(57)【要約】  天然抽出物であって、健康に悪影響を及ぼすおそれがなく、安全に、簡便に摂取することが可能である、耐熱性、耐圧性、耐酸性、耐塩基性および耐酵素性に優れた安定的な免疫活性の高い物質を提供するため、植物の核酸およびその断片物の少なくとも一方からなる免疫活性物質とした。
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
植物の核酸およびその断片物の少なくとも一方からなることを特徴とする免疫活性物質。
【請求項２】
上記植物の核酸がＲＮＡに由来するものである請求項１記載の免疫活性物質。
【請求項３】
上記植物の核酸が、細胞質リボソームＲＮＡおよび色素体リボソームＲＮＡの少なくとも一方に由来するものである請求項１または２記載の免疫活性物質。
【請求項４】
上記植物の核酸が色素体リボソームＲＮＡに由来するものである請求項１〜３のいずれか一項に記載の免疫活性物質。
【請求項５】
請求項１〜４のいずれか一項に記載の免疫活性物質を含有する粗生成物。
【請求項６】
請求項１〜４のいずれか一項に記載の免疫活性物質および請求項５記載の粗生成物の少なくとも一方を含有することを特徴とする組成物。
【請求項７】
請求項１〜４のいずれか一項に記載の免疫活性物質を組成物全体の１０〜９９重量％含有する請求項５または６記載の組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、簡便に摂取することが可能である天然抽出物であって、生体の免疫活動や免疫機能の維持および調節にかかわる免疫活性物質およびそれを含有する粗生成物、組成物に関するものである。
【背景技術】
【０００２】
生薬や漢方薬は、その原材料となる植物を熱水で煎じる事で作製され（例えば、非特許文献１参照）、これらの煎じ液は自然免疫活性化効果を有することが知られている。これら植物の煎じ液中に含まれる免疫活性化成分としては、多糖類が広く知られており、実際に利用されている。例えば、霊芝をはじめとする菌類の細胞壁にはＤ−グルコースがβ１−３結合で連なった多糖であるβ−グルカンが含まれており、このβ−グルカンはマクロファージや樹状細胞を介して自然免疫系を活性化させることが明らかにされている（非特許文献２参照）。また、主にβ１−３結合を持つシゾフィラン（Schizophyllan）も免疫活性化作用を持ち、子宮頸がんに対する治療効果が報告されている（非特許文献３参照）。【０００３】
一方、長年研究を続けてきた結果、ヒト臨床試験における無作為化比較において、漢方薬は、高齢者の免疫を活性化する事で、インフルエンザワクチンの効果を増強することが明らかになっている（非特許文献４参照）。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【０００４】
【非特許文献１】日本東洋医学会学術教育委員会著  「専門医のための漢方医学テキスト」南江堂  ２０１０年
【非特許文献２】The repertoire for pattern recognition of pathogens by the innate immune system is defined by cooperation between toll-like receptors. Proc Natl Acad Sci USA. 2000 Dec 5; 97(25): 13766-71.
【非特許文献３】Activated (HLA-DR+) T-lymphocyte subsets in cervical carcinoma and effects of radiotherapy and immunotherapy with sizofiran on cell-mediated immunity and survival. Gynecol Oncol. 1995 Mar; 56(3): 412-20.
【非特許文献４】The long-term effects of a Kampo medicine, juzentaihoto, on maintenance of antibody titer in elderly people after influenza vaccination. eCAM Volume 2013, Article ID 568074, 8 pages.
【０００５】
しかし、漢方薬・生薬は原材料費が高いためコストが障壁となり、種々の商品展開をし辛いという現状がある。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
そこで、本発明は、植物抽出物であって、安価に摂取することが可能であり、しかも耐熱性、耐圧性、耐酸性、耐塩基性、および耐酵素性に優れた安定的な免疫活性物質およびそれを含有する粗生成物、組成物を提供する。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
上記目的を達成するため、本発明は、以下の［１］〜［７］を要旨とする。
［１］植物の核酸およびその断片物の少なくとも一方からなる免疫活性物質。
［２］上記植物の核酸がＲＮＡに由来するものである、［１］記載の免疫活性物質。
［３］上記植物の核酸が、細胞質リボソームＲＮＡおよび色素体リボソームＲＮＡの少なくとも一方に由来するものである、［１］または［２］記載の免疫活性物質。
［４］上記植物の核酸が色素体リボソームＲＮＡに由来するものである、［１］〜［３］のいずれか記載の免疫活性物質。
［５］［１］〜［４］のいずれか記載の免疫活性物質を含有する粗生成物。
［６］［１］〜［４］のいずれか記載の免疫活性物質および［５］記載の粗生成物の少なくとも一方を含有する組成物。
［７］［１］〜［４］のいずれか記載の免疫活性物質を組成物全体の１０〜９９重量％含有する、［６］の組成物。【０００８】
すなわち、漢方薬・生薬は原材料費が高いため、日常的に使用できるような商品に気軽に用いることができない。そこで、本発明者らが鋭意努力を続けた結果、漢方薬・生薬よりもはるかに安価な野菜や穀物を煎じた液からも、新規な免疫活性物質を大量に取得することができることを見出した。なお、本発明の免疫活性物質は、生薬はもちろん、野菜や穀物からも得ることができるため、漢方薬・生薬と同様に安全性は高いと考えられる。
【発明の効果】
【０００９】
本発明の植物の核酸およびその断片物の少なくとも一方からなる免疫活性物質は、免疫活性が高いだけでなく、生物の健康に悪影響を及ぼすおそれが少なく、耐熱性、耐圧性、耐酸性、耐塩基性および耐酵素性にも優れ、安定的である。【００１０】
そして、上記植物の核酸がＲＮＡに由来するものであると、とりわけ免疫活性を高めることができる。【００１１】
さらに、上記植物の核酸が細胞質リボソームＲＮＡおよび色素体リボソームＲＮＡの少なくとも一方に由来するものであると、より一層免疫活性を高めることができ、なかでも色素体リボソームＲＮＡに由来するものであると、さらに一層免疫活性を高めることができる。【００１２】
また、上記免疫活性物質を含有する粗生成物は、煩雑な精製工程を経由せずに得ることができるため、さらに低コストを実現できる。【００１３】
そして、上記免疫活性物質および粗生成物の少なくとも一方を含有する組成物は、免疫活性が高く、しかもその由来から生物の健康に悪影響を及ぼすおそれが少ないため、安全に、簡便に摂取することが可能である。【００１４】
また、上記免疫活性物質を組成物全体の１０〜９９重量％含有する組成物は、より確実に免疫活性に優れる効果を期待できる。
【図面の簡単な説明】
【００１５】
【図１】本発明の一実施の形態である免疫活性物質がＲＮＡ断片物であることの説明図である。
【図２】本発明の一実施の形態である免疫活性物質がＲＮＡ断片物であることの説明図である。
【図３】本発明の一実施の形態である免疫活性物質がＲＮＡ断片物であることの説明図である。
【図４】本発明の一実施の形態である免疫活性物質のＢＬＡＳＴ解析結果を示した図である。
【図５】本発明の一実施の形態である免疫活性物質をｐＨおよび酵素処理した後のＲＮＡ断片物の状態を説明する図である。
【図６】本発明の一実施の形態である免疫活性物質の免疫活性強度の説明図である。
【発明を実施するための形態】
【００１６】
つぎに、本発明を実施するための形態について説明する。但し、本発明は、この実施の形態に限定されるものではない。
【００１７】
本発明の一実施の態様は、（Ｉ）植物の核酸およびその断片物の少なくとも一方からなる免疫活性物質および（II）上記免疫活性物質およびその免疫活性物質を含有する粗生成物の少なくとも一方を含有する組成物にかかるものである。
【００１８】
（Ｉ）植物の核酸およびその断片物の少なくとも一方からなる免疫活性物質
本発明において、「植物」とは、植物界に属する生物だけでなく、菌界に属する生物、原生生物界に属する生物および原核生物界に属する生物をも含むものであり、このような生物としては、例えば、紅藻類、褐藻類、緑藻類、車軸藻類、コケ植物、シダ植物、種子植物等があげられる。
【００１９】
上記菌界に属する生物としては、例えば、藻菌類、子のう菌類、担子菌類、地衣類等があげられ、原生生物界に属する生物としては、例えば、ケイ藻類があげられる。さらに、原核生物界に属する生物としては、例えば、細菌類、ラン藻類等があげられる。
【００２０】
上記核酸とは、生物の細胞を構成する成分の一つであり、糖、塩基、リン酸が１分子ずつ結合したヌクレオチドという構成単位が多数結合したポリヌクレオチド鎖である。本発明において、「核酸」には、デオキシリボ核酸（ＤＮＡ）とリボ核酸（ＲＮＡ）の両者が含まれる。
【００２１】
上記ＤＮＡは、通常、糖としてデオキシリボースを有し、塩基としてアデニン、グアニン、シトシン、チミンを有している。
【００２２】
上記ＲＮＡは、通常、糖としてリボースを有し、塩基としてアデニン、グアニン、シトシン、ウラシルを有している。上記ＲＮＡには、リボソームＲＮＡ（ｒＲＮＡ）、伝令ＲＮＡ、転移ＲＮＡ等が含まれ、なかでも細胞内に多量に含まれるため、ｒＲＮＡであることが好ましい。
【００２３】
ｒＲＮＡとは、リボソームを構成するＲＮＡであり、ＲＮＡとしては生体内でもっとも大量に存在している。リボソーム内での働きは未解明の部分が多いが、タンパク質生合成（翻訳）の触媒作用に、より積極的な働きがあると指摘されている。
【００２４】
上記核酸の断片物とは、上記ＤＮＡまたはＲＮＡが切断され、そのサイズが小さくなったものを意味する。上記切断は、自然に行われたものであってもよいし、人為的に行われたものであってもよい。すなわち、植物の核酸の断片物には、意図的に核酸を切断して得られるものと、上記製法により免疫活性物質を製造する際に、意図せず核酸が切断されたものとが含まれる。植物の核酸を意図的に切断するとは、例えば、高温処理、強酸性処理、強アルカリ性処理、酵素処理、高圧処理、破砕処理などの定法に従って切断することがあげられる。
【００２５】
上記核酸およびその断片物は、細胞質に由来するものが好ましく、細胞質のなかでも細胞質リボソームＲＮＡおよび色素体リボソームＲＮＡの少なくとも一方に由来するものが好ましく、とりわけ色素体リボソームＲＮＡに由来するものが好ましい。色素体は、細胞内部に共生した細菌に起源するものであるため、より高い免疫活性を発揮すると考えられる。なお、上記細胞質リボソームＲＮＡには、ゴルジ体結合型および細胞質遊離型リボソームの双方が含まれる。
【００２６】
本発明において、「細胞質」には、ミトコンドリア、色素体、小胞体、ゴルジ体等の細胞小器官および細胞質基質が含まれる。すなわち、植物細胞は、脂質二重層を主成分とする薄膜状の細胞膜で包まれており、その内部には細胞質基質とよばれる液体が、核、小胞体、ゴルジ体、ミトコンドリア、色素体等の細胞小器官とともに封入されている。なお、植物細胞の細胞膜で囲まれた部分のうち、核以外の部分が細胞質である。
【００２７】
上記ミトコンドリアは、一般的に、直径０．５〜１．０μｍの糸状または顆粒状の細胞小器官である。１個の細胞内に多数（通常、数百〜数千）存在する。上記ミトコンドリアは、酸化的リン酸化反応によりＡＴＰ（アデノシン５'−三リン酸）を合成している。
【００２８】
上記色素体は、色素を有するか色素を形成しうる小体であり、通常、植物細胞に含まれ光合成を行う細胞小器官を意味する。色素体が有する色素により、葉緑体、有色体、白色体に分けられる。また、その断片物とは、色素体が破砕され、そのサイズが小さくなったものを意味する。上記破砕は、自然に行われたものであってもよいし、人為的に行われたものであってもよい。
【００２９】
上記小胞体は、別名をミクロソームといい、すべての真核生物の細胞に存在し、１層の膜でできた薄い袋のような細胞小器官である。また、上記小胞体は、細胞全体に占める体積がおよそ１０％に及び、タンパク質のプロセシングを行う等、種々の機能を有している。
【００３０】
上記ゴルジ体は、扁平な袋を数枚重ねた構造をした細胞小器官であり、通常、小胞体に隣接している。上記ゴルジ体は、細胞外へ分泌されるタンパク質の糖鎖修飾を行う等、種々の機能を有している。
【００３１】
本発明の一態様である植物の核酸およびその断片物の少なくとも一方からなる免疫活性物質は、例えば、以下の製法により製造することができる。すなわち、植物を裁断、破砕し、水系溶液に浸漬し、好ましくは加熱することにより、本発明の一態様である免疫活性物質を含有する粗生成物を作製し、ついで、この粗生成物を精製することで、本発明の一態様である免疫活性物質を得ることができる。
【００３２】
上記植物の裁断、破砕は、植物の種類や状態によっても異なるが、免疫活性物質の抽出効率を高めるため、できるだけ細かく裁断、破砕することが好ましい。また、上記水系溶液は、免疫活性物質をヒト等が服用等することを考慮し、健康面への配慮から水、アルコールが好ましい。また、水系溶液の加熱は、通常、６０℃以上で３分間以上行うことが好ましい。
【００３３】
上記粗生成物の精製は、例えば、多糖類やポリフェノール類を大量に含む植物からＲＮＡ抽出を行うための前処理試薬を添加し、遠心操作により夾雑物を除去した後、ｔｏｔａｌ ＲＮＡ抽出試薬を添加する等の、ＲＮＡ抽出の定法によって精製することができる。
【００３４】
本発明の一態様である、植物の核酸およびその断片物の少なくとも一方からなる免疫活性物質は、少なくとも、免疫活性化作用（ＲＡＷ−Ｂｌｕｅ  Ａｓｓａｙによる活性）を有している。
【００３５】
そして、植物の核酸が細胞質リボソーム、色素体リボソームに由来する免疫活性物質は、植物を等張液中で冷却下、ホモジナイザーなどの定法に従って破砕し、その細胞破砕液を遠心分離器にかけることで、細胞質および各細胞小器官が分画され、これらを有する分画を上記に記載の方法を経由させることにより得ることができる。
【００３６】
（II）本発明の免疫活性物質およびそれを含有する粗生成物の少なくとも一方を含有する組成物
本発明の一態様である免疫活性物質および粗生成物は、例えば、製剤、食品、化粧品等に配合することにより、生体内のさまざまな免疫活動を調節したり、活性化したりすることが可能になる。本発明の一態様である免疫活性物質は、製剤等を構成する組成物に対し比較的少量配合するだけで免疫活性の制御が可能となるため、製剤等を構成する組成物の配合の自由度を高めた組成物とすることができる。また、本発明の一態様である粗生成物は、煩雑な工程を経由せずに作製が可能であるため、より低コストの組成物とすることができる。
【００３７】
本発明の一態様である免疫活性物質を製剤等に配合する場合には、製剤等を構成する組成物全体に対し、１〜９９重量％含まれていることが好ましく、より好ましくは１０〜９９重量％、さらに好ましくは１０〜９０重量％、より一層好ましくは２０〜８０重量％である。
【実施例】
【００３８】
つぎに、実施例を説明する。ただし、本発明は、これに限定されるものではない。【００３９】
［実施例１］
生薬として汎用されているカンゾウ［根およびストロンで、ときには周皮を除いたもの(皮去りカンゾウ)、栃本天海堂社、トチモトのカンゾウＰ］１００ｇを、沸騰させた後に９５℃にした蒸留水５００ｍＬに浸漬し、５０分間加熱を続け、煎じ液を得た。
この煎じ液をガーゼでこし、２００ｍＬにメスアップした試験液を、１２０００ｇ、４℃、５分間遠心して、得られた上清（粗生成物）を実施例１とした。【００４０】
［実施例２］
上記で得られた上清（実施例１）と等量のFruit-mate for RNA Purification(タカラバイオ社)を加え混合した。この混合液と等量のＲＮＡ ｉｓｏ Ｂｌｏｏｄ(タカラバイオ社)を加え混合し、室温（約２３℃）で５分間静置した。その後、全量の０．２倍量のクロロホルムを加え混合し、室温で５分間静置し、１２０００ｇ、４℃、１５分間遠心し、得られた水層を等量のイソプロパノールと混合し、室温で１０分間静置した。その後、１２０００ｇ、４℃、１０分間遠心し、遠心管の底近傍に現れたペレットを採取し、７５％エタノールで洗浄した。その後、エタノールで洗浄されたペレットを７５００ｇ、４℃、５分遠心し、遠心管の底近傍に現れたペレット（免疫活性物質）を得た。【００４１】
実施例２で得られたペレット（免疫活性物質）は、ＲＮＡ断片物の集合体である。すなわち、上記ペレット（免疫活性物質）をＲＮａｓｅ Ｆｒｅｅ Ｗａｔｅｒで溶解し、この溶解液をＡｇｉｌｅｎｔ ＲＮＡキット（アジレントテクノロジー社）で処理し、バイオアナライザ（アジレントテクノロジー社）により解析したものを図１に示す。この結果から、実施例２で得られたペレットは各種サイズ（約２５から約２００塩基）のＲＮＡ断片物の集合体であるといえ、同様に、実施例１の上清には上記ＲＮＡ断片物が含まれるといえる。【００４２】
＜酵素および熱に対する難分解性＞
実施例２のＲＮＡ断片物は、熱に対して難分解性で安定的である。すなわち、カンゾウを熱水煮沸し煎じていることから、これらに耐え得た実施例２のＲＮＡ断片物は、熱に対して難分解性で安定的である。【００４３】
＜塩基配列＞
実施例２のＲＮＡ断片物の塩基配列を、次世代シークエンサー（イルミナ社）によって解析した。解析結果の一部分（２０種類）を下記の表１に示す。さらに、実施例２のＲＮＡ断片物についてＢＬＡＳＴ解析を行った。その結果、実施例２のＲＮＡ断片物の大部分は、植物のｒＲＮＡの塩基配列と完全に一致することが確認された。これらの結果から、実施例２のＲＮＡ断片物は、核酸、特にｒＲＮＡおよびその断片物の少なくとも一方に由来することが明らかとなった。【００４４】
【表１】
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【００４５】
＜免疫活性＞
実施例２のＲＮＡ断片物について、下記に示す条件にしたがってＲＡＷ−Ｂｌｕｅ  Ａｓｓａｙを行った。ＲＡＷ−Ｂｌｕｅ  Ａｓｓａｙは、多くの自然免疫受容体の発現が確認されているＲＡＷ−２６４．７（マウスマクロファージア細胞株）から作製された細胞を用いた試験法である。上記細胞は自然免疫受容体のリガンドが培地に含まれていると転写因子ＮＦ―κＢ、およびＡＰ−１を介して酵素を産生するため、比色法により、自然免疫の活性化の程度を測定することができる。【００４６】
＜ＲＡＷ−Ｂｌｕｅ  Ａｓｓａｙの条件＞
実施例２のＲＮＡ断片物を、Opti-MEM（登録商標）で適宜希釈し、細胞培養時の最終量の０．３％のLipofectamine RNAiMAX Transfection Reagent(ThermoFisher Scientific)を添加し、３０分間室温に静置して、RNA-Lipofectamine複合体を作成した。一方、RAW-Blue細胞(InvivoGen社)をAIM V Serum Free Medium(ThermoFisher Scientific)に懸濁し、９６ウェルプレートに播種し、細胞の接着を確認後、上記RNA-Lipofectamine複合体を添加した。そして、３７℃、５％ＣＯ2の条件下で２０時間培養した後に、１０００ｒｐｍ、４℃、５分間遠心し、培養上清を回収した。この上清３０μＬと、別途調整したQUANTI-Blue(InvivoGen社)９０μＬを混合し、３７℃、５％ＣＯ2の条件下で２０時間培養した。その後、iMarkマイクロプレートリーダー(Bio-Rad社)を用い６２０ｎｍの吸光度を測定した。吸光度の測定は各濃度についてｎ＝３で行い、その平均と標準偏差を下記の表２に示した。なお、ネガティブコントロールとしては、RNase free waterを使用し、およびポジティブコントロールとして、強い免疫活性が知られているリポ多糖（ＬＰＳ）を表２に示す濃度で使用した。【００４７】
【表２】
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【００４８】
表２に示されるとおり、実施例２のＲＮＡ断片物は、転写因子ＮＦ-κＢ、およびＡＰ−１を介して、免疫活性化作用を有していることがわかった。【００４９】
つぎに日常的に摂取する、穀物や野菜に関して検討を行った。
［実施例３］
液体窒素で凍結した炊飯米５００ｍｇを乳鉢で粉砕し、そのうちの３００ｍｇを別容器に取り、Fruit-mate for RNA Purification(タカラバイオ社)３ｍＬを加え混合した。この混合液と等量のＲＮＡ ｉｓｏ Ｂｌｏｏｄ(タカラバイオ社)を加え混合し、室温（約２３℃）で５分間静置した。その後、定法に従って実施例２と同様に処理を行い、ＲＮＡ断片物を得た。図２は、実施例３をバイオアナライザ（アジレントテクノロジー社製）により解析したものである。この図２に示されるように、実施例３は、各種サイズ（約２５から約５００塩基）のＲＮＡ断片物からなることがわかる。【００５０】
［実施例４］
細断されたレタス５００ｍｇを１．５ｍＬチューブに取り、RNase Free Waterを２５０μＬ加え、９５℃に設定したブロックインキュベータで１６０分間加熱して、レタスの水煮沸物を作製した。このレタスの水煮沸物を液体窒素で凍結した後、乳鉢で粉砕し、そのうちの３００ｍｇを別容器に取り、Fruit-mate for RNA Purification(タカラバイオ社)３ｍＬを加え混合した。この混合液と等量のＲＮＡ ｉｓｏ Ｂｌｏｏｄ(タカラバイオ社)を加え混合し、室温（約２３℃）で５分間静置した。その後、定法に従って実施例２と同様に処理を行い、ＲＮＡ断片物を得た。図３は、実施例４のバイオアナライザ（アジレントテクノロジー社）により解析したものである。この図３に示されるように、実施例４は、各種サイズ（約２５から約３００塩基）のＲＮＡ断片物からなることがわかる。【００５１】
なお、実施例２と同様に、実施例３の炊飯米は高温高圧化、実施例４のレタスは熱水で煮沸し煎じていることから、実施例３および４のＲＮＡ断片物は、圧力、および熱に対して難分解性を有し、安定的であること明らかとなった。【００５２】
＜塩基配列＞
実施例３および４のＲＮＡ断片物を、次世代シークエンサー（イルミナ社）によって塩基配列を解析した。解析結果の一部分（２０種類）を下記の表３に示す。さらに、実施例３および４のＲＮＡ断片物についてＢＬＡＳＴ解析を行った。その結果、実施例３および４のＲＮＡ断片物の大部分は、植物のｒＲＮＡの塩基配列と完全に一致することが確認された。これらの結果から、実施例３および４のＲＮＡ断片物は、核酸、特にｒＲＮＡおよびその断片物の少なくとも一方に由来することが明らかとなった。【００５３】
【表３】
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【００５４】
＜免疫活性＞
実施例３および４のＲＮＡ断片物について、実施例２に準じ、ＲＡＷ−Ｂｌｕｅ  Ａｓｓａｙを行った。実施例３の結果を下記の表４に示し、実施例４の結果を下記の表５に示す。これらの結果から、実施例３および４のＲＮＡ断片物は、転写因子ＮＦ-κＢおよびＡＰ−１を介して、免疫活性化作用を有していることがわかった。【００５５】
【表４】
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【００５６】
【表５】
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【００５７】
表４および表５に示すとおり、実施例３と比べて実施例４のＲＮＡ断片物は免疫活性化作用が強いことがわかった。その理由を解明するため、これらに対し、それぞれＢＬＡＳＴ解析を行った。結果を図４に示す。【００５８】
図４に示すように、実施例４には、実施例３には存在しない色素体（葉緑体）由来のｒＲＮＡ（色素体４．５Ｓ、５Ｓ、２３Ｓおよび１６Ｓ）が含まれていることがわかった。この結果より、色素体（葉緑体）由来のｒＲＮＡからなる免疫活性物質は、より強い免疫活性化作用を有すると推定される。【００５９】
［実施例５］
つぎに、レタスを人工胃液に１５分間浸漬させ、さらに人工胆汁液に３０分間浸漬させて、レタス消化物を作製した。このレタス消化物３００ｍｇを別容器に取り、Fruit-mate for RNA Purification(タカラバイオ社)３ｍＬを加え混合した。この混合液と等量のＲＮＡ ｉｓｏ Ｂｌｏｏｄ(タカラバイオ社)を加え混合し、室温（約２３℃）で５分間静置した。その後、定法に従って実施例２と同様に処理を行い、ＲＮＡ断片物を得た。図５は、実施例５をバイオアナライザ（アジレントテクノロジー社）により解析したものである。図５と、実施例４のバイオアナライザ解析結果である図３と、を対比してわかるように、ＲＮＡ断片物のサイズはほぼ同じであることから、レタス由来のＲＮＡ断片物は、ｐＨおよび酵素に対しても難分解性があり、安定的であること明らかとなった。
なお、上記人工胃液および人工胆汁液の組成は、以下のとおりである。
・人工胃液：酵素Ｐｅｐｓｉｎ  ３ｇ/Ｌ ０．５％食塩水、ＨＣｌでｐＨを２．０に調整したもの。
・人工胆汁：酵素Ｐａｎｃｒｅａｔｉｎ  １ｇ/Ｌ ０．５％食塩水、Ｂｉｌｅ ｓａｌｔｓ ４．５％、ＮａＯＨでｐＨを８．０に調整したもの。【００６０】
［実施例６〜９］
レタスより色素体（葉緑体）を豊富に含むホウレンソウを、等張液に浸漬し冷却しながらホモジナイザーなどの定法に従って破砕し、その細胞破砕液を所定の回転数に設定された遠心分離器にかけ、得られた上清をさらに所定の回転数に設定された遠心分離器にかけるという操作を繰り返し行った。これにより、色素体（葉緑体）に由来するＲＮＡ断片物を含有する粗生成物（実施例６）と、細胞質から色素体（葉緑体）を除いたものに由来するＲＮＡ断片物を含有する粗生成物（実施例７）を得た。【００６１】
上記で得られた実施例６および７の粗生成物について、実施例２に準じて精製し、遠心して、それぞれペレット状のＲＮＡ断片物の集合体を得た（色素体由来のＲＮＡ断片物：実施例８、色素体以外の細胞質に由来のＲＮＡ断片物：実施例９）。【００６２】
＜免疫活性＞
得られた実施例８および９について、実施例２に準じてＲＡＷ−Ｂｌｕｅ  Ａｓｓａｙを行い、これらの免疫活性を測定した。その結果を図６に示す。この結果から、細胞質から色素体（葉緑体）を除いたものから得られたＲＮＡ断片物（実施例９）と比べて、色素体（葉緑体）から得られたＲＮＡ断片物（実施例８）は免疫活性が強いことが判明した。また、この結果から、これらを含有する上記実施例６および７の粗生成物は、いずれも免疫活性が認められるといえ、とりわけ実施例７の免疫活性が強いといえる。【００６３】
このように、本発明の一態様である免疫活性物質は、生薬のみならず野菜等の食物から核酸およびその断片物の少なくとも一方を取り出したものであり、少量で所望の免疫活性効果を得ることができ、効率がよい。また、免疫活性物質が特定され、免疫活性化の制御がし易くなったため、本発明の一態様である免疫活性物質は、より一層気軽に摂取することができるようになる。【００６４】
上記実施例においては、本発明における具体的な形態について示したが、上記実施例は単なる例示にすぎず、限定的に解釈されるものではない。当業者に明らかな様々な変形は、本発明の範囲内であることが企図されている。
【産業上の利用可能性】
【００６５】
本発明の免疫活性物質および粗生成物は、製剤等に配合することができ、種々の生体反応を制御する組成物として用いるのに適している。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【国際調査報告】
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