(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
プロテアーゼと尿素の存在する条件下にアレルゲンを維持することにより、前記アレルゲンを不活性化することを特徴とするアレルゲン不活性化方法。
【請求項２】
更に熱も存在することを特徴とする請求項１に記載のアレルゲン不活性化方法。
【請求項３】
請求項１又は２に記載のアレルゲンを不活化する方法を行うためのアレルゲン不活性部を具備することを特徴とする空調機。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明の属する技術分野】
アレルゲンを不活性化する方法に関する。
【０００２】
【従来の技術】
近年、アレルギー問題がクローズアップされている。アレルゲンとしてはスギ花粉が有名であるが、住宅の高気密化など、最近の住宅事情により、ダニなどの害虫およびその排泄物などによるアレルギーも深刻化している。そのようなアレルギー対策として、従来から、種々の製品、例えば掃除機やモップなどのハウスダストをまとめて処理する掃除用具などが世に送り出されている。
【０００３】
また、一般的に行われているアレルギーから身を守る方法、即ち、アレルゲンを排除する方法としては以下のようなものがある。例えば、スギに代表される花粉の場合には、外出時に着用するマスクに花粉を通過させないような細かいメッシュを入れることによって体内に花粉が取り込まれないようにする方法が、また屋内では集塵機に代表される装置によってそれらを捕獲する方法などが行われている。しかしながら、集塵機などによって居住空間に存在する花粉を積極的に排除したとしても、それは空気中浮遊物質の一部として花粉が捕獲されるに過ぎない。従って、このような方法では積極的なアレルゲンの除去方法とは言い難い。
【０００４】
一方、ダニなどに代表される害虫由来のアレルゲンの場合、寝具やソファ、並びに畳や床などの清掃をこまめに行うことで害虫の存在量を減らし、それによってアレルゲン量を軽減させているのが現状である。しかしながら、このような方法では、一時的にアレルゲンの量は減少するものの、害虫が繁殖すればアレルゲン量も増加してしまう。従って、アレルゲン量を十分に低い値で維持するためには相当な人力が必要とされる。また、薬品を用いて害虫駆除を行うことも可能であるが、使用される薬品自体の人体に対する影響も考慮する必要があり、十分な方策とは言い難い。
【０００５】
【発明が解決しようとする課題】
このような状況に鑑み、本発明の目的は、アレルゲンを特異的に排除するアレルゲン不活性化方法及び空調機を提案することである。
【０００６】
【課題を解決するための手段】
上記の課題を解決するための鋭意研究の結果、本発明者らは、以下のような手段を見出した。即ち、（１）プロテアーゼと尿素の存在する条件下にアレルゲンを維持することにより、前記アレルゲンを不活性化することを特徴とするアレルゲン不活性化方法、（２）更に熱も存在することを特徴とする（１）に記載のアレルゲン不活性化方法、並びに（３）（１）又は（２）に記載のアレルゲンを不活化する方法を行うためのアレルゲン不活性部を具備することを特徴とする空調機である。
【０００７】
【発明の実施の形態】
１．アレルゲン不活化方法
アレルギーを引き起こす原因物質であるアレルゲンは、生物由来の蛋白質を主成分とする。本発明は、本発明者らが蛋白質を変性することによってアレルゲンを特異的且つ効果的に不活性化できることを明らかにしたことに基づく。従って、本明細書は、蛋白質の変性によりアレルゲンを不活性化できることを初めて報告するものである。ここで使用される「アレルゲン」または「アレルゲン物質」の語は、アレルゲンとして活性を有する物質を示す。
【０００８】
本発明に従うと、熱、アルカリ、酸およびプロテアーゼからなる群より選択される１の存在する条件下にアレルゲンを維持することによりアレルゲンを不活性化する方法が提供される。
【０００９】
従来では、一般的に蛋白質が、酸やアルカリによる化学的変性、高温での物理的変性、および蛋白質分解酵素による生化学的変性によって分解されることは知られている。しかしながら、このような蛋白質の変性によって、蛋白質が有するであろうエピトープとなり得る性質、即ち、アレルゲンとしての活性を特異的に不活化できることは報告されてはおらず、更にまた、生化学の知識で理解でき且つ効果的なアレルゲン不活性化方法はこれまでには報告されていない。今回本発明者らが、蛋白質の変性によりアレルゲンを不活性化できることを明らかにしたことは画期的なことである。
【００１０】
以下、熱、アルカリ、酸およびプロテアーゼを用いてアレルゲンを不活性化する方法に関して説明する。
【００１１】
（１）熱
本発明に従って、熱の存在する条件下でアレルゲンを不活性化する場合、例えば、約８０℃以上の場合であれば約６０分間、アレルゲンを熱に対して曝露すればよい。また、８０℃以下の温度であっても、例えば加熱時間を長くすればアレルゲンの不活性化は可能である。
【００１２】
本発明の１側面において、本発明は、アレルゲンの不活性化に熱を使用するというユニークで且つ新しい発想を基に達成された。従って、本発明において重要な点の１つは、温度や加熱時間などの条件ではなく、熱を利用してアレルゲンを不活性化すること自体にある。言い換えれば、熱によってアレルゲンを不活性化するために必要な温度や加熱温度の組み合わせなどの条件は、可能な組み合わせが本発明に含まれるものである。
【００１３】
またここで使用される「熱の存在する条件」とは、それ自身公知の熱源を用いてアレルゲンまたはこれを含む対象を加熱しても、或いは加熱した媒体を介して間接的にアレルゲンまたはこれを含む対象を加熱しても得ることが可能である。
【００１４】
（２）アルカリ
本発明に従って、アルカリの存在する条件下でアレルゲンを不活性化する場合、例えば、約２．５ＭのＮａＯＨが存在する条件、またはこれに類似する条件を達成し得る塩基性物質が存在する条件下でアレルゲンを存在させればよい。本発明においてアルカリの存在する条件を得るために使用できる塩基性物質は、水に溶解した場合に水酸化物イオンを生成する物質であればよい。例えば、これらに限られるものではないが、水酸化ナトリウムおよび水酸化カリウムなどの種々の塩、並びに強塩基性陰イオン交換樹脂などの物質でよい。また、アルカリ条件に加えて、熱を存在させれば、効率的に不活性化を行うことが可能である。アルカリと熱を組み合わせて処理する場合には、加熱温度と加熱時間を調節することにより、上述の条件よりも低濃度の塩基性物質または上述の強塩基に比較してアルカリ性の弱い弱塩基性物質を使用することによっても良好なアレルゲンの不活性化が達成され得る。
【００１５】
本発明の１側面において、本発明は、アレルゲンの不活性化にアルカリを使用するというユニークで且つ新しい発想を基に達成された。従って、本発明において重要な点の１つは、アルカリの存在に関する詳細な条件にあるのではなく、アルカリを利用してアレルゲンを不活性化すること自体にある。言い換えれば、アルカリによるアレルゲンの不活性化に関わるｐＨおよび塩基性物質の濃度、並びに加熱の有無や加熱温度および時間などの条件は、可能な全ての組み合わせが本発明に全て含まれるものである。
【００１６】
（３）酸
本発明に従って、酸の存在する条件下でアレルゲンを不活性化する場合、これに限定されるものではないが、例えば、約２．５Ｍの濃度でＨＣｌが存在する条件、またはこれに類似する条件を達成し得る酸性物質が存在する条件下でアレルゲンを存在させればよい。本発明において酸の存在する条件を得るために使用できる物質は、水に溶解した場合に水素イオンを生成する物質であればよい。例えば、これらに限られるものではないが、塩酸および硫酸などの酸、並びに強酸性陽イオン交換樹脂が含まれる。また、酸条件に加えて、熱を存在させれば、効率的に不活性を行うことが可能である。酸と熱を組み合わせて処理する場合には、加熱温度と加熱時間を調節することにより、上述の条件よりも低濃度の酸性物質または上述の強酸に比較して酸性の弱い弱酸性物質を使用することによっても良好なアレルゲンの不活性化が達成され得る。
【００１７】
上述の本発明の１側面において、本発明は、アレルゲンの不活性化に酸を使用するというユニークで且つ新しい発想を基に達成された。従って、本発明において重要な点の１つは、酸の存在に関する詳細な条件にあるのではなく、酸を利用してアレルゲンを不活性化すること自体にある。言い換えれば、酸によるアレルゲンの不活性化に関わるｐＨおよび酸性物質の濃度、並びに加熱の有無や加熱温度などの条件は、可能な全ての組み合わせが本発明に全て含まれるものである。
【００１８】
（４）プロテアーゼ
ここで使用される「プロテアーゼ」の語は、蛋白質およびペプチドを分解する性質を有する酵素を総括的に示す。本発明において使用できる酵素は、それ自身公知の酸性、中性および塩基性の何れのプロテアーゼであってよい。例えば、トリプシンなどのセリンプロテアーゼ、パパイン、カルパイン、カテプシンＢおよびカテプシンＬなどのシステインプロテアーゼ、ペプシン、レニンおよびカテプシンＤなどのアスパラギン酸プロテアーゼおよびメタロプロテアーゼなどのプロテアーゼであってよい。また、プロテアーゼによりアレルゲンを不活性化する場合、使用されるプロテアーゼの至適条件を考慮して、温度および補酵素などの条件を実施者が任意に選択してよい。
【００１９】
また、本発明に従ってプロテーゼによってアレルゲンを不活性化する場合には、使用されるプロテアーゼに加えて尿素を存在させれば、より効率的に不活性を行うことが可能である。
【００２０】
例えば、本発明に使用されるプロテアーゼの濃度は、例えば、ｐｆｕの場合、アレルゲン蛋白質０．４５μｇ当たり約１ユニットである。また、プロテアーゼを使用する場合、処理温度や処理時間および尿素の有無によって、得られる効果は変動する。従って、使用されるプロテアーゼの濃度は上記に限定されるものではなく、種々の条件で有効に使用することが可能である。
【００２１】
上述の本発明の１側面において、本発明は、アレルゲンの不活性化にプロテアーゼ、並びにプロテアーゼと尿素を併用して使用するというユニークで且つ新しい発想を基に達成された。従って、本発明において重要な点の１つは、それらの濃度および処理時間並びに加熱温度および加熱時間などの詳細な条件ではなく、プロテアーゼ、並びにプロテアーゼと尿素の併用処理を利用してアレルゲンを不活性化すること自体にある。言い換えれば、プロテーゼおよび尿素によるアレルゲンの不活性化に関わる酵素の種類および濃度、尿素の有無および尿素の濃度、並びに加熱の有無や加熱温度および時間などの条件は、可能な全ての組み合わせが本発明に全て含まれるものである。
【００２２】
２．空調機への利用
本発明の更なる側面に従うと、上述した方法を空調機に利用することが可能である。即ち、本発明は、熱、アルカリ、酸およびプロテアーゼからなる群より選択される１の存在する条件下にアレルゲンを維持することによりアレルゲンを不活性化する方法を行うためのアレルゲン不活性部を具備する空調機も提供するものである。
【００２３】
本発明に従って使用されるアレルゲン不活性部は、熱、アルカリ、酸およびプロテアーゼからなる群より選択される１の存在する条件下でアレルゲンを維持することが可能な手段であればよい。熱の存在下でアレルゲンを維持する場合には、それ自身公知の任意の加熱体を用いればよい。アルカリ、酸またはプロテアーゼの存在下でアレルゲンを維持する場合には、例えば、一般的なクロマトグラフィー技術を利用することが可能である。その場合、アルカリおよび酸を提供し得る化合物または酵素を、フィルターまたは粒子などの担体に固定化し、移動相に含まれるアレルゲンを処理すればよい。
【００２４】
本発明に従って使用され得るフィルターの例を以下に示す。
【００２５】
（１）熱によるアレルゲン不活性フィルター
本発明に従うフィルターの第１の例は、図１に示す通り、アレルゲンをトラップする不織布フィルター１１と、この不織布フィルター１１の片面に配置されたステンレス製面発熱体１２と、このステンレス製面発熱体１２を加熱するヒータ１３とを具備する（図１）。
【００２６】
ステンレス製面発熱体１２としては、これに限るものではないが、例えば、ステンレス線維をメッシュ状に編んだものが含まれる。ヒータ１３の電源は、通常アレルゲン不活性フィルター１４は空調機に組み込まれて使用されるので、空調機の電源を利用することが好ましい。ヒータ１３は、通常空調機がＯＦＦの時、所定の温度、時間加熱するが、短時間であれば空調機などの部品に損傷を与えない程度の高温で行い、長時間であれば低温で加熱する。しかし、温度および時間は部品の材質等に応じて適宜設定することができる。ヒータ１３による面発熱体１２の加熱によりアレルゲン蛋白質の変性が起こり、アレルゲンとしての活性が失われる。
【００２７】
（２）酸またはアルカリを保持させたアレルゲン不活性フィルター
本発明に従うフィルターの第２の例は、図２に示す通り、不織布フィルター２１に、強酸性陽イオン交換樹脂または強塩基性陰イオン交換樹脂を保持させたことを特徴とする（図２）。このようなフィルターは、以下に示すようなイオン交換樹脂（例えば、線維または粒状樹脂であってよい）を一般的なフィルターに織り込むことにより製造可能である。
【００２８】
ｉ）強酸性陽イオン交換樹脂
本発明では、例えば、一般式Ｒ−ＳＯ３・Ｈ（但し、Ｒは高分子基体を）で表される強酸性陽イオン交換樹脂を使用することが可能である。この樹脂は酸を用いて再生することが可能である。使用前には酸を用いて活性化しておく必要がある。
【００２９】
ｉｉ）強塩基性陰イオン交換樹脂
また、本発明では、例えば、以下の一般式で表される強塩基性陰イオン交換樹脂を使用することが可能である。この樹脂は塩基を用いて再生することが可能である。使用前には塩基を用いて活性化しておく必要がある。
【００３０】
【化１】
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【００３１】
酸またはアルカリの存在する条件下で維持されたアレルゲン蛋白質はそのｐＨ条件の作用によって変性され、アレルゲンとしての活性を失う。
【００３２】
（３）酵素を保持させたアレルゲン不活性フィルター
本発明に従うフィルターの第３の例は、図３に示す通り、吸水性ポリマーの径より小さいメッシュを有した第１の支持体３１と、この第１の支持体３１の片側に配置された、吸水性ポリマーの径より小さいメッシュを有した第２の支持体３２と、前記第１の支持体と第２の支持体間に配置された吸水性ポリマー層３４とを具備する（図３）。
【００３３】
酵素の担体としては、アクリル酸−ビニルアルコール共重合体、アクリル酸−ナトリウム重合体などの吸水性ポリマーを使用し得る。また、前記担体の吸水能は少なくとも乾燥重量１ｇの吸水性ポリマー当たり６００ｇ程度であることが好ましい。
【００３４】
前記第１および第２の支持体としては、例えば、樹脂製のものが挙げられるが、これに限るものではない。また、前記吸水性ポリマー３４は、所定数のプロテアーゼを含むことが好ましい。酵素を保持させたアレルゲン不活性フィルター３５は、例えば、担体を織り込んだフィルターを作製した後に酵素溶液をフィルターに塗布してもよく、担体に酵素溶液を塗布した後にこれをフィルターに織り込んでもよい。また、相対湿度（即ち、水分活性）を７０％以下に保つことによってカビ汚染も減少できる。更に、界面活性剤（例えば、０．１％程度）を共存させることによって更なる効果も期待できる。
【００３５】
アレルギーはアレルゲンが直接皮膚に接触することによっても生じるが、その多くは、空気中の浮遊アレルゲンを吸引することによって生じる。従って、空気中のアレルゲンを排除できれば、アレルギー症状を緩和できると考えられる。上述のような本発明に従う装置によって空気中に浮遊するアレルゲンを不活性化することが可能であり、それにより住環境の大幅な改善が期待できる。
【００３６】
【実施例】
以下、例を用いて本発明を更に詳しく説明する。
【００３７】
１．方法および材料
（１）アレルゲンの検出
アレルゲンの存在を検出するためには、人間や動物が持っているアレルギー反応に類似する検出システムを採用することが望ましい。以下の試験では、本発明者らは、アレルギー反応が抗体抗原反応であることから、抗体を使った測定法を採用した。
【００３８】
（２）アレルゲン
以下の例において行った試験では、アレルゲンの１つとしてダニ抽出物を使用した。また、使用したダニ抽出物は、コスモバイオ社から入手したダニ抽出物−Ｄｆ（これはダニ虫体をリン酸緩衝液ですりつぶしその上清を凍結乾燥した物である）であり、この１０ｍｇを、処方箋に従って２．５ｍＬのＰＢＳ溶液に溶解した。得られた溶液を以下、ダニ原液と称し、使用時にはＰＢＳ溶液で適当な濃度に希釈して実験に用いた。
【００３９】
２．実施例
（１）方法
実施例１  アレルゲン測定１
本例では、ウエスタンブロッティング法（一般的にはドットブロット法とも称する）によってダニ抽出物中のダニアレルゲンの測定を行った。使用したダニ抽出物の量は蛋白質量として０．０１、０．０８３、０．２５、０．８３および２．５μｇである。
【００４０】
ダニ抽出物に対する抗体は、ダニ抽出物で免役したウサギの全血清（コスモバイオ社から入手した、使用時には２５００倍希釈した）を用いた。また、ウサギ全血清に対する抗体は、西洋わさびペルオキシダーゼで修飾したウサギＩｇに対する抗体（アマシャム社製）を用いた。使用前に１０００倍に希釈してから使用した。
【００４１】
アレルゲンの検出には、アマシャム社製のウエスタンブロッティング検出システムであるＥＣＬ＋Ｐｌｕｓを用い、製造元のマニュアルに従って行った。その他の操作手順は一般的な方法に準じて行った。
【００４２】
ダニ抽出物濃度に依存して得られた発光量から、ダニ抽出物中のダニアレルゲン量に関する検量線を取得した。図４はウエスタンブロッティングの結果を示す模式図である。図４から明かであるように得られた発光量は濃度依存的に増大した。従って、ダニ抽出物中の蛋白量はダニアレルゲン量を反映していることが明かになった。また、ウエスタンブロッティングにより得られた発光量を数値化して得た検量線を図５に示す。
【００４３】
実施例２  アレルゲン測定２
本例を含む以下の例では、サンプル中のダニアレルゲンの相対量をダニスキャンによって測定した。まず、ダニスキャンの定量性を確認するために、ダニ抽出物中のダニアレルゲンについての検量線を作製した。
【００４４】
前記ダニ原液をＰＢＳ溶液で希釈した溶液について、ダニアレルゲン測定システムとしてダニスキャン（DaniScan、登録商標、アサヒビール薬品社製）を用いてアレルゲンを検出した。
【００４５】
ダニスキャンは、抗原抗体反応を利用して簡易にダニアレルゲンを検出できるキットである。図６に示すダニスキャンに具備されるちり採取器１のサンプル添加部２に被検サンプルを添加し、そこに現像液を添加すれば、被検サンプル中のダニアレルゲンの量を反映したバンド３が得られる。前記バンドから被検サンプル中の相対的なアレルゲンを検出することが可能である。本明細書において、ダニスキャンの各バンドは、便宜上「太実線」、「中太実線」「細実線」、「破線」および「表示なし」で示し、これらの表示は、「太実線」＞「中太実線」＞「細実線」＞「破線」＞「表示なし」の順で４段階の発色強度を模式的に示している。
【００４６】
また、サンプル中に含まれるダニアレルゲン量は、ダニ抽出物中のダニ抗原に結合したダニ抗体に由来する発色強度のピーク値（Ｔ）とダニ抗原に結合しなかったダニ抗体に由来する発色強度のピーク値（Ｃ）から、以下の式に従ってピーク比を求めることによって評価した。図７にダニスキャン上の位置と発色強度の関係を示すグラフを示す。ここで前記ピーク値（Ｔ）とピーク値（Ｃ）は図７中の「Ｃ」と「Ｔ」のピークに相当する。
【００４７】
発色強度からピークＣとピークＴの発色強度からピーク比を求めるための式は；
ピーク比（％）＝Ｔ／（Ｔ＋Ｃ）＊１００
である。このとき、Ｃ＞Ｔであればサンプル中のダニアレルゲン量は少なく、Ｔ＞Ｃであればサンプル中にダニアレルゲンが大量に存在していることを示す。
【００４８】
図６に、ダニアレルゲン陽性（即ち、アレルゲンが多く存在する場合）のバンドが示されたダニスキャンの模式図を示す。Ｃの位置のバンドはダニ抗原に結合しなかったダニ抗体に由来するバンドであり、Ｔの位置のバンドはダニ抗原に結合したダニ抗体に由来するバンドである。図８にダニ抽出物中に存在するダニアレルゲンに関する検量線を示す。
【００４９】
実施例３  熱によるアレルゲンの不活性化
熱処理によるダニアレルゲン不活性化作用を証明するために以下の実験を行った。
【００５０】
ダニ原液のＰＢＳ溶液による１０倍希釈液を調製した。得られた１０倍希釈液を７本のマイクロチューブに分注し、そのうちの１本を加熱時間０分の対照区とした。残りの６本をヒートブロック上で８０℃に加熱し、それぞれ、１０、２０、３０、４０、５０および６０分間維持した。これを処理区とした。加熱終了後、氷上にて冷却した。その後、各サンプルからそれぞれ５μＬずつを抜き取ってダニスキャンに添加してアレルゲンの検出を行った。添加した５μＬには蛋白質として２μｇのダニ抽出物が含まれていることになるので、１ダニスキャン当たり２μｇのダニ抽出物を添加したことになる。
【００５１】
熱処理時間とサンプル中のダニアレルゲン量の関係を示す結果を図９のグラフに示す。図９のグラフの縦軸には、対照区におけるピーク比を１００とした、処理区における相対ピーク比を示し、横軸には熱処理時間を示す。
【００５２】
前記グラフから明かであるように、熱処理によりアレルゲンは不活性化された。特に加熱処理１時間後にはかなりのアレルゲンが不活性化した（図９）。
【００５３】
実施例４  アルカリによる不活性化
アルカリ処理によるダニアレルゲン不活性化作用を証明するために以下の実験を行った。
【００５４】
まず、氷上で５本のマイクロチューブ内で、それぞれダニ原液５０μＬと５Ｍ水酸化ナトリウム５０μＬを混合した。得られた混合液の水酸化ナトリウムの終濃度は２．５Ｍである。それらのマイクロチューブを４０℃と６０℃の温度条件下で、それぞれ０、１０および３０分間維持した。反応終了後、５Ｍ塩酸５０μＬを加えて氷上で中和した。その後、得られた反応液の各１μＬ（蛋白質として１．３３μｇダニ抽出物／ダニスキャン）をダニスキャンに添加し、ダニアレルゲンを検出した。図１０に結果を示す。図１０は反応後のダニスキャンに見られるバンドを模式的に示した図である。図１０の１は処理なしから得た結果（即ち、１ダニスキャン当たり１．３３μｇのダニ抽出物のみを添加した結果）であり、これは対照サンプルである。図１０の２から４は、ダニ抽出物について４０℃でそれぞれ０分、１０分および３０分間に亘ってアルカリ処理を行った結果である。図１０の５および６は、ダニ抽出物について、６０℃で、それぞれ０分および１０分間アルカリ処理した場合の結果である。図１０から明かであるように４０℃および６０℃ともに、１０分間の処理でアレルゲンが不活性化した（図１０）。
【００５５】
実施例５  酸による不活性化
酸処理によるダニアレルゲン不活性化作用を証明するために以下の実験を行った。
【００５６】
まず、４本のマイクロチューブにダニ原液５０μＬと５Ｍ塩酸５０μＬを氷上で混合した。得られた混合液の塩酸の終濃度は２．５Ｍである。それらのマイクロチューブを６０℃の温度条件下で、それぞれ０、１０、３０および６０分間維持した。反応終了後、５Ｍの水酸化ナトリウム５０μＬを加えて氷上で中和した。得られた反応液の各１μＬ（蛋白質として０．１３３μｇダニ抽出物／ダニスキャン）をダニスキャンに添加し、ダニアレルゲン量を測定した。
【００５７】
図１１に結果を示す。図１０は反応後のダニスキャンに見られるバンドを模式的に示した図である。図１１の１は処理なし（即ち、１ダニスキャン当たり蛋白質として１．３３μｇのダニ抽出物を添加した）であり、これを対照サンプルとした。図１１の２から５は、ダニ抽出物を６０℃でそれぞれ０分、１０分、３０分および６０分間酸処理した場合の結果を示す。図１１から明かであるように６０℃で６０分間の酸処理により大部分のアレルゲンが不活性化されたことが確認された。
【００５８】
実施例６  プロテアーゼによる不活性化１
プロテアーゼによるダニアレルゲン不活性化作用を証明するために以下の実験を行った。
【００５９】
まず、３本のマイクロチューブのそれぞれに、ダニ原液９０μＬとｐｆｕ  プロテアーゼＳ（以下、ｐｆｕと記す、宝酒造社製）の８μＬ（０．８ユニット）を氷上で加えた。これらのうち１本を０℃で１０分、他の１本を９５℃で１０分間、残りの１本を８０℃で１０分の加熱を行った。酵素添加なしの対照サンプルについては９５℃で１０分間の加熱を行った。これらの熱処理後、全てのマイクロチューブを氷上に戻し、プロテアーゼ阻害剤であるフェニルメチルスルホニルフルオリド（以下、ＰＭＳＦと記す）溶液を加えた（ＰＭＳＦの終濃度は４ｍＭ）。
【００６０】
その後、ＰＭＳＦを加えた各サンプルから５μＬを抜き取ってダニスキャンに添加してダニアレルゲンを検出した。このとき１ダニスキャン当たり蛋白量として１８μｇのダニ抽出物が含まれる。
【００６１】
結果は図１２に示した。図１２の１は酵素添加し、０℃で１０分間反応したサンプル、図１２の２は酵素なしで９５℃１０分間維持した対照サンプル、３は酵素添加で９５℃で１０分間処理したサンプル、４は酵素添加で８０℃１０分間処理したサンプルについての結果を示す。図から明かであるように、上述の至適温度でのプロテアーゼ処理を１０分間行えば、ダニアレルゲン活性は失活できる。
【００６２】
実施例７  プロテアーゼによる不活性化２
次にプロテアーゼと尿素を併用した場合のダニアレルゲン不活性化作用を証明するための実験を行った。
【００６３】
３本のマイクロチューブのそれぞれに、ダニ原液２０μＬとｐｆｕの３．２μＬ（０．３２ユニット）を氷上で加え、更にＰＢＳ溶液で調製した１０Ｍの尿素の１６．８μＬを加えた。尿素の最終濃度は４．２Ｍである。これらを次に６０℃で０、１０および３０分間加熱した。加熱後、氷上に戻し反応を終了した。得られたサンプルからそれぞれ１μＬを抜き取ってダニスキャンによりアレルゲンを検出した。このとき、１つのダニスキャンに添加したダニ抽出物は蛋白量として２μｇである。この結果は図１３の１から３に示す。図１３の１、２および３は、それぞれ、６０℃で０、１０および３０分間加熱したサンプルについての結果である。
【００６４】
更に以下の試験を同様に行った。４本のマイクロチューブのそれぞれに、ダニ原液１２μＬとｐｆｕの８μＬ（０．８ユニット）を氷上で加え、更に１０Ｍの尿素を８０μＬを加えた。尿素の最終濃度は８Ｍである。これらを次に４０℃で０、１０、３０および６０分間加熱した。得られたサンプルからそれぞれ１μＬを抜き取ってダニスキャンによりアレルゲン量を測定した。このとき、１つのダニスキャンに添加したダニ抽出物は蛋白量として０．４８μｇである。この結果は図１３の５から８に示す。図１３の５、６、７および８は、それぞれ、４０℃で０、１０、３０および６０分間加熱したサンプルについての結果である。
【００６５】
また、対照サンプルとして、酵素および加熱処理なしのサンプルを調製し試験した。氷上で、１本のマイクロチューブにダニ原液１２μＬ、１０Ｍの尿素８０μＬおよびＰＢＳ溶液８μＬを加えた。尿素の最終濃度は８Ｍである。このマイクロチューブには加熱を行わなかった。このサンプルから１μＬを抜き取ってダニスキャンによりアレルゲンを検出した。このとき、１つのダニスキャンに添加したダニ抽出物は蛋白量として０．４８μｇである。この結果は図１３の４に示す。
【００６６】
図１３に示す結果から明かであるように、尿素４．２Ｍ存在下で６０℃で加熱した場合１０分後にはアレルゲンは不活性化された。また、尿素８Ｍ存在下で４０℃で加熱した場合には３０分後にはアレルゲンは不活性化された。
【００６７】
実施例８  プロテアーゼによる不活性化３
更に、もう１つのプロテアーゼの実施例としてパパインを使用した場合のダニアレルゲン不活性化作用を証明するために実験を行った。
【００６８】
まず、１０Ｍ尿素溶液４００μＬに０．２ｇ／ｍＬのパパイン（ナガセケムテックス社製、食品用精製パパイン）とＰＢＳ溶液１００μＬを混合して８Ｍの尿素パパイン溶液を調製した。
【００６９】
８本のマイクロチューブのそれぞれにダニ原液２０μＬと８０μＬの８Ｍ尿素パパイン溶液を添加した。尿素の最終濃度は６．４Ｍである。これらについて４０℃での加熱を０、１０、３０、６０、１２０、１６５、２８０および３２０分間行った。前記加熱の後、各サンプルからそれぞれ１８μＬずつ取り出し、それぞれ１０ｍＭのアンチパイン（antipain, BACHEM社製）の２μＬずつを加えた。アンチパインの最終濃度は１ｍＭである。
【００７０】
得られた溶液のそれぞれ１μＬずつ採取してダニスキャンに添加し、ダニアレルゲンを検出した。このとき１ダニスキャン当たりには蛋白質として０．７２μｇのダニ抽出物を添加されたことになる。
【００７１】
得られた結果は、図１４の１から８に示した。図１４の１、２、３、４、５、６、７および８は、それぞれ４０℃で０、１０、３０、６０、１２０、１６５、２８０および３２０分間行って得たサンプルについての結果である。これらの結果から、上記の条件では１６５分の加熱でアレルゲンの不活性化が可能であり、特に３２０分の加熱では殆どのアレルゲンが不活性化された。
【００７２】
更に、３０℃で加熱した場合のパパインの効果を試験した。
【００７３】
５本のマイクロチューブのそれぞれにダニ原液２０μＬと１８０μＬの８Ｍ尿素パパイン溶液を添加した。尿素の最終濃度は７．２Ｍである。これらについて３０℃での加熱を０、１０、３０、１２０および１８０分間行った。前記加熱の後、各サンプルからそれぞれ１８μＬずつ取り出し、それぞれ１０ｍＭのアンチパイン（antipain, BACHEM社製）の２μＬずつを加えた。アンチパインの最終濃度は１ｍＭである。
【００７４】
得られた溶液のそれぞれ１μＬずつをダニスキャンに添加し、ダニアレルゲンを検出した。このとき１ダニスキャン当たりには蛋白質として０．３６μｇのダニ抽出物が添加されたことになる。
【００７５】
得られた結果は、図１４の９から１３に示した。図１４の９、１０、１１、１２および１３は、それぞれ３０℃で０、１０、３０、１２０および１８０分間行って得たサンプルについての結果である。上記の条件では１２０分の加熱でアレルゲンの不活性化が可能であった（図１４）。また、図１４には示していないが、上記の条件では３２０分の加熱により殆どのアレルゲンが不活性化できた。
【００７６】
以上の実施例からも明かであるように、本発明に従うと、蛋白質がエピトープとなるアレルゲンの不活性化方法として、普遍的に使える解決方法が提供される。また、本発明は蛋白質がエピトープとなるアレルゲンに関して、全てに対応できるものである。
【００７７】
（２）フィルターおよび空調の実施例
以下に、本発明に従うフィルターおよび空調機の実施例を図面を参照して説明する。
【００７８】
実施例９
図１を参照しながら実施例９を説明する。図中の符番１１は、アレルゲンをトラップする不織布フィルターを示す。この不織布フィルター１１の下面には、花粉粒子（２０〜３０μｍ）やダニ（特にダニの糞、１０〜４０μｍ）の径より小さいメッシュを有したステンレス製の繊維状面発熱体１２が配置されている。このステンレス製の線維状面発熱体（商品名：ソフテレック、帝人社製）１２の下部には、前記面発熱体１２を加熱する電熱ヒータ１３が配置されている。
【００７９】
このように実施例９に係るアレルゲン不活性フィルター１４は、アレルゲンをトラップする不織布フィルター１１と、この不織布フィルター１１の下面に配置された、花粉粒子やダニの径より小さいメッシュを有したステンレス製面発熱体１２と、この繊維状面発熱体１２の下部に配置された、該面発熱体１２を加熱する電熱ヒータ１３とを具備した構成となっている。
【００８０】
こうしたアレルゲン不活性フィルター１４は、後述する空調機（図１５参照）の所定の位置にエアコン搭載可能な大きさ（例えば、５ｃｍ×１０ｃｍ）で取り付けられて使用される。空調機の空気取り込み口にアレルゲン不活性フィルター１４を取り付ける際は、不織布フィルター１１をアレルゲン含有空気（矢印Ａ）の入口側に配置する。そして、空調機がＯＦＦの時、フィルター１４の電熱ヒータ１３をＯＮにして面発熱体１２の加熱温度を例えば約７０℃で発熱される。
【００８１】
これにより、アレルゲン含有空気は不織布フィルター１１を通過するが、高温状態に保持された面発熱体１２で花粉粒子やダニが捕獲され、ここでアレルゲン蛋白質の変性が行われ、アレルゲンとしての活性は失われ、ステンレス面発熱体１２からはアレルゲン軽減空気（矢印Ｂ）が通過する。
【００８２】
従って、実施例１のアレルゲン不活性フィルター１４によれば、従来のように害虫駆除用の薬品を用いることがないので、薬品自体の人体への影響を回避できるとともに、前記発熱体を所定の温度で加熱するだけで自動的にアレルゲン量を軽減することができる。
【００８３】
実施例１０
図２を参照する。実施例１０に係るアレルゲン不活性フィルター２１は、不織布フィルター２２に、強酸性陽イオン交換樹脂（図示せず）を保持させた構成となっている。ここで、強酸性陽イオン交換樹脂は、Ｒ−ＳＯ３・Ｈ（但し、Ｒは高分子基体を示す）であり、酸を使って再生が可能である。この強酸性陽イオン交換樹脂は、使用前に活性化しておく。
【００８４】
実施例１０によれば、アレルゲン含有空気Ａが不織布フィルター２２を通過するだけで該不織布フィルター２２に保持された強酸性陽イオン交換樹脂によりアレルゲン蛋白質はそのｐＨの影響で変性し、アレルゲンとしての活性を失う。従って、不織布フィルター２２からはアレルゲン軽減空気Ｂが排気される。従って、実施例１０のアレルゲン不活性フィルター２１によれば、従来のように害虫駆除用の薬品を用いることがないので薬品自体の人体への影響を回避できるとともに、強酸性陽イオン交換樹脂を保持させた不織布フィルター２２にアレルゲン含有空気Ａを通すだけで自動的にアレルゲン量を軽減することができる。
【００８５】
なお、実施例１０では、強酸性陽イオン交換樹脂を使用する場合について述べたが、これに限らず、上記化合物１に示す強塩基性陰イオン交換樹脂を使用してもよい。但し、この場合も、強塩基性陰イオン交換樹脂は使用前に活性化しておくことが好ましい。
【００８６】
実施例１１
図３を参照して実施例１１を説明する。図中の符番３１は吸水性ポリマー３２が移動しない大きさで且つ花粉粒子やダニを通すメッシュ（＞５０μｍ）を有した樹脂製の第１の支持体を示す。この第１の支持体３１の下側には吸水性ポリマー３４が移動しない大きさで且つ花粉粒子やダニを通さないメッシュ（＞５０μｍ）を有した樹脂製の第２の支持体３３が配置されている。前記第１の支持体３１と第２の支持体３３の間には、吸水性ポリマー３２からなる吸水性ポリマー層３４が挟まれて配置されている。ここで、吸水性ポリマー３２は、例えば、５０万ユニット／フィルターのプロテアーゼを含んでいる。前記吸水ポリマー層３４は、例えば、プロテアーゼを含む酸素溶液にポリマーを含浸させることにより形成することができる。
【００８７】
実施例１１に係るアレルゲン不活性フィルター３５は、樹脂製の第１の支持体３１と第２の支持体３３の間に吸水性ポリマー層３４を挟んだ構造を有する。それにより、アレルゲン含有空気Ａが吸水性ポリマー層３４を通過するだけで、蛋白質を分解する酵素によってアレルゲンが分解される。従って、実施例１１のアレルゲン不活性フィルター３５によれば、従来のように害虫駆除用の薬品を用いることがないので薬品自体の人体への影響を回避できるとともに、吸水性ポリマー層３４にアレルゲン含有空気Ａを通すだけで自動的にアレルゲン量を軽減することができる。
【００８８】
実施例１２
図１５は、実施例９から１１に係るアレルゲン不活性フィルターをエアコンの空気取り込み口に取り付けた例を示す。図１５において、符番４２はエアコン用冷却ユニットを示し、符番４３は筐体を示す。この筐体４３の内側には、ファン４４などが配置されている。ここで、前記アレルゲン不活性フィルター１４は、該フィルター１４の主要な構成である不織布フィルター２１が空気アレルゲン含有空気の入口に位置するよう配置される。
【００８９】
このように実施例１２に係る空調機は、エアコンの空気取り込み口にアレルゲン不活性フィルター１４を配置した構成になっている。そのため、空調機がＯＦＦの時、フィルター１４の電熱ヒータ１３をＯＮにして面発熱体１２を発熱させることにより、高温状態に保持された面発熱体１２で花粉粒子やダニが捕獲され、ここでアレルゲン蛋白質の変性が起こり、アレルゲンとしての活性が失われる。ステンレス面発熱体１２からはアレルゲン軽減空気が通過する。なお、前記電熱ヒータ１３には空調機の電源を利用する。
【００９０】
エアコン、空気清浄機などの空調機に、本発明のアレルゲン分解機能を付加することで住環境の著しい改善が図れる。
【００９１】
【発明の効果】
本発明に従うと、アレルゲンを特異的に排除する方法が提供される。
【図面の簡単な説明】
【図１】本発明に従うアレルゲン不活性フィルターの例を示す図。
【図２】本発明に従うアレルゲン不活性フィルターの例を示す図。
【図３】本発明に従うアレルゲン不活性フィルターの例を示す図。
【図４】ウエスタンブロッティングの結果の模式図。
【図５】ウエスタンブロッティングにより得た検量線を示すグラフ。
【図６】サンプル中にダニアレルゲンが多量に存在する場合に得られるバンドが示されたダニスキャンの模式図。
【図７】ダニスキャン上のバンドの位置と発色強度の関係を示すグラフ。
【図８】ダニ抽出物中に存在するダニアレルゲンに関する検量線を示すグラフ。
【図９】熱処理時間とサンプル中のダニアレルゲン量の関係を示すグラフ。
【図１０】反応後のダニスキャンに見られるバンドを模式的に示した図
【図１１】反応後のダニスキャンに見られるバンドを模式的に示した図
【図１２】反応後のダニスキャンに見られるバンドを模式的に示した図
【図１３】反応後のダニスキャンに見られるバンドを模式的に示した図
【図１４】反応後のダニスキャンに見られるバンドを模式的に示した図
【図１５】図１のアレルゲン不活性フィルターを空気の入口側に取り付けた本発明に係る空調機を示す図。
【符号の説明】
１．ちり採取器    ２．サンプル添加部    ３．バンド    １１.不織布フィルター    １２．繊維状面発熱体    １３．電熱ヒータ    １４．アレルゲン不活性フィルター    ２１、２２．不織布フィルター    ３１．第１の支持体    ３２．吸水性ポリマー    ３３．第２の支持体    ３４．吸水性ポリマー層    ３５．アレルゲン不活性フィルター    ４２．エアコン用冷却ユニット    ４３．筐体    ４４．ファン
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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【図１４】
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【図１５】
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