(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
超臨界抽出剤として二酸化炭素を用い、抽出圧力６〜２０ＭＰａ、抽出温度２５〜１００℃で冬虫夏草より抽出して得られる冬虫夏草抽出物を有効成分とする真皮線維芽細胞増殖促進剤。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は、真皮線維芽細胞の増殖促進作用により、皮膚の老化防止、肌荒れ改善等に有効な皮膚化粧料、及び抗炎症剤、創傷治療剤等として有用な皮膚外用剤に関する。
【０００２】
【従来の技術】
従来、皮膚外用剤の分野において、皮膚細胞自体を賦活し、皮膚の機能そのものを活性化して、皮膚症状の改善や抗炎症効果又は創傷治療効果を生ぜしめる研究が多くなされている。従来、かかる皮膚賦活剤として、ホルモン類，ビタミン類，γ-オリザノール，サポニン等の生薬抽出物，胎盤抽出物，植物レクチン，キノコ抽出物、さらには動物由来タンパク質といった種々の物質が使用されてきた。
【０００３】
【発明が解決しようとする課題】
しかし、以上述べたような皮膚賦活剤においては、副作用の問題から使用に際し制限を受けたり、作用・効果が十分でなく、かなり大量に配合しなければならなかったり、といった問題点があった。また、動物由来物質においては特に品質の管理が困難で、安定な皮膚賦活剤の提供を受けることが難しく、さらに皮膚外用剤に配合した場合、活性が失われやすいという問題もあった。
【０００４】
【課題を解決するための手段】
上記の課題を解決するため、我々は微量で十分な真皮線維芽細胞の増殖促進効果を有する物質の検索を行った。その結果、冬虫夏草の超臨界流体抽出物が、ごく微量で、真皮の線維芽細胞の増殖を有意に促進する作用を有することを見い出した。
【０００５】
【発明の実施の形態】
本発明の実施の形態を説明する。
【０００６】
本発明において使用可能な抽出原料である冬虫夏草は特に制限はなく、一般に知られている蝶蛾類鱗翅目および鞘翅日の昆虫又はその幼虫に寄生してその体内の菌核を形成し、夏季に宿主である昆虫又はその幼虫の体表面に形成される子実体であればよい。本発明においては特に好ましく使用可能な冬虫夏草としては、コウモリ蛾科の幼虫（Hepialus armoricanus Ober.）に寄生してその体内に菌核を形成し、夏季に頭部から根棒状の子実体を形成するコルダイセプシネンシス（Cordyceps sinensis）が挙げられる。また、コルダイセプシネンシス以外の冬虫夏草で生薬として薬効のあるものとしてはセミタケ（Cordyceps sobolifera B.）やサナギタケ（Cordyceps militaris Link）、ミミカキタケ（Cordyceps nutans Pat.）などが知られており、これらも本発明において好ましく使用できるものである。本発明にかかる方法により、これらの冬虫夏草であって、有効成分を産生するものであればいずれの場合も抽出可能である。また、本発明にかかる方法を用いることにより、子実体又は被子体の区別なく抽出可能であるが、特に高収量で得るためには、コルダイセプシネンシスの子実体からの抽出が好ましい。
【０００７】
［超臨界流体又は亜臨界流体抽出物］
次に、超臨界流体又は亜臨界流体を用いて抽出する方法について説明する。超臨界（又は亜臨界）流体抽出装置に冬虫夏草の全草又は子実体又は被子体の１又は２以上の箇所を生のまま若しくは乾燥させたもの、あるいは、水、エタノール、メタノール、イソプロパノール、イソブタノール、n-ヘキサノール、メチルアミルアルコール、2-エチルブタノール、n-オクチルアルコール等の１価アルコール類、グリセリン、エチレングリコール、エチレングリコールモノメチルエーテル、プロピレングリコール、プロピレングリコールモノメチルエーテル、プロピレングリコールモノエチルエーテル、トリエチレングリコール、1,3-ブチレングリコール、へキシレングリコール等の多価アルコール又はその誘導体、アセトン、メチルエチルケトン、メチルイソブチルケトン、メチル-n-プロピルケトン等のケトン類、酢酸エチル、酢酸イソプロピル等のエステル類、エチルエーテル、イソプロピルエーテル、n-ブチルエーテル等のエーテル類、スクワラン、ワセリン、パラフィンワックス、パラフィン油などの炭化水素類、オリーブ油、小麦胚芽油、米油、ゴマ油、マカダミアンナッツ油、アルモンド油、ヤシ油等の植物油脂、牛脂、豚脂、鯨油等の動物油脂、リン酸緩衝生理食塩水等の無機塩類を添加した極性溶媒、界面活性剤を添加した溶媒などを用いて予め抽出した抽出物を濃縮した後に減圧乾燥させた成分を投入し、超臨界流体又は亜臨界流体によって抽出する。
【０００８】
超臨界流体抽出法又は亜臨界流体抽出法で用いる抽出剤には特に制限はなく、例えば、水、二酸化炭素、エチレン、プロピレン、エタン、プロパン、一酸化二窒素、クロロジフルオロメタン、クロロトリフルオロメタン、キセノン、アンモニア、メタノール、エタノールなどを使用することができるが、最終製品が食品や医薬品または化粧品や医薬部外品であるときには、取り扱い上において、あるいは安全性、製品への混入による毒性の問題などを考慮すると、二酸化炭素を使用することが好ましい。抽出圧力は、使用する抽出剤の臨界圧力に応じて適宜選定することができるが、通常は３〜７０ＭＰａであることが好ましく、特に二酸化炭素を使用するときは４〜６０ＭＰａ、好ましくは５〜４０ＭＰａ、最も好ましくは６〜２０ＭＰａである。抽出温度は、使用する抽出剤の臨界温度に応じて適宜選定することができるが、通常は１０〜７００℃であることが好ましく、特に抽出剤として二酸化炭素を使用するときは１５〜２００℃、好ましくは２０〜１５０℃、最も好ましくは２５〜１００℃である。
【０００９】
抽出の際の冬虫夏草と抽出剤との比率は特に限定されないが、冬虫夏草１に対して溶媒０．１〜１０００重量倍、特に抽出操作、効率の点で、０．５〜１００重量倍が好ましい。また、抽出時間は抽出条件などにより異なるが２時間〜２週間の範囲とするのが好ましい。
【００１０】
また、抽出剤の溶解度を向上させるためにエントレーナを用いることもできる。エントレーナとしては、水、メタノール、エタノール、プロパノール、ブタノール、アセトン、ヘキサン、シクロヘキサン、トルエン等の溶媒が挙げられるが、特に限定されない。
【００１１】
これらの溶媒を単独で、または２種以上を組み合わせてエントレーナとして用いる。特にエントレーナとして、水、メタノール、エタノール、プロパノール、ブタノールなどを用いた場合、好ましいエントレーナ濃度は、０．０００００１〜３０．０％、より好ましくは、０．００００１〜１０．０％、最も好ましくは、０．０００１〜１．０％である。これらのエントレーナを用いることで抽出剤、特に二酸化炭素中への有効成分の溶解度を向上させる効果が高く、抽出率も高くなる。
【００１２】
このようにして得られた冬虫夏草の有効成分は、抽出物をそのまま用いることもできるが、その効果を失わない範囲で、脱臭、脱色、濃縮などの精製操作を加えたり、さらにはカラムクロマトグラフィーなどを用いて分画物として用いてもよい。これらの抽出物や精製物、分画物は、これらから溶媒を除去することによって乾固物とすることもでき、さらに、アルコールなどの溶媒に可溶化した形態、或いは乳剤の形態で用いることができる。
【００１３】
本発明における真皮線維芽細胞増殖剤は、前述の冬虫夏草を超臨界流体又は亜臨界流体により抽出して得られる抽出物を有効成分とする。また、かかる真皮線維芽細胞増殖剤である冬虫夏草の超臨界流体抽出物又は亜臨界流体抽出物を皮膚外用剤に配合することにより、優れた皮膚の老化防止効果、肌荒れ改善効果、及び抗炎症効果、創傷治療効果を発揮することができる。
【００１４】
冬虫夏草を超臨界流体又は亜臨界流体により抽出して得られる抽出物の皮膚外用剤への配合量としては、一般に、０．０００００１重量％〜１０．０重量％であり、好ましくは、０．００００１重量％〜５．０重量％、さらに好ましくは０．０００１重量％〜１．０重量％である。
【００１５】
本発明の冬虫夏草抽出物を皮膚外用剤として使用する場合、クリーム、軟膏、ローション、乳液、固形状、散剤など任意の剤型とすることができ、化粧水、乳液、美容液、保湿クリーム等の基礎化粧料、日焼け止めクリーム、日焼け止めローション、日焼けオイル、カーマインローション等のサンケア商品、ファンデーション、アイライナー、マスカラ、アイカラー、チークカラー、口紅などのメイクアップ化粧料、洗顔料、ボディーシャンプー、ヘアシャンプー等の洗浄料、リンス、トリートメント、ヘアクリーム、ヘアオイル、整髪剤などの毛髪用化粧料、香水、防臭制汗剤等の形態で提供することができる。
【００１６】
その際、本発明の効果を損なわない範囲内で、皮膚外用剤に一般的に用いられる油性成分、界面活性剤、保湿剤、顔料、紫外線吸収剤、抗酸化剤、香料、防菌防黴剤等の一般的な医薬品及び化粧料用原料や、皮膚細胞賦活剤、抗炎症剤、美白剤等の生理活性成分をも含有させることができる。
【００１７】
【実施例】
次に、実施例を挙げて本発明について更に詳細に説明を加えるが、本発明が、これら実施例にのみ限定されないことは言うまでもない。なお、以下に用いる％は、特記しないものはすべて重量％である。
【００１８】
＜実施例１＞  冬虫夏草の超臨界流体抽出物
冬虫夏草（Cordyceps sinensis）粉末５０gを５００ｍＬの熱水で５時間抽出した後、抽出残試料を乾燥粉砕する。エントレーナとして０．００３％のエタノールを加えた後、４０℃において１５ＭＰａの二酸化炭素を分離槽出口での大気圧下での二酸化炭素の流量が７００リットル／時間となるように調節しながら超臨界状態の二酸化炭素を供給した。その後、抽出槽の圧力を減圧し抽出物を取り出した。
【００１９】
［真皮線維芽細胞増殖作用の評価］
正常ヒト真皮線維芽細胞を１穴当たり５．０×１０3個となるように４８穴プレートに播種した。播種培地は５容量％牛胎児血清を添加した市販培地のＤ−ＭＥＭ（日研生物医学研究所）を用いた。２４時間培養後、任意の濃度に調製した冬虫夏草の超臨界流体抽出物を添加した５容量％牛胎児血清含有Ｄ−ＭＥＭ培地に交換し、さらに任意の時間培養を行った。その後、各培養時間毎にCoulter Counter（ベックマン・コールター株式会社）を用いて１穴当りの細胞数の計測を行った。測定法の妥当性を確認するためのポジティブコントロールとして、１０容量％牛胎児血清を添加したＤ−ＭＥＭを用いたものを同時に測定した。
【００２０】
冬虫夏草の超臨界流体抽出物の真皮線維芽細胞の増殖に及ぼす作用を表１に示した。表１中、冬虫夏草の超臨界流体抽出物の各添加濃度における真皮線維芽細胞の増殖を細胞増殖指数で示している。細胞増殖指数は、冬虫夏草の超臨界流体抽出物を添加していない試料を１００としている。なお、本実験における陽性コントロールは１４６であった。
【００２１】
【表１】
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**：ｐ<0.01
【００２２】
表１より明らかなように、冬虫夏草の超臨界流体抽出物を３．１３μｇ/ｍｌ及び６．２５μｇ/ｍｌ添加した試料において、細胞増殖指数が１３８及び１３６と危険率１％において有意な真皮線維芽細胞の増殖が認められた。このことから、実施例１で示した冬虫夏草の超臨界流体抽出物は、優れた真皮線維芽細胞の増殖促進作用を有することが明らかとなった。
【００２３】
そこで、我々は、この冬虫夏草の超臨界流体抽出物を皮膚外用剤に配合することを検討した。
【００２４】
冬虫夏草の超臨界流体抽出物の配合量は、上記した細胞増殖指数に対する示適濃度から、皮膚外用剤として用いた場合の有効濃度を勘案して、０．０００１重量％〜１．０重量％程度が適当であると考えられる。
【００２５】
表２に示す処方で実施例２にかかる化粧水を調製した。尚、この化粧水は、(１)に(２)〜(６)を溶解したアルコール相を、(７)〜(９)を均一に混合、溶解した水相に添加して、均一に混合することにより調製した。
【００２６】
【表２】
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【００２７】
［皮膚の老化防止効果］
本発明の実施例２において、６カ月間の実使用試験を行った。なお、冬虫夏草の超臨界流体抽出物を配合していない処方を比較例とした。実使用試験は、パネラーとして、しわや皮膚弾性の低下といった皮膚の老化症状を顕著に呈する４０才〜６０才代の女性を１群２０名として用い、各群に実施例及び比較例をそれぞれブラインドにて１日２回使用させて行った。使用試験開始前及び終了後に皮膚の状態を観察し、しわ及び皮膚の弾性の改善効果について「改善」、「やや改善」、「変化なし」の３段階にて評価した。なお、しわの程度については写真撮影及びレプリカ採取により、皮膚の弾性についてはキュートメーターにより測定して評価した。結果は、各評価を行ったパネラー数にて表３に示した。
【００２８】
【表３】
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【００２９】
表３より明らかなように、本発明の実施例２では、しわ、皮膚弾性ともに全パネラーで症状の改善傾向が見られた。これに対して、冬虫夏草の超臨界流体抽出物を配合していない比較例では、しわ、皮膚弾性ともに明確な改善の見られたパネラーは存在しなかった。
【００３０】
［肌荒れ改善効果］
次に、実施例２、及び比較例において、それぞれ肌荒れ症状を有するパネラー２０名に１ヶ月間使用させ、肌荒れ症状の改善について評価させた。評価は、「改善」、「やや改善」、「変化なし」の３段階で行わせた。結果は、各評価を行ったパネラー数にて表４に示した。
【００３１】
【表４】
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【００３２】
表４より明らかなように、実施例２を使用したほとんどのパネラーが、肌荒れ症状はやや改善されたと答えており、肌荒れ症状が改善されなかったと答えたパネラーはいなかった。これに対して、冬虫夏草の超臨界流体抽出物を配合していない比較例では、肌荒れが明確に改善されたパネラーは存在しなかった。
【００３３】
［抗炎症効果及び創傷治療効果］
次に、実施例２及び比較例について、人工的に炎症又は創傷を生じさせたマウス各５匹に、各試料を炎症部位又は創傷部位に０．５ｇずつ１日２回７日間塗布した。７日目に炎症部位又は創傷部位の状態を観察し、抗炎症効果については「有効」、「やや有効」、「変化なし」の３段階で、創傷治療効果については「完全治癒」、「ほぼ治癒」、「変化なし」の３段階で評価した。結果は、各評価を行ったマウスの数にて表５に示した。
【００３４】
【表５】
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【００３５】
表５より、実施例２を使用した場合、ほとんどのマウスにおいて抗炎症効果、及び創傷治療効果が認められた。これに対して、比較例を使用した場合には、抗炎症効果については、やや改善傾向が見られるものの、実施例２のように十分なものではなく、創傷治療効果に関しては、全例において不完全であった。
【００３６】
次に、本発明の他の実施例を示す。
【００３７】
＜実施例３＞  水中油乳化型クリーム
(１)スクワラン                                      １０．００(重量％)
(２)ミリスチン酸オクチルドデシル                      ５．００
(３)水素添加大豆リン脂質                              ０．２０
(４)バチルアルコール                                  ３．００
(５)硬化油                                            ２．００
(６)ステアリン酸                                      １．５０
(７)親油型モノステアリン酸グリセリン                  １．５０
(８)モノステアリン酸ポリグリセリル                    １．５０
(９)ベヘニルアルコール                                ０．８０
(10)モノミリスチン酸ポリグリセリル                    ０．７０
(11)サラシミツロウ                                    ０．３０
(12)混合脂肪酸トリグリセリド                          ０．１０
(13)d-δ-トコフェロール                               ０．０５
(14)冬虫夏草の超臨界流体抽出物                        ０．５０
(15)精製水                                                残量
(16)キサンタンガム                                    ０．２０
(17)精製水                                          １９．８０
(18)1,3-ブチレングリコール                          １５．００
(19)パラオキシ安息香酸エステル                        ０．１０
(20)水酸化ナトリウム                                  ０．２０
(21)精製水                                            １．８０
(22)香料                                              ０．１５
(23)エタノール                                        ２．００
製法：(１)〜(14)の油相成分及び(15)〜(19)の水相成分をそれぞれ８０℃に加熱し、混合均一化した後、水相に油相を添加する。更に、予め混合溶解しておいた(20)〜(21)を加えてホモミキサーにて乳化する。撹拌しながら冷却し、４０℃で予め混合、溶解した(22)、(23)を添加し、撹拌、均一化する。
【００３８】
＜実施例４＞  美容液
(１)ジステアリン酸ポリグリセリル                      ２．５０(重量％)
(２)トリ-2-エチルヘキサン酸グリセリル                 ８．００
(３)水素添加大豆リン脂質                              ０．５０
(４)親油型モノステアリン酸グリセリン                  ０．５０
(５)ベヘニルアルコール                                ０．５０
(６)冬虫夏草の超臨界流体抽出物                        ０．２０
(７)グリセリン                                        ７．５０
(８)精製水                                                残量
(９)キサンタンガム                                    ０．４０
(10)エタノール                                        ８．００
製法：(１)〜(６)及び(７)〜(９)の成分をそれぞれ７０℃に加熱し混合、溶解した後、両成分を混合してホモミキサーで乳化する。撹拌しながら冷却し、４０℃で(10)の成分を添加し、混合、均一化する。
【００３９】
＜実施例５＞  化粧水
(１)精製水                                                残量(重量％)
(２)冬虫夏草の超臨界流体抽出物                        ０．１０
(３)エタノール                                        ８．００
(４)パラオキシ安息香酸エステル                        ０．０５
(５)カルボキシビニルポリマー                          ０．０５
(６)精製水                                            ４．９５
(７)キサンタンガム                                    ０．１０
(８)精製水                                            ９．９０
(９)１，３−ブチレングリコール                        ３．００
(10)濃グリセリン                                    １５．００
(11)Ｌ−アルギニン                                    ０．１０
(12)精製水                                            ０．９０
製法：(１)の成分に予め混合しておいた成分(２)と(３)を加え、(４)〜(12)の成分を順次添加して、混合、溶解、均一化する。
【００４０】
＜実施例６＞  クレンジングクリーム
0003822517.tif 000007
製法：(１)〜(９)の油相成分を混合，加熱溶解して７０℃とする。一方(10)〜(12)の水相成分を混合、溶解して７０℃に加熱する。この水相成分に前記油相成分を徐々に添加した後、予め混合、溶解しておいた(13)〜(14)を添加しホモミキサーにて均一に乳化する。乳化後、４０℃まで冷却した後、(15)を添加し混合する。
【００４１】
＜実施例７＞  メイクアップベース
(１)ステアリン酸                                     １．００(重量％)
(２)ベヘニルアルコール                               ０．５０
(３)自己乳化型グリセリルモノステアリン酸エステル     １．５０
(４)冬虫夏草の超臨界流体抽出物                       ０．９０
(５)スクワラン                                     １０．００
(６)1,3-ブチレングリコール                         １０．００
(７)グリセリン                                       ３．００
(８)精製水                                               残量
(９)水酸化カリウム                                   ０．１０
(10)香料                                             ０．１０
(11)二酸化チタン                                     １．００
(12)ベンガラ                                         ０．０１
(13)黄酸化鉄                                         ０．０４
製法：(11)〜(13)を(６)で混練し、これを(７)と(８)の水相に添加、混合し、７０℃に加熱する。一方、(１)〜(５)の油相成分を混合、加熱して７０℃とする。(９)を加えた水相に油相を攪拌しながら添加して乳化する。４０℃まで冷却した後、(10)を添加する。
【００４２】
＜実施例８＞  油中水型乳化クリーム
(１)スクワラン                                      １５．００(重量％)
(２)デカメチルシクロペンタシロキサン                １５．００
(３)架橋型メチルポリシロキサン                        １．００
(４)ジメチコンコポリオール                            ３．００
(５)クオタニウム-18ヘクトライト                       １．００
(６)冬虫夏草の超臨界流体抽出物                        １．００
(７)1,3-ブチレングリコール                            ８．００
(８)メチルパラベン                                    ０．２０
(９)精製水                                                残量
(10)香料                                              ０．１０
製法：(１)〜(６)を混合した油相に、(７)〜(９)の水相を攪拌しながら徐々に添加しホモミキサーにて乳化する。乳化後、(10)を添加し混合する。
【００４３】
＜実施例９＞  クレンジングジェル
(１)グリセリン                                     １５．００(重量％)
(２)1,3-ブチレングリコール                         １０．００
(３)無水ケイ酸                                       ７．００
(４)ポリオキシエチレン(20EO)ラウリルエーテル         ５．００
(５)ポリオキシエチレン(50EO)硬化ヒマシ油             ２．５０
(６)ジエチレングリコールモノエチルエーテル           ５．００
(７)カルボキシビニルポリマー                         ０．５０
(８)水酸化カリウム                                   ０．４５
(９)冬虫夏草の超臨界流体抽出物                       ０．０５
(10)香料                                             ０．１０
(11)精製水                                               残量
製法：(３)、(７)を(11)に添加し均一とした後、(１)及び(２)に(４)〜(６)を溶解させて加え、７０℃に加熱して均一に溶解させる。次いで冷却して４０℃にて(９)、(10)を添加し、最後に(８)を加えて中和する。
【００４４】
＜実施例１０＞  ヘアリンス
(１)セタノール                                        ３．００(重量％)
(２)塩化ステアリルトリメチルアンモニウム              ０．７０
(３)シリコーン油                                      ３．００
(４)ポリオキシエチレン（10EO）オレイルエーテル        １．００
(５)グリセリン                                        ５．００
(６)冬虫夏草の超臨界流体抽出物                        ０．０１
(７)緑色３号１重量％水溶液                            ０．２０
(８)香料                                              ０．１０
(９)精製水                                                残量
製法：(９)に(５)、(７)を加え、７０℃に加熱する。一方(１)〜(４)を混合、溶解し、７０℃に加熱する。この油相を攪拌しながら先に調製した水相に徐々に加えて予備乳化し、ホモミキサーを加えて均一とした後冷却し、４０℃にて(６)、(８)を添加する。
【００４５】
＜実施例１１＞  ヘアトリートメント
(１)ポリオキシエチレン(30EO)ベへニルエーテル         ４．００(重量％)
(２)自己乳化型グリセリルモノステアレート             ６．００
(３)ミリスチン酸イソプロピル                         ５．００
(４)ヘキシルデカノール                               ５．００
(５)スクワラン                                       ３．００
(６)精製ラノリン                                     ３．００
(７)ステアリン酸                                     ５．００
(８)冬虫夏草の超臨界流体抽出物                       １．００
(９)ラウリルジメチルアミノ酢酸ベタイン               ５．００
(10)グリセリン                                     １０．００
(11)精製水                                               残量
(12)香料                                             ０．２０
製法：(１)〜(８)の油相成分を混合、加熱して８０℃とする。一方、(９)〜(11)の水相成分を混合、加熱して８５℃とし、これに前記油相を添加して乳化し、冷却後４０℃にて(12)を添加する。
【００４６】
＜実施例１２＞  洗顔料
(１)ステアリン酸                                   １０．００(重量％)
(２)パルミチン酸                                   １０．００
(３)ミリスチン酸                                   １２．００
(４)ラウリン酸                                       ４．００
(５)オレイルアルコール                               １．５０
(６)ラノリンアルコール                               １．００
(７)冬虫夏草の超臨界流体抽出物                       ０．５０
(８)水酸化カリウム                                   ６．００
(９)精製水                                               残量
(10)1,3-ブチレングリコール                         １０．００
(11)香料                                             ０．１０
製法：(１)〜(７)の油相及び(８)〜(10)の水相をそれぞれ７５℃に混合加熱溶解した後、油相に水相を加えてケン化する。冷却後４０℃で(11)を添加して混合する。
【００４７】
＜実施例１３＞  ボディシャンプー
(１)ラウリン酸                                      ５．００(重量％)
(２)ミリスチン酸                                    ７．５０
(３)ラウロイルジエタノールアミド                    ５．００
(４)冬虫夏草の超臨界流体抽出物                      １．００
(５)グリセリン                                    ２０．００
(６)水酸化カリウム(１０重量％水溶液)                ３．００
(７)精製水                                              残量
(８)香料                                            ０．３０
製法：(１)〜(４)の油相及び(５)〜(７)の水相をそれぞれ７５℃に混合加熱溶解した後、油相に水相を加えてケン化する。冷却後４０℃で(８)を添加して混合する。
【００４８】
本発明の実施例３〜実施例１３について、しわ、皮膚弾性、肌荒れ、抗炎症、創傷治療の改善効果を評価したところ、いずれの実施例においても改善効果が確認された。
【００４９】
なお、本発明の実施例１〜１３を１０℃以下で保存した場合、真皮線維芽細胞増殖促進効果は６ヶ月間にわたってほぼ変化なく維持されていた。更に、本発明の実施例１〜１３を２５℃で６ヶ月間保存した場合においても、真皮線維芽細胞増殖促進効果や製剤の状態に何らの変化も認められなかった。さらに上記実使用試験において、本発明の実施例使用群では、皮膚刺激性反応や皮膚感作性反応を認めたパネラーは存在せず、使用時に痛みや温感、ヒリヒリ感、チクチク感といった刺激感又は不快感を訴えたパネラーも存在しなかった。
【００５０】
【発明の効果】
以上詳述したように、本発明により、優れた真皮線維芽細胞増殖促進剤、及びこれを有効成分として含有する皮膚の老化防止効果、肌荒れ改善効果、抗炎症効果、創傷治療効果を有し、且つ皮膚とのなじみがよく、製剤安定性及び安全性に優れる皮膚外用剤を得ることができた。