(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
リン脂質及び胆汁塩の溶液中に乳化された、少なくとも１種類の疎水性で水に不溶性であり、そして水に非分散性のポリマーもしくはコポリマーを含み、かつ、０．２２μｍの多孔度フィルターで滅菌濾過できることを特徴とするナノ粒子。
【請求項２】
有効成分がポリマーもしくはコポリマーとともに導入されることを特徴とする、請求項１に記載のナノ粒子。
【請求項３】
疎水性で水に不溶性であり、そして水に非分散性のポリマーもしくはコポリマーが生物適合性でそして生分解性のポリマーから選ばれることを特徴とする、請求項1に記載のナノ粒子。
【請求項４】
平均直径が、９５％まで１００nm未満であることを特徴とする、請求項1に記載のナノ粒子。
【請求項５】
請求項１〜4のいずれか1項に記載のナノ粒子の製造方法であって、リン脂質及び胆汁塩の水溶液又は分散物を調製し、それに、疎水性で水に不溶性であり、そして水に非分散性のポリマーもしくはコポリマー及び、適宜な場合には、有効成分を含んでなる非混和性の有機相を添加し、次いで前以て乳化を実施しそして混合物をホモジナイズさせ、有機溶媒を蒸発させ、次いで得られた懸濁物を場合によっては濾過しそして場合によっては凍結乾燥させる、ことを特徴とする方法。
【請求項６】
滅菌濾過後に無菌である組成物の製造のための、請求項1〜４のいずれか１項に記載のナノ粒子の使用。
【請求項７】
滅菌濾過操作を実施することにより滅菌されていることを特徴とする、請求項1〜４のいずれか１項に記載のナノ粒子。
【請求項８】
滅菌濾過操作を、減少する多孔度をもつフィルター上で、カスケード状態で実施することを特徴とする、請求項７に記載のナノ粒子。
【請求項９】
凍結乾燥することを特徴とする、請求項1〜４、7及び８のいずれか１項に記載のナノ粒子。
【請求項１０】
滅菌濾過、凍結乾燥及び再溶解の操作を実施することを特徴とする、請求項1〜4、及び7〜９のいずれか１項に記載のナノ粒子。
【請求項１１】
場合によっては、１種類以上の、適合性のあるそして製薬的に許容できる賦形剤又は補助剤と組み合わせた、請求項１〜４、及び７〜１０のいずれか1項に記載のナノ粒子からなる製薬組成物。
【発明の詳細な説明】
本発明は、毛細管中で大きさの問題がなく血流中に循環させることが出来る利点の他に、安定化されており、滅菌状態で濾過できる、そして凍結乾燥することができる利点をもつ、非常に小さなナノ粒子に関する。
欧州特許第523,183号、同第520,888号及び同第520,889号明細書は注射可能の利点をもつ小球状の粒子につき記載している。しかし、このようにして製造されたナノ粒子は５０から５００nmの次元の平均直径をもち、そして著しい収量喪失を伴わずに滅菌濾過により滅菌することができないであろうし、そして／又は安定性が不十分なために凍結乾燥はできないであろう。
Eur.J,Pharm.Biopharm.,39(5),173-191(1993)において、著者等は、製薬産業のために意図されたナノ粒子の分野において最近可能な技術を検討した。その182ページに、ナノ粒子の懸濁物の滅菌濾過についてはまだ記載されていない、と述べられている。
低溶解性をもつ有効成分の単分散粒子の製造方法は、国際公開第90/15593号パンフレットに記載されている。前記粒子は場合によっては、該粒子の表面に留まるであろうコロイド保護物質としてポリマーを含んでなることができる。
その平均直径が９５％の程度まで、１００nm未満であり、そしてより正確には、その平均直径が２０と７５nmの間にあり、そして従って、収量の喪失を伴わずに、０．２２μmフィルター上で滅菌濾過することができる粒子を製造することができることが見いだされ、そしてこれが本発明の主題を構成する。これらの粒子は更に、これまでの当該技術により得られるものよりも安定であり、そして粒子のどんな凝集をも招く事なく、凍結乾燥することができる。
本発明による当該ナノ粒子は、リン脂質及び胆汁塩の溶液又は水性分散液中に乳化された、少なくとも１種類の、疎水性の、水に不溶性のそして水に非分散性のポリマーもしくはコポリマーを含んでなる。
本発明による有効成分は、前記ポリマーもしくはコポリマーとともにナノ粒子中に導入することができる。
当該リン脂質は、例えば、天然の、合成の又は半合成のリン脂質から選ばれる；より具体的には、例えば、精製された卵又は大豆レシチン（lecithin E100(R)、lecithin E80(R)及びPhospholipons(R)、例えばPhospholipon 90(R)）、ホスファチジルエタノールアミン、ホスファチジルセリン、ホスファチジルイノシトール、ホスファチジルグリセロール、ジパルミトイルホスファチジルコリン、ジパルミトイルグリセロホスファチジルコリン、ジミリストイルホスファチジルコリン、ジステアロイルホスファチジルコリン及びホスファチジン酸又はそれらの混合物のようなレシチン類（ホスファチジルコリン）が使用される。
本発明による胆汁塩は例えば、特にコール酸塩、タウロコール酸塩、グリココール酸塩、デオキシコール酸塩、ケノデオキシコール酸塩、グリコデオキシコール酸塩、タウロデオキシコール酸塩、タウロケノデオキシコール酸塩、デヒドロコール酸塩から選ばれるコール酸から誘導された塩又はそれに代わるこれらの塩の誘導体又は混合物である。ナトリウム塩が好都合に使用される。
疎水性の、水に不溶性のそして水に非分散性のポリマーもしくはコポリマーは、生適合性及び生分解性のポリマー、例えば乳酸又はグリコール酸ポリマー及びそれらのコポリマー、あるいは、好ましくは1000及び200,000の間の分子量をもつポリ乳酸／ポリ（エチレンオキシド）［又はポリ（プロピレンオキシド）］コポリマー、ポリヒドロキシ酪酸ポリマー、少なくとも１２個の炭素原子を含有する脂肪酸のポリラクトン又はポリアンヒドリドから選ぶことができる。
本発明によるナノ粒子は疎水性の有効成分に対する使用に完全に適切である。使用することができる有効成分は、ヒト又は動物用医薬の目的の、主要な群の医薬品から選ぶことができる。それらはまた、化粧品又は農芸−食品産業のために意図された主成分又は診断用薬剤から選ぶこともできる。
実施例により、製薬業にとって興味深い有効成分は、抗リュウマチ剤、非ステロイド抗炎症剤、鎮痛剤、鎮咳剤、向精神薬、ステロイド剤、バルビツル酸塩、抗微生物剤、抗アレルギー剤、抗喘息剤、抗痙攣剤、抗分泌剤、脳血管拡張剤及び心臓血管薬、脳保護剤及び肝臓保護剤、胃腸管の治療剤、抗癌剤又は抗ウイルス剤、ビタミン剤、避妊剤、ワクチン等から、制限されずに選ぶことができる。
本発明によると、ナノ粒子は、それに、有効成分及び、疎水性の、水に不溶性の、そして水に非分散生のポリマーもしくはコポリマーを含んでなる非混和性有機相が添加されている、リン脂質及び胆汁塩の水溶液又は分散物から出発する、溶媒蒸発法による得ることができる。非常に小さいナノ粒子の水性懸濁液を得るためには、該混合物を前以て乳化させ、次いでホモジナイズさせ、そして有機溶媒を蒸発させる。
この方法の実施法は、実施例中でより詳細に説明される。
非混和性有機相は、好ましくは選ばれたポリマー系にとって良好な溶媒になることができる揮発性溶媒から選ばれる。例えば、特に、酢酸エチルのようなエステル、塩素化溶媒、例えばジクロロメタン又はクロロホルム、あるいは代替的には、メチルエチルケトンのようなケトン類が選ばれるであろう。
概括的に、有効成分は好ましくは、導入されたポリマーの量に対しておよそ２５重量％を形成する。しかし、この量は変動することができ、導入されたポリマーもしくはコポリマーの量に対して５０重量％まで減少もしくは増加させることができる。
非混和性有機相は、有効成分及びポリマーもしくはコポリマーが溶液の０．１から７重量％を表すように生成される。
リン脂質及び胆汁塩の水溶液又は分散液からなる水性相は、それぞれこれらの成分を１／１の分子比で含んでなる。しかし、この割合は、胆汁塩に対するリン脂質の分子比が０．１から１の間であるように変化することができる。
当該水性相はリン脂質及び胆汁塩が合計で、溶液の０．２から２重量％を表すように生成される。
有機相及び水性相の相対量は、有機相が水性相に対して２０から６０容量％を表すように選ばれる。
このようにして得られたナノ粒子は、ブロッキングの問題を増加することなくそして良好な収量で濾過することができる。濾過は減少する多孔度をもつフィルター上でのカスケード濾過と、それに続く０．２２μmフィルター上での最終濾過により実施される。
濾過後に、得られた懸濁液を好ましくは１種類以上の不透明化防止剤(cryptoprotective agent)の存在下で凍結乾燥させる。不透明化防止剤は凍結乾燥させる懸濁液の約５（重量／容量）％で構成される。
凍結乾燥を目的とする溶液は、非イオン性化合物、例えば、不透明化防止剤又は注射用最終溶液の等張性を調整するための薬剤、のようなある種の添加剤を含んでなる。これらの薬剤は糖（例えばグルコース、マンニトール、ソルビトール及びスクロース）、ポリマー［例えばデキストラン（デキストラン1500、デキストラン40,000）、注射用ポリビニルピロリドン、ポリエチレングリコール、等］、アミノ酸（例えばグリシン）、あるいはこの機能をもつその他の薬剤から選ぶことができる。それはまた１種類（又はそれ以上の）の保存剤（類）を含むこともできる。適宜な場合には、当該凍結乾燥物質を注射用調製物の使用の際に水中に取り込むことができる。このような操作は該粒子の大きさに影響を与えないことは理解されている。
本発明によるナノ粒子はそれらの安定性に関して特に好都合である。この安定性が、特に、使用中のそれらの再溶解物及び／又は再懸濁物が改善され、そしてそれらのために再生成された懸濁物が、初回のナノ粒子のそれと近い直径をもつ粒子を含有するような、良好な性状をもつ凍結乾燥物質を得ることを可能にさせる。
本発明によるナノ粒子は製薬もしくは動物薬分野、化粧品もしくは農業−食品分野又は診断薬を目的とした滅菌組成物調製のために使用することができる。
この方法は、それが、場合によっては、これまで可能でなかった、有効成分を含有した、安定化されたそして汚染物質を除去したナノ粒子懸濁物の工業的規模の製造への道を開拓するので、特に好都合である。更に、本発明による安定化されたナノ粒子は、例えばタキソイド類の抗癌剤のようなある種の有効成分の場合に著しく好都合である。それらは実に、従来の調製物に比較すると、該製品の活性を増加させる。
メラノーマＢ１６に対するマウスへの静注により研究された実施例６の製品は、水中のポリソルベート８０／エタノール／５％デキストローズ（５／５／９０容量）混合物中の従来の調製物と比較すると、ナノ粒子組成物形態において２倍活性であることが判明した。
本発明はまた、場合によっては１種類以上の適合性のあるそして製薬的に許容できる賦形剤又は補助剤と組み合わせた、本発明によるナノ粒子からなる製薬組成物に関する。これらの組成物は好ましくは注射用組成物である。
非経口投与は静脈内、腹腔内、筋肉内及び皮下投与を含んでなる。腹腔内又は静脈内投与がより具体的に好ましい。
組成物は治療的に活性な製品を少なくとも０．０１％を含有することができる。組成物中の活性製品の量は適宜な投与量を処方することができるような量である。組成物は好ましくは、非経口投与に対しては、単位投与量が活性製品をおよそ０．０１から１０００mg含有するように製造される。
ヒトにおいて、投与量は概括的に０．０１から２００mg/kgである。静脈内投与の場合には、投与量は概括的に０．１と５０mg/kg、好ましくは０．１と８mg/kgの間である。最も適宜な投与量を選択するためには、投与経路、患者の体重、患者の全般的健康状態、年令及び治療の効果に影響を与える可能性のあるすべての要素を考慮に入れねばならないであろう。
下記の実施例は、何らの限定も意味することなく、本発明を具体的に示す。
実施例１
分子量２０００Dのポリ（d,l-乳酸）４．０g及び(3aS,4S,7aS)-7,7-ジフェニル-4-(2-メトキシフェニル)-2-[(S)-2-(2-メトキシフェニル)プロピオニル]ペルヒドロ-4-イソインドロール１．０gを、４５℃の温度まで水浴上で加熱した、１００mlの容量の酢酸エチル中に溶解させる（溶液Ａ）。コール酸ナトリウム１．２５g及びlecithin E80(R)１．７５gを５００mlの容量の注射用調製物用の水中に、撹拌しながらUltra-turrax(R)とともに分散させる（溶液Ｂ）。
溶液Ａを１分間に渡り、Ultra-turrax(R)とともに溶液Ｂ中に前以て乳化させる。次いで前以て乳化されたエマルションをMicrofluidizer 110 T(R)型のホモジナイザー中に導入し、そこで６バールの作業圧力下で、０℃の冷却温度下で、２０回の連続過程を通過させる。
６１０mlの容量のエマルションを２−リットルの丸底フラスコに導入する。回転蒸発機を使用し、真空＋ミクロブリード下で、３０℃の温度で、約４５分間に渡り、酢酸エチルを蒸発させる。４５０mlの容量のナノ粒子懸濁液が回収され、そして注射用調製物用の水を添加して５００mlにして終結させる。
０．５バールの窒素圧力下で、懸濁液を、直径４５mmで、基準減少多孔度：ＲＡＷＰ１．２μm、ＡＡＷＰ０．８μm、ＨＡＷＰ０．４５μm及びＧＳＷＰ０．２２μmをもつ、MIllipore(R)セルロースエステルの４枚の膜上で連続濾過する。
滅菌濾過された懸濁液を二分させる。一方はグルコース５重量／容量％の存在下で凍結乾燥させ、他方はスクロース５重量／容量％の存在下で凍結乾燥させる。
凍結乾燥の前及び凍結乾燥物が同量の注射用調製物用の水に取り込まれた後の、Brookhaven(R)機器における光散乱法により測定された当該粒子の平均直径は（両者とも）約７０nmである。
最初の理論濃度（２mg/ml）に対する、濾過後の(3aS,4S,7aS)-7,7-ジフェニル-4-(2-メトキシフェニル)-2-[(S)-2-(2-メトキシフェニル)プロピオニル]ペルヒドロ-4-イソインドロールの最終濃度の比率として表される生成収率は９５％である。
０．２２μmフィルター上での最終濾過前及び後の懸濁液の４０５nmにおける光学濃度はそれぞれ２．２０と２．１０である。
０．２２μmフィルター上での最終濾過前及び後の(3aS,4S,7aS)-7,7-ジフェニル-4-(2-メトキシフェニル)-2-[(S)-2-(2-メトキシフェニル)プロピオニル]ペルヒドロ-4-イソインドロールの濃度は不変である。
(3aS,4S,7aS)-7,7-ジフェニル-4-(2-メトキシフェニル)-2-[(S)-2-(2-メトキシフェニル)プロピオニル]ペルヒドロ-4-イソインドロールは国際公開第93/21155号パンフレットに記載のように製造することができる。
実施例２
実施例１中に前記のように実施することにより、しかし分子量３０kDのポリ（d,l-乳酸）及び分子量２kD（PLA-PEG）のポリエチレングリコールの組み合わせ物からなる２ブロックコポリマー４．０g及び(3aS,4S,7aS)-7,7-ジフェニル-4-(2-メトキシフェニル)-2-[(S)-2-(2-メトキシフェニル)プロピオニル]ペルヒドロ-4-イソインドロール１．０gから出発することにより、ナノ粒子の懸濁液が得られる。
０．５バールの窒素圧下で、懸濁液を直径４５mmで基準減少多孔度：ＲＡＷＰ１．２μm、ＡＡＷＰ０．８μm、ＨＡＷＰ０．４５μm及びＧＳＷＰ０．２２μmをもつ、MIllipore(R)セルロースエステルの４枚の膜上で連続濾過する。
滅菌濾過された懸濁液はグルコース５％w/vの存在下で凍結乾燥させる。
凍結乾燥の前及び凍結乾燥物が同量の注射用調製物用の水に取り込まれた後の、Brookhaven(R)機器における光散乱法により測定された当該粒子の平均直径は（両者とも）約７５nmである。
当初の理論濃度（２mg/ml）に対する、濾過後の(3aS,4S,7aS)-7,7-ジフェニル-4-(2-メトキシフェニル)-2-[(S)-2-(2-メトキシフェニル)プロピオニル]ペルヒドロ-4-イソインドロールの最終濃度の比率として表される生成収率は９８％である。
０．２２μmフィルター上での最終濾過前及び後の懸濁液の４０５nmにおける光学濃度はそれぞれ２．７と２．６である。
０．２２μmフィルター上での最終濾過前及び後の(3aS,4S,7aS)-7,7-ジフェニル-4-(2-メトキシフェニル)-2-[(S)-2-(2-メトキシフェニル)プロピオニル]ペルヒドロ-4-イソインドロールの濃度は不変である。
実施例３
分子量７０，０００Dのポリ（d,l-乳酸）１６０mg及び(3aS,4S,7aS)-7,7-ジフェニル-4-(2-メトキシフェニル)-2-[(S)-2-(2-メトキシフェニル)プロピオニル]ペルヒドロ-4-イソインドロール４０mgを４５℃の温度まで水浴上で加熱された酢酸エチル４ml容量中に溶解させる（溶液Ａ）。コール酸ナトリウム１００mg及びlecithin E80(R)７０mgを注射調製物用の水２０mlの容量中に撹拌しながらUltra-turrax(R)とともに分散させる（溶液Ｂ）。
溶液Ａを１分間に渡り、Ultra-turrax(R)とともに溶液Ｂ中に前以て乳化させる。次いで前以て乳化されたエマルションをMicrofluidizer 110 S(R)型のホモジナイザー中に導入し、そこで６バールの作業圧力下で、０℃の冷却温度下で、３分間の連続的再循環過程を通過させる。
３０mlの容量のエマルションを２００mlの丸底フラスコに導入する。回転蒸発機を使用し、真空＋ミクロブリード下で、３０℃の温度で、約４５分間に渡り、酢酸エチルを蒸発させる。１９mlの容量のナノ粒子懸濁液が回収され、そして注射調製物用の水を添加して２０mlにする。
懸濁液を、直径２５mmで基準減少多孔度：ＨＡＷＰ１．２μm及びＳＬＧＳ０．２２μmをもつ、Millipore(R)セルロースエステルの２枚の膜上で連続濾過する。
滅菌濾過された懸濁液を二分させる。一方はグルコース５重量／容量％の存在下で凍結乾燥させ、他方はスクロース５重量／容量％の存在下で凍結乾燥させる。
凍結乾燥の前及び凍結乾燥物が同量の注射調製物用の水に取り込まれた後の、Brookhaven(R)機器において光散乱法により測定された当該粒子の平均直径は（両者とも）約６０nmである。
０．２２μmフィルター上での最終濾過前及び後の、懸濁液の４０５nmにおける光学濃度はそれぞれ１．２９と１．１４である。
０．２２μmフィルター上での最終濾過前及び後の(3aS,4S,7aS)-7,7-ジフェニル-4-(2-メトキシフェニル)-2-[(S)-2-(2-メトキシフェニル)プロピオニル]ペルヒドロ-4-イソインドロールの濃度は不変である。
実施例４
分子量７０，０００Dのポリ（d,l-乳酸）１６０mg及び(3aS,4S,7aS)-7,7-ジフェニル-4-(2-メトキシフェニル)-2-[(S)-2-(2-メトキシフェニル)プロピオニル]ペルヒドロ-4-イソインドロール４０mgを４５℃の温度まで水浴上で加熱された酢酸エチル４mlの容量中に溶解させる（溶液Ａ）。コール酸ナトリウム５０mg及びlecithin E80(R)７０mgを注射調製物用の水２０mlの容量中に、撹拌しながらUltra-turrax(R)とともに分散させる（溶液Ｂ）。
溶液Ａを１分間に渡り、Ultra-turrax(R)とともに溶液Ｂ中に前以て乳化させる。次いで前以て乳化されたエマルションをMicrofluidizer 110 S(R)型のホモジナイザー中に導入し、そこで６バールの作業圧力下で、０℃の冷却温度下で、３分間の連続的再循環過程を通過させる。
３０mlの容量のエマルションを２００mlの丸底フラスコに導入する。回転蒸発機を使用し、真空＋ミクロブリード下で、３０℃の温度で、約４５分間に渡り、酢酸エチルを蒸発させる。１９mlの容量のナノ粒子懸濁液が回収され、注射用調製物用水を添加して２０mlにする。
懸濁液を、直径２５mmで基準減少多孔度：ＨＡＷＰ１．２μm及びＳＬＧＳ０．２２μmをもつ、Millipore(R)セルロースエステルの２枚の膜上で連続濾過する。
滅菌濾過された懸濁液を二分させる。一方はグルコース５重量／容量％の存在下で凍結乾燥させ、他方はスクロース５重量／容量％の存在下で凍結乾燥させる。
凍結乾燥の前及び凍結乾燥物が、同量の注射調製物用水に取り込まれた後の、Brookhaven(R)機器における光散乱法により測定された当該粒子の平均直径は（両者とも）約７０nmである。
０．２２μmフィルター上での最終濾過前及び後の懸濁液の４０５nmにおける光学濃度はそれぞれ１．８８と１．８０である。
０．２２μmフィルター上での最終濾過前及び後の(3aS,4S,7aS)-7,7-ジフェニル-4-(2-メトキシフェニル)-2-[(S)-2-(2-メトキシフェニル)プロピオニル]ペルヒドロ-4-イソインドロールの濃度は不変である。
実施例５
分子量３０kDのポリ（d,l-乳酸）及び分子量２kD（PLA-PEG）のポリエチレングリコールの組み合わせ物からなる２ブロックコポリマー４００mg及び(3aS,4S,7aS)-7,7-ジフェニル-4-(2-メトキシフェニル)-2-[(S)-2-(2-メトキシフェニル)プロピオニル]ペルヒドロ-4-イソインドロール１００mgを４５℃の温度まで水浴上で加熱された酢酸エチル１０mlの容量中に溶解させる（溶液Ａ）。コール酸ナトリウム１２５mg及びlecithin E80(R)１７５mgを注射用調製物用水５０mlの容量中に撹拌しながらUltra-turrax(R)とともに分散させる（溶液Ｂ）。
溶液Ａを１分間に渡り、Ultra-turrax(R)とともに溶液Ｂ中に前以て乳化させる。次いで前以て乳化されたエマルションをMicrofluidizer 110 S(R)型のホモジナイザー中に導入し、そこで６バールの作業圧力下で、０℃の冷却温度下で、１０分間の連続的再循環段階を通過させる。
６０mlの容量のエマルションを２００mlの丸底フラスコに導入する。回転蒸発機を使用し、真空＋ミクロブリード下で、３０℃の温度で、約４５分間に渡り、酢酸エチルを蒸発させる。４５mlの容量のナノ粒子懸濁液が回収され、そして注射用調製物用水を添加して５０mlにする。
懸濁液を、直径２５mmで基準減少多孔度：ＨＡＷＰ１．２μm及びＳＬＧＳ０．２２μmをもつ、Millipore(R)セルロースエステルの２枚の膜上で連続濾過する。
滅菌濾過された懸濁液をグルコース５％w/vの存在下で凍結乾燥させる。
凍結乾燥の前及び凍結乾燥物が同量の注射調製物用水に取り込まれた後の、Brookhaven(R)機器における光散乱法により測定された当該粒子の平均直径は（両者とも）約６０nmである。
０．２２μmフィルター上での最終濾過前及び後の懸濁液の４０５nmにおける光学濃度はそれぞれ０．８７と０．８１である。
０．２２μmフィルター上での最終濾過前及び後の(3aS,4S,7aS)-7,7-ジフェニル-4-(2-メトキシフェニル)-2-[(S)-2-(2-メトキシフェニル)プロピオニル]ペルヒドロ-4-イソインドロールの濃度は不変である。
実施例６
分子量３０kDのポリ（d,l-乳酸）及び分子量２kD（PLA-PEG）のポリエチレングリコールの組み合わせ物からなる２ブロックコポリマー３００mg及び（理論的には１５mg/ml）及び(2R,3S)-3-tert-ブトキシ-カルボニルアミノ-2-ヒドロキシ-3-フェニルプロピオン酸4α,10β-ジアセトキシ-2α-ベンゾイルオキシ-5β,20-エポキシ-1β-ヒドロキシ-7β,8β-メチレン-9-オキソ-19-ノル-11-タキセン-13α-イル１００mg（理論的に５mg/ml）を酢酸エチル８ml中に溶解させる（溶液Ａ）。lecithin E80(R)７０mg及びコール酸ナトリウム５０mgを５％w/vグルコース溶液２０ml中に分散させる（溶液Ｂ）。溶液ＡをUltra-turrax(R)とともに溶液Ｂ中に乳化させ、次いで前以て乳化されたエマルションをMicrofluidizer 110 S(R)型のホモジナイザー中に１０℃で、３分間に渡り導入する。回収されたエマルションの容量は約３０ml（３０g）である。酢酸エチルを減圧下（１００mm水銀）で回転蒸発機を使用して約１７ml（１７g）の懸濁物容量になるまで除去する。懸濁液を一連の減少多孔度（１．２μmMinisart NML(R)＋０．２２μmSLGS(R)）をもつ２枚のフィルター上で濾過する。２種類の同様な懸濁物を同様な条件下で製造し同じフラスコ中で合わせる。濾過された懸濁物は滅菌である。
Brookhaven(R)機器における光散乱法により測定された当該粒子の平均直径は約７５nmである。
０．２２μmフィルター上での最終濾過前及び後の懸濁液の４０５nmにおける光学濃度は７．２である。
当初の理論濃度（５mg/ml）に対する、濾過後の(2R,3S)-3-tert-ブトキシ-カルボニルアミノ-2-ヒドロキシ-3-フェニルプロピオン酸4α,10β-ジアセトキシ-2α-ベンゾイルオキシ-5β,20-エポキシ-1β-ヒドロキシ-7β,8β-メチレン-9-オキソ-19-ノル-11-タキセン-13α-イルの最終濃度の比率として表される生成収率は９４％である。
PLA-PEG濃度［(2R,3S)-3-tert-ブトキシ-カルボニルアミノ-2-ヒドロキシ-3-フェニルプロピオン酸4α,10β-ジアセトキシ-2α-ベンゾイルオキシ-5β,20-エポキシ-1β-ヒドロキシ-7β,8β-メチレン-9-オキソ-19-ノル-11-タキセン-13α-イルの収量に対して計算された］は１４．１mg/mlである。
(2R,3S)-3-tert-ブトキシ-カルボニルアミノ-2-ヒドロキシ-3-フェニルプロピオン酸4α,10β-ジアセトキシ-2α-ベンゾイルオキシ-5β,20-エポキシ-1β-ヒドロキシ-7β,8β-メチレン-9-オキソ-19-ノル-11-タキセン-13α-イルは国際公開第94/13654号パンフレット中に記載のように製造することができる。