(57)【要約】  本発明は、アレルギー性疾患（例えば、アレルギー性鼻炎またはアレルギー性結膜炎）と、肥満細胞および／または好酸球の活性化状態を検出する新規な方法と、アレルギー性疾患に対する治療効果の新規な判定方法の提供を目的とする。本発明によれば、対象の生体試料中の脂質代謝物の濃度を測定する工程を含んでなる、アレルギー性疾患、または鼻腔もしくは目における肥満細胞および／または好酸球の活性化状態の検出方法が提供される。本発明によればまた、対象の生体試料中の脂質代謝物の濃度を測定する工程を含んでなる、アレルギー性疾患に対する治療効果の判定方法が提供される。【特許請求の範囲】
【請求項１】
対象の生体試料中の脂質代謝物の濃度を測定する工程を含んでなる、アレルギー性疾患、または鼻腔もしくは目における肥満細胞および／または好酸球の活性化状態の検出方法。
【請求項２】
前記対象の生体試料中の脂質代謝物の濃度が、健常な対象の生体試料中の当該脂質代謝物の濃度を上回る場合に、対象がアレルギー性疾患に罹患していること、あるいは対象の鼻腔または目において肥満細胞および／または好酸球が活性化していることが示される、請求項１に記載の検出方法。
【請求項３】
対象の生体試料中の脂質代謝物の濃度を測定する工程を含んでなる、アレルギー性疾患に対する治療効果の判定方法。
【請求項４】
前記対象の生体試料中の脂質代謝物の濃度が、治療前の対象の生体試料中の当該脂質代謝物の濃度またはアレルギー性疾患に罹った対象の生体試料中の当該脂質代謝物の濃度を下回る場合に、治療効果があることが示される、請求項３に記載の判定方法。
【請求項５】
前記アレルギー性疾患がアレルギー性鼻炎またはアレルギー性結膜炎である、請求項１または２に記載の検出方法または請求項３または４に記載の判定方法。
【請求項６】
前記アレルギー性疾患がアレルギー性鼻炎であり、アレルギー性鼻炎に対する治療が、薬物療法、免疫療法または外科手術療法である、請求項３〜５のいずれか一項に記載の判定方法。
【請求項７】
前記アレルギー性鼻炎が、季節性アレルギー性鼻炎または通年性アレルギー性鼻炎である、請求項５に記載の検出方法または請求項５または６に記載の判定方法。
【請求項８】
前記生体試料が、前記対象から非侵襲的に採取された体液である、請求項１、２、５または７に記載の検出方法または請求項３〜７のいずれか一項に記載の判定方法。
【請求項９】
前記脂質代謝物が、アラキドン酸代謝物、エイコサペンタエン酸代謝物、ドコサヘキサエン酸代謝物、リノレン酸代謝物およびエイコサジエン酸代謝物からなる群から選択される１種または２種以上である、請求項１、２、５、７または８のいずれか一項に記載の検出方法または請求項３〜８のいずれか一項に記載の判定方法。
【請求項１０】
前記脂質代謝物が、ＰＧＤ２、ＰＧＥ２、１２−ＨＥＴＥ、１５−ＨＥＴＥ、１２−ＨＥＰＥ、１５−ＨＥＰＥ、１４−ＨＤｏＨＥ、８−ＨＤｏＨＥ、１３−ＨＯＤＥ、８−ｉｓｏＰＧＥ２、１６−ＨＤｏＨＥ、１５−ＨＥＤＥ、１５−ＯｘｏＥＤＥ、２０−ＨＥＴＥ、１４，１５−ＥＥＴ、１３，１４−ｄｉｈｙｄｒｏ−１５−ｋｅｔｏ−ＰＧＤ２、ＰＧＪ２、ＬＴＢ４、９−ＨＯＴｒＥ、１３−ＨＯＴｒＥ、９，１０−ＤｉＨＯＭＥ、１２，１３−ＤｉＨＯＭＥ、１３−ＨｐＯＤＥ、１８−ＨＥＰＥ、１０−ＨＤｏＨＥおよび２０−ＨＤｏＨＥからなる群から選択される１種または２種以上である、請求項１、２、５および７〜９のいずれか一項に記載の検出方法または請求項３〜９のいずれか一項に記載の判定方法。
【請求項１１】
前記脂質代謝物の濃度を質量分析法により測定する、請求項１、２、５および７〜１０のいずれか一項に記載の検出方法または請求項３〜１０のいずれか一項に記載の判定方法。
【請求項１２】
アレルギー性疾患マーカー、または鼻腔もしくは目における肥満細胞および／または好酸球の活性化マーカーとしての脂質代謝物の使用。
【請求項１３】
前記アレルギー性疾患がアレルギー性鼻炎またはアレルギー性結膜炎である、請求項１２に記載の使用。
【請求項１４】
前記アレルギー性疾患がアレルギー性鼻炎であり、前記アレルギー性鼻炎が、季節性アレルギー性鼻炎または通年性アレルギー性鼻炎である、請求項１２または１３に記載の使用。
【請求項１５】
前記脂質代謝物が、アラキドン酸代謝物、エイコサペンタエン酸代謝物、ドコサヘキサエン酸代謝物、リノレン酸代謝物およびエイコサジエン酸代謝物からなる群から選択される１種または２種以上である、請求項１２〜１４のいずれか一項に記載の使用。
【請求項１６】
前記脂質代謝物が、ＰＧＤ２、ＰＧＥ２、１２−ＨＥＴＥ、１５−ＨＥＴＥ、１２−ＨＥＰＥ、１５−ＨＥＰＥ、１４−ＨＤｏＨＥ、８−ＨＤｏＨＥ、１３−ＨＯＤＥ、８−ｉｓｏＰＧＥ２、１６−ＨＤｏＨＥ、１５−ＨＥＤＥ、１５−ＯｘｏＥＤＥ、２０−ＨＥＴＥ、１４，１５−ＥＥＴ、１３，１４−ｄｉｈｙｄｒｏ−１５−ｋｅｔｏ−ＰＧＤ２、ＰＧＪ２、ＬＴＢ４、９−ＨＯＴｒＥ、１３−ＨＯＴｒＥ、９，１０−ＤｉＨＯＭＥ、１２，１３−ＤｉＨＯＭＥ、１３−ＨｐＯＤＥ、１８−ＨＥＰＥ、１０−ＨＤｏＨＥおよび２０−ＨＤｏＨＥからなる群から選択される１種または２種以上である、請求項１２〜１５のいずれか一項に記載の使用。
【請求項１７】
アレルギー性疾患の治療薬の候補薬を対象に投与する工程と、前記対象の生体試料中の脂質代謝物の濃度を測定する工程とを含んでなる、アレルギー性疾患の治療薬のスクリーニング方法。
【請求項１８】
候補薬投与後の対象の生体試料中の脂質代謝物の濃度が、候補薬投与前の対象の生体試料中の当該脂質代謝物の濃度またはアレルギー性疾患に罹った対象の生体試料中の当該脂質代謝物の濃度を下回る場合に、前記治療薬に治療効果があることが示される、請求項１７に記載のスクリーニング方法。
【請求項１９】
生体試料中の脂質代謝物においてアレルギー性疾患マーカー、または鼻腔もしくは目における肥満細胞および／または好酸球の活性化マーカーを同定する方法であって、アレルギー性疾患に罹患した対象の生体試料中の脂質代謝物の濃度と、健常な対象の生体試料中の脂質代謝物の濃度を測定する工程と、前記の測定した２つの濃度を比較する工程を含む方法。
【請求項２０】
アレルギー性疾患に罹患した対象の生体試料中の脂質代謝物の濃度が、健常な対象の生体試料中の当該脂質代謝物の濃度を上回る場合に、当該脂質代謝物がアレルギー性疾患マーカー、または鼻腔もしくは目における肥満細胞および／または好酸球の活性化マーカーであることが示される、請求項１９に記載の同定方法。
【請求項２１】
前記アレルギー性疾患がアレルギー性鼻炎またはアレルギー性結膜炎である、請求項１７または１８に記載のスクリーニング方法または請求項１９または２０に記載のマーカーの同定方法。
【発明の詳細な説明】
【関連出願の参照】
【０００１】
本願は、先行する日本国出願である特願２０１８−４３４０３（出願日：２０１８年３月９日）の優先権の利益を享受するものであり、その開示内容全体は引用することにより本明細書の一部とされる。
【技術分野】
【０００２】
本発明は、アレルギー性疾患の検出方法に関する。本発明はまた、鼻腔または目における肥満細胞および／または好酸球の活性化状態の検出方法およびアレルギー性疾患に対する治療効果の判定方法に関する。
【背景技術】
【０００３】
アレルギー性疾患のうちアレルギー性鼻炎の患者は世界中で年々増加しており、日本では国民の４割以上が罹患している（厚生労働省２０１６）。アレルギー性鼻炎は花粉やハウスダスト等の抗原を体内へ取り込むことで引き起こされ、くしゃみや鼻漏、鼻閉等の症状を呈する。これらの症状によって引き起こされる全身倦怠感、睡眠障害は、アレルギー性鼻炎患者のＱＯＬを著しく低下させる。【０００４】
アレルギー性鼻炎の診断方法として、血中ＩｇＥ濃度の測定、皮内テスト、スクラッチテストおよび鼻汁中好酸球数測定等が行われている。しかし、これらの診断法は、病態進行（症状）との相関がない場合があること、侵襲性があること、上気道炎（風邪）および喘息などの病気との鑑別が難しいといった問題を含んでいる（非特許文献１）。このような背景のもと、抗原による反応誘発検査がアレルギー性鼻炎の確定診断として行われているが、患者への負担が大きく、また、診断を行うことができる病院も限られているという問題があった。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【０００５】
【非特許文献１】Chawes, B. L. K. Upper and lower airway pathology in young children with allergic- and non-allergic rhinitis. Danish Medical Journal 1-23 (2011).
【発明の概要】
【０００６】
本発明は、アレルギー性疾患を検出する新規な方法を提供することを目的とする。本発明はまた、鼻腔または目における肥満細胞および／または好酸球の活性化状態の新規な検出方法と、アレルギー性疾患に対する治療効果の新規な判定方法を提供することを目的とする。
【０００７】
本発明者らは今般、鼻腔内において肥満細胞や好酸球の活性化が認められたアレルギー性鼻炎モデルマウスの鼻腔分泌液中にアレルギー性鼻炎特異的な脂質代謝物の排泄を確認した。本発明者らはまた、鼻腔分泌液中の特定の脂質代謝物濃度を指標にすることにより、アレルギー性鼻炎と、鼻腔内における肥満細胞および好酸球の活性化状態を検出できることを見出した。本発明者らはさらに、肥満細胞や好酸球の活性化が認められたアレルギー性結膜炎モデルモルモットの目から分泌された涙液中にアレルギー性結膜炎特異的な脂質代謝物の排泄を確認した。本発明者らはさらにまた、目からの分泌液中の特定の脂質代謝物濃度を指標にすることにより、アレルギー性結膜炎と、目における肥満細胞および好酸球の活性化状態を検出できることを見出した。本発明はこれらの知見に基づくものである。
【０００８】
本発明によれば以下の発明が提供される。
［１］対象の生体試料中の脂質代謝物の濃度を測定する工程を含んでなる、アレルギー性疾患、または鼻腔もしくは目における肥満細胞および／または好酸球の活性化状態の検出方法。
［２］前記対象の生体試料中の脂質代謝物の濃度が、健常な対象の生体試料中の当該脂質代謝物の濃度を上回る場合に、対象がアレルギー性疾患に罹患していること、あるいは対象の鼻腔または目において肥満細胞および／または好酸球が活性化していることが示される、上記［１］に記載の検出方法。
［３］対象の生体試料中の脂質代謝物の濃度を測定する工程を含んでなる、アレルギー性疾患に対する治療効果の判定方法。
［４］前記対象の生体試料中の脂質代謝物の濃度が、治療前の対象の生体試料中の当該脂質代謝物の濃度またはアレルギー性疾患に罹った対象の生体試料中の当該脂質代謝物の濃度を下回る場合に、治療効果があることが示される、上記［３］に記載の判定方法。
［５］前記アレルギー性疾患がアレルギー性鼻炎またはアレルギー性結膜炎である、上記［１］または［２］に記載の検出方法または上記［３］または［４］に記載の判定方法。
［６］前記アレルギー性疾患がアレルギー性鼻炎であり、アレルギー性鼻炎に対する治療が、薬物療法、免疫療法または外科手術療法である、上記［３］〜［５］のいずれかに記載の判定方法。
［７］前記アレルギー性鼻炎が、季節性アレルギー性鼻炎または通年性アレルギー性鼻炎である、上記［５］に記載の検出方法または上記［５］または［６］に記載の判定方法。
［８］前記生体試料が、前記対象から非侵襲的に採取された体液である、上記［１］、［２］、［５］または［７］に記載の検出方法または上記［３］〜［７］のいずれかに記載の判定方法。
［９］前記脂質代謝物が、アラキドン酸代謝物、エイコサペンタエン酸代謝物、ドコサヘキサエン酸代謝物、リノレン酸代謝物およびエイコサジエン酸代謝物からなる群から選択される１種または２種以上である、上記［１］、［２］、［５］、［７］または［８］のいずれかに記載の検出方法または上記［３］〜［８］のいずれかに記載の判定方法。
［１０］前記脂質代謝物が、ＰＧＤ２、ＰＧＥ２、１２−ＨＥＴＥ、１５−ＨＥＴＥ、１２−ＨＥＰＥ、１５−ＨＥＰＥ、１４−ＨＤｏＨＥ、８−ＨＤｏＨＥ、１３−ＨＯＤＥ、８−ｉｓｏＰＧＥ２、１６−ＨＤｏＨＥ、１５−ＨＥＤＥ、１５−ＯｘｏＥＤＥ、２０−ＨＥＴＥ、１４，１５−ＥＥＴ、１３，１４−ｄｉｈｙｄｒｏ−１５−ｋｅｔｏ−ＰＧＤ２、ＰＧＪ２、ＬＴＢ４、９−ＨＯＴｒＥ、１３−ＨＯＴｒＥ、９，１０−ＤｉＨＯＭＥ、１２，１３−ＤｉＨＯＭＥ、１３−ＨｐＯＤＥ、１８−ＨＥＰＥ、１０−ＨＤｏＨＥおよび２０−ＨＤｏＨＥからなる群から選択される１種または２種以上である、上記［１］、［２］、［５］および［７］〜［９］のいずれかに記載の検出方法または上記［３］〜［９］のいずれかに記載の判定方法。
［１１］前記脂質代謝物の濃度を質量分析法により測定する、上記［１］、［２］、［５］および［７］〜［１０］のいずれかに記載の検出方法または上記［３］〜［１０］のいずれかに記載の判定方法。
［１２］アレルギー性疾患マーカー、または鼻腔もしくは目における肥満細胞および／または好酸球の活性化マーカーとしての脂質代謝物の使用。
［１３］前記アレルギー性疾患がアレルギー性鼻炎またはアレルギー性結膜炎である、上記［１２］に記載の使用。
［１４］前記アレルギー性疾患がアレルギー性鼻炎であり、前記アレルギー性鼻炎が、季節性アレルギー性鼻炎または通年性アレルギー性鼻炎である、上記［１２］または［１３］に記載の使用。
［１５］前記脂質代謝物が、アラキドン酸代謝物、エイコサペンタエン酸代謝物、ドコサヘキサエン酸代謝物、リノレン酸代謝物およびエイコサジエン酸代謝物からなる群から選択される１種または２種以上である、上記［１２］〜［１４］のいずれかに記載の使用。
［１６］前記脂質代謝物が、ＰＧＤ２、ＰＧＥ２、１２−ＨＥＴＥ、１５−ＨＥＴＥ、１２−ＨＥＰＥ、１５−ＨＥＰＥ、１４−ＨＤｏＨＥ、８−ＨＤｏＨＥ、１３−ＨＯＤＥ、８−ｉｓｏＰＧＥ２、１６−ＨＤｏＨＥ、１５−ＨＥＤＥ、１５−ＯｘｏＥＤＥ、２０−ＨＥＴＥ、１４，１５−ＥＥＴ、１３，１４−ｄｉｈｙｄｒｏ−１５−ｋｅｔｏ−ＰＧＤ２、ＰＧＪ２、ＬＴＢ４、９−ＨＯＴｒＥ、１３−ＨＯＴｒＥ、９，１０−ＤｉＨＯＭＥ、１２，１３−ＤｉＨＯＭＥ、１３−ＨｐＯＤＥ、１８−ＨＥＰＥ、１０−ＨＤｏＨＥおよび２０−ＨＤｏＨＥからなる群から選択される１種または２種以上である、上記［１２］〜［１５］のいずれかに記載の使用。
［１７］アレルギー性疾患の治療薬の候補薬を対象に投与する工程と、前記対象の生体試料中の脂質代謝物の濃度を測定する工程とを含んでなる、アレルギー性疾患の治療薬のスクリーニング方法。
［１８］候補薬投与後の対象の生体試料中の脂質代謝物の濃度が、候補薬投与前の対象の生体試料中の当該脂質代謝物の濃度またはアレルギー性疾患に罹った対象の生体試料中の当該脂質代謝物の濃度を下回る場合に、前記治療薬に治療効果があることが示される、上記［１７］に記載のスクリーニング方法。
［１９］生体試料中の脂質代謝物においてアレルギー性疾患マーカー、または鼻腔もしくは目における肥満細胞および／または好酸球の活性化マーカーを同定する方法であって、アレルギー性疾患に罹患した対象の生体試料中の脂質代謝物の濃度と、健常な対象の生体試料中の脂質代謝物の濃度を測定する工程と、前記の測定した２つの濃度を比較する工程を含む方法。
［２０］アレルギー性疾患に罹患した対象の生体試料中の脂質代謝物の濃度が、健常な対象の生体試料中の当該脂質代謝物の濃度を上回る場合に、当該脂質代謝物がアレルギー性疾患マーカー、または鼻腔もしくは目における肥満細胞および／または好酸球の活性化マーカーであることが示される、上記［１９］に記載の同定方法。
［２１］前記アレルギー性疾患がアレルギー性鼻炎またはアレルギー性結膜炎である、上記［１７］または［１８］に記載のスクリーニング方法または上記［１９］または［２０］に記載のマーカーの同定方法。
【０００９】
本発明によれば、アレルギー性疾患やアレルギー性疾患に対する治療効果を、簡便かつ的確に検出できる点で有利である。
【図面の簡単な説明】
【００１０】
【図１】図１は、未感作群およびＯＶＡ投与によって感作したＯＶＡ感作群の血清中のオボアルブミン特異的ＩｇＥ量を示すグラフである。＊はＰ＜０．０５を示す。
【図２】図２は、溶媒またはＯＶＡ投与後１０分間における、くしゃみ回数の推移を示すグラフである。＊＊はＰ＜０．０１ｖｓ溶媒投与群を示す。
【図３】図３は、溶媒投与群またはＬＰＳを投与した上気道炎モデル群（ＬＰＳ投与群）におけるくしゃみ回数の推移を示すグラフである。＊＊はＰ＜０．０１ｖｓ溶媒１回投与群を示す。
【図４】図４は、溶媒またはＯＶＡの投与前、投与５回目から２４時間後および投与１０回目から２４時間後の鼻腔体積の変化を示すグラフである。＊はＰ＜０．０５を示す。
【図５】図５は、鼻の断面のＨＥ染色像の典型例を示す。右拡大図は、鼻甲介を示す。
【図６】図６は、ＯＶＡ投与によるアレルギー性鼻炎モデルマウス、ＬＰＳ投与による上気道炎モデルマウスおよび対照群における鼻甲介（鼻腔）に浸潤した粘膜型肥満細胞数の定量結果を示すグラフである。＊＊はＰ＜０．０１ｖｓ溶媒１０回投与群を示す。
【図７】図７は、アレルギー性鼻炎モデルマウス、上気道炎モデルマウスおよび対照群における鼻甲介に浸潤した結合織型肥満細胞数の定量結果を示すグラフである。
【図８】図８は、アレルギー性鼻炎モデルマウス、上気道炎モデルマウスおよび対照群における鼻甲介に浸潤した好酸球数の定量結果を示すグラフである。＊＊はＰ＜０．０１ｖｓ溶媒１０回投与群を示し、＃はＰ＜０．０１ｖｓ溶媒５回投与群を示し、＄はＰ＜０．０１ｖｓＬＰＳ投与群を示す。
【図９】図９は、アレルギー性鼻炎モデルマウス、上気道炎モデルマウスおよび対照群における鼻甲介に浸潤した好中球数の定量結果を示すグラフである。＊はＰ＜０．０５ｖｓ溶媒１回投与群を示す。
【図１０】図１０は、アレルギー性鼻炎モデルマウス、上気道炎モデルマウスおよび対照群の鼻腔洗浄液中に検出されたＣＯＸ下流（ＡＡ由来）の脂質メディエーター（Ａ：ＰＧＤ２、Ｂ：ＰＧＥ２）の相対値を示すグラフである。＊はＰ＜０．０５ｖｓ溶媒１０回投与群を示し、＃はＰ＜０．０５ｖｓ溶媒５回投与群またはＰ＜０．０５ｖｓＬＰＳ投与群を示す。
【図１１】図１１は、アレルギー性鼻炎モデルマウス、上気道炎モデルマウスおよび対照群の鼻腔洗浄液中に検出された１２／１５−ＬＯＸ下流（ＡＡ由来）の脂質メディエーター（Ａ：１２−ＨＥＴＥ、Ｂ：１５−ＨＥＴＥ）の相対値を示すグラフである。＊＊はＰ＜０．０１ｖｓ溶媒１０回投与群を示す。＊はＰ＜０．０５ｖｓ溶媒５回または１０回投与群を示す。
【図１２】図１２は、アレルギー性鼻炎モデルマウス、上気道炎モデルマウスおよび対照群の鼻腔洗浄液中に検出された１２／１５−ＬＯＸ下流（ＥＰＡ由来）の脂質メディエーター（Ａ：１２−ＨＥＰＥ、Ｂ：１５−ＨＥＰＥ）の相対値を示すグラフである。＊はＰ＜０．０５ｖｓ溶媒５回または１０回投与群を示す。
【図１３】図１３は、アレルギー性鼻炎モデルマウス、上気道炎モデルマウスおよび対照群の鼻腔洗浄液中に検出された１２／１５−ＬＯＸ下流（ＤＨＡ由来）の脂質メディエーター（Ａ：１４−ＨＤｏＨＥ）および５−ＬＯＸ下流（ＤＨＡ由来）の脂質メディエーター（Ｂ：８−ＨＤｏＨＥ）の相対値を示すグラフである。＊はＰ＜０．０５ｖｓ溶媒５回投与群を示す。＊＊はＰ＜０．０１ｖｓ溶媒１０回投与群を示す。
【図１４】図１４は、アレルギー性鼻炎モデルマウス、上気道炎モデルマウスおよび対照群の鼻腔洗浄液中に検出された１２／１５−ＬＯＸ下流（ＬＡ由来）の脂質メディエーター（１３−ＨＯＤＥ）の相対値を示すグラフである。＊はＰ＜０．０５ｖｓ溶媒１回投与群を示し、＃はＰ＜０．０５ｖｓＬＰＳ投与群を示す。
【図１５】図１５は、アレルギー性鼻炎モデルマウス、上気道炎モデルマウスおよび対照群の鼻腔洗浄液中に検出されたＯＸ下（ＡＡ由来）の脂質メディエーター（８−ｉｓｏＰＧＥ２）の相対値を示すグラフである。＊はＰ＜０．０５ｖｓ溶媒１０回投与群を示す。
【図１６】図１６は、アレルギー性鼻炎モデルマウス、上気道炎モデルマウスおよび対照群の鼻腔洗浄液中に検出されたＯＸ下（ＤＨＡ由来）の脂質メディエーター（１６−ＨＤｏＨＥ）の相対値を示すグラフである。
【図１７】図１７は、アレルギー性鼻炎モデルマウス、上気道炎モデルマウスおよび対照群の鼻腔洗浄液中に検出されたＯＸ下（ＥＤＡ由来）の脂質メディエーター（Ａ：１５−ＨＥＤＥ）および１５−ＨＥＤＥの代謝物（Ｂ：１５−ＯｘｏＥＤＥ）の相対値を示すグラフである。＊はＰ＜０．０５ｖｓ溶媒１０回投与群を示す。
【図１８】図１８は、アレルギー性鼻炎モデルマウス、上気道炎モデルマウスおよび対照群の鼻腔洗浄液中に検出されたＣＹＰ下流（ＡＡ由来）の脂質メディエーター（Ａ：２０−ＨＥＴＥ、Ｂ：１４，１５−ＥＥＴ）の相対値を示すグラフである。＊はＰ＜０．０５ｖｓ溶媒１０回投与群を示す。
【図１９】図１９は、アレルギー性鼻炎モデルマウスおよび対照群の尿中に検出されたＣＯＸ下（ＡＡ由来）の脂質メディエーター（ＰＧＤ２）の相対値を示すグラフである。
【図２０】図２０は、アレルギー性鼻炎モデルマウスおよび対照群の尿中に検出された１２／１５−ＬＯＸ下（ＡＡ由来）の脂質メディエーター（１２−ＨＥＴＥ）の相対値を示すグラフである。
【図２１】図２１は、アレルギー性鼻炎モデルマウスおよび対照群の尿中に検出された１２／１５−ＬＯＸ下（ＥＰＡ由来）の脂質メディエーター（１２−ＨＥＰＥ）の相対値を示すグラフである。
【図２２】図２２は、未感作モルモット、アレルギー性結膜炎モデルモルモットおよび感染性結膜炎モデルモルモットの結膜の腫れについて示す図である。
【図２３】図２３は、溶媒投与群、アレルギー性結膜炎モデルモルモットおよび感染性結膜炎モデルモルモットの結膜を示す図である。
【図２４】図２４は、溶媒投与群、アレルギー性結膜炎群および感染性結膜炎群の結膜の血管透過性、水分量および厚みを示すグラフである。
【図２５】図２５は、アレルギー性結膜炎群および感染性結膜炎群の結膜の断面のＨＥ染色像およびＧｉｅｍｓａ染色像の典型例を示す。
【図２６】図２６は、未感作群、アレルギー性結膜炎群および感染性結膜炎群の涙および結膜嚢洗浄液中に検出された脂質メディエーター（ＰＧＤ２、１３，１４−ｄｉｈｙｄｒｏ−１５−ｋｅｔｏ−ＰＧＤ２、ＰＧＪ２）の相対値を示すグラフである。１３，１４−ｄｉｈｙｄｒｏ−１５−ｋｅｔｏ−ＰＧＤ２は、９α−ヒドロキシ−１１，１５−ジオキソ−プロスト−５Ｚ−エン−１−酸（９α−ｈｙｄｒｏｘｙ−１１，１５−ｄｉｏｘｏ−ｐｒｏｓｔ−５Ｚ−ｅｎ−１−ｏｉｃ  ａｃｉｄ）である。ＰＧＪ２は、１１−オキソ−１５Ｓ−ヒドロキシ−プロスタ−５Ｚ，９，１３Ｅ−トリエン−１−酸（１１−ｏｘｏ−１５Ｓ−ｈｙｄｒｏｘｙ−ｐｒｏｓｔａ−５Ｚ，９，１３Ｅ−ｔｒｉｅｎ−１−ｏｉｃ  ａｃｉｄ）である。
【図２７】図２７は、未感作群、アレルギー性結膜炎群および感染性結膜炎群の涙および結膜嚢洗浄液中に検出された脂質メディエーター（ＰＧＥ２、８−ｉｓｏ−ＰＧＥ２、１２−ＫＥＴＥ）の相対値を示すグラフである。ＰＧＥ２は、９−ｏｘｏ−１１α，１５Ｓ−ｄｉｈｙｄｒｏｘｙ−ｐｒｏｓｔａ−５Ｚ，１３Ｅ−ｄｉｅｎ−１−ｏｉｃ  ａｃｉｄ（９−オキソ−１１α，１５Ｓ−ジヒドロキシ−プロスタ−５Ｚ，１３Ｅ−ジエン−１−酸）である。８−ｉｓｏ−ＰＧＥ２は、９−ｏｘｏ−１１α，１５Ｓ−ｄｉｈｙｄｒｏｘｙ−（８β）−ｐｒｏｓｔａ−５Ｚ，１３Ｅ−ｄｉｅｎ−１−ｏｉｃ  ａｃｉｄ（９−オキソ−１１α，１５Ｓ−ジヒドロキシ−（８β）−プロスタ−５Ｚ，１３Ｅ−ジエン−１−酸）である。１２−ＫＥＴＥは、１２−オキソ−５Ｚ，８Ｚ，１０Ｅ，１４Ｚ−エイコサテトラエン酸（１２−ｏｘｏ−５Ｚ，８Ｚ，１０Ｅ，１４Ｚ−ｅｉｃｏｓａｔｅｔｒａｅｎｏｉｃ  ａｃｉｄ）である。
【図２８】図２８は、未感作群、アレルギー性結膜炎群および感染性結膜炎群の涙および結膜嚢洗浄液中に検出された脂質メディエーター（ＬＴＢ４、２０−ＨＥＴＥ、１５−ＨＥＴＥ、１２−ＨＥＴＥ）の相対値を示すグラフである。ＬＴＢ４は、５Ｓ，１２Ｒ−ジヒドロキシ−６Ｚ，８Ｅ，１０Ｅ，１４Ｚ−エイコサテトラエン酸（５Ｓ，１２Ｒ−ｄｉｈｙｄｒｏｘｙ−６Ｚ，８Ｅ，１０Ｅ，１４Ｚ−ｅｉｃｏｓａｔｅｔｒａｅｎｏｉｃ  ａｃｉｄ）である。
【図２９】図２９は、未感作群、アレルギー性結膜炎群および感染性結膜炎群の涙および結膜嚢洗浄液中に検出された脂質メディエーター（９−ＨＯＴｒＥ、１３−ＨＯＴｒＥ、９，１０−ＤｉＨＯＭＥ、１２，１３−ＤｉＨＯＭＥ）の相対値を示すグラフである。９−ＨＯＴｒＥは、９Ｓ−ヒドロキシ−１０Ｅ，１２Ｚ，１５Ｚ−オクタデカトリエン酸（９Ｓ−ｈｙｄｒｏｘｙ−１０Ｅ，１２Ｚ，１５Ｚ−ｏｃｔａｄｅｃａｔｒｉｅｎｏｉｃ  ａｃｉｄ）である。１３−ＨＯＴｒＥは、１３Ｓ−ヒドロキシ−９Ｚ，１１Ｅ，１５Ｚ−オクタデカトリエン（１３Ｓ−ｈｙｄｒｏｘｙ−９Ｚ，１１Ｅ，１５Ｚ−ｏｃｔａｄｅｃａｔｒｉｅｎｏｉｃ  ａｃｉｄ）である。９，１０−ＤｉＨＯＭＥは、（±）９，１０−ジヒドロキシ−１２Ｚ−オクタデセン酸（（±）９，１０−ｄｉｈｙｄｒｏｘｙ−１２Ｚ−ｏｃｔａｄｅｃｅｎｏｉｃ  ａｃｉｄ）である。１２，１３−ＤｉＨＯＭＥは、（±）１２，１３−ジヒドロキシ−９Ｚ−オクタデセン酸（（±）１２，１３−ｄｉｈｙｄｒｏｘｙ−９Ｚ−ｏｃｔａｄｅｃｅｎｏｉｃ  ａｃｉｄ）である。
【図３０】図３０は、未感作群、アレルギー性結膜炎群および感染性結膜炎群の涙および結膜嚢洗浄液中に検出された脂質メディエーター（１３−ＨｐＯＤＥ、１８−ＨＥＰＥ、１２−ＨＥＰＥ）の相対値を示すグラフである。１３−ＨｐＯＤＥは、（±）１３−ヒドロペルオキシ−９Ｚ，１１Ｅ−オクタデカジエン酸（（±）１３−ｈｙｄｒｏｐｅｒｏｘｙ−９Ｚ，１１Ｅ−ｏｃｔａｄｅｃａｄｉｅｎｏｉｃ  ａｃｉｄ）である。１８−ＨＥＰＥは、（±）−１８−ヒドロキシ−５Ｚ，８Ｚ，１１Ｚ，１４Ｚ，１６Ｅ−エイコサペンタエン酸（（±）−１８−ｈｙｄｒｏｘｙ−５Ｚ，８Ｚ，１１Ｚ，１４Ｚ，１６Ｅ−ｅｉｃｏｓａｐｅｎｔａｅｎｏｉｃ  ａｃｉｄ）である。
【図３１】図３１は、未感作群、アレルギー性結膜炎群および感染性結膜炎群の涙および結膜嚢洗浄液中に検出された脂質メディエーター（８−ＨＤｏＨＥ、１０−ＨＤｏＨＥ、１６−ＨＤｏＨＥ、２０−ＨＤｏＨＥ）の相対値を示すグラフである。１０−ＨＤｏＨＥは、（±）１０−ヒドロキシ−４Ｚ，７Ｚ，１１Ｅ，１３Ｚ，１６Ｚ，１９Ｚ−ドコサヘキサエン酸（（±）１０−ｈｙｄｒｏｘｙ−４Ｚ，７Ｚ，１１Ｅ，１３Ｚ，１６Ｚ，１９Ｚ−ｄｏｃｏｓａｈｅｘａｅｎｏｉｃ  ａｃｉｄ）である。２０−ＨＤｏＨＥは、（±）２０−ヒドロキシ−４Ｚ，７Ｚ，１０Ｚ，１３Ｚ，１６Ｚ，１８Ｅ−ドコサヘキサエン酸（（±）２０−ｈｙｄｒｏｘｙ−４Ｚ，７Ｚ，１０Ｚ，１３Ｚ，１６Ｚ，１８Ｅ−ｄｏｃｏｓａｈｅｘａｅｎｏｉｃ  ａｃｉｄ）である。
【発明の具体的説明】
【００１１】
本発明において「脂質代謝物」とは、生体において酵素依存的酸化または酵素非依存的酸化（本明細書中「ＯＸ」ということがある）による分解で生じた脂質の分解物を意味し、炎症反応を制御する生理作用を持った脂質メディエーターを包含する。酵素依存的酸化は、生体内に存在する脂質代謝酵素により進行する。当該酵素としては、アレルギー性鼻炎の発症および進展に関連する脂質代謝酵素（好ましくはアレルギー性鼻炎の発症および進展により活性化される脂質代謝酵素）が挙げられ、例えば、シクロオキシゲナーゼ（本明細書中「ＣＯＸ」ということがある）、リポキシゲナーゼ（本明細書中「ＬＯＸ」ということがある）（例えば、１２／１５ＬＯＸ、５−ＬＯＸ）、酵素非依存的酸化、シトクロムｐ４５０（本明細書中「ＣＹＰ」ということがある）が挙げられる。また、酵素依存的酸化または酵素非依存的酸化により分解される脂質の例としては、アラキドン酸、エイコサペンタエン酸、ドコサヘキサエン酸、リノレン酸およびエイコサジエン酸が挙げられる。
【００１２】
本発明において脂質代謝物の例としては、アラキドン酸代謝物、エイコサペンタエン酸代謝物、ドコサヘキサエン酸代謝物、リノレン酸代謝物およびエイコサジエン酸代謝物が挙げられる。脂質代謝物の好ましい例としては、アラキドン酸のＣＯＸ代謝物（例えば、ＰＧＤ２およびＰＧＥ２）、アラキドン酸のＬＯＸ代謝物（例えば、１２−ＨＥＴＥおよび１５−ＨＥＴＥのようなアラキドン酸の１２／１５ＬＯＸ代謝物）、アラキドン酸のＯＸ代謝物（例えば、８−ｉｓｏＰＧＥ２）、アラキドン酸のＣＹＰ代謝物（例えば、２０−ＨＥＴＥおよび１４，１５−ＥＥＴ）、エイコサペンタエン酸のＬＯＸ代謝物（例えば、１２−ＨＥＰＥおよび１５−ＨＥＰＥのようなエイコサペンタエン酸の１２／１５ＬＯＸ代謝物）、ドコサヘキサエン酸のＬＯＸ代謝物（例えば、１４−ＨＤｏＨＥのようなドコサヘキサエン酸の１２／１５ＬＯＸ代謝物、８−ＨＤｏＨＥのようなドコサヘキサエン酸の５−ＬＯＸ代謝物）、ドコサヘキサエン酸のＯＸ代謝物（例えば、１６−ＨＤｏＨＥ）、リノレン酸のＬＯＸ代謝物（例えば、１３−ＨＯＤＥのようなリノレン酸の１２／１５ＬＯＸ代謝物）およびエイコサジエン酸のＯＸ代謝物（例えば、１５−ＨＥＤＥおよび１５−ＯｘｏＥＤＥ）が挙げられる。
【００１３】
本発明においてアレルギー性鼻炎の検出、鼻腔における肥満細胞および／または好酸球の活性化状態の検出、アレルギー性鼻炎に対する治療効果の判定、アレルギー性鼻炎マーカー、鼻腔における肥満細胞および／または好酸球の活性化マーカー等に有用な脂質代謝物は、ＰＧＤ２、ＰＧＥ２、１２−ＨＥＴＥ、１５−ＨＥＴＥ、１２−ＨＥＰＥ、１５−ＨＥＰＥ、１４−ＨＤｏＨＥ、８−ＨＤｏＨＥ、１３−ＨＯＤＥ、８−ｉｓｏＰＧＥ２、１６−ＨＤｏＨＥ、１５−ＨＥＤＥ、１５−ＯｘｏＥＤＥ、２０−ＨＥＴＥおよび１４，１５−ＥＥＴである。
【００１４】
本発明においてアレルギー性結膜炎の検出、目における肥満細胞および／または好酸球の活性化状態の検出、アレルギー性結膜炎に対する治療効果の判定、アレルギー性結膜炎マーカー、目における肥満細胞および／または好酸球の活性化マーカー等に有用な脂質代謝物は、ＰＧＤ２、１３，１４−ｄｉｈｙｄｒｏ−１５−ｋｅｔｏ−ＰＧＤ２、ＰＧＪ２、ＬＴＢ４、２０−ＨＥＴＥ、１５−ＨＥＴＥ、１２−ＨＥＴＥ、９−ＨＯＴｒＥ、１３−ＨＯＴｒＥ、９，１０−ＤｉＨＯＭＥ、１２，１３−ＤｉＨＯＭＥ、１３−ＨｐＯＤＥ、１８−ＨＥＰＥ、１２−ＨＥＰＥ、８−ＨＤｏＨＥ、１０−ＨＤｏＨＥ、１６−ＨＤｏＨＥおよび２０−ＨＤｏＨＥである。
【００１５】
本発明において「アレルギー性疾患」はアレルギー性反応を伴う疾患であり、例えば、アレルギー性鼻炎およびアレルギー性結膜炎が挙げられる。
【００１６】
本発明において「アレルギー性鼻炎」は、抗原刺激により発症する鼻炎を意味し、季節性アレルギー性鼻炎および通年性アレルギー性鼻炎が含まれる。季節性アレルギー性鼻炎は、花粉症とも呼ばれ、スギ、ヒノキ、イネ、シラカンバ、ブタクサ、ヨモギ、カナムグラ等の花粉により引き起こされるアレルギー性鼻炎である。通年性アレルギー性鼻炎は、ハウスダスト、ダニ、カビ、ペットの毛等のアレルゲンにより引き起こされるアレルギー性鼻炎である。
【００１７】
本発明において「アレルギー性結膜炎」は、抗原刺激により発症する結膜炎を意味し、季節性アレルギー性結膜炎および通年性アレルギー性結膜炎が含まれる。季節性アレルギー性結膜炎は、スギ、ヒノキ、イネ、シラカンバ、ブタクサ、ヨモギ、カナムグラ等の花粉により引き起こされるアレルギー性疾患である。通年性アレルギー性結膜炎は、ハウスダスト、ダニ、カビ、ペットの毛等のアレルゲンにより引き起こされるアレルギー性疾患である。
【００１８】
本発明において「生体試料」は、生体から分離された試料を意味し、好ましくは生体から非侵襲的に採取された体液（例えば、鼻腔分泌液、口腔洗浄液、涙液などの目からの分泌液および尿）である。
【００１９】
本発明における「対象」は、ヒトのみならず、ヒト以外の哺乳動物（例えば、サル、マウス、ラット、イヌ、ネコ、ウサギ、ウマ、ウシ、ブタ、ヒツジ）を含む意味で用いられる。
【００２０】
本発明の第一の側面によれば、アレルギー性疾患の検出方法と、鼻腔または目における肥満細胞および／または好酸球の活性化状態の検出方法が提供される。本発明の検出方法によれば、生体試料中の脂質代謝物を指標にしてアレルギー性疾患と、鼻腔または目における肥満細胞および／または好酸球の活性化状態（特に、鼻腔または目における肥満細胞の活性化状態）を検出することができる。
【００２１】
本発明の第一の側面の好ましい態様によれば、アレルギー性鼻炎の検出方法と、鼻腔における肥満細胞および／または好酸球の活性化状態の検出方法が提供される。本発明の検出方法によれば、生体試料中の脂質代謝物を指標にしてアレルギー性鼻炎と、鼻腔における肥満細胞および／または好酸球の活性化状態（特に、鼻腔における肥満細胞の活性化状態）を検出することができる。
【００２２】
本発明の検出方法においては、まず、（Ａ）被験対象の生体試料中の脂質代謝物の濃度を測定する工程を実施する。脂質代謝物の濃度の測定は、公知の方法により実施することができ、例えば、質量分析法や、ＥＬＩＳＡ法およびイムノクロマト法等のイムノアッセイにより脂質代謝物の濃度を測定することができる。質量分析法の例としては、液体クロマトグラフィー−マススペクトロメトリー法（ＬＣ−ＭＳ）、液体クロマトグラフィー−タンデムマススペクトロメトリー法（ＬＣ−ＭＳＭＳ）、高速液体クロマトグラフィー−マススペクトロメトリー法（ＨＰＬＣ−ＭＳ）および高速液体クロマトグラフィー−タンデムマススペクトロメトリー法（ＨＰＬＣ−ＭＳＭＳ）が挙げられる。イムノアッセイは、検出可能に標識した抗脂質代謝物抗体、または検出可能に標識した、抗脂質代謝物抗体に対する抗体（二次抗体）を用いる分析法である。抗体の標識法により、エンザイムイムノアッセイ（ＥＩＡまたはＥＬＩＳＡ）、ラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ）、蛍光イムノアッセイ（ＦＩＡ）、蛍光偏光イムノアッセイ（ＦＰＩＡ）、化学発光イムノアッセイ（ＣＬＩＡ）等に分類され、これらのいずれも本発明に用いることができる。構造が類似した脂質代謝物の濃度を正確に測定する観点から、質量分析法（特に、ＬＣ−ＭＳＭＳおよびＨＰＬＣ−ＭＳＭＳ）による測定が好ましい。
【００２３】
本発明の検出方法においては、前記工程（Ａ）で測定された脂質代謝物の濃度に基づいて、生体試料を採取した対象についてアレルギー性鼻炎の有無、または鼻腔における肥満細胞および好酸球のいずれかまたは両方の活性化状態を決定する工程をさらに実施することができる。この工程では、対象の生体試料中の脂質代謝物の濃度が、健常な対象の生体試料中の当該脂質代謝物の濃度を上回る場合に（好ましくは有意差をもって上回る場合に）、対象がアレルギー性鼻炎に罹患していること、あるいは対象の鼻腔において肥満細胞および／または好酸球が活性化していることが示される。すなわち、本発明の検出方法は、（Ｂ１）対象の生体試料中の脂質代謝物の濃度が、健常な対象の生体試料中の当該脂質代謝物の濃度を上回る場合に（好ましくは有意差をもって上回る場合に）、対象がアレルギー性鼻炎に罹患していると、あるいは対象の鼻腔において肥満細胞および／または好酸球が活性化していると決定する工程をさらに含んでいてもよい。健常な対象の生体試料中の脂質代謝物の濃度は、事前に複数の健常な対象から生体試料を採取して脂質代謝物濃度を測定して算出した平均値を用いることができる。また、「アレルギー性鼻炎に罹患している」とは、罹患している可能性がある場合も含む意味で用いられるものとし、「鼻腔において肥満細胞および／または好酸球が活性化している」とは、これらの細胞がヒスタミン等のアレルギー誘発物質を放出し、アレルギー反応を惹起している状態を意味し、肥満細胞数と好酸球数の増加とそれによるアレルギー反応の増加を含む意味で用いられるものとする。なお、本発明において「健常な対象」は、アレルギー性鼻炎を発症していない対象であればよく、例えば、アレルギー性鼻炎がスギ花粉に起因する季節性アレルギー性鼻炎である場合には、スギ花粉が飛散する前の対象を「健常な対象」とすることができる。
【００２４】
本発明の検出方法によれば、対象についてアレルギー性鼻炎を検出することができる。従って、本発明の検出方法は、アレルギー性鼻炎の診断に補助的に用いることができ、対象がアレルギー性鼻炎に罹っているか否かの判断は、場合によっては他の所見と組み合わせて、最終的には医師または獣医師が行うことができる。
【００２５】
本発明の検出方法によれば、被験対象から非侵襲的に採取された生体試料に基づいてアレルギー性鼻炎や、鼻腔における肥満細胞および／または好酸球の活性化状態の検出を行うことができる。すなわち、本発明の検出方法は、患者への負担を軽減しつつ、簡便かつ的確にアレルギー性鼻炎や、鼻腔における肥満細胞および／または好酸球の活性化状態を検出できる点で有利である。
【００２６】
本発明の第一の側面の好ましい態様によればまた、アレルギー性結膜炎の検出方法と、目における肥満細胞および／または好酸球の活性化状態の検出方法が提供される。本発明の検出方法によれば、生体試料中の脂質代謝物を指標にしてアレルギー性結膜炎と、目における肥満細胞および／または好酸球の活性化状態（特に、目における肥満細胞の活性化状態）を検出することができる。
【００２７】
本発明の検出方法においては、まず、（Ａ）被験対象の生体試料中の脂質代謝物の濃度を測定する工程を実施する。脂質代謝物の濃度の測定は、前記のように公知の方法により実施することができる。
【００２８】
本発明の検出方法においては、前記工程（Ａ）で測定された脂質代謝物の濃度に基づいて、生体試料を採取した対象についてアレルギー性結膜炎の有無、または目における肥満細胞および好酸球のいずれかまたは両方の活性化状態を決定する工程をさらに実施することができる。この工程では、対象の生体試料中の脂質代謝物の濃度が、健常な対象の生体試料中の当該脂質代謝物の濃度を上回る場合に（好ましくは有意差をもって上回る場合に）、対象がアレルギー性結膜炎に罹患していること、あるいは対象の目において肥満細胞および／または好酸球が活性化していることが示される。すなわち、本発明の検出方法は、（Ｂ２）対象の生体試料中の脂質代謝物の濃度が、健常な対象の生体試料中の当該脂質代謝物の濃度を上回る場合に（好ましくは有意差をもって上回る場合に）、対象がアレルギー性結膜炎に罹患していると、あるいは対象の目において肥満細胞および／または好酸球が活性化していると決定する工程をさらに含んでいてもよい。健常な対象の生体試料中の脂質代謝物の濃度は、事前に複数の健常な対象から生体試料を採取して脂質代謝物濃度を測定して算出した平均値を用いることができる。また、「アレルギー性結膜炎に罹患している」とは、罹患している可能性がある場合も含む意味で用いられるものとし、「目において肥満細胞および／または好酸球が活性化している」とは、これらの細胞がヒスタミン等のアレルギー誘発物質を放出し、アレルギー反応を惹起している状態を意味し、肥満細胞数と好酸球数の増加とそれによるアレルギー反応の増加を含む意味で用いられるものとする。なお、本発明において「健常な対象」は、アレルギー性結膜炎を発症していない対象であればよく、例えば、アレルギー性結膜炎がスギ花粉に起因する季節性アレルギー性結膜炎である場合には、スギ花粉が飛散する前の対象を「健常な対象」とすることができる。
【００２９】
本発明の検出方法によれば、対象についてアレルギー性結膜炎を検出することができる。従って、本発明の検出方法は、アレルギー性結膜炎の診断に補助的に用いることができ、対象がアレルギー性結膜炎に罹っているか否かの判断は、場合によっては他の所見と組み合わせて、最終的には医師または獣医師が行うことができる。
【００３０】
本発明の検出方法によれば、被験対象から非侵襲的に採取された生体試料に基づいてアレルギー性結膜炎や、目における肥満細胞および／または好酸球の活性化状態の検出を行うことができる。すなわち、本発明の検出方法は、患者への負担を軽減しつつ、簡便かつ的確にアレルギー性結膜炎や、目における肥満細胞および／または好酸球の活性化状態を検出できる点で有利である。
【００３１】
本発明の第二の側面によれば、アレルギー性疾患に対する治療効果の判定方法が提供される。本発明の判定方法によれば、生体試料中の脂質代謝物を指標にしてアレルギー性疾患に対する治療効果を判定することができる。
【００３２】
本発明の第二の側面の好ましい態様によれば、アレルギー性鼻炎に対する治療効果の判定方法が提供される。本発明の判定方法によれば、生体試料中の脂質代謝物を指標にしてアレルギー性鼻炎に対する治療効果を判定することができる。
【００３３】
本発明の判定方法においては、本発明の検出方法と同様に、（Ｃ）被験対象の生体試料中の脂質代謝物の濃度を測定する工程を実施する。脂質代謝物の濃度の測定は、本発明の検出方法と同様に行うことができる。
【００３４】
本発明の判定方法においては、前記工程（Ｃ）で測定された脂質代謝物の濃度に基づいて、治療を受けた対象についてアレルギー性鼻炎に対する治療効果を決定する工程をさらに実施することができる。この工程では、アレルギー性鼻炎に対する治療を受けた対象の生体試料中の脂質代謝物の濃度が、治療前の対象の生体試料中の当該脂質代謝物の濃度またはアレルギー性鼻炎に罹った対象の生体試料中の当該脂質代謝物の濃度を下回る場合に（好ましくは有意差をもって下回る場合に）、治療効果があることが示される。すなわち、本発明の判定方法は、（Ｄ１）アレルギー性鼻炎に対する治療を受けた対象の生体試料中の脂質代謝物の濃度が、治療前の対象の生体試料中の当該脂質代謝物の濃度またはアレルギー性鼻炎に罹った対象の生体試料中の当該脂質代謝物の濃度を下回る場合に（好ましくは有意差をもって下回る場合に）、治療効果があると決定する工程をさらに含んでいてもよい。治療前の対象の生体試料中の脂質代謝物の濃度は、治療前に対象の生体試料中の脂質代謝物の濃度を測定して得た値を用いることができる。健常な対象の生体試料中の脂質代謝物の濃度は、事前に複数の健常な対象から生体試料を採取して脂質代謝物濃度を測定して算出した平均値を用いることができる。なお、本発明の判定方法において治療を受ける対象は、好ましくはアレルギー性鼻炎に罹った対象である。また、本発明において「アレルギー性鼻炎に罹った対象」は、他の検査方法の結果がアレルギー性鼻炎を示している対象であればよく、好ましくは医師または獣医師によりアレルギー性鼻炎を発症しているとの診断を受けた対象とすることができる。
【００３５】
本発明の判定方法によって治療効果を判定できるアレルギー性鼻炎に対する治療としては、例えば、薬物療法、免疫療法および外科手術療法が挙げられる。薬物療法としては、アレルギー性鼻炎の治療薬による治療が挙げられ、そのような治療薬の例としては、抗ヒスタミン薬、ロイコトリエン受容体拮抗薬およびトロンボキサンＡ２阻害薬が挙げられる。免疫療法としては、アレルゲンの投与が挙げられ、そのようなアレルゲンの例としては、スギ花粉等の花粉が挙げられ、投与形式の例としては、舌下投与、皮下投与、経リンパ節投与が挙げられる。
【００３６】
本発明の判定方法によれば、アレルギー性鼻炎に対する治療を受けた対象において、当該治療効果を判定することができるため、対象に対して行ったアレルギー性鼻炎に対する治療の有効性を検証することができる。そして、治療効果が認められない場合には直ちにその治療を中止し、別の治療計画を立てることができる。従って、本発明の判定方法は、無駄な投薬を抑制することができ、ひいては医療費削減や患者負担軽減に資することができる点で有利である。
【００３７】
本発明の第二の側面の好ましい態様によればまた、アレルギー性結膜炎に対する治療効果の判定方法が提供される。本発明の判定方法によれば、生体試料中の脂質代謝物を指標にしてアレルギー性結膜炎に対する治療効果を判定することができる。
【００３８】
本発明の判定方法においては、本発明の検出方法と同様に、（Ｃ）被験対象の生体試料中の脂質代謝物の濃度を測定する工程を実施する。脂質代謝物の濃度の測定は、本発明の検出方法と同様に行うことができる。
【００３９】
本発明の判定方法においては、前記工程（Ｃ）で測定された脂質代謝物の濃度に基づいて、治療を受けた対象についてアレルギー性結膜炎に対する治療効果を決定する工程をさらに実施することができる。この工程では、アレルギー性結膜炎に対する治療を受けた対象の生体試料中の脂質代謝物の濃度が、治療前の対象の生体試料中の当該脂質代謝物の濃度またはアレルギー性結膜炎に罹った対象の生体試料中の当該脂質代謝物の濃度を下回る場合に（好ましくは有意差をもって下回る場合に）、治療効果があることが示される。すなわち、本発明の判定方法は、（Ｄ２）アレルギー性結膜炎に対する治療を受けた対象の生体試料中の脂質代謝物の濃度が、治療前の対象の生体試料中の当該脂質代謝物の濃度またはアレルギー性結膜炎に罹った対象の生体試料中の当該脂質代謝物の濃度を下回る場合に（好ましくは有意差をもって下回る場合に）、治療効果があると決定する工程をさらに含んでいてもよい。治療前の対象の生体試料中の脂質代謝物の濃度は、治療前に対象の生体試料中の脂質代謝物の濃度を測定して得た値を用いることができる。健常な対象の生体試料中の脂質代謝物の濃度は、事前に複数の健常な対象から生体試料を採取して脂質代謝物濃度を測定して算出した平均値を用いることができる。なお、本発明の判定方法において治療を受ける対象は、好ましくはアレルギー性結膜炎に罹った対象である。また、本発明において「アレルギー性結膜炎に罹った対象」は、他の検査方法の結果がアレルギー性結膜炎を示している対象であればよく、好ましくは医師または獣医師によりアレルギー性結膜炎を発症しているとの診断を受けた対象とすることができる。
【００４０】
本発明の判定方法によって治療効果を判定できるアレルギー性結膜炎に対する治療としては、例えば、薬物療法、免疫療法および外科手術療法が挙げられる。薬物療法としては、アレルギー性結膜炎の治療薬による治療が挙げられ、そのような治療薬の例としては、抗ヒスタミン薬、ロイコトリエン受容体拮抗薬およびトロンボキサンＡ２阻害薬が挙げられる。免疫療法としては、アレルゲンの投与が挙げられ、そのようなアレルゲンの例としては、スギ花粉等の花粉が挙げられ、投与形式の例としては、舌下投与、皮下投与、経リンパ節投与が挙げられる。
【００４１】
本発明の判定方法によれば、アレルギー性結膜炎に対する治療を受けた対象において、当該治療効果を判定することができるため、対象に対して行ったアレルギー性結膜炎に対する治療の有効性を検証することができる。そして、治療効果が認められない場合には直ちにその治療を中止し、別の治療計画を立てることができる。従って、本発明の判定方法は、無駄な投薬を抑制することができ、ひいては医療費削減や患者負担軽減に資することができる点で有利である。
【００４２】
本発明の第三の側面によれば、アレルギー性疾患マーカーとしての脂質代謝物の使用が提供される。本発明において「アレルギー性疾患マーカー」は、その存在および量がアレルギー性疾患の発症の有無やその症状の重篤度の指標となる物質をいう。すなわち、本発明によれば、脂質代謝物をアレルギー性疾患の疾患識別マーカーとして使用し、他の類症疾患との鑑別に使用することができるとともに、脂質代謝物をアレルギー性疾患の重篤度の評価に使用することができる。
【００４３】
本発明の第三の側面の好ましい態様によれば、アレルギー性鼻炎マーカーとしての脂質代謝物の使用が提供される。本発明において「アレルギー性鼻炎マーカー」は、その存在および量がアレルギー性鼻炎の発症の有無やその症状の重篤度の指標となる物質をいう。すなわち、本発明によれば、脂質代謝物をアレルギー性鼻炎の疾患識別マーカーとして使用し、他の類症疾患（例えば、上気道炎および喘息）との鑑別に使用することができるとともに、脂質代謝物をアレルギー性鼻炎の重篤度の評価に使用することができる。
【００４４】
本発明の第三の側面によればまた、鼻腔における肥満細胞および／または好酸球の活性化マーカーとしての脂質代謝物の使用が提供される。本発明において「鼻腔における肥満細胞および／または好酸球の活性化マーカー」は、その存在および量が鼻腔における肥満細胞の活性化の有無やその活性化の程度の指標となる物質をいう。すなわち、本発明によれば、脂質代謝物を鼻腔における肥満細胞および／または好酸球の活性化マーカーとして使用し、鼻腔における肥満細胞および／または好酸球の活性化の有無やその活性化の程度に加えて、鼻腔内のアレルギー反応の程度の検査に使用することができる。本発明の使用は、本発明の検出方法および判定方法の記載に従って実施することができる。
【００４５】
本発明の第三の側面の好ましい態様によればまた、アレルギー性結膜炎マーカーとしての脂質代謝物の使用が提供される。本発明において「アレルギー性結膜炎マーカー」は、その存在および量がアレルギー性結膜炎の発症の有無やその症状の重篤度の指標となる物質をいう。すなわち、本発明によれば、脂質代謝物をアレルギー性結膜炎の疾患識別マーカーとして使用し、他の類症疾患（例えば、感染性結膜炎）との鑑別に使用することができるとともに、脂質代謝物をアレルギー性結膜炎の重篤度の評価に使用することができる。
【００４６】
本発明の第三の側面によればまた、目における肥満細胞および／または好酸球の活性化マーカーとしての脂質代謝物の使用が提供される。本発明において「目における肥満細胞および／または好酸球の活性化マーカー」は、その存在および量が目における肥満細胞の活性化の有無やその活性化の程度の指標となる物質をいう。すなわち、本発明によれば、脂質代謝物を目における肥満細胞および／または好酸球の活性化マーカーとして使用し、目における肥満細胞および／または好酸球の活性化の有無やその活性化の程度に加えて、目内のアレルギー反応の程度の検査に使用することができる。本発明の使用は、本発明の検出方法および判定方法の記載に従って実施することができる。
【００４７】
本発明の判定方法は、アレルギー性疾患の治療薬の有効性の判定に用いることができるため、アレルギー性疾患の治療薬のスクリーニングにも使用することができる。例えば、本発明の判定方法は、アレルギー性鼻炎の治療薬の有効性の判定に用いることができるため、アレルギー性鼻炎の治療薬のスクリーニングに使用することができる。すなわち、本発明の第四の側面によれば、（Ｅ１）アレルギー性鼻炎の治療薬の候補薬を対象に投与する工程と、（Ｆ１）前記対象の生体試料中の脂質代謝物の濃度を測定する工程とを含んでなる、アレルギー性鼻炎の治療薬のスクリーニング方法が提供される。本発明のスクリーニング方法においては、前記工程（Ｆ１）で測定された脂質代謝物の濃度に基づいて、候補薬の治療効果の有無を決定する工程をさらに実施することができる。この工程では、候補薬投与後の対象の生体試料中の脂質代謝物の濃度が、候補薬投与前の対象の生体試料中の当該脂質代謝物の濃度またはアレルギー性鼻炎に罹った対象の生体試料中の当該脂質代謝物の濃度を下回る場合に（好ましくは有意差をもって下回る場合に）、前記候補薬に治療効果があることが示される。すなわち、本発明のスクリーニング方法は、（Ｇ１）候補薬投与後の対象の生体試料中の脂質代謝物の濃度が、候補薬投与前の対象の生体試料中の当該脂質代謝物の濃度またはアレルギー性鼻炎に罹った対象の生体試料中の当該脂質代謝物の濃度を下回る場合に（好ましくは有意差をもって下回る場合に）、治療効果があると決定する工程をさらに含んでいてもよく、それにより治療効果がある候補薬を選択することができる。本発明のスクリーニング方法は、本発明の検出方法および判定方法の記載に従って実施することができる。本発明のスクリーニング方法において候補薬を投与される対象は、好ましくはアレルギー性鼻炎に罹った対象である。本発明のスクリーニング方法を実施する場合には、対象はヒト以外の哺乳動物を用いることができる。
【００４８】
本発明の判定方法はまた、アレルギー性結膜炎の治療薬の有効性の判定に用いることができるため、アレルギー性結膜炎の治療薬のスクリーニングに使用することができる。すなわち、本発明の第四の側面によればまた、（Ｅ２）アレルギー性結膜炎の治療薬の候補薬を対象に投与する工程と、（Ｆ２）前記対象の生体試料中の脂質代謝物の濃度を測定する工程とを含んでなる、アレルギー性結膜炎の治療薬のスクリーニング方法が提供される。本発明のスクリーニング方法においては、前記工程（Ｆ２）で測定された脂質代謝物の濃度に基づいて、候補薬の治療効果の有無を決定する工程をさらに実施することができる。この工程では、候補薬投与後の対象の生体試料中の脂質代謝物の濃度が、候補薬投与前の対象の生体試料中の当該脂質代謝物の濃度またはアレルギー性結膜炎に罹った対象の生体試料中の当該脂質代謝物の濃度を下回る場合に（好ましくは有意差をもって下回る場合に）、前記候補薬に治療効果があることが示される。すなわち、本発明のスクリーニング方法は、（Ｇ２）候補薬投与後の対象の生体試料中の脂質代謝物の濃度が、候補薬投与前の対象の生体試料中の当該脂質代謝物の濃度またはアレルギー性結膜炎に罹った対象の生体試料中の当該脂質代謝物の濃度を下回る場合に（好ましくは有意差をもって下回る場合に）、治療効果があると決定する工程をさらに含んでいてもよく、それにより治療効果がある候補薬を選択することができる。本発明のスクリーニング方法は、本発明の検出方法および判定方法の記載に従って実施することができる。本発明のスクリーニング方法において候補薬を投与される対象は、好ましくはアレルギー性結膜炎に罹った対象である。本発明のスクリーニング方法を実施する場合には、対象はヒト以外の哺乳動物を用いることができる。
【００４９】
本発明の第五の側面によれば、（Ｈ）アレルギー性疾患に罹患した対象の生体試料中の脂質代謝物の濃度と、健常な対象の生体試料中の脂質代謝物の濃度を測定する工程と、（Ｉ）前記の測定した２つの濃度を比較する工程とを含んでなる、生体試料中の脂質代謝物においてアレルギー性疾患マーカー、または鼻腔もしくは目における肥満細胞および／または好酸球の活性化マーカーを同定する方法が提供される。
【００５０】
本発明の第五の側面の好ましい態様によれば、（Ｈ１）アレルギー性鼻炎に罹患した対象の生体試料中の脂質代謝物の濃度と、健常な対象の生体試料中の脂質代謝物の濃度を測定する工程と、（Ｉ１）前記の測定した２つの濃度を比較する工程とを含んでなる、生体試料中の脂質代謝物においてアレルギー性鼻炎マーカー、または鼻腔における肥満細胞および／または好酸球の活性化マーカーを同定する方法が提供される。本発明の同定方法においては、前記工程（Ｉ１）で行った濃度の比較結果に基づいて、脂質代謝物をアレルギー性鼻炎マーカー、または鼻腔における肥満細胞および／または好酸球の活性化マーカーと決定する工程をさらに実施することができる。この工程では、アレルギー性鼻炎に罹患した対象の生体試料中の脂質代謝物の濃度が、健常な対象の生体試料中の当該脂質代謝物の濃度を上回る場合に（好ましくは有意差をもって上回る場合に）、当該脂質代謝物がアレルギー性鼻炎マーカー、または鼻腔における肥満細胞および／または好酸球の活性化マーカーであることが示される。すなわち、本発明の同定方法は、（Ｊ１）アレルギー性鼻炎に罹患した対象の生体試料中の脂質代謝物の濃度が、健常な対象の生体試料中の当該脂質代謝物の濃度を上回る場合に（好ましくは有意差をもって上回る場合に）、当該脂質代謝物がアレルギー性鼻炎マーカー、または鼻腔における肥満細胞および／または好酸球の活性化マーカーであると決定する工程をさらに含んでいてもよい。本発明の同定方法は、本発明の検出方法および判定方法の記載に従って実施することができる。
【００５１】
本発明の第五の側面の好ましい態様によればまた、（Ｈ２）アレルギー性結膜炎に罹患した対象の生体試料中の脂質代謝物の濃度と、健常な対象の生体試料中の脂質代謝物の濃度を測定する工程と、（Ｉ２）前記の測定した２つの濃度を比較する工程とを含んでなる、生体試料中の脂質代謝物においてアレルギー性結膜炎マーカー、または目における肥満細胞および／または好酸球の活性化マーカーを同定する方法が提供される。本発明の同定方法においては、前記工程（Ｉ２）で行った濃度の比較結果に基づいて、脂質代謝物をアレルギー性結膜炎マーカー、または目における肥満細胞および／または好酸球の活性化マーカーと決定する工程をさらに実施することができる。この工程では、アレルギー性結膜炎に罹患した対象の生体試料中の脂質代謝物の濃度が、健常な対象の生体試料中の当該脂質代謝物の濃度を上回る場合に（好ましくは有意差をもって上回る場合に）、当該脂質代謝物がアレルギー性結膜炎マーカー、または目における肥満細胞および／または好酸球の活性化マーカーであることが示される。すなわち、本発明の同定方法は、（Ｊ２）アレルギー性結膜炎に罹患した対象の生体試料中の脂質代謝物の濃度が、健常な対象の生体試料中の当該脂質代謝物の濃度を上回る場合に（好ましくは有意差をもって上回る場合に）、当該脂質代謝物がアレルギー性結膜炎マーカー、または目における肥満細胞および／または好酸球の活性化マーカーであると決定する工程をさらに含んでいてもよい。本発明の同定方法は、本発明の検出方法および判定方法の記載に従って実施することができる。
【００５２】
本発明の検出方法によりアレルギー性疾患が検出された対象に対しては、アレルギー性疾患に対する治療を実施することができる。従って、本発明の第六の側面によれば、（Ａ）対象の生体試料中の脂質代謝物の濃度を測定する工程と、（Ｂ）対象の生体試料中の脂質代謝物の濃度が、健常な対象の生体試料中の当該脂質代謝物の濃度を上回る場合に、対象がアレルギー性疾患に罹患していると決定する工程と、（Ｋ）アレルギー性疾患に罹患していると決定された対象に、アレルギー性疾患に対する治療を実施する工程を含んでなる、アレルギー性疾患の治療方法が提供される。
【００５３】
本発明の第六の側面の好ましい態様によれば、（Ａ）対象の生体試料中の脂質代謝物の濃度を測定する工程と、（Ｂ１）対象の生体試料中の脂質代謝物の濃度が、健常な対象の生体試料中の当該脂質代謝物の濃度を上回る場合に、対象がアレルギー性鼻炎に罹患していると決定する工程と、（Ｋ１）アレルギー性鼻炎に罹患していると決定された対象に、アレルギー性鼻炎に対する治療を実施する工程を含んでなる、アレルギー性鼻炎の治療方法が提供される。本発明の治療方法のうちアレルギー性鼻炎の検出工程（すなわち、工程（Ａ）および（Ｂ１））は、本発明の検出方法の記載に従って実施することができる。アレルギー性鼻炎に対する治療は、本発明の判定方法の記載に従って実施することができる。
【００５４】
本発明の第六の側面の好ましい態様によればまた、（Ａ）対象の生体試料中の脂質代謝物の濃度を測定する工程と、（Ｂ２）対象の生体試料中の脂質代謝物の濃度が、健常な対象の生体試料中の当該脂質代謝物の濃度を上回る場合に、対象がアレルギー性結膜炎に罹患していると決定する工程と、（Ｋ２）アレルギー性結膜炎に罹患していると決定された対象に、アレルギー性結膜炎に対する治療を実施する工程を含んでなる、アレルギー性結膜炎の治療方法が提供される。本発明の治療方法のうちアレルギー性結膜炎の検出工程（すなわち、工程（Ａ）および（Ｂ２））は、本発明の検出方法の記載に従って実施することができる。アレルギー性結膜炎に対する治療は、本発明の判定方法の記載に従って実施することができる。
【００５５】
本発明の第七の側面によれば、対象の生体試料中の脂質代謝物の定量手段を含んでなる、アレルギー性疾患（例えば、アレルギー性鼻炎またはアレルギー性結膜炎）、または鼻腔もしくは目における肥満細胞および／または好酸球の活性化状態の検出用キットが提供される。本発明のキットは、典型的には、本発明の検出方法を使用してアレルギー性疾患（例えば、アレルギー性鼻炎またはアレルギー性結膜炎）、または鼻腔もしくは目における肥満細胞および／または好酸球の活性化状態を検出するためのキットである。脂質代謝物の定量手段としては、例えば、該脂質代謝物に特異的に結合する物質が挙げられ、典型的には脂質代謝物に対する抗体である。脂質代謝物の定量手段としてはまた、前記のような質量分析法に使用する質量分析計が挙げられる。
【００５６】
本発明のキットにおいて、脂質代謝物の定量手段が抗体である場合には、本発明のキットは該抗体を利用するイムノアッセイにより脂質代謝物の濃度を測定するために必要な試薬（および場合によっては装置）を含むものである。
【００５７】
本発明のキットの例としては、サンドイッチ法によって脂質代謝物の濃度を測定するキットが挙げられ、該キットは、マイクロタイタープレートと、捕捉用の抗脂質代謝物抗体と、アルカリホスファターゼまたはペルオキシダーゼで標識した抗脂質代謝物抗体と、アルカリホスファターゼの基質またはペルオキシダーゼの基質とを含んでいてもよい。
【００５８】
上記キットは、例えば、以下のようにして使用することができる。まず、マイクロタイタープレートに捕捉用抗体を固定し、ここに対象の生体試料を適宜希釈して添加した後インキュベートし、該試料を除去して洗浄する。続いて、標識した抗脂質代謝物抗体を添加してインキュベートおよび洗浄を行った後、基質を加えて発色させる。マイクロタイタープレートリーダー等を用いて発色を測定することにより、脂質代謝物の濃度を求めることができる。
【００５９】
本発明のキットの例としてはまた、二次抗体を使用したサンドイッチ法によって脂質代謝物の濃度を測定するキットが挙げられ、該キットは、マイクロタイタープレートと、捕捉用の抗脂質代謝物抗体と、一次抗体としての抗脂質代謝物抗体と、二次抗体としての、アルカリホスファターゼまたはペルオキシダーゼで標識した抗脂質代謝物抗体に対する抗体と、アルカリホスファターゼの基質またはペルオキシダーゼの基質とを含んでいてもよい。
【００６０】
上記キットは、例えば、以下のようにして使用することができる。まず、マイクロタイタープレートに捕捉用抗体を固定し、ここに対象の生体試料を適宜希釈して添加した後インキュベートし、該試料を除去して洗浄する。続いて、一次抗体を添加してインキュベートおよび洗浄を行い、さらに酵素標識した二次抗体を添加してインキュベートを行った後、基質を加えて発色させる。マイクロタイタープレートリーダー等を用いて発色を測定することにより、脂質代謝物の濃度を求めることができる。
【００６１】
本発明のキットにおいて、標識抗体は、酵素標識した抗体に限定されず、放射性物質（２５Ｉ、１３１Ｉ、３５Ｓ、３Ｈ等）、蛍光物質（フルオレセインイソチオシアネート、ローダミン、ダンシルクロリド、フィコエリトリン、テトラメチルローダミンイソチオシアネート、近赤外蛍光材料等）、発光物質（ルシフェラーゼ、ルシフェリン、エクオリン等）、ナノ粒子（金コロイド、量子ドット）等で標識した抗体であってもよい。また、標識抗体としてビオチン化抗体を用い、標識したアビジンまたはストレプトアビジンをキットに加えることもできる。
【００６２】
本発明のキットの例としてはさらに、イムノクロマト法によって脂質代謝物の濃度を測定するキットが挙げられ、該キットは、金コロイドなどで標識した第１の抗脂質代謝物抗体が格納された抗体格納部と、第２の抗脂質代謝物抗体（好ましくは脂質代謝物の別のエピトープを認識する抗体）をセルロース膜などにライン状に固定した判定部とが細い溝でつながれた構成とすることができる。
【００６３】
上記キットは、例えば、以下のようにして使用することができる。まず、抗体格納部あるいは抗体格納部に隣接する生体試料受部に生体試料を添加すると、抗体格納部で標識抗体と脂質代謝物が結合して脂質代謝物−標識抗体複合体となり、当該複合体が毛細管現象により溝を通って判定部に移動する。続いて、当該複合体が、固定された第２の抗脂質代謝物抗体に捕捉されると、金コロイドのプラズモン効果により、赤色のラインが判定部に出現し、脂質代謝物の存在を検出することができる。この場合のキットは検査用スティック等のスティック状の形態で提供することができ、生体試料としては尿を用いることができる。該検査用スティックは、尿検体を吸収するための吸収紙や、乾燥剤等をさらに備えていてもよい。
【００６４】
本発明のキットにおいて、脂質代謝物の定量手段が質量分析計である場合には、本発明のキットは質量分析計に加えて、場合によっては内部標準装置を含むものである。内部標準を用いることにより質量分析器による測定の際に、分析毎の抽出効率およびイオン化効率を補正することができる。質量分析に使用する内部標準としては、重水素化脂質代謝物が挙げられる。
【００６５】
本発明のキットは、上記に加えて、本発明の検出方法および判定方法の記載に従って実施することができる。
【００６６】
本発明によれば以下の発明が提供される。
［１０１］対象の生体試料中の脂質代謝物の濃度を測定する工程を含んでなる、アレルギー性鼻炎、または鼻腔における肥満細胞および／または好酸球の活性化状態の検出方法。
［１０２］前記対象の生体試料中の脂質代謝物の濃度が、健常な対象の生体試料中の当該脂質代謝物の濃度を上回る場合に、対象がアレルギー性鼻炎に罹患していること、あるいは対象の鼻腔において肥満細胞および／または好酸球が活性化していることが示される、上記［１０１］に記載の検出方法。
［１０３］対象の生体試料中の脂質代謝物の濃度を測定する工程を含んでなる、アレルギー性鼻炎に対する治療効果の判定方法。
［１０４］前記対象の生体試料中の脂質代謝物の濃度が、治療前の対象の生体試料中の当該脂質代謝物の濃度またはアレルギー性鼻炎に罹った対象の生体試料中の当該脂質代謝物の濃度を下回る場合に、治療効果があることが示される、上記［１０３］に記載の判定方法。
［１０５］アレルギー性鼻炎に対する治療が、薬物療法、免疫療法または外科手術療法である、上記［１０３］または［１０４］に記載の判定方法。
［１０６］前記生体試料が、前記対象から非侵襲的に採取された体液である、上記［１０１］または［１０２］に記載の検出方法または上記［１０３］〜［１０５］のいずれかに記載の判定方法。
［１０７］前記アレルギー性鼻炎が、季節性アレルギー性鼻炎または通年性アレルギー性鼻炎である、上記［１０１］、［１０２］および［１０６］のいずれかに記載の検出方法または上記［１０３］〜［１０６］のいずれかに記載の判定方法。
［１０８］前記脂質代謝物が、アラキドン酸代謝物、エイコサペンタエン酸代謝物、ドコサヘキサエン酸代謝物、リノレン酸代謝物およびエイコサジエン酸代謝物からなる群から選択される１種または２種以上である、上記［１０１］、［１０２］、［１０６］および［１０７］のいずれかに記載の検出方法または上記［１０３］〜［１０７］のいずれかに記載の判定方法。
［１０９］前記脂質代謝物が、ＰＧＤ２、ＰＧＥ２、１２−ＨＥＴＥ、１５−ＨＥＴＥ、１２−ＨＥＰＥ、１５−ＨＥＰＥ、１４−ＨＤｏＨＥ、８−ＨＤｏＨＥ、１３−ＨＯＤＥ、８−ｉｓｏＰＧＥ２、１６−ＨＤｏＨＥ、１５−ＨＥＤＥ、１５−ＯｘｏＥＤＥ、２０−ＨＥＴＥおよび１４，１５−ＥＥＴからなる群から選択される１種または２種以上である、上記［１０１］、［１０２］および［１０６］〜［１０８］のいずれかに記載の検出方法または上記［１０３］〜［１０８］のいずれかに記載の判定方法。
［１１０］前記脂質代謝物の濃度を質量分析法により測定する、上記［１０１］、［１０２］および［１０６］〜［１０９］のいずれかに記載の検出方法または上記［１０３］〜［１０９］のいずれかに記載の判定方法。
［１１１］アレルギー性鼻炎マーカー、または鼻腔における肥満細胞および／または好酸球の活性化マーカーとしての脂質代謝物の使用。
［１１２］前記アレルギー性鼻炎が、季節性アレルギー性鼻炎または通年性アレルギー性鼻炎である、上記［１１１］に記載の使用。
［１１３］前記脂質代謝物が、アラキドン酸代謝物、エイコサペンタエン酸代謝物、ドコサヘキサエン酸代謝物、リノレン酸代謝物およびエイコサジエン酸代謝物からなる群から選択される１種または２種以上である、上記［１１１］または［１１２］に記載の使用。
［１１４］前記脂質代謝物が、ＰＧＤ２、ＰＧＥ２、１２−ＨＥＴＥ、１５−ＨＥＴＥ、１２−ＨＥＰＥ、１５−ＨＥＰＥ、１４−ＨＤｏＨＥ、８−ＨＤｏＨＥ、１３−ＨＯＤＥ、８−ｉｓｏＰＧＥ２、１６−ＨＤｏＨＥ、１５−ＨＥＤＥ、１５−ＯｘｏＥＤＥ、２０−ＨＥＴＥおよび１４，１５−ＥＥＴからなる群から選択される１種または２種以上である、上記［１１１］〜［１１３］のいずれかに記載の使用。
［１１５］アレルギー性鼻炎の治療薬の候補薬を対象に投与する工程と、前記対象の生体試料中の脂質代謝物の濃度を測定する工程とを含んでなる、アレルギー性鼻炎の治療薬のスクリーニング方法。
［１１６］候補薬投与後の対象の生体試料中の脂質代謝物の濃度が、候補薬投与前の対象の生体試料中の当該脂質代謝物の濃度またはアレルギー性鼻炎に罹った対象の生体試料中の当該脂質代謝物の濃度を下回る場合に、前記治療薬に治療効果があることが示される、上記［１１５］に記載のスクリーニング方法。
［１１７］生体試料中の脂質代謝物においてアレルギー性鼻炎マーカー、または鼻腔における肥満細胞および／または好酸球の活性化マーカーを同定する方法であって、アレルギー性鼻炎に罹患した対象の生体試料中の脂質代謝物の濃度と、健常な対象の生体試料中の脂質代謝物の濃度を測定する工程と、前記の測定した２つの濃度を比較する工程を含む方法。
［１１８］アレルギー性鼻炎に罹患した対象の生体試料中の脂質代謝物の濃度が、健常な対象の生体試料中の当該脂質代謝物の濃度を上回る場合に、当該脂質代謝物がアレルギー性鼻炎マーカー、または鼻腔における肥満細胞および／または好酸球の活性化マーカーであることが示される、上記［１１７］に記載の同定方法。
【実施例】
【００６７】
以下の例に基づき本発明をより具体的に説明するが、本発明はこれらの例に限定されるものではない。【００６８】
例１：疾患モデルマウスの作製
（１）アレルギー性鼻炎モデルマウスの作製
ＢＡＬＢ／Ｃ系統のマウス（雌、５週齢）２３匹（日本クレア社、以下同様）に生理食塩水（大塚製薬社製）で溶解希釈したオボアルブミン（ｏｖａｌｂｕｍｉｎ、Ｓｉｇｍａ社製、本明細書中「ＯＶＡ」ということがある。）５０μｇおよび硫酸カリウムアルミニウム（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ社製）１ｍｇを同時に腹腔内投与し、２週間後に再度、ＯＶＡ５０μｇを腹腔内投与して感作を行った。２回目の感作から２週間後に、ＯＶＡ（４００μｇ／１０μＬ）を１日に１回、５日間（計５回）または１０日間（計１０回）経鼻投与して刺激し、アレルギー性鼻炎（本明細書中「ＡＲ」ということがある。）モデルマウスを作製した。なお、ＯＶＡを５回投与した群を「ＯＶＡ５回投与群」（１１匹）とし、ＯＶＡを１０回投与した群を「ＯＶＡ１０回投与群」（１２匹）とした。【００６９】
（２）上気道炎モデルマウスの作製
ＢＡＬＢ／Ｃ系統のマウス（雌、５週齢）９匹にリポ多糖（Ｌｉｐｏｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅ、Ｓｉｇｍａ社製、本明細書中「ＬＰＳ」ということがある。）（１５μｇ／１０μＬ）を１回、経鼻投与して、上気道炎モデルマウスを作製した。【００７０】
（３）対照群
対照群として、ＢＡＬＢ／Ｃ系統のマウス（雌、５週齢）１０匹に、上記（１）で用いた生理食塩水（１０μＬ）を１日に１回、１日間（計１回）、５日間（計５回）または１０日間（計１０回）経鼻投与した（溶媒投与群）。なお、溶媒を１回投与した群を「溶媒１回投与群」とし、溶媒を５回投与した群を「溶媒５回投与群」とし、溶媒を１０回投与した群を「溶媒１０回投与群」とした。【００７１】
例２：アレルギー性鼻炎および上気道炎の症状の評価
（１）血清中の抗原特異的ＩｇＥ量の測定
抗原の感作により、血清中の抗原特異的ＩｇＥ値が上昇することが知られている。例１（１）で作製したアレルギー性鼻炎モデルマウスのオボアルブミンによる感作を確認するため、血清中のオボアルブミン特異的ＩｇＥ量を測定した。具体的には、ＯＶＡ感作マウス（ＯＶＡ２回感作後、ＯＶＡ刺激をしていない群）（５匹）および対照群として未感作のマウス（ＢＡＬＢ／Ｃ系統のマウス（雌、５週齢）、５匹、本明細書中「未感作群」ということがある。）から眼窩採血により５０μＬ採血した。採取した血液を常温で１時間放置した。次いで、９５００ｒｐｍ、４℃で１０分間遠心し、血清と血餅を分離した。血清を回収した後、−８０℃で保存した。ＩｇＥ量の測定は、凍結保存した血清を２５倍希釈し、次いで、Ａｎｔｉ−Ｏｖａｌｂｕｍｉｎ  ＩｇＥ（マウス）ＥＬＩＳＡ  Ｋｉｔ（Ｃａｙｍａｎ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ社製）を用いて、キット添付の説明書に従って実施した。【００７２】
（２）くしゃみ症状の評価
例１で作製したＡＲモデルマウス（２２匹）および溶媒投与群（１０匹）は、１〜１０回の各回目のＯＶＡ投与または溶媒投与後１分から１１分までの１０分間のくしゃみ回数を計測した。例１で作製した上気道炎モデルマウス（９匹）および溶媒１回投与群（６匹）は、ＬＰＳ投与後または溶媒投与後１時間おきに（１０時間後まで）くしゃみ回数を計測した。【００７３】
（３）鼻腔体積の測定
例１で作製したＡＲモデルマウスの鼻腔体積は、ＯＶＡ投与前（６匹）、ＯＶＡ５回目投与から２４時間後（６匹）、およびＯＶＡ１０回目投与から２４時間後（６匹）にコンピューター断層撮影法（Ｃｏｍｐｕｔｅｄ  Ｔｏｍｏｇｒａｐｈｙ）により測定した。対照として、例１で作製した溶媒投与群の鼻腔体積は、溶媒投与前（６匹）、溶媒５回目投与から２４時間後（６匹）、および溶媒１０回目投与から２４時間後（６匹）に上記と同様にして測定した。具体的には、麻酔したマウスを４８ｍｍΦ視野固定具に固定した後、ｍｉｃｒｏ  ＣＴ（ＬＣＴ−２００、日立アロカメディカル社製）を用いて撮影した。撮影条件はピクセルサイズ：４８μｍ、スライス厚・スライス間隔：９６μｍ、スライス数：３５枚、回転速度：標準、回転角度：３６０°、Ｘ管電圧：低、投影方向数：１５９２とした。撮影した画像から−９００から−３００ＨＵ（Ｈｏｕｓｅｆｉｅｌｄ  ｕｎｉｔ）のＣＴ値を持つ領域を鼻腔と判断し、その体積を測定した。【００７４】
（４）統計処理
例２〜例５において、測定値は平均値±標準偏差で表した。また、有意差検定はｏｎｅ−ｗａｙ  ａｎａｌｙｓｉｓ  ｏｆ  ｖａｒｉａｎｃｅ（ＡＮＯＶＡ）を用いた後、Ｔｕｋｅｙ’ｓ  ｔｅｓｔを行った。２要因の群間での有意差検定はｔｗｏ−ｗａｙ  ＡＮＯＶＡを用いた後、Ｂｏｎｆｅｒｒｏｎｉ  ｐｏｓｔ−ｔｅｓｔを行った。危険率（Ｐ）が５％未満の場合に有意差ありと判定した。【００７５】
（５）結果
例１で作製したモデルマウスについて行った上記（１）〜（３）の評価結果は図１〜４に示される通りであった。【００７６】
図１の結果から、未感作群では、ＯＶＡ特異的ＩｇＥは検出されなかったのに対し、ＯＶＡ感作マウスでは、２３±６．２９ｎｇ／ｍＬの血清中オボアルブミン特異的ＩｇＥが検出されたことから、例１（１）で作製したアレルギー性鼻炎モデルマウスはオボアルブミンにより感作されたことが確認された。また、図２の結果から、溶媒投与群では、溶媒の投与回数はくしゃみの頻度に影響を与えなかったのに対し、アレルギー性鼻炎モデルマウスでは、ＯＶＡ投与１回目からくしゃみ頻度の上昇がみられ、ＯＶＡ投与５回目では溶媒投与群と比較してくしゃみ回数が有意に増加し、ＯＶＡ投与１０回目まで高頻度のくしゃみ回数が維持された。また、図３の結果から、上気道炎モデルマウスのくしゃみ回数は、ＬＰＳ投与２時間後には増加し、ＬＰＳ投与６時間後には最大値を示したが、ＬＰＳ投与１０時間後には溶媒投与群と同等レベルまで減少した。上気道炎モデルマウスのくしゃみ回数の最大値は、アレルギー性鼻炎モデルマウスのＯＶＡ投与５回目（ＯＶＡ５回投与群）のくしゃみ回数と同程度であった。また、図４の結果から、溶媒投与群では溶媒の投与回数は鼻腔体積に影響しなかった。アレルギー性鼻炎モデルマウスでは、ＯＶＡ５回投与群では鼻腔体積が減少し、ＯＶＡ１０回投与群では、ＯＶＡ投与前と比較して鼻腔体積が有意に減少したことから、ＯＶＡ１０回投与群では鼻閉の症状が確認された。【００７７】
例３：アレルギー性鼻炎および上気道炎の病理組織学的評価
（１）手順
例１で作製したＡＲモデルマウス（ＯＶＡ５回投与群、ＯＶＡ１０回投与群）、上気道炎モデルマウス（ＬＰＳ投与群）および対照群（溶媒１回投与群、溶媒５回投与群、溶媒１０回投与群）（各群６匹）を用いて病理組織学的解析を行った。具体的には、マウスから上顎を切除し、即座に４％パラホルムアルデヒドに４℃で５日間浸漬した。次いで、ＥＤＴＡに毎日浸漬して４℃で１０日間脱灰処理を行った。次いで、眼窩を覆う骨を剃刀で切除し、脱水、透徹処理後、パラフィンに包埋し幅４μｍの連続切片標本を作製した。ヘマトキシリン・エオジン染色（ＨＥ染色）、クロロアセテート・エステラーゼ染色（ＣＡＥ染色）、トルイジンブルー染色（ＴＢ染色）またはメイグリュンワルド・ギムザ染色（ＭＧ染色）を常法に従って行い封入した。具体的な染色手順は、後記の通りである。染色した鼻腔組織を光学顕微鏡（ＡＣＴ−１０、ニコン社製）下で観察し、顕微鏡用デジタルカメラ（ＯＰＴＩＰＨＯＴ−２、ニコン社製）を用いて撮影した。鼻甲介（鼻炎が起こったときに炎症細胞が浸潤してくる、毛細血管が多く集まる部位）における免疫細胞（結合織型肥満細胞、粘膜型肥満細胞、好酸球、好中球）数を、１セクションあたり１６〜２４個の無作為に選択された区画内（倍率×４００）で計測した。【００７８】
（２）クロロアセテート・エステラーゼ（ＣＡＥ）染色
ＣＡＥ染色は、ナフトールＡＳ−Ｄクロロアセテートを基質にして肥満細胞特異的なエステラーゼを赤色に染める染色法である。上記（１）で作製した連続切片標本を脱パラフィン処理後、染色に用いた。４％の亜硝酸ナトリウム溶液とニューフクシン液を１：１で混合した後、この溶液とナフトール液を１：９の割合で混合した。この溶液とリン酸バッファー（０．２Ｍ  ＮａＨ２ＰＯ４  ０．２Ｍ  Ｎａ２ＨＰＯ４  ｐＨ７．６）を１：２０の割合で混合し、切片を１０分間浸漬した。切片を蒸留水で洗浄後、ヘマトキシリン溶液を用いて対比染色を行った。１ｍｍ２内の結合組織および粘膜組織に存在する全ての肥満細胞（結合織型肥満細胞および粘膜型肥満細胞）数を計測し、平均値および標準偏差を算出した。【００７９】
（３）トルイジンブルー（ＴＢ）染色
ＴＢ染色は、酸性粘液多糖類を染色する。酸性粘液多糖類は、結合織型肥満細胞に存在し、粘膜型肥満細胞には存在しない。上記（１）で作製した連続切片標本を脱パラフィン処理後、０．０５％トルイジンブルー溶液（ｐＨ４．１）に１０分間浸漬した。次いで、９０％アルコール溶液で脱色させた後、封入した。ここで、ＣＡＥ染色は結合織型および粘膜型のいずれの肥満細胞も染色するが、ＴＢ染色は結合織型肥満細胞のみを染色する。ＣＡＥ染色とＴＢ染色をそれぞれ別の切片で行い、ＣＡＥ染色陽性、かつ、ＴＢ染色陽性な細胞を結合織型肥満細胞と判断した。また、ＣＡＥ染色陽性、かつ、ＴＢ染色陰性な細胞を粘膜型肥満細胞と判断し、１ｍｍ２内の結合組織および粘膜組織に存在する全ての結合織型肥満細胞数または粘膜型肥満細胞数を計測し、平均値および標準偏差を算出した。【００８０】
（４）メイグリュンワルド・ギムザ（ＭＧ）染色
メイグリュンワルド・ギムザ染色は、好酸球に特異的な好酸性顆粒を赤色に染色する。上記（１）で作製した連続切片標本を脱パラフィン処理後、メイグリュンワルド染色液に切片を６分間浸漬した。次いで、１／１５Ｍ−リン酸緩衝液（×１０）（０．２Ｍ  ＮａＨ２ＰＯ４  ０．２Ｍ  Ｎａ２ＨＰＯ４  ｐＨ６．４〜６．８）で切片を洗浄後、ギムザ染色液と蒸留水を１：２０の割合で混合した溶液に切片を３分間浸漬した。ＨＥ染色とＭＧ染色をそれぞれ別の切片で行い、ＨＥ染色により分葉核が確認され、かつ、ＭＧ染色陽性な細胞を好酸球と判断した。また、ＨＥ染色により分葉核が確認され、かつ、ＭＧ染色陰性な細胞を好中球と判断し、１ｍｍ２内の結合組織および粘膜組織に存在する全ての好酸球数または好中球数を計測し、平均値および標準偏差を算出した。【００８１】
（５）結果
例１で作製したモデルマウスについて行った上記（２）〜（４）の病理組織学的評価の結果は図６〜９に示される通りであった。【００８２】
図６に示される通り、ＯＶＡ５回投与群、溶媒投与群（投与回数：１、５、１０回、以下同様）およびＬＰＳ投与群では、鼻甲介（図５）に浸潤した粘膜型肥満細胞数に有意な差は認められなかったのに対し、ＯＶＡ１０回投与群では溶媒１０回投与群と比較して、粘膜型肥満細胞数が有意に増加した。また、図７に示される通り、ＯＶＡ投与群（５、１０回）、溶媒投与群（１、５、１０回）およびＬＰＳ投与群では、鼻甲介に浸潤した結合織型肥満細胞数に有意な差は認められなかった。また、図８に示される通り、ＯＶＡ５回投与群およびＯＶＡ１０回投与群では、溶媒１０回投与群と比較して、鼻甲介に浸潤した好酸球数の有意な増加が認められた。また、ＯＶＡ１０回投与群はＯＶＡ５回投与群と比較して浸潤した好酸球数が有意に増加した。さらに、ＯＶＡ５回投与群では、ＬＰＳ投与群と比較して浸潤した好酸球数が有意に増加した。また、図９に示される通り、ＯＶＡ投与群（５、１０回）および溶媒投与群（１、５、１０回）では、鼻甲介に浸潤した好中球数に有意な差は認められなかったのに対し、ＬＰＳ投与群では溶媒１回投与群と比較して、好中球数が有意に増加した。以上の免疫細胞の鼻腔内（鼻甲介）浸潤程度、鼻腔組織の病態学的特徴および例２で示されたアレルギー症状（くしゃみ、鼻閉）を総合判断し、ＯＶＡ５回投与群を軽度のアレルギー性鼻炎、ＯＶＡ１０回投与群を重度のアレルギー性鼻炎と定義した。なお、アレルギー性鼻炎の発症および進行には肥満細胞および好酸球の組織内浸潤が重要な役割を果たすこと、および成熟度の高い結合織型肥満細胞は鼻腔内に常在し、未成熟な粘膜型肥満細胞は炎症刺激により鼻甲介に浸潤することが知られている（Terada, N. et al., Journal of Allergy and Clinical Immunology 94, 629-642, 1994）。【００８３】
例４：アレルギー性鼻炎と上気道炎モデルマウスの鼻腔洗浄液中の脂質メディエーターの分析
（１）脂質メディエーターの測定
ア  鼻腔洗浄液の調製
例１（１）で作製したアレルギー性鼻炎モデルマウス（ＯＶＡ５回投与群：１１匹、ＯＶＡ１０回投与群：１２匹）、上気道炎モデルマウス（ＬＰＳ投与群：９匹）および溶媒投与群（溶媒１回投与群、溶媒５回投与群、溶媒１０回投与群、各群１０匹）を用いて脂肪酸代謝酵素（ＣＯＸ、ＬＯＸ、ＣＹＰ）下流およびＯＸ下の脂質メディエーター産生量を調べた。各群におけるＯＶＡ投与、ＬＰＳ投与または溶媒投与から２０分後にマウスを安楽死処置した。下顎を切除し、冷却した生理食塩水５５０μＬを気管支から鼻先まで流し、採取し、−８０℃で凍結することにより、鼻腔洗浄液を調製した。【００８４】
イ  鼻腔洗浄液からの脂質抽出
上記アで調製した鼻腔洗浄液を１０００ｒｐｍ、４℃で１０分間遠心分離した。上清４００μＬに０．０５％ギ酸水５０μＬ、表２に示す内部標準溶液５０μＬおよび蒸留水５５０μＬを加え試料溶液を調製した。試料溶液を予めメタノールおよび蒸留水で平衡化した固相抽出カートリッジ（ＨＬＢ  １ｃｃ  Ｖａｃ  Ｃａｒｔｒｉｄｇｅ、Ｏａｓｉｓ、Ｗａｔｅｒｓ社製）に負荷した。カートリッジをＭｉｌｌｉＱ水１ｍＬ、ヘキサン１ｍＬで洗浄した後、カートリッジに付着させた脂質をメタノール１ｍＬで溶出した。次いで、溶出液を室温で４時間、減圧乾固してペレットにした後、８０％メタノールに再溶解することによって脂質サンプル溶液を調製した。【００８５】
ウ  液体クロマトグラフィー質量分析法による脂質濃度の測定
上記イで調製したサンプル溶液を質量分析器で解析した。液体クロマトグラフィー質量分析に用いた条件は以下の通りである。【００８６】
＜ＬＣ条件＞
分析カラム：Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ，ＫｉｎｅｔｅｘＣ８（２．１ｍｍＩ．Ｄ．×１５０ｍｍ、２．６μｍ、ＫＩＮＥＴＥＸ社製）
移動相Ａ：０．０５％ギ酸
移動相Ｂ：０．０５％ギ酸アセトニトリル
流速：０．４ｍＬ／分
注入量：５μＬ
カラム温度：４５℃
グラジエントプログラム：表１に示される通りであった。【００８７】
【表１】
2019172457.tif 000002
【００８８】
＜ＭＳ条件＞
質量分析器：ＬＣＭＳ−８０３０（島津製作所社製）
測定プログラム；ＬＣ／ＭＳ／ＭＳメソッドパッケージ  脂質メディエーターｖｅｒ．１
（島津製作所社製）
ネブライザーガス流量：３Ｌ／分
ドライイングガス流量：１５Ｌ／分
ＤＬ温度：２５０℃
ヒートブロック温度：４００℃
イオン化モード：ＥＳＩ＋／−
内部標準溶液：組成は表２に示される通りであった。【００８９】
【表２】
2019172457.tif 000003
【００９０】
（２）データ処理
上記測定プログラムに従って、検出された脂質メディエーター（１３３種）を物性に基づいて１３種類のグループに分割し、各グループに対して内部標準物質を設定した（表２参照）。ＬａｂＳｏｌｕｔｉｏｎｓ（Ｖｅｒｓｉｏｎ５．８０、島津製作所社製）を用いて、各脂質メディエーターのクロマトグラムから算出したピーク面積値を、上記の対応する内部標準物質のピーク面積値で除することによって脂質抽出時に生じる定量誤差等を補正した。脂質メディエーターの濃度（図１０〜２１の縦軸）は、脂質メディエーターのピーク面積値を内部標準物質のピーク面積値で除した値として示した。【００９１】
（３）結果
下記に記載の通り、検出された脂質メディエーター（１３３種）のうち１５種について、ＯＶＡ投与群（すなわち、鼻腔において肥満細胞および好酸球が活性化されたＡＲモデルマウス）での産生量が有意に高いこと、あるいは、高い傾向が観察された【００９２】
ア  ＣＯＸ下流の脂質メディエーターの産生量
図１０に示される通り、ＯＶＡ投与群の鼻腔洗浄液において、アラキドン酸（ａｒａｃｈｉｄｏｎｉｃ  ａｃｉｄ、本明細書中「ＡＡ」ということがある。）由来、シクロオキシゲナーゼ（ＣＯＸ）下流の脂質メディエーターであるプロスタグランジンＤ２（ｐｒｏｓｔａｇｌａｎｄｉｎ  Ｄ２、本明細書中「ＰＧＤ２」ということがある。）およびプロスタグランジンＥ２（ｐｒｏｓｔａｇｌａｎｄｉｎ  Ｅ２、本明細書中「ＰＧＥ２」ということがある。）が検出された。ＰＧＤ２の産生量は、ＯＶＡ１０回投与群では、溶媒１０回投与群およびＬＰＳ投与群と比較して有意に高かった（図１０Ａ）。また、ＰＧＥ２の産生量は、ＯＶＡ１０回投与群では、溶媒１０回投与群、ＯＶＡ５回投与群およびＬＰＳ投与群と比較して有意に高かった（図１０Ｂ）。【００９３】
イ  ＬＯＸ下流の脂質メディエーターの産生量
図１１に示される通り、ＯＶＡ投与群の鼻腔洗浄液において、ＡＡ由来、１２／１５−リポキシゲナーゼ（ＬＯＸ）下流の脂質メディエーターである１２−ヒドロキシエイコサテトラエン酸（ｈｙｄｒｏｘｙ  ｅｉｃｏｓａｔｅｔｒａｅｎｏｉｃ  ａｃｉｄ、本明細書中「ＨＥＴＥ」ということがある。）および１５−ＨＥＴＥが検出された。１２−ＨＥＴＥの産生量は、ＯＶＡ１０回投与群では、溶媒１０回投与群と比較して有意に高かった（図１１Ａ）。また、１５−ＨＥＴＥの産生量は、ＯＶＡ５回投与群およびＯＶＡ１０回投与群では、それぞれ溶媒５回および１０回投与群と比較して有意に高かった（図１１Ｂ）。【００９４】
図１２に示される通り、ＯＶＡ投与群の鼻腔洗浄液において、エイコサペンタエン酸（ｅｉｃｏｓａｐｅｎｔａｅｎｏｉｃ  ａｃｉｄ、本明細書中「ＥＰＡ」ということがある。）由来、１２／１５−ＬＯＸ下流の脂質メディエーターである１２−ヒドロキシエイコサペンタエン酸（ｈｙｄｒｏｘｙ  ｅｉｃｏｓａｐｅｎｔａｅｎｏｉｃ  ａｃｉｄ、本明細書中「ＨＥＰＥ」ということがある。）および１５−ＨＥＰＥが検出された。１２−ＨＥＰＥの産生量は、ＯＶＡ１０回投与群では、溶媒１０回投与群と比較して有意に高かった（図１２Ａ）。また、１５−ＨＥＰＥの産生量は、ＯＶＡ５回投与群では、溶媒５回投与群と比較して有意に高かった（図１２Ｂ）。【００９５】
図１３に示される通り、ＯＶＡ投与群の鼻腔洗浄液において、ドコサヘキサエン酸（ｄｏｃｏｓａｈｅｘａｅｎｏｉｃ  ａｃｉｄ、本明細書中「ＤＨＡ」ということがある。）由来、１２／１５−ＬＯＸ下流の脂質メディエーターである１４−ヒドロキシドコサヘキサエン酸（ｈｙｄｒｏｘｙ  ｄｏｃｏｓａｈｅｘａｅｎｏｉｃ  ａｃｉｄ、本明細書中「ＨＤｏＨＥ」ということがある。）および５−ＬＯＸ下流の脂質メディエーターである８−ＨＤｏＨＥが検出された。１４−ＨＤｏＨＥの産生量は、ＯＶＡ５回投与群およびＯＶＡ１０回投与群では、それぞれ溶媒５回および１０回投与群と比較して有意に高かった（図１３Ａ）。また、８−ＨＤｏＨＥの産生量は、ＯＶＡ５回投与群およびＯＶＡ１０回投与群では、それぞれ溶媒５回および１０回投与群と比較して有意に高かった（図１３Ｂ）。【００９６】
図１４に示される通り、ＯＶＡ投与群の鼻腔洗浄液において、リノレン酸（α−ｌｉｎｏｌｅｎｉｃ  ａｃｉｄ、本明細書中「ＬＡ」ということがある。）由来、１２／１５−ＬＯＸ下流の脂質メディエーターである１３−ヒドロキシオクタデカジエン酸（ｈｙｄｒｏｘｙ  ｏｃｔａｄｅｃａｄｉｅｎｏｉｃ  ａｃｉｄ、本明細書中「ＨＯＤＥ」ということがある。）が検出された。１３−ＨＯＤＥの産生量は、ＯＶＡ５回投与群では、溶媒５回投与群と比較して有意に高かった。また、ＯＶＡ１０回投与群では、ＬＰＳ投与群と比較して有意に高かった。【００９７】
ウ  ＯＸ下の脂質メディエーターの産生量
図１５に示される通り、ＯＶＡ投与群の鼻腔洗浄液において、ＡＡ由来、酵素非依存的酸化（ＯＸ）下流の脂質メディエーターである８−イソプロスタグランジンＥ２（ｉｓｏ  ｐｒｏｓｔａｇｌａｎｄｉｎ  Ｅ２、本明細書中「ｉｓｏＰＧＥ２」ということがある。）が検出された。８−ｉｓｏＰＧＥ２の産生量は、ＯＶＡ１０回投与群では、溶媒１０回投与群と比較して有意に高かった。【００９８】
図１６に示される通り、ＯＶＡ投与群の鼻腔洗浄液において、ＤＨＡ由来、ＯＸ下の脂質メディエーターである１６−ＨＤｏＨＥが検出された。１６−ＨＤｏＨＥの産生量は、ＯＶＡ投与群では、溶媒投与群と比較して高い傾向が認められた。【００９９】
図１７に示される通り、ＯＶＡ投与群の鼻腔洗浄液において、エイコサジエン酸（ｅｉｃｏｓａｄｉｅｎｏｉｃ  ａｃｉｄ、本明細書中「ＥＤＡ」ということがある。）由来、ＯＸ下の脂質メディエーターである１５−ヒドロキシエイコサジエン酸（ｈｙｄｒｏｘｙ  ｅｉｃｏｓａｄｉｅｎｏｉｃ  ａｃｉｄ、本明細書中「ＨＥＤＥ」ということがある。）および１５−オキソエイコサジエン酸（本明細書中「ＯｘｏＥＤＥ」ということがある。）が検出された。１５−ＨＥＤＥの産生量は、ＯＶＡ１０回投与群では、溶媒１０回投与群と比較して有意に高かった。また、１５−ＯｘｏＥＤＥの産生量は、ＯＶＡ投与群では、溶媒投与群と比較して高い傾向が認められた。【０１００】
エ  ＣＹＰ下流の脂質メディエーターの産生量
図１８に示される通り、ＯＶＡ投与群の鼻腔洗浄液において、ＡＡ由来、シトクロムｐ４５０（ＣＹＰ）下流の脂質メディエーターである２０−ＨＥＴＥおよび１４，１５−エポキシエイコサトリエン酸（ｅｐｏｘｙ  ｅｉｃｏｓａｔｒｉｅｎｏｉｃ  ａｃｉｄ、本明細書中「ＥＥＴ」ということがある。）が検出された。２０−ＨＥＴＥの産生量は、ＯＶＡ１０回投与群では、溶媒１０回投与群と比較して有意に高かった（図１８Ａ）。また、１４，１５−ＥＥＴの産生量は、ＯＶＡ１０回投与群では、溶媒１０回投与群と比較して有意に高かった（図１８Ｂ）。【０１０１】
例５：アレルギー性鼻炎と上気道炎モデルマウスの尿中の脂質メディエーター
（１）脂質メディエーターの測定
ア  尿の調製
例１で作製したＡＲモデルマウス（ＯＶＡ５回投与群、ＯＶＡ１０回投与群）および対照群（溶媒５回投与群、溶媒１０回投与群）（各群１０匹）を用いて脂肪酸代謝酵素（ＣＯＸ、ＬＯＸ、ＣＹＰ）下流およびＯＸ下の脂質メディエーター産生量を調べた。各群のマウスから尿を採取した。具体的には、ＯＶＡ５回投与群および溶媒５回投与群の採尿は、ＯＶＡまたは溶媒の４回目投与の後に代謝ケージにマウスを入れ、投与５回目までの２４時間の尿を採取した。また、ＯＶＡ１０回投与群および溶媒１０回投与群の採尿は、ＯＶＡまたは溶媒の１０回目投与の後に代謝ケージにマウスを入れ、２４時間後までの尿を採取した。【０１０２】
イ  尿からの脂質抽出
上記アで調製した尿を１０００ｒｐｍ、４℃で１０分間遠心分離した。上清１００μＬに０．０５％ギ酸水１０μＬ、内部標準溶液５０μＬおよび脱イオン水８５０μＬを加え試料溶液を調製した以外は、例４（１）イの記載と同様にして、脂質サンプル溶液を調製した。【０１０３】
ウ  液体クロマトグラフィー質量分析法による脂質濃度の測定
例４（１）ウの記載と同様にして、脂質濃度を測定した。【０１０４】
（２）データ処理
例４（２）の記載と同様にして、データ処理を実施した。【０１０５】
（３）結果
ア  ＣＯＸ下流の脂質メディエーターの産生量
図１９に示される通り、ＯＶＡ投与群の尿において、ＡＡ由来、ＣＯＸ下流の脂質メディエーターであるＰＧＤ２が検出された。ＰＧＤ２の産生量は、ＯＶＡ５回投与群およびＯＶＡ１０回投与群では、溶媒投与群と比較して高い傾向が認められた。【０１０６】
イ  ＬＯＸ下流の脂質メディエーターの産生量
図２０に示される通り、ＯＶＡ投与群の尿において、ＡＡ由来、１２／１５−ＬＯＸ下流の脂質メディエーターである１２−ＨＥＴＥが検出された。１２−ＨＥＴＥの産生量は、ＯＶＡ５回投与群およびＯＶＡ１０回投与群では、溶媒投与群と比較して高い傾向が認められた。【０１０７】
図２１に示される通り、ＯＶＡ投与群の尿において、ＥＰＡ由来、１２／１５−ＬＯＸ下流の脂質メディエーターである１２−ＨＥＰＥが検出された。１２−ＨＥＰＥの産生量は、ＯＶＡ５回投与群およびＯＶＡ１０回投与群では、溶媒投与群と比較して高い傾向が認められた。【０１０８】
例６：アレルギー性結膜炎疾患モデルモルモットの作製
（１）アレルギー性結膜炎モデルモルモットの作製
Ｋｗｌ：Ｈａｒｔｌｅｙ系統のモルモット（雄、７〜１１週齢）（３匹）に生理食塩水（大塚製薬社製）１０μＬで溶解希釈したオボアルブミン（ｏｖａｌｂｕｍｉｎ、Ｓｉｇｍａ社製、本明細書中「ＯＶＡ」ということがある。）１００μｇおよび硫酸カリウムアルミニウム（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ社製）１ｍｇを同時に腹腔内投与し、２週間後に再度、生理食塩水１０μＬで溶解希釈したＯＶＡ１００μｇおよび硫酸カリウムアルミニウム１ｍｇを腹腔内投与して感作を行った。２回目の感作から２週間後に、ＯＶＡ（２５０μｇ／１０μＬ）を１日おきに１回、１１日間（計６回）点眼投与して刺激し、アレルギー性結膜炎モデルモルモットを作製した。【０１０９】
（２）感染性結膜炎モデルモルモットの作製
Ｋｗｌ：Ｈａｒｔｌｅｙ系統のモルモット（雄、７〜１１週齢）３匹にリポ多糖（Ｌｉｐｏｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅ、Ｓｉｇｍａ社製、本明細書中「ＬＰＳ」ということがある。）（５μｇ／５μＬ）を２回、結膜内投与して、感染性結膜炎モデルモルモットを作製した。以下、特に断りのない限り、ＬＰＳ投与から１２時間後に試験に用いた。【０１１０】
（３）対照群（溶媒投与群）
アレルギー性結膜炎の対照群として、Ｋｗｌ：Ｈａｒｔｌｅｙ系統のモルモット（雄、７〜１１週齢）３匹に、上記（１）で用いた量と回数の生理食塩水（５μＬ）を点眼投与した（溶媒投与群１）。感染性結膜炎の対照群として、Ｋｗｌ：Ｈａｒｔｌｅｙ系統のモルモット（雄、７〜１１週齢）３匹に、上記（２）で用いた量と回数の生理食塩水（５μＬ）を点眼投与した（溶媒投与群２）。【０１１１】
（４）対照群（未感作群）
対照群として、Ｋｗｌ：Ｈａｒｔｌｅｙ系統のモルモット（雄、７〜１１週齢）を用いた（未感作群）。【０１１２】
例７：アレルギー性結膜炎および感染性結膜炎の症状の評価
（１）結膜の腫れの観察
ア  方法
例６で作製したアレルギー性結膜炎モデルモルモット（ＯＶＡ２回感作後、ＯＶＡ刺激回数が１、２または３回の各モルモット）、感染性結膜炎モデルモルモットおよび未感作群の結膜の腫れを観察した。各アレルギー性結膜炎モデルは、最終のＯＶＡ刺激から３０分後の結膜について、また、感染性結膜炎モデルモルモットは、ＬＰＳ投与から１０時間後の結膜について観察した。【０１１３】
イ  結果
結果は、図２２に示される通りであった。アレルギー性結膜炎および感染性結膜炎の両モデルモルモットにおいて、未感作群と比較して、結膜の腫れが確認された。【０１１４】
（２）血管透過性の評価
ア  方法
例６で作製したアレルギー性結膜炎モデルモルモット（３匹）、感染性結膜炎モデルモルモット（３匹）および対照群として溶媒投与群１（３匹）および溶媒投与群２（３匹）の結膜の血管透過性、水分量および結膜の厚みを観察した。血管透過性は、エバンスブルー（Sigma社製）を用いてマイルズアッセイ法に従って測定した。水分量は、シルマル試験紙（あゆみ製薬社製）を用いて測定した。結膜の厚みは、ノギスを用いて測定した。【０１１５】
イ  結果
結果は、図２３と図２４に示される通りであった。アレルギー性結膜炎モデルでは、感染性結膜炎モデルまたは溶媒投与群１と比較して、水分量の増加および血管透過性の亢進が確認された。【０１１６】
（３）アレルギー性結膜炎および感染性結膜炎の病理組織学的評価
ア  方法
例６で作製したアレルギー性結膜炎モデルモルモットおよび感染性結膜炎モデルモルモットの結膜における病理組織学的評価を行った。具体的には、例３に記載の方法を用いた。【０１１７】
イ  結果
結果は、図２５に示される通りであった。アレルギー性結膜炎モデルおよび感染性結膜炎モデルの各病態に即した免疫細胞の浸潤が認められた。【０１１８】
例８：アレルギー性結膜炎および感染性結膜炎モデルモルモットの涙および結膜嚢洗浄液中の脂質メディエーターの分析
（１）脂質メディエーターの測定
ア  涙および結膜嚢洗浄液の調製
例６で作製したアレルギー性結膜炎モデルモルモット（３匹）、感染性結膜炎モデルモルモット（３匹）および未感作群（３匹）の結膜を用いて脂肪酸代謝酵素（COX、5-LO、12/15-LO、CYP）下流の脂質メディエーター産生量を調べた。涙および結膜嚢洗浄液の調製は、逆相固相抽出で行った。【０１１９】
イ  涙および結膜嚢洗浄液からの脂質抽出
上記アで調製した涙および結膜嚢洗浄液からの脂質抽出は、例４（１）イの記載に従って行った。【０１２０】
ウ  液体クロマトグラフィー質量分析法による脂質濃度の測定
上記イで調製したサンプル溶液の脂質濃度の測定は、例４（１）ウの記載に従って行った。【０１２１】
（２）データ処理
上記（１）で検出された脂質メディエーターの脂質メディエーターの濃度（図２６〜３１の縦軸）は、例４（２）の記載に従って行った。【０１２２】
（３）結果
結果は、図２６〜３１に示される通りであった。検出された脂質メディエーターのうちＰＧＤ２、１３，１４−ｄｉｈｙｄｒｏ−１５−ｋｅｔｏ−ＰＧＤ２、ＰＧＪ２、ＬＴＢ４、２０−ＨＥＴＥ、１５−ＨＥＴＥ、１２−ＨＥＴＥ、９−ＨＯＴｒＥ、１３−ＨＯＴｒＥ、９，１０−ＤｉＨＯＭＥ、１２，１３−ＤｉＨＯＭＥ、１３−ＨｐＯＤＥ、１８−ＨＥＰＥ、１２−ＨＥＰＥ、８−ＨＤｏＨＥ、１０−ＨＤｏＨＥ、１６−ＨＤｏＨＥおよび２０−ＨＤｏＨＥについて、アレルギー性結膜炎モデルにおいて有意に産生量が高いこと、あるいは、生産量が高い傾向が観察された。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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【図１４】
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【図１５】
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【図１６】
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【図１７】
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【図１８】
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【図１９】
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【図２０】
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【図２１】
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【図２２】
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【図２３】
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【図２４】
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【図２５】
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【図２６】
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【図２７】
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【図２８】
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【図２９】
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【図３０】
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【図３１】
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【国際調査報告】
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