(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
ＨＭＧ−ＣｏＡレダクターゼインヒビターを得るためのプロセスであって、粗ＨＭＧ−ＣｏＡレダクターゼインヒビターの精製のプロセスにおける工程の１つが、ＨＭＧ−ＣｏＡレダクターゼインヒビターを置換するためのディスプレーサの使用を伴う置換クロマトグラフィーを含んでおり、
該置換クロマトグラフィーによって９９．７％を越えるＨＰＬＣ純度を有するＨＭＧ−ＣｏＡレダクターゼインヒビターを製造するためのプロセス。
【請求項２】
ＨＭＧ−ＣｏＡレダクターゼインヒビターがプラバスタチンであることを特徴とする請求項１記載のプロセス。
【請求項３】
ＨＭＧ−ＣｏＡレダクターゼインヒビターが、メバスタチン、ロバスタチン、シンバスタチン、フルバスタチンおよびアトルバスタチンからなる群から選択されることを特徴とする請求項１記載のプロセス。
【請求項４】
ＨＭＧ−ＣｏＡレダクターゼインヒビターが、ラクトン形態、もしくは酸の形態またはそれらの塩の形態であることを特徴とする請求項１〜３のいずれか１項に記載のプロセス。
【請求項５】
置換クロマトグラフィーが以下の工程：
ａ）移動相でクロマトグラフィーカラムを調整する工程
ｂ）移動相に溶解したＨＭＧ−ＣｏＡレダクターゼインヒビターを供給する工程
ｃ）カラムからＨＭＧ−ＣｏＡレダクターゼインヒビターを置換するためにディスプレーサを導入する工程、および
ｄ）精製されたＨＭＧ−ＣｏＡレダクターゼインヒビターを得る工程、
を含むことを特徴とする請求項１〜４のいずれか１項に記載のプロセス。
【請求項６】
精製されたＨＭＧ−ＣｏＡレダクターゼインヒビターを、
ｄ１）フラクションを収集する工程、および
ｄ２）分析用ＨＰＬＣで上記フラクションを分析し、そして純度の質に依存して該フラクションを貯蔵する工程
によって得ることを特徴とする請求項５記載のプロセス。
【請求項７】
置換クロマトグラフィーが、さらに、続く工程：
ｅ）カラムをアルコール／水の混合物で洗浄してディスプレーサを溶出することによってクロマトグラフィーカラムを再生する工程、
を含むことを特徴とする請求項５または６記載のプロセス。
【請求項８】
得られた精製されたＨＭＧ−ＣｏＡレダクターゼインヒビターは、貯蔵されたフラクションにおいて、９９．７％以上のＨＰＬＣ純度を有することを特徴とする請求項５〜７のいずれか１項に記載のプロセス。
【請求項９】
移動相が、水、アセトニトリル／水の溶液または低級アルコールの水溶液、ならびにアルカリ金属カチオン、アンモニアあるいはアミンを含む、有機酸、ハロゲン化された有機酸または無機酸の緩衝化された希釈溶液からなる群から選択されることを特徴とする請求項５〜８のいずれか１項に記載のプロセス。
【請求項１０】
使用される移動相のｐＨが、４．５と１０．５との間であることを特徴とする請求項５〜９のいずれか１項に記載のプロセス。
【請求項１１】
クロマトグラフィーカラムを通過する移動相の流速が、１．５ｍｌ／（分・ｃｍ２）
と３０ｍｌ／（分・ｃｍ２）との間であることを特徴とする請求項５〜１０のいずれか
１項に記載のプロセス。
【請求項１２】
固定相が、逆相であることを特徴する請求項５〜１１のいずれか１項に記載のプロセス。
【請求項１３】
固定相が異なる長さのアルキル鎖を有するシリカゲルのような天然逆相であることを特徴する請求項１２記載のプロセス。
【請求項１４】
固定相の粒径が、３μｍと２０μｍとの間であることを特徴とする請求項５〜１１のいずれか１項に記載のプロセス。
【請求項１５】
ディスプレーサが、長鎖アルコール、長鎖カルボン酸、長鎖アルキルアンモニウム塩、芳香族ジカルボン酸エステル、オキソ−およびジオキソ−アルコール、ポリアルキレンポリグリコールエーテル、ならびにポリアリールまたはポリアルキレンポリアリールエーテルからなる群から選択されることを特徴とする請求項１〜１４のいずれか１項に記載のプロセス。
【請求項１６】
移動相中のディスプレーサの濃度が、１％と３５％との間であることを特徴とする請求項１〜１５のいずれか１項に記載のプロセス。
【発明の詳細な説明】
（技術分野）
ロバスタチン、プラバスタチン、メバスタチン、アトルバスタチン、ならびにそれらの誘導体およびアナログはＨＭＧ−ＣｏＡレダクターゼインヒビターとして知られており、抗高コレステロール血症薬(antihypercholesterolemic agent)として使用されている。それらの大部分は、Aspergillus 、Monascus、Nocardia、Amycolatopsis 、Mucor またはPenicillium 属に属する種として同定された異なる種の微生物を使用する発酵によって製造され、そのいくつかは、化学合成法を使用する発酵生成物を処理することによって得られるか、またはそれらは全化学合成の生成物である。
【０００１】
活性成分の純度は、特に薬学的生成物を高血漿コレステロール(high plasma cholesterol) の治療または予防において長期間服用しなければならない場合に、安全で効果的な薬剤を製造するための重要な因子である。より低い純度の薬剤からの不純物の蓄積は、治療中の多くの副作用を引き起こし得る。
【０００２】
本発明は、いわゆる置換クロマトグラフィーを使用するＨＭＧ−ＣｏＡレダクターゼインヒビターの単離のための新規の工業プロセスに関する。本発明の使用により、高収率、より低い製造コストおよび適切な生態バランスで高純度のＨＭＧ−ＣｏＡレダクターゼインヒビターを得ることができる。
【０００３】
（先行技術）
以前の特許に開示される抗高コレステロール血症薬の単離および精製のためのプロセスは、抽出、クロマログラフィー法、ラクトニセーション（分子内エステル化）法および結晶化法の種々の組合せを含む。これらの手順によって得られる最終生成物の純度はＵＳＰ標準に従うが、所望の生成物の収率は比較的低い。さらに、それらは、大量の有機溶媒とこれらの量に適合した大きな装置との両方を必要とする。
【０００４】
ＷＯ  ９２／１６２７６号に開示される単離プロセスは、工業的ＨＰＬＣ（高速液体クロマログラフィー）装置の使用により９９．５％より大きい純度のＨＭＧ−ＣｏＡレダクターゼインヒビターを得るための解決法を提供する。ＷＯ  ９２／１６２７６号によれば、８５％以上の純度を有する粗ＨＭＧ−ＣｏＡレダクターゼインヒビターを、有機溶媒、または有機溶媒および水の溶液に溶解する。次いで、この混合物を２と９の間のｐＨに緩衝化し、ＨＰＬＣカラムに入れる。重要なＨＭＧ−ＣｏＡレダクターゼインヒビターのピークを収集した後、溶媒の一部を除去し水を加えるか、または溶媒混合物の２／３を除去して、ＨＭＧ−ＣｏＡレダクターゼインヒビターを結晶化する。最終的には、このプロセスによって得られた生成物の純度は、約９０％の収率を有して、少なくとも９９．５％である。
【０００５】
ＷＯ  ９２／１６２７６号に開示される方法は、比較的高い収率を有して、高い純度のＨＭＧ−ＣｏＡレダクターゼインヒビターを得ることができ、従来のクロマトグラフィーカラムに関する上記方法の不利益は、ＨＰＬＣカラム当たりに充填される物質の量が相対的に少ないことである。カラムに供給される少量のサンプルはまた、十分な量の所望の物質を得るために単離操作の繰り返しの回数が増加することに関連して、結果的に大量の溶媒が使用されてより高い製造コストとなる。
【０００６】
本発明の基本である置換クロマトグラフィー法は、以前に使用されたクロマトグラフィー法と実質的には異ならない。
【０００７】
置換クロマトグラフィーは、固定相の活性部位に対するカラムに供給されたサンプルの成分の競争に基づく。サンプルの個々の成分は互いに列車(train) のように置換しており、固定相に対する非常に高い親和性を有し、カラムに沿って供給されたサンプルから遅れて移動するディスプレーサ(displacer) は、ディスプレーサと同じ速度で移動する１成分の領域へのサンプル成分の分離を行う。個々の成分の濃縮は、精製と同時に行われる。
【０００８】
置換クロマトグラフィー法の原理は、１９４３年以来知られている比較的古いものであるが、能率的なカラムがないので、つい１９８１年に実用されたことが紹介された（Cs. Horvath et al., J. Chromatogr., 215 (1981) 295; J. Chromatogr., 330 (1985) 1; J. Chromatogr., 440 (1988) 157) 。ここで参考として紹介されたこれらの論文は、置換モードにおいて逆相高速液体クロマトグラフィーを使用して生物学的に活性なペプチドおよびポリミキシン抗生物質（ポリペプチド）の分析用および調製用分離ならびに精製を記述する。ポリミキシンオクタデシルシリカゲルカラム２５０×４．６ｍｍ、粒径５μｍに対して、移動相として水に１０％のアセトニトリルおよびディスプレーサとして異なるハロゲン化テトラアルキルアンモニウムが使用された。
【０００９】
置換クロマトグラフィーの分野における最近の調査（S.M. Cramer et al., Enzyme Microb. Technol., 11 (1989) 74; Prep. Chromatogr., 1 (1988) 29; J. Chromatogr., 394 (1987) 305; J. Chromatogr., 439 (1988) 341; J. Chromatogr., 454 (1988) 1 （理論的最適化）) ； A. Felinger et al., J. Chromatogr., 609 (1992) 35（理論的最適化）、ここで全ての論文は参考として紹介される）においては、同様のカラムが使用され；移動相はリン酸緩衝液中のメタノールであり、ディスプレーサはアセトニトリル中の２−（２−ｔ−ブトキシエトキシ）エタノール（ＢＥＥ）および酢酸ナトリウムである。異なるペプチドであるタンパク質およびセファロスポリンＣ抗生物質は、サンプルとして使用された。
【００１０】
ＵＳ特許第５，０４３，４２３号（２７．０８．１９９１）およびＥＰ  ４１６．４１６号は、それぞれ、使用された固定相が陽イオン交換樹脂である置換イオン交換クロマトグラフィーで特定の低分子（１０００ダルトンより小さい）ペプチド（特に、タフトシンおよびその合成誘導体）を精製するための方法を記載し、輸送体溶媒は水または種々の強酸の希釈溶液であり、使用されるディスプレーサは、異なる濃度のトリエチレンテトラアンモニウム塩である。ＵＳ特許出願０８／８７５，４２２号（まだ公開されていない）においては、バンコマイシンの単離および精製のために置換クロマトグラフィーを使用することが記載されている。
【００１１】
（技術的解決）
研究室スケールに適用することができる多くの技術が、それらの使用を正しいとする大規模製造操作において実質的には経済的でないか、または環境基準を満たさないので、大規模で高純度の活性物質を得ることは、時には困難である。上記の事実は、高品質の生成物と経済的および生態的に適合した製造の両方を提供する新しい技術を産業に探らせる。本発明は、純粋なＨＭＧ−ＣｏＡレダクターゼインヒビターを得ることが可能なより古い特許および他の文献に公知のプロセスの欠点を解消し、さらに精製プロセスそれ自体は、時間がかかることなく、高収率を提供し、少量の溶媒を使用する。上記プロセスは、自然に優しく；さらに、空間およびエネルギーに関して必要とせず、それゆえ経済的に大規模製造を可能にする。
【００１２】
（発明の説明）
本発明は、置換クロマトグラフィーを使用するＨＭＧ−ＣｏＡレダクターゼインヒビターの精製のためのプロセスを提供する。すなわち、粗ＨＭＧ−ＣｏＡレダクターゼインヒビターの精製のプロセスにおいて少なくとも１つの工程が、置換クロマトグラフィーを含む。精製されるＨＭＧ−ＣｏＡレダクターゼインヒビターは、例えば、メバスタチン、プラバスタチン、ロバスタチン、シンバスタチン、フルバスタチンおよびアトルバスタチンからなる群から選択される。選択されたインヒビターは、置換クロマトグラフィーによって精製するためにラクトン（分子内エステル）形態、または酸の形態あるいはそれらの塩の形態であり得る。本発明のプロセスを特徴とする置換クロマトグラフィーは、好ましくは、以下の工程を含む：
ａ）適切な移動相でクロマトグラフィーカラムを調整する工程、
ｂ）移動相に溶解した粗ＨＭＧ−ＣｏＡレダクターゼインヒビターを供給する工程、
ｃ）カラムからＨＭＧ−ＣｏＡレダクターゼインヒビターを置換するためにディスプレーサを導入する工程、および
ｄ）精製されたＨＭＧ−ＣｏＡレダクターゼインヒビターを得る工程。
【００１３】
精製されたＨＭＧ−ＣｏＡレダクターゼインヒビターは、好ましくは、
ｄ１）フラクションを収集する工程、および
ｄ２）分析用ＨＰＬＣでフラクションを分析し、そして純度の質に依存してフラクションを貯蔵する工程、
によって得られる。精製されたＨＭＧ−ＣｏＡレダクターゼインヒビターが得られた後、アルコール／水の混合物でカラムを洗浄してディスプレーサを溶出することによって、クロマトグラフィーカラムを、再生することができる。
【００１４】
そして、ここで記述される様式で得られたＨＭＧ−ＣｏＡレダクターゼインヒビターは、従来技術の状態からすでに知られている方法によって、例えば凍結乾燥、もしくは、好ましくはラクトン形態、酸形態またはそれらの塩形態（好ましくは、アルカリまたはアルカリ土類金属塩）を得るための結晶化によって、移動相から単離される。
【００１５】
不純物に加えてかなりの割合のＨＭＧ−ＣｏＡレダクターゼインヒビターを含むフラクションは、再びプロセスに供することができ、９５％を越える総収率になる。
【００１６】
使用される固定相は、逆相であり、天然（異なる長さのアルキル鎖を有するシリカゲル）または合成（Ｃ−１８またはＣ−８の有機物）固定相が、適切である。好ましくは、スチレンおよびジビニルベンゼンの合成架橋ポリマーマトリクスが使用される。固定相の粒径は、３μｍから２０μｍが適切であり、７μｍと１５μｍの間が好ましい。
【００１７】
使用される移動相は、好ましくは、水、アセトニトリル／水の溶液および低級（好ましくはＣ1 〜Ｃ4 ）アルコールの水溶液、アルカリ金属カチオン、アンモニアあるいはアミンを含む有機酸、ハロゲン化した有機酸または無機酸（例えば蟻酸、酢酸、プロピオン酸、塩酸、ほう酸、リン酸、炭酸または硫酸（ｓｕｐｈｕｒｉｃ  ａｃｉｄ））の緩衝化された希釈溶液から選択される。水ならびにアセトニトリルおよびとりわけメタノールまたはエタノールの水溶液は、特に好ましく、水溶液中の有機溶媒の量は、好ましくは８０％以下であり、より好ましくは４５％以下であり、とりわけ３０％以下である。移動相において有毒なメタノールは、より毒性の少ないエタノールで取り換えてもよく、または良好な結果を有する水で少なくとも部分的に取り換えてもよいので、処分する溶媒の除去がより容易であり、したがって、本発明は生態学的面から判断して先行技術の状態と比較して著しく向上している。
【００１８】
使用される移動相のｐＨは、好ましくは４．５と１０．５との間であり、より好ましくは６．５と８との間であり、とりわけ約７である。カラムを通過する移動相の流速は、１．５ｍｌ／（分・ｃｍ2 ）と３０ｍｌ／（分・ｃｍ2 ）との間、好ましくは３ｍｌ／（分・ｃｍ2 ）と１５ｍｌ／（分・ｃｍ2 ）との間であるように適切に調整される。ディスプレーサが移動相と混合されることによってクロマトグラフィーカラムに導入されるのと同時に、流速は、好ましくは１．５ｍｌ／（分・ｃｍ2 ）と１５ｍｌ／（分・ｃｍ2 ）との間、そしてとりわけ３ｍｌ／（分・ｃｍ2 ）と１０ｍｌ／（分・ｃｍ2 ）の間にあるように調整される。なぜなら、より高い流速は、収集されるサンプルの希釈を引き起こし、そしてまた分離がより悪くなるからである。
【００１９】
ディスプレーサは、適切には、界面活性剤、洗浄剤等のような両親媒性構造を有する化合物である。ディスプレーサの例は、長鎖アルコール、長鎖カルボン酸、長鎖アルキルアンモニウム塩、芳香族ジカルボン酸エステル、オキソ−およびジオキソ−アルコール、ジエチレングリコールモノ−（またはジ−）アルキルエーテルのようなポリアルキレンポリグリコールエーテル、ポリアリールまたはＴｒｉｔｏｎ（登録商標）Ｘ−１００のようなポリアルキレンポリアリールエーテルなどである。前述の「長鎖」は少なくともＣ4 −鎖、好ましくは少なくともＣ10−鎖およびより好ましくは少なくともＣ14−鎖以上を有するアルキル鎖を意味する。
【００２０】
移動相におけるディスプレーサの濃度は、適切には、１から３５％、好ましくは２から２０％、そしてとりわけ７から１４％になるように調整される。
【００２１】
クロマトグラフィーカラムから溶出される個々のフラクションにおける純度の質を調整する好ましい実施形態において、分析されるＨＭＧ−ＣｏＡレダクターゼインヒビターに関する分析用ＨＰＬＣ法を、以下に記載されるように行うことができる。
【００２２】
分析されるサンプルを、アセトニトリルを有する２０ｍＭＮＨ4 ＨＣＯ3 水溶液を含む移動相を用いて１００回希釈する（アセトニトリルの割合を、分析物の保持因子が５と１０の間であるように調整する）。このサンプルの１０μｍを、高速液体クロマトグラフィーのためのＨｙｐｅｒｓｉｌ  ＯＤＳカラム（Ｈｙｐｅｒｓｉｌ、ｔｈｅ  Ｕｎｉｔｅｄ  Ｋｉｎｇｄｏｍ、粒径３μｍ、カラムサイズ５０×４．６ｍｍ）に入れる。吸光度を２３５ｎｍで測定する。サンプルのＨＰＬＣ純度を、クロマトグラムにおける個々のピークの面積の間の比から計算する。
【００２３】
クロマトグラフィーが完了した後、固定相は、例えば、低級アルコールの２０から１００％水溶液を有する移動相を使用して、好ましくは再生される。
【００２４】
本発明は、以下の実施例によって説明されているが、決して限定されるものではない。
【００２５】
（実施例）
（実施例１）
プラバスタチンの粗ナトリウム塩（１．０ｇ、ＨＰＬＣ純度８８％、アッセイ８５％）を、１０ｍｌの移動相Ａ（蒸留水）に溶解し、０．２ＭＮａＯＨ水溶液でｐＨを７に調整し、濾過した。カラムを移動相Ａで平衡化した。上記の様式で得られたサンプルを、Ｇｒｏｍ−Ｓｉｌ  １２０−ＯＤＳ  ＨＥカラム（Ｇｒｏｍ  Ａｎａｌｙｔｉｃ  ＋  ＨＰＬＣ  ＧｍｂＨ、Ｇｅｒｍａｎｙ）、粒径１１μｍ、カラムサイズ２５０×１０ｍｍに供給した。カラムを、移動相Ａに７％のジエチレングリコールモノブチルエーテルを含む移動相Ｂで、４．５ｍｌ／分の流速で洗浄した。吸光度は、２６０ｎｍで測定し、そして０．５ｍｌのフラクションを上記吸光度における最初の増加で収集した。シグナルが減少したとき、カラムを２５ｍｌの７０％メタノールで洗浄した。得られたフラクションを、ここでの上記ＨＰＬＣ分析法により分析した。９９．５％以上の純度を有するフラクションを貯蔵した。貯蔵されたフラクション（７ｍｌ）におけるＨＰＬＣ純度は、９９．８％であった。
【００２６】
（実施例２）
プラバスタチンの粗ナトリウム塩（０．４ｇ、ＨＰＬＣ純度８８％、アッセイ８５％）を５ｍｌの移動相Ａ（蒸留水）に溶解し、０．２ＭＮａＯＨ水溶液でｐＨを７に調整し、濾過した。カラムを、移動相Ａで平衡化した。上記の様式で得られたサンプルをＫｒｏｍａｓｉｌ  １００  Ｃ−１８カラム（ＥＫＡ  Ｃｈｅｍｉｃａｌｓ  ＡＢ、Ｓｗｅｄｅｎ）、粒径１０μｍ、カラムサイズ２００×１０ｍｍに供給した。カラムを移動相Ａに７％のＴｒｉｔｏｎ  Ｘ−１００を含む移動相Ｂで、１ｍｌ／分の流速で洗浄した。吸光度を２６０ｎｍで測定し、そして０．５ｍｌのフラクションを上記吸光度における最初の増加で収集した。得られたフラクションを上記ＨＰＬＣ分析法により分析した。９９．５％以上の純度を有するフラクションを貯蔵した。貯蔵したフラクション（３ｍｌ）におけるＨＰＬＣ純度は、９９．７％であった。
【００２７】
（実施例３）
０．６ｇのプラバスタチンの粗ナトリウム塩を、５ｍｌの蒸留水に溶解した。使用される移動相（３０％メタノール水溶液）を除いて、実施例１に記載のプロトコールを使用し、９９．８％のＨＰＬＣ純度を有する貯蔵したフラクションを得た。
【００２８】
（実施例４）
実施例３に記載の方法を、繰り返した。ここでは移動相におけるディスプレーサの濃度を１４％にした。実施例１に記載された基準によれば、貯蔵されたフラクションにおけるＨＰＬＣ純度は９９．８％であった。
【００２９】
（実施例５）
プラバスタチンラクトン（０．４ｇ、ＨＰＬＣ純度８５％）を、３３ｍｌの４５％のメタノールを含む移動相Ａに溶解した。上記の様式で得られたサンプルを、Ｇｒｏｍ−Ｓｉｌ  １２０−ＯＤＳ  ＨＥカラム（Ｇｒｏｍ  Ａｎａｌｙｔｉｃ  ＋  ＨＰＬＣ  ＧｍｂＨ、Ｇｅｒｍａｎｙ）、粒径１１μｍ、カラムサイズ２５０×１０ｍｍに供給した。カラムを、移動相Ａに２％のジエチレングリコールジブチルエーテルを含む移動相Ｂで、４．５ｍｌ／分の流速で洗浄した。吸光度を２６０ｎｍで測定し、そして１ｍｌのフラクションを上記吸光度における最初の増加で収集した。シグナルが減少したとき、カラムを２５ｍｌの７０％メタノールで洗浄した。
【００３０】
９９．５％以上の純度を有するフラクションを貯蔵した。貯蔵したフラクションにおけるＨＰＬＣ純度は、９９．７％であった。
【００３１】
（実施例６）
プラバスタチンラクトン（０．３ｇ、ＨＰＬＣ純度８５％）を３０％のメタノールを含む８０ｍｌの移動相Ａに溶解した。カラムを移動相Ａで平衡化した。上記の様式で得られたサンプルを、Ｌｉｃｒｏｓｐｈｅｒｅ  ＲＰ  １８カラム、粒径１２μｍ、カラムサイズ２００×１０ｍｍに供給した。カラムを、移動相Ａに５％のジエチレングリコールモノ−ｎ−ヘキシルエーテルを含む移動相Ｂで、４．５ｍｌ／分の流速で洗浄した。吸光度を、２３５ｎｍで測定し、そして１ｍｌのフラクションを上記吸光度における最初の増加で収集した。シグナルが減少したとき、カラムを、２５ｍｌの９０％メタノールで洗浄した。得られたフラクションを、上記のＨＰＬＣ分析法で分析した。
【００３２】
９９．５％以上の純度を有するフラクションを、貯蔵した。貯蔵したフラクションにおけるＨＰＬＣ純度は、９９．８％であった。
【００３３】
（実施例７）
プラバスタチンラクトン（０．３ｇ、ＨＰＬＣ純度８５％）を３５％のアセトニトリルを含む２５ｍｌの移動相Ａに溶解した。カラムを移動相Ａで平衡化した。上記の様式で得られたサンプルを、Ｌｉｃｒｏｓｐｈｅｒｅ  ＲＰ  １８カラム、粒径１２μｍ、カラムサイズ２００×１０ｍｍに供給した。カラムを、移動相Ａに１％のジエチレングリコールジブチルエーテルを含む移動相Ｂで、４．５ｍｌ／分の流速で洗浄した。吸光度を２３５ｎｍで測定し、そして１ｍｌのフラクションを上記吸光度における最初の増加で収集した。シグナルが減少したとき、カラムを、２５ｍｌの９０％メタノールで洗浄した。得られたフラクションを、上記のＨＰＬＣ分析法で分析した。
【００３４】
９９．５％以上の純度を有するフラクションを貯蔵した。貯蔵したフラクションにおけるＨＰＬＣ純度は９９．８％であった。
【００３５】
（実施例８）
実施例７に記載の方法を、ここでは、移動相Ｂを移動相Ａ中の０．８５％ジエチルフタラート（ｄｉｅｔｈｙｌｐｈｔｈａｌａｔ）にして繰り返した。
【００３６】
９９．５％以上の純度を有するフラクションを、貯蔵した。貯蔵したフラクションにおけるＨＰＬＣ純度は、９９．８％であった。
【００３７】
（実施例９）
シンバスタチンラクトン（０．４２ｇ、ＨＰＬＣ純度８７％）を、６ｍｌの６６％のアセトニトリルに溶解し、１．２ｍｍｏｌの水酸化ナトリウムで加水分解した。アセトニトリルを除去し、そしてｐＨを希釈したＨ3 ＰＯ4 で７に調整した。カラムを、１４％のメタノールを含む移動相Ａで平衡化した。上記の様式で得られたサンプルを、Ｇｒｏｍ−Ｓｉｌ  １２０−ＯＤＳ  ＨＥカラム（Ｇｒｏｍ  Ａｎａｌｙｔｉｃ  ＋  ＨＰＬＣ  ＧｍｂＨ、Ｇｅｒｍａｎｙ）、粒径１１μｍ、カラムサイズ２５０×１０ｍｍに供給した。カラムを、移動相Ａに６．７％のジエチレングリコールモノ−ｎ−ヘキシルエーテルを含む移動相Ｂで、４．５ｍｌ／分の流速で洗浄した。吸光度を２６０ｎｍで測定し、そして０．５ｍｌのフラクションを上記吸光度における最初の増加で収集した。シグナルが減少したとき、カラムを２５ｍｌのメタノールで洗浄した。
【００３８】
９９．５％以上の純度を有するフラクションを、貯蔵した。貯蔵したフラクションにおけるＨＰＬＣ純度は９９．８％であった。
【００３９】
（実施例１０）
シンバスタチンラクトン（０．５ｇ、ＨＰＬＣ純度８７％）を、７０％のメタノールを含む２０ｍｌの移動相に溶解した。カラムを移動相Ａで平衡化した。上記の様式で得られたサンプルを、Ｇｒｏｍ−Ｓｉｌ  １２０−ＯＤＳ  ＨＥカラム（Ｇｒｏｍ  Ａｎａｌｙｔｉｃ  ＋  ＨＰＬＣ  ＧｍｂＨ、Ｇｅｒｍａｎｙ）、粒径１１μｍ、カラムサイズ２５０×１０ｍｍに供給した。カラムを、移動相Ａに３％のデカン酸を含む移動相Ｂで、４．５ｍｌ／分の流速で洗浄した。吸光度を２６０ｎｍで測定し、そして０．７５ｍｌのフラクションを上記吸光度における最初の増加で収集した。シグナルが減少したとき、カラムを２５ｍｌのメタノールで洗浄した。得られたフラクションをここでの上記の方法で分析した。９９．５％以上の純度を有するフラクションを、貯蔵した。貯蔵したフラクションにおけるＨＰＬＣ純度は９９．７％であった。
【００４０】
（実施例１１）
シンバスタチンラクトン（０．５ｇ、ＨＰＬＣ純度８７％）を、６０％のアセトニトリルを含む２０ｍｌの移動相に溶解した。カラムを、移動相Ａで平衡化した。上記の様式で得られたサンプルを、Ｇｒｏｍ−Ｓｉｌ  １２０−ＯＤＳ  ＨＥカラム（Ｇｒｏｍ  Ａｎａｌｙｔｉｃ  ＋  ＨＰＬＣ  ＧｍｂＨ、Ｇｅｒｍａｎｙ）、粒径１１μｍ、カラムサイズ２５０×１０ｍｍに供給した。カラムを、移動相Ａに２％のテトラキス（デシル）アンモニウムブロミドを含む移動相Ｂで、４．５ｍｌ／分の流速で洗浄した。吸光度を２６０ｎｍで測定し、そして１ｍｌのフラクションを上記吸光度における最初の増加で収集した。シグナルが減少したとき、カラムを２５ｍｌのメタノールで洗浄した。
【００４１】
９９．５％以上の純度を有するフラクションを、貯蔵した。貯蔵したフラクションにおけるＨＰＬＣ純度は９９．８％であった。
【００４２】
（実施例１２）
ロバスタチンラクトン（０．５ｇ、ＨＰＬＣ純度８７％）を６０ｍｌの７５％メタノールに溶解した。カラムを、７０％のメタノールを含む移動相Ａで平衡化した。上記の様式で得られたサンプルを、Ｇｒｏｍ−Ｓｉｌ  １２０−ＯＤＳ  ＨＥカラム（Ｇｒｏｍ  Ａｎａｌｙｔｉｃ  ＋  ＨＰＬＣ  ＧｍｂＨ、Ｇｅｒｍａｎｙ）、粒径１１μｍ、カラムサイズ２５０×１０ｍｍに供給した。カラムを、移動相Ａに７０％のメタノールおよび４．５％のデカン酸を含む移動相Ｂで、６ｍｌ／分の流速で洗浄した。吸光度を２６０ｎｍで測定し、そして１ｍｌのフラクションを上記吸光度における最初の増加で収集した。シグナルが減少したとき、カラムを２５ｍｌのメタノールで洗浄した。得られたフラクションを上記のＨＰＬＣ分析法で分析した。
【００４３】
９９．５％以上の純度を有するフラクションを、貯蔵した。貯蔵したフラクションにおけるＨＰＬＣ純度は、９９．９％であった。
【００４４】
（実施例１３）
ロバスタチンラクトン（０．４２ｇ、ＨＰＬＣ純度８７％）を、８ｍｌの５０％アセトニトリルに溶解し、そして１．５ｍｍｏｌの水酸化ナトリウムで加水分解した。アセトニトリルを除去し、ｐＨを希釈したＨ3 ＰＯ4 で７に調整した。カラムを、１４％のメタノールを含む移動相Ａで平衡化した。上記の様式で得られたサンプルを、Ｇｒｏｍ−Ｓｉｌ  １２０−ＯＤＳ  ＨＥカラム（Ｇｒｏｍ  Ａｎａｌｙｔｉｃ  ＋  ＨＰＬＣ  ＧｍｂＨ、Ｇｅｒｍａｎｙ）、粒径１１μｍ、カラムサイズ２５０×１０ｍｍに供給した。カラムを、移動相Ａに６．７％のジエチレングリコールモノ−ｎ−ヘキシルエーテルを含む移動相Ｂで、１ｍｌ／分の流速で洗浄した。吸光度を２６０ｎｍで測定し、そして０．２５ｍｌのフラクションを上記吸光度における最初の増加で収集した。シグナルが減少したとき、カラムを２５ｍｌのメタノールで洗浄した。
【００４５】
得られたフラクションを実施例９に記載の方法により分析した。９９．５％以上の純度を有するフラクションを、貯蔵した。貯蔵したフラクションにおけるＨＰＬＣ純度は９９．８％であった。
【００４６】
（実施例１４）
メバスタチンラクトン（０．５ｇ、ＨＰＬＣ純度８５％）を、７０％のメタノールを含む１５０ｍｌの移動相Ａに溶解した。カラムを移動相Ａを平衡化した。上記の様式で得られたサンプルを、Ｇｒｏｍ−Ｓｉｌ  １２０−ＯＤＳ  ＨＥカラム（Ｇｒｏｍ  Ａｎａｌｙｔｉｃ  ＋  ＨＰＬＣ  ＧｍｂＨ、Ｇｅｒｍａｎｙ）、粒径１１μｍ、カラムサイズ２５０×１０ｍｍに供給した。カラムを、移動相Ａに４．５％のデカン酸を含む移動相Ｂで、６ｍｌ／分の流速で洗浄した。吸光度を２６０ｎｍで測定し、そして１ｍｌのフラクションを上記吸光度における最初の増加で収集した。シグナルが減少したとき、カラムを２５ｍｌのメタノールで洗浄した。
【００４７】
得られたフラクションを上記のＨＰＬＣ分析法で分析した。
【００４８】
９９．５％以上の純度を有するフラクションを貯蔵した。貯蔵したフラクションにおけるＨＰＬＣ純度は、９９．８％であった。