(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
ポストカラム誘導体化高速液体クロマトグラフ法において、ポストラベル反応試薬としてヒドララジン又はその誘導体を用いて、試料中のアルデヒド類とヒドララジン又はその誘導体を反応させ、該アルデヒド類の含有量を測定することを特徴とするアルデヒド類の測定方法。
【請求項２】
アルデヒド類とヒドララジン又はその誘導体との反応が、１２０℃以上で行われる請求項１に記載のアルデヒド類の測定方法。
【請求項３】
アルデヒド類が、ホルムアルデヒドである請求項１又は請求項２に記載のアルデヒド類の測定方法。
【請求項４】
移動相供給装置、試料注入装置、分離カラム、反応試薬供給装置、検出器、及びデータ処理装置からなるポストカラム誘導体化高速液体クロマトグラフ法に使用する測定装置において、反応試薬供給装置がヒドララジン又はその誘導体の収容部を配設したこと、分離カラム及び反応試薬供給装置の連結部と検出器の間に加熱反応管を配設したこと、並びに検出器の下流に排圧調整器を配設したことを特徴とするアルデヒド類の測定装置。
【請求項５】
加熱反応管の長さが、１乃至４０ｍである請求項４に記載のアルデヒド類の測定装置。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は、飲料水、食品、又は化粧品（石鹸、シャンプーを含む。）中に含まれるホルムアルデヒドに代表されるアルデヒド類の簡便、かつ高感度の測定方法、及びその測定装置に関する。
【０００２】
更に詳しくは、本発明は、ポストカラム誘導体化高速液体クロマトグラフ法において、ポストラベル反応試薬としてヒドララジン又はその誘導体を用いて、試料中のアルデヒド類とヒドララジン又はその誘導体を反応させ、該アルデヒド類の含有量を測定することを特徴とするアルデヒド類の測定方法、並びに移動相供給装置、試料注入装置、分離カラム、反応試薬供給装置、検出器、及びデータ処理装置からなるポストカラム誘導体化高速液体クロマトグラフ法に使用する測定装置において、反応試薬供給装置がヒドララジン又はその誘導体の収容部を配設したこと、分離カラム及び反応試薬供給装置の連結部と検出器の間に加熱反応管を配設したこと、並びに検出器の下流に排圧調整器を配設したことを特徴とするアルデヒド類の測定装置に関するものである。
【０００３】
【従来の技術】
従来、ホルムアルデヒドに代表されるアルデヒド類の測定方法としては、ガスクロマトグラフ法［日本薬学会編、「衛生試験法・注解１９９０」、第１７９２乃至１７９４頁、金原出版、１９９０年（以下、この出版物を文献１と記載する。）］、アセチルアセトン、４−アミノ−３−ヒドラジノ−５−メルカプト−１，２，４−トリアゾール等の各種発色試薬を用いる方法（文献１第１０８乃至１１０頁）、及びポストラベル反応試薬としてアセチルアセトン又はその誘導体を用いたポストカラム誘導体化高速液体クロマトグラフ法［文献１第１７１９乃至１７２１頁。アナリティカル・ケミストリー（Analytical Chemistry）、第６２巻、第１４号、第１３９７乃至１４０２頁、１９９０年（以下、文献２と記載する。）］等が知られている。
【０００４】
また、反応試薬としてヒドララジンを用いて大気圧下の沸騰浴中（いわゆる１００℃）で反応し、プレラベルした試料中のホルムアルデヒドを高速液体クロマトグラフ法により測定する方法［エレルメンゼシ・アイパ（Elelmezesi Ipar ）、第４９巻、第９号、第２７５乃至２８０頁、１９９５年（以下、文献３と記載する。）。アクタ・アリメンラリア（Acta Alimenraria）、第２５巻、第３号、第２９１乃至２９８頁、１９９６年（以下、文献４と記載する。）］が報告されている。
【０００５】
しかしながら、これらの従来技術には、次に記載するとおりの不都合があった。
【０００６】
【発明が解決しようとする課題】
前記従来の技術に開示されているとおり、各種のアルデヒド類の測定方法が開発されていた。しかしながら、従来のアルデヒド類の測定方法の内、ガスクロマトグラフ法は、文献１に記載されるとおり定量下限は１μｇ／ｌ（１ｐｐｂ）であり、本発明の測定方法と比較して、定量下限の点では同等であるが、夾雑物の影響を受け易く、試料をヘキサン等による抽出操作等の前処理に付す必要性があり、操作が繁雑であるという問題点があった。また、各種発色試薬を用いる方法は、アルデヒド類と発色試薬との反応により生じる反応物質の色調、蛍光性等と同様の色調、蛍光性等を有する夾雑物を含む試料に対しては、正確な測定が行えないという問題点があった。更に、文献１及び文献２に記載されるとおり、各種発色試薬を用いる方法の問題点を、アルデヒド類と夾雑物を予め高速液体クロマトグラフ法により分離し、のちアルデヒド類と反応試薬であるアセチルアセトンとを反応することにより解決した方法として、ポストカラム誘導体化高速液体クロマトグラフ法が開発されているが、この方法は、本発明の測定方法と比較して、定量下限が約４００ｐｐｂであり、いわゆる感度が悪いという問題点があった。
【０００７】
また、文献３及び文献４に記載されるとおり、反応試薬としてヒドララジンを用いて大気圧下の沸騰浴中（いわゆる１００℃）で反応し、プレラベルした試料中のホルムアルデヒドを高速液体クロマトグラフ法で測定する方法は、夾雑物が存在するとヒドララジンとアルデヒドの定量的な反応が妨害されることから、予め夾雑物を除去し、のちプレラベルする必要性があり、操作が繁雑であり、更に、予め夾雑物の除去操作を行った場合も、本発明の測定方法と比較して、定量下限が５．０ｎｇ／ｇ（いわゆる５ｐｐｂ）であり、いわゆる感度が劣るという問題点があった。
【０００８】
本発明者らは、前記従来技術に鑑みて、ポストカラム誘導体化高速液体クロマトグラフ法を基礎として、これを改良し、アルデヒド類の簡便かつ高感度の測定方法を開発することを目的とし、種々の反応試薬について試験した。その結果、ポストカラム誘導体化高速液体クロマトグラフ法において、ポストラベル反応試薬としてヒドララジン又はその誘導体を用いて、試料中のアルデヒド類とヒドララジン又はその誘導体を反応させ、該アルデヒド類の含有量を測定することが、従来技術に比較して、簡便かつ高感度でアルデヒド類を測定できること、及びポストカラム誘導体化高速液体クロマトグラフ法に使用する測定装置において、反応試薬供給装置がヒドララジン又はその誘導体の収容部を配設し、分離カラム及び反応試薬供給装置の連結部と検出器の間に加熱反応管を配設し、並びに検出器の下流に排圧調整器を配設した測定装置がアルデヒド類の簡便、かつ高感度の測定に好適な装置であることを見い出し、本発明を完成した。
【０００９】
本発明の目的は、新規なアルデヒド類の測定方法及びその測定装置を提供することである。
【００１０】
【課題を解決するための手段】
前記課題を解決する本発明の第一の発明は、ポストカラム誘導体化高速液体クロマトグラフ法において、ポストラベル反応試薬としてヒドララジン又はその誘導体を用いて、試料中のアルデヒド類とヒドララジン又はその誘導体を反応させ、該アルデヒド類の含有量を測定することを特徴とするアルデヒド類の測定方法であり、アルデヒド類とヒドララジン又はその誘導体の反応が、１２０℃以上で行われること（以下、態様１と記載する。）、及びアルデヒド類が、ホルムアルデヒドであること（以下、態様２と記載する。）を望ましい態様としてもいる。
【００１１】
前記課題を解決する本発明の第二の発明は、移動相供給装置、試料注入装置、分離カラム、反応試薬供給装置、検出器、及びデータ処理装置からなるポストカラム誘導体化高速液体クロマトグラフ法に使用する測定装置において、反応試薬供給装置がヒドララジン又はその誘導体の収容部を配設したこと、分離カラム及び反応試薬供給装置の連結部と検出器の間に加熱反応管を配設したこと、並びに検出器の下流に排圧調整器を配設したことを特徴とするアルデヒド類の測定装置であり、加熱反応管の長さが、１乃至４０ｍであること（以下、態様３と記載する。）を望ましい態様としてもいる。
【００１２】
【発明の実施の形態】
次に、本発明の第一の発明について詳細に説明する。
【００１３】
本発明の測定方法の基礎となるポストカラム誘導体化高速液体クロマトグラフ法とは、文献１及び文献２に記載されるとおり、測定対象物（アルデヒド類等）と夾雑物を予め高速液体クロマトグラフ法により分離し、のち測定対象物とポストラベル反応試薬を反応させ、反応物質（発色物質、蛍光物質等）を検出し測定する方法である。
【００１４】
ポストラベル反応試薬は、測定対象物と反応し、反応物質（発色物質、蛍光物質等）を生成する物質であるが、本発明の測定方法においては、文献３及び文献４に記載されるヒドララジン（1-hydrazinophthalazine）又はその誘導体であることを特徴とする。
【００１５】
ヒドララジン又はその誘導体は、アルデヒド類と反応して蛍光物質を生成することから、アルデヒド類を測定をすることができる。例えば、ヒドララジンとホルムアルデヒドが反応した場合、文献４に記載されるとおり、蛍光物質であるトリアゾロフタラジン［triazolo(3,4-a)phthalazine（以下、Tri-P と記載する。）］が生成する。
【００１６】
本発明の測定方法に使用されるヒドララジンは、市販のヒドララジン塩酸（和光純薬工業社製）等を使用することができる。
【００１７】
また、ヒドララジンの誘導体は、ヒドララジンとアルデヒド類の本質的な反応に影響しないフタラジン(phthalazine）骨格の４、５、６、７、又は８位にハロゲン、ニトロ基、アルキル基、水酸基、カルボキシル基、アルコキシル基等の置換基を有するヒドララジンの誘導体を使用することができる。
【００１８】
本発明の測定方法に使用されるヒドララジンは、アルデヒド類との反応効率を考慮してｐＨ２乃至９、特にｐＨ３乃至７、のリン酸緩衝液に溶解して使用することが望ましく、ヒドララジンの濃度は０．０５乃至１０ｍＭ、特に０．１乃至１ｍＭであることが望ましい。
【００１９】
本発明の測定方法の測定対象である飲料水、食品、又は化粧品（石鹸、シャンプーを含む。）中に含まれるアルデヒド類は、例えば、代表的なアルデヒド類であるホルムアルデヒド、酸性条件でホルムアルデヒドを生成するホルムアルデヒド−亜硫酸水素ナトリウム付加体、及びイミン（シッフ塩基）等である。
【００２０】
本発明の測定方法によれば、後記する図２に示すとおり、アルデヒド類の注入量として０．１乃至１０ｎｇの範囲で良好な直線性を有する検量線が得られる。尚、本発明の測定方法によるアルデヒド類の検出限界は３０ｐｇである。
【００２１】
従って、本発明の測定方法によれば、アルデヒド類を含有する試料の高速液体クロマトグラフ装置への注入容積等を変更するにより、アルデヒド類を、１ｐｐｂ（１ｎｇ／ｍｌ）乃至１００ｐｐｍ（１００μｇ／ｍｌ）の範囲で定量的に測定することが可能となる。
【００２２】
また、本発明の態様１に示すとおり、アルデヒド類とヒドララジン又はその誘導体の反応を１２０℃以上で行うことが、後記する試験例の結果からも明らかなとおり、高感度が得られることから望ましい。尚、反応温度の上限は反応を阻害することがない限り限定されるものではないが、温度効率を考慮して１８０℃である。
【００２３】
更に、本発明の態様２に示すとおり、アルデヒド類がホルムアルデヒドであることが、飲料水、食品、又は化粧品（石鹸、シャンプーを含む。）中のホルムアルデヒドの定量の需要が多く、ヒドララジンとの反応性がよいことから望ましい。
【００２４】
次に、本発明の測定装置である本発明の第二の発明について、測定装置の一実施例を例示した図１に基づいて、具体的に説明する。尚、本発明の要素には後記する実施例の要素との対応を容易にするため、実施例の要素の符号をカッコで囲んだものを付記している。本発明を後記の実施例の符号と対応させて説明する理由は、本発明の理解を容易とするためであって、本発明の技術的範囲を実施例に限定するものではない。
【００２５】
図１は、本発明のアルデヒド類の測定装置の一実施例を示す模式図である。
【００２６】
本発明の測定装置の基礎となるポストカラム誘導体化高速液体クロマトグラフ法に使用する測定装置は、移動相供給装置、試料注入装置、分離カラム、反応試薬供給装置、検出器、及びデータ処理装置からなっている。
【００２７】
移動相供給装置（１）は、移動相収容部（３）及び送液ポンプ（１４）から構成されている。
【００２８】
移動相収容部（３）に、収容される移動相は、高速液体クロマトグラフ法において、アルデヒド類を分離できるものであればいずれであってもよいが、分離カラムの種類に対応して、ギ酸、酢酸等の酸、又はアセトニトリル、メタノール、エタノール等の有機溶媒を水に分散、溶解した酸性水溶液を使用することができる。尚、移動相に使用する水は、アルデヒド類を含まない水である必要があり、簡便には、市販の精製水、例えばＶＯＣ測定用水（住友精密工業社製）等を使用することができる。
【００２９】
送液ポンプ（１４）は、移動相を０．１乃至２ｍｌ／分の範囲内の一定流速で送液できる定量ポンプであればいずれであってもよく、例えば定量ポンプ（島津製作所製。LC-10AD ）等を使用することができる。
【００３０】
移動相供給装置（１）の下流には、試料注入装置（５）が配設され、試料注入装置（５）の下流には、分離カラム（６）が配設されている。
【００３１】
試料注入装置（５）は、高速液体クロマトグラフィー法で分離測定可能な測定対象物の注入容積が０．１乃至１０００μｌ、望ましくは１乃至２００μｌであることから、この注入容積を注入できる試料注入装置であればいずれであってもよい。
【００３２】
分離カラム（６）は、試料中のアルデヒド類と夾雑物等のその他の成分を分離できるものであればいずれであってもよく、分離カラムに充填される充填剤は、オクタデシル基、オクチル基、アミノ基、ポリヒドロキシアスパラミド基、スルホン酸基、４級アミン基等を化学結合したシリカゲル、又はポリマー系の充填剤を使用することができる。簡便には、市販の分離カラム、例えば逆相クロマトグラフィー用のDeverosil ODS-MG-5カラム（野村化学社製。内径４．６ｍｍ×長さ１５０ｍｍ又は内径４．６ｍｍ×長さ２５０ｍｍ）、サイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）用のPolyHYDROXYETHYL Aspartamideカラム（PolyLC社製。内径４．６ｍｍ×長さ２００ｍｍ）、イオン交換クロマトグラフィー用のPolypore H,Hydrogen Formカラム（PE BROWNREE 社製。内径４．６ｍｍ×長さ２２０ｍｍ）等を適宜組み合わせて使用することができる。
【００３３】
分離カラム（６）は、分離条件を一定にするため、カラム内の温度を１０乃至３０℃の範囲内の一定温度に維持する必要があるので、恒温槽（７）に収容されている。
【００３４】
分離カラム（６）の下流には、反応試薬供給装置（２）が連結されており、前記本発明の測定方法の特徴であるヒドララジンを含むリン酸緩衝液が反応試薬として供給される。
【００３５】
本発明の測定装置において、反応試薬供給装置（２）は、ヒドララジン又はその誘導体の収容部（４）を配設したことを特徴としており、反応試薬を一定流速で供給するための送液ポンプ（１５）を備えている。
【００３６】
送液ポンプ（１５）は、試料中のアルデヒド類に一定の濃度で反応試薬を供給するために、反応試薬を０．１乃至１ｍｌ／分の範囲内の一定流速で送液できる定量ポンプであればいずれであってもよく、例えば定量ポンプ（島津製作所製。LC-10AD ）等を使用することができる。
【００３７】
本発明の測定装置は、分離カラム（６）及び反応試薬供給装置（２）の連結部と検出器（１１）の間に加熱反応管（９）を配設したことを特徴としており、加熱反応管（９）は加熱手段としての恒温槽（８）に収容されている。
【００３８】
本発明の測定装置の加熱反応管（９）の内径及び長さは、流速、反応時間等に応じて適宜選択されるが、内径は熱の伝導効率を考慮して０．２５乃至０．８ｍｍが望ましい。また、長さは、測定対象物であるアルデヒド類と反応試薬であるヒドララジン又はその誘導体の反応を１２０℃以上の高温で行うことが、後記する試験例の結果からも明らかなとおり、高感度が得られることから望ましいため、本発明の態様３に示すとおり、試料を十分に加熱することができる長さである１乃至４０ｍであることが望ましい。更に、加熱反応管は素材としてピーク（peek）を使用した市販のピークチューブ（GLサイエンス社製）等を使用することができる。
【００３９】
加熱手段としての恒温槽（８）の温度は、測定対象物であるアルデヒド類と反応試薬であるヒドララジン又はその誘導体の反応条件を一定とするため、加熱反応管内の温度を１００乃至１８０℃の範囲内の一定温度に維持する必要がある。また、恒温槽は、高温度の維持が可能な市販のドライ反応槽（島村計器製作所製。DB-5）等を使用することができる。
【００４０】
加熱反応管（９）の下流には、冷却管（１０）が配設され、冷却管（１０）の下流には、検出器（１１）が配設されている。
【００４１】
冷却管（１０）の内径及び長さは、冷却効率等を考慮して適宜選択され、通常、内径及び長さはそれぞれ０．２５乃至０．８ｍｍ及び０．５乃至１０ｍである。また、冷却管は素材としてピーク（peek）を使用した市販のピークチューブ（GLサイエンス社製）等を使用することができる。尚、冷却管（１０）は、蛍光物質の検出が高温に不適合であるため設けられるものであり、冷却管なしで蛍光物質の検出の適温である０乃至３０℃の範囲内の一定温度に冷却可能の場合には必須ではない。
【００４２】
検出器（１１）は、測定対象物であるアルデヒド類と反応試薬であるヒドララジン又はその誘導体の反応により生成するTri-P 等の蛍光物質を検出できる検出器（１１）であればいずれであってもよく、例えば分光蛍光検出器（島津製作所製）等を使用することができる。
【００４３】
検出条件は、検出対象物である蛍光物質の種類によって適宜選択されるが、例えばホルムアルデヒドとヒドララジンの反応により生成する蛍光物質であるTri-P の検出条件は、励起波長２２０乃至２４０ｎｍ、蛍光測定波長３５０乃至４５０ｎｍの条件である。
【００４４】
検出器（１１）には、データ処理装置（１２）が接続されており、データ処理装置（１２）は、図３に示すとおりの検出器から得られるデータ（クロマトグラム）を処理して、図２に示すとおりの検量線を予め作成しておくことにより、ピーク面積よりアルデヒド類を精度よく定量することができる。更に、ノイズのピークの高さの平均値Ｎを求め、シグナルとして検出される試料中の測定対象物のピークの高さの値Ｓより感度の指標となるＳ／Ｎ比を求めることができる。尚、得られたクロマトグラム中のピークの同定は、市販の標準物質（例えば、ホルムアルデヒド）を本発明の測定装置を使用して作成したクロマトグラム中の標準物質のピークの保持時間と比較することにより行うことができる。
【００４５】
データ処理装置（１２）は、例えばデータ処理装置（島津製作所製。Class LC-10 ）等を使用することができる。
【００４６】
また、本発明の測定装置は、検出器（１１）の下流には、排圧調整器（１３）を配設したことを特徴としている。
【００４７】
本発明の測定装置の排圧調整器（１３）は、加熱反応管（９）において、試料溶液が１００乃至１８０℃の高温に加熱されることにより発生する泡が検出対象物である蛍光物質の検出を妨害することから、泡の発生を防止するために、０．５乃至１．０ＭＰａの排圧を付与できる排圧調整器であればいずれであってもよく、例えば排圧調整器（UPCHURCH SCIENTIFIC 社製）等を使用することができる。
【００４８】
次に試験例を示して本発明を詳細に説明するが、本発明においては、次の試験方法を採用した。
【００４９】
（１）感度の試験方法
データ処理装置（島津製作所製。Class LC-10 ）を使用して、ノイズのピークの高さの平均値Ｎを求め、シグナルとして検出される試料中に一定量［０．２ｎｇ］含有するホルムアルデヒドのピークの高さの値Ｓを求め、Ｓ／Ｎ比を算出し、これを感度の指標とした。
【００５０】
試験例１
この試験は、本発明の測定方法によるホルムアルデヒドの検量線を作成するために行った。
【００５１】
（１）試料の調製
ホルムアルデヒド標準原液（関東化学社製。１０００ｐｐｍ）をＶＯＣ測定用水（住友精密工業社製）を使用して１万倍に希釈し、０．１ｐｐｍ（０．１ｎｇ／μｌ）のホルムアルデヒド水溶液を調製し、これを試料として用いた。
【００５２】
（２）試験方法
前記試料の注入容積を１乃至１００μｌの範囲で変更して注入し、後記する実施例１に示す本発明の測定装置を使用して、実施例１に示す本発明の測定方法に従って、ホルムアルデヒド量０．１ｎｇ、０．２ｎｇ、０．５ｎｇ、１ｎｇ、２ｎｇ、５ｎｇ、及び１０ｎｇにおけるピーク面積を測定した。
【００５３】
（３）試験結果
この試験の結果は、縦軸をピーク面積及び横軸をホルムアルデヒド量として図示した図２に示すとおりである。図２から明らかなとおり、ホルムアルデヒド量が０．１乃至１０ｎｇの範囲で良好な直線性（相関係数γ＝０．９９９）を有するＹ＝２．４×１０5Ｘ（Ｘ及びＹはそれぞれホルムアルデヒド量及びピーク面積を示す。）という式で表される検量線が得られた。
【００５４】
尚、アルデヒド類の種類、又はヒドララジンをヒドララジン誘導体に適宜変更して試験したが、本試験例とほぼ同様に、アルデヒド類の量が０．１乃至１０ｎｇの範囲で良好な直線性を有する検量線が得られた。また、実施例１と構成を変更した実施例２に示す本発明の測定装置を使用して試験したが、アルデヒド類の量が０．１乃至１０ｎｇの範囲で良好な直線性を有する検量線が得られた。
【００５５】
試験例２
この試験は、従来技術と本発明の測定方法とを比較するために行った。
【００５６】
（１）試料の調製
ホルムアルデヒド標準原液（関東化学社製。１０００ｐｐｍ）をＶＯＣ測定用水（住友精密工業社製）を使用して、２千倍、１万倍、及び１００万倍に希釈し、それぞれ５００ｐｐｂ、１００ｐｐｂ及び１ｐｐｂのホルムアルデヒド水溶液を調製し、これを試料として用いた。
【００５７】
（２）試験方法
▲１▼本発明の測定方法として、後記する実施例１に示す本発明の測定装置を使用して、実施例１に示す本発明の測定方法に従って、ピーク面積を測定し、前記試験例１で作成した検量線に基づいて各ホルムアルデヒド水溶液試料のホルムアルデヒド濃度を算出した。
【００５８】
▲２▼従来技術として、文献２の記載に従って、ポストラベル反応試薬としてアセチルアセトン又はその誘導体を用いたポストカラム誘導体化高速液体クロマトグラフ法により各ホルムアルデヒド水溶液試料のホルムアルデヒド濃度を測定した。
【００５９】
（３）試験結果
この試験の結果は、表１に示すとおりである。表１から明らかなとおり、従来技術では１００ｐｐｂ濃度から正確な測定が不能となるが、本発明の測定方法によれば、１ｐｐｂ濃度まで定量的に測定することができ、従来技術に比較して本発明の測定方法が優れていることが判明した。
【００６０】
尚、アルデヒド類の種類、又はヒドララジンをヒドララジン誘導体に適宜変更して試験したが、ほぼ同様の結果が得られた。
【００６１】
【表１】
0003841972.tif 000002
【００６２】
試験例３
この試験は、感度を指標として、アルデヒド類とヒドララジン又はその誘導体の望ましい反応温度を調べるために行った。
【００６３】
（１）試料の調製
ホルムアルデヒド標準原液（関東化学社製。１０００ｐｐｍ）をＶＯＣ測定用水（住友精密工業社製）を使用して、１０万倍に希釈し、１０ｐｐｂのホルムアルデヒド水溶液を調製し、これを試料として用いた。
【００６４】
（２）試験方法
前記試料を２０μｌ（ホルムアルデヒド量として０．２ｎｇ）注入し、後記する実施例１に示す本発明の測定装置を使用して、反応温度１００℃、１２０℃、及び１４０℃における感度を前記試験方法により測定して試験した。
【００６５】
（３）試験結果
この試験の結果は、表２に示すとおりである。表２から明らかなとおり、感度の指標となるＳ／Ｎ比が、反応温度１００℃に比較して１２０℃以上の温度で、２倍以上となることから、本発明の測定方法において高感度で精度よくアルデヒド類を測定するためには、アルデヒド類とヒドララジン又はヒドララジン誘導体の反応が１２０℃以上で行われることが望ましいことが判明した。
【００６６】
尚、アルデヒド類の種類、又はヒドララジンをヒドララジン誘導体に適宜変更して試験したが、ほぼ同様の結果が得られた。
【００６７】
【表２】
0003841972.tif 000003
【００６８】
次に実施例を示して本発明を更に詳細に説明するが、本発明は以下の実施例に限定されるものではない。
【００６９】
【実施例】
実施例１
図１は、本発明のアルデヒド類の測定装置の一実施例を示す模式図である。
図１において、本発明のアルデヒド類の測定装置は、移動相収容部３（遮光ガラス瓶。岩城硝子社製）及び送液ポンプ１４（定量ポンプ。島津製作所製。LC-10AD ）から構成される移動相供給装置１、試料注入装置５（島津製作所製）、恒温槽７（島津製作所製）に収容された分離カラム６（PolyHYDROXYETHYL Aspartamideカラム。PolyLC社製。内径４．６ｍｍ×長さ２００ｍｍを３本連結）、ヒドララジン又はその誘導体の収容部４（遮光ガラス瓶。岩城硝子社製）及び送液ポンプ１５（定量ポンプ。島津製作所社製。LC-10AD ）から構成される反応試薬供給装置２、恒温槽８（ドライ反応槽。島村計器製作所製。DB-5）に収容された加熱反応管９（ピークチューブ。GLサイエンス社製。内径０．５ｍｍ×長さ１０ｍ）、冷却管１０（ピークチューブ。GLサイエンス社製。内径０．５ｍｍ×長さ２ｍ）、検出器１１（分光蛍光検出器。島津製作所製）、データ処理装置１２（島津製作所製。Class LC-10 ）、並びに排圧調整器１３（UPCHURCH SCIENTIFIC 社製）を備えている。
【００７０】
次に、図１に示したアルデヒド類の測定装置の作用を、本発明のアルデヒド類の測定方法に基づいて説明する。
【００７１】
水道水を試料として、試料１００μｌを試料注入装置５（島津製作所社製）により、恒温槽７（島津製作所製）に収容され、カラム内の温度を２５℃に維持した分離カラム６（PolyHYDROXYETHYL Aspartamideカラム。PolyLC社製。内径４．６ｍｍ×長さ２００ｍｍを３本連結）に注入し、これに移動相として９８重量％ギ酸（ナカライテスク社製）をＶＯＣ測定用水（住友精密工業社製）で希釈して調製した５０ｍＭギ酸水溶液を、移動相収容部３（遮光ガラス瓶。岩城硝子社製）及び送液ポンプ１４（定量ポンプ。島津製作所製。LC-10AD ）から構成される移動相供給装置１により、０．８ｍｌ／分の流速で連続的に供給し、アルデヒド類を溶出させ分離する。
【００７２】
分離されたアルデヒド類を含む溶出液に対して、ポストラベル反応試薬として９９重量％ヒドララジン塩酸（和光純薬社製）を、リン酸二水素カリウム（ナカライテスク社製。試薬特級）、リン酸水素二カリウム・三水和物（ナカライテスク社製。試薬特級）、及びＶＯＣ測定用水（住友精密工業社製）により調製した０．２５Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ６．１）で希釈して調製した０．５ｍＭヒドララジン溶液を、ヒドララジン又はその誘導体の収容部４（遮光ガラス瓶。岩城硝子社製）及び送液ポンプ１５（定量ポンプ。島津製作所社製。LC-10AD ）から構成される反応試薬供給装置２により、０．５ｍｌ／分の流速で連続的に供給し、のち恒温槽８（ドライ反応槽。島村計器製作所。DB-5）に収容され、管内の温度を１４５℃に維持した加熱反応管９（ピークチューブ。GLサイエンス社製。内径０．５ｍｍ×長さ１０ｍ）中でアルデヒド類とヒドララジンを反応し、冷却管１０（ピークチューブ。GLサイエンス社製。内径０．５ｍｍ×長さ２ｍ）で２５℃に冷却する。
【００７３】
次いで、反応物質であるアルデヒド類とヒドララジンの反応により生成する蛍光物質を含む溶出液を、連続的に検出器１１（分光蛍光検出器。島津製作所製）に供給し、励起波長２３０ｎｍ及び蛍光測定波長３７０ｎｍの検出条件で、蛍光物質を検出し、図３に示すとおりのクロマトグラムが得られる。
【００７４】
図３に示すクロマトグラム中のピークは、予め本測定装置を使用して確認した標準物質であるホルムアルデヒドのピークの保持時間約１２分に一致することからホルムアルデヒドであると同定される。ホルムアルデヒドに対しては、前記試験例１で作成したホルムアルデヒドの検量線が使用できることから、検出器１１に接続されたデータ処理装置１２（島津製作所製。Class LC-10 ）により、図３に示すホルムアルデヒドのピーク面積より試料１００μｌ中に含有されるホルムアルデヒド量は０．３６ｎｇであることが求まり、試料中のホルムアルデヒドの濃度は３．６ｐｐｂであることが算出される。また、前記試験方法により試験したＳ／Ｎ比は４１であった。
【００７５】
アルデヒド類の測定を終了した溶出液の排出先には、排圧調整器１３（UPCHURCH SCIENTIFIC 社製）が配設されており、加熱反応管９において、溶出液が高温に加熱されることによる泡の発生を防止するために、０．７ＭＰａの排圧を付与する。
【００７６】
以上のとおり、アルデヒド類含有量が少ない水道水等の飲料水試料に対しても、簡便、かつ高感度で選択的にアルデヒド類を精度よく測定することができる。
【００７７】
実施例２
次に、前記実施例１のアルデヒド類の測定装置の分離カラム６をDeverosil ODS-MG-5カラム（野村化学社製。内径４．６ｍｍ×長さ１５０ｍｍ）、Deverosil ODS-MG-5カラム（野村化学社製。内径４．６ｍｍ×長さ２５０ｍｍ）、及びPolypore H,Hydrogen Formカラム（PE BROWNREE 社製。内径４．６ｍｍ×長さ２２０ｍｍ）各１本を順次連結したものに変更したことを除き、前記実施例１と同一のアルデヒド類の測定装置を使用し、Ａ社製のシャンプーを試料として試料中のホルムアルデヒド濃度を測定した実施例について説明する。
【００７８】
Ａ社製のシャンプーを試料として、試料１ｇをＶＯＣ測定用水（住友精密工業社製）に溶解し１００ｍｌとし、この希釈水溶液５０μｌを試料注入装置５（島津製作所製）により、恒温槽７（島津製作所製）に収容され、カラム内の温度を２５℃に維持した分離カラム６（Deverosil ODS-MG-5カラム。野村化学社製。内径４．６ｍｍ×長さ１５０ｍｍ、Deverosil ODS-MG-5カラム。野村化学社製。内径４．６ｍｍ×長さ２５０ｍｍ、及びPolypore H,Hydrogen Formカラム。PE BROWNREE 社製。内径４．６ｍｍ×長さ２２０ｍｍ各１本を順次連結したもの）に注入し、これに移動相として９８重量％ギ酸（ナカライテスク社製）をＶＯＣ測定用水（住友精密工業社製）で希釈して調製した５０ｍＭギ酸水溶液を、移動相収容部３（遮光ガラス瓶。岩城硝子社製）及び送液ポンプ１４（定量ポンプ。島津製作所製。LC-10AD ）から構成される移動相供給装置１により、０．８ｍｌ／分の流速で連続的に供給し、アルデヒド類を溶出させ分離する。
【００７９】
分離されたアルデヒド類を含む溶出液に対して、ポストラベル反応試薬として９９重量％ヒドララジン塩酸（和光純薬工業社製）を、リン酸二水素カリウム（ナカライテスク社製。試薬特級）、リン酸水素二カリウム・三水和物（ナカライテスク社製。試薬特級）、及びＶＯＣ測定用水（住友精密工業社製）により調製した０．２５Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ６．１）で希釈して調製した０．５ｍＭヒドララジン溶液を、ヒドララジン又はその誘導体の収容部４（遮光ガラス瓶。岩城硝子社製）及び送液ポンプ１５（定量ポンプ。島津製作所製。LC-10AD ）から構成される反応試薬供給装置２により、０．５ｍｌ／分の流速で連続的に供給し、のち恒温槽８（ドライ反応槽。島村計器製作所製。DB-5）に収容され、管内の温度を１４５℃に維持した加熱反応管９（ピークチューブ。GLサイエンス社製。内径０．５ｍｍ×長さ１０ｍ）中でアルデヒド類とヒドララジンを反応し、冷却管１０（ピークチューブ。GLサイエンス社製。内径０．５ｍｍ×長さ２ｍ）で２５℃に冷却する。
【００８０】
次いで、反応物質であるアルデヒド類とヒドララジンの反応により生成する蛍光物質を含む溶出液を、連続的に検出器１１（分光蛍光検出器。島津製作所製）に供給し、励起波長２３０ｎｍ及び蛍光測定波長４００ｎｍの検出条件で、蛍光物質を検出し、予め本測定装置を使用して確認した標準物質であるホルムアルデヒドのピークの保持時間より、試料のクロマトグラム中のホルムアルデヒドのピークを同定する。前記試験例１と同様の方法により予め本測定装置を使用して作成したホルムアルデヒドの検量線を使用し、検出器１１に接続されたデータ処理装置１２（島津製作所製。Class LC-10 ）により、試料のクロマトグラム中ホルムアルデヒドのピーク面積より希釈水溶液５０μｌ中に含有されるホルムアルデヒド量は０．１４ｎｇであることが求まり、試料中のホルムアルデヒドの濃度は０．２９ｐｐｍであることが算出される。また、前記試験方法により試験したＳ／Ｎ比は３０であった。
【００８１】
アルデヒド類の測定を終了した溶出液の排出先には、排圧調整器１３（UPCHURCH SCIENTIFIC 社製）が配設されており、加熱反応管９において、溶出液が高温に加熱されることによる泡の発生を防止するために、０．７ＭＰａの排圧を付与する。
【００８２】
以上のとおり、シャンプー等の各種化粧品試料に対しても、簡便、かつ高感度で選択的にホルムアルデヒド濃度を精度よく測定することができる。
【００８３】
【発明の効果】
以上詳記したとおり、本発明は、ポストカラム誘導体化高速液体クロマトグラフ法において、ポストラベル反応試薬としてヒドララジン又はその誘導体を用いて、試料中のアルデヒド類とヒドララジン又はその誘導体を反応させ、該アルデヒド類の含有量を測定することを特徴とするアルデヒド類の測定方法、並びに移動相供給装置、試料注入装置、分離カラム、反応試薬供給装置、検出器、及びデータ処理装置からなるポストカラム誘導体化高速液体クロマトグラフ法に使用する測定装置において、反応試薬供給装置がヒドララジン又はその誘導体の収容部を配設したこと、分離カラム及び反応試薬供給装置の連結部と検出器の間に加熱反応管を配設したこと、並びに検出器の下流に排圧調整器を配設したことを特徴とするアルデヒド類の測定装置に関するものであり、本発明により奏せられる効果は次のとおりである。
【００８４】
１）本発明のアルデヒド類の測定方法は、夾雑物を予め高速液体クロマトグラフ法により分離し、のち測定対象物であるアルデヒド類とヒドララジン又はその誘導体を反応させ、生成する蛍光物質を検出するため、簡便、かつ高感度で選択的にアルデヒド類を測定することができる。
【００８５】
２）本発明のアルデヒド類の測定装置は、ヒドララジン又はその誘導体の連続的な供給に好適であり、アルデヒド類とヒドララジン又はその誘導体の高温下での反応に好適であり、並びに高温下での反応に起因して生成する泡の発生の防止に好適である。
【図面の簡単な説明】
【図１】図１は、本発明のアルデヒド類の測定装置の一実施例を示す模式図である。
【図２】図２は、本発明の測定方法によるホルムアルデヒドの検量線である。
【図３】図３は、本発明の測定方法によるホルムアルデヒドのクロマトグラムである。
【符号の説明】
１  移動相供給装置
２  反応試薬供給装置
３  移動相収容部
４  ヒドララジン又はその誘導体の収容部
５  試料注入装置
６  分離カラム
７  恒温槽
８  恒温槽
９  加熱反応管
１０  冷却管
１１  検出器
１２  データ処理装置
１３  排圧調整器
１４  送液ポンプ
１５  送液ポンプ
【図１】
0003841972.tif 000004
【図２】
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【図３】
0003841972.tif 000006