(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
一般式（Ｉ）
0003845307.tif 000005
（式中Ｒ１はＣＨ２，ＣＨ２ＣＨ２，ＣＨ２Ｏ，ＣＨ２ＳおよびＣＨ２ＳＯからなる群より選ばれた一員を示し、Ｒ２は水素原子または炭素数１から４の低級アルキル基またはベンジル基を示し、Ｒ３は一般式ＣＯＯＲ４（ここでＲ４は水素原子または炭素数１から４の低級アルキル基を示す）または一般式ＮＨＣＯＲ５（ここでＲ５は置換基を有していてもよいフェニル基を示す）または一般式ＣＯＮＲ６Ｒ７（ここでＲ６は水素原子または炭素数１から４の低級アルキル基を示し、Ｒ７は炭素数１から４の低級アルキル基または置換基を有していてもよいフェニル基またはカルボキシアルキル基または低級アルキルスルホニル基を示す）またはＰＯ３Ｈ２またはＳＯ３Ｈで表される基を示し、ｎは１から４の整数を示す）で表される化合物およびその塩の１種または２種以上を有効成分として含有する心筋梗塞の治療剤または予防剤。
【請求項２】
一般式（ＩＩ）
0003845307.tif 000006
（式中、Ｒ８，Ｒ９は同一または異なって、水素原子または炭素数１から４の低級アルキル基を示す）で表される化合物およびその塩の１種または２種以上を有効成分として含有することを特徴とする請求項１記載の治療剤または予防剤。
【発明の詳細な説明】
技術分野
本発明はメトトレキセート誘導体を含有する薬剤に関する。さらに詳しくは、心筋梗塞の治療および予防に有効なメトトレキセート誘導体を含有する薬剤に関する。
背景技術
心筋梗塞は、冠状動脈の閉塞又は急激な血流減少により、心筋に変性や壊死を起こす疾患であり、主として、冠状動脈硬化による狭窄部に、血栓、塞栓、攣縮などが加わり閉塞を引き起こすことにより発症するとされている。具体的症状は、激しい胸痛、悪心、嘔吐、顔面蒼白、及び血圧降下、並びにそれらに続くショック状態などであり、重篤の場合は死に至り、近年の高齢化社会において、最も注目される疾患のひとつとなっている。
近年、心筋梗塞とアデノシンとの間に密接な関係があることが明らかになってきている。
例えば、急性心筋梗塞症例に対してアデノシン静脈内持続投与の効果を検討した多施設共同研究（ＡＭＩＳＴＡＤ  ｔｒｉａｌ）の結果が１９９７年の米国心臓病学会（Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｈｅａｒｔ  Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ）で公表され、再灌流後平均６日後に行われた心臓核医学検査結果から梗塞サイズを評価すると、アデノシン投与群で有意な梗塞縮小効果が認められた（Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ  ９６，Ｉ−２０６，１９９７）。
麻酔開胸イヌにおいても、９０分間冠動脈狭窄後にアデノシンを６時間冠状動脈内に持続投与することにより、再灌流２４時間後に評価した心筋壊死領域は、対照群に比べて有意に縮小するという実験結果が得られている（Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ  ７６，１１３５−１１４５，１９８７）。従って、アデノシンは、心筋虚血後の再灌流障害に対し、保護的に作用することが示唆されている。
一方、メトトレキセート（ＭＴＸ）の抗炎症作用にアデノシンの産生の増大（細胞からのアデノシン放出の増大）が関与することが、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ８８，２４４１−２４４５，１９９１；Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．９２，２６７５−２６８２，１９９３；Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５６，１９３７−１９４１，１９９６等により、報告されている。また、ＭＴＸによる細胞からのアデノシンン放出が、アデノシン合成酵素であるｅｃｔｏ−５’−ｎｕｃｌｅｏｔｉｄａｓｅの阻害剤で抑制されることから、ＭＴＸは本酵素の活性上昇を介して細胞からのアデノシンン放出を増大させることが示唆されている（Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．１０１，２９５−３００，１９９８）。
加えて、ＭＴＸは、葉酸代謝拮抗剤であり、制癌剤としては急性白血病、悪性リンパ腫などの治療に用いられているが、免疫抑制剤としても知られており、おもに骨髄移植における急性移植片宿主反応の予防に用いられている。さらに、低用量のＭＴＸの投与は慢性関節リウマチの治療に有効であることも知られている。
発明の開示
本発明の目的は、優れた心筋梗塞の、治療剤および予防剤を提供することである。
本発明者らは鋭意研究を重ねた結果、ある種のメトトレキセート誘導体またはその塩が心筋梗塞の、治療剤および予防剤として有用であることを見いだし本発明を完成した。
すなわち本発明は、一般式（Ｉ）
0003845307.tif 000002
（式中Ｒ１はＣＨ２，ＣＨ２ＣＨ２，ＣＨ２Ｏ，ＣＨ２ＳおよびＣＨ２ＳＯからなる群より選ばれた一員を示し、Ｒ２は水素原子または炭素数１から４の低級アルキル基またはベンジル基を示し、Ｒ３は一般式ＣＯＯＲ４（ここでＲ４は水素原子または炭素数１から４の低級アルキル基を示す）または一般式ＮＨＣＯＲ５（ここでＲ５は置換基を有していてもよいフェニル基を示す）または一般式ＣＯＮＲ６Ｒ７（ここでＲ６は水素原子または炭素数１から４の低級アルキル基を示し、Ｒ７は炭素数１から４の低級アルキル基または置換基を有していてもよいフェニル基またはカルボキシアルキル基または低級アルキルスルホニル基を示す）またはＰＯ３Ｈ２またはＳＯ３Ｈで表される基を示し、ｎは１から４の整数を示す）で表される化合物およびその塩の１種または２種以上を有効成分として含有する心筋梗塞の治療剤または予防剤に関する。
また、本発明は、一般式（ＩＩ）
0003845307.tif 000003
（式中、Ｒ８，Ｒ９は同一または異なって、水素原子または炭素数１から４の低級アルキル基を示す）で表される化合物およびその塩の１種または２種以上を有効成分として含有する心筋梗塞の治療剤または予防剤に関する。
発明を実施するための最良の形態
本発明の一般式（Ｉ）で表される化合物は国際公開ＷＯ９２／０３４３６号公報に記載されており、同公報にはこの化合物がヒトリンパ球、ラットおよびヒトのケラチノサイト、マウス癌細胞（Ｐ３８８，ｃｏｌｏｎ２６）の増殖を抑制することを示すデータが記載されており、この実験結果からリウマチ、乾癬および癌の治療剤として有用であることが示唆されている。さらに、国際公開ＷＯ９４／１４８１０号公報には一般式（ＩＩ）で表される化合物がリウマチ患者由来の滑膜細胞の増殖抑制作用を示すデータが記載されており、抗リウマチ剤として有用であることが示唆されている。
しかしながら、一般式（Ｉ）で表される化合物が心筋梗塞の治療あるいは予防に有効であるという報告はまだない。
本発明の薬剤は心筋梗塞の治療および予防に有用である。本発明において、心筋梗塞は、心電図における異常Ｑ波が出現する／しないにより、Ｑ波心筋梗塞及び非Ｑ波心筋梗塞に、発症時に激しい胸痛などの典型的な症状を示す／示さないにより、症候性心筋梗塞及び無痛性心筋梗塞に、並びに臨床上の発症後の時間経過によって、急性心筋梗塞及び陳旧性心筋梗塞に分類されるが、本発明の治療剤が対象とする心筋梗塞としては、それらの全てを含む。なお、心筋梗塞の分類にあたっては、例えば、図説病態内科講座、循環器−１、１９９３、２０５、メジカルレビュー社および最新内科学大系、３４、１９９０、３０９、中山書店等を参照することができる。
本発明において、低級アルキル基とは、特に炭素数の限定がない場合は炭素数１から６の直鎖又は分岐鎖状のアルキル基を示し、好ましくはメチル基、エチル基、ｎ−プロピル基、イソプロピル基、ｎ−ブチル基、イソブチル基、ｓｅｃ−ブチル基、ｔｅｒｔ−ブチル基、ｎ−ペンチル基、ｎ−ヘキシル基等を示す。また、炭素数１から４の低級アルキル基としては、メチル基、エチル基、ｎ−プロピル基、イソプロピル基、ｎ−ブチル基、イソブチル基、ｓｅｃ−ブチル基、ｔｅｒｔ−ブチル基が挙げられる。
置換基を有していてもよいフェニル基における置換基とは、低級アルキル基、水酸基、アミノ基、ハロゲノ基、シアノ基、低級アルキルオキシ基、メルカプト基、アシル基、アシルオキシ基、フェニル基、カルボキシル基、低級アルキルオキシカルボニル基等であり好ましくはカルボキシル基、低級アルキルオキシカルボニル基等である。
カルボキシアルキル基とは、１以上のカルボキシル基で置換された低級アルキル基を示し、好ましくは１つのカルボキシル基で置換された低級アルキル基があげられ、さらに好ましい例としてはたとえば３−カルボキシプロピル基などがあげられる。
低級アルキルスルホニル基の好ましい例としてはたとえばメタンスルホニル基などがあげられる。
本発明の化合物は通常の方法により塩の形にして用いることもできる。用いられる塩としては例えば、塩酸塩、臭化水素酸塩、ヨウ化水素酸塩、硫酸塩、リン酸塩などの無機酸塩、コハク酸塩、マロン酸塩、酢酸塩、マレイン酸塩、フマル酸塩、クエン酸塩、グルコン酸塩、マンデル酸塩、安息香酸塩、サリチル酸塩、メタンスルホン酸塩、ベンゼンスルホン酸塩、ｐ−トルエンスルホン酸塩など有機酸塩、ナトリウム塩、カリウム塩、マグネシウム塩などの金属塩があげられ、好ましくは無機酸塩または有機酸塩であり、さらに好ましくは、臭化水素酸塩またはメタンスルホン酸塩である。
本発明の治療剤の好ましい化合物の例としてはたとえば国際公開ＷＯ９２／０３４３６号公報および国際公開ＷＯ９４／１４８１０号公報の実施例に記載されている化合物があげられ、最も好ましい例としては、国際公開ＷＯ９４／１４８１０号公報の実施例に記載されている化合物があげられる。
本発明の化合物を含有する薬剤は経口的にまたは非経口的に投与することができるが、急性心筋梗塞の場合は、非経口投与が好ましく、陳旧性心筋梗塞の場合は、経口投与が好ましい。本発明の化合物を含有する薬剤の剤形としては注射剤等のような液剤、錠剤、カプセル剤、散剤等があげられる。また、注射剤等の液剤である場合、経皮的冠動脈形成術（ＰＴＣＡ）と組み合わせることも可能である。具体的には、ＰＴＣＡと液剤の点滴とを並行して行う方法、ＰＴＣＡにより患部に液剤を直接到達させる方法、ＰＴＣＡにおけるバルーンに、液剤を浸潤させる方法などが挙げられる。投与量は、疾患の種類、患者の体重、症状などにより異なるが通常０．０１から１００ｍｇ／日／人である。
実施例
以下に実施例を示して本発明をより詳細に説明する。なお、実施例では本発明の薬物として、Ｎ−（１−（（２，４−ジアミノ−６−プテリジニル）メチル）−３，４−ジヒドロ−２Ｈ−１，４−ベンゾチアジン−７−カルボニル）−Ｌ−α−アミノアジピン酸（以下、ＭＸ−６８と称する）
0003845307.tif 000004
を用いた。
実施例１：  ビーグル成犬の実験的心筋梗塞に対する効果
（方法）
ビーグル成犬を麻酔開胸し、製剤例１もしくは製剤例の２ＭＸ−６８注射剤（０．１ｍｇ／ｋｇ）を虚血１０分前に静脈内投与した後、左冠動脈前下行枝を９０分間完全閉塞した。ＭＸ−６８（０．１ｍｇ／ｋｇ／時間）は再潅流６時間まで持続静脈内投与（１．５μｇ／ｋｇ／分）した。６時間再潅流後、エバンスブルーにて図１に示す梗塞危険領域を、ＴＴＣ染色にて図３に示す梗塞サイズを評価した（ＭＸ−６８群）。エバンスブルーは、生理的食塩水に溶解し（０．０５〜０．１ｇ／ｍＬ）、左前下行枝を閉塞しておいて、動脈内投与し、非虚血部と虚血部とが染め分けられた時点（１分後程度）で、塩化カリウムを静脈内投与し、心停止後すばやく心臓を取り出した。虚血部（栓塞危険領域）と非虚血部とを分別し、各々の重量を測定した後、虚血部を心尖部から心基部にかけて、５〜６片に切断し、ＴＴＣ染色液（０．０５〜０．１ｇ／ｍＬ）中、３７℃で１０〜２０分間固定した。レンガ色に染色された部分を非栓塞領域、染色されなかった部分を栓塞領域として、それらの面積をそれぞれ測定した。図２に示す心内膜側副血流量は虚血８０分時に、マイクロスフェアー法にて測定した。マイクロスフェアーは、５００〜１０００万個を左心耳より投与し、同時に、頸動脈又は大腿動脈よりリファレンスとしての血液を、１分間に８ｍＬの割合で２分間採取した。実験終了後、虚血部の心筋に存在するマイクロスフェアー数を、採取したリファレンスの血液中のマイクロスフェアー数と比較し、虚血時の心筋灌流量（側副血流量）を算出した。同様のプロトコールに基づき対照群を作成した。さらにアデノシン受容体遮断薬である８−スルフォフェニルテオフィリン（８−ｓｕｌｆｏｐｈｅｎｙｌｔｈｅｏｐｈｙｌｌｉｎｅ：８ＳＰＴ）（３０μｇ／ｋｇ／分）をＭＸ−６８投与前から冠動脈内投与した群をＭＸ−６８＋８ＳＰＴ群とした。またさらに、８ＳＰＴのみを投与した群を８ＳＰＴ群とした。なお、この方法の実施にあたっては、例えばＪ，Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．９３，２１９７−２２０５，１９９４を参照することができる。
（結果）
ＭＸ−６８投与により体血圧、心拍数に変化は生じなかった。また、ＭＸ−６８投与群と非投与群との間で、栓塞危険領域（図１）および虚血中の心内膜側副血流量（図２）に、有意差はなかったが、ＭＸ−６８投与により心筋梗塞サイズは有意に減少した（図３）。この事実は、本発明の薬剤が心筋梗塞の治療剤および予防剤として有用であることを示すものである。
以下に本発明治療剤の製剤例を示す。
製剤例１：ＭＸ−６８ｉｖ製剤処方及び調製法（３００ｍＬスケール）
＜処方＞
Ｎａ２ＨＰＯ４・１２Ｈ２Ｏ              ６．０ｇ
ＮａＨ２ＰＯ４                          ３．３ｇ
ＭＸ−６８＊１                          ３００ｍｇ
上記試薬を注射用蒸留水を用いて溶解し、全量を３００ｍＬとした。
＜調製法＞
Ｎａ２ＨＰＯ４・１２Ｈ２ＯおよびＮａＨ２ＰＯ４を約２５０ｍＬの注射用蒸留水に溶解した。その液にＭＸ−６８原体を加え、スターラーで軽く攪拌した後、約５分間超音波溶解＊２した。
超音波処理によって、ＭＸ−６８溶液の液温が上昇し、分解物を生成する恐れがあるため、超音波溶解後は液温が下がるまで放冷した。
上記操作を３回繰り返した後、ＭＸ−６８溶液が、黄色透明溶液（蛍光）になっていることを目視により確認した。（なお、溶解が不十分な場合は必要に応じて、液温の上昇に配慮しながら超音波処理を行う。）
十分に溶解していることを確認した後、残りの注射用蒸留水を加え、液量を３００ｍＬとした。
この溶液を０．２２μｍディスポーサブル滅菌濾過器＊３で滅菌濾過し、ＭＸ−６８ｉｖ製剤とした。
＊１  ＭＸ−６８：ＭＸ−６８原体採取量×（１００−水分量（％））／１００＊２  超音波槽：  ＢＲＡＮＳＯＮＩＣ  Ｂ２２００（ヤマト製）
＊３  ディスポーサブル滅菌濾過器：  Ｓｔｅｒｉｃｕｐ  ０．２２μｍ  ＧＶＤｕｒａｐｏｒｅ（ＭＩＬＬＩＰＯＲＥ製）
製剤例２：ＭＸ−６８ｉｖ製剤処方及び調製法（３００ｍＬスケール）
＜処方＞
Ｎａ２ＨＰＯ４・１２Ｈ２Ｏ              ６．０ｇ
ＮａＨ２ＰＯ４                          ３．３ｇ
ＭＸ−６８＊１                          ３００ｍｇ
上記試薬を注射用蒸留水を用いて溶解し、全量を３００ｍＬとした。
＜調製法＞
Ｎａ２ＨＰＯ４・１２Ｈ２Ｏを約２５０ｍＬの注射用蒸留水に溶解した。その液にＭＸ−６８原体を加え、スターラーで攪拌した。
ＭＸ−６８原体が溶解したことを確認した後、ＮａＨ２ＰＯ４を加えて溶解させる。
十分に溶解していることを確認した後、残りの注射用蒸留水を加え、全量を３００ｍＬとした。
この溶液を０．２２μｍディスポーサブル滅菌濾過器＊２で滅菌濾過し、ＭＸ−６８ｉｖ製剤とした。
＊１  ＭＸ−６８：ＭＸ−６８原体採取量×（１００−水分量（％））／１００
＊２  ディスポーサブル滅菌濾過器：  Ｓｔｅｒｉｃｕｐ  ０．２２μｍ  ＧＶＤｕｒａｐｏｒｅ（ＭＩＬＬＩＰＯＲＥ製）
産業上の利用の可能性
上記実施例に示すように、本発明の薬剤はビーグル成犬の実験的心筋梗塞に対し有効であることが確認された。この事実は、本発明の薬剤が心筋梗塞の、治療剤および予防剤として有用であることを示すものである。
【図面の簡単な説明】
図１は、実施例１において梗塞危険領域を表すグラフである。
図２は、実施例１において心筋虚血時の心内膜側副血流量を表すグラフである。
図３は、実施例１において各群の心筋梗塞サイズを表すグラフである。
【図１】
0003845307.tif 000007
【図２】
0003845307.tif 000008
【図３】
0003845307.tif 000009