(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
オカラをBacillus sp TT-52(工業技術院生命工学工業技術研究所寄託番号FERM P-16530)により発酵させる工程を含むことを特徴とするビタミンＫ類の製造方法。
【請求項２】
オカラをBacillus sp TT-52(工業技術院生命工学工業技術研究所寄託番号FERM P-16530)により発酵させて得られるビタミンＫ類含有機能性食品の製造方法。
【請求項３】
請求項２記載の方法で得られるビタミンＫ類含有機能性食品。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は、ビタミンＫ類及びビタミンＫ類含有機能性食品の製造方法及び該方法により製造されるビタミンＫ類含有機能性食品に関する。
【０００２】
【従来の技術】
ビタミンＫ類は、血液凝固系に関与するビタミンであり、これが欠乏すると低プロトロンビン血症や出血傾向を招来することが知られている。
【０００３】
また、骨代謝に関与すると考えられている蛋白質であるオステオカルシンはビタミンＫ類依存性に形成されたγ−カルボキシグルタミン酸を含むことが明らかになり、ビタミンＫ類は、骨代謝においても重要な役割を担っていると考えられるようになっている。さらに、骨粗鬆症の発症を予防するためには、従来生体における必要量と考えられていた量よりもはるかに多量のビタミンＫ類を摂取することが必要であることが明らかになってきている。従って、栄養補助食品等により日常的にビタミンＫ類を摂取することにより、骨粗鬆症の予防や治療を行うことができると考えられる。
【０００４】
ビタミンＫ類を多く含む食品の一つとして、納豆が知られている。納豆は、原料の大豆に由来するものに加え、Bacillus subtilisに属する納豆菌により産生されるビタミンＫ類、特にメナキノン（ビタミンＫ2）の一種であるＭＫ−７を多く含み、糸引き納豆においてＭＫ−７の含有割合が８６３６ｎｇ／ｇである例が報告されている（平内三政、ビタミン、６２巻、３９３、１９８８）。しかしながら、ビタミンＫ類をさらに多く含み、且つ安価に提供される機能性食品が求められている。
【０００５】
【発明が解決しようとする課題】
本発明の目的は、簡便且つ低コストなビタミンＫ類の製造方法を提供することにある。
【０００６】
本発明の別の目的は、簡便且つ低コストにビタミンＫ類を著しく多く含む機能性食品を製造することができる製造方法を提供することにある。
【０００７】
本発明の別の目的は、安価に提供でき、安全性が高い、骨粗鬆症、低プロトロンビン血症、出血傾向等の予防や治療に有用な機能性食品を提供することにある。
【０００８】
【課題を解決するための手段】
本発明によれば、オカラをBacillus sp TT-52(工業技術院生命工学工業技術研究所寄託番号FERM P-16530)により発酵させる工程を含むことを特徴とするビタミンＫ類の製造方法が提供される。
【０００９】
また、本発明によれば、オカラをBacillus sp TT-52(工業技術院生命工学工業技術研究所寄託番号FERM P-16530)により発酵させて得られるビタミンＫ類含有機能性食品の製造方法が提供される。
【００１０】
さらに本発明によれは、前記方法で得られるビタミンＫ類含有機能性食品が提供される。
【００１１】
【発明の実施の形態】
本発明において、ビタミンＫ類とは、フィロキノン（ビタミンＫ1）及び／又はメナキノン類（ビタミンＫ2）を含む。前記メナキノン類は、ＭＫ−４〜ＭＫ−８等の各種のメナキノンを含む。
【００１２】
本発明のビタミンＫ類の製造方法は、オカラを納豆菌で発酵させる工程を含む。
【００１３】
前記オカラとしては、特に限定されず、豆腐、豆乳、凍豆腐、大豆油、大豆タンパク質等の製造の過程で発生するもの、又はこれらの混合物等のあらゆるオカラを挙げることができる。また、発酵に供する際のオカラの水分含量は約７０〜９０重量％であることが好ましい。従って、発酵に際してオカラの水分含量がこの範囲外である場合、ローラープレスによる脱水又は水分の添加等により、適宜水分含量を好ましい範囲に調節することが好ましい。
【００１４】
前記納豆菌は、Bacillus sp TT-52(工業技術院生命工学工業技術研究所寄託番号FERM P-16530)を用いることが、高効率にビタミンＫ類を生産することができるため好ましい。
【００１５】
前記発酵の具体的操作としては、前記オカラを前記納豆菌で発酵させる限りにおいて特に限定されないが、例えば以下の方法に従うことが好ましい。
【００１６】
まず、発酵に供するオカラの水分含量を必要に応じて約７０〜９０重量％の範囲に調節した後、加熱処理する。加熱処理は、圧力釜等を用い、高圧下で行うことが好ましい。加熱条件としては、加熱温度が１０５〜１３０℃、圧力が１．２〜３ｋｇ／ｃｍ2、加熱時間が２０〜５０分間であることが好ましい。前記加熱処理により、発酵を妨げる雑菌の滅菌、殺菌等を行うことができる。
【００１７】
続いて、前記加熱処理を行ったオカラに前記納豆菌を接種する。前記納豆菌の接種量は、１０5〜１０6／ｇ（乾燥オカラ換算重量）が好ましい。
【００１８】
続いて、前記納豆菌を接種したオカラを発酵させる。発酵に際しては、酸素の供給を十分に行うことが好ましい。具体的にはステンレス金網等の網状の支持体の上に、前記オカラを１ｃｍ程度の層にして載置して発酵に供することが好ましい。
【００１９】
前記発酵の際の発酵温度が２０〜４０℃であることが好ましい。また発酵時間は、２４〜１４４時間であることが好ましく、３０〜７２時間であることがさらに好ましい。
【００２０】
さらに好ましくは、３５〜３８℃で４５〜５０時間発酵させた後、温度を２０〜２５℃としてさらに１５〜２０時間発酵することにより、粘性が低く、アンモニア臭の低い発酵物が得られる。
【００２１】
以上のような方法に従う場合、菌の培養を助けるブドウ糖等の培養助成剤を全く添加しなくても、発酵を行うことができる。
【００２２】
尚、前記Bacillus sp TT-52等の納豆菌を、液体培地で培養することによっても、ビタミンＫ類を含む発酵物を得ることができる。この場合、Bacillus subtilisが増殖可能な組成の培地を殺菌後、１０5〜１０6／ｇ（乾燥オカラ換算重量）の納豆菌を接種し、例えば約４０℃、４８〜１４４時間の条件で振とう培養することにより、ビタミンＫ類を含む発酵物を得ることができる。
【００２３】
得られた前記発酵物について、必要に応じてさらに乾燥、精製、添加物の添加、その他各種の製剤化のための処理を行って、ビタミンＫ類を得ることができる。
【００２４】
本発明の機能性食品の製造方法は、前記オカラを前記納豆菌で発酵させる工程を含む。前記納豆菌としては、特にBacillus sp TT-52(工業技術院生命工学工業技術研究所寄託番号FERM P-16530)を用いることが、高効率に機能性食品を産生することができるため好ましい。
【００２５】
ここで発酵の具体的操作は、前記ビタミンＫ類の製造方法と同様に行うことができる。前記発酵により得られた発酵物は、そのまま、又は必要に応じてさらに乾燥、精製、添加物の添加、その他各種の処理を行って、ビタミンＫ類を含む機能性食品とすることができる。
【００２６】
本発明のビタミンＫ類含有機能性食品は、前記製造方法により得られるものである。
【００２７】
本発明のビタミンＫ類含有機能性食品は、前記発酵物を、好ましくは５〜１００重量％、さらに好ましくは２０〜１００重量％の割合で含有する。前記発酵物の含有割合を５重量％以上とすることにより、好ましい本発明の効果を得ることができる。また、前記発酵物は、ビタミンＫ類を、全量中好ましくは１〜５０μｇ／ｇ、さらに好ましくは５〜３５μｇ／ｇの割合で含有する。このような発酵物は、例えば前述の方法により製造することができる。
【００２８】
本発明のビタミンＫ類含有機能性食品は、前記発酵物を含むが、さらにこの他にブドウ糖、乳糖、粉末状水あめ、ショ糖、デキストリン等の添加物、ビタミン類、有機酸等の他の添加物を含んでも良い。
【００２９】
本発明のビタミンＫ類含有機能性食品の形態としては、特に限定されないが、乾燥、精製等を行わない前記発酵物そのまま、凍結乾燥等により乾燥し微粉末としたもの、又は前記発酵物をさらに加工し必要に応じ他の添加物を加え、散剤、顆粒剤、錠剤等の剤形としたもの、若しくは腸溶カプセル等のカプセルに充填しカプセル剤としたもの、半生タイプのスティック、ビスケット状等の形状、他の食品中に混入したもの、精製した前記発酵物を溶解し甘味料、香料等を加えドリンク剤としたもの等を挙げることができる。
【００３０】
本発明のビタミンＫ類含有機能性食品の投与量は、例えばヒトの場合、ビタミンＫに換算して０．０１〜５μｇ／ｋｇ／日、好ましくは０．０４〜３μｇ／ｋｇ／日であることが望ましい。
【００３１】
本発明のビタミンＫ類含有機能性食品を摂取することにより、骨粗鬆症、低プロトロンビン血症、出血傾向等のビタミンＫ類の欠乏に起因すると考えられる各種の疾患を治療若しくは予防することができ、又はその症状を緩和することができる。特に、本発明の機能性食品は、摂取者に対する負担が少なく日常的に摂取することが可能なので、前記各種疾患の予防のために摂取するのに特に適している。
【００３２】
前記発酵物は、大豆粕であるオカラの納豆菌発酵物であるので、納豆とほぼ同様な発酵物であり、長期の食経験でその安全性が十分に保証されていることから、本発明のビタミンＫ類含有機能性食品の安全性は高いものと考えられる。
【００３３】
【発明の効果】
本発明のビタミンＫ類の製造方法は、通常は廃棄されているオカラを原材料としてビタミンＫ類を簡便に製造できるので、ビタミンＫ類の簡便且つ低コストな製造方法として有用である。
【００３４】
本発明のビタミンＫ類含有機能性食品の製造方法は、通常は廃棄されているオカラを原材料として、ビタミンＫ類を著しく多く含む機能性食品を簡便に製造できるので、前記ビタミンＫ類含有機能性食品の簡便且つ低コストな製造方法として有用である。
【００３５】
本発明のビタミンＫ類含有機能性食品は、通常は廃棄されているオカラを原材料として簡便に得られる機能性食品であるため安価に提供でき、天然の食品由来であるため安全性が高いので、骨粗鬆症、低プロトロンビン血症、出血傾向等の予防や治療のために継続的に投与しうるビタミンＫ類含有機能性食品として有用である。
【００３６】
【実施例】
以下実施例によりさらに詳細に説明するが、本発明はこれらに限定されるものではない。
【００３７】
【実施例１】
豆腐の製造過程で発生したオカラ（水分含有率８０重量％、種皮部混入割合６重量％）を、圧力釜中１２１℃、圧力１．３ｋｇ／ｃｍ2にて２０分間加熱処理した。
【００３８】
処理後のオカラに納豆菌Bacillus sp TT-52を１０5／ｇ（乾燥オカラ換算）の割合で接種し、ステンレス製金網上に厚さ約１ｃｍの層として載置し、３７℃で４８時間発酵させ、その後温度を２５℃とし、さらに１７時間発酵させ、発酵物を得た。
【００３９】
【実施例２】
実施例１で得られた発酵物５．０ｇを正確にとり、水２０．０ｍｌ、イソプロパノール６０．０ｍｌ、ｎ−ヘキサン３０．０ｍｌを加え、室温で３０分間振とうした後×８００Ｇで５分間遠心分離した。上層のｎ−ヘキサン層を取り、溶媒を減圧留去した。残留物にｎ−ヘキサン２．０ｍｌを加え、あらかじめエーテル：ｎ−ヘキサン（４：９６、容量比）１０．０ｍｌで洗浄したＳｅｐ−ｐａｋシリカカートリッジ（ウォーターズ社製）に負荷した。カートリッジをｎ−ヘキサン１０．０ｍｌで洗浄した後エーテル：ｎーヘキサン（４：９６、容量比）５．０ｍｌを加えて溶出した。得られた溶出液を集めたものを試料として以下の条件でＨＰＬＣで分析し、ビタミンＫ類（ビタミンＫ1及びメナキノンＭＫ−４〜８）の含有量を乾燥オカラ発酵物中の含有割合として求めた。結果を表１に示す。
【００４０】
カラム：ＨＩＳＩＬ  Ｃ１８（１５０×４．５ｍｍ、ＨＩＧＧＩＮＳ  ＡＮＡＬＹＴＩＣＡＬ社製）
移動相：メタノール：エタノール（７：３、容量比）
流速：１．０ｍｌ／分
検出波長：励起波長（Ｅｘ）３２０ｎｍ、蛍光波長（Ｅｍ）４３０ｎｍ
還元装置：白金カラム
【００４１】
【表１】
0003836242.tif 000002
【００４２】
【参考例１】
ペプトン（Ｄｉｆｃｏ製）５．０重量％、ブドウ糖５．０重量％、ＫＨ2ＰＯ4０．１重量％、ＭｇＳＯ4 ０．０５重量％、ＮａＣｌ ０．０５重量％及びビオチン１００μｇ／ｌを水に溶解した培地を１２１℃で１５分間殺菌したのち、１０5／ｇの納豆菌Bacillus sp TT-52を接種し、４０℃で１４４時間振とう培養した。
【００４３】
得られた培養物５０．０ｇを約２０．０ｍｌまで減圧下で濃縮し、イソプロパノール６０．０ｍｌ、ｎ−ヘキサン３０．０ｍｌを加え、室温で３０分間振とうした後×８００Ｇで５分間遠心分離した。上層のｎ−ヘキサン層を取り、溶媒を減圧留去した。残留物にｎ−ヘキサン２．０ｍｌを加え、あらかじめエーテル：ｎ−ヘキサン（４：９６、容量比）１０．０ｍｌで洗浄したＳｅｐ−ｐａｋシリカカートリッジ（ウォーターズ社製）に負荷した。カートリッジをｎ−ヘキサン１０．０ｍｌで洗浄した後エーテル：ｎーヘキサン（４：９６、容量比）５．０ｍｌを加えて溶出した。得られた溶出液を集めたものを試料として、実施例２で行ったものと同様の条件でＨＰＬＣによる分析を行い、ビタミンＫ類（ビタミンＫ1及びメナキノンＭＫ−４〜８）の含有量を培養物中の含有割合として求めた。結果を表２に示す。
【００４４】
【表２】
0003836242.tif 000003