(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
一般式（Ｉ）
0003830187.tif 000056
(式中、Ｒ1はアセチル基またはトリフルオロアセチル基であり、Ｒ2はアミノ基またはグアニジノ基である)で示される３−エピシアスタチンＢ誘導体またはそれらの塩。
【請求項２】
請求項１に示される一般式（Ｉ）でＲ1がアセチル基でＲ2がアミノ基である化合物であり、すなわち次式（Ia）
0003830187.tif 000057
で示される（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ，６Ｒ）−６−アセトアミド−４−アミノ−５−ヒドロキシピペリジン−３−カルボン酸またはその塩である請求項１に記載の化合物。
【請求項３】
請求項１に示される一般式（Ｉ）でＲ1がアセチル基でＲ2がグアニジノ基である化合物であり、すなわち次式（Ib）
0003830187.tif 000058
で示される（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ，６Ｒ）−６−アセトアミド−４−グアニジノ−５−ヒドロキシピペリジン−３−カルボン酸またはその塩である請求項１に記載の化合物。
【請求項４】
請求項１に示される一般式（Ｉ)でＲ1がトリフルオロアセチル基でＲ2がアミノ基である化合物であり、すなわち次式（Ic）
0003830187.tif 000059
で示される（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ，６Ｒ）−４−アミノ−５−ヒドロキシ−６−トリフルオロアセトアミドピペリジン−３−カルボン酸またはその塩である請求項１に記載の化合物。
【請求項５】
請求項１に示される一般式（Ｉ)でＲ1がトリフルオロアセチル基でＲ2がグアニジノ基である化合物であり、すなわち次式（Id）
0003830187.tif 000060
で示される（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ，６Ｒ）−４−グアニジノ−５−ヒドロキシ−６−トリフルオロアセトアミドピペリジン−３−カルボン酸またはその塩である請求項１に記載の化合物。
【請求項６】
次式（II）
0003830187.tif 000061
で示されるシアスタチンＢから既知の方法で導かれた次式（III）
0003830187.tif 000062
（式中、Ｒはイミノ保護基を表わす）で示されるＮ−保護−４−デオキシ−３−エンシアスタチンＢのカルボキシル基をエステル化剤と反応させてエステル化し、次式（IV）
0003830187.tif 000063
（式中、Ｒは前記と同じ意味をもち、Ｒaはエステル形成基であるカルボキシル保護基を表わす）で示されるエステル化合物を生成し、次に式（IV）の化合物をトリクロロアセトニトリルと反応させることによってオキサゾリン環を形成して、次式（Ｖ）
0003830187.tif 000064
（式中、ＲおよびＲaは前記と同じ意味をもつ）で示される化合物を生成し、次に式（Ｖ）の化合物を加水分解にかけてオキサゾリン環を開環し、これにより次式（VI）
0003830187.tif 000065
（式中、ＲおよびＲaは前記と同じ意味をもつ）で示される化合物を生成し、さらに式（VI）の化合物からトリクロロアセチル基を脱離して次式（VII）
0003830187.tif 000066
（式中、ＲおよびＲaは前記と同じ意味をもつ）で示される化合物を生成し、さらに式（VII）の化合物から、そのイミノ保護基（Ｒ）およびカルボキシル保護基（Ｒa）を脱離することを特徴とする次式（Ia）
0003830187.tif 000067
で示される（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ，６Ｒ）−６−アセトアミド−４−アミノ−５−ヒドロキシピペリジン−３−カルボン酸、またはその塩の製造法。
【請求項７】
次式（VII）
0003830187.tif 000068
（式中、Ｒはイミノ保護基を表わし、Ｒaはエステル形成基であるカルボキシル保護基を表わす）で示される（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ，６Ｒ）−６−アセトアミド−４−アミノ−５−ヒドロキシピペリジン−３−カルボン酸の保護誘導体を次式
0003830187.tif 000069
（式中、Ａはアルコキシカルボニル基、アリールオキシカルボニル基またはアラルキルオキシカルボニル基であるアミノ保護基を表わす）で示されるＮ，Ｎ´−ジ−保護−チオ尿素と反応させることによりアミジノ化して次式（VIII）
0003830187.tif 000070
（式中、Ｒ、ＲaおよびＡは前記と同じ意味をもつ）で示される化合物を生成し、次いで式（VIII）の化合物からそれぞれの保護基（Ｒ、ＲaおよびＡ）を脱離することを特徴とする、次式（Ib）
0003830187.tif 000071
で示される（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ，６Ｒ）−６−アセトアミド−４−グアニジノ−５−ヒドロキシピペリジン−３−カルボン酸、またはその塩の製造法。
【請求項８】
シアスタチンＢから既知の方法で導かれた次式（IX）
0003830187.tif 000072
（式中、Ｒはイミノ保護基を表わし、Ｘ1、Ｘ2はそれぞれに１価のヒドロキシル保護基であるか、あるいは両者は共同して２価のヒドロキシル保護基を表わす）で示される（３Ｒ，４Ｓ，５Ｒ，６Ｓ）−Ｎ−保護−６−アミノ−３−ヒドロキシメチル−４，５−ジヒドロキシ−４，５−Ｏ−ジ−保護−ピペリジンの６位アミノ基を、イミノ保護基（Ｒ）と異なる脱離法で脱離できるアミノ保護基（Ｒb）で保護して、次式（Ｘ）
0003830187.tif 000073
（式中、Ｒ、Ｒb、Ｘ1およびＸ2は前記と同じ意味をもつ）で示される化合物を生成し、次いで式（Ｘ）の化合物の３-ヒドロキシメチル基を酸化してカルボキシル基に変換して次式（XI）
0003830187.tif 000074
（式中、ＲおよびＲbならびにＸ1およびＸ2は前記と同じ意味をもつ）で示されるカルボン酸化合物を生成し、次に式（XI）の化合物をエステル化剤と反応させて次式（XII）
0003830187.tif 000075
（式中、Ｒ、Ｘ1、Ｘ2は前記と同じ意味をもち、Ｒaはエステル形成基であるカルボキシル保護基を示し、ＲbはＲと異なる脱離法で脱離できるアミノ保護基を表わす）で示されるエステル化合物を生成し、次に式（XII）の化合物の４位ヒドロキシル基の脱離（デオキシ化）を行い且つ３位および４位炭素の間の結合を２重結合に転換して次式（XIII）
0003830187.tif 000076
（式中、Ｒ、ＲaおよびＲbは前記と同じ意味をもつ)で示される化合物を生成し、次に式（XIII）の化合物をトリクロロアセトニトリルと反応させることによりオキサゾリン環の形成を行って次式（XIV）
0003830187.tif 000077
（式中、Ｒ、ＲaおよびＲbは前記と同じ意味をもつ）で示される化合物を生成し、次に式（XIV）の化合物を加水分解にかけて式（XIV）の化合物のオキサゾリン環を開環し、これにより次式（XV）
0003830187.tif 000078
（式中、Ｒ、ＲaおよびＲbは前記と同じ意味をもつ）で示される化合物を生成し、さらに式（XV）の化合物からトリクロロアセチル基を脱離して次式（XVI）
0003830187.tif 000079
（式中、Ｒ、ＲaおよびＲbは前記と同じ意味をもつ）で示される化合物を生成し、式（XVI）の化合物の４位アミノ基をイミノ保護基（Ｒ）と同一のアミノ保護基で保護して、次式（XVII）
0003830187.tif 000080
（式中、Ｒ、ＲaおよびＲbは前記と同じ意味をもつ）で示される化合物を生成し、式（XVII）の化合物からカルボキシル保護基（Ｒa）を脱離して次式（XVII-a）
0003830187.tif 000081
（式中、ＲおよびＲbは前記と同じ意味をもつ）で示される化合物を生成し、式（XVII-a）の化合物の３位カルボキシル基を、イミノ保護基（Ｒ）を脱離させる方法と同じ反応で脱離できるカルボキシル保護基（Ｒc）で保護して次式（XVIII）
0003830187.tif 000082
（式中、ＲおよびＲbは前記と同じ意味をもち、Ｒcはカルボキシル保護基を表わす）で示される化合物を生成し、次に式（XVIII）の化合物からアミノ保護基（Ｒb）を脱離して次式（XVIII-a）
0003830187.tif 000083
（式中、ＲおよびＲcは前記と同じ意味をもつ）で示される化合物を生成し、さらに式（XVIII-a）の化合物の６位アミノ基をトリフルオロアセチル化して次式（XIX）
0003830187.tif 000084
（式中、ＲおよびＲcは前記と同じ意味をもつ）で示される化合物を生成し、次いで式（XIX）の化合物からアミノ保護基（Ｒ）とカルボキシル保護基（Ｒc）を脱離することを特徴とする次式（Ic）
0003830187.tif 000085
で示される（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ，６Ｒ）−４−アミノ−５−ヒドロキシ−６−トリフルオロアセトアミドピペリジン−３−カルボン酸、またはその塩の製造法。
【請求項９】
次式（XVI）
0003830187.tif 000086
〔式中、Ｒはイミノ保護基を表わし、Ｒaはエステル形成基であるカルボキシル保護基を表わし、Ｒbはイミノ保護基（Ｒ）と異なる脱離法で脱離できるアミノ保護基を表わす〕で示される（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ，６Ｒまたは６Ｓ）−６−Ｎ−保護−４，６−ジアミノ−５−ヒドロキシピペリジン−３−カルボン酸の保護誘導体を次式
0003830187.tif 000087
（式中、Ａはアルコキシカルボニル基、アリールオキシカルボニル基またはアラルキルオキシカルボニル基であるアミノ保護基を表わす）で示されるＮ，Ｎ´−ジ−保護−チオ尿素と反応させることによりアミジノ化して次式（XX）
0003830187.tif 000088
（式中、Ｒ、Ｒa、ＲbおよびＡは前記と同じ意味をもつ）で示される化合物を生成し、次いで式（XX）の化合物の６位のアミノ保護基（Ｒb）を選択的に脱離して次式（XX-a）
0003830187.tif 000089
（式中、Ｒ、ＲaおよびＡは前記と同じ意味をもつ）で示される化合物を生成し、次に式（XX-a）の化合物の６位のアミノ基をトリフルオロアセチル化して次式（XXI）
0003830187.tif 000090
（式中、Ｒ、ＲaおよびＡは前記と同じ意味をもつ）で示される化合物を生成し、さらに式（XXI）の化合物からそれぞれの保護基（Ｒ、ＲaおよびＡ）を脱離することを特徴とする、次式（Id）
0003830187.tif 000091
で示される（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ，６Ｒ）−４−グアニジノ−５−ヒドロキシ−６−トリフルオロアセトアミドピペリジン−３−カルボン酸、またはその塩の製造法。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は癌細胞転移抑制活性をもつ新規物質である３-エピシアスタチンＢ誘 導体、詳しくは（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ，６Ｒ)-６-アセトアミド-４-アミノ-５-ヒ ドロキシピペリジン-３-カルボン酸、（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ，６Ｒ)-６-アセトア ミド-４-グアニジノ-５-ヒドロキシピペリジン-３-カルボン酸、（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ，６Ｒ)-４-アミノ-５-ヒドロキシ-６-トリフルオロアセトアミドピリジン-３-カルボン酸、（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ，６Ｒ)-４-グアニジノ-５-ヒドロキシ-６-トリフルオロアセトアミドピペリジン-３-カルボン酸およびそれらの製薬学的に許容できる塩に関する。また、本発明はそれらの製造法に関する。
【０００２】
【従来の技術】
従来既知の制癌剤は悪性細胞を死滅させる殺細胞性の活性物質を有効成分とするか或いは人の免疫系を介して悪性細胞を死滅させる活性物質を有効成分とする薬剤が主体であった。この種の制癌剤は現在多く研究され、臨床に用いられているものもある。しかし従来の制癌剤は癌の治療に未だ充分なものとは言えない。また、固型癌に関しては外科手術あるいは放射線による治療も数多く行われている。他方、癌の転移は (イ)癌細胞の原発巣からの遊離、(ロ)脈管内への癌細胞 の播種、(ハ)毛細血管での停滞、栓塞等を経て標的組織内へ到達して癌細胞が増殖を開始することからなるプロセスであることが知られている。
【０００３】
【発明が解決しようとする課題】
現行の種々の癌の療法の有効性は癌細胞の転移を抑制することで、更に高められると期待されている。しかし、癌細胞の転移を抑制する活性を作用の主体とする活性物質は数少なく、臨床で用いられているものは未だない。従って、毒性が低く且つ水溶性を有してしかも癌転移抑制作用の強い化合物であって癌の治療ならびに予防に有効な新しい化合物を提供することが強く要望されている。
【０００４】
【課題を解決するための手段】
本発明者らは、新規な癌細胞転移抑制物質を得る目的で研究を進め、シアスタチンＢ誘導体に注目して鋭意研究を行った。その結果、優れた癌細胞転移抑制活性を有する後記の一般式(Ｉ)で示される新規な３−エピシアスタチンＢ誘導体を合成することに成功し、またこれら新規化合物の製造に適する方法を見出した。これによって、本発明を完成した。
【０００５】
第一の本発明においては、一般式（Ｉ）
0003830187.tif 000002
（式中、Ｒ1はアセチル基またはトリフルオロアセチル基であり、Ｒ2はアミノ基またはグアニジノ基である）で示される３−エピシアスタチンＢ誘導体、またはそれらの製薬学的に許容できる塩が提供される。
【０００６】
本発明のおける一般式(Ｉ）の３-エピシアスタチンＢ誘導体は次の４つの化合物を包含する。
【０００７】
(１）化合物Ｎo.１：  次式
0003830187.tif 000003
で示される(３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ，６Ｒ)-６-アセトアミド-４-アミノ-５-ヒドロキシピペリジン-３-カルボン酸〔一般式(Ｉ)でＲ1がアセチル基であり、Ｒ2がアミノ基である化合物に相当する〕。
【０００８】
(２）化合物Ｎo.２：  次式
0003830187.tif 000004
で示される(３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ，６Ｒ)-６-アセトアミド-４-グアニジノ-５-ヒドロキシピペリジン-３-カルボン酸〔一般式(Ｉ)でＲ1がアセチル基であり、Ｒ2がグアニジノ基である化合物に相当する〕。
【０００９】
(３）化合物Ｎo.３：  次式
0003830187.tif 000005
で示される(３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ，６Ｒ)-４-アミノ-５-ヒドロキシ-６-トリフルオロアセトアミドピペリジン-３-カルボン酸〔一般式(Ｉ)でＲ1がトリフルオロア セチル基であり、Ｒ2がアミノ基である化合物に相当する〕。
【００１０】
(４）化合物Ｎo.４：  次式
0003830187.tif 000006
で示される(３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ，６Ｒ)-４-グアニジノ-５-ヒドロキシ-６-トリフルオロアセトアミドピペリジン-３-カルボン酸〔一般式(Ｉ)でＲ1がトリフルオ ロアセチル基であり、Ｒ2がグアニジノ基である化合物に相当する〕。
【００１１】
第１の本発明による一般式(Ｉ)の化合物の塩には、それのカルボン酸基における製薬学的に許容できる金属との塩、例えばアルカリ金属塩、例えばナトリウム塩、あるいはアルカリ土類金属塩、例えばカルシウム塩ならびにアンモニウム塩がある。また一般式(Ｉ）の化合物のイミノ基及び(又は）グアニジノ基における酸付加塩も包含され、特に製薬学的に許容できる鉱酸、例えば塩酸、硫酸、あるいは有機酸、例えば酢酸、プロピオン酸、等との製薬学的に許容できる酸付加塩がある。
【００１２】
次に、第１の本発明による化合物(塩酸塩として）の物理化学的性質を示す。
（ａ）（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ，６Ｒ)-６-アセトアミド-４-アミノ-５-ヒドロキ シピペリジン-３-カルボン酸（化合物Ｎo.１）の二塩酸塩：
色および形状：無色不定形固体
分子式：Ｃ8Ｈ15Ｎ3Ｏ4・２ＨＣl
比旋光度：［α]26D +31.8°(c 0.19, 水）
1Ｈ-ＮＭＲスペクトル（400 MHz, D2O, δppm): 2.13(3H, s, NHCOCH3), 3.20(1H, dt, J=3.9, 11.5 Hz, 3-H), 3.28(1H, t, J=12.0 Hz, 2-Hax), 3.61(1H,dd, J=3.9, 12.0 Hz, 2-Heq), 3.98(1H, dd, J=2.7, 11.5 Hz, 4-H), 4.32(1H, t, J=2.7 Hz, 5-H), 5.45(1H, d, J=2.7 Hz, 6-H)溶解性: 水によく溶ける。
【００１３】
（ｂ）（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ，６Ｒ)-６-アセトアミド-４-グアニジノ-５-ヒド ロキシピペリジン-３-カルボン酸（化合物Ｎo.２）の二塩酸塩：
色および形状：無色不定形固体
分子式：Ｃ9Ｈ17Ｎ5Ｏ4・２ＨＣl
比旋光度：［α]26D ＋16.8°(c 0.26, 水）
1Ｈ-ＮＭＲスペクトル（400 MHz, D2O, δppm): 2.31(3H, s, NHCOCH3), 3.35(1H, dt, J=4.4, 11.0 Hz, 3-H), 3.54(1H, t, J=12.0 Hz, 2-Hax), 3.69(1H,dd, J=4.4, 12.0 Hz, 2-Heq), 4.38(1H, t, J=3.2 Hz, 5-H), 4.45(1H, dd,J=3.2, 11.0 Hz, 4-H), 5.52(1H, d, J=3.2 Hz, 6-H)
溶解性: 水によく溶ける。
【００１４】
（ｃ）（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ，６Ｒ)-４-アミノ-５-ヒドロキシ-６-トリフルオ ロアセトアミドピペリジン-３-カルボン酸（化合物Ｎo.３）の二塩酸塩：
色および形状：無色不定形固体
分子式：Ｃ8Ｈ12Ｆ3Ｎ3Ｏ4・２ＨＣl
比旋光度：［α]29D ＋22.1°(c 0.36, 1N HCl）
1Ｈ-ＮＭＲスペクトル（400 MHz, D2O, δppm): 3.07(1H, dd, J=4.0, 11.2 Hz,3-H), 3.15(1H, t, J=12.7 Hz, 2-Hax), 3.50(1H, dd, J=4.0, 12.7Hz, 2-Heq),3.93(1H, dd, J=2.9, 11.2 Hz, 4-H), 4.25(1H, t, J=2.9 Hz, 5-H), 5.41(1H, d, J=2.9 Hz, 6-H)
溶解性: 水によく溶ける。
【００１５】
（ｄ）（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ，６Ｒ)-６-トリフルオロアセトアミド-４-グアニ ジノ-５-ヒドロキシピペリジン-３-カルボン酸（化合物Ｎo.４）の二塩酸塩：
色および形状：無色不定形固体
分子式：Ｃ9Ｈ14Ｆ3Ｎ5Ｏ4・２ＨＣl
比旋光度：［α]29D ＋1.3°(c 0.47, 1N HCl）
1Ｈ-ＮＭＲスペクトル（400 MHz, D2O, δppm): 3.27(1H, dt, J=4.1, 11.0 Hz,3-H), 3.38(1H, t, J=12.0 Hz, 2-Hax), 3.55(1H, dd, J=4.1, 12.0Hz, 2-Heq),4.25(1H, t, J=3.9 Hz, 5-H), 4.39(1H, dd, J=3.9, 11.0 Hz, 4-H), 5.42(1H, d, J=3.9 Hz, 6-H)
溶解性: 水によく溶ける。
【００１６】
第一の本発明による一般式(Ｉ）の化合物が癌細胞転移抑制活性を有すること を下記の試験例により例証する。
【００１７】
試験例１
第１の本発明による式(Ｉ)の化合物の癌細胞転移抑制作用の評価の試験はキジマ-スダ(Kijuma-Suda)らの方法 (「Cancer Research」、46巻、858-862頁、1986 年）を基にして行った。
【００１８】
試験法は次のとおりである。すなわち、マウスの腫瘍であるメラノーマＢ16株よりフィドラー（Fidler）の方法「Method in Cancer Research」15巻、399-439頁、1978年）に準じてメラノーマＢ16高転移株を選択し、供試の癌細胞として使用した。
【００１９】
先ずＢ16高転移株を牛胎児血清を加えたダルベコ培地に植え、24時間、５％ＣＯ2の存在下で37℃で培養した。その後、一般式(Ｉ）の化合物を供試薬剤として後記の表１および表２に示す各濃度で加え、２４時間あるいは７２時間、５％ＣＯ2の存在下37℃で培養した。その後、増殖した細胞をトリプシンとＥＤＴＡ 溶液で培養容器より剥がした。このように上記薬剤で処理されて増殖した癌細胞を、平衡塩類溶液で生細胞として１ml当たり１×106個の細胞を含む細胞懸濁液 になるように懸濁した。
【００２０】
この癌細胞懸濁液の0.1 mlをＢＤＦ1マウス(雌、７週令）の尾静脈に投与して移植した。14日間飼育した後、供試薬剤処理群のマウスを開腹して肺を摘出し、肺表面及び内部に形成されたＢ16高移転株のコロニーを計数した。更に、薬剤処理をしなかった対照群と比較した。その処理群と対照群における肺転移したＢ16高移転株のコロニー数、及びコロニー数から算出された転移抑制率(％"を試験結果として次の表１および表２に示した。
【００２１】
0003830187.tif 000007
【００２２】
0003830187.tif 000008
【００２３】
以上の試験結果より明らかな通り、本発明による一般式(Ｉ)の（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ，６Ｒ)-６-アセトアミド-４-アミノ-５-ヒドロキシピペリジン-３-カルボ ン酸(化合物Ｎo.１)二塩酸塩、(３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ，６Ｒ)-６-アセトアミド-４-グアニジノ-５-ヒドロキシピペリジン-３-カルボン酸(化合物Ｎo.２)二塩酸塩、(３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ，６Ｒ)-４-アミノ-５-ヒドロキシ-６-トリフルオロアセトアミドピペリジン-３-カルボン酸(化合物Ｎo.３)二塩酸塩および(３Ｒ，４Ｓ，５ Ｓ，６Ｒ)-４-グアニジノ-５-ヒドロキシ-６-トリフルオロアセトアミドピペリ ジン-３-カルボン酸(化合物Ｎo.４)二塩酸塩はこれらによる癌細胞処理の薬剤濃度を上げるのに従って、肺に形成される癌細胞コロニーの数を減少させており、癌細胞の肺への転移を強く抑制させている。
【００２４】
本発明による癌細胞転移抑制活性をもつ一般式(Ｉ)の化合物またはその塩は、一般的に、癌細胞の拡散、転移を極めて顕著に抑制する。従って、既存の制癌剤と同時に本発明化合物またはその塩を投与して、また、外科手術療法或いは放射線療法時に投与することで制癌効果を著しく高めることができるから、癌の治療法で極めて有用な薬剤である。
【００２５】
さらに、新規な癌細胞転移抑制物質である一般式(Ｉ)の３-エピシアスタチン Ｂ誘導体を生成する製造法について説明する。
【００２６】
本発明の３-エピシアスタチンＢ誘導体を製造するには、原料としてシアスタ チンＢを用いる。シアスタチンＢは放射菌ストレプトミセス・バーチシラス・バリエタス・クインツム(Streptomyces verticillus var. quintum)(微工研菌寄第507号)を培養して、その培養液から採取する方法(特公昭55-46714号）によって 製造される。
【００２７】
第一の本発明による前記の式(Ia）で示される(３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ，６Ｒ)-６- アセトアミド-４-アミノ-５-ヒドロキシピペリジン-３-カルボン酸(化合物Ｎo. １）および式(Ib）で示される（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ，６Ｒ)-６-アセトアミド-４-グアニジノ-５-ヒドロキシピペリジン-３-カルボン酸(化合物Ｎo.２）は、シア スタチンＢから調製できるＮ-保護-４-デオキシ-３-エンシアスタチンＢを出発 化合物として用い、これを数工程で化学的に変換することにより製造できる。
【００２８】
第二の本発明においては、式(Ia)の本発明化合物の製造法として、次式(II)
0003830187.tif 000009
で示されるシアスタチンＢから既知の方法で導かれた次式(III）
0003830187.tif 000010
(式中、Ｒはイミノ保護基を表わす）で示されるＮ-保護-４-デオキシ-３-エンシアスタチンＢのカルボキシル基をエステル化剤と反応させてエステル化し、次式(IV）
0003830187.tif 000011
(式中、Ｒは前記と同じ意味をもち、Ｒaはエステル形成基であるカルボキシル保護基を表わす）で示されるエステル化合物を生成し、次に式(IV）の化合物をト リクロロアセトニトリルと反応させることによってオキサゾリン環を形成して、次式(Ｖ）
0003830187.tif 000012
(式中、ＲおよびＲaは前記と同じ意味をもつ）で示される化合物を生成し、次に式(Ｖ）の化合物を加水分解にかけてオキサゾリン環を開環し、これにより次式 (VI）
0003830187.tif 000013
(式中、ＲおよびＲaは前記と同じ意味をもつ）で示される化合物を生成し、さらに式(VI）の化合物からトリクロロアセチル基を脱離して次式(VII）
0003830187.tif 000014
(式中、ＲおよびＲaは前記と同じ意味をもつ）で示される化合物を生成し、さらに式(VII)の化合物から、そのイミノ保護基(Ｒ)およびカルボキシル保護基(Ｒa)を脱離することを特徴とする次式(Ia）
0003830187.tif 000015
で示される(３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ，６Ｒ)-６-アセトアミド-４-アミノ-５-ヒドロキシピペリジン-３-カルボン酸、またはその塩の製造法が提供される。
【００２９】
第２の本発明方法で、出発化合物として用いられる一般式(III）の１-Ｎ-保護-４-デオキシ-３-エン-シアスタチンＢは、上記の式(II)のシアスタチンＢを原 料として用いて西村ら「Natural Product Lett.」１巻、39-43頁(1992年)、ならびに工藤ら；「J. Antibiotics」46巻、300-309頁(1993年)、さらには特開平4- 89481号公報に記載される方法で調製できる。例えば、４-デオキシ-３-エン-１-Ｎ-(ターシャリーブトキシカルボニル)シアスタチンＢは、トリエチルアミンの ような有機アミンの存在下に、Ｎ，Ｎ-ジメチルホルムアミド中でシアスタチン Ｂにジ-第３級ブチルカルボネート等を加えて５〜100℃で２〜５時間反応させることにより製造できる。
【００３０】
次に、第二の本発明の方法の各工程の実施法を説明する。
一般式(III）のエノ化シアスタチンＢの化合物でイミノ保護基(Ｒ)は、アルコキシカルボニル基、アリールオキシカルボニル基またはアラルキルオキシカルボニル基であるのが好ましく、特にターシャリーブトキシカルボニル基であるのが便利である。イミノ保護基(Ｒ)の導入は常法で行い得る。
【００３１】
先づ、式(III）の化合物のカルボキシル基の保護のため、エステル形成基をカルボキシル基に導入させるエステル化剤と式(III）の化合物を反応させる。エステル化剤は、アルカリ加水分解で脱離し易いジフェニルメチル基をカルボキシル保護基(Ｒa）として導入するのに利用できる化合物、例えばジフェニルジアゾメタンであるのが便利である。
【００３２】
上記のエステル化剤としてジフェニルジアゾメタンを使用する場合、式(III) で示される１-Ｎ-保護-４-デオキシ-３-エンシアスタチンＢをジクロロメタンとメタノールの混合溶媒中に溶解し、その溶液にジフェニルジアゾメタンを加えて室温でエステル化反応を実施でき、これにより式(IV）のエステル化合物が得ら れる。なお、上記のエステル化剤は、一般には、メタノールの如き(Ｃ1〜Ｃ6)アルカノールや、ベンジルアルコールの如きアラルキルアルコール又はその均等的な反応性誘導体であることができ、これらでエステル化すると、夫々に対応のエステル化合物(IV）が得られる。
【００３３】
次に、式(IV)の化合物をジクロロメタン等の有機溶媒に溶解し、その溶液に  １，８-ジアザビシクロ[５.４.０]-７-ウンデセンなどの有機塩基の存在下にト リクロロアセトニトリルを加えて室温で反応させることにより、オキサゾリン環を形成させる。これにより式(Ｖ)の化合物が得られる。式(Ｖ)の化合物をピリジンと水の混合溶媒またはその他の適当な溶媒に溶解し、その溶液にパラ−トルエンスルホン酸等の酸を加えて加水分解することにより式(Ｖ)の化合物のオキサゾリン環を開環させる。こうして式(VI)の化合物が得られる。
【００３４】
式(VI)の化合物をエタノール等の溶媒に溶解し、その溶液に水素化ホウ素ナトリウム等の金属ヒドリドを加え、室温で反応させる。これにより、式(VI)の化合物から脱トリクロロアセチル化すると、式(VII)の化合物が得られる。式(VII)の化合物を、1〜４Ｎ ＨＣl-ジオキサンなどの塩化水素を含む有機溶媒に溶解し、室温で保護基の脱離反応を行うと、アミノ保護基(Ｒ)およびカルボキシル保護基(Ｒa）が除去される。これにより前記の式(Ia)の本発明の化合物Ｎo.１が塩酸塩として生成する。
【００３５】
第三の本発明は、前記の式（Ib）の本発明化合物の製造法に関する。第三の本発明の方法は、第二の本発明の方法で中間体として得られた式（VII）の化合物から出発して、式（VII）の化合物の２位アミノ基をアミジノ化する工程を含む。すなわち、詳しくは、第三の本発明においては、次式（VII）
0003830187.tif 000016
（式中、Ｒはイミノ保護基を表わし、Ｒaはエステル形成基であるカルボキシル保護基を表わす）で示される（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ，６Ｒ）−６−アセトアミド−４−アミノ−５−ヒドロキシピペリジン−３−カルボン酸の保護誘導体を次式
0003830187.tif 000017
（式中、Ａはアルコキシカルボニル基、アリールオキシカルボニル基またはアラルキルオキシカルボニル基であるアミノ保護基を表わす）で示されるＮ，Ｎ´−ジ−保護−チオ尿素と反応させることによりアミジノ化して次式（VIII）
0003830187.tif 000018
（式中、Ｒ、ＲaおよびＡは前記と同じ意味をもつ）で示される化合物を生成し、次いで式（VIII）の化合物からそれぞれの保護基（Ｒ、ＲaおよびＡ）を脱離することを特徴とする、次式（Ib）
0003830187.tif 000019
で示される（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ，６Ｒ）−６−アセトアミド−４−グアニジノ−５−ヒドロキシピペリジン−３−カルボン酸、またはその塩の製造法が提供される。
【００３６】
第三の本発明の方法の各工程の実施法を次に説明する。この方法において、式(VII)の化合物を上記のＮ，Ｎ´-ジ-保護-チオ尿素と反応させてアミジノ化する工程では、式(VII)の化合物のアミジノ化反応は、該化合物をＮ，Ｎ-ジメチルホルムアミド等の有機溶媒中で、トリエチルアミン等の有機塩基の存在下に、Ｎ，Ｎ´-ジ-保護-チオ尿素と塩化第二水銀を加えて冷却して攪拌反応させて行いう る。これにより、式(VIII）の化合物が得られる。また、上記の式(VII）の化合 物から式(VIII）の化合物を得る反応は、一般のグアニジノ化の反応によっても 行い得る。
【００３７】
次いで、式(VIII)の化合物を、1〜４Ｎ ＨＣl-ジオキサンなどの塩化水素を含む有機溶媒に溶解し、この溶液を室温で保護基の脱離反応を行う。これにより、アミノ保護基(Ｒ)、グアニジノ基の保護基(Ａ)およびカルボキシル保護基(Ｒa）が式(VIII）の化合物から脱離されて、前記の式（Ib）の本発明の化合物Ｎo.２ が塩酸塩として生成される。
【００３８】
第四の本発明は、前記の式(Ic）の本発明化合物の製造法に関する。この方法 においては、シアスタチンＢから複数の工程で新規な中間体として一般式(IX）
0003830187.tif 000020
で示される(３Ｒ，４Ｓ，５Ｒ，６Ｓ)-Ｎ-保護-６-アミノ-３-ヒドロキシメチル-４，５-ジヒドロキシ-４，５-Ｏ-ジ保護ピペリジン(特願平7-250142号明細書、参照）を調製し、さらに式(IX）の化合物を出発化合物として用いて複数の工程 で化学的に変換することによって、本発明における一般式(Ｉ）の化合物に包含 される式(Ic）の化合物、すなわち（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ，６Ｒ)-４-アミノ-５-ヒドロキシ-６-トリフルオロアセトアミドピペリジン-３-カルボン酸（化合物Ｎo.３）を製造する。
【００３９】
すなわち、詳しくは第四の本発明においては、シアスタチンＢから既知の方法で導かれた次式（IX）
0003830187.tif 000021
（式中、Ｒはイミノ保護基を表わし、Ｘ1、Ｘ2はそれぞれに１価のヒドロキシル保護基であるか、あるいは両者は共同して２価のヒドロキシル保護基を表わす）で示される（３Ｒ，４Ｓ，５Ｒ，６Ｓ）−Ｎ−保護−６−アミノ−３−ヒドロキシメチル−４，５−ジヒドロキシ−４，５−Ｏ−ジ−保護−ピペリジンの６−アミノ基を、イミノ保護基（Ｒ）と異なる脱離法で脱離できるアミノ保護基（Ｒb）で保護して、次式（Ｘ）
0003830187.tif 000022
（式中、Ｒ、Ｒb、Ｘ1およびＸ2は前記と同じ意味をもつ）で示される化合物を生成し、次いで式（Ｘ）の化合物の３−ヒドロキシメチル基を酸化してカルボキシル基に変換して次式（XI）
0003830187.tif 000023
（式中、ＲおよびＲbならびにＸ1およびＸ2は前記と同じ意味をもつ）で示されるカルボン酸化合物を生成し、次に式（XI）の化合物をエステル化剤と反応させて次式（XII）
0003830187.tif 000024
（式中、Ｒ、Ｘ1、Ｘ2は前記と同じ意味をもち、Ｒaはエステル形成基であるカルボキシル保護基を示し、ＲbはＲと異なる脱離法で脱離できるアミノ保護基を表わす）で示されるエステル化合物を生成し、次に式（XII）の化合物の４位ヒドロキシル基の脱離（デオキシ化）を行い且つ３位および４位炭素の間の結合を２重結合に転換（エノ化）して次式（XIII）
0003830187.tif 000025
（式中、Ｒ、ＲaおよびＲbは前記と同じ意味をもつ）で示される化合物を生成し、次に式（XIII）の化合物をトリクロロアセトニトリルと反応させることによりオキサゾリン環の形成を行なって次式（XIV）
0003830187.tif 000026
（式中、Ｒ、ＲaおよびＲbは前記と同じ意味をもつ）で示される化合物を生成し、次に式（XIV）の化合物を加水分解にかけて式（XIV）の化合物のオキサゾリン環 を開環し、これにより次式（XV）
0003830187.tif 000027
（式中、Ｒ、ＲaおよびＲbは前記と同じ意味をもつ）で示される化合物を生成し、さらに式（XV）の化合物からトリクロロアセチル基を脱離して次式（XVI）
0003830187.tif 000028
（式中、Ｒ、ＲaおよびＲbは前記と同じ意味をもつ）で示される化合物を生成し、式（XVI）の化合物の４位アミノ基をイミノ保護基（Ｒ）と同一のアミノ保護基で保護して、次式（XVII）
0003830187.tif 000029
（式中、Ｒ、ＲaおよびＲbは前記と同じ意味をもつ）で示される化合物を生成し、式（XVII）の化合物からカルボキシル保護基（Ｒa）を脱離して次式（XVII-a）
0003830187.tif 000030
（式中、ＲおよびＲbは前記と同じ意味をもつ）で示される化合物を生成し、式（XVII-a）の化合物の３位カルボキシル基を、イミノ保護基（Ｒ）を脱離させる方法と同じ反応で脱離できるカルボキシル保護基（Ｒc）で保護して次式（XVIII）
0003830187.tif 000031
（式中、ＲおよびＲbは前記と同じ意味をもち、Ｒcはカルボキシル保護基を表わす）で示される化合物を生成し、次に式（XVIII）の化合物からアミノ保護基（Ｒb）を脱離して次式（XVIII-a）
0003830187.tif 000032
（式中、ＲおよびＲcは前記と同じ意味をもつ）で示される化合物を生成し、さらに式（XVIII-a）の化合物の６位アミノ基をトリフルオロアセチル化して次式（XIX）
0003830187.tif 000033
（式中、ＲおよびＲcは前記と同じ意味をもつ）で示される化合物を生成し、次いで式（XIX）の化合物からアミノ保護基（Ｒ）とカルボキシル保護基（Ｒc）を脱離することを特徴とする次式（Ic）
0003830187.tif 000034
で示される（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ，６Ｒ）−４−アミノ−５−ヒドロキシ−６−トリフルオロアセトアミドピペリジン−３−カルボン酸、またはその塩の製造法が提供される。
【００４０】
次に、第四の本発明方法の各工程の実施法について説明する。出発化合物として用いる一般式(IX)の化合物は、新規化合物である(３Ｒ，４Ｓ，５Ｒ，６Ｓ)- ６-アミノ-Ｎ-(ターシャリーブトキシカルボニル)-３-ヒドロキシメチル-４，５-ジヒドロキシ-４，５-Ｏ-イソプロピリデン-ピペリジン(1995年９月５日出願の特願平7-250142号明細書、参照）を酸加水分解にかけ、これにより次式(Ａ)
0003830187.tif 000035
で示される(３Ｒ，４Ｓ，５Ｒ，６Ｓ)-６-アミノ-３-ヒドロキシメチル-４，５-ジヒドロキシ-ピペリジンを得て、この化合物にイミノ保護基（Ｒ）とヒドロキ シル保護基（Ｘ1、Ｘ2）を慣用の官能基保護法で導入することによって調製できる。
【００４１】
式（XI）の化合物において、Ｒであるイミノ保護基はターシャリーブトキシカルボニル基 (CH3)3CO-CO-（略号：Ｂoc)であるのが便利である。イミノ保護基(Ｒ）としては、一般には、Ｂoc基に代えて、常用のイミノ保護基を糖化学で知 られる保護法により導入して利用できる。例えば加水分解法で脱離できる適当なイミノ保護基（Ｒ）としてはアルコキシカルボニル基、アリールオキシカルボニル基又はアラルキルオキシカルボニル基を使用できる。
【００４２】
式（IX）の化合物の４位及び５位のヒドロキシル基を同時に保護する適当な２価のヒドロキシル保護基（Ｘ1、Ｘ2）はイソプロピリデン基であるのが便利であるが、一般的にはその他の各種の基を利用できる。すなわち、次式
0003830187.tif 000036
〔但しＹ及びＺは、互いに同じ又は異なってもよく、それぞれが水素、アルキル基(好ましくは炭素数１〜４の低級アルキル基）又はアリール基(好ましくはフェニル基又は置換フェニル基、例えばパラ-メトキシフェニル基)である〕で表される２価のヒドロキシル保護基(イソプロピリデン基を包含)を利用できる。またこれに代えて、ベンジリデン基により、あるいはシクロアルキリデン基、例えばシクロヘキシリデン基またはテトラヒドロピラニリデン基により４位および５位のヒドロキシル基を同時に保護することも便利である。
【００４３】
このような２価のヒドロキシル保護基の導入は、糖の化学において、隣接する２個の炭素原子に結合するヒドロキシル基の２個を同時に保護するための慣用のヒドロキシ基保護の技術に従って行なわれる。また別に、適当な１価のヒドロキシル保護基としてトリアルキルシリル基、特にターシャリーブチルジメチルシリル基を用いることができ、常用の技術で導入できる。
【００４４】
式（Ａ）の化合物の４位および５位のヒドロキシル基を保護するために、保護基として４，５-Ｏ-イソプロピリデン基を導入する反応を例示すると、式（Ａ）の化合物を例えばＮ，Ｎ-ジメチルホルムアミドなどの有機溶媒に溶解し、その 溶液に例えば２，２-ジメトキシプロパン（イソプロピリデン基の導入剤）を加 え、さらにクロロトリメチルシランの如き塩化アルキルシラン、またはパラ−トルエンスルホン酸などの酸触媒を加えて室温で数時間反応させることにより、式(IX）で示される化合物の一例として４，５-Ｏ-ジイソプロピリデン誘導体が得 られる。
【００４５】
なお、上記のヒドロキシル基保護反応に用いられた２，２-ジメトキシプロパ ンに代えて、ベンツアルデヒドジメチルアセタール又は１，１-ジメトキシシク ロヘキサンあるいはその他の各種のアセタールおよびケタール試薬を用いると、４，５-Ｏ-ベンジリデン基又はシクロヘキシリデン基を導入された又はその他のアセタールおよびケタール基を導入された式（IX）の化合物が得られる。
【００４６】
第四の本発明の方法の第１工程では、出発化合物として用いる式（IX）の化合物の６位アミノ基がイミノ保護基(Ｒ)と異なる脱離法で脱離できるアミノ保護基(Ｒb)で保護される。このアミノ保護基(Ｒb)は、加水分解で脱離できるアラルキルオキシカルボニル基、好ましくはベンジルオキシカルボニル基であるのが便利である。アミノ保護基(Ｒb)の導入は常法で行うことができる。例えば式(IX)の 化合物をメタノールの如き有機溶媒に溶解し、その溶液にＮ，Ｎ−ジイソプロピルアミン等の塩基の存在下にアラルキルオキシカルボニル・クロライド、好ましくは塩化ベンジルオキシカルボニルを加えて、得られた混合物を冷却して反応することにより、６位アミノ基が保護された式(Ｘ)の化合物が得られる。
【００４７】
次に、式(Ｘ）の化合物の３位ヒドロキシメチル基をカルボキシル基に酸化す る。このためには式(Ｘ）の化合物を四塩化炭素、アセトニトリル、水の混合溶 媒に溶かし、その溶液にメタ過ヨウ素酸ナトリウムの存在下に酸化剤、好ましくは二酸化ルテニウムを加え、得られた混合物を室温で酸化反応を行う。これにより、式(XI)の遊離カルボン酸化合物が得られる。
【００４８】
式(XI)の化合物を塩化メチレンとメタノールの混合溶媒に溶かし、その溶液にエステル化剤を加え、室温で式(XI)の化合物のカルボキシル基をエステル化することにより保護する。これにより、式(XII)の化合物が得られる。エステル化剤 は第二の本発明方法で用いたものと同じであることができる。
【００４９】
次に、式(XII)の化合物の４位ヒドロキシル基の脱離とエノ化を行う。このた めには、該化合物をテトラヒドロフラン等の有機溶媒に溶かし、その溶液にアルコキシアルカリ金属、好ましくはターシャリーブトキシカリウムを加えて、冷却下に反応を行う。これにより、式（XIII）の化合物が得られる。
【００５０】
さらに、式（XIII）の化合物の５位ヒドロキシル基と４位との間にオキサゾリン環を形成する反応を行う。このためには該化合物をベンゼン等の有機溶媒に溶解し、その溶液に１，８-ジアザビシクロ[５.４.０]-７-ウンデセンなどの有機 塩基の存在下にトリクロロアセトニトリルを加えて室温で反応させる。これにより、オキサゾリン環が形成されて式（XIV）の化合物が得られる。
【００５１】
さらに、式(XIV)の化合物のオキサゾリン環の開環を行う。このために該化合 物をピリジンと水の混合溶媒等の溶媒に溶解し、その溶液にパラ-トルエンスル ホン酸等の酸を加えて加水分解する。これによりオキサゾリン環が開環されて、式(XV)の化合物が得られる。
【００５２】
次に、式(XV)の化合物からトリクロロアセチル基を脱離する。このためには、該化合物をエタノール等の溶媒に溶解し、その溶液に水素化ホウ素ナトリウム等の金属ヒドリドを加え、室温で反応する。これにより、式(XV)の化合物は脱トリクロロアセチル化を受けて式(XVI)の化合物が得られる。
【００５３】
さらに式(XVI）の化合物の４位アミノ基をイミノ保護基(Ｒ）と同じ保護基で 保護する。このためには、該化合物をメタノール等の溶媒に溶解し、その溶液にＮ，Ｎ−ジイソプロピルアミン等の塩基の存在下に、アミノ保護基導入試薬、好ましくはジ・ターシャリージ・カーボネートを加えて反応させる。これで４位アミノ基の保護が行われることにより、式（XVII）の化合物が得られる。
【００５４】
さらに、式（XVII）の化合物のカルボキシル保護基（Ｒa）を脱離するため、 該化合物をメタノール等の溶媒に溶解し、その溶液に１Ｍ水酸化ナトリウム水溶液を加えて、アルカリ性加水分解させると、式（XVII-a）の脱エステル化体を得る。式（XVII-a）の化合物を塩化メチレン等の溶媒に溶解し、その溶液にイミノ保護基（Ｒ）と同じ脱離法で脱離できる種類のカルボキシル保護基（Ｒc）の導 入用のエステル化剤を加え、Ｎ，Ｎ-ジイソプロピルアミン等の塩基の存在下に 再エステル化反応を行う。これにより、式（XVIII）の化合物が得られる。
【００５５】
次に、式（XVIII)の化合物の６位アミノ基から保護基（Ｒb）の脱離を行う。 このために、該化合物をアセトニトリル等の溶媒に溶解し、その溶液に10％パラジウム炭素を加え、水素雰囲気下に室温で加水素分解をする。これにより、式  （XVIII-a）の化合物を得る。得られた式(XVIII-a)の化合物の６位アミノ基のトリフルオロアセチル化を次に行う。このため該化合物を塩化メチレン等の溶媒に溶解し、その溶液にピリジン等の塩基の存在下に、トリフルオロアセチル化剤、好ましくは無水トリフルオロ酢酸を加えて反応させると、６位アミノ基のトリフルオロアセチル化が行われる。これにより、式（XIX）の化合物が得られる。
【００５６】
最後に、式（XIX）の化合物からアミノ保護基(Ｒ）およびカルボキシル保護基(Ｒc）を脱離する反応を行う。このために、該化合物を、それぞれ１〜４Ｎ塩酸ガス-ジオキサンなどの塩化水素を含む有機溶媒に溶解し、酸加水分解によりア ミノ保護基（Ｒ）とカルボキシル保護基（Ｒc）を除去すると、式（Ic）の本発 明の化合物Ｎo.３を塩酸塩として生成する。
【００５７】
さらにまた、第五の本発明は前記の式(Id)の本発明化合物の製造法に関する。式(Id)の化合物、すなわち(３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ，６Ｒ)-４-グアニジノ-５-ヒドロキシ-６-トリフルオロアセトアミドピペリジン-３-カルボン酸(化合物 Ｎo.４）は、第四の本発明の方法で中間体として得られた式（XVI）の化合物から出発し てアミジノ化反応にかけることにより、製造できる。
【００５８】
すなわち、第五の本発明においては、次式（XVI）
0003830187.tif 000037
〔式中、Ｒはイミノ保護基を表わし、Ｒaはエステル形成基であるカルボキシル保護基を表わし、Ｒbはイミノ保護基（Ｒ）と異なる脱離法で脱離できるアミノ保護基を表わす〕で示される（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ，６Ｒまたは６Ｓ）−６−Ｎ−保護−４，６−ジアミノ−５−ピペリジン−３−カルボン酸の保護誘導体を次式
0003830187.tif 000038
（式中、Ａはアルコキシカルボニル基、アリールオキシカルボニル基またはアラルキルオキシカルボニル基であるアミノ保護基を表わす）で示されるＮ，Ｎ´−ジ−保護−チオ尿素と反応させることによりアミジノ化して次式（XX）
0003830187.tif 000039
（式中、Ｒ、Ｒa、ＲbおよびＡは前記と同じ意味をもつ）で示される化合物を生成し、次いで式（XX）の化合物の６位のアミノ保護基（Ｒb）を選択的に脱離して次式（XX-a）
0003830187.tif 000040
（式中、Ｒ、ＲaおよびＡは前記と同じ意味をもつ）で示される化合物を生成し、次に式（XX-a）の化合物の６位のアミノ基をトリフロオロアセチル化して次式（XXI）
0003830187.tif 000041
（式中、Ｒ、ＲaおよびＡは前記と同じ意味をもつ）で示される化合物を生成し、さらに式（XXI）の化合物からそれぞれの保護基（Ｒ、ＲaおよびＡ）を脱離することを特徴とする、次式（Id）
0003830187.tif 000042
で示される（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ，６Ｒ）−４−グアニジノ−５−ヒドロキシ−６−トリフルオロアセトアミドピペリジン−３−カルボン酸、またはその塩の製造法が提供される。
【００５９】
第五の本発明方法の各工程の実施法を次に説明する。この方法においては、先づ式(XVI)の化合物をＮ，Ｎ-ジメチルホルムアミド等の有機溶媒中で、トリエチルアミン等の有機塩基の存在下に、前記の式のN,N'-ジ-保護-チオ尿素と塩化第 二水銀を加えて、冷却下に反応させる。これにより、式(XX）の化合物が得られ る。上記のチオ尿素誘導体のアミノ保護基は、一般には、前記の第三の本発明方法と同様に、常用の尿素の保護基であるアルキルオキシカルボニル基、アリールオキシカルボニル基又はアラルキルオキシカルボニル基等が利用できる。上記の式(XVI）の化合物から式(XX）の化合物を得る反応は、一般のグアニジノ化の反 応によっても行い得る。
【００６０】
次に、式(XX）の化合物の６位アミノ基の保護基(Ｒb）を選択的に脱離する。 このためには、該化合物をアセトニトリル等の溶媒に溶解し、その溶液をアミノ保護基(Ｒb）の脱離反応にかけ、これにより式(XX-a）の化合物を得る。得られ た式(XX-a)の化合物の６位アミノ基を次にトリフルオロアセチル化する。このためには、該化合物を、塩化メチレン等の溶媒に溶解し、その溶液にピリジン等の塩基の存在下に、トリフルオロアセチル化剤、好ましくは無水トリフルオロ酢酸を加えて反応させる。６位アミノ基がトリフロオロアセチル化されて式(XXI)の 化合物が得られる。
【００６１】
最後に、上記の式(XXI）の化合物から保護基(Ｒ、ＲaおよびＡ）を脱離する反応を行う。このためには、式(XXI）の化合物を、1〜４Ｎ ＨＣl-ジオキサンなどの塩化水素を含む有機溶媒に溶解し、酸加水分解にかけるのが便利である。それによりアミノ保護基(Ｒ)、およびカルボキシル保護基(Ｒa）ならびにグアニジノ保護基(Ａ）が脱離されて、本発明の式（Id）の化合物Ｎo.４が塩酸塩として生 成する。
【００６２】
第二〜第五の本発明の方法で式（Ia)、（Ib)、（Ic）または（Id）の化合物が上記のごとき塩酸塩などの酸付加塩の形で得られた場合には、その酸付加塩の水溶液を常法により陽イオン交換樹脂、例えばダウエックス５０Ｗ（米国ダウケミカル社製)(Ｈ+型）で処理することにより、またはアンモニアを含有する溶媒系 によるクロマトグラフィーで精製することにより、遊離塩基の形の本発明の化合物Ｎo.１、Ｎo.２、Ｎo.３またはＮo.４が得られる。
【００６３】
第二の本発明方法によると、４-デオキシ-３-エン-１-Ｎ-(ターシャリーブト キシカルボニル)シアスタチンＢから出発して、本発明による式(Ia）で示される(３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ，６Ｒ)-６-アセトアミド-４-アミノ-５-ヒドロキシピペリジン-３-カルボン酸（化合物Ｎo.１）を生成する方法は、例えば、次の反応チャート１に示す複数の工程からなる反応経路で実施できる。但し、反応チャート１でＢocはイミノ保護基としてのターシャリーブトキシカルボニル基（CH3)3CO-CO- を示し、Ｐｈはフェニル基を示す。
【００６４】
反応チャート１
0003830187.tif 000043
すなわち、上記反応チャート１について説明するに、式（III-1）で示される ４-デオキシ-３-エン-１-Ｎ-(ターシャリーブトキシカルボニル)シアスタチンＢを、ジクロロメタンとメタノールの混合溶媒中に溶解し、その溶液にジフェニルジアゾメタンを加えて室温で攪拌下に反応させることにより式（III-1）の化合 物のカルボキシル基をジフェニルメチル基-ＣＨＰｈ2でエステル化する。これにより式（IV-1）の化合物が得られる。
【００６５】
式（IV-1)の化合物をジクロロメタンに溶解し、その溶液に１，８-ジアザビシクロ[５.４.０]-７-ウンデセンおよびトリクロロアセトニトリルを加えて室温で反応することにより、オキサゾリン環を形成させると、式（V-1）の化合物が得 られる。さらに、式（V-1）の化合物をピリジンと水の混合溶媒に溶解し、その 溶液にパラ−トルエンスルホン酸を加えて加水分解することにより、オキサゾリン環を開環させると、式（VI-1）の化合物が得られる。
【００６６】
式（VI-1）の化合物をエタノールに溶解し、その溶液に水素化ホウ素ナトリウムを加え、室温で反応を行うことにより、４位アミノ基から脱トリクロロアセチル化すると、式（VII-1）の化合物が得られる。
【００６７】
上記の式（VII-1）の化合物を、1〜４Ｎ ＨＣl-ジオキサンに溶解し、室温で 保護基の脱離反応を行うと、アミノ保護基Ｂocおよびカルボキシル保護基ジフェニルメチル基が除去されて式（Ia）の本発明の化合物Ｎo.１が塩酸塩として生成する。
【００６８】
第三の本発明方法によると、前記の反応チャート１で示された式(VII-1)の化 合物から出発して、本発明による式(Ib）で示される(３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ，６Ｒ)-６-アセトアミド-４-グアニジノ-５-ヒドロキシピペリジン-３-カルボン酸(化合物Ｎo.２)を生成する方法は、例えば、次の反応チャート２に示す複数の工程か らなる反応経路で実施できる。但し反応チャート２でＢocはイミノ保護基としての第３級ブトキシカルボニル基を示し、Ｐｈはフェニル基を示す。
【００６９】
反応チャート２
0003830187.tif 000044
すなわち、上記反応チャート２について説明するに、式(VII-1）の化合物をＮ，Ｎ-ジメチルホルムアミドに溶解し、その溶液にトリエチルアミン等の有機 塩基とＮ，Ｎ´-ジ-(ターシャリーブチルオキシカルボニル)チオ尿素と塩化第二水銀を加えて、冷却下に例えば０℃で反応させる。これにより、式（VIII-1）の化合物が得られる。次いで、式(VIII-1）の化合物を１〜４Ｎ ＨＣl-ジオキサンに溶解して、酸加水分解により式(VIII-1）の化合物からアミノ保護基(Ｂoc）とカルボキシル保護基(-ＣＨＰｈ2）との脱離反応を行う。これにより、式(Ib）の本発明化合物Ｎo.２が塩酸塩として生成される。
【００７０】
第四の本発明方法によると、後記の式(IX-1）で示される(３Ｒ，４Ｓ，５Ｒ，６Ｓ)-６-(Ｎ-ターシャリーブトキシカルボニルアミノ)-３-ヒドロキシメチル- ４，５-ジヒドロキシ-４，５-Ｏ-イソプロピリデン-ピペリジンから出発して、 本発明による式(Ic)で示される(３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ，６Ｒ)-４-アミノ-５-ヒドロキシ-６-トリフルオロアセトアミドピペリジン-３-カルボン酸（化合物Ｎo.３）を生成する方法は、例えば次の反応チャート３に示す複数の工程からなる反応過程で実施できる。
【００７１】
但し反応チャート３でＢocおよびＰｈは前記と同じ意味を示し、Ｍｅはメチル基を示し、Ｚはアミノ保護基としてベンジルオキシカルボニル基Ｃ6Ｈ5ＣＨ2-Ｏ-ＣＯ-を示し、ＭＥＭはカルボキシル保護基である２-メトキシエトキシメチル 基ＣＨ3ＯＣＨ2ＣＨ2ＯＣＨ2-を示す。
【００７２】
反応チャート３
0003830187.tif 000045
すなわち、上記反応チャート３について説明するに、式(XI-1)で示される(３ Ｒ，４Ｓ，５Ｒ，６Ｓ)-６-アミノ-１-Ｎ-(ターシャリーブトキシカルボニル)- ４，５-ジヒドロキシ-３-ヒドロキシメチル-４，５-Ｏ-イソプロピリデンピペリジンをメタノールに溶解し、その溶液にＮ，Ｎ-ジイソプロピルアミンと塩化ベ ンジルオキシカルボニルを加えて、冷却下に、例えば０℃で反応を行う。これにより６位アミノ基が保護された式（X-1）の化合物が得られる。
【００７３】
式（X-1）の化合物を四塩化炭素、アセトニトリル、水の混合溶媒に溶かし、 その溶液にメタ過ヨウ素酸ナトリウムと二酸化ルテニウムを加えて室温で反応させ、式（X-1）の化合物の３位ヒドロキシメチル基を酸化させることにより、式 （XI-1）の化合物が得られる。式（XI-1）の化合物を塩化メチレンとメタノールの混合溶媒に溶かし、その溶液にジフェニルジアゾメタンを加え、室温で攪拌して、その６位カルボキシル基をジフェニルメチル基で保護するエステル化反応を行う。これにより、式（XII-1）の化合物が得られる。
【００７４】
式（XII-1）の化合物をテトラヒドロフランに溶かし、その溶液にターシャリ ーブトキシカリウムを加えて、冷却下に、例えば０℃で脱離反応とエノ化反応を行うことにより、式（XIII-1）の化合物が得られる。式（XIII-1）の化合物をベンゼンに溶解し、その溶液に１，８-ジアザビシクロ[５.４.０]-７-ウンデセン およびトリクロロアセトニトリルを加えて室温で反応させる。これにより、オキサゾリン環を形成させると、式（XIV-1）の化合物が得られる。
【００７５】
式（XIV-1）の化合物をピリジンと水の混合溶媒に溶解し、その溶液にパラ− トルエンスルホン酸を加えて加水分解する。これによりオキサゾリン環を開環させると、式（XV-1）の化合物が得られる。式（XV-1）の化合物をエタノールに溶解し、その溶液に水素化ホウ素ナトリウムを加え、室温で反応させる。これにより、式（XV-1）の化合物からトリクロロアセチル基を脱離すると、式（XVI-1） の化合物が得られる。
【００７６】
式（XVI-1）の化合物をメタノールに溶解し、その溶液にＮ，Ｎ-ジイソプロピルアミンおよびジ・ターシャリージ・カーボネートを加えて、室温で３位アミノ基をＢoc基で保護する反応を行う。これにより、式（XVII-1）の化合物が得られる。式（XVII-1）の化合物をメタノールに溶解し、その溶液に１Ｍ水酸化ナトリウム水溶液を加えて、アルカリ加水分解することにより、式（XVII-a-1）の遊離カルボン酸化合物を得る。この得られた化合物（XVII-a-1）を塩化メチレンに溶解し、その溶液にＮ，Ｎ-ジイソプロピルアミンおよびクロロメチル（２-メトキシ）エチルエーテルを加えて反応させる。これによりカルボキシル基をＭＥＭ基で再エステル化すると、式（XVIII-a-1）の化合物が得られる。
【００７７】
式（XVIII-a-1）の化合物をアセトニトリルに溶解し、その溶液に10％パラジ ウム炭素を加え、水素雰囲気下に室温で攪拌下に加水素分解を行うと、脱ベンジルオキシカルボニル化されて式（XVIII-a-1）の化合物を得る。式（XVIII-a-1）の化合物を塩化メチレン溶媒に溶解し、その溶液にピリジンおよび無水トリフルオロ酢酸を加えて攪拌下に反応させる。６位アミノ基のトリフルオロアセチル化が行われることにより、式（XIX-1）の化合物が得られる。
【００７８】
上記の式（XIX-1）の化合物を、１〜４Ｎ ＨＣl-ジオキサンに溶解し、室温で保護基の脱離反応にかける。これにより、アミノ保護基Ｂocと、カルボキシル保護基である２-メトキシエトキシメチル基（-ＭＥＭ）を除去すると、式（Id）の本発明の化合物Ｎo.４を塩酸塩として生成する。
【００７９】
第五の本発明方法によると、反応チャート３に示された式（XVI-1）の化合物 から出発して、本発明による式（Id）で示される化合物（化合物Ｎo.４）を生成する方法は、例えば次の反応チャート４に示す複数の工程からなる反応過程で実施できる。
但し反応チャート４でＢoc、ＰｈおよびＺは前記と同じ意味を有する。
【００８０】
反応チャート４
0003830187.tif 000046
反応チャート４について説明するに、式（XVI-1）の化合物をＮ，Ｎ-ジメチルホルムアミドに溶解し、トリエチルアミンおよびＮ，Ｎ´-ジ-(ターシャリーブ トキシカルボニル)チオ尿素と塩化第二水銀を加えて、０℃で攪拌下に反応させ る。これにより、式（XX-1）の化合物が得られる。式（XX-1）の化合物をアセトニトリルに溶解し、その溶液に10％パラジウム炭素を加え、水素雰囲気下に室温で攪拌下に脱ベンジルオキシカルボニル化反応を行う。これにより式(XX-a-1)の化合物を得る。得られた式（XX-a-1）の化合物を塩化メチレンに溶解し、その溶液にピリジンおよび無水トリフルオロ酢酸を加えて攪拌下に反応する。これにより６位アミノ基のトリフルオロアセチル化が行われて式（XXI-1）の化合物が得 られる。
【００８１】
上記の式(XXI-1）の化合物を、１〜４Ｎ ＨＣl-ジオキサンに溶解し、室温で 攪拌下に保護基の脱離反応を行う。これによりアミノ保護基であるＢoc、ならびにカルボキシル保護基であるジフェニルメチル基を除去すると、本発明の式(Id)の化合物Ｎo.４が塩酸塩として生成する。
【００８２】
第四の本発明方法で出発化合物として用いられる一般式（IX）の化合物は新規化合物であるから、これの製法を下記に説明する。
【００８３】
一般式（IX）の化合物は、要約すると、次の諸工程、すなわち、一般式（Ｂ）
0003830187.tif 000047
(式中、Ｒは前記と同じ意味のイミノ保護基、好ましくはアルコキシカルボニル 基である)で示されるＮ-保護-シアスタチンＢの４位および５位のヒドロキシル 基を、１価または２価のヒドロキシル保護基（Ｘ1、Ｘ2）で保護して次の一般式（Ｃ）
0003830187.tif 000048
(式中、Ｒはイミノ保護基であり、Ｘ1とＸ2は夫々に１価のヒドロキシル保護基 であるか、あるいはＸ1とＸ2の両者は共同して２価のヒドロキシル保護基１個、例えばイソプロピリデン基、ベンジリデン基、シクロアルキリデン基またはテトラヒドロピラニリデン基を示す〕で表されるＮ-保護-４，５-ジ-Ｏ-保護シアス タチンＢを生成する工程と、式（Ｃ）の化合物の３位のカルボキシル基をエステル化剤と反応させて次の一般式（Ｄ）
0003830187.tif 000049
(式中、Ｒ、Ｘ1、Ｘ2は前記と同じ意味をもち、Ｔはエステル形成基である)で示されるシアスタチンＢ保護誘導体を生成する工程と、式（Ｄ）の化合物の３位カルボキシレート基-ＣＯ2Ｔを還元によりヒドロキシメチル基に転化して次の一般式（Ｅ）
0003830187.tif 000050
(式中、Ｒ、Ｘ1、Ｘ2は前記と同じ意味をもつ)で示される（３Ｒ，４Ｓ，５Ｒ，６Ｒまたは６Ｓ)-６-アセタミド-Ｎ-保護-３-ヒドロキシメチル-４，５-ジヒド ロキシ-４，５-Ｏ-ジ保護-ピペリジンを生成する工程と、さらに一般式（Ｅ）の化合物の６位のアセタミド基から脱アセチル化により遊離のアミノ基を形成して次の一般式（Ｆ）
0003830187.tif 000051
(式中、Ｒ、Ｘ1、Ｘ2は前記と同じ意味をもつ)で示される（３Ｒ，４Ｓ，５Ｒ，６Ｓ)-１-Ｎ-保護-６-アミノ-３-ヒドロキシメチル-４，５-ジヒドロキシ-４， ５-Ｏ-ジ保護-ピペリジンを生成する工程とから成る方法により製造できる（後 記の参考例１、参照）。
【００８４】
なお、上記の式（Ｆ）の化合物から常法でイミノ保護基（Ｒ）とヒドロキシル保護基（Ｘ1、Ｘ2）を脱離すると、前出の式（Ａ）の化合物、すなわち（３Ｒ，４Ｓ，５Ｒ，６Ｓ)-６-アミノ-３-ヒドロキシメチル-４，５-ジヒドロキシピペ リジンを収得できる。さらに所望ならば、式（Ａ）の化合物に、任意のイミノ保護基とヒドロキシル保護基を常法で導入することにより、一般式（IX）の化合物を製造できる。
【００８５】
上記の式（Ｂ）のＮ-保護-シアスタチンＢにおいて、Ｒであるイミノ保護基はターシャリーブトキシカルボニル基(略号：Ｂoc)であるのが便利である。
【００８６】
式（Ｂ）のＮ-保護-シアスタチンＢの４位および５位のヒドロキシル基を保護するために、保護基として４，５-Ｏ-イソプロピリデン基を導入する場合には、式(Ｂ）化合物を例えばＮ，Ｎ-ジメチルホルムアミドなどの有機溶媒に溶解し、その溶液に例えば２，２-ジメトキシプロパン（イソプロピリデン基の導入剤） を加え、さらにクロロトリメチルシランの如き塩化アルキルシランまたはパラトルエンスルホン酸などの酸触媒を加えて室温で数時間反応させることにより、式(Ｃ)の４，５-Ｏ-ジ-保護-シアスタチンＢ（但し、Ｘ1およびＸ2が共同してイソプロピリデン基を示す場合）を得る。
【００８７】
なお、上記の２，２-ジメトキシプロパンに代えて、ベンツアルデヒドジメチ ルアセタール又は１，１-ジメトキシシクロヘキサンあるいはその他の各種アセ タールおよびケタール試薬を用いると４，５-Ｏ-ベンジリデン基又はシクロヘキシリデン基あるいはその他のアセタールおよびケタール基を導入された一般式  （Ｃ）の化合物が得られる。
【００８８】
つぎに、一般式（Ｃ）の化合物の３位カルボキシル基にエステル形成基（Ｔ）を導入するために、該化合物を、Ｎ，Ｎ-ジメチルホルムアミドなどの有機溶剤 に溶解し、その溶液にジイソプロピルアミンやトリエチルアミンなどの塩基を加え、この塩基の存在下にエステル化剤として例えばメトキシエトキシメチルクロリドを加える。得られる反応混合物を室温で数時間反応させることにより一般式（Ｄ）のエステル化化合物（但しＴがメトキシエトキシメチル基である場合）を得る。
【００８９】
なお、上記のエステル化剤として、メトキシエトキシメチルクロリドに代えてアルキルクロリド、アリールクロリド、アラルキルクロリドや、低級アルコキシメチルクロリド、アラルキルオキシメチルクロリド、又はメトキシメチルクロリド等の如きアルコキシド置換−低級アルコキシメチルクロリドをエステル形成基(Ｔ)の導入剤として用いると、式(Ｄ)の化合物におけるエステル形成基(Ｔ)が夫々に、アルキル基、アリール基、アラルキル基、低級アルコキシメチル基、アラルキルオキシメチル基又はアルコキシ置換−低級アルコキシメチル基である場合の式（Ｄ）の化合物が生成される。
【００９０】
次に、一般式（Ｄ）の化合物の３位カルボキシレート基(-ＣＯ2Ｔ）を還元す るために、該化合物をテトラヒドロフラン等の単一の有機溶剤、あるいはこれらの混合有機溶剤に溶解し、この溶液に水素化ホウ素ナトリウム、水素化リチウムアルミニウムまたは水素化ジイソブチルアルミニウムなどの還元剤を加え、室温で数時間反応させると、３位カルボキシレート基が還元によりヒドロキシメチル基に転化される。これにより、一般式（Ｅ）のアルコール化合物を得る。
【００９１】
つぎに、一般式（Ｅ）の化合物の６位のアセタミド基を遊離したアミノ基に転化させるため、該化合物をヒドラジン水和物に溶解し、例えば５０〜１００℃で７〜１４日間反応させると、アセタミド基からアセチル基が脱離されて遊離したアミノ基を有する一般式（Ｆ）の化合物を得る。
【００９２】
【発明の実施の形態】
以下に本発明の実施例を示す。
実施例１は本発明による式(Ia）の化合物、実施例２は式(Ib）の化合物、実施例３は式(Ic）の化合物、また実施例４は式(Id）の化合物の製造の例を示す。しかしながら、これら実施例は単に例示であって本発明を限定するものではない。本発明の範囲内で種々の変形および修正が可能である。
【００９３】
実施例１
（１） (５Ｒ，６Ｓ)-アセトアミド-１-Ｎ-(ターシャリーブトキシカルボニル)-３，４-ジデヒドロピペリジン-３-カルボン酸ジフェニルメチルエステル〔式（IV-1）の化合物〕の製造
前出の式(III-1）で示される(５Ｓ，６Ｓ)-６-アセトアミド-１-Ｎ-(ターシャリーブトキシカルボニル)-３，４-ジデヒドロピペリジン-３-カルボン酸（1.87 ｇ)をジクロロメタン-メタノールの(１：１)混合溶媒60mlに溶かし、その溶液にジフェニルジアゾメタン(３．６４ｇ）を加え、室温で一晩攪拌してエステル化 反応を行った。酢酸(０．９ml)を加えて反応を停止させた後、反応液を室温で１時間攪拌した後、溶媒を減圧留去した。残留物をクロロホルムに溶かし、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液で３回洗浄した。有機相を無水硫酸マグネシウムで乾燥した後、綿栓ろ過した。ろ液を溶媒を減圧留去した。残留物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー(溶出溶媒：ジクロロメタン-メタノール，９９：１〜９８：２，勾配法)で精製し、無色泡状の表題化合物(２．６６ｇ，９２％)を得た。
【００９４】
[α]24D +90.7°(c 0.86, CHCl3):
1Ｈ-ＮＭＲスペクトル(CD3OD, δppm): 1.49(9H, s, COOC(CH3)3), 1.89(3H, s,NHCOCH3), 3.86(1H, broad d, J=19.1 Hz, 2-Ha), 4.16(1H, broad, 5-H), 4.52(1H, dd, J=19.1 and 2.0 Hz, 2-Hb), 6.10(1H, broad s, 6-H), 6.97(1H, s,Ph2CHO-), 7.12(1H, m, 4-H), 7.27-7.42(10H, m, Ph)。
【００９５】
（２）  (３ａＳ，４Ｒ，７Ｓ，７ａＳ)-７-アセトアミド-６-Ｎ-(ターシャリーブトキシカルボニル)-２-(トリクロロメチル)-４-(ジフェニルメチルオキシカルボニル)-３ａ，７ａ-ジヒドロオキサゾロ［５，４-ｃ］ピペリジン〔式（V-1） の化合物〕の製造
前項(１)で得た式（IV-1）の化合物(２３３mg）をジクロロメタン(５ml）に溶かし、その溶液にトリクロロアセトニトリル(６５．２μｌ）とＤＢＵ(１５．０μｌ）を加え、室温で５分間攪拌して反応を行った。飽和塩化アンモニウム水溶液を反応溶液に加えて反応を停止させた。反応溶液をクロロホルムで希釈し、飽和塩化アンモニウム水溶液で３回洗浄した。有機相を無水硫酸マグネシウムで乾燥した後、綿栓ろ過した。ろ過の溶媒を減圧留去した。残留物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶出溶媒：トルエン−アセトン、６：１）で精製し、無色泡状の表題化合物（２３４mg、７６％）を得た。
【００９６】
[α]24D +20.5°(c 0.86, CHCl3):
1Ｈ-ＮＭＲスペクトル (CD3OD, 40℃, δppm): 1.47(9H, s, COOC(CH3)3), 1.75(3H, s, NHCOCH3), 2.77(1H, dt, J=8.3, 5.6 Hz, 3-H), 3.46(1H, dd, J=13.7,8.3Hz, 2-Hax), 3.89(1H, dd, J=13.7, 4.9Hz, 2-Heq), 4.96-5.03(2H, m, 4-H,5-H), 6.18(1H, s, 6-H), 7.10(1H, s, Ph2CHO-), 7.26-7.42(10H, m, Ph)。
【００９７】
（３）  （３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ，６Ｓ)-６-アセトアミド-１-Ｎ-(ターシャリーブ トキシカルボニル)-５-ヒドロキシ-４-トリクロロアセトアミドピペリジン-３- カルボン酸ジフェニルメチルエステル〔式（VI-1）の化合物〕の製造
前項（２）で得た式（V-1）の化合物（１.５３ｇ）をピリジン（２４ml）と水(６ml）の混合溶媒に溶かし、その溶液にパラ−トルエンスルホン酸(一水和物、０.７１３ｇ、３.７５mmol）を加え、８０℃で２時間攪拌して反応を行った。反応溶液を室温まで冷却した後、クロロホルムで希釈し、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液で３回洗浄した。有機相を無水硫酸マグネシウムで乾燥した後、綿栓ろ過した。ろ液の溶媒を減圧留去した。残留物をトルエンで３回共沸した後、シリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶出溶媒：クロロホルム−メタノール，３０：１）で精製し、無色泡状の表題化合物（１.２０ｇ，７７％）を得た。
【００９８】
[α]24D +3.8°(c 0.95, CHCl3):
1Ｈ-ＮＭＲスペクトル (CD3OD, 40℃, δppm): 1.47(9H, s, COOC(CH3)3), 1.99(3H, s, NHCOCH3), 3.17(1H, broad t, J=12.7 Hz, 2-Hax), 3.27(1H, dt,J=11.5, 4.2 Hz, 3-H), 3.82(1H, broad m, 5-H), 4.30(1H, broad d,J=12.7Hz,2-Heq), 4.47(1H, dd, J=11.5, 2.7 Hz, 4-H), 6.05(1H, d, J=1.5 Hz, 6-H),  6.84(1H, s, Ph2CHO-), 7.25-7.38(10H, m, Ph)。
【００９９】
（４）  （３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ，６Ｓ)-６-アセトアミド-４-アミノ-１-Ｎ-(ター シャリーブトキシカルボニル)-５-ヒドロキシピペリジン-３-カルボン酸ジフェ ニルメチルエステル〔式（VII-1）の化合物〕の製造
前項(３）で得た式(VI-1）の化合物（６２９mg）をエタノール（１３ml）に溶かし、その溶液に水素化ホウ素ナトリウム（１４mg）を加え、室温で５０分間攪拌して反応を行った。反応溶液をクロロホルムで希釈し、飽和塩化ナトリウム水溶液で２回洗浄した。有機相を無水硫酸マグネシウムで乾燥した後、綿栓ろ過した。ろ液の溶媒を減圧留去した。残留物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー(溶出溶媒：クロロホルム−メタノール，９：１）で精製し、無色泡状の表題化 合物（２９８mg，６２％）を得た。
【０１００】
[α]24D +19.7°(c 0.78, CHCl3):
1Ｈ-ＮＭＲスペクトル (CD3OD, 40℃, δppm): 1.47(9H, s, COOC(CH3)3), 1.95(3H, s, NHCOCH3), 2.88(1H, dt, J=11.4, 4.4 Hz, 3-H), 3.01(1H, t, J=13.2 Hz, 2Hax), 3.17(1H, dd, J=10.7, 2.4 Hz, 4-H), 3.73(1H, broad s, 5-H), 4.27(1H, dd, J=13.7, 3.9 Hz, 2-Heq), 6.03(1H, d, J=2.0 Hz, 6-H), 6.92(1H, s, Ph2CHO-), 7.26-7.41(10H, m, Ph)。
【０１０１】
（５）  （３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ，６Ｒ)-６-アセトアミド-４-アミノ-５-ヒドロキ シピペリジン-３-カルボン酸〔式（Ia）の化合物〕の製造
前項（４）で得た式（VII-1）の化合物（４６mg）を４Ｍ塩酸-ジオキサン溶液(１.５ml)に溶かし、その溶液を室温で一晩攪拌した。保護基の脱離反応が行わ れた。無色固体が析出して懸濁した反応溶液にジエチルエーテルを加えてよく攪拌した後、析出した無色固体を遠心分離によって沈殿させ、上澄みを除いた。この後、沈殿をジエチルエーテルに懸濁させ、遠心分離した後、上澄みを捨てる操作を２回繰り返した。得られた沈殿を風乾した後、ポンプで減圧して乾燥させ、式（Ia）の化合物Ｎo.１の粗製物（３１mg）を無色固体として得た。
【０１０２】
この粗製物をダイヤイオンＨＰ２０樹脂に吸着させ、水で溶出してさらに精製した。得られた精製物をメタノールで３回共沸して無色不定形固体とした後、極少量のメタノールに溶かした。これに１Ｍ塩酸-ジオキサン溶液を加えて無色固 体を析出させ、さらにジエチルエーテルを加えてよく攪拌した。析出した無色固体を遠心分離によって沈殿させ、上澄みを除いた。この後、沈殿をジエチルエーテルに懸濁させ、遠心分離した後、上澄みを捨てる操作を２回繰り返した。得られた沈殿を風乾した後、ポンプで減圧して乾燥させ、無色固体として表題化合物すなわち本発明化合物Ｎo.１の二塩酸塩（２７mg，１００％）を得た。
【０１０３】
実施例２
（１）  （３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ，６Ｓ)-６-アセトアミド-５-[Ｎ，Ｎ′-ジ-(ター シャリーブトキシカルボニル）グアニジノ]-１-Ｎ-(ターシャリーブトキシカル ボニル)-４-ヒドロキシピペリジン-３-カルボン酸ジフェニルメチルエステル〔式（VIII-1）の化合物〕の製造
実施例１（４）で得た式（VII-1）の化合物（２４２mg）をＮ，Ｎ-ジメチルホルムアミド（５ml）に溶かし、０℃に冷却した。この溶液にトリエチルアミン(０.２８ml)、Ｎ，Ｎ´-ジ-(ターシャリーブトキシカルボニル)チオ尿素(２７６mg）、塩化第二水銀（II)(２７２mg）を加え、得られた混合物を０℃で１時間攪拌してアミジノ化反応を行った。
【０１０４】
黄土色の固体が析出した反応溶液に酢酸エチルを加え、遠心分離して固体を沈殿させた後、上澄みを別に移した。この後、沈殿を酢酸エチルに懸濁させ、遠心分離した後、上澄みを別に移す操作を２回繰り返した。上澄みを合わせ、水で２回、少量の飽和塩化ナトリウム水溶液で１回洗浄した。有機相を無水硫酸マグネシウムで乾燥した後、綿栓ろ過した。ろ液の溶媒を減圧留去した。残留物をトルエンで３回共沸した後、シリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶出溶媒：トルエン-アセトン，３：１)で精製し、無色不定形固体として表題化合物（３２０mg，８８％）を得た。
【０１０５】
[α]23D -2.3°(c 0.72, CHCl3):
1Ｈ-ＮＭＲスペクトル (CD3OD, 40℃, δppm): 1.47, 1.48, 1.49(9H, s, COOC(CH3)3), 2.01(3H, s, NHCOCH3), 2.99(1H, dt, J=11.7, 3.9 Hz, 3-H), 3.16(1H, m, 2-Hax), 3.73(1H, m, 5-H), 4.17(1H, broad d, J=13.7 Hz, 2-Heq), 4.68(1H, dd, J=2.5, 11.7 Hz, 4H), 6.02(1H, d, J=2.0 Hz, 6-H), 6.81(1H, s, Ph2CHO-), 7.24-7.34(10H, m, Ph)。
【０１０６】
（２）  （３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ，６Ｒ)-６-アセトアミド-４-グアニジノ-５-ヒド ロキシピペリジン-３-カルボン酸〔式（Ib）の化合物〕の製造
前項（１）で得た式（VIII-1）の化合物（７３mg）を４Ｍ塩酸−ジオキサン溶液（２.５ml）に溶かし、その溶液を室温で一晩攪拌して脱保護反応を行った。 無色固体が析出して懸濁した反応溶液にジエチルエーテルを加えてよく攪拌した後、析出した無色固体を遠心分離によって沈殿させ、上澄みを除いた。この後、沈殿をジエチルエーテルに懸濁させ、遠心分離した後、上澄みを捨てる操作を２回繰り返した。得られた沈殿を風乾した後、ポンプで減圧して乾燥させ、式(Ib)の化合物の粗精製物（３７mg）を無色固体として得た。
【０１０７】
この粗精製物をダイヤイオンＨＰ２０樹脂に吸着させ、水で溶出してさらに精製した。得られた精製物をメタノールで３回共沸して無色不定形固体とした後、極少量のメタノールに溶かした。これに１Ｍ塩酸-ジオキサン溶液を加えて無色 固体を析出させ、さらにジエチルエーテルを加えてよく攪拌した。析出した無色固体を遠心分離によって沈殿させ、上澄みを除いた。この後、沈殿をジエチルエーテルに懸濁させ、遠心分離した後、上澄みを捨てる操作を２回繰り返した。得られた沈殿を風乾した後、ポンプで減圧して乾燥させ、無色固体として表題化合物すなわち本発明化合物Ｎo.２の二塩酸塩（３１mg，９４％）を得た。
【０１０８】
実施例３
（１）  （３Ｒ，４Ｓ，５Ｒ，６Ｓ)-６-ベンジルオキシカルボニルアミノ-１- Ｎ-(ターシャリーブトキシカルボニル)-３-ヒドロキシメチル-４，５-ジヒドロ キシ-４，５-Ｏ-イソプロピリデンピペリジン〔式（X-1）の化合物〕の製造
前出の式（IX-1）で示される（３Ｒ，４Ｓ，５Ｒ，６Ｓ)-１-Ｎ-(ターシャリ ーブトキシカルボニル)-６-アミノ-３-ヒドロキシメチル-４，５-ジヒドロキシ ピペリジン（３.２４ｇ）をメタノール（６５ml）に溶かし、その溶液を０℃に 冷却した。これにＮ，Ｎ-ジイソプロピルエチルアミン（７.４６ml）と塩化ベンジルオキシカルボニル（４.５８ml）を加え、０℃で１時間攪拌した。その後、 反応溶液に塩化ベンジルオキシカルボニル（０.７６ml）を追加し、０℃で３０ 分間攪拌してＮ-ベンジルオキシカルボニル化反応を行った。水（１.５ml）を加えて反応を停止させ、得られた反応溶液を室温で３０分間攪拌した。その後、溶媒を減圧留去した。
【０１０９】
残留物をクロロホルムに溶かし、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液で２回、水で２回洗浄した。有機相を無水硫酸マグネシウムで乾燥した後、綿栓ろ過した。ろ液の溶媒を減圧留去した。残留物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶出溶媒：クロロホルム-メタノール、４０：１）で精製し、無色泡状の表題化合物 （４.００ｇ，８６％）を得た。
【０１１０】
[α]24D +12.8°(c 1.09, CHCl3):
1Ｈ-ＮＭＲスペクトル(CD3OD, 40℃, δppm): 1.34(3H, s, イソプロピリデン),1.44(12H, s, COOC(CH3)3, イソプロピリデン), 1.94(1H, t, J=5.9 Hz, OH),  2.04(1H, m, 5-H), 3.17(1H, t, J=12.2 Hz, 6-Hax), 3.45(1H, dd, J=12.2, 4.4 Hz, 6-Heq), 3.75(2H, t, J=5.9 Hz, -CH2OH), 4.53(1H, dd, J=7.8, 2.4  Hz, 3-H), 4.57(1H, broad d, J=7.8 Hz, 4-H), 4.87(1H, broad, -NHCO-), 5.08, 5.13(1H, ABq, J=12.0Hz, PhCH2O-), 5.65(1H, dd, J=6.1, 2.4Hz, 2-H),7.25(1H, s, Ph2CH=), 7.29-7.35(5.4, m, Ph)。
【０１１１】
（２）  （３Ｓ，４Ｓ，５Ｒ，６Ｓ)-６-ベンジルオキシカルボニルアミノ-１- Ｎ-(ターシャリーブトキシカルボニル)-４，５-ジヒドロキシ-４，５-Ｏ-イソプロピリデンピペリジン-３-カルボン酸〔式（XI-1）の化合物〕の製造
前項（１）で得た式（X-1) の化合物（２.１８ｇ）を四塩化炭素−アセトニトリルの（１：１）の混合溶媒（６０ml）に溶かし、その溶液に、メタ過ヨウ素酸ナトリウム（３.１２ｇ）を水（４５ml）に溶かした溶液を加えた。この二液相 混合物に二酸化ルテニウム（IV）（８.０mg）を加え、室温で４０分間激しく攪 拌して酸化反応を行った。析出した灰白色の固体を減圧ろ過して除いた後、有機相と水相を分液した。
【０１１２】
水相を酢酸エチルで２回抽出した。酢酸エチル抽出液と有機相を合わせ、２−プロパノール（５ml）を加えて室温で２時間攪拌した。桐山ろうとを用いて析出した固体を除いた後、ろ液を水で１回洗浄した。有機相を無水硫酸マグネシウムで乾燥した後、綿栓ろ過した。ろ液の溶媒を減圧留去した。残留物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶出溶媒：クロロホルム-メタノール-濃アンモニア水、６０：１０：１）で精製し、無色不定形固体として表題化合物(１.７９ｇ，９０％）を得た。
【０１１３】
[α]23D +5.7°(c 0.96, CHCl3):
1Ｈ-ＮＭＲスペクトル(CD3OD, 40℃, δppm): 1.32, 1.37(3H, s, イソプロピリデン), 1.44(9H, s, COOC(CH3)3), 2.96(1H, ddd, J=12.7, 5.4, 2.9 Hz, 3-H),3.46(1H, t, J=12.7 Hz, 2-Hax), 3.55(1H, dd, J=12.7, 5.4 Hz, 2-Heq), 4.45(1H, dd, J=7.6, 2.0 Hz, 5-H), 4.82(1H, dd, J=7.6, 2.9 Hz, 4-H), 5.08, 5.12(1H, ABq, J=12.7 Hz, PhCH2O-), 5.63(1H, d, J=2.0 Hz, 6-H), 7.27-7.38(5H, m, Ph)。
【０１１４】
（３）  （３Ｓ，４Ｓ，５Ｒ，６Ｓ)-６-ベンジルオキシカルボニルアミノ-１- Ｎ-(ターシャリーブトキシカルボニル)-４，５-ジヒドロキシ-４，５-Ｏ-イソプロピリデンピペリジン-３-カルボン酸ジフェニルメチルエステル〔式（XII-1） の化合物〕の製造
前項（２）で得た式（XI-1）の化合物（１１７mg）をジクロロメタン（１.５ ml)−メタノール（１.５ml）の混合溶媒に溶かし、その溶液にジフェニルジアゾメタン（０.１５２ｇ）を加え、室温で一晩攪拌してエステル化反応を行った。 酢酸（６０μｌ）を反応溶液に加えて反応を停止させ、室温で３０分間攪拌した後、溶媒を減圧留去した。残留物をクロロホルムに溶かし、その溶液を飽和炭酸水素ナトリウム水溶液で１回、水で３回洗浄した。有機相を無水硫酸マグネシウムで乾燥した後、綿栓ろ過した。ろ液の溶媒を減圧留去した。残留物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶出溶媒：ヘキサン−酢酸エチル、３：１）で精製し、無色泡状の表題化合物（１５０mg，９４％）を得た。
【０１１５】
[α]24D +3.55°(c 0.87, MeOH):
1Ｈ-ＮＭＲスペクトル(CD3OD, 40℃, δppm): 1.33, 1.36(3H, s, イソプロピリデン), 1.43(9H, s, COOC(CH3)3), 3.49(1H, t, J=12.7 Hz, 2-Hax), 3.64(1H, dd, J=12.2, 4.9 Hz, 2-Heq), 4.52(1H, dd, J=7.8, 2.0 Hz, 5-H), 4.93(1H, dd, 7.8, 2.4 Hz, 4-H), 5.07, 5.13(1H, ABq, J=12.2 Hz, PhCH2O-), 5.66(1H,d, J=2.0 Hz, 6-H), 6.89(1H, s, Ph2CHO-), 7.25-7.37(15H, m, Ph)。
【０１１６】
（４）  （５Ｓ，６Ｓ)-６-ベンジルオキシカルボニルアミノ-１-Ｎ-(ターシャ リーブトキシカルボニル)-３，４-ジデヒドロピペリジン-３-カルボン酸ジフェ ニルメチル〔式（XIII-1）の化合物〕の製造
アルゴン雰囲気下に式（XII-1）の化合物（７９９mg）をテトラヒドロフラン に溶かし、その溶液を０℃に冷却した。これにターシャリーブトキシカリウム  （１５mg）を加え、０℃で２時間攪拌してデオキシ化とエノ化の反応を行った。反応溶液をクロロホルムで希釈し、飽和塩化アンモニウム水溶液で２回、水で２回、少量の飽和塩化ナトリウム水溶液で１回洗浄した。有機相を無水硫酸マグネシウムで乾燥した後、綿栓ろ過した。ろ液の溶媒を減圧留去した。残留物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶出溶媒：トルエン−アセトン、７：１）で精製し、無色泡状の表題化合物（５０８mg，７０％）を得た。
【０１１７】
[α]24D +62.9°(c 0.89, CHCl3):
1Ｈ-ＮＭＲスペクトル (CD3OD, 40℃, δppm): 1.47(9H, s, COOC(CH3)3), 3.81(1H, d, J=19.0 Hz, 2-Ha), 4.19(1H, d, J=5.4 Hz, 5-H), 4.53(1H, d, J=19.0Hz, 2-Hb), 5.06, 5.10(1H, ABq, J=12.7 Hz, PhCH2O-), 5.92(1H, d, J=1 Hz, 6-H), 6.95(1H, s, Ph2CHO-), 7.70(1H, m, 4-H), 7.26-7.40(1.5H, m, Ph)。
【０１１８】
（５） (３ａＳ，４Ｒ，７Ｓ，７ａＳ)-７-(ベンジルオキシカルボニルアミノ)-６-Ｎ-(ターシャリーブトキシカルボニル)-２-(トリクロロメチル)-４-(ジフェ ニルメチルオキシカルボニル)-３ａ，７ａ-ジヒドロオキサゾロ[５，４-ｃ］ピ ペリジン〔式（XIV-1）の化合物〕の製造
前項（４）で得た式（XIII-1）の化合物（１６８mg）をベンゼン（４ml）に溶かし、その溶液にトリクロロアセトニトリル(３９μｌ）、ＤＢＵ(９．０μｌ）を加え、室温で４５分間攪拌して反応を行った。飽和塩化アンモニウム水溶液を反応溶液に加えて反応を停止させた。反応溶液をクロロホルムで希釈し、水で３回洗浄した。有機相を無水硫酸マグネシウムで乾燥した後、綿栓ろ過した。ろ液の溶媒を減圧留去した。残留物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶出溶媒：トルエン−アセトン、５０：１）で精製し、無色泡状の表題化合物（１４７mg，７０％）を得た。
【０１１９】
[α]26D +2.0°(c 0.89, CHCl3):
1Ｈ-ＮＭＲスペクトル(CD3OD, 40℃, δppm): 1.42(9H, s, COOC(CH3)3), 3.39 (1H, broad t, J=11.7 Hz, 2-Hax), 3.54(1H, ddd, J=12.7, 4.9, 4.4 Hz,3-H),3.64(1H, dd, J=11.7, 4.9 Hz, 2-Heq), 5.09, 5.14(1H, ABq, J=11.7 Hz, PhCH2O-), 5.18(1H, dd, J=9.8, 4.4 Hz, 4-H), 5.27(1H, broad d, J=9.8 Hz, 5-H), 5.82(1H, d, J=2.0 Hz, 6-H), 6.92(1H, s, Ph2CHO-), 7.23-7.41(15H,  m, Ph)。
【０１２０】
（６） (３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ，６Ｓ)-６-ベンジルオキシカルボニルアミノ-１-Ｎ-(ターシャリーブトキシカルボニル)-５-ヒドロキシ-４-トリクロロアセトアミドピペリジン-３-カルボン酸ジフェニルメチルエステル〔式（XV-1）の化合物〕の製造
前項（５）で得た式（XIV-1）の化合物（１.５５ｇ）をピリジン（２４ml）−水（６ml）の混合溶媒に溶かし、その溶液にパラ−トルエンスルホン酸（一水和物、６３８mg）を加え、８０℃で３時間攪拌した。得られた反応溶液を室温まで冷却した後、溶媒を減圧留去した。残留物をクロロホルムに溶かし、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液で２回、水で２回洗浄した。有機相を無水硫酸マグネシウムで乾燥した後、綿栓ろ過した。ろ液の溶媒を減圧留去した。残留物をトルエンで３回共沸した後、シリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶出溶媒：クロロホルム−メタノール，３０：１)で精製し、無色泡状の表題化合物（１.５１ｇ，９５％）を得た。
【０１２１】
[α]26D -5.7°(c 0.92, CHCl3):
1Ｈ-ＮＭＲスペクトル (CD3OD, 40℃, δppm): 1.45(9H, s, COOC(CH3)3), 3.14(1H, broad t, J=12.4 Hz, 2-Hax), 3.23(1H, dt, J=11.7, 4.1 Hz, 3-H), 3.84(1H, broad s, 5-H), 4.24(1H, broad d, J=12.2 Hz, 2-Heq), 4.52(1H, dd, J=11.5, 2.7 Hz, 4-H), 5.10, 5.14(1H, ABq, J=12.7 Hz, PhCH2O-), 5.87(1H, d, J=2.0 Hz, 6-H), 6.83(1H, s, Ph2CHO-), 7.24-7.38(15H, m, Ph)。
【０１２２】
（７）  （３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ，６Ｓ)-６-ベンジルオキシカルボニルアミノ-４- アミノ-１-Ｎ-(ターシャリーブトキシカルボニル)-５-ヒドロキシピペリジン-３-カルボン酸ジフェニルメチルエステル〔式（XVI-1）の化合物〕の製造
式（XV-1）の化合物（１４４mg）をエタノール（３ml）に溶かし、これに水素化ホウ素ナトリウム（２３mg）を加え、室温で３５分間攪拌した。トリクロロアセチル基の脱離が行われた。得られた反応溶液をクロロホルムで希釈し、飽和塩化ナトリウム水溶液で２回洗浄した。有機相を無水硫酸マグネシウムで乾燥した後、綿栓ろ過した。ろ液の溶媒を減圧留去した。残留物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶出溶媒：クロロホルム−メタノール，２０：１）で精製し、無色泡状の表題化合物（５７mg）を得た。完全に精製できなかった部分を分取用ＴＬＣ（クロロホルム・メタノール、１５：１）で再精製し、無色不定形固体として表題化合物（２１mg）を得た。
【０１２３】
[α]26D +6.3°(c 1.90, CHCl3):
1Ｈ-ＮＭＲスペクトル (CD3OD, 40℃, δppm): 1.44(9H, s, COOC(CH3)3), 2.84(1H, dt, J=11.4, 4.1 Hz, 3-H), 2.99(1H, t, J=12.5 Hz, 2-Hax), 3.22(1H,  dd, J=10.7, 2.9 Hz, 4-H), 3.74(1H, broad s, 5-H), 4.22(1H, dd, J=13.4,  4.6 Hz, 2-Heq), 5.09(2H, s, PhCH2O-), 5.86(1H, d, J=1.5 Hz, 6-H), 6.90(1H, s, Ph2CHO-), 7.25-7.40(15H, m, Ph)。
【０１２４】
（８）  （３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ，６Ｓ)-６-ベンジルオキシカルボニルアミノ-１- Ｎ-(ターシャリーブトキシカルボニルアミノ)-４-(ターシャリーブトキシカルボニル)−５-ヒドロキシピペリジン-３-カルボン酸ジフェニルメチルエステル〔式（XVII-1）の化合物〕の製造
式（XVI-1）の化合物（８１mg）をメタノール（１．６ml）に溶かし、その溶 液にＮ，Ｎ-ジイソプロピルエチルアミン（７３．２μｌ）とジ-ターシャリーブチルジカルボネート（６４．３μｌ）を加えた。室温で１時間攪拌してアミノ基保護の反応を行った。その後、反応溶液から溶媒を減圧留去した。残留物をクロロホルムに溶かし、１０％クエン酸水溶液で２回洗浄した。有機相を無水硫酸マグネシウムで乾燥した後、綿栓ろ過した。ろ液を減圧留去した。残留物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶出溶媒：トルエン-アセトン、８：１）で精 製し、無色不定形固体の表題化合物（８７mg、９１％）を得た。
【０１２５】
[α]26D -3.1°(c 0.93, MeOH):
1Ｈ-ＮＭＲスペクトル(CD3OD, 40℃, δppm): 1.33, 1.42(9H, s, COOC(CH3)3),2.96(1H, dt, J=11.7, 4.1 Hz, 3-H), 3.11(1H, t, J=12.7 Hz, 2Hax), 3.77(1H, m, 5-H), 4.12(2H, m, 2-Heq, 4-H), 5.08, 5.11(1H, ABq, J=12.5 Hz, PhCH2O-), 5.83(1H, d, J=〜2.0 Hz, 6-H), 6.81(1H, s, Ph2CHO-), 7.23-7.37 (15H, m, Ph)。
【０１２６】
（９）  （３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ，６Ｓ)-６-ベンジルオキシカルボニルアミノ-１- Ｎ-(ターシャリーブトキシカルボニル)-４-(ターシャリーブトキシカルボニルアミノ)-５-ヒドロキシピペリジン-３-カルボン酸（２-メトキシ）エトキシメチルエステル〔式（XVIII-1）の化合物〕の製造
式（XVII-1）の化合物（２０mg）をメタノール（０.４ml）に溶かし、これに １Ｍ水酸化ナトリウム水溶液（０.１５ml）を加えた。室温で１.５時間攪拌してアルカリ加水分解を行った。その反応溶液から、溶媒を減圧留去した。得られた無色固体は式（XVII-a-1）の化合物を含む。これにクロロホルムと１０％クエン酸水溶液を加えて攪拌後に有機相と水相とに分液した。水相をクロロホルムで２回抽出した。クロロホルム抽出液を有機相と合わせ、無水硫酸マグネシウムで乾燥した後、綿栓ろ過した。ろ液の溶媒を減圧留去した。残留物をジクロロメタン(０.４ml）に溶かし、その溶液を０℃に冷却した。これにＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（６.３μｌ）とクロロメチル（２−メトキシ）エチルエーテル （４.１μｌ）を加え、０℃で１.５時間攪拌して再エステル化の反応を行った。反応溶液をクロロホルムで希釈し、水で３回洗浄した。有機相を無水硫酸マグネシウムで乾燥した後、綿栓ろ過した。ろ液の溶媒を減圧留去した。残留物を分取用ＴＬＣ(トルエン・アセトン、３：１)で精製し、無色固体の表題化合物（１５mg、８３％）を得た。
【０１２７】
[α]25D -2.4°(c 0.67, CHCl3):
1Ｈ-ＮＭＲスペクトル(CD3OD, 40℃, δppm): 1.42, 1.44(9H, s, COOC(CH3)3),2.84(1H, dt, J=11.7, 4.4 Hz, 3-H), 3.15(1H, broad t, J=13.2 Hz, 2-Hax), 3.36(3H, s, -OCH3), 3.55, 3.79(2H, m, -OCH2CH2O), 3.77(1H, m, 5-H), 4.06(1H, dd, J=11.2, 2.5 Hz, 4-H), 4.14(1H, J=13.2, 3.7 Hz, 2-Hap), 5.10, 5.13(1H, ABq, J=12.5 Hz, PhCH2O-), 5.28, 5.31(1H, ABq, J=6.1 Hz,  -CO2CH2O-), 5.83(1H, d, 6-H), 7.27-7.39(5H, m, Ph)。
【０１２８】
（10）  (３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ，６Ｓ)-Ｎ-(ターシャリーブトキシカルボニル)-４-(ターシャリーブトキシカルボニルアミノ)-５-ヒドロキシ-６-(トリフルオロア セトアミド）ピペリジン-３-カルボン酸（２-メトキシ）エトキシメチルエステ ル〔式（XIX-1）の化合物〕の製造
式（XVIII-1）の化合物（４３mg）をアセトニトリル（２ml）に溶かし、これ に１０％パラジウム炭素（１５mg）を加え、水素雰囲気下、室温で３０分間攪拌して、ベンジルオキシカルボキシル基の脱離反応を行った。１０％パラジウム炭素を減圧ろ過して除いた後、ろ液の溶媒を減圧留去した。式（XVIII-a-1）の化 合物を含む残留物を得た。
【０１２９】
残留物をジクロロメタン(０.８ml）に溶かし、その溶液を０℃に冷却した。これにピリジン(１３μｌ）と無水トリフルオロ酢酸（１１μｌ）を加え、０℃で ２０分間攪拌してトリフルオロアセチル化反応を行った。その反応溶液にピリジン(１３μｌ）と無水トリフルオロ酢酸(１１μｌ）を追加し、０℃でさらに２０分間攪拌した。反応溶液をクロロホルムで希釈し、水で１回、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液で２回、水で２回洗浄した。有機相を無水硫酸マグネシウムで乾燥した後、綿栓ろ過した。ろ液の溶媒を減圧留去した。残留物をトルエンで３回共沸した後、分取用ＴＬＣ（展開溶媒：クロロホルム-メタノール、２５：１）で 精製し、無色固体として表題化合物（２７mg、６８％）を得た。
【０１３０】
[α]27D +8.8°(c 1.08, CHCl3):
1Ｈ-ＮＭＲスペクトル(CD3OD, 40℃, δppm): 1.43, 1.46(9H, s, COOC(CH3)3),2.92(1H, dt, J=11.7, 4.0 Hz, 3-H), 3.27(1H, broad t, J=11.7 Hz, 2-Hax), 3.37(3H, s, -OCH3), 3.55(2H, m, -OCH2CH2O-), 3.81(3H, m, -OCH2CH2O-, 5-H), 4.04(1H, broad d, J=10.7 Hz, 4-H), 4.21(1H, dd, J=13.7, 3.9 Hz, 2-Heq), 5.30, 5.33(1H, ABq, J=6.1 Hz, -CO2CH2O-), 6.01(1H, s, 6-H)。
【０１３１】
（11）  （３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ，６Ｒ)-４-アミノ-５-ヒドロキシ-６-トリフルオ ロアセトアミドピペリジン-３-カルボン酸〔式（Ic）の化合物〕の製造
式（XIX-1）の化合物（２２mg）を４Ｍ塩酸-ジオキサン溶液（０．７ml）に溶かし、その溶液を室温で一晩攪拌して脱保護反応を行った。無色固体が析出して懸濁した反応溶液にジエチルエーテルを加えてよく攪拌した後、析出した無色固体を遠心分離によって沈殿させ、上澄みを除いた。得られた沈殿を風乾した後、ポンプで減圧して乾燥させ、無色固体として表題化合物、すなわち本発明化合物Ｎo.３の二塩酸塩（１５mg，１１２％）を得た。
【０１３２】
実施例４
（１）  （３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ，６Ｓ)-６-ベンジルオキシカルボニルアミノ-１- Ｎ-(ターシャリーブトキシカルボニル)-４-[Ｎ，Ｎ′-ジ-(ターシャリーブトキ シカルボニル)］グアニジノ-５-ヒドロキシピペリジン-３-カルボン酸ジフェニ ルメチルエステル〔式（XX-1）の化合物〕の製造
実施例３（７）で得た式（XVI-1）の化合物（０.２０７ｇ）をＮ，Ｎ-ジメチ ルホルムアミド（４ml）に溶かし、その溶液を０℃に冷却した。これにトリエチルアミン（０.２０ml)、Ｎ，Ｎ′-ジ-（ターシャリーブトキシカルボニル）チオ尿素(０.１９９ｇ)、塩化第二水銀（II)(０.１９６ｇ）を加え、０℃で１.５時 間攪拌してアミジノ化反応を行った。黄土色の固体が析出した反応溶液に酢酸エチルを加え、遠心分離して固体を沈殿させた後、上澄みを別に移した。この後、沈殿を酢酸エチルに懸濁させ、遠心分離した後、上澄みを別に移す操作を２回繰り返した。上澄みを合わせ、水で３回、少量の飽和塩化ナトリウム水溶液で１回洗浄した。有機相を無水硫酸マグネシウムで乾燥した後、綿栓ろ過した。ろ液の溶媒を減圧留去した。残留物をトルエンで３回共沸した後、シリカゲルカラムクロマトグラフィー（展開溶媒：トルエン-アセトン、１０：１）で精製し、無色 泡状の表題化合物（０.２９ｇ、９８％）を得た。
【０１３３】
[α]25D -7.7°(c 0.98, CHCl3):
1Ｈ-ＮＭＲスペクトル (CD3OD, 40℃, δppm): 1.46, 1.47, 1.48(9H, s, COOC(CH3)3), 2.95(1H, dt, J=11.7, 3.9 Hz, 3-H), 3.13(1H, broad t, J=12.7Hz, 2-Hax,), 3.74(1H, broad s, 5-H), 4.14(1H, broad d, J=12.7 Hz, 2-Heq),5.11(2H, broad s, PhCH2O-), 5.85(1H, broad s, 6-H), 6.80(1H, s,  Ph2CHO-), 7.24-7.38(15H, m, Ph)。
【０１３４】
（２）  (３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ，６Ｓ)-１-Ｎ-(ターシャリーブトキシカルボニル)-４-[Ｎ，Ｎ′-ジ-(ターシャリーブトキシカルボニル）］グアニジノ-５-ヒドロ キシ-６-トリフルオロアセトアミドピペリドン-３-カルボン酸ジフェニルメチルエステル〔式（XXI-1）の化合物〕の製造
式(XX-1）の化合物(１８８mg）をアセトニトリル（９ml）に溶かし、その溶液に１０％パラジウム炭素(６３mg)を加え、水素雰囲気下、室温で８時間攪拌してベンジルオキシカルボニル基の脱離反応を行った。１０％パラジウム炭素を減圧ろ過して除いた後、ろ液の溶媒を減圧留去した。得られた残留物は式（XX-a-1）の化合物を含む。
【０１３５】
残留物をジクロロメタン(４ml）に溶かし、０℃に冷却した。これにピリジン （４０μｌ）と無水トリフルオロ酢酸(３５μｌ)を加え、０℃で３０分間攪拌してトリフルオロアセチル化反応を行った。その反応溶液にピリジン(４０μｌ） と無水トリフルオロ酢酸(３５μｌ)を追加し、０℃でさらに３０分間攪拌した。反応溶液をクロロホルムで希釈し、水で１回、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液で２回、水で２回洗浄した。有機相を無水硫酸マグネシウムで乾燥した後、綿栓ろ過した。ろ液の溶媒を減圧留去した。残留物をトルエンで３回共沸した後、分取用ＴＬＣ（展開溶媒：トルエン−アセトン、８：１）で精製し、無色固体の表題化合物（３８mg，３３％）を得た。また、このとき、未反応の式（XX-1）の化合物（６８mg，３６％）を回収した。
【０１３６】
[α]24D -6.7°(c 0.78, CHCl3):
1Ｈ-ＮＭＲスペクトル (CD3OD, 40℃, δppm): 1.471, 1.477, 1.480(9H, s, COOC(CH3)3), 3.01(1H, dt, J=11.7, 4.4 Hz, 3-H), 3.19(1H, broad t, J=12.2Hz, 2-Hax), 3.84(1H, broad s, 5-H), 4.21(1H, broad d, J=12.6 Hz, 2-Heq),6.04(1H, broad d, J=1.5 Hz, 6-H), 6.82(1H, s, Ph2CHO-), 7.26-7.34(10H,  m, Ph)。
【０１３７】
（３）  （３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ，６Ｒ)-５-ヒドロキシ-４-グアニジノ-６-トリフ ルオロアセトアミドピペリジン-３-カルボン酸〔式（Id）の化合物〕の製造
式（XXI-1）の化合物（４４mg）を４Ｍ塩酸-ジオキサン溶液（１．３ml）に溶かし、その溶液を室温で一晩攪拌して脱保護反応を行った。無色固体が析出して懸濁した反応溶液にジエチルエーテルを加えてよく攪拌した後、析出した無色固体を遠心分離によって沈殿させ、上澄みを除いた。得られた沈殿を風乾した後、ポンプで減圧して乾燥させ、無色固体の表題化合物、すなわち本発明の化合物  Ｎo.４の二塩酸塩（２１mg，１００％）を得た。
【０１３８】
参考例１
（ａ）Ｎ-(ターシャリーブトキシカルボニル)-４,５-Ｏ-イソプロピリデンシ アスタチンＢの製造
Ｎ-(ターシャリーブトキシカルボニル)-シアスタチンＢ（０.９５５ｇ，３ mmol）をＮ，Ｎ-ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ)(１５ml）に懸濁させ、これに ２，２-ジメトキシプロパン（３.６９ml，３０mmol）およびクロロトリメチルシラン（１.９０ml，１５mmol）を加えた。得られた混合物を室温で２時間攪拌し た後、反応溶液にピリジン（１.５ml）を加えて反応を停止させた。
【０１３９】
反応溶液をクロロホルムで希釈し、これに水を加えて抽出した後、水相をクロロホルム-メタノール（９：１）の混合溶液で３回抽出した。有機相を合わせ、 無水硫酸マグネシウムで乾燥した後、ろ過した。ろ液を減圧濃縮し、残留物をトルエンで３回共沸した後、展開溶媒としてクロロホルム-メタノール-濃アンモニア水（２：１：０.３）を用いるシリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製し た。無色泡末状の固体として次式
0003830187.tif 000052
(式中、ＢｏｃおよびＭｅは前記と同じ意味をもつ）で示される表題の化合物を １.０５ｇ（９８％）得た。比旋光度：[α]23D +29°(c 0.88, メタノール)。
【０１４０】
（ｂ）Ｎ-(ターシャリーブトキシカルボニル)-４,-５-Ｏ-イソプロピリデンシアスタチンＢの２-メトキシエトキシメチルエステルの製造
前記(ａ）で得た式(Ｃ′）の化合物（２.５１ｇ，７mmol）をＤＭＦ(５０ml）に溶解し、これにジイソプロピルエチルアミン（４.８８ml，２８mmol）および 塩化２-メトキシエトキシメチル（１.６０ml，１４mmol）を加えた。得られた混合物を室温で２時間攪拌した。その後、反応溶液に水（０.２ml）を加えて反応 を停止させた。
【０１４１】
反応溶液をクロロホルムで希釈し、これに水を加えて抽出した後、水相をクロロホルムで３回抽出した。有機相を合わせ、無水硫酸マグネシウムで乾燥した後、ろ過した。ろ液を減圧濃縮し、残留物をトルエンで３回共沸した後、展開溶媒としてクロロメタン-メタノール（２０：１）を用いるシリカゲルカラムクロマ トグラフィーで精製した。無色シロップとして次式
0003830187.tif 000053
(式中、Ｂoc，ＭｅおよびＭＥＭは前記と同じ意味をもつ)で示される表題化合物を２.６１ｇ（８３％）得た。比旋光度：[α]25D -18.7°(c 0.91, クロロホル ム)。
【０１４２】
（ｃ）  （３Ｒ，４Ｓ，５Ｒ，６Ｓ)-６-アセタミド-Ｎ-(ターシャリーブトキシカルボニル)-３-ヒドロキシメチル-４，５-ジヒドロキシ-４，５-Ｏ-イソプロピリデンピペリジンの製造
前記(ｂ）で得た式(Ｄ′）の化合物（２.５９ｇ，５.８mmol）をテトラヒドロフラン(５０ml）と２，２，２-トリフルオロエタノール（５ml）の混合溶媒に溶かし、これに水素化ホウ素ナトリウム（０.６８５ｇ，１７.４mmol）を加えた。その得られた混合物を室温で１時間攪拌して還元反応を行った。その後、反応溶液に水（１.５ml）を加えて反応を停止させ、さらに室温で３０分間攪拌した。 得られた反応液を減圧濃縮した後、残留物に水を加え、クロロホルムで３回抽出した。有機相（クロロホルム抽出液）を合わせ、無水硫酸マグネシウムで乾燥した後、ろ過した。ろ液を減圧濃縮した後、残留物を展開溶媒としてジクロロメタン-メタノール（１２：１）を用いるシリカゲルカラムクロマトグラフィーで精 製し、無色泡末状固体として次式
0003830187.tif 000054
表題化合物を１.９８ｇ（９９％）得た。比旋光度：[α]25D +27°(c 0.95, ク ロロホルム)。
【０１４３】
（ｄ）  （３Ｒ，４Ｓ，５Ｒ，６Ｓ)-６-アミノ-Ｎ-(ターシャリーブトキシカルボニル)-３-ヒドロキシメチル-４，５-ジヒドロキシ-４，５-Ｏ-イソプロピリデンピペリジンの製造
前記(ｃ）で得た式（Ｅ′）の化合物（１.０３ｇ，３mmol）をヒドラジン水和物（Ｈ2ＮＮＨ2・ｘＨ2Ｏ，２０ml）に溶かし、７０℃で１０日間攪拌した。式 （Ｅ′）の化合物の６位のアセタミド基からアセチル基が脱離される反応が起きた。その反応溶液を室温まで冷却した後、反応溶液を減圧濃縮した。残留物に水を加え、クロロホルムで３回抽出した。有機相(クロロホルム抽出液)を合わせ、無水硫酸マグネシウムで乾燥した後、ろ過した。ろ液を減圧濃縮し、残留物を展開溶媒として酢酸エチル-メタノール（５０：１）を用いるシリカゲルカラムク ロマトグラフィーおよび展開溶媒として酢酸エチル-メタノール（１０：１）を 用いるシリカゲル分取用ＴＬＣクロマトグラフィーで精製した。無色シロップとして次式
0003830187.tif 000055
で示される表題化合物を０.４８８g(５４％）得た。比旋光度：[α]26D -14.4°(c 0.99, クロロホルム)。また、このとき、未反応である式（Ｅ′）の化合物を０.３３２ｇ（３２％）回収した。
【０１４４】
なお、上記の式（Ｆ′）の化合物を４Ｍ塩酸-ジオキサンに溶かし、その溶液 を室温で一晩攪拌して脱保護反応を行うと、前出の式（Ａ）で示される（３Ｒ，４Ｓ，５Ｒ，６Ｓ)-６-アミノ-３-ヒドロキシメチル-４，５-ジヒドロキシピペ リジンが無色物質として得られた。