(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
非拮抗的葉酸類縁体の投与に伴う副作用の減少のための医薬の製造における葉酸誘導体の使用方法であって、
該葉酸誘導体が葉酸、５−ホルミルテトラヒドロ葉酸又は５−メチルテトラヒドロ葉酸から選ばれ；
該非拮抗的葉酸類縁体がチミジル酸シンターゼ阻害剤であり、
該チミジル酸シンターゼ阻害剤が式（Ｉ）、
0003774850.tif 000011
〔式中、点線は単結合又は二重結合を表し、
Ｒ1はＣ１〜４アルキルであるか、又はＣ１〜４アルキル基、Ｃ１〜５アルカノイル基若しくはベンジル基によって置換されていてもよいアミノ、であり、
Ｒ2、Ｒ3、Ｒ4及びＲ5は同一又は異なっており、各々、水素、フェニル、ハロ、ニトロ、
基Ｓ（Ｏ）nＲ8（ここにｎは整数０、１又は２であり、Ｒ8はハロであるか、又はＣ１〜４アルキル若しくは基ＮＲ9Ｒ10であり、ここにＲ9及びＲ10はともに水素である。）、
基ＮＲ11Ｒ12（ここにＲ11及びＲ12は同一又は異なっており、各々水素又はＣ１〜４アルキルである。）、
基ＯＲ13（ここにＲ13は水素であるか、又はハロによって置換されていてもよいＣ１〜４アルキル）、
Ｃ１〜４脂肪族基（ここに該基は基ＯＲ14又はＮＲ14Ｒ15で置換されていてもよく、Ｒ14及びＲ15は、同一又は異なっており、各々水素又はＣ１〜４アルキルである。）、
から選ばれるか、又は
Ｒ2乃至Ｒ5のうちの２つが一つに結合してベンゾ基を形成しているか、又はＲ2乃至Ｒ5のうちの１つが基−Ｘ−Ｙ−Ｒ16（ここにＸはＣＨ2、ＮＲ17、ＣＯ又はＳ（Ｏ）mであり、ｍは０，１又は２であり、そしてＲ17は水素又はＣ１〜４脂肪族基であり、ＹはＣＨ2、Ｏ、ＮＲ17’又はＳ（Ｏ）m'であり、ここにｍ’は０，１又は２であり、そしてＲ17'は水素又はＣ１〜４脂肪族基である（但しＸとＹとは各々がＣＨ2のときのみ同一である。）か、又は、−Ｘ−Ｙ−は基−Ｏ−、−ＮＲ17−、−ＣＨ＝ＣＨ−若しくは−Ｎ＝Ｎ−（ここにＲ17は前記定義の通りである。）であり、Ｒ16はＣ１〜４脂肪族基であるか又は、Ｙに結合している炭素原子から少なくとも１炭素原子離れた位置において基Ｒ18によって置換されていてよい５又は６員の芳香環であり、該５又は６員環はハロ原子によって更に置換されていてよく、そしてＲ18はハロ、Ｃ１〜４アルコキシ、ニトロ、ニトリルであるか、ハロで置換されていてよいＣ１〜４アルキル、、ハロ又は基ＣＯＲ19（ここにＲ19はヒドロキシ、Ｃ１〜４アルコキシであるか又は、１つ又は２つのカルボキシ基又はそれらのＣ１〜12エステルによって置換されていてよいＣ１〜６アルキルであるか、又はＲ19は基ＮＲ20Ｒ21（ここにＲ20及びＲ21は同一又は異なっており各々水素であるか又は、ヒドロキシで置換されていてよいＣ１〜４アルキルである。）であるか、又はＲ19はアミノ酸基若しくはそのエステル（ここに該アミノ酸基の第１窒素原子は該５又は６員芳香環に結合して更なる５又は６員複素環を形成していてよい。）であるか、又はＲ19は該５又は６員芳香環に結合して更なる５又は６員環を形成しているＣ２〜３アルキレン基であり、
Ｒ6及びＲ7は同一又は異なっており各々水素であるか、ヒドロキシで置換されていてよいＣ１〜４アルキルであるか、又はＣ１〜４アルコキシであるか、又はブロムによって置換されたメチルであるか、又は一緒になってベンゾ基を形成し、
但し、Ｒ2乃至Ｒ7のうちの少なくとも１つは水素以外でありそしてＲ4は、Ｒ1がメチルのときはメトキシでない。〕のベンゾキナゾリン誘導体又はその塩である、前記葉酸誘導体の使用方法。
【請求項２】
チミジル酸シンターゼ阻害剤が式（III）、
0003774850.tif 000012
（式中、Ｒ1、Ｒ6及びＲ7は請求項１の定義の通りであり、Ｒ32乃至Ｒ35は同一又は異なっており一つは基Ｘ−Ｙ−Ｒ16であり他は同一又は異なっており各々、水素、ハロ、ニトロ、基Ｓ（Ｏ）nＲ8、基ＮＲ11Ｒ12、基ＯＲ13又は、基ＯＲ14若しくはＮＲ14Ｒ15で置換されていてよいＣ１〜４脂肪族基から選ばれ、ここにＸ、Ｙ、Ｒ8、Ｒ11、Ｒ12、Ｒ13、Ｒ14、Ｒ15及びＲ16は請求項１の定義の通りである。）の化合物又はその塩である、請求項１の使用方法。
【請求項３】
該チミジル酸シンターゼ阻害剤が式（ＩＶ）、
0003774850.tif 000013
（式中、Ｒ1、Ｒ6、Ｒ7及びＲ32乃至Ｒ35は請求項２の定義の通りである。）の化合物又はその塩である、請求項２の使用方法。
【請求項４】
該ベンゾキナゾリン誘導体が、
（Ｓ）−２−（５−（（（１，２−ジヒドロ−３−メチル−１−オキソベンゾ〔ｆ〕キナゾリン−９−イル）メチル）アミノ−１−オキソ−２−イソインドリニル）グルタール酸
Ｎ−（４−（（（１，２−ジヒドロ−３−メチル−１−オキソベンゾ〔ｆ〕キナゾリン−９−イル）メチル）アミノ）−２−フルオロベンゾイル）−Ｌ−グルタミン酸
Ｎ−（４−（（１，２，５，６−テトラヒドロ−３−メチル−１−オキソベンゾ〔ｆ〕キナゾリン−９−イル）−スルホンアミド）ベンゾイル）−Ｌ−グルタミン酸
又はそれらの塩より選ばれる、請求項１の使用方法。
【請求項５】
該ベンゾキナゾリン誘導体が、（Ｓ）−２−（５−（（（１，２−ジヒドロ−３−メチル−１−オキソベンゾ〔ｆ〕キナゾリン−９−イル）メチル）アミノ）−１−オキソ−２−イソインドリニル）グルタル酸又はその塩である、請求項４の使用方法。
【請求項６】
新生物増殖の治療のための医薬の製造のための、非拮抗的葉酸類縁体と組合せた葉酸誘導体の使用であって、該葉酸誘導体は葉酸、５−ホルミルテトラヒドロ葉酸又は５−メチルテトラヒドロ葉酸から選ばれ、
該非拮抗的葉酸類縁体は請求項１ないし５のいずれかのベンゾキナゾリン誘導体又はその塩である、前記使用方法。
【請求項７】
免疫系障害および関連する疾病の治療のための医薬の製造のための、非拮抗的葉酸類縁体と組合せた葉酸誘導体の使用方法であって、
該葉酸誘導体は葉酸、５−ホルミルテトラヒドロ葉酸又は５−メチルテトラヒドロ葉酸から選ばれ、
該非拮抗的葉酸類縁体は請求項１ないし５のいずれかのベンゾキナゾリン誘導体又はその塩である、前記使用方法。
【請求項８】
細菌および真菌感染の治療のための医薬の製造のための、非拮抗的葉酸類縁体と組合せた葉酸誘導体の使用方法であって、
該葉酸誘導体は葉酸、５−ホルミルテトラヒドロ葉酸又は５−メチルテトラヒドロ葉酸から選ばれ、
該非拮抗的葉酸類縁体は請求項１ないし５のいずれかのベンゾキナゾリン誘導体又はその塩である、前記使用方法。
【請求項９】
非拮抗的葉酸類縁体は請求項５のベンゾキナゾリン誘導体又はその塩であり、葉酸誘導体は葉酸又は５−ホルミルテトラヒドロ葉酸である、請求項６ないし８のいずれかの使用方法。
【請求項１０】
一以上の薬学的に許容し得る担体および任意に一以上の他の治療剤と組合せた葉酸誘導体及び非拮抗的葉酸類縁体よりなる新生物増殖の治療、免疫系疾患およびこれに関連する疾患の治療、または細菌および真菌感染の治療のための医薬製剤であって、
該非拮抗的葉酸類縁体は請求項１ないし５のいずれかのベンゾキナゾリン誘導体又はその塩であり、
該葉酸誘導体は葉酸、５−ホルミルテトラヒドロ葉酸又は５−メチルテトラヒドロ葉酸から選ばれる、医薬製剤。
【請求項１１】
非拮抗的葉酸類縁体は請求項５のベンゾキナゾリン誘導体であり、葉酸誘導体は葉酸又は５−ホルミルテトラヒドロ葉酸である請求項１０の医薬製剤。
【発明の詳細な説明】
本発明は、非拮抗的葉酸類縁体と保護剤との新規の組み合わせ及びこれらの組み合わせを用いた治療方法に関する。
ヨーロッパ特許出願0505640は、治療を受けるホストへの葉酸結合性タンパク質結合剤の同時投与による、ＧＡＲ−トランスホルミラーゼ阻害剤その他の抗葉酸剤の治療的利用性を改善するための方法を提供している。
チミジレート合成酵素は、ＤＮＡ合成に必要とされるチミジル酸のde novo合成における最終ステップを触媒する酵素である。この酵素の阻害剤が抗腫瘍活性を有することが予想できるとされており、そして、Ｎ10−プロパルギル−５，８−ジデアザ葉酸のin vivo抗腫瘍活性がこの酵素に対するその阻害作用のみから生じているということが報告されている（Jones et al., J. Med. Chem., 29:468(1986)）。
ＰＣＴ国際公開WO/91/19700は式（Ｉ）、
0003774850.tif 000002
〔式中、点線は単結合又は二重結合を表し、
Ｒ1はＣ１〜４アルキルであるか、又はＣ１〜４アルキル基、Ｃ１〜５アルカノイル基若しくはベンジル基によって置換されていてもよいアミノ、であり、
Ｒ2、Ｒ3、Ｒ4及びＲ5は同一又は異なっており、各々、水素、フェニル、ハロ、ニトロ、
基Ｓ（Ｏ）nＲ8（ここにｎは整数０、１又は２であり、Ｒ8はハロであるか、又はＣ１〜４アルキル若しくは基ＮＲ9Ｒ10であり、ここにＲ9及びＲ10はともに水素である。）、
基ＮＲ11Ｒ12（ここにＲ11及びＲ12は同一又は異なっており、各々水素又はＣ１〜４アルキルである。）、
基ＯＲ13（ここにＲ13は水素であるか、又はハロによって置換されていてもよいＣ１〜４アルキル）、
Ｃ１〜４脂肪族基（基ＯＲ14又はＮＲ14Ｒ15で置換されていてもよく、ここにＲ14及びＲ15は、同一又は異なっており、各々水素又はＣ１〜４アルキルである。）、
から選ばれるか、又は
Ｒ2乃至Ｒ5のうちの２つが一つに結合してベンゾ基を形成しているか、又は
Ｒ2乃至Ｒ5のうちの１つが基−Ｘ−Ｙ−Ｒ16（ここにＸはＣＨ2、ＮＲ17、ＣＯ又はＳ（Ｏ）mであり、ｍは０，１又は２であり、そしてＲ17は水素又はＣ１〜４脂肪族基であり、ＹはＣＨ2、Ｏ、ＮＲ17’又はＳ（Ｏ）m'であり、ここにｍ’は０，１又は２であり、そしてＲ17'は水素又はＣ１〜４脂肪族基である（但しＸとＹとは各々がＣＨ2のときのみ同一である。）か、又は、−Ｘ−Ｙ−は基−Ｏ−、−ＮＲ17−、−ＣＨ＝ＣＨ−若しくは−Ｎ＝Ｎ−（ここにＲ17は前記定義の通りである。）であり、Ｒ16はＣ１〜４脂肪族基であるか又は、Ｙに結合している炭素原子から少なくとも１炭素原子離れた位置において基Ｒ18によって置換されていてよい５又は６員の芳香環であり、該５又は６員環はハロ原子によって更に置換されていてよく、そしてＲ18はハロ、Ｃ１〜４アルコキシ、ニトロ、ニトリルであるか、ハロで置換されていてよいＣ１〜４アルキル、、ハロ又は基ＣＯＲ19（ここにＲ19はヒドロキシ、Ｃ１〜４アルコキシであるか又は、１つ又は２つのカルボキシ基又はそれらのＣ１〜12エステルによって置換されていてよいＣ１〜６アルキルであるか、又はＲ19は基ＮＲ20Ｒ21（ここにＲ20及びＲ21は同一又は異なっており各々水素であるか又は、ヒドロキシで置換されていてよいＣ１〜４アルキルである。）であるか、又はＲ19はアミノ酸基若しくはそのエステル（ここに該アミノ酸基の第１窒素原子は該５又は６員芳香環に結合して更なる５又は６員複素環を形成していてよい。）であるか、又はＲ19は該５又は６員芳香環に結合して更なる５又は６員環を形成しているＣ２〜３アルキレン基である。）であり、
Ｒ6及びＲ7は同一又は異なっており各々水素であるか、ヒドロキシで置換されていてよいＣ１〜４アルキルであるか、又はＣ１〜４アルコキシであるか、又は一緒になってベンゾ基を形成し、
但し、Ｒ2乃至Ｒ7のうちの少なくとも１つは水素以外でありそしてＲ4は、Ｒ1がヒドロキシ又はメチルのときはメトキシでない。〕の化合物又はその塩がチミジル酸シンターゼの阻害剤であること及び抗腫瘍活性を有していることを開示している。
術後「ハロ」が意味ずるのは、フルオロ、ブロモ、クロロ及びヨードである。
術後「Ｃ１〜４脂肪族基」が意味するのは、Ｃ１〜４のアルキル、アルケニル、又はアルキニル基である。
術後「アミノ酸基」が意味するのは、天然に存するアミノ酸である。
好ましいアミノ酸基としては、グリシン基、グルタミン酸基、及びポリグルタミン酸基が含まれる。
該アミノ酸基が該５又は６員芳香環と結合するとき、これはＣＯＲ19が付いている炭素に隣接した、該芳香環の炭素原子を介している。
好ましくは該点線は二重結合である。
芳香環Ｒ16に適した置換基としては、ハロ、各々１乃至５個のハロ原子で置換されていてよいＣ１〜４アルキル及びＣ１〜４アルコキシが含まれる。最も適しているのは、フルオロ、クロロ、メチル、トリフルオロメチル及びメトキシより選ばれる１つ又は２つの置換基がある（そして好ましくはフルオロである）か、又は該芳香環に置換基が存しない。好ましい一具体例においては、−Ｘ−Ｙ−Ｒ16は基、
0003774850.tif 000003
〔式中、Ｒ18は前記定義の通りであって、好ましくは前記定義の通りの基ＣＯＲ19であり、そしてＲ22は水素又はフルオロである。〕である。
更なる好ましい一具体例においては、Ｘ−Ｙ−Ｒ16は基、
0003774850.tif 000004
〔ここに、Ｈ2ＮＲ19aは、グルタミン酸基又はポリグルタミン酸基であり、ＺはＣＨ2、Ｓ又はＯである。〕である。
適切には、Ｒ1は、１つ又は２つのメチル基又はエチル基で置換されたアミノ基であるか又は、Ｒ1はメチル基又はエチル基である。好ましくはＲ1はアミノ基又はメチル基である。
適切には、Ｒ2乃至Ｒ5のうちの最大３つだけそして好ましくは最大２つだけが、水素以外であり、そして各々独立して、水素、ハロ、ヒドロキシ、ニトロであるか、ヒドロキシ若しくはＣ１〜２アルコキシで置換されていてよいＣ１〜３アルキルであるか、Ｃ１〜３アルコキシであるか、１つ若しくは２つのメチル基若しくはエチル基で置換されていてよいアミノ、又は基Ｓ（Ｏ）nＲ23（ここにｎは０、１又は２であり、Ｒ23はＣ１〜４アルキル基であるか又は１つ若しくは２つのメチル基若しくはエチル基で置換されていてよいアミノ基である。）より選ばれるか、又は、Ｒ2乃至Ｒ5のうちの一つは基−Ｘ−Ｙ−Ｒ24（ここにＲ24は基、
0003774850.tif 000005
（ここに、Ｒ18、Ｒ19a、Ｒ22及びＺは前記定義の通りである。）である。）。好ましい一具体例においては、Ｒ18はニトロ基又は基、
0003774850.tif 000006
（ここに、Ｒ25、Ｒ26及びＲ27は同一又は異なっており各々水素又はＣ１〜４アルキル基であり、ｔは０乃至６の整数である。好ましくは、Ｒ25、Ｒ26及びＲ27は水素でありｔは０である。）である。好ましくはＺはＣＨ2又はＳである。
好ましくは、Ｒ2〜Ｒ5のうちの１つは上記に定義した基−Ｘ−Ｙ−Ｒ24である。好ましくはＲ3は基−Ｘ−Ｙ−Ｒ24である。
適切には、Ｒ6及びＲ7は同一又は異なっており各々水素、メチル、エチルであるか、又はブロモ、ヒドロキシ若しくはメトキシで置換されたメチルである。好ましくは、Ｒ7は水素であり、Ｒ6はメチルである。
好ましくは−Ｘ−Ｙ−は基−ＳＯ2ＮＲ17−又はＣＨ2ＮＲ17でありここにＲ17は前記定義の通りである。
適切には、Ｒ17は水素又はＣ１〜４アルキル基又はアルケニル基であり、好ましくはＲ17は水素又はメチルである。
式Ｉの更なる一群の化合物は、式（II）、
0003774850.tif 000007
（式中、Ｒ1、Ｒ6、Ｒ7及び点線は前記定義の通りであり、Ｒ28乃至Ｒ31は同一又は異なっており各々、水素、ハロ、ニトロ、基Ｓ（Ｏ）nＲ8、基ＮＲ11Ｒ12、基ＯＲ13であるか又は、基ＯＲ１４若しくはＮＲ14Ｒ15で置換されていてよいＣ１〜４脂肪族基より選ばれ、ここにＲ8、Ｒ11、Ｒ12、Ｒ13、Ｒ14及びＲ15は前記定義の通りであり、但しＲ28乃至Ｒ31の全てが水素であることはなく、かつＲ30はＲ1がヒドロキシ又はメチルのときはメトキシでない。）の化合物又はそれらの塩である。
式（Ｉ）の化合物の好ましい一群は、式（III）、
0003774850.tif 000008
（式中、Ｒ1、Ｒ6及びＲ7は前記定義の通りであり、Ｒ32乃至Ｒ35は同一又は異なっており一つは基Ｘ−Ｙ−Ｒ16であり他は同一又は異なっており各々、水素、ハロ、ニトロ、基Ｓ（Ｏ）nＲ8、基ＮＲ11Ｒ12、基ＯＲ13又は、基ＯＲ14若しくはＮＲ14Ｒ15で置換されていてよいＣ１〜４脂肪族基から選ばれ、ここにＸ、Ｙ、Ｒ8、Ｒ11、Ｒ12、Ｒ13、Ｒ14、Ｒ15及びＲ16は前記定義の通りである。）の化合物又はそれらの塩である。
式１の化合物の更なる好ましい一群は式（IV）、
0003774850.tif 000009
（式中、Ｒ1、Ｒ6、Ｒ7及びＲ32乃至Ｒ35は前記定義の通りである。）の化合物である。
好ましくは、Ｒ33は前記定義の基Ｘ−Ｙ−Ｒ16である。
式（Ｉ）の好ましい化合物としては次のものが含まれる。
３−アミノ−９−ブロモベンゾ〔ｆ〕キナゾリン−１（２Ｈ）−オン
３−アミノ−９−エチニルベンゾ〔ｆ〕キナゾリン−１（２Ｈ）−オン
Ｎ−（４−（（３−アミノ−１，２，５，６−テトラヒドロ−１−オキソベンゾ〔ｆ〕キナゾリン−９−イル）スルホンアミド）ベンゾイル）−Ｌ−グルタミン酸
Ｎ−（４−（（１，２，５，６−テトラヒドロ−３−メチル−１−オキソベンゾ〔ｆ〕キナゾリン−９−イル）−スルホンアミド）ベンゾイル）−Ｌ−グルタミン酸
Ｎ−（４−（（１，２−ジヒドロ−３−メチル−１−オキソベンゾ〔ｆ〕キナゾリン−９−イル）スルホンアミド）ベンゾイル）−Ｌ−グルタミン酸
Ｎ−（４−（（（１，２−ジヒドロ−３−メチル−１−オキソベンゾ〔ｆ〕キナゾリン−９−イル）メチル）アミノ）−２−フルオロベンゾイル）−Ｌ−グルタミン酸
Ｎ−（４−（（（１，２−ジヒドロ−３−メチル−１−オキソベンゾ〔ｆ〕キナゾリン−９−イル）メチル）アミノ）ベンゾイル）−Ｌ−グルタミン酸
（Ｓ）−２−（５−（（（１，２−ジヒドロ−３−メチル−１−オキソベンゾ〔ｆ〕キナゾリン−９−イル）メチル）アミノ−１−オキソ−２−イソインドリニル）グルタール酸
９−（（４−アセチルアニリノ）メチル）−３−メチルベンゾ〔ｆ〕キナゾリン−１（２Ｈ）−オン
３−メチル−９−（（４−ニトロアニリノ）メチル）ベンゾ〔ｆ〕キナゾリン−１（２Ｈ）−オン
Ｎ−（４−（（（３−アミノ−１，２−ジヒドロ−１−オキソベンゾ〔ｆ〕キナゾリン−９−イル）メチル）アミノ）ベンゾイル）−Ｌ−グルタミン酸
３−アミノ−９−（（４−ニトロアニリノ）メチル）ベンゾ〔ｆ〕キナゾリン−１（２Ｈ）−オン
９−（（４−アセチルアニリノ）メチル）−３−アミノベンゾ〔ｆ〕キナゾリン−１（２Ｈ）−オン
（ＲＳ）−２−（２−（４−（（（１，２−ジヒドロ−３−メチル−１−オキソベンゾ〔ｆ〕キナゾリン−９−イル）メチル）アミノ）フェニル）−２−オキソエチル）グルタール酸
４−（４−（（（１，２−ジヒドロ−３−メチル−１−オキソベンゾ〔ｆ〕キナゾリン−９−イル）メチル）アミノ）フェニル）−４−オキソブタン酸エチル
４−（４−（（（１，２−ジヒドロ−３−メチル−１−オキソベンゾ〔ｆ〕キナゾリン−９−イル）メチル）アミノ）フェニル）−４−オキソブタン酸
Ｎ−（４−（（（１，２−ジヒドロ−３−メチル−１−オキソベンゾ〔ｆ〕キナゾリン−９−イル）メチル）アミノ）−２−フルオロベンゾイル）グリシン
Ｎ−（４−（（（１，２−ジヒドロ−３−メチル−１−オキソベンゾ〔ｆ〕キナゾリン−９−イル）メチル）アミノ）−２−フルオロベンゾイル）グリシンエチル
式（Ｉ）のある化合物は、非対称の炭素原子を含み、従って光学異性体として存在することが可能である。それら個々の異性体及びそれらの混合物は、本発明の範囲に含まれる。
式（Ｉ）の化合物が、これらの化合物の望ましくない副作用を防止又は減少させるために以下の保護剤と組み合わせて使用できることが今や見出された。
本発明は、それらの活性を阻害することなく式（Ｉ）の化合物の腸毒性を阻止する保護剤との組み合わせにおける、式（Ｉ）の化合物の投与に関する。適した保護剤は、葉酸類例えば葉酸、テトラヒドロ葉酸、５−ホルミルテトラヒドロ葉酸（ロイコボリン）又は５−メチルテトラヒドロ葉酸である。他の保護剤としては、チミン又はチミジンが含まれる。保護剤は、経口の処方として投与してよい。式（Ｉ）の化合物の投与の前、最中又は後に保護剤を投与することは、本発明の範囲内である。好ましくは、保護剤は、式（Ｉ）の化合物の投与の少し前、すなわち式（Ｉ）の化合物の15分乃至１時間前に投与される。
本発明はまた、非拮抗的葉酸類縁体を上記定義の保護剤と組み合わせて投与することを含む、組み合わせ療法にも関する。これは、、上に定義した保護剤のない場合に使用し得るよりも、非拮抗的葉酸類縁体の一層高投与量での使用を許容し、従って、ホストの毒性を最小限に止めつつ、より高い、より許容力な投与量を達成することができる。保護剤の存在は、該保護剤の非存在下において利用される投与量での該非拮抗的葉酸類縁体の毒性を低下させる（すなわち、保護剤の存在下においては、同一投与量で毒性が一層低い）。
非拮抗的葉酸類縁体は、標的酵素（例えば、チミジル酸シンターゼ、グリシンアミドリボヌクレオチドトランスホルミラーゼ、又はジヒドロ葉酸レダクターゼ）に対して古典的な非拮抗阻害動力学（葉酸基質に対する）を表す葉酸の構造的類縁体〔式（Ｉ）のベンゾキナゾリン化合物、例えば実施例１）又は２）の化合物を含むがこれに限定されない。〕と定義される。代わりとしては、本発明の非拮抗阻害剤は、上に定義した葉酸保護剤の存在下においても標的酵素に働いて殺細胞性を保持する（上に定義した）葉酸の構造的類縁体と定義される。該非拮抗阻害剤は静脈内又は腹腔内ボーラス又は注入として投与してよく、そして保護剤は、静脈内又は腹腔内ボーラス、注入として又は経口処方として投与してよい。古典的非拮抗阻害の定義については、I. H. Segal(1975), Enzyme kinetics, John Wiley and Sonsを参照のこと（参照によりここに導入する）。
より具体的には、葉酸、テトラヒドロ葉酸、５−ホルミルテトラヒドロ葉酸（ロイコボリン）又は５−メチルテトラヒドロ葉酸より選ばれる保護剤は、それらの抗腫瘍活性を阻止することなく式（Ｉ）の化合物の腸毒性を阻止することができる。
好ましくは、該非拮抗的葉酸類縁体（すなわち、非拮抗阻害剤）は、式（Ｉ）の化合物でありそして保護剤は葉酸又は５−ホルミルテトラヒドロ葉酸である。より好ましくは、該非拮抗的葉酸類縁体（非拮抗阻害剤）は、（Ｓ）−２−（５−（（（１，２−ジヒドロ−３−メチル−１−オキソベンゾ〔ｆ〕キナゾリン−９−イル）メチル）アミノ）−１−オキソ−２−イソインドリニル）グルタール酸、Ｎ−（４−（（（１，２−ジヒドロ−３−メチル−１−オキソベンゾ〔ｆ〕キナゾリン−９−イル）メチル）アミノ）−２−フルオロベンゾイル）−Ｌ−グルタミン酸、又はＮ−（４−（（１，２，５，６−テトラヒドロ−３−メチル−オキソベンゾ〔ｆ〕キナゾリン−９−イル）スルホンアミド）ベンゾイル）−Ｌ−グルタミン酸より選ばれる化合物であり、そして組み合わせて使用される保護剤は、葉酸又は５−ホルミルテトラヒドロ葉酸である。最も好ましくは、化合物（Ｓ）−２−（５−（（（１，２−ジヒドロ−３−メチル−１−オキソベンゾ〔ｆ〕キナゾリン−９−イル）メチル）アミノ）−１−オキソ−２−イソインドリニル）グルタール酸が、葉酸又は５−ホルミルテトラヒドロ葉酸と組み合わせて用いられる。
本発明の化合物の塩もまた、保護剤又はそれらの塩と組み合わせて用いることができる。
本発明の化合物又は保護剤の適した塩は、アミノ基に由来する酸付加塩でも、又は、化合物（Ｉ）若しくは保護剤に由来する陰イオン種（例えばカルボキシル基で置換されている場合）及び陽イオンを含むものであってよい。両タイプの塩において、治療活性はここに規定した化合物から来る部分に存し、そして他の構成要素の同一性は、治療及び予防目的には薬剤的に患者に許容し得ることが好ましいものの、相対的に重要性は低い。薬剤的に許容し得る酸付加塩の例としては、鉱酸例えば塩酸、臭化水素酸、リン酸、メタリン酸、硝酸及び硫酸等に由来する塩、並びに、有機酸例えば酒石酸、酢酸、トリフルオロ酢酸、クエン酸、リンゴ酸、乳酸、フマル酸、安息香酸、グリコール酸、グルコン酸、コハク酸及びメタンスルホン酸及びアリールスルホン酸例えばｐ−トルエンスルホン酸等に由来する塩が含まれる。化合物（Ｉ）由来の陰イオン種と陽イオンとを含む塩の例としては、アンモニウム塩、ナトリウム及びカリウム等のアルカリ金属塩、マグネシウム及びカルシウムの様なアルカリ土類金属塩、並びに、有機塩基によって形成された塩、例えばモノ−、ジ−、トリ−（低級アルキル）又は（低級アルカノール）アミン例えばトリエタノールアミン及びジエチルアミノ−エタノールアミン等に由来するアミノ塩、並びにピペリジン、ピリジン、ピペラジン及びモルフォリンのような複素環アミンとの塩、が含まれる。薬剤的に許容し得る塩はそのように許容し得ない塩と共に本発明の化合物の単離及び／又は精製において有用性を有し、そして薬剤的に許容し得ない塩はまた、当該分野において周知の技術によって薬剤的に許容し得る塩へと変換可能であるという点においてやはり有用である。
本発明の化合物又は塩が動物に投与される経路は、経口、局所、非経口（皮下、皮内、筋肉内、静脈内又は直腸を含む）であってよい。該化合物又は塩が薬剤処方形態で提供される場合（それは好ましいことであるが）、用いられる実際の処方は勿論内科医又は獣医によって選ばれた投与経路に依存する。例えば、経口投与が好ましいとされるときは、用いられる薬剤処方は、好ましくは、そのような経路に適したものである。
本発明の化合物又は塩の治療上有効な量は、例えば動物の齢及び体重、治療を必要としているその状態及びその重症度、処方の性質、及び投与経路等を含む多くの要因に依存し、最終的には担当の内科医又は獣医の自由裁量であろう。しかしながら、新生物増殖例えば結腸癌又は乳癌の治療のために（上述の）保護剤と組み合わせて使用すべき（上述の）本発明の非拮抗的葉酸類縁体の有効量は、一般には、１日あたり0.1乃至100ｍｇ／ｋｇ患者（哺乳類）体重の範囲にあり、より通常は、１乃至50ｍｇ／ｋｇ体重／日であろう。従って、70ｋｇの成体哺乳類について、１日あたりの実際の量は通常70乃至3500ｍｇであり、そしてこの量は１日あたり単一投与量として投与してもよく、また、より普通には、１日の総投与量が同じであるような何回か（例えば２、３、４、５又は６回）の１日あたり部分投与量の形で投与してもよい。本発明の塩の有効量は、本化合物それ自体の有効量に対する或る比率として決定することができる。
免疫系の疾患（例えば間接リウマチ及び組織拒絶）及び乾癬のような関連疾病の治療のための本発明の化合物の有効量は、一般には、１日あたり0.5〜10ｍｇ／ｋｇ患者（哺乳類）体重の範囲にあるであろう。従って、70ｋｇの成人では、１日あたりの実際の量は、通常、１日あたり約35〜700ｍｇであり、この量は１日あたりの単一投与量として投与してもよく、また、より通常は、投与は間欠的、例えば12時間間隔又は週１回であろう。本発明の塩の有効量は、本化合物それ自体の有効量に対する或る比率として決定することができる。
細菌及び真菌感染の治療のための本発明の化合物の有効投与量は、１日あたり0.1〜100ｍｇ／ｋｇ患者（哺乳類）体重の範囲にあり、好ましくは１日あたり１〜50ｍｇ／ｋｇ体重の範囲にある。従って、70ｋｇの成体哺乳類では、１日あたりの実際の投与量は、70〜3500ｍｇであり、この量は１日あたりの単一投与量として投与してもよく、また、より好ましくは、１日あたり総投与量が同一であるような何回か（例えば２、３、４、５又は６回）の副投与量の形で投与してもよい。本発明の塩の有効量は、本化合物それ自体の有効投与量に対する或る比率として決定することができる。
非拮抗的葉酸類縁体（ここに記述した本発明の化合物を含むがこれに限定されない）と組み合わせて使用するための本発明の保護剤（例えば葉酸）の有効量は、１日あたり１〜300ｍｇ／ｋｇ患者（哺乳類）体重の範囲にあり、好ましくは、１日あたり５〜50ｍｇ／ｋｇ体重の範囲にある。従って、70ｋｇ／ｍｇの成体哺乳類では、実際の投与量は350〜3500ｍｇであり、この量は１日あたりの単一投与量として投与してもよく、また、より好ましくは、１日あたりの総投与量が同一であるような何回か（例えば２、３、４、５又は６回）の副投与量の形で投与してもよい。
本発明の化合物による新生物増殖の治療は、時には、該動物への解毒剤又は救護剤、例えばチミジンの投与を必要とする。
ここに記述した保護剤と組み合わせて使用することのできる本発明の化合物それ自体は、ＰＣＴ国際公開WO/91/19700に開示されているものを含むがそれらに限られない。本発明の保護剤は、容易に入手でき、当業者に周知である。
本発明の化合物又は塩は、その儘の化合物質として投与することも可能ではあるが、それらを薬剤処方の形で与えることが好ましい。
従って、本発明は、医療適用のための、本発明の化合物と保護剤又は上記に定義したそれらの薬剤的に許容し得る塩とを組み合わせの形で、１つ又はより多くの薬剤的に許容し得るそれらの担体とそして所望により１つ又は他の治療成分と共に含むものである、薬剤処方を更に提供する。
該薬剤処方は所望により、本発明の化合物又は塩と一緒に有用性をもって用いることのできる他の治療剤、例えば、本発明の化合物又は塩の抗新生物活性を高める能力のあるピリミジンヌクレオシド移転阻害剤等を含んでよい。担体に関連してここに用いられている「薬剤的に許容し得る」という表現は、処方中に用いられる本発明の化合物又は塩とも、そして存在してよい如何なる他の治療剤とも適合性であり且つ患者に有害でない、という意味で用いられている。該担体それ自体は、本発明の化合物又は塩及び存在してよい如何なる他の治療剤をも薬剤処方として処方化することを可能にする、薬学の分野において慣用的に用いられている１つ又はより多くの賦形剤よりなるものであってよい。
本発明の薬剤組成物としては、経口、非経口（皮下、皮内、筋肉内及び静脈内を含む）及び直腸投与に適したものが含まれるが、最適な経路は、例えば患者の状態及び同一性等におそらくは依存するであろう。処方は、簡便には単位投与量形態で提供してよく、当業者に周知の如何なる方法で調製してもよい。全ての方法は、活性成分すなわち本発明の化合物又は塩及び保護剤を担体と合わせるステップを含む。
一般には、処方は、活性成分を液体担体又は細かく分割された個体担体又は両方と均一に又は親密に合わせ、次いで、必要なら、合わせた混合物を所望の処方へと形成する。
経口投与に適した本発明の薬剤処方は、各々所定量の活性成分を含有するカプセル、カシェー、錠、又はロゼンジのような個別の単位として提供してもよく、粉末又は顆粒として、シロップ剤、エリキシル剤又は飲料のような水性液体又は非水性液体中の溶液又は懸濁液として、又は水中油液体エマルジョン又は油中水溶液エマルジョンとして提供してもよい。該処方はまた、ボーラス、舐剤又はペーストであってもよい。
一般には、錠剤は、経口投与に適した最も簡便な薬剤処方である。錠剤は、活性成分を薬剤的に許容し得る担体と共に圧縮又は成形することによって作ることができる。圧縮錠は、適当な機器中において、粉末又は顆粒のような自由流れ形態の活性成分を、例えば結合剤、不活性賦形剤、滑沢剤、崩壊剤及び／又は界面活性剤等と混合して、圧縮することによって製造することができる。鋳型成形錠は、不活性な液体賦形剤によって湿らせた粉末化した活性成分の混合物を、適当な機器中において型で成形することにより調製することができる。錠剤は、所望により、被覆し又は刻み目を入れてよく、そして該活性成分のゆっくりした又は制御された放出を提供するように処方されてもよい。
非経口投与に適した本発明の薬剤処方としては、例えば抗酸化剤、緩衝剤、制菌剤及び組成物を患者の血液と等張による溶液等を含有してよい、水性及び非水性の滅菌注射溶液、及び例えば懸濁化剤及び粘稠剤等を含んでよい水性及び非水性の滅菌懸濁剤が含まれる。処方は、例えば密封されたアンプル及びバイアル等の単一投与量又はマルチ投与量容器中に入れて提供してもよく、使用直前に例えば注射用水等の滅菌液体担体の添加のみを要するものである凍結乾燥状態において貯蔵してもよい。即座の注射溶液及び懸濁液は、上述の種類の滅菌粉末、顆粒及び錠剤から製造してよい。
直腸投与に適した本発明の薬剤処方は、例えばカカオ脂及びポリエチレングリコール等を含有する坐剤として製造してよい。
式（Ｉ）の化合物及び塩は、ヒト結腸ＳＷ480腺癌細胞培養物の細胞毒性試験（これにおいて本発明の代表的化合物が活性であることが示されている）及びヒト乳房ＭＣＦ７腺癌細胞培養物において抗新生物活性を有する。本発明の化合物が新生物増殖を阻止できるということがこうして確立された。従って、本発明の化合物及び塩は、医学において、そして特に、哺乳類における黒色腫、乳腺腫及び結腸腫のような充実性腫瘍を含む新生物増殖の治療において有用である。従って、本発明は、尚も更に、治療的に有効な量の本発明の化合物又は塩を保護剤と組み合わせて動物に投与することを含む、動物例えば哺乳類における感受性のある悪性腫瘍及び白血病を治療するための方法を提供する。代わりとして、保護剤と組み合わせた本発明の化合物又は塩も提供される。代わりとして、医学において用いるためのそして特に悪性腫瘍のような新生物増殖の治療において用いるための、保護剤と組み合わせた本発明の化合物又は塩も提供される。
本発明はまた、新生物増殖の治療のための医薬を製造するための、保護剤と組み合わせた式（Ｉ）の化合物又はその塩の使用をも提供する。
保護剤と組み合わせて本発明の化合物又は塩による治療を必要とする該動物は、通常、ヒトのような哺乳類である。
以下の実施例は、本発明において有用でありそして本発明を明らかにするものである代表的化合物の製造及び薬理学的性質を説明する。これらの実施例は説明に過ぎず、本発明の範囲を限定し又は狭めるものと解釈してはならない。
実施例１
（Ｓ）−２−（５−（（（１，２−ジヒドロ−３−メチル−１−オキソベンゾ〔ｆ〕キナゾリン−９−イル）メチル）アミノ）−１−オキソ−２−イソインドリニル）グルタール酸  〔化合物Ａ〕
Ａ．  （Ｓ）−２−（４−ニトロフタルイミド）グルタール酸ジエチル
ジイソプロピルエチルアミン（24ｍｌ、0.138mol）（Aldrich）を、４−ニトロフタル酸無水物（25ｇ、0.13mol）（東京化成）と塩酸Ｌ−グルタミン酸ジエチルエステル（35ｇ、0.146mol）（Aldrich）とのトルエン（130ｍｌ）中懸濁液に加えた。Dean-Starkトラップを利用して、反応混合物を還流下に2.5時間攪拌した。冷却した後、溶液をジエチルエーテル（300ｍｌ）で希釈し、水（75ｍｌ）、飽和ＮａＨＣＯ3溶液（50ｍｌ）で洗浄し、乾燥し（ＭｇＳＯ4）、70℃にて真空下に濃縮して、（Ｓ）−２−（４−ニトロフタルイミド）グルタール酸ジエチルを油状物として得、これは放置により白色固体へと固化した（35.8ｇ）。融点＝65.5〜66.5℃
Ｂ．  （Ｓ）−２−（４−アミノフタルイミド）グルタール酸ジエチル
（Ｓ）−２−（４−ニトロフタルイミド）グルタール酸ジエチル（35.6ｇ、94.1mmol）と10％パラジウム−活性炭（0.5ｇ）（Aldrich）とのエタノール（200ｍｌ）中懸濁液を、水素雰囲気下（40〜50ｐｓｉ）で26時間震盪した。溶液をセライトを通すことにより濾過し、真空下に濃縮した。残渣をクロマトグラフィーによりシリカゲル（250ｇ）上ジエチルエーテル：ヘキサン（４：１）で溶出させて精製し（Ｓ）−２−（４−アミノフタルイミド）グルタール酸ジエチルを粘稠な黄色油状物として得た（29.1ｇ）。
Ｃ．  （Ｓ）−２−（５−アミノ−１−オキソ−２−イソインドリニル）グルタール酸ジエチル
（Ｓ）−２−（４−アミノフタルイミド）グルタール酸ジエチル（10.5ｇ、30.2mmol）のエタノール（150ｍｌ）中の溶液をアセトニトリル／ＣＯ2浴中で冷却した。濃ＨＣｌ（25ｍｌ）を加え、続いて、内部温度が−40℃に達したとき30メッシュの顆粒状Ｚｎ（10.5ｇ、0.161mol）（Fisher）を加えた。この反応混合物を1.5時間この温度で攪拌し、−10℃にて更に１時間攪拌した。過剰のＺｎを溶液から濾去した。10％パラジウム−活性炭（1.0ｇ）を加え、溶液を水素下（30〜50ｐｓｉ）に終夜震盪した。セライトを通すことによって触媒を濾去し、濾液を真空下に濃縮した。残渣をシリカゲル（15ｇ）に吸収させ、シリカゲル（440ｇ）上クロマトグラフィーにより酢酸エチル：塩化メチレン（１：14ｇ）を用いて溶出させることによって精製した。
Ｄ．  ９−ブロモメチル−３−メチルベンゾ〔ｆ〕キナゾリン−１（２Ｈ）−オン
３，９−ジメチルベンゾ〔ｆ〕キナゾリン−１（２Ｈ）−オン（4.00ｇ、17.9mmol）のベンゼン（20000ｍｌ）中の熱い溶液に窒素下にＮ−ブロモスクシンイミド（4.00ｇ、22.5mmol）を加えた。この反応混合物を還流温度の直ぐ下で30分間攪拌し、次いで穏やかに還流しつつ30分間攪拌した。得られた懸濁液を２時間放冷し、固形物を濾取し、70℃にて減圧下に乾燥させて９−ブロモメチル−３−メチルベンゾ〔ｆ〕キナゾリン−１（２Ｈ）−オン（4.32ｇ、ＮＭＲにて純度83％）を得た。
Ｅ．  （Ｓ）−２−（５−（（（１，２−ジヒドロ−３−メチル−１−オキソベンゾ〔ｆ〕キナゾリン−９−イル）メチル）アミノ）−１−オキソ−２−イソインドリニル）グルタール酸ジエチル
粗製９−ブロモメチル−３−メチルベンゾ〔ｆ〕キナゾリン−１（２Ｈ）−オン（4.32ｇ）と（Ｓ）−２−（５−アミノ−１−オキソ−２−イソインドリニル）グルタール酸ジエチル（4.0ｇ、12mmol）とＮａＨＣＯ3（2.0ｇ、24mmol）とのＤＭＦ（30ｍｌ）中の溶液を、窒素下に105℃にて1.5時間攪拌した。冷却後、酢酸（１ｍｌ、17mmol）を加え、この反応混合液をエタノールを入れた大型の丸底フラスコへ移し替え、次いで真空下にシリカゲル（30ｇ）上へ濃縮した。この吸収された材料をシリカゲル上クロマトグラフィーによりメタノール：塩化メチレン（１：24）で溶出させ、次いで固体を塩化メチレン（〜20ｍｌ）から酢酸エチル（〜45ｍｌ）及びメタノール（〜５ｍｌ）によって沈殿させた。この白色固体を窒素下に濾取し、高真空下に乾燥させて（Ｓ）−２−（５−（（（１，２−ジヒドロ−３−メチル−１−オキソベンゾ〔ｆ〕キナゾリン−９−イル）メチル）アミノ）−１−オキソ−２−イソインドリニル）グルタール酸ジエチルを得た（3.27ｇ）。
Ｆ．  （Ｓ）−２−（５−（（（１，２−ジヒドロ−３−メチル−１−オキソベンゾ〔ｆ〕キナゾリン−９−イル）メチル）アミノ）−１−オキソ−２−イソインドリニル）グルタール酸
（Ｓ）−２−（５−（（（１，２−ジヒドロ−３−メチル−１−オキソベンゾ〔ｆ〕キナゾリン−９−イル）メチル）アミノ）−１−オキソ−２−イソインドリニル）グルタール酸ジエチル（3.20ｇ、5.75mmol）の0.2Ｎ  ＮａＯＨ（140ｍｌ）中の溶液を窒素下に室温にて３時間攪拌した。次いで１Ｎ  ＨＣｌにより溶液をｐＨ３にゆっくりと調節し、得られた懸濁液を手短に攪拌した。この白色固体を窒素下に濾取し、水洗し、高真空下に乾燥させて（Ｓ）−２−（５−（（（１，２−ジヒドロ−３−メチル−１−オキソベンゾ〔ｆ〕キナゾリン−９−イル）メチル）アミノ）−１−オキソ−２−イソインドリニル）グルタール酸を得た（2.85）。
1Ｈ  ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ6／Ｄ2Ｏ，300ＭＨｚ）δ：1.86-2.34（m，4H，glu CH2，CH2），2.44（s，3H，CH3），4.25（非常に強くカップリングしたＡＢ対，2H，glu NCH2Ar），4.58（s，2H，C9-CH2），4.67-4.75(m，1H，glu CH)，6.69-6.77(m，2H，Ar)，7.37（d，J=8 Hz，1H，Ar），7.59（d，J=9 Hz，1H，Ar），7.64(dd，J=8.2 Hz，1H，Ar），8.01（d，J=8 Hz，1H，Ar），8.22（d，J=9 Hz，1H，Ar），9.85（s，1H，Ar）
分析：Ｃ27Ｈ24Ｎ4Ｏ6・1.6Ｈ2Ｏとして：
理論値：Ｃ，61.27；Ｈ，5.18；Ｎ，10.58
実測値：Ｃ，61.29；Ｈ，5.18；Ｎ，10.57
実施例２
（Ｓ）−２−（５−（（（３−アミノ−１，２−ジヒドロ−１−オキソベンゾ〔ｆ〕キナゾリン−９−イル）メチル）アミノ）−１−オキソ−２−イソインドリニル）グルタール酸
Ａ．  Ｎ−（９−ブロモメチル−１，２−ジヒドロ−１−オキソベンゾ〔ｆ〕キナゾリン−３−イル）ピバラミド
Ｎ−（９−メチル−１，２−ジヒドロ−１−オキソベンゾ〔ｆ〕キナゾリン−３−イル）ピバラミド（15ｇ、48mmol）を還流ベンゼン（4000ｍｌ）中に溶解させた。反応から熱を除去してＮ−ブロモコハク酸イミド（11.28ｇ、64mmol、Kodak）を加えた。溶液を、還流下２時間加熱した。ベンゼンを真空下に除去し、残渣を少量のエタノールでスラリーとし、濾過しそして高真空下に乾燥させてブロモメチル誘導体を得た。この生成物を、更に精製することなく使用した。
Ｂ．  （Ｓ）−２−（５−（（（１，２−ジヒドロ−１−オキソ−３−ピバラミドベンゾ〔ｆ〕キナゾリン−９−イル）メチル）アミノ）−１−オキソ−２−イソインドリニル）グルタール酸ジエチル
（Ｓ）−２−（５−アミノ−１−オキソ−２−イソインドリニル）グルタール酸ジエチル（2.8ｇ）とＮ−（９−ブロモメチル−１，２−ジヒドロ−１−オキソベンゾ〔ｆ〕キナゾリン−３−イル）ピバラミド（2.0ｇ）とをジメチルホルムアミド（15ｍｌ）中で115℃にて1.5時間加熱した。この反応混合物をシリカゲル上へ濃縮し、塩化メチレン／メタノール（97：３）で溶出させた。生成物を含有する画分を蒸発させ、そして高真空下に終夜貯蔵した。この部分的に結晶化した残渣油状物を酢酸エチル中に懸濁させて濾過した。固体はメタノールから再結晶させ、濾過し、高真空下に乾燥させてジエステルを白色固体として得た（0.21ｇ）。
Ｃ．  （Ｓ）−２−（５−（（（３−アミノ−１，２−ジヒドロ−１−オキソベンゾ〔ｆ〕キナゾリン−９−イル）メチル）アミノ）−１−オキソ−２−イソインドリニル）グルタール酸
（Ｓ）−２−（５−（（（１，２−ジヒドロ−１−オキソ−３−ピバラミドベンゾ〔ｆ〕キナゾリン−９−イル）メチル）アミノ）−１−オキソ−２−イソインドリニル）グルタール酸ジエチルの0.33Ｍ水酸化ナトリウム水溶液／テトラヒドロフラン（12ｍｌ、１：１）中の溶液を加熱して還流させた。反応混合物を均質に保つために追加の水（６ｍｌ）を加え、溶液を還流下に2.5時間過熱した。冷却した溶液を１Ｍ塩酸でｐＨ３に調節し、沈殿を濾取し水で洗い、高真空下に乾燥させた。この粗生成物で白色固体（0.15ｇ）は、ＮＭＲによると所望の二価酸の３−ピバラミドを約20％含有していた。この固体を0.5Ｍ水酸化ナトリウム（５ｍｌ）中に再溶解させ室温にて２日間攪拌した。溶液のｐＨを２に調節し、析出した固体を濾取し、水で洗い、そして室温にて高真空下に乾燥させて該二価酸を白色固体として得た（0.13ｇ）。
1Ｈ  ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ6，300ＭＨｚ）；δ1.88-2.08（m，1H），2.10-2.30（m，3H），2.26（s，2H），4.52（d．J=5.6 Hz，2H），4.65-4.75(m，1H)，6.57（br s，2H），6.67-6.75(重なったs及びdd，2H），7.13（br t．J=5.6 Hz，1H），7.27（d，J=8.9 Hz，1H），7.35(d，J=8.3 Hz，1H），7.46（dd，J=8.3,1.1 Hz，1H），7.85（d，J=8.2 Hz，1H），8.00（d，J=8.9 Hz，1H），9.68（s，1H），11.14（brs，1H），11.9-12.9（v br s 2H）
分析：Ｃ28Ｈ23Ｎ5Ｏ6・2.5Ｈ2Ｏとして：
理論値：Ｃ，57.61；Ｈ，4.93；Ｎ，12.80
実施例３
Ｎ−４−（（１，２，５，６−テトラヒドロ−３−メチル−１−オキソベンゾ〔ｆ〕キナゾリン−９−イル）スルホンアミド）ベンゾイル）−Ｌ−グルタミン酸
Ａ．  Ｎ−（４−（（１，２，５，６−テトラヒドロ−３−メチル−１−オキソベンゾ〔ｆ〕キナゾリン−９−イル）スルホンアミド）ベンゾイル）−Ｌ−グルタミン酸ジエチル
Ｎ−（４−アミノベンゾイル）−Ｌ−グルタミン酸ジエチルエステル（6.06ｇ、0.0188mol）（Aldrich）及び塩化１，２，５，６−テトラヒドロ−３−メチル−１−オキソベンゾ〔ｆ〕キナゾリン−９−スルホニル（5.84ｇ、0.0188mol）をピリジン（55ｍｌ）に溶解させ、反応混合物を室温にて3.5時間攪拌した。真空下にピリジンを除去し、残渣を水で洗浄して、桃色の固体を濾取した。この粗生成物を高真空下に乾燥させ、次いでWaters Prep 500装置によりクロマトグラフィーに付した（シリカカートリッジ、メタノール：塩化メチレン（１：４）で溶出）。生成物をエタノールから再結晶させ高真空下に乾燥させてジエチルエステルを得た（5.68ｇ、51％）。
Ｂ．  Ｎ−（４−（（１，２，５，６−テトラヒドロ−３−メチル−１−オキソベンゾ〔ｆ〕キナゾリン−９−イル）スルホンアミド）ベンゾイル）−Ｌ−グルタミン酸
Ｎ−（４−（（１，２，５，６−テトラヒドロ−３−メチル−１−オキソベンゾ〔ｆ〕キナゾリン−９−イル）スルホンアミド）ベンゾイル）−Ｌ−グルタミン酸ジエチル（4.53ｇ、7.6mmol）をＮ  ＮａＯＨ（64ｍｌ）中に溶解させ、溶液を室温にて４時間攪拌した。この溶液のｐＨを１Ｎ  ＨＣｌで3.00に調節し、固体を濾過により集め、水で洗浄し、高真空下に乾燥させて生成物をほぼ白色の固体として得た（3.94ｇ、96％）。
1Ｈ  ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ6，300ＭＨｚ）δ：1.84-1.96（m，1H，glu CH），2.00-2.10（m，1H，glu CH），2.32（s，3H，CH3;t，2H，glu CH2に重なる），2.71（m，2H，ArCH2），2.89（m，2H，ArCH2），4.28-4.36（m，1H，glu CH），7.20（d，J=9Hz，2H，Ar），7.39（d，J=8Hz，1H，Ar），7.62（dd，J=8.2Hz，1H，Ar），7.74（d，J=9Hz，2H，Ar），8.44（d，J=8Hz，1H，gluNH），9.21（d，J=2Hz，1H，Ar），10.73（s，1H，SO2NH），12.36（br s，2H，CO2H），12.72（br s，1H，NH）
分析：Ｃ25Ｈ24Ｎ4Ｏ8Ｓ・3/2Ｈ2Ｏとして：
理論値：Ｃ，52.91；Ｈ，4.79；Ｎ，9.87；Ｓ，5.65
実測値：Ｃ，52.98；Ｈ，4.78；Ｎ，9.87；Ｓ，5.58
実施例４
Ｎ−（４−（（（１，２−ジヒドロ−３−メチル−１−オキソベンゾ〔ｆ〕キナゾリン−９−イル）メチル）アミノ）−２−フルオロベンゾイル）−Ｌ−グルタミン酸
Ａ．  Ｎ−（４−（（（１，２−ジヒドロ−３−メチル−１−オキソベンゾ〔ｆ〕キナゾリン−９−イル）メチル）アミノ）−２−フルオロベンゾイル）−Ｌ−グルタミン酸ジエチル
３，９−ジメチルベンゾ〔ｆ〕キナゾリン−１（２Ｈ）−オン（2.0ｇ、8.9mmol）のベンゼン（1000ｍｌ）中の熱い溶液に窒素下にＮ−ブロモコハク酸イミド（ＮＢＳ）（2.0ｇ、11mmol）を加えた。この溶液を還流下に１時間攪拌し、次いで真空下に濃縮して粗製の９−ブロモメチル−３−メチルベンゾ〔ｆ〕キナゾリン−１（２Ｈ）−オンを得た。この固体をＮ−（４−アミノ−２−フルオロベンゾイル）−Ｌ−グルタミン酸ジエチル（T．R．Jones他、英国特許ＧＢ2175903Ａ，1986）（6.0ｇ、18mmol）と共にＤＭＦ（20ｍｌ）中に懸濁させ、窒素下に100℃にて30分間攪拌した。反応混合物を冷却させ、Ｎ−メチルモルフォリン（1.0ｍｌ、9.1mmol）（Aldrich）を加え、溶液を高真空下に濃縮した。残渣をシリカゲルクロマトグラフィーにより塩化メチレン：ＴＨＦ（５：１）で溶出させて精製した。生成物を含有する画分を真空下に濃縮して粘稠なペースとし、少量のジエチルエーテルに該固体を懸濁させ、窒素下に濾過し、高真空下に乾燥させてＮ−（４−（（（１，２−ジヒドロ−３−メチル−１−オキソベンゾ〔ｆ〕キナゾリン−９−イル）メチル）アミノ）−２−フルオロベンゾイル）−Ｌ−グルタミン酸ジエチルを白色固体として得た（2.3ｇ）。
Ｎ−（４−（（（１，２−ジヒドロ−３−メチル−１−オキソベンゾ〔ｆ〕キナゾリン−９−イル）メチル）アミノ）−２−フルオロベンゾイル）−Ｌ−グルタミン酸
Ｎ−（４−（（（１，２−ジヒドロ−３−メチル−１−オキソベンゾ〔ｆ〕キナゾリン−９−イル）メチル）アミノ）−２−フルオロベンゾイル）−Ｌ−グルタミン酸ジエチル（2.3ｇ、4.1mmol）の、エタノール（25ｍｌ）と0.2Ｎ  ＮａＯＨ（100ｍｌ）中の溶液を窒素下に室温にて３時間攪拌した。この溶液を１Ｎ  ＨＣｌにてｐＨ７に調節し、エタノールの除去するために真空下に液量を減少させた。窒素下に攪拌しつつ１Ｎ  ＨＣｌでｐＨ３へと溶液を酸性にすることによって生成物を析出させた。この懸濁液を15分間攪拌し、窒素下に濾過し、水で洗浄し、ラテックスシートでプレスして過剰の水を除去し、高真空下に乾燥させて、Ｎ−（４−（（（１，２−ジヒドロ−３−メチル−１−オキソベンゾ〔ｆ〕キナゾリン−９−イル）メチル）アミノ）−２−フルオロベンゾイル−Ｌ−グルタミン酸を白色固体として得た（2.1ｇ）。
1Ｈ  ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ6，300ＭＨｚ）ｄ：1.82-2.12（m，2H，glu CH2），2.29（t，J=7 Hz，2H，glu CH2），2.43（s，3H，C3-CH3），4.32-4.42（m，1H，glu CH），4.57（d，J=6 Hz，2H，C9-CH2），6.39（dd，J=15.2 Hz，1H，Ar），6.53（dd，J=9.2 Hz，1H，Ar），7.30（t，J=6 Hz，1H，ArNH），7.47（dd，J=9.9 Hz，1H，Ar），7.59（d，J=9 Hz，1H，Ar），7.61（dd，J=8.2 Hz，1H，Ar），7.73（t，J=7 Hz，1H，glu NH），8.01（d，J=8 Hz，1H，Ar），8.22（d，J=9 Hz，1H，Ar），9.85（s，1H，Ar），12.42（br s，2H，CO2H's），12.53（s，1H，N2H）
分析：Ｃ26Ｈ23ＦＮ4Ｏ6Ｓ・3/2Ｈ2Ｏ・1/3ＮａＣｌとして：
理論値：Ｃ，56.49；Ｈ，4.74；Ｎ，10.14；Ｃｌ，2.12；Ｎａ，1.37
実測値：Ｃ，56.48；Ｈ，4.64；Ｎ，10.20；Ｃｌ，2.01；Ｎａ，1.30
実施例５
チミジル酸シンターゼ阻害剤である化合物Ａ（８ｍｇ／ｋｇ）は、静脈内ボーラスとしてビーグル犬に５日連続して投与したとき致死的であった。対照的に、葉酸を50ｍｇ／ｋｇ経口投与した30分後に静脈内ボーラス投与した場合には、化合物Ａの20ｍｇ／ｋｇは致死的ではなかった。同様に10ｍｇ／ｋｇの化合物Ａの連続５日の静脈内投与は単独投与のときは致死的であった。しかし同じ投与量を、10、50、100又は200ｍｇ／ｋｇのロイコボリン（Wellcovorin）の経口投与の30分後に投与したときは、死亡は起こらなかった。
実施例６
腎下カプセルにヒト腫瘍ＧＣ３ＴＫを有するヌードマウスへ５日間腹腔内ボーラス投与した3.2又は10ｍｇ／ｋｇ化合物Ａは、腫瘍増殖の完全な阻止をもたらした。50ｍｇ／ｋｇの葉酸又は200ｍｇ／ｋｇのロイコボリンを化合物Ａの腹腔内ボーラス投与の30分前に経口投与したとき、腫瘍増殖の完全阻止が依然として観察された。別の実験においては、保護剤の不存在下において、化合物Ａの10ｍｇ／ｋｇは完全な増殖阻止をもたらし、3.2ｍｇ／ｋｇは89％阻止をもたらした。化合物Ａの30分前に500ｍｇ／ｋｇの葉酸を経口投与したとき、腫瘍増殖阻止は、葉酸の不存在下において観察されたのと有意には異ならなかった。
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