(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
少なくとも１種のシュードモナス（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ）  ｓｐ  Ｉ−２０５４（又はＤＳＭ  １２２９５）菌株又はその変異体の一つと、該菌株又は変異体の一つによって同化できる炭素源とを含む培地を発酵させることによって得ることができるヘテロ多糖類であって、グルコース、ガラクトース、マンヌロン酸、酢酸及び（又は）それらの塩類の単位を、参照物としてのガラクトースを１に等しいものとして、次のモル割合：
・グルコース                      ：０．２〜５、
・マンヌロン酸及び（又は）その塩類：０．２〜５、
・酢酸及び（又は）その塩類        ：０〜１０
で含むヘテロ多糖類（ＨＰ）。
【請求項２】
該単位を、参照物としてのガラクトースを１に等しいものとして、次のモル割合：
・グルコース                      ：０．５〜４、
・マンヌロン酸及び（又は）その塩類：０．５〜４、
・酢酸及び（又は）その塩類        ：０〜８
で含む請求項１に記載のヘテロ多糖類（ＨＰ）。
【請求項３】
該単位を、参照物としてのガラクトースを１に等しいものとして、次のモル割合：
・グルコース                      ：０．８〜２、
・マンヌロン酸及び（又は）その塩類：０．８〜２、
・酢酸及び（又は）その塩類        ：０〜６
で含むことを特徴とする請求項１に記載のヘテロ多糖類（ＨＰ）。
【請求項４】
マンヌロン酸及び酢酸が塩の形で存在することを特徴とする請求項１〜３のいずれかに記載のヘテロ多糖類（ＨＰ）。
【請求項５】
１×１０5〜８×１０6ｇ／モルの重量平均分子量（Ｍｗ）を有することを特徴とする請求項１〜４のいずれかに記載のヘテロ多糖類（ＨＰ）。
【請求項６】
８×１０5〜５×１０6ｇ／モルの重量平均分子量（Ｍｗ）を有することを特徴とする請求項５に記載のヘテロ多糖類（ＨＰ）。
【請求項７】
２．５×１０6〜４×１０6ｇ／モルの重量平均分子量（Ｍｗ）を有することを特徴とする請求項１〜６のいずれかに記載のヘテロ多糖類（ＨＰ）。
【請求項８】
該ヘテロ多糖類（ＨＰ）を蒸留水に溶解してなる０．５％重量／重量溶液が２３℃及び１Ｈｚの周波数で０．１〜２００ＰａのＧ’値及び０．１〜２０ＰａのＧ”値を与えることを特徴とする請求項１〜７のいずれかに記載のヘテロ多糖類（ＨＰ）。
【請求項９】
該ヘテロ多糖類（ＨＰ）を蒸留水に溶解してなる０．５％重量／重量溶液が２３℃及び１Ｈｚの周波数で２０〜２００ＰａのＧ’値及び０．５〜１５ＰａのＧ”値を示すことを特徴とする請求項１〜８のいずれかに記載のヘテロ多糖類（ＨＰ）。
【請求項１０】
該（ＨＰ）を０．５％重量／重量のＮａＣｌを含有する蒸留水に溶解してなる１％重量／重量溶液が２３℃で０．１ｓ-1の剪断速度で１００〜５０００Ｐａ・ｓの流れ粘度値を示すことを特徴とする請求項１〜９のいずれかに記載のヘテロ多糖類（ＨＰ）。
【請求項１１】
該（ＨＰ）を０．５％重量／重量のＮａＣｌを含有する蒸留水に溶解してなる１％重量／重量溶液が２３℃で１０ｓ-1の剪断速度で０．５〜３００Ｐａ・ｓの流れ粘度値を示すことを特徴とする請求項１〜１０のいずれかに記載のヘテロ多糖類（ＨＰ）。
【請求項１２】
ヘテロ多糖類（ＨＰ）が発酵液から次の工程：
（ｉ）発酵終了後の液を８０℃〜１２０℃でほぼ１０〜６０分間熱処理に付し、
（ii）ヘテロ多糖類（ＨＰ）を少なくとも部分的に水混和性の有機液体によって沈殿させ、
（iii）ヘテロ多糖類（ＨＰ）を有機液体から分離する
ことによって分離される請求項１〜１１のいずれかに記載のヘテロ多糖類（ＨＰ）を製造する方法。
【請求項１３】
工程（ｉ）において、熱処理に付される液が６〜８のｐＨを有することを特徴とする請求項１２に記載の方法。
【請求項１４】
工程（ｉ）から得られた液が熱処理の温度と同じ温度に保持されることを特徴とする請求項１２又は１３に記載の方法。
【請求項１５】
工程（ii）において、有機液体によるヘテロ多糖類（ＨＰ）の沈殿がナトリウム、カリウム又はカルシウムの硫酸塩、塩化物又は燐酸塩のような塩類の存在下に達成されることを特徴とする請求項１２〜１４のいずれかに記載の方法。
【請求項１６】
工程（ii）において、沈殿が４０〜６０℃の温度で行なわれることを特徴とする請求項１２〜１５のいずれかに記載の方法。
【請求項１７】
ＣＮＣＭに番号Ｉ−２０５４として、またＤＳＭＺに番号ＤＳＭ  １２２９５として寄託されたシュードモナス（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ）  ｓｐ菌株。
【請求項１８】
シュードモナス  ｓｐ  Ｉ−２０５４（又はＤＳＭ  １２２９５）の純粋培養物。
【請求項１９】
請求項１〜１１のいずれかに記載のヘテロ多糖類（ＨＰ）よりなる増粘剤及び（又は）ゲル化剤。
【請求項２０】
食品組成物又は処方物の重量に対して０．０１〜５重量％の請求項１〜１１のいずれかに記載のヘテロ多糖類（ＨＰ）の量で使用される食品処方物用の増粘剤及び（又は）ゲル化剤。
【請求項２１】
食品組成物又は処方物の重量に対して０．０５〜２重量％の請求項１〜１１のいずれかに記載のヘテロ多糖類（ＨＰ）の量で使用される食品処方物用の増粘剤及び（又は）ゲル化剤。
【請求項２２】
請求項１〜１１のいずれかに記載のヘテロ多糖類（ＨＰ）よりなる、媒質に追加の陽イオンを添加することなくゲルを与えるためのゲル化剤。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
本発明は、新規なヘテロ多糖類（ＨＰ）、これをシュードモナス（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ）  ｓｐ  Ｉ−２０５４（又はＤＳＭ  １２２９５）菌株を発酵させることにより製造するための方法、並びにこのヘテロ多糖類を増粘剤及び（又は）ゲル化剤として使用することに関する。
【０００２】
多くの産業分野において、
・改善された流動学的性質、ゲルを形成できること、
・混合する媒体との増大された相溶性、
・広範な温度及びｐＨ範囲内で大きな安定性
を特徴とする新規な化合物が常に求められている。
細菌発酵の結果として得られる化合物の場合には、その化合物が良好な生産性を有することも重要である。
【０００３】
ゲル化能力は非常に有益である。何故ならば、そのような系は、それらの用途が見出される分野が多様であるために特に魅力的であり、そのいくつかの用途はゲルの使用を要求するからである。
しかして、例えば、農業関連産業は広範なゲル製品（クリームデザート、ヨーグルト、種々のゼリー、アイスなど）を提供し、また製薬産業は活性成分のためのビヒクルとして又は増粘剤としてゲルを使用する。
【０００４】
全く異なった分野では、いくつかの塗料は、静止状態でゲル特性を持つために滴下しないが、ブラシの作用で容易に拡散する（剪断減粘性プロフィル）。
また、水性ゲルはクロマトグラフィーの支持体として又はコンタクトレンズの開発のために使用される。
【０００５】
例えば、キサンタンガムのような細菌起源のヘテロ多糖類が既に文献に記載され、極限温度及びｐＨ条件下でその有効な流動学的性質のために使用されている。しかし、溶液状での用途において好適であるこれらのヘテロ多糖類は、常にゲルを生成しない。
【０００６】
媒質のゲル化は、該媒質の成分の架橋に続いて三次元網状構造が形成されたときに起こることが知られている。
一般には、このゲル化は、媒質に追加の陽イオン、特にアルカリ金属又はアルカリ土類金属（例えば、カルシウム及び（又は）マグネシウム）型の陽イオンを添加することによって、ｐＨを酸性又は塩基性の値に切り替えることによって、別の化合物、特に別の多糖類（例えば、キサンタンとカロブとの組合せ）を添加することによって、又は温度を変更することによってもたらされる。
【０００７】
想定される用途が何であれ、上記のゲル化条件は、
・ゲルを得るために導入しなければならない追加の陽イオン又は補助添加剤と該組成物中に存在するその他の成分との間の相互作用のために最終ゲルの安定性及び相溶性を害するか、又は
・高温及び（又は）ｐＨ変化のために該組成物中に存在するヘテロ多糖類及び（又は）その他の成分を変性させる
かもしれない。
【０００８】
本発明との関係で、用語“ゲル”とは、液体に分散されたヘテロ多糖類鎖の少なくとも部分的な会合から生じた疑似固体（固体と非常に類似した挙動をする）を意味する。応力周波数範囲ω内では、疑似固体ゲルは、一般に、その固体成分に関しては弾性モジュラスＧ’（ω）（貯蔵モジュラスとも称される）によって、またその液状又は粘性の成分に関しては粘性モジュラスＧ”（ω）（損失モジュラスとも称される）によって特徴づけられる。
【０００９】
機械的な値Ｇ’（ω）及びＧ”（ω）は、振動様式で作働する制御された歪流動計を使用して測定することができる。例示すれば、例えば、Ｒｈｅｏ−Ｆｌｕｉｄ  Ｓｐｅｃｔｒｏｍｅｔｅｒ（登録商標）流動計が挙げられる。
また、Ｇ’及びＧ”は、振動様式で作働する制御された応力流動計で測定することができる。例示すれば、例えば、ＣＡＲＲＩＭＥＤ（登録商標）流動計が挙げられる。
【００１０】
測定の原理は、第一に、可逆的な機械的歪みの範囲であってゲルの機械的応力に対する応答が該歪みの関数として直線的である歪みの範囲を決定することからなる。第二に、ゲルが上で決定した直線的な範囲内に含まれる一定の値の機械的歪みに付される。次いで、流動計が範囲ωで走査を実行する。
【００１１】
歪みの相内に存在するゲルの応力応答は、弾性モジュラスＧ’（ω）に接近させる。Ｇ’（ω）は、弾性形態のゲルによって貯蔵されるエネルギーに相当し、回復性である。
歪みにより９０°の角度だけ相の外に存在するゲルの応力応答は、粘性モジュラスＧ”（ω）に接近させる。Ｇ”（ω）は、粘性流れによって散逸したエネルギーに相当し、回復性ではない。
【００１２】
ゲルは、走査した応力周波数範囲（ω）の全体にわたって、Ｇ’／Ｇ”の比が１０以上であるとき、即ち、ゲルの弾性が高いままであり且つＧ’（ω）の値が１０Ｐａ以上であるときに強い又は真のゲルであると言われる。
【００１３】
本発明の特定の目的は、非常に良好な流動学的性質、特に増粘性及び擬塑性(剪断減粘性)と、また媒質に追加の陽イオンを添加したりｐＨを切り替えたりすることなく真のゲルを与え且つ４０℃以下でそのようにさせる能力を持ったヘテロ多糖類を提供することである。
【００１４】
本発明の他の目的は、低濃度で非常に良好な流動学的性質を有するヘテロ多糖類を提供することである。
【００１５】
まず、本発明は、少なくとも１種のシュードモナス（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ）  ｓｐ  Ｉ−２０５４（又はＤＳＭ  １２２９５）菌株又はその変異体の一つと、該菌株又は変異体の一つによって同化できる炭素源とを含む培地を発酵させることにより得ることができることを特徴とするヘテロ多糖類（ＨＰ）を提供する。
【００１６】
シュードモナス種菌株は、ブタペスト条約に従って１９９８年７月２２日に微生物培養物の国内収集機関（ＣＮＣＭ）に寄託されており、そこでこのものは番号Ｉ−２０５４として公的に利用することができる。また、それは、１９９８年７月１３日に微生物及び細胞培養物のドイツ国収集機関（ＤＳＭＺ）に寄託されており、そこでこのもは番号ＤＳＭ  １２２９５として公的に利用することができる。この菌株は、本発明の目的の一つを構成する。
【００１７】
シュードモナス  ｓｐ  Ｉ−２０５４（又はＤＳＭ  １２２９５）の純粋培養は、本発明の別の観点をなすものであるが、２５℃〜３０℃、特に２５℃〜２８℃の温度でほぼ２４時間温置したペトリ皿で実施することができる。
【００１８】
シュードモナス  ｓｐ  Ｉ−２０５４（又はＤＳＭ  １２２９５）により同化できる窒素源及び炭素源は、グルコース、フルクトース、ガラクトース、トレハロース、マンノース、メロビオース、シュクロース、ラフィノース、マルトトリオース、マルトース、ラクトース、ラクツロース、メチル−β−ガラクトピラノシド、メチル−α−ガラクトピラノシド、セロビオース、ゲントビオース、メチル−β−Ｄ−グルコピラノシド、メチル−α−Ｄ−グルコピラノシド、エスクリン、リボース、アラビノース、キシロース、パラチノース、ラムノース、フコース、メレジトース、Ｄ（＋）−アラビット、Ｌ（−）−アラビット、キシリット、ズルシット、タガトース、グリセリン、ミオイノシット、マンニット、マルチット、ツラノース、ソルビット、アドニット、リキソース、エリトリット、Ｄ（−）−タータレート、Ｄ（＋）−マレート、Ｌ（−）−マレート、ｃｉｓ−アコニテート、ｔｒａｎｓ−アコニテート、２−ケト−Ｄ−グルコネート、Ｎ−アセチルグルコサミン、キネート、ベタイン、スクシンネート、フマレート、グリセレート、グルコサミンから選択される。
【００１９】
菌株のための可能な維持培地のうちでは、Ｄｉｆｃｏ  ＭＹ寒天型の維持培地（参照番号０７１２−０１−８）が特に有益であると思われる。このＤｉｆｃｏ  ＭＹ寒天型培地は、次の組成：
バクト−酵母抽出物          ３ｇ
麦芽抽出物                  ３ｇ
バクト−ペプトン            ５ｇ
バクト−デキストロース    １０ｇ
バクト−寒天              ２０ｇ
を有する。
【００２０】
菌株を保存するためには、少なくとも一つの予備培養工程を提供することが好ましい。予備培養工程とは、菌株を多糖類を産生させることなく成長させ増殖させることからなる工程を意味する。
【００２１】
一般に、ヘテロ多糖類は、グルコース、ガラクトース、マンヌロン酸及び（又は）その塩類、そして酢酸及び（又は）その塩類の単位を含むことが証明できた。
ヘテロ多糖類（ＨＰ）の構成単位は、一般に、参照物としてのガラクトースを１に等しいものとして、次のモル割合：
・グルコース                      ：０．２〜５、
・マンヌロン酸及び（又は）その塩類：０．２〜５、
・酢酸及び（又は）その塩類        ：０〜１０
で存在する。
【００２２】
更に特定すれば、該単位は、参照物としてのガラクトースを１に等しいものとして、次のモル割合：
・グルコース                      ：０．５〜４、好ましくは０．８〜２、
・マンヌロン酸及び（又は）その塩類：０．５〜４、好ましくは０．８〜２、
・酢酸及び（又は）その塩類        ：０〜８、好ましくは０〜６
で存在する。
マンヌロン酸及び酢酸は、塩類の形で存在し得る。塩類としては、ナトリウム、カリウム、カルシウム又はアンモニウム塩が挙げられる。
【００２３】
上で特記したようにヘテロ多糖類（ＨＰ）の実験式を決定するのを可能にさせたそれの分析方法の原理は、該ヘテロ多糖類（ＨＰ）の加水分解後の構成要素（単糖類及び酸）の決定並びに内部又は外部較正をしたクロマトグラフィー検定である。
しかして、クロマトグラフィー検定は、以下のように実施された。
１００ｍｇのヘテロ多糖類（ＨＰ）を密閉チューブにおいて５ｍＬの１モルトリフルオル酢酸と共に１０５℃で３〜６時間加水分解する。
この操作に続いて蒸発させ、乾燥残留物を内部標準としての１５ｍｇのソルビットを含有する５ｍＬのピリジンに溶解させ、次いで１ｍＬのピリジン溶液について０．９ｍＬのヘキサメチルジシラザンによりシリル化する。シリル化は０．１ｍＬのトリフルオル酢酸により接触させる。
【００２４】
次いで、単糖類が、長さが２５ｍで直径が０．２５ｍｍで、０．１４μの膜厚を有するメチルシリコーン相を充填してあるガラス毛細管でＦＩＤ（炎イオン化検出）付きのガスクロマトグラフィーにより検定される。使用されるキャリアーガスは２ｍＬ／分の流量の水素である。
【００２５】
酢酸は、１００ｍｇのヘテロ多糖類（ＨＰ）を５ｍＬの２Ｎ塩酸により１０５℃で１時間加水分解した後に検定される。次いで、５ｍＬのプロピン酸溶液（５ｍｇ／ｍＬ）が内部標準として添加され、混合物が１５ｍＬの脱塩水により作られる。検定は、長さが２５０ｃｍで直径が４．６ｍｍである５μのＣ−１８グラフト化シリカカラムを使用するＨＰＬＣにより実施する。溶離剤は、１．２ｍＬ／分の流量の０．０２モル／Ｌの燐酸水溶液である。検出は屈折計法により行なう。
【００２６】
マンヌロン酸は、「食品化学処方集」第４版第７６８頁に記載された方法に従ってガム質を塩酸により熱処理した後に脱炭酸することにより放出されたＣＯ2によって検定される。
【００２７】
重量分子量は、連続したＴＳＫ  ＰＷ４０００及び６０００カラム（長さが３０ｃｍで直径が７ｍｍのカラム）での排除クロマトグラフィーによって、屈折計法による検出を用いて検定される。溶離剤は０．１モル／Ｌの硝酸ナトリウム溶液である。溶離剤中のヘテロ多糖類の濃度はほぼ０．０１５重量％である。較正は、プルランを使用して行なうが、後者は１０7ｇ／モルまで外挿して５×１０3〜１．６×１０6ｇ／モルの分子量を持つ単分散多糖類である。
重量平均分子量（Ｍｗ）は、クロマトグラムから得られる分子量分布曲線から得られる。それは、一般に、１×１０5〜８×１０6モル、好ましくはほぼ８×１０5〜５×１０6ｇ／モルである。
更に特定すれば、（ＨＰ）は、ほぼ２．５×１０6〜４×１０6ｇ／モルの重量平均分子量を有する。
【００２８】
既に述べたように、（ＨＰ）は溶液状で、特に蒸留水又は水道水中で非常に良好な流動学的性質を有する。
しかして、例えば、（Ｈｐ）を蒸留水に溶解してなる０．５％重量／重量溶液は２３℃で１Ｈｚの周波数で０．１〜２００ＰａのＧ’値及び０．１〜２０ＰａのＧ”値を与えることが分かった。
【００２９】
（ＨＰ）は、Ｇ’及びＧ”値がＧ’については２０〜２００Ｐａであり、Ｇ”については０．５〜１５Ｐａであるときに強いゲル又は真のゲルを与える。さらに有利には、Ｇ’は２０〜１５０Ｐａであり、Ｇ”は０．５〜１０Ｐａである。特に好ましい一具体例では、Ｇ’の値はほぼ１００Ｐａであり、Ｇ”の値はほぼ５Ｐａである（蒸留水中）。
【００３０】
（ＨＰ）は、流れの流動学により評価される水性媒質粘度を与える。流れ粘度の流動学的測定は、制御された応力流動計又は制御された剪断速度流動計、例えば、それぞれＲＨＥＯＭＡＴ（登録商標）又はＣＡＲＲＩＭＥＤ（登録商標）型の粘度計を使用して実施される。
いずれの場合も、装置は、（ＨＰ）＋水の混合物の流れの下でこの混合物が可逆的に歪みを受けているときに応力を測定する。流れ粘度は応力から計算される。
従って、この装置は、所定の剪断速度で粘度レベルを定量するのを可能にさせる。
流れ粘度は、ブルックフィールド粘度計によって一層簡単に評価することができる。
更に、これらの（ＨＰ）の流れ粘度の流動学的測定は、（ＨＰ）を含む（ＨＰ）溶液及び（又は）処方物の流れ閾値を評価するのを可能にさせる。該閾値は、媒質の構造を破壊してそれを流れさせるために与えねばならない力を表わしている。
また、流れの流動学は、（ＨＰ）を含む（ＨＰ）溶液及び（又は）処方物が制御された剪断が増大する（擬塑性又は剪断減粘性の挙動）ときに流れる容易さを定量するのを可能にさせる。
【００３１】
例えば、（ＨＰ）を０．５％重量／重量のＮａＣｌを含有する蒸留水に溶解してなる１％重量／重量溶液が２３℃で０．１ｓ-1の剪断速度で１００〜５０００Ｐａ・ｓ、特に２００〜２０００Ｐａ・ｓの流れ粘度値を与えることが見出された。
類似の条件下で、１０ｓ-1の剪断速度で、０．５〜３００Ｐａ・ｓ、特に５〜１５０Ｐａ・ｓである。
これらの流れの流動学データは、処方物が混練りされているとき、一つの容器から別の容器に移送されるとき、膨張されるときなどにおける該処方物の挙動を表わしている。
【００３２】
（ＨＰ）を媒質に混入することによって得られたゲルは、自己回復性のゲルである。換言すれば、剪断後に、強い剪断でさえも、“破壊された”ゲルは矯正してその初期の性質を回復する能力を有する。
（ＨＰ）から得られたゲルの自己回復能力は、例えば、直径が１２．７ｍｍの円筒状測定本体からなるＥＴＩＡ  Ｔ２テクスチャライザーで、０．０５ｍｍ／ｓ及び１５ｍｍの浸透高さでもって実施される圧縮測定を使用して評価される。プランジャーがゲルに同じ箇所で多数回、異なった時間間隔で押し当てられ、圧縮力が記録される。ゲルの弾性の表わしている原点での傾斜（ｍＮ／ｍｍで表わされる）が決定される。
【００３３】
例えば、（ＨＰ）を蒸留水に溶解してなる０．５％重量／重量溶液によりゲルが調製される。次いで、このゲルは２４時間貯蔵されてから、圧縮測定が室温（ほぼ２５℃）か又は低温で、ほぼ６℃で実施される。
圧縮測定は、種々の時間間隔：０分、５分、１５分及び２４時間で、それぞれの測定の間に５分間あけて、実施される。
しかして、一定に留まる傾斜は、測定時間にかかわらず（ｔ＝０．５分、１５分及び２４時間）、４５±１ｍＮ／ｍｍにほぼ等しい。
このことは、ゲルの弾性が安定であること、ゲルがずっと連続して何度も自己回復する能力を有すると共に同じゲル強度を維持することを示している。
【００３４】
また、本発明は、上記したヘテロ多糖類（ＨＰ）を製造するための方法を提供する。
この製造方法は、まず、シュードモナス（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ）  ｓｐ  Ｉ−２０５４（又はＤＳＭ  １２２９５）菌株、その組換え型の一つ又はその変異体の一つにより同化できる炭素源を含む培地を発酵させることにからなる。
該同化性炭素源以外に、発酵培地は、少なくとも１種の有機又は無機窒素源及び要すれば１種以上の無機塩類を含有することができる。
培地は、シュードモナス（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ）  ｓｐ  Ｉ−２０５４（又はＤＳＭ  １２２９５）菌株により慣用的な態様で接種される。
【００３５】
発酵培地の一成分である有機炭素源としては、上記の糖以外に、でんぷん（有利には、加水分解されたもの）、でんぷん加水分解産物、これらの糖の混合物、これらの糖の少なくとも１種を含む混合物が挙げられる。
更に詳しくは、グルコース、スクロース、でんぷん（有利には加水分解されたもの）、でんぷん加水分解産物、ラクトース、これらの糖の混合物、これらの糖の少なくとも１種を含む混合物が挙げられる。グルコース及びスクロースが、更に好ましい糖である。
発酵培地中の炭素源の濃度は、１〜１００ｇ／Ｌ、好ましくは１５〜６０ｇ／Ｌであってよい。
【００３６】
有機窒素源としては、カゼイン及びカゼイン酸塩、魚の加水分解産物、小麦、トウモロコシ又は大豆の粉末、酵母エキス（べーカーズ酵母、ビール酵母、乳酸酵母など）、トウモロコシ浸漬液（ＣＳＬ）、尿素及びジャガイモ蛋白が挙げられる。
無機窒素源としては、硝酸アンモニウム若しくはナトリウム、燐酸アンモニウム又は硫酸アンモニウムが挙げられる。
また、発酵は、有機窒素源と無機窒素源との混合物により行なうことができる。
発酵培地中の窒素源濃度（有機、無機、又は両者の混合物）は、１〜８０ｇ／Ｌ、好ましくは３〜５０ｇ／Ｌであってよい。
【００３７】
発酵培地は、有利に、カルシウムを単独で或いは、要すれば、鉄、マンガン及び（又は）マグネシウムのようなその他の微量元素との混合物で、またビタミン及びヌクレオチドも含む。
カルシウムは、培地中に、無機又は有機性である組成物又は化合物、例えばＣＳＬ、大豆粉末、又は燐酸塩、硝酸塩、炭酸塩又は硫酸塩の形で導入することができる。
【００３８】
発酵は、１〜４バールの圧力下に２５℃〜３５℃、好ましくは２５℃〜３０℃の温度で好気性条件下に実施することができる。
発酵培地のｐＨは５〜９、好ましくは６〜８であることができる。ｐＨは、要すれば、水酸化ナトリウム、水酸化カリウム若しくはアンモニア水のような塩基により、又は硫酸、燐酸、塩酸若しくは硝酸のような酸により調節することができる。
【００３９】
発酵培地は、発酵タンク又は容器に入れて、遊離に撹拌に付することができる。この撹拌は、例えば、往復振盪機、回転振盪機、撹拌スピンドル又は気泡カラムを使用して実施することができる。発酵時間は、慣用的には３０時間よりも長いが、一般に４０〜１００時間である。
【００４０】
発酵収率は、一般に、使用した炭素源に関して、４０重量％以上、好ましくは５５〜７５重量％、最も好ましくは６０〜７５重量％のヘテロ多糖類（ＨＰ）を生じる。
発酵後、ヘテロ多糖類（ＨＰ）は、発酵液から次の工程：
（ｉ）発酵終了後の液を８０℃〜１２０℃でほぼ１０〜６０分間熱処理に付し、
（ii）ヘテロ多糖類（ＨＰ）を少なくとも部分的に水混和性の有機溶媒によって沈殿させ、
（iii）ヘテロ多糖類（ＨＰ）を有機液体から分離する
によって分離することができる。
【００４１】
工程（ｉ）において、ヘテロ多糖類（ＨＰ）を含有する発酵液は、８０℃〜１２０℃の温度に１０〜６０分間、好ましくは１５〜４５分間有利に加熱される。
熱処理に付される発酵液は、有利には６〜８のｐＨを有する。
しかし、このｐＨは、必要ならば、塩基又は酸によって調節することができる。
後者は、発酵培地のｐＨを調節するのに使用される上記の塩基又は酸から選択できる。
【００４２】
本発明の好ましい別法の一つによれば、工程（ｉ）から得られた液は、熱処理温度と同じ温度に保持される。
工程（ii）で、ヘテロ多糖類（ＨＰ）が工程（ｉ）で得られた液から、有利には、少なくとも部分的に水混和性であり且つヘテロ多糖類（ＨＰ）が不溶であるか又は実質的に不溶である有機液体を使用する沈殿によって、回収される。
本発明に従って好適である液体としては、アセトン又は１〜６個の炭素原子を含有するアルコール、例えば、エタノール、プロパノール、イソプロパノール、ブタノール、ｔ−ブタノール又はそれらの混合物が挙げられる。
特に、（ＨＰ）の沈殿は、イソプロパノールにより実施される。
使用される有機液体の容積は、一般に、処理しようとする液の容積の少なくとも２倍である。
【００４３】
有機液体によるヘテロ多糖類（ＨＰ）の沈殿は、塩類、例えば、ナトリウム、カリウム又はカルシウムの硫酸塩、塩化物又は燐酸塩の存在下に達成することができる。
特定の一具体例によれば、沈殿は、４０〜６０℃の温度で行なうことができる。
【００４４】
ヘテロ多糖類（ＨＰ）は、沈殿したならば、次いで、工程（iii）で有機液体から分離することができる。
分離方法は、それ自体重要ではなく、通常知られた分離方法、例えば、ろ過、遠心分離又は吸引ろ過から任意に選択することができる。
得られた繊維は、例えば、アセトン又はエタノール、プロパノール若しくはイソプロパノールのようなアルコールを使用して随意に脱水することができる。
この脱水操作を実施するのに必要なアルコールの重量は、一般に、処理しようとする繊維の重量の１〜１０倍である。
脱水された繊維は、更にろ過、遠心分離又は吸引ろ過操作を受けることができる。
適当ならば、繊維は、ヘテロ多糖類（ＨＰ）粉末を与えるようにろ過し、粉砕し及び（又は）篩い分けすることができる。
一層純粋な粉末を得たいと望むならば、発酵液か又は上記の方法により得た粉末から再構成された水溶液を１種以上の酵素を使用して処理することが可能である。
この目的に好適である酵素としては、プロテアーゼ、ムタナーゼ、リポプロテアーゼ、セルラーゼ及びキチナーゼが挙げられる。
酵素による精製は、物理的な精製方法、例えば種々のろ過、遠心分離又は透析法或いは種々のクロマトグラフィー技術と併用し或いはこれらで代えることができる。
【００４５】
発酵液及びヘテロ多糖類（ＨＰ）の再構成溶液は、精製処理を受け又は受けずに、濃縮することができる。
濃縮は、ある場合に、特に、輸送コストがそれにより削減できるときには、有益である。更に、濃縮溶液は、ヘテロ多糖類（ＨＰ）粉末よりも更に迅速に使用することができる。
濃縮は、当業者に知られた全ての技術、例えば蒸発、限外濾過又は透析ろ過により実施することができる。
【００４６】
本発明においては、ヘテロ多糖類（ＨＰ）は、繊維又は粉末型の固体の形態で有利に存在する。
既に述べたように、（ＨＰ）は、非常に良好な流動学的性質、特に真のゲルを形成する能力を有する。発酵条件、特に、培地中の成分やそれらの濃度に応じて及び（又は）本方法の工程（ii）における沈殿条件（特に、沈殿が塩類の存在下に起こるかどうか）に応じて、（ＨＰ）は、増粘剤として、ゲル化剤として又はそれらの両方として使用できるという利点を有する。
【００４７】
しかして、本発明は、前記した又は蒸気の方法により得られたヘテロ多糖類（ＨＰ）を増粘剤及び（又は）ゲル化剤として使用することに関する。
例えば、（ＨＰ）は、石油、農薬、食品、化粧品、製紙及び繊維産業に、更に、塗料、コンタクトレンズ、糊料、インキ及び住宅用又は産業用クリーナーにおいて増粘剤及び（又は）ゲル化剤として使用することができる。
【００４８】
化粧品組成物に使用できる本発明のヘテロ多糖類（ＨＰ）の量は、増粘させ及び（又は）ゲル化させようとする水性媒質に依存する。この量は、増粘され又はゲル化された水性媒質の重量のほぼ０．０１％〜５％、好ましくは０．１％〜０．３％程度を占めよう。
用語“化粧品組成物又は処方物”とは、化粧品指令と称される１９７６年７月２７日付けヨーロッパ指令Ｎｏ．７６／７６８／ＥＥＣの貼付物１（“化粧品のカテゴリーによる例示リスト”）に記載されたタイプの化粧品又は製剤の全てを意味するものとする。
【００４９】
化粧品組成物は、多数のタイプの皮膚及び（又は）毛髪用製品、例えばムース、ジェル（特に、整髪用ジェル）、コンディショナー、毛髪を整え又は毛髪をすくのを容易にさせるための処方物、リンス処方物、ハンドローション、ボデーローション、皮膚への加湿を調節させる製品、クレンジングミルク、メイキャップ除去用組成物、日光及び紫外線保護のためのクリーム又はローション、ビューティクリーム、抗ニキビ製剤、局所用鎮痛剤、マスカラ、唇又はその他の粘膜に適用するための製品、口紅、同様のタイプのその他の組成物に処方することができる。
【００５０】
これらの化粧品組成物は、ほぼ０．５％〜９９．５％、一般にほぼ５〜９０％の濃度で該組成物中に存在するビヒクル又は２種以上のビヒクルの混合物を使用する。
適切なビヒクルの選定は、使用された成分の種類及び該組成物の用途に依存し、処方された製品が適用された表面に残っている（例えば、スプレー、ムース、トニックローション又はジェル）か又は他方では使用後にすすぎ落とされる（例えば、シャンプー、コンディショナー、リンスローションなど）かどうかに依存する。
【００５１】
また、化粧品組成物中に存在する水性ビヒクルは、Ｃ1〜Ｃ6アルコール、特にメタノール、エタノール及びイソプロパノールを含むことができる。また、該組成物に使用された種々の成分を水性媒質中に可溶化させ又は分散させるのを可能にさせる他の溶媒も含むことができる。
しかして、該ビヒクルは、広範な種類の他の溶媒、例えばアセトン、炭化水素、ハロ炭化水素、リナロール、揮発性シリコーン及びエステル類も含むことができる。水性ビヒクルに使用できる種々の溶媒は、それぞれ互いに混和性又は不混和性であることができる。
【００５２】
化粧品組成物がスプレー、トニックローション、ジェル又はムースの形態にあるときは、好ましいビヒクルは、水以外に、エタノール、シリコーンの揮発性誘導体及びそれらの混合物を含む。
エーロゾルスプレー及びムース用の処方物は、製品をムース又は微細な均一噴霧の形態で発生させることができる発射剤も含むことができる。例えば、トリクロルフルオルメタン、ジクロルジフルオルメタン、ジフルオルエタン、ジメチルエーテル、プロパン、ｎ−ブタン又はイソブタンが挙げられる。
【００５３】
該水性ビヒクルは、多くの形態、特に、水中油型エマルジョン、油中水型エマルジョン及びマルチエマルジョンを含めてエマルジョンの形態を取ることができ、その所望の粘度は２，０００，０００ｍＰａ・ｓまでであることができる。
【００５４】
化粧品組成物は、水性ビヒクル以外に、使用された種々の化合物を分散させ、乳化させ、可溶化させ及び安定化させるのに、特に緩和性又は湿潤性を付与するために使用される界面活性剤を含むことができる。それらは、陰イオン性、非イオン性、陽イオン性、双性イオン性又は両性型のものであってよい。例えば、下記のものが挙げられる。
・３％〜５０％、好ましくは５％〜２０％の範囲である量での陰イオン性界面活性剤、例えば、
アルキルスルホン酸エステル塩、
アルキル硫酸塩、
アルキルアミド硫酸塩、
飽和又は不飽和脂肪酸の塩類。
・０．１％〜３０％、好ましくは２％〜１０％の範囲である量での非イオン性界面活性剤、例えば、
ポリオキシアルキレン化アルキルフェノール、
グルコサミド、グルカミド、
Ｎ−アルキルアミンから誘導されるグリセリンアミド、
ポリオキシアルキレン化Ｃ8〜Ｃ22脂肪族アルコール、
プロピレンオキシドとプロピレングリコールとの縮合から生じる疎水性化合物とエチレンオキシドとの縮合から生じる生成物、
アミンオキシド、
アルキルポリグリコシド及びそれらのポリオキシアルキレン化誘導体、
Ｃ8〜Ｃ20脂肪酸のアミド、
エトキシル化脂肪酸、
エトキシル化アミドアミン、アミン及びアミド。
・０．１％〜３０％、好ましくは１％〜１０％の範囲である量での両性及び双性イオン性界面活性剤、例えば、
ベタイン型のもの、例えば、ベタイン、スルホベタイン、アミドアルキルベタイン及びスルホベタイン、
アルキルスルタイン、
脂肪酸と蛋白質加水分解産物との縮合生成物、
ココアンフォ酢酸塩及びココアンフォ二酢酸塩、
アルキルアンフォ−プロピオン酸塩及び−ジプロピオン酸塩
アルキルポリアイミンの両性誘導体。
【００５５】
また、コンディショナーも０．０５％〜５％、好ましくは０．１％〜１％の範囲である量で存在できる。これらのうちでは、ポリクォーターニウム、例えばポリクォーターニウム−２、−７及び−１０として周知の合成起源のもの、多糖類の陽イオン性誘導体、例えばヒドロキシエチルココジモニウムセルロース、グアーヒドロキシプロピルトリモニウムクロリド、ヒドロキシプロピルグアーヒドロキシプロピルトリモニウムクロリド、シリコーンの不揮発性誘導体、例えばアモジメチコーン、シクロメチコーン、非水溶性で不揮発性のオルガノポリシロキサン、例えばシロキサンオイル、樹脂又はガム質、例えばジフェニルジメチコーンガムが挙げられる。
【００５６】
また、化粧品組成物は、固定機能を与えるように使用できる皮膜形成性の重合体を含むこともきる。これらの重合体は、一般に０．０１〜１０％、好ましくは０．５〜５％の濃度で存在する。それらは、好ましくはポリビニルピロリドン、ポリビニルピロリドンとメタクリル酸メチルとの共重合体、ポリビニルピロリドンと酢酸ビニルとの共重合体、ポリエチレングリコールテレフタレート／ポリエチレングリコール共重合体及びスルホン化テレフタル酸コポリエステル重合体型のものである。
【００５７】
また、化粧品組成物は、０．０１〜１０％程度、好ましくは０．１〜５重量％の量で保護機能を果たす重合体物質を含むことができる。例えば、下記の誘導体である。
セルロース誘導体、
ポリアルキレン主鎖にグラフト化したポリビニルエステル、
ポリビニルアルコール、
スルホン化テレフタル酸コポリエステル重合体、
エトキシル化モノアミン又はポリアミン、エトキシル化アミンの重合体。
【００５８】
また、化粧品組成物の性能は、可塑剤を、処方物の０．１〜２０％、好ましくは１〜１５％の量で使用することによって改善することができる。これらの可塑剤のうちでは、アジピン酸エステル、フタル酸エステル、イソフタル酸エステル、アゼライン酸エステル、ステアリン酸エステル、シリコンコポリオール、グリコール類、ひまし油又はこれらの混合物が挙げられる。
【００５９】
また、これらの組成物に金属イオン封鎖剤、特に、カルシウムを封鎖するもの、例えばくえん酸イオン又は重合体分散剤を０．１〜７重量％程度の量で添加してカルシウム及びマグネシウム硬度を制御することが可能である。例えば、下記の封鎖剤である。
ポリカルボン酸の水溶性の塩類、
１，０００〜５０，０００程度の分子量のポリエチレングリコール。
【００６０】
また、化粧品組成物に湿潤剤を配合することが可能である。グリセリン、ソルビット、尿素、コラーゲン、ゼラチン、そして一般にアルキルモノグリセリド及びアルキルジグリセリド、植物から抽出される油及び動物起源の油のようなトリグリセリド又はその水素化誘導体、鉱油又は液状パラフィン、ジオール類、脂肪エステル及びシリコーンから選択される緩和剤が挙げられる。
【００６１】
これらの配合物には、無機粒子又は粉末、例えば、炭酸カルシウム、粉末状又はコロイド状の無機酸化物、例えば二酸化チタン、シリカ、アルミニウム塩、カオリン、タルク、クレー及びそれらの誘導体を組合わせて添加することが可能である。
【００６２】
一般に、１種以上の香料、着色剤及び（又は）顔料のような乳白剤がこれらの成分に添加される。
【００６３】
皮膚及び（又は）毛髪を日光及び紫外線からの攻撃より保護するためには、これらの処方物に、紫外線を強く吸収する化学物質か又は酸化亜鉛、二酸化チタン若しくは酸化セリウムのような無機粒子のいずれかである日焼け止め剤を添加することが可能である。
【００６４】
ｐ−ヒドロキシ安息香酸エステル、安息香酸ナトリウムのような保存剤、又は細菌の増殖又若しくは黴の増殖を防止しかつ化粧品組成物に慣用されている任意の薬剤がこれらの組成物に一般に０．０１〜３重量％の量で導入される。
水の活性を変性させ且つ浸透圧を大きく増大させる物質、例えば炭水化物又は塩類を時として使用することができる。
【００６５】
また、化粧品組成物は、その他の粘度変性用及び（又は）ゲル化用重合体、例えば、架橋ポリアクリル酸エステル、キサンタンガム及びレオザン（登録商標）のような発酵により得られるヒドロコロイド、ヒドロキシプロピルセルロース又はカルボキシメチルセルロースのようなセルロース誘導体、グアーガム及びその誘導体などを単独で又は組合わせて含むことができる。
【００６６】
本発明は、特に、ヘテロ多糖類を食品処方物における増粘剤及び（又は）ゲル化剤として使用することを提供する。
ヘテロ多糖類（ＨＰ）が添加される食品処方物は、慣例的に単純な又は複数の液体のエマルジョン、複雑なガスと液体のエマルジョン、液体と固体の懸濁液（膨張系）、又はこれらの可能性を併有する任意のその他の系である。
これらの処方物において、液体は有利には水であるか又は水を少なくとも一部含む液体である。
【００６７】
食品処方物は、それらをそのタイプに従って製造するための慣用的方法を実行することによって得られる。しかして、（ＨＰ）は、有利には繊維又は粉末型の固体の形態で、処方物に要求されるその他の成分と混合される。混合物全体は適当ならば均質化することができる。
処方物を製造する温度は、それ自体臨界的ではない。（ＨＰ）を含む処方物は、それらの有用性を害することなく滅菌することができる。（ＨＰ）の他の利点は、成分を予め加熱することなく食品処方物を製造することを可能にさせることである。
（ＨＰ）は、食品処方物の多様性（ｐＨ、イオン強度、組成）にかかわらず相溶性のままであり、その性質を実質的に留めている。
【００６８】
本発明の主題であるヘテロ多糖類（ＨＰ）と関連した有益な流動学的性質と、このものが４０℃以下の温度で真のゲルを与え且つ広いｐＨ範囲内でそうのようにする能力とは、それが単独で又は他の添加剤と組み合わせて使用される処方物に、該添加剤を専ら含む処方物の感触に近い感触を付与することを可能にさせる。
【００６９】
食品処方物の感触又は口当たりを特徴づけるための測定できるパラメーターは、その性質上流動学的であり、弾性モジュラス（Ｇ’）及び粘性モジュラス（Ｇ”）並びに所定の剪断速度での流れ粘度を測定することから本質的になる。Ｇ’及びＧ”並びに粘度は上で定義した。
これらの流動学的特徴の目的は、処方物を互いに比較するためにそれらの粘弾性及び（又は）擬塑性的挙動を立証することである。
【００７０】
（ＨＰ）は、有利には繊維又は粉末型の固体の形態で、それを含む処方物に剪断減粘性プロフィルを付与する能力を有する。
また、同様に、（ＨＰ）は、機械的応力の適用後に自己回復できる真のゲルを与える能力を有する。
【００７１】
処方物のために測定されたＧ’及びＧ”モジュラス並びに粘度は、蒸留水中の（ＨＰ）について測定されたものとは異なることがあることに留意すべきある。
【００７２】
ミルクをベースにしゲル化したデザート、例えばフランにおいては、通常のゲル化剤、特にゼラチンを少なくとも部分的に（ＨＰ）で有利に置き換えることが可能である。
ヴィネグレットのような塩気のある酸性媒質においては、存在する水性媒質は、少量の（Ｐ）を添加することによって構成することができる。
製菓業の分野、特にＨＡＲＩＢＯ（登録商標）型のゼリーキャンディでは、例えばゼラチンのようなゲル化剤を少なくとも部分的に（ＨＰ）で有利に置き換えることが可能である。
【００７３】
高いイオン強度の媒質、特に豚肉製品においては、（ＨＰ）は、表面感触、特に例えばソーセージの弾性外観を強化させるためにカラジーナンに添加することができる。
シャンティイークリーム、トッピング又はアイスクリームのような膨張させる処方物においては、（ＨＰ）は増粘剤及び（又は）ゲル化剤として使用することができる。
同様に、（ＨＰ）は、マヨネーズ、野菜ムース又は蛋白質を含有するムース、例えばミート又はフィッシュムース、又はアルブミンを含有するムース、例えばメレンゲに使用することができる。
増粘剤及び（又は）ゲル化剤として、（ＨＰ）はヨーグルトの組成の一部であることができる。
【００７４】
上記した食品処方物においては、一般に、ヘテロ多糖類を含む組成物又は処方物の重量に関して０．０１〜５重量％、好ましくは０．５〜２重量％のヘテロ多糖類（ＨＰ）が使用される。更に好ましくは、組成物又は処方物の重量に対して０．１〜１重量％のヘテロ多糖類（ＨＰ）が使用される。
【００７５】
ヘテロ多糖類（ＨＰ）は、これが導入される食品の味覚を何ら変化させないことに留意すべきである。
本発明は、最後に、上で定義したようなヘテロ多糖類（ＨＰ）を含む食品組成物又は処方物を提供する。
【００７６】
以下の実施例は、本発明を例示するものであって、それを限定するものではない。
実施例
例１
この例は、シュードモナス（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ）  ｓｐ  Ｉ−２０５４（又はＤＳＭ  １２２９５）の純粋培養並びにこの菌株を保存する条件を説明する。
シュードモナス（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ）  ｓｐ  Ｉ−２０５４（又はＤＳＭ  １２２９５）の純粋培養
シュードモナス（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ）  ｓｐ  Ｉ−２０５４（又はＤＳＭ  １２２９５）菌株を保持するための培地は、Ｄｉｆｃｏ  ＭＹ寒天培地（参照番号０７１２−０１−８）である。既に作ってあるこの培地の組成は以下の通りである。
バクト酵母エキス              ３ｇ
麦芽エキス                    ３ｇ
バクトペプトン                ５ｇ
バクトデキストロース        １０ｇ
バクト寒天                  ２０ｇ
この培地の２１ｇを１Ｌの蒸留水により希釈する。溶解後に、培地をオートクレーブで１２１℃で１５分間滅菌する。次いで、培地をペトリ皿に分配する。
２５℃〜３０℃、好ましくは２５℃〜２８℃で最低２４時間温置したペトリ皿で培養を実施する。
【００７７】
予備培養−保存
次いで、菌株を液体窒素冷凍法（ＬＮＦ）により−１９６℃で冷凍した試験管の形で保存する。
液体窒素冷凍（ＬＮＦ）のために、以下の組成を有するＰＹＧ１０培地上で予備培養物を調製する。
麦芽エキス                ３ｇ（オキソイド社から得た）
酵母エキス                ３ｇ（オキソイド社製）
大豆ペプトン              ５ｇ（オキソイド社製）
グルコース              １０ｇ（プロラボ社から得た）
ミネラルウオーター      １Ｌとするのに要する量
培地を調製するために、成分の全部をミネラルウオーターに分散させる。ｐＨを１０％Ｈ2ＳＯ4により６．５に調節する。この培地をオートクレーブで１２０℃で２０分間滅菌する。
２２０ｒｐｍで振幅＝５０ｍｍの回転振盪機上で２８℃で２４時間温置した後、１０容量％の純粋無菌グリセリンを培養物に添加する。次いで、この培養物を１ｍＬ〜１０ｍＬ、好ましくは２ｍＬ〜４ｍＬの範囲の容量を持つ低温試験管に分配する。
これらの試験管を液体窒素中に保存する。
【００７８】
例２
この例は、二つの発酵方法、即ち、一つは有機窒素源、他方は無機窒素源によるヘテロ多糖類の製造及び産生を説明する。
この例には、二つの“予備培養”工程が含まれる。これらの工程は５００ｍＬの丸底フラスコにおいて行なわれ、これは１００ｍＬの培地に相当する。
産生工程は、菌株が多糖類を産生させる工程に相当し、１５Ｌの有効容量を有する２０Ｌの発酵器で行なわれる。
回転振盪機の撹拌条件は、速度＝２２０ｒｐｍ及び振幅＝５０ｍｍである。
【００７９】
予備培養工程１：
予備培養工程１を下記の組成のＰＹＧ１０培地で実施する。
麦芽エキス                ３ｇ（オキソイド社製）
酵母エキス                ３ｇ（オキソイド社製）
バクトペプトン            ５ｇ（オキソイド社製）
グルコース              １０ｇ（プロラボ社製）
蒸留水                  １Ｌとするのに要する量
成分の全部を１Ｌとするのに十分なの量の蒸留水に分散させる。滅菌前に、ｐＨを１０％Ｈ2ＳＯ4により６．５に調節する。培地をオートクレーブで１２０℃で２０分間滅菌する。
滅菌後及び低温試験管（ｑｓ）による接種前のｐＨは７．３３である。
各丸底フラスコに十分な量のＬＮＦにより接種する。
回転振盪機（２２０ｒｐｍ、Ａ＝５０ｍｍ）上で２８℃で２４時間温置した後、培地は下記の特性を有する。
ｐＨ＝６．５０、
粘度＜１０ｍＰａ・ｓ、
ＭＹ寒天（Ｄｉｆｃｏ培地、参照番号０７１２−０１−８）上で２８℃で７２時間後に読んだ集団＝１．７×１０5ｃｆｕ／ｍＬ。
２４時間温置した後に、予備培養物１を使用して予備培養物２に接種する。
【００８０】
予備培養工程２：
予備培養工程２を下記の組成を有する培地で実施する。
酵母エキス                ４ｇ（オキソイド社製）
ＭｇＳＯ4・７Ｈ2Ｏ        ０．８ｇ（プロラボ社製）
ＦｅＳＯ4・７Ｈ2Ｏ        ０．０１ｇ（プロラボ社製）
ＭｎＳＯ4・Ｈ2Ｏ          ５ｐｐｍＭｎ2+（プロラボ社製）
Ｋ2ＨＰＯ4                ４ｇ（プロラボ社製）
又はＮａ2ＨＰＯ4          ３ｇ（プロラボ社製）
グルコース              １０ｇ（プロラボ社製）
脱イオン水                １Ｌとするのに要する量
１００ｇ／Ｌのグルコース溶液を蒸留水で調製し、次いで中性ｐＨで１２１℃で１５分間滅菌する。
成分の残余を９００ｍＬとするのに十分な量の脱イオン水に分散させ、次いでｐＨ６．８に調節してから１２１℃で１５分間滅菌する。
滅菌後、各丸底フラスコに１０ｍＬのグルコース溶液を添加する。
滅菌後及び接種前のｐＨは６．８８である。
各丸底フラスコに予備培養物１を十分な量で接種する。
回転振盪機（２２０ｒｐｍ、Ａ＝５０ｍｍ）上で２８℃で２４時間温置した後、培地は下記の特性を有する。
ｐＨ＝６．８２、
粘度＝５０〜１００ｍＰａ・ｓ、
ＭＹ寒天（Ｄｉｆｃｏ培地、参照番号０７１２−０１−８）上で２８℃で７２時間後に読んだ集団＝１．６×１０9ｃｆｕ／ｍＬ。
２４時間温置した後に、産生工程において予備培養物２を使用して二つの発酵培地（発酵器１及び２）に接種する。
【００８１】
産生工程：
最終工程は、ヘテロ多糖類（ＨＰ）の産生工程である。
発酵器１の培地は、下記の組成を有する。
グルコース              ２０ｇ（プロラボ社製）
ＣＳＬ（コーン浸漬液）    ６ｇ（プロラボ社製）
ＭｇＳＯ4・７Ｈ2Ｏ        ０．８ｇ（プロラボ社製）
ＭｎＳＯ4・Ｈ2Ｏ          ５ｐｐｍＭｎ2+（プロラボ社製）
Ｋ2ＨＰＯ4                １ｇ（プロラボ社製）
消泡剤                    ０．２ｍＬ
脱イオン水                １Ｌとするのに要する量
グルコース→  十分なｇ数のグルコースを３Ｌとするのに十分な量の脱イオン水に溶解する。ｐＨを１０％Ｈ2ＳＯ4により５まで低下させる。この溶液をオートクレーブでマリオッテフラスコ中で１２０℃で３０分間滅菌する。
窒素＋塩類→  十分なｇ数のコーン浸漬液（ＣＳＬ）、１５ｇのＫ2ＨＰＯ4、１２ｇのＭｇＳＯ4・７Ｈ2Ｏ、２３ｍＬのＭｎＳＯ4・Ｈ2Ｏ溶液（１０ｇ／Ｌ）及び３ｍＬの消泡剤を７Ｌとするのに十分な量の脱イオン水に溶解する。ｐＨを１０％Ｈ2ＳＯ4により６．５まで低下させる。この溶液をその場で１２０℃で３０分間滅菌する。
１Ｎ水酸化ナトリウム→  ４０ｇのＮａＯＨペレットを１Ｌとするのに十分な量の蒸留水に溶解する。この溶液をオートクレーブにおいてマリオッテフラスコで１２０℃で３０分間滅菌する。
全ての成分が２８℃にあるときに、それらを発酵器において混合する。次いで、発酵器に十分な量の予備培養物２を接種する。
発酵器１における発酵条件は、下記の通りである。
撹拌→  ０〜２０時間は２００ｒｐｍ、次いで発酵の終了までは４００ｒｐｍ。
曝気→  ０〜１８時間は４００Ｌ／時間、次いで２４時間から発酵の終了までは８２５Ｌ／時間。
温度は２８℃に調節する。
ｐＨは１ＮのＮａＯＨにより６．８に調節する。
圧力は大気圧である。
【００８２】
発酵器２の培地は下記の組成を有する。
ＮａＮＯ3                １．２ｇ（プロラボ社製）
ＮＨ4ＮＯ3                ０．２５ｇ（プロラボ社製）
ＣａＳＯ4・２Ｈ2Ｏ        ０．３ｇ（プロラボ社製）
ＭｇＳＯ4・７Ｈ2Ｏ        ０．８ｇ（プロラボ社製）
ＭｎＳＯ4・Ｈ2Ｏ          ５ｐｐｍＭｎ2+（プロラボ社製）
ＦｅＳＯ4・７Ｈ2Ｏ        ０．０１ｇ（プロラボ社製）
Ｎａ2ＨＰＯ4              ３ｇ（プロラボ社製）
グルコース              ４５ｇ（プロラボ社製）
消泡剤                    ０．２ｍｌ
脱塩水                  １Ｌとするのに要する量
グルコース→  十分なｇ数のグルコースを３Ｌとするのに十分な量の脱イオン水に溶解する。ｐＨを１０％Ｈ2ＳＯ4により５に調節する。この溶液をオートクレーブでマリオッテフラスコ中で１２０℃で３０分間滅菌する。
窒素＋塩類→  １８ｇのＮａＮＯ3、３．７５ｇのＮＨ4ＮＯ3、４．５ｇのＣａＳＯ4・２Ｈ2Ｏ、２３ｍＬのＭｎＳＯ4・Ｈ2Ｏ溶液（１０ｇ／Ｌ）、１２ｇのＭｇＳＯ4・７Ｈ2Ｏ、７５ｍＬのＦｅＳＯ4・７Ｈ2Ｏ溶液（２ｇ／Ｌ）、４．５ｇのＮａ2ＨＰＯ4及び３ｍＬの消泡剤を７Ｌとするのに十分な量の脱イオン水に溶解する。ｐＨを１０％Ｈ2ＳＯ4により６に調節する。この混合物をその場で１２０℃で３０分間滅菌する。
１Ｎ水酸化ナトリウム→  ４０ｇのＮａＯＨペレットを１Ｌとするのに十分な量の蒸留水に溶解する。この溶液をオートクレーブにおいてマリオッテフラスコで１２０℃で３０分間滅菌する。
全ての成分が２８℃にあるときに、それらを発酵器で混合する。次いで、発酵器に十分な量の予備培養物２を接種する。
発酵器２における発酵条件は、下記の通りである。
撹拌→  ０〜２０時間は２００ｒｐｍ、次いで発酵の終了までは４００ｒｐｍ。
曝気→  ０〜２４時間は４００Ｌ／時間、次いで２４時間から発酵の終了までは８２５Ｌ／時間。
温度は２８℃に調節する。
ｐＨは１ＮのＮａＯＨにより６．８に調節する。
圧力は大気圧である。
【００８３】
発酵結果：
研究した培地によるが、発酵時間は６０〜１１５時間であり、イソプロパノールにより沈殿し得る固体は１０〜１８ｇ／ｋｇの範囲にあり、使用した炭素源に関しての重量収率は４４〜７０％である。
【００８４】
抽出及び精製：
発酵終了後の液を１０％（重量／重量）の純ＩＰＡにより安定化させる。次いで、これをｐＨ７で１００〜１１０℃で２０分間熱処理する。熱処理中のｐＨは変わらない。
熱処理から出たならば、液を熱い（温度＞７０℃）内に抽出する。
沈殿条件は、４．５ｋｇの純ＩＰＡ中で１７ｋｇの熱い液（ほぼ５０℃）である。
沈殿させた後、繊維を切断し、次いで洗浄し、７０％の純度を有するＩＰＡにより脱水する。
次いで、繊維を換気オーブンにおいてほぼ８５℃で、ほぼ１０重量％の水分を有する生成物が得られるまで、乾燥する。
次いで、繊維を粉砕し、篩い分けする。
【００８５】
発酵器１の培地（有機培地）で得られたヘテロ多糖類の単位の分析はモル割合（重量％）で下記の通りである。
ガラクトース                  １（１３％）
グルコース                    １．０８（１４％）
マンヌロン酸                  １．１（１７％）
酢酸                          ４．３（１８．６％）
発酵器２の培地（無機培地）で得られたヘテロ多糖類の単位の分析はモル割合（重量％）で下記の通りである。
ガラクトース                  （２２．５％）
グルコース                    （２１．７％）
マンヌロン酸                  （２６％）
酢酸                          （３１％）
【００８６】
例３
この例の主題は、例２で得られた（ＨＰ）をトッピング用食品処方物に使用することである。
下記の例において、流れ粘度（ｍＰＡ・ｓで表わす）をブルックフィールドＲＶＴ２０−２粘度計を室温で使用して測定した。
ＣＡＲＲＩＭＥＤ  ＣＳＬ１００の制御された応力流動計を使用して、弾性モジュラス（Ｐａで表わす）値を生じさせた。これらは振動装置系で０．０１〜１０Ｈｚの周波数で測定された。
膨張度（％で表わす）の測定は下記のように実施した。
・ムースを既知の容積（Ｖ）及び既知の重量のビーカーに導入し、ビーカーを３回強くたたき、ムースの高さを測る。
・ビーカーを秤量して中に入っているムースの重量（Ｍ）を決定する。
・膨張度＝［Ｍ（ｇ）／Ｖ（ｍＬ）］×１００。
二つの処方物を調製した。
処方物３．１：本発明に従うヘテロ多糖類（ＨＰ）を含む。
処方物３．２（比較）：カゼイン酸ナトリウム及びアルギン酸ナトリウムを含む。
これらの処方物の組成を表Ｉに要約する。
【００８７】
【表１】
0003734711.tif 000002
【００８８】
水性相：
デフロキュレーション用パドルを備えたビーカーに必要量の水を秤量し、上記の表に記載した粉末の混合物を激しく撹拌（５００ｒｐｍ）しながら分散させる。
撹拌は、該粉末を導入した後、５分間維持する。
【００８９】
油性相：
ビーカーに入れた脂肪物質及び乳化剤を水浴において７０℃に加熱する。
次いで、油性相を水性相に１０００ｒｐｍで撹拌しながら添加する。
撹拌は、油性相を導入した後、５分間維持する。この操作の間、水の蒸発を補う。
次いで、混合物全体をＵｌｔｒａ−Ｔｕｒｒａｘを使用して２０，０００ｒｐｍで２分間均質化する。
この混合物を１０℃以下の温度に冷却してから、膨張させる。これは、ＫＥＮＷＯＯＤ  ＣＨＥＦ型の実験室用ミキサーを使用して、最高速度で５℃付近の温度で３分間行なう。
結果を表IIに要約する。
【００９０】
【表２】
0003734711.tif 000003
【００９１】
これらの結果は、本発明に従う（ＨＰ）を使用する処方物３．１が比較処方物３．２の粘度よりも低い粘度を有し、その故に容易に膨張することを示す。
更に、処方物３．１（本発明に従う）は、最初に多くゲル化し（高い周波数で高いＧ’）、従って向上した膨張度を有する。