(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
次の式（１）又は式（２）；
【化１】
0003808907.tif 000010
【化２】
0003808907.tif 000011
〔式中、Ｒ1 は炭素数１０〜２０のアルキル基を示し、ｎは２〜１０の整数を示す〕で表されるアルキルグリセリルオリゴマルトシドを含有する膜脂質を多価アルコールに溶解し、次いでネオカルチノスタチンを溶解させた水性担体溶液を加え室温で粗リポソームとし、エクストル−ジョン処理することを特徴とする抗腫瘍リポソーム製剤の製造方法。
【請求項２】
膜脂質と多価アルコールの重量比が、膜脂質／多価アルコール＝０．０３〜０．３である請求項１記載の抗腫瘍リポソーム製剤の製造方法。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【産業上の利用分野】
本発明は、抗腫瘍効果及び安全性の高い抗腫瘍物質リポソーム製剤の製造方法に関する。
【０００２】
【従来の技術】
現在、癌は死亡原因のトップを占める疾病であり、その根本的な治療方法が求められている。そのため、ブレオマイシン、シスプラチン、ネオカルチノスタチン等の多くの抗腫瘍剤が開発されてきた。しかしながら、これらの抗腫瘍剤は毒性が強い上に腫瘍への配向性が低いため、充分な抗腫瘍効果を得る事が出来なかった。従って、これら抗腫瘍剤をより多く腫瘍に配向せしめる試みが種々行われてきた。
【０００３】
例えば、血管造影剤であるヨードトリルとともに抗腫瘍剤を動脈投与する動注閉塞療法、抗腫瘍モノクローナル抗体と抗腫瘍剤を結合せしめた、いわゆるミサイル療法などが考え出された。
【０００４】
しかしながら、動注閉塞療法ではこの方法が用いることのできる腫瘍種が極めて限られていると言う欠点があり、ミサイル療法では、抗腫瘍モノクローナル抗体が極めて高価で産生しにくく、抗体が生体由来物質であるため安定性に問題があり、更に抗原性のため安全性に問題がある等の欠点があった。即ち、現状では腫瘍配向性を高め、抗腫瘍効果を向上させたり、安全性を向上させたりし得る抗腫瘍剤の製剤は得られていないのが実情である。
【０００５】
一方、腫瘍へ抗腫瘍剤を配向させる剤型的な手段として、脂質配向性の高いリポソーム製剤が各種開発されてきた。しかしながら、従来のリポソーム製剤によって抗腫瘍効果が改善されたケースは極めて少ない。これは、抗腫瘍剤がリポソーム内部に安定に内包されにくいことと、内包された抗腫瘍剤が腫瘍に於いてリリースされにくい為、リポソームが有している腫瘍配向性の良さと言うメリットが生きていないためである。
【０００６】
【発明が解決しようとする課題】
従って、本発明の目的は抗腫瘍効果と安全性に優れる抗腫瘍物質リポソーム製剤の製造方法を提供することにある。
【０００７】
【課題を解決するための手段】
斯かる実情に鑑み、本発明者らは鋭意研究を重ねた結果、リポソームを構成する脂質にアルキルグリセリルオリゴマルトシドを含有せしめ、特定のプロセスでリポソーム製剤を製造することにより、抗腫瘍効果と安全性の双方が向上した抗腫瘍物質リポソーム製剤が得られることを見出し本発明を完成させた。即ち、本発明は、下記式（１）又は式（２）で表されるアルキルグリセリルオリゴマルトシドを含有する膜脂質を多価アルコールに溶解し、次いでネオカルチノスタチンを溶解させた水性担体溶液を加え室温で粗リポソームとし、エクストル−ジョン処理することを特徴とする抗腫瘍リポソーム製剤の製造方法を提供するものである。
【０００８】
リポソーム製剤は脂質二重膜構造からなる粒子の内部に薬物を内包せしめた製剤であるが、本発明で製造される抗腫瘍物質リポソーム製剤は、この脂質二重膜構成成分に下記式（１）又は（２）で表されるジアルキルグリセリルオリゴマルトシドを含むことを特徴とする。即ち、リポソームの脂質二重膜の成分として下記式（１）又は（２）で表されるアルキルグリセリルオリゴマルトシドを加えることにより、安全性が高まり、抗腫瘍効果が著しく向上する。これはアルキルグリセリルオリゴマルトシドを加えることにより腫瘍への配向性が向上するためと推測される。
【０００９】
本発明で用いるアルキルグリセリルオリゴマルトシドは、式（１）で表わされるα，α−ジアルキルグリセリルオリゴマルトシド及び式（２）で表わされるα，β−ジアルキルグリセリルオリゴマルトシドのいずれでもよい。
【００１０】
【化１】
0003808907.tif 000002
【００１１】
〔式中、Ｒ1 は炭素数１０〜２０のアルキル基を示し、ｎは２〜１０の整数を示す〕
【００１２】
上記式（１）、（２）中、Ｒ1 としては炭素数１０〜２０のアルキル基が好ましく、特に炭素数１２〜１８のアルキル基がより好ましい。また、ｎとしては２〜１０の整数が好ましく、特に３〜８の整数がより好ましい。
【００１３】
上記アルキルグリセリルオリゴマルトシドは例えば次の反応式に従って製造することができる。
【００１４】
α，α−ジアルキルグリセリルオリゴマルトシドの製造法：
【００１５】
【化２】
0003808907.tif 000003
【００１６】
〔式中、Ｒ1 及びｎは前記と同じものを示す〕
【００１７】
即ち、高級アルコールとエピクロルヒドリンをアルカリの存在下反応せしめ、α，α−ジアルキルグリセリルエーテル（３）とし、この（３）とアシル化（アセチル化）オリゴマルトシド（４）をルイス酸の存在下、縮合させた後、常法によりアルコリシスにより脱アシル化すれば、α，α−ジアルキルグリセリルオリゴマルトシド（１）を得ることができる。
【００１８】
α，β−ジアルキルグリセリルオリゴマルトシドの製造：
【００１９】
【化３】
0003808907.tif 000004
【００２０】
〔式中、Ｒ1 及びｎは前記と同じものを示す〕
【００２１】
α，β−ジアルキルグリセリルオリゴマルトシド（２）は、アリルグリセリルエーテル（６）に、高級アルコールのＯＨを臭化チオニルで臭素に置換したアルキルブロマイドをアルカリ存在下、縮合反応させ、α，β−ジアルキルアリルグリセリルエーテル（７）となし、これをトシル酸存在下、パラジウム炭素で脱保護してα，β−ジアルキルグリセリルエーテル（８）とし、これとアシル化オリゴマルトシド（９）をルイス酸存在下、縮合し、しかる後、脱アシル化すれば容易に得られる。
【００２２】
本発明の抗腫瘍物質リポソーム製剤に於けるアルキルグリセリルオリゴマルトシドの好適な含有量は脂質の全重量に対して５〜５０重量％である。この量が脂質の重量に対して５重量％未満では腫瘍への配向性が低く抗腫瘍効果の増強や安全性の向上に寄与しないため適当ではなく、脂質の重量に対して５０重量％を超え配合しても効果が向上せず、また、リポソームが形成し難くなり適当でない。更に好適な配合量は脂質の重量に対して１０〜３０重量％である。
【００２３】
本発明に用いる脂質はリポソームを作成しうる脂質であれば、特に限定されず、微細で均一なリポソームとすることができる。このような脂質としては、例えば、フォスファチジルコリン、フォスファチジルイノシトール、フォスファチジルエタノールアミン、フォスファチジルセリン、フォスファチジルグリセロール、ジフォスファチジルグリセロール、グリセロリン脂質、スフィンゴミエリン等のスフィンゴリン脂質、コレステロール等が挙げられ、これらの脂質は２種以上を混合して用いてもよいが、アルキルグリセリルオリゴマルトシドは必ず含まれていなければならない。
【００２４】
抗腫瘍物質リポソーム製剤に配合する抗腫瘍剤としては、毒性も抗腫瘍効果も高いネオカルチノスタチンが最も好適である。また、本発明のリポソーム製剤には、多価アルコールを含有するが、必要により、無機塩類、糖類等を添加してもよい。
【００２５】
抗腫瘍剤をリポソーム製剤にする方法としては、超音波分散法、溶液法、エクストルージョン法の３種類が知られている。このうち最も一般的なものが超音波分散法であり、これはフラスコ等の容器の表面に脂質の薄膜を作り、これに水性担体に溶解させた薬物を加え、超音波をかけることにより、薄膜をこの水性担体中に分散させる製造法であり、この方法では超音波分散時に発熱が起こることが避けられず、熱安定性の低い抗腫瘍剤のリポソーム製剤化には好ましくない。
【００２６】
また、溶液法は脂質を一度グリセリンやプロピレングリコール等の多価アルコールに溶かし込み、これに生理食塩水等の水性担体に溶解させた薬物を徐々に加えリポソームを作成する方法である。この方法では加熱工程は脂質を多価アルコールに溶かし込む際の脂質を溶解する工程のみであり、直接薬物に熱を与えないと言う長所が有る。しかし、得られたリポソームの粒子径が大きく、粒子の大きさのバラツキも大きい。
【００２７】
エクストルージョン法は脂質、エクストルーダー（リペックス・バイオメンブランス社（カナダ）製）を用いて水性担体等の混合物を微細な穴より押し出し、リポソームとする方法であるが、この方法によれば微細で且つ大きさのバラツキの少ないリポソームが得られる。但し、目詰まりを起こし易いので製造には注意を要する。
従って、本発明では、溶液法により一度粗リポソームを作り、これをエクストルーダーにかけて粗リポソームを整粒する方法により抗腫瘍物質リポソーム製剤を製造することが好ましい。この方法によれば、微細で均一なリポソームを薬剤を加熱すること無く調製できるので、熱に対して安定性の悪い抗腫瘍物質のリポソーム製剤化には大変有益である。
【００２８】
よって、本発明の抗腫瘍物質リポソーム製剤を製造する方法は、脂質を多価アルコールに溶解せしめ、これに抗腫瘍物質の水性担体溶液を加えたものをエクストルージョン処理する方法で行う。なお、ここで用いる多価アルコールとしては、エチレングリコール、プロピレングリコール、グリセリン等が例示される。
【００２９】
より具体的には、例えば次の如くして製造することが好ましい。
すなわち、まず脂質を多価アルコールに溶解せしめる。この脂質と多価アルコールとの比は、脂質／多価アルコール＝０．０３〜０．３（重量比）とすることが好ましい。また脂質は例えば７０〜９０℃に加熱溶解してから、多価アルコールを加えることが好ましい。
【００３０】
この後、これに抗腫瘍物質の水性担体溶液を加えるが、ここで用いる抗腫瘍物質の水性担体としては、燐酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）、リンゲル液、乳酸リンゲル液等の各種緩衝液を用いることが好ましい。また、このときの抗腫瘍物質の濃度は０．０１〜１０重量％とすることが好ましく、更に０．１〜１重量％とすることが好ましい。抗腫瘍物質含有の水性担体は、脂質と多価アルコールの混合物に対して、１〜３倍程度加えることが好ましい。
【００３１】
エクストルージョン処理は、エクストルーダー（例えば、リペックス・バイオメンブランス社（カナダ）製のもの）を用いて水性担体等の混合物を微細な穴より押し出し、リポソームとする方法である。この方法によれば微細で且つ大きさのバラツキの少ないリポソームが得られる。しかしながら、溶液法による処理を行わずにエクストルージョン処理を行っても、エクストルーダーのフィルターが目詰まりを起こしてしまいリポソームが得られない。
【００３２】
斯くして得られた抗腫瘍物質のリポソーム製剤の投与方法は、確実に腫瘍に到達できる注射による投与が好ましい。注射による投与方法としては、静脈内投与、動脈内投与、門脈内投与、筋肉内投与、皮下投与、腹腔内投与、病巣内直接投与等が例示できる。
【００３３】
また、これらの薬物の投与量は、内包される薬物の投与量に準じて適宜決定すればよい。
【００３４】
【実施例】
以下、実施例を挙げて更に詳しく本発明について説明するが、本発明は、これら実施例に何等限定されるものではない。なお、以下の実施例で用いたエクストルーダーは、リペックス・バイオメンブランス社（カナダ）製のもので、このフィルターは全て１００nmのポアサイズのフィルターを用いた。
【００３５】
実施例１
下記処方に従って溶液−エクストルーダー法によりネオカルチノスタチンのリポソームを作成した。即ち、（Ａ）と（Ｂ）とを８０℃で加熱溶解し、室温まで冷却し、これに（Ｃ）を滴下し、粗リポソームとした後、エクストルーダーにかけてリポソームを作成した。これを更にゲル濾過して内包されていないネオカルチノスタチンを除去し、ネオカルチノスタチンのリポソーム製剤を得た。
作成後リポソームに内包されているネオカルチノスタチンの量をトリトーンを１％加えてリポソームを壊した後、マイクロコッカス・ルテウスを用いた抗菌活性で定量したところ、１５２０単位であった。
【００３６】
【表１】
0003808907.tif 000005
【００３７】
実施例２
下記処方に従って溶液−エクストルーダー法によりネオカルチノスタチンのリポソームを作成した。即ち、（Ａ）と（Ｂ）とを８０℃で加熱溶解し、室温まで冷却し、これに（Ｃ）を滴下し、粗リポソームとした後、エクストルーダーにかけてリポソームを作成した。これを更にゲル濾過して内包されていないネオカルチノスタチンを除去し、ネオカルチノスタチンのリポソーム製剤を得た。
作成後リポソームに内包されているネオカルチノスタチンの量を抗菌活性で定量したところ、１３７０単位あった。
【００３８】
【表２】
0003808907.tif 000006
【００３９】
実施例３
下記処方に従って溶液−エクストルーダー法によりネオカルチノスタチンのリポソームを作成した。即ち、（Ａ）と（Ｂ）とを８０℃で加熱溶解し、室温まで冷却し、これに（Ｃ）を滴下し、粗リポソームとした後、エクストルーダーにかけてリポソームを作成した。これを更にゲル濾過して内包されていないネオカルチノスタチンを除去し、ネオカルチノスタチンのリポソーム製剤を得た。
作成後リポソームに内包されているネオカルチノスタチンの抗菌活性で定量したところ、１４８０単位あった。
【００４０】
【表３】
0003808907.tif 000007
【００４１】
実施例４
下記処方に従って溶液−エクストルーダー法によりネオカルチノスタチンのリポソームを作成した。即ち、（Ａ）と（Ｂ）とを８０℃で加熱溶解し、室温まで冷却し、これに（Ｃ）を滴下し、粗リポソームとした後、エクストルーダーにかけてリポソームを作成した。これを更にゲル濾過して内包されていないネオカルチノスタチンを除去し、ネオカルチノスタチンのリポソーム製剤を得た。
作成後リポソームに内包されているネオカルチノスタチンの量を抗菌活性で定量したところ、１４１０単位あった。
【００４２】
【表４】
0003808907.tif 000008
【００４３】
試験例１
血中安定性
実施例１〜４のリポソーム製剤について、兎を用いて血中半減期を求めた。即ち、リポソーム製剤を静脈内投与し、一定時間毎に耳静脈より採血し血中濃度を求め濃度と時間の曲線より、血中半減期を求めた。併せて、実施例    においてジアルキルグリセリルオリゴマルトシドをダイズレシチンに置換したものを比較例として、参考例としてネオカルチノスタチンそのものを用いた。結果を表５に示す。本発明のリポソーム製剤は血中安定性に優れている事が判る。
【００４４】
【表５】
0003808907.tif 000009
【００４５】
試験例２
急性毒性
実施例３及び比較例、参考例の急性毒性をＢＡＬＢ／ｃマウス（雄性２０〜２５ｇ）を用いてＬＤ50を調べた。その結果、比較例は２０００単位／kg、参考例は２４５０単位／kg、実施例３は８１２０単位／kgであった。これより本発明のリポソーム製剤は安全性に優れる事が判る。
【００４６】
【発明の効果】
本発明の抗腫瘍物質リポソーム製剤の製造方法で得られるリポソーム製剤は、腫瘍配向性が高いため、抗腫瘍効果及び安全性が高い。