(57)【要約】  本発明は、腸管バリア機能を増強するための飲食品（腸管バリア増強用食品組成物）における利用に適した、腸管におけるムチンの産生を促進する作用を有する剤（ムチン生成促進剤）および腸管におけるフコシル化を促進する作用を有する剤（フコシル化促進剤）を提供する。本発明の剤は、酵母マンナンを含有することを特徴とするムチン生成促進剤、および酵母マンナンを含有することを特徴とするフコシル化促進剤である。また、本発明は、それらの剤を含有する腸管バリア機能増強用食品組成物を提供する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
酵母マンナンを含有することを特徴とするムチン生成促進剤。
【請求項２】
酵母マンナンを含有することを特徴とするフコシル化促進剤。
【請求項３】
請求項１に記載のムチン生成促進剤または請求項２に記載のフコシル化促進剤を含有する、腸管バリア機能増強用食品組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、腸管におけるムチンの生成を促進する、またはフコシル化を促進するための剤に関する。また、本発明は、酵母細胞壁から抽出されるマンナン（酵母マンナン）の用途に関する。
【背景技術】
【０００２】
腸管上皮細胞の一種である杯細胞は、糖蛋白質であるムチンを大量に分泌し、上皮細胞表面に粘液層を形成することで細菌の侵入を防いでいる。また、腸管上皮細胞は多くの糖鎖および糖転移酵素を発現しているが、特にフコース転移酵素（Ｆｕｔ２）を欠損しているマウスでは病原性細菌の一種であるサルモネラ菌に感染しやすくなることから、腸管のフコース付加（フコシル化）は感染防御機構において重要な役割を担っていると考えられている。腸管上皮細胞は、自然リンパ球ＩＬＣ３がインターロイキン２２を産生することでＦｕｔ２遺伝子の発現を上昇させることによりフコシル化される。【０００３】
特許文献１（特開２００２−２５５８４８号公報）には、乳汁や乳製品、特にホエー（乳漿）に高濃度で含まれているタンパク質であるα−ラクトアルブミンが、胃などの粘膜細胞からのムチン産生分泌を促進する作用等を有することが記載されている。【０００４】
特許文献２（特開２００８−２８９３８１号公報）には、スクロースにフルクトースが多数結合した多糖である、イヌリン型フラクタン（一般的には「フルクタン」と呼ばれることが多い。）が、大腸などにおけるムチン分泌促進作用を有すること、さらに炎症性腸疾患を抑制する作用を有することが記載されている。【０００５】
また一般的に、嵩の高い不溶性食物繊維や粘性の高い水溶性食物繊維は、その物理的性質により、小腸でのムチン分泌を促進すると言われている。例えば非特許文献１では、溶性食物繊維においては嵩が高ければ高いほど、水溶性食物繊維（例えばグルコマンナン）では粘度が高ければ高いほど、小腸内のムチン量が増加すると報告されている。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００６】
【特許文献１】特開２００２−２５５８４８号公報
【特許文献２】特開２００８−２８９３８１号公報
【非特許文献】
【０００７】
【非特許文献１】森田達也，食物繊維による小腸ムチン分泌促進機序の解明とその新たな栄養生理意義の探索，静岡大学，2012年5月15日（http://hdl.handle.net/10297/6999）
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００８】
腸管におけるムチンの分泌やフコシル化によって病原性細菌の感染を防御する機能（本明細書において「腸管バリア機能」と称する。）を増強することのできる保健機能食品（機能性表示食品等）、あるいはその有効成分（機能性関与成分等）となる剤が望まれているが、十分な増強効果および実用性を有するものはまだ開発されていない。【０００９】
非特許文献１に記載されているように、食物繊維に粘膜細胞からのムチンの分泌を促進する作用があることは知られているが、不溶性食物繊維は不溶性であるがゆえに食品形態として用途が限定され、グルコマンナンなどの粘性の高い水溶性食物繊維は一度に多く摂取することができず、飲料への使用が困難である。また、特許文献１に記載されているラクトアルブミンなどのタンパク質成分は、加熱凝集するために飲料形態での加工に制限がある。【００１０】
本発明は、腸管バリア機能を増強するための飲食品（腸管バリア増強用食品組成物）における利用に適した、腸管におけるムチンの生成を促進する作用を有する剤、および腸管におけるフコシル化を促進する作用を有する剤、すなわちムチン生成促進剤およびフコシル化促進剤を提供することを課題とする。
【課題を解決するための手段】
【００１１】
本発明者らは、酵母から抽出されたα−マンナン（本明細書において「酵母マンナン」又は「酵母α−マンナン」と称する。）が、腸管からのムチンの産生、分泌を促進する作用を有することを見出した。酵母マンナンは水溶性であり、その水溶液は粘性が非常に低いため、飲食品への利用に適したムチン産生促進剤となる。【００１２】
本発明者らはさらに、酵母マンナンが腸管上皮細胞のフコシル基転移酵素（Ｆｕｔ２）の発現を亢進し、細胞表面へのフコースの付加、つまり腸管のフコシル化を促進する作用を有すること、したがってフコシル化促進剤として利用することもできることを見出した。【００１３】
すなわち本発明は、下記の事項を包含する。
［項１］
酵母マンナンを含有することを特徴とするムチン生成促進剤。
［項２］
酵母マンナンを含有することを特徴とするフコシル化促進剤。
［項３］
項１に記載のムチン生成促進剤または項２に記載のフコシル化促進剤を含有する、腸管バリア機能増強用食品組成物。
【発明の効果】
【００１４】
酵母マンナンを含有する本発明のムチン生成促進剤またはフコシル化促進剤を利用することにより、腸管バリア機能増強作用に優れ、かつ摂取しやすい、腸管バリア機能増強用食品組成物を製造することが可能となる。
【図面の簡単な説明】
【００１５】
【図１】図１は、実施例の実験１（ムチン生成促進）における、６週間にわたる試験期間後のムチン生成量（マウス糞便中のムチンの量）を各群間で比較した結果を示すグラフである。＊：ｐ＜０．０５、＊＊：ｐ＜０．０１、＊＊＊：ｐ＜０．００１。
【図２】図２は、実施例の実験２（フコシル化促進）における、６週間にわたる試験期間後のＦｕｔ２遺伝子の発現量（比較例１を１．０とする相対値）を示すグラフである。＊＊：ｐ＜０．０１。
【発明を実施するための形態】
【００１６】
［ムチン生成促進剤およびフコシル化促進剤］
本発明のムチン生成促進剤およびフコシル化促進剤は酵母マンナンを含有するものであり、それぞれムチン生成の促進およびフコシル化の促進という用途における有効成分として酵母マンナンのみを含む（酵母マンナンからなる）ものであってもよいし、酵母マンナンに加えて同じ用途に対する他の有効成分を含むものであってもよい。
【００１７】
本発明の典型的な実施形態において、ムチン生成促進剤およびフコシル化促進剤の有効成分となる酵母マンナンを摂取することにより、腸管におけるムチンの生成およびフコシル化を同時に促進することができる。したがって、本発明の一つの実施形態において、ムチン生成促進剤およびフコシル化促進剤は、同一の剤によって具現化することができる。一方で、ムチン生成促進の作用効果が奏されるがフコシル化促進の作用効果は奏されない実施形態、逆にフコシル化生成促進の作用効果が奏されるがムチン生成促進の作用効果は奏されない実施形態も、本発明に包含される。
【００１８】
（１）酵母マンナン
本発明において、酵母マンナンは、酵母由来の「α−マンナン」及び酵母由来の「α−マンナン―タンパク質複合体」の、少なくとも１種を含む物質を指す。α−マンナン及びα−マンナン―タンパク質複合体は、いずれも酵母の細胞壁を構成する主要な成分である。
【００１９】
上述の「α−マンナン」は、Ｄ−マンノースがα１，６−結合、α１，２−結合、又はα１，３−結合により重合した多糖類であり、その主鎖には、マンノピラノースが１又は２以上、α１，２−結合又はα１，３−結合した側鎖が結合していてもよい。このα―マンナンは水溶性である。
【００２０】
一方、上述の「α−マンナン―タンパク質複合体」は、酵母の細胞壁に局在するタンパク質に、Ｎ−グリコシド結合又はＯ−グリコシド結合により、１又は２以上のα−マンナン鎖が結合した水溶性の糖タンパク質である。この糖タンパク質に結合している「α−マンナン鎖」は、上記「α−マンナン」と同様に、Ｄ−マンノースがα１，６−結合、α１，２−結合、又はα１，３−結合により重合した多糖鎖であり、その主鎖には、マンノピラノースが１又は２以上、α１，２−結合又はα１，３−結合した側鎖が結合していてもよい。
【００２１】
酵母マンナンは、酵母に由来している限り、どのように回収されたものであってもよい。例えば、酵母の細胞壁を酵素又は化学的処理等により損傷させて分離回収（抽出）した酵母マンナンであってもよく、酵母から培地中に放出されたものを回収した酵母マンナンであってもよい。
【００２２】
酵母マンナンは、商品としても容易に入手することもできる。具体的には、マンナン  ｆｒｏｍ  Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ  ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ  Ｍ７５０４（シグマ  アルドリッチ  ジャパン合同会社）等が挙げられる。また、酵母マンナンは、以下に記載するような公知のいずれかの方法を用いて、酵母から調製することができる。
【００２３】
（２）酵母マンナンの調製方法
酵母マンナンの調製方法としては、公知のいずれかの方法を用いることができる。例えば、酵母からその細胞壁を調製する工程として、ビール、清酒、及び、パン等の製造に用いられた酵母から酵母エキスを抽出し、残滓である酵母の細胞壁から酵母マンナンを調製する工程により、酵母マンナンを得ることができる。酵母マンナンの原料とする酵母の細胞壁としては、例えば「酵母細胞壁」の商品名でアサヒグループ食品株式会社から販売されている酵母の細胞壁や、その他の同様の商品を用いてもよい。
【００２４】
酵母の細胞壁から酵母マンナンを調製する工程としては、例えば、酵母の細胞壁から酵母マンナン粗抽出物を得る工程（本明細書において「粗抽出工程」と呼ぶ。）を含み、必要に応じて当該工程の後にさらに、酵母マンナン粗抽出物を精製し、酵母マンナン精製物を得る工程（本明細書において「精製工程」と呼ぶ。）を含む工程が挙げられる。粗抽出工程の前に、酵母からその細胞壁を調製する工程を行う場合もあるが、予め製造された酵母の細胞壁を原料として用いる場合はそのような工程は不要となる。粗抽出工程においては、例えば、熱水（希アルカリを含む）抽出法（例えば、特公昭６４−３４７９号公報、及び、特開昭５８−１０９４２３号公報参照。）、自己消化法（例えば、特公昭５８−５７１５３号公報参照。）、細胞壁溶解酵素による酵素消化方法（例えば、特公昭５９−４０１２６号公報参照。）等の方法を用いることができる。精製工程においては、例えば、塩酸等によるタンパク質の除去処理、アルコール沈殿処理、プロテアーゼ処理、及び、クロマトグラフィーによる処理等を行うことができる。
【００２５】
本明細書では、酵母マンナン粗抽出物と酵母マンナン精製物とを総称して「酵母マンナン調製物」と呼ぶ。上述したような市販されている酵母マンナンも酵母マンナン調製物に該当する。酵母マンナン調製物中には、酵母由来のα−マンナンおよび／または酵母由来のα−マンナン−タンパク質複合体の他、酵母の細胞壁中に存在していたり、酵母マンナンの調製のための処理により生じたりした、様々な夾雑物（例えば、グルカン、タンパク質、マンノース等）も含まれていてもよい。酵母マンナン調製物中の酵母マンナンの含有量は、酵母マンナンとして酵母マンナン調製物を用いたときに本発明の作用効果が奏される含有量の後述する酵母α−マンナンを有する酵母マンナンである限り、特に限定されるものではない。粗抽出工程でどのような方法を用いるか、および精製工程を行うかどうか、精製工程を行う場合はどのような処理を用いるかなどは、所望の含有量の酵母α−マンナンを有する酵母マンナン調製物が得られるよう、適宜選択すればよい。当業者であれば、一般的な方法および条件に従って、本発明の作用効果を奏する上で支障のない含有量の酵母α−マンナンを有する酵母マンナンを調製することができる。言い換えれば、一般的な方法および条件に従って当業者によって調製された酵母マンナンは、本発明の作用効果を奏する上で支障のない含有量の酵母α−マンナンを有している。
【００２６】
上述の酵母マンナンの調製方法における原料として用いられる酵母は、上述のα−マンナン、及び、上述のα−マンナン―タンパク質複合体を細胞壁の構成成分とする酵母であれば特に限定されるものではない。このような酵母は、例えば、サッカロマイセス（Saccharomyces）属菌、シゾサッカロマイセス（Shizosaccharomyces）属菌、ピキア（Pichia）属菌、キャンディダ（Candida）属菌、クリベロマイセス（Kluyveromyces）属菌、ウィリオプシス（Williopsis）属菌、デバリオマイセス（Debaryomyces）属菌、ガラクトマイセス（Galactomyces）属菌、トルラスポラ（Torulaspora）属菌、ロドトルラ（Rhodotorula）属菌、ヤロウィア（Yarrowia）属菌、ジゴサッカロマイセス（Zygosaccharomyces）属菌等の酵母であってもよく、サッカロマイセス属菌が好ましい。当業者であれば、一般的な方法および条件に従って、本発明の作用効果を奏する酵母マンナンを調製するための原料として用いる上で支障のない酵母を培養することができる。言い換えれば、一般的な方法および条件に従って当業者によって培養された酵母は、本発明の作用効果を奏する酵母マンナンを調製する上で支障のない原料として用いることができる。
【００２７】
また、上述の酵母マンナンの原料として用いられる酵母は、可食性の酵母であることが好ましく、パン酵母又はビール酵母として使用されている酵母であることがより好ましい。具体的には、サッカロマイセス・セレビシエ（Saccharomyces cerevisiae）、シゾサッカロマイセス・ポンベ（Schizosaccharomyces pombe）、サッカロマイセス・パストリアヌス（Saccharomyces pastorianus）、サッカロマイセス・パラドキサス（Saccharomyces paradoxus）、サッカロマイセス・ミカタエ（Saccharomyces mikatae）、サッカロマイセス・バヤヌス（Saccharomyces bayanus）、サッカロマイセス・クドリアヴゼヴィイ（Saccharomyces kudriavzevii）、クルイベロマイセス・ラクチス（Kluyveromyces lactis）、キャンディダ・ユーティリス（Candida utilis）、キャンディダ・アルビカンス（Candida albicans）、キャンディダ・トロピカリス（Candida tropicalis）、キャンディダ・リポリティカ（Candida lypolitica）、及び、キャンディダ・サケ（Candida sake）等が挙げられる。上述の酵母マンナンの原料として用いられる酵母は、例えば、サッカロマイセス・セレビシエ、サッカロマイセス・パストリアヌス、及び、サッカロマイセス・バヤヌスであることが好ましい。
【００２８】
（３）酵母α−マンナンの含有率の算出方法
上記の調製方法により得られる酵母マンナン調製物には、酵母由来のα−マンナン−タンパク質複合体（つまりα−マンナン鎖と結合した状態のタンパク質部分）も含まれていてもよい。ここで、本明細書において、酵母由来のα−マンナンと、酵母由来のα−マンナン−タンパク質複合体のうちのα−マンナン鎖部分とをあわせて「酵母α−マンナン」と総称することとする（「酵母α−マンナン」は、純粋な酵母マンナンということもできる）。酵母マンナン中の酵母α−マンナンの含有率は、酵母マンナンの調製方法によって多少変動するが概ね一定の範囲内にあり、通常は３０〜９５％である。酵母α−マンナンの含有率は、酵母マンナンとして酵母マンナン調製物を用いたときに本発明の作用効果が奏される限り特に限定されるものではない。当業者であれば、一般的な方法および条件に従って、本発明の作用効果を奏する上で支障のない酵母α−マンナンの含有率を有する酵母マンナンを調製することができる。言い換えれば、一般的な方法および条件に従って当業者によって調製された酵母マンナンは、本発明の作用効果を奏する上で支障のない、酵母α−マンナンの含有率を有している。
【００２９】
酵母マンナン調製物中の酵母α−マンナンの含有率は、次の方法により算出する。まず、酵母マンナン調製物の検体（Ａ）中のマンノース、および、酵母マンナン調製物を加水分解した検体（Ｂ）中のマンノースを各々定量する。ここで、検体（Ｂ）は、検体（Ａ）を硫酸で処理することにより、検体（Ａ）中の全ての糖鎖を単糖に加水分解した後、中和された検体である。各検体中のマンノースは、例えば、高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ：high performance liquid chromatography）により定量することができ、一般財団法人  日本食品分析センターで実施されている方法で定量してもよい。続いて、検体（Ｂ）のマンノース量から検体（Ａ）のマンノース量を差し引いた値に対して、酵母α−マンナンの加水分解により結合した水の量を減じるため、０．９を乗じることにより酵母マンナン調製物中の酵母α−マンナンの含有量を算出する。最後に、検体（Ａ）の重量に対する、酵母α−マンナンの含有量の割合を算出することにより、酵母マンナン調製物中の酵母α−マンナンの割合、すなわち酵母α−マンナンの含有率を算出することができる。
【００３０】
本発明の各剤は、酵母α−マンナンの含有率が１００％である酵母マンナン調製物を用いる必要はなく、酵母α−マンナンの含有率が上記のような一般的な範囲にある酵母マンナン調製物を用いてもよい。
【００３１】
本発明のムチン生成促進剤およびフコシル化促進剤の剤型は特に限定されるものではなく、粉末状であってもよいし、水または他の溶媒を用いた溶液状（分散液状）であってもよい。本発明のムチン生成促進剤およびフコシル化促進剤は、典型的には腸管バリア機能増強用食品組成物に配合して使用されるので、そのような食品組成物の製造に適した剤型とすることが好ましい。
【００３２】
本発明のムチン生成促進剤およびフコシル化促進剤、またはその有効成分として含有される酵母マンナンは、それを摂取することにより、ヒト、マウス、その他の哺乳類の腸管におけるムチンの生成およびフコシル化を促進することができる。ムチンの生成量や、フコシル化に関与するＦｕｔ２遺伝子の発現量は、試験条件によって、例えば実験動物を用いた試験における給餌条件によって変動するものであり、効果を一律に数値範囲等で規定することは困難である。しかしながら少なくとも、比較可能なように適切に設定された試験条件下で、ムチン生成促進剤の摂取後のムチン生成量およびフコシル化促進剤の摂取後のＦｕｔ２遺伝子発現量を、それぞれ摂取前のムチン生成量およびＦｕｔ２遺伝子発現量よりも、統計学的な有意差をもって増加させることができればよい。また、ムチン生成促進剤の摂取後のムチン生成量およびフコシル化促進剤の摂取後のＦｕｔ２遺伝子発現量は、コントロール群（ムチン生成促進剤およびフコシル化促進剤を摂取しない群）と比較して、好ましくはさらに「難消化性デキストリン」など他の成分を摂取した群と比較して、統計学的な有意差をもって大きければよい。
【００３３】
ムチン生成量およびＦｕｔ２遺伝子発現量は、それらの解析のために一般的に用いられている手法により測定することができる。腸管におけるムチン生成量は、例えば、糞便検体中のムチンの量によって評価することができ、そのためのキット（例：コスモ・バイオ株式会社「Fecal Mucin Assay Kit」）も市販されている。Ｆｕｔ２遺伝子発現量は、例えば、回腸組織中のｔｏｔａｌ  ＲＮＡからｃＤＮＡを調製し、その中に含まれるＦｕｔ２遺伝子を適切なプライマーを用いてリアルタイムＰＣＲによって増幅することなどにより測定することができる。
【００３４】
［食品組成物］
本発明の腸管バリア機能増強用食品組成物は、本発明のムチン生成促進剤またはフコシル化促進剤と、食品組成物の形態に適合したその他の成分とを含有するものである。なお、ムチン生成促進剤またはフコシル化促進剤の有効成分である酵母マンナンを、細胞壁を有する酵母の形態で含有するが、組成物として製造されていない天然の素材またはその調理・加工品、例えば酵母が残存している発酵食品自体は、本発明の食品組成物には該当しない。
【００３５】
食品組成物の形態は特に限定されるものではなく、本発明のムチン生成促進剤またはフコシル化促進剤を配合することのできる、公知の各種の飲食品と同様の形態とすることができる。例えば、錠剤、カプセル剤、散剤（顆粒剤）、その他の剤型のサプリメント（栄養補助食品）；清涼飲料（炭酸飲料、ノンアルコール飲料、ジュース、コーヒー飲料、茶系飲料、ミネラルウォーター、スポーツ飲料など）、乳飲料、豆乳飲料、発酵乳、乳酸菌飲料、ココア、アルコール飲料（ビール、発泡酒、その他の醸造酒、リキュール、日本酒、甘酒、ワイン、焼酎など）、インスタント粉末から調製される飲料、その他の飲料；パン、シリアル、菓子類（ビスケット、クッキー、チョコレートなど）、加工品（かつおぶし、塩辛、くさやなど）、漬物（ぬか漬け、キムチ、ピクルスなど）、発酵食品（納豆、チーズ、ヨーグルトなど）、調味料（醤油、味噌、酢など）、食品添加物、その他の食品が挙げられる。
【００３６】
食品組成物中のムチン生成促進剤またはフコシル化促進剤の含有量、またはその有効成分としての酵母マンナンの含有量は、本発明によるムチン生成促進効果またはフコシル化促進効果が奏される限り特に限定されるものではない。食品組成物の形態や製造方法などを考慮して、また必要に応じて一食または一日あたりの有効成分量などを考慮して、適宜設定することができる。本発明のムチン生成促進剤またはフコシル化促進剤として、酵母マンナン調製物を用いる場合は、その酵母マンナン調製物の重量と、その酵母マンナン調製物中に含まれる酵母α−マンナンの割合（すなわち、酵母α−マンナンの含有率）とによって、有効成分としての酵母α−マンナンの含有量が本発明の作用効果を奏する範囲となるよう調節することができる。
【００３７】
例えば、本発明の食品組成物がサプリメントである場合は、ムチン生成促進剤またはフコシル化促進剤の含有量は、そこに含まれる酵母α−マンナンの含有量が、食品組成物（サプリメント）の全質量に対して、通常５％以上、好ましくは１０％以上となり、通常７５％以下とすることができる。本発明の食品組成物が飲料である場合は、ムチン生成促進剤またはフコシル化促進剤の含有量は、そこに含まれる酵母α−マンナンの含有量が、食品組成物（飲料）の全質量に対して、通常０．０４％以上、好ましくは０．１％以上となり、通常７．５％以下、好ましくは４％以下とすることができる。
【００３８】
本発明の食品組成物の、ムチン生成促進剤またはフコシル化促進剤以外の原料または成分は、従来の食品組成物と同様とすることができる。
【００３９】
例えば、サプリメントの形態をとる本発明の食品組成物は、ムチン生成促進剤またはフコシル化促進剤に加えて、一般的ないし公知のサプリメントが含有する各種の成分、例えば賦形剤、甘味料、着色料、香料およびその他の成分から選ばれる少なくとも１種を含有することができる。
【００４０】
飲料の形態をとる本発明の食品組成物は、ムチン生成促進剤またはフコシル化促進剤に加えて、一般的ないし公知の飲料が含有する各種の成分、例えば水（炭酸水）、コーヒー抽出物、茶葉抽出物、果汁、その他の植物原料抽出物、乳、豆乳、発酵乳、甘味料、酸味料、着色料および香料から選ばれる少なくとも１種を含有することができる。
【００４１】
このような本発明の食品組成物は、成分として本発明のムチン生成促進剤またはフコシル化促進剤を加える工程をさらに含むこと以外は、従来の食品組成物と同様の方法により製造することができる。
【００４２】
食品組成物は、保健機能食品（すなわち、栄養機能食品、特定保健用食品および機能性表示食品）として、また治療食（すなわち、治療の目的を果たすもの、又は、医師が食事箋を出し、それに従い栄養士等が作成した献立に基づいて調理されたもの。）、食事療法食、介護食などとして、製造することもできる。
【００４３】
食品組成物の一食分または一日あたりの摂取目安量（有効成分量）は、腸管バリア機能を増強する対象の年齢、体重、性別や、摂取前の腸管バリア機能に関係する指標値などに応じて、また非臨床的または臨床的な試験結果等に基づいて、適宜設定することができる。食品組成物の摂取期間も適宜設定することができ、長期間に亘って繰り返し、また日常的に、摂取することが好ましい。本発明の一つの側面において、本発明の食品組成物は、そこに含まれる有効成分としての酵母α−マンナンの摂取量が、好ましくは０．１ｇ／日以上、より好ましくは０．２ｇ／日以上、さらに好ましくは０．３ｇ／日以上であり、好ましくは４ｇ／日以下、より好ましくは２．５ｇ／日以下、さらに好ましくは１．５ｇ／日以下となるよう摂取されるものである。
【００４４】
本発明の食品組成物の「腸管バリア機能の増強」という用途は、直接的にまたは間接的に表示することができる。直接的な表示の例は、製品自体、パッケージ、容器、ラベル、タグ等の有体物への記載であり、間接的な表示の例は、ウェブサイト、店頭、展示会、看板、掲示板、新聞、雑誌、テレビ、ラジオ、郵送物、電子メール等の場所または手段による、広告・宣伝活動である。本発明の食品組成物を機能性表示食品として製造する場合は、例えば「腸のバリアを厚くする」、「腸のバリアを強くする」、「腸の健康をサポートする（支える）」、「腸から強いカラダに」、「腸から健康体質に」、「腸のバリア機能を高める」、「健康な腸内環境を維持（キープ）する」、「腸内環境を健康に保つ」、「リスクに強い腸をつくる」、「腸の防御力を強化する」などのように、機能性成分として含まれる酵母マンナンの作用効果（ムチン生成促進またはフコシル化促進）に基づく機能性を表示することができる。
【００４５】
［本発明の他の側面］
本発明は一つの側面において、有効量の酵母マンナンを摂取させることを含む、ヒトおよびヒト以外の哺乳類（例えばマウス等の実験動物、またはペット）の腸管におけるムチンの生成を促進する方法を提供する。本発明は一つの側面において、有効量の酵母マンナンを摂取させることを含む、ヒトおよびヒト以外の哺乳類（例えばマウス等の実験動物、またはペット）の腸管におけるフコシル化を促進する方法を提供する。これらの「ムチン生成促進方法」および「フコシル化促進方法」の発明は、上述した「ムチン生成促進剤」および「フコシル化促進剤」の発明から当業者であれば転換可能であり、本明細書に記載した「ムチン生成促進剤」および「フコシル化促進剤」に関する事項を同様に適用することができる。
【００４６】
本発明は一つの側面において、有効量の酵母マンナン（あるいは本発明のムチン生成促進剤および／またはフコシル化促進剤）を摂取させることを含む、ヒトおよびヒト以外の哺乳類（例えばマウス等の実験動物、またはペット）の腸管バリア機能を増強する方法を提供する。このような「腸管バリア機能増強方法」は、上述した「腸管バリア機能増強用食品組成物」の発明から当業者であれば転換可能であり、本明細書に記載した「腸管バリア機能増強用食品組成物」に関する事項を同様に適用することができる。
【００４７】
本発明は一つの側面において、ヒトおよびヒト以外の哺乳類（例えばマウス等の実験動物、またはペット）の腸管バリア機能を増強するための食品組成物の製造における酵母マンナンの使用を提供する。本発明は一つの側面において、当該食品組成物の製造における、ヒトおよびヒト以外の哺乳類の腸管における、ムチンの生成を促進するための、および／またはフコシル化を促進するための有効成分としての、酵母マンナンの使用を提供する。このような「酵母マンナンの使用」は、上述した「ムチン生成促進剤」、「フコシル化促進剤」および「腸管バリア機能増強用食品組成物」の発明から当業者であれば転換可能であり、本明細書に記載した「ムチン生成促進剤」、「フコシル化促進剤」および「腸管バリア機能増強用食品組成物」に関する事項を同様に適用することができる。
【実施例】
【００４８】
（酵母α−マンナンの含有率の算出方法）
本実施例では、一般財団法人  日本食品分析センターに委託し、後述するようにして得られた酵母マンナン調製物Ｘの検体（Ａ）中のマンノース、および酵母マンナン調製物Ｘを加水分解した検体（Ｂ）中のマンノースを各々定量した。その定量結果に基づいて、酵母マンナン調製物Ｘ中の酵母α−マンナンの含有率を上述した算出方法により算出した。【００４９】
一般財団法人  日本食品分析センターにおける、検体（Ａ）および検体（Ｂ）中のマンノースの定量方法の具体的な手順は次の通りである。検体（Ａ）および検体（Ｂ）それぞれ０．６ｇを採取し、濃度７２％の硫酸に添加し、室温で１時間撹拌した。検体溶液の硫酸の濃度を４％に希釈した後、オートクレーブ（１２１℃）中で１時間を加熱した。検体溶液を室温に冷却後、中和して、水で２００ｍＬに定量した。定量後の検体溶液を濾紙で濾過し、濾液を水で５０倍に希釈し、希釈液をさらにメンブランフィルターで濾過した。この濾液を下記の操作条件による高速液体クロマトグラフ法で分析し、濾液中のマンノースの濃度を測定して、検体（Ａ）および検体（Ｂ）中のマンノースを定量した。
機種：ＬＣ−２０ＡＤ（株式会社島津製作所）
検出器：蛍光分光光度計ＲＦ−２０Ａxs（株式会社島津製作所）
カラム：ＴＳＫｇｅｌ  ＳＵＧＡＲ  ＡＸＩ，φ４．６ｍｍ×１５０ｍｍ（東ソー株式会社）
カラム温度：６０℃
移動相：０．５ｍｏｌ／Ｌ  ホウ酸緩衝液（ｐＨ８．７）
流量：０．４ｍＬ／ｍｉｎ
注入量：２０μＬ
蛍光励起波長：３２０ｎｍ
蛍光測定波長：４３０ｎｍ
ポストカラム：反応液；１ｗ／ｖ％  Ｌ−アルギニン溶液
反応液流量；０．７ｍＬ／ｍｉｎ
反応温度；１５０℃【００５０】
（酵母マンナン調製物Ｘ）
市販の酵母の細胞壁（商品名「酵母細胞壁」、アサヒグループ食品株式会社）１０ｋｇを蒸留水に懸濁し、水酸化ナトリウムを添加してｐＨ１１．０に調整した後、９０℃で１２時間煮沸した。遠心分離により上清を回収し、塩酸を添加してｐＨ５．５に調整した。凍結乾燥操作により２ｋｇの酵母マンナン調製物Ｘを得た。上述した方法により、酵母α−マンナンの含有率を算出したところ、５０％であった。【００５１】
実施例１および２の「酵母マンナン（２％）」および「酵母マンナン（５％）」はそれぞれ、飼料（「ＡＩＮ９３Ｇ」、オリエンタル酵母工業社製）の質量に対して、２％または５％の質量の酵母マンナン調製物Ｘを混合したことを意味する。【００５２】
（セルロース及び難消化性デキストリン）
比較例１では、セルロース（「セオラスＵＦ−Ｆ７０２」、旭化成ケミカルズ社製）を使用した。また、比較例２では、難消化性デキストリン（「ファイバーソル２」、松谷化学社製）を使用した。【００５３】
比較例１および２の「セルロース（５％）」および「難消化性デキストリン（５％）」は、飼料（「ＡＩＮ９３Ｇ」、オリエンタル酵母工業製）の質量に対してセルロースまたは難消化性デキストリンを各々混合した重量比率を意味する。【００５４】
（実験１）ムチン生成促進
上述したように、酵母マンナン調製物Ｘ、セルロース、及び、難消化性デキストリンを飼料（「ＡＩＮ９３Ｇ」、オリエンタル酵母工業社製）に各々混合して各試験飼料を調製した。４週齢のオスのＩＣＲマウスを９匹ずつに分け、各試験飼料を６週間自由摂食させた。各試験飼料摂取前後に得られた糞便を凍結乾燥粉砕し、コスモ・バイオ社製Ｆｅｃａｌ  Ｍｕｃｉｎ  Ａｓｓａｙ  Ｋｉｔ（ＦＦＡ−ＭＵ−Ｋ０１）を用いてムチンを定量した。摂取６週間後の糞便のムチン量について、セルロース５％投与群（比較例１、対照群）、酵母マンナン５％投与群（実施例１）および難消化性デキストリン５％投与群（比較例２）の各群間に有意差があるかを、Ｔｕｋｅｙ−Ｋｒａｍｅｒ検定によって分析した。【００５５】
結果を表１および図１に示す。酵母マンナン５％を与えると（実施例１）、糞便中のムチン量がセルロース５％投与群（比較例１）および酵母マンナン５％投与群（比較例２）のどちらに対しても有意に増加すること、したがって腸管におけるムチン生成量が促進されることが示された。【００５６】
【表１】
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【００５７】
（実験２）フコシル化促進
上述したように、酵母マンナン調製物Ｘ、セルロース、及び、難消化性デキストリンを飼料（「ＡＩＮ９３Ｇ」、オリエンタル酵母工業社製）に各々混合して各試験飼料を調整した。４週齢のオスのＩＣＲマウスを９匹ずつに分け、各試験飼料を６週間自由摂食させた。６週間後に頸椎脱臼により安楽死させ、回腸を長さ２．０ｃｍに切り出し、２．５ｍｌのＲＮＡ  ｌａｔｅｒ液の入ったチューブに入れた後、４℃で２４時間冷蔵後、−８０℃で凍結した。【００５８】
ＲＮＡ  ｌａｔｅｒに浸漬し凍結された回腸組織を細かく裁断した後に３０ｍｇを秤量し、ＱＩＡＧＥＮ社製「ＲＮｅａｓｙ  Ｆｉｂｒｏｕｓ  Ｔｉｓｓｕｅ  Ｍｉｎｉ  Ｋｉｔ」を用いてｔｏｔａｌ    ＲＮＡを精製した。次にＡｐｐｌｉｅｄ    Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ社製「Ｈｉｇｈ  Ｃａｐａｃｉｔｙ  ｃＤＮＡ  Ｒｅｖｅｒｓｅ  Ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ  Ｋｉｔｓ」を用いて、ｔｏｔａｌ  ＲＮＡからｃＤＮＡを調製した。得られたｃＤＮＡを鋳型として、Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ社製「ＴａｑＭａｎ  Ｇｅｎｅ  Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  Ｍａｓｔｅｒ  Ｍｉｘ」と「ＴａｑＭａｎ  Ｇｅｎｅ  Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  Ａｓｓａｙｓ」（Ｆｕｔ２遺伝子用プライマー：Ｍｍ００４９０１５２＿ｓ１、ＧＡＰＤＨ遺伝子用プライマー：Ｍｍ９９９９９９１５＿ｇ１）を用いて、プロトコルに記載の通りにＰＣＲ反応を行った。反応と検出には、定量ＰＣＲ装置（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ社製「Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ  ７５００Ｆａｓｔ  Ｒｅａｌ−Ｔｉｍｅ  ＰＣＲ  Ｓｙｓｔｅｍ」）を用いた。【００５９】
フコシル基転移酵素Ｆｕｔ２遺伝子のｍＲＮＡ相対量は、定量ＰＣＲ装置付属の説明書に記載の比較Ｃｔ法により算出した。各群におけるフコシル基転移酵素Ｆｕｔ２遺伝子のｍＲＮＡ量は、内部標準ＧＡＰＤＨ（グリセルアルデヒド三リン酸デヒドロゲナーゼ）遺伝子のｍＲＮＡ量を測定することにより標準化した。標準化後のフコシル基転移酵素Ｆｕｔ２遺伝子のｍＲＮＡ量（発現量）について、セルロース５％投与群（比較例１、対照群）を１．０とし、それに対する酵母マンナン５％投与群（実施例１）および難消化性デキストリン５％投与群（比較例２）の相対値を求めた。実施例１および実施例２の発現量（相対値）に比較例１に対する有意差があるかを、Ｄｕｎｎｅｔｔ検定によって分析した。【００６０】
結果を図２に示す（＊＊印は有意水準が１％未満（ｐ＜０．０１）で有意差があることを表す）。酵母マンナン５％を与えると（実施例１）、回腸組織においてフコシル基転移酵素Ｆｕｔ２遺伝子の発現量が有意に増加すること、したがって回腸におけるフコシル化が促進されることが示された。
【図１】
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【図２】
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【国際調査報告】
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