(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
ラクトンまたはラクタム部分を含む大環状化合物構造を有しており、アスコマイシンまたはラパマイシンであるマクロライドＴ−細胞免疫調節剤または免疫抑制剤とチオカルバメート抗真菌剤およびアリールまたはヘテロアリールメチルアミン抗真菌剤から選択されたスクアレンエポキシダーゼ阻害剤の両者を必須成分とする、抗真菌剤。
【請求項２】
マクロライドＴ−細胞免疫調節剤または免疫抑制剤が３３−エピクロロ,３３−デスオキシアスコマイシンであり、スクアレンエポキシダーゼ阻害剤がテルビナフィンである、請求項１記載の抗真菌剤。
【請求項３】
両必須成分を、相乗効果を示すに有効な量で使用する、請求項１または２記載の抗真菌剤。
【請求項４】
少なくとも１種の薬学的に許容される希釈剤または担体を配合した、請求項１〜３のいずれかに記載の抗真菌剤。
【請求項５】
ラクトンまたはラクタム部分を含む大環状化合物構造を有しており、アスコマイシンまたはラパマイシンであるマクロライドＴ−細胞免疫調節剤または免疫抑制剤とチオカルバメート抗真菌剤およびアリールまたはヘテロアリールメチルアミン抗真菌剤から選択されたスクアレンエポキシダーゼ阻害剤の両者を、一緒または別々の単位投与形で、使用指示書と共に含む、抗真菌剤。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
本発明は、特に真菌感染に対して使用する、医薬組成物に関する。
【０００２】
スクアレンエポキシダーゼ阻害剤を、クロライドＴ−細胞免疫調節剤または免疫抑制剤と共に含む医薬組成物に関する。
【０００３】
抗真菌活性が種々のマクロライドＴ−細胞免疫調節剤および免疫抑制剤について知られており、このようなマクロライドの幾つか、例えばアスコマイシンおよびラパマイシンは、当初、抗真菌剤として文献に記載されたほどであった。他方、それらの抗真菌活性は、それらの免疫調節特性とおおむね一致するものと理解され、さらに共通のパターンは知られておらず、これらの化合物の間の構造および機構類似性が見出されたのは、それらの最初の単離から長い年月を経た後であった。特に、マクロライドＴ−細胞免疫調節剤および免疫抑制剤の抗真菌活性知見の蓄積にも拘わらず、当該抗真菌活性に対するスクアレンエポキシダーゼ阻害剤の増強効果について、文献上で有意な報告を見出すことはできず、また、これら２種のクラスの医薬を組み合わせて含む相乗的医薬組成物も知られていない。
【０００４】
驚くべきことに、組み合わせて使用した場合、スクアレンエポキシダーゼ阻害剤とマクロライドＴ−細胞免疫調節剤および免疫抑制剤は、相乗的に作用して薬理学的活性の増強をもたらし、個々の有効量よりも十分に少ない投与量の併用によって効果的に有利な、特に抗真菌活性が認められることが見出された。さらに、スクアレンエポキシダーゼ阻害剤以外の抗真菌剤、特にアゾール系１４α−メチルデメチラーゼ阻害剤では、そのようなマクロライドとの有意なポジテイブ相互作用は認められないか、認められるとしても遙かに僅かな程度の相互作用であるか、または例えばフルコナゾールと共に使用した場合のように拮抗作用すら認められる。
【０００５】
本発明は、したがって、マクロライドＴ−細胞免疫調節剤または免疫抑制剤と関連させたまたは組み合わせたスクアレンエポキシダーゼ阻害剤を含む、新規医薬組成物に関し、以後簡単に“本発明の組成物”と呼ぶ。
【０００６】
マクロライドＴ−細胞免疫調節剤または免疫抑制剤は、本明細書では、ラクトンまたはラクタム部分を含む大環状化合物構造を有する、Ｔ−細胞免疫調節剤またはＴ−細胞免疫抑制剤として理解されるべきである。好ましくは、少なくともあるＴ−細胞免疫調節または免疫抑制剤活性を有するが、付随して、または優勢的に抗炎症活性のような他の薬学的特性も示し得る。
【０００７】
本発明の組成物は、全身、例えば経口たは静脈内、または局所的使用に適合させ得る；好ましくは局所的使用である。それらは、その中に含まれる特定の活性剤に関して既知の適応症に有用である。それらは特に、例えば、ＣandidaまたはＭalassezia(Ｐityrosporum)種のような酵母、またはＭicrosporum種のような皮膚糸状菌による、真菌感染または擬似真菌感染が関与する疾患への使用；または例えば、皮膚への真菌または擬似真菌の住み着きが関与する、所望により、アトピー性皮膚炎または脂漏性皮膚炎のような炎症性要素または炎症性合併症と所望により関連した状態への、または真菌耐性の状況への使用が特に示される。
【０００８】
適当なスクアレンエポキシダーゼ阻害剤は、例えば、トルナフテートまたはトルシクレートのようなチオカルバーメト抗真菌剤またはアリール−またはヘテロアリールメチルアミン抗真菌剤、好ましくは、例えばＧＢ１'５７９'８７９、ＥＰ８９６、ＥＰ２４５８７、ＧＢ２'１１６'１７１、ＧＢ２'１８５'９８０、ＥＰ１６４６９７、ＥＰ２２１７８１およびＥＰ４２１３０２に記載のようなアリールメチルアミンクラスの抗真菌剤である。特にナフチフィン(Ｅxoderil(登録商標))またはブテナフィン(Ｍentax(登録商標))、好ましくはテルビナフィン(Ｌamisil(登録商標))、すなわち、遊離形または塩形、特にＥＰ２４５８７の実施例１６に記載の塩酸付加塩形の、式Ｉ
【化１】
0003841682.tif 000002
の(Ｅ)−Ｎ−メチル−Ｎ−(１−ナフチルメチル)−６,６−ジメチルヘプタ−２−エン−４−アミンである。
【０００９】
適当なマクロライドＴ−細胞免疫調節剤または免疫抑制剤は、例えばＦＫＢＰ１２−結合カルシニューリン(calcineurin)阻害剤またはマイトージェン活性化キナーゼ調節剤または阻害剤、特にアスコ−またはラパマイシンである。好ましくはアスコマイシンである。マクロライドは、好ましくは少なくとも一定のカルシニューリン−またはマイトージェン−活性化キナーゼ調節または阻害活性を有するが、付随して、または優勢的に抗炎症活性のような更なる薬学的得し得も示し得る。好ましくは化合物、例えばアスコマイシが、同じ構造クラスの他のメンバーと比較して長期に作用する活性を有する、例えば、不活性産物に代謝的にゆっくり分解される。
【００１０】
アスコ−またはラパマイシンは、アスコ−またはラパマイシンそれ自体またはそれらの誘導体であると理解される。誘導体は、基本構造を保持し、親化合物の少なくとも一つの生物学的、例えば、免疫学的特性を調節する、親化合物のアンタゴニスト、アゴニストまたはアナログであると理解される。
【００１１】
適当なアスコマイシン類は、例えばＥＰ１８４１６２、ＥＰ３１５９７８、ＥＰ３２３０４２、ＥＰ４２３７１４、ＥＰ４２７６８０、ＥＰ４６５４２６、ＥＰ４７４１２６、ＷＯ９１／１３８８９、ＷＯ９１／１９４９５、ＥＰ４８４９３６、ＥＰ５２３０８８、ＥＰ５３２０８９、ＥＰ５６９３３７、ＥＰ６２６３８５、ＷＯ９３／５０５９およびＷＯ９７／８１８２に記載のもの；
特に：
−アスコマイシン；
−タクロリムス(ＦＫ５０６；Ｐrograf(登録商標))；
−イミダゾリルメトキシアスコマイシン(ＷＯ９７／８１８２の実施例１および式Ｉの化合物として)；
−３２−Ｏ−(１−ヒドロキシエチルインドール−５−イル)アスコマイシン(Ｌ−７３２５３１)(Transplantation 65 [1998] 10-18, 18-26, 頁1, Figure 1)；および
−(３２−デスオキシ,３２−エピ−Ｎ１−テトラゾリル)アスコマイシン(ＡＢＴ−２８１)(J.Invest.Dermatol. 12 [1999] 729-738, 頁730, Figure 1)；
好ましくは：
−{１Ｒ,５Ｚ,９Ｓ,１２Ｓ−[１Ｅ−(１Ｒ,３Ｒ,４Ｒ)],１３Ｒ,１４Ｓ,１７Ｒ,１８Ｅ,２１Ｓ,２３Ｓ,２４Ｒ,２５Ｓ,２７Ｒ}−１７−エチル−１,１４−ジヒドロキシ−１２−[２−(４−ヒドロキシ−３−メトキシシクロヘキシル)−１−メチルビニル]−２３,２５−ジメトキシ−１３,１９,２１,２７−テトラメチル−１１,２８−ジオキサ−４−アザトリシクロ[２２.３.１.０(４,９)]オクタコス−５,１８−ジエン−２,３,１０,１６−テトラオン(ＥＰ６２６３８５の実施例８)、以後“５,６−デヒドロアスコマイシン”；
−{１Ｅ−(１Ｒ,３Ｒ,４Ｒ)]１Ｒ,４Ｓ,５Ｒ,６Ｓ,９Ｒ,１０Ｅ,１３Ｓ,１５Ｓ,１６Ｒ,１７Ｓ,１９Ｓ,２０Ｓ}−９−エチル−６,１６,２０−トリヒドロキシ−４−[２−(４−ヒドロキシ−３−メトキシシクロヘキシル)−１−メチルビニル]−１５,１７−ジメトキシ−５,１１,１３,１９−テトラメチル−３−オキサ−２２−アザトリシクロ[１８.６.１.０(１,２２)]ヘプタコス−１０−エン−２,８,２１,２７−テトラオン(ＥＰ５６９３３７の実施例６dおよび７１)、以後"ＡＳＤ  ７３２"と呼ぶ；および
−ピメクロリムス(ＩＮＮ推奨)(ＡＳＭ９８１；Ｅlidel(登録商標))、すなわち、式Ｉ
【化２】
0003841682.tif 000003
の{[１Ｅ−(１Ｒ,３Ｒ,４Ｓ)]１Ｒ,９Ｓ,１２Ｓ,１３Ｒ,１４Ｓ,１７Ｒ,１８Ｅ,２１Ｓ,２３Ｓ,２４Ｒ,２５Ｓ,２７Ｒ}−１２−[２−(４−クロロ−３−メトキシシクロヘキシル)−１−メチルビニル]−１７−エチル−１,１４−ジヒドロキシ−２３,２５−ジメトキシ−１３,１９,２１,２７−テトラメチル−１１,２８,ジオキサ−４−アザトリシクロ[２２.３.１.０(４,９)]オクタコス−１８−エン−２,３,１０,１６−テトラオン(ＥＰ４２７６８０の実施例６６a),
以後、“３３−エピクロロ,３３−デスオキシアスコマイシン”と呼ぶ
である。
【００１２】
適当なラパマイシン類は、例えばＵＳＰ３'９２９'９９２、ＷＯ９４／９０１０およびＵＳＰ５'２５８'３８９に記載のもの、好ましくはシロリムス(ラパマイシン；Ｒapamune(登録商標))およびエベロリムス(ＲＡＤ００１；Ｃertican(登録商標))である。
【００１３】
特に好ましいのは、アスコマイシンと組み合わせたアリールメチルアミン抗真菌剤、特に３３−エピクロロ,３３−デスオキシアスコマイシンと組み合わせたテルビナフィンを含む、本発明の組成物である。
【００１４】
炎症が関与する状態の処置における使用に好ましいのは、３３−エピクロロ,３３−デスオキシアスコマイシンと組み合わせたナフチフィンまたはテルビナフィンのような、１個または両方の成分がある程度の固有の抗炎症性活性を有する、本発明の組成物である。
【００１５】
本発明で使用する“処置”は、予防、すなわち、予防法としてのおよび治療的処置を含む。
【００１６】
相乗効果は、例えば下記実施例１またはBerenbaum, Clin. Exp. Immunol. 28 (1977) 1に記載のように、Chou et al., Transpl. Proc. 26 (1994) 3043に記載のような二つの医薬の間の機構における差異を補正する相互作用項を使用して計算する。相乗効果の指数は：
【数１】
0003841682.tif 000004
(式中、ＡおよびＢの特定の組合せに使用するもの、およびＡＥおよびＢＥは、同じ効果を与えるＡおよびＢの個々の投与量である)として計算する。結果が１より小さい場合、相乗効果がある；結果が１である場合、効果は相加的である；結果が１より大きい場合、ＡおよびＢは拮抗的である。Ａ／ＡＥの投与量対Ｂ／ＢＥの投与量のアイソボログラムをプロットすることにより、最大相乗効果を決定できる。アイソボログラムに沿った相乗的量、特に、最大相乗効果の近くあたはその点での二つの組成物の重量比の観点で示す相乗的比率を、ついで二つの化合物の最適相乗作用比を含む製剤の決定に使用できる。
【００１７】
本発明はまたスクアレンエポキシダーゼ阻害剤、例えばテルビナフィンおよびマクロライドＴ−細胞免疫調節剤または免疫抑制剤、例えば３３−エピクロロ,３３−デスオキシアスコマイシンまたは５,６−デヒドロアスコマイシンを、相乗効果的に有効な投与量で共投与するための製品および方法、例えば：
−本発明の組成物の相乗作用的有効量を共投与することを含む、このような感染または状態に罹患している、または危険性を有する対象における真菌感染が関与するまたは真菌感染が疑われる疾患の処置法、または真菌または擬似真菌の住み着きが関与する、または真菌耐性の状況の、免疫調節または免疫抑制法；
−マクロライドＴ−細胞免疫調節剤または免疫抑制剤と相乗作用的有効量で共投与するための医薬の製造における、スクアレンエポキシダーゼ阻害剤の使用；
−スクアレンエポキシダーゼ阻害剤と相乗作用的有効量で共投与するための医薬の製造におけるマクロライドＴ−細胞免疫調節剤または免疫抑制剤の使用；
−使用指示書と共に、所望により成分化合物の投与の承諾を促進するための更なる手段、例えば、ラベルまたは図と共に、スクアレンエポキシダーゼ阻害剤およびマクロライドＴ−細胞免疫調節剤または免疫抑制剤を別々の単位投与形で含み、好ましくは単位投与形は相乗作用的有効量の成分化合物の投与に適する、キット剤；
−マクロライドＴ−細胞免疫調節剤または免疫抑制剤との共投与を促進するために使用する医薬キットの製造における、スクアレンエポキシダーゼ阻害剤の使用；
−スクアレンエポキシダーゼ阻害剤との共投与を促進するために使用する医薬キットの製造における、マクロライドＴ−細胞免疫調節剤または免疫抑制剤の使用；
−好ましくは相乗作用的有効量の、例えば真菌感染の処置または予防のための、または真菌または擬似真菌の住み着きが役割を担う状態における免疫調節または免疫抑制のための、同時の、別々のまたは連続的使用のための組合せ医薬製剤としての、スクアレンエポキシダーゼ阻害剤およびマクロライドＴ−細胞免疫調節剤または免疫抑制剤；
−少なくとも一つの薬学的に許容される希釈剤または担体と共に、マクロライドＴ−細胞免疫調節剤または免疫抑制剤と組み合わせたまたは関連させたスクアレンエポキシダーゼ阻害剤を、例えば、相乗作用的有効量で含む、例えば真菌感染の処置または予防のための、または真菌または擬似真菌の住み着きが役割を担う状態、または真菌耐性の状況における免疫調節または免疫抑制のための、医薬組成物；および
−スクアレンエポキシダーゼ阻害剤およびマクロライドＴ−細胞免疫調節剤または免疫抑制剤を、少なくとも一つの薬学的に許容される希釈剤または担体と組み合わせてまたは関連させて混合することを含む、本発明の医薬組成物の製造法
を提供する。
【００１８】
“相乗作用的有効量”は、個々に関連する適応症のための各々の有効量よりも少ないが、共投与で、例えば、上記のように計算して、例えば、相乗作用的比で薬学的に活性である、スクアレンエポキシダーゼ阻害剤の量およびマクロライドＴ−細胞免疫調節剤または免疫抑制剤の量を意味する。更に、“相乗作用的有効量”は、各々関連する適応症の投与量と個々に等しく、相加効果以上のものをもたらす、スクアレンエポキシダーゼ阻害剤の量およびマクロライドＴ−細胞免疫調節剤または免疫抑制剤の量を意味し得る。
【００１９】
存在するスクアレンエポキシダーゼ阻害剤のモル量は、おおよそマクロライドＴ−細胞免疫調節剤または免疫抑制剤の量と等しいか、明らかに多く、好ましくは２倍以上である。スクアレンエポキシダーゼ阻害剤のマクロライドＴ−細胞免疫調節剤または免疫抑制剤に対する相乗作用比は、重量で約１：１０から約５０：１、好ましくは約１：５から約２０：１、最も好ましくは約１：１から約１５：１、例えば約１２：１である。
【００２０】
本発明の組成物は、自由な組合せとして投与でき、または医薬を固定組合せに調剤でき、これは患者に対する利便性を非常に改善する。
【００２１】
化合物の正確な投与量は、多くの因子、例えば、個体、投与経路、所望の期間、活性剤の放出速度、および処置する状態の性質および重症度に依存して変化する。例えば、必要な活性剤の量およびそれらの放出速度は、血漿における特定の活性剤濃度が、どれだけ長く治療効果のために許容されるレベルで残るかを測定する、既知のインビトロおよびインビボ法に基づいて、決定し得る。
【００２２】
例えば、真菌または擬似真菌感染の予防および処置において、維持投与量の約２−３倍の初期投与量を適当には投与し、続いて、維持投与量の約２−３倍の一日投与量を１から２週間の間投与し、続いて投与量を約５％／週の割合で維持投与量に到達するまで徐々に漸減させる。一般に、テルビナフィンおよび３３−エピクロロ,３３−デスオキシアスコマイシンの、大型哺乳類、例えばヒトにおける真菌疾患の予防および処置に使用するための経口投与の相乗作用的有効量は、上記のように相乗作用比で、約２mg／kg／日まで、例えば約０.０１mg／kg／日から約２mg／kg／日、好ましくは約０.５mg／kg／日の３３−エピクロロ,３３−デスオキシアスコマイシンと共投与または組み合わせた、約５０mg／kg／日まで、例えば約０.２５mg／kg／日から約５０mg／kg／日、好ましくは約２.５mg／kg／日テルビナフィンである。これらの化合物の経口共投与のための適当な単位投与量は、約１０mgから約３０００mg、好ましくは約５０mgから約５００mgのテルビナフィンおよび約０.５mgから約１００mg、好ましくは約３mgから約３０mgの３３−エピクロロ,３３−デスオキシアスコマイシンの程度を含み得る。経口投与用の一日投与量は、好ましくは１回量で摂取するが、１日あたり２回、３回または４回に分け得る。i.v.投与のために、有効投与量は経口投与で必要なものより低く、例えば経口投与量の約５分の１である。
【００２３】
“共投与”は、本発明の組成物の、一緒の、または実質的に同時の、例えば、１５分以内またはそれ以下の、同じ媒体または異なる媒体中の投与を意味し、経口投与により、例えば、両方の成分が胃腸管に同時に存在する。好ましくは、化合物を固定組合せで投与する。
【００２４】
本発明の組成物は、任意の慣用経路による投与に適した組成物を含む
特に、飲用溶液、錠剤またはカプセルの形の経腸的、例えば、経口、または例えば、注射用溶液または懸濁液の形の非経腸的な；または、例えば約０.１重量％から約２重要％の各成分濃度の、特に、浸透促進剤と組み合わせたまたは関連させた、例えば皮膚クリーム、軟膏、点耳法、ムース、シャンプー、溶液、ローション、ジェル、エマルゲル（emulgel）等の製剤の形の、例えば皮膚または粘膜の真菌状態を処置するための、ならびに、例えば、眼用クリーム、ジェルまたは点眼製剤の形の、眼への適用のための、肺および気道の真菌または擬似真菌状態の処置のための、例えば、吸入用組成物の形の、および例えば、膣用錠剤の形の、粘膜適用のための、局所的な適用に適している。
【００２５】
本発明の組成物は、適当には、スクアレンエポキシダーゼ阻害剤およびマクロライドＴ−細胞免疫調節剤または免疫抑制剤を相乗作用的比で含む、エマルジョン、マイクロエマルジョン、エマルジョン前濃縮物またはマイクロエマルジョン前濃縮物、または固体分散剤、特に、油中水型マイクロエマルジョン前濃縮物または水中油型マイクロエマルジョンである。
【００２６】
本発明の組成物は、慣用法で、例えばスクアレンエポキシダーゼ阻害剤およびマクロライドＴ−細胞免疫調節剤または免疫抑制剤を、少なくとも一つの薬学的に許容される希釈剤または担体と組み合わせてまたは関連させて混合することにより製剤できる。
【００２７】
活性成分は、遊離形または適当な場合、薬学的に許容される塩形であり得る。
【００２８】
以下の実施例は本発明を説明する。全ての温度は摂氏である。化合物は、特記しない限り遊離形、すなわち中性または塩基性形である。以下の略語を使用する：
ＢＳＡ＝ウシ血清アルブミン
cfu＝コロニー−形成単位
ＦＫＢＰ１２＝ＦＫ−結合タンパク質１２
ＭＩＣ＝最小阻害濃度
ＭＯＰＳ＝３−(Ｎ−モルホリノ)プロパンスルホン酸
【００２９】
実施例１：酵母(Ｃandida)における相乗作用
組合せ試験は、Ｃandida種で、下記のように修飾したＮＣＣＬＳ標準アッセイ(National Committee for Clinical Laboratory Standards [1995], Reference method for broth dilution antifungal susceptibility testing of yeasts (Tentative Standard M27-T, NCCL, Villanova, Pa, USＡ)を使用して行なう：アッセイを、ＮaＨＣＯ３を含まないが、ＭＯＰＳでpＨ  ７.０に緩衝化されたＬ−グルタミンを含むＲＰＭＩ  １６４０培地で、３７°で行なう。接種は２.５×１０３cfu／mlである。インキュベーション時間は４８時間である。ＭＩＣは、真菌生育の８０％阻害をもたらす最低医薬濃度として定義する。
【００３０】
参照試験化合物(テルビナフィンまたはフルコナゾールのいずれか)を、完全濃度範囲で、１、２、４および８μg／mlの濃度の他の試験薬の非存在下または存在下で試験する。
医薬の間の相互作用を：
FICI=[(組合せにおけるMIC A)/MIC A]+[組合せにおけるMIC B]/MIC B]
と定義のフラクショナル・インヒビトリー・コンセントレーション・インデックス(ＦＩＣＩ)の計算により分析する。
【００３１】
二つの医薬の間の相互作用の観点からのＦＩＣＩの解釈は下記の通りである：ＦＩＣＩ＝０.５：相乗効果；＜０.５＜ＦＩＣＩ＝１：相加的；１＜ＦＩＣＩ＝２：無関係；２＜ＦＩＣＩ：拮抗(実際的な観点から、この定義による相乗効果は、両方の医薬のＭＩＣが、組み合わせて使用した場合、少なくとも２希釈段階まで減少することを意味する)。
【００３２】
４つの試験化合物、３３−エピクロロ,３３−デスオキシアスコマイシン、５,６−デヒドロアスコマイシン、アスコマイシンおよびタクロリムスが、テルビナフィンおよびフルコナゾールの抗真菌剤活性影響する能力を、両方の医薬に感受性のＣandida albicans単離株および、テルビナフィンに耐性であり、フルコナゾールにほとんど感受性ではないＣandida kruseiの一つの単離株で試験した。試験化合物単独は、両方の株に完全に不活性である。表は得られた相互作用のパターンを要約する：
【表１】
0003841682.tif 000005
aこの記号は、本実施例で記載するような、ＦＩＣＩ値の解釈に関する、および意味：(＊：相乗効果；＋：相加的；−：無関係／拮抗)
【００３３】
参照化合物としてのテルビナフィンでは、全４種の試験化合物はＣandida albicansに対して強力な相互作用を示すが、アスコマイシンおよびタクロリムスは、テルビナフィンとＣandida kruseiに対して協力に相乗的であり、３３−エピクロロ,３３−デスオキシ−アスコマイシンおよび５,６−デヒドロアスコマイシンはまた強くポジティブである。異なるパターンがフルコナゾールで見られ、それは相乗効果は見られず、多くの例で拮抗的である。
【００３４】
実施例１a：皮膚糸状菌(Ｍicrosporum canis)における相乗作用
皮膚糸状菌に対する最小阻害濃度(ＭＩＣ)を、９６−ウェルアッセイトレイで、ＮＣＣＬＳ微量希釈法Ｍ３８−Ｐ(National Committee for Clinical Laboratory Standards, Reference method for broth antifungal susceptibility testing of conidium-forming filamentous fungi; NCCLS document M38-P; NCCLS, Wayne, PＡ, USＡ [1998])の修飾で、H.A. Norris et al., J.Am.Acad.Dermatol. 40 [1999] S9-S13)に詳述のように試験する。ＭＩＣは、真菌生育の８０％阻害をもたらす最低医薬濃度として定義する。
【００３５】
組合せ試験は、必要な濃度範囲内の二つの医薬の全ての可能な投与量組合せのマトリックスを提供するための、上記アッセイを使用したチェッカーボードデザインにおいて行なう。マトリックス構造は、アッセイに使用するためのマイクロタイタートレイにより提供される。テルビナフィン希釈シリーズをy軸(縦列)およびパートナー医薬をx軸(横軸)に配置する。各横軸において、ウェル１番は無菌コントロール（sterility control）を含み、２番はテルビナフィン塩酸塩を含み、ウェル３番から１１番は、パートナー医薬３３−エピクロロ,３３−デスオキシアスコマイシンの希釈シリーズを含み、ウェル１２番は生育コントロールを含む。各縦列において、ウェルＡはパートナー医薬単独を含み、ウェルＢからＨは、テルビナフィン塩酸塩の希釈シリーズを含む。
【００３６】
二つの医薬の間の相互作用の性質を、以下の式：
FICI=[(組合せにおけるMIC A)/MIC A]+[(組合せにおけるMIC B)/MIC B]
から計算される、フラクショナル・インヒビトリー・コンセントレーション・インデックス(ＦＩＣＩの手段により、定量的に定義する。
【００３７】
ＦＩＣＩの解釈は：
＜０.５：相乗効果；
＞０.５であるが＜１：相加的；
＞１であるが＜２：無関係；
＞２：拮抗
である。
【００３８】
実際には、この方法で計算された相乗効果は、それらを組み合わせた場合の各医薬のＭＩＣの少なくとも２希釈段階の減少と等しい。
【００３９】
Ｍicrosporum canis(ＮＦＩ  ５１６７株)で得られた結果を表２に示す：
【表２】
0003841682.tif 000006
【００４０】
実施例２：錠剤
固体分散の形の造粒テルビナフィン塩酸塩および３３−エピクロロ,３３−デスオキシアスコマイシンの経口使用のための錠剤を、６００mg投与量で、慣用法により製造し、下記成分を含む：
【表３】
0003841682.tif 000007
【００４１】
実施例３：クリーム
溶解させたテルビナフィン塩基のクリームを、３３−エピクロロ,３３−デスオキシアスコマイシンと、両方とも１％w／w濃度で慣用法で製剤し、以下の成分を含む：
【表４】
0003841682.tif 000008
【００４２】
実施例４：軟膏
懸濁形のテルビナフィン塩酸塩および３３−エピクロロ,３３−デスオキシアスコマイシンを、慣用法で、１％w／w濃度で製剤し、以下の成分を含む：
【表５】
0003841682.tif 000009
【００４３】
実施例５：膣錠
造粒テルビナフィン塩酸塩および３３−エピクロロ,３３−デスオキシアスコマイシンの膣使用のための錠剤を、１６００mg投与量で製剤し、以下の成分を含む：
【表６】
0003841682.tif 000010
【００４４】
実施例２から５のテルビナフィンを、モル等量のトルナフテート、トルシクレート、ナフチフィンまたはブテナフィンと置き換え得る。
【００４５】
実施例２から５の３３−エピクロロ,３３−デスオキシアスコマイシンを、モル等量のアスコマイシン、タクロリムス、イミダゾリルメトキシアスコマイシン、３２−Ｏ−(１−ヒドロキシエチルインドール−５−イル)アスコマイシン、(３２−デスオキシ,３２−エピ−Ｎ１−テトラゾリル)アスコマイシン、５,６−デヒドロアスコマイシン、ＡＳＤ  ７３２、シロリムスまたはエベロリウムスと置き換え得る。