(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
ペプチド核酸、および配列番号１に記載した核移行シグナルのＮ末端およびＣ末端のそれぞれにアルギニン残基が２個ずつ結合したペプチド配列からなるオリゴペプチドからなる化合物。
【請求項２】
前記ペプチド核酸とオリゴペプチドとが、二価性架橋剤によって架橋されている請求項１記載の化合物。
【請求項３】
前記二価性架橋剤が、式：
【化１】
0003806059.tif 000007
（式中、ｎ＝３〜１１）で表わされる化合物である請求項２記載の化合物。 
【請求項４】
（Ａ）ペプチド核酸を合成し、脱保護したＮ末端に二価性架橋剤を連結させる工程、
（Ｂ）ＣまたはＮ末端にシステイン残基を導入したオリゴペプチドを合成する工程、および
（Ｃ）（Ａ）ペプチド核酸に連結した二価性架橋剤と（Ｂ）オリゴペプチドのシステイン残基とを連結させる工程
からなる請求項２記載の化合物の製造方法。
【請求項５】
（Ａ）オリゴペプチドを合成し、脱保護したＮ末端に二価性架橋剤を連結させる工程、
（Ｂ）ＣまたはＮ末端にシステイン残基を導入したペプチド核酸を合成する工程、および
（Ｃ）（Ａ）オリゴペプチドに連結した二価性架橋剤と（Ａ）ペプチド核酸のシステイン残基とを連結させる工程
からなる請求項２記載の化合物の製造方法。
【請求項６】
請求項１、２または３記載の化合物からなるＤＮＡ転写調節剤。
【請求項７】
請求項１、２または３記載の化合物からなる医薬化合物。
【請求項８】
請求項１、２または３記載の化合物からなる抗癌剤。
【請求項９】
請求項１、２または３記載の化合物を、インビトロにて培養細胞に接触させることにより、該化合物を細胞の核内に導入する方法。
【請求項１０】
請求項１、２または３記載の化合物を培養細胞に導入し、該化合物中のペプチド核酸を標的配列にハイブリダイズさせ、該標的配列がコードするまたは該標的配列が転写調節する遺伝子の発現を抑制することからなる遺伝子の機能解析方法。 
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は、ペプチド核酸（以下、ＰＮＡという）およびオリゴペプチドからなる生体膜透過性に優れた新規化合物に関する。
【０００２】
【従来の技術】
ＰＮＡは、ＤＮＡ類似構造を有する非天然の化合物である。その構造は、ＤＮＡやＲＮＡとは異なり、ペプチド結合で骨格部分を形成し、側鎖がＤＮＡ構造を有する。ＰＮＡは、ＤＮＡ、ＲＮＡまたは二本鎖ＤＮＡと強くハイブリダイズし、また、ヌクレアーゼなどの分解酵素の作用を受けないことから、従来のオリゴＤＮＡより、強力なアンチセンス作用を有するものと期待されている（ベッツら、Science、第２７０巻、１８３８〜１８４１頁、１９９５年；コルテスら、Drug Discov. Today、第６巻、８９３〜９０４頁、２００１年）。
【０００３】
しかしながら、ＰＮＡは、溶解性および細胞膜透過性が低く、実際に細胞の中に導入し、アンチセンス・アンチジーンとして作用させることは困難であった（コルテスら、Drug Discov. Today、第６巻、８９３〜９０４頁、２００１年）。実際にＰＮＡを単独で投与する場合、非常に高濃度、たとえば１０μＭ以上のＰＮＡを使用することにより核内への導入は可能であったが、この濃度では細胞毒性が認められ、生体に使用できる濃度ではなかった。
【０００４】
この問題点を改良するため、ＳＶ４０のＰＮＡに核移行シグナル（ＰＫＫＫＲＫＶ（配列番号１：以下、ＮＬＳという））を付加し、さらにポリエチレンイミン（ＰＥＩ）とインキュベーションすることにより正電荷を付加すると、細胞内とくに核への導入効率がよくなったとの報告がある（ブランデンら、Nature Biotechnology、第１７巻、７８４〜７８７頁、１９９９年；カトロナら、Nature Biotechnology、第１８巻、３００〜３０３頁、２０００年）。しかし、核移行シグナルを付加しただけでは、ＰＮＡを細胞膜透過させることは困難であるとの報告もある。またＰＥＩは、その細胞毒性が指摘されており、そのうえ、この方法だと、細胞核内に導入するために２ステップ必要となり煩雑であるなどの欠点がある。さらに、この方法でＰＮＡと核移行シグナルを連結するために使用された二価性架橋剤はＰＮＡと核移行シグナルとを堅く固定してしまうため、ＰＮＡの標的配列へのハイブリダイズを核移行シグナル部位が妨害すると考えられている。
【０００５】
【発明が解決しようとする課題】
本発明はかかる従来の問題点を解決し、複雑な合成経路なしに合成でき、細胞内、さらには核内に効率よく導入できるＰＮＡ含有化合物を提供することを目的とする。また、本発明は、標的配列へのハイブリダイズが有効に達成できるＰＮＡ含有化合物を提供することを目的とする。
【０００６】
【課題を解決するための手段】
前記課題を解決するために鋭意検討を重ねた結果、ＰＮＡと特定の修飾核移行シグナルとを連結することにより、得られた化合物は核内に効率よく導入されることを見出した。さらに、特定の二価性架橋剤を用いることでＰＮＡの標的配列へのハイブリダイズが有効に達成できることを見いだした。
【０００７】
すなわち本発明は、ＰＮＡ、および配列番号１に記載した核移行シグナルのＮ末端および／またはＣ末端にリジン残基および／またはアルギニン残基が両端合わせて２〜７個結合したペプチド配列からなるオリゴペプチドからなる化合物に関する。
【０００８】
前記化合物において、ＰＮＡとオリゴペプチドとが、二価性架橋剤によって架橋されていることが好ましい。
【０００９】
前記二価性架橋剤が、式：
【００１０】
【化２】
0003806059.tif 000002
【００１１】
（式中、ｎ＝３〜１１）で表わされる化合物であることが好ましい。
【００１２】
前記化合物において、オリゴペプチドがＲＲＰＫＫＫＲＫＶＲＲ（配列番号２：以下、２Ｒ−ＮＬＳ−２Ｒという）であることが好ましい。
【００１３】
また、本発明は、（Ａ）ペプチド核酸を合成し、脱保護したＮ末端に二価性架橋剤を連結させる工程、（Ｂ）末端にシステイン残基を導入したオリゴペプチドを合成する工程、および（Ｃ）（Ａ）ペプチド核酸に連結した二価性架橋剤とオリゴペプチドのシステイン残基とを連結させる工程からなる前記化合物の製造方法に関する。
【００１４】
本発明は、（Ａ）オリゴペプチドを合成し、脱保護したＮ末端に二価性架橋剤を連結させる工程、（Ｂ）末端にシステイン残基を導入したペプチド核酸を合成する工程、および（Ｃ）（Ａ）オリゴペプチドに連結した二価性架橋剤とペプチド核酸のシステイン残基とを連結させる工程からなる前記化合物の製造方法に関する。
【００１５】
さらに本発明は、前記化合物からなるＤＮＡ転写調節剤に関する。
【００１６】
また本発明は、前記化合物からなる医薬化合物に関する。
【００１７】
本発明は、前記化合物からなる抗癌剤に関する。
【００１８】
また、本発明は、前記化合物をインビトロにて培養細胞に接触させることにより、該化合物を細胞の核内に導入する方法に関する。
【００１９】
本発明は、前記化合物を培養細胞に導入し、該化合物中のペプチド核酸を標的配列にハイブリダイズさせ、該標的配列がコードするまたは該標的配列が転写調節する遺伝子の発現を抑制することからなる遺伝子の機能解析方法に関する。
【００２０】
本発明は、プラスミドベクターＤＮＡの配列とハイブリダイズする前記化合物を、該プラスミドベクターＤＮＡと反応させたのち培養細胞に添加することからなる、外来遺伝子を細胞内に導入する方法に関する。
【００２１】
【発明の実施の形態】
本発明のＰＮＡ、および配列番号１に記載した核移行シグナルのＮ末端および／またはＣ末端にリジン残基および／またはアルギニン残基が２〜７個結合したペプチド配列からなるオリゴペプチドからなる化合物（以下、ペプチドＰＮＡという）を、以下詳細に説明する。
【００２２】
本発明のペプチドＰＮＡは、この構成により容易にＰＮＡを核内へ導入することができる。
【００２３】
本発明のペプチドＰＮＡにおいてＰＮＡとオリゴペプチドを連結させる方法としては、とくに限定されることなく、二化性架橋剤を用いる方法など、周知の方法を利用することができる。
【００２４】
本発明に用いられる二価性架橋剤としては、ＰＮＡとオリゴペプチドとを連結できるものであればどのようなものを使用してもよく、それぞれ、ＰＮＡまたはオリゴペプチドの反応させようとする部位によって、それに応じた二価性架橋剤を選択することができる。また、得られるペプチドＰＮＡに構造的自由度を付加し得るものが好ましい。
【００２５】
たとえば、ＰＮＡまたはオリゴペプチドどちらかのアミノ基と、それ以外のＰＮＡまたはオリゴペプチドに結合させたシステイン残基のスルフィド基とを連結する場合には、式：
【００２６】
【化３】
0003806059.tif 000003
【００２７】
（式中、ｎ＝３〜１１）で表わされる構造を有するものが好ましい。ｎの数は４〜８がより好ましく、ｎの数が３より小さくなると得られるペプチドＰＮＡの構造的自由度が減少する傾向があり、１１より大きくなると自由度は増大するが、水溶液中での溶解度が減少する傾向がある。このような二価性架橋剤具体例としては、好ましくはＮ−（４−マレイミドブチリルオキシ）スクシニミド（ＧＭＣＳ）、ＥＭＣＳ、Ｎ−（８−マレイミドカプリルオキシ）スクシニミド（ＨＭＣＳ）、Ｎ−（１１−マレイミドウンデカノイルオキシ）スクシニミド（ＫＭＵＳ）などがあげられ、ＥＭＣＳが最も好ましい。
【００２８】
このように二価性架橋剤として構造的自由度の高いスペーサーを有するものを使用すると、ＰＮＡとオリゴペプチドとの架橋が容易で、高収率で生成物を得られるのみならず、ＰＮＡが標的配列とハイブリダイズする際にも、オリゴヌクレオチド部分が該ハイブリダイズを妨害することなく、効率的に標的配列の発現を阻害することができる。
【００２９】
本発明に用いるＰＮＡは、合成可能なものであればどのようなものでも使用することができ、特定ＤＮＡまたはｍＲＮＡへのハイブリダイズの特異性およびＤＮＡまたはｍＲＮＡへの親和性・結合性の点から塩基数６〜２０が好ましく、７〜１４がさらに好ましい。塩基数が６より少なくなると、目的のＤＮＡまたはｍＲＮＡのみにハイブリダイズしなくなる傾向があり、２０より多くなるとＤＮＡまたはｍＲＮＡへの結合力が弱くなる傾向がある。
【００３０】
本発明のオリゴペプチドは、配列番号１に記載した核移行シグナルＮＬＳのＮ末端および／またはＣ末端にリジン残基および／またはアルギニン残基が両末端合わせて２〜７個結合したペプチド配列からなることが必要である。核移行シグナルに結合するリジン残基およびアルギニン残基の総数としては、２〜７個が好ましく、２〜４個が最も好ましい。核移行シグナルに結合するアルギニン残基およびリジン残基の総数は、２より少ないと細胞膜透過性が減少する傾向にあり、７以上になるとＰＮＡの塩基ＧまたはＣと水素結合し凝集することから、ＰＮＡのアンチセンス効果を阻害する傾向がある。
【００３１】
このようなオリゴヌクレオチドとしては、具体的には、２Ｒ−ＮＬＳ−２Ｒ（配列番号２）、ＲＲＲＰＫＫＫＲＫＶ（配列番号３：以下、３Ｒ−ＮＬＳという）またはＰＫＫＫＲＫＶＲＲＲ（配列表４：以下、ＮＬＳ−３Ｒという）があげられ、細胞膜透過性と、ＰＮＡとの相互作用の点から２Ｒ−ＮＬＳ−２Ｒが最も好ましい。
【００３２】
本発明のペプチドＰＮＡは、ＰＮＡのＮ末端とオリゴペプチドのＣ末端を連結する場合、（Ａ）ＰＮＡを合成し、脱保護したＮ末端に二価性架橋剤を連結させる工程、（Ｂ）末端にシステイン残基を導入したオリゴペプチドを合成する工程、および（Ｃ）（Ａ）で得られたＰＮＡに連結した二価性架橋剤と（Ｂ）で得られたオリゴペプチドのシステイン残基とを連結させる工程から製造することができる。また、オリゴペプチドのＮ末端とＰＮＡのＣ末端を連結する場合は、（Ａ）オリゴペプチドを合成し、脱保護したＮ末端に二価性架橋剤を連結させる工程、（Ｂ）末端にシステイン残基を導入したＰＮＡを合成する工程、および（Ｃ）（Ａ）で得られたオリゴペプチドに連結した二価性架橋剤と（Ｂ）で得られたＰＮＡ二結合したシステイン残基とを連結させる工程から製造することができる。
【００３３】
たとえば、本発明のペプチドＰＮＡは、固相合成して樹脂に結合した状態のＮ末端にアミノ基を有するＰＮＡに対し、溶媒中に溶解した二価性架橋剤を約１．５当量添加し室温にて約３時間撹拌し、これを前記溶媒にて数回洗浄し、未反応の二価性架橋剤を除去し、溶媒中に溶解したＳＨ基を有するペプチドを約１．５当量添加し、室温にて約５時間撹拌し、得られた生成物を溶媒で数回洗浄し、未反応のペプチドを除去し、常法により側鎖の脱保護を行ない、さらに樹脂から切り出し、得られた生成物をエーテルで沈殿させＨＰＬＣで精製することから製造できる。
【００３４】
本発明のペプチドＰＮＡは、核に導入されると、核内の標的配列とハイブリダイズすることにより、ＤＮＡの転写調節をしたり、ｍＲＮＡの翻訳を阻害したり、リボザイムの活性を阻害したりすることができる。
【００３５】
本発明における「ＤＮＡの転写調節」とは、ＤＮＡの転写の促進または抑制を意味し、ＤＮＡの転写領域にハイブリダイズして転写を抑制することのみならず、ＤＮＡの転写調節領域にハイブリダイズして転写調節因子の機能を阻害することにより転写を促進または抑制することをも意味する。
【００３６】
したがって、本発明のペプチドＰＮＡは、用いるＰＮＡを適宜選択することによって、遺伝子変異に起因して起こる疾患、または遺伝子もしくはタンパク質が異常に高発現して起こる疾患など様々な疾患の治療剤となり得る。具体的には、癌、アルツハイマー病、心肥大、高血圧症、動脈硬化症などがあげられる。
【００３７】
本発明のＤＮＡ転写阻害剤および抗癌剤の投与経路としては、患部への直接投与、経口投与、経静脈的投与、直腸投与などが考えられる。患者への負担、副作用の点から、患部への直接投与、経口投与がより好ましい。
【００３８】
本発明のＤＮＡ転写阻害剤および抗癌剤の剤形は投与方法によって適宜設定することができる。具体的には、水溶液、乳剤、懸濁液などの液剤、軟膏剤、錠剤、カプセル剤などがあげられる。患部への直接投与の場合、液剤または軟膏剤が好ましく、経口投与の場合、錠剤またはカプセル剤が好ましい。
【００３９】
投与量は、投与方法、適用する患者の年齢、体重、病状などによって適宜設定することができるが、ペプチドＰＮＡに換算して１日に０．１〜２００ｍｇ／ｋｇが好ましい。投与量が０．１ｍｇ／ｋｇより少ないとペプチドＰＮＡとしての効果が半減する傾向がある。投与量の下限は０．１ｍｇ／ｋｇであるが１ｍｇ／ｋｇがより好ましい。投与量の上限は２００ｍｇ／ｋｇであるが５０ｍｇ／ｋｇがより好ましい。投与は単回または複数回のどちらで行なっても良い。
【００４０】
本発明の医薬化合物の製剤化には、その剤形に合わせて通常当業者により使用される様々な添加物を使用することができる。たとえば、酸化防止剤、ｐＨ調整剤、防腐剤などがあげられる。
【００４１】
また、本発明のペプチドＰＮＡは、培養細胞に適用し所望のＰＮＡを細胞核内に効率的に導入することもできる。
【００４２】
さらに、培養細胞において、標的配列のアンチセンスＰＮＡからなるペプチドＰＮＡを導入し、標的配列にハイブリダイズさせ、その標的配列がコードするまたは転写調節する遺伝子の発現を促進または抑制することにより、その遺伝子の機能を解析することができる。
【００４３】
本発明のペプチドＰＮＡは、プラスミドベクターＤＮＡの配列とハイブリダイズするＰＮＡを用いることによって、該プラスミドベクターＤＮＡとハイブリダイズさせたのち培養細胞に添加することにより、外来遺伝子を細胞内に導入することができる。
【００４４】
培養細胞に適用する場合、本発明のペプチドＰＮＡの添加量としては、細胞濃度５×１０4cells／ｍｌの培養液に０．０１〜５００ｎｍｏｌ／ｍｌが好ましく、０．１〜１００ｎｍｏｌ／ｍｌがより好ましい。添加量が０．０１ｎｍｏｌ／ｍｌより少ないと、ＰＮＡの効果が半減する傾向があり、５００ｎｍｏｌ／ｍｌより多いと細胞毒性を示す傾向がある。
【００４５】
【実施例】
ここで、本発明を実施例にもとづいて、詳細に説明するが、本発明はかかる実施例のみに限定されるものではない。
【００４６】
以下の実施例中、固相合成用装置、ＰＮＡおよびオリゴペプチド合成用モノマーおよび樹脂はアップライド・バイオシステム社製を、ＥＭＣＳは同人堂製を使用した。
【００４７】
実施例１
転写因子の１つであるヒトｐ５３遺伝子のアミノ酸６番〜１０番に相当するアンチセンス鎖と同様の核酸配列（５′−ＧＡＣ  ＧＣＴ  ＡＧＧ  ＡＴＣ  ＴＧＡ−３′（配列番号５））を有するＰＮＡは、固相ペプチド合成法であるＢｏｃ法により、通常の方法で末端まで合成したのち、脱保護し、末端にフリーのアミノ基を露出させた。得られたＰＮＡ７．５μｍｏｌに二価性架橋剤ＥＭＣＳ（Ｎ−（６−マレイミドカプロイルオキシ）スクシニイミド）１２μｍｏｌを添加し、３時間撹拌し、アミノ基とＥＭＣＳを連結した。さらに、ジクロロメタン／ジメチルホルムアミド（１：１）溶液１ｍｌで洗浄し、未反応のＥＭＣＳを除去した。洗浄を２回繰り返したのち、Ｃ末端にシステイン残基を導入したオリゴペプチド２Ｒ−ＮＬＳ−２Ｒ（配列番号２）（ペプチド研究所製）１２μｍｏｌを添加し、１０時間撹拌した。得られたペプチドＰＮＡの側鎖を定法により脱保護し、樹脂より切り出した。これをエタノール沈澱により粗精製したのち、ＨＰＬＣで精製した（収率２５％）。すべての操作は、室温で、ジクロロメタン／ジメチルホルムアミド（１：１）溶液中で行なった。
【００４８】
実施例２
転写因子の１つであるヒトｐ５３遺伝子のアミノ酸６番〜１０番に相当するアンチセンス鎖と同様の核酸配列（５′−ＧＡＣ  ＧＣＴ  ＡＧＧ  ＡＴＣ  ＴＧＡ−３′）を有するＰＮＡを、固相ペプチド合成法であるＢｏｃ法により合成した。Ｃ末端に架橋点としてのＳＨ基を導入するために、システイン残基を１残基目に導入した。末端まで合成したのち、定法通りにＮ末端を脱保護し、樹脂から切り出した。
【００４９】
オリゴペプチド２Ｒ−ＮＬＳ−２Ｒ（配列番号２）も固相ペプチド合成法であるＦｍｏｃ法により末端まで合成したのち、脱保護し、末端にフリーのアミド基を露出させた。得られたオリゴペプチド１２μｍｏｌに二価性架橋剤ＥＭＣＳ１２μｍｏｌを添加し、３時間撹拌し、アミド基とＥＭＣＳを連結した。さらに、ジクロロメタン／ジメチルホルムアミド（１：１）溶液１ｍｌで洗浄し、未反応のＥＭＣＳを除去した。洗浄を２回繰り返したのち、システイン結合ＰＮＡ７．５μｍｏｌを添加し、１０時間撹拌した。得られたペプチドＰＮＡを定法により側鎖を脱保護し、樹脂より切り出した。これをエタノール沈澱により粗精製したのち、ＨＰＬＣで精製した（収率２５％）。すべての操作は、室温で、ジクロロメタン／ジメチルホルムアミド（１：１）溶液中で行なった。
【００５０】
実施例３
＜ＮＯＳ−１細胞の調製＞
ヒト口腔癌由来の扁平上皮癌細胞でｐ５３遺伝子に変異が認められるＮＯＳ−１細胞５×１０4を、ポリ−Ｄ−リシンでコーティングした直径１０ｍｍカバーガラス上にて、７０％コンフルエントになるまで培養した。培養は、培地としてペニシリン（インビトロジェン株式会社製）およびストレプトマイシン（インビトロジェン株式会社製）を添加したＧＩＴ培地（日本製薬株式会社製）（ペニシリンの最終濃度１００単位／ｍｌ、ストレプトマイシンの最終濃度１００μｇ／ｍｌ）１ｍｌを使用し、炭酸ガスインキュベーター（５％ＣＯ2、３７℃）中で行なった。
【００５１】
＜ペプチドＰＮＡへのＦＩＴＣの接合＞
Ｎ末端のアミノ基に架橋剤としてＥＭＣＳを用いてＦＩＴＣを接合したオリゴペプチドを用いた以外は、実施例１と同様にしてペプチドＰＮＡを合成し、樹脂から切り出しＦＩＴＣ接合ペプチドＰＮＡを得た。
【００５２】
＜細胞内への導入＞
得られたＦＩＴＣ接合ペプチドＰＮＡを培地内に最終濃度が１μＭとなるよう添加した。３時間後、培地を完全に除去し、細胞をＰＢＳ（ｐＨ７．４）で３回洗浄後、新鮮なペニシリン・ストレプトマイシンを添加したＧＩＴ培地を添加し、さらに４時間培養した。
【００５３】
細胞を４％パラフィルムアルデヒドにて固定後、１μｇ／ｍｌローダミンを接合したファロイジン（Ｐｈａｌｌｏｉｄｉｎ）０．５ｍｌと１時間インキュベーションした。４回ＰＢＳで洗浄したのちスライドグラスにマウントし、共焦点レーザー顕微鏡（Ｚｗｅｉｓｓ社製）にて、ＦＩＴＣシグナル（緑）とローダミンシグナル（赤）を観察した。ファロイジンはＦ−アクチンに特異的に結合するため、細胞骨格を判別することを可能にする化合物である。
【００５４】
図１に示すようにペプチドＰＮＡが核内に導入、局在できることが確認できた。
【００５５】
比較例１
オリゴペプチドとして、ＲＲＲＲＲＲＲＲＲＲＲＰＫＫＫＲＫＶＲＫ（配列番号６：以下、１１Ｒ−ＮＬＳ−Ｒ−Ｋという）を用いた以外は、実施例３と同様にしてＦＩＴＣ接合ペプチドＰＮＡを製造し、細胞内への導入を観察した。
【００５６】
１１Ｒ−ＮＬＳ−Ｒ−Ｋを用いたペプチドＰＮＡは、細胞内に導入されているが（緑のシグナル）、核の中に移行せず、細胞質に留まっている（図２（ｂ））。一方、実施例３の２Ｒ−ＮＬＳ−２Ｒを用いたペプチドＰＮＡは、核内に移行している（緑のシグナル）（図２（ａ））。
【００５７】
【発明の効果】
本発明によるペプチドＰＮＡは、ＰＮＡを効率よく核内に導入することを可能とする。本発明によれば、低濃度のＰＮＡでも充分に核内に移行され効果を発揮することができるため、高濃度のＰＮＡによる細胞毒性および生体に対する毒性などの副作用を受けることなく使用できる。
【００５８】
【配列表フリーテキスト】
配列番号２：２Ｒ−ＮＬＳ−２Ｒのアミノ酸配列
配列番号３：３Ｒ−ＮＬＳのアミノ酸配列
配列番号４：ＮＬＳ−３Ｒのアミノ酸配列
配列番号６：１１Ｒ−ＮＬＳ−Ｒ−Ｋのアミノ酸配列
【００５９】
【配列表】
0003806059.tif 000004
0003806059.tif 000005
0003806059.tif 000006
【図面の簡単な説明】
【図１】オリゴペプチドとして、２Ｒ−ＮＬＳ−２Ｒ（配列番号２）を用いた場合の、細胞および核内へのペプチドＰＮＡの導入を示す蛍光顕微鏡写真のデータである。（ａ）は、ローダミンによるＦ−アクチンを示し、（ｂ）はＦＩＴＣによるペプチドを示し、（ｃ）は（ａ）および（ｂ）を重ね合わせデータである。
【図２】オリゴペプチドとして、２Ｒ−ＮＬＳ−２Ｒ（配列番号２）を用いたペプチドＰＮＡ（ａ）と、オリゴペプチドとして１１Ｒ−ＮＬＳ−Ｒ−Ｋ（配列番号６）を用いたペプチドＰＮＡ（ｂ）の細胞内への導入を示す蛍光顕微鏡写真のデータである。
【符号の説明】
１  細胞骨格
２  核
３  細胞質
【図１】
0003806059.tif 000008
【図２】
0003806059.tif 000009