(57)【要約】  ヒトミルクオリゴ糖（ＨＭＯｓ）の資化能が低いプロバイオティクスを、ＨＭＯｓ存在下にて増殖促進することを可能とする技術を提供すること。  ビフィドバクテリウム・ビフィダムに属する細菌と、ヒトミルクオリゴ糖の資化能が低い１種以上のプロバイオティクスと、ヒトミルクオリゴ糖と、を含有する栄養組成物を提供する。本技術に係る栄養組成物は、飲食品、医薬品、医薬部外品、飼料等に好適に用いることができる。【特許請求の範囲】
【請求項１】
ビフィドバクテリウム・ビフィダムに属する細菌と、
ヒトミルクオリゴ糖の資化能が低い１種以上のプロバイオティクスと、
ヒトミルクオリゴ糖と、
を含有する栄養組成物。
【請求項２】
前記ヒトミルクオリゴ糖が、２’−フコシルラクトース及び／又はラクト−Ｎ−ネオテトラオースである、請求項１記載の栄養組成物。
【請求項３】
前記プロバイオティクスが、ビフィドバクテリウム属細菌（ビフィドバクテリウム・ビフィダムに属する細菌を除く）及び／又は乳酸菌である、請求項１又は２に記載の栄養組成物。
【請求項４】
前記ビフィドバクテリウム属細菌（ビフィドバクテリウム・ビフィダムに属する細菌を除く）が、ビフィドバクテリウム・ロンガム・サブスピーシーズ・ロンガム、ビフィドバクテリウム・アドレセンティス、ビフィドバクテリウム・シュードカテニュラータム、ビフィドバクテリウム・アニマリス・サブスピーシーズ・ラクティス、ビフィドバクテリウム・ブレーベ、ビフィドバクテリウム・シュードロンガムから選択される１以上の細菌である、請求項３記載の栄養組成物。
【請求項５】
前記乳酸菌が、ラクトバチルス・パラカゼイ、ラクトバチルス・プランタラム、ラクトバチルス・アシドフィルス、ラクトバチルス・ラムノーサス、ラクトバチルス・ガセリから選択される１以上の細菌である、請求項３記載の栄養組成物。
【請求項６】
前記ビフィドバクテリウム・ビフィダムに属する細菌が、ビフィドバクテリウム・ビフィダムＡＴＣＣ２９５２１、ビフィドバクテリウム・ビフィダム（ＮＩＴＥ  ＢＰ−２４２９）、ビフィドバクテリウム・ビフィダム（ＮＩＴＥ  ＢＰ−１２５２）、ビフィドバクテリウム・ビフィダム（ＮＩＴＥ  ＢＰ−２４３１）、ビフィドバクテリウム・ビフィダム（ＮＩＴＥ  ＢＰ−０２６４８）、ビフィドバクテリウム・ビフィダム（ＮＩＴＥ  ＢＰ−０２４３２）、ビフィドバクテリウム・ビフィダム（ＮＩＴＥ  ＢＰ−０２４３３）、から選択される１以上の細菌である、請求項１から５のいずれか一項に記載の栄養組成物。
【請求項７】
請求項１から６のいずれか一項に記載の栄養組成物を含有する飲食品組成物。
【請求項８】
請求項１から６のいずれか一項に記載の栄養組成物を含有する調製粉乳。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本技術は、ヒトミルクオリゴ糖（以下、「ＨＭＯｓ」ともいう）の資化能が低いプロバイオティクスの増殖促進が可能な栄養組成物に関する。
【背景技術】
【０００２】
ビフィズス菌は、ヒトを含む哺乳類の腸管内常在菌であり、腸管内での病原性腸内細菌の増殖を阻害する作用があることが知られている。
一般に、健康な乳児の腸内フローラ（腸内菌叢）はビフィズス菌が優勢であるが、加齢とともに徐々に減少し、大腸菌やクロストリジウム属細菌などの腐敗菌が増加することにより、宿主（人）の健康に悪影響を及ぼす。このため、長く健康状態を維持するためには、ビフィズス菌が優勢な腸内フローラを維持することが重要である。【０００３】
ＨＭＯｓは母乳中に１０−２０ｇ／Ｌ含まれ、１３０種類以上のオリゴ糖の混合物と言われている。それらの構造は、１３種類のコア構造にフコース、シアル酸が付加した構造をとる。ヒトのミルクにおいてフコシル化された中性糖の割合が高く、代表的なのは２’−フコシルラクトース（以下、「２’−ＦＬ」ともいう）、ラクト−Ｎ−フコペンタオースＩ（以下、「ＬＮＦＰＩ」ともいう）、ラクト−Ｎ−ジフコヘキサオースＩ（以下、「ＬＮＤＦＰ  Ｉ」ともいう）およびラクト−Ｎ−テトラオース（以下、「ＬＮＴ」ともいう）で、これら４種類だけで全ヒトミルクオリゴ糖の１／３〜１／４を占めている。ラクト−Ｎ−ビオースを含むオリゴ糖をタイプＩ型、Ｎ−アセチルラクトサミン（Gal(β1-4)G1cNAc）を含むオリゴ糖をタイプＩＩ型というが，ヒトミルク中ではタイプＩ型のＬＮＴやＬＮＦＰ１がタイプＩＩ型のラクト−Ｎ−ネオテトラオース（以下、「ＬＮｎＴ」ともいう）やラクト−Ｎ−フコペンタオースＩＩＩよりも含有量が高い。タイプＩ型とタイプＩＩ型の共存、ならびにタイプＩ型の優先性は、他種ミルクオリゴ糖とは異なるヒトミルクオリゴ糖の際だった特徴である（非特許文献１及び２参照）。【０００４】
母乳に含まれるＨＭＯｓである２’−ＦＬおよびＬＮｎＴは、ビフィズス菌増殖活性を有し、ビフィズス菌に選択的に利用されることによりビフィズス菌の増殖因子として作用することが知られており、ビフィズス菌優勢な腸内フローラの形成に重要である。また、ＨＭＯｓは合成が可能で、工業的に利用できる状況にある（特許文献１参照）。【０００５】
ビフィズス菌は一部のＨＭＯｓをビフィズス菌に特異的なＧＮＢ／ＬＮＢ経路を利用して代謝している。この経路は乳児に良くみられる多くの種が持っており、成人の腸管でよく見られるビフィズス菌は持っていない。ＨＭＯｓを単独の炭素源として利用可能な菌種は乳児によく見られるビフィズス菌であるビフィドバクテリウム・ロンガム・サブスピーシーズ・ロンガム、ビフィドバクテリウム・ロンガム・サブスピーシーズ・インファンティス、ビフィドバクテリウム・ブレーベ、ビフィドバクテリウム・ビフィダムの４菌種のうち、ビフィドバクテリウム・ロンガム・サブスピーシーズ・インファンティスとビフィドバクテリウム・ビフィダムの２菌種が報告されている（非特許文献３参照）。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００６】
【特許文献１】ＷＯ２０１４／０８６３７３
【非特許文献】
【０００７】
【非特許文献１】Japanese Journal of Lactic Acid Bacteria Vol. 22, No. 1 2011
【非特許文献２】Milk Science Vol. 56，No. 4 2008
【非特許文献３】Milk Science Vol. 61，No.2 . 2012
【非特許文献４】THE JOURNAL OF BIOLOGICAL CHEMISTRY VOL. 286, NO. 40
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００８】
ＨＭＯｓを代謝するに当たり、前述の通り、ビフィズス菌の中でも、ＨＭＯｓの資化能がない又は低い菌も存在する一方で、ビフィドバクテリウム・ロンガム・サブスピーシーズ・インファンティスとビフィドバクテリウム・ビフィダムのように、ＨＭＯｓに資化性を有する菌も存在する。そして、ＨＭＯｓを代謝するに当たっては、例えば、ビフィドバクテリウム・ロンガム・サブスピーシーズ・インファンティスは、ＨＭＯｓを、菌体内に取り込んで利用する一方で、ビフィドバクテリウム・ビフィダムは、これらのオリゴ糖を菌体外酵素で分解することで菌体外に一時的に乳糖を蓄積する（非特許文献３及び４参照）。【０００９】
このように、細菌の中には、ＨＭＯｓの資化能がない又は低い菌も存在するが、そのような菌であっても、善玉菌として利用可能な細菌は数多く存在する。そのため、ヒトミルクオリゴ糖（以下、「ＨＭＯｓ」ともいう）の資化能がない又は低いプロバイオティクスであっても、ＨＭＯｓ存在下で増殖することができれば、栄養組成物として有用である。【００１０】
そこで、本技術では、ヒトミルクオリゴ糖（ＨＭＯｓ）の資化能が低いプロバイオティクスを、ＨＭＯｓ存在下にて増殖促進することを可能とする技術を提供することを主目的とする。
【課題を解決するための手段】
【００１１】
本発明者らは、前記課題を解決すべく、ビフィドバクテリウム・ビフィダムが、ＨＭＯｓを、菌体外酵素で分解することで菌体外に一時的に乳糖を蓄積することに着目した。そして、ＨＭＯｓの資化能が低いプロバイオティクスと、ビフィドバクテリウム・ビフィダムと、ＨＭＯｓとを、一緒に培養することで、ＨＭＯｓの資化能が低いプロバイオティクスの増殖が促進されることを見出した。【００１２】
即ち、本技術では、ビフィドバクテリウム・ビフィダムに属する細菌と、
ヒトミルクオリゴ糖の資化能が低い１種以上のプロバイオティクスと、ヒトミルクオリゴ糖と、を含有する栄養組成物を提供する。
本技術に係る栄養組成物において、前記ヒトミルクオリゴ糖としては、２’−フコシルラクトース及び／又はラクト−Ｎ−ネオテトラオースを用いることができる。
本技術に係る栄養組成物において、前記プロバイオティクスとしては、ビフィドバクテリウム属細菌（ビフィドバクテリウム・ビフィダムに属する細菌を除く）及び／又は乳酸菌を用いることができる。
この場合、前記ビフィドバクテリウム属細菌（ビフィドバクテリウム・ビフィダムに属する細菌を除く）としては、ビフィドバクテリウム・ロンガム・サブスピーシーズ・ロンガム、ビフィドバクテリウム・アドレセンティス、ビフィドバクテリウム・シュードカテニュラータム、ビフィドバクテリウム・アニマリス・サブスピーシーズ・ラクティス、ビフィドバクテリウム・ブレーベ、ビフィドバクテリウム・シュードロンガムから選択される１以上の細菌を用いることができる。
また、乳酸菌としては、ラクトバチルス・パラカゼイ、ラクトバチルス・プランタラム、ラクトバチルス・アシドフィルス、ラクトバチルス・ラムノーサス、ラクトバチルス・ガセリから選択される１以上の細菌を用いることができる。
本技術に係る栄養組成物において、前記ビフィドバクテリウム・ビフィダムに属する細菌としては、ビフィドバクテリウム・ビフィダムＡＴＣＣ２９５２１、ビフィドバクテリウム・ビフィダム（ＮＩＴＥ  ＢＰ−０２４２９）、ビフィドバクテリウム・ビフィダム（ＮＩＴＥ  ＢＰ−１２５２）、ビフィドバクテリウム・ビフィダム（ＮＩＴＥ  ＢＰ−０２４３１）、ビフィドバクテリウム・ビフィダム（ＮＩＴＥ  ＢＰ−０２６４８）、ビフィドバクテリウム・ビフィダム（ＮＩＴＥ  ＢＰ−０２４３２）、ビフィドバクテリウム・ビフィダム（ＮＩＴＥ  ＢＰ−０２４３３）、から選択される１以上の細菌を用いることができる。【００１３】
本技術に係る栄養組成物は、飲食品組成物や調製粉乳に用いることができる。
【発明の効果】
【００１４】
本技術によれば、ヒトミルクオリゴ糖（ＨＭＯｓ）の資化能が低いプロバイオティクスを、ＨＭＯｓ存在下にて増殖促進することが可能である。なお、ここに記載された効果は、必ずしも限定されるものではなく、本技術中に記載されたいずれかの効果であってもよい。
【発明を実施するための形態】
【００１５】
以下、本技術を実施するための好適な実施形態について説明する。なお、以下に説明する実施形態は、本開示の代表的な実施形態の一例を示したものであり、これにより本技術の範囲が狭く解釈されることはない。なお、本明細書において、数値範囲を「下限〜上限」で表現するものに関しては、上限は「以下」であっても「未満」であってもよく、下限は「以上」であっても「超」であってもよい。また、本明細書において百分率は特に断りのない限り質量による表示である。
【００１６】
１．栄養組成物
本技術に係る栄養組成物は、（１）ビフィドバクテリウム・ビフィダムに属する細菌と、（２）ヒトミルクオリゴ糖の資化能が低い１種以上のプロバイオティクスと、（３）ヒトミルクオリゴ糖と、を少なくとも含有する。以下、各含有成分について、詳細に説明する。
【００１７】
（１）ビフィドバクテリウム・ビフィダムに属する細菌
本技術で用いることができるビフィドバクテリウム・ビフィダムに属する細菌としては、本技術の効果を損なわない限り、公知又は未知のビフィドバクテリウム・ビフィダムに属する細菌を１種又は２種以上、自由に選択して用いることができる。具体的に挙げるとすれば、例えば、ビフィドバクテリウム・ビフィダムＡＴＣＣ２９５２１、ビフィドバクテリウム・ビフィダム（ＮＩＴＥ  ＢＰ−０２４２９）、ビフィドバクテリウム・ビフィダム（ＮＩＴＥ  ＢＰ−１２５２）、ビフィドバクテリウム・ビフィダム（ＮＩＴＥ  ＢＰ−０２４３１）、ビフィドバクテリウム・ビフィダム（ＮＩＴＥ  ＢＰ−０２６４８）、ビフィドバクテリウム・ビフィダム（ＮＩＴＥ  ＢＰ−０２４３２）、ビフィドバクテリウム・ビフィダム（ＮＩＴＥ  ＢＰ−０２４３３）ビフィドバクテリウム・ビフィダム（ＦＥＲＭ  ＢＰ−７９１）、ビフィドバクテリウム・ビフィダム（ＦＥＲＭ  Ｐ−１１７８８）、ビフィドバクテリウム・ビフィダム（ＦＥＲＭ  Ｐ−１１７９１）、ビフィドバクテリウム・ビフィダム（ＮＩＴＥ  ＢＰ−３１）、ビフィドバクテリウム・ビフィダムＧ９−１、ビフィドバクテリウム・ビフィダムＢＦ−１、ビフィドバクテリウム・ビフィダムＲｏｓｅｌｌ−７１、ビフィドバクテリウム・ビフィダム（ＮＣＤＯ  １４５３）等を挙げることができる。
【００１８】
ビフィドバクテリウム・ビフィダム  ＡＴＣＣ２９５２１は、アメリカン・タイプ・カルチャー・コレクション（住所：12301 Parklawn Drive, Rockville, Maryland 20852, United States of America）から入手することができる。
【００１９】
ビフィドバクテリウム・ビフィダム  （ＮＩＴＥ  ＢＰ−０２４２９）ビフィドバクテリウム・ビフィダム  （ＮＩＴＥ  ＢＰ−０２４３１）、ビフィドバクテリウム・ビフィダム（ＮＩＴＥ  ＢＰ−０２４３２）ビフィドバクテリウム・ビフィダム（ＮＩＴＥ  ＢＰ−０２４３３）は、２０１７年２月２１日に独立行政法人製品評価技術基盤機構（ＮＩＴＥ）  特許微生物寄託センター（〒２９２−０８１８  千葉県木更津市かずさ鎌足２−５−８  １２２号室）にブダペスト条約に基づく国際寄託がなされている。（受託番号はＮＩＴＥ  ＢＰ−０２４２９、ＮＩＴＥ  ＢＰ−０２４３１、ＮＩＴＥ  ＢＰ−０２４３２、ＮＩＴＥ  ＢＰ−０２４３３）
【００２０】
ビフィドバクテリウム・ビフィダム  （ＮＩＴＥ  ＢＰ−１２５２）は２０１２年２月２３日に独立行政法人製品評価技術基盤機構（ＮＩＴＥ）  特許微生物寄託センター（〒２９２−０８１８  千葉県木更津市かずさ鎌足２−５−８  １２２号室）にブダペスト条約に基づく国際寄託がなされている。（受託番号はＮＩＴＥ  ＢＰ−１２５２）
【００２１】
ビフィドバクテリウム・ビフィダム  （ＮＩＴＥ  ＢＰ−０２６４８）は２０１８年２月２６日に独立行政法人製品評価技術基盤機構（ＮＩＴＥ）  特許微生物寄託センター（〒２９２−０８１８  千葉県木更津市かずさ鎌足２−５−８  １２２号室）に寄託がなされている。（受託番号はＮＩＴＥ  ＢＰ−０２６４８）
【００２２】
なお、上記例示した菌株名で特定される菌株には、当該菌株名で所定の機関に寄託や登録がなされている株そのもの（以下、説明の便宜上、「寄託株」ともいう）に限られず、それと実質的に同等な株（「派生株」または「誘導株」ともいう）も包含される。すなわち、例えば、「ビフィドバクテリウム・ビフィダムＡＴＣＣ２９５２１」には、ビフィドバクテリウム・ビフィダムＡＴＣＣ２９５２１の寄託番号で上記寄託機関に寄託されている株そのものに限られず、それと実質的に同等な株も包含される。
上記寄託株と実質的に同等の株は、例えば、当該寄託株を親株とする派生株であってよい。派生株としては、寄託株から育種された株や寄託株から自然に生じた株が挙げられる。
【００２３】
実質的に同一の菌株、派生株は下記のような株が挙げられる。
（１）ＲＡＰＤ（Randomly Amplified Polymorphic DNA）法、ＰＦＧＥ（Pulsed-field gel electrophoresis）法により同一の菌株と判定される菌株（Probiotics in food/Health and nutritional properties and guidelines for evaluation 85 Page43に記載）
（２）当該寄託菌株由来の遺伝子のみ保有し、外来由来の遺伝子を持たず、ＤＮＡの同一性が９５％以上である菌株
（３）当該菌株から育種された株（遺伝子工学的改変、突然変異、自然突然変異を含み、同一の形質を有する株
【００２４】
これらのビフィドバクテリウム・ビフィダムに属する細菌は、ＨＭＯｓの代謝に際し、ＨＭＯｓを菌体外酵素で分解することで菌体外に一時的に乳糖を蓄積する。この蓄積された乳糖を、後述するヒトミルクオリゴ糖の資化能が低いプロバイオティクスが利用することによって、ヒトミルクオリゴ糖の資化能が低いプロバイオティクスを増殖させることができる。
【００２５】
（２）ヒトミルクオリゴ糖の資化能が低いプロバイオティクス
本技術で用いることができるヒトミルクオリゴ糖の資化能が低いプロバイオティクスとしては、本技術の効果を損なわない限り、公知又は未知のヒトミルクオリゴ糖の資化能が低いプロバイオティクスから１種又は２種以上の菌体を、自由に選択して用いることができる。
【００２６】
本発明において、「ヒトミルクオリゴ糖の資化能が低い」とは、グルコースや乳糖等、プロバイオティクスであるビフィズス菌、乳酸菌が一般的に資化する糖類を炭素源として含む培地で培養した際と比べて、ヒトミルクオリゴ糖を炭素源として含む培地で培養したときに、糖を資化する能力、代謝する能力、増殖する能力が低い菌を意味する。
例えば、ヒトミルクオリゴ糖の資化能は、細胞中に取り込まれるヒトミルクオリゴ糖の取り込み速度を指標に評価することが出来、培養開始時におけるヒトミルクオリゴ糖が経時的に減少しているかどうか測定することにより算出することが出来る。あるいは、ヒトミルクオリゴ糖のみを炭素源として含む培地で、微生物の濁度や比増殖速度を確認することにより確認出来る。
【００２７】
微生物の比増殖速度は単位時間あたりの細胞の増加として定義されるが、「ヒトミルクオリゴ糖の資化能が低い」場合、グルコースや乳糖を炭素源とする培地と比べて、ヒトミルクオリゴ糖を炭素源とした場合比増殖速度が８０％以下、好ましくは７０％以下、より好ましくは５０％以下、さらに好ましくは１０％以下に低下することを意味する。具体的には、例えば、本技術では、ヒトミルクオリゴ糖の資化能が低いプロバイオティクスとして、ビフィドバクテリウム属細菌（ビフィドバクテリウム・ビフィダムに属する細菌を除く）及び／又は乳酸菌が挙げられる。
【００２８】
本発明においては、ヒトミルクオリゴ糖非資化性のプロバイオティクス菌体を用いてもかまわない。ヒトミルクオリゴ糖非資化性のプロバイオティクス菌体とは、ヒトミルクオリゴ糖を全く利用することができない、あるいは代謝経路を一部欠損している、代謝された糖を体内に取り込むトランスポーターが存在しない菌体を意味する。
【００２９】
より具体的には、ビフィドバクテリウム属細菌（ビフィドバクテリウム・ビフィダムに属する細菌を除く）としては、ビフィドバクテリウム・ロンガム・サブスピーシーズ・ロンガム、ビフィドバクテリウム・アドレセンティス、ビフィドバクテリウム・シュードカテニュラータム、ビフィドバクテリウム・アニマリス・サブスピーシーズ・ラクティス、ビフィドバクテリウム・ブレーベ、ビフィドバクテリウム・シュードロンガム等を挙げることができる。
【００３０】
更に具体的には、ビフィドバクテリウム・ロンガム・サブスピーシーズ・ロンガムＡＴＣＣ１５７０７、ビフィドバクテリウム・ロンガム・サブスピーシーズ・ロンガムＢＢ５３６、ビフィドバクテリウム・アドレセンティスＡＴＣＣ１５７０３、ビフィドバクテリウム・シュードカテニュラータムＡＴＣＣ２７９１９、ビフィドバクテリウム・アニマリス・サブスピーシーズ・ラクティスＤＳＭ１０１４０、ビフィドバクテリウム・アニマリス・サブスピーシーズ・ラクティスＭＣＣ−５２５、ビフィドバクテリウム・ブレーベＡＴＣＣ１５７００、ビフィドバクテリウム・シュードロンガムＡＴＣＣ２５５２６、ビフィドバクテリウム・ロンガム（ＦＥＲＭ  Ｐ−１０６５７）、ビフィドバクテリウム・アニマリス・サブスピーシーズ・ラクティスＢｂ−１２  ＤＳＭ１５９５、ビフィドバクテリウム・アニマリス・サブスピーシーズ・ラクティスＧＣＬ２５０５、ビフィドバクテリウム・アニマリス・サブスピーシーズ・ラクティスＣＮＣＭＩ−２４９４、ビフィドバクテリウム・アニマリス・サブスピーシーズ・ラクティスＬＡＦＴＩ  Ｂ９４、ビフィドバクテリウム・アニマリス・サブスピーシーズ・ラクティス、ビフィドバクテリウム・ロンガムＲｏｓｅｌｌ−１７５、ビフィドバクテリウム・アニマリス・サブスピーシーズ・アニマリス、ビフィドバクテリウム・アニマリス・サブスピーシーズ・ラクティスＨＮ０１９等を挙げることができる。
【００３１】
また、乳酸菌としては、ラクトバチルス・パラカゼイ、ラクトバチルス・プランタラム、ラクトバチルス・アシドフィルス、ラクトバチルス・ラムノーサス、ラクトバチルス・ガセリ等を挙げることができる。
【００３２】
より具体的には、ラクトバチルス・パラカゼイＡＴＣＣ２５３０２、ラクトバチルス・プランタラムＡＴＣＣ１４９１７、ラクトバチルス・アシドフィルスＡＴＣＣ４３５６、ラクトバチルス・ラムノーサスＡＴＣＣ７４６９、ラクトバチルス・ガセリＡＴＣＣ３３３２３、ラクトバチルス・ガセリＦＥＲＭ  ＢＰ−１０９５３、ラクトバチルス・ガセリＦＥＲＭ  ＢＰ−６９９９、ラクトバチルス・ガセリ（ＮＩＴＥ  ＢＰ−２２４Ｒ）、ラクトバチルス・デルブリュッキー・サブスピーシーズ・ブルガリカス（ＦＥＲＭ  Ｐ−１７２２７）、ラクトバチルス・ラムノーサスＡＴＣＣ５３１０３、ラクトバチルス・ロイテリＤＳＭ１７９３８、バチルス・コアギュランスＧＢＩ−３０、ラクトバチルス・アシドフィルス、ラクトバチルス・アシドフィルスＬＡＦＴＩ  Ｌ１０、ラクトバチルス・カゼイＬＡＦＴＩ（登録商標）  Ｌ２６、ラクトバチルス・カゼイＬＡＦＴＩ（登録商標）  Ｌ２６、ラクトコッカス・ラクティス・サブスピーシーズ・ラクティスＲｏｓｅｌｌ−１０５８、ラクトバチルス・パラカゼイＮＣＣ２４６１、ラクトバチルス・ジョンソニーＮＣＣ５３３、ラクトバチルス・ラムノーサスＲｏｓｅｌｌ−１１、ラクトバチルス・アシドフィルスＲｏｓｅｌｌ−５２、ラクトバチルス・カゼイ・ラクトバチルス・カゼイ・シロタ株等を挙げることができる。
【００３３】
これらのヒトミルクオリゴ糖の資化能が低いプロバイオティクスは、ＨＭＯｓが前述したビフィドバクテリウム・ビフィダムに属する細菌によって代謝される際に生成する乳糖を利用することで、増殖することができる。より好ましくは、ビフィドバクテリウム・ビフィダムに属する細菌とともに培養することにより、プロバイオティクスの比増殖速度が上昇することが好ましい。例えば、グルコースや乳糖を炭素源とする培地と比べて、ヒトミルクオリゴ糖を炭素源とした場合比増殖速度が１０５％以上、好ましくは１１０％以上、より好ましくは１２０％以上に上昇することを意味する。
【００３４】
なお、本技術において、「プロバイオティクス」とは、ヒトの健康に有益な作用を示す、生きている細菌を意味する。
【００３５】
（３）ヒトミルクオリゴ糖（ＨＭＯｓ）
ＨＭＯｓとは、人乳に少量含まれている乳糖を除く三糖以上のオリゴ糖の総称である。哺乳動物の乳は、ラクト−Ｎ−テトラオース（ＬＮＴ）、ラクト−Ｎ−ネオテトラオース（ＬＮｎＴ）、ラクト−Ｎ−ヘキサオース（ＬＮＨ）、ラクト−Ｎ−ネオヘキサオース（ＬＮｎＨ）などの１２系列のコア骨格をもつ。これらの骨格にルイスａ，ｂ，ｘやα２−３／２−６Ｎ−アセチルノイラミン酸が付加されることにより、糖鎖には１００種類ものバリエーションが存在する。
【００３６】
本技術で用いることができるＨＭＯｓとしては、ビフィドバクテリウム・ビフィダムに属する細菌が利用可能であって、かつ、前記プロバイオティクスが利用できないオリゴ糖であれば、本技術の効果を損なわない限り、公知又は未知のＨＭＯｓを１種又は２種以上、自由に選択して用いることができる。具体的には、例えば、L-fucose、Lacto-N-fucopentaose I、Lacto-N-fucopentaose II、2'-Fucosyllactose、3'-Fucosyllactose、Lacto-N-fucopentaose III、3'-Fucosyllacto-N-hexaose、Lacto-N-difucohexaose I、Lacto-difucotetraose、Lacto-difucohexaose I、Lactodifucohexaose II、Lacto-N-tetraose、Difucosyl syalyllacto-N-hexaose、Syalyllacto-N-tetraose、Fucosylsyalyl lacto-N-hexaose I、3'-Fucosylsialyl lacto-N-tetraose(Fuc 1, 2 Gal, Fuc 1, 4 Gal NAC)、Lacto-N-neotetraose、3'-Sialyl-3-fucosyllactose、Disialomonofucosyllacto-N-neohexaose、Monofucosylmonosialyl lacto-N-octaose、Sialyllacto-N-fucohexaose II、Disialyllacto-N-fucopentaose II、Monofucosyldisialyllacto-N-tetraose、2'-Sialyllactose、2'-Sialyllactosamine、3'-Sialyllactose、3'-Sialyllactosamine、6'-Sialyllactose、6'-Sialyllactosamine、Sialyllacto-N-neotetraose c、Monosialyllacto-N-hexaose、Disialyllacto-N-hexaose I、Monosialyllacto-N-neohexaose I、Monosialyllacto-N-neohexaose II、Disialyllacto-N-neohexaose、Disialyllacto-N-tetraose、Disialyllacto-N-hexaose II、Sialyllacto-N-tetraose a、Disialyllacto-N-hexaose I、Sialyllacto-N-tetraose b、2'-Fucosyllacto-N-hexaose、3'-Fucosyllacto-N-neohexaose、2'-Fucosyl-N-acetylglucosamine、Lacto-N-fucopentaose V、 Lacto-N-hexaose、Para-lacto-N-hexaose、Lacto-N-neohexaose、Para-lacto-N-neohexaose、Monofucosyllacto-N-hexaose II、Isomeric fucosylated lacto-N-hexaose (1)、Isomeric fucosylated lacto-N-hexaose (3)、Isomeric fucosylated lacto-N-hexaose (2)、Difucosyl-para-lacto-N-neohexaose、Difucosyl-para-lacto-N-hexaose、2' 3'-Difucosyllacto-N-hexaose、Lacto-N-neoocataose、Para-lacto-N-octanose、Iso-lacto-N-octaose、Lacto-N-octaose、Monofucosyllacto-neoocataose、Monofucosyllacto-N-ocataose、Difucosyllacto-N-octaose I、Difucosyllacto-N-octaose II、Difucosyllacto-N-neoocataose II、Difucosyllacto-N-neoocataose I、Lacto-N-decaose、Trifucosyllacto-N-neooctaose、Trifucosyllacto-N-octaose、Trifucosyl-iso-lacto-N-octaose、Lacto-N-difuco-hexaose II、Sialyl-lacto-N-tetraose a、Sialyl-lacto-N-tetraose b、Sialyl-lacto-N-tetraose c、Sialyl-fucosyl-lacto-N-tetraose I、Sialyl-fucosyl-lacto-N-tetraose II、Disialyl-lacto-N-tetraose、Lacto-N-neotetraose等とこれらの組み合わせが挙げられる。
なかでも、２’−フコシルラクトース（以下、「２’−ＦＬ」ともいう）、ラクト−Ｎ−フコペンタオースＩ（以下、「ＬＮＦＰＩ」ともいう）、ラクト−Ｎ−ジフコヘキサオースＩ（以下、「ＬＮＤＦＰ  Ｉ」ともいう）およびラクト−Ｎ−ネオテトラオース（以下、「ＬＮｎＴ」ともいう）が利用できる。
【００３７】
２．本技術に係る栄養組成物の用途
本発明の栄養組成物を投与することにより、善玉菌に作用するプロバイオティクスの増殖促進効果が期待できる。即ちプロバイオティクスが腸内で増殖することにより、腸内細菌叢が改善される。腸内細菌叢が改善されることにより、腸内細菌叢に起因する疾患が改善または予防され、治療が可能になる。
腸内細菌叢に起因する疾患としては、炎症性大腸炎  潰瘍性大腸炎、過敏性大腸炎、大腸がん、糖尿病、動脈硬化等が挙げられる。
さらに、本発明の栄養組成物を投与することにより、免疫機能が増進される。免疫機能が増進することにより、花粉症、喘息、アトピー性皮膚炎等のアレルギーの予防または改善、治療が可能になる。
本技術に係る栄養組成物は、飲食品、医薬品、医薬部外品、飼料等に好適に用いることができる。
【００３８】
なお、本実施形態の用途は、治療目的使用であっても、非治療目的使用であってもよい。
「非治療目的」とは、医療行為、すなわち、治療による人体への処置行為を含まない概念である。例えば、健康増進、美容行為等が挙げられる。
「改善」とは、疾患、症状又は状態の好転；疾患、症状又は状態の悪化防止、遅延；疾患又は症状の進行の逆転、防止又は遅延をいう。
「予防」とは、適用対象における疾患若しくは症状の発症の防止や遅延、又は適用対象の疾患若しくは症状の危険性の低下をいう。
【００３９】
栄養組成物のそれぞれにおいて、プロバイオティクスは、投与量単位につき約１０３〜約１０１２ＣＦＵ／ｇで投与されることが好ましいが、これよりも高い数値でも許容される。プロバイオティクス組成物が成人のヒト（すなわち、１６歳を超えるヒト）に投与される場合、プロバイオティクスは、好ましくは少なくとも１０６ＣＦＵ／ｇ、より好ましくは１０８ＣＦＵ／ｇで投与されることが好ましい。プロバイオティクス組成物が小児（すなわち、１６歳未満のヒト）に投与される場合、プロバイオティクスは、好ましくは約１０６〜約１０８ＣＦＵ／ｇの範囲で投与されることが好ましい。なお、ＣＦＵはコロニー形成単位：colony forming unitを意味する。
【００４０】
本発明の投与対象は、乳幼児が好ましい。
乳幼児とは、乳児及び幼児を含み、さらに詳細には、乳児、幼児及び新生児を含み、さらに詳細には、乳児、幼児、新生児、未熟児、早産児及び低出生体重児を含む。本発明において、乳幼児の種には、特に断りがない限り、ヒトが含まれる。乳児とは、乳児期にある子供を指し、乳児期とは母乳などの乳を主な栄養源としている時期を意味し、ヒトの場合、通常では１歳未満が乳児期にあたる。幼児とは、一般には就学前までの時期にある子供を指す。新生児とは、新生児期にある子供を指し、新生児期とは出生後の間もない時期を意味し、ヒトの場合、通常では出生後から４週間以内が新生児期にあたる。
【００４１】
さらに本発明においては、ヒトミルクオリゴ糖に加えて、プレバイオティクスも併せて用いてもよい。プレバイオティクスとは、大腸内の特定の細菌の増殖および活性を選択的に変化させることより、宿主に有利な影響を与え、宿主の健康を改善する難消化性食品成分のことである。
プレバイオティクスは、本細菌又はその培養物とともに摂取させたときに本発明の効果をより発揮し得るものであれば特に制限されないが、例えば、ラクチュロース、ラフィノース、ガラクトオリゴ糖、フラクトオリゴ糖、大豆オリゴ糖、乳果オリゴ糖、キシロオリゴ糖、イソマルオリゴ糖、コーヒー豆マンノオリゴ糖、グルコン酸、ポリデキストロース、イヌリン等が好ましく、その中でも、ラクチュロース、ラフィノース、ガラクトオリゴ糖等がより好ましく、ラクチュロース、ラフィノース及びガラクトオリゴ糖がさらに好ましい。
【００４２】
＜飲食品＞
本技術に係る栄養組成物は、公知の飲食品に添加して調製することもできるし、飲食品の原料中に混合して新たな飲食品を製造することもできる。
【００４３】
本技術に係る栄養組成物を用いる飲食品は、液状、ペースト状、固体、粉末等の形態を問わず、錠菓、流動食等のほか、例えば、小麦粉製品、即席食品、農産加工品、水産加工品、畜産加工品、乳・乳製品、油脂類、基礎調味料、複合調味料・食品類、冷凍食品、菓子類、飲料、これら以外の市販品等が挙げられる。
【００４４】
前記小麦粉製品としては、例えば、パン、マカロニ、スパゲッティ、めん類、ケーキミックス、から揚げ粉、パン粉等が挙げられる。
前記即席食品類としては、例えば、即席めん、カップめん、レトルト・調理食品、調理缶詰め、電子レンジ食品、即席スープ・シチュー、即席みそ汁・吸い物、スープ缶詰め、フリーズ・ドライ食品、その他の即席食品等が挙げられる。
前記農産加工品としては、例えば、農産缶詰め、果実缶詰め、ジャム・マーマレード類、漬物、煮豆類、農産乾物類、シリアル（穀物加工品）等が挙げられる。
前記水産加工品としては、例えば、水産缶詰め、魚肉ハム・ソーセージ、水産練り製品、水産珍味類、つくだ煮類等が挙げられる。
前記畜産加工品としては、例えば、畜産缶詰め・ペースト類、畜肉ハム・ソーセージ等が挙げられる。
前記乳・乳製品としては、例えば、発酵乳、加工乳、乳飲料、ヨーグルト類、乳酸菌飲料類、チーズ、アイスクリーム類、調製粉乳類、クリーム、その他の乳製品等が挙げられる。
前記油脂類としては、例えば、バター、マーガリン類、植物油等が挙げられる。
前記基礎調味料としては、例えば、しょうゆ、みそ、ソース類、トマト加工調味料、みりん類、食酢類等が挙げられ、前記複合調味料・食品類として、調理ミックス、カレーの素類、たれ類、ドレッシング類、めんつゆ類、スパイス類、その他の複合調味料等が挙げられる。
前記冷凍食品としては、例えば、素材冷凍食品、半調理冷凍食品、調理済冷凍食品等が挙げられる。
前記菓子類としては、例えば、キャラメル、キャンディー、チューインガム、チョコレート、クッキー、ビスケット、ケーキ、パイ、スナック、クラッカー、和菓子、米菓子、豆菓子、デザート菓子、その他の菓子等が挙げられる。
前記飲料としては、例えば、炭酸飲料、天然果汁、果汁飲料、果汁入り清涼飲料、果肉飲料、果粒入り果実飲料、野菜系飲料、豆乳、豆乳飲料、コーヒー飲料、お茶飲料、粉末飲料、濃縮飲料、スポーツ飲料、栄養飲料、アルコール飲料、その他の嗜好飲料等が挙げられる。
上記以外の市販食品としては、例えば、ベビーフード、ふりかけ、お茶潰けのり等が挙げられる。
【００４５】
本技術に係る飲食品中のビフィドバクテリウム・ビフィダムに属する細菌の含有量は、本技術の効果を損なわない限り、自由に設定することができる。本技術では、特に、飲食品中のビフィドバクテリウム・ビフィダムに属する細菌の含有量を、飲食品の最終組成物に対し、１０３〜１０１２ＣＦＵ／ｍＬまたはｇに設定することができる。
【００４６】
本技術に係る飲食品中のヒトミルクオリゴ糖の資化能が低いプロバイオティクスの含有量は、本技術の効果を損なわない限り、自由に設定することができる。本技術では、特に、飲食品中のヒトミルクオリゴ糖の資化能が低いプロバイオティクスの含有量を、飲食品の最終組成物に対し、１０３〜１０１２ＣＦＵ／ｍＬまたはｇに設定することができる。
【００４７】
本技術に係る飲食品中のＨＭＯｓの含有量は、本技術の効果を損なわない限り、自由に設定することができる。本技術では、特に、飲食品中のＨＭＯｓの含有量を、飲食品の最終組成物に対し、０．３％〜５．０％に設定することができる。
【００４８】
〔機能性表示飲食品〕
また、本技術で定義される飲食品等は、特定の用途（特に保健の用途）や機能が表示された飲食品として提供・販売されることも可能である。
「表示」行為には、需要者に対して前記用途を知らしめるための全ての行為が含まれ、前記用途を想起・類推させうるような表現であれば、表示の目的、表示の内容、表示する対象物・媒体等の如何に拘わらず、全て本技術の「表示」行為に該当する。
【００４９】
また、「表示」は、需要者が上記用途を直接的に認識できるような表現により行われることが好ましい。具体的には、飲食品に係る商品又は商品の包装に前記用途を記載したものを譲渡し、引き渡し、譲渡若しくは引き渡しのために展示し、輸入する行為、商品に関する広告、価格表若しくは取引書類に上記用途を記載して展示し、若しくは頒布し、又はこれらを内容とする情報に上記用途を記載して電磁気的（インターネット等）方法により提供する行為等が挙げられる。
【００５０】
一方、表示内容としては、行政等によって認可された表示（例えば、行政が定める各種制度に基づいて認可を受け、そのような認可に基づいた態様で行う表示等）であることが好ましい。また、そのような表示内容を、包装、容器、カタログ、パンフレット、ＰＯＰ等の販売現場における宣伝材、その他の書類等へ付することが好ましい。
【００５１】
また、「表示」には、健康食品、機能性食品、病者用食品、経腸栄養食品、特別用途食品、保健機能食品、特定保健用食品、機能性表示食品、栄養機能食品、医薬用部外品等としての表示も挙げられる。この中でも特に、消費者庁によって認可される表示、例えば、特定保健用食品制度、機能性表示食品制度、これらに類似する制度にて認可される表示等が挙げられる。より具体的には、特定保健用食品としての表示、条件付き特定保健用食品としての表示、機能性表示食品としての表示、身体の構造や機能に影響を与える旨の表示、疾病リスク低減表示等を挙げることができる。この中でも典型的な例としては、健康増進法施行規則（平成１５年４月３０日日本国厚生労働省令第８６号）に定められた特定保健用食品としての表示（特に保健の用途の表示）、食品表示法（平成２５年法律第７０号）に定められた機能性表示食品としての表示及びこれらに類する表示である。
【００５２】
〔調製粉乳〕
本技術に係る栄養組成物は、飲食品の中でも特に、調製粉乳に好適に用いることができる。調製粉乳としては、乳児用調製粉乳、フォローアップ用調製粉乳、低出生体重児用調製粉乳、小児用調製粉乳、成人用調製粉乳、高齢者用調製粉乳、アレルギー用調製粉乳、乳糖不耐症用調製粉乳、先天代謝異常用調製粉乳等が挙げられる。特に乳児用調製粉乳、フォローアップ用調製粉乳、低出生体重児用調製粉乳、小児用調製粉乳に用いられることが好ましい。乳幼児用調製粉乳とは、０〜１２か月の乳児を対象とする乳児用調製粉乳、６〜９か月以降の乳児および年少幼児（３歳まで）を対象とするフォローアップミルク、出生時の体重が２５００ｇ未満の新生児（低出生体重児）を対象とする低出生体重児用調製粉乳、牛乳アレルギーや乳糖不耐症等の病的状態を有する児の治療に用いられる各種治療用ミルクなどを指す。さらに、該組成物を保健機能食品や病者用食品に適用することができる。保健機能食品制度は、内外の動向、従来からの特定保健用食品制度との整合性を踏まえて、通常の食品のみならず錠剤、カプセル等の形状をした食品を対象として設けられたもので、特定保健用食品（個別許可型）と栄養機能食品（規格基準型）の２種類の類型からなる。
【００５３】
本技術の栄養組成物を投与することにより、投与対象の腸内中にビフィドバクテリウム属細菌および／または乳酸菌が増殖する。これらのプロバイオティクスが腸内で増殖することにより、免疫力が向上し、さらに腸内フローラが改善する。特に乳幼児においては、本発明の栄養組成物を投与することにより、腸内のビフィズス菌が有効に増加し、腸内環境が整う。さらにビフィズス菌とともに悪玉菌や日和見菌を取り入れることにより免疫力が獲得でき、出来上がった腸内細菌フローラ等の腸内環境はそのまま大人になっても引き継がれる。
【００５４】
調製粉乳の製造方法は、本技術の効果を損なわない限り、公知の製造方法を１種又は２種以上自由に組み合わせて用いることができる。具体的には、例えば、原料乳に本技術に係る栄養組成物及び各種添加物が混合され、均質化、殺菌、濃縮、乾燥、造粒、篩別等の工程を経て製造することができる。
【００５５】
本技術の調製粉乳は、具体的には、例えば、以下の方法により製造できる。
【００５６】
すなわち、本技術は、ビフィドバクテリウム・ビフィダムに属する細菌及びヒトミルクオリゴ糖の資化能が低い１種以上のプロバイオティクスを含む菌体粉末と、ヒトミルクオリゴ糖を混合し、母乳成分増強用の粉乳を得る、母乳成分増強用粉乳の製造方法を提供する。
具体的には、下記工程（Ａ）〜（Ｃ）を含む、母乳成分増強用粉乳の製造方法を提供する：
（Ａ）乳成分を含有する培地で本発明のビフィドバクテリウム・ビフィダムに属する細菌、ヒトミルクオリゴ糖の資化能が低い１種以上のプロバイオティクスを培養し、培養物を得る工程；
（Ｂ）前記培養物を噴霧乾燥および／または凍結乾燥に供し、それぞれの菌体粉末を得る工程；
（Ｃ）前記菌体粉末とヒトミルクオリゴ糖を混合し、調製粉乳を得る工程。
【００５７】
また、本技術は、下記工程（Ａ）を含む、調製粉乳の製造方法を提供する：
（Ａ）ヒトミルクオリゴ、発明のビフィドバクテリウム・ビフィダムに属する細菌、ヒトミルクオリゴ糖の資化能が低い１種以上のプロバイオティクス、および乳成分を混合し、粉乳を得る工程。
【００５８】
また、本技術の食品組成物は、具体的には、例えば、乳幼児用サプリメントであってよい。乳幼児用サプリメントは、例えば、以下の方法により製造できる。
【００５９】
すなわち、本技術は、下記工程（Ａ）および（Ｂ）を含む、母乳成分増強用サプリメントの製造方法を提供する：
（Ａ）ヒトミルクオリゴ糖、ビフィドバクテリウム・ビフィダムに属する細菌、ヒトミルクオリゴ糖の資化能が低い１種以上のプロバイオティクス、および賦形剤を混合し、混合物を得る工程；
（Ｂ）前記混合物を打錠する工程。
【００６０】
上記いずれの製造方法においても、適宜、上記工程で言及した成分以外の成分を併用してよい。
【００６１】
本技術に係る栄養組成物の添加方法は、本技術の効果を損なわない限り、特に限定されないが、例えば、本技術に係る栄養組成物を、上記のように混合時に液状で添加する他に、粉末化後に添加して粉体混合し、製造することができる。
【００６２】
本技術に係る調製粉乳中のビフィドバクテリウム・ビフィダムに属する細菌の含有量は、本技術の効果を損なわない限り、自由に設定することができる。本技術では、特に、調製粉乳中のビフィドバクテリウム・ビフィダムに属する細菌の含有量を、調製粉乳の最終組成物に対し、１０３〜１０１２ＣＦＵ／ｇに設定することができる。
【００６３】
本技術に係る調製粉乳中のヒトミルクオリゴ糖の資化能が低いプロバイオティクスの含有量は、本技術の効果を損なわない限り、自由に設定することができる。本技術では、特に、調製粉乳中のヒトミルクオリゴ糖の資化能が低いプロバイオティクスの含有量を、調製粉乳の最終組成物に対し、１０３〜１０１２ＣＦＵ／ｇに設定することができる。
【００６４】
本技術に係る調製粉乳中のＨＭＯｓの含有量は、本技術の効果を損なわない限り、自由に設定することができる。本技術では、特に、調製粉乳中のＨＭＯｓの含有量を、調製粉乳の最終組成物に対し、０．３％〜５．０％に設定することができる。
【００６５】
＜医薬品、医薬部外品＞
本技術に係る栄養組成物は、公知の医薬品又は医薬部外品（以下、「医薬品等」ともいう）に添加して調製することもできるし、医薬品等の原料中に混合して新たな医薬品等を製造することもできる。
【００６６】
本技術に係る栄養組成物を医薬品等に配合する場合、該医薬品等は、経口投与や非経口投与などの投与方法に応じて、適宜所望の剤形に製剤化することができる。その剤形は特に限定されないが、経口投与の場合、例えば、散剤、顆粒剤、錠剤、トローチ剤、カプセル剤等の固形製剤；溶液剤、シロップ剤、懸濁剤、乳剤等の液剤等に製剤化することができる。非経口投与の場合、例えば、座剤、噴霧剤、吸入剤、軟膏剤、貼付剤、注射剤等に製剤化することができる。本技術では、経口投与の剤形に製剤化することが好ましい。
なお、製剤化は剤形に応じて、適宜、公知の方法により実施できる。
【００６７】
製剤化に際しては、適宜製剤担体を配合する等して製剤化してもよい。また、本技術のペプチドのほか、通常製剤化に用いられている賦形剤、ｐＨ調整剤、着色剤、矯味剤等の成分を用いることができる。更に、公知の又は将来的に見出される疾患や症状の予防、改善及び／又は治療の効果を有する成分を、適宜目的に応じて併用することも可能である。
【００６８】
前記製剤担体としては、剤形に応じて、各種有機又は無機の担体を用いることができる。固形製剤の場合の担体としては、例えば、賦形剤、結合剤、崩壊剤、滑沢剤、安定剤、矯味矯臭剤等が挙げられる。
【００６９】
前記賦形剤としては、例えば、乳糖、白糖、ブドウ糖、マンニット、ソルビット等の糖誘導体；トウモロコシデンプン、馬鈴薯デンプン、α−デンプン、デキストリン、カルボキシメチルデンプン等のデンプン誘導体；結晶セルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、カルボキシメチルセルロース、カルボキシメチルセルロースカルシウム等のセルロース誘導体；アラビアゴム；デキストラン；プルラン；軽質無水珪酸、合成珪酸アルミニウム、メタ珪酸アルミン酸マグネシウム等の珪酸塩誘導体；リン酸カルシウム等のリン酸塩誘導体；炭酸カルシウム等の炭酸塩誘導体；硫酸カルシウム等の硫酸塩誘導体等が挙げられる。
【００７０】
前記結合剤としては、例えば、上記賦形剤の他、ゼラチン；ポリビニルピロリドン；マクロゴール等が挙げられる。
【００７１】
前記崩壊剤としては、例えば、上記賦形剤の他、クロスカルメロースナトリウム、カルボキシメチルスターチナトリウム、架橋ポリビニルピロリドン等の化学修飾されたデンプン又はセルロース誘導体等が挙げられる。
【００７２】
前記滑沢剤としては、例えば、タルク；ステアリン酸；ステアリン酸カルシウム、ステアリン酸マグネシウム等のステアリン酸金属塩；コロイドシリカ；ピーガム、ゲイロウ等のワックス類；硼酸；グリコール；フマル酸、アジピン酸等のカルボン酸類；安息香酸ナトリウム等のカルボン酸ナトリウム塩；硫酸ナトリウム等の硫酸塩類；ロイシン；ラウリル硫酸ナトリウム、ラウリル硫酸マグネシウム等のラウリル硫酸塩；無水珪酸、珪酸水和物等の珪酸類；デンプン誘導体等が挙げられる。
【００７３】
前記安定剤としては、例えば、メチルパラベン、プロピルパラベン等のパラオキシ安息香酸エステル類；クロロブタノール、ベンジルアルコール、フェニルエチルアルコール等のアルコール類；塩化ベンザルコニウム；無水酢酸；ソルビン酸等が挙げられる。
【００７４】
前記矯味矯臭剤としては、例えば、甘味料、酸味料、香料等が挙げられる。
なお、経口投与用の液剤の場合に使用する担体としては、水等の溶剤、矯味矯臭剤等が挙げられる。
【００７５】
本技術に係る医薬品等中のビフィドバクテリウム・ビフィダムに属する細菌の含有量は、本技術の効果を損なわない限り、自由に設定することができる。本技術では、特に、医薬品等中のビフィドバクテリウム・ビフィダムに属する細菌の含有量を、医薬品等の最終組成物に対し、１０３〜１０１２ＣＦＵ／ｍＬまたはｇに設定することができる。
【００７６】
本技術に係る医薬品等中のヒトミルクオリゴ糖の資化能が低いプロバイオティクスの含有量は、本技術の効果を損なわない限り、自由に設定することができる。本技術では、特に、医薬品等中のヒトミルクオリゴ糖の資化能が低いプロバイオティクスの含有量を、医薬品等の最終組成物に対し、１０３〜１０１２ＣＦＵ／ｍＬまたはｇに設定することができる。
【００７７】
本技術に係る医薬品等中のＨＭＯｓの含有量は、本技術の効果を損なわない限り、自由に設定することができる。本技術では、特に、医薬品等中のＨＭＯｓの含有量を、医薬品等の最終組成物に対し、０．３％〜５．０％に設定することができる。
【００７８】
＜飼料＞
本技術に係る栄養組成物は、公知の飼料に添加して調製することもできるし、飼料の原料中に混合して新たな飼料を製造することもできる。
【００７９】
本技術に係る栄養組成物を飼料に配合する場合、飼料の原料としては、例えば、トウモロコシ、小麦、大麦、ライ麦等の穀類；ふすま、麦糠、米糠、脱脂米糠等の糠類；コーングルテンミール、コーンジャムミール等の製造粕類；脱脂粉乳、ホエー、魚粉、骨粉等の動物性飼料類；ビール酵母等の酵母類；リン酸カルシウム、炭酸カルシウム等の鉱物質飼料；油脂類；アミノ酸類；糖類等が挙げられる。また、前記飼料の形態としては、例えば、愛玩動物用飼料（ペットフード等）、家畜飼料、養魚飼料等が挙げられる。
【００８０】
本技術に係る飼料中のビフィドバクテリウム・ビフィダムに属する細菌の含有量は、本技術の効果を損なわない限り、体重等に応じて自由に設定することができる。本技術では、特に、飼料中のビフィドバクテリウム・ビフィダムに属する細菌の含有量を、飼料の最終組成物に対し、１０３〜１０１２ＣＦＵ／ｍＬまたはｇに設定することができる。
【００８１】
本技術に係る飼料中のヒトミルクオリゴ糖の資化能が低いプロバイオティクスの含有量は、本技術の効果を損なわない限り、体重等に応じて自由に設定することができる。本技術では、特に、飼料中のヒトミルクオリゴ糖の資化能が低いプロバイオティクスの含有量を、飼料の最終組成物に対し、１０３〜１０１２ＣＦＵ／ｍＬまたはｇに設定することができる。
【００８２】
本技術に係る飼料中のＨＭＯｓの含有量は、本技術の効果を損なわない限り、体重等に応じて自由に設定することができる。本技術では、特に、飼料中のＨＭＯｓの含有量を、飼料の最終組成物に対し、０．３％〜５．０％に設定することができる。
【００８３】
なお、本技術は、以下の構成を採用することも可能である。
［１］
ビフィドバクテリウム・ビフィダムに属する細菌と、
ヒトミルクオリゴ糖の資化能が低い１種以上のプロバイオティクスと、
ヒトミルクオリゴ糖と、
を含有する栄養組成物。
［２］
ビフィドバクテリウム・ビフィダムに属する細菌と、
ヒトミルクオリゴ糖の資化能が低い１種以上のプロバイオティクスと、
ヒトミルクオリゴ糖と、
を含有する飲食品組成物。
［３］
ビフィドバクテリウム・ビフィダムに属する細菌と、
ヒトミルクオリゴ糖の資化能が低い１種以上のプロバイオティクスと、
ヒトミルクオリゴ糖と、
を含有する調製粉乳。
［４］
ビフィドバクテリウム・ビフィダムに属する細菌と、
ヒトミルクオリゴ糖の資化能が低い１種以上のプロバイオティクスと、
ヒトミルクオリゴ糖と、
を含有する医薬品又は医薬部外品組成物。
［５］
ビフィドバクテリウム・ビフィダムに属する細菌と、
ヒトミルクオリゴ糖の資化能が低い１種以上のプロバイオティクスと、
ヒトミルクオリゴ糖と、
を含有する飼料組成物。
［６］
ビフィドバクテリウム・ビフィダムに属する細菌と、
ヒトミルクオリゴ糖の資化能が低い１種以上のプロバイオティクスと、
ヒトミルクオリゴ糖と、
の栄養組成物への使用。
［７］
ビフィドバクテリウム・ビフィダムに属する細菌と、
ヒトミルクオリゴ糖の資化能が低い１種以上のプロバイオティクスと、
ヒトミルクオリゴ糖と、
の飲食品組成物への使用。
［８］
ビフィドバクテリウム・ビフィダムに属する細菌と、
ヒトミルクオリゴ糖の資化能が低い１種以上のプロバイオティクスと、
ヒトミルクオリゴ糖と、
の調製粉乳への使用。
［９］
ビフィドバクテリウム・ビフィダムに属する細菌と、
ヒトミルクオリゴ糖の資化能が低い１種以上のプロバイオティクスと、
ヒトミルクオリゴ糖と、
の医薬品又は医薬部外品組成物への使用。
［１０］
ビフィドバクテリウム・ビフィダムに属する細菌と、
ヒトミルクオリゴ糖の資化能が低い１種以上のプロバイオティクスと、
ヒトミルクオリゴ糖と、
の飼料組成物への使用。
［１１］
栄養組成物の製造のための、
ビフィドバクテリウム・ビフィダムに属する細菌と、
ヒトミルクオリゴ糖の資化能が低い１種以上のプロバイオティクスと、
ヒトミルクオリゴ糖と、
の使用。
［１２］
飲食品組成物の製造のための、
ビフィドバクテリウム・ビフィダムに属する細菌と、
ヒトミルクオリゴ糖の資化能が低い１種以上のプロバイオティクスと、
ヒトミルクオリゴ糖と、
の使用。
［１３］
調製粉乳の製造のための、
ビフィドバクテリウム・ビフィダムに属する細菌と、
ヒトミルクオリゴ糖の資化能が低い１種以上のプロバイオティクスと、
ヒトミルクオリゴ糖と、
の使用。
［１４］
医薬品又は医薬部外品組成物の製造のための、
ビフィドバクテリウム・ビフィダムに属する細菌と、
ヒトミルクオリゴ糖の資化能が低い１種以上のプロバイオティクスと、
ヒトミルクオリゴ糖と、
の使用。
［１５］
飼料組成物の製造のための、
ビフィドバクテリウム・ビフィダムに属する細菌と、
ヒトミルクオリゴ糖の資化能が低い１種以上のプロバイオティクスと、
ヒトミルクオリゴ糖と、
の使用。
［１６］
［１］〜［１５］において、
前記ヒトミルクオリゴ糖が、２’−フコシルラクトース及び／又はラクト−Ｎ−ネオテトラオースである。
［１７］
［１］〜［１６］において、
前記プロバイオティクスが、ビフィドバクテリウム属細菌（ビフィドバクテリウム・ビフィダムに属する細菌を除く）及び／又は乳酸菌である。
［１８］
［１７］において、
前記ビフィドバクテリウム属細菌（ビフィドバクテリウム・ビフィダムに属する細菌を除く）が、ビフィドバクテリウム・ロンガム・サブスピーシーズ・ロンガム、ビフィドバクテリウム・アドレセンティス、ビフィドバクテリウム・シュードカテニュラータム、ビフィドバクテリウム・アニマリス・サブスピーシーズ・ラクティス、ビフィドバクテリウム・ブレーベ、ビフィドバクテリウム・シュードロンガムから選択される１以上の細菌である。
［１９］
［１７］において、
前記乳酸菌が、ラクトバチルス・パラカゼイ、ラクトバチルス・プランタラム、ラクトバチルス・アシドフィルス、ラクトバチルス・ラムノーサス、ラクトバチルス・ガセリから選択される１以上の細菌である。
［２０］
［１］〜［１９］において、
前記ビフィドバクテリウム・ビフィダムに属する細菌が、ビフィドバクテリウム・ビフィダムＡＴＣＣ２９５２１、ビフィドバクテリウム・ビフィダム（ＮＩＴＥ  ＢＰ−０２４２９）、ビフィドバクテリウム・ビフィダム（ＮＩＴＥ  ＢＰ−１２５２）、ビフィドバクテリウム・ビフィダム（ＮＩＴＥ  ＢＰ−０２４３１）、ビフィドバクテリウム・ビフィダム（ＮＩＴＥ  ＢＰ−０２６４８）、ビフィドバクテリウム・ビフィダム（ＮＩＴＥ  ＢＰ−０２４３２）、ビフィドバクテリウム・ビフィダム（ＮＩＴＥ  ＢＰ−０２４３３）、から選択される１以上の細菌である。
［２１］
下記工程（Ａ）〜（Ｃ）を含む、調製粉乳の製造方法。
（Ａ）乳成分を含有する培地でビフィドバクテリウム・ビフィダムに属する細菌、ヒトミルクオリゴ糖の資化能が低い１種以上のプロバイオティクスを培養し、培養物を得る工程；
（Ｂ）前記培養物を噴霧乾燥および／または凍結乾燥に供し、それぞれの菌体粉末を得る工程；
（Ｃ）前記菌体粉末とヒトミルクオリゴを混合し、調製粉乳を得る工程。
［２２］
下記工程（Ａ）を含む、調製粉乳の製造方法：
（Ａ）ヒトミルクオリゴ糖、ビでビフィドバクテリウム・ビフィダムに属する細菌、ヒトミルクオリゴ糖の資化能が低い１種以上のプロバイオティクス、および乳成分を混合し、粉乳を得る工程。
［２３］
下記工程（Ａ）および（Ｂ）を含む、母乳成分増強用サプリメントの製造方法
（Ａ）ヒトミルクオリゴ糖、ビフィドバクテリウム・ビフィダムに属する細菌、ヒトミルクオリゴ糖の資化能が低い１種以上のプロバイオティクス、および賦形剤を混合し、混合物を得る工程；
（Ｂ）前記混合物を打錠する工程。
［２４］
前記乳成分が、乳タンパク質である、［２１］または［２２］に記載の方法。
［２５］
前記乳タンパク質が、ホエイ、ホエイ加水分解物、カゼインからなる群より選択される少なくとも１つの成分である、［２４］に記載の方法。
［２６］
下記工程（Ａ）および（Ｂ）を含む、サプリメントの製造方法：
（Ａ）い、ビフィドバクテウム（Bifidobacterium）属細菌、および賦形剤を混合し、混合物を得る工程；
（Ｂ）前記混合物を打錠する工程。
［２７］
［２１］〜［２６］において、
前記ヒトミルクオリゴ糖が、２’−フコシルラクトース及び／又はラクト−Ｎ−ネオテトラオースである。
［２８］
［２１］〜［２７］において、
前記プロバイオティクスが、ビフィドバクテリウム属細菌（ビフィドバクテリウム・ビフィダムに属する細菌を除く）及び／又は乳酸菌である。
［２９］
［２８］において、
前記ビフィドバクテリウム属細菌（ビフィドバクテリウム・ビフィダムに属する細菌を除く）が、ビフィドバクテリウム・ロンガム・サブスピーシーズ・ロンガム、ビフィドバクテリウム・アドレセンティス、ビフィドバクテリウム・シュードカテニュラータム、ビフィドバクテリウム・アニマリス・サブスピーシーズ・ラクティス、ビフィドバクテリウム・ブレーベ、ビフィドバクテリウム・シュードロンガムから選択される１以上の細菌である。
［３０］
［２８］において、
前記乳酸菌が、ラクトバチルス・パラカゼイ、ラクトバチルス・プランタラム、ラクトバチルス・アシドフィルス、ラクトバチルス・ラムノーサス、ラクトバチルス・ガセリから選択される１以上の細菌である。
［３１］
［２１］〜［３０］において、
前記ビフィドバクテリウム・ビフィダムに属する細菌が、ビフィドバクテリウム・ビフィダムＡＴＣＣ２９５２１、ビフィドバクテリウム・ビフィダム（ＮＩＴＥ  ＢＰ−２４２９）、ビフィドバクテリウム・ビフィダム（ＮＩＴＥ  ＢＰ−１２５２）、ビフィドバクテリウム・ビフィダム（ＮＩＴＥ  ＢＰ−２４３１）、ビフィドバクテリウム・ビフィダム（ＮＩＴＥ  ＢＰ−０２６４８）、ビフィドバクテリウム・ビフィダム（ＮＩＴＥ  ＢＰ−０２４３２）、ビフィドバクテリウム・ビフィダム（ＮＩＴＥ  ＢＰ−０２４３３）、から選択される１以上の細菌である、請求項１から５のいずれか一項に記載の栄養組成物。
【実施例】
【００８４】
以下、実施例に基づいて本技術を更に詳細に説明する。なお、以下に説明する実施例は、本技術の代表的な実施例の一例を示したものであり、これにより本技術の範囲が狭く解釈されることはない。【００８５】
＜実験方法＞
（１）糖溶液の調製
グルコース（ナカライテスク株式会社製）、ＨＭＯｓの一例として、２’−ＦＬ（（≧９５％）フナコシ社、シグマ社から入手可能）、ＬＮｎＴ（ELICITYL社製）を、イオン交換水で１０％溶液を調製し、Millex-GV（SLGV033RS）を用いて無菌濾過をした。【００８６】
（２）ビフィドバクテリウム属細菌及び乳酸菌の菌液調製
下記表１（ビフィドバクテリウム・ビフィダムに属する細菌）及び下記表２の菌株に、Lactobacilli MRS Broth(BD)（ビフィドバクテリウム属細菌には０．０５％L-Cysteine Hydrochloride）を添加し、滅菌処理後に菌液を３％接種し、３７℃で嫌気的に１６時間培養した（前々培養）。
翌日、表３に示した改変ＢＬ寒天培地（光岡知足著「ビフィズス菌の研究」ｐ.３０６，（財）ビフィズス菌センター，１９９４年発行）に、１％グルコースを加えて調製し、滅菌処理後に前々培養菌液を３％接種し、３７℃で嫌気的に１２時間前培養した（前培養）。
前培養が終了した菌液を集菌し、滅菌生理食塩水で１回洗浄後、表３に示した改変ＢＬ寒天培地（光岡知足著「ビフィズス菌の研究」ｐ.３０６,（財）ビフィズス菌センター，１９９４年発行）で等量にメスアップし、懸濁した菌液を調製した。【００８７】
（３）ビフィドバクテリウム属細菌及び乳酸菌の増殖菌数解析用培地の調製
表３に示した改変ＢＬ寒天培地（光岡知足著「ビフィズス菌の研究」ｐ.３０６,（財）ビフィズス菌センター，１９９４年発行）を６０％の容量で調製して、オートクレーブ滅菌処理後、（１）で調製したそれぞれの糖溶液４０％を無菌的に加えて、糖濃度が４％となる培地を調製した。【００８８】
（４）下記表１及び下記表２の菌株の単菌培養
９６穴のプレートに培養する容量の半分の容量である前記（３）で調製した培地を分注し、残りの半分の容量に菌液が６％となるように前記（２）で調製した菌液を分注し、最終的な糖濃度を２％とした。菌液を分注したプレートは３７℃で嫌気的に８時間培養した。【００８９】
（５）ビフィドバクテリウム・ビフィダムに属する細菌と、ヒトミルクオリゴ糖の資化能が低いプロバイオティクスと、の混合培養
９６穴のプレートに無菌的に培養する容量の半分の容量である前記（３）で調製した培地を分注し、残りの４分の１の容量である前記（３）で調製した培地に菌液が１２％となるように前記（２）で調製した表１のビフィドバクテリウム・ビフィダムに属する細菌と表２のヒトミルクオリゴ糖の資化能が低いプロバイオティクスの菌株の菌液をそれぞれ分注し、最終的な糖濃度を２％とした。菌液を分注したプレートは３７℃で嫌気的に８時間培養した。【００９０】
（６）ビフィドバクテリウム属細菌及び乳酸菌の増殖菌数の解析方法
前記（４）と前記（５）のプレートの各ウェルから、培養前（０時間）と培養後（８時間）に、MICROPLATE READER SH-9000（CORONA ELECTRIC社製）でＯＤ６５０を測定した。濁度測定後に菌体を回収し、ＤＮＡ抽出を行った。ＤＮＡ抽出後、表４に示した菌種特異的プライマーを用いて、定量ＰＣＲ法によりビフィズス菌・乳酸菌の増殖菌数を解析した（渡辺幸一著「腸内フローラの構造解析」―定量的ＰＣＲを用いたヒト糞便中の菌叢解析―  腸内細菌学雑誌、２０：３５−４２，２００６参照）。【００９１】
【表１】
2019189200.tif 000002
【００９２】
【表２】
2019189200.tif 000003
【００９３】
【表３】
2019189200.tif 000004
【００９４】
【表４】
2019189200.tif 000005
【００９５】
＜測定・結果＞
（１）ビフィドバクテリウム・ビフィダムに属する細菌のＨＭＯｓの利用性
表１のビフィドバクテリウム・ビフィダムに属する細菌について、ＨＭＯｓである２’−ＦＬ又はＬＮｎＴを糖源として、各菌株を単菌で培養し、ＯＤ６５０を測定した。結果を下記表５に示す。表５は、２’−ＦＬ又はＬＮｎＴを糖源として表１のビフィドバクテリウム・ビフィダムに属する細菌７株の８時間培養後のＯＤ６５０増加値を示す。【００９６】
【表５】
2019189200.tif 000006
【００９７】
表５に示す通り、表１のビフィドバクテリウム・ビフィダムに属する細菌は、全て、ＨＭＯｓである２’−ＦＬ又はＬＮｎＴ資化性を有していた。【００９８】
（２）ヒトミルクオリゴ糖の資化能が低いプロバイオティクスのＨＭＯｓの利用性
表２の菌株について、ＨＭＯｓである２’−ＦＬ又はＬＮｎＴを糖源として、各菌株を単菌で培養し、ＯＤ６５０を測定した。２’−ＦＬについての結果を下記表６に、ＬＮｎＴについての結果を下記表７示す。【００９９】
【表６】
2019189200.tif 000007
【０１００】
【表７】
2019189200.tif 000008
ＰＣ： positive control【０１０１】
表６及び７に示す通り、表２の菌株のうち、利用性があると言われているビフィドバクテリウム・インファンティス以外の菌株は、全て、ＨＭＯｓである２’−ＦＬ又はＬＮｎＴに対して資化性を有していいない、あるいは資化性が低かった。【０１０２】
（３）ＨＭＯｓを糖源とした、ビフィドバクテリウム・ビフィダムに属する細菌及びヒトミルクオリゴ糖の資化能が低いプロバイオティクスの混合培養
〔ビフィドバクテリウム・ビフィダム（ＮＩＴＥ  ＢＰ−０２４２９）＋ヒトミルクオリゴ糖の資化能が低いプロバイオティクス〕
前記で２’−ＦＬ又はＬＮｎＴの利用性が見られたビフィドバクテリウム・ビフィダム（ＮＩＴＥ  ＢＰ−０２４２９）を、２’−ＦＬ又はＬＮｎＴ利用できない表２の菌株と組み合わせて培養することとした。ビフィドバクテリウム・ビフィダム（ＮＩＴＥ  ＢＰ−０２４２９）と２’−ＦＬ又はＬＮｎＴを利用できない表２の菌株を２’−ＦＬ又はＬＮｎＴを糖源として混合培養し、８時間培養後の各菌株の菌数の増殖割合（増殖割合＝８時間混合培養後の菌数／単菌培養後の菌数）を表２の菌株の表４に示す各菌株特異的オリゴヌクレオチドプライマーを用いて定量ＰＣＲ法で測定した。結果を表８に示す。【０１０３】
【表８】
2019189200.tif 000009
【０１０４】
表８に示す通り、前記表６又は７において、ヒトミルクオリゴ糖に資化性を有さない菌株であっても、ビフィドバクテリウム・ビフィダム（ＮＩＴＥ  ＢＰ−０２４２９）と混合培養することにより、増殖することが分かった。【０１０５】
〔ビフィドバクテリウム・ビフィダムに属する細菌＋ビフィドバクテリウム・ロンガム・サブスピーシーズ・ロンガムＢＢ５３６〕
２’−ＦＬ又はＬＮｎＴを糖源として、表１のビフィドバクテリウム・ビフィダム７株と２’−ＦＬ又はＬＮｎＴを利用することができないビフィドバクテリウム・ロンガム・サブスピーシーズ・ロンガムＢＢ５３６を混合培養し、８時間培養後のビフィドバクテリウム・ロンガム・サブスピーシーズ・ロンガムＢＢ５３６の菌数と単菌培養8時間後の菌数を表４に示すビフィドバクテリウム・ロンガム・サブスピーシーズ・ロンガム特異的オリゴヌクレオチドプライマーを用いて定量ＰＣＲ法で測定し、増殖割合（増殖割合＝８時間後の混合培養菌数／８時間単菌培養菌数）を比較した。結果を表９に示す。【０１０６】
【表９】
2019189200.tif 000010
【０１０７】
表９に示す通り、において、２’−ＦＬに資化性を有さないビフィドバクテリウム・ロンガム・サブスピーシーズ・ロンガムＢＢ５３６は、ビフィドバクテリウム・ビフィダムに属する細菌と混合培養することにより、増殖することが分かった。また、ＬＮｎＴに資化性を有さないビフィドバクテリウム・ロンガム・サブスピーシーズ・ロンガムＢＢ５３６は、ビフィドバクテリウム・ビフィダムに属する細菌と混合培養することにより、増殖することが分かった。【０１０８】
〔ビフィドバクテリウム・ビフィダムに属する細菌＋ビフィドバクテリウム・アニマリス・サブスピーシーズ・ラクティスＭＣＣ−５２５〕
２’−ＦＬ又はＬＮｎＴを糖源として、表１のビフィドバクテリウム・ビフィダム７株と２’−ＦＬ又はＬＮｎＴを利用することができないビフィドバクテリウム・アニマリス・サブスピーシーズ・ラクティスＭＣＣ−５２５を混合培養し、８時間培養後のビフィドバクテリウム・アニマリス・サブスピーシーズ・ラクティスＭＣＣ−５２５の菌数と単菌培養８時間後の菌数を表４のビフィドバクテリウム・アニマリス・サブスピーシーズ・ラクティス特異的オリゴヌクレオチドプライマーを用いて定量ＰＣＲ法で測定し、増殖割合（増殖割合＝８時間後の混合培養菌数/８時間単菌培養菌数）を比較した。結果を表１０に示す。【０１０９】
【表１０】
2019189200.tif 000011
【０１１０】
２’−ＦＬ又はＬＮｎＴを糖源としてビフィドバクテリウム・ビフィダム７株と組み合わせて培養した場合に、全てのビフィドバクテリウム・ビフィダムとの組み合わせでビフィドバクテリウム・アニマリス・サブスピーシーズ・ラクティスＭＣＣ−５２５を単菌で培養した場合と比較して、ビフィドバクテリウム・アニマリス・サブスピーシーズ・ラクティスＭＣＣ−５２５の菌数増殖促進が見られた。中でもＬＮｎＴを糖源とした場合にビフィドバクテリウム・ビフィダム（ＮＩＴＥ  ＢＰ−１２５２）との組み合わせで菌数増殖促進効果が顕著に高かった。【０１１１】
〔ビフィドバクテリウム・ビフィダムに属する細菌＋ラクトバチルス・ガセリＡＴＣＣ３３３２３〕
２’−ＦＬを糖源として、表１のビフィドバクテリウム・ビフィダム７株と２’−ＦＬを利用することができないラクトバチルス・ガセリＡＴＣＣ  ３３３２３Ｔを混合培養し、８時間後のラクトバチルス・ガセリＡＴＣＣ  ３３３２３Ｔの菌数と単菌培養８時間後の菌数を表４のラクトバチルス・ガセリ特異的オリゴヌクレオチドプライマーを用いて定量ＰＣＲ法で測定し、増殖割合（増殖割合＝８時間後の混合培養菌数/８時間単菌培養菌数）を比較した。結果を表１１に示す。【０１１２】
【表１１】
2019189200.tif 000012
【０１１３】
２’−ＦＬを糖源としてビフィドバクテリウム・ビフィダム７株と組み合わせて培養した場合に、全ての組み合わせでラクトバチルス・ガセリＡＴＣＣ３３３２３Ｔを単菌培養した場合の菌数と比較してラクトバチルス・ガセリＡＴＣＣ３３３２３Ｔの菌数増殖促進が見られた。ビフィドバクテリウム・ビフィダムは７株のうち、ビフィドバクテリウム・ビフィダムＡＴＣＣ２９５２１Ｔより他の６株で増殖効果が高かった。【０１１４】
〔ビフィドバクテリウム・ビフィダムに属する細菌＋ラクトバチルス・パラカゼイＡＴＣＣ  ２５３０２Ｔ〕
２’−ＦＬ又はＬＮｎＴを糖源として、表１のビフィドバクテリウム・ビフィダム７株と２’−ＦＬ又はＬＮｎＴを利用することができないラクトバチルス・パラカゼイＡＴＣＣ  ２５３０２Ｔを混合培養し８時間後のラクトバチルス・パラカゼイＡＴＣＣ  ２５３０２Ｔの菌数を単菌培養後の菌数の増殖割合（増殖割合＝８時間後の混合培養菌数/８時間単菌培養菌数）を定量ＰＣＲ法で測定した。結果を表１２に示す。【０１１５】
【表１２】
2019189200.tif 000013
【０１１６】
２’−ＦＬ又はＬＮｎＴを糖源としてビフィドバクテリウム・ビフィダム７株と組み合わせて培養した場合に、全ての組み合わせでラクトバチルス・パラカゼイＡＴＣＣ  ２５３０２Ｔを単菌で培養した場合と比較して、ラクトバチルス・パラカゼイＡＴＣＣ  ２５３０２Ｔの菌数増殖促進が見られた。【０１１７】
［製造例］
下記に栄養組成物、医薬品組成物、及び食品組成物の製造例を示す。【０１１８】
＜製造例１＞
ビフィドバクテリウム・ビフィダムを、ＭＲＳ液体培地３ｍＬに添加し、３７℃で１６時間嫌気培養後、培養液を濃縮し、凍結乾燥を行い、細菌の凍結乾燥粉末（菌末）を得る。ビフィドバクテリウム・ビフィダムを含む菌末と、プロバイオティクス・ヒトミルクオリゴ糖（フナコシ社から入手可能）・ホエイタンパク質濃縮物（Whey protein concentrate；ＷＰＣ）と、プレバイオティクス（ラクチュロース、ラフィノース及びガラクトオリゴ糖）を均一に混合して組成物を得る。当該組成物２０ｇを２００ｇの水に溶かし、栄養組成物を得る。【０１１９】
＜製造例２＞
ビフィドバクテリウム・ビフィダムを、ＭＲＳ液体培地３ｍＬに添加し、３７℃で１６時間嫌気培養後、培養液を濃縮し、凍結乾燥を行い、細菌の凍結乾燥粉末（菌末）を得る。菌末と、プロバイオティクス・ヒトミルクオリゴ糖（フナコシ社から入手可能）・乳タンパク質濃縮物の乾燥粉末（ＭＰＣ４８０、フォンテラ社製、タンパク質含量８０質量％、カゼインタンパク質：ホエイタンパク質＝約８：２）と、プレバイオティクス（ラクチュロース、ラフィノース及びガラクトオリゴ糖）を均一に混合して、当該組成物２０ｇを２００ｇの水に溶かし、栄養組成物を得る。【０１２０】
＜製造例３＞
ビフィドバクテリウム・ビフィダムを、ＭＲＳ液体培地３ｍＬに添加し、３７℃で１６時間嫌気培養後、培養液を濃縮し、凍結乾燥を行い、細菌の凍結乾燥粉末（菌末）を得る。次に、ビフィドバクテリウム・ビフィダムを含む菌末と、プロバイオティクス・ヒトミルクオリゴ糖（フナコシ社から入手可能）・プレバイオティクス（ラクチュロース、ラフィノース及びガラクトオリゴ糖）、結晶セルロースを撹拌造粒機に投入し混合する。その後、精製水を加え造粒、造粒物を乾燥し、細菌の抽出成分及びプレ、プロバイオティクスを含有し、賦形剤を含有してなる造粒物（医薬品組成物）を得る。【０１２１】
＜製造例４＞
ビフィドバクテリウム・ビフィダムを添加した発酵乳の製造法を下記に示す。
まず、乳原料、および必要に応じた水、その他の成分等を混合し、好ましくは均質化処理を行い、加熱殺菌処理する。均質化処理および加熱殺菌処理は常法により行うことができる。加熱殺菌された殺菌調乳液に乳酸菌スターターを添加（接種）し、所定の発酵温度に保持して発酵させ、発酵物を得る。発酵によりカードが形成される。【０１２２】
乳酸菌スターターとしては、例えば、ラクトバチルス・ブルガリクス（Lactobacillus bulgaricus）、ラクトコッカス・ラクチス（Lactococcus lactis）、ストレプトコッカス・サーモフィラス（Streptococcus thermophilus）等のヨーグルト製造に通常用いられている乳酸菌を用いることができる。ｐＨが目標の値に達したら、形成されたカードを撹拌により破砕し、１０℃以下に冷却して発酵物を得る。１０℃以下に冷却することにより、乳酸菌の活性を低下させて酸の生成を抑制することができる。【０１２３】
次いで、発酵工程で得られた発酵物を加熱処理して加熱後発酵物（加熱処理後の発酵物）を得る。発酵物を適度に加熱することにより、加熱後発酵物中の乳酸菌による酸の生成を抑えることができる。これによって、その後の製造工程中および／またはビフィズス菌入り濃縮発酵乳の保存中のｐＨの低下を抑えることができ、その結果、ビフィズス菌の生残性を向上させることができる。【０１２４】
次いで、加熱処理工程で得られた加熱後発酵物に、ビフィドバクテリウム・ビフィダム及びヒトミルクオリゴ糖（フナコシ社から入手可能）を添加する。ビフィドバクテリウム・ブレーベＭＣＣ１２７４（ＦＥＲＭ  ＢＰ−１１１７５）の添加量は、加熱後発酵物に対して１×１０７〜１×１０１１ＣＦＵ／ｍＬが好ましく、１×１０８〜１×１０１０ＣＦＵ／ｍＬがより好ましい。ビフィドバクテリウム・ビフィダムが死菌の場合、ＣＦＵ／ｍＬは、個細胞／ｍＬと置き換えることができる。【０１２５】
加熱後発酵物にビフィドバクテリウム・ビフィダム及びヒトミルクオリゴ糖を添加した後、濃縮を行う。濃縮工程は公知の濃縮方法を適宜用いて行うことができる。遠心分離法では、被濃縮物（ビフィズス菌及びプレバイオティクスが添加された加熱後発酵物）中のホエーが除去されて、固形分濃度が高められたビフィドバクテリウム・ビフィダムの濃縮発酵乳が得られる。得られた発酵乳を摂取することにより、腸内フローラの改善が可能になる。【０１２６】
＜製造例５＞
ビフィドバクテリウム・ビフィダムを添加した調製粉乳の製造法を下記に示す。
脱塩牛乳乳清蛋白質粉末（ミライ社製）１０ｋｇ、牛乳カゼイン粉末（フォンテラ社製）６ｋｇ、乳糖（ミライ社製）４８ｋｇ、ミネラル混合物（富田製薬社製）９２０ｇ、及びビタミン混合物（田辺製薬社製）３２ｇ、ヒトミルクオリゴ糖、ラクチュロース（森永乳業社製）５００ｇ、ラフィノース（日本甜菜製糖社製）５００ｇ、ガラクトオリゴ糖液糖（ヤクルト薬品工業社製）９００ｇを温水３００ｋｇに溶解し、さらに９０℃で１０分間加熱溶解し、調製脂肪（太陽油脂社製）２８ｋｇを添加して均質化する。その後、殺菌、濃縮の工程を行って噴霧乾燥し、調製粉乳約９５ｋｇを調製する。これに、澱粉に倍散したビフィドバクテリウム・ビフィダムの菌体粉末１００ｇ、及び乳酸菌・ビフィズス菌の菌体粉末１００ｇを加えてビフィドバクテリウム・ビフィダム・ヒトミルクオリゴ糖（フナコシ社から入手可能）配合調製粉乳約９５ｋｇを調製する。得られた調製粉乳を水に溶解して、標準調乳濃度である総固形分濃度１４％（ｗ／Ｖ）の調乳液としたとき、調乳液中のビフィドバクテリウム・ビフィダムの菌数は２．７×１０９ＣＦＵ／１００ｍｌを得ることができる。上述のようにして得られた調製粉乳を投与することにより、プロバイオティクスが腸内で増殖促進可能になる。【０１２７】
上述の製造例１−５で製造された栄養組成物を投与することにより、ＨＭＯｓをプロバイオティクスが利用可能となり、腸内で増殖することにより、腸内フローラの改善につながる。
【配列表】
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【国際調査報告】
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