(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
一般式Ｉ：
0003768524.tif 000028
［式中、
Ｒ1はフェニル又は（Ｃ1−Ｃ18）アルキルを示し、
Ｒ2は水素もしくはジュウテリウム原子、フェニルもしくは（Ｃ1−Ｃ18）アルキル基、又は式：
0003768524.tif 000029
（式中、Ａは単結合、メチレン基又はオキサメチレン基（ここで酸素原子はラジカルＺ１のリン原子に結合している）であり、Ｙは酸素原子を示し、Ｒは水素原子、（Ｃ1−Ｃ18）アルキルもしくは（Ｃ6−Ｃ18）アリールを示すか、又はＹはメチレン基を示し、Ｒは水素原子、（Ｃ1−Ｃ17）アルキルもしくは（Ｃ6−Ｃ18）アリールを示す）のラジカルＺ１を示し、
Ｒ3、Ｒ4及びＲ5は互いに独立して水素もしくはジュウテリウム原子又はフェニルもしくは（Ｃ1−Ｃ18）アルキル基を示し、
Ｒ6は水素もしくはジュウテリウム原子、フェニルもしくは（Ｃ1−Ｃ18）アルキル基、又は式：
0003768524.tif 000030
（式中、Ｂは単結合を示し、Ｙ及びＲは先に定義した通りである）のラジカルＺ２を示し、
Ｒ7は水素もしくはジュウテリウム原子又はメチル基を示すが、
但し基Ｒ2及びＲ6のうち１個だけが式：
0003768524.tif 000031
（式中、Ｃは単結合、メチレン基又はオキサメチレン基（ここで酸素原子はラジカルＺ３のリン原子に結合している）を示し、Ｒ及びＹは先に定義した通りである）のラジカルＺ３を示すものとする］で表される化合物、並びにその対応する無機又は有機塩基の作用により得られる生理学的に許容可能な塩。
【請求項２】
式II：
0003768524.tif 000032
（式中、
Ｒは水素原子、（Ｃ1−Ｃ18）アルキル又は（Ｃ6−Ｃ18）アリールを示し、
Ｒ1はフェニル又は（Ｃ1−Ｃ18）アルキルを示し、
Ｒ3、Ｒ4、Ｒ5及びＲ6は互いに独立して水素もしくはジュウテリウム原子、フェニル基又は（Ｃ1−Ｃ18）アルキル基を示し、
Ｒ7は水素もしくはジュウテリウム原子又はメチル基を示す）で表される請求項１に記載の化合物。
【請求項３】
Ｒ1がメチル基、Ｒ7が水素又はジュウテリウム原子である請求項２に記載の式IIの化合物。
【請求項４】
５−ジエトキシホスホリル−５−メチル−１−ピロリン  １−オキシド、５−ホスホノ−５−メチル−１−ピロリン  １−オキシド及び５−ジエトキシホスホリル−５−メチル−（２，３，３−2Ｈ3）−１−ピロリン  １−オキシドの中から選択されることを特徴とする請求項１から３のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項５】
一般式Ｉ：
0003768524.tif 000033
［式中、
Ｒ1はフェニル又は（Ｃ1−Ｃ18）アルキルを示し、
Ｒ2は水素もしくはジュウテリウム原子、フェニルもしくは（Ｃ1−Ｃ18）アルキル基、又は式：
0003768524.tif 000034
（式中、Ａは単結合、メチレン基又はオキサメチレン基（ここで酸素原子がラジカルＺ１のリン原子に結合されている）であり、Ｙは酸素原子を示し、Ｒは水素原子、（Ｃ1−Ｃ18）アルキルもしくは（Ｃ6−Ｃ18）アリールを示すか、又はＹはメチレン基を示し、Ｒは水素原子、（Ｃ1−Ｃ17）アルキルもしくは（Ｃ6−Ｃ18）アリールを示す）のラジカルＺ１を示し、
Ｒ3、Ｒ4及びＲ5は互いに独立して水素もしくはジュウテリウム原子又はフェニルもしくは（Ｃ1−Ｃ18）アルキル基を示し、
Ｒ6は水素もしくはジュウテリウム原子、フェニルもしくは（Ｃ1−Ｃ18）アルキル基、又は式：
0003768524.tif 000035
（式中、Ｂは単結合を示し、Ｙ及びＲは先に定義した通りである）のラジカルＺ２を示し、
Ｒ7は水素もしくはジュウテリウム原子又はメチル基を示すが、
但し基Ｒ2及びＲ6のうち１個だけが式：
0003768524.tif 000036
（式中、Ｃは単結合、メチレン基又はオキサメチレン基（ここで酸素原子はラジカルＺ３のリン原子に結合している）を示し、Ｒ及びＹは先に定義した通りである）のラジカルＺ３を示すものとする］で表される化合物並びにその対応する無機又は有機塩基の作用により得られる生理学的に許容可能な塩の製造方法であって、一般式III：
0003768524.tif 000037
（式中のＲ1〜Ｒ7は先に定義した通りである）の化合物を酸化することを特徴とする方法。
【請求項６】
酸化剤がｍ−クロロ過安息香酸である請求項５に記載の方法。
【請求項７】
酸化剤が過酸化水素／酸化セレン系である請求項５に記載の方法。
【請求項８】
酸化剤がジメチルジオキシランである請求項５に記載の方法。
【請求項９】
酸化剤がタングステン酸ナトリウムである請求項５に記載の方法。
【請求項１０】
一般式Ｉ：
0003768524.tif 000038
［式中、
Ｒ1はフェニル又は（Ｃ1−Ｃ18）アルキルを示し、
Ｒ2、Ｒ3、Ｒ4及びＲ5は互いに独立して水素もしくはジュウテリウム原子、フェニル基又は（Ｃ1−Ｃ18）アルキル基を示し、
Ｒ6は式：
0003768524.tif 000039
（式中、Ｂは単結合であり、Ｙが酸素原子を示すときにＲは水素原子、（Ｃ1−Ｃ18）アルキルもしくは（Ｃ6−Ｃ18）アリールを示すか、又はＹがメチレン基を示すときにＲは水素原子、（Ｃ1−Ｃ17）アルキルもしくは（Ｃ6−Ｃ18）アリールを示す）のラジカルＺ２を示す］で表される化合物並びにその対応する無機又は有機塩基の作用により得られる生理学的に許容可能な塩の製造方法であって、式XI：
0003768524.tif 000040
（式中、Ｒ1〜Ｒ7は先に定義した通りである）の対応化合物を
ｉ）水素化ナトリウムで処理し、次いで式Ｘ：
0003768524.tif 000041
（式中、Ｘはハロゲンを示し、Ｒ及びＹは先に定義した通りである）の化合物と反応させるか、又は
ii）順次Ｎ−ブロモスクシンイミド及び式Ｐ（ＹＲ）3（式中、Ｙ及びＲは先に定義した通りである）の化合物で処理することを特徴とする方法。
【請求項１１】
請求項１から４のいずれか一項に記載の少なくとも１種の化合物を活性成分として含んでいる、美容術で使用される組成物。
【請求項１２】
請求項１から４のいずれか一項に記載の少なくとも１種の化合物を含んでいる、酸化性ストレスの評価に使用可能な診断組成物。
【請求項１３】
請求項１から４のいずれか一項に記載の少なくとも１種の化合物を含んでいることを特徴とする酸化性ストレスの評価用診断キット。
【発明の詳細な説明】
本発明は、ラジカルスカベンジャーとして使用可能な環式ニトロン誘導体に関する。
現在、ラジカルを捕獲し得る環式ニトロンは多数知られている。ヨーロッパでは、Ａｌｄｒｉｃｈ、Ｆｌｕｋａ及びＳｉｇｍａのような様々な会社から５，５−ジメチルピロリンＮ−オキシド（ＤＭＰＯ）が市販されている。この化合物、即ちラジカル捕捉剤は電子常磁性共鳴実験でのみ使用されている。この化合物は不安定で、生物媒体への溶解性が低く、またその捕獲アダクトが不安定であるため、医薬品及び化粧品分野への適用は限定されている。
更には、Ｍ．Ｊ．Ｔｕｒｎｅｒ及びＧ．Ｍ．ＲｏｓｅｎはＪ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．２９（１２），２４３９−２４４４（１９８６）に掲載された論文に、３種の環式ニトロン、即ち５−ブチル−５−メチル−１−ピロリン  １−オキシド（ＢＭＰＯ）、５，５−ジプロピル−１−ピロリン  １−オキシド（ＤＰＰＯ）及び２−アザ−２−シクロペンテンスピロシクロペンタン  ２−オキシド（ＣＰＰＯ）がＤＭＰＯよりも効果的なラジカルスカベンジャーであることが判明したと記載している。しかしながら、これらの化合物はＤＭＰＯよりも高い親油性を示すため、生物媒体への溶解性は不十分である。
高い安定性及び生物媒体へのより良い溶解性を示すと共に、比較的より安定な捕獲アダクトを生成する新規環式ニトロンを発見した。
本発明の目的は、一般式Ｉ：
0003768524.tif 000002
［式中、
Ｒ1はフェニル又は（Ｃ1−Ｃ18）アルキルを示し、
Ｒ2は水素もしくはジュウテリウム原子、フェニルもしくは（Ｃ1−Ｃ18）アルキル基、又は式：
0003768524.tif 000003
（式中、Ａは単結合、メエチレン基又はオキサメチレン基（ここで酸素原子はラジカルＺ１のリン原子に結合されている）であり、Ｙが酸素原子を示すとき、Ｒは水素原子、（Ｃ1−Ｃ18）アルキルもしくは（Ｃ6−Ｃ18）アリールを示すか、又はＹがメチレン基を示すとき、Ｒは水素原子、（Ｃ1−Ｃ17）アルキルもしくは（Ｃ6−Ｃ18）アリールを示す）のラジカルＺ１を示し、
Ｒ3、Ｒ4及びＲ5は互いに独立して水素もしくはジュウテリウム原子又はフェニルもしくは（Ｃ1−Ｃ18）アルキル基を示し、
Ｒ6は水素もしくはジュウテリウム原子、フェニルもしくは（Ｃ1−Ｃ18）アルキル基、又は式：
0003768524.tif 000004
（式中、Ｂは単結合を示し、Ｙ及びＲは先に定義した通りである）のラジカルＺ２を示し、
Ｒ7は水素もしくはジュウテリウム原子又はメチル基を示すが、
但し基Ｒ2及びＲ6のうち１個だけが式：
0003768524.tif 000005
（式中、Ｃは単結合、メチレン基又はオキサメチレン基（ここで酸素原子ラジカルＺ３のリン原子に結合している）を示し、Ｒ及びＹは先に定義した通りである）のラジカルＺ３を示すものとする］で表される環式ニトロン、並びにその対応する無機又は有機塩基の作用により得られる生理学的に許容可能な塩である。
式Ｉの好ましい化合物類は、以下の式II：
0003768524.tif 000006
（式中、
Ｒは水素原子、（Ｃ1−Ｃ18）アルキル又は（Ｃ6−Ｃ18）アリールを示し、
Ｒ1はフェニル又は（Ｃ1−Ｃ18）アルキルを示し、
Ｒ3、Ｒ4、Ｒ5及びＲ6は互いに独立して水素もしくはジュウテリウム原子、フェニル基又は（Ｃ1−Ｃ18）アルキルを示し、
Ｒ7は水素もしくはジュウテリウム原子又はメチル基を示す）の化合物からなる。
Ｒ1がメチル基、Ｒ7が水素又はジュウテリウム原子を示せば有利である。
これらの好ましい化合物類の中で、以下の化合物を特記することができる：５−ジエトキシホスホリル−５−メチル−１−ピロリン  １−オキシド（ＤＥＰＭＰＯ）、５−ホスホノ−５−メチル−１−ピロリン  １−オキシド及び５−ジエトキシホスホリル−５−メチル−（２，３，３−2Ｈ3）−１−ピロリン  １−オキシド（ＤＥＰＭＰＯD）。
（Ｃ1−Ｃ17）アルキル基及び（Ｃ1−Ｃ18）アルキル基は、それぞれ１〜１７個の炭素原子又は１〜１８個の炭素原子を有する直鎖又は分枝鎖の基を意味する。
（Ｃ6−Ｃ18）アリール基は、６〜１８個の炭素原子を含む単環式又は多環式芳香族化合物を意味する。
生理学的に許容可能な塩は、無機又は有機塩基を式Ｉ又はIIの化合物に作用させることにより生成されるものである。
好ましい塩としては、式Ｉ又はIIのホスホン酸のナトリウム塩を挙げることができる。
本発明の化合物は、一般式III：
0003768524.tif 000007
（式中のＲ1、Ｒ2、Ｒ3、Ｒ4、Ｒ5、Ｒ6及びＲ7は先に定義した通りである）の化合物を適切な酸化剤で酸化することからなる方法により製造され得る。
この反応では、酸化剤が有機ペルオキシ酸（例えばｍ−クロロ過安息香酸）、無機酸化剤（例えばタングステン酸ナトリウム）、無機酸化物と過酸化水素との任意の組み合わせ（例えば過酸化水素存在下での酸化セレン）又は有機酸化剤（例えばジメチルジオキシラン）であれば有利であり得る。
反応条件は選択した酸化剤の種類に依存し、一般的基礎知識による反応条件の決定は当業者には自明である。従って、酸化が有機ペルオキシ酸の作用により生起するときには、例えばジクロロメタン又はクロロホルムのような不活性溶媒を選択する。酸化剤が無機酸化物の存在下での水溶液中過酸化水素のときには、例えばアセトンのような極性非プロトン性溶媒の中から選択する。
温度は、式IIIの化合物の種類に応じて変化し得る。温度は０℃から溶媒の還流温度までの間が有利である。
一般式III［式中、Ｒ2は、式：
0003768524.tif 000008
（式中、Ｒ及びＹは先に定義した通りである）ラジカルを示す］の化合物は、一般式IV：
0003768524.tif 000009
［式中、Ｘは塩素、臭素又はヨウ素のようなハロゲンを示し、Ｒ1、Ｒ3、Ｒ4、Ｒ5、Ｒ6及びＲ7は先に定義した通りであるが、但し基Ｒ6は式：
0003768524.tif 000010
（式中、Ｂは単結合を示し、Ｒ及びＹは先に定義した通りである）のラジカルＺ２を示さないものとする］のハロケトンを、式Ｖ：
0003768524.tif 000011
（式中、Ｙ及びＲは先に定義した通りである）とＮＨ3の存在下で反応させることからなる方法により製造することができる。
この場合も、反応条件は式IV及びＶの反応体の種類に依存し、当業者により容易に決定され得る。反応は一般に極性非プロトン性溶媒中で生起する。溶媒がエタノールであれば有利である。温度は室温から溶媒の還流温度までの間であり得る。
式IV及びＶの化合物は市販の化合物であるか又は当業者が公知の方法を用いて製造することのできる化合物である。
一般式III（式中、Ｒ2は式：
0003768524.tif 000012
のラジカルを示す）の化合物は、
ａ）式VI：
0003768524.tif 000013
［式中、Ｒ1、Ｒ3、Ｒ4、Ｒ5、Ｒ6及びＲ7は先に定義した通りであるが、但し基Ｒ6は式：
0003768524.tif 000014
（式中、Ｂは単結合を示し、Ｒ及びＹは先に定義した通りである）のラジカルＺ２を示さないものとし、Ｐｒは例えばベンジルオキシカルボニル基のようなアミン官能基を保護する基である］の対応化合物を、式Ｐ（ＹＲ）3（式中、Ｙ及びＲは先に定義した通りである）のリン誘導体と反応させ、
ｂ）次いで、当業者に周知の方法のいずれかにより、第二級アミン官能基を脱保護する
ことからなる方法により製造され得る。
式VIの化合物は、以下の式VIII：
0003768524.tif 000015
（式中、Ｒ1、Ｒ3、Ｒ4、Ｒ5、Ｒ6、Ｒ7及びＰｒは化合物VIについて定義した通りである）の化合物から２段階で製造され得る。
第１段階で式VIIIの化合物を二酢酸水銀と反応させる。第２段階は、得られた生成物を順次ヨウ化カリウム及びヨウ素で処理して直接式VIの対応化合物を生成することからなる。
式VIIIの化合物は、市販の化合物から公知の方法を用いて当業者により容易に製造される。
一般式III（式中、Ｒ2は式：
0003768524.tif 000016
のラジカルを示す）の化合物は、
ａ）式IX：
0003768524.tif 000017
［式中、Ｒ1、Ｒ3、Ｒ4、Ｒ5、Ｒ6、Ｒ7及びＰｒは先に定義した通りであるが、
但し基Ｒ6は式：
0003768524.tif 000018
（式中、Ｂは単結合を示し、Ｒ及びＹは先に定義した通りである）のラジカルＺ２を示さないものとする］の対応化合物を、式Ｘ：
0003768524.tif 000019
（式中、Ｘは塩素のようなハロゲンを示し、Ｒ及びＹは先に定義した通りである）の化合物と反応させ、
ｂ）次いで、当業者に周知の方法のいずれかにより、第二級アミン官能基を脱保護する
ことからなる方法により製造され得る。
式IXの化合物の製造は、式VIIIの対応化合物から２段階で実施される。
第１段階で式VIIIの化合物を二酢酸水銀と反応させる。第２段階では、得られた生成物をホウ水素化カリウムのような水素化物の存在下にて酸素で処理して式IXの所望の化合物を得る。
式Ｉ［式中、Ｒ6は式：
0003768524.tif 000020
（式中、Ｒ及びＹは先に定義した通りである）のラジカルを示す］の化合物の製造は、少なくとも２つの異なるプロセスにより実施され得る。
第１の合成プロセスは、式XI：
0003768524.tif 000021
［式中、Ｒ1、Ｒ2、Ｒ3、Ｒ4、Ｒ5及びＲ7は先に定義した通りであるが、但し基Ｒ2は式：
0003768524.tif 000022
（式中、Ｒ及びＹは先に定義した通りであり、Ａは単結合、メチレン基又はオキサメチレン基（ここで酸素原子がラジカルＺ１のリン原子に結合している）を示す）の基を示さないものとする］の対応化合物を水素化ナトリウムで処理し、次いで得られたナトリウム塩を式Ｘの化合物と反応させることからなる。
第２の合成プロセスでは、式XIの化合物を順次Ｎ−ブロモスクシンイミド及び式Ｐ（ＹＲ）3（式中、Ｙ及びＲは先に定義した通りである）の化合物で処理する。
問題の式Ｉの化合物のＹが酸素原子のときには、この反応はアルブーゾフ反応の名称で知られている。
式XIの化合物は、式IIIの対応化合物から酸化剤により製造される。使用する方法はこれまでに詳しく説明した通りである。
一般式Ｉ（式中、Ｙは酸素原子であり、Ｒは水素原子である）の化合物は、無水条件下にて式Ｉ（式中、Ｒはアルキルである）の対応化合物にトリメチルシリルブロマイドのようなトリメチルシリルハライドを作用させ、次いで水性加水分解することにより製造され得る。この反応では、非プロトン性不活性溶媒を使用することができる。ジクロロメタン及びクロロホルムを好ましい溶媒として挙げることができる。温度は問題の式Ｉの化合物に依存し、室温から溶媒の還流温度までの間で変動し得る。
式Ｉ（式中、Ｒ2、Ｒ3、Ｒ4、Ｒ5、Ｒ6及びＲ7の中の特定ラジカルのうち１個以上がジュウテリウム原子を示す）の化合物は、重水（Ｄ2Ｏ）中で同じ式（式中、ジュウテリウム原子は水素原子に置換されている）の化合物にナトリウムジュウテロキシド（ＮａＯＤ）を作用させることにより製造される。反応温度は、問題の式Ｉの化合物の種類に依存する。０℃から重水の還流温度までの温度を選択して同様の結果を得ることができる。
本発明の化合物は、ラジカルスカベンジャーとして使用可能である。これらの化合物はその物理化学的特性により、美容術及び医学の分野に適用される。
ヒト生物媒体では、数種の反応性酸素化種、即ちＯ2-、ＨＯ-、ＨＯＯ-型プロオキシダント(prooxidants)が、呼吸により体内に輸送される酸素から生成され得る。正常な状態では、一連の酵素系又は非酵素系酸化防止剤でこれらの種を除去することにより、その定常濃度が低く調整されている。
酸化防止剤とプロオキシダントとの間に局所的不均衡が存在してプロオキシダントに有利に作用すると、酸化性ストレスの状況が確立される。酸化性ストレスの状況は、冠虚血、動脈硬化症及び梗塞のような様々な心臓血管病理学の症例や、血管手術で使用される体外循環の場合に、又は炎症、感染もしくは細胞老化過程中に実証されている。
本発明の化合物は、細胞老化の原因となるプロオキシダント種の捕捉剤として美容術で使用することができる有効なラジカルスカベンジャーである。
医学では、特に診断の分野では、本発明の化合物は酸化性ストレスの評価で有用である。ｉｎ  ｖｉｖｏ生成したＯ2-、ＨＯＯ-、ＨＯ-ラジカルは、スピン磁性がゼロでないにもかかわらず、不安定であるために、電子常磁性共鳴（ＥＰＲ）により直接検出することはできない。実際、これらのラジカルの半減期は約１０-5〜１０-3秒である。
スピントラッピングは、これらのラジカルの検出に使用される技術である。その原理を以下で説明する。検査すべき生物媒体をラジカルスカベンジャーＳの存在下に置く。媒体にＯ2-、ＨＯ-、ＨＯＯ-のようなラジカルが存在すれば、これらのラジカルはスカベンジャーＳと結合してアダクト（Ｓ−−Ｏ2）-、（Ｓ−−ＯＨ）-又は（Ｓ−−ＯＯＨ）-を生成する。このアダクトは常に常磁性であり、従って電子常磁性共鳴（ＥＰＲ）により検出することができる。
ラジカルに関しては、本発明の化合物は、生物媒体中のプロオキシダントラジカルのＥＰＲによる検出を可能とする有効なスカベンジャーであることが判明した。
本発明の化合物をラジカル捕捉剤又はスカベンジャーとして使用すると、多数の利点がある。これらの化合物の安定性、及びその生物媒体への溶解性を挙げることができる。
本発明者等は、本発明の化合物によるＨＯＯ-のようなラジカルの捕獲速度が、従来技術の５，５−ジメチルピロリンＮ−オキシド（ＤＭＰＯ）の場合よりも遥かに速いことを実証することもできた。
ＤＭＰＯによるＨＯＯ-ラジカルの捕捉反応は遅く、二次速度定数ｋが１０Ｍ-1  ｓ-1であることを特徴とする。従って、超酸化物ラジカルのｉｎ  ｖｉｖｏ生成をＤＭＰＯで検出することは困難である。対照的に、本発明の化合物である５−ジエトキシホスホリル−５−メチル−１−ピロリン  １−オキシド（ＤＥＰＭＰＯ）によるＨＯＯ-ラジカルの捕捉速度は２．５倍速い。
更には、ＤＭＰＯによるＨＯＯ-の検出中に（ＤＭＰＯ−−ＯＯＨ）-アダクトが（ＤＭＰＯ−−ＯＨ）-アダクトに分解すると報告した著者もいる。このために、ＤＭＰＯを用いて実施されるスピントラッピング実験の信頼性は低い。
他方、本発明の化合物であるＤＥＰＭＰＯの場合、（ＤＥＰＭＰＯ−−ＯＯＨ）-アダクトから（ＤＭＰＯ−−ＯＨ）-アダクトへの分解は観察されなかった。
本発明の化合物から得られるアダクトの安定性は更に、以下の定性及び定量実験により実証される。
凍結融解試験
酸化性ストレスの存在を包含し得る種々の状況にある（体外循環を伴う心臓血管手術を行った又は心筋梗塞の症例の）患者から採取した血液試料を医学分野で使用するために保存できることが肝要である。本発明の化合物の場合、以下の実験で分かるように、捕獲アダクトは安定性が高いので、血液試料を７７Ｋで凍結保存する前に、捕獲ラジカルを付加することができる。
ＤＥＰＭＰＯとＯ2-、ＨＯＯ-ラジカルとの捕獲アダクトを７７Ｋで貯蔵し、融解した後に電子常磁性共鳴により分析した。アダクトのスペクトルは、凍結前のアダクトと同一であることが判明した。このことから安定性が良好であることが実証された。
他方、ＤＭＰＯアダクトを用いる同一の実験では、融解アダクトのＥＲＲスペクトルの解釈を阻止する多数のスプリアスシグナルが発生する。
ニトロン−（Ｏ2-／ＨＯＯ-）アダクトの分解速度の研究
この実験では、０．１Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ７）中、リボフラビン（０．１ｍＭ）／ＤＴＰＡ（４ｍＭ）系の存在下、室温で可視で照射してラジカル（Ｏ2-／ＨＯＯ-）を生成した。
研究したニトロンを、濃度０．０８Ｍの照射溶液に添加する。
照射を停止すると、（Ｏ2-／ＨＯＯ-）ラジカルの生成が止まり、［ニトロン−（Ｏ2-／ＨＯＯ-）］アダクトの減少をＥＰＲ分析により監視する。
（従来技術の）ニトロンＤＭＰＯ及び（本発明の）ニトロンＤＥＰＭＰＯの場合でアダクトの経時的な濃度変動を調査した。２、１０、２０、３０及び４０分後のアダクトの濃度値を記録した。これらの値を表Ｉに示す。
0003768524.tif 000023
アダクトの消失速度はいずれの場合も一次である。計算した速度定数をそれぞれ以下に示す：
ｋDMPO＝１．４×１０-2  ｓ-1
ｋDEPMPO＝１．４×１０-3  ｓ-1
本発明の研究から、［（ＤＥＰＭＰＯ）−（ＨＯＯ-／Ｏ2-）］アダクトの半減期が［（ＤＭＰＯ）−（ＨＯＯ-／Ｏ2-）］アダクトの１０倍であることが分かる。
本発明は更に、本発明の化合物を活性成分として含んでいる、美容術で使用される組成物を目的とする。即ち、一般式Ｉの生成物を賦形剤、香料及び適切な着色料と合わせて例えばエーロゾル、溶液、クリーム又は軟膏を生成する。
本発明の他の目的は、本発明の化合物を含んでいる、酸化性ストレスの評価に使用可能な診断製品である。
以下の実施例で本発明を非制限的に説明する。核磁気共鳴（ＮＭＲ）データでは、化学シフトδをＴＭＳに対するｐｐｍとして表す。
実施例１
５−ジエトキシホスホリル−５−メチル−１−ピロリン  １−オキシド
0003768524.tif 000024
ａ）ジエチル（２−メチル−２−ピロリジニル）ホスホネート
５−クロロ−２−ペンタノン（１１．８ｇ）及びジエチルホスファイト（１４ｇ）のエタノール（５０ｍｌ）溶液をアンモニア流下、５０℃で４時間維持する。次いで、反応混合物を濾過し、溶媒を蒸発させる。残留物を２Ｎ  ＨＣｌ溶液４０ｍｌで排出し、次いで塩化メチレン（２×５０ｍｌ）で抽出する。重炭酸ナトリウムを添加して水性相を中和し、クロロホルムで抽出する。この有機相を硫酸ナトリウムで乾燥する。溶媒を減圧蒸発させると、無色油状物１３．７ｇが得られる。
ｂ）５−ジエトキシホスホリル−５−メチル−１−ピロリン  １−オキシド
前記ピロリジン（２ｇ）のクロロホルム（３０ｍｌ）冷却（０℃）溶液に、７０％ｍ−クロロ過安息香酸（４．４ｇ）のクロロホルム（４０ｍｌ）溶液を滴下する。次いで、反応混合物を重炭酸ナトリウム飽和溶液（２×１５ｍｌ）、次に塩化ナトリウム飽和溶液（１５ｍｌ）で洗浄する。有機相を硫酸ナトリウムで乾燥し、次いで減圧濃縮する。残留物をクロマトグラフィー（シリカ、ＣＨ2Ｃｌ2／ＥｔＯＨ８５：１５）にかけると黄色油状物０．４ｇが得られる。
実施例２
５−ホスホノ−５−メチル−１−ピロリン  １−オキシド
0003768524.tif 000025
乾燥ジクロロメタン５ｍｌに溶解した５−ジエトキシホスホリル−５−メチル−１−ピロリン  １−オキシド３００ｍｇに、トリメチルシリルブロマイド０．６７ｍｌを添加する。混合物を２０時間還流加熱する。塩化メチレンを減圧蒸発させる。残留物をアセトン６ｍｌ中にて水０．８ｍｌで加水分解する。沈殿物を濾別し、アセトン（１５ｍｌ）で洗浄し、ジメチルスルホキシドで再結晶化させると白色粉末１３７ｍｇが得られる。
実施例３
５−ジエトキシホスホリル−２，５−ジメチル−１−ピロリン  １−オキシド
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５−ジエトキシホスホリル−２，５−ジメチル−１−ピロリジン（８．６１ｇ）及びＳｅＯ2（０．２１ｇ）のアセトン（７２ｍｌ）溶液に、３０％過酸化水素水溶液１２．０６ｇをアルゴン下、０℃で滴下する。添加後、反応混合物を室温で３０時間撹拌する。アセトンを減圧除去する。水性相をジクロロメタンで抽出する。有機相を硫酸ナトリウムで乾燥し、次いで減圧濃縮する。残留物をカラムクロマトグラフィー（シリカ、ＣＨ2Ｃｌ2／ＥｔＯＨ９０：１０）にかけると黄色油状物２．１ｇが得られる。
実施例４
５−ジエトキシホスホリル−５−メチル−（２，３，３，−2Ｈ3）−１−ピロリン  １−オキシド（ＤＥＰＭＰＯD）
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５−ジエトキシホスホリル−５−メチル−１−ピロリン  １−オキシド（０．５ｇ）の重水Ｄ2Ｏ（３ｍｌ）溶液に、ナトリウムジュウテロキシド（Ｄ2Ｏ中８Ｎ  ＮａＯＤ、０．２ｍｌ）の重水Ｄ2Ｏ（１０ｍｌ）予冷溶液をゆっくりと添加する。光を遮断した不活性雰囲気（アルゴン）下にて室温で反応を生起する。反応をＮＭＲで監視する。２４時間後、エチレン性プロトンシグナルの消失が認められる。次いで、反応媒体を、五酸化リン（Ｐ2Ｏ5）で蒸留したばかりのジクロロメタン（３×１０ｍｌ）で抽出する。次いで、有機相を減圧蒸発させる。残留黄色油状物０．３ｇが得られる。