(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４及びＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：７の配列からなる群から選ばれるペプチドであって、該ペプチドが哺乳動物に投与されるとき食欲を制御するか又は食物の摂取を阻害することを特徴とするペプチド。
【請求項２】
哺乳動物の食欲及び食物摂取を抑制するのに有効な量で請求項１記載のペプチドを含むことを特徴とする哺乳動物の食欲及び食物摂取の抑制用組成物。
【請求項３】
製薬上許容し得る担体と混合された請求項１記載のペプチド含むことを特徴とする哺乳動物の食欲及び食物摂取の抑制用医薬組成物。
【請求項４】
請求項１記載のペプチドを含むことを特徴とする食品用組成物。
【請求項５】
請求項１記載のペプチドを含むことを特徴とする栄養食品。
【発明の詳細な説明】
技術分野
本出願は、１９９４年３月２２日に出願された米国特許出願第０８／２１６５３７号のコンチュニエーション・イン・パートである。
本明細書に記載された本発明は、Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ（Ｎｏｓ．ＮＩＨ  ＤＫ−３２２８８及びＤＫ−０１５７５）の方針でなされ、さらにその補助金の下でなされ、そのため、米国政府が権利を有する。
本発明は、蛋白及びペプチド化学に関する。特に、それは、その配列が蛋白の領域、アポリポ蛋白Ａ−ＩＶに一致する新規なペプチドの発見及び単離に関する。本発明は、また食欲及び食物摂取の抑制におけるこれらの新規なペプチドの使用に関する。
背景技術
アポリポ蛋白は、血漿中に見いだされるリピド−蛋白コンプレックス（リポ蛋白）の蛋白成分である。リピドを結合する能力に加えて、個々のアポリポ蛋白は、独特な機能、例えば明確な密度の群のリポ蛋白粒子との特定の結合の形成を有する。或るアポリポ蛋白は、細胞表面受容体とのリポ蛋白の相互反応をコントロールするリガンドとして働く。アポリポ蛋白も、リピド代謝における必須の酵素の補助因子として機能する。（Ｂｏｇｕｓｋｉら、Ｊ．Ｂｉｏ．Ｃｈｅｍ．２６１、６３９８−６４０７、１９８６）。
ヒトでは、多数のアポリポ蛋白が存在する。これらの異なるアポリポ蛋白の発現は、発生、ホルモン、栄養及び組織の特定の制御のコントロールの下にある。（例えば、Ｂｏｇｕｓｋｉら、Ｊ．Ｂｉｏ．Ｃｈｅｍ．２６１、６３９８−６４０７、１９８６参照）。ラット及びヒトのアポＡ−Ｉ、アポＣ−ＩＩＩ及びアポＡ−ＩＶのアミノ酸配列は、相同性のかなりの領域をともにしている。ラット及びヒトにおけるこれら３種のアポリポ蛋白についてコードされている遺伝子中のエキソンのヌクレオチド配列は、有意に相同であり、そして両方の種の染色体１１に位置する。（例えば、Ｈａｄｄａｄら、Ｊ．Ｂｉｏ．Ｃｈｅｍ．２６１、１３２６８−１３２７７、１９８６、Ｌｉら、Ｊ．Ｌｉｐｉｄ  Ｒｅｓ．２９、２４５−２７１、１９８８参照）。
ラット及びヒトにおけるアポＡ−Ｉ、アポＣ−ＩＩＩ及びアポＡ−ＩＶの遺伝子の相対的サイズ、転写の方向及びイントロン−エキソンのオーガニゼーションも、似ている。両方の種のアポＡ−Ｉ、アポＣ−ＩＩＩ及びアポＡ−ＩＶの遺伝子に特に見いだされる２種のイントロンは、同様な位置でのコーディング領域を中断する。さらに、中断の点は、分泌（シグナルペプチド）並びにアポＡ−Ｉ、アポＣ−ＩＩＩ及びアポＡ−ＩＶの蛋白のリピド結合（両親媒性領域）に含まれる特定のアミノ酸ドメインを規定する。同上。
ラットのアポＡ−Ｉ、アポＣ−ＩＩＩ及びアポＡ−ＩＶの転写開始部位の上流に位置するヌクレオチド配列は、ヒトの対応するヌクレオチド配列と有意に相同である。恐らく、これらの遺伝子の発現は、それらのそれぞれのプロモーター配列への５’に位置するシス作用ＤＮＡ要素により制御され、そして同様にラット及びヒトで制御される。同上。
アポＡ−ＩＶの完全なアミノ酸配列は、マウス（Ｗｉｌｌｉａｍｓら、Ｍｏｌ．ａｎｄ  Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．６（１１）、３８０７−３８１４、１９８６）、ラット（Ｈａｄｄａｄら、Ｊ．Ｂｉｏ．Ｃｈｅｍ．２６１、１３２６８−１３２７７、１９８６）及びヒト（Ｋａｒａｔｈａｎａｓｉｓら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．８３、８４５７−８４６１、１９８６）について報告されている。アポＡ−ＩＶは、２０アミノ酸シグナルペプチド配列により大きなプレカーサーとして最初に合成される。（Ｇｏｒｄｏｎら、Ｊ．Ｂｉｏ．Ｃｈｅｍ．２５９、４６８−４７１、１９８４）。アポＡ−ＩＶシグナルペプチドのアミノ酸配列は、マウス、ラット及びヒトの中で極めて保存されている。ラット及びヒトのアポＡ−ＩＶのシグナルペプチドのアミノ酸配列の比較は、２０アミノ酸の内の１５が同じであることを明らかにしている。マウス及びヒトのアポＡ−ＩＶのシグナル配列は、２０アミノ酸の内１６が同一であり、マウス配列中に導入される一つのギャップを有して最大の相同性について整列する。全アポＡ−ＩＶプレカーサーに関するラット及びヒトのアミノ酸配列が比較されるとき、６３％の配列の相同性が明らかにされる。マウス及びヒトのアポＡ−ＩＶプレカーサー蛋白は、６１％のアミノ酸配列の相同性を有する。
それらの反復性のシグナルペプチドを除いて、アポリポ蛋白は、異なる度合いのダイバージェンスをうけたリピド結合配列の複数のコピーからおおよそ成り立つ。例えば、アポリポ蛋白Ａ−Ｉ、Ａ−ＩＶ及びＥは、両親媒性のドコサペプチドについてコーディングした多数の縦列に繰り返される配列からおおよそ成り立つ。（例えば、Ｂｏｇｕｓｋｉら、Ｊ．Ｂｉｏ．Ｃｈｅｍ．２６１、６３９８−６３９７、１９８４参照）。アポリポ蛋白中の基本的な繰り返し単位は、１１アミノ酸又は３３ヌクレオチドである。２２アミノ酸又は６６ヌクレオチドの繰り返し単位は、さらに共通の進化単位と思われ、そしてまた官能単位であろう。同上。ラット中の繰り返し単位は、以下のアミノ酸配列を含む。ＤＹＦＴＱＬＳＮＮＡＫＥＡＶＥＱＬＱＫＴＤＶ及びそれらのアナログ。ヒトのアポＡ−ＩＶにおける縦列に繰り返されるドコサペプチドは、また正確な重複ではない。殆どのアミノ酸の置換は、しかし、同類であり、即ち置換したアミノ酸は、同様な物理的、化学的な性質を有する。アポＡ−ＩＶ繰り返し単位の或るものに現れる非同類置換の場合には、ほぼ半分が、小さい中性のアミノ酸グリシン、セリン又はスレオニンにより置換される。（Ｂｏｇｕｓｋｉら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．８１、５０２１−５０２５、１９８４）。
アポリポ蛋白Ａ−ＩＶ（アポＡ−ＩＶ）は、リポ蛋白と結合した４６０００Ｄａのポリペプチドであり、ヒトでは、小腸のみにより生成される。（Ｓｗａｎｅｙら、Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ６、２７１−２７９、１９７７、Ｔｓｏ、Ｐ．Ａｄｖ．Ｌｉｐｉｄ  Ｒｅｓ．２１、１４３−１８６、１９８５、Ｓｈｅｒｍａｎら、Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌｏｇｙ９５、３９４−４０１、１９８８）。２０アミノ酸シグナルペプチドは、小腸の上皮細胞によるアポＡ−ＩＶの分泌中、開裂する。（Ｇｏｒｄｏｎら、Ｊ．Ｂｉｏ．Ｃｈｅｍ．２５７、８４１８−８４２３、１９８２）。またヒトにおいて、アポＡ−ＩＶは、トリグリセリドに富むリポ蛋白、並びに血漿のｄ＞１．２１ｇ／ｍＬフラクションに多量に存在する。（例えば、Ｇｏｒｄｏｎら、Ｊ．Ｂｉｏ．Ｃｈｅｍ．２５９、４６８−４７４、１９８４参照）。
アポＡ−ＩＶは、１８年以上前に発見され（Ｓｗａｎｅｙら、Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ１６、２７１−２７９、１９７７）そしてラットのアポＡ−ＩＶは、Ｂｏｇｕｓｋｉら（Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．８１、５０２１−５０２５、１９８４）により報告されたが、その生理学的機能は、十分に理解されていない。最近、しかし、小腸によるアポＡ−ＩＶの合成が、リピドの摂取後顕著に増大し、その結果腸管膜のリンパ腺におけるアポＡ−ＩＶの生成量を顕著に増大させる。（Ｋｒａｕｓｅら、Ｌ．Ｌｉｐｉｄ  Ｒｅｓ．２２、６１０−６１９、Ｈａｙａｓｈｉら、Ｌ．Ｌｉｐｉｄ  Ｒｅｓ．３１、１６１３−１６２５、１９９０）。アポＡ−ＩＶの小腸の合成及び分泌が、トリアシルグリセロール摂食後増大するため、アポＡ−ＩＶが、小腸のトリグリセリドに富むリポ蛋白の生合成及び／又は代謝に関連するものと思われる。（Ｇｏｒｄｏｎら、Ｊ．Ｂｉｏ．Ｃｈｅｍ．２５９、４６８−４７４、１９８４）。脂肪摂食後小腸によるアポＡ−ＩＶの生合成及び分泌におけるこの増大が、小腸のキロミクロンの形成及び分泌により引き起こされることも立証されている。（Ｈａｙａｓｈｉら、Ｌ．Ｌｉｐｉｄ  Ｒｅｓ．３１、１６１３−１６２５、１９９０、Ａｐｆｅｌｂａｕｍら、Ａｍ．Ｊ．Ｐｈｙｓｉｏｌ．２５２、Ｇ６６２−Ｇ６６６、１９８７）。さらに、リピド食事後の腸管膜のリンパ腺に現れるアポＡ−ＩＶが、食物の摂取を抑制することが示され、そのため、アポＡ−ＩＶが、また脂肪摂食後血液中を循環する飽満因子として作用することを示唆する。（Ｆｕｊｉｍｏｔｏら、Ａｍ．Ｊ．Ｐｈｙｓｉｏｌ．２６２、Ｇ１００２−Ｇ１００６、１９９２）。
摂食の行動は、多くの循環する化学的因子により影響され、そしてこれらの因子に関する化学感受性モニタリングシステムは、中枢神経系及び末梢器官の両者に存在する。（Ｂｒａｙら、Ｖｉｔａｍ．Ｈｏｒｍ．４５、１−１２５、１９８９、Ｏｏｍｕｒａら、Ｊ．Ａｕｔｏ．Ｎｅｒｖ．Ｓｙｓ．１０、３５９−３７２、１９８４、Ｎｏｖｉｎら、Ｄｉａｂｅｔｏｌｏｇｉａ、２０、３３１−３３６、１９８１）。最近、アポＡ−ＩＶが、雄のＳｐｒａｇｕｅ  Ｄａｗｌｅｙラットに中枢神経系で投与されるとき、食物の摂取が、投与量依存の形で有意に抑制されることが示された。（Ｆｕｊｉｍｏｔｏら、Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．４、１８３０−１８３３、１９９３）。さらに、アポＡ−ＩＶは、末梢的に投与されるよりも中枢神経系に投与されるとき５０倍より多く有効である。これらのデータは、アポＡ−ＩＶに対応する中枢神経系の特異的な受容体の存在の可能性を示唆している。同上。
アポＡ−ＩＶが中枢神経系を経て食物の摂取を抑制することは、無制限に摂食するラットの第三脳室中に注入されたヤギの抗ラットアポＡ−ＩＶ血清が、テストされた総ての動物における摂食を誘発したことを示すデータによりさらに支持される。対照的に、第三脳室中への抗ラットアポＡ−ＩＶ血清又は食塩水の投与は、摂食を誘発させることができなかった。（Ｆｕｊｉｍｏｔｏら、Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．４、１８３０−１８３３、１９９３）。これらの観察の一つの説明は、第三脳室におけるアポＡ−ＩＶ抗血清の投与が、内因性アポＡ−ＩＶの除去を導くことである。同上。
米国人口の約２５％が、肥満（理想より２０％以上重い体重）と考えられ、そして人口の１３％が、病的に肥満であると考えられる。（Ｍａｒｋｅｔｌｅｔｔｅｒ、１８ページ、ＩＭＳＷＯＲＬＤ  ｐｕｂｌ．Ｌｔｄ．１０月１日、１９９０）。病的に肥満な人々は、かれらの肥満のために生命を脅かされる状態にある人々である。さらに、Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ  ｏｆ  Ａｎｏｒｅｘｉａ  Ｎｅｒｖｏｓａ  ａｎｄ  Ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ  Ｅａｔｉｎｇ  Ｄｉｓｏｒｄｅｒｓは、摂食障害に罹っている８百万の米国人は、しばしば、食欲不振と多食症との間を行ったり来たりすると推定している。現在、有効な薬剤は、肥満又は心理学的病状を生ずる摂食障害に罹っている人々を治療するのに入手できない。
食欲不振剤の市場の主なものは、処方アンフェタミン、それらの誘導体、並びに薬局扱い（ＯＴＣ）フェニルプロパノールアミン及びその誘導体である。これらの薬剤は、二三の短所を有する。例えば、アンフェタミンは、精神を変化させる性質を有する陶酔的にする欠点を有する。フェニルプロパノールアミン及びその誘導体は、望まない鎮静性の副作用を有する。その上、一度これらの薬剤及び他の抗うつ剤がもはや投与されないならば、体重の低下は、しばしば、維持されない。
二三のペプチドが、摂食行動に影響するもの、それ故可能な食欲抑制剤として提案されてきている。グルカゴン、コレシストキニン、アノレクチン（成長ホルモンのフラグメント）、コルチコトロピン放出ホルモン、エンテロスタチン、カルシトニン、ノイロテンシン、ボンベシン及びシクロ−ＨｉｓＰｒｏは、総て、動物の研究で食物の摂取を低下させることを示している。これらのペプチドの多くは、しかし、重大なしかも望ましくない副作用又は他の合併症例えば性欲の欠乏、そして摂食の間接的な減量を生成する行動に対する作用及び免疫原性及び／又は適切な脳領域への摂触の欠乏を生ずる大きなサイズを有する。
従って、殆ど又は全く合併症及び副作用を有しない安全且つ有効な食欲抑制剤が、非常に望まれている。
発明の開示
本発明は、食欲を抑制ししかも食物の摂取を阻害する方法及び手段を提供する。本発明によれば、アポリポ蛋白Ａ−ＩＶから由来する多数の新規な摂食抑制ペプチドが、固相ペプチド合成により製造される。これらのペプチドは、経口又は静脈内に投与されるとき、個人の食事において食物の摂取を阻害するのに使用できる食欲抑制性を有する。それらの相対的に小さいサイズのために、本発明のペプチドは、もし必要ならば、脳血液関門を通過できるだろう。ペプチドは、自然のアポＡ−ＩＶ蛋白の特異的な部分を含んでいるので、ヒトへのそれらの投与に伴う免疫原性の問題はないだろう。さらに、本発明のペプチドの投与は、より特異的な満腹のシグナルを準備することができる。
本発明のペプチドは、アポリポ蛋白Ａ−ＩＶ分子の特異的な領域に相当し、さらに本発明により同定されて食物の摂取の阻害を含む食欲抑制活性を示す成熟アポリポ蛋白Ａ−ＩＶのアミノ端末部分から由来する１４アミノ酸配列の少なくともフラグメントを含む。例えば３−１３アミノ酸のペプチドのより小さいフラグメントも本発明により包含される。それぞれその配列内に上記の繰り返し配列を含む例えば１５−約３０アミノ酸のより大きなペプチドも、本発明に包含される。
用語「フラグメント」は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯＳ：１−１０に示される任意のペプチドの同一限界内の部分であるアミノ酸配列を有する任意の問題のペプチドに関し、そしてそのフラグメントは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯＳ：１１−８７を含む問題のペプチドとして食欲抑制又は摂食阻害性を維持する。
本発明の一つの態様では、摂食抑制ペプチドのアミノ酸配列は、実質的に、ラットアポリポ蛋白Ａ−ＩＶプレカーサーのアミノ酸残基２１−５０（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１）並びにその同族体、アナログ及びフラグメントに相当する。
他の態様では、食欲抑制ペプチドのアミノ酸配列は、実質的に、ラットアポＡ−ＩＶプレカーサーのアミノ酸残基３７−５０、並びにその配列同族体、アナログ及びフラグメントに相当する。例えば、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３及びＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４参照。「同族体」により、他の周知のアポＡ−ＩＶ蛋白から由来ししかも同じ又は実質的に同じ食欲抑制及び食物摂取阻害性を有する相当するペプチドを意味する。「アナログ」により、ペプチドのアミノ酸配列における置換を意味し、食欲抑制及び摂食阻害性をもたらすことが維持される。アナログは、またペプチドのＮ−及び／又はＣ−末端部分に加えられる追加のアミノ酸を包含できる。例えば、本発明のペプチドのアナログは、それによりペプチドが生体内投与のために担体蛋白例えばアルブミンに共有結合的に結合できるペプチドのアミノ又はカルボキシル末端でシステイン又は他のアミノ酸を含むことができる。他の担体分子は、蛋白分解的開裂及び血液からのペプチドの排除を避けるように働くポリエチレングリコール（ＰＥＧ）を含む。
本発明のペプチドは、追加の配列が長さで１−約４５アミノ酸である、Ｎ−端末及びＣ−端末の何れか又はそれらの両者によりアミノ酸の追加の配列に結合できる。これらの追加のアミノ酸配列、即ちリンカー配列は、検出可能なラベル又は固体マトリックス又は担体に共有結合的に結合できる。本発明のペプチドにより使用できるラベル、固体マトリックス及び担体は、以下に記述される。結合に使用される代表的なアミノ酸残基は、チロシン、システイン、リジン、グルタミン酸及びアスパラギン酸などである。
他の態様では、本発明のペプチドは、ラットアポリポ蛋白Ａ−ＩＶプレカーサーのアミノ酸３１６−３４６（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：７参照）、並びにその同族体、アナログ及びフラグメントに実質的に相当するアミノ酸配列を有する。
本発明の他の局面では、成熟ヒトアポリポ蛋白Ａ−ＩＶの初めの３０アミノ酸（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：８）に相当するペプチド、並びにその同族体、アナログ及びフラグメントが提供される。また、ヒトアポリポ蛋白Ａ−ＩＶプレカーサーのアミノ酸残基３７−５０（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：９）に相当するペプチド、並びにその同族体、アナログ及びフラグメントも提供される。本発明の他の態様は、ヒトアポＡ−ＩＶプレカーサーのアミノ酸残基３１６−３４６（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１０）に相当するペプチドである。
本発明の他の態様では、特異的に又は実質的に含まれる本発明の食欲抑制ペプチドは、以下のアミノ酸配列に相当する。
0003754072.tif 000002
0003754072.tif 000003
0003754072.tif 000004
0003754072.tif 000005
本発明のペプチドには、上記の特定のペプチドの同族体、アナログ及びフラグメントを特異的に含む。
0003754072.tif 000006
本発明のペプチドにおけるアミノ酸残基を示すのに使用される一文字の記号は、当業者において通常使用される記号である。「実質的に相当する」は、リストされた配列の任意のもの少なくとも約７０％のの相同性を有するアミノ酸配列を意味する。
本発明は、またヒトを含む哺乳動物における食欲の抑制及び摂食の阻害のための組成物を提供する。組成物は、生理学的に許容可能な担体と混合される、それらの活性な成分として少なくとも１種の本発明による上記のペプチドを有する。用語「製薬的に許容可能」は、ヒトに投与されるとき、アレルギー性又は同様な望ましくない反応を生成しない分子又は組成物に関する。
本発明のペプチドと関連して使用される製薬上許容可能な担体は、投与の態様に従って変化する。例えば、組成物は、経口の液体処方例えば懸濁物、エリキシル、及び溶液のための任意の好適な担体中で処方できる。液状経口投与物のための組成物は、任意の通常の製薬媒体例えば水、油、アルコール、香料、保存剤、着色剤などを含む。経口固体製剤（粉末カプセル及び錠剤）の場合、担体例えば澱粉、砂糖、希釈剤、顆粒剤、滑沢剤、結合剤、崩壊剤などが使用できる。さらに、担体例えばリポソーム、マイクロエマルション及び自己乳化可能なガラスが使用できる。
本発明の組成物は、また静脈内投与のために処方できる。この場合では、ペプチドは、滅菌水及び塩水又は他の製薬上許容可能な担体と混合される。
本発明のペプチドは、さらに食物組成物例えば栄養食物（ｎｕｔｒｉｃｅｕｔｉｃａｌ）中に処方できる。「栄養食物」により、任意の食物、例えば消費されるとき製薬上の効果（即ち、食欲の抑制又は食物の摂取の阻害）を有する液状又は粉末状の組成物を意味する。
本発明のペプチドは、また、例えば食欲を抑制するか又は食物の摂取を阻害する食物組成物又は食物補助物として使用される粉末、液体（例えばシェーク）、ゲル、ガム、スナックフーズ、ケーキ、キャンディ又は他の食料品に添加、混合、ブレンド又はそれ以外に配合されることができる。
本発明のペプチドは、変性構造例えばポリエチレングリコール（ＰＥＧ）により変更してペプチドの蛋白分解を防ぎそして血液からのペプチドの排除を低下させることができる。
本発明のこれらそして他の態様は、本明細書の記述からみて当業者に容易に明らかであろう。
【図面の簡単な説明】
図１は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２及びＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３に相当するペプチドの注入に応じて雄のＳｐｒａｇｕｅ  Ｄａｗｌｅｙラットにおける食物の摂取の抑制を比較するグラフである。
図２は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５に相当するペプチドの注入に応じて雄のＳｐｒａｇｕｅ  Ｄａｗｌｅｙラットにおける食物の摂取の抑制を立証するグラフである。
図３ａは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４に相当するペプチドの注入に応じて雄のＳｐｒａｇｕｅ  Ｄａｗｌｅｙラットにおける食物の摂取の抑制を立証するグラフである。
図３ｂは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４に相当するペプチドの質量スペクトルである。
図４は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：６に相当するペプチドの注入に応じて雄のＳｐｒａｇｕｅ  Ｄａｗｌｅｙラットにおける食物の摂取の抑制を立証するグラフである。
図５は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：７に相当するペプチドの注入に応じて雄のＳｐｒａｇｕｅ  Ｄａｗｌｅｙラットにおける食物の摂取の抑制を立証するグラフである。
図６は、ヒトアポリポ蛋白Ａ−ＩＶの注入に応じて雄のＳｐｒａｇｕｅ  Ｄａｗｌｅｙラットにおける食物の摂取の抑制を立証するグラフである。
発明を実施するための最良の形態
本発明は、アポリポ蛋白Ａ−ＩＶの特定の部分に見いだされるアミノ酸配列に実質的に相当する、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４に示された特定の１４アミノ酸ペプチド及びそのアナログ、同族体及びフラグメントを特に含む、例えば長さ約１５−３０アミノ酸の多数の摂食抑制ペプチドを提供する。本発明の殆ど総ての摂食抑制ペプチドは、アポＡ−ＩＶのアミノ−末端部分に見いだされる配列に相当する。本明細書で使用されるとき、「ペプチド」は、隣接するアミノ酸残基のアルファ−アミノ及びカルボキシ基間のペプチド結合により互いに結合した約３５より少ないアミノ酸残基の線状のシリーズに関する。用語「合成ペプチド」は、天然蛋白及びそのフラグメントのない、そしてペプチド結合により互いに結合した化学的に由来する鎖のアミノ酸残基に関することを目的とする。さらに、本発明によりもたらされる新規なペプチドのアナログ、同族体、フラグメント、化学誘導体及び製薬上許容可能な塩は、用語「ペプチド」の範囲内に含まれる。
本発明のペプチドの原型の配列は、ラットアポＡ−ＩＶのアミノ酸配列から由来しそしてそれに相当するが、しかし、ヒトアポＡ−ＩＶから由来する同族体的ペプチドは、また本発明により包含される。ラット及びヒトのアポＡ−ＩＶは、アミノ酸配列において実質的に同族的であり、同族姓は、約６３％である。「同族体」により、同じ又は実質的に同じ食欲抑制及び摂食阻害性を有する他の周知のアポＡ−ＩＶから由来する相当するペプチドを意味する。
「アナログ」により、本発明のペプチドのアミノ酸配列における改変又は置換を意味し、その置換又は改変、例えばアミノ酸残基の付加及び欠失は、ペプチドの食欲抑制又は摂食阻害性を失わない。従って、アナログは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯＳ：１−８７として本明細書で提供されるペプチドと実質的に同じアミノ酸配列を有し、そして１個以上のアミノ酸残基が化学的に同様なアミノ酸により同類的に置換されたペプチドを含むことができる。同類置換の例は、非極性（疎水性）残基例えばイソロイシン、バリン、ロイシン又はメチオニンの他のものへの置換を含む。同様に、本発明は、アルギニン及びリジンの間、グルタミン及びアスパラギンの間、そしてグリシン及びセリンの間のような１個の極性（親水性）残基の置換を含む。さらに、塩基性残基例えばリジン、アルギニン又はヒスチジンの他のものへの置換、又は１個の酸性残基例えばアスパラギン酸又はグルタミン酸の他のものへの置換も含まれる。
用語「同類置換」は、また、当業者により容易に決定できる、ペプチドが、必要な食欲抑制又は摂食阻害性を維持する限り、非誘導化残基の代わりに化学的に誘導された残基の使用を含む。例えば、Ｓｈａｒｇｉｌｌら、Ｂｒａｉｎ  Ｒｅｓ．５４４、１３７−１４０（１９９１）参照。アナログは、また、生物学的活性に影響しない追加のアミノ酸の存在又は１個以上のアミノ酸の欠失を含む。例えば、本発明のペプチドのアナログは、Ｎ−又はＣ−末端システインを含むことができ、それにより、もし所望ならば、ペプチドは、担体蛋白例えばアルブミンへ共有結合的に結合できる。この結合は、血液からのペプチドの排除を最小にし、さらにペプチドの蛋白分解を防ぐものと思われる。さらに、本発明の目的のために、Ｌ−アミノ酸の代わりにＤ−アミノ酸を含むペプチドも、用語「同類置換」に含まれる。これらＤ異性体の存在は、蛋白分解活性及びペプチドの排除を最小にすることを助けることができる。
本発明の実施は、他に指示されない限り、当業者の技量内である、合成有機化学、蛋白化学、分子生物学、微生物学、及び組み換えＤＮＡ技術の従来の手法を使用する。これらの手法は、文献に十分に説明されている。例えば、Ｓｃｏｐｅｓ、Ｒ．Ｋ．「Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ  Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅｓ」第二版（Ｓｐｒｉｎｇｅｒ−Ｖｅｒｌａｇ．１９８７）、「Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ」（Ｍ．Ｄｅｕｔｓｃｈｅｒ編、Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ  Ｉｎｃ．１９９０）、Ｓａｍｂｒｏｏｋら「Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ」第二版、（Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｐｒｅｓｓ、Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ、Ｎ．Ｙ．１９８９）、「Ｈａｎｄｂｏｏｋ  ｏｆ  Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ」Ｉ−ＩＶ巻、（Ｄ．Ｍ．Ｗｅｉｒ及びＣ．Ｃ．Ｂｌａｃｋｗｅｌｌ編、１９８６、Ｂｌａｃｋｗｅｌｌ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ  Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎｓ）、Ｈｏｕｓｅ［Ｍｏｄｅｒｎ  Ｓｙｎｔｈｅｔｉｃ  Ｒｅａｃｔｉｏｎｓ」第二版、（Ｂｅｎｊａｍｉｎ／Ｃｕｍｍｉｎｇｓ、Ｍｅｎｌｏ  Ｐａｒｋ、Ｃａｌ．１９７２）。
本明細書で使用されるとき、用語「実質的に相当」は、アポリポ蛋白Ａ−ＩＶペプチドに対してアミノ酸配列で少なくとも約７０％の相同性を有するペプチドアミノ酸配列を意味する。
用語「化学誘導体」は、本発明のペプチドから由来する任意のペプチドを含み、さらに１個以上のアミノ酸が、ペプチド中に存在するアミノ酸残基の１個以上の官能側鎖基の反応により化学的に誘導体化されている。従って、本明細書で使用されるとき、「化学誘導体」は、１種以上の化学段階により本明細書で同定されるペプチドから由来するペプチドである。誘導体化分子の例は、遊離のアミノ基が誘導体化されてアミン塩酸塩、ｐ−トルエンスルホニル基、カルボベンゾキシ基、ｔ−ブチルオキシカルボニル基、チオウレタンタイプ誘導体、トリフルオロアセチル基、クロロアセチル基又はホルミル基を形成する分子を含む。遊離のカルボキシ基は、誘導体化して塩、メチル及びエチルエステル又は他のタイプのエステル又はヒドラジドを形成できる。遊離のヒドロキシ基は、誘導体化してＯ−アシル又はＯ−アルキル誘導体を形成できる。ヒスチジンのイミダゾール窒素は、誘導体化してＮ−イムベンジルヒスチジンを形成できる。また、化学誘導体として、２０の標準アミノ酸の１個以上の天然のアミノ酸誘導体を含むペプチドが含まれる。例えば、４−ヒドロキシプロリンは、プロリンを置換し、５−ヒドロキシリジンは、リジンを置換し、３−メチルヒスチジンは、ヒスチジンを置換し、ホモセリンは、セリンを置換し、そしてオルニチンは、リジンを置換できる。
用語「フラグメント」は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯＳ：１−１０に示された任意のペプチドのそれより短いアミノ酸配列を有する任意の本発明のペプチドに関し、そのフラグメントは、本発明のペプチドとして食欲抑制又は摂食阻害性を維持する。
さらに特に、本発明のペプチドは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯＳ：１、３、４又はアポＡ−ＩＶのように食欲抑制又は摂食阻害性を示すＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯＳ：１１−８７に示されたペプチドを含む。
本発明のペプチド、その同族体、アナログ及びフラグメントは、多数の周知の手法により合成できる。例えば、ペプチドは、Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．８５、２１４９−２１５４（１９６３）にＭｅｒｒｉｆｉｅｌｄにより最初に記述された固相合成手法を使用して製造できる。他のペプチド合成手法は、Ｍ．Ｂｏｄａｎｓｚｋｙら、「Ｐｅｐｔｉｄｅ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ」Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ、第二版（１９７６）並びに当業者が容易に入手できる他の文献に見いだされる。ポリペプチド合成手法の要約は、Ｊ．Ｓｔｕａｒｔ及びＪ．Ｄ．Ｙｏｕｎｇ「Ｓｏｌｉｄ  Ｐｈａｓｅ  Ｐｅｐｔｉｄｅ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ」Ｐｉｅｒｃｅ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｃｏｍｐａｎｙ、Ｒｏｃｋｆｏｒｄ、Ｉｌｌ．（１９８４）に見いだすことができる。ペプチドは、また「Ｔｈｅ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ」ＩＩ巻、第三版、Ｎｅｕｒａｔｈ、Ｈ．ら編、１０５−２３７ページ、Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ、Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ、Ｎ．Ｙ．（１９７６）に記載されているような溶液法により合成できる。異なるペプチド合成に使用される適切な保護基は、上記のテキスト、並びにＪ．Ｆ．Ｗ．ＭｃＯｍｉｅ、「Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ  Ｇｒｏｕｐｓ  ｉｎ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ」Ｐｌｅｎｕｍ  Ｐｒｅｓｓ、Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ、Ｎ．Ｙ．（１９７３）に記述されている。本発明のペプチドは、またアポリポ蛋白Ａ−ＩＶ分子のより大きな部分から又は全アポＡ−ＩＶ分子からの化学又は酵素開裂により製造できるだろう。
さらに、本発明のペプチドは、また組み換えＤＮＡ手法により製造できる。蛋白をつくるのに使用されるアミノ酸の殆どでは、１個より多いコーディングヌクレオチドトリプレット（コドン）が、特別なアミノ酸残基についてコーディングできる。遺伝的コードのこの性質は、重複性として知られている。それ故、多数の異なるヌクレオチド配列は、特別な本発明の摂食抑制ペプチドについてコーディングできる。本発明は、また、それから本発明のポリペプチドが酵素的又は化学的に開裂できる本発明のポリペプチド又は本発明のキメラポリペプチドについてコーディングする、即ち発現できる遺伝子を規定するデオキシリボ核酸（ＤＮＡ）分子又はセグメントを包含する。
本発明のペプチドをエンコードするＤＮＡ分子は、化学的手法、例えばＭａｔｔｅｕｃｃｉｅら、Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．１０３、３１８５（１９８１）のホスホトリエステル方法により合成できる。化学的ＤＮＡ合成手法を使用して、ペプチド配列における所望の修飾が、未変性アミノ酸配列についてコードする塩基を置換することにより行うことができる。上記のＤＮＡ分子のリボ核酸同等物も使用できる。
本発明のポリペプチド又は本発明のキメラポリペプチドに関するコーディング配列を規定するＤＮＡ分子の複製及び発現ができるベクターを含む核酸分子も包含される。
本発明のペプチドは、好ましくは、Ｍｅｒｒｉｆｉｅｌｄの固相手法により化学的に合成される。一般に、方法は、成長するペプチド鎖への１個以上のアミノ酸残基の逐次付加を含む。通常、初めのアミノ酸残基のアミノ基又はカルボキシル基の何れかは、好適な選択的に除去可能な保護基により保護される。異なる選択的に除去可能な保護基は、反応性側鎖基例えばリジンを含むアミノ酸について利用される。
固相合成の好ましい方法は、その保護されていないカルボキシル又はアミノ基を経て不活性固体支持体へ保護された又は誘導体化アミノ酸を結合することを含む。アミノ又はカルボキシル基の保護基は、次に選択的に除かれ、そして好適に保護された相補的（アミノ又はカルボキシル）基を有する配列中の次のアミノ酸が混合されそして固体支持体へ既に結合した残基とアミド結合を形成するのに好適な条件下で反応させる。アミノ又はカルボキシル基の保護基は、次にこの新しく付加されたアミノ酸残基から除かれ、そして次のアミノ酸（好適には保護された）が次に付加され、そして繰り返される。総ての望ましいアミノ酸が適当な配列で結合した後、固体支持体を含む任意の残りの末端及び側鎖基の保護基は、連続して又は同時に除かれて最後のペプチドを生ずる。
本発明の総てのペプチドは、製薬上許容可能な塩の形で使用できる。本発明のペプチドと塩を形成できる好適な酸は、無機酸、例えば塩酸、臭化水素酸、過塩素酸、硝酸、チオシアン酸、硫酸、燐酸など、並びに有機酸、例えば蟻酸、酢酸、プロピオン酸、グリコール酸、乳酸、ピルビン酸、シュウ酸、マロン酸、琥珀酸、マレイン酸、フマール酸、アントラニル酸、シンナミン酸、ナフタレンスルホン酸、スルファニル酸などを含む。
本発明のペプチドと塩を形成できる好適な塩基は、無機塩基、例えば水酸化ナトリウム、水酸化アンモニウム、水酸化カリウムなど、並びに有機塩基、例えばモノ−、ジ−及びトリ−アルキルアミン（例えば、トリエチルアミン、ジイソプロピルアミン、メチルアミン、ジメチルアミンなど）及び任意に置換されたエタノールアミン（例えば、エタノールアミン、ジエタノールアミンなど）を含む。
ペプチドＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯＳ：１−８７は、以下の配列を有する。
0003754072.tif 000007
0003754072.tif 000008
0003754072.tif 000009
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本発明のペプチドは、上記の特定のペプチドの同族体、アナログ及びフラグメントを特異的に含む。
0003754072.tif 000011
本発明のペプチドの観察された性質と一致して、本発明のペプチドが摂食抑制剤として使用できる。関連する局面では、本発明は、また、所望のレベルの食欲抑制を達成するのに十分な時間及び条件下患者に本発明のペプチドを投与することにより、ヒトを含む動物の食欲を抑制する方法に関する。本発明のペプチドは、従って目的とする動物又はヒトの食欲を抑制するのに有効な量で投与される。
本発明のペプチドは、治療上有効な量で製薬組成物として患者に好ましくは投与される。製薬組成物は、製薬上許容可能な担体とともに、本発明によるペプチドの少なくとも１種の治療上有効な投与量を含む。用語「治療上有効な量」は、ヒトに抑制された食欲を生成するのに必要な投与量を意味する。
好ましくは、本発明のペプチドを含む組成物は、食物の摂取を抑制する目的のために静脈内に投与される。食物の摂取の望ましい減少の裏の理由について制限は存在しない。肥満及び病的な肥満のヒトは、本発明のペプチドの投与のための主要な目標であるが、摂食障害を有する他の人々が、本発明のペプチドにより利益を得ることも包含される。従って、多食症、神経性食欲不振又はその両者の障害に罹っている患者も、本発明のペプチド又はそれらの拮抗剤を投与する効果から利益を得ることができる。
静脈内に投与されるとき、ペプチド組成物は、他の成分、例えば担体及び／又は助剤と組み合わされることができる。ペプチドは、また、ペプチドの排除を最小にするために、蛋白担体例えばアルブミンに共有結合的に結合できる。他の成分の性質に制限はないが、ただしそれらは、それらの目的とする投与に製薬上許容可能でしかも有効でなければならず、さらに組成物の活性成分の活性を劣化できなければならない。本発明のペプチド組成物は、また、好ましくは液体又は半液体の形で、皮膚透過パッチに含浸されるか又は皮下インサートに含まれ、そのパッチ又はインサートは、治療上有効な量の本発明のペプチドの１種以上を放出する。
注入に好適な製薬上の形は、滅菌の注入可能な溶液又は分散物のその場の製造のための滅菌水溶液又は分散物及び滅菌粉末を含む。総ての場合に、最終の溶液の形は、滅菌でありしかも流体でなければならない。代表的な担体は、例えば、水で緩衝された水溶液（即ち医用緩衝液）、エタノール、ポリオール例えばグリセロール、プロピレングリコール、ポリエチレングリコール、好適なこれらの混合物、界面活性剤又は植物油を含む溶媒又は分散媒体を含む。滅菌は、濾過又は抗菌剤、或いは抗かび剤、例えばパラベン、クロロブタノール、フェノール、ソルビン酸或いはチメロサールの添加を含むがこれらに限定されない任意の当業者が認識している手法により達成できる。さらに、等張剤例えば砂糖又は塩化ナトリウムは、本発明の組成物に配合できる。
本発明のペプチドを含む滅菌の注入可能な溶液の製造は、必要に応じ上記の種々の成分を有する適切な溶媒中に必要な量でこれらの化合物を配合し、次に滅菌、好ましくは濾過滅菌により達成される。滅菌粉末を得るために、上記の溶液は、必要に応じ真空乾燥又は凍結乾燥される。
本発明のペプチドが経口的に投与されるとき、有効な投与量のペプチドを含むその製薬組成物は、また、同化可能な食用担体などのような不活性希釈剤を含み、ハード又はソフトのカプセルに入れられ、錠剤に打錠され、又はエリキシル、懸濁物、シロップなどに加えられる。
本発明のペプチドは、従って、治療上有効な投与量で好適な製薬上許容可能な担体とともに製薬上有効な量での好都合且つ有効な投与のための化合物である。
ヒトに適用される本発明の方法で使用されるペプチドの正確な治療上有効な量は、個人の摂食習慣及び身体のサイズの変化の理由で、述べることができない。さらに、ペプチドの正確な治療上有効な量は、それが、アポリポ蛋白Ａ−ＩＶ受容体に実際到達するペプチドの量に依存するため、特定するのが困難である。しかし、ペプチドが、好ましくは、１投与（ｄｏｓｅ）あたり少なくとも約１０ｍｇの量で、さらに好ましくは１投与あたり約１０００ｍｇまでの量で投与されねばならない。本発明のペプチド組成物は、実際には血流から排除されるので、組成物の再投与が指示されそして好ましい。
ペプチドは、投与処方と適合するやり方でそして治療上で有効な量で投与される。全身的な投与は、年齢、患者の体重及び症状及び投与経路に依存する。例えば、成人への投与のための好適な投与量は、体重１ｋｇあたり約１．０−約２０ｍｇに及ぶ。
本明細書で使用されるとき、製薬上許容可能な担体は、任意且つ総ての溶媒、分散媒体、コーティング、抗菌剤及び抗かび剤、等張剤などを含む。これらの媒体及び剤の使用は、等業者にとり周知である。
実施例
本発明は、本発明の範囲を決して制限することを目的とするものではない以下の特定の例により、さらに説明される。
実施例
ペプチド合成
本発明のペプチドは、自動固相ペプチド合成機（Ｍｉｌｌｉｇｅｎ  ９０５０）を使用して合成された。合成は、ポリスチレン樹脂（目標ペプチドのＣ末端アミノ酸をそれに結合した）及びガラスビーズ（直径１５０−２２０ミクロン）の混合物をカラムに充填することにより始めた。樹脂に結合したアミノ酸は、カラムへの充填前に保護され、そしてペプチド合成のプロセスは、先ずＣ末端残基を保護するためにピペリジン／Ｎ、Ｎ−ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）の２０％ｖ／ｖ溶液によりカラムを洗うことにより始めた。次の残基、ＦＭＯＣ保護Ｌ−アミノ酸（ペンタフルオロフェニルエステルの形の）をヒドロキシベンゾトリアゾールの溶液（ＨＯＢＴ／ＤＭＦ）に溶解し、そしてインストルメントカラムへ移した。完全なカップリングを確実に行うために、アミノ酸／ＤＭＦの溶液を、さらに４５−９０分間カラムに通した。もし残基の結合が、立体の理由のために困難であることが立証されたならば、カップリングの時間は、インストルメントの組み込まれた化学プロトコールの手動の修飾により延長された。合成のプロトコールは、基本的に、多数のサイクルからなり、それぞれは、以下の操作を行った。ピペリジンによる以前の残基の脱保護、ＤＭＦによるカラムの洗浄、及び次の残基の結合。
カップリング反応の完了後、樹脂をジクロロメタンにより洗った。樹脂を乾燥し、そして選択されたトリフルオロ酢酸／フェノール混合物（９５：５ｖ／ｖ）を加えて樹脂からペプチドを抽出した。もしペプチドがメチオニン又はシステイン残基の何れかを含んでいたならば、カラムからのペプチドの開裂は、９５％のトリフルオロ酢酸、４％のフェノール及び１％のチオフェノール又はアニソールの何れかの混合物により行われた。開裂プロセスは、約２−３時間続く。
上清を次に最後の体積が約２−５ｍＬに達するまで３０−４０℃の蒸発により除いた。ジエチルエーテルを、次にこの点で加えて、ペプチドを沈殿させそしてペプチドを高純度且つ乾燥アルゴン流下で乾燥した。ペプチドを次に蒸留水に溶解し、そして凍結乾燥してフェノール性化合物及び残りの溶媒を除いた。
エレクトロスプレイ質量分光測定を、それぞれの合成したペプチドについて行い、その分子量を決定した。エレクトロスプレイ質量分光測定は、例えば合成又は開裂／脱保護プロトコール中の欠失、化学的修飾及び保護基の不完全な除去などの問題が、１５分以下の全分析時間で１ピコモルのような少ないサンプル量で容易に検出されるため、ペプチドを分析するのに選ばれた。デザインされたペプチドと実際のペプチドとの間の相違は、次に決定できた。相違が検出されると、ペプチドは、Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ  ４７７Ａ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｓｅｑｕｅｎｃｅｒを使用して、製造者の指示に従いそして当業者に周知の従来行われている方法を使用して、配列を調べられた。
上記で規定されたアミノ酸配列では、アミノ酸残基の番号は、それぞれ、Ｂｏｇｕｓｋｉら、Ｊ．Ｂｉｏ．Ｃｈｅｍ．２６１、６３９８−６４０７、１９８６及びＫａｒａｔｈａｎａｓｉｓら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．８３、８４５７−８４６１、１９８６に提供された、ラット又はヒトのアポリポ蛋白Ａ−ＩＶに関するアミノ酸配列のアミノ酸残基の番号に相当する。同族体ペプチドは、最大の相同性において配列が一致する、他のアポリポ蛋白Ａ−ＩＶポリペプチド例えばマウスアポＡ−ＩＶの相同的領域から由来する。理解されるように、ラット及びヒトのアポリポ蛋白Ａ−ＩＶ配列は、アミノ酸レベルで約６３％相同的である。ヒト及びマウスは、アミノ酸レベルで約６１％の配列同一性を有する。
本発明のペプチドは、食物の摂取を抑制する。摂食における減少を測定するアッセイは、多数の異なる方法を行うことができる。以下の実験的なプロトコールは、本発明のペプチドの投与に応じて減少した摂食を測定する代表的なアッセイを示す。
摂食プロトコール
生体内の食物の摂取の研究に使用される動物は、体重２８０−３２０ｇの雄のＳｐｒａｇｕｅ  Ｄａｗｌｅｙラットであった。ラットを、温度が２１±１℃に維持されしかも０６：００−１８：００の間照明した（１２時間日光−闇サイクル）室で飼育した。水道水及び粉末化実験室食物（Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｃｈｏｗ  ＃５００１、Ｐｕｒｉｎａ  Ｍｉｌｌｓ、Ｉｎｃ．）を自由にラットに与えた。
研究に使用したラットに、第三脳室に注入カニューラを手術して設けた。ナトリウムペントベルビタール麻酔（５０ｍｇ／ｋｇ腹腔内）下、それぞれのラットを定位装置に固定し、その頭蓋を開け、そして２本の小さいねじを頭蓋にねじこんで、カニューラを固定した。直径３ｍｍの孔を、耳バーゼロ（ｂａｒ  ｚｅｒｏ）の６ｍｍ前の中心線上で頭蓋に開けた。長さ１５ｍｍ（２３ゲージ）のステンレス鋼のカニューラを、Ｇ．Ｐａｘｉｎｏｓ及びＣ．Ｗａｔｓｏｎ「Ｔｈｅ  Ｒａｔ  Ｂｒａｉｎ  ｉｎ  Ｓｔｅｒｅｏｔａｘｉｃ  Ｃｏｏｒｄｉｎａｔｅｓ」第二版（Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ、Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ、１９８６）に従って、皮質表面から７．８ｍｍの深さに、第三脳室中に永続的に移植した。ラットを、実験５日前に回復させた。テスト時に、食物の摂取及び体重が、普通に戻ったことを確かめた。総てのラットを、実験前に毎日５分間処理して、それらの覚醒レベルを平衡させた。
摂食研究では、食物は、実験２４時間前に取り除かれるが、水は自由に飲むことができた。異なる投与量のテストされるそれぞれの合成ペプチドを、生理的食塩水に溶解し、そして第三脳室中に注入した。注入速度は、１０分間１μＬ／分であり、そして注入は、食物が提供される１０分前に始まる、抑制されないしかも無麻酔の条件下で投与された。２４時間の絶食後、それぞれのラットは、１３：００に再び食物を与えられ、そして粉末化食物の消費を、摂食の再開３０分後測定した。
コントロールとして、１０μＬの塩水（媒体）を第三脳室中に注入し、３０分間に消費された食物の量は、４．５±０．５ｇ（平均±ＳＥ、Ｎ＝５）であった。
本発明のペプチドを投与する別の態様では、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４に相当するペプチドは、また静脈内注入により投与された。
摂食の研究からのデータは、分散の一方向分析を使用して評価され、そして多重比較は、最下位差の方法を使用して行った。差は、偶然により生ずる差の確率が、１００中５より小さかった（Ｐ＜０．０５）とき、有意と考えた。
実施例  １
成熟ラットアポＡ−ＩＶの初めの３０アミノ酸（アポＡ−ＩＶプレカーサーのアミノ酸位置２１で始まる）に相当する以下の３０マーのペプチドは、Ｍｉｌｌｉｇｅｎ合成機（モデル９０５０）で固相ペプチド合成により合成され、質量分光測定により分析され、そしてエーテルにより洗われてフェノール性化合物を除いた。
ＥＶＴＳＤＱＶＡＮＶＭＷＤＹＦ
ＴＱＬＳＮＮＡＫＥＡＶＥＱＬＱ  （ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１）
ペプチドを、緩衝された溶液１ｍＬあたり１００μｇのペプチドの濃度で懸濁し、次に雄のＳｐｒａｇｕｅ  Ｄａｗｌｅｙラットにおける摂食を抑制するその能力について異なる投与量でテストした。ペプチドの投与は、第三脳室への注入によった。４匹の２群のラットを研究に使用した。第一群の各ラットは、０．５０μｇのペプチドを投与され、一方第二群の各ラットは、１．０μｇのペプチドを投与された。
第二のアスパラギン酸（Ｄ）で始まりＴｙｒ及びＰｈｅ（Ｙ及びＦ）を伴う、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１に相当するペプチドの３０アミノ酸の１８は、Ｂｏｇｕｓｋｉら（Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．８１、５０２１−５０２５、１９８４）により記述された繰り返し配列に属する。
ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１に相当するペプチドが質量分光測定により分析されたとき、アミノ酸の一つの配合による問題が観察された。恐らく、失われたアミノ酸は、スレオニンであり、そしてそれがペプチドへ配合できなかったことは、恐らく立体障害によるものである。図１に示されるように、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１に相当する３０マー（恐らく主として２９マー）は、投与量依存の関係で食物の摂取を阻害することを立証した。
実施例  ２
成熟ラットアポＡ−ＩＶの初めの１５アミノ酸（アポＡ−ＩＶプレカーサーのアミノ酸位置２１で始まる）に相当する以下の１５マーのペプチドは、Ｍｉｌｌｉｇｅｎ合成機（モデル９０５０）で固相ペプチド合成により合成され、質量分光測定により分析され、そしてエーテルにより洗われてフェノール性化合物を除いた。
0003754072.tif 000012
このペプチドを、緩衝された溶液１ｍＬあたり１００μｇのペプチドの濃度で懸濁し、次に雄のＳｐｒａｇｕｅ  Ｄａｗｌｅｙラットにおける摂食を抑制するその能力について異なる投与量でテストした。ペプチドの投与は、第三脳室への注入によった。２群のラットを研究に使用した。第一群の４匹のラットは、０．５０μｇのペプチドを投与され、一方第二群の４匹のラットは、１．０μｇのペプチドを投与された。このペプチドの最後の３残基、Ａｓｐ、Ｔｙｒ及びＰｈｅ（Ｄ、Ｙ及びＦ）は、Ｂｏｇｕｓｋｉら（Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．８１、５０２１−５０２５、１９８４）により記述された繰り返し配列の初めの３残基を示す。図１に示されるように、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２に相当するこの１５マーペプチドは、食物の摂取の阻害に無効である。
実施例  ３
ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１のペプチドの最後の１５アミノ酸（ラットアポＡ−ＩＶプレカーサーの位置３７で始まる）に相当する以下の１５マーのペプチドは、Ｍｉｌｌｉｇｅｎ合成機（モデル９０５０）で固相ペプチド合成により合成され、質量分光測定により分析され、そしてエーテルにより洗われてフェノール性化合物を除いた。
0003754072.tif 000013
ペプチドを、緩衝された溶液１ｍＬあたり１００μｇのペプチドの濃度で懸濁し、次に雄のＳｐｒａｇｕｅ  Ｄａｗｌｅｙラットにおける摂食を抑制するその能力について異なる投与量でテストした。ペプチドの投与は、第三脳室への注入によった。４群のラットを研究に使用した。４匹のラットの第一群のそれぞれのラットは、０．２５μｇのペプチドを投与され、一方第二群及び第三群（それぞれ４匹のラットを含む）のそれぞれのラットは、それぞれ０．５０μｇ又は１．００μｇのペプチドを投与された。２匹のラットの第四群は、０．１２５μｇのペプチドを投与された。
図１に示されるように、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３に相当するこの１５マーペプチドは、投与量依存の関係で食物の摂取の阻害に有効である。ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１の最後の１５アミノ酸の範囲の第一のアミン酸残基は、アポＡ−ＩＶプレカーサーの位置３６に相当するＴｈｒ（Ｔ）である。
得られるペプチドのアミノ酸の配列決定は、ペプチドは、位置３６でＴｈｒ（Ｔ）を欠き、そのかわりペプチドの第一のアミノ酸としてＧｌｎ（Ｑ）を含んでいることを明らかにした。さらに、合成中、追加のＡｓｎ（Ｎ）は、アポＡ−ＩＶプレカーサーの位置４０及び４１に通常見いだされる２個のＡｓｎ残基後のペプチドに配合された。
ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３に相当するペプチドは、図１の示されるように投与量依存の関係で食物の摂取の阻害に有効であるため、Ｔｈｒ（Ｔ）の欠失及びＡｓｎ（Ｎ）の付加は、変更されたペプチドの生物学的活性と干渉しない。
実施例  ４
ラットアポＡ−ＩＶプレカーサーのアミノ酸３７−５０に相当する以下の１４マーのペプチドは、Ｍｉｌｌｉｇｅｎ合成機（モデル９０５０）で固相ペプチド合成により合成され、質量分光測定により分析され、そしてエーテルにより洗われてフェノール性化合物を除いた。
0003754072.tif 000014
ペプチドを、緩衝された溶液１ｍＬあたり１００μｇのペプチドの濃度で懸濁し、次に雄のＳｐｒａｇｕｅ  Ｄａｗｌｅｙラットにおける摂食を抑制するその能力について異なる投与量でテストした。ペプチドの投与は、第三脳室への注入によった。４匹の３群のラットを研究に使用した。第一群の各ラットは、０．２５μｇのペプチドを投与され、一方第二群及び第三群の各ラットは、それぞれ０．５又は１．０μｇのペプチドを投与された。ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４に相当するペプチドは、投与量依存の関係で食物の摂取の阻害に有効であることが分かった（図３ａ）。ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４に相当するペプチドは、また、食物の摂取の阻害にＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３のペプチドと同様に有効であることが分かった。さらに、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３及びＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４に相当するペプチドの両者は、投与されるペプチドのμｇでの投与量に基づいて、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１のペプチドより食物の摂取を抑制するのにさらに有効である。
ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４に相当するペプチドのアミノ酸配列が、ヒトアポＡ−ＩＶの同じ領域と比較されるとき、１４アミノ酸の内１３が同じであることも注意すべきである。これは、アミノ酸配列レベルで９３％の相同性の度合を示す。
第三脳室中へのペプチドの注入を経る中枢神経への適用に加えて、３匹の雄のＳｐｒａｇｕｅ  Ｄａｗｌｅｙラットに、静脈内注入によりＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４に相当するペプチド２００μｇを投与した。食物摂取は、１時間の研究時間で、２０−４０％（３匹のテストラットでそれぞれ２０％、３１％及び３９％）減少した。この発見は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４に相当するペプチド及び他の本発明のペプチドの摂食抑制効果は、中枢神経への適用に制限されないことを立証する。
実施例  ５
ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１のペプチドの最後の１５アミノ酸（ラットアポＡ−ＩＶプレカーサーの位置３６で始まる）に相当する以下の１５マーのペプチドは、Ｍｉｌｌｉｇｅｎ合成機（モデル９０５０）で固相ペプチド合成により合成され、質量分光測定により分析され、そしてエーテルにより洗われてフェノール性化合物を除いた。
0003754072.tif 000015
ペプチドを、緩衝された溶液１ｍＬあたり１００μｇのペプチドの濃度で懸濁し、次に雄のＳｐｒａｇｕｅ  Ｄａｗｌｅｙラットにおける摂食を抑制するその能力について異なる投与量でテストした。ペプチドの投与は、第三脳室への注入によった。２群のラットを研究に使用した。０．５μｇのペプチドを２匹のラットの第一群に投与し、１．０μｇのペプチドを４匹のラットの第二群に投与した。ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５のペプチドは、アポＡ−ＩＶプレカーサーのアミノ酸位置３６−５０を示す。
実施例  ６
ラットアポＡ−ＩＶプレカーサーのアミノ酸２３１−２５２に相当する以下のマーのペプチドは、Ｍｉｌｌｉｇｅｎ合成機（モデル９０５０）で固相ペプチド合成により合成され、質量分光測定により分析され、そしてエーテルにより洗われてフェノール性化合物を除いた。
ＱＥＫＬＮＨＱＭＥＧＬＡＦＱＭＫＫＮＡＥＥＬ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：６）
このペプチドは、ラット及びヒトアポＡ−ＩＶ間のかなりな相同性を有するアミノ酸の範囲を包含している。ラット及びヒトアミノ酸配列は、２２位置の２０で同一であり、９０％のアミノ酸配列の相同性を与える。
このペプチドを、緩衝された溶液１ｍＬあたり１００μｇのペプチドの濃度で懸濁し、次に雄のＳｐｒａｇｕｅ  Ｄａｗｌｅｙラットにおける摂食を抑制するその能力について異なる投与量でテストした。ペプチドの投与は、第三脳室への注入によった。４匹の２群のラットを研究に使用した。第一群の各ラットは、０．５μｇのペプチドを投与され、一方第二群の各ラットは、１．０μｇのペプチドを投与された。図４に示されるように、何れの投与も、食物の摂取に何等効果を示さなかった。
実施例  ７
ラットアポＡ−ＩＶプレカーサーのアミノ酸３１６−３４６に相当する以下の３０マーのペプチドは、Ｍｉｌｌｉｇｅｎ合成機（モデル９０５０）で固相ペプチド合成により合成され、質量分光測定により分析され、そしてエーテルにより洗われてフェノール性化合物を除いた。
0003754072.tif 000016
ペプチドを、緩衝された溶液１ｍＬあたり１００μｇのペプチドの濃度で懸濁し、次に雄のＳｐｒａｇｕｅ  Ｄａｗｌｅｙラットにおける摂食を抑制するその能力について異なる投与量でテストした。ペプチドの投与は、第三脳室への注入によった。２群のラットを研究に使用し、第一群は４匹のラットを有し、第二群は６匹のラットを有した。第一群のラットは、０．５μｇのペプチドを投与され、一方第二群の各ラットは、１．０μｇのペプチドを投与された。
図５に示されるように、ペプチドは、食物の摂取を阻害することが分かった。０．５μｇ及び１．０μｇの間の食物摂取における差は、統計的に有意でないことが見いだされた。さらに、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３又はＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４からなるペプチドに比較したとき、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：７からなるペプチドが食物の摂取を阻害するのに有効でなかったことが見いだされた。
実施例  ８
全ヒトアポリポ蛋白Ａ−ＩＶ分子が、ヒト血清から得られ、そして調製ポリアクリルアミドゲル電気泳動により精製された。ポリペプチドを次に緩衝された溶液１ｍＬあたり１００μｇのペプチドの濃度で懸濁し、次に雄のＳｐｒａｇｕｅ  Ｄａｗｌｅｙラットにおける摂食を抑制するその能力についてテストした。アポＡ−ＩＶ溶液を、１匹のラットあたり１．５及び３μｇの投与量で、第三脳室への注入により雄のＳｐｒａｇｕｅ  Ｄａｗｌｅｙラットに投与した。図６に示されるように、ヒトアポＡ−ＩＶは、投与量依存の関係でラットにおける食物の摂取を抑制するのに有効であることが分かった。この発見は、ヒトアポリポ蛋白Ａ−ＩＶが、予想されるように、食欲抑制性を有することを立証する。さらに、ヒトアポＡ−ＩＶの異なるアミノ酸配列は、ヒトアポＡ−ＩＶがラットに投与されるとき、食欲抑制性を行うと思われない。
実施例  ９
成熟ヒトアポリポ蛋白Ａ−ＩＶの初めの３０アミノ酸（アポＡ−ＩＶプレカーサーの位置２１で始まる）に相当する以下の３０マーのペプチドは、固相ペプチド合成により合成され、質量分光測定により分析され、そしてエーテルにより洗われてフェノール性化合物を除いた。
0003754072.tif 000017
ペプチドは、静脈内、経口又は他の処方のために、凍結乾燥粉末として貯蔵されるか、又は緩衝された塩水溶液中に直ぐに溶解される。
実施例  １０
ヒトアポＡ−ＩＶプレカーサーのアミノ酸３７−５０に相当する以下の１４マーのペプチドは、固相ペプチド合成により合成され、質量分光測定により分析され、そしてエーテルにより洗われてフェノール性化合物を除いた。
0003754072.tif 000018
ペプチドは、静脈内、経口又は他の処方のために、凍結乾燥粉末として貯蔵されるか、又は緩衝された塩水溶液中に直ぐに溶解される。
実施例  １１
ヒトアポＡ−ＩＶプレカーサーのアミノ酸３１６−３４６に相当する以下の３０マーのペプチドは、固相ペプチド合成により合成され、質量分光測定により分析され、そしてエーテルにより洗われてフェノール性化合物を除いた。
0003754072.tif 000019
ペプチドは、静脈内、経口又は他の処方のために、凍結乾燥粉末として貯蔵されるか、又は緩衝された塩水溶液中に直ぐに溶解される。
配列表
（１）一般情報
（ｉ）出願人：ツョ  パトリック
（ii）発明の名称：
（iii）配列番号：８７
（iv）通信の宛先
（Ａ）宛先人：サッカリー，スコット，マーフィー  エンド  プレザー
（Ｂ）ストリート：ガーデン  シティ  プラザ  ４００
（Ｃ）市：ガーデン  シティ
（Ｄ）州：ニューヨーク
（Ｅ）国：アメリカ合衆国：
（Ｆ）郵便番号：１１５３０
（ｖ）コンピュータ読み出し形体：
（Ａ）メディアム  タイプ：フロッピーディスク
（Ｂ）コンピュータ：互換性  ＩＢＭ  ＰＣ
（Ｃ）オペレーティング  システム：ＰＣ−ＤＯＳ／ＭＳ−ＤＯＳ
（Ｄ）ソフトウェア：パテントイン  リリース  ♯１．０，バージョン♯１．２５
（vi）現在の出願データ：
（Ａ）出願番号：
（Ｂ）出願日：１９９５年３月２２日：
（Ｃ）分類：
（viii）代理人／エージェント情報
（Ａ）名前：ジギグリオ  フランク  エス
（Ｂ）登録番号：３１，３４６
（Ｃ）整理／ドケット番号：９０２１Ｚ
（ix）電話通信番号：
（Ａ）電話：５１６−７４２−４３４３
（Ｂ）テレファックス：５１６−７４２−４３６６
（Ｃ）テレックス：２３０  ９０１  ＳＡＮＳ  ＵＲ
（２）配列番号１の情報：
（ｉ）配列の特徴：
（Ａ）配列の長さ：  ３０  アミノ酸
（Ｂ）配列の型：    アミノ酸
（Ｃ）鎖の数：一本鎖
（Ｄ）トポロジー：直鎖状
（ii）分子の型：ペプチド
（iv）配列の記載：  配列番号１：
0003754072.tif 000020
（２）配列番号２の情報：
（ｉ）配列の特徴：
（Ａ）配列の長さ：  １５  アミノ酸
（Ｂ）配列の型：    アミノ酸
（Ｃ）鎖の数：  一本鎖
（Ｄ）トポロジー：  直鎖状
（ii）分子の型：  ペプチド
（ｘｉ）配列の記載：  配列番号２：
0003754072.tif 000021
（２）配列番号３の情報：
（ｉ）配列の特徴：
（Ａ）配列の長さ：  １５  アミノ酸
（Ｂ）配列の型：    アミノ酸
（Ｃ）鎖の数：  一本鎖
（Ｄ）トポロジー：  直鎖状
（ii）分子の型：  ペプチド
（ｘｉ）配列の記載：  配列番号３：
0003754072.tif 000022
（２）配列番号４の情報：
（ｉ）配列の特徴：
（Ａ）配列の長さ：  １４  アミノ酸
（Ｂ）配列の型：    アミノ酸
（Ｃ）鎖の数：  一本鎖
（Ｄ）トポロジー：  直鎖状
（ii）分子の型：  ペプチド
（ｘｉ）配列の記載：  配列番号４：
0003754072.tif 000023
（２）配列番号５の情報：
（ｉ）配列の特徴：
（Ａ）配列の長さ：  １５  アミノ酸
（Ｂ）配列の型：    アミノ酸
（Ｃ）鎖の数：  一本鎖
（Ｄ）トポロジー：  直鎖状
（ii）分子の型：  ペプチド
（ｘｉ）配列の記載：  配列番号５：
0003754072.tif 000024
（２）配列番号６の情報：
（ｉ）配列の特徴：
（Ａ）配列の長さ：  ２２  アミノ酸
（Ｂ）配列の型：    アミノ酸
（Ｃ）鎖の数：  一本鎖
（Ｄ）トポロジー：  直鎖状
（ii）分子の型：  ペプチド
（ｘｉ）配列の記載：  配列番号６：
0003754072.tif 000025
（２）配列番号７の情報：
（ｉ）配列の特徴：
（Ａ）配列の長さ：  ３０  アミノ酸
（Ｂ）配列の型：    アミノ酸
（Ｃ）鎖の数：  一本鎖
（Ｄ）トポロジー：  直鎖状
（ii）分子の型：  ペプチド
（ｘｉ）配列の記載：  配列番号７：
0003754072.tif 000026
（２）配列番号８の情報：
（ｉ）配列の特徴：
（Ａ）配列の長さ：  ３０  アミノ酸
（Ｂ）配列の型：    アミノ酸
（Ｃ）鎖の数：  一本鎖
（Ｄ）トポロジー：  直鎖状
（ii）分子の型：  ペプチド
（ｘｉ）配列の記載：  配列番号８：
0003754072.tif 000027
（２）配列番号９の情報：
（ｉ）配列の特徴：
（Ａ）配列の長さ：  １４  アミノ酸
（Ｂ）配列の型：    アミノ酸
（Ｃ）鎖の数：  一本鎖
（Ｄ）トポロジー：  直鎖状
（ii）分子の型：  ペプチド
（ｘｉ）配列の記載：  配列番号９：
0003754072.tif 000028
（２）配列番号１０の情報：
（ｉ）配列の特徴：
（Ａ）配列の長さ：  ２８  アミノ酸
（Ｂ）配列の型：    アミノ酸
（Ｃ）鎖の数：  一本鎖
（Ｄ）トポロジー：  直鎖状
（ii）分子の型：  ペプチド
（ｘｉ）配列の記載：  配列番号１０：
0003754072.tif 000029
（２）配列番号１１の情報：
（ｉ）配列の特徴：
（Ａ）配列の長さ：  ３  アミノ酸
（Ｂ）配列の型：    アミノ酸
（Ｃ）鎖の数：  一本鎖
（Ｄ）トポロジー：  直鎖状
（ii）分子の型：  ペプチド
（ｘｉ）配列の記載：  配列番号１１：
0003754072.tif 000030
（２）配列番号１２の情報：
（ｉ）配列の特徴：
（Ａ）配列の長さ：  ３  アミノ酸
（Ｂ）配列の型：    アミノ酸
（Ｃ）鎖の数：  一本鎖
（Ｄ）トポロジー：  直鎖状
（ii）分子の型：  ペプチド
（ｘｉ）配列の記載：  配列番号１２：
0003754072.tif 000031
（２）配列番号１３の情報：
（ｉ）配列の特徴：
（Ａ）配列の長さ：  ３  アミノ酸
（Ｂ）配列の型：    アミノ酸
（Ｃ）鎖の数：  一本鎖
（Ｄ）トポロジー：  直鎖状
（ii）分子の型：  ペプチド
（ｘｉ）配列の記載：  配列番号１３：
0003754072.tif 000032
（２）配列番号１４の情報：
（ｉ）配列の特徴：
（Ａ）配列の長さ：  ３  アミノ酸
（Ｂ）配列の型：    アミノ酸
（Ｃ）鎖の数：  一本鎖
（Ｄ）トポロジー：  直鎖状
（ii）分子の型：  ペプチド
（ｘｉ）配列の記載：  配列番号１４：
0003754072.tif 000033
（２）配列番号１５の情報：
（ｉ）配列の特徴：
（Ａ）配列の長さ：  ３  アミノ酸
（Ｂ）配列の型：    アミノ酸
（Ｃ）鎖の数：  一本鎖
（Ｄ）トポロジー：  直鎖状
（ii）分子の型：  ペプチド
（ｘｉ）配列の記載：  配列番号１５：
0003754072.tif 000034
（２）配列番号１６の情報：
（ｉ）配列の特徴：
（Ａ）配列の長さ：  ３  アミノ酸
（Ｂ）配列の型：    アミノ酸
（Ｃ）鎖の数：  一本鎖
（Ｄ）トポロジー：  直鎖状
（ii）分子の型：  ペプチド
（ｘｉ）配列の記載：  配列番号１６：
0003754072.tif 000035
（２）配列番号１７の情報：
（ｉ）配列の特徴：
（Ａ）配列の長さ：  ３  アミノ酸
（Ｂ）配列の型：    アミノ酸
（Ｃ）鎖の数：  一本鎖
（Ｄ）トポロジー：  直鎖状
（ii）分子の型：  ペプチド
（ｘｉ）配列の記載：  配列番号１７：
0003754072.tif 000036
（２）配列番号１８の情報：
（ｉ）配列の特徴：
（Ａ）配列の長さ：  ３  アミノ酸
（Ｂ）配列の型：    アミノ酸
（Ｃ）鎖の数：  一本鎖
（Ｄ）トポロジー：  直鎖状
（ii）分子の型：  ペプチド
（ｘｉ）配列の記載：  配列番号１８：
0003754072.tif 000037
（２）配列番号１９の情報：
（ｉ）配列の特徴：
（Ａ）配列の長さ：  ３  アミノ酸
（Ｂ）配列の型：    アミノ酸
（Ｃ）鎖の数：  一本鎖
（Ｄ）トポロジー：  直鎖状
（ii）分子の型：  ペプチド
（ｘｉ）配列の記載：  配列番号１９：
0003754072.tif 000038
（２）配列番号２０の情報：
（ｉ）配列の特徴：
（Ａ）配列の長さ：  ３  アミノ酸
（Ｂ）配列の型：    アミノ酸
（Ｃ）鎖の数：  一本鎖
（Ｄ）トポロジー：  直鎖状
（ii）分子の型：  ペプチド
（ｘｉ）配列の記載：  配列番号２０：
0003754072.tif 000039
（２）配列番号２１の情報：
（ｉ）配列の特徴：
（Ａ）配列の長さ：  ３  アミノ酸
（Ｂ）配列の型：    アミノ酸
（Ｃ）鎖の数：  一本鎖
（Ｄ）トポロジー：  直鎖状
（ii）分子の型：  ペプチド
（ｘｉ）配列の記載：  配列番号２１：
0003754072.tif 000040
（２）配列番号２２の情報：
（ｉ）配列の特徴：
（Ａ）配列の長さ：  ３  アミノ酸
（Ｂ）配列の型：    アミノ酸
（Ｃ）鎖の数：  一本鎖
（Ｄ）トポロジー：  直鎖状
（ii）分子の型：  ペプチド
（ｘｉ）配列の記載：  配列番号２２：
0003754072.tif 000041
（２）配列番号２３の情報：
（ｉ）配列の特徴：
（Ａ）配列の長さ：  ４  アミノ酸
（Ｂ）配列の型：    アミノ酸
（Ｃ）鎖の数：  一本鎖
（Ｄ）トポロジー：  直鎖状
（ii）分子の型：  ペプチド
（ｘｉ）配列の記載：  配列番号２３：
0003754072.tif 000042
（２）配列番号２４の情報：
（ｉ）配列の特徴：
（Ａ）配列の長さ：  ４  アミノ酸
（Ｂ）配列の型：    アミノ酸
（Ｃ）鎖の数：  一本鎖
（Ｄ）トポロジー：  直鎖状
（ii）分子の型：  ペプチド
（ｘｉ）配列の記載：  配列番号２４：
0003754072.tif 000043
（２）配列番号２５の情報：
（ｉ）配列の特徴：
（Ａ）配列の長さ：  ４  アミノ酸
（Ｂ）配列の型：    アミノ酸
（Ｃ）鎖の数：  一本鎖
（Ｄ）トポロジー：  直鎖状
（ii）分子の型：  ペプチド
（ｘｉ）配列の記載：  配列番号２５：
0003754072.tif 000044
（２）配列番号２６の情報：
（ｉ）配列の特徴：
（Ａ）配列の長さ：  ４  アミノ酸
（Ｂ）配列の型：    アミノ酸
（Ｃ）鎖の数：  一本鎖
（Ｄ）トポロジー：  直鎖状
（ii）分子の型：  ペプチド
（ｘｉ）配列の記載：  配列番号２６：
0003754072.tif 000045
（２）配列番号２７の情報：
（ｉ）配列の特徴：
（Ａ）配列の長さ：  ４  アミノ酸
（Ｂ）配列の型：    アミノ酸
（Ｃ）鎖の数：  一本鎖
（Ｄ）トポロジー：  直鎖状
（ii）分子の型：  ペプチド
（ｘｉ）配列の記載：  配列番号２７：
0003754072.tif 000046
（２）配列番号２８の情報：
（ｉ）配列の特徴：
（Ａ）配列の長さ：  ４  アミノ酸
（Ｂ）配列の型：    アミノ酸
（Ｃ）鎖の数：  一本鎖
（Ｄ）トポロジー：  直鎖状
（ii）分子の型：  ペプチド
（ｘｉ）配列の記載：  配列番号２８：
0003754072.tif 000047
（２）配列番号２９の情報：
（ｉ）配列の特徴：
（Ａ）配列の長さ：  ４  アミノ酸
（Ｂ）配列の型：    アミノ酸
（Ｃ）鎖の数：  一本鎖
（Ｄ）トポロジー：  直鎖状
（ii）分子の型：  ペプチド
（ｘｉ）配列の記載：  配列番号２９：
0003754072.tif 000048
（２）配列番号３０の情報：
（ｉ）配列の特徴：
（Ａ）配列の長さ：  ４  アミノ酸
（Ｂ）配列の型：    アミノ酸
（Ｃ）鎖の数：  一本鎖
（Ｄ）トポロジー：  直鎖状
（ii）分子の型：  ペプチド
（ｘｉ）配列の記載：  配列番号３０：
0003754072.tif 000049
（２）配列番号３１の情報：
（ｉ）配列の特徴：
（Ａ）配列の長さ：  ４  アミノ酸
（Ｂ）配列の型：    アミノ酸
（Ｃ）鎖の数：  一本鎖
（Ｄ）トポロジー：  直鎖状
（ii）分子の型：  ペプチド
（ｘｉ）配列の記載：  配列番号３１：
0003754072.tif 000050
（２）配列番号３２の情報：
（ｉ）配列の特徴：
（Ａ）配列の長さ：  ４  アミノ酸
（Ｂ）配列の型：    アミノ酸
（Ｃ）鎖の数：  一本鎖
（Ｄ）トポロジー：  直鎖状
（ii）分子の型：  ペプチド
（ｘｉ）配列の記載：  配列番号３２：
0003754072.tif 000051
（２）配列番号３３の情報：
（ｉ）配列の特徴：
（Ａ）配列の長さ：  ４  アミノ酸
（Ｂ）配列の型：    アミノ酸
（Ｃ）鎖の数：  一本鎖
（Ｄ）トポロジー：  直鎖状
（ii）分子の型：  ペプチド
（ｘｉ）配列の記載：  配列番号３３：
0003754072.tif 000052
（２）配列番号３４の情報：
（ｉ）配列の特徴：
（Ａ）配列の長さ：  ５  アミノ酸
（Ｂ）配列の型：    アミノ酸
（Ｃ）鎖の数：  一本鎖
（Ｄ）トポロジー：  直鎖状
（ii）分子の型：  ペプチド
（ｘｉ）配列の記載：  配列番号３４：
0003754072.tif 000053
（２）配列番号３５の情報：
（ｉ）配列の特徴：
（Ａ）配列の長さ：  ５  アミノ酸
（Ｂ）配列の型：    アミノ酸
（Ｃ）鎖の数：  一本鎖
（Ｄ）トポロジー：  直鎖状
（ii）分子の型：  ペプチド
（ｘｉ）配列の記載：  配列番号３５：
0003754072.tif 000054
（２）配列番号３６の情報：
（ｉ）配列の特徴：
（Ａ）配列の長さ：  ５  アミノ酸
（Ｂ）配列の型：    アミノ酸
（Ｃ）鎖の数：  一本鎖
（Ｄ）トポロジー：  直鎖状
（ii）分子の型：  ペプチド
（ｘｉ）配列の記載：  配列番号３６：
0003754072.tif 000055
（２）配列番号３７の情報：
（ｉ）配列の特徴：
（Ａ）配列の長さ：  ５  アミノ酸
（Ｂ）配列の型：    アミノ酸
（Ｃ）鎖の数：  一本鎖
（Ｄ）トポロジー：  直鎖状
（ii）分子の型：  ペプチド
（ｘｉ）配列の記載：  配列番号３７：
0003754072.tif 000056
（２）配列番号３８の情報：
（ｉ）配列の特徴：
（Ａ）配列の長さ：  ５  アミノ酸
（Ｂ）配列の型：    アミノ酸
（Ｃ）鎖の数：  一本鎖
（Ｄ）トポロジー：  直鎖状
（ii）分子の型：  ペプチド
（ｘｉ）配列の記載：  配列番号３８：
0003754072.tif 000057
（２）配列番号３９の情報：
（ｉ）配列の特徴：
（Ａ）配列の長さ：  ５  アミノ酸
（Ｂ）配列の型：    アミノ酸
（Ｃ）鎖の数：  一本鎖
（Ｄ）トポロジー：  直鎖状
（ii）分子の型：  ペプチド
（ｘｉ）配列の記載：  配列番号３９：
0003754072.tif 000058
（２）配列番号４０の情報：
（ｉ）配列の特徴：
（Ａ）配列の長さ：  ５  アミノ酸
（Ｂ）配列の型：    アミノ酸
（Ｃ）鎖の数：  一本鎖
（Ｄ）トポロジー：  直鎖状
（ii）分子の型：  ペプチド
（ｘｉ）配列の記載：  配列番号４０：
0003754072.tif 000059
（２）配列番号４１の情報：
（ｉ）配列の特徴：
（Ａ）配列の長さ：  ５  アミノ酸
（Ｂ）配列の型：    アミノ酸
（Ｃ）鎖の数：  一本鎖
（Ｄ）トポロジー：  直鎖状
（ii）分子の型：  ペプチド
（ｘｉ）配列の記載：  配列番号４１：
0003754072.tif 000060
（２）配列番号４２の情報：
（ｉ）配列の特徴：
（Ａ）配列の長さ：  ５  アミノ酸
（Ｂ）配列の型：    アミノ酸
（Ｃ）鎖の数：  一本鎖
（Ｄ）トポロジー：  直鎖状
（ii）分子の型：  ペプチド
（ｘｉ）配列の記載：  配列番号４２：
0003754072.tif 000061
（２）配列番号４３の情報：
（ｉ）配列の特徴：
（Ａ）配列の長さ：  ５  アミノ酸
（Ｂ）配列の型：    アミノ酸
（Ｃ）鎖の数：  一本鎖
（Ｄ）トポロジー：  直鎖状
（ii）分子の型：  ペプチド
（ｘｉ）配列の記載：  配列番号４３：
0003754072.tif 000062
（２）配列番号４４の情報：
（ｉ）配列の特徴：
（Ａ）配列の長さ：  ６  アミノ酸
（Ｂ）配列の型：    アミノ酸
（Ｃ）鎖の数：  一本鎖
（Ｄ）トポロジー：  直鎖状
（ii）分子の型：  ペプチド
（ｘｉ）配列の記載：  配列番号４４：
0003754072.tif 000063
（２）配列番号４５の情報：
（ｉ）配列の特徴：
（Ａ）配列の長さ：  ６  アミノ酸
（Ｂ）配列の型：    アミノ酸
（Ｃ）鎖の数：  一本鎖
（Ｄ）トポロジー：  直鎖状
（ii）分子の型：  ペプチド
（ｘｉ）配列の記載：  配列番号４５：
0003754072.tif 000064
（２）配列番号４６の情報：
（ｉ）配列の特徴：
（Ａ）配列の長さ：  ６  アミノ酸
（Ｂ）配列の型：    アミノ酸
（Ｃ）鎖の数：  一本鎖
（Ｄ）トポロジー：  直鎖状
（ii）分子の型：  ペプチド
（ｘｉ）配列の記載：  配列番号４６：
0003754072.tif 000065
（２）配列番号４７の情報：
（ｉ）配列の特徴：
（Ａ）配列の長さ：  ６  アミノ酸
（Ｂ）配列の型：    アミノ酸
（Ｃ）鎖の数：  一本鎖
（Ｄ）トポロジー：  直鎖状
（ii）分子の型：  ペプチド
（ｘｉ）配列の記載：  配列番号４７：
0003754072.tif 000066
（２）配列番号４８の情報：
（ｉ）配列の特徴：
（Ａ）配列の長さ：  ６  アミノ酸
（Ｂ）配列の型：    アミノ酸
（Ｃ）鎖の数：  一本鎖
（Ｄ）トポロジー：  直鎖状
（ii）分子の型：  ペプチド
（ｘｉ）配列の記載：  配列番号４８：
0003754072.tif 000067
（２）配列番号４９の情報：
（ｉ）配列の特徴：
（Ａ）配列の長さ：  ６  アミノ酸
（Ｂ）配列の型：    アミノ酸
（Ｃ）鎖の数：  一本鎖
（Ｄ）トポロジー：  直鎖状
（ii）分子の型：  ペプチド
（ｘｉ）配列の記載：  配列番号４９：
0003754072.tif 000068
（２）配列番号５０の情報：
（ｉ）配列の特徴：
（Ａ）配列の長さ：  ６  アミノ酸
（Ｂ）配列の型：    アミノ酸
（Ｃ）鎖の数：  一本鎖
（Ｄ）トポロジー：  直鎖状
（ii）分子の型：  ペプチド
（ｘｉ）配列の記載：  配列番号５０：
0003754072.tif 000069
（２）配列番号５１の情報：
（ｉ）配列の特徴：
（Ａ）配列の長さ：  ６  アミノ酸
（Ｂ）配列の型：    アミノ酸
（Ｃ）鎖の数：  一本鎖
（Ｄ）トポロジー：  直鎖状
（ii）分子の型：  ペプチド
（ｘｉ）配列の記載：  配列番号５１：
0003754072.tif 000070
（２）配列番号５２の情報：
（ｉ）配列の特徴：
（Ａ）配列の長さ：  ６  アミノ酸
（Ｂ）配列の型：    アミノ酸
（Ｃ）鎖の数：  一本鎖
（Ｄ）トポロジー：  直鎖状
（ii）分子の型：  ペプチド
（ｘｉ）配列の記載：  配列番号５２：
0003754072.tif 000071
（２）配列番号５３の情報：
（ｉ）配列の特徴：
（Ａ）配列の長さ：  ７  アミノ酸
（Ｂ）配列の型：    アミノ酸
（Ｃ）鎖の数：  一本鎖
（Ｄ）トポロジー：  直鎖状
（ii）分子の型：  ペプチド
（ｘｉ）配列の記載：  配列番号５３：
0003754072.tif 000072
（２）配列番号５４の情報：
（ｉ）配列の特徴：
（Ａ）配列の長さ：  ７  アミノ酸
（Ｂ）配列の型：    アミノ酸
（Ｃ）鎖の数：  一本鎖
（Ｄ）トポロジー：  直鎖状
（ii）分子の型：  ペプチド
（ｘｉ）配列の記載：  配列番号５４：
0003754072.tif 000073
（２）配列番号５５の情報：
（ｉ）配列の特徴：
（Ａ）配列の長さ：  ７  アミノ酸
（Ｂ）配列の型：    アミノ酸
（Ｃ）鎖の数：  一本鎖
（Ｄ）トポロジー：  直鎖状
（ii）分子の型：  ペプチド
（ｘｉ）配列の記載：  配列番号５５：
0003754072.tif 000074
（２）配列番号５６の情報：
（ｉ）配列の特徴：
（Ａ）配列の長さ：  ７  アミノ酸
（Ｂ）配列の型：    アミノ酸
（Ｃ）鎖の数：  一本鎖
（Ｄ）トポロジー：  直鎖状
（ii）分子の型：  ペプチド
（ｘｉ）配列の記載：  配列番号５６：
0003754072.tif 000075
（２）配列番号５７の情報：
（ｉ）配列の特徴：
（Ａ）配列の長さ：  ７  アミノ酸
（Ｂ）配列の型：    アミノ酸
（Ｃ）鎖の数：  一本鎖
（Ｄ）トポロジー：  直鎖状
（ii）分子の型：  ペプチド
（ｘｉ）配列の記載：  配列番号５７：
0003754072.tif 000076
（２）配列番号５８の情報：
（ｉ）配列の特徴：
（Ａ）配列の長さ：  ７  アミノ酸
（Ｂ）配列の型：    アミノ酸
（Ｃ）鎖の数：  一本鎖
（Ｄ）トポロジー：  直鎖状
（ii）分子の型：  ペプチド
（ｘｉ）配列の記載：  配列番号５８：
0003754072.tif 000077
（２）配列番号５９の情報：
（ｉ）配列の特徴：
（Ａ）配列の長さ：  ７  アミノ酸
（Ｂ）配列の型：    アミノ酸
（Ｃ）鎖の数：  一本鎖
（Ｄ）トポロジー：  直鎖状
（ii）分子の型：  ペプチド
（ｘｉ）配列の記載：  配列番号５９：
0003754072.tif 000078
（２）配列番号６０の情報：
（ｉ）配列の特徴：
（Ａ）配列の長さ：  ７  アミノ酸
（Ｂ）配列の型：    アミノ酸
（Ｃ）鎖の数：  一本鎖
（Ｄ）トポロジー：  直鎖状
（ii）分子の型：  ペプチド
（ｘｉ）配列の記載：  配列番号６０：
0003754072.tif 000079
（２）配列番号６１の情報：
（ｉ）配列の特徴：
（Ａ）配列の長さ：  ８  アミノ酸
（Ｂ）配列の型：    アミノ酸
（Ｃ）鎖の数：  一本鎖
（Ｄ）トポロジー：  直鎖状
（ii）分子の型：  ペプチド
（ｘｉ）配列の記載：  配列番号６１：
0003754072.tif 000080
（２）配列番号６２の情報：
（ｉ）配列の特徴：
（Ａ）配列の長さ：  ８  アミノ酸
（Ｂ）配列の型：    アミノ酸
（Ｃ）鎖の数：  一本鎖
（Ｄ）トポロジー：  直鎖状
（ii）分子の型：  ペプチド
（ｘｉ）配列の記載：  配列番号６２：
0003754072.tif 000081
（２）配列番号６３の情報：
（ｉ）配列の特徴：
（Ａ）配列の長さ：  ８  アミノ酸
（Ｂ）配列の型：    アミノ酸
（Ｃ）鎖の数：  一本鎖
（Ｄ）トポロジー：  直鎖状
（ii）分子の型：  ペプチド
（ｘｉ）配列の記載：  配列番号６３：
0003754072.tif 000082
（２）配列番号６４の情報：
（ｉ）配列の特徴：
（Ａ）配列の長さ：  ８  アミノ酸
（Ｂ）配列の型：    アミノ酸
（Ｃ）鎖の数：  一本鎖
（Ｄ）トポロジー：  直鎖状
（ii）分子の型：  ペプチド
（ｘｉ）配列の記載：  配列番号６４：
0003754072.tif 000083
（２）配列番号６５の情報：
（ｉ）配列の特徴：
（Ａ）配列の長さ：  ８  アミノ酸
（Ｂ）配列の型：    アミノ酸
（Ｃ）鎖の数：  一本鎖
（Ｄ）トポロジー：  直鎖状
（ii）分子の型：  ペプチド
（ｘｉ）配列の記載：  配列番号６５：
0003754072.tif 000084
（２）配列番号６６の情報：
（ｉ）配列の特徴：
（Ａ）配列の長さ：  ８  アミノ酸
（Ｂ）配列の型：    アミノ酸
（Ｃ）鎖の数：  一本鎖
（Ｄ）トポロジー：  直鎖状
（ii）分子の型：  ペプチド
（ｘｉ）配列の記載：  配列番号６６：
0003754072.tif 000085
（２）配列番号６７の情報：
（ｉ）配列の特徴：
（Ａ）配列の長さ：  ８  アミノ酸
（Ｂ）配列の型：    アミノ酸
（Ｃ）鎖の数：  一本鎖
（Ｄ）トポロジー：  直鎖状
（ii）分子の型：  ペプチド
（ｘｉ）配列の記載：  配列番号６７：
0003754072.tif 000086
（２）配列番号６８の情報：
（ｉ）配列の特徴：
（Ａ）配列の長さ：  ９  アミノ酸
（Ｂ）配列の型：    アミノ酸
（Ｃ）鎖の数：  一本鎖
（Ｄ）トポロジー：  直鎖状
（ii）分子の型：  ペプチド
（ｘｉ）配列の記載：  配列番号６８：
0003754072.tif 000087
（２）配列番号６９の情報：
（ｉ）配列の特徴：
（Ａ）配列の長さ：  ９  アミノ酸
（Ｂ）配列の型：    アミノ酸
（Ｃ）鎖の数：  一本鎖
（Ｄ）トポロジー：  直鎖状
（ii）分子の型：  ペプチド
（ｘｉ）配列の記載：  配列番号６９：
0003754072.tif 000088
（２）配列番号７０の情報：
（ｉ）配列の特徴：
（Ａ）配列の長さ：  ９  アミノ酸
（Ｂ）配列の型：    アミノ酸
（Ｃ）鎖の数：  一本鎖
（Ｄ）トポロジー：  直鎖状
（ii）分子の型：  ペプチド
（ｘｉ）配列の記載：  配列番号７０：
0003754072.tif 000089
（２）配列番号７１の情報：
（ｉ）配列の特徴：
（Ａ）配列の長さ：  ９  アミノ酸
（Ｂ）配列の型：    アミノ酸
（Ｃ）鎖の数：  一本鎖
（Ｄ）トポロジー：  直鎖状
（ii）分子の型：  ペプチド
（ｘｉ）配列の記載：  配列番号７１：
0003754072.tif 000090
（２）配列番号７２の情報：
（ｉ）配列の特徴：
（Ａ）配列の長さ：  ９  アミノ酸
（Ｂ）配列の型：    アミノ酸
（Ｃ）鎖の数：  一本鎖
（Ｄ）トポロジー：  直鎖状
（ii）分子の型：  ペプチド
（ｘｉ）配列の記載：  配列番号７２：
0003754072.tif 000091
（２）配列番号７３の情報：
（ｉ）配列の特徴：
（Ａ）配列の長さ：  ９  アミノ酸
（Ｂ）配列の型：    アミノ酸
（Ｃ）鎖の数：  一本鎖
（Ｄ）トポロジー：  直鎖状
（ii）分子の型：  ペプチド
（ｘｉ）配列の記載：  配列番号７３：
0003754072.tif 000092
（２）配列番号７４の情報：
（ｉ）配列の特徴：
（Ａ）配列の長さ：  １０  アミノ酸
（Ｂ）配列の型：    アミノ酸
（Ｃ）鎖の数：  一本鎖
（Ｄ）トポロジー：  直鎖状
（ii）分子の型：  ペプチド
（ｘｉ）配列の記載：  配列番号７４：
0003754072.tif 000093
（２）配列番号７５の情報：
（ｉ）配列の特徴：
（Ａ）配列の長さ：  １０  アミノ酸
（Ｂ）配列の型：    アミノ酸
（Ｃ）鎖の数：  一本鎖
（Ｄ）トポロジー：  直鎖状
（ii）分子の型：  ペプチド
（ｘｉ）配列の記載：  配列番号７５：
0003754072.tif 000094
（２）配列番号７６の情報：
（ｉ）配列の特徴：
（Ａ）配列の長さ：  １０  アミノ酸
（Ｂ）配列の型：    アミノ酸
（Ｃ）鎖の数：  一本鎖
（Ｄ）トポロジー：  直鎖状
（ii）分子の型：  ペプチド
（ｘｉ）配列の記載：  配列番号７６：
0003754072.tif 000095
（２）配列番号７７の情報：
（ｉ）配列の特徴：
（Ａ）配列の長さ：  １０  アミノ酸
（Ｂ）配列の型：    アミノ酸
（Ｃ）鎖の数：  一本鎖
（Ｄ）トポロジー：  直鎖状
（ii）分子の型：  ペプチド
（ｘｉ）配列の記載：  配列番号７７：
0003754072.tif 000096
（２）配列番号７８の情報：
（ｉ）配列の特徴：
（Ａ）配列の長さ：  １０  アミノ酸
（Ｂ）配列の型：    アミノ酸
（Ｃ）鎖の数：  一本鎖
（Ｄ）トポロジー：  直鎖状
（ii）分子の型：  ペプチド
（ｘｉ）配列の記載：  配列番号７８：
0003754072.tif 000097
（２）配列番号７９の情報：
（ｉ）配列の特徴：
（Ａ）配列の長さ：  １１  アミノ酸
（Ｂ）配列の型：    アミノ酸
（Ｃ）鎖の数：  一本鎖
（Ｄ）トポロジー：  直鎖状
（ii）分子の型：  ペプチド
（ｘｉ）配列の記載：  配列番号７９：
0003754072.tif 000098
（２）配列番号８０の情報：
（ｉ）配列の特徴：
（Ａ）配列の長さ：  １１  アミノ酸
（Ｂ）配列の型：    アミノ酸
（Ｃ）鎖の数：  一本鎖
（Ｄ）トポロジー：  直鎖状
（ii）分子の型：  ペプチド
（ｘｉ）配列の記載：  配列番号８０：
0003754072.tif 000099
（２）配列番号８１の情報：
（ｉ）配列の特徴：
（Ａ）配列の長さ：  １１  アミノ酸
（Ｂ）配列の型：    アミノ酸
（Ｃ）鎖の数：  一本鎖
（Ｄ）トポロジー：  直鎖状
（ii）分子の型：  ペプチド
（ｘｉ）配列の記載：  配列番号８１：
0003754072.tif 000100
（２）配列番号８２の情報：
（ｉ）配列の特徴：
（Ａ）配列の長さ：  １１  アミノ酸
（Ｂ）配列の型：    アミノ酸
（Ｃ）鎖の数：  一本鎖
（Ｄ）トポロジー：  直鎖状
（ii）分子の型：  ペプチド
（ｘｉ）配列の記載：  配列番号８２：
0003754072.tif 000101
（２）配列番号８３の情報：
（ｉ）配列の特徴：
（Ａ）配列の長さ：  １２  アミノ酸
（Ｂ）配列の型：    アミノ酸
（Ｃ）鎖の数：  一本鎖
（Ｄ）トポロジー：  直鎖状
（ii）分子の型：  ペプチド
（ｘｉ）配列の記載：  配列番号８３：
0003754072.tif 000102
（２）配列番号８４の情報：
（ｉ）配列の特徴：
（Ａ）配列の長さ：  １２  アミノ酸
（Ｂ）配列の型：    アミノ酸
（Ｃ）鎖の数：  一本鎖
（Ｄ）トポロジー：  直鎖状
（ii）分子の型：  ペプチド
（ｘｉ）配列の記載：  配列番号８４：
0003754072.tif 000103
（２）配列番号８５の情報：
（ｉ）配列の特徴：
（Ａ）配列の長さ：  １２  アミノ酸
（Ｂ）配列の型：    アミノ酸
（Ｃ）鎖の数：  一本鎖
（Ｄ）トポロジー：  直鎖状
（ii）分子の型：  ペプチド
（ｘｉ）配列の記載：  配列番号８５：
0003754072.tif 000104
（２）配列番号８６の情報：
（ｉ）配列の特徴：
（Ａ）配列の長さ：  １３  アミノ酸
（Ｂ）配列の型：    アミノ酸
（Ｃ）鎖の数：  一本鎖
（Ｄ）トポロジー：  直鎖状
（ii）分子の型：  ペプチド
（ｘｉ）配列の記載：  配列番号８６：
0003754072.tif 000105
（２）配列番号８７の情報：
（ｉ）配列の特徴：
（Ａ）配列の長さ：  １３  アミノ酸
（Ｂ）配列の型：    アミノ酸
（Ｃ）鎖の数：  一本鎖
（Ｄ）トポロジー：  直鎖状
（ii）分子の型：  ペプチド
（ｘｉ）配列の記載：  配列番号８７：
0003754072.tif 000106
【図１】
0003754072.tif 000107
【図２】
0003754072.tif 000108
【図３ａ】
0003754072.tif 000109
【図３ｂ】
0003754072.tif 000110
【図４】
0003754072.tif 000111
【図５】
0003754072.tif 000112
【図６】
0003754072.tif 000113