(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
ホウ砂及び／又はホウ酸０．１〜３．８ｗ／ｖ％、グリセリン４０〜７０ｗ／ｖ％及び有効量の微生物由来アルカリプロテアーゼを含み、ｐＨが４．５〜６．０であるコンタクトレンズ用組成物と、電気伝導度が１〜５ｍＳ／ｃｍでｐＨが５．０〜８．５のカチオン性殺菌剤を含む水性媒体からなり、前記組成物を水性媒体で２５〜２００倍に希釈することにより、混合後のｐＨが６．７〜７．８となることを特徴とするコンタクトレンズ用洗浄消毒液。
【請求項２】
前記請求項１記載の洗浄消毒液を用いて、これにコンタクトレンズを浸漬することにより、洗浄及び殺菌を同時に行うことを特徴とするコンタクトレンズの洗浄、消毒方法。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明はコンタクトレンズ、特に含水性コンタクトレンズの洗浄、消毒に用いられる洗浄消毒液とそれを用いたコンタクトレンズの洗浄、消毒方法に関する。より詳しくは、タンパク質分解酵素を含むコンタクトレンズ用組成物を、殺菌剤を含む水性媒体で希釈して、コンタクトレンズの洗浄及び消毒を同時に行うことができる洗浄消毒液およびそれを用いたコンタクトレンズの洗浄、消毒方法に関するものである。
【０００２】
【従来の技術】
プロテアーゼはコンタクトレンズの洗浄に早くから用いられてきた。一般にプロテアーゼ等の酵素は溶液中では不安定であることから、従来は錠剤や顆粒の固形状体で供給され、使用時にＣＬ保存液やＣＬ消毒液に溶解して用いられるのが普通であった。しかし使用時に酵素を溶解して用いるのは不便であることから、水溶液中で酵素を安定化し、コンタクトレンズ用酵素を液剤として供給する技術が開発された。このようなコンタクトレンズ用液体酵素剤は、使用時は通常コンタクトレンズ保存液や消毒液等の水性媒体で希釈して用いられる。
【０００３】
コンタクトレンズ用液体酵素剤を殺菌剤を含む水性媒体で希釈してこれにコンタクトレンズを浸漬することにより、レンズの酵素洗浄と消毒を同時に行う方法はレンズの処理工程が短縮出来て便利なため、特開平２−２８９２５５号等で提案されて以来、含水性コンタクトレンズ洗浄、消毒法に用いられつつある。
【０００４】
液体酵素剤の安定化技術としては、多価アルコールとホウ酸及び／又はホウ砂などのホウ酸化合物を組み合わせる技術が知られている。従来知られているホウ酸／ホウ酸化合物の添加量は比較的高く、主に４％〜２０％、或いは多価アルコールに対して２０％〜１００％の量で添加されていた（例えば特開２００１−８３４７１号公報）。しかしホウ酸類は細胞毒性が高く生体に吸収された場合に過敏症状や炎症などの副作用を生じるおそれがあり（日局１３改正解説書）、添加量を多く必要とすることは好ましくないものであった。このため比較的低濃度のホウ酸化合物と多価アルコールの組み合わせで酵素を安定化する技術が望まれている。
【０００５】
一方、酵素には固有の安定ｐＨ領域（水溶液中で比較的安定なｐＨ領域）と至適ｐＨ領域（酵素活性が比較的高いｐＨ領域）があり、アルカリプロテアーゼは中性からアルカリ性に至適ｐＨを持ち、一般に中性付近で安定であることが知られている。  例えば、Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｌｉｃｈｅｎｉｆｏｒｍｉｓ由来のアルカリプロテアーゼ（製品名：クリアレンズプロ（ノボザイムズジャパン（株）製）の技術資料（Ｐｒｏｄｕｃｔ  ｓｈｅｅｔ）には該酵素の性質が示されており、至適ｐＨは８〜１０で、安定ｐＨも８〜１０であることが示されている。すなわち２５℃で２４時間保存後における酵素残存活性はｐＨ８〜１０で約９０％であるが、ｐＨ６では６０％以下、ｐＨ５．５では２０％に低下することが示されている。  またＢａｃｉｌｌｕｓ  ｓｕｂｔｉｌｉｓ由来のアルカリプロテアーゼ（製品名：ビオプラーゼ（ナガセ産業（株））の技術資料には至適ｐＨ８〜１０、安定ｐＨは６〜９であることが示されている。すなわち３０℃で５０分保存後の酵素残存活性はｐＨ６〜９では約９０％であるが、ｐＨ５では約４０％に低下することが示されている。
【０００６】
このため、ホウ酸化合物と多価アルコールを組み合わせて酵素の安定化を図ったコンタクトレンズ用液体酵素剤においても、その液のｐＨは中性付近のｐＨが用いられるのが普通であった。
【０００７】
しかし、従来のホウ酸及び／又はホウ砂のホウ酸化合物と多価アルコールの組み合わせにおいて、中性付近の安定ｐＨ領域でプロテアーゼを安定化させた場合、コンタクトレンズ保存液やコンタクトレンズ消毒液などの水性媒体に希釈した時にｐＨがアルカリ側に変化し、水性媒体の緩衝能力が十分に大きくない場合はｐＨが８以上に上昇する問題があった。またホウ酸及び／又はホウ砂の含量が３．８ｗ／ｖ％より高い場合、水性媒体に希釈した時に、混合液がアルカリ側に傾いて、ｐＨが８以上になる場合があった。ｐＨが８以上に上昇した場合、含水性コンタクトレンズの寸法、ベースカーブ等の物性に影響を与えるだけでなく、眼刺激性が高まり、眼に障害が生じるおそれがあった。このため酵素処理後にはコンタクトレンズを別途コンタクトレンズ保存液などでよくすすぐことが必要であった。
【０００８】
【発明が解決しようとする課題】
本発明は上述のごとき事情を背景としてなされたもので、その課題とするところは、比較的低濃度のホウ酸化合物と、多価アルコールを用いて溶液中の酵素を安定化し、カチオン性殺菌剤を含有する水性媒体で希釈して、混合後の溶液のｐＨが自動的に６．７〜７．８の領域に入るようなコンタクトレンズ用洗浄消毒液を提供することにある。
【０００９】
【課題を解決するための手段】
本発明者らは上記目的を達成するため種々検討した結果、微生物由来のアルカリプロテアーゼを、比較的低濃度のホウ酸化合物とグリセリンの組み合わせにより安定化した溶液のｐＨを、４．５〜６．０の弱酸性側に調整することにより、意外にも酵素の安定性が中性又は弱アルカリ性領域よりも向上することを見出し、さらにこの液を殺菌剤を含む水性媒体で希釈すると、該希釈液の緩衝能力が低くても、混合液のｐＨが自動的に６．５〜８．０の領域に入ることを見出し本発明に到達した。
【００１０】
すなわち本発明はホウ砂及び／又はホウ酸０．１〜３．８ｗ／ｖ％、グリセリン４０〜７０ｗ／ｖ％及び有効量の微生物由来アルカリプロテアーゼを含み、ｐＨが４．５〜６．０であるコンタクトレンズ用組成物と、電気伝導度が１〜５ｍＳ／ｃｍでｐＨが５．０〜８．５のカチオン性殺菌剤を含む水性媒体からなり、前記組成物を水性媒体で２５〜２００倍に希釈することにより、混合後のｐＨが６．７〜７．８となることを特徴とするコンタクトレンズ用洗浄消毒液をその要旨とする。
【００１１】
また本発明はホウ砂及び／又はホウ酸０．１〜３．８ｗ／ｖ％、グリセリン４０〜７０ｗ／ｖ％及び有効量の微生物由来アルカリプロテアーゼを含み、ｐＨが４．５〜６．０であるコンタクトレンズ用組成物と、電気伝導度が１〜５ｍＳ／ｃｍでｐＨが５．０〜８．５のカチオン性殺菌剤を含む水性媒体からなり、前記液体組成物を水性媒体で２５〜２００倍に希釈することにより、混合後にｐＨが６．７〜７．８となる洗浄消毒液とした後、これにコンタクトレンズを浸漬することにより、洗浄及び殺菌を同時に行うことを特徴とするコンタクトレンズの洗浄、消毒方法をその要旨とする。
【００１２】
本発明においては、アルカリプロテアーゼをホウ酸化合物及びグリセリンで安定化したコンタクトレンズ用組成物のｐＨを弱酸性側に調整することにより、従来技術の問題点であった比較的低濃度のホウ酸化合物における酵素の不安定性と、希釈によって混合液のｐＨがアルカリ側に入る問題の双方を解決するに至った。本発明のコンタクトレンズ用組成物を用いると、任意の市販のコンタクトレンズ用消毒液で希釈しても混合液のｐＨは自動的に６．５〜８．０の領域に入るので、便利に、安全に使用することが出来る。
【００１３】
【発明の実施の形態】
本発明のコンタクトレンズ用組成物に用いる酵素としては、微生物由来アルカリプロテアーゼが用いられるが、中でも至適ｐＨが７以上の微生物由来のアルカリプロテアーゼが適している。一般にプロテアーゼは酵素が作用するのに適した固有のｐＨ領域（至適ｐＨ）があり、また水溶液中で比較的安定である固有のｐＨ領域（安定ｐＨ）を有する。プロテアーゼを至適ｐＨから分類すると、酸性領域に至適ｐＨを有する「酸性プロテアーゼ」と、中性領域に至適ｐＨを有する「中性プロテアーゼ」と、アルカリ領域に至適ｐＨを有する「アルカリプロテアーゼ」に大別される。酸性プロテアーゼは眼に安全なｐＨ領域での作用が低く本発明に不適当である。中性プロテアーゼはＥＤＴＡなどの金属キレート剤により失活し易いが、コンタクトレンズの保存液や消毒液には無機物を除去するために通例金属キレート剤が配合されているため、本発明には不適当である。アルカリプロテアーゼは、セリンを活性中心としてもつ酵素で、金属キレート剤により失活せず、眼に安全な中性ｐＨ領域での活性が高いため本発明に適している。
【００１４】
プロテアーゼの至適ｐＨを調べる方法は、生化学分野で通常実施されている方法が用いられ、具体的には、適当な希薄な緩衝液（リン酸緩衝液、トリス塩酸緩衝液、Ｇｏｏｄの緩衝液など）存在下で種々のｐＨに設定し、一定時間、室温〜４０℃で作用させた時のカゼインなどの基質に対する酵素活性を比較し、ｐＨによる相対的な活性値をもとめるもので、相対活性が高かったｐＨ領域を至適ｐＨと呼ぶ。  本発明で用いる微生物由来のアルカリプロテアーゼの至適ｐＨは7〜１０が好ましい。
【００１５】．
また、動物由来のトリプシンやキモトリプシンなどのプロテアーゼ、パンクレアチンなどの複合酵素がコンタクトレンズ洗浄用酵素として古くから知られている。これらの酵素は至適ｐＨが中性から弱アルカリにあり、また活性中心がセリン残基であり、アルカリプロテアーゼの一種といえるが、これらのトリプシンやキモトリプシンは基質特異性が狭い（特定のアミノ酸残基を切る活性が強い）ためコンタクトレンズの汚れに対する洗浄力が低いことから、本発明には不適である。
【００１６】
微生物由来のアルカリプロテアーゼは基質特異性が広く、コンタクトレンズの汚れの洗浄のように作用させる基質が不特定である場合に、高い洗浄効果を発揮し、本発明に好適に用いられる。
【００１７】
また、植物由来のプロテアーゼにはパパインやブロメライン等があり、弱酸性からアルカリ性（パパインはｐＨ４〜６、ブロメラインはｐＨ７〜９）に至適ｐＨ領域を持つが、これらの酵素はチオール基を活性基として有し、チオール基は水溶液中の酸素によって容易に酸化され不活性化されるため本発明には不適当である。
【００１８】
さらに、従来より脂質汚れを除去する目的で、脂質分解酵素も併用する場合があった。しかし本発明においては、実質的に脂質分解酵素（リパーゼ）を含まないことが望ましい。脂質分解酵素は一般に中性脂質を脂肪酸とグリセリンに分解する。しかし分解された脂肪酸はレンズから除去されるどころかソフトコンタクトレンズ内に吸着し、レンズの劣化を早めることが明らかとなった。
【００１９】
本発明に好適に用いられる酵素は具体的には、クリアレンズプロ２．５ＭＧ（ノボザイムズジャパン製）、アルカリプロテアーゼＳ−３８０、アルカリプロテアーゼＧＬ−４４０（協和エンザイム製）、アロアーゼＡＰ−１０（ヤクルト薬品工業製）、プロテアーゼＰ「アマノ」、プロテアーゼＳ「アマノ」（天野製薬製）、スミチームＭＰ（新日本化学工業製）、ビオソークＡＣ５０（大和化成工業製）、アルカリ蛋白分解酵素ビオプラーゼ（長瀬産業製）などのアルカリプロテアーゼがある。
【００２０】
酵素の添加量は、洗浄効果が十分に発揮でき、眼や生体に安全である配合量が選択される。具体的には１０００ｕｎｉｔｓ／ｍＬ〜５０００ｕｎｉｔｓ／ｍＬ、好ましくは１５００ｕｎｉｔｓ／ｍＬ〜４０００ｕｎｉｔｓ／ｍＬの範囲である。プロテアーゼは、いくつかの公知の方法によって酵素活性が定量的に測定することができる。測定方法によって、活性値は同一とはならないが、本発明で規定するプロテアーゼの活性測定方法は、以下の方法による（以下ＴＣＡ活性測定法と呼ぶ）。
【００２１】
先ず、プロテアーゼを含むそれぞれのコンタクトレンズ洗浄組成物を適当な希釈倍率ｄとなるように精製水で希釈し、その各々の１ｍＬに、３７℃に加温した基質として０．６ｗ／ｖ％カゼイン水溶液（ｐＨ７．０、０．０５Ｍリン酸一水素ナトリウム水溶液）５ｍＬをそれぞれ添加する。これを３７℃の温度下に１０分保温しながら、各洗浄組成物に含まれるプロテアーゼを作用させる。その後、沈殿試薬（０．１１Ｍトリクロル酢酸、０．２２Ｍ酢酸ナトリウム及び０．３３Ｍ酢酸の混合液）５ｍＬを加えて、未分解の基質を沈殿させる。そしてこの溶液をろ過して得られたろ液について２７５ｎｍにおける吸収（Ａ）を測定する。また、対照として、それとは別にそれぞれのコンタクトレンズ用組成物を精製水で前記希釈倍率ｄとなるように希釈し、その各々の１ｍＬに前記沈殿試薬５ｍＬをそれぞれ加えたものを用意し、これに更に前記カゼイン水溶液５ｍＬを添加して、基質を沈殿させる。そしてこれをろ過して得られるろ液について、２７５ｎｍにおける吸収（Ａ０）を測定する。そして、それらの測定結果に基づいて、次式により、プロテアーゼの活性を求める。なお、１分間にチロシン１×１０−６ｇ相当の２７５ｎｍ吸収を示す非蛋白性物質を生成することのできるプロテアーゼの活性を１ｕｎｉｔとする。
プロテアーゼ活性（ｕｎｉｔｓ／ｍＬ）＝｛（Ａ−Ａ０）／（Ａｓ）｝×５０×１１×ｄ／１０
Ａｓ：２７５ｎｍにおけるチロシン５０μｇ／ｍＬあたりの吸収
ｄ：希釈倍率
【００２２】
酵素原料は通常賦形剤や安定化剤を含むので、本発明の目的とする上記の配合量とするのに要するアルカリプロテアーゼの添加量は原料の比活性（重量あたりの活性量）によって若干異なるが、本発明のコンタクトレンズ用組成物においては、酵素原料として０．１〜４ｗ／ｖ％を添加することになる。
【００２３】
本発明のコンタクトレンズ用組成物のホウ砂及び／又はホウ酸濃度は０．１〜３．８ｗ／ｖ％とする。好ましくは１〜２ｗ／ｖ％である。ホウ砂及び／又はホウ酸が３．８ｗ／ｖ％を越えると細胞毒性が高く安全性に問題が生ずる。また水性媒体により希釈する際、ｐＨが８以上になる場合が生ずるので好ましくない。一方ホウ砂及び／又はホウ酸が０．１ｗ／ｖ％以下になると、酵素の安定化が不十分となり、また希釈時に所定のｐＨに入らない場合が生ずる。
【００２４】
ホウ砂及びホウ酸は、液を所定のｐＨに調整するために比率を変化させることが出来るが、ホウ砂及びホウ酸の比率を１００：０〜３０：７０の範囲とするのが好ましい。
【００２５】
グリセリンは４０〜７０ｗ／ｖ％の濃度とする。好ましくは５０〜６０ｗ／ｖ％である。多価アルコール類が酵素の安定化剤として有効であることは、公知技術から明らかとなっているが、本発明においては、プロピレングリコール、ソルビトールなど、グリセリン以外の多価アルコールは、本発明で用いるｐＨ領域でのアルカリプロテアーゼの安定化効果が低いので使用出来ない。ただし、酵素原料には微量の、グリセリン以外の多価アルコーが含まれる場合があるので、このような多価アルコールの不純物としての混入は、５％未満であれば許容しうる。また、グリセリン濃度が７０ｗ／ｖ％以上になると、水性媒体で希釈したときに浸透圧が上昇し、眼刺激性を高めるため好ましくない。４０ｗ／ｖ％以下になると酵素安定化の効果が不十分となる。
【００２６】
本発明のコンタクトレンズ用組成物のｐＨはｐＨ４．５〜６．０とする必要がある。好ましくはｐＨ５．０〜５．８とする。所望のｐＨに調整するにはホウ酸、ホウ砂の割合の他、水酸化ナトリウム、塩酸など適当なｐＨ調整剤を使用することもできる。コンタクトレンズ用組成物のｐＨが４．５以下になると、カチオン性殺菌剤を含む水性媒体で希釈したときに、混合液のｐＨが６．５〜８．０の範囲より低くなる場合が生ずる他、酵素の安定性も低下する。又コンタクトレンズ用組成物のｐＨが６．０以上になると、カチオン性殺菌剤を含む水性媒体で希釈したときに混合液のｐＨが６．５〜８．０の領域より高くなる場合が生ずる他、酵素の安定性が低下するので好ましくない。
【００２７】
また酵素の安定化を高めるために、必要に応じて微量のカルシウム塩、マグネシウム塩を添加できる。カルシウム塩やマグネシウム塩など二価の金属イオンは、一般に蛋白分解酵素の安定化剤として有効であり、添加する場合には具体的には０．０１〜０．２ｗ／ｖ％程度添加できる。好ましくは０．０２〜０．１ｗ／ｖ％である。これらの金属イオン濃度が高いと洗浄効果を下げ、低いと安定化の効果がない。
【００２８】
本発明に用いる微生物由来のアルカリプロテアーゼはｐＨ７〜１０が安定ｐＨである。しかし本発明においては、所定の濃度のグリセリンとホウ砂で安定化させた場合、弱酸性下の方が酵素が一段と安定であることが見出されたものである。しかも本発明のコンタクトレンズ用組成物は、水性媒体で希釈した時、アルカリプロテアーゼの活性の高い中性から弱アルカリ性のｐＨに変化する。すなわち保存状態では酵素が至適ｐＨ領域から外れており、酵素作用は低いが、使用時に水性媒体で希釈することにより高い作用を示すことになり、極めて有利である。
【００２９】
上述の酵素を含有するコンタクトレンズ用組成物を、カチオン性殺菌剤を含む水性媒体で希釈して、本発明に係る洗浄消毒液を得、その洗浄消毒液にコンタクトレンズを浸漬することにより、コンタクトレンズの消毒と洗浄を同時に行うことが出来る。
【００３０】
本発明のコンタクトレンズ用組成物の、カチオン系殺菌剤を含む水性媒体による希釈は、コンタクトレンズの洗浄消毒の直前に行うのが好ましい。具体的方法としては、コンタクトレンズを浸漬したカチオン系殺菌剤を含む水性媒体約１〜約５ｍＬ、好ましくは１．５ｍＬ〜２ｍＬに対し、本発明のコンタクトレンズ用組成物１〜４滴（２５〜１００μＬ）を滴下して軽く混和すればよい。この場合の好ましい希釈率としては、２５倍〜２００倍、特に好ましくは３５倍〜１２０倍である。２００倍以上では洗浄効果が不十分となる。２５倍以下では混合液のｐＨが所定の領域に入らない場合が生ずる。混合液調製後は、消毒が必要な時間、具体的には１時間以上、好ましくは２時間以上２４時間以内コンタクトレンズを浸漬すればよく、消毒中に同時に洗浄がなされる。
【００３１】
上記水性媒体に用いる殺菌剤としては、コンタクトレンズの消毒に使える公知の殺菌剤が使用可能である。このような殺菌剤としてはカチオン性殺菌剤が有効であることが知られている。例えばビグアニド系殺菌剤（クロルヘキシジン塩、ポリヘキサメチレンビグアニドなど）、４級アンモニウム塩系殺菌剤（ポリクアテリウム−１、ポリクアテリウム−６、ポリクアテリウム−７、ポリクアテリウム−１６、ポリクアテリウム−２２）などが使用できる。
【００３２】
本発明のコンタクトレンズ用組成物をカチオン性殺菌剤を含む水性媒体で希釈した時、混合液のｐＨはアルカリプロテアーゼの活性が高く、且つ殺菌剤の消毒効果が十分に発揮でき、眼に入れても安全に使用できるｐＨ範囲にある必要がある。カチオン性殺菌剤は中性付近からアルカリ性において殺菌効果を発揮し、アルカリプロテアーゼが洗浄効果を発揮するｐＨ領域と一致する。このｐＨは６．５〜８．０、好ましくは６．７〜７．８の範囲である。
【００３３】
本発明のコンタクトレンズ用組成物をカチオン性殺菌剤を含む水性媒体で希釈する場合、カチオン性殺菌剤を含む水性媒体のｐＨが５．０〜８．５の範囲にあれば、希釈倍率２５〜２００倍において、混合液のｐＨは自動的に６．５〜８．０の領域に入る。例えば本発明のコンタクトレンズ用組成物を、カチオン性殺菌剤を添加した、緩衝能が低い生理食塩水で上記希釈倍率に希釈した時、混合液のｐＨは６．５〜８．０の範囲に入る。緩衝能が更に高い水性媒体を用いる場合は更に容易にｐＨ６．５〜８．０の範囲に入る。水性媒体のｐＨが５．０より低いと混合後のｐＨが６．５より低くなる場合が生じ、８．５より高いと混合後のｐＨが８．０を越える場合が生ずる。
【００３４】
コンタクトレンズ用の保存液或いは消毒液のｐＨは一般に５．０〜８．５の範囲にある。従って本発明のコンタクトレンズ用組成物をコンタクトレンズ用水性媒体で上記希釈率に希釈する時、混合液のｐＨは自動的にｐＨ６．５〜８．０の範囲に入る。
【００３５】
本発明のコンタクトレンズ用組成物をカチオン性殺菌剤を含む水性媒体で希釈した時のｐＨは６．５以上であるため、酵素の洗浄力と殺菌剤の殺菌効力が低下することがない。またｐＨが８以内であるため、眼刺激が生ずることがない。
【００３６】
本発明のコンタクトレンズ用組成物と水性媒体の混合液は生体に対して安全であるため、コンタクトレンズの洗浄消毒後にそのまま眼に装用することが可能である．また必要に応じて水性媒体ですすぐこともできる。
【００３７】
本発明のコンタクトレンズ用組成物は上記のように一般のコンタクトレンズ用水性媒体で希釈して使用することが出来る。従って市販の保存液にカチオン性殺菌剤を添加したものや、カチオン性殺菌剤が添加された市販のコンタクトレンズ用消毒剤を用いることができる。市販のコンタクトレンズ保存液やコンタクトレンズ消毒液には緩衝能が低いものもあるため、従来の液体酵素剤を添加すると液体酵素中の成分の影響を受けてｐＨが高くなりすぎる場合があったが、本発明のコンタクトレンズ用組成物の場合は常に混合液のｐＨを中性範囲に保つことが出来るので極めて便利である。
【００３８】
カチオン性殺菌剤を含む水性媒体の電気伝導度は、洗浄効果をより高め、殺菌効果を発揮するためには１〜５ｍＳ／ｃｍの範囲が好ましい。
【００３９】
また、カチオン性殺菌剤を含む水性媒体の浸透圧は、通常直接目に接触するコンタクトレンズ保存液やコンタクトレンズ用消毒液で用いられる範囲が適用される。具体的には２００〜５００ｍＯｓｍ、好ましくは２２０〜４００ｍＯｓｍの範囲が用いられる。浸透圧がこの範囲外になると、眼に対する刺激や含水性コンタクトレンズの直径など物性に影響が大きく、不適当である。
【００４０】
さらに、通常コンタクトレンズ保存液や消毒液に添加される等張化剤、緩衝剤、キレート化剤、界面活性剤などの成分は適宜いずれも用いることができる。
【００４１】
【実施例】
以下に、本発明を更に具体的に説明するために、本発明の幾つかの実施例を示すこととするが、本発明がそのような実施例の記載によって、何らの制約を受けるものでないことは言うまでもないところである。
【００４２】
実施例１（コンタクトレンズ用組成物の調製例）
グリセリン５１ｇ、ホウ砂０．５ｇ、ホウ酸１．４ｇ、塩化カルシウム２水和物０．０５ｇを量り取り、精製水を適量加えて均一にした後、クリアレンズプロ２．５ＭＧ（ノボザイムズジャパン製）を１．５ｇ溶解し、ｐＨを５．５になるように１Ｎ水酸化ナトリウムで調整し、精製水で１００ｍＬに定容してコンタクトレンズ用組成物を調製した。この時のプロテアーゼ活性はＴＣＡ活性測定法で３７５０ｕｎｉｔｓ／ｍＬであった。
【００４３】
比較例１および比較例２（比較コンタクトレンズ用組成物の調製例）
グリセリン５１ｇ、ホウ砂０．５ｇ、ホウ酸１．４ｇ、塩化カルシウム２水和物０．０５ｇを量り取り、精製水を適量加えて均一にした後、クリアレンズプロ２．５ＭＧ（ノボザイムズジャパン製）を１．５ｇ溶解し、ｐＨを７．０及び７．５になるように１Ｎ水酸化ナトリウムで調整し、精製水で１００ｍＬに定容し比較コンタクトレンズ用組成物を調製した。この時のプロテアーゼ活性はＴＣＡ活性測定法でいずれも３７５０ｕｎｉｔｓ／ｍＬであった。
【００４４】
実施例２、比較例３、４（酵素の安定性試験）
実施例１、比較例１及び２のコンタクトレンズ用組成物をガラスバイアルに入れ、５０℃の恒温槽に保存し、１か月、２か月及び３か月目の酵素活性を測定し、以下の式により残存プロテアーゼ活性（％）を求め、酵素安定性を調べた。残存プロテアーゼ活性（％）＝｛（保存後のプロテアーゼ活性）／（調製時のプロテアーゼ活性）｝×１００
その結果表１のようにｐＨを５．５に調製した本発明による実施例１の組成物は５０℃、３カ月後においても９０％以上の高い安定性を示したが、ｐＨを７．０ないし７．５に調製した比較例１および比較例２の比較組成物は５０℃、３カ月において５０％以下の安定性しかなかった。
【００４５】
表１
0003754357.tif 000002
【００４６】
比較例５（ホウ酸緩衝液中での酵素安定性）
実施例１、比較例１、２に用いた微生物由来のアルカリプロテアーゼであるクリアレンズプロ２．５ＭＧ（ノボザイムズジャパン製）のホウ酸緩衝液中での安定性を確認するため、以下の試験を行った。０．７２ｗ／ｖ％の塩化ナトリウムと０．３７ｗ／ｖ％のホウ酸を含む水溶液及び０．７２ｗ／ｖ％の塩化ナトリウムと２．２９ｗ／ｖ％のホウ砂を含む水溶液を用い、それぞれｐＨが５．０、５．５、６．０、６．５、７．０、８．０であり、浸透圧が約２９０ｍＯｓｍのホウ酸緩衝液を調製し、これにクリアレンズプロ２．５ＭＧを０．０３ｗ／ｖ％になるように溶解した。次にこの溶液をそれぞれ４０℃及び２５℃の恒温槽に保管し、２５℃、２週間及び４０℃、１週間保存後のプロテアーゼ残存活性（％）を以下の式により求めた。
残存プロテアーゼ活性（％）＝｛（保存後のプロテアーゼ活性）／（調製時のプロテアーゼ活性）｝×１００
その結果表２に示すように、ｐＨ８．０にした場合が最も安定で、ｐＨ６．０以下においては極めて不安定であった。この結果は従来提示されているメーカー技術資料を裏付ける結果であり、実施例2に示した実施例１の処方における安定ｐＨが、従来知られているアルカリプロテアーゼの安定ｐＨとまったく異なることを示している。この結果から、本発明の範囲外の組成物において、酵素が酸性化で不安定であることが確認された。
【００４７】
表２
0003754357.tif 000003
【００４８】
実施例３（コンタクトレンズ用組成物処方例）
グリセリン６０ｇ、ホウ砂０．８ｇ、ホウ酸１．１ｇを量り取り、精製水を適量加えて均一にした後、クリアレンズプロ２．５ＭＧ（ノボザイムズジャパン製）を１．５ｇ溶解し、ｐＨを５．０になるように１Ｎ水酸化ナトリウムで調整し、精製水で１００ｍＬに定容した。この時のプロテアーゼ活性は３７５０ｕｎｉｔｓ／ｍＬであった。
【００４９】
実施例４（コンタクトレンズ用組成物処方例）
グリセリン５１ｇ、ホウ砂０．９７ｇ、ホウ酸１．０ｇを量り取り、精製水を適量加えて均一にした後、アルカリプロテアーゼＧＬ−４４０（協和エンザイム製）を１．３ｇ溶解し、精製水で１００ｍＬに定容した。この時のｐＨは５．１、プロテアーゼ活性は２６３５ｕｎｉｔｓ／ｍＬであった。
【００５０】
実施例５（コンタクトレンズ用組成物処方例）
グリセリン５５ｇ、ホウ砂０．３ｇ、ホウ酸０．７ｇを量り取り、精製水を適量加えて均一にした後、ビオプラーゼコンク（長瀬産業製）を０．５ｇ溶解し、ｐＨを５．５になるように１Ｎ水酸化ナトリウムで調整し、精製水で１００ｍＬに定容した。この時のプロテアーゼ活性は１７５０ｕｎｉｔｓ／ｍＬであった。
【００５１】
実施例３〜５の処方の組成と調整後のｐＨ及びプロテアーゼ活性を表３に示した。
【００５２】
表３
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【００５３】
比較例６（比較コンタクトレンズ用組成物処方例）
グリセリン６０ｇ、ホウ砂５ｇを量り取り、精製水を適量加えて均一にした後、クリアレンズプロ２．５ＭＧを１．５ｇ溶解し、ｐＨを６．５になるように１Ｎ水酸化ナトリウムで調整し、精製水で１００ｍＬに定容した。この時の酵素活性は３７５０ｕｎｉｔｓ／ｍＬであった。
【００５４】
比較例７（比較コンタクトレンズ用組成物処方例）
プロピレングリコール６０ｇ、ホウ砂５ｇを量り取り、精製水を適量加えて均一にした後、パンクレアチンＦ（天野製薬製）を２ｇ溶解し、ｐＨを７．２になるように１Ｎ水酸化ナトリウムで調整し、精製水で１００ｍＬに定容した。この時の酵素活性は１５６６ｕｎｉｔｓ／ｍＬであった。
【００５５】
比較例８（比較コンタクトレンズ用組成物処方例）
グリセリン３０ｇ、プロピレングリコール３０ｇ、ホウ砂８ｇを量り取り、精製水を適量加えて均一にした後、アルカリプロテアーゼＧＬ−４４０（協和エンザイム製）を１．３ｇ溶解し、ｐＨを６．２になるように１Ｎ水酸化ナトリウムで調整し、精製水で１００ｍＬに定容した。この時の酵素活性は２６３０ｕｎｉｔｓ／ｍＬであった。
【００５６】
比較例６〜８の組成と調整後のｐＨおよびプロテアーゼ活性を表４に示した。
【００５７】
表４
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【００５８】
実施例６〜８、比較例９〜１１（コンタクトレンズ用組成物及び比較コンタクトレンズ用組成物を水性媒体で希釈したときのｐＨと浸透圧）
（１）カチオン性殺菌剤を含む水性媒体１の調製
ポリヘキサメチレンビグアニド塩酸塩  １ｐｐｍ、プロピレングリコール１．１ｗ／ｖ％、塩化ナトリウム  ０．１％ｗ／ｖ、  ポリオキシエチレン［１９６］ポリオキシプロピレン［６７］グリコール  ０．２ｗ／ｖ％、エデト酸ナトリウム  ０．０３ｗ／ｖ％、グリシン０．３ｗ／ｖ％の水溶液を精製水を用いて調製し、１Ｎ  水酸化ナトリウムでｐＨを７．２に調整した。液の浸透圧、電気伝導度を測定したところ、浸透圧２３０ｍＯｓｍ、電気伝導度１．８５ｍＳ／ｃｍであった（以下水性媒体１と呼ぶ）。
（２）コンタクトレンズ用組成物及び比較コンタクトレンズ用組成物を水性媒体１で希釈した時のｐＨと浸透圧
水性媒体１をそれぞれ２ｍＬ及び３．５ｍＬレンズケースに入れ、実施例３で調製したコンタクトレンズ用組成物  １滴（３３μＬ）を滴下して軽く混合し、ｐＨ及び浸透圧を測定した。同様に実施例４、５並びに比較例６〜８で調製した比較コンタクトレンズ用組成物について、水性媒体１の２ｍＬおよび３．５ｍＬで希釈したときのｐＨ及び浸透圧を表５に示した。その結果、本発明の実施例３〜５の処方では、水性媒体１で希釈した後のｐＨは７．４８〜７．７８であったが、比較例６〜８の処方を用いた場合のｐＨは８．３４〜８．６２とｐＨが８以上となった。
【００５９】
表５
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注１）各コンタクトレンズ用組成物  ３３μＬに対して希釈に用いた水性媒体の液量（ｍＬ）
【００６０】
実施例９〜１１、比較例１２〜１４（コンタクトレンズ用組成物を市販のカチオン性殺菌剤を含む水性媒体で希釈した時のｐＨおよび浸透圧）
カチオン性殺菌剤としてポリクアテリウム−１を配合した市販のソフトコンタクトレンズ用化学消毒剤  オプティフリー（アルコン社製）の２ｍＬおよび３．５ｍＬをレンズケースに入れ、実施例３で調製したコンタクトレンズ用組成物１滴（３３μＬ）を滴下し、軽く混合してｐＨ及び浸透圧を測定した。また同様に実施例４、５並びに比較例６〜８の処方についてオプティフリーの２ｍＬおよび３．５ｍＬで希釈したときのｐＨ及び浸透圧を表６に示した。その結果本発明の実施例３〜５の処方ではオプティフリーに対して希釈した後のｐＨは７．１１〜７．５７であったが、比較例６〜８の処方を用いた場合のｐＨは８．７１〜９．１０となり、中性領域を外れて高くなった。
【００６１】
表６
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注１）各コンタクトレンズ用組成物  ３３μＬに対して希釈に用いたオプティフリーの液量（ｍＬ）
【００６２】
実施例１２〜１４、比較例１５〜１７（コンタクトレンズ用組成物及び比較コンタクトレンズ用組成物を水性媒体２で希釈した時のｐＨと浸透圧）
グルコン酸クロルヘキシジン  ５ｐｐｍ、ポリエチレングリコール２００    ３ｗ／ｖ％、塩化ナトリウム  ０．２ｗ／ｖ％、ポリオキシエチレン［１９６］ポリオキシプロピレン［６７］グリコール  ０．２ｗ／ｖ％、ホウ酸０．３ｗ／ｖ％、ホウ砂０．０３ｗ／ｖ％、エデト酸ナトリウム二水和物  ０．０３ｗ／ｖ％、の溶液を精製水を用いて調製し、ｐＨ、浸透圧、電気伝導度を測定したところ、ｐＨ７．３１、浸透圧２９１ｍＯｓｍ、電気伝導度３．１８ｍＳ／ｃｍであった（以下水性媒体２と呼ぶ）。水性媒体２をそれぞれ２ｍＬ及び３．５ｍＬレンズケースに入れ、実施例３で調製したコンタクトレンズ用酵素洗浄液  １滴（３３μＬ）を滴下して軽く混合し、ｐＨ及び浸透圧を測定した。同様に実施例４、５並びに比較例６、７、８の処方について水性媒体２の２ｍＬおよび３．５ｍＬで希釈したときのｐＨ及び浸透圧を表７に示した。その結果、本発明の実施例３〜５の処方では水性媒体２で希釈した後のｐＨはいずれも７．１６〜７．３７であったが、比較例６〜８の処方を用いた場合のｐＨは、８．１１〜８．２６と高くなった。
【００６３】
表７
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注１）各コンタクトレンズ用組成物  ３３μＬに対して希釈に用いた水性媒体の液量（ｍＬ）
【００６４】
実施例１５〜１７、比較例１８〜２０（洗浄効果試験）
（１）蛋白汚れレンズの作製
蛋白汚れ液として、アルブミン０．３８８ｇ、γ−グロブリン０．１６１ｇ、リゾチーム０．１２ｇ、塩化ナトリウム０．９ｇ、塩化カルシウム二水和物０．０１５ｇ、リン酸二水素ナトリウム二水和物０．１０４ｇと１Ｎ水酸化ナトリウム液  適量と精製水１００ｍＬからなる人工涙液（ｐＨ７．４）を調製した。次にソフトコンタクトレンズ（メニコンソフトＭＡ（（株）メニコン）を前記人工涙液１．５ｍＬ中で３０分間煮沸した後冷水に３０分間浸漬した。この操作を４回繰り返した。処理後にレンズを生理食塩水中で暗視野実体顕微鏡を用い拡大して観察したところ、いずれのレンズにも全面に白い蛋白性の汚れが確認された。
（２）洗浄効果試験
実施例３〜５及び比較例６〜８の処方それぞれ３３μＬを下記表８の各水性媒体２ｍＬに滴下して希釈し、（１）で作成した汚れレンズをそれぞれ２時間浸漬して洗浄効果を評価した。評価は下記の４段階とし、結果を表８に記した。
◎：汚れがほとんど除去された
○：汚れが大部分除去された
△：試験前より汚れは除去されたがかなり残っていた．
×：ほとんど汚れが除去されなかった．
本発明の処方では、いずれも高い洗浄効果が得られたが、動物由来のパンクレアチンやホウ砂濃度が高い比較例７、比較例８の処方では洗浄効果は低かった。
【００６５】
表８
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【００６６】
実施例１８、比較例２１（安全性試験−動物装用試験）
健康な２ｋｇ以上（２．８６〜３．２６ｋｇ）の日本白色種雄ウサギ５羽を準備し、試験前日に肉眼及びポータブルスリットランプを用いて両眼に異常がないことを確認した。またレンズケース５個のそれぞれに実施例４のコンタクトレンズ用組成物３３μＬとカチオン性殺菌剤を含む水性媒体２の２ｍＬを入れ、これにソフトコンタクトレンズ  メニコンソフトＳ（（株）メニコン）を１枚入れ、室温で一晩浸漬した。一方別のレンズケース５個のそれぞれに比較例６の比較コンタクトレンズ用組成物３３μＬとカチオン性殺菌剤を含む水性媒体２の２ｍＬを入れ、これにソフトコンタクトレンズ  メニコンソフトＳ（（株）メニコン）を１枚入れて、室温で一夜浸漬した。
次いでそれぞれの液に一夜浸漬したレンズを取り出し、水性媒体２で１０秒間濯ぎ、ウサギの片眼に装用し即時刺激を３０秒間観察した。次いでそのまま１時間装用を続け、１時間後に結膜の状態を観察した後、レンズを外して０．０５ｗ／ｖ％のフルオレセインナトリウム液で角膜を染色、ポータブルスリットランプを用いて角膜の障害の程度を染色の状態から評価した。その結果を表９に示す。
【００６７】
表９
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【００６８】
実施例１９（殺菌効果への影響）
市販のトリプトソイ寒天培地（栄研化学製）４０ｇを蒸留水１Ｌに溶解させ、１２１℃、２０分間の条件にて高圧蒸気滅菌することにより、トリプトソイ寒天培地（ＴＳＡ培地）を調製した。  次いでカチオン性殺菌剤としてポリヘキサメチレンビグアニドの１ｐｐｍを含む市販のコンタクトレンズ用消毒液（（株）メニコン  商品名：アイネス）の１０ｍＬを、それぞれ別の試験管に取り、このそれぞれに、実施例３のコンタクトレンズ用組成物０．２５ｍＬを加えて５０倍に希釈した。また実施例３のコンタクトレンズ用組成物を添加しない上記コンタクトレンズ用消毒液を対照とした。更にそれぞれの試験管にセラチア・マルセッセンス（Ｓｅｒｒａｔｉａ  ｍａｒｃｅｓｃｅｎｓ）、黄色ブドウ球菌（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ａｕｒｅｕｓ）のうちの何れかを約１０８ｃｆｕ／ｍＬ含む菌液０．０５ｍＬを加えた後、撹拌して１０５〜１０６ｃｆｕ／ｍＬの菌を含むように調製し、これを２５℃で４時間静置した（以下これを菌懸濁液という）。そしてこれらのそれぞれについて、菌懸濁液１ｍＬを取り出し、生理食塩水で１０倍毎に希釈してサンプルを調製した。次いでこの得られたサンプルを、トリプトソイ寒天培地１７ｍＬを用いて培養し、平板希釈法により、サンプル１ｍＬに含まれる生菌数を測定し、その値から菌懸濁液１ｍＬ中に含まれる生菌数を算出した。結果を表１０に示した。実施例３の処方をアイネスに添加したものは、本発明のコンタクトレンズ用組成物を加えなかった対照の場合と同等の殺菌効果を示した。
【００６９】
表１０
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【００７０】
【発明の効果】
本発明は特定濃度のホウ酸化合物及びグリセリンで酵素を安定化させたコンタクトレンズ用組成物のｐＨを、弱酸性側に調整することにより、酵素の安定性を著しく向上させ、且つカチオン性殺菌剤の配合された水性媒体で希釈した時に、安全性が高く、酵素の洗浄効果も高く、カチオン性殺菌剤の消毒効果への影響も生じないようにすることに成功したものである。本発明のコンタクトレンズ用組成物を用いれば、カチオン性殺菌剤を含むどのようなコンタクトレンズ用消毒液とも併用することが可能で、安心して使用することが出来る。またホウ酸化合物の濃度が比較的低く、眼に対する安全性が高いにもかかわらず酵素の安定性が高いという特徴を有する。