(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
以下の構造式で表される化合物。
【化１】
0003832993.tif 000008
【請求項２】
以下の構造式で表される化合物のいずれか１種以上を含む逆転写酵素阻害剤。
【化２】
0003832993.tif 000009
【請求項３】
以下の構造式で表される化合物を含む飲料または食品。
【化３】
0003832993.tif 000010
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は、逆転写酵素阻害活性を有する化合物、逆転写酵素阻害剤およびこれを用いた飲料または食品に関する。特に本発明は、フェノール性化合物にぺルオキシダーゼまたはラッカーゼを反応させることによって製造することができる逆転写酵素阻害活性を有する化合物に関する。
【０００２】
【従来の技術】
逆転写酵素は、レトロウィルス中に含まれているＲＮＡ依存性ＤＮＡポリメラーゼであり、一本鎖ＲＮＡを鋳型として該ＲＮＡと相補的な配列を有するＤＮＡを合成する作用を有する。近年、急速に広まった後天性免疫不全症候群（ＡＩＤＳ）の原因であるヒト免疫不全ウィルス（ＨＩＶ）もレトロウィルスの一種であり、逆転写酵素によって複製を行っている。このため、逆転写酵素を阻害する薬剤を提供すれば、レトロウィルスによるＡＩＤＳなどの疾患を予防または治療し得ることが期待できる。
【０００３】
このような期待のもとに、これまでにも種々の精力的な研究がなされてきた。その結果、今日までに、逆転写酵素阻害活性を有するさまざまな物質が開発されている。例えば、アジドチミジン、ジデオキシシチジン、ジデオキシノシンが逆転写酵素阻害活性を有するＡＩＤＳ治療薬として認可されている。しかしながら、これらの治療薬は製造コストが高く、副作用が強いという問題がある。
【０００４】
これに対処するために、自然界に豊富に存在する植物から副作用の低い逆転写酵素阻害活性成分を安価に取得する試みがなされている。例えば、国際公開公報ＷＯ９５／１９７８２には、ウルシの葉部やハルニレの花部を原料として逆転写酵素阻害剤を調製することが記載されている。この逆転写酵素阻害活性剤は、安全で作用も強いことから有用性が高いものと期待されている。
【０００５】
しかしながら、これらの研究はいずれも逆転写酵素阻害活性が強い化合物を発見することを目的とするものであり、逆転写酵素阻害活性を高める一般的な方法を提供するものではない。このため、これまでは新たな活性化合物を提供するために多大な労力とコストを要しており、ひとつの研究により提供される活性化合物の数も極めて少なかった。
【０００６】
【発明が解決しようとする課題】
本発明は、このような従来技術の問題を解決することを課題とした。すなわち本発明は、逆転写酵素阻害活性を有する化合物および該化合物等を用いた逆転写酵素阻害剤等を提供することを解決すべき課題とした。
【０００７】
【課題を解決するための手段】
これらの課題を解決するために鋭意検討を重ねた結果、本発明者らは、カフェ酸にぺルオキシダーゼまたはラッカーゼを作用させることによって得られた化合物等が、飛躍的に高い逆転写酵素阻害活性を有することを見出して本発明を提供するに至った。
【０００８】
具体的には、以下の発明を提供する。
（１）以下の構造式で表される化合物。
【化４】
0003832993.tif 000002
（２）以下の構造式で表される化合物のいずれか１種以上を含む逆転写酵素阻害剤。
【化５】
0003832993.tif 000003
（３）以下の構造式で表される化合物を含む飲料または食品。
【化６】
0003832993.tif 000004
【０００９】
【発明の実施の形態】
以下において、本発明の内容を詳細に説明する。本発明の逆転写酵素阻害剤は、カフェ酸に過酸化水素の存在下でぺルオキシダーゼを反応させるか、あるいは酸素の存在下でラッカーゼを反応させることにより得られる。
【００１５】
本発明の逆転写酵素阻害剤等の製造に用いるペルオキシダーゼの種類はとくに制限されない。したがって、西洋わさびやインゲンから調製された粗酵素や商業的に入手できるものを用いることができる。フェノール性化合物をペルオキシダーゼと反応させる場合は、過酸化水素の存在下で行う。過酸化水素の濃度は、通常１ｍｇあたり１×１０-5ｍｏｌ〜１×１０-4ｍｏｌとするがこれ以外の濃度であっても本発明は実施しうる。
【００１６】
また、本発明の逆転写酵素阻害剤等の製造に用いるラッカーゼの種類もとくに制限されない。したがって、ウルシなどの植物や各種微生物・菌類から調製された粗酵素や商業的に入手できるものを用いることができる。フェノール性化合物をラッカーゼと反応させる場合は、酸素の存在下で行う。ただし、必ずしも酸素を含む空気を反応混合液中に導入する必要はなく、大気中などの酸素含有雰囲気下で反応させてもよい。
【００１７】
カフェー酸とペルオキシダーゼやラッカーゼとの反応は、緩衝液中で行ってもよい。緩衝液としては、例えばリン酸ナトリウム緩衝液を用いることができる。反応温度は、ペルオキシダーゼまたはラッカーゼが活性を示す温度であれば特に制限されないが、通常は２５℃前後で行う。反応時間を長くしたり、濃度を高めたりすることにより、より活性が高い物質を製造することができる。なお、反応の進行は適当な展開液を用いてＴＬＣにより追跡することができる。
【００１８】
反応生成物は、粗生成物のままでも逆転写酵素阻害活性を示すことから、さらに精製することなくそのまま逆転写酵素阻害剤として用いることができる。しかし、粗生成物の中には逆転写酵素阻害活性が特に強い化合物とそうでない化合物が混在しているのが一般的であることから、特に活性が強い化合物を精製して使用するのが好ましい。精製の方法は、カラムクロマトグラフィーなどの当業者に周知の技術を用いることができる。
【００１９】
本発明の逆転写酵素阻害活性剤を下記に示す。
【化８】
0003832993.tif 000005
【００２２】
本発明の逆転写酵素阻害剤は、目的に応じて様々な態様で使用することができる。例えば、医薬品、食品、飲料として安全かつ有効に使用することができる。たとえば、本発明の逆転写酵素阻害剤を医薬品として使用する場合には、その投与経路によって様々な剤型を選択することができる。本発明の逆転写酵素阻害剤は、経口的または非経口的に投与することができる。例えば、直腸投与、鼻内投与、頬側投与、舌下投与、膣内投与、筋肉内投与、皮下投与、静脈内投与を行なうことが可能である。中でも、本発明の逆転写酵素阻害剤は、経口投与、皮下投与または経皮投与するのが好ましい。
【００２３】
経口投与に適した製剤として、錠剤、カプセル剤、散剤、細粒剤、顆粒剤、液剤、シロップ剤などを挙げることができ、非経口投与に適した製剤として、注射剤、点滴剤、坐剤、吸入剤、経皮吸収剤、経粘膜吸収剤、貼付剤などを挙げることができる。注射剤は、静脈注射、筋肉注射、皮下注射、点滴などのいずれに用いるものであってもよい。本発明の逆転写酵素阻害剤は、特に経口用製剤、注射剤、貼付剤のいずれかであるのが好ましい。
【００２４】
本発明の逆転写酵素阻害剤には、必要に応じて薬理学的および製剤学的に許容しうる添加物を添加することができる。例えば、賦形剤、崩壊剤または崩壊補助剤、結合剤、滑沢剤、コーティング剤、色素、希釈剤、基剤、溶解剤または溶解補助剤、等張化剤、ｐＨ調節剤、安定化剤、噴射剤、粘着剤、湿潤剤などを使用することができる。
【００２５】
これらの添加剤を適宜組み合わせて使用することによって、本発明の逆転写酵素阻害剤にさまざまな付加的機能を持たせることができる。例えば、必要に応じて活性成分が徐放されるように設計することができる。また、体内の必要な個所において活性成分が集中的に放出されるように設計することもできる。このような徐放性製剤やドラッグデリバリーシステムは、製剤業界において周知の方法にしたがって設計のうえ製造することができる。
【００２６】
また、本発明の逆転写酵素阻害剤には、有機物または無機物の担体を使用することができる。そのような担体として、乳糖、でんぷん、植物性および動物性脂肪や油脂を例示することができる。本発明の逆転写酵素阻害剤には、活性物質を０．０１〜１００重量％の範囲内で使用することができる。本発明の逆転写酵素阻害剤は、後天性免疫不全症候群やヒト成人Ｔ細胞白血病の予防および治療剤として有用である。
【００２７】
さらに、本発明の逆転写酵素阻害剤は、他の逆転写酵素阻害剤と組み合わせて使用することもできる。例えば、本発明の逆転写酵素阻害剤と他の逆転写酵素阻害剤とを同時または連続して投与してもよいし、場合によっては一定の間隔をおいて投与してもよい。
【００２８】
本発明の逆転写酵素阻害剤の投与量は、治療または予防の目的、患者の性別、体重、年齢、疾患の種類や程度、剤型、投与経路、投与回数などの種々の条件に応じて適宜決定する。例えば、経口投与する場合には、０．１μｇ〜１００ｍｇ（活性成分乾燥重量）／ｋｇ体重／日で、一日一回から数回に分けて投与することができるが、投与量はこの範囲に限定されるものではない。
【００２９】
本発明の逆転写酵素阻害剤は、各種食品や飲料に含ませることによって、機能性食品および機能性飲料にすることができる。例えば、紅茶、清涼飲料水、ジュース、あめ、澱粉質食品、各種加工食品等に添加することができる。活性物質の添加量は、約０．１〜９９重量％の範囲内に設定することができる。また、必要に応じて、ゲル化剤などを添加して食感を改良してもよい。
【００３０】
【実施例】
以下に実施例および試験例を挙げて本発明をさらに具体的に説明する。以下の実施例に示す材料、試薬、割合、操作等は、本発明の趣旨を逸脱しない限り適宜変更することができる。したがって、本発明の範囲は以下に示す具体例に制限されるものではない。
【００３１】
（実施例１）
カフェー酸１ｇ、０．２Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ６）１００ｍｌ、３％Ｈ2Ｏ2５ｍｌ、西洋わさび由来のペルオキシダーゼ（東洋紡製、１ユニットが１μｌ）１００μｌの混合物を２５℃で１時間インキュベートした。４０℃で減圧蒸留することによって、反応生成物９６０ｍｇを得た。
この反応生成物は、逆転写酵素阻害活性を有する複数のカフェー酸反応生成物を含有するものであった。また、生成した活性化合物の中には、［化５］に記載されていないカフェー酸多量体もあった。以下に、反応生成物の一部を精製した結果を記載する。
【００３２】
まず、反応生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィーにより精製した。溶出溶媒としては、酢酸エチル／メタノール（１：１）から酢酸エチル／メタノール／水（７：２：１）へと段階的に濃度変化させた溶媒を用いた。溶出液は４画分に分けて取得し、３番目の画分から溶媒を留去することによって４５ｍｇの混合物１を得た。
【００３３】
この混合物１を、溶出溶媒としてメタノール／水（１：９）を用いてカラムクロマトグラフィー（ＳｅｐｈａｄｅｘＬＨ２０）により精製した。溶出液は４０画分に分けて取得し、８〜１６番目の画分を集めて４０℃で減圧蒸留することによって混合物２を得た。この混合物２のＬＤ−ＴＯＦマススペクトルと1Ｈ  ＮＭＲスペクトルを図１および図２にそれぞれ示す。これらの結果は、混合物２が３つの化合物（化合物Ａ〜Ｃ）の混合物であることを示唆している。
【００３４】
得られた混合物２を、展開液としてメタノール／水／酢酸（３０：７０：１）を用いてＴＬＣ（ＯＤＳ）で精製した。Ｒｆ値が０．５２の画分と、Ｒｆ値が０．４５の画分をそれぞれ取得した。
Ｒｆ値が０．５２の画分を、展開液として酢酸エチル／メタノール／水（８：２：１）を用いてＴＬＣ（シリカゲル）により精製した。Ｒｆ値が０．３５の画分を取得して、展開液として酢酸エチル／メタノール／水（７：２：１）を用いてカラムクロマトグラフィー（シリカゲル）を行って化合物Ａ（４ｍｇ）を得た。
【００３５】
一方、Ｒｆ値が０．４５の画分については、展開液として酢酸エチル／メタノール／水（７：２：１）を用いてカラムクロマトグラフィー（シリカゲル）を行って化合物Ｂ（３ｍｇ）を得た。
得られた化合物Ａおよび化合物Ｂの1Ｈ  ＮＭＲスペクトルを図３および図４にそれぞれ示す。
図１〜４の結果を総合して、化合物Ａ、ＢおよびＣの構造をそれぞれ以下のように同定した。
【００３６】
【化７】
0003832993.tif 000006
【００３８】
（実施例３）
ペルオキシダーゼの代わりにラッカーゼ（和光純薬（株）製）を用いて実施例１と同じ反応操作を繰り返して行うことにより、逆転写酵素阻害活性を有する混合物８４０ｍｇを得た。この混合物には、量比は異にするものの実施例１で得られた混合物と同じ生成物が含まれていた。混合物のＬＤ−ＴＯＦマススペクトルを図５に示す。
【００３９】
（試験例）
ニワトリ骨髄芽球症ウィルス（ａｖｉａｎｍｙｅｌｏｂｌａｓｏｓｉｓｖｉｒｕｓ）由来の逆転写酵素を用いて、カフェー酸、クロロゲン酸、実施例１で製造した化合物ＡおよびＢのＩＣ50を求め、逆転写酵素阻害活性を比較した。結果は以下の表に示すとおりであった。
【００４０】
【表１】
0003832993.tif 000007
【００４１】
【発明の効果】
上表の結果は、カフェー酸やクロロゲン酸は逆転写酵素阻害活性が極めて弱いにもかかわらず、ペルオキシダーゼで処理した本発明の化合物等は、逆転写酵素阻害活性が飛躍的に高いことを示している。すなわち、本発明の化合物等を用いることによって、フェノール性化合物の顕著に高い逆転写酵素阻害活性を得ることができる。このため、本発明の方法は広範な逆転写酵素阻害剤を簡便かつ迅速に提供しうる点で極めて有用であり、産業上の利用性および研究への応用性が極めて高いものである。
【図面の簡単な説明】
【図１】  実施例１の混合物２のマススペクトル
【図２】  実施例１の混合物２の1Ｈ  ＮＭＲスペクトル
【図３】  実施例１の化合物Ａの1Ｈ  ＮＭＲスペクトル
【図４】  実施例１の化合物Ｂの1Ｈ  ＮＭＲスペクトル
【図５】  実施例３の混合物のマススペクトル
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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