(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
サメ軟骨より抽出した分子量３０万以上のプロテオグリカンを含有することを特徴とする美白剤。
【請求項２】
サメ軟骨より抽出した分子量３０万以上のプロテオグリカンを含有することを特徴とするメラニン排出促進剤。
【請求項３】
サメ軟骨より抽出した分子量３０万以上のプロテオグリカンと、チョウジ、シャクヤク及びゲンノショウコの抽出物とを含有することを特徴とする老化防止化粧料。
【請求項４】
サメ軟骨より抽出した分子量３０万以上のプロテオグリカンと、チョウジ、シャクヤク及びゲンノショウコの抽出物とを含有することを特徴とするシワ、タルミ改善化粧料。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は、サメ軟骨より抽出したプロテオグリカンを含有することを特徴とし、シミ、ソバカスの改善とシワ、タルミの改善効果に優れた皮膚外用剤に関する。
【０００２】
【従来の技術】
一般にシミ、ソバカス、日焼け等に見られる皮膚の色素沈着は、ホルモンの異常や紫外線の刺激により、皮膚内に存在するメラニン色素生成細胞がメラニン色素を過剰に生成し、これが皮膚内に沈着することが原因と考えられている。このような色素沈着を防ぐ方法の一つに、メラニンの過剰な生成を抑制する方法が知られている。従来、色素沈着の治療にハイドロキノンやアスコルビン酸等を外用する処置が行われてきた。
【０００３】
従来よりプロテオグリカンは、アスコルビン酸と併用して美白化粧料等に用いられているが（特開平４−２１０６１４）、市場で利用されていたプロテオグリカンは牛、豚等の高等動物由来のものであった。これらのプロテオグリカンの水溶液等は、濁りがあるため、透明感の必要な化粧品に高濃度に利用することはできなかった。また、サメ由来の化粧料用原料としては、肝臓から抽出されたスクワレン等の油性原料、皮膚から抽出されるコラーゲン、軟骨を分解精製したコンドロイチン硫酸等のムコ多糖が挙げられる。しかしながら、サメ由来のプロテオグリカンとメラニン生成抑制剤との併用、あるいは活性酸素消去剤との併用した化粧料についてほとんど研究されていなかった。
【０００４】
【発明が解決しようとする課題】
以上に示すように、プロテオグリカンは、化粧料に配合したとき濁りが無く、透明感の高い安定なもので、皮膚に対する美白作用と老化防止に優れたものが望まれている。また、アスコルビン酸との併用で美白作用が相乗的に高まり、活性酸素消去作用を有する生薬等と併用することによって老化防止効果がさらに高まるものが求められている。
【０００５】
【課題を解決するための手段】
このような事情により、本発明者らは鋭意検討した結果、サメ軟骨から抽出したプロテオグリカンが、従来から市販されている牛由来のプロテオグリカンに比べて透明感が高く、しっとりとした使用感に特に優れていることを見出した。また、サメ軟骨から抽出したプロテオグリカンは、牛由来のプロテオグリカンよりもケラチノサイト細胞を活性化する効果が高かった。さらに、メラニン生成抑制剤と併用することによりそのシミ、ソバカスの改善効果が高まった。また、上記プロテオグリカンと活性酸素消去作用を有する生薬抽出物と併用することにより、シワ、タルミの改善効果が高まることを見出し、本発明を完成するに至った。
【０００６】
本発明に用いるプロテオグリカンとは、サメ軟骨由来のムコ多糖類蛋白質複合体を含む抽出液のことである。
【０００７】
本発明に用いるサメは、ヨシキリザメ、モウカザメが好ましいが、特にその種に限定されるものではない。サメ軟骨の使用部位は、ヒレ軟骨が好ましいが、それに限定されるものではない。また、サメ軟骨は、そのまま抽出してもよいが、抽出する前に前処理として、水やエタノール等の水系溶剤で洗浄してもよく、又プロテオグリカン由来の糖蛋白が残存する範囲でプロテアーゼ等の酵素で分解してもよい。
【０００８】
本発明に用いるプロテオグリカンの抽出方法は、例えば、水や含水アルコール等を用いて抽出することができ、その中に塩を加えて抽出してもよい。その抽出方法は特に限定されず、例えば、加熱抽出したものであっても良いし、冷蔵抽出したものであっても良い。
【０００９】
抽出する水に加える塩の種類としては、例えば、塩化ナトリウム、塩化マグネシウム、塩酸グアニジン等が利用できる。その添加量としては、０．１％以上が好ましく、１〜２０％がより好ましい。これらの塩は、一種又は二種以上を混合して用いても良い。
【００１０】
上記プロテオグリカンは、抽出した溶液のまま用いても良く、必要に応じて、濃縮、希釈、エタノール可溶分の除去又は限外濾過処理による分子量分画、脱塩、脱色、脱臭、活性炭等による脱色、脱臭処理等をして用いても良い。更には、抽出した溶液を濃縮乾固、噴霧乾燥、凍結乾燥等の処理を行い、乾燥物として用いても良い。
【００１１】
上記プロテオグリカンと併用できるメラニン生成抑制剤としては、Ｌ−アスコルビン酸リン酸塩、コウジ酸、アロエ抽出物等が挙げられる。また、併用できる活性酸素消去剤としては、チョウジ、シャクヤク、ゲンノショウコ、高麗人参、ヤクモソウ、オウゴン等の生薬抽出物、カテキン、フラボン等が挙げられる。
【００１２】
本発明の皮膚外用剤には、上記抽出物をそのまま使用しても良く、抽出物の効果を損なわない範囲内で、外用剤に用いられる成分である油脂類、ロウ類、炭化水素類、脂肪酸類、アルコール類、エステル類、界面活性剤、金属石鹸、ｐＨ調整剤、防腐剤、香料、保湿剤、粉体、紫外線吸収剤、増粘剤、色素、酸化防止剤、美白剤、キレート剤等の成分を配合することができる。
【００１３】
本発明の皮膚外用剤は、化粧品、医薬部外品、医薬品のいずれにも用いることができ、その剤形としては、例えば、化粧水、クリ−ム、乳液、ゲル剤、エアゾール剤、エッセンス、パック、洗浄剤、浴用剤、ファンデ−ション、打粉、口紅、軟膏、パップ剤等の皮膚に適用されるものが挙げられる。
【００１４】
本発明に用いるプロテオグリカンの配合量は、本発明の皮膚外用剤全量に対し、固形物に換算して０．０００１重量％以上、好ましくは０．００１〜１０重量％の配合が良い。０．０００１重量％未満では十分な効果は望みにくい。１０重量％を越えて配合した場合、粘度が高く利用しにくい。また、添加の方法については、予め加えておいても、製造途中で添加しても良く、作業性を考えて適宜選択すれば良い。
【００１５】
【実施例】
次に本発明を詳細に説明するため、実施例として本発明に用いるプロテオグリカンの製造例、本発明の処方例及び実験例を挙げるが、本発明はこれに限定されるものではない。実施例に示す配合量の部とは重量部を、％とは重量％を示す。
【００１６】
製造例１  サメ軟骨の塩化ナトリウム水溶液抽出物
サメ軟骨の乾燥物１．０ｋｇに３Ｍ塩化ナトリウム水溶液２０Ｌを加え、４℃で２４時間抽出した後、濾過し、その濾液を分子量３０万の限外ろ過膜を用いて脱塩、分画処理して、１％濃度の抽出物を１．３ｋｇ得た。
【００１７】
製造例２  サメ軟骨の塩酸グアニジン水溶液抽出物
サメ軟骨の乾燥物０．２ｋｇに３Ｍ塩酸グアニジン水溶液４Ｌを加え、４℃で３日間抽出した後、濾過し、その濾液を分画分子量１万の透析チューブを用いて脱塩精製し、１％濃度の抽出物を０．３ｋｇ得た。
【００１８】
製造例３  サメ軟骨の水抽出物
サメ軟骨の乾燥物１．０ｋｇに精製水２０Ｌを加え、４℃で２４時間抽出した後、濾過し、その濾液に２倍量のエタノールを加え、生成した沈殿物を遠心分離で回収し、乾燥してサメ軟骨の水抽出物を４．０ｇ得た。
【００１９】
製造例４  サメ軟骨のプロテアーゼ処理粉末
サメ軟骨の水抽出液をプロテアーゼ処理した液の乾燥物１００ｇを９０％エタノールで洗浄した後に乾燥して、サメ軟骨のプロテアーゼ処理粉末を８５ｇ得た。
【００２０】
製造例５  チョウジの熱水抽出物
チョウジ５０ｇに精製水１．０Ｌを加え、１００℃で２時間抽出した後、濾過し、チョウジの熱水抽出物を９００ｇ得た。
【００２１】
製造例６  シャクヤクの熱水抽出物
シャクヤク５０ｇに精製水１．０Ｌを加え、１００℃で２時間抽出した後、濾過し、シャクヤクの熱水抽出物を９００ｇ得た。
【００２２】
製造例７  ゲンノショウコの熱水抽出物
ゲンノショウコ５０ｇに精製水１．０Ｌを加え、１００℃で２時間抽出した後、濾過し、ゲンノショウコの熱水抽出物を９００ｇ得た。
【００２３】
実施例１  化粧水１
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［製造方法］成分１〜６及び１１と、成分７〜１０をそれぞれ均一に溶解し、両者を混合し濾過して製品とする。
【００２４】
実施例２ 化粧水２
実施例１において、精製水の一部（３．０部）をＬ−アスコルビン酸リン酸マグネシウムに置き換えたものを化粧水２とした。
【００２５】
実施例３ 化粧水３
実施例１において、精製水の一部（３．０部）をチョウジ、シャクヤク、ゲンノショウコの各熱水抽出物（製造例５、６、７）の等量混合物に置き換えたものを化粧水３とした。
【００２６】
比較例１    従来の化粧水
実施例１において、サメ軟骨の塩化ナトリウム水溶液抽出物を市販の牛由来プロテオグリカン抽出物（１％水溶液）に置き換えたものを従来の化粧水とした。
【００２７】
実施例４  クリーム
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［製造方法］成分２〜９を加熱溶解して混合し、７０℃に保ち油相とする。成分１及び１１〜１４を加熱溶解して混合し、７５℃に保ち水相とする。油相に水相を加えて乳化して、かき混ぜながら冷却し、４５℃で成分１０を加え、更に３０℃まで冷却して製品とする。
【００２８】
実施例５  乳液
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［製造方法］成分２〜８を加熱溶解して混合し、７０℃に保ち油相とする。成分１及び１０〜１３を加熱溶解して混合し、７５℃に保ち水相とする。油相に水相を加えて乳化して、かき混ぜながら冷却し、４５℃で成分９を加え、更に３０℃まで冷却して製品とする。
【００２９】
実施例６  ゲル剤
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［製造方法］成分２〜５と、成分１及び６〜１１をそれぞれ均一に溶解し、両者を混合して製品とする。
【００３０】
実施例７  パック
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［製造方法］成分１〜１１を均一に溶解し製品とする。
【００３１】
実施例８  ファンデーション
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［製造方法］成分２〜８を加熱溶解し、８０℃に保ち油相とする。成分１９に成分９をよく膨潤させ、続いて、成分１及び１０〜１３を加えて均一に混合する。これに粉砕機で粉砕混合した成分１４〜１７を加え、ホモミキサーで撹拌し７５℃に保ち水相とする。この水相に油相をかき混ぜながら加え、冷却し、４５℃で成分１８を加え、かき混ぜながら３０℃まで冷却して製品とする。
【００３２】
実施例９    浴用剤
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［製造方法］成分１〜５を均一に混合し製品とする。
【００３３】
実施例１０  軟膏
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［製造方法］成分３〜６を加熱溶解して混合し、７０℃に保ち油相とする。成分１、２及び７〜９を加熱溶解して混合し、７５℃に保ち水相とする。油相に水相を加えて乳化して、かき混ぜながら３０℃まで冷却して製品とする。
【００３４】
本発明のサメ軟骨由来のプロテオグリカンは、従来の牛由来のプロテオグリカンに比べて透明感が高く、しっとりとした使用感に優れていた。次に、本発明の効果をさらに詳細に説明するため、実験例を挙げる。
【００３５】
実験例１    濁度測定試験
試料として、製造例１及び４のサメ軟骨抽出物を用い、固形分１％の水溶液に調製して、６５０ｎｍの吸光度を測定した。コントロールとして、市販されている牛由来プロテオグリカン水溶液を用いた。
【００３６】
その結果、サメ軟骨の塩化ナトリウム水溶液抽出物（製造例１）の吸光度は０．２０、サメ軟骨のプロテアーゼ処理粉末（製造例４）は０．１９であり、牛由来プロテオグリカン水溶液の０．８１に比べて低く、透明感が高いものであった。
【００３７】
実験例１    細胞増殖促進試験
Ｅａｇｌｅ‘ｓ  ＭＥＭ培養液で最終濃度０．１〜１．０μｇ／ｍＬになるように調製した被験物質溶液をファルコンディッシュ（３５ｍｍφ）に加えた。２．０×１０４のヒト皮膚ケラチノサイト細胞を、１％牛胎児血清を含むＥａｇｌｅ‘ｓ  ＭＥＭ培地で懸濁した溶液１ｍＬを加え、３７℃、５％ＣＯ２条件下で７日間培養後、細胞を剥離し、血球計算板を用いて細胞数を計測した。試料は、製造例１及び４のサメ軟骨抽出物を用い、比較例として市販の牛由来プロテオグリカン水溶液を用いた。コントロールには血清を含まないＥａｇｌｅ‘ｓ  ＭＥＭ培地を用いた。
【００３８】
これらの試験結果を表１に示した。その結果、サメ軟骨の塩化ナトリウム水溶液抽出物（製造例１）及びサメ軟骨のプロテアーゼ処理粉末（製造例４）は、ヒト皮膚ケラチノサイトの細胞増殖効果を示し、比較例の牛由来プロテオグリカン水溶液より優れていた。細胞増殖効果は、メラニンの排出を促進して美白効果が期待でき、また新陳代謝の促進により皮膚に張りを与えるコラーゲン等の合成が促進されることから、シワやタルミの改善効果が期待できる。
【００３９】
【表１】
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【００４０】
実験例２    使用試験１
実施例１、２の化粧水及び比較例１の従来の化粧水を用いて、シミ、ソバカスに悩む女性３０人（２１〜４６才）を対象に１ヶ月間の使用試験を行った。使用後、シミ、ソバカスの改善効果をアンケートにより判定した。
【００４１】
これらの試験結果を表２に示した。その結果、サメ軟骨のプロテオグリカンを含有する皮膚外用剤は、優れたシミ、ソバカスの改善効果を示した。特に、サメ軟骨のプロテオグリカンとＬ−アスコルビン酸マグネシウムを併用した実施例２の化粧水２は、より効果が優れていた。なお、試験期間中、皮膚トラブルは一人もなく、安全性においても問題なかった。また、処方成分の劣化についても問題なかった。
【００４２】
【表２】
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【００４３】
実験例３    使用試験２
実施例１、３の化粧水及び比較例１の従来の化粧水を用いて、女性３０人（２１〜４６才）を対象に１ヶ月間の使用試験を行った。使用後、肌のシワ、タルミの改善効果をアンケートにより判定した。
【００４４】
これらの試験結果を表３に示した。その結果、サメ軟骨の抽出物を含有する皮膚外用剤は優れたシワ、タルミの改善効果を示した。特に、サメ軟骨のプロテオグリカンとチョウジ、シャクヤク、ゲンノショウコの各熱水抽出物の等量混合物を併用した実施例３の化粧水３は、より効果が優れていた。なお、試験期間中、皮膚トラブルは一人もなく、安全性においても問題なかった。また、処方成分の劣化についても問題なかった。
【００４５】
【表３】
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【００４６】
実施例４〜１０についても同様に使用試験を行ったところ、優れたシミ、ソバカス、シワ、タルミ等の改善効果を示した。
【００４７】
【発明の効果】
以上のことから、本発明のサメ軟骨から抽出したプロテオグリカンは、従来の牛由来プロテオグリカンに比べ透明感が高く、しっとりとした使用感に優れ、細胞増殖促進効果を有していた。さらに、本発明の皮膚外用剤は、シミ、ソバカスの改善、シワ、タルミの改善効果を示した。また、Ｌ−アスコルビン酸リン酸マグネシウム等のメラニン生成抑制剤との併用によりシミ、ソバカスの改善効果がさらに優れ、チョウジ、シャクヤク、ゲンノショウコ、高麗人参、ヤクモソウ、オウゴン等の活性酸素消去効果を有する生薬抽出物を併用することによりシワ、タルミの改善効果がさらに優れた皮膚外用剤を提供できた。