(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
補骨脂及び／又は補骨脂から分離される成分である式１記載のバクチオール（bakuchiol）を有効成分として含有するレジオネラ菌及び／又はＭＲＳＡ抑制用組成物。
【化１】
0003840868.tif 000008
【請求項２】
補骨脂が補骨脂抽出物である請求項１記載のレジオネラ菌及び／又はＭＲＳＡ抑制用組成物。
【請求項３】
補骨脂及び／又はバクチオールを含有することを特徴とするレジオネラ菌及び／又はＭＲＳＡ抑制用浴湯または循環水添加剤組成物。
【請求項４】
補骨脂が補骨脂抽出物である請求項３記載のレジオネラ菌及び／又はＭＲＳＡ抑制用浴湯または循環水添加剤組成物。
【請求項５】
補骨脂及び／又はバクチオールを含有することを特徴とするレジオネラ菌及び／又はＭＲＳＡ抑制用洗浄剤組成物。
【請求項６】
補骨脂が補骨脂抽出物である請求項５記載のレジオネラ菌及び／又はＭＲＳＡ抑制用洗浄剤組成物。
【請求項７】
補骨脂及び／又はバクチオールをレジオネラ菌及び／又はＭＲＳＡに作用させることを特徴とするレジオネラ菌及び／又はＭＲＳＡを抑制する方法。
【請求項８】
補骨脂及び／又はバクチオールを浴湯または循環水添加物に含有させることを特徴とするレジオネラ菌及び／又はＭＲＳＡを抑制する方法。
【請求項９】
補骨脂及び／又はバクチオールを洗浄剤に含有させることを特徴とするレジオネラ菌及び／又はＭＲＳＡを抑制する方法。
【請求項１０】
補骨脂が補骨脂抽出物である請求項７ないし９の何れかの項記載のレジオネラ菌及び／又はＭＲＳＡを抑制する方法。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は、漢方生薬の１種である補骨脂及び／又は補骨脂から分離される成分であるバクチオールを、レジオネラ菌又はＭＲＳＡが繁殖する可能性のある環境で使用する各種製品に配合することによる、それらの病原性細菌の繁殖を防止する補骨脂の使用方法及び、補骨脂とその抽出物およびバクチオールの、レジオネラ菌抑制作用および／又はＭＲＳＡ抑制作用に関し、更に、補骨脂及び／又はバクチオールを配合する組成物に関する。
【０００２】
【従来の技術】
レジオネラ菌は1976年フィラデルフィアで開催された在郷軍人会で集団発生した、在郷軍人病の病原菌として分離された。この菌が惹起するレジオネラ肺炎は適切な抗生剤の治療をしないと致死率15%以上という恐ろしいものであり、中には抗生物質（β-ラクタム系抗生物質の一部）に対する耐性を持つ菌も存在する事がわかっている。レジオネラ菌は水系、土壌など自然界に広く分布するブドウ糖非発酵グラム陰性桿菌であり、肺炎を主徴とする細菌感染症を惹起する。近年、レジオネラ菌が24時間風呂、温泉地の循環浴水等から多量に検出されることが報告され、浴湯での感染症としておそれられている。さらに、浴湯だけでなく、エアコンの循環水、空調用冷却塔、床暖房等の循環水、台所、トイレ、池や沼等において検出される可能性も指摘されており、実際にオランダで温噴水の循環系統で繁殖したものが飛沫で感染し、レジオネラ菌に集団感染したケースが報告されている。このようなレジオネラ症の流行に対し、厚生省は、平成11年4月1日施行の「感染症の予防及び感染症の患者に対する医療に関する法律施行規則（厚生省令第99号）」において、レジオネラ症を四類感染症に指定し、これらの患者を診断した医師に対し、患者の年齢・性別等を保健所経由で、都道府県知事に届け出る義務を課して、レジオネラ症の感染予防対策を進めている。又、それ以外にも、1994年3月に厚生省監修の「レジオネラ症防止指針」が（財）ビル管理センターにより発行されたり、1996年９月に厚生省生活衛生局長より各都道府県知事および政令市市長に対し冷却塔などの衛生確保に関する通知が発信され、レジオネラに関する知識の普及・啓発に努めるとともに、冷却塔の維持管理や給湯の維持管理、加湿設備の維持管理を適切に行なうよう病院等に指導することを求めている。これらの状況からもわかるとおり、レジオネラ菌による感染は、温泉や24時間風呂だけでなく、生活環境関連水系全般でのレジオネラ感染の可能性が苦慮されている。
【０００３】
また、ＭＲＳＡは、数年来特に病院における院内感染菌として問題視されている。ＭＲＳＡは、メチシリンに代表されるβ-ラクタム系などの各種抗生物質に耐性を示す黄色ブドウ球菌(メチシリン耐性黄色ブドウ球菌,methicillin-resistant Staphylococcus aureus,MRSA)であり、現在、世界中に蔓延し、大きな医療問題にまで発展している。その理由として、ＭＲＳＡが、メチシリン、クロキサシリン、オキサシリン、ジクロキサシリンなどの耐性ブドウ球菌用ペニシリンに耐性を示すのみならず、第一、第二、第三世代と呼ばれるほとんどすべてのセファム系抗生物質にも耐性を示すことによる。ＭＲＳＡは健康な人は感染しないが、免疫力の弱った人や乳幼児や老人は感染しやすく、一度感染すると治療が非常に困難である。従って、多くの人が接触するような場所での除菌が重要視されている。
【０００４】
さらに、先に述べた場所は、人の生活環境に密着しており、抗菌剤として使用するためには、まず人体および環境等への安全性を有しており、さらに継続的に使用した時にもその安全性が検証されたものでなければ、実用に供することが出来ない。従って、これらの菌に対して強い抗菌作用を有し、かつ、人体または環境等にやさしい抗菌剤の開発が求められている。
【０００５】
従来、レジオネラ菌またはＭＲＳＡに対する抗菌作用を有する様々なものが報告されているが、生活環境の周辺に存在する水系で実際に使用することが可能な抗菌性および安全性を持った抗菌剤の報告はまれである。例えば、抗菌効果をうたった入浴剤は数種類市場に存在するが、特にレジオネラ菌またはＭＲＳＡに対する抗菌作用を有したものは存在しない。
【０００６】
【発明が解決しようとする課題】
レジオネラ菌には抗生物質又は高濃度の塩素が有効であると言われている。しかし、抗生物質は日常的に使用することは耐性菌の出現や副作用の点で好ましくない。又、生活環境周辺の水系には多量の水が存在するため、これらの場所で抗生物質を使用するためには、大量に使用する必要があり、環境および人体への悪影響も予想され、さらにコスト的にも高いものとなる。それに対し、水道水の消毒には塩素が用いられているが、塩素は人体にも好ましいものではなく、さらに配管等の腐蝕も問題となる。従って、抗生物質又は高濃度の塩素を生活環境周辺の水系で使用することは問題がある。
【０００７】
さらに、ＭＲＳＡは病院の院内感染が問題となっているものであり、抗生物質では効果が得られない場合がある。
【０００８】
従って、抗生物質等の既存の抗菌剤を、レジオネラ菌抑制またはＭＲＳＡ抑制の目的で、生活環境周辺の水系で使用したとしても問題は解決せず、さらに使用すること自体困難である。このような状況にあってレジオネラ菌とＭＲＳＡの生活環境周辺の水系での感染を予防することが望まれており、日常的に使用しても副作用がなく、大量使用が可能である抗菌剤および抗菌活性を有する組成物が望まれている。
【０００９】
一方、生薬抽出物の中には、種々の菌に対する抗菌効果を有するものが存在することが報告されており、ＭＲＳＡまたはレジオネラ菌に対する抗菌作用が報告されたものある。例えば、生薬抽出物中に、抗レジオネラ作用を有するもの（特許公開平成１１年第４３４４２号）、抗ＭＲＳＡ作用をもつもの（特許公開平成６年第３１２９３３号）が報告されているが、抗菌効果を発現させるためにはある程度の配合量を必要としており、不充分であった。
【００１０】
そこで本発明者らは、人体又は環境等への安全性が高い各種生薬およびその抽出物並びに生薬から分離精製した成分について、ＭＲＳＡとレジオネラ菌に対して抗菌効果を有するかどうかのスクリーニングを行った。その結果、生薬補骨脂（オランダビユ [Psoralea corlifolia]の種実）においてレジオネラ菌およびＭＲＳＡに対する抗菌効果が認められることを見いだし、本発明を完成するに至ったものである。
【００１１】
本発明にかかる抗レジオネラ菌および／または抗ＭＲＳＡ配合組成物は生活環境水系で使用することにより、その抗菌作用は低濃度においても充分な抗菌作用を有することが必要である。例えば、浴湯添加剤や、種々の循環水の抗菌剤では、多量の水の存在下で使用するものであり、浴室又はトイレで使用する製品は、これら抗菌剤を大量に配合することは、製品成型のし易さ、コスト面等において問題となる。
【００１２】
【課題を解決するための手段】
従来の抗菌効果を有する生薬では、これらの用途において充分使用可能な濃度範囲で抗レジオネラ菌および／または抗ＭＲＳＡ効果を有するものはほとんど見いだされていなかったが、本発明の補骨脂及び／又はバクチオールは、レジオネラ菌およびＭＲＳＡに対し2μg/mLまたは4μg/mLといった低濃度で菌を死滅させる効果が認められ、これは、現実的に、浴湯添加剤その他の本願記載の使用方法において使用する場合に、実際に配合可能な量の範囲内であり、実用化が可能である。
【００１３】
本発明の補骨脂及び／又はバクチオールは、特に浴湯添加剤として配合可能な量において、浴槽と同じ温湿度条件で充分に抗菌作用を発揮する事が判明しており、浴槽および皮膚に対して優れた清浄作用を持つものである。本発明の補骨脂及び／又はバクチオールは、抗菌剤として単独で用いられるばかりでなく浴湯および循環水添加剤、洗浄剤等に配合することが出来る。浴湯添加剤としては、浴用剤、浴湯清浄剤などが挙げられ、循環水添加剤としては、噴水用、冷却水用などが挙げられ、洗浄剤としては、身体用、頭髪用、洗顔用、浴槽用、浴室用、食器用、調理器具（まな板など）用、手洗い用、洗濯槽用、床洗い用、トイレ用などが挙げられる。
【００１４】
さらに本発明の浴湯添加剤には、通常配合される成分を、目的とする効能、効果に応じて適宜選択して配合すればよい。使用できる成分を以下に示す。
【００１５】
無機塩類；
塩化ナトリウム、硫酸ナトリウム、硝酸カリウム、硝酸ナトリウム、硝酸カルシウム、硫酸アルミニウム、ポリリン酸ナトリウム、塩化アンモニウム、硫酸鉄、リン酸ナトリウム、硫酸マグネシウム、チオ硫酸ナトリウム、炭酸水素ナトリウム、セスキ炭酸ナトリウム、硫化ナトリウム、ホウ砂、酸化カルシウム、炭酸マグネシウム、塩化カリウム、臭化カリウム、次亜硫酸ナトリウム等
【００１６】
無機酸類；
ホウ酸、メタケイ酸、無水ケイ酸等
【００１７】
有機酸類；
安息香酸、クエン酸、フマル酸、酒石酸、ピロリドンカルボン酸、サリチル酸等
【００１８】
生薬、ハーブ類；
ソウジュツ、ビャクジュツ、カノコソウ、ケイガイ、コウボク、センキュウ、トウキ、ショウキョウ末、ニンジン、ケイヒ、シャクヤク、ハッカ葉、オウゴン、サンシシ、ブクリョウ、ドクカツ、ショウブ、ガイヨウ、マツブサ、ビャクシ、ジュウヤク、樟脳、サフラン、オウバク、チンピ、ウイキョウ、カン皮末、カミツレ、メリッサ、ローズマリー、マロニエ、アルニカ等
【００１９】
油脂類；
ヌカ油、米ヌカエキス、オリーブ油、大豆油、流動パラフィン、白色パラフィン、ローズヒップオイル等
【００２０】
香料類；
天然香料
ラベンダー油、ジャスミン油、レモン油、ローズ油、オレンジ油、パイン油、テレビン油、ベルガモット油、菖蒲油等
合成香料
ゲラニオール、シトロネロール、フェニルエチルアルコール、ベンジルアセテート等
【００２１】
色素類；
赤色２号、黄色４号、緑色４号、青色１号、赤色２１３号、橙色２０５号、黄色２０２号の（１）、緑色２０１号、緑色２０４号、青色２０１号等の厚生省令タール色素別表ＩおよびＩＩの色素、クロロフィル、リボフラビン、アンナット、カンタキサンチン、クロシン、コチニール、べにばな、アントラキノン等の食品添加剤として認められる天然色素
【００２２】
多価アルコール類；
グリセリン、プロピレングリコール、ソルビトール等
【００２３】
界面活性剤類；
ラウリル硫酸ナトリウム、ポリオキシエチレンラウリルエーテル硫酸ナトリウム、ポリオキシエチレンアルキルエーテル硫酸塩、ラウリン酸ジエタノールアミド、ポリエチレングリコールモノステアレート等
【００２４】
その他
イオウ、鉱砂、湯の花、カゼイン、中性白土、サリチル酸ナトリウム、カルボキシセルロースナトリウム、卵黄末、いり糖、雲母末、脱脂粉乳、デキストリン、ポリビニルピロリドン等
【００２５】
さらに、本発明の洗浄剤では、通常洗浄剤に配合される成分を、目的とする効能、効果に応じて適宜選択して配合すればよい。使用できる成分を以下に示す。
【００２６】
アニオン界面活性剤
（ａ）スルホネート系
直鎖または分岐アルキル（Ｃ８〜22）ベンゼンスルホン酸塩、長鎖アルキル（Ｃ８〜22）スルホン酸塩等
（ｂ）サルフェート系
長鎖モノアルキル（Ｃ８〜22）硫酸エステル塩、ポリオキシエチレン（１〜６モル）長鎖アルキル（Ｃ８〜22）エーテル硫酸エステル塩、ポリオキシエチレン（１〜６モル）アルキル（Ｃ８〜22）フェニルエーテル硫酸エステル塩等
（ｃ）ホスフェート系
長鎖モノアルキル、ジアルキルまたはセスキアルキル（Ｃ８〜22）リン酸塩、ポリオキシエチレン（１〜６モル）モノアルキル、ジアルキルまたはセスアルキル（Ｃ８〜22）リン酸塩等
（ｄ）カルボキシレート系
炭素数６〜24の飽和および／または炭素数６〜24不飽和脂肪酸塩等
上記各アニオン界面活性剤の対イオンは、アルカリ金属イオン、アルカリ土類イオン、アルカノールアミンイオン、アンモニウムイオン等である。
カチオン界面活性剤
アルキルトリメチルアンモニウムクロリド、ジアルキルジメチルアンモニウムクロリド、アルキルベンジルアンモニウムクロリド等
ノニオン界面活性剤
ポリオキシエチレン（１〜20モル）長鎖アルキル（Ｃ８〜22）エーテル、ポリオキシエチレン（１〜20モル）アルキル（Ｃ８〜22）フェニルエーテル、ポリオキシエチレンポリオキシプロピレンブロックポリマー等
両性界面活性剤；
アルキルアミドベタイン型界面活性剤、イミダゾリン型界面活性剤等
非イオン界面活性剤；
脂肪酸アルカノールアマイド、ポリオキシエチレンアルキルエーテル、アルキルアミンオキシド等
【００２７】
油分；
スクワラン、ホホバ油、オリーブ油、高級アルコール、ラノリン等
水溶性高分子化合物（アニオン性、非イオン性、カチオン性、両性等）；キレート剤防腐剤；殺菌剤；ｐＨ調整剤；酸化防止剤；色素；香料；動植物由来の天然エキス等
【００２８】
本発明の補骨脂及び／又はバクチオールの使用方法では、補骨脂及び／又はバクチオールをポリマー等に練り込んだ後、成型することにより抗菌力を有する製品を製造すること、並びに給水器、空調機、加湿器等のフィルターをコーティングする事により除菌効果を持たせた製品を作ることもできる。
【００２９】
また、レジオネラ菌またはＭＲＳＡが繁殖可能な環境で使用される各種製品の具体的な例としては、24時間風呂や循環器付きの浴槽、浴室で使用される壁材、空調機、水が循環する装置（クーリングタワー、床暖房等）、便座、便器などのトイレ用品、ペット用品、洗濯槽、加湿器、給湯器、高分子吸収体含有製品、容器、給水器（冷却水、カップ式自販機等）、などが挙げられる。
【００３０】
本発明の補骨脂及び／又はバクチオールの使用方法および補骨脂及び／又はバクチオールを配合する組成物では、補骨脂及び／又はバクチオールの配合量は、浴用剤、浴湯清浄剤および添加剤等であれば浴湯等の水における濃度で、1
μg/mL以上特に好ましくは５μg/mL以上配合することが望ましい。ポリマー等に練り込んだ後、成型することにより抗菌力を有する製品（プラスチック製品、繊維、衣類等）に配合する場合等には、製品中の重量比で5%以上配合するとコスト的に合わなくなる為、０．００１〜５％配合することが好ましく、特に好ましくは０．０１〜１％配合することが望ましい。
【００３１】
なお、本発明にかかる補骨脂は、原体そのものを配合してもよく、あるいは生薬を通常行なわれる方法で粉末化または細片化したものを用いてもよい。さらに、補骨脂を水あるいはアルコール、アセトン等の有機溶媒またはそれらの混合液を用いて、生薬を通常行なわれる方法で抽出することにより得られる補骨脂抽出物を使用してもよく、その抽出物から通常行なわれる方法で分離精製して得られるバクチオールを配合してもよい。補骨脂抽出物は、抽出液そのものでも効果があるが、抽出液を、減圧、加温等の通常行なわれる方法により濃縮したもの、あるいは乾燥させた粉末、さらにそれらを固形物としたものであってもよくその状態は限定されない。
【００３２】
【発明の実施の形態】
前記の補骨脂及び／又はバクチオールを、レジオネラ菌及び／又はＭＲＳＡ抑制剤として使用する方法を示す。
【００３３】
（1）補骨脂抽出物の作製
常法で粉砕した補骨脂に、その量の１０倍量の５０％エタノール水溶液を加えて、２時間加熱還流抽出を行なった。得られた抽出液を、濾過し、濾液中のエタノールを減圧留去後凍結乾燥し、補骨脂抽出物を作製した。
【００３４】
(2)バクチオールの精製
補骨脂を５０％エタノール水溶液で加熱還流抽出した補骨脂抽出物５．０ｇを、展開溶媒として、ベンゼン：酢酸エチル＝９５：５を用いて、シリカゲルカラムクロマトグラフィー（直径6cm、長さ60cm）を行ない、溶出分画を得た。各溶出分画について順に薄層クロマトグラフィー（展開溶媒：ベンゼン：酢酸エチル＝９５：５）を行ない、最初に単一スポット（Rf=0.46）が現れた溶出分画から同一スポットのみが現れている分画を合わせて減圧留去し、バクチオールを０．４２ｇ得た。
【００３５】
【試験例】
次に本発明の効果を示すため、抗菌試験例を示す。
レジオネラ菌およびにＭＲＳＡに対する抗菌活性の測定試験
１．レジオネラ菌への抗菌活性測定試験
レジオネラ菌に対する抗菌活性は、日本化学療法学会の定めた方法に準じて、106CFU/mLに菌液を調製後、液体希釈法によって測定し、最小発育阻止濃度（MIC;Minimum Inhibitory Concentration）を調査した。先の補骨脂抽出物を水に溶解し、希釈した抽出物液にレジオネラ菌液を混合し、その後培地に塗布した。培地にはWYOα寒天培地（栄研化学社）を用いて好気的条件下37℃で、５日間培養し抗菌活性を確認した。その結果、補骨脂抽出物のレジオネラ菌に対する最小発育阻止濃度は0.032mg/mLであった。
【００３６】
２．ＭＲＳＡへの抗菌活性測定試験
ＭＲＳＡに対する抗菌活性は、日本化学療法学会の定めた方法に準じて、106CFU/mLに菌液を調製後、寒天平板希釈法によって測定し、最小発育阻止濃度（MIC;Minimum Inhibitory Concentration）を調査した。先の補骨脂抽出物を培地に溶解し、培地としてTrypticase Soy Agar（Becton Dickinson社）を用いてＭＲＳＡ菌液を培地に塗布し、37℃で一晩培養後、菌の育成の有無で抗菌活性を確認した。その結果、補骨脂抽出物のＭＲＳＡに対する最小発育阻止濃度は0.040mg/mLであった。
【００３７】
入浴環境レベルでの抗菌活性試験
３．入浴条件でのレジオネラ菌に対する抗菌活性の測定試験
補骨脂抽出物を設定濃度で溶解し、滅菌した補骨脂抽出物水溶液を調製した。ここに菌の最終濃度が１×103CFU/mLとなるように菌浮遊液を加え、42℃の恒温槽で培養した。0,10,30,60,120分後、50μLずつ採取してＷＹＯα寒天培地（栄研化学）にコンラージ棒を用いて広げ、各時間における菌数を確認した。
測定の結果、補骨脂のレジオネラ菌に対する効果は、2μg/mLの濃度で２時間後に全ての菌を死滅させるものであった。さらに、1μg/mLの濃度でも菌数を約100分の1にする事が確認された。
上記の試験結果から、補骨脂抽出エキスはレジオネラ菌の発育を阻害することが可能であり、レジオネラ菌の感染源の除菌に補骨脂抽出物を用いることが有効であるといえる。
【００３８】
４．入浴条件でのＭＲＳＡに対する抗菌活性の測定試験
補骨脂抽出物を設定濃度で溶解し、滅菌した補骨脂抽出物水溶液を調製した。ここに菌の最終濃度が１×103CFU/mLとなるように菌浮遊液を加え、42℃の恒温槽で培養した。0,10,30,60,120分後、50μLずつを採取し、Trypticase Soy Agar（Becton dickinson社製）にコンラージ棒を用いて広げ、各時間における菌数を確認した。
その結果、補骨脂は4μg/mLの濃度で２時間後に全ての菌を死滅させるものであった。
上記の試験結果から、補骨脂抽出物はＭＲＳＡの発育を阻害することが可能であり、ＭＲＳＡの感染源の除菌に補骨脂抽出物を用いることが有効であるといえる。
【００３９】
次に、本発明にかかるレジオネラ菌抑制剤組成物として、各種洗浄剤、浴用剤、清浄剤を実施例として示す。ただし、本発明はこれら実施例に限定されるものではない。
【００４０】
【実施例】
0003840868.tif 000002
【００４１】
0003840868.tif 000003
【００４２】
0003840868.tif 000004
【００４３】
0003840868.tif 000005
【００４４】
0003840868.tif 000006
【００４５】
0003840868.tif 000007
【００４６】
【発明の効果】
本発明により、人体又は環境等への安全性が高く生活環境への適用が可能な、補骨脂及び／又はバクチオールを有効成分とする、安全なレジオネラ菌抑制方法及び／又はＭＲＳＡ抑制方法、レジオネラ菌抑制及び／又はＭＲＳＡ抑制剤、レジオネラ菌抑制剤及び／又はＭＲＳＡ抑制剤配合組成物が提供される。