(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
ラクトコッカス属に属し、受託番号  ＦＥＲＭ  Ｐ−１５７６４として寄託されている、高光学純度のＬ−乳酸生産能とＴＮＦ産生誘導活性を有する事により、Ｌ−乳酸の工業的生産と制癌効果を有する物質の生産を同時にする事を特徴とする、Ｌ−乳酸生産能及びＴＮＦ産生誘導活性を有する乳酸菌。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明の属する技術分野】
【０００２】
本発明は、Ｌ−乳酸生産能及びＴＮＦ産生誘導活性を有する乳酸菌に関し、詳細には、Ｌ−乳酸を工業的に生産し、その菌体を制癌効果を有する物質として利用できる乳酸菌に関する。
【０００３】
【従来の技術】
【０００４】
Ｌ−乳酸は、食品添加物の一つであり酸味剤として使用される他、生分解性プラスティックであるポリ乳酸の原料として利用される。
【０００５】
従来、Ｌ−乳酸の生産菌については、ストレプトコッカス（Streptococcus）属，ラクトバチルス  キシロサス（Lactobacillus xylosus），ラクトバチルスカゼイ（Lactobacillus casei），ラクトバチルス  パラカゼイ（Lactobacillus paracasei），エンテロコッカス  フェシウム（Enterococcus faecium），バチルス  コアギュランス（Bacillus coagulans），リゾプス  オリーゼ（Rhizopus oryzae）等が知られている。
【０００６】
また、ＴＮＦとは、腫瘍壊死因子(Tumor Necrosis Factor)の略称であり、体内に於て乳酸菌等の微生物が進入したとき、それを抗原として免疫を担う細胞マクロファージより誘導分泌されるタンパク質サイトカインの一つであり、癌の壊死を引き起こす因子が含まれている。
【０００７】
このＴＮＦ産生誘導活性を有する菌については、ストレプトコッカス  パイオジェネス（Streptococcus pyogenes），エンテロコッカス  フェカリス（Enterococcus faecalis），ラクトバチルス  カゼイ（Lactobacillus casei）等が知られている。
【０００８】
【発明が解決しようとする課題】
【０００９】
しかし、工業的なＬ−乳酸の生産を行い、その副産物としての菌体をＴＮＦ（腫瘍壊死因子：Tumor Necrosis Factor）産生誘導物質として利用できるものは未だ見いだされていない。
【００１０】
乳酸及び抗腫瘍活性物質を個々に生産する従来の方法に於ては、乳酸製造で分離除去される菌体は産業廃棄物であり、また、抗腫瘍活性物質製造に於て副生する乳酸を含んだ発酵液も利用することが出来ず廃水処理の負荷量増加となる。
ＴＮＦ産生誘導活性を有する乳酸菌にはＬ−乳酸生産能を持つ菌も多数存在するが、現状では何れもＬ−乳酸の生産量が低く、工業的生産として利用出来る段階に達していない。
【００１１】
【課題を解決するための手段】
【００１２】
本発明者らは、乳酸及び抗腫瘍活性物質を同時に利用することができれば、廃棄物とならずコストの削減になると考え、また、採算性等を考えたとき大規模生産が必須条件となることより、両条件を満足する菌の探索を行い、乳酸菌ラクトコッカス  ラクティス  サブスピーシズ  ラクティス  ３３２（Lactococcus lactis subsp. lactis 332）が、Ｌ−乳酸生産能力、菌体のＴＮＦ産生誘導活性、共に満足出来るものであることを見出し、本発明を完成するに至った。
【００１３】
即ち、本発明の課題を解決するための手段は、下記のとおりである。
【００１４】
第１に、高光学純度のＬ−乳酸生産能とＴＮＦ産生誘導活性を有する事より、Ｌ−乳酸の工業的生産と制癌効果を有する物質を同時に生産する事を特徴とする、Ｌ−乳酸生産能及びＴＮＦ産生誘導活性を有する乳酸菌。
【００１５】
第２に、ラクトコッカス属に属し、受託番号  ＦＥＲＭ  Ｐ−１５７６４として寄託されている、上記第１に記載のＬ−乳酸生産能及びＴＮＦ産生誘導活性を有する乳酸菌。
【００１６】
上記のラクトコッカス（Ｌａｃｔｏｃｏｃｃｕｓ）属に属し、受託番号  ＦＥＲＭ  Ｐ−１５７６４として寄託されている、Ｌ−乳酸生産能及びＴＮＦ産生誘導活性を有する乳酸菌は、ラクトコッカス  ラクティス  サブスピーシズ  ラクティス  ３３２（Lactococcus lactis subsp. lactis 332）（以下、ラクティス３３２という）を、日本国茨城県にある工業技術院生命工学研究所に、平成８年８月５日付で寄託したものであり、次の菌学的性質を有する。
【００１７】
なお、下記で「＋」は活性ありを示し、「−」は活性なしを示している。
【００１８】
（１）性質
【００１９】
細胞の形態：短桿〜球
細胞の配列：２連
グラム染色：＋
運動性：−
胞子形成：−
カタラーゼ反応：−
NO3 → NO2：−
ブドウ糖からのガス発生：−
発酵形式：Ｈｏｍｏ
乳酸の光学型体：Ｌ型
【００２０】
（２）生育の範囲
【００２１】
温度１５℃：−
温度２０℃：＋
温度３０℃：＋
温度４０℃：＋
温度４５℃：＋
温度５０℃：−
【００２２】
ｐＨ４．０：−
ｐＨ４．５：±
ｐＨ５．０：＋
ｐＨ９．０：＋
【００２３】
リトマスミルク酸性化：＋
リトマスミルク還元：＋
リトマスミルク凝固：−
リトマスミルク液化：−
ゼラチン液化：−
食塩要求：−
二酸化炭素要求：−
【００２４】
（３）糖発酵性
【００２５】
アラビノース，Ｌ：−
リボース，Ｄ：＋
キシロース，Ｄ：＋
グルコネート：＋
グルコース：＋
フラクトース：＋
ガラクトース：＋
マンノース：＋
ラムノース：−
セロビオース：＋
ラクトース：−
マルトース：−
メリビオース：−
蔗糖：＋
ラフィノース：−
サリシン：＋
トレハロース：＋
メレジトース：−
マンニトール：＋
ソルビトール：−
澱粉：−
イヌリン：−
【００２６】
蔗糖よりデキストラン：−
分離源：サイレージ
【００２７】
【実施例１】
【００２８】
Ｌ−乳酸製造を主目的としたラクティス３３２は、次の条件で培養した。
【００２９】
培地としては、培地用ＣＳＬを固形分濃度２５％に希釈してＮＨ4ＯＨを加え、ｐＨ８．５に調整後、沈澱を除去したものを固形分濃度２．０％に調整し、これにグルコース１０．０％添加したものを用いた。
【００３０】
また、中和剤として、２５％ＮＨ4ＯＨを用い、温度３７℃、ｐＨ５．５で６４時間培養した。
【００３１】
培養後、集菌し、菌体を洗浄した後に殺菌を行い、凍結乾燥した。
【００３２】
得られた菌体は、乾燥量が培養液１リットルあたり２．９８ｇ、ＴＮＦ活性が６．８９Ｕ／ｍｌ±１．７６（ｎ＝５）、Ｌ−乳酸濃度が１０．０％、光学純度が９６．２％であり、Ｌ−乳酸の製造に適したものであった。
【００３３】
【実施例２】
【００３４】
ＴＮＦ活性を主目的としたラクティス３３２は、次の条件で培養した。
【００３５】
培地としては、培地用ＣＳＬを固形分濃度２５％に希釈してＮＨ4ＯＨを加え、ｐＨ８．５に調整後、沈澱を除去したものを固形分濃度２．０％に調整し、これにグルコース４．０％添加したものを用いた。
【００３６】
また、中和剤として、２５％ＮＨ4ＯＨを用い、温度３７℃、ｐＨ５．５で２４時間培養した。
【００３７】
培養後、集菌し、菌体を洗浄した後に殺菌を行い、凍結乾燥した。
【００３８】
得られた菌体は、乾燥量が培養液１リットルあたり２．６６ｇ、ＴＮＦ活性が７．８４Ｕ／ｍｌ±１．３８（ｎ＝５）、Ｌ−乳酸濃度が３．９８％、光学純度が９６．２％であり、ＴＮＦ活性に優れたものであった。
【００３９】
【試験例１】
【００４０】
本発明に係るラクティス３３２と各種乳酸菌との乳酸生成量及びＬ−乳酸光学純度を比較して、Ｌ−乳酸光学純度が高く、乳酸生成量の多く、糖耐性の高い菌を選択するために、ＣａＣＯ3法を用いてグルコース１０％添加のＣＳＬ培地での培養液中の乳酸生成量を測定した（ＣＳＬ  固形分濃度３％、グルコース１０％、ＣａＣＯ3 ５％、３７℃で２日間）。
【００４１】
なお、本試験は培養時間が短く、乳酸発酵は完結していないが、各乳酸菌の比較が容易であるため敢えてこの条件で試験した。
【００４２】
その結果を表１に示す。
【００４３】
【表１】
0003841495.tif 000002
【００４４】
表１に示すように、本発明に係るラクティス３３２は、他の菌株より乳酸生成量が多かった。
【００４５】
【試験例２】
【００４６】
本発明に係るラクティス３３２によって誘導されたＴＮＦ（腫瘍壊死因子）誘導活性測定値を、市販品であるピシバニール（中外製薬製）と比較した。
【００４７】
なお、測定法はＣａｒｓｗｅｌｌ等の方法による。
【００４８】
その結果を表２に示す。
【００４９】
【表２】
0003841495.tif 000003
【００５０】
【発明の効果】
【００５１】
本発明に係るラクティス３３２は、工業的なＬ−乳酸の生産を行い、その副産物としての菌体をＴＮＦ産生誘導物質として利用できる。