(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
次の工程（Ａ）から（Ｄ）を含んで糖化物質の比率を測定する光学的分析方法。
（Ａ）タンパク質等とそれに糖が結合した糖化物質とを含む試料に、糖化物質のグリコシル基に結合性を有する色素Ｄ１を反応させて色素標識糖化物質を生成させる工程、
（Ｂ）前記工程を経た反応液を、沈澱を生成させることなく、メンブランフィルタ、精密濾過膜、限外濾過膜又は逆浸透膜によって濾過し、その反応液中のタンパク質等と色素標識糖化物質とをその膜に捕集する工程、
（Ｃ）その膜に捕集された状態のタンパク質等と色素標識糖化物質とに、前記色素Ｄ１の吸収波長λ１及びタンパク質等の吸収波長λ２を含む光を照射し、その反射光から波長λ１及びλ２でのそれぞれの反射光強度Ａ１及びＡ２を測定する工程、
（Ｄ）タンパク質等による反射光強度Ａ２に対する色素Ｄ１による反射光強度Ａ１の比Ａ１／Ａ２を算出し、その比を基にして糖化物質の比率を求める工程。
【請求項２】
タンパク質等がヘモグロビンであり、糖化物質がグリコヘモグロビンである請求項１に記載の光学的分析方法。
【請求項３】
次の工程（Ａ）から（Ｄ）を含んで糖化物質の比率を測定する光学的分析方法。
（Ａ）タンパク質等とそれに糖が結合した糖化物質とを含む試料に、糖化物質のグリコシル基に結合性を有する色素Ｄ１とタンパク質等に結合性を有する色素Ｄ２を反応させて色素Ｄ１標識糖化物質と色素Ｄ２標識タンパク質等とを生成させる工程、
（Ｂ）前記工程を経た反応液を、沈澱を生成させることなく、メンブランフィルタ、精密濾過膜、限外濾過膜又は逆浸透膜によって濾過し、その反応液中のタンパク質等と糖化物質とをその膜に捕集する工程、
（Ｃ）その膜に捕集された状態のタンパク質等と糖化物質とに、色素Ｄ１の吸収波長λ１及び色素Ｄ２の吸収波長λ３を含む光を照射し、その反射光から波長λ１及びλ３でのそれぞれの反射光強度Ａ１及びＡ３を検出する工程、
（Ｄ）色素Ｄ２による反射光強度Ａ３に対する色素Ｄ１による反射光強度Ａ１の比Ａ１／Ａ３を算出し、その比を基にして糖化物質の比率を求める工程。
【請求項４】
タンパク質等がアルブミンであり、糖化物質がグリコアルブミンである請求項３に記載の光学的分析方法。
【請求項５】
糖化物質に結合性を有する色素Ｄ１は、ジヒドロキシボロニル基含有色素又は色素標識抗糖化物質抗体である請求項１から４のいずれかに記載の光学的分析方法。
【請求項６】
タンパク質等に結合性を有する色素Ｄ２は、ブロムクレゾールパープル、ブロムフェノールブルー、ブロムクレゾールグリーンもしくは、チバクロンブルー−Ｆ３Ｇ−Ａから選ばれるタンパク質結合性色素、又は色素標識抗タンパク質等抗体である請求項３又は４に記載の光学的分析方法。
【請求項７】
糖化物質に結合性を有する色素Ｄ１は蛍光色素であり、反射光強度Ａ１の測定に代えて、膜に捕集されたタンパク質等と糖化物質へのその色素Ｄ１を励起できる波長光の照射による蛍光測定を行ない、反射光強度Ａ１に代えてその蛍光強度Ｆ１を用いる請求項１から６のいずれかに記載の光学的分析方法。
【請求項８】
タンパク質等からの反射光強度Ａ２の測定に代えて、膜に捕集されたタンパク質等と糖化物質への励起波長光の照射による蛍光測定を行ない、反射光強度Ａ２に代えてその蛍光強度Ｆ２を用いる請求項１，２，５又は７に記載の光学的分析方法。
【請求項９】
タンパク質等に結合性を有する色素Ｄ２は蛍光色素であり、反射光強度Ａ３の測定に代えて、膜に捕集されたタンパク質等と糖化物質へのその色素Ｄ２を励起できる波長光の照射による蛍光測定を行ない、反射光強度Ａ３に代えてその蛍光強度Ｆ３を用いる請求項３，４，５又は７に記載の光学的分析方法。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は糖化アルブミン、糖化ヘモグロビン、糖化グロブリンなどの糖化物質の測定を行なう光学的分析方法に関するものである。
【０００２】
【従来の技術】
糖化物質は、タンパク質、ペプチド又はアミノ酸のようなアミノ基を有する物質（これらを総称してタンパク質等という）と、アルドースのような還元性の糖が共存する場合、一部のアミノ基とアルデヒド基が非酵素的に結合して生成される。糖化物質の生成量は、反応性物質の濃度、接触時間、温度などの関数で表わされる。したがって、その生成量からそれらの反応性物質を含有する物質に関する様々な情報を得ることができると考えられている。糖化物質を含有するものとしては、醤油などの食品や、血液などの体液がある。
【０００３】
例えば、生体では糖とアミノ酸が結合し、糖化物質であるフルクトシルアミン誘導体が生成している。血液中のヘモグロビンが糖化されたフルクトシルアミン誘導体はグリコヘモグロビン、アルブミンが糖化されたフルクトシルアミン誘導体はグリコアルブミン、血液中のタンパク質が糖化されたフルクトシルアミン誘導体はフルクトサミンと呼ばれる。これらのフルクトシルアミン誘導体の血中濃度は、過去の一定期間の平均血糖値を反映しており、その測定値は糖尿病の病状の診断及び病状の管理の重要な指標となりうる。グリコヘモグロビン（ＧＨｂ）は、その濃度が１〜２ヵ月間の平均的な血中糖濃度を反映するため、糖尿病の診断あるいは経過観察に適した指標として広く利用されている。ＧＨｂは、総Ｈｂ中の特定のＧＨｂであるヘモグロビンＡ1c（ＨｂA1cと略す）の割合を指標として用いることが一般化されており、通常、比率で表示され、約４〜６％が目安とされている。
また、食品中の糖化物質を測定することにより、その食品の製造後の保存状況や期間を知ることができ、品質管理に役立つと考えられる。
このように、糖化物質の測定は、医学及び食品を含む広範な分野で有用である。
【０００４】
ＧＨｂの測定法としては、電気泳動法、ボロン酸アフィニティ−クロマトグラフィー法、イオン交換クロマトグラフィー法、イムノアッセイ法などが知られているが、現在では所要時間や分離性などの点からイオン交換高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）法が主流となっている。
ＨＰＬＣ法は、コストが高い、測定に時間がかかるとともに、わずかな温度変化や不安定型グリコヘモグロビン、カルバミル化ヘモグロビン及びアセチル化ヘモグロビンによって測定値が影響を受ける欠点がある。
【０００５】
一方、イムノアッセイ法は、用いる抗体の特異性が高いため、ＨＰＬＣ法において問題となるヘモグロビン変化物などの影響を受けず、迅速で、かつ検体処理能力が大きい長所があるが、一般に精度がＨＰＬＣ法より低い傾向がある。また、ＧＨｂに対する特異抗体はＨｂとの化学構造が相違する部位をエピトープとしているため、特定のＧＨｂであるＨｂA1cではその部位は十分露出しておらず、イムノアッセイを行なう際、露出させるための変性操作を必要とすることが多い。
【０００６】
従来のＨＰＬＣ法及びイムノアッセイ法では比較的大型の分析装置を必要とし、大病院検査室や検査センターで測定が行なわれているのが現状である。これに反し、中小病院や開業医でも簡易で迅速に測定できるキットや装置が開発されればそのメリットは極めて大きいわけであるが、それに適したものは現在まだ市販されていない。
【０００７】
ＧＨｂを色素結合ボロン酸で着色した後、Ｈｂ及び着色化ＧＨｂを亜鉛イオンで沈殿させ、その沈澱を分取して未反応の色素から分離した後、その沈澱をそのまま、又は再溶解した溶液について色素及びＨｂのそれぞれの吸収波長での反射光強度を測定することにより、Ｈｂに対するＧＨｂの比率を求める方法が提案されている（特表平４−５０６７０３号公報参照）。
【０００８】
【発明が解決しようとする課題】
提案の方法は、沈澱を分取することによる操作の煩雑さがある。その方法でＨｂと着色化ＧＨｂを沈殿させるのは、試料液に過剰に添加された色素をＨｂ及び着色化ＧＨｂから分離して除去するためである。もし沈澱させずに過剰の色素が残ったままの反応液で吸光度を測定しても、未反応の色素と着色化ＧＨｂとの区別をつけることができず、着色化ＧＨｂのみを測定することができないからである。
【０００９】
本発明は、大型の分析装置を用いず、検体数の少ない中小病院や開業医でも小型機器を用いて、簡単な操作で、タンパク質等に対する糖化物質の比率、例えばＨｂに対するＧＨｂの比率（％ＧＨｂ）を直接測定できるようにする方法であるが、その際、ＧＨｂのような糖化物質を過剰に添加された色素で着色し、その反応液に残った過剰の色素を反応生成物である色素標識糖化物質及びタンパク質等から分離する際に、沈澱を生成する操作をなくすことにより処理を簡略化することを目的とするものである。
【００１０】
【課題を解決するための手段】
タンパク質等が独自の吸収をもつ場合には、糖化物質だけを、そのグリコシル基に結合性を有する色素を反応させて標識化すればよい。その場合、本発明は、次の工程（Ａ）から（Ｄ）を含んで糖化物質の比率を測定する。（Ａ）タンパク質等とそれに糖が結合した糖化物質とを含む試料に、糖化物質のグリコシル基に結合性を有する色素を反応させて色素標識糖化物質を生成させる工程、（Ｂ）前記工程を経た反応液を、沈澱を生成することなく、メンブランフィルタ、精密濾過膜、限外濾過膜又は逆浸透膜によって濾過し、その反応液中のタンパク質等と色素標識糖化物質とをその膜に捕集する工程、（Ｃ）その膜に捕集された状態のタンパク質等と色素標識糖化物質とに、前記色素の吸収波長λ１及びタンパク質等の吸収波長λ２を含む光を照射し、その反射光から波長λ１及びλ２でのそれぞれの反射光強度Ａ１及びＡ２を測定する工程、（Ｄ）タンパク質等による反射光強度Ａ２に対する色素による反射光強度Ａ１の比Ａ１／Ａ２を算出し、その比を基にして糖化物質の比率を求める工程。
【００１１】
その吸収のシグナルのうち、色素の吸収波長λ１での反射光強度Ａ１は糖化物質の量に対応したものであり、タンパク質等の吸収波長λ２での反射光強度Ａ２は糖化物質も含む総タンパク質等の量に対応したものである。したがって、両反射光強度の比Ａ１／Ａ２は総タンパク質等に占める糖化物質の比率を間接的に表わすことになる。
【００１２】
この方法ではタンパク質等を着色しないので、対象となるタンパク質等は反射光強度を測定するのに適する吸収をもつものである。タンパク質等を着色しないこの方法は、タンパク質等がヘモグロビン（Ｈｂ）で、糖化物質がグリコヘモグロビン（ＧＨｂ）である場合に適用するのが好ましい。
【００１３】
ＧＨｂとＨｂの測定についてさらに具体的に述べる。試料中のＧＨｂ及びＨｂにボロン酸基又はジヒドロキシボロニル基を有する色素、例えばキシレンシアノールアミノフェニルボロン酸や、フルオレセインイソチオシアネートとアミノフェニルボロン酸との複合体など、を作用させると、ＧＨｂのグリコシル基のジオール基と縮合して色素標識ＧＨｂを生成するが、Ｈｂはグリコシル基をもっていないので変化しない。
【００１４】
色素による吸収波長λ１での反射光強度Ａ１と、Ｈｂの吸収波長λ２での反射光強度Ａ２との比率Ａ１／Ａ２は、総Ｈｂに対するＧＨｂの比率（％ＧＨｂ）を反映する。その結果、キャリブレータを用いて％ＧＨｂに対するＡ１／Ａ２をプロットした検量線を作成し、これにより試料中の％ＧＨｂが求められる。
【００１５】
【発明の実施の形態】
糖化物質と結合する色素Ｄ１の一例は、反応基としてフェニルボロン酸基などのボロン酸基（ジヒドロキシボロニル基）を有する着色物質又は蛍光物質であって、糖化物質のグリコシル基のシスジオール基と反応するようにしたものである。また、糖化物質のグリコシル基をその認識部位に含んでおり、その糖化物質と結合する色素標識抗体や色素標識レセプタなどであってもよい。色素の着色物質又は蛍光物質として好適なものには次のようなものが含まれる。アントラキノン類、アゾ色素、アジン色素、トリアジン類、フィコエリスリン類、クマリン類、アクリジン類、ローダミン類、フルオレセイン類、フタロシアニン類、及びそれらの誘導体。もちろん十分な吸収、蛍光などの光信号を与え、また色調の変化をもたらす原子団又は分子であればよく、この例に限定されるものではない。
【００１６】
前記のボロン酸基を有する着色物質又は蛍光物質については、特表平６−５０２１７０号公報や特表平６−５０２２４４号公報などに、ボロン酸複合体含有ラベル化剤などとして、キシレンシアノールアミノフェニルボロン酸など、種々の色調変化を生じる官能基を有するボロン酸誘導体が詳述されている。また、特開平７−２４７２９２号公報には、ｐＨに応答して色調変化をもたらすアゾ基含有原子団などを含むボロン酸誘導体が詳述されている。J.B.Burnett, et al., Biochemical and Biophysical Research Communication, 96, 157-162(1980)などには蛍光性ボロン酸であるN-(5-ジメチルアミノ-1-ナフタレンスルホニル)-3-アミノベンゼンスルホン酸が記載されている。K. Tsukagashi and S. Shinkai, J. Org. Chem., 56, 4089-4091(1991)、 S. Shinkai and K. Tsukagashi, Y. Ishikawa and T. Kunitake, J. Chem. Soc., Chem. Commun., 1991, 1039-1041などには、円偏光二色性を示すボロン酸誘導体なども含めた記述がある。
【００１７】
また、糖化物質のグリコシル基をその認識部位に含んでいて、その糖化物質と結合する色素標識抗体やレセプタは、通常のイムノアッセイに用いる標識操作と同じようにして、標識用色素をこの抗体やレセプタに反応させて容易に得られることは言うまでもない。
【００１８】
また、糖鎖と結合するレクチンの色素標識物などとしては、例えば、コムギ胚凝集素をフルオレセインで化学的に標識した例が U. R. Rao, et al., Int. J. Parasito., 20, 1099-1103(1990)に記載されている。
色素の最適な例は、ジヒドロキシボロン酸部分を有する着色物質であり、例えばキシレンシアノールアミノフェニルボロン酸である。
【００１９】
糖化物質に結合性を有する色素Ｄ１の着色物質として蛍光色素を用いることもできる。その場合は、波長λ１の光照射による反射光強度Ａ１の測定に代えて、膜に捕集されたタンパク質等と糖化物質へのその色素Ｄ１を励起できる波長光の照射による蛍光測定を行ない、反射光強度Ａ１の測定に代えてその蛍光強度Ｆ１を用いることができる。
【００２０】
一方、タンパク質等が反射光強度を測定するのに十分な吸収をもっていない場合には、タンパク質等も着色する必要がある。その場合には、本発明は次の工程（Ａ）から（Ｄ）を含むことになる。（Ａ）タンパク質等とそれに糖が結合した糖化物質とを含む試料に、糖化物質のグリコシル基に結合性を有する色素Ｄ１とタンパク質等に結合性を有する色素Ｄ２を反応させて色素Ｄ１標識糖化物質と色素Ｄ２標識タンパク質等とを生成させる工程、（Ｂ）前記工程を経た反応液を、沈澱を生成することなく、メンブランフィルタ、精密濾過膜、限外濾過膜又は逆浸透膜によって濾過し、その反応液中のタンパク質等と糖化物質とをその膜に捕集する工程、（Ｃ）その膜に捕集された状態のタンパク質等と糖化物質とに、色素Ｄ１の吸収波長λ１及び色素Ｄ２の吸収波長λ３を含む光を照射し、その反射光から波長λ１及びλ３でのそれぞれの反射光強度Ａ１及びＡ３を検出する工程、（Ｄ）色素Ｄ２による反射光強度Ａ３に対する色素Ｄ１による反射光強度Ａ１の比Ａ１／Ａ３を算出し、その比を基にして糖化物質の比率を求める工程。タンパク質等も着色するこの方法は、タンパク質等がアルブミンで、糖化物質がグリコアルブミンである場合に適用するのが好ましい。
【００２１】
タンパク質等に結合する色素／蛍光色素Ｄ２には、ブロムクレゾールパープル、ブロムフェノールブルー、ブロムクレゾールグリーン、チバクロンブルー−Ｆ３Ｇ−Ａのようなもの、また糖化物質用の色素と同様の次のようなものの標識抗体や標識レセプターが含まれるが、糖化物質用に選択した色素／蛍光色素とは、吸収／励起／蛍光波長の離れたものを選択する必要がある。アントラキノン類、アゾ色素、アジン色素、トリアジン類、フィコエリスリン類、クマリン類、アクリジン類、ローダミン類、フルオレセイン類、フタロシアニン類、及びそれらの誘導体。もちろん十分な吸収、蛍光などの光信号を与える物質であればよく、この例に限定されるものではない。
【００２２】
タンパク質等や糖化物質のような生体物質は、適当な波長域の光による励起により蛍光を発生する傾向が強い。そこで、タンパク質等からの反射光強度Ａ２の測定に代えて、膜に捕集されたタンパク質等と糖化物質への励起波長光の照射による蛍光測定を行ない、反射光強度Ａ２に代えてその蛍光強度Ａ２を用いることができる。また、タンパク質等に結合性を有する色素Ｄ２として蛍光色素を用いることもできる。その場合は反射光強度Ａ３の測定に代えて、膜に捕集されたタンパク質等と糖化物質へのその色素Ｄ２を励起できる波長光の照射による蛍光測定を行ない、反射光強度Ａ３に代えてその蛍光強度Ａ３を用いることができる。
【００２３】
前記の反射光強度の代わりに蛍光強度を用いる測定では、例えば膜のような固体表面近傍からの蛍光を測定する。この場合の蛍光測定については、例えば R. J. Hurtubise, Anal. Chem., 61(15), 889A(1989)などに詳述されているが、後述する測定装置を用いることによって特に好ましく実施できる。
【００２４】
測定に用いる吸収波長は、糖化物質と結合する色素による反射光強度Ａ１と、タンパク質等による反射光強度Ａ２（又はタンパク質等を着色する色素による反射光強度Ａ３）との差が大きくなる波長を選択するのが好ましい。より好ましくは、Ａ１＞Ａ２（又はＡ３）となる波長λ１と、Ａ１＜Ａ２（又はＡ３）となる波長λ２（又はλ３）を選ぶことである。例えば、色素及びタンパク質等のそれぞれの吸収極大波長を選択するのもよい。
【００２５】
また、前記の方法において、Ｄ１又はＤ２に蛍光色素を用いるときなど、蛍光測定を行なうときは、前出の記載において、反射光強度Ａ１，Ａ２，Ａ３のいずれか１つ以上に代えて、蛍光強度Ｆ１，Ｆ２，Ｆ３のいずれか１つ以上を用いる。このとき、蛍光強度と反射光強度との差、又は蛍光強度の差が大きくなる波長を選ぶことができる。また、Ｄ１、Ｄ２、タンパク質への照射光又は励起光の波長は一致していてもよい。これら照射光又は励起光の波長と、蛍光の波長とは、少なくとも５ｎｍ以上、好ましくは１０ｎｍ以上離れるように色素等を選ぶのが好ましい。
【００２６】
色素標識糖化物質とその色素で標識化されていないタンパク質は、試料液を膜を用いて濾過することによって膜上に捕集することができる。このとき未反応の色素は膜を通過することにより除去される。こうして、色素標識糖化物質とタンパク質を捕集した膜上に、標識色素の吸収波長、例えば６３５ｎｍの光を照射し、膜上の捕集物からの反射光の強度を６３５ｎｍで測定することによって試料中の糖化物質の比率を測定することができる。また、タンパク質がヘモグロビンのように吸収をもつものである場合には、ヘモグロビンの吸収波長、例えば４７０ｎｍの波長光を照射し、膜上の捕集物からの反射光の強度をその４７０ｎｍで測定することによって、試料中の全ヘモグロビン量を検出することができる。ここで、全ヘモグロビン量とは、色素によって標識化されたグリコヘモグロビンと標識されていないヘモグロビンの総量を意味する。
【００２７】
また、例えばフルオレセインイソチオシアネートとアミノフェニルボロン酸との複合体などを用いて蛍光測定を行なうときは、例えば次のように測定を実施することができる。色素標識糖化物質とタンパク質を捕集した膜上に、フルオレセインの励起波長である４９０ｎｍの光を照射し、膜上の捕集物からの蛍光の強度を５２０ｎｍで測定することによって試料中の糖化物質を検出することができる。
【００２８】
濾過は常圧下において自然流下によって行なってもよいし、加圧又は減圧することによって濾過速度を上昇させてもよい。また、液又は膜を加温してもよい。またセライトなどの濾過助剤を添加して濾過を行なってもよい。このように、濾過において通常行なわれる種々の操作を加えることができる。もちろん、濾過の後に膜に洗浄液を通過させて未反応の色素をさらに除去し、膜上の捕集物の純度を向上させてもよい。特に蛍光で測定するときはこの洗浄を行なうことが望ましい。
【００２９】
また、濾過の際に試料液が膜に滲みこむだけで、膜上に色素標識糖化物質及び標識化されていないタンパク質が捕集されるようにしてもよく、試料液が微量であるときはこの方法は好ましい。このとき、未反応の色素は膜内部に浸透するので、膜上から除去することができ、糖化物質に結合した色素だけを測定することができる。
【００３０】
次に、試料液の濾過に用いる膜について説明する。
濾過用の膜は、ガラス、石英フィルタ、濾紙などの繊維集合体や、メンブランフィルタなどから選ばれる膜であって、好ましくは精密濾過膜、限外濾過膜、逆浸透膜の各群から選ばれる多孔性膜であり、さらに好ましくは限外濾過膜である。
【００３１】
精密濾過膜、限外濾過膜、逆浸透膜の種類と性質については、中垣正幸監修「膜処理技術体系  上巻〔基礎・製品編〕」（フジ・テクノシステム（１９９１年））の２２９〜２３５頁、３６３〜３７１頁、４４７〜４５３頁にそれぞれ詳細に説明されている。また、タンパク質の捕集や濃縮に用いられる限外濾過膜については、日本生化学会編「新生化学実験講座  タンパク質Ｉ  分離・精製・性質」（東京化学同人（１９９０年））の１１６頁の表６・５、日本生化学会編「生化学データブック〔ＩＩ〕酵素・代謝・栄養  遺伝・微生物・細胞・免疫  生化学的技術」（東京化学同人（１９８０年））の１２１５頁などに特に説明されている。
【００３２】
膜の主たる基材として、次の素材や化学物質から選ばれる成分を含む膜が好ましい。ステンレス繊維、ポーラスステンレスなどのメタル系、アルミナ、ガラス、ガラス繊維、シリカ、炭化ケイ素、酸化ジルコン、ポーラスセラミックなどの無機系、アガロース、デキストラン、セルロース、キトサン、アセチルカードラン、ゼラチン、セルロースアセテート、セルロースジアセテート、セルローストリアセテート、ニトロセルロース、ポリエステル、ポリスルホン、ポリエーテルスルホン、スルホン化ポリベンゾキサジンジオン、スルホン化ポリスルホン、スルホン化ポリフルフリルアルコール、ナフィオン、ポリカーボネート、フェノール樹脂、メラミン樹脂、ナイロン６、ナイロン６，６、芳香族ポリアミド、ポリイミド、ポリエーテルアミド、ポリアミドカルボン酸、ポリアクリロニトリル、ポリ塩化ビニル、ポリアクリル酸塩、ポリメタクリル酸、ポリビニルアルコール、ポリピペラジン、ポリピペラジンアミド、ポリベンツイミダゾール、ポリベンツイミダピロン、ポリエチレン、ポリプロピレン、ポリ四フッ化エチレンやポリフッ化ビニリデンなどのフッ素樹脂、アクリロニトリルと塩化ビニルの共重合体、エチレンとビニルアルコールの共重合体、メタクリル酸の共重合体、スルホン化メタクリル酸とアクリロニトリルと４級化２−メチル−５−ビニルピリジンの共重合体などの有機高分子系。
【００３３】
このうち、主たる基材として、アガロース、デキストラン、セルロース、キトサン、アセチルカードラン、ゼラチン、セルロースアセテート、セルロースジアセテート、セルローストリアセテート、ニトロセルロース、ポリエステル、ポリスルホン、ポリエーテルスルホン、スルホン化ポリベンゾキサジンジオン、スルホン化ポリスルホン、スルホン化ポリフルフリルアルコール、ナフィオン、ポリカーボネート、フェノール樹脂、メラミン樹脂、ナイロン６、ナイロン６，６、芳香族ポリアミド、ポリイミド、ポリエーテルアミド、ポリアミドカルボン酸、ポリアクリロニトリル、ポリ塩化ビニル、ポリアクリル酸塩、ポリメタクリル酸、ポリビニルアルコール、ポリエチレン、ポリプロピレン、ポリ四フッ化エチレンやポリフッ化ビニリデンなどのフッ素樹脂などの素材や化学物質から選ばれる成分を含む膜が特に好ましい
また、上述の基材を主たる成分とする膜に、さらにポリビニルアルコール、ポリアクリル酸などの樹脂を含浸させたデプスフィルタも好ましい。
【００３４】
また、主たる基材として、アガロース、デキストラン、セルロース、キトサン、アセチルカードラン、ゼラチン、セルロースアセテート、セルロースジアセテート、セルローストリアセテート、ニトロセルロース、ポリエステル、ポリスルホン、ポリエーテルスルホン、スルホン化ポリベンゾキサジンジオン、スルホン化ポリスルホン、スルホン化ポリフルフリルアルコール、ナフィオン、ポリカーボネート、ナイロン６、ナイロン６，６、芳香族ポリアミド、ポリイミド、ポリエーテルアミド、ポリアミドカルボン酸、ポリアクリロニトリル、ポリアクリル酸、ポリメタクリル酸、ポリビニルアルコールなどの極性のある素材や化学物質から選ばれる成分を含む膜は、試料が水溶液として供される場合に特に好ましい。
【００３５】
また、ポリ塩化ビニル、ポリエチレン、ポリプロピレン、ポリ四フッ化エチレンやポリフッ化ビニリデンなどの低極性又は無極性成分を主たる基材とする膜を、プラズマ放電処理や親水性樹脂（湿潤化剤）のコーティングなどの表面処理を行なうことによって親水化した膜も、試料が水溶液として供される場合に特に好ましい。湿潤化剤としてはポリアクリル酸やその誘導体、ポリビニルアルコール、ポリビニルピロリデン、ポリエチレングリコールなどから選ばれる親水性樹脂が用いられる。
このような種々の膜のうち、以下に述べる条件を勘案して色素標識糖化物質及びタンパク質が膜上に捕集され、未反応の色素が通過するように選ぶことが好ましい。
【００３６】
膜を透過する最大の分子量、又は透過しない最小の分子量を、一般に分画分子量（限界分子量又は分画性ともいう）と呼び、膜の性能を表わすのに用いられる。分子ふるいが主たる効果とみなせる理想的な場合には、分画分子量に対応する分子サイズと、膜の細孔系がよく一致することが知られている。
【００３７】
色素標識糖化物質及びタンパク質が膜上に捕集されるのは、分子サイズによるふるい、クーロン力による吸着、疎水性相互作用による吸着などの効果が複合した結果と考えられる。主たる効果は分子サイズによるふるい効果であって、タンパク質を捕集するのに適した多孔性膜の種類が知られている（例えば、加藤滋雄、谷垣昌敬、新田友茂共著「新体系化学工学  分離工学」（オーム社（１９９２年））の１５０頁の図６．６、須磨靖徳ら共著「ニューフィルムと膜」（化学工業日報社（１９９０年））の１５６頁の図２１、  頼実正弘著「化学系研究実験の基礎」（培風館（１９８９年））の６７頁の図２・３２、古崎新太郎編「ケミカルエンジニアリングのすすめ」（共立出版（１９８７年））の１１６頁の図６・２など、多くの成書に記述されている）。
【００３８】
ここに紹介した文献に従えば、分子量が約６４.０００であって、分子サイズがおおよそ３×５ｎｍであるヘモグロビンを膜上に捕集するための膜を容易に選ぶことができる。したがって、膜のうち、限外濾過膜及び逆浸透膜が好ましい。例えば、分画分子量が１００,０００〜１０,０００ダルトンである限外濾過膜は好ましい一例である。しかし、これに限定されるものではなく、例えば分画分子量が３０,０００〜５,０００ダルトンである限外濾過膜を用いることもできる。なぜならば、前述のように、分子サイズによるふるい効果に加え、クーロン力による吸着、疎水性相互作業による吸着などの効果が複合しているので、膜の材質を選び、それらの効果を利用してより幅広い分画分子量範囲を持つ膜（例えば、分画分子量が３００,０００の限外濾過膜など）を用いることもできるからである。ただし、分画分子量がより大きな分子サイズである膜（例えば、通常の濾過用ガラスフィルタや精密濾過膜）を用いると、膜による捕集効率（阻止率又は排除率）が低下し、分子サイズの小さな色素標識糖化物質の一部やタンパク質の一部が流出して測定精度が落ちる場合がある。
【００３９】
また、分画分子量がより小さな分子サイズである膜（例えば逆浸透膜）を利用すると、膜の通過抵抗が大きくなるため、より大きな圧力で加圧濾過又は吸引濾過する必要がでてくることがある。
したがって、本発明では、濾過用の膜として精密濾過膜、限外濾過膜、逆浸透膜が好ましく、特に限外濾過膜が好ましい。しかし、本発明の原理から考えてこれに限定されるものではない。
【００４０】
膜は対称膜であっても非対称膜であってもよく、また複合膜であってもよいが、血液の透析等においてよく知られているように、非対称膜や複合膜が好ましい。非対称膜などについては、例えば日本化学会編「化学総説  Ｎｏ．４５  機能性有機薄膜」（学会出版センター（１９８４年））の３２頁など多くの成書中に説明されている。
【００４１】
膜は、荷電膜でも非荷電膜でもよいが、標識色素を吸着しない膜であることが好ましい。このことを、キシレンシアノールアミノフェニルボロン酸、ブロムクレゾールパープルなどのスルホフタレイン色素を例にして説明する。スルホフタレイン系色素はアニオン性のスルホン基を有するので、例えばアニオン交換性の官能基である３級アミノ基、又は４級アンモニウム塩を含む膜に吸着される傾向が強い。吸着されると未反応の色素が膜上に残存することになって測定誤差を与える。したがって、上述のアニオン交換性の官能基を含まない、例えばカルボキシル基、スルホン基などを含む膜である荷電膜（例えばポリアクリル酸、ナフィオンなどを主たる成分とする膜）、又は非荷電膜（例えばポリエチレン、ポリフッ化ビニリデンなどを主たる成分とする膜）が好ましい。
【００４２】
これらの膜は市販されており、次にその例を挙げる。
ガラス又は石英フィルターとしては、例えばＧＡ−１００、ＧＡ−２００、ＧＢ−１００Ｒ、ＧＳ−２５、ＧＣ−５０、ＧＣ−９０、ＤＰ−７０、ＱＲ−８０、ＱＲ−１００、ＱＲ−２００（以上は東洋濾紙社の製品）、ＧＦ／Ａ、ＧＦ／Ｂ、ＧＦ／Ｃ、ＧＦ／Ｄ、ＧＦ／Ｆ、９３４−ＡＨ、ＥＰＭ２０００、Ｆ１９２−０１（以上はワットマン社の製品）などがある。
【００４３】
濾紙としては、例えばＮｏ．１、Ｎｏ．２、Ｎｏ．１０１、Ｎｏ．１３１、Ｎｏ．３、Ｎｏ．４Ａ、Ｎｏ．５Ａ、Ｎｏ．５Ｂ、Ｎｏ．５Ｃ、Ｎｏ．６、Ｎｏ．７、ＣＭ（以上は東洋濾紙社の製品）、Ｎｏ．１、Ｎｏ．２、Ｎｏ．３、Ｎｏ．４、Ｎｏ．５、Ｎｏ６、Ｎｏ．１１３、Ｎｏ．１１４、Ｎｏ．４０、Ｎｏ．４１、Ｎｏ．４２、Ｎｏ．４３、Ｎｏ．４４、Ｎｏ．５０、Ｎｏ．５１、Ｎｏ．５２、Ｎｏ．５４、Ｎｏ．５４０、Ｎｏ．５４１、Ｎｏ．５４２、Ｐ８１（以上はワットマン社の製品）などがある。
【００４４】
精密濾過膜としては、アブソルタ、ポリメート（以上はニチダイ社の製品）ナスロン、ＮＰ（以上は日本精線社の製品）などのメタル系膜、ＧＡ−１００、ＧＡ−２００、ＧＢ−１００Ｒ、ＧＳ−２５、ＧＣ−５０、ＧＣ−９０、ＤＰ−７０、ＱＲ−８０、ＱＲ−１００、ＱＲ−２００（以上は東洋濾紙社の製品）、ＧＦ／Ａ、ＧＦ／Ｂ、ＧＦ／Ｃ、ＧＦ／Ｄ、ＧＦ／Ｆ、９３４−ＡＨ、ＥＰＭ２０００（以上はワットマン社の製品）、グラスファイバーフィルター、デプスフィルター（以上はニュークリポア社の製品）などのガラス又は石英製膜がある。
【００４５】
精密濾過膜としては、例えば、フロロポア（住友電工社の製品）、ＴＭ、ＴＭ−Ｐ、ポリフロンＰＦ−１、ＰＦ−２（以上は東洋濾紙社の製品）、ＦＲ、ＦＮ、ＦＧ（以上は富士写真フィルム社の製品）、ユミクロンＭＦ（湯浅電池社の製品）、ゼータポアＥＲ（ＡＭＦ社の製品）、ＢＴＳ（ブリュンズビッグ社の製品）、シュラガード（セラニーズ社の製品）、ＧＡ Metricel、ＨＴ Tuffryn、Vinyl Metricel、Fluorocarbon、ＧＡ（以上はゲルマンサイエンス社の製品）、ＭＦ−ミリポア、ＴＦ、ポリビック、デュラポア、フロリナート、ＮＲ、マイテックス、アイソポア、オムニポア（以上はミリポア社の製品）、Nalgene Filter（ナルゲ社の製品）、ニュークリポア、メンブラフィル、シルフィル、フィリナート（以上はニュークリポア社の製品）、ＳＭ、フランＨ（ザルトリウス社の製品）などがある。
【００４６】
限外濾過膜としては、例えば、Ｇ−０５Ｈ、Ｇ−０１Ｔ、Ｇ−０５Ｔ、Ｇ−１０Ｔ、Ａ−１５Ｔ、Ａ−５０Ｔ、Ｓ−１５Ｔ、Ｆ−５０Ｔ（以上はアルバックサービス社の製品）、ＵＦ−１０ＰＳ、ＵＦ−３０ＰＳ、ＵＦ−５０ＰＳ、ＵＦ−１００ＰＳ、ＵＦ−３００ＰＳ、ＵＦ−１０００ＰＳ、ＵＦ−３０００ＰＳ（以上は東ソー社の製品）、ＵＨ−０５、ＵＨ−１、ＵＫ−１０、ＵＫ−５０、ＵＫ−２００、ＵＰ−２０、ウルトラフィルター（以上は東洋濾紙社の製品）、ＵＭ０５、ＵＭ２、ＵＭ１０、ＵＭ２０Ｅ、ＤＭ５、ＰＭ１０、ＰＭ３０、ＸＭ５０、ＸＭ１００Ａ、ＸＭ３００、ＹＭ１０（以上はアミコン社の製品）、ＵＦＣＯＮ（ケミコプロセスエンバイアロジェニクス社の製品）、ＧＲ−８１Ｐ、ＧＲ−６１Ｐ、ＧＲ−６０Ｐ、ＧＲ−５０Ｐ、ＣＡ−８００、ＣＡ−６００、ＣＡ−５００、ＣＳ−６１、ＣＳ−８１、ＣＳ−９０、ＦＳ−５０、ＦＳ−６１、ＦＳ−８１（以上はＤＤＳ社の製品）、１０ＰＯＲ−ＡＰ、Ｃ−２、Ｃ−５、Ｃ−１０、Ｃ−３０、Ｄ−５０、Ｓ−１０、Ｓ−３０（以上は Dorr Oliver社の製品）、ＵＦＣＡ−１００（Kalle社の製品）、ＰＳＡＤ、ＰＳＥＤ、ＰＳＤＭ、ＰＳＶＰ、ＰＣＡＣ、ＰＴＧＣ、ＰＴＴＫ、ＰＴＨＫ、ＰＴＭＫ、ＰＬＧＣ、ＰＬＨＫ、ＰＬＭＫ（以上はミリポア社の製品）、ニユークリポアＡ（ニュークリポア社の製品）、ＩＲＩＳ−３０４２、ＩＲＩＳ−３０３８、ＩＲＩＳ−３０５０、ＩＲＩＳ−３０２６、ＭＰＳ（以上は Chemie Fine社の製品）、アシンメトリックウルトラフィルター、ＳＭ１４５２９、ＳＭ１４５３９、ＳＭ１４５４９、ＳＭ１４５６９（以上はザルトリウス社の製品）、ダイアフローメンブレン（グレーズ社の製品）、フィルトンロンＮＭ、フィルトロンＯＭ（以上はコーニング社の製品）などがある。
【００４７】
逆浸透膜としては、例えば、ＲＭ−９７、ＲＭ−８９、ＲＭ−９０Ｓ、ＲＭ−３０Ｓ、ＲＭ−１５Ｓ（以上はアルバックサービス社の製品）、ＨＲ−９８、ＨＲ−９５（以上はＤＤＳ社の製品）、ＵＯ−９８、ＵＯ−９７、ＵＯ−９５（以上は Kalle Film社の製品）などがある。
【００４８】
次に、本発明の分析装置の例を図１に概略的に示す。
光源３０は反射光強度又は蛍光強度を測定する２つの波長の光をそれぞれ発振する２つのレーザ装置であるか、又はその２波長の光を含む複数波長光もしくは連続波長光を発生するランプ光源である。光調整部３１は光源３０からの光を測定部３２の膜上に補集されたタンパク質等と色素標識糖化物質に照射する集光レンズ、光源強度を調整するＮＤフィルタ、光路を変えるミラー、光源が複数波長を含んでいる場合に１つの光路を２つに分割するビームスプリッタ、その分割されたそれぞれの光路の波長をそれぞれの測定波長にするバンドパスフィルタなどを含んだ光学系である。光源３０と光調整部３１は光源部を構成する。
【００４９】
測定部３２には、メンブランフィルタ、精密濾過膜、限外濾過膜及び逆浸透膜から選ばれた膜にタンパク質等と色素標識糖化物質を捕集した試料が設置される。その試料上のタンパク質等と色素標識糖化物質に光調整部３１を経た光が照射される。
【００５０】
光調整部３３は測定部３２の試料からの反射光又は蛍光を検出部３４の検出器に導く光学系であり、集光レンズ、光が複数波長を含んでいる場合にその透過光を２つの光路に分割するビームスプリッタ、分割されたそれぞれの光路の反射光波長又は蛍光波長をそれぞれの測定波長に限定するバントパスフィルタなどを含んでいる。検出部３４は、測定用の光路がそれぞれの測定波長の２つの光路に分かれている場合にはそれぞれの光路に設けられた検出器を備え、反射光強度又は蛍光強度を検出して反射光強度を求める。検出部３４はまた、光源３０が複数波長を含み、試料からの反射光が１つの光路で入射する場合には、それぞれの測定波長に分光した後に検出する分光検出部である場合も含んでいる。光調整部３３と検出部３４は受光検出部を構成する。
【００５１】
Ａ／Ｄ変換部３５は検出部３４での検出信号をデジタル信号に変換するものである。演算出力部３７は、そのデジタル化された検出信号から２つの波長λ１とλ２での反射光もしくは蛍光である測定光の強度の比Ａ１／Ａ２、又は２つの波長λ１とλ３での反射光もしくは蛍光である測定光の強度の比Ａ１／Ａ３を計算し、その比から検量線に基づいて糖化物質の比率を求めて出力する。制御部３６は検出部３４や演算出力部３７の動作、及びこの測定装置全体の動作を制御する制御部である。
【００５２】
波長λ２はタンパク質等自体による吸収波長、励起波長又は蛍光波長としているが、以下の説明では波長λ２はタンパク質等を第２の色素で標識化した場合のその第２の色素による吸収波長λ３、励起波長又は蛍光波長も含んだ意味で使用する。
【００５３】
【実施例】
図２から図６にこの分析装置の具体的な光学系の例を示す。いずれも（Ａ）は光源部、（Ｂ）は受光検出部を表わしている。
図２は光源として波長λ１とλ２のそれぞれの光を発生するレーザ装置を備えた例である。光源部を示す（Ａ）において、レーザ装置１は波長λ１のレーザビームを光ビーム１１として発生し、その光ビーム１１は集光レンズ４−１，４−２を通り、反射ミラー５−１で光路が折り曲げられ、ハーフミラー６−１で反射されて、試料への照射光光路におかれる。他方のレーザ装置２は波長λ２のレーザビームを光ビーム１２として発生し、その光ビーム１２は集光レンズ４−３，４−４からハーフミラー６−１を透過して光ビーム１１と同じ照射光光路におかれる。
【００５４】
照射光は、測定部（図示略）おいて、両光ビーム１１，１２が試料９の膜上に補集されているタンパク質等と色素標識糖化物質に照射される。
受光検出部を示す（Ｂ）において、試料９からの反射光（正反射も拡散反射も含む）又は蛍光（正反射、拡散反射などの反射光も含む）がビームスプリッタとなるハーフミラー６−２で透過光と反射光に分割され、透過光は波長λ１の光を透過させるバンドパスフィルタ１３を透過して波長λ１の反射光となり、集光レンズ４−５を経て光検出素子７−１で検出される。ハーフミラー６−２での反射光は反射ミラー５−２で光路が曲げられ、波長λ２の光を透過させるバンドパスフィルタ１４を透過して波長λ２の反射光となり、集光レンズ４−６を経て光検出素子７−２で検出される。
【００５５】
８−１，８−２はそれぞれの光検出素子７−１，７−２の検出信号をデジタル信号に変換するＡ／Ｄ変換器であり、それぞれの出力はコンピュータ１０に取り込まれる。コンピュータ１０では、そのデジタル化された検出信号から２つの波長λ１とλ２での反射光又は蛍光である測定光の強度の比Ａ１／Ａ２を計算し、その比から検量線に基づいて糖化物質の比率を求めて出力する。
【００５６】
レーザ装置１，２は連続発振をする半導体レーザダイオード、Ａｒイオンレーザ、Ｋｒイオンレーザ、Ｈｅ−Ｎｅレーザ、Ｈｅ−Ｃｄレーザ、Ｎｄ：ＹＡＧレーザなど、又はパルスレーザなどを用いることができ、近紫外域から近赤外域に渡る広い波長範囲のレーザから選択して利用することができる。
光源としてレーザ装置を用いた場合には分光器が不要になって装置が安価になる。
レーザ装置のうち、特に半導体レーザダイオードを用いると、さらに小型軽量になる。
【００５７】
図３と図４は光源として複数波長又は連続波長の光を発生するランプ光源を使用した場合の例である。測定部と受光検出部は図２のものと同じであるので、説明を省略し、光源部のみを示している。
図３の分析装置は、波長λ１の光と波長λ２の光のみを含む照射光を試料に照射するようにしたものである。ランプ光源３としては、例えばハロゲンランプを使用することができる。光源３からの測定ビームは集光レンズ４−８，４−９を経てハーフミラー６−３により透過光と反射光に２分される。反射光はバンドパスフィルタ１３を経て波長λ１の測定ビーム１１となり、ミラー５−３で光路が折り曲げられ、ハーフミラー６−１を透過して、試料への照射光光路におかれる。他方、ハーフミラー６−３の透過光は反射ミラー５−４で光路が曲げられ、バンドパスフィルタ１４を経て波長λ２の測定ビーム１２となり、ハーフミラー６−１で反射されて、光ビーム１１と同じ照射光光路におかれる。
【００５８】
図４の分析装置は、波長λ１の光と波長λ２の光以外の波長光も含む光源からの光を照射光として試料に照射するようにしたものである。ランプ光源３からの測定ビームは集光レンズ４−８，４−９，４−１０を経て照射光として試料に照射される。
【００５９】
図３、図４の分析装置では、光源が複数波長成分を含んでいるが、光源部と受光検出部の一方又は両方にバンドパスフィルタを設けて測定する波長をλ１とλ２に制限しているので、この場合も分光器が不要になる。図３、図４の分析装置では、光源３として分光装置で多用され入手の容易なハロゲンランプを使用することができ、好都合である。
【００６０】
図５は、図２の光学系でレーザ装置１，２の光源強度変動を補正するようにした分析装置を表わしたものである。光源部（Ａ）では、図２（Ａ）の光源部と同様に、レーザ装置１からの波長λ１のレーザビームとレーザ装置２からの波長λ２のレーザビームがハーフミラー６−１によって同一光路の光ビームとされた後、試料９に入射する前にハーフミラー６−４によって透過光と反射光に分割される。分割された一方のビームは試料９に照射される照射光となり、他方は光源強度を補正するための補正光となる。補正光は試料９に照射されることなく、その強度が検出される。
【００６１】
受光検出部（Ｂ）において、試料に照射された光の反射光は、図２の受光検出部と同様に、ハーフミラー６−２で透過光と反射光に分割された後、バンドパスフィルタ１３，１４によって波長λ１と波長λ２の光となり、それぞれ集光レンズ４−５，４−６を経て光検出素子７−１，７−２で検出され、Ａ／Ｄ変換器８−１，８−２を経てコンピュータ１０に取り込まれる。
【００６２】
光源強度の補正をする補正光は、試料９に照射されることなく受光検出部に入射し、ビームスプリッタとなるハーフミラー６−５で透過光と反射光に分割される。透過光は波長λ１の光を透過させるバンドパスフィルタ１３を透過して波長λ１の補正光となり、集光レンズ４−１１を経て光検出素子７−３で検出される。ハーフミラー６−５での反射光は反射ミラー５−３で光路が曲げられ、波長λ２の光を透過させるバンドパスフィルタ１４を透過して波長λ２の補正光となり、集光レンズ４−１２を経て光検出素子７−４で検出される。
光検出素子７−３，７−４による検出出力は、それぞれＡ／Ｄ変換器８−３，８−４を経てコンピュータ１０に取り込まれる。
【００６３】
コンピュータ１０では、波長λ１の光強度を補正するためにＡ／Ｄ変換器８−１の出力がＡ／Ｄ変換器８−３の出力で割算され、波長λ２の光強度を補正するためにＡ／Ｄ変換器８−２の出力がＡ／Ｄ変換器８−４の出力で割算される。
【００６４】
図６は図３のように、光源として複数波長又は連続波長の光を発生するランプ光源を使用した場合に、光源強度変動を補正するようにした分析装置を表わしたものである。図３の光源部においてハーフミラー６−１によって同一光路の光ビームとされた後、試料９に入射する前にハーフミラー６−４によって透過光と反射光に分割され、一方が試料への照射光と、他方が補正光となって、図５の受光検出部と同様に反射光の検出と光源強度の補正がなされる。
【００６５】
図４のように波長λ１，λ２以外の波長光も含む多波長のままで試料への照射光とされる場合も、図５の受光検出部により反射光の検出と光源強度の補正がなされる。
図５、図６のように、光源強度の補正をする光学系を設けることにより、光源強度の変動に対して測定データの安定性が増し、信頼性の高い測定を行なうことができるようになる。
【００６６】
図２から図６の分析装置で、光源部で光源１、２又は３からの光を試料９への照射光とする光学系が図１の光調整部３１に該当し、受光検出部で試料からの反射光を光検出素子７−１，７−２に導く光学系が図１の光調整部３３に該当する。コンピュータ１０は、図１における演算出力部３７と制御部３６の機能を実現するものである。
【００６７】
【発明の効果】
本発明では、タンパク質等とそれに糖が結合した糖化物質とを含む試料に、糖化物質のグリコシル基に結合性を有する色素を反応させ、必要があればタンパク質等も別の色素で標識化し、その反応液から色素標識糖化物質とタンパク質等を膜を用いて濾過することによって膜上に捕集して試料とする。その試料の反射光強度を測定するものであり、糖化物質に結合した色素の吸収波長λ１での反射光もしくは蛍光である測定光の強度Ａ１と、タンパク質等自体又はタンパク質等と結合した色素の吸収波長λ２（又はλ３）での反射光もしくは蛍光である測定光の強度Ａ２（又はＡ３）とを検出し、その比Ａ１／Ａ２（又はＡ１／Ａ３）を基にして糖化物質の比率を求めるようにしたので、大型の分析装置を用いず、検体数の少ない中小病院や開業医でも小型機器を用いて、簡単な操作で、タンパク質等に対する糖化物質の比率、例えばＨｂに対するＧＨｂの比率（％ＧＨｂ）を直接測定できるようになる。
また、その際、沈澱を生成する操作をなくしたことにより、簡易で、迅速性に優れ、実用性が高くなる。
【図面の簡単な説明】
【図１】  本発明を実施する分析装置を概略的に示すブロック図である。
【図２】  その分析装置の第１の例を示すブロック図である。
【図３】  その分析装置の第２の例の光源部を示すブロック図である。
【図４】  その分析装置の第３の例の光源部を示すブロック図である。
【図５】  その分析装置の第４の例の光源部と受光検出部を示すブロック図である。
【図６】  その分析装置の第５の例の光源部を示すブロック図である。
【符号の説明】
３０      光源
３１，３３      光調整部
３２      測定部
３４      検出部
３５      Ａ／Ｄ変換部
３６      制御部
３７      演算出力部
【図１】
0003747295.tif 000002
【図２】
0003747295.tif 000003
【図３】
0003747295.tif 000004
【図４】
0003747295.tif 000005
【図５】
0003747295.tif 000006
【図６】
0003747295.tif 000007