(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
ホタテガイ中腸腺にプロテアーゼを作用させて、遊離される高度不飽和脂肪酸含有油を分離採取し、次いで脱ガム工程、脱酸工程、及び脱色工程を含む工程により精製してホタテガイ中腸腺油を製造する方法。
【請求項２】
請求項１の方法により得られるホタテガイ中腸腺油をエチルエステル化あるいはメチルエステル化し、尿素付加分別工程を含む工程により精製し、その脂肪酸組成が、エイコサペンタエン酸６０％以上、且つアラキドン酸１．０％未満である高度不飽和脂肪酸含有油を製造する方法。
【請求項３】
請求項１記載の方法により得られるホタテガイ中腸腺油。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は、高度不飽和脂肪酸含有油の製造方法に関し、特にホタテガイ中腸腺を原料とした、エイコサペンタエン酸含有量が高く、且つアラキドン酸含有量が低い高度不飽和脂肪酸含有油及びその製造方法に関する。
【０００２】
【従来の技術】
エイコサペンタエン酸（以下「ＥＰＡ」と称することがある）は様々な薬効を有するために、エチルエステル体として医薬品の認可を受けている。その製造法としては、高度不飽和脂肪酸の油脂を豊富に含有するイワシ、アンチョビー、メンヘーデン、ピルチャード等の魚を圧搾して採油し、得られる魚油を蒸留法、尿素付加分別法、クロマト分別法などの様々な手段を用いて精製し、精密蒸留等により濃縮して医薬品とする方法が用いられている。
【０００３】
上記方法において課題となっているのは、ＥＰＡと同じく高度不飽和脂肪酸の仲間であるドコサヘキサエン酸（以下「ＤＨＡ」と称することがある）、及びアラキドン酸（以下「ＡＡ」と称することがある）の除去である。特にＡＡはＥＰＡに極めて近い分子構造を有しながら、ＥＰＡとは逆の薬理作用を有し、また発疹等の障害を引き起こすと報告されており、その効率的な除去方法について種々の研究が為されている。特開平４−１０３５５８号には、ＥＰＡを銀錯体として抽出してＡＡ等から分離精製する方法が開示されている。しかし、この方法は高価な硝酸銀を使用するために工業的に有利な方法とはいえない。
【０００４】
本発明者らは、原料油として、ＥＰＡの含有量が高く、且つＡＡの含有量が低いものを用いれば、高価な分離手段に拠らずとも純度の高いＥＰＡを得ることができると考え、種々の原料油を検討した。その結果、ホタテガイ中腸腺（以下  「ホタテウロ」と称することがある）を原料とする油脂（以下「ホタテウロ油」と称することがある）が好適であるという知見を得た。ホタテウロ油は、粗油の段階でイワシ油と比較すると、以下に示すように脂肪酸組成でＥＰＡが約１０％多く、かつＡＡがイワシ油のそれの約４分の１程度である。
ホタテウロ粗油（％）            イワシ粗油（％）
ＥＰＡ              ３１                  ２０
ＡＡ                  ０．３１              １．２
ＡＡ／ＥＰＡ（％）    １．０％              ６．０％
しかし、ホタテウロ油はイワシ油と違って圧搾により採油することができず、又タンパク質等も多く含まれているため、ホタテウロ油を原料としてＥＰＡを製造することは、未だ工業的規模で行われていない。
【０００５】
【発明が解決しようとする課題】
そこで本発明は上記の課題を解決し、ホタテウロから、ＥＰＡ含有量が高く、且つアラキドン酸重量濃度が低いホタテウロ油を効率良く製造し、高純度ＥＰＡ又はそのエステルの原料として供する方法を提供することを課題とする。
【０００６】
【課題を解決するための手段】
すなわち本発明は、ホタテガイ中腸腺にプロテアーゼを作用させて、遊離される高度不飽和脂肪酸含有油を分離採取し、次いで脱ガム工程、脱酸工程、及び脱色工程を含む工程により精製して得られるホタテガイ中腸腺油及びその製造方法に関する。
【０００７】
又本発明は、上記の方法により得られるホタテガイ中腸腺油をエチルエステル化あるいはメチルエステル化し、尿素付加分別工程を含む工程により精製し、その脂肪酸組成が、エイコサペンタエン酸６０％以上、且つアラキドン酸１．０％未満である高度不飽和脂肪酸含有油を製造する方法に関する。
【０００８】
さらに、本発明は上記の方法により得られるホタテガイ中腸腺油に関する。
【０００９】
【発明の実施の形態】
本発明において、高度不飽和脂肪酸とは不飽和度３以上の脂肪酸を意味し、高度不飽和脂肪酸含有油とは、高度不飽和脂肪酸及び／又はそのエステルを含有する油をいう。エステルには、メチルエステル、エチルエステル、トリグイセライド等の種々のエステルが含まれる。
【００１０】
本発明で用いられるホタテウロは、いずれの水揚げ地のものであってもよく、また生であっても、茹でてあるものでもよいが、比較的油分含有量が高い５月から１０月に水揚げされたものが好ましい。また、中腸腺以外の部位、例えば生殖腺、外套部、貝殻等が含まれていないものが、採油率を高くすることができる点と、油分中のＥＰＡ含有量が多い点で好ましい。
【００１１】
本発明においては、ホタテウロにプロテアーゼを作用させ、高度不飽和脂肪酸含有油を採取することを特徴とする。ホタテウロに加える水の量は、流動性の確保と油分の分離促進の点から、ホタテウロ１部あたり約０．１〜１０部、好ましくは２〜５部が適切である。
【００１２】
プロテアーゼとしては、タンパク質を分解し得る酵素であれば、いずれの酵素であってもよく、それを単独であるいは混合して使用することができる。酵素の起源としては、動植物のほか微生物に由来するものでもよく、ペプシン、ブロメライン、レニン、トリプシン、キモトリプシンの他、細菌プロテアーゼ、糸状菌プロテアーゼ、放線菌プロテアーゼ等も広く利用できる。これらの酵素は、市販されている精製品だけでなく、未精製酵素、酵素を含有する培養液または麹等の酵素含有物の形の物も使用することができる。
【００１３】
プロテアーゼの添加量は、その力価、および処理温度及び時間等に依存して適宜定められるが、典型的にはホタテウロ重量の０．０１〜５重量％、好ましくは０．１〜２重量％である。
【００１４】
プロテアーゼの蛋白質分解反応は、約１０〜７０℃、好ましくは３０〜５０℃に加温し、ｐＨを約３〜９、好ましくは５〜８に調整して、約０．５〜２４時間、好ましくは３〜５時間撹拌して行う。所定時間後、反応を停止するために、１０〜１５分間、９０℃以上に加熱してプロテアーゼを失活させる。
【００１５】
上記反応で得られた液から、例えば遠心分離機にて３０００〜１０，０００ｒｐｍで５〜１０分間遠心分離をすること等によって、油分を分離採取する。このようにして採油率（抽出油重量／粗脂肪重量×１００）、９５％以上を達成することができる。
【００１６】
採取された粗油は、脱ガム工程、脱酸工程、及び脱色工程を含む工程により精製される。これらの工程の順序は特に限定されないが、脱色工程は最後に行うことが望ましい。
【００１７】
脱ガム方法としては、リン酸、ホウ酸又は食塩を加えて行う方法があるが、リン酸の添加による方法がガム質が容易に凝固する点で好ましい。生成するガム状物を遠心分離によって除去する。
【００１８】
脱酸方法としては、例えばカ性ソーダや炭酸ソーダ等の添加による中和法、メタノール、アセトン等の溶剤で洗浄する方法などがあるが、不純物、例えば色素、不ケン化物等を効率良く除去できる点で中和法が好ましい。また脱酸は連続法であっても回分法であってもよい。脱酸処理された油を、遠心分離し、脱酸油を採取する。次いで脱酸油を水洗し、脱水する。
【００１９】
その後、酸性白土や活性白土、活性炭による吸着脱色等により脱色してホタテウロ油を得る。さらに、食用油として供する場合等には、脱臭工程等を施してもよい。
【００２０】
ホタテウロ油のエチルエステル化あるいはメチルエステル化は、公知のエステル交換法により行うことができ、例えばホタテウロ油に２％水酸化ナトリウムエタノール溶液又は１０％硫酸エタノール溶液を添加して、約２０〜５０℃で２〜１２時間加熱撹拌してエステル交換し、靜置分離によりグリセリンを除去後、水洗することによって行う。
【００２１】
次に、上記エチルエステル化物あるいはメチルエステル化物を、尿素付加分別工程を含む工程により精製する。すなわち、エチルエステル化物あるいはメチルエステル化物に、１〜５倍重量の、好ましくは３〜４倍重量の尿素を加え、さらに該尿素の２〜５倍容量のエタノール水溶液（約８０〜９０％）又はアセトン水溶液（約８０〜９０％）を加えて、６０〜７０℃に加温し、尿素を溶解させる。約１０分間、該温度で撹拌した後、５〜３０℃に冷却して尿素に付加する脂肪酸エステルを沈澱させ、濾別して除去する。濾液から溶媒を留去した後、水洗、脱水し、必要であれば上述したような方法で脱色工程を施す。
【００２２】
以上のようにして得られる高度不飽和脂肪酸含有油は、その脂肪酸組成が、エイコサペンタエン酸６０％以上、アラキドン酸１．０％未満であることを特徴とする。このように、アラキドン酸のエイコサペンタエン酸に対する相対含有量が、２％以下、好ましくは１％以下、にすることができるので、それ以上銀錯体法や特殊なクロマトグラフ法等により精製しなくとも、精密蒸留法、又は通常の高速クロマトグラフ等を用いて、純度９６．５％以上のエイコサペンタエン酸エチルを得ることができる。従って、工業的に極めて有利である。なお、本発明における脂肪酸組成は、脂肪酸メチルエステル又はエチルエステルをガスクロマトグラフィー分析して得られるクロマトグラムのピーク面積より求めた値をいい、その測定の詳細については後述する。
【００２３】
【実施例】
以下実施例により、本発明をより具体的に説明する。
【００２４】
【実施例１】
ホタテウロは北海道渡島管内で水揚げされたホタテガイを原料とし、同管内の水産加工場で排出されたものを用いた。表１にその一般性状を示す。該ウロ１０ｋｇに４０リットルのイオン交換水と、バチルス属に属する微生物由来のプロテアーゼ（プロチンＰＣ−１０、大和化成株式会社製）１００ｇを加え、５０℃で４時間撹拌した。９０℃で１０分間加熱してプロテアーゼを失活後、３，０００ｒｐｍで１０分間遠心分離し、油分６４０ｇを得た。採油率は９５．５％であった。得られた油の一般性状及び脂肪酸組成を表２に示す。脂肪酸組成は、油を０．１Ｎナトリウムメチラートメタノール溶液でメチルエステル化し、下記条件のガスクロマトグラフィー分析に供し、得られたクロマトグラムにおける総ての脂肪酸メチルのピーク面積の総和に対する各脂肪酸メチルの面積％を計算して求めた。
0003836231.tif 000002
次に、得られた油１００ｇに、リン酸（８５％）１ｇを添加し、生成した沈澱物を３，０００ｒｐｍで１０分間遠心分離して除去した後、１０％水酸化ナトリウム水溶液を３ｍｌ添加し、１０分間撹拌した後、遠心分離により沈澱物を除去して脱酸した。次いで水洗、脱水後、活性白土（水澤化学株式会社製）５ｇを加えて脱色し、色調（Ｇ）８の精製油９３ｇを得た。上記精製工程によるホタテウロ精製油の脂肪酸組成の変化は無く、粗油の脂肪酸組成と同一であった。
【００２５】
得られた精製油に２％水酸化ナトリウムエタノール溶液３０ｍｌを加え、３０℃で１０時間撹拌してエチルエステル化し、グリセリンを除去した後、水洗、脱水して脂肪酸エチルエステル混合物８３ｇを得た。該混合物に尿素（試薬１級）３００ｇと、８５％エタノール水溶液７５０ｍリットルとを加え、６０℃に加温して尿素を溶解させた後、その温度で１０分間撹拌後２０℃に冷却し、生成した沈澱物を濾別して除去した。濾液中の溶媒をロータリーエバポレーターで留去した後、水洗、脱水後、活性白土１ｇを加えて脱色し、表３に示す組成の脂肪酸エチルエステル混合物３５ｇを得た。
表３  ホタテウロ油（精製油）から得られた脂肪酸混合物の組成
脂肪酸組成            （％）
ＡＡ                  ０．５９
ＥＰＡ              ６１．２７
ＤＨＡ              １６．３０
上記脂肪酸エチルエステル混合物を、精密蒸留し、純度９６．５％のエイコサペンタエン酸エチルを得た。
【００２６】
【比較例１】
実施例１で用いたものと同じホタテウロ１０ｋｇをミキサーで破砕した後、イオン交換水４０リットルを加え、５０℃で４時間撹拌した。その後、９０℃で１０分間加熱し、３，０００ｒｐｍで１０分間遠心分離し、油分１５０ｇを得た。採油率は２２．４％であり、実施例１に記載したプロテアーゼ処理を施した場合と比べて著しく低い値であった。
【００２７】
【比較例２】
イワシ油１００ｇに２％水酸化ナトリウムエタノール溶液３０ｍｌを加え、３０℃で１０時間撹拌することによりエチルエステル化し、グリセリンを除去した後、水洗、脱水して脂肪酸エチルエステル混合物９２ｇを得た。該混合物に尿素３６０ｇと、８５％エタノール水溶液９００ｍリットルとを加え、６０℃に加温して尿素を溶解させた後、２０℃に冷却し、生成した沈澱物を濾別して除去した。濾液中の溶媒をロータリーエバポレーターで留去した後、水洗、脱水後、活性白土１ｇを加えて脱色し、表４に示す組成を有する脂肪酸エチルエステル混合物３３ｇを得た。
【００２８】
表４  イワシ油から得られた脂肪酸混合物の組成
脂肪酸組成            （％）
ＡＡ                  ３．３４
ＥＰＡ              ４４．３５
ＤＨＡ              ２０．３２
表３と表４を比較すると、ホタテウロ油はイワシ油に比べ、ＥＰＡ含有量が高く、且つＡＡ含有量が低く優れたＥＰＡ原料であることが分かる。
【００２９】
【発明の効果】
本発明によれば、ホタテウロをプロテアーゼ処理し適切な精製工程を施すことによって、効率良くホタテウロ油を製造することができる。該ホタテウロ油はイワシ油等に比べてＥＰＡ含有量が高く、且つＡＡ含有量が低いので、尿素付加工程による分別だけで、その脂肪酸組成がエイコサペンタエン酸６０％以上、且つアラキドン酸１．０％未満である高度不飽和脂肪酸含有油を得ることができ、高純度エイコサペンタエン酸エチルの好適な原料として供することができる。