオキシ）ベンジルアミノカルボニル〕サリチル酸、
Ｎ−〔４−（ベータ−Ｄ−グルクロニルオキシ）ベンジルオキシカルボニル〕ジクロフェナック、
Ｎ−〔４−（ベータ−Ｄ−グルクロニルオキシ）ベンジルオキシカルボニル〕フルフェナム酸、
４−Ｎ−〔４−（ベータ−Ｄ−グルクロニルオキシ）ベンジルオキシカルボニル〕−４−メチルアミノフェナゾン、
７−Ｎ−〔４−（ベータ−Ｄ−グルクロニルオキシ）ベンジルオキシカルボニル〕テオフィリン、
１−Ｎ−〔４−ベータ−Ｄ−グルクロニルオキシ）ベンジルオキシカルボニル〕ニフェジピン、
４−（β−Ｄ−グルクロニルオキシ）−３−ニトロベンジル２−〔１−シアノ−１−（Ｎ−４−トリフルオロメチルフェニル）カルバモイル〕プロペン−１−イルカーボネート、
３′−Ｎ−〔４−（アルファ−Ｄ−ガラクトシルオキシカルボニル）−４−アミノベンジルオキシカルボニル〕ドキソルビシン、
９−Ｏ−〔４−（ベータ−Ｄ−グルクロニルオキシ）−３−クロロベンジルオキシカルボニル〕キニン、または
メチル１８−Ｏ−〔３,５−ジメトキシ−４−〔４−（ベータ−Ｄ−グルクロニルオキシ）−３−クロロベンジルオキシカルボニル〕ベンゾイル〕レセルペート。
【００２４】
これらの化合物は、適当な医薬組成物（presentation）（例えばリポソームまたは担体としてヒト蛋白質を使用）に変換しそして医薬として使用することができる。
【００２５】
本発明はまた、式Ｉの化合物を製造する方法に関するものでありそして該方法は、Andrianomenjanahary等（Int. Carbohydr. Symposium, p. 299, Abstract A264, Palis, 1992）により記載されているようにして製造された式II
グリコシル−Y〔-C(=Y)-X-〕p-W(R)n-X-C(=Y)−Ｚ    (II)
〔式中、
グリコシルは、ヒドロキシル基が遊離であるかまたはアセチルまたはモノ−、ジ−またはトリハロアセチル保護基（ハロゲンは弗素または塩素である）またはベンジル保護基により保護されている多糖、オリゴ糖または単糖であり、
Ｗは、共役二重結合を有している芳香族、ヘテロ芳香族または脂肪族基または、好ましくは５〜２０個の炭素原子および０〜４個のヘテロ原子（ヘテロ原子は、Ｎ、Ｏ、またはＳを意味する）を有する、グリコシル基の除去後環化するアミノ酸誘導体基であり、そして置換分Ｒが結合していてもよく、
Ｒは、独立してまたは全く同じに、Ｈ、メチル、メトキシ、カルボキシル、メチルオキシカルボニル、ＣＮ、ヒドロキシル、ニトロ、弗素、塩素、臭素、スルホ、スルファモイルまたは（Ｃ1〜Ｃ4）−アルキルスルファモイルであり、
【００２６】
ｐは、０または１であり、
ｎは、整数であり、
Ｘは、Ｏ、ＮＨ、メチレンオキシ、メチレンアミノまたはメチレン（Ｃ1〜Ｃ4）−アルキルアミノであり、
Ｙは、ＯまたはＮＨであり、そして
Ｚはクロライド、ブロマイド、アジドまたはＮ−サクシンイミドオキシからなる群から選択された反応性の除去基である〕のフェニルグリコシドを、トリエチルアミン、ジイソプロピルエチルアミンまたはジメチルアミノピリジンからなる群から選択された有機塩基およびアセトニトリル、ジオキサン、テトラヒドロフラン、ジクロロメタンまたはジクロロエタンからなる群から選択された溶剤の存在下において、好ましくは上述したようなドラッグ（薬剤）と、反応性ヒドロキシル、アミノ基またはイミノ基を経て反応させて保護された中間体化合物を得そして次にメタノール、エタノールまたは水の存在下において、アルカリ金属水酸化物溶液による加水分解、アルカリ金属炭酸塩、アルカリ金属シアン化物、酸化バリウム、ピペリジンまたはモルホリンにより保護基を除去して、式Ｉの化合物を得ることからなる。
【００２７】
本発明によるグリコシル−スペーサー−ドラッグ化合物（以下プロドラッグと称す）の薬理学的活性は、適切な動物実験系において生体内的に試験される。腫瘍学的適用に対して選択されたモデルは、ヒト腫瘍を皮下的にヌードマウスに移植しそして腫瘍の確立後本発明によるプロドラッグを静脈内投与する方法である。
【００２８】
結果（表とともに実施例２６〜２８）は、有意な割合の崩壊腫瘍細胞を有する腫瘍に対して、本発明によるプロドラッグは、薬剤の最高の許容投与量を使用して実施した標準化学療法よりもかなりより有効であることを示す。この点に関して、腫瘍細胞の有意割合の崩壊が腫瘍の大きさおよび腫瘍の一部の不完全な栄養〔中心壊死（central necrosis）〕により行われるかまたは処理工程において外因的に投与される物質（免疫毒素、照射、抗体−酵素接合体のすぐれた実施化としての融合蛋白質、結合領域（binding region）およびＤＮＡｓｅ １、例えばｓｃＦＶＤＮＡｓｅｌからなる融合蛋白質、細胞増殖抑制剤など）により誘発されるかどうかは、重要なことではない。上述した処理工程は、前もって使用されるか、平行して行われるかまたは後で使用される。
【００２９】
本発明によるプロドラッグのすぐれた薬理学的活性は、次の性質から理解される。
【００３０】
（ａ）  プロドラッグは、プロドラッグに含有されている標準薬剤よりも生体内において有意に（＞７０×）低毒性である。
【００３１】
（ｂ）  活性化の部位（腫瘍）において生体内でプロドラッグから遊離される細胞毒性薬剤の量は、上記実験条件下において、標準静脈内治療により腫瘍において達成することのできる薬剤の量より５〜５０×高い。
【００３２】
（ｃ）  正常な組織中におけるプロドラッグから非−特異的に遊離される薬剤の量、または腫瘍において発生した薬剤からの潜在的移行により生ずる正常な組織における薬剤濃度は、標準薬剤の静脈内投与後に到達する正常な組織における薬剤の濃度よりも著しく低い。この観察は、薬剤に比較してプロドラッグを使用するときは生体内毒性が激烈的に低下されることを証明するデータ（ａ）を支持する。
【００３３】
これらの観察は、本発明によるプロドラッグは、主として生体内において細胞外分布を与える十分な親水性を有しているという結論を与える。
【００３４】
本発明によるプロドラッグのグリコシル部分は、局所的に病態生理学的条件下放出される酵素によってのみ開裂することができるように選択されるので、親油性薬剤も同様に標的組織においてのみ遊離しそしてそこにおいて細胞毒性作用を示すことができる。
【００３５】
細胞毒性薬剤成分を有する本発明によるプロドラッグのすぐれた作用は、それを異なる細胞毒性薬剤成分を有する本発明によるプロドラッグと組み合わせることにより増大することができる。この場合においては、有利なプロドラッグ組み合わせは、活性機構が使用される細胞毒性成分において異なっている、多化学療法に相当するものである。特に、カリチエアミシンのような非常に効率的にＤＮＡにおける単一ストランドまたは二重ストランド破壊を起こす薬剤を使用することが適当であると思われる。しかしながら、特に有利である本発明によるプロドラッグ組み合わせは、一方の薬剤が細胞毒性能を有しているが他方の薬剤が例えば多剤耐性をブロックするものである組み合わせである。この点に関して特に適しているものは、薬剤成分が、チロシンホスホキナーゼを阻害することにより、分化を誘発することにより、ホルモン性またはホルモン−拮抗作用を示すことにより、カルモジュリン阻害剤により、プロタインキナーゼＣ阻害剤により、ｐ−グリコプロタイン阻害剤により、イオンチャンネルブロッカーにより、ミトコンドリアルヘキソキナーゼを阻害することによりまたはガンマ−グルタミルシスティンシンセターゼ、グルタチオンＳトランスフェラーゼおよびスーパーオキシドジスムターゼを阻害することにより多剤耐性に影響を与える本発明によるプロドラッグである。腫瘍生長に影響を与える他の重要な薬剤は、Gerdes等（Amer. J. Pathol. 138, 867-873, 1991）により記載されている増殖−誘発蛋白質を機能的にブロックする化合物である。特に、本発明によるグリコシル−スペーサー−ドラッグ化合物の薬剤成分として、それは、局所酵素活性化後、特にこれらの薬剤の効率を選択的に利用することができるものであらねばならない。
【００３６】
特に有利な治療作用は、例えばグルクロニル−スペーサー−キニンプロドラッグを、グルクロニル−スペーサー−ドキソルビシンプロドラッグと組み合わせて使用する場合に得られる（表２参照）。分析的な調査は、この型の組み合わせにおいては、普通の細胞増殖抑制治療と比較したときの細胞増殖抑制薬剤濃度におけるように、腫瘍におけるキニン濃度は普通のキニン処理に比較して同様に大なる程度に増加されることを示す。
本発明のプロドラッグは、多剤耐性を打破する化合物と組み合わされてもよい。そのような化合物は、好ましくは、シクロスポリンＡ、Ｒ−ベラパミル、ペントキシフィリンおよびラパマイシンである。
【００３７】
次の動物実験系を、非腫瘍学的疾患に適した本発明によるプロドラッグの薬理学的試験に対して選択した。
【００３８】
（ａ）マウスにおける肉芽腫のうモデル
Bottomley等、Brit. J. Pharmacol. 93, 627-635（1988）
（ｂ）ラットにおけるアジュバント関節炎
Schorlemmer等、Exptl. Clin. Res. XVII(10／11）471-483（1991）
（ｃ）マウスにおけるＤＴＨモデル
Dickneite等、Inject. Immun. 44(1), 168-174（1984）
（ｄ）マウスにおけるデキストランサルフェートにより誘発された結腸炎
Okayasu等、Gastroenterology 98, 694-702（1990）
（ｅ）ＥＡＥモデル
Schorlemmer等、Drugs Exptl. Clin. Res. XVII(10／11)461-469(1991)
（ｆ）ＭＲＬ−１モデル
Schorlemmer等、Int. J. Immunother. VII(4), 169-180（1991）。
【００３９】
特に、実施例８および２２に詳細に記載したプロドラッグ化合物８または２３の活性をこれらのモデルにおいて検査した。活性物質（レフルノミド）それ自体と比較したプロドラッグ２２のすぐれた活性は、特にアジュバント関節炎およびＥＡＥに対して見出された。標準治療と比較したプロドラッグ８のすぐれた活性は、ＤＴＨに対して見出された。腫瘍学的適用における上述した検査と同様な方法において、すぐれた活性は、特に滑液（アジュバント関節炎）中の薬剤の高濃度に関係した。
【００４０】
上述した非腫瘍学的モデルにおけるこれらの観察は、本発明によるプロドラッグが一般的な利用性を有していることを示唆する。適当な薬剤成分は、治療的使用が不快な副作用と関連するかまたは有効な濃度が生体内で限界的に達するすべての物質である。これらは、実施例２２からの免疫抑制活性物質以外の、他の免疫抑制剤（アザチオプリン、Ｎ−{４−［Ｎ−（２,４−ジアミノプテリジン−６−イルメチル）−Ｎ−メチルアミノ］ベンゾイル}−Ｌ−グルタミン酸、シクロホスファミド、クロラムブシル、１５−デオキシスペルグアリン、シクロスポリンＡ、ＦＫ５０６など）、非ステロイド性抗炎症薬剤（ＮＳＡＩＤ；例：イブプロフェン、インドメタシン、アスピリンなど）、徐々に作用する抗リウマチ薬剤（ＳＡＡＲＤ；例：スルファサラジン、ペニシラミン、クロロキン）およびステロイド（例：デキサメタゾン、プレドニソロンなど）を包含する。さらに、本発明によるプロドラッグ中の薬剤成分として適当なものは、以下の実施例により説明される抗炎症作用、鎮痛作用および解熱作用を有する物質である。
【００４１】
抗炎症作用、鎮痛作用および解熱作用を有する物質の例：
１．次の有機酸の誘導体
サリチル酸
ｐ−アミノサリチル酸
ジクロフェナック
フルフェナム酸
メフェナム酸
２．非−酸鎮痛／抗炎症剤
パラセタモール
ピラゾロン誘導体（例えば、４−アミノフェナゾン；４−メチルアミノフェ
ナゾン）
３．オキシフェンブタゾン。
【００４２】
本発明によるプロドラッグの成分として適している他の薬剤は、Ｃａ++アンタゴニスト（例：ニフェジピン、適用：炎症疾患）、抗ヒスタミン（例：テルフェナジン、適用：アレルギー、ぜんそく、炎症疾患）、ホスホジエステラーゼの阻害剤（例：テオフィリン、適用：ぜんそく、アレルギー、炎症疾患）、副交感神経作動薬（例：ムスカリン、適用：自己免疫疾患）および交感神経作動薬（例：テルブタリン、フェノテロール、サルブタモール、オルシプレナリン、イソプレナリン、適用：ぜんそく）である。本発明によるプロドラッグに対する薬剤として特に適した物質の級は、好ましくは将来炎症疾患の治療に対してプロドラッグ形態で使用する可能性のある合成ウロキナーゼ阻害剤（例えばｐ−ニトロフェニルグアニジノベンゾエート、アミロリドなど）によって示される。
【００４３】
要約すると、上述した薬剤および本発明によりそれから製造することのできるプロドラッグは、単に例を示したにすぎないことは再び強調しなければならない。本発明によるプロドラッグは、特に活性化状態でマクロファージ、顆粒球および血小板が存在するすべての非−腫瘍学的疾患に対して使用することができる。活性化された状態で、上述した細胞は、主として、本発明によるプロドラッグの部位−特異的活性化を可能にする細胞内酵素を分泌する。
【００４４】
腫瘍学的適用において、本発明によるプロドラッグの活性化は、腫瘍細胞から放出される細胞内酵素によって行われる。この現像は、特に大きな腫瘍（＞０.３cm）の場合そしてまた免疫毒素、細胞増殖抑制剤、照射、融合蛋白質、抗体−酵素接合体による処理による腫瘍に対する損傷後にも起こる。さらに、腫瘍中に存在する活性化細胞（特にマクロファージ、顆粒球など）からのプロドラッグ活性化に対する寄与を除外することはできない。
【００４５】
以下の実施例は、さらに本発明を説明するために示す。
実施例１
４′−Ｏ−〔４−（アルファ−Ｄ−グルコピラノシルオキシ）フェニルアミノカルボニル〕エトポシド（化合物１）
２″,３″−ジ−Ｏ−クロルアセチルエトポシド５００mg（０.６８ミリモル）を、ＤＭＦ ５０mlに溶解しそして室温で、ジイソプロピルエチルアミン０.３４ml（３当量）およびジホスゲン０.１２ml（１.５当量）を加える。反応混合物を、２時間撹拌しそして次にＤＭＦ ５０mlに溶解したジイソプロピルエチルアミン０.２２mlおよび４−（アルファ−Ｄ−グルコピラノシルオキシ）アニリン２５０mg（０.９ミリモル）を加える。反応混合物を室温で１４時間撹拌し、それから酢酸エチルを加えそして混合物をクエン酸塩緩衝液（pH５）で３回洗浄する。有機相を硫酸ナトリウム上で乾燥しそして真空中で蒸発する。残留物を、クロロホルムおよびメタノール（６：１）を使用してシリカゲル（５０ｇ）上でカラムクロマトグラフィー処理することにより精製する。４′−Ｏ−〔４−（アルファ−Ｄ−グルコピラノシルオキシ）フェニルアミノカルボニル〕−２″,３″−ジ−Ｏ−クロロアセチルエトポシド４３８mgを得た。薄層クロマトグラフィーによる分析：Ｒｆ＝クロロホルムおよびメタノール（３：１）中０.６。
【００４６】
得られた接合体（４００mg）を、メタノール８０mlに溶解しそしてドウエックス１×８イオン交換体３.０ｇを加える。反応混合物を室温で４時間撹拌しそして樹脂を濾去しそして洗浄する。濾液を、真空中で蒸発する。残留物を、クロロホルム、メタノールおよび氷酢酸（５：２：２）を使用してシリカゲル（５０ｇ）上で精製する。標記化合物２５６mgを得た。薄層クロマトグラフィーによる分析：Ｒｆ＝クロロホルム、メタノールおよび氷酢酸（５：２：２）中０.４６。
【００４７】
実施例２
４′−Ｏ−〔４−（ベータ−Ｄ−グルコピラノシルオキシ）フェニルアミノカルボニル〕エトポシド（化合物２）
２″,３″−ジ−Ｏ−クロルアセチルエトポシド５００mg（０.６８ミリモル）を、ＤＭＦ ５０mlに溶解しそして室温で、ジイソプロピルエチルアミン０.３４ml（３当量）およびジホスゲン０.１２ml（１.５当量）を加える。反応混合物を２時間撹拌しそして次にＤＭＦ ５０mlに溶解したジイソプロピルエチルアミン０.２２mlおよび４−（ベータ−Ｄ−グルコピラノシルオキシ）アニリン２５０mg（０.９ミリモル）を加える。反応混合物を室温で１４時間撹拌し、それから酢酸エチルを加えそして混合物をクエン酸塩緩衝液（pH５）で３回洗浄する。有機相を硫酸ナトリウム上で乾燥しそして真空中で蒸発する。残留物を、クロロホルムおよびメタノール（６：１）を使用してシリカゲル（５０ｇ）上でカラムクロマトグラフィー処理することにより精製する。４′−Ｏ−〔４−（ベータ−Ｄ−グルコピラノシルオキシ）フェニルアミノカルボニル〕−２″,３″−Ｏ−クロロアセチルエトポシド４５０mgを得た。薄層クロマトグラフィーによる分析：Ｒｆ＝クロロホルムおよびメタノール（３：１）中０.５６。
【００４８】
得られた接合体（４００mg）を、実施例１に記載したようにドウエックス１×８イオン交換体３.０ｇを使用してメタノール８０ml中で脱ブロックする。標記化合物２７０mgを得た。薄層クロマトグラフィーによる分析：Ｒｆ＝クロロホルム、メタノールおよび氷酢酸中０.４４。
【００４９】
実施例３
４′−Ｏ−〔４−（アルファ−Ｄ−ガラクトピラノシルオキシ）フェニルアミノカルボニル〕エトポシド（化合物３）
２″,３″−ジ−Ｏ−クロルアセチルエトポシド５００mg（０.６８ミリモル）を、ＤＭＦ ５０mlに溶解しそして室温で、ジイソプロピルエチルアミン０.３４ml（３当量）およびジホスゲン０.１２ml（１.５当量）を加える。反応混合物を２時間撹拌しそして次にＤＭＦ ５０mlに溶解したジイソプロピルエチルアミン０.２２mlおよび４−（アルファ−Ｄ−ガラクトピラノシルオキシ）アニリン２５０mg（０.９ミリモル）を加える。反応混合物を室温で１４時間撹拌し、それから酢酸エチルを加えそして混合物をクエン酸塩緩衝液（pH５）で３回洗浄する。有機相を硫酸ナトリウム上で乾燥しそして真空中で蒸発する。残留物を、クロロホルムおよびメタノール（６：１）を使用してシリカゲル（５０ｇ）上でカラムクロマトグラフィー処理することにより精製する。４′−Ｏ−〔４−（アルファ−Ｄ−ガラクトピラノシルオキシ）フェニルアミノカルボニル〕−２″,３″−Ｏ−クロロアセチルエトポシド４６０mgを得た。薄層クロマトグラフィーによる分析：Ｒｆ＝クロロホルムおよびメタノール（３：１）中０.４６。
【００５０】
得られた接合体（４２０mg）を、実施例１に記載したようにドウエックス１×８イオン交換体３.０ｇを使用してメタノール８０ml中で脱ブロックする。標記化合物２５０mgを得た。薄層クロマトグラフィーによる分析：Ｒｆ＝クロロホルム、メタノールおよび氷酢酸（５：２：２）中０.４１。
【００５１】
実施例４
４′−Ｏ−〔４−（ベータ−Ｄ−グルクロニルオキシ）フェニルアミノカルボニル〕エトポシド（化合物４）
２″,３″−ジ−Ｏ−クロルアセチルエトポシド５００mg（０.６８ミリモル）を、ＤＭＦ ５０mlに溶解しそして室温で、ジイソプロピルエチルアミン０.３４ml（３当量）およびジホスゲン０.１２ml（１.５当量）を加える。反応混合物を２時間撹拌しそしてそれから、ＤＭＦ ５０mlに溶解したジイソプロピルエチルアミン０.２２mlおよび４−（６−Ｏ−メチル−ベータ−Ｄ−グルクロニルオキシ）アニリン２５０mg（０.８６ミリモル）を加える。反応混合物を、室温で１４時間撹拌し、それから酢酸エチルを加えそして混合物をクエン酸塩緩衝液（pH５）で３回洗浄する。有機相を硫酸ナトリウム上で乾燥しそして真空中で蒸発する。残留物を、クロロホルムおよびメタノール（６：１）を使用してシリカゲル（５０ｇ）上でカラムクロマトグラフィー処理することにより精製する。４′−Ｏ−〔４−（６−Ｏ−メチル−ベータ−Ｄ−グルクロニルオキシ）フェニルアミノカルボニル〕−２″,３″−ジ−Ｏ−クロロアセチルエトポシド４６０mgを得た。薄層クロマトグラフィーによる分析：Ｒｆ＝クロロホルムおよびメタノール（３：１）中０.６３。
【００５２】
得られた接合体（４００mg）を、酸化バリウム２.０ｇを使用してメタノール８０ml中で脱ブロックする。標記化合物２８０mgを得た。薄層クロマトグラフィーによる分析：Ｒｆ＝クロロホルム、メタノールおよび氷酢酸（５：２：２）中０.２４。
【００５３】
実施例５
４′−Ｏ−〔４−（ベータ−Ｄ−グルクロニルオキシ）−３−ニトロベンジルアミノカルボニル〕エトポシド（化合物５）
２″,３″−ジ−Ｏ−クロルアセチルエトポシド５００mg（０.６８ミリモル）を、ＤＭＦ ５０mlに溶解しそして室温で、ジイソプロピルエチルアミン０.３４ml（３当量）およびジホスゲン０.１２ml（１.５当量）を加える。反応混合物を２時間撹拌しそしてそれから、ＤＭＦ ５０mlに溶解したジイソプロピルエチルアミン０.２２mlおよび４−（６−Ｏ−メチル−ベータ−Ｄ−グルクロニルオキシ）−３−ニトロベンジルアミン２５０mg（０.８０ミリモル）を加える。反応混合物を室温で１４時間撹拌し、それから酢酸エチルを加えそして混合物をクエン酸緩衝液（pH５）で３回洗浄する。有機相を硫酸ナトリウム上で乾燥しそして真空中で蒸発する。残留物を、クロロホルムおよびメタノール（６：１）を使用してシリカゲル（５０ｇ）上でカラムクロマトグラフィー処理することにより精製する。４′−Ｏ−〔４−（６−Ｏ−メチル−ベータ−Ｄ−グルクロニルオキシ）−３−ニトロベンジルアミノカルボニル〕−２″,３″−ジ−Ｏ−クロロアセチルエトポシド４５６mgを得た。薄層クロマトグラフィーによる分析：Ｒｆ＝クロロホルムおよびメタノール（３：１）中０.６４。
【００５４】
得られた接合体（４００mg）を、酸化バリウム２.０ｇを使用してメタノール８０ml中で脱ブロックする。標記化合物３２０mgを得た。薄層クロマトグラフィーによる分析：Ｒｆ＝クロロホルム、メタノールおよび氷酢酸（５：２：２）中０.２７。
【００５５】
実施例６
４′−Ｏ−〔４−（ベータ−Ｄ−グルクロニルオキシ）−３−クロロベンジルアミノカルボニル〕エトポシド（化合物６）
２″,３″−ジ−Ｏ−クロルアセチルエトポシド５００mg（０.６８ミリモル）を、ＤＭＦ ５０mlに溶解しそして室温で、ジイソプロピルエチルアミン０.３４ml（３当量）およびジホスゲン０.１２ml（１.５当量）を加える。反応混合物を２時間撹拌しそしてそれから、ＤＭＦ ５０mlに溶解したジイソプロピルエチルアミン０.２２mlおよび４−（６−Ｏ−メチル−ベータ−Ｄ−グルクロニルオキシ）−３−クロロベンジルアミン２５０mg（０.８０ミリモル）を加える。反応混合物を室温で１４時間撹拌し、それから酢酸エチルを加えそして混合物をクエン酸塩緩衝液（pH５）で３回洗浄する。有機相を硫酸ナトリウム上で乾燥しそして真空中で蒸発する。残留物を、クロロホルムおよびメタノール（６：１）を使用してシリカゲル（５０ｇ）上でカラムクロマトグラフィー処理することにより精製する。４′−Ｏ−〔４−（６−Ｏ−メチル−ベータ−Ｄ−グルクロニルオキシ）−３−クロロベンジルアミノカルボニル〕−２″,３″−ジ−Ｏ−クロロアセチルエトポシド４３０mgを得た。薄層クロマトグラフィーによる分析：Ｒｆ＝クロロホルムおよびメタノール（３：１）中０.６８。
【００５６】
得られた接合体（４００mg）を、酸化バリウム２.０ｇを使用してメタノール８０ml中で脱ブロックする。薄層クロマトグラフィーによる分析：Ｒｆ＝クロロホルム、メタノールおよび氷酢酸（５：２：２）中０.２９。
【００５７】
実施例７
１−Ｎ−〔４−（ベータ−Ｄ−グルクロニルオキシ）ベンジルオキシカルボニル〕ミトマイシンＣ（化合物７）
４−（６−メチル−２,３,４−トリ−Ｏ−アセチル−ベータ−Ｄ−グルクロニルオキシ）ベンジルアルコール５００mg（１.１３ミリモル）を、トルエン２０mlに溶解しそしてジイソプロピルエチルアミン４４０mg（３当量）およびジホスゲン３１５mg（１.５当量）を加える。混合物を室温で１時間撹拌する。次にＤＭＦ ５０mlに溶解したミトマイシンＣ ６８０mg（１.８当量）およびジイソプロピルエチルアミン２９０mg（２当量）を加える。反応混合物を１４時間撹拌し、それから酢酸エチルを加えそして混合物をクエン酸塩緩衝液で洗浄する。有機相を硫酸ナトリウム上で乾燥しそして真空中で蒸発する。粗収量：６５１mg（７２％）。接合体（６００mg）を、クロロホルムおよびメタノール（２：１）３０mlに溶解しそして酸化バリウム２５０mgを加える。４時間撹拌した後、混合物を濾過しそして濾液を蒸発する。残留物を、メタノールおよび水を使用してセファデックス上でカラムクロマトグラフィー処理することにより精製する。標記化合物の収量：３３５mg（７５％）。
【００５８】
実施例８
１４−Ｏ−〔４−（ベータ−Ｄ−グルクロニルオキシ）−３−ニトロベンジルアミノカルボニル〕ドキソルビシン（化合物８）
３′−Ｎ−フルオレニルメチルオキシカルボニルドキソルビシン４００mg（０.５２ミリモル）を、トルエン２０mlに溶解しそしてジイソプロピルエチルアミン２００mg（３当量）およびジホスゲン１４４mg（１.５当量）を加える。反応混合物を室温で１時間撹拌しそしてＤＭＦ ５０mlに溶解した４−（６−Ｏ−メチル−ベータ−Ｄ−グルクロニルオキシ）−３−ニトロベンジルアミン２９４mg（１.８当量）およびジイソプロピルエチルアミン１３４mg（２当量）を加える。混合物を１４時間撹拌し、それから酢酸エチルを加えそして混合物をクエン酸塩緩衝液（pH５）で洗浄する。有機相を硫酸ナトリウム上で乾燥しそして真空中で濃縮する。粗製生成物を、シリカゲル上でカラムクロマトグラフィー処理することにより精製する。収量：３７０mg（６５％）。保護された中間体化合物（３００mg）をＴＨＦ ２０mlに溶解しそしてピペリジン１.０mlを加える。混合物を１４時間撹拌しそしてそれから真空中で蒸発しそしてトルエンと一緒に共蒸留する。残留物をメタノール２０mlに溶解しそして酸化バリウム２５０mgを加える。５時間撹拌した後、反応混合物を濾過しそして濾液を真空中で蒸発する。残留物を、メタノールおよび水を使用してセファデックス上のカラムクロマトグラフィーにより精製する。標記化合物の収量：１４０mg（５６％）。
【００５９】
実施例９
４−Ｏ−〔４−（ベータ−Ｄ−グルクロニルオキシ）ベンジルアミノカルボニル〕−４−ヒドロキシ−Ｎ,Ｎ−ビス（２−クロロエチル）アニリン（化合物９）
４−ヒドロキシ−Ｎ,Ｎ−ビス（２−クロロエチル）アニリン４００mg（１７１ミリモル）をトルエン２０mlに溶解しそしてジイソプロピルエチルアミン９５０mgおよびジホスゲン５００mg（１.５当量）を加える。反応混合物を１時間撹拌しそしてそれからＤＭＦ ５０mlに溶解した４−（６−Ｏ−メチル−ベータ−Ｄ−グルクロニルオキシ）ベンジルアミン９６０mg（１.８当量）およびジイソプロピルエチルアミン０.６３mlを加える。反応混合物を１４時間撹拌し、それから酢酸エチルを加えそして混合物をクエン酸塩緩衝液で洗浄する。有機相を硫酸ナトリウム上で乾燥しそして真空中で蒸発する。残留物（５５０mg）をメタノールに溶解しそして酸化バリウム４００mgを加える。反応混合物を４時間撹拌し、濾過し次に真空中で蒸発する。残留物を、セファデックス上のカラムクロマトグラフィーにより精製する。標記化合物の収量：４２０mg。
【００６０】
実施例１０
４−Ｏ−〔４−（ベータ−Ｄ−グルクロニルオキシ）ベンジルアミノカルボニル〕テルフェナジン（化合物１０）
標記化合物は、テルフェナジンおよび４−（６−Ｏ−メチル−ベータ−Ｄ−グルクロニルオキシ）ベンジルアミンから出発して、実施例９に記載したようにして製造した。
実施例１１
３′−Ｏ−〔４−（ベータ−Ｄ−グルクロニルオキシ）ベンジルアミノカルボニル〕テルブタリン（化合物１１）
標記化合物は、テルブタリンおよび４−（６−Ｏ−メチル−ベータ−Ｄ−グルクロニルオキシ）ベンジルアミンから出発して、実施例９に記載したようにして製造した。
実施例１２
３′−Ｏ−〔４−（ベータ−Ｄ−グルクロニルオキシ）ベンジルアミノカルボニル〕フェノテロール（化合物１２）
標記化合物は、フェノテロールおよび４−（６−Ｏ−メチル−ベータ−Ｄ−グルクロニルオキシ）ベンジルアミンから出発して、実施例９に記載したようにして製造した。
【００６１】
実施例１３
１″−Ｏ−〔４−（ベータ−Ｄ−グルクロニルオキシ）ベンジルアミノカルボニル〕サルブタモール（化合物１３）
標記化合物は、サルブタモールおよび４−（６−Ｏ−メチル−ベータ−Ｄ−グルクロニルオキシ）ベンジルアミンから出発して、実施例９に記載したようにして製造した。
実施例１４
３−Ｏ−〔４−（ベータ−Ｄ−グルクロニルオキシ）ベンジルアミノカルボニル〕ムスカリン（化合物１４）
標記化合物は、ムスカリンおよび４−（６−Ｏ−メチル−ベータ−Ｄ−グルクロニルオキシ）ベンジルアミンから出発して、実施例９に記載したようにして製造した。
実施例１５
４′−Ｏ−〔４−（ベータ−Ｄ−グルクロニルオキシ）ベンジルアミノカルボニル〕オキシフェンブタゾン（化合物１５）
標記化合物は、オキシフェンブタゾンおよび４−（６−Ｏ−メチル−ベータ−Ｄ−グルクロニルオキシ）ベンジルアミンから出発して、実施例９に記載したようにして製造した。
【００６２】
実施例１６
２−Ｏ−〔４−（ベータ−Ｄ−グルクロニルオキシ）ベンジルアミノカルボニル〕サリチル酸（化合物１６）
標記化合物は、サリチル酸メチルおよび４−（６−Ｏ−メチル−ベータ−Ｄ−グルクロニルオキシ）ベンジルアミンから出発して、実施例９に記載したようにして製造した。
実施例１７
Ｎ−〔４−（ベータ−Ｄ−グルクロニルオキシ）ベンジルオキシカルボニル〕ジクロフェナック（化合物１７）
標記化合物は、４−（６−メチル−２,３,４−トリ−Ｏ−アセチル−ベータ−Ｄ−グルクロニルオキシ）ベンジルアルコールおよびジクロフェナックから出発して、実施例７に記載したようにして製造した。
【００６３】
実施例１８
Ｎ−〔４−（ベータ−Ｄ−グルクロニルオキシ）ベンジルオキシカルボニル〕フルフェナム酸（化合物１８）
標記化合物は、４−（６−メチル−２,３,４−トリ−Ｏ−アセチル−ベータ−Ｄ−グルクロニルオキシ）ベンジルアルコールおよびフルフェナム酸から出発して、実施例７に記載したようにして製造した。
実施例１９
４−Ｎ−〔４−（ベータ−Ｄ−グルクロニルオキシ）ベンジルオキシカルボニル〕−４−メチルアミノフェナゾン（化合物１９）
標記化合物は、４−（６−メチル−２,３,４−トリ−Ｏ−アセチル−ベータ−Ｄ−グルクロニルオキシ）ベンジルアルコールおよび４−メチルアミノフェナゾンから出発して、実施例７に記載したようにして製造した。
【００６４】
実施例２０
７−Ｎ−〔４−（ベータ−Ｄ−グルクロニルオキシ）ベンジルオキシカルボニル〕テオフィリン（化合物２０）
標記化合物は、４−（６−メチル−２,３,４−トリ−Ｏ−アセチル−ベータ−Ｄ−グルクロニルオキシ）ベンジルアルコールおよびテオフィリンから出発して、実施例７に記載したようにして製造した。
実施例２１
１−Ｎ−〔４−（ベータ−Ｄ−グルクロニルオキシ）ベンジルオキシカルボニル〕ニフェジピン（化合物２１）
標記化合物は、４−（６−メチル−２,３,４−トリ−Ｏ−アセチル−ベータ−Ｄ−グルクロニルオキシ）ベンジルアルコールおよびニフェジピンから出発して、実施例７に記載したようにして製造した。
【００６５】
実施例２２
４−（β−Ｄ−グルクロニルオキシ）−３−ニトロベンジル２−〔１−シアノ−１−（Ｎ−４−トリフルオロメチルフェニル）カルバモイル〕プロペン−１−イルカーボネート（化合物２２）
既知の方法によって例えばメチル（４−ヒドロキシメチル−２−ニトロフェニル−２,３,４−トリ−Ｏ−アセチル−β−Ｄ−グルコピラノシド）ウロネートおよびホスゲンから、クロロギ酸エステル（４−〔（２,３,４−トリ−Ｏ−アセチル−β−Ｄ−グルコピラノシル）メチルウロネート〕−３−ニトロベンジルオキシカルボニルクロライド）を製造することができる。２−ヒドロキシ−５−ニトロベンズアルデヒドと反応させそして次に還元することによって、メチル（２,３,４−トリ−Ｏ−アセチル−β−Ｄ−グルコピラノシル）ウロネートブロマイドから、メチル（４−ヒドロキシメチル−２−ニトロフェニル−２,３,４−トリ−Ｏ−アセチル−β−Ｄ−グルコピラノシド）ウロネートを得ることができる。
【００６６】
２−シアノ−３−ヒドロキシ−Ｎ−（トリフルオロメチルフェニル）クロトンアミドは、レフルノマイドの活性代謝物、ヒドロキシクロトンアミド誘導体２（ＷＯ９１／１７７４８）である。それは、明細書中に記載されている例４Ｂによってレフルノマイドのアルカリ性開環によって得られる。４−〔（２,３,４−トリ−Ｏ−アセチル−β−Ｄ−グルコピラノシル）メチルウロネート〕−３−ニトロベンジルオキシカルボニルクロライド５.５ｇ（０.０９１モル）および２−シアノ−３−ヒドロキシ−Ｎ−（トリフルオロメチルフェニル）クロトンアミド２.７ｇ（０.０１モル）を、アセトニトリル８０mlに溶解する。ＡｇＮＯ3 １.７ｇ（０.０１モル）を加え次いで撹拌しながら６０℃で３時間加熱する。冷却および濾過後得られた濾液を、減圧下で蒸発乾固する。この粗製生成物をクロロホルム／メタノール（２：１)(ｖ：ｖ）２００mlに溶解しそして酸化バリウム１.５ｇを加える。混合物を５時間撹拌しそして濾過後に得られた濾液を蒸発乾固する。カラムクロマトグラフィーにより精製して、化合物２２を得た。
【００６７】
実施例２３
Ｎ−〔４−（アルファ−Ｄ−ガラクトピラノシルオキシカルボニルアミノ）ベンジルオキシカルボニル〕ドキソルビシン（化合物２３）
【化１】
0003841311.tif 000002
【００６８】
２,３,４,６−テトラ−Ｏ−アセチル−Ｄ−ガラクトピラノシド（２）
ヒドラジンアセテート（３.５ｇ、３８ミリモル）を、ＤＭＦ中のペンタ−Ｏ−アセチル−Ｄ−ガラクトース（１０ｇ、２５.６ミリモル）の溶液に加える。混合物を８０℃で１５分加熱する。冷却した溶液を水（１００ml）でうすめそして酢酸エチルで抽出する。有機相を食塩水で洗浄し、乾燥（ＭｇＳＯ4）しそして蒸発する。残留物のフラッシュクロマトグラフィー処理（シクロヘキサン：酢酸エチル、３：２、ｖ／ｖ）によって、固体として化合物２ ４.９５ｇ（５５％）を得た。
化合物２：C14H20O10。融点：１０４℃。〔α〕D20 ＋９５°(Ｃ１、CHCl3）。
【００６９】
Ｎ−〔２,３,４,６−テトラ−Ｏ−アセチル−α−Ｄ−ガラクトピラノシルオキシ〕−ｐ−トルイジン（３）
イソシアン酸ｐ−トリル（４.４ｇ、３３ミリモル）を、ＤＭＦ（５０ml）中の化合物２（３.４８ｇ、１０ミリモル）の溶液に加える。反応混合物を、４０℃で１５分撹拌しそしてそれからＨ2Ｏ（１２０ml）でうすめそして酢酸エチルで抽出する。有機相を、はじめにＨ2Ｏ（２×５０ml）でそしてそれから食塩水で洗浄しそして乾燥（ＭｇＳＯ4）し次に減圧下で蒸発する。フラッシュクロマトグラフィー処理（シクロヘキサン：酢酸エチル、２：１、ｖ／ｖ）によって化合物３（２.２ｇ、４５％）を得た。
化合物３：C22H27O11N。融点：９３℃。〔α〕D20 ＋８４°(Ｃ１、CHCl3）。
【００７０】
Ｎ−〔２,３,４,６−テトラ−Ｏ−アセチル−α−Ｄ−ガラクトピラノシルオキシカルボニル）−４−ホルミルアニリン（６）およびＮ−〔２,３,４,６−テトラ−Ｏ−アセチル−α−Ｄ−ガラクトピラノシルオキシカルボニル）−４−ヒドロキシメチルアニリン（７）
Ｎ−ブロモサクシンイミド（４２０mg、１.１当量）および過酸化ベンゾイル１２０mgを、ＣＣｌ4（６０ml）中の化合物３（１ｇ）の溶液に加える。混合物を還流下で４時間撹拌しそしてそれから冷却しそして濾過し、次に、濾液をＨ2Ｏそしてそれから食塩水で洗浄しそして乾燥（ＭｇＳＯ4）する。減圧下で蒸発して残留物１ｇを得、これをフラッシュクロマトグラフィー処理により精製しそしてモノブロモおよびジブロモ化合物の混合物８００mgを得る。この混合物を、さらに直接使用する。混合物８００mgを、アセトン（１４ml）に溶解しそして硝酸銀の水溶液（０.１Ｎ、１４ml）を加える。この反応混合物を、室温で３時間撹拌する。セライトを通した濾過後の濾液を、減圧下で蒸発しそして残った水性相をＣＨ2Ｃｌ2（ジクロロメタン）で抽出する。有機相をＨ2Ｏおよび食塩水で洗浄し、乾燥（ＭｇＳＯ4）しそして減圧下で蒸発する。得られた残留物をフラッシュクロマトグラフィー処理（シクロヘキサン：アセトン、２：１、ｖ／ｖ）により精製しそして化合物６ １２０mgおよび化合物７ ２６０mgを得た。
化合物６：C22H25O12N。融点：８１℃。〔α〕D20 ＋１０９°(Ｃ１、CHCl3)。
化合物７：C22H27O12N。融点：８５℃。〔α〕D20 ＋１２９°(Ｃ１、CHCl3)。
【００７１】
Ｎ−〔２,３,４,６−テトラ−Ｏ−アセチル−α−Ｄ−ガラクトピラノシルオキシカルボニル）−４−ニトロフェニルオキシカルボニルオキシメチルアニリン（８）
クロロギ酸ｐ−ニトロフェニル（３６０mg）およびピリジン（０.１８ml）を、ＣＨ2Ｃｌ2（３０ml）中の化合物７（３００mg）の溶液に加える。反応混合物を室温で３時間撹拌しそしてそれからＨ2Ｏ（５０ml）でうすめそして抽出する。合した有機相をＨ2Ｏおよび食塩水で洗浄しそして乾燥（ＭｇＳＯ4）する。減圧下で蒸発した後得られた残留物を、フラッシュクロマトグラフィー処理（シクロヘキサン／アセトン、２：１、ｖ／ｖ)により精製しそして化合物８ ３８０mg（５１％）を得た。
化合物８：C29H30O16N2。融点：９２℃。〔α〕D20 ＋８１°(Ｃ１、CHCl3)。
【００７２】
Ｎ−〔４−（２,３,４,６−テトラ−Ｏ−アセチル−α−Ｄ−ガラクトピラノシルオキシカルボニルアミノ)ベンジルオキシカルボニル〕ドキソルビシン(９)−４−ニトロフェニルオキシカルボニルオキシメチルアニリン（８）
ドキソルビシン１００mgおよびトリエチルアミン８０μｌを、ＤＭＦ中の化合物８（１００mg）の溶液に加える。反応混合物を室温で６時間撹拌する。減圧蒸発（１mm、△＝５０℃）後得られた残留物を、フラッシュクロマトグラフィーにより精製しそして化合物９ ８０mg（５０％）を得た。
化合物９：C50O24H54N2。融点：１４２℃。〔α〕D20 ＋１９６°(Ｃ１、CHCl3)。
【００７３】
化合物２３
ナトリウムメタノレート２０mgを、ＭｅＯＨ（メタノール）（３０ml）中の化合物９（１００mg）の溶液に加える。反応混合物を３時間撹拌しそしてアンバーライトＩＲＣ−５０（Ｈ+）で中和する。濾過後の濾液を、減圧下で濃縮しそして固体の残留物を得る。この残留物のシリカ上のフラッシュクロマトグラフィー処理（アセトニトリル：水、９：１、ｖ／ｖ）によって化合物２３の６７mg（８０％）を得た。
化合物２３：C42H46O2ON2。融点：１３６℃。〔α〕D20 ＋２２５°（Ｃ ０.１、ＥｔＯＨ）。
1H NMR（270MHz, D2O）：δ 1.3(d, J=6.3H, Me-6)；1.9および2.2（AB, 2H, CH2-8, J=9）；2.8および2.9（AB, 2H, CH2-2, J=20）；3.8（S, 3H, OCH3）；5.3（m, 1H, H-1′）；6.0（d, 1H, J=3.5）；7.1（d, 1H, J=8, H-3）；7.3（d, J=8, 1H, H-2）；7.5（d, 1H, J=8, H-1）；7.8（m, H-芳香族）。
【００７４】
実施例２４
９−Ｏ−〔４−（ベータ−Ｄ−グルクロニルオキシ）−３−クロロベンジルオキシカルボニル〕キニン（化合物２４）
４−β−Ｄ−メチルグルクロニルオキシ−３−クロロベンズアルデヒド(１)０.１Ｎメタノール性ナトリウムメタノレート（５０ml）中の４−（２,３,４−トリ−Ｏ−アセチル−β−Ｄ−メチルグルクロニルオキシ）−３−クロロベンズアルデヒド（３.０５ｇ、６.４５ミリモル）の溶液を、０℃で３０分撹拌する。反応混合物を、アンバーライト ＩＲＣ １２０Ｈ+イオン交換樹脂の添加により中和し、濾過しそして減圧下で蒸発してフォーム状物質として４−β−Ｄ−メチルグルクロニルオキシ−３−クロロベンズアルデヒド（１）（２.１７ｇ、９７％）を得た。
Ｃ14Ｈ15ＣｌＯ8、Ｍ＝３４６.５
ＩＲ（ＫＢｒ）νcm-1：3400，3030，2975，1375，1040, 835
1H NMR（300MHz, (CD3)2SO）：3.25-4.25(4H,m), 3.70(3H,s), 5.05(1H,d,J=7Hz), 7.28(1H,d,J=8Hz), 7.75(1H,dd,J=8Hz,J′=2Hz), 7.90(1H,d,J=2Hz), 9.85(1H,s)。
MS（DCl／NH3）：m／z：364／366（M＋NH4)+。
【００７５】
４−（２,３,４−トリ−Ｏ−（４−メトキシベンジル）−β−Ｄ−メチルグルクロニルオキシ）−３−クロロベンズアルデヒド（２）
乾燥ジメチルホルムアミド（２０ml）中の４−β−Ｄ−メチルグルクロニルオキシ−３−クロロベンズアルデヒド（２.１０ｇ、６.０６ミリモル）の溶液を、無水のジメチルホルムアミド２０ml中の水素化ナトリウム（２ｇ）の懸濁液に徐々に加える。４−メトキシベンジルクロライド（３.２ml、２３.５ミリモル）を、反応混合物を約２０℃に保持するように冷却しながら、３０分にわたって滴加する。それから、溶液を１８時間撹拌しそしてメタノール（５ml）の添加によって処理する。１時間後に、溶液を氷中に注加しそして１Ｍ塩酸でpH８にする。水性相を酢酸エチル（２×５０ml）で抽出する。水（２×５０ml）で洗浄した後、有機相を蒸発乾固する。残留物をシリカゲル６０Ｈ上でカラムクロマトグラフィー処理〔ヘキサン：酢酸エチル（８：２、ｖ／ｖ）〕することにより精製して、無色のフォーム状物質として４−（２,３,４−トリ−Ｏ−（４−メトキシベンジル）−β−Ｄ−メチルグルクロニルオキシ）−３−クロロベンズアルデヒド（２）（１.９７ｇ、４６％）を得た。
Ｃ38Ｈ39ＣｌＯ11、Ｍ＝７０６.５
ＩＲ（ＫＢｒ）νcm-1：3040, 2945, 1725, 1505, 1375, 1230, 1040, 825
1H NMR（300MHz, CDCl3）：3.30-4.50(4H,m), 3.73(3H,s), 3.85(3H,s), 3.88(3H,s), 3.92(3H,s), 4.50-4.90(6H,m), 5.12(1H,d,J=7Hz), 6.90-7.80(15H,m)，10.02(1H,s)。
MS（DCl／NH3）：m／z：722／724（M＋NH4)+。
【００７６】
２−クロロ−４−ヒドロキシメチルフェニル２,３,４−トリ−Ｏ−（４−メトキシベンジル）−β−Ｄ−メチルグルクロニド（３）
メタノール（３０ml）中のアルデヒド２（１.５７ｇ、２.２２ミリモル）の溶液を、水素化硼素ナトリウム（０.７ｇ）で処理しそして反応混合物を０℃で９０分撹拌する。それから、水−反応停止混合物を、ジクロロメタン（３×２０ml）で抽出する。シリカゲル６０Ｈ上でカラムクロマトグラフィー処理〔ヘキサン：酢酸エチル（７：３、ｖ／ｖ）〕することにより精製して無定形の固体として２−クロロ−４−ヒドロキシメチルフェニル２,３,４−トリ−Ｏ−（４−メトキシベンジル）−β−Ｄ−メチルグルクロニド（３）（１.２８ｇ、８１％）を得た。
Ｃ38Ｈ41ＣｌＯ11、Ｍ＝７０８.５
ＩＲ（ＫＢｒ）νcm-1：3420, 3030, 2935, 1725, 1510, 1510, 1375, 1230, 1040, 825
1H NMR（300MHz, CDCl3）：3.25-4.50(4H,m), 3.69(3H,s), 3.85(3H,s), 3.87(3H,s), 3.91(3H,s), 4.50-4.80(8H,m), 5.08(1H,d,J=7Hz), 6.85-7.90(15H,m)
MS(DCl／NH3)：m／z：724／726（M＋NH4)+。
【００７７】
４−〔２,３,４−トリ−Ｏ−（４−メトキシベンジル）−β−Ｄ−メチルグルクロニルオキシ〕−３−クロロベンジル−４−ニトロフェニルカーボネート(４)
アルコール３（０.２５ｇ、０.３５ミリモル）を酢酸エチル（１.５ml）およびピリジン（０.１５ml）に溶解する。クロロギ酸４−ニトロフェニル（０.３０ｇ、１.４８ミリモル）を加えそして得られた混合物を一夜撹拌する。溶剤を減圧下で除去する。残留物をシリカゲル６０Ｈ上のカラムクロマトグラフィー処理〔ヘキサン：酢酸エチル（７：３、ｖ／ｖ）〕により精製して４−〔２,３,４−トリ−Ｏ−（４−メトキシベンジル）−β−Ｄ−メチルグルクロニルオキシ〕−３−クロロベンジル−４−ニトロフェニルカーボネート(４)（０.１６ｇ、５２％）を得た。
Ｃ45Ｈ44ＣｌＮＯ15、Ｍ＝８７３.５
ＩＲ(ＫＢｒ)νcm-1：3055, 2930, 1735, 1515, 1370, 1320, 1230, 1040, 8301H NMR（300MHz, CDCl3）：3.25-4.50(4H,m), 3.71(3H,s), 3.82(3H,s), 3.87(3H,s), 3.91(3H,s), 4.45-4.85(6H,m), 5.05(1H,d,J=7Hz), 5.15(2H,s), 6.80-8.40(19H,m)
MS(DCl／NH3)：891／893（M＋NH4)+。
【００７８】
【化２】
0003841311.tif 000003
【００７９】
ジクロロメタン（２０ml）およびトリエチルアミン（１８８μl）中の４（０.１５ｇ、０.１７ミリモル）の撹拌溶液に、キニン（５０mg、０.１５ミリモル）を加える。混合物を室温で１８時間保持する。溶剤を減圧下で蒸発除去する。残留物をシリカゲル６０Ｈ上のカラムクロマトグラフィー処理〔ジクロロメタン：メタノール（９５：５、ｖ／ｖ）〕により精製して無色のフォーム状物質として化合物５（０.０５７ｇ、３６％）を得た。
Ｃ59Ｈ63ＣｌＮ2Ｏ14、Ｍ＝１０５８.５
ＩＲ（ＫＢｒ）νcm-1：3050, 2940, 1740, 1520, 1370, 1320, 1230, 1010, 835，810
1H NMR（300MHz, CDCl3）：1.80-4.40(15H,m), 3.72(3H,s), 3.85(3H,s), 3.93(6H,s), 3.95(3H,s), 4.45-4.85(6H,m), 5.10(1H,d,J=7Hz), 5.15(2H,s), 5.30(2H,m), 5.72(1H,m), 6.30(1H,d,J=7Hz), 6.80-8.40(19H,m), 8.75(1H,d,J=5Hz)
MS(DCl／NH3)：1076／1078（M＋NH4)+。
【００８０】
【化３】
0003841311.tif 000004
【００８１】
水（０.５ml）を含有するジクロロメタン（１０ml）中の５（０.０５０ｇ、０.０５ミリモル）の撹拌溶液に、５℃で２,３−ジクロロ−５,６−ジシアノ−１,４−ベンゾキノン（０.０１７ｇ、０.０７５ミリモル）を加える。１時間後に、飽和水性ＮａＨＣＯ3（１０ml）を加えそして混合物を急速にジクロロメタン（３×１５ml）で抽出する。有機相を、水で洗浄し、Ｎａ2ＳＯ4上で乾燥しそして減圧下で蒸発する。残留物をシリカゲル６０Ｈカラム上でクロマトグラフィー処理〔ジクロロメタン：メタノール（８０：２０、ｖ／ｖ）〕して、無定形の固体として化合物６（０.０２３ｇ、６６％）を得た。
Ｃ35Ｈ39ＣｌＮ2Ｏ11、Ｍ＝６９８.５
ＩＲ（ＫＢｒ）νcm-1：3420, 3040, 2940, 1735, 1530, 1375, 1320, 1235, 1020, 830
1H NMR（300MHz, (CD3)2SO）：1.80-4.30(15H,m), 3.70(3H,s), 3.94(3H,s), 5.12(1H,d,J=7Hz), 5.17(2H,s), 5.30(2H,m), 5.71(1H,m), 6.34(1H,d,J=7Hz), 7.10-8.00(6H,m), 8.77(1H,d,J=5Hz)
MS(FAB, マトリックス：ニトロベンジルアルコール)：699／701（M＋H)+。
【００８２】
化合物２４
【化４】
0003841311.tif 000005
【００８３】
水性燐酸塩緩衝液（pH＝８）（２４ml）中の６（０.０２０ｇ、０.０３ミリモル）の溶液に、豚肝臓エステラーゼ溶液（シグマ＃Ｅ−３１２８）（０.６ml）およびアセトン（１２ml）を加える。混合物を、３７℃で４時間保持しそして減圧下で蒸発する。残留物を、シリカゲル６０Ｈ上のカラムクロマトグラフィー処理〔アセトニトリル：水（９５：５、ｖ／ｖ）〕により精製して無色の固体として化合物２４（０.０１１ｇ、５６％）を得た。
Ｃ34Ｈ37ＣｌＮ2Ｏ11、Ｍ＝６８４.５
ＩＲ(ＫＢｒ)νcm-1：3450, 3060, 2950, 1730, 1520, 1370, 1320, 1240, 1020, 820
1H NMR（300MHz, (CD3)2SO）：1.80-4.30(15H,m), 3.94(3H,s), 5.10(1H,d,J=7Hz), 5.22(2H,s), 5.32(2H,m), 5.70(1H,m), 6.32(1H,d,J=7Hz), 7.10-8.00(6H,m), 8.79(1H,d,J=5Hz)
MS(FAB, マトリックス：ニトロベンジルアルコール)：685／687（M＋H)+。
【００８４】
実施例２５
メチル１８−Ｏ−〔３,５−ジメトキシ−４−〔４−（ベータ−Ｄ−グルクロニルオキシ）−３−クロロベンジルオキシカルボニル〕ベンゾイル〕レセルペート（化合物２５）
４−β−Ｄ−グルクロニルオキシ−３−クロロベンズアルデヒド（８）
テトラヒドロフラン（６０ml）および水（４０ml）中の４−β−Ｄ−メチルグルクロニルオキシ−３−クロロベンズアルデヒド（１）（３.５２ｇ、１０.１ミリモル）の溶液に、３０分にわたって、２Ｍ水性水酸化ナトリウム（１０ml）を滴加する。混合物を、２時間撹拌し、アンバーライトＩＲＣ ５０Ｓ Ｈ+イオン交換樹脂の添加により中和し、濾過しそして真空中で蒸発して無色のフォーム状物質として４−β−Ｄ−グルクロニルオキシ−３−クロロベンズアルデヒド（２.６２ｇ、７８％）を得た。
Ｃ13Ｈ13ＣｌＯ8、Ｍ＝３３２.５
ＩＲ(ＫＢｒ)νcm-1：3400, 3050, 2940, 1735, 1330, 1040, 830
1H NMR（300MHz, (CD3)2SO）：3.25-4.25(4H,m), 5.05(1H,d,J=7Hz), 7.31(1H,d,J=8Hz), 7.77(1H,dd,J=8Hz, J′=2Hz), 7.92(1H,d,J=2Hz), 9.82(1H,s), 11.85(1H,br,s)
MS(DCl／NH3)；m／z：350／352(M＋NH4)+。
【００８５】
４−（２,３,４−トリ−Ｏ−ベンジル）−β−Ｄ−ベンジルグルクロニルオキシ−３−クロロベンズアルデヒド（９）
乾燥ジメチルホルムアミド（２０ml）中の４−β−Ｄ−グルクロニルオキシ−３−クロロベンズアルデヒド（８）（２.５５ｇ、７.６７ミリモル）の溶液を、無水のジメチルホルムアミド２０ml中の水素化ナトリウム（２ｇ）の懸濁液に徐々に加える。反応混合物を約２０℃に保持するように冷却しながら、臭化ベンジル（５.０ml、４２ミリモル）を３０分にわたり滴加する。それから、溶液を１８時間撹拌しそしてメタノール（５ml）の添加により処理する。１時間後に、溶液を水に注加しそして１Ｍ塩酸でpH８にする。水性相を酢酸エチル（２×５０ml）で抽出する。水（２×５０ml）で洗浄した後、有機相を蒸発乾固する。残留物を、シリカゲル６０Ｈ上のカラムクロマトグラフィー処理〔ヘキサン：酢酸エチル（８５：１５、ｖ／ｖ）〕により精製して、無色のフォーム状物質として４−（２,３,４−トリ−Ｏ−ベンジル）−β−Ｄ−ベンジルグルクロニルオキシ−３−クロロベンズアルデヒド（９）（２.０４ｇ、３８％）を得た。
Ｃ41Ｈ37ＣｌＯ8、Ｍ＝６９２.５
ＩＲ(ＫＢｒ)νcm-1：3050, 2930, 1730, 1520, 1370, 1330, 1230, 1040, 8251H NMR（300MHz, CDCl3）：3.40-4.50(4H,m), 4.50-5.00(8H,m), 5.08(1H,d,J=7Hz), 6.90-7.70(23H,m), 9.93(1H,s)
MS(DCl／NH3)；m／z：710／712(M＋NH4)+。
【００８６】
２−クロロ−４−ヒドロキシメチルフェニル２,３,４−トリ−Ｏ−ベンジル−β−Ｄ−ベンジルグルクロニド（１０）
メタノール（３０ml）中のアルデヒド（９）（２.００ｇ、２.８８ミリモル）の溶液を、水素化硼素ナトリウム（０.７ｇ）で処理しそして反応混合物を０℃で９０分撹拌する。それから、水−反応停止混合物をジクロロメタン（３×２０ml）で抽出する。シリカゲル６０Ｈ上のカラムクロマトグラフィー処理〔ヘキサン：酢酸エチル（７：３、ｖ／ｖ）〕による精製によって、無定形の固体として２−クロロ−４−ヒドロキシメチルフェニル２,３,４−トリ−Ｏ−ベンジル−β−Ｄ−ベンジルグルクロニド（１０）（１.９１ｇ、９５％）を得た。
Ｃ41Ｈ39ＣｌＯ8、Ｍ＝６９４.５
ＩＲ(ＫＢｒ)νcm-1：3400, 3040, 2940, 1725, 1515, 1370, 1330, 1230, 1040, 825
1H NMR（300MHz, CDCl3）：3.40-4.50(4H,m), 4.50-5.00(10H,m), 5.12(1H,d,J=7Hz), 6.90-7.75(23H,m)
MS(DCl／NH3)；m／z：712／714(M＋NH4)+。
【００８７】
４−〔（２,３,４−トリ−Ｏ−ベンジル）−β−Ｄ−ベンジルグルクロニルオキシ〕−３−クロロベンジル４−ニトロフェニルカーボネート（１１）
アルコール１０（０.４０ｇ、０.５７ミリモル）を酢酸エチル（２ml）およびピリジン（０.２ml）に溶解する。クロロギ酸４−ニトロフェニル（０.４０ｇ、１.９７ミリモル）を加えそして得られた混合物を一夜撹拌する。溶剤を減圧下で除去する。残留物を、シリカゲル６０Ｈ上のカラムクロマトグラフィー処理〔ヘキサン：酢酸エチル（７：３、ｖ／ｖ）〕により精製して４−〔（２,３,４−トリ−Ｏ−ベンジル）−β−Ｄ−ベンジルグルクロニルオキシ〕−３−クロロベンジル４−ニトロフェニルカーボネート（０.２３ｇ、４７％）を得た。
Ｃ48Ｈ42ＣｌＮＯ12、Ｍ＝８４５.５
ＩＲ（ＫＢｒ）νcm-1：3050, 2940, 1735, 1510, 1360, 1320, 1230, 1050, 835, 810
1H NMR（300MHz, CDCl3）：3.40-4.50(4H,m), 4.55-5.00(8H,m), 5.12(1H,d,J=7Hz), 5.21(2H,s), 6.80-8.40(27H,m)
MS(DCl／NH3)；m／z：863／865(M＋NH4)+。
【００８８】
【化５】
0003841311.tif 000006
【００８９】
ジクロロメタン（２０ml）およびトリエチルアミン（２６０μl）中の１１（０.２０ｇ、０.２３５ミリモル）の撹拌溶液に、メチル１８−Ｏ−（３,５−ジメトキシ−４−ヒドロキシベンゾイル）レセルペート〔Lucas等、J. Am. Chem. Soc., 1959, 81, 1928-1932〕（１３０mg、０.２２ミリモル）を加える。混合物を室温で２２時間保持する。溶剤を減圧下で蒸発する。残留物をシリカゲル６０Ｈ上のカラムクロマトグラフィー処理〔ジクロロメタン：メタノール（９０：１０、ｖ／ｖ）〕により精製して、無色のフォーム状物質として化合物１２（０.１２７ｇ、４４％）を得た。
Ｃ74Ｈ75ＣｌＮ2Ｏ18、Ｍ＝１３１４.５
ＩＲ（ＫＢｒ）νcm-1：3050, 2940, 1750, 1720, 1515, 1360, 1320, 1280, 1230, 1050, 835
1H NMR（300MHz, CDCl3）：1.80-4.50(19H,m), 3.46(3H,s), 3.80(3H,s), 3.82(3H,s), 3.97(6H,s), 4.60-5.00(8H,m), 5.05(1H,dd,J=12.9, 5Hz), 5.14(1H,d,J=7Hz), 5.22(2H,s), 6.70-7.90(28H,m)
MS(FAB, マトリックス：チオグリセロール)：1315／1317(M＋H)+。
【００９０】
化合物２５
【化６】
0003841311.tif 000007
【００９１】
１２（０.１００ｇ、９０.０７ミリモル）の溶液に、１０％パラジウム付炭素（０.２ｇ）を加えそして得られた混合物を窒素下（１気圧）下で３時間保持する。触媒を、セライトを通した濾過により除去する。濾液を減圧下で蒸発する。残留物をシリカゲル６０Ｈ上のカラムクロマトグラフィー処理〔アセトニトリル：水（９２：８、ｖ／ｖ）〕により精製して無色のフォーム状物質として化合物２５（０.０３４ｇ、５１％）を得た。
Ｃ46Ｈ51ＣｌＮ2Ｏ18、Ｍ＝９５４.５
ＩＲ（ＫＢｒ）νcm-1：3450, 3050, 2940, 1740, 1725, 1520, 1500, 1360, 1280, 1230, 1050, 825
1H NMR（300MHz, (CD3)2SO）：1.80-4.50(19H,m), 3.44(3H,s), 3.79(3H,s), 3.81(3H,s), 3.99(6H,s), 5.04(1H,dd,J=12.9, 5Hz), 5.12(1H,d,J=7Hz), 5.21(2H,s), 6.70-7.80(8H,m)
MS(FAB, マトリックス：チオグリセロール)：955／957(M＋H)+。
【００９２】
グリコシル−スペーサー−ドラッグ化合物（以下プロドラッグと称す）の薬理学的活性は、適切な動物実験系において生体内試験により試験される。腫瘍学的適用に対して選択したモデルは、ヒト腫瘍を無毛マウスに皮下的に移植しそして腫瘍の確立後本発明によるプロドラッグを静脈的に投与する方法である。
【００９３】
実施例２６
急性毒性の測定
急性毒性を測定するために、無毛マウス（ＣＤ−１、nu／nu）に、５分にわたって、５％グルコース溶液０.５mlに溶解した試験物質の種々な投与量を注入した。比較対照グループには、単に、５％グルコース溶液０.５mlを注入した。試験物質の１つの濃度当り５匹のマウスを使用した。１４日目に生き残っているマウスの数を測定しそしてLitchfield Wilcoxon法を使用してＬＤ50を測定した。薬剤（ドキソルビシン）と比較して検査したプロドラッグの毒性は、表１に要約する通りである。
【００９４】
【表１】
0003841311.tif 000008
【００９５】
実施例２７
無毛マウスにおいて皮下的に生長するヒト腫瘍の生長の阻害
試験物質の生長−阻害活性に対する試験は、Fiebig等（Proc. Europ. Soc. Med. Oncol. in Cancer Chemother. Pharmacol. Suppl. 9, 18, 1982；Verh. dtsch. Ges. inn. Med. 88, 966, 1982）およびInoue等（Cancer Chemother. Pharmacol. 10, 182-186, 1983）により記載されている方法に基づいた。試験ヒト腫瘍を型の如く維持しそして無毛マウスに通過させる。腫瘍は、それぞれ第３の通過においてモノクローナル抗体を使用する免疫組織化学によってヒト特性について試験する。腫瘍を、滅菌条件下で除去しそして約５〜１０mm3の小片に切断する。腫瘍の１片を、それぞれの無毛マウスの側面に皮下的に移植する。約７〜１４日後に、腫瘍の片は周囲組織に粘着する。腫瘍の大きさＡを、カリパスおよび次式によって、２つの対立直径（ａ、ｂ）の測定によって測定する。
Ａ＝ａ×ｂ
【００９６】
３日の間隔において実施した腫瘍の大きさの他の測定の後に、動物を比較対照グループおよび処理されるグループ（それぞれのグループにおける動物６匹）に無作為に分ける。進行性の腫瘍生長が見出された動物のみを、この試験に対して使用する。無作為化の日（day−７）に開始して、動物を以下に示すスキームにしたがって試験物質で処理する。１週間に２回、２つの腫瘍の直径をそれぞれのマウスに対して測定しそして個々の腫瘍面積を上述した式により計算する。
【００９７】
実験の終了後に、特定の測定日におけるそれぞれの個々の動物の相対的な腫瘍の大きさを、式 Ａr＝Ａ(dayX)／Ａ(day0)により計算する。処理したグループの腫瘍の大きさ（ＡT）の中央値を比較対照の腫瘍の大きさ（ＡC）の中央値を比較しそしてＴ／Ｃ％＝ＡT／ＡC×１００を計算する。抗腫瘍作用の統計学的有意さを、Wilcoxon試験により測定する。
【００９８】
結果：
【表２】
0003841311.tif 000009
【００９９】
表２に示した動物実験データは、ドキソルビシン処理の場合に観察された腫瘍生長（Ｔ／Ｃ〜８０％）よりも融合蛋白質およびプロドラッグまたはプロドラッグ単独で処理した動物においては生長がおそい（Ｔ／Ｃ〜４０％）ことを示す。ドキソルビシン処理とプロドラッグ治療との間の差およびドキソルビシン処理と融合蛋白質＋プロドラッグ治療との間の差は、統計学的に有意である（ｐ＜０.０５）。
【０１００】
驚くべきことには、プロドラッググループにおける治療は、プロドラッグと組み合わされた融合蛋白質を与えたグループと同様に有効である。この意外な観察は、次の組織分析により説明することができる。プロドラッグまたはドキソルビシン治療（表２、ｄ０）のときにおける腫瘍を有する無毛マウスからとられた冷凍保存したＬｏＶｏ腫瘍に対する組織学的検査は、腫瘍が広範囲にわたる中心壊死（central necrosis）を起こしていることを示す。機能性ヒトβ−グルクロニダーゼの測定に対する組織化学的試験（Murray等、the journal of histochemistry and cytochemistry 37, 643-652, 1989）によって、機能的に活性なヒトｐ−グルクロニダーゼが壊死中に存在すること、すなわち、細胞質膜がすでに損傷された細胞がなお細胞質中に機能的に活性なβ−グルクロニダーゼを含有していることを証明することができた。壊死中に局在しそして細胞膜により保護されていないこのヒトβ−グルクロニダーゼは、ＬｏＶｏ腫瘍中において薬剤への親水性プロドラッグの開裂を起こす。中心壊死によるプロドラッグの内因性活性化のこの意外な知見は、多数のヒト腫瘍異種移植（卵巣、乳房、胃、肺および腸癌）において確認された。ヒト癌からの生検材料に対する組織学的および組織化学的検査は、中心壊死が、無毛マウスに異種移植したヒト腫瘍においてのみ起こるアーチファクトではなくて、ヒトにおけるプロドラッグ単治療が広範囲な可能な使用を有することを期待させる広範囲にわたる病態生理学的現象であることを証明する。しかしながら、有意な割合の壊死を生じない腫瘍はプロドラッグ単治療により処理することはできない（データは示されていない）。この型の腫瘍の場合においては、プロドラッグ治療のすぐれた作用を利用することができるために、前もって腫瘍における細胞外限局化（localization）を与える融合蛋白質を使用することが必要である（例：散在性転移、小さな非壊死性の原発腫瘍など）。
【０１０１】
実施例２８
腫瘍を有する無毛マウスにおける、プロドラッグおよびドキソルビシンの薬物動態
組織および腫瘍におけるプロドラッグおよびドキソルビシンの濃度を評価するために、プロドラッグ（５００mg／kg）およびドキソルビシン（１０mg／kg）を、５分の期間にわたって、予め１４日前にヒト結腸腫瘍（Ｍｚ−Ｓｔｏ−１）の皮下的移植をうけた無毛マウスに注入する。注入後、動物を種々の時間において犠牲にしそして器官および腫瘍を除去する。それぞれの場合において、７７０μlの２０mMホスフェート緩衝液、１０mMサッカロラクトン(pH３)を組織２３０mgに加えそしてサンプルをUltraturraxを使用して均質化する。３.３％硝酸銀溶液４０μlおよびアセトニトリル１６０μlを、この均質化物のそれぞれ２００μlに加える。サンプルを３０分振盪しそして次に遠心分離（５分、１２,０００ｇ）し、上澄液１００μlを除去しそして３００μlのホスフェート緩衝液、１０mMサッカロラクトン（pH６.０）でうすめそしてプロドラッグおよびドキソルビシンの含量を、Ｃ−１８ Bondelutカートリッジ（ＡＡＳＰ）上の自動プレカラム抽出および高圧液体クロマトグラフィーにより分析する。
【０１０２】
結果：
【表３】
0003841311.tif 000010
【０１０３】
実施例２９
炎症に対する１４−Ｏ−〔４−（ベータ−Ｄ−グルクロニルオキシ）−３−ニトロベンジルアミノカルボニル〕ドキソルビシン（プロドラッグ）の作用を、CollinsおよびMackaness（J. Immunol. 101：830-845, 1968）により記載されている方法に相当する遅延型皮膚反応のモデル（Delayed Type Hypersensitivity, DTH）で検査した。
【０１０４】
このモデルにおいて、マウスを、１週間の間隔で２回、殺したSalmonella typhimurium細菌（１０９）の限定された量で免疫化する。はじめの免疫化３週間後に、ＤＴＨ反応は、Salmonella typhimurium抗原（ＳＴＡ）の足底内注入によって起こる。顆粒球、マクロファージ、リンパ球および蓄積された間隙性液体からなる局所炎症性浸潤物が生ずる。反応の程度は、反応の起きた後２４時間後の足膨潤の増加により測定する。炎症反応に対するプロドラッグの作用は、２つの処理スキームにより試験した。１つのグループには、ＳＴＡ注入の２時間後にプロドラッグ５００mg／kgを１回静脈内投与し、そして他のグループには、ＳＴＡ注入の２、５および８時間後にそれぞれ３００mg／kgを３回注入した。
【０１０５】
表４から判るように、両方のプロドラッグ処理スキームは、炎症反応における有意な減少を与えるそしてプロドラッグの３回の投与は、抗炎症剤であるイブプロフェンを使用した標準治療より僅かにすぐれている。
【０１０６】
【表４】
0003841311.tif 000011
【０１０７】
実施例３０
１４−Ｏ−〔４−（ベータ−Ｄ−グルクロニルオキシ）−３−ニトロベンジルアミノカルボニル〕ドキソルビシン（プロドラッグ）は、D. Papahadjopoulos等（PNAS, USA 88：11460-11464, 1991）により記載されているようにステルスリポソームに封入される。ＣＤ１nu／nuマウスに静脈内注入した後、リポソーム中に封入されたプロドラッグの血漿半減期は、およそ４０時間であって、これは遊離ドラッグの血漿半減期（およそ２０分）より著しく長い（データは示されていない）。このｔ１／２βの有意な増大は、改善された薬理的効能を与える。血漿半減期の低度な顕著な増加は、５０ｇ／リットル ヒト血清アルブミンまたはヒト酸性アルファ−１糖蛋白質（acid alpha-1 glycoprotein）のプレインキュベーションにより達成される。