(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
プロアントシアニジンを含有する抽出物を、酢酸のアルキルエステル、アルコール類、ケトン類、アセトニトリルから選ばれた少なくとも１種の有機溶媒に、水の混合割合が０．１〜９％（Ｖ／Ｖ）となるように調整した水との混合溶媒で、再抽出処理することを特徴とするプロアントシアニジン抽出物の脱色法。
【請求項２】
有機溶媒が酢酸エチルである請求項１記載のプロアントシアニジン抽出物の脱色法。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は食品、化粧品等の酸化防止剤やラジカル捕捉剤、医薬品等の製造原料として有用なプロアントシアニジンを含有する抽出物を効率よく高純度かつ薄色化する方法に係るものである。
【０００２】
【従来の技術】
プロアントシアニジンは、各種植物体中に存在する縮合型タンニンで、フラバン−３−オールまたはフラバン−３，４−ジオールを構成単位として縮合もしくは重合により結合した化合物群であり、これらは酸処理によりシアニジン、デルフィニジン、ペラルゴニジン等のアントシアニジンを生成するところから、この名称が与えられているものである。そして上記構成単位の２量体、３量体、４量体さらに１０〜３０量体以上の高分子のプロシアニジン、プロデルフィニジン、プロペラルゴニジン等のプロアントシアニジンおよびそれらの立体異性体等を含むものである。
【０００３】
本発明者等は先にこのプロアントシアニジンが強い抗酸化作用を有することを見い出し、プロアントシアニジンを主成分とする抗酸化剤として特許出願した（特公平３−７２３２号）。またプロアントシアニジンが、ブドウ種子又は果実の搾汁粕から水により７０℃以上で効率よく抽出できることを見い出した（特開平３−２００７８１号）。
【０００４】
【発明が解決しようとする課題】
このプロアントシアニジンが、各種植物体を水やエタノール、アセトン等の有機溶媒、又はこれらの混合液で抽出することにより得られることはよく知られている。しかしながらこれらの抽出物を分析したところ、目的物質であるプロアントシアニジンの他に、粗蛋白、炭水化物、灰分のほか着色成分がかなりの量含まれている事が確認された。またこれらの抽出物質は植物体に元々含まれている着色成分に加え、植物体からのプロアントシアニジンの抽出操作中に着色が進行し、これらが商品価値の低下の原因となっている。また特にこの着色成分が用途の上で大きな制約条件となっており、市場では高純度かつ色の薄いプロアントシアニジン製剤が望まれている。
【０００５】
本発明は従来の植物体からのプロアントシアニジン抽出物が有する欠点を克服し、高純度かつ色の薄いプロアントシアニジン製剤を得る為の脱色法を提供することを目的としてなされたものである。
【０００６】
【課題を解決するための手段】
本発明者らは前記目的を達成するために、鋭意検討を重ねた結果、プロアントシアニジンは有機溶媒−水の混合溶媒に溶解しやすく逆にプロアントシアニジンを含有する抽出物に含まれる不純物質（粗蛋白、炭水化物、灰分、等）、特に着色成分は０．１〜９％の有機溶媒−水（ｖ／ｖ）の混合溶媒に溶解しにくい性質を有しているという知見を得た。
【０００７】
本発明はこれらの知見に基づいて完成したものである。
以下本発明を詳細に説明する。
【０００８】
本発明の対象となるプロアントシアニジンを含有する抽出物とは、各種植物体、例えばぶどう種子、ブドウ果実、グランベリー果実、リンゴ果実、小豆、杉、松、檜の樹皮等から水あるいは有機溶媒もしくはその混合溶媒で抽出して得られるプロアントシアニジンを含有する抽出液の濃縮液、あるいは濃縮液を乾燥、粉末化した粉体等であって少なくとも１０％以上のプロアントシアニジンを含有するものが好ましい。
【０００９】
本発明に用いられる有機溶媒は、目的のプロアントシアニジンを抽出することができ、かつ不純物、特に着色した成分が抽出されない溶媒であれば、どのような溶媒でもよいが、効率的にプロアントシアニジンを抽出しかつ着色成分をできるだけ除くといった観点から、具体的には酢酸エチル、酢酸メチル等の酢酸エステル類、メタノール、エタノール、イソプロパノール、ｎ−ブタノール等の水溶性アルコール類、アセトン、エチルメチルケトン等のケトン類、アセトニトリル等が例として挙げられる。
【００１０】
有機溶媒は単独で用いてもよいが、プロアントシアニジン抽出量と不純物量のバランスの調整等の目的で、任意の比で混合して用いてもよい。
そしてこれらの有機溶媒に０．１〜９％（Ｖ／Ｖ）の水を混合して用いる。
【００１１】
有機溶媒の中では、不純物質が抽出されにくいこと、特に着色成分が最も抽出されにくいこと、沸点が比較的低いため抽出後の除去が容易であること、入手が容易であることなどから酢酸のアルキルエステル、特に酢酸エチルが好ましい。酢酸エチルを抽出溶媒に用いた場合、抽出効率を高く、不純物の割合を少なくするという見地に立つと、酢酸エチル：水の混合比は９９：１〜９１：９（ｖ／ｖ）が好ましく、特に好ましい混合比は９８：２〜９２：８（ｖ／ｖ）である。
【００１２】
再抽出する際の原料が粉体の場合はあらかじめ用意をしておいた抽出溶媒で再抽出処理を行えば良いが、原料が濃縮液等の場合は水の混合割合が０．１〜９％（ｖ／ｖ）となるように有機溶媒を加える必要がある。有機溶媒と水の比が９％（ｖ／ｖ）を極端に越えるとプロアントシアニジンの抽出量が増えプロアントシアニジンの回収率が良くなるといった利点があるが、逆に不純物の抽出量も増え、特に着色成分も抽出されやすくなってしまい、結果的には着色度及び純度とも元の原料とたいして変わらなくなってしまい脱色及び高純度化という本来の目的を達成できなくなってしまうので有機溶媒に対する水の比は注意深く設定する必要がある。
【００１３】
再抽出する際の原料（植物体プロアントシアニジン抽出物、無水物換算）に対する溶媒の量は特に限定しないが、通常１〜５０倍量（ｖ／ｗ）、好ましくは１０〜３０倍量である。また必要により少量のＮａＣｌや酸化防止剤（例えばアスコルビン酸等）などを加えてもよい。また必要により、窒素やアルゴンなどの不活ガス雰囲気下で抽出を行ってもよい。
【００１４】
再抽出の時間は、溶媒量、溶媒の種類、温度等の抽出条件に著しく左右されるため、再抽出物中のプロアントシアニジンの抽出量と純度が最大となり着色成分の抽出量が最低となるよう適宜選択をする。通常は１０分〜２４時間であり、好ましくは３０分〜３時間程度である。再抽出方法は特に限定しないが攪拌を加える事により抽出効率が良くなる。また攪拌が困難な場合は加温もしくは還流を行う事により効率よく抽出を行う事ができる。また再抽出操作は遮光下で行う事が着色を防止する上から好ましい。
【００１５】
抽出後の分液は通常行われるいかなる方法を用いても良いが、抽出条件により固液分離となった場合は、濾布を用いての濾過が操作し易い。また必要によりセライト濾過、メンブラン濾過等を行っても良い。抽出条件により水層と有機溶媒の層とが分離した場合は分液ロート等、通常行われる分液の方法を用いて有機溶媒の層を分取する事ができる。
【００１６】
以上のようにして得られたプロアントシアニジン含有溶液の抽出溶媒を減圧留去などによって除去すれば、そのままプロアントシアニジン含有濃縮物や乾燥物として得ることができる。実施例に示すように、最適の原料と抽出条件を用いれば、原料と比較し高い純度かつ脱色されたプロアントシアニジン乾燥物を、簡単に得ることができるが、濃縮物や乾燥物を更に、セファデックス、ポリアミド、シリカゲル、ＯＤＳ等を用いたカラムクロマトグラフ、セルロース膜等を用いた膜分離、酢酸エチル−水等を用いた液液分離など精製・分離・脱色操作を行うことにより、より高純度の、あるいは望む重合度のプロアントシアニジン製品を得ることができる。
【００１７】
【発明の効果】
本発明によれば、食品、化粧品等の酸化防止剤やラジカル捕捉剤、医薬品等の製造原料として有用な高純度かつ色の薄いプロアントシアニジンを簡単な操作で得ることができる。
【００１８】
【実施例】
以下に実施例を示して本発明をさらに具体的に説明するが、本発明はこれらの例に限定されるものではない。
【００１９】
なお実施例におけるプロアントシアニジンの定量は、下記のR. Jambunathanらの方法｛J. Agric. Food Chem., 34, 425〜429 (1986)}により行った。すなわちプロアントシアニジン含有試料を希塩酸存在下で加熱処理してプロアントシアニジンを赤色のアントシアニジンに変換し、この波長５５０ｎｍにおける吸光度の測定値と、A.G.H. Leaの方法｛J. Sci. Food Agric., 26, 471〜477 (1978)｝を用いてりんご酒より分離精製してプロシアニジン４量体を標準品として作成した検量線とからプロアントシアニジンを定量した。また抽出液の固形分重量は、プロアントシアニジン含有抽出液の全液量を凍結乾燥して秤量するか、全液量を正確に測定した後、一定量の抽出液（通常５ｍＬ）を量りとり、これを加熱乾固（通常８８℃−１．５ｈｒ及び１１０℃−２．０ｈｒ）した後、デシケーター中で１ｈｒ室温に放置してから秤量し、全液量換算して算出した。
【００２０】
実施例１
ブドウ（中国産白羽種）の種子から熱水抽出をして得たプロアントシアニジン製剤１７００ｇに酢酸エチル３３L、水１．３２L（４％， ｖ／ｖ）を加え室温、遮光、攪拌下３ｈの抽出を行い、固液分離したのち、濃縮乾固しプロアントシアニジン製剤１９７ｇを得た。このプロアントシアニジン製剤の固形分量重（熱乾燥法）、プロアントシアニジン量、純度（プロアントシアニジン量／固形分量重）、０．４７７ｇ／１００ｍｌ（精製水）に溶解した水溶液の吸光度（４２０ｎｍ、ＯＤ）及びプロアントシアニジンを１００％換算した結果（ＯＤ／純度×１００）を表１に示す。
【００２１】
【表１】
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【００２２】
実施例２
ブドウ（中国産白羽種）の種子から熱水抽出、乾燥して得たプロアントシアニジン製剤（粉末）２６０ｇに酢酸エチル５．２L、水２０８ｍL（４％， ｖ／ｖ）を加え８０℃、還流１ｈの抽出を行い、固液分離したのち、濃縮乾固し粉末プロアントシアニジン製剤２３．８ｇを得た。分析値を表２に示す。
【００２３】
【表２】
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【００２４】
実施例３
ブドウ（中国産白羽種）の種子から熱水抽出、濃縮して得たプロアントシアニジン濃縮液１５．２ｍｌ(固形分５０００ｍｇ)に酢酸エチル１５０ｍｌ、飽和食塩水０．２ｍｌを加え４０℃、２ｈの抽出を行い、固液分離したのち、濃縮乾固し、粉末プロアントシアニジン製剤６４４ｍｇを得た。分析値を表３に示す。
【００２５】
【表３】
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【００２６】
実施例４
ブドウ（中国産白羽種）の種子から水−アルコール抽出、乾燥して得た粉末プロアントシアニジン製剤５０００ｍｇに酢酸エチル１００ｍL、水４ｍL（４％，ｖ／ｖ）を加え４０℃、静置１ｈの抽出を行い、固液分離したのち、濃縮乾固し、粉末プロアントシアニジン製剤４７３ｍｇを得た。分析値を表４に示す。
【００２７】
【表４】
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【００２８】
実施例５
ブドウ（アルゼンチン  セレサ種）の種子から水−アルコール抽出、乾燥して得た粉末プロアントシアニジン製剤５０００ｍｇに酢酸エチル１００ｍL、水４ｍL（４％，ｖ／ｖ）を加え４０℃、静置１ｈの抽出を行い、固液分離したのち、濃縮乾固し粉末プロアントシアニジン製剤１２０ｍｇを得た。分析値を表５に示す。
【００２９】
【表５】
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【００３０】
実施例６
ブドウ（中国産白羽種）の種子から熱水抽出、乾燥して得た粉末プロアントシアニジン製剤５０００ｍｇにエタノール５０ｍL、水０．５ｍL（１％， ｖ／ｖ）を加え４０℃、攪拌下１ｈの抽出を行い、固液分離したのち、濃縮乾固し、粉末プロアントシアニジン製剤１７２７ｍｇを得た。分析値を表６に示す。
【００３１】
【表６】
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【００３２】
実施例７
ブドウ（中国産白羽種）の種子から熱水抽出、乾燥して得た粉末プロアントシアニジン製剤５０００ｍｇにアセトン５０ｍL、水０．５ｍL（１％， ｖ／ｖ）を加え４０℃、攪拌下１ｈの抽出を行い、固液分離したのち、濃縮乾固し、粉末プロアントシアニジン製剤１２７３ｍｇを得た。分析値を表７に示す。
【００３３】
【表７】
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【００３４】
実施例８
ブドウ（中国産白羽種）の種子から熱水抽出、乾燥して得た粉末プロアントシアニジン製剤５０００ｍｇにイソプロピルアルコール５０ｍL、水２．０ｍL（４％， ｖ／ｖ）を加え４０℃、攪拌下１ｈの抽出を行い、固液分離したのち、濃縮乾固し、粉末プロアントシアニジン製剤１３２８ｍｇを得た。分析値を表８に示す。
【００３５】
【表８】
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