(57)【要約】本発明は、蛋白質を安定化する方法であって、生体に由来する検体中に含まれる蛋白質を、アリールボロン酸と共存させる工程を含み、生体に由来する検体中に含まれる蛋白質が、ヘモグロビン、ハプトグロビン、およびヘモグロビン−ハプトグロビン複合体からなる群から選ばれる少なくとも一種である、方法を提供する。本発明によれば、生体に由来する検体中に含まれる血液蛋白質等の蛋白質を安定化することができる。本発明はさらに、生体に由来する検体中に含まれる蛋白質を安定化させるための安定化溶液、ならびに生体に由来する検体中に含まれる蛋白質を検出するための方法およびキットを提供する。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
生体に由来する検体中に含まれる蛋白質を安定化する方法であって、
前記生体に由来する検体中に含まれる蛋白質を、アリールボロン酸と共存させる工程を含み、
前記生体に由来する検体中に含まれる蛋白質が、ヘモグロビン、ハプトグロビン、およびヘモグロビン−ハプトグロビン複合体からなる群から選ばれる少なくとも一種である、方法。
【請求項２】
アリールボロン酸が、フェニルボロン酸およびその誘導体からなる群から選ばれる少なくとも一種である、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
アリールボロン酸が、フェニルボロン酸、ヒドロキシフェニルボロン酸、カルボキシフェニルボロン酸、アミノフェニルボロン酸およびこれらの塩からなる群から選ばれる少なくとも一種である、請求項１または２に記載の方法。
【請求項４】
前記工程は、前記生体に由来する検体中に含まれる蛋白質を、前記アリールボロン酸を含む溶液中に分散させる工程であり、
前記アリールボロン酸の前記溶液中の濃度が、０．１ｍｍｏｌ／Ｌ以上である、請求項１〜３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５】
前記工程は、前記生体に由来する検体中に含まれる蛋白質を、前記アリールボロン酸および糖と共存させる工程である、請求項１〜４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６】
前記糖が、糖アルコール、単糖および二糖からなる群から選ばれる少なくとも一種である、請求項５に記載の方法。
【請求項７】
前記糖が、ソルビトール、グルコース、マンニトール、フルクトース、キシリトール、エリトリトール、スクロース、トレハロース、ラクトース、およびマルトースからなる群から選ばれる少なくとも一種である、請求項５または６に記載の方法。
【請求項８】
前記工程は、前記生体に由来する検体中に含まれる蛋白質を、前記アリールボロン酸および前記糖を含む溶液中に分散させる工程であり、
前記糖の前記溶液中の濃度が、５ｍｍｏｌ／Ｌ以上である、請求項５〜７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項９】
前記生体に由来する検体は、ヘモグロビンを少なくとも含み、
前記方法は、当該ヘモグロビンと、ハプトグロビンとを接触させ、ヘモグロビンとハプトグロビンとの複合体を形成させる工程を含む、請求項１〜８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１０】
前記生体に由来する検体が、糞便、唾液、または尿である、請求項１〜９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１１】
生体に由来する検体に含まれる蛋白質を安定化させるための溶液であって、
アリールボロン酸を含み、
前記生体に由来する検体に含まれる蛋白質が、ヘモグロビン、ハプトグロビン、およびヘモグロビン−ハプトグロビン複合体からなる群から選ばれる少なくとも一種である、安定化溶液。
【請求項１２】
前記アリールボロン酸が、フェニルボロン酸およびその誘導体からなる群から選ばれる少なくとも一種である、請求項１１に記載の安定化溶液。
【請求項１３】
前記アリールボロン酸が、フェニルボロン酸、ヒドロキシフェニルボロン酸、カルボキシフェニルボロン酸、アミノフェニルボロン酸およびこれらの塩からなる群から選ばれる少なくとも一種である、請求項１１または１２に記載の安定化溶液。
【請求項１４】
糖を含む、請求項１１〜１３のいずれか一項に記載の安定化溶液。
【請求項１５】
糖が、ソルビトール、グルコース、マンニトール、フルクトース、キシリトール、エリトリトール、スクロース、トレハロース、ラクトース、およびマルトースからなる群から選ばれる少なくとも一種である、請求項１４に記載の安定化溶液。
【請求項１６】
ハプトグロビンを含む、請求項１１〜１５のいずれか一項に記載の安定化溶液。
【請求項１７】
前記検体が糞便、唾液、または尿である、請求項１１〜１６のいずれか一項に記載の安定化溶液。
【請求項１８】
前記生体に由来する検体を保存するための溶液である、請求項１１〜１７のいずれか一項に記載の安定化溶液。
【請求項１９】
生体に由来する検体中の蛋白質を検出する方法であって、
請求項１１〜１８のいずれか一項に記載の安定化溶液に、前記生体に由来する検体を添加して当該検体を含有する試料を得る工程と、
試料中の前記蛋白質を免疫学的測定方法により検出する工程と、
を備え、
前記生体に由来する検体中の蛋白質が、ヘモグロビン、ハプトグロビン、およびヘモグロビン−ハプトグロビン複合体からなる群から選ばれる少なくとも一種である、方法。
【請求項２０】
前記生体に由来する検体は、ヘモグロビンを少なくとも含み、
前記試料中の前記ヘモグロビンはハプトグロビンと複合体を形成している、請求項１９に記載の方法。
【請求項２１】
前記安定化溶液は、請求項１６に記載の安定化溶液である、請求項２０に記載の方法。
【請求項２２】
生体に由来する検体中に含まれる蛋白質を検出するためのキットであって、
請求項１１〜１８のいずれか一項に記載の安定化溶液と、
前記蛋白質を認識する抗体を含む試薬と、
を含み、
前記蛋白質が、ヘモグロビン、ハプトグロビン、およびヘモグロビン−ハプトグロビン複合体からなる群から選ばれる少なくとも一種である、キット。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、生体に由来する検体中に含まれる蛋白質を安定化する方法、生体に由来する検体中に含まれる蛋白質を安定化させるための安定化溶液、ならびに生体に由来する検体中に含まれる蛋白質を検出するための方法およびキットに関する。
【背景技術】
【０００２】
糞便、尿、唾液等の検体中に含まれる蛋白質の検出は、多くの疾患の診断に有用である。例えば糞便検体中の血液を検出する便潜血検査により、大腸癌をはじめとする消化器疾患の診断における重要な情報を得ることができる。糞便等の検体中に含まれる、ヘモグロビンやハプトグロビン、ヘモグロビン−ハプトグロビン複合体等の血液蛋白質などを検出する方法として、これらの蛋白質に対する抗体を用いて検出する免疫学的測定方法が知られている。【０００３】
潜血検査に用いる検体は、通常、被験者自身が保存溶液の入った保存容器に採取し、病院等の検査機関に輸送される。多くの場合、検体を含有する保存溶液（試料）の輸送には数日間を要し、輸送中の温度の管理は一般的に困難なために、保存上好ましくない温度条件にさらされることも多い。検体中に含まれる血液蛋白質等の蛋白質が、輸送時の温度条件等によって変性したり、検体中の細菌や酵素によって分解または修飾されたりすることで、エピトープまたはその近傍の構造が変化すると、抗体がこれらの糞便中に含まれる蛋白質を認識できなくなり、免疫学的測定法による正確な測定ができなくなる。特にヘモグロビンは溶液中で不安定であり、高温条件下では特に変性または分解しやすい。【０００４】
保存溶液中のヘモグロビンを安定化する技術としては、例えば、チメロサール、クロルヘキシジン等の抗菌剤を添加する方法（例えば、特許文献１）、プロテアーゼ阻害物質を添加する方法（例えば、特許文献２）、グリコシダーゼ型溶菌酵素を添加する方法（例えば、特許文献３）、ヘモグロビンの酵素分解産物を添加する方法（例えば、特許文献４）、リンゴ酸等の有機酸を添加する方法（例えば、特許文献５）、イミノカルボン酸を添加する方法（例えば、特許文献６）、ハロアルカンスルホン酸を添加する方法（例えば、特許文献７）等の様々な方法が提案されている。【０００５】
さらに、ヘモグロビンを安定化するために、ハプトグロビンを添加する方法も知られている（例えば、特許文献８）。ハプトグロビンは、幅広い動物の血液中に存在し、ヘモグロビンと速やかに結合し、安定なヘモグロビン−ハプトグロビン複合体（Ｈｂ−Ｈｐ複合体）を形成することが知られている。糞便等の検体を保存する保存溶液等にあらかじめハプトグロビンを添加しておくことで、糞便等の検体を加えた際に、生体に由来する検体に含まれるヘモグロビンを、安定なヘモグロビン−ハプトグロビン複合体にすることができる。【０００６】
しかしながら、ヘモグロビンは非常に不安定であることから、これらのヘモグロビンの安定化方法であっても、その変性あるいは分解を十分に防ぐには至っていない。そのため、便潜血を検出する方法として、ヘモグロビンよりも安定性にすぐれたトランスフェリンを測定する方法も知られている（例えば、特許文献９）が、血液中のトランスフェリンは、ヘモグロビンの１／６０程度しか存在しないため、感度が低いという問題がある。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００７】
【特許文献１】特開昭６３−２７１１６０号公報
【特許文献２】特開平３−２７９８５９号公報
【特許文献３】特開昭６３−２４６６６７号公報
【特許文献４】特開平１１−２１８５３３号公報
【特許文献５】特開２００３−１４７６８号公報
【特許文献６】特開２００９−０９７９５６号公報
【特許文献７】特開２０１６−１９１５８０号公報
【特許文献８】特開平１０−１３２８２４号公報
【特許文献９】特開昭６３−２４６６６８号公報
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００８】
糞便、尿、唾液等の生体由来の検体、特に糞便中には、ヘモグロビン等の蛋白質の分解や修飾を引き起こす細菌や酵素が多く存在するため、ヘモグロビン−ハプトグロビン複合体のような比較的安定性の高い蛋白質であっても、分解や修飾されてしまう場合があった。
そこで、本発明は、生体に由来する検体中に含まれる蛋白質を、分解や変性等の起こりやすい好ましくない温度条件においても安定性を高める方法を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００９】
〔１〕  生体に由来する検体中に含まれる蛋白質を安定化する方法であって、
前記生体に由来する検体中に含まれる蛋白質を、アリールボロン酸と共存させる工程を含み、
前記生体に由来する検体中に含まれる蛋白質が、ヘモグロビン、ハプトグロビン、およびヘモグロビン−ハプトグロビン複合体からなる群から選ばれる少なくとも一種である、方法。
〔２〕  アリールボロン酸が、フェニルボロン酸およびその誘導体からなる群から選ばれる少なくとも一種である、〔１〕に記載の方法。
〔３〕  アリールボロン酸が、フェニルボロン酸、ヒドロキシフェニルボロン酸、カルボキシフェニルボロン酸、アミノフェニルボロン酸およびこれらの塩からなる群から選ばれる少なくとも一種である、〔１〕〔２〕に記載の方法。
〔４〕  前記工程は、前記生体に由来する検体中に含まれる蛋白質を、前記アリールボロン酸を含む溶液中に分散させる工程であり、
前記アリールボロン酸の前記溶液中の濃度が、０．１ｍｍｏｌ／Ｌ以上である、〔１〕〜〔３〕に記載の方法。
〔５〕  前記工程は、前記生体に由来する検体中に含まれる蛋白質を、前記アリールボロン酸および糖と共存させる工程である、〔１〕〜〔４〕に記載の方法。
〔６〕  前記糖が、糖アルコール、単糖および二糖からなる群から選ばれる少なくとも一種である、〔５〕に記載の方法。
〔７〕  前記糖が、ソルビトール、グルコース、マンニトール、フルクトース、キシリトール、エリトリトール、スクロース、トレハロース、ラクトース、およびマルトースからなる群から選ばれる少なくとも一種である、〔５〕〔６〕に記載の方法。
〔８〕  前記工程は、前記生体に由来する検体中に含まれる蛋白質を、前記アリールボロン酸および前記糖を含む溶液中に分散させる工程であり、
前記糖の前記溶液中の濃度が、５ｍｍｏｌ／Ｌ以上である、〔５〕〜〔７〕に記載の方法。
〔９〕  前記生体に由来する検体は、ヘモグロビンを少なくとも含み、
前記方法は、当該ヘモグロビンと、ハプトグロビンとを接触させ、ヘモグロビンとハプトグロビンとの複合体を形成させる工程を含む、〔１〕〜〔８〕に記載の方法。
〔１０〕  前記生体に由来する検体が、糞便、唾液、または尿である、〔１〕〜〔９〕に記載の方法。【００１０】
〔１１〕  生体に由来する検体に含まれる蛋白質を安定化させるための溶液であって、
アリールボロン酸を含み、
前記生体に由来する検体に含まれる蛋白質が、ヘモグロビン、ハプトグロビン、およびヘモグロビン−ハプトグロビン複合体からなる群から選ばれる少なくとも一種である、安定化溶液。
〔１２〕  前記アリールボロン酸が、フェニルボロン酸およびその誘導体からなる群から選ばれる少なくとも一種である、〔１１〕に記載の安定化溶液。
〔１３〕  前記アリールボロン酸が、フェニルボロン酸、ヒドロキシフェニルボロン酸、カルボキシフェニルボロン酸、アミノフェニルボロン酸およびこれらの塩からなる群から選ばれる少なくとも一種である、〔１１〕〔１２〕に記載の安定化溶液。
〔１４〕  糖を含む、〔１１〕〜〔１３〕に記載の安定化溶液。
〔１５〕  糖が、ソルビトール、グルコース、マンニトール、フルクトース、キシリトール、エリトリトール、スクロース、トレハロース、ラクトース、およびマルトースからなる群から選ばれる少なくとも一種である、〔１４〕に記載の安定化溶液。
〔１６〕  ハプトグロビンを含む、〔１１〕〜〔１５〕に記載の安定化溶液。
〔１７〕  前記検体が糞便、唾液、または尿である、〔１１〕〜〔１６〕に記載の安定化溶液。
〔１８〕  前記生体に由来する検体を保存するための溶液である、〔１１〕〜〔１７〕に記載の安定化溶液。【００１１】
〔１９〕  生体に由来する検体中の蛋白質を検出する方法であって、
〔１１〕〜〔１８〕に記載の安定化溶液に、前記生体に由来する検体を添加して当該検体を含有する試料を得る工程と、
試料中の前記蛋白質を免疫学的測定方法により検出する工程と、
を備え、
前記生体に由来する検体中の蛋白質が、ヘモグロビン、ハプトグロビン、およびヘモグロビン−ハプトグロビン複合体からなる群から選ばれる少なくとも一種である、方法。
〔２０〕  前記生体に由来する検体は、ヘモグロビンを少なくとも含み、
前記試料中の前記ヘモグロビンはハプトグロビンと複合体を形成している、〔１９〕に記載の方法。
〔２１〕  前記安定化溶液は、〔１６〕に記載の安定化溶液である、〔２０〕に記載の方法。【００１２】
〔２２〕  生体に由来する検体中に含まれる蛋白質を検出するためのキットであって、
〔１１〕〜〔１８〕に記載の安定化溶液と、
前記蛋白質を認識する抗体を含む試薬と、
を含み、
前記蛋白質が、ヘモグロビン、ハプトグロビン、およびヘモグロビン−ハプトグロビン複合体からなる群から選ばれる少なくとも一種である、キット。
【発明の効果】
【００１３】
本発明によれば、生体に由来する検体中に含まれる血液蛋白質等の蛋白質を安定化することができる。いいかえれば、本発明によれば、生体に由来する検体中に含まれる血液蛋白質等の蛋白質の変性、分解や修飾を防ぐことができる。よって、本発明によれば、生体に由来する検体中に含まれる蛋白質を免疫学的測定方法により正確に測定することが可能となる。
【発明を実施するための形態】
【００１４】
以下、本発明の好適な実施形態について説明する。
【００１５】
〔生体に由来する検体中に含まれる蛋白質の安定化方法，蛋白質の安定化溶液〕
本発明の一実施形態に係る、生体に由来する検体中に含まれる蛋白質の安定化方法は、生体に由来する検体中に含まれる蛋白質を、アリールボロン酸と共存させる工程を含む。本実施形態において、生体に由来する検体中に含まれる蛋白質は、ヘモグロビン、ハプトグロビン、およびヘモグロビン−ハプトグロビン複合体からなる群から選ばれる少なくとも一種であってよい。
【００１６】
生体に由来する検体中に含まれる蛋白質を、アリールボロン酸と共存させることにより、生体に由来する検体中に含まれる蛋白質の安定性を高めることができる。蛋白質を含む生体に由来する検体は、糞便、唾液、または尿であってよく、糞便であってよい。
【００１７】
生体に由来する検体中に含まれる蛋白質を、アリールボロン酸と共存させる方法は特に限定されないが、アリールボロン酸を含む溶液中に、生体に由来する検体中に含まれる蛋白質を分散させる方法が挙げられる。ここで、「分散」には溶解および懸濁が含まれる。
アリールボロン酸を含む溶液としては、生体に由来する検体を保存するための保存溶液、検体を保存溶液に分散させた試料をさらに希釈するための希釈溶液、検体中の蛋白質を検出するためのキット等における反応溶液などが挙げられる。特に、本実施形態によれば、生体に由来する検体中に含まれる蛋白質の安定性を顕著に向上させることができるため、検体の保存溶液を好適に用いることができる。
【００１８】
アリールボロン酸は、公知のものから適宜選択することができる。アリールボロン酸は、フェニルボロン酸およびその誘導体からなる群から選ばれる少なくとも一種であってよく、フェニルボロン酸、ヒドロキシフェニルボロン酸、カルボキシフェニルボロン酸、アミノフェニルボロン酸およびこれらの塩からなる群から選ばれる少なくとも一種であってよく、フェニルボロン酸、３−ヒドロキシフェニルボロン酸、２−カルボキシフェニルボロン酸、３−カルボキシフェニルボロン酸、４−カルボキシフェニルボロン酸、３−アミノフェニルボロン酸およびこれらの塩からなる群から選ばれる少なくとも一種であってよく、特に、フェニルボロン酸、３−ヒドロキシフェニルボロン酸、３−カルボキシフェニルボロン酸、３−アミノフェニルボロン酸およびこれらの塩からなる群から選ばれる少なくとも一種であってよい。
【００１９】
上記溶液中のアリールボロン酸の濃度は、下限値が０．１ｍｍｏｌ／Ｌ以上、０．２ｍｍｏｌ／Ｌ以上、または０．５ｍｍｏｌ／Ｌ以上であることが好ましい。アリールボロン酸の濃度が上記下限値以上であると、生体に由来する検体中に含まれる蛋白質の安定化効果がより優れたものとなる。
また、上記溶液中のアリールボロン酸の濃度は、上限値が１００ｍｍｏｌ／Ｌ以下、５０ｍｍｏｌ／Ｌ以下、または３０ｍｍｏｌ／Ｌ以下であることが好ましい。アリールボロン酸の濃度が高くなりすぎると、生体に由来する検体中に含まれる蛋白質を免疫学的測定法にて測定したときに、見かけ上の回収率が低下することがある。これは、生体に由来する検体中に含まれる蛋白質の安定化効果が下がるのではなく、高濃度のアリールボロン酸が免疫学的測定に悪影響を与えているものと考えられる。しかし、アリールボロン酸の濃度が上記上限値以下であると、免疫学的測定法への悪影響が抑えられ、より正確に測定することができる。
ただし、溶液中に高濃度のアリールボロン酸が含まれる場合であっても、後述する高濃度の糖と共存する場合には、アリールボロン酸と糖とが複合体を形成することで、高濃度のアリールボロン酸による免疫学的測定方法への悪影響が抑制される。そのため、高濃度の糖と共存する場合には、アリールボロン酸の濃度が５０ｍｍｏｌ／Ｌ程度、さらには１００ｍｍｏｌ／Ｌ程度であっても、免疫学的測定法による正確な測定が確保される。
【００２０】
本実施形態のより具体的な一態様として、アリールボロン酸は、生体に由来する検体中に含まれる蛋白質を安定化させるための溶液（安定化溶液）に含有させることができる。例えば、安定化溶液が後述するハプトグロビンを含まない場合、アリールボロン酸の安定化溶液中の濃度は、下限値が０．１ｍｍｏｌ／Ｌ以上、０．２ｍｍｏｌ／Ｌ以上、または０．５ｍｍｏｌ／Ｌ以上とすることができる。また、アリールボロン酸の安定化溶液中の濃度は、上限値が２０ｍｍｏｌ／Ｌ以下、１０ｍｍｏｌ／Ｌ以下、または５ｍｍｏｌ／Ｌ以下とすることができる。
【００２１】
上記工程は、生体に由来する検体中に含まれる蛋白質を、上記アリールボロン酸とともに、さらに糖と共存させる工程とすることができる。アリールボロン酸に加え、さらに糖と共存させることにより、生体に由来する検体中に含まれる蛋白質の安定性をさらに高めることができる。生体に由来する検体中に含まれる蛋白質を、糖と共存させる方法は、例えば、上記アリールボロン酸を含む溶液に、糖をさらに含有させる方法が挙げられる。
【００２２】
糖は、公知のものから適宜選択することができ、例えば、ソルビトール、マンニトール、キシリトール、エリトリトール等の糖アルコール；グルコース、フルクトース、マンノース、ガラクトース等の単糖；スクロース、トレハロース、ラクトース、マルトース等の二糖；オリゴ糖；などが挙げられる。
糖は、糖アルコール、単糖および二糖からなる群から選ばれる少なくとも一種であってよく、ソルビトール、グルコース、マンニトール、フルクトース、キシリトール、エリトリトール、スクロース、トレハロース、ラクトース、およびマルトースからなる群から選ばれる少なくとも一種であってよく、ソルビトール、マンニトール、フルクトース、およびスクロースからなる群から選ばれる少なくとも一種であってよい。
【００２３】
しかしながら、グルコースやフルクトース等の、溶液中でアルデヒド基やケトン基を形成する糖（還元糖）は、生体に由来する検体中に含まれる蛋白質やこれら蛋白質の安定化剤として溶液に添加されるアルブミン等と反応して（メイラード反応）蛋白質を修飾し、褐色物質（メラノイジン）を生成するため、蛋白質と反応しない糖が好ましい。生体に由来する検体中に含まれる蛋白質のエピトープまたはその近傍が還元糖により修飾され構造が変化すると、抗体によっては、これらの生体に由来する検体中に含まれる蛋白質を認識できなくなり、免疫学的測定法による正確な測定ができなくなることがある。そのため、本実施形態のより具体的な一態様としては、蛋白質と反応しない非還元糖を用いることがより好ましい。非還元糖は、ソルビトール、マンニトール、キシリトール、エリトリトール、トレハロース、スクロース、およびラクトースからなる群から選ばれる少なくとも一種であってよく、ソルビトール、マンニトールおよびスクロースからなる群から選ばれる少なくとも一種であってよい。
【００２４】
糖の濃度は、下限値が５ｍｍｏｌ／Ｌ以上、１０ｍｍｏｌ／Ｌ以上、または２５ｍｍｏｌ／Ｌ以上であることが好ましい。糖の濃度が上記下限値以上であると、アリールボロン酸と相乗的に作用し、生体に由来する検体中に含まれる蛋白質の安定化効果がより一層優れたものとなる。
糖の濃度の上限値は、糖アルコールおよび単糖では、１０００ｍｍｏｌ／Ｌ以下、５００ｍｍｏｌ／Ｌ以下、または１００ｍｍｏｌ／Ｌ以下であってよく、二糖では、５００ｍｍｏｌ／Ｌ以下、２５０ｍｍｏｌ／Ｌ以下、または１００ｍｍｏｌ／Ｌ以下であってよい。糖の濃度が上記上限値以下であると、安定化溶液の粘度が高くなりすぎないため測定に支障が生じ難い。
【００２５】
生体に由来する検体中に含まれる蛋白質を保存するための安定化溶液は、ｐＨを５〜１０、好ましくは６〜８にたもてる緩衝液であればよく、２−モルホリノエタンスルホン酸（ＭＥＳ）、ヒドロキシエチルピペラジン−２−エタンスルホン酸（ＨＥＰＥＳ）、ピペラジン−ビス（２−エタンスルホン酸）（ＰＩＰＥＳ）等のグッド緩衝液を含む緩衝液であってよく、リン酸緩衝液、トリス緩衝液またはグリシン緩衝液であってもよい。
【００２６】
安定化溶液は、抗菌剤、ｐＨ調整剤、イオン強度を調節するために塩類、界面活性剤、凝集促進剤、蛋白質の保存時に使用される公知の安定化剤等の添加剤をさらに含んでもよい。抗菌剤は、アジ化ナトリウム、抗生物質、溶菌酵素を含む。添加剤としては、ヒスチジン、リジン等のアミノ酸、アルブミン、プロテアーゼ阻害剤、エチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ）等のキレート剤など、蛋白質を安定化する作用を持つことが知られている公知の物質が含まれる。
【００２７】
上述の安定化方法又は安定化溶液によれば、アリールボロン酸の作用により、またはアリールボロン酸と糖との相乗作用により、生体に由来する検体中に含まれる蛋白質の安定性を高めることができる。いいかえれば、上記の安定化方法又は安定化溶液によれば、生体に由来する検体中に含まれる蛋白質の変性、分解または修飾を防ぐことができ、生体に由来する検体中に含まれる蛋白質のエピトープ及びその周辺部位の構造を維持することができる。そのため、生体に由来する検体中に含まれる蛋白質を免疫学的測定方法により検出する場合、検出の正確性の向上が期待できる。
【００２８】
本実施形態のより具体的な一態様は、ヘモグロビンを少なくとも含む生体に由来する検体を、ハプトグロビンと接触させることにより、ヘモグロビン−ハプトグロビン複合体を形成させる工程を含んでもよい。この場合において、ヘモグロビンを含む生体に由来する検体は、糞便、唾液、または尿であってよく、糞便であってよい。糞便中には、ヘモグロビンの分解や修飾を引き起こす細菌や酵素が特に多く存在するため、本実施形態の方法が特に有用である。
【００２９】
ヘモグロビンを含む生体に由来する検体とハプトグロビンとはどのように接触させてもよいが、ハプトグロビンを含む前記保存溶液中に、ヘモグロビンを含む生体に由来する検体を添加するのが好ましい。生体に由来する検体中に含まれるヘモグロビンは、保存溶液中のハプトグロビンと速やかに反応し、ヘモグロビン−ハプトグロビン複合体を形成する。そして、生体に由来する検体を添加した保存溶液をそのまま保存することで、ヘモグロビン−ハプトグロビン複合体を安定的に保存することができる。なお、ヘモグロビンとハプトグロビンとの複合体形成では、ヘモグロビンは、α鎖とβ鎖が二つずつ会合した４量体（α２β２）から二つの２量体（αβ）に乖離するが、この現象は、本明細書における「分解」または「変性」には該当しない。
【００３０】
本実施形態に係る、ヘモグロビンを含む生体に由来する検体中に含まれる蛋白質を安定化させるための安定化溶液は、アリールボロン酸、またはアリールボロン酸および糖を含む上述の安定化溶液に、ハプトグロビンをさらに添加したものであることが好ましい。安定化溶液中のハプトグロビンの濃度は、生体に由来する検体の量にもよるが、例えば、０．０５単位／Ｌ〜５０単位／Ｌ、０．１単位／Ｌ〜１０単位／Ｌ、または、０．２単位／Ｌ〜２単位／Ｌである。ここで、１単位は、１ｍｇのヘモグロビンに結合するハプトグロビンの量を表す。上記範囲のハプトグロビン濃度は、生体に由来する検体中の全てのヘモグロビンを、ヘモグロビン−ハプトグロビン複合体にするのに十分な濃度である。
【００３１】
ここで、安定化溶液が後述するハプトグロビンを含む場合、上記アリールボロン酸の安定化溶液中の濃度は、下限値が０．１ｍｍｏｌ／Ｌ以上、０．２ｍｍｏｌ／Ｌ以上、０．５ｍｍｏｌ／Ｌ以上、１ｍｍｏｌ／Ｌ以上、または５ｍｍｏｌ／Ｌ以上とすることができる。アリールボロン酸の濃度が上記下限値以上であると、生体に由来する検体中に含まれるヘモグロビンのアリールボロン酸による安定化効果が、ハプトグロビンによる安定化効果と相まって、より顕著なものとなる。
また、アリールボロン酸の安定化溶液中の濃度は、上限値が１００ｍｍｏｌ／Ｌ以下、５０ｍｍｏｌ／Ｌ以下、または３０ｍｍｏｌ／Ｌ以下とすることができる。アリールボロン酸の濃度が上記上限値以下であると、免疫学的測定法への悪影響が抑えられ、より正確な測定が可能となる。
【００３２】
上述の一態様に係る安定化方法または安定化溶液によれば、生体に由来する検体中に含まれるヘモグロビンを、ヘモグロビン−ハプトグロビン複合体の形で、安定的に保存することができる。いいかえれば、上述の安定化方法または安定化溶液によれば、生体に由来する検体中に含まれるヘモグロビンの変性、分解または修飾を防ぐことができ、ヘモグロビンのエピトープおよびその周辺部位の構造を保持することができる。したがって、生体に由来する検体中に含まれるヘモグロビンを免疫学的測定方法により測定する場合、検出の正確性の向上が期待できる。
【００３３】
〔生体に由来する検体中に含まれる蛋白質の検出方法，検出キット〕
本発明の一実施形態により提供される、生体に由来する検体中に含まれる蛋白質を検出する方法は、当該蛋白質を安定化させるための上述の安定化溶液に生体に由来する検体を添加して、生体に由来する検体を含む試料を得る工程と、試料中の蛋白質を免疫学的測定方法により検出する工程と、を備える。
また、本発明の他の一実施形態により提供される、生体に由来する検体中に含まれる蛋白質を検出するためのキットは、上述の安定化溶液と、生体に由来する検体中に含まれる蛋白質を認識する抗体を含む試薬と、を含む。
上記検出方法または検出キットにおいて、生体に由来する検体中に含まれる蛋白質は、ヘモグロビン、ハプトグロビン、およびヘモグロビン−ハプトグロビン複合体から選ばれる少なくとも一種であってよい。
【００３４】
本実施形態で用いられる安定化溶液としては、生体に由来する検体を保存するための保存溶液、検体を保存溶液に分散させた試料をさらに希釈するための希釈溶液、検体中の蛋白質を検出するためのキット等における反応溶液などが挙げられる。キット等における反応溶液としては、後述する免疫学的測定方法における抗体を含有する溶液のほか、試料と混合し測定環境を調整するための溶液などが含まれる。
免疫学的測定方法は、生体に由来する検体中に含まれる蛋白質に対する抗体を利用する方法であり、公知の免疫学的測定手法を使用することができる。免疫学的測定方法は、例えば、ラテックス凝集法や金コロイド凝集法等の免疫凝集法、イムノクロマトグラフ法、またはＥＬＩＳＡ法であってよい。
【００３５】
生体に由来する検体中に含まれる蛋白質に対する抗体に制限はなく、ポリクローナル抗体であっても、モノクローナル抗体であってもよく、生体に由来する検体中に含まれる蛋白質を認識可能な、生体に由来する検体中に含まれる蛋白質に対する抗体の断片であってもよい。
生体に由来する検体中に含まれる蛋白質に対する抗体は、測定対象となる蛋白質を認識するものであればよく、抗ヘモグロビン抗体、抗ハプトグロビン抗体、抗ヘモグロビン−ハプトグロビン複合体抗体であってよい。これらの抗体は、常法により製造することができる。
【００３６】
生体に由来する検体中に含まれる蛋白質、例えばヘモグロビンの検出は、一例として、次のように行うことができる。まず、保存溶液の入った容器に検体を添加し、試料とする。容器内で検体を任意の時間保存してもよく、また検体を含有する保存溶液をろ過して試料としてもよい。次いで、試料中のヘモグロビンを、免疫学的測定方法、例えばラテックス凝集法により検出する。より具体的には、抗ヘモグロビン抗体を表面に担持させたラテックス粒子を含む試薬を、試料に加える。ラテックス粒子を含む試薬を加える前に、試料を希釈液により希釈してもよく、また反応溶液を添加してもよい。本態様において、アリールボロン酸を含む上述した安定化溶液は、保存溶液、希釈液、反応溶液のいずれであってもよい。保存溶液が、上述した安定化溶液であると、特に好ましく、この場合において、希釈液および／または反応溶液は、アリールボロン酸を含んでも含まなくてもよい。
ヘモグロビンは、生体に由来する検体中において、検体中のハプトグロビンと複合体を形成しているものもあれば、遊離したヘモグロビンとして存在しているものもある。そのため、ヘモグロビンの検出に用いる抗ヘモグロビン抗体は、遊離したヘモグロビンのエピトープを認識可能であるとともに、ヘモグロビン−ハプトグロビン複合体におけるヘモグロビンのエピトープをも認識可能であり、かつ、ハプトグロビンと交差反応を起こさないことが好ましい。
試料中にヘモグロビンが存在する場合、抗ヘモグロビン抗体がヘモグロビンを認識し、抗体を担持しているラテックス粒子が凝集する。凝集による濁度の変化を測定し、濃度既知のヘモグロビンを含むキャリブレータを用いて作成した検量線により、試料中のヘモグロビン濃度を求める。また、キャリブレータのヘモグロビンの濃度に基づいて作成した検量線により、試料中のヘモグロビンの濃度を求めることもできる。
【００３７】
上記安定化溶液がハプトグロビンを含む場合においては、ヘモグロビンの検出は、例えば、次のように行うことができる。まず、保存溶液の入った容器に検体を添加し、試料とする。容器内で検体を任意の時間保存してもよく、また、検体を含有する保存溶液をろ過して試料としてもよい。次いで、試料中のヘモグロビンを、免疫学的測定方法、例えばラテックス凝集法により検出する。より具体的には、抗ヘモグロビン抗体を表面に担持させたラテックス粒子を含む試薬を、試料に加える。ラテックス粒子を含む試薬を加える前に、試料を希釈液により希釈してもよく、また反応溶液を添加してもよい。
本態様において、アリールボロン酸およびハプトグロビンを含む安定化溶液は、保存溶液、希釈液、反応溶液のいずれであってもよい。
保存溶液が、アリールボロン酸およびハプトグロビンを含む安定化溶液であると、特に好ましく、この場合において、希釈液および／または反応溶液は、ハプトグロビンを含んでも含まなくてもよく、さらには、アリールボロン酸を含んでも含まなくてもよい。
本態様においては、検体中にヘモグロビンが存在する場合、ヘモグロビンは、安定化溶液に含まれるハプトグロビンと反応し、ヘモグロビン−ハプトグロビン複合体を形成する。検体中の全てのヘモグロビンが複合体を形成する必要はなく、検体を含有する安定化溶液（試料）には、ハプトグロビンと複合体を形成していないヘモグロビンが存在してもよいが、検体中の全てのヘモグロビンがハプトグロビンと複合体を形成していることが好ましい。
抗ヘモグロビン抗体は、ヘモグロビン−ハプトグロビン複合体におけるヘモグロビンのエピトープを認識可能であり、かつ、ハプトグロビンと交差反応を起こさないことが好ましい。
試料中にヘモグロビンが存在する場合、抗ヘモグロビン抗体がヘモグロビン（ハプトグロビンと複合体を形成したヘモグロビンを含む）を認識し、抗体を担持しているラテックス粒子が凝集する。凝集による濁度の変化を測定し、ヘモグロビン濃度既知のヘモグロビン−ハプトグロビン複合体を含むキャリブレータを用いて作成した検量線により、試料中のヘモグロビン濃度を求める。また、キャリブレータのヘモグロビン−ハプトグロビン複合体の濃度に基づいて作成した検量線により、試料中のヘモグロビン−ハプトグロビン複合体の濃度を求めることもできる。
【００３８】
以上説明した実施形態は、本発明の理解を容易にするために記載されたものであって、本発明を限定するために記載されたものではない。したがって、上記実施形態に開示された各要素は、本発明の技術的範囲に属する全ての設計変更や均等物をも含む趣旨である。
【実施例】
【００３９】
実施例１
４０ｍｍｏｌ／ＬのＨＥＰＥＳ（ｐＨ６．８）、０．１％のＢＳＡ、０．１％のＮａＮ３、１単位／Ｌのハプトグロビン、および０〜１００ｍｍｏｌ／Ｌのフェニルボロン酸を添加した保存溶液を調製した。ヘモグロビンを添加した糞便検体を、糞便濃度が０．５％となるように保存溶液に加えた試料を、３７℃で、０、７、１４および２１日保存した。なお、糞便検体には、試料中のヘモグロビン濃度が約３００μｇ／Ｌとなる量のヘモグロビンを添加した。ヘモグロビンを添加した糞便検体に代えて、試料中のヘモグロビン濃度が３００μｇ／Ｌとなるようにヘモグロビンを保存溶液に添加した、糞便検体を含まない試料を、同様に保存した。保存した試料中のヘモグロビン（Ｈｂ）濃度（μｇ／Ｌ）を、ラテックス凝集法により測定した。【００４０】
ヘモグロビンの濃度は、測定試薬として「ＯＣ−ヘモディア（登録商標）オートＩＩＩ‘栄研’」（栄研化学株式会社製）、測定装置として「ＯＣ−センサーＤＩＡＮＡ」（栄研化学株式会社製）を用いて測定した。上記測定試薬は、抗ヒトヘモグロビンウサギポリクローナル抗体を担持させたラテックス粒子を含む。【００４１】
測定したヘモグロビンの濃度から、糞便検体を保存溶液に加えた直後のヘモグロビン濃度（すなわち、糞便検体を加えてから０日後の濃度）に対する回収率（％）を算出した。結果を表１に示す。表１から明らかなように、糞便１、糞便２および糞便３のいずれの試料においても、フェニルボロン酸を０．５ｍｍｏｌ／Ｌ以上の濃度で添加することにより、試料中のヘモグロビンの回収率が向上した。ヘモグロビンの回収率はフェニルボロン酸濃度に依存して向上し、フェニルボロン酸濃度１５ｍｍｏｌ／Ｌで最大となり、５０ｍｍｏｌ／Ｌ以上の添加では見かけ上の回収率が低下した。糞便検体を含まない試料においては、フェニルボロン酸の添加による回収率の向上は見られない。これらの結果は、フェニルボロン酸が、糞便を含む試料中のヘモグロビンを安定化することを示している。なお、試料中のヘモグロビンは、保存溶液中に含まれるハプトグロビンと結合したヘモグロビン−ハプトグロビン複合体として存在するため、上記結果は、フェニルボロン酸が、ヘモグロビン−ハプトグロビン複合体を安定化したことを意味する。【００４２】
【表１】
2019168109.tif 000002
【００４３】
実施例２
実施例１の保存溶液のフェニルボロン酸に替えて、２−カルボキシフェニルボロン酸（２−ＣＰＢＡ）、３−カルボキシフェニルボロン酸（３−ＣＰＢＡ）、４−カルボキシフェニルボロン酸（４−ＣＰＢＡ）、３−ヒドロキシフェニルボロン酸（３−ＨＰＢＡ）および３−アミノフェニルボロン酸（３−ＡＰＢＡ）をそれぞれ１５ｍｍｏｌ／Ｌずつ添加した保存溶液を調製し、実施例１と同様に試験した。比較例として、アリールボロン酸を添加しない保存溶液を調製して、同様に試験した。結果を表２に示す。表２から明らかなように、他のアリールボロン酸を用いた場合であっても、アリールボロン酸を添加しない比較例と比べて、糞便１、糞便２および糞便３のいずれの糞便検体においても、試料中のヘモグロビンの回収率が向上した。【００４４】
【表２】
2019168109.tif 000003
【００４５】
実施例３
実施例１の保存溶液のフェニルボロン酸の濃度を１５ｍｍｏｌ／Ｌに固定して、５０ｍｍｏｌ／Ｌもしくは１００ｍｍｏｌ／Ｌの糖（ソルビトール、スクロース、トレハロース、グルコース、フルクトース、またはマンニトール）をさらに添加した保存溶液、または糖を添加しない保存溶液を調製し、実施例１と同様に試験した。比較例として、フェニルボロン酸および糖を添加しない保存溶液を調製して、同様に試験した。結果を表３に示す。表３から明らかなように、フェニルボロン酸に、ソルビトール、マンニトール、スクロース、またはフルクトースをさらに添加した場合、糞便１、糞便２および糞便３のいずれの糞便検体においても、試料中のヘモグロビンの回収率がさらに向上し、特にソルビトールおよびマンニトールで顕著に回収率が向上した。しかし、トレハロース、またはグルコースでは、回収率の向上が見られない糞便検体（糞便３）も認められた。これらの結果は、フェニルボロン酸に、糖をさらに添加することで、糞便を含む試料中のヘモグロビンの安定性を、さらに向上することができるが、添加する糖の種類により、効果に差異があることを示している。ソルビトール、スクロース、トレハロース、グルコース、フルトース、またはマンニトールの中では、ソルビトールおよびマンニトールの効果が顕著であり、特にソルビトールは糞便検体（糞便１）において回収率の低下がまったく見られなかった。【００４６】
【表３】
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【００４７】
実施例４
フェニルボロン酸を含まない実施例１の保存溶液に、１００ｍｍｏｌ／Ｌの、ソルビトール、スクロース、トレハロース、グルコース、フルクトース、またはマンニトールを添加した保存溶液を調製し、実施例１と同様に試験した。比較のため、これらの糖を添加しないで、同様に試験した。結果を表４に示す。表４から明らかなように、フェニルボロン酸を含まない保存溶液に、ソルビトール、スクロース、トレハロース、グルコース、またはフルクトースを添加しても、糞便検体を含む試料中のヘモグロビンの回収率は向上しない。この結果は、ソルビトール、スクロース、トレハロース、グルコース、またはフルクトース等の糖単独では、糞便を含む試料中のヘモグロビンを安定化しないことを示しており、フェニルボロン酸と糖がともに存在する必要があることを示している。【００４８】
【表４】
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【００４９】
実施例５
実施例１の保存溶液のフェニルボロン酸を１５ｍｍｏｌ／Ｌに固定して、１０〜５００ｍｍｏｌ／Ｌのソルビトール、もしくは１０〜２５０ｍｍｏｌ／Ｌのスクロースを添加した保存溶液、または糖を添加しない保存溶液を調製し、実施例１と同様に試験した。比較例として、フェニルボロン酸および糖を添加しない保存溶液を調製して、同様に試験した。結果を表５に示す。表５から明らかなように、糞便１、糞便２および糞便３のいずれの試料においても、ソルビトール、またはスクロースの添加濃度に依存して、糞便を含む試料中のヘモグロビンの回収率は向上し、２５ｍｍｏｌ／Ｌ以上の添加で一定化した。【００５０】
【表５】
2019168109.tif 000006
【００５１】
実施例６
実施例１の保存溶液のフェニルボロン酸に替えて、３−カルボキシフェニルボロン酸（３−ＣＰＢＡ）、３−ヒドロキシフェニルボロン酸（３−ＨＰＢＡ）および３−アミノフェニルボロン酸（３−ＡＰＢＡ）をそれぞれ１５ｍｍｏｌ／Ｌずつ添加し、１００ｍｍｏｌ／Ｌの、ソルビトール、スクロース、またはマンニトールを添加した保存溶液を調製し、実施例１と同様に試験した。比較例として、アリールボロン酸を添加しない保存溶液を調製して、同様に試験した。結果を表６に示す。表６から明らかなように、他のアリールボロン酸を用いた場合であっても、ソルビトール、スクロース、またはマンニトールをさらに添加した場合、糞便１、糞便２および糞便３のいずれの糞便検体においても、試料中のヘモグロビンの回収率がさらに向上し、糞便を含む試料中のヘモグロビンの安定性を相乗的に高めることできると認められた。【００５２】
【表６】
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【００５３】
実施例７
実施例１の保存溶液のフェニルボロン酸を０〜５０ｍｍｏｌ／Ｌとし、１００ｍｍｏｌ／Ｌの、ソルビトール、またはマンニトールを添加した保存溶液を調製し、実施例１と同様に試験した。結果を表７に示す。表７から明らかなように、糖を添加した保存溶液においては、フェニルボロン酸を５０ｍｍｏｌ／Ｌ添加しても見かけ上の回収率の低下が見られない。この理由は、アリールボロン酸は（高濃度において）免疫凝集反応を阻害する性質を有しているものの、高濃度のアリールボロン酸が存在すると免疫学的測定方法に悪影響を与え見かけ上の回収率が低下する一方で、さらに高濃度の糖が共存する場合には、アリールボロン酸と糖とが複合体を形成することで、高濃度のアリールボロン酸による免疫学的測定方法への悪影響が抑制されるものと考えられる。【００５４】
【表７】
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【００５５】
実施例８
４０ｍｍｏｌ／ＬのＨＥＰＥＳ（ｐＨ６．８）、０．１％のＢＳＡ、０．１％のＮａＮ３、および０〜２．５ｍｍｏｌ／Ｌのフェニルボロン酸を添加した保存溶液を調製した。また、フェニルボロン酸に替えて、３−カルボキシフェニルボロン酸（３−ＣＰＢＡ）、３−ヒドロキシフェニルボロン酸（３−ＨＰＢＡ）および３−アミノフェニルボロン酸（３−ＡＰＢＡ）をそれぞれ０．５ｍｍｏｌ／Ｌずつ添加した保存溶液を合わせて調製した。ヘモグロビンを添加した糞便検体を、糞便濃度が０．５％となるように保存溶液に加えた試料を、３７℃で、０、１６、３８および６２時間保存した。なお、糞便検体には、試料中のヘモグロビン濃度が約３００μｇ／Ｌとなる量のヘモグロビンを添加した。ヘモグロビンを添加した糞便検体に代えて、試料中のヘモグロビン濃度が３００μｇ／Ｌとなるようにヘモグロビンを保存溶液に添加した、糞便検体を含まない試料を、同様に保存した。保存した試料中のヘモグロビン（Ｈｂ）濃度（μｇ／Ｌ）を、実施例１と同じ測定試薬および測定装置を用い、ラテックス凝集法により測定した。【００５６】
本実施例では、保存溶液にハプトグロビンが含まれていないため、実施例１〜７と比べるとヘモグロビンは早く分解してしまうが、アリールボロン酸によるヘモグロビンの安定化効果は、本実施例においても認められた。すなわち、表８から明らかなように、糞便１、糞便２および糞便３のいずれの試料においても、アリールボロン酸を０．２５ｍｍｏｌ／Ｌ以上の濃度で添加することにより、試料中のヘモグロビンの回収率が向上した。なお、実施例１〜７と異なり保存溶液中にハプトグロビンが含まれていないため、試料中のヘモグロビンの大半はハプトグロビンと複合体を形成せずに存在していると認められる。そのため、上記結果は、アリールボロン酸が、ハプトグロビンと複合体を形成していないヘモグロビンについても安定化したことを意味する。【００５７】
【表８】
2019168109.tif 000009
【００５８】
実施例９
実施例８の保存溶液のフェニルボロン酸の濃度を０．５ｍｍｏｌ／Ｌに固定して、１０〜２５０ｍｍｏｌ／Ｌのソルビトールもしくはスクロース、または５０〜１００ｍｍｏｌ／Ｌのトレハロース、グルコース、フルクトースもしくはマンニトールをさらに添加した保存溶液を調製し、実施例８と同様に試験した。また、フェニルボロン酸を添加し糖を添加しない保存溶液、さらに比較例として、フェニルボロン酸および糖を添加しない保存溶液を調製して、同様に試験した。結果を表９Ａおよび９Ｂに示す。表９Ａおよび９Ｂから明らかなように、ハプトグロビンを含まない保存溶液であっても、フェニルボロン酸に、ソルビトール、スクロース、トレハロース、グルコース、フルクトースまたはマンニトールをさらに添加した場合、糞便１、糞便２および糞便３のいずれの糞便検体においても、試料中のヘモグロビンの回収率がさらに向上した。また、フェニルボロン酸を含まない保存溶液に糖を添加しても、糞便検体を含む試料中のヘモグロビンの回収率は向上しない。これらの結果は、ハプトグロビンを含まない保存溶液であっても、実施例２〜７と同様にフェニルボロン酸と各種糖との相乗効果が得られることを示している。【００５９】
【表９Ａ】
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【００６０】
【表９Ｂ】
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【００６１】
実施例８の保存溶液のフェニルボロン酸の濃度を０．５ｍｍｏｌ／Ｌに固定し、またフェニルボロン酸に替えて、３−カルボキシフェニルボロン酸（３−ＣＰＢＡ）、３−ヒドロキシフェニルボロン酸（３−ＨＰＢＡ）および３−アミノフェニルボロン酸（３−ＡＰＢＡ）をそれぞれ０．５ｍｍｏｌ／Ｌずつ添加し、１００ｍｍｏｌ／Ｌのソルビトールまたはスクロースを添加した保存溶液を調製し、実施例８と同様に試験した。比較例として、アリールボロン酸を添加しない保存溶液を調製して、同様に試験した。結果を表１０に示す。表１０から明らかなように、ハプトグロビンを含まない保存溶液であっても、各種のアリールボロン酸と糖との併用により試料中のヘモグロビンの回収率がさらに向上し、糞便を含む試料中のヘモグロビンの安定性を相乗的に高めることできると認められた。【００６２】
【表１０】
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【国際調査報告】
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