(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
式（I）で示される化合物からなることを特徴とする光増感性ＤＮＡ活性阻害剤。
【化１】
0003739685.tif 000005
【請求項２】
式（I）で示される化合物からなることを特徴とする光増感性生物活性阻害剤。
【化２】
0003739685.tif 000006
【請求項３】
前記生物が、バチルス・スブチリス、メシチリン耐性スタフィロコッカス・アウレウス、メシチリン感受性スタフィロコッカス・アウレウス、カンジダ・アルビカンス、アスペルギリス・フミガタス、およびフザリウム・オキシスポラムからなる群より選ばれる１種または２種以上である、請求項２に記載の光増感性生物活性阻害剤。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は、生物活性の抑制剤およびＤＮＡ活性阻害剤に関する。
【０００２】
【従来の技術】
＜Ａ＞  ＤＮＡ結合化合物
ＤＮＡに結合するという性質を有する化合物（ＤＮＡ結合化合物）が知られており、ＤＮＡ結合化合物は、抗生物質、抗腫瘍性物質、その他の医薬品、細胞（特に核酸）染色剤等のさまざまな用途に用いられている。また、これらの化合物は、ＤＮＡに結合することから、突然変異や発がん性などの毒性を持つものもある。以下に、これまで知られているＤＮＡ結合化合物の概要を列挙する。
【０００３】
１．抗腫瘍性抗生物質
（１−１）アンスラサイクリン（Anthracycline）系抗腫瘍物質
(a) ダウノマイシン（daunomycin）
ダウノマイシンは、ストレプトミセス・ペウセティウス（Streptomyces peucetius）の生産するAnthracycline系抗生物質である。制がん剤として用いられる。白血病に対して有効である。ＤＮＡの二重鎖にインターカレートし核酸合成を阻害する。Neidle S.and Numm C.M.Natural Product reports 151-15(1998)にＤＮＡ結合様式に関する記載がある。
【０００４】
(b) ドキソルビシン（Doxorubicin、アドリアマイシン（adriamycin）ともいう）
ドキソルビシンは、ダウノマイシンのＣＯＣＨ3 がＣＯＣＨ2 ＯＨに変わったものである。ダウノマイシンより抗がんスペクトルが広く、白血病のみならず、固形がんにも広く用いられる。
【０００５】
(c) アクラシノマイシン（Aclacinomycin）
アクラシノマイシンは、ストレプトミセス・ガリアエウス（Streptomyces galilaeus）の生産するAnthracycline系抗生物質である。Daunomycin、adriamycinより心毒性が低く、急性白血病、悪性リンパ腫、乳がん他に臨床的に使用される。
【０００６】
(d) ナガラマイシンＡ（nagalamycin A）
ナガラマイシンＡについては、Neidle S.and Numm C.M.Natural Product reports 151-15(1998)に記載がある。
【０００７】
（１−２）フェノキサゾン（phenoxazone）系抗腫瘍性抗生物質
フェノキサゾン系抗腫瘍性抗生物質は、ストレプトミセス・パルブラス（Streptomyces parvullus）やストレプトミセス・アンチバイオチクス（Streptomyces antibioticus）が生産する抗腫瘍性抗生物質で、抗菌作用も強い。アクチノマイシン（Actinomycin）類は、構成アミノ酸の違いにより２０種余りに分類されるが、生産菌の培地に特定のアミノ酸を添加することにより、それぞれ異なったactinomycinが得られる。Actinomycin Ｄは、制がん剤として臨床的にて用いられている。また生化学試薬としても使われている。ＤＮＡ二重鎖に結合しＲＮＡ合成を阻害する。
【０００８】
（１−３）ネトロプシン（netropsin）
ネトロプシンは、ストレプトミセス・ネトロプシス（Streptomyces netropsis）より得られる抗生物質である。ＤＮＡ二重鎖のマイナーグルーブ（minor groove）に結合する。Neidle S.and Numm C.M.Natural Product reports 151-15(1998)に記載がある。
【０００９】
（１−４）アンスラマイシン
アンスラマイシンは、ストレプトミセス・レフイネアス（Streptomyces refuineus）の一種である、Streptomyces refuineus var.thermotolerans の生産するピロロ(1,4)ベンゾジアゼピン系の抗生物質である。培養濾液よりn-ブタノールに抽出される。酸、アルカリ、熱に不安定である。主としてグラム陽性菌に抗菌力を示し、グラム陰性菌、カビに対する抗菌力は微弱である。抗腫瘍性も示す。二本鎖ＤＮＡと結合し、ＲＮＡポリメラーゼおよびＤＮＡポリメラーゼの反応を阻害するが、ＲＮＡポリメラーゼに対する阻害の方が強い。
【００１０】
Neidle S.and Numm C.M.Natural Product reports 151-15(1998)にＤＮＡ結合様式に関する記載がある。
【００１１】
２．その他医薬品
（２−１）ソラレン化合物
ソラレン類は長波長紫外線処理により活性が高められる性質を有しており、この性質を利用して乾癬等の治療に高い効果を上げている。ＤＮＡ結合活性、ＤＮＡに関与する細胞機能解明のための試薬としても用いられている。ソラレン（Psoralen）、8-メトキシソラレン（8-Methoxypsoralen、略記「8-MOP」）、5-メトキシソラレン（5-Methoxypsoralen、略記「5-MOP」）、4,8,5'-トリメチルソラレン（4,8,5'-Trimethylpsoralen、略記「TMP」）、アンゲリシン（Angelicine）、4'-ヒドロキシメチル-4,8,5'-トリメチルソラレン（4'-Hydroxymethyl-4,8,5'-trimethylpsoralen、略記「HMT」） などがある。
【００１２】
（２−２）ポドフィロトキシン
ポドフィロトキシンは、北米ポリドフィラム・ペルタテューム（Podophyllum peltatum L.（メギ科））の地下茎などより得られる。皮膚に炎症を起こすとともに抗腫瘍作用を示す。
【００１３】
３．染料
（３−１）アクリジン色素
アクリジン色素は、塩基対とほぼ平行に重なり合うようにＤＮＡ塩基対間に入り込むインターカレーション（intercalation）を生じる。このためフレームシフト突然変異やプラスミッドの除去を引き起こす。アクリンジンオレンジ（Acridine orenge）、ICR-170、ICR 10 は発がん性が認められている。また、キノリン（Quinoline）、およびアクリジン（acridine）化合物には、光動力学作用があることも知られている。
【００１４】
(a) アクリフラビン（Acriflavin）
アクリフラビンは、ＤＮＡの塩基対間にインターカレート（intercalate）しフレームシフト突然変異を起こす。ＲＮＡの合成を阻害する。グラム陽性菌に対してもグラム陰性菌に対しても強い抗菌力を示し、局所殺菌剤として感染症の治療に用いられる。トリパノゾーマ、トリコモナスなどの原虫に対しても有効である。
【００１５】
(b) アデプリン（キナクリンあるいはアクリナミン）；
アデプリンは、抗マラリア剤として使われる。
【００１６】
（３−２）メチレンバイオレット（Methylene violet）
メチレンバイオレットはＤＮＡ 二重鎖にインターカレートする。また、細胞内のウイルスを不活化する。
【００１７】
４．生化学試薬
（４−１）ヘマトキシリン（hematoxylin）
ヘマトキシリンは、中南米産のログウッド（logwood、学名；Haematoxylon campechianum L)の心材から得られる。結晶は白色ないし黄色である。光りにあたると赤みを帯びる。溶液を放置すると暗色になる。（アルカリ金属あるいはアルカリ土類金属と）キレートを形成すると染色剤になり、核、染色体、ミトコンドリアなどを青紫色に染める。核を染色することから、ＤＮＡ結合活性があることが予想されている。
【００１８】
（４−２）ヘマトキシリン−エオシン 染色（hematoxylin-eosin staining）
ヘマトキシリン−エオシン染色は、ヘマトキシリン（hematoxylin）で細胞核を青紫色に、エオシン（eosin）で細胞質細胞質物質の大部分を赤く染める。
【００１９】
（４−３）エチジウムブロミド（ethidium bromide）
エチジウムブロミドは、フェナントリジン（Phenanthridine）系の色素である。核酸と相互作用するため、核酸のゲル電気泳動の染色に用いられる。二塩基間に挿入（インターカレーション（intercalation））され300nmの紫外線を吸収したり、核酸に吸収された260nmの紫外線が、エチジウムブロミドにエネルギー転移されると590nmの蛍光を放射するので、核酸のバンドの検出に有効である。また、ＤＮＡら旋の巻数を変化させる、インターカレーション効果を用いたＤＮＡの構造研究にも応用される。負の超ら旋にエチジウム ブロミドが１分子インターカレートされると１２゜ら旋の巻き戻りが起こる。３０分子によって１巻きほどかれる。これは沈降計数の減少で追跡できる。ＤＮＡにインターカレートされると、ＤＮＡの正常な複製や転写を妨げるため、突然変異誘起剤の効果を持つ。
【００２０】
５．毒物
（５−１）ベンゾピレン
これ自身ではＤＮＡと反応しないが、代謝酵素による産物中でベイ領域エポキシドの7,8-ジオール、9,10-エポキシドはＤＮＡとの反応性が高く、グアニン塩基付加体の形成がin vivoでも確かめられている。これが究極的な発がん物質と考えられている。
【００２１】
（５−２）アフラトキシン
アフラトキシンは、アスペルギルス・フラブス（Aspergillus flavus）より単離される。1960年英国における七面鳥大量へい死事件の原因物質である。広範囲の鳥獣魚に対して致死毒性を示す。強い発がん性を有する。生体内では2,3位の二重結合がエポキシ化された後、核酸に結合することで作用を発揮すると考えられている。
【００２２】
６．その他
（６−１）ジクタミン
シキミ（Skimmia japonica Thunb.）等の植物から得られるジクタミンは、ＤＮＡ二重差に結合することが知られている。またこの化合物は、サッカロミセス・セレビシェ（Saccharomyces cerevisiae）およびカンジダ・アルビカンス（Candida albicans）に対して抗微生物活性を示す。
【００２３】
＜Ｂ＞  ジャンクソール（Juncsol）の活性に関する既報
以下に、ジャンクソールの生物活性およびその文献を示す。ジャンクソールに関しては、人間鼻咽頭上皮癌細胞に対する細胞毒性、抗ブラインシュリンプ活性、ポテトディスク抗腫瘍活性、藻類生長阻害活性および抗微生物作用が報告されている。
【００２４】
(a) 人間鼻咽頭上皮癌細胞に対する細胞毒性
Miles,D.H.Bhattacharyya,J.Mody,N.V.Atwood,J.L.Black,S.and Hedin,P.A.The structure of juncusol.A novel cytotoxic dihydrophenanthrene from the estuarine marshplant Juncus roemerianus, J.Am.Chem.Soc.99 618-620(1997)。
【００２５】
(b) 藻類生長阻害活性（Microbial growth inhibition against Selenastrum capricornutum）
Della Greca,M.,Fiorentino,A.,Monaco,P.,Previtera,L.Influence of Phenanthrenes on microalgal growth, Proc.Plant Growth Regul.Soc.Am.(1995),22nd,125-129。
【００２６】
Della Greca,M.,Fiorentino,A.,Monaco,P.,Pinto,G.,Pollio,A.,Previtera,L.Action of antialgal compounds from Juncus effusus L.on Selenastrum capricornutum, J.Chem.Ecol.(1996),22(3),587-603。
【００２７】
(c) 抗ブラインシュリンプ活性およびポテトディスク抗腫瘍活性
Della Greca,M.,Fiorentino,A.,Mangoni,L.,Molinaro,A.,Monaco,P.and Previtera,L.Cytotoxic 9,10-dihydrophenanthrenes from Juncus effusus L.,Tetrahedron(1993),49(16),3425-32。
【００２８】
(d) 抗微生物活性（Bacillus subtilis,Mycobacterium phlei,Staphylococcus aureus）
Chapatwala,K.D.,de la Cruz,A.A.and Miles D.H.Antimicrobial activity of Juncusol,a nobel 9-10-dihyrophenanthrene from the marsh plant Juncus roemerianus, Life Science 29 1997-2000(1981)。
【００２９】
＜Ｃ＞  デヒドロエフューソール(Dehydroeffusol)にの生物活性
デヒドロエフューソールに関しては、生物活性についての報告はない。
【００３０】
【発明が解決しようとする課題】
本発明は、ＤＮＡ活性を阻害する方法および生物活性を抑制する方法を提供することを課題とする。
【００３１】
【課題を解決するための手段】
本発明者は、植物の抽出物から、１つの指標として、抗微生物活性のある化合物を探索していたところ、「イ」（Juncus effusus L.）の地下部の有機溶媒による抽出物中に、ＵＶを照射することによって、抗微生物活性が極めて顕著に増大する化合物が含まれることを見出し、この化合物を特定したところ、この化合物が光増感性のＤＮＡ結合活性を有することを見出し、本発明を完成させた。
【００３２】
すなわち、本発明は、次の通りである。
（１）式（I）で示される化合物からなることを特徴とする光増感性ＤＮＡ活性阻害剤。
【００３３】
【化３】
0003739685.tif 000002
【００３５】
（２）式（I）で示される化合物からなることを特徴とする光増感性生物活性阻害剤。
【００３６】
【化４】
0003739685.tif 000003
【００３８】
（３）前記生物が、バチルス・スブチリス、メシチリン耐性スタフィロコッカス・アウレウス、メシチリン感受性スタフィロコッカス・アウレウス、カンジダ・アルビカンス、アスペルギリス・フミガタス、およびフザリウム・オキシスポラムからなる群より選ばれる１種または２種以上である、前記（２）に記載の光増感性生物活性阻害剤。
【００３９】
【発明の実施の形態】
本発明は、紫外線（ＵＶ）を照射することによりＤＮＡに結合する活性が著しく増幅する化合物を投与して、ＤＮＡの複製、転写などのＤＮＡ活性を阻害する方法である。本発明の方法はＤＮＡ活性を阻害するため、ひいては生物活性を抑制する方法でもある。本明細書においては、光を照射して化学的な活性が生じる又は増強する化合物のことを「光増感性化合物」といい、光を照射することによりＤＮＡに結合する又はＤＮＡに結合する活性が増強する化合物を「光増感性ＤＮＡ結合剤」という。
【００４０】
まず、本発明のＤＮＡ活性阻害剤について説明し、後に生物活性抑制方法について説明する。本発明のＤＮＡ活性阻害剤では、今まで光増感性を有することが知られていなかった光増感性化合物が用いられる。式（I）で示される化合物はデヒドロエフューソール（Dehydroeffusol）という化合物である。さらに、既知のＤＮＡ結合剤などを併用してもよい。
【００４１】
デヒドロエフューソールは、合成してもよいが、植物から抽出分離して得ることもできる。例えば、植物「イ」（Juncus effusus L.）から抽出することができ、具体的な手法の１つを下記実施例に詳説した。
【００４２】
本発明で用いられる光増感性ＤＮＡ結合剤の添加量は、ＤＮＡ100ngに対して、好ましくは150pmole以上、特に好ましくは200pmole以上である。これらの範囲以上であれば、十分かつ円滑にＤＮＡ活性を阻害することができる。ＤＮＡ活性を阻害するという点からは特に添加量に上限はないが、所定量を超えると添加量に応じたほどの効果は得にくくなる。
【００４３】
本発明のＤＮＡ活性阻害方法では、対象物に上記の光増感性ＤＮＡ活性阻害剤を添加し、ＵＶを照射する。デヒドロエフューソールは、光を当てなくても二重鎖ＤＮＡにインターカレートすると考えられるが、ＵＶを照射することによりＤＮＡに結合する。ＤＮＡに結合させるために照射するＵＶの強度は、好ましくは２０ｋJ/m2以上であり、より好ましくは３０ｋJ/m2以上である。照射するＵＶの波長は、好ましくはＵＶＡの波長域である３１５〜４００ｎｍ程度である。
【００４４】
デヒドロエフューソールについては、チミン（Ｔ）およびアデニン（Ａ）が連なっている部分に結合しやすい傾向があり、ＡＴリッチな領域への親和性が高いものと考えられる。生物における二重鎖ＤＮＡ分子においてＡＴリッチな部分としては、例えば、ＤＮＡの複製起点にあるＡＴリッチな領域やＲＮＡ転写開始に必要なプロモーター領域にあるTATAボックスなどが挙げられる。したがって、デヒドロエフューソールは、これらの結合しやすい部位へ所望の薬物等を送達するための担体として利用することも可能である。
【００４５】
本発明で用いられる上記光増感性ＤＮＡ結合剤は、二重鎖ＤＮＡに結合するため、ＤＮＡ活性を阻害する。ＤＮＡ活性阻害とは、より具体的には、ＤＮＡポリメラーゼ阻害、これに起因するＤＮＡの複製阻害および細胞分裂阻害、さらにＲＮＡポリメラーゼ阻害、これに起因するＲＮＡ転写阻害およびタンパク質合成阻害などが挙げられる。
【００４６】
ＤＮＡ活性を阻害しようとする対象物はＤＮＡを含むものであり、二重鎖ＤＮＡ分子を含む細胞、微生物などが対象物として特に好適である。
【００４７】
式（Ｉ）で示される光増感性ＤＮＡ活性阻害剤は、ＤＮＡ活性に基づく様々な生物活性を阻害または抑制する抗生物剤として用いることもできる。すなわち本発明は、ＤＮＡ活性阻害剤であるデヒドロエフュソールを対象物に添加しＵＶを照射することにより、これらの化合物を抗微生物剤、抗腫瘍剤、光化学療法剤、乾癬等の皮膚病に対する薬剤などの医薬として利用すること、およびＤＮＡの複製・転写・修復機構の解明、ＤＮＡ構造解析・反応性の解明あるいは酵素合成阻害などの各種研究用試薬として利用することを可能にするものである。
【００４８】
したがって、本発明は、生物活性を抑制する光増感性生物活性阻害剤を提供するものでもある。本発明の光増感性生物活性阻害剤が特に有効に適用される具体例を例示すると、例えば、グラム陽性バクテリアである、バチルス・スブチリス（和名：枯草菌、学名：Batillus subtilis）、メシチリン耐性およびメシチリン感受性スタフィロコッカス・アウレウス（和名：黄色ブドウ球菌、学名：Staphylococcus aureus）、真菌である、カンジダ・アルビカンス（Candida albicans）、アスペルギリス・フミガタス（Aspergillis fumigatus）、フザリウム・オキシスポラム（Fusariumoxysporum）などに対して好適であり、特に好ましくは、バチルス・スブチリス、メシチリン耐性スタフィロコッカス・アウレウス、メシチリン感受性スタフィロコッカス・アウレウス、カンジダ・アルビカンスなどに好適である。
【００４９】
生物活性を抑制するためにデヒドロエフューソール等を用いる場合の好ましい添加量は、上記ＤＮＡ活性阻害剤として用いる場合の添加量を１つの目安とすることができ、対象とする生物の種類などの条件に応じて適宜調整すればよい。好ましい添加量の例を具体的に例示すると、デヒドロエフューソールの場合、メシチリン耐性を有するスタフィロコッカス・アウレウス、メシチリン耐性を有しないスタフィロコッカス・アウレウスおよびカンジダ・アルビカンスのそれぞれに対しては最小限濃度として1.6μg/ml程度であり、バチルス・スブチリスに対しては最小限濃度として3.1μg/ml程度である。
【００５０】
デヒドロエフューソールをＤＮＡ活性阻害剤または抗生物剤とする場合の剤形には特に制限はなく、医薬品、試薬として一般的に用いられるさまざまな剤形とすることができる。例えば、そのものを乾燥させて、粉末、粒状などにしておいてもよいし、また、例えば、含エタノール水溶液などの基材または溶媒に配合してもよい。さらに、光増感性ＤＮＡ結合活性を損なわない限りにおいて、他のＤＮＡ活性阻害剤、医薬、試薬と混合してもよい。ＤＮＡ活性阻害剤等の中の、デヒドロエフューソールの濃度は、用途などに応じて適宜調整することができる。
【００５１】
【実施例】
下記に実施例を示し本発明をより詳細に説明するが、本発明は下記実施例に限定されるものではない。
【００５２】
＜実施例１＞光増感性ＤＮＡ結合剤の単離
以下に、ジャンクソールおよびデヒドロエフューソールの単離方法について説明する。抽出スキームを図１に示す。
【００５３】
植物「イ」（Juncus effusus L.）の地下部風乾物粉末を448ｇをメタノールで抽出し、51.27ｇの粗抽出物を得た。これをメタノール（200ml）と水（100ml）の混合物に溶解し、ヘキサン300mlで２度抽出した。下層（メタノール−水層）を減圧濃縮した後、新たに水150mlを加えたものを酢酸エチル300mlで２度抽出後、得られた抽出物を減圧濃縮し茶褐色の酢酸エチル抽出物13.9ｇを得た。残った水層を、200mlのｎ−ブタノールで２度抽出し、ｎ−ブタノール層及び水層をそれぞれ11.14ｇおよび22.2ｇ得た。
【００５４】
得られた酢酸エチル抽出物13.9ｇを200ｇのシリカゲルカラムクロマトグラフィーに付し、ヘキサン−酢酸エチルの溶出溶媒で酢酸エチルの割合を増やすことで極性を上げながら順次溶出し、１１の画分を得た後、メタノールで溶出することによりさらに２画分を得た。これらを溶出順に、Fr01（ヘキサン［Ｈ］：酢酸エチル［Ｅ］＝1000：50、500ml）、Fr02（Ｈ：Ｅ＝1000：100、500ml）、Fr03（Ｈ：Ｅ＝1000：100、500ml）、Fr04（Ｈ：Ｅ＝1000：200、500ml）、Fr05（Ｈ：Ｅ＝1000：200、600ml）、Fr06（Ｈ：Ｅ＝900：300、500ml）、Fr07（Ｈ：Ｅ＝900：300、600ml）、Fr08（Ｈ：Ｅ＝600：600、500ml）、Fr09（Ｈ：Ｅ＝600：600、600ml）、Fr10（Ｅ、500ml）、Fr11（Ｅ、600ml）、Fr12（メタノール、500ml）、Fr13（メタノール、1000ml）とした。
【００５５】
Fr06およびFr07を混合したもの（Fr 0607、2.59ｇ）を40ｇのシリカゲルカラムクロマトグラフィーに付し、ヘキサン[Ｈ]−クロロホルム[Ｃ]−メタノール[Ｍ]系の溶出溶媒で極性を上げながら順次溶出し、２５画分を得た。これらを溶出順に、Fr0607-01（Ｈ：Ｃ：Ｍ＝100:50:1、200ml）、Fr0607-02（Ｈ：Ｃ：Ｍ＝70:50:1、240ml）、Fr0607-03からFr0607-12まで（Ｈ：Ｃ：Ｍ＝20:50:1、各15ml）、Fr0607-13からFr0607-20まで（Ｃ：Ｍ＝100：1、各15ml）、Fr0607-21からFr0607-25まで（Ｃ：Ｍ＝50：1、各15ml）とした。このうち、Fr0607-04からFr0706-15まで、Fr0607-16からFr0706-22まで、Fr0607-23からFr0706-25までをそれぞれひとまとめにし、それぞれ、Fr0607-0415、Fr0607-1622、Fr0607-2325とした。
【００５６】
さらに、Fr0607-0415（2.16ｇ）を20ｇのシリカゲルかラムクロマトグラフィーに付し、ヘキサン−クロロホルム−メタノール系の溶出溶媒で極性を上げながら順次溶出し、５つの画分を得た。これらを溶出順にFr0607-0415-01（Ｈ：Ｃ：Ｍ＝200：50：1、550ml）、Fr0607-0415-02（Ｈ：Ｃ：Ｍ＝100:50:1、525ml）、Fr0607-0415-03（Ｈ：Ｃ：Ｍ＝900：350：7、300ml）、Fr0607-0415-04（Ｈ：Ｃ：Ｍ＝900：350：7、300ml）、Fr0607-0415-05（Ｈ：Ｃ：Ｍ＝30：100：1、390ml）とした。
【００５７】
Fr0607-1622（462.0mg）およびFr0607-0415-05（954.8mg）を混合してFr0607-αとし、これをシリカゲルカラムクロマトグラフィーに付し、ヘキサン−クロロホルム−メタノール系の溶出溶媒で極性を上げながら順次溶出し、４つの画分を得た。これらを溶出順に、Fr0607-α-1（Ｈ：Ｃ：Ｍ＝100：50：1、550ml）、Fr0607-α-2（Ｈ：Ｃ：Ｍ＝100：50：１、500ml）、Fr0607-α-3（Ｈ：Ｃ：Ｍ＝100：50：1、500ml）、Fr0607-α-4（Ｈ：Ｃ：Ｍ＝90：40：1、490ml）とした。
【００５８】
Fr0607-α-1（173.3mg）を調製ＴＬＣに付し、Ｒｆ値の高い方および低い方のバンドをかき取ることにより２つの画分Fr0607-α-1H（Ｒｆ値の高い方）およびFr0607-α-1L（Ｒｆ値の低い方）を得た。
【００５９】
Fr0607-α-1LをＨＰＬＣ（高速液体クロマトグラフィー）に付し、保持時間17.04分（カラム：Waters bondopack C18、7.9×300mm。溶出溶媒［アセトニトリル−水系］：0−4分、アセトニトリル30％；4−20分、アセトニトリル30％から40％に徐々に増加；20−21分、アセトニトリル40％；21−23分、アセトニトリル40％から30％に減少）のピーク化合物を集め、ジャンクソール(化合物２)の精製物を79.3mg得た。
【００６０】
Fr0607-2325（13.8mg）およびFr0607-α-4（58.5mg）を合わせたもの（Fr0607-β）を調製ＴＬＣに付し、Ｒｆ値の高い方およびＲｆ値の低い方のバンドをかき取ることにより２つの画分Fr0607-βH（Ｒｆ値の高い方）およびFr0607-βL（Ｒｆ値の低い方）を得た。
【００６１】
Fr0607-βLをＨＰＬＣに付し、保持時間47.86分（カラム：Waters bondopack C18、7.9×300mm。溶出溶媒［アセトニトリル−水系］：0−30分、アセトニトリル24％；30−45分、アセトニトリル24％から28％に徐々に増加；45−51分、アセトニトリル28％；51−52分、アセトニトリル28％から24％に減少）のピークの化合物を集め、デヒドロエフューソール（化合物１）の精製物を6.8mg得た。
【００６２】
＜実施例２＞．生物検定（最小阻害濃度測定）
上記のようにして得たデヒドロエフューソール（化合物１）およびジャンクソール（化合物２）、ならびに既存抗生物質・抗菌剤について、各種微生物に対する阻害作用が認められる最小の濃度（最小阻害濃度）を試験した結果を表１に示した。
【００６３】
なお、各微生物に対する最小阻害濃度の測定は、M.Kobaisy,Z.Abramowski,L.Lermer,G.Saxena,R.E.W.Hancock,and G.H.N Towers, Antimycobacterial Polyynes of Devil's Club(Oplopanax horridus),A North American Native Medicinal Plant.,Journal of Natural products,60,1210-1213(1997)に示された方法に従った。試験は、それぞれの微生物に対して、暗所条件下またはＵＶＡ照射下（8.8W/m2で１時間照射、照射エネルギーに換算して31.7kJ/m2）で行った。
【００６４】
【表１】
0003739685.tif 000004
【００６５】
表１に示されるように、デヒドロエフューソール（化合物１）は、既存の光増感作用を示し乾癬の治療薬として用いられている８−ＭＯＰより高い活性を、真菌であるCandida albicansおよびグラム陽性菌のBatillus subtilisに対して示し、同等の抗バクテリア活性をメシチリン感受性および耐性Staphylococcus aureusに対して示した。またこの化合物は、ＵＶＡ照射により、Candida albicansに対して、既存の抗真菌薬であるナイスタチンの暗所における活性よりも強い抗菌活性を示した。
【００６６】
ジャンクソール（化合物２）は、デヒドロエフューソールよりは弱いながらも、各種の微生物に対して抗微生物活性を示し、メシチリン感受性 Staphylococcus aureusおよびCandida albicansに対しては、光増感作用による抗微生物活性の増大を示した。
【００６７】
＜実施例３＞ＤＮＡ結合活性の測定
本発明者らは、図４に示したポリリンカーサイトを有する1518残基の塩基配列をもつ二重鎖ＤＮＡ分子を構築し、この二重鎖ＤＮＡ分子に化合物を作用させ、ＵＶＡを照射あるいは非照射処理した後に各種の制限酵素で切断し、得られるＤＮＡ断片を観察することで、化合物のＤＮＡ結合活性を調べる実験系を構築した。ＤＮＡ結合活性のある化合物は、ＤＮＡに結合することで制限酵素の基質となるＤＮＡの構造を変化させるため、制限酵素が働かなくなる。したがって、ＤＮＡ結合剤を作用させた後、各種の制限酵素を作用させ、電気泳動などによってＤＮＡ断片の大きさを測定することにより、そのＤＮＡ結合活性を測ることができる。具体的には、図４に示されるＤＮＡ鎖をＤＮＡ結合剤で処理した後、図４中に示される制限酵素のうちの１種で処理した場合、その制限酵素の認識部位にＤＮＡ結合剤が結合していれば、1.5kbのＤＮＡ断片は切断されずに、1.5kbの大きさを示す位置に泳動バンドが現れる。
【００６８】
図５に、上記のＤＮＡ結合活性測定方法に従って、デヒドロエフューソールとジャンクソールのＤＮＡ結合活性を測定した結果を示す。なお、デヒドロエフューソールおよびジャンクソールは、ＤＮＡ断片100ngに対して各々200pmoleの本発明化合物を添加した。また、各制限酵素ごとに、ＵＶＡ照射した場合（図５中、「Ｕ」）と、ＵＶＡ非照射の暗所条件下の場合（図５中、「Ｄ」）とについて試験を行った。
【００６９】
図５に示されるとおり、デヒドロエフューソールに関しては、Kpn I、Pac I、Xba I、Pme I、Dra I、Bci VIおよびSph Iが強く阻害されている。これら６種の制限酵素は、5'-TpA塩基配列を制限サイトにもっており、デヒドロエフューソールがＡＴリッチな部分に結合する傾向があることが明らかになった。また、上記の６種の他、EcoR I、Sac I、BamH I、Sal I、Pst I、およびHind IIIもわずかに阻害を受けていることが分かる。なお、Bci VIについては暗所条件下の場合にも1.5kbの位置に若干バンドが検出されているが、使用した制限酵素の活性が弱く、ジャンクソールで処理しない場合であっても完全にはＤＮＡ断片を切断できないためである。
【００７０】
他方、ジャンクソールに関してはKpn I、Bci VIおよびSph Iに対して阻害作用を示すことが1.5kbの非切断断片が検出されたことから明かとなった。このうち前者２つの制限酵素は、5'-TpA塩基配列を制限サイトにもつ制限酵素であり、ジャンクソールもＡＴリッチな領域に結合する傾向を示している。なお、Bci VIについては暗所条件下の場合にも1.5kbの位置に若干バンドが検出されているが、使用した制限酵素の活性が弱く、ジャンクソールで処理しない場合であっても完全にはＤＮＡ断片を切断できないためである。
【００７１】
また、図５に示される結果からは、デヒドロエフューソールは、ジャンクソールよりもより強いＤＮＡ結合作用があることが明かとなった。
【００７２】
【発明の効果】
本発明によれば、ＤＮＡの複製、転写をなどのＤＮＡの活性を阻害し、細胞や微生物などの生物活性を抑制することができる。
【図面の簡単な説明】
【図１】ジャンクソールおよびデヒドロエフューソールの単離操作のスキーム（単離スキーム１−１）を示す図である。
【図２】ジャンクソールの単離操作のスキーム（単離スキーム１−２）を示す図である。
【図３】デヒドロエフューソールの単離操作のスキーム（単離スキーム１−３）を示す図である。
【図４】ＤＮＡ結合活性測定に用いたＤＮＡ鎖およびそのＤＮＡ鎖の制限酵素認識部位を示す図である。なお、上段右端部「＊」は下段左端部「＊」に連続する。
【図５】実施例３の実験による電気泳動の結果を示す図である。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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