(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
式（Ｉ）
【化１】
0003830402.tif 000004
（式中、Ｒ1、Ｒ2およびＲ3は、水素、Ｎ−アセチルアミノエチル基、低級炭化水素基、高級炭化水素基、チオール基、または、エステル結合、ケトン結合、エーテル結合もしくはアミド結合を含む含酸素含窒素炭化水素基で表される有機基である）で表される化合物を含む美白剤。
【請求項２】
前記Ｒ1およびＲ2のいずれか一つがＮ−アセチルアミノエチル基であることを特徴とする請求項１記載の美白剤。
【請求項３】
前記Ｒ1およびＲ2のいずれか一方が水素の場合他方が前記有機基である、または前記Ｒ1およびＲ2の両方が前記有機基である場合前記Ｒ3が水素もしくは前記有機基であることを特徴とする請求項１または請求項２記載の美白剤。
【請求項４】
前記化合物が昆虫由来のクチクラを抽出して得られることを特徴とする請求項１、請求項２または請求項３記載の美白剤。
【請求項５】
前記クチクラがセンタイ由来であることを特徴とする請求項４記載の美白剤。
【請求項６】
請求項１ないし請求項５のいずれか１項記載の美白剤を含むことを特徴とする美白用皮膚外用剤。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は美白剤および美白用皮膚外用剤に関し、特にセンタイを抽出して得られる化合物を主成分とする美白剤および美白用皮膚外用剤に関する。
【０００２】
【従来の技術】
人の皮膚は生物学的、化学的、あるいは物理的攻撃に常に曝されている。紫外線は皮膚に対する公知の物理的攻撃の例であり、紫外線の刺激やホルモンの異常などが生じると、表皮メラノサイト内のメラニン色素の産生が過剰になり、しみ、そばかすなどの色素沈着が皮膚に発生する。
従来、しみ、そばかすを防止するためにメラニン色素の生成を抑制する物質について研究され、メラニン色素生成過程における生化学反応の第一段階を触媒する酵素チロシナーゼの活性を阻害する物質、例えばハイドロキノン、コウジ酸、あるいは酸化によるメラニン色素の黒化過程を抑えるアスコルビン酸、システインなどが美白剤として知られている。また、アルブチンは酵素チロシナーゼの活性阻害またはメラニン生合成阻害作用があり、代表的な美白剤として知られている。これら美白剤を軟膏、クリーム、ローションなどの皮膚外用剤に配合して美白用皮膚外用剤が得られ、局所に塗布するなどの方法がとられている。
【０００３】
一方、セミ科のさなぎの抜け殻として知られているセンタイ（蝉退）は、解熱剤や鎮痙剤として有効な漢方薬として利用されている。
【０００４】
【発明が解決しようとする課題】
しかしながら、センタイの美白剤としての作用は知られておらず、また、そのセンタイを抽出して得られる物質の特性についても知られておらず、安全な美白剤への応用は従来考慮されていないという問題がある。
本発明はこのような問題に対処するためになされたもので、天然物あるいは漢方薬なので安全性に優れるとともに、優れた美白効果を発揮する美白剤およびその美白剤を用いた美白用皮膚外用剤の提供を目的とする。
【０００５】
【課題を解決するための手段】
本発明に係る美白剤は、式（Ｉ）
【化２】
0003830402.tif 000002
（式中、Ｒ1、Ｒ2およびＲ3は、水素、Ｎ−アセチルアミノエチル基、低級炭化水素基、高級炭化水素基、チオール基、または、エステル結合、ケトン結合、エーテル結合もしくはアミド結合を含む含酸素含窒素炭化水素基で表される有機基である）で表される化合物を含むことを特徴とする。
また、上記Ｒ1およびＲ2のいずれか一つがＮ−アセチルアミノエチル基であることを特徴とする。
また、上記Ｒ1およびＲ2のいずれか一方が水素の場合他方が上記有機基である、または上記Ｒ1およびＲ2の両方が上記有機基である場合上記Ｒ3が水素もしくは上記有機基であることを特徴とする。
また、上記化合物が昆虫由来のクチクラ、特にセンタイ（蝉退）を抽出して得られることを特徴とする。
本発明に係る美白用皮膚外用剤は、上記式（Ｉ）を含むことを特徴とする。
【０００６】
天然物として存在する昆虫由来のクチクラの抽出成分および該クチクラの生合成過程について研究したところ、該クチクラがチロシナーゼ類似の酵素で生合成され、抽出成分がチロシナーゼ活性抑制効果に優れているカフェ酸誘導体に似ており、実験の結果、チロシナーゼ活性抑制効果を示すことを見出した。本発明はこのような知見に基づくものである。
【０００７】
【発明の実施の形態】
本発明に係る式（Ｉ）で示される化合物は、Ｎ−アセチルドーパミンの二量体類似構造であり、Ｒ1、Ｒ2およびＲ3は、水素、または炭素、窒素もしくは酸素を含む有機基である。有機基としては、Ｎ−アセチルアミノエチル基、低級炭化水素基、高級炭化水素基、エステル結合、ケトン結合、エーテル結合もしくはアミド結合等を含む含酸素含窒素炭化水素基、チオール基などを含む含硫黄炭化水素基等が挙げられる。これら有機基の中で、Ｒ1およびＲ2はＮ−アセチルアミノエチル基が好ましく、Ｒ1およびＲ2のいずれか一方が水素で、他方がＮ−アセチルアミノエチル基でＲ3がＮ−アセチルアミノ基である場合、式（ＩＩ）に示すように、Ｎ−アセチルドーパミンの二量体（以下、ＮＡＤＡ二量体と略称する）となる。
【０００８】
【化３】
0003830402.tif 000003
【０００９】
ＮＡＤＡ二量体の場合、式（ＩＩ）は、２位に結合している水素（２−Ｈ）と３位に結合している水素（３−Ｈ）との結合形態により、次の４種類の異性体がある。
（１）Ｒ1が水素で、Ｒ2がＮ−アセチルアミノエチル基の化合物（２-（３',４'-ジヒドロキシフェニル）-３-アセチルアミノ-７-（Ｎ-アセチル-２''-アミノエチル）-２,３-ジヒドロ-１,４-ベンゾジオキサン）でトランス形態となる（トランス−１）
（２）Ｒ1がＮ−アセチルアミノエチル基で、Ｒ2が水素の化合物（２-（３',４'-ジヒドロキシフェニル）-３-アセチルアミノ-６-（Ｎ-アセチル-２''-アミノエチル）-２,３-ジヒドロ-１,４-ベンゾジオキサン）でトランス形態となる（トランス−２）
（３）Ｒ1が水素で、Ｒ2がＮ−アセチルアミノエチル基でシス形態となる（シス−１）
（４）Ｒ1がＮ−アセチルアミノエチル基で、Ｒ2が水素でシス形態となる（シス−２）
【００１０】
式（ＩＩ）で示される化合物は異性体を含めて、ＮＭＲと質量分析とにより同定された。この化合物は［Ｍ＋Ｎａ］+イオン ｍ／ｚ＝４０９．７を示し、この値はＮＡＤＡ二量体の計算値と一致する。また、1Ｈ-ＮＭＲと13Ｃ-ＮＭＲスペクトルもＮＡＤＡ二量体構造の文献値（Noda et al.,(2000) Chem. Pharm.Bull.,vol48, pages1749-1752)と一致した。更に、各異性体のＨ−Ｈ、ＣＯＳＹ、ＨＳＱＣ、ＨＭＢＣを含む２Ｄ ＮＭＲ分析結果から式（ＩＩ）の構造が確定された。
また、各異性体の分離はＲＰ-ＨＰＬＣにより行なった。
【００１１】
ＮＡＤＡ二量体は、Ｎ−アセチルドーパミンの二量化反応によって合成できる。また、ＮＡＤＡ二量体を含む天然物の抽出によっても得られる。
本発明においては、ＮＡＤＡ二量体を含む天然物である昆虫由来のクチクラを抽出し、分離することが好ましい。使用できる昆虫材料としては、センタイ、シャムシ、蚕等が挙げられる。これらの中で、ＮＡＤＡ二量体を多く含むセンタイが好ましい。
【００１２】
センタイ（蝉退）は、セミ科のスジアカクマゼミ、その他のセミ科、または近縁動物のさなぎの抜け殻であり、漢方薬として入手できる。
ＮＡＤＡ二量体はセンタイを有機溶媒により抽出して得られる。抽出液としては、メタノール、エタノール、プロパノール、ブタノール、エチレングリコール、プロピレングリコール、1,3-ブチレングリコール、グリセリンなどのアルコール系溶媒、水とアルコール系溶媒との混合溶媒、塩化メチレンなどの有機塩素系溶媒、またはこれらの混合系溶媒等が挙げられる。好ましい溶媒としては低級アルコール系溶媒、または水と低級アルコール系溶媒である。
ＮＡＤＡ二量体は低級アルコール系溶媒により粗抽出された抽出物を精製して得られる。精製方法としては、例えば、カラムクロマトによる分画法が挙げられる。
【００１３】
式（Ｉ）で示される化合物、特に式（ＩＩ）で示される化合物は、後述する実施例で示すように、酵素チロシナーゼ活性を阻害する効果に優れているので、美白クリームなどの化粧料に用いられる美白剤として使用できる。
【００１４】
美白用皮膚外用剤として使用する場合は、他の化粧料原料、たとえばスクワラン、ホホバ油等の液状油、ミツロウ、セチルアルコール等の固体油、各種の活性剤、グリセリン、1,3-ブチレングリコール等の保湿剤や各種薬剤等とを添加してさまざまな剤形に調整することができる。たとえばローション、クリーム、乳液、パック等の目的に応じた利用形態とすることができる。
【００１５】
【実施例】
実施例１
ＮＡＤＡ二量体を次の方法で得た。センタイ（栃本天海堂（株）より入手） 1 kg を粉砕して、メタノールおよび塩化メチレン混合液（重量比で１／１） 10 リットルに室温で 12 時間浸漬し、その後懸濁液をろ過してろ液を得た。この操作を 8 回繰り返してろ液を集め、溶媒を蒸発させて 40 g の粗固形抽出物を得た。
粗固形抽出物 5 g を 0.1％ のトリフルオロ酢酸に分散させてＯＤＳカラム (φ0.5×30cm) に付し、エタノール水溶液の濃度を順に変えて流した。その結果、20％ エタノール−水フラクションおよび 25％ エタノール−水フラクションからＮＡＤＡ二量体が得られた。
得られたＮＡＤＡ二量体は逆相クロマトグラフィーを用いて分離し、20％ エタノール−水フラクション 530 mg から 27 mg のトランス−１ＮＡＤＡ二量体と、 34 mg のトランス−２ＮＡＤＡ二量体とが得られ、25％ エタノール−水フラクション 580 mg から 13 mg の混合シスＮＡＤＡ二量体が得られた。
【００１６】
得られたＮＡＤＡ二量体を用いてチロシナーゼ活性抑制効果を評価した。
チロシナーゼ活性抑制効果は、マッシュルームチロシナーゼ［ＥＣ１．１４．１８．１］活性をＬ−チロシンを用いてドーパクローム法により測定した。
Ｌ−チロシン(0.5mmol)と、リン酸塩系緩衝液(PH6.8)(10mmol)と、マッシュルームチロシナーゼ(30ユニット)と、供試試料との混合液(1ml)とを 37℃で 10 分間保持した。供試試料は 33μＭ、 100μＭ、および 250μＭをそれぞれ準備した。その後、波長 475nm における混合液の吸光度を測定した。チロシナーゼに対する抑制効果を以下の式で求めた。
チロシナーゼ活性抑制効果（％）＝（［Ａ−（Ｂ−Ｃ）］／Ａ）×１００
ここで、Ａ：供試試料を含まない混合液の吸光度
Ｂ：供試試料を含む混合液の吸光度
Ｃ：供試試料の吸光度
をそれぞれ表す。
比較例としてはアルブチンを用いた。結果を図１に示す。なお、図１においては、上記式で求めた、それぞれの 250μＭにおけるチロシナーゼ活性抑制効果を 100 ％として相対％として示してある。上記式で求めた 100μＭでの具体的なチロシナーゼ活性抑制効果はトランス−１ＮＡＤＡ二量体が 62 ％、トランス−２ＮＡＤＡ二量体が 33 ％、混合シスＮＡＤＡ二量体が 23 ％、アルブチンが 24 ％であった。
【００１７】
図１に示すように、ＮＡＤＡ二量体は 100μＭから 250μＭにおいて濃度に依存しないで優れたチロシナーゼ活性抑制効果を示した。一方、アルブチンは濃度低下により、チロシナーゼ活性抑制効果が大きく低下した。
【００１８】
本発明に係る美白用皮膚外用剤は、式（Ｉ）で示される化合物を有効成分として含んでいればよい。特にセンタイを抽出して得られるＮＡＤＡ二量体を含んでいることが好ましい。
配合量は、有効成分を 0.005〜2 重量％含有することが好ましい。0.005 重量％未満では美白効果がなく、2 重量％をこえると美白効果の向上が望めなくなる。
【００１９】
なお、ＮＡＤＡ二量体の他に、他の化粧品原料、例えばコウジ酸、アスコルビン酸、ハイドロキノン、チオール系化合物等の美白剤、スクワラン、ホホバ油等の液状油、ミツロウ、セチルアルコール等の固体油、各種の活性剤、グリセリン、1,3-ブチレングリコール等の保湿剤や各種薬剤等とを添加してさまざまな剤形の美白用皮膚外用剤に調整できる。例えばローション、クリーム、乳液、パック、洗顔剤等の目的に応じた利用形態で使用できる。
【００２０】
実施例２
ローションの例について説明する。配合成分と配合量（重量％）を以下に示す。
オリーブ油                                                  ０．５
トランス−１ＮＡＤＡ二量体                                  ０．５
ポリオキシエチレン（ 20 E.0 ）ソルビタンモノステアレート    ２．０
ポリオキシエチレン（ 60 E.0 ）硬化ヒマシ油                  ２．０
エタノール                                                １０．０
ヒアルロン酸ナトリウム水溶液（ 1.0重量％）                  ５．０
精製水                                                    ８０．０
【００２１】
精製水におよびヒアルロン酸ナトリウム水溶液加え 70 ℃に加熱調整する。オリーブ油にポリオキシエチレン（ 20 E.0 ）ソルビタンモノステアレートおよびポリオキシエチレン（ 60 E.0 ）硬化ヒマシ油を加え 70 ℃に加熱調整する。この油相を先に調整した水相に加え予備乳化し、さらにＮＡＤＡ二量体およびエ
タノールを加えてホモミキサーにて乳化粒子を均一にした後、脱気、濾過、冷却して実施例１のローションを得た。
【００２２】
実施例３
クリームの例について説明する。配合成分と配合量（重量％）を以下
に示す。
Ａ成分：
スクワラン                                                ２０．０
オリーブ油                                                  ２．０
ミンク油                                                    １．０
ホホバ油                                                    ５．０
ミツロウ                                                    ５．０
セトステアリルアルコール                                    ２．０
グリセリンモノステアレート                                  １．０
ソルビタンモノステアレート                                  ２．０
Ｂ成分：
精製水                                                    ４７．９
ポリオキシエチレン（ 20 E.0 ）ソルビタンモノステアレート    ２．Ｏ
ポリオキシエチレン（ 60 E.0 ）硬化ヒマシ油                  １．０
グリセリン                                                  ５．０
混合ＮＡＤＡ二量体                                          ０．５
ヒアルロン酸ナトリウム水溶液（ 1.0重量％）                  ５．０
パラオキシ安息香酸メチル                                    ０．１
【００２３】
Ａ成分とＢ成分とをそれぞれ計量し、それぞれ 70 ℃まで加温し、Ｂ成分にＡ成分を攪拌しつつ徐々に加えたのち、ゆっくり攪拌しつつ 30 ℃まで冷却して実施例２のクリームを得た。
【００２４】
実施例１および実施例２で得られた美白用皮膚外用剤は、皮膚外用剤として安定して得られた。また使用テストの結果、ＮＡＤＡ二量体を含有しない化粧料等に比較して美白効果が見られた。
【００２５】
【発明の効果】
本発明に係る美白剤は、上記式（Ｉ）を含むので、特にセンタイを抽出して得られるＮＡＤＡ二量体を含むので、チロシナーゼ活性抑制効果に優れる。
本発明に係る美白用皮膚外用剤は、このＮＡＤＡ二量体を美白成分として含むので、美白効果に優れる。
【図面の簡単な説明】
【図１】チロシナーゼ活性抑制効果を示す図である。
【図１】
0003830402.tif 000005