(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
以下の構造式により表される化合物、またはその薬学的に受容可能な塩：
0003833704.tif 000105
ここで、Ｒは、Ｈまたは（Ｃ1−Ｃ8）アルキルであり；
Ｒ1およびＲ2は、独立して、以下からなる群から選択される：Ｈ、（Ｃ1−Ｃ8）アルキル、アリールおよびアリール（Ｃ1−Ｃ8）アルキル；
Ｒ5は−ＯＲ9であり、ここで、Ｒ9は水素または（Ｃ1−Ｃ8）アルキルであり；
ｎは１であり；
ｑは４〜６であり；
Ａ1およびＲ5は一緒になってα−アミノアシル誘導体の基を形成し、ここで、Ａ1は、α−イミノ基にて分子に結合する２価のα−イミノアシル基であり、そしてここで、Ｒ5は、Ａ1のアシル末端に結合し；
Ｒ6は、フェニルメトキシカルボニル、アリールカルボニルまたは−Ａ2−Ｒ7であり、ここで、Ａ2は、アシル末端にて分子に結合する２価のα−イミノアシル基であり、そしてここでＲ7は、該α−イミノ原子に結合したＲ8ＳＯ2−であり、ここでＲ8は、（Ｃ1−Ｃ8）アルキルであり、
該α−アミノアシル誘導体および該α−イミノアシル基は、Ｒキラル形態またはＳキラル形態の天然のαアミノ酸に由来する、
化合物。
【請求項２】
以下の構造式を有する請求項１に記載の化合物であって、
0003833704.tif 000106
ここで、Ｒは、Ｈまたはメチルであり；
Ｒ1およびＲ2は、独立して、以下からなる群から選択される：Ｈ、（Ｃ1−Ｃ8）アルキル、ベンジル、ナフチルメチルおよび置換されたベンジルであり、ここで該置換基は、−ＯＨ、−ＯＣＨ3、−Ｏ−ベンジル、−ＯＳＯ2ＣＦ3、−Ｃ（Ｏ）−ＮＨ2、−Ｃ（Ｏ）ＯＣＨ3、−ＣＯ（Ｏ）Ｈおよびモルホリノカルボニルからなる群より選択され、；
Ｒ5は−ＯＲ9であり、ここで、Ｒ9は水素または（Ｃ1−Ｃ8）アルキルであり；
ｎは１であり；
ｑは４〜６であり；
Ａ1およびＲ5は一緒になって形成された以下：
0003833704.tif 000107
であり、
Ｒ6は、フェニルメトキシカルボニル、−Ｃ（Ｏ）−ＣＨ（ＮＨＳＯ2ＣＨ3）−（ＣＨ2）4−ＮＨ2、−Ｃ（Ｏ）−ＣＨ（ＮＨＳＯ2ＣＨ3）−（ＣＨ2）4−ＮＨ−Ｃ（Ｏ）−Ｏ−ＣＨ2−フェニル、
以下
0003833704.tif 000108
である、
化合物。
【請求項３】
以下からなる群から選択される請求項１に記載の化合物：Ｎ−［［１−［［ヒドロキシ［２−フェニル−１（Ｒ）−［［（フェニルメトキシ）カルボニル］アミノ］エチル］−ホスフィニル］メチル］シクロペンチル］カルボニル］−Ｌ−トリプトファン；
Ｎ−［［１−［［ヒドロキシ［２−（４−メトキシフェニル）−１（Ｒ，Ｓ）−［［（フェニルメトキシ）カルボニル］アミノ］エチル］ホスフィニル］メチル］シクロペンチル］カルボニル］−Ｌ−トリプトファン；
Ｎ−［［１−［［ヒドロキシ［２−フェニル−１（Ｒ）−［［（フェニルメトキシ）カルボニル］アミノ］エチル］ホスフィニル］メチル］シクロペンチル］カルボニル］−Ｌ−チロシン；
Ｎ−［［１−［［ヒドロキシ［２−フェニル−１（Ｒ）−［［２（Ｓ）−［（メチルスルホニル）アミノ］−１−オキソ−６−［［（フェニルメトキシ）カルボニル］アミノ］ヘキシル］アミノ］エチル］ホスフィニル］メチル］シクロペンチル］カルボニル］−Ｌ−トリプトファン；
Ｎ−［［１−［［ヒドロキシ［２−（４−メトキシフェニル）−１（Ｒ，Ｓ）−［［２（Ｓ）−［（メチルスルホニル）アミノ］−１−オキソ−６−［［（フェニルメトキシ）カルボニル］アミノ］ヘキシル］アミノ］エチル］ホスフィニル］メチル］シクロペンチル］カルボニル］−Ｌ−トリプトファン；
Ｎ−［［１−［［ヒドロキシ［２−（４−ヒドロキシフェニル）−１（Ｒ，Ｓ）−［［２（Ｓ）−［（メチルスルホニル）アミノ］−１−オキソ−６−［［（フェニルメトキシ）カルボニル］アミノ］ヘキシル］アミノ］エチル］ホスフィニル］メチル］シクロペンチル］カルボニル］−Ｌ−トリプトファン；
Ｎ−［［１−［［ヒドロキシ［２−フェニル−１（Ｒ）−［［２（Ｓ）−［（メチルスルホニル）アミノ］−１−オキソ−６−［［（フェニルメトキシ）カルボニル］アミノ］ヘキシル］アミノ］エチル］ホスフィニル］メチル］シクロペンチル］カルボニル］−Ｌ−チロシン；
Ｎ−［［１−［［ヒドロキシ−［１（Ｒ）−［［６−アミノ−２（Ｓ）−［（メチルスルホニル）アミノ］−１−オキソヘキシル］アミノ］−２−フェニルエチル］ホスフィニル］メチル］シクロペンチル］カルボニル］−Ｌ−トリプトファンリチウム塩；
Ｎ−［［１−［［ヒドロキシ−［１（Ｒ，Ｓ−［［６−アミノ−２（Ｓ）−［（メチルスルホニル）アミノ］−１−オキソヘキシル］−アミノ］−２−（４−メトキシフェニル）エチル］ホスフィニル］メチル］シクロペンチル］カルボニル］−Ｌ−トリプトファンリチウム塩；
Ｎ−［［１−［［ヒドロキシ−［１（Ｒ，Ｓ）−［［６−アミノ−２（Ｓ）−［（メチルスルホニル）アミノ］−トオキソヘキシル］−アミノ］−２−（４−ヒドロキシフェニル）エチル］ホスフィニル］メチル］シクロペンチル］カルボニル］−Ｌ−トリプトファンリチウム塩；
Ｎ−［［１−［［ヒドロキシ−［１（Ｒ）−［［６−アミノ−２（Ｓ）−［（メチルスルホニル）アミノ］−１−オキソヘキシル］−アミノ］−２−フェニルエチル］ホスフィニル］メチル］シクロペンチル］カルボニル］−Ｌ−チロシンリチウム塩；
Ｎ−［［１−［［ヒドロキシ−［１（Ｒ）−［［４−（アミノメチル）ベンゾイル］アミノ］−２−フェニルエチル］ホスフィニル］メチル］シクロペンチル］カルボニル］−Ｌ−トリプトファン；
Ｎ−［［１−［［ヒドロキシ−［１（Ｒ）−［［４−ニトロベンゾイル］アミノ］−２−フェニルエチル］ホスフィニル］メチル］シクロペンチル］カルボニル］−Ｌ−トリプトファン；
Ｎ−［［１−［［ヒドロキシ［２−［４−（４−モルホリンカルボニル）フェニル］−１（Ｒ，Ｓ）−［［（フェニルメトキシ）カルボニル］アミノ］エチル］−ホスフィニル］メチル］シクロペンチル］カルボニル］−Ｌ−トリプトファン；およびＮ−［［１−［［ヒドロキシ［２−（４−ヒドロキシフェニル）−１（Ｒ，Ｓ）−［［（フェニルメトキシ）カルボニル］アミノ］エチル］−ホスフィニル］メチル］シクロペンチル］カルボニル］−Ｌ−トリプトファン。
【請求項４】
エンドセリン変換酵素を阻害する処置が必要な哺乳類において、該エンドセリン変換酵素を阻害するに有効な量の請求項１、２または３のいずれかに記載の化合物を、薬学的に受容可能なキャリアー中に含む薬学的組成物。
【請求項５】
以下の構造式により表される化合物、またはその薬学的に受容可能な塩の、エンドセリン変換酵素を阻害する薬剤を調製するための使用：
0003833704.tif 000109
ここで、Ｒは、Ｈまたは（Ｃ1−Ｃ8）アルキルであり；
Ｒ1およびＲ2は、独立して、以下からなる群から選択される：Ｈ、（Ｃ1−Ｃ8）アルキル、アリールおよびアリール（Ｃ1−Ｃ8）アルキル；
Ｒ3およびＲ4は、独立して、Ｈ，アルキルおよびＣ5−Ｃ7環からなる群より選択され；
Ｒ5は−ＯＲ9であり、ここで、Ｒ9は水素または（Ｃ1−Ｃ8）アルキルであり；
ｎは１であり；
ｑは４〜６であり；
Ａ1およびＲ5は一緒になってα−アミノアシル誘導体の基を形成し、ここで、Ａ1は、α−イミノ基にて分子に結合する２価のα−イミノアシル基であり、そしてここで、Ｒ5は、Ａ1のアシル末端に結合し；
Ｒ6は、フェニルメトキシカルボニル、アリールカルボニルまたは−Ａ2−Ｒ7であり、ここで、Ａ2は、アシル末端にて分子に結合する２価のα−イミノアシル基であり、そしてここでＲ7は、該α−イミノ原子に結合したＲ8ＳＯ2−であり、ここでＲ8は、（Ｃ1−Ｃ8）アルキルであり、
該α−アミノアシル誘導体および該α−イミノアシル基は、Ｒキラル形態またはＳキラル形態の天然のαアミノ酸に由来する、
使用。
【請求項６】
前記化合物が：
以下からなる群から選択される化合物：Ｎ−［［１−［［ヒドロキシ［２−フェニル−１（Ｒ）−［［（フェニルメトキシ）カルボニル］アミノ］エチル］−ホスフィニル］メチル］シクロペンチル］カルボニル］−Ｌ−トリプトファン；
Ｎ−［［１−［［ヒドロキシ［２−（４−メトキシフェニル）−１（Ｒ，Ｓ）−［［（フェニルメトキシ）カルボニル］アミノ］エチル］ホスフィニル］メチル］シクロペンチル］カルボニル］−Ｌ−トリプトファン；
Ｎ−［［１−［［ヒドロキシ［２−フェニル−１（Ｒ）−［［（フェニルメトキシ）カルボニル］アミノ］エチル］ホスフィニル］メチル］シクロペンチル］カルボニル］−Ｌ−チロシン；
Ｎ−［［１−［［ヒドロキシ［２−フェニル−１（Ｒ）−［［２−（Ｓ）−［（メチルスルホニル）アミノ］−１−オキソ−６−［［（フェニルメトキシ）カルボニル］アミノ］ヘキシル］アミノ］エチル］ホスフィニル］メチル］シクロペンチル］カルボニル］−Ｌ−トリプトファン；
Ｎ−［［１−［［ヒドロキシ［２−（４−メトキシフェニル）−１（Ｒ，Ｓ）−［［２（Ｓ）−［（メチルスルホニル）アミノ］−１−オキソ−６−［［（フェニルメトキシ）カルボニル］アミノ］ヘキシル］アミノ］エチル］ホスフィニル］メチル］シクロペンチル］カルボニル］−Ｌ−トリプトファン；
Ｎ−［［１−［［ヒドロキシ［２−（４−ヒドロキシフェニル）−１（Ｒ，Ｓ）−［［２（Ｓ）−［（メチルスルホニル）アミノ］−１−オキソ−６−［［（フェニルメトキシ）カルボニル］アミノ］ヘキシル］アミノ］エチル］ホスフィニル］メチル］シクロペンチル］カルボニル］−Ｌ−トリプトファン；
Ｎ−［［１−［［ヒドロキシ［２−フェニル−１（Ｒ）−［［２（Ｓ）−［（メチルスルホニル）アミノ］−１−オキソ−６−［［（フェニルメトキシ）カルボニル］アミノ］ヘキシル］アミノ］エチル］ホスフィニル］メチル］シクロペンチル］カルボニル］−Ｌ−チロシン；
Ｎ−［［１−［［ヒドロキシ−［１（Ｒ）−［［６−アミノ−２（Ｓ）−［（メチルスルホニル）アミノ］−１−オキソヘキシル］アミノ］−２−フェニルエチル］ホスフィニル］メチル］シクロペンチル］カルボニル］−Ｌ−トリプトファンリチウム塩；
Ｎ−［［１−［［ヒドロキシ−［１（Ｒ，Ｓ）−［［６−アミノ−２（Ｓ）−［（メチルスルホニル）アミノ］−１−オキソヘキシル］−アミノ］−２−（４−メトキシフェニル）エチル］ホスフィニル］メチル］シクロペンチル］カルボニル］−Ｌ−トリプトファンリチウム塩；
Ｎ−［［１−［［ヒドロキシ−［１（Ｒ，Ｓ）−［［６−アミノ−２（Ｓ）−［（メチルスルホニル）アミノ］−トオキソヘキシル］−アミノ］−２−（４−ヒドロキシフェニル）エチル］ホスフィニル］メチル］シクロペンチル］カルボニル］−Ｌ−トリプトファンリチウム塩；
Ｎ−［［１−［［ヒドロキシ−［１（Ｒ）−［［６−アミノ−２（Ｓ）−［（メチルスルホニル）アミノ］−１−オキソヘキシル］−アミノ］−２−フェニルエチル］ホスフィニル］メチル］シクロペンチル］カルボニル］−Ｌ−チロシンリチウム塩；
Ｎ−［［１−［［ヒドロキシ−［１（Ｒ）−［［４−（アミノメチル）ベンゾイル］アミノ］−２−フェニルエチル］ホスフィニル］メチル］シクロペンチル］カルボニル］−Ｌ−トリプトファン；
Ｎ−［［１−［［ヒドロキシ−［１（Ｒ）−［［４−ニトロベンゾイル］アミノ］−２−フェニルエチル］ホスフィニル］メチル］シクロペンチル］カルボニル］−Ｌ−トリプトファン；
Ｎ−［［１−［［ヒドロキシ［２−［４−（４−モルホリンカルボニル）フェニル］−１（Ｒ，Ｓ）−［［（フェニルメトキシ）カルボニル］アミノ］エチル］−ホスフィニル］メチル］シクロペンチル］カルボニル］−Ｌ−トリプトファン；およびＮ−［［１−［［ヒドロキシ［２−（４−ヒドロキシフェニル）−１（Ｒ，Ｓ）−［［（フェニルメトキシ）カルボニル］アミノ］エチル］−ホスフィニル］メチル］シクロペンチル］カルボニル］−Ｌ−トリプトファン、ならびにＮ−［２−［［ヒドロキシ［１−［［２（Ｓ）−［（メチルスルホニル）アミノ］−１−オキソ−６−［［フェニルメトキシ）カルボニル］アミノ］ヘキシル］アミノ］−２−（２ーナフタレニル）エチル］ホスフィニル］メチル］−４−メチル−１−オキソペンチル］−Ｌ−トリプトファン二ナトリウム塩、およびＮ−［２−［［ヒドロキシ［３−メチル−１−［［２−［（メチルスルホニル）アミノ］−１−オキソ−６−［［フェニルメトキシ）−カルボニル］アミノ］ヘキシル］アミノ］ブチル］ホスフィニル］メチル］−４−メチル−１−オキソペンチル］−Ｌ−トリプトファン二ナトリウム塩からなる群から選択される、請求項５に記載の使用。
【発明の詳細な説明】
発明の背景
本発明は、エンドセリン（endothelin）変換酵素の阻害剤としてのホスフィン酸誘導体の使用、新規ホスフィン酸誘導体、および該新規化合物を含有する薬学的組成物に関する。
エンドセリンは、ペプチドのファミリーであり、エンドセリン-1、エンドセリン-2、エンドセリン-3（ET-1、ET-2、およびET-3）を包含し、これらは強力な血管収縮能力、および分裂促進能力を示す。ET-1（その前駆体ビッグ-エンドセリン-1（BET-1）より100倍強力である）は、BET-1からエンドセリン変換酵素（ECE）により遊離すると考えられている。S.Bertenshawら、J. Med. Chem.，36（1993）、173-176頁を参照のこと。エンドセリンレセプターブロッカーは、腎臓病の進行における傷害に対して保護すると報告されている。A.Benigniら、Kidney International、44（1993）、440-444頁を参照のこと。それゆえ、ECEの阻害（これはまた、エンドセリンのレセプターに対して、エンドセリンを利用できなくする）は、エンドセリンの過剰な産生により特徴付けられる疾患状態を処置し得る。従って、本発明のホスフィン酸誘導体は、心筋虚血、うっ血性心不全、不整脈、高血圧、肺高血圧、喘息、大脳欠陥痙攣、クモ膜下出血、子癇前症、創傷治癒、月経制御、急性／慢性腎不全、腎臓虚血、腎臓糸球体硬化症、アテローム硬化症、バーガー病、タカヤス動脈炎、糖尿病合併症、肺ガン、胃腸疾患、内毒素ショック、および敗血症の治療に有用である。
発明の要旨
エンドセリン変換酵素阻害剤として使用される化合物またはその薬学的に受容可能な塩は、式Ｉにより表される：
0003833704.tif 000002
ここで、Ｒは、Ｈ、（Ｃ1−Ｃ8）アルキル、またはアルカノイルオキシメチレンであり；
Ｒ1、Ｒ2、Ｒ3およびＲ4は、独立して、以下からなる群から選択される：Ｈ、（Ｃ1−Ｃ8）アルキル、（Ｃ1−Ｃ8）アルケニル、（Ｃ1−Ｃ8）アルケニル（Ｃ1−Ｃ8）アルキル、アリール、アリール（Ｃ1−Ｃ8）アルキル、ヘテロアリール、ヘテロアリール（Ｃ1−Ｃ8）アルキル、ヒドロキシ（Ｃ1−Ｃ8）アルキル、カルボキシ（Ｃ1−Ｃ8）アルキル、チオ（Ｃ1−Ｃ8）アルキル、（Ｃ1−Ｃ6）アルコキシチオ（Ｃ1−Ｃ8）アルキル、アミノ（Ｃ1−Ｃ8）アルキル、（Ｃ1−Ｃ8）アルキルアミノ（Ｃ1−Ｃ8）アルキル、シクロアルキル−置換（Ｃ1−Ｃ8）アルキル、およびヘテロシクロアルキル；あるいは、Ｒ1およびＲ2は、これらを結合する炭素と共に一緒になって、３〜８員のシクロアルキル環を形成し、そしてＲ3およびＲ4は上記で定義された通りである；あるいはＲ3およびＲ4は、これらを結合する炭素と共に一緒になって、３〜７員のシクロアルキル環を形成し、そしてＲ1およびＲ2は上記で定義された通りである；あるいはＲ1およびＲ2は一緒に、ならびにＲ3およびＲ4は一緒になって、各々上記のシクロアルキル環を形成し；
Ｒ5は−ＯＲ9または−ＮＨＲ9であり、ここで、Ｒ9は水素または（Ｃ1−Ｃ8）アルキルであり；
ｎは０または１であり；
Ａ1はｐ−アミノベンゾイルまたはｐ−アミノベンゼンスルホニルであり、あるいはＡ1およびＲ5は共にα−アミノアシル誘導体の基を形成し、ここで、Ａ1は、α-イミノ基で分子に結合する２価のα−イミノアシル基であり、そしてここで、Ｒ5は、Ａ1のアシル末端に結合し；
Ｒ6は、フェニルメトキシカルボニル、アリールカルボニル、ヘテロアリールカルボニル、または−Ａ2−Ｒ7であり、ここで、Ａ2は、アシル末端で分子に結合する２価のα−イミノアシル基であり、そしてここでＲ7は、Ｈ、Ｒ8ＯＣＯ−、Ｒ8ＳＯ2−、およびＲ8ＮＨＣＯ−からなる群から選択されるα−イミノ原子上の置換基であり、ここでＲ8は、アリール、アリールメチル、または（Ｃ1−Ｃ8）アルキルである。
本発明の新規化合物は、構造式IIに表される化合物またはその薬学的に受容可能な塩である：
0003833704.tif 000003
ここで、Ｒは、Ｈ、（Ｃ1−Ｃ8）アルキル、またはアルカノイルオキシメチレンであり；
Ｒ1およびＲ2は、独立して、以下からなる群から選択される：Ｈ、（Ｃ1−Ｃ8）アルキル、（Ｃ1−Ｃ8）アルケニル、（Ｃ1−Ｃ8）アルケニル（Ｃ1−Ｃ8）アルキル、アリール、アリール（Ｃ1−Ｃ8）アルキル、ヘテロアリール、ヘテロアリール（Ｃ1−Ｃ8）アルキル、ヒドロキシ（Ｃ1−Ｃ8）アルキル、カルボキシ（Ｃ1−Ｃ8）アルキル、チオ（Ｃ1−Ｃ8）アルキル、（Ｃ1−Ｃ6）アルコキシチオ（Ｃ1−Ｃ8）アルキル、アミノ（Ｃ1−Ｃ8）アルキル、（Ｃ1−Ｃ8）アルキルアミノ（Ｃ1−Ｃ8）アルキル、シクロアルキル−置換（Ｃ1−Ｃ8）アルキル、およびヘテロシクロアルキル；あるいは、Ｒ1およびＲ2は、これらを結合する炭素と共に一緒になって、３〜８員のシクロアルキル環を形成する；
Ｒ5は−ＯＲ9または−ＮＨＲ9であり、ここで、Ｒ9は水素または（Ｃ1−Ｃ8）アルキルであり；
ｎは０または１であり；
ｑは４〜６であり；
Ａ1はｐ−アミノベンゾイルまたはｐ−アミノベンゼンスルホニルであり、あるいはＡ1およびＲ5は共にα−アミノアシル誘導体の基を形成し、ここで、Ａ1は、α-イミノ基で分子に結合する２価のα−イミノアシル基であり、そしてここで、Ｒ5は、Ａ1のアシル末端に結合し；
Ｒ6は、フェニルメトキシカルボニル、アリールカルボニル、ヘテロアリールカルボニル、または−Ａ2−Ｒ7であり、ここで、Ａ2は、アシル末端で分子に結合する２価のα−イミノアシル基であり、そしてここでＲ7は、Ｈ、Ｒ8ＯＣＯ−、Ｒ8ＳＯ2−、およびＲ8ＮＨＣＯ−からなる群から選択されるα−イミノ原子上の置換基であり、ここでＲ8は、アリール、アリールメチル、または（Ｃ1−Ｃ8）アルキルである。
式Ｉの好ましい化合物は、Ａ1−Ｒ5が、L-トリプトファニル、L-チロシニル、またはL-Ｏ-メチルチロシニルである化合物である。Ｒ1およびＲ2が、独立して、Ｈ、アリールアルキル、分枝アルキル、およびシクロアルキルからなる群から選択される式Ｉの化合物もまた、好ましい。特に好ましくは、Ｒ1およびＲ2の一方が水素であり、そして他方がベンジル、2-ナフチルメチル、または分枝アルキルである化合物である。
好ましい化合物の他のグループは、Ｒ3およびＲ4が、独立して、水素およびアルキルからなる群から選択され、好ましくはアルキル基はイソ-プロピルおよびイソ-ブチルであるか、あるいはＲ3およびＲ4が共に、それらを結合する炭素と一緒になって、５員または７員のシクロアルキル環を形成するものである。
式Ｉの好ましい化合物においては、ｎは１である。Ｒが水素であり、そしてＲ5がヒドロキシである式Ｉの化合物もまた、好ましい。
式Ｉの好ましい化合物のさらに別のグループは、Ｒ6がフェニルメトキシカルボニルまたはＡ2−Ｒ7であるものである。ここでＡ2は、ＲまたはＳキラル形態の天然α-アミノ酸（好ましくは、リジン、ε-CBZリジン、アルギニン、イソロイシン、ロイシン、バリン、フェニルアラニン、アラニン、グリシン、またはチロシン）から誘導されるα-イミノアシル基であり、そしてＲ7はベンジルオキシカルボニルまたはメタンスルホニルである。
同様に、式IIの好ましい化合物は、Ａ1−Ｒ5が、L-トリプトファニル、L-チロシニル、またはL-Ｏ-メチルチロシニルである化合物である。
Ｒ1およびＲ2が、独立して、Ｈ、アリールアルキル、および分枝アルキルからなる群から選択される式IIの化合物もまた、好ましい。特に好ましくは、Ｒ1およびＲ2の一方が水素であり、そして他方がベンジル、2-ナフチルメチル、または分枝アルキルである化合物である。
式IIの好ましい化合物においては、ｎは１である。ｑについて好ましい値は４である。Ｒが水素であり、そしてＲ5がヒドロキシである式IIの化合物もまた、好ましい。
式IIの好ましい化合物のさらに別のグループは、Ｒ6がフェニルメトキシカルボニルまたはＡ2−Ｒ7であるものである。ここでＡ2は、ＲまたはＳキラル形態の天然α-アミノ酸（好ましくは、リジン、ε-CBZリジン、アルギニン、イソロイシン、ロイシン、バリン、フェニルアラニン、アラニン、グリシン、またはチロシン）から誘導されるα-イミノアシル基であり、そしてＲ7はベンジルオキシカルボニルまたはメタンスルホニルである。
本発明はまた、式Ｉの化合物のエンドセリン変換酵素阻害剤としての使用に関し、特に式IIの化合物のエンドセリン変換酵素阻害剤としての使用に関する。
他の局面において、本発明は、式IIの化合物を薬学的に受容可能なキャリヤ中に含有する薬学的組成物に関する。
【図面の簡単な説明】
図１および図２は、麻酔されたラットのBET-1に対する血圧上昇応答についての本発明の２つの化合物（以下に示される）の効果を示す図である。
図３、４、５、および６は、単離灌流されたモルモットの肺における虚血／低酸素症誘発されたET-1放出についての本発明の４つの化合物（以下に示される）の効果を示す図である。
詳細な説明
本明細書で使用される用語「２価のα-イミノアシル基」とは、構造式
0003833704.tif 000004
を有する基をいう。同様に、用語「α-アミノアシル誘導体の基」は、構造式
0003833704.tif 000005
の基をいう。α-イミノアシル基およびα-アミノアシル誘導体は、ＲまたはＳキラル形態の天然α-アミノ酸またはエステルから誘導される。
本明細書で使用される用語「アルキル」は、１個〜８個の炭素原子の直鎖または分枝アルキル鎖を意味する。「アルコキシ」は、１個〜６個の炭素原子を有するアルコキシ基を意味する。「アルケニル」は、１つまたはそれ以上の二重結合を鎖中に共役または非共役にて有する１個〜８個の炭素原子の直鎖または分枝鎖を意味する。
「シクロアルキル」は、３個〜６個の炭素原子の飽和炭素環式環を意味する。「ヘテロシクロアルキル」は、３員〜６員の飽和環を意味し、ここで、１個〜３個の環の構成要素は、独立して、イオウ、酸素、および窒素からなる群から選択され得、例えば、テトラヒドロフラニル、チオピラニル、モルホリニル、ピロリジニル、ピペリジニル、またはテトラヒドロチオフェニルである。
「アルカノイルオキシメチレン」は、式 低級アルキル-C（O）-O-CH2-を有する基を意味する。
本明細書で使用される用語「アリール」は、フェニル、インダニル、ナフチル、またはテトラヒドロナフチル環を意味し、Ｈ、アルキル、-OH、アルコキシ、カルボキシ、ハロ、アミノアルキル、カルバミル、-NO2、トリフルオロメチル、モルホリンカルボニル、フェニル、フェノキシ、ベンゾイルオキシ、およびフェニルチオからなる群から選択される１つまたはそれ以上の置換基を有するか、またはフェニル環上の隣接アルキルおよびアルコキシ置換基は、５員環または６員環（例えば、ジヒドロベンゾ−フラニル）を形成する。
「ヘテロアリール」は、フラニル、チエニル、ピロリル、またはそれらのベンゾ縮合形態（例えば、インドリルおよびベンゾフラニル）を表し、必要に応じて、アリールについて記載したように置換される。
「ハロ」は、フッ素、塩素、臭素、またはヨウ素基をいう。
本発明の化合物は、少なくとも１つの不斉炭素原子を有し、それゆえ、全ての異性体（ジアステレオマーおよび回転異性体を含む）は、本発明の一部として意図される。本発明は、両方とも純粋な形態および混合物（ラセミ混合物を含む）でのｄおよびｌ異性体を含む。異性体は、通常の技術を用いて、エナンチオマーの出発物質を反応させることによって、あるいは式ＩまたはIIの化合物の異性体を分離することによって調製され得る。異性体はまた、例えば、二重結合が存在する場合には、幾何異性体を含み得る。このような幾何異性体の全ても、本発明について意図される。
当業者は、式ＩまたはIIのいくつかの化合物について、一方の異性体が他方の異性体よりも薬理学的に活性が大きいことを示すということを理解する。
アミノ基を有する本発明の化合物は、有機および無機酸と薬学的に受容可能な塩を形成し得る。塩形成のための適切な酸の例には、塩酸、硫酸、リン酸、酢酸、クエン酸、シュウ酸、マロン酸、サリチル酸、リンゴ酸、フマル酸、コハク酸、アスコルビン酸、マレイン酸、メタンスルホン酸、ならびに当業者に周知の他の鉱酸およびカルボン酸がある。塩は、遊離塩基形態と、塩を生成するに充分な量の所望の酸とを接触させることにより調製される。遊離塩基形態は、塩を適切な塩基性希釈水溶液（例えば、希釈NaHCO3水溶液）で処理することにより再生成され得る。遊離塩基形態は、特定の物理的性質（例えば、極性溶媒中の溶解度）において各塩形態といくぶん異なるが、塩は、その他の点では、本発明の目的においてその各遊離塩基形態と等価である。
酸性である本発明の化合物は、無機および有機塩基と薬学的に受容可能な塩を形成する。このような塩の例には、アルカリ金属塩およびアルカリ土類金属塩があり、例えば、リチウム塩、ナトリウム塩、カリウム塩、カルシウム塩、アルミニウム塩、金塩、および銀塩がある。薬学的に受容可能なアミンにより形成される塩もまた含まれ、例えば、アンモニア塩、アルキルアミン塩、ヒドロキシアルキルアミン塩、N-メチルグルカミンなどがある。
式ＩおよびIIの化合物は、当業者に公知の方法によって、市販の出発物質を用いて調製されるか、または公知の方法により容易に調製される。以下の説明で、本発明の化合物を調製する２つのプロセスを例示する。
プロセスＡ：
Ｒ3およびＲ4の一方が水素であり、そして他方が上記で定義される通りであり、そして残りの変数が上記で定義される通りである式Ｉの化合物は、以下の反応スキーム（ここでは、Ｒ3は水素として例示される）に従って調製され得る。
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ホスフィン酸２（ここで、Ｒ1、Ｒ2およびＲは、上記で定義された通りであり、そしてCbzはベンジルオキシカルボニルである）は公知化合物であり、そしてカルボニル化合物１から公知の方法により調製され得る。あるいは、アミノ基は、他の適切な保護基（例えば、tert-ブトキシカルボニル）により保護され得る。ホスフィン酸２を、共役付加生成物３（ここで、ｎは１である）に、公知の方法によりまたは公知方法の改変により転換する。公知の方法では、ホスフィン酸２を、１当量の適切な塩基（例えば、NaH）で脱プロトン化し、そしてテトラヒドロフラン（THF）のような溶媒中でアクリレート７と反応させる（ここで、Ｒ10は、カルボン酸保護基であり、例えば、メチル、エチル、ベンジル、2-トリメチルシリルエチル、または3,4-ジメトキシベンジルである）。化合物３は脱保護されて、標準的な方法論を用いて酸４となる。酸４は、適切なカップリング剤（例えば、1,1'-カルボニルジイミダゾール）を用いて有機溶媒（例えば、ジメチルホルムアミド（DMF））中で、アミノ酸エステル（例えば、トリプトファンメチルエステル）とカップリングされ、化合物５となる。化合物５は、標準ペプチドカップリング手順および必要ならば保護基操作により化合物Ｉにさらに合成され得る。
プロセスＢ：
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ホスフィン酸エステル２ａ（ここで、Ｒ、Ｒ1、Ｒ2、Ｒ3、およびＲ4は上記で定義された通りである）は、適切な塩基（例えば、リチウムジイソプロピルアミド（LDA））で適切な溶媒（例えば、THF）中にて低温で脱プロトン化され、次いで式６のトリフレート（Tf）と反応され、化合物３ａとなる。化合物３ａは、プロセスＡに記載した方法により式Ｉの化合物にさらに合成され得る。
上記プロセスの出発物質は当該分野で公知であるか、あるいは公知方法により調製され得る。これらのいくつかは、以下の調製例に例示される。
本発明は、ECEを阻害する方法に関し、この方法は、このような処置が必要な哺乳類に、本発明の式Ｉの化合物のECE阻害に有効な量を投与する工程を包含する。式Ｉの化合物は、好ましくは、薬学的に受容可能なキャリヤ中にて、特に経口投与に適切な薬学的キャリヤ中にて投与される。
処置局面の方法に加えて、式IIの新規化合物もまた特許請求され、それゆえ、本発明はまた、式IIの化合物のECE阻害に有効な量を薬学的に受容可能なキャリヤ中に含有する薬学的組成物に関する。
式ＩまたはIIの化合物は、任意の通常の経口投薬形態（例えば、カプセル剤、錠剤、散剤、カシェ剤、懸濁剤または水剤）で投与され得る。処方物および薬学的組成物は、従来の薬学的に受容可能な賦形剤および添加物ならびに従来の技術を用いて調製し得る。このような薬学的に受容可能な賦形剤および添加物としては、非毒性の相溶性の充填剤、結合剤、崩壊剤、緩衝液、防腐剤、抗酸化剤、滑沢剤、調味剤、増粘剤、着色剤、乳化剤などが挙げられる。式Ｉの化合物を含有する同様の薬学的組成物もまた、調製され得る。
式ＩまたはIIの化合物の１日のECE阻害剤の用量は、１日当たり約0.1から約100mg/kg体重、好ましくは約10mg/kgである。従って、70kgの平均体重に対しては、用量レベルは１日当たり約７mgから約７ｇの薬剤、好ましくは約700mgの薬剤であり、これらは単回または2-4回に分けて投与される。しかし、正確な用量は、かかっている臨床医により決定され、そして投与される化合物の効力、患者の年齢、体重、状態および応答に依存する。
以下に、出発物質の調製例および式ＩおよびIIの化合物を得るためのプロセスの実施例を示す。調製例および実施例において、以下の略語が用いられる：R.T.は室温である。飽和（sat'd）は飽和（satureted）である。aq.は水溶液である。EtOAcは酢酸エチルである。Et2Oはジエチルエーテルである。EDCは1-（3-ジメチルアミノプロピル）-3-エチル-カルボジイミド塩酸塩である。HOBTは1-ヒドロキシベンゾトリアゾール水和物である。HOAcは酢酸である。Msはメタンスルホニルである。Cbzはカルボベンジルオキシである。そしてBocはt-ブトキシカルボニルである。
調製例１
4-（（1,1-ジメチルエトキシカルボニル）アミノメチル）安息香酸
1M NaOH（50ml）、1,4-ジオキサン（100ml）、およびH2O（50ml）中の4-（アミノメチル）安息香酸（7.6ｇ、50mmol）の氷冷溶液に、ジ-t-ブチルジカーボネート（12.0ｇ、55mmol）を迅速に撹拌しながら添加する。混合物を１時間撹拌し、次いでエバポレートして、体積を減らす。得られた水溶液を氷浴中で冷却し、EtOAc（250ml）の層で覆い、そして濃HClで酸性化する。水層をEtOAc（2×100ml）で抽出し、一緒にしたEtOAc層を飽和NaClで洗浄し、乾燥（MgSO4）し、濾過し、そしてエバポレートして乾燥する。残渣を再結晶（EtOAc/ヘキサン）して表題化合物（7.78ｇ、62％）を針状結晶として得る。
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調製例２
（4-メトキシフェニル）エタナール
トルエン（250ml）中のメチル4-メトキシフェニルアセテート（45.0ｇ）の-78℃まで冷却した撹拌溶液に、DIBALHの1.5Mトルエン（167ml）溶液を５時間かけて添加し、反応温度を-78℃で保持する。さらに0.5時間撹拌し、次いで1:1の氷／1M HCl（1500ml）およびEt2O（500ml）に注ぐ。スラリーを１時間撹拌し、層を分離し、そして水層をEt2O（2×500ml）で抽出する。一緒にした有機層を飽和NaHCO3（500ml）および飽和NaClで洗浄し、乾燥（MgSO4）し、濾過し、そしてエバポレートしてオイルを得る。バルブ−バルブ蒸留（bulb-to-bulb distillation）（100-130℃、１mmHg）を行い、表題化合物（33.9ｇ、90％）を無色液体として得る。
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適切な出発物質、ならびに本質的に同様の手順を用いて、以下の化合物を調製する：
調製例２Ａ：  ［（4-フェニルメトキシ）フェニル］エタナール
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調製例３
N-（トリフェニルメチル）-（4-メトキシフェニル）アセタールジミン
CH2Cl2（100ml）中の（4-メトキシフェニル）エタナール（28.92ｇ、0.193mol）およびMgSO4（20ｇ）の撹拌スラリーに、トリチルアミン（50.0ｇ、0.193mol）のCH2Cl2（180ml）溶液を10分かけて添加する。１時間後、混合物を濾過し、そして濾液をエバポレートして乾燥し、表題化合物を粘稠なオイルとして得る。
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適切な出発物質、ならびに本質的に同様の手順を用いて、以下の化合物を調製する。
調製例３Ａ：  N-（トリフェニルメチル）-［（4-フェニルメトキシ）フェニル］アセタールジミン
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調製例４
1-アミノ-2-（4-メトキシ）フェニルエチル ホスフィン酸
適切な（neat）ビス（トリメチルシリル）ホスホナイトを、ヘキサメチルジシラザン（61ml、0.29mol）およびホスフィン酸アンモニウム（24ｇ、0.29mol）から調製し、そしてCH2Cl2（100ml）で希釈する。CH2Cl2（250ml）中の調製例３の撹拌氷冷溶液にN2下で、ビス（トリメチルシリル）ホスホナイトの溶液をカニューレにより添加する。反応混合物を室温にする。20時間後、反応混合物を氷浴中で冷却し、そして85％ EtOH（250ml）でクエンチする。４日後、沈殿物を回収し、85％ EtOHで洗浄し、空気乾燥し、そして減圧乾燥して、表題化合物（23.1ｇ、56％）を白色粉末として得る。FAB MS m/z 216（M+H）+。
適切な出発物質、ならびに本質的に同様の手順を用いて、以下の化合物を調製する：
調製例４Ａ：  1-アミノ-2-（4-フェニルメトキシ）フェニルエチル ホスフィン酸
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調製例５
2-（4-メトキシ）フェニル-1（R,S）-［N-［（フェニルメトキシ）カルボニル］］-アミノエチル ホスフィン酸
氷冷1M NaOH（100ml）中の調製例４（21.5ｇ、0.10mol）の撹拌溶液に、ベンジルクロロホルメート（16ml、0.11mol）および1M NaOH（100ml）を別々に添加し、そして６時間撹拌する。さらなるベンジルクロロホルメート（８ml、0.05mol）を添加し、そして反応混合物を1M NaOHの添加によりpH９に調節する。４時間後、反応混合物を濃HClの添加によりpH１に酸性化する。沈殿物を回収し、H2Oで洗浄し、空気乾燥し、次いで減圧乾燥して、表題化合物（34.8ｇ、100％）を白色粉末として得る。FAB MS m/z 350（M+H）+。
適切な出発物質、ならびに本質的に同様の手順を用いて、以下の化合物を調製する。
調製例５Ａ：  1（R,S）-［N-［（フェニルメトキシ）カルボニル］］アミノ-2-（4-フェニルメトキシ）フェニルエチル ホスフィン酸
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調製例６
P（R,S）-2-フェニル-1（R）-［（フェニルメトキシ）カルボニル］-アミノエチルホスフィン酸メチルエステル
氷冷の10:1の1,4-ジオキサン/MeOH（150ml）中の2-フェニル-1（R）-［（フェニルメトキシ）カルボニル］アミノエチルホスフィン酸（Baylisら、J. Chem. Soc. Perkin Trans., 1（1984）, p.2845）（3.12ｇ、9.77mmol）の撹拌溶液に、エーテル中の過剰のCH2N2を添加する。CH3OHを添加し、得られた懸濁液を分散し、そして反応混合物を室温にする。過剰のCH2N2をHOAｃの添加により消失させる。シロップになるまで反応混合物をエバポレートし、次いでEtOAc（100ml）中に溶解し、飽和NaHCO3（50ml）および飽和NaClで洗浄し、乾燥（MgSO4）し、濾過し、そしてエバポレートして表題化合物（2.72ｇ、84％）を、放置すると結晶化するシロップとして得る。リンにおけるジアステレオマー混合物。
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適切な出発物質、ならびに本質的に同様の手順を用いて、以下の化合物を調製する：
調製例６Ａ：  P（R,S)-1（R,S）-[（フェニルメトキシ）カルボニル]アミノ-2-（4-フェニルメトキシ）フェニルエチル ホスフィン酸メチルエステル
リンにおけるジアステレオマー混合物。
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調製例７
P（R,S）-2-（4-メトキシ）フェニル-1（R,S）-[（フェニルメトキシ）カルボニル]アミノエチルホスフィン酸メチルエステル
6:1のTHF/CH3OH（60ml）中の調製例５（6.00ｇ、17.2mmol）および4-ジメチルアミノピリジン（42mg、0.34mmol）の撹拌氷冷懸濁液に、EDC（3.62ｇ、18.9mmol）を添加する。20分後、氷浴を取り外し、反応混合物を４時間撹拌し、次いでシロップになるまでエバポレートする。シロップをEtOAc（60ml）と1M HCl（60ml）との間に分配する。水層をEtOAc（2×60ml）で抽出し、そして一緒にした有機層をH2O（100ml）、10％ NaHCO3（100ml）、および飽和NaClで洗浄し、次いで乾燥（MgSO4）し、濾過し、そしてエバポレートして、表題化合物をシロップ（5.40ｇ、87％）として得る。FAB MS m/z 364.2（M+H）+。
調製例８
t-ブチル シクロペンタンカルボキシレート
金属ボンベ（bomb）をCO2-アセトン浴中で冷却し、そしてイソブチレン（150ml）、シクロペンタンカルボン酸（29.4ｇ、0.26mol）、t-ブタノール（４ml）およびH2SO4（１ml）を充填する。ボンベを冷浴から取り出し、密封し、そして３日間撹拌する。ボンベをCO2-アセトン浴中で冷却し、空気に対して開放し、そして反応混合物を室温で保持しながら、N2流動下でイソブチレンをエバポレートする。Et2O（300ml）を添加し、そして混合物を飽和NaHCO3（300ml）および飽和NaClで洗浄し、次いで乾燥（MgSO4）し、濾過し、そして濃縮して無色のオイル（41.5ｇ、95％）を得る。これはさらなる精製をせずに用いられる。
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調製例９
t-ブチル1-ヒドロキシメチルシクロペンタンカルボキシレート
THF（800ml）中のジイソプロピルアミン（34ml、0.24mol）の撹拌している氷冷溶液に、n-BuLiのヘキサン溶液（2.5M、100ml、0.25mol）を添加する。0.5時間後、混合物を-78℃まで冷却し、そして調製例８（41ｇ、0.24mol）のTHF（100ml）溶液をカニューレによりN2下で0.5時間かけて添加する。１時間後、撹拌している-78℃の溶液に、パラホルムアルデヒド（36ｇ、５当量）を添加し、-78℃で１時間撹拌し、次いで氷浴を取り外す。得られたゲル状懸濁液を４時間撹拌し、次いで飽和NH4Cl（800ml）でクエンチする。EtOAc（2×800ml）で抽出し、一緒にしたEtOAc抽出液を1M HClおよび飽和NaClで洗浄し、乾燥（MgSO4）し、濾過し、そして濃縮する。粗生成物を蒸留し、表題化合物（42.5ｇ、89％）を無色液体として得る。
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調製例１０
t-ブチル1-[（トリフルオロメタンスルホニル）オキシ]メチルシクロペンタンカルボキシレート
-78℃までN2下で冷却したCH2Cl2（75ml）中のピリジン（10ml、124mmol）の撹拌溶液に、トリフリック無水物（10ｇ、35.5mmol）のCH2Cl2（10ml）溶液を滴下漏斗により滴下する。10分後、調製例９（4.73ｇ、23.7mmol）のCH2Cl2（20ml）溶液を滴下する。得られた反応混合物を-78℃で0.5時間撹拌し、次いで冷浴を取り外す。反応混合物が室温に達した時に、ヘキサン（500ml）に注ぎ、1m HCl（3×200ml）、H2O（200ml）、飽和NaHCO3（200ml）および飽和NaClで洗浄し、次いで乾燥（MgSO4）し、濾過し、そしてエバポレートして乾燥する。得られた赤みがかったオイル（7.34ｇ、93％）を、フリーザーの温度で貯蔵して固化し、そしてさらなる精製をせず用いる。
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調製例１１
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工程１：  ホルムアルデヒド水溶液（37％、16.1ml）を、氷浴中で冷却した（CH3）2NH水溶液（40％、12.5ml）に添加する。混合物を10分間撹拌し、次いでイソブチルマロン酸（16.7ｇ、104mmol）を添加する。反応混合物を室温まで温め、次いで90℃で１時間加熱する。反応混合物を室温まで冷却し、1N HClでpH１まで酸性化し、そしてEt2Oで抽出する。Et2O層をMgSO4で乾燥し、そして減圧下で濃縮する。
工程２：  工程１の生成物のCH2Cl2（90ml）溶液を氷浴中で冷却し、そして3,4-ジメトキシベンジルアルコール（29.2ｇ、174mmol）、ジメチルアミノピリジン（750mg、６mmol）、およびDCC（30.8ｇ、150mmol）のCH2Cl2（180ml）溶液を添加する。反応混合物を０℃で１時間撹拌し、次いでフリーザー（-20℃）で18時間保持する。反応混合物を濾過し、濾液をCH2Cl2で洗浄し、減圧濃縮し、そして粗生成物をシリカゲルのクロマトグラフィーにより、ヘキサン中の10％ EtOAcで溶出することにより精製し、22ｇ（理論値の76％）の表題化合物を得る。
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実施例１
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工程１：
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THF（15ml）中のジイソプロピルアミン（1.93ml、13.8mmol）の撹拌している氷冷溶液に、n-ブチルリチウムのヘキサン溶液（1.6M，8.6ml、13.8mmol）をN2下で添加する。15分後、反応混合物を-78℃まで冷却する。この-78℃のLDA溶液に、調製例６（4.20ｇ、12.5mmol）のTHF（25ml）溶液を、温度が-60℃未満に保持される速度で添加する。添加完了後、反応混合物を10分間混合し、次いで調製例10（4.98ｇ、15.0mmol）のTHF（12ml)溶液を添加する。反応混合物を-78℃で15分間撹拌し、次いで氷浴を取り外す。４時間後、反応混合物を飽和NH4Cl（200ml）でクエンチし、そしてEtOAc（2×200ml）で抽出する。一緒にした有機抽出液を1M HCl（400ml）、飽和NaHCO3（400ml）、および飽和NaClで洗浄し、次いで乾燥（MgSO4）し、濾過し、そしてエバポレートする。残渣をフラッシュクロマトグラフィー（3:2 EtOAc/ヘキサン）により分離して、化合物1.1（3.78ｇ、59％）を白色固体として得る。1H Nmr分析は、リンにおける2:1のジアステレオマー混合物であることを示す。
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適切な出発物質、ならびに本質的に同様の手順を用いて、以下の化合物を調製する：
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工程２：
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方法（ｉ）：CH2Cl2（120ml）中の実施例1.1（7.50ｇ、14.6mmol）の撹拌氷冷溶液に、CF3CO2H（20ml）を添加する。１時間後に、CF3CO2H（20ml）を１時間ごとの間隔で、TLCが出発物質を示さなくなるまで（約4.5時間）添加する。反応混合物をシロップになるまでエバポレートし、次いでCH2Cl2に溶解し、そしてエバポレートして乾燥した（2×）。残渣をEtOAcから結晶化して化合物1.2を得る（5.77ｇ、89％）。
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方法（ii）：化合物1.1（2.144ｇ、4.16mmol）を4M HCl/1,4-ジオキサン（45ml）に溶解する。反応混合物を４時間撹拌し、次いでさらに4M HCl/1,4-ジオキサン（45ml）を添加する。６時間後、反応混合物をシロップになるまでエバポレートし、そして1M NaOH（150ml）に溶解する。EtOAc（2×100ml）で水溶液を洗浄し、そして濃HClでpH１まで水層を酸性化する。エマルジョン水溶液をEtOAc（150ml）で抽出し、次いでNaClで水層を飽和させ、そしてEtOAc（350ml）で抽出する。一緒にしたEtOAc層を飽和NaClで洗浄し、乾燥（MgSO4）し、濾過し、そしてエバポレートして乾燥し、化合物1.2（1.810ｇ、98％）を白色固体として得る。
適切な出発物質、ならびに本質的に同様の方法（ii）に記載されている手順を用いて、以下の化合物を調製する：
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工程３：
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DMF（18ml）中の実施例1.2（1.505ｇ、3.38mmol）の撹拌氷冷溶液に、1,1'-カルボニルジイミダゾール（0.823ｇ、5.07mmol）を添加する。0.5時間後、反応混合物を室温まで温め、そしてさらに１時間後、L-トリプトファンメチルエステル塩酸塩（1.72ｇ、6.75mmol）、次いでN-メチルモルホリン（0.74ml、6.7mmol）を添加する。反応混合物を48時間撹拌し、次いでEtOAc（200ml）と1M HCl（200ml）との間に分配する。水層をNaClで飽和し、そしてEtOAc（200ml）で抽出する。一緒にしたEtOAc層を、H2Oで数回洗浄し、飽和NaClで１回洗浄し、次いで乾燥（MgSO4）し、濾過し、そしてエバポレートする。残渣のフラッシュクロマトグラフィー（1:24 MeOH/CH2Cl2、次いで1:2:47 CH3CO2H/MeOH/CH2Cl2）により、化合物1.3（1.740ｇ、80％）をベージュ色の泡沫として得る。
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適切な出発物質、ならびに本質的に同様の手順を用いて、以下の化合物を調製する：
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工程４：  実施例1.3（200mg、0.31mmol）およびLiOH.H2O（33mg、0.79mmol）の混合物を3:2 CH3OH/H2O（５ml）中で室温で４時間撹拌する。反応混合物を減圧濃縮し、そして得られた水性懸濁液を希釈HClでpH１まで酸性化する。沈殿物を濾過し、これをH2Oで洗浄し、空気乾燥し、次いで減圧乾燥して化合物１（182mg、93％）を白色固体として得る。
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適切な出発物質、ならびに本質的に同様の手順を用いて、以下の化合物を調製する：
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化合物１Ｂは、２つのジアステレオマーの混合物である。
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適切な出発物質を用い、そして実施例１の工程１−４の手順に従って、以下の化合物もまた、２つのジアステレオマーの混合物として調製され得る。
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実施例２
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実施例1.3C（150mg、0.22mmol）の撹拌CH2Cl2（４ml）溶液に、CF3CO2H（８ml）を添加する。２時間後、反応混合物をエバポレートして乾燥し、表題化合物のメチルエステル（135mg、99％）を泡沫として得る。FAB MS 623（M+H）+。このエステル（130mg、0.21mmol）のCH3OH（３ml）溶液に、LiOH.H2O（37mg、0.88mmol）を添加する。反応混合物を一晩撹拌し、次いで減圧濃縮して、CH3OHを除去する。得られた水溶液混合物をH2O（10ml）で希釈し、EtOAc（10ml）で洗浄し、1M HClでpH１まで酸性化し、そしてEtOAc（50ml）で抽出する。水層をNaClで飽和させ、そしてEtOAc（50ml）で抽出する。一緒にしたEtOAc抽出液を飽和NaClで洗浄し、乾燥（MgSO4）し、濾過し、そしてエバポレートして乾燥し、化合物２（107mg、84％）を得る。FAB MS m/z 609（M+H）+。
実施例３
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工程１：
0003833704.tif 000038
実施例1.3（1.80ｇ、2.8mmol）のEtOAc（50ml）溶液を、CH2N2のEt2O溶液で、黄色が消えなくなるまで処理する。数滴のCH3CO2Hを添加し、過剰のCH2N2を分解し、そして1M HCl（50ml）および飽和NaCl（50ml）で、混合物を洗浄する。有機層をEt2O中の過剰のCH2N2で処理する。CH3CO2Hを添加して、過剰のCH2N2を分解し、飽和NaHCO3（50ml）および飽和NaCl（50ml）で、混合物を洗浄し、乾燥し（MgSO4）、濾過し、そしてエバポレートして、泡沫として化合物3.1を得る（1.78ｇ、96％）。C36H43N3O7P（M+H）+についてのFAB HRMS計算値660.2839。実測値660.2812。
適切な出発物質、ならびに本質的に同一の手順を用いて、以下の化合物を調製する：
0003833704.tif 000039
C37H45N3O8P（M+H）+についてのFAB HRMS計算値690.2944。実測値690.2970。
0003833704.tif 000040
C38H50N2O8P（M+H）+についてのFAB HRMS計算値693.3305。実測値693.3319。
工程２：
0003833704.tif 000041
10％Pd/C（0.26ｇ）を含有する、実施例3.1（1.75ｇ、2.66mmol）のCH3OH（100ml）溶液をH2雰囲気下で５時間撹拌する。触媒をセライトを通す濾過により除去し、そして濾過パッドをCH3OHで洗浄する。一緒にした濾液をエバポレートし、洗浄して、乾燥し、無色のガラス体として化合物3.2を得る（1.34ｇ、96％）。
0003833704.tif 000042
適切な出発物質、ならびに本質的に同一の手順を用いて、以下の化合物を調製する：
0003833704.tif 000043
C29H39N3O6P（M+H）+についてのFAB HRMS計算値556.2576。実測値556.2586。
0003833704.tif 000044
工程３：
0003833704.tif 000045
実施例3.2（3.00ｇ、5.85mmol）、Nε-フェニルメトキシカルボニル-Nα-メチルスルホニル-（S）-リジン（ε-CBZ-α-Ms-Lys）（2.09ｇ、5.85mmol）およびHOBT（0.87ｇ、6.43mmol）のCH2Cl2（80ml）撹拌溶液に、EDC（1.23ｇ、6.43mmol）を添加する。48時間後、反応混合物を1M HCl（200ml）中に注ぎ、そしてEtOAc（２×200ml）で抽出する。水層をNaClで飽和させ、そしてEtOAc（100ml）で抽出する。一緒にした有機層を10％NaHCO3（150ml）および飽和NaClで洗浄し、次いで乾燥し、濾過し、そしてエバポレートする。残渣をフラッシュクロマトグラフィーにかけ（１：10：10 CH3OH/EtOAc/ヘキサン）、うす黄色の泡沫として化合物3.3を得る（4.02ｇ、79％）（FAB MS m/z 866.5（M+H）+）。
適切な出発物質、ならびに本質的に同一の手順を用いて、以下の化合物を調製する：
0003833704.tif 000046
C45H64N4O11PS（M+H）+についてのFAB HRMS計算値889.4030。実測値899.5338。
工程４：実施例3.3（3.70ｇ、4.27mmol）のCH2Cl2/4M HCl-ジオキサン（400ml）の96：４の溶液を室温で一晩撹拌する。反応混合物を減圧下で濃縮し、化合物３のメチルエステルを、泡沫として得る。FAB MS m/z 852.1（M+H）+。LiOH.H2Oで処理し、酸性化し、そして実施例２において記載された方法と同様の方法で抽出し、表題化合物３を白色固体として得る（3.10ｇ、87％）。C41H52N5O10PS.1.1H2Oについての分析計算値
0003833704.tif 000047
適切な出発物質、ならびに本質的に同一の手順を用いて、以下の化合物を調製する：
0003833704.tif 000048
C42H55N5O11PS（M+H）+についてのFAB HRMS計算値868.3356。実測値868.3405。
0003833704.tif 000049
C41H52N5O11PS.1.5H2Oについての分析計算値：
0003833704.tif 000050
適切な出発物質、ならびに実施例３の工程１〜４に記載されている手順と本質的に同一の手順を用いて、以下の化合物を調製する：
0003833704.tif 000051
実施例４
0003833704.tif 000052
化合物3.3C（276mg、0.31mmol）のCH2Cl2（4ml）撹拌溶液にCF3CO2H（８ml）を添加した。４時間後、反応混合物をエバポレートして乾燥する。残渣をCH3OHに溶解し、濾過し、そしてエバポレートして乾燥する。得られた泡沫をCH3OH（２ml）に溶解し、そしてLiOH.H2O（63mg、1.5mmol）およびH2O（２ml）を添加し、そして一晩撹拌する。水溶液をpH１まで1M HClで酸性化し、沈殿物を回収し、H2Oで洗浄し、空気乾燥し、そして減圧下で乾燥する。粗生成物をカラムクロマトグラフィーにかけ（C18、H2O、次いで1:1 H2O/CH3OH）、所望の生成物および対応するメチルエステルの混合物を得（142mg）、1H nmrスペクトルで決定する。混合物を、１：１CH3OH/H2O（６ml）中のLiOH.H2O（25mg、0.60mmol）で３時間処理する。CH3OHを減圧下でエバポレートし、得られた水溶液を1M HClで酸性化し（pH １）、得られた沈殿物を濾過し、H2Oで洗浄し、空気乾燥し、そして減圧下で乾燥し、化合物４を白色粉末として得る（124mg、50％）。C39H51N4O11PS.H2Oについての分析計算値
0003833704.tif 000053
実施例５
0003833704.tif 000054
10％Pd/C（10mg）を含有する、化合物３（106mg、0.127mmol）およびLiOH.H2O（5.3mg、0.126mmol）の1:1 CH3OH-H2O（８ml）溶液をH2下で15時間撹拌する。触媒をセライトを通す濾過により除去し、そして濾過パッドをCH3OHおよびH2Oで洗浄する。一緒にした濾液および洗浄液を減圧下で濃縮し、CH3OHを除去し、得られた水溶液を凍結乾燥し、化合物５を白色粉末として得る（88.9mg、99％）。C33H46N5O8PLiS（M+H）+についてのFAB HRMS計算値710.2965。実測値710.2983。［α］D=-18.9°（ｃ0.94 H2O）。
適切な出発物質、ならびに本質的に同一の手順を用いて、以下の化合物を調製する：
0003833704.tif 000055
C34H48N5O9PLiS（M+H）+についてのFAB HRMS計算値740.3070。実測値740.3088。
0003833704.tif 000056
実施例６
0003833704.tif 000057
工程１：
0003833704.tif 000058
調製例１（0.60ｇ、2.39mmol）、CH2Cl2（15ml）中の、（COCl）2（0.21ml、2.4mmol）およびDMF（２滴）から新たに調製した4-（（1,1-ジメチルエトキシカルボニル）-アミノ）メチルベンゾイルクロライドの撹拌氷冷懸濁液に、化合物3.2（1.20ｇ、2.28mmol）およびN-メチルモルホリン（0.53ml、4.8mmol）のCH2Cl2（14ml）溶液を添加する。反応混合物を３時間撹拌し、次いで1M HCl（50ml）、飽和NaHCO3、および飽和NaClで洗浄し、乾燥し（MgSO4）、濾過し、そしてエバポレートする。残渣をフラッシュクロマトグラフィーにかけ（3% CH3OH/CH2Cl2）、化合物6.1をオフホワイト固体として得る。（1.19ｇ、69％）。FAB MS m/z 759（M+H）+。
適切な出発物質、ならびに本質的に同一の手順を用いて、以下の化合物を調製する：
0003833704.tif 000059
C35H40N4O8P（M+H）+についてのFAB HRMS計算値675.2584。実測値675.2570。
0003833704.tif 000060
工程２：  実施例３、工程４の手順を用いて、化合物6.1、6.1Aおよび6.1Bを脱保護し、以下を得る：
0003833704.tif 000061
C39H47N4O8P.H2Oについての分析計算値：
0003833704.tif 000062
C33H36N3O6P.H2Oについての分析計算値：
0003833704.tif 000063
工程３：  化合物6.2（300mg、0.41mmol）および4M HCl/ジオキサン（50ml）の混合物を2.5時間撹拌する。反応混合物をエバポレートして乾燥し、表題化合物６をベージュ色の粉末として得る（0.27ｇ、100％）。
0003833704.tif 000064
実施例７
0003833704.tif 000065
工程１：
0003833704.tif 000066
化合物3.2B（1.40ｇ、2.58mmol）のCH2Cl2（25ml）の撹拌溶液に、N-（ベンジルオキシカルボニルオキシ）スクシンイミド（0.71ｇ、2.85mmol）を添加する。30時間後、反応混合物をEtOAc（200ml）で希釈し、そして溶液を1M HCl（200ml）、飽和NaHCO3（200ml）、および飽和NaCl（200ml）で溶液を洗浄し、次いで乾燥し（MgSO4）、濾過し、そしてエバポレートする。フラッシュクロマトグラフィーにかけ（５％、CH3OH/CH2Cl2）、化合物7.1を白色固体として得る（1.22ｇ、70％）。
0003833704.tif 000067
工程２：
0003833704.tif 000068
化合物7.1（1.090ｇ、1.61mmol）およびトリエチルアミン（0.27ml、1.9mmol）の撹拌氷冷溶液に、N-フェニルトリフリミド（N-phenyl triflimide）を添加する。反応混合物を室温まで加温し、そして20時間撹拌し、次いでEtOAc（150ml）と1M HCl（150ml）との間に分配する。有機層を飽和NaHCO3（150ml）および飽和NaCl（150ml）で洗浄し、次いで乾燥し（MgSO4）、濾過し、そしてエバポレートして乾燥する。フラッシュクロマトグラフィー（20％ヘキサン／EtOAc、次いでEtOAc）にかけ、化合物7.2を泡沫として得る（1.070ｇ、82％）。C37H41N3O10PF3S.0.5H2Oについての分析計算値
0003833704.tif 000069
工程３：
0003833704.tif 000070
化合物7.2（150mg、0.186mmol）およびモルホリン（0.50ml、5.7mmol）のDMF（１ml）溶液に、1,3-ビス（ジフェニルホスフィノ）プロパン（16mg、0.039mmol）およびPd（OAc）2（5mg、0.02mmol）を添加し、次いで混合物を３時間にわたってCOで泡立たせる。混合物を70℃でCO雰囲気下で６時間加熱し、室温まで冷却する。EtOAc（15ml）を添加し、そして溶液を1M HCl（２×15ml）、H2O（４×15ml）、および飽和NaClで洗浄する。有機層をCH2N2のEt2O溶液で黄色が消えなくなるまで処理し、そして過剰のCH2N2をCH3CO2Hを添加することにより分解する。乾燥し（MgSO4）、濾過し、そして濃縮する。残渣をフラッシュクロマトグラフィーにかけ（４％ CH3OH/CH2Cl2）、化合物7.3を無色のガラス体として得る（99mg、69％）。
0003833704.tif 000071
化合物7.2（200mg、0.25mmol）およびトリエチルアミン（77μl、0.55mmol）のDMF（１ml）溶液に、1,3-ビス（ジフェニルホスフィノ）プロパン（20mg、0.048mmol）およびPd（OAc）2を添加する。混合物をNH3で２分間にわたって泡立たせ、次いで混合物をCOで２分間にわたって泡立たせる。混合物をCOとNH3との混合物を含有する風船の下に置き、そして70℃まで６時間にわたって加熱する。反応混合物を冷却し、そしてEtOAc（15ml）で希釈し、次いでH2O（６×15ml）および飽和NaClで洗浄する。乾燥し（MgSO4）、濾過し、そして濃縮する。残渣をフラッシュクロマトグラフィーにかけ（5% MeOH/CH2Cl2）、化合物7.3Aを無色のガラス体として得る（63mg、36％）。
0003833704.tif 000072
上記と同様の手順を用い（但し、NH3は除外し、反応混合物中にCH3OHを含む）、化合物7.3Bを得る。FAB MS m/z 718.5（M+H）+。
工程４：  引き続き、化合物7.3（93mg、0.12mmol）を、HCl/1,4-ジオキサン/CH2Cl2およびLiOH.H2Oで実施例３の工程４に記載されているように脱保護し、表題化合物をオフホワイトの粉末として得る（75mg、83％）。C39H45N4O9P.2.5H2Oについての分析計算値
0003833704.tif 000073
実施例８
0003833704.tif 000074
化合物7.1（46mg、0.068mmol）を、HCl/1.4-ジオキサン/CH2Cl2およびLiOH.H2Oで実施例３の工程４に記載されているように連続的に脱保護し、化合物８を得る（41mg、92％）。C34H38N3O8P.2H2Oについての分析計算値
0003833704.tif 000075
同様の方法で、化合物7.3Aおよび7.3Bを脱保護し、以下の化合物8Aおよび8B（これらの各々は２つのジアステレオマーの混合物である）を得る：
0003833704.tif 000076
C35H39N4O8P.2H2Oについての分析計算値：
0003833704.tif 000077
0003833704.tif 000078
C35H38N3O9P.1.5H2Oについての分析計算値：
0003833704.tif 000079
実施例９
0003833704.tif 000080
工程１：2-ナフチルトリフレート（90ｇ、326mmol）のDMF（240ml）溶液に、トリフェニルホスフィン（9.6ｇ、36.6mmol）、ビニルアセテート（149ｇ、1862mmol）、および酢酸パラジウム（3.8ｇ、17mmol）を添加する。反応混合物を１時間還流し、次いで飽和NaHCO3溶液を添加してクエンチする。混合物をEt2Oで抽出し、乾燥し、そして濃縮する。残渣をシリカゲルクロマトグラフィーによって精製し（ヘキサン中の5%EtOAc）、35ｇ（165mmol、51％）の2-（2-ナフチル）ビニルアセテートを得る。
アミノジフェニルメタン（106ｇ、578mmol）および乾燥H3PO2（95ｇ、1376mmol）のジオキサン（200ml）温溶液に、激しく撹拌しながら2-（2-ナフチル）-ビニルアセテート（70ｇ、330mmol）のジオキサン（200ml）溶液を添加する。この混合物に、濃HCl（30ml）を添加し、３時間還流し、次いで室温まで冷却する。白色沈殿物を濾過により回収し、CH3OHで洗浄し、乾燥して次亜リン酸を得る（120ｇ、91％理論値）。
0003833704.tif 000081
工程２：  工程１の生成物（80ｇ、200mmol）、CF3CO2H（150ml）、およびアニソール（150ml）の混合物を85〜90℃で３時間撹拌する。超減圧下で揮発分を除去する。残渣をCH2Cl2で粉にする。沈殿物を濾過により回収する。
得られた残渣を10％NaOH水溶液（140ml）に溶解し、そして550mlまでH20で希釈する。溶液を氷浴中で冷却し、そしてベンジルクロロホルメート（83.65ｇ、490mmol）を、溶液のpHを10〜12の間に10％NaOH水溶液を添加することにより維持しながら、滴下する。ベンジルクロロホルメートの添加後、反応混合物をpH１に濃HClを用いて酸性化する。EtOAc（500ml）を反応混合物に添加し、生成物を沈殿させ、濾過により回収する（55ｇ、75％）。
０℃まで冷却した得られた残渣（7.5ｇ、20.3mmol）のジオキサン（300ml）とCH3OH（40ml）との混合物溶液に、トリメチルシリルジアゾメタンのヘキサン溶液（Aldrich）を、黄色が消えなくなるまで滴下する。反応混合物を０℃で30分間撹拌し、減圧下で濃縮する。生成物をシリカゲルクロマトグラフィー（CH2Cl2中の３％CH3OHで溶出する）で精製し、7.2ｇの生成物を得る（93％）。MS（FAB）m/e 384（M+H）+。
工程３：  アルゴン下で-78℃まで冷却した工程２の生成物（7.2ｇ、18.8mmol）および調製例11（8.5ｇ、30.5mmol）の脱酸素乾燥THF（100ml）溶液に、NaHのオイル分散液（70mg、60％、1.8mmol）を添加する。冷却を中止し、反応混合物を室温まで加温する。１時間後、反応を飽和NH4Cl溶液（200ml）を添加することによりクエンチする。有機相をEt20（３×200ml）で抽出し、そしてブラインで洗浄する。一緒にした有機相をMgSO4で乾燥し、そして減圧下で濃縮する。粗生成物をシリカゲルクロマトグラフィー（ヘキサン中の30％EtOAcで溶出する）により精製し、11.0ｇの生成物（88％）を得る。
0003833704.tif 000082
工程４：工程３の生成物（11.0ｇ、16.6mmol）とCF3CO2H（50ml）のアニソール（20ml）溶液とを混合し、０℃まで冷却する。反応混合物を40分間撹拌し、そして揮発分をkugel rhorer蒸留で室温で除去する。得られた残渣をDMF（100ml）に溶解し、そしてトリプトファンメチルエステル塩酸塩（8.45ｇ、33.17mmol）、HOBT（3.9ｇ、29mmol）、EDCI（14.5ｇ、48.8mmol）、およびN-メチルモルホリン（15.6ｇ、154mmol）を添加する。反応混合物を室温で18時間アルゴン下で撹拌する。希HCl（1N、200ml）を添加し、次いでEt20で抽出する（３×150ml）。一緒にした有機層をブラインおよび飽和NaHCO3溶液で洗浄する。粗生成物をシリカゲルクロマトグラフィー（EtOAc中の５％CH3OH）により精製し、9.5ｇ（71％）の所望の生成物を得る。
0003833704.tif 000083
工程５：工程４の生成物（300mg、0.42mmol）のエチルアルコール（100ml）溶液に、パラジウムカーボン（10％、100mg）を添加する。懸濁液を60psiで２時間にわたって水素添加する。触媒を濾過により除去し、そして濾液を減圧下で濃縮する。
工程４に記載された手順と同様の手順を用い、得られたアミン（780mg、1.31mmol）とε-CBZ-α-Ms-Lys（1.00ｇ、2.8mmol）とをカップリングさせ、660mg（理論値72％）の生成物を、1:2の比の２セットのジアステレオマーの混合物として得る。
0003833704.tif 000084
工程６：2.7ｇの工程６の生成物のTHF（100ml）溶液に、0.5M NaOH水溶液（100ml）を添加する。反応混合物を室温で15時間にわたって撹拌し、そしてpHを８に希HClを添加することにより調節する。溶媒を超減圧下で除去し、残渣を逆相HPLC（C-18カラム、CH3OH/H2Oで溶出）にかけ、３つのジアステレオマーを得る:Ａ（400mg、理論値14.5％）、Ｂ（720mg、理論値26％）;およびＣ（350mg、理論値12.7％）。
0003833704.tif 000085
0003833704.tif 000086
実施例１０
0003833704.tif 000087
工程１：
0003833704.tif 000088
化合物9a（4.80ｇ、31mmol）のNaOH水溶液（22ml、lM）に、室温でジ-tert-ブチルカルボネート（11ｇ、40mmol）を添加し、そして室温で１時間、pHを８〜９に維持しながら撹拌する。反応混合物をEt2Oで抽出する。水相をpH2に,6N HClを用いて酸性化し、そしてEtOAcで抽出する。有機層を乾燥し、そして減圧下で濃縮し、化合物9bを得る（6.Oｇ、86％）。
0003833704.tif 000089
ホスフィン酸9b（6.0ｇ、27mmol）のジオキサン（20ml）およびCH3OH（１ml）溶液に、トリメチルシリルジアゾメタンのヘキサン溶液（Aldrich）を黄色が消えなくなるまで添加する。反応混合物を室温で一晩撹拌する。減圧下で溶媒を除去し、残渣をシリカゲルクロマトグラフィーにかけ、CH2Cl2中の２％CH3OHで抽出し、化合物9cを得る（4.4ｇ、61％）。
0003833704.tif 000090
工程２：
0003833704.tif 000091
化合物9c（1.65ｇ、6.2mmol）、およびアクリレート9d（1.3ｇ、6.0mmol）の溶液を実施例９の工程３と同様の方法で処理し、化合物9eを得る（1.91ｇ、3.9mmol、63％）。
0003833704.tif 000092
化合物9e（1.9ｇ、3.9mmol）のEtOAc（20ml）の溶液に、Pd-C（10％、300mg）を添加する。懸濁液を室温で60psiで２時間にわたって水素添加する。混合物をセライトパッドを通して濾過し、濾液を減圧下で濃縮してカルボン酸9fを得る（1.4ｇ、92％）。
0003833704.tif 000093
工程３：  9f（0.60ｇ、1.5mmol）とトリプトファンメチルェステル塩酸塩（48ｇ、1.9mmol）を実施例９の工程４と同様の方法でカップリングさせ、ヘキサン中の５％EtOAcを用いるカラムで溶出し、0.540ｇ（63％）の所望生成物を得る。
0003833704.tif 000094
得られた化合物（0.40ｇ、0.71mmol）のCH2Cl2溶液（アルゴン下で撹拌）に、CF3CO2Hを添加する。反応混合物を室温で１時間撹拌し、溶媒を減圧下で除去し、残渣をCH2Cl2中に溶解し、そしてNaHCO3水溶液で洗浄する。溶媒を除去し、所望の粗アミンを得る（0.250ｇ、76％）。
工程４：工程３の生成物（0.100ｇ、0.21mmol）とε-CBZ-α-Ms-Lys（.119ｇ、0.33mmol）とを、実施例９の工程４の手順を用いてカップリングし、CH2Cl2中の２％CH3OHを用いるカラムで溶出し、0.110ｇ（61％）の生成物を得る。
0003833704.tif 000095
工程５：工程４からのエステルをTHF（30ml）に溶解し、そしてNaOHの溶液（0.5N、30ml）を添加する。反応混合物を室温で一晩撹拌する。溶媒を減圧下で除去し、そして残渣を逆相シリカゲルカラムクロマトグラフィー（C-18）にかけ、CH3OH-H2O（75％ CH3OH〜100％ CH3OH）で溶出し、表題化合物を２つの画分として得る：
0003833704.tif 000096
適切な出発物質および実施例10の工程２〜５で概説した工程と同様の手順に従って、以下の化合物もまた４つのジアステレオマーの混合物として調製し得る：
0003833704.tif 000097
実施例10で記載した手順と同様の手順を用いて、以下の化合物を調製する：
0003833704.tif 000098
以下の処方物は、本発明の特定の投薬形態を例示する。それぞれにおいて、「活性化合物」という用語は式ＩまたはIIの化合物を指す。
実施例Ａ
0003833704.tif 000099
製造方法
番号１および２を適切な混合機で10〜15分間混合する。混合物を番号３と共に顆粒状にする。必要ならば、粗いスクリーン（screen）（例えば、1/4インチ、0.63cm）にかけて湿った粒を粉砕する。湿った粒を乾燥する。必要ならば乾燥粒をスクリーンにかけ、番号４と混合し、そして10〜15分間混合する。番号５を加え、そして１〜３分間混合する。適切な打錠機で、混合物を適切な大きさおよび重さに圧縮する。
実施例Ｂ
0003833704.tif 000100
製造方法
番号１、２、および３を適切な混合器で10〜15分間混合する。番号４を加え、そして１〜３分間混合する。適切なカプセル化機で、混合物を適切な２ピースの硬いゼラチンカプセルに充填する。
0003833704.tif 000101
実施例Ｃ
製造方法
再構成のためには、注射用減菌水を添加するか、あるいは注射用静菌水を添加する。
式ＩおよびIIの化合物のインビトロおよびインビボECE阻害活性を、以下の手順により決定し得る。
BETチャレンジ方法：ECEインビボ活性を、Vemulapalliら、Life Sciences, 53（1993）、783-793頁により記載されているように決定する。簡単にいえば、体重250〜275ｇのオスCharles River CDラット（Wilmington, MA）を、イナクチン（Inactin）,100mg/kgで腹腔内投与により麻酔する。気管にカテーテルを入れる。右頸動脈および右頸静脈にカニューレを入れ、それぞれ血圧（BP）を記録し、そして薬剤を注入する。BPを、動脈カテーテルをStatham圧力変換器に接続することにより記録し、そしてGrassポリグラフ上に表示する。直腸温度を37℃に保つ。15〜30分の平衡化期間の後、ラットに生理食塩水ビヒクル（20μl/分）または試験化合物（0.01〜0.25mg/kg/分）を、研究中、注入する。注入開始から30分後、ラットをBET-1（5μｇ/kg）で静脈カテーテルを通してチャレンジし、そしてBPをさらに15分間モニターする。
図１および図２は、本発明の２つの化合物のBETチャレンジの結果を示す：
化合物Ａ：N-[[1-[[ヒドロキシ-[1（R）-[[6-アミノ-2（S）-[（メチルスルホニル）アミノ]-1-オキソヘキシル]-アミノ]-2-フェニルエチル]ホスフィニル]メチル]シクロペンチル]カルボニル]-L-トリプトファンリチウム塩；
化合物Ｂ：N-[2-[[ヒドロキシ[1-[[2（S）-[（メチルスルホニル）アミノ]-1-オキソ-6-[[（フェニルメトキシ）-カルボニル]アミノ]ヘキシル]アミノ]-2-（2-ナフタレニル）エチル]ホスフィニル]メチル]-4-メチル-1-オキソペンチル]-L-トリプトファン二ナトリウム塩。
図１は、ビヒクルと比較して、0.1mg/kg/分の用量で投与した化合物Ａが、BET-1チャレンジに応答して約15mmHg低い血圧を示すことを示す。図２は、ビヒクルと比較して、0.1mg/kg/分の用量で投与された化合物Ｂは効果を有しないが、0.30mg/kg/分の用量での投与は、BET-1チャレンジに応答して約22mmHg低い血圧を示すことを示す。
単離灌流モルモット肺方法：  この方法は、Vemulapalliら、J.Pharmacol.Exp.Therap.,262,3（1992）,1062-1069頁に記載されている通りである。簡単にいえば、オスDunkin-Hartleyモルモット（400〜600ｇ）を、ペントバルビタール30mg/kgで腹腔内投与により麻酔する。気管にカニューレをいれ、呼吸を助ける。右頸静脈にカニューレを入れ、生理食塩水ビヒクルまたは試験化合物を投与するか、あるいは化合物を経口または皮下に投与する。生理食塩水ビヒクルまたは試験化合物の投与10分後、開胸を行い、気管、肺、および心臓を無傷で取り出し、加温した以下の組成のTyrode緩衝液（34〜35℃）中に置く：（単位mM）NaCl 120、KCl 4.8、MgSO4・7H2O 1.2、KH2PO4 1.2、NaHCO3 25、CaCl2・2H2O 11.25、グルコースll、およびBSA O.5%。肺動脈および気管にカニューレを入れ、そして肺を灌流装置上に設置する。肺を、3.2ml/分の速度で、肺動脈を通して酸素化した（95% O2および5% CO2）Tyrode溶液（34〜35℃で維持）で灌流する。肺を、室内の空気で、2.5ml/ストロークおよび50ストローク/分の体積で機械的に換気する。肺通気圧（PIP）を、Statham圧力変換器を備える灌流装置のサイドアームを通してモニターし、そしてGrassポリグラフ上に記録する。肺を15分間にわたって安定化させる。肺流出物（50ml）を15分ごとに、各100μlアプロチニン（200カリクレイン阻害単位/ml）およびダイズトリプシン阻害剤（20 N-α-ベンゾイル-L-アルギニンエチルエステル単位/ml）を含有する冷却ポリプロピレン遠心分離チューブ（Corning）中に回収した。虚血-低酸素（I/H）を、15分間、換気および灌流を中止し、次いで60分間再灌流および再換気することにより生じさせる。実験の終わりに、肺を5-ヒドロキシトリプタミン（0.5mg）で、肺動脈カニューレを通して直接肺にチャレンジすることにより、心肺反応性について試験する。
別の研究においては、麻酔したモルモットに、生理食塩水ビヒクルまたは試験化合物を投与する。10分後、肺を取り出し、そして上記のように灌流装置上に設置する。15分の平衡化期間の後、BET-1（15分間の30μｇ）またはET-1（15分間の0.6μｇ）を、灌流媒体中に直接注入し、そしてビヒクル中のPIPに関する効果および試験化合物によって処理されたモルモットの肺を評価する。
図３〜６は、単離灌流モルモット肺におけるI/H誘導性ET-1放出に関する本発明の４つの化合物の結果を示す。化合物としては、上記で同定された化合物ＡおよびＢ、および以下が挙げられる：
化合物Ｃ：N-（2-（（1-（（6-アミノ-2-（メチルスルホニル）アミノ）-1-オキソヘキシル）アミノ）-2-フェニルエチル）ヒドロキシホスフィニル）メチル）-3-メチル-1-オキソブチル）-L-トリプトファン；および
化合物Ｄ：N-[2-[[ヒドロキシ[2-[1-[4-メチル-1-オキソ-2-[[（フェニルメトキシ）カルボニル]アミノ]ペンチル]アミノ]-2-フェニルエチル]ホスフィニル]メチル]-4-メチル-1-オキソペンチル]-トリプトファン。
図３は、I/Hにより生じたPIPにおける上昇（ビヒクルのみ投与結果を参照のこと）が、１時間および３時間で、化合物Ａを30mg/kgの用量で経口投与することにより減少することを示す。アスタリスクは、ビヒクルと比較して、統計学的有意性（P<0.05）を示す。
図４は、I/Hにより生じたPIPにおける上昇が、１時間で３mg/kgの皮下（sc）投与、および６時間で10mg/kgおよび30mg/kgの化合物Ｂのsc投与によって減少することを示す。
図５は、I/Hにより生じたPIPにおける上昇が、10mg/kgの化合物Ｃの静脈内（iv）投与によって減少することを示す。同様に、図６は、10mg/kgの化合物Ｄのiv投与により、I/H後のET-1放出の減少を示す。
ECEアッセイ方法（インビトロ）：  ECEアッセイは、膜結合ETレセプターへの結合によって、チロシン-13で標識された[125I]BET-1から放出される[125I]ET-1を定量的に測定することに基づく。モルモット肺膜（GPLGM）を、ホスホルアミドン（phosphoramidon）感受性ECEの適切な組織源として選択した。GPLGMはまた、高密度ETレセプターを含有することが見いだされた。従って、この調製物は、[125I]BET-1の変換からの[125I]ET-1の定量的測定のための、ECEおよび飽和濃度のETレセプターの両方の供給源として用いられた。ECEアッセイの選択された実験条件下で、結合した特異的な[125I]BET-1は、ECE活性に直接関係した。アッセイを試験化合物の異なる濃度の存在下で実施し、ECE活性を阻害するそれらの効力を評価した。
モルモット肺膜（GPLGM）の調製：  凍結モルモット肺（Keystone Biologicals,Cleveland,OH）を秤量し、そして10倍のグラム組織重量の溶液Ａ（50mM Tris-HCl、pH 7.4、0.25Mスクロース、および2mM EDTA）中で、Polytron組織ホモジナイザー（プローブPTA-20S）を用いてホモジナイズする。ホモジナイズを、各10秒間で７回に設定した速度で、かつホモジナイズの間に氷上で５〜８分の間隔で、４回、繰り返す。ホモジネートを、30分間2000ｇで回転させる（SS34ローター中で4100rpmまたはSA-600ローター中で3800rpm）。膜を含有する上清を注意深くデカントし、そして保存する。ペレットを上記のように溶液Ａ中で再ホモジナイズし、そしてホモジネートを2000ｇで30分間回転させる。上清を取り出し、最初の回転からの上清と混合し、そして45Tiローター中（107022ｇ）で37000rpmで60分間回転させる。膜を含有するペレットを、溶液Ｂ（10mM Tris-HCl、pH7.4、および0.125Mスクロース）中に、Dounceホモジナイザーを用いて懸濁する。サンプルを1mMの画分に分け、すぐにドライアイスメタノール浴中で冷凍し、そして-80℃で保存する。全工程を４℃で行う。
ルブロール処理したGPLGM（L-GPLGM）の調製：上記のように調製されたGPLGM画分を解凍し、そして１mg膜タンパク質／mLの濃度で、0.06％ルブロールPX、50mM Tris-HCl（pH7.4）、および100mM NaClを含有する溶液中に再懸濁する。混合物を１時間撹拌し、次いで１時間、45Tiローター中で37000rpm（107022ｇ）で回転させる。上清を捨て、そしてペレットを、50mM Tris-HCl（pH7.4）、および100mM NaClを含有する溶液中で、Dounceホモジナイザーを用いて再懸濁し、そして最終容量を最初の容量の半分に調節する。ホモジネートを１時間、45Tiローター中で37000rpm（107022ｇ）で回転させる。膜ペレットを溶液Ｂ中で懸濁し、そして上記のように処理する。全行程を４℃で行う。
ECEアッセイ：20μｇのタンパク質を含有するL-GPLGMのサンプルを、100mM Tris-HCl（pH７）、100mM NaCl、および5mg/ml BSA（画分Ｖ、98〜99％アルブミン）（Sigma Chemical Co.）を含有する溶液中で、100μLの最終反応容量でインキュベートする。ECEアッセイを、[125I]BET-1を添加することにより開始し、500pMの最終濃度を得る。反応を30分間37℃で実施する。反応を４mLの溶液Ｃ（10mM Tris-HCl、pH7.4、および150mM NaCl）を４℃で添加することにより終了させ、その後、Whatman GF/Bガラスミクロファイバーフィルター上で迅速に濾過する。フィルターを４℃で１時間にわたって、50mM Tris-HCl（pH7.4）、10mg/mL BSA、および0.1％アジ化ナトリウムを含有する溶液中で前もって浸漬する。試験管およびフィルターを４回、４mLの溶液Ｃで４℃で洗浄し、そしてγカウンターでフィルター上に残存する放射能を計数する。非特異的結合を、１μMの非標識ET-1（Peninsula Laboratories,Inc.,Belmont,CA）の存在下、反応混合物中で測定する。全反応を２連で、実施する。
ECE阻害アッセイ：ECE活性についての試験化合物の効果を試験するために、ECEアッセイを、化合物の異なる濃度の存在下で実施する。アッセイを、L-GPLGMを化合物とともに、４℃で２時間インキュベートしたのちにアッセイを開始する。化合物存在下のECE活性を、膜調製物（これは、同時に測定される）のコントロールECE活性の割合として表示する。ECE活性の50％阻害を生じる化合物の濃度（IC50値）を、コントロールECE活性の割合対化合物の濃度の対数のプロットから決定する。
ECEアッセイの評価：化合物によるECE阻害の選択性を評価するために、ECEアッセイと同一の同時実験を、250pM[125I]ET-1を[125I]ET-1の代わりに用いて実施する。特異的[125I]ET-1結合量を、化合物を含有しないコントロール中の量の割合として表示する。これらの結果は、レセプターに結合するET-1上の化合物の直接的効果に関する情報を提供する。このような実験は、研究を通して日常的に行われ、そして結果をECEアッセイの完全性の指標、およびECE阻害活性の値の有効性として用いる。
タンパク質アッセイ。タンパク質の濃度を、SchaffnerおよびWeissmann（1973）に記載のアミドブラック結合アッセイにより、BSAを標準として用いて測定する。
上記のインビトロECEアッセイを用いて、ECE IC50（nM）データを、実施例に示す多くの化合物について得た。
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本発明の範囲内のさらなる化合物は、上記の方法と同様の方法により調製され、そして以下の表に示されるインビトロでのECE阻害活性を有することが見いだされた：
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【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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