(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
１，２−ビス（ニコチンアミド）プロパンを有効成分として含有する遅発性脳血管攣縮抑制剤。
【発明の詳細な説明】
技術分野
本発明は、ヘムオキシゲナーゼ−１（ＨＯ−１）の誘導または誘導増強剤に関する。
背景技術
ヘムオキシゲナーゼ（Ｈｅｍｅ  Ｏｘｙｇｅｎａｓｅ；ＨＯ）は、ヘム（ｈｅｍｅ）の分解代謝における律速酵素であり、現在までにＨＯには３つの異なるアイソザイム（ｉｓｏｚｙｍｅ）、即ち、ＨＯ−１、ＨＯ−２およびＨＯ−３が知られている。ＨＯ−１は基質であるヘム蛋白、重金属、低酸素やさまざまな酸化ストレスで発現が誘導される酵素である。一方、ＨＯ−２は構成的に発現している酵素である。ＨＯ−３は最近新たに同定されたが、その機能は明らかではない。
少なくともＨＯ−１およびＨＯ−２は肝や脾以外でも、神経細胞や血管内皮細胞、平滑筋細胞をはじめとする生体内のさまざまな細胞や臓器で発現している。また、ＨＯにより生成されるビリベルジン（ｂｉｌｉｖｅｒｄｉｎ）、遊離鉄イオンや一酸化炭素（ＣＯ）は生理的に重要なさまざまな作用を有している。
以上のことから、ＨＯ、特にＨＯ−１は循環器系や神経系などにおけるさまざまな病態生理への関与に興味が持たれている（血管（Ｊａｐａｎｅｓｅ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ）、Ｖｏｌ．２２、Ｎｏ．２、４３−５１、１９９９）。
脳血管攣縮は脳動脈瘤破裂によるクモ膜下出血（ＳＡＨ）後に生じる特異な病態で、ＳＡＨ患者の最も重大な予後不良因子である。脳血管攣縮はＳＡＨに暴露された主幹脳動脈がＳＡＨ発症後４日目から１４日目に狭窄する現象（遅発性攣縮）で、脳虚血の原因となる。最近、本発明者は、遅発性攣縮を起こした脳動脈において、ＨＯ−１が攣縮の程度に平行して著明に誘導されること、および、その際にＨＯ−１が内因性の抗攣縮分子として作用して脳血管攣縮の自然解除に寄与していることを明らかにした（Ｔｈｅ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｉｏｎ、Ｖｏｌ．１０４、Ｎ０．１、５９−６６、Ｊｕｌｙ  １９９９）。
このことから、発症時に誘導されるＨＯ−１は生体防御的分子として機能する可能性があるので、病態においてＨＯ−１の誘導作用または誘導増強作用を有するような薬物があれば、病態の緩解を促進し医療上極めて有用なものとなる可能性がある。しかし、これまでのところ、そのような薬物は全く知られていなかった。
１、２−ビス（ニコチンアミド）プロパンは、いわゆるラジカル捕捉剤として、血管攣縮の抑制に有効であることが知られている（特公昭６１−５５９１１号公報）。しかし、該公報には、ラジカル捕捉剤としての作用および効果の記載はあっても、上記物質がＨＯ−１を誘導または誘導増強することに基づく作用および効果については一切記載されていないし、また、病態においてＨＯ−１が強く誘導されるさまざまな臓器や細胞の病態を緩解し得ることも全く記載されていない。
発明の開示
本発明の目的は、ＨＯ−１を誘導または誘導増強し得る薬剤を提供することである。また、本発明の目的は、正常な状態では実質的に生体への作用を有しないが、病態時にＨＯ−１が強く誘導される臓器や細胞のＨＯ−１をさらに誘導または誘導増強して、病態の緩解を促進し得る薬物を提供することである。
本発明者は、上記目的達成のため鋭意研究を重ねた結果、ラットの脳血管攣縮モデルに１，２−ビス（ニコチンアミド）プロパンを投与すると、その脳底動脈壁細胞で誘導されるＨＯ−１のｍＲＮＡレベルおよびＨＯ−１タンパクの発現レベルが、非投与の場合に比較して著しく上昇し、これに対応して血管攣縮の解除を促進することを見出し、この知見に基づいて本発明を完成させた。
すなわち、本発明は、ニコチンアミド誘導体を有効成分として含有する、ヘムオキシゲナーゼ−１の誘導または誘導増強剤を提供する。また、本発明は、ニコチンアミド誘導体を有効成分として含有し、ヘムオキシゲナーゼ−１を誘導または誘導増強することにより生体内防御反応または細胞障害防御反応を促進する、生体内防御反応または細胞障害防御反応促進剤も提供する。また、ニコチンアミド誘導体を有効成分として含有し、病態時に高いヘムオキシゲナーゼ−１誘導性を示す臓器または細胞の病態を改善促進する、病態改善促進剤を提供する。また、循環器系または神経系などの臓器または細胞の病態を改善促進する病態改善促進剤を提供する。また、本発明は、ニコチンアミド誘導体を有効成分として含有し、ヘムオキシゲナーゼ−１を誘導または誘導増強することによって血管攣縮を抑制する薬剤を提供する。また、特に、ニコチンアミド誘導体が、１，２−ビス（ニコチンアミド）プロパンである、上記いずれかの剤を提供する。
発明を実施するための最良の形態
本発明において、ニコチンアミド誘導体としては、１，２−ビス（ニコチンアミド）プロパン、および、これに類似する構造を有するものなどが挙げられるが、１，２−ビス（ニコチンアミド）プロパンが好ましい。１，２−ビス（ニコチンアミド）プロパンは公知物質であり、例えば、特公昭６１−５５９１１号公報に記載の方法により製造することができる。また、その他のニコチンアミド誘導体も、ＨＯ−１を誘導または誘導増強する作用を誘導または誘導増強する作用を有するものはすべて本発明に含まれ、これらは、公知の方法を用いてあるいは応用して製造することができる。
ヘムオキシゲナーゼ−１（ＨＯ−１）の誘導または誘導増強には、ＨＯ−１のｍＲＮＡもしくはＨＯ−１の発現を誘導し、または、これらの誘導を増強することが含まれる。
生体内防御反応または細胞障害防御反応には、本発明においては、生体内で起こり得るさまざまな細胞障害（例えば、血液や虚血による細胞障害など）に対して予防的に作用する生体内反応や病態改善を促進する生体内反応などが含まれる。
病態時に高いヘムオキシゲナーゼ−１誘導性を示す臓器または細胞には、循環器系、神経系に加えて、かかる性質を有する生体内の臓器または細胞は全て含まれ、また、かかる性質を有する限り、解剖学的、生理学的分類方法に関わらず、全てのものが含まれる。具体的には、脳、肝、脾、神経細胞、血管内皮細胞、平滑筋細胞、脳動脈（脳底動脈など）、グリア細胞などが挙げられる。
投与経路、投与量は、ニコチンアミド誘導体の種類、患者の体型、年齢、体調、疾患の種類や度合い、発症後の経過時間等により、適宜選択することができるが、非経口投与（静注、筋注、皮下注）の場合には、一般に０．０１〜３０００ｍｇ／日の用量で使用される。１、２−ビス（ニコチンアミド）プロパンの場合には、通常、例えば、間欠的または持続的に静脈内投与で行うのが好ましい。
投与時期は、病態の進行に平行して生体防御的にＨＯ−１が誘導されると考えられる時期を含むような任意の時期に投与可能であるが、例えば脳血管攣縮の場合には、発症直後から２週間までの期間内の投与で効果が期待できる。
具体的な治療対象としては、例えば、くも膜下出血などにより生ずる脳血管攣縮に限らず、生体内で生体防御分子としてＨＯ−１が誘導されるような病態環境を有する種々の疾患に有効である。
投与剤型としては、液剤、懸濁剤、乳剤、錠剤、カプセル剤、顆粒剤、細粒剤、粉末剤、散剤、座剤等が挙げられる。このような剤型を調製するためには医薬上許容し得る液体または固体状の適当な賦形剤、充填剤、増量剤、溶剤、乳化剤、滑沢剤、風味補正剤、香料、染料、緩衝物質等の補助剤を加えてもよい。
実施例
以下、実施例を挙げて本発明をさらに詳しく説明するが、本発明はこれらの実施例に限定されるものではない。
実施例１
１，２−ビス（ニコチンアミド）プロパンによる、ラット脳血管攣縮モデルにおけるＨＯ−１ｍＲＮＡの発現の誘導および誘導の増強
ラット脳血管攣縮モデルの作製およびＨＯ−１ｍＲＮＡの発現の測定は、文献記載の方法に準じた（Ｔｈｅ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｉｏｎ、Ｖｏｌ．１０４、Ｎｏ．１、Ｊｕｌｙ  １９９９）。即ち、ＳＤラット大槽内に自家動脈血を１回注入した脳血管攣縮モデル（１回出血モデル）を用いて、１，２−ビス（ニコチンアミド）プロパンの投与による、脳底動脈壁におけるｍＲＮＡの発現変化を検討した。
１回出血モデルは、自家動脈血の大槽内への注入量は、０．５ｍｌとした。自家動脈血の注入直後から、１，２−ビス（ニコチンアミド）プロパンを２日間、静脈内持続投与した（０．２ｍｌ／ｈｒ；１ｍｇ／ｋｇ／ｍｉｎ）。投与後、２日目に脳底動脈壁におけるｍＲＮＡ発現量を、定量的ＲＴ−ＰＣＲ法により測定した。
また、対照として、上記自家動脈血、および／または、上記１，２−ビス（ニコチンアミド）プロパンに代えて、それぞれ生理食塩水を用いて同様に操作した。２日目に測定したのは、１回出血モデルは、２日目に最も強い遅発性血管攣縮が現れるからである。
結果は、ＨＯ−１発現量／ＨＯ−２発現量として、図１に表した（各群ｎ＝５）。データは平均±標準誤差で表した。ここで、ＨＯ−２の発現量を分母に採用したのは、本モデルではＨＯ−２の発現量は変化しないとされていることから、ＨＯ−２発現量を分母にとれば個体差によらずに客観的にＨＯ−１の発現変化を観察することができるからである。図中、ＨＯ−１／ＨＯ−２は、ＨＯ−１発現量／ＨＯ−２の発現量；ｓａｌｉｎｅ  ｉ．ｃ．＋ｓａｌｉｎｅ  ｉ．ｖ．は、大槽内へ生理食塩水を注入し、生理食塩水を静脈内投与したモデル；ｓａｌｉｎｅｉ．ｃ．＋１，２−ビス（ニコチンアミド）プロパンｉ．ｖ．は、大槽内へ生理食塩水を注入し、１，２−ビス（ニコチンアミド）プロパンを静脈内投与したモデル；ｂｌｏｏｄ  ｉ．ｃ．＋ｓａｌｉｎｅ  ｉ．ｖ．は、大槽内へ自家動脈血を注入し、生理食塩水を静脈内投与したモデル；ｂｌｏｏｄ  ｉ．ｃ．＋１，２−ビス（ニコチンアミド）プロパン  ｉ．ｖ．は、大槽内へ自家動脈血を注入し、１，２−ビス（ニコチンアミド）プロパンを静脈内投与したモデル、をそれぞれ意味する。データの統計処理は、分散分析により行い、＊は、ｓａｌｉｎｅ  ｉ．ｃ．に対してｐ＜０．０５；＊＊は、ｂｌｏｏｄ  ｉ．ｃ．＋ｓａｌｉｎｅ  ｉ．ｖ．に対してｐ＜０．０１であることを示す。
図１から、ＨＯ−１ｍＲＮＡの発現量は、自家動脈血注入後１，２−ビス（ニコチンアミド）プロパンを静脈内投与することにより、有意に増加したことがわかる。
実施例２
１，２−ビス（ニコチンアミド）プロパンによる、ラット脳血管攣縮モデルにおけるＨＯ−１タンパクの発現の誘導および誘導の増強
実施例１の動物モデルを用いて、実施例１と同様の処理後のＨＯ−１タンパクの発現の変化を検討した。タンパク発現の変化は、クマシー染色、およびウエスタンブロッティングにより行った（方法は前記文献に記載の方法に準じた）。
結果を図２に示す。図中、上側はクマシー染色、下側はウエスタンブロッティングである。各レーンの説明は、図１の対応する説明と同じである。
図２から、１，２−ビス（ニコチンアミド）プロパンは、自家動脈血注入後にＨＯ−１タンパクを誘導または誘導増強することがわかる。
実施例３
１，２−ビス（ニコチンアミド）プロパンによる、ラット脳血管攣縮モデルにおける脳血管攣縮の改善促進
実施例１のモデルを用いて、脳底動脈径の経時変化を検討した。脳底動脈径の測定は、前記文献記載の方法に準じた。即ち、血管撮影により測定し、投与前の径の変化を０として１日目〜７日目のそれぞれの径を投与前に対する変化率（％）として表した。
また、自家血または生理食塩水の注入は実施例１と同様の方法にしたがった。１，２−ビス（ニコチンアミド）プロパンまたは生理食塩水の静脈内投与は、上記注入直後から７日目まで持続的に行った。
結果を図３に示す（各群ｎ＝３）。データは平均±標準誤差で表した。図中、縦軸は、血管直径の変化率（％）を示す。横軸は、自家動脈血または生理食塩水の大槽内注入の日（Ｄａｙ０）から、７日目（Ｄａｙ７）までを表す。白抜き三角（△）は、実施例１の図１の説明における、ｓａｌｉｎｅ  ｉ．ｃ．＋ｓａｌｉｎｅ  ｉ．ｖ．；白抜き四角（□）は、実施例１の図１の説明における、ｓａｌｉｎｅ  ｉ．ｃ．＋１，２−ビス（ニコチンアミド）プロパン  ｉ．ｖ，；白丸（○）は、実施例１の図１の説明における、ｂｌｏｏｄ  ｉ．ｃ．＋ｓａｌｉｎｅ  ｉ．ｖ．；黒丸（●）は、実施例１の図１の説明における、ｂｌｏｏｄ  ｉ．ｃ．＋１，２−ビス（ニコチンアミド）プロパン  ｉ．ｖ．と、それぞれ同じ意味を表す。データの統計処理は、群内については対応のあるｔ検定により、群間については分散分析により行い、＊は、Ｄａｙ０に対して、Ｐ＜０．０５、＊＊は、Ｄａｙ０に対して、ｐ＜０．０１、＊＊＊は、Ｄａｙ２の白丸（○）に対してｐ＜０．０１を表す。
図３より、１，２−ビス（ニコチンアミド）プロパンは、遅発性脳血管攣縮を著明に改善していることがわかる。また、出血がない場合には脳血管径に影響していないこともわかる。
以上のことから、１，２−ビス（ニコチンアミド）プロパンは、病態時に生体防御的に作用するＨＯ−１の発現を誘導、増強し、病態の緩解を促進するということができ、また、病態時以外は、ほとんど生体に影響してないことから、副作用の少ないＨＯ−１誘導増強剤として期待できる。また、このことは、実施例に示したような脳血管攣縮以外の病態であっても、ＨＯ−１を誘導する他の臓器や細胞の病態に対しても同様な効果を期待できる。
産業上の利用の可能性
本発明によれば、ニコチンアミド誘導体は、病態においてＨＯ−１を誘導または誘導増強して病態の緩解を促進できるので、医療上極めて有用である。特に、１，２−ビス（ニコチンアミド）プロパンは、正常な状態では実質的に生体への作用をせず、実質的に病態時にだけＨＯ−１を誘導または誘導増強するため、副作用が少なくかつ病態の緩解を促進し得る薬物として医療上極めて有用である。
【図面の簡単な説明】
図１は、大槽内注入後２日目のラット脳血管攣縮モデルの脳底動脈壁におけるＨＯ−１ｍＲＮＡの発現量を示すグラフである。
図２は、大槽内注入後２日目のラット脳血管攣縮モデルの脳底動脈壁におけるＨＯ−１タンパクの発現を示すＳＤＳ−ＰＡＧＥパターンである。
図３は、ラット脳血管攣縮モデルの脳底動脈直径の経時変化を示すグラフである。
【図１】
0003860752.tif 000002
【図２】
0003860752.tif 000003
【図３】
0003860752.tif 000004