(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
安定剤としてpH３．０〜５．０の緩衝剤を含有する、ハイブリッドα−インターフェロンＢＤＢＢ（配列番号１）の安定水性溶液。
【請求項２】
４．０〜４．５のpHを有する、請求項１記載の安定溶液。
【請求項３】
緩衝剤がグリシン／ＨＣｌ又はナトリウムシトレートである、請求項１又は２記載の安定溶液。
【請求項４】
緩衝剤が２０〜４００mMの濃度で存在する、請求項１〜３のいずれか１項に記載の安定溶液。
【請求項５】
緩衝剤が５０〜１５０mM濃度のグリシン／ＨＣｌである、請求項１〜４のいずれか１項に記載の安定溶液。
【請求項６】
前記ハイブリッドα−インターフェロンが０．１〜１．５mg／mlの濃度である、請求項１〜５のいずれか１項に記載の安定溶液。
【請求項７】
前記ハイブリッドα−インターフェロンが０．２〜０．４mg／mlの濃度である、請求項６記載の安定溶液。
【請求項８】
医薬的に許容され得るポリオールをさらに含有する、請求項１〜７のいずれか１項に記載の安定溶液。
【請求項９】
前記ポリオールが、マンニトール、グルコース又はスクロースである、請求項８記載の安定溶液。
【請求項１０】
前記ポリオールが２０〜５００mMの濃度で存在する、請求項８又は９記載の安定溶液。
【請求項１１】
前記ポリオールが１００〜２５０mMの濃度のマンニトールである、請求項８記載の安定溶液。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【産業上の利用分野】
本発明はα−インターフェロンハイブリッドを含有する安定水性組成物に関する。
【０００２】
【従来の技術】
インターフェロンは、ウイルスおよび他の刺激に応答して生産される誘発性分泌蛋白質の群である。α−インターフェロンは多数の異なる疾患状態（これには、ヘアリー（Ｈａｉｒｙ）−細胞白血病、ＡＩＤＳにおけるカポージ（Ｋａｒｐｏｓｉｓ）肉腫、慢性非Ａ、非Ｂ肝炎および基底細胞癌が含まれる）の治療に対し今日臨床的に用いられている。
【０００３】
組換えヒトα−インターフェロンＢ／Ｄハイブリッド成分は、有利な性質を有する分子を造るために親α−インターフェロンＢおよびＤ種の配列の種々の部分を有するように構築された（Ａ．マイスター，Ｇ．Ｕz ，Ｋ．Ｋ．モゲンセン，Ｊ．Ｇｅｎ．Ｖｉｒｏｌ．６７，１６３３，（１９８６））。親分子は開裂しペプチド配列１〜６０、６１〜９２，９３〜１５０および１６１〜１６６をコードするＤＮＡセグメントを交換する。ＢＤＢＢハイブリッドは特に興味ある症状発現前の抗ウィルスおよび抗増殖作用を示すことが見出された（Ｈ．Ｋ．ホッケペル，Ｍ．グルター，Ｍ．Ａ．ホリスベーゲル，Ｊ．Ｋ．ラディンス，Ｄｒｕｇｓｏｆ  ｔｈｅ  Ｆｕｔｕｒｅ，１７（１０），８９９（１９９２））．蛋白質、例えばα−インターフェロンＢＤＳＳは複雑な化学的および物理的性質を有し、これらの性質はこれらの種の精製、分離、保存および輸送において困難さをもたらす。従って、蛋白質薬剤の配合は、堅い小さな有機分子のそれとは大きく異なる。幾つかのクラスの賦形剤が蛋白質およびペプチドの非経口製剤において用いられた。蛋白質は劣った経口生物適合性を有しているので、最も普通のやり方は、有効なドラッグデリバリーを達成するため注入可能な製品としてそれらを提供することである。溶液中での不安定性のために、蛋白質は一般に、皮下、筋肉内又は静脈内投与により注入される直前に再構成されるために凍結乾燥された粉末として製剤化される。
【０００４】
【発明が解決しようとする課題】
蛋白質の分解は２つのカテゴリー、すなわち化学的安定性および物理的安定性に分けることができる。化学的安定性は、蛋白質が結合開裂又は形成を介して化学的に改変される全てのプロセスに関連する。物理的安定性は共有改変を含まないが、しかし例えば変性、凝集又は沈殿を介して蛋白質のより高次元構造において変化する。可能性のある不都合なイムノゲンの作用および／又は治療中の不調和な投与を排除するためハイブリッドα−インターフェロンＢＤＢＢを離解した状態に維持することが望ましい。
【０００５】
注入可能な治療剤として使用するための望ましい濃度では、ハイブリッドα−インターフェロンＢＤＢＢは、水中において物理的に不安定性である。その溶解性は損なわれそしてそれは凝集した状態で存在する。従って、安定化賦形剤を用いねばならない。
【０００６】
【課題を解決するための手段】
本発明者等は、中性pH（ホスフェートで緩衝化）での溶液中で製剤化されるとき、ハイブリッドα−インターフェロンが凝集状態で存在することを見出した。加えて、ペプチドの溶解性は、このような条件下で損なわれているようであり、そして実際極めてわずかしか溶解しない。
【０００７】
本発明者等は、今や、低濃度pHの水性溶液中のハイブリッドα−インターフェロンの製剤化は、蛋白質を安定させ、そしてそれを望ましい単分子状態に保ちそしてより溶解せしめて溶液とすることを見出した。
従って、本発明は安定剤としてpH３．０〜５．０の緩衝剤を含有するハイブリッドα−インターフェロンの安定水性溶液を提供する。
【０００８】
溶液のpHは好ましくは４．０〜４．５である。
ハイブリッドα−インターフェロンは好ましくはα−インターフェロンＢＤＢＢ（配列番号１）である。
選ばれた緩衝塩は医薬として許容され得るものであるべきであり、例えばグリシン／ＨＣｌ又はナトリウムシトレートでありそして好ましくは２０〜４００mMの濃度で存在すべきである。好ましい緩衝塩は５０〜１５０mMの濃度のグリシン／ＨＣｌである。
【０００９】
医薬として許容され得るポリオール、例えばマニトール、グルコース又はスクロースもまた、好ましくは２０〜５００mMの濃度で用いることができる。好ましいポリオールは、１００〜２５０mMの濃度のマニトールである。
ポリオールが溶液の張性を生理学的値に調製するため主に用いられる。
ハイブリッドα−インターフェロンは、好ましくは０．１〜１．５mg／mlの濃度で存在する。より好ましい範囲は、０．２〜０．４mg／mlである。
【００１０】
ハイブリッドα−インターフェロンは、普通に単離されそして多工程手順により精製されそして医薬的に許容されないpH７の緩衝系の凍結せられる大量の溶液として保存される。本発明の安定の溶液を製造するため、この緩衝液を所望pHで医薬として許容され得るものと交換する必要がある。これは、所望の緩衝剤を加え、溶液を限外濾過に委ね、緩衝剤を加えそしてサイクルを数回くり返すことにより行うことができる。
【００１１】
本発明の製剤は、皮下、筋肉内又は静脈内注射により、前述した症状に対する医薬として使用するのに適している。
本発明を以下の実施例により説明する。
【００１２】
【実施例】
例１
pH４．０の安定な０．３mg／mlのハイブリッドα−インターフェロンＢＤＢＢシトレート溶液製剤の調製：
ハイブリッドα−インターフェロンＢＤＢＢ（pH７．０の２００mMの塩化アンモニウム／２０mMのトリス（ヒドロキシメチル）メチルアミン中に２．６mg／ml）の保存大量溶液を、１０ＫＤａ分子量カットオフ膜（アミコンＹＭ１０）を備えた限外濾過セル（アミコン）中でpH４．０の４０mMのナトリウムシトレート／クエン酸を用い５０mlにする。セルを、酸素を有しない窒素を用い５０〜６０ｐｓｉに加圧する。容積を減少させるが、蛋白質が沈殿するであろうようなそのような程度までではなく、膜の表面で蛋白質の濃度を最少にするため連続的に撹伴し、そしてpH４．０の４０mMのナトリウムシトレート／クエン酸を用いて希釈し５０mlに戻した。このサイクルを５回くり返す。最終溶液のpHは４．０として確認する。最終溶液の蛋白質含量を標準手順（ブラッドフォード分析、バイオ−ラッド）を用い０．３mg／mlとして確認する。
【００１３】
前述の製剤を滅菌濾過しそして２mlの医薬等級タイプ１のガラス管に無菌的に充てんしそしてテフロンコートしたゴム隔壁／アルミニウムクリンプ（ｃｒｉｍｐ）キャップで封止する。バイアルを４℃で暗所に保存する。１定間隔時に、サンプルを逆相ｈｐｌｃ（化学的安定性の指標）およびサイズ排除クロマトグラフィー（溶液中の蛋白質の凝集状態の測定）を用いて分析する。
【００１４】
総ピーク面積の内のハイブリッドα−インターフェロンを％として表わされる、逆相ｈｐｌｃの結果を以下に示す：
0003745395.tif 000002
【００１５】
結果をくり返し（一般に３〜５回）注入の平均として表わす。これらの測定の変動係数は＜０．３％である。
分解は為りの一次動力学に従っているようである。データを通じた最良に適合した直線の延長により、ハイブリッドα−インターフェロンＢＤＢＢの初期含量の９５％（ｔ９５）まで分解するのに要する時間として定義される保存寿命の推定を行うことができる。この製剤は４℃で少なくとも８月の予測した保存寿命を有する。
サイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）は、４℃で１３６日間の保存後、凝集の検知できる形成は示さない。
【００１６】
例２
例１をくり返す。但し、溶液はまた２００mMのマニトールを含有する。安定性試験を例１における如く行うがしかし、加速された試験に対し以下に示す如く異なる温度で保存を行う。
【００１７】
0003745395.tif 000003
【００１８】
0003745395.tif 000004
【００１９】
0003745395.tif 000005
分解は為りの一次動力学に従っているように思われる。例１で記載した方法を用い、製剤は２５℃で６週を超える予測された保存寿命を有する。
【００２０】
例３
pH４．０の安定な０．３mg／mlハイブリッドα−インターフェロンＢＤＢＢグリシン溶液製剤の調製：
例１で記載した方法を類似の方法を用い、ハイブリッドα−インターフェロンＢＤＢＢ（pH７．０の２００mMの塩化アンモニウム／２０mMのトリス（ヒドロキシメチル）メチルアミン中２．６mg／ml）の保存大量溶液を、pH４．０の８０mMのグリシン／ＨＣｌ緩衝液中、蛋白質の０．３mg／mlの溶液に変換する。
【００２１】
pH４．０の安定なハイブリッドα−インターフェロンＢＤＢＢグリシン溶液製剤の安定性試験を、例１で記載した如き手順に従って行う。
結果は次の通りである。
【００２２】
0003745395.tif 000006
【００２３】
分解は為りの一次動力学に従うように思われる。例１で記載した方法を用い、製剤は４℃で少なくとも１８日の予測された保存寿命を有する。
ＳＥＣは４℃で１３６日後、凝集した種の意義ある形成を示さない。
【００２４】
例４
例３をくりかえすが、但し溶液はまた２００mMのマニトールを含有する。安定性試験を例３における如く行うが、異なる温度での保存は下記の如くである。
【００２５】
0003745395.tif 000007
【００２６】
0003745395.tif 000008
【００２７】
分解は為りの一次動力学に従っているようである。例１で記載した方法を用い、製剤は４℃で少なくとも５年の予測された保存寿命を有する。
ＳＥＣは、４℃で２０週間の保存後又は４０℃で４週間の保存後凝集された種の意義ある形成を示さない。
【００２８】
例５
例３をくり返すが、但しグリシン／ＨＣｌ緩衝剤の濃度は３１８mMである。安定性試験を例３における如く行うが、しかし以下に示す如く異なる温度で保存する。
【００２９】
0003745395.tif 000009
【００３０】
0003745395.tif 000010
分解は為りの一次動力学に従っているようである。例１で記載した方法を用い、製剤は４℃で少なくとも６月の予測された保存寿命を有する。
【００３１】
【配列表】
一般情報：
（ｉ）出現人
（Ａ）名称：チバ−ガイギーＡＧ
（Ｂ）街：クレーベックストラーセ１４１
（Ｃ）市：バーゼル
（Ｅ）国：スイス
（Ｆ）郵便番号：４００２
（Ｇ）電話：０６１  ９６９  １１１１
（Ｈ）ファクシミリー：０６１  ９６９  ７９７６
（Ｉ）テレックス：９６２９９１
（ii) 発明の名称：医薬組成物
（iii)配列番号：１
（iv) コンピューター読みとり方式
（Ａ）媒体のタイプ：フロッピーディスク
（Ｂ）コンピューター：１  ＢＭ  ＰＣ  コンパチブル
（Ｃ）作動システム：ＰＣ−ＤＯＳ／ＭＳ−ＤＯＳ
（Ｄ）ソフトウェア：ケムテクト  バージョン１．５０
配列番号１
（ｉ）配列の特徴
（Ａ）長さ：１６６個のアミノ酸
（Ｂ）タイプ：アミノ酸
（Ｃ）鎖の数：１本鎖
（Ｄ）トポロジー：直鎖状
（ii) 配列の型：タンパク質
（iii)ハイポセティカル：Ｎｏ
（iv) アンチセンス：Ｎｏ
（Ｖ）名称：組換えハイブリッドインターフェロンαＢＤＢＢ
0003745395.tif 000011
（ix) 特徴：
（Ａ）名称／キー：ジスルフィド結合
（Ｂ）位置：アミノ酸１〜９９
（ix) 特徴
（Ａ）名称／キー：ジスルフィド結合
（Ｂ）位置；アミノ酸２９〜１３９