(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
ヒトヨタケ科に属する担子菌の子実体から有機溶剤を抽出溶媒として用いて摘出を行なうことを特徴とするエルゴステロール又は下記の式〔Ｉ〕で表されるエルゴステロール類縁体の製造方法
【化１】
0003756538.tif 000006
但し、式中Ｒは、
【化２】
0003756538.tif 000007
又は
【化３】
0003756538.tif 000008
のいずれかである。
【請求項２】
エルゴステロール又は請求項１記載のエルゴステロール類縁体を有効成分として含有する種子形成抑制剤
【発明の詳細な説明】
【０００１】
本発明は、エルゴステロールあるいはその類縁体物質を使用する植物の種子形成抑制剤に関するものである。
【０００２】
【従来の技術】
ヒトヨタケ科に属する担子菌の子実体の抽出物が、植物の種子形成抑制作用を有することは知られていない。
【０００３】
【発明が解決しようとする課題】
本発明の目的はエルゴステロール又はその類縁体物質を有効成分とする植物の種子形成抑制剤を提供することにある。
【０００４】
本発明の他の目的は毒性のない除草剤等として有用な種子形成抑制剤を提供することにある。
【０００５】
【課題を解決するための手段】
本発明者らは上記目的を達成するべく鋭意検討の結果、ヒトヨタケ科に属する担子菌の子実体のアセトン抽出物が種子形成抑制作用を有する成分を含んでいることを見出してその分離に成功した。本発明はかかる知見に基づいてなされたものである。
【０００６】
すなわち、本発明は、ヒトヨタケ科に属する担子菌の子実体から有機溶剤を抽出溶媒として用いて抽出を行なうことを特徴とするエルゴステロール又は下記の式〔Ｉ〕で表されるエルゴステロール類縁体の製造方法
【０００７】
【化４】
0003756538.tif 000002
（但し、式中Ｒは、
【０００８】
【化５】
0003756538.tif 000003
又は
【０００９】
【化６】
0003756538.tif 000004
のいずれかである。）、およびこれらのエルゴステロール又はその類縁体を有効成分として含有する種子形成抑制剤に関するものである。
【００１０】
エルゴステロール及び上記のエルゴステロール類縁体はヒトヨタケ科の担子菌の子実体から得ることができる。これらの担子菌の例としてはヒトヨタケ科のヒトヨタケを挙げることができる。
【００１１】
上記の子実体を抽出しやすいようにまず細断、または粉砕しておく。次いで、抽出を行なう。抽出溶媒にはアセトン、メタノール、エタノール、クロロホルム、酢酸メチル、酢酸エチル等の有機溶媒を用いることができる。抽出液からのエルゴステロール及びその類縁体の分離には溶媒抽出や各種クロマトグラフィーを組み合わせて行なえばよい。
【００１２】
本発明のエルゴステロール類縁体はいずれもアセトン可溶性、酢酸エチル可溶性であり、シリカゲルを薄層に用いベンゼン：酢酸エチル：クロロホルム（混合比５：５：２）を展開溶媒とした場合Ｒｆ値は０．６である。
【００１３】
エルゴステロール及び本発明のエルゴステロール類縁体はいずれも種子形成抑制作用を有しているので種子形成抑制剤として使用することができる。種子形成抑制剤には子実体から抽出した抽出液をそのまま、あるいは濃縮して必要により第３成分を適宜配合して製剤とすればよい。目的により更に精製したものも使用しうることはいうまでもない。
【００１４】
植物体に使用する時期は一年草、多年草の草花では幼芽の形成以降から花芽形成の前であり、樹木では新芽が形成し、花芽形成の前に使用する。使用に際しての濃度は、抽出固形物として０．０１〜１０ｗ／ｖ％である。
【００１５】
適用方法を例示すれば、噴霧、塗布、滴下などの方法が適宜用いられる。
【００１６】
【実施例】
実施例１
ヒトヨタケの子実体５００ｇをミキサーと乳鉢により粉砕し、アセトン１ｌに浸漬して室温下で７２時間時折ゆるくかきまぜながら抽出を行なった。抽出液を濾別し、残渣を少量のアセトンで洗浄した。洗浄液を抽出液に合わせ、アセトンを留去した。この残渣を分液ロートに移し、酢酸エチル３００ｍｌと塩酸でｐＨ２に調整した水３００ｍｌを加えて抽出を行なった。
【００１７】
酢酸エチル層を分取して、分取用薄層クロマトグラフィーで分離を行なった。薄層には厚さ１ｍｍのシリカゲルを用い、ベンゼン：酢酸エチル：クロロホルム（混合比５：５：２）の混合溶媒で展開した。点着量は３００μｌでＵＶ２５４ｎｍで検出されるＲｆ０．６付近のスポットを掻き取り、クロロホルムを１００ｍｌ用いて抽出した。抽出液をＯＤＳ，ＹＭＣ−Ａ３２３(２５０×１０ｍｍ)に入れ、メタノール：アセトニトリル(混合比５：２)の混合溶媒を３ｍｌ／ｍｉｎの速度で流して高速液体クロマトグラフィーを行なった。流出液の２５４ｎｍにおける吸光度を測定して２０分以降に現れた３つの大きなピークをそれぞれ分取した。
【００１８】
各ピークの化合物の紫外線吸収スペクトル、融点、旋光度、質量分析、ＮＭＲおよび赤外線吸収スペクトルを測定した結果を高速液体クロマトグラフィーの流出順に示す。
【００１９】
（第１ピーク化合物の分析）
ＵＶ：
吸収極大（ｎｍ）  ２６０，２７１，２８２，２９４
ｍａｓｓ（Ｌｏｗ）：
ｍ／ｅ  ３９６，３７８，３６３，３５１，３１２，２５３，２５１，２１１，２０７，１９９
ｍａｓｓ（Ｈｉｇｈ）：
３９６．３３９９、Ｃ28Ｈ44Ｏ、不飽和度＝７
1Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3）δｐｐｍ：
０．５〜１．１（１５Ｈ，メチル）
３．６４（１Ｈ，ｔ，ｔ，３−Ｈ）
４．６〜４．８（２Ｈ，ｓ，２８−Ｈ）
５．４（１Ｈ，ｄ，ｔ，６−Ｈ）
５．６（１Ｈ，ｄ，ｄ，７−Ｈ）
ＩＲ：
３４２０，２９５７，２９３１，２８７１，１６５６，１４６４，１３７８，１０５７，１０３２，８３２
【００２０】
（第２ピーク化合物の分析）
ＵＶ：
吸収極大（ｎｍ）  ２６０，２７１，２８２，２９４
ｍ．ｐ．：
１５８〜１６０℃
〔α〕D：
〔α〕D（２７℃）＝−１０８．５５°（Ｃ＝０．２，ＣＨＣｌ3）
比較(市販品)  〔α〕D(２５．８)＝−１１２.１６(Ｃ＝０.２５，ＣＨＣｌ3)
質量分析：
ｍａｓｓ（Ｌｏｗ）
ｍ／ｅ  ３９６，３７８，３６３，３３７，２５３，２１１，１９９
ｍａｓｓ（Ｈｉｇｈ）
３６９．３４１８、Ｃ28Ｈ44Ｏ、不飽和度＝７
1Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3）δｐｐｍ：
０．５〜１．１（１８Ｈ，メチル）
２．２４〜２．３１（１Ｈ，ｔ，ｑ，９−Ｈ）
２．４５〜２．４９（１Ｈ，ｄ，ｇ，１７−Ｈ）
３．６５（１Ｈ，ｔ，ｔ，３−Ｈ）
５．２（２Ｈ，ｄ，ｄ，２２−Ｈ，２３−Ｈ）
５．３９（１Ｈ，ｄ，ｔ，６−Ｈ）
５．５７（１Ｈ，ｄ，ｄ，７−Ｈ）
ＩＲ（ＫＢｒ）ｃｍ-1：
３４２５，２９５４，２９３０，３８７１，１６５５，１４５９，１３８３，１３６９，１０５５，１０３３，９６８，８３４
【００２１】
（第３ピーク化合物の分析）
ＵＶ：
吸収極大（ｎｍ）  ２６０，２７１，２８２，２９４
ｍ．ｐ．：
１５０〜１５３℃
旋光度〔α〕D：
〔α〕D（２７℃）＝−１０４．６４°（Ｃ＝０．２５４，ＣＨＣｌ3）
質量分析：
ｍａｓｓ（Ｌｏｗ）
３９８，３８０，３６５，３３９，２５５，２５３，２１１，１９９
ｍａｓｓ（Ｈｉｇｈ）
３９８．３５５０、Ｃ28Ｈ46Ｏ、不飽和度＝７
1Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3）δｐｐｍ：
０．５〜１．１（１８Ｈ，メチル）
２．２〜２．４（１Ｈ，ｔ，ｑ，９−Ｈ）
２．４〜２．６（１Ｈ，ｔ，ｑ，１７−Ｈ）
３．６４（１Ｈ，ｔ，ｔ，３−Ｈ）
５．４（１Ｈ，ｄ，ｔ，６−Ｈ）
５．６（１Ｈ，ｄ，ｄ，７−Ｈ）
ＩＲ（ＫＢｒ）ｃｍ-1：
３３５７，２９６１，２９３６，２８７１，１６４０，１４６３，１３７９，１０５７，１０３９，９８５，９４６，８３３
【００２２】
以上の分析結果から第１ピーク化合物はエルゴスター５，７，２４（２８）−トリエン−３−オール、第２ピーク化合物はエルゴステロール、そして第３ピーク化合物はエルゴスター５，７−ジエン−３β−オールと同定した。
【００２３】
上記のエルゴステロールおよびエルゴステロール類縁体の植物の生育および種子形成能に対する影響をシロイヌナズナ（Ａｎａｂｉｄｏｐｓｉｓ  Ｔｈａｌｉａｎａ）を用いて調べた。
【００２４】
測定方法としては、まず、プランターにバーミキュライトを入れ、その上にロックウールをひき、下記のメディウム５０ｍｌをまき、シロイヌナズナの種を播種する。
【００２５】
ＭｇＳＯ4・７Ｈ2Ｏ：７３．９６ｇ／リットル
Ｃａ（ＮＯ3）2・４Ｈ2Ｏ：９４．４４ｇ／リットル
ＮａＨ2ＰＯ4・２Ｈ2Ｏ：５５．２０ｇ／リットル
ＫＮＯ3：６０．６６ｇ／リットル
Ｎａ2Ｈ2ＥＤＴＡ：５．０ｇ／リットル
ＦｅＳＯ4・７Ｈ2Ｏ：０．４８ｇ／リットル
ＭｎＳＯ4・４Ｈ2Ｏ：０．４６ｇ／リットル
ＣｕＳＯ4・５Ｈ2Ｏ：０．０４８ｇ／リットル
ＺｎＳＯ4・７Ｈ2Ｏ：０．０５８ｇ／リットル
Ｈ3ＢＯ3：０．３７２ｇ／リットル
（ＮＨ4）6Ｍｏ7Ｏ24・４Ｈ2Ｏ：０．００６ｇ／リットル
【００２６】
その後、２５℃、１６時間  明、８時間  暗の明暗サイクルを繰り返し、１週間に２回メディウムをまく。播種後、１８日前後のシロイヌナズナ株を１０株／１プランターに間引きし、花芽を形成する直前の株の中心部に１０μｌの試験物質溶液（溶解にはメタノール，アセトンを用いる）と、対照用として溶媒のみをそれぞれ１０μｌ滴下し、滴下後の株の状態を２４時間毎に観察した。
【００２７】
前記のエルゴステロール又はその類縁体５０ｍｇをとり、２ｍｌの５０％アセトンで懸濁させたものを上記のｉｎ−ｖｉｖｏテストによる種子形成抑制効果を観察した結果を表１に示す。
【００２８】
【表１】
0003756538.tif 000005
【００２９】
尚、枯れ死および生育抑制はすべて起こらなかった。
【００３０】
【発明の効果】
本発明のエルゴステロール及びその類縁体は新たな毒性のない種子形成抑制剤として使用しうる。