(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
式（Ｉ）
0003821485.tif 000031
（式中、Ｘ1はＡｓｎまたはＡｓｐを表わし、Ｘ2はＨｉｓまたはＬｙｓを表わし、Ｘ3は同一または異なってＰｒｏまたはＡｌａを表わし、Ｙは天然型カルシトニン、天然型カルシトニン部分ペプチドまたは天然型カルシトニン部分ペプチド残基を表わし、ｎは０〜３の整数を表わす）で表される化合物またはその薬理学的に許容される塩。
【請求項２】
式（ＩＡ）
0003821485.tif 000032
（式中、Ｙおよびｎはそれぞれ前記と同義である）で表される化合物またはその薬理学的に許容される塩。
【請求項３】
請求の範囲１または２記載の化合物またはその薬理学的に許容される塩を含有する医薬。
【請求項４】
請求の範囲１または２記載の化合物またはその薬理学的に許容される塩を含有する骨粗鬆症治療薬。
【発明の詳細な説明】
技術分野
本発明は、特定の構造からなる環状ペプチドと、カルシトニン、カルシトニン部分ペプチドあるいはその類似体でありカルシトニン様の生物学的活性発現のために必要なアミノ酸配列を有するペプチドとが、必要に応じてスペーサーを介して結合した、生物学的活性を有するカルシトニン誘導体に関する。
本発明のペプチドは、カルシトニン、カルシトニン部分ペプチドあるいはその類似体に比べ、高い活性及び／または安定性を有する。
背景技術
従来、天然型カルシトニンとしては、ウナギ、サケ、ヒト、ブタ、ニワトリ、ウシ、ヒツジ、ラット、アカエイ由来のものが知られている。これらはすべて３２個のアミノ酸よりなるポリペプチドで、その１番目と７番目のアミノ酸がＬ−システインであり両者のメルカプト基がジスルフィド結合を形成し、カルボキシル末端がプロリンアミドである点で共通している。
これら各種カルシトニンの有するジスルフィド結合は、溶液中で不安定であることが予想され、この点を克服するためのカルシトニン誘導体として、１番目のシステインを欠失させかつ７番目のシステインに換えある種の低級カルボキシアルキレン基を有するα−アミノ酸を用い、このアミノ酸の側鎖カルボキシル基と２番目のアミノ酸のα−アミノ基との間でアミド結合を形成させたポリペプチドが知られており（特開昭５１−１２８９９３、特開昭５３−５９６８８、特開昭６１−１１２０９９）、特にウナギカルシトニンの配列を基本にした該類似体は骨ページェット病、高カルシウム血症、骨粗鬆症の治療薬として実用に供されている。この形の類似体のアルキレン鎖中の単結合の一部を二重結合あるいは三重結合に置き換えたものも知られている（ＷＯ９３／１５１０６）。同様の目的をもったカルシトニン類似体として、１番目のアミノ酸をグリシンやβ−アラニンに、かつ７番目のアミノ酸をアスパラギン酸やグルタミン酸に置換し、前者のα−アミノ基と後者の側鎖カルボキシル基との間でアミド結合を形成させたポリペプチド、さらにアルキレン基の一部をフェニレン基に置き換えたものも知られている（特開平２−２６２５９５、特開平３−１７８９９３）。
さらに、天然型のカルシトニンの生理活性を向上させる目的で、多くのカルシトニン類似体が報告されている〔例えば、Endocrinology, vol.117,p.801(1985)、Eur.J.Biochem., vol.159,p.125(1986)、Biochem.Biophys.Res.Commun., vol.152,p.203(1988)、Endocrinology, vol.127,p.163(1990)等〕。
発明の開示
本発明は、式（Ｉ）
0003821485.tif 000002
（式中、ＺはＧｌｙまたはＣｙｓを表し、Ｘは同一または異なったα−アミノ酸残基を表し、Ｙは天然型カルシトニン、天然型カルシトニン部分ペプチドまたは天然型カルシトニン類似ペプチド残基を表し、ｍは５〜８の整数を表し、ｎは０〜３の整数を表す。ただし、ｍ＝５の場合、−（Ｘ）m−のうちのＣ末側４残基の配列は天然型カルシトニンの３番目から６番目までの配列とは異なる）またはその薬理学的に許容される塩に関する。
以下、式（Ｉ）で表されるペプチド化合物を化合物（Ｉ）という。
式（Ｉ）の定義において、α−アミノ酸残基としては、グリシン、Ｌ−もしくはＤ−体のアラニン、アスパラギン、アスパラギン酸、アルギニン、システイン、グルタミン、グルタミン酸、ヒスチジン、イソロイシン、ロイシン、リジン、メチオニン、フェニルアラニン、プロリン、セリン、スレオニン、トリプトファン、チロシン、バリン等の天然型アミノ酸の各残基またはβ−アラニン、γ−アミノ酪酸、アミノ安息香酸、Ｌ−もしくはＤ−体のヒドロキシプロリン、ノルバリン、β−２−ナフチルアラニン等の非天然型アミノ酸の各残基があげられる。
上記式（Ｉ）の定義において、−（Ｘ）m−としては、例えば、−Ｘ1−Ｔｒｐ−Ｘ2−Ｇｌｙ−Ｔｈｒ−Ａｌａ−Ｘ3−（式中、Ｘ1はＡｓｎまたはＡｓｐを表し、Ｘ2はＨｉｓまたはＬｙｓを表し、Ｘ3はＰｒｏまたはＡｌａを表す）、−Ｓｅｒ−Ａｌａ−Ａｌａ−Ｖａｌ−Ｔｙｒ−Ｐｈｅ−、−Ｐｈｅ−Ｉｌｅ−Ｇｌｙ−Ｔｒｐ−Ｇｌｙ−Ａｓｎ−、−Ｔｙｒ−Ｐｒｏ−Ｔｒｐ−Ｔｒｐ−Ａｓｎ−Ｔｙｒ−Ａｒｇ−、−Ｌｅｕ−Ｇｌｙ−Ｖａｌ−Ｇｌｙ−Ｓｅｒ−Ｘ4−Ａｓｎ−（式中、Ｘ4はＣｙｓ、ＡｌａまたはＳｅｒを表す）等があげられる。
式Ｙで表わされる天然型カルシトニン残基とは、天然のカルシトニン様生理活性を有するペプチドの残基を示す。また式Ｙで表される天然型カルシトニンの部分ペプチド残基または天然型カルシトニン類似ペプチド残基としては、天然型カルシトニン残基の少なくとも一つのアミノ酸配列と少なくとも２０％以上の相同性を有するペプチド残基を示し、例えば下記式（ＩＩ）で表される基をあげることができる。
0003821485.tif 000003
〔式中、Ｐ1は単結合、Ｃｙｓ−Ｇｌｙ−Ａｓｎ−Ｌｅｕ−Ｓｅｒ−Ｔｈｒ−Ｃｙｓ、Ｓｅｒ−Ｇｌｙ−Ａｓｎ−Ｌｅｕ−Ｓｅｒ−Ｔｈｒ−Ｓｅｒ、Ｃｙｓ−Ｓｅｒ−Ａｓｎ−Ｌｅｕ−Ｓｅｒ−Ｔｈｒ−ＣｙｓまたはＳｅｒ−Ｓｅｒ−Ａｓｎ−Ｌｅｕ−Ｓｅｒ−Ｔｈｒ−Ｓｅｒを表し、Ｐ2はＶａｌ、Ｍｅｔ、Ｇｌｙまたは単結合を表し、Ｐ3はＧｌｙ−Ｌｙｓ、Ａｌａ−Ａｌａ、Ｇｌｙ−ＴｈｒまたはＧｌｙ−Ｓｅｒを表し、Ｐ4はＬｅｕまたはＴｙｒを表し、Ｐ5はＳｅｒ−Ｇｌｎ−Ｇｌｕ、Ａｌａ−Ａｌａ−Ａｌａ、Ｔｈｒ−Ｇｌｎ−Ａｓｐ、Ｔｈｒ−Ｇｌｕ−ＶａｌまたはＴｈｒ−Ｇｌａ−Ｖａｌを表し、Ｐ6はＬｅｕまたはＰｈｅを表し、Ｐ7はＨｉｓ−Ｌｙｓ、Ａｌａ−Ａｌａ、Ａｓｎ−ＬｙｓまたはＡｌａ−Ｌｙｓを表し、Ｐ8はＧｌｎ、ＡｌａまたはＨｉｓを表し、Ｐ9はＴｈｒ、Ａｌａ、ＧｌｕまたはＧｌａを表し、Ｐ10はＴｙｒ、ＰｈｅまたはＬｅｕを表し、Ｐ11はＰｒｏまたはＨｙｐを表し、Ｐ12はＡｒｇ、Ｇｌｎ、ＬｙｓまたはＤ−Ａｒｇを表し、Ｐ13はＴｈｒまたはＳｅｒを表し、Ｐ14はＡｓｎ、ＧｌｎまたはＡｌａを表し、Ｐ15はＴｈｒまたはＩｌｅを表し、Ｐ16はＧｌｙまたはβ−Ａｌａを表し、Ｐ17はＳｅｒ、ＶａｌまたはＡｌａを表し、Ｐ18はＴｈｒまたはＡｌａを表し、Ｐ19はアミノ基または下記式（ＩＩＩ）で表される基を表す。なお、式（ＩＩ）で表されるアミノ酸配列において少なくとも１個のアミノ酸が欠失、挿入または置換されていてもよい。〕
0003821485.tif 000004
化合物（Ｉ）の薬理学的に許容される塩としては、酸付加塩、金属塩、有機塩基付加塩等があげられる。薬理学的に許容される酸付加塩としては、塩酸塩、硫酸塩、リン酸塩等の無機酸塩、酢酸塩、マレイン酸塩、フマル酸塩、酒石酸塩、クエン酸塩等の有機酸塩があげられ、薬理学的に許容される金属塩としては、ナトリウム塩、カリウム塩等のアルカリ金属塩、マグネシウム塩、カルシウム塩等のアルカリ土類金属塩、アルミニウム塩、亜鉛塩等があげられる。薬理学的に許容される有機塩基付加塩としては、メチルアミン、エチルアミン、アニリン等の一級アミン、ジメチルアミン、ジエチルアミン、ピロリジン、ピペリジン、モルホリン、ピペラジン等の二級アミン、トリメチルアミン、トリエチルアミン、Ｎ，Ｎ−ジメチルアニリン、ピリジン等の三級アミンとで形成される塩、アンモニウム塩等があげられる。
以下に、本発明を詳細に説明する。
本発明において使用したアミノ酸及びその保護基に関する略号は、生化学命名に関するＩＵＰＡＣ−ＩＵＢ委員会（IUPAC-IUB Joint Commition on Biochemical Nomenclature）の勧告〔Eur.J.Biochem., vol.138,p.9(1984)〕に従った。
以下の略号は、特に断わらない限り対応する下記のアミン酸及び保護基を表す。
Ｇｌｙ；グリシン
Ａｌａ；Ｌ−アラニン
β−Ａｌａ；β−アラニン
Ｔｈｒ；Ｌ−スレオニン
Ｐｒｏ；Ｌ−プロリン
Ｈｙｐ；トランス−４−ヒドロキシ−Ｌ−プロリン
Ａｓｐ；Ｌ−アスパラギン酸
Ａｓｎ；Ｌ−アスパラギン
Ａｓｘ；Ｌ−アスパラギン酸またはＬ−アスパラギン
Ｇｌｕ；Ｌ−グルタミン酸
Ｇｌｎ；Ｌ−グルタミン
Ｇｌａ；γ−カルボキシ−Ｌ−グルタミン酸
Ｇｌｘ；Ｌ−グルタミン酸、Ｌ−グルタミンまたはγ−カルボキシ−Ｌ−グルタミン酸
Ｈｉｓ；Ｌ−ヒスチジン
Ｔｒｐ；Ｌ−トリプトファン
Ｖａｌ；Ｌ−バリン
Ｌｅｕ；Ｌ−ロイシン
Ｓｅｒ；Ｌ−セリン
Ｍｅｔ；Ｌ−メチオニン
Ｃｙｓ；Ｌ−システイン
Ｉｌｅ；Ｌ−イソロイシン
Ｐｈｅ；Ｌ−フェニルアラニン
Ｔｙｒ；Ｌ−チロシン
Ｌｙｓ；Ｌ−リジン
Ａｒｇ；Ｌ−アルギニン
Ｄ−Ａｒｇ；Ｄ−アルギニン
Ｆｍｏｃ；９−フルオレニルメチルオキシカルボニル
ｔ−Ｂｕ；ｔ−ブチル
Ｔｒｔ；トリチル
Ｂｚｌ；ベンジル
Ｂｚｌ（ＮＯ2）；ｐ−ニトロベンジル
Ｐｍｃ；２，２，５，７，８−ペンタメチルクロマン−６−スルホニル
Ｂｏｃ；ｔ−ブチルオキシカルボニル
以下の略号は、対応する下記の側鎖保護アミノ酸を表す。
Ｆｍｏｃ−Ａｓｐ−ＯＢｚｌ（ＮＯ2）；Ｎα−９−フルオレニルメチルオキシカルボニル−Ｌ−アスパラギン酸  ｐ−ニトロベンジルエステル
Ｆｍｏｃ−Ａｓｐ（Ｏｔ−Ｂｕ）−ＯＢｚｌ（ＮＯ2）；Ｎα−９−フルオレニルメチルオキシカルボニル−Ｌ−アスパラギン酸  β−ｔ−ブチルエステル  α−ｐ−ニトロベンジルエステル
Ｆｍｏｃ−Ａｓｐ（Ｏｔ−Ｂｕ）−ＯＨ；Ｎα−９−フルオレニルメチルオキシカルボニル−Ｌ−アスパラギン酸  β−ｔ−ブチルエステル
Ｆｍｏｃ−Ｇｌｕ（Ｏｔ−Ｂｕ）−ＯＨ；Ｎα−９−フルオレニルメチルオキシカルボニル−Ｌ−グルタミン酸  γ−ｔ−ブチルエステル
Ｆｍｏｃ−Ｇｌａ（Ｏｔ−Ｂｕ）2−ＯＨ；Ｎα−９−フルオレニルメチルオキシカルボニル−γ−カルボキシ−Ｌ−グルタミン酸  β，γ−ジ−ｔ−ブチルエステル
Ｆｍｏｃ−Ｈｉｓ（Ｔｒｔ）−ＯＨ；Ｎα−９−フルオレニルメチルオキシカルボニル−Ｎim−トリチル−Ｌ−ヒスチジン
Ｆｍｏｃ−Ｔｈｒ（ｔ−Ｂｕ）−ＯＨ；Ｎα−９−フルオレニルメチルオキシカルボニル−Ｏ−ｔ−ブチル−Ｌ−スレオニン
Ｆｍｏｃ−Ｓｅｒ（ｔ−Ｂｕ）−ＯＨ；Ｎα−９−フルオレニルメチルオキシカルボニル−Ｏ−ｔ−ブチル−Ｌ−セリン
Ｆｍｏｃ−Ｔｙｒ（ｔ−Ｂｕ）−ＯＨ；Ｎα−９−フルオレニルメチルオキシカルボニル−Ｏ−ｔ−ブチル−Ｌ−チロシン
Ｆｍｏｃ−Ｈｙｐ（ｔ−Ｂｕ）−ＯＨ；Ｎα−９−フルオレニルメチルオキシカルボニル−Ｏ−ｔ−ブチル−トランス−４−ヒドロキシ−Ｌ−プロリン
Ｆｍｏｃ−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）−ＯＨ；Ｎα−９−フルオレニルメチルオキシカルボニル−Ｎε−ｔ−ブチルオキシカルボニル−Ｌ−リジン
Ｆｍｏｃ−Ａｓｎ（Ｔｒｔ）−ＯＨ；Ｎα−９−フルオレニルメチルオキシカルボニル−Ｎγ−トリチル−Ｌ−アスパラギン
Ｆｍｏｃ−Ｇｌｎ（Ｔｒｔ）−ＯＨ；Ｎα−９−フルオレニルメチルオキシカルボニル−Ｎδ−トリチル−Ｌ−グルタミン
Ｆｍｏｃ−Ａｒｇ（Ｐｍｃ）−ＯＨ；Ｎα−９−フルオレニルメチルオキシカルボニル−Ｎg−２，２，５，７，８−ペンタメチルクロマン−６−スルホニル−Ｌ−アルギニン
Ｈ−Ｔｒｐ−ＯＢｚｌ；Ｌ−トリプトファンベンジルエステル
以下の略号は、対応する下記の反応溶媒、反応試薬等を表す。
ＰｙＢＯＰ；ベンゾトリアゾール−１−イルオキシトリピロリジノフォスフォニウムヘキサフルオロフォスフェート
ＨＯＢｔ；Ｎ−ヒドロキシベンゾトリアゾール
ＮＭＭ；Ｎ−メチルモルホリン
ＤＭＦ；Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド
ＤＣＭ；ジクロロメタン
ＴＦＡ；トリフルオロ酢酸
ＤＩＥＡ；ジイソプロピルエチルアミン
Ｐｄ／Ｃ；パラジウム／炭素触媒
αＭＥＭ；最小培地
ＦＣＳ；ウシ胎児血清
ＢＳＡ；ウシ血清アルブミン
ＨＥＰＥＳ；Ｎ−２−ヒドロキシエチルピペラジン−Ｎ’−２−エタンスルホン酸
ＰＢＳ；リン酸緩衝生理食塩水
ＴＲＡＰ；酒石酸抵抗性酸性ホスファターゼ
次に、化合物（Ｉ）の製造法について説明する。
0003821485.tif 000005
（式中、Ｚ、Ｘ、Ｙ、ｍ及びｎは前記と同義である）
化合物（Ｉ）中の環状ペプチド部分は、適当に側鎖保護した部分ペプチドを後述のペプチド合成機あるいは一般的な液相ペプチド合成法（ペプチド合成の基礎と実験、泉屋信夫ら、丸善）に従って合成し、これを出発物質としてＰｙＢＯＰ等の縮合剤を用いて環化反応を行うことにより得ることができる。
さらに、ペプチド合成機あるいは液相合成法を用い、あるいは両法を適宜組み合わせて得られるＣ末側直鎖ペプチドと上記環状ペプチドとを縮合することにより化合物（Ｉ）を得ることができる。
ペプチド合成機によるペプチドの合成は、島津製作所製ペプチド合成機、Applied Biosystems, Inc., U.S.A.（ＡＢＩ社）製ペプチド合成機等の市販のペプチド合成機上で、適当に側鎖保護したＮα−９−フルオレニルメチルオキシカルボニルアミノ酸を用い、それぞれの合成プログラムに従い、実施することができる。
化合物（Ｉ）の原料となる保護アミノ酸及び担体樹脂は、ＡＢＩ社、島津製作所、国産化学（株）、Nova biochem社、渡辺化学（株）あるいはペプチド研究所（株）から入手することができる。
このようにして得られた化合物（Ｉ）は、Ｃ−４、Ｃ−８あるいはＣ−１８逆相シリカゲルカラムを用いた高速液体クロマトグラフィー（以下、ＨＰＬＣという）あるいは分配、吸着樹脂、シリカゲル、化学修飾シリカゲル、逆相シリカゲル、アルミナ、珪藻土、珪酸マグネシウム、イオン交換樹脂、あるいはゲル濾過等のカラムクロマトグラフィーもしくは薄層クロマトグラフィーにより精製することができる。
化合物（Ｉ）の薬理上許容される塩を取得するときは、常法に従う。すなわち、化合物（Ｉ）の酸付加塩及び有機塩基付加塩は、対応する酸あるいは有機塩基の水溶液に化合物（Ｉ）を溶解し、凍結乾燥することによって得られる。また、化合物（Ｉ）の金属塩は、対応する金属イオンを含む水溶液に化合物（Ｉ）を溶解し、ゲル濾過もしくはＨＰＬＣで精製することによって得られる。
次に、化合物（Ｉ）の具体例を第１表に示す。
0003821485.tif 000006
次に、化合物（Ｉ）の生物活性及び蛋白質分解酵素に対する安定性について試験例で説明する。
試験例１  カルシトニン様生物活性
１−１  破骨細胞の調製
破骨細胞としては、文献〔Akatsu T. et al., J.Bone Miner.Res.,7,1297-1306(1992)〕に記載された方法で、マウス骨芽細胞と骨髄細胞をコラーゲンゲル上で共培養することにより誘導される破骨細胞様細胞（Osteoclast-like Multinucleated Cell）を用いた。具体的には、Cellmatrix Type I-A（新田ゼラチン）でコラーゲンコートした１００mmディッシュ(IWAKI）にマウス頭蓋冠由来骨芽細胞を５×１０5cells播種し、ＣＯ2インキュベーター（３７℃、５％ＣＯ2）で１日培養した（培地はαMEM＋10% FCSを使用、いずれもGIBCO社製）。培地を除去した後、骨芽細胞上にマウス骨髄細胞を６×１０6cells播種し、カルシトリオール10-8M（和光純薬）及びデキサメタゾン(Dexamethasone)10-7M(SIGMA)を添加した。骨芽細胞播種から７日目に得られるＴＲＡＰ陽性の多核細胞（破骨細胞用細胞）を破骨細胞として使用した。
１−２  象牙片上への破骨細胞の播種と培養
ディッシュの培地を除去しＰＢＳ（−）でリンスした後、コラゲナーゼ／ディスパーゼ溶液を加えて（コラゲナーゼ：和光純薬、ディスパーゼ：合同酒精）細胞を分散させてチューブへ集め８００ｒｐｍ×５分遠心した。遠心後、上清を吸引除去し、αMEMで細胞を再び懸濁した後、象牙片（直径４ｍｍ、厚さ２００μｍ）上へ１００μｌずつ加えた。ＣＯ2インキュベーター内で２時間静置して破骨細胞を象牙片に接着させた後、この象牙片を取り出し、試験化合物を含む培地をあらかじめ添加した４８wellプレート(IWAKI)へ静かに移し、４８時間後に後述する方法により骨吸収活性を測定した。試験化合物を含む培地は、HEPES緩衝液に溶解した試験化合物を、最終濃度が第２及び第３表に示す値になるように１−１に記載の培地に添加して調製した。
１−３  象牙片の染色及び骨吸収窩面積の定量による骨吸収活性の測定
培地から取り出した象牙片を0.1Ｎアンモニア水の入ったチューブへ移し、ソニケーターで２０〜３０秒処理して破骨細胞を取り除いた。象牙片を取り出して蒸留水でアンモニアを洗い流した後、ヘマトキシリン−エオジン(SIGMA）染色液に浸して吸収窩を染色した。染色の終わった象牙片の顕微鏡写真から画像解析装置で骨吸収窩面積率を下式により算出した。
0003821485.tif 000007
試験化合物の骨吸収抑制活性は、以下の式に従い算出した。
0003821485.tif 000008
Ａ；試験化合物を加えないときの骨吸収窩面積率
Ｂ；試験化合物を加えたときの骨吸収窩面積率
結果を第２表及び第３表に示す。
0003821485.tif 000009
0003821485.tif 000010
試験例２  プロリルエンドペプチダーゼに対する安定性
試験化合物を、０．０１％のアジ化ナトリウム及び０．１ｍＭの塩化カルシウムを含むｐＨ７．２のＰＢＳ（−）緩衝液を用いて、２５μｇ／ｍｌの濃度の溶液に調製した後、試験化合物に対し重量比で５０分の１量のプロリルエンドペプチダーゼ（生化学工業）を加え、３７℃の恒温槽中でインキュベートし、経時的に一定量を採取した。採取液の分析は、逆相カラム（ＹＭＣ−Ｐａｃｋ  ＯＤＳ−ＡＭ  １５０×６ｍｍＩ．Ｄ．）を用いたＨＰＬＣを用いて行い、０．１％ＴＦＡを含む０〜４５％アセトニトリルを用いた３０分間の直線濃度勾配法で溶出し、２２０ｎｍの吸光度により検出した。
経時的な分析値は、プロリルエンドペプチダーゼ未処理の試験化合物を用いた場合のピーク高さを１００％とし、これに対する相対値として試験化合物の残存率をそれぞれ計算した。
結果を図１及び図２に示す。１時間後の残存率は、図１に示すように化合物ｃが１６％であるのに対し、化合物１が３２％であった。また、図２に示すように化合物ｄが１９％であるのに対し、化合物２が４５％であった。
試験例３
４週令のSD系雄性ラット（日本クレア）を、試験前24時間絶食し，１群５匹として実験に供した。対照群は、１％ＢＳＡ（シグマ社製）生理食塩液（大塚製薬製）をラット当り0.5mlを尾静脈内投与した。化合物９の各投与群は、被験薬を１％ ＢＳＡ生理食塩液で調製し、対照群と同様にラット当り0.5mlを静脈内投与した。投与60分後に右大腿動脈より採血し、４℃下、3000rpmで15分間遠心分離して、血清を採取し血清中のカルシウム濃度をカルシウムc-テストワコー（和光純薬製）で測定した。
統計処理方法は、数値を平均値±標準誤差で示し、Williams-Wilcoxonの検定法を用い、P＜0.05を統計的有意差ありと判定した。
結果を、第４表に示す。化合物９投与群は対照群と比較して１００μｇ／ｍｌで血清カルシウム濃度を有意に低下した。
0003821485.tif 000011
【図面の簡単な説明】
図１は、化合物１及び化合物ｃのプロリルエンドペプチダーゼに対する安定性を経時的な残存率で示す。
図２は、化合物２及び化合物ｄのプロリルエンドペプチダーゼに対する安定性を経時的な残存率で示す。
発明を実施するための最良の形態
以下の実施例において、化合物の理化学的性質は次の方法により測定した。
質量分析は、日本電子JMS-SX102Aを用いFAB法により行った。
アミノ酸分析は、Bidlingmeyer B. A.らの方法〔Ｊ．Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒ．，ｖｏｌ．３３６，ｐ．９３（１９８４）〕により行った。加水分解は塩酸蒸気中１１０℃で２２時間行い、加水分解物のアミノ酸組成はWaters Pico Tagアミノ酸分析計（Waters社製）を用い分析した。なお、実測値は、ＡｌａまたはＬｅｕの値を基準とした相対値で表した。
実施例１  化合物１の合成
参考例１で得られる化合物ａ５．０ｍｇをＤＭＦ１．４ｍｌに溶解し、これに、氷冷下、ＰｙＢＯＰ４．７ｍｇ、ＨＯＢｔ１．２ｍｇ及びＮＭＭ１．５μｌを加え、氷冷下のまま５分間放置した。この溶液を、参考例３で得られるペプチドの結合した担体樹脂のうちの５３ｍｇに加え、４℃で６６時間、さらに室温で６時間攪拌した。担体樹脂を濾取し、メタノール、ブチルエーテルで順次洗浄後、減圧下１時間乾燥した。得られた樹脂に、５ｍｇ／ｍｌの２−メチルインドールを含む、ＴＦＡ（８２．５％）、チオアニソール（５％）、水（５％）、エチルメチルスルフィド（３％）、１，２−エタンジチオール（２．５％）及びチオフェノール（２％）からなる混合溶液３００μｌを加えて室温で６時間放置し、側鎖保護基を除去するとともに樹脂よりペプチドを切り出した。樹脂を濾別後、得られた溶液にエーテル約１０ｍｌを加え、生成した沈澱を遠心分離及びデカンテーションにより回収し、粗ペプチドとして取得した。これを参考例１の工程２と同様にしてＨＰＬＣで精製し、化合物１，０．５６ｍｇを得た。
質量分析［ＦＡＢＭＳ］；３７２７（Ｍ＋Ｈ）
アミノ酸分析；Ａｓｘ２．４（３），Ｇｌｘ３．１（３），Ｓｅｒ２．０（２），Ｇｌｙ５．３（５），Ｈｉｓ２．１（２），Ａｒｇ１．１（１），Ｔｈｒ５．１（５），Ａｌａ１．０（１），Ｐｒｏ２．８（３），Ｔｙｒ１．０（１），Ｌｅｕ４．０（４），Ｌｙｓ２．０（２），Ｔｒｐは分析せず
実施例２  化合物２の合成
参考例２で得られる化合物ｂ１１．０ｍｇをＤＭＦ２．２ｍｌに溶解し、これに、氷冷下、ＰｙＢＯＰ１２．０ｍｇ、ＨＯＢｔ３．１ｍｇ及びＮＭＭ３．８μｌを加え、氷冷下のまま５分間放置した。この溶液のうちの１．０ｍｌを、参考例４で得られるペプチドの結合した担体樹脂のうちの３５ｍｇに加え、４℃で８日間攪拌した。担体樹脂を濾取後、実施例１と同様にして洗浄、乾燥し、樹脂よりペプチドを切り出し、粗ペプチドを取得した。これを参考例１の工程２と同様にしてＨＰＬＣで精製し、化合物２，０．４８ｍｇを得た。ただし、逆相カラムはＹＭＣ製カラム（ＹＭＣ−Ｐａｃｋ  ＯＤＳ−ＡＭ  ＳＨ３４３−５  ２０ｍｍＩ．Ｄ．×２５０ｍｍ）を用いた。
質量分析［ＦＡＢＭＳ］；３６４０（Ｍ＋Ｈ）
アミノ酸分析；Ａｓｘ２．０（３），Ｇｌｘ２．９（３），Ｓｅｒ１．９（２），Ｇｌｙ５．０（５），Ｈｉｓ１．８（２），Ａｒｇ１．１（１），Ｔｈｒ３．９（５），Ａｌａ１．０（１），Ｐｒｏ２．８（３），Ｔｙｒ１．０（１），Ｖａｌ０．９（１），Ｌｅｕ４．０（４），Ｌｙｓ１．６（２），Ｔｒｐは分析せず
実施例３  化合物３の合成
参考例２で得られる化合物ｂ４．６ｍｇをＤＭＦ０．９２ｍｌに溶解し、これに、氷冷下、ＰｙＢＯＰ７．６ｍｇ、ＨＯＢｔ２．０ｍｇ及びＮＭＭ２．７μｌを加え、氷冷下のまま５分間放置した。この溶液のうちの０．４６ｍｌを、参考例５で得られるペプチドの結合した担体樹脂のうちの２４ｍｇに加え、４℃で５日間攪拌した。さらに、氷冷下、ＰｙＢＯＰ３．８ｍｇ、ＨＯＢｔ１．０ｍｇ及びＮＭＭ１．４μｌを加え、室温で２日間攪拌した。担体樹脂を濾取後、実施例１と同様にして洗浄、乾燥し、樹脂よりペプチドを切り出し、粗ペプチドを取得した。これを参考例１の工程２と同様にしてＨＰＬＣで精製し、化合物３，０．１４ｍｇを得た。ただし、逆相カラムはＹＭＣ製カラム（ＹＭＣ−Ｐａｃｋ  ＯＤＳ−ＡＭ  ＳＨ３４３−５  ２０ｍｍＩ．Ｄ．×２５０ｍｍ）を用いた。
質量分析［ＦＡＢＭＳ］；３２０６（Ｍ＋Ｈ）
アミノ酸分析；Ａｓｘ２．８（３），Ｓｅｒ１．２（１），Ｇｌｙ４．９（４），Ｈｉｓ１．０（１），Ａｒｇ１．１（１），Ｔｈｒ４．４（４），Ａｌａ９．５（１０），Ｐｒｏ３．３（３），Ｖａｌ０．８（１），Ｌｅｕ５．０（５），Ｔｒｐは分析せず
実施例４  化合物４の合成
参考例２で得られる化合物ｂ３．６７ｍｇをＤＭＦ１．０ｍｌに溶解し、これに、氷冷下、ＰｙＢＯＰ４．０７ｍｇ、ＨＯＢｔ１水和物１．２０ｍｇ及びＮＭＭ１．２９μｌを加え、氷冷下のまま５分間放置した。この溶液を、参考例６で得られるペプチドの結合した担体樹脂のうちの４７．２ｍｇに加え、４℃で２４時間攪拌した。担体樹脂を濾取後、実施例１と同様にして洗浄、乾燥し、樹脂よりペプチドを切り出し、粗ペプチドを取得した。これを参考例１の工程２と同様にしてＨＰＬＣで精製し、化合物４，６．４ｍｇを得た。
質量分析［ＦＡＢＭＳ］；３６５６（Ｍ＋Ｈ）
アミノ酸分析；Ａｓｘ３．６（４），Ｇｌｘ１．９（２），Ｇｌｙ４．９（５），Ｈｉｓ１．７（２），Ｔｈｒ４．４（５），Ａｌａ２．８（３），Ｐｒｏ２．８（３），Ｔｙｒ０．９（１），Ｖａｌ０．９（１），Ｍｅｔ１．０（１），Ｉｌｅ０．９（１），Ｌｅｕ１．０（１），Ｐｈｅ２．５（３），Ｌｙｓ０．９（１），Ｔｒｐは分析せず
実施例５  化合物５の合成
参考例２で得られる化合物ｂ５．３ｍｇをＤＭＦ２．５ｍｌに溶解し、これに、氷冷下、ＰｙＢＯＰ７．８ｍｇ、ＨＯＢｔ２．０ｍｇ及びＮＭＭ２．８μｌを加え、氷冷下のまま３０分間放置した。この溶液のうちの０．５５ｍｌを、参考例７で得られるペプチドの結合した担体樹脂のうちの１７．３ｍｇに加え、０℃で１０分間放置後、室温で２４時間攪拌した。担体樹脂を濾取後、実施例１と同様にして洗浄、乾燥し、樹脂よりペプチドを切り出し、粗ペプチドを取得した。これを参考例１の工程２と同様にしてＨＰＬＣで精製し、化合物５，０．３６ｍｇを得た。ただし、逆相カラムはＹＭＣ製カラム（ＹＭＣ−Ｐａｃｋ  ＯＤＳ−ＡＭ  ＳＨ３４３−５  ２０ｍｍＩ．Ｄ．×２５０ｍｍ）を用いた。
質量分析［ＦＡＢＭＳ］；３３８９（Ｍ＋Ｈ）
アミノ酸分析；Ａｓｘ２．５（３），Ｇｌｘ１．０（１），Ｓｅｒ２．０（２），Ｇｌｙ５．８（６），Ｈｉｓ０．８（１），Ａｒｇ１．０（１），Ｔｈｒ４．７（５），Ａｌａ３．７（４），Ｐｒｏ２．８（３），Ｔｙｒ１．０（１），Ｖａｌ０．９（１），Ｌｅｕ４．０（１），Ｌｙｓ０．９（１），Ｔｒｐは分析せず
実施例６  化合物６の合成
参考例２で得られる化合物ｂ５．３ｍｇをＤＭＦ１．２５ｍｌに溶解し、これに、氷冷下、ＰｙＢＯＰ７．８ｍｇ、ＨＯＢｔ２．０ｍｇ及びＮＭＭ２．８μｌを加え、氷冷下のまま３０分間放置した。この溶液のうちの０．５５ｍｌを、参考例８で得られるペプチドの結合した担体樹脂のうちの１７．１ｍｇに加え、０℃で１０分間放置後、室温で１３時間攪拌した。担体樹脂を濾取後、実施例１と同様にして洗浄、乾燥し、樹脂よりペプチドを切り出し、粗ペプチドを取得した。これを参考例１の工程２と同様にしてＨＰＬＣで精製し、化合物６，０．３９ｍｇを得た。ただし、逆相カラムはＹＭＣ製カラム（ＹＭＣ−Ｐａｃｋ  ＯＤＳ−ＡＭ  ＳＨ３４３−５  ２０ｍｍＩ．Ｄ．×２５０ｍｍ）を用いた。
質量分析［ＦＡＢＭＳ］；３３７３（Ｍ＋Ｈ）
アミノ酸分析；Ａｓｘ１．７（２），Ｇｌｘ２．１（２），Ｓｅｒ２．１（２），Ｇｌｙ６．２（６），Ｈｉｓ０．８（１），Ａｒｇ１．０（１），Ｔｈｒ３．７（４），Ａｌａ４．７（５），Ｐｒｏ２．８（３），Ｔｙｒ０．９（１），Ｖａｌ０．９（１），Ｌｅｕ４．０（４），Ｌｙｓ１．０（１），Ｔｒｐは分析せず
実施例７  化合物７の合成
参考例２で得られる化合物ｂ５．３ｍｇをＤＭＦ２．５ｍｌに溶解し、これに、氷冷下、ＰｙＢＯＰ７．８ｍｇ、ＨＯＢｔ２．０ｍｇ及びＮＭＭ２．８μｌを加え、氷冷下のまま３０分間放置した。この溶液のうちの０．５５ｍｌを、参考例９で得られるペプチドの結合した担体樹脂のうちの１８．２ｍｇに加え、０℃で１０分間放置後、室温で２４時間攪拌した。担体樹脂を濾取後、実施例１と同様にして洗浄、乾燥し、樹脂よりペプチドを切り出し、粗ペプチドを取得した。これを参考例１の工程２と同様にしてＨＰＬＣで精製し、化合物７，０．４５ｍｇを得た。ただし、逆相カラムはＹＭＣ製カラム（ＹＭＣ−Ｐａｃｋ  ＯＤＳ−ＡＭ  ＳＨ３４３−５  ２０ｍｍＩ．Ｄ．×２５０ｍｍ）を用いた。
質量分析［ＦＡＢＭＳ］；３４２１（Ｍ＋Ｈ）
アミノ酸分析；Ａｓｘ２．５（３），Ｇｌｘ１．０（１），Ｓｅｒ２．０（２），Ｇｌｙ５．９（６），Ｈｉｓ０．８（１），Ａｒｇ１．０（１），Ｔｈｒ４．６（５），Ａｌａ３．７（４），Ｐｒｏ０．８（１），Ｔｙｒ０．９（１），Ｖａｌ０．９（１），Ｌｅｕ４．０（４），Ｌｙｓ１．０（１），Ｔｒｐ，Ｈｙｐは分析せず
実施例８  化合物８の合成
参考例２で得られる化合物ｂ５．３ｍｇをＤＭＦ１．２５ｍｌに溶解し、これに、氷冷下、ＰｙＢＯＰ７．８ｍｇ、ＨＯＢｔ２．０ｍｇ及びＮＭＭ２．８μｌを加え、氷冷下のまま３０分間放置した。この溶液のうちの０．７ｍｌを、参考例１０で得られるペプチドの結合した担体樹脂のうちの１８．１ｍｇに加え、０℃で１０分間放置後、室温で１３時間攪拌した。担体樹脂を濾取後、実施例１と同様にして洗浄、乾燥し、樹脂よりペプチドを切り出し、粗ペプチドを取得した。これを参考例１の工程２と同様にしてＨＰＬＣで精製し、化合物８，０．６７ｍｇを得た。ただし、逆相カラムはＹＭＣ製カラム（ＹＭＣ−Ｐａｃｋ  ＯＤＳ−ＡＭ  ＳＨ３４３−５  ２０ｍｍＩ．Ｄ．×２５０ｍｍ）を用いた。
質量分析［ＦＡＢＭＳ］；３４０３（Ｍ＋Ｈ）
アミノ酸分析；Ａｓｘ２．６（３），Ｇｌｘ１．０（１），Ｓｅｒ２．１（２），Ｇｌｙ５．１（５），Ｈｉｓ＋β−Ａｌａ２．０（２），Ａｒｇ１．０（１），Ｔｈｒ４．７（５），Ａｌａ３．７（４），Ｐｒｏ２．９（３），Ｔｙｒ０．９（１），Ｖａｌ０．９（１），Ｌｅｕ４．０（４），Ｌｙｓ１．０（１），Ｔｒｐは分析せず。Ｈｉｓとβ−Ａｌａは分離できないため同一アミノ酸として同定。
実施例  ９  化合物９の合成
参考例２で得られる化合物ｂ８．１ｍｇを３．０ｍｌのＤＭＦに溶解し、氷冷下でＰｙＢＯＰ１３．２ｍｇ、ＨＯＢｔ３．４ｍｇ、ＮＭＭ４．６５μｌを加え氷冷下のまま３０分間放置した。この溶液のうち１．０ｍｌを、参考例１１で得られる、ペプチドの結合した担体樹脂のうち２６．８ｍｇに加えて、４℃で６日間攪拌した。担体樹脂を濾取し、実施例１と同様に洗浄、乾燥し、樹脂よりペプチドを切り出し、粗ペプチドとして１９．２ｍｇ取得した。これを参考例１の工程２と同様ＨＰＬＣで精製し、化合物９を０．５８ｍｇ得た。ただし逆相カラムはＹＭＣ製カラム（ＹＭＣ−Ｐａｃｋ  ＯＤＳ−ＡＭ  ＳＨ３４３−５  ２０ｍｍＩ．Ｄ．×２５０ｍｍ）を用いた。
質量分析［ＦＡＢＭＳ］：３４４７（Ｍ＋Ｈ）
アミノ酸分析：Ａｓｘ２．８（３），Ｇｌｘ２．６（２），Ｓｅｒ２．１（２），Ｇｌｙ６．０（６），Ｈｉｓ０．９（１），Ａｒｇ１．２（１），Ｔｈｒ４．９（５），Ａｌａ３．２（３），Ｐｒｏ３．０（３），Ｔｙｒ１．０（１），Ｖａｌ１．０（１），Ｌｅｕ４．０（４），Ｌｙｓ１．２（１），Ｔｒｐは分析せず
実施例  １０  化合物１０の合成
参考例２で得られる化合物ｂ８．１ｍｇを３．０ｍｌのＤＭＦに溶解し、氷冷下でＰｙＢＯＰ１３．２ｍｇ、ＨＯＢｔ３．４ｍｇ、ＮＭＭ４．６５μｌを加え氷冷下のまま３０分間放置した。この溶液のうち１．０ｍｌを、参考例１２で得られるペプチドの結合した担体樹脂のうち２７．４ｍｇに加えて、４℃で６日間攪拌した。担体樹脂を濾取し、実施例１と同様に洗浄、乾燥し、樹脂よりペプチドを切り出し、粗ペプチドとして１９．２ｍｇ取得した。これを参考例１の工程２と同様ＨＰＬＣで精製し、化合物１０を０．７０ｍｇ得た。ただし逆相カラムはＹＭＣ製カラム（ＹＭＣ−Ｐａｃｋ  ＯＤＳ−ＡＭ  ＳＨ３４３−５  ２０ｍｍＩ．Ｄ．×２５０ｍｍ）を用いた。
質量分析［ＦＡＢＭＳ］：３４９１（Ｍ＋Ｈ）
アミノ酸分析：Ａｓｘ２．５（３），Ｇｌｘ２．２（２），Ｓｅｒ２．０（２），Ｇｌｙ５．７（６），Ｈｉｓ０．８（１），Ａｒｇ１．０（１），Ｔｈｒ４．７（５），Ａｌａ３．０（３），Ｐｒｏ２．９（３），Ｔｙｒ１．０（１），Ｖａｌ０．９（１），Ｌｅｕ４．０（４），Ｌｙｓ１．１（１），ＧｌａはＧｌｘとして検出，Ｔｒｐは分析せず
実施例  １１  化合物１１の合成
参考例２で得られる化合物ｂ８．１ｍｇを３．０ｍｌのＤＭＦに溶解し、氷冷下でＰｙＢＯＰ１３．２ｍｇ、ＨＯＢｔ３．４ｍｇ、ＮＭＭ４．６５μｌを加え氷冷下のまま３０分間放置した。この溶液のうち０．５ｍｌを、参考例１３で得られるペプチドの結合した担体樹脂のうち１５．６ｍｇに加えて、４℃で６日間攪拌した。担体樹脂を濾取し、実施例１と同様に洗浄、乾燥し、樹脂よりペプチドを切り出し、粗ペプチドとして１０．８ｍｇ取得した。これを参考例１の工程２と同様ＨＰＬＣで精製し、化合物１１を０．１４ｍｇ得た。ただし逆相カラムはＹＭＣ製カラム（ＹＭＣ−Ｐａｃｋ  ＯＤＳ−ＡＭ  ＳＨ３４３−５  ２０ｍｍＩ．Ｄ．×２５０ｍｍ）を用いた。
質量分析［ＦＡＢＭＳ］：３４９１（Ｍ＋Ｈ）
アミノ酸分析：Ａｓｘ２．０（３），Ｇｌｘ２．２（２），Ｓｅｒ１．６（２），Ｇｌｙ５．１（６），Ｈｉｓ０．７（１），Ａｒｇ０．８（１），Ｔｈｒ３．７（５），Ａｌａ２．８（３），Ｐｒｏ２．２（３），Ｔｙｒ０．９（１），Ｖａｌ１．０（１），Ｌｅｕ４．０（４），Ｌｙｓ１．０（１），ＧｌａはＧｌｘとして検出，Ｔｒｐは分析せず
実施例  １２  化合物１２の合成
参考例２で得られる化合物ｂ８．１ｍｇを３．０ｍｌのＤＭＦに溶解し、氷冷下でＰｙＢＯＰ１３．２ｍｇ、ＨＯＢｔ３．４ｍｇ、ＮＭＭ４．６５μｌを加え氷冷下のまま３０分間放置した。この溶液のうち０．５ｍｌを、参考例１４で得られるペプチドの結合したピンヘッドのうち２個に加えて、４℃で６日間攪拌した。ピンヘッドを濾取し、実施例１と同様に洗浄、乾燥し、実施例１のペプチドの切り出しと同様の操作を行い側鎖保護基の除去を行った。溶液を排出しメタノールで洗浄した後、減圧下乾燥し側鎖保護基の除去されたペプチドの結合したピンヘッドを得た。ここに０．０５ＭのＨＥＰＥＳ緩衝液（ｐＨ８．２）０．５ｍｌを加え、室温で５時間放置し、ペプチドをピンヘッドから切り出した。このペプチドを含む溶液を、参考例１の工程２と同様にＨＰＬＣにより精製し、化合物１２を０．０６ｍｇ得た。ただし逆相カラムはＹＭＣ製カラム（ＹＭＣ−Ｐａｃｋ  ＯＤＳ−ＡＭ  ＳＨ３４３−５  ２０ｍｍＩ．Ｄ．×２５０ｍｍ）を用いた。
質量分析［ＦＡＢＭＳ］：３７２６（Ｍ＋Ｈ）
アミノ酸分析：Ａｓｘ２．４（３），Ｇｌｘ２．２（２），Ｓｅｒ１．９（２），Ｇｌｙ５．７（６），Ｈｉｓ＋β−Ａｌａ１．８（２），Ａｒｇ１．１（１），Ｔｈｒ４．６（５），Ａｌａ２．９（３），Ｐｒｏ３．９（４），Ｔｙｒ１．１（１），Ｖａｌ１．０（１），Ｌｅｕ４．０（４），Ｌｙｓ２．０（２），Ｔｒｐは分析せず。Ｈｉｓとβ−Ａｌａは分離できないため同一アミノ酸として同定。
実施例  １３  化合物１３の合成
参考例２で得られる化合物ｂ２．２ｍｇを０．２３ｍｌのＤＭＦに溶解し、氷冷下でＰｙＢＯＰ２．４５ｍｇ、ＨＯＢｔ０．７２ｍｇ、ＮＭＭ０．７８μｌを加え、これを、参考例１５で得られるペプチドの結合した担体樹脂のうち２０．８ｍｇに加えて、４℃で２日間攪拌した。担体樹脂を濾取し、実施例１と同様に洗浄、乾燥し、樹脂よりペプチドを切り出し、粗ペプチドとして１７．９ｍｇ取得した。これを参考例１の工程２と同様ＨＰＬＣで精製し、化合物１３を０．３９ｍｇ得た。
質量分析［ＦＡＢＭＳ］：３４４７（Ｍ＋Ｈ）
アミノ酸分析：Ａｓｘ２．２（３），Ｇｌｘ２．１（２），Ｓｅｒ１．９（２），Ｇｌｙ５．６（６），Ｈｉｓ０．７（１），Ａｒｇ１．０（１），Ｔｈｒ４．８（５），Ａｌａ２．９（３），Ｐｒｏ２．８（３），Ｔｙｒ１．０（１），Ｖａｌ１．０（１），Ｌｅｕ４．０（４），Ｌｙｓ１．１（１），Ｔｒｐは分析せず
実施例  １４  化合物１４の合成
参考例２で得られる化合物ｂ２．２ｍｇを０．２３ｍｌのＤＭＦに溶解し、氷冷下でＰｙＢＯＰ２．４５ｍｇ、ＨＯＢｔ０．７２ｍｇ、ＮＭＭ０．７８μｌを加え、これを、参考例１６で得られるペプチドの結合した担体樹脂のうち２０．８ｍｇに加えて、４℃で２日間攪拌した。担体樹脂を濾取し、実施例１と同様に洗浄、乾燥し、樹脂よりペプチドを切り出し、粗ペプチドとして２６．３ｍｇ取得した。これを参考例１の工程２と同様ＨＰＬＣで精製し、化合物１３を０．９６ｍｇ得た。
質量分析［ＦＡＢＭＳ］：３４１９（Ｍ＋Ｈ）
アミノ酸分析：Ａｓｘ２．３（３），Ｇｌｘ２．２（２），Ｓｅｒ２．０（２），Ｇｌｙ５．８（６），Ｈｉｓ０．８（１），Ｔｈｒ４．８（５），Ａｌａ３．０（３），Ｐｒｏ２．９（３），Ｔｙｒ１．０（１），Ｖａｌ１．０（１），Ｌｅｕ４．０（４），Ｌｙｓ２．０（２），Ｔｒｐは分析せず
参考例１  化合物ａの合成
0003821485.tif 000012
工程１：Ｆｍｏｃ−Ｇｌｙ−Ａｓｎ（Ｔｒｔ）−Ｔｒｐ−Ｈｉｓ（Ｔｒｔ）−Ｇｌｙ−Ｔｈｒ（ｔ−Ｂｕ）−Ａｌａ−Ｐｒｏ−Ａｓｐ（Ｏｔ−Ｂｕ）−ＯＨ（配列番号１）の合成
アミノ酸結合部位としてのクロロ基を８４μｍｏｌ有する担体樹脂（２−クロロトリチルクロライド  レジン）６０ｍｇに、ＤＭＦ０．１ｍｌとＤＣＭ０．５ｍｌの混合溶媒に溶解したＦｍｏｃ−Ａｓｐ（Ｏｔ−Ｂｕ）−ＯＨ１７．２８ｍｇ（４２μｍｏｌ）及びＤＩＥＡ６．１μｌを加え、室温で５分間攪拌した。さらに、ＤＩＥＡ１２．２μｌ及びＤＣＭ１２．２μｌを加え、室温で３０分間攪拌した後、メタノール４８μｌを加え、室温で１０分間攪拌した。樹脂を濾取し、ＤＣＭ、ＤＭＦ、イソプロパノール、メタノール、ジエチルエーテルで順次洗浄後、減圧下２時間乾燥し、Ｆｍｏｃ−Ａｓｐ（Ｏｔ−Ｂｕ）が結合した担体樹脂を得た。この樹脂にピペリジン５％を含むＤＭＦとＤＣＭの１／１の混合溶液１ｍｌを加えて１０分間放置した後、自動合成機の反応器に入れ、島津製作所の合成プログラムに従い次の操作を行った。
（ａ）担体樹脂をＤＭＦにより３分間洗浄し、該溶液を排出した。
（ｂ）３０％ピペリジン−ＤＭＦ溶液を加えて混合物を４分間攪拌し、該溶液を排出し、この操作をもう１回繰り返した。
（ｃ）担体樹脂をＤＭＦで１分間洗浄し、該溶液を排出し、この操作を５回繰り返した。
こうして、Ｆｍｏｃ基を除去したＡｓｐ（Ｏｔ−Ｂｕ）の結合した担体樹脂を得た。
（ｄ）Ｆｍｏｃ−Ｐｒｏ−ＯＨ３３６μｍｏｌ、ＰｙＢＯＰ３３６μｍｏｌ、ＨＯＢｔ３３６μｍｏｌ及びＮＭＭ５０４μｍｏｌをＤＭＦ１．１８ｍｌ中で３分間攪拌し、得られた溶液を樹脂に加えて混合物を３０分間攪拌し、溶液を排出した。
（ｅ）担体樹脂をＤＭＦで１分間洗浄し、これを５回繰り返した。こうして、Ｆｍｏｃ−Ｐｒｏ−Ａｓｐ（Ｏｔ−Ｂｕ）が担体上に合成された。
次に、（ａ）〜（ｃ）の洗浄、脱保護工程を行った後、（ｄ）の工程でＦｍｏｃ−Ａｌａ−ＯＨを用いて縮合反応を行い、次いで（ｅ）の洗浄工程を経て、Ｆｍｏｃ−Ａｌａ−Ｐｒｏ−Ａｓｐ（Ｏｔ−Ｂｕ）が担体上に合成された。以下、工程（ｄ）において、Ｆｍｏｃ−Ｔｈｒ（ｔ−Ｂｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｙ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｈｉｓ（Ｔｒｔ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｔｒｐ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｓｎ（Ｔｒｔ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｙ−ＯＨを順次用いて、（ａ）〜（ｅ）を繰り返し、最終工程の後にＤＣＭで洗浄し、保護ペプチドの結合した担体樹脂を得た。これに、酢酸（１０％）、トリフルオロエタノール（１０％）及びＤＣＭ（８０％）の混合溶液０．９ｍｌを加えて室温で１時間放置し、樹脂よりペプチドを切り出した。樹脂を濾別後、得られた溶液から減圧下溶媒を留去し、標記化合物３７．６ｍｇを得た。
工程２：Ｆｍｏｃ−Ｇｌｙ−Ａｓｎ（Ｔｒｔ）−Ｔｒｐ−Ｈｉｓ（Ｔｒｔ）−Ｇｌｙ−Ｔｈｒ（ｔ−Ｂｕ）−Ａｌａ−Ｐｒｏ−Ａｓｐ（Ｏｔ−Ｂｕ）−Ｔｒｐ−ＯＢｚｌ（配列番号２）の合成
工程１で得られたペプチドのうちの１０ｍｇをＤＭＦ３ｍｌに溶解し、これに、氷冷下、ＰｙＢＯＰ１０．４ｍｇ、ＨＯＢｔ２．７ｍｇ及びＮＭＭ３．０μｌを加え、氷冷下のまま５分間放置した。これに、氷冷下、Ｈ−Ｔｒｐ−ＯＢｚｌ１塩酸塩６．６ｍｇ及びＮＭＭ２．０μｌを加え、４℃で１６時間攪拌した。２Ｍ酢酸で中和後、逆相カラム（資生堂製、ＣＡＰＣＥＬＬ  ＰＡＫ  Ｃ１８  ３０ｍｍＩ．Ｄ．×２５０ｍｍ）を用いたＨＰＬＣで精製した。０．１％ＴＦＡ水溶液に、ＴＦＡ０．１％を含む９０％アセトニトリル水溶液を加えていく直線濃度勾配法で溶出し、２２０ｎｍで検出し、標記化合物を含む画分を得た。この画分を凍結乾燥して、標記化合物２４ｍｇを得た。
工程３：Ｈ−Ｇｌｙ−Ａｓｎ−Ｔｒｐ−Ｈｉｓ−Ｇｌｙ−Ｔｈｒ−Ａｌａ−Ｐｒｏ−Ａｓｐ−Ｔｒｐ−ＯＢｚｌ（配列番号３）の合成
工程２で得られたペプチド２４ｍｇに、ＴＦＡ１８００μｌ、１，２−エタンジチオール１００μｌ、アニソール１００μｌ及び２−メチルインドール１０ｍｇからなる混合溶液を加え、室温で２時間放置した。これに、エーテルを加え、生成した白色沈澱を遠沈させて回収し、乾燥した。得られた白色粉末に２０％ピペリジン−ＤＭＦ溶液１ｍｌを加え、室温で１０分間放置した。再びエーテルを加え、生成した白色沈澱を遠沈させて回収、乾燥し、標記化合物１７．８ｍｇを得た。
工程４：化合物ａ
（ａ）工程３で得られたペプチド１７．８ｍｇをＤＭＦ１０ｍｌに溶解し、これに、氷冷下、ＰｙＢＯＰ１５．１ｍｇ、ＨＯＢｔ３．９ｍｇ及びＮＭＭ４．４μｌを加え、４℃で１５時間攪拌した。２Ｍ酢酸で中和後、工程２と同様にしてＨＰＬＣで精製し、化合物ａのベンジルエステル体５．３ｍｇを得た。
（ｂ）（ａ）で得られたベンジルエステル体５．３ｍｇにギ酸アンモニウムの飽和メタノール溶液１ｍｌ及び１０％Ｐｄ／Ｃ約１０ｍｇを加え、室温で２時間攪拌した。Ｐｄ／Ｃを濾別し、濾液から減圧下溶媒を留去した後、残渣を２Ｍ酢酸に溶解し、工程２と同様にしてＨＰＬＣで精製し、化合物ａ４．５ｍｇを得た。
質量分析［ＦＡＢＭＳ］；１１２２（Ｍ＋Ｈ）
アミノ酸分析；Ｇｌｙ２．０（２），Ａｓｘ１．７（２），Ｈｉｓ１．０（１），Ｔｈｒ１．０（１），Ａｌａ１．０（１），Ｐｒｏ１．０（１），Ｔｒｐは分析せず
参考例２  化合物ｂの合成
0003821485.tif 000013
工程１：Ｆｍｏｃ−Ａｓｐ−ＯＢｚｌ（ＮＯ2）
Ｆｍｏｃ−Ａｓｐ（Ｏｔ−Ｂｕ）−ＯＨ２．０６ｇ及び炭酸水素ナトリウム０．８４ｇをＤＭＦ２５ｍｌに懸濁させ、これに、ｐ−ニトロベンジルブロミド５．４ｇを加え、室温で１９時間撹拌した。反応液に酢酸エチル２００ｍｌ及び水５００ｍｌを加えて振盪し、有機層を回収した。無水硫酸ナトリウム上で脱水し、濾過後、濾液にシリカゲル（メルク社製キーゼルゲル６０）６０ｍｌを加えて溶媒を留去し、ゲルに反応混合物を吸着させた。これを上記シリカゲル３００ｍｌを詰めたガラス製カラム上に乗せ、ヘキサン／酢酸エチルを溶離液として溶出した。Ｆｍｏｃ−Ａｓｐ（Ｏｔ−Ｂｕ）−ＯＢｚｌ（ＮＯ2）を含む画分を回収し、溶媒を留去して、粉末２．２４ｇを得た。これに、９８％ギ酸３０ｍｌを加え、室温で２時間、次いで３７℃で２時間放置した後、２Ｍ酢酸５０ｍｌを加え、凍結乾燥して、標記化合物１．８６ｇを得た。
質量分析；４９１［Ｍ＋Ｈ］
工程２：Ｈ−Ｇｌｙ−Ａｓｎ（Ｔｒｔ）−Ｔｒｐ−Ｈｉｓ（Ｔｒｔ）−Ｇｌｙ−Ｔｈｒ（ｔ−Ｂｕ）−Ａｌａ−Ｐｒｏ−Ａｓｐ−ＯＢｚｌ（ＮＯ2）（配列番号４）の合成
アミノ酸結合部位としてのクロロ基を８４μｍｏｌ有する担体樹脂（２−クロロトリチルクロライド  レジン）６０ｍｇに、ＤＭＦ０．１ｍｌとＤＣＭ０．５ｍｌの混合溶媒に溶解した工程１で得られるＦｍｏｃ−Ａｓｐ−ＯＢｚｌ（ＮＯ2）３０．９ｍｇ（６３μｍｏｌ）及びＤＩＥＡ９．１μｌを加え、室温で５分間攪拌した。さらに、ＤＩＥＡ１８．３μｌ及びＤＣＭ１８．３μｌを加え、室温で３０分間攪拌した後、メタノール４８μｌを加え、室温で１０分間攪拌した。樹脂を濾取し、ＤＣＭ、ＤＭＦ、イソプロパノール、メタノール、ジエチルエーテルで順次洗浄後、減圧下２時間乾燥し、Ｆｍｏｃ−Ａｓｐ−ＯＢｚｌ（ＮＯ2）がアスパラギン酸のβ−カルボキシル基を介して結合した担体樹脂を得た。この樹脂を出発物質として用い、参考例１の工程１と同様にして、島津製作所の合成プログラムに従い、Ｆｍｏｃ−Ｐｒｏ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｌａ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｔｈｒ（ｔ−Ｂｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｙ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｈｉｓ（Ｔｒｔ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｔｒｐ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｓｎ（Ｔｒｔ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｙ−ＯＨを順次用いて合成を行った。さらに、（ａ）〜（ｃ）の操作を行った後、ＤＣＭで洗浄し、側鎖保護ペプチドの結合した担体樹脂を得た。これに、酢酸（１０％）、トリフルオロエタノール（１０％）及びＤＣＭ（８０％）の混合溶液０．９ｍｌを加えて室温で１時間放置し、樹脂よりペプチドを切り出した。樹脂を濾別後、得られた溶液から減圧下溶媒を留去し、これにエーテル約１０ｍｌを加え、生成した沈殿を遠心分離及びデカンテーションにより回収した。回収した粉末に５ｍｇ／ｍｌの２−メチルインドールを含むＴＦＡ（９０％）、チオアニソール（５％）及び１，２−エタンジチオール（５％）からなる混合溶液３００μｌを加え、室温で２時間放置した。これに、エーテル約１０ｍｌを加え、生成した沈殿を遠心分離及びデカンテーションにより回収し、標記化合物１３９．８ｍｇを粗ペプチドとして得た。
質量分析；１０８９［Ｍ＋Ｈ］
工程３：化合物ｂ
工程２で得られた粗ペプチドのうちの６０ｍｇをＤＭＦ１０ｍｌに溶解し、これに、氷冷下、ＰｙＢＯＰ５７．２ｍｇ、ＨＯＢｔ１４．９ｍｇ及びＮＭＭ１８．２μｌを加え、４℃で２２時間攪拌した。反応溶液を減圧下７ｍｌまで濃縮した後、９０％酢酸水溶液７ｍｌを加えて氷冷した。これに、亜鉛末２５０ｍｇを加え、氷冷したまま１０分間放置後、室温で１時間撹拌した。反応液を濾過し、濾液を減圧下乾固させた後、得られた固形物を参考例１の工程２と同様にしてＨＰＬＣで精製し、化合物ｂ１５．６ｍｇを得た。ただし、逆相カラムはＹＭＣ製カラム（ＹＭＣ−Ｐａｃｋ  ＯＤＳ−ＡＭ  ＳＨ３４３−５  ２０ｍｍＩ．Ｄ．×２５０ｍｍ）を用いた。
質量分析［ＦＡＢＭＳ］；９３６（Ｍ＋Ｈ）
参考例３  化合物ｃ（Ｈ−Ｌｅｕ−Ｇｌｙ−Ｌｙｓ−Ｌｅｕ−Ｓｅｒ−Ｇｌｎ−Ｇｌｕ−Ｌｅｕ−Ｈｉｓ−Ｌｙｓ−Ｌｅｕ−Ｇｌｎ−Ｔｈｒ−Ｔｙｒ−Ｐｒｏ−Ａｒｇ−Ｔｈｒ−Ａｓｎ−Ｔｈｒ−Ｇｌｙ−Ｓｅｒ−Ｇｌｙ−Ｔｈｒ−Ｐｒｏ−ＮＨ2、配列番号５）の合成
Ｆｍｏｃ−ＮＨ４０．８μｍｏｌが結合した担体樹脂（リンク  アミド  ＭＢＨＡ  レジン）８０ｍｇを自動合成機の反応器に入れ、島津製作所の合成プログラムに従い次の操作を行った。
（ａ）担体樹脂をＤＭＦにより３分間洗浄し、該溶液を排出した。
（ｂ）３０％ピペリジン−ＤＭＦ溶液９００μｌを加えて混合物を４分間攪拌し、該溶液を排出し、この操作をもう１回繰り返した。
（ｃ）担体樹脂をＤＭＦで１分間洗浄し、該溶液を排出し、この操作を５回繰り返した。
こうして、Ｆｍｏｃ基を除去したＮＨの結合した担体樹脂を得た。
（ｄ）Ｆｍｏｃ−Ｐｒｏ−ＯＨ３２６．４μｍｏｌ、ＰｙＢＯＰ３２６．４μｍｏｌ、ＨＯＢｔ１水和物３２６．４μｍｏｌ及びＮＭＭ４８９．６μｍｏｌをＤＭＦ１１４２．４μｌ中で３分間攪拌し、得られた溶液を樹脂に加えて混合物を３０分間攪拌し、溶液を排出した。
（ｅ）担体樹脂をＤＭＦで１分間洗浄し、これを５回繰り返した。こうして、Ｆｍｏｃ−Ｐｒｏ−ＮＨが担体上に合成された。
次に、（ａ）〜（ｃ）の洗浄、脱保護工程を行った後、（ｄ）の工程でＦｍｏｃ−Ｔｈｒ（ｔ−Ｂｕ）−ＯＨを用いて縮合反応を行い、次いで（ｅ）の洗浄工程を経て、Ｆｍｏｃ−Ｔｈｒ（ｔ−Ｂｕ）−Ｐｒｏが担体上に合成された。以下、工程（ｄ）において、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｙ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｓｅｒ（ｔ−Ｂｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｙ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｔｈｒ（ｔ−Ｂｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｓｎ（Ｔｒｔ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｔｈｒ（ｔ−Ｂｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｒｇ（Ｐｍｃ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｐｒｏ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｔｙｒ（ｔ−Ｂｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｔｈｒ（ｔ−Ｂｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｎ（Ｔｒｔ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｌｅｕ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｈｉｓ（Ｔｒｔ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｌｅｕ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｕ（Ｏｔ−Ｂｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｎ（Ｔｒｔ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｓｅｒ（ｔ−Ｂｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｌｅｕ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｙ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｌｅｕ−ＯＨを順次用いて、（ａ）〜（ｅ）を繰り返し、保護ペプチドの結合した担体樹脂を得た。さらに、（ａ）〜（ｃ）の洗浄、脱保護工程を行い、メタノール、ブチルエーテルで順次洗浄後、減圧下１２時間乾燥して、側鎖保護ペプチドの結合した担体樹脂２４０ｍｇを得た。このうちの４０ｍｇに、ＴＦＡ（８２．５％）、チオアニソール（５％）、水（５％）、エチルメチルスルフィド（３％）、１，２−エタンジチオール（２．５％）及びチオフェノール（２％）からなる混合溶液２００μｌを加えて室温で８時間放置し、側鎖保護基を除去するとともに樹脂よりペプチドを切り出した。樹脂を濾別後、得られた溶液にエーテル約１０ｍｌを加え、生成した沈澱を遠心分離及びデカンテーションにより回収し、粗ペプチドとして２５．６ｍｇを取得した。この粗生成物を参考例１の工程２と同様にしてＨＰＬＣで精製し、化合物ｃ３．８ｍｇを得た。
質量分析［ＦＡＢＭＳ］；２６２４（Ｍ＋Ｈ）
アミノ酸分析；Ａｓｘ０．９（１），Ｇｌｘ２．９（３），Ｓｅｒ２．０（２），Ｇｌｙ３．２（３），Ｈｉｓ１．０（１），Ａｒｇ１．０（１），Ｔｈｒ３．７（４），Ｐｒｏ１．９（２），Ｔｙｒ０．９（１），Ｌｅｕ４．０（４），Ｌｙｓ１．８（２）
参考例４  化合物ｄ（Ｈ−Ｖａｌ−Ｌｅｕ−Ｇｌｙ−Ｌｙｓ−Ｌｅｕ−Ｓｅｒ−Ｇｌｎ−Ｇｌｕ−Ｌｅｕ−Ｈｉｓ−Ｌｙｓ−Ｌｅｕ−Ｇｌｎ−Ｔｈｒ−Ｔｙｒ−Ｐｒｏ−Ａｒｇ−Ｔｈｒ−Ａｓｎ−Ｔｈｒ−Ｇｌｙ−Ｓｅｒ−Ｇｌｙ−Ｔｈｒ−Ｐｒｏ−ＮＨ2、配列番号６）の合成
Ｆｍｏｃ−Ｖａｌ−ＯＨ８５μｍｏｌ、ＰｙＢＯＰ８５μｍｏｌ、ＨＯＢｔ８５μｍｏｌ及びＮＭＭ１２７．５μｍｏｌをＤＭＦ２９７．５μｌ中で３分間攪拌し、得られた溶液を参考例３で得られたペプチドの結合した樹脂８０ｍｇに加えて混合物を３０分間攪拌し、溶液を排出した。次いで、参考例３の（ａ）、（ｂ）、（ｃ）の操作を行った後、参考例３と同様にして樹脂を洗浄、乾燥し、側鎖保護ペプチドの結合した担体樹脂８１ｍｇを得た。このうちの２７ｍｇを用い、ペプチドの切り出し及びＨＰＬＣによる精製を参考例３と同様にして行い、化合物ｄ２．６ｍｇを得た。
質量分析［ＦＡＢＭＳ］；２７２３（Ｍ＋Ｈ）
アミノ酸分析；Ａｓｘ０．６（１），Ｇｌｘ２．７（３），Ｓｅｒ２．０（２），Ｇｌｙ３．４（３），Ｈｉｓ１．０（１），Ａｒｇ１．１（１），Ｔｈｒ３．３（４），Ｐｒｏ２．２（２），Ｔｙｒ１．１（１），Ｖａｌ１０．９（１），Ｌｅｕ４．０（４），Ｌｙｓ２．０（２），Ｔｒｐは分析せず
参考例５  化合物ｅ（Ｈ−Ｖａｌ−Ｌｅｕ−Ａｌａ−Ａｌａ−Ｌｅｕ−Ａｌａ−Ａｌａ−Ａｌａ−Ｌｅｕ−Ａｌａ−Ａｌａ−Ｌｅｕ−Ａｌａ−Ａｌａ−Ｌｅｕ−Ｐｒｏ−Ａｒｇ−Ｔｈｒ−Ａｓｎ−Ｔｈｒ−Ｇｌｙ−Ｓｅｒ−Ｇｌｙ−Ｔｈｒ−Ｐｒｏ−ＮＨ2、配列番号７）の合成
Ｆｍｏｃ−ＮＨ１４．１μｍｏｌが結合した担体樹脂３０ｍｇを出発物質として用い、参考例３と同様にして、Ｆｍｏｃ−Ｐｒｏ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｔｈｒ（ｔ−Ｂｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｙ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｓｅｒ（ｔ−Ｂｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｙ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｔｈｒ（ｔ−Ｂｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｓｎ（Ｔｒｔ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｔｈｒ（ｔ−Ｂｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｒｇ（Ｐｍｃ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｐｒｏ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｌｅｕ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｌａ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｌａ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｌｅｕ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｌａ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｌａ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｌｅｕ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｌａ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｌａ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｌａ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｌｅｕ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｌａ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｌａ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｌｅｕ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｖａｌ−ＯＨを順次用いて、側鎖保護ペプチドの結合した担体樹脂６８．２ｍｇを得た。このうちの２２．７ｍｇを用い、ペプチドの切り出し及びＨＰＬＣによる精製を参考例３と同様にして行い、化合物ｅ１．１ｍｇを得た。ただし、逆相カラムはＹＭＣ製カラム（ＹＭＣ−Ｐａｃｋ  ＯＤＳ−ＡＭ  ＳＨ３４３−５  ２０ｍｍＩ．Ｄ．×２５０ｍｍ）を用いた。
質量分析［ＦＡＢＭＳ］；２２８９（Ｍ＋Ｈ）
アミノ酸分析；Ａｓｘ１．０（１），Ｓｅｒ１．２（１），Ｇｌｙ２．４（２），Ａｒｇ１．１（１），Ｔｈｒ３．０（３），Ｐｒｏ２．１（２），Ａｌａ８．８（９），Ｖａｌ０．７（１），Ｌｅｕ５．０（５）
参考例６  化合物ｆ（Ｈ−Ｍｅｔ−Ｌｅｕ−Ｇｌｙ−Ｔｈｒ−Ｔｙｒ−Ｔｈｒ−Ｇｌｎ−Ａｓｐ−Ｐｈｅ−Ａｓｎ−Ｌｙｓ−Ｐｈｅ−Ｈｉｓ−Ｔｈｒ−Ｐｈｅ−Ｐｒｏ−Ｇｌｎ−Ｔｈｒ−Ａｌａ−Ｉｌｅ−Ｇｌｙ−Ｖａｌ−Ｇｌｙ−Ａｌａ−Ｐｒｏ−ＮＨ2、配列番号８）の合成
Ｆｍｏｃ−ＮＨ２３．５μｍｏｌが結合した担体樹脂５０ｍｇを出発物質として用い、参考例３と同様にして、Ｆｍｏｃ−Ｐｒｏ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｌａ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｙ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｖａｌ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｙ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｉｌｅ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｌａ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｔｈｒ（ｔ−Ｂｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｎ（Ｔｒｔ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｐｒｏ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｐｈｅ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｔｈｒ（ｔ−Ｂｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｈｉｓ（Ｔｒｔ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｐｈｅ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｓｎ（Ｔｒｔ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｐｈｅ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｓｐ（Ｏｔ−Ｂｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｎ（Ｔｒｔ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｔｈｒ（ｔ−Ｂｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｔｙｒ（ｔ−Ｂｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｔｈｒ（ｔ−Ｂｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｙ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｌｅｕ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｍｅｔ−ＯＨを順次用いて、保護ペプチドの結合した担体樹脂１４１．５ｍｇを得た。このうちの４８ｍｇを用い、ペプチドの切り出し及びＨＰＬＣによる精製を参考例３と同様にして行い、化合物ｆ８．４ｍｇを得た。
質量分析［ＦＡＢＭＳ］；２７３９（Ｍ＋Ｈ）
アミノ酸分析；Ａｓｘ２．０（２），Ｇｌｘ２．０（２），Ｇｌｙ３．２（３），Ｈｉｓ１．０（１），Ｔｈｒ３．９（４），Ａｌａ２．０（２），Ｐｒｏ２．０（２），Ｔｙｒ０．９（１），Ｖａｌ１．０（１），Ｍｅｔ０．９（１），Ｉｌｅ１．０（１），Ｌｅｕ１．０（１），Ｐｈｅ２．８（３），Ｌｙｓ１．０（１）
参考例７  化合物ｇ（Ｈ−Ｇｌｙ−Ｌｅｕ−Ｇｌｙ−Ｓｅｒ−Ｌｅｕ−Ｔｈｒ−Ｇｌｕ−Ｖａｌ−Ｌｅｕ−Ａｌａ−Ｌｙｓ−Ｌｅｕ−Ａｌａ−Ａｌａ−Ｔｙｒ−Ｐｒｏ−Ａｒｇ−Ｔｈｒ−Ａｓｎ−Ｔｈｒ−Ｇｌｙ−Ｓｅｒ−Ｇｌｙ−Ｔｈｒ−Ｐｒｏ−ＮＨ2、配列番号９）の合成
Ｆｍｏｃ−ＮＨ９．４μｍｏｌが結合した担体樹脂２０ｍｇを出発物質として用い、参考例３と同様にして、Ｆｍｏｃ−Ｐｒｏ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｔｈｒ（ｔ−Ｂｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｙ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｓｅｒ（ｔ−Ｂｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｙ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｔｈｒ（ｔ−Ｂｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｓｎ（Ｔｒｔ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｔｈｒ（ｔ−Ｂｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｒｇ（Ｐｍｃ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｐｒｏ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｔｙｒ（ｔ−Ｂｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｌａ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｌａ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｌｅｕ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｌａ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｌｅｕ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｖａｌ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｕ（ｔ−Ｂｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｔｈｒ（ｔ−Ｂｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｌｅｕ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｓｅｒ（ｔ−Ｂｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｙ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｌｅｕ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｙ−ＯＨを順次用いて、保護ペプチドの結合した担体樹脂５１．９ｍｇを得た。このうちの１７．３ｍｇを用い、ペプチドの切り出し及びＨＰＬＣによる精製を参考例３と同様にして行い、化合物ｇ３．６ｍｇを得た。ただし、逆相カラムはＹＭＣ製カラム（ＹＭＣ−Ｐａｃｋ  ＯＤＳ−ＡＭ  ＳＨ３４３−５  ２０ｍｍＩ．Ｄ．×２５０ｍｍ）を用いた。
質量分析［ＦＡＢＭＳ］；２４７１（Ｍ＋Ｈ）
アミノ酸分析；Ａｓｘ０．９（１），Ｇｌｘ１．０（１），Ｓｅｒ１．９（２），Ｇｌｙ３．９（４），Ａｒｇ１．０（１），Ｔｈｒ３．８（４），Ａｌａ２．８（３），Ｐｒｏ１．９（２），Ｔｙｒ０．９（１），Ｖａｌ０．９（１），Ｌｅｕ４．０（４），Ｌｙｓ１．０（１）
参考例８  化合物ｈ（Ｈ−Ｇｌｙ−Ｌｅｕ−Ｇｌｙ−Ｓｅｒ−Ｌｅｕ−Ｔｈｒ−Ｇｌｕ−Ｖａｌ−Ｌｅｕ−Ａｌａ−Ｌｙｓ−Ｌｅｕ−Ａｌａ−Ａｌａ−Ｔｙｒ−Ｐｒｏ−Ａｒｇ−Ｓｅｒ−Ｇｌｎ−Ｔｈｒ−Ｇｌｙ−Ａｌａ−Ｇｌｙ−Ｔｈｒ−Ｐｒｏ−ＮＨ2、配列番号１０）の合成
Ｆｍｏｃ−ＮＨ９．４μｍｏｌが結合した担体樹脂２０ｍｇを出発物質として用い、参考例３と同様にして、Ｆｍｏｃ−Ｐｒｏ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｔｈｒ（ｔ−Ｂｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｙ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｌａ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｙ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｔｈｒ（ｔ−Ｂｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｎ（Ｔｒｔ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｓｅｒ（ｔ−Ｂｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｒｇ（Ｐｍｃ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｐｒｏ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｔｙｒ（ｔ−Ｂｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｌａ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｌａ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｌｅｕ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｌａ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｌｅｕ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｖａｌ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｕ（ｔ−Ｂｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｔｈｒ（ｔ−Ｂｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｌｅｕ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｓｅｒ（ｔ−Ｂｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｙ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｌｅｕ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｙ−ＯＨを順次用いて、保護ペプチドの結合した担体樹脂５２．３ｍｇを得た。このうちの１７．１ｍｇを用い、ペプチドの切り出し及びＨＰＬＣによる精製を参考例３と同様にして行い、化合物ｈ２．４ｍｇを得た。ただし、逆相カラムはＹＭＣ製カラム（ＹＭＣ−Ｐａｃｋ  ＯＤＳ−ＡＭ  ＳＨ３４３−５  ２０ｍｍＩ．Ｄ．×２５０ｍｍ）を用いた。
質量分析［ＦＡＢＭＳ］；２４５６（Ｍ＋Ｈ）
アミノ酸分析；Ｇｌｘ１．９（２），Ｓｅｒ１．９（２），Ｇｌｙ４．０（４），Ａｒｇ１．０（１），Ｔｈｒ２．９（３），Ａｌａ３．９（４），Ｐｒｏ１．９（２），Ｔｙｒ０．９（１），Ｖａｌ０．８（１），Ｌｅｕ４．０（４），Ｌｙｓ１．０（１）
参考例９  化合物ｉ（Ｈ−Ｇｌｙ−Ｌｅｕ−Ｇｌｙ−Ｓｅｒ−Ｌｅｕ−Ｔｈｒ−Ｇｌｕ−Ｖａｌ−Ｌｅｕ−Ａｌａ−Ｌｙｓ−Ｌｅｕ−Ａｌａ−Ａｌａ−Ｔｙｒ−Ｈｙｐ−Ａｒｇ−Ｔｈｒ−Ａｓｎ−Ｔｈｒ−Ｇｌｙ−Ｓｅｒ−Ｇｌｙ−Ｔｈｒ−Ｈｙｐ−ＮＨ2、配列番号１１）の合成
Ｆｍｏｃ−ＮＨ９．４μｍｏｌが結合した担体樹脂２０ｍｇを出発物質として用い、参考例３と同様にして、Ｆｍｏｃ−Ｈｙｐ（ｔ−Ｂｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｔｈｒ（ｔ−Ｂｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｙ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｓｅｒ（ｔ−Ｂｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｙ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｔｈｒ（ｔ−Ｂｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｓｎ（Ｔｒｔ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｔｈｒ（ｔ−Ｂｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｒｇ（Ｐｍｃ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｈｙｐ（ｔ−Ｂｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｔｙｒ（ｔ−Ｂｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｌａ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｌａ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｌｅｕ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｌａ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｌｅｕ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｖａｌ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｕ（ｔ−Ｂｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｔｈｒ（ｔ−Ｂｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｌｅｕ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｓｅｒ（ｔ−Ｂｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｙ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｌｅｕ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｙ−ＯＨを順次用いて、保護ペプチドの結合した担体樹脂５４．７ｍｇを得た。このうちの１８．２ｍｇを用い、ペプチドの切り出し及びＨＰＬＣによる精製を参考例３と同様にして行い、化合物ｊ２．９ｍｇを得た。ただし、逆相カラムはＹＭＣ製カラム（ＹＭＣ−Ｐａｃｋ  ＯＤＳ−ＡＭ  ＳＨ３４３−５  ２０ｍｍＩ．Ｄ．×２５０ｍｍ）を用いた。
質量分析［ＦＡＢＭＳ］；２５０４（Ｍ＋Ｈ）
アミノ酸分析；Ａｓｘ１．０（１），Ｇｌｘ１．０（１），Ｓｅｒ２．０（２），Ｇｌｙ４．１（４），Ａｒｇ１．０（１），Ｔｈｒ３．８（４），Ａｌａ３．０（３），Ｔｙｒ１．０（１），Ｖａｌ０．８（１），Ｌｅｕ４．０（４），Ｌｙｓ０．９（１），Ｈｙｐは分析せず
参考例１０  化合物ｊ（Ｈ−Ｇｌｙ−Ｌｅｕ−Ｇｌｙ−Ｓｅｒ−Ｌｅｕ−Ｔｈｒ−Ｇｌｕ−Ｖａｌ−Ｌｅｕ−Ａｌａ−Ｌｙｓ−Ｌｅｕ−Ａｌａ−Ａｌａ−Ｔｙｒ−Ｐｒｏ−Ａｒｇ−Ｔｈｒ−Ａｓｎ−Ｔｈｒ−β−Ａｌａ−Ｓｅｒ−Ｇｌｙ−Ｔｈｒ−Ｐｒｏ−ＮＨ2、配列番号１２）の合成
Ｆｍｏｃ−ＮＨ９．４μｍｏｌが結合した担体樹脂２０ｍｇを出発物質として用い、参考例３と同様にして、Ｆｍｏｃ−Ｐｒｏ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｔｈｒ（ｔ−Ｂｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｙ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｓｅｒ（ｔ−Ｂｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−β−Ａｌａ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｔｈｒ（ｔ−Ｂｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｓｎ（Ｔｒｔ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｔｈｒ（ｔ−Ｂｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｒｇ（Ｐｍｃ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｐｒｏ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｔｙｒ（ｔ−Ｂｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｌａ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｌａ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｌｅｕ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｌａ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｌｅｕ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｖａｌ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｕ（ｔ−Ｂｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｔｈｒ（ｔ−Ｂｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｌｅｕ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｓｅｒ（ｔ−Ｂｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｙ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｌｅｕ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｙ−ＯＨを順次用いて、保護ペプチドの結合した担体樹脂５５．４ｍｇを得た。このうちの１８．１ｍｇを用い、ペプチドの切り出し及びＨＰＬＣによる精製を参考例３と同様にして行い、化合物ｋ３．９ｍｇを得た。ただし、逆相カラムはＹＭＣ製カラム（ＹＭＣ−Ｐａｃｋ  ＯＤＳ−ＡＭ  ＳＨ３４３−５  ２０ｍｍＩ．Ｄ．×２５０ｍｍ）を用いた。
質量分析［ＦＡＢＭＳ］；２４８６（Ｍ＋Ｈ）
アミノ酸分析；Ａｓｘ０．９（１），Ｇｌｘ１．０（１），Ｓｅｒ１．９（２），Ｇｌｙ３．０（３），β−Ａｌａ１．１（１），Ａｒｇ１．０（１），Ｔｈｒ３．８（４），Ａｌａ２．９（３），Ｐｒｏ２．０（２），Ｔｙｒ０．９（１），Ｖａｌ０．８（１），Ｌｅｕ４．０（４），Ｌｙｓ０．９（１）
参考例  １１
化合物ｋ（Ｈ−Ｇｌｙ−Ｌｅｕ−Ｇｌｙ−Ｓｅｒ−Ｌｅｕ−Ｔｈｒ−Ｇｌｕ−Ｖａｌ−Ｌｅｕ−Ａｌａ−Ｌｙｓ−Ｌｅｕ−Ａｌａ−Ｇｌｕ−Ｔｙｒ−Ｐｒｏ−Ａｒｇ−Ｔｈｒ−Ａｓｎ−Ｔｈｒ−Ｇｌｙ−Ｓｅｒ−Ｇｌｙ−Ｔｈｒ−Ｐｒｏ−ＮＨ2、配列番号１３）の合成
Ｆｍｏｃ−ＮＨ１４．１μｍｏｌが結合した担体樹脂３０ｍｇを用い、参考例３と同様の方法で、Ｆｍｏｃ−Ｐｒｏ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｔｈｒ（ｔ−Ｂｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｙ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｓｅｒ（ｔ−Ｂｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｙ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｔｈｒ（ｔ−Ｂｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｓｎ（Ｔｒｔ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｔｈｒ（ｔ−Ｂｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｒｇ（Ｐｍｃ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｐｒｏ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｔｙｒ（ｔ−Ｂｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｕ（Ｏｔ−Ｂｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｌａ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｌｅｕ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｌａ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｌｅｕ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｖａｌ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｕ（Ｏｔ−Ｂｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｔｈｒ（ｔ−Ｂｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｌｅｕ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｓｅｒ（ｔ−Ｂｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｙ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｌｅｕ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｙ−ＯＨを順次用いて、保護ペプチドの結合した担体樹脂８０．３ｍｇを得た。このうちの２６．８ｍｇを用いペプチドの切り出し及びＨＰＬＣによる精製を参考例３と同様に行い、化合物ｋ３．０ｍｇを得た。ただし逆相カラムはＹＭＣ製カラム（ＹＭＣ−Ｐａｃｋ  ＯＤＳ−ＡＭ  ＳＨ３４３−５  ２０ｍｍＩ．Ｄ．×２５０ｍｍ）を用いた。
質量分析［ＦＡＢＭＳ］：２５３０（Ｍ＋Ｈ）
アミノ酸分析：Ａｓｘ０．８（１），Ｇｌｘ２．０（２），Ｓｅｒ１．９（２），Ｇｌｙ４．３（４），Ａｒｇ１．０（１），Ｔｈｒ３．９（４），Ｐｒｏ２．１（２），Ａｌａ２．１（１），Ｔｙｒ１．０（１），Ｖａｌ０．９（１），Ｌｅｕ４．０（４），Ｌｙｓ１．０（１）
参考例  １２
化合物ｌ（Ｈ−Ｇｌｙ−Ｌｅｕ−Ｇｌｙ−Ｓｅｒ−Ｌｅｕ−Ｔｈｒ−Ｇｌａ−Ｖａｌ−Ｌｅｕ−Ａｌａ−Ｌｙｓ−Ｌｅｕ−Ａｌａ−Ｇｌｕ−Ｔｙｒ−Ｐｒｏ−Ａｒｇ−Ｔｈｒ−Ａｓｎ−Ｔｈｒ−Ｇｌｙ−Ｓｅｒ−Ｇｌｙ−Ｔｈｒ−Ｐｒｏ−ＮＨ2、配列番号１４）の合成
Ｆｍｏｃ−ＮＨ１４．１μｍｏｌが結合した担体樹脂３０ｍｇを用い、参考例３と同様の方法で、Ｆｍｏｃ−Ｐｒｏ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｔｈｒ（ｔ−Ｂｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｙ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｓｅｒ（ｔ−Ｂｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｙ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｔｈｒ（ｔ−Ｂｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｓｎ（Ｔｒｔ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｔｈｒ（ｔ−Ｂｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｒｇ（Ｐｍｃ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｐｒｏ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｔｙｒ（ｔ−Ｂｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｕ（Ｏｔ−Ｂｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｌａ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｌｅｕ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｌａ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｌｅｕ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｖａｌ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌａ（Ｏｔ−Ｂｕ）２−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｔｈｒ（ｔ−Ｂｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｌｅｕ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｓｅｒ（ｔ−Ｂｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｙ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｌｅｕ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｙ−ＯＨを順次用いて、保護ペプチドの結合した担体樹脂８２．１ｍｇを得た。このうちの２７．４ｍｇを用いペプチドの切り出し及びＨＰＬＣによる精製を参考例３と同様に行い、化合物ｌ３．６ｍｇを得た。ただし逆相カラムはＹＭＣ製カラム（ＹＭＣ−Ｐａｃｋ  ＯＤＳ−ＡＭ  ＳＨ３４３−５  ２０ｍｍＩ．Ｄ．×２５０ｍｍ）を用いた。
質量分析［ＦＡＢＭＳ］：２５７４（Ｍ＋Ｈ）
アミノ酸分析：Ａｓｘ０．８（１），Ｇｌｘ２．１（２），Ｓｅｒ２．０（２），Ｇｌｙ４．３（４），Ａｒｇ１．０（１），Ｔｈｒ４．１（４），Ｐｒｏ２．０（２），Ａｌａ２．１（２），Ｔｙｒ１．０（１），Ｖａｌ０．９（１），Ｌｅｕ４．０（４），Ｌｙｓ１．０（１），ＧｌａはＧｌｘとして検出
参考例  １３
化合物ｍ（Ｈ−Ｇｌｙ−Ｌｅｕ−Ｇｌｙ−Ｓｅｒ−Ｌｅｕ−Ｔｈｒ−Ｇｌｕ−Ｖａｌ−Ｌｅｕ−Ａｌａ−Ｌｙｓ−Ｌｅｕ−Ａｌａ−Ｇｌａ−Ｔｙｒ−Ｐｒｏ−Ａｒｇ−Ｔｈｒ−Ａｓｎ−Ｔｈｒ−Ｇｌｙ−Ｓｅｒ−Ｇｌｙ−Ｔｈｒ−Ｐｒｏ−ＮＨ2、配列番号１５）の合成
Ｆｍｏｃ−ＮＨ１４．１μｍｏｌが結合した担体樹脂３０ｍｇを用い、参考例３と同様の方法で、Ｆｍｏｃ−Ｐｒｏ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｔｈｒ（ｔ−Ｂｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｙ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｓｅｒ（ｔ−Ｂｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｙ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｔｈｒ（ｔ−Ｂｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｓｎ（Ｔｒｔ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｔｈｒ（ｔ−Ｂｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｒｇ（Ｐｍｃ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｐｒｏ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｔｙｒ（ｔ−Ｂｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌａ（Ｏｔ−Ｂｕ）２−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｌａ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｌｅｕ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｌａ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｌｅｕ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｖａｌ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｕ（Ｏｔ−Ｂｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｔｈｒ（ｔ−Ｂｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｌｅｕ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｓｅｒ（ｔ−Ｂｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｙ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｌｅｕ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｙ−ＯＨを順次用いて、保護ペプチドの結合した担体樹脂４６．８ｍｇを得た。このうちの１５．６ｍｇを用いペプチドの切り出し及びＨＰＬＣによる精製を参考例３と同様に行い、化合物ｍ０．８ｍｇを得た。ただし逆相カラムはＹＭＣ製カラム（ＹＭＣ−Ｐａｃｋ  ＯＤＳ−ＡＭ  ＳＨ３４３−５  ２０ｍｍＩ．Ｄ．×２５０ｍｍ）を用いた。
質量分析［ＦＡＢＭＳ］：２５７４（Ｍ＋Ｈ）
アミノ酸分析：Ａｓｘ０．９（１），Ｇｌｘ２．１（２），Ｓｅｒ１．８（２），Ｇｌｙ３．９（４），Ａｒｇ１．０（１），Ｔｈｒ３．５（４），Ｐｒｏ１．７（２），Ａｌａ２．１（２），Ｔｙｒ１．０（１），Ｖａｌ０．９（１），Ｌｅｕ４．０（４），Ｌｙｓ０．９（１），ＧｌａはＧｌｘとして検出
参考例  １４
0003821485.tif 000014
カイロンミモトープ社（オーストラリア）製のマルチピンペプチド合成キット（Cleavable Peptide Kit - Diketopiperazine C-Termini）の合成用ピンヘッド４個を参考例３の担体樹脂の代わりに用い、参考例３と同様の方法で、Ｆｍｏｃ−Ｐｒｏ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｔｈｒ（ｔ−Ｂｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｙ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｓｅｒ（ｔ−Ｂｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｙ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｔｈｒ（ｔ−Ｂｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｓｎ（Ｔｒｔ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｔｈｒ（ｔ−Ｂｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｒｇ（Ｐｍｃ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｐｒｏ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｔｙｒ（ｔ−Ｂｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｕ（Ｏｔ−Ｂｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｌａ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｌｅｕ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｌａ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｌｅｕ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｖａｌ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｕ（Ｏｔ−Ｂｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｔｈｒ（ｔ−Ｂｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｌｅｕ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｓｅｒ（ｔ−Ｂｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｙ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｌｅｕ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｙ−ＯＨを順次用いて、保護ペプチドの結合したピンヘッド４個を得た。このうちの２個を用い、参考例３のペプチドの切り出しと同様の操作を行い側鎖保護基の除去を行った。溶液を排出しメタノールで洗浄した後、減圧下乾燥し側鎖保護基の除去されたペプチドの結合したピンヘッドを得た。ここに０．０５ＭのＨＥＰＥＳ緩衝液（ｐＨ８．２）０．５ｍｌを加え、室温で５時間放置することでペプチドをピンヘッドから切り出した。このペプチドを含む溶液を、参考例３と同様にＨＰＬＣにより精製し、化合物ｎ０．２６ｍｇを得た。ただし逆相カラムはＹＭＣ製カラム（ＹＭＣ−Ｐａｃｋ  ＯＤＳ−ＡＭ  ＳＨ３４３−５  ２０ｍｍＩ．Ｄ．×２５０ｍｍ）を用いた。
質量分析［ＦＡＢＭＳ］：２８０９（Ｍ＋Ｈ）
アミノ酸分析：Ａｓｘ０．７（１），Ｇｌｘ１．９（２），Ｓｅｒ１．９（２），Ｇｌｙ４．３（４），Ａｒｇ１．１（１），Ｔｈｒ３．９（４），Ｐｒｏ３．１（３），Ａｌａ２．１（２），Ｔｙｒ１．０（１），Ｖａｌ０．９（１），Ｌｅｕ４．０（４），Ｌｙｓ２．０（２），β−Ａｌａ１．２（１）
参考例  １５
化合物ｏ（Ｈ−Ｇｌｙ−Ｌｅｕ−Ｇｌｙ−Ｓｅｒ−Ｌｅｕ−Ｔｈｒ−Ｇｌｕ−Ｖａｌ−Ｌｅｕ−Ａｌａ−Ｌｙｓ−Ｌｅｕ−Ａｌａ−Ｇｌｕ−Ｔｙｒ−Ｐｒｏ−Ｄ−Ａｒｇ−Ｔｈｒ−Ａｓｎ−Ｔｈｒ−Ｇｌｙ−Ｓｅｒ−Ｇｌｙ−Ｔｈｒ−Ｐｒｏ−ＮＨ2）の合成
Ｆｍｏｃ−ＮＨ１４．１μｍｏｌが結合した担体樹脂３０ｍｇを用い、参考例３と同様の方法で、Ｆｍｏｃ−Ｐｒｏ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｔｈｒ（ｔ−Ｂｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｙ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｓｅｒ（ｔ−Ｂｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｙ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｔｈｒ（ｔ−Ｂｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｓｎ（Ｔｒｔ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｔｈｒ（ｔ−Ｂｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｄ−Ａｒｇ（Ｐｍｃ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｐｒｏ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｔｙｒ（ｔ−Ｂｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｕ（Ｏｔ−Ｂｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｌａ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｌｅｕ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｌａ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｌｅｕ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｖａｌ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｕ（Ｏｔ−Ｂｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｔｈｒ（ｔ−Ｂｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｌｅｕ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｓｅｒ（ｔ−Ｂｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｙ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｌｅｕ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｙ−ＯＨを順次用いて、保護ペプチドの結合した担体樹脂７４．７ｍｇを得た。このうちの２４．９ｍｇを用いペプチドの切り出し及びＨＰＬＣによる精製を参考例３と同様に行い、化合物ｏ２．３ｍｇを得た。
質量分析［ＦＡＢＭＳ］：２５３０（Ｍ＋Ｈ）
アミノ酸分析：Ａｓｘ１．３（１），Ｇｌｘ２．４（２），Ｓｅｒ２．１（２），Ｇｌｙ４．３（４），Ａｒｇ１．１（１），Ｔｈｒ４．４（４），Ｐｒｏ２．２（２），Ａｌａ１．７（２），Ｔｙｒ１．１（１），Ｖａｌ１．１（１），Ｌｅｕ４．１（４），Ｌｙｓ１．２（１）
参考例  １６
化合物ｐ（Ｈ−Ｇｌｙ−Ｌｅｕ−Ｇｌｙ−Ｓｅｒ−Ｌｅｕ−Ｔｈｒ−Ｇｌｕ−Ｖａｌ−Ｌｅｕ−Ａｌａ−Ｌｙｓ−Ｌｅｕ−Ａｌａ−Ｇｌｕ−Ｔｙｒ−Ｐｒｏ−Ｌｙｓ−Ｔｈｒ−Ａｓｎ−Ｔｈｒ−Ｇｌｙ−Ｓｅｒ−Ｇｌｙ−Ｔｈｒ−Ｐｒｏ−ＮＨ2、配列番号１６）の合成
Ｆｍｏｃ−ＮＨ１４．１μｍｏｌが結合した担体樹脂３０ｍｇを用い、参考例３と同様の方法で、Ｆｍｏｃ−Ｐｒｏ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｔｈｒ（ｔ−Ｂｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｙ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｓｅｒ（ｔ−Ｂｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｙ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｔｈｒ（ｔ−Ｂｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｓｎ（Ｔｒｔ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｔｈｒ（ｔ−Ｂｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｐｒｏ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｔｙｒ（ｔ−Ｂｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｕ（Ｏｔ−Ｂｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｌａ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｌｅｕ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｌａ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｌｅｕ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｖａｌ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｕ（Ｏｔ−Ｂｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｔｈｒ（ｔ−Ｂｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｌｅｕ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｓｅｒ（ｔ−Ｂｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｙ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｌｅｕ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｙ−ＯＨを順次用いて、保護ペプチドの結合した担体樹脂６２．５ｍｇを得た。このうちの２０．８ｍｇを用いペプチドの切り出し及びＨＰＬＣによる精製を参考例３と同様に行い、化合物ｐ３．６ｍｇを得た。
質量分析［ＦＡＢＭＳ］：２５０２（Ｍ＋Ｈ）
アミノ酸分析：Ａｓｘ１．２（１），Ｇｌｘ２．４（２），Ｓｅｒ２．１（２），Ｇｌｙ４．３（４），Ｔｈｒ４．４（４），Ｐｒｏ２．２（２），Ａｌａ１．７（２），Ｔｙｒ１．１（１），Ｖａｌ１．１（１），Ｌｅｕ４．１（４），Ｌｙｓ２．４（２）
産業上の利用可能性
本発明により、カルシトニン、カルシトニン部分ペプチドあるいはその類似体に比べ、高い生物学的活性及び／または安定性を有する新規カルシトニン誘導体が提供される。
配列番号：１
配列の長さ：９
配列の型：アミノ酸
鎖の数：一本鎖
トポロジー：直鎖状
配列の種類：ペプチド
配列の特徴：
特徴を表す記号：Modified-site
存在位置：１
特徴を決定した方法：Ｅ
他の情報：存在位置１のXaaはＮα−９−フルオレニルメチルオキシカルボニルグリシンを表す
特徴を表す記号：Modified-site
存在位置：２
特徴を決定した方法：Ｅ
他の情報：存在位置２のXaaはＮγ−トリチル−Ｌ−アスパラギンを表す
特徴を表す記号：Modified-site
存在位置：４
特徴を決定した方法：Ｅ
他の情報：存在位置４のXaaはＮim−トリチル−Ｌ−ヒスチジンを表す
特徴を表す記号：Modified-site
存在位置：６
特徴を決定した方法：Ｅ
他の情報：存在位置６のXaaはＯ−ｔ−ブチル−Ｌ−スレオニンを表す
特徴を表す記号：Modified-site
存在位置：９
特徴を決定した方法：Ｅ
他の情報：存在位置９のXaaはＬ−アスパラギン酸−β−ｔ−ブチルエステルを表す
配列
0003821485.tif 000015
配列番号：２
配列の長さ：１０
配列の型：アミノ酸
鎖の数：一本鎖
トポロジー：直鎖状
配列の種類：ペプチド
配列の特徴：
特徴を表す記号：Modified-site
存在位置：１
特徴を決定した方法：Ｅ
他の情報：存在位置１のXaaはＮα−９−フルオレニルメチルオキシカルボニルグリシンを表す
特徴を表す記号：Modified-site
存在位置：２
特徴を決定した方法：Ｅ
他の情報：存在位置２のXaaはＮγ−トリチル−Ｌ−アスパラギンを表す
特徴を表す記号：Modified-site
存在位置：４
特徴を決定した方法：Ｅ
他の情報：存在位置４のXaaはＮim−トリチル−Ｌ−ヒスチジンを表す
特徴を表す記号：Modified-site
存在位置：６
特徴を決定した方法：Ｅ
他の情報：存在位置６のXaaはＯ−ｔ−ブチル−Ｌ−スレオニンを表す
特徴を表す記号：Modified-site
存在位置：９
特徴を決定した方法：Ｅ
他の情報：存在位置９のXaaはＬ−アスパラギン酸−β−ｔ−ブチルエステルを表す
特徴を表す記号：Modified-site
存在位置：１０
特徴を決定した方法：Ｅ
他の情報：存在位置１０のXaaはＬ−トリプトファンベンジルエステルを表す
配列
0003821485.tif 000016
配列番号：３
配列の長さ：１０
配列の型：アミノ酸
鎖の数：一本鎖
トポロジー：直鎖状
配列の種類：ペプチド
配列の特徴：
特徴を表す記号：Modified-site
存在位置：１０
特徴を決定した方法：Ｅ
他の情報：存在位置１０のXaaはＬ−トリプトファンベンジルエステルを表す
配列
0003821485.tif 000017
配列番号：４
配列の長さ：９
配列の型：アミノ酸
鎖の数：一本鎖
トポロジー：直鎖状
配列の種類：ペプチド
配列の特徴：
特徴を表す記号：Modified-site
存在位置：２
特徴を決定した方法：Ｅ
他の情報：存在位置２のXaaはＮγ−トリチル−Ｌ−アスパラギンを表す
特徴を表す記号：Modified-site
存在位置：４
特徴を決定した方法：Ｅ
他の情報：存在位置４のXaaはＮim−トリチル−Ｌ−ヒスチジンを表す
特徴を表す記号：Modified-site
存在位置：６
特徴を決定した方法：Ｅ
他の情報：存在位置６のXaaはＯ−ｔ−ブチル−Ｌ−スレオニンを表す
特徴を表す記号：Modified-site
存在位置：９
特徴を決定した方法：Ｅ
他の情報：存在位置９のXaaはＬ−アスパラギン酸−ｐ−ニトロベンジルエステルを表す
配列
0003821485.tif 000018
配列番号：５
配列の長さ：２４
配列の型：アミノ酸
鎖の数：一本鎖
トポロジー：直鎖状
配列の種類：ペプチド
配列の特徴：
特徴を表す記号：Modified-site
存在位置：２４
特徴を決定した方法：Ｅ
他の情報：存在位置２４のXaaはＬ−プロリンアミドを表す
配列
0003821485.tif 000019
配列番号：６
配列の長さ：２５
配列の型：アミノ酸
鎖の数：一本鎖
トポロジー：直鎖状
配列の種類：ペプチド
配列の特徴：
特徴を表す記号：Modified-site
存在位置：２５
特徴を決定した方法：Ｅ
他の情報：存在位置２５のXaaはＬ−プロリンアミドを表す
配列
0003821485.tif 000020
配列番号：７
配列の長さ：２５
配列の型：アミノ酸
鎖の数：一本鎖
トポロジー：直鎖状
配列の種類：ペプチド
配列の特徴：
特徴を表す記号：Modified-site
存在位置：２５
特徴を決定した方法：Ｅ
他の情報：存在位置２５のXaaはＬ−プロリンアミドを表す
配列
0003821485.tif 000021
配列番号：８
配列の長さ：２５
配列の型：アミノ酸
鎖の数：一本鎖
トポロジー：直鎖状
配列の種類：ペプチド
配列の特徴：
特徴を表す記号：Modified-site
存在位置：２５
特徴を決定した方法：Ｅ
他の情報：存在位置２５のXaaはＬ−プロリンアミドを表す
配列
0003821485.tif 000022
配列番号：９
配列の長さ：２５
配列の型：アミノ酸
鎖の数：一本鎖
トポロジー：直鎖状
配列の種類：ペプチド
配列の特徴：
特徴を表す記号：Modified-site
存在位置：２５
特徴を決定した方法：Ｅ
他の情報：存在位置２５のXaaはＬ−プロリンアミドを表す
配列
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配列番号：１０
配列の長さ：２５
配列の型：アミノ酸
鎖の数：一本鎖
トポロジー：直鎖状
配列の種類：ペプチド
配列の特徴：
特徴を表す記号：Modified-site
存在位置：２５
特徴を決定した方法：Ｅ
他の情報：存在位置２５のXaaはＬ−プロリンアミドを表す
配列
0003821485.tif 000024
配列番号：１１
配列の長さ：２５
配列の型：アミノ酸
鎖の数：一本鎖
トポロジー：直鎖状
配列の種類：ペプチド
配列の特徴：
特徴を表す記号：Modified-site
存在位置：１６
特徴を決定した方法：Ｅ
他の情報：存在位置１６のXaaはトランス−４−ヒドロキシ−Ｌ−プロリンを表す
特徴を表す記号：Modified-site
存在位置：２５
特徴を決定した方法：Ｅ
他の情報：存在位置２５のXaaはトランス−４−ヒドロキシ−Ｌ−プロリンアミドを表す
配列
0003821485.tif 000025
配列番号：１２
配列の長さ：２５
配列の型：アミノ酸
鎖の数：一本鎖
トポロジー：直鎖状
配列の種類：ペプチド
配列の特徴：
特徴を表す記号：Modified-site
存在位置：２１
特徴を決定した方法：Ｅ
他の情報：存在位置２１のXaaはβ−アラニンを表す
特徴を表す記号：Modified-site
存在位置：２５
特徴を決定した方法：Ｅ
他の情報：存在位置２５のXaaはＬ−プロリンアミドを表す
配列
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配列番号：１３
配列の長さ：２５
配列の型：アミノ酸
鎖の数：一本鎖
トポロジー：直鎖状
配列の種類：ペプチド
配列の特徴
特徴を表す記号：Modified-site
存在位置：２５
特徴を決定した方法：Ｅ
他の情報：存在位置２５のＸａａはＬ−プロリンアミドを表す
配列
0003821485.tif 000027
配列番号：１４
配列の長さ：２５
配列の型：アミノ酸
鎖の数：一本鎖
トポロジー：直鎖状
配列の種類：ペプチド
配列の特徴
特徴を表す記号：Modified-site
存在位置：７
特徴を決定した方法：Ｅ
他の情報：存在位置７のＸａａはγ−カルボキシ−Ｌ−グルタミン酸を表す
特徴を表す記号：Modified-site
存在位置：２５
特徴を決定した方法：Ｅ
他の情報：存在位置２５のＸａａはＬ−プロリンアミドを表す
配列
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配列番号：１５
配列の長さ：２５
配列の型：アミノ酸
鎖の数：一本鎖
トポロジー：直鎖状
配列の種類：ペプチド
配列の特徴
特徴を表す記号：Modified-site
存在位置：１４
特徴を決定した方法：Ｅ
他の情報：存在位置１４のＸａａはγ−カルボキシ−Ｌ−グルタミン酸を表す
特徴を表す記号：Modified-site
存在位置：２５
特徴を決定した方法：Ｅ
他の情報：存在位置２５のＸａａはＬ−プロリンアミドを表す
配列
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配列番号：１６
配列の長さ：２５
配列の型：アミノ酸
鎖の数：一本鎖
トポロジー：直鎖状
配列の種類：ペプチド
配列の特徴
特徴を表す記号：Modified-site
存在位置：２５
特徴を決定した方法：Ｅ
他の情報：存在位置２５のＸａａはＬ−プロリンアミドを表す
配列
0003821485.tif 000030
【図１】
0003821485.tif 000033
【図２】
0003821485.tif 000034