(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
活性化プロテインＣを有効成分として含有することを特徴とする脳血管攣縮治療剤。
【請求項２】
活性化プロテインＣを有効成分として含有することを特徴とする血腫除去剤。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は、脳血管攣縮治療剤および血腫除去剤に関するものである。
【０００２】
【従来の技術】
クモ膜下出血は、脳動脈瘤や脳動静脈奇形の破裂によりクモ膜下腔に出血が広がり、意識障害や麻痺などの神経脱落症状を呈する機能予後の悪い疾患である。本疾患は発症後約1週間前後において主幹動脈の持続的でかつ高度の狭窄である脳血管攣縮を生じ、これが病態の増悪に関与するといわれている。即ち、脳血管攣縮が主幹動脈の脳血流を低下させると共に血管壁や血液の性状を変化させて循環障害をきたし、これらが脳虚血を更に悪化させて重篤な神経脱落症状を惹起するというものである。
【０００３】
脳血管攣縮の発症機序の詳細は不明であるが、実験的に動物のクモ膜下腔に血液を注入することにより脳血管攣縮が惹起されること、臨床的にクモ膜下腔の血腫量と脳血管攣縮の発生頻度との相関関係が示唆されていることから、クモ膜下腔に残存した血腫の存在が主たる原因と考えられている。これまでのところ脳血管攣縮の直接的な原因物質としては、過酸化脂質、オキシヘモグロビン、トロンボキサンＡ２、エンドセリン、トロンビンなど種々の生理活性物質が挙げられているが特定には至っていない。
【０００４】
クモ膜下出血後の脳血管攣縮や、これに伴う脳虚血症状に対しては脂質過酸化抑制剤、トロンボキサンＡ２合成酵素阻害剤、脳血管拡張剤の全身投与などの治療がなされているが、これらの治療法は血管攣縮の主因である血腫が存在した状態での対症療法であるため十分な成績は得られていない。
【０００５】
近年、上記対症療法での有効性の限界から血腫を積極的に溶解、除去する目的でウロキナーゼ、組織プラスミノーゲンアクティベーター等の血栓溶解剤を用いた脳槽灌流による治療法も試みられている。しかし、これらの薬剤では至適用量や投与方法が明らかでない上に脳内出血、クモ膜下出血、硬膜外出血等の出血性合併症の報告もみられることから、より安全かつ有効な治療薬が求められている。
【０００６】
また、このクモ膜下出血後に用いられる脳槽内灌流は脳出血時の血腫除去にも応用が考えられることから、出血の副作用の少ない安全かつ有効な薬剤は脳出血後の血腫除去に際しても極めて有用であり、こうした薬剤の開発は本疾患分野においては重要な課題と考えられる。
【０００７】
一方、活性化プロテインＣ（以下「ＡＰＣ」と略す）は２本鎖からなる分子量61,000の抗凝固作用を有するセリンプロテアーゼである。このＡＰＣは通常その前駆体であるプロテインＣ（以下「ＰＣ」と略す）として血中に存在するが、いったん凝固系が作動すると生じたトロンビンにより限定分解を受け、酵素活性を発現する。
【０００８】
ＡＰＣは、凝固因子のカスケードのうち活性化された第VIII因子（以下「FVIIIa」と略す）および第V因子（以下「FVa」と略す）を不活性化することによりトロンビン産生を抑制して抗凝固作用を示す（Biochemistry, 16, 5824-5831, 1977, Biochem. Biophys. Acta., 571, 333-342, 1979, Blood, 59, 1067-1072, 1982, J. Biol. Chem., 258, 1914-1920, 1982, Biochemistry, 19, 401-409, 1980）。  また、ＡＰＣはin vitroではプラスミノーゲン活性化因子インヒビターも阻害することから、間接的にプラスミノーゲン活性化因子を相加させ線溶活性を示す可能性があると考えられている（Proc. Natl. Acad. Sci., 82, 1121-1125, 1985）。汎発性血管内血液凝固症候群（以下「ＤＩＣ」と略す）等の動的凝固亢進状態では強力な抗凝固作用が要求されるが、FVIIIaやFVaを不活性化するＡＰＣはトロンビンの産生を抑制することによって、トロンビンによるFVIIIaやFVaの産生、即ち凝固系のポジティブ・フィードバックを遮断することになり、強力な抗凝固作用が期待される。一方、ＤＩＣ等の血栓形成局所では、血管内皮細胞の損傷によるトロンボモジュリン（以下「ＴＭ」と略す）の欠如が考えられる。特に、エンドトキシンに起因する場合する場合はＴＭ活性の低下が考えられ、ＰＣからＡＰＣへの転換が十分でないと考えられる。したがって、高純度のＡＰＣはＤＩＣ等の凝固亢進状態を直接的に抑制し有効な治療薬として期待されている。
【０００９】
しかしながら、従来ＡＰＣが脳血管攣縮を抑制し、頭蓋内の血腫除去に対して有効であることは知られていない。
【００１０】
【発明が解決しようとする課題】
本発明者らは、クモ膜下出血後などの脳血管攣縮治療剤および頭蓋内の血腫除去剤を開発すべく鋭意研究を行った結果、ＡＰＣが上記疾患の治療剤として臨床応用できることを見出し、本発明を完成した。
【００１１】
【課題を解決するための手段】
すなわち、本発明は、ＡＰＣを有効成分として含有することを特徴とする脳血管攣縮治療剤またはＡＰＣを有効成分として含有することを特徴とする血腫除去剤である。
【００１２】
【発明の実施の形態】
本発明で用いられるＡＰＣは，ヒト、その他の哺乳動物の血液から得られる血液由来のＡＰＣおよび遺伝子組換え技術によって製造されるヒト等の哺乳動物由来のＡＰＣを含むものとする。本発明に用いられるＡＰＣとしては、これらＡＰＣのなかでもヒト血液由来のＡＰＣ、遺伝子組換え技術によって製造されるヒトＡＰＣが好ましい。また、本発明の目的とする脳血管攣縮治療剤および血腫除去剤としての効果を得られる限り、血液由来のＡＰＣまたは遺伝子組換え技術によって製造されるＡＰＣと生理学的に同等の活性を有するＡＰＣの全アミノ酸配列の一部が欠損、置換、挿入、追加等された誘導体も本発明のＡＰＣに含まれる。
【００１３】
本発明のＡＰＣは、従来公知の方法によって製造することができる。例えば、ヒト血液より分離したＰＣを活性化する方法、ヒト血液よりＡＰＣを分離する方法、或いは遺伝子組換え技術によって製造する方法等が挙げられる。
【００１４】
この中で、ＰＣからＡＰＣへ活性化する方法としては特に制約はなく、例えばヒトやウシ等の血液より分離したトロンビンにより活性化する方法、或いは合成ペプチドにより活性化する方法等が挙げられる。
【００１５】
血液由来のＡＰＣの製造方法としては以下の方法が挙げられる。例えば、ヒト血漿から抗プロテインＣ抗体、好ましくはモノクローナル抗体を用いてアフィニティークロマトグラフィーにより精製されたＰＣをヒトトロンビンで活性化した後、陽イオン交換クロマトグラフィーにより精製する方法（Blood, 63, 115-121, 1984）、或いはKisielによるヒト血漿からクエン酸Ba吸着・溶出、硫酸アンモニウム画分化、DEAE-セファデックスカラムクロマトグラフィー、デキストラン硫酸アガロースクロマトグラフィーおよびポリアクリルアミドゲル電気泳動等の工程により精製して得られたＰＣを活性化してＡＰＣとする方法（J. Clin. Invest. 64, 761-769, 1979）、或いは市販のＰＣを含有する血液凝固製剤をTaylor等の方法（J. Clin. Invest. 79, 918-925, 1987）で活性化してＡＰＣとする方法等がある。
【００１６】
また、遺伝子組換え技術を用いてＡＰＣを調製する方法としては、例えば特開昭61-205487号、特開平1-2338号或いは特開平1-85084号等に記載された方法等がある。
【００１７】
上述の方法で調製されたＡＰＣの活性を最大限に維持するため、本発明で用いられるＡＰＣは新鮮なもの、あるいは４℃で保存して使用する場合には保存後５日以内のものであることが好ましい。また、本発明で用いられるＡＰＣは好適な安定化剤と共に凍結乾燥して保存したものを用いることもできるし、更にＡＰＣ溶液を凍結、保存したものを用いることも可能である。
【００１８】
本発明の製剤は、有効成分としてＡＰＣを含有していればよく、公知のいかなる製剤学的製造法によっても製造することができる。本発明のＡＰＣは薬剤として一般的に用いられる適当な担体または、媒体、例えば滅菌水や生理食塩水、植物油、鉱油、高級アルコール、高級脂肪酸、無害性有機溶媒等、さらには必要に応じて賦形剤、着色剤、乳化剤、懸濁剤、界面活性剤、溶解補助剤、吸着防止剤、安定化剤、保存剤、保湿剤、酸化防止剤、緩衝剤、等張化剤、無痛化剤等と適宜組み合わせて生体に効果的に投与するのに適した注射剤、経鼻吸収剤、経口剤等の医薬品製剤、好ましくは注射剤に調整することができ、これらの具体例のいくつかについては公知である。注射剤の製剤としては、例えば凍結乾燥品や、注射用水剤、あるいは浸透圧ポンプに封入した形等で提供できる。
【００１９】
本発明の製剤は、動脈注射、静脈注射、脳槽内注射によって投与することができる。また、より直接的な効果が期待できる点で脳槽内穿刺により脳槽内へ投与することが好ましい。特に、開頭手術時にドレナージを挿入した後、脳槽内を灌流する方法等が最適である。投与量は、例えば脳槽内投与の場合、一般成人１日当たり０．５〜１０mg／人が適当である。
【００２０】
【実施例】
以下、実施例を示し本発明を更に詳細に説明するがこれら実施例は本発明の範囲を限定するものではない。
【００２１】
［実施例１］
ウサギクモ膜下出血（SAH）モデルにより、ＡＰＣをクモ膜下出血後の脳槽内に投与することで脳血管攣縮の治療を試みた。
【００２２】
ウサギを用い自家血3mlを大槽に注入してSAHとし、15分後にＡＰＣ0.1mg、0.5mg或いは溶媒を0.5mlとして大槽に1回注入した。被験薬の作用はDAY2において▲１▼クモ膜下腔の血腫残存量、▲２▼脳底動脈（以下「ＢＡ」と略す）血管径、▲３▼ＢＡのacetylcholineに対する弛緩反応(Emax)で評価した。
【００２３】
▲１▼クモ膜下腔の残存血腫は溶媒群では脳幹腹側部を中心に認められた。APC0.1mg群では血腫が減少し、脳幹腹側部には僅かに残存したが、APC0.5mg群ではほとんど認められなかった。▲２▼BA血管径は、脳血管撮影によりSAH前と比較したところ、溶媒群 77.5±3.1％ (n=7)に対してAPC0.5mg群では97.2±3.8％(n=5)であった。▲３▼BAのacetylcholineに対する弛緩反応のEmaxは溶媒群66.0±6.3％に対してAPC 0.5mg群106.9±2.9％となり、APC投与群でEmaxの改善がみられた。
【００２４】
【発明の効果】
本発明のＡＰＣを有効成分として含有する治療剤は脳血管攣縮を抑制し、更に血腫の除去を促進する作用を有する。従って、ＡＰＣを有効成分とすることにより脳血管攣縮治療剤或いは脳出血、特にクモ膜下出血後の血腫除去剤として使用することができる。また、本発明のＡＰＣタンパクは、例えば抗血栓剤等のような既存の薬剤に比べて出血などの副作用が少ないことから、安全な脳血管攣縮治療剤および血腫除去剤となる。