(57)【要約】  安全性が高く、妊娠期及び／又は授乳期の母体に摂取されることによって、該母体から生まれる乳幼児の呼吸器疾患を予防するための組成物の提供。  ビフィドバクテリウム属細菌を有効成分とする呼吸器疾患予防用組成物であって、該組成物は、妊娠期及び／又は授乳期の母体に投与されるものであり、且つ、該母体から生まれる乳幼児の呼吸器疾患を予防するためのものである、前記組成物。当該組成物は、特には前記母体が大気汚染環境下及び／又は受動喫煙にさらされる環境下にあることより高まる前記乳幼児の前記呼吸器疾患への罹患リスクを下げるために適している。
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
ビフィドバクテリウム属細菌を有効成分として含む呼吸器疾患予防又は緩和用組成物であって、
該組成物は、妊娠期及び／又は授乳期の母体に投与されるものであり、且つ、該母体から生まれる乳幼児の呼吸器疾患を予防又は緩和するためのものである、前記組成物。
【請求項２】
前記呼吸器疾患が、２型自然リンパ球を介して引き起こされる呼吸器疾患である、請求項１に記載の組成物。
【請求項３】
前記疾患が、前記母体が大気汚染環境下にあることを一因として発症又は悪化するものである、請求項１又は２に記載の組成物。
【請求項４】
前記呼吸器疾患が喘息である、請求項１〜３のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項５】
前記呼吸器疾患がステロイド抵抗性喘息である、請求項１〜４のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項６】
前記ビフィドバクテリウム属細菌がビフィドバクテリウム・ブレーベである、請求項１〜５のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項７】
前記ビフィドバクテリウム属細菌がビフィドバクテリウム・ブレーベＭ−１６Ｖ（ＮＩＴＥ  ＢＰ−０２６２２）である、請求項１〜６のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項８】
前記組成物が飲食品組成物である、請求項１〜７のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項９】
前記組成物が医薬組成物である、請求項１〜７のいずれか一項に記載の組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本技術は、呼吸器疾患を予防又は緩和するための組成物に関する。
【背景技術】
【０００２】
妊婦の生活環境が、出産後の子供の呼吸器疾患のリスクに影響を与える場合があることが知られている。例えば、妊娠期の母親の大気汚染曝露が、生まれてくる子の喘息を増悪させることが報告されている（非特許文献１）。また、妊娠中に受動喫煙があった母親から生まれる子は、受動喫煙の無い母親から生まれる子と比較して、有意に喘息になりやすいという報告がある（非特許文献２）。そのため、胎児の将来的な呼吸器疾患のリスクを考慮すれば、妊婦は、出来る限り大気の綺麗な環境下で生活することが好ましい。【０００３】
また、妊婦の段階で、胎児が生まれた後の疾病リスクに対処する手段が開発されている。例えば、下記特許文献１には、妊産婦とその子供にビフィドバクテリウム属細菌を投与することを特徴とする、乳幼児のアレルギー疾患の予防剤が開示されている。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００４】
【特許文献１】特開２０１４−６５６６９号公報
【非特許文献】
【０００５】
【非特許文献１】K. Hamada et al., J. Toxicol. Environ. Health A., 2007, Vol.70(8), pp.688-695
【非特許文献２】A. Zacharasiewicz, ERJ Open Res., 2016, Vol.2(3)
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
上記のとおり、妊婦は出来る限り大気の綺麗な環境下で生活することが好ましいが、生活環境を変えることは容易ではない場合が多い。特に、大気汚染曝露及び受動喫煙曝露などの環境要因を排除することはしばしば困難である。
そこで、本技術は、子供の呼吸器疾患罹患リスクに対処するための新たな手段を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
本発明者等が鋭意研究をした結果、妊娠期及び／又は授乳期の母体へビフィドバクテリウム属細菌を投与することで、その乳幼児が呼吸器疾患に罹患するリスクに対処できることを見出した。すなわち、本技術は以下を提供する。【０００８】
［１］ビフィドバクテリウム属細菌を有効成分として含む呼吸器疾患予防又は緩和用組成物であって、
該組成物は、妊娠期及び／又は授乳期の母体に投与されるものであり、且つ、該母体から生まれる乳幼児の呼吸器疾患を予防又は緩和するためのものである、前記組成物。
［２］前記呼吸器疾患が、２型自然リンパ球を介して引き起こされる呼吸器疾患である、前記［１］に記載の組成物。
［３］前記疾患が、前記母体が大気汚染環境下にあることを一因として発症又は悪化するものである、前記［１］又は［２］に記載の組成物。
［４］前記呼吸器疾患が喘息である、前記［１］〜［３］のいずれか一つに記載の組成物。
［５］前記呼吸器疾患がステロイド抵抗性喘息である、前記［１］〜［４］のいずれか一つに記載の組成物。
［６］前記ビフィドバクテリウム属細菌がビフィドバクテリウム・ブレーベである、前記［１］〜［５］のいずれか一つに記載の組成物。
［７］前記ビフィドバクテリウム属細菌がビフィドバクテリウム・ブレーベＭ−１６Ｖ（ＮＩＴＥ  ＢＰ−０２６２２）である、前記［１］〜［６］のいずれか一つに記載の組成物。
［８］前記組成物が飲食品組成物である、前記［１］〜［７］のいずれか一つに記載の組成物。
［９］前記組成物が医薬組成物である、前記［１］〜［７］のいずれか一つに記載の組成物。
【発明の効果】
【０００９】
本技術によれば、妊娠期及び／又は授乳期の母体へビフィドバクテリウム属細菌を投与することで、該母体から生まれる乳幼児の呼吸器疾患を予防又は緩和することができる。
なお、本技術の効果は、ここに記載された効果に限定されず、本明細書内に記載されたいずれかの効果であってもよい。
【図面の簡単な説明】
【００１０】
【図１】無処置群、対照群、及び摂取群における気管支肺胞洗浄液中の白血球中の好酸球の割合の平均値を示すグラフである。
【図２】対照群および摂取群におけるムチンスコアを示すグラフである。
【図３】対照群および摂取群における、Ｌｉｎ−ＣＤ４５＋細胞中のＩＬＣ２の割合を示すグラフである。
【発明を実施するための形態】
【００１１】
次に、本技術の好ましい実施形態について説明する。ただし、本技術は以下の好ましい実施形態に限定されず、本技術の範囲内で自由に変更することができるものである。尚、本明細書において百分率は特に断りのない限り質量による表示である。
【００１２】
＜呼吸器疾患予防又は緩和用組成物＞
本技術の呼吸器疾患予防又は緩和用組成物は、ビフィドバクテリウム属細菌を有効成分として含む。当該組成物は、妊娠期及び／又は授乳期の母体に投与されるものであり、且つ、該母体から生まれる乳幼児の呼吸器疾患を予防又は緩和するためのものである。
【００１３】
本技術の呼吸器疾患予防用組成物によって、該母体から生まれる乳幼児の呼吸器疾患を予防することができる。特に、妊娠期及び／又は授乳期に大気汚染環境下における生活を余儀なくされる母体及び受動喫煙にさらされることを回避できない母体から生まれてくる子の呼吸器疾患の罹患率を有効に低減させることができる。
また、本技術の呼吸器疾患予防又は緩和用組成物は、妊娠期及び／又は授乳期に母体だけに投与されるだけで、当該予防又は緩和作用が発揮される。よって、本技術の呼吸器疾患予防又は緩和用組成物は、当該母体から生まれる子には投与されなくてよい。乳幼児への組成物の投与は、しばしば手間のかかるものである。本技術の組成物は、当該母体から生まれる子に投与されなくてよいので、簡便に利用できる。
本技術の効果は、妊娠期及び／又は授乳期の母親がビフィドバクテリウム属細菌を摂取することによって当該母親の腸内細菌叢及び／又は母乳に変化を及ぼし、当該変化が、生まれてくる子の体質に影響を与えることによって奏されると考えられる。
母親の腸内細菌叢及び／又は母乳が生まれてくる子の体質に影響を与えることに関して、例えば以下が報告されている。妊娠期の母親の腸内細菌と、子の糖尿病関連遺伝子のメチル化には関係があることが報告されている（Tachibana K et al. J Diabetes Investig. 2017;8(4):550-553.）。これは、母親の腸内細菌が産生する代謝産物等が胎盤を通過することで、胎児発生時のエピジェネティクス制御に影響を及ぼすためだと考えられている。さらに経膣での出生時には、母親の腸内菌叢の一部は子に受け継がれることが知られている。乳児の腸内細菌叢に影響を与える母親の腸内細菌叢は、その子の将来の肥満、糖尿病、非アルコール性脂肪性肝疾患、アレルギー疾患等の発症に影響を及ぼすことが分かってきている（Mulligan CM, Friedman JE, J Endocrinol. 2017;235(1):R1-R12.）。加えて、母親の母乳には、子のアレルギー発症を予防する成分が含まれていることが知られている。授乳婦がプロバイオティクスを摂取することで、母乳中のアレルギー予防に関する成分の濃度が変化することから、授乳期の母親のプロバイオティクス摂取は、母乳を介して子の体質に影響することが示唆されている（Munblit D et al. Clin Exp Allergy. 2015; 45(3):583-601.）。以上のとおり、母親の腸内細菌叢及び／又は母乳が、生まれてくる子の体質に影響を与える。本技術においても、母親の腸内細菌叢及び／又は母乳が、生まれてくる子の体質に影響を与え、その結果呼吸器疾患が予防又は緩和されると考えられる。
【００１４】
本技術において「予防」は、疾患が発症することを防ぐこと、疾患の発症リスクを下げること、及び疾患の発症の可能性を下げること、並びに、疾患の少なくとも一つの症状が発現することを防ぐこと、疾患の少なくとも一つの症状が発現するリスクを下げること、及び疾患の少なくとも一つの症状が発現する可能性を下げることを包含する。
【００１５】
本技術において「緩和」は、疾患の程度を軽減すること、疾患の進行を遅らせること、及び疾患の進行を止めること、並びに、疾患の少なくとも一つの症状を軽減すること、疾患の少なくとも一つの症状の進行を遅らせること、及び疾患の少なくとも一つの症状を止めることを包含する。本技術により緩和される呼吸器疾患は、本技術の組成物が母体に投与される時点では、当該母体から生まれる乳幼児又は当該母体から生まれた乳幼児において発症していなくてもよい。本技術の組成物を妊娠期及び／又は授乳期の母体が摂取することによって、当該母体から生まれる子又は当該母体から生まれた子が将来的に呼吸器疾患を発症した場合に、当該呼吸器疾患を緩和することができる。すなわち、本技術の組成物は、このように将来的に発症する呼吸器疾患を緩和するために用いられてよい。
【００１６】
本技術において呼吸器疾患は、好ましくは、２型自然リンパ球（Ｇｒｏｕｐ２ ｉｎｎａｔｅ ｌｙｍｐｈｏｉｄ ｃｅｌｌ、以下「ＩＬＣ２」ともいう）を介して引き起こされる呼吸器疾患であってよい。本技術の組成物は、当該呼吸器疾患の予防又は緩和に特に適している。本技術における呼吸器疾患は、例えば２型自然リンパ球を介して引き起こされる喘息、気管支炎、又は肺炎であってよく、特には２型自然リンパ球を介して引き起こされる喘息であってよい。２型自然リンパ球を介して引き起こされる喘息として、例えばステロイド抵抗性喘息を挙げることができる。
【００１７】
本技術において呼吸器疾患は、例えば気道上皮杯細胞の過形成及び／又は気管支内の好酸球増多を伴う疾患であってよい。本技術の組成物は、このような疾患を予防又は緩和するのに特に適している。
本技術において呼吸器疾患として、例えば喘息、気管支炎、環境性肺疾患、慢性気管支炎、ＣＯＰＤ（慢性閉塞性肺疾患）、過敏性肺炎、及び好酸球性肺炎などを挙げることができるが、これらに限定されない。
【００１８】
また、本技術において、前記疾患は、前記母体が大気汚染環境下にあることを一因として発症又は悪化するものであってよい。すなわち、前記母体が大気汚染環境下にあることのみが、前記疾患の発症要因又は悪化要因であってもよく、又は、前記母体が大気汚染環境下にあることに加えて、他の要因（例えば遺伝的要因、体質的要因、及び食生活要因など）が、前記疾患の発症要因又は悪化要因であってもよい。
【００１９】
本技術において、前記母体は大気汚染環境下にあってよい。すなわち、本技術の組成物は、前記母体が大気汚染環境下にある場合に、当該母体に投与されることで該母体から生まれる乳幼児の呼吸器疾患を予防及び／又は緩和することができる。本技術において、前記母体が大気汚染環境下にあるとは、前記母体が大気汚染環境下で生活をしていることを包含する。前記母体は、妊娠期のうちのいずれかの期間又は全期間、授乳期のうちのいずれかの期間又は全期間、若しくは、妊娠期及び授乳期の全期間において大気汚染環境下で生活していてよく、又は、妊娠期の前に大気汚染環境下で生活しており且つ妊娠期及び授乳期においては大気汚染環境下で生活していなくてもよい。また、前記組成物は、前記母体が大気汚染にさらされている状態で投与されてもよく、又は、大気汚染環境下にある清浄空間内（例えば清浄な室内など）において投与されてもよい。
【００２０】
＜ビフィドバクテリウム属細菌＞
本技術に用いるビフィドバクテリウム属細菌は、本技術の効果を損なわない限り特に限定されず、公知のビフィドバクテリウム属細菌を用いることができる。
当該ビフィドバクテリウム属細菌として、例えば、ビフィドバクテリウム・ブレーベ（Bifidobacterium breve）、ビフィドバクテリウム・ロンガム・サブスピーシーズ・ロンガム（Bifidobacterium longum subsp. longum）ビフィドバクテリウム・ビフィダム（Bifidobacterium bifidum）、ビフィドバクテリウム・アドレセンティス（Bifidobacterium adolescentis）、ビフィドバクテリウム・アンギュラツム（Bifidobacterium angulatum）、ビフィドバクテリウム・デンティウム（Bifidobacterium dentium）、ビフィドバクテリウム・シュードカテヌラータム（Bifidobacterium pseudocatenulatum）、ビフィドバクテリウム・アニマリス・サブスピーシーズ・ラクティス（Bifidobacterium animalis subsp. lactis）、ビフィドバクテリウム・シュードロンガム・サブスピーシーズ・グロボッサム（Bifidobacterium pseudolongum subsp. globosum）、ビフィドバクテリウム・シュードロンガム・サブスピーシーズ・シュードロンガム（Bifidobacterium pseudolongum subsp. pseudolongum）、及びビフィドバクテリウム・サーモフィラム（Bifidobacterium thermophilum）等が挙げられる。本技術に用いるビフィドバクテリウム属細菌は、上述の群から１種又は２種以上を選択することができ、１種のみを用いてもよいし、任意の２種以上を用いてもよい。なお、ビフィドバクテリウム・ロンガム・サブスピーシーズ・ロンガムは、単にビフィドバクテリウム・ロンガムと表記される場合もある。
【００２１】
さらに、上記ビフィドバクテリウム属細菌のうち、ビフィドバクテリウム・ブレーベ（Bifidobacterium breve）が好ましく、ビフィドバクテリウム・ブレーベ（Bifidobacterium breve）Ｍ−１６Ｖ（ＮＩＴＥ  ＢＰ−０２６２２）がより好ましい。
ビフィドバクテリウム・ブレーベ（Bifidobacterium breve）Ｍ−１６Ｖ（ＮＩＴＥ  ＢＰ−０２６２２）は、２０１８年１月２６日に、独立行政法人製品評価技術基盤機構特許微生物寄託センター（郵便番号：292-0818、住所：千葉県木更津市かずさ鎌足2-5-8 122号室）にブダペスト条約に基づく国際寄託がなされており、該寄託センターから入手することができる。
【００２２】
本技術に用いられるビフィドバクテリウム属細菌は、本技術の目的を達成できる特性を有する限り、上記ビフィドバクテリウム属細菌の変異体であってもよい。このような変異体は、上記ビフィドバクテリウム属細菌に非人為的に変異が導入されることで構築されてもよい。また、ＵＶ等の変異原を用いた処理により上記細菌に変異を導入して構築してもよく、種々の遺伝子操作法により上記細菌に変異を導入して構築してもよい。
本技術においてビフィドバクテリウム属細菌として前記変異体を用いる場合、当該変異体は、上記ビフィドバクテリウム属細菌と同一の菌学的性質を有し、かつ、上記ビフィドバクテリウム属細菌と同等以上のＩＬＣ２産生抑制効果を有するものが好ましい。ある変異体が上記ビフィドバクテリウム属細菌と「同等以上のＩＬＣ２産生抑制効果」を有するか否かは、例えば、後述する試験例に記載された方法により、肺組織中のＩＬＣ２割合を測定することで確認することができる。
【００２３】
本技術に用いられるビフィドバクテリウム属細菌は、常法によりビフィドバクテリウム属細菌を培養することにより容易に取得できる。また、本技術のビフィドバクテリウム属細菌は、前記細菌そのもの（菌体）、前記細菌の培養物、前記細菌の培養物からの分離精製物（例えば、培養上清）又は前記細菌の菌体処理物の形態でも用いることができる。
すなわち、ビフィドバクテリウム属細菌そのものでもよく、ビフィドバクテリウム属細菌を培養して得られた培養物をそのまま用いてもよい。また、本技術に用いられるビフィドバクテリウム属細菌は、生菌であっても死菌であってもよく、生菌と死菌との両方を含むものでもよい。
【００２４】
前記細菌の菌体処理物としては、例えば、菌体の細胞壁及び細胞膜が超音波処理やホモジナイザー処理等の常法により一部又は完全に破砕された細胞破砕物等が挙げられる。さらに、前記細胞破砕物は前記破砕後の全画分でもよく一部の画分でもよく、前記破砕後の遠心分離上清、その上清を硫安処理等で部分精製した画分、又は前記上清を濃縮したものであってもよい。
【００２５】
本技術において用いられるビフィドバクテリウム属細菌は、後記実施例に示すように、妊娠中又は授乳中に母体が摂取することで、生まれてくる乳幼児の肺組織中のＩＬＣ２の過剰産生を抑制する作用を有する。すなわち、妊娠中又は授乳中に母体が本技術に従いビフィドバクテリウム属細菌を摂取することで、生まれてくる乳幼児のＩＬＣ２に起因する呼吸器疾患を有効に予防又は緩和することができる。なお、肺組織中のＩＬＣ２は、後述する実施例に記載するとおりの方法にて測定することができる。
【００２６】
ここで、ＩＬＣ２は、リンパ球の一種である２型自然リンパ球（Ｇｒｏｕｐ２ ｉｎｎａｔｅ ｌｙｍｐｈｏｉｄ ｃｅｌｌ）を意味するものであり、大気汚染物質、微生物、糖脂質等によって刺激された気道上皮細胞が産生するＩＬ−２５やＩＬ−３３によって活性化され、Ｔｈ２サイトカイン（ＩＬ−５、ＩＬ−１３）を産生する。かかるＴｈ２サイトカインが、好酸球の活性化や、杯細胞の過形成を引き起こし、喘息症状が現れる。杯細胞の過形成によって気道粘液であるムチンが過剰産生されることは、気道のリモデリングにつながる。気道リモデリングは慢性呼吸器疾患の症状を増悪する（Jantina C. de Groot et al., ERJ Open Res., 2015, Vol.1(1)）。本技術の組成物は、例えば慢性呼吸器疾患の憎悪を防ぐために用いられてよい。また、本技術の組成物は、気道リモデリングを予防又は緩和するために用いられてもよい。また、本技術の組成物は、ムチン過剰産生を予防又は緩和するために用いられてもよい。
【００２７】
ＩＬＣ２の過剰産生に伴う喘息症状においては、Ｔｈ２細胞を介さずに症状が惹起されることから、Ｔｈ２細胞の活性制御による従来の呼吸器疾患の予防又は治療が有効でない場合がある。本技術によれば、ＩＬＣ２の過剰産生を抑制することができるため、Ｔｈ２細胞の活性制御による予防又は治療が有効に作用しない呼吸器疾患の予防又は治療に有効である。
【００２８】
また、ＩＬＣ２の活性化又は増殖は、ステロイド抵抗性喘息の原因になることが確認されている（H. Kabata et al, Nat. Commun., 2013, 4:2675）。ステロイド抵抗性喘息は難治性であり、高用量ステロイドの吸入投与を必要とする重篤な疾患である。また、喫煙する妊婦から生まれてくる子の喘息は、喘息の治療で用いられるステロイド剤の効き目が悪く、難治性喘息になりやすいことが分かっている（Robyn T. Cohen et al., J. Allergy Clin Immunol., 2010, 126(3), 491-497）。
本技術の呼吸器疾患予防又は緩和用組成物は、ＩＬＣ２の過剰産生を抑制することができるため、呼吸器疾患の中でもステロイド抵抗性の難治性喘息予防に有効である。
【００２９】
本技術において用いられるビフィドバクテリウム属細菌は、有効成分として組成物に含有させることができ、また、安全性が高いので、医薬品、飲食品、飼料等の幅広い用途の製品に使用できる。これら製品は、各用途に適用した任意成分を適宜用い、各用途に適合した公知の製造方法によって、製造することができる。
本技術において用いられるビフィドバクテリウム属細菌は、これ自体をそのまま用いることが可能であり、又は生理的、医薬品的若しくは飲食品的に許容される通常の担体若しくは希釈剤等と共に混合して用いることもできる。
また、本技術において用いられるビフィドバクテリウム属細菌は、これら各種製剤又は各種組成物等の製造のために使用することができる。
【００３０】
本技術において用いられるビフィドバクテリウム属細菌は、アレルギー疾患の予防又は緩和のために用いられてもよい。すなわち、当該ビフィドバクテリウム属細菌は、アレルギー疾患を予防又は緩和するための組成物であって、妊娠期及び／又は授乳期の母体に投与されるものであり且つ該母体から生まれる乳幼児の呼吸器疾患を予防又は緩和するためのものである前記組成物に、当該予防又は緩和のための有効成分として含まれてもよい。
【００３１】
＜組成物が投与される対象及び投与期間＞
本技術の呼吸器疾患予防用組成物の適用対象者は、妊娠中及び／又は授乳中の母体であり、とりわけ、大気汚染環境下及び／又は受動喫煙にさらされる環境下において生活する必要がある妊娠中及び／又は授乳中の母体に好適に用いることができる。すなわち、本技術の呼吸器疾患予防又は緩和用組成物は、前記母体が大気汚染環境下及び／又は受動喫煙にさらされる環境下にあることにより高まる前記乳幼児の前記呼吸器疾患への罹患リスクを下げるために特に適している。
本技術において、母体とは、妊娠中及び／又は授乳中の哺乳動物であり、該哺乳動物はヒト又はペットが好ましく、より好ましくはヒトである。
さらに、本技術の呼吸器疾患予防又は緩和用組成物の摂取は、妊娠期の一定期間及び／又は授乳期の一定期間継続されることが好ましい。特に好ましくは、本技術の組成物の摂取は、妊娠期及び授乳期の両方において一定期間継続されることがより好ましい。好ましくは、本技術の組成物は、少なくとも妊娠期間中継続して摂取され、より好ましくは、妊娠中及び授乳中に継続して摂取される。本技術の組成物は、毎日摂取することが望ましい。
例えば、本技術の呼吸器疾患予防又は緩和用組成物は、出産予定日の少なくとも６日前から、より好ましくは４週間前から、さらに好ましくは２ヶ月前、３ヶ月前、４ヶ月前、６ヶ月前、又は８ヶ月前から出産日まで摂取されることが好ましい。また、本技術の組成物は、妊娠期の全期間を通じて摂取されてもよい。加えて、出産後の授乳期に摂取され、出産日から３０日間、より好ましくは２ヵ月間、３ヵ月間、４ヵ月間、６ヵ月間、又は８ヵ月間、さらに好ましくは１年間継続して摂取されることが好ましい。また、本技術の組成物は、授乳期の全期間を通じて摂取されてもよい。
【００３２】
本技術の呼吸器疾患予防又は緩和用組成物は、妊娠期及び／又は授乳期に母体だけに投与され、当該母体から生まれる乳幼児には投与又は摂取されなくてよい。乳幼児への組成物の投与は、しばしば手間のかかるものである。本技術の組成物は、当該母体から生まれる子に投与されなくともその効果を発揮するので、簡便に利用できる。
【００３３】
前記のとおり、本技術の呼吸器疾患予防又は緩和用組成物は、大気汚染環境下における生活を余儀なくされる妊娠中及び／又は授乳中の母体に投与されることで、当該母体が大気汚染環境下及び／又は受動喫煙にさらされる環境下にあることより高まる前記乳幼児の前記呼吸器疾患への罹患リスクを下げることができる。
ここで、本明細書における大気汚染環境下とは、微小粒子状物質ＰＭ２．５等の大気汚染物質によって大気が汚染されている環境下のことをいう。大気汚染に係る環境条件に関する具体的な例として、日本の環境基本法では、同法第１６条第１項に基づき定められた基準を挙げることができる。当該環境条件に関して、同項では、人の健康を保護し、及び生活環境を保全する上で維持されることが望ましい基準を定めるものとすると規定されている。当該望ましい基準として、大気汚染に関しては、大気中の微小粒子状物質ＰＭ２．５の年平均濃度１５μｇ／ｍ３以下、かつ２４時間平均濃度３５μｇ／ｍ３以下という環境基準が定められている。この環境基準を上回る環境を、本技術における大気汚染環境として例示することができる。
【００３４】
なお、微小粒子状物質ＰＭ２．５とは、大気中に浮遊している粒径２．５μｍ以下の微粒子である。ＰＭ２．５として、物の燃焼などによって直接排出されるものと、硫黄酸化物（ＳＯｘ）、窒素酸化物（ＮＯｘ）、揮発性有機化合物（ＶＯＣ）等のガス状大気汚染物質が、主として環境大気中での化学反応により粒子化したものとを挙げることができる。ＰＭ２．５の発生源としては、ボイラー、焼却炉などのばい煙、コークス炉、鉱物の堆積場等の粉塵、自動車、船舶、航空機等の排気ガスを挙げることができる。さらには、ＰＭ２．５は、土壌、海洋、火山等の自然からも発生している。また、たばこの煙も典型的なＰＭ２．５である。
なお、動物モデルにおいて、ＰＭ２．５による健康被害を検討する際には、後述する実施例に示すように、ニッケル、バナジウム、亜鉛を主成分とする石油燃焼灰燼（ｒｅｓｉｄｕａｌ ｏｉｌ ｆｌｙ ａｓｈ；ＲＯＦＡ）を用いてＰＭ２．５による大気汚染環境を再現することが可能である（非特許文献１）。
【００３５】
＜医薬組成物＞
本技術の呼吸器疾患予防又は緩和用組成物は、医薬組成物として用いることができる。本技術の医薬組成物は、妊娠中及び／又は授乳中に母体に投与されることにより、該母体から生まれる乳幼児の呼吸器疾患を予防又は緩和するために使用することができる。呼吸器疾患として、気管支喘息及びステロイド抵抗性喘息を例示することができる。
【００３６】
また、本技術の医薬組成物は、経口組成物成分として長年使用されているビフィドバクテリウム属細菌及び／又は前記細菌の培養物（例えば、前記細菌の培養物の培養上清及び／又は前記細菌の菌体処理物等）を有効成分とするため、種々の疾患を罹患した患者に対しても安心して投与できる。また、ビフィドバクテリウム属細菌は、動物の腸内にも存在するため、本技術は、長期間、連続的に投与しても副作用が生じにくいことが期待される。したがって、本技術の組成物は、妊娠中又は授乳中であっても、安心して摂取することができる。
【００３７】
本技術に係る呼吸器疾患予防又は緩和用組成物を医薬組成物として利用する場合、当該医薬組成物は、経口投与及び非経口投与のいずれで投与されてもよく、投与方法に応じて、適宜所望の剤形に製剤化することができる。例えば、経口投与の場合、散剤、顆粒剤、錠剤、カプセル剤等の固形製剤；溶液剤、シロップ剤、懸濁剤、乳剤等の液剤等に製剤化することができる。また、非経口投与の場合、例えば胃ろうを介して本技術の組成物を投与することができる。
【００３８】
また、製剤化に際しては、本技術に係る医薬組成物には、通常製剤化に用いられている賦形剤、ｐＨ調整剤、着色剤、矯味剤等の成分を用いることができる。また、本技術の効果を損なわない限り、本技術に係る医薬組成物には、公知の又は将来的に見出される呼吸器疾患又はこれらの症状に対する予防、改善及び／又は治療の効果を有する成分を使用することもできる。
加えて、製剤化は剤形に応じて適宜公知の方法により実施できる。製剤化に際しては、適宜、製剤担体を配合して製剤化してもよい。
【００３９】
本技術の医薬組成物の摂取量又は投与量は、剤形に合わせて適宜選択することができるが、例えば、体重１ｋｇあたりの１日のビフィドバクテリウム属細菌の摂取量又は投与量は、１×１０５〜１×１０１２ＣＦＵ／ｋｇ体重／日が好ましく、１×１０７〜１×１０１１ＣＦＵ／ｋｇ体重／日がより好ましく、１×１０８〜１×１０１０ＣＦＵ／ｋｇ体重／日がさらに好ましい。または、１個体（Ｂｏｄｙ  ｗｅｉｇｈｔ）あたりの摂取量又は投与量としては、１０６〜１０１４ＣＦＵ／日が好ましく、１０８〜１０１３ＣＦＵ／日がより好ましく、１０９〜１０１２ＣＦＵ／日がさらに好ましい。
また、ビフィドバクテリウム属細菌の培養物、前記細菌の培養物由来の分離精製物（例えば培養上清）や前記細菌の菌体処理物を用いる場合のその摂取量又は投与量は、ビフィドバクテリウム属細菌の摂取量又は投与量に換算された場合に上記摂取量又は投与量となることが好ましい。
【００４０】
さらに、本技術の医薬組成物は、前記摂取量又は投与量で、妊娠中及び／又は授乳中に摂取されることが好ましい。また、出産予定日の少なくとも６日前から、より好ましくは４週間前から、さらに好ましくは２ヶ月前、３ヶ月前、４ヶ月前、６ヶ月前、又は８ヶ月前から出産日まで摂取されることが好ましい。また、本技術の医薬組成物は、妊娠期の全期間を通じて摂取されてもよい。加えて、出産後の授乳期に摂取され、出産日から３０日間、より好ましくは２ヵ月間、３ヵ月間、４ヵ月間、６ヵ月間、又は８ヵ月間、さらに好ましくは１年間継続して摂取されることが好ましい。また、本技術の医薬組成物は、授乳期の全期間を通じて摂取されてもよい。
【００４１】
また、本技術の医薬組成物中のビフィドバクテリウム属細菌の含有量は、前記摂取量又は投与量に基づいて適宜選択することができる。例えば、１×１０３〜１×１０１３ＣＦＵ／ｇ又は１×１０３〜１×１０１３ＣＦＵ／ｍＬ、好ましくは１×１０７〜１×１０１１ＣＦＵ／ｇ又は１×１０７〜１×１０１１ＣＦＵ／ｍＬ、より好ましくは１×１０８〜１×１０１０ＣＦＵ／ｇ又は１×１０８〜１×１０１０ＣＦＵ／ｍＬとすることができる。該細菌が死菌の場合、ＣＦＵは、個細胞（ｃｅｌｌｓ）と置き換えることができる。
また、ビフィドバクテリウム属細菌の培養物、前記細菌の培養物由来の分離精製物（例えば培養上清）や前記細菌の菌体処理物を用いる場合のその含有量は、ビフィドバクテリウム属細菌の含有量に換算された場合に上記含有量となることが好ましい。
【００４２】
また、前記製剤担体としては、剤形に応じて、各種有機又は無機の担体を用いることができる。固形製剤の場合の担体としては、例えば、賦形剤、結合剤、崩壊剤、滑沢剤、安定剤、矯味矯臭剤等が挙げられる。
【００４３】
賦形剤としては、例えば、乳糖、白糖、ブドウ糖、マンニット、ソルビット等の糖誘導体；トウモロコシデンプン、馬鈴薯デンプン、α‐デンプン、デキストリン、カルボキシメチルデンプン等のデンプン誘導体；結晶セルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、カルボキシメチルセルロース、カルボキシメチルセルロースカルシウム等のセルロース誘導体；アラビアゴム；デキストラン；プルラン；軽質無水珪酸、合成珪酸アルミニウム、メタ珪酸アルミン酸マグネシウム等の珪酸塩誘導体；リン酸カルシウム等のリン酸塩誘導体；炭酸カルシウム等の炭酸塩誘導体；硫酸カルシウム等の硫酸塩誘導体等が挙げられる。
【００４４】
結合剤としては、例えば、上記賦形剤の他、ゼラチン；ポリビニルピロリドン；マクロゴール等が挙げられる。
【００４５】
崩壊剤としては、例えば、上記賦形剤の他、クロスカルメロースナトリウム、カルボキシメチルスターチナトリウム、架橋ポリビニルピロリドン等の化学修飾されたデンプン又はセルロース誘導体等が挙げられる。
【００４６】
滑沢剤としては、例えば、タルク；ステアリン酸；ステアリン酸カルシウム、ステアリン酸マグネシウム等のステアリン酸金属塩；コロイドシリカ；ピーガム、ゲイロウ等のワックス類；硼酸；グリコール；フマル酸、アジピン酸等のカルボン酸類；安息香酸ナトリウム等のカルボン酸ナトリウム塩；硫酸ナトリウム等の硫酸塩類；ロイシン；ラウリル硫酸ナトリウム、ラウリル硫酸マグネシウム等のラウリル硫酸塩；無水珪酸、珪酸水和物等の珪酸類；デンプン誘導体等が挙げられる。
【００４７】
安定剤としては、例えば、メチルパラベン、プロピルパラベン等のパラオキシ安息香酸エステル類；クロロブタノール、ベンジルアルコール、フェニルエチルアルコール等のアルコール類；塩化ベンザルコニウム；無水酢酸；ソルビン酸等が挙げられる。
【００４８】
矯味矯臭剤としては、例えば、甘味料、酸味料、香料等が挙げられる。
なお、経口投与用の液剤の場合に使用する担体としては、水等の溶剤、矯味矯臭剤等が挙げられる。
【００４９】
＜飲食品組成物＞
さらに、本技術の呼吸器疾患予防又は緩和用組成物は、飲食品組成物として用いることができる。本技術の飲食品組成物は、ビフィドバクテリウム属細菌及び／又は前記細菌の培養物（例えば、前記細菌の培養物の培養上清及び／又は前記細菌の菌体処理物等）を公知の飲食品に添加することによって製造してもよいし、ビフィドバクテリウム属細菌及び／又は前記細菌の培養物（例えば、前記細菌の培養物の培養上清及び／又は前記細菌の菌体処理物等）を飲食品の原料中に混合して新たな飲食品組成物として製造することもできる。
【００５０】
本技術における飲食品組成物は、液状、ペースト状、固体、粉末等の形態を問わず、錠菓、流動食、飼料（ペット用を含む）等のほか、例えば、小麦粉製品、即席食品、農産加工品、水産加工品、畜産加工品、乳・乳製品、油脂類、基礎調味料、複合調味料・食品類、冷凍食品、菓子類、飲料、これら以外の市販品等が挙げられる。
【００５１】
また、本技術で定義される飲食品組成物は、母体が摂取することにより、乳幼児の呼吸器疾患の予防、リスク低減、症状緩和及び／又は治療等の用途（保健用途を含む）が表示された飲食品として提供・販売されることが可能である。また、飲食品の摂取対象として、「妊娠中の方」、「授乳中の方」、「胎児又は乳幼児の呼吸器疾患リスクが気になる方」、「胎児又は乳幼児の喘息罹患リスクが気になる方」、「妊娠又は授乳中の生活環境が気になる方」、「妊娠又は授乳中の空気が気になる方」等と表示して提供・販売されることが可能である。
「表示」行為には、需要者に対して前記用途を知らしめるための全ての行為が含まれ、前記用途を想起・類推させうるような表現であれば、表示の目的、表示の内容、表示する対象物・媒体等の如何に拘わらず、全て本技術の「表示」行為に該当する。
【００５２】
また、「表示」は、需要者が上記用途を直接的に認識できるような表現により行われることが好ましい。具体的には、飲食品に係る商品又は商品の包装に前記用途を記載したものを譲渡し、引き渡し、譲渡若しくは引き渡しのために展示し、輸入する行為、商品に関する広告、価格表若しくは取引書類に上記用途を記載して展示し、若しくは頒布し、又はこれらを内容とする情報に上記用途を記載して電磁的（インターネット等）方法により提供する行為等が挙げられる。
【００５３】
一方、表示内容としては、行政等によって認可された表示（例えば、行政が定める各種制度に基づいて認可を受け、そのような認可に基づいた態様で行う表示等）であることが好ましい。また、そのような表示内容を、包装、容器、カタログ、パンフレット、ＰＯＰ等の販売現場における宣伝材、その他の書類等へ付することが好ましい。
【００５４】
また、「表示」には、健康食品、機能性食品、経腸栄養食品、特別用途食品、保健機能食品、特定保健用食品、栄養機能食品、機能性表示食品、医薬用部外品等としての表示も挙げられる。この中でも特に、消費者庁によって認可される表示、例えば、特定保健用食品、栄養機能食品、若しくは機能性表示食品に係る制度、又はこれらに類似する制度にて認可される表示等が挙げられる。具体的には、特定保健用食品としての表示、条件付き特定保健用食品としての表示、身体の構造や機能に影響を与える旨の表示、疾病リスク減少表示、科学的根拠に基づいた機能性の表示等を挙げることができ、より具体的には、健康増進法に規定する特別用途表示の許可等に関する内閣府令（平成二十一年八月三十一日内閣府令第五十七号）に定められた特定保健用食品としての表示（特に保健の用途の表示）及びこれに類する表示が典型的な例である。
【００５５】
本技術の飲食品組成物の摂取量は、適宜選択することができるが、例えば、体重１ｋｇあたりの１日のビフィドバクテリウム属細菌の摂取量は、１×１０５〜１×１０１２ＣＦＵ／ｋｇ体重／日が好ましく、１×１０７〜１×１０１１ＣＦＵ／ｋｇ体重／日がより好ましく、１×１０８〜１×１０１０ＣＦＵ／ｋｇ体重／日がさらに好ましい。または、１個体（Ｂｏｄｙ  ｗｅｉｇｈｔ）あたりの摂取量又は投与量としては、１０６〜１０１４ＣＦＵ／日が好ましく、１０８〜１０１３ＣＦＵ／日がより好ましく、１０９〜１０１２ＣＦＵ／日がさらに好ましい。該細菌が死菌の場合、ＣＦＵは、個細胞（ｃｅｌｌｓ）と置き換えることができる。
また、ビフィドバクテリウム属細菌の培養物や前記細菌の菌体処理物を用いる場合のその摂取量は、ビフィドバクテリウム属細菌の摂取量に換算された場合に上記摂取量となることが好ましい。
【００５６】
さらに、本技術の飲食品組成物は、前記摂取量又は投与量で、妊娠中又は授乳中に摂取され、出産予定日の少なくとも６日前から、より好ましくは４週間前から、さらに好ましくは２ヶ月前、３ヶ月前、４ヶ月前、６ヶ月前、又は８ヶ月前から出産日まで摂取されることが好ましい。また、本技術の飲食品組成物は、妊娠期の全期間を通じて摂取されてもよい。加えて、出産後の授乳期に摂取され、出産日から３０日間、より好ましくは２ヵ月間、３ヵ月間、４ヵ月間、６ヵ月間、又は８ヵ月間、さらに好ましくは１年間継続して摂取されることが好ましい。また、本技術の飲食品組成物は、授乳期の全期間を通じて摂取されてもよい。
【００５７】
また、本技術の飲食品組成物中のビフィドバクテリウム属細菌の含有量は、前記摂取量に基づいて適宜選択することができるが、例えば、１×１０６〜１×１０１２ＣＦＵ／ｇ又は１×１０６〜１×１０１２ＣＦＵ／ｍＬ、好ましくは１×１０７〜１×１０１１ＣＦＵ／ｇ又は１×１０７〜１×１０１１ＣＦＵ／ｍＬ、より好ましくは１×１０８〜１×１０１０ＣＦＵ／ｇ又は１×１０８〜１×１０１０ＣＦＵ／ｍＬとすることができる。該細菌が死菌の場合、ＣＦＵは、個細胞（ｃｅｌｌｓ）と置き換えることができる。
【００５８】
本技術は、以下の方法及び物も提供する。
［１］
ビフィドバクテリウム属細菌を、呼吸器疾患予防又は緩和用組成物の製造のために使用する方法であって、
該組成物は、妊娠期及び／又は授乳期の母体に投与されるものであり、且つ、該母体から生まれる乳幼児の呼吸器疾患を予防又は緩和するためのものである、前記方法。
［２］
呼吸器疾患の予防又は緩和のためのビフィドバクテリウム属細菌であって、
前記ビフィドバクテリウム属細菌は、妊娠期及び／又は授乳期の母体に投与されるものであり、且つ、該母体から生まれる乳幼児の呼吸器疾患を予防又は緩和するためのものである、前記ビフィドバクテリウム属細菌。
［３］
ビフィドバクテリウム属細菌を、妊娠期及び／又は授乳期の母体に投与することを含む、該母体から生まれる乳幼児の呼吸器疾患を予防又は緩和する方法。
【実施例】
【００５９】
［試験例１］
大気汚染粉塵にさらされた母体から生まれた子が罹患する喘息モデルの作成方法として、妊娠雌性マウスにＲＯＦＡ処理を行い、そして、当該妊娠雌性マウスから生まれた子マウスに卵白アルブミン処理する方法が確立されている（上記非特許文献１）。試験例１では、当該喘息モデルを用いて、母体へのビフィドバクテリウム属細菌の投与の効果を調べた。【００６０】
正常妊娠雌性マウスＢＡＬＢ／ｃ（日本ＳＬＣ社）を、ビフィドバクテリウム属細菌Ｍ−１６Ｖ（ＮＩＴＥ  ＢＰ−０２６２２）を摂取するビフィドバクテリウム属細菌摂取群と、ビフィドバクテリウム属細菌を摂取しない対照群と、ビフィドバクテリウム属細菌を摂取せず且つ下記卵白アルブミン処理も受けない無処置群とに分けた。いずれの群にも、妊娠１４、１６、及び１８日目（出産５日前、３日前及び出産前日）に、非特許文献１に記載の方法に従い、ＲＯＦＡ浸潤液５０ｍｇ／ｍｌを３０分間エアロゾル曝露した。いずれの群のマウスについても、ＡＩＮ９３−Ｇ（オリエンタルバイオサービス社）を自由摂取させた。また、当該自由摂取に加えて、対照群及び無処置群にはＡＩＮ９３−Ｇ精製飼料を０．５ｇを、摂取群にはＡＩＮ９３−Ｇ精製飼料０．５ｇ中に１０億個のビフィドバクテリウム属細菌Ｍ−１６Ｖ（ＮＩＴＥ  ＢＰ−０２６２２）を含むビフィドバクテリウム属細菌末を添加した飼料を、一日一回摂取させた。該摂取は、試験終了まで（出産日の６日前〜出産日から３０日間）継続した。【００６１】
摂取群及び対照群の妊娠雌性マウスから出生した仔マウスに生後３日目に卵白アルブミン（ＯＶＡ、Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ社）１２．５μｇと水酸化アルミニウム１２．５μｇを腹腔内投与し、生後２６、２７及び２８日目にＯＶＡ１％溶液を超音波ネブライザー（ＰＡＲＩボーイＮ）にて１０分間曝露してＯＶＡを抗原とする呼吸器疾患モデルマウスを作成した。なお、卵白アルブミンは、呼吸器疾患を誘発するための物質であり、水酸化アルミニウムはアジュバンドである。卵白アルブミン及び水酸化アルミニウムは、ＰＢＳ溶液中に含めた状態で投与された。すなわち、２５０μｇ／ｍｌの濃度で卵白アルブミンを含み且つ２５０μｇ／ｍｌの濃度で水酸化アルミニウムを含むＰＢＳ溶液５０μｌが、上記腹腔内投与において用いられた。
無処置群の妊娠雌性マウスから出生した仔マウスには、生後３日目に、前記卵白アルブミン及び水酸化アルミニウムのいずれも含まないＰＢＳ溶液５０μｌを腹腔内投与し、生後２６、２７及び２８日目にＰＢＳを超音波ネブライザー（ＰＡＲＩボーイＮ）にて１０分間曝露した。
全ての群の仔マウスは、母マウスからの母乳栄養により飼育した後、出生３０日目に解剖した。【００６２】
〔白血球中の好酸球割合〕
仔マウスの安楽死後、気管内にＰＢＳを注入し、気管支肺胞洗浄液（ｂｒｏｎｃｈｏａｌｖｅｏｌａｒｌａｖａｇｅ ｆｌｕｉｄ；ＢＡＬＦ）を回収した。当該気管支肺胞洗浄液を遠心して上清を除去した後、沈殿物をＰＢＳで再懸濁し、総細胞数をカウントしてスライドガラスに塗抹標本を作製した（サイトスピン使用：ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ社）。その後、Ｄｉｆｆ-Ｑｕｉｋ染色キット（シスメックス社）を用いてＤｉｆｆ-Ｑｕｉｋ染色を実施して気管支肺胞洗浄液中の白血球分画を測定した。各マウスの白血球中の好酸球割合を測定し、各群について好酸球割合の平均値を算出した。【００６３】
その結果、各群における気管支肺胞洗浄液中の白血球中の好酸球の割合の平均値は、表１及び図１に記載した通りの結果となった。
対照群では、無処置群と比べて、白血球中の好酸球の割合が有意に高かった。よって、対照群では、ＯＶＡ処理によって好酸球が有意により多く気管支内に浸潤しており、呼吸器疾患が形成された。
摂取群では、対照群に比して、白血球中の好酸球の割合が有意により低く、１２ポイント以上低下していることが確認された。よって、摂取群では、ビフィドバクテリウム属細菌の摂取によって、呼吸器疾患の状態が予防又は緩和された。【００６４】
【表１】
2019163257.tif 000003
【００６５】
〔肺組織中のムチンスコア〕
仔マウスの肺組織をホルマリン固定してパラフィン包埋切片を作成し、ＰＡＳ染色により気道上皮の杯細胞から分泌されるムチンの胞体を染色した。染色した切片を組織学的に評価し、気道上皮杯細胞過形成の度合いを以下の表２に記載のムチンスコアにて評価した当該評価は、C. Ptaschinski et al., PLOS Pathogens, DOI:10.1371/journal.ppat.1004978, June 17, 2015に記載された方法に従い行われた。【００６６】
【表２】
2019163257.tif 000004
【００６７】
その結果、対照群および摂取群におけるムチンスコアは、以下の表３及び図２に示されるとおりとなった。摂取群では、対照群と比較してムチンスコアが有意に低下した。よって、ビフィドバクテリウム属細菌の摂取によって、杯細胞過形成が抑制された。【００６８】
【表３】
2019163257.tif 000005
【００６９】
〔肺組織中のＩＬＣ２測定〕
該仔マウスの肺組織を細胞単位に分離し、２型自然リンパ球（ＩＬＣ２）の割合をフローサイトメトリーＭＡＣＳＱｕａｎｔ  Ａｎａｌｙｚｅｒ１０（ミルテニー社）で測定した。死細胞を除去するために、７−Ａｍｉｎｏ−Ａｃｔｉｎｏｍｙｃｉｎ Ｄ（７−ＡＡＤ）染色を使用した。ＩＬＣ２は、ＦＳＣ−ＳＳＣ展開のリンパ球画分におけるＬｉｎｅａｇｅ（Ｌｉｎ）−ＣＤ４５＋、ＳＴ２（ＩＬ−３３Ｒ）＋、Ｔｈｙ１．２＋細胞と定義し、Ｌｉｎ−ＣＤ４５＋細胞中のＩＬＣ２の割合を測定した。当該測定は、Duerr CU, Fritz JH. Methods Mol Biol. 2017;1656:253-261.に記載された方法に従い行われた。
Ｌｉｎｅａｇｅは、ＣＤ３ε、ＣＤ４、ＣＤ５、ＣＤ８α、ＣＤ１１ｃ、ＣＤ１９、Ｆ４／８０、ＦｃεＲＩα、Ｇｒ−１、ＮＫ１．１、及びＴＥＲ１１９の抗体（いずれもＢｉｏＬｅｇｅｎｄ社）を含むものを使用した。【００７０】
その結果、対照群および摂取群における、Ｌｉｎ−ＣＤ４５＋細胞中のＩＬＣ２の割合は、表４及び図３に示すとおりとなった。摂取群では、対照群に比較して、有意にＩＬＣ２の割合が減少することが確認された。よって、ビフィドバクテリウム属細菌の摂取によって、ＩＬＣ２の過剰産生が抑制された。【００７１】
【表４】
2019163257.tif 000006
【００７２】
以上のとおり、妊娠中又は授乳中に母体がビフィドバクテリウム属細菌を摂取することで、生まれてくる仔のムチンスコア及び好酸球の割合が低減した。よって、当該摂取により、仔の呼吸器疾患を予防又は緩和することができると分かる。
また、妊娠中又は授乳中にビフィドバクテリウム属細菌を摂取することで、生まれてくる仔に呼吸器疾患を誘発した際のＩＬＣ２過剰産生を抑制できることが確認された。また、仔のムチンスコア及び好酸球の割合が低減した。これらの結果より、呼吸器疾患、特にはＩＬＣ２の過剰産生を伴う呼吸器疾患（例えば喘息など）の発症リスクが低減されることが分かる。
以上のとおりであるので、本技術によれば、妊娠中又は授乳中に母体がビフィドバクテリウム属細菌を摂取することにより、生まれてくる乳幼児の呼吸器疾患、とりわけＩＬＣ２の過剰産生に起因する呼吸器疾患を予防又は緩和できる。【００７３】
［試験例２］
ＩＬＣ２を介した呼吸器疾患を引き起こす実験モデルとして、マウスにサイトカインＩＬ−３３を経鼻投与する方法が確立されている（Klein Wolterink RG, Eur J Immunol. 2012 ;42(5):1106-16.）。ＩＬ−３３は、気道上皮細胞が大気汚染物質や微生物等によって刺激されることで産生される。ＩＬ−３３の経鼻投与は、肺組織のＩＬＣ２が活性化することでＴｈ２サイトカインの産生を促し、喘息様症状を引き起こすことが知られている。【００７４】
試験例２では、ＩＬＣ２を介して引き起こされる子の呼吸器疾患に対する、当該子の母親へのビフィドバクテリウム属細菌の投与の効果を調べた。【００７５】
試験例１と同様の方法にて、正常妊娠雌性マウスを、ビフィドバクテリウム属細菌Ｍ−１６Ｖ（ＮＩＴＥ  ＢＰ−０２６２２）を摂取する群と、摂取しない対照群とに分け、いずれの群もＲＯＦＡ浸潤液によるエアロゾル曝露を行った。【００７６】
前記妊娠雌性マウスから出生した仔マウスに生後２６、２７及び２８日目にＩＬ−３３を０．２５μｇ（ＢｉｏＬｅｇｅｎｄ社）を経鼻投与した。仔マウスは、母マウスからの母乳栄養により飼育した後、出生３０日目に解剖した。【００７７】
ＩＬ−３３により活性化された肺組織中のＩＬＣ２の割合を、フローサイトメトリーにより測定した。測定方法は試験例１に記載された方法と同様であった。【００７８】
当該測定の結果、対照群および摂取群におけるＬｉｎ−ＣＤ４５＋細胞中のＩＬＣ２の割合は以下表５に示す通りであった。摂取群では、対照群に比較して、有意にＩＬＣ２の割合が減少することが確認された。【００７９】
【表５】
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【００８０】
以上の結果より、妊娠中及び／又は授乳中にビフィドバクテリウム属細菌を母体が摂取することで、生まれてくる仔のＩＬＣ２を介して引き起こされる呼吸器疾患が抑制されることが確認された。【００８１】
試験例２に示されるとおり、妊娠中及び／又は授乳中に母体がビフィドバクテリウム属細菌を摂取することによって、子にＩＬ−３３を経鼻投与した際のＩＬＣ２の増加が抑制された。よって、当該摂取によって、ＩＬＣ２を介して引き起こされる呼吸器疾患が抑制される。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【国際調査報告】
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