(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
非塩形態、塩形態、溶媒和形態または水和形態の下記一般式（Ｉ）で表される化合物：
0003787605.tif 000012
Ｒ1はＣ1-6アルキルまたは−Ｃ1-6アルキル−ＡＲ9［ＡはＯ、ＮＲ9またはＳ（Ｏ）m（m＝０〜２）を示し、Ｒ9はＨ、Ｃ1-4アルキル、フェニル、ピリジルまたはピリミジニルを示す。Ａ＝ＮＲ9のときには、Ｒ9は同一または異なっていてもよい］を示す。
Ｒ2はＨまたはＣ1-6アルキルを示す。
Ｒ3は［Ａlk］nＲ6（ＡlkはＣ1-6アルキルまたはＣ2-6アルケニルを示し、nは０または１を示す）を示す。
ＸはＮＲ4Ｒ5［Ｒ4はＨを示し、Ｒ5はＨまたはＣ1-6アルキルを示す］を示す。
Ｒ7はＨまたはＲ10ＣＯ［Ｒ10はＣ1-4アルキル］を示す。
Ｒ8はフェニル（Ｒ11で置換）、ピリジル（Ｒ11で置換されていてもよい）、Ｃ1-4アルキル−Ｒ11、−Ｃ1-4アルキル−フェニル（Ｒ11で置換）、−Ｃ1-4アルキル−ピリジル（Ｒ11で置換されていてもよい）、シクロ（Ｃ3-6）アルキル（Ｒ11で置換されていてもよい）、−Ｃ1-4アルキル−シクロ（Ｃ3-6）アルキル（Ｒ11で置換されていてもよい）、
Ｒ6はＡＲ9、シクロ（Ｃ3-6）アルキル、シクロ（Ｃ3-6）アルケニル、Ｃ1-6アルキル、フェニル、ピリジル、チアゾリル、インドリル、ピリミジニル、−Ｃ1-6アルキル−ＣＯＯＲ9、−Ｃ1-6アルキル−ＮＨＲ、ＣＯＮＨＲ、ＮＨＣＯ2Ｒ、ＮＨＳＯ2ＲまたはＮＨＣＯＲを示す（ＲはＲ10として定義される）。
Ｒ11はＳＲ7、ＣＯＲ13、Ｎ（Ｒ9）2、ＮＲ9Ｒ12、スクシンイミドまたはフタルイミドを示す。
Ｒ12はＨ、ＣＯＲ9、ＳＯ2Ｒ9（Ｒ9はＨを示さない）を示す。
Ｒ13はＯＨ、ＯＣ1-4アルキル、Ｎ（Ｒ9）2（Ｒ9は同一または異なっていてもよい）を示す。
【請求項２】
Ｒ1がＣ1-6アルキルまたはＣ1-6アルキル−ＡＲ9［ＡはＳ（Ｏ）m（mは０、１または２を示す）、ＮＲ9（Ｒ9はＨ、Ｃ1-4アルキルまたはフェニルを示す）または０を示す請求項１の化合物。
【請求項３】
Ｒ3が［Ａlk]nＲ6（nは０または１を示し、ＡlKはＣ1-6アルキルを示し、Ｒ6はＣ1-6アルキル、−Ｃ1-3アルキルフェニル、−Ｃ1-3アルキルピリジルまたはＡＲ9を示す）を示す請求項１または２記載の化合物。
【請求項４】
Ｒ8がＣ1-4アルキル−Ｒ11またはシクロ（Ｃ3-6）アルキル−Ｒ11を示し、Ｒ11がＣＯＲ13、ＮＲ9Ｒ12、Ｎ（Ｒ9）2、スクシンイミドまたはフタルイミドを示し、Ｒ12がＣＯＲ9、またはＳＯ2Ｒ9（Ｒ9はＨを示さない）を示し、Ｒ13がＯＨ、ＯＣ1-4アルキルまたはＮ（Ｒ9）2を示す請求項１から３いずれかに記載の化合物。
【請求項５】
Ｒ1がＣ1-6アルキル、またはＣ1-6アルキル−ＡＲ9を示し、Ｒ9はＣ1-4アルキル、フェニル、ピリジルまたはピリミジニルを示し、Ｒ7がＨまたはＲ10ＣＯを示し、Ｒ10がＣ1-4アルキルを示し、Ｒ8が置換されていてもよいフェニル、ピリジル、Ｃ1-6アルキルフェニル、シクロ（Ｃ3-6）アルキルまたはＣ1-6アルキルシクロ（Ｃ3-6）アルキル、（Ｃ1-4）アルキル-Ｒ11を示し、
Ｒ6がシクロ（Ｃ3-6）アルキル、シクロ（Ｃ3-6）アルケニル、Ｃ1-6アルキル、または３−インドリルメチルを示し、
Ｒ11がＳＲ7、ＣＯＲ13、Ｎ（Ｒ9）2、ＮＲ9Ｒ12、スルシンイミドまたはフタルイミドを示し、Ｒ13がＯＨ、ＯＣ1-4アルキル、Ｎ（Ｒ9）2を示す請求項１から４いずれかに記載の化合物。
【請求項６】
下記の化合物から選択される請求項１記載の化合物：
Ｎ−［２，３−ビス−アセチルメルカプトプロパノイル］−Ｌ−ロイシル−Ｌ−フェニルアラニン−Ｎ−メチルアミド、
Ｎ−［２−アセチルメルカプト−３−メトキシカルボニルプロパノイル］−Ｌ−ロイシル−Ｌ−フェニルアラニンＮ−メチルアミド、
Ｎ−［２−アセチルメルカプト−４−メトキシカルボニルブタノイル］−Ｌ−ロイシル−Ｌ−フェニルアラニンＮ−メチルアミド、
Ｎ−［２−アセチルメルカプト−５−メトキシカルボニルペンタノイル］−Ｌ−ロイシル−Ｌ−フェニルアラニンＮ−メチルアミド、
Ｎ−［２−アセチルメルカプト−６−メトキシカルボニルヘキサノイル］−Ｌ−ロイシル−Ｌ−フェニルアラニンＮ−メチルアミド、
Ｎ−［２−アセチルメルカプト−４−フタルイミドブタノイル］−Ｌ−ロイシル−Ｌ−フェニルアラニンＮ−メチルアミド、
Ｎ−［２−アセチルメルカプト−５−フタルイミドペンタノイル］−Ｌ−ロイシル−Ｌ−フェニルアラニンＮ−メチルアミド、
Ｎ−［２−アセチルメルカプト−６−フタルイミドヘキサノイル］−Ｌ−ロイシル−Ｌ−フェニルアラニンＮ−メチルアミド、
Ｎ−［２，３−ビス−メルカプトプロパノイル］−Ｌ−ロイシル−Ｌ−フェニルアラニンＮ−メチルアミド、
Ｎ−［２−メルカプト−３−メトキシカルボニルプロパノイル］−Ｌ−ロイシル−Ｌ−フェニルアラニンＮ−メチルアミド、
Ｎ−［２−メルカプト−４−メトキシカルボニルブタノイル］−Ｌ−ロイシル−Ｌ−フェニルアラニンＮ−メチルアミド、
Ｎ−［２−メルカプト−５−メトキシカルボニルペンタノイル］−Ｌ−ロイシル−Ｌ−フェニルアラニンＮ−メチルアミド、
Ｎ−［２−メルカプト−６−メトキシカルボニルヘキサノイル］−Ｌ−ロイシル−Ｌ−フェニルアラニンＮ−メチルアミド、
Ｎ−［２−メルカプト−４−フタルイミドブタノイル］−Ｌ−ロイシル−Ｌ−フェニルアラニン−Ｎ−メチルアミド、
Ｎ−［２−メルカプト−５−フタルイミドペンタノイル］−Ｌ−ロイシル−Ｌ−フェニルアラニンＮ−メチルアミドおよび
Ｎ−［２−メルカプト−６−フタルイミドヘキサノイル］−Ｌ−ロイシル−Ｌ−フェニルアラニンＮ−メチルアミド。
【請求項７】
下記の化合物から選択される請求項１記載の化合物：
Ｎ−［２−アセチルメルカプト−５−メトキシカルボニルペンタノイル］−Ｌ−ロイシル−Ｌ−フェニルアラニンＮ−メチルアミド
Ｎ−［２−アセチルメルカプト−６−メトキシカルボニルヘキサノイル］−Ｌ−ロイシル−Ｌ−フェニルアラニンＮ−メチルアミド、
Ｎ−［２−アセチルメルカプト−６−メトキシカルボニルヘキサノイル］−Ｌ−バリニル−Ｌ−フェニルアラニンＮ−メチルアミド、
Ｎ−［２−アセチルメルカプト−６−メトキシカルボニルヘキサノイル］−Ｌ−ロイシル−Ｌ−トリプトファンＮ−メチルアミド、
Ｎ−［２−アセチルメルカプト−５−フタルイミドペンタノイル］−Ｌ−ロイシル−Ｌ−フェニルアラニンＮ−メチルアミド、
Ｎ−［２−アセチルメルカプト−５−フタルイミドペンタノイル］−Ｌ−バリニル−Ｌ−フェニルアラニンＮ−メチルアミド、
Ｎ−［２−アセチルメルカプト−５−フタルイミドペンタノイル］−Ｌ−ロイシル−Ｌ−トリプトファンＮ−メチルアミド、
Ｎ−［２−アセチルメルカプト−５−フタルイミドペンタノイル］−Ｌ−ロイシル−Ｌ−［β−（４−チアゾリル）］アラニンＮ−メチルアミド、
Ｎ−［２−アセチルメルカプト−５−フタルイミドペンタノイル］−Ｌ−ロイシル−Ｌ−［β−（２−ピリジル）］アラニンＮ−メチルアミド、
Ｎ−［２−アセチルメルカプト−５−フタルイミドペンタノイル］−Ｌ−ロイシル−５−メチル−Ｌ−グルタミン酸Ｎ−メチルアミド、
Ｎ−［２−アセチルメルカプト−６−フタルイミドヘキサノイル］−Ｌ−ロイシル−Ｌ−フェニルアラニンＮ−メチルアミド、
Ｎ−［２−アセチルメルカプト−２−（３−フタルイミド）フェニルアセチル］−Ｌ−ロイシル−Ｌ−フェニルアラニンＮ−メチルアミド、
Ｎ−［２−メルカプト−５−メトキシカルボニルペンタノイル］−Ｌ−ロイシル−Ｌ−フェニルアラニンＮ−メチルアミド、
Ｎ−［２−メルカプト−６−メトキシカルボニルヘキサノイル］−Ｌ−ロイシル−Ｌ−フェニルアラニンＮ−メチルアミド、
Ｎ−［２−メルカプト−６−メトキシカルボニルヘキサノイル］−Ｌ−ロイシル−Ｌ−トリプトファンＮ−メチルアミド、
Ｎ−［２−メルカプト−５−フタルイミドペンタノイル］−Ｌ−ロイシル−Ｌ−フェニルアラニンＮ−メチルアミド、
Ｎ−［２−メルカプト−５−フタルイミドペンタノイル］−Ｌ−ロイシル−Ｌ−トリプトファンＮ−メチルアミド、
Ｎ−［２−メルカプト−５−フタルイミドペンタノイル］−Ｌ−ロイシル−Ｌ−［β−（４−チアゾリル）］アラニンＮ−メチルアミド、
Ｎ−［２−メルカプト−５−フタルイミドペンタノイル］−Ｌ−ロイシル−Ｌ−［β−（２−ピリジル）］アラニンＮ−メチルアミド、
Ｎ−［２−メルカプト−５−フタルイミドペンタノイル］−Ｌ−ロイシル−５−メチル−Ｌ−グルタミン酸Ｎ−メチルアミドおよび
Ｎ−［２−メルカプト−６−フタルイミドヘキサノイル］−Ｌ−ロイシル−Ｌ−フェニルアラニンＮ−メチルアミド。
【請求項８】
Ｒ1が−ＣＨ2ＳＣＨ3を示す請求項１から５いずれかに記載の化合物。
【請求項９】
（ＲＳ）−Ｎ−［２−（アセチルメルカプト）−５−フタルイミドペンタノイル］−（Ｓ−メチル）−Ｌ−システイニル−Ｌ−フェニルアラニンＮ−メチルアミド、
（Ｓ）−Ｎ−［２−メルカプト−５−フタルイミドペンタノイル］−Ｌ−（Ｓ−メチル）システイニル−Ｌ−トリプトファンＮ−メチルアミド、
（ＲＳ）−Ｎ−［２−メルカプト−４−スクシンイミドブタノイル］−Ｌ−（Ｓ−メチル）システイニル−Ｌ−t−ロイシンＮ−メチルアミド、
（ＲＳ）−Ｎ−［２−メルカプト−４−スクシンイミドブタノイル］−Ｌ−（Ｓ−メチル）システイニル−Ｌ−トリプトファンＮ−メチルアミドおよび
（ＲＳ）−Ｎ−［２−メルカプト−４−スクシンイミドブタノイル］−Ｌ−（Ｓ−メチル）システイニル−Ｌ−フェニルアラニンＮ−メチルアミド
のいずれかの請求項８記載の化合物。
【請求項１０】
Ｒ3がt−ブチルまたは−Ｃ（ＣＨ3）2Ｓ（Ｏ）0-2ＣＨ3を示す請求項１から５いずれかに記載の化合物。
【請求項１１】
（Ｓ）−Ｎ−［２−（アセチルメルカプト）−５−フタルイミド］ペンタノイル−Ｌ−ロイシル−（Ｓ）−t−ロイシンＮ−メチルアミド、
（ＲＳ）−Ｎ−［２−（アセチルメルカプト）−５−フタルイミド］ペンタノイル−Ｌ−ロイシル−（Ｒ）−ペニシルアミンＮ−メチルアミド、
（ＲＳ）−Ｎ−［２−（アセチルメルカプト）−５−フタルイミド］ペンタノイル−Ｌ−ロイシル−（Ｒ）−（Ｓ−メチル）−ペニシルアミンＮ−メチルアミド、
（ＲＳ）−Ｎ−［２−（アセチルメルカプト）−５−フタルイミド］ペンタノイル−Ｌ−ロイシル−（Ｒ）−（２，２−ジメチル−２−メタンスルホニル）アラニンＮ−メチルアミド、
（ＲＳ）−Ｎ−［２−（アセチルメルカプト）−５−フタルイミド］ペンタノイル−Ｌ−ロイシル−（Ｒ）−（２，２−ジメチル−２−メタンスルフィニル）アラニンＮ−メチルアミド、
（ＲＳ）−Ｎ−［２−（アセチルメルカプト）−５−フタルイミド］ペンタノイル−Ｌ−ロイシル−（Ｓ）−t−ロイシンＮ−メチルアミド、
（ＲＳ）−Ｎ−［２−メルカプト−５−フタルイミド］ペンタノイル−Ｌ−ロイシル−（Ｒ）−（Ｓ−メチル）−ペニシルアミンＮ−メチルアミド、
（Ｓ）−Ｎ−（２−メルカプト−５−フタルイミド］ペンタノイル−Ｌ−ロイシル−（Ｓ）−t−ロイシルＮ−メチルアミドおよび
（ＲＳ）−Ｎ−［２−メルカプト−４−スクシンイミドブタノイル］−Ｌ−ロイシル−Ｌ−t−ロイシンＮ−メチルアミド
のいずれかの請求項１０記載の化合物。
【請求項１２】
単一の鏡像体もしくはジアステレオマーまたはこれらの異性体の混合物の形態である請求項１から１１いずれかに記載の化合物。
【発明の詳細な説明】
発明の分野
この発明は新規なペプチジル誘導体および該誘導体の製法と医学的使用に関する。
発明の背景
正常な組織においては、細胞結合組織の合成は細胞外基質の退化によって相殺され、この動的平衡においては２つの対立する効果が存在する。マトリックス(matrix)の退化は内在する結合組織細胞および浸潤する炎症性細胞から放出されるプロテアーゼの作用によってもたらされ、部分的には少なくとも３つのグループの金属プロテアーゼの活性に起因する。これらの金属プロテアーゼはコラゲナーゼ(間質コラゲナーゼ、ＭＭＰ−１;ＰＭＮコラゲナーゼ、ＭＭＰ−８コラゲナーゼ３、ＭＭＰ１３)、ゼラチナーゼ(ゼラチナーゼＡ、ＭＭＰ−２、７２kＤa−ゼラチナーゼ、IV型コラゲナーゼ;ゼラチナーゼＢ、ＭＭＰ−９、９２kＤa−ゼラチナーゼ、IV型コラゲナーゼ)およびストロメリシン(プロテオグリカナーゼ、ＭＭＰ−３、ストロメリシン−１、トランシン;ストロメリシン−２、ＭＭＰ−１０;ストロメリシン−３、ＭＭＰ−１１)である。通常、これらの異化酵素はこれらの合成と分泌のレベルおよびこれらの細胞外活性のレベルにおいて厳しく調節され、後者の調節は特異的インヒビター、例えば金属プロテアーゼと不活性錯体を形成するＴＩＭＰ(金属プロテアーゼの組織インヒビター)等、およびより一般的なプロテアーゼインヒビター、例えばa2−マクログロブリン等の作用によっておこなわれる。
金属プロテアーゼによって触媒される細胞外マトリックスの吸収によって促進される結合組織の調節できない破壊は多くの病的症状の特徴である。このような症状としては次のものが例示される:リウマチ性関節炎、骨関節炎、敗血性関節炎、角膜潰瘍、表皮潰瘍、胃潰瘍、腫瘍の転移または浸潤、歯周疾患、タンパク尿症、アテローム性プラク破裂に関連する冠状動脈血栓症および骨疾患。永続的無能をもたらす外傷を伴う病的症状(pathological  sqaelae)を予防するのに本発明によるインヒビターは有用である。これらの化合物は排卵または着床を妨げるので産児制限の手段としても有用である。金属プロテアーゼインヒビターの投与によってこれらの疾患の発病を有利な方向へ改善することが期待されており、このような目的のために多数の化合物が提案されている。これに関する一般的な概説文献としては次のものが挙げられる:ヴァール(Ｒ．Ｃ．Ｗahl)ら、Ａnn．Ｒep．Ｍed．Ｃhem．、第２５巻、第１７５頁〜第１８５頁、アカデミックプレス社(サンジエゴ)１９９０年発行。
金属プロテアーゼを抑制する多数の低分子量のペプチド様化合物が報告されている。これらのうちで最も注目すべきものはアンギオテンシン転換酵素(ＡＣＥ)に関連するものであり、このような作因はデカペプチドアンギオテンシンＩから強力な昇圧物質であるアンギオテンシンIIへの転換を阻害する作用をする。このタイプの化合物はヨーロッパ特許出願ＥＰ−Ａ−００１２４０１号明細書に記載されている。また、関連するメルカプトアミドペプチジル誘導体も生体外および生体内においてＡＣＥインヒビター活性を示すことが報告されている［ウェラー(Ｈ．Ｎ．Ｗeller)ら、Ｂiochem. Ｂiophys. Ｒes. Ｃomm.、第１２５巻(１)、第８２頁〜第８９頁(１９８４年)］。
ＴＮＦαは、細胞に結合した２８kＤ前駆体として最初に生産されるサイトカインであり、これは活性な１７kＤ形として放出され[ジュー(Ｄ−Ｍ、Ｊue)ら、Ｂiochemistry、第２９巻、第８３７１頁〜第８３７７頁(１９９０年)]、該活性形は生体内における多数の有害な効果を媒介する。これをヒトまたはその他の動物に投与すると、炎症、発熱、心血管に影響を及ぼす効果、出血、凝固と急性相応答および急性疾患やショック状態の間にみられる症状と類似の症状がもたらされる。長期間にわたる投与によってもカヘキシーおよび無食欲症がもたらされる。ＴＮＦαの過度の蓄積は致命的となる。
特異的な抗体によるＴＮＦα効果のブロッキングが急性疾患、ショック状態、移植片−宿主反応(graft  versus  host  reaction)および自己免疫疾患に有益であるという重要な証拠が動物実験の研究から得られている。ＴＮＦαは一部の骨髄腫やリンパ腫に対する自己毛髪(autocrine)成長因子であり、これら腫瘍を有する患者の正常な造血を抑制する作用をする。
従って、ＴＮＦαの生産もしくは作用を防止することは、多くの炎症、感染症、免疫疾患または悪性疾患の強力な治療的方策になると予測されている。この種の疾患には、特に限定的ではないが次のものが例示される:敗血症ショック、血行力学的ショックおよび敗血症症候群[マシソン(Ｍathison)ら、Ｊ． Ｃlin. Ｉnve st.、第８１巻、第１９２５頁〜第１９３７頁(１９８８年);ミースク(Ｍiethke)ら、Ｊ．Ｅxp. Ｍed.、第１７５巻、第９１頁〜第９８頁(１９９２年)]、虚血後の再灌流損傷、マラリア(グラウ(Ｇrau)ら、Ｉmmunol. Ｒev.、第１１２巻、第４９頁〜第７０頁(１９８９年)]、マイコバクテリウム感染症[パーネス(Ｂarnes)ら、Ｉnfect. Ｉmm.、第６０巻、第１４４１頁〜第１４４６頁(１９９２年)]、髄膜炎、乾癬、充血性心不全、線維性疾患、悪態症、移植充血、癌、自己免疫疾患、リウマチ性関節炎、多発性硬化症、放射性障害、免疫反応抑制性モノクローナル抗体、例えば、ＯＫＴ３またはＣＡＭＰＡＴＨ−１等の投与後の毒性および酸素過剰症的歯槽損傷。
現在の臨床的な抗ＴＮＦα対策にはコルチコステロイド、例えばデキサメタソン等の使用およびサイトカイン遺伝子転写の非特異的インヒビターであるシクロスポン−ＡまたはＦＫ５０６の使用が含まれる。ホスホジエステラーゼインヒビター、例えば、ペントキシフィリン等はＴＮＦα遺伝子転写のより特異的なインヒビターであることが報告されている[エンドレス(Ｅndres  Ｓ．)、Ｉmmunol.、第７２巻、第５６頁〜第６０頁(１９９１年);シャンデン(Ｓchandene)ら、Ｉmmunol.、第７６巻、第３０頁〜第３４頁(１９９２年);アレグレ(Ａlegre、Ｍ．Ｌ．)ら、Ｔransplantation、第５２巻、第６７４頁〜第６７９頁(１９９１年);ビアンコ(Ｂianco)ら、Ｂlood、第７８巻、第１２０５頁〜第１２２１頁(１９９１年)]。サリドマイドも白血球によるＴＮＦαの生産を抑制する[サンパジョ(Ｓanpajo)ら、Ｊ．Ｅxp. Ｍed.、第１７３巻、第６９９頁〜第７０３頁(１９９１年)]。実験的条件下においては、抗−ＴＮＦαモノクローナル抗体、可溶性ＴＮＦレセプターおよび可溶性ＴＮＦレセプター／免疫アドヘシンはＴＮＦの作用効果を特異的に抑制する[バッグバイ(Ｂagby)ら、Ｊ．Ｉnfect. Ｄis.、第１６３巻、第８３頁〜第８８頁(１９９１年);シャルパンティエ(Ｃharpentier)ら、Ｐresse-med.、第２０巻、第２００９頁〜第２０１１頁(１９９１年);シルバ(Ｓilva)ら、Ｊ．Ｅnfect. Ｄis.、第１６２巻、第４２１頁〜第４２７頁(１９９０年);フランクス(Ｆranks)ら、Ｉnfect. Ｉmmun.、第５９巻、第２６０９頁〜第２６１４頁(１９９１年);トレーシー(Ｔracey)ら、Ｎature、第３３０巻、第６６２頁〜第６６４頁(１９８７年);フィッシャー(Ｆischer)ら、ＰＮＡＳ  ＵＳＡ(１９９２年)(印刷中);レスラウアー(Ｌesslauer)ら、Ｅur. Ｊ．Ｉmmunol.、第２１巻、第２８８３頁〜第２８８６頁(１９９１年);アシュケナジ(Ａshkenazi)ら、ＰＮＡＳ  ＵＳＡ、第８８巻、第１０５３５頁〜第１０５３９頁(１９９１年)]。
ＴＮＦの効果が２種のペプチド(ＴＮＦαおよびＴＮＦβ)によって媒介されることが最近報告されている。これらのペプチドは相互にわずか３０％の相同性しか有しないが、同じレセプターを活性化させ、また、隣接遺伝子によって直接的にコードされる。従って、腫瘍壊死因子またはＴＮＦという用語は、本明細書で用いるように、腫瘍壊死因子αおよびＴＮＦαに比べて高度の配列相同性または実質的に類似の生理的効果を有するペプチド(例えば、ＴＮＦβ)を意味する。
本発明の一つの目的は、細胞からＴＮＦの放出を実質上抑制する化合物であって、ＴＮＦによって媒介される疾患の処置に使用できる化合物を提供することである。このような用途には、特に限定的ではないが、以下に例示する疾患の処置が含まれる:炎症、熱病、心血管効果、出血、凝血および急性相応答(acute  phase  response)、カヘキシー、無食欲症、急性感染症、ショック状態、移植片−宿主反応および自己免疫症。
結合組織の破壊に関連する金属プロテアーゼ、例えば、コラゲナーゼ、ストロメリシンおよびゼラチナーゼ等の作用を抑制する特性を有する化合物が、生体外および生体内におけるＴＮＦの放出を抑制することが報告されている[ギアリング(Ａ．Ｊ．Ｈ．Ｇearing)ら、Ｎature、第３７０巻、第５５５頁〜第５５７頁(１９９４年);マクギーハン(Ｇ．Ｍ．ＭcＧeehan)ら、Ｎature、第３７０巻、第５５８頁〜第５６１頁(１９９４年);クリミン(Ｍ．Ｊ．Ｃrimmin)ら、ＷＯ９３／２００４７]。これらの文献に報告されているインヒビターはヒドロキサミン酸亜鉛結合基を有している。
従って、本発明の別の目的は、ＴＮＦの放出を抑制すると共に、ＭＭＰの作用を抑制する化合物であって、ＴＮＦおよび／またはＭＭＰによって媒介される疾患で患う患者の処置に使用できる化合物を提供することである。
当業者に理解されるように、ヒトの線維芽細胞コラゲナーゼ、ストロメリシンおよびゼラチナーゼの間のホモロジーの有意な割合は、１種の酵素を抑制する化合物がこれらの全てをある程度抑制するという可能性をもたらす。
コラゲナーゼを抑制する化合物であって、本発明による化合物と類似の構造を有する化合物は米国特許第４，５１１，５０４号明細書(１９８５年４月１６日発行)および同第４，５６８，６６６号明細書(１９８６年２月４日発行)に開示されている。ストロメリシン(プロテオグリカナーゼ)を抑制する関連する構造を有する化合物は米国特許第４，７７１，０３７号明細書(１９８８年９月１３日発行)に開示されている。
ストロメリシンおよびコラゲナーゼインヒビターは敗血性関節炎に関連する関節軟骨損傷の防止に有用であると考えられる。関節の細菌感染症は炎症反応を誘発し、該炎症反応は伝染性作因の除去が必要となる限度を越えて永続するので、組織成分の永続的損傷がもたらされる。細菌剤を動物実験に用いることによって、タンパク質分解活性を発現する関節炎反応を誘発させることが報告されている[ケース(Ｊ．Ｐ．Ｃase)ら、Ｊ．Ｃlin. Ｉnvest.、第８４巻、第１７３１頁〜第１７４０頁(１９８９年);ウイリアムズ(Ｒ．Ｊ．Ｗilliams)]ら、Ａrth. Ｒheum.、第３３巻、第５３３頁〜第５４１頁(１９９０年)]。
ストロメリシン、コラゲナーゼおよびゼラチナーゼのインヒビターは腫瘍転移の制御に有用であると考えられる。この場合、所望により、常用されている化学療法および／または照射療法を併用してもよい[マトリシアン(Ｌ．Ｍ．Ｍatrislian)ら、ＰＮＡＳ(Ｐroc. Ｎatl. Ａcad. Ｓci.)ＵＳＡ、第８３巻、第９４１３頁〜第９４１７頁(１９８６年);ウィルヘルム(Ｓ．Ｍ．Ｗillhelm)ら、ＰＮＡＳ  ＵＳＡ、第８４巻、第６７２５頁〜第６７２９頁(１９８７年);ウェルブ(Ｚ．Ｗerb)ら、Ｊ．Ｃell  Ｂiol.第１０９巻、第８７２頁〜第８８９頁(１９８９年);リオッタ(Ｌ．Ａ．Liotta)ら、Ｌab. Ｉnvest.第４９巻、第６３６頁〜第６４９頁(１９８３年);ライヒ(Ｒ．Ｒeich)ら、Ｍetastasis、チバ財団シンポジウム(ウィリー、チチェスター、１９８８年)、第１９３頁〜第２１０頁]。
分泌プロテアーゼ、例えば、ストロメリシン、コラゲナーゼおよびゼラチナーゼは、転移腫瘍浸潤中における細胞の移動を含む過程において重要な役割を果たす。実際、マトリックス金属プロテアーゼが特定の腫瘍細胞系において過発現されることが証明されている。この場合、この酵素は下部の基底膜を浸透し、初期の腫瘍形成部位から腫瘍細胞を離脱させて循環系内へ流入させる。血管壁に付着した腫瘍細胞はこれらの金属プロテアーゼを利用して下部の基底膜を貫通して他の組織内へ浸潤することによって腫瘍転移をもたらす。この過程を抑制することにより、現在利用されている化学療法および／または照射療法の効能を改善することが可能となる。
これらのインヒビターは歯周疾患、例えば、歯肉炎等の抑制にも有用である。コラゲナーゼとストロメリシンの活性は、炎症を起こした歯肉から誘導された線維芽細胞から遮断されている[ユイット(Ｖ．Ｊ．Ｕitto)ら、Ｊ．Ｐeriodontal  Ｒes.、第１６巻、第４１７頁〜第４２４頁(１９８１年)]。酵素の濃度は歯肉疾患の痛みと関連づけられている[オーバーオール(Ｃ．Ｍ．Ｏverall)ら、Ｊ．Ｐeriodontal  Ｒes.、第２２巻、第８１頁〜第８８頁(１９８７年)]。
タンパク質分解過程はアルカリ熱傷による角膜の潰瘍化においても観察されている[ブラウン(Ｓ．Ｉ．Ｂrown)ら、Ａrch. Ｏpthalmol.、第８１巻、第３７０頁〜第３７３頁(１９６９年)]。メルカプト含有ペプチドは、ウサギのアルカリ熱傷角膜から単離されたコラゲナーゼを抑制する[バーンズ(Ｆ．Ｒ．Ｂurns)、Ｉnvest. Ｏpthalmol.、第３０巻、第１５６９頁〜第１５７５頁(１９８９年)]。アルカリ熱傷眼または感染症により角膜が潰瘍化した眼を、これらの金属エンドプロテアーゼのインヒビターと共にクエン酸ナトリウムもしくはアスコルビン酸ナトリウムおよび／または殺菌剤を用いて処理すると、角膜崩壊の進行が効果的に防止される。
ストロメリシンは、尿中への血漿タンパク質の通過制限を主要な機能とする腎糸球体基底膜(ＧＢＭ)の組織成分の崩壊と関連づけられている[バリコス(Ｗ．Ｈ．Ｂaricos)ら、Ｂiochem. Ｊ，、第２５４巻、第６０９頁〜第６１２頁(１９８９年)]。腎糸球体疾患によってもたらされるタンパク尿は、血漿タンパク質に対するＧＢＭの透過率が増大によって引き起こされる過剰タンパク質含有尿である。ＧＢＭの透過率が増大する原因は知られていないが、ストロメリシンを含むプロテアーゼが腎糸球体疾患において重要な役割を果たしている。この酵素の抑制により、腎機能不全に関連するタンパク尿が軽減される。
ストロメリシンの活性の抑制により、冠状動脈血栓症へ導くアテローム性プラクの破裂が防止されることが提案されている。アテローム性プラクの引き裂きまたは破裂は冠状動脈血栓症を発生させる最も一般的な現象である。これらのプラクを包囲する結合組織マトリックスが炎症性細胞の浸潤によって放出されるサイトカインまたはタンパク質分解酵素によって不安定化または崩壊されることがプラクの亀裂の原因として提案されている。このようなプラクの破裂により、血管から血液が急激に流出すると急性の血栓症がもたらされる。高レベルのストロメリシンのＲＮＡメッセージが、手術時の心臓移植患者から採取されたアテローム性プラク内の個々の細胞に局在化することが見出されている[ヘニー(Ａ．Ｍ．Ｈenny)ら、ＰＮＡＳ  ＵＳＡ、第８８巻、第８１５４頁〜第８１５８頁]。これらの化合物によるストロメリシンの抑制により、アテローム性プラクを安定化させる結合組織マトリックスの崩壊の防止もしくは遅延を促進させ、これによって急性の冠状動脈血栓症の惹起を防止することができる。
ストロメリシンとコラゲナーゼの特異的インヒビターを避妊薬としても有用であると考えられる。ストロメリシンやコラゲナーゼを含む金属プロテアーゼの発現は未受精卵、接合体および分割がさらに進行した受精卵において観察されており、その発現は胎児の胞胚段階において増大し、また、内胚葉分化によって増大することが証明されている[ブレンナー(Ｃ．Ａ．Ｂrenner)ら、Ｇenes  ＆  Ｄevelop.、第３巻、第８４８頁〜第８５９頁(１９８９年)]。腫瘍の浸潤の場合のように、胞胚は金属プロテアーゼを発現し、着床中は子宮壁の細胞外マトリックスを貫通する。これらの初期の発育過程におけるストロメリシンとコラゲナーゼの抑制により、子宮内における正常な胚の発育および／または着床が妨げられるものと考えられている。このような妨害作用は新規な避妊法を構成する。さらに、コラゲナーゼが排卵過程においても重要な役割を果たすことが明らかにされている。この場合、卵胞の尖端領域上のコラゲナーゼ被覆層は、卵子を逸脱させるためには貫通されなければならない。コラゲナーゼはこの過程において検出されており、インヒビターが排卵を妨害するのに有効であることが明らかにされている[ヴェスナー(Ｊ．Ｆ．Ｗoessner)ら、Ｓteroids、第５４巻、第４９１頁〜第４９９頁(１９８９年)]。また、排卵中のストロメリシン活性に関する役割も知られている[トー(Ｋ．Ｌ．Ｔoo)ら、Ｅndocrin.、第１１５巻、第１０４３頁〜第１０５０頁(１９８４年)]。
コラーゲン分解活性およびストロメリシン活性は栄養失調性表皮水泡症においても観察されている[クロンベルガー(Ａ．Ｋronberger)ら、Ｊ．ＩInvest. Ｄermatol.、第７９巻、第２０８頁〜第２１１頁(１９８２年);サワムラ(Ｄ．Ｓawamura)ら、Ｂiochem. Ｂiophys. Ｒes. Ｃommun.、第１８４巻、第１００３頁〜第１００８頁(１９９１年)]。金属エンドプロテアーゼの抑制により、皮膚の結合成分の急激な破壊は制限されるべきである。
組織成分を含有する細胞外マトリックスのほかに、ストロメリシンはa1−プロテアーゼインヒビターを含む他の生体内基質を崩壊させるので、他のプロテアーゼ、例えば、エラスターゼ等の活性に影響を及ぼす[ウィンヤード(Ｐ．Ｇ．Ｗinyard)ら、ＦＥＢＳ  Ｌetts.、第２７９巻(１)、第９１頁〜第９４頁(１９９１年)]。金属エンドプロテアーゼマトリックスの抑制により、内因性インヒビターの抗プロテアーゼ活性を高くすることができる。
最近の文献によれば、ＭＭＰ系の数種類の新規酵素が同定されており、これらのうちの一部の酵素は疾患において重要な役割を果たすことが明らかにされている。乳癌細胞に対して特有な酵素であるコラゲナーゼ３は乳癌において有用である[フレイジェ(Ｊ．Ｍ．Ｐ．Ｆreije)ら、Ｊ．Ｂiol. Chem.、第２６９巻(２４)、第１６７６６頁〜第１６７７３頁(１９９４年)]。ＭＭＰ系の別の酵素であるＭＴ−ＭＭＰはゼラチナーゼＡの活性化において重要な酵素であることが明らかにされている[サトウ(Ｈ．Sato)ら、Ｎature、第３７０巻、第６１頁〜第６５頁(１９９４年)]。ゼラチナーゼＡは、前述のような腫瘍の増殖と転移において重要な酵素である。
β−アミロイド前駆体タンパク質(ＡＰＰ)の崩壊により、老人性プラクの主要な構成要素であって、アルツハイマー疾患(ＡＤ)の患者にみられるアミロイドプラクが発生する。最近の２つの文献によれば、ＡＰＰを分解してアミロイドプラクを発生する金属プロテアーゼ酵素が同定されている[アブラハム(Ｃ．Ｒ．Ａbrham)ら、Ｂiochemistry、第３３巻、第１９２頁〜第１９９頁(１９９４年);フーバー(Ｇ．Ｈuber)ら、ＢBiochem. Ｂiophys. Ｒes. Ｃomm.、第２０１巻(１)、第４５頁〜第５３頁(１９９４年)]。
当業者に理解されるように、これらの新規な酵素と他のＭＭＰの間のホモロジーの有意な割合は、１種の酵素を抑制する化合物がこれらの新規な酵素をある程度抑制するという可能性をもたらす。従って、本発明に包含されるインヒビターは、これらの新規な酵素が関連する疾患において有用である。
発明の概要
本発明には、マトリックス金属プロテアーゼおよび／または変性疾患(例えば、前記のような疾患)や癌を含むＴＮＦαで媒介される疾患の有用なインヒビターである式(Ｉ)で表される新規なメルカプトアルキルペプチジル化合物が包含される。
本発明の一つの観点によれば、下記の一般式(Ｉ)で表される化合物、その塩、溶媒和物および水和物が提供される。
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一般式(Ｉ)において、Ｒ1等は以下の意義を有する。
Ｒ1はＣ1-6アルキル、Ｃ2-6アルケニル、−Ｃ1-6アルキル−アリール、アリール、−Ｃ1-6アルキル−へテロアリール、ヘテロアリールまたは−Ｃ1-6アルキル−ＡＲ9[ＡはＯ、ＮＲ9またはＳ(Ｏ)m(m＝０〜２)を示し、Ｒ9はＨ、Ｃ1-4アルキル、アリール、ヘテロアリール、−Ｃ1-4アルキル−アリールまたは−Ｃ1-4アルキル−へテロアリールを示す。Ａ＝ＮＲ9のときには、Ｒ9は同一または異なっていてもよい]を示す。
Ｒ2はＨまたはＣ1-6アルキルを示す。
Ｒ3は[Alk]nＲ6(AlkはＣ1-6またはＣ2-6アルケニルを示し、nは０または１を示す)を示す。
ＸはＮＲ4Ｒ5[(ｉ)Ｒ4はＨまたはアミノ(ＮＨ2)、アリール、アリールアミノ、保護アミノ、ジ(Ｃ1-6アルキル)アミノ、モノ(Ｃ1-6アルキル)アミノ、ＣＯ2Ｈ、保護カルボキシル、カルバモイル、モノ(Ｃ1-6アルキル)カルバモイルもしくはジ（Ｃ1-6アルキル)カルバモイルによって置換されていてもよいＣ1-6アルキルを示し、Ｒ5はＨまたはＣ1-6アルキルを示すか、あるいは(ii)ＮＲ4Ｒ5はピロリジノ、ピペリジノまたはモルホリノ等の環を形成する］を示す。
Ｒ7はＨまたはＲ10ＣＯ[Ｒ10はＣ1-4アルキル、−Ｃ1-4アルキル−アリール、−Ｃ1-4アルキル−ヘテロアリール、シクロ(Ｃ3-6)アルキル、−Ｃ1-4アルキル−シクロ(Ｃ3-6)アルキル、Ｃ2-6アルケニル、−Ｃ2-6アルケニル−アリール、アリールまたはヘテロアリールを示す。
Ｒ8はアリール(Ｒ11で置換)、ヘテロアリール(Ｒ11で置換されていてもよい)、Ｃ1-4アルキル−Ｒ11、−Ｃ1-4アルキル−アリール(Ｒ11で置換)、−Ｃ1-4アルキル−ヘテロアリール(Ｒ11で置換されていてもよい)、シクロ(Ｃ3-6)アルキル(Ｒ11で置換されていてもよい)、シクロ(Ｃ3-6)アルケニル(Ｒ11で置換されていてもよい)、−Ｃ1-4アルキル−シクロ(Ｃ3-6)アルキル(Ｒ11で置換されていてもよい)、または下記の３群の基のいずれかの基
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[pは１または２を示し、ＢおよびＣは相互に独立してＯ、Ｓ、Ｃ、(Ｒ9)2およびＮＲ9から選択される]を示す。
Ｒ6はＡＲ9、シクロ(Ｃ3-6)アルキル、シクロ(Ｃ3-6)アルケニル、Ｃ1-6アルキル、−Ｃ1-6アルコキシ−アリール、ベンジルオキシアリール、アリール、ヘテロアリール、−Ｃ1-3アルキル−へテロアリール、−Ｃ1-3アルキル−アリール、−Ｃ1-6アルキル−ＣＯＯＲ9、−Ｃ1-6アルキル−ＮＨＲ、ＣＯＮＨＲ、ＮＨＣＯ2Ｒ、ＮＨＳＯ2ＲまたはＮＨＣＯＲを示す(ＲはＲ10として定義される)。
Ｒ11はＳＯ2Ｒ13、ＳＲ7、ＳＲ9、ＣＯＲ13、Ｎ(Ｒ9)2、ＮＲ9Ｒ12、ＯＲ9、スクシンイミドまたはフタルイミドを示す。
Ｒ12はＨ、ＣＯＲ9、ＣＯ2Ｒ9(Ｒ9はＨを示さない)、ＣＯＮＨＲ9またはＳＯ2Ｒ9(Ｒ9はＨを示さない)を示す。
Ｒ13はＯＨ、ＯＣ1-4アルキル、Ｏ−Ｃ1-4アルキル−アリール、Ｎ(Ｒ9)2(Ｒ9は同一または異なっていてもよい)、Ｃ1-4アルキル、アリール、ヘテロアリール、Ｃ1-4アルキル−アリールまたは−Ｃ1-4アルキル−へテロアリールを示す。
本発明による好ましい化合物には、Ｒ1等が相互に独立的または従属的に下記の意義を有する化合物が含まれる。
Ｒ1:Ｃ1-6アルキルまたはＣ1-4アルキルＡＲ9[ＡはＳ(Ｏ)m、ＮＲ9またはＯを示し、mは０、１または２を示し、Ｒ9はＨ、Ｃ1-4アルキルまたはアリールを示す]
Ｒ2:ＨまたはＣ1-4アルキル
Ｒ3:[Alk]nＲ6[nは０または１を示し、ＡlkはＣ1-4アルキルを示し、Ｒ6はＣ1-4アルキル、Ｃ1-3アルキルアリール、Ｃ1-3アルキルへテロアリールまたはＡＲ9を示す]
Ｒ4:Ｈ
Ｒ5:ＨまたはＣ1-6アルキル
ＮＲ4Ｒ5:５〜７員環(例えば、ピロリジン環、ピペリジン環またはモルホリン環)
Ｒ7:ＨまたはＲ10ＣＯ(Ｒ10はＣ1-4アルキルを示す)
Ｒ8:Ｃ1-4アルキルＲ11、Ｃ1-4アルケニルＲ11、シクロ(Ｃ3-6)アルキルＲ11[Ｒ11はＣＯＲ13、ＮＲ9Ｒ12、Ｎ(Ｒ9)2、スクシンイミドまたはフタルイミドを示す]
Ｒ12:ＣＯＲ9、ＣＯ2Ｒ9(但し、Ｒ9はＨを示さない)またはＳＯ2Ｒ9(但し、Ｒ9はＨを示さない)
Ｒ13:ＯＨ、ＯＣ1-4アルキルまたはＮ(Ｒ9)2
本発明による化合物はＭＭＰに対しては５０mＭよりも小さなＩＣ50値および／またはＴＮＦ抑制の全細胞アッセイにおいては５０mＭよりも小さなＩＣ50値を示す。
本発明による化合物は１個または２個以上の置換された不斉炭素原子[例えば、式(Ｉ)において星印☆で示す炭素原子]を有する。式(Ｉ)で表される化合物中に１個または２個以上の不斉中心があるために立体異性体が存在するが、本発明には鏡像体やジアステレオマーを含む全ての立体異性体およびラセミ混合物を含むこれらの混合物も包含される。
これらの式において、「〜」はＲ−およびＳ−立体配置の可能性を示す潜在的不斉中心で使用し、また、「＜」および「・・・」は不斉中心における特有の立体配置を示すのに使用する。
「Ｃ1-6アルキル」は炭素原子数１〜６の直鎖状または分枝鎖状アルキル基、例えば、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ブチル、ｔ−ブチル、ペンチルおよびヘキシル等を示す。
「Ｃ1-4アルキル」は炭素原子数１〜４の直鎖状または分枝鎖状アルキル基、例えば、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ブチルおよびｔ−ブチル等を示す。
「Ｃ2-6アルケニル」はＥもしくはＺ立体化学が可能な二重結合１個を有する炭素原子数２〜６の直鎖状または分枝鎖状アルケニル基、例えば、ビニル、１−プロペニル、１−ブテニル、２−ブテニルおよび２−メチル−２−プロペニル等を示す。
「Ｃ3-6シクロアルキル」は炭素原子数３〜６の飽和脂環式基、例えば、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチルおよびシクロヘキシル等を示す。
「Ｃ3-6シクロアルケニル」は二重結合１個を有する炭素原子数３〜６の脂環式基、例えば、シクロペンテニルおよびシクロヘキセニル等を示す。
「アリール」は所望により置換基、例えば、ハロゲン(フッ素、塩素、臭素およびヨウ素)、トリフルオロメチル、Ｃ1-6アルキル、アルコキシおよびフェニル等から選択される置換基を有するフェニル基またはナフチル基を示す。
「保護アミノ」および「保護カルボキシル」は、当業者に既知の方法によって保護されたアミノ基およびカルボキシル基を示す。例えば、アミノ基はベンジルオキシカルボニル、ｔ−ブチルカルボニルおよびアセチル等によって保護されていてもよく、あるいはフタルイミド基等の形態であってもよく、また、カルボキシル基は易開裂性エステル、例えば、メチルエステル、エチルエステル、ベンジルエステルまたはｔ−ブチルエステルの形態で保護されていてもよい。
「アルコキシ」は炭素原子数１〜６の直鎖状または分枝鎖状アルコキシ基、例えば、メトキシ、エトキシ、プロポキシ、イソプロポキシ、ブトキシまたはｔ−ブトキシ等を示す。
「Ｃ0-4アルキル」は単結合または炭素原子数４までの直鎖状もしくは分枝鎖状アルキル基、例えば、メチル、エチル、プロピルおよびイソプロピル等を示す。
「ヘテロアリール」は少なくとも１個の原子がＯ、ＮおよびＳから成る群から選択される５〜１０個の原子から成る芳香族環系を示す。
式(Ｉ)で表される化合物の塩には薬学的に許容される塩、例えば、無機酸または有機酸から誘導される酸付加塩、例えば、塩酸塩、臭化水素酸塩、ｐ−トルエンスルホン酸塩、リン酸塩、硫酸塩、過塩素酸塩、酢酸塩、トリフルオロ酢酸塩、プロピオン酸塩、クエン酸塩、マロン酸塩、コハク酸塩、乳酸塩、シュウ酸塩、酒石酸塩および安息香酸塩等が含まれる。
塩は塩基を用いて形成させてもよい。この種の塩には無機塩基または有機塩基から誘導される塩、例えば、アルカリ金属塩(例えば、マグネシウム塩、カルシウム塩等)および有機アミン塩(例えば、ホルモン塩、ピペリジン塩、ジメチルアミン塩、ジエチルアミン塩等)等が含まれる。
本発明による化合物の「保護カルボキシル基」がエステル化されたカルボキシル基の場合、該基は代謝的に不安定なエステルＣＯ2Ｒ14であってもよい[Ｒ14はエチル、ベンジル、フェネチル、フェニルプロピル、α−ナフチル、β−ナフチル、２，４−ジメチルフェニル、４−ｔ−ブチルフェニル、２，２，２−トリフルオロエチル、１−(ベンジルオキシ)ベンジル、１−(ベンジルオキシ)エチル、２−メチル−１−プロピオニルオキシプロピル、２，４，６−トリメチルベンジルオキシメチルまたはピバロイルオキシメチルであってもよい。]
一般式(Ｉ)で表される化合物は当該分野で既知の適当な方法および／または以下に説明する方法によって調製してもよく、これらの調製法も本発明の一部を構成する。従って、本発明の第二の観点によれば、前記の一般式(Ｉ)で表される化合物の製造法が提供される。式(Ｉ)で表される特定の立体異性体が必要な場合には、適当なホモキラル出発原料を用いて本明細書に記載の方法に従って合成してもよく、または、常套の分離技術(例えば、ＨＰＬＣ)を用いて混合物から異性体を分離してもよい。
本発明による化合物は以下の方法によって調製してもよい。以下の説明と式において、Ｒ1、Ｒ2、Ｒ3、Ｒ4、Ｒ5、Ｒ6、Ｒ7、Ｒ8、Ｒ9、Ｒ10、Ｒ11、Ｒ12、Ｒ13、Ｒ14、Ａ、Ｂ、ＣおよびＸは、特に言及しない限り、前記と同意義である。以下に記載の種々の化合物中に存在する官能基であって該化合物中に保持するのが望しい基、例えば、アミノ基、ヒドロキシル基またはカルボキシル基はいずれかの反応を開始する前に保護することが必要である。この場合、保護基は特定の反応の最終段階において除去すればよい。このような官能基の適当な保護基は当業者には明らかであり、詳細は例えば、次の文献を参照されたい:「有機合成における保護基」、ウィリー・インターサイエンス社発行、グリーン(Ｔ．Ｗ．Ｇreene)およびウッツ(Ｐ．Ｇ．Ｍ．Ｗts)著。
一般式(Ｉ)で表される化合物の調製法には、一般式(Ｉ)においてＲ7が適当な保護基、例えば、ｔ−ブチル基またはアセテート基を示す一般式(II)で表される化合物を、例えば加水分解によって脱保護する工程が含まれる。
0003787605.tif 000004
式(Ｉ)で表される特定の立体異性体が必要な場合には、高速液体クロマトグラフィーのような常套の分離技術によって該異性体を得てもよい。しかしながら、所望により、カップリング反応において適当なホモキラル出発原料を用いて式(Ｉ)で表される特定の立体異性体を得てもよく、これについては以下に例示する。
一般式(II)で表される中間体は、式(III)(式中、Ｒ7とＲ8は前記と同意義である)で表される酸またはこれらの活性誘導体を式(IV)で表されるアミンとカップリングさせることによって調製してもよい。式(III)で表される酸の活性誘導体には、例えば、酸無水物および酸ハロゲン化物(例えば、酸塩化物)が包含される。
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カップリング反応はこのタイプのアミノ化反応の場合の標準的条件下でおこなってもよい。即ち、この反応は溶剤、例えば、不活性有機溶剤、例えば、エーテル(例えば、テトラヒドロフランのような環状エーテル)、アミド(例えば、ジメチルホルムアミドのような置換アミド)またはハロゲン化炭化水素(例えば、ジクロロメタン)を使用し、所望による塩基、例えば、アミンのような有機塩基(例えば、トリエチルアミンまたはＮ−メチルモルホリンのような環状アミン)の存在下において、低温(例えば、−３０℃)から室温の間の温度、例えば、−２０℃〜０℃でおこなう。式(III)で表される酸を用いる場合、この反応はさらに縮合剤、例えば、Ｎ，Ｎ'−ジシクロヘキシルカルボジイミドのようなジイミドの存在下でおこなってもよいが、１−ヒドロキシベンゾトリアゾールのようなトリアゾールの存在下でおこなうのが有利である。あるいは、式(IV)で表されるアミンとの反応の前に、該酸をクロロ蟻酸エチルのようなクロロ蟻酸塩と反応させてもよい。
一般式(IV)で表されるアミンは、式（Ｖ）で表される酸もしくはその活性誘導体を式(IV)で表されるアミンとカップリングさせた後、保護基を除去することによって調製してもよい。
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式(Ｖ)で表される酸の活性誘導体には、例えば、先に略述したように、酸無水物または酸塩化物のような酸ハロゲン化物が包含される。
一般式(Ｖ)および(VI)で表されるアミノ酸およびこれらの誘導体はキラル体またはラセミ体として得ることができる。キラル体の場合、これらの化合物は、一般式(Ｉ)で表される化合物のキラル合成に必要な基本的な不斉要素を提供する。多数のこれらの誘導体は、出発原料として市販品を使用し、当業者に既知の方法によって容易に得ることができる。これに関しては、例えば、次の文献を参照されたい:「ペプチド合成の実際」、ボダンスズク(Ｍ．Ｂodanszk)ら著、スプリンガー・フェアラーク(ニューヨーク)１９８４年発行;ＷＯ  ９２／２１３６０。
本発明の別の観点によれば、一般式(II)で表される化合物は、一般式(VII)[式中、Ｒ15は適当な脱離基(例えば、臭素原子のようなハロゲン原子またはメタンスルホネートのようなアルキルスルホネートエステル)を示す]で表される化合物および一般式(VIII)[式中、Ｒ7は適当な保護基(例えば、ｔ−ブチル基またはアセテート基)を示す]で表されるチオールを、当業者に既知の標準的な条件下において(ＷＯ  ９０／０５７１９参照)、求核置換反応させることによって調製してもよい。
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一般式(VIII)で表されるチオールは、市販の出発原料を使用し、当業者に既知の方法によって調製してもよい。一般式(VIII)で表される多くのチオールが市販されている。
一般式(VII)で表される化合物は、一般式(IX)(式中、Ｒ15とＲ8は前記と同意義を有する基またはこれらの適当な保護基を示す)で表される酸またはその活性誘導体および一般式(IV)で表されるアミンを、式(II)で表される化合物の調製に関して説明したカップリング条件と類似の条件下でカップリングさせることによって調製してもよい。
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式(III)および(IX)で表されるカルボン酸はキラル体またはラセミ体として得ることができる。これらの誘導体の多くは、市販の出発原料を使用し、当業者に既知の方法によって容易に得ることができる(ＷＯ  ９０／０５７１９)。
本発明のさらに別の観点によれば、一般式(II)で表される中間体は、一般式(Ｘ)[式中、Ｒ1、Ｒ7およびＲ8は前記と同意義である]で表される酸または該酸の活性誘導体を前述のようにして一般式(VI)で表されるアミンとカップリングさせることによって調製してもよい。
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一般式(Ｘ)で表される酸は一般式(III)で表される酸またはその活性誘導体を一般式(VI)[式中、ＸはＯＨを示す]で表されるアミンとカップリングさせるか、または該アミンの適当な保護誘導体とカップリングさせた後、脱保護させることによって調製してもよい。
一般式(Ｖ)で表される活性誘導体としては酸無水物および酸ハライド、例えば前述の酸クロリド等が例示される。
一般式(Ｉ)で表される化合物は、式(Ｉ)で表される他の化合物の相互転換によって調製してもよい。即ち、例えば、式(Ｉ)(式中、Ｒ1はＣ1-6アルキル基を示す)で表される化合物は式(Ｉ)(式中、Ｒ1はＣ2-6アルケニル基を示す)で表される化合物を適当な溶剤、例えば、エタノールのようなアルコール中でカーボン担持パラジウム触媒を用いて水素化することによって調製してもよい。さらにまた、別の製造法として、式(Ｉ)においてＲ7がＲ10ＣＯを示す化合物を、式(Ｉ)においてＲ7がＨを示す化合物を適当な溶剤、例えば、ジクロロメタンのような塩素化溶剤中、トリエチルアミンのような塩基の存在下において、適当な酸塩化物Ｒ10ＣＯＣｌを用いてアシル化することによって調製してもよい。
得られる最終生成物または中間体の混合物は、その構成成分の物理化学的な差異に基づいて既知の方法、例えば、クロマトグラフィー、蒸留、分別結晶、または所定の条件下で可能であるならば塩形成等によって分離することができる。
本発明による化合物は、ストロメリシン、コラゲナーゼおよびゼラチナーゼに関して生体外抑制活性を示し、また、ＴＮＦαの放出に関して生体外抑制活性を示す。該化合物の活性と選択性は、例えば、以下の実施例Ａにおいて説明するような酵素抑制試験によって決定してもよい。
本発明は、前述のようにマトリックス金属プロテアーゼおよび／またはＴＮＦαに起因する障害または疾患で患う患者(ヒトおよび／または乳製品、肉製品もしくは毛皮製品に関連する分野で問題となる哺乳動物またはペットとしての哺乳動物を含む)の処置法、特に、式(Ｉ)で表されるマトリックス金属プロテアーゼインヒビターを投与することを含む処置法に関する。
従って、式(Ｉ)で表される化合物は特に、骨関節炎、リューマチ性関節炎、および特定の転移性腫瘍細胞系においてみられるようなマトリックス金属プロテアーゼの過発現による適応症や疾患の処置使用できる。
前述のように、式(Ｉ)で表される化合物はＴＮＦαおよびＭＭＰのインヒビターとしての活性を示すのでヒトまたは獣医の分野において有用である。従って、別の観点によれば、本発明は、哺乳類、特にヒトにおいてＴＮＦαおよび／またはＭＭＰによって媒介される疾患または病状の処置法(治療法および予防法)であって、前記の式(Ｉ)で表される化合物または薬学的に許容されるこれらの塩を哺乳類の有効処置量投与することを含む該処置法、ヒトおよび獣医の分野において、特にＴＮＦαおよび／またはＭＭＰによって媒介される疾患または病状を処置(治療または予防)に使用するための式(Ｉ)で表される化合物、およびＴＮＦαおよび／またはＭＭＰによって媒介される疾患または病状を処置(治療または予防)するための製剤の製造における化合物(Ｉ)の使用法に関する。
このような疾患または病状には次のものが含まれる:炎症、熱病、心血管効果、出血、凝血および急性相応答、カヘキシー、無食欲性、急性感染症、ショック状態、移植片−宿主反応、自己免疫症;組織破壊を伴うもの、例えば、骨吸収、炎症性疾患、皮膚病、腫瘍増殖、二次転移による浸潤と血管形成、特に、リューマチ性関節炎、骨関節炎、歯周炎、歯肉炎、角膜潰瘍、腫瘍増殖および二次転移による浸潤と血管形成。
リューマチ性関節炎、骨関節炎、特定の転移性腫瘍細胞系等にみられるようなマトリックス金属エンドプロテアーゼの過発現に起因する適応症や疾患、またはマトリックス金属エンドプロテアーゼまたはＴＮＦαの生産増大によって媒介される他の疾患を処置するためには、式(Ｉ)で表される化合物のほかに非毒性の薬学的に許容されるキャリヤー、アジュバントおよび賦形剤を含有する単位投与形態の配合物を経口的、局所的、非経口的、吸入的、噴霧的または経直腸的に投与する。非経口的投与には皮下注射、静脈注射、筋肉注射、胸骨内注射および注入(infusion)が含まれる。本発明による化合物は温血動物、例えば、マウス、ラット、馬、牛、羊、犬および猫等の処置のほかに、ヒトの処置においても有効である。
前記の活性成分を含有する薬剤組成物は経口投与用に適した形態に調製してもよく、このような形態としてはタブレット、トローチ、ドロップ、水性もしくは油性懸濁液、分散性の粉末もしくは顆粒、エマルション、硬質もしくは軟質のカプセル、シロップおよびエリキシル等が例示される。経口投与用組成物は薬剤組成物の製造分野において既知のいずれかの方法によって調製すればよく、また、このような組成物には、薬学的に上品で風味のある製剤とするために、甘味剤、香味剤、着色剤および防腐剤から成る群から選択される１種または２種以上の添加剤を適宜配合してもよい。タブレットには、活性成分と共にタブレットの製造に適した非毒性の薬学的に許容される賦形剤を配合する。賦形剤としては不活性希釈剤(例えば、炭酸カルシウム、炭酸ナトリウム、ラクトース、リン酸カルシウムおよびリン酸ナトリウム)、造粒剤および崩壊剤(例えば、コーンスターチ、アルギン酸)、結合剤(例えば、デンプン、ゼラチンおよびアカシア)および潤滑剤(例えば、ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸およびタルク)等が例示される。タブレットは被覆しなくてもよいが、既知の方法によって被覆することにより胃腸管内での崩壊と吸収を遅延させることによって活性成分を長期間にわたって徐放させてもよい。例えば、遅延剤としてモノステアリン酸グリセリンまたはジステアリン酸グリセリンを用いてもよい。タブレットは米国特許第４，２５６，１０８号、同第４，１６６，４５２号および同第４，２６５，８７４号各明細書に記載の方法によって被覆することにより、浸透性の徐放性治療錠にしてもよい。
経口用組成物は硬質ゼラチンカプセル(この場合、活性成分は固体状の不活性希釈剤、例えば、炭酸カルシウム、リン酸カルシウムまたはカオリン等と混合する)または軟質カプセル(この場合、活性成分は水または油性媒体、例えば、ピーナッツオイル、流動パラフィンまたはオリーブ油等と混合する)の形態で提供してもよい。
水性懸濁液には活性成分と共に、水性懸濁液の調製に適した賦形剤を配合する。このような賦形剤としては沈澱防止剤(例えば、カルボキシメチルセルロースナトリウム、メチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、アルギン酸ナトリウム、ポリビニルピロリドン、トラガカントゴムおよびアカシアゴム)および分散剤もしくは湿潤剤が例示される。分散剤もしくは湿潤剤としてはレシチンのような天然に存在するホスファド、アルキレンオキシドと脂肪酸との縮合物(例えば、ポリオキシエチレンステアレート)、エチレンオキシドと脂肪族長鎖アルコールとの縮合物(例えば、ヘプタデカエチレンオキシセタノール)および脂肪酸とヘキシトールから誘導される部分エステルとエチレンオキシドとの縮合物、例えば、脂肪酸と無水ヘキシトールから誘導される部分エステルとポリオキシエチレンとの縮合物(例えば、ポリオキシエチレンソルビタンモノオレエート)等が例示される。水性懸濁液には１種または２種以上の防腐剤(例えば、エチルp−ヒドロキシベンゾエート、n−プロピルp−ヒドロキシベンゾエート)、１種または２種以上の着色剤、１種または２種以上の香味剤、１種または２種以上の甘味剤(例えば、スクロースまたはサッカリン)を配合してもよい。
油性懸濁液は、活性成分を植物油(例えば、ピーナッツオイル、オリーブ油、ゴマ油、ヤシ油)または鉱物油(例えば、流動パラフィン)に懸濁することによって調製してもよい。油性懸濁液には増粘剤、例えば、蜜ロウ、硬質パラフィンまたはセチルアルコールを配合してもよい。前記のような甘味剤および香味剤を配合することによって風味のある経口製剤を調製してもよい。これらの組成物は、アスコルビン酸のような抗酸化剤を添加して保存してもよい。
水の添加によって水性懸濁液を調製するのに適した分散性の粉末および顆粒には活性成分のほかに分散剤もしくは湿潤剤、沈澱防止剤および１種または２種以上の防腐剤を配合する。適当な分散剤もしくは湿潤剤および沈澱防止剤は先に例示した。甘味剤、香味剤および着色剤を配合してもよい。
本発明による薬剤組成物は水中油形エマルションの形態であってもよい。油性相は植物油(例えば、オリーブ油、ピーナッツオイル)、鉱物油(例えば、流動パラフィン)またはこれらの混合物であってもよい。適当な乳化剤としては天然ゴム(例えば、アカシアゴム、トラガントゴム)、天然ホスファチド(例えば、大豆ホスファチド、レシチン)、脂肪酸と無水ヘキシトールから誘導される完全エステルもしくは部分エステル(例えば、ソルビタンモノオレエート)および該部分エステルとエチレンオキシドとの縮合物(例えば、ポリオキシエチレンソルビタンモノオレエート)が例示される。このエマルションには甘味剤や香味剤を配合してもよい。
シロップおよびエリキシルは甘味剤、例えば、グリセロール、プロピレングリコール、ソルビトールまたはスクロースを用いて調製してもよい。この種の組成物には粘滑剤、防腐剤、香味剤および着色剤を配合してもよい。
薬剤組成物は注射可能な無菌水性もしくは油性懸濁液の形態であってもよい。この種の懸濁液は前記の適当な分散剤もしくは湿潤剤および沈澱防止剤を使用し、既知の方法によって調製すればよい。注射可能な無菌製剤は、非毒性の薬学的に許容される希釈剤もしくは溶剤、例えば、１，３−ブタンジオールを媒体とする注射可能な無菌溶液または懸濁液であってもよい。この場合に使用してもよい賦形剤および溶剤としては、水、リンゲル液および等張性塩化ナトリウム溶液等が例示される。さらに、無菌不揮発油を溶剤または懸濁体として用いてもよい。この種の不揮発油としては、合成のモノグリセリドやジグリセリドを含む刺激の少ないいずれの不揮発油を用いてもよい。また、注射用組成物の調製にはオレイン酸のような脂肪酸を用いてもよい。
式(Ｉ)で表される化合物は、経直腸投与用の坐剤形態で投与してもよい。この種の組成物は、常温では固体であるが、直腸内の温度では液体となる適当な無刺激性賦形剤と活性成分と混合することによって調製することができ、該組成物は直腸内で融解して活性成分を放出する。適当な賦形剤としてはココア乳脂およびポリエチレングリコールが例示される。
局所的用途には、式(Ｉ)で表される化合物を含有するクリーム、軟膏、ゼリー、溶液または懸濁液を用いればよい。このような局所的な投与態様には、含嗽剤やうがい剤としての使用が含まれる。
前述の疾患や病状を処置するのに有効な１日あたりの投与量は、患者の体重１kgあたり約０．０５mg〜約１４０mgである(１日あたりの患者への投与量:約２．５mg〜約７g)。例えば、炎症は、式(Ｉ)で表される化合物を患者の体重１kgあたり約０．０１mg／日〜約５０mg／日投与することによって効果的に処置することができる(１日あたりの患者への投与量:約０．５mg〜約３．５g)。
単一投与形態の組成物にキャリヤーと共に配合される活性成分の量は処置される患者の個体差や投与様式の相違によって変化し、例えば、ヒトに経口投与するための組成物の場合には、全組成物の約５〜約９５％である。単位投与形態の組成物中の活性成分の量は、一般的には約１mg〜約５００mgである。
しかしながら、個々の患者に対する具体的な投与量は種々の要因によって左右される。このような要因には、使用する特定の化合物の活性、患者の年齢、体重、全身的健康状態および性別、投与のダイエット時間、投与経路、排泄速度、併用薬剤の種類および治療を受ける特定の疾患の痛みの程度等が含まれる。
以下の実施例１〜７９は、適当な場合には未精製中間体を経由する本発明による化合物の調製例を示すものである。
また、実施例Ａ〜Ｇは試験法を示すものである。
実施例においては次の略語を用いる:
ＤＣＣ;ジシクロヘキシルカルボジイミド
ＲＴ;室温
ＥＤＣ;１−(３−ジメチルアミノプロピル)−３−エチルカルボジイミドヒドロクロリド
ＴＮＦα;腫瘍壊死因子α
ＬＰＳ;リポポリサッカリド
ＥＬＩＳＡ;酵素−結合免疫吸着剤アッセイ
中間体１  (ＲＳ)−２−ブロモ−４−メトキシカルボニルブタン酸
ハンバイ(Ｈanby)らの方法[Ｊ．Ｃhem. Ｓoc.、第５１巻、第３２３９頁(１９５０年)]によって調製したd−メチル−Ｄ，Ｌ−グルタミン酸(６．０g)および臭化カリウム(１５．５g)を１．２５Ｍ硫酸水溶液(１００ml)に溶解させた溶液を０℃において、亜硝酸ナトリウム(４．０g)を１時間かけて少量ずつ添加することによって処理した。この溶液をＲＴまで温め、２時間撹拌した後、酢酸エチルを用いる抽出処理をおこなった(２×１００l)。一緒にした抽出物をＭgＳＯ4を用いて乾燥させた後、真空蒸発処理に付すことによって標記化合物を無色油状物として４．５g得た。ＴＬＣのＲf値:０．１４(２５％ＥｔＯＡｃ−ヘキサン)
上記の中間体１の調製手順に準拠して下記の中間体２および３を調製した。
中間体２  (ＲＳ)−２−ブロモ−５−メトキシカルボニルペンタン酸
出発原料:(ＲＳ)−２−アミノ−５−メトキシカルボニルペンタン酸(１．８g)(ハンバイらの前記文献に記載のエステル化法によって調製した。)
生成物:淡褐色油状物(１．９５g)
ＴＬＣのＲf値:０．３０(５％ＭeＯＨ−ＣＨ2Ｃl2)
中間体３  (ＲＳ)−２−ブロモ−６−メトキシカルボニルヘキサン酸
出発原料:(ＲＳ)−２−アミノ−６−メトキシカルボニルヘキサン酸(３．９３g)(ハンバイらの前記文献に記載のエステル化法によって調製した。)
生成物:無色油状物(４．３９g)
ＴＬＣのＲf値:０．２６(５％ＭeＯＨ−ＣＨ2Ｃl2)
中間体４  (ＲＳ)−２−アセチルメルカプト−３−メトキシカルボニルプロピオン酸
メタノール(２ml)にチオール酢酸カリウム(１．４８g)を溶解させた溶液をモノメチルマレエート(１．６４g)[Ｊ．Ａm. Ｃhem. Ｓoc.、第１０８巻、第３頁(１９８６年)に記載の方法によって調製した]の溶液に添加し、混合物をＲＴで一夜撹拌した。溶剤を蒸発除去し、残渣を水(３０ml)とジクロロメタン(３０ml)に分配させ、水性層を２Ｎ塩酸を用いてpＨ３まで酸性化した。この水性層を分離し、ジクロロメタンで抽出した(２×３０ml)。一緒に有機抽出物をＭgＳＯ4を用いて乾燥させた後、真空蒸発処理に付すことによって褐色油状物を得た。この油状物をフラッシュカラムクロマトグラフィー処理(溶離液:メタノール１０％含有ジクロロメタン)に付すことによって標記化合物を無色油状物[ＴＬＣのＲf値:０．３０(１０％ＭeＯＨ−ＣＨ2ＣL2)]として０．４８g得た。
中間体５  (ＲＳ)−２−アセチルメルカプト−４−メトキシカルボニルブタン酸
エタノール(３０ml)に中間体１(３．０g)を溶解させた溶液にチオール酢酸カリウム(２．０g)を添加し、混合物をＲＴで一夜撹拌した。反応混合物を真空蒸発処理に付し、残渣を酢酸エチル(３０ml)と水(３０ml)に分配させ、有機層を飽和ブライン(３０ml)を用いて洗浄し、次いでＭgＳＯ4を用いて乾燥させた後、真空蒸発処理に付すことによって標記化合物を無色油状物[ＴＬＣのＲf値:０．４６(ＥtＯＡc)]を１．８３g得た。
上記の中間体５の調製手順に準拠して下記の中間体６および７を調製した。
中間体６  (ＲＳ)−２−アセチルメルカプト−５−メトキシカルボニルペンタン酸
出発原料:中間体２(１．８９g)
生成物:黄色油状物(０．８７g)[ＴＬＣのＲf値:０．３０(５％ＭeＯＨ−ＣＨ2Ｃl2)]
中間体７  (ＲＳ)−２−アセチルメルカプト−６−メトキシカルボニルヘキサン酸
出発原料:中間体３(４．３g)
生成物:黄色油状物(２．７８g)[ＴＬＣのＲf値:０．２３(５％ＭeＯＨ−ＣＨ2Ｃl2)]
中間体８  (ＲＳ)−(１，１−ジメチルエチル)２，４−ジブロモブチレート
４−ブロモブチリルクロリド(１００g;０．５４mol)に臭素(３１．３ml;０．５４mol)を撹拌下、１００℃で４時間かけて滴下した。得られた酸クロリドを冷却した後、無水ジクロロメタン（６００ml）にt−ブタノール(２４０ml)とトリエチルアミン(６４ml;０．４６１mol)を加えた溶液に撹拌下、０℃で滴下した。２Ｍ塩酸を添加して層分離させた。有機層を１０％ピロ亜硫酸ナトリウム溶液(２×５００ml)、水(５００ml)およびブライン(５００ml)を用いて順次洗浄し、次いでＭgＳＯ4を用いて乾燥させた後、真空蒸発処理に付すことによって標記化合物を褐色液体[1Ｈ−ＮＭＲ(２５０ＭＨz;ＣＤＣl3;ＴＭＳ基準基準)、１．５０(９Ｈ，s）、２．４５(２Ｈ,q)、３．５５(２Ｈ,t)、４．４０(１Ｈ,dd)]として１２０g得た(収率:８６％)。
上記の中間体８の調製手順に準拠して下記の中間体９および１０を調製した。
中間体９  (ＲＳ)−(１，１−ジメチルエチル)２，５−ジブロモペンタノエート
出発原料:５−ブロモバレリルクロリド(７５g;０．３７mol)
生成物:褐色油状物(８１g;収率６８％)[1Ｈ−ＮＭＲ(２５０ＭＨz;ＣＤＣl3;ＴＭＳ基準)、１．５０(９Ｈ,s)、１．８〜２．３(４Ｈ,m)、３．４５(２Ｈ,t)、４．１８(１Ｈ,dd)]
中間体１０  (ＲＳ)−(１，１−ジメチルエチル)２，６−ジブロモヘキサノエート
出発原料:６−ブロモヘキサノイルクロリド(１００g;０．４７mol)
生成物:褐色油状物(１３３g;収率８７％)[1Ｈ−ＮＭＲ(２５０ＭＨz;ＣＤＣl3;ＴＭＳ基準)、１．５０(９Ｈ,s)、１．６〜２．１(６Ｈ,m)、３．４(２Ｈ,t)、４．１(１Ｈ,dd)]
中間体１１  (ＲＳ)−(１，１−ジメチルエチル)２，４−ビス−(アセチルメルカプト)ブチレート
メタノール(２５ml)に中間体８(２g;６．６mmol)を加えた溶液に撹拌下でチオール酢酸カリウム(１．５１g;１３．２mmol)を添加し、混合物をＲＴで一夜撹拌した。反応混合物をジクロロメタン(１００ml)を用いて希釈し、ブラインを用いて洗浄し(２×５０ml)、ＭgＳＯ4を用いて乾燥させた後、真空蒸発処理に付すことによって黄色油状物を得た。この油状物をフラッシュカラムクロマトグラフィー処理(溶離液:ジクロロメタン３０％含有ヘキサン)に付すことによって標記化合物を無色油状物[ＴＬＣのＲf値:０．５７(ＣＨ2Ｃl2)]として１．１g得た（収率:５７％）。
上記の中間体１１の調製手順に準拠することによって下記の中間体１２および１３を調製した。
中間体１２  (ＲＳ)−(１，１−ジメチルエチル)２，５−ビス−(アセチルメルカプト)ペンタノエート
出発原料:中間体９(２g;６．３２mmol)
生成物:無色油状物(１．１２g;収率５７％)[ＴＬＣのＲf値:０．５７(ＣＨ2Ｃl2)]
中間体１３  (ＲＳ)−(１，１−ジメチルエチル)２，６−ビス−(アセチルメルカプト)ヘキサノエート
出発原料:中間体１０(２g;６．３２mmol)
生成物:無色油状物(１．０９g;収率５７％)[ＴＬＣのＲf値:０．５７(ＣＨ2Ｃl2)]
中間体１４  (ＲＳ)−２，３−ゾス−(アセチルメルカプト)プロピオン酸
１Ｎ水酸化カリウム水溶液(１４．７ml)にチオール酢酸(１．１２g)を加えた溶液を、１Ｎ水酸化カリウム水溶液(７．３５ml)に２，３−ジブロモプロピオン酸(１．７１g)を加えた溶液に滴下し、混合物をＲＴで５時間撹拌した。反応混合物のpＨを１Ｎ水酸化カリウム水溶液の添加によって８〜９に調整し、撹拌をさらに２時間続行し、次いで混合物のpＨを濃塩酸の添加によって１〜２にした後、該混合物を酢酸エチルを用いて抽出した(２×２５ml)。一緒にした抽出物をＮa2ＳＯ4を用いて乾燥させた後、蒸発処理に付すことによって黄色油状物を得た。２つの反応の生成物を一緒にし、フラッシュカラムクロマトグラフィー処理(溶離液:酢酸４％含有トルエン)に付すことによって無色油状物[ＴＬＣのＲf値:０．１５(５％ＡcＯＨ−トルエン)]を０．４２２g得た。
中間体１５  (ＲＳ)−２，４−ビス−(アセチルメルカプト)酪酸
ジクロロメタン(５０ml)に中間体１１(１．１g;３．７mmol)を加えた溶液をトリフルオロ酢酸(２．９ml;３７mmol)を用いて処理し、この混合物をＲtで一夜撹拌した。反応混合物に水(５０ml)を加え、この混合物をジクロロメタンで抽出した(３×４０ml)。一緒にした有機抽出物を水(５０ml)およびブライン(５０ml)を用いて順次洗浄し、ＭgＳＯ4を用いて乾燥させた後、真空蒸発処理に付すことによって標記化合物を淡黄色油状物[ＴＬＣのＲf値:０．１２(２５％ＭeＯＨ−ＣＨ2Ｃl2)]として８７０mg得た(収率９８％)。
上記の中間体１５の調製手順に準拠して下記の中間体１６および１７を調製した。
中間体１６  (ＲＳ)−２，５−ビス−(アセチルメルカプト)ペンタン酸
出発原料:中間体１２(１．１g;３．６mmol)
生成物:淡黄色油状物(９０６mg;収率１００％)[ＴＬＣのＲf値:０．１２(２５％ＭeＯＨ−ＣＨ2Ｃl2)]
中間体１７  (ＲＳ)−２，６−ビス−(アセチルメルカプト)ヘキサン酸
出発原料:中間体１３(１．１g;３．６mmol)
生成物:淡黄色油状物(８９５mg;収率９８％)[ＴＬＣのＲf値:０．１２(２５％ＭeＯＨ−ＣＨ2Ｃl2)]
中間体１８  ４−フタルイミドブタン酸
水(１５０ml)に４−アミノブタン酸(５．１６g)および炭酸ナトリウム(５．３５g)を加えた溶液にＮ−カルボエトキシフタルイミド(１０．９６g)をＲＴで激しく撹拌しながら一度に添加した。この混合物を実質上全ての固体が溶解するまで撹拌し(３０分間)、次いで濾過処理に付した。濾液を６Ｎ塩酸(約２２ml)を用いて酸性化し(pＨ１)、白色沈澱物を濾取し、水(１５０ml)を用いて十分に洗浄した。この固体を空気中で乾燥させた後、真空下で乾燥させることによって標記化合物を無色固体[1Ｈ−ＮＭＲ(２５０ＭＨz;ＣＤＣl3;ＴＭＳ基準)、d２．０３(２Ｈ,pent.)、２．４２(２Ｈ,t)、３．７８(２Ｈ,t)、７．６５〜７．７７(２Ｈ,m)、７．８１〜７．９０(２Ｈ,m)]として７．３５g得た。
上記の中間体１８の調製手順に準拠して下記の中間体１９〜２１を調製した。
中間体１９  ５−フタルイミドペンタン酸
出発原料:５−アミノペンタン酸(５．０g)
生成物:無色固体(６．８g)[1Ｈ−ＮＭＲ(２５０ＭＨz;ＣＤＣl3;ＴＭＳ基準)、d１．６〜１．８(４Ｈ,m)、２．２０(２Ｈ,t)、３．８５(２Ｈ,t)、７．７０〜７．７５(２Ｈ,m)、７．８５〜７．９５(２Ｈ,m)、１０．２(１Ｈ,br  s)]
中間体２０  ６−フタルイミドヘキサン酸
出発原料:６−アミノヘキサン酸(５．０g)
生成物:無色固体(５．８g)[1Ｈ−ＮＭＲ(６０ＭＨz;ＣＤＣl3:ＴＭＳ基準)、１．５〜２．４(６Ｈ,m)、２．３(２Ｈ,t)、３．８０(２Ｈ,t)、７．８〜８．１(４Ｈ,m)、１０．４(１Ｈ,br  s)]
中間体２１  ２−(３−フタルイミドフェニル)酢酸
出発原料:２−(３−アミノフェニル)酢酸(３．０g)
生成物:灰色がかった白色固体(４．０g;収率７２％)[ＴＬＣのＲf値:０．３６(７．５％ＭeＯＨ−０．５ＡcＯＨ−ＣＨ2Ｃl2)]
中間体２２  シス−３−アミノシクロペント−４，５−エンカルボン酸
２Ｎ塩酸(１０００ml)にラセミラクタム(５０g;０．４５８mol)を加えた溶液を１時間加熱還流させた。混合物を真空蒸発処理に付し、残渣をアセトンから晶出させることによって標記化合物をヒドロクロリド塩を白色固体として７３g得た(収率９７％)。
このヒドロクロリド塩(２０g;０．１２２mol)を水(３００ml)に溶解させ、この溶液を撹拌下においてアンバーライト(ＩＲＡ−６７)イオン交換樹脂を用いてpＨが７になるまで処理した。該樹脂を濾去し、溶剤を真空下で除去し、残渣をアセトンから晶出させることによって標記化合物を白色固体として１３．７g得た(収率８８％)。
中間体２３  シス−３−フタルイミドシクロペント−４，５−エンカルボン酸
中間体２２ヒドロクロリド(２２．３g;０．１３６mol)を出発原料として標記化合物を白色固体[ＴＬＣのＲf値:０．３７(１％ＡcＯＨ−５％ＭeＯＨ−ＣＨ2Ｃl2)]として１３．７g得た(収率３９％)。
中間体２４  トランス−メチル３−フタルイミドシクロペント−４，５−エンカルボキシレート
中間体２３(２３．２g;０．１８３mol)と無水フタル酸(２７．０３g;０．１８３mol)を一緒に粉砕し、窒素雰囲気下において１９０℃に撹拌しながら溶融させた。混合物をＲＴまで冷却させ、残渣を酢酸エチル（１２０ml）を用いて処理した。活性炭(１．０g)を添加し、この混合物を３０分間還流させ、次いでセライトを用いて濾過し、濾液を真空蒸発処理に付すことによって中間体フタルイミド−酸(シス／トランス異性体の１:１混合物)を淡黄色固体として４５．７g得た(収率９７％)。
この酸をメタノール(３００ml)に加えた溶液を濃塩酸(０．５ml)を用いて処理し、この混合物を３０分間加熱還流させ、ＲＴまで冷却させ、真空蒸発処理に付した。残渣を酢酸エチル(４００ml)に溶解させ、この溶液を８％重炭酸ナトリウム溶液(２×１００ml)、水(１００ml)およびブライン(１００ml)を用いて順次洗浄し、次いでＭgＳＯ4を用いて乾燥させた後、真空蒸発処理に付すことによってフタルイミドエステルをシス／トランス異性体の１:１混合物として得た。これをフラッシュカラムクロマトグラフィー処理(溶離液:６０％エーテル−ペンタン)に付すことによって標記化合物を白色固体[ＴＩＬＣのＲf値:０．４６(４０％ペンタン−エーテル)]として９．７２g得た。(収率２０％)。
中間体２５  トランス−３−フタルイミドシクロペント−４，５−エンカルボン酸
０．５Ｎ塩酸(１００ml)と氷酢酸(１００ml)の混合物に中間体２４(９．７２g;３５．８mmol)を加えた溶液を３０分間加熱還流した。この混合物を水(２００mmol)を用いて希釈し、これを酢酸エチルを用いて抽出した(３×１００ml)。一緒にした抽出物をブライン(１００ml)を用いて洗浄し、次いでＭgＳＯ4を用いて乾燥させた後、真空蒸発処理に付すことによって粗生成物を得た。これをエーテルから晶出させることによって標記化合物を白色固体[ＴＬＣのＲf値:０．４８(１％ＡcＯＨ−５％ＭeＯＨ−ＣＨ2Ｃl2)]として７．５６g得た(収率８２％)。
中間体２６  シス−３−フタルイミドシクロペンタンカルボン酸
中間体２３(１５．１g;５８．７mmol)を５％Ｐd−Ｃ触媒(２g)を用いて酢酸エチル(７００ml)中において大気圧下、ＲＴで一夜水素化反応に付した。触媒をセライトを用いて濾去し、濾液を真空蒸発処理に付すことによって標記化合物を白色固体[ＴＬＣのＲf値:０．３７(１％ＡcＯＨ−５％ＭeＯＨ−ＣＨ2Ｃl2)]として１５g得た(収率９８％)。
中間体２７  トランス−３−フタルイミドシクロペンタンカルボン酸
中間体２６の調製手順に準拠して中間体２５(７．５５g;２９．３mmol)から標記化合物を白色固体[ＴＬＣのＲf値:０．４７（１％ＡcＯＨ−５％ＭeＯＨ−ＣＨ2Ｃl2）]として７．０４g得た(収率９３％)。
中間体２８  シス−(１，１−ジメチルエチル)３−フタルイミドシクロペンチルアセテート
乾燥ジクロロメタン(６０ml)に中間体２６(５．０９g;１９．６mmol)を加えた溶液をオキサリルクロリド(３．４ml;３９．３mmol)を用いて処理し、次いでジメチルホルムアミド(１滴)を添加した。この混合物をＲＴで２時間撹拌した後、溶剤を真空蒸発処理によって除去することによって残渣として中間体酸クロリドを得た。
この残渣をテトラヒドロフラン(３０ml)に溶解させ、この溶液を０℃においてジアゾメタンのエーテル溶液(２００ml;約８０mmol)を用いて処理した。この混合物をＲＴで一夜撹拌した後、真空蒸発処理に付すことによってジアゾケトンを黄色固体として得た。このジアゾケトンをt−ブタノール(１００ml)に溶解させ、この溶液を、トリエチルアミン(５ml)に安息香酸銀(４３８mg;１．９mmol)を加えた溶液を２時間かけて少量ずつ添加しながら加熱還流させた。加熱還流をさらに１時間続行し、混合物をＲＴまで冷却し、セライトを用いる濾過処理に付し、濾液を真空蒸発処理に付すことによって、残渣として黄色固体を得た。この残渣をジクロロメタン(７５ml)に溶解させ、この溶液を８％重炭酸ナトリウム溶液(５０ml)、水(５０ml)およびブラインを用いて順次洗浄し、次いでＭgＳＯ4を用いて乾燥させた後、真空蒸発処理に付すことによって粗生成物を得た。この粗生成物をフラッシュカラムクロマトグラフィー処理(溶離液:５０％エーテル−ペンタン)に付すことによって標記化合物を白色固体[ＴＬＣのＲf値:０．５２（５０％ペンタン−エーテル)]として３．８g得た（収率６０％）。
中間体２９  トランス−(１，１−ジメチルエチル)３−フタルイミドシクロペンチルアセテート
中間体２８の調製手順に準拠し、中間体２７(１．４１g;５．４４mmol)を出発原料として標記化合物を白色固体[ＴＬＣのＲf値:０．５８（５０％ペンタン−エーテル）]として１．２２g得た（収率７０％）。
中間体３０  シス−３−フタルイミドシクロペンチル酢酸
ジクロロメタン(２０ml)に中間体２８(１．７８g;５．４mmol)を加えた溶液をトリフルオロ酢酸(２．１ml;２７mmol)を用いて処理し、この混合物をＲＴで一夜撹拌した。溶剤と過剰のトリフルオロ酢酸を真空下で除去することによって標記化合物を白色固体[ＴＬＣのＲf値:０．３２（３０％ペンタン−エーテル）]として１．４１g得た（収率９６％）。
中間体３１  トランス−３−フタルイミドシクロペンチル酢酸
中間体３０の調製手順に準拠し、中間体２９(１．１８g;３．５８mmol)を出発原料として標記化合物を白色固体[ＴＬＣのＲf値:０．４１（３０％ペンタン−エーテル）]として８４２mg得た（収率８６％）。
中間体３２  (ＲＳ)２−ブロモ−５−フタルイミドペンタン酸
中間体１９(５．０g;２０．２mmol)をチオニルクロリド(１０ml)と共に６５℃で３０分間加熱した。Ｎ−ブロモスクシンイミド(５．４g)および付加的なチオニルクロリドを添加し、さらに４８％ＨＢr水溶液(１滴)を添加した。この溶液を６０℃で１０分間加熱した後、さらに７０℃において２時間１５分加熱した。さらにＮ−ブロモスクシンイミド(８５０mg)を添加し、この混合物を７０℃で２時間加熱した。過剰のチオニルクロリドを減圧下での蒸発処理によって除去し、油状残渣を乾燥テトラヒドロフラン(２００ml)および水(２００ml)を用いて希釈した。この混合物を固体状の重炭酸ナトリウムを用いてpＨが７〜８になるように注意深く処理した後、ＲＴで一夜撹拌した。過剰のテトラヒドロフランを真空下で除去し、残渣をジクロロメタンを用いて洗浄した(３×３００ml)。水性層を６Ｍ塩酸を用いて注意深く酸性化した後(pＨ１)、ジクロロメタンを用いて抽出した（４×２００ml）。一緒にした抽出物を水(２×４００ml)およびブライン(４００ml)を用いて順次洗浄し、次いでＭgＳＯ4を用いて乾燥させた後、真空蒸発処理に付すことによって標記混合物を淡黄褐色固体[ＴＬＣのＲf値:０．４７（ＥtＯＡc）]として４．７g得た（収率７１％）。
上記の中間体３２の調製手順に準拠することによって下記の中間体３３〜３５を調製した。
中間体３３  (ＲＳ)２−ブロモ−２−(３−フタルイミドフェニル)酢酸
出発原料:中間体２１
生成物:無色固体(５８８mg;種率７５％)[ＴＬＣのＲf値:０．１９（５％ＭeＯＨ−０．１％ＡcＯＨ−ＣＨ2Ｃl2）]
中間体３４  シス−a−ブロモ−３−フタルイミドシクロペンチル酢酸
出発原料:中間体３０(１．４１g;５．１６mmol)
生成物:淡黄褐色泡状物(１．５９g;収率８７％)[ＴＬＣのＲf値:０．４６(２％ＭeＯＨ−エーテル)]
中間体３５  トランス−a−ブロモ−３−フタルイミドシクロペンチル酢酸
出発原料:中間体３１(８１５mg;２．９８mmol)
生成物:黄褐色泡状物(８０５mg;収率７７％)[ＴＬＣのＲf値:０．４８(２％ＭeＯＨ−エーテル)]
中間体３６  (ＲＳ)２−アセチルメルカプト−５−フタルイミドペンタン酸
メタノール(３０ml)に中間体３３(３．０g;９．２mmol)を加えた溶液をチオール酢酸カリウム(１．０５g;９．２mmol)を用いて処理し、この混合物をＲＴで一夜撹拌した。反応混合物を真空蒸発処理に付し、残渣をジクロロメタン(１００ml)に溶解させ、この溶液を水(２×５０ml)を用いて洗浄し、次いでＭgＳＯ4を用いて乾燥させ後、真空蒸発処理を付すことによって標記化合物を淡黄色泡状物[ＴＬＣのＲf値:０．４３(ＥtＯＡc)]として２．４g得た(収率８１％)。
上記の中間体３６の調製手順に準拠することによって下記の中間体３７〜３９を調製した。
中間体３７  (ＲＳ)２−アセチルメルカプト−２−(３−フタルイミド)フェニル酢酸
出発原料:中間体３３
生成物:無色固体(７２２mg;収率１００％)[ＴＬＣのＲf値:０．１５(５％ＭeＯＨ−０．１％ＡcＯＨ−ＣＨ2Ｃl2)]
中間体３８  シス−a−(アセチルメルカプト)−３−フタルイミドシクロペンチル酢酸
出発原料:中間体３４(２．０１g;５．７１mmol)
生成物:褐色泡状物(１．４４g;収率７３％)[ＴＬＣのＲf値:０．４２(エーテル)]
中間体３９  トランス−a−(アセチルメルカプト)−３−フタルイミドシクロペンチル酢酸
出発原料:中間体３５(７７４mg;２．２mmol)
生成物:ベージュ色泡状物(３２９mg;収率４３％)[ＴＬＣのＲf値:０．４５(エーテル)]
中間体４０  (ＲＳ)−Ｎ−[２−ブロモ−４−フタルイミドブタノイル]−Ｌ−ロイシル−Ｌ−フェニルアラニンＮ−メチルアミド
中間体１８(２．３３g)およびチオニルクロリド(２．９２ml)を６５℃で３０分間加熱した。Ｎ−ブロモスクシンイミド(２．５１g)および付加的なチオニルクロリドを添加し、さらに４８％ＨＢr水溶液(１滴)を添加し、この溶液を６０℃で１０分間加熱し、次いで７０℃で２時間１５分加熱した。さらにＮ−ブロモスクシンイミド(８５０mg)を添加し、この混合物を７０℃で２時間加熱した。過剰のチオニルクロリドを減圧下で蒸発除去し、油状残渣を乾燥ジクロロメタン(１０ml)を用いて希釈した。上澄み液の一部(４．０ml)を、乾燥ジクロロメタン(１０ml)にＬ−ロイシル−Ｌ−フェニルアラニンＮ−メチルアミド(５００mg)とトリエチルアミン(０．２４ml)を加えた溶液に０℃で添加し、この混合物をＲＴで一夜撹拌した。反応混合物をジクロロメタンを用いて希釈し、次いで重炭酸ナトリウム飽和水溶液(５０ml)、１Ｎ塩酸(５０ml)および飽和ブライン(５０ml)を用いて順次洗浄し、ＭgＳＯ4を用いて乾燥させた後、真空蒸発処理に付すことによって褐色固体を得た。この固体をフラッシュカラムクロマトグラフィー処理(４×１８cm;溶離液:２％メタノール−ジクロロメタン)に付すことによって標記化合物を灰色がかった白色固体[ＴＬＣのＲf値:０．４４(５％ＭeＯＨ−ＣＨ2Ｃl2)]として５３０mg得た。
上記の中間体４０の調製手順に準拠することによって下記の中間体４１および４２を調製した。
中間体４１  (ＲＳ)−Ｎ−[２−ブロモ−５−フタルイミドペンタノイル]−Ｌ−ロイシル−Ｌ−フェニルアラニンＮ−メチルアミド
出発原料:中間体１９(４．０g)およびＬ−ロイシル−Ｌ−フェニルアラニンＮ−メチルアミド(１．１８g)
生成物:ピンク色固体(１．２g)[ＴＬＣのＲf値:０．３４(５％ＭeＯＨ−ＣＨ2Ｃl2)]
中間体４２  (ＲＳ)−Ｎ−[２−ブロモ−６−フタルイミドヘキサノイル]−Ｌ−ロイシル−Ｌ−フェニルアラニンＮ−メチルアミド
出発原料:中間体２０(４．０g)およびＬ−ロイシル−Ｌ−フェニルアラニンＮ−メチルアミド(１．１８g)
生成物:ほとんど無色の固体(１．０g)[ＴＬＣのＲf値:０．５２(１０％ＭeＯＨ−ＣＨ2Ｃl2)]
中間体４３  (ＲＳ)−２−[(１，１−ジメチル)メルカプト]−５−フタルイミドペンタン酸
無水テトラヒドロフラン(２１５ml)にカリウムt−ブトキシド(２２．４５g;０．１mol)を加えた溶液にt−ブチルチオール(１１．３ml;０．１mol)を撹拌下で添加し、この混合物をＲＴで２０分間撹拌した。無水テトラヒドロフラン(８０ml)に中間体１３(３２．６g;０．１mol)を加えた溶液を添加し、この混合物をＲＴで一夜撹拌した。水(３００ml)を添加し、この混合物を１Ｎ塩酸を用いて酸性化した後(pＨ１)、ジクロロメタンを用いて抽出した(３×２００ml)。一緒にした抽出物をＭgＳＯ4を用いて乾燥させた後、真空蒸発処理に付すことによって黄色油状物を得た。この油状物をフラッシュカラムクロマトグラフィー処理(溶離液:５〜１５％ジクロロメタン−酢酸エチル)に付した後、ジクロロメタン／ヘキサンから晶出させることによって標記化合物を淡黄色固体[ＴＬＣのＲf値:０．４８(１０％ＭeＯＨ−ＣＨ2Ｃl2)]として２２g得た(収率６６％)。
中間体４４  (ＲＳ)−Ｎ−[２−[(１，１−ジメチルエチル)メルカプト]−５−フタルイミドペンタノイル]−Ｌ−ロイシル−Ｌ−フェニルアラニンＮ−メチルアミド
ジクロロメタン(２５０ml)に中間体４３(８．０６g;２４mmol)とＬ−ロイシル−Ｌ−フェニルアラニンＮ−メチルアミド(７．０g;２４mmol)を加えた溶液をＮ−ヒドロキシベンゾトリアゾール(３．９g;２８．９mmol)を用いて処理し、さらにＥＤＣ(５．０６g;２６．４mmol)を用いて処理した後、この混合物をＲＴで一夜撹拌した。反応混合物を１Ｎ塩酸(３００ml)を用いて洗浄し、水性層をジクロロメタンを用いて抽出した(２×１００ml)。一緒にした抽出物を１Ｎ塩酸(３００ml)、８％重炭酸ナトリウム溶液(３００ml)、水(３００ml)およびブライン(３００ml)を用いて順次洗浄し、次いでＭgＳＯ4を用いて乾燥させた後、真空蒸発処理に付すことによって淡黄色固体を得た。この固体をフラッシュカラムクロマトグラフィー処理(溶離液:５％メタノール−ジクロロメタン)に付すことによって標記化合物をほぼ白色の固体[ＴＬＣのＲf値:０．５５(１０％ＭeＯＨ−ＣＨ2Ｃl2)]として１２．８g得た(収率８８％)。
中間体４５  (ＲＳ)−Ｎ−[２−［(１，１−ジメチルエチル)メルカプト]−５−アミノペンタノイル]−Ｌ−ロイシル−Ｌ−フェニルアラニンＮ−メチルアミド
テトラヒドロフラン(１０ml)とエタノール(５０ml)の混合物に中間体４４(２．５６g;４．２mmol)を加えた溶液をヒドラジン水和物(１０ml;xs)を用いて処理し、この混合物を２時間加熱還流した。ＲＴまで冷却した後、水(３０ml)を添加し、溶剤を真空下で除去し、残渣を１Ｎ塩酸を用いて酸性化した後(pＨ１)、ジクロロメタン(２×１００ml)を用いて洗浄した。水性層を２Ｍ水酸化ナトリウム溶液を用いて塩基性化した後(pＨ１４)、ジクロロメタン(２×１００ml)を用いて抽出した。一緒にした抽出物をブライン(１００ml)を用いて洗浄し、次いでＭgＳＯ4を用いて乾燥させた後、真空蒸発処理に付すことによって淡黄色固体を得た。この固体をフラッシュカラムクロマトグラフィー処理(溶離液:１０〜２５％メタノール−ジクロロメタン)に付すことによって標記化合物をほぼ白色の固体[ＴＬＣのＲf値:０．２３(３０％ＭeＯＨ−ＣＨ2Ｃl2)]として９．２g得た(収率９１％)。
中間体４６  (ＲＳ)−Ｎ−[２−(１，１−ジメチルエチル)メルカプト]−５−(アセチルアミノ)ペンタノイル]−Ｌ−ロイシル−Ｌ−フェニルアラニンＮ−メチルアミド
無水ジクロロメタン(４５ml)に中間体４５(１．１４g;２．３８mmol)とトリエチルアミン(２ml;１４mmol)を加えた溶液にアセチルクロリド(０．５ml;７mmol)を撹拌下で添加し、この混合物をＲＴで一夜撹拌する。反応混合物をジクロロメタン(７５ml)を用いて希釈し、次いで１Ｎ塩酸(１００ml)、８％重炭酸ナトリウム溶液(１００ml)、水(１００ml)およびブライン(１００ml)を用いて順次洗浄し、ＭｇＳＯ4を用いて乾燥させた後、真空蒸発処理に付すことによって淡黄色固体を得た。この固体をフラッシュカラムクロマトグラフィー処理(溶離液:５％メタノール−ジクロロメタン)に付すことによって標記化合物をほぼ白色の固体[ＴＬＣのＲf値:０．３１(１０％ＭeＯＨ−ＣＨ2Ｃl2)]として１．２g得た(収率９５％)。
上記の中間体４６の調製手順に準拠することによって下記の中間体４７〜５６を調製した。
中間体４７  (ＲＳ)−Ｎ−[２−(１，１−ジメチルエチル)メルカプト]−５−(ベンゾイルアミノ)ペンタノイル]−Ｌ−ロイシル−Ｌ−フェニルアラニンＮ−メチルアミド
出発原料:中間体４５(２．８６g;５．９７mmol)およびベンゾイルクロリド(０．８４ml;７．２mmol)
生成物:ほぼ白色の固体(３．４３g;収率９９％)[ＴＬＣのＲr値:０．４１(１０％ＭeＯＨ−ＣＨ2Ｃl2)]
中間体４８  (ＲＳ)−Ｎ−[２−[(１，１−ジメチルエチル)メルカプト]−５−スクシンイミドペンタノイル]−Ｌ−ロイシル−Ｌ−フェニルアラニンＮ−メチルアミド
出発原料:中間体４５(１．１４g;２．３８mmol)および無水コハク酸(０．３３g;３．３mmol)
生成物:ほぼ無色の固体(０．５４g;収率４０％)[ＴＬＣのＲf値:０．５８(１０％ＭeＯＨ−ＣＨ2Ｃl2)]
中間体４９  (ＲＳ)−[２−[(１，１−ジメチルエチル)メルカプト]−５−(メタンスルホニル)アミノペンタノイル]−Ｌ−ロイシル−Ｌ−フェニルアラニンＮ−メチルアミド
出発原料:中間体４５(２．０３g;４．２４mmol)およびメタンスルホニルクロリド(０．３５ml;４．６mmol)
生成物:ほぼ白色の固体(１．７８g;収率７７％)[ＴＬＣのＲf値:０．４６(１０％ＭeＯＨ−ＣＨ2Ｃl2)]
中間体５０  (ＲＳ)−[２−[(１，１−ジメチルエチル)メルカプト]−５−(ベンゼンスルホニル)アミノペンタノイル]−Ｌ−ロイシル−Ｌ−フェニルアラニンＮ−メチルアミド
出発原料:中間体４５(２．０３g;４．２４mmol)およびベンゼンスルホニルクロリド(０．５９ml;４．６mmol)
生成物:ほぼ白色の固体(２．１８g;収率８５％)[ＴＬＣのＲf値:０．５４(１０％ＭeＯＨ−ＣＨ2Ｃl2)]
中間体５１  (ＲＳ)−Ｎ−[２−[(１，１−ジメチルエチル)メルカプト]−５−(メトキシカルボニル)アミノペンタノイル]−Ｌ−ロイシル−Ｌ−フェニルアラニンＮ−メチルアミド
出発原料:中間体４５(２００mg;０．４３mmol)およびメチルクロロホーメート(０．０３ml;０．４１mmol)
生成物:ほぼ白色の固体(１９６mg;収率８９％)[ＴＬＣのＲf値:０．３２(５％ＭeＯＨ−ＣＨ2Ｃl2)]
中間体５２  (ＲＳ)−Ｎ−[２−[(１，１−ジメチルエチル)メルカプト]−５−(ベンジルオキシカルボニル）アミノペンタノイル]−Ｌ−ロイシル−Ｌ−フェニルアラニンＮ−メチルアミド
出発原料:中間体４５(２００mg;０．４３mmol)およびベンジルクロロホーメート(０．０６ml;０．４１mmol)
生成物:ほぼ白色の固体(２３０mg;収率９３％)[ＴＬＣのＲf値:０．４４(５％ＭeＯＨ−ＣＨ2Ｃl2)]
中間体５３  (ＲＳ)−Ｎ−[２−[(１，１−ジメチルエチル)メルカプト]−５−(４−ピリジルカルボニル）アミノペンタノイル]−Ｌ−ロイシル−Ｌ−フェニルアラニンＮ−メチルアミド
出発原料:中間体４５(２．０３g;４．２４mmol)およびイソニコチノイルクロリド(８３４mg;４．６６mmol)
生成物:ほぼ白色の固体(１．８１g;収率７７％)[ＴＬＣのＲf値:０．２２(１０％ＭeＯＨ−ＣＨ2Ｃl2)]
中間体５４  (ＲＳ)−Ｎ−[２−[(１，１−ジメチルエチル)メルカプト]−５−(３−ピリジルカルボニル）アミノペンタノイル]−Ｌ−ロイシル−Ｌ−フェニルアラニンＮ−メチルアミド
出発原料:中間体４５(２００mg;０．４２mmol)およびニコチノイルクロリド(８３mg;０．４７mmol)
生成物:ほぼ白色の固体(１３０mg;収率５６％)[ＴＬＣのＲf値:０．２６(１０％ＭeＯＨ−ＣＨ2Ｃl2)]
中間体５５  (ＲＳ)−Ｎ−[２−[(１，１−ジメチルエチル)メルカプト]−５−(２−ピリジルカルボニル）アミノペンタノイル]−Ｌ−ロイシル−Ｌ−フェニルアラニンＮ−メチルアミド
出発原料:中間体４５(２００mg;０．４２mmol)およびピコリノイルクロリド(８３mg;０．４７mmol)
生成物:ほぼ白色の固体(１４５mg;収率６２％)[ＴＬＣのＲf値:０．２１(１０％ＭeＯＨ−ＣＨ2Ｃl2)]
中間体５６  (ＲＳ)−Ｎ−[２−[(１，１−ジメチルエチル)メルカプト]−５−(２−ピラジニルカルボニル）アミノペンタノイル]−Ｌ−ロイシル−Ｌ−フェニルアラニンＮ−メチルアミド
出発原料:中間体４５(２００mg;０．４２mmol)およびピラジノイルクロリド(８５mg;０．４７mmol)
生成物:ほぼ白色の固体(１４５mg;収率６２％)[ＴＬＣのＲf値:０．１８(１０％ＭeＯＨ−ＣＨ2Ｃl2)]
中間体５７  (ＲＳ)−Ｎ−[２−[(２−ニトロフェニルスルファニル)メルカプト]−５−(アセチル）アミノペンタノイル]−Ｌ−ロイシル−Ｌ−フェニルアラニンＮ−メチルアミド
氷酢酸(７５ml)に中間体４６(１．２３g;６．４9mmol)を加えた溶液に２−ニトロスルフェニルクロリド(３．２６g;６．２６mmol)を撹拌下で添加し、この混合物をＲＴで一夜撹拌した。反応混合物から溶剤を真空下で除去し、残渣をフラッシュカラムクロマトグラフィー処理(溶離液:５％メタノール−ジクロロメタン)に付すことによって標記化合物を黄色固体[ＴＬＣのＲf値:０．３４(１０％ＭeＯＨ−ＣＨ2Ｃl2)]として３．７4g得た(収率９７％)。
上記の中間体５７の調製手順に準拠することによって下記の中間体５８〜６８を調製した。
中間体５８  (ＲＳ)−Ｎ−[２−[(２−ニトロフェニルスルファニル)メルカプト]−５−(ベンゾイルアミノ）ペンタノイル]−Ｌ−ロイシル−Ｌ−フェニルアラニンＮ−メチルアミド
出発原料:中間体４７(１．０８g;５．６７mmol)
生成物:黄色固体(３．４３g;収率９９％)[ＴＬＣのＲf値:０．５４(１０％ＭeＯＨ−ＣＨ2Ｃl2)]
中間体５９  (ＲＳ)−Ｎ−[２−[(２−ニトロフェニルスルファニル)メルカプト]−５−スクシンイミドペンタノイル]−Ｌ−ロイシル−Ｌ−フェニルアラニンＮ−メチルアミド
出発原料:中間体４８(６１８mg;１．１mmol)
生成物:黄色固体(６６５mg;収率９２％)[ＴＬＣのＲf値:０．２５(１０％ＭeＯＨ−ＣＨ2Ｃl2)]
中間体６０  (ＲＳ)−Ｎ−[２−[(２−ニトロフェニルスルファニル)メルカプト]−５−（メタンスルホニル）アミノペンタノイル]−Ｌ−ロイシル−Ｌ−フェニルアラニンＮ−メチルアミド
出発原料:中間体４９(１．７８g;３．２７mmol)
生成物:黄色固体(１８４g;収率８８％)[ＴＬＣのＲf値:0．３２(１０％ＭeＯＨ−ＣＨ2Ｃl2)]
中間体６１  (ＲＳ)−Ｎ−[２−[(２−ニトロフェニルスルファニル)メルカプト]−５−（ベンゼンスルホニル）アミノペンタノイル]−Ｌ−ロイシル−Ｌ−フェニルアラニンＮ−メチルアミド
出発原料:中間体５０(２．２５g;３．７１mmol)
生成物:黄色固体(１．６g;収率６８％)[ＴＬＣのＲf値:０．３７(１０％ＭeＯＨ−ＣＨ2Ｃl2)]
中間体６２  (ＲＳ)−Ｎ−[２−[(２−ニトロフェニルスルファニル)メルカプト]−５−（メトキシカルボニル）アミノペンタノイル]−Ｌ−ロイシル−Ｌ−フェニルアラニンＮ−メチルアミド
出発原料:中間体５１(１９６mg;０．３１mmol)
生成物:黄色固体(８６mg;収率３８％)[ＴＬＣのＲf値:０．２５(１０％ＭeＯＨ−ＣＨ2Ｃl2)]
中間体６３  (ＲＳ)−Ｎ−[２−[(２−ニトロフェニルスルファニル)メルカプト]−５−（ベンジルオキシカルボニル）アミノペンタノイル]−Ｌ−ロイシル−Ｌ−フェニルアラニンＮ−メチルアミド
出発原料:中間体５２(２２９mg;０．３２mmol)
生成物:黄色固体(１５５mg;収率６０％)[ＴＬＣのＲf値:０．３７(１０％ＭeＯＨ−ＣＨ2Ｃl2)]
中間体６４  (ＲＳ)−Ｎ−[２−[(２−ニトロフェニルスルファニル)メルカプト]−５−（４−ピリジルカルボニル）アミノペンタノイル]−Ｌ−ロイシル−Ｌ−フェニルアラニンＮ−メチルアミド
出発原料:中間体５３(１．９２g;３．２９mmol)
生成物:黄色固体(１．６６g;収率７４％)[ＴＬＣのＲf値:０．２９(１０％ＭeＯＨ−ＣＨ2Ｃl2)]
中間体６５  (ＲＳ)−Ｎ−[２−[(２−ニトロフェニルスルファニル)メルカプト]−５−（３−ピリジルカルボニル）アミノペンタノイル]−Ｌ−ロイシル−Ｌ−フェニルアラニンＮ−メチルアミド
出発原料:中間体５４(１９０mg;０．３３mmol)
生成物:黄色固体(８５mg;収率３８％)[ＴＬＣのＲf値:０．２４(１０％ＭeＯＨ−ＣＨ2Ｃl2)]
中間体６６  (ＲＳ)−Ｎ−[２−[(２−ニトロフェニルスルファニル)メルカプト]−５−（２−ピリジルカルボニル）アミノペンタノイル]−Ｌ−ロイシル−Ｌ−フェニルアラニンＮ−メチルアミド
出発原料:中間体５５(２１０mg;０．３６mmol)
生成物:黄色固体(１２０mg;収率５４％)[ＴＬＣのＲf値:０．２１(１０％ＭeＯＨ−ＣＨ2Ｃl2)]
中間体６７  (ＲＳ)−Ｎ−[２−[(２−ニトロフェニルスルファニル)メルカプト]−５−（２−ピリジニルカルボニル）アミノペンタノイル]−Ｌ−ロイシル−Ｌ−フェニルアラニンＮ−メチルアミド
出発原料:中間体５６(３００mg;０．５１mmol)
生成物:黄色固体(１１０mg;収率４２％)[ＴＬＣのＲf値:０．１８(１０％ＭeＯＨ−ＣＨ2Ｃl2)]
中間体６８  (ＲＳ)−Ｎ−[２−[(２−ニトロフェニルスルファニル)メルカプト]−５−アミノペンタノイル]−Ｌ−ロイシル−Ｌ−フェニルアラニンＮ−メチルアミド
[ＴＬＣのＲf値:０．１６(１０％ＭeＯＨ−ＣＨ2Ｃl2)]
中間体６９  (Ｒ)−Ｎ−(フェニルメトキシ)カルボニル−（Ｓ−メチル）−Ｌ−システイン
２Ｍ水酸化ナトリウム水溶液(５０ml)に(Ｓ−メチル)−Ｌ−システイン(１０g;７５mmol)を加えた溶液にベンジルクロロホーメート(１１．１mg;６５mmol)を撹拌下で滴下し、この混合物をＲＴで４時間撹拌した。反応混合物を２Ｍ水酸化ナトリウム溶液を用いて塩基性化した後(pＨ１４)、酢酸エチル(４×５０ml)を用いて洗浄した。水性層を濃塩酸を用いて酸性化した後(pＨ３)、酢酸エチルを用いて抽出した。一緒に抽出物をブラインを用いて洗浄し、次いでＭgＳＯ4を用いて乾燥させた後、真空蒸発処理に付すことによって標記化合物を淡黄色油状物[ＴＬＣのＲf値:０．２１(１０％ＭeＯＨ−ＣＨＣl3)]として１６．８g得た(収率８４％)。
中間体７０  (Ｒ)−Ｎ−(１，１−ジメチルエトキシ)カルボニル(Ｓ−メチル)システイン
水(１５０ml)とジオキサン(１００nl)との混合物にＳ−メチル−Ｌ−システイン(５g;３７mmol)と重炭酸ナトリウム(７．８g;９２．５mmol)を加えた溶液にジ−t−ブチルジカーボネート(８．８８g;４０．７mmol)を０℃において撹拌下で添加した。この混合物をＲＴまで温めて一夜撹拌し、水(１００ml)を用いて希釈し、次いで１Ｎ塩酸を用いて酸性化した後(pＨ３)、酢酸エチルを用いて抽出した(３×１００ml)。一緒にした抽出物をブラインを用いて洗浄し、次いでＭgＳＯ4を用いて乾燥させた後、真空蒸発処理に付すことによって標記化合物を無色油状物[ＴＬＣのＲf値:０．５５(ＭeＯＨ−Ｈ2Ｏ)]として６．６４g得た(収率７６％)。
中間体７１  (Ｓ)−Ｎ−(１，１−ジメチルエトキシ)カルボニル−プロピルリシン
上記中間体７０の調製手順に準拠して、(Ｓ)−ノルバリン(５g;４２．７mmol)を出発原料として標記化合物を無色油状物[ＴＬＣのＲf値:０．５０(ＭeＯＨ−Ｈ2Ｏ)]として６．３g得た(収率６８％)。
中間体７２  (Ｓ)−Ｎ−(１，１−ジメチルエトキシ)カルボニル−(Ｏ−メチル)セリン
無水ＤＭＦ(２５０ml)に(Ｓ)−Ｎ−(１，１−ジメチルエトキシ)カルボニルセリン(１０g;４８．７mmol)を加えた溶液に水素化ナトリウム(６０％分散液;４．３g;０．１０７mol)を０℃において撹拌下で少量ずつ添加した。次いで、無水ＤＭＦ(１０ml)にヨードメタン(６．１ml;０．１mol)を加えた溶液を滴下した。この混合物をＲＴまで温めて一夜撹拌し、１Ｎ塩酸を用いて酸性化した後(pＨ３)、真空下で約２００mlまで濃縮した。この濃縮物を水(２００ml)を用いて希釈した後、酢酸エチル(３×１００ml)を用いて抽出した。一緒にした抽出物をブライン(１００ml)を用いて洗浄し、次いでＭgＳＯ4を用いて乾燥させた後、真空蒸発処理に付すことによって標記化合物を黄色油状物[ＴＬＣのＲf値:０．３９(１０％ＭeＯＨ−ＣＨ2Ｃl2)]として７．４８g得た(収率７０％)。
中間体７３  (ＲＳ)−Ｎ−ベンゾイル−[b−(４−ピリジル)]アラニンメチルエステル
a)２−(４−ピリジル)−１−(Ｎ−ベンゾイル)アミノエチレン−１−カルボン酸ヒドロクロリド
無水酢酸(３６０ml;３．８mol)に酢酸ナトリウム(１６g;０．１９５mol)と馬尿酸(１５０g;０．８４mol)を加えた氷冷懸濁液に４−ピリジルカルボキサルデヒド(８５g;０．７９mol)を撹拌下で添加した(発熱反応によって反応容器の内部温度は３０〜４０℃に達した)。反応混合物をＲＴまで冷却した後、水(１５００ml)の中へ投入した。得られた固体を濾取し、水(２×５００ml)を用いて洗浄することによって中間体アズラクトンを褐色固体として７４g得た(収率３７％)。アズラクトン(７０g;０．２８mol)を濃塩酸(２１０ml)に溶解させ、直ちに生成した沈澱物を濾取し、アセトン(２×５００ml)を用いて洗浄し、真空下で乾燥させることによって標記化合物を淡緑色固体として７１g得た(収率７８％)。
b)(ＲＳ)−Ｎ−ベンゾイル−[b−(４−ピリジル)]アラニンヒドロクロリド
上記のオレフィンヒドロクロリド(７０g;０．２３mol)を水中(７００ml)において５％Pd−Ｃ触媒(７g)を用いて大気圧下、ＲＴで一夜水素化した。セライトを用いて触媒を濾去し、濾液を約１００mlまで濃縮した後、アセトン(１０００ml)を添加し、生成した沈澱物を濾取し、真空下で乾燥させることによって標記化合物を灰色がかった白色固体として５３g得た(収率７５％)。
c)(ＲＳ)−Ｎ−ベンゾイル−[b−(４−ピリジル)]アラニンメチルエステル
メタノール(２００ml)に上記酸(５３g;０．１７mol)を加えた氷冷溶液にチオニルクロリド(１５ml;０．２１mol)を添加した。反応混合物をＲＴまで温め、３０分後、溶剤を真空下で除去することによって灰色がかった白色半固体を得た。これを８％重炭酸ナトリウム溶液(５００ml)に懸濁させ、生成物を酢酸エチル(４×４００ml)を用いて抽出した。一緒にした抽出物をブライン(１０００ml)を用いて洗浄し、次いでＭgＳＯ4を用いて乾燥させ後、真空蒸発処理に付すことによって標記化合物を灰色がかった固体(Ｃ16Ｈ16Ｎ2Ｏ3[２８４．３];[ＭＨ+２８５])として４６g得た(収率９４％)。
上記の中間体７３の調製手順に準拠して下記の中間体７４および７５を調製した。
中間体７４  (ＲＳ)−Ｎ−ベンゾイル−[b−(３−ピリジル)]アラニンメチルエステル
出発原料:ピリジン−３−カルボキサルデヒド
生成物:白色固体(Ｃ16Ｈ16Ｎ2Ｏ3[２８４．３];[ＭＨ+２８５)]
中間体７５  (ＲＳ)−Ｎ−ベンゾイル−２−メトキシアラニンメチルエステル
出発原料:２−メトキシベンズアルデヒド
生成物:白色固体(Ｃ17Ｈ19Ｎ2Ｏ4)[３０１．３];[ＭＨ+３０２)
中間体７６  (Ｓ)−Ｎ−(１，１−ジメチルエトキシ)カルボニル−[b−(４−ピリジル)]アラニン
中間体７３(２７g;０．１０４mol)を加熱アセトン(５０ml)に溶解させ、この溶液を０．０３Ｍリン酸二水素カリウム溶液(５００ml;PＨ７．２)に添加した。アルカラーゼ(１ml)を激しく撹拌しながら添加し、系のpＨは１Ｍ水酸化ナトリウム水溶液(約２０ml)の添加によって３０分間７．２に維持した。未溶解エステルを濾去し、濾液を酢酸エチル(４×２５０ml)を用いて洗浄した。溶剤を真空下で除去し、残渣を６Ｎ塩酸(１００ml)に溶解させ、この溶液を５時間加熱還流させた。ＲＴまで冷却後、沈澱した安息香酸を濾去し、濾液を酢酸エチル(２×１００ml)を用いて洗浄した。水性層を真空蒸発処理に付すことによって光学的に純粋なアミノ酸をそのジヒドロクロリド塩として９．４８g得た(収率８１％)。
このジヒドロクロリド塩を水(１５０ml)に溶解させ、この溶液をアンバーライトＩＲＡ−６７イオン交換樹脂を用いて処理し、pＨを８に調製した。セライトを用いてこの樹脂を濾去し、濾液を真空蒸発処理に付すことによって遊離アミノ酸を白色固体として６．７g得た(収率１００％)。
t−ブタノール(１００ml)と水(５０ml)との混合物に上記アミノ酸を加えた懸濁液にジ−t−ブチルジカーボネート(１３g;６０mmol)を撹拌下で添加した。この場合、反応系のpＨは１Ｍ水酸化ナトリウム溶液(５５ml)の添加によって４０分間８．５に維持した。水(５０ml)を添加し、この混合物をヘプタン(２×１００ml)を用いて洗浄し、次いで固体状硫酸水素カリウムの添加によって酸性化した(pＨ３．５)。この混合物を蒸発乾燥させ、残渣をメタノール(３×１５０ml)を用いてすり砕いて生成物を抽出した。一緒にした抽出物を真空蒸発処理に付すことによって標記化合物を白色固体として得た。該固体をエタノール水溶液から晶出させることによって光学的に純粋な該化合物を３．２７g得た(収率６１％)。[a]D＋２４．３°(c＝１，トリフルオロ酢酸)
上記の中間体７６の調製手順に準拠して下記の中間体７７および７８を調製した。
中間体７７  (Ｓ)−(１，１−ジメチルエトキシ)カルボニル−[b−(３−ピリジル)]アラニン
出発原料:中間体７４
生成物:白色固体[a]D＋１６．１°(c＝１，トリフルオロ酢酸)
中間体７８  (Ｓ)−(１，１−ジメチルエチル)カルボニル−２−メトキシフェニルアラニン
出発原料:中間体７５
生成物:白色固体(１１．１g;収率９７％)[a]D−１５．２°(c＝ＭeＯＨ)
中間体７９  (ＲＳ)−Ｎ−アセチル−[b−(２−ピリジル)]アラニン
メタノール(３００ml)にナトリウムメトキシド(６５．８g;１．２２mol)を加えた溶液をジエチルアセタミドマロネート(１３２．３g;０．６１mol)を用いて約４５℃で少量ずつ処理した。この混合物を１５分間加熱還流した後、５０℃まで冷却し、次いで２−クロロメチルピリジンヒドロクロリド(１００g;０．６１mol)の懸濁液を用いてゆっくりと処理した。ピンク色の懸濁液をさらに６時間加熱還流した。水(５００ml)を添加し、１０Ｍ水酸化ナトリウム溶液(１２２ml;１．２mol)を用いてpＨを約１１に維持しながら混合物を７０℃で一夜加熱した。反応混合物をＲＴまで冷却し、メタノールを真空下で除去し、水性残渣を酢酸エチル(２×５００ml)を用いて洗浄し、次いでpＨを５に調製し、さらに酢酸エチル(２×５００ml)を用いて洗浄した後、真空蒸発処理に付すことによって半固体を得た。この半固体を加熱エタノール(５００ml)を用いてすり砕き、塩化ナトリウムを濾去した。濾液を真空蒸発処理に付し、残渣をメタノール−酢酸エチル混合溶剤から晶出させることによって標記化合物を黄色固体[ＴＬＣのＲf値:０．５(n−ＢuＯＨ−ＡcＯＨ−ピリジン−Ｈ2Ｏ(１５_３_１０_１２))]として７０g得た(収率６６％)。
中間体８０  (ＲＳ)−Ｎ−アセチル−[b−(４−チアゾリル)]アラニン
上記の中間体７９の調製手順に準拠し、４−(クロロメチル)チアゾールを出発原料として標記化合物を白色泡状物[ＴＬＣのＲf値:０．３７(１％ＡcＯＨ−２０％ヘキサン−ＥtＯＡc)]として６．７gを得た(収率７３％)。
中間体８１  (Ｓ)−(１，１−ジメチルエトキシ)カルボニル−[b−(２−ピリジル)]アラニン
正リン酸二カリウム水溶液(１０mＭ，６５０ml)に中間体７９(６５g;０．３１mol)を懸濁させた懸濁液を４０℃まで加温し、得られた混合物(pＨ４)を１０Ｍ水酸化ナトリウム溶液(１０ml)を用いて塩基性化し(pＨ８)、得られた溶液にアシラーゼ３０，０００(１．３g)を添加し、この混合物を４０℃で一夜インキュベートした。得られた懸濁液をＲＴまで冷却し、固体を濾去し、濾液を２Ｎ塩酸を用いて酸性化し(pＨ１)、酢酸エチル(２×３００ml)を用いて洗浄した。水性層を真空蒸発処理に付して得られた半固体を加熱メタノール(３００ml)を用いてすり砕き、固形分を濾去した。冷却濾液に５Ｍ水酸化ナトリウム溶液を添加して塩基性化し(pＨ１０)、次いでジ−t−ブチルカーボネート(２８．６g;０．１３１mol)を添加し、この混合物のpＨを５Ｍ水酸化ナトリウム溶液(４４ml)の添加によって６時間にわたって１０に維持した。メタノールを真空下で除去し、水性残渣をエーテル(２×５００ml)を用いて洗浄した後、１Ｍ硫酸水素カリウム溶液を用いて酸性化した(pＨ３）。この混合物を酢酸エチル(４×５００ml)を用いて抽出し、一緒にした抽出物をブライン(５００ml)を用いて洗浄し、次いでＭgＳＯ4を用いて乾燥させた後、真空蒸発処理に付すことによって生じた粗生成物を酢酸エチルから晶出させることによって標記化合物を白色固体[[a]D−１６．０°(c＝１，ＭeＯＨ)]として１１．６g得た(収率２３％)。
中間体８２  (Ｓ)−Ｎ−(１，１−ジメチルエトキシ)カルボニル−[b−(４−チアゾリル)]アラニン
上記の中間体８１の調製手順に準拠し、中間体８０を出発原料として標記化合物を白色固体[ＨＰＬＣ(Ｃhirex(Ｄ)−ペニシラミン;２mＭ  ＣuＳＯ4;０．７ml／min;ＲＴ:３．２５min;９９％ee)]として１１g得た(収率９４％)。
中間体８３  (Ｓ)−Ｎ−(１，１−ジメチルエトキシ)カルボニル−[b−(２−ピリジル)]アラニンＮ−メチルアミド
乾燥テトラヒドロフラン(２００ml)に中間体８１(５．０g;１８．８mmol)とＮ−ヒドロキシスクシンイミド(２．２７g;１９．７mmol)を加えた氷冷溶液にＤＣＣ(４．０７g;１９．７mmol)を添加し、これをＲＴで３時間撹拌し、反応混合物を４０％w／vメチルアミン水溶液(６．８ml;７９mmol)を用いて処理し、撹拌をさらに２時間続行した。沈澱した固体を濾去し、濾液を真空蒸発処理に付し、残渣をジクロロメタン(１００ml)に溶解させ、この溶液を水(２×１００ml)、８％重炭酸ナトリウム溶液(２×１００ml)およびブライン(１００ml)を用いて順次洗浄し、次いでＭgＳＯ4を用いて乾燥させ、真空蒸発処理を付すことによって生じた粗生成物をカラムクロマトグラフィー処理(溶離液:２〜５％メタノール／ジクロロメタン)に付すことによって標記化合物を赤色泡状物[ＴＬＣのＲf値:０．３８(３％ＭeＯＨ−ＣＨ2Ｃl2)]として２．７g得た（収率５１％）。
中間体８４  (Ｓ)−Ｎ−(１，１−ジメチルエトキシ)カルボニル−Ｌ−[b−(４−チアゾリル)]アラニンＮ−メチルアミド
上記の中間体８３の調製手順に準拠し、中間体８２を出発原料として標記化合物を白色固体[ＴＬＣのＲf値:０．４６(５％ＭeＯＨ−ＣＨ2Ｃl2)]として３．０g得た(収率６４％)。
中間体８５  (Ｒ)−Ｎ−(１，１−ジメチルエトキシ)カルボニルペニシルアミンＮ−メチルアミド
無水ジメチルホルムアミド(３００ml）に(Ｒ)−Ｎ−(１，１−ジメチルエトキシ)カルボニルペニシルアミン(１４g;５６．１mmol)、Ｎ−ヒドロキシベンゾトリアゾール(７．６g;５６．１mmol)、メチルアミンヒドロクロリド(１８．９g;２８０mmol)、Ｎ−メチルモルホリン(３４ml;３０８mmol)、４−ジメチルアミノピリジン(６８５mg;５．６mmol)およびＥＤＣ(１１．８g;６２mmol)を加えた溶液をＲＴで一夜撹拌した。反応混合物を１０％w／vクエン酸溶液(７５０ml)中に注ぎ、これをエーテル(３×５００ml)を用いて抽出した。一緒にした抽出物を８％重炭酸ナトリウム溶液(２×５００ml)およびブライン(５００ml)を用いて順次洗浄し、次いでＭgＳＯ4を用いて乾燥させた後、真空蒸発処理に付すことによって標記化合物[ＴＬＣのＲf値:０．４７(５０％ヘキサン−ＥtＯＡc)]を１２．３g得た(収率８３％)。
上記の中間体８５の調製手順に準拠することによって下記の中間体８６〜９０を調製した。
中間体８６  (１，１−ジメチルエトキシ)カルボニル−５−メチル−Ｌ−グルタミン酸Ｎ−メチルアミド
出発原料:(１，１−ジメチルエトキシ)カルボニル−５−メチル−Ｌ−グルタミン酸
生成物:白色固体(５．４g;収率９４％)[ＴＬＣのＲf値:０．２１(２％ＭeＯＨ−ＣＨ2Ｃl2)]
中間体８７  (Ｓ)−Ｎd−(１，１−ジメチルエトキシ)カルボニル−Ｎα−(ベンジルオキシ)カルボニルオルニチンＮ−メチルアミド
出発原料:(Ｓ)−Ｎd−(１，１−ジメチルエトキシ)カルボニル−Ｎα−(ベンジルオキシ)カルボニルオルニチン(１１．５g;３１．４mmol)
生成物:白色固体(１１．０g;収率９４％)[ＴＬＣのＲf値:０．６５(３％ＭeＯＨ−ＣＨ2Ｃl2)]中間体８８  (Ｓ)−Ｎ−(１，１−ジメチルエトキシ)カルボニル−２−メトキシフェニルアラニンＮ−メチルアミド
出発原料:中間体７８(５００mg;１．６９mmol)
生成物:白色固体(３８０mg;収率７３％)[ＴＬＣのＲf値:０．５５(５％ＭeＯＨ−ＣＨ2Ｃl2)]
中間体８９  (Ｓ)−Ｎ−(１，１−ジメチルエトキシ)カルボニル−b−(３−ピリジル)アラニンＮ−メチルアミド
出発原料:中間体７７(２．０g;７．５mmol)
生成物:白色固体(１．０g;収率４８％)[ＴＬＣのＲf値:０．４２(５％ＭeＯＨ−ＣＨ2Ｃl2)]
中間体９０  (Ｓ)−Ｎ−(１，１−ジメチルエトキシ)カルボニル−b−(４−ピリジル)アラニンＮ−メチルアミド
出発原料:中間体７６(２．０g;７．５mmol)
生成物:白色固体(１．７g;収率８１％)[ＴＬＣのＲf値:０．３８(５％ＭeＯＨ−ＣＨ2Ｃl2)]
中間体９１  (Ｒ)−Ｎ−(１，１−ジメチルエトキシ)カルボニル−(Ｓ−メチル)ペニシルアミンＮ−メチルアミド
メタノール(５ml)にヨードメタン(０．５９ml;９．５５mmol)を加えた溶液を２Ｍ水酸化ナトリウム溶液(５ml)とメタノール(１５ml)との混合液に中間体８５(５００mg;１．５１mmol)を加えた溶液に０℃において撹拌下で滴下した。この混合物をＲＴで一夜撹拌し、次いでメタノールを真空下で除去し、残渣を水(５０ml)を用いて希釈した後、エーテル(３×５０ml)を用いて抽出した。一緒にした抽出物をブラインを用いて洗浄し、次いでＭgＳＯ4を用いて乾燥させた後、真空蒸発処理に付すことによって標記化合物を無色油状物[ＴＬＣのＲf値:０．４７(５０％ヘキサン−ＥtＯＡc)]として５４０mg得た(収率９９％)。
中間体９２  (Ｒ)−Ｎ−(１，１−ジメチルエトキシ)カルボニル−２，２−ジメチル−２−メタンスルホニルアラニンＮ−メチルアミド
水(５ml)にオキソン(Ｏxone)(１．０２g;１．６６mmol)を加えた懸濁液を、メタノール(５ml)に中間体９１(１５３mg;０．５５mmol)を加えた溶液に０℃において撹拌下で添加し、この混合物をＲＴまで温めて４時間撹拌した。反応混合物を水(５０ml)を用いて希釈した後、酢酸エチルを用いて抽出した。一緒にした抽出物をブライン(５０ml)を用いて洗浄し、次いでＭgＳＯ4を用いて乾燥させた後、真空蒸発処理に付すことによって標記化合物を無色油状物[ＴＬＣのＲf値:０．３５(５０％ヘキサン−ＥtＯＡc)]として１０１mg得た(収率５９％)。
中間体９３  (Ｒ)−Ｎ−(１，１−ジメチルエトキシ)カルボニル−２，２−ジメチル−２−メタンスルフィニルアラニンＮ−メチルアミド
ジクロロメタンに(２５ml)に３−クロロ過安息香酸(６７０mg;２．８９mmol)を加えた溶液を、ジクロロメタン(２５ml)に中間体９１(８００mg;２．８９mmol)に加えた溶液に０℃において撹拌下で添加し、この混合物をＲＴまで温めて一夜撹拌した。反応混合物を１０％w／v亜硫酸ナトリウム溶液(２×５０mmol)、８％重炭酸ナトリウム溶液(２×５０ml)およびブライン(５０ml)を用いて順次洗浄し、次いでＭsＳＯ4を用いて乾燥させた後、真空蒸発処理に付すことによって無色油状の粗生成物を得た。この粗生成物をフラッシュカラムクロマトグラフィー処理(溶離液:１０％メタノール−ジクロロメタン)に付すことによって標記化合物を無色油状物[ＴＬＣのＲf値:０．０５(５０％ヘキサン−ＥtＯＡc)]として４７０mg得た(収率５５％)。
中間体９４  (Ｒ)−２，２−ジメチル−２−メタンスルフィニルアラニンＮ−メチルアミドヒドロクロリド
ジオキサン(２５ml)と２Ｍ塩酸(２５ml)との混合液に中間体９３(４７０mg;１．６１mmol)を加えた溶液をＲＴで一夜撹拌した。反応混合物を真空下で蒸発乾燥させた後、一夜連結乾燥させることによって標記化合物を無色粘性物[ＴＬＣのＲf値:０．０６(１％ＮＥt3−１０％ＭeＯＨ−ＣＨ2Ｃl2)]として３７０mg得た(収率１００％)。
上記の中間体９４の調製手順に準拠して下記の中間体９５〜１００を調製した。
中間体９５  (Ｒ)−２，２−ジメチル−２−メタンスルホニルアラニンＮ−メチルアミドヒドロクロリド
出発原料:中間体９２(３００mg;０．９７mmol)
生成物:無色泡状物(２１０mg;収率１００％)[ＴＬＣのＲf値:０．１０(１％ＮＥt3−１０％ＭeＯＨ−ＣＨ2Ｃl2)]
中間体９６  (Ｒ)−ペニシルアミンＮ−メチルアミドヒドロクロリド
出発原料:中間体８５(３００mg;１．１４mmol)
生成物:無色泡状物(２３０mg;収率１００％)[ＴＬＣのＲf値:０．１３(１％ＮＥt3−１０％ＭeＯＨ−ＣＨ2Ｃl2)]
中間体９７  (Ｓ)−b−(３−ピリジル)アラニンＮ−メチルアミドジヒドロクロリド
出発原料:中間体８９(１．２g;４．２９mmol)
生成物:白色固体(１．１g;収率１００％)[ＴＬＣのＲf値:０．０５(１％ＮＥt3−１０％ＭeＯＨ−ＣＨ2Ｃl２)]
中間体９８  (Ｓ)−b−(４−ピリジル)アラニンＮ−メチルアミドジヒドロクロリド
出発原料:中間体９０(１．６g;５．７３mmol)
生成物:白色固体(１．４５g;収率１００％)[ＴＬＣのＲf値:０．０８(１％ＮＥt3−１０％ＭeＯＨ−ＣＨ2Ｃl2)]
中間体９９  (Ｓ)−b−(２−ピリジル)アラニンＮ−メチルアミドジヒドロクロリド
出発原料:中間体８３(１．４g;５．０１mmol)
生成物:白色固体(１．２７g;収率１００％)[ＴＬＣのＲf値:０．１３(１％ＮＥt3−１０％ＭeＯＨ−ＣＨ2Ｃl2)]
中間体１００  (Ｓ)−b−(４−チアゾリル)アラニンＮ−メチルアミドヒドロクロリド
出発原料:中間体８４(１．０g;３．５mmol)
生成物:白色固体(７３０mg;収率９４％)[ＴＬＣのＲf値:０．２１(１％ＮＥt3−１０％ＭeＯＨ−ＣＨ2Ｃl2)]
中間体１０１  (Ｒ)−(Ｓ−メチル)ペニシルアミンＮ−メチルアミドトリフルオロアセテート
トリフルオロ酢酸(２ml)を含有するジクロロメタン(４ml)に中間体９１(２００mg;０．７２mmol)を加えた溶液ＲＴで一夜撹拌し、反応混合物から溶剤を真空下で除去し、過剰のトリフルオロ酢酸をヘプタン(３×２０ml)を用いる共沸蒸留によって除去することによって標記化合物を無色泡状物[ＴＬＣのＲf値:０．３２(１％ＮＥt3−１０％ＭeＯＨ−ＣＨ2Ｃl2)]として１９６mg得た(収率９４％)。
上記の中間体１０１の調製手順に準拠して下記の中間体１０２および１０３を調製した。
中間体１０２  (Ｓ)−２−(メトキシフェニル)アラニンＮ−メチルアミドトリフルオロアセテート
出発原料:中間体８８(２００mg;０．６５mmol)
生成物:淡黄色泡状物(２０９mg;収率１００％)[ＴＬＣのＲf値:０．２５(１％ＮＥt3−１０％ＭeＯＨ−ＣＨ2Ｃl2)]
中間体１０３  (Ｓ)−５−メチル−グルタミン酸Ｎ−メチルアミドトリフルオロアセテート
出発原料:中間体８６(７０７mg;２．５８mmol)
生成物:白色固体(７２８mg;収率９８％)[ＴＬＣのＲf値:０．３７(１％ＮＥt3−１０％ＭeＯＨ−ＣＨ2Ｃl2)]
中間体１０４  (Ｓ)−Ｎd−(１，１−ジメチルエトキシ)カルボニルオルニチンＮ−メチルアミド
エタノール中において１０％Ｐd−Ｃ触媒(１g)を用いて中間体８７(１１g;２９mmol)を大気圧下、ＲＴで水素化した。触媒をハイフロ(hyflo)を用いて濾去し、濾液を真空蒸発処理に付すことによって標記化合物を無色油状物[ＴＬＣのＲf値:０．３７(５％ＭeＯＨ−ＣＨ2Ｃl2)]として２．６g得た(収率３６％)。
中間体１０５  Ｎ−(フェニルメトキシ)カルボニル−(Ｓ−メチル)−Ｌ−システイニル−Ｌ−フェニルアラニンＮ−メチルアミド
乾燥テトラヒドロフラン(１００ml)にＬ−フェニルアラニンＮ−メチルアミド(８．９g;５０mmol)、中間体６９(１３．９g;５０mmol)およびＮ−ヒドロキシベンゾトリアゾール(８．１g;６０mmol)を加えた溶液にＥＤＣ(１０．５g;５５mmol)を撹拌下で添加し、この混合物をＲＴで一夜撹拌した。反応混合物を１Ｍ塩酸(３００ml)を用いて処理した後、酢酸エチル(４×２００ml)を用いて抽出した。一緒にした抽出物を８％重炭酸ナトリウム溶液(２×２００ml)、水(２００ml)およびブライン(２００ml)を用いて順次洗浄し、次いでＭgＳＯ4を用いて乾燥させた後、真空蒸発処理に付することによって標記化合物を白色固体[ＴＬＣのＲf値:０．４７(１０％ＭeＯＨ−ＣＨＣl3)]として１６．５g得た(収率７５％)。
上記の中間体１０５の調製手順に準拠して下記の中間体１０６〜１１０を調製した。
中間体１０６  Ｎ−(１，１−ジメチルエトキシ)カルボニル−(Ｓ)−プロピルグリシニル−Ｌ−フェニルアラニンＮ−メチルアミド
出発原料:中間体７１(５g;２３mmol)およびＬ−フェニルアラニンＮ−メチルアミド(４．１g;２３mmol)
生成物:白色固体(７．７２g;収率８９％)[ＴＬＣのＲf値:０．４８(１０％ＭeＯＨ−ＣＨ2Ｃl2)]
中間体１０７  Ｎ−(１，１−ジメチルエトキシ)カルボニル−Ｌ−ロイシル−Ｌ−t−ロイシンＮ−メチルアミド
出発原料:Ｎ−(１，１−ジメチルエトキシ)カルボニル−Ｌ−ロイシン(１３．０７g;５６mmol)およびＬ−t−ロイシンＮ−メチルアミド(８．１１g;５６mmol)
生成物:白色固体(１５．７７g;収率７９％)[ＴＬＣのＲf値:０．２５(５％ＭeＯＨ−ＣＨ2Ｃl2)]
中間体１０８  Ｎ−(１，１−ジメチルエトキシ)カルボニル−(Ｓ)−(Ｓ−メチル)システイニル−Ｌ−t−ロイシンＮ−メチルアミド
出発原料:中間体７０(６．６４g;２８mmol)およびＬ−t−ロイシンＮ−メチルアミド(４．０７g;２８mmol)
生成物:白色固体(４．２６g;収率４２％)[ＴＬＣのＲf値:０．４５(１０％ＭeＯＨ−ＣＨ2Ｃl2)]
中間体１０９  Ｎ−(１，１−ジメチルエトキシ)カルボニル−(Ｓ)−(Ｏ−メチル)セリニル−Ｌ−t−ロイシンＮ−メチルアミド
出発原料:中間体７２(７．４８g;３４mmol)および−Ｌ−t−ロイシンＮ−メチルアミド(４．９２g;３４mmol)
生成物:白色固体(４．２６g;収率４２％)[ＴＬＣのＲf値:０．４０(１０％ＭeＯＨ−ＣＨ2Ｃl2)]
中間体１１０  Ｎ−(フェニルメトキシ)カルボニル−Ｌ−バリニル−Ｎd−(１，１−ジメチルエトキシ)カルボニル−Ｌ−オルニチンＮ−メチルアミド
出発原料:中間体１０４(２．６g;１０．６mmol)およびＮ−(フェニルメトキシ)カルボニル−Ｌ−バリン(２．８２g;１１．２mmol)
生成物:白色固体(３．０g;収率６１％)[ＴＬＣのＲf値:０．３２(５％ＭeＯＨ−ＣＨ2Ｃl2)]
中間体１１１  (Ｓ−メチル)−Ｌ−システイニル−Ｌ−フェニルアラニンＮ−メチルアミド
ジクロロメタン(１０ml)に中間体１０５(２．０g;４．６５mmol)を加えた溶液を、２５％臭化水素酸含有酢酸(１８．６ml)を用いて処理し、混合物をＲＴで１時間撹拌した。反応混合物に水(１０ml)を添加し、この混合物をジクロロメタン(３×１５ml)を用いて洗浄し、水性層を５Ｍ水酸化ナトリウム溶液を用いて塩基性化した後(pＨ１４)、ジクロロメタン(４×３０ml)を用いて抽出した。一緒にした有機抽出物をブライン(３０ml)を用いて洗浄し、次いでＭgＳＯ4を用いて乾燥させた後、真空蒸発処理に付すことによって標記化合物を白色固体[ＴＬＣのＲf値:０．３１(１０％ＭeＯＨ−ＣＨＣl3)]として１．２２g得た(収率８８％)。
中間体１１２  Ｌ−バレリル−Ｎd−(１，１−ジメチルエトキシ)カルボニル−Ｌ−オルニチンＮ−メチルアミド
エタノール(１００ml)中において１０％Ｐd−Ｃ触媒(３００mg)を用いて大気圧下、ＲＴで中間体１１０(３．０g;６．５mmol)を水素化した。触媒をハイフロを用いて濾去し、濾液を真空蒸発処理に付すことによって標記化合物を白色固体[ＴＬＣのＲf値:０．２６(１０％ＭeＯＨ−ＣＨ2Ｃl2)]として２．２g得た(収率９９％)。
中間体１１３  (Ｓ)−プロピルグリシル−Ｌ−フェニルアラニンＮ−メチルアシド
ジオキサン(２５０ml)と２Ｍ塩酸(２５０ml)との混合液に中間体１０６(５．３６g;１４．２mmol)を加えた溶液をＲＴで一夜撹拌した。反応混合物から溶剤を真空下で除去することによって得られた白色固体残渣を水(２００ml)に溶解させ、この溶液をジクロロメタン(３×１００ml)を用いて洗浄し、次いで２Ｍ水酸化ナトリウム溶液を用いて塩基性化した後(pＨ１０)、ジクロロメタン(４×１００ml)を用いて抽出した。一緒にした抽出物ブライン(１００ml)を用いて洗浄し、次いでＭgＳＯ4を用いて乾燥させた後、真空蒸発処理に付すことによって標記化合物を白色固体[ＴＬＣのＲf値:０．２９(１０％ＭeＯＨ−ＣＨ2Ｃl2)]として１．４５g得た(収率３７％)。
上記の中間体１１３の調製手順に準拠して下記の中間体１１４〜１１６を調製した。
中間体１１４  (Ｓ)−(Ｓ−メチル)システイニル−Ｌ−t−ロイシンＮ−メチルアミド
出発原料:中間体１０８
生成物:白色固体(３．５g;収率９７％)[ＴＬＣのＲf値:０．４５(１０％ＭeＯＨ−ＣＨ2Ｃl2)]
中間体１１５  (Ｓ)−(Ｏ−メチル)セリニル−Ｌ−t−ロイシンＮ−メチルアミド
出発原料:中間体１０９
生成物:白色固体(２．７g;収率９８％)[ＴＬＣのＲf値:０．４０(１０％ＭeＯＨ−ＣＨ2Ｃl2)]
中間体１１６  Ｌ−ロイシル−Ｌ−t−ロイシンＮ−メチルアミド
出発原料:中間体１０７
生成物:白色固体(１１．２g;収率９９％)[ＴＬＣのＲf値:０．５７(１０％ＭeＯＨ−ＣＨ2Ｃl2)]
中間体１１７  (Ｒ)−２−ブロモ−５−フタルイミドペンタン酸
水(３５０ml)にＤ−オルニチンヒドロクロリド(３５g;０．２０８mol)を加えた溶液を硫酸銅(ＩＩ)(１６．６g;０．１０４mol)を用いて処理した。この処理液に５Ｍ水酸化カリウム溶液(約４０ml)を添加してpＨを３に調整した後、Ｎ−カルボエトキシフタルイミド(４５．５g;０．２０８mol)を添加し、次いで５Ｍ水酸化カリウム溶液(約５５ml)を添加してpＨを９〜１０に維持した。２時間後、４８％臭化水素酸(約７７ml)を添加してpＨを０．４として得られた沈澱物を濾去した。濾液を５℃以下に冷却した後、臭化水素酸(１５２ml)および臭化カリウム(５９g;０．５mol)を用いて処理した。この混合物に、水(２７５ml)に亜硝酸ナトリウム(２８．６g;０．４１mol)を加えた溶液を４５分間かけて滴下した(滴下中の温度は５℃以下に維持した)。この混合物を５℃以下の温度で一夜撹拌した。生じた沈澱物を濾去し、濾液を酢酸エチル(４００ml)に溶解させ、この溶液を水(２×２００ml)およびブライン(２００ml)を用いて順次洗浄し、次いでＭgＳＯ4を用いて乾燥させた後、真空蒸発処理に付すことによって標記化合物をクリーム色固体[ＴＬＣのＲf値:０．８０(１０％ＭeＯＨ−ＣＨ2Ｃl2)]として４０．６g得た(収率４７％)。
上記の中間体１１７の調製手順に準拠して下記の中間体１１８を調製した。
中間体１１８  (Ｓ)−２−ブロモ−５−フタルイミドペンタン酸
出発原料:Ｌ−オルニチンヒドロクロリド(２０g;０．１１８mol)
生成物:クリーム色固体(２２g;収率５７％)[ＴＬＣのＲf値:０．８０(１０％ＭeＯＨ−ＣＨ2Ｃl2)]
中間体１１９  (Ｓ)−２−アセチルメルカプト−５−フタルイミドペンタン酸
中間体１１７(３９．９g;０．１１mol)を出発原料とし、先に説明した類似化合物の調製手順に準拠して標記化合物を淡いオレンジ色油状物[ＴＬＣのＲf値:０．２４(５０％ヘキサン−ＥtＯＡc)]として３９．９g得た(収率９９％)。
中間体１２０  (Ｒ)−２−アセチルメルカプト−５−フタルイミドペンタン酸
中間体１１８(２０g;５６mmol)を出発原料として、先に説明した類似化合物の調製手順に準拠して標記化合物を淡いオレンジ色油状物[ＴＬＣのＲf値:０．２４(５０％ヘプタン−ＥtＯＡc)]として１７．７g得た(収率９９％)。
中間体１２１  (ＲＳ)−２−(アセチルメルカプト)−５−フタルイミドペンタノイル−Ｌ−ロイシン１，１−ジメチルエチルエステル
乾燥テトラヒドロフラン(２００ml)にＬ−ロイシン１，１−ジメチルエチルエステル(３．９３g;１７．６mmol)、Ｎ−ヒドロキシベンゾトリアゾール(２．６２g;１９．４mmol)、トリエチルアミン(２．５１ml;18mmol)および中間体１５(５．９４g;１８．５mmol)を加えた溶液にＥＤＣ(３．６４g;１９mmol)を撹拌下で添加し、この混合物を一夜撹拌した。反応混合物から溶剤を真空下で除去し、残渣を水(１００ml)と酢酸エチル(１００ml)に分配させた。水性層を酢酸エチル(２×５０ml)を用いて抽出し、一緒にした抽出物を水(２×１００ml)およびブライン(１００ml)を用いて順次洗浄し、次いでＭgＳＯ4を用いて乾燥させた後、真空蒸発処理に付すことによって無色油状物を得た。この油状物をカラムクロマトグラフィー処理(溶離液:ヘキサンと酢酸エチルの２:１混合液)に付すことによって標記化合物(ジアステレオマーの１:１混合物)を白色固体[ＴＬＣのＲf値:０．４２(ＥtＯＡc／ヘキサン(１:１)]として６．６g得た(収率７７％)。
中間体１２２  (ＲＳ)−２−（アセチルメルカプト）−５−フタルイミドペンタノイル−Ｌ−ロイシン
乾燥ジクロロメタン(４０ml)に中間体１２１(３．０g;６１mmol)を加えた溶液にトリフルオロ酢酸(９．０ml;１１５mmol)を撹拌下で添加し、この混合物をＲＴで一夜撹拌した。反応混合物を真空下で濃縮し、過剰のトリフルオロ酢酸をヘプタンとの共沸混合物として除去することによって標記化合物(ジアステレオマーの１:１混合物)を無色泡状物[ＴＬＣのＲf値:０．４２(ＥtＯＡc／ヘキサン(３:２)]として２．４８g得た(収率９４％)。
中間体１２３  (ＲＳ)−２−(アセチルメルカプト)−４−スクシンイミドブタン酸
中間体３６の場合の調製手順に準拠して標記化合物[ＴＬＣのＲf値:０．３８(ＨＯＡc／ＥtＯＡc／ヘキサン(０．１:１:１))]を得た。
中間体１２４  (Ｓ−メチル)−Ｌ−システイニル−Ｌ−トリプトファンＮ−メチルアミド
中間体１１１の場合の調製手順に準拠し標記配合物[ＴＬＣのＲf値:０．４５(ＥtＯＡc／ヘキサン(１:１))]を得た。
中間体１２５  (Ｒ)−２−[(１，１−ジメチルエチル)メルカプト]−３−フタルイミドプロパナン酸
中間体４３の場合の調製手順に準拠し標記化合物[ＴＬＣのＲf値:０．４８(ＨＯＡc／ＥtＯＡc／ヘキサン(０．１:１:１))]を得た。
実施例１  (ＲＳ)−Ｎ−[２，３−ビス−アセチルメルカプトプロパノイル]−Ｌ−ロイシル−Ｌ−フェニルアラニンＮ−メチルアミド
乾燥ＴＨＦ(１０ml)に中間体１４(２０９mg)、Ｌ−ロイシル−Ｌ−フェニルアラニンＮ−メチルアミド(２７４mg)およびＮ−ヒドロキシベンゾトリアゾールハイドレート(１５３mg)を加えた溶液にＥＤＣ(１９８mg)を０℃で添加し、この混合物を０℃で７２時間撹拌した。出発原料が完全に消費されたことはＴＬＣ分析(５％ＭeＯＨ−ＣＨ2Ｃl2)によって確認した。溶剤を蒸発除去し、残渣を１Ｎ塩酸(３５ml)と酢酸エチル(５０ml)に分配させた。有機層を分離し、重炭酸ナトリウム水溶液(２×２００ml)およびブライン(２×２０ml)を用いて順次洗浄し、次いでＭgＳＯ4を用いて乾燥させた後、真空蒸発処理に付すことによって粗生成物を得た。この粗生成物をフラシュカラムクロマトグラフィー処理(溶離液:２〜５％ＭeＯＨ−ＣＨ2Ｃl2)に付すことによって標記化合物を無色固体[ＴＬＣのＲf値:０．２５(２％ＭeＯＨ−ＣＨ2Ｃl2)]として２６４mg得た。
上記の実施例１の調製手順に準拠して以下の実施例２〜２２に記載の化合物を調製した。
実施例２  (ＲＳ)−Ｎ−[(２，４−ビス−アセチルメルカプト)ブタノイル]−Ｌ−ロイシル−Ｌ−フェニルアラニンＮ−メチルアミド
出発原料:中間体１５(８７０mg;３．７mmol)およびＬ−ロイシル−Ｌ−フェニルアラニンＮ−メチルアミド(１．０７g;３．７mmol)
生成物:白色固体(１．４g;収率７４％)
Ｃ24Ｈ35Ｎ3Ｏ5Ｓ2[５０９．７];[ＭＨ+＝５１０]
実施例３  (ＲＳ)−Ｎ−[(２，５−ビス−アセチルメルカプト)ペンタノイル]−Ｌ−ロイシル−Ｌ−フェニルアラニンＮ−メチルアミド
出発原料:中間体１６(９０６mg;収率３．６mmol)およびＬ−ロイシル−Ｌ−フェニルアラニンＮ−メチルアミド(１．０６g;３．６mmol)
生成物:白色固体(１．５g;収率７９％)
Ｃ25Ｈ37Ｎ3Ｏ5Ｓ2[５２３．７];[ＭＨ+＝５２４]
実施例４  (ＲＳ)−Ｎ−[(２，６−ビス−アセチルメルカプト)ヘキサノイル]−Ｌ−ロイシル−Ｌ−フェニルアラニンＮ−メチルアミド
出発原料:中間体１７(８９５mg;３．４mmol)およびＬ−ロイシル−Ｌ−フェニルアラニンＮ−メチルアミド(９９１mg;３．４mmol)
生成物:白色固体(１．４g;収率７４％)
Ｃ26Ｈ39Ｎ3Ｏ5Ｓ2[５３７．７５];[ＭＨ+＝５３８]
実施例５  (ＲＳ)−Ｎ−[２−アセチルメルカプト−３−メトキシカルボニルプロパノイル]−Ｌ−ロイシル−Ｌ−フェニルアラニンＮ−メチルアミド
出発原料:中間体４(０．２６g)
生成物:無色固体(０．３３g)
Ｃ23Ｈ33Ｎ3Ｏ6Ｓ[４７９．６];[ＭＨ+＝４８０]
実施例６  (ＲＳ)−Ｎ−[２−アセチルメルカプト−４−メトキシカルボニルブタノイル]−Ｌ−ロイシル−Ｌ−フェニルアラニンＮ−メチルアミド
出発原料:中間体５(０．４０g)
生成物:無色固体(０．６７g)
Ｃ24Ｈ35Ｎ3Ｏ6Ｓ[４９３．６];[ＭＨ+＝４９４]
実施例７  (ＲＳ)−Ｎ−[アセチルメルカプト−５−メトキシカルボニルペンタノイル]−Ｌ−ロイシル−Ｌ−フェニルアラニンＮ−メチルアミド
出発原料:中間体６(０．９g)
生成物:無色固体(１．１g)
Ｃ25Ｈ37Ｎ3Ｏ6Ｓ[５０７．６];[ＭＨ+＝５０８]
実施例８  (ＲＳ)−Ｎ−[２−アセチルメルカプト−６−メトキシカルボニルヘキサノイル]−Ｌ−ロイシル−Ｌ−フェニルアラニンＮ−メチルアミド
出発原料:中間体７(０．９５g)
生成物:無色固体(１．０g)
Ｃ26Ｈ39Ｎ3Ｏ6Ｓ[５２１．６];[ＭＨ+＝５２２]
実施例９  (ＲＳ)−Ｎ−[２−アセチルメルカプト−５−フタルイミドペンタノイル]−Ｌ−ロイシル−Ｌ−トリプトファンＮ−メチルアミド
出発原料:中間体３６(７３０mg)およびＬ−ロイシル−Ｌ−トリプトファンＮ−メチルアミド(７００mg)
生成物:淡黄色泡状物(１．０g;収率７４％)
Ｃ33Ｈ39Ｎ5Ｏ6Ｓ[６３３．７];[ＭＨ+＝６３４]
実施例１０  (ＲＳ)−Ｎ−[２−アセチルメルカプト−６−メトキシカルボニルヘキサノイル]−Ｌ−ロイシル−Ｌ−トリプトファンＮ−メチルアミド
出発原料:中間体７(３７５mg)およびＬ−ロイシル−Ｌ−トリプトファンＮ−メチルアミド(５００mg)
生成物:淡黄色泡状物(４４０mg;収率５２％)
Ｃ28Ｈ40Ｎ4Ｏ6Ｓ[５６０．７];[ＭＨ+＝５６１]
実施例１１  (ＲＳ)−Ｎ−[２−アセチルメルカプト−５−フタルイミドペンタノイル]−Ｌ−バリニル−Ｌ−フェニルアラニンＮ−メチルアミド
出発原料:中間体３６(２３２mg)およびＬ−バリニル−Ｌ−フェニルアラニンＮ−メチルアミド(２００mg)
生成物:白色固体(２３０mg;収率５５％)
Ｃ30Ｈ36Ｎ4Ｏ6Ｓ[５８０．７];[ＭＨ+＝５８１]
実施例１２  (ＲＳ)−Ｎ−[２−アセチルメルカプト−６−メチルカルボニルヘキサノイル]−Ｌ−バリニル−Ｌ−フェニルアラニンＮ−メチルアミド
出発原料:中間体７(１７９mg)およびＬ−バリニル−Ｌ−フェニルアラニンＮ−メチルアミド(２００mg)
生成物:白色固体(２００mg;収率５６％)
Ｃ25Ｈ37Ｎ3Ｏ6Ｓ[５０７．６];[ＭＨ+＝５０８]
実施例１３  (ＲＳ)−Ｎ−[２−アセチルメルカプト−２−（３−フタルイミドフェニル）アセチル]−Ｌ−ロイシル−Ｌ−フェニルアラニンＮ−メチルアミド
出発原料:中間体３７(６９０mg)およびＬ−ロイシル−Ｌ−フェニルアラニンＮ−メチルアミド(４８９mg)
生成物:白色固体(９２７mg;収率８８％)
Ｃ34Ｈ36Ｎ4Ｏ6Ｓ[６２８．８];[ＭＨ+＝６２９]
実施例１４  Ｎ−[２−(アセチルメルカプト)−２−[３−シス−フタルイミドシクロペンチル]アセチル−Ｌ−ロイシル−Ｌ−フェニルアラニンＮ−メチルアミド
出発原料:中間体３８(１４０mg;０．４mmol)およびＬ−ロイシル−Ｌ−フェニルアラニンＮ−メチルアミド(１１７mg;０．４mmol)
生成物:黄褐色泡状物(１９７mg;収率７９％);４種のジアステレオマーの１:１:１:１混合物
Ｃ33Ｈ40Ｎ4Ｏ6Ｓ[６２０．８];[ＭＨ+＝６２１]
実施例１５  Ｎ−[２−(アセチルメルカプト)−２−[３−トランス−フタルイミドシクロペンチル]アセチル−Ｌ−ロイシル−Ｌ−フェニルアラニンＮ−メチルアミド
出発原料:中間体３９(２３５mg;０．７mmol)およびＬ−ロイシル−Ｌ−フェニルアラニンＮ−メチルアミド(１９７mg;０．７mmol)
生成物:褐色泡状物(３５８mg;収率８５％);４種のジアステレオマーの１:１:１:１混合物
Ｃ33Ｈ40Ｎ4Ｏ6Ｓ[６２０．８];[ＭＨ+＝６２１]
実施例１６  (Ｓ)−Ｎ−[２−(アセチルメルカプト)−５−フタルイミド]ペンタノイル−Ｌ−ロイシル−(Ｓ)−t−ロイシンＮ−メチルアミド
出発原料:中間体１１９(１３．８g;４３mmol)および中間体１１６(１１．２g;４４mmol)
生成物:白色固体(１１．６g;収率４８％)
Ｃ28Ｈ40Ｎ4Ｏ6Ｓ[５６０．７];[ＭＨ+＝５６１]
実施例１７  (Ｓ)−Ｎ−[２−(アセチルメルカプト)−５−フタルイミド]ペンタノイル−Ｌ−ロイシル−Ｌ−フェニルアラニンＮ−メチルアミド
出発原料:中間体１１９(１０g;３１mmol)およびＬ−ロイシル−Ｌ−フェニルアラニンＮ−メチルアミド(９．０g;３１mmol)
生成物:白色固体(１０．５g;収率５７％)
Ｃ31Ｈ38Ｎ4Ｏ6Ｓ[５９４．７];[ＭＨ+＝５９５]
実施例１８  (Ｒ)−Ｎ−[２−(アセチルメルカプト)−５−フタルイミド]ペンタノイル−Ｌ−ロイシル−Ｌ−フェニルアラニンＮ−メチルアミド
出発原料:中間体１２０(１．０g;３．１mmol)およびＬ−ロイシル−Ｌ−フェニルアラニンＮ−メチルアミド(９００mg;３．１mmol)
生成物:白色固体(８８５mg;収率４８％)
Ｃ31Ｈ38Ｎ4Ｏ6Ｓ[５９４．７];[ＭＨ+＝５９５]
実施例１９  (Ｓ)−Ｎ−[２−(アセチルメルカプト)−５−フタルイミド]ペンタノイル−Ｌ−ロイシル−Ｌ−トリプトファンＮ−メチルアミド
出発原料:中間体１１９(４１１mg;１．２８mmol)およびＬ−ロイシル−Ｌ−トリプトファンＮ−メチルアミド(４２３mg;１．２８mmol)
生成物:白色固体(３３０mg;収率４１％)
Ｃ33Ｈ39Ｎ5Ｏ6Ｓ[６３３．７];[ＭＨ+＝６３４]
実施例２０  (ＲＳ)−Ｎ−[２−(アセチルメルカプト)−５−フタルイミドペンタノイル]−(Ｓ−メチル)−Ｌ−システイニル−Ｌ−フェニルアラニンＮ−メチルアミド
出発原料:中間体３６(３２６mg;１mmol)および中間体１１４(３５０mg;１mmol)
生成物:白色固体(３８０mg;収率６４％)
Ｃ29Ｈ34Ｎ4Ｏ6Ｓ2[５９８．７];[ＭＨ+＝５９９]
実施例２１  (ＲＳ)−Ｎ−[２−(アセチルメルカプト)−５−フタルイミド]ペンタノイル−(Ｓ)−プロピルグリシニル−Ｌ−フェニルアラニンＮ−メチルアミド
出発原料:中間体１１３(１４５mg;０．５２mmol)および中間体３６(１６８mg;０．５２mmol)
生成物:白色固体(１６０mg;収率５３％)
Ｃ30Ｈ36Ｎ4Ｏ6Ｓ[５８０．７];[ＭＨ+＝５８１]
実施例２２  (ＲＳ)−Ｎ−[２−(アセチルメルカプト)−５−フタルイミド]ペンタノイル−Ｌ−バリニル−Ｎd−(１，１−ジメチルエトキシ)カルボニル−Ｌ−オルニチンＮ−メチルアミド
出発原料:中間体１１２(５０８mg;１．４７mmol)および中間体３６(４９１mg;１．５３mmol)
生成物:白色固体(６８７mg;収率７２％)
Ｃ31Ｈ45Ｎ5Ｏ8Ｓ[６４７．８];[ＭＨ+＝６４８]
実施例２３  (ＲＳ)−Ｎ−[２−(アセチルメルカプト)−５−フタルイミド]ペンタノイル−Ｌ−バリニル−Ｌ−オルニチンＮ−メチルアミドトリフルオロアセテート
トリフルオロ酢酸(２ml)を含有するジクロロメタン(２０ml)に実施例２２の生成物(５８５mg;０．９０mmol)を加えた溶液をＲＴで一夜撹拌した。反応混合物から溶剤を真空下で除去し、過剰のトリフルオロ酢酸をヘプタン(３×２０ml)を用いる共沸蒸留によって除去することにより標記化合物を灰色がかった白色固体として５９６mg得た(収率９９％)。
Ｃ26Ｈ38Ｎ5Ｏ6Ｓ[５４８．７];[ＭＨ+＝５４９]
実施例２４  (ＲＳ)−Ｎ−[２−(アセチルメルカプト)−５−フタルイミド]ペンタノイル−Ｌ−バリニル−Ｎd−(アセチル−Ｌ−オルニチンＮ−メチルアミド
無水ジクロロメタン(２０ml)に実施例２３の生成物(２０５mg;０．３１mmol)およびＮ−メチルモルホリン(０．１３４ml;０．３１mmol)を加えた溶液にアセチルクロリド(０．０２４ml;０．３４mmol)を撹拌下、０℃で添加した。この混合物をＲＴまで温めて１時間撹拌した後、ジクロロメタン(２０ml)を用いて希釈し、次いで２Ｎヒドロクロリド(２０ml)、８％重炭酸ナトリウム溶液(２０ml)、水(２０ml)およびブライン(２０ml)を用いて順次洗浄し、ＭgＳＯ4を用いて乾燥させた後、真空蒸発処理に付すとによって無色泡状物を得た。この泡状物をフラシュカラムクロマトグラフィー処理(溶離液:３〜５％ＭｅＯＨ−ＣＨ2Ｃl2)に付することによって標記化合物を白色固体として３０mg得た(収率１７％)。
Ｃ28Ｈ41Ｎ5Ｏ7Ｓ[５９０．７];[ＭＨ+＝５９１]
実施例２５  (ＲＳ)−Ｎ−[２−アセチルメルカプト−４−フタルイミドブタノイル]−Ｌ−ロイシル−Ｌ−フェニルアラニンＮ−メチルアミド
メタノール(２ml)にチオール酢酸カリウム(９８mg)を加えた溶液を、メタノール(１０ml)に中間体４０(０．５g)を加えた懸濁液に添加し、この混合物をＲＴで３０分間撹拌した後、６時間加熱還流させた。反応混合物から溶剤を減圧下で除去し、残渣を水(５０ml)とジクロロメタン(１５０ml)に分配させた。層分離させ、有機層を硫酸ナトリウムを用いて乾燥させ、固体を濾去し、濾液を蒸発処理に付すことによって粗生成物を得た。この粗生成物をフラッシュカラムクロマトグラフィー処理(溶離液:５０％酢酸エチル−ジクロロメタン)に付すことによって標記化合物を無色固体[ＴＬＣのＲf値:０．３０(５０％ＥtＯＡc／ＣＨ2Ｃl2)]として２７０mg得た。
実施例２５の調製手順に準拠して以下の実施例２６および２７に記載の化合物を調製した。
実施例２６  (ＲＳ)−Ｎ−[２−アセチルメルカプト−５−フタルイミドペンタノイル]−Ｌ−ロイシル−Ｌ−フェニルアラニンＮ−メチルアミド
出発原料:中間体４１(０．５０g)
生成物:ほとんど無色の固体(０．４２g)[ＴＬＣのＲf値:０．２０(５０％ＥtＯＡc−ＣＨ2Ｃl2)]
実施例２７  (ＲＳ)−Ｎ−[２−アセチルチオ−６−フタルイミドヘキサノイル]−Ｌ−ロイシル−Ｌ−フェニルアラニンＮ−メチルアミド
出発原料:中間体４２(０．５０g)
生成物:淡黄色固体(０．３９g)[ＴＬＣのＲf値:０.３１(５０％ＥteＯＡc−ＣＨ2Ｃl2)]
実施例２８  (ＲＳ)−Ｎ−[２−(アセチルメルカプト)−５−フタルイミド]ペンタノイル−Ｌ−ロイシル−Ｌ−[β−(４−チアゾリル)]アラニンＮ−メチルアミド
乾燥テトラヒドロフラン(３０ml)に中間体１２２(２２２mg;０．５１mmol)、Ｎ−ヒドロキシベンゾトリアゾール(７６mg;０．５６mmol)、トリエチルアミン(７５ml;０．５３mmol)および中間体１００(１１３mg;０．５１mmol)を加えた溶液にＥＤＣ(１０７mg;０．５６mmol)を撹拌下で添加した。この混合物をＲＴで一夜撹拌し、溶剤を真空下で除去した後、残渣を水(２０ml)と酢酸エチル(２０ml)に分配させた。水性層を酢酸エチル(２×２０ml)を用いて抽出し、一緒にした抽出物を水(２×５０ml)およびブライン(５０ml)を用いて順次洗浄し、次いでＭgＳＯ4を用いて乾燥させた後、真空蒸発処理に付すことによって淡黄色の油状物を得た、この油状物をカラムクロマトグラフィー処理(溶離液:ジクロロメタン／メタノール(９８:２))に付すことによって標記化合物を白色固体として１７０mg得た(収率５５％)。
Ｃ28Ｈ35Ｎ5Ｏ6Ｓ2[６０１．７];[ＭＨ+＝６０２]
上記の実施例２８の調製手順に準拠して以下の実施例２９〜３８に記載の化合物を調製した
実施例２９  (ＲＳ)−Ｎ−[２−(アセチルメルカプト)−５−フタルイミド]ペンタノイル−Ｌ−ロイシル−Ｌ−[β−(２−ピリジル)]アラニンＮ−メチルアミド
出発原料:中間体１２２および中間体９９
生成物:白色固体(２７７mg;収率６７％)
Ｃ30Ｈ37Ｎ5Ｏ6Ｓ[５９５．７];[ＭＨ＝５９６]
実施例３０  (ＲＳ)−Ｎ−[２−(アセチルメルカプト)−５−フタルイミド]ペンタノイル−Ｌ−ロイシル−Ｌ−[β−ピリジル)]アラニンＮ−メチルアミド
出発原料:中間体１２２および中間体９７
生成物:白色固体(５０mg;収率１２％)
Ｃ30Ｈ37Ｎ5Ｏ6Ｓ[５９５．７];[ＭＨ＝５９６]
実施例３１  (ＲＳ)−Ｎ−[２−(アセチルメルカプト)−５−フタルイミド]ペンタノイル−Ｌ−ロイシル−Ｌ−[β−４−ピリジル)]アラニンＮ−メチルアミド
出発原料:中間体１２２および中間体９８
生成物:白色固体(３１０mg;収率７７％)
Ｃ30Ｈ37Ｎ5Ｏ6Ｓ[５９５．７];[ＭＨ＝５９６]
実施例３２  (ＲＳ)−Ｎ−[２−(アセチルメルカプト)−５−フタルイミド]ペンタノイル−Ｌ−ロイシル−５−メチル−Ｌ−グルタミン酸Ｎ−メチルアミド
出発原料:中間体１２２および中間体１０３
生成物:白色固体(２０１mg;収率４９％)
Ｃ28Ｈ38Ｎ4Ｏ8Ｓ[５９０．３];[ＭＨ＝５９１]
実施例３３  (ＲＳ)−Ｎ−[２−(アセチルメルカプト)−５−フタルイミド]ペンタノイル−Ｌ−ロイシル−(Ｓ)−(２−メトキシフェニル)アラニンＮ−メチルアミド
出発原料:中間体１２２および中間体１０２
生成物:白色固体(１５０mg;収率３７％)
Ｃ32Ｈ40Ｎ4Ｏ7Ｓ[６２４．８];[ＭＨ＝６２５]
実施例３４  (ＲＳ)−Ｎ−[２−(アセチルメルカプト)−５−フタルイミド]ペンタノイル−Ｌ−ロイシル−(Ｒ)−ペニシルアミンＮ−メチルアミド
出発原料:中間体１２２および中間体９６
生成物:白色固体(２３０mg;収率３５％)
Ｃ27Ｈ38Ｎ4Ｏ6Ｓ2[５７８．８];[ＭＨ＝５７９]
実施例３５  (ＲＳ)−Ｎ−[２−(アセチルメルカプト)−５−フタルイミド]ペンタノイル−Ｌ−ロイシル−(Ｒ)−(Ｓ−メチル)−ペニシルアラニンＮ−メチルアミド
出発原料:中間体１２２および中間体１０１
生成物:白色固体(４００mg;収率３５％)
Ｃ28Ｈ40Ｎ4Ｏ6Ｓ2[５９２．８];[ＭＨ＝５９３]
実施例３６  (ＲＳ)−Ｎ−[２−(アセチルメルカプト)−５−フタルイミド]ペンタノイル−Ｌ−ロイシル−(Ｒ)−(２，２−ジメチル−２−メタンスルホニル)アラニンＮ−メチルアミド
出発原料:中間体１２２および中間体９５
生成物:白色固体(３８０mg;収率６６％)
Ｃ28Ｈ40Ｎ4Ｏ8Ｓ2[６２４．８];[ＭＨ＝６２５]
実施例３７  (ＲＳ)−Ｎ−[２−(アセチルメルカプト)−５−フタルイミド]ペンタノイル−Ｌ−ロイシル−(Ｒ)−(２，２−ジメチル−２−メタンスルフィニル)アラニンＮ−メチルアミド
出発原料:中間体１２２および中間体９４
生成物:白色固体(３６０mg;収率３７％)
Ｃ28Ｈ40Ｎ4Ｏ7Ｓ2[６０８．８];[ＭＨ＝６０９]
実施例３８  (ＲＳ)−Ｎ−[２−(アセチルメルカプト)−５−フタルイミド]ペンタノイル−Ｌ−ロイシル−(Ｓ)−t−ロイシンＮ−メチルアミド
出発原料:中間体１２２およびＮ−メチルアミドヒドロクロリド
生成物:白色固体(１２０mg;収率２５％)
Ｃ28Ｈ40Ｎ4Ｏ6Ｓ[５６０．７];[ＭＨ＝５６１]
実施例３９  (ＲＳ)−Ｎ−[２−メルカプト−５−(アセチル)アミノペンタノイル]−Ｌ−ロイシル−Ｌ−フェニルアラニンＮ−メチルアミド
メタノールに中間体５７(２０３mg;０．３２８mmol)および２−メルカプトエタノール(０．２３ml;３．２８mmol)を加えた溶液に０．４Ｍ水酸化ナトリウム溶液を０℃で撹拌しながら添加し、１５分後、酢酸(０．５ml)を添加し、次いで溶剤を真空下で蒸発させることによって黄色油状物を得た。この油状物にエーテル(２０ml)を添加し、生じた沈澱を濾去して粗製チオールを得た。この粗製チオールをフラッシュクロマトグラフィー処理(溶離液：５％ＭｅＯＨ−ＣＨ2Ｃl2)に付すことによって標記化合物を白色固体として８６mg得た(収率５６％)。
Ｃ23Ｈ36Ｎ4Ｏ4Ｓ[４６４．６];[ＭＨ＝４６５]
上記の実施例３９の調製手順に準拠して以下の実施例４０〜４７に記載の化合物を調製した。
実施例４０  (ＲＳ)−Ｎ−[２−(メルカプト−５−(ベンゾイル)アミノペンタノイル]−Ｌ−ロイシル−Ｌ−フェニルアラニンＮ−メチルアミド
出発原料:中間体５８[４００mg;０．５９mmol)
生成物:白色固体(１７５mg;収率５９％)
Ｃ28Ｈ38Ｎ4Ｏ4Ｓ[５２６．７];[ＭＨ＝５２７]
実施例４１  (ＲＳ)−Ｎ−[２−メルカプト−５−(スクシンイミド)ペンタノイル]−Ｌ−ロイシル−Ｌ−フェニルアラニンＮ−メチルアミド
出発原料:中間体５９(６００mg;０．９１mmol)
生成物:白色固体(１４７mg;収率３２％)
Ｃ25Ｈ36Ｎ4Ｏ5Ｓ[５０４．７];[ＭＨ＝５０５]
実施例４２  (ＲＳ)−Ｎ−[２−メルカプト−５−(メタンスルホニル)アミノペンタノイル]−Ｌ−ロイシル−Ｌ−フェニルアラニンＮ−メチルアミド
出発原料:中間体６０(６００mg;１．０mmol)
生成物:白色固体(２６２mg;収率５７％)
Ｃ22Ｈ36Ｎ4Ｏ5Ｓ2[５００．７];[ＭＨ＝５０１]
実施例４３  (ＲＳ)−Ｎ−[２−(メルカプト)−５−(ベンゼンスルホニル)アミノペンタノイル]−Ｌ−ロイシル−Ｌ−フェニルアラニンＮ−メチルアミド
出発原料:中間体６１(５００mg;０．７mmol)
生成物:白色固体(２２１mg;収率５６％)
Ｃ27Ｈ36Ｎ4Ｏ5Ｓ2[５６２．８];[ＭＨ＝５６３]
実施例４４  (ＲＳ)−Ｎ−[２−メルカプト−５−(４−ピリジルカルボニル)アミノペンタノイル]−Ｌ−ロイシル−Ｌ−フェニルアラニンＮ−メチルアミド
出発原料:中間体６４(３３０mg;０．４８mmol)
生成物:白色固体(１１５mg;収率２２％)
Ｃ27Ｈ37Ｎ5Ｏ4Ｓ[５２７．７];[ＭＨ＝５２８]
実施例４５  (ＲＳ)−Ｎ−[２−メルカプト−５−(３−ピリジルカルボニル)アミノペンタノイル]−Ｌ−ロイシル−Ｌ−フェニルアラニンＮ−メチルアミド
出発原料:中間体６５(２００mg;０．２９mmol)
生成物:白色固体(３４mg;収率２２％)
Ｃ27Ｈ37Ｎ5Ｏ4Ｓ[５２７．７];[ＭＨ＝５２８]
実施例４６  (ＲＳ)−Ｎ−[２−メルカプト−５−(２−ピリジルカルボニル)−アミノペンタノイル]−Ｌ−ロイシル−Ｌ−フェニルアラニンＮ−メチルアミド
出発原料:中間体６６(１５０mg;０．２２mmol)
生成物:白色固体(６０mg;収率５２％)
Ｃ27Ｈ37Ｎ5Ｏ4Ｓ[５２７．７];[ＭＨ＝５２８]
実施例４７  (ＲＳ)−Ｎ−[２−メルカプト−５−(２−ピラジニルカルボニル)アミノペンタノイル]−Ｌ−ロイシル−Ｌ−フェニルアラニンＮ−メチルアミド
出発原料:中間体６７(１００mg;０．１５mmol)
生成物:白色固体(３０mg;収率３８％)
Ｃ26Ｈ36Ｎ6Ｏ4Ｓ[５２８．７];[ＭＨ＝５２９]
実施例４８  (ＲＳ)−Ｎ−[２−メルカプト−５−フタルイミド]ペンタノイル−Ｌ−ロイシル−Ｌ−[β−(４−チアゾリル)]アラニンＮ−メチルアミド
メタノール(１０ml)に実施例２８の生成物(１１０mg;０．１８mmol)を加えた溶液に濃水酸化アンモニウム(０．５ml)を０℃で添加し、この混合物を０℃で３時間撹拌した。反応混合物を水(１０ml)を用いて希釈し、２Ｎ塩酸を用いて酸性化した後、ジクロロメタン(３×２０ml)を用いて抽出した。一緒にした抽出物をＮa2ＳＯ4を用いて乾燥させた後、濾過し、濾液を蒸発処理に付すことによって粗生成物を得た。この粗生成物をフラッシュクロマトグラフィー処理(溶離液:２％ＭeＯＨ−ＣＨ2Ｃl2)に付すことによって標記化合物を無色固体として７１mg得た(収率７１％)。
Ｃ26Ｈ33Ｎ5Ｏ5Ｓ2[５５９．７];[ＭＨ＝５６０]
上記の実施例４８の調製手順に準拠して以下の実施例４９〜６３に記載の化合物を調製した。
実施例４９  (ＲＳ)−Ｎ−[２−メルカプト−５−フタルイミド]ペンタノイル−Ｌ−ロイシル−Ｌ−[β−２−ピリジル)]アラニンＮ−メチルアミド
出発原料:実施例２９の生成物
生成物:白色固体(７５mg;収率８０％)
Ｃ28Ｈ35Ｎ5Ｏ5Ｓ[５５３．７];[ＭＨ＝５５４]
実施例５０  (ＲＳ)−Ｎ−[２−メルカプト−５−フタルイミド]ペンタノイル−Ｌ−ロイシル−５−メチル−Ｌ−グルタミン酸Ｎ−メチルアミド
出発原料:実施例３２の生成物
生成物:白色固体(６８mg;収率７８％)
Ｃ26Ｈ36Ｎ4Ｏ7Ｓ[５４８．６];[ＭＨ＝５４９]
実施例５１  (ＲＳ)−Ｎ−[２−メルカプト−５−フタルイミド]ペンタノイル−Ｌ−ロイシル−(Ｒ)−(Ｓ−メチル)−ペニシルアミンＮ−メチルアミド
出発原料:実施例３５の生成物
生成物:白色固体(１６０mg;収率７０％)
Ｃ26Ｈ38Ｎ4Ｏ5Ｓ2[５５０．８];[ＭＨ＝５５１]
実施例５２  (Ｓ)−Ｎ−(２−メルカプト−５−フタルイミド]ペンタノイル−Ｌ−ロイシル−(Ｓ)−t−ロイシンＮ−メチルアミド
出発原料:実施例１６の生成物
生成物:白色固体(８．１２g;収率８０％)
Ｃ26Ｈ38Ｎ4Ｏ5Ｓ[５１８．７];[ＭＨ＝５１９]
実施例５３  (Ｓ)−Ｎ−(２−メルカプト−５−フタルイミド]ペンタノイル−Ｌ−ロイシル−Ｌ−フェニルアラニンＮ−メチルアミド
出発原料:実施例１７の生成物
生成物:白色固体(２．７g;収率６７％)
Ｃ29Ｈ36Ｎ4Ｏ5Ｓ[５５２．７];[ＭＨ＝５５３]
実施例５４  (ＲＳ)−Ｎ−[２，３−ジメチルカプトプロパノイル]−Ｌ−ロイシル−Ｌ−フェニルアラニンＮ−メチルアミド
出発原料:実施例１の生成物
生成物:無色固体(７６mg)
Ｃ19Ｈ29Ｎ3Ｏ3Ｓ2[４１１．５];[ＭＨ＝４１２]
実施例５５  (ＲＳ)−Ｎ−[２−メルカプト−３−メトキシカルボニルプロパノイル]−Ｌ−ロイシル−Ｌ−フェニルアラニンＮ−メチルアミド
出発原料:実施例５の生成物(０．１６g)
生成物:無色固体(０．１４g)
Ｃ21Ｈ31Ｎ3Ｏ5Ｓ2[４３７．５];[ＭＨ＝４３８]
実施例５６  (ＲＳ)−Ｎ−[２−メルカプト−４−メトキシカルボニルブタノイル]−Ｌ−ロイシル−Ｌ−フェニルアラニンＮ−メチルアミド
出発原料:実施例６の生成物(０．１８g)
生成物:無色固体(０．１６g)
Ｃ22Ｈ33Ｎ3Ｏ5Ｓ[４５１．５];[ＭＨ＝４５２]
実施例５７  (ＲＳ)−Ｎ−[２−メルカプト−５−メトキシカルボニルペンタノイル]−Ｌ−ロイシル−Ｌ−フェニルアラニンＮ−メチルアミド
出発原料:実施例７の生成物(０．３２g)
生成物:無色固体(０．１５g)
ＴＬＣのＲf値:０．２９(５％  ＭeＯＨ−ＣＨ2Ｃl2)
実施例５８  (ＲＳ)−Ｎ−[２−メルカプト−６−メトキシカルボニルヘキサノイル]−Ｌ−ロイシル−Ｌ−フェニルアラニンＮ−メチルアミド
出発原料:実施例８の生成物(０．３１g)
生成物:無色固体(０．２２g)
ＴＬＣのＲf値:０．３０(５％  ＭeＯＨ−ＣＨ2Ｃl2)
実施例５９  (ＲＳ)−Ｎ−[２−メルカプト−４−フタルイミドブタノイル]−Ｌ−ロイシル−Ｌ−フェニルアラニンＮ−メチルアミド
出発原料:実施例２５の生成物(０．２０g)
生成物:淡黄色固体(０．１２g)
Ｃ28Ｈ34Ｎ4Ｏ5Ｓ[５３８．６];[ＭＨ＝５４０]
実施例６０  (ＲＳ)−Ｎ−[２−メルカプト−５−フタルイミドペンタノイル]−Ｌ−ロイシル−Ｌ−フェニルアラニンＮ−メチルアミド
出発原料:実施例２６生成物(０．２g)
生成物:無色固体(０．１８g)
ＴＬＣのＲf値:０．４１(５％  ＭeＯＨ−ＣＨ2Ｃl2)
実施例６１  (ＲＳ)−Ｎ−[２−(メルカプト−６−フタルイミドヘキサノイル]−Ｌ−ロイシル−Ｌ−フェニルアラニンＮ−メチルアミド
出発原料:実施例２７の生成物(０．１５g)
生成物:淡黄色固体(０．１２g)
ＴＬＣのＲf値:０．２５(１０％  ＭeＯＨ−ＣＨ2Ｃl2)
実施例６２  (ＲＳ)−Ｎ−[２−メルカプト−５−フタルイミドペンタノイル]−Ｌ−ロイシル−Ｌ−トリプトファンＮ−メチルアミド
出発原料:実施例９の生成物(２５０mg)
生成物:淡黄色泡状物(２２２mg;収率９６％)
Ｃ31Ｈ37Ｎ5Ｏ5Ｓ[５９１．７];[ＭＨ＝５９２]
実施例６３  (ＲＳ)−Ｎ−[２−メルカプト−６−メトキシカルボニルヘキサノイル]−Ｌ−ロイシル−Ｌ−トリプトファンＮ−メチルアミド
出発原料:実施例１０の生成物(３３０mg)
生成物:無色泡状物(３００mg;収率９８％)
Ｃ26Ｈ38Ｎ4Ｏ5Ｓ[５１８．７];[ＭＨ＝５１９]
実施例６４  (Ｓ)−Ｎ−[２−メルカプト−５−フタルイミドペンタノイル]−Ｌ−(Ｓ−メチル)システイニル−Ｌ−トリプトファンＮ−メチルアミド
実施例２８および４８に記載の調製手順に準拠し、中間体１１９および１２４を出発原料として標記化合物を調製した。
Ｃ29Ｈ32Ｎ5Ｏ5Ｓ2[５９５．７];[ＭＨ＝５９６]
実施例６５  (ＲＳ)−Ｎ−[２−メルカプト−３−フタルイミドプロパノイル]−Ｌ−ロイシル−Ｌ−フェニルアラニンＮ−メチルアミド
実施例３９に記載の調製手順に準拠し、中間体１２５およびＬ−ロイシル−フェニルアラニンＮ−メチルアミドを出発原料とし、中間体４３を経由して標記化合物を調製した。
Ｃ27Ｈ32Ｎ4Ｏ5Ｓ[５２４．６];[ＭＨ＝５２５]
実施例６６  (ＲＳ)−Ｎ−[２−メルカプト−４−スクシンイミドブタノイル]−Ｌ−ロイシル−Ｌ−フェニルアラニンＮ−メチルアミド
実施例２８および４８に記載の調製手順に準拠し、中間体１２３およびＬ−ロイシル−Ｌ−フェニルアラニンＮ−メチルアミドを出発原料として標記化合物を調製した。
Ｃ24Ｈ34Ｎ4Ｏ5Ｓ[４９０．６];[ＭＨ＝４９１]
実施例６７  (ＲＳ)−Ｎ−[２−メルカプト−４−スクシンイミドブタノイル]−(Ｓ)−プロピルグリシニル−Ｌ−フェニルアラニンＮ−メチルアミド
実施例２８および４８に記載の調製手順に準拠し、中間体１２３および１１３を出発原料として標記化合物を調製した。
Ｃ23Ｈ31Ｎ4Ｏ5Ｓ[４７５．６];[ＭＨ＝４７６]
実施例６８  (ＲＳ)−Ｎ−[２−メルカプト−４−スクシンイミドブタノイル]−Ｌ−(Ｓ−メチル)システイニル−Ｌ−t−ロイシンＮ−メチルアミド
実施例２８および４８に記載の調製手順に準拠し、中間体１２３および１１４を出発原料として標記化合物を調製した。
Ｃ19Ｈ32Ｎ4Ｏ5Ｓ2[４６０．６];[ＭＨ＝４６１]
実施例６９  (ＲＳ)−Ｎ−[２−メルカプト−４−スクシンイミドブタノイル]−Ｌ−(Ｓ−メチル)システイニル−Ｌ−トリプトファンＮ−メチルアミド
実施例２８および４８に記載の調製手順に準拠し、中間体１２３および１２４を出発原料として標記化合物を調製した。
Ｃ24Ｈ31Ｎ5Ｏ5Ｓ2[５３３．７];[ＭＨ＝５３４]
実施例７０  (ＲＳ)−Ｎ−[２−メルカプト−４−スクシンイミドブタノイル]−Ｌ−(Ｓ−メチル)システイニル−Ｌ−フェニルアラニンＮ−メチルアミド
実施例２８および４８に記載の調製手順に準拠し、中間体１２３および１１１を出発原料として標記化合物を調製した。
Ｃ23Ｈ30Ｎ4Ｏ5Ｓ2[５０６．６];[ＭＨ＝５０７]
実施例７１  (ＲＳ)−Ｎ−[２−メルカプト−４−スクシンイミドブタノイル]−Ｌ−(Ｏ−メチル)セリニル−Ｌ−t−ロイシンＮ−メチルアミド
実施例２８および４８に記載の調製手順に準拠し、中間体１２３および１１５を出発原料として標記化合物を調製した。
Ｃ19Ｈ32Ｎ4Ｏ5Ｓ[４４４．５];[ＭＨ＝４４５]
実施例７２  (ＲＳ)−Ｎ−[２−メルカプト−４−スクシンイミドブタノイル]−Ｌ−ロイシル−Ｌ−t−ロイシンＮ−メチルアミド
実施例２８および４８に記載の調製手順に準拠し、中間体１２３および１１６を出発原料として標記化合物を調製した。
Ｃ21Ｈ36Ｎ4Ｏ5Ｓ[４５６．６];[ＭＨ＝４５７]
実施例７３  (ＲＳ)−Ｎ−[２−メルカプト−６−カルボニルヘキサノイル]−Ｌ−ロイシル−Ｌ−トリプトファンＮ−メチルアミド
実施例１０の生成物の加水分解によって標記化合物を調製した。
Ｃ25Ｈ36Ｎ4Ｏ5Ｓ[５０４．７];[ＭＨ＝５０５]
実施例７４  (Ｒ)−Ｎ−[２−アセチルメルカプト−６−メトキシカルボニルヘキサノイル]−Ｌ−ロイシル−Ｌ−トリプトファンＮ−メチルアミド
実施例１０生成物中のジアステレオマーの１:１混合物をフラッシュカラムクロマトグラフィー処理により分解することによって標記化合物を調製した。
Ｃ26Ｈ38Ｎ4Ｏ5Ｓ[５１８．７];[ＭＨ＝５１９]
実施例７５  (Ｓ)−Ｎ−(２−アセチルメルカプト−６−メトキシカルボニルヘキサノイル]−Ｌ−ロイシル−Ｌ−トリプトファンＮ−メチルアミド
実施例１０の生成物中のジアステレオマーの１:１混合物をフラッシュカラムクロマトグラフィー処理により分離することによって標記化合物を調製した。
Ｃ26Ｈ38Ｎ4Ｏ5Ｓ[５１８．７];[ＭＨ＝５１９]
実施例７６  (Ｒ)−Ｎ−[２−アセチルメルカプト−５−フタルイミドペンタノイル]−Ｌ−ロイシル−Ｌ−トリプトファンＮ−メチルアミド
実施例９の生成物中のジアステレオマー１:１混合物をフラッシュカラムクロマトグラフィー処理により分離することによって標記化合物を調製した。
Ｃ31Ｈ37Ｎ5Ｏ5Ｓ2[５９１．７];[ＭＨ＝５９２]
実施例７７  (Ｒ)−Ｎ−[２−アセチルメルカプト−５−メトキシカルボニルペンタノイル]−Ｌ−ロイシル−Ｌ−フェニルアラニンＮ−メチルアミド
実施例７の生成物中のジアステレオマーの１:１混合物をフラッシュカラムクロマトグラフィー処理により分離することによって標記化合物を調製した。
Ｃ25Ｈ36Ｎ4Ｏ5Ｓ[５０４．７];[ＭＨ＝５０５]
実施例７８  (ＲＳ)−Ｎ−[２−メルカプト−６−(メチルアミノ）カルボニルヘキサノイル]−Ｌ−ロイシル−Ｌ−フェニルアラニンＮ−メチルアミド
実施例８の生成物の加水分解によって標記化合物を調製した。
Ｃ24Ｈ38Ｎ4Ｏ4Ｓ[４７８．６];[ＭＨ＝４７９]
実施例７９  (ＲＳ)−Ｎ−[２−メルカプト−６−(アミノ)カルボニルヘキサノイル]−Ｌ−ロイシル−Ｌ−フェニルアラニンＮ−メチルアミド
実施例８の生成物の加水分解によって標記化合物を調製した。
Ｃ23Ｈ36Ｎ4Ｏ4Ｓ[４６４．６];[ＭＨ＝４６５]
実施例Ａ
一般式(Ｉ)で表される化合物のコラゲナーゼのインヒビターとしての効能をカウストン(Ｃawston)とバレット(Ｂarrett)の方法に従って測定した[Ａnal. Ｂiochem.、第９９巻、第３４０頁〜第３４５頁(１９７９年)]。即ち、被験インヒビターの１mＭ溶液またはその希釈液をコラーゲンおよびコラゲナーゼ[５mＭ  ＣaＣl2、０．０５％Ｂrij３５、６０mＭ  ＮaＣlおよび０．０２％ＮaＮ3を含有する５０mＭ  Ｔris(pＨ７．６)を用いて緩衝化したもの]と共に３７℃で１６時間インキュベートした。コラーゲンとしては、カウストンとマーフィー(Ｍurphy)の方法[Ｍethods  in  Ｅnzymology、第８０巻、第７１１頁(１９８１年)によって調製したアセチル化した3Ｈ−または14Ｃ−コラーゲンを用いた。コラゲナーゼのコラーゲン基質分解能は放射性標識の種類によって変化しなかった。試料を遠心分離処理に付することによって未消化コラーゲンを沈降させ、放射性上澄み液のアリコートを加水分解の尺度としてのシンチレーション計数管上でのアッセイのために採取した。インヒビターの１mＭ溶液またはその希釈液の存在下でのコラゲナーゼ活性を、インヒビター不存在下での対照中での活性と比較し、コラゲナーゼを５０％抑制するインヒビターの濃度(ＩＣ50)を決定した。
実施例Ｂ  ストロメリシン抑制活性
一般式(Ｉ)で表される化合物のストロメリシンのインヒビターとしての効能をナガセらの方法によって測定した[Ｍethods  in  Ｅnzymology、第２５４巻(１９９４年)]。即ち、被験インヒビターの１mＭ溶液またはその希釈液をストロメリシンおよび3Ｈ−トランスフェリン[１０mＭ  ＣaＣl2、１５０Ｍ  ＮaＣl、０．０５％Ｂrij３５および０．０２％ＮaＮ3を含有する５０mＭ  Ｔris(pＨ７．６)を用いて緩衝化したもの]と共に３７℃で１６時間インキュベートした。該トランスフェリンは3Ｈヨード酢酸を用いてカルボキシメチル化した。インヒビターの１mM溶液またはその希釈液の存在下でのストロメリシンの活性を、インヒビターの不存在下での対照中での活性と比較し、ストロメリシンを５０％抑制するインヒビターの濃度(ＩＣ50)を決定した。
実施例Ｃ  ゼラチナーゼ抑制活性
一般式(Ｉ)で表される化合物のゼラチナーゼのインヒビターとしての効能をハリス(Ｈarris)とクレーン(Ｋrane)の方法[Ｂiochem. Ｂiophys. Ａcta、第２５８巻、第５６６頁〜第５７６頁(１９７２年)によって測定した。即ち、被験インヒビターの１mM溶液またはその希釈液をゼラチナーゼおよび熱変性させた3Ｈ−または14Ｃ−アセチル化コラーゲン[５mＭ  ＣaＣl2、０．０５％Brij３５および０．０２％ＮaＮ3を含有する５０mＭ  Ｔris(pＨ７．６)を用いて緩衝化したもの]と共に３７℃で１６時間インキュベートした。3Ｈ−または14Ｃ−ゼラチンはカウストンとマーフィーによる[Ｍethods  in  Ｅnzymology、第８０巻、第７１１頁(１９８１年)参照]方法によって調製した3Ｈ−または14Ｃ−コラーゲンを６０℃で３０分間インキュベートして熱変性させることによって調製した。未消化ゼラチンはトリクロロ酢酸の添加によって沈澱させた後、遠心分離処理によって除去した。インヒビターの１mM溶液またはその希釈液の存在下でのゼラチナーゼ活性を、インヒビターの不存在下での対照中での活性と比較し、ゼラチナーゼを５０％抑制するインヒビターの濃度(ＩＣ50)を決定した。
実施例Ｄ  ＴＮＦαの生産の抑制
一般式(Ｉ)で表される化合物のＴＮＦα生産のインヒビターとしての効能を以下の方法によって測定した。被験インヒビターの１mＭ溶液またはその希釈液をＴＨＰ−１細胞(ヒトの単球)と共に５％ＣＯ2雰囲気下、３７℃でインキュベートした。該細胞はＲＰＭ１  １６４０培地および２０μＭβ−メルカプトエタノール中に１×１０6／mlの細胞密度で懸濁させた後、最終濃度５μg／mlのＬＰＳを用いて処理したものを用いた。１８時間後、市販のＥＬＩＳＡキット(Ｒ＆Ｄシステムズ社製)を用いて上澄み液中のＴＮＦαの濃度を測定した。インヒビターの０．１mＭ溶液またはその希釈液の存在下で活性を、インヒビターの不存在下での対照中での活性と比較し、ＴＮＦα生産の５０％抑制するインヒビターの濃度を決定した。
実施例Ｅ  アジュバント関節炎ラットモデル
一般式(Ｉ)で表される化合物の効能を次の文献に記載の方法に従い、アジュバント関節炎ラットにおいて調べた:ニューボールド(Ｂ．Ｂ．Ｎewbould)、Ｂr,Ｊ．Ｐharmacol、第２１巻、第１２７頁〜第１３６頁(１９６３年)並びにパーソン(Ｃ．Ｍ．Ｐearson)およびウッド(Ｆ．Ｄ．Ｗood)、Ａrthritis  Ｒheum、第２巻、第４４０頁〜第４５９頁(１９５９年)。この方法は手短かに言えば次の通りである。雄のウィスターラット(体重１８０〜２００g)の尾の基底部にフロインドアジュバントを注射し、１２日間経過後、応答するラットを無作為に選択して実験グループに分けた。１２日から実験終了の２２日まで一般式(Ｉ)で表される化合物を１％メチルセルロース懸濁液として経口投与するか、または０．２％カルボキシメチルセルロース懸濁液として腹腔内投与した。１２日から２日毎に後脚の体積を測定し、実験終了後に後脚のＸ線写真を撮った。実験結果は、１２日目の後脚の体積に対する実験終了後の後脚の体積の増加率(％)で示した。
実施例Ｆ  マウスの卵巣癌の異種移植片モデル
一般式(Ｉ)で表される化合物の効能を次の文献に記載の方法に従い、マウスの卵巣癌の異種移植片モデルについて調べた:デービーズ(Ｂ．Ｄavies)ら、Ｃancer  Ｒesearch、第５３巻、第２０８７頁〜第２０９１頁(１９９３年)。この方法は手短かに言えば、雌のヌー／ヌーマウスの腹腹腔内に１×１０9個のＯＶＣＡＲ３−icr細胞を接種することを含む。一般式(Ｉ)で表される化合物を１％メチルセルロース懸濁液として経口投与するか、またはＴween−２０を０．０１％含有するリン酸塩で緩衝化した塩水の懸濁液として腹腔内投与した。実験終了後(４〜５週間後)、腹膜細胞の数を測定し、充実性腫瘍沈着物を秤量した。一部の実験においては、腫瘍の増殖を腫瘍特異性抗原の測定によってモニターした。
実施例Ｇ  ラットの乳癌モデル
一般式(Ｉ)で表される化合物の効能をＨＯＳＰ．１ラットの乳癌モデルについて調べた[エックルズ(Ｓ．Ｅccles)ら、Ｃancer  Ｒesearch(１９９５年)、印刷中]。この方法は雌のＣＢＨ／cbiラットの頸静脈中へ２×１０4個の腫瘍細胞を接種することを含む。一般式(Ｉ)で表される化合物を１％メチルセルロース懸濁液として経口投与するか、またはＴween−２０を０．０１％含有するリン酸塩緩衝化塩水懸濁液として腹腔内投与した。実験終了後(４〜５週間後)、被験ラットを屠殺し、肺臓を摘出してメタカーン(Ｍethacarn)中に２０時間固定した後の腫瘍細胞数を測定した。