(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
野菜、果物、海草、及び／又は穀物の酵母発酵物と、糖類を含み、酵母が寄託番号ＦＥＲＭ  Ｐ−１８５４０の酵母であることを特徴とする高血圧症、高脂血症、肥満症改善予防用液状組成物。
【請求項２】
請求項１に記載の液状組成物において、糖度が５０〜６０％であることを特徴とする高血圧症、高脂血症、肥満症改善予防用液状組成物。
【請求項３】
下記（Ａ）〜（Ｃ）工程を含むことを特徴とする高血圧症、高脂血症、肥満症改善予防用液状組成物の製造方法。
（Ａ）  野菜、果物、海草、及び／又は穀物に寄託番号ＦＥＲＭ  Ｐ−１８５４０の酵母を添加する工程。
（Ｂ）  前記（Ａ）工程後、糖類を添加し、原液を抽出する工程。
（Ｃ）  前記（Ｂ）工程後、原液を発酵・熟成する工程。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は、疾患改善予防用液状組成物及びその製造方法、特に機能性食品を用いた疾患改善予防用液状組成物及びその製造方法の改良に関する。
【０００２】
【従来の技術】
近年、食生活の多様性や美食ブームから一般的に若年層から肥満化の傾向にある。また、超高齢化社会やストレス化社会への突入に従って、加齢や生活習慣に関わる疾患が増加することが予測される。さらに循環系疾患の中でも高血圧症は肥満や運動不足から増加する傾向にある。
【０００３】
遺伝的素因と日常生活上の不摂生（塩分の過剰摂取、ストレス、運動不足、アルコール、肥満など）以外に高血圧の原因が見つからない場合、本態性高血圧と呼ばれる。このタイプの高血圧は一般に中年以降に発症することが多く、糖尿病やその一歩手前である耐糖能障害、あるいは高脂血症・脂質代謝異常、肥満などの成人病を伴いやすいことが知られている。実際１ｋｇの減量で血圧が１〜２mmHg低下するといわれている。
【０００４】
従来の高血圧疾患に対する治療法としては、Ｃａ拮抗薬、β受容体作動薬、アンギオテンシン転換酵素阻害薬を用いる方法が効果的であり、広範に用いられている。しかし、これらの薬物による長期治療での副作用の発現は、患者にとって治療を拒否する原因となっている。
また、肥満の改善方法としては、運動療法、食事療法が主流となっているが、いずれも継続が困難である。
このため、副作用を生じる可能性が低い自然食品や健康食品（機能性食品を含む）に対する関心が高まっている。
【０００５】
【発明が解決しようとする課題】
しかしながら、従来の機能性食品においては、高血圧症、高脂血症及び肥満症等の改善・防止効果が必ずしも十分ではなく、より効果的な機能性食品が望まれていた。
本発明は、上記従来技術の課題に鑑みなされたものであり、その目的は、副作用を生じる可能性が低く、且つ優れた高血圧症、高脂血症及び肥満症等の改善・防止効果を持つ疾患改善予防用組成物、及びその製造方法を提供することにある。
【０００６】
【課題を解決するための手段】
前記目的を達成するために、本発明者らが鋭意検討を行った結果、酵母を添加した植物抽出液を熟成発酵させた液状組成物は、優れた高血圧症、高脂血症及び肥満症等の改善・防止効果を持つことを見出し、本発明を完成するに至った。
【０００７】
すなわち、本発明の第一の主題は、野菜、果物、海草、及び／又は穀物の酵母発酵物と、糖類を含み、酵母が寄託番号ＦＥＲＭ  Ｐ−１８５４０の酵母であることを特徴とする高血圧症、高脂血症、肥満症改善予防用液状組成物である。
前記液状組成物において、糖度が５０〜６０％であることが好適である。
【０００８】
本発明の第二の主題は、下記（Ａ）〜（Ｃ）工程を含むことを特徴とする疾患改善予防用液状組成物の製造方法である。
（Ａ）  野菜、果物、海草、及び／又は穀物に寄託番号ＦＥＲＭ  Ｐ−１８５４０の酵母を添加する工程。
（Ｂ）  前記（Ａ）工程後、糖類を添加し、原液を抽出する工程。
（Ｃ）  前記（Ｂ）工程後、原液を発酵・熟成する工程。
【０００９】
【発明の実施の形態】
以下、本発明の好適な実施形態を詳細に説明する。
本発明の疾患改善予防用液状組成物において、原材料となるのは旬の物を中心とした野菜、果物、海草、及び穀物等である。
例えば、キャベツ、ホウレンソウ、ニンジン、パセリ、ナス、ピーマン、トマト、キュウリ、カブ、大根、春菊、小松菜、モロヘイヤ、蓮根、サツマイモ、ジャガイモ、ショウガ、リンゴ、ミカン、レモン、カキ、モモ、スイカ、ブドウ、ナシ、イチゴ、パイナップル、キウイ、バナナ、米、麦等が好適に用いられる。
【００１０】
図１に示す製造方法について、詳しく説明する。
洗浄・水切り
初めに原材料となる野菜、果物、海草、及び穀物等を水で洗浄し、水切りする。この時使用する水は、清浄なものであれば特に限定されないが、塩素の含有量の少ない地下水等を使用することが好ましい。また、洗浄時には洗剤等を使用しないことが好ましい。
【００１１】
仕込み・酵母添加
次に水切りした原材料を適当な大きさに刻み、容器に入れ、酵母を添加する。容器は発酵に適するものであれば特に制限されないが、木桶を使用することが好適である。また、原材料を刻む方法は特に限定されないが、栄養素の破壊を防止するため、刃物の使用は最小限にとどめることが好ましい。加熱に強い抽出物を得るために、酵母は寄託番号ＦＥＲＭ  Ｐ−１８５４０の酵母を使用することが特に好適である。酵母の添加量は、その種類等にもより特に限定されないが、原材料１ｇ当たり１０６〜１０７個程度であることが好適である。
なお、本発明にかかる酵母は、平成１３年９月２０日付でＦＥＲＭ  Ｐ−１８５４０として工業技術院生命工学工業技術研究所に受託されている。
【００１２】
なお、本発明にかかる酵母ＦＥＲＭ  Ｐ−１８５４０は、識別のための表示をＦＣＥ  Shizosaccharomyces sp.といい、科学的性質等は以下の通りである。
１．科学的性質…炭素源と窒素源を含む栄養培地下において白色〜クリーム色のコロニーを形成する。光学的顕微鏡下において、細胞の中央に隔壁を生じて分裂する形態が観察される。母細胞と娘細胞の区別はできない。
２．分類学上の位置…酵母菌：食用酵母
３．培養条件
▲１▼培地名…ＳＭＹＡ培地（Ｓ：サッカロース、Ｍ：マルトエキストラクト、Ｙ：イーストエキストラクト、Ａ：寒天）
▲２▼培地の組成…培地１０００ｍｌ当たり
１％サッカロース  １０ｇ、１％マルトエキストラクト  １０ｇ、０．４％イーストエキストラクト  ４ｇ、２％寒天  ２０ｇ
【００１３】
▲３▼培地のｐＨ…５．０〜７．０（最適ｐＨ５．５）
▲４▼培地の殺菌条件…１２１℃  ２０分
▲５▼培地温度…３２℃
▲６▼培養期間…１０日間
▲７▼酸素要求性…好気性
【００１４】
４．保管条件
凍結法にて保管できる。
▲１▼凍結条件…−８０℃
▲２▼保護剤…１０〜２０％グリセリン水溶液（最適は２０％）
▲３▼凍結後の復元率…１年で１００％、３年で９９％
【００１５】
５．生存試験の条件
▲１▼微生物の復元…４０℃
▲２▼接種・培養・確認法…培養条件と同一条件による。
【００１６】
糖添加・原液抽出
次に糖添加し、浸透圧により栄養素を破壊することなく、抽出する。また、抽出操作は常圧下、常温下で行うことが好ましいが、１〜５気圧、６０〜１５０℃の加圧、加熱下で抽出してもよい。加える糖はブドウ糖、果糖、麦芽糖、乳糖、ショ糖、蜂蜜、エリスリトール等が好適である。添加量は、糖度３０〜４０％となるようにすることが好適である。３０％より少ないと、腐敗する恐れがあり、４０％より多いと、酵母の発酵を妨げてしまう。
【００１７】
糖添加
さらに糖添加する。加える糖はブドウ糖、果糖、麦芽糖、乳糖、ショ糖、蜂蜜、エリスリトール等が好適である。添加量は抽出物に対して、５０〜６０質量％であることが好適である。５０質量％より少ないと、腐敗する恐れがあり、６０質量％より多いと、糖度が高すぎて本発明の効果が損なわれてしまう恐れがある。
以下の工程においては、糖度が５０％未満とならないように調製することが好ましい。
【００１８】
熟成発酵
次に熟成発酵させる。
熟成発酵の条件としては、１５〜４０℃、特に好ましくは２０〜３５℃の温度下で、１〜７時間、特に好ましくは２〜５時間熟成発酵させることが望ましい。である。１５℃より低い温度、あるいは１時間より熟成発酵期間が短いと、本発明の効果が十分に発揮されず、４０℃を越える温度、あるいは５時間より長く熟成発酵させても、本発明の効果がよりあがることは期待できない。
【００１９】
原液熟成
さらに熟成させる。熟成の条件としては、２〜２０℃、特に好ましくは５〜１２℃の温度下で、１５〜３０時間、特に好ましくは１８〜２５時間熟成させることが望ましい。１５時間より熟成期間が短いと、本発明の効果が十分に発揮されず、２５時間より長く熟成させても、本発明の効果がよりあがることは期待できない。また、２０℃を越える温度であると品質を損なう恐れがある。
【００２０】
濾過・滅菌
次に原液を濾過し、雑菌を滅菌する。
滅菌の条件は温度９０〜１３０℃、時間１秒間〜５分間であることが好適である。９０℃未満又は１秒間未満であると、雑菌が十分滅菌できず、１３０℃を越える温度又は５分より長い時間であると、本発明の効果が薄れてしまう恐れがある。
滅菌には通常の滅菌機を用いることができ、例えばプレート式滅菌機、チューブラー式滅菌機、ジャケット付きタンク等を使用することができる。
【００２１】
また、冷却には通常の冷却機を用いることができ、例えば熱交換プレート、チューブラー式冷却機、ジャケット付きタンク等を使用することができる。
【００２２】
充填・殺菌
上記の工程により、できた液状組成物を殺菌処理した瓶等の容器に充填、打栓し、最終殺菌する。
【００２３】
本発明の疾患改善予防用液状組成物には、本発明の趣旨に反しない公知の賦形剤や添加剤を必要に応じて適宜加えることができる。
本発明の疾患改善予防用液状組成物は、常法により加工して錠剤、カプセル剤、顆粒剤、散剤、液剤等の製剤とすることができる。
また、必要に応じて着色剤、芳香剤、矯味剤等を加えることもできる。
【００２４】
本発明の疾患改善予防用液状組成物は経口投与して、高血圧症、高脂血症及び肥満症等の発症予防あるいは治療のために適用する。摂取量は症状により異なり特に限定されないが、成人（体重６０ｋｇ）１日当たり１〜１５ｍｌ、特に６〜９ｍｌであることが好適である。１ｍｌより少ないと所望の効果を奏することが難しくなり、１５ｍｌを越えて摂取してもさらなる効果は認められない場合がある。
【００２５】
【実施例】
以下、実施例を挙げて本発明をさらに詳細に説明するが、本発明はこれに限定されるものではない。
１．高血圧症改善予防剤
（１）試験ラットの飼育、及び被験薬の投与方法
▲１▼予備飼育（６〜７週齢）
日本チャールスリバー（株）より購入した６週齢の雄性自然発症高血圧ラット（ＳＨＲ）、及び正常血圧のウィスター京都ラット（ＷＫＹ）を、室温２２±１℃、湿度６０±１０％に調節された飼育室において、白色蛍光灯で１日１２時間（７〜１９時明期）の光調節を行い、飼料及び水道水を自由摂取させ１週間予備飼育した。
予備飼育後、各個体の体重測定及び血圧測定を行い、１群１０頭とし、体重の平均値がほぼ等しくなるようにＳＨＲラットをＡ〜Ｄ群に、ＷＫＹラットをＥ〜Ｆ群に分類した。
【００２６】
▲２▼被験薬（液状組成物）の抽出方法
野菜、果物等の原材料５ｋｇを洗浄し、水切りする。次に水切りした原材料を適当な大きさに刻み、容器に入れ、酵母（寄託番号ＦＥＲＭ  Ｐ−１８５４０の酵母）を添加する。次にショ糖・麦芽糖を糖度５０％となるよう添加し、浸透圧により原液を抽出する。さらに麦芽糖を糖度５０％となるよう添加する。１５℃下で５時間熟成発酵させる。さらに１２℃下で２５時間熟成させる。これを濾過し、１００℃で３０分滅菌する。
【００２７】
▲３▼被験薬投与方法（８〜２０週齢）
下記の要領で、各群のラットに被験薬投与を行い、８週齢からさらに１２週間、２０週齢まで飼育した。飼料と水道水を各群とも自由摂取させた。飼育室の環境は、温度２２±１℃、湿度６０±１０％、白色蛍光灯で１日１２時間の採光下（７〜１９時明期）とした。
各被験薬はすべて経口投与とし、毎日午前１０時より施行し、被験薬飲用後は滅菌水を自由摂取させた。なお、どの群においても被験薬投与により、飼料摂取量は変化しなかったが、水の摂取量は用量依存的に増加した。しかしながら、水の摂取量は９ｍｌ投与のＤ群においても、無投与のＡ、Ｅ群の２倍以内であった。
【００２８】
Ａ群：ＳＨＲラット：無投与
Ｂ群：ＳＨＲラット：１日に体重１ｋｇ当たり前記被験薬３ｍｌを投与する。
Ｃ群：ＳＨＲラット：１日に体重１ｋｇ当たり前記被験薬６ｍｌを投与する。
Ｄ群：ＳＨＲラット：１日に体重１ｋｇ当たり前記被験薬９ｍｌを投与する。
Ｅ群：ＷＫＹラット：無投与
Ｆ群：ＷＫＹラット：１日に体重１ｋｇ当たり前記被験薬６ｍｌを投与する。
【００２９】
（２）結果
▲１▼血圧検査
血圧検査は週１回、被験薬投与前に行った。
結果を表１に示す。
【００３０】
0003806009.tif 000002
【００３１】
表１より、ＳＨＲラット（Ａ〜Ｄ群）はＷＫＹラット（Ｅ〜Ｆ群）と比較して、血圧値が高かったが、ＳＨＲラット無投与群（Ａ群）と比較して、９ｍｌ投与のＤ群では８週齢当たりから、６ｍｌ投与のＣ群では１６週齢当たりから血圧上昇が抑制される傾向が見られた。また、ＷＫＹラットにおいても、１９週齢当たりから血圧上昇が抑制される傾向が見られた。
よって、抽出物を投与することにより、用量依存的に高血圧治療効果があることがわかった。また、正常血圧である場合にも、加齢性の血圧上昇を抑制することがわかった。このように従来の高血圧治療薬のように単に血圧を下げるのではなく、血圧を正常値に近づける効果があり、より安全に服用できることがわかる。
【００３２】
▲２▼血液検査
実験最終日の前日に全ラットを絶食させ、翌日に深麻酔（ネンブタール,45mg/kg,i.p.）し、左心室から20Ｇ採血針で可能な限り採血を行った。
採取した血液を用いて、下記の項目において生化学的検査（自動化学分析装置：Auto Lab, Radio lmmuno Assay 法）を行った。得られた成績は、群間比較をWilcoxon U-testで解析し、１％以内の危険率を持って有意差があると判定した（ｐ＜０．０５）。なお、すべての値は平均値と標準誤差値で表示した。
結果を表２に示す。
【００３３】
0003806009.tif 000003
【００３４】
総コレステロール、遊離コレステロール、ＨＤＬ−Ｃｈｏ、ＬＤＬ−Ｃｈｏ
表２より、ＳＨＲラット（Ａ〜Ｄ群）はＷＫＹラット（Ｅ〜Ｆ群）と比較して、遊離コレステロール、及びＬＤＬ−Ｃｈｏの値が高いことがわかった。
コレステロールは、生体細胞膜の構成成分として細胞の形態・機能の維持およびステロイドホルモン、胆汁酸の前駆物質として必須の成分である。血液中コレステロールの70％はエステル型で、残りが遊離型として存在するが、その和を総コレステロールと呼んでいる。
【００３５】
遊離コレステロールは、血中に存在している総コレステロールの一部であり、 Tchoの約70％がエステル型、残りの約30％がFchoとして存在する。 Fchoを測定することで、脂質代謝異常をきたす疾患の推測ができる。
またコレステロールは、善玉コレステロール（ＨＤＬ−Ｃｈｏ）と、悪玉コレステロール（ＬＤＬ−Ｃｈｏ）とに分けられる。ＬＤＬ−Ｃｈｏは動脈硬化を促進し、ＨＤＬ−Ｃｈｏは血管壁に付着したＬＤＬ−Ｃｈｏを取り除く働きをする。
よって、これらを測定することにより、脂質代謝異常をきたす疾患の推測ができる。
【００３６】
Ａ群と比較して、Ｃ、Ｄ群では遊離コレステロール、及びＬＤＬ−Ｃｈｏの低下が見られ、Ｅ群の値に近づいた。一方、善玉コレステロールであるＨＤＬ−Ｃｈｏは低下することがなかった。また、正常ラットである場合には抽出液投与により、これらの値には目立った変化（異常）を示さなかった。
よって、高血圧治療効果に伴い、脂質代謝異常の改善効果を有することが推察される。
【００３７】
中性脂肪
表２より、ＳＨＲラット（Ａ〜Ｄ群）はＷＫＹラット（Ｅ〜Ｆ群）と比較して、中性脂肪値が高いことがわかった。
中性脂肪は、蛋白と結合して水溶性のリポ蛋白として存在する。 中性脂肪の測定は、脂質代謝異常をきたす疾患の診断、予後の判定などの指標として実施される。
Ａ群と比較して、Ｃ、Ｄ群では中性脂肪の低下が見られ、Ｅ群の値に近づいた。また、正常ラットである場合には抽出液投与により、中性脂肪の値には目立った変化（異常）を示さなかった。
よって、中性脂肪値の測定においても、高血圧治療効果に伴い、脂質代謝異常の改善効果を有することが確認された。
【００３８】
β−リポタンパク
表２より、ＳＨＲラット（Ａ〜Ｄ群）はＷＫＹラット（Ｅ〜Ｆ群）と比較して、βリポタンパク値が高いことがわかった。
βリポタンパクは、 電気泳動法によりβ位に泳動されるリポ蛋白の総称である。 主な機能はコレステロールを肝臓から各臓器に移送することである。βリポタンパクの測定は、高リポタンパク白血症などの脂質代謝異常疾患の指標とされる。
Ａ群と比較して、Ｂ〜Ｄ群ではβリポタンパク値の低下が見られ、Ｅ群の値に近づいた。一方、正常ラットである場合には抽出液投与により、βリポタンパク値には目立った変化（異常）を示さなかった。
よって、βリポタンパク値においても高血圧治療効果に伴い、脂質代謝異常の改善も見られることが確認された。
【００３９】
尿素窒素、クレアチニン、尿酸
表２より、ＳＨＲラット（Ａ〜Ｄ群）はＷＫＹラット（Ｅ〜Ｆ群）と比較して、尿素窒素、クレアチニン、尿酸の値が高いことがわかった。
尿素窒素は、蛋白の最終代謝産物である尿素中の窒素のことである。 尿素は肝で尿素サイクルを経て生成する窒素成分で、血中に放出され腎臓から排泄される。 尿素窒素値は、食品として摂取される蛋白および異化蛋白量と腎臓での排泄量に支配されており、肝・腎機能の指標となる。
【００４０】
クレアチニンは、血中非蛋白性窒素化合物の１つである。 尿素や尿酸などと同様に腎を介して尿中に排泄される。 クレアチニンの測定は、腎機能の指標に用いられる。
【００４１】
尿酸は肝臓、筋肉、骨髄で生成される核酸構成成分であるプリン体の最終代謝産物である。 尿酸は組織で分解され、少量は胆汁・腸に、大部分は尿中に排泄される。 尿酸の測定は、腎臓における尿酸排泄異常の診断に利用される。
尿素窒素値は、Ａ群と比較して、Ｄ群では低下が確認され、Ｅ群の値に近づいた。クレアチニン値は、Ａ群と比較して、Ｂ〜Ｄ群、特にＤ群では低下する傾向が見られ、Ｅ群の値に近づいた。尿酸値は、Ａ群と比較して、Ｂ〜Ｄ群ではの低下が見られ、Ｅ群の値に近づいた。一方、正常ラットである場合には抽出液投与により、これらの値には目立った変化（異常）を示さなかった。
よって、高血圧治療効果に伴い、肝・腎機能の改善も見られることが確認された。
【００４２】
Ａ／Ｇ比、白血球数
表２より、ＳＨＲラット（Ａ〜Ｄ群）はＷＫＹラット（Ｅ〜Ｆ群）と比較して、Ａ／Ｇ比、白血球数が低いことがわかった。
Ａ／Ｇ比は、血漿蛋白であるアルブミン（Alb）と総グロブリン（Glob）の比率であり、 その値はAlbとGlobの相対的変動に依存する。 Ａ／Ｇ比は体内の蛋白質代謝の指標として利用されるが、臨床的に問題となるのは、 Ａ／Ｇ比の低下であり、Ａ／Ｇ比を知ることで全身の一般状態を推測できる。
Ａ／Ｇ比は、Ａ群と比較して、Ｂ〜Ｄ群ではＡ／Ｇ比が上昇する傾向が見られ、Ｅ群の値に近づいた。
【００４３】
また、白血球数はＡ群と比較して、Ｂ〜Ｄ群では上昇が見られた。
一方、正常ラットである場合には抽出液投与により、これらの値には目立った変化（異常）を示さなかった。
よって、これらのパラメーターの改善効果は高血圧治療効果の強い群と密接な関連を有することが推察される。
【００４４】
また、抽出液投与によって、総タンパク、アルブミン等には異常をきたすことはなかった。
よって血液検査から、本発明にかかる疾患改善予防用液状組成物投与により血圧降下作用を示しても、血液成分には異常をきたさないことが確認された。
【００４５】
２．肥満改善予防剤
Zuckerラットの遺伝形式は常染色体性の単純劣性遺伝様式を取り、病因遺伝子（fa遺伝子）をホモに持つ個体（fa/fa）のみが肥満を呈し（Zucker-fattyラット：(ZUC)-fa/fa）、ヘテロ接合体（fa/+）及び野生型（+/+）は肥満を呈さない（Zucker-leanラット：(ZUC)-lean）。Zucker-fattyラットは、生後４週齢頃より体重増加及び外観によって肥満状態が認められ、１０週齢頃までに急速に肥満が進行し、その後も徐々に進行する。さらに高脂血症、高インシュリン血症、高レプチン血症及び耐糖性の異常を示すことが知られている。このZucker-fattyラット及び比較としてZucker-leanラットを使用し、肥満改善効果について試験を行った。
【００４６】
（１）試験ラットの飼育、及び被験薬の投与方法
▲１▼予備飼育（５〜６週齢）
日本チャールスリバー（株）より購入した５週齢の雄性Zucker fattyラット、及び雄性Zucker-leanラットを、室温２２±１℃、湿度６０±１０％に調節された飼育室において、白色蛍光灯で１日１２時間（７〜１９時明期）の光調節を行い、飼料及び水道水を自由摂取させ１週間予備飼育した。
予備飼育後、各個体の体重測定を行い、１群５頭とし、体重の平均値がほぼ等しくなるようにZucker fattyラットをＧ〜Ｋ群に、Zucker-leanラットをＬ〜Ｍ群に分類した。
【００４７】
▲２▼被験薬（液状組成物）の抽出方法
野菜、果物等の原材料５ｋｇを洗浄し、水切りする。次に水切りした原材料を適当な大きさに刻み、容器に入れ、酵母（寄託番号ＦＥＲＭ  Ｐ−１８５４０の酵母）を添加する。次にショ糖・麦芽糖を糖度５０％となるよう添加し、浸透圧により原液を抽出する。さらに麦芽糖を糖度５０％となるよう添加する。１５℃下で５時間熟成発酵させる。さらに１２℃下で２５時間熟成させる。これを濾過し、１００℃で３０分滅菌する。
【００４８】
▲３▼被験薬投与方法（６〜１６週齢）
下記の要領で、各群のラットに被験薬投与を行い、さらに１０週間、１６週齢まで飼育した。飼料と水道水を各群とも自由摂取させた。飼育室の環境は、温度２２±１℃、湿度６０±１０％、白色蛍光灯で１日１２時間の採光下（７〜１９時明期）とした。
各被験薬はすべて経口投与とし、毎日午前１０時より施行し、被験薬飲用後は滅菌水を自由摂取させた。なお、どの群においても被験薬投与により、飼料摂取量は変化しなかったが、水の摂取量は用量依存的に増加した。しかしながら、水の摂取量は１２ｍｌ投与のＫ群においても、無投与のＧ、Ｌ群の２倍以内であった。
【００４９】
Ｇ群：Zucker-fattyラット：無投与
Ｈ群：Zucker-fattyラット：１日に体重１ｋｇ当たり前記被験薬３ｍｌを投与する。
Ｉ群：Zucker-fattyラット：１日に体重１ｋｇ当たり前記被験薬６ｍｌを投与する。
Ｊ群：Zucker-fattyラット：１日に体重１ｋｇ当たり前記被験薬９ｍｌを投与する。
Ｋ群：Zucker-fattyラット：１日に体重１ｋｇ当たり前記被験薬１２ｍｌを投与する。
Ｌ群：Zucker-leanラット：無投与
Ｍ群：Zucker-leanラット：１日に体重１ｋｇ当たり前記被験薬６ｍｌを投与する。
【００５０】
（２）結果
▲１▼体重変動
体重測定は週１回、被験薬投与前に行った。各群ラットの体重の平均値を求めた。結果を表３に示す。
0003806009.tif 000004
【００５１】
表３より、Zucker-fattyラット（Ｇ〜Ｋ群）はZucker-leanラット（Ｌ〜Ｍ群）と比較して、体重の増加が激しかったが、Zucker-fattyラット無投与群（Ｇ群）と比較して、投与群（Ｈ〜Ｋ群）では８週齢当たりから体重増加の抑制が見られた。体重増加の抑制効果は、用量が多い群ほど高かった。
また、正常体重であるZucker-leanラットにおいては、体重増加の抑制（異常）は見られなかった。
よって、抽出物を投与することにより、用量依存的に肥満を抑制する効果が見られることがわかった。また、体重増加抑制効果は肥満である場合にのみ働くため、服用が安全であることが確認された。
【００５２】
▲２▼血液検査
実験最終日の前日に全ラットを絶食させ、翌日に深麻酔（ネンブタール,45mg/kg,i.p.）し、左心室から20Ｇ採血針で可能な限り採血を行った。
採取した血液を用いて、下記の項目において生化学的検査（自動化学分析装置：Auto Lab, Radio lmmuno Assay 法）を行った。得られた成績は、群間比較をWilcoxon U-testで解析し、１％以内の危険率を持って有意な差があると判定した（ｐ＜０．０５）。なお、すべての値は平均値と標準誤差値で表示した。
結果を表４に示す。
【００５３】
0003806009.tif 000005
0003806009.tif 000006
【００５４】
中性脂肪、リン脂質、総脂質
表４より、Zucker-fattyラット（Ｇ〜Ｋ群）はZucker-leanラット（Ｌ〜Ｍ群）と比較して、中性脂肪、リン脂質、総脂質の値が高いことがわかった。
前述のように中性脂肪の測定は、脂質代謝異常をきたす疾患の診断、予後の判定などの指標として実施される。
【００５５】
リン脂質は、生体内において、細胞膜の構成成分として膜の透過性の維持に関与している。 血液中のリン脂質は、主に肝臓で合成され、リポ蛋白の表層成分として血中に分泌される。
総脂質とは、血中の脂質成分である総コレステロール、中性脂肪、遊離脂肪酸、 リン脂質等の総和である。総脂質の測定は、脂質代謝を総括的に把握するのに重要である。
【００５６】
Ｇ群と比較して、Ｈ〜Ｋ群では用量依存的に中性脂肪、リン脂質、及び総脂質の低下が見られ、Ｌ群の値に近づいた。また、細胞膜の構成成分として重要であるリン脂質は低下したものの、中性脂肪や総脂質と比較して低下が少なく、Ｌ群の値以下になることもなかった。
【００５７】
また、Zucker-leanラット（正常なラット）においては、これらの値に目立った変化（異常）はなかった。
よって、肥満抑制効果に伴い、脂質代謝の改善も見られることが確認された。
【００５８】
総コレステロール、遊離コレステロール、ＨＤＬ−Ｃｈｏ
表４より、Zucker-fattyラット（Ｇ〜Ｋ群）はZucker-leanラット（Ｌ〜Ｍ群）と比較して、総コレステロール、遊離コレステロールの値が高いことがわかった。
前述のようにコレステロール値を測定することにより、脂質代謝異常をきたす疾患の推測ができる。
Ｇ群と比較して、Ｈ〜Ｋ群では総コレステロール、遊離コレステロールが低下した。また、これら値の低下に対し、善玉コレステロールであるＨＤＬ−Ｃｈｏの値は低下することなく、むしろ上昇が見られた。また、Zucker-leanラット（正常なラット）においては、これらの値に目立った変化（異常）はなかった。
よって、コレステロール値においても肥満抑制効果に伴い、脂質代謝の改善が確認された。
【００５９】
βリポタンパク
表４より、Zucker-fattyラット（Ｇ〜Ｋ群）はZucker-leanラット（Ｌ〜Ｍ群）と比較して、βリポタンパクの値が高いことが確認された。
前述のようにβリポタンパクの測定は、高リポタンパク白血症などの脂質代謝異常疾患の指標とされる。
Ｇ群と比較して、Ｈ〜Ｋ群では用量依存的にβリポタンパク値の低下が見られ、Ｌ群の値に近づいた。よって、βリポタンパク値においても肥満抑制効果に伴い、脂質代謝異常の改善も見られることが確認された。
【００６０】
クレアチニン
表４より、Zucker-fattyラット（Ｇ〜Ｋ群）はZucker-leanラット（Ｌ〜Ｍ群）と比較して、クレアチニンの値が低いことがわかった。
前述のように、クレアチニンの測定は腎機能の指標に用いられる。
Ｇ群と比較して、Ｈ〜Ｋ群では用量依存的にクレアチニン値の上昇が見られた。よって、肥満抑制効果に伴い、腎機能の改善も見られることが確認された。
【００６１】
また、抽出液投与によって、総タンパク、アルブミン、Ａ／Ｇ比、尿素窒素値等には異常をきたすことはなかった。
よって血液検査から、本発明の疾患改善予防用液状組成物投与により肥満抑制効果に伴い、血液成分の改善が見られ、また正常な値については異常をきたさないことが確認された。
【００６２】
実施例１  疾患改善予防用液状組成物
野菜、果物等の原材料５ｋｇを洗浄し、水切りする。次に水切りした原材料を適当な大きさに刻み、容器に入れ、酵母（寄託番号ＦＥＲＭ  Ｐ−１８５４０の酵母）を添加する。次にショ糖・麦芽糖を糖度５０％となるよう添加し、浸透圧により原液を抽出する。さらに麦芽糖を糖度５０％となるよう添加する。１５℃下で５時間熟成発酵させる。さらに１２℃下で２５時間熟成させる。これを濾過し、１００℃で３０分滅菌する。
表５〜１１に各種成分の分析値を示す。
【００６３】
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【００６４】
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【００６５】
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【００６６】
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【００６７】
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【００６８】
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【００６９】
表より、本発明の疾患改善予防用液状組成物は、重金属や病原性一般生細菌を含有しない安全性の高いものであることが確認された。
【００７０】
【発明の効果】
本発明にかかる植物抽出液を主成分とした高血圧症、高脂血症、肥満症改善予防用液状組成物、及びその製造方法によれば、酵母が寄託番号ＦＥＲＭ  Ｐ−１８５４０の酵母を用いることにより、副作用を生じる可能性が低く、且つ優れた効果を持つ高血圧症、高脂血症、肥満症改善予防用液状組成物、及びその製造方法を提供することができる。
【図面の簡単な説明】
【図１】本発明にかかる疾患改善予防用液状組成物の製造方法のフローチャートである。
【図１】
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