(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
アグロバクテリウム属、エンテロバクター属及びアルカリゲネス属よりなる群から選ばれたエリスリトールをＤ−スレイトールに変換する能力を有する微生物の菌体及び／または該菌体処理物を、エリスリトールに作用させることを特徴とするＤ−スレイトールの製造方法。
【請求項２】
アグロバクテリウム属に属する微生物であってエリスリトールをＤ−スレイトールに変換する能力を有する微生物の菌体及び／または該菌体処理物を、エリスリトールに作用させることを特徴とするＤ−スレイトールの製造方法。
【請求項３】
微生物の菌体及び／または該菌体処理物をエリスリトールに作用させるに際し、リビトール、キシリトール、アラビノース、リボース、ソルビトール、マンニトール、イノシトール、グルコース、フラクトース、ソルボース、ラクチトール、ミオ−イノシトール、サッカロース、エタノール、グリセロール、及びピルビン酸よりなる群から選ばれた化合物を共存させることを特徴とする請求項１又は２記載のＤ−スレイトールの製造方法。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は、微生物の菌体及び／または該菌体処理物によるエリスリトールからスレイトールの製造に関するものである。
【０００２】
【従来の技術及び発明が解決しようとする課題】
スレイトール（Threitol）は医薬あるいは農薬の中間原料として有用な物質であると近年注目されている。
このスレイトールの化学的製造方法として、Ｄ−キシロース（D-Xylose）を原料とて化学的にＤ−スレイトールを製造する方法（J.Organic.Chem. 54(1989)22,5257-5264）、エリスリトールから化学的な異性化によりＤＬ−スレイトールを製造する方法（Carbohydrate.Res.,44(1975)106 ）等が知られているが、収率が低いこと、プロセスが煩雑であること等からいずれも工業的な製造には適した方法ではない。
【０００３】
生物化学的にスレイトールをつくる方法は、Acetobacter suboxydansのエリスリトールの酸化物においてＬ−スレイトールが検出された例（C.L. HU, E,A,McCOMB , and V.V. RENDIG  ARCHIVES of BIOCHEM.&BIOPHYSIC.  110  p350-353, 1965 ）が報告されてはいるが、エリスリトールからＬ−スレイトールの工業的な製造方法は全く知られていない。さらにエリスリトールからＤ−スレイトールの微生物的変換は全く報告例がない。
従って、本発明の目的はスレイトールを安価な原料から効率的に工業生産できる方法を提供することにある。
【０００４】
【課題を解決するための手段】
本発明者らは、スレイトールの工業的製造法を提供するべく鋭意検討した結果、エリスリトールからスレイトールを生成しうる微生物を見いだし、本発明を完成した。
即ち、本発明はエリスリトールからスレイトールに変換する能力を有する微生物の菌体及び／または該菌体処理物を、エリスリトールに作用させることを特徴とするスレイトールの製造方法に存する。
【０００５】
【発明の実施の形態】
以下、本発明を詳細に説明する。
本発明においては、エリスリトールを変換しスレイトールを生産する能力を持つ微生物であれば、いずれの微生物も使用し得るが、好ましい微生物としては、アルカリゲネス（Alcaligenes ）属、アシネトバクター（Acinetobacter ）属、アグロバクテリウム（Agrobacterium ）属、アルスロバクター（Arthrobacter）属、オーレオバクテリウム（Aureobacterium）属、バチルス（Bacillus）属、バクテリジウム（Bacteridium ）属、ボルデテラ（Bordrtella）属、ブレビバクテリウム（Brevibacterium）属, クレブシエラ（Klebsiella）属、コマモナス（Comamonas ）属、コリネバクテリウム（Corynebacterium ）属、エンテロバクター（Enterobacter）属、エッシェリティア（Escherichia ）属、エルウィニア（Erwinia ）属、フラボバクテリウム（Flavobacterium）属、グルコノバクター（Gluconobacter ）属、ハフニア（Hafnia）属、ミクロバクテリウム（Microbacterium）属、ミクロコッカス（Micrococcus ）属、モラクセラ（Moraxella ）属、パラコッカス（Paracoccus）属、ラネラ（Rhanella）属、キサントモナス（Xanthomonas ）属、、シュードモナス（Pseudomonas ）属、セルロモナス（Cellulomonas）属、バークホルデリア（Burkholderia）属、ロドトルラ（Rhodotorula ）属、ファエノココマイセス（Phaeococcomyces ）属、キャンディダ（Candida ）属、トリグノプシス（Trignopsis）属及びハンセニアスポラ（Hanseniaspora ）属から選ばれる属に属する微生物が挙げられる。
【０００６】
本発明において使用するアルカリゲネス（Alcaligenes ）属に属する微生物の好ましい種としては、例えばAlcaligenes faecalis castellani,  Alcaligenes denitrificans sub. denitrificans,  Alcaligenes paradoxus, Alcaligenes xylosoxidans ssp. xylosoxidans等が挙げられる。さらに具体的な代表株としてAlcaligenes faecalis castellani IAM1015,  Alcaligenes denitrificans sub. denitrificans IAM12370,  Alcaligenes paradoxus Biotype I DSM66,  Alcaligenes paradoxus Biotype II DSM30162, Alcaligenes xylosoxidans ssp. xylosoxidans IAM12600, Alcaligenes xylosoxidans ssp. xylosoxidans IAM12685 等が挙げられる。
【０００７】
本発明において使用するアシネトバクター（Acinetobacter ）属に属する微生物の好ましい種としては、例えばAcinetobacter calcoaceticus ,Acinetobacter lwoffii等が挙げられる。さらに具体的な菌株としては  Acinetobacter calcoaceticus IFO12552, Acinetobacter calcoaceticus ATCC19606, Acinetobacter lwoffii ATCC17910等が挙げられる。
【０００８】
本発明において使用するアルスロバクター（Arthrobacter）属に属する微生物の好ましい種としては、例えばArthrobacter paraffineus, Arthrobacter crystallopoietes, Arthrobacter oxydans, Arthrobacter ramousus Arthrobacter citreus, Arthrobacter atrocyaneus, Arthrobacter hystidinolovorans, Arthrobacter sulfureus 等が挙げられる。さらに具体的な菌株としては Arthrobacter paraffineus ATCC15590, Arthrobacter crystallopoietes JCM2522, Arthrobacter oxydans JCM2521, Arthrobacter ramousus JCM1334, Arthrobacter citreus JCM1331, Arthrobacter atrocyaneus JCM1329,Arthrobacter hystidinolovorans JCM2520, Arthrobacter sulfureus JCM1338等が挙げられる。
【０００９】
本発明において使用するアグロバクテリウム（Agrobacterium ）属に属する微生物の好ましい種としては、例えばAgrobacterium radiobacter, Agrobacterium aureum, Agrobacterium rhizogenes, Agrobacterium tumefaciens, Agrobacterium viscosum等が挙げられる。さらに具体的な代表株としてはAgrobacterium radiobacter NRRL B-11291, Agrobacterium radiobacter IAM12048, Agrobacterium tumefaciens IAM13129, Agrobacterium tumefaciens MAFF03-01224, Agrobacterium tumefaciens MAFF03-01001, Agrobacterium viscosum IFO13652, Agrobacterium aureum IFO13647, Agrobacterium rhizogenes MAFF07-20001, Agrobacterium rhizogenes MAFF03-01724等が挙げられる。
【００１０】
本発明において使用するオーレオバクテリウム（Aureobacterium）属に属する微生物の好ましい種としては、例えば Aureobacterium saperdae, Aureobacterium testaceum等が挙げられる。さらに具体的な代表株としてAureobacterium saperdae JCM 1352, Aureobacterium testaceum JCM1353等が挙げられる。
本発明において使用するバチルス（Bacillus）属に属する微生物の好ましい種としては、例えばBacillus licheniformis, Bacillus megaterium, Bacillus sphaerium 等が挙げられる。さらに具体的な代表株としてはBacillus licheniformis IFO12200, Bacillus megaterium IFO12108, Bacillus megaterium ATCC13639, Bacillus sphaerium ATCC7055 等が挙げられる。
【００１１】
本発明において使用するバクテリジウム（Bacteridium ）属に属する微生物の好ましい種としては、例えばBacteridium sp等が挙げられる。さらに具体的な代表株としては Bacteridium sp.R340 FERM P-2718等が挙げられる。
本発明において使用するボルデテラ（Bordrtella）属に属する微生物は、例えば Bordrtella bronchiseptica等が挙げられる。さらに具体的な代表株としてBordrtella bronchiseptica ATCC4617等が挙げられる。
【００１２】
本発明において使用するブレビバクテリウム（Brevibacterium）属に属する微生物の好ましい種としては、例えばBrevibacterium ammoniagenes,Brevibacterium butanicum, Brevibacterium flavum, Brevibacterium iodinum 等が挙げられる。さらに具体的な代表株としてはBrevibacterium ammoniagenes JCM1305, Brevibacterium ammoniagenes JCM1306,Brevibacterium butanicum ATCC21196, Brevibacterium flavum ATCC14067, Brevibacterium iodinum IFO3558等が挙げられる。
【００１３】
本発明において使用するコマモナス（Comamonas ）属に属する微生物の好ましい種としては、例えばComamonas acidovorans, Comamonas terrigena等が挙げられる。さらに具体的な代表株としてはComamonas acidovorans NCIMB9289, Comamonas terrigena IFO13299 等が挙げられる。
本発明において使用するコリネバクテリウム（Corynebacterium ）属に属する微生物の好ましい種としては、例えばCorynebacterium glutamicum, Corynebacterium flaccumfaciens, Corynebacterium flavescens, Corynebacterium hydrocarboclastum 等が挙げられる。さらに具体的な代表株としてCorynebacterium glutamicum ATCC13032, Corynebacterium flaccumfaciens ATCC12813, Corynebacterium flavescens JCM1317, Corynebacterium hydrocarboclastum ATCC15960 等が挙げられる。
【００１４】
本発明において使用するエンテロバクター（Enterobacter）属に属する微生物の好ましい種としては、例えばEnterobacter aerogenes, Enterobacter cloacae, Enterobacter taylorae 等が挙げられる。さらに具体的な代表株としてEnterobacter aerogenes IFO13534, Enterobacter aerogenes ATCC13048, Enterobacter cloacae ATCC222, Enterobacter cloacae ATCC13047, Enterobacter cloacae IFO12935, Enterobacter tayloraeJCM3943等が挙げられる。
【００１５】
本発明において使用するエルウィニア（Erwinia ）属に属する微生物の好ましい主としては、例えばErwinia chrysanthemi, Erwinia rhapontici等が挙げられる。さらに具体的な代表株としてErwinia chrysanthemi MAFF 03-01767, Erwinia rhapontici MAFF 03-01331等が挙げられる。
本発明において使用するエッシェリティア（Escherichia ）属に属する微生物の好ましい主としては、例えばEscherichia coli等が挙げられる。さらに具体的な代表株としてEscherichia coli ATCC11775, Escherichia coli IFO3301, Escherichia coli ATCC10798等が挙げられる。
【００１６】
本発明において使用するフラボバクテリウム（Flavobacterium）属に属する微生物の好ましい種としては、例えばFlavobacterium aquatile, Flavobacterium dehydrogenans 等が挙げられる。さらに具体的な代表株としてFlavobacterium aquatile IFO3772, Flavobacterium dehydrogenans ATCC13930 等が挙げられる。
本発明において使用するグルコノバクター（Gluconobacter ）属に属する微生物の好ましい種としては、例えばGluconobacter capsulatus等が挙げられる。さらに具体的な代表株としてGluconobacter capsulatus IAM1813等が挙げられる。
【００１７】
本発明において使用するハフニア（Hafnia）属に属する微生物の好ましい種としては、例えばHafnia alvei等が挙げられる。さらに具体的な代表株としてHafnia alvei ATCC13337等が挙げられる。
本発明において使用するクレブシエラ（Klebsiella）属に属する微生物の好ましい種としては、例えばKlebsiella planticola, Klebsiella oxytoca , Klebsiella terrigena等が挙げられる。さらに具体的な代表株としてKlebsiella planticola NCIB11885, Klebsiella oxytoca JCM1665, Klebsiella terrigena JCM1687 等が挙げられる。
【００１８】
本発明において使用するミクロバクテリウム（Microbacterium）属に属する微生物の好ましい種としては、例えばMicrobacterium lacticum, Microbacterium flavum等が挙げられる。さらに具体的な代表株としてMicrobacterium lacticum IAM1640, Microbacterium flavum JCM1317等が挙げられる。
本発明において使用するミクロコッカス（Micrococcus ）属に属する微生物の好ましい種としては、例えばMicrococcus varians, Micrococcus morrhuae , Micrococcus luteus等が挙げられる。さらに具体的な代表株としてMicrococcus varians IAM1314, Micrococcus morrhuae IAM1711, Micrococcus luteus ATCC4698, Micrococcus varians IAM1099 等が挙げられる。
【００１９】
本発明において使用するモラクセラ（Moraxella ）属に属する微生物の好ましい種としては、例えばMoraxella nonliquefaciens 等が挙げられる。さらに具体的な代表株としてMoraxella nonliquefaciens FERM-P4348等が挙げられる。
本発明において使用するパラコッカス（Paracoccus）属に属する微生物の好ましい種としては、例えばParacoccus denitrificans等が挙げられる。さらに具体的な代表株としてParacoccus denitrificans IFO13301 、Paracoccus denitrificans FERM-P4349 等が挙げられる。
【００２０】
本発明において使用するシュードモナス属（Pseudomonas ）属に属する微生物の好ましい種としては、例えばPseudomonas putida, Pseudomonas oleovolans, Pseudomonas sp. 等が挙げられる。さらに具体的な代表株としてPseudomonas putida NCIMB11924, Pseudomonas oleovolans IFO13583, Pseudomonas sp. ATCC13261 等が挙げられる。
本発明において使用するラネラ（Rhanella）属に属する微生物の好ましい種としては、例えばRhanella aquatilis等が挙げられる。さらに具体的な代表株としてRhanella aquatilis JCM1683等が挙げられる。
【００２１】
本発明において使用するキサントモナス（Xanthomonas ）属に属する微生物の好ましい種としては、例えばXanthomonas maltophila等が挙げられる。さらに具体的な代表株としてXanthomonas maltophila ATCC13637等が挙げられる。
本発明において使用するにセルロモナス（Cellulomonas）属に属する微生物の好ましい種としては、例えばCellulomonas biazotea, Cellulomonas flavigena, Cellulomonas gelida等が挙げられる。さらに具体的な代表株としてCellulomonas biazotea ATCC486, Cellulomonas flavigena ATCC482, Cellulomonas biazotea JCM1340, Cellulomonas flavigena IFO3754, Cellulomonas gelida IFO3748 等が挙げられる。
【００２２】
本発明において使用するバークホルデリア（Burkholderia）属に属する微生物の好ましい種としては、例えばBurkholderia cepacia等が挙げられる。さらに具体的な代表株としてBurkholderia cepacia ATCC25416等が挙げられる。
本発明において使用するロドトルラ（Rhodotorula ）属する微生物の好ましい種としては、例えばRhodotorula minuta等が挙げられる。さらに具体的な代表株としてRhodotorula minuta IFO0387等が挙げられる。
【００２３】
本発明において使用するファエノココマイセス（Phaeococcomyces ）属に属する微生物の好ましい種としては、例えばPhaeococcomyces nigricans 等が挙げられる。さらに具体的な代表株としてPhaeococcomyces nigricans CBS 652.76等が挙げられる。
本発明において使用するキャンディダ（Candida ）属に属する微生物の好ましい種としては、例えばCandida molischiana, Candida terreus, Candida parapsilosis, Candida zeylanoides, Candida maltosa等が挙げられる。さらに具体的な代表株としてCandida molischiana IFO 10926, Candida terreus IFO 0727, Candida parapsilosis IFO 604, Candida zeylanoides IFO6408, Candida maltosa IFO 1977等が挙げられる。
【００２４】
本発明において使用するトリグノプシス（Trignopsis）属に属する微生物の好ましい種としては、例えばTrignopsis variabilis 等が挙げられる。さらに具体的な代表株としてTrignopsis variabilis IFO4095 等が挙げられる。
本発明において使用するハンセニアスポラ（Hanseniaspora ）属に属する微生物の好ましい種としては、例えばHanseniaspora uvarum IFO 1755 等が挙げられる。さらに具体的な代表株としてHanseniaspora uvarum IFO 1755 等が挙げられる。
【００２５】
また、リビトール、ガラクチトールあるいはキシリトールを唯一の炭素源として生育できる菌株の数多くの菌株がエリスリトールからスレイトールへの変換が可能である。よって自然界よりリビトール、ガラクチトールあるいはキシリトールを唯一の炭素源として生育できる菌で、エリスリトールからスレイトールへの変換が可能な菌であればいずれも本反応に使用できる。
【００２６】
また、上記微生物は、変異株、あるいは細胞融合もしくは遺伝子組換え法などの遺伝学的手法により誘導される組換え株などのいずれの株であってもよい。
また、上記の菌株はいずれも公知の菌株であり、それぞれ、（財）発酵研究所（ＩＦＯ）、セントラルビューローフォーシュメルカルチャーズ（ＣＢＳ）、アメリカンタイプカルチャーコレクション（ＡＴＣＣ）から容易に入手することができる。
【００２７】
本発明の製造方法においては、上記微生物の１種あるいは２種以上が菌体及び／または菌体処理物として用いられる。具体的には、上記微生物を培養して得られた菌体をそのまま、あるいは培養して得られた菌体を公知の手法で処理したもの、即ち、アセトン処理したもの、凍結乾燥処理したもの、菌体を物理的または酵素的に破砕したもの等の菌体処理物を用いることができる。また、これらの菌体または菌体処理物から、エリスリトールに作用しスレイトールへ変換する能力を有する酵素画分を粗製物あるいは精製物として取り出して用いることも可能である。さらには、このようにして得られた菌体、菌体処理物、酵素画分等を通常の固定化技術を用いて、すなわち、ポリアクリルアミド、カラギーナンゲル等の担体に固定化したもの等を用いることも可能である。そこで本明細書において、「菌体及び／または該菌体処理物」の用語は、上述の菌体、菌体処理物、酵素画分、及びそれらの固定化物全てを含有する概念として用いられる。
【００２８】
次に、本発明の製造方法について具体的に説明する。
本発明においては、原料としてエリスリトールを用い、これに上記特定の微生物の菌体又は該菌体処理物を作用させて、スレイトールを製造する。
本発明の製造方法において微生物は、通常、培養して用いられるが、この培養については定法通り行うことができる。本微生物の培養の為に用いられる培地には本微生物が資化しうる炭素源、窒素源、及び無機イオン等が含まれる。炭素源としては、グルコース、フルクトース、サッカロース等の炭水化物、グリセロール、マンニトール、キシリトール、リビトール等のポリアルコール類、有機酸その他が適宜使用される。窒素源としては、ＮＺアミン、トリプトース、酵母エキス、ポリペプトン、肉エキス、大豆抽出物などの有機窒素源、あるいは硫酸アンモニウム塩、硝酸アンモニウム塩などの無機窒素源、その他などが適宜使用される。無機イオンとしては、リン酸イオン、マグネシウムイオン、鉄イオン、マンガンイオン、モリブデンイオンその他が必要に応じ適宜使用される。更に、イノシトール、パントテン酸、ニコチン酸アミドその他のビタミン類を必要に応じ添加することは有効である。酵素の誘導剤として、エリスリトール、グリセロール、マンニトール、キシリトール、リビトール等のポリアルコール類が適宜使用される。培養は、好気的条件下に、ｐＨ約３〜１１、温度約４〜５０℃の適当な範囲に制御しつつ１〜１００時間行う。
【００２９】
エリスリトールからスレイトールを製造する方法として、本微生物を培養し、得られた菌体及び／または該菌体処理物にエリスリトールを添加し反応させスレイトールを得る方法、培地にエリスリトールを添加し培養と反応を同時に行う方法、あるいは培養終了後、エリスリトールを添加して更に反応を行う方法等を適宜用いることができる。
反応は温度４〜７０℃、好ましくは２０〜５０℃の範囲で行い、ｐＨは２〜１１、好ましくは６〜９のの範囲で行う。エリスリトールの濃度は０．０００１〜８０％、好ましくは０．０１〜５０％の範囲が望ましく、必要ならばエリスリトールは反応の間、追補添加される。
【００３０】
エリスリトール以外の炭水化物が反応液に添加されると著しく反応が促進される場合がある。これらの炭水化物としてはグルコース、フルクトース、サッカロース等の糖類、エタノール、グリセロール、マンニトール、キシリトール、リビトール等のアルコール類、ピルビン酸などの有機酸などが適宜使用される。添加濃度はエリスリトールに対し０．１〜２００％、好ましくは１０〜１００％の範囲で用いられる。
【００３１】
また、必要に応じてコバルトイオン、マグネシウムイオン等の金属イオンを添加することにより反応が促進される場合がある。
微生物によっては反応の中間体物質としてエリスルロースが検出されることもあり、この場合は酸化と還元が微生物内で同時に行われ結果的にスレイトールが蓄積されると推定される。微生物によってはこの中間体がほとんど検出されないものもあり、ある種の異性化酵素である可能性も示唆される。
【００３２】
培養及び反応で得られたスレイトールの採取方法としては、微生物などの固形分を遠心分離、フィルタープレス、限外濾過などの通常の分離装置によりを除去した後に、残存するその他の糖質や菌体及び培地由来の物質を通常の方法、すなわちクロマトグラフィーや晶析技術を用いることで除去できる。工業的には、イオン交換樹脂を用いた疑似移動相型クロマトグラフィーにより分離することも可能である。分離精製の工程には、必要に応じて脱塩、脱色など、通常の棟の精製における操作を加えることもできる。さらに低温晶析、有機溶媒を用いた晶析等、通常の晶析技術を用い、スレイトールの結晶を得る事ができる。
【００３３】
【実施例】
以下に実施例を挙げて本発明を更に具体的に説明するが、その要旨を越えない限り本発明の技術分野における通常の変更をすることができる。
実施例１
リビトール  １０ｇ／Ｌ、イーストエキス  ５ｇ／Ｌ、ポリペプトン  ５ｇ／Ｌ、リン酸２カリウム  ３ｇ／Ｌ、リン酸１カリウム  １ｇ／Ｌ（ｐＨ７．１）の組成からなる液体培地１０ｍＬに、第１表に示した各種の菌株を接種し、３０℃で２４時間好気的に培養した。得られた培養液を遠心分離し、菌体を集め、これにエリスリトール  １０ｇ／Ｌ、およびフルクトース  ５ｇ／Ｌを含む１００ｍＭリン酸カリウム緩衝液（ｐＨ７．５）を加え、全量を１ｍＬとし３０℃で２４時間好気的に反応させた。反応終了後菌体を遠心分離にて除去し上清を高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）にて分析した。
ＨＰＬＣの条件は
カラム：ＭＣＩＧＥＬ  ＣＫ０８ＥＣ  温度：７５度
溶離液：水１００％    流速：０．８ml/min.
検出器：ＲＩ検出器およびＵＶ検出器（２１０ｎｍ）
標準サンプルとしてＳｉｇｍａ社の試薬を用いた。結果を第１表に示す。
【００３４】
【表１】
0003750339.tif 000002
【００３５】
【表２】
0003750339.tif 000003
【００３６】
実施例２
マンニトール  ２ｇ／Ｌ、リビトール  ５ｇ／Ｌ、硫安  ３ｇ／Ｌ、リン酸２ナトリウム  １３．５ｇ／Ｌ、リン酸１カリウム  １．５ｇ／Ｌ、硫酸マグネシウム７水和物  ０．２ｇ／Ｌ、硫酸第二鉄  ５ｍｇ／Ｌ（ｐＨ７．２）の組成からなる液体培地1 ０ｍＬにEnterobacter aerogenes IFO13534, Enterobacter aerogenes ATCC13048, Enterobacter cloacae ATCC222, Enterobacter cloacae ATCC13047, Enterobacter cloacae IFO12935, Enterobacter tayloraeJCM3943をそれぞれ接種し、３０℃で３０時間好気的に培養した。得られた培養液を遠心分離し、菌体を集めた。
【００３７】
この菌体に１ｍｌの１％エリスリトール溶液（１００ｍＭリン酸カリウム緩衝液（ｐＨ８．０））と蒸留水９ｍｌを加え３０℃で４日間反応させた。反応開始１日目にピルビン酸を１０マイクロリットル添加して反応を続けた。反応終了後菌体を遠心分離にて除去し上清をＨＰＬＣにて分析した。結果を第２表に示す。
【００３８】
【表３】
0003750339.tif 000004
【００３９】
実施例３
リビトール  10ｇ／Ｌ、イーストエキス  10ｇ／Ｌ、リン酸１カリウム  1.4 ｇ／Ｌ、リン酸２ナトリウム  ３ｇ／Ｌ、硫酸アンモニウム５ｇ／Ｌ、ＮａＣＬ０．５ｇ／Ｌ、硫酸マグネシウム０．５ｇ／Ｌ（ｐＨ６．３）の組成からなる液体培地１０ｍＬに、第３表に示した各種の菌株を接種し、３０℃で４８〜７２時間好気的に培養した。得られた培養液を遠心分離し、菌体を集め、これにエリスリトール１５ｇ／Ｌ、およびフルクトース５ｇ／Ｌを含む１００ｍＭリン酸カリウム緩衝液（ｐＨ7.5 ）を加え、全量を1 ｍＬとし３０℃で２４時間好気的に反応させた。反応終了後菌体を遠心分離にて除去し上清を高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）にて分析した。結果を第３表に示す。
【００４０】
【表４】
0003750339.tif 000005
【００４１】
実施例４
グルコース１０ｇ／Ｌ、イーストエキス  １０ｇ／Ｌ、リン酸２カリウム  ３ｇ／Ｌ、リン酸１カリウム  １ｇ／Ｌ、エリスリトール  ２ｇ／Ｌ、硫酸マグネシウム  ０．５ｇ／Ｌ、硫酸マンガン  １０ｍｇ／Ｌ、塩化コバルト  １０ｍｇ／Ｌ（ｐＨ７．０）の組成からなる液体培地２００ｍＬに、Agrobacterium radiobacter NRRL B-11291を接種し、３０℃で２４時間好気的に培養し種培養とした。同組成の培地２０Ｌを３０Ｌジャーファーメンターに仕込み、１２０℃２０分殺菌後、３１℃に温度を設定し、種培養を植菌して、１５時間培養した。得られた培養液を遠心分離し、菌体を集め、全量１Ｌになるように水に懸濁した。この懸濁液５００ｍＬと水１２５０ｍＬ、さらにエリスリトール１９０ｇ、およびフルクトース３７．５ｇを含む１００ｍＭリン酸カリウム緩衝液（ｐＨ７．５）２００ｍＬを加え１Ｍリン酸カリウム緩衝液（ｐＨ７．５）１００ｍＬ加え、５Ｌのミニジャーファーメンターにて３０℃、６００ｒｐｍ、１ｖｖｍで６日間反応させた。反応終了後ＨＰＬＣにて分析したところ、スレイトール１５２ｇ、エリスリトール８ｇ含まれていた。
（収率８０．３％）  （変換率９５．７％）
【００４２】
実施例５
実施例４の反応終了液を遠心分離にかけ菌体を除いた。さらにその上清を透析膜にて高分子物質を除き、濃縮後エタノールを加えて結晶を析出させた。
この結晶２０ｍｇとりテトラヒドロフラン０．２ｍＬと無水トリフルオロ酢酸を０．０２ｍＬ加え、さらにピリジンを５μｌ加え室温で撹拌し、ガスクロマトグラフィー（ＧＣ）にて光学純度の分析した。光学純度は１００％Ｄ体であった。ＧＣの条件は以下の通りである。
Column :β-DEX325 （Superco, 30m*0.25mmID*0.25μm ）
Carrier : He 1.5ml/min（1.2KG ）, Oven : 100℃, Det : FID, 300℃
Inj : 1 μｌ, split （50:1）, 220 ℃
尚、ＴＦＡ化エリスリトールは7.3 分に、ＴＦＡ化Ｌ−スレイトールは10.1分に、ＴＦＡ化Ｄ−スレイトールは9.3 分に検出される。
【００４３】
実施例６
リビトール  １０ｇ／Ｌ、イーストエキス  ５ｇ／Ｌ、ポリペプトン  ５ｇ／Ｌ、リン酸２カリウム  ３ｇ／Ｌ、リン酸１カリウム  １ｇ／Ｌ（ｐＨ７．１）の組成からなる液体培地５０ｍＬに、Agrobacterium tumefaciens IAM 13129, Enterobacter aerogenes IFO13534, Alcaligenes paradoxus Biotype II DSM30162 をそれぞれ接種し、３０℃で２４時間好気的に培養した。得られた培養液を遠心分離し、菌体を集め、これにエリスリトール８０ｇ／Ｌ、およびマンニトール４０ｇ／Ｌを含む１００ｍＭリン酸カリウム緩衝液（ｐＨ７．５）を加え、全量を５ｍＬとし３０℃で２４時間好気的に反応させた。反応終了後菌体を遠心分離にて除去し上清を得た。この上清を濃縮乾固し、実施例５と同様にＧＣにて光学純度の分析を行った。結果、Agrobacterium tumefaciens IAM 13129 及び, Enterobacter aerogenes IFO13534 はＬ−スレイトール由来のピークは認められず、１００％Ｄ体のスレイトールであった。 Alcaligenes paradoxus Biotype II DSM30162は９６．７％の光学純度であった。
【００４４】
実施例７
グルセロール１０ｇ／Ｌ、イーストエキス  １０ｇ／Ｌ、リン酸２カリウム３ｇ／Ｌ、リン酸１カリウム  １ｇ／Ｌ、エリスリトール２ｇ／Ｌ（ｐＨ７．０）の組成からなる液体培地２０ｍＬに、Agrobacterium radiobacter NRRL B-11291を接種し、３０℃で２４時間好気的に１７時間培養した。得られた培養液を遠心分離し、菌体を集め、全量２ｍＬになるように水に懸濁した。この懸濁液１００μＬと１０％エリスリトール２００μＬ、および第４表に示した各種の炭水化物１０％濃度液を１００μＬ、１００ｍＭリン酸カリウム緩衝液（ｐＨ７．５）６００μＬを加え、２７℃で２０時間好気的に反応させた。反応終了後ＨＰＬＣにて分析して炭水化物の影響を調べた。
結果を第４表に示すが、何も入れないときに比べて特に、フルクトースにもっとも生産性を高める効果があった。
【００４５】
【表５】
0003750339.tif 000006
【００４６】
実施例８
リビトール  １０ｇ／Ｌ、イーストエキス  ５ｇ／Ｌ、ポリペプトン  ５ｇ／Ｌ、リン酸２カリウム  ３ｇ／Ｌ、リン酸１カリウム  １ｇ／Ｌ（ｐＨ７．１）の組成からなる液体培地１０ｍＬに、第５表に示した各種の菌株を接種し、３０℃で２４時間好気的に培養した。得られた培養液を遠心分離し、菌体を集め、これにエリスリトール８０ｇ／Ｌ、およびフルクトース３０ｇ／Ｌを含む１００ｍＭリン酸カリウム緩衝液（ｐＨ７．５）を加え、全量を1 ｍＬとし３０℃で２４時間好気的に反応させた。反応終了後菌体を遠心分離にて除去し上清を高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）にて分析した。結果を第５表に示す。
【００４７】
【表６】
0003750339.tif 000007
【００４８】
【発明の効果】
本発明によって、微生物を利用してエリスリトールからスレイトールを簡便に製造することが可能になった。