(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
ヒアルロン酸ナトリウム１質量部に対して亜鉛として０．０００００１〜０．１質量部の塩化亜鉛とを含有することを特徴とするヒアルロン酸ナトリウム水溶液の安定化組成物。
【請求項２】
更に、コハク酸、リンゴ酸、乳酸、グルタミン酸、グリシンから選ばれる少なくとも１種以上の物質又はその塩とを含有することを特徴とする請求項１記載のヒアルロン酸ナトリウム水溶液の安定化組成物。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は、 ヒアルロン酸及び／又はその塩と亜鉛化合物とを含有することを特徴とするヒアルロン酸及び／又はその塩の水溶液の安定化組成物に関する。
【０００２】
【従来の技術】
ヒアルロン酸は、β−Ｄ−Ｎ−アセチルグルコサミンとβ−Ｄ−グルクロン酸が交互に結合した直鎖状の高分子多糖である。ヒアルロン酸は哺乳動物の結合組織等に分布するほか、ニワトリのとさか、連鎖球菌の夾膜などにも存在が知られている。ニワトリのとさか、臍帯等が抽出材料として用いられているほか、連鎖球菌の培養物からも精製物が調製されている。
ヒアルロン酸は保湿性、粘弾性、潤滑性等の特性や創傷治癒作用等の薬理作用を有することから、化粧品としての他に眼科手術補助剤、変形性関節症の治療薬、角膜上皮障害治療用の点眼剤等の医薬品として市販されている。
【０００３】
ところで、ヒアルロン酸はそれ自体では不安定な物質であるため、そのナトリウム塩の形で製品化されているが、ヒアルロン酸ナトリウムも水溶液の状態において決して安定であるとは言えず、分子量低下がおこり、高粘弾性等の特性が損なわれることがある。従って、ヒアルロン酸ナトリウム水溶液の状態での保存方法が問題になる。そこで安定性に優れたすなわち分子量低下を抑制するヒアルロン酸ナトリウム水溶液の安定化組成物の開発が強く要望されていた。
【０００４】
以前からヒアルロン酸の安定化の目的でヒアルロン酸に共存させる物質の検討がなされ、特開平８−１０４６４２号、特開平９−２２７３８５号、特開平１０−７２３７６号、及び特開平１１−３０２１９７号等が開示されている。しかしながら、これらはいずれも実用化には到っていない。
【０００５】
医薬品としてヒアルロン酸及び／又はその塩を提供するにはヒアルロン酸及び／又はその塩の構造を極力変化させないで一定の品質を維持させることが望まれている。即ち、ヒアルロン酸及び／又はその塩の低分子化を抑制することが必要である。
【０００６】
【発明が解決しようとする課題】
本発明者らは、このような状況のもとで、ヒアルロン酸及び／又はその塩の水溶液のヒアルロン酸の低分子化を抑制できる安定化組成物につき鋭意検討を行った結果、ヒアルロン酸及び／又はその塩と亜鉛化合物とを共存させることにより分子量低下が抑制できることを見出し、本発明を完成させたものである。
【０００７】
【課題を解決するための手段】
すなわち、本発明は、（１）ヒアルロン酸ナトリウム１質量部に対して亜鉛として０．０００００１〜０．１質量部の塩化亜鉛とを含有することを特徴とするヒアルロン酸ナトリウム水溶液の安定化組成物、（２）更に、コハク酸、リンゴ酸、乳酸、グルタミン酸、グリシンから選ばれる少なくとも１種以上の物質又はその塩とを含有することを特徴とする（１）記載のヒアルロン酸ナトリウム水溶液の安定化組成物である。
【０００８】
【発明の実施の形態】
以下、本発明を詳細に説明する。
本発明は、ヒアルロン酸及び／又はその塩と亜鉛化合物とを含有することを特徴とするヒアルロン酸及び／又はその塩の水溶液の安定化組成物である。
【０００９】
本発明に用いられるヒアルロン酸は、動物組織から抽出したものでも、また発酵法で製造したものでもその起源を問うことなく使用できる。
発酵法で使用する菌株は自然界から分離されるストレプトコッカス属等のヒアルロン酸生産能を有する微生物、又は特開昭６３−１２３３９２号公報に記載したストレプトコッカス・エクイＦＭ−１００（微工研菌寄第9027号) 、特開平２−２３４６８９号公報に記載したストレプトコッカス・エクイＦＭ−３００（微工研菌寄第2319号) のような高収率で安定にヒアルロン酸を生産する変異株が望ましい。上記の変異株を用いて培養、精製されたものが用いられる。
【００１０】
ヒアルロン酸及び／又はその塩の重量平均分子量は、特に限定されないが、１０万〜５００万が好ましい。尚、重量平均分子量は、第十四改正日本薬局方一般試験法第４５項粘度測定法に従って極限粘度を測定し、Ｌａｕｒｅｎｔらの式により算出することができる。
【００１１】
本発明に用いられるヒアルロン酸及び／又はその塩は、ヒアルロン酸、ヒアルロン酸の塩、又はヒアルロン酸とヒアルロン酸の塩の混合物を包含している。
ヒアルロン酸及び／又はその塩は、遊離の形でもよく又その塩でもよく例えば、アルカリ金属塩（ナトリウム塩、カリウム塩）、アルカリ土類金属塩（カルシウム塩、マグネシウム塩）等が挙げられる。医薬品として用いる場合には、エンドトキシン量を低減したヒアルロン酸ナトリウムが使用されるのが通常である。
【００１２】
本発明の組成物におけるヒアルロン酸及び／又はその塩の濃度は、特に限定されないが、０．０１〜４％（W／V）が好ましい。
【００１３】
本発明の組成物で用いる亜鉛化合物の形態は特に限定されず、サリチル酸亜鉛、リン酸亜鉛、硫酸亜鉛、硝酸亜鉛、ヨウ化亜鉛、フッ化亜鉛、塩化亜鉛、臭化亜鉛、炭酸亜鉛、ｐ−ｔ−ブチル安息香酸亜鉛、チオシアン酸亜鉛、乳酸亜鉛、酢酸亜鉛、及び酸化亜鉛等を用いることができる。また、亜鉛酸イオンの塩等のように錯体としても用いることができる。医薬品に使用する場合には、酢酸亜鉛、硫酸亜鉛、塩化亜鉛、及び酸化亜鉛等を用いる。特に注射剤に用いる場合には、酢酸亜鉛や塩化亜鉛を用いることができる。この場合には、エンドトキシン濃度を低減したものを用いる。
【００１４】
亜鉛の濃度は、ヒアルロン酸及び／又はその塩１質量部に対して０．０００００１質量部〜１質量部添加するのが好ましい。０．０００００１質量部未満ではヒアルロン酸及び／又はその塩の分子量低下抑制効果が期待できない。１質量部を超えてもヒアルロン酸及び／又はその塩の分子量低下抑制効果は変わらない。
【００１５】
本発明の組成物で用いる溶媒は、ヒアルロン酸及び／又はその塩と、亜鉛化合物を溶解できる溶媒を選択する。例えば、生理食塩水や注射用水等が挙げられるが、これらに限定されるものではない。
【００１６】
本発明の組成物のｐＨは、特に制限はないが、長期保存において安定な組成物を得るのを目的とする場合にはヒアルロン酸及び／又はその塩が安定な領域を選択するのが好ましく、ｐＨ５．５〜８となるように各種緩衝剤や酸・アルカリを用いて調整することになる。緩衝剤としては、リン酸緩衝液やトリスアミノメタン−塩酸緩衝液が好ましい。
【００１７】
本組成物の浸透圧は生理食塩水に対する浸透圧比として表すと１．０〜１．２であることが好ましい。
【００１８】
ヒアルロン酸及び／又はその塩の分子量低下抑制効果を有する亜鉛化合物とそれ以外の添加剤と共存させることによりさらにヒアルロン酸及び／又はその塩の分子量低下抑制効果を高めることができる。
【００１９】
ヨウ素含有の還元剤として、ヨウ化カリウムやヨウ化ナトリウム、硫黄含有の還元剤として、チオシアン酸カリウム、チオ尿素、チオ硫酸ナトリウム、Ｌ−メチオニン等を用いることができる。また、酒石酸、コハク酸、酢酸、リンゴ酸、乳酸のような有機酸又はその塩、グルタミン酸、グリシンのようなアミノ酸又はその塩を用いることができる。
【００２０】
本発明の組成物は注射剤、外用剤、点眼剤等の剤型で医薬品として用いることができる。その際には、シリンジ、アンプル、バイアル等の注射剤用容器、外用剤用容器、及び点眼剤用容器等の適当な容器に充填・密封して市場に提供することになる。
【００２１】
【実施例】
以下に実施例により具体的に説明するが、本発明はこの実施例に限定されるものではない。
【００２２】
実施例１
ヒアルロン酸水溶液を下の処方により調製した。
ヒアルロン酸ナトリウム（分子量２００万）        １％
リン酸ナトリウムバッファー（ｐＨ＝７．５）      ２ｍＭ
塩化ナトリウム                                  ０．８５％
塩化亜鉛                                   亜鉛として０〜１００ｐｐｍ
注射用水                                         適量
【００２３】
調製したヒアルロン酸水溶液をバイアルに密封後、６０℃で保存し、２週間後に極限粘度を測定し、Ｌａｕｒｅｎｔの式から重量平均分子量を算出し、開始時に対する相対値を％表示した。結果を表１に示す。
【００２４】
【表１】
0003779200.tif 000002
【００２５】
表１より、亜鉛として０．０１ｐｐｍ以上添加した場合に分子量低下抑制効果が認められる。
【００２６】
実施例２
ヒアルロン酸水溶液を下の処方により調製した。
ヒアルロン酸ナトリウム（分子量９０万）          １％
リン酸ナトリウムバッファー（ｐＨ＝７．５）      ２ｍＭ
塩化ナトリウム                                  ０．８５％
塩化亜鉛                                    亜鉛として０〜１００ｐｐｍ
注射用水                                         適量
【００２７】
調製したヒアルロン酸水溶液をバイアルに密封後、６０℃で保存し、２週間後に極限粘度を測定し、Ｌａｕｒｅｎｔの式から重量平均分子量を算出し、開始時に対する相対値を％表示した。結果を表２に示す。
【００２８】
【表２】
0003779200.tif 000003
【００２９】
表２より、分子量９０万のヒアルロン酸ナトリウム水溶液の場合にも、亜鉛として０．０１ｐｐｍ以上添加した場合に分子量低下抑制効果が認められる。
【００３０】
実施例３
ヒアルロン酸水溶液を下の処方により調製した。
ヒアルロン酸ナトリウム（分子量２００万）          １％
リン酸ナトリウムバッファー（ｐＨ＝７．５）      ２ｍＭ
塩化ナトリウム                                  ０．８５％
塩化亜鉛                                        亜鉛として１ｐｐｍ
各種還元剤                                      １００ｐｐｍ
注射用水                                         適量
【００３１】
調製したヒアルロン酸水溶液をバイアルに密封後、６０℃で保存し、２週間後に極限粘度を測定し、Ｌａｕｒｅｎｔの式から重量平均分子量を算出し、開始時に対する相対値を％表示した。結果を表３に示す。
【００３２】
【表３】
0003779200.tif 000004
【００３３】
表３より、各種還元剤を共存させたとき、亜鉛として１ｐｐｍだけの場合よりもヒアルロン酸の分子量低下抑制効果が高まることがわかる。
【００３４】
実施例４
ヒアルロン酸水溶液を下の処方により調製した。
ヒアルロン酸ナトリウム（分子量２００万）          １％
リン酸ナトリウムバッファー（ｐＨ＝７．５）      ２ｍＭ
塩化ナトリウム                                  ０．８５％
塩化亜鉛                                        亜鉛として１ｐｐｍ
各種添加物                                      １００ｐｐｍ
注射用水                                         適量
【００３５】
調製したヒアルロン酸水溶液をバイアルに密封後、６０℃で保存し、２週間後に極限粘度を測定し、Ｌａｕｒｅｎｔの式から重量平均分子量を算出し、開始時に対する相対値を％表示した。結果を表４に示す。
【００３６】
【表４】
0003779200.tif 000005
【００３７】
表４より、各種添加剤を加えることより、亜鉛として１ｐｐｍだけの場合よりもヒアルロン酸の分子量低下抑制効果が高まることがわかる。
【００３８】
実施例５
ヒアルロン酸水溶液を下の処方により調製した。
ヒアルロン酸ナトリウム（分子量２００万）        １％
緩衝剤（ｐＨ＝７．５）                          ２ｍＭ
塩化ナトリウム                                  ０．８５％
塩化亜鉛                                        亜鉛として１０ｐｐｍ
注射用水                                         適量
【００３９】
調製したヒアルロン酸水溶液をバイアルに密封後、６０℃で保存し、２週間後に極限粘度を測定し、Ｌａｕｒｅｎｔの式から重量平均分子量を算出し、開始時に対する相対値を％表示した。結果を表５に示す。
【００４０】
【表５】
0003779200.tif 000006
【００４１】
表５より、 緩衝剤として、リン酸塩の他に、トリス（ヒドロキシメチル）アミノメタンを用いた場合も、塩化亜鉛無添加の場合の重量平均分子量が１４１万である（実施例１参照）のに対して、ヒアルロン酸の分子量低下抑制効果が認めらる。
【００４２】
【発明の効果】
以上のように、本発明におけるヒアルロン酸及び／又はその塩の水溶液の安定化組成物は、ヒアルロン酸及び／又はその塩の水溶液に亜鉛化合物を添加することによって、著しく低分子化を抑制することができる。従って、本発明により、ヒアルロン酸及び／又はその塩の水溶液を取り扱う際に、著しい利点をもたらし、変形性膝関節症治療薬等の医薬品や化粧品等の長期保存安定性を増すことができる。