(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
(a)  ｐＨ５未満で本質的に不溶性であるｐＨ依存性ポリマー及び場合により可塑剤の水性混合物を調製し；
(b)  工程(a)の混合物のｐＨを該ｐＨ依存性ポリマーの可溶化ｐＨより高いｐＨに調整して、該ｐＨ依存性ポリマーを溶解し；
(c)  工程(b)の溶液に、有害生物防除剤、紫外線防護剤、場合によりスチルベン化合物、場合により崩壊剤及び場合により滑剤を添加し、そしてブレンドして、均質な懸濁液を製造し；
(d) 工程(c)の該均質な懸濁液を乾燥し；そして
(e)  場合により工程(d)の乾燥材料を微粉砕する
ことを含んでなる、被覆有害生物防除剤の製造方法。
【請求項２】
(a)   ｐＨ５未満で本質的に不溶性であるｐＨ依存性ポリマー、有害生物防除剤、場合により可塑剤、紫外線防護剤、場合によりスチルベン化合物、場合により崩壊剤及び場合により滑剤からなる混合物を、アセトン、Ｃ1〜Ｃ3アルコール及びその混合物からなる群より選択される有機溶媒中でブレンドし；
(b)  工程(a)の均質な懸濁液を乾燥し；そして
(c)  場合により工程(b)の乾燥材料を微粉砕する
ことを含んでなる、被覆有害生物防除剤の製造方法。
【請求項３】
２〜２５重量％のメタクリル酸とメタクリル酸メチルのコポリマー、無水マレイン酸とスチレンのコポリマーおよびそれらの混合物から選ばれるｐＨ依存性ポリマー、０％〜５重量％の可塑剤、５〜４５重量％の紫外線防護剤、０％〜７５重量％のスチルベン化合物、０％〜１０重量％の崩壊剤及び０％〜１０重量％の滑剤を含むマトリックスで囲まれた、有害生物防除剤コアを含んでなり、そして請求項１又は２に記載の製造方法で得られる被覆有害生物防除剤。
【請求項４】
２〜２５重量％の湿潤剤；２〜４０重量％の分散剤；１０〜７０重量％の増量剤；１〜１０重量％の流動促進剤；０％〜２０重量％のｐＨ調整剤；５〜７５重量％の請求項３記載の被覆有害生物防除剤を、含んでなる水和有害生物防除組成物。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
特定の有害生物防除剤は太陽からの紫外線照射により不活化される。それら有害生物防除剤は、望ましくない有害生物の防除に有用でありそしてそれらが紫外線照射にさらされる領域に施用されるので、それら有害生物防除剤を含む光安定性組成物が要求されている。
【０００２】
有害生物防除剤の紫外線不活化を防ぐために、紫外線吸収剤及び／又は反射剤並びに有害生物防除剤を含む組成物が調製されてきている。
【０００３】
米国特許第３，５４１，２０３号明細書には殺虫用の保護ウイルス組成物が記載されている。好適な組成物には、ウイルス、化学線吸収剤及び高分子量結合剤が含まれている。この特許には、化学線吸収剤とウイルスとの混合物をエチルセルロース高分子物質と結合させるために、混合物をトルエン溶液中でエチルセルロースと混合することが開示されている。得られた混合物を攪拌し、ポリブタジエンで処理し、そして石油蒸留物中に注ぐことにより、エチルセルロースが凝固し、エチルセルロース高分子物質の非常に小さな粒子が得られる。この粒子は、この粒子内に、実質的に均一に包まれた化学線吸収剤とウイルスとの混合物を有している。次に粒子をさらなる石油蒸留物で数回洗浄し、残留量の液体ポリブタジエン材料を完全に除去する。米国特許第３，５４１，２０３号明細書に記載の好適な組成物を調製するのに用いる方法は、毒性物質の使用並びに引火性溶媒を用いる数多くの洗浄工程を必要とするので、残念なことに、この方法は完全に満足できるものではない。
【０００４】
米国特許第４，９４８，５８６号明細書にはマイクロカプセル化された殺虫性病原体が開示されている。４種のマイクロカプセル化組成物がオートグラファ・カリフォルニカ（Ａｕｔｏｇｒａｐｈａ  ｃａｌｉｆｏｒｎｉｃａ）  ＮＰＶの光不活化を低減することが示されている。しかしながら、このマイクロカプセル化組成物は、直射日光にさらされる前に元の活性の３０．７〜７１．４３％を維持するだけである。米国特許第４，９４８，５８６号明細書には、数多くの工程を有しそして時間がかかるとともに面倒で骨のおれる、マイクロカプセル化殺虫性病原体の調製方法が開示されている。米国特許第４，９４８，５８６号明細書に記載されている方法及びマイクロカプセル化殺虫性病原体のいずれも、殺虫性病原体を紫外線照射による影響から保護するために完全に満足できるものではないことは明らかである。
【０００５】
本発明の目的は、紫外線照射暴露後にその元の活性の顕著な量を維持する被覆有害生物防除剤を提供することである。
【０００６】
本発明の目的は、また、商業的製造により適する、簡単でより面倒でない被覆有害生物防除剤の製造方法を提供することである。
【０００７】
本発明のさらなる目的は、被覆有害生物防除剤を含んでなる水和有害生物防除組成物を提供することである。
【０００８】
【発明の概要】
本発明は、紫外線照射暴露後にその元の活性の顕著な量を維持する被覆有害生物防除剤を記述する。
【０００９】
本発明の被覆有害生物防除剤は、約２〜２５重量％のｐＨ依存性ポリマー、０％〜約５重量％の可塑剤、約５〜４５重量％の紫外線防護剤、０％〜約７５重量％のスチルベン化合物、０％〜約１０重量％の崩壊剤及び０％〜約１０重量％の滑剤を含むマトリックスで囲まれた、有害生物防除剤コアを含んでなる。
【００１０】
本発明は、さらに、被覆有害生物防除剤の製造方法、並びに被覆有害生物防除剤を含んでなる水和有害生物防除組成物を提供する。
【００１１】
本発明は、当業者に公知の方法に関連する問題を回避する、被覆有害生物防除剤の製造方法を提供する。
【００１２】
本発明の１つの方法は、
(a)  ｐＨ依存性ポリマー、有害生物防除剤、場合により可塑剤、紫外線防護剤、場合によりスチルベン化合物、場合により崩壊剤及び場合により滑剤の混合物を、アセトン、Ｃ1〜Ｃ3アルコール又はその組み合わせのような有機溶媒中でブレンドして、均質な懸濁液を製造し；
(b)  工程(a)の均質な懸濁液を乾燥し；そして
(c)  場合により工程(b)の乾燥材料を微粉砕する
ことを含んでなる。
【００１３】
有利なことに、本発明の上述の方法は、多段混合及び乳化工程の使用を回避しそして引火性溶媒を用いる数多くの洗浄工程の使用を回避する、被覆有害生物防除剤の製造のための効率的な２又は３工程方法を提供する。さらに、本発明の上記方法は、好適には、殺虫性病原体のような有害生物防除剤を有意に不活化しない、アセトン／Ｃ1〜Ｃ3アルコール溶液を使用する。当業者によって教示される塩化メチレンなどのような他の有機溶媒は、殺虫性病原体のような有害生物防除剤を有意に不活化することができる。
【００１４】
上記方法が先行方法にくらべて顕著な進歩であると信じられている一方、有機溶媒の使用を回避する好適な方法も発明された。
【００１５】
すばらしいことに、被覆有害生物防除剤は、
(a)  ｐＨ依存性ポリマー及び場合により可塑剤の水性混合物を調製し；
(b)  工程(a)の混合物のｐＨを塩基で約８．５〜１０に調整して、該ｐＨ依存性ポリマーを溶解し；
(c)  工程(b)の溶液に、有害生物防除剤、紫外線防護剤、場合によりスチルベン化合物、場合により崩壊剤及び場合により滑剤を添加し、そしてブレンドして、均質な懸濁液を製造し；
(d) 工程(c)の該均質な懸濁液を乾燥し；そして
(e)  場合により工程(d)の乾燥材料を微粉砕する
ことを含んでなる水性方法により、調製できることが見い出された。
【００１６】
有利なことに、本発明の水性方法は、多段混合及び乳化工程の使用を回避し、そして引火性溶媒を用いる数多くの洗浄工程の使用を必要とせず、そしてさらに有機溶媒の使用を必要としない。
【００１７】
本発明の被覆有害生物防除剤は、好ましくは約２０μｍ未満の粒度、より好ましくは約２μｍ〜１０μｍの粒度を有する。本発明の均質な懸濁液はどのような従来の乾燥技術を用いても乾燥できる。好適には、懸濁液は噴霧乾燥或いは風乾される。
【００１８】
上述の方法で調製された好適な被覆有害生物防除剤は、約２〜２５重量％のｐＨ依存性ポリマー、最高約５重量％までの可塑剤、約５〜４５重量％の紫外線防護剤、最高約７５重量％までのスチルベン化合物、最高約１０重量％までの崩壊剤及び最高約１０重量％までの滑剤を含むマトリックスで囲まれた、有害生物防除剤コアを含んでなるものである。
【００１９】
マトリックスに対する有害生物防除剤の割合は、好ましくは約１：１〜１：１０である。そしてＣ1〜Ｃ3アルコールに対するアセトンの割合は、好ましくは約１：９〜９：１で、より好ましくは約１：４〜２：３である。有機方法に使用するための適当なＣ1〜Ｃ3アルコールにはメタノール、エタノール、イソプロパノール及びｎ−プロパノールが含まれ、イソプロパノールが好ましい。
【００２０】
本発明に使用するために適当な有害生物防除剤には、紫外線照射で不活化される化学的及び生物学的な殺虫剤、殺ダニ剤、殺線虫剤、殺菌・殺カビ剤又はその混合物が含まれる。好ましい有害生物防除剤は、殺虫性病原体、例えばウイルス病原体、細菌性病原体及び菌類病原体である。使用に適当な０ウイルス病原体には、野生マイマイガ  ＮＰＶ；  オートグラファ・カリフォルニカ（Ａｕｔｏｇｒａｐｈａ  ｃａｌｉｆｏｒｎｉｃａ）  ＮＰＶ、例えばＡｃＭＮＰＶ  Ｅ２、ＡｃＭＮＰＶ  Ｌ１、ＡｃＭＮＰＶ  Ｖ８、Ｖ８ｖＥＧＴＤＥＬ及びＶ８ｖＥＧＴＤＥＬ−ＡａＩＴ；  ユーロピアン・パイン・ソー・フライ（Ｅｕｒｏｐｅａｎ  ｐｉｎｅ  ｓａｗ  ｆｌｙ）  ＮＰＶ；  及びヘリオシス・ジー（Ｈｅｌｉｏｔｈｉｓ  ｚｅａ）  ＮＰＶが含まれる。本発明に使用するために最も好ましい有害生物防除剤は、野生マイマイガ  ＮＰＶ、ＡｃＭＮＰＶ  Ｅ２、ＡｃＭＮＰＶ  Ｌ１、ＡｃＭＮＰＶ  Ｖ８、Ｖ８ｖＥＧＴＤＥＬ、Ｖ８ｖＥＧＴＤＥＬ−ＡａＩＴ及びヘリオシス・ジーＮＰＶである。
【００２１】
ＡｃＭＮＰＶ  Ｅ２は１９９４年、１０月２６日に発行された欧州特許第６２１３３７号（ＥＰ  ６２１３３７）に記載されている。
【００２２】
本発明に使用するために適当なｐＨ依存性ポリマーには、ｐＨ約５未満で本質的に不溶性であるポリマー、例えばメタクリル酸とメタクリル酸メチルのコポリマー、無水マレイン酸とスチレンのコポリマー等、又はその混合物が含まれる。好ましいｐＨ依存性ポリマーには、メタクリル酸とメタクリル酸メチルのコポリマー、メタクリル酸とメタクリル酸メチルのコポリマー混合物並びに無水マレイン酸とスチレンのコポリマーが含まれる。最も好ましいｐＨ依存性ポリマーは、ユーラジット（Ｅｕｄｒａｇｉｔ）（商標）Ｓ（エステルに対する遊離のカルボキシル基の割合が約１：２である、メタクリル酸とメタクリル酸メチルのコポリマー；Ｒｏｅｈｍ  Ｐｈａｒｍａ  ＧｍｂＨ製，  Ｗｅｉｔｅｒｓｔａｄｔ、ドイツ）、ユーラジット（商標）Ｌ（エステルに対する遊離のカルボキシル基の割合が約１：１である、メタクリル酸とメタクリル酸メチルのコポリマー；Ｒｏｅｈｍ  Ｐｈａｒｍａ  ＧｍｂＨ製）並びにその混合物である。
【００２３】
本発明に使用するために適当な可塑剤には、当業者に公知のどのような従来の可塑剤も含まれ、例えばポリエチレングリコール類、ポリプロピレングリコール類、フタル酸ジエチル、フタル酸ジブチル、クエン酸エステル類、ヒマシ油、トリアセチン等又はその混合物が挙げられ、好ましいのは約３００〜１，０００の分子量を有するポリエチレングリコール類である。
【００２４】
紫外線防護剤は、有害生物防除剤の光不活化を低減するために本発明に用いられる。使用に適当な紫外線防護剤には紫外線吸収剤、紫外線反射剤又はその混合物が含まれる。紫外線吸収剤には、炭素の種々の形態、例えばカーボンブラック；  ベンゾフェノン類、例えば２−ヒドロキシ−４−メトキシベンゾフェノン［シアソルブ（ＣＹＡＳＯＲＢ）（商標）ＵＶ  ９，Ｃｙｔｅｃ  Ｉｎｄ．製］、２，２−ジヒドロキシ−４−メトキシベンゾフェノン［シアソルブ（商標）ＵＶ２４，Ｃｙｔｅｃ  Ｉｎｄ．製］、２−ヒドロキシ−４−アクリロイルオキシエトキシベンゾフェノン［シアソルブ（商標）ＵＶ  ２０９８，Ｃｙｔｅｃ  Ｉｎｄ．製］、２−ヒドロキシ−４−ｎ−オクトキシベンゾフェノン［シアソルブ（商標）ＵＶ  ５３１，Ｃｙｔｅｃ  Ｉｎｄ．製］等；  並びに染料、例えばコンゴレッド、マラカイトグリーン、マラカイトグリーン塩酸塩、メチルオレンジ、メチルグリーン、ブリリアントグリーン、アクリジンイエロー、ＦＤＣグリーン、ＦＤＣイエロー、ＦＤＣレッド等が含まれる。紫外線反射剤には二酸化チタン等が含まれる。好ましい紫外線防護剤にはカーボンブラック、ベンゾフェノン類、染料及び二酸化チタンが含まれ、最も好ましいのはカーボンブラック、シアソルブ（商標）ＵＶ  ９及びシアソルブ（商標）ＵＶ  ２４である。
【００２５】
本発明の水性方法に使用するために適当な塩基には、水酸化アンモニウム、アルカリ金属水酸化物、アルカリ土類金属水酸化物等が含まれ、好ましいのは水酸化アンモニウムである。特定の殺虫性ウイルス抗原体は１０より高いｐＨで失活できる。したがって、迅速な可溶化を確保しそして失活を低減するために、ｐＨを約８．５〜１０に調整し得る量の塩基を選択することが好ましい。
【００２６】
スチルベン化合物は、有害生物防除剤の有害生物防除活性を高めるために本発明で用いられる。本発明に使用するために適当なスチルベン化合物は、米国特許第５，２４６，９３６号明細書に記載されている。
【００２７】
好ましいスチルベン化合物は、４，４’−ジアミノ−２，２’−スチルベンジスルホン酸の類似体、すなわち、カルコフラワー・ホワイト（Ｃａｌｃｏｆｌｕｏｒ  Ｗｈｉｔｅ）（Ｓｉｇｍａ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｃｏ．，Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，Ｍｏ．から入手可能）、例えばカルコフラワー・ホワイト Ｍ２Ｒ、カルコフラワー・ホワイト ＡＢＴ、カルコフラワー・ホワイト  ＬＤ、カルコフラワー・ホワイト  ＲＷＰ等；  ブランコフォール（Ｂｌａｎｃｏｐｈｏｒ）（Ｍｏｂａｙ  Ｃｈｅｍｉｃａｌｓ，Ｐｉｔｔｓｂｕｒｇｈ，Ｐａ．から入手可能）、例えばブランコフォール  ＢＢＨ、ブランコフォール  ＭＢＢＨ、ブランコフォール  ＢＨＣ等；  イントラワイト（ＩＮＴＲＡＷＩＴＥ）（商標）（複素環スチルベン誘導体、Ｃｒｏｍｐｔｏｎ  ａｎｄ  Ｋｎｏｗｌｅｓ  Ｃｏｒｐ．，  Ｃｈａｒｌｏｔｔｅ，Ｎ．Ｃ．から入手可能）、例えばイントラワイト（商標）ＣＦ等；  ロイコフォール（Ｌｏｕｃｏｐｈｏｒ）（Ｓｎｄｏｚ  Ｃｈｅｍｉｃａｌｓ  Ｃｏｒｐ．，Ｃｈａｒｌｏｔｔｅ，Ｎ．Ｃ．から入手可能）、例えばロイコフォールＢＳ、ロイコフォールＢＳＢ、ロイコフォールＥＫＢ、ロイコフォールＰＡＢ等；  フォルワイト（Ｐｈｏｒｗｉｔｅ）（Ｍｏｂａｙ  Ｃｈｅｍｉｃａｌｓ  Ｃｏｒｐ．，Ｐｉｔｔｓｂｕｒｇｈ，Ｐａ．から入手可能）、例えばフォルワイトＡＲ、フォルワイトＢＢＵ、フォルワイトＢＫＬ、フォルワイトＣＬ、フォルワイトＰＫＫ等が含まれる。ブランコフォール  ＢＢＨ、カルコフラワー・ホワイト Ｍ２Ｒ及びフォルワイトＡＲが最も好ましいスチルベン化合物である。
【００２８】
崩壊剤は、微粉砕時間を短縮しそして乾燥材料の粒度低減を高めるために本発明に使用される。本発明に使用するために適当な崩壊剤には、ホルムアルデヒドと多環式芳香族化合物のスルホン化生成物との縮合物の塩、親水性澱粉、例えばデキストラン、カルボキシメチルセルロース、ポリビニルピロリドン等又はその混合物が含まれる。好ましい崩壊剤は、ホルムアルデヒドと多環式芳香族化合物のスルホン化生成物との縮合物の塩、例えばホルムアルデヒドとナフタレンスルホネート、石油スルホネート及びリグニンスルホネートとの縮合物の塩であり、最も好ましいのはナフタレンホルムアルデヒド縮合物のスルホン酸ナトリウム、例えばモルウェト（ＭＯＲＷＥＴ）（商標）Ｄ４２５（Ｗｉｔｃｏ製，Ｈｏｕｓｔｏｎ，Ｔｅｘａｓ）、ロマール（ＬＯＭＡＲ）（商標）ＰＷ（Ｈｅｎｋｅｌ製，Ｃｉｎｃｉｎｎａｔｉ，Ｏｈｉｏ）及びダルバン（ＤＡＲＶＡＮ）（商標）１（Ｒ．Ｔ．  Ｖａｎｄｅｒｂｉｌｔ  Ｃｏ．製，Ｎｏｒｗａｌｋ，Ｃｏｎｎｅｔｉｃｕｔ）である。
【００２９】
滑剤は、乾燥され被覆された有害生物防除剤が相互に粘着することを防止するために本発明の方法に使用される。本発明に使用するために適当な崩壊剤には、タルク、ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸カルシウム、硫酸カルシウム等又はその混合物が含まれ、好ましいのはタルクである。
【００３０】
本発明におけるマトリックは、他の添加剤、例えば保存剤、安定剤（トレハロース）、抗カビ剤、抗菌・抗カビ剤、抗菌剤等も含むことができる。明らかに、菌性病原体及び細菌性病原体をそれぞれ被覆する場合には、抗菌・抗カビ剤及び抗菌剤は一般に使用されないであろう。
【００３１】
本発明の好ましい被覆有害生物防除剤は、約２〜２０重量％のｐＨ依存性ポリマー、最高約３重量％までの可塑剤、約５〜３５重量％の紫外線防護剤、約２５〜７５重量％のスチルベン化合物、最高約１０重量％までの崩壊剤及び最高約１０重量％までの滑剤を含むマトリックスで囲まれた、有害生物防除剤コアを含んでなるものである。
【００３２】
また、本発明は、約２〜２５重量％の湿潤剤；約２〜４０重量％の分散剤；約１０〜７０重量％の増量剤；約１〜１０重量％の流動促進剤；最高約２０重量％までのｐＨ調整剤；並びに約２〜２５重量％のｐＨ依存性ポリマー、最高約５重量％までの可塑剤、約５〜４５重量％の紫外線防護剤、最高約７５重量％までのスチルベン化合物、最高約１０重量％までの崩壊剤及び最高約１０重量％までの滑剤を含むマトリックスで囲まれた有害生物防除剤コアを含む、約５〜７５重量％の被覆有害生物防除剤を、含んでなる水和有害生物防除組成物を提供する。
【００３３】
本発明の好ましい水和有害生物防除組成物は、約２〜１５重量％の湿潤剤；約２〜１５重量％の分散剤；約１０〜６０重量％の増量剤；約１〜５重量％の流動促進剤；最高約２０重量％までのｐＨ調整剤；並びに約２〜２５重量％のｐＨ依存性ポリマー、最高約５重量％までの可塑剤、約５〜４５重量％の紫外線防護剤、最高約７５重量％までのスチルベン化合物、最高約１０重量％までの崩壊剤及び最高約１０重量％までの滑剤を含むマトリックスで囲まれた有害生物防除剤コアを含む、約５〜７５重量％の被覆有害生物防除剤を、含んでなるものである。
【００３４】
本発明に使用するために適当な湿潤剤には当業者に公知のどのような従来の湿潤剤も含まれる。好ましい湿潤剤には、アニオン湿潤剤、例えばＮ−メチル−Ｎ−オレオイルタウリンナトリウム塩、オクチルフェノキシポリエトキシエタノール、ノニルフェノキシポリエトキシエタノール、ジオクチルスルホコハク酸ナトリウム、ドデシルベンゼンスルホン酸ナトリウム、ラウリル硫酸ナトリウム、アルキルナフタレンスルホン酸ナトリウム、スルホン化アルキルカルボン酸ナトリウム等又はその混合物が含まれる。アルキルナフタレンスルホン酸ナトリウムとスルホン化アルキルカルボン酸ナトリウムとの混合物（モルウェト（ＭＯＲＷＥＴ）（商標）ＥＦＷ，Ｗｉｔｃｏ製）が最も好ましい湿潤剤である。
【００３５】
本発明の水和有害生物防除組成物に有用な分散剤には，当業者に公知のどのような従来の分散剤も含まれる。好ましい分散剤は、アニオン分散剤、例えばホルムアルデヒドと多環式芳香族化合物のスルホン化生成物との縮合物の塩、リグノスルホン酸ナトリウム等又はその混合物であり、最も好ましいのは、ナフタレンホルムアルデヒド縮合物のスルホン酸ナトリウム、例えばモルウェト（ＭＯＲＷＥＴ）（商標）Ｄ４２５（Ｗｉｔｃｏ製）、ロマール（ＬＯＭＡＲ）（商標）ＰＷ（Ｈｅｎｋｅｌ製）及びダルバン（ＤＡＲＶＡＮ）（商標）１（Ｒ．Ｔ．Ｖａｎｄｅｒｂｉｌｔ  Ｃｏ．製）である。
【００３６】
本発明の組成物に使用するために適当な増量剤には、天然及び合成のクレー及び珪酸塩、例えば：珪藻土のような天然シリカ類；タルクのような珪酸マグネシウム類；アタパルガイト及びヒル石のような珪酸アルミニウムマグネシウム類；カオリナイト、モンモリロナイト及び雲母のような珪酸アルミニウム類；並びにカオリンクレーのような水和珪酸アルミニウム類が含まれる。好ましい増量剤は、水和珪酸アルミニウム類、珪酸アルミニウム類、珪酸マグネシウム類及び珪酸アルミニウムマグネシウム類であり、最も好ましい増量剤はカオリンクレーである。本発明の水和有害生物防除組成物に有用な流動促進剤は、当業者に公知の従来の流動促進剤であり、好ましいのは珪酸カルシウムのような珪酸塩類である。
【００３７】
ｐＨ調整剤は、本発明の組成物から調製される水性タンク・ミックスのｐＨを約５より低く維持するために使用される。使用に適当なｐＨ調整剤にはフタル酸水素カリウム及び有機酸が含まれ、好ましいのはクエン酸である。
【００３８】
本発明の水和有害生物防除組成物は、水和剤、分散剤、増量剤、流動促進剤及び場合によりｐＨ調整剤からなる混合物をブレンドして、プレミックスを形成することにより調製できる。次にプレミックスを被覆有害生物防除剤とブレンドして、本発明の所望の水和有害生物防除組成物が形成される。
【００３９】
有害生物の防除に際して、本発明の水和有害生物防除組成物を水と希釈し、水性タンク・ミックスを形成し、そしてタンク・ミックスを有害生物、それらが繁殖している土壌、供給食物又は生息地に直接施用する。
【００４０】
他の成分、例えば誘因物質、粘着剤、消泡剤等を本発明の水和組成物に添加してもよい。しかしながら、それら添加成分は一般に分離してタンク・ミックスに添加される。補助剤又は補助剤の混合物もタンク・ミックスに混合してもよい。
【００４１】
【実施例】
本発明のさらなる理解を促進するために、主としてそのより具体的な詳細を説明する目的で以下の実施例を提供する。特許請求の範囲で規定される以外に、本発明をそれによって限定的に解してはならない。
【００４２】
特記がなければ、Ｓａｍｂｒｏｏｋら、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ：  Ａ  Ｌａｂｏｒｏｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，２ｎｄ  ｅｄ．，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｐｒｅｓｓ，  Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ，Ｎ．Ｙ．（１９８９）に記載されているプロトコルに従う、標準分子生物学的技術を用いた。Ｓｕｍｍｅｒｓ  ａｎｄ  Ｓｍｉｔｈ  Ａ  Ｍａｎｕａｌ  Ｏｆ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  Ｆｏｒ  Ｂａｃｕｌｏｖｉｒｕｓ  Ｖｅｃｔｏｒｓ  ａｎｄ  Ｉｎｓｅｃｔ  Ｃｅｌｌ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  Ｐｒｏｃｅｄｕｒｅｓ，  Ｄｅｐｔ．  ｏｆ  Ｅｎｔｏｍｏｌｏｇｙ，  Ｔｅｘａｓ  Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ  Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ  Ｓｔａｔｉｏｎ  ａｎｄ  Ｔｅｘａｓ  Ａ  ＆  Ｍ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，  Ｃｏｌｌｅｇｅ  Ｓｔａｔｉｏｎ，  Ｔｅｘａｓ  ７７８４３−２４７５，  Ｔｅｘａｓ  Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ  Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔ  Ｓｔａｔｉｏｎ  Ｂｕｌｌｅｔｉｎ  Ｎｏ．１５５５（１９８７）に記載されているプロトコルに従う、バキュロウイルス増殖及び再生の標準技術が用いられる。
【００４３】
実施例１
被覆Ｖ８ｖＥＧＴＤＥＬポリヒドリン封入体の調製  −  水性方法
水酸化アンモニウム溶液（２８％ＮＨ3）を、脱イオン水（５５１．８ｇ）中のユーラジット（Ｅｕｄｒａｇｉｔ）（商標）Ｓ１００（６２ｇ、Ｒｏｅｈｍ  Ｐｈａｒｍａ  Ｃｏ．製）とＰＥＧ  ４００［６２ｇ、ポリ（エチレングリコール）  平均分子量４００、Ａｌｄｒｉｃｈ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｃｏ．製］との混合物に、約９．４のｐＨが得られるまで添加した。得られた混合物を３０分間攪拌して溶液を得た。ｐＨを調整した水溶液に、Ｖ８ｖＥＧＴＤＥＬポリヒドリン封入体（６２ｇ、約２μｍの粒度、１グラム当たり約１０11封入体）、ブランコファー（Ｂｌａｎｃｏｐｈｏｒ）ＢＢＨ（２４８ｇ、スチルベン増白剤、Ｍｉｌｅｓ  Ｉｎｃ．製）及びシアソルブ（ＣＹＡＳＯＲＢ）（商標）ＵＶ  ９（３１ｇ、平均粒度約２μｍ、Ｃｙｔｅｃ  Ｉｎｄ．）を添加した。得られた混合物を３０分間攪拌し、そしてブレンドしながら風乾して固体粒状物を得た。固体粒状物を空気微粉砕して、被覆Ｖ８ｖＥＧＴＤＥＬポリヒドリン封入体（３６２ｇ、平均粒度約５μｍ）を得た。上述のようにして調製した被覆Ｖ８ｖＥＧＴＤＥＬポリヒドリン封入体を、表ＩＩ中、組成物１として表示した。
【００４４】
表Ｉに列挙されている成分を用いた以外は本質的に同じ方法で、表ＩＩ中、組成物２〜１０として表示されている被覆有害生物防除剤を調製した。
【００４５】
表Ｉ
有害生物防除剤
ａ．Ｖ８ｖＥＧＴＤＥＬポリヒドリン封入体
ｂ．ヘリオシス・ジー（Ｈｅｌｉｏｔｈｉｓ  ｚｅａ）ＮＰＶ
ｃ．ＡｃＭＮＰＶ
ｄ．ヘリオシス・ジー  ＮＰＶ及びＡｃＭＮＰＶの１：１混合物
ｐＨ依存性ポリマー
ｅ．ユーラジット（Ｅｕｄｒａｇｉｔ）（商標）Ｓ１００
可塑剤
ｆ．ＰＥＧ  ４００
ＵＶ防護剤
ｇ．シアソルブ（ＣＹＡＳＯＲＢ）（商標）ＵＶ  ９
ｈ．木炭
スチルベン化合物
ｉ．ブランコファー（Ｂｌａｎｃｏｐｈｏｒ）ＢＢＨ
滑剤
ｊ．タルク
【００４６】
【表１】
0003806952.tif 000002
【００４７】
実施例２
被覆Ｖ８ｖＥＧＴＤＥＬポリヒドリン封入体の調製  −  有機方法
Ｖ８ｖＥＧＴＤＥＬポリヒドリン封入体（４３．２４ｇ、粒度約２μｍ、１グラム当たり約１０11封入体）、ブランコファー（Ｂｌａｎｃｏｐｈｏｒ）ＢＢＨ（８６．４４ｇ）及びシアソルブ（ＣＹＡＳＯＲＢ）（商標）ＵＶ  ９（３１．９３ｇ）を、３０：７０  アセトン／イソプロパノール溶液（１９５．１５ｇ）中のユーラジット（Ｅｕｄｒａｇｉｔ）（商標）Ｓ１００（５．８８ｇ）及びＰＥＧ  ４００（１．５１ｇ）の溶液に添加した。得られた混合物を数分間攪拌し、そしてブレンドしながら風乾して固体粒状物を得た。固体粒状物を６０メッシュ篩を通して微粉砕して、約１０μｍの平均粒度を有する被覆Ｖ８ｖＥＧＴＤＥＬポリヒドリン封入体を得た。上述のようにして調製した被覆Ｖ８ｖＥＧＴＤＥＬポリヒドリン封入体を表ＩＶ中、組成物１１として表示した。
【００４８】
表IIIに列挙されている成分を用いた以外は本質的に同じ方法で、表ＩＶ中、組成物１２〜２８として表示されている被覆有害生物防除剤を調製した。
【００４９】
表III
有害生物防除剤
ａ．Ｖ８ｖＥＧＴＤＥＬポリヒドリン封入体
ｂ．野生マイマイガＮＰＶ
ｐＨ依存性ポリマー
ｃ．ユーラジット（Ｅｕｄｒａｇｉｔ）（商標）Ｓ１００
ｄ．シプレス（Ｃｙｐｒｅｓｓ）（商標）４８
（無水マレイン酸／スチレンのコポリマー／Ｃｙｔｅｃ  Ｉｎｄ．製）
可塑剤
ｅ．ＰＥＧ  ４００
ＵＶ防護剤
ｆ．シアソルブ（ＣＹＡＳＯＲＢ）（商標）ＵＶ  ９
ｇ．木炭
ｈ．ＴｉＯ2
スチルベン化合物
ｉ．ブランコファー（Ｂｌａｎｃｏｐｈｏｒ）ＢＢＨ
崩壊剤
ｊ．モルウェット（ＭＯＲＷＥＴ）（商標）Ｄ４２５
安定剤
ｋ．トレハロース
【００５０】
【表２】
0003806952.tif 000003
【００５１】
【表３】
0003806952.tif 000004
【００５２】
実施例３
水和有害生物防除組成物の調製
表ＩＩ中で組成物１として表示されている被覆Ｖ８ｖＥＧＴＤＥＬポリヒドリン封入体（３６２ｇ）を、モルウェット（ＭＯＲＷＥＴ）（商標）ＥＦＷ（１３．１ｇ）、モルウェット（商標）Ｄ４２５（２６．２ｇ）、カオリンクレー（９１．６ｇ）、合成硫酸カルシウム［６．５ｇ、マイクロ−セル（ＭＩＣＲＯ−ＣＥＬ））（商標）Ｅ、Ｍａｎｖｉｌｌｅ  Ｃｏ．製］及びクエン酸（０．７ｇ）からなるプレミックスに添加した。得られた混合物をブレンドして、表Ｖ中、組成物２９として表示されている水和組成物を得た。
【００５３】
本質的に同じ方法で、表Ｖ中、組成物３０〜５３として表示されている水和組成物を調製した。
【００５４】
【表４】
0003806952.tif 000005
【００５５】
【表５】
0003806952.tif 000006
【００５６】
実施例４
Ｌ．ディスパールに対する非照射及び照射水和有害生物防除組成物の殺虫性評価
水和殺虫性病原体組成物を蒸留水に懸濁し、そして１ｍＬ当たり２．４  ｘ  １０5被覆殺虫性ポリヒドリン封入体の濃度に希釈した。得られた懸濁液（０．５ｍＬ）を、１８０ｍＬのプラスチック・カップ中の小麦胚餌の表面にピペットで移した。各カップを、紫外線照射（１つのウエスチングハウスＢＬＢバルブと１つのフィリップスＦ４０  ＵＶＢバルブとは３インチ離してセットし、照射源の中央線と餌の表面との距離は４インチとした）に０分間または８０分間のいずれかにさらした。１０匹の２令のＬ．ディスパール（Ｌ．ｄｉｓｐａｒ）毛虫幼虫を各カップに入れた。カップにカバーをし、そして２９℃で、５５〜６０％相対湿度で暗所に維持した。１３日後に、カップを検査し、そしてウイルス感染による死亡率を求めた。
【００５７】
結果を表ＶＩに要約した。表ＶＩ中、各組成物の有効性は、紫外線暴露後に残存している元の活性のパーセント（％  ＯＡＲ）として、すなわち、照射組成物により生じた死亡％  ÷  非照射組成物により生じた死亡％  ｘ  １００で表されている。評価に用いた対照組成物を以下に表示する。
【００５８】
0003806952.tif 000007
１：  ９３．６２重量／重量％の野生マイマイガＮＰＶ、４．２６重量／重量％のユーラジット（商標）Ｓ１００及び２．１３重量／重量％のＰＥＧ  ４００
【００５９】
【表６】
0003806952.tif 000008
【００６０】
実施例５
ヘリコバーパ・ジーに対する水和有害生物防除組成物の殺虫性評価
１トレー当たり３２個の開口ウエル（長さ４  ｘ  幅４  ｘ  高さ２．５  ｃｍ、Ｃ−Ｄ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  Ｉｎｃ．製）を含むプラスチック・バイオアッセイ・トレーを、この評価において試験区域として使用した。５ｍＬのストーンビル（Ｓｔｏｎｅｖｉｌｌｅ）餌（大豆／小麦胚）を各トレー・ウエル中に注ぎ、そして硬化させた。水和殺虫性病原体組成物の水性懸濁液（０．４ｍＬ）を、硬化した餌の表面上に均一に塗布して、１ウエル当たり４  ｘ  １０5〜４  ｘ  １０7  Ｖ８ｖＥＧＴＤＥＬ被覆又は非被覆ポリヒドリン封入体を得た。層流フード中でトレーを乾燥した後、１匹の３日齢ヘリコバーパ・ジー（Ｈｅｌｉｃｏｖｅｒｐａ  ｚｅａ）幼虫を各トレー・ウエル中の餌の表面に収容した。粘着性で、通気穴を有する透明なプラスチック・シート（Ｃ−Ｄ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  Ｉｎｃ．製）でウエルを覆い、約２７℃の温度で一定の蛍光下で維持した。処理後、５日目及び１０日目に、ウエルを検査し、そして幼虫の死亡率を測定した。
【００６１】
結果を表VIIに要約した。評価に用いた対照組成物を以下に表示する。
【００６２】
0003806952.tif 000009
【００６３】
【表７】
0003806952.tif 000010
【００６４】
実施例６
Ｈ．ジー及びＨ．ビレセンスに対する非照射及び照射水和組成物の評価
１トレー当たり３２個の開口ウエル（長さ４  ｘ  幅４  ｘ  高さ２．５  ｃｍ、Ｃ−Ｄ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  Ｉｎｃ．製）を含むプラスチック・バイオアッセイ・トレーを、この評価において試験区域として使用した。５ｍＬのストーンビル（Ｓｔｏｎｅｖｉｌｌｅ）餌（大豆／小麦胚）を各トレー・ウエル中に注ぎ、そして硬化させた。水和殺虫性病原体組成物の水性懸濁液（０．４ｍＬ）を、硬化した餌の表面上に均一に塗布して、１ウエル当たり４  ｘ  １０6  Ｖ８ｖＥＧＴＤＥＬ被覆又は非被覆ポリヒドリン封入体を得た。次に処理トレーのうちの幾つかを蛍光ランプ（２個のＦＳ４ＯＵＶＢバルブをトレー上３０ｃｍにセットした、Ｐｈｉｌｌｉｐｓ  Ｃｏ．製）下に１時間又は２時間のいずれかに維持した。餌の乾燥過度及び亀裂を防止するために、２時間の照射用に選択されたトレーに１時間の間隔で１ウエル当たり０．４ｍＬのさらなる脱イオン水を供給した。次に全トレーを単一の３日齢のＨ．ジー（Ｈ．ｚｅａ）又は４日齢のＨ．ビレセンス（Ｈ．ｖｉｒｅｓｃｅｎｓ）幼虫で感染した。粘着性で、通気穴を有する透明なプラスチック・シート（Ｃ−Ｄ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  Ｉｎｃ．製）でウエルを覆い、そして約２７℃の温度で、一定の蛍光下で維持した。処理後１０日目にウエルを検査し、そして幼虫の死亡率を測定した。
【００６５】
結果を表VIIIに要約した。評価に用いた対照組成物を以下に表示する。
【００６６】
0003806952.tif 000011
【００６７】
【表８】
0003806952.tif 000012
【００６８】
実施例７
溶媒相溶性評価
オートグラファ・カリフォルニカ（Ａｕｔｏｇｒａｐｈａ  ｃａｌｉｆｏｒｎｉｃａ）ポリヒドリン封入体に対する各種溶媒及びその混合物の効果を測定するために、以下の評価を用いた。オートグラファ・カリフォルニカポリヒドリン封入体（０．５５ｇ）と適当な溶媒又は溶媒混合物（１．５ｍＬ）との混合物を、円錐状チューブ中に１０分間又は６０分間維持した。次にチューブを遠心し、そして上清をデカントした。固体をデシケーター中で減圧下乾燥した。次に乾燥した固体を、実施例６で記載した方法（非照射）に従いヘリオシス・ビレセンス（Ｈｅｌｉｏｔｈｉｓ  ｖｉｒｅｓｃｅｎｓ）に対して評価した。
【００６９】
結果を表ＩＸに要約した。表ＩＸ中のデータから分かるように、１０分間及び６０分間塩化メチレンと混合したオートグラファ・カリフォルニカ・ポリヒドリン封入体は、アセトン、イソプロパノール及び３０：７０アセトン／イソプロパノール混合物と混合した封入体と比較して、有意に活性でなかった。
【００７０】
【表９】
0003806952.tif 000013
【００７１】
本発明の特徴および態様を示せば以下のとおりである。
【００７２】
１．
(a)  ｐＨ依存性ポリマー及び場合により可塑剤の水性混合物を調製し；
(b)  工程(a)の混合物のｐＨを該ｐＨ依存性ポリマーの可溶化ｐＨより高いｐＨに調整して、該ｐＨ依存性ポリマーを溶解し；
(c)  工程(b)の溶液に、有害生物防除剤、紫外線防護剤、場合によりスチルベン化合物、場合により崩壊剤及び場合により滑剤を添加し、そしてブレンドして、均質な懸濁液を製造し；
(d) 工程(c)の該均質な懸濁液を乾燥し；そして
(e)  場合により工程(d)の乾燥材料を微粉砕する
ことを含んでなる、被覆有害生物防除剤の製造方法。
【００７３】
２．ｐＨ依存性ポリマーがメタクリル酸とメタクリル酸メチルのコポリマー、メタクリル酸とメタクリル酸メチルのコポリマー類の混合物並びに無水マレイン酸とスチレンのコポリマーからなる群より選択され；可塑剤がポリエチレングリコール、ポリプロピレングリコール、フタル酸ジエチル、フタル酸ジブチル、クエン酸エステル、ヒマシ油及びトリアセチンからなる群より選択され；塩基が水酸化アンモニウム、アルカリ金属水酸化物、アルカリ土類金属水酸化物からなる群より選択され；有害生物防除剤が殺虫性病原体であり；紫外線防護剤がカーボンブラック、ベンゾフェノン、染料及び二酸化チタンからなる群より選択され；工程(b)でｐＨ８．５〜１０にｐＨが調整され；崩壊剤がホルムアルデヒドと多環式芳香族化合物のスルホン化生成物との縮合物の塩、親水性澱粉、カルボキシメチルセルロース及びポリビニルピロリドンからなる群より選択され；そして滑剤がタルク、ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸カルシウム及び硫酸カルシウムからなる群より選択される上記１記載の方法。
【００７４】
３．可塑剤が約３００〜１，０００の分子量を有するポリエチレングリコールであり、塩基が水酸化アンモニウムであり；殺虫性病原体が野生マイマイガ  ＮＰＶ、ＡｃＭＮＰＶ  Ｅ２、ＡｃＭＮＰＶ  Ｌ１、ＡｃＭＮＰＶ  Ｖ８、Ｖ８ｖＥＧＴＤＥＬ、Ｖ８ｖＥＧＴＤＥＬ−ＡａＩＴ及びヘリオシス・ジー（Ｈｅｌｉｏｔｈｉｓ  ｚｅａ）ＮＰＶからなる群より選択されるウイルスであり；崩壊剤がナフタレンホルムアルデヒド縮合物のスルホン酸ナトリウムであり；そして滑剤がタルクであり、そして被覆有害生物防除剤が約２０μｍ未満の粒度を有する上記２記載の方法。
【００７５】
４．
(a)  ｐＨ依存性ポリマー、有害生物防除剤、場合により可塑剤、紫外線防護剤、場合によりスチルベン化合物、場合により崩壊剤及び場合により滑剤からなる混合物を、アセトン、Ｃ1〜Ｃ3アルコール及びその混合物からなる群より選択される有機溶媒中でブレンドし；
(b)  工程(a)の均質な懸濁液を乾燥し；そして
(c)  場合により工程(b)の乾燥材料を微粉砕する
ことを含んでなる、被覆有害生物防除剤の製造方法。
【００７６】
５．有機溶媒がアセトンとＣ1〜Ｃ3アルコールとの混合物であり、そしてＣ1〜Ｃ3アルコールに対するアセトンの割合が約１：９〜９：１である上記４記載の方法。
【００７７】
６．ｐＨ依存性ポリマーがメタクリル酸とメタクリル酸メチルのコポリマー、メタクリル酸とメタクリル酸メチルのコポリマー類の混合物並びに無水マレイン酸とスチレンのコポリマーからなる群より選択され；有害生物防除剤が殺虫性病原体であり；可塑剤がポリエチレングリコール、ポリプロピレングリコール、フタル酸ジエチル、フタル酸ジブチル、クエン酸エステル、ヒマシ油及びトリアセチンからなる群より選択され；紫外線防護剤がカーボンブラック、ベンゾフェノン、染料及び二酸化チタンからなる群より選択され；崩壊剤がホルムアルデヒドと多環式芳香族化合物のスルホン化生成物との縮合物の塩、親水性澱粉、カルボキシメチルセルロース及びポリビニルピロリドンからなる群より選択され；滑剤がタルク、ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸カルシウム及び硫酸カルシウムからなる群より選択され；そしてＣ1〜Ｃ3アルコールがイソプロパノールである上記４記載の方法。
【００７８】
７．約２〜２５重量％のｐＨ依存性ポリマー、０％〜約５重量％の可塑剤、約５〜４５重量％の紫外線防護剤、０％〜約７５重量％のスチルベン化合物、０％〜約１０重量％崩壊剤及び０％〜約１０重量％滑剤を含むマトリックスで囲まれた、有害生物防除剤コアを含んでなる被覆有害生物防除剤。
【００７９】
８．マトリックスに対する有害生物防除剤の割合が約１：１〜１：１０である上記７記載の被覆有害生物防除剤。
【００８０】
９．ｐＨ依存性ポリマーがメタクリル酸とメタクリル酸メチルのコポリマー、メタクリル酸とメタクリル酸メチルのコポリマー類の混合物並びに無水マレイン酸とスチレンのコポリマーからなる群より選択され；可塑剤がポリエチレングリコール、ポリプロピレングリコール、フタル酸ジエチル、フタル酸ジブチル、クエン酸エステル、ヒマシ油及びトリアセチンからなる群より選択され；紫外線防護剤がカーボンブラック、ベンゾフェノン、染料及び二酸化チタンからなる群より選択され；崩壊剤がホルムアルデヒドと多環式芳香族化合物のスルホン化生成物との縮合物の塩、親水性澱粉、カルボキシメチルセルロース及びポリビニルピロリドンからなる群より選択され；そして滑剤がタルク、ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸カルシウム及び硫酸カルシウムからなる群より選択される上記７記載の被覆有害生物防除剤。
【００８１】
１０．約２〜２５重量％の湿潤剤；約２〜４０重量％の分散剤；約１０〜７０重量％の増量剤；約１〜１０重量％の流動促進剤；０％〜約２０重量％のｐＨ調整剤；並びに約２〜２５重量％のｐＨ依存性ポリマー、０％〜約５重量％の可塑剤、約５〜４５重量％の紫外線防護剤、０％〜約７５重量％のスチルベン化合物、０％〜約１０重量％の崩壊剤及び０％〜約１０重量％の潤り剤を含むマトリックスで囲まれた有害生物防除剤コアを含む、約５〜７５重量％の被覆有害生物防除剤を、含んでなる水和有害生物防除組成物。
【図面の簡単な説明】
【図１】ｅｇｔ遺伝子の位置を示すＡｃＭＮＰＶゲノムの概略図を示す。１Ａにおいて、全ＡｃＭＮＰＶゲノムは、交差単位中に、そしてＥｃｏ  ＲＩ及びＨｉｎｄ  ＩＩＩ  制限地図として存在する。１Ｂは交差単位７．６及び１１．１の間に位置する領域のより詳細な地図を示し、そしてｅｇｔ遺伝子の位置を示す。
【図２】２Ａはｅｇｔ遺伝子領域の概略図を示し、これはＡｃＭＮＰＶゲノム中の交差単位８．３及び９．８の間の重要な制限部位を示す。２Ｂは、交差単位８．３及び９．８の間のＡｃＭＮＰＶゲノムの３つ前向き（１，２，３）及び３つ逆向き（１’，２’，３’）の読取り枠中の、オープン読取り枠の構成を示す。読取り枠２中の大きなオープン読取り枠はｅｇｔ遺伝子のタンパク質コード領域の位置を示す。
【図３】（未負荷）ＡｃＭＮＰＶ  Ｖ８転移ベクターＮＦ４を構築するのに用いられるＤＮＡ断片の構成及び誘導法の略図を示す。３Ａは断片Ａ〜Ｄが集まってＮＦ４を形成する方法を示す。３Ｂは断片Ｃ及びＤの調製のために使用する概略図を示す。ＡｃＭＮＰＶ  Ｖ８  Ｅｃｏ  ＲＩ  「Ｉ」断片の線状制限地図上の矢印は、ＡｃＭＮＰＶゲノム中の交差単位０．３２及び５．８３の間に位置する主要オープン読取り枠（ＯＲＦＳ）の位置及び転写極性を示す。符号「Ｈ」及び「Ｅ」は、それぞれ制限エンドヌクレアーゼＨｉｎｄ  ＩＩＩ及びＥｃｏ  ＲＩの認識部位の位置を示す。
【図４】プラスミドｐＢＳ  ＡＤＫ−ＡａＩＴの構築の詳細を示し、これは異種脂質動員ホルモン遺伝子シグナル配列並びにＡａＩＴをコードするコドン最適化ｃＤＮＡ配列を含む。
【図５】プロモーター・モジュール、ポリリンカー・モジュール及び３’ＵＴＲモジュールを含む発現カセットの反対側末端の、Ｂｓｕ  ３６Ｉ部位及びＳｓｅ  ８３８７Ｉ部位を有するモジュラー発現ベクターの一部を示す。ポリリンカー・モジュールはＢｓｐ  ３Ｉ認識部位を含む。最も遠いＢｓｕ  ３６Ｉ  Ｓｓｅ  ８３８７Ｉ部位によって結合された領域はウイルス挿入モジュールとして定義される。
【図６】脂質動員ホルモン遺伝子シグナル／コドン最適化ＡａＩＴ遺伝子の増幅のためのポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）を示し、 これは次にＢａｍ  ＨＩで消化される。
【図７】脂質動員ホルモン遺伝子シグナル／コドン最適化ＡａＩＴをｐＭＥＶ１．１に挿入して形成されたモジュラー発現ベクター（ＡＣ００７５．１）の概略図を示し、これはＡｃＭＮＰＶ  ＤＡ２６プロモーターを含む。
【図１】
0003806952.tif 000014
【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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