(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
α−(２,４−ジスルホフェニル)−Ｎ−ｔｅｒｔ−ブチルニトロン二ナトリウム塩の濃縮水溶液を含み、濃度が１００〜６００mg／mlの範囲で、ｐＨが７〜９.５の範囲内であることを特徴とする医薬処方物。
【請求項２】
濃度が２００〜４００mg／mlである、請求項１に記載の処方物。
【請求項３】
濃度が４００mg／mlである、請求項１に記載の処方物。
【請求項４】
溶液が生理的に許容される緩衝剤を用いてｐＨ範囲７〜９.５以内に緩衝される、請求項１〜３の何れか一項に記載の処方物。
【請求項５】
溶液がｐＨ８.５に緩衝される、請求項４に記載の処方物。
【請求項６】
緩衝剤がリン酸塩緩衝剤である、請求項４または５に記載の処方物。
【請求項７】
溶液が不活性ガスでパージされる、請求項１〜６の何れか一項に記載の処方物。
【請求項８】
溶液が密封ガラスバイアル中に上部空間体積がバイアルの全最大体積の３０％未満で貯蔵され、そして該上部空間が不活性ガスで充填される、請求項１〜７の何れか一項に記載の処方物。
【請求項９】
密封ガラスバイアル内の上部空間体積が該バイアルの全最大体積の２０％未満である、請求項８に記載の処方物。
【請求項１０】
不活性ガスが窒素である、請求項７〜９の何れか一項に記載の処方物。
【請求項１１】
α−(２,４−ジスルホフェニル)−Ｎ−ｔｅｒｔ−ブチルニトロン二ナトリウム塩を注射用水または適切な緩衝剤水溶液に溶解し；必要により該溶液のｐＨをｐＨ範囲７〜９.５以内に調節し、次いで場合により不活性ガスを用いて該溶液を脱気することを含む、請求項１〜７の何れか一項に記載の処方物の製造方法。
【請求項１２】
下記の工程：
ａ) 好適な緩衝剤を注射用水に溶解し；
ｂ) α−(２,４−ジスルホフェニル)−Ｎ−ｔｅｒｔ−ブチルニトロン二ナトリウム塩を該緩衝剤溶液に溶解し；
ｃ) ｐＨをチェックし、次いで適切な量の水酸化ナトリウム水溶液または塩酸水溶液の添加によりｐＨをｐＨ範囲７〜９.５以内に調節し；
ｄ) 注射用水をさらに添加して、α−(２,４−ジスルホフェニル)−Ｎ−ｔｅｒｔ−ブチルニトロン二ナトリウム塩の必要な最終濃度を与え；
ｅ) 該溶液を窒素ガスで好適な時間脱気し；
ｆ) 該溶液を０.２２μｍ滅菌フィルターに通して前滅菌した容器中に滅菌濾過し；
ｇ) 該溶液を窒素中で個々のバイアル中に無菌的に移し、次いで各バイアルを密封すること、
を含む請求項１１に記載の方法。
【請求項１３】
工程ａ)における緩衝剤が、リン酸水素二ナトリウムである請求項１２に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明の分野】
本発明は、α−(２,４−ジスルホフェニル)−Ｎ−ｔｅｒｔ−ブチルニトロンおよびその製薬上許容される塩の新規な医薬処方物、および種々の疾患および状態の処置におけるこのような処方物の使用に関する。このような化合物は、別に４−[(ｔｅｒｔ−ブチルイミノ)メチル]ベンゼン−１,３−ジスルホン酸Ｎ−オキシド誘導体と名付けられる。
【０００２】
【発明の背景】
米国特許第５,４８８,１４５号には、α−(２,４−ジスルホフェニル)−Ｎ−ｔｅｒｔ−ブチルニトロンおよびその製薬上許容される塩が開示されている。米国特許第５,４７５,０３２には、卒中および進行性中枢神経系機能損失状態の治療におけるこのような化合物の使用が開示されている。米国特許第５,５０８,３０５には、疾患の抗腫瘍剤処置から生じる酸化的損傷により引き起こされる副作用を寛解するためのこのような化合物の使用が開示されている。同様の開示はＷＯ ９５／１７８７６でも行われている。米国特許第５,７８０,５１０には、振盪症の処置におけるこれら同じ化合物の使用が開示されている。
【０００３】
卒中、振盪症、外傷性脳傷害およびＣＮＳ外傷のような状態の処置に使用するためには、α−(２,４−ジスルホフェニル)−Ｎ−ｔｅｒｔ−ブチルニトロンの製薬上許容される塩を非経口的に投与することが必要である。この化合物を静脈内輸液により投与することが特に好ましい。α−(２,４−ジスルホフェニル)−Ｎ−ｔｅｒｔ−ブチルニトロンおよびその製薬上許容される塩の標準水性処方物は、これらが容易に分解を受けるという問題をこうむる。特に、このような処方物の貯蔵寿命は受け入れられないほど短い。本発明は、分解に関連する問題を解決し、そして非経口的投与に使用するのに特に適しているα−(２,４−ジスルホフェニル)−Ｎ−ｔｅｒｔ−ブチルニトロン二ナトリウム塩の濃縮水溶液に基づく特定の医薬処方物を開示する。
【０００４】
【発明の開示】
一つの態様において、本発明は、一般式(Ｉ)の化合物
【化１】
0003744857.tif 000002
（式中、Ｍは製薬上許容される陽イオンを表す）の医薬処方物を提供する。
Ｍ+がＮａ+を表すことが特に好ましい。
【０００５】
α−(２,４−ジスルホフェニル)−Ｎ−ｔｅｒｔ−ブチルニトロン二ナトリウム塩の水溶液は少なくとも二つの異なる経路で分解を受ける。２,４−ジスルホベンズアルデヒド二ナトリウム塩（II）は、これらの経路の共通生成物である。
【化２】
0003744857.tif 000003
【０００６】
理論で拘束されることを欲せずに、一方の分解経路はニトロン官能基の加水分解を伴い、アルデヒド（II）およびＮ−tert−ブチルヒドロキシルアミンが生成物として生じる。第二の経路は自動酸化過程を伴い、おそらく遊離基で媒介される分解を伴う。この経路においては、上記の同じ二つの生成物が最初に形成されるが、Ｎ−tert−ブチルヒドロキシルアミンは続いてさらなる反応を行い、他の生成物を与える。自動酸化過程は温度、水素イオン濃度、極微量の金属、極微量の過酸化物または光によって影響されることが知られている［K. Kasraian ら, Pharm. Dev. & Technol., 4(4), 475-480 (1999)］。例えばフェントン型自動酸化は周知である。このような酸化は典型的には金属、特にイオンと分子状酸素との相互作用によって開始され、ヒドロキシル基を生じる［B. Halliwell および J. Gutteridge, Biochem. J., 219, 1-14 (1984)］。
【０００７】
酸化的分解の複雑な性質のため、そしてこの場合に加水開裂により同時に起こる分解のために、どのようにすれば式(Ｉ)の化合物の安定な処方物の製造を達成できるかは明らかでない。この技術分野では、酸化的分解を受けやすい化合物は、酸化に対するそれらの抵抗性が上昇するように、低い（酸性の）ｐＨ値で処方すべきであることが認められている。特にこのような分解は、ｐＨ３〜４で最小限にされることが一般的に認められている（Pharmaceutical Preformulation, J. I. Wells 編, Ellis Horwood, 1988, 166頁）。しかしながらこの場合は、低いｐＨの使用は付随する加水分解の速度の容認できない加速をもたらす。
【０００８】
どの要因がα−(２,４−ジスルホフェニル)−Ｎ−ｔｅｒｔ−ブチルニトロン二ナトリウム塩の水性処方物の安定性に対して重要な効果を有するのかを確認するために研究を行った。調査した要因はｐＨ、溶液中および溶液上の酸素レベル、極微量金属の存在、および酸化防止剤またはキレート化剤の添加を含んでいた。最初の場合、溶液中の形成された２,４−ジスルホベンズアルデヒド二ナトリウム塩（II）の濃度の測定により、分解を評価した。
【０００９】
α−(２,４−ジスルホフェニル)−Ｎ−ｔｅｒｔ−ブチルニトロン二ナトリウム塩の種々のバッチの極微量金属を分析したところ、ｐｐｍ以下のレベルでさえ、鉄、そしてまたおそらく銅、クロムおよびアルミニウムの存在が、続いて調製した水性処方物の安定性に対して効果を有するであろうことを示した。しかしながら、周知のキレート化剤であるエチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ）二ナトリウムの添加は、水性処方物の安定性を改善しなかった（表２）。キレート化樹脂 Chelex-100 (登録商標)（Bio-Rad Laboratories）の使用は、貯蔵に際して形成されたアルデヒド（II）の量を少しではあるが有意に減少させた（表３）。
【００１０】
酸化防止剤であるアスコルビン酸ナトリウムをα−(２,４−ジスルホフェニル)−Ｎ−ｔｅｒｔ−ブチルニトロン二ナトリウム塩の濃縮水性処方物に添加したところ、貯蔵の際のアルデヒド（II）の形成は、ほとんど半分だけ減少した（表２）。しかしながら、これらの溶液は変色をきたし、そして若干の沈殿が生じたので、分解レベルを低下させる手段としてのアスコルビン酸塩の役割を除外した。驚くべきことに、類似レベルのアルデヒド（II）形成の減少は、α−(２,４−ジスルホフェニル)−Ｎ−ｔｅｒｔ−ブチルニトロン二ナトリウム塩の濃縮水溶液を窒素ガスでパージする簡単な便法によって達成された（表２および３）。
【００１１】
水性濃縮物それ自体を不活性ガスでパージすることに加えて、バイアル中の濃縮物の上にある上部空間の体積を減少させること、およびこの空間を不活性ガスで充填することも有益である（表４、５および６）。上部空間体積がバイアルの全最大体積の３０％未満であることが好ましい。上部空間体積がバイアルの全最大体積の２０％未満であることがさらに好ましい。標準１０mlサイズ医薬用バイアルの場合、実際の全最大体積は１３mlであり、１０.７mlの実際の充填体積を用いることが好都合である。標準２０mlサイズ医薬用バイアルの場合、実際の全最大体積は２５mlであり、２０.７mlの実際の充填体積を用いることが好都合である。標準２０mlサイズ医薬用バイアルの使用が好ましい。
【００１２】
最も驚くべきことは、α−(２,４−ジスルホフェニル)−Ｎ−ｔｅｒｔ−ブチルニトロン二ナトリウム塩の水溶液の安定性が、溶液中のα−(２,４−ジスルホフェニル)−Ｎ−ｔｅｒｔ−ブチルニトロン二ナトリウム塩の濃度が高まるにつれて実質的に上昇したという事実であった。この安定化は、形成されたアルデヒド（II）の量の減少、および自動酸化経路から生じる他の生成物の減少の両方に関して明らかであった（表８、９および１０）。
【００１３】
従って本発明に係る特別の処方物は、α−(２,４−ジスルホフェニル)−Ｎ−ｔｅｒｔ−ブチルニトロン二ナトリウム塩の濃縮水溶液を含み、α−(２,４−ジスルホフェニル)−Ｎ−ｔｅｒｔ−ブチルニトロン二ナトリウム塩の濃度が５０〜６００mg／mlの範囲にある。好ましい処方物は、濃度が１００〜６００mg／mlの範囲内にある処方物である。より好ましいものは、濃度が２００〜４００mg／mlの範囲内にある処方物である。特に好ましいものは、濃度が約４００mg／mlである処方物である。このような溶液を不活性ガスでパージし、そして不活性ガスの下で貯蔵することがさらに好ましい。不活性ガスとして窒素を使用することが特に好ましい。
【００１４】
このような濃縮溶液は、さらに安定化するために緩衝剤を必要としない。しかしながら患者に静脈内輸液として投与する前に、このような処方物は生理食塩水で希釈される。この希釈工程はｐＨ低下をもたらし、得られた希釈溶液の分解速度がこれによって加速する。このｐＨ変化を防止するために、緩衝剤が必要である。この緩衝剤を希釈段階で添加するよりはむしろ、濃縮処方物中に含めておくことが極めて好都合である（表１１、１２および１３）。
【００１５】
従って本発明のもう一つの好ましい態様において、溶液がｐＨ７〜９.５で緩衝されている濃縮水性処方物が提供される。より好ましくは、溶液はｐＨ約８.５で緩衝されている。任意の生理的に許容される緩衝剤を使用できる。好ましくは緩衝剤はリン酸塩緩衝剤である。従ってリン酸水素二ナトリウム(５〜５０mM)を濃縮物に添加し、そして水酸化ナトリウム水溶液または塩酸水溶液を適宜に添加することにより、ｐＨを必要なレベルに調節する。
【００１６】
もう一つの態様において、本発明は、α−(２,４−ジスルホフェニル)−Ｎ−ｔｅｒｔ−ブチルニトロンの製薬上許容される塩の新規な処方物の製造方法、特にα−(２,４−ジスルホフェニル)−Ｎ−ｔｅｒｔ−ブチルニトロン二ナトリウム塩の新規な処方物の製造方法に関する。
【００１７】
一般的な用語で述べると、この方法は、α−(２,４−ジスルホフェニル)−Ｎ−ｔｅｒｔ−ブチルニトロンの製薬上許容される塩を水または好適な緩衝剤水溶液に溶解し、次いで必要に応じて、溶液のｐＨをｐＨ範囲７〜９.５以内に調節し、そののち場合により窒素のような不活性ガスを用いて溶液を脱気することを含む。
【００１８】
好ましくは、この方法は下記の工程：
ａ) 好適な緩衝剤、例えばリン酸水素二ナトリウムを注射用水に溶解し；
ｂ) α−(２,４−ジスルホフェニル)−Ｎ−ｔｅｒｔ−ブチルニトロン二ナトリウム塩を該緩衝剤溶液に溶解し；
ｃ) ｐＨをチェックし、次いで適切な量の水酸化ナトリウム水溶液または塩酸水溶液の添加によりｐＨをｐＨ範囲７〜９.５以内に調節し；
ｄ) 注射用水をさらに添加して、α−(２,４−ジスルホフェニル)−Ｎ−ｔｅｒｔ−ブチルニトロン二ナトリウム塩の必要な最終濃度を与え；
ｅ) 該溶液を窒素ガスで好適な時間脱気し；
ｆ)  該溶液を０.２２μｍ滅菌フィルターに通して前滅菌した容器中に滅菌濾過し；
ｇ) 該溶液を窒素中で個々のバイアル中に無菌的に移し、次いで各バイアルを密封することを含む。
特に好ましい方法は、実施例１に詳細に開示する方法である。
【００１９】
ある事情によっては、非経口投与に意図した医薬処方物を多用量容器中に存在させうることが特に好都合である。多用量容器は、内容物の逐次的部分を、残りの部分の濃度、質または純度を変化させることなく抜き取ることを可能にする容器である。多用量水性注射液は、その調製物それ自体が充分な抗微生物特性を有する場合を除いて、好適な抗微生物保存剤を適切な濃度で含有することが、規制要件である（ヨーロッパ薬局方２００１年）。この技術分野では、無菌的に充填される医薬製品（すなわち、０.２２μｍフィルターを通した濾過により最終的に滅菌されるもの）は、製造工程中の微生物汚染に対して格別に敏感であることが認められている。それ故に、製造の観点ならびに他の安全性の理由の両方から（例えば臨床における製品の取り扱いおよび貯蔵中に生じる損傷による可能な汚染）、薬剤処方物それ自体が抗微生物特性を示すならば、著しく有利であると考えられる。従って、医薬処方物それ自体が保存剤に関する規制要件を満たすならば、別の保存剤を添加する要件は廃止される。
【００２０】
それ故に、本発明のもう一つの利点は、本明細書に開示する濃縮水性処方物が著しい抗微生物特性を有することである。従って、α−(２,４−ジスルホフェニル)−Ｎ−ｔｅｒｔ−ブチルニトロン二ナトリウム塩の処方物が次の微生物の成長を阻止するための可能性を評価した − シュードモナス・アエルギノーザ（Ps. aeruginoza, 緑膿菌）、スタフィロコッカス・オーレウス（S. aureus, 黄色ぶどう球菌）、Bur. cepacia、エンテロバクター・ジェルゴビエ（E. gergovia)、エシェリヒア・コリ（E. coli, 大腸菌）、カンジダ・アルビカンス（C. albicans）およびアスペルギルス・ニガー（A. niger, 黒色麹菌）。
【００２１】
表１４に示すように、α−(２,４−ジスルホフェニル)−Ｎ−ｔｅｒｔ−ブチルニトロン二ナトリウム塩を含む本発明に係る濃縮水性処方物（４００mg／ml）は、かなりの抗微生物効力を有する。このように、Ps. aeruginoza、Bur. cepacia および E. gergovia では、ml当たりのコロニー形成単位（ＣＦＵ／ml）の極めて有意な減少（≧１０3倍）が６時間以内に認められる。そして同様のレベルの効果が、S. aureus および E. coli では２４時間以内に、C. albicans では４８時間以内に認められる。詳細な結果を表１４に示し、α−(２,４−ジスルホフェニル)−Ｎ−ｔｅｒｔ−ブチルニトロン二ナトリウム塩の処方物（１０mg／ml）および緩衝剤コントロールに関する比較結果をそれぞれ表１５および１６に示す。
【００２２】
表７に示すように、α−(２,４−ジスルホフェニル)−Ｎ−ｔｅｒｔ−ブチルニトロン二ナトリウム塩の希釈水溶液（０.９mg／ml）は、室温で普通の室内光に８時間あてると著しい光分解を受ける。水溶液を緩衝すると光分解速度が低下される。より濃縮した水溶液（１０mg／ml）は著しく低下した程度で光分解を受ける（表７）。同じ条件下で、本発明の一態様に係る水性濃縮処方物（４００mg／ml）は、同じ時間規模以内に光分解を受けなかった。
【００２３】
特に好ましい実施形態において、本発明は、窒素でパージされ、そして小さい上部空間および窒素で充填された上部空間を有する２０ml密封ガラスバイアル中に貯蔵された、α−(２,４−ジスルホフェニル)−Ｎ−ｔｅｒｔ−ブチルニトロン二ナトリウム塩の濃縮水溶液（４００mg／ml）およびリン酸水素二ナトリウム（５〜５０mM）を含むｐＨ８.５の医薬溶液を提供する。よりいっそう好ましくは、リン酸水素二ナトリウムは約１０mMの濃度で存在する。このような処方物は、冷蔵（約２〜８℃の温度）貯蔵すると、少なくとも２４か月間の予想外に長い貯蔵寿命を有し、そして室温で貯蔵したときでさえ、少なくとも６か月間、使用可能な状態を維持する。
本発明を下記の実施例により説明するが、決して限定するものではない。
【００２４】
実施例１
α−(２,４−ジスルホフェニル)−Ｎ−ｔｅｒｔ−ブチルニトロン二ナトリウム塩の水性濃縮処方物の製造
リン酸水素二ナトリウム二水和物（１８６ｇ）を注射用水（６０kg）に加えた。この混合物を溶解が完了するまで３００rpmの速度で撹拌した（１０分間）。そのときの溶液のｐＨは９.３であった。次いでα−(２,４−ジスルホフェニル)−Ｎ−ｔｅｒｔ−ブチルニトロン二ナトリウム塩（３９.６kg）を加え、この材料が溶解するまで撹拌を続けた（２０分間）。次いで溶液のｐＨを２Ｍ水酸化ナトリウム水溶液（６０４ml）の添加により５.８〜８.５に調節した。注射用水をさらに加えて１１７.１kgの最終重量を得た。これらの量を用いて、４００mg／mlのα−(２,４−ジスルホフェニル)−Ｎ−ｔｅｒｔ−ブチルニトロン二ナトリウム塩を含有する濃縮物が得られる。ニトロンの使用量を変更することにより、５０〜６００mg／mlの範囲の濃度を有する濃縮物を同様に製造することができる。  次いで上記の溶液を窒素ガスで１３０分間脱気した（表１）。
【００２５】
【表１】
0003744857.tif 000004
【００２６】
次いで上記の溶液を、前滅菌した４００Ｌステンレススチール容器中に０.２２μｍ滅菌フィルターを用いて濾過した。窒素ガスを用いてこの容器に１０〜１５kPaの圧力をかけた。この溶液を、加熱滅菌した乾燥１０mlまたは２０mlガラスバイアル中に滅菌濾過した窒素ガスを用いて無菌的に充填し、充填の前および後の両方で窒素ガスをバイアル中にパージした。充填体積はそれぞれ１０.５mlおよび２０.７mlであった。
バイアル中の残留酸素の工程内管理を、東レ酸素分析装置を用いて行った。上部空間中の残留酸素含有量は０.９±０.１％（ｎ＝２９）であった。
【００２７】
実施例２
α−(２,４−ジスルホフェニル)−Ｎ−ｔｅｒｔ−ブチルニトロン二ナトリウム塩の濃縮水溶液の安定性に対するキレート化剤、酸化防止剤、酸素の除去およびｐＨの相対的影響
加えた幾つかの要因の効果を、多変量技術を用いて計画した実験で調査した。０.３％未満の２,４−ジスルホベンズアルデヒド二ナトリウム塩（II）を含有するα−(２,４−ジスルホフェニル)−Ｎ−ｔｅｒｔ−ブチルニトロン二ナトリウム塩の水溶液（１００mg／ml）を、密封１０mlガラスバイアルに１０mlの充填体積で入れた。分解生成物、特に ２,４−ジスルホベンズアルデヒド二ナトリウム塩（II）の濃度を、＋４０℃および７５％相対湿度で２か月間の促進貯蔵条件ののち、クロマトグラフィー法により測定した。
結果を表２に示す。
【００２８】
【表２】
0003744857.tif 000005
【００２９】
数値は平均±標準偏差である。ｎは独立した実験の数を示す。ｔ−検定を行って異なる要因の有意差を評価した。
この実験で研究したｐＨ７〜９のｐＨ範囲は、分解の程度に対して有意な効果を有しなかった。
【００３０】
実施例３
α−(２,４−ジスルホフェニル)−Ｎ−ｔｅｒｔ−ブチルニトロン二ナトリウム塩の濃縮水溶液の安定性に対するキレート化樹脂の効果
α−(２,４−ジスルホフェニル)−Ｎ−ｔｅｒｔ−ブチルニトロン二ナトリウム塩（１００mg／ml）およびリン酸水素二ナトリウム（５.３mM）の濃縮水溶液をｐＨ８.０で、キレート化樹脂 Chelex-100 (登録商標) のカラムを一夜通過させた。得られた溶液を少量ずつ（８ml）１０mlガラスバイアルに入れ、次いでこれらを密封した。アルデヒド（II）の出発レベルは０.２０％であった。＋４０℃および７５％相対湿度で２か月ののち、アルデヒド（II）の濃度は２.３％に上昇した。樹脂での処理を省略したコントロール実験において、アルデヒド(II)のレベルは３.０％に上昇した。
【００３１】
実施例４
α−(２,４−ジスルホフェニル)−Ｎ−ｔｅｒｔ−ブチルニトロン二ナトリウム塩の濃縮水溶液の安定性に対する異なる空気／窒素ガス混合物によるパージの効果
α−(２,４−ジスルホフェニル)−Ｎ−ｔｅｒｔ−ブチルニトロン二ナトリウム塩（４００mg／ml）およびリン酸水素二ナトリウム（５.３mM）の濃縮水溶液をｐＨ８.５で、異なるレベルの空気／窒素ガス混合物でパージした。これらの溶液を密封１０mlガラスバイアル中で７mlの充填体積で貯蔵した。試料を＋４０℃および７５％相対湿度で２か月間貯蔵した。初期の濃縮水溶液はアルデヒド（II）（０.２５面積％）および関連物質（０.５６空間％）を含有していた。結果を表３に示す。
【００３２】
【表３】
0003744857.tif 000006
【００３３】
実施例５
バイアル上部空間体積の重要性の評価
酸素にさらされるのを防ぐ別の態様は、充填体積の増加によりバイアルの上部空間体積を減少させることである。
α−(２,４−ジスルホフェニル)−Ｎ−ｔｅｒｔ−ブチルニトロン二ナトリウム塩（４００mg／ml）およびリン酸水素二ナトリウム（１０.５mM）の濃縮水溶液をｐＨ８.５で、窒素で３０分間パージした。この溶液の８mlまたは１３mlを標準１０mlガラスバイアル（標準１０mlガラスバイアルの可能な最大充填体積は１３mlである）に入れた。上部空間は窒素でパージしなかった。これらのバイアルを密封し、＋４０℃および７５％相対湿度で２か月間貯蔵した。初期のアルデヒドレベルは０.１％であった。
結果を表４に示す。
【００３４】
【表４】
0003744857.tif 000007
【００３５】
実施例６
空気または窒素で充填した上部空間の比較
α−(２,４−ジスルホフェニル)−Ｎ−ｔｅｒｔ−ブチルニトロン二ナトリウム塩（１５００ｇ）を、溶解したリン酸水素二ナトリウム二水和物（３.５１ｇ）を含む注射用水（２２００ml）に添加することにより、α−(２,４−ジスルホフェニル)−Ｎ−ｔｅｒｔ−ブチルニトロン二ナトリウム塩の濃度４００mg／ml濃縮物を製造した。次いでこの溶液を２Ｍ水酸化ナトリウムの添加によりｐＨ８.５に調節したのち、注射用水を添加して３７５０mlの最終体積を得た。製造したのち、この溶液を窒素で９０分間パージし、次いで１０mlガラスバイアルに７.７mlの充填体積で入れた。バイアルを密栓する前に上部空間を窒素でパージした。１０個のバイアルから上部空間の酸素含有量のためにサンプリングし、酸素含有量は０.０５％未満であることが分かった。バイアルを＋５℃および周囲相対湿度で、または＋２５℃および６０％相対湿度で貯蔵した。
【００３６】
５０mMリン酸塩緩衝液で緩衝したα−(２,４−ジスルホフェニル)−Ｎ−ｔｅｒｔ−ブチルニトロン二ナトリウム塩の４００mg／ml濃縮物の第二バッチを、上部空間を窒素ではなく空気で充填し、充填体積を１０.５mlとしたこと以外は、同様に処理した。
結果を表５にまとめて示す。
【００３７】
【表５】
0003744857.tif 000008
【００３８】
他のデータを表６に示す。１０mlバイアルサイズでは充填体積は１０.７mlであり；２０mlバイアルサイズでは充填体積は２０.７mlであった。
【００３９】
【表６】
0003744857.tif 000009
【００４０】
実施例７
α−(２,４−ジスルホフェニル)−Ｎ−ｔｅｒｔ−ブチルニトロン二ナトリウム塩の水溶液の光分解の評価
α−(２,４−ジスルホフェニル)−Ｎ−ｔｅｒｔ−ブチルニトロン二ナトリウム塩の希釈水溶液（０.９mg／mlまたは１０mg／ml）を、室温で室内光に８時間あてて光安定性について試験した。低濃度の溶液を、炭酸塩緩衝剤の添加または無添加の両方で試験した。光分解の主生成物が生成した。緩衝した処方物は、緩衝しなかった処方物よりも良好な程度で光分解に耐えた。α−(２,４−ジスルホフェニル)−Ｎ−ｔｅｒｔ−ブチルニトロン二ナトリウム塩を含む処方物（１０mg／ml）は最低の光分解速度を有した。
α−(２,４−ジスルホフェニル)−Ｎ−ｔｅｒｔ−ブチルニトロン二ナトリウム塩の４００mg／ml水性濃縮物を用いた同様の実験は、この場合は用いた実験条件下で８時間後に分解は全く起こらなかったことを示した。
結果を表７にまとめて示す。
【００４１】
【表７】
0003744857.tif 000010
【００４２】
実施例８
α−(２,４−ジスルホフェニル)−Ｎ−ｔｅｒｔ−ブチルニトロン二ナトリウム塩の水溶液の安定性に対する濃度の効果
最初の実験において、炭酸水素ナトリウム（５mM）で緩衝したα−(２,４−ジスルホフェニル)−Ｎ−ｔｅｒｔ−ブチルニトロン二ナトリウム塩の三つの異なる濃度の水溶液を、２０mlガラスバイアル中に分配し、密封し、次いで＋４０℃および７５％相対湿度で４０日間貯蔵した。使用したα−(２,４−ジスルホフェニル)−Ｎ−ｔｅｒｔ−ブチルニトロン二ナトリウム塩の特別なバッチは、高い初期アルデヒド含有量を有した。結果を表８にまとめて示す。
【００４３】
【表８】
0003744857.tif 000011
【００４４】
第二の実験において、α−(２,４−ジスルホフェニル)−Ｎ−ｔｅｒｔ−ブチルニトロン二ナトリウム塩の緩衝しない水溶液（濃度１００mg／mlまたは２００mg／ml）を５０mlガラスバイアル中に分配し、＋５℃で貯蔵した。
結果を表９にまとめて示す。
【００４５】
【表９】
0003744857.tif 000012
【００４６】
第三の研究において、リン酸塩緩衝剤（５mM）で緩衝したα−(２,４−ジスルホフェニル)−Ｎ−ｔｅｒｔ−ブチルニトロン二ナトリウム塩の水溶液（濃度２００mg／mlまたは４００mg／ml）を１０mlガラスバイアル中に分配し、＋５℃で貯蔵した。
結果を表１０にまとめて示す。
【００４７】
【表１０】
0003744857.tif 000013
【００４８】
実施例９
α−(２,４−ジスルホフェニル)−Ｎ−ｔｅｒｔ−ブチルニトロン二ナトリウム塩の水溶液の安定性に対するｐＨの効果
α−(２,４−ジスルホフェニル)−Ｎ−ｔｅｒｔ−ブチルニトロン二ナトリウム塩の水溶液のｐＨ依存性分解を広範囲に研究した。表１１に、リン酸塩（０.５３mM）で緩衝したα−(２,４−ジスルホフェニル)−Ｎ−ｔｅｒｔ−ブチルニトロン二ナトリウム塩の溶液（４mg／ml）と比較した、α−(２,４−ジスルホフェニル)−Ｎ−ｔｅｒｔ−ブチルニトロン二ナトリウム塩の緩衝しない溶液（４mg／ml）の比較を示す。相当する濃縮物の適切な希釈により得られた両方の溶液を、患者に投与する準備ができた希釈濃縮物を合理的に模倣する条件下に室温で貯蔵した。
【００４９】
【表１１】
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【００５０】
実施例１０
α−(２,４−ジスルホフェニル)−Ｎ−ｔｅｒｔ−ブチルニトロン二ナトリウム塩の水性濃縮物の希釈のｐＨに対する効果
α−(２,４−ジスルホフェニル)−Ｎ−ｔｅｒｔ−ブチルニトロン二ナトリウム塩の水性濃縮物（４００mg／ml）の三つのバッチを製造し、ｐＨ８.５に調節した。一つの濃縮物は緩衝せず、他の二つの濃縮物はそれぞれ２.６または２６mMリン酸水素二ナトリウムで緩衝した。それぞれの場合に濃縮物の７ml部分をＰＶＣバッグに入れた０.９％塩化ナトリウム溶液（５００ml）中に移した。次いでこれらのバッグを光から保護して室温で４８時間貯蔵した。試料を０、２４および４８時間で採取し、分析した。
結果を表１２にまとめて示す。
【００５１】
【表１２】
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【００５２】
実施例１１
α−(２,４−ジスルホフェニル)−Ｎ−ｔｅｒｔ−ブチルニトロン二ナトリウム塩の水溶液および濃縮物の安定性に対するｐＨの効果
もう一つの研究において、室温で貯蔵したα−(２,４−ジスルホフェニル)−Ｎ−ｔｅｒｔ−ブチルニトロン二ナトリウム塩の緩衝した(炭酸水素ナトリウム)および緩衝しない両方の水溶液および水性濃縮物の安定性を比較した。結果（表１３）は、分解が両方とも濃度依存性であり、そしてまた、より低いｐＨ値ではいっそう顕著であることを示している。緩衝した溶液は、短い貯蔵時間および温和な貯蔵時間のために、明白な濃度依存性分解を示さない。
【００５３】
【表１３】
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【００５４】
実施例１２
α−(２,４−ジスルホフェニル)−Ｎ−ｔｅｒｔ−ブチルニトロン二ナトリウム塩(１０mg／ml）およびコントロールと比較したα−(２,４−ジスルホフェニル)−Ｎ−ｔｅｒｔ−ブチルニトロン二ナトリウム塩（４００mg／ml）の抗微生物剤効力
抗微生物剤効力を三つの異なる溶液について試験した：
ｉ)  α−(２,４−ジスルホフェニル)−Ｎ−ｔｅｒｔ−ブチルニトロン二ナトリウム塩、１０mg／ml；
ii)  α−(２,４−ジスルホフェニル)−Ｎ−ｔｅｒｔ−ブチルニトロン二ナトリウム塩、４００mg／ml；および
iii) 炭酸塩緩衝剤コントロール。
【００５５】
これらの試験を、ヨーロッパ薬局方２０００年、５.１.３章、２５９〜２６０頁に従って行った。７個の１０mlバイアルを、試験微生物当たり１個のバイアルで接種した。試験中に、バイアルを制御した室温で貯蔵し、光から保護した。異なる時間間隔で試料を抜き取り、適切に希釈したのち、標準プレートカウント手順を用いて生育可能な微生物（ml当たりのコロニー形成単位、ＣＦＵ／ml）の数を決定した。
これら三つの溶液に関する結果をそれぞれ表１４、１５および１６に示す。
【００５６】
【表１４】
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【００５７】
【表１５】
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【００５８】
【表１６】
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