(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
塩蔵赤シソ葉をｐＨ０．５〜２．３の酸性条件下、かつ８０〜９３℃の加熱条件下に水で抽出し、得られた抽出液を吸着性樹脂を用いるクロマトグラフィーにかけてエキスを得、次いで必要に応じ当該エキスを濃縮、粉末化することを特徴とするフェノール類含有エキスの製造法。
【請求項２】
酸性条件下が、クエン酸、乳酸、リンゴ酸、酒石酸、コハク酸、塩酸またはリン酸による酸性条件下である請求項１記載の方法。
【請求項３】
吸着性樹脂が、芳香族系または置換芳香族系である請求項１又は２に記載の方法。
【請求項４】
吸着性樹脂が、比表面積が５００〜２０００ｍ2 ／ｇ、かつ細孔半径が２０〜２００Åのものである請求項３記載の方法。
【請求項５】
フェノール類がロスマリン酸である請求項１〜４のいずれかに記載の方法。
【請求項６】
請求項１〜５のいずれかに記載の方法で得られたフェノール類を含有するエキスまたは粉末。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は、塩蔵赤シソからのフェノール類含有エキスの製造法に関し、詳しくは塩蔵赤シソの葉に含まれるフェノール類を高濃度に含有するエキスまたは粉末の製造法に関する。
【０００２】
【従来の技術】
赤シソの葉に含まれるフェノール類が、抗アレルギー作用を有していることが知られている（月刊フードケミカル、７巻、p. 37-42, 2000）。
本発明者らの一部は、赤シソ等のシソ科植物の葉からフェノール類高含有エキスを製造する方法を確立し、特にロスマリン酸が抗アレルギー作用の有効成分であることを明らかにした（特願2001−25277号、特願2001−100346号、WO02/62365号公報）。しかしながら、赤シソの葉は、季節性の高い食材であり、一年を通しての生産はなされていないため、年間を通して赤シソの生葉からエキスを生産することは不可能であった。
ところで、赤シソは塩蔵により保存することが可能であることは、従来より知られている。しかし、塩蔵の赤シソにも生葉と同程度のフェノール類が残存しているか不明である上に、たとえフェノール類が残存していても、塩分が含まれているため、多様な飲食品への応用が困難である。
しかも、塩蔵赤シソから脱塩と同時に効率よくフェノール類を抽出する方法も見出されていなかった。
【０００３】
【発明が解決しようとする課題】
従来より一般的に行われている脱塩方法を適用すると、フェノール類の残存率が低くなるため、塩蔵の赤シソから得られるエキスは機能性飲食品等に利用するためには、フェノール類、特にロスマリン酸含量が不十分であった。
本発明の目的は、塩蔵の赤シソ葉からフェノール類を高濃度に含有する赤シソエキスもしくは粉末を効率よく製造する方法を提供することである。
【０００４】
【課題を解決するための手段】
本発明者らは、上記課題を解決すべく鋭意研究を重ねた結果、塩蔵赤シソの葉に含まれるフェノール類を高濃度に含有する赤シソエキスもしくはその粉末の効率的な製造法を見出し、本発明を完成するに到った。
【０００５】
請求項１記載の本発明は、塩蔵赤シソ葉をｐＨ０．５〜２．３の酸性条件下、かつ８０〜９３℃の加熱条件下に水で抽出し、得られた抽出液を吸着性樹脂を用いるクロマトグラフィーにかけてエキスを得、次いで必要に応じ当該エキスを濃縮、粉末化することを特徴とするフェノール類含有エキスの製造法である。
請求項２記載の本発明は、酸性条件下が、クエン酸、乳酸、リンゴ酸、酒石酸、コハク酸、塩酸またはリン酸による酸性条件下である請求項１記載の方法である。
請求項３記載の本発明は、吸着性樹脂が、芳香族系または置換芳香族系である請求項１又は２のいずれかに記載の方法である。
請求項４記載の本発明は、吸着性樹脂が、比表面積が５００〜２０００ｍ2 ／ｇ、かつ細孔半径が２０〜２００Åのものである請求項３記載の方法である。
請求項５記載の本発明は、フェノール類がロスマリン酸である請求項１〜４のいずれかに記載の方法である。
請求項６記載の本発明は、請求項１〜５のいずれかに記載の方法で得られたフェノール類を含有するエキスまたは粉末である。
【０００６】
【発明の実施の形態】
塩蔵赤シソ葉からフェノール類含有エキスを製造する本発明の方法は、当該エキスが食品分野でも利用されるものであることから、第１に製造方法が人体に無害な方法であることが要求される。さらに、原料が塩蔵品であることから、脱塩処理が必要とされるが、この処理によって目的とするフェノール類の含量を低減させないことが重要な課題である。
【０００７】
そのため、本発明では水を用いて塩蔵赤シソ葉からフェノール類含有エキスを抽出する。
【０００８】
抽出は、酸性条件下、かつ加熱条件下で行うことが好ましく、具体的には酸として、例えばクエン酸、乳酸、リンゴ酸、酒石酸、コハク酸、塩酸、リン酸などが用いられ、ｐＨ０．５〜２．３の条件下で抽出を行う。
また、加熱条件としては３０〜９３℃、好適には８０〜９３℃であり、通常１〜６０分間、好ましくは２０〜４０分間抽出処理を行う。
【０００９】
次に、塩蔵赤シソからのフェノール類含有エキスの抽出方法について説明すると、例えば親水性溶媒として単に水のみを使用して抽出を行う場合は、原料の塩蔵赤シソ葉１００重量部に対し、水１００〜５０００重量部、好ましくは２００〜１０００重量部を使用する。なお、酸性条件、加熱条件などについては上記した通りである。
【００１０】
抽出処理後、濾過して得られた抽出液には、目的とするフェノール類以外に塩分、その他の成分が含まれているので、脱塩操作などの精製操作を行うことが必要である。
このための精製操作としては、吸着性樹脂を用いるクロマトグラフィーが好適である。すなわち、吸着性樹脂を充填したカラムに抽出液を通液して当該抽出液中の目的成分であるフェノール類を選択的に吸着させた後、含水親水性溶媒によりフェノール類を分離、溶出させて採取する。
【００１１】
本発明に用いる吸着性樹脂としては、その化学構造により芳香族系、置換芳香族系およびアクリル系に分類される。芳香族系吸着性樹脂とは、架橋スチレン系の多孔質重合体であり、例えばダイヤイオンＨＰ２０、ダイヤイオンＨＰ２１、セパビーズＳＰ８２５、セパビーズＳＰ８５０（いずれも商品名、三菱化学（株）製）などが挙げられる。置換芳香族系吸着性樹脂とは、芳香族重合体の芳香核に臭素原子を結合させたものであり、例えばセパビーズＳＰ２０７（商品名、三菱化学（株）製）などが挙げられる。また、アクリル系吸着性樹脂とは、メタクリル酸エステル重合体を骨格とするもので、例えばダイヤイオンＨＰ２ＭＧ（商品名、三菱化学（株）製）などが挙げられる。これら吸着性樹脂の中では芳香族系および置換芳香族系が好ましく、芳香族系がより好ましい。
さらに、吸着性樹脂は、比表面積が５００ｍ2 ／ｇより大きく、好ましくは５００〜２０００ｍ2 ／ｇのものがよく、かつ細孔半径が２００Åより小さく、好ましくは２０〜２００Å、より好ましくは３０〜１５０Åの樹脂がよい。
【００１２】
次に、吸着性樹脂の使用量については、樹脂量対抽出液との容量比が１：１から１：３００、好ましくは１：３から１：１５０である。
吸着性樹脂を充填したカラムに前記の抽出液を通液することによって、フェノール類は選択的に樹脂に吸着される。
【００１３】
フェノール類を樹脂に吸着後、水を通すことによって非吸着性物質を洗い流す。このときの水の使用量はカラム樹脂量の１〜２０倍量、好ましくは３〜１０倍量が適当である。
その後、含水親水性溶媒を溶離液として用い、フェノール類を溶出する。ここで、含水親水性溶媒としては、例えば７０％エタノール水溶液のような水−エタノール混液が好適である。水とエタノールは容量比で１０：９０から８０：２０の範囲で用いられ、５０：５０から２０：８０の範囲が好ましい。なお、溶離液の量はカラム樹脂量の１〜２０倍が用いられ、２〜１０倍量が好適な量である。
【００１４】
ここで、赤シソの葉に含まれているフェノール類について説明する。
フェノール類としては、例えばフラボノイド、アントシアン、フェノール酸等が挙げられる。フラボノイドとしては、フラボン、イソフラボン、フラボノール、フラバノン等があり、アントシアンとしては、シアニジン、デルフィニジン、シソニンおよびそれらの配糖体が挙げられる。
【００１５】
また、フェノール酸としては、ロスマリン酸、クロロゲン酸、クマリン酸、カフェ酸、没食子酸、バニリン酸、フェルラ酸、プロトカテキュ酸などが挙げられる。
フェノール酸のうちロスマリン酸の含有量が他の成分よりも多い上に、このものは抗アレルギー作用の主要な活性成分である。
【００１６】
本発明では、上記の溶出液（エキス）をそのまま赤シソエキスとして用いることができるが、必要に応じて濃縮、粉末化することが好ましい。この場合、まず溶出液を減圧濃縮する。次いで、得られた濃縮液を粉末化するため、凍結乾燥またはスプレードライなどを行う。
また、スプレードライを行う際に、バインディング材としてデキストリン、乳糖等を添加することにより、効率的に粉末化が可能となる。しかも、これによりフェノール類含有量を調整することも可能である。
【００１７】
【実施例】
以下、実験例をあげて本発明を具体的に説明するが、これらは本発明を限定するものではない。
実施例１
塩蔵赤シソ全葉５０００ｇに９０℃の熱水５００００ｍｌおよび５００ｇのクエン酸を添加し（ｐＨ２．３）、９３℃で３０分撹拌して抽出した後、Ｎｏ. ６の濾紙を用いて濾過し、室温に冷却した。
このようにして得た抽出液を芳香族系吸着性樹脂（商品名：セパビーズＳＰ８５０、比表面積  １０００ｍ2 ／ｇ、細孔半径  ３５−４５Å、三菱化学（株）製）３５０ｍｌを充填したオープンカラム（内径８ｃｍ×長さ４０ｃｍ）に供し、クロマトグラフィーを実施した。
その後、３５００ｍｌの水を通して洗浄し、非吸着性成分を除去した。次に、７０％エタノール水溶液３０００ｍｌを流して溶出した。
【００１８】
得られた溶出液をＢｘ２４まで減圧濃縮後、凍結乾燥して粉末４３ｇを得た。この粉末にはフェノール類７6.０重量％（粉末重量当たり）含まれており、ロスマリン酸含量は３5.５重量％（粉末重量当たり）であった。
フェノール類の測定は、プルシアンブルー法（Methods in Enzymology, vol.234, 432-433 参照）により実施した。すなわち、１％クエン酸溶液に溶解したロスマリン酸（extrasynthese 社製) を標品として予め作成しておいた検量線から求めた。また、ロスマリン酸量は、Planta Medica, 63, 177-179 (1997) を参照し、ＨＰＬＣ法で分析した。すなわち、ＨＰＬＣ分析は、溶離液としてＡ液（0.１％トリフルオロ酢酸含有蒸留水）とＢ液（0.１％トリフルオロ酢酸含有アセトニトリル）の２液を用いたグラジェントの系で実施した。カラムとしてＯＤＳ１２０Ｔ（東ソー社製、4.６ｍｍ×１５０ｍｍ）を用い、流速0.８ｍｌ／ｍｉｎ、検出はＵＶ３２０ｎｍで実施した。なお、グラジェント条件は、下記の通りである。
【００１９】
０−１０ｍｉｎ  ：Ａ液／Ｂ液＝９０／１０
１０−３５ｍｉｎ  ：Ａ液／Ｂ液＝９０／１０→Ａ液／Ｂ液＝６０／４０
３５−４０ｍｉｎ  ：Ａ液／Ｂ液＝６０／４０→Ａ液／Ｂ液＝  ０／１００
４０−４５ｍｉｎ  ：Ａ液／Ｂ液＝  ０／１００
【００２０】
実施例２
塩蔵赤シソ全葉１０００ｇに水２０００ｍｌおよび濃塩酸８３ｍｌを添加し（ｐＨ０．５）、８０℃で４０分撹拌して抽出した後、Ｎｏ. ６の濾紙を用いて濾過し、室温に冷却した。
このようにして得た抽出液を芳香族系吸着性樹脂（商品名：セパビーズＳＰ８２５、比表面積  １０００ｍ2 ／ｇ、細孔半径  ５０−６０Å、三菱化学（株）製）３５０ｍｌを充填したオープンカラム（内径８ｃｍ×長さ４０ｃｍ）に供し、クロマトグラフィーを実施した。
その後、１２００ｍｌの水を通して洗浄し、塩分などの非吸着性成分を除去した。次いで、８０％エタノール水溶液１０００ｍｌを流して溶出した。
８０％エタノール水溶液による溶出液をＢｘ２４まで減圧濃縮後、凍結乾燥して粉末を得た。このものについて、実施例１と同様に分析したところ、これは粉末重量当たりフェノール類４8.９重量％、ロスマリン酸２3.１重量％を含んでおり、粉末重量は9.２ｇであった。
【００２１】
実施例３
塩蔵赤シソ全葉５０００ｇに９０℃の熱水５００００ｍｌおよび５００ｇのクエン酸を添加し（ｐＨ２．３）、９３℃で３０分撹拌して抽出した後、Ｎｏ. ６の濾紙を用いて濾過し、室温に冷却した。
このようにして得た抽出液を芳香族系吸着性樹脂（商品名：セパビーズＳＰ８５０、比表面積  １０００ｍ2 ／ｇ、細孔半径  ３５−４５Å、三菱化学（株）製）３５０ｍｌを充填したオープンカラム（内径８ｃｍ×長さ４０ｃｍ）に供し、クロマトグラフィーを実施した。
その後、３５００ｍｌの水を通して洗浄し、非吸着性成分を除去した。次に、７０％エタノール水溶液３０００ｍｌを流して溶出した。
【００２２】
次いで、得られた７０％エタノール溶出液をＢｘ２４まで減圧濃縮後、デキストリン（商品名：アミコール６−Ｈ、（株）日澱化学製）１０００ｇを添加してスプレードライした。これにより、赤シソエキスの粉末１０４３ｇが得られた。
【００２３】
比較例１
塩蔵赤シソ全葉５００ｇに水５０００ｍｌおよび５０ｇのクエン酸を添加し（ｐＨ２．３）、９３℃で３０分撹拌して抽出した後、Ｎｏ. ６の濾紙を用いて濾過し、室温に冷却した。
このようにして得た抽出液をアクリル系吸着性樹脂（商品名：ダイヤイオンＨＰ２ＭＧ、比表面積  ５００ｍ2 ／ｇ、細孔半径  ２００−３００Å、三菱化学（株）製）３５ｍｌを充填したオープンカラム（内径８ｃｍ×長さ４０ｃｍ）に供し、クロマトグラフィーを実施した。
その後、３５０ｍｌの水を通して洗浄し、非吸着性成分を除去した。次に、７０％エタノール水溶液３００ｍｌを流して溶出した。
【００２４】
次に、７０％エタノール溶出液をＢｘ２４まで減圧濃縮後、凍結乾燥して粉末を得た。このものについて、実施例１と同様に分析したところ、これは粉末重量当たりフェノール類２4.６重量％、ロスマリン酸１1.６重量％を含んでおり、粉末重量は4.４ｇであった。
【００２５】
【発明の効果】
本発明により、塩蔵赤シソ葉を原料として、赤シソに含まれるフェノール類を効率よく回収できる製造法が提供される。フェノール類を含む赤シソエキス自体またはこれを濃縮、粉末化したものを飲食品等に添加することにより、花粉症、アトピー性皮膚炎などの症状を改善する作用を有する抗アレルギー性飲食品等として利用できる。