(57)【要約】  下記式（Ｉ）で表される化合物を有効成分として含む、腎臓病に用いられる薬剤。2019181388.tif 000046
2019181388.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
下記式（Ｉ）で表される化合物を有効成分として含む、腎臓病に用いられる薬剤。
【化１】
2019181388.tif 000038
式（Ｉ）中、Ｌは、炭素数４〜１０の脂肪族炭化水素基を表し、Ｘは、ヒドロキシ基又はカルボキシ基を表し、ｎは、０〜２の整数を表し、Ｒは、水素原子又は分子量１０００以下の置換基を表す。
【請求項２】
前記式（Ｉ）で表される化合物が、下記式（ＩＡ）で表される化合物である、請求項１に記載の薬剤。
【化２】
2019181388.tif 000039
式（ＩＡ）中、Ｘは−ＣＨＹ−Ｃ（ＣＨ３）２Ｚであり、Ｙ及びＺはそれぞれ独立に、−Ｈ若しくは−ＯＨであるか、又は一緒になって単結合を形成し、Ｒは、水素原子又は分子量１０００以下の置換基を表す。
【請求項３】
前記式（Ｉ）で表される化合物が、下記式（ＩＩ）又は式（ＩＩＩ）で表される化合物である請求項１又は請求項２に記載の薬剤。
【化３】
2019181388.tif 000040
式（ＩＩ）又は式（ＩＩＩ）中、Ｘ１、Ｘ２及びＸ３はそれぞれ独立に、−ＣＨＹ−Ｃ（ＣＨ３）２Ｚであり、Ｙ及びＺはそれぞれ独立に、−Ｈ若しくは−ＯＨであるか、又は一緒になって単結合を形成し、Ｒ１は、下記（Ａ）から（Ｄ）のいずれか１つを表す。
（Ａ）天然アミノ酸、天然アミノ酸のＤ体、並びに天然アミノ酸及び天然アミノ酸のＤ体において少なくとも１つのカルボキシ基を水素原子、ヒドロキシ基又はヒドロキシメチル基に置き換えた化合物からなる群より選択されるアミノ化合物から、１個のアミノ基を除いた残基（ただし、−（ＣＨ）２−ＯＨは除く）、
（Ｂ）カルボキシ基、水酸基、スルホン酸基及び第二アミノ基からなる群より選択される少なくとも１つを置換基として若しくは置換基の一部として有する芳香族基、又は第二アミノ基を含み且つ窒素原子を含んでいてもよい芳香族基、
（Ｃ）下記式（ＩＩ−１）で表される芳香族アミノ酸残基（式中、Ｒ３はそれぞれ独立に、あってもなくてもよい置換基であって、存在する場合は、水酸基、カルボキシ基又は炭素数１〜５のアルキル基を表し、ｎは０又は１の整数を表し、ｍは０〜５の整数を表し、＊は結合部位を表す。）、
【化４】
2019181388.tif 000041
（Ｄ）−Ｌ１−Ｌ２−Ｒ４で表される置換基（式中、Ｌ１はカルボキシ基を有する炭素数１〜４のアルキレン基である連結基を表し、Ｌ２は−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−又は−ＮＨ−Ｃ（＝Ｓ）−ＮＨ−で示される連結基を表し、Ｒ４は炭素数１〜３のアルキルオキシ基を有する９−フルオレニルアルキルオキシ基又は下記式（ＩＩ−２）で表される多複素環基（式（ＩＩ−２）中、＊は結合部位を表す。）を表す。）。
【化５】
2019181388.tif 000042
Ｒ２は、２個のアミノ基を有する天然アミノ酸、２個のアミノ基を有する天然アミノ酸のＤ体、２個のアミノ基を有する天然アミノ酸及び２個のアミノ基を有する天然アミノ酸のＤ体において少なくとも１つのカルボキシ基を水素原子、ヒドロキシ基又はヒドロキシメチル基に置き換えた化合物、Ｈ２Ｎ−ＣＨ（ＣＯＯＨ）−（ＣＨ２）ｎ−ＮＨ２（ｎは０〜９の整数）、並びにＨ２Ｎ−ＣＨ（ＣＯＯＨ）−（ＣＨ２）ｍ−Ｓｐ−（ＣＨ２）ｑ−ＣＨ（ＣＯＯＨ）−ＮＨ２（ｍ、ｐ及びｑはそれぞれ独立に０〜９の整数）で示される化合物からなる群より選択されるアミノ化合物から、２個のアミノ基を除いた残基を表す。
【請求項４】
前記式（Ｉ）で表される化合物が、下記ＳＭＴＰ−０、下記ＳＭＴＰ−１、下記ＳＭＴＰ−４、下記ＳＭＴＰ−５Ｄ、下記ＳＭＴＰ−６、下記ＳＭＴＰ−７、下記ＳＭＴＰ−８、下記ＳＭＴＰ−１１〜１４、下記ＳＭＴＰ−１８〜２９、下記ＳＭＴＰ−３６、下記ＳＭＴＰ−３７、下記ＳＭＴＰ−４２、下記ＳＭＴＰ−４３、下記ＳＭＴＰ−４３Ｄ、下記ＳＭＴＰ−４４、下記ＳＭＴＰ−４４Ｄ、下記ＳＭＴＰ−４６及び下記ＳＭＴＰ−４７よりなる群から選択される少なくとも１つを含む、請求項１〜請求項３のいずれか１項に記載の薬剤。
【化６】
2019181388.tif 000043
【化７】
2019181388.tif 000044
式中、＊は結合部位を表す。
【請求項５】
前記式（Ｉ）で表される化合物が、前記ＳＭＴＰ−７を含む、請求項４に記載の薬剤。
【請求項６】
前記腎臓病が慢性腎臓病である請求項１〜請求項５のいずれか１項に記載の薬剤。
【請求項７】
前記腎臓病が急性腎臓病である請求項１〜請求項５のいずれか１項に記載の薬剤。
【請求項８】
前記急性腎臓病がシスプラチン腎症である請求項７に記載の薬剤。
【請求項９】
腎臓病の治療又は予防に有効な量の請求項１〜請求項８のいずれか１項に記載の薬剤を、腎臓病を有する又は腎臓病を発症するリスクを有する対象に投与することを含む、前記対象における腎臓病を治療又は予防する方法。
【請求項１０】
腎臓病を治療又は予防するための、請求項１〜請求項８のいずれか１項に記載の薬剤。
【請求項１１】
腎臓病を治療又は予防するための、請求項１〜請求項８のいずれか１項に記載の薬剤を製造するための、前記式（Ｉ）で表される化合物の使用。
【請求項１２】
腎臓病の治療又は予防における、下記式（Ｉ）で表される化合物の使用。
【化８】
2019181388.tif 000045
式（Ｉ）中、Ｌは炭素数４〜１０の脂肪族炭化水素基を表し、Ｘはヒドロキシ基又はカルボキシ基を表し、ｎは０〜２の整数を表し、Ｒは、水素原子又は分子量１０００以下の置換基を表す。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、薬剤及び該薬剤を用いて腎臓病を治療又は予防する方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
腎臓は、尿生成を通じて、体液の恒常性の維持、尿素などのタンパク質代謝物の排出、内分泌と代謝調節など、生物にとって重要な機能を有している。
腎臓病は、腎臓における腎機能の低下をきたす病態の総称であり、急性腎臓病と慢性腎臓病に大きく分けられ、いずれも進行すると腎不全に至る。腎不全は腎臓機能の７０％以上が失われた状態であり、さらに症状が進行した末期腎不全では機能の９０％以上が失われ、透析・移植が必要となる。急性腎臓病には急性腎不全及びシスプラチン腎症が、慢性腎臓病には慢性腎不全がそれぞれ含まれる。
腎不全の症状の病期分類及び臨床症状については、日本内科学会雑誌／８７巻（１９９８）、７号、１２３４−１２４０頁の記載を参照できる。【０００３】
一方、ＳＭＴＰ（Stachybotrys microspora triprenyl phenol）化合物は、糸状菌が生産するトリプレニルフェノール骨格を有する化合物の一群であり、特開２００４−２２４７３７号公報、特開２００４−２２４７３８号公報、及び国際公開第２００７／１１１２０３号によれば、血栓溶解促進作用や血管新生阻害作用を有することが知られている。血栓溶解促進作用に関しては、FEBS Letter 1997;418:58-62によれば、ＳＭＴＰ化合物がプラスミノーゲンのコンフォメーション変化を導き、その結果、プラスミノーゲンのｔ−ＰＡに対する感受性と、プラスミノーゲンの血栓などへの結合を増加させ、血栓の溶解を促進する作用機序が示唆されている。さらに、J Biol Chem 2014;289:35826-35838によれば、ＳＭＴＰ化合物は優れた抗炎症作用をもつことも示されている。
また、国際公開第２００７／０４００８２号には、上記ＳＭＴＰ化合物を有効成分とする腎炎治療用組成物が記載されている。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００４】
本発明者らは、式（Ｉ）で表される化合物が、腎臓病の治療又は予防に対する効果を有していることを見出した。
上記化合物が腎臓病に対して治療効果又は予防効果を奏するメカニズムとしては定かではないが、以下のように推測している。
腎臓病の発症機序の詳細は不明であるが、酸化ストレスや炎症もその一因となることが示唆されている。上記化合物は、抗酸化作用を有することが確認されていることから、腎臓病に対する作用も抗炎症作用と抗酸化作用のコンビネーションに基づくものと推察される。【０００５】
特開２００４−２２４７３７号公報、特開２００４−２２４７３８号公報、国際公開第２００７／１１１２０３号及びＦＥＢＳ Ｌｅｔｔｅｒ １９９７;４１８:５８−６２、Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ ２０１４;２８９:３５８２６−３５８３８には、式（Ｉ）で表される化合物の腎臓病に対する効果についての詳細については記載も示唆もない。
また国際公開第２００７／０４００８２号には、式（Ｉ）で表される化合物による線溶反応促進作用の結果、抗腎基底膜抗体自体又は抗腎基底膜抗体に対する宿主の免疫複合体を分解する過程が促進される、あるいは、局所的な組織のタンパク質分解が促進されることにより、腎炎が予防又は治療されることが記載されている。しかし、国際公開第２００７／０４００８２号には、上述の抗炎症作用と抗酸化作用のコンビネーションによる腎臓病に対する作用については、記載も示唆もない。【０００６】
本開示に係る一実施形態により解決される課題は、腎臓病に対する治療又は予防効果に優れた薬剤、及び、式（Ｉ）で表される化合物の医薬としての新規用途を提供することである。
また、本開示に係る別の一実施形態により解決される課題は、式（Ｉ）で表される化合物を有効成分として含む薬剤を、腎臓病を有する又は腎臓病を発症するリスクを有する対象に投与することを含む、前記対象における腎臓病を治療又は予防する方法を提供することである。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
上記課題を解決するための手段には、以下の態様が含まれる。
＜１＞  下記式（Ｉ）で表される化合物を有効成分として含む、腎臓病に用いられる薬剤。【０００８】
【化１】
2019181388.tif 000003
【０００９】
式（Ｉ）中、Ｌは炭素数４〜１０の脂肪族炭化水素基を表し、Ｘはヒドロキシ基又はカルボキシ基を表し、ｎは０〜２の整数を表し、Ｒは、水素原子又は分子量１０００以下の置換基を表す。
＜２＞前記式（Ｉ）で表される化合物が、下記式（ＩＡ）で表される化合物である、前記＜１＞に記載の薬剤。【００１０】
【化２】
2019181388.tif 000004
【００１１】
式（ＩＡ）中、Ｘは−ＣＨＹ−Ｃ（ＣＨ３）２Ｚであり、Ｙ及びＺはそれぞれ独立に、−Ｈ若しくは−ＯＨであるか、又は一緒になって単結合を形成し、Ｒは、水素原子又は分子量１０００以下の置換基を表す。
＜３＞  前記式（Ｉ）で表される化合物が、下記式（ＩＩ）又は式（ＩＩＩ）で表される化合物である前記＜１＞又は＜２＞に記載の薬剤。【００１２】
【化３】
2019181388.tif 000005
【００１３】
式（ＩＩ）又は式（ＩＩＩ）中、Ｘ１、Ｘ２及びＸ３はそれぞれ独立に、−ＣＨＹ−Ｃ（ＣＨ３）２Ｚであり、Ｙ及びＺはそれぞれ独立に、−Ｈ若しくは−ＯＨであるか、又は一緒になって単結合を形成し、Ｒ１は、下記（Ａ）から（Ｄ）のいずれか１つを表す。
（Ａ）天然アミノ酸、天然アミノ酸のＤ体、並びに天然アミノ酸及び天然アミノ酸のＤ体において少なくとも１つのカルボキシ基を水素原子、ヒドロキシ基又はヒドロキシメチル基に置き換えた化合物からなる群より選択されるアミノ化合物から、１個のアミノ基を除いた残基（ただし、−（ＣＨ）２−ＯＨは除く）、
（Ｂ）カルボキシ基、水酸基、スルホン酸基及び第二アミノ基からなる群より選択される少なくとも１つを置換基として若しくは置換基の一部として有する芳香族基、又は第二アミノ基を含み且つ窒素原子を含んでいてもよい芳香族基、
（Ｃ）下記式（ＩＩ−１）で表される芳香族アミノ酸残基（式中、Ｒ３はそれぞれ独立に、あってもなくてもよい置換基であって、存在する場合は、水酸基、カルボキシ基又は炭素数１〜５のアルキル基を表し、ｎは０又は１の整数を表し、ｍは０〜５の整数を表し、＊は結合部位を表す。）、【００１４】
【化４】
2019181388.tif 000006
【００１５】
（Ｄ）−Ｌ１−Ｌ２−Ｒ４で表される置換基（式中、Ｌ１はカルボキシ基を有する炭素数１〜４のアルキレン基である連結基を表し、Ｌ２は−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−又は−ＮＨ−Ｃ（＝Ｓ）−ＮＨ−で示される連結基を表し、Ｒ４は炭素数１〜３のアルキルオキシ基を有する９−フルオレニルアルキルオキシ基又は下記式（ＩＩ−２）で表される多複素環基（式（ＩＩ−２）中、＊は結合部位を表す。）を表す。）。【００１６】
【化５】
2019181388.tif 000007
【００１７】
Ｒ２は、２個のアミノ基を有する天然アミノ酸、２個のアミノ基を有する天然アミノ酸のＤ体、２個のアミノ基を有する天然アミノ酸及び２個のアミノ基を有する天然アミノ酸のＤ体において少なくとも１つのカルボキシ基を水素原子、ヒドロキシ基又はヒドロキシメチル基に置き換えた化合物、Ｈ２Ｎ−ＣＨ（ＣＯＯＨ）−（ＣＨ２）ｎ−ＮＨ２（ｎは０〜９の整数）、並びにＨ２Ｎ−ＣＨ（ＣＯＯＨ）−（ＣＨ２）ｍ−Ｓｐ−（ＣＨ２）ｑ−ＣＨ（ＣＯＯＨ）−ＮＨ２（ｍ、ｐ及びｑはそれぞれ独立に０〜９の整数）で示される化合物からなる群より選択されるアミノ化合物から、２個のアミノ基を除いた残基を表す。
＜４＞  前記式（Ｉ）で表される化合物が、下記ＳＭＴＰ−０、下記ＳＭＴＰ−１、下記ＳＭＴＰ−４、下記ＳＭＴＰ−５Ｄ、下記ＳＭＴＰ−６、下記ＳＭＴＰ−７、下記ＳＭＴＰ−８、下記ＳＭＴＰ−１１〜１４、下記ＳＭＴＰ−１８〜２９、下記ＳＭＴＰ−３６、下記ＳＭＴＰ−３７、下記ＳＭＴＰ−４２、下記ＳＭＴＰ−４３、下記ＳＭＴＰ−４３Ｄ、下記ＳＭＴＰ−４４、下記ＳＭＴＰ−４４Ｄ、下記ＳＭＴＰ−４６及び下記ＳＭＴＰ−４７よりなる群から選択される少なくとも１つを含む、前記＜１＞〜＜３＞のいずれか１つに記載の薬剤。【００１８】
【化６】
2019181388.tif 000008
【００１９】
【化７】
2019181388.tif 000009
【００２０】
式中、＊は結合部位を表す。
＜５＞  前記式（Ｉ）で表される化合物が、前記ＳＭＴＰ−７を含む、前記＜４＞に記載の薬剤。
＜６＞  前記腎臓病が慢性腎臓病である前記＜１＞〜＜５＞のいずれか１つに記載の薬剤。
＜７＞  前記腎臓病が急性腎臓病である前記＜１＞〜＜５＞のいずれか１つに記載の薬剤。
＜８＞  前記急性腎臓病がシスプラチン腎症である前記＜７＞に記載の薬剤。
＜９＞  腎臓病の治療又は予防に有効な量の前記＜１＞〜＜８＞のいずれか１つに記載の薬剤を、腎臓病を有する又は腎臓病を発症するリスクを有する対象に投与することを含む、前記対象における腎臓病を治療又は予防する方法。
＜１０＞  腎臓病を治療又は予防するための、前記＜１＞〜＜８＞のいずれか１つに記載の薬剤。
＜１１＞  腎臓病を治療又は予防するための、前記＜１＞〜＜８＞のいずれか１つに記載の薬剤を製造するための、前記式（Ｉ）で表される化合物の使用。
＜１２＞  腎臓病の治療又は予防における、下記式（Ｉ）で表される化合物の使用。【００２１】
【化８】
2019181388.tif 000010
【００２２】
式（Ｉ）中、Ｌは炭素数４〜１０の脂肪族炭化水素基を表し、Ｘはヒドロキシ基又はカルボキシ基を表し、ｎは０〜２の整数を表し、Ｒは、水素原子又は分子量１０００以下の置換基を表す。
【発明の効果】
【００２３】
本開示に係る一実施形態によれば、腎臓病に対する治療又は予防効果に優れた薬剤、並びに式（Ｉ）で表される化合物の医薬としての新規用途を提供することができる。
また、本開示に係る別の一実施形態によれば、式（Ｉ）で表される化合物を有効成分として含む薬剤を、腎臓病を有する又は腎臓病を発症するリスクを有する対象に投与することを含む、前記対象における腎臓病を治療又は予防する方法を提供することができる。
【図面の簡単な説明】
【００２４】
【図１】急性腎臓病（シスプラチン腎症）モデル動物を用いた試験における、Ｓｈａｍ群におけるＨＥ染色の結果を示す図である。
【図２】急性腎臓病（シスプラチン腎症）モデル動物を用いた試験における、Ｃｏｎｔｒｏｌ群におけるＨＥ染色の結果を示す図である。
【図３】急性腎臓病（シスプラチン腎症）モデル動物を用いた試験における、シスプラチン投与１日後にＳＭＴＰ−７を１０ｍｇ／ｋｇで投与した群におけるＨＥ染色の結果を示す図である。
【発明を実施するための形態】
【００２５】
以下において、本開示の内容について詳細に説明する。以下に記載する構成要件の説明は、本開示の代表的な実施態様に基づいてなされることがあるが、本開示はそのような実施態様に限定されるものではない。
本開示中に段階的に記載されている数値範囲において、１つの数値範囲で記載された上限値又は下限値は、他の段階的な記載の数値範囲の上限値又は下限値に置き換えてもよい。また、本開示中に記載されている数値範囲において、その数値範囲の上限値又は下限値は、実施例に示されている値に置き換えてもよい。
更に、本開示において薬剤等の組成物中の各成分の量は、組成物中に各成分に該当する物質が複数存在する場合、特に断らない限り、組成物中に存在する該当する複数の物質の合計量を意味する。
また、本明細書における基（原子団）の表記において、置換及び無置換を記していない表記は、置換基を有さないものと共に置換基を有するものをも包含するものである。
また、本明細書中の「工程」の用語は、独立した工程だけではなく、他の工程と明確に区別できない場合であっても、その工程の所期の目的が達成されれば本用語に含まれる。  また、本開示において、「質量％」と「重量％」とは同義であり、「質量部」と「重量部」とは同義である。
更に、本開示において、２以上の好ましい態様の組み合わせは、より好ましい態様である。
以下、本開示を詳細に説明する。
【００２６】
（薬剤）
本開示に係る薬剤は、上記式（Ｉ）で表される化合物を有効成分として含む、腎臓病に用いられる薬剤である。
【００２７】
＜式（Ｉ）で表される化合物＞
本開示に係る薬剤は、式（Ｉ）で表される化合物を含有する。
【００２８】
【化９】
2019181388.tif 000011
式（Ｉ）中、Ｌは炭素数４〜１０の脂肪族炭化水素基を表し、Ｘはヒドロキシ基又はカルボキシ基を表し、ｎは０〜２の整数を表し、Ｒは、水素原子又は分子量１０００以下の置換基を表す。
【００２９】
Ｌで示される炭素数４〜１０の脂肪族炭化水素基は、直鎖状、分岐鎖状及び環状のいずれであってもよい。また不飽和結合を含んでいてもよい。中でも直鎖状又は分岐鎖状の不飽和結合を含んでもよい脂肪族炭化水素基であることが好ましい。
式（Ｉ）において、−Ｌ−Ｘｎで表される基は、下記式（Ｖ）、化学式（Ｙ１）〜（Ｙ４）のいずれかで表されることが好ましい。
【００３０】
【化１０】
2019181388.tif 000012
【００３１】
式（Ｖ）中、Ｚ１及びＺ２はそれぞれ独立して、水素原子若しくはヒドロキシ基であるか、又は一緒になって単結合を形成する。なお、化学式中の「＊」は結合位置を示す。
【００３２】
式（Ｉ）のＲにおける分子量１，０００以下の置換基としては、後述する虚血に起因する腎機能不全を抑制する観点からは、分子量８００以下の置換基が好ましく、分子量７００以下の置換基がより好ましく、分子量６００以下の置換基が更に好ましい。
式（Ｉ）のＲとしては、α−アミノ酸が挙げられる。α−アミノ酸は特に制限されず、天然アミノ酸であっても、非天然アミノ酸であってもよい。また天然アミノ酸に置換基が導入されたアミノ酸誘導体であってもよい。さらにα−アミノ酸が２以上のアミノ基を有する場合、いずれのアミノ基が取り除かれてもよい。
中でもα−アミノ酸は、天然アミノ酸、天然アミノ酸のＤ体、又は、ヒドロキシ基、カルボキシ基及び炭素数１〜５のアルキル基からなる群より選ばれる少なくとも１種の置換基を有してもよいフェニルアラニン若しくはフェニルグリシンであることが好ましく、天然アミノ酸、天然アミノ酸のＤ体、又は、ヒドロキシ基、カルボキシ基及び炭素数１〜５のアルキル基からなる群より選ばれる少なくとも１種の置換基を有してもよいフェニルグリシンであることがより好ましい。
【００３３】
天然アミノ酸は、天然に存在し得るアミノ酸であれば特に制限されない。例えば、グリシン、アラニン、スレオニン、バリン、イソロイシン、チロシン、システイン、シスチン、メチオニン、ヒスチジン、アスパラギン酸、グルタミン酸、アスパラギン、グルタミン、アルギニン、リシン、ヒドロキシリシン、オルニチン、シトルリン、ホモシステイン、３，４−ジヒドロキシフェニルアラニン、ホモシスチン、ジアミノピメリン酸、ジアミノプロピオン酸、セリン、ロイシン、フェニルアラニン、トリプトファン等が挙げられる。
【００３４】
天然アミノ酸に置換基が導入されたアミノ酸誘導体における置換基としては、例えば、ニトロ基、ヒドロキシ基、炭素数７〜１６のアリールアルキル基、ウレイド基、チオウレイド基、カルボキシ基、フルオレサミンから水素原子を１つ取り除いて構成される基等が挙げられる。前記アミノ酸誘導体における置換基は可能な場合にはさらに置換基を有していてもよい。置換基が有する置換基はアミノ酸誘導体における置換基と同様である。
【００３５】
式（Ｉ）のＲにおけるアミノ糖は、アミノ基を少なくとも１つ有する糖誘導体であれば特に制限されない。具体的には例えば、グルコサミン、ガラクトサミン、マンノサミン、ノイラミン酸等を挙げることができる。
【００３６】
式（Ｉ）のＲにおける複素環基としては、ヘテロ原子を含む環状基であれば特に制限されず、脂肪族複素環基及び芳香族複素環基のいずれであってもよい。またヘテロ原子としては窒素原子、酸素原子、硫黄原子等を挙げることができる。
中でも、ヘテロ原子として窒素原子を含む含窒素複素環基であることが好ましく、プリン、ピリジン、ピリダジン、ピロール、イミダゾール、ピラゾール、及びピラゾロンからなる群より選ばれる複素環化合物から水素原子を一つ取り除いて構成される複素環基であることがより好ましく、プリン、ピリジン、及びピラゾロンからなる群より選ばれる複素環化合物から水素原子を一つ取り除いて構成される複素環基であることがさらに好ましい。なお、複素環化合物から水素原子を取り除く位置は特に制限されない。中でも複素環化合物の炭素原子上から取り除かれることが好ましい。
【００３７】
Ｒにおける複素環基は置換基を有していてもよい。複素環基における置換基としては、例えば、炭素数１〜５のアルキル基、炭素数１４以下のアリール基、カルボキシ基、カルバモイル基、スルホン酸基等を挙げることができる。中でもフェニル基及びカルバモイル基から選ばれる少なくとも１種であることが好ましい。
複素環基における置換基の数は特に制限されないが、３以下であることが好ましい。
【００３８】
式（Ｉ）のＲにおける炭素数２〜８のアルキル基としては、直鎖状、分岐鎖状及び環状のいずれであってもよい。なかでも直鎖状又は分岐鎖状であることが好ましく、直鎖状であることがより好ましい。また炭素数は２〜６であることが好ましい。なお、アルキル基の炭素数にはアルキル基上の置換基の炭素数は含まれない。
【００３９】
Ｒにおけるアルキル基は置換基を有していてもよい。アルキル基における置換基としては、炭素数１〜５のアルキル基、炭素数１４以下のアリール基、炭素数１６以下のアリールアルキル基、ヒドロキシ基、カルボキシ基、カルバモイル基、スルホン酸基、アミノ基、カルバモイルオキシ基、ウレイド基、チオウレイド基、アルキルスルフィド基、アルキルジスルフィド基、式（Ｉ）で表される化合物からＲを取り除いて構成される基、フルオレサミンから水素原子を１つ取り除いて構成される基等を挙げることができる。中でも、ヒドロキシ基、カルボキシ基、アミノ基、カルバモイルオキシ基、炭素数７〜１４のアリールアルキル基、チオウレイド基、式（Ｉ）で表される化合物からＲを取り除いて構成される基、及びフルオレサミンから水素原子を１つ取り除いて構成される基からなる群より選ばれる少なくとも１種であることが好ましい。
【００４０】
アルキル基における置換基の数は特に制限されないが、３以下であることが好ましい。
またアルキル基における置換基は可能な場合にはさらに置換基を有していてもよい。置換基が有する置換基はアルキル基における置換基と同様である。
【００４１】
式（Ｉ）のＲにおけるアリール基は、炭素数６〜１４のアリール基であることが好ましく、炭素数６〜１０のアリール基であることがより好ましく、フェニル基であることがさらに好ましい。
【００４２】
Ｒにおけるアリール基は置換基を有していてもよい。アリール基における置換基としては、炭素数１〜５のアルキル基、炭素数１４以下のアリール基、ヒドロキシ基、カルボキシ基、スルホン酸基、カルバモイル基、アリールカルボニル基等を挙げることができる。中でも、ヒドロキシ基、カルボキシ基、スルホン酸基、カルバモイル基及びアリールカルボニル基からなる群より選ばれる少なくとも１種であることが好ましい。
【００４３】
アリール基における置換基の数は特に制限されないが、３以下であることが好ましい。
またアリール基における置換基は可能な場合にはさらに置換基を有していてもよい。置換基が有する置換基はアリール基における置換基と同様である。さらにアリール基における置換基は可能な場合には、置換基同士が結合して環状構造を形成してもよい。
【００４４】
〔式（Ｉ）で表される化合物の製造方法〕
本開示に用いられる式（Ｉ）で表される化合物は、化学合成によって得たものでもよく、糸状菌、例えば、スタキボトリス・ミクロスポラ（Stachybotrys microspora）の培養物から精製して得たものでもよい。式（Ｉ）で表される化合物を糸状菌の培養物から精製して得る方法として、例えば、スタキボトリス・ミクロスポラの培養液に所定の添加有機アミノ化合物を添加したときに得られた培養物から目的の化合物を精製することを含む方法が挙げられる。これらの方法は、例えば、特開２００４−２２４７３７号公報、特開２００４−２２４７３８号公報、及び国際公開第２００７／１１１２０３号等に記載されている。
【００４５】
本開示に用いられる式（Ｉ）で表される化合物は、鏡像異性体、ジアステレオマー、及び鏡像異性体どうし又はジアステレオマーどうしの混合物でもよい。鏡像異性体、ジアステレオマー、及び鏡像異性体どうし又はジアステレオマーどうしの混合物は、化学合成によって得たものでもよく、糸状菌の培養物から精製して得たものでもよい。糸状菌の培養物から精製して得る場合には、糸状菌の培地に添加する添加有機アミノ化合物のＤ体又はＬ体を用いることで、それぞれに対応した異性体を得ることができる。
【００４６】
＜式（ＩＡ）で表される化合物＞
前記式（Ｉ）で表される化合物は、下記式（ＩＡ）で表される化合物であることが好ましい。
【化１１】
2019181388.tif 000013
【００４７】
式（ＩＡ）中、Ｘは−ＣＨＹ−Ｃ（ＣＨ３）２Ｚであり、Ｙ及びＺはそれぞれ独立に、−Ｈ若しくは−ＯＨであるか、又は一緒になって単結合を形成する。Ｒは、水素原子又は分子量１，０００以下の置換基を表す。
式（ＩＡ）中のＲは式（Ｉ）中のＲと同義であり、好ましい態様も同様である。
【００４８】
〔式（ＩＩ）で表される化合物〕
本開示に用いられる式（Ｉ）で表される化合物の具体例の一つは、下記式（ＩＩ）で表される化合物である。
【００４９】
【化１２】
2019181388.tif 000014
【００５０】
式（ＩＩ）中、Ｘ１は−ＣＨＹ−Ｃ（ＣＨ３）２Ｚであり、Ｙ及びＺはそれぞれ独立に、−Ｈ若しくは−ＯＨであるか、又は一緒になって単結合を形成し、Ｒ１は、下記（Ａ）から（Ｄ）のいずれか１つを表す。
（Ａ）天然アミノ酸、天然アミノ酸のＤ体、並びに天然アミノ酸及び天然アミノ酸のＤ体において少なくとも１つのカルボキシ基を水素原子、ヒドロキシ基又はヒドロキシメチル基に置き換えた化合物よりなる群から選択されるアミノ化合物から、１個のアミノ基を除いた残基（ただし、−（ＣＨ）２−ＯＨは除く）、
（Ｂ）カルボキシ基、水酸基、スルホン酸基及び第二アミノ基よりなる群から選択される少なくとも１つを置換基として若しくは置換基の一部として有する芳香族基、又は第二アミノ基を含み且つ窒素原子を含んでいてもよい芳香族基、
（Ｃ）下記式（ＩＩ−１）で表される芳香族アミノ酸残基（式中、Ｒ３はそれぞれ独立に、あってもなくてもよい置換基であって、存在する場合は、水酸基、カルボキシ基又は炭素数１〜５のアルキル基を表し、ｎは０又は１の整数を表し、ｍは０〜５の整数を表し、＊は結合部位を表す。）、
【００５１】
【化１３】
2019181388.tif 000015
【００５２】
（Ｄ）−Ｌ１−Ｌ２−Ｒ４で表される置換基（式中、Ｌ１はカルボキシ基を有する炭素数１〜４のアルキレン基である連結基を表し、Ｌ２は−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−又は−ＮＨ−Ｃ（＝Ｓ）−ＮＨ−で示される連結基を表し、Ｒ４は炭素数１〜３のアルキルオキシ基を有する９−フルオレニルアルキルオキシ基又は下記式（ＩＩ−２）で表される多複素環基を表す。）。
【００５３】
【化１４】
2019181388.tif 000016
【００５４】
式（ＩＩ）において、Ｒ１が前記（Ａ）の場合の化合物について説明する。
前記（Ａ）は、天然アミノ酸、天然アミノ酸のＤ体、並びに天然アミノ酸及び天然アミノ酸のＤ体において少なくとも１つのカルボキシ基を水素原子、ヒドロキシ基又はヒドロキシメチル基に置き換えた化合物からなる群より選択されるアミノ化合物から、１個のアミノ基を除いた残基（ただし、−（ＣＨ）２−ＯＨは除く）である。
【００５５】
天然アミノ酸は、天然に存在し得るアミノ酸であれば、特に制限されず、例えば、α−アミノ酸、β−アミノ酸、γ−アミノ酸及びδ−アミノ酸などがある。このようなアミノ酸は、天然物から得られるものであってもよく、又は人為的に有機合成などの手法により得られるものでもよい。
天然アミノ酸として、例えば、α−アミノ酸として、グリシン、アラニン、スレオニン、バリン、イソロイシン、チロシン、システイン、シスチン、メチオニン、ヒスチジン、アスパラギン酸、グルタミン酸、アスパラギン、グルタミン、アルギニン、リシン、ヒドロキシリシン、オルニチン、シトルリン、ホモシステイン、３，４−ジヒドロキシフェニルアラニン、ホモシスチン、ジアミノピメリン酸、ジアミノプロピオン酸、セリン、ロイシン、フェニルアラニン及びトリプトファンなどが挙げられ、β−アミノ酸として、β−アラニンなどが挙げられ、γ−アミノ酸として、γ−アミノ酪酸及びカルニチンなどが挙げられ、δ−アミノ酸として、５−アミノレブリン酸及び５−アミノ吉草酸などが挙げられる。
【００５６】
上記の天然アミノ酸若しくは天然アミノ酸のＤ体において、少なくとも１つのカルボキシ基を水素原子、ヒドロキシ基又はヒドロキシメチル基に置き換えた化合物として、例えばアミノアルコール及びアミンが挙げられる。このようなアミノアルコールとして、例えば２−アミノエタノールなどが挙げられる。
【００５７】
式（ＩＩ）においてＲ１が前記（Ａ）の場合の化合物の具体例としては、下記の表１に示す化合物が挙げられる。なお、表中の「添加有機アミノ化合物」は、化合物を、スタキボトリス・ミクロスポラの培養液に所定の添加有機アミノ化合物を添加したときに得られた培養物から精製して得る場合に用いる、その添加有機アミノ化合物を示す（以下、同様）。表中、＊は結合部位を表す（以下、同様）。
【００５８】
【表１】
2019181388.tif 000017
【００５９】
上記の表１に示す化合物は、本開示に用いられる式（Ｉ）で表される化合物として、好適に用いることができる。
【００６０】
式（ＩＩ）において、Ｒ１が前記（Ｂ）の場合の化合物について説明する。
前記（Ｂ）は、カルボキシ基、水酸基、スルホン酸基及び第二アミノ基からなる群より選択される少なくとも１つを置換基として若しくは置換基の一部として有する芳香族基、又は第二アミノ基を含み且つ窒素原子を含んでいてもよい芳香族基である。
前記芳香族基としては、例えば、下記構造式で表される基が挙げられる。各構造式中、＊は結合部位を表す。
【００６１】
【化１５】
2019181388.tif 000018
【００６２】
式（ＩＩ）においてＲ１が前記（Ｂ）の場合の化合物の具体例としては、下記の表２に示す化合物が挙げられる。
【００６３】
【表２】
2019181388.tif 000019
【００６４】
上記の表２に示す化合物は、本開示に用いられる式（Ｉ）で表される化合物として、好適に用いることができる。
【００６５】
式（ＩＩ）において、Ｒ１が前記（Ｃ）の場合の化合物について説明する。
前記（Ｃ）は、下記式（ＩＩ−１）で表される芳香族アミノ酸残基（式中Ｒ３はあってもなくてもよい置換基であって、存在する場合は、水酸基、カルボキシ基及び炭素数１〜５のアルキル基からなる群より選択される少なくとも１つの置換基を表し、ｎは０又は１の整数を表し、ｍは０〜５の整数を表し、＊は結合部位を表す。上記アルキル基は更に置換基を有してもよく、置換基としては、水酸基、アルケニル基、アミノ基、カルボキシル基、スルフヒドリル基等が挙げられる。）である。
【００６６】
【化１６】
2019181388.tif 000020
【００６７】
前記式（ＩＩ−１）で表される芳香族アミノ酸残基としては、例えば、下記構造式で表される基が挙げられる。＊は結合部位を表す。
【００６８】
【化１７】
2019181388.tif 000021
【００６９】
式（ＩＩ）においてＲ１が前記（Ｃ）の場合の化合物の具体例としては、下記の表３に示す化合物が挙げられる。
【００７０】
【表３】
2019181388.tif 000022
【００７１】
上記の表３に示す化合物は、本開示に用いられる式（Ｉ）で表される化合物として好適に用いることができる。
【００７２】
式（ＩＩ）において、Ｒ１が前記（Ｄ）の場合の化合物について説明する。
前記（Ｄ）は、−Ｌ１−Ｌ２−Ｒ４で表される置換基（式中、Ｌ１はカルボキシ基を有する炭素数１〜４のアルキレン基である連結基を表し、Ｌ２は−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−又は−ＮＨ−Ｃ（＝Ｓ）−ＮＨ−で示される連結基を表し、Ｒ４は炭素数１〜３のアルキルオキシ基を有する９−フルオレニルアルキルオキシ基又は下記式（ＩＩ−２）で表される多複素環基を表す。）である。
【００７３】
【化１８】
2019181388.tif 000023
【００７４】
式（ＩＩ）においてＲ１が前記（Ｄ）の場合の化合物の具体例としては、下記の表４に示す化合物が挙げられる。
【００７５】
【表４】
2019181388.tif 000024
【００７６】
上記の表４に示す化合物は、本開示に用いられる式（Ｉ）で表される化合物として好適に用いることができる。
【００７７】
〔式（ＩＩＩ）で表される化合物〕
本開示に用いられる式（Ｉ）で表される化合物の具体例の一つは、下記式（ＩＩＩ）で表される化合物である。
【化１９】
2019181388.tif 000025
【００７８】
式（ＩＩＩ）中、Ｘ２及びＸ３はそれぞれ独立に、−ＣＨＹ−Ｃ（ＣＨ３）２Ｚであり、Ｙ及びＺは、それぞれ独立に−Ｈ若しくは−ＯＨであるか、又は一緒になって単結合を形成する。Ｒ２は、２個のアミノ基を有する天然アミノ酸、２個のアミノ基を有する天然アミノ酸のＤ体、２個のアミノ基を有する天然アミノ酸及び２個のアミノ基を有する天然アミノ酸のＤ体において少なくとも１つのカルボキシ基を水素原子、ヒドロキシ基又はヒドロキシメチル基に置き換えた化合物、Ｈ２Ｎ−ＣＨ（ＣＯＯＨ）−（ＣＨ２）ｎ−ＮＨ２（ｎは０〜９の整数）、並びにＨ２Ｎ−ＣＨ（ＣＯＯＨ）−（ＣＨ２）ｍ−Ｓｐ−（ＣＨ２）ｑ−ＣＨ（ＣＯＯＨ）−ＮＨ２（ｍ、ｐ及びｑはそれぞれ独立に０〜９の整数）で示される化合物からなる群より選択されるアミノ化合物から、２個のアミノ基を除いた残基を表す。
【００７９】
前記ｎは、０〜９の整数を表し、好ましくは０〜６の整数、より好ましくは１〜５の整数、更に好ましくは１〜４の整数である。
前記ｍは、０〜９の整数を表し、好ましくは０〜４の整数、より好ましくは１〜３の整数、更に好ましくは１又は２である。
前記ｐは、０〜９の整数を表し、好ましくは０〜４の整数、より好ましくは１〜３の整数、更に好ましくは１又は２である。
前記ｑは、０〜９の整数を表し、好ましくは０〜４の整数、より好ましくは１〜３の整数、更に好ましくは１又は２である。
前記ｐが０の場合、ｍ＋ｑとしては、０〜９の整数が好ましく、より好ましくは０〜６の整数、更に好ましくは１〜５の整数、特に好ましくは１〜４の整数である。
【００８０】
２個のアミノ基を有する天然アミノ酸として、例えば、α−アミノ酸として、ヒドロキシリシン、シトルリン、シスチン、ホモシスチン、ジアミノピメリン酸、ジアミノプロピオン酸、リシン及びオルニチンなどが挙げられる。
２個のアミノ基を有する天然アミノ酸及び２個のアミノ基を有する天然アミノ酸のＤ体において少なくとも１つのカルボキシ基を水素原子、ヒドロキシ基又はヒドロキシメチル基に置き換えた化合物として、Ｈ２Ｎ−（ＣＨ２）ｋ−ＮＨ２（ｋは１〜１０の整数、好ましくは１〜６の整数、より好ましくは１〜４の整数である）が挙げられる。
【００８１】
式（ＩＩＩ）で表される化合物の具体例としては、下記の表５に示す化合物が挙げられる。
【００８２】
【表５】
2019181388.tif 000026
【００８３】
上記の表５に示す化合物は、本開示に用いられる式（Ｉ）で表される化合物として好適に用いることができる。
【００８４】
前記式（ＩＩ）又は（ＩＩＩ）で表される化合物のほかに、前記式（Ｉ）で表される化合物の具体例として、下記の表６〜表８に示す化合物が挙げられる。
【００８５】
【表６】
2019181388.tif 000027
【００８６】
【表７】
2019181388.tif 000028
【００８７】
【表８】
2019181388.tif 000029
【００８８】
上記の表６〜表８に示す化合物は、薬剤に含まれる式（Ｉ）で表される化合物として好適に用いることができる。
【００８９】
上述の化合物の中でも、式（Ｉ）で表される化合物としては、ＳＭＴＰ−０、ＳＭＴＰ−１、ＳＭＴＰ−４、ＳＭＴＰ−５Ｄ、ＳＭＴＰ−６、ＳＭＴＰ−７、ＳＭＴＰ−８、ＳＭＴＰ−１１〜１４、ＳＭＴＰ−１８〜２９、ＳＭＴＰ−３６、ＳＭＴＰ−３７、ＳＭＴＰ−４２、ＳＭＴＰ−４３、ＳＭＴＰ−４３Ｄ、ＳＭＴＰ−４４、ＳＭＴＰ−４４Ｄ、ＳＭＴＰ−４６及びＳＭＴＰ−４７よりなる群から選択された少なくとも１つを含むことが好ましく、ＳＭＴＰ−７、ＳＭＴＰ−１９、ＳＭＴＰ−２２、ＳＭＴＰ−４３、及びＳＭＴＰ−４４Ｄよりなる群から選択された少なくとも１つを含むことがより好ましく、ＳＭＴＰ−７を含むことが更に好ましい。
【００９０】
本開示に用いられる式（Ｉ）で表される化合物は、遊離形態、薬学的に許容され得る塩若しくはエステルの形態、又は溶媒和物の形態で薬剤に含まれる。塩酸、臭化水素酸、硫酸、硝酸、リン酸、またはクエン酸、ギ酸、フマル酸、リンゴ酸、酢酸、コハク酸、酒石酸、メタンスルホン酸、ｐ−トルエンスルホン酸等の無機酸または有機酸が、本開示に用いられる式（Ｉ）で表される化合物の薬学的に許容され得る塩の形成に好適である。また、例えばナトリウム、カリウム、カルシウム、マグネシウム等のアルカリ金属またはアルカリ土類金属を含む化合物、塩基性アミン、または塩基性アミノ酸も、本開示に用いられる式（Ｉ）で表される化合物の薬学的に許容され得る塩の形成に好適である。また、炭素数１〜１０個のアルコールまたはカルボン酸など、好ましくは、メチルアルコール、エチルアルコール、酢酸、又はプロピオン酸などが、本開示に用いられる式（Ｉ）で表される化合物の薬学的に許容され得るエステルの形成に好適である。また、水などが、本開示に用いられる式（Ｉ）で表される化合物の薬学的に許容され得る溶媒和物の形成に好適である。
上述したＳＭＴＰ−７等の式（Ｉ）で表される化合物の具体例の記載は、これらの塩等の形態をも含むものである。
【００９１】
＜担体及び添加物＞
本開示に係る薬剤の調製に用いられる担体および製剤用添加物の種類は、特に制限されない。本開示に係る薬剤は、本開示に係る式（Ｉ）で表される化合物と、薬学的に許容される固体担体（例えば、ゼラチン、乳糖）あるいは液体担体（例えば、水、生理食塩水、ブドウ糖水溶液）を用い、製剤化される。
【００９２】
＜投与量＞
本開示に係る薬剤は、有効成分として用いる化合物の種類、及び腎臓病の重傷度等にもよるが、成人１回当たりの有効量として０．００１〜１００ｍｇ／ｋｇの投与が好ましく、０．０１〜３０ｍｇ／ｋｇの投与がより好ましい。投与回数に特に制限はなく、１回投与で用いてもよく、反復投与で用いてもよく、持続投与で用いてもよい。投与間隔および投与期間は、臨床所見、画像所見、血液所見、併存する疾患、既往歴などに応じて、当業者が選択できる。
【００９３】
本開示に係る薬剤を反復投与で用いる場合、患部が持続的に本開示に係る薬剤に接触する観点から、１日当たり１時間〜２４時間の持続投与をする態様も好ましい。
【００９４】
投与する方法は、特に制限されず、静脈内投与、皮下投与、筋肉内投与、経口投与、など種々の投与経路の選択が可能である。例えば、各病気の急性期の場合、患者に所望の投与量を迅速かつ確実に投与する観点から、静脈内投与、具体的には、静脈注射または点滴を用いることもできる。その際、例えば当業者は、１回分の投与量の１割を急速静注し、９割を３０分から１時間かけて点滴投与する方法を採用できる。
【００９５】
＜用途＞
本開示に係る薬剤は、腎臓病に用いられる薬剤である。
本開示に係る薬剤は、腎臓病の治療又は予防に用いられる薬剤であることが好ましい。
本開示において、「治療」とは、症状の改善又は抑制であればよく、重症化の抑制や症状の軽減若しくは緩和もこの用語に包摂される。
本開示において、「予防」とは、発症の阻害、発症リスクの低減または発症の遅延などを意味する。
本開示において、腎臓病に用いられるとは、腎臓病による症状が見出されている場合、及び、腎臓病による症状が発現することが予見されている場合に用いられることをいう。
本開示に係る薬剤は、腎臓病による症状を治療する、上記症状の進行を抑制する、又は上記症状を緩和するために用いられる。ただし、使用時期又は使用の際の症状によっては複合的に用いられ、限定的に解釈されるものではない。
腎臓病による症状が見出されている場合、又は、腎臓病による症状が発現することが予見されている場合としては、腎炎、腎虚血、その他腎の治療中、又は治療後を挙げることができる。あるいは、シスプラチン、造影剤、その他の腎臓病を副作用として有する薬剤等の薬剤の投与に起因する急性腎臓病が予見される、上記薬剤投与後の時期等を挙げることができる。これらの時期においては、予防的に用いることもできる。
なお、腎臓病の可能性があれば、上述した時期に制限されず使用してよい。
【００９６】
腎臓病には、各種の腎障害と腎不全が含まれる。本開示に係る薬剤は、そのいずれに対しても用いることができるが、腎不全に用いられることが好ましい。
また腎不全には、急性腎不全と慢性腎不全とが含まれるが、本開示に係る薬剤は、そのいずれに対しても用いることができる。
本開示に係る薬剤は、慢性腎臓病、及び、急性腎臓病のいずれに対しても用いられる。
慢性腎臓病としては、例えば、慢性腎虚血、慢性腎炎による腎臓病等が挙げられる。
急性腎臓病としては、例えば、急性腎虚血、急性腎炎による腎臓病、シスプラチン腎症等の薬剤投与に起因する腎臓病等が挙げられる。
【００９７】
本開示に係る薬剤は、ヒトでの使用に限定されずに用いてもよい。他の適用対象としては、ウシ、ウマ、ヒツジ等の家畜や、イヌ、ネコ、サル等のペット等に用いてもよい。
【００９８】
＜他の薬剤との併用＞
本開示に係る薬剤は、単独で用いてもよく、少なくとも１種以上の腎臓病に用いられる他の薬剤とともに用いてもよい。
本開示に係る薬剤と、他の薬剤とを併用することにより、治療効果を増強することが期待できる。この場合、本開示に係る薬剤は、他の薬剤と同時に又は時間をかえて、用いることができる。
【００９９】
また、本開示に係る薬剤は、腎臓病を副作用として有する他の薬剤と併用することにより、腎臓病を予防又は治療するための薬剤として使用してもよい。
腎臓病を副作用として有する他の薬剤としては、シスプラチン等が挙げられる。
以下に本発明の実施例について説明するが、本発明はこれに限定されるものではない。なお、特に断りのない限り、「％」は質量基準である。
【０１００】
（治療又は予防する方法）
本開示に係る治療又は予防する方法は、腎臓病の治療又は予防に有効な量の本開示に係る薬剤を、腎臓病を有する又は腎臓病を発症するリスクを有する対象に投与することを含む、前記対象における腎臓病を治療又は予防する方法である。
本開示に係る治療方法又は予防方法により、例えば、腎臓病の重症化の抑制、症状の軽減若しくは緩和、又は、腎臓病の発症の阻害、発症リスクの低減若しくは発症の遅延といった効果が得られる。
【０１０１】
本開示に係る治療方法又は予防方法における本開示に係る薬剤の投与量、投与間隔、投与期間、投与方法などの態様は、既述の本開示に係る薬剤におけるこれらの態様と同様である。
本開示に係る治療方法又は予防方法は、急性腎臓病及び慢性腎臓病のいずれにも適用可能である。
【０１０２】
（化合物）
本開示の別の一態様は、腎臓病を治療又は予防するための上記式（Ｉ）により表される上述の化合物である。
腎臓病を治療又は予防するための用法等の詳細は、上述の腎臓病を治療又は予防する方法と同様であり、好ましい態様も同様である。
【実施例】
【０１０３】
以下に本発明の実施例について説明するが、本発明はこれに限定されるものではない。なお、特に断りのない限り、「％」は質量基準である。【０１０４】
＜ＳＭＴＰ−７及びエダラボンの準備＞
ＳＭＴＰ−７は、特開２００４−２２４７３８号公報に記載された方法を用いて、スタキボトリス・ミクロスポラ  ＩＦＯ３００１８株の培地に添加有機アミノ化合物としてＬ−オルニチンを添加した場合に得られる培養物から精製して得た。精製して得たＳＭＴＰ−７の乾固物に０．３Ｎ（０．３ｍｏｌ／Ｌ）  ＮａＯＨ水溶液及び生理食塩水（０．９％ＮａＣｌ）を加えて、５０ｍｇ／ｍｌ溶液を調製した。その後０．３Ｎ（０．３ｍｏｌ／Ｌ）  ＨＣｌ水溶液と生理食塩水を用いて、ＳＭＴＰ−７の濃度が１０ｍｇ／ｍｌ、ｐＨが弱アルカリとなるように調整し、濾過滅菌を行い小分けにして−３０℃に凍結保存した。ＳＭＴＰ−７は、必要に応じて、生理食塩水で稀釈して使用した。
ＳＭＴＰ−７は、上記の凍結保存したものを試験直前に生理食塩水で１ｍｇ／ｍｌに溶解した。
エダラボン（商品名ラジカット、田辺三菱製薬株式会社）は、１．５ｍｇ／ｍｌの原液を用いた。以上の薬物は必要に応じて生理食塩水で稀釈した。【０１０５】
（実施例１：慢性腎不全モデル動物を用いた試験）
＜慢性腎不全モデル動物の作製＞
３０ｇ〜４０ｇの雄性ｄｄＹ系マウスを用いた。イソフルラン麻酔下で、マウス右側腹部を切開し、腎動静脈を結紮後、右腎臓を摘出した。縫合後、消毒としてアクリノールを縫合部位に塗布し、感染予防としてエンフロキサシンを５ｍｇ／ｋｇ、鎮痛目的としてアセトアミノフェンを７５ｍｇ／ｋｇ皮下投与した。３週間〜４週間の回復期間後、マウスの左側腹部を切開し、腎臓の両面に１００％酢酸を１０回塗布し、これを１クールとして５分間隔で２クール行い、縫合後、片腎切除時と同様の方法で術後処置を行った。手術の影響を考慮し、酢酸を適用しないｓｈａｍ群を設けた。【０１０６】
＜薬剤の投与＞
酢酸塗布４週間後より、ＳＭＴＰ−７を、１０ｍｇ／ｋｇ又は３０ｍｇ／ｋｇの投与量で投与した。投与は週に３回で８週間連続腹腔内投与した。また、ｓｈａｍ群（酢酸適用なし）及びＣｏｎｔｒｏｌ群（酢酸適用あり）には生理食塩液を同様に投与した。【０１０７】
＜評価＞
酢酸塗布してから１２週間後、代謝ケージを用いて２４時間尿を採取し、尿量を測定した。採尿中は、自由飲水とした。採尿後、下行大動脈より採血を行い、採取した血液を３０００ｒｐｍで１５分遠心し、血清を分離、ＢＵＮ（尿素窒素）およびｓＣｒ（血清クレアチニン値）を測定した。また、尿中のタンパク質およびクレアチニンの測定も行い、クレアチニンクリアランス（Ｃｃｒ）を算出した。ＢＵＮは尿素Ｂ−テストワコー（和光純薬工業（株）製）、ＱｕａｎｔｉＣｈｒｏｍ  Ｕｒｅａ  Ａｓｓａｙ  Ｋｉｔ（フナコシ（株）製）を、ｓＣｒはラボアッセイクレアチニン（和光純薬工業（株）製）を、尿中タンパク質は、ＢＣＡ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  ａｓｓａｙ  ｋｉｔ（Thermo Fisher社製）をそれぞれ用いて測定した。
ＢＵＮ、ｓＣｒ、尿量（Urinary output）および尿中タンパク質（Urinary protein）を測定することにより腎機能を評価した。また、尿中クレアチニンの測定も行い、クレアチニンクリアランス（Ｃｃｒ）を算出した。測定結果は表９に記載した。【０１０８】
【表９】
2019181388.tif 000030
【０１０９】
表９中、実験結果は平均値±標準誤差で表示した。統計学的有意差は、二群間の比較の場合は、対応のない２群間の検定（Ｓｔｕｄｅｎｔ’ｓ  ｔ−ｔｅｓｔ）を、多群間の比較の場合は、一元配置の分散分析の後、Ｄｕｎｎｅｔｔ検定を行い、いずれも、危険率５％以下（Ｐ＜０．０５）を有意差ありとした。【０１１０】
〔血液生化学パラメーターの評価結果〕
Ｓｈａｍ群のＢＵＮおよびｓＣｒは、それぞれ３５．９±２．０６ｍｇ／ｄＬ、０．５５±０．０３ｍｇ／ｄＬであった。酢酸適用によりこれらのパラメーターには有意な上昇（ＢＵＮ：８０．３±７．９８１ｍｇ／ｄＬ、ｓＣｒ：０．７４±０．０２ｍｇ／ｄＬ）が認められた。
上記上昇は、ＳＭＴＰ−７投与により用量依存的に抑制され、３０ｍｇ／ｋｇ投与群では、いずれのパラメーターにおいても（ＢＵＮ：５５．１±１．５７ｍｇ／ｄＬ、ｓＣｒ：０．６０±０．０５ｍｇ／ｄＬ）、Ｃｏｎｔｒｏｌ群との間に有意差が認められた。【０１１１】
〔尿中パラメーターの評価結果〕
Ｓｈａｍ群の尿量および尿中タンパク質は、それぞれ６７．７±１４．９ｍｌ／ｋｇ／ｄａｙ、５５３±８７．４ｍｇ／ｋｇ／ｄａｙであった。酢酸適用によりこれらのパラメーターは有意に上昇し(尿量：１５３±３７．２ｍｌ／ｋｇ／ｄａｙ、尿中タンパク質：１１１８±１４３ｍｇ／ｋｇ／ｄａｙ）、ｓｈａｍ群との間に有意差が認められた。ＳＭＴＰ−７の３０ｍｇ／ｋｇ投与により、尿量は低下傾向を示したが（７７．３±１８．５ｍｌ／ｋｇ／ｄａｙ）、Ｃｏｎｔｒｏｌ群との間に有意差は認められなかった。
一方、尿中タンパク質の上昇に対しては、用量依存的抑制が認められ、３０ｍｇ／ｋｇ投与群（５２７±９６．２ｍｇ／ｋｇ／ｄａｙ）ではＣｏｎｔｒｏｌ群との間に有意差が認められた。また、Ｃｃｒは、酢酸適用により、Ｓｈａｍ群に比し有意な低下が認められた（Ｓｈａｍ：２．２９±０．３０ｍｌ／ｍｉｎ／ｋｇ、Ｃｏｎｔｒｏｌ：０．８７±０．１４ｍｌ／ｍｉｎ／ｋｇ）。ＳＭＴＰ−７は用量依存的にＣｃｒの低下を抑制し、３０ｍｇ／ｋｇ投与群では（２．６６±０．３７ｍｌ／ｍｉｎ／ｋｇ）、Ｃｏｎｔｒｏｌ群との間に有意差が認められた。【０１１２】
＜エダラボンによる効果＞
上記ＳＭＴＰ−７を３０ｍｇ／ｋｇ投与した群において、上記ＳＭＴＰ−７の替わりにエダラボン（edaravone）  ３０ｍｇ／ｋｇを投与した以外は、ＳＭＴＰ−７を３０ｍｇ／ｋｇ投与した群と同様に実験及び評価を行った。測定結果は表１０に記載した。【０１１３】
【表１０】
2019181388.tif 000031
【０１１４】
（実施例２：急性腎不全モデル動物を用いた試験）
＜急性腎不全モデル動物の作製＞
実験動物として、雄性ｄｄＹ系マウス（３０ｇ）を用いた。イソフルラン麻酔下で右側腹部を２ｃｍ程度切開し、腎臓を露出した。腎動静脈および輸尿管を結紮後、右腎を摘出した。
２週間の回復期間を与えた後、急性腎不全モデルマウスを作製した。イソフルラン麻酔下のもと、左側腹部を３ｃｍ程度切開し、左腎を露出して腎動静脈周囲の脂肪を除去した。非外傷性クリップを用いて左腎動静脈の血流を遮断し、腎臓を４５分間虚血状態とした。その後、非外傷性クリップを取り外すことにより血流を再灌流させ、腎臓を腹腔内に戻し、側腹部を縫合した。非外傷性クリップを用いた虚血再灌流以外の工程を同様に施したマウスをｓｈａｍ群（８頭）とした。【０１１５】
＜急性腎不全モデル動物の作製＞
急性腎不全モデルマウスを、ｖｅｈｉｃｌｅ（生理食塩水）を投与したｃｏｎｔｒｏｌ群、ＳＭＴＰ−７投与群（０．０１ｍｇ／ｋｇ、 ０．１ｍｇ／ｋｇ、 1ｍｇ／ｋｇ、 １０ ｍｇ／ｋｇ）、ＳＭＴＰ−２７ 投与群 （３０ｍｇ／ｋｇ）、ＳＭＴＰ−４４Ｄ 投与群 （３０ｍｇ／ｋｇ) およびｅｄａｒａｖｏｎｅ 投与群 (３ｍｇ／ｋｇ)としてランダムに８頭ずつ割り当てた。ｖｅｈｉｃｌｅ、ＳＭＴＰ−７、ＳＭＴＰ−２７、ＳＭＴＰ−４４Ｄ及びｅｄａｒａｖｏｎｅを、虚血開始１５分後から、大腿静脈より３０分間持続投与した。
虚血再灌流処置２４時間後より、代謝ケージを用いて２４時間尿を採取し、尿量（ＵＦ；μＬ／ｍｉｎ／ｋｇ）を測定した。採尿中は、自由飲水のみ可能とした。採尿後、マウスの体重を測定し、イソフルラン麻酔下にて腹部大動脈より採血を行った。採血後、左腎臓を摘出し、生理食塩中で脂肪を剥離した。腎重量（ＫＷ；ｍｇ／ｇ）を測定した後、Hematoxylin Eosin（ＨＥ）染色を行うために、１０％中性緩衝ホルマリン液内で固定を行った。【０１１６】
＜腎機能パラメーターの測定＞
採取した血液を２５℃で１５分間８００×ｇにて遠心を行い、血清を採取した。また、代謝ケージを用いて採取した尿も併せて用い、腎機能の評価を行った。その血清中のパラメーターを評価するために、ＱｕａｎｔｉＣｈｒｏｍ  Ｕｒｅａ  Ａｓｓａｙ  Ｋｉｔ（フナコシ（株）製）を用いて血中尿素窒素（ＢＵＮ；ｍｇ／ｄＬ）を測定した。ＬａｂＡｓｓａｙＴＭ  Ｃｒｅａｔｉｎｉｎｅ（和光純薬工業（株）製）を用いて血清クレアチニン濃度（Ｓｃｒ；ｍｇ／ｄＬ）および尿中クレアチニン濃度（Ｕｃｒ；ｍｇ／ｄＬ）を測定し、クレアチニンクリアランス（Ｃｃｒ；ｍＬ／ｍｉｎ／ｋｇ）を算出した。富士ドライケム  ７０００（富士フイルム（株）製）を用いて血清および尿中のナトリウム濃度を測定し、ナトリウム排泄率（ＦＥＮａ；％）を算出した。Ａｌｂｗｅｌ  Ｍ（コスモバイオ（株）製）を用いて尿中アルブミン濃度（Ｕａｌｂ；ｍｇ／ｈｒ／ｋｇ）を測定した。
測定結果は表１１に記載した。【０１１７】
【表１１】
2019181388.tif 000032
【０１１８】
表１１中、実験結果は各群８頭における平均値±標準誤差で表示した。多群間比較として、初めに一元分散分析（ＡＮＯＶＡ）を行い、有意差が認められたものについてＢｏｎｆｅｒｒｏｎｉの検定を行った。危険率５％未満（Ｐ＜０．０５）を有意差ありと判定した。【０１１９】
〔ＳＭＴＰ−７、ＳＭＴＰ−２７、ＳＭＴＰ−４４Ｄおよび  ｅｄａｒａｖｏｎｅ  を投与した際の  ＵＦ  および  Ｕａｌｂ  の変化〕
ｃｏｎｔｒｏｌ群のＵＦ（８８．９±１１．９μＬ／ｍｉｎ／ｋｇ）は、ｓｈａｍ群のＵＦ（３５．７±４．８μＬ／ｍｉｎ／ｋｇ）に比べて有意に上昇した。ＳＭＴＰ−７の投与により、用量依存的にＵＦが改善されていたが（０．０１ｍｇ／ｋｇ；７４．６±１２．８μＬ／ｍｉｎ／ｋｇ、０．１ｍｇ／ｋｇ；８２．５±８．８μＬ／ｍｉｎ／ｋｇ、１ｍｇ／ｋｇ；６２．３±１３．４μＬ／ｍｉｎ／ｋｇ、１０ｍｇ／ｋｇ；４６．８±９．５μＬ／ｍｉｎ／ｋｇ）、統計学的な有意な変化は認められなかった。ＳＭＴＰ−２７（３０ｍｇ／ｋｇ）投与群における ＵＦ は ７７．８±１６．４μＬ／ｍｉｎ／ｋｇ、ＳＭＴＰ−４４Ｄ（３０ｍｇ／ｋｇ）投与群における ＵＦ は １０３．２±３３．４７μＬ／ｍｉｎ／ｋｇで、顕著な変化は認められなかった。また、ｅｄａｒａｖｏｎｅ（３ｍｇ／ｋｇ）投与群においても、ＵＦの有意な改善が認められた（５５．３±１２．１μＬ／ｍｉｎ／ｋｇ）。
ｃｏｎｔｒｏｌ群のＵａｌｂ（１．３±０．２ｍｇ／ｈｒ／ｋｇ）は、ｓｈａｍ群のＵａｌｂ（０．３±０．１ｍｇ／ｈｒ／ｋｇ）に比べて有意に上昇した。ＳＭＴＰ−７の投与により、用量依存的にＵａｌｂが改善され（０．０１ｍｇ／ｋｇ；１．８±０．３ｍｇ／ｈｒ／ｋｇ、０．１ｍｇ／ｋｇ；１．１±０．３ｍｇ／ｈｒ／ｋｇ、１ｍｇ／ｋｇ；０．７±０．２ｍｇ／ｈｒ／ｋｇ、１０ｍｇ／ｋｇ；０．５±０．１ｍｇ／ｈｒ／ｋｇ）、１０ｍｇ／ｋｇのＳＭＴＰ−７投与群ではｃｏｎｔｒｏｌ群に比べ有意なＵａｌｂの改善が認められた。ＳＭＴＰ−２７（３０ｍｇ／ｋｇ）投与群における Ｕａｌｂ は ２．０±０．４ｍｇ／ｈｒ／ｋｇ、ＳＭＴＰ−４４Ｄ（３０ｍｇ／ｋｇ）投与群における Ｕａｌｂ は １．３±０．３ｍｇ／ｈｒ／ｋｇで、顕著改善は認められなかった。また、ｅｄａｒａｖｏｎｅ（３ｍｇ／ｋｇ）投与群においては、Ｕａｌｂの有意な改善は認められなかった（０．９±０．２ｍｇ／ｈｒ／ｋｇ）。【０１２０】
〔ＳＭＴＰ−７、ＳＭＴＰ−２７、ＳＭＴＰ−４４Ｄおよび  ｅｄａｒａｖｏｎｅ  を投与した際の  ＫＷ  の変化〕
ｃｏｎｔｒｏｌ群のＫＷ（１３．９±０．６ｍｇ／ｇ）は、ｓｈａｍ群のＫＷ（９．０±０．４ｍｇ／ｇ）に比べて有意に上昇した。ＳＭＴＰ−７の投与により、用量依存的にＫＷが改善され（０．０１ｍｇ／ｋｇ；１４．５±０．６ｍｇ／ｇ、０．１ｍｇ／ｋｇ；１３．６±１．０ｍｇ／ｇ、１ｍｇ／ｋｇ；１１．２±０．８ｍｇ／ｇ、１０ｍｇ／ｋｇ；１１．１±０．４ｍｇ／ｇ）、１０ｍｇ／ｋｇおよび１ｍｇ／ｋｇのＳＭＴＰ−７投与群ではｃｏｎｔｒｏｌ群に比べ有意なＫＷの改善が認められた。ＳＭＴＰ−２７（３０ｍｇ／ｋｇ）投与群におけるＫＷは１３．８±０．７ｍｇ／ｇ、ＳＭＴＰ−４４Ｄ（３０ｍｇ／ｋｇ）投与群におけるＫＷは１２．３±１．２ｍｇ／ｇで、顕著な改善は認められなかった。また、ｅｄａｒａｖｏｎｅ（３ｍｇ／ｋｇ）投与群においては、ＫＷの有意な改善は認められなかった（１３．４±０．６ｍｇ／ｇ）。【０１２１】
〔ＳＭＴＰ−７、ＳＭＴＰ−２７、ＳＭＴＰ−４４Ｄ又はｅｄａｒａｖｏｎｅを投与した際のＢＵＮ、Ｓｃｒ、ＣｃｒおよびＦＥＮａの変化〕
ｃｏｎｔｒｏｌ群のＢＵＮ（１９２．２±４４．３ｍｇ／ｄＬ）は、ｓｈａｍ群のＢＵＮ（３８．４±２．７ｍｇ／ｄＬ）に比べて有意に上昇した。ＳＭＴＰ−７の投与により、用量依存的にＢＵＮが改善され（０．０１ｍｇ／ｋｇ；１０８．８±２６．６ｍｇ／ｄＬ、０．１ｍｇ／ｋｇ；１２５．８±２８．７ｍｇ／ｄＬ、１ｍｇ／ｋｇ；６６．０±１１．３ｍｇ／ｄＬ、１０ｍｇ／ｋｇ；４４．１±２．９ｍｇ／ｄＬ）、全ての用量においてＳＭＴＰ−７投与群ではｃｏｎｔｒｏｌ群に比べ有意なＢＵＮの改善が認められた。ＳＭＴＰ−２７（３０ｍｇ／ｋｇ）投与群におけるＢＵＮは５９．７±１０．５ｍｇ／ｄＬ、ＳＭＴＰ−４４Ｄ（３０ｍｇ／ｋｇ）投与群におけるＢＵＮは５５．７±１４．２ｍｇ／ｄＬで、有意な改善が認められた。また、ｅｄａｒａｖｏｎｅ（３ｍｇ／ｋｇ）投与群においても、ＢＵＮの有意な改善が認められた（６１．１±５．９ｍｇ／ｄＬ）。
ｃｏｎｔｒｏｌ群のＳｃｒ（１．７±０．４ｍｇ／ｄＬ）は、ｓｈａｍ群のＳｃｒ（０．３±０．０ｍｇ／ｄＬ）に比べて有意に上昇した。ＳＭＴＰ−７の投与により、用量依存的にＳｃｒが改善され（０．０１ｍｇ／ｋｇ；０．９±０．２ｍｇ／ｄＬ、０．１ｍｇ／ｋｇ；１．０±０．３ｍｇ／ｄＬ、１ｍｇ／ｋｇ；０．５±０．１ｍｇ／ｄＬ、１０ｍｇ／ｋｇ；０．４±０．０ｍｇ／ｄＬ）、全ての用量においてＳＭＴＰ−７投与群ではｃｏｎｔｒｏｌ群に比べ有意なＳｃｒの改善が認められた。ＳＭＴＰ−２７（３０ｍｇ／ｋｇ）投与群におけるＳｃｒは０．５±０．０ｍｇ／ｄＬ、ＳＭＴＰ−４４Ｄ（３０ｍｇ／ｋｇ）投与群におけるＳｃｒは０．６±０．１ｍｇ／ｄＬで、有意な改善が認められた。また、ｅｄａｒａｖｏｎｅ（３ｍｇ／ｋｇ）投与群においても、Ｓｃｒの有意な改善が認められた（０．５±０．０ｍｇ／ｄＬ）。
ｃｏｎｔｒｏｌ群のＣｃｒ（１．２±０．４ｍＬ／ｍｉｎ／ｋｇ）は、ｓｈａｍ群のＣｃｒ（２．８±０．２ｍＬ／ｍｉｎ／ｋｇ）に比べて有意に低下した。ＳＭＴＰ−７の投与により、用量依存的にＣｃｒが改善され（０．０１ｍｇ／ｋｇ；１．６±０．３ｍＬ／ｍｉｎ／ｋｇ、０．１ｍｇ／ｋｇ；１．７±０．４ｍＬ／ｍｉｎ／ｋｇ、１ｍｇ／ｋｇ；２．３±０．４ｍＬ／ｍｉｎ／ｋｇ、１０ｍｇ／ｋｇ；３．１±０．２ｍＬ／ｍｉｎ／ｋｇ）、１０ｍｇ／ｋｇおよび１ｍｇ／ｋｇのＳＭＴＰ−７投与群ではｃｏｎｔｒｏｌ群に比べ有意なＣｃｒの改善が認められた。ＳＭＴＰ−２７（３０ｍｇ／ｋｇ）投与群におけるＣｃｒは2.5±0.1ｍＬ／ｍｉｎ／ｋｇ、ＳＭＴＰ−４４Ｄ（３０ｍｇ／ｋｇ）投与群におけるＣｃｒは 2.3±0.4ｍＬ／ｍｉｎ／ｋｇで、有意な改善が認められた。また、ｅｄａｒａｖｏｎｅ（３ｍｇ／ｋｇ）投与群においては、Ｃｃｒの有意な改善は認められなかった（２．１±０．２ｍＬ／ｍｉｎ／ｋｇ）。
ｃｏｎｔｒｏｌ群のＦＥＮａ（５．２±２．１％）は、ｓｈａｍ群のＦＥＮａ（０．９±０．０％）に比べて有意に上昇した。ＳＭＴＰ−７の投与により、用量依存的にＦＥＮａが改善され（０．０１ｍｇ／ｋｇ；１．８±０．８％、０．１ｍｇ／ｋｇ；２．３±１．０％、１ｍｇ／ｋｇ；１．０±０．２％、１０ｍｇ／ｋｇ；０．７±０．１％）、全ての用量においてＳＭＴＰ−７投与群ではｃｏｎｔｒｏｌ群に比べ有意なＦＥＮａの改善が認められた。ＳＭＴＰ−２７（３０ｍｇ／ｋｇ）投与群におけるＦＥＮａは０．８±０．１％、ＳＭＴＰ−４４Ｄ（３０ｍｇ／ｋｇ）投与群におけるＦＥＮａは１．２±０．１％で、有意な改善が認められた。また、ｅｄａｒａｖｏｎｅ（３ｍｇ／ｋｇ）投与群においても、ＦＥＮａの有意な改善が認められた（１．０±０．１％）。【０１２２】
＜病理組織標本の作製＞
虚血再灌流処置２４時間後より、代謝ケージを用いて２４時間尿を採取し、体重測定および採血を行った後に腎臓摘出を行い、自動包埋装置を用いて、ホルマリン固定した腎臓をパラフィン浸透し、パラフィンブロックを作製した。パラフィンブロックをミクロトームで３μｍの切片に薄切してスライドガラスに載せ、５２°Ｃのパラフィン伸展器で切片を伸ばし、３７℃のパラフィン熔融器で一晩十分に乾燥させた。脱パラフィンおよび水洗後、マイヤーのｈｅｍａｔｏｘｙｌｉｎ染色液で１分間染色して、１５分間流水水洗した。その後、ｅｏｓｉｎ染色液で４５秒間染色し、８０％〜１００％エタノールで脱水した後、キシレンで透徹およびマリノールで封入した。光学顕微鏡を用いて、各標本を５０倍で鏡検した。皮質、髄質外層外帯および髄質外層内帯における、尿細管拡張、尿細管壊死および尿細管円柱について、下記基準に従って、各部位全体のうちの病巣の割合を評価した。評価結果は表１２に記載した。
０点：病変無し
１点：２０％未満の最小限の病巣の変化
２点：２５％程度の軽度な病巣の変化
３点：２５％〜５０％の中程度の病巣の変化
４点：５０％以上の重度な病巣の変化【０１２３】
【表１２】
2019181388.tif 000033
【０１２４】
表１２中、実験結果は各群８頭における平均値±標準誤差で表示した。多群間比較として、初めに一元分散分析（ＡＮＯＶＡ）を行い、有意差が認められたものについてＢｏｎｆｅｒｒｏｎｉの検定を行った。危険率５％未満（Ｐ＜０．０５）を有意差ありと判定した。【０１２５】
〔ＳＭＴＰ−７およびｅｄａｒａｖｏｎｅを投与した際の病理組織学的変化〕
ｃｏｎｔｒｏｌ群の腎臓の皮質、髄質外層外帯および髄質外層内帯における尿細管拡張、尿細管壊死および尿細管円柱の病巣変化は、ｓｈａｍ群に比べていずれも有意に高いスコアを示した。ＳＭＴＰ−７（１０ｍｇ／ｋｇ）投与群では、腎臓の皮質の尿細管円柱以外の病巣変化が有意に改善されていた。一方、ｅｄａｒａｖｏｎｅ（３ｍｇ／ｋｇ）投与群では、腎臓の髄質外層外帯の尿細管壊死および尿細管円柱、髄質外層内帯の尿細管円柱においてのみ、病巣変化が有意に改善されていた。【０１２６】
（実施例３：急性腎臓病（シスプラチン腎症）モデル動物を用いた試験）
＜急性腎臓病（シスプラチン腎症）モデル動物の作製＞
実験動物として、雄性ｄｄＹ系マウス（３０〜４０ｇ）を用いた。イソフルラン麻酔下、大腿静脈よりシスプラチン（２０ｍｇ／ｋｇ）を１５分かけて定速静注し、腎症を発症させた。その３日後、下行大静脈より採血を行い、血清分離後、血中尿素窒素（ＢＵＮ）および血清クレアチニン（ｓＣｒ）を測定し、腎機能を評価した。また、腎臓を灌流後摘出し、ＲＮＡの抽出、逆転写を行い、作製したｃＤＮＡをテンプレートとしてｒｅａｌ  ｔｉｍｅ  ＲＴ−ＰＣＲを行ない、腎組織中のＴＮＦ−α  ｍＲＮＡ発現におよぼす影響についても検討を行った。シスプラチンに代わり生理食塩液を投与した群をｓｈａｍ群とした【０１２７】
＜薬剤の投与＞
投与タイミングの検討においては、シスプラチンと同時、あるいは１日後又は２日後に大腿静脈より１０ｍｇ／ｋｇを、用量相関性の検討においては、０．１ｍｇ／ｋｇ、１ｍｇ／ｋｇ又は１０ｍｇ／ｋｇを大腿静脈より定速静注した。
また、ＴＮＦ−α  ｍＲＮＡ発現におよぼす影響および病理組織学的検討では、１０ｍｇ／ｋｇをシスプラチン投与１日後に同様に投与した。【０１２８】
＜ＢＵＮおよびｓＣｒの測定＞
採取した血液を３０００ｒｐｍで１５分遠心し、血清を分離、ＢＵＮおよびｓＣｒを測定した。ＢＵＮは、尿素Ｂ−テストワコー（和光純薬工業（株）製）、ＱｕａｎｔｉＣｈｒｏｍ  Ｕｒｅａ  Ａｓｓａｙ  Ｋｉｔ（フナコシ（株）製）を、ｓＣｒはラボアッセイクレアチニン（和光純薬工業（株）製）を用いて測定した。測定結果は表１３に記載した【０１２９】
＜ＲＮＡの抽出および逆転写＞
ＴＮＦ−α  ｍ−ＲＮＡ発現量およびＢＵＮ、ｓＣｒの経時推移の関連性の検討では、前述した採血の後、生理食塩水を心臓より灌流し血液を除いた後に右腎を摘出した。摘出した腎臓をＴＲＩｚｏｌ（登録商標）Ｒｅａｇｅｎｔ（Ａｍｂｉｏｎ）を用いてホモジネートし、クロロホルムを加えてボルテックスにより混和した。４℃、１２，０００×ｇで１５分間遠心後、水層を分取し、イソプロパノールを加え１０分間室温でインキュベートした。４℃、１２，０００×ｇで１０分間遠心した後、上清を捨て、ペレットを７５％エタノールで洗浄、４℃、７，５００×ｇで５分間遠心し、上清を捨てペレットを自然乾燥させた。
ペレットはＲＮａｓｅ−ｆｒｅｅ  ｗａｔｅｒに溶解させＳｕｐｅｒＳｃｒｉｐｔ（登録商標）ＶＩＲＯ  ｃＤＮＡ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ  Ｋｉｔ  （Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）を用いて逆転写反応を行い、ｃＤＮＡを作製した。【０１３０】
＜Ｒｅａｌ  ｔｉｍｅ  ＲＴ−ＰＣＲ＞
Ｒｅａｌ  ｔｉｍｅ  ＲＴ−ＰＣＲは、前述のように作製したｃＤＮＡをテンプレートとしてＳＹＢＲ  ＧｒｅｅｎＥＲ（登録商標）  ｑＰＣＲ  Ｓｕｐｅｒ  Ｍｉｘ  ｆｏｒ  ＡＢＩ  ＰＲＩＳＭ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）を使用して行った。ＳＹＢＲ  ＧｒｅｅｎＥＲのプロトコールに従い、ｐｒｉｍｅｒごとに１２．５μＬＳＹＢＲ  ＧｒｅｅｎＥＲ、２．５μＬ  ｐｒｉｍｅｒ（β−Ａｃｔｉｎの場合は０．５μＬ  ｆｏｒｗａｒｄ  ｐｒｉｍｅｒ、０．５μＬ  ｒｅｖｅｒｓｅ  ｐｒｉｍｅｒ）、２．５μＬ  テンプレートを混和後、滅菌精製水を使用して合計２５μＬとした。Ｒｅａｌ  ｔｉｍｅ  ＰＣＲ検出システム（ＡＢＩ  ＰＲＩＳＭ  ７９００）を使用して、５０℃：２ｍｉｎ、９５℃：１０ｍｉｎ、９５℃：１５ｓｅｃ、６０℃：１ｍｉｎの一連の反応を４０回繰り返し反応させた。定量は、検量線法を用いて行った。
用いたｐｒｉｍｅｒはＴＮＦ−α（ＱＴ００１０４００６）、β−Ａｃｔｉｎ  ｆｏｒｗａｒｄおよびβ−Ａｃｔｉｎ  ｒｅｖｅｒｓｅである。ＴＮＦ−αのｐｒｉｍｅｒは株式会社ＱＩＡＧＥＮより購入したものを使用した。以下は、いずれもＩｎｖｉｔｒｏｇｅｎに依頼し、作製した。
β-Actin forward: 5’-CCTTCCTTCTTGGGTATGGAATC-3’
β-Actin reverse: 5’-TGCTAGGAGCCAGAGCAGTAATC-3’【０１３１】
【表１３】
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【０１３２】
【表１４】
2019181388.tif 000035
【０１３３】
【表１５】
2019181388.tif 000036
【０１３４】
表１３〜表１５中、実験結果は平均値±標準誤差で表示した。また、ＲＴ−ＰＣＲの結果は内在性コントロール遺伝子であるβ−Ａｃｔｉｎ量で補正を行った。統計学的有意差は、二群間の比較の場合は、対応のない２群間の検定（Ｓｔｕｄｅｎｔ’ｓ  ｔ−ｔｅｓｔ）を、多群間の比較の場合は、一元配置の分散分析の後、Ｄｕｎｎｅｔｔ検定を行った。また、病理組織学的検討おいては、Ｍａｎｎ−Ｗｈｉｔｎｅｙ  Ｕ検定を行い、いずれも、危険率５％以下（Ｐ＜０．０５）を有意差ありとした。【０１３５】
〔投与タイミングの検討結果（表１３）〕
Ｓｈａｍ群のＢＵＮは２７．５〜２９，９ｍｇ／ｄＬ、ｓＣｒは０．４１〜０．５８ｍｇ／ｄＬであった。シスプラチン投与によりＢＵＮおよびｓＣｒはｓｈａｍ群に比し有意な上昇が認められ（ＢＵＮ：６５．５〜８６．２ｍｇ／ｄＬ、ｓＣｒ：０．８２〜１．１１ｍｇ／ｄＬ）腎症の発症が確認された。
この上昇に対し、１０ｍｇ／ｋｇのＳＭＴＰ−７をシスプラチンと同時に投与した場合（Ｃｏａｄｍｉｎｉｓｔｒａｔｉｏｎ）は、ＢＵＮ（Ｃｏｎｔ：６５．５±３．８３ｍｇ／ｄＬ、ＳＭＴＰ−７：６６．３±９．２３ｍｇ／ｄＬ）、ｓＣｒ（Ｃｏｎｔｒｏｌ：０．８２±０．０４ｍｇ／ｄＬ、ＳＭＴＰ−７：０．８１±０．０９ｍｇ／ｄＬ）いずれの上昇に対しても抑制効果は認められなかったが、１日後に投与した場合（１ｄａｙ）は、その上昇を有意に抑制した（ＢＵＮ：Ｃｏｎｔｒｏｌ：８６．２±１８．５ｍｇ／ｄＬ、ＳＭＴＰ−７：４４．５±２．１９ｍｇ／ｄＬ。ｓＣｒ：Ｃｏｎｔｒｏｌ：１．１１±０．０５ｍｇ／ｄＬ、ＳＭＴＰ−７：０．８０±０．０７ｍｇ／ｄＬ）。
一方、２日後に投与した場合（２ｄａｙ）にも抑制傾向は認められたが、Ｃｏｎｔｒｏｌ投与群との間に有意差は認められなかった（ＢＵＮ：Ｃｏｎｔｒｏｌ：７８．８±９．３１ｍｇ／ｄＬ、ＳＭＴＰ−７：７４．２±１７．８ｍｇ／ｄＬ。ｓＣｒ：Ｃｏｎｔｒｏｌ：０．９６±０．１３ｍｇ／ｄＬ、ＳＭＴＰ−７：０．７８±０．１８ｍｇ／ｄＬ）。本結果より、以降の検討ではシスプラチン投与１日後にＳＭＴＰ−７を投与することとした。【０１３６】
〔用量相関性の検討結果（表１４）〕
ｓｈａｍ群のＢＵＮは２６．６±１．９０ｍｇ／ｄＬ、ｓＣｒは０．５１±０．０４ｍｇ／ｄＬであった。シスプラチン投与により、ＢＵＮは８２．６±９．６７ｍｇ／ｄＬ、ｓＣｒは０．９７±０．１３ｍｇ／ｄＬとｓｈａｍ群に比し、有意に上昇した。
ＳＭＴＰ−７は、いずれの上昇に対しても用量依存的な抑制効果を示し、ＢＵＮはいずれの用量においても（０．１ｍｇ／ｋｇ：５７．０±５．４７ｍｇ／ｄＬ、１ｍｇ／ｋｇ：４５．０±６．２８ｍｇ／ｄＬ、１０ｍｇ／ｋｇ：３２．１±４．６３ｍｇ／ｄＬ）、ｓＣｒは１および１０ｍｇ／ｋｇ投与群において（０．１ｍｇ／ｋｇ：０．７８±０．０８ｍｇ／ｄＬ、１ｍｇ／ｋｇ：０．６５±０．０９ｍｇ／ｄＬ、１０ｍｇ／ｋｇ：０．５３±０．０３ｍｇ／ｄＬ）、それぞれＣｏｎｔｒｏｌ群との間に有意差が認められた。【０１３７】
〔ＴＮＦ−α  ｍＲＮＡ発現におよぼす影響の検討結果（表１５）〕
腎組織中のＴＮＦ−α  ｍＲＮＡ発現に及ぼす影響について検討した。シスプラチン投与によりＢＵＮ（Ｓｈａｍ：２５．３±０．８５ｍｇ／ｄＬ、Ｃｏｎｔｒｏｌ：８９．３±１２．５ｍｇ／ｄＬ）、ｓＣｒ（Ｓｈａｍ：０．３４±０．０４ｍｇ／ｄＬ、Ｃｏｎｔｒｏｌ：１．０８±０．３６ｍｇ／ｄＬ）ともに有意な上昇が認められ、この上昇はＳＭＴＰ−７により有意に抑制された。
この条件下、ｒｅａｌ  ｔｉｍｅ  ＲＴ−ＰＣＲにてＴＮＦ−α  ｍＲＮＡ発現を測定したところ、シスプラチン投与により、０．３９±０．０８から０．６４±０．０９へ上昇し、両群間に有意差が認められた。この増加に対しＳＭＴＰ−７は抑制効果を示し（０．４３±０．０７）、ｃｏｎｔｒｏｌ群との間に有意差が認められた。【０１３８】
＜病理組織学的検討＞
ＳＭＴＰ−７の１０ｍｇ／ｋｇをシスプラチン投与１日後に投与し、その３日後、ｒｅａｌ  ｔｉｍｅ  ＲＴ−ＰＣＲの評価と同様の方法により腎臓を摘出し、病理組織学的検討を行った。
自動包埋装置を用いて、ホルマリン固定した腎臓をパラフィン浸透し、パラフィンブロックを作製した。パラフィンブロックをミクロトームで３μｍの切片に薄切してスライドガラスに載せ、５２℃のパラフィン伸展器で切片を伸ばし、３７℃のパラフィン熔融器で一晩十分に乾燥させた。脱パラフィンおよび水洗後、マイヤーのｈｅｍａｔｏｘｙｌｉｎ染色液で１分間染色して、１５分間流水水洗した。その後、ｅｏｓｉｎ染色液で４５秒間染色し、８０％〜１００％エタノールで脱水した後、キシレンで透徹およびマリノールで封入した。光学顕微鏡を用いて、各標本を５０倍で鏡検した。障害の程度は１００倍で５視野顕鏡し（１視野＝２ｍｍ、５視野＝１０ｍｍ）、以下の基準でスコアー化した。
評点０：著変なし
評点１：障害範囲  １ｍｍ以下
評点２：障害範囲  １−２ｍｍ
評点３：障害範囲  ２−５ｍｍ
評点４：障害範囲  ５ｍｍ以上【０１３９】
【表１６】
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【０１４０】
＜病理組織学的検討の結果（表１６）＞
シスプラチンの投与により、著明な近位尿細管の変性(degeneration)、壊死(Necrosis)、尿細管拡張（tublar diratation、硝子円柱（Hyaline casts））が認められた。一方、糸球体には明らかな組織学的変化は認められなかった。一方、ＳＭＴＰ−７投与群でも近位尿細管の病理組織学的変化は認められるものの、その程度はＣｏｎｔｒｏｌ群に比し、軽度であり、有意な差は認められなかった。
病理組織学的検討により得られた顕微鏡画像の一例を図１〜図３に記載した。
図１はＳｈａｍ群、図２はＣｏｎｔｒｏｌ群、図３はシスプラチン投与１日後にＳＭＴＰ−７を１０ｍｇ／ｋｇで投与した群における、ＨＥ染色の結果をそれぞれ示している。【０１４１】
以上の結果から、本開示に係る薬剤は、慢性腎臓病及び急性腎臓病に対する治療効果及び予防効果を有していることがわかる。【０１４２】
２０１８年３月２３日に出願された日本国特許出願２０１８−０５７０５５号の開示は、その全体が参照により本明細書に取り込まれる。
本明細書に記載された全ての文献、特許出願、および技術規格は、個々の文献、特許出願、および技術規格が参照により取り込まれることが具体的かつ個々に記された場合と同程度に、本明細書中に参照により取り込まれる。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【国際調査報告】
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