(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
次の一般式（１）：
【化１】
0003771446.tif 000020
（式中、Ｒ101及びＲ102は、互いに独立して高級脂肪酸のアシル残基を表す。）により表される化合物（ただし、一般式（１）において、Ｒ101が５，８，１１，１４，１７−イコサペンタエノイル基であり、かつＲ102がヘキサデカノイル基である化合物を除く）及びその薬学的に許容される塩からなる群から選択される少なくとも１種を有効成分として含有する免疫抑制剤。
【請求項２】
次の一般式（１）：
【化２】
0003771446.tif 000021
（式中、Ｒ101及びＲ102は、互いに同じ、高級脂肪酸のアシル残基を表す。）により表される化合物及びその薬学的に許容される塩からなる群から選択される少なくとも１種を有効成分として含有する免疫抑制剤。
【請求項３】
次の一般式（２）：
【化３】
0003771446.tif 000022
（式中、Ｒ101及びＲ102は、互いに独立して高級脂肪酸のアシル残基を表す。）により表される化合物及びその薬学的に許容される塩からなる群から選択される少なくとも１種を有効成分として含有する免疫抑制剤。
【請求項４】
Ｒ101及びＲ102が、それぞれ、式Ｒ−Ｃ（＝Ｏ）−（ここで、Ｒは、炭素数１３以上２５以下のアルキル基またはアルケニル基を表す。）で示される請求項１〜３のいずれか１項に記載の免疫抑制剤。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【技術分野】
本発明は、新規な免疫抑制剤に関する。
【０００２】
【従来の技術】
現在臨床においては、化学療法では治癒不可能と判断される疾病においてその原因臓器あるいはその一部分を他者から移植することによって回復を図るという方法が選択され得るようになった。腎臓、肝臓、肺、腸管、心臓、膵臓、角膜など多種の臓器において移植治療が鋭意進められその件数も増え続けている。
【０００３】
また、皮膚組織は元来免疫能の高い組織であるが、他人の皮膚を移植する場合、わずか数週間定着を維持できれば、その後の自己皮膚再生により治癒可能になるため、高度の広範囲火傷や裂傷などにおいては他人の皮膚を移植することにより形態的回復を図る方法が選択される。
【０００４】
こうした各組織及び臓器を他者から移植する場合最も懸念されるのは、被移植者の免疫力に由来する拒絶反応である。
【０００５】
そこで、1970年代から欧米を中心に被移植者の拒絶反応を防止し、移植臓器の永続的定着を目的に免疫抑制剤の研究が進められてきた。
【０００６】
また一方で、リウマチ、膠原病などいわゆる自己免疫疾患においても免疫抑制剤はその症状の緩和において重要な薬剤となり得る。
【０００７】
過去にシクロスポリンＡ、FK506などの免疫抑制剤が開発されている。しかしながら、これらの免疫抑制剤は作用機構も近似し、また慢性毒性が懸念されており、長期延命を目的とする次世代の臓器移植に対しては、異なる化学構造で異なる作用機構が期待できる、より毒性の低い物質が求められている。
【０００８】
天然から得られた含硫糖脂質には、これまで制癌性（佐原ら、British Journal of Cancer, 75(3), 324-332, (1997))、DNA合成酵素阻害活性（水品ら、Biochemical Pharmacology, 55, 537-541, (1998)、太田ら、Chemical & Pharmaceutical Bulletin, 46(4), (1998)）、HIV抑制剤（特表平5-501105号公報）と薬理活性が見いだされている。しかしながら、含硫糖脂質、特に、スルホキノボシルジアシルグリセロール誘導体についての免疫抑制反応に関する知見は未だない。
【０００９】
【発明が解決しようとする課題】
本発明は、新規な免疫抑制剤を提供することを目的とする。より詳細には、より毒性が低く、長期投与が可能であり、かつその免疫抑制活性の高い免疫抑制剤を提供することを目的とする。
【００１０】
【課題を解決するための手段】
本発明者らは、上記事情に鑑みて研究した結果、特定のスルホキノボシルジアシルグリセロール誘導体に顕著な免疫抑制活性を認め、本発明を完成するに至った。すなわち、本発明は、次の一般式（１）：
【００１１】
【化４】
0003771446.tif 000002
【００１２】
（式中、Ｒ101及びＲ102は、互いに独立して高級脂肪酸のアシル残基を表す。）により表される化合物及びその薬学的に許容される塩からなる群から選択される少なくとも１種を有効成分として含有する免疫抑制剤を提供する。
ただし、本発明の第１の側面によると、一般式（１）において、Ｒ101が５，８，１１，１４，１７−イコサペンタエノイル基であり、かつＲ102がヘキサデカノイル基である化合物は、除外される。
本発明の第２の側面によると、Ｒ101及びＲ102は、互いに同じ、高級脂肪酸のアシル残基である。
本発明の第３の側面によると、式（１）の化合物において、キノボースとグリセロールの結合がβ結合であるところの、次の一般式（２）：
【００１３】
【化５】
0003771446.tif 000003
【００１４】
（式中、Ｒ101及びＲ102は、式（１）で規定した通り。）により表される化合物及びその薬学的に許容される塩からなる群から選択される少なくとも１種を有効成分として含有する免疫抑制剤が提供される。
【００１５】
【発明の実施の形態】
本明細書において、保護基の「炭素数」とは、当該保護基を非置換としてみなした場合の炭素原子の数をいう。従って、例えば、Ｒ6により表される基が置換アルキル基である場合、その炭素数とは、当該アルキル基に置換する置換基の炭素原子を含まない、アルキル基の骨格部分の炭素原子の数をいう。保護基がアルキル基以外の場合についても同様である。
【００１６】
まず、本発明の免疫抑制剤が有効成分として含有する一般式（１）：
【００１７】
【化６】
0003771446.tif 000004
【００１８】
（式中、Ｒ101及びＲ102は、互いに独立して高級脂肪酸のアシル残基を表す。）で表されるスルホキノボシルジアシルグリセロール誘導体について詳細に説明する。
【００１９】
上記一般式（１）において、Ｒ101は、高級脂肪酸のアシル残基を表す。Ｒ101により表される高級脂肪酸のアシル残基を提供する脂肪酸には、直鎖状又は分岐状の、飽和又は不飽和高級脂肪酸が含まれる。
【００２０】
Ｒ101により表される、直鎖状又は分岐状の、高級脂肪酸のアシル残基には、Ｒ−Ｃ（＝Ｏ）−（式中、Ｒは、炭素数１３以上のアルキル基又はアルケニル基を表す。）で表される基が含まれる。このアシル残基：Ｒ−Ｃ（＝Ｏ）−のＲにより表されるアルキル基及びアルケニル基の炭素数は、免疫抑制活性、製造コスト等を考慮すると、１３以上２５以下が好ましく、１５〜２５の奇数が更に好ましい。Ｒの炭素数が２５を越えると、特に製造コストが高くなるという問題点がある。
【００２１】
上記一般式（１）において、Ｒ102は、上述のＲ101と同義である。
【００２２】
ここで、本発明の第１の側面において、既述の通り、一般式（１）で示される化合物のうち、Ｒ101が５，８，１１，１４，１７−イコサペンタエノイル基であり、かつＲ102がヘキサデカノイル基である化合物は除外される。
Ｒ101とＲ102は、互いに同じであっても異なっていてもよいが、製造の容易性の観点から同じであることが好ましい。そこで、本発明の第２の側面において、上記一般式（１）において、Ｒ101とＲ102は、互いに同じ、高級脂肪酸のアシル残基である。
上記一般式（１）において、スルホキノボシドの糖骨格は、舟形、いす型のいずれの配置をもとり得る。しかしながら、いす型のもののほうが、安定性の観点から好ましい。また、グリセロール部分の２位の炭素（不斉炭素）における絶対配置は、Ｓ又はＲの何れであってもよい。
【００２３】
スルホキノボシドとグリセロールとの結合は、α又はβの何れでもよいが、細胞を用いた免疫抑制活性のアッセイ結果から判断すると、βが好ましい。このβ体は、次の一般式（２）：
【００２４】
【化７】
0003771446.tif 000005
【００２５】
で示される。ここで、Ｒ101及びＲ102は、上記一般式の定義と同義であり、すなわち互いに独立して高級脂肪酸のアシル残基を表す。
本発明のスルホキノボシルジアシルグリセロール誘導体は、次の反応式に従い、（工程Ａ）〜（工程Ｊ）を経て製造することができる。
【００２６】
【化８】
0003771446.tif 000006
【００２７】
（工程Ａ）Ｄ−グルコースのＣ１炭素に結合する水酸基を２−プロペニル化する。（工程Ｂ）グルコースのＣ６炭素の水酸基を保護する。（工程Ｃ）グルコースのＣ２、Ｃ３およびＣ４炭素に結合する水酸基を保護する。（工程Ｄ）先に保護したＣ６炭素の保護基を脱保護する。（工程Ｅ）Ｃ６炭素に結合する水酸基をカルボニルチオ基に変換し得る基（例えば、アルキルスルホニルオキシ基又はアリールスルホニルオキシ基）に置換する。（工程Ｆ）Ｃ６炭素をカルボニルチオ化する。（工程Ｇ）Ｃ１炭素に結合する２−プロペニル基をジオール化する。（工程Ｈ）得られたジオールのそれぞれを所望の高級脂肪酸によりエステル化する。（工程Ｉ）Ｃ６炭素のカルボニルチオ基をスルホン酸塩化する。（工程Ｊ）得られたスルホン酸塩のＣ２、Ｃ３およびＣ４炭素の保護基を脱保護することにより、塩の形態にある、本発明のスルホキノボシルジアシルグリセロール誘導体を製造することができる。このようにして得られた塩は、塩酸等の酸による滴定に供することにより、本発明のスルホキノボシルジアシルグリセロール誘導体にすることができる。
【００２８】
上記工程Ａ〜Ｊをさらに詳細に説明する。
【００２９】
工程Ａの２−プロペニル化は、グルコースとアリルアルコールをトリフルオロメタンスルホン酸等の強酸の存在下に、通常、室温から１００℃、好ましくは８０℃〜９０℃の温度で、半日〜２日間反応させることにより行うことができる。但し、反応条件の設定によって反応時間は異なる。
【００３０】
工程Ｂにおいては、Ｃ６炭素に結合する水酸基を保護し、Ｃ６炭素に−ＯＲ6を結合させる（ここで、Ｒ6は、アルキル基又は置換シリル基を表す。）。
【００３１】
水酸基を保護し得る化合物としては、Ｒ6により表される基がアルキル基又は置換シリル基になるような化合物を用いることができる。
【００３２】
Ｒ6により表されるアルキル基には、好ましくはかさ高い置換の低級アルキル基が含まれる。置換基にはメチル基、フェニル基等が含まれる。置換アルキル基の具体例としては、ｔ−ブチル基、トリチル基等を挙げることができる。
【００３３】
Ｒ6により表される基が置換シリル基である場合、置換シリル基の置換基には、低級アルキル基、好ましくは炭素数１〜４のアルキル基（例えば、メチル基、エチル基、イソプロピル基、ｔ−ブチル基）、およびアリール基、好ましくは炭素数６のアリール基（例えば、フェニル基）等が含まれる。Ｒ6により表される置換シリル基は、好ましくは３置換のシリル基であり、より好ましくはｔ−ブチルジフェニルシリル基等が含まれる。
【００３４】
工程Ｂにおける水酸基の保護は、Ｒ6がアルキル基である化合物３を得る場合、乾燥ピリジン等の有機溶媒に溶解した化合物２の溶液に、Ｒ6−Ｘで表される化合物（式中、Ｒ6は上で規定したアルキル基、Ｘは塩素原子等のハロゲン原子。）を添加し、ｐ−ジメチルアミノピリジン（ＤＭＡＰ）等の触媒の存在下に室温で反応させることにより行うことができる。化合物Ｒ6−Ｘとしては、トリチルクロリドが、製造コスト、反応の容易性の観点から好ましく用いられる。
【００３５】
Ｒ6が置換シリル基である化合物３を得る場合、化合物Ｒ6−Ｘとしてｔ−ブチルジフェニルシリルクロリド等を用い、イミダゾール等の触媒の存在下、室温で、半日〜２日間反応させることにより行うことができる。但し、反応条件の設定によって反応時間は異なる。
【００３６】
工程Ｃにおいては、Ｃ２、Ｃ３およびＣ４炭素に結合する水酸基を保護し、それぞれ−ＯＲ1、−ＯＲ2および−ＯＲ3（ここで、Ｒ1〜Ｒ3は、互いに独立して、アルキル基又は置換シリル基を表わす。）にする。これらの水酸基の保護は、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）等の有機溶媒に溶解した化合物３の、Ｃ２、Ｃ３およびＣ４炭素に結合する水酸基を水素化ナトリウム等により活性化し、水酸基を保護し得る化合物を室温で反応させることにより行うことができる。
【００３７】
水酸基を保護し得る化合物としては、ベンジルブロミド、ｐ−メトキシベンジルブロミド、ｔ−ブチルジメチルシリルクロリド、トリエチルシリルクロリド等を用いることができる。
【００３８】
これらの水酸基を保護し得る化合物を用いる場合の反応は、それぞれの保護基に適した反応条件により行うことができる。
【００３９】
工程ＤにおけるＣ６炭素に結合する保護基の脱保護は、メタノール等の有機溶媒に溶解した化合物４の溶液を、ｐ−トルエンスルホン酸等の触媒の存在下に室温で、半日〜１日間反応させることにより行うことができる。但し、反応条件の設定によって反応時間は異なる。
【００４０】
工程Ｅにおいては、化合物５のＣ６炭素の水酸基に、Ｒ4、すなわちアルキルスルホニル基又はアリールスルホニル基を結合させることにより、当該水酸基を−ＯＲ4に転化して化合物６を得る。
【００４１】
この−ＯＲ4基への反応は、有機溶媒に溶解した化合物５の溶液に、アルキルスルホニル基を有する化合物又はアリールスルホニル基を有する化合物等を添加し、反応させることにより行うことができる。アルキルスルホニル基を有する化合物のアルキル基としては、好ましくは非置換のアルキル基であって、より好ましくは低級アルキル基、さらにより好ましくは炭素数１〜２のアルキル基（メチル基、エチル基）が含まれる。アルキルスルホニル基を有する化合物としては、式：Ｒ4’−Ｘ（式中、Ｒ4’はアルキルスルホニル基を表し、Ｘはハロゲン原子を表す。）で表されるものを用いることができ、その具体例を挙げると、メタンスルホニルクロリド、エタンスルホニルクロリド等が含まれる。
【００４２】
一方、アリールスルホニル基を有する化合物のアリール基としては、非置換又は置換のアリール基であって、好ましくは炭素数６のアリール基（例えば、フェニル基）が含まれる。置換アリール基の場合、その置換基としては、ｐ−メチル基、ｐ−メトキシ基等が含まれる。アリールスルホニル基を有する化合物としては、式：Ｒ4”−Ｘ（式中、Ｒ4”はアリールスルホニル基を表し、Ｘはハロゲン原子を表す。）で表されるものを用いることができ、その具体例を挙げると、ｐ−トルエンスルホニルクロリド、ｐ−メトキシベンゼンスルホニルクロリド、ベンゼンスルホニルクロリド等が含まれる。
【００４３】
これらのアルキルスルホニル基又はアリールスルホニル基を有する化合物のうち、トシル基を有するものが反応の容易性の観点から好ましい。
【００４４】
工程Ｅの反応において、有機溶媒としては、ピリジン、ジクロロメタン等を用いることができる。
上記の反応は、必要に応じて、ＤＭＡＰ等の触媒の存在下に室温で、２時間〜１日間行うことができる。但し、反応条件の設定によって反応時間は異なる。
【００４５】
工程Ｆにおいて、化合物６のスルホニルオキシ基（−ＯＲ4）をカルボニルチオ基｛−ＳＣ（＝Ｏ）Ｒ5（ここで、Ｒ5は、水素原子、アルキル基又はアリール基を表す。）｝に置換する。
【００４６】
この反応では、有機溶媒中の化合物６のアルキルスルホニルオキシ基又はアリールスルホニルオキシ基をカルボニルチオ基に置換することのできる化合物（以下、「Ｏ−置換基→Ｓ−置換基化合物」ともいう。）を反応させることにより化合物７が得られる。
【００４７】
Ｏ−置換基→Ｓ−置換基化合物には、チオカルボン酸のアルカリ金属塩およびアルカリ土類金属塩が含まれる。チオカルボン酸には、チオギ酸、並びに低級チオカルボン酸、好ましくは炭素数１〜５の脂肪族炭化水素が置換した脂肪族チオカルボン酸（例えば、チオ酢酸、チオプロピオン酸）、および好ましくは炭素数６〜１０の芳香族炭化水素が置換した芳香族チオカルボン酸（例えば、チオ安息香酸）等が含まれる。
【００４８】
これらのチオカルボン酸と塩を形成するアルカリ金属には、カリウム、ナトリウム等が含まれ、アルカリ土類金属には、マグネシウム、カルシウム等が含まれる。
【００４９】
上記Ｏ−置換基→Ｓ−置換基化合物のうち、チオ酢酸の塩は、反応の安定性の点および後の工程において硫黄原子を酸化しやすい点から好ましく用いることができる。
【００５０】
反応に用いる有機溶媒には、アルコール、好ましくは低級アルコール（例えば、メタノール、エタノール、プロパノール）、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド、ジメチルスルホキシド等が含まれる。
【００５１】
上記反応は、通常、室温ないし用いる溶媒の沸点において、通常、１時間〜１日間撹拌することにより行うことができる。但し、反応条件の設定によって反応時間は異なる。
【００５２】
工程Ｇのジオール化は、ｔ−ブタノールおよび水等の溶媒混液に溶解した化合物７の溶液に、四酸化オスミウム等の酸化剤を添加し、トリメチルアミンＮ−オキシド等の再酸化剤を共存させ、室温で、１時間〜３日間反応させることにより行うことができる。但し、反応条件の設定によって反応時間は異なる。
【００５３】
工程Ｈのエステル化反応により、所望の高級脂肪酸がグリセロールとエステル結合したスルホキノボシルジアシルグリセロール誘導体を得ることができる。
【００５４】
この反応は、ジクロロメタン等の適当な有機溶媒に溶解した化合物８の溶液に、最終生成物に対応する高級脂肪酸を添加し、必要に応じて、エチルジメチルアミノプロピルカルボジイミド（ＥＤＣＩ）−ＤＭＡＰ系等の適当な触媒の存在下に反応させることにより行うことができる。
【００５５】
工程Ｈの反応において、添加すべき脂肪酸としては、上述した一般式（１）のＲ101により表されるアシル残基を有する高級脂肪酸、すなわち、直鎖状又は分岐状の、飽和又は不飽和高級脂肪酸を用いることができる。
【００５６】
工程Ｈの反応により、化合物９において、Ｒ101及びＲ102が、添加した高級脂肪酸のアシル残基である本発明の一般式（１）で表されるジアシルエステルと、Ｒ101のみにアシル残基が結合したモノアシルエステルの混合物が得られる。工程Ｈの反応においては、所望に応じて、添加すべき高級脂肪酸を２種以上用いることもできる。この場合、Ｒ101及びＲ102が同じアシル残基または互いに異なるアシル残基である一般式（１）で表されるジアシルエステルと、Ｒ101が互いに異なるアシル残基であるモノエステルとの混合物が得られる。
【００５７】
これらのモノエステルとジエステルの混合物は、必要に応じて、例えば、クロマトグラフィーにより、各々のエステルに単離し、次の工程Ｉの反応に供することができる。また、脂肪酸の添加量を化合物８の２〜３倍モルに設定することにより、モノエステルの生成を極力抑え、ジエステルを優先的に合成することができる。
【００５８】
工程Ｉのスルホン酸塩化は、酢酸および酢酸カリウムを用いて緩衝した有機溶媒中の化合物９の溶液に、ＯＸＯＮＥ（２ＫＨＳＯ5、ＫＨＳＯ4、Ｋ2ＳＯ4）等の酸化剤を添加し、室温で、半日〜２日間反応させることにより行うことができる。但し、反応条件の設定によって反応時間は異なる。
【００５９】
工程ＪのＣ２〜Ｃ４炭素に結合する保護基の脱保護は、用いた保護基および結合する高級脂肪酸のアシル残基に合った脱保護の方法で行うことができる。例えば、保護基がベンジル基であり、Ｒ101及びＲ102が飽和の高級脂肪酸のアシル残基である場合、エタノール等の有機溶媒に溶解した化合物１０の溶液を、パラジウム−活性炭（Ｐｄ−Ｃ）等の触媒の存在下に水素ガス雰囲気下に室温で反応させることにより行うことができる。また、Ｒ101及びＲ102により表される高級脂肪酸のアシル残基の少なくとも一方が不飽和の高級脂肪酸のアシル残基である場合には、用いた保護基に合った脱保護法であり、なおかつ不飽和脂肪酸の二重結合を維持できる方法により行うことができる。例えば、シリル系の保護基の場合は、酸触媒（例えば、トリフルオロ酢酸）で脱保護することができる。
【００６０】
なお、出発物質であるグルコースは溶液中でα−アノマーおよびβ−アノマーの構造をとりうるため、各工程の生成物は、α−およびβ−アノマーの混合物となる。これらの混合物は、クロマトグラフィー等に供することにより各アノマーに分離することができる。
【００６１】
また、工程Ｂの前に、化合物２とベンズアルデヒドを反応させ、ベンジリデン化する工程を採用することにより、α-アノマーを選択的に結晶化させ、分離することもできる。さらに、工程Ａの２−プロペニル化の前に、Ｃ１炭素に臭素等のハロゲンを結合させることにより、その後の反応においてプロペニル基をβ位に導入することができ、β-アノマーを選択的に合成することもできる。
【００６２】
本発明の免疫抑制剤は、上述の本発明の一般式（１）で表されるスルホキノボシルジアシルグリセロール誘導体及びその薬学的に許容される塩からなる群から選択される少なくとも１種を有効成分として含有する。本発明の免疫抑制剤において用い得る薬学的に許容される塩には、例えば、ナトリウム及びカリウムのような一価の陽イオンの塩が含まれるが、これらに限定されるものではない。以下、本発明のスルホキノボシルジアシルグリセロール誘導体及びその薬学的に許容される塩からなる群の化合物を「本発明の免疫抑制物質」ともいう。
【００６３】
本発明の免疫抑制物質が有効成分として含有するスルホキノボシルアシルグリセロール誘導体には、キノボースとグリセロールの結合がα結合又はβ結合である異性体、グリセロールのＣ２炭素（不斉炭素）における異性体等が含まれる。本発明の免疫抑制物質は、その活性に悪影響を及ぼさない限り、これらの異性体を単独で含有することも、２種以上の異性体の混合物を含有することもできる。
【００６４】
本発明の免疫抑制物質は、例えば、経口投与、非経口投与することができる。本発明の免疫抑制物質は、これらの投与経路に応じて、適切な薬学的に許容される賦形剤又は希釈剤等と組み合わせることにより薬学的製剤にすることができる。
【００６５】
経口投与に適した剤型としては、固体、半固体、液体又は気体等の状態のものが含まれ、具体的には、錠剤、カプセル剤、粉末剤、顆粒剤、溶液剤、懸濁剤、シロップ剤、エリキシル剤等を挙げることができるが、これらに限定されるものではない。
【００６６】
本発明の免疫抑制物質を錠剤、カプセル剤、粉末剤、顆粒剤、溶液剤、懸濁剤等に製剤化するためには、それ自体は既知の方法を用いて、本発明の免疫抑制物質をバインダー、錠剤崩壊剤、潤滑剤等と混合し、さらに、必要に応じて、希釈剤、緩衝剤、浸潤剤、保存剤、フレーバー剤等と混合することにより行うことができる。一例を挙げると、上記バインダーには、結晶セルロース、セルロース誘導体、コーンスターチ、ゼラチン等が、錠剤崩壊剤には、コーンスターチ、馬鈴薯デンプン、カルボキシメチルセルロースナトリウム等が、潤滑剤には、タルク、ステアリン酸マグネシウム等が含まれ、さらには、ラクトース、マンニトール等のような従来用いられている添加剤等を用いることができる。
【００６７】
また、本発明の免疫抑制物質は、液体、微細粉末の形態のものを、気体又は液体の噴霧剤と共に、又は必要に応じて浸潤性付与剤のような既知の助剤と共に、エアロゾル容器、ネブライザーのような非加圧容器に充填し、エアロゾル剤又は吸入剤の形態で投与することもできる。噴霧剤としては、ジクロロフルオロメタン、プロパン、窒素等の加圧ガスを用いることができる。
【００６８】
本発明の免疫抑制物質を非経口投与する場合、例えば、注射、経皮投与、直腸投与、および眼内投与等により投与することができる。
【００６９】
注射による投与としては、皮下、皮内、静脈内、筋肉内等に投与することができる。これらの注射用製剤は、それ自体は既知の方法により、本発明の免疫抑制物質を、植物性油、合成脂肪酸グリセリド、高級脂肪酸のエステル、プロピレングリコールのような水性又は非水性の溶媒中に溶解、懸濁又は乳化し、さらに、所望により、可溶化剤、浸透圧調節剤、乳化剤、安定剤及び保存料のような従来用いられている添加剤と共に製剤化することができる。
【００７０】
本発明の免疫抑制物質を溶液、懸濁液、シロップ、エリキシル等の形態にするためには、注射用滅菌水や規定生理食塩水のような薬学的に許容される溶媒を用いることができる。
【００７１】
経皮投与は、対象となる皮膚の状態等に応じて軟膏剤、乳化剤、パスタ剤、ハップ剤、リニメント剤、ローション剤、懸濁剤等として投与することができる。
【００７２】
軟膏剤は、それ自体は既知の方法により、本発明の免疫抑制物質をワセリン、パラフィン等のような疎水性基材または親水ワセリン、マクロゴール等のような親水性基材と練合することにより製剤化することができる。乳化剤その他の経皮投与剤も、通常用いられる方法により製剤化することができる。
【００７３】
直腸投与には、例えば、坐薬として投与することができる。坐薬は、それ自体は既知の方法により、本発明の免疫抑制物質を、体温で融解するが室温では固化しているカカオバター、カーボンワックス、ポリエチレングリコールのような賦形剤と混合し、成形することにより製剤化することができる。
【００７４】
眼内投与は、点眼剤、眼軟膏等のような眼用製剤等として投与することができる。点眼剤は、それ自体は既知の方法により、滅菌精製水のような水性溶剤に本発明の免疫抑制物質を溶解または懸濁し、必要に応じて保存剤、緩衝剤、界面活性剤等を添加することにより製剤化することができる。
【００７５】
本発明の免疫抑制物質は、薬学的に許容される他の活性を有する化合物と併用して薬学的製剤とすることもできる。
【００７６】
本発明の免疫抑制物質の投与量は、投与形態、投与経路、対象とする疾病の程度や段階等に応じて適宜設定、調節することができる。一例を挙げると、経口投与する場合は、免疫抑制物質として、１〜100mg/kg体重/日、好ましくは１〜10mg/kg体重/日、注射剤として投与する場合は、免疫抑制物質として、１〜50mg/kg体重/日、好ましくは1〜5mg/kg体重/日、経皮投与する場合は、免疫抑制物質として、１〜100mg/kg体重/日、好ましくは1〜10mg/kg体重/日、直腸投与する場合は、免疫抑制物質として、１〜50mg/kg体重/日、好ましくは1〜5mg/kg体重/日、眼内投与の場合は、免疫抑制物質として、0.01〜3％程度の溶液を１日数回に分けて点眼するなどに設定することができるが、これらに限定されるものではない。
【００７７】
【実施例】
以下、本発明を例を挙げて説明する。しかしながら、本発明は、これらの例に限定されるものではない。
【００７８】
合成例
本発明の免疫抑制剤において用いる有効成分のうち、スルホキノボシルジアシルグリセロールβ誘導体の合成例を以下に示す。
【００７９】
＜例１＞
経路a；2,3,4,6-テトラ-O-アセチル-D-グルコピラノシル・ブロミド (II)
無水酢酸400mLに0℃条件下、60％過塩素酸2.4mLを滴下した。溶液を室温に戻した後、撹拌しつつD-グルコース 100g (0.56mol)を液温が30〜40℃に保たれるように約30分で添加した。反応液を20℃に冷却後、赤リン30g (1.0mol)を添加した。さらに液温を20℃以下に保ちながら臭素180g (2.3mol)を、ついで水36mLを滴下した。室温で2時間放置後、冷クロロホルム300mLを加え、ガラスウールを敷き詰めた漏斗で反応液を濾過した。濾液を冷水800mLに注ぎ、分液漏斗でクロロホルム層を分離した。水層をクロロホルム50mLで抽出し、クロロホルム層を合わせて、冷水300mLで洗浄した。クロロホルム層を飽和炭酸水素ナトリウム溶液500mLに注ぎ、分液漏斗で十分振とうし、クロロホルム層を回収した。無水硫酸ナトリウムで乾燥後、濾過、減圧濃縮し、結晶状物質を得た。乳鉢内で石油エーテル：エーテル＝2：1溶液とともに細かく砕き、これを濾別し、粗結晶物質を減圧乾燥した。冷ジイソプロピルエーテルを用いて再結晶を行い純粋な結晶を得た(収量152.6g 0.37mol、収率66.7％)。
【００８０】
融点；88〜90℃、Rf値；0.338 (ヘキサン：酢酸エチル＝4：1)
【００８１】
【化９】
0003771446.tif 000007
【００８２】
経路b；2,3,4,6-テトラ-O-アセチル-1-O-(2-プロペニル)-β-D-グルコース (III)
化合物(II) 16.7g (40.6mmol)をアリルアルコール 100mLに溶解し、シアン化水銀10.0g (39.6mmol)を添加し、室温で一晩撹拌した。反応液を減圧濃縮し、クロロホルム100mL及び冷水とともに分液漏斗中で振とうし、クロロホルム層を分離した。無水硫酸ナトリウムで乾燥後、濾過、減圧濃縮し、得られたシロップを冷ジイソプロピルエーテルに溶かし、少量の結晶種を加え、氷冷下にて結晶を得た(収量12.6g 32.5mmol、収率80％)。
【００８３】
融点；77〜81℃。Rf値；0.282 (ベンゼン：酢酸エチル＝4：1)
【００８４】
【化１０】
0003771446.tif 000008
【００８５】
経路c；1-O-(2-プロペニル)-β-D-グルコース (IV)
化合物(III) 30.3g (78.1mmol)をメタノール120mLに溶解し、撹拌しながら28％ナトリウムメトキシド・メタノール溶液を少量滴下し、室温で4時間反応した。0.1N塩酸で中和し、無水硫酸ナトリウムで乾燥後、濾過、減圧濃縮し、シリカゲルフラッシュクロマトグラフィー(クロロホルム：メタノール＝4：1)で精製し、無色透明油状物質を得た(収量15.8g 71.8mmol、収率91.9％)。Rf値；0.407 (クロロホルム：メタノール＝4：1)
【００８６】
【化１１】
0003771446.tif 000009
【００８７】
経路d；1-O-(2-プロペニル)-6-O-トリフェニルメチル-β-D-グルコース (V)
化合物 (IV) 15.8g(71.8mmol)を乾燥ピリジン 120mLに溶解し、その溶液にトリチルクロリド 23.4g (83.9mmol)、p-ジメチルアミノピリジン (DMAP) 0.1g (0.82mmol)を添加し、撹拌しながら室温で36時間反応した。その後冷水300mLを加えて反応を停止し、酢酸エチルで抽出(300mL×3回)し、有機層を合わせて1.0N塩酸でpH 4まで中和し、飽和食塩水で洗浄(300mL×2回)し、無水硫酸ナトリウムで乾燥した後、濾過、減圧濃縮し、シリカゲルフラッシュクロマトグラフィー(ジクロロメタン：メタノール＝20：1)で精製し、淡黄色油状物質を得た(収量28.7g 62.1mmol、収率86.5％)。Rf値；0.306 (クロロホルム：メタノール＝19：1)
【００８８】
【化１２】
0003771446.tif 000010
【００８９】
経路e；2,3,4-トリ-O-ベンジル-1-O-(2-プロペニル)-6-O-トリフェニルメチル-β-D-グルコース (VI)
ミネラルオイル中に拡散されている80％水素化ナトリウム3.2g (133mmol)を反応器に取り、乾燥ヘキサン 50mLでよく洗浄した後ヘキサンを取り除き、乾燥 N,N-ジメチルホルムアミドに溶解した化合物 (V) 14.2g (30.7mmol)を氷冷下にて徐々に添加し、15分後室温に戻し、撹拌しながら1時間反応した。
【００９０】
次に再び氷冷下にてベンジルブロミド 21.6g (126mmol)を徐々に添加し、15分後室温に戻し、撹拌しながら3時間反応した。その後メタノール20mL、冷水30mLを加えて反応を停止し、酢酸エチルで抽出(50mL×3回)し、有機層を合わせて飽和食塩水で洗浄(100mL×2回)し、無水硫酸ナトリウムで乾燥した後、濾過、減圧濃縮し、シリカゲルフラッシュクロマトグラフィー(ヘキサン：酢酸エチル＝10：1)で精製し、淡黄色油状物質を得た(収量21.6g 29.5mmol、収率96.1％)。Rf値；0.410 (ヘキサン：酢酸エチル＝4：1)
【００９１】
【化１３】
0003771446.tif 000011
【００９２】
経路f；2,3,4-トリ-O-ベンジル-1-O-(2-プロペニル)-β-D-グルコース(VII)
化合物 (VI) 21.6g (29.5mmol)をメタノール150mLに溶解し、p-トルエンスルホン酸一水和物 2.80g (14.7mmol)を添加し、撹拌しながら一晩反応した。その後冷水100mLを加えて反応を停止し、酢酸エチルで抽出(200mL×3回)し、有機層を合わせて飽和食塩水で洗浄(300mL×2回)し、無水硫酸ナトリウムで乾燥した後、濾過、減圧濃縮し、シリカゲルフラッシュクロマトグラフィー(ヘキサン：酢酸エチル＝4：1)で精製し、白色結晶状物質を得た(収量9.0g 18.4mmol、収率62.4％)。融点80〜82℃。Rf値；0.338 (ヘキサン：酢酸エチル＝4：1)。[α]D＝＋0.4゜(c 5.50、CHCl3)
1H NMR (300MHz、CDCl3+TMS、δ)；7.36〜7.23 (15H、m、Ar)、6.02〜5.89 (1H、m、-CH=CH2)、5.34 (1H、dd、J＝1.5 & 17.2、-CH=CH2)、5.22 (1H、dd、J＝1.4 & 10.4、-CH=CH2)、4.95 (1H、d、J＝10.9、Ar-CH2)、4.94 (1H、d、J＝10.9、Ar-CH2)、4.86 (1H、d、J＝10.9、Ar-CH2)、4.81 (1H、d、J＝10.9、Ar-CH2)、4.73 (1H、d、J＝10.9、Ar-CH2)、4.64 (1H、d、J＝10.9、Ar-CH2)、4.50 (1H、d、J＝7.8、H-1)、4.43〜4.13 (2H、m、-O-CH2-CH=CH2)、3.88〜3.34 (6H、m、H-2 & H-3 & H-4 & H-5 & H-6a,b)
【００９３】
【化１４】
0003771446.tif 000012
【００９４】
経路g；2,3,4-トリ-O-ベンジル-1-O-(2-プロペニル)-6-O-(4-トリルスルホニル)-β-D-グルコース (VIII)
化合物 (VII) 9.80g (20.0mmol)を乾燥ピリジン 200mLに溶解し、DMAP 24.4mg (0.2mmol)、p-トルエンスルホニルクロリド 11.4g (60.0mmol)を添加し、撹拌しながら室温で一晩反応した。その後、冷水300mLを加えて反応を停止し、酢酸エチルで抽出(200mL×3回)し、有機層を合わせて1.0N及び0.1N塩酸でpH 4まで中和し、飽和食塩水で洗浄(300mL×2回)し、無水硫酸ナトリウムで乾燥した後、濾過、減圧濃縮し、シリカゲルフラッシュクロマトグラフィー(ヘキサン：酢酸エチル＝4：1)で精製し、白色結晶状物質を得た(収量9.00g 14.0mmol、収率70.0％)。融点111〜112℃、Rf値；0.295 (ヘキサン：酢酸エチル＝4：1)
1H NMR (300MHz、CDCl3+TMS、δ)；7.77 (2H、d、J＝8.2、Ts Me側のH)、7.31〜7.25 (15H、m、Ar)、7.19〜7.16 (2H、m、Ts SO2側のH)、5.98〜5.85 (1H、m、-CH=CH2)、5.35〜5.19 (2H、m、-CH=CH2)、4.92 (2H、d、J＝10.9、Ar-CH2)、4.81 (1H、d、J＝10.8、Ar-CH2)、4.75 (1H、d、J＝10.9、Ar-CH2)、4.68 (2H、d、J＝10.9、Ar-CH2)、4.48 (1H、d、J＝10.8、Ar-CH2)、4.39 (1H、d、J＝7.8、H-1)、4.34〜3.38 (8H、m、H-2 & H-3 & H-4 & H-5 & H-6a,b & -O-CH2-CH=CH2)、2.42 (3H、s、Ts CH3)
【００９５】
【化１５】
0003771446.tif 000013
【００９６】
経路h；2,3,4-トリ-O-ベンジル-1-O-(2-プロペニル)-6-デオキシ-6-アセチルチオ-β-D-グルコース (IX)
化合物(VIII) 9.00g (14.0mmol)を乾燥エタノール 250mLに溶解し、チオ酢酸カリウム 4.80g (42.0mmol)を添加し、還流条件下で撹拌しながら3時間反応した。その後、冷水300mLを加えて反応を停止し、酢酸エチルで抽出(200mL×3回)し、有機層を合わせて飽和食塩水で洗浄(300mL×2回)し、無水硫酸ナトリウムで乾燥した後、濾過、減圧濃縮し、シリカゲルフラッシュクロマトグラフィー(ヘキサン：酢酸エチル＝10：1)で精製し、白色結晶状物質を得た(収量6.60g 12.0mmol、収率85.7％)。融点70〜73℃。Rf値；0.295 (ヘキサン：酢酸エチル＝4：1)、[α]D＝＋26.7゜(c 0.75、CHCl3)
1H NMR (300MHz、CDCl3+TMS、δ)；7.35〜7.25 (15H、m、Ar)、6.00〜5.89 (1H、m、-CH=CH2)、5.35 (1H、dd、J＝1.5 & 17.2、-CH=CH2)、5.22 (1H、dd、J＝1.3 & 10.4、-CH=CH2)、4.95 (1H、d、J＝10.9、Ar-CH2)、4.93 (1H、d、J＝10.8、Ar-CH2)、4.87 (1H、d、J＝10.8、Ar-CH2)、4.78 (1H、d、J＝10.9、Ar-CH2)、4.71 (1H、d、J＝10.9、Ar-CH2)、4.63 (1H、d、J＝10.7、Ar-CH2)、4.42 (1H、d、J＝7.9、H-1)、4.37〜3.33 (7H、m、H-2 & H-3 & H-4 & H-5 & H-6a & -O-CH2-CH=CH2)、2.96 (1H、dd、J＝6.9 & 13.6、H-6b) 、2.34 (3H、s、SCOCH3)
【００９７】
【化１６】
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【００９８】
経路i；3-O-(2,3,4-トリ-O-ベンジル-6-デオキシ-6-アセチルチオ-β-D-グルコピラノシル)-グリセロール (X)
化合物 (IX) 3.30g (6.02mmol)をt-ブタノール：水＝4：1溶液に溶解し、トリメチルアミンN-オキシド二水和物1.34g (12.1mmol)、四酸化オスミウム-t-ブタノール溶液(0.04M) 11.7mLを添加し、撹拌しながら室温で3日間反応した。その後活性炭5.8gを加え、撹拌しながら室温で1.5時間放置し、その後吸引濾過した。次に冷水250mLを加えて反応を停止し、酢酸エチルで抽出(200mL×3回)し、有機層を合わせて飽和食塩水で洗浄(300mL×2回)し、無水硫酸ナトリウムで乾燥した後、濾過、減圧濃縮し、シリカゲルフラッシュクロマトグラフィー(ヘキサン：酢酸エチル＝1：1)で精製し、白色結晶状物質を得た(収量1.79g 3.08mmol、収率51.2％)。融点91〜93℃、Rf値；0.112 (ヘキサン：酢酸エチル＝1：1)、[α]D＝＋18.0゜(c 0.75、CHCl3)
1H NMR (300MHz、CDCl3+TMS、δ)；7.35〜7.25 (15H、m、Ar)、4.94〜4.61 (6H、m、Ar-CH2)、4.38 (0.5H、d、J＝7.8、H-1(R or S))、4.37 (0.5H、d、J＝7.8、H-1(R or S))、3.83〜3.37 (7H、m、H-2 & H-3 & H-4 & H-5 & H-6a & -O-CH2-CH=CH2)、2.96 (1H、dd、J＝6.9 & 13.6、H-6b)、2.34 (3H、s、SCOCH3)
【００９９】
【化１７】
0003771446.tif 000015
【０１００】
経路j；3-O-(2,3,4-トリ-O-ベンジル-6-デオキシ-6-アセチルチオ-β-D-グルコピラノシル)-1,2-ジ-O-ステアロイル-グリセロール (XI)
化合物(X) 1.23g (2.12mmol)をジクロロメタン100mLに溶解し、1-エチル-3-(3-ジメチルアミノプロピル)-カルボジイミド塩酸塩(EDCI) 1.30g (6.79mmol)、DMAP 260mg (2.13mmol)、ステアリン酸 1.75g (6.15mmol)を添加し、撹拌しながら室温にて1日反応した。その後ジクロロメタン100mLを加え反応を停止し、飽和食塩水で洗浄(50mL×2回)し、無水硫酸ナトリウムで乾燥後、濾過、減圧濃縮し、シリカゲルフラッシュクロマトグラフィー(ヘキサン：酢酸エチル＝10：1→8：1)で精製し、白色非結晶状固形物質を得た(収量2.10g 1.88mmol、収率88.7％)。Rf値；0.487 (ヘキサン：酢酸エチル＝4：1)、[α]D=−21.3゜(c 0.15、CHCl3)
1H NMR (300MHz、CDCl3+TMS、δ)；7.34〜7.26 (15H、m、Ar)、5.28  (1H、m、Gly-H-2)、4.92〜4.60 (6H、m、Ar-CH2)、4.36 (0.5H、d、J＝7.7、H-1(R or S))、4.35 (0.5H、d、J＝7.8、H-1(R or S))、4.25〜2.96 (10H、m、H-2 & H-3 & H-4 & H-5 & H-6a, b & Gly-H-1a, b & Gly-H-3a, b)、2.37 (1.5H、s、SCOCH3(R or S)) 、2.35 (1.5H、s、SCOCH3(R or S))、2.32〜2.24  (4H、m、OCOCH2)、1.65〜1.58 (4H、m、OCOCH2CH2)、1.25 (56H、br、-CH2-)、0.88 (6H、t、J＝6.3、CH3)
【０１０１】
【化１８】
0003771446.tif 000016
【０１０２】
経路k；3-O-(2,3,4-トリ-O-ベンジル-6-デオキシ-6-スルホ-β-D-グルコピラノシル)-1,2-ジ-O-ステアロイル-グリセロール・ナトリウム塩 (XII)
化合物 (XI) 1.24g (1.11mmol)を酢酸 50mLに溶解し、酢酸カリウム 1.5g 及びOXONE (2KHSO5、KHSO4、K2SO4) 1.55gを添加し、撹拌しながら室温にて一晩反応した。その後冷水100mLを加えて反応を停止し、酢酸エチルで抽出(50mL×5回)し、有機層を合わせて飽和炭酸水素ナトリウム溶液で中和し、さらに飽和食塩水で洗浄(100mL×2回)し、無水硫酸ナトリウムで乾燥した後、濾過、減圧濃縮し、シリカゲルフラッシュクロマトグラフィー(クロロホルム：メタノール＝20：1→15：1)で精製し、白色非結晶状固形物質を得た(収量773mg 0.677mmol、収率61.0％)。Rf値；0.288 (ジクロロメタン：メタノール＝10：1)、[α]D=＋4.8゜(c 0.17、CHCl3)
1H NMR (300MHz、CDCl3+TMS、δ)；7.29〜7.16 (15H、m、Ar)、5.31  (1H、m、Gly-H-2)、4.91〜4.56 (6H、m、Ar-CH2)、4.50 (1H、d、J＝7.6、H-1)、4.44〜3.03 (10H、m、H-2 & H-3 & H-4 & H-5 & H-6a, b & Gly-H-1a, b & Gly-H-3a, b)、2.62  (4H、br、OCOCH2)、2.19〜2.17 (4H、br、OCOCH2CH2)、1.49 (4H、br、OCO CH2CH2CH2)、1.25 (52H、br、-CH2-)、0.88 (6H、t、J＝6.3、CH3)
【０１０３】
【化１９】
0003771446.tif 000017
【０１０４】
経路l；3-O-(6-デオキシ-6-スルホ-β-D-グルコピラノシル)-1,2-ジ-O-ステアロイル-グリセロール・ナトリウム塩(XIII)
化合物 (XII) 773mg (0.677mmol)をエタノール50mLに溶解し、10%パラジウム-活性炭(Pd-C) 2.00gを添加し、フラスコ内を水素で置換し、撹拌しながら室温で一晩反応した。その後、セライトを用いて吸引濾過し、減圧濃縮後、シリカゲルフラッシュクロマトグラフィー(クロロホルム：メタノール＝10：1→クロロホルム：メタノール：水＝70：30：4)で精製し、白色非結晶状固形物質を得た(収量311mg 0.356mmol、収率52.6％)。
【０１０５】
白色非結晶状固形物質、Rf値；0.402 (クロロホルム：メタノール：水＝65：25：4)、[α]D=−3.6゜(c 0.59、CHCl3:CH3OH:H2O=70:30:4)
1H NMR (300MHz、CDCl3+TMS、δ)； 5.28  (1H、m、Gly-H-2)、4.32 (1H、d、J＝7.7、H-1)、4.27〜3.11 (10H、m、H-2 & H-3 & H-4 & H-5 & H-6a, b & Gly-H-1a, b & Gly-H-3a, b)、2.36〜2.30  (4H、m、OCOCH2)、1.60 (4H、m、OCOCH2CH2)、1.27 (56H、br、-CH2-)、0.89 (6H、t、J＝6.4、CH3)
【０１０６】
【化２０】
0003771446.tif 000018
【０１０７】
＜アッセイ１＞
混合リンパ球反応
刺激細胞、反応細胞となるリンパ球をそれぞれ別の健康人から採取した血液より調製した。
【０１０８】
リンパ球のうち反応細胞になるものは、更に選別をかけ、Ｔリンパ球のみとした。
【０１０９】
反応細胞は無処理、刺激細胞は増殖を停止させるために106/mLの細胞に対して10μg/mLのマイトマイシンＣで処理した。処理後はPBS(phosphate buffer saline)で４回洗浄した。
【０１１０】
次に反応細胞を105個／ウエルずつ播種し、被験物質（以下の表１に示すSQAG3、SQAG5、SQAG７及びSQAG9）を所定濃度添加し、37℃、一時間培養した。その後刺激細胞を105個／ウエルずつ添加し、CO2インキュベーターで37℃４日間培養した。その培養の後、反応細胞の増殖能を定量するために、［3Ｈ］−チミジンを添加し、12時間培養して細胞核内へ取り込ませた後、シンチレーションカウンターで細胞内取り込み量を計測した。
【０１１１】
【表１】
0003771446.tif 000019
【０１１２】
得られた結果を図１〜図４に示す。
【０１１３】
図１〜図４は、それぞれSQAG3、SQAG5、SQAG7及びSQAG9を添加した時の細胞への［3Ｈ］−チミジンの取り込み量を表す。［3Ｈ］−チミジンの核内取り込み量が低いほど免疫抑制能が高いことを表す。図１〜図４の何れも、縦軸は、放射能の強さを表し、横軸は、試験化合物の濃度を表す。
【０１１４】
図１〜図４から明らかなように、試験した化合物は、何れも有意な免疫抑制活性を有する。特に、SQAG9は他の化合物よりも顕著に優れた免疫抑制活性を有することが分かる。
【０１１５】
＜アッセイ２＞
皮膚移植による拒絶反応試験
ACIラットおよびLEWラットを準備し、エーテルの吸入麻酔を施した。ACIラットの背部を剃毛した後、側背部から１×１ｃｍの大きさに皮膚を除去して皮膚欠損創を作り、止血した。一方、LEWラットの尾部の皮膚を採取し、１×１ｃｍの大きさの皮膚片とした。この採皮片をACIラットの皮膚欠損創に当て、5-0ナイロン糸で縫合し、手術部にガーゼをあてがい、さらに創の安静を図るためゴムバンド付きの胴巻きを取り付けた。このような、皮膚移植手術を合計１０匹のACIラットに対して行い、ランダムに５匹をコントロール群、５匹を被験物質投与群とした。コントロール群には、手術後５日間にわたり毎日、10mLの生理食塩水を腹腔内に投与した。被験物質投与群には、SQAG9を1mg/mLの濃度に生理食塩水に溶解した溶液10mLを、コントロール群と同様、手術後５日間にわたり毎日、腹腔内に投与した。
【０１１６】
手術後７日目に、移植した皮膚を採取して組織標本を作製し、藤田らの方法（ T.Fujita, S.Takahashi, A. Yagihashi, K. Jimbow, N. Sato,  Transplantation, vol.64, 922-925, 1997）にしたがってＨ−Ｅ染色を行い、組織学的に判定した。
【０１１７】
判定の結果、コントロール群は、５匹全ての組織像において、表皮が真皮から剥離しており、表皮が壊死していることを確認した。それに対し、SQAG9投与群では、５匹のうち３匹の組織像から、表皮の壊死が確認されたが、２匹の組織像については、表皮が真皮から剥離している部分が見られたものの、生着した部分が観察できた。
【０１１８】
本発明者らは、免疫抑制活性の評価法としては、皮膚移植による拒絶反応試験は、最も厳しい試験であり、さらに、このアッセイで用いた、ACI系ラットとLEW系ラットの組み合わせは、拒絶反応がもっとも激しく起こるものであると考えている。このような厳しい条件下でのアッセイにおいても５例中２例で拒絶反応の抑制効果が観察されたことは、本発明のSQAGが免疫抑制剤として高い効果をもつことを示すものである。
【０１１９】
また、SQAGを投与した群のラットにはいずれも、試験期間中、急性毒性による死亡例は一例もなかった。さらに、体重の減少、肉眼的な所見による体調不良、一般病理試験による主要臓器の異常等の所見も全く見られず、本発明の免疫抑制剤が極めて毒性の低いものであることを確認した。
【０１２０】
市販の免疫抑制剤のうち、皮膚移植試験で拒絶反応防止に効果を示すものはFK506など少数が知られているが、低毒性で効果の高い免疫抑制剤は未だ知られていない。
【図面の簡単な説明】
【図１】一般式（１）で表される化合物(SQAG3)の濃度と免疫抑制能との関係を表すグラフである。
【図２】一般式（１）で表される化合物(SQAG5)の濃度と免疫抑制能との関係を表すグラフである。
【図３】一般式（１）で表される化合物(SQAG7)の濃度と免疫抑制能との関係を表すグラフである。
【図４】一般式（１）で表される化合物(SQAG9)の濃度と免疫抑制能との関係を表すグラフである。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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