(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
以下のアミノ酸配列を有する蛋白質：
0003779999.tif 000012
【請求項２】
以下の工程：
弱酸性緩衝液の存在下においてラナ・ピピエンスの卵を機械的に処理し、
機械的に処理した卵を第一および第二段階の陽イオン交換クロマトグラフィーに付し、そして
第二段階の陽イオン交換クロマトグラフィーから溶出した物質をサイズ排除クロマトグラフィーに付すこと
からなる、請求項１に記載の精製蛋白質の製造方法。
【請求項３】
第一および第二段階の陽イオン交換クロマトグラフィーを同一条件下に行う請求項２記載の方法。
【発明の詳細な説明】
発明の背景
本発明は医薬に関し、さらに詳しくはヒトにおける腫瘍の処置に使用する医薬に関する。この種の医薬はPCT特許出願WO 91/07435号およびWO 94/03197号に開示されている。
現在、腫瘍は、化学療法、放射線療法または外科手術のいずれかで処置されている。これらの治療法はそれぞれ欠点がある。
化学療法、放射線療法および外科手術の欠点を回避することは有利である。
本発明の目的の一つはヒトの腫瘍に対する薬物療法を提供することにある。
他の目的は、他の既知の治療法に比べて不利な副作用の少ない治療法を提供することにある。
さらに他の目的は、２種類以上の腫瘍に使用するための治療法を提供することにある。
さらに他の目的は、一般的に、ヒトにおける腫瘍の処置のための既知の治療法を改良することにある。
本発明によれば、ヒトにおける腫瘍の処置のための医薬の２つの好ましい実施態様が提供される。いずれの実施態様においても、医薬は分子量約12,000で特徴的な高い等電点を有する単純なタンパク質である。２つの実施態様のアミノ酸組成は類似するが同一ではない。必須ではないが有利にはこれらの実施態様はカエルの卵から誘導される。好ましい実施態様においてはこの医薬はカエル、ラナ・ピピエンス(Rana pipiens)の卵から誘導される。誘導は機械的処理、イオン交換クロマトグラフィーおよびサイズ排除クロマトグラフィーにより行われる。
1989年11月13日に出願された米国特許出願第07/436,141号およびそれ以後に出願されたその継続出願には、そのアミノ酸配列および組成を参照して医薬が記載され、そこに記載された医薬は本出願に記載され請求される第一の好ましい実施態様である。
1989年11月13日に出願された米国特許出願第07/436,141号およびそれ以後に出願されたその継続出願には、イオン交換クロマトグラフィーカラムから溶出する大きなタンパク質ピーク（抗増殖／細胞毒性活性を有する）の単離が教示され、またその活性タンパク質ピークの特定の説明が教示されている。イオン交換クロマトグラフィーカラムから溶出する別のタンパク質は均一な状態に精製されて特性が解明されており、この第二のタンパク質が本出願に記載され請求される第二の好ましい実施態様である。この第二の好ましい実施態様は第一の好ましい実施態様より遅れてカラムから溶出するので、第二の好ましい実施態様は、より塩基性の強い物質を含有するものである。試験により、この第二の好ましい実施態様もある種の癌細胞系に対して生物活性をもつことが示されている。本出願に記載され請求される２つの実施態様はわずかに異なるアミノ酸配列を有する極めて類似したタンパク質であり、第二のタンパク質は第一のタンパク質より塩基性が強い。
第一の好ましい実施態様は現在、臨床試験に使用されていて、この物質を比較的大量に製造することが必要になっている。第一の好ましい実施態様の工業的規模でのロットの製造のためのスケールアップ型に適当と考えられ、実際に行われているその好ましい製造方法は以下に記述する。第二の好ましい実施態様は少量が調製されたのみで、その製造のためにスケールアップが容易な方法は現在のところ存在しない。
【図面の簡単な説明】
本発明は、以下の例示的、非限定的な図面を参照すれば、そのよりよい理解が可能であろう。
図１は、好ましい実施態様の製造方法のフローチャートであり、本発明の好ましい方法を示す。
図２は、本発明の第一の好ましい実施態様による医薬を製造するための好ましい方法における第一の陽イオン交換クロマトグラフィーの結果の例示的記録を示す。
図３は、本発明の第一の好ましい実施態様による医薬を製造するための好ましい方法における第二の陽イオン交換クロマトグラフィーの結果の例示的記録を示す。
図４は、本発明の第一および第二の好ましい実施態様による医薬を製造するための好ましい方法における第三の陽イオン交換クロマトグラフィーの結果の例示的記録を示し、これにより活性タンパク質が濃縮される。
図５は、好ましい方法におけるサイズ排除クロマトグラフィーの結果の例示的記録を示し、これにより本発明の第一の好ましい実施態様による医薬が最終的に精製される。
図６は、本発明の第二の好ましい実施態様による医薬を製造するための陽イオン交換クロマトグラフィーの結果の例示的記録を示す。
図７は、本発明の第二の好ましい実施態様による医薬を最終的に精製するためのサイズ排除クロマトグラフィーの結果の例示的記録を示す。
図８は本発明の第一の好ましい実施態様による医薬のアミノ酸配列を示す。
図９は本発明の第二の好ましい実施態様による医薬のアミノ酸配列を示す。
好ましい実施態様の詳細な説明
Ｉ．製造方法
Ａ．ラナ・ピピエンスの卵の蓄積
本発明の好ましい実施態様においては、ラナ・ピピエンスの卵は、４月から８月の時期の雌のラナ・ピピエンス（この時期に雌のラナ・ピピエンスは自然に排卵する）から得られる。これらの卵を容器中に掻き落とし、−15℃〜−20℃において凍結した型で保存する。この保存は本発明の実施に必須ではないが、以後の処理をバッチで実施することが便利な場合にのみ好ましい。通常、以後の工程は重量約16〜21kgの卵のバッチを用いて行われる。
Ｂ．卵の機械的処理
卵を凍結していた場合には、それらを加熱しすぎない任意の方法で解凍する。解凍した、または凍結しなかった卵を、弱酸性の緩衝液の存在下にホモジナイズし、一連の凍結-解凍サイクルに付す。
好ましい実施態様においては、卵を室温で、１重量部の卵に対して２重量部の緩衝液を用い、0.15Ｍ酢酸ナトリウム（pH 5.0）と混合する。緩衝液は酢酸ナトリウムである必要はないが、酸性でなければならない。酢酸ナトリウムを使用するのは、好ましい実施態様においては、SP-Sepharose FFクロマトグラフィーが行われ、酢酸ナトリウムが４〜5.8のpH範囲内で（SP-Sepharose交換カラムが有効な範囲）良好な緩衝液であり、また弱酸性緩衝液はカラムの容量を増大させ、より良好な分離を生じるからである。ホモジナイズはワーリングブレンダー内で卵がすべて肉眼で見て破壊されるまで行うが、ワーリングブレンダーは必須ではなく、完全なホモジナイズを達成するための任意の衛生的な方法が使用できる。無傷の卵の痕跡が見られず、懸濁液が均一な外観を呈した時点で、ホモジナイズは完了する。好ましい実施態様においては、ホモジナイズは高速で５分間続ける。アリコート（0.5kg〜1.0kg）をホモジナイズして別個に瓶に詰め凍結する。
ホモジネートの全アリコートを、ついで周囲温度に一夜おいて解凍させる。約15〜17時間かけることが好ましい。ついで瓶を手で振盪し、ホモジネートを再凍結して−20℃±10℃で24時間保存する。解凍および再凍結のサイクルを続けてさらに４回繰り返す。５回目のサイクルの終了後、ホモジネートの瓶を−20℃±10℃に保存する。
凍結−解凍サイクルはホモジネートの粘度を低下させ、クロマトグラフィーカラムの詰まりを減少させる（下記参照）。凍結−解凍サイクルは、その目的には有効であるが、かなりの時間を要し、製造過程の所要時間を増大させる。時間を節約するために、凍結−解凍サイクルを凍結乾燥器中で完遂することもできる。
凍結/解凍-処理したホモジネートの全アリコートを密栓した保存容器中、周囲温度に一夜おいて解凍する。解凍された解凍／凍結−処理ホモジネートをついで、ペリスタポンプを用いてプロセス・プラスティック・カラム（Pharmacia, PP252/30または均等物）中プラスティックのネットを通して少しずつ連続的にろ過する。不溶の残留物はフローアダプターでフィルターの底部に押しつける。ろ液を集める。不溶の残留物をカラムセグメント中0.15Ｍ酢酸ナトリウム（pH 5.0）に再懸濁し、手で攪拌し、ろ過する。この工程に用いられる緩衝溶液の量は、初期のホモジネートの重量の約1/3である。不溶の残留物をついで除去し捨てたのち解凍ホモジネートの次の部分を上述のように処理する。全ホモジネート部分からのろ液を合わせる。
DEAE Sepharoseフィルター（2.5×１〜２cm, Pharmaciaでセットアップ，PP 252/30カラムセグメント）を３kgの0.15Ｍ酢酸ナトリウム（pH 5.0)で洗浄する。以下に記載の処理工程でカラムを詰まらせる可能性のある細胞屑を除去するため、前工程からのろ液を合わせたものをペリスタポンプを用いDEAE Sepharoseフィルターを２度通過させる。ろ液を予め秤量した容器中に集め、ついで0.15Ｍの酢酸ナトリウム（pH 5.0）を２回に分けて（各1.0kg）フィルターを通過させる。これらの工程からのすべてのろ液を合わせて15〜30ガロンのタンクに取る。合わせたろ過溶液を攪拌装置で5〜10分間攪拌し秤量する。
攪拌した集合ろ過溶液を、48時間以内にさらに処理する場合には、２℃〜８℃に保存する。そうではなく、処理が48時間以上のちに行われる場合には、攪拌した集合ろ過溶液は−20℃±10℃で凍結保存する。
以下にさらに詳細に記述するように、攪拌した集合ろ過溶液は中間体であり、それから本発明の第一および第二の好ましい実施態様を抽出できる。本発明の第一の好ましい実施態様を製造するためには、攪拌した集合ろ過溶液を２工程の陽イオン交換クロマトグラフィー、１工程の濃縮、および１工程のサイズ排除クロマトグラフィーに記載の順序で付す。本発明の第二の好ましい実施態様の製造には、攪拌した集合ろ過溶液を１工程の陽イオン交換クロマトグラフィー、１工程の濃縮、および１工程のサイズ排除クロマトグラフィーに付す。以下の工程Ｃ１，Ｄ１，Ｅ１およびＦ１には本発明の第一の好ましい実施態様の製造を記載し、工程Ｃ２，Ｄ２およびＥ２には本発明の第二の好ましい実施態様の製造を記載する。
Ｃ１．第一の陽イオン交換クロマトグラフィー
以下に記載する第一の陽イオン交換クロマトグラフィーにおいては２種の活性タンパク質および他の塩基性分子は交換樹脂に結合し、カラム中に保持される。大部分の他の成分は、カラムに最初に負荷した時点でカラムから溶出される。ついで、活性タンパク質は、0.15Ｍ酢酸ナトリウム緩衝液（pH 5.0）中食塩の段階的勾配を用いて溶出する。この結果、エンドトキシンを実質的に含まない物質が得られる。
溶出液にいつ活性タンパク質が含まれるかを決定するには、溶出液を連続的に280nmの紫外線（以下「280nm UV」と略す）の吸収によってモニターする。タンパク質はこの波長の光の強力な吸収物質であり、したがって280nm UVの吸収は活性タンパク質がカラムから溶出していることの良好な指標となる。
Pharmaciaのプロセス・プラスチック・カラム（PP 113/60もしくは均等物）にSP Sepharose FF(Pharmacia)樹脂を充填して11.3cm×30〜40cm固定床（3.0Ｌ〜4.0Ｌ）を得る。このカラムには、0.15Ｍ酢酸ナトリウム（pH 5.0）中DEAE Sepharose FFプレフィルターを設ける。Pharmaciaのプロセス・プラスチック・カラム（PP 252/15もしくは均等物）にDEAE Sepharose FFを充填し、床サイズ25.5×１〜２cmとする。プレフィルターおよび処理カラムは、カラムからの流出液のpHが5.0±0.1， 280nm UVの吸収が平坦なベースラインを示すまで0.15Ｍ酢酸ナトリウム（pH 5.0）で平衡化する。
上述の工程Ｂの最後に調製された攪拌した集合ろ過溶液を室温に戻す。ついでこれをペリスタポンプを用い、線流速50〜75cm/hでプレフィルターを通してカラムに負荷し、このカラム中で陽イオン交換クロマトグラフィーに付す。
カラム負荷時に溶出する初期の「貫流分画」（図２）は捨てる。カラム負荷完了時に、カラムに0.15Ｍ酢酸ナトリウム（pH 5.0）を、280nm UVの吸収がベースラインに近づくまで通過させる。流出液は捨てプレフィルターを外す。
ついで、７〜10カラム床容量の0.15Ｍ酢酸ナトリウム緩衝液（pH 5.0）中0.04Ｍ NaClをカラムに通し、この間連続的に280nm UVの吸収をモニターする。溶出液（陽イオン交換樹脂に弱く結合する成分）は、280nm UVの吸収が再び上昇するまで捨てる。
この時点で0.04Ｍ NaCl含有緩衝液を0.1Ｍ NaCl含有緩衝液に置換する。少なくとも２カラム容量の緩衝液をカラムに通過させたのちに、緩衝液中0.1Ｍ食塩によって溶出されるピークを、280nm UVの吸収が図２にタンパク質ピークと表示した大きなピークにある間、収集する。２種の活性タンパク質の第一のタンパク質（すなわち、本発明の好ましい第一の実施態様）を部分精製型で含有する溶出液を衛生的な容器に収集する。
Ｄ１．第二の陽イオン交換クロマトグラフィー
以下に説明する第二の陽イオン交換クロマトグラフィー工程では、条件は上記Ｃに記載の第一の陽イオン交換クロマトグラフィー工程の場合と正確に同一である。すなわち、0.15Ｍ酢酸ナトリウム緩衝液中0.04Ｍ食塩を最初に流し（この場合はカラムに少なくとも15床容量を通過させる）、第一の活性タンパク質（すなわち、本発明の好ましい第一の実施態様）は280nm UVの吸収が上昇し始めたならば、緩衝液中0.1Ｍ食塩を用いて溶出する。
第二の陽イオン交換クロマトグラフィー工程、ならびに以後の各製造工程は清潔な部屋で行う。緩衝溶液はすべて注射用滅菌水（米局）で調製し、使用前に滅菌0.22μm Sterivex-GS膜フィルター（Millipore Corp.，または均等物）を通してろ過する。
Pharmacia BioProcess Glass Column（BPG 100/750，もしくは均等物）にSP Sepharose FF(Pharmacia)を充填して10cm×30〜40cm（2.35Ｌ〜3.1Ｌ）の樹脂床を得る。カラムは、0.15Ｍ酢酸ナトリウム緩衝液，pH 5.0中で平衡化する。
上記工程Ｃに記載の前の陽イオン交換クロマトグラフィー工程の最後に溶出した部分精製活性タンパク質を、等容量の注射用滅菌水（米局）で希釈し、50〜75cm/hで操作したペリスタポンプを用いてカラムに負荷する。
部分精製活性タンパク質がカラムに負荷されたならば、少なくとも15床容量の0.15Ｍ酢酸ナトリウム緩衝液中0.04Ｍ NaCl, pH 5.0をカラムに通過させる。これを280nm UVの吸収がベースライン以上に上昇するまで継続する。この上昇が起こったならば、緩衝液を0.15Ｍ酢酸ナトリウム緩衝液中0.1Ｍ NaCl, pH 5.0に変更し、カラムに少なくとも２カラム床容量のNaCl緩衝液を通過させる。活性タンパク質を含有する流出液（すなわち、図３にタンパク質ピークと表示したピーク下に存在）を滅菌した容器に収集する。
Ｅ１．クロマトグラフィーによる濃縮
この工程では、タンパク質を含有する流出液をSP Sepharose FFクロマトグラフィーで濃縮する。Pharmacia BioProcess Glass Column（BPG 100/500，もしくは均等物）にSP Sepharose FF樹脂(Pharmacia)を充填して10cm×７〜10cmの樹脂床を得る。カラムの負荷および溶出には、50〜75cm/hで操作したペリスタポンプを用い、前のクロマトグラフィー工程と同様に280nm UVの吸収を連続的にモニターする。
カラムを0.15Ｍ酢酸ナトリウム（pH 5.0）でカラム流出液がpH 5.0±0.1になり、280nm UVの吸収が平坦なベースラインになるまで平衡化する。
上記工程Ｄの最後に生成したタンパク質含有流出液を、等容量の注射用滅菌水（米局）で希釈し、カラムに負荷する。280nm UVの吸収を連続的にモニターする。カラムへの負荷が完了したならば、カラムを１カラム容量の注射用滅菌水（米局）で洗浄し、過剰の酢酸ナトリウム緩衝液を除去する。
ついで１Ｍ NaClをカラムに通す。280nm UVの吸収を連続的にモニターし、第一の活性タンパク質（すなわち本発明の好ましい第一の実施態様）のピークを滅菌容器に収集する。ピークは図４にタンパク質ピークと表示したピークである。
Ｆ１．サイズ排除クロマトグラフィーによる精製
サイズ排除クロマトグラフィーは上記工程Ｅの最後に生成した濃縮活性タンパク質について実施する。前工程から回収されたタンパク質は高度に精製されているが、なお少量の他の分子を含有する。これらの分子は第一の好ましい実施態様と同じ等電点を有するか、またはそれに極めて類似する等電点を有する。したがって、これらの分子は陽イオン交換クロマトグラフィーによる前工程では除去されない。しかしながら、これらの分子は本発明の第一の好ましい実施態様とは異なる分子量を有し、この工程の間にサイズ排除クロマトグラフィーによって除去される。
縦列に２本のカラムを用いる。それぞれPharmacia BioProcess Glass Column（BPG 200/950，もしくは均等物）である（縦列カラムは適当なサイズのカラム床を得る便利な方法であることから、縦列カラムを選択した。これは本発明の必須要件ではない）。各カラムにSephacryl S-100高分解能樹脂(Pharmacia)を充填して20cm×50〜60cm樹脂床（各カラム17〜20Ｌ）を形成させる。カラムへの材料の供給には流速５〜10cm/hにペリスタポンプを調整して使用し、溶出液の280nm UVの吸収を連続的にモニターする。
カラムを少なくとも２カラム床容量の注射用滅菌水（米局）中0.075Ｍ重炭酸アンモニウムで平衡化する。上記工程Ｅの最後に生成した濃縮活性タンパク質をカラムに負荷し、注射用滅菌水（米局）中0.075Ｍ重炭酸アンモニウムを流す。溶出液の280nm UVの吸収を連続的にモニターする。
活性タンパク質より分子量の大きい分子は活性タンパク質より前にカラムから溶出する。これらのピークは捨てる。活性タンパク質を含有する主ピーク分画（これらは図５にタンパク質ピークと表示したピーク下に存在する）は衛生的な瓶に収集する。ピークの上昇および下降ショルダー下分画のアリコート（0.05mL〜0.1mL）について純度を試験する。得られた結果に基づいて、純粋なタンパク質を含む分画をピークの主要部分と、滅菌した高密度ポリエチレンまたはポリプロピレン容器中で合わせる。
得られた純粋なタンパク質を含む溶液を、滅菌した0.22μmのSterivax-GS（Millipore Corp.，または均等物）膜フィルターを通して滅菌容器中にろ過する。このろ液は活性タンパク質のサブロットである。
Ｃ２．陽イオン交換クロマトグラフィー
クロマトグラフィーカラムにSP Sepharose FF樹脂を充填し、直径2.5cm，長さ7.2cmの固定床を形成させる。このカラムを0.15Ｍ酢酸ナトリウム緩衝液で平衡化する。上述の工程Ｂにおいて最後に生成した、撹拌した集合ろ過溶液を、カラムに流速50mL/hで負荷する。クロマトグラフィーは、280nm UVの吸収を測定して連続的にモニターし、各5.85mLの分画を自動的に収集する。貫流分画（ほぼ分画51で終了）は捨てる。ついでカラムを平衡化緩衝液中連続（0Ｍ〜0.45Ｍ）食塩勾配で展開する。バーで指示し、タンパク質ピークと表示した図６のピークが本発明の第二の好ましい実施態様を含有し、このピーク下のすべての分画を収集する。
Ｄ２．濃縮
上記工程Ｃ２の最後に収集された分画をついで、上記工程Ｅ１と同様にして濃縮する。Pharmacia BioProcess Glass Column（BPG 100/500，もしくは均等物）にSP Sepharose FF樹脂(Pharmacia)を充填して2.5cm×1.3cmの樹脂床を得る。カラムの負荷および溶出には、50〜75cm/hで操作したペリスタポンプを用い、280nm UV光の吸収を連続的にモニターする。
カラムを、カラムからの流出液のpHが5.0±0.1になり、280nm UVの吸収が平坦なベースラインを示すまで、0.15Ｍ酢酸ナトリウム（pH 5.0）で平衡化する。
上記工程Ｃ２の最後に収集された分画を等容量の水で希釈し、カラムに負荷する。280nm UVの吸収を連続的にモニターする。カラムの負荷が完了したならば、カラムを１カラム容量の水で洗浄して過剰の酢酸ナトリウム緩衝液を除去する。
ついで、１Ｍ NaClをカラムに通す。280nm UVの吸収を連続的にモニターし、図４にタンパク質ピークと表示したピーク（すなち、本発明の第二の実施態様）を衛生的な容器に収集する。
Ｅ２．サイズ排除クロマトグラフィー
上述の工程Ｄ２．の最後に収集された分画を、水中0.075Ｍ重炭酸アンモニウムを用いてSephacryl S-100高分解能樹脂(Pharmacia)を充填し、2.5cm×46cm樹脂床を形成させたカラムにより、クロマトグラフィーを行う。分画は自動的に収集する。主ピーク下の分画（このピークは図７にタンパク質ピークと表示されている）を収集した。これらの収集された分画は本発明の第二の実施態様の精製された状態である。
II．好ましい実施態様の生物活性
インビトロおよびインビボで確認された動物データは、本発明の第一の好ましい実施態様による医薬が、ヒト下顎類表皮癌A-253細胞ならびにヒト卵巣腺癌NIH-OVCAR-3細胞に対して活性であることを示している。この第一の好ましい実施態様はまた、ヒト白血病HL-60細胞、結腸腺癌から最初に単離されたヒトCOLO 320 DM細胞、ヒトLOX黒色腫、およびヒト肺鱗癌HT-520細胞に対しても活性を示す。
本発明の第一の好ましい実施態様による医薬の活性を報告している刊行された論文は、
Cell Tissue Kinet.（1988）21, 169-182,
Br.J.Cancer（1992）66, 304-310,
Int.J.Oncol.（1992）1, 779-785
に見られる。
第二の好ましい実施態様による医薬がヒト下顎類表皮癌A-253細胞およびヒト膀胱癌T-24細胞に対して活性であることはインビトロのデータによって示されている。
好ましい実施態様の化学分析および組成
本発明の好ましい実施態様は、化学的な特性が十分に解明されている。実施態様はラナ・ピピエンスから単離されたタンパク質であるが、最終結果が以下の化学および構造である限り、それらは遺伝子工学的技術を用いて製造可能であると考えられる。
両実施態様ともに、純粋なタンパク質である（すなわち、タンパク質の均一性をアッセイするために使用される標準試験によって確立された均一性を示す）。以下に掲げたアミノ酸配列に基づく分子量の計算によれば、分子量は、第一の好ましい実施態様の場合11,835であり、第二の好ましい実施態様の場合11,890である。マススペクトルによって測定すると、第一の好ましい実施態様の分子量は約12,000であり、第二の好ましい実施態様の分子量もマススペクトルによって測定すれば同じであることが期待される。好ましい実施態様はいずれも等電点ｐＩを9.5〜10の間に有し、既知の配列から計算すると第一の好ましい実施態様の等電点ｐＩは9.70であり、第二の好ましい実施態様の等電点ｐＩは9.94である。いずれもブロックされたアミノ末端基を有し、本質的に炭水化物は含まない（アントロンおよびオルシノール法によって決定）。
本発明の好ましい実施態様は以下の特性を有する。
0003779999.tif 000002
0003779999.tif 000003
0003779999.tif 000004
0003779999.tif 000005
0003779999.tif 000006
0003779999.tif 000007
0003779999.tif 000008
0003779999.tif 000009
本発明の好ましい実施態様は配列決定されている。以下に示すように、いずれの例も総配列の長さは104残基である。このタンパク質のＮ−末端はピログルタミン酸（＜Glu）である。これは直接配列決定に必要な遊離アミノ基を欠くグルタミン酸の環状誘導体であり、したがって、このタンパク質のＮ−末端を「ブロック」している。
本発明の第一の好ましい実施態様は以下のアミノ酸配列を有する。
0003779999.tif 000010
本発明の第二の好ましい実施態様は以下のアミノ酸配列を有する。
0003779999.tif 000011
以上、２つの好ましい実施態様について説明したが、本発明の範囲は以下の請求の範囲によってのみ限定される。
【図１】
0003779999.tif 000013
【図２】
0003779999.tif 000014
【図３】
0003779999.tif 000015
【図４】
0003779999.tif 000016
【図５】
0003779999.tif 000017
【図６】
0003779999.tif 000018
【図７】
0003779999.tif 000019
【図８】
0003779999.tif 000020
【図９】
0003779999.tif 000021