(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
（ａ）  １分子中に少なくとも２個のエチレン性不飽和結合を有する親水性熱硬化性樹脂、
（ｂ）  酸化剤と還元剤からなるレドックス系熱重合開始剤又はその一部、及び
（ｃ）  アルカリ金属イオン又は多価金属イオンとの接触によりゲル化する能力のある水溶性高分子多糖類
を含んでなる水性液状組成物を、アルカリ金属イオン又は多価金属イオンを含有する水性媒体中に滴下して該組成物を粒状にゲル化させるか又は該水性媒体の表面上に所定の時間連続的に注加して液滴を所望の粒径になるまで生長させた後、その液滴を沈降させてゲル化させ、次いで得られる粒状ゲルを熱重合して該粒状ゲル中の熱硬化性樹脂を硬化させることを特徴とする酵素又は微生物菌体固定化用粒状成形物の製造方法。
【請求項２】
レドックス系熱重合開始剤（ｂ）を構成する酸化剤又は還元剤の一方をアルカリ金属イオン又は多価金属イオンを含有する水性媒体中に含有させる請求項１に記載の方法。
【請求項３】
レドックス系熱重合開始剤（ｂ）が、ペルオキソ二硫酸塩類又は過酸化水素からなる酸化剤と、亜硫酸水素塩類又は二価の鉄塩からなる還元剤との組合せからなるものである請求項１又は２記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は酵素又は微生物菌体固定化用粒状成形物の製造方法に関する。
【０００２】
【従来の技術】
酵素又は微生物の固定化法としては、従来から、包括法、物理的吸着法、共有結合法等多くの方法が知られている。これらの方法によって得られる塊状又はシート状の固定化物は、微生物反応や酵素反応に使用する場合には、細かく切断したり磨砕したりした後カラムに充填するのが普通である。しかしその場合、固定化物は面同志で密着することが多く、微生物反応や酵素反応の効率が悪くなり、また、屡々チャネリング現象を起こしてカラムを閉塞する等の欠点がある。
【０００３】
このため、最近では、酵素又は微生物菌体を粒状成形物として固定化することによって、流動しやすく、カラムへの充填作業が容易で、粒子同志の接触面積も少なく、微生物反応や酵素反応の効率をアップさせることが提案されている（例えば、特公昭６２−１９８３７号公報参照）。しかしながら、酵素又は微生物菌体を固定化する従来の光硬化性樹脂を主成分とする粒状成形物は、硬化時に光を粒状成形物の内部まで均一に照射させる必要があるため、高価な光照射装置を必要とし、また、１台の照射装置で処理できる粒状物の量に限度があることから生産性が低下する等の問題がある。
【０００４】
さらに、平均粒径が５ｍｍ以上の大粒径の粒状成形物を製造しようとする場合には、粒状物の中心部が未硬化の液状状態で存在するという問題もある。
【０００５】
【発明が解決しようとする課題】
本発明の目的は、酵素又は微生物菌体を固定化する粒状成形物の生産性を向上させることができ且つ大粒径の粒状成形物であっても全体が完全に硬化した粒状成形物を製造することができる方法を提供することである。
【０００６】
【発明が解決する手段】
本発明者らは、上記した目的を達成するために鋭意検討を重ねた結果、水溶性高分子多糖類を用いた酵素又は微生物菌体固定化用粒状担体の構成材料として親水性熱硬化性樹脂を併用し、これにレドックス系熱重合開始剤を添加して加熱硬化させることにより、光硬化性樹脂を用いる場合に生ずる前記の如き問題が一挙に解決できることを見い出し、本発明を完成するに至った。
【０００７】
かくして、本発明に従えば、
（ａ）  １分子中に少なくとも２個のエチレン性不飽和結合を有する親水性熱硬化性樹脂、
（ｂ）  酸化剤と還元剤からなるレドックス系熱重合開始剤又はその一部、及び
（ｃ）  アルカリ金属イオン又は多価金属イオンとの接触によりゲル化する能力のある水溶性高分子多糖類
を含んでなる水性液状組成物を、アルカリ金属イオン又は多価金属イオンを含有する水性媒体中に滴下して該組成物を粒状にゲル化させるか又は該水性媒体の表面上に所定の時間、連続的に注加して液滴を所望の粒径になるまで生長させた後、その液滴を沈降させてゲル化させ、次いで得られる粒状ゲルを熱重合して該粒状ゲル中の熱硬化性樹脂を硬化させることを特徴とする酵素又は微生物菌体固定化用粒状成形物の製造方法が提供される。
【０００８】
以下、本発明についてさらに詳しく説明する。
【０００９】
（ａ）  熱硬化性樹脂
本発明において、酵素又は微生物菌体固定化用粒状担体の製造に用いられる１分子中に少なくても２個のエチレン性不飽和結合を有する熱硬化性樹脂としては、一般に、３００〜３００００、好ましくは５００〜２００００の範囲内の数平均分子量を有し、水性媒体中に均一に分散するに充分なイオン性又は非イオン性の親水性基、例えば水酸基、アミノ基、カルボキシル基、リン酸基、スルホン酸基、エーテル結合等を含むものが好適に使用される。そのような熱硬化性樹脂としては、包括固定化用の光硬化性樹脂として既に知られているものを同様に用いることができる（例えば、特公昭５５−４０号公報、特公昭５５−２０６７６号公報、特公昭６２−１９８３７号公報等参照）。代表的なものとしては以下に記載するものを挙げることができる。
【００１０】
（ｉ）  ポリアルキレングリコールの両末端に熱重合可能なエチレン性不飽和基を有する化合物：例えば、
▲１▼  分子量４００〜６０００のポリエチレングリコール１モルの両末端水酸基を（メタ）アクリル酸２モルでエステル化したポリエチレングリコールジ（メタ）アクリレート類。
【００１１】
▲２▼  分子量２００〜４０００のポリプロピレングリコール１モルの両末端水酸基を（メタ）アクリル酸２モルでエステル化したポリプロピレングリコールジ（メタ）アクリレート類。
【００１２】
▲３▼  分子量４００〜６０００のポリエチレングリコール１モルの両末端水酸基をトリレンジイソシアネート、キシリレンジイソシアネート、イソホロンジイソシアネート等のジイソシアネート化合物２モルでウレタン化し、次いで（メタ）アクリル酸２−ヒドロキシエチル等の不飽和モノヒドロキシエチル化合物２モルを付加した不飽和ポリエチレングリコールウレタン化物。
【００１３】
▲４▼  分子量２００〜４０００のポリプロピレングリコール１モルの両末端水酸基をトリレンジイソシアネート、キシリレンジイソシアネート、イソホロンジイソシアネート等のジイソシアネート化合物２モルでウレタン化し、次いで（メタ）アクリル酸２−ヒドロキシエチル等の不飽和モノヒドロキシ化合物２モルを付加した不飽和ポリプロピレングリコールウレタン化物、など。
【００１４】
（ii）  高酸価不飽和ポリエステル樹脂：
不飽和多価カルボン酸を含む多価カルボン酸成分と多価アルコールとのエステル化により得られる酸価が４０〜２００の不飽和ポリエステルの塩類など。
【００１５】
（iii） 高酸価不飽和エポキシ樹脂：
エポキシ樹脂と（メタ）アクリル酸などの不飽和カルボキシル化合物との付加反応物に残存するヒドロキシル基に酸無水物を付加して得られる酸価４０〜２００の不飽和エポキシ樹脂など。
【００１６】
（iv）  アニオン性不飽和アクリル樹脂：
（メタ）アクリル酸及び（メタ）アクリル酸エステルから選ばれる少なくとも２種の（メタ）アクリル系モノマーを共重合させて得られるカルボキシル基、リン酸基及び／又はスルホン酸基を含有する共重合体に熱重合可能なエチレン性不飽和基を導入した樹脂など。
【００１７】
（ｖ）  不飽和ポリアミド：
トリレンジイソシアネート、キシリレンジイソシアネートなどのジイソシアネートとアクリル酸２−ヒドロキシエチルなどのエチレン性不飽和ヒドロキシ化合物との付加物をゼラチンなどの水溶性ポリアミドに付加反応させた不飽和ポリアミドなど。
【００１８】
以上に例示した如き熱硬化性樹脂はそれぞれ単独で使用することができ、或いは２種もしくはそれ以上組み合わせて使用してもよい。
【００１９】
これらの熱硬化性樹脂のうち、本発明において特に有利に使用しうるものは、前記（ｉ）のポリアルキレングリコールの両末端に熱重合可能なエチレン性不飽和基を有する化合物であり、代表的なものとしては、関西ペイント株式会社からＥＮＴ−１０００、ＥＮＴ−２０００、ＥＮＴ−４０００、ＥＮＴＧ−２０００、ＥＮＴＧ−３８００等の商品名で販売されているものを挙げることができる。
（ｂ）  レドックス系熱重合開始剤
上記（ａ）に述べた熱硬化性樹脂の熱重合反応を促進する目的で、本発明に従う液状組成物にはレドックス系熱重合開始剤を含ませる。レドックス系熱重合開始剤としては、従来から公知のものを使用することができ、例えば、−１０℃〜５０℃程度の比較的低温でラジカル重合を行ない得る、酸化剤と還元剤の組み合わせからなる重合開始剤が好適に使用される。
【００２０】
酸化剤としては、例えば、過酸化ベンゾイル、メチルエチルケトンペルオキシド、ジクミルペルオキシド、ｔ−ブチルパーベンゾエート、クメンヒドロペルオキシドなどの有機過酸化物類；ペルオキソ二硫酸アンモニウム、ペルオキソ二硫酸カリウムなどのペルオキソ二硫酸塩類；過酸化水素等が挙げられる。また、還元剤としては、例えば、亜硫酸水素ナトリウムなどの亜硫酸水素塩類；硫酸第一鉄、塩化第一鉄などの二価の鉄塩類；Ｎ,Ｎ−ジメチルアニリン、フエニルモルホリンなどのアミン類；ナフテン酸コバルト、ナフテン酸マンガン、ナフテン酸銅などのナフテン酸金属塩類；等を挙げることができる。
【００２１】
これらのレドックス系熱重合開始剤のうち、本発明において特に有利に使用しうるものは、酸化剤がペルオキソ二硫酸塩類又は過酸化水素からなり、還元剤が亜硫酸水素塩類又は二価の鉄塩からなる組み合わせのものである。
【００２２】
（ｃ）  水溶性高分子多糖類
本発明において使用する水溶性高分子多糖類は、水溶性であり、かつ水性媒体中でアルカリ金属イオン又は多価金属イオンと接触したときに水に不溶性又は難溶性のゲルに変化する能力のある高分子多糖類であって、一般に約３０００〜約２００００００の範囲内の数平均分子量を有し、また、アルカリ金属イオン又は多価金属イオンと接触させる前の水溶性の状態で、通常少なくとも約１０ｇ／ｌ（２５℃）の溶解度を示すものが好適に使用される。
【００２３】
かかる特性をもつ水溶性高分子多糖類の具体例には、アルギン酸のアルカリ金属塩、カラギーナン等が包含される。
【００２４】
これら水溶性高分子多糖類は、水性媒体中に溶解した状態で、カラギーナンの場合は、カリウムイオン、ナトリウムイオン等のアルカリ金属イオンと接触することによって、また、アルギン酸のアルカリ金属塩の場合は、マグネシウムイオン、カルシウムイオン、ストロンチウムイオン、バリウムイオン等のアルカリ土類金属イオン；或いはアルミニウムイオン、セリウムイオン、ニッケルイオン等の他の多価金属イオン；のうちの少なくとも１種の多価金属イオンと接触することによってゲル化しうるものである。ゲル化が起るアルカリ金属イオン又は多価金属イオンの濃度は水溶性高分子多糖類の種類等により異なるが、一般には０.０１〜５ｍｏｌ／ｌの範囲内である。
【００２５】
上記（ａ）、（ｂ）及び（ｃ）の各成分の相互の使用割合は厳密に制限されるものではなく、各成分の種類等に応じて広範にわたって変えることができるが、一般には、（ａ）成分の親水性熱硬化性樹脂１００重量部に対し、（ｂ）及び（ｃ）成分はそれぞれ下記の割合で使用するのが適当である（カッコ内は好適範囲である）。
【００２６】
（ｂ）  レドックス系熱重合開始剤：０.１〜５重量部（０.３〜３重量部）
（ｃ）  水溶性高分子多糖類：０.５〜１５重量部（１〜８重量部）
また、上記（ｂ）のレドックス熱重合開始剤は酸化剤と還元剤とを組み合わせて使用されるが、両者の混合割合はモル比で一般に５：１〜１：５、好適には２.５：１〜１：２.５の範囲内とするのが適当である。
【００２７】
本発明によって製造される粒状成形物は、一般に水とほぼ同じ１.０〜１.０３の範囲内の比重を有しているが、流動床型の大型リアクターや複雑な構造のリアクター中で流動させて使用する場合、下方に移動しやすく均一に流動させることが困難な場合がある。このような場合には粒状成形物の比重を低くする必要があり、粒状成形物の組成物中に無機質系微小中空ビーズを添加することによって粒状成形物の比重を低くすることができる。
【００２８】
粒状成型物の比重調整のために使用される無機質系微小中空ビーズとしては、好ましくは珪素を主成分とし、殊に珪酸塩又はアルミナシリカを主成分とし、粒子内に中空体構造を有する比重が０.３〜０.７の範囲内にある完全閉鎖型微小中空粒子を使用することができる。具体的には中空ガラスビーズ及び中空セライトを挙げることができる。
【００２９】
微小中空ビーズは、一般に１〜２００μｍ、好適には３〜５０μｍの範囲内の平均粒子径を有することができ、また、中空の大きさは、所望される比重によっても異なるが、通常、ビーズの直径の 1/2 以下、好ましくは 1/3 以下であることが有利である。
【００３０】
中空の直径が 1/2 より大きいものは、得られる固定化用粒状成形物中で破壊したりして圧縮強度が低下するおそれがある。
【００３１】
微小中空ビーズは、前記（ａ）、（ｂ）及び（ｃ）の各成分からなる水性液状組成物中の（ａ）成分１００重量部に対し０.１〜１０重量部の割合で添加することによって、得られる粒状成形物の比重が０.９０〜１.００の範囲内になるように調整することができる。
【００３２】
他方、粒状成形物の比重を大きくしたい場合には、ガラスビーズ、微細硫酸バリウム等比重が１以上の無機質系粉粒体を（ａ）成分１００重量部に対して０.１〜３０重量部の割合で粒状成形物の組成物中に添加することによって、粒状組成物の比重が１〜１.２４の範囲内になるように比重調整することができる。
【００３３】
以上に述べた（ａ）〜（ｃ）の各成分及び必要に応じて添加される比重調整用の上記した添加剤は水性媒体中に溶解ないし分散させることにより、水性液状組成物が調製される。この液状組成物の固形分濃度は一般に５〜３０重量％の範囲内が適当である。なお、（ｂ）成分のレドックス系熱重合開始剤を構成する酸化剤又は還元剤のいずれか一方は、必要に応じて、アルカリ金属イオン又は多価金属イオンを含有する水性媒体中に、例えば０.０５〜５重量％、好ましくは０.１〜２重量％の濃度で含有させるようにしてもよい。
【００３４】
このようにして調製される水性液状組成物は、次いで、前述した如き種類のアルカリ金属イオン又は多価金属イオンを含有する水性媒体中に滴下するか、又は平均粒子径が５ｍｍ以上の粒状物を得る場合には、該水性媒体表面上に所定の時間連続的に注加して液滴を所望の粒径になるまで生長させた後、その液滴を沈降させることにより、該液状組成物が粒状でゲル化せしめられる。
【００３５】
アルカリ金属イオン又は多価金属イオンを含有する水性媒体中への水性液状組成物の滴下は、例えば、注射器の先端から該液状組成物を滴下する方法、遠心力を利用して該液状組成物を粒状に飛散させる方法、スプレーノズルの先端から該液状組成物を霧化して粒状とし滴下する方法などの方法により行なうことができる。また、水性液状組成物の水性媒体表面への注加は、所望の孔径のノズル口から細い液流として連続的に供給することによって行うことができる。液滴の大きさは、最終の粒状固定化物に望まれる粒径に応じて自由に変えることができるが、通常、滴下法では、直径が約０.１〜約５ｍｍ、好ましくは約０.５〜約４ｍｍの範囲内の液滴として滴下させるのが、また注加法では、約０.５〜３ｃｍの範囲内の液滴とするのが好都合である。
【００３６】
上記の如くして生成せしめた粒状ゲルは、そのまま水性媒体中に分散させた状態で、或いは水性媒体から分離した後、熱重合させることにより、該粒状ゲル中の親水性熱硬化性樹脂を硬化せしめる。これにより粒状ゲルは水に実質的に不溶性で機械的強度の大きい酵素又は微生物菌体固定化用粒状成形物が得ることができる。
【００３７】
上記の粒状ゲルは、レドックス系熱重合開始剤を含有しているため、室温で放置しておくだけでも熱重合が進行して必要な機械的強度が得られるまでに硬化されるが、必要に応じ、恒温雰囲気中で硬化させてもよい。恒温雰囲気の温度は一般に０℃〜５０℃、特に２０℃〜４０℃の範囲内が好適である。また、必要な機械的強度を得るためには、少なくとも熱硬化に１０分〜３０分の時間をかけることが望ましい。
【００３８】
このように熱重合による硬化処理が終った粒状ゲルは水又は緩衝水溶液で洗浄し、そのまゝあるいは凍結乾燥して保存することができる。
【００３９】
本発明によって製造される酵素又は微生物菌体固定化用粒状成形物は、表面の構造が特に微生物の付着に適しており、微生物を大量に付着させることができる。該担体に付着させうる微生物は、特に限定されず、嫌気性微生物、好気性微生物のどちらでも用いることができる。微生物の種類としては、アスパルギルス属、ペニシリウム属、フザリウム属などのカビ類、サッカロミセス属、ファフィア属、カンジダ属などの酵母類；ザイモモナス属、ニトロソモナス属、ニトロバクター属、パラコッカス属、ビブリオ属、メタノサルシナ属、バチルス属などの細菌類等を挙げることができる。
【００４０】
なお、上記した微生物や酵素は、熱重合温度が常温のような低温度であれば、予め（ａ）、（ｂ）及び（ｃ）の各成分からなる水性液状物に混合しておいて包括固定化してもよい。
【００４１】
かくして、本発明の固定化用粒状成形物の製造方法によれば、従来の光硬化系の粒状固定化物と同等の性能のものが、平均粒径が０.１ｍｍ〜３０ｍｍの範囲でより生産性を向上させて得ることができる。しかも、本発明の方法により提供される粒状成形物は、水中における流動性に優れているため、流動床型のバイオリアクターまたは攪拌型の発酵槽等に使用するのに最も適しているが、固定床型のバイオリアクター、発酵槽等に応用することも可能である。
【００４２】
【実施例】
次に実施例により本発明をさらに具体的に説明する。
【００４３】
実施例１
数平均分子量約４０００のポリエチレングリコール２０００ｇとイソホロンジイソシアネート１モル（２２２ｇ）とを反応容器に入れ、８０℃で２時間反応させた。さらにアクリル酸２−ヒドロキシエチル１モル（１１６ｇ）とハイドロキノン１ｇとを反応容器に入れ、空気を吹き込みながら８０℃で３時間反応させ、１分子の両末端にエチレン性不飽和結合を有する親水性熱硬化性樹脂を得た。
【００４４】
上記熱硬化性樹脂１００重量部と、ペルオキソ二硫酸アンモニウム１重量部、亜硫酸水素ナトリウム無水塩１重量部、２％アルギン酸ナトリウム水溶液１００重量部及び蒸留水１００重量部をよく混合して得られる水性液状組成物を、５％塩化カルシウム水溶液中に、注射器の先端から液面高さ約１０ｃｍより滴下したところ、粒径約２ｍｍの粒状物が得られた。この粒状物をそのまま３０℃で３０分間放置して、比重１.０３及び圧縮強度２０ｋｇ／ｃｍ2の固定化用粒状成形物を得た。
【００４５】
実施例２
実施例１で調製した親水性熱硬化性樹脂１００重量部、ペルオキソ二硫酸アンモニウム１重量部、硫酸第一鉄０.７重量部、２％アルギン酸ナトリウム水溶液１００重量部及び蒸留水１００重量部をよく混合して得られる水性液状組成物を、５％塩化カルシウム水溶液中に、注射器の先端から液面高さ約１０ｃｍより滴下したところ、粒径約２ｍｍの粒状物が得られた。この粒状物をそのまま３０℃で３０分間放置して、比重１.０２及び圧縮強度２０ｋｇ／ｃｍ2の固定化用粒状成形物を得た。
【００４６】
実施例３
実施例１で調製した親水性熱硬化性樹脂１００重量部、過酸化ベンゾイル１重量部、Ｎ,Ｎ−ジメチルアニリン０.５重量部、２％アルギン酸ナトリウム水溶液１００重量部及び蒸留水１００重量部をよく混合して得られる水性液状組成物を、５％塩化カルシウム水溶液中に、注射器の先端から液面高さ約１０ｃｍより滴下したところ、粒径約２ｍｍの粒状物が得られた。この粒状物をそのまま３０℃で３０分間放置して、比重１.０４及び圧縮強度２０ｋｇ／ｃｍ2の固定化用粒状成形物を得た。
【００４７】
実施例４
実施例１で調製した親水性熱硬化性樹脂１００重量部、硫酸第一鉄０.７重量部、２％アルギン酸ナトリウム水溶液１００重量部及び蒸留水１００重量部をよく混合して得られる水性液状組成物を、５％塩化カルシウム水溶液（０.５％のペルオキソ二硫酸アンモニウムを含む）中に、注射器の先端から液面高さ約１０ｃｍより滴下したところ、粒径約２ｍｍの粒状物が得られた。この粒状物をそのまま３０℃で３０分間放置して、比重１.０１及び圧縮強度２０ｋｇ／ｃｍ2の固定化用粒状成形物を得た。
【００４８】
実施例５
実施例１で調製した熱硬化性樹脂１００重量部に蒸留水１００重量部を加えてから約５０℃に加温してよく混合して均一な樹脂水溶液とした。この樹脂混合液２００重量部にペルオキソ二硫酸アンモニウム１重量部、亜硫酸水素ナトリウム無水塩１重量部及び２％アルギン酸ナトリウム水溶液１００重量部をよく混合して得られる水性液状組成物を、ペリスターポンプを用いて５％塩化カルシウム水溶液表面に、１ｍｌ／秒の流速で３秒間連続供給した。供給された該組成物は水溶液中に自然沈降し、粒径約１０ｍｍの粒状物が得られた。この粒状物をそのまま３０℃で３０分間放置して、比重１.０３及び圧縮強度３０ｋｇ／ｃｍ2の固定化用粒状成形物を得た。
【００４９】
実施例６
実施例４で調製した熱硬化性樹脂水溶液２００重量部にペルオキソ二硫酸アンモニウム１重量部、亜硫酸水素ナトリウム無水塩１重量部、３％ｋ−カナギーナン水溶液７５重量部及び２％グリコースイソメラーゼ菌体酵素液（重炭酸ナトリウム緩衝液ｐＨ８）２５重量部を加えて均一な混合液を調製した。この均一な混合液を注射器の先端から５％塩化カリウム水溶液中に液面より約２０ｃｍの高さの位置から滴下したところ、粒径約１.５ｍｍの粒状物が得られた。この粒状物をそのまま３０℃で３０分間放置して、比重１.０１及び圧縮強度３０ｋｇ／ｃｍ2の固定化用粒状成形物を得た。
【００５０】
実施例７
重合度が５００のポリビニルアルコール５００ｇ、Ｎ−メチロールアクリルアミドル１モル（１０１ｇ）、ハイドロキノン０.５ｇ及び脱イオン水１８０３ｇを反応容器に入れ、７０℃に７時間保って付加反応を行い、親水性熱硬化性樹脂の２５％水溶液を得た。この熱硬化性樹脂水溶液４００重量部にペルオキソ二硫酸アンモニウム１重量部、亜硫酸水素ナトリウム無水塩１重量部、２％アルギン酸ナトリウム水溶液１００重量部及び平均粒子径７５μｍの中空アルミナシリカ（日本フエライト社製商品名、Filite ３００／７、真比重０.７）５重量部をよく混合して得られる水性液状組成物を、５％塩化カルシウム水溶液中に、注射器の先端から液面高さ約１０ｃｍより滴下したところ、粒径２ｍｍの粒状物が得られた。この粒状物をそのまま３０℃で３０分間放置して、比重０.９７及び圧縮強度１０ｋｇ／ｃｍ2の固定化用粒状成形物を得た。
【００５１】
以上、実施例１〜５及び実施例７で得られた固定化用粒状成形物を、それぞれ別々に５００ｍＬの三角フラスコに取り、ついでそれぞれにＧＹ−１０培地（酵母エキス１ｇ／Ｌ、グルコース１００ｇ／Ｌからなる）を１００ｍＬ加えた。それに２％の濃度でザイモモナス・モビリス(Zymomonas mobilis)ＩＦＯ１３７５６を加え、３０℃で２４時間静置賦活培養を行った。
【００５２】
賦活後、それぞれの固定化用粒状成形物の表面を蒸留水で洗浄した後、賦活発酵液を新しい培地と交換し、２４時間静置培養を行ない、エタノール濃度を測定した。その結果以下に示す。
【００５３】
粒状成形物 エタノール濃度
実施例１                ７.５％
実施例２                ７.１％
実施例３                ６.７％
実施例４                ７.６％
実施例５                ６.６％
実施例７                ６.４％
【００５４】
【発明の効果】
本発明の酵素又は微生物菌体固定化用粒状成形物の製造方法によれば、上記実施例から明らかなように、従来の光硬化型の粒状物と同等の粒状成形物が得られ、しかも光硬化型の樹脂を用いる場合のように光照射装置を全く必要とせず生産性が高く、粒状成形物の製造コストを大きく下げることができる。