(57)【要約】  本発明は、変異ＬＣＡＴタンパクに対して優れたＬＣＡＴ活性化作用を有し、ＬＣＡＴ欠損症治療効果を有する化合物を含有する医薬を提供することを目的とし、  式（Ｉ）【化１】2019189046.tif 000007［式中、Ｒ１は、水素原子又は水酸基であり、Ｒは、２−（トリフルオロメチル）ピリミジン−５−イル基又は５−（トリフルオロメチル）ピラジン−２−イル基である。］で表される化合物又はその薬理上許容される塩を含有するＬＣＡＴ欠損症治療薬を提供することである。
2019189046.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
一般式（Ｉ）
【化１】
2019189046.tif 000006
［式中、Ｒ１は、水素原子又は水酸基であり、Ｒは、２−（トリフルオロメチル）ピリミジン−５−イル基又は５−（トリフルオロメチル）ピラジン−２−イル基である。］で表される化合物又はその薬理上許容される塩を含有するＬＣＡＴ欠損症治療薬。
【請求項２】
Ｒ１が水素原子であり、Ｒが２−（トリフルオロメチル）ピリミジン−５−イル基である、請求項１に記載のＬＣＡＴ欠損症治療薬。
【請求項３】
Ｒ１が水酸基であり、Ｒが５−（トリフルオロメチル）ピラジン−２−イル基である、請求項１に記載のＬＣＡＴ欠損症治療薬。
【請求項４】
ＬＣＡＴ欠損症が、家族性ＬＣＡＴ欠損症（Familial LCAT deficiency；ＦＬＤ）である、請求項１〜３のいずれか１項に記載のＬＣＡＴ欠損症治療薬。
【請求項５】
ＬＣＡＴ欠損症が、Ｇ３０Ｓ、Ｌ３２Ｐ、Ｇ３３Ｒ、Ａ９３Ｔ、Ｒ１３５Ｗ、Ｒ１３５Ｑ、Ｒ１４０Ｈ、Ｒ１４７Ｗ、Ｙ１５６Ｎ、Ｇ１８３Ｓ、Ｌ２０９Ｐ、Ｎ２２８Ｋ、Ｒ２４４Ｇ、Ｍ２５２Ｋ、Ｔ３２１Ｍ、Ｇ３４４Ｓ、Ｔ３４７Ｍ、Ｒ３９９Ｃ、Ｇ２３０Ｒ、Ｆ３８２Ｖ、Ｔ２０８Ｓ、Ｓ１８１Ｎ、Ｒ１４０Ｃ、Ｇ１７９Ｒ、Ｍ２９３Ｒ、Ｐ４０６Ｌ、Ｃ７４Ｔ、Ｒ２６８Ｌ又はＤ１０１Ｎのアミノ酸変異によるＦＬＤである、請求項１〜３のいずれか１項に記載のＬＣＡＴ欠損症治療薬。
【請求項６】
ＬＣＡＴ欠損症が、Ｙ１５６Ｎ又はＮ２２８Ｋのアミノ酸変異によるＦＬＤである、請求項１〜３のいずれか１項に記載のＬＣＡＴ欠損症治療薬。
【請求項７】
ＬＣＡＴ欠損症が、魚眼病（Fish eve disease; ＦＥＤ）である、請求項１〜３のいずれか１項に記載のＬＣＡＴ欠損症治療薬。
【請求項８】
ＬＣＡＴ欠損症が、Ｎ１３１Ｄ、Ｎ３９１Ｓ、Ｐ１０Ｌ、Ｐ１０Ｑ、Ｔ１２３Ｉ、Ｒ９９Ｃ又はＴ１３Ｍのアミノ酸変異によるＦＥＤである、請求項１〜３のいずれか１項に記載のＬＣＡＴ欠損症治療薬。
【請求項９】
ＬＣＡＴ欠損症が、Ｎ１３１Ｄ、Ｐ１０Ｑ又はＴ１２３Ｉのアミノ酸変異によるＦＥＤである、請求項１〜３のいずれか１項に記載のＬＣＡＴ欠損症治療薬。
【請求項１０】
請求項１〜９のいずれか１項に記載の化合物又はその薬理上許容される塩の有効量を、ヒトに投与する工程を含む、ＬＣＡＴ欠損症の治療方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、優れたレシチンコレステロールアセチルトランスフェラーゼ（以下、ＬＣＡＴという）活性化作用（好適には、可逆的なＬＣＡＴ活性化作用）を有するピラゾロピリジン誘導体又はその薬理上許容される塩を含有するＬＣＡＴ欠損症治療薬に関する。
【背景技術】
【０００２】
レシチンコレステロールアシルトランスフェラーゼ（lecithin cholesterol acyl transferase：ＬＣＡＴ）欠損症は、コレステロールのエステル化を担う酵素ＬＣＡＴの遺伝子変異により、タンパク発現の欠損や酵素活性が低下することで遊離コレステロールやレシチン（フォスファチジルコリン）が増加し、高比重リポタンパク(high density lipoprotein:ＨＤＬ)コレステロールの顕著な低下や血清コレステロールエステル比の低下が認められる遺伝性疾患である。組成が変化した異常リポタンパクが組織に沈着することで角膜混濁や腎障害、赤血球膜の脂質組成異常による溶血性貧血などの症状を呈する。【０００３】
ＬＣＡＴの先天的な機能異常による病態は、家族性ＬＣＡＴ欠損症（Familial LCAT deficiency；ＦＬＤ）と魚眼病（Fish eve disease; ＦＥＤ）に大別される。現在までに約１００種類のＬＣＡＴ遺伝子変異が報告されている。約６０種類がＦＬＤの原因遺伝子とされ、そのうち1/３はナンセンス変異もしくはフレームシフトにより全長ＬＣＡＴタンパクが産生されないもの、２/３はミスセンス変異で活性が部分欠損したものとされている。【０００４】
例えば、ＦＬＤのアミノ酸変異としては、Ｇ３０Ｓ、Ｌ３２Ｐ、Ｇ３３Ｒ、Ａ９３Ｔ、Ｒ１３５Ｗ、Ｒ１３５Ｑ、Ｒ１４０Ｈ、Ｒ１４７Ｗ、Ｙ１５６Ｎ、Ｇ１８３Ｓ、Ｌ２０９Ｐ、Ｎ２２８Ｋ、Ｒ２４４Ｇ、Ｍ２５２Ｋ、Ｔ３２１Ｍ、Ｇ３４４Ｓ、Ｔ３４７Ｍ、Ｒ３９９Ｃ（非特許文献１）、Ｇ２３０Ｒ（非特許文献２）、Ｆ３８２Ｖ、Ｔ２０８Ｓ（非特許文献３）、Ｓ１８１Ｎ（非特許文献４）、Ｒ１４０Ｃ（非特許文献５）、Ｇ１７９Ｒ（非特許文献６）、Ｍ２９３Ｒ（非特許文献７）、Ｐ４０６Ｌ（非特許文献８）、Ｃ７４Ｔ（非特許文献９）、Ｒ２６８Ｌ（非特許文献１０）、Ｄ１０１Ｎ（非特許文献１１）などが報告されている。【０００５】
ＦＥＤのアミノ酸変異としては、Ｎ１３１Ｄ、Ｎ３９１Ｓ、Ｐ１０Ｌ、Ｐ１０Ｑ、Ｔ１２３Ｉ（非特許文献１）、Ｒ９９Ｃ（非特許文献１２）、Ｔ１３Ｍ（非特許文献１３）などが報告されている。【０００６】
ＦＬＤにはＬＣＡＴ活性が健常人の１０％未満となる古典型と部分欠損型がある。古典型では大多数の症例で幼少期からアルブミンを中心としたタンパク尿が出現し、進行性の腎不全を４０〜５０歳で発症する。部分欠損型では、健常人と古典型の中間的な病態となるため、その臨床症状（重症度）は多様である。比較的幼年期から角膜混濁のみを呈するＦＥＤというＬＣＡＴ欠損症の一亜型が存在する。角膜混濁による視力障害により角膜移植が必要となることがある。腎不全、角膜混濁のどちらも生活の質（Quality of life: ＱＯＬ）の低下が大きな問題となる。【０００７】
ＬＣＡＴ欠損症の生命予後を規定する因子は腎不全の進行である。腎移植は一時的な腎機能改善効果はあるが、再発リスクがある。腎機能の保護を目的として低脂肪食による食事療法、アンジオテンシンII受容体拮抗薬、アンジオテンシン転換酵素阻害剤などの薬物療法が行われているが、いずれも対処療法であり腎機能障害の原因物質である異常リポタンパクの改善が期待できないことから、長期の病態進展に対する治療および予防効果は明確ではない。現時点では確立された治療方法はない。（非特許文献１４）【０００８】
ＬＣＡＴ欠損症は、ＬＣＡＴ活性低下に起因することから根治療法としてＬＣＡＴ活性を持続的に維持する方法が求められている。組換えＬＣＡＴタンパクの酵素補充療法（非特許文献１５）、アデノ随伴ウィルスをベクターとした遺伝子治療（非特許文献１６）やＬＣＡＴ遺伝子導入脂肪細胞移植によるex vivo遺伝子細胞治療（非特許文献１７）が研究されている。【０００９】
組換えタンパクの補充療法については、生涯にわたり定期的な注入を実施する必要があり、組換えタンパクに対する抗体の出現というタンパク製剤特有の課題点を抱えている。また遺伝子治療や遺伝子導入細胞を用いた細胞治療は、持続的なＬＣＡＴタンパクの発現とそれによる活性維持が可能という利点があるが、遺伝子導入細胞のターンノーバーに伴い導入遺伝子の発現低下が予想され、ＬＣＡＴ活性を長期に安定的に保持するという点での課題点が存在する。【００１０】
ＬＣＡＴタンパクの補充とは異なるアプローチとして、ＬＣＡＴタンパクの活性化剤が報告されている。ＬＣＡＴタンパクに作用し、その活性を亢進させる薬剤は、ペプチド化合物（たとえば、非特許文献１８）、あるいは低分子化合物（たとえば、特許文献１）が知られている。【００１１】
特許文献１記載の低分子化合物は、健常人およびＬＣＡＴ欠損症患者の血液サンプルを用いた検討が実施されて、ＦＬＤおよびＦＥＤ患者由来のある種の変異ＬＣＡＴタンパクの活性を向上させたとの報告がある。（非特許文献１９）【００１２】
正常ヒトＬＣＡＴタンパクに対する活性化作用を有する低分子化合物としては、ピラゾロピリジン骨格を有する特許文献２〜４に記載の化合物が知られている。しかしながら、ピラゾロピリジン骨格を有する化合物が、患者由来の変異ＬＣＡＴタンパクに対して優れたＬＣＡＴ活性化作用を有するかは、これまで知られていない。
【先行技術文献】
【特許文献】
【００１３】
【特許文献１】ＷＯ２００８／００２５９１号パンフレット
【特許文献２】ＷＯ２０１２／０２８２４３号パンフレット
【特許文献３】ＷＯ２０１３／１８７４６２号パンフレット
【特許文献４】ＷＯ２０１５／０８７９９４号パンフレット
【非特許文献】
【００１４】
【非特許文献１】Ｋｕｉｖｅｎｈｏｖｅｎ，J.A., Ｊ．Ｌｉｐｉｄ Ｒｅｓ.，１９９７年，第３８巻，第１９１−２０５頁
【非特許文献２】Ｍｉｅｔｔｉｎｅｎ，Ｈ.Ｅ., Ａｒｔｅｒｉｏｓｃｌｅｒ．Ｔｈｒｏｍｂ．Ｖａｓｃ．Ｂｉｏｌ．，１９９８年，第１８巻，第５９１−５９８頁
【非特許文献３】Ｎａｎｊｅｅ，Ｍ．Ｎ．， Ａｔｈｅｒｏｓｃｌｅｒｏｓｉｓ，２００３年，第１７０巻，第１０５-１１３頁
【非特許文献４】Ｆｒａｓｃａ，Ｇ．Ｍ．， Ｎｅｐｈｒｏｌ．Ｄｉａｌ．Ｔｒａｎｓｐｌａｍｔ.，２００４年，第１９巻，第６２２−６２４頁
【非特許文献５】Ｈｉrａｓｈｉｏ，S., Ｊ．Ａｒｔｅｒｉｏｓｃｌｅｒ．Ｔｈｒｏｍｂ．，２０１０年，第17巻，第１２９７−１３０１頁
【非特許文献６】Ｗａｎｇ，Ｘ．Ｌ., Ｊ．Ａｒｔｅｒｉｏｓｃｌｅｒ．Ｔｈｒｏｍｂ．，２０１１年，第１８巻，第７１３−７１９頁
【非特許文献７】Ｒｏｓｈａｎ，Ｂ., Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｌｉｐｉｄｏｌ.，２０１１年，第５巻，第４９３−４９９頁
【非特許文献８】Ｃｏｎｃａ，Ｐ., Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｌｉｐｉｄｏｌ.，２０１２年，第６巻，第２４４−２５０頁
【非特許文献９】Ｎａｉｔｏ，Ｓ., Ａｔｈｅｒｏｓｃｌｅｒｏｓｉｓ，２０１３年，第２２８巻，第１９３−１９７頁
【非特許文献１０】Ｃａｓｔｒｏ−Ｆｅｒｒｅｉｒａ，I., ＪＩＭＤ．，Ｒｅｐ.，２０１８年，第４０巻，第５５−６２頁
【非特許文献１１】Ｏｌｉａｅｉ，Ｆ., Ｊ． Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｃｈｅｍ. ，２０１８年，第２巻
【非特許文献１２】Ｂｌａｎｃｏ−Ｖａｃａ，F., Ａｔｈｅｒｏｓｃｌｅｒｏｓｉｓ，１９９７年，第１３１巻，第８５−９５頁
【非特許文献１３】Ｍｉｉｄａ，T., Ｃｌｉｎ．Ｃｈｉｍ．Ａｃｔａ.，２００４年，第３４３巻，第２０１−２０８頁
【非特許文献１４】Ｋｕｒｏｄａ，Ｍ.， Ｎｉｐｐｏｎ Ｒｉｎｓｈｏ，２０１３年，第７１巻，増刊号３，第２７５−２７９頁
【非特許文献１５】Ｓｈａｍｂｕｒｅｋ，Ｒ．， Ｊ. Ｃｌｉｎ．Ｌｉｐｉｄｏｌ．，２０１６年，第１０巻，第３５６−３６７頁
【非特許文献１６】Ｃｈｅｎ，Ｚ．， Ｊ．Ｃａｒｄｉｏｖａｓｃ．Ｔｒａｎｓｌ. Ｒｅｓ．，２０１１年，第４巻，第８０１−８１０頁
【非特許文献１７】Ｋｕｒｏｄａ，Ｍ.， Ｊ．Ｄｉａｂｅｔ. Ｉｎｖｅｓｔ．，２０１１年，第２巻，第３３３−３４０頁
【非特許文献１８】Ｉｗａｔａ，Ａ．， Ａｔｈｅｒｏｓｃｌｅｒｏｓｉｓ，２０１１年，第２１８巻，第３００−３０７頁
【非特許文献１９】Ｆｒｅｅｍａｎ，Ｌ．Ａ．， Ｊ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．Ｅｘｐ．Ｔｈｅｒ．，２０１７年，第３６２巻，第３０６−３１８頁
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１５】
現在、ＬＣＡＴ変異のある患者血液に対してＬＣＡＴ活性化作用を示す低分子化合物の報告はあるが、その化合物は安全性及び有効性の面で満足できるものではない。遺伝性疾患であるＬＣＡＴ欠損症患者に対して、腎機能低下の進行による人工透析への移行や角膜混濁の進行による角膜移植への移行を防止することを目的に、長期間にわたり持続的に投与することができる安全性と有効性に優れたＬＣＡＴ活性化剤が切望されている。
【課題を解決するための手段】
【００１６】
発明者らは、特定の構造を有するピラゾロピリジン誘導体又はその薬理上許容される塩が、患者由来のある種の変異ＬＣＡＴタンパクに対して優れたＬＣＡＴ活性化作用を有することを見出した。【００１７】
本発明は、患者自身の内在性の変異ＬＣＡＴタンパクに対して直接優れたＬＣＡＴ活性化作用（好適には、可逆的なＬＣＡＴ活性化作用）を有するピラゾロピリジン誘導体又はその薬理上許容される塩を含有するＬＣＡＴ欠損症治療薬を提供する。
すなわち、本発明は、
（１）一般式（Ｉ）【００１８】
【化１】
2019189046.tif 000003
【００１９】
［式中、Ｒ１は、水素原子又は水酸基であり、Ｒは、２−（トリフルオロメチル）ピリミジン−５−イル基又は５−（トリフルオロメチル）ピラジン−２−イル基である。］で表される化合物又はその薬理上許容される塩を含有するＬＣＡＴ欠損症治療薬、
（２）Ｒ１が水素原子であり、Ｒが２−（トリフルオロメチル）ピリミジン−５−イル基である、（１）に記載のＬＣＡＴ欠損症治療薬、
（３）Ｒ１が水酸基であり、Ｒが５−（トリフルオロメチル）ピラジン−２−イル基である、（１）に記載のＬＣＡＴ欠損症治療薬、
（４）ＬＣＡＴ欠損症が、家族性ＬＣＡＴ欠損症（Familial LCAT deficiency；ＦＬＤ）である、（１）〜（３）に記載のＬＣＡＴ欠損症治療薬。
（５）ＬＣＡＴ欠損症が、Ｇ３０Ｓ、Ｌ３２Ｐ、Ｇ３３Ｒ、Ａ９３Ｔ、Ｒ１３５Ｗ、Ｒ１３５Ｑ、Ｒ１４０Ｈ、Ｒ１４７Ｗ、Ｙ１５６Ｎ、Ｇ１８３Ｓ、Ｌ２０９Ｐ、Ｎ２２８Ｋ、Ｒ２４４Ｇ、Ｍ２５２Ｋ、Ｔ３２１Ｍ、Ｇ３４４Ｓ、Ｔ３４７Ｍ、Ｒ３９９Ｃ、Ｇ２３０Ｒ、Ｆ３８２Ｖ、Ｔ２０８Ｓ、Ｓ１８１Ｎ、Ｒ１４０Ｃ、Ｇ１７９Ｒ、Ｍ２９３Ｒ、Ｐ４０６Ｌ、Ｃ７４Ｔ、Ｒ２６８Ｌ又はＤ１０１Ｎのアミノ酸変異によるＦＬＤである、（１）〜（３）に記載のＬＣＡＴ欠損症治療薬。
（６）ＬＣＡＴ欠損症が、Ｒ１４７Ｗ、Ｔ２７４Ｉ、Ｌ３７２Ｒ、Ｐ２７８Ｓ、Ｖ３０９Ｍ、Ｙ１５６Ｎ又はＮ２２８Ｋのアミノ酸変異によるＦＬＤである、（１）〜（３）に記載のＬＣＡＴ欠損症治療薬。
（７）ＬＣＡＴ欠損症が、魚眼病（Fish eve disease; ＦＥＤ）である、（１）〜（３）に記載のＬＣＡＴ欠損症治療薬。
（８）ＬＣＡＴ欠損症が、Ｎ１３１Ｄ、Ｎ３９１Ｓ、Ｐ１０Ｌ、Ｐ１０Ｑ、Ｔ１２３Ｉ、Ｒ９９Ｃ又はＴ１３Ｍのアミノ酸変異によるＦＥＤである、（１）〜（３）に記載のＬＣＡＴ欠損症治療薬。
（９）ＬＣＡＴ欠損症が、Ｎ１３１Ｄ、Ｐ１０Ｑ又はＴ１２３Ｉのアミノ酸変異によるＦＥＤである、（１）〜（３）に記載のＬＣＡＴ欠損症治療薬。
（１０）（１）〜（９）のいずれか１項に記載の化合物又はその薬理上許容される塩の有効量を、ヒトに投与する工程を含む、ＬＣＡＴ欠損症の治療方法である。【００２０】
以下に、本発明の化合物（Ｉ）を説明する。
本発明の化合物（Ｉ）は、式（Ｉ）で表される化合物、及び、その互変異性体である式（Ｉｘ）【００２１】
【化２】
2019189046.tif 000004
【００２２】
で表される化合物の両方を含む。本願では、特に断りのない限り、便宜上、いずれの互変異性体を含む化合物（Ｉ）をも、式（Ｉ）の構造式、及び、それに対応する化学名で表す。また、本発明化合物（Ｉ）のその他の互変異性体（アミド−イミド酸）のいずれの異性体も本願化合物（Ｉ）に含有され、本願では、便宜上、いずれの互変異性体を含む化合物（Ｉ）をも、式（Ｉ）で表される構造式、及び、それに対応する化学名で表す。【００２３】
本発明の化合物（Ｉ）は、塩基性基を有するため、薬理上許容される酸との酸付加塩とすることができる。本発明において「その薬理上許容される塩」としては、例えばフッ化水素酸塩、塩酸塩、臭化水素酸塩、ヨウ化水素酸塩等のハロゲン化水素酸塩；硝酸塩、過塩素酸塩、硫酸塩、燐酸塩等の無機酸塩；メタンスルホン酸塩、トリフルオロメタンスルホン酸塩、エタンスルホン酸塩等の低級アルカンスルホン酸塩；ベンゼンスルホン酸塩、ｐ−トルエンスルホン酸塩等のアリールスルホン酸塩；酢酸、りんご酸、フマル酸塩、コハク酸塩、クエン酸塩、酒石酸塩、蓚酸塩、マレイン酸塩等の有機酸塩；及びオルニチン酸塩、グルタミン酸塩、アスパラギン酸塩等のアミノ酸塩を挙げることができる。
本発明の化合物（Ｉ）又はその薬理上許容される塩は、大気中に放置されることにより水分を吸収し、水和物になる場合があり、そのような水和物も本発明に包含される。【００２４】
本発明の化合物（Ｉ）又はその薬理上許容される塩は、溶媒中に放置されることにより、溶媒和物になる場合があり、そのような溶媒和物も本発明に包含される。【００２５】
本発明の化合物（Ｉ）には、分子内の不斉中心に基づく光学異性体が存在する。特に断りのない限り、本発明の化合物においては、これらの異性体及びこれらの異性体の混合物が全て単一の式、すなわち一般式（Ｉ）で示されている。従って、本発明はこれらの異性体及びこれらの異性体の混合物をも全て含むものとする。【００２６】
本発明の化合物（Ｉ）は、化合物を構成する原子の１以上に、原子同位体の非天然割合も含有し得る。原子同位体としては、例えば、重水素（２Ｈ）、トリチウム（３Ｈ）、ヨウ素−１２５（１２５Ｉ）、又は炭素−１４（１４Ｃ）等が挙げられる。また、前記化合物は、例えば、トリチウム（３Ｈ）、ヨウ素−１２５（１２５Ｉ）、又は炭素−１４（１４Ｃ）等の放射性同位体で放射性標識され得る。放射性標識された化合物は、治療又は予防剤、研究試薬、例えば、アッセイ試薬、及び診断剤、例えば、インビボ画像診断剤として有用である。本発明の化合物の全ての同位体変異種は、放射性であると否とを問わず、本発明の範囲に包含されるものとする。【００２７】
本発明において、ＬＣＡＴ欠損症は、ＬＣＡＴをコードする遺伝子の欠損、ＬＣＡＴの発現低下、ＬＣＡＴの不活性化等が含まれる。ＬＣＡＴをコードする遺伝子の欠損には、ホモ欠損及びヘテロ欠損が含まれる。ＬＣＡＴの発現低下には、転写レベルでの発現の低下及び翻訳レベルでの発現の低下の双方が含まれる。ＬＣＡＴの不活性化には典型的にはＬＣＡＴをコードする遺伝子の不活性型変異が含まれる。このようなＬＣＡＴ欠損症は、家族性ＬＣＡＴ欠損症（Familial LCAT deficiency；ＦＬＤ）と魚眼病（Fish eve disease; ＦＥＤ）に大別される。例えば、ＦＬＤのアミノ酸変異としては、Ｇ３０Ｓ、Ｌ３２Ｐ、Ｇ３３Ｒ、Ａ９３Ｔ、Ｒ１３５Ｗ、Ｒ１３５Ｑ、Ｒ１４０Ｈ、Ｒ１４７Ｗ、Ｙ１５６Ｎ、Ｇ１８３Ｓ、Ｌ２０９Ｐ、Ｎ２２８Ｋ、Ｒ２４４Ｇ、Ｍ２５２Ｋ、Ｔ３２１Ｍ、Ｇ３４４Ｓ、Ｔ３４７Ｍ、Ｒ３９９Ｃ、Ｇ２３０Ｒ、Ｆ３８２Ｖ、Ｔ２０８Ｓ、Ｓ１８１Ｎ、Ｒ１４０Ｃ、Ｇ１７９Ｒ、Ｍ２９３Ｒ、Ｐ４０６Ｌ、Ｃ７４Ｔ、Ｒ２６８Ｌ、Ｄ１０１Ｎなどが挙げられ、ＦＥＤのアミノ酸変異としては、Ｎ１３１Ｄ、Ｎ３９１Ｓ、Ｐ１０Ｌ、Ｐ１０Ｑ、Ｔ１２３Ｉ、Ｒ９９Ｃ、Ｔ１３Ｍなどが挙げられる。
【発明の効果】
【００２８】
本発明の一般式（Ｉ）で表される化合物又はその薬理上許容される塩は、患者由来のＬＣＡＴ変異タンパクに対して優れたＬＣＡＴ活性化作用を有し、ＬＣＡＴ欠損症治療剤として有用である。
【発明を実施するための形態】
【００２９】
本発明の化合物（Ｉ）はＷＯ２０１５／０８７９９４号パンフレットに記載の方法で製造することができる。
【００３０】
本発明の化合物（Ｉ）の薬理上許容される塩は、常法の造塩反応に付すことにより、製造することができる。単離、精製は、抽出、濃縮、留去、結晶化、ろ過、再結晶、又は各種クロマトグラフィー等の通常の化学操作を適用して行われる。
【００３１】
本発明の化合物（Ｉ）の各種の異性体は、異性体間の物理化学的性質の差を利用して分離することができる。例えば、ラセミ混合物は、光学活性な塩基若しくは酸とのジアステレオマー塩に導く分別結晶化又はキラルカラムを用いたクロマトグラフィー等により、光学的に純粋な異性体に導くことができる。又、ジアステレオ混合物は、分別結晶化又は各種クロマトグラフィー等により分離できる。又、光学活性な化合物は適当な光学活性な原料を用いることにより製造することもできる。
【００３２】
本発明の一般式（Ｉ）を有する化合物又はその薬理上許容される塩の投与形態としては、例えば、錠剤、顆粒剤、散剤、カプセル剤若しくはシロップ剤等による経口投与、又は注射剤若しくは坐剤等による非経口投与を挙げることができ、全身的又は局所的に投与することができる。
【００３３】
本発明の一般式（Ｉ）を有する化合物又はその薬理上許容される塩の経口用の医薬の形態としては、錠剤、丸剤、顆粒剤、散剤、カプセル剤、液剤、懸濁剤、乳剤、シロップ剤、又はエリキシル剤等が挙げられる。非経口用の医薬の形態としては、注射剤、軟膏剤、ゲル剤、クリーム剤、貼付剤、噴霧剤、吸入剤、スプレー剤、点眼剤、又は坐剤等が挙げられる。これらの形態の医薬は、賦形剤、結合剤、希釈剤、安定化剤、防腐剤、着色剤、溶解補助剤、懸濁化剤、緩衝剤、又は湿潤化剤等の薬学的に許容される添加剤から、必要に応じて適宜選択した添加剤を用いて、常法に従って調製することができる。
【００３４】
本発明の一般式（Ｉ）を有する化合物又はその薬理上許容される塩の投与する際の投与量は、その投与される者（温血動物、例えばヒト）の症状、体重、年齢、投与方法等により異なる。例えば、経口投与の場合には、１回当たり、下限として０．０１ｍｇ／ｋｇ体重（好ましくは、０．０３ｍｇ／ｋｇ体重）、上限として、３００ｍｇ／ｋｇ体重（好ましくは、１００ｍｇ／ｋｇ体重）を、１日当たり１乃至数回、症状に応じて投与することが望ましい。また、静脈内投与の場合には、１回当たり、下限として０．０１ｍｇ／ｋｇ体重（好ましくは、０．０３ｍｇ／ｋｇ体重）、上限として、３００ｍｇ／ｋｇ体重（好ましくは、１００ｍｇ／ｋｇ体重）を１日あたり１乃至数回、症状に応じて投与することが望ましい。
【００３５】
以下、実施例、試験例及び製剤例を挙げて本発明をさらに詳細に説明するが、本発明の範囲はこれらに限定されるものではない。
【実施例】
【００３６】
（被検化合物）  （＋）−ｃｉｓ−５−ヒドロキシ−４−（トリフルオロメチル）−３−｛１−［２−（トリフルオロメチル）ピリミジン−５−イル］ピペリジン−４−イル｝−１，４，５，７−テトラヒドロ−６Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｂ］ピリジン−６−オン
被検化合物は、ＷＯ２０１５／０８７９９４号パンフレットの実施例２１の方法に従って製造した。【００３７】
（試験例１）ＬＣＡＴ変異タンパクを用いたＬＣＡＴ活性の測定
家族性ＬＣＡＴ欠損症（Familial LCAT deficiency；ＦＬＤ）患者および魚眼病（Fish eve disease; ＦＥＤ）患者での遺伝子変異が報告されている変異ＬＣＡＴタンパクをＨＥＫ２９３細胞に発現させ、培養上清より変異ＬＣＡＴタンパクを精製して酵素源として使用した。フォスファチジルコリン、［１４Ｃ］標識コレステロールおよび アポリポプロテインＡ−ＩからＨＤＬを再構成して反応基質として使用した。被検化合物はジメチルスルホキシドに溶解して調製した。変異ＬＣＡＴタンパク溶液(濃度０.０３４μｇ/μＬ)７μＬ、１０％牛血清アルブミンあるいはメルカプトエタノールを含むPBSをそれぞれ 1μＬ、前述の再構成HDLを４０μＬ、さらにこれらに被検化合物（最終濃度１又は１０μＭ）１μＬを加えて全量を５０μＬとした。この混合物を３７℃で１時間インキュベートした後、ヘキサン及びイソプロパノールの混合液（混合比＝３：２）を加え反応を停止した。水を加え攪拌後ヘキサン層を採取し、これを濃縮乾固した。これにクロロホルム溶液（濃度１０ｍｇ／ｍＬ）を加え、シリカゲル薄層板にスポットし、ヘキサン、ジエチルエーテル及び酢酸エチルの混合液（混合比＝８５：１５：２）で展開した。シリカゲル薄層板での展開により、各レーンで分離されたコレステロールエステルに相当する部分の放射能活性をイメージングアナライザーＢＡＳ−２５００（富士フイルム社製）で測定した。被検化合物の有無での放射能活性を比較し、各種変異タンパクについて、被験化合物無添加時に対する被験化合物添加時のＬＣＡＴ活性の比率を算出した。また両者での有意差の有無を、ｔ検定、あるいはＤｕｎｎｅｔｔ多重比較検定を用いて統計学的に評価した。その結果を表１示す。【００３８】
【表１】
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【００３９】
以上のように、変異ＬＣＡＴタンパクに対して、被験化合物の処置により統計学的に有意なＬＣＡＴ活性の上昇作用を示したことから、ＬＣＡＴ欠損症の疾患の治療若しくは予防のための医薬として有用である。【００４０】
（試験例２）  ＬＣＡＴ変異タンパクを用いたＬＣＡＴ活性の測定
本発明において、ＬＣＡＴ欠損症（ＬＣＡＴ機能障害）は、家族性ＬＣＡＴ欠損症（Familial LCAT deficiency；ＦＬＤ）と魚眼病（Fish eve disease; ＦＥＤ）に大別される。例えば、ＦＬＤのアミノ酸変異としては、Ｙ１５６Ｎ及びＮ２２８Ｋの他に、Ｇ３０Ｓ、Ｌ３２Ｐ、Ｇ３３Ｒ、Ａ９３Ｔ、Ｒ１３５Ｗ、Ｒ１３５Ｑ、Ｒ１４０Ｈ、Ｒ１４７Ｗ、Ｇ１８３Ｓ、Ｌ２０９Ｐ、Ｒ２４４Ｇ、Ｍ２５２Ｋ、Ｔ３２１Ｍ、Ｇ３４４Ｓ、Ｔ３４７Ｍ、Ｒ３９９Ｃ、Ｇ２３０Ｒ、Ｆ３８２Ｖ、Ｔ２０８Ｓ、Ｓ１８１Ｎ、Ｒ１４０Ｃ、Ｇ１７９Ｒ、Ｍ２９３Ｒ、Ｐ４０６Ｌ、Ｃ７４Ｔ、Ｒ２６８Ｌ及びＤ１０１Ｎなどが挙げられ、ＦＥＤのアミノ酸変異としては、Ｐ１０Ｑ、Ｔ１２３Ｉ及びＮ１３１Ｄの他に、Ｎ３９１Ｓ、Ｐ１０Ｌ、Ｒ９９Ｃ及びＴ１３Ｍなどが挙げられる。【００４１】
試験例１に用いた変異ＬＣＡＴタンパクの代わりに、上記変異ＬＣＡＴタンパクを用い、試験例１と同様に試験することにより、その他のＬＣＡＴ変異タンパクを用いたＬＣＡＴ活性の上昇を確認することができる。【００４２】
（製剤例１）ハ−ドカプセル剤
標準二分式ハ−ドゼラチンカプセルの各々に、１００ｍｇの粉末状の実施例の化合物、１５０ｍｇのラクト−ス、５０ｍｇのセルロ−ス及び６ｍｇのステアリン酸マグネシウムを充填することにより、単位カプセルを製造し、洗浄後、乾燥する。【００４３】
（製剤例２）ソフトカプセル剤
消化性油状物、例えば、大豆油、綿実油又はオリ−ブ油中に入れた、実施例の化合物の混合物を調製し、正置換ポンプでゼラチン中に注入して、１００ｍｇの活性成分を含有するソフトカプセルを得、洗浄後、乾燥する。【００４４】
（製剤例３）錠剤
常法に従って、１００ｍｇの実施例の化合物、０．２ｍｇのコロイド性二酸化珪素、５ｍｇのステアリン酸マグネシウム、２７５ｍｇの微結晶性セルロ−ス、１１ｍｇのデンプン及び９８．８ｍｇのラクト−スを用いて製造する。
なお、所望により、剤皮を塗布する。【００４５】
（製剤例４）懸濁剤
５ｍＬ中に、１００ｍｇの微粉化した実施例の化合物、１００ｍｇのナトリウムカルボキシメチルセルロ−ス、５ｍｇの安息香酸ナトリウム、１．０ｇのソルビト−ル溶液（日本薬局方）及び０．０２５ｍＬのバニリンを含有するように製造する。【００４６】
（製剤例５）注射剤  １．５重量％の実施例の化合物を、１０重量％のプロピレングリコール中で撹拌し、次いで、注射用水で一定容量に調整した後、滅菌して注射剤とする。
【産業上の利用可能性】
【００４７】
試験例１で示したように、本発明の一般式（Ｉ）で表される化合物又はその薬理上許容される塩に対して感受性を有する変異ＬＣＡＴタンパクに対して、優れた活性上昇作用を示すことで、ＬＣＡＴ欠損症患者で減弱したＬＣＡＴ活性を単独で回復させることができる。【００４８】
ＬＣＡＴ欠損症での遺伝子変異は多岐に渡る。本発明の一般式（Ｉ）で表される化合物又はその塩が、十分な感受性を発現しないＬＣＡＴ変異に遭遇した際でも、組換ＬＣＡＴタンパク製剤による酵素補充療法、現在開発中のアデノ随伴ウィルスベクターを用いた遺伝子治療法および脂肪細胞を用いたex vivo遺伝子細胞治療法に、本発明の一般式（Ｉ）で表される化合物又はその薬理上許容される塩を併用して使用することで、外因性タンパクの生体内でのクリアランスや外因性タンパクに対する抗体の発現、あるいは導入したＬＣＡＴ遺伝子の発現減衰により生じる外因性ＬＣＡＴ活性の低下に対して、血中に残存するＬＣＡＴタンパクの活性を亢進させることで、酵素補充量や補充頻度を低減させるなど、ＬＣＡＴ活性の安定的な保持とそれによる高い治療効果を実現できる。【００４９】
このようにＬＣＡＴ欠損症における角膜混濁、又は、腎疾患の治療剤又は予防剤の有効成分として有用である。
【国際調査報告】
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