(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
バチルス属細菌に由来し、かつ、チロシン−ヒスチジン−グリシン−チロシン−トリプトファン−アラニン−アルギニン−アスパラギン酸からなる部分配列を１箇所のみ含むシクロデキストリン合成酵素の該部分配列の４残基目のチロシンをトリプトファン、フェニルアラニン、ロイシンまたはアスパラギンのいずれかに置換した改変シクロデキストリン合成酵素。
【請求項２】
バチルス属細菌がバチルス・マセランスである請求項１に記載の改変シクロデキストリン合成酵素。
【請求項３】
配列表の配列番号１のアミノ酸配列からなるシクロデキストリン合成酵素の１００位のチロシンをトリプトファン、フェニルアラニン、ロイシンまたはアスパラギンのいずれかに置換した配列からなり、α−シクロデキストリンを特異的に生成することを特徴とする改変シクロデキストリン合成酵素。
【請求項４】
請求項１から３のいずれか１項に記載の改変シクロデキストリン合成酵素のアミノ酸配列をコードする遺伝子をバチルス属細菌に形質転換し、該形質転換体を培養することにより、該改変シクロデキストリン合成酵素を培養物中に生成、蓄積せしめ、これを採取することを特徴とする改変シクロデキストリン合成酵素の製造法。
【請求項５】
請求項１から３のいずれか１項に記載の改変シクロデキストリン合成酵素を基質に作用せしめ、反応液よりシクロデキストリンを採取することを特徴とするシクロデキストリンの製造法。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は、改変シクロデキストリン合成酵素（CGTase : Cyclomaltodextrin glucanotransferase）及びその製造法並びに該改変CGTaseを用いたシクロデキストリン（ＣＤ：cyclodextrin）の製造法に関する。さらに詳しくは、バチルス・マセランス（Bacillus macerans）由来のCGTaseのアミノ酸配列中、Ｎ末端から１００位のチロシン（Ｔｙｒ）を他のアミノ酸に置換した改変CGTaseに関する。また、他のCGTaseにおいても、バチルス・マセランス由来の該酵素の１００位の位置のＴｙｒに相当するＴｙｒを他のアミノ酸に置換した改変CGTaseに関する。
【０００２】
更にまた、本発明は、該改変CGTaseのアミノ酸配列をコードする遺伝子をバチルス（Bacillus）属細菌に形質転換し、該形質転換体を培養することにより、該改変CGTaseを培養物中に生成、蓄積せしめ、これを採取することを特徴とする該改変CGTaseの製造法に関する。さらに該改変CGTaseを澱粉などの基質に作用せしめ、α−ＣＤ含有量の非常に高い反応液よりＣＤを採取することを特徴とするＣＤの製造法に関する。
【０００３】
【従来の技術】
CGTaseは、α−１，４グリコシド結合のみを加水分解するα−アミラーゼの一種であり、澱粉を分解し分子内糖転移により、環状多糖類であるシクロデキストリン（ＣＤ）を生成する酵素である。
現在までに、バチルス（Bacillus）属、クレブシーラ（Klebsiella）属及びミクロコッカス（Micrococcus）属に属する細菌がCGTaseを生産することが報告されている。
【０００４】
CGTaseの作用によって澱粉から生成されるα−ＣＤ、β−ＣＤ及びγ−ＣＤは、それぞれ６、７及び８個のグルコース残基がα−１，４結合により環状構造をとったホモ・オリゴ糖であり、いずれのＣＤも環状構造の空隙にゲストとなる疎水性の様々な物質を保持して安定な包接化合物を形成し、親水性を与える。ＣＤはこの包接機能を有するため、揮発性物質の安定化、酸化防止、特異臭の除去、苦味の抑制、乳化作用、潮解性物質の安定化、物質の溶解性の変化などの目的で、食品、薬品、化粧品その他の産業において広く利用されている。
【０００５】
従来のα−ＣＤ、β−ＣＤ及びγ−ＣＤの製造は、バチルス属などの微生物由来のCGTaseを澱粉などの基質に作用させ、α−、β−、γ−ＣＤの混合溶液を得た後、その後の結晶化やクロマトなどによる分離によって各々のＣＤに分画、分取していた。しかしこの方法では、純度の高い各々のＣＤを得るために複数回のクロマトを適用する必要があるなど分取に時間と労力が必要で、製造コストが高くなるという問題があった。
【０００６】
また特異性の高いCGTaseを使用して、特定のＣＤを効率よく生産する方法も行われている。例えば、生成するＣＤの約50％がα−ＣＤであるバチルス・マセランス（Bacillus macerans）の生産する比較的α−ＣＤを高率に生産するCGTaseを使用することにより、ある程度選択的にα−ＣＤを調製することができる。
しかし、この方法もいまひとつＣＤ生成の選択性が低く、混在するＣＤからα−ＣＤを分離・精製する必要があるという問題があった。
【０００７】
【発明が解決しようとする課題】
本発明の目的は、このような問題点を解決して、ＣＤを効率よく製造することであって、先ず、特定のＣＤを特異的に生産するCGTaseを新たに開発することを目的として設定した。
【０００８】
しかして、CGTase分子はＡ、Ｂ、Ｃ及びＤ領域から構成され（化学と生物  31, 112-120 (1993)）、現在までに報告されている由来の異なるCGTase間のアミノ酸配列は、互いに６０％以上の相同性を有していることが知られている。
Ａ領域は、澱粉に結合して分解する活性を有する領域である。バチルス・マセランス由来のCGTase(Takano, T. et. al., J.Bacteriol., 166, 1118-1122(1986)）のＮ末端から１００番目のＡ領域に属するアミノ酸はチロシン（Ｔｒｙ１００）であるが、この１００番目のアミノ酸はＡ領域の活性中心を構成しており、CGTaseの活性の発現に重要な役割を果たしていると考えられる。
【０００９】
そこで、上記バチルス・マセランス由来のCGTase遺伝子のＴｙｒ１００領域を遺伝子工学的に他のアミノ酸に改変すれば、CGTaseの酵素としての性質が変化し、特定ＣＤを特異的に生成する性質を有するCGTaseを得ることができるとの考えにはじめてたち、改変CGTaseの開発という技術課題をはじめて創設した。
【００１０】
【課題を解決するための手段】
本発明は、上記課題を解決するためになされたものであって、本発明者らは、特定ＣＤの生成率の高いCGTaseを得るために、バチルス・マセランスのCGTaseのＡ領域のＴｙｒ１００に注目し、鋭意検討を行った。
その結果、Ｔｙｒ１００をＴｒｐ、Ｐｈｅ、ＬｅｕまたはＡｓｎに置換した改変CGTaseがα−ＣＤを特異的に生成することを見出し、本発明を完成するに至った。
【００１１】
すなわち、本発明は、バチルス・マセランス由来のCGTaseのＴｙｒ１００をＴｒｐ、Ｐｈｅ、Ｌｅｕ、またはＡｓｎに置換した、α−ＣＤを特異的に生成する改変CGTaseに関するものである。また更に、バチルス・マセランス由来のCGTaseのみでなく、他のすべてのCGTaseにおいても、同菌由来の酵素のＮ末端から１００位の位置のＴｙｒに相当するＴｒｙについて、これを他のアミノ酸に置換しても、α−ＣＤを特異的に生成する改変CGTaseを創製することができ、本発明は、これらすべての新規な改変CGTaseを包含するものである。
【００１２】
また本発明は、該改変CGTaseのアミノ酸配列をコードする遺伝子をバチルス属細菌に形質転換し、該形質転換体を培養することによる改変CGTaseの製造法に関する。さらに該改変CGTaseを澱粉などの基質に作用せしめ、反応液よりＣＤを採取することを特徴とするＣＤの製造法に関する。
【００１３】
本発明においては、CGTaseであればすべてのものが改変に供することが可能であって、バチルス・マセランス由来のCGTaseも有利に使用することができ、例えば、下記表１、表２、表３、表４で示される配列表の配列番号１に示されるところの、バチルス・マセランス  ＩＡＭ  １２４３（Bacillus macerans IAM 1243 : Takano, T. et. al., J.Bacteriol., 166, 1118-1122(1986)）のCGTaseが好適に使用できる。
【００１４】
【表１】
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【００１５】
【表２】
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【００１６】
【表３】
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【００１７】
【表４】
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【００１８】
また、B. maceransのほか、
B. licheniformis (Nucleic Acids Res., 18, 199 (1990))、
B. ohbensis (Appl. Microbiol. Biotechnol., 35, 600-605(1991))、
B. circulans (J. Mol. Biol., 236, 590-600 (1994))、
B. sp. #1011 (J. Bacteriol., 169, 4399-4402 (1987))、
B. sp. #1018 (Biochem. Biophys. Res. Commun., 166, 630-638 (1990))、
B. stearothermophilus (Appl. Microbiol. Biotechnol., 58, 4018-4025(1991))、
その他バチルス属菌由来のCGTaseも、本発明において広く改変に供することができる。
【００１９】
本発明を実施するには、バチルス・マセランス由来のCGTaseのＡ領域の活性中心、Ｔｙｒ１００を他のアミノ酸に置換する必要があり、例えば配列番号１に示されるCGTaseの１００位のＴｙｒを他のアミノ酸に置換すればよい。
【００２０】
また、バチルス・マセランス以外のすべての菌由来のCGTaseについても、例えば図１に示すように、バチルス・マセランスの１００位の位置のＴｙｒに相当するＴｙｒが存在しており、このＴｙｒを他のアミノ酸に置換すればよい。このように、CGTaseであれば、由来を問わず、すべての酵素を本発明の改変に供することができる。
【００２１】
CGTaseにおいて、Ｔｙｒ１００（又はそれに相当するＴｙｒ）を他のアミノ酸に置換するには、化学的手法、生物学的手法、遺伝子工学的手法その他各種の方法が適宜利用可能である。
【００２２】
これらのうち、遺伝子工学的手法による置換は、例えば次のようにして行う。先ず、CGTaseをコードする遺伝子を調製しなければならないが、CGTaseをコードする遺伝子は公知の方法で得ることが出来る。例えばCGTaseを生産するバチルス・マセランスからCGTaseをコードする遺伝子をクローニングすることによって得ることが出来る。例えばバチルス・マセランス  ＩＡＭ１２４３からSaito、Miuraの方法（Saito, H., and Miura, K., Biochem. Biophys. Acta., 72, 639(1964)）によって染色体ＤＮＡを取り出したのち、既知の上記CGTaseのシークエンスを基に作製したプライマーを用いて、ＰＣＲにてCGTase遺伝子を増幅すればよい。
【００２３】
CGTaseの改変は、CGTaseをコードする遺伝子を部位特異的変異（Site-Directed Mutagenesis）などの方法で改変することによって行うことができる。
例えば、CGTase分子中のＮ末端から１００番目のＴｙｒをコードする塩基配列を、他のアミノ酸をコードする塩基配列に改変した合成ＤＮＡをプライマーとし、CGTase遺伝子を鋳型としてＰＣＲを行えば、目的とする１００番目のＴｙｒ部分のみが改変した改変CGTase遺伝子を得ることが出来る。
【００２４】
このようにして得た改変CGTase遺伝子をベクターに挿入し、該ベクターで宿主菌を形質転換すれば、改変CGTaseを生産する形質転換体を得ることが出来る。
【００２５】
改変遺伝子を挿入するベクターとしては、宿主微生物で自律的に増殖し得るファージまたはプラスミドが適している。例えばプラスミドはｐＮＨ４００（J.Bacteriol., 177, 745-749(1995)）、ｐＮＵ２００（鵜高重三、日本農芸化学会誌、61、669(1987)）、ｐＨＹ７００（Biosci, Biotech, Biochem., 56, 812-813(1992)）、ｐＨＴ１１０（特開平6-133782）やこれらの派生体などが使用できる。プラスミドを構築する方法としては、公知の方法が適宜用いられ、例えばMolecular cloning, A Laboratory Manual, Cold Spring Harber Laboratory(1982)に記載の方法などが例示される。
【００２６】
改変CGTase遺伝子を組み込んだ発現ベクターで形質転換する微生物としては、ベクター、プロモーターが発現可能なバチルス属細菌であれば何れでもよく、バチルス・ブレビス（Bacillus brevis）などが使用できるが、特に好適にはバチルス・ブレビスＨＰＤ３１（本菌株はバチルス・ブレビスＨ１０２（ＦＥＲＭ  ＢＰ−１０８７）と同一菌株である。）が使用される。
【００２７】
宿主にプラスミドを導入する方法としては、公知の方法、例えば、トリス−ＰＥＧ法（J. Bacteriol., 156, 1130-1134(1983)）やエレクトロポレーション法（Agric, Biol. Chem., 53, 3099-3100(1989)）などが適用できる。
CGTaseを生産する形質転換体の選択は、澱粉を含むプレート上で、コロニーの周りが透明になるかどうか（澱粉が分解された際生じるハロ）を確認して行うことができる。
【００２８】
得られた形質転換体の培養に用いる培地は、形質転換体が生育して目的とする改変CGTaseを生産しうるものであれば如何なる培地でもよい。例えば培地の炭素源としては、グルコース、シュークロース、グリセロール、澱粉、デキストリン、糖蜜、廃糖蜜、有機酸などが用いられる。また窒素源としては、カゼイン、ペプトン、肉エキス、酵母エキス、カザミノ酸、グリシンなどの有機窒素源、硫酸アンモニウム、塩化アンモニウム、硝酸アンモニウムなどの無機窒素源などが用いられる。その他、塩化カリウム、リン酸一カリウム、リン酸二カリウム、塩化ナトリウム、硫酸マグネシウムなどの無機塩が必要に応じて培地に加えられる。栄養要求性を示す菌はその生育に必要な栄養物質を培地に添加すればよい。該栄養物質としては、アミノ酸類、ビタミン類、核酸などが挙げられる。
【００２９】
また、培養に際して必要があれば、培地に抗生物質例えば、ペニシリン、エリスロマイシン、クロラムフェニコール、バシトラシン、Ｄ−サイクロセリン、アンピシリン、ネオマイシンなどを加える。更に必要により、消泡剤例えば大豆油、ラード油、各種界面活性剤などを加えてもよい。
【００３０】
培地の初発ｐＨは５．０〜９．０、さらに好ましくは６．５〜７．５である。培養温度は通常１５℃〜４２℃、さらに好ましくは２４℃〜３７℃であり、培養時間は通常１６〜１６６時間、さらに好ましくは２４〜９６時間である。
【００３１】
本発明では、形質転換体を前記の条件で培養することによって、培養物中に改変CGTaseが生成、蓄積される。
このようにして得られた改変CGTaseは、公知の方法により、例えば膜処理、硫安分画法、クロマトグラフィーなど（蛋白質・核酸の基礎実験法、南江堂、（１９８５））で精製することができる。
【００３２】
精製された各種の改変CGTaseの澱粉分解能の分析は、可溶性澱粉を基質として、酵素液を加えて反応後、ヨード液で反応を停止させ吸光度（ＯＤ５５０）を測定することによって行えばよい。
また、精製された改変CGTaseの反応生成物の分析は、可溶性澱粉を基質にし、酵素液を加えて３７℃で反応させ、煮沸にて反応を停止させた後、生成したＣＤをＨＰＬＣで分析することによって行うことができる。
【００３３】
また本発明の改変CGTaseを澱粉などの基質溶液に作用させてＣＤ含有溶液を得、このＣＤ溶液からＨＰＬＣなどの方法によって各種ＣＤに分画することによって各種のＣＤを得ることができる。
【００３４】
以下本発明を実施例により更に詳しく説明するが、これは例示的なものであり、本発明はこれに限定されるものではない。
【００３５】
【実施例１】
▲１▼発現ベクター(pNH400CG)の構築
Takanoらによって明らかにされているバチルス・マセランスのCGTaseのＤＮＡシークエンス（J.Bacteriol., 166, 1118-1122(1986)）を基にPrimerを作製し、バチルス・マセランスＩＡＭ１２４３の染色体よりCGTase遺伝子を増幅した。次に増幅した遺伝子を制限酵素NcoI及びBamHIで処理し、０．８％アガロースゲル電気泳動を行い、２kbのCGTase断片をゲルからGene clean（Bio101社製、 USA）を用いて回収した。
【００３６】
プラスミドpNH400(J.Bacteriol., 177, 745-749(1995)）を、BamHIで処理後NcoIで部分分解し、pNH400のＭＷＰ由来のシグナルペプチド上のNcoIが切断されている４．１ｋｂ断片をアガロースゲルより回収し、先に得たCGTase遺伝子断片とＴ4ＤＮＡリガーゼを用いて連結し、CGTase遺伝子を保有するプラスミドpNH400CGを構築した。次に、pNH400CGを用いてバチルス・ブレビスＨＰＤ３１（ＦＥＲＭ  ＢＰ−１０８７）をエレクトロポレーション法（Agric, Biol. Chem., 53, 3099-3100(1989)）により形質転換した。形質転換体からのCGTase生産株の選択は３％澱粉を含むＴ２プレート培地（澱粉３％、ペプトン１％、肉エキス０．５％、酵母エキス０．２％、グルコース１％、ネオマイシン６０μｇ／ｍｌ、寒天１．５％、ｐＨ７．０）で、コロニーの周りが透明になるかどうか（澱粉が分解された際生じるハロ）を確認することによって行い、CGTaseを生産する形質転換体を得た。
【００３７】
▲２▼部位特異的変異及び改変CGTase遺伝子を保有する発現ベクターの構築
Ｔｙｒ１００をＴｒｐ、Ｐｈｅ、Ｌｅｕ、Ａｓｎに置換させるためpNH400CG上のCGTase遺伝子を２断片に分け増幅した（Ｎ末端側の断片をFragment N、Ｃ末端側の断片をFragment Cと呼ぶ）。
【００３８】
Fragment N（０．３ｋｂ）の増幅には、表５で示される配列表の配列番号２に示されるPrimer Nと、表７で示される配列番号４に示されるPrimer YCを用いた。また、Fragment C（１．８ｋｂ）の増幅には、表６で示される配列番号３に示されるPrimer Cと、表８で示される配列番号５に示されるPrimer YNW、表９で示される配列番号６に示されるPrimer YNF、表１０で示される配列番号７に示されるPrimer YNL及び表１１で示される配列番号８に示されるPrimer YNNを用いた。（図２）
【００３９】
【表５】
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【００４０】
【表６】
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【００４１】
【表７】
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【００４２】
【表８】
0003809472.tif 000009
【００４３】
【表９】
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【００４４】
【表１０】
0003809472.tif 000011
【００４５】
【表１１】
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【００４６】
Ｔｙｒ１００は、４種のPrimer YNW、YNF、YNL及びYNNにより、各々Ｔｒｐ、Ｐｈｅ、Ｌｅｕ及びＡｓｎに置換した。Ｔｙｒ１００が正しく置換されていることは、ＤＮＡのシークエンスを行って確認した。
【００４７】
得られたFragment NをNcoI、BspEIでFragment CをBspEI、BamHIでそれぞれ処理した後、▲１▼のpNH400CG構築時と同様の方法でプラスミドpNH400に挿入し、改変CGTaseをコードする遺伝子を保持するプラスミドpNH400CGY100W、pNH400CGY100F、pNH400CGY100L、pNH400CGY100Nを得た。
ここで得た各々のプラスミドでバチルス・ブレビス  ＨＰＤ３１（ＦＥＲＭ  ＢＰ−１０８７）を▲１▼と同じ方法で形質転換し、改変CGTaseを生産する形質転換体を得た。
【００４８】
▲３▼Wild Type（バチルス・マセランス  ＩＡＭ１２４３のCGTase）及び改変CGTaseの発現・精製
▲１▼及び▲２▼で得た各々の形質転換体を、オートクレーブ滅菌した２ＳＬ培地（ペプトン４％、酵母エキス０．５％、グルコース２％、ＦｅＳＯ4・７Ｈ2Ｏ  ０．００１％、ＭｎＳＯ4・４Ｈ2Ｏ  ０．０００１％、ＺｎＳＯ4・７Ｈ2Ｏ  ０．０００１％、ネオマイシン６０μｇ／ｍｌ、ｐＨ７．２）１００ｍｌを含む５００ｍｌ容三角フラスコに植菌し、３０℃、３日間振とう培養した。各々のCGTase（バチルス・マセランス  ＩＡＭ１２４３のCGTase（Wild Type）、Ｔｒｐ改変CGTase、Ｐｈｅ改変CGTase、Ｌｅｕ改変CGTase及びＡｓｎ改変CGTase）の培養液中ヘの生産量はいずれも約１ｇ／Ｌであった。
【００４９】
培養終了後、各々の培養液から遠心分離で菌体を除いた培養上清に５０％飽和になるように硫酸アンモニウムを加え、生成したCGTaseを沈澱させた。沈澱を遠心分離にて回収して、酢酸緩衝液（５０ｍＭ酢酸ナトリウム、１ｍＭＣａＣｌ2、ｐＨ６．０）に溶解後、同緩衝液で透析した。溶解したCGTaseを上記と同じ酢酸緩衝液にて平衡化させたDEAE-Toyopearl 650Mカラムに吸着させた後、塩化ナトリウム０Ｍ〜０．２Ｍまでの直線濃度勾配により溶出させ、CGTase画分を回収した。回収したCGTase画分に最終塩濃度４Ｍ〜０Ｍになる様に塩化ナトリウムを加え、４Ｍ塩化ナトリウムを含む酢酸緩衝液にて平衡化させたphenyl-Toyopearl 650Mカラムに吸着させ、塩化ナトリウム濃度４Ｍからの直線逆濃度勾配にてCGTaseを溶出させ、CGTase画分を回収した。回収したCGTase画分を酢酸緩衝液を用いて透析して、Wild type CGTase、Ｔｒｐ改変CGTase、Ｐｈｅ改変CGTase、Ｌｅｕ改変CGTase及びＡｓｎ改変CGTaseの精製物を得た。
【００５０】
▲４▼改変CGTaseの反応生成物の分析
▲３▼で得たWild Type及び各々の改変CGTaseの酵素液３５０μｌ（CGTaseを４ｍｇ／ｍｌで含む５０ｍＭ酢酸緩衝液、ｐＨ６．０）に、０．４％可溶性澱粉を含む酢酸緩衝液１００μｌを加え、３７℃で反応を行った。反応開始２０分経過後にサンプリングを行い、直ちに１００℃で５分間煮沸し、反応を停止させた。反応停止後、反応液をフィルター濾過し（０．０２μｍ）、生成したＣＤをＨＰＬＣ（カラム：ＴＳＫ−ＧＥＬ  ＯＤＳ−８０Ｔｓ、粒径５μｍ、径４．６ｍｍ×長さ２５０ｍｍ（東ソー社製）、緩衝液：メタノール／水（１２／８８）、流速：１．０ｍｌ／ｍｉｎ、検出器：示差屈折計）にて分析した。
【００５１】
図３に（１）α−ＣＤ、β−ＣＤ及びγ−ＣＤの標準品を混合したスタンダード溶液、（２）澱粉溶液にWild Type CGTaseを２０分間作用させた時の反応液、（３）澱粉溶液にＬｅｕ改変CGTaseを２０分間作用させた時の反応液のＨＰＬＣ分析のパターンを示した。
【００５２】
またこのときの生成された総ＣＤ量に対するα−、β−、γ−ＣＤの生成比率を表１２に示した。Wild Type CGTaseは、α−ＣＤ５３％、β−ＣＤ３４％、γ−ＣＤ１３％である。これに対していずれの改変CGTaseもα−ＣＤの生成比率が高くなっている。この様にCGTaseのＴｙｒ１００の改変はα−ＣＤ生成率を増加させ、特にＬｅｕ改変CGTaseにおいてその傾向は顕著に現れた。
【００５３】
【表１２】
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【００５４】
▲５▼改変CGTaseを用いたＣＤの製造
▲３▼で得たＬｅｕ改変CGTase１．５ｇ、を０．４％可溶性澱粉溶液／５０ｍＭ酢酸緩衝液（ｐＨ６．０）１００ｍｌに添加し、４０℃にて３０分間反応させた後、煮沸して酵素を失活させた。この反応液をフィルター濾過（０．０２μｍ）したのち、ＨＰＬＣ（カラム：ＴＳＫ−ＧＥＬ  ＯＤＳ−８０Ｔｓ、粒径５μｍ、径４．６ｍｍ×長さ２５０ｍｍ（東ソー社製）、緩衝液：メタノール／水（１２／８８）、流速：１．０ｍｌ／ｍｉｎ、検出器：示差屈折計）にてα−ＣＤ画分を分取した。本画分のα−ＣＤの純度は９５％であり、ＨＰＬＣによる１回の分画のみで高純度のα−ＣＤを得ることが出来た。
【００５５】
【発明の効果】
本発明によって改変CGTaseの製造がはじめて可能となった。本改変CGTaseは従来未知の新規酵素であって、本酵素を澱粉等の基質に作用させると、特にα−ＣＤ含有量が非常に高いＣＤが得られる。
【図面の簡単な説明】
【図１】各種菌株由来CGTaseのＡ領域におけるチロシン残基前後のアミノ酸配列を示す。
【図２】  CGTase遺伝子の２断片（Fragment A、B）の増幅を示す。
【図３】３種類のサンプルについてのＨＰＬＣ分析パターンを示す。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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