(57)【要約】  分析制御装置の第１の送液制御部は、試料分析時において、分析カラムおよび合流部を通して移動相を蛍光検出器に供給するように第１の送液部を制御する。試料導入制御部は、試料分析時において、試料導入部により分析カラムの上流で移動相に試料を導入するように試料導入部を制御する。第２の送液制御部は、試料分析時において、移動相の供給開始時点よりも後でかつ移動相に導入された試料が合流部に到達する以前に蛍光反応液が合流部に到達するように第２の送液部に蛍光反応液の供給を開始させ、試料が合流部を通過した以後に第２の送液部に蛍光反応液の供給を停止させる。生成部は、試料分析時において、蛍光検出器の出力信号に基づいてクロマトグラムを生成する。
2020129223.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
第１の送液部、第２の送液部、試料導入部、分析カラム、合流部および蛍光検出器を含む液体クロマトグラフ分析部を制御する分析制御装置であって、
試料分析時において、前記分析カラムおよび前記合流部を通して移動相を前記蛍光検出器に供給するように前記第１の送液部を制御する第１の送液制御部と、
前記試料分析時において、前記合流部を通して蛍光反応液を前記蛍光検出器に供給するように前記第２の送液部を制御する第２の送液制御部と、
前記試料分析時において、前記試料導入部により前記分析カラムの上流で前記移動相に試料を導入するように前記試料導入部を制御する試料導入制御部と、
前記試料分析時において、前記蛍光検出器の出力信号に基づいてクロマトグラムを生成する生成部とを備え、
前記第２の送液制御部は、前記移動相の供給開始時点よりも後でかつ前記移動相に導入された前記試料が前記合流部に到達する以前に前記蛍光反応液が前記合流部に到達するように前記第２の送液部に前記蛍光反応液の供給を開始させ、前記試料が前記合流部を通過した以後に前記第２の送液部に前記蛍光反応液の供給を停止させる、分析制御装置。
【請求項２】
分析条件決定時において、前記第２の送液部が前記蛍光反応液の供給を開始する時点から前記第２の送液部が前記蛍光反応液の供給を終了する時点までの期間を供給期間として決定する供給期間決定部をさらに備え、
前記第２の送液制御部は、前記試料分析時において、前記決定された供給期間の開始時点で前記第２の送液部に前記蛍光反応液の供給を開始させ、前記供給期間の終了時点で前記第２の送液部に前記蛍光反応液の供給を停止させる、請求項１記載の分析制御装置。
【請求項３】
前記第１および第２の送液制御部は、前記分析条件決定時において、前記分析カラムおよび前記合流部を通して前記移動相を前記蛍光検出器に供給するように前記第１の送液部を制御するとともに、前記合流部を通して前記蛍光反応液を前記蛍光検出器に供給するように前記第１および第２の送液部を制御し、
前記試料導入制御部は、前記分析条件決定時において、前記試料導入部により前記分析カラムの上流で前記移動相に前記試料を導入するように前記試料導入部を制御し、
前記供給期間決定部は、
前記分析条件決定時において、前記生成部より生成されたクロマトグラムに基づいて前記試料が前記移動相に導入された時点を基準として前記試料中の成分のピークが出現した期間をピーク出現期間として検出するピーク期間検出部と、
前記分析条件決定時において、前記合流部から前記蛍光検出器に供給される前記移動相、前記試料および前記蛍光反応液の合計の流量と、前記合流部から前記蛍光検出器までの流路の容積とに基づいて、前記合流部から前記蛍光検出器への前記試料の移動時間を算出する時間算出部と、
前記分析条件決定時において、前記ピーク期間検出部により検出されたピーク出現期間よりも前記時間算出部により算出された移動時間だけ前の期間を含む期間を、前記供給期間として算出する期間算出部とを含む、請求項１または２記載の分析制御装置。
【請求項４】
第１の送液部、第２の送液部、試料導入部、分析カラム、合流部および蛍光検出器を含む液体クロマトグラフ分析部と、
前記液体クロマトグラフ分析部を制御する請求項１または２記載の分析制御装置とを備えた、液体クロマトグラフ分析システム。
【請求項５】
分析カラム、合流部および蛍光検出器を含む液体クロマトグラフ分析部による分析方法であって、
試料分析時において、前記分析カラムおよび前記合流部を通して移動相を前記蛍光検出器に供給するステップと、
前記試料分析時において、前記合流部を通して蛍光反応液を前記蛍光検出器に供給するステップと、
前記試料分析時において、前記分析カラムの上流で前記移動相に試料を導入するステップと、
前記試料分析時において、前記蛍光検出器の出力信号に基づいてクロマトグラムを生成するステップとを含み、
前記合流部を通して前記蛍光反応液を前記蛍光検出器に供給するステップは、前記移動相の供給開始時点よりも後でかつ前記移動相に導入された前記試料が前記合流部に到達する以前に前記蛍光反応液が前記合流部に到達するように前記蛍光反応液の供給を開始し、前記試料が前記合流部を通過した以後に前記蛍光反応液の供給を停止することを含む、分析方法。
【請求項６】
分析条件決定時において、前記蛍光反応液の供給を開始する時点から前記蛍光反応液の供給を終了する時点までの期間を供給期間として決定するステップをさらに含み、
前記蛍光反応液を前記分析カラムに供給するステップは、前記試料分析時において、前記決定された供給期間の開始時点で前記蛍光反応液の供給を開始し、前記供給期間の終了時点で前記蛍光反応液の供給を停止することを含む、請求項５記載の分析方法。
【請求項７】
前記供給期間を決定するステップは、
前記分析条件決定時において、前記生成されたクロマトグラムに基づいて前記試料が前記移動相に導入された時点を基準として前記試料中の成分のピークが出現した期間をピーク出現期間として検出することと、
前記分析条件決定時において、前記合流部から前記蛍光検出器に供給される前記移動相、前記試料および前記蛍光反応液の合計の流量と、前記合流部から前記蛍光検出器までの流路の容積とに基づいて、前記合流部から前記蛍光検出器への前記試料の移動時間を算出することと、
前記分析条件決定時において、前記検出されたピーク出現期間よりも前記算出された移動時間だけ前の期間を含む期間を、前記供給期間として算出することとを含む、請求項６記載の分析方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、分析制御装置、液体クロマトグラフ分析システムおよび分析方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
蛍光検出器を用いた液体クロマトグラフ分析システムが知られている（例えば特許文献１参照）。液体クロマトグラフ分析システムでは、例えば、試料が導入された移動相が分析カラムに供給される。分析カラムを通過した移動相および試料に蛍光反応液が合流し、反応コイルを通過する際に試料中の特定の成分が蛍光反応液と反応して蛍光性を有する誘導体に変化する。誘導体により発せられる蛍光が蛍光検出器により検出される。
【特許文献１】特開２０００−１９３６４９号公報
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００３】
蛍光検出器を用いた液体クロマトグラフ分析システムにおいて、高いｐＨを有する蛍光反応液が用いられることがある。この場合、蛍光反応液により蛍光検出器のフローセル等の光学部品が溶解し、蛍光検出器において液漏れが生じることがある。そのため、光学部品の整備または交換の頻度が高くなる。【０００４】
本発明の目的は、蛍光検出器の部品の整備または交換の頻度の低減を可能とする分析制御装置、液体クロマトグラフ分析システムおよび分析方法を提供することである。
【課題を解決するための手段】
【０００５】
本発明の一局面に従う分析制御装置は、第１の送液部、第２の送液部、試料導入部、分析カラム、合流部および蛍光検出器を含む液体クロマトグラフ分析部を制御する分析制御装置であって、試料分析時において、分析カラムおよび合流部を通して移動相を蛍光検出器に供給するように第１の送液部を制御する第１の送液制御部と、試料分析時において、合流部を通して蛍光反応液を蛍光検出器に供給するように第２の送液部を制御する第２の送液制御部と、試料分析時において、試料導入部により分析カラムの上流で移動相に試料を導入するように試料導入部を制御する試料導入制御部と、試料分析時において、蛍光検出器の出力信号に基づいてクロマトグラムを生成する生成部とを備え、第２の送液制御部は、移動相の供給開始時点よりも後でかつ移動相に導入された試料が合流部に到達する以前（到達するときまたは到達する前）に蛍光反応液が合流部に到達するように第２の送液部に蛍光反応液の供給を開始させ、試料が合流部を通過した以後（通過したときまたは通過した後）に第２の送液部に蛍光反応液の供給を停止させる。【０００６】
その分析制御装置においては、分析の間、第１の送液部により分析カラムおよび合流部を通して蛍光検出器に移動相が供給される。一方、移動相の供給開始時点よりも後でかつ移動相に導入された試料が合流部に到達する前に合流部への蛍光反応液の供給が開始され、試料が合流部を通過した後に合流部への蛍光反応液の供給が停止される。試料が合流部に到着するときには、蛍光反応液が合流部に供給されているので、試料が合流部から蛍光検出器に移動する間に試料中の特定の成分が蛍光反応液により蛍光性を有する誘導体に変化する。それにより、クロマトグラムにおいて試料の特定の成分に対応するピークが出現する。この場合、蛍光反応液が蛍光検出器に供給されている時間は、分析の総時間に比べて短い。その結果、蛍光検出器の部品の整備または交換の頻度を低減することが可能である。【０００７】
分析制御装置は、分析条件決定時において、第２の送液部が蛍光反応液の供給を開始する時点から第２の送液部が蛍光反応液の供給を終了する時点までの期間を供給期間として決定する供給期間決定部をさらに備え、第２の送液制御部は、試料分析時において、決定された供給期間の開始時点で第２の送液部に蛍光反応液の供給を開始させ、供給期間の終了時点で第２の送液部に蛍光反応液の供給を停止させてもよい。【０００８】
上記の構成により、試料分析時には、分析条件決定時に決定された供給期間に基づいて第２の送液部による蛍光反応液の供給の開始および停止が制御される。この場合、決定された供給期間を任意の回数の分析で用いることができる。【０００９】
第１および第２の送液制御部は、分析条件決定時において、分析カラムおよび合流部を通して移動相を蛍光検出器に供給するように第１の送液部を制御するとともに、合流部を通して蛍光反応液を蛍光検出器に供給するように第１および第２の送液部を制御し、試料導入制御部は、分析条件決定時において、試料導入部により分析カラムの上流で移動相に試料を導入するように試料導入部を制御し、供給期間決定部は、分析条件決定時において、生成部より生成されたクロマトグラムに基づいて試料が移動相に導入された時点を基準として試料中の成分のピークが出現した期間をピーク出現期間として検出するピーク期間検出部と、分析条件決定時において、合流部から蛍光検出器に供給される移動相、試料および蛍光反応液の合計の流量と、合流部から蛍光検出器までの流路の容積とに基づいて、合流部から蛍光検出器への試料の移動時間を算出する時間算出部と、分析条件決定時において、ピーク期間検出部により検出されたピーク出現期間よりも時間算出部により算出された移動時間だけ前の期間を含む期間を、供給期間として算出する期間算出部とを含んでもよい。この場合、分析条件決定時に、蛍光反応液の供給期間が自動的に決定される。【００１０】
本発明の他の局面に従う液体クロマトグラフ分析システムは、第１の送液部、第２の送液部、試料導入部、分析カラム、合流部および蛍光検出器を含む液体クロマトグラフ分析部と、液体クロマトグラフ分析部を制御する上記の分析制御装置とを備える。【００１１】
本発明のさらに他の局面に従う分析方法は、分析カラム、合流部および蛍光検出器を含む液体クロマトグラフ分析部による分析方法であって、試料分析時において、分析カラムおよび合流部を通して移動相を蛍光検出器に供給するステップと、試料分析時において、合流部を通して蛍光反応液を蛍光検出器に供給するステップと、試料分析時において、分析カラムの上流で移動相に試料を導入するステップと、試料分析時において、蛍光検出器の出力信号に基づいてクロマトグラムを生成するステップとを含み、合流部を通して蛍光反応液を蛍光検出器に供給するステップは、移動相の供給開始時点よりも後でかつ移動相に導入された試料が合流部に到達する以前に蛍光反応液が合流部に到達するように蛍光反応液の供給を開始し、試料が合流部を通過した以後に蛍光反応液の供給を停止することを含む。【００１２】
分析方法は、分析条件決定時において、蛍光反応液の供給を開始する時点から蛍光反応液の供給を終了する時点までの期間を供給期間として決定するステップをさらに含み、蛍光反応液を分析カラムに供給するステップは、試料分析時において、決定された供給期間の開始時点で蛍光反応液の供給を開始し、供給期間の終了時点で蛍光反応液の供給を停止することを含んでもよい。【００１３】
供給期間を決定するステップは、分析条件決定時において、生成されたクロマトグラムに基づいて試料が移動相に導入された時点を基準として試料中の成分のピークが出現した期間をピーク出現期間として検出することと、分析条件決定時において、合流部から蛍光検出器に供給される移動相、試料および蛍光反応液の合計の流量と、合流部から蛍光検出器までの流路の容積とに基づいて、合流部から蛍光検出器への試料の移動時間を算出することと、分析条件決定時において、検出されたピーク出現期間よりも算出された移動時間だけ前の期間を含む期間を、供給期間として算出することとを含んでもよい。
【発明の効果】
【００１４】
本発明によれば、蛍光検出器の部品の整備または交換の頻度を低減することが可能である。
【図面の簡単な説明】
【００１５】
【図１】図１は、本発明の一実施の形態に係る分析制御装置を含む液体クロマトグラフ分析システムの構成を示すブロック図である。
【図２】図２は、図１の分析制御装置の機能的な構成を示すブロック図である。
【図３】図３は、図１の液体クロマトグラフ分析システムにより得られるクロマトグラムの一例を示す図である。
【図４】図４は、本実施の形態に係る分析方法における分析条件決定方法を示すフローチャートである。
【図５】図５は、本実施の形態に係る分析方法における試料分析方法を示すフローチャートである。
【発明を実施するための形態】
【００１６】
以下、本発明の実施の形態に係る分析制御装置、液体クロマトグラフ分析システムおよび分析方法について図面を参照しながら詳細に説明する。
【００１７】
（１）液体クロマトグラフ分析システムの構成
図１は本発明の一実施の形態に係る分析制御装置を含む液体クロマトグラフ分析システムの構成を示すブロック図である。本実施の形態に係る液体クロマトグラフ分析システムは、蛍光検出器を含むＨＰＬＣ（high performance liquid chromatography）用システムである。
【００１８】
図１の液体クロマトグラフ分析システム１００は、液体クロマトグラフ１０および分析制御装置３０を含む。液体クロマトグラフ１０は、移動相用の第１のポンプ１１、蛍光反応液用の第２のポンプ１２、試料導入部１３、導入ポート１４、カラムオーブン１５、分析カラム１６、反応コイル１７および蛍光検出器１８を含む。分析カラム１６および反応コイル１７は、カラムオーブン１５内に設けられる。カラムオーブン１５は、分析カラム１６および反応コイル１７を設定された温度に維持する。
【００１９】
第１のポンプ１１は、移動相容器１１０内の移動相を吸引し、分析カラム１６に供給する。試料導入部１３は、例えばオートサンプラまたはインジェクタを含み、分析対象である試料を導入ポート１４において移動相に導入する。第２のポンプ１２は、蛍光反応液容器１２０内の蛍光反応液を吸引し、合流部Ａに供給する。本実施の形態では、第２のポンプ１２のオンおよびオフが後述のように制御される。
【００２０】
分析カラム１６を通過した移動相および試料は、合流部Ａで蛍光反応液と合流する。それにより、試料中の特定の成分が蛍光反応液と反応し、蛍光性を有する誘導体に変化する。合流部Ａで合流した移動相、試料および蛍光反応液は、反応コイル１７を通して蛍光検出器１８に供給される。蛍光検出器１８は、特定の成分により発せられる蛍光を検出する。
【００２１】
また、液体クロマトグラフ１０は、クロマトグラフ制御部１９、操作部２０および表示部２１を含む。クロマトグラフ制御部１９は、第１のポンプ１１、第２のポンプ１２、試料導入部１３、カラムオーブン１５および蛍光検出器１８を制御する。操作部２０は、使用者がクロマトグラフ制御部１９に種々の指令を与えるために用いられる。表示部２１は、種々のデータ等を表示する。
【００２２】
分析制御装置３０は、入出力Ｉ／Ｆ（インタフェース）３１、ＣＰＵ（中央演算処理装置）３２、ＲＡＭ（ランダムアクセスメモリ）、ＲＯＭ（リードオンリメモリ）３４および記憶装置３５を含み、例えばパーソナルコンピュータまたはサーバにより構成される。入出力Ｉ／Ｆ３１、ＣＰＵ３２、ＲＡＭ３３、ＲＯＭ３４および記憶装置３５はバス３８に接続されている。分析制御装置３０のバス３８には、操作部３６および表示部３７が接続される。操作部３６は、キーボードおよびポインティングデバイス等を含み、種々の値等の入力および種々の操作のために用いられる。表示部３７は、液晶ディスプレイまたは有機エレクトロルミネッセンスディスプレイ等を含み、種々の情報および画像を表示する。操作部３６および表示部３７は、タッチパネルディスプレイにより構成されてもよい。
【００２３】
記憶装置３５は、ハードディスク、光学ディスク、磁気ディスク、半導体メモリまたはメモリカード等の記憶媒体を含み、分析制御プログラムを記憶する。ＲＡＭ３３は、ＣＰＵ３２の作業領域として用いられる。ＲＯＭ３４にはシステムプログラムが記憶される。ＣＰＵ３２が記憶装置３５に記憶された分析制御プログラムをＲＡＭ３３上で実行することにより、後述する分析方法が実施される。分析方法は、分析条件決定方法および試料分析方法を含む。
【００２４】
（２）分析制御装置３０の機能的な構成
図２は図１の分析制御装置３０の機能的な構成を示すブロック図である。図２に示すように、分析制御装置３０は、第１の送液制御部３０１、第２の送液制御部３０２、クロマトグラム生成部３０３、試料導入制御部３０４、動作切替部３０５、ピーク期間検出部３０６、移動時間算出部３０７、供給期間算出部３０８および供給期間記憶部３０９を含む。第２の送液制御部３０２、ピーク期間検出部３０６、移動時間算出部３０７および供給期間算出部３０８が供給期間決定部３１０を構成する。上記の構成要素（３０１〜３１０）の機能は、図１のＣＰＵ３２が記憶装置３５等の記憶媒体（記録媒体）に記憶されたコンピュータプログラムである分析制御プログラムを実行することにより実現される。なお、分析制御装置３０の一部または全ての構成要素が電子回路等のハードウエアにより実現されてもよい。
【００２５】
第１の送液制御部３０１は、第１のポンプ１１のオンおよびオフをクロマトグラフ制御部１９に指令する。第２の送液制御部３０２は、第２のポンプ１２のオンおよびオフをクロマトグラフ制御部１９に指令する。試料導入制御部３０４は、試料導入部１３による試料の導入をクロマトグラフ制御部１９に指令する。
【００２６】
動作切替部３０５は、使用者による操作部３６の操作に基づいて液体クロマトグラフ１０の動作を分析条件決定時の動作と試料分析時の動作とに切り替える。具体的には、動作切替部３０５は、分析条件決定時と試料分析時とで、第２の送液制御部３０２の動作を切り替える。
【００２７】
分析条件決定時には、第１のポンプ１１および第２のポンプ１２が分析の開始時点から終了時点までオンしている。一方、試料分析時においては、第１のポンプ１１は分析の開始時点から終了時点までオンしており、第２のポンプ１２は決定された供給期間においてのみオンしている。
【００２８】
クロマトグラム生成部３０３は、分析条件決定時および試料分析時において、蛍光検出器１８からの出力信号に基づいてクロマトグラムを生成する。生成されたクロマトグラムは表示部３７に表示される。
【００２９】
ピーク期間検出部３０６は、分析条件決定時において、クロマトグラム生成部３０３により生成されたクロマトグラムに基づいて、試料が移動相に導入された時点を基準として試料中の特定の成分に対応するピークが出現した期間をピーク出現期間として検出する。
【００３０】
移動時間算出部３０７は、分析条件決定時において、合流部Ａから蛍光検出器１８に供給される移動相、試料および蛍光反応液の合計の流量と、合流部Ａから蛍光検出器１８までの流路の容積とに基づいて、合流部Ａから蛍光検出器１８までの試料の移動時間を算出する。移動相および試料の流量は、第１のポンプ１１に設定された流量である。蛍光反応液の流量は、第２のポンプ１２に設定された流量である。また、合流部Ａから蛍光検出器１８までの流路の容積は、合流部Ａから蛍光検出器１８までの反応コイル１７を含む配管の容積である。
【００３１】
供給期間算出部３０８は、分析条件決定時において、ピーク期間検出部３０６により検出されたピーク出現期間よりも移動時間だけ前の期間を含む期間を、供給期間として算出する。それにより、蛍光反応液の供給期間が決定される。供給期間の決定方法の具体例については後述する。供給期間記憶部３０９は、供給期間算出部３０８により算出された供給期間を記憶する。決定された供給期間は、一つの分析条件として分析メソッドに規定される。
【００３２】
供給期間を使用者が決定する場合には、使用者は、決定した供給期間を操作部３６を用いて供給期間記憶部３０９に入力する。使用者が供給期間を決定する場合には、ピーク期間検出部３０６、移動時間算出部３０７および供給期間算出部３０８は設けられなくてもよい。
【００３３】
（３）供給期間の決定方法の具体例
図３は図１の液体クロマトグラフ分析システム１００により得られるクロマトグラムの一例を示す図である。図３を参照しながら第２のポンプ１２による蛍光反応液の供給期間の決定方法を説明する。図３の横軸は時間（分）であり、縦軸は蛍光検出器１８の出力信号の電圧（ｍＶ）である。
【００３４】
分析条件決定時には、例えば標準試料を用いて少なくとも１回の分析が行われる。分析の間、第１のポンプ１１および第２のポンプ１２がオンにされる。それにより、図３のクロマトグラムが得られる。分析の総時間は３０．０分である。
【００３５】
図３のクロマトグラムにおいて、０．０分は試料導入部１３により試料が導入ポート１４に導入された時点である。試料の導入時点の約２０．０分後にピークＰＫが出現している。ピークＰＫの出現期間ＴＰの開始時点は１９．０分であり、出現期間ＴＰの終了時点は２１．０分である。本例では、液体クロマトグラフ１０の合流部Ａから蛍光検出器１８までの流路の容量を２０００［μＬ］とする。また、第１のポンプ１１の吐出流量を１０００［μＬ／ｍｉｎ］とし、第２のポンプ１２の吐出流量を１０００［μＬ／ｍｉｎ］とする。この場合、合流部Ａから反応コイル１７を通して蛍光検出器１８に供給される移動相、試料および蛍光反応液の合計の流量は２０００［μＬ／ｍｉｎ］となる。したがって、試料が合流部Ａから蛍光検出器１８まで移動するために要する移動時間Ｔｍは次式により求められる。
【００３６】
Ｔｍ＝２０００［μＬ］／（１０００［μＬ／分］＋１０００［μＬ／ｍｉｎ］）＝１．０［ｍｉｎ］
試料は、ピークＰＫの出現期間ＴＰの開始時点よりも移動時間Ｔｍだけ前の時点で合流部Ａに到着し、出現期間ＴＰの終了時点よりも移動時間Ｔｍだけ前の時点で合流部Ａを通過する。したがって、ピークＰＫの出現期間ＴＰの開始時点よりも移動時間Ｔｍだけ前の時点から出現期間ＴＰの終了時点よりも移動時間Ｔｍだけ前の時点までの期間（以下、合流点通過期間ＴＳＡと呼ぶ。）において蛍光反応液が合流部Ａに供給されるように第２のポンプ１２が制御される。本例では、合流点通過期間ＴＳＡは１９．０分〜２１．０分である。
【００３７】
また、第１または第２のポンプ１１，１２の劣化または外気温度の変化等の原因により合流部Ａへの試料の到着時点のばらつきを考慮して、本例では、合流点通過期間ＴＳＡの前後にマージンΔＴ１，ΔＴ２が付加される。本例において、マージンΔＴ１，ΔＴ２は、試料の導入時点から合流部Ａへの到着時点まで時間２０．０分の１０％である２．０分にそれぞれ設定される。これにより、供給期間ＴＳは合流点通過期間ＴＳＡの開始時点よりマージンΔＴ１だけ前の時点から合流点通過期間ＴＳＡの終了時点よりマージンΔＴ２だけ後の時点までに設定される。本例では、供給期間ＴＳは１６．０分〜２２．０分である。なお、マージンΔＴ１，ΔＴ２は、第１または第２のポンプ１１，１２の性能、外気温度の変化の程度、または分析条件決定の実施頻度等により任意の値に設定することができる。マージンΔＴ１，ΔＴ２を考慮する必要がない場合には、供給期間ＴＳは合流点通過期間ＴＳＡと等しい期間に決定されてもよい。
【００３８】
第２のポンプ１２は、供給期間ＴＳの開始時点ｔ１でオンにされ、供給期間ＴＳの終了時点ｔ２でオフにされる。それにより、試料が合流部Ａに到着して合流部Ａを通過するまでの期間ＴＳＡを含む供給期間ＴＳにおいて合流部Ａに蛍光反応液が供給される。供給期間ＴＳは、１回の分析で第１のポンプ１１がオンしている時間（移動相が蛍光検出器１８に供給されている時間）に比べて短い。本例では、１回の分析の総時間３０分のうち６分のみ蛍光反応液が蛍光検出器１８に供給される。
【００３９】
（４）分析方法
図４は本実施の形態に係る分析方法における分析条件決定方法を示すフローチャートである。図４の分析条件決定方法は、分析制御プログラムの実行により実施される。
【００４０】
第１のポンプ１１の吐出流量および第２のポンプ１２の吐出流量は、分析メソッドに予め規定されている。まず、使用者による操作部３６の操作に基づいて動作切替部３０５が第２の送液制御部３０２の動作を分析条件決定に切り替える。分析条件決定時において、第１の送液制御部３０１および第２の送液制御部３０２は、クロマトグラフ制御部１９を通して第１および第２のポンプ１１，１２をオンにする（ステップＳ１）。それにより、第１のポンプ１１により移動相容器１１０から分析カラム１６を通して合流部Ａに移動相が設定された流量で供給され、第２のポンプ１２により蛍光反応液容器１２０から合流部Ａに蛍光反応液が設定された流量で供給される。次に、試料導入制御部３０４は、クロマトグラフ制御部１９を通して試料導入部１３により導入ポート１４に試料を導入させる（ステップＳ２）。
【００４１】
クロマトグラム生成部３０３は、蛍光検出器１８の出力信号に基づいてクロマトグラムの生成を開始する（ステップＳ３）。移動相、試料および蛍光反応液は、合流部Ａから蛍光検出器１８に供給される。このとき、試料中の特定の成分が蛍光反応液により蛍光性を有する誘導体に変化する。生成されたクロマトグラムは、表示部３７に表示される。
【００４２】
ピーク期間検出部３０６は、クロマトグラム生成部３０３により生成されたクロマトグラムに基づいて試料中の特定の成分に対応するピークＰＫの出現期間ＴＰを検出する（ステップＳ４）。移動時間算出部３０７は、合流部Ａから蛍光検出器１８に供給される移動相、試料および蛍光反応液の合計の流量と、合流部Ａから蛍光検出器１８までの流路の容積とに基づいて、合流部Ａから蛍光検出器１８への試料の移動時間Ｔｍを算出する（ステップＳ５）。この場合、移動時間算出部３０７は、合流部Ａから蛍光検出器１８までの反応コイル１７を含む流路の容積を予め記憶している。
【００４３】
供給期間算出部３０８は、ピークＰＫの出現期間ＴＰおよび合流部Ａから蛍光検出器１８への試料の移動時間Ｔｍに基づいて供給期間ＴＳを算出する（ステップＳ６）。このようにして、供給期間決定部３１０により供給期間ＴＳが自動的に決定される。供給期間記憶部３０９は、供給期間算出部３０８により算出された供給期間ＴＳを記憶する。
【００４４】
その後、第１および第２の送液制御部３０１，３０２は、クロマトグラフ制御部１９を通して第１および第２のポンプ１１，１２をオフにする（ステップＳ７）。それにより、合流部Ａへの移動相の供給および蛍光反応液の供給が終了し、蛍光検出器１８に移動相および蛍光反応液が供給されない。
【００４５】
なお、ステップＳ４〜Ｓ６の処理を使用者が行い、供給期間ＴＳを決定してもよい。この場合、使用者は、クロマトグラム生成部３０３により生成されたクロマトグラムにおけるピークＰＫに基づいて図３に示される方法で供給期間ＴＳを算出することができる。使用者は、算出した供給期間ＴＳを操作部３６により供給期間記憶部３０９に記憶させる。
【００４６】
図５は本実施の形態に係る分析方法における試料分析方法を示すフローチャートである。図４の試料分析方法は、分析制御プログラムの実行により実施される。
【００４７】
まず、使用者による操作部３６の操作に基づいて動作切替部３０５が第２の送液制御部３０２の動作を試料分析に切り替える。試料分析時においては、第２の送液制御部３０２が供給期間記憶部３０９に記憶された供給期間ＴＳを取得する（ステップＳ１１）。第１の送液制御部３０１は、クロマトグラフ制御部１９を通して第１のポンプ１１をオンにする（ステップＳ１２）。それにより、第１のポンプ１１により移動相容器１１０から分析カラム１６および合流部Ａを通して蛍光検出器１８に移動相が設定された流量で供給される。次に、試料導入制御部３０４は、クロマトグラフ制御部１９を通して試料導入部１３により導入ポート１４に試料を導入させる（ステップＳ１３）。第２の送液制御部３０２は、導入ポート１４への試料の導入時点からの経過時間を計測する。
【００４８】
クロマトグラム生成部３０３は、蛍光検出器１８の出力信号に基づいてクロマトグラムの生成を開始する（ステップＳ１４）。生成されたクロマトグラムは、表示部３７に表示される。
【００４９】
第２の送液制御部３０２は、供給期間ＴＳの開始時点ｔ１が到来したか否かを判定する（ステップＳ１５）。供給期間ＴＳの開始時点ｔ１が到来していない場合には、第２の送液制御部３０２は、供給期間ＴＳの開始時点ｔ１が到来するまで待機する。供給期間ＴＳの開始時点ｔ１が到来した場合には、第２の送液制御部３０２は、クロマトグラフ制御部１９を通して第２のポンプ１２をオンにする（ステップＳ１６）。それにより、第２のポンプ１２により蛍光反応液容器１２０から合流部Ａに蛍光反応液が設定された流量で供給される。
【００５０】
蛍光反応液が合流部Ａに供給された時点以後に、ステップＳ１３で導入された試料が合流部Ａに到着する。それにより、移動相、試料および蛍光反応液が合流部Ａから反応コイル１７を通して蛍光検出器１８に供給される。このとき、試料中の特定の成分が蛍光反応液により蛍光性を有する誘導体に変化する。
【００５１】
第２の送液制御部３０２は、供給期間ＴＳの終了時点ｔ２が到来したか否かを判定する（ステップＳ１７）。供給期間ＴＳの終了時点ｔ２が到来していない場合には、第２の送液制御部３０２は、供給期間ＴＳの終了時点ｔ２が到来するまで待機する。供給期間ＴＳの終了時点ｔ２が到来した場合には、第２の送液制御部３０２は、クロマトグラフ制御部１９を通して第２のポンプ１２をオフにする（ステップＳ１８）。それにより、第２のポンプ１２による合流部Ａへの蛍光反応液の供給が終了する。したがって、蛍光反応液は蛍光検出器１８に供給されない。
【００５２】
動作切替部３０５は、全ての試料の分析が終了したか否かを判定する（ステップＳ１９）。全ての試料の分析が終了していない場合には、試料導入制御部３０４は、ステップＳ１３に戻る。それにより、次の試料についてステップＳ１３〜Ｓ１９が行われる。全ての試料の分析が終了した場合には、第１の送液制御部３０１は、クロマトグラフ制御部１９を通して第２のポンプ１２をオフにする（ステップＳ２０）。
【００５３】
図４の分析条件決定は、１つの試料の１回の分析ごとに行われてもよく、または１ロットまたは複数ロットの試料の複数回の分析ごとに行われてもよい。
【００５４】
（５）実施の形態の効果
本実施の形態に係る液体クロマトグラフ分析システム１００においては、分析条件決定時に決定された供給期間ＴＳに蛍光反応液が合流部Ａに供給される。供給期間ＴＳは、試料が合流部Ａに到着する時点から試料が合流部Ａを通過する時点までの期間ＴＳＡを含む短い期間である。したがって、蛍光検出器１８に蛍光反応液が供給される時間は、１回の分析の総時間に比べて短い。その結果、蛍光検出器１８の光学部品の整備または交換の頻度を低減することが可能である。
【００５５】
また、本実施の形態では、試料分析時には、分析条件決定時に決定された供給期間ＴＳに基づいて第２のポンプ１２による蛍光反応液の供給の開始および停止が制御される。この場合、決定された供給期間ＴＳを任意の回数の分析で用いることができる。
【００５６】
さらに、分析条件決定時に、図２の供給期間決定部３１０が用いられる場合には、蛍光反応液の供給期間が自動的に決定されるので、使用者の作業が軽減される。
【００５７】
（６）他の実施の形態
上記実施の形態では、分析制御装置３０が液体クロマトグラフ１０内のクロマトグラフ制御部１９とは別個に設けられているが、クロマトグラフ制御部１９が分析制御装置３０の一部または全ての機能を有していてもよい。
【００５８】
（７）請求項の各構成要素と実施の形態の各要素との対応
以下、請求項の各構成要素と実施の形態の各要素との対応の例について説明する。上記実施の形態では、第１のポンプ１１が第１の送液部の例であり、第２のポンプ１２が第２の送液部の例であり、クロマトグラム生成部３０３が生成部の例であり、移動時間算出部３０７が時間算出部の例であり、供給期間算出部３０８が期間算出部の例である。請求項の各構成要素として、請求項に記載されている構成または機能を有する他の種々の要素を用いることもできる。
【図１】
2020129223.tif 000003
【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【手続補正書】
【提出日】令和3年5月17日(2021.5.17)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
第１の送液部、第２の送液部、試料導入部、分析カラム、合流部および蛍光検出器を含む液体クロマトグラフ分析部を制御する分析制御装置であって、
試料分析時において、前記分析カラムおよび前記合流部を通して移動相を前記蛍光検出器に供給するように前記第１の送液部を制御する第１の送液制御部と、
前記試料分析時において、前記合流部を通して蛍光反応液を前記蛍光検出器に供給するように前記第２の送液部を制御する第２の送液制御部と、
前記試料分析時において、前記試料導入部により前記分析カラムの上流で前記移動相に試料を導入するように前記試料導入部を制御する試料導入制御部と、
前記試料分析時において、前記蛍光検出器の出力信号に基づいてクロマトグラムを生成する生成部とを備え、
前記第２の送液制御部は、前記移動相の供給開始時点よりも後でかつ前記移動相に導入された前記試料が前記合流部に到達する以前に前記蛍光反応液が前記合流部に到達するように前記第２の送液部に前記蛍光反応液の供給を開始させ、前記試料が前記合流部を通過した以後に前記第２の送液部に前記蛍光反応液の供給を停止させる、分析制御装置。
【請求項２】
分析条件決定時において、前記第２の送液部が前記蛍光反応液の供給を開始する時点から前記第２の送液部が前記蛍光反応液の供給を終了する時点までの期間を供給期間として決定する供給期間決定部をさらに備え、
前記第２の送液制御部は、前記試料分析時において、前記決定された供給期間の開始時点で前記第２の送液部に前記蛍光反応液の供給を開始させ、前記供給期間の終了時点で前記第２の送液部に前記蛍光反応液の供給を停止させる、請求項１記載の分析制御装置。
【請求項３】
前記第１および第２の送液制御部は、前記分析条件決定時において、前記分析カラムおよび前記合流部を通して前記移動相を前記蛍光検出器に供給するように前記第１の送液部を制御するとともに、前記合流部を通して前記蛍光反応液を前記蛍光検出器に供給するように前記第１および第２の送液部を制御し、
前記試料導入制御部は、前記分析条件決定時において、前記試料導入部により前記分析カラムの上流で前記移動相に前記試料を導入するように前記試料導入部を制御し、
前記供給期間決定部は、
前記分析条件決定時において、前記生成部より生成されたクロマトグラムに基づいて前記試料が前記移動相に導入された時点を基準として前記試料中の成分のピークが出現した期間をピーク出現期間として検出するピーク期間検出部と、
前記分析条件決定時において、前記合流部から前記蛍光検出器に供給される前記移動相、前記試料および前記蛍光反応液の合計の流量と、前記合流部から前記蛍光検出器までの流路の容積とに基づいて、前記合流部から前記蛍光検出器への前記試料の移動時間を算出する時間算出部と、
前記分析条件決定時において、前記ピーク期間検出部により検出されたピーク出現期間よりも前記時間算出部により算出された移動時間だけ前の期間を含む期間を、前記供給期間として算出する期間算出部とを含む、請求項２記載の分析制御装置。
【請求項４】
第１の送液部、第２の送液部、試料導入部、分析カラム、合流部および蛍光検出器を含む液体クロマトグラフ分析部と、
前記液体クロマトグラフ分析部を制御する請求項１〜３のいずれかに記載の分析制御装置とを備えた、液体クロマトグラフ分析システム。
【請求項５】
分析カラム、合流部および蛍光検出器を含む液体クロマトグラフ分析部による分析方法であって、
試料分析時において、前記分析カラムおよび前記合流部を通して移動相を前記蛍光検出器に供給するステップと、
前記試料分析時において、前記合流部を通して蛍光反応液を前記蛍光検出器に供給するステップと、
前記試料分析時において、前記分析カラムの上流で前記移動相に試料を導入するステップと、
前記試料分析時において、前記蛍光検出器の出力信号に基づいてクロマトグラムを生成するステップとを含み、
前記合流部を通して前記蛍光反応液を前記蛍光検出器に供給するステップは、前記移動相の供給開始時点よりも後でかつ前記移動相に導入された前記試料が前記合流部に到達する以前に前記蛍光反応液が前記合流部に到達するように前記蛍光反応液の供給を開始し、前記試料が前記合流部を通過した以後に前記蛍光反応液の供給を停止することを含む、分析方法。
【請求項６】
分析条件決定時において、前記蛍光反応液の供給を開始する時点から前記蛍光反応液の供給を終了する時点までの期間を供給期間として決定するステップをさらに含み、
前記蛍光反応液を蛍光検出器に供給するステップは、前記試料分析時において、前記決定された供給期間の開始時点で前記蛍光反応液の供給を開始し、前記供給期間の終了時点で前記蛍光反応液の供給を停止することを含む、請求項５記載の分析方法。
【請求項７】
前記供給期間を決定するステップは、
前記分析条件決定時において、前記生成されたクロマトグラムに基づいて前記試料が前記移動相に導入された時点を基準として前記試料中の成分のピークが出現した期間をピーク出現期間として検出することと、
前記分析条件決定時において、前記合流部から前記蛍光検出器に供給される前記移動相、前記試料および前記蛍光反応液の合計の流量と、前記合流部から前記蛍光検出器までの流路の容積とに基づいて、前記合流部から前記蛍光検出器への前記試料の移動時間を算出することと、
前記分析条件決定時において、前記検出されたピーク出現期間よりも前記算出された移動時間だけ前の期間を含む期間を、前記供給期間として算出することとを含む、請求項６記載の分析方法。
【国際調査報告】
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2020129223.tif 000009
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