(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
式
【化１】
0003845895.tif 000005
（式中、Ｒ1は水素原子又は炭素原子数１〜４個のアルコキシ基を示し、Ｒ2は水素原子、フェニル基、アミノ基、モノ若しくはジアルキルアミノ基、置換若しくは非置換のピロリジノ基、置換若しくは非置換のピペリジノ基、置換若しくは非置換のピペラジノ基又はモルホリノ基を示し、ｎは１〜２０の整数を示す。）で表されるイソベンゾフラノン誘導体又はそれらの製薬的に許容される塩。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【産業上の利用分野】
本発明は、コレステロール低下作用を有し医薬として有用なイソベンゾフラノン系化合物に関する。
【０００２】
【従来の技術】
動脈硬化の危険因子は数多く存在するが、高脂血症（特に高コレステロール血症）、高血圧及び喫煙が三大因子と言われている。これらの因子のうち、最も動脈硬化（心疾患による死亡率）との相関が知られているのは、高コレステロール血症であり、従ってコレステロール低下剤に関する研究が盛んに行われている。生体のコレステロールを低下させるには、食物からの吸収や体内における生合成を阻害するか、あるいは代謝排泄を促進すればよい。吸収阻害剤としてβ−シトステロール、代謝排泄促進剤としてコレスチラミンが知られている。最近、生合成阻害剤としてＨＭＧ−ＣｏＡ還元酵素阻害機構に基づくプラバスタチン、シンバスタチンが上市され、優れた効果が報告されている。
【０００３】
一方、血中のコレステロールの約７０％はＬＤＬ（低密度リポタンパク）であり、ＬＤＬレセプターを介して肝臓や種々の臓器に取り込まれ利用される。ＬＤＬの代謝の多くは肝臓で行われていると考えられており、従って、ＬＤＬの肝臓への取り込みを促進させ、血中コレステロールを低下させることができれば、高脂血症治療薬となりうる。プラバスタチンはコレステロール生合成阻害作用の他、ＬＤＬ取り込み促進作用も報告されているが、臨床においては、より強力なＬＤＬ取り込み促進作用に基づく新規有用コレステロール低下剤の開発が望まれていた。
【０００４】
【発明が解決しようとする課題】
本発明の目的は、ＬＤＬ取り込み促進作用に基づく新規コレステロール低下剤を提供することにある。
【０００５】
【課題を解決するための手段】
本発明者らは、鋭意検討した結果、ＬＤＬ取り込み促進作用を有し血中コレステロール低下剤として有用な新規なイソベンゾフラン誘導体を見出し本発明を完成した。
【０００６】
本発明は、下記式
【０００７】
【化２】
0003845895.tif 000002
【０００８】
（式中、Ｒ1は水素原子又は炭素原子数１〜４個のアルコキシ基を示し、Ｒ2は水素原子、フェニル基、アミノ基、モノ若しくはジアルキルアミノ基、置換若しくは非置換のピロリジノ基、置換若しくは非置換のピペリジノ基、置換若しくは非置換のピペラジノ基又はモルホリノ基を示し、ｎは１〜２０の整数を示す。）で表されるイソベンゾフラノン誘導体又はそれらの製薬的に許容される塩である。
【０００９】
本発明において、アルコキシ基とは直鎖状又は分枝鎖状のものであり、それらは例えばメトキシ基、エトキシ基、プロポキシ基、イソプロポキシ基、ブトキシ基等であり、好ましくはメトキシ基である。また、モノ若しくはジアルキルアミノ基とは炭素原子数１〜５のアルキル基の１又は２個で置換されたアミノ基であり、それらは例えばメチルアミノ基、エチルアミノ基、ジメチルアミノ基、ジエチルアミノ基、ジプロピルアミノ基等であり、好ましくはジメチルアミノ基である。Ｒ2で定義される置換されたピロリジノ基、ピペリジノ基及びピペラジノ基とは、フェニル基、ピリジル基、シクロアルキル基、ピペリジノ基又はベンジル基で置換されたそれぞれピロリジノ基、ピペリジノ基及びピペラジノ基であり、それらは例えば４−ベンジルピペリジノ基、４−ピペリジノピペリジノ基、４−（２−ピリジル）ピペラジン−１−イル基、ピペラジン−１−イル基、４−シクロヘプチルピペラジノ基、４−フェニルピペラジン−１−イル基等である。
【００１０】
また、製薬学的に許容される塩とは、例えば塩酸塩、臭酸塩、硫酸塩、硝酸塩、リン酸塩等の鉱酸塩、メタンスルホン酸塩、ベンゼンスルホン酸塩、ｐ−トルエンスルホン酸塩、酢酸塩、プロピオン酸塩、酒石酸塩、フマール酸塩、マレイン酸塩、リンゴ酸塩、シュウ酸塩、コハク酸塩、クエン酸塩、安息香酸塩、マンデル酸塩、乳酸塩等の有機酸塩を挙げることができる。
【００１１】
本発明の化合物は、例えば以下に示す方法によって製造することができる。
【００１２】
下記式中、Ｒ1及びＲ2は前記と同意義であり、Ｒは任意の低級アルキル基、アリル基又はベンジル基を示し、Ｘ及びＹは塩素原子、臭素原子、ヨウ素原子又はメチルスルホニルオキシ基を示す。
【００１３】
【化３】
0003845895.tif 000003
【００１４】
即ち、式中［Ａ］で示される無水フタル酸誘導体と［Ｂ］で示されるウィッティッヒ試薬を反応することによって立体異性体の混合物である「Ｃ］を得、２重結合を例えば接触還元等の方法によって還元することによって化合物［Ｄ］へと導く。接触還元を行なう際の触媒としては、白金、パラジウム等を用いることができ、また水素雰囲気下での還元だけでなくギ酸、ギ酸アンモニウム等の共存下に反応を実施することもできる。次いで、化合物［Ｄ］を例えば水酸化ナトリウム水溶液、水酸化カリウム水溶液等によって加水分解して桂皮酸誘導体［Ｅ］とし、更に１,４−ジアザビシクロ［２,２,２］オクタン等の塩基で処理することによって化合物［Ｆ］を得る。
【００１５】
また、Ｒがアリル基若しくはベンジル化合物である化合物［Ｃ］を用いた場合は接触還元を行うことによって直接化合物［Ｆ］に導くことが可能である。続いて、化合物［Ｆ］のカルボキシル基を選択的にアルコールに還元することによって化合物［Ｇ］を得ることができる。この際還元剤としては例えばジボラン溶液、ＢＨ3・ＴＨＦ錯体、ＢＨ3・ジメチルスルフィド錯体等を用いることができ、更には反応混合物中でＢＨ3を発生させることができる水素化ホウ素ナトリウムとＢＦ3・ジエチルエーテル錯体、あるいはジメチル硫酸、あるいはヨウ素との混合物等を用いることができる。
【００１６】
化合物［Ｇ］は、例えば四臭化炭素とトリフェニルホスフィンの混合物で処理する等の一級アルコールをハロゲン化アルキルに変換する一般的な方法を用いることによってＸが塩素原子、臭素原子あるいは沃素原子である化合物［Ｈ］に導くことができ、同様に化合物［Ｇ］を塩基の存在化にメタンスルホン酸クロリドと処理することによってＸがメチルスルホニルオキシ基である化合物［Ｈ］を得ることができる。
【００１７】
化合物［Ｈ］は、例えばチオ酢酸カリウム等のチオ酢酸の塩あるいは塩基とチオ酢酸で処理することによって化合物［Ｉ］へと導くことができる。更に化合物［Ｉ］を塩基の存在下にＲ2Ｙ（式中、Ｒ2は前記と同意義であり、Ｙは塩素原子、臭素原子、沃素原子あるいはメチルスルホニルオキシ基を示す）と反応させることによって本発明の化合物［Ｊ］へと導くことができる。
【００１８】
本発明の化合物は、経口又は非経口的に投与することができる。その投与剤型は錠剤、カプセル剤、顆粒剤、散剤、粉剤、トローチ剤、軟膏剤、クリーム剤、乳剤、懸濁剤、坐剤、注射剤などであり、いずれも慣用の製剤技術によって製造することができる。これらの投与剤型は、患者の症状、年齢及び治療の目的に応じて適宜選択することができる。各種剤型の製剤の製造においては、常用の賦形剤（例えば、結晶セルロース、デンプン、乳糖、マンニトールなど）、結合剤（例えば、ヒドロキシプロピルセルロース、ポリビニルピロリドンなど）、滑沢剤（例えば、ステアリン酸マグネシウム、タルクなど）、崩壊剤（例えば、カルボキシメチルセルロースカルシウムなど）などを用いることができる。
【００１９】
【発明の効果】
本発明の化合物はＨｅｐＧ２細胞（ヒト肝癌細胞）に対してＬＤＬ取り込み促進活性を有するのでコレステロール低下剤として有用である。
【００２０】
【実施例】
以下、実施例及び試験例を挙げて本発明を更に具体的に説明する。
【００２１】
実施例１
（１）  ４−メトキシフタル酸ジメチルエステル（７.３８ｇ）とメタノール：水＝８：１混合溶液（７０ｍｌ）の混合物に２Ｎ水酸化カリウム水（３５ｍｌ）を加え、１１時間室温にて撹拌を行った。反応液を６Ｎ塩酸水で酸性とし、含まれているメタノールを減圧留去した後、酢酸エチルで抽出して、酢酸エチル層を１Ｎ塩酸水、飽和食塩水で順次洗浄した後、無水硫酸マグネシウムで乾燥した。溶媒を減圧留去して得た粗生成物を酢酸エチル−ヘキサンから結晶化し、白色粉末状の４−メトキシフタル酸（５.９１ｇ、収率９１％）を得た。
融点  １５９.５〜１６０.５℃。
【００２２】
（２）  ４−メトキシフタル酸（２.８４ｇ）及びトリエチルアミン（２.１ｍｌ）を含むクロロホルム溶液（２０ｍｌ）に、塩化チオニル（１.０６ｍｌ）を氷冷下滴下し、室温にて５.５時間撹拌した。更に塩化チオニル（０.５３ｍｌ）を滴下し１７時間撹拌した。反応混合物に水を加えて、クロロホルムで抽出した。このクロロホルム層を１Ｎ塩酸水、飽和食塩水で順次洗浄後、無水硫酸マグネシウムで乾燥して、残渣をクロロホルム−ヘキサンから結晶化して白色粉末状の４−メトキシ無水フタル酸（１.９１ｇ、収率７４％）を得た。
融点  １３８.５〜１４０℃。
【００２３】
（３）  ４−メトキシ無水フタル酸（１.７８ｇ）のクロロホルム溶液（５０ｍｌ）にエトキシカルボニルメチレントリフェニルホスホラン（４.１８ｇ）を加え、９時間加熱還流した。反応混合物を減圧留去して、残渣にエーテルを加えデカンテーション法によって不溶性のトリフェニルホスフィンオキシドを除去した。エーテル溶液を減圧留去して得られた残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（展開溶媒；ヘキサン：酢酸エチル＝４：１）で精製した後、更に酢酸エチル−ヘキサンから結晶化して、白色粉末状の３−エトキシカルボニルビニリデン−５−メトキシ−３Ｈ−イソベンゾフラン−１−オン（１.３３ｇ、収率５４％）を得た。
融点  ９９〜１００℃。
【００２４】
（４）  ３−エトキシカルボニルビニリデン−５−メトキシ−３Ｈ−イソベンゾフラン−１−オン（１.２４ｇ）のエタノール溶液（１０ｍｌ）に５％パラジウム炭素（３００ｍｇ）を加え、水素雰囲気下室温にて２２時間撹拌した。反応終了後パラジウム炭素を濾去し、濾液に酢酸エチルを加えて飽和炭酸水素ナトリウム水、飽和食塩水で順次洗浄して、無水硫酸マグネシウムで乾燥した。溶媒を減圧留去して、得られた残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（展開溶媒；ヘキサン：酢酸エチル＝３：１）で精製して、白色結晶状の３−エトキシカルボニルメチル−５−メトキシ−３Ｈ−イソベンゾフラン−１−オン（０.６９ｇ、収率５５％）を得た。
融点  ６４.５〜６５℃。
【００２５】
（５）  ３−エトキシカルボニルメチル−５−メトキシ−３Ｈ−イソベンゾフラン−１−オン（１２.５ｇ）のメタノール溶液（１５０ｍｌ）に２Ｎ水酸化カリウム水（１５０ｍｌ）を加えて６０℃で８時間撹拌した。反応混合物からメタノールを減圧留去した後、２Ｎ塩酸水にてｐＨ２に調整し析出した結晶を濾取して白色結晶状の２−カルボキシ−５−メトキシ桂皮酸（９.４５ｇ、収率８５％）を得た。
融点  １５８〜１５９℃。
【００２６】
（６）  ２−カルボキシ−５−メトキシ桂皮酸（９.３１ｇ）のアセトニトリル溶液（２００ｍｌ）に１,４−ジアザビシクロ［２,２,２］オクタン（２.３５ｇ；以下Ｄａｂｃｏと略す）を加え、室温にて１９時間撹拌した。反応混合物に１Ｎ塩酸水を加えてｐＨ２に調整したのちアセトニトリルを減圧留去した。析出した結晶を濾取して白色結晶状の３−カルボキシメチル−５−メトキシ−３Ｈ−イソベンゾフラン−１−オン（８.２６ｇ、収率８９％）を得た。
融点  １４６〜１４９℃（分解）。
【００２７】
（７）  ３−カルボキシメチル−５−メトキシ−３Ｈ−イソベンゾフラン−１−オン（７.６６ｇ）のＴＨＦ溶液（６０ｍｌ）に水素化ホウ素ナトリウム（３.９１ｇ）及びジメチル硫酸（９.８ｍｌ）を数回に分けて氷冷下に添加した。３０分間撹拌を続け、更に室温にて２.５時間撹拌した。反応混合物に水（１０ｍｌ）、３Ｎ水酸化ナトリウム（１０ｍｌ）、飽和食塩水（６０ｍｌ）を順次加えて、２０分間撹拌した後、酢酸エチルで抽出した。酢酸エチル層を１Ｎ塩酸水、飽和食塩水で順次洗浄して無水硫酸マグネシウムで乾燥した後、減圧留去を行った。得られた残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（展開溶媒；ヘキサン：酢酸エチル＝３：１）で精製し、アセトン−ヘキサンから結晶化を行い白色結晶状の３−（２−ヒドロキシエチル）−５−メトキシ−３Ｈ−イソベンゾフラン−１−オン（３.３１ｇ、収率４６％）を得た。
融点  ７４〜７５℃。
【００２８】
（８）  ３−（２−ヒドロキシエチル）−５−メトキシ−３Ｈ−イソベンゾフラン−１−オン（７.４６ｇ）、メタンスルホニルクロリド（４.４４ｍｌ）とジクロロメタン（３０ｍｌ）の混合物にトリエチルアミン（８.０ｍｌ）を室温にて滴下し３時間撹拌した。反応混合物に１Ｎ塩酸水を加えた後、ジクロロメタンで抽出し、ジクロロメタン層を飽和炭酸水素ナトリウム、飽和食塩水で順次洗浄して無水硫酸マグネシウムで乾燥した後、溶媒を減圧留去して、５−メトキシ−３−（２−メチルスルホニルオキシエチル）−３Ｈ−イソベンゾフラン−１−オン（１１.４５ｇ）を得た。この化合物は精製することなく次の反応へ使用した。上記で得た化合物（１１.４５ｇ）のＤＭＦ溶液（１００ｍｌ）にチオ酢酸カリウム（４.４ｇ）を加えて２時間室温にて撹拌した。反応混合物に水を加えて酢酸エチルで抽出を行った。酢酸エチル層を１Ｎ塩酸水、飽和食塩水で順次洗浄して、無水硫酸マグネシウムで乾燥した。減圧留去後、得られた残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（展開溶媒；ヘキサン：酢酸エチル＝２：１）で精製し赤色油状物質物質として３−（２−アセチルチオエチル）−５−メトキシ−３Ｈ−イソベンゾフラン−１−オン（７.１４ｇ、収率７８％）を得た。
1Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3,２００ＭＨｚ）δｐｐｍ：2.00(m,1H),2.33(m,1H),2.36(s,3H),2.99〜3.08(m,2H),3.91(s,3H),5.45(dd,J=8.6,3.1Hz,1H),6.89(d,J=2.1Hz,1H),7.04(dd,J=8.4,2.1Hz,1H),7.80(d,J=8.4Hz,1H)。
【００２９】
（９）  ３−（２−アセチルチオエチル）−５−メトキシ−３Ｈ−イソベンゾフラン−１−オン（５００ｍｇ）、１−ウンデカン（０.４６ｍｌ）及びメタノール（５ｍｌ）の混合物に１Ｎ水酸化ナトリウム水溶液（２ｍｌ）を加え、３時間加熱還流した。反応混合物に１Ｎ塩酸水を加え酸性とした後、酢酸エチルで抽出した。酢酸エチル層を飽和炭酸水素ナトリウム水溶液、食塩水で順次洗浄して、無水硫酸マグネシウムで乾燥した後、減圧留去した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（展開溶媒；ヘキサン：酢酸エチル＝２：１）で精製して、無色油状物質として５−メトキシ−３−（２−ウンデシルチオエチル）−３Ｈ−イソベンゾフラン−１−オン（４６０ｍｇ、収率６５％）を得た。
1Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3,２００ＭＨｚ）δｐｐｍ：0.86〜1.61(m,21H),2.02(m,1H),2.23(m,1H),2.56(t,J=7.1Hz,2H),2.69〜2.77(m,2H),3.92(s,3H),5.57(dd,J=8.6,3.3Hz,1H),6.87(d,J=1.8Hz,1H),7.05(dd,J=8.5,1.8Hz,1H),7.82(d,J=8.5Hz,1H)。
【００３０】
実施例１の（８）で得た化合物を用いて実施例１の（９）と同様の反応操作を行い、以下の化合物を得た。
５−メトキシ−３−（２−メチルチオエチル）−３Ｈ−イソベンゾフラン−１−オン
融点６５〜６６℃
５−メトキシ−３−｛２−［６−（４−フェニルピペラジン−１−イル）−ヘキシルチオ］エチル｝−３Ｈ−イソベンゾフラン−１−オン
1Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3,２００ＭＨｚ）δｐｐｍ：1.25〜2.75(m,20H),3.22(t,J=5.0Hz,4H),3.91(s,3H),5.55(dd,J=8.6,2.9Hz,1H),6.81〜6.95(m,4H),7.04(dd,J=8.6,2.2Hz,1H),7.22〜7.34(m,2H),7.81(d,J=8.6Hz,1H)
５−メトキシ−３−（２−ペンチルチオエチル）−３Ｈ−イソベンゾフラン−１−オン
1Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3,２００ＭＨｚ）δｐｐｍ：0.87〜1.63(m,9H),2.00(m,1H),2.23(m,1H),2.55(t,J=7.2Hz,2H),2.65〜2.75(m,2H),3.91(s,3H),5.55(dd,J=8.6,3.3Hz,1H),6.86(d,J=2.2Hz,1H),7.04(dd,J=8.6,2.2Hz,1H),7.80(d,J=8.6Hz,1H)。
【００３１】
５−メトキシ−３−［２−（６−ピペリジノヘキシルチオ）エチル］−３Ｈ−イソベンゾフラン−１−オン
1Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3,２００ＭＨｚ）δｐｐｍ：1.27〜2.44(m,22H),2.56(t,J=7.3Hz,2H),2.65〜2.76(m,2H),3.93(s,3H),5.57(dd,J=8.8,3.1Hz,1H),6.86(d,J=1.8Hz,1H),7.05(dd,J=8.4,1.8Hz,1H),7.82(d,J=8.4Hz,1H)
５−メトキシ−３−［２−（６−モルホリノヘキシルチオ）エチル］−３Ｈ−イソベンゾフラン−１−オン
1Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3,２００ＭＨｚ）δｐｐｍ：1.26〜2.74(m,20H),3.72(t,J=4.8Hz,4H),3.91(s,3H),5.55(dd,J=8.4,3.1Hz,1H),6.86(d,J=2,0Hz,1H),7.04(dd,J=8.6,2.0Hz,1H),7.81(d,J=8.6Hz,1H)
３−［２−（６−ジメチルアミノヘキシルチオ）エチル］−５−メトキシ−３Ｈ−イソベンゾフラン−１−オン
1Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3,２００ＭＨｚ）δｐｐｍ：1.35〜2.29(m,12H),2.22(s,6H),2.55(t,J=7.4Hz,2H),2.67〜2.74(m,2H),3.91(s,3H),5.56(dd,J=7.5,2.5Hz,1H),6.86(d,J=2.0Hz,1H),7.04(dd,J=8.6,2.0Hz,1H),7.80(d,J=8.6Hz,1H)。
【００３２】
５−メトキシ−３−｛２−［６−（４−ピペリジノピペリジノ）ヘキシルチオ］エチル｝−３Ｈ−イソベンゾフラン−１−オン
1Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3,２００ＭＨｚ）δｐｐｍ：1.26〜3.02(m,33H),3.53(t,J=6.7Hz,2H),3.91(s,3H),5.55(dd,J=7.5,2.5Hz,1H),6.85(d,J=2.2Hz,1H),7.04(dd,J=8.5,2.2Hz,1H),7.80(d,J=8.5Hz,1H)
５−メトキシ−３−［２−（６−フェニルヘキシルチオ）エチル］−３Ｈ−イソベンゾフラン−１−オン
1Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3,２００ＭＨｚ）δｐｐｍ：1.23〜1.67(m,8H),1.96〜2.28(m,2H),2.50〜2.75(m,6H),3.91(s,3H),5.55(dd,J=8.5,3.0Hz,1H),6.85(d,J=2.1Hz,1H),7.04(dd,J=8.5,2.1Hz,1H),7.14〜7.34(m,5H),7.81(d,J=8.5Hz,1H)。
【００３３】
実施例２
（１）  Ｎ,Ｎ−ジメチルホルムアミド（５.８ｍｌ）とオキシ塩化リン（１５.５ｍｌ）の混合物を室温で３時間撹拌した。この混合物に３、５−ジメトキシベンジルアルコール（１０.０ｇ）を加え、７時間室温にて撹拌した。この反応混合物を氷水中に注ぎ析出した結晶を濾取した。得られた結晶をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（展開溶媒；ヘキサン：酢酸エチル＝２：１）で精製し、２−ヒドロキシメチル−４,６−ジメチルベンズアルデヒド（６.２４ｇ、収率５３％）を得た。
1Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3,２００ＭＨｚ）δｐｐｍ：3.93(s,6H),5.06(s,2H),6.45(d,J=2.5Hz,1H),6.75(d,J=2.5Hz,1H),10.63(s,1H)。
【００３４】
（２）  ２−ヒドロキシメチル−４,６−ジメチルベンズアルデヒド（３１.６ｇ）、水酸化ナトリウム（１６.１ｇ）、過マンガン酸ナトリウム（７６.２ｇ）及び水（９００ｍｌ）の混合物を３時間加熱還流した。不溶物を濾去した後に１Ｎ塩酸水を加えｐＨ２に調整し析出した結晶を濾取して、３,５−ジメトキシフタル酸（２３.５２ｇ、収率６４.６％）を得た。
1Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ6,２００ＭＨｚ）δｐｐｍ：3.79(s,3H),3.83(s,3H),6.81(d,J=2.5Hz,1H),6.93(d,J=2.5Hz,1H),12.9(brs,2H)。
【００３５】
（３）  ３,５−ジメトキシフタル酸（２３.５２ｇ）と無水酢酸（１００ｍｌ）の混合物を５時間加熱還流した。反応混合物を減圧留去して得られた残渣をヘキサンで洗浄して、３,５−ジメトキシ無水フタル酸（２０.３２ｇ、収率９３.９％）を得た。
1Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3,２００ＭＨｚ）δｐｐｍ：3.98(s,3H),4.02(s,3H),6.76(d,J=1.5Hz,1H),7.03(d,J=1.5Hz,1H)。
【００３６】
（４）  ３,５−ジメトキシ無水フタル酸（２０.３２ｇ）のクロロホルム（５００ｍｌ）溶液にエトキシカルボニルメチレントリフェニルホスホラン（４１.９ｇ）を加えて、７時間加熱還流した。反応混合物を減圧留去した後、残渣にエーテルを加え不溶物をデカンテーション法によって除去した後、エーテル溶液を減圧留去した。得られた残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（展開溶媒；クロロホルム：酢酸エチル＝７：１）で精製し、更にクロロホルム−ヘキサンから結晶化して、白色粉末状の５,７−ジメトキシ−３−エトキシカルボニルビニリデン−３Ｈ−イソベンゾフラン−１−オン（１５.７８ｇ、収率５８％）を得た。
融点  １１７〜１１８℃。
【００３７】
（５）  ５,７−ジメトキシ−３−エトキシカルボニルビニリデン−３Ｈ−イソベンゾフラン−１−オン（１５.２０ｇ）のＮ,Ｎ−ジメチルホルムアミド溶液（４００ｍｌ）にギ酸（３０.９ｍｌ）、ギ酸アンモニウム（１０.４ｇ）及び１０％パラジウム炭素（２ｇ）を加えて、室温で１０時間撹拌した。反応混合物から不溶物を濾去した後、減圧留去して、残渣に水を加えた後、酢酸エチルで抽出を行った。この酢酸エチル層を飽和炭酸水素ナトリウム水、飽和食塩水で順次洗浄して、無水硫酸マグネシウムで乾燥した後、減圧留去した。得られた残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（展開溶媒；ヘキサン：酢酸エチル＝１：１）で精製し、５,７−ジメトキシ−３−エトキシカルボニルメチル−３Ｈ−イソベンゾフラン−１−オン（１３.１９ｇ、収率８６％）を得た。
融点  ９３〜９３.５℃。
【００３８】
（６）  ５、７−ジメトキシ−３−エトキシカルボニルメチル−３Ｈ−イソベンゾフラン−１−オン（１３.１９ｇ）のメタノール溶液（１２０ｍｌ）に２Ｎ水酸化カリウム水溶液（１２０ｍｌ）を加え６０℃で２時間撹拌した。反応混合物からメタノールを減圧留去した後、２Ｎ塩酸水にてｐＨ２に調整した後、酢酸エチルにて抽出した。酢酸エチル層を減圧留去して、得られた結晶を水で洗浄して２−カルボキシ−３,５−ジメトキシ桂皮酸（９.２７ｇ、収率７８％）を得た。
1Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ6,２００ＭＨｚ）δｐｐｍ：3.77(s,3H),3.83(s,3H),6.60(d,J=15.8Hz,1H),6.66(d,J=2.0Hz,1H),6.95(d,J=2.0Hz,1H),7.50(d,J=15.8Hz,1H)。
【００３９】
（７）  ２−カルボキシ−３,５−ジメトキシ桂皮酸（９.２７ｇ）のアセトニトリル（１５０ｍｌ）溶液にＤａｂｃｏ（２.４７ｇ）を加え、室温にて５.５時間撹拌した。反応混合物を１Ｎ塩酸水でｐＨ２に調整したのちアセトニトリルを減圧留去し析出した結晶を濾取して、白色結晶状の３−カルボキシメチル−５,７−ジメトキシ−３Ｈ−イソベンゾフラン−１−オン（８.９７ｇ、収率９７％）を得た。
融点  ２２３.５〜２２４℃。
【００４０】
（８）  ３−カルボキシメチル−５,７−ジメトキシ−３Ｈ−イソベンゾフラン−１−オン  （８.９５ｇ）のテトラヒドロフラン溶液（１００ｍｌ）に水素化ホウ素ナトリウム（４.７０ｇ）及びジメチル硫酸（１１.７６ｍｌ）を数回に分けて添加した後、室温にて９.５時間撹拌した。反応混合物に２Ｎ水酸化ナトリウム（２０ｍｌ）、飽和食塩水（１００ｍｌ）を順次加えて、２０分間撹拌した。この混合液を酢酸エチルで抽出した後、酢酸エチル層を１Ｎ塩酸水、飽和食塩水で順次洗浄して無水硫酸マグネシウムで乾燥した。得られた残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（展開溶媒；クロロホルム：酢酸エチル＝７：１）で精製して、アセトン−ヘキサンから結晶化を行い白色結晶状の５,７−ジメトキシ−３−（２−ヒドロキシエチル）−３Ｈ−イソベンゾフラン−１−オン（８.６９ｇ、収率１００％）を得た。
融点  １３０.５〜１３２℃。
【００４１】
（９）  ５,７−ジメトキシ−３−（２−ヒドロキシエチル）−３Ｈ−イソベンゾフラン−１−オン（８.１８ｇ）、メタンスルホニルクロリド（３.１９ｍｌ）とジクロロメタン（５０ｍｌ）の混合物にトリエチルアミン（７.１９ｍｌ）を室温にて添加した後、１時間撹拌した。反応混合物に１Ｎ塩酸水を加えた後、ジクロロメタン層を飽和炭酸水素ナトリウム、飽和食塩水で順次洗浄して、無水硫酸マグネシウムした後、減圧留去して、５,７−ジメトキシ−３−（２−メチルスルホニルオキシエチル）−３Ｈ−イソベンゾフラン−１−オン（９.３３ｇ）を得た。
1Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3,２００ＭＨｚ）δｐｐｍ：2.02(m,1H),2.51(m,1H),3.05(s,3H),3.90(s,3H),3.96(s,3H),4.46(dd,J=7.7,4.6Hz,2H),5.46(dd,J=9.5,3.1Hz,1H),6.46(brs,2H)。
【００４２】
（１０）  ５,７−ジメトキシ−３−（２−メチルスルホニルオキシエチル）−３Ｈ−イソベンゾフラン−１−オン（９.３０ｇ）のＮ,Ｎ−ジメチルホルムアミド溶液（８０ｍｌ）にチオ酢酸カリウム（３.６８ｇ）を加えて、４時間室温にて撹拌した。反応混合物に水を加えた後、酢酸エチルで抽出を行った。酢酸エチル層を１Ｎ塩酸水、飽和食塩水で順次洗浄して、無水硫酸マグネシウムで乾燥した後、減圧留去した。得られた残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（展開溶媒；ヘキサン：酢酸エチル＝１：１）で精製し褐色結晶状の３−（２−アセチルチオエチル）−５,７−ジメトキシ−３Ｈ−イソベンゾフラン−１−オン（６.９０ｇ、収率６８％）を得た。
融点  １０５〜１０６.５℃（分解）。
【００４３】
（１１）  ３−（２−アセチルチオエチル）−５,７−ジメトキシ−３Ｈ−イソベンゾフラン−１−オン（３１０ｍｇ）、４−（６−クロロヘキシル）−１−フェニルピペラジン（５７０ｍｇ）及びメタノ−ル（５ｍｌ）の混合物に１Ｎ水酸化ナトリウム水溶液（２ｍｌ）を加えて、３時間加熱還流した。反応混合物に水を加えて、酢酸エチルで抽出した。酢酸エチル層を飽和炭酸水素ナトリウム水溶液、食塩水で順次洗浄して、無水硫酸マグネシウムで乾燥した後、減圧留去した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（展開溶媒；ヘキサン：酢酸エチル＝１：１）で精製し、無色油状物質として５,７−ジメトキシ−３−｛２−［６−（４−フェニルピペラジン−１−イル）ヘキシルチオ］エチル｝−３Ｈ−イソベンゾフラン−１−オン（２３０ｍｇ、収率４４％）を得た。
融点  ８３.５−８５℃。
【００４４】
実施例２の（１０）で得られた化合物を用いて実施例２の（１１）と同様な反応操作を実施して、以下の化合物を得た。
５,７−ジメトキシ−３−（２−ウンデシルチオエチル）−３Ｈ−イソベンゾフラン−１−オン
融点  ７０〜７０.５℃
５,７−ジメトキシ−３−［２−（６−ピペリジノヘキシルチオ）エチル］−３Ｈ−イソベンゾフラン−１−オン
1Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3,２００ＭＨｚ）δｐｐｍ：1.26〜3.00(m,25H),3.54(t,J=6.6Hz,1H),3.90(s,3H),3.96(s,3H),5.46(dd,J=8.0,2.8Hz,1H),6.39〜6.43(m,2H)
５,７−ジメトキシ−３−［２−（６−モルホリノヘキシルチオ）エチル］−３Ｈ−イソベンゾフラン−１−オン
1Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3,２００ＭＨｚ）δｐｐｍ：1.26〜2.73(m,20Hz),3.54(t,J=6.6Hz,4H),3.90(s,3H),3.96(s,3H),5.45(dd,J=8.6,3.3Hz,1H),6.41〜6.43(m,2H)
５,７−ジメトキシ−３−（２−ペンチルチオエチル）−３Ｈ−イソベンゾフラン−１−オン
1Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3,２００ＭＨｚ）δｐｐｍ：0.90(t,J=6.8Hz,3H),1.30〜1.62(m,6H),1.97(m,1H),2,24(m,1H),2.54(t,J=7.1Hz,2H),2.65〜2,73(m,2H),3.89(s,3H),3.95(s,3H),5.46(dd,J=8.8,3.1Hz,1H),6.42〜6.43(m,2H)。
【００４５】
５,７−ジメトキシ−３−｛２−［３−（４−フェニルピペラジン−１−イル）プロピルチオ］エチル｝−３Ｈ−イソベンゾフラン−１−オン
1Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3,２００ＭＨｚ）δｐｐｍ：1.79〜2.08(m,3H),2.27(m,1H),2.46〜2.76(m,10H),3.18〜3.23(m,4H),3.90(S,3H),3.97(s,3H),5.47(dd,J=8.4,2.9Hz,1H),6.43〜6.44(m,2H),6.83〜7.00(m,3H),7.24〜7.32(m,2H)
５,７−ジメトキシ−３−［２−｛６−［４−（ピリジン−２−イル）ピペラジン−１−イル］ヘキシルチオ｝エチル］−３Ｈ−イソベンゾフラン−１−オン1Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3,２００ＭＨｚ）δｐｐｍ：1.22〜2.74(m,24H),3.90(s,3H),3.96(s,3H),5.46(dd,J=8.6,3.0Hz,1H),6.42〜6.43(m,2H),6.59〜6.67(m,2H),7.48(m,1H),8.15(m,1H)
３−｛２−［６−（４−ベンジルピペリジニル）ヘキシルチオ］エチル｝−５,７−ジメトキシ−３Ｈ−イソベンゾフラン−１−オン
1Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3,２００ＭＨｚ）δｐｐｍ：1.30〜2.92(m,27H),3.89(s,3H),3.95(s,3H),5.45(dd,J=8.8,3.0Hz,1H),6.41〜6.43(m,2H),7.11〜7.31(m,5H)。
【００４６】
３−｛２−［６−（４−シクロヘプチルピペラジン−１−イル）ヘキシルチオ］エチル｝−５,７−ジメトキシ−３Ｈ−イソベンゾフラン−１−オン
1Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3,２００ＭＨｚ）δｐｐｍ：1.28〜2.70(m,37H),3.91(s,3H),3.97(s,3H),5.47(dd,J=8.5,3.6Hz,1H),6.43〜6.44(m,2H)
５,７−ジメトキシ−３−（２−メチルチオエチル）−３Ｈ−イソベンゾフラン−１−オン
融点  ９９.５〜１００℃
５,７−ジメトキシ−３−［２−（６−フェニルヘキシルチオ）エチル］−３Ｈ−イソベンゾフラン−１−オン
1Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3,２００ＭＨｚ）δｐｐｍ：1.32〜1.67(m,8H),1.94(m,1H),2.24(m,1H),2.51〜2.74(m,6H),3.90(s,3H),3.97(s,3H),5.46(dd,J=8.5,3.3Hz,1H),6.43〜6.44(m,2H),7.14〜7.33(m,5H)
３−［２−（６−ジメチルアミノヘキシルチオ）エチル］−５,７−ジメトキシ−３Ｈ−イソベンゾフラン−１−オン
1Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3,２００ＭＨｚ）δｐｐｍ：1.27〜2.30(m,12H),2.23(s,6H),2.56(d,J=7.0Hz,2H),2.67〜2.74(m,2H),3.91(s,3H),3.97(s,3H),5.47(dd,J=8.6,3.1Hz,1H),6.42〜6.45(m,2H)
３−｛２−［６−（４−ピペリジノピペリジノ）ヘキシルチオ］エチル｝−５,７−ジメトキシ−３Ｈ−イソベンゾフラン−１−オン
1Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ6,２００ＭＨｚ）δｐｐｍ：1.21〜2.59(m,33H),2.79〜2.87(m,2H),3.87(s,3H),3.88(s,3H),5.47(dd,J=8.4,3.3Hz,1H),6.60(d,J=1.7Hz,1H),6.79(m,1H)。
【００４７】
試験例  ［ＨｅｐＧ２細胞を用いた in vitro ＬＤＬ取り込み促進作用］
ＤＭＥＭ（Dalbecco's minimum essential medium;10%FBS）培養液を用いて、ＨｅｐＧ２細胞を４×１０5／ｍｌの濃度に調節した培養液を、直径２０ｍｍの２４穴プレート（コーニング社製）に０.５ｍｌずつ分注し、３７℃、５％炭酸ガス培養器内で４８時間培養した。次いで、本発明化合物を目的濃度にあらかじめ希釈したエタノール溶液１０μＬを加えた１０％ＬＰＤＳ（Lipoprotein deficient sserum；国際バイオ社製）を含んだＤＭＥＭ０.３ｍｌで培地交換し、更に２４時間培養した。１μｇのＤｉＩ−ＬＤＬ（フナコシ薬品社製）を添加して４時間培養したのち培地を除去した。リン酸バッファーで洗浄後２ｍＭ  ＳＤＳ（Sodium dodecyl sulfate）溶液０.４ｍｌで細胞を溶解した。細胞溶解液０.３ｍｌを精製水で２倍希釈して蛍光光度計（Shimadzu RF-5000）で蛍光強度を測定した。また、同溶液０.１ｍｌを用いＬｏｗｒｙ法により蛋白を定量した。取り込まれたＤｉＩ−ＬＤＬ量はあらかじめ得られた検量線にて算出し、コントロールに対する単位蛋白質量あたりの比活性を取り込み促進活性として表した。また、対照薬としてケトコナゾールを用いて同時に促進活性の測定を行った。
その結果を表１に示した。
【００４８】
【表１】
0003845895.tif 000004
【００４９】
（注）
Ａ；５,７−ジメトキシ−３−｛２−［６−（４−フェニルピペラジン−１−イル）ヘキシルチオ］エチル｝−３Ｈ−イソベンゾフラン−１−オン
Ｂ；５−メトキシ−３−｛２−［６−（４−フェニルピペラジン−１−イル）−ヘキシルチオ］エチル｝−３Ｈ−イソベンゾフラン−１−オン