(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
一般式（Ｉ）
【化１】
0003860639.tif 000007
［式中、Ｒ1 はアミノ基の保護基を意味し、
Ｒ2 は水素原子、炭素数１から６のアルキル基または炭素数２から７のアルコキシアルキル基を意味する。］
で表されるγ−置換アミノ−β−ヒドロキシ酪酸誘導体を、ブレビバクテリウム属またはロドトルーラ属に属する微生物の培養液、該微生物菌体または該微生物菌体処理物の存在下で処理し、β位の水酸基の立体配置のどちらか一方の配置をもう一方の配置へ変換させることを特徴とする、β位の水酸基の立体配置の一方の配置を有するγ−置換アミノ−β−ヒドロキシ酪酸誘導体を優位に得る製造法。
【請求項２】
Ｒ2 が水素原子である請求項１記載の製造法。
【請求項３】
一般式（Ｉ）で表されるγ−置換アミノ−β−ヒドロキシ酪酸誘導体が異性体の混合物である請求項１または２記載の製造法。
【請求項４】
一般式（Ｉ）で表されるγ−置換アミノ−β−ヒドロキシ酪酸誘導体がβ位の水酸基の立体配置がどちらか一方のみの化合物である請求項１または２記載の製造法。
【請求項５】
β位の水酸基がＲ配置である化合物を優位に得る請求項１から４のいずれか一項記載の製造法。
【請求項６】
微生物がブレビバクテリウム（Brevibacterium）属の微生物である請求項５記載の製造法。
【請求項７】
ブレビバクテリウム（Brevibacterium）属の微生物がＩＦＯ１２１７０である請求項６記載の製造法。
【請求項８】
β位の水酸基がＳ配置である化合物を優位に得る請求項１から４のいずれか一項記載の製造法。
【請求項９】
微生物がロドトル−ラ（Rhodotolura）属の微生物である請求項８記載の製造法。
【請求項１０】
ロドトル−ラ（Rhodotolura）属の微生物がＩＦＯ０００２である請求項９記載の製造法。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【産業上の利用分野】
本発明は、光学活性なγ−置換アミノ−β−ヒドロキシ酪酸誘導体の微生物を利用する製造法に関する。
【０００２】
光学活性なγ−置換アミノ−β−ヒドロキシ酪酸誘導体は種々の医薬品の製造中間体として重要である。
【０００３】
【従来の技術】
一般式（Ｉ）で表される光学活性なγ−置換アミノ−β−ヒドロキシ酪酸誘導体の製造法は従来、ラセミ体と光学活性な酸または塩基を反応させて塩とし、これを分別再結晶する（特開昭５２−１３３９２０号）等の手法が知られていた。
【０００４】
【発明が解決しようとする課題】
しかし、光学分割法は高価な分割剤を用いることや最大理論収率が５０％にしかならない等の問題点があった。
【０００５】
【課題を解決するための手段】
そこで、本発明者らは、一般式（Ｉ）で表される化合物を微生物を用いて処理したところ、収率よく光学純度の高いγ−置換アミノ−β−ヒドロキシ酪酸誘導体が得られることを見出し、本発明を完成させた。
【０００６】
すなわち、本発明は一般式（Ｉ）
【０００７】
【化２】
0003860639.tif 000002
［式中、Ｒ1 はアミノ基の保護基を意味し、
Ｒ2 は水素原子、炭素数１から６のアルキル基または炭素数２から７のアルコキシアルキル基を意味する。］
で表されるγ−置換アミノ−β−ヒドロキシ酪酸誘導体に、微生物の培養液、該微生物菌体または該微生物菌体処理物の存在下で処理し、β位の水酸基の立体配置のどちらか一方の配置をもう一方の配置へ変換させることを特徴とする、β位の水酸基の立体配置の一方の配置を有するγ−置換アミノ−β−ヒドロキシ酪酸誘導体を優位に得る製造法に関する。
【０００８】
また、本発明は一般式（Ｉ）で表されるγ−置換アミノ−β−ヒドロキシ酪酸誘導体が異性体の混合物である上記の製造法に関する。
【０００９】
あるいは、本発明は一般式（Ｉ）で表されるγ−置換アミノ−β−ヒドロキシ酪酸誘導体がβ位の水酸基の立体配置がどちらか一方のみの化合物である上記の製造法に関する。
【００１０】
さらに、微生物が不斉酸化・還元能を有する微生物である上記の製造法に関する。
【００１１】
そして、β位の水酸基がＲ配置であるγ−置換アミノ−β−ヒドロキシ酪酸誘導体を優位に得る製造法に関する。
【００１２】
また、微生物がブレビバクテリウム(Brevibacterium)属の微生物であって、γ−置換アミノ−β−ヒドロキシ酪酸誘導体のβ位の水酸基の立体配置をＳからＲへ変換する製造法に関する。
【００１３】
さらに、ブレビバクテリウム(Brevibacterium)属の微生物がＩＦＯ１２１７０である上記の製造法に関する。
【００１４】
あるいは、β位の水酸基がＳ配置であるγ−置換アミノ−β−ヒドロキシ酪酸誘導体を優位に得る製造法に関する。
【００１５】
また、微生物がロドトル−ラ(Rhodotolura)属の微生物で、γ−置換アミノ−β−ヒドロキシ酪酸誘導体のβ位の水酸基の立体配置をＲからＳへ変換する上記の製造法に関する。
【００１６】
さらに、ロドトル−ラ(Rhodotolura)属の微生物がＩＦＯ０００２である上記の製造法に関する。
【００１７】
そして、不斉炭素に結合した水酸基を有する化合物を、ブレビバクテリウム属またはロドトル−ラ属の微生物の培養液、該微生物菌体または該微生物菌体処理物の存在下で処理し、水酸基の立体配置のどちらか一方の配置をもう一方の配置へ変換させることを特徴とする、水酸基の立体配置の一方の配置を有する化合物を優位に得る製造法に関する。
【００１８】
また、微生物がブレビバクテリウム属の微生物であって、水酸基の立体配置をＳからＲへ変換する、不斉炭素に結合した水酸基を有する化合物の製造法に関する。
【００１９】
さらに、ブレビバクテリウム属の微生物がＩＦＯ１２１７０である上記の製造法に関する。
【００２０】
あるいは、微生物がロドトル−ラ属の微生物であって、水酸基の立体配置をＲからＳへ変換する、不斉炭素に結合した水酸基を有する化合物の製造法に関する。
【００２１】
そして、ロドトル−ラ属の微生物がＩＦＯ０００２である上記の製造法に関する。
【００２２】
一般式（Ｉ）中のＲ1 のアミノ基の保護基としては、通常使用される保護基でよいが、例えば、第三級ブトキシカルボニル基、２，２，２−トリクロロエトキシカルボニル基等のアルコキシカルボニル基類、ベンジルオキシカルボニル基、パラメトキシベンジルオキシカルボニル基、パラニトロベンジルオキシカルボニル基等のアラルキルオキシカルボニル基類、アセチル基、メトキシアセチル基、トリフルオロアセチル基、クロロアセチル基、ピバロイル基、ホルミル基、ベンゾイル基等のアシル基類、第三級ブチル基、ベンジル基、パラニトロベンジル基、パラメトキシベンジル基、トリフェニルメチル基等のアルキル基類又はアラルキル基類、メタンスルホニル基、トリフルオロメタンスルホニル基等のアルキルスルホニル基類あるいはハロゲノアルキルスルホニル基類、そしてベンゼンスルホニル基、トルエンスルホニル基等のアリールスルホニル基等を挙げることができる。
【００２３】
本発明の製造法は、γ−置換アミノ−β−ヒドロキシ酪酸誘導体のβ位の不斉構造部分を認識して、化３に示した化合物の一方の立体異性体の水酸基に対する不斉酸化・還元が起こることを特徴とするものである。
【００２４】
【化３】
0003860639.tif 000003
【００２５】
基質となるγ−置換アミノ−β−ヒドロキシ酪酸誘導体は、β位の立体配置がＲの化合物とＳの化合物の混じりでもよく、β位の立体配置がＲの化合物またはＳの化合物どちらか一方のみからなるものであってもよい。
【００２６】
β位の立体配置がＲの化合物とＳの化合物の混じりである場合は、β位の立体配置がＲの化合物とＳの化合物どちらか一方の立体配置を有する化合物のみが変換され、β位の立体配置がＲの化合物またはＳの化合物のどちらか一方の化合物を優先的に得ることができる。
【００２７】
β位の立体配置がＲの化合物またはＳの化合物どちらか一方のみからなるものである場合は、β位の立体配置がＲからＳに、またはβ位の立体配置がＳからＲに変換され、β位の水酸基の立体配置が処理前とは異なる立体配置を有する化合物を優位に得ることができる。
【００２８】
また、本発明の製造法によって不斉酸化・還元が可能な基質としては、一般式（Ｉ）で表わされるγ−置換アミノ−β−ヒドロキシ酪酸誘導体のみならず、これと炭素鎖が同じで、β位に水酸基、γ位に置換アミノ基を有するカルボン酸誘導体であればよく、α位に置換基を有する化合物や、γ位にさらに置換基を有する化合物でも同様の不斉認識が期待され、不斉酸化・還元が行われると予想される。
【００２９】
本発明には微生物の培養液、該微生物菌体または該微生物菌体処理物が使用されるが、目的とする化合物の水酸基の立体配置によって微生物を使い分ければよい。例えば、水酸基がＲ配置である化合物が必要な場合は、ブレビバクテリウム属に属する微生物の培養液等を用いればよく、水酸基がＳ配置である化合物が必要な場合は、ロドトルーラ属に属する微生物の培養液等を用いればよい。
【００３０】
本発明には、ブレビバクテリウム属またはロドトルーラ属に属する微生物の培養液、該微生物菌体または該微生物菌体処理物が使用される。
【００３１】
微生物の培養液とは、当該微生物を適当な培地で培養したもので、増殖した微生物菌体およびその代謝物を含むものである。
【００３２】
微生物の菌体とは、培養液から遠心分離、濾過等により集菌された生菌体、あるいは、真空乾燥菌体、凍結乾燥菌体および有機溶媒による乾燥菌体等の乾燥菌体などである。
【００３３】
微生物菌体処理物としては、微生物菌体の抽出物や微生物菌体の磨砕物、微生物菌体を超音波処理ものや、さらには、それらをクロマトグラフィー、濾過等の公知の方法により分画し、本発明の不斉酸化・還元の処理に必要な成分を分離したものである。なお、この分画物に含まれる処理に必要な成分は完全に純粋な状態でなくともよく、他の成分を含んでいてもよい。
【００３４】
また、菌体を公知の方法によって水不溶の担体（例えば、アクリルアミドゲル）などに固定化したものを使用してもよい。
【００３５】
なお、ＩＦＯ番号の付された微生物は（財）発酵研究所（ＩＦＯ）発行のList of cultures，第９版（１９９２）に記載されており、ＩＦＯから入手することができる。
【００３６】
本発明の製法は、以下のようにして実施される。
【００３７】
まず一般式（Ｉ）で表される化合物を適当な培養液に加え、微生物の培養液、該微生物菌体または該微生物菌体処理物を添加し、反応液を振盪培養させることにより行う。処理終了後、反応液をろ過、分液、減圧濃縮等の通常の操作を用いることにより目的化合物を単離することができる。
【００３８】
処理温度は、１０℃から４０℃の範囲であればよいが、好ましくは３０℃付近である。
【００３９】
処理液のｐＨは、５から７の範囲であればよい。
【００４０】
処理時間は、３日間から７日間の範囲であればよいが、５日間程度が好ましい。
【００４１】
処理液中の一般式Ｉで表される化合物の濃度は特に制限はないが、０．１から１．０％が好ましい。
【００４２】
得られた化合物は、種々の医薬品およびその誘導体の製造中間体として有用であり、例えば、以下
【００４３】
【化４】
0003860639.tif 000004
のように変換を行い下記の構造式で表わされる経口β−メチルカルバペネム系抗生物質（特開平２−２２３５８７号）の３位側鎖部分の合成に用いることができる。
【００４４】
【化５】
0003860639.tif 000005
以下に本発明を実施例あるいは参考例により具体的に説明するが本発明はこれらに限定されるものではない。
【００４５】
【実施例】
参考例１
普通ブイヨン培地（ｐＨ７．０）を試験管に４ ml 分注し、オートクレーブにて加熱滅菌した。試験管の培地にブレビバクテリウム属（ＩＦＯ１２１７０）の種菌を接種し３０℃で２晩振盪培養し、菌体培養液を得た。
実施例１
ブレビバクテリウム属細菌（ＩＦＯ１２１７０）による（Ｒ）−４−ベンジルオキシカルボニルアミノ−３−ヒドロキシブタン酸の製造
ブドウ糖２％、ペプトン０．２％、酵素エキス０．２％、塩酸アンモニウム１％、リン酸水素二カリウム０．２５％、リン酸二水素カリウム０．２５％、硫酸第一鉄(FeSO4 ・7H2O)０．００９％からなる液体培地（ｐＨ７．０）を坂口フラスコに５０ ml 分注し、オートクレーブにて加熱滅菌した。この培養液に無菌的に４−ベンジルオキシカルボニルアミノ−３−ヒドロキシブタン酸８０ mg を加え、次いでブレビバクテリウム属（ＩＦＯ１２１７０）の種菌を２ｍｌ接種し３０℃で一週間振盪培養した。反応液に１Ｎ塩酸５ ml と酢酸エチル１００ ml を加えセライトろ過により菌体を除いた。水層を更に酢酸エチル１００ ml で２回抽出し、有機層を乾燥後、溶媒を留去した。残渣をシリカゲルクロマトグラフィーに供することにより目的物を黄色油状物質で６３ mg （光学純度９２％ｅｅ）を得た。
なお、光学異性体の分析はＨＰＬＣを用いて行った。
【００４６】
使用カラム：ULTRON ES-OVM 150 × 4.6 mm （信和化学工業株式会社製）
移動層：４％メタノール（含５０ mM リン酸緩衝液）、ｐＨ５．５
流速：０．８ ml/min 、波長：２２０ nm 、カラム温度：４０℃
NMR(CDCl3 )δ(ppm)：
2.5(2H,d-d), 3.1(1H,d-t), 3.3(1H,m), 3.7(3H,s), 4.1(1H,d-t),
5.0(2H,s), 7.4(5H,s)
【００４７】
同様にして、各種菌体での光学活性な４−ベンジルオキシカルボニルアミノ−３−ヒドロキシブタン酸の製造を行った。
【００４８】
【表１】
0003860639.tif 000006
【００４９】
【効果】  本発明は、緩和な条件下で反応を行わせることができ、高純度で収率よくγ−置換アミノ−β−ヒドロキシ酪酸誘導体を得ることができる。