(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
粒径１ｍｍ以下の薬用人参細胞塊を抽出することを特徴とする高パナキサン含有薬用人参エキスの製造方法であって、該エキスのサポニン抽出量に対するパナキサン抽出量の比が１．５以上である製造方法。
【請求項２】
抽出時間が０．５〜２時間であって、高パナキサン含有薬用人参エキスがエキス固形分１ｇ当たりのパナキサン抽出量が１０ｍｇ以上である請求項１の製造方法。
【請求項３】
薬用人参細胞塊が、薬用人参のカルスを液体培養して得られる細胞塊または薬用人参を天日または加熱乾燥することにより調製されるものである請求項１または２に記載の製造方法。
【請求項４】
薬用人参細胞塊が薬用人参のカルスを液体培養して得られる細胞塊である請求項１〜３のいずれか１項に記載の製造方法。
【請求項５】
薬用人参細胞塊が含水率１０％以下の細胞塊である請求項１〜４のいずれか１項に記載の製造方法。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【産業上の利用分野】
本発明は、血糖降下作用などの薬効を示すパナキサンを多く含有する薬用人参のエキスを効率よく製造することができる方法に関する。
【０００２】
【従来の技術】
薬用人参、例えば、オタネ人参(Panax ginseng C.A.Meyer) 、チクセツ人参 (Panax japonicus C.A.Meyer)、アメリカ人参(Panax quinquefolium L.)、三七人参(Panax notoginseng [Burk] F.H.Chen) 、シベリア人参(Eleutherococcus senticosus)の根は、有用漢方薬として珍重され広く利用させている。薬効としては、古くから強壮、長生などが言われ、現在では血糖降下作用、鎮静、興奮、利尿作用なども明らかにされている。
【０００３】
薬用人参の有効成分としては、パナキサン、サポニン、サポゲニン、ビタミンＢ群、β−シトステロール−Ｄ−ｏ−グルコシドなどが報告されており、このうち最近パナキサンの薬効が明らかにされ、特に注目されている。パナキサンは薬用人参中に多種存在する高分子多糖類であり、現在までにパナキサンＡ〜ＵやカルサンＡ〜Ｅが単離されている。これらいずれのパナキサンについても血糖降下作用を示すことが報告されている。これらの多くの薬効成分を含む薬用人参から抽出されたエキスは、医薬品、食品の原料や化粧品の添加剤として利用されている。
【０００４】
薬用人参エキスは、通常、生の薬用人参（水参）を乾燥した白参または紅参を水および／またはエタノールなどの溶媒で抽出して得られる。市販の薬用人参エキスとしては、例えば、９０％エタノール人参エキスや５０％エタノール人参エキスがある。ここで、白参とは生の薬用人参の皮を剥いで天日または加熱乾燥したものであり、紅参とは生の薬用人参を皮つきのまま熱湯または水蒸気処理した後、天日または加熱乾燥したものである。また、これまでに高品質の薬用人参エキスを短時間でかつ安価に製造する方法が提供されている（特開昭６２−３２５２９号公報参照）。
【０００５】
しかし、白参または紅参の薬用人参細胞塊の粒径は大きい方に分布しており、その平均比表面積は非常に小さい。このように平均比表面積が小さくても、薬用人参エキスやサポニンの抽出が著しく抑制されることはないが、前述した血糖降下作用を示す有効成分パナキサンは、平均比表面積が小さいと十分に抽出されず、パナキサンを多く含有する薬用人参エキスは得られなかった。
【０００６】
【発明が解決しようとする課題】
本発明は、上記従来の欠点を解決するものであり、その目的とするところは、有効成分であるパナキサンを効率よく抽出し、パナキサンを多く含有する薬用人参エキスの製造方法を提供することにある。
【０００７】
【課題を解決するための手段】
本発明の高パナキサン含有薬用人参エキスの製造方法は、有効成分であるパナキサンを効率よく抽出し、パナキサンを多く含有する薬用人参エキスを製造することができる方法であり、粒径１ｍｍ以下の薬用人参細胞塊を抽出することを特徴とする。特に、薬用人参細胞塊が、薬用人参のカルスを液体培養して得られる細胞塊または薬用人参を天日または加熱乾燥することにより調製されるものである態様、および含水率１０％以下の細胞塊である態様が好ましい。
【０００８】
本発明で用いられる薬用人参細胞塊は、薬用人参そのものを乾燥させて得られる乾燥細胞塊、あるいは薬用人参組織から得られたカルスおよび／またはこのカルスを液体培養により増殖させた細胞塊を乾燥させて得られる乾燥細胞塊である。
【０００９】
後者の乾燥細胞塊を得るには、まず、薬用人参の組織を通常の植物組織培養法により培養し、カルスを発生させる。用いられる薬用人参は、オタネ人参、チクセツ人参、アメリカ人参、三七人参、シベリア人参などの既知の薬用人参である。
【００１０】
次に、得られたカルスを液体培養に供し、増殖させる。このカルスは液体培養により無限に増殖させられ得る。液体培養条件は何ら格別である必要はない。培地としては、植物組織培養に通常用いられるムラシゲ−スクーグ(Murashige-Skoog) の培地、ホワイト(White) の培地、オー．エル．ガンボーグ(O. L. Gamborg) のＢ５培地、ニッチェ(Nitsch)の培地、ヘラー(Heller)の培地、モーレル(Morel) の培地などを用いることが可能である。これら培地に、必要であれば、カゼイン分解酵素、大豆粉、コーンスティープリカー、ビタミン類などが添加され得る。
【００１１】
液体培養で得られるカルス（細胞群または細胞塊）は、濾別などの手段により集められる。これら細胞は、最小単位としての単細胞から最大単位としての細胞塊として存在する。細胞塊は、液体培養における振盪または攪拌により、極端に大きくなることはなく、最大直径はせいぜい１５ｍｍ程度である。
【００１２】
薬用人参そのもの、または前記液体培養により得られた細胞塊を天日または加熱乾燥、好ましくは３０〜８０℃、より好ましくは５０〜７０℃の温風下で緩徐に乾燥させる。乾燥温度が８０℃を越える高温下で乾燥を行うと、薬用人参特有の香りが失われたり、含有される有効成分が分解するおそれもあり、乾燥温度が３０℃未満の低温下で乾燥を行うと、長時間を要するので乾燥中に腐敗してしまうおそれがあるが、必ずしも３０〜８０℃の乾燥温度に制限される訳ではない。
【００１３】
また、乾燥後の細胞塊（薬用人参そのものを含む。）の含水率は、１０重量％以下、特に５重量％以下が好ましい。その理由は、含水率が１０重量％を越えると保存性が極端に悪くなるためであるが、保存性が要求されないなどの場合には、必ずしも含水率を１０重量％以下にする必要はない。
【００１４】
このようにして調製された薬用人参細胞塊を、そのままあるいは粉砕器や石臼などで粉砕した後、ふるいなどにより粒径で分画して、粒径１ｍｍ以下、好ましくは７５０μｍ以下、より好ましくは１５０μｍ以下の顆粒ないし粉末状の細胞塊を得る。
【００１５】
粒径１ｍｍ以下の細胞塊を用いて抽出することにより、パナキサンを多く含有する薬用人参エキスを効率よく製造することができる。粒径１ｍｍを越える細胞塊を用いる場合には、粒径の大小にかかわらず、パナキサンは同程度に少ししか抽出されない。但し、抽出時間を長くすることによって、従来のものよりも高パナキサン含有のエキスを得ることが可能ではあるが、本発明方法に比べて極端に長時間を要するだけでなく、顕著なパナキサンの抽出量の増大は望めず、本発明方法により得られる薬用人参エキス程にパナキサンを多く含有するものは得られないので、単に抽出時間を長くする方法は、製造効率が極めて低い。
【００１６】
このようにして得られる粒径１ｍｍ以下の細胞塊に抽出溶媒を加えて、薬用人参エキスが抽出される。抽出溶媒としては、水および／またはアルコールが挙げられる。アルコールとしては、好適には炭素数１〜４の低級アルコールが挙げられ、例えばメタノール、エタノール、プロパノール、イソプロパノール、ブタノールなどが挙げられる。アルコールはそれ単独または２種以上の混合物として用いてもよく、また水と適当な割合〔例えば、エタノール／水（５０／５０）〕で混合して用いてもよい。
【００１７】
抽出溶媒の量は特に限定されないが、顆粒ないし粉末状の細胞塊（乾燥物に換算して）１重量部あたり、通常、３〜２００重量部、好ましくは５〜１００重量部、より好ましくは１０〜５０重量部である。顆粒ないし粉末状の細胞塊（乾燥物に換算して）１重量部あたり抽出溶媒の量が３重量部未満では抽出が不十分となり、２００重量部を越えるとパナキサンの抽出量の増大が望めないだけでなく、後述の濾過、濃縮処理に要する時間が長くなる。
【００１８】
抽出温度は通常、５〜８０℃、好ましくは１５〜７５℃、より好ましくは５０〜７０℃である。５℃以下の低温であっても抽出時間が長くなるが抽出は可能である。抽出温度が８０℃を越えると、薬用人参特有の香りが失われたり、含有する有効成分が分解するおそれがある。抽出を行うには、静置する方法の他、必要に応じて抽出溶媒を攪拌あるいは振盪する方法が採用され、抽出時間は特に限定されず、抽出条件（抽出温度など）により異なるが、通常０．５〜２時間である。
【００１９】
かくして製造される薬用人参エキスは、高含有率でパナキサンを含有し、エキス固形分１ｇ当たりのパナキサン抽出量が通常１０ｍｇ以上、好ましくは２０ｍｇ以上、より好ましくは２５ｍｇ以上である。また、サポニン抽出量に対するパナキサン抽出量の比が通常１．５以上、好ましくは１．７以上、より好ましくは２以上である。
【００２０】
このようにして得られる薬用人参エキスは、そのまま、あるいは必要により更に濾過、遠心分離、濃縮などの適当な処理を施すことによって、高パナキサン含有薬用人参エキスとなる。濾過処理としては、例えばメンブランフィルターを用いた限外濾過、またはケイソウ土濾過などを用いた方法が挙げられる。
【００２１】
本発明方法で製造される高パナキサン含有薬用人参エキスは、そのままで、または適当な担体、添加物とともに製剤化処理、加工処理などを行うことによって、医薬製剤、化粧品、食品などとすることができる。例えば、担体、添加剤としては、医薬上許容されるもの（例えば崩壊剤、賦形剤、保存量、緩衝剤、等張剤など）、食品衛生上許容されるもの、および化粧品成分として許容されるものを使用すればよく、液状、乳液状、懸濁状、クリーム状、固体状、粉末状などのいずれの形態にすることも可能である。
【００２２】
特に、本発明方法で製造される高パナキサン含有薬用人参エキスは、高分子多糖類であるパナキサンを顕著に多く含有するので、飲料に使用すれば沈殿物（不溶物）の発現が軽減でき、粉末状にした場合には吸湿性を抑えることができる。
【００２３】
【実施例】
以下、実施例、比較例および実験例をもって本発明を詳細に述べるが、本発明はこれらによって何ら限定されるものではない。
【００２４】
〔実施例１〕
（Ａ）顆粒ないし粉末状の薬用人参塊の調製：ＭＳ液体培地１００Ｌを容量１５０Ｌの液体培養タンクに仕込み、高圧滅菌した。これに、同培地を用いてあらかじめオタネ人参の根から誘導したカルス２ｋｇを接種し、２５℃にて２週間、通気攪拌培養した。得られた細胞塊１０ｋｇを５０℃の温風で４８時間乾燥して、含水率８重量％とした。粒径６ｍｍ以下の薬用人参細胞塊１．０５ｋｇが得られた。その細胞塊をウイレー型粉砕器により細かく粉砕して、顆粒ないし粉末状の細胞塊が調製された。
【００２５】
（Ｂ）薬用人参エキスの抽出：（Ａ）項で得られた顆粒ないし粉末状の細胞塊を、目の開き１ｍｍのふるいにより粒径１ｍｍ以下の細胞塊に分け、それを５０ｇ採取した後、蒸留水１Ｌを加え振盪しながら７０℃で１時間保温した。これを遠心分離（８０００ｒｐｍ，１５分間）および濾過により細胞塊を除去して、薬用人参エキス溶液が得られた。このエキス溶液の一部をロータリーエバポレーターで減圧濃縮・乾燥して、抽出されたエキスの固形分重量を測定した。
【００２６】
（Ｃ）サポニンの分析：（Ｂ）項で得られたエキス溶液の一部をセッパック（日本ミリポア工業株式会社製）で前処理し、高速液体クロマトグラフィーによりサポニンの一種であるジンセノサイド類の定量を行った。ジンセノサイド類の総和をサポニン抽出量とし、（Ｂ）項で測定したエキス固形分１ｇ当りのサポニン抽出量を算出した。
【００２７】
（Ｄ）パナキサンの分析：（Ｂ）項で得られたエキス溶液を限外濾過膜（旭化成工業株式会社製，分画分子量１万）により濃縮し、さらに一定量の蒸留水を添加し、同様の膜濃縮を５回繰り返して２００ｍｌに定容した。これをパナキサン溶液とした。
【００２８】
得られたパナキサン溶液に同量の２Ｎ硫酸を加え、１００℃で５時間加熱して加水分解を行った。この一定量を減圧濃縮・乾燥し、ＴＭＳ化剤(TMSI-C:N-Trimethylsilyl imidazole, ジーエルサイセンス株式会社製）を添加・攪拌して、ＴＭＳ誘導体を調製した。市販のカラムＤＢ−１（Ｊ＆Ｗ社製，０．２５ｍｍφ×３０ｍ， df=０．２５μｍ，１ｍｅｓｈ）を用い、１００℃から３００℃（１０℃／分）でヘリウム（４０ｍｌ／ｍｉｎ）によりガスクロマトグラフィーを行い、パナキサンの主な構成単糖（ガラクトース、アラビノース、ラムノース）を定量した。この単糖の量からパナキサン量を換算し、（Ｂ）項で測定したエキス固形分１ｇ当りのパナキサン抽出量を算出した。
【００２９】
その結果として、抽出に使用された粒径１ｍｍ以下の細胞塊５０ｇより得られたエキス固形分重量、そのエキス固形分１ｇ当たりのパナキサン抽出量およびサポニン抽出量を表１に示す。
【００３０】
〔比較例１〕
実施例１の（Ｂ）項の薬用人参エキスの抽出において、実施例１の（Ａ）項で得られた顆粒ないし粉末状の細胞塊を、目の開き１ｍｍおよび２ｍｍのふるいにより粒径１ｍｍより大きく２ｍｍ以下の細胞塊に分け、その細胞塊５０ｇを抽出に用い、抽出時間として１時間の他に７２時間も行った以外は、実施例１の（Ｂ）〜（Ｄ）項に準じて抽出・分析を行った。
【００３１】
その結果として、抽出に使用された細胞塊５０ｇより得られたエキス固形分重量、そのエキス固形分１ｇ当たりのパナキサン抽出量およびサポニン抽出量を表１に示す。
【００３２】
〔比較例２〕
実施例１の（Ｂ）項の薬用人参エキスの抽出において、実施例１の（Ａ）項で得られた顆粒ないし粉末状の細胞塊を、目の開き２ｍｍおよび３ｍｍのふるいにより粒径２ｍｍより大きく３ｍｍ以下の細胞塊に分け、その細胞塊５０ｇを抽出に用いた以外は、実施例１の（Ｂ）〜（Ｄ）項に準じて抽出・分析を行った。
【００３３】
その結果として、抽出に使用された細胞塊５０ｇより得られたエキス固形分重量、そのエキス固形分１ｇ当たりのパナキサン抽出量およびサポニン抽出量を表１に示す。
【００３４】
【表１】
0003841458.tif 000002
【００３５】
表１に示したように、実施例１の粒径１ｍｍ以下の細胞塊を用いた場合には、粒径１ｍｍより大きく２ｍｍ以下の細胞塊の場合（比較例１の抽出１時間）や粒径２ｍｍより大きく３ｍｍ以下の細胞塊の場合（比較例２）よりも、エキス固形分重量およびそのエキス固形分１ｇ当たりのサポニン抽出量はわずかに増大したが（約１．２倍程度）、その増大の割合以上に、エキス固形分１ｇ当たりのパナキサン抽出量は著しく増大し（約６倍）、サポニン抽出量に対するパナキサン抽出量の比が、比較例１および２では０．４程度だったのが、約１．９にまで増大した。
【００３６】
比較例１で、抽出時間を７２時間に延長した場合に、エキス固形分１ｇ当たりのパナキサン抽出量は、抽出時間が１時間の場合の約４倍近くに増大したが、実施例１の場合には及ばず、実施例１での抽出量の約０．６倍に過ぎなかった。また、サポニン抽出量に対するパナキサン抽出量の比は約１．１に過ぎなかった。
【００３７】
〔実施例２〕
（Ａ）薬用人参エキスの抽出：オタネ人参の根の乾燥品（紅参）を一辺が１〜３ｍｍの小片に裁断し、これをハンディータイプの粉砕器で粒径３ｍｍ以下の顆粒ないし粉末状の細胞塊を得た。得られた細胞塊を、目の開き０．７１ｍｍのふるいにより粒径０．７１ｍｍ以下の細胞塊を分画し、この細胞塊２ｇに蒸留水２００ｍｌを加え、室温（２５℃）で２４時間攪拌しながら放置した。これを吸引濾過して濾液を得、さらに０．４５μｍメンブレンフィルター（アドバンテック東洋株式会社製，セルロースニトレートタイプ）で濾過して、薬用人参エキス溶液を得た。このエキス溶液の一部をロータリーエバポレーターで減圧濃縮・乾燥して、抽出されたエキスの固形分重量を測定した。
【００３８】
（Ｂ）サポニンの分析：（Ａ）項で得られたエキス溶液の一部を実施例１の（Ｃ）項に準じて、サポニン抽出量を定量し、（Ａ）項で測定したエキス固形分１ｇ当たりのサポニン抽出量を算出した。
【００３９】
（Ｃ）パナキサンの分析：（Ａ）項で得られたエキス溶液を限外濾過膜（旭化成工業株式会社製，分画分子量１万）により濃縮し、さらに一定量の蒸留水を添加し、同様の膜濃縮を５回繰り返し５０ｍｌに定容して、これをパナキサン溶液とした。
【００４０】
得られたパナキサン溶液を実施例１の（Ｄ）項に準じて分析し、（Ａ）項で測定したエキス固形分１ｇ当りのパナキサン抽出量を算出した。
【００４１】
その結果として、抽出に使用された粒径０．７１ｍｍ以下の細胞塊２ｇより得られたエキス固形分重量、そのエキス固形分１ｇ当たりのパナキサン抽出量およびサポニン抽出量を表２に示す。
【００４２】
〔比較例３〕
実施例２の（Ａ）項の薬用人参エキスの抽出において、粉砕器により得られた顆粒ないし粉末状の細胞塊を、目の開き１ｍｍおよび２ｍｍのふるいにより粒径１ｍｍより大きく２ｍｍ以下の細胞塊を分画した以外は、実施例２の（Ａ）〜（Ｃ）項に準じて抽出・分析を行った。
【００４３】
その結果として、抽出に使用された細胞塊２ｇより得られたエキス固形分重量、そのエキス固形分１ｇ当たりのパナキサン抽出量およびサポニン抽出量を表２に示す。
【００４４】
【表２】
0003841458.tif 000003
【００４５】
表２に示したように、実施例１の液体培養により得られた薬用人参細胞塊の場合と同様に、オタネ人参根の乾燥品の場合にも、粒径０．７１ｍｍ以下に分画することにより、エキス固形分重量およびそのエキス固形分１ｇ当たりのサポニン抽出量はわずかに増大したが（約１．１倍程度）、その増大の割合以上にエキス固形分１ｇ当たりのパナキサン抽出量は著しく増大し、エキス固形分１ｇ当たりのパナキサン抽出量が１０倍以上増大した。また、サポニン抽出量に対するパナキサン抽出量の比が、比較例３では０．２程度だったのが、約２にまで増大した。
【００４６】
【発明の効果】
本発明方法によれば、血糖降下作用を示すパナキサンを多く含有する薬用人参エキスが効率的に抽出される。当然のことながら、細胞塊の粒径が１ｍｍ以下になると、反比例して平均比表面積は大きくなり、粒径１ｍｍを越える場合に比べて、薬用人参エキスの固形分重量は１．２〜１．３倍に増大する。しかし、細胞塊の粒径が１ｍｍ以下になると、わずかに増大するエキス固形分１ｇ当りのサポニン抽出量がせいぜい１．５倍程度しか増大しないのに対して、エキス固形分１ｇ当りのパナキサン抽出量は２倍から１０倍以上増大する。すなわち、細胞塊の粒径１ｍｍを境にして、薬用人参エキスの固形分重量およびサポニン抽出量が増大する割合より、顕著に大きな割合でパナキサン抽出量が増大して、血糖降下作用を示すパナキサンを多く含有する薬用人参エキスが効率よく抽出される。
【００４７】
また、本発明方法で製造される高パナキサン含有薬用人参エキスは、従来のパナキサン含有薬用人参エキスに比べてパナキサンを顕著に多く含有するので、パナキサンの薬効（例えば血糖降下作用）が顕著に現れる医薬製剤、化粧品、食品などを調製することが可能となる。特に、サポニン抽出量に対するパナキサン抽出量の比が１．５以上である薬用人参エキスは、従来のパナキサン含有薬用人参エキスに比べて、サポニン抽出量に対するパナキサン抽出量の比が大きいので、薬用人参エキスを用いて医薬製剤、化粧品、食品（飲料など）を調製する際、加工処理によりサポニンが分解され、沈殿物（不溶物）が生ずるのを軽減することができる。