(57)【要約】開示されているのは、エンテロコッカス属に属する乳酸菌の菌体及びその菌体成分からなる群から選択される少なくとも１種を含有する育毛用又は脱毛防止用外用剤である。【特許請求の範囲】
【請求項１】
エンテロコッカス属に属する乳酸菌の菌体及びその菌体成分からなる群から選択される少なくとも１種を含有する育毛用又は脱毛防止用外用剤。
【請求項２】
前記エンテロコッカス属に属する乳酸菌がエンテロコッカス・フェカリスである、請求項１に記載の外用剤。
【請求項３】
前記エンテロコッカス属に属する乳酸菌がエンテロコッカス・フェカリスNF-1011株(FERM BP-10902)である、請求項１又は２に記載の外用剤。
【請求項４】
前記菌体が死菌体である、請求項１〜３のいずれか一項に記載の外用剤。
【請求項５】
前記乳酸菌の菌体成分が、乳酸菌の溶菌酵素及び加熱処理物である、請求項１〜４のいずれか一項に記載の外用剤。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、育毛用又は脱毛防止用外用剤に関する。
【背景技術】
【０００２】
エンテロコッカス属に属する乳酸菌は、生体に対して多様な効果を有することが知られている。【０００３】
例えば、エンテロコッカス・フェカリス(Enterococcus faecalis) NF-1011株は、血圧上昇抑制作用及び心臓肥大防止効果(特許文献１)、免疫賦活効果(特許文献２)、インターフェロン産生増強効果(特許文献３)、感染防御効果(特許文献４)、制癌増強効果(特許文献５)、抗癌剤の毒性軽減効果(特許文献６)、生体抗酸化能賦活効果(特許文献７)などが報告されている。【０００４】
しかしながら、特許文献１〜７では基本的には乳酸菌を経口摂取することが記載されており外用剤としての用途は想定されていない。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００５】
【特許文献１】日本国特開平5-201871号公報
【特許文献２】日本国特開平8-99887号公報
【特許文献３】日本国特開平8-259450号公報
【特許文献４】日本国特開平8-283166号公報
【特許文献５】日本国特開平8-295631号公報
【特許文献６】日本国特開平9-48733号公報
【特許文献７】日本国特開2017-1961号公報
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
本発明は、優れた育毛作用及び脱毛防止作用を有する外用剤を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
本発明者らは、上記目的を達成すべく鋭意研究を重ねた結果、エンテロコッカス・フェカリスNF-1011株の菌体及びその菌体成分が、顕著に優れた育毛作用及び脱毛防止作用を示すという知見を得た。【０００８】
本発明は、これら知見に基づき、更に検討を重ねて完成されたものであり、次の育毛用又は脱毛防止用外用剤を提供するものである。【０００９】
項１．エンテロコッカス属に属する乳酸菌の菌体及びその菌体成分からなる群から選択される少なくとも１種を含有する育毛用又は脱毛防止用外用剤。
項２．前記エンテロコッカス属に属する乳酸菌がエンテロコッカス・フェカリスである、項１に記載の外用剤。
項３．前記エンテロコッカス属に属する乳酸菌がエンテロコッカス・フェカリスNF-1011株(FERM BP-10902)である、項１又は２に記載の外用剤。
項４．前記菌体が死菌体である、項１〜３のいずれか一項に記載の外用剤。
項５．前記乳酸菌の菌体成分が、乳酸菌の溶菌酵素及び加熱処理物である、項１〜４のいずれか一項に記載の外用剤。
項６．エンテロコッカス属に属する乳酸菌の菌体及びその菌体成分からなる群から選択される少なくとも１種を育毛又は脱毛予防を必要とする哺乳動物の皮膚に適用する工程を含む、育毛又は脱毛予防方法。
項７．前記エンテロコッカス属に属する乳酸菌がエンテロコッカス・フェカリスである、項６に記載の方法。
項８．前記エンテロコッカス属に属する乳酸菌がエンテロコッカス・フェカリスNF-1011株(FERM BP-10902)である、項６又は７に記載の方法。
項９．前記菌体が死菌体である、項６〜８のいずれか一項に記載の方法。
項１０．前記乳酸菌の菌体成分が、乳酸菌の溶菌酵素及び加熱処理物である、項６〜９のいずれか一項に記載の方法。
項１１．育毛用又は脱毛防止用外用剤の製造における、エンテロコッカス属に属する乳酸菌の菌体及びその菌体成分からなる群から選択される少なくとも１種の使用。
項１２．前記エンテロコッカス属に属する乳酸菌がエンテロコッカス・フェカリスである、項１１に記載の使用。
項１３．前記エンテロコッカス属に属する乳酸菌がエンテロコッカス・フェカリスNF-1011株(FERM BP-10902)である、項１１又は１２に記載の使用。
項１４．前記菌体が死菌体である、項１１〜１３のいずれか一項に記載の使用。
項１５．前記乳酸菌の菌体成分が、乳酸菌の溶菌酵素及び加熱処理物である、項１１〜１４のいずれか一項に記載の使用。
【発明の効果】
【００１０】
エンテロコッカス属に属する乳酸菌の菌体及びその菌体成分は、顕著に優れた育毛作用及び脱毛防止作用を有するので育毛用又は脱毛防止用外用剤の有効成分として有用である。
【図面の簡単な説明】
【００１１】
【図１】試験例１における男性被験者の頭頂部の写真である。
【図２】試験例２における各被験者の頭頂部の写真である。
【図３】試験例２における各被験者の頭頂部の写真である。
【発明を実施するための形態】
【００１２】
以下、本発明の実施の形態について詳細に説明する。
【００１３】
なお、本明細書において「含有する、含む(comprise)」とは、「本質的にからなる(essentially consist of)」という意味と、「のみからなる(consist of)」という意味をも包含する。
【００１４】
本発明の育毛用又は脱毛防止用外用剤は、エンテロコッカス属に属する乳酸菌の菌体及びその菌体成分からなる群から選択される少なくとも１種を含有することを特徴とする。
【００１５】
エンテロコッカス属に属する乳酸菌としては、特に限定されず、例えば、エンテロコッカス・フェカリス(Enterococcus faecalis)、エンテロコッカス・フェシウム(Enterococcus faecium)、エンテロコッカス・アビウム(Enterococcus avium)、エンテロコッカス・カッセリフラバス(Enterococcus casseliflavus)、エンテロコッカス・ガリナルム(Enterococcus gallinarum)、エンテロコッカス・フラベセンス(Enterococcus flavescens)等が挙げられる。これらの中でも、好ましくはエンテロコッカス・フェカリス、エンテロコッカス・フェシウム等であり、より好ましくはエンテロコッカス・フェカリスである。また、エンテロコッカス・フェカリスの中でも、好ましくは健常者の糞便から分離された菌株であるエンテロコッカス・フェカリスNF-1011株である。エンテロコッカス・フェカリスNF-1011株は、独立行政法人産業技術総合研究所特許生物寄託センター（日本国茨城県つくば市東１丁目１番地１ 中央第６（郵便番号３０５−８５６６））に1991年10月8日に受託番号FERM P-12564として寄託されている。また、この菌株は、現在国際寄託に移管されており、その受託番号はFERM BP-10902である。尚、独立行政法人産業技術総合研究所特許生物寄託センターは、２０１２年４月に独立行政法人製品評価技術基盤機構（ＮＩＴＥ）特許微生物寄託センターと統合され、現在、独立行政法人製品評価技術基盤機構バイオテクノロジーセンター特許生物寄託センター（NITE-IPOD）（〒２９２−０８１８ 日本国千葉県木更津市かずさ鎌足２−５−８ １２０号室）にてその微生物寄託業務は承継されている。
【００１６】
エンテロコッカス属に属する乳酸菌の菌体は、エンテロコッカス属に属する乳酸菌の構成物全体である限り特に限定されず、生菌体であっても、死菌体であってもよい。菌体は、凍結乾燥物等の乾燥物であってもよい。エンテロコッカス属に属する乳酸菌の生菌体は、ATCC、IFO、JCM等の国内分譲機関、国際分譲機関等から取り寄せることができるし、生物体から単離することもできる。
【００１７】
また、培養により容易に大量に得ることができるため、培養して得られた生菌体を用いると生産コストが安く経済的である。エンテロコッカス属に属する乳酸菌の生菌体は、公知の方法に従って培養することにより、増殖させることもできる。例えば、該乳酸菌を、適量の滅菌ロゴザ液体培地に播種し、35〜37℃にて10〜16時間好気的に静置培養し、前培養液を得て、これを大容量の滅菌ロゴザ液体培地に加え同様に静置培養することによって、大量の生菌体を得ることができる。生菌体を採用する場合、例えば、培養液そのものを用いてもよいし、該培養液の固形分(例えば、培養液から遠心分離等で生菌体を沈殿させて得られた沈殿物、その後必要に応じて生理食塩水等で洗浄して得られた沈殿物等)を用いてもよいし、該固形分の懸濁液(例えば、生理食塩水などの等張液に懸濁して得られた懸濁液等)を用いてもよい。
【００１８】
エンテロコッカス属に属する乳酸菌の死菌体は、特に限定されないが、例えば、生菌体の加熱処理物であることができる。熱処理の温度は、100℃以上であれば特に限定されないが、好ましくはオートクレーブ処理ができる温度(例えば、110〜125℃)である。熱処理時間は、例えば、1分間以上、好ましくは5〜20分間、より好ましくは5〜15分間程度である。
【００１９】
乳酸菌エンテロコッカス・フェカリスNF-1011株の菌体は、例えば、FK-23 (商標)としてニチニチ製薬株式会社より市販されている。
【００２０】
本発明において「乳酸菌の菌体成分」とは、乳酸菌の細胞壁が破壊されることにより細胞外に放出される成分を意味する。
【００２１】
乳酸菌の菌体成分は、特に限定されないが、例えば、生菌体の細胞壁破壊処理物である。この細胞壁破壊は、生菌体の細胞壁の全体であってもよいし、又は一部分であってもよい。細胞壁破壊処理方法としては、例えば、熱処理、物理的力による処理、溶菌酵素による処理等、或いはこれらを組み合わせた処理が挙げられる。これらの中でも、好ましくは溶菌酵素による処理を含む方法が挙げられ、より好ましくは（ａ）溶菌酵素による処理、並びに（ｂ）熱処理及び物理的力による処理からなる群より選択される少なくとも1種の処理(好ましくは熱処理)を含む方法が挙げられ、更に好ましくは（ａ）溶菌酵素による処理後に、（ｂ）熱処理及び物理的力による処理からなる群より選択される少なくとも1種の処理(好ましくは熱処理)を行うことを含む方法が挙げられる。
【００２２】
熱処理の温度は、100℃以上であれば特に限定されないが、好ましくはオートクレーブ処理ができる温度(例えば、110〜125℃)である。熱処理時間は、細胞壁の一部又は全部を破壊できる限り特に限定されず、熱処理の温度に応じて適宜設定することができる。熱処理時間は、例えば1分間以上、好ましくは5〜20分間、より好ましくは5〜15分間程度である。
【００２３】
物理的力による処理の方法は、細胞壁の一部又は全部を破壊できる限り特に限定されない。例えば、超音波処理、フレンチプレス等が挙げられる。
【００２４】
溶菌酵素による処理に用いる酵素は、細胞壁の一部又は全部を破壊できる限り特に限定されず、細菌類を溶菌するために一般的に用いられている酵素を広く用いることができる。溶菌酵素としては、例えば、リゾチーム、アクチナーゼ、ザイモリエース、キタラーゼ、ムタノシリン、アクロモペプチターゼ等が挙げられる。これらの中でも、好ましくはリゾチームである。溶菌酵素は、1種単独で用いてもよいし、又は2種以上を組み合わせて用いてもよい。
【００２５】
溶菌酵素による処理条件は、溶菌酵素の種類、溶菌対象(生菌体)量等に応じて適宜設定することができる。例えば、溶菌酵素を終濃度0.01〜1 mg/mLになるように生菌体懸濁液に添加し、30〜40℃で1〜10時間処理すればよい。
【００２６】
乳酸菌の菌体成分は、該乳酸菌の菌体を構成する成分である限り特に制限されない。該菌体成分は、好ましくは水溶性成分である。水溶性成分は、例えば、乳酸菌を細胞壁破壊した物から、遠心分離等により固形分を除いて得られる。
【００２７】
乳酸菌エンテロコッカス・フェカリスNF-1011株の菌体成分は、例えば、LFK (商標)としてニチニチ製薬株式会社より市販されている。
【００２８】
本発明の外用剤は、エンテロコッカスに属する乳酸菌の菌体及び菌体成分により育毛作用及び脱毛防止作用を発揮するため、育毛用、脱毛防止用などの外用剤として好適に使用される。また、本発明の外用剤には、外用の医薬品及び化粧料が含まれる。当該化粧料には、医薬部外品も包含される。また、本発明の外用剤は、ヒトを含む哺乳動物の皮膚(頭皮を含む)に適用されるものである。なお、本発明において、育毛には、発毛及び養毛の概念が含まれているものとする。
【００２９】
医薬品を調製する場合、乳酸菌の菌体及び菌体成分を、公知の成分とともに、外用固形剤、外用液剤、スプレー剤、軟膏剤、クリーム剤、ゲル剤、貼付剤などの形態に調製して、外用の製剤にすることが可能である。
【００３０】
医薬品には、外用剤に使用される公知の添加剤、例えば、抗菌剤、清涼剤、乳化剤、油分、酸化防止剤、界面活性剤、香料、紫外線吸収剤、色素、エタノール、水、保湿剤、増粘剤、可溶化剤、ゲル化剤などから選択される1種又は2種以上を配合することができる。
【００３１】
医薬品中に含まれる乳酸菌の菌体及び菌体成分の割合は、特に制限されず、例えば、0.01〜99質量%の濃度を挙げることができる。
【００３２】
化粧料の剤型は、水溶液系、可溶化系、乳化系、油液系、粉末系、ゲル系、軟膏系、エアゾール系、水−油２層系、水−油−粉末３層系等の幅広い剤型を採り得る。
【００３３】
化粧料の用途も任意であり、例えば、シャンプー、リンス、ヘアートリートメント、ヘアーコンディショナー、整髪料、ヘアートニック、染毛剤、ヘアーマニキュア、ポマード、ヘアーリキッド、ヘアースプレー、ヘアークリーム、育毛剤等が挙げられる。
【００３４】
化粧料には、乳酸菌の菌体及び菌体成分以外に、通常化粧料に用いられる成分、例えば、保湿剤、酸化防止剤、油性成分、紫外線吸収剤、界面活性剤、増粘剤、アルコール類、色材、殺菌剤、防腐剤、香料、溶剤、pH調整剤、血行促進剤等を必要に応じて適宜配合することができる。
【００３５】
化粧料中に含まれる乳酸菌の菌体及び菌体成分の割合は、特に制限されず、例えば、0.01〜99質量%の濃度を挙げることができる。
【００３６】
エンテロコッカス属に属する乳酸菌の菌体及びその菌体成分は、育毛作用及び脱毛防止作用を有するので、育毛用、脱毛防止用などの外用剤の有効成分として有用である。
【実施例】
【００３７】
以下、本発明を更に詳しく説明するため実施例を挙げる。しかし、本発明はこれら実施例等になんら限定されるものではない。【００３８】
１．菌体試料の調製(FK-23)
エンテロコッカス・フェカリスNF-1011株を液体培地(グルコース2%、酵母エキス2%、ペプトン2%、リン酸水素二カリウム4%)中で37℃、18時間培養した。マイクロフィルトレーション膜で集菌及び洗浄し、生菌体を回収した。これを110℃で10分間熱処理し、処理後、スプレードライで乾燥させた。得られた死菌体乾燥物を、菌体試料(FK-23)として、以下の実験で用いた。【００３９】
２．菌体試料の調製(LFK)
エンテロッコカス・フェカリスNF-1011株をロゴサ液体培地10 mlに播種し、37℃にて15時間好気的に静置培養(前培養)し、菌体濃度が約109個/mlの菌体液(シード)を得た。これをロゴサ液体培地10Lに播種(菌体濃度：106個/ml)し、37℃で16時間好気的に静置培養し、生菌数約109個/mlの菌体液を得た。得られた菌体液を遠心分離(12,000×g、20分間)して集菌し、これを生理食塩水(0.85%塩化ナトリウム水溶液)で2回洗浄して、蒸留水100 mlに懸濁し、菌体懸濁液を得た。当該菌体懸濁液にリゾチームを終濃度0.1 mg/ml量となるよう添加し、37℃で4時間処理後、110℃で10分間加熱処理して、菌体処理物を得た。得られた菌体処理物を、菌体試料(LFK)として、以下の実験で用いた。【００４０】
試験例１
39歳の男性被験者に対して、エタノールと水とを主成分とする溶液にFK-23：LFKを1：1で混合した粉末を1%懸濁した整髪料を、頭皮の主に地肌が見えて気になっている部分に1日1回使用した。使用時間帯は特に指定しなかったが、主に就寝前、洗髪時には髪を乾燥させた後に使用した。【００４１】
使用開始後の男性被験者の頭頂部の写真を図１に示す。2018年6月5日から使用を開始し、同年6月19日から7月3日にかけて頭髪が増加していったことが肉眼で観察された。【００４２】
試験例２
40〜70代の男女被験者5名に対して、試験例１と同様の整髪料を、頭皮の主に地肌が見えて気になっている部分に1日1回使用した。使用時間帯は特に指定しなかったが、主に就寝前、洗髪時には髪を乾燥させた後に使用した。【００４３】
使用開始後の各被験者の頭頂部の写真を図２及び３に示す。早い被験者で使用から4週間目、遅い被験者でも8週間目には地肌が目立たなくなっていることが確認できた。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【国際調査報告】
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