(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
マルトオリゴシルツラノース及びマルトオリゴシルパラチノース含有糖質。
【請求項２】
マルトオリゴシルツラノース及びマルトオリゴシルパラチノースに加えてマルトオリゴシルトレハルロースを含有することを特徴とする請求項１記載のマルトオリゴシルツラノース及びマルトオリゴシルパラチノース含有糖質。
【請求項３】
マルトオリゴシルスクロース含有溶液に非還元性糖質生成酵素を作用させてマルトオリゴシルツラノース及びマルトオリゴシルパラチノースを生成せしめ、これを採取することを特徴とするマルトオリゴシルツラノース及びマルトオリゴシルパラチノース含有糖質の製造方法。
【請求項４】
マルトオリゴシルツラノース及びマルトオリゴシルパラチノース含有糖質を含有せしめた飲食物。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は、マルトオリゴシルツラノース及びマルトオリゴシルパラチノース含有糖質とその製造方法並びに用途に関し、更に詳細にはマルトオリゴシルツラノース及びマルトオリゴシルパラチノース含有糖質、およびマルトオリゴシルスクロースに非還元性糖質生成酵素を作用させるマルトオリゴシルツラノース及びマルトオリゴシルパラチノース含有糖質の製造方法、並びにこの糖質を含有せしめた組成物に関する。
【０００２】
【従来の技術】
ツラノース及びパラチノースは、グルコースとフルクトースとからなる二糖類であり、化学的には、ツラノースが３−０−α−Ｄ−グルコピラノシル−Ｄ−フルクトースで示され、パラチノースが６−０−α−Ｄ−グルコピラノシル−Ｄ−フルクトースで示される還元性糖質である。
【０００３】
ツラノースは、特開平５−２５２９７４号公報に開示されているように澱粉質とフルクトースとを含有する水溶液にシクロマルトデキストリン・グルカノトランスフェラーゼの作用により調製することが知られている。パラチノースは、「精糖技術研究会誌」第３４号、第３７乃至４４頁（１９８５年）に記載されているように、プロタミノバクター・ルブラム（Ｐｒｏｔａｍｉｎｏｂａｃｔｅｒ  ｒｕｂｒｕｍ）のα−グルコシダーゼの作用によりスクロースから調製することが知られている。これら糖質は、比較的低甘味でう蝕を誘発しにくい糖質で、種々の飲食物への甘味付素材として利用が期待されるものの、晶出を起こし易く、高濃度シラップ状甘味料の製造が困難であったり、甘味糖質を多く含む食品、例えば、あん、羊羹等の製造に際しては、シャリ防止の工夫を施す必要のあることが知られている。これら糖質の味質の特徴を生かしつつ、非晶質で、粘度調整、水分調整の機能をも併せ持つ、更に高分子のオリゴ糖の開発が望まれる。
【０００４】
【発明が解決しようとする課題】
本発明は、マルトオリゴシルスクロースからのマルトオリゴシルツラノース及びマルトオリゴシルパラチノース生成率が高く、工業的実施の容易なマルトオリゴシルツラノース及びマルトオリゴシルパラチノースの製造方法を提供するとともに、この製造方法により得られるマルトオリゴシルツラノース及びマルトオリゴシルパラチノース含有糖質とこの糖質の用途を提供することである。
【０００５】
【課題を解決するための手段】
本発明者等は、マルトオリゴシルツラノース及びマルトオリゴシルパラチノースの製造方法について鋭意検討してきた。その結果、本発明者等が先に特開平７−１４３８７６号公報で開示した非還元性糖質生成酵素（別名、マルトオリゴシルトレハロース生成酵素）が、マルトオリゴ糖をマルトオリゴシルトレハロースへ変換するのみならず、マルトオリゴシルスクロースから非晶質のマルトオリゴシルツラノース及びマルトオリゴシルパラチノースを容易に高率で生成する意外な事実を見いだし、マルトオリゴシルスクロース含有溶液に非還元性糖質生成酵素を作用させることを特徴とするマルトオリゴシルツラノース及びマルトオリゴシルパラチノース含有糖質の製造方法を確立し、併せて、この製造方法で得られるマルトオリゴシルツラノース及びマルトオリゴシルパラチノース含有糖質とこの糖質を含有せしめた飲食物、化粧品、医薬品などの組成物を確立して本発明を完成した。
【０００６】
非還元性糖質生成酵素は、特開平７−１４３８７６号公報で開示したように、リゾビウム・スピーシーズ（Ｒｈｉｚｏｂｉｕｍ  ｓｐ．）Ｍ−１１  ＦＥＲＭＢＰ−４１３０、アルスロバクター・スピーシーズ（Ａｒｔｈｒｏｂａｃｔｅｒｓｐ．）Ｑ３６  ＦＥＲＭ  ＢＰ−４３１６、ブレビバクテリウム・ヘロボルム（Ｂｒｅｖｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｈｅｌｏｖｏｌｕｍ）ＡＴＣＣ１１８２２、フラボバクテリウム・アクアティレ（Ｆｌａｖｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ａｑｕａｔｉｌｅ）ＩＦＯ３７７２、ミクロコッカス・ロゼウス（Ｍｉｃｒｏｃｏｃｃｕｓ  ｒｏｓｅｕｓ）ＡＴＣＣ１８６、クルトバクテリウム・シトレウム（Ｃｕｒｔｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｃｉｔｒｅｕｍ）ＩＦＯ１５２３１、マイコバクテリウム・スメグマチス（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｓｍｅｇｍａｔｉｓ）ＡＴＣＣ１９４２０、テラバクター・ツメスセンス（Ｔｅｒｒａｂａｃｔｅｒ  ｔｕｍｅｓｃｅｎｓ）ＩＦＯ１２９６０、あるいは、特開平６−１６６０１１号公報に記載の、スルフォロブス（Ｓｕｌｆｏｌｏｂｕｓ）属に属する微生物などにより生産され、マルトオリゴ糖をマルトオリゴシルトレハロースに変換する分子内糖転移酵素である。この反応の平衡点は圧倒的にマルトオリゴシルトレハロース側に片寄っており、例えば、マルトペンタースを基質とした場合のマルトトリオシルトレハロース生成率は約９０ｗ／ｗ％（以下、特にことわらない限り、本発明書ではｗ／ｗ％を％と略記する。）以上にも達する。
【０００７】
本発明では、上記菌株の酵素のみならず、リゾビウム属及びアルスロバクター属、ブレビバクテリウム属、フラボバクテリウム属、ミクロコッカス属、クルトバクテリウム属、マイコバクテリウム属、テラバクター属及びスルフォロブス属に属し、非還元性糖質生成酵素産生能を有する他の菌株やこれらの変異株、さらに、これらの菌株の非還元性糖質生成酵素遺伝子を組み込んだ微生物が生産する酵素も適宜使用することができる。また、スルフォロブス属に属する微生物としては、例えば、スルフォロブス・アシドカリダリウス（Ｓｕｌｆｏｌｏｂｕｓ  ａｃｉｄｏｃａｌｄａｒｉｕｓ）ＡＴＣＣ３３９０９及びＡＴＣＣ４９４２６、スルフォロブス・ソルファタリカス（Ｓｕｌｆｏｌｏｂｕｓ  ｓｏｌｆａｔａｒｉｃｕｓ）ＡＴＣＣ３５０９１及びＡＴＣＣ３５０９２などが有利に利用できる。
【０００８】
非還元性糖質生成酵素を産生する微生物の培養に用いる培地は、微生物が生育でき、本酵素を産生するものであればよく、合成培地及び天然培地のいずれでもよい。炭素源としては、微生物が資化できる物であればよく、例えば、グルコース、フルクトース、糖蜜、トレハロース、ラクトース、スクロース、マンニトール、ソルビトール、澱粉部分分解物などの糖質、また、クエン酸、コハク酸などの有機酸又はそれらの塩なども使用することができる。培地におけるこれらの炭素源の濃度は炭素源の種類により適宜選択される。例えば、グルコースを用いる場合には、その濃度は、４０ｗ／ｖ％以下が望ましく、とりわけ、微生物の生育及び増殖からは１０ｗ／ｖ％以下が好ましい。窒素源としては、例えば、アンモニウム塩、硝酸塩などの無機窒素化合物や、例えば、尿素、コーン・スティープ・リカー、カゼイン、ペプトン、酵母エキス、肉エキスなどの有機窒素含有物などが用いられる。また、無機成分としては、例えば、カルシウム塩、マグネシウム塩、カリウム塩、ナトリウム塩、リン酸塩、マンガン塩、亜鉛塩、鉄塩、銅塩、モリブデン塩、コバルト塩などが適宜用いられる。
【０００９】
培養条件は、微生物が生育し、本発明に用いる非還元性糖質生成酵素を産生する条件であればよく、通常、温度約４乃至８０℃、好ましくは２０乃至７５℃、ｐＨ５乃至９、好ましくはｐＨ６乃至８．５から選ばれる条件で、好気的に行われる。培養時間は微生物が増殖し得る時間であればよく、好ましくは約１０乃至１００時間である。また、培養液の溶存酸素濃度には特に制限はないが、通常は、約０．５乃至２０ｐｐｍが好ましい。そのために、通気量を調節したり、攪拌したり、酸素を使用したり、また、培養槽内の圧力を高めるなどの手段が採用される。また、培養方式は、回分培養または連続培養のいずれでもよい。
【００１０】
このようにして、微生物を培養した後、得られる培養物から酵素を回収する。非還元性糖質生成酵素の活性は、培養物の菌体外培養液及び菌体のいずれにも認められ、菌体外培養液及び菌体を粗酵素として回収すればよく、また、培養物全体を粗酵素として用いることもできる。菌体外培養液と菌体との分離には通常の固液分離手段が採用される。例えば、培養物そのものをそのまま遠心分離する手段、培養物に濾過助剤を加えたり、あるいは、プレコートすることにより濾過分離する手段、平膜、中空糸膜などを用いる膜濾過分離する手段などを適用し得る。菌体外培養液をそのまま粗酵素液として用いることができるが、好ましくは通常の手段で濃縮して用いる。例えば、硫安塩析法、アセトン及びアルコール沈殿法、平膜、中空糸膜などを用いる膜濃縮法などが採用される。
【００１１】
菌体内酵素は、通常の手段を用いて菌体から抽出し、粗酵素液として用いることができる。例えば、超音波による破砕法、ガラスビーズ及びアルミナによる機械的破砕法、フレンチプレスによる破砕法などで菌体から酵素を抽出し、遠心分離または膜濾過などで清澄な粗酵素液を得ることができる。
【００１２】
更に、菌体外培養液およびその濃縮物または菌体抽出液は、通常の手段で固定化することもできる。例えば、イオン交換体への結合法、樹脂および膜などとの共有結合・吸着法、高分子物質を用いた包括法などが採用される。また、培養物から分離した菌体をそのまま粗酵素として用いることができるが、菌体を固定化し固定化酵素として用いてもよい。例えば、菌体をアルギン酸ナトリウムと混合して、塩化カルシウム溶液中に滴下して粒状にゲル化させ得られる粒状化菌体を、さらにポリエチレンイミン、グルタルアルデヒドで処理した固定化酵素として用いてもよい。
【００１３】
粗酵素はそのまま用いてもよいが、通常の手段によって精製することもできる。一例として、菌体破砕抽出液を硫安塩析して濃縮した粗酵素標品を透析後、セパビーズＦＰ−ＤＡ１３ゲルを用いた陰イオン交換カラムクロマトグラフィー、続いて、ＤＥＡＥセファデックスＡ−５０を用いた陰イオン交換カラムクロマトグラフィー、ウルトラゲルＡｃＡ４４を用いたゲル濾過クロマトグラフィー、ブチルトヨパール６５０Ｍゲルを用いた疎水クロマトグラフィーなどを組合わせて電気泳動的に単一な酵素を得ることができる。
【００１４】
本発明の非還元性糖質生成酵素の活性測定方法は、基質としてマルトペンタオース１．２５ｗ／ｖ％（５０ｍＭリン酸緩衝液、ｐＨ７．０）４ｍｌに酵素液を１ｍｌ加え４０℃で６０分間反応させた後、１００℃で１０分間加熱して反応を停止させ、その反応液を正確に脱イオン水で１０倍に希釈し、その希釈液の還元力をソモギー・ネルソン法にて測定する。対照として、あらかじめ１００℃で１０分間加熱することにより失活させた酵素液を用いて同様に測定する。上記の測定方法を用いて、１分間に１μｍｏｌｅのマルトペンタオースに相当する還元力を減少させる酵素量を１単位と定義した。なお、スルフォロブス属由来の酵素の場合、反応温度を６０℃、ｐＨを５．５として反応を行い、酵素失活を１００℃、３０分で行った。
【００１５】
本発明の基質濃度は特に限定されない。基質溶液としてマルトオリゴシルスクロース濃度を、例えば、０．１％で用いた場合でも、５０％で用いた場合でも、本酵素の反応は進行し、マルトオリゴシルツラノース及びマルトオリゴシルパラチノースを生成する。また、基質溶液中に完全に溶けきれない基質を含有する高濃度溶液であってもよい。反応温度は酵素が失活しない温度、すなわち８０℃付近までで行えばよいが、好ましくは約０乃至７０℃の範囲、とりわけアルスロバクター属に属する微生物由来の酵素の場合には、約３０乃至５０℃の範囲において、マルトオリゴシルスクロースからのマルトオリゴシルツラノース及びマルトオリゴシルパラチノース生成率が高く好都合である。反応ｐＨは、通常、５．５乃至９．０の範囲に調整すればよいが、好ましくはｐＨ約６．０乃至８．５の範囲に調整する。反応時間は、酵素反応の進行具合により適宜選択すればよく、通常、基質固形物グラム当たり約１０乃至１，０００単位の酵素使用量で約０．１乃至２００時間程度である。
【００１６】
このようにして得られる反応液は、糖組成でマルトオリゴシルツラノース及びマルトオリゴシルパラチノースが、通常１０％以上、好ましくは１５％以上、最大で約６０％以上にも達することが判明した。
【００１７】
反応液は、常法により、瀘過、遠心分離などして不溶物を除去した後、活性炭で脱色、Ｈ型、ＯＨ型イオン交換樹脂で脱塩し、濃縮し、シラップ状製品とすることも、更に、乾燥して粉末状製品にすることも随意である。
【００１８】
必要ならば、更に、高度な精製をすることも随意である。例えば、イオン交換カラムクロマトグラフィーによる分画、活性炭カラムクロマトグラフィーによる分画、シリカゲルカラムクロマトグラフィーによる分画などの方法で精製することにより、高含有のマルトオリゴシルツラノース及びマルトオリゴシルパラチノース製品を得ることも容易である。また、カラムクロマトグラフィーなどにより分離し得られるマルトオリゴシルスクロースを、再び、非還元性糖質生成酵素の基質に用いてマルトオリゴシルツラノース及びマルトオリゴシルパラチノース生成反応を行うことも有利に実施できる。
【００１９】
このようにして得られた本発明のマルトオリゴシルツラノース及びマルトオリゴシルパラチノース含有糖質を、必要により、グルコアミラーゼ、β−アミラーゼなどで加水分解したり、澱粉部分分解物などを加え、シクロマルトデキストリン・グルカノトランスフェラーゼやグルコシルトランスフェラーゼなどで糖転移したりして、甘味性、粘性などを調整することも、また、酵母により発酵性糖質を除去することなど更なる加工処理を施すことも随意である。これを、前述の精製方法、例えば、イオン交換カラムクロマトグラフィーなどにより、グルコース及びフルクトースを除去し、マルトオリゴシルツラノース及びマルトオリゴシルパラチノース高含有画分を採取し、これを精製、濃縮して、シラップ状製品を得ることも、更に乾燥して粉末製品を得ることも有利に実施できる。
【００２０】
イオン交換カラムクロマトグラフィーとしては、特開昭５８−２３７９９号公報、特開昭５８−７２５９８号公報などに開示されている塩型強酸性カチオン交換樹脂を用いるカラムクロマトグラフィーにより、夾雑糖類を除去してマルトオリゴシルツラノース及びマルトオリゴシルパラチノース高含有画分を採取する方法が有利に実施できる。この際、固定床方式、移動床方式、擬似移動床方式のいずれの方式を採用することも随意である。
【００２１】
このようにして製造される本発明のマルトオリゴシルツラノース及びマルトオリゴシルパラチノース含有糖質は、非晶質で水に対する溶解性が高く、良質で上品な甘味を有している。更に、マルトオリゴシルツラノース及びマルトオリゴシルパラチノースは、いずれも小腸の加水分解酵素によりグルコースとフルクトースとに分解されることから、経口摂取した場合、容易に消化吸収され、カロリー源として利用される。また、虫歯誘発菌などによって、醗酵されにくく、虫歯誘発菌によるスクロースからの不溶性グルカン合成を阻害することから、非う蝕性甘味料としても利用できる。
【００２２】
従って、本発明のマルトオリゴシルツラノース及びマルトオリゴシルパラチノース含有糖質は、甘味料、呈味改良剤、品質改良剤、安定剤などとして飲食物、嗜好物、飼料、化粧品、医薬品などの各種組成物に有利に利用できる。
【００２３】
本発明のマルトオリゴシルツラノース及びマルトオリゴシルパラチノース含有糖質は、そのまま甘味付けのための調味料として使用することができる。必要ならば、例えば、粉飴、ブドウ糖、フルクトース、マルトース、スクロース、異性化糖、蜂蜜、メイプルシュガー、ソルビトール、マルチトール、ラクチトール、ジヒドロカルコン、ステビオシド、α−グリコシルステビオシド、レバウディオシド、グリチルリチン、Ｌ−アスパルチル−Ｌ−フェニルアラニンメチルエステル、サッカリン、グリシン、アラニンなどのような他の甘味料の一種または二種以上の適量と混合して使用してもよく、また必要ならば、デキストリン、澱粉、乳糖などのような増量剤と混合して使用することもできる。
【００２４】
また、本発明のマルトオリゴシルツラノース及びマルトオリゴシルパラチノース含有糖質の甘味は、酸味、塩から味、渋味、旨味、苦味などの他の呈味を有する各種物質とよく調和し、耐酸性、耐熱性も大きいので、一般の飲食物の甘味付け、呈味改良に、また品質改良などに有利に利用できる。
【００２５】
例えば、醤油、粉末醤油、味噌、粉末味噌、もろみ、ひしお、ふりかけ、マヨネーズ、ドレッシング、食酢、三杯酢、粉末すし酢、中華の素、天つゆ、麺つゆ、ソース、ケチャップ、たくあん漬の素、白菜漬の素、焼肉のタレ、カレールウ、シチューの素、スープの素、ダシの素、複合調味料、みりん、新みりん、テーブルシュガー、コーヒーシュガーなど各種調味料として有利に使用できる。
【００２６】
また、例えば、せんべい、あられ、おこし、餅類、まんじゅう、ういろう、あん類、羊羮、水羊羮、錦玉、ゼリー、カステラ、飴玉などの各種和菓子、パン、ビスケット、クラッカー、クッキー、パイ、プリン、バタークリーム、カスタードクリーム、シュークリーム、ワッフル、スポンジケーキ、ドーナツ、チョコレート、チューインガム、キャラメル、キャンデーなどの洋菓子、アイスクリーム、シャーベットなどの氷菓、果実のシロップ漬、氷蜜などのシロップ類、フラワーペースト、ピーナッツペースト、フルーツペースト、スプレッドなどのペースト類、ジャム、マーマレード、シロップ漬、糖果などの果実、野菜の加工食品類、福神漬、べったら漬、千枚漬、らっきょう漬などの漬物類、ハム、ソーセージなどの畜肉製品類、魚肉ハム、魚肉ソーセージ、かまぼこ、ちくわ、天ぷらなどの魚肉製品、ウニ、イカの塩辛、酢こんぶ、さきするめ、ふぐみりん干しなどの各種珍味類、のり、山菜、するめ、小魚、貝などで製造されるつくだ煮類、煮豆、ポテトサラダ、こんぶ巻などの惣菜食品、乳製品、魚肉、畜肉、果実、野菜のビン詰、缶詰類、清酒、合成酒、リキュール、洋酒などの酒類、紅茶、コーヒー、ココア、ジュース、炭酸飲料、乳酸飲料、乳酸菌飲料などの清涼飲料水、プリンミックス、ホットケーキミックス、即席しるこ、即席スープなどの即席食品、更には、離乳食、治療食、ドリンク剤などの各種飲食物への甘味付に、呈味改良に、また、品質改良などに有利に利用できる。
【００２７】
また、家畜、家禽、その他蜜蜂、蚕、魚などの飼育動物のために飼料、餌料などの嗜好性を向上させる目的で使用することもできる。その他、タバコ、練歯磨、口紅、リップクリーム、内服液、錠剤、トローチ、肝油ドロップ、口中清涼剤、口中香剤、うがい剤など各種固形物、ペースト状、液状などで嗜好物、化粧品、医薬品などの各種組成物への甘味剤として、または呈味改良剤、矯味剤として、更には、品質改良剤として有利に利用できる。
【００２８】
以上述べたような各種組成物にマルトオリゴシルツラノース及びマルトオリゴシルパラチノース含有糖質を含有せしめる方法は、その製品が完成するまでの工程で含有せしめればよく、例えば、混和、溶解、融解、浸漬、浸透、散布、塗布、被覆、噴霧、注入、固化など公知の方法が適宜選ばれる。その量は、通常、マルトオリゴシルツラノース及びマルトオリゴシルパラチノースとして０．１％以上、望ましくは、１％以上含有せしめるのが好適である。次に実験により本発明をさらに具体的に説明する。
【００２９】
【実験１  マルトテトラオシルスクロースの調製】
マルトテトラオシルスクロースの調製は、特公昭５７−５８９０５号公報の実験の項記載の方法に準じて行った。すなわち、マルトペンタオース（株式会社林原生物化学研究所販売）２８重量部と市販のスクロース１２重量部を水６０重量部に加熱溶解し、この溶液を４５℃、ｐＨ６．５に調整した後、バチラス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ）属由来のレバンスクラーゼ（ＥＣ．２．４．１．１０）をスクロースグラム当たり１単位加えて２０時間反応させ、次いで１００℃に３０分間加熱して、酵素を失活させた。この反応液の糖組成を高速液体クロマトグラフィー（以下、ＨＰＬＣと略称する。）で分析した。高速液体クロマトグラフ装置はＣＣＰＭ（東ソー株式会社製）、カラムはＡＱ−３０３  ＯＤＳ（ＹＭＣ社製）（４．６ｍｍφ×２５ｃｍ）、溶離液は精製脱イオン水を流量０．７５ｍｌ／分で、カラム温度は３０℃で分析した。検出は示差屈折計（ＲＩ−８０２０、東ソー株式会社製）を用いた。その結果、マルトテトラオシルスクロースが固形物当たり２１％生成していた。水酸化ナトリウムでｐＨ１２に調整した後、１００℃に３０分間加熱して還元糖を分解した。本溶液を活性炭で脱色し、イオン交換樹脂（Ｈ型およびＯＨ型）にて脱塩して精製した。本溶液は糖組成でマルトテトラオシルスクロース６２％とスクロース３８％を含んでいた。これを濃度約４０％に濃縮して、分画用樹脂（塩型強酸性カチオン交換樹脂（オルガノ株式会社販売、商品名アンバーライトＸＴ−１０１６Ｎａ型））を用いたカラムクロマトグラフィーを行ない、純度約９８％のマルトテトラオシルスクロース高含有画分を採取した。図１にＨＰＬＣのクロマトグラムを示す。この溶液をｐＨ４．５、５５℃に調整して、グルコアミラーゼ（ナガセ生化学工業販売、商品名グルコチーム）を固形物グラム当たり２０単位加え１６時間反応させ、次いで１００℃に１５分間加熱して、酵素を失活させた。本品は、ＨＰＬＣにより、グルコースとスクロースをモル比で４：１の割合で生成したことから、マルトテトラオシルスクロース（１−Ｏ−α−マルトペンタオシル  ２−Ｏ−β−Ｄ−フラクトフラノシド）であると判断された。
【００３０】
【実験２  酵素の産生】
マルトース（株式会社林原製）２％ｗ／ｖ％、ペプトン０．５ｗ／ｖ％、酵母エキス０．１ｗ／ｖ％、リン酸二ナトリウム０．２ｗ／ｖ％、硫酸マグネシウム０．０５ｗ／ｖ％、および水からなる液体培地を、ｐＨ７．０に調整した後、５００ｍｌ容三角フラスコに１００ｍｌずつ入れ、オートクレーブで１２０℃で、２０分間滅菌し、冷却して、アルスロバクター・スピーシーズ  Ｑ３６株（ＦＥＲＭ  ＢＰ−４３１６）を接種し、２８℃、２００ｒｐｍで２４時間回転振とう培養したものを種培養とした。
【００３１】
容量３０ｌのファーメンターに種培養の場合と同組成の培地をそれぞれ約２０ｌ入れて、加熱滅菌、冷却して温度２８℃とした後、種培養液１ｖ／ｖ％を接種し、温度２８℃、ｐＨ６．５乃至８．０に保ちつつ、約２２時間通気攪拌培養した。
【００３２】
【実験３  酵素の精製】
実験２で得られた培養液を遠心分離して湿重量約０．６ｋｇの菌体を回収し、これを１０ｍＭリン酸緩衝液（ｐＨ７．０）に懸濁した。この菌体懸濁液約１．９ｌを、超音波破砕機  モデルＵＳ３００（株式会社日本精機製作所製）で処理し、菌体を破砕した。この破砕処理液を遠心分離（１５，０００Ｇ、３０分間）することにより、約１．８ｌの上清を得た。その上清に飽和度０．２になるように硫安を加え溶解させ、４℃、一夜放置した後、遠心分離機にかけ上清を回収した。さらに、この液に飽和度０．６になるように硫安を加え溶解させ、４℃、一夜放置した後、遠心分離機にかけ、硫安塩析物を回収した。
【００３３】
得られた硫安塩析物を１０ｍＭリン酸緩衝液（ｐＨ７．０）に溶解させた後、同じ緩衝液に対して２４時間透析し、遠心分離して不溶物を除いた。その透析液を、セパビーズＦＰ−ＤＡ１３ゲル（三菱化成製）を用いた陰イオン交換カラムクロマトグラフィー（ゲル量３８０ｍｌ）を行った。
【００３４】
非還元性糖質生成酵素はセパビーズＦＰ−ＤＡ１３ゲルに吸着し、食塩０Ｍから０．５Ｍを含む同緩衝液のリニアグラジエントでカラムから溶出した。溶出した酵素活性画分を回収した後、同緩衝液に対して透析し、次に、ＤＥＡＥセファデックスＡ−５０（スウェーデン国、ファルマシア・エルケイビー社製）を用いた陰イオン交換カラムクロマトグラフィー（ゲル量１００ｍｌ）を行った。非還元性糖質生成酵素はＤＥＡＥセファデックスＡ−５０ゲルに吸着し、食塩０Ｍから０．５Ｍを含む同緩衝液のリニアグラジエントによりカラムより溶出させ、酵素活性画分を回収し、限外濾過モジュールＰＭ−１０（アミコン製）により６ｍｌに濃縮した。
【００３５】
次に、ウルトラゲルＡｃＡ４４（Ｓｅｐｒａｃｏｒ製）を用いたゲル濾過クロマトグラフィー（ゲル量６３０ｍｌ）を行った。非還元性糖質生成酵素は吸着されず、食塩１Ｍを含む同緩衝液で溶出された。
【００３６】
続いて、ブチルトヨパール６５０Ｍゲル（東ソー株式会社製）を用いた疎水クロマトグラフィー（ゲル量７．８ｍｌ）を行い、硫安１Ｍから０Ｍのリニアグラジエントにより溶出した酵素活性画分を回収し、電気泳動的に単一な非還元性糖質生成酵素標品を得た。精製酵素標品の比活性は、蛋白ｍｇ当たり２０３単位であった。
【００３７】
【実験４  非還元性糖質生成酵素のマルトテトラオシルスクロースへの作用】
実験１の方法で得たマルトテトラオシルスクロース４０重量部を水６０重量部に溶解し、この溶液を４０℃、ｐＨ６．５に調整した後、実験３の方法で得た、アルスロバクター・スピーシーズ  Ｑ３６（Ａｒｔｈｒｏｂａｃｔｅｒ  ｓｐ．  Ｑ３６）株由来の非還元性糖質生成酵素をマルトテトラオシルスクロースグラム当たり１００単位加えて２４時間反応させ、次いで１００℃に３０分間加熱して、酵素を失活させた。この反応液を、実験１の方法に準じてＨＰＬＣで分析した。ＨＰＬＣのクロマトグラムを図２に示す。糖組成は、ピーク１の糖質が２７．９％、ピーク２の糖質が３５．９％であった。各ピークの糖質を分取用逆相カラム（ＹＭＣ−Ｐａｃｋ  ＯＤＳ  Ｒ−３５５−１５，５ｃｍφ×５０ｃｍ，ＹＭＣ社製）で分取した。各々の糖質を濃度２ｗ／ｖ％、ｐＨ４．５、４０℃に保ち、グルコアミラーゼ（生化学工業製）を固形物当たり２０単位加え、２４時間反応を行い、限外濾過膜（モルカットII、ミリポア製）で酵素を除去し、ＨＰＬＣ及びキーゼルゲル６０（メルク社製；アルミプレート，２０×２０ｃｍ）を用いた薄層クロマトグラフィー（以下、ＴＬＣと略称する。）で構成糖を調べた。ＴＬＣは展開溶媒に１−ブタノール：ピリジン：水＝６：４：１（容積比）を用い、室温で１回展開した。発色は２０ｖ／ｖ％硫酸−メタノール溶液を噴霧し、１１０℃で１０分間加熱しておこなった。ピーク１の糖質からは、グルコースとツラノースをモル比でそれぞれ３．８１：１で生成した。このことから、ピーク１の糖質はマルトテトラオシルツラノースであることがわかった。ピーク２の糖質からは、グルコースとパラチノースとトレハルロースをモル比でそれぞれ４．７７：１：０．２１で生成した。非還元性糖質生成酵素のマルトオリゴ糖に対する作用特性及びピーク１の糖質の構造を考慮すると、ピーク２の糖質は大量のマルトテトラオシルパラチノースと少量のマルトテトラオシルトレハルロースを含んでいるものと判断された。以上の結果から、マルトテトラオシルスクロースから主としてマルトテトラオシルツラノース及びマルトテトラオシルパラチノースを生成し、併せて少量のマルトテトラオシルトレハルロースを生成することが判明した。
【００３８】
【実験５  マルトテトラオシルツラノース、マルトテトラオシルパラチノース及びマルトテトラオシルトレハルロース生成に及ぼす酵素作用量の影響】
マルトテトラオシルスクロース濃度を４０％で、温度４０℃、ｐＨ６．５にて、実験３の方法で得た精製非還元性糖質生成酵素をマルトテトラオシルスクロースグラム当たり１単位、４単位、１０単位、２０単位、あるいは１００単位加えて２４時間反応させた。限外濾過膜（モルカットII、ミリポア製）で酵素を除去し、実験４と同様、ＨＰＬＣにて糖組成を分析した。各酵素作用量で生成した目的物質であるピーク１の糖質及びピーク２の糖質の含量を表１に示す。
【００３９】
【表１】
0003778991.tif 000002
【００４０】
表１の結果から明らかなように、４単位以上の酵素作用量で目的のピーク１の糖質（マルトテトラオシルツラノース）及びピーク２の糖質（マルトテトラオシルパラチノース及びマルトテトラオシルトレハルロース）を併せて１５％以上生成する。
【００４１】
【実験６  他の微生物由来の非還元性糖質生成酵素によるマルトテトラオシルスクロースからのマルトテトラオシルツラノース、マルトテトラオシルパラチノース及びマルトテトラオシルトレハルロースの生成】
実験２及び３の方法に準じて、アルスロバクター・スピーシーズ（Ａｒｔｈｒｏｂａｃｔｅｒ  ｓｐ．）Ｑ３６  ＦＥＲＭ  ＢＰ−４３１６、リゾビウム・スピーシーズ（Ｒｈｉｚｏｂｉｕｍ  ｓｐ．）Ｍ−１１（ＦＥＲＭ  ＢＰ−４１３０）の各精製非還元性糖質生成酵素、及び、スルフォロブス・アシドカルダリウス（Ｓｕｌｆｏｌｏｂｕｓ  ａｃｉｄｏｃａｌｄａｒｉｕｓ）ＡＴＣＣ３３９０９由来のＤＥＡＥ−トヨパール６５０カラムクロマトグラフィーによる部分精製非還元性糖質生成酵素を調製し、表２に示すそれぞれの作用条件で、２０％のマルトテトラオシルスクロースへ９６時間作用させた。この反応液を実験４と同様にＨＰＬＣにて分析し、ピーク１の糖質及びピーク２の糖質の量からマルトテトラオシルツラノース生成率と、マルトテトラオシルパラチノース及びマルトテトラオシルトレハルロースの生成率を求めた。結果は表２にまとめた。
【００４２】
【表２】
0003778991.tif 000003
【００４３】
表２の結果から明らかなように、アルスロバクター・スピーシーズ  Ｑ３６  ＦＥＲＭ  ＢＰ−４３１６、リゾビウム・スピーシーズ  Ｍ−１１（ＦＥＲＭ  ＢＰ−４１３０）及び、スルフォロブス・アシドカルダリウス  ＡＴＣＣ３３９０９のいずれの非還元性糖質生成酵素を用いても、目的のマルトテトラオシルツラノース、マルトテトラオシルパラチノース及びマルトテトラオシルトレハルロースを容易に高収率で生成することが判明した。
【００４４】
【実験７  マルトオリゴシルスクロースへの非還元性糖質生成酵素の作用】
糖受容体として、マルトトリオース、マルトテトラオース又はマルトヘキサオース（以上いずれも  株式会社林原生物化学研究所製）及びスクロースを用い、実験１と同様にレバンスクラーゼを作用させて、それぞれ、マルトシルスクロース、マルトトリオシルスクロース及びマルトペンタオシルスクロースを調製した。また、実験１で調製したマルトテトラオシルスクロース及び、市販のスクロース及びグルコシルスクロース（エルロース、株式会社林原生物化学研究所製）を含め、スクロースにグルコースが０個から６個結合した一連の糖質を準備した。これら一連の糖質に、実験３の方法で得たアルスロバクター・スピーシーズ  Ｑ３６株由来の非還元性糖質生成酵素を、実験４と同様に作用させた。この反応液を実験４と同様にＨＰＬＣにて分析し、各基質の重合度に相当するマルトオリゴシルツラノースの生成率とマルトオリゴシルパラチノース及びマルトオリゴシルトレハルロースの生成率を求めた。結果は表３にまとめた。
【００４５】
【表３】
0003778991.tif 000004
【００４６】
表３の結果から明らかなように、非還元性糖質生成酵素は、基質として、マルトトリオシルスクロース以上のマルトオリゴシルスクロースに良く作用し、マルトオリゴシルスクロースのスクロース部分を分子内変換してマルトオリゴシルツラノース、マルトオリゴシルパラチノース及びマルトオリゴシルトレハルロースを容易に高収率で生成することが判明した。
【００４７】
【実験８  マルトオリゴシルスクロースからのマルトオリゴシルツラノース、マルトオリゴシルパラチノース及びマルトオリゴシルトレハルロースの調製】
α−サイクロデキストリン（株式会社林原生物化学研究所販売）２５重量部と市販のスクロース２５重量部を水５０重量部に加熱溶解し、この溶液を６０℃、ｐＨ６．０に調整した後、バチルス・ステアロサーモフィラス由来のシクロマルトデキストリン・グルカノトランスフェラーゼ（株式会社林原生物化学研究所販売）をα−サイクロデキストリングラム当たり５単位加えて２０時間反応させ、次いで１００℃に３０分間加熱して、酵素を失活させた。この溶液には一連のマルトオリゴシルスクロースを含んでいる。この溶液を４０℃、ｐＨ６．５に調整した後、アルスロバクター・スピーシーズ  Ｑ３６株由来の非還元性糖質生成酵素を固形物当たり２００単位加えて２４時間反応させ、次いで１００℃に３０分間加熱して、酵素を失活させた。この反応液は比較的多量のマルトオリゴシルツラノース及びマルトオリゴシルパラチノースを含有し、他に少量のマルトオリゴシルトレハルロースを含んでいた。
【００４８】
以上の結果から明かなように、非還元性糖質生成酵素は、マルトオリゴ糖をマルトオリゴシルトレハロースに変換するのみならず、マルトオリゴシルスクロースにも作用して分子内変換し、マルトオリゴシルツラノース及びマルトオリゴシルパラチノース含有糖質に変換する。
【００４９】
【実験９  急性毒性テスト】
７週齢のｄｄ系マウスを使用して、後述する実施例Ａ−４の方法で調製したマルトテトラオシルツラノース及びマルトテトラオシルパラチノース含有糖質を経口投与して急性毒性テストをしたところ、体重１ｋｇ当たり１５ｇまで死亡例は見られず、これ以上の投与は困難であった。従って、本糖質の毒性は極めて低い。また、後述する実施例Ａ−２の方法で調製したマルトオリゴシルツラノース及びマルトオリゴシルパラチノース含有糖質を同様に経口投与して急性毒性テストしたところ、同様に体重１ｋｇ当たり１５ｇまで死亡例は見られず、本糖質の毒性は極めて低いことが判明した。
【００５０】
以下、酵素の生産を参考例で、本発明のマルトオリゴシルツラノース及びマルトオリゴシルパラチノース含有糖質の製造方法を実施例Ａで、マルトオリゴシルツラノース及びマルトオリゴシルパラチノース含有糖質の用途を実施例Ｂで示す。
【００５１】
【参考例１】
アルスロバクター・スピーシーズ  Ｑ３６（ＦＥＲＭ  ＢＰ−４３１６）を、グルコース４．０ｗ／ｖ％、ポリペプトン０．５ｗ／ｖ％、酵母エキス０．１ｗ／ｖ％、リン酸二カリウム０．１ｗ／ｖ％、リン酸一ナトリウム０．０６ｗ／ｖ％、硫酸マグネシウム・７水塩０．０５ｗ／ｖ％、及び水からなる液体培地を用い、温度を２７℃とした以外は実験２の方法に準じて、ファーメンターで約６０時間、通気攪拌培養した。この培養液約１８ｌを、超高圧菌体破砕装置ミニラボ（大日本製薬株式会社製）で処理し、菌体を破砕した。この菌体破砕懸濁液を遠心分離機にかけ、その上清を回収した。次いで実験３の方法に準じて精製を行い、非還元性糖質生成酵素をｍｌ当たり約３０単位有する部分精製酵素液約３００ｍｌを回収した。
【００５２】
【参考例２】
リゾビウム・スピーシーズ  Ｍ−１１（ＦＥＲＭ  ＢＰ−４１３０）を、グルコース２．０ｗ／ｖ％、ペプトン０．５ｗ／ｖ％、酵母エキス０．１ｗ／ｖ％、リン酸二ナトリウム０．１ｗ／ｖ％、リン酸一カリウム０．１ｗ／ｖ％及び水からなる液体培地を用い、温度を３０℃とした以外は実験２の方法に準じて、ファーメンターで約２４時間、通気攪拌培養した。この培養液約１８ｌを遠心分離にかけ、湿重量約０．４ｋｇの菌体を得た。これを４ｌの１０ｍＭリン酸緩衝液に懸濁し、超音波破砕機で処理し、菌体を破砕した。この菌体破砕懸濁液を遠心分離機にかけ、その上清を回収した。次いで実験３の方法に準じ、非還元性糖質生成酵素をｍｌ当たり約１５単位有する部分精製酵素液約１００ｍｌを回収した。
【００５３】
【参考例３】
ペプトン０．１ｗ／ｖ％、酵母エキス０．１ｗ／ｖ％、硫酸アンモニウム０．２ｗ／ｖ％、リン酸一カリウム０．０５ｗ／ｖ％、硫酸マグネシウム七水塩０．０２ｗ／ｖ％、塩化カリウム０．０２ｗ／ｖ％及び水からなる液体培地を、５００ｍｌ容三角フラスコに１００ｍｌずつ入れ、オートクレーブで１２０℃で、２０分間滅菌し、冷却した後、硫酸にてｐＨ３．０に調整した。この液体に、スルフォロブス・アシドカリダリウス（Ｓｕｌｆｏｌｏｂｕｓ  ａｃｉｄｏｃａｌｄａｒｉｕｓ）ＡＴＣＣ３３９０９を接種し、７５℃、１３０ｒｐｍで２４時間回転振とう培養したものを種培養とした。
【００５４】
容量３０ｌのファーメンターに種培養の場合と同組成の培地をそれぞれ約２０ｌ入れて、加熱滅菌、冷却してｐＨ３．０、温度７５℃とした後、種培養液１ｖ／ｖ％を接種し、温度７５℃、約４８時間通気攪拌培養したものを第２次種培養液とした。容量３００ｌのファーメンターに第２次種培養の場合と同組成の培地をそれぞれ約２５０ｌ入れて、加熱滅菌、冷却してｐＨ３．０、温度７５℃とした後、第２次種培養液１ｖ／ｖ％を接種し、温度７５℃、約４２時間通気攪拌培養した。この培養液約１７０ｌをＳＦ膜及び遠心分離することにより、菌体を湿重量として２５８ｇ回収した。この菌体に１０ｍＭリン酸緩衝液（ｐＨ７．０）を３００ｍｌ加え、懸濁した後、超音波破砕装置で処理し、菌体を破砕した。この菌体破砕懸濁液を遠心分離機にかけ、その上清を回収した。更にその液を硫安塩析、ＤＥＡＥトヨパールを用いたイオン交換クロマトグラフィー及びブチルトヨパール  ６５０を用いた疎水カラムクロマトグラフィーを行い、非還元性糖質生成酵素をｍｌ当たり約１０単位有する部分精製酵素液約５０ｍｌを回収した。
【００５５】
【実施例Ａ−１】
スクロース２．５重量部及びマルトオリゴ糖（株式会社林原商事販売、登録商標「ペントラップ」）３．５重量部を水４重量部に加熱溶解しこの溶液をｐＨ６．５、４５℃に調整して、バチラス属由来のレバンスクラーゼ（ＥＣ．２．４．１．１０）をスクロースグラム当たり１単位加えて２０時間反応させ、次いで加熱して酵素を失活させた。本溶液に、参考例１の方法で調製したアルスロバクター属由来の非還元性糖質生成酵素を、固形物グラム当たり５０単位加えて、４０℃で４０時間反応させ、次いで加熱して酵素を失活させた。本反応液を、常法に従って、活性炭にて脱色、イオン交換樹脂（Ｈ型およびＯＨ型）にて脱塩して精製し、濃縮して濃度約７５％のマルトオリゴシルツラノース及びマルトオリゴシルパラチノース含有糖質シラップを固形物収率約９３％で得た。本品は、非晶質でマルトオリゴシルツラノース及びマルトオリゴシルパラチノースを固形物当たり約２０％含有しており、上品な甘味、適度の粘度、保湿性を有し、飲食物、化粧品、医薬品など各種組成物に有利に利用できる。更に、本品を水素添加して、マルトオリゴシルツラノース及びマルトオリゴシルパラチノースを含む還元性糖質を、対応する非還元性の糖アルコールに換えて利用することも有利に実施できる。
【００５６】
【実施例Ａ−２】
スクロース２５重量部及びα−シクロマルトデキストリン（株式会社林原生物化学研究所販売）２５重量部に水５０重量部加え加熱溶解した。この溶液を６０℃、ｐＨ５．５に調整して、バチルス・ステアロサーモフィラス由来のシクロマルトデキストリン・グルカノトランスフェラーゼ（株式会社林原生物化学研究所販売）をα−シクロマルトデキストリングラム当たり５単位加えて２０時間作用させ、次いで加熱して酵素を失活させた。本溶液に参考例１の方法で調製したアルスロバクター属由来の非還元性糖質生成酵素を、固形物グラム当たり１００単位加えて、４０℃で２０時間反応させ、次いで加熱して酵素を失活させた。
【００５７】
本反応液を、常法に従って、活性炭にて脱色、イオン交換樹脂（Ｈ型およびＯＨ型）にて脱塩・精製し、濃縮し、真空乾燥し、粉砕して、マルトオリゴシルツラノース及びマルトオリゴシルパラチノース含有糖質粉末を固形物当たり、約９０％の収率で得た。本品は、非晶質でマルトオリゴシルツラノース及びマルトオリゴシルパラチノースを固形物当たり約２０％含有していた。本品は、実施例１の場合と同様に、上品な甘味、適度の粘度、保湿性を有し、各種組成物に有利に利用できる。
【００５８】
【実施例Ａ−３】
砂糖結合水飴（株式会社林原商事販売、登録商標「カップリングシュガー」、水分約２５％）５重量部に水５重量部を加え、４５℃、ｐＨ６．５に調整して、参考例２の方法で調製したリゾビウム属由来の非還元性糖質生成酵素を、固形物グラム当たり５０単位加えて、３０時間反応させ、次いで加熱して酵素を失活させた。本反応液を、常法に従って、活性炭にて脱色、イオン交換樹脂（Ｈ型およびＯＨ型）にて脱塩して精製し、濃縮して濃度約７５％のマルトオリゴシルツラノース及びマルトオリゴシルパラチノース含有糖質シラップを固形物収率約９３％で得た。本品は、非晶質でマルトオリゴシルツラノース及びマルトオリゴシルパラチノースを固形物当たり約１５％含有しており、上品な甘味、適度の粘度、保湿性を有し、飲食物、化粧品、医薬品など各種組成物に有利に利用できる。
【００５９】
【実施例Ａ−４】
スクロース２．５重量部及びマルトペンタオース（株式会社林原生物化学研究所製）２．５重量部を水５重量部に加熱溶解しこの溶液をｐＨ６．５、４５℃に調整して、バチラス属由来のレバンスクラーゼをスクロースグラム当たり１単位加えて２０時間反応させ、次いで加熱して酵素を失活させた。本反応液を、常法に従って、活性炭にて脱色、イオン交換樹脂（Ｈ型およびＯＨ型）にて脱塩して精製し、次いで、分取用ＯＤＳカラムによる分取を行い、高純度のマルトテトラオシルスクロースを得た。本溶液に、参考例３の方法により調製したスルフォロブス属由来の耐熱性非還元性糖質生成酵素を、固形物グラム当たり５０単位加えて、６５℃で２０時間反応させ、次いで加熱して酵素を失活させた。本反応液を、常法に従って、活性炭にて脱色、イオン交換樹脂（Ｈ型およびＯＨ型）にて脱塩して精製し、濃縮して、噴霧乾燥して、マルトテトラオシルツラノース及びマルトテトラオシルパラチノース含有粉末を固形物当たり約８５％の収率で得た。本品は、非晶質でマルトテトラオシルツラノース及びマルトテトラオシルパラチノースを固形物当たり約５５％と、マルトテトラオシルスクロースを固形物当たり約１８％含有しており、上品な甘味を有し、飲食物、化粧品、医薬品など各種組成物に有利に利用できる。
【００６０】
【実施例  Ｂ−１】
甘味料
実施例Ａ−４の方法で得たマルトテトラオシルツラノース及びマルトテトラオシルパラチノース含有糖質粉末１重量部に、α−グリコシルステビオシド（東洋精糖株式会社販売、商品名αＧスイート）０．０５重量部を均一に混合し、顆粒成形機にかけて、顆粒状甘味料を得た。本品は、甘味の質が優れ、スクロースの約２倍の甘味度を有し、甘味度当りカロリーは、スクロースの約１／２に低下している。本甘味料は、低カロリー甘味料として、カロリー摂取を制限している肥満者、糖尿病者などのための低カロリー飲食物などに対する甘味付に好適である。また、本甘味料は、虫歯誘発菌による酸の生成が少なく、不溶性グルカンの生成も少ないことより、虫歯を抑制する飲食物などに対する甘味付に好適である。
【００６１】
【実施例  Ｂ−２】
ハードキャンデー
濃度５５％マルトオリゴシルスクロース溶液１００重量部に、実施例Ａ−１の方法で得たマルトオリゴシルツラノース及びマルトオリゴシルパラチノース含有糖質シラップ３０重量部を加熱混合し、次いで減圧下で水分２％未満になるまで加熱濃縮し、これにクエン酸１重量部および適量のレモン香料と着色料とを混和し、常法に従って成形し、製品を得た。本品は、歯切れ、呈味良好で、マルトオリゴシルスクロースの晶出も起こらない高品質のハードキャンデーである。
【００６２】
【実施例  Ｂ−３】
いちごジャム
生いちご１５０重量部、マルトオリゴシルスクロース６０重量部、マルトース２０重量部、実施例Ａ−１の方法で得たマルトオリゴシルツラノース及びマルトオリゴシルパラチノース含有糖質シラップ４０重量部、ペクチン５重量部およびクエン酸１重量部をなべで煮詰め、ビン詰めして製品を得た。本品は、風味、色調とも良好なジャムである。
【００６３】
【実施例  Ｂ−４】
乳酸飲料
脱脂乳１０重量部を８０℃で２０分間加熱殺菌した後、４０℃に冷却し、これにスターター０．３重量部を加えて約３７℃で１０時間醗酵させた。次いで、これをホモジナイズした後、実施例Ａ−２の方法で得たマルトオリゴシルツラノース及びマルトオリゴシルパラチノース含有糖質粉末４重量部、マルトオリゴシルスクロース１重量部および異性化糖シラップ２重量部を加えて７０℃に保って殺菌した。これを冷却し、適量の香料を加え、ビン詰めして製品を得た。本品は、風味、甘味が酸味とよく調和した高品質の乳酸飲料である。
【００６４】
【実施例  Ｂ−５】
加糖練乳
原乳１００重量部に、実施例Ａ−３の方法で得たマルトオリゴシルツラノース及びマルトオリゴシルパラチノース含有糖質シラップ３重量部およびマルトオリゴシルスクロース１重量部を溶解し、プレートヒーターで加熱殺菌し、次いで濃度約７０％に濃縮し、無菌状態で缶詰めして製品を得た。本品は、温和な甘味で、風味もよく、乳幼児食品、フルーツ、コーヒー、ココア、紅茶などの調味用に有利に利用できる。
【００６５】
【実施例  Ｂ−６】
チューインガム
ガムベース３重量部を柔らかくなる程度に加熱溶融し、これにマルトオリゴシルスクロース６重量部および実施例Ａ−４の方法で得たマルトテトラオシルツラノース及びマルトテトラオシルパラチノース含有糖質粉末１重量部とを加え、更に適量の香料と着色料とを混合し、常法に従って、ロールにより練り合わせ、成形、包装して製品を得た。本品は、テクスチャー、風味とも良好なチューインガムである。
【００６６】
【実施例  Ｂ−７】
カスタードクリーム
コーンスターチ１００重量部、実施例Ａ−３の方法で得たマルトオリゴシルツラノース及びマルトオリゴシルパラチノース含有糖質シラップ１００重量部、マルトース８０重量部、マルトオリゴシルスクロース２０重量部および食塩１重量部を充分に混合し、鶏卵２８０重量部を加えて攪拌し、これに沸騰した牛乳１０００重量部を徐々に加え、更に、これを火にかけて攪拌を続け、コーンスターチが完全に糊化して全体が半透明になった時に火を止め、これを冷却して適量のバニラ香料を加え、計量、充填、包装して製品を得た。本品は、なめらかな光沢を有し、温和な甘味で美味である。
【００６７】
【実施例  Ｂ−８】
ういろうの素
米粉９０重量部に、コーンスターチ２０重量部、実施例Ａ−４の方法で得たマルトテトラオシルツラノース及びマルトテトラオシルパラチノース含有糖質粉末１２０重量部、プルラン４重量部を均一に混合してういろうの素を製造した。ういろうの素と適量の抹茶と水とを混練し、これを容器に入れて６０分間蒸し上げて抹茶ういろうを製造した。本品は、照り、口当りも良好で、風味も良い。また、澱粉の老化も抑制され、日持ちもよい。
【００６８】
【実施例  Ｂ−９】
流動食用固体製剤
実施例Ａ−４の方法で得たマルトテトラオシルツラノース及びマルトテトラオシルパラチノース含有糖質粉末５００重量部、粉末卵黄２７０重量部、脱脂粉乳２０９重量部、塩化ナトリウム４．４重量部、塩化カリウム１．８５重量部、硫酸マグネシウム４重量部、チアミン０．０１重量部、アスコルビン酸ナトリウム０．１重量部、ビタミンＥアセテート０．６重量部およびニコチン酸アミド０．０４重量部からなる配合物を調製し、この配合物２５グラムずつ防湿性ラミネート小袋に充填し、ヒートシールして製品を得た。本品は、１袋分を約１５０乃至３００ｍＬの水に溶解して流動食とし、経口的、または鼻腔、胃、腸などへ経管的使用方法により利用される。
【００６９】
【実施例  Ｂ−１０】
外傷治療用膏薬
実施例Ａ−４の方法で得たマルトテトラオシルツラノース及びマルトテトラオシルパラチノース含有糖質粉末５００重量部に、ヨウ素３重量部を溶解したメタノール５０重量部を加え混合し、更に１０％プルラン水溶液２００重量部を加えて混合し、適度の延び、付着性を示す外傷冶療用膏薬を得た。本品は、治癒期間が短縮され、創面もきれいに治る。
【００７０】
【発明の効果】
上記から明らかなように、マルトオリゴシルスクロースを含有する水溶液に非還元性糖質生成酵素を作用させ得られるマルトオリゴシルツラノース及びマルトオリゴシルパラチノース含有糖質は、マルトオリゴシルスクロースからのマルトオリゴシルツラノース及びマルトオリゴシルパラチノース生成率が高く、分離、精製も容易である。マルトオリゴシルツラノース及びマルトオリゴシルパラチノースはいずれもグルコースとフルクトースとからなる還元性オリゴ糖で、上品で良質な甘味を有している。また、経口的または非経口的に使用され、毒性、副作用の懸念もなく、よく代謝利用される。
【００７１】
本発明のマルトオリゴシルツラノース及びマルトオリゴシルパラチノース含有糖質は、非晶質の糖質で、液状で、又は粉末状でその取扱いが容易である。さらに、本糖質は、浸透圧調節性、賦型性、照り付与性、保湿性、粘性、他糖の晶出防止性、難発酵性などの諸性質を具備している。これらの諸性質は、甘味料、呈味改良剤、品質改良剤、安定剤などとして各種組成物の製造に有利に利用できる。  従って、本発明のマルトオリゴシルツラノース及びマルトオリゴシルパラチノース含有糖質とその製造方法並びに用途を確立したことは、食品、化粧品、医薬品分野などにおける工業的意義が極めて大きい。
【図面の簡単な説明】
【図１】高純度マルトテトラオシルスクロースのＨＰＬＣのクロマトグラムを示す図である。
【図２】高純度マルトテトラオシルスクロースに非還元性糖質生成酵素を作用させた後のＨＰＬＣのクロマトグラムを示す図である。
【図１】
0003778991.tif 000005
【図２】
0003778991.tif 000006