(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
生薬パロアズル（palo azul（南米）由来の抽出物と、グリセリンと、キシリトールとを、有効成分とする皮膚外用剤。
【発明の詳細な説明】
技術分野
本発明は、乾燥による皮膚傷害（または肌荒れ）の抑制もしくは修復のための化粧品または皮膚科用調製剤、ならびにそのような調製剤に含められる物質の評価方法に関する。
背景技術
角層水分量の保持に天然保湿因子（ＮＭＦ）が重要な働きをしている（Ｂｌａｎｋ  Ｉ．Ｈ．Ｊ．Ｉ．Ｄｅｒｍａｔｏｌ．，１８，４３３（１９５２），Ｂｌａｎｋ  Ｉ．Ｈ．Ｊ．Ｉ．Ｄｅｒｍａｔｏｌ．，２１，２５９（１９５３））。ＮＭＦの主成分であるアミノ酸は、ケラトヒアリン顆粒に由来するフィラグリンタンパクの分解によって産生されることが報告されている（Ｓｃｏｔｔ  Ｉ．Ｒ．ｅｔ  ａｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ  Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ａｃｔａ．，７１９，１１０−１１７（１９８２），Ｈｏｒｉｉ  Ｉ．ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｄｅｒｍａｔｏｌ．，１０，２５−３３（１９８３））。フィラグリンは３１７個のアミノ酸からなるタンパク質である。ＮＭＦの主成分であるアミノ酸がフィラグリンに由来することが明らかになって以来、乾燥肌を呈する病態とフィラグリンの関連性についての研究が進められている。近年、老人性乾皮症、アトピー性疾患などの乾燥肌において角層中のアミノ酸が減少していること（Ｈｏｒｉｉ  Ｉ．ｅｔ  ａｌ．，Ｂｒ．Ｊ．Ｄｅｒｍａｔｏｌ．，１２１，５８７−５９２（１９８９），Ｔａｎａｋａ  Ｍ．ｅｔ  ａｌ．，Ｂｒ．Ｊ．Ｄｅｒｍａｔｏｌ．，１３９，６１８−６２１（１９９８））、およびフィラグリンの発現が減少していること（Ｔｅｚｕｋａ  Ｔ．ｅｔ  ａｌ．，Ｄｅｒｍａｔｏｌｏｇｙ，１８８，２１−２４（１９９４），Ｓｅｇｕｃｈｉ  Ｔ，ｅｔ  ａｌ．，Ａｒｃｈ．Ｄｅｒｍａｔｏｌ．Ｒｅｓ．２８８，４４２−４４６，（１９９６））が明らかになってきている。また、乾燥環境によって肌荒れ等の皮膚トラブルを生じることは良く知られている。
このような背景からか、ＦＲ２  ７７７  １８５−Ａ１には、保水能の調節に有利に作用するためのフィラグリン合成を刺激する物質を他の活性物質と組み合わせたシワの処置用組成物が提案されている。しかし、フィラグリン合成を刺激する物質が、具体的に如何なる物質であるかについては記載がない。また、特開２０００−２６２７２号公報には、白色ルピン［またはシロバナルピナス（Ｌｕｐｉｎｕｓ ａｌｂｕｓ）］の種子の粉末に由来するタンパク質分解処理物がヒトのケラチノサイトのフィラグリンのｍＲＮＡを増加させ、角層の厚みを増加する作用がある旨の記載がある。さらに、ＷＯ９９／４７１１７には、ビタミンＢ３化合物を含む組成物が保湿剤として作用し、そしてフィラグリン、ケラチンおよびインボクリンより選ばれる皮膚タンパク質のレベルを増加させ、水分の角層への吸着もしくは吸収能を高めることが記載されている。
発明の開示
上述のように、従来から、フィラグリンの産生量を上昇させ、角層の厚みを増加させるとか、または角層への水分の吸収能を高める物質が提案されている。しかし、フィラグリンの産生に関与し、しかも健康な皮膚状態を維持するとの、より広範な観点から有効性が認められる物質または化合物の提供は依然として望まれるであろう。
本発明者らは、ヒトケラチノサイトにおいて、乾燥と角層水分量に関与する因子について検討した結果、フィラグリンタンパク質のレベルと該遺伝子の発現が乾燥により低下することを見い出した。
さらに、ある一定の培養ヒトケラチノサイトを気相暴露した場合に、フィラグリン遺伝子の発現量が有意に低下し、この現象が上記乾燥による皮膚傷害と相関性を有することを見出した。そして、該培養ヒトケラチノサイトを用いる培養系で、気相暴露によるフィラグリン遺伝子の発現量の低下を有意に抑制しうる物質が、上記乾燥による皮膚傷害を抑制ないしは修復しうることを見出した。
本発明はかかる知見に基づくものである。
したがって、本発明によれば、培養ヒトケラチノサイトの気相暴露によるフィラグリン遺伝子発現能の低下を有意に抑制しうる物質をヒト皮膚における角層のバリア機能の低下を抑制するのに十分な量、ならびに化粧品および／または皮膚科用製剤での使用が許容される基剤もしくは添加剤を含んでなる皮膚外用剤が提供される。
本発明の好ましい態様では、前記フィラグリン遺伝子発現能の低下を有意に抑制しうる物質が、ベタイン化合物およびそれらの誘導体、ポリオールおよびそれらの誘導体、生薬、ならびに抗酸化作用を有する物質からなる群より選ばれる１種または２種以上である皮膚外用剤が提供される。
また、本発明は、培養ヒトケラチノサイトの気相暴露によるフィラグリン遺伝子発現能の低下を有意に抑制しうる物質のヒト皮膚における角層のバリア機能および保湿機能の低下を抑制することのできる皮膚外用剤の調製のための使用にも関する。
その上、本発明は、ベタイン化合物およびそれらの誘導体、ポリオールおよびそれらの誘導体、生薬、ならびに抗酸化作用を有する物質からなる群より選ばれる１種もしくは２種以上を含む組成物をヒトの皮膚に塗布する段階を含んでなる乾燥による皮膚傷害の抑制または修復方法にも関する。
また、別の態様の本発明によれば、化合物等が乾燥による皮膚傷害を防止しうるか否かを評価するための方法が提供される。この評価方法は、
（Ａ）培養ヒトケラチノサイトを用意し、
（Ｂ）被験物の存在下で該培養ヒトケラチノサイトを気相暴露した後、該ケラチノサイトにおけるフィラグリン遺伝子の発現能を検出し、そして
（Ｃ）検出されたフィラグリン遺伝子の発現能を対照のそれと比較し、発現能の多寡を該皮膚傷害の抑制能の指標とする、
ことを特徴とするものである。
発明を実施するための最良の形態
本発明にいう、「培養ヒトケラチノサイトの気相暴露によるフィラグリン遺伝子発現能の低下を有意に抑制しうる」とは、後述する評価方法によって、評価したときに、対照（被検物質不含）の系における上記発現能の低下に比べて、被検物質含有系における上記発現能の低下が統計的に有意に抑制しうることを意味する。
また、本発明にいう、「皮膚傷害」とは、肌荒れや皮膚における小じわの形成、皮膚の柔軟性の低下など、健康な皮膚においては認められない様々な態様の変化、皮膚トラブルを意味する。
本発明では、上記発現能の低下を有意に抑制しうるものであれば、いずれも本発明に従う外用剤、使用および方法における有効成分に包含される。しかし、かような有効成分の具体的なものとしては、ベタイン化合物およびそれらの誘導体、ポリオールおよびそれらの誘導体、生薬、ならびに抗酸化作用を有する物質を挙げることができる。
「ベタイン化合物およびそれらの誘導体」は、本発明の目的に沿うものであれば、ベタイン（また、グリシンベタインとも称されている）およびその誘導体、ならびに対応するスルテイン（ベタインのカルボキシルがスルホにいれ替わっている）の双性イオン化合物に包含される如何なる化合物であってもよい。かような誘導体の代表的なものとしてはグリシンベタインのＮ−メチル基の１ないし３個が他の分枝していてもよい飽和もしくは不飽和炭化水素鎖または次式：（ＣｎＨ２ｎＣＯＮＨ（ＣＨ２）ｍ−）で示されるアミド結合で中断された該炭化水素鎖（式中、ｍおよびｎは独立して１〜３０の整数である）で入れ替わっているか、または、第四級アンモニウム基とカルボキシル基もしくはスルホ基との間の炭化水素鎖の長さが変動（例えば、炭素原子数２〜６）しているか、あるいはベタイン残基をペンダント基として複数有する重合体が挙げられる。また、これらは環状化合物であってもよい。限定されるものでないが、このような誘導体の具体例としては、上記したものの他、γ−ブチロベタイン、デシルベタイン、ラウリルベタイン、ミリスチルベタイン、セチルベタイン、ステアリルベタイン、ベヘニルベタイン、ラウラミドプロピルベタイン、オレアミドプロピルベタイン、パルミタミドプロピルベタイン、γ−ブチロベタイン、ラウリルスルタイン、ココースルタイン、ポリ（メタクリロイルオキシエチルベタイン）、ポリ（メタクリロイルオキシエチルベタイン−コ−２−ヒドロキシエチルメタクリル酸）等を挙げることができる。好ましいのは、グリシンベタイン、スルテイン、ポリ（メタクリロイルオキシエチルベタイン）、ポリ（メタクリロイルオキシエチルベタイン−コ−２−ヒドロキシエチルメタルメタクリル酸である。
「ポリオールおよびそれらの誘導体」は、１分子当たり２個以上の水酸基を有する化合物およびそれらの誘導体、例えば、エチレンオキシド付加物等を挙げることができる。かかるポリオールの具体的なものとしては、グリセリン、１，３−プロパンジオール、２−メチル−１，３−プロパンジオール、１，４−ブタンジオール、１，５−ペンタンジオール、ジグリセリン、エリスリトール、グルコン酸、１，２，６−ヘキサントリオール、イノシトール、ラクチトール、マルチトール、マンニトール、キシリトール等を挙げることができる。特に、グリセリン、とキシリトールを初めとする糖アルコールとの組み合わせ使用が好ましい。
「生薬」とは、医薬品もしくは民間薬またはその原料として植物由来の素材に乾燥、切断、粉砕や抽出等の操作を施して得たものを称し、本発明の目的に沿うものであれば、植物の科または属を問わない。しかし、限定されるものでないが、具体的には生薬として、キク科（Ｃｏｍｐｏｓｉｔａｅ）のバッカリス属（Ｂａｃｃｈａｒｉｓ）植物、特に、バッカリス・ジェニステロイズ（Ｂａｃｃｈａｒｉｓ ｇｅｎｉｓｔｅｌｌｏｉｄｓ）に由来する生薬カルクエジャ［ｃａｒｑｕｅｊａ（南米）］、アキロクリネ属（Ａｃｈｙｒｏｃｌｉｎｅ）植物、特に、アキロクリネ・サチュレオイデス（Ａｃｈｙｒｏｃｌｉｎｅ ｓａｔｕｒｅｏｉｄｅｓ）に由来する生薬マセラミスタ［ｍａｃｅｌａｍｉｓｔａ（南米）］、およびノコギリソウ属（Ａｃｈｉｌｌｅａ）植物、特に、セイヨウノコギリソウ（Ａｃｈｉｌｌｅａ ｍｉｌｌｅｆｏｌｉｕｍ  Ｌ．）に由来する生薬セイヨウノコギリソウ；シソ科（Ｌａｂｉａｔａｅ）のイブキジャコウ属（Ｔｈｙｍｕｓ）植物、特に、イブキジャコウソウ（Ｔｈｙｍｕｓ ｓｅｒｐｈｙｌｌｕｍ  Ｌｉｎｎｅ  ｓｕｂｓｐ．ｓｅｒｐｈｙｌｌｕｍ）に由来する生薬イブキジャコウエキス、ハナハッカ属（Ｏｒｉｇａｎｕｍ）植物、特に、マヨラナ（Ｏｒｉｇａｎｕｍ ｍａｊｏｒａｎａ  Ｌ．）に由来する生薬マジョラムエキス、タツナミソウ属（Ｓｃｕｔｅｌｌａｒｉａ）植物、特に、コガネバナ（Ｓｃｕｔｅｌｌａｒｉａ ｂａｉｃａｌｅｎｓｉｓ  Ｇｅｏｒｇｉ）に由来する生薬オウゴンおよびラベンドラ属（Ｌａｖａｎｄｕｌａ）植物、特に、ラベンダー（Ｌａｖａｎｄｕｌａ ｏｆｆｉｃｉｎａｌｌｓ）に由来する生薬ラベンダー油；バラ科（Ｒｏｓａｃｅａｅ）のバラ属（Ｒｏｓａ）植物、特に、イザヨウバラ（Ｒｏｓａ ｒｏｘｂｕｒｇｈｉｉ）に由来する生薬イザヨウバラ果実およびサクラ属（Ｐｒｕｎｕｓ）植物、特に、サトザクラ（Ｐｒｕｎｕｓ ｌａｎｎｅｓｉａｎａ（Ｃｏｒｒ．）Ｗｉｌｓｏｎ  ｖａｒ．Ｓｐｃｉｏｓａ（Ｋｏｉｄｚ）Ｍａｋｉｎｏ）に由来する生薬サクラリーフエキス；マンサク科（Ｈａｍａｍｅｌｉｄａｃｅａｅ）のマンサク属（Ｈａｍａｍｅｌｉｓ）植物、特に、ハマメリス（Ｈａｍａｍｅｌｉｓ ｖｉｒｇｉｎｉａｎａ  Ｌ．）に由来する生薬ハマメリス；イチヤクソウ科（Ｐｙｒｏｌａｃｅａｅ）のイチヤクソウ属（Ｐｙｒｏｌａ）植物、特に、イチヤクソウ（Ｐｙｒｏｌａ ｊａｐｏｎｉｃｕｓ  Ｋｌｅｎｚｅ）に由来する生薬イチヤクソウ；ならびにマメ科（Ｌｅｇｕｍｉｎｏｓａｅ）のエイセンハードティア属（Ｅｙｓｅｎｈａｒｄｔｉａ）植物、特に、エイセンハードティア・ポリスタキア（Ｅｙｓｅｎｈａｒｄｔｉａ ｐｏｌｉｓｔａｃｈｙａ）に由来する生薬パロアズル［ｐａｌｏ  ａｚｕｌ（南米）］等を挙げることができる。好ましい生薬は、限定されるものでないが、生薬パロアズル、生薬マセラミスタおよび生薬カルクエジャである。
「抗酸化作用を有する物質」は、皮膚に悪影響を及ぼすことなく、本発明の目的を達成できるものであれば、いかなる化合物または物質（混合物、組成物等）であってもよい。皮膚に悪影響を及ぼさないとの観点に立てば、具体的なものとしては、例えば、化粧料の分野で、抗酸化剤として既に使用されているか、あるいは使用されることが提案されているものを包含する化合物または物質を挙げることができる。
このような化合物としては、限定されるものでないが、アスコルビン酸およびその塩もしくは誘導体が挙げられる。塩もしくは誘導体としては、例えば、アスコルビン酸マグネシウム、アスコルビン酸ナトリウム等、アスコルビン酸アルキルエステル、アスコルビン酸リン酸エステル、アスコルビン酸硫酸エステル、アスコルビン酸グルコシド等のアスコルビン酸誘導体を挙げることができる。さらに具体的には、アスコルビン酸アルキルエステルとしては、パルミチン酸アスコルビル、イソパルミチン酸アスコルビル、ジパルミチン酸アスコルビル、ジイソパルミチン酸アスコルビル、ステアリン酸アスコルビル、イソステアリン酸アスコルビル、ジステアリン酸アスコルビル、ミリスチン酸アスコルビル、イソミリスチン酸アスコルビル、ジミリスチン酸アスコルビル、ジイソミリスチン酸アスコルビル、２−エチルヘキサン酸アスコルビル、ジ２−エチルヘキサン酸アスコルビル、オレイン酸アスコルビル、ジオレイン酸アスコルビル等を挙げることができ、その他の誘導体としては、アスコルビン酸ポリペプチド、リン酸アスコルビルマグネシウム、メチルシラノールアスコルベート、リン酸アスコルビルトコフェリルカリウム等を挙げることができる。
さらに、トコフェロールおよびその誘導体、該誘導体としては限定されるものでないが、酢酸トコフェリル、リノール酸トコフェリル、ニコチン酸トコフェリル、コハク酸トコフェリル等のトコフェロールエステル、ならびにトコフェレス−５、トコフェレス−１０、トコフェレス−１２等のトコフェロールのエチレンオキシド付加物が挙げられる。また、含硫アミノ酸含有化合物（含硫アミノ酸それ自体を包含する）およびそれらの中間代謝物、例えば、アセチルシステイン、メチオニン、システイン、ホモシステイン、グルタチオン、ヒポタウリン、システインスルフィン酸、システイン酸、チオシステイン、タウリン、ジエンコール酸、シスタチオニン、Ｓ−アリルシステイン、レンチオニン、エチオニン等を挙げることができる。
これらのうち、ヒポタウリンは、ヒトを含めた多くの哺乳類の主要臓器、例えば心臓、脳、肝臓等に含有されるものである。また、皮膚に対する刺激、かゆみ、かぶれ等の副作用も報告されておらず、極めて安全性に優れたアミノエチル化合物である。なお、ヒポタウリンはシステイン等の入手可能なチオ化合物から通常公知の方法で製造して用いることが可能であり、市販品を用いることも可能である。したがって、本発明者らはヒポタウリンの使用を特に強く企画している。
本発明に従えば、上記有効成分は上記に好ましいものとして挙げた生薬と他の有効成分との、組み合わせ、より好ましくは、生薬としてのパロアズル（ｐａｌｏａｚｕｌ）とグリセリンおよび炭素数４〜６の糖アルコールのいずれかとの、生薬としてのパロアズルとグリセリンおよびグルタチオンもしくはヒポタウリンとの、生薬としての生薬パロアズルとグリセリンおよびアスコルビン酸とを、あるいは生薬としての生薬パロアズルとグリセリンおよびベタイン化合物またはその誘導体との組み合わせ使用を挙げることができる。他方、グリセリンおよび炭素数４〜６のいずれかと、上記に具体的なものとして列挙した生薬、特に、生薬カルクエジャ（ｃａｒｑｕｅｊａ（南米））、生薬マセラミスタ（ｍａｃｅｌａｍｉｓｔａ（南米））および／または生薬パロアズル（ｐａｌｏ  ａｚｕｌ（南米））との組み合わせも、有効成分を組み合わせ使用する場合に好ましい態様である。
なお、以上の製薬の調製は、それ自体公知の方法、例えば、廣川薬用植物大事典、編集者  木島正夫他、昭和５５年、株式会社廣川書店発行に記載の方法に準じて行うことができる。
本発明の外用剤には、上記の有効成分の他に、化粧品および／または皮膚科用製剤に常用されている基剤または添加物、あるいは他の有効成分を含めてもよい。
本発明の外用剤では、有効成分としてのベタイン化合物、ポリオール類または抗酸化作用を有する物質を、外用剤の総重量あたり、０．０００１〜２０重量％、好ましくは０．０１〜１．０重量％とすることができる。また、生薬は、その剤型によって有効成分含量が変動するので限定できないが、調製剤の総産量あたり、０．０００１〜２０重量％（乾燥物換算で、約５×１０−７〜２×１０−１重量％）、好ましくは０．０１〜１．０重量％（乾燥物換算で、約５×１０−５〜５×１０−３重量％）とすることができる。いずれにしても、それぞれ特有の使用態様について後述する試験方法または評価方法に従って得られる結果をもとに、さらには試験的にボランティア等で実使用した結果等を勘案すれば、皮膚科学分野の専門家は上記有効成分が効能を発揮するのに最適の使用量を容易に決定できるであろう。
本発明の外用剤は、化粧料、医薬品、医薬部外品、として皮膚に適用されるものをさし、従ってその剤型も水溶液系、可溶化系、乳化系、粉末系、ゲル系、軟膏系、クリーム、水−油２層系、水−油−粉末３層系など、幅広い形態をとり得る。すなわち基礎化粧品であれば、洗顔料、化粧水、乳液、クリーム、ジェル、エッセンス（美容液）、パック、マスクなどの形態に、上記の多様な剤型において広く適用可能である。メーキャップ化粧品であれば、ファンデーション等の形態に広く適用可能である。さらに、医薬品または医薬部外品であれば、各種の軟膏等の形態に広く適用可能である。そして、これらの剤型および形態に本発明皮膚外用剤のとり得る形態が限定されるものでは無い。
上記基剤成分は、これらの剤型および形態に応じて、選ぶことができ、そして基剤成分もしくは添加剤としては、水、低級アルカノール、液体油脂、固体油脂、ロウ類、エステル油、炭化水素油、シリコーン樹脂、シリコーン、陰イオン性界面活性剤、アニオン系界面活性剤、陽イオン性界面活性剤、両性界面活性剤、非イオン性界面活性剤、低級アルコール、ステロール類、水溶性高分子、金属イオン封鎖剤、中和剤、ｐＨ調整剤、抗菌剤、香料、色素等を挙げることができる。
以上に述べた外用剤は、直接ボランティアに適用して効能を確認することができるが、それに先立って、もう一つの態様の本発明である、乾燥による皮膚傷害を抑制しうるか否かについての物質の評価方法によって確認することもできる。
かかる評価方法で用いるヒトケラチノサイトは、被検物質の存在下と不存在下で、それぞれ培養することにより、フィラグリンタンパク質の量および遺伝子発現量の変動が有意に識別できるものであれば、いかなる細胞であってもよい。しかし、好適にはヒト包皮由来の正常細胞とフィーダーレイヤー（支持細胞）としてマウス由来の３Ｔ３細胞（ＡＴＣＣ  ＣＲＬ−１６５８）からなる培養細胞系を都合よく用いることができる。これらの細胞系は例えば、Ｒｈｅｉｎｗａｌｄ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｅｌｌ  ６，３３１−３４４（１９７５）に記載の方法に従って、３Ｔ３細胞を適当なシャーレにて培養し、マイトマイシンＣ処理を行ない、こうして支持細胞層を形成した後に、該層上にヒト正常ケラチノサイトを播種し、例えば、９５％空気−５％炭素ガス環境下で、３７℃にてコンフルエントになるまで培養することで、作成できる。
通常、被検物質の不存在下で培養する系（対照）は、被検物質の存在下で培養する（試験系）と平行して処理されるのが好ましいが、予め、被検物質の不存在下の各種条件下で培養を実施し、次いで気相暴露した後のフィラグリンタンパク質の量やフィラグリン遺伝子の発現量の値を得ていて、これらの値を対照としてもよい。
なお、試験系への被検物質の添加は、培養ヒトケラチノサイトがコンフルエントに達した後行ない、そのまま、短時間（例えば、３０分間）インキュベートする様式が好ましい。
このような培養ヒトケラチノサイトの気相暴露は、好ましくは、培地を除去した後に、例えば、９５％空気−５％炭酸ガス環境下で、３７℃にてインキュベートすることにより、行うことができる。このような気相暴露は通常、約６時間までに完了することができる。
こうして、気相暴露した培養ヒトケラチノサイトは、フィラグリンタンパク質量またはフィラグリン遺伝子の発現量のそれ自体公知の測定法に供することで、気相暴露によりヒトケラチノサイトが受ける傷害の程度、あるいは該傷害に対する被験物の効能の程度を評価することができる。このような評価方法は、乾燥によるヒトケラチノサイトにおけるｉｎ ｖｉｖｏでのフィラグリンの低下に付随する皮膚傷害を防止できる、さらなる有効物質のスクリーニングにも有用である。
以下、具体例を挙げて本発明をさらに説明するが、これらの例は本発明を限定することを意図するものでは無い。説明中に用いるパーセンテージは、特記しない限り重量基準である。
フィラグリン遺伝子発現量の測定試験：
（１）培養細胞
ヒト包皮由来の正常ケラチノサイトとマウス由来の３Ｔ３細胞を用いた。
（２）培養細胞用培地
培地はＤＭＥＭ−Ｈａｍ’ｓＦ１２（３：１）に、ヒドロコルチゾン、コレラエンテロトキシン、上皮増殖因子、インスリンおよび１０％ＦＢＳを含む。
（３）培養
Ｒｈｅｉｎｗａｌｄ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｅｌｌ  ６，３３１−３４４（１９７５）に記載の方法に従って培養する。
概要を以下に示す。３Ｔ３細胞をマイトマイシンＣによって処理し、フィーダーレイヤー（支持細胞）として使用した。ヒト正常ケラチノサイト１×１０５個細胞をマイトマイシンＣで処理した３Ｔ３細胞上に播種し、９５％空気−５％炭素ガス環境下で、３７℃にてコンフルエントになるまで培養した。培養上清を除去することにより気相暴露を行なった。なお、各被験物は気相暴露３０分前に添加し、３７℃にて培養を行なった。被験物を添加しないものを対照とした。気相暴露は３７℃にて０−６時間行なった。
（４）フィラグリンタンパク質量の測定
上記培養系に、各被験物を添加後、一定時間気相暴露した細胞からタンパク質を抽出した。常法に従いウエスタンブロッティングにてフィラグリンタンパク質またはフィラグリンタンパク質前駆体（プロフィラグリン）を定量した。概要を以下に示す。抽出したタンパク質をＳＤＳ−ＰＡＧＥで泳動させた後に、ＰＤＶＦ膜に転写し、一次抗体としてフィラグリンに特異的なマウスモノクローナル抗体（ａｎｔｉ−ＨＵＭＡＮ  Ｆｉｌａｇｇｒｉｎ  ＭＡｂ）を用いて抗原−抗体反応を行なった。その後、二次抗体にＨｏｒｓｅｒａｄｉｓｈ  ｐｅｒｏｘｉｄａｓｅかＡｌｋａｌｉｎｅ  ｐｈｏｓｐｈａｔａｓｅで標識した抗体を用いて抗原−抗体反応を行なった。反応後、標識酵素に対応する色素原基質を用いて酵素反応を行う発色法または化学発色法を用いて、測定を行なった。バンドの定量はＮＩＨイメージ（解析プログラム）を用いて行なった。
（５）フィラグリン遺伝子発現量の測定
上記培養系に、各被験物を添加後、一定時間気相暴露した細胞からＡＧＰＣ法を用いてＲＮＡを抽出した。これらのＲＮＡに対して下記のようにＲＴ−ＰＣＲを行なった。フィラグリンに特異的なプライマーをＭｃＫｉｎｌｅｙ−Ｇｒａｎｔ  Ｌ．Ｊ．ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．，８６，４８４８−４８５２（１９８９）が報告しているフィラグリンの塩基配列に基づき作成した。ＲＴ−ＰＣＲは、ｍＲＮＡを一度逆転写酵素でｃＤＮＡにし、それを鋳型にして、上記プライマーを用いてポリメラーゼ反応（公知の反応）を行ない、フィラグリンのｍＲＮＡを測定した。ＰＣＲ産物はアガロースゲルにて電気泳動し、電気泳動後のゲルをエチジウムブロマイド溶液に浸漬したのちに、ＤＮＡを測定した。ＤＮＡバンドの定量はＮＩＨイメージ（解析プログラム）を用いて行なった。補正はグリセルアルデヒド−３−リン酸デヒドロゲナーゼ（Ｇ３ＰＤＨ）を用いて行なった。
（６）結果
（６−１）ヒトケラチノサイトを気相暴露したときのフィラグリンタンパク質量の経時的な変動を図１に示す。図より、乾燥によりヒトケラチノサイトのフィラグリンタンパク質は有意に低下することが明らかである。
（６−２）上記気相暴露によりヒトケラチノサイトのフィラグリン遺伝子発現量の経時的な変動を図２に示す。図より、乾燥によりヒトケラチノサイトのフィラグリン遺伝子発現は有意に低下することが明らかである。また、その低下は比較的短時間のうちに生じている。
（６−３）ヒトケラチノサイトにおける気相暴露（乾燥刺激）によるフィラグリンタンパク質量への傷害を抑制する作用を、培養系への該試料（１０％グリセリン）の添加の有無によるフィラグリンタンパク質量で評価した。結果を図３に示す。
（６−４）ヒトケラチノサイトにおける気相暴露（乾燥刺激）によるフィラグリン遺伝子発現を低下させる傷害を抑制する作用を、培養系への該試料（グリセリンおよびトリメチルグリシン）の添加の有無によるフィラグリン遺伝子発現量で評価した。結果を図４に示す。
（６−５）ヒトケラチノサイトにおける乾燥によるフィラグリン遺伝子発現を低下させる傷害を抑制する作用を、培養系への生薬抽出物の添加の有無によるフィラグリン遺伝子発現量で評価した。結果を図５に示す。
（６−６）ヒトケラチノサイトにおける乾燥によるフィラグリン遺伝子発現を低下させる傷害を抑制する作用を、培養系へのアスコルビン酸およびグルタチオンの添加の有無によるフィラグリン遺伝子発現量で評価した。結果を図６に示す。
（６−７）ヒトケラチノサイトにおける乾燥によるフィラグリン遺伝子発現を低下させる傷害を抑制する作用を、培養系へのヒポタウリンの添加の有無によるフィラグリン遺伝子発現量の変動を図７に示す。濃度依存性も同時に示す。
（６−８）培養ヒトケラチノサイトの乾燥によるフィラグリン遺伝子発現低下に対するその他の有効成分および、有効成分の組み合わせの効能を下記表１および２にそれぞれ示す。表では、乾燥前の遺伝子発現を１００％、乾燥後の遺伝子発現を０％として、薬剤添加による遺伝子発現低下の抑制率を％にて示した。表１では、有効成分が、エキス濃度として０．５％添加した。また、表２では、そこに示されている有効成分および濃度（重量％）の組成物を用いて試験された。
0003782779.tif 000002
0003782779.tif 000003
なお、上記回復率（％）は、それぞれ被検物質の添加によって、乾燥刺激を与えていない無処置群におけるフィラグリン遺伝子発現レベルまでどの程度回復したかを示す。
これらの図および表から、本発明に従う調製剤は、ヒトケラチノサイトが乾燥によりうける角層水分量の低下を、角層水分を保持するために必須なアミノ酸の原材料となるフィラグリンのタンパク質量と遺伝子発現の低下を有意に抑制できることが確認される。
以下、本発明に従う調製剤の処方例を示す。すべて常法に従って調製できる。なお、調製剤における各成分の含有率は特記しない限り重量％を意味する。
処方例１（クリーム）
ベヘニルアルコール                                            １．０
ステアリルアルコール                                          ２．０
スクワラン                                                  １０．０
テトラオクタン酸ペンタエリスチル                              ５．０
ラノリン                                                      ５．０
パラベン                                                      ０．３
ポリオキシエチレンベヘニルアルコール                          １．０
グリセリン                                                  １０．０
生薬抽出物（生薬ｃａｒｑｕｅｊａ）                            ０．２
アセチルヒアルロン酸ナトリウム                                ０．１
精製水                                                        残部
処方例２（クリーム）
スクワラン                                                  １０．０
ミリスチン酸イソプロピル                                    ２０．０
デカメチルシクロペンタンヘキサン                            ３５．０
アルキル変性カルボキシビニルポリマー                          ０．０５
ソルビタンモノオレート                                        ５．０
ジプロピレングリコール                                        ３．０
生薬抽出物（生薬ｍａｃｅｌａｍｉｓｔａ）                      １．０
精製水                                                        残部
処方例３（クリーム）
流動パラフィン                                              １０．０
オクタメチルシクロテトラシロキサン                            ５．０
１，３−ブチルグリコール                                    １０．０
グリセリン                                                    ３．０
アスコルビン酸誘導体                                          ３．０
トリメチルグリシン                                            ０．５
カルボキシルビニルポリマー                                    ０．１５
キサンタンガム                                                ０．２５
ステアリン酸                                                  １．５
セチルアルコール                                              ０．５
ポリオキシエチレン（１０）モノオレイン酸エステル              １．０
ステアリン酸モノグリセリド                                    １．０
エタノール                                                    ３．０
香料                                                          適量
精製水                                                        残部
処方例４（クリーム）
セトステアリルアルコール                                      ３．５
スクワラン                                                  ２０．０
ミツロウ                                                      ３．０
ラノリン                                                      ５．０
パラベン                                                      ０．３
ポリオキシエチレン（２０）ソノビタンモノパルミチン酸エステル  ２．０
ステアリン酸モノグリセリド                                    ２．０
植物抽出液（生薬ｐａｌｏ  ａｚｕｌ）                          ２．０
ビタミンＡ                                                    ２．０
香料                                                          適量
精製水                                                        残部
処方例５（クリーム）
タルク                                                        ３．０
二酸化チタン                                                  ５．０
ベンガラ                                                      ０．５
黄酸化鉄                                                      １．４
黒酸化鉄                                                      １．０
モノステアリン酸ポリオキシエチレンソルビタン                  ０．９
トリエタノールアミン                                          １．０
プロピレングリコール                                          ５．０
生薬抽出物（またはトリメチルグリジンもしくはネオトレハロース）１．０
ステアリン酸                                                  ２．２
イソヘキサデシルアルコール                                    ７．０
ステアリン酸モノグリセリド                                    ２．０
ラノリン                                                      ２．０
パラフィン                                                    ８．０
パラベン                                                      適量
香料                                                          適量
処方例６（クリーム）
流動パラフィン                                                ５．０
ワセリン                                                      ２．０
メチルポリシロキサン                                          １．０
ステアリルアルコール                                          ２．０
ベヘニルアルコール                                            ２．０
硬化油                                                        １．０
スクワラン                                                    ５．０
ステアリン酸                                                  ２．０
２−エチルヘキサン酸セチル                                    ４．０
自己乳化型モノステアリン酸グリセリン                          ２．０
４−ｔｅｒｔ−４′−メトキシベンゾイルメタン                  ０．１
マカデミアナッツ油                                            １．０
メタリン酸ナトリウム                                          ０．０２
プラセンタエキス                                              １．０
パラベン                                                      適量
色剤                                                          適量
グリセリン                                                    ５．０
シプロピレングリコール                                        ５．０
１，３−ブチレングリコール                                    ３．０
植物抽出液（生薬ｐａｌｏ  ａｚｕｌ）                          １．０
植物抽出液（植物イザヨウバラ果実）                            ０．５
精製水                                                        残余
処方例７（クリーム）
メチルポリシロキサン                                          ２．０
デカメチルシクロペンタシロキサン                            １０．０
ポリオキシエチレン・メチルポリシロキサン重合体                ３．０
ジメチルジステアリルアンモニウムヘクトライト                  ３．０
政府所定変性アルコール                                        ２．０
グリセリン                                                    ５．０
ジプロピレングリコール                                        ３．０
ポリエチレングリコール                                        １．０
メタリン酸ナトリウム                                          ０．０５
植物抽出液（生薬ｐａｌｏ  ａｚｕｌ）                          ２．０
植物抽出液（生薬サクラリーフエキス）                          １．０
パラベン                                                      適量
エデト酸三ナトリウム                                          ０．０５
色剤                                                          適量
香料                                                          適量
精製水                                                        残余
処方例８（クリーム）
メチルポリシロキサン                                          ５．０
デカメチルシクロペンタシロキサン                            １０．０
ポリオキシエチレン・メチルポリシロキサン共重合体              ０．５
ポリ（オキシエチレン・オキシプロピレン）
メチルポリシロキサン共重合体                                ０．５
球状ポリアクリル酸アルキル                                    ２．０
グリセリン                                                    ５．０
植物抽出液（生薬ｐａｌｏ  ａｚｕｌ）                          ０．０５
植物抽出液（生薬オウゴンリキッドＳＥ）                        ２．０
１，３−ブチレングリコール                                    ５．０
塩化ナトリウム                                                ２．０
メタリン酸ナトリウム                                          ０．０５
フェノキシエタノール                                          適量
エデト酸三ナトリウム                                          ０．０５
色剤                                                          適量
香料                                                          適量
精製水                                                        残余
処方例９（クリーム）
メチルポリシロキサン                                          ５．０
デカメチルシクロペンタシロキサン                            １５．０
ベヘニルアルコール                                            １．０
バチルアルコール                                              １．０
サラシミツロウ                                                ２．０
トリ２−エチルヘキサン酸グリセリル                            ２．０
オクタン酸セチル                                              ２．０
グリセリン                                                    ４．０
植物抽出液（生薬ｐａｌｏ  ａｚｕｌ）                          ０．１
植物抽出液（生薬ハマメリス）                                  ０．２
ジプロピレングリコール                                        ６．０
エデト酸三ナトリウム                                          ０．０５
パラベン                                                      適量
香料                                                          適量
精製水                                                        残余
処方例１０（クリーム）
ワセリン                                                      １．０
メチルポリシロキサン                                          ２．０
スクワラン                                                    ２．０
グリセリン                                                    ５．０
シプロピレングリコール                                        ３．０
１，３−ブチレングリコール                                    ３．０
ポリエチレングリコール                                        ２．０
植物抽出液（生薬ｐａｌｏ  ａｚｕｌ）                          ２．０
植物抽出液（生薬オウゴンリキッドＳＥ）                        １．０
水酸化カリウム                                                ０．２５
メタリン酸ナトリウム                                          ０．０５
色剤                                                          適量
パラベン                                                      適量
キサンタンガム                                                ０．１
アクリル酸・メタクリル酸アルキル共重合体                      ０．１
カルボキシビニルポリマー                                      ０．５
精製水                                                        残余
処方例１１（クリーム）
流動パラフィン                                                ８．０
ワセリン                                                      ２．０
メチルポリシロキサン                                          ２．０
ステアリルアルコール                                          ２．０
ベヘニルアルコール                                            ２．０
テトラオクタン酸ペンタエリスリット                            ３．０
イソステアリン酸ポリオキシエチレングリセリル                  ２．０
モノステアリン酸ポリオキシエチレングリセリン                  ２．０
親油型モノステアリン酸グリセリン                              ２．０
４−ｔｅｒｔ−ブチル−４′−メトキシベンゾイルメタン          ０．０５
パラメトキシケイ皮酸２−エチルヘキシル                        ０．５
ヒドロキシエチルセルロース                                    ０．５
カルボキシビニルポリマー                                      ０．０４
エデト酸三ナトリウム                                          ０．０５
植物抽出液（生薬ｐａｌｏ  ａｚｕｌ）                          １．０
植物抽出液（生薬ラベンダー油）                                １．０
グリセリン                                                    ５．０
ジプロピレングリコール                                        ５．０
香料                                                          適量
パラベン                                                      適量
精製水                                                        残余
処方例１２（クリーム）
ワセリン                                                      ２．０
メチルポリシロキサン                                          ２．０
ベヘニルアルコール                                            ０．５
バチルアルコール                                              ０．５
ホホバ油                                                      ３．０
スクワラン                                                    ２．０
テトラオクタン酸ペンタエリスリット                            １．０
ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油                                ０．５
政府所定変性アルコール                                        ５．０
植物抽出液（生薬ｐａｌｏ  ａｚｕｌ）                          １．５
植物抽出液（生薬イチヤクソウ）                                ０．５
グリセリン                                                    ５．０
１，３−ブチレングリコール                                    ５．０
ポリエチレングリコール                                        ２．０
水酸化カリウム                                                ０．０９
パラベン                                                      適量
エデト酸三ナトリウム                                          ０．０５
色剤                                                          適量
キサンタンガム                                                ０．０５
メタリン酸ナトリウム                                          ０．０５
カルボキシビニルポリマー                                      ０．２５
精製水                                                        残余
処方例１３（クリーム）
流動パラフィン                                              １０．０
メチルポリシロキサン                                          ５．０
スクワラン                                                    ５．０
テトラ２−エチルヘキサン酸ペンタエリスリット                  ５．０
植物抽出液（生薬ｐａｌｏ  ａｚｕｌ）                          ０．０５
植物抽出液（生薬イブキジャコウエキス）                        ２．０
１，３−ブチレングリコール                                    ５．０
エリスリトール                                                ５．０
ポリエチレングリコール                                        ５．０
水酸化カリウム                                                ０．１
メタリン酸ナトリウム                                          ０．０５
パラベン                                                      適量
フェノキシエタノール                                          適量
ヒドロキシプロピルメチルセルロース                            ０．２
ポリビニルアルコール                                          ０．２
カルボキシビニルポリマー                                      ０．１
アクリル酸・メタクリル酸アルキル共重合体                      ０．１
色剤                                                          適量
香料                                                          適量
精製水                                                        残余
処方例１４（クリーム）
流動パラフィン                                                ５．０
ワセリン                                                      ５．０
セレシン                                                      ２．０
スクワラン                                                  １５．０
ミツロウ                                                      ０．５
ジイソステアリン酸ポリグリセリル                              ５．０
植物抽出液（生薬ｐａｌｏ  ａｚｕｌ）                          ０．０５
植物抽出液（生薬マジョラムエキス）                            １．０
ポリエチレン末                                                適量
プロピレングリコール                                          適量
グルタミン酸ナトリウム                                        適量
セリン                                                        適量
グリシン                                                      適量
アラントイン                                                  適量
香料                                                          適量
塩化ナトリウム                                                適量
精製水                                                        残余
処方例１５（クリーム）
オレフィンオリゴマー                                          ８．０
ワセリン                                                      ５．０
セレシン                                                      ４．０
スクワラン                                                  １８．０
ミツロウ                                                      １．０
ジイソステアリン酸ポリグリセリル                              ５．０
セリン                                                        適量
メタリン酸ナトリウム                                          ０．０５
植物抽出液（生薬ｐａｌｏ  ａｚｕｌ）                          ０．５
植物抽出液（生薬セイヨウノコギリソウ）                        １．０
グリセリン                                                    ２．０
１，３−ブチレングリコール                                    ５．０
塩化ナトリウム                                                適量
ポリエチレン末                                                ０．１
パラベン                                                      適量
香料                                                          適量
色剤                                                          適量
精製水                                                        残余
処方例１６（クリーム）
オレフィンオリゴマー                                          ６．０
デカメチルシクロペンタンシロキサン                          １８．０
ポリオキシエチレン・メチルポリシロキサン共重合体              ２．０
メチルフェニルポリシロキサン                                  １．０
ステアリルアルコール                                          ０．５
ベヘニルアルコール                                            １．３
マカデミアナッツ油脂肪酸フィトステリル                        ０．３
Ｎ−ステアロイル−Ｌ−グルタミン酸ナトリウム                  ０．９
ジメチルジステアリルアンモニウムヘクトライト                  ０．８
グリセリン                                                    ４．０
植物抽出液（生薬ｐａｌｏ  ａｚｕｌ）                          ５．０
１，３−ブチレングリコール                                    ５．０
塩化ナトリウム                                                ０．０５
パラベン                                                      適量
フェノキシエタノール                                          適量
色剤                                                          適量
香料                                                          適量
精製水                                                        残余
処方例１７（乳液）
メチルポリシロキサン                                          ２．０
デカメチルシクロペンタシロキサン                              ２．０
スクワラン                                                    ２．０
政府所定変性アルコール                                        ５．０
グリセリン                                                    ５．０
１，３−ブチレングリコール                                    ５．０
ポリオキシエチレンメチルグリコシド                            ５．０
植物抽出液（生薬ｐａｌｏ  ａｚｕｌ）                          ０．０２
水酸化カリウム                                                ０．１
メタリン酸ナトリウム                                          ０．０５
パラベン                                                      適量
色剤                                                          適量
カルボキシビニルポリマー                                      ０．１５
アクリル酸・メタクリル酸アルキル共重合体                      ０．１
精製水                                                        残余
処方例１８（乳液）
メチルポリシロキサン                                          ２．０
ベヘニルアルコール                                            ０．５
バチルアルコール                                              ０．５
硬化油                                                        ３．０
スクワラン                                                    ６．０
テトラ２−エチルヘキサン酸ペンタエリスリット                  ２．０
イソステアリン酸ポリオキシエチレングリセリル                  １．５
モノステアリン酸ポリオキシエチレングリセリン                  １．５
グリセリン                                                    ５．０
１，３−ブチレングリコール                                    ５．０
エリスリトール                                                ３．０
植物抽出液（生薬ｐａｌｏ  ａｚｕｌ）                          ０．０５
水酸化カリウム                                                ０．０５
メタリン酸ナトリウム                                          ０．０３
フェノキシエタノール                                          適量
カルボキシビニルポリマー                                      ０．１２
精製水                                                        残余
処方例１９（乳液）
流動パラフィン                                                ８．０
ワセリン                                                      ３．０
デカメチルシクロペンタシロキサン                              １．０
ベヘニルアルコール                                            ２．０
ホホバ油                                                      １．０
ステアリン酸                                                  １．０
ベヘニル酸                                                    ０．５
テトラ２−エチルヘキサン酸ペンタエリスリット                  ３．０
２−エチルヘキサン酸セチル                                    ３．０
自己乳化型モノステアリン酸グリセリン                          １．５
パラメトキシケイ皮酸２−エチルヘキシル                        ０．１
グリセリン                                                    ８．０
植物抽出液（生薬ｐａｌｏ  ａｚｕｌ）                          ５．０
ジプロピレングリコール                                        ５．０
ポリエチレングリコール                                        ５．０
水酸化カリウム                                                ０．１
メタリン酸ナトリウム                                          ０．０５
エデト酸三ナトリウム                                          ０．０５
パラベン                                                      適量
色剤                                                          適量
香料                                                          適量
精製水                                                        残余
処方例２０（乳液）
デカメチルシクロペンタシロキサン                            １５．０
ポリオキシエチレン・メチルポリシロキサン重合体                ３．０
マカデミアナッツ油                                            １．０
スクワラン                                                    ２．０
ヒドロキシステアリン酸コレステリル                            ０．２
２−エチルヘキサン酸セチル                                    ２．０
塩化ジステアリルジメチルアンモニウム                          ０．３
グリセリン                                                    ８．０
１，３−ブチレングリコール                                    ５．０
植物抽出液（生薬ｐａｌｏ  ａｚｕｌ）                          ３．０
マルチチトール液                                              ２．０
エデト酸三ナトリウム                                          ０．０５
ケイ酸アルミニウムマグネシウム                                ０．３
パラベン                                                      適量
色剤                                                          適量
イオン交換水                                                  残余
処方例２１（乳液）
スクワラン                                                    ０．２
ヒドロキシステアリン酸コレステリル                            ０．１
トリ２−エチルヘキサン酸グリセリン                            ０．４
ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油                                ０．４
ジイソステアリン酸ポリグリセリル                              ０．３
変性アルコール                                                ５．０
グリセリン                                                    ２．０
植物抽出液（生薬ｐａｌｏ  ａｚｕｌ）                          １．０
ジプロピレングリコール                                        ５．０
ポリエチレングリコール                                        ２．０
水酸化カリウム                                                ０．６
エデト酸三ナトリウム                                          ０．０５
キサンタンガム                                                ０．２
ヒドロキシエチルセルロース                                    ０．０３
カルボキシビニルポリマー                                      ０．３
香料                                                          適量
パラベン                                                      適量
精製水                                                        残余
処方例２２（乳液）
ワセリン                                                      ５．０
ベヘニルアルコール                                            ０．５
硬化油                                                        １．５
ホホバ油                                                      ２．５
スクワラン                                                    ４．０
テトラオクタン酸ペンタエリスリット                            ３．０
ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油                                ０．５
グリセリン                                                    ５．０
１，３−ブチレングリコール                                    ５．０
ポリエチレングリコール                                        ２．０
植物抽出液（生薬ｐａｌｏ  ａｚｕｌ）                          １．０
水酸化カリウム                                                ０．０７
カルボキシビニルポリマー                                      ０．２
パラベン                                                      適量
色剤                                                          適量
精製水                                                        残余
処方例２３（乳液）
ワセリン                                                      ２．０
メチルポリシロキサン                                          ２．０
ベヘニルアルコール                                            ０．３
バチルアルコール                                              ０．３
ヒドロキシステアリン酸コレステリル                            ０．１
４−ｔｅｒｔ−ブチル−４′−メトキシベンゾイルメタン          ０．１
変性アルコール                                                ３．０
グリセリン                                                    ８．０
植物抽出液（生薬ｐａｌｏ  ａｚｕｌ）                          １．０
１，３−ブチレングリコール                                    ４．０
ポリエチレングリコール                                        ３．０
ヤシ油脂肪酸加水分解コラーゲンカリウム液                      ０．２
水酸化カリウム                                                ０．０８
エデト酸三ナトリウム                                          ０．０５
キサンタンガム                                                ０．０５
カルボキシビニルポリマー                                      ０．２２
色剤                                                          適量
パラベン                                                      適量
香料                                                          適量
精製水                                                        残余
処方例２４（乳液）
ワセリン                                                      ０．７
メチルポリシロキサン                                          ０．３
ベヘニルアルコール                                            ０．７
スクワラン                                                    ２．０
２−エチルヘキサン酸セチル                                    ０．５
Ｎ−ステアロイル−Ｌ−グルタミン酸ナトリウム                  ０．３
変性アルコール                                                ３．０
グリセリン                                                    ４．０
ジプロピレングリコール                                        ６．０
１，３−ブチレングリコール                                    ４．０
植物抽出液（生薬ｐａｌｏ  ａｚｕｌ）                          １．０
水酸化カリウム                                                ０．０７
メタリン酸ナトリウム                                          ０．０１
キサンタンガム                                                ０．０２
カルボキシビニルポリマー                                      ０．１４
色剤                                                          適量
パラベン                                                      適量
香料                                                          適量
精製水                                                        残余
処方例２５（化粧水）
１，３−ブチレングリコール                                    ６．０
グリセリン                                                    ４．０
オレイルアルコール                                            ０．１
ＰＯＥ（２０）ソルビタンモノラウリン酸エステル                ０．５
ＰＯＥ（１５）ラウリルアルコールエーテル                      ０．５
植物抽出液（生薬ｐａｌｏ  ａｚｕｌ）                          １．０
植物抽出液（生薬ハマメリス）                                  ０．５
エタノール                                                  １０．０
香料                                                          適量
色剤                                                          適量
精製水                                                        残余
処方例２６（化粧水）
ソルビット                                                    ４．０
ジプロピレングリコール                                        ６．０
ＰＥＧ  １５００                                              ５．０
ＰＯＥ（２０）オレイルアルコールエーテル                      ０．５
メチルセルロース                                              ０．２
クインズシードエキス                                          ０．１
植物抽出液（生薬ｐａｌｏ  ａｚｕｌ）                          ０．５
植物抽出液（生薬オウゴンリキッドＳＥ）                        ０．１
エタノール                                                  １０．０
香料                                                          適量
色剤                                                          適量
精製水                                                        残余
処方例２７（化粧水）
１，３−ブチレングリコール                                    ６．０
グリセリン                                                    ３．０
ＰＥＧ  ４０００                                              ３．０
オリーブ油                                                    ０．５
ＰＯＥ（２０）ソルビタンモノステアリン酸エステル              １．５
ＰＯＥ（５）オレイルアルコールエーテル                        ０．３
エタノール                                                  １０．０
植物抽出液（生薬ｐａｌｏ  ａｚｕｌ）                          ０．３
植物抽出液（生薬マジョラムエキス）                            １．５
香料                                                          適量
色剤                                                          適量
精製水                                                        残余
処方例２８（化粧水）
ジプロピレングリコール                                        １．０
ソルビット                                                    １．０
ＰＯＥ（２０）オレイルアルコールエーテル                      １．０
スルホ石炭酸亜鉛                                              ０．２
クエン酸                                                      ０．１
エタノール                                                  １５．０
植物抽出液（生薬ｐａｌｏ  ａｚｕｌ）                          ０．３
植物抽出液（生薬イザヨイバラ果実）                            １．５
香料                                                          適量
色剤                                                          適量
精製水                                                        残余
処方例２９（化粧水）
１，３−ブチレングリコール                                    ６．０
ジプロピレングリコール                                        ６．０
ＰＥＧ  ４００                                                ６．０
ＰＯＥ（２０）ソルビタンモノラウリン酸エステル                １．０
ポリオキシエチレンポリオキシプロピレンブロックポリマー        １．５
エタノール                                                  １５．０
植物抽出液（生薬オウゴンリキッドＳＥ）                        １．０
植物抽出液（生薬イザヨイバラ果実）                            ０．５
香料                                                          適量
色剤                                                          適量
精製水                                                        残余
処方例３０（クリーム）
ベヘニルアルコール                                            １．０
ステアリルアルコール                                          ２．０
スクワラン                                                  １０．０
テトラオクタン酸ペンタエリスチル                              ５．０
ラノリン                                                      ５．０
パラベン                                                      ０．３
ポリオキシエチレンベヘニルアルコール                          １．０
グリセリン                                                  １０．０
ヒポタウリン                                                  ０．１
アセチルヒアルロン酸ナトリウム                                ０．１
精製水                                                        残部
処方例３１（乳液）
スクワラン                                                  １０．０
ミリスチン酸イソプロピル                                    ２０．０
デカメチルシクロペンタンヘキサン                            ３５．０
アルキル変性カルボキシビニルポリマー                          ０．０５
ソルビタンモノオレート                                        ５．０
ジプロピレングリコール                                        ３．０
グルタチオン                                                  １．０
精製水                                                        残部
処方例３２（乳液）
流動パラフィン                                              １０．０
オクタメチルシクロテトラシロキサン                            ５．０
１，３−ブチルグリコール                                    １０．０
グリセリン                                                    ３．０
アスコルビン酸誘導体                                          ３．０
グルタチオン                                                  ０．１
カルボキシルビニルポリマー                                    ０．１５
キサンタンガム                                                ０．２５
ステアリン酸                                                  １．５
セチルアルコール                                              ０．５
ポリオキシエチレン（１０）モノオレイン酸エステル              １．０
ステアリン酸モノグリセリド                                    １．０
エタノール                                                    ３．０
香料                                                          適量
精製水                                                        残部
処方例３３（クリーム）
セトステアリルアルコール                                      ３．５
スクワラン                                                  ２０．０
ミツロウ                                                      ３．０
ラノリン                                                      ５．０
パラベン                                                      ０．３
ポリオキシエチレン（２０）ソノビタンモノパルミチン酸エステル  ２．０
ステアリン酸モノグリセリド                                    ２．０
ヒポタウリン                                                  ０．１
ビタミンＡ                                                    ２．０
香料                                                          適量
精製水                                                        残部
処方例３４（ファンデーション）
タルク                                                        ３．０
二酸化チタン                                                  ５．０
ベンガラ                                                      ０．５
黄酸化鉄                                                      １．４
黒酸化鉄                                                      １．０
モノステアリン酸ポリオキシエチレンソルビタン                  ０．９
トリエタノールアミン                                          １．０
プロピレングリコール                                          ５．０
ヒポタウリン                                                  １．０
ステアリン酸                                                  ２．２
イソヘキサデシルアルコール                                    ７．０
ステアリン酸モノグリセリド                                    ２．０
ラノリン                                                      ２．０
パラフィン                                                    ８．０
パラベン                                                      適量
香料                                                          適量
処方例３５（クリーム）
流動パラフィン                                                ３
ワセリン                                                      １
メチルポリシロキサン                                          １
ステアリルアルコール                                          １．８
ベヘニルアルコール                                            １．６
グリセリン                                                    ８
ジプロピレングリコール                                        ５
マカデミアナッツ油                                            ２
硬化油                                                        ３
スクワラン                                                    ６
キシリトール                                                  ３
ステアリン酸                                                  ２
ヒドロキシステアリン酸コレステリル                            ０．５
２−エチルヘキサン酸セチル                                    ４
自己乳化型モノステアリン酸グリセリン                          ３
水酸化カリウム                                                ０．１５
メタリン酸ナトリウム                                          ０．０５
トリメチルグリシン                                            ２
ＤＬ−α−トコフェロール  ２−Ｌ−
アスコルビン酸リン酸ジエステルカリウム                      １
酢酸ＤＬ−α−トコフェロール                                  ０．１
パロアズル抽出液（生薬  ｐａｌｏ  ａｚｕｌ）                  ０．０５
甜茶エキス                                                    ０．１
パラベン                                                      適量
エデト酸３ナトリウム                                          ０．０５
４−ｔ−ブチル−４’−メトキシジベンゾイルメタン              ０．０５
ジパラメトキシ桂皮酸モノ−２−エチルヘキ酸酸グリセリル        ０．０５
ベンガラ                                                      適量
黄酸化鉄                                                      適量
カルボキシビニルポリマー                                      ０．０５
精製水                                                        残余
処方例３６（クリーム）
流動パラフィン                                                ８
ワセリン                                                      ３
メチルポリシロキサン                                          ２
ステアリルアルコール                                          ３
ベヘニルアルコール                                            ２
グリセリン                                                    ５
ジプロピレングリコール                                        ４
キシリトール                                                  １
テトラ２−エチルヘキサン酸ペンタエリスリット                  ４
イソステアリン酸ポリオキシエチレングリセリル                  ２
モノステアリン酸ポリオキシエチレングリセリン                  １
親油型モノステアリン酸グリセリン                              ２
クエン酸                                                      ０．０５
クエン酸ナトリウム                                            ０．０５
水酸化カリウム                                                ０．０１５パロアズル抽出液（生薬  ｐａｌｏ  ａｚｕｌ）                  ０．１
カンゾウフラボノイド                                          ０．１
パルミチンレチノール（１００万単位＿）                        ０．２５
酢酸ＤＬ−α−トコフェロール                                  ０．１
パラオキシ安息香酸エステル                                    適量
フェノキシエタノール                                          適量
ジブチルヒドロキシトルエン                                    ０．１
エデト酸３ナトリウム                                          ０．０５
４−ｔ−ブチル−４’−メトキシジベンゾイルメタン              ０．０１
パラメトキシ桂皮酸２−エチルヘキシル                          ０．１
β−カロチン                                                  ０．０１
ポリビニルアルコール                                          ０．５
ヒドロキシエチルセルロース                                    ０．５
カルボキシビニルポリマー                                      ０．０５
精製水                                                        残余
香料                                                          適量
処方例３７（保湿クリーム）
流動パラフィン                                              １０
メチルポリシロキサン                                          ２
グリセリン                                                  １０
１，３−ブチレングリコール                                    ２
エリスリトール                                                １
キシリトール                                                  １．５
ポリエチレングリコール１５００                                ５
スクワラン                                                  １５
テトラ２−エチルヘキサン酸ペンタエリスリット                  ５
水酸化カリウム                                                ０．１
パロアズル抽出液（生薬  ｐａｌｏ  ａｚｕｌ）                  ０．０８
メタリン酸ナトリウム                                          ０．０５
酢酸トコフェロール                                            ０．０５
パラオキシ安息香酸エステル                                    適量
ヒドロキシプロピルメチルセルロース                            ０．３
ポリビニルアルコール                                          ０．１
カルボキシビニルポリマー                                      ０．２
アクリル酸・メタクリル酸アルキル共重合体                      ０．１
精製水                                                        残余
処方例３８（クリーム（オイルフリー））
シクロメチコン                                              ３０
ポリオキシエチレン・メチルポリシロキサン共重合体              １．５
グリセリン                                                    ５
ジプロピレングリコール                                        ５
キシリトール                                                  ３
タルク                                                        ５
パラベン                                                      適量
パロアズル抽出液（生薬  ｐａｌｏ  ａｚｕｌ）                  ０．０３
フェノキシエタノール                                          ０．３
エデト酸３ナトリウム                                          ０．０２
ジメチルジステアリルアンモニウムヘクトライト                  ０．５
精製水                                                        残余
トリメチルシロキシケイ酸                                      ０．５
球状無水ケイ酸                                                ０．５
微粒子酸化チタン（疎水化処理品３０ｎｍ）                      ７
球状ポリエチレン粉末                                          ２
ポリ（オキシエチレン・オキシプロピレン）・
メチルポリシロサン共重合体                                  １
処方例３９（乳液）
流動パラフィン                                                ７
ワセリン                                                      ３
デカメチルシクロペンタシロキサン                              ２
ベヘニルアルコール                                            ２
グリセリン                                                    ５
ジプロピレングリコール                                        ７
ポリエチレングリコール１５００                                ２
キシリトール                                                  ２
ホホバ油                                                      １
イソステアリン酸                                              ０．５
ステアリン酸                                                  ０．５
ベヘニン酸                                                    ０．５
テトラ２−エチルヘキサン酸ペンタエリスリット                  ３
２−エチルヘキサン酸セチル                                    ３
モノステアリン酸グリセリン                                    １
モノステアリン酸ポリオキシエチレングリセリン                  １
水酸化カリウム                                                ０．１
ヘキサメタリン酸ナトリウム                                    ０．０５
グリチルレチン酸ステアリル                                    ０．０５
Ｌ−アルギニン                                                ０．１
ローヤルゼリーエキス                                          ０．１
酢酸トコフェロール                                            ０．１
ヒアルロン酸ナトリウム                                        ０．１
パロアズル抽出液（生薬  ｐａｌｏ  ａｚｕｌ）                  ０．０５
パラベン                                                      適量
エデト酸３ナトリウム                                          ０．０５
４−ｔ−ブチル−４’−メトキシジベンゾイルメタン              ０．１
パラメトキシ桂皮酸２−エチルヘキシル                          ０．１
黄酸化鉄                                                      適量
カルボキシビニルポリマー                                      ０．１５
精製水                                                        残余
香料                                                          適量
処方例４０（乳液）
メチルポリシロキサン                                          ２
ベヘニルアルコール                                            １
バチルアルコール                                              ０．５
グリセリン                                                    ５
１，３−ブチレングリコール                                    ７
キシリトール                                                  ２
エリスリトール                                                ２
硬化油                                                        ３
スクワラン                                                    ６
テトラ２−エチルヘキサン酸ペンタエリスリット                  ２
イソステアリン酸ポリオキシエチレングリセリル                  １
モノステアリン酸ポリオキシエチレングリセリン                  １
パロアズル抽出液（生薬  ｐａｌｏ  ａｚｕｌ）                  ０．１
水酸化カリウム                                                適量
ヘキサメタリン酸ナトリウム                                    ０．０５
フェノキシエタノール                                          適量
カルボキシビニルポリマー                                      ０．１１
精製水                                                        残余
処方例４１（リンクルケア用乳液）
デカメチルシクロペンタシロキサン                            １５
トリメチルシロキシケイ酸                                      ５
ポリオキシエチレン・メチルポリシロキサン共重合体              ５
グリセリン                                                    ５
１，３−ブチレングリコール                                    ５
マルチトール液                                                ２
マカデミアナッツ油                                            ２
スクワラン                                                    ２
キシリトール                                                  ３
ヒドロキシステアリン酸コレステリル                            ０．５
２−エチルヘキサン酸セチル                                    ２
塩化ジステアリルジメチルアンモニウム                          ０．２
Ｌ−アスコルビン酸硫酸エステル２ナトリウム                    ０．１
ＤＬ−α−トコフェロール  ２−Ｌ−
アスコルビン酸リン酸ジエステルカリウム                      ０．１
酢酸トコフェロール                                            ０．０５
魚コラーゲン                                                  ０．４
コンドロイチン硫酸ナトリウム                                  ０．０１
ヒアルロン酸ナトリウム                                        ０．１
パロアズル抽出液（生薬  ｐａｌｏ  ａｚｕｌ）                  ０．１
パラベン                                                      適量
エデト酸３ナトリウム                                          ０．０５
ジパラメトキシ桂皮酸モノ−２−エチルヘキサン酸グリセリル      ０．０５
ケイ酸アルミニウムマグネシウム                                ０．３
精製水                                                        残余
処方例４２（乳液）
メチルポリシロキサン                                          ３
デカメチルシクロペンタシロキサン                              ４
エチルアルコール                                              ５
グリセリン                                                    ６
１，３−ブチレングリコール                                    ５
ポリオキシエチレンメチルグルコシド                            ３
ヒマワリ油                                                    １
スクワラン                                                    ２
キシリトール                                                  ３
水酸化カリウム                                                ０．１
ヘキサメタリン酸ナトリウム                                    ０．０５
ヒドロキシプロピル−β−シクロデキストリン                    ０．１
グリチルリチン酸ジカリウム                                    ０．０５
ビワ葉エキス                                                  ０．１
Ｌ−グルタミン酸ナトリウム                                    ０．０５
ウイキョウエキス                                              ０．１
ラベンダー油                                                  ０．１
パロアズル抽出液（生薬  ｐａｌｏ  ａｚｕｌ）                  ０．０５
パラベン                                                      適量
ジモルホリノピリダジン                                        ０．１
ベンガラ                                                      適量
黄酸化鉄                                                      適量
キサンタンガム                                                ０．１
カルボキシビニルポリマー                                      ０．１
アクリル酸・メタクリル酸アルキル共重合体                      ０．１
精製水                                                        残余
処方例４３（乳液）
ワセリン                                                      ５
ベヘニルアルコール                                            ０．４
バチルアルコール                                              ０．４
グリセリン                                                    ７
１，３−ブチレングリコール                                    ７
キシリット                                                    ３
ポリエチレングリコール２００００                              ２
硬化油                                                        ２
ホホバ油                                                      ２
スクワラン                                                    ５
イソステアリン酸                                              ０．４
テトラ２−エチルヘキサン酸ペンタエリスリット                  ２
ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油                                ０．５
ラウリルジメチルアミノ酢酸ベタイン                            ０．４
水酸化カリウム                                                適量
ピロ亜硫酸ナトリウム                                          ０．０１
ヘキサメタリン酸ナトリウム                                    ０．０５
グリチルリチン酸ジカリウム                                    ０．０５
トリメチルグリシン                                            ３
アルブチン                                                    ３
酵母エキス                                                    ０．１
酢酸トコフェロール                                            ０．１
チオタウリン                                                  ０．１
パロアズル抽出液（生薬  ｐａｌｏ  ａｚｕｌ）                  ０．０５
クララエキス                                                  ０．１
フェノキシエタノール                                          適量
ベンガラ                                                      適量
クインズシードエキス                                          ０．１
カルボキシビニルポリマー                                      ０．２
精製水                                                        残余
処方例４４（化粧水）
エチルアルコール                                              ５
グリセリン                                                    ２
１，３−ブチレングリコール                                    ５
ポリオキシエチレンポリオキシプロピレンデシル
テトラデシルエーテル                                        ０．２
ヘキサメタリン酸ナトリウム                                    ０．０３
トリメチルグリシン                                            １
キシリトール                                                  ３
ポリアスパラギン酸ナトリウム                                  ０．１
ＤＬ−α−トコフェロール  ２−Ｌ−
アスコルビン酸リン酸ジエステルカリウム                      ０．１
チオタウリン                                                  ０．１
緑茶エキス                                                    ０．１
パロアズル抽出液（生薬  ｐａｌｏ  ａｚｕｌ）                  ０．０５
イリス根エキス                                                ０．１
フェノキシエタノール                                          ０．１２
エチレンジアミンヒドロキシエチル酢酸三ナトリウム（ＨＥＤＴＡ）０．０７
カルボキシビニルポリマーカリウム                              ０．０９
精製水                                                        残余
香料                                                          適量
処方例４５（化粧水）
グリセリン                                                    ２
１，３−ブチレングリコール                                    ４
エリスリトール                                                ２
キシリトール                                                  ３
パロアズル抽出液（生薬  ｐａｌｏ  ａｚｕｌ）                  ０．２
ポリオキシエチレンメチルグルコシド                            １
ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油                                ０．５
クエン酸                                                      ０．０２
クエン酸ナトリウム                                            ０．０８
フェノキシエタノール                                          ０．２５
Ｎ−ヤシ油脂肪酸アシルＬ−アルギニンエチル・
ＤＬ−ピロリドンカルボン酸                                  ０．１
精製水                                                        残余
処方例４６（化粧水）
エチルアルコール                                              ５
グリセリン                                                    ０．１
ジプロピレングリコール                                        ２
１，３−ブチレングリコール                                    ６
キシリトール                                                  ６
ローズマリー油                                                ０．００１
セージ油                                                      ０．００１
クエン酸                                                      ０．０２
クエン酸ナトリウム                                            ０．０８
ヘキサメタリン酸ナトリウム                                    ０．０３
ヒドロキシプロピル−β−シクロデキストリン                    ０．１
ムクロジエキス                                                ０．１
エイジツエキス                                                ０．１
ユリエキス                                                    ０．１
オウバクエキス                                                ０．１
トゲナシエキス                                                ０．１
木苺エキス                                                    ０．１
ラベンダー油                                                  ０．１
トウニンエキス                                                ０．１
パロアズル抽出液（生薬  ｐａｌｏ  ａｚｕｌ）                  ０．１
アルギン酸ナトリウム                                          ０．００１
精製水                                                        残余
産業上の利用可能性
本発明の外用剤は、ヒトケラチノサイトが乾燥によりうける角層水分量の低下を有意に防止できるとともに、角層の皮膚バリア機能低下を抑制することができる。したがって、本発明は化粧品または皮膚科用製剤の製造業において利用可能である。
【図面の簡単な説明】
図１は、培養ヒトケラチノサイトの乾燥（気相暴露）によるフィラグリンタンパク質レベルの相対的な経時的変化を示すグラフである。試行ｎ＝４〜５における平均±ＳＥＭ値で表示している。なお＊＊はｐ＜０．０１を意味する。
図２は、培養ヒトケラチノサイトの乾燥（気相暴露）によるフィラグリン遺伝子の経時的な発現レベルの変化を示すグラフである。試行ｎ＝４〜６における、平均±ＳＥＭ値で表示している。なお、＊＊はｐ＜０．０１を、＊はｐ＜０．０５を意味する。
図３は、培養ヒトケラチノサイトの乾燥（気相暴露）によるフィラグリンタンパク質レベルの低下を抑制するグリセリンの効果を示すグラフである。対になっている棒の右側が１０％グリセリン存在下での培養例を示す（左側は対照である。）。試行ｎ＝３〜６における、平均±ＳＥＭ値により表示している。なお、＊＊はｐ＜０．０１を、＊はｐ＜０．０５を意味する。
図４は、培養ヒトケラチノサイトの乾燥によるフィラグリン遺伝子発現低下に対するグリセリンおよびトリメチルグリシンの効果を示すグラフである。試行ｎ＝３における、平均±ＳＥＭ値により表示している。なお、＊＊はｐ＜０．０１である。
図５は、図４と薬剤として生薬を用いる他は、同様な意味を有するグラフである。なお各薬剤濃度は乾燥残分濃度０．００２５％である。また、ｎ＝３であり、＊はｐ＜０．０５、＊＊はｐ＜０．０１、＊＊＊はｐ＜０．００１を意味する。
図６は、薬剤としてアスコルビン酸およびグルタチオンを、それぞれ１ｍＭの濃度で用いたこと以外は、図４と同様な意味を有するグラフである。なお＊＊＊はｐ＜０．００１で、＊＊はｐ＜０．０１を意味する。
図７は、薬剤としてヒポタウリンを用いた他は図４と同様な意味を有するグラフである。＊はｐ＜０．０５を意味する。
【図１】
0003782779.tif 000004
【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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