(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
腐葉土を含む培地で菌根菌を培養する工程を含む、菌根菌の子実体の人工栽培方法であって、該菌根菌が、ホンシメジ（Lyophyllum shimeji）であり、該培地が、乾燥重量比で、広葉樹オガクズ４２％、腐葉土１７%、米ヌカ２０％、フスマ２０％およびリグニン１％からなる、方法。
【請求項２】
前記腐葉土が、広葉樹に由来する、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記広葉樹が、ブナ、ミズナラ、シイ、カシ、またはコナラの少なくとも１種である、請求項１に記載の方法。
【請求項４】
腐葉土を含む、菌根菌の子実体の人工栽培用培地であって、該菌根菌が、ホンシメジ（Lyophyllum shimeji）であり、該培地が、乾燥重量比で、広葉樹オガクズ４２％、腐葉土１７%、米ヌカ２０％、フスマ２０％およびリグニン１％からなる、培地。
【請求項５】
前記腐葉土が、広葉樹に由来する、請求項４に記載の培地。
【請求項６】
前記広葉樹が、ブナ、ミズナラ、シイ、カシ、またはコナラの少なくとも１種である、請求項４に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は、菌根菌の子実体の人工栽培および菌根菌の子実体の培養に用いる培地に関する。
【０００２】
【従来の技術】
従来より、マツタケ、ホンシメジなどに代表される菌根性菌（以後、菌根菌）は、多くの研究機関によって生態学的研究、栽培研究が行われてきた。菌根菌は、樹木と共生関係にあるといわれているにもかかわらず、その関係が未だに解明されていない。従って、菌根菌に関して人工培地を用いて菌糸を増殖させることはできるが、子実体を形成させることはできない。これまでの菌根菌の研究では、菌根形成に関するミクロフローラの影響に重点がおかれ、子実体の形成には、菌根菌以外の微生物の作用が必要であるとする学説もある。
【０００３】
菌根菌の子実体は、市場価値の高いキノコが多いが、天然のキノコは収穫時期、収穫量などに制限があるため、菌根菌の子実体を安定的に大量に入手する目的で、菌根菌の子実体の人工栽培が試みられている。今日、一般に販売されている「ほんしめじ」、「やまびこほんしめじ」などの名称で販売されているキノコは、木材腐朽性であって子実体の栽培が容易なブナシメジ（Hypsizygus marmoreus）であり、分類上のホンシメジ（Lyophyllum shimeji）とは異なる。この事実は、今関六地、大谷吉雄、本郷次雄：日本のキノコ、山と渓谷、(1988)によって「たくましい商魂はブナシメジの栽培品をホンシメジと偽って和名を混同させた」と指摘されている。
【０００４】
しばしば、菌根菌であるホンシメジおよびマツタケの人工栽培に成功した、との報告（きのこ技術集談会編集委員会編；きのこの基礎科学２最新技術、257〜275頁、農村文化社、1991）があるが、これらは子実体を形成させるには至っていない。つまり、現在まで菌根菌の子実体の人工栽培方法は確立されていない。
【０００５】
【発明が解決しようとする課題】
本発明は、上記問題の解決を目的とするものであり、特に、菌根菌の子実体を人工栽培する方法、および菌根菌の子実体の人工栽培用培地を提供することを目的とする。
【０００６】
【課題を解決するための手段】
本発明者らは、既存のキノコ栽培には用いられない腐葉土を培地成分として含む培地を用いて栽培を行うことにより、菌根菌の子実体を人工的に形成させることが可能であることを見出して本発明を完成した。さらに、本発明者らは、滅菌を行った培地を用いて子実体の発生に成功したことから、子実体の発生が他の微生物の作用とは無関係であることを発見した。つまり、本発明の培地を用いることにより、菌根菌の菌糸生長を促進し、子実体の原基形成を誘導することが可能であることを見出した。
【０００７】
本発明の人工栽培方法は、腐葉土を含む培地で菌根菌を培養する工程を含む。
【０００８】
好ましい実施態様においては、上記菌根菌は、ホンシメジ（Lyophyllum shimeji）、マツタケ（Tricholoma matsutake）、バカマツタケ（Tricholoma bakamatsutake）、トリュフ（Tuber melanosporum）、あるいはショウロ（Rhizopogon rubescens）である。
【０００９】
好ましい実施態様においては、上記腐葉土は、広葉樹に由来する。
【００１０】
好ましい実施態様においては、上記培地は、オガクズをさらに含む。
【００１１】
好ましい実施態様においては、上記オガクズは、広葉樹に由来する。
【００１２】
好ましい実施態様においては、上記広葉樹は、ブナ、ミズナラ、シイ、カシ、またはコナラの少なくとも１種である。
【００１３】
好ましい実施態様においては、上記培地は、リグニンをさらに含む。
【００１４】
好ましい実施態様においては、上記培地は、米ヌカおよびフスマをさらに含む。
【００１５】
好ましい実施態様においては、上記培地は、腐葉土、オガクズ、米ヌカ、フスマ、およびリグニンからなる培地である。
【００１６】
好ましい実施態様においては、上記培地は、乾燥重量比で、腐葉土10〜30％、オガクズ30〜50％、米ヌカ10〜30％、フスマ10〜30％、およびリグニン０〜２％からなる培地である。
【００１７】
本発明の菌根菌の子実体の人工栽培用培地は、腐葉土を含む。
【００１８】
好ましい実施態様においては、上記培地は、オガクズ、米ヌカ、およびフスマをさらに含む。
【００１９】
好ましい実施態様においては、上記培地は、腐葉土、オガクズ、米ヌカ、フスマ、およびリグニンからなる培地である。
【００２０】
好ましい実施態様においては、上記培地は、乾燥重量比で、腐葉土10〜30％、オガクズ30〜50％、米ヌカ10〜30％、フスマ10〜30％、およびリグニン０〜２％からなる培地である。
【００２１】
【発明の実施の形態】
本発明の菌根菌の子実体の人工栽培方法は、腐葉土を含む培地で菌根菌を培養する工程を含む。本発明の人工栽培方法および人工栽培方法に用いられる培地を、以下に詳述する。
【００２２】
１．菌根菌
本明細書において、菌根菌とは、自然界で菌根を形成し得る菌をいう。菌根菌は、好ましくは、Lyophyllum属、Tricholoma属、Rhizopogon属、Tuber属などに属する菌であり、より好ましくは、ホンシメジ（Lyophyllum shimeji）、マツタケ（Tricholoma matsutake）、バカマツタケ（Tricholoma bakamatsutake）、トリュフ（Tuber melanosporum）、またはショウロ（Rhizopogon rubescens）であり、最も好ましくは、ホンシメジである。菌根菌は、天然に生じる子実体から採取してもよいし、例えば、研究機関および寄託機関に保存されているものでもよい。
【００２３】
２．菌根菌の子実体の人工栽培用培地の組成および作成
組成
本発明の人工栽培用培地は、腐葉土を含む。本発明の人工栽培用培地は、培地全体の乾燥重量に対して腐葉土を乾燥重量比で３％以上、好ましくは10％以上、さらにより好ましくは15％以上で有する。ただし、本明細書中では、乾燥重量とは、90℃において５時間乾燥を行った後の重量をいう。
【００２４】
ここで、本明細書において腐葉土とは、広葉樹の葉、樹皮、小枝などを自然環境下で６カ月以上放置したものをいう。腐葉土は、一般に広葉樹として公知である全ての樹種に由来し得る。腐葉土は、広葉樹の葉、樹皮などに由来し得る。腐葉土は、１種の広葉樹に由来し得、あるいは多種類の広葉樹に由来し得る。また、腐葉土は、市販のものを使用し得る。
【００２５】
本発明の人工栽培用培地は、オガクズをさらに含み得る。本発明の人工栽培用培地は、培地全体の乾燥重量に対してオガクズを乾燥重量比で20％以上、好ましくは30％以上、さらにより好ましくは40％以上で有する。
【００２６】
ここで、本明細書においてオガクズとは、広葉樹の木材から得られる直径５ミリ以下の木材破片をいう。オガクズは、一般に広葉樹として公知である全ての樹種に由来し得る。オガクズは、１種の広葉樹に由来し得、あるいは多種類の広葉樹に由来し得る。好ましい広葉樹は、ブナ属、コナラ属、またはシイ属に属する広葉樹、より好ましくは、ブナ、コナラ、ミズナラ、カエデ、シイ、カシ、またはクヌギ、さらにより好ましくは、ブナである。
【００２７】
本発明の人工栽培用培地は、米ヌカ、フスマ、およびリグニンをさらに含み得る。
【００２８】
本発明の人工栽培用培地は、腐葉土、オガクズ、米ヌカ、およびフスマを含むことが好ましく、腐葉土、オガクズ、米ヌカ、フスマ、およびリグニンからなることがさらに好ましく、そして乾燥重量比で、腐葉土10〜30％、オガクズ30〜50％、米ヌカ10〜30％、フスマ10〜30％、およびリグニン０〜２％からなることが最も好ましい。
【００２９】
上記の培地成分を混合し、当業者に周知の方法に従って水を加えて練り合わせることにより、本発明の人工栽培方法に用いられる培地が作成される。
【００３０】
培養容器
本発明の培地を入れる培養容器は、滅菌処理に耐え得る容器であれば、その形状、大きさ、材料などは制限されない。キノコ栽培で最も一般的に用いられる容量850cc、58φのビンを使用してもよいし、他の菌床栽培用容器、例えば袋栽培用の袋を使用することもできる。
【００３１】
３．滅菌
上記の人工栽培用培地は、培養容器に詰められた後、滅菌処理が行われる。腐葉土は雑菌が多く、栄養価の高い米ヌカ、フスマなどを用いると雑菌の繁殖を招き、菌根菌の繁殖の妨げとなるため、十分に殺菌を行う必要がある。滅菌方法の例としては、高圧蒸気滅菌、常圧蒸気滅菌などが挙げられるが、特に121℃60分程度の高圧蒸気滅菌が好ましい。滅菌条件は、一般的に用いられる滅菌処理の条件の範囲内であれば、特に限定されないが、大量に蒸気滅菌を行う場合は、滅菌処理の時間を延長することが好ましい。
【００３２】
４．菌根菌の接種
接種に用いられる菌根菌としては、微生物寄託機関および研究機関などで保存されている菌株、あるいは天然の菌根菌の子実体から採取した胞子、またはこの胞子を発芽および増殖させて得た菌糸であってもよい。
このような菌根菌を、オガクズ米ヌカ混合培地などの培地で増殖させた状態のものを種菌として用いる。
【００３３】
５．子実体の栽培
5.1  培養
菌根菌の子実体を栽培するためには、まず、種菌を培地に接種し培養を行い、菌根菌を増殖させ、菌回りを完了させる（培地全体に菌糸が行き渡った状態を、菌回りが完了した、という）。培養条件は、菌根菌が生育可能な条件であれば、特に限定されない。好ましくは、温度は、20℃以上26℃以下、湿度は、50％以上75％以下、CO2濃度は、2000ppm以下である。より好ましくは、温度は、22℃以上24℃以下、湿度は60％以上70％以下、CO2濃度は、1500ppm以下である。さらに好ましくは、温度23℃、湿度60〜70％RH、CO2濃度1500ppm以下である。光照射は、あってもなくてもよいが、好ましくは、暗黒条件である。菌回りにかかる時間は、培養に用いる容器の容量（培地の容量）によって変動する。菌回りが完了した後、さらに数日間培養を続け、菌糸を熟成させ、子実体の発生を促進する。熟成期間は、５日以上30日以下、好ましくは15日以上20日以下であり得る。しかし、熟成は必ずしも必要ではない。
【００３４】
5.2  芽出し
培養後、芽出し操作を行う。芽出し操作の前に、菌掻きを行ってもよく、行わなくてもよい。菌掻きを行わない場合、上記5.1の培養物を、芽出し条件で培養する。菌掻きを行う場合は、上記5.1の培養物に菌掻きを行った後、芽出し条件で培養する。菌掻きの方法の例としては、当業者に周知の「ぶっかき」、「ひらがき」、「まんじゅうがき」などの方法が挙げられるが、これらに限定されない。菌掻きを行うと、子実体の形態が整う、子実体の成長が揃う、などの効果が得られる。
【００３５】
芽出し条件は、一般に菌根菌が生育可能な条件であれば、特に限定されない。好ましくは、温度は、14℃以上20℃以下、湿度は、80％以上95％以下、CO2濃度は、3000ppm以下である。より好ましくは、温度は、16℃以上20℃以下、湿度は85％以上95％以下、CO2濃度は、2500ppm以下である。さらに好ましくは、温度18℃、湿度90％RH、CO2濃度2000ppm以下である。光照射は、あってもなくてもよいが、好ましくは、暗黒条件である。芽出し条件は、培養条件よりも低温、および高湿度であることが好ましい。芽出し条件で培養される日数は、特に限定されず、肉眼で幼子実体の形成が認められるまでである。
【００３６】
5.3  子実体の生育
5.2で得られる幼子実体の生育は、菌根菌が生育可能な条件であれば、特に限定されない。好ましくは、温度は、14℃以上20℃以下、湿度は、75％以上95％以下、CO2濃度は、2000ppm以下である。より好ましくは、温度は、16℃以上20℃以下、湿度は85％以上95％以下、CO2濃度は、1800ppm以下である。さらに好ましくは、温度18℃、湿度90％RH、CO2濃度1500ppm以下である。生育工程では、光照射が必要である。光照射は、好ましくは、50Lux以上500Lux以下で１日あたり１時間以上８時間以下、さらに好ましくは、100Lux以上300Lux以下で１日あたり１時間以上６時間以下、さらにより好ましくは、100Lux以上200Lux以下で１日あたり３時間程度である。所望の形態のキノコ得るためには、光照射およびCO2濃度を、適切にコントロールする。
生育を行う日数は、菌根菌の生育条件によって変化し得る。菌根菌の子実体が所望の大きさに生育したら、子実体の収穫を行う。
【００３７】
【実施例】
以下に、本発明の実施例を説明する。しかし、本発明はこれら実施例に限定されるものではない。
【００３８】
１．培地の作製
以下の表１に示す培地成分を混合し、口径58φ、容量850ccのポリプロピレン製のビンに詰め、常法に従って、培地中央に直径18mmのホールをあけ、キャップをはめた。次いで、121℃、60分間の蒸気滅菌を行い、その後、清浄な室内で培地温度が18℃となるまで冷却した。
【００３９】
【表１】
0003821320.tif 000002
【００４０】
２．ホンシメジの接種
市販のホンシメジ（Lyophyllum shimeji）の子実体から胞子を採取し、ポテトデキストロース寒天培地(PDA培地）上で発芽および菌糸の増殖を行った。発芽および菌糸の増殖の条件は、温度25℃、湿度65％RH、暗黒条件下で25日間培養した。培養菌糸片５mm角を新たにPDA培地に接種し、同条件下で培養を行った。この操作を計３回繰り返して菌を純化した。そして米ヌカを栄養源として含む広葉樹オガクズ培地に接種し、種菌を作製した。このようにして得られた菌糸とオガクズ培地の混合物を種菌として用いた。
種菌を、常法に従って上記の腐葉土を含む培地（１コンテナ、16本）に接種した。
【００４１】
３．子実体の栽培
3.1  培養
暗黒下、温度23℃、湿度60〜70％RH、CO2濃度1500ppm以下の条件で培養した。菌糸は30日間で菌回りが完了したが、その後15日間の熟成期間をとり、総培養日数は45日間とした。
【００４２】
3.2  芽出し
培養終了後、芽出し操作を行った。菌掻きを行う方法と菌掻きをしない方法の二種で行った。
いずれの場合も芽出しの条件は、暗黒下、温度18℃、湿度90％RH、CO2濃度2000ppm以下であった。
(1)菌掻きした場合
「ぶっかき」による方法で菌掻きを行い芽出室へ移動した。菌糸が再生し幼子実体が形成されるまでに12日間かかった。
(2)菌掻きしない場合
キャップを取りはずし、芽出室へ移動した。幼子実体が形成されるまでに10日間かかった。
これらの結果から、菌掻きを行うか否かにかかわらず、ホンシメジが子実体を形成することが分かった。
【００４３】
3.3  子実体の生育
3.2で得られた幼子実体の生育を、温度18℃、湿度90％RH、CO2濃度1500ppm以下の条件で行った。生育工程では、100〜200Luxで１日あたり３時間程度の光照射を行った。
子実体は、菌掻きを行うか否かにかかわらず、生育11日目で茎長８cm程度となった。１ビンあたりで収穫された子実体の収量は平均120gであった。
【００４４】
【発明の効果】
本発明によって、これまで不可能とされてきた菌根菌の子実体の人工栽培が可能となった。本発明の人工栽培方法は、場所、季節、天候にかかわらず、キノコの子実体を施設栽培することが可能であるため、大量栽培に道が拓けた。これまでのキノコと比較しても大差のない、総栽培日数65〜70日間での栽培も可能である。
【図面の簡単な説明】
【図１】  生育11日目のホンシメジの子実体である、生物の形態を示す写真である。
【図１】
0003821320.tif 000003