(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
幹、葉、芽または花の線虫に対し高い感染力を有し、かつ、in vivoまたは固形培地上で増殖させた場合の第１のタイプの分生子柄、分生子形成細胞および分生子並びに第２のタイプの分生子柄、分生子形成細胞および分生子の産生によって特徴づけられるエステヤ属に属する真菌類であって、
第１のタイプの分生子柄が、複柄状、単柄状、一枝状、直立状、かつ広がったアンプル状であり；第１のタイプの分生子形成細胞が融合し、フィアロ型であり、かつ、まれに基部から頂点まで広がっており；第１のタイプの分生子が単生、単細胞性、非対称楕円、三日月形、かつ凹型であり；
第２のタイプの分生子柄が複柄状、単柄状、一枝または分枝状、円筒状、短剣状、かつ細長であり；第２のタイプの分生子形成細胞が融合し、フィアロ型であり、内生分芽型、末端または節間、側生繁殖性、かつ、無限であり；第２のタイプの分生子が単生、単細胞性、桿状、かつ円筒状であるエステヤ属(Esteya sp.)に属する真菌類。
【請求項２】
さらに、液体肉汁中で増殖させた場合、芽状胞子を産生する、請求項１記載の真菌類。
【請求項３】
線虫がブルサフェレンカス(Bursaphelenchus)、アフェレンコイデス(Aphelenchoides)、ジチレンカス(Ditylenchus)、またはファディナフェレンカス(Phadinaphelenchus)属である、請求項１記載の真菌類。
【請求項４】
さらに、液体肉汁中で増殖させた場合、芽状胞子を産生する、請求項３記載の真菌類。
【請求項５】
線虫がブルサフェレンカス属である、請求項３記載の真菌類。
【請求項６】
線虫がブルサフェレンカス・キシロフィラス(Bursaphelenchus xylophilus)種である、請求項３記載の真菌類。
【請求項７】
さらに、液体肉汁中で増殖させた場合、芽状胞子を産生する、請求項６記載の真菌類。
【請求項８】
幹、葉、芽または花の線虫に対し高い感染力を有し、かつ、in vivoまたは固形培地上で増殖させた場合の第１のタイプの分生子柄、分生子形成細胞および分生子、並びに第２のタイプの分生子柄、分生子形成細胞および分生子の産生によって特徴づけられるエステヤ属(Esteya sp.)に属する真菌類であって、
第１のタイプの分生子柄が複柄状、単柄状、一枝状、直立状、広がったアンプル状で、細い頸部へと上に向かって先細であり、半透明ないしは灰色がかった緑色で、かつ、平滑、粗いかないしは極めて粗く；第１のタイプの分生子形成細胞が、融合し、フィアロ型であり、かつ、まれに基部から頂点まで広がっており；第１のタイプの分生子が単生、単細胞性、非対称楕円、三日月形、凹型、透明、平滑壁を有し、かつ粘着性であり、かつ、頂端が緩やかな微突頭であり、かつ、内生胞子様構造を含み；かつ、
第２のタイプの分生子柄が複柄、単柄、一枝または分枝状、直立状、円筒状、短剣状で、隔壁を有し、透明、半透明ないしは灰色がかった緑色で、平滑、粗いかないしは極めて粗く、かつ、基部においていく分か膨張しており；第２の分生子形成細胞が融合し、フィアロ型であり、内生分芽型、末端または節間、側生繁殖性、かつ、無限であり；かつ、第２のタイプの分生子が単生、粘液性、単細胞性、桿状、円筒状、透明、平滑で、かつ非粘着性であり、しばしば偽頭を形成する頂端に集塊をなしているエステヤ属に属する真菌類。
【請求項９】
さらに、液体肉汁中で増殖させた場合、芽状胞子を産生する、請求項８記載の真菌類。
【請求項１０】
線虫がブルサフェレンカス、アフェレンコイデス、ジチレンカス、またはファディナフェレンカス属である、請求項１記載の真菌類。
【請求項１１】
さらに、液体肉汁中で増殖させた場合、芽状胞子を産生する、請求項１０記載の真菌類。
【請求項１２】
線虫がブルサフェレンカス属である、請求項１０記載の真菌類。
【請求項１３】
線虫がブルサフェレンカス・キシロフィラス種である、請求項１２記載の真菌類。
【請求項１４】
さらに、液体肉汁中で増殖させた場合、芽状胞子を産生する、請求項１３記載の真菌類。
【請求項１５】
in vivoで真菌類を増殖させた場合、第１のタイプの分生子柄、分生子形成細胞、および分生子が優勢となり、かつ、線虫が第１のタイプの分生子により寄生される、請求項１記載の真菌類。
【請求項１６】
線虫がパインウッド・センチュウ（pinewood nematode）である、請求項１５記載の真菌類。
【請求項１７】
in vivoで真菌類を増殖させた場合、第１のタイプの分生子柄、分生子形成細胞、および分生子が優勢となり、かつ、線虫が第１のタイプの分生子により寄生される、請求項８記載の真菌類。
【請求項１８】
線虫がパインウッド・センチュウである、請求項１７記載の真菌類。
【請求項１９】
1999年1月29日にAmerican Type Culture Collectionに寄託され、受託番号７４４８５を受けたエステヤ属(Esteya sp.)に属する真菌類；またはそれに由来する突然変異体。
【請求項２０】
1999年1月29日にAmerican Type Culture Collectionに寄託され、受託番号７４４８５を受けた系統と同一の特徴を有するエステヤ属(Esteya sp.)に属する真菌類。
【請求項２１】
in vivoまたは固形培地上で増殖させた場合に、第１のタイプの分生子柄、分生子形成細胞および分生子並びに第２のタイプの分生子柄、分生子形成細胞および分生子を産生する特徴を有する、エステヤ属(Esteya sp.)に属する真菌類の生物学的に純粋な培養物であって、
第１のタイプの分生子柄が、複柄状、単柄状、一枝状、直立状、かつ広がったアンプル状であり；第１のタイプの分生子形成細胞が融合し、フィアロ型であり、かつ、まれに基部から頂点まで広がっており；第１のタイプの分生子が単生、単細胞性、非対称楕円、三日月形、かつ凹型であり；
第２のタイプの分生子柄が複柄状、単柄状、一枝または分枝状、円筒状、短剣状、かつ細長であり；第２のタイプの分生子形成細胞が融合し、フィアロ型であり、内生分芽型、末端または節間、側生繁殖性、かつ、無限であり；第２のタイプの分生子が単生、単細胞性、桿状、かつ円筒状である培養物。
【請求項２２】
in vivoまたは固形培地上で増殖させた場合に、第１のタイプの分生子柄、分生子形成細胞および分生子並びに第２のタイプの分生子柄、分生子形成細胞および分生子を産生する特徴を有する、エステヤ属(Esteya sp.)に属する真菌類の生物学的に純粋な培養物であって、
第１のタイプの分生子柄が複柄状、単柄状、一枝状、直立状、広がったアンプル状で、細い頸部へと上に向かって先細であり、半透明ないしは灰色がかった緑色で、かつ、平滑、粗いかないしは極めて粗く；第１のタイプの分生子形成細胞が、融合し、フィアロ型であり、かつ、まれに基部から頂点まで広がっており；第１のタイプの分生子が単生、単細胞性、非対称楕円、三日月形、凹型、透明、平滑壁を有し、かつ粘着性であり、かつ、頂端が緩やかな微突頭であり、かつ、内生胞子様構造を含み；かつ、
第２のタイプの分生子柄が複柄、単柄、一枝または分枝状、直立状、円筒状、短剣状で、隔壁を有し、透明、半透明ないしは灰色がかった緑色で、平滑、粗いかないしは極めて粗く、かつ、基部においていく分か膨張しており；第２の分生子形成細胞が融合し、フィアロ型であり、内生分芽型、末端または節間、側生繁殖性、かつ、無限であり；かつ、第２のタイプの分生子が単生、粘液性、単細胞性、桿状、円筒状、透明、平滑で、かつ非粘着性であり、しばしば偽頭を形成する頂端に集塊をなしている培養物。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明の背景】
東アジアでは、パインウッド・センチュウ、ブルサペレンカス・キシロフィラス(Bursaphelenchus xylophilus)により引き起こされるマツ萎凋病が蔓延している。1981年に日本で行われた調査によれば、例えば、ニホンアカマツ ピナス・ デンシフォーラ・スレブおよびザック(Pinus densiflora Sleb. & Zucc)、ニホ ンクロマツ P.サンベルギー・パール(P. thunbergii Parl)およびラシュマツ(Luchu pine) P.ラシュエンシス・メイル(P. luchuensis Mayr)などの天然のマツ立ち木密度の年間の減少は、10万近くの木の枯死を伴っておよそ200万m3であった 。日本では、マツ萎凋病の最初の発生は、1905年に九州の長崎において報告されている。この時点では、マツのこの破壊的病害の原因は理解できないものであった。接種試験によって、パインウッド・センチュウ B.キシロフィラスがマツ萎 凋伝染病の原因となる病原体であることが証明された。
【０００２】
【発明の概要】
本発明は、幹、葉、芽または花の線虫に対し高い感染力を有する新規真菌類を特徴とし、in vivoか、または固形培地上で増殖させた場合の第１のタイプの分 生子柄、分生子形成細胞および分生子と、第２のタイプの分生子柄、分生子形成細胞および分生子の産生によって特徴づけられる。
【０００３】
さらに具体的には、第１のタイプの分生子柄は、複柄、単柄、一枝からなり、直立、および広がったアンプル状であり；第１のタイプの分生子形成細胞は融合し、フィアロ型であり、かつ、まれに基部から頂点まで広がっており；また、第１のタイプの分生子は単生、単細胞性、非対称楕円、三日月形、および凹型であり；また、第２のタイプの分生子柄は複柄、単柄、一枝からなるかまたは分枝しており、円筒状、短剣状、かつ細長く；第２のタイプの分生子形成細胞は融合し、フィアロ型であり、内生分芽型、末端または節間、側生繁殖性、かつ、無限であり；さらに、第２のタイプの分生子は単生、単細胞性、桿状、および円筒状である。さらに本発明の真菌類は、液体肉汁中で増殖させた場合、芽状胞子を産生することにより特徴づけられる。
【０００４】
この２種の細胞のより詳細な特徴としては：第１の分生子柄は複柄、単柄、一枝からなり、直立、広がったアンプル状で、細い頸部へと上に向かって先細であり、半透明ないしは灰色がかった緑色で、かつ、平滑、粗いかないしは極めて粗く；第１のタイプの分生子形成細胞は、融合し、フィアロ型であり、かつ、まれに基部から頂点まで広がっており；第１のタイプの分生子は単生、単細胞性、非対称楕円、三日月形、凹型、透明、平滑壁を有し、かつ粘着性であり、かつ、頂端が緩やかな微突頭であり、かつ、内生胞子様構造を含み；第２のタイプの分生子柄は複柄、単柄、一枝からなるかまたは分枝しており、直立、円筒状、短剣状で、隔壁を有し、透明、半透明ないしは灰色がかった緑色で、平滑、粗いかないしは極めて粗く、かつ、基部においていく分か膨張しており；第２の分生子形成細胞は融合し、フィアロ型であり、内生分芽型、末端または節間、側生繁殖性、かつ、無限であり；さらに、第２のタイプの分生子は単生、粘液性、単細胞性、桿状、円筒状、透明、平滑で、かつ非粘着性であり、しばしば偽頭を形成する頂端に集塊をなしていることが挙げられる。
【０００５】
本発明の真菌類は、パインウッド・センチュウ、B.キシロフィラス；イネシンガレセンチュウ、アフェレンコイデス・ベッセイ(Aphelenchoides besseyi)；シュードパインウッド・センチュウ、バルサフェレンカス・マクロナタス(Bursaphelenchus mucronatus)；イネ茎線虫、ジチレンカス・アンガスタス(Ditylenchus angustus)；イチゴ、コムギ、トウモロコシ、タバコ、トマト、およびテンサイの茎線虫、ジチレンカス・ジプサシス(Ditylenchus dipsacis)；ココヤシのレッド・リング・センチュウ、ファディナフェレンカス・ココフィラス(Phadinaphelenchus cocophilus)；イチゴ・センチュウ、アフェレンコイデス・フラガリエ(Aphelemchoides fragariae)またはアフェレンコイデス・リツェマボス(Aphelemchoides ritzemabos)；および他の形態的または生来密接に関連した茎、葉、芽お よび花線虫などの線虫に感染可能である。
【０００６】
本発明の真菌類、エステヤ・ベルミコラ(Esteya vermicola)系統は、1999年1 月29日にAmerican Type Culture Collection, U.S.A.に寄託し、受託番号74485 を受けた。また、1994年2月4日には、Culture Collection and Research Crnter, Taiwanにも寄託した（受託番号 CCRC 930028）。（従来法または組換え法によって得られた）本寄託系統に由来する突然変異体、ならびに本寄託系統の特徴に一致するいずれの真菌類も、本発明の範囲内にある。
【０００７】
寄託系統およびその突然変異体を含め、本発明の真菌類は総て、線虫を食し、線虫に対する生態的防除剤として使用することができる。本発明の他の特徴は以下の図面、詳細な説明、ならびに添付の請求の範囲から明らかになろう。
【０００８】
【発明の具体的説明】
北部地方では、本病害の最初の発生は1985年に台湾で認められた。今やこの病害は蔓延し、この国において50〜60％またはそれより高い枯死率であるとさえ言われている。コッホの仮定を用いて病原性を証明するためには、萎凋しているマツからパインウッド・センチュウを回収することが第一の工程であって、発明者らの研究室では慣例として行われている。ある時、萎凋しているクロマツから回収したパインウッド・センチュウ、B.キシロフィラスを、ポテトデキストロース寒天(PDA)(Difco)斜面培地上の真菌類菌糸体無菌培養上に樹立した。説明がつかないことに、室温で2〜4週間培養した後に、この個体群は完全に萎縮することがわかった。この個体群のパインウッド・センチュウの死骸を調べると、内部寄生性ヒポミセート(hyphomycete)の蔓延が明らかになった。内部寄生生物の純培養 は、単胞子または胞子塊単離法によって得た。in vivoおよびin vitroにて着色 した内部寄生生物は、２種の分生子柄、分生子形成細胞および分生子を産生し、それらの割合は様々であった。第１のタイプの分生子形成細胞は膨張した半球形ないしは球形の基部と急に細くなくなる細い頸部、小襟（カラー）を持たない頸部(neck incollarate)から構成されていた。分生子は、三日月形、凹型で、明確な内生胞子様器官を含んでいた。第２のタイプの分生子柄は単柄、一枝からなるかまたは分枝していた。分生子形成細胞は、分離または融合し、細長く、短剣状で、3〜7の隔壁を有し、基部は膨張している場合と膨張していない場合があり、頂端は平滑か、または突起を有していた。分生子は円筒状ないしは桿状であった。外見上、この内部寄生生物は、フィアロホラ・メドラール(Phialophora Medlar)との類似点をいくつか有するが、胞子形成構造、分生子における形態学的特徴によって、さらにはその生態学および生育環境において容易に識別できる。この内部寄生生物は記載された微細な動物の寄生生物のいずれにも当てはめることはできず、新たな属を創出してこの生物に当てはめる。
【０００９】
さらに詳述しなくとも、前記の記載が十分に本発明を可能にしたものと確信する。従って、以下の具体的な実施例は単に例示のためのものであり、いかなる場合にも本開示の残りの部分を限定するものではない。本明細書に挙げた刊行物は総て引用することにより本明細書の一部とされる。
【００１０】
パインウッド・センチュウ、B.キシロフィラスの二者培養
1995年9月に、台湾、台北、ヤンミンシャンにて、センチュウに感染したマツ および穿孔動物の増加した萎凋ニホンクロマツから、長さ約5〜8cm、直径0.3mm の木芯片を採取した。この木芯片を長さおよそ0.5〜1cmの小断片にカットし、ペトリ皿中の水道水に浸した。この皿を室温で（およそ24〜27℃）24時間インキュベートした。木材組織から水道水へと遊離した大量のパインウッド・センチュウを超微細らせん状にエッチングした金属針で採取し、表面殺菌のため2〜3分間、1%次亜塩素酸ナトリウムに移し、次いで、各々およそ5分ずつ滅菌蒸留水で３回 洗浄した。最後に、おそらく純培養であると思われるパインウッド・センチュウをPDA斜面培地の真菌類菌糸体無菌培養物へ移し、照明を行わず、25℃にて、個 体群が形成するまでインキュベートした。形成したセンチュウの個体群を3〜4週間の間隔で継代培養し、接種試験用に維持した。
【００１１】
ヒポミセート内部寄生生物の単離、培養、判定および図示
真菌類内部寄生生物に感染したパインウッド・センチュウの死骸を2%寒天平板培地上に広げた。付着した分生子を、実体顕微鏡下で１個または集塊で単離し、次いで、PDA斜面培地へ移した。純粋な菌培養物を25℃にて2〜3週間インキュベ ートし、次いで、それらの形態学的特徴を判定し、複合光学顕微鏡 (Olympus BH-2)下でドローイングチューブ(drawing tube) (Olympus)を用い、400倍または1,000倍の倍率で図示した。また、接種パインウッド・センチュウ、および感染パ インウッド・センチュウから生じた内部寄生生物の胞子形成構造および分生子を前記の方法により、判定および図示した。色彩表示はKornerup, A. & Wanscher, j. H. (1978)に対応している。Methuen Handbook of Colour. Eyre Methuen Ltd: London, U.K.
【００１２】
新規真菌類内部寄生生物によるB.キシロフィラスの寄生
真菌類内部寄生生物は、4℃または室温のいずれかで、PDA斜面培地で維持した。感染力試験については、内部寄生生物をまず、25℃にておよそ2〜3週間、1/10強度のコーンミール寒天(CMA)(Difco)平板培地または斜面培地へ継体培養した。増殖中の菌糸体を含む寒天ディスク片を切り取り、2%寒天平板培地の中央へ接種した。25℃にて約7〜10日間のインキュベーションの後、コロニーは十分な量の 三日月形の粘着性分生子を生じており、次いで、この平板培地を、10μl懸濁液 中の250〜300個体のパインウッド・センチュウで感染させた。接種した平板培地を、2、4、6、8、16、24時間、および2、4、7日に光学顕微鏡下で調べ、感染率 を記録した。種々の生育段階の内部寄生生物に感染した線虫を採取し、水にマウントし、寄生様式に関して光学顕微鏡および写真により調べた。走査電子顕微鏡(SEM)により寄生者または宿主−寄生者相互作用を調べるために、前記した方法 を用いた。Tzean, S. S. & Estey, R. H. (1978). Schizophyllum commune Fr. as a destructive mycoparasite. Canadian Journal of Microbiology 24, 780-784.
【００１３】
分類学
エステヤ（属の定義）
２種の子嚢菌起源、分生子柄、分生子形成細胞および分生子を有するデューテロミコチア(Deuteromycotia)、ヒポミセテス(Hypomycetes)。第１のタイプの分 生子柄は、複柄、単柄、一枝、直立、広がったアンプル状；分生子形成細胞は、融合、フィアロ型、まれに基部から先端まで広がる；分生子は、単生、単細胞性、非対称楕円、三日月形、凹型。第２のタイプの分生子柄は、複柄、単柄、一枝からなるかまたは分枝、円筒状、短剣状、細長；分生子形成細胞は融合、フィアロ型、内生分芽型、末端または節間、側生繁殖性、無限；分生子は単生、単細胞性、桿状、円筒状。
【００１４】
エステヤ・ベルミコラ（種の定義）
緩やかに増殖するポテトデキストロース寒天(PDA)上のコロニー、25℃にて7日後、径3.5〜4.5、灰色、灰色がかった緑色ないしは暗緑色(27F6-7; 27EF1-3)； 灰色から暗緑色へ反転(28F4-5; 30F1-4)。菌糸は分枝、隔壁を有する、透明、半透明ないしは灰色がかった緑色、平滑、粗いかないしは極めて粗い、2-4μmに広がる。２種の分生子柄、分生子形成細胞および分生子。第１のタイプの分生子柄は、複柄、単柄、一枝、直立、広がったアンプル状、(10-)16-29(-62)X(1.5)3-4.4μm、細首へと上方に向かって先細、幅1.5-1.9μm、半透明ないしは灰色がか った緑色、平滑、粗いかないしは極めて粗い；分生子形成細胞は、融合、フィアロ型、まれに基部から先端まで広がる；分生子は、単生、単細胞性、非対称楕円、三日月形、凹型、頂端が緩やかな微突頭、透明、平滑壁を有する、8.2-11.1X3.5-3.7μm、内生胞子様構造を含み、粘着性。第２のタイプの分生子柄は、複柄 、単柄、一枝または分枝、直立、円筒状、短剣状、隔壁を有する、透明、半透明ないしは灰色がかった緑色、平滑、粗いかないしは極めて粗い、長さ(22.2-)34.1-43μm、基部は幅3-4.4μm、頂部は幅1.48μm；分生子形成細胞は、融合、フィアロ型、内生分芽型、末端または節間、側生繁殖性、無限；分生子は、単生、粘液性、単細胞性、桿状、円筒状、透明、平滑、(3-)4.4-7.4X1.5-1.9μm、非粘着性、しばしば偽頭を形成する頂端に集塊をなす。液体肉汁中で、三日月形および棒状分生子以外の細胞は、おびただしい数の分芽胞子を産生することができる。この分芽胞子は、低栄養固形培地上で継代培養した場合、三日月形の粘着性分生子を生じる。in vivoにおける線虫感染宿主では、第１のタイプの分生子柄、分 生子形成細胞および分生子が優勢であり；この形態学的特徴は培養培地上で生じたものに一致する。
【００１５】
生育場所：パインウッド・センチュウに寄生
語源：この属は、名誉教授 R. H. Estey, Macdonald College, McGill University, Canada,に敬意を表し、彼の、線虫を食する真菌類および線虫学に関する 研究への寄与を認めて命名し；この種は、本真菌類の線虫に寄生する能力に関して命名するものである。
【００１６】
調査した標本：1995年9月に台北市ヤンミンシャンにて、萎凋したニホンクロ マツ、ピナス・サンベルギー(Pinus thunbergii)から抽出したパインウッド・センチュウ、B.キシロフィラス由来；正基準標本PPH30（乾燥培養物）およびエク スタイプ(extype)（生培養物）は、Department of Plant Pathology and Entomology, National Taiwan University, Taipei, TaiwanおよびCulture Collection and Research Center, Taiwan（受託番号CCRC 930028）に寄託した。
【００１７】
寄生
エステヤ・ベルミコラは、低栄養寒天平板培地で、散生菌糸体、および優位には分離したフラスコ型分生子形成細胞および三日月形、凹型の粘着性分生子を有するコロニーを生じた（図1、4および5）。これらの平板培地では、線虫が移動 し、分生子形成細胞および分生子に接触した場合に、多くの三日月形分生子が、凹型側部の粘液によって容易にパインウッド・センチュウに付着した。24時間以内に寄生線虫の90%に粘着性分生子が付着し、感染したことが判明した（図2）。分生子の線虫宿主への付着は、頭部および尾部領域が好ましい部位であるように思われるが、体長にわたってランダムであった（図2）。付着18〜24時間後、分 生子は発芽し、微細な感染ペグにより線虫表皮を透過し、皮下感染球を形成し、そこから２または３つの栄養体菌糸を生じた（図7および8）。感染菌糸が広範囲に分枝し、器官および組織を破壊した後、線虫は死に至った。通常、感染8〜10 日後以内に（図3、9および10）、線虫個体群のほとんど100%が殺生された。菌糸は、殺生された線虫から現れた際には、ほとんど独占的に分離したフラスコ型の分生子形成細胞と三日月形の粘着性分生子を生じた（図3および10）。栄養豊富 な培地では、E.ベルミコラは細長い短剣状の、複数の隔壁を有する分生子形成細胞と、円筒状ないし桿状の非粘着性分生子を生じた（図1および6）。寄生された線虫で、このタイプの分生子により侵入されたものは認められなかった。
【００１８】
見かけ上、E.ベルミコラがオリーブのような緑色ないしは黒色のコロニーおよび有色のフラスコ型ないしは円筒状、短剣状の分生子形成細胞を有することにおいては、いくつかのフィアロホラ(Phialophora)種に似ている。Schol-Schwarz, M. B. (1970). Persoonia 6, 59-94; G.T.& Kendrick, B. (1973). Mycologia 65, 661-688; Iwatsu, T., Udagawa, S. I. & Toyazaki, N.(1988). Mycotaxon 32, 439-445; Millar, K. R. (1990). Mycologia 85, 647-650。しかしながら、 フィアロホラでは、頸部に圧縮され、明確なカップ型またはビーカー型小襟(collarate)を伴って開裂した分生子形成細胞は、エステヤのものとは明確に対比さ れる。E.ベルミコラと最もよく似ているフィアロホラ種の１つにP.ババキー(P.bubakii)(Laxa)Schol-Schwarzがあった。Schol-Schwarz, M. B.(1970)。それは２種の分生子形成細胞と数種の分生子を生じる。第１のフィアライドはフラスコ型で平滑または突起を有し、円筒状ないしはソーセージ状の分生子を生じる。第２のフィアライドは円筒状、先細で、エイジとともに不明瞭な小襟(collatette)を有する鋭い点で終わり、かつ、卵型ないしは球形の分生子を生じる。またP.ババキーは、数珠形の菌糸、分生子柄束性分生子柄および小菌核により特徴づけられる。類似性はあるものの、E.ベルミコラはP.ババキーと胞子形成器官および同様に分生子における顕微鏡的特徴により明確に区別できる。場合によっては、数種のフィアロホラにおけるフィアライドは増殖し、基部から先端まで広がり、また、分生子は二形性を有するか、あるいはエイジ、培養培地または培養条件によって形および大きさが変化する[Schol-Schwarz(1970); Cole & Kendrick(1973)]。また同様の事象がE.ベルミコラにも生じ、かくして、一致性の確認に必要な予防措置および標準化に対する注意が喚起される。ほとんどのフィアロホラ種は腐生的であり、大気、水、土壌および貯蔵されているマツ材、またはシラカンバ(Betula)、マツ(Pinus)、エゾマツ(Picea)、モミ(Abies)、ポプラ(Populas)、ブナ(Fagus)などの樹木から単離されているが、いくつかはヒト病原体であった。Schol-Schwarz(1970); Cole & Kendrick(1973)。２種の内部寄生性フィアロホラ、P. エンドパラシティカ(P. endoparasitica) Barron & Szijarto、およびP.トリブ ラチスポラ(P. tribrachispora) Barron & Szijartoは、ブデロイド・ロティフ ァー(クルマムシ；bdelloid rotifer)由来として記載され、双方とも、顕著な膜質小襟を伴い開裂したボトル型フィアライドと付属する分生子によって特徴づけられる。Barron, G. L. & Szijarto, E. (1982). Canadian Journal of Botany 60, 1212-1215; Barron, G. L. & Szijarto, E. (1984). Mycologia 76, 1107-1100。より最近では、これら２種は、新たなハプトスポラ・バロン(Haptospora Barron)属に移され、H.アペンディクラータ・バロン(H. appendiculate Barron) に分類され、これはまたクルマムシ内部寄生生物でもあるBarron, G. L. (1991). Canadian Journal of Botany 69, 503-506。生物学的および生態学的にこれらの種は、E.ベルミコラにより近い。それらの間の系統発生的相関は、ｒＲＮＡ分子技術を用いるさらなる研究の功績により得られる。Yan, Z. H., Rogers, S. O. & Wang, C. J. K. (1995). Mycologia 87, 72-83。
【００１９】
また、E.ベルミコラの形態学的特徴は、フェオアクレモニウム(Phaeoacremonium) W. Gams、Crous et M. J. Wingf.およびフィアレモニウム(Phialemonium)W. Gams & McGinnisに幾分か類似しており、２属はフィアロホラとアクレモニウム・リンク(Acremonium Link):Fr.の中間型であり、有色の分生子形精細胞と目立 たない小襟を有する。これらの属は腐生的であるか、病原生があり、ヒトへの感染を引き起こしたり、木本植物を攻撃して生育阻害や立ち枯れをもたらしたりする。それらは生物学的にいずれの線虫内部寄生性真菌類とも無関係であると思われた。Crous, P. W., Gams, W., Wingfield, M. j. & Wyk, P. S. van. (1983).
Mycologia 75, 977-987。
【００２０】
ヒルステラ(Hirsutella)属は、リング・センチュウ、クリコネメラ・キセノプラクス(Criconemella xenoplax)(Roski) Luc & Rasiisanおよびシスト・センチ ュウ、ヘテローダ・スカチティー・スクミジ(Heterodea schachtii Schmidtに寄生可能であると報告されているヒルステラ・ロッシリエンシス(Hirsutella rhossiliensis)Minter & Brady以外の大部分が虫性病原性を有していた[Minter, D. W. & Brady, B. L. (1980). Transactions of the British Mycological Society 74, 271-282; Evans, H. C. & Samson, R. A. (1986). Canadian Journal of Botany 64, 2098-2103]。Jaffee, B. A. & Zehr, E. I. (1982). Phytopathology 72, 1378-1381; Jaffee, B. A. & Zehr, E. I. (1985). Journal of Namatodology 17, 341-345; Jaffee, B. A. & Muldoon, A. E. (1989). Journal of Nematology 21, 505-510。ヒルステラは単柄、または分生子柄束、モノフィアライドまたはポリフィアライドである。Minter & Brady(1980)。H.ロッシリエンシスの分生子形成細胞は無柄であり、栄養繁殖菌糸からだいたい直立して単独で生じ、透明、平滑、または長く薄い頂端に向かいわずかに突起で覆われ、基部は膨張している。その分生子は一細胞性で、透明で、しばしばオレンジ断面の形の楕円状で、その頸部に単独で、または群をなして着生し、粘液質の鞘で覆われている。Minter & Brady (1980)。これらの特徴は、E.ベルミコラのフラスコ型分生子形 成細胞および三日月形粘着性分生子を思い出させる。しかしながら、三日月形分生子は、粘液質の鞘の被覆を欠き、また、この粘液は凹型側部にしか存在しない。この特異的な部位での付着の限局化は、線虫−内部寄生生物、ドレクメリア・コニオスポラ(Drechmeria coniospora)(Drech.) W. Gams & Janssonでも報告さ れ、線虫表皮へ付着するためには、分生子の離れた末端にある付着瘤が用いられる[Gam, W. & Jansson, H. B. (1985). Mycotaxon 22, 33-38; Dijksterhuis, J., Veenhuis, M. & Haeder, W. (1990). Mycological Research 94, 1-8]。
【００２１】
E.ベルミコラは初めて記録されたパインウッド・センチュウの内部寄生生物である。それはパインウッド・センチュウに対して高い感染力を示す。in vitroにおいては、パインウッド・センチュウの個体群は、8-10日以内にE.ベルミコラにより完全に殺生することができる。このように、E.ベルミコラはパインウッド・センチュウに対する生態的防除剤である。
【００２２】
他の具体例
本明細書に開示された特徴の総ては、いずれの組み合わせで組み合わせてもよい。本明細書に開示された各々の特徴は、同様、同等または類似の目的を果たす代替的な特徴により置き換えられてもよい。このように、特に断りのない限り、開示された各々の特徴は、同等または類似の特徴を有するある属のシリーズの一例であるに過ぎない。
【００２３】
なお、前記の説明から、当業者であれば容易に本発明の本質的な特徴を確認することができ、また、その精神ならびに範囲から逸脱することなく、本発明の種々の変形および変更により、種々の用途および条件に適合させることができる。
【図面の簡単な説明】
【図１】エステヤ・ベルミコラの２種の分生子柄および分生子を示す。
【図２】線虫表皮に付着したエステヤ・ベルミコラの分生子を示す。
【図３】感染した線虫から発生しているエステヤ・ベルミコラの分生子柄、分生子形成細胞および分生子を示す。
【図４】フラスコ状のフィアロ型分生子形成細胞の頂端に形成した、エステヤ・ベルミコラの非対称楕円の尖頭型分生子を示す（矢印の先端）；バー＝5μm。
【図５】分生子形成細胞（矢印の先端）の明確な開裂と、付着した非対称楕円の分生子（矢印）を有する、エステヤ・ベルミコラのフラスコ状フィアロ型を有する、第２のタイプの分生子柄を示す；バー＝5μm。
【図６】棒状の分生子を有するエステヤ・ベルミコラの第１のタイプの分生子柄を示す（矢印の先端）。
【図７】線虫の表皮に付着したエステヤ・ベルミコラの分生子を示す（矢印の先端）；バー＝5μm。
【図８】線虫の表皮および筋肉層を通過しているエステヤ・ベルミコラの分生子から発生した感染ペグを示す（矢印の先端）；バー＝10μm。
【図９】感染線虫から発生しているエステヤ・ベルミコラの分生子柄および分生子（矢印の先端）を示す；バー＝それぞれ50および20μm。
【図１０】感染線虫から発生しているエステヤ・ベルミコラの分生子柄および分生子（矢印の先端）を示す；バー＝それぞれ50および20μm。
【図１】
0003737303.tif 000002
【図２】
0003737303.tif 000003
【図３】
0003737303.tif 000004
【図４】
0003737303.tif 000005
【図５】
0003737303.tif 000006
【図６】
0003737303.tif 000007
【図７】
0003737303.tif 000008
【図８】
0003737303.tif 000009
【図９】
0003737303.tif 000010
【図１０】
0003737303.tif 000011