(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
炭素数５〜炭素数１２のジカルボン酸から選択される１種もしくは２種以上の化合物と、エチレンジアミン四酢酸のナトリウム塩、リン酸、クエン酸、コハク酸、グルコン酸、ポリリン酸ナトリウム、及びメタリン酸ナトリウムから選択される１種もしくは２種以上の化合物とを有効成分として含有する皮膚炎症性潰瘍の治癒剤。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明が属する技術分野】
本発明は、結合組織の構成タンパク質であるコラーゲンを特異的に切断し、皮膚の老化，骨粗しょう症等の代謝性疾患，炎症性疾患，リューマチ関節炎，骨関節炎等の関節性疾患などの緩和，治療に副作用なく安全に使用し得るコラゲナーゼ阻害剤に関する。さらに詳しくは、ジカルボン酸或いはこれと金属キレート剤を含有して成るコラゲナーゼ阻害剤に関する。
【０００２】
【従来の技術】
コラーゲンは動物の結合組織を構成する主要タンパク質であり、種々の組織においてＩ型〜ＸIII型の１３種類の存在が知られている。コラゲナーゼは、かかるコラーゲンタンパク質を特異的に切断する酵素であり、加齢や紫外線による皮膚のしわの発生や粘弾性の低下、骨粗しょう症等の代謝性疾患、表皮水疱症，角膜潰瘍，歯根病等の炎症性疾患、リューマチ関節炎，骨関節炎等の関節性疾患など、実に幅広く多くの疾患に関与する。
【０００３】
従って、コラゲナーゼ活性を阻害することにより、上記のような疾患を緩和或いは治療する試みが多くなされており、コラゲナーゼ阻害剤として、羊膜由来物質（特開平６−３４５６３６），ソバ殻タンパク質抽出物（国際公開９４２０５４１），ケイガイ，ハッカ抽出物（特開平６−１８３９９０），水溶性糖誘導体（特開平６−１８３９４１），ラクトフェリン（特開平５−１８６３６８），コーヒー酸又はその塩（特開平５−１１７１４５），アスコルビン酸，エリソルビン酸及びこれらの塩の混合物（特開平４−２９０８１９），アセチルポリアミド（フランス国特許２６６９６２９），ガロタンニン（特開平４−６６５２４），κ-カゼイン（特開平４−４１４１７），カカオ殻の抽出物（特開平３−４４３３１），ヒドロキサム酸テトラペプチド（特開平１−１６０９９７），1,3-ビス-置換-ナフチルアミノカルボニルフェニル尿素誘導体（特公昭６３−８１０１）などが開示されている。
【０００４】
また、コラゲナーゼは金属プロテアーゼであるため、ディフェロキサミン（deferoxamine），エチレンディアミン四酢酸（ethylenediamine tetraacetic acid，ＥＤＴＡ）塩，酒石酸，クエン酸等の金属キレート剤もコラゲナーゼ阻害剤として用いられる。
【０００５】
しかしながら、少量で高い阻害活性を示し、しかも副作用が少なくさらに安定性の高いコラゲナーゼ阻害剤としては、いまだに満足なものが得られていないのが現状である。
【０００６】
【発明が解決しようとする課題】
そこで、本発明は少量の適用で高いコラゲナーゼ阻害活性を示し、しかも副作用がなく安全で、さらに種々の製剤基剤中で安定性が高く、いろいろな剤型の医薬品や化粧料等に応用することのできるコラゲナーゼ活性阻害剤を得ることを目的とする。
【０００７】
【課題を解決するための手段】
上記の課題を解決するため、種々の物質のコラゲナーゼ阻害活性をスクリーニングした結果、ジカルボン酸類がやはり金属キレート作用を有し、しかも生体に対する作用が穏和で副作用がほとんどなく、また種々の形態の基剤中で安定であることを見い出し、本発明を完成するに至った。
【０００８】
本発明においては、ジカルボン酸より１種又は２種以上を選択して基剤に配合する。ジカルボン酸としては、グルタル酸，アジピン酸，ピメリン酸，スベリン酸，アゼライン酸，セバシン酸，1,9-ノナメチレンジカルボン酸，1,10-デカメチレンジカルボン酸の炭素数５〜１２の飽和二塩基酸が特に好ましい。配合量としては、製剤全量に対して０．０１重量％〜１０．０重量％程度が適当である。
【０００９】
また、ジカルボン酸の１種又は２種以上に加えて金属キレート剤の１種又は２種以上を併用すると、コラゲナーゼ阻害活性が相乗的に増強される。金属キレート剤としては、ディフェロキサミン（deferoxamine），エチレンジアミン四酢酸（ethylenediamine tetraacetic acid，ＥＤＴＡ）のナトリウム塩，リン酸，クエン酸，アスコルビン酸，コハク酸，グルコン酸，ポリリン酸ナトリウム，メタリン酸ナトリウム等が挙げられ、これらより１種又は２種以上を選択して配合する。
【００１０】
【作用】
本発明のコラゲナーゼ阻害剤は、少量の添加で優れたコラゲナーゼ阻害作用を示し、且つ生体に対する作用が穏和で、製剤中における安定性にも優れる。その結果、本発明のコラゲナーゼ阻害剤の適用により、加齢や紫外線による皮膚のしわの発生や粘弾性の低下、骨粗しょう症等の代謝性疾患、表皮水疱症，角膜潰瘍，歯根病等の炎症性疾患、リューマチ関節炎，骨関節炎等の関節性疾患などを緩和或いは治療することができ、また、創傷の治癒をも促進する。
【００１１】
一例として、アゼライン酸のコラゲナーゼ阻害作用について以下に示す。コラゲナーゼを最終濃度で０〜１５μg/ml含む水溶液に、アゼライン酸を最終濃度が８mM及び１６mMとなるように加え、次いでフルオレセインイソチオシアネート（ＦＩＴＣ）標識を行ったコラーゲンを最終濃度４０μg/mlとなるように加えて、３７℃で１時間インキュベーションした。エタノール添加により酵素反応を停止させた後、未反応のＦＩＴＣ標識コラーゲンを除去するため遠心分離を行い、上清中の蛍光強度を励起波長４９５nm，蛍光波長５２０nmで測定した。アゼライン酸を含まない溶媒のみを添加した系についても同様に蛍光強度を測定し、対照とした。結果は表１に示す。
【００１２】
【表１】
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表１には、式（１）により求めたコラゲナーゼ阻害率を併記した。これより、アゼライン酸はコラゲナーゼによるＦＩＴＣの遊離に対して、８mMで４８〜５８％程度、１６mMで２８〜３１％程度まで抑制することが示された。すなわち、コラゲナーゼ阻害率はアゼライン酸の濃度に依存して増加し、８mMで４１．５〜５２．３、１６mMで６８．９〜７１．８％となった。
【数１】
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【００１３】
【発明の実施の形態】
本発明に係るコラゲナーゼ阻害剤は、粉末状，水性懸濁液，アルコール等の極性有機溶媒を含む水性基剤に可溶化した形態或いは乳剤の形態で提供でき、食品，飲料，医薬品，化粧料等に添加，配合して用いることができる。食品においては、油脂製品や乳化製品、清涼飲料等に添加することができる。医薬品では、経口製剤，注射剤，皮膚外用剤等への添加が考えられる。化粧料としては、化粧水，乳液，クリーム等の他、洗口剤など口腔用組成物への添加も可能である。
【００１４】
【実施例】
さらに本発明の特徴について、実施例により詳細に説明する。まず、本発明の実施例１〜実施例３として、含エタノール水性製剤タイプのコラゲナーゼ阻害剤について表２に示す。表２中、ジカルボン酸をエタノールに溶解し、キレート剤を溶解した精製水と混合，可溶化して調製する。
【表２】
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【００１５】
表３には、乳剤タイプのコラゲナーゼ阻害剤である実施例４〜実施例６の処方を示した。表３中、油相にジカルボン酸を添加して７５℃に加熱して溶解，均一化する。一方、水相にキレート剤を添加して加熱，溶解して７５℃に保ち、これに前記油相成分を徐々に添加して乳化した後、冷却して調製する。
【表３】
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【００１６】
表４には、クリームタイプのコラゲナーゼ阻害剤である実施例７〜実施例９の処方を示した。表４中、油相にジカルボン酸を添加して７５℃に加熱して溶解，均一化する。一方、水相にキレート剤を添加して加熱，溶解して７５℃に保ち、これに前記油相成分を徐々に添加して乳化した後、冷却して調製する。
【表４】
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【００１７】
上記の本発明の実施例について、炎症性潰瘍に対する治癒効果を評価した。マウス５匹を１群とし、背部に界面活性剤処理により炎症性潰瘍を生じさせた。この部位に試料を１日２回０．５gずつ７日間塗布し、７日後の潰瘍の治癒状況を観察した。治癒状況は「完全治癒」，「ほぼ治癒」，「治癒不完全」の３段階にて評価し、各評価を得たマウスの数を示した。なお、表２〜表４において、ジカルボン酸をガロタンニンに、キレート剤としてアスコルビン酸を用いたものをそれぞれ比較例１〜比較例３とした。
【００１８】
また、製剤を２５℃で３カ月間保存した際の安定性及び皮膚刺激性についても評価した。保存安定性は「○；状態の変化は認められない」，「△；変退色或いは成分の分離が若干認められる」，「×；変退色或いは成分の分離が顕著に認められる」として評価し、皮膚刺激性は男性パネラー２０名による４８時間閉塞貼付試験により、表５に示す判定基準に従って皮膚刺激指数を求め、２０名の平均値を算出して評価した。以上の結果は表６にまとめて示した。
【表５】
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【００１９】
【表６】
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表６より、本発明の実施例塗布群においては、いずれも皮膚潰瘍の治癒傾向が認められ、治癒が不完全なマウスは見られなかった。特に実施例８及び実施例９塗布群で良好な治癒を認めた。これに対し、比較例塗布群では完全治癒を認めたマウスはなく、ほぼ半数のマウスにおいて治癒が不完全であった。
【００２０】
また、本発明の実施例については、３カ月経過後においても、いずれも製剤の状態に変化は認められなかった。これに対して、比較例ではすべてに変色が認められた。皮膚刺激性についても、エタノールを５０重量％配合する実施例１〜実施例３で若干皮膚刺激指数は高くなっているが、それでも実用的には全く問題のない程度であった。一方、比較例ではいずれも各実施例に比べて皮膚刺激指数は有意に高い結果となった。
【００２１】
【発明の効果】
以上詳述したように、本発明により、安定性及び安全性に優れ、良好な阻害活性を有するコラゲナーゼ阻害剤を提供することができた。