(57)【要約】  タンパク質のような分子量の大きい親水性薬物を皮膚から体内へと送達させる技術の提供。  親水性薬物および油性基剤を含む経皮吸収性製剤であって、親水性薬物の少なくとも一部が油性基剤中で、溶解することなく懸濁状態で存在することを特徴とする、製剤。
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
親水性薬物および油性基剤を含む経皮吸収性製剤であって、親水性薬物の少なくとも一部が油性基剤中で溶解することなく懸濁状態で存在することを特徴とする、
製剤。
【請求項２】
更に油溶性経皮浸透促進物質を含む、請求項１に記載の経皮吸収性製剤。
【請求項３】
前記油溶性経皮浸透促進物質が、ホスホグリセリド、グリセリド、糖アルコールの脂肪酸エステル、グリコールの脂肪酸エステル、脂肪酸、テルペンおよび精油からなる群より選ばれる少なくとも１種である、請求項２に記載の経皮吸収性製剤。
【請求項４】
前記油溶性経皮浸透促進物質が、テルペンである、請求項２または３に記載の経皮吸収性製剤。
【請求項５】
前記油溶性経皮浸透促進物質が、グリセリンの脂肪酸エステルである、請求項２または３に記載の経皮吸収性製剤。
【請求項６】
前記油溶性経皮浸透促進物質が、グリセリンの不飽和脂肪酸エステルである、請求項５に記載の経皮吸収性製剤。
【請求項７】
前記不飽和脂肪酸の炭素鎖が、１６以上２２以下である、請求項６に記載の経皮吸収性製剤。
【請求項８】
前記油溶性経皮浸透促進物質が、モノオレイン酸グリセリルである、請求項２、３、５〜７のいずれか１項に記載の経皮吸収性製剤。
【請求項９】
前記親水性薬物の分子量が５００Da乃至２００kDaである、請求項１〜８のいずれか１項に記載の経皮吸収性製剤。
【請求項１０】
前記親水性薬物のゼータ電位が−５０〜１０mVである、請求項１〜９のいずれか１項に記載の経皮吸収性製剤。
【請求項１１】
実質的に水を含まない、請求項１〜１０のいずれか１項に記載の経皮吸収性製剤。
【請求項１２】
親水性薬物および油性基剤を含む経皮吸収性製剤において、親水性薬物の少なくとも一部を油性基剤中で溶解することなく懸濁状態で存在させることを特徴とする、親水性薬物の経皮吸収性を向上させる方法。
【請求項１３】
前記経皮吸収性製剤が更に油溶性経皮浸透促進物質を含む、請求項１２に記載の方法。
【請求項１４】
前記油溶性経皮浸透促進物質が、ホスホグリセリド、グリセリド、糖アルコールの脂肪酸エステル、グリコールの脂肪酸エステル、脂肪酸、テルペンおよび精油からなる群より選ばれる少なくとも１種である、請求項１３に記載の方法。
【請求項１５】
前記油溶性経皮浸透促進物質が、テルペンである、請求項１３または１４に記載の方法。
【請求項１６】
前記油溶性経皮浸透促進物質が、グリセリンのモノ脂肪酸エステルである、請求項１３または１４に記載の方法。
【請求項１７】
前記油溶性経皮浸透促進物質が、グリセリンの不飽和脂肪酸エステルである、請求項１６に記載の方法。
【請求項１８】
前記不飽和脂肪酸の炭素鎖が、１６以上２２以下である、請求項１７に記載の方法。
【請求項１９】
前記油溶性経皮浸透促進物質が、モノオレイン酸グリセリルである、請求項１３、１４、１６〜１８のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２０】
前記親水性薬物の分子量が５００Da乃至２００kDaである、請求項１２〜１９のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２１】
前記親水性薬物のゼータ電位が−５０〜１０mVである、請求項１９〜２０のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２２】
実質的に水を含まない、請求項１２〜２１のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２３】
親水性薬物と、油性基剤とを混合する工程、および親水性薬物の少なくとも一部を沈降させる工程を含む、経皮吸収性製剤の製造方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、親水性薬物、油性基剤、及び場合により油溶性経皮浸透促進物質を含む経皮吸収性製剤、並びに当該親水性薬物を経皮吸収させる方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
近年、薬剤の投与法として、経口投与法や注射法に代わる手法として、皮膚から全身に薬剤を投与する経皮薬剤投与法が注目されている。経皮投与法で使用される剤形には、クリーム剤、スプレー剤、貼付剤などが挙げられ、注射の様な痛みを伴うことなく、長時間の投与が可能になる等、非常に優れた投与方法と考えられている。【０００３】
しかしながら、人の皮膚中には、最外層に厚さ２０μm程度の角質層と呼ばれる疎水性の高い層が存在し、体内の水分が蒸発するのを防ぐとともに、外来生物や分子の侵入を阻害する役割を担っている。そのため、特殊な化合物（化学的促進法）や器具（物理的促進法）を使用しない場合、皮膚を透過して体内へと到達できるのは、比較的疎水性の高い分子や、分子量が５００Da以下の分子だけであることが知られている。そのため、特にワクチンや免疫グロブリン製剤等のタンパク質製剤等の親水性高分子の経皮投与は困難となっている。【０００４】
これらの課題を解決する方法としては、化学的に角質層バリアを透過して薬剤を体内へと送達させる手法、例えば、テルペンや脂肪酸、アルコールなどの経皮浸透促進剤を添加する方法や、リポソーム様物質やポリ乳酸（ＰＬＡ）粒子などのナノサイズの粒子を使用する方法が報告されている（例えば、非特許文献１参照）。しかし、脂質二重膜やプルロニックからなるキャリアは、薬物水溶液を内包し、水性基剤に分散させることが可能であるが、長期保存中の薬物の変質や、薬剤の内包率が低いことが課題である。【０００５】
これに対し、近年、角質層に馴染みの良い油を基剤として用いる製剤も幾つか提案されており、例えばリオトロピック液晶（例えば、非特許文献２参照）、レシチンオルガノゲル（例えば、非特許文献３参照）、Inverse Micellar Sugar Glass（ＩＭＳＧ）ナノ粒子（例えば、非特許文献４参照）、Water-in-Oil（Ｗ／Ｏ）マイクロエマルション（例えば、非特許文献５参照）、Solid-in-Oil（Ｓ／Ｏ）ナノ分散液（例えば、特許文献１、非特許文献６参照）などが挙げられる。【０００６】
しかしながら、油を基剤とした系においても、前記リオトロピック液晶、レシチンオルガノゲルおよびＷ／Ｏエマルションのような水やアルコールを含む系では、水性基剤と同様の課題に加え、薬物の内包率は用いる薬物の水やアルコールへの溶解性に大きく依存するという問題点がある。【０００７】
他方、ＩＭＳＧナノ粒子やＳ／Ｏナノ粒子のようなエマルションを凍結乾燥させて調製する手法では、最終製品には水が含まれないが、使用可能な界面活性剤や油性基剤が限られるという問題点がある。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００８】
【特許文献１】国際公開公報第２００６／０２５５８３号
【非特許文献】
【０００９】
【非特許文献１】International Journal of Pharmaceutics 293 (2005) 73-82
【非特許文献２】Drug Dsign, Developmet and Therapy 11 (2017) 393-406
【非特許文献３】Journal of Controlled Release 180 (2014) 10-24
【非特許文献４】Journal of Controlled Release 206 (2015) 140-152
【非特許文献５】Vaccine 29 (2011) 5393-5398
【非特許文献６】Journal of Controlled Release 131 (2008) 14-18
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１０】
上記の様に、従来の、親水性薬物を皮膚へ浸透させる技術、すなわち経皮吸収させる技術は、いずれも問題点があり、親水性薬物の経皮浸透を阻害するような界面活性剤の使用を回避するとともに、タンパク質のような分子量の大きい親水性薬物を皮膚から体内へと送達させる技術が求められていた。
【課題を解決するための手段】
【００１１】
本発明は、上記課題を鑑みなされたものであり、親水性薬物を、油性基剤へ直接懸濁させた製剤（Solid in Oil Suspension；Ｓ／Ｏ−Ｓ製剤）を調製することで、親水性薬物、油性基剤、および場合により油溶性経皮浸透促進物質を含む製剤、並びに当該親水性薬物を経皮吸収させる方法を提供する。ここで、油溶性経皮浸透促進物質を含む場合には、実質的に水を含まない、当該親水性薬物を経皮吸収させる方法を提供する。【００１２】
すなわち、本発明は、以下のとおりである：
（１）  親水性薬物および油性基剤を含む経皮吸収性製剤であって、親水性薬物の少なくとも一部が油性基剤中で溶解することなく懸濁状態で存在することを特徴とする、製剤。
（２）  更に油溶性経皮浸透促進物質を含む、上記（１）に記載の経皮吸収性製剤。
（３）  前記油溶性経皮浸透促進物質が、ホスホグリセリド、グリセリド、糖アルコールの脂肪酸エステル、グリコールの脂肪酸エステル、脂肪酸、テルペンおよび精油からなる群より選ばれる少なくとも１種である、上記（２）に記載の経皮吸収性製剤。
（４）  前記油溶性経皮浸透促進物質が、テルペンである、上記（２）または（３）に記載の経皮吸収性製剤。
（５）  前記油溶性経皮浸透促進物質が、グリセリンの脂肪酸エステルである、上記（２）または（３）に記載の経皮吸収性製剤。
（６）  前記油溶性経皮浸透促進物質が、グリセリンの不飽和脂肪酸エステルである、上記（５）に記載の経皮吸収性製剤。
（７）  前記不飽和脂肪酸の炭素鎖が、１６以上２２以下である、上記（６）に記載の経皮吸収性製剤。
（８）  前記油溶性経皮浸透促進物質が、モノオレイン酸グリセリルである、上記（２）、（３）、（５）〜（７）のいずれか１つに記載の経皮吸収性製剤。
（９）  前記親水性薬物の分子量が５００Da乃至２００kDaである、上記（１）〜（８）のいずれか１つに記載の経皮吸収性製剤
（１０）  前記親水性薬物のゼータ電位が−５０〜１０mVである、上記（１）〜（９）のいずれか１つに記載の経皮吸収性製剤。
（１１）  実質的に水を含まない、（１）〜（１０）のいずれか１つに記載の経皮吸収性製剤。
（１２）  親水性薬物および油性基剤を含む経皮吸収性製剤において、親水性薬物の少なくとも一部を油性基剤中で溶解することなく懸濁状態で存在させることを特徴とする、親水性薬物の経皮吸収性を向上させる方法。
（１３）  前記経皮吸収性製剤が更に油溶性経皮浸透促進物質を含む、上記（１２）に記載の方法。
（１４）  前記油溶性経皮浸透促進物質が、ホスホグリセリド、グリセリド、糖アルコールの脂肪酸エステル、グリコールの脂肪酸エステル、脂肪酸、テルペンおよび精油からなる群より選ばれる少なくとも１種である、上記（１３）に記載の方法。
（１５）  前記油溶性経皮浸透促進物質が、テルペンである、上記（１３）または（１４）に記載の方法。
（１６）  前記油溶性経皮浸透促進物質が、グリセリンのモノ脂肪酸エステルである、上記（１３）または（１４）に記載の方法。
（１７）  前記油溶性経皮浸透促進物質が、グリセリンの不飽和脂肪酸エステルである、上記（１６）に記載の方法。
（１８）  前記不飽和脂肪酸の炭素鎖が、１６以上２２以下である、上記（１７）に記載の方法。
（１９）  前記油溶性経皮浸透促進物質が、モノオレイン酸グリセリルである、上記（１３）、（１４）、（１６）〜（１８）のいずれか１つに記載の方法。
（２０）  前記親水性薬物の分子量が５００Da乃至２００kDaである、上記（１２）〜（１９）のいずれか１つに記載の方法。
（２１）  前記親水性薬物のゼータ電位が−５０〜１０mVである、上記（１２）〜（２０）のいずれか１つに記載の方法。
（２２）  実質的に水を含まない、（１２）〜（２１）のいずれか１項に記載の経皮吸収性製剤。
（２３）  親水性薬物と、油性基剤とを混合する工程、および親水性薬物の少なくとも一部を沈降させる工程を含む、経皮吸収性製剤の製造方法。
【発明の効果】
【００１３】
本発明の経皮吸収性製剤は、親水性薬物の粉末を、油性基剤へと直接懸濁させた製剤（Ｓ／Ｏ−Ｓ製剤）とすることにより、親水性薬物の経皮浸透を阻害するような界面活性剤の使用を回避できたとともに、油溶性の経皮浸透促進物質を大量に含有させることも可能となったことから、タンパク質のような親水性薬物を、最大で水溶液の数十倍、皮膚から体内へ送達可能となった。
【図面の簡単な説明】
【００１４】
【図１】実施例１で得られた、ＣＭＡＰペプチドおよび各種油性基剤を含むＳ／Ｏ−Ｓ製剤のＣＭＡＰペプチドの皮膚浸透性試験の結果を示したグラフである。
【図２】実施例２で得られた、ＯＶＡ、ＩＰＭおよび各種油溶性経皮浸透促進物質を含むＳ／Ｏ−Ｓ製剤のＯＶＡの皮膚浸透性試験の結果を示したグラフである。
【図３】実施例３で、油溶性経皮浸透促進物質としてＥＲ２９０（Ａ）、Ｌ１９５（Ｂ）、Ｐ９０Ｇ（Ｃ）およびＭＧＯＬ−７０（Ｄ）を使用し、得られたＯＶＡ、ＩＰＭおよび各種油溶性経皮浸透促進物質を含むＳ／Ｏ−Ｓ製剤の皮膚浸透性試験の結果、各種油溶性経皮浸透促進物質の濃度とＯＶＡ経皮浸透量の関係を示したグラフである。
【図４】実施例４で得られた、ＯＶＡ、ＩＰＭ、および油溶性経皮浸透促進物質として各種テルペンを含むＳ／Ｏ−Ｓ製剤のＯＶＡの皮膚浸透性試験の結果を示したグラフである。
【図５】実施例５で、油溶性経皮浸透促進物質としてNerolidol（Ａ）およびGeraniol（Ｂ）を使用し、得られたＯＶＡ、ＩＰＭおよび各種油溶性経皮浸透促進物質を含むＳ／Ｏ−Ｓ製剤の皮膚浸透性試験の結果、各種油溶性経皮浸透促進物質の濃度とＯＶＡ経皮浸透量の関係を示したグラフである。
【図６】実施例７で得られた、粒子径の異なる２種のＯＶＡ粒子、ＩＰＭおよびＭＧＯＬ−７０を含むＳ／Ｏ−Ｓ製剤のＯＶＡの皮膚浸透性試験の結果を示したグラフである。
【図７】実施例８で得られた、ＯＶＡ、ＭＧＯＬ−７０および各種油性基剤を含むＳ／Ｏ−Ｓ製剤のＯＶＡの皮膚浸透性試験の結果を示したグラフである。
【図８】実施例９で得られた、ヒアルロン酸、ＭＧＯＬ−７０およびスクアランを含むＳ／Ｏ−Ｓ製剤のヒアルロン酸皮膚浸透性試験の結果を示したグラフである。
【図９】実施例９で得られた、ヒアルロン酸、ＭＧＯＬ−７０およびスクアランを含むＳ／Ｏ−Ｓ製剤を投与したブタ皮膚の組織切片の蛍光顕微鏡写真である。
【図１０】実施例１１で、油溶性経皮浸透促進物質としてモノオレイン酸グリセリルおよび／またはモノリノール酸グリセリルを使用し、得られたＯＶＡ、ＩＰＭおよび油溶性経皮浸透促進物質を含むＳ／Ｏ−Ｓ製剤の皮膚浸透性試験の結果、油溶性経皮浸透促進物質におけるモノリノール酸グリセリルの添加比率とＯＶＡ経皮浸透量の関係を示したグラフである。
【発明を実施するための形態】
【００１５】
（経皮吸収性製剤）
本発明の経皮吸収性製剤は、親水性薬物および油性基剤を含み、親水性薬物の少なくとも一部が、油性基剤中で、溶解することなく懸濁状態で存在することを特徴とする。本発明における懸濁とは、固体粒子が液体中に分散した状態を意味し、場合によっては固体粒子全部又は一部が沈降していてもよい。本発明の経皮吸収性製剤は、油性基剤中で沈降した親水性薬物が、皮膚との接触部位において、濃縮された状態であるのが好ましい。濃縮された親水性薬物は、皮膚と接触した際に、皮膚の微量の水分によって溶解し、皮膚中へと浸透していくと考えられる。
【００１６】
本発明の経皮吸収性製剤においては、親水性薬物の量は、その少なくとも一部が油性基剤に溶解することなく存在することができる量であれば、特に限定されず、任意の割合で薬物を基剤中に投入することがきるが、薬物の油溶性基剤に対する比（質量基準）としては、０．０１：１００〜１００：０．０１、好ましくは０．１：１００〜１００：０．１であり、より好ましくは１：１０〜１０：１である。なお、油溶性基剤中で、溶解することなく存在する「親水性薬物の少なくとも一部」とは、基剤に投入された薬物の総量の１０質量％以上であり、好ましくは５０質量％以上であり、より好ましくは８０質量％以上であり、さらに好ましくは９０質量％以上であり、特に好ましくは９９質量％以上である。
【００１７】
（親水性薬物）
本発明において使用される親水性薬物は、常温（例えば、２５℃）で固体であり、その少なくとも一部が水に溶け、化粧品および医薬品分野でヒトを含む動物に適用可能な有効成分であれば特に限定されない。ここで、その少なくとも一部が水に溶ける薬物とは、例えば、日本薬局方の通則に定められている溶解性を示す用語にて、溶けにくい（薬物１ｇを溶かすに要する水の量が１００mL以上１０００mL未満）、やや溶けにくい（薬物１ｇを溶かすに要する水の量が３０mL以上１００mL未満）、やや溶けやすい（薬物１ｇを溶かすに要する水の量が１０mL以上３０mL未満）、溶けやすい（薬物１ｇを溶かすに要する水の量が１mL以上１０mL未満）、または極めて溶けやすい（薬物１ｇを溶かすに要する水の量が１mL未満）のいずれかに該当するものであればよい。
【００１８】
本発明において使用される親水性薬物の分子量は、特に限定されないが、本発明の経皮吸収性製剤は分子量の大きい親水性薬物を皮膚から体内へと送達させることができる点から、好ましくは分子量が５００Da以上であり、より好ましくは１０００Da（すなわち、１kDa）以上であり、かつ好ましくは２００kDA以下であり、より好ましくは１００kDa以下であり、特に好ましくは５０kDa以下である。
【００１９】
そのような親水性薬物の例としては、ヒアルロン酸およびその塩、ヘパリンおよびその類似化合物、キトサン等の多糖類；卵白アルブミン、カゼイン、コラーゲン等のタンパク質類；ビタミンＣおよびその誘導体、レチノール等のビタミン類；アミノ酸、トラネキサム酸、プラセンタエキス等のアミノ酸類；アルブチン等の配糖体類；コエンザイムＱ１０等の補酵素類；コレラ毒素サブユニットＢ、上皮成長因子、血清アルブミン、免疫グロブリン、インターロイキン、インターフェロン、ヒトグルカゴン、ヒト成長ホルモン、エリスロポエチン、血小板由来成長因子、インスリン等のタンパク質性製剤類；ガンワクチン、アレルギーワクチン等のペプチド製剤類が挙げられる。
【００２０】
（油性基剤）
本発明において使用される油性基剤としては、常温（例えば、２５℃）で液体であり、実質的に水に不溶で、粘性があり、水より比重が低いものであって、化粧品および医薬品分野で使用され、ヒトを含む動物の皮膚に接触した際に悪影響を及ぼさないものであれば、特に限定はない。そのような油性基剤の例としては、セタノール、ミリスチルアルコール、オレイルアルコール、ラウリルアルコール、セトステアリルアルコール、ステアリルアルコール、ベヘニルアルコール、ホホバアルコール、キミルアルコール、セラキルアルコール、バチルアルコール、ヘキシルデカノール、イソステアリルアルコール、２−オクチルドデカノール、ダイマージオール等の高級（多価）アルコール類；ベンジルアルコール等のアラルキルアルコールおよびその誘導体；イソステアリン酸、ベヘン酸、ウンデシレン酸、１２−ヒドロキシステアリン酸、パルミトオレイン酸、オレイン酸、リノール酸、リノレン酸、エルカ酸、ドコサヘキサエン酸、エイコサペンタエン酸、イソヘキサデカン酸、アンテイソヘンイコサン酸、ダイマー酸、水素添加ダイマー酸等の長鎖脂肪酸およびその誘導体；流動パラフィン（ミネラルオイル）、重質流動イソパラフィン、軽質流動イソパラフィン、α−オレフィンオリゴマー、ポリイソブテン、水添ポリイソブテン、ポリブテン、スクワラン、オリーブ由来スクワラン、スクワレン、ワセリン、固形パラフィン等の炭化水素類；キャンデリラワックス、カルナウバワックス、ライスワックス、木ろう、みつろう、モンタンワックス、オゾケライト、セレシン、パラフィンワックス、マイクロクリスタリンワックス、ペトロラタム、フィッシャートロプシュワックス、ポリエチレンワックス、エチレン・プロピレンコポリマー等のワックス類；ヤシ油、パーム油、パーム核油、サフラワー油、オリーブ油、ヒマシ油、アボカド油、ゴマ油、茶油、月見草油、小麦胚芽油、シソ油、杏仁油、アーモンド油、マカデミアナッツ油、ヘーゼルナッツ油、ククイナッツ油、ローズヒップ油、メドウフォーム油、パーシック油、ティートリー油、ハッカ油、トウモロコシ油、ナタネ油、ヒマワリ油、小麦胚芽油、アマニ油、綿実油、大豆油、落花生油、コメヌカ油、カカオ脂、シア脂、水素添加ヤシ油、水素添加ヒマシ油、ホホバ油、水素添加ホホバ油等の植物性油脂類；牛脂、乳脂、馬脂、卵黄油、ミンク油、タートル油等の動物性油脂類；鯨ロウ、ラノリン、オレンジラッフィー油等の動物性ロウ類；液状ラノリン、還元ラノリン、吸着精製ラノリン、酢酸ラノリン、酢酸液状ラノリン、ヒドロキシラノリン、ポリオキシエチレンラノリン、ラノリン脂肪酸、硬質ラノリン脂肪酸、ラノリンアルコール、酢酸ラノリンアルコール、酢酸（セチル・ラノリル）エステル等のラノリン類；コレステロール、ジヒドロコレステロール、ラノステロール、ジヒドロラノステロール、フィトステロール、コール酸等のステロール類；サポゲニン類；サポニン類；酢酸コレステリル、ノナン酸コレステリル、ステアリン酸コレステリル、イソステアリン酸コレステリル、オレイン酸コレステリル、Ｎ−ラウロイル−Ｌ−グルタミン酸ジ（コレステリル／ベヘニル／オクチルドデシル）、Ｎ−ラウロイル−Ｌ−グルタミン酸ジ（コレス���リル／オクチルドデシル）、Ｎ−ラウロイル−Ｌ−グルタミン酸ジ（フィトステリル／ベヘニル／オクチルドデシル）、Ｎ−ラウロイル−Ｌ−グルタミン酸ジ（フィトステリル／オクチルドデシル）、１２−ヒドロキシステアリン酸コレステリル、マカデミアナッツ油脂肪酸コレステリル、マカデミアナッツ油脂肪酸フィトステリル、イソステアリン酸フィトステリル、軟質ラノリン脂肪酸コレステリル、硬質ラノリン脂肪酸コレステリル、長鎖分岐脂肪酸コレステリル、長鎖α−ヒドロキシ脂肪酸コレステリル等のステロールエステル類；Ｎ−ラウロイルサルコシンイソプロピル等のアシルサルコシンアルキルエステル類；リン脂質・コレステロール複合体、リン脂質・フィトステロール複合体等の脂質複合体；ミリスチン酸オクチルドデシル、ミリスチン酸ヘキシルデシル、イソステアリン酸オクチルドデシル、パルミチン酸セチル、パルミチン酸オクチルドデシル、オクタン酸セチル、オクタン酸ヘキシルデシル、イソノナン酸イソトリデシル、イソノナン酸イソノニル、イソノナン酸オクチル、イソノナン酸イソトリデシル、ネオペンタン酸イソデシル、ネオペンタン酸イソトリデシル、ネオペンタン酸イソステアリル、ネオデカン酸オクチルドデシル、オレイン酸オレイル、オレイン酸オクチルドデシル、リシノレイン酸オクチルドデシル、ラノリン脂肪酸オクチルドデシル、ジメチルオクタン酸ヘキシルデシル、エルカ酸オクチルドデシル、イソステアリン酸硬化ヒマシ油、オレイン酸エチル、アボカド油脂肪酸エチル、ミリスチン酸イソプロピル、パルミチン酸イソプロピル、パルミチン酸オクチル、イソステアリン酸イソプロピル、ラノリン脂肪酸イソプロピル等の長鎖脂肪酸エステル類；セバシン酸ジエチル、セバシン酸ジイソプロピル、セバシン酸ジオクチル、アジピン酸ジイソプロピル、セバシン酸ジブチルオクチル、アジピン酸ジイソブチル、コハク酸ジオクチル、クエン酸トリエチル等のジカルボン酸エステル類；乳酸セチル、リンゴ酸ジイソステアリル、モノイソステアリン酸水添ヒマシ油等のオキシ酸エステル類；トリオクタン酸グリセリル（トリ２−エチルヘキサン酸グリセリル）、トリオレイン酸グリセリル、トリイソステアリン酸グリセリル、ジイソステアリン酸グリセリル、トリ（カプリル酸／カプリン酸）グリセリル、トリ（カプリル酸／カプリン酸／ミリスチン酸／ステアリン酸）グリセリル、水添ロジントリグリセリド（水素添加エステルガム）、ロジントリグリセリド（エステルガム）、ベヘン酸エイコサン二酸グリセリル、トリオクタン酸トリメチロールプロパン、トリイソステアリン酸トリメチロールプロパン、ジオクタン酸ネオペンチルグリコール、ジカプリン酸ネオペンチルグリコール、ジオクタン酸２−ブチル−２−エチル−１，３−プロパンジオール、ジオレイン酸プロピレングリコール、テトラオクタン酸ペンタエリスリチル、水素添加ロジンペンタエリスリチル、トリエチルヘキサン酸ジトリメチロールプロパン、（イソステアリン酸／セバシン酸）ジトリメチロールプロパン、トリエチルヘキサン酸ペンタエリスリチル、（ヒドロキシステアリン酸／ステアリン酸／ロジン酸）ジペンタエリスリチル、ジイソステアリン酸ジグリセリル、テトライソステアリン酸��リグリセリル、ノナイソステアリン酸ポリグリセリル−１０、デカ（エルカ酸／イソステアリン酸／リシノレイン酸）ポリグリセリル−８、（ヘキシルデカン酸／セバシン酸）ジグリセリルオリゴエステル、ジステアリン酸グリコール（ジステアリン酸エチレングリコール）、ジネオペンタン酸３−メチル−１，５−ペンタンジオール、ジネオペンタン酸２，４−ジエチル−１，５−ペンタンジオール等の多価アルコール脂肪酸エステル類；ダイマージリノール酸ジイソプロピル、ダイマージリノール酸ジイソステアリル、ダイマージリノール酸ジ（イソステアリル／フィトステリル）、ダイマージリノール酸（フィトステリル／ベヘニル）、ダイマージリノール酸（フィトステリル／イソステアリル／セチル／ステアリル／ベヘニル）、ダイマージリノール酸ダイマージリノレイル、ジイソステアリン酸ダイマージリノレイル、ダイマージリノレイル水添ロジン縮合物、ダイマージリノール酸硬化ヒマシ油、ヒドロキシアルキルダイマージリノレイルエーテル等のダイマー酸若しくはダイマージオールの誘導体；ヤシ油脂肪酸モノエタノールアミド（コカミドＭＥＡ）、ヤシ油脂肪酸ジエタノールアミド（コカミドＤＥＡ）、ラウリン酸モノエタノールアミド（ラウラミドＭＥＡ）、ラウリン酸ジエタノールアミド（ラウラミドＤＥＡ）、ラウリン酸モノイソプロパノールアミド（ラウラミドＭＩＰＡ）、パルミチン酸モノエタノールアミド（パルタミドＭＥＡ）、パルミチン酸ジエタノールアミド（パルタミドＤＥＡ）、ヤシ油脂肪酸メチルエタノールアミド（コカミドメチルＭＥＡ）等の脂肪酸アルカノールアミド類；ジメチコン（ジメチルポリシロキサン）、高重合ジメチコン（高重合ジメチルポリシロキサン）、デカメチルシクロペンタシロキサン（単にシクロペンタシロキサンともいう）等のシクロメチコン（環状ジメチルシロキサン）、フェニルトリメチコン、ジフェニルジメチコン、フェニルジメチコン、ステアロキシプロピルジメチルアミン、（アミノエチルアミノプロピルメチコン／ジメチコン）コポリマー、ジメチコノール、ジメチコノールクロスポリマー、シリコーン樹脂、シリコーンゴム、アミノプロピルジメチコンおよびアモジメチコン等のアミノ変性シリコーン、カチオン変性シリコーン、ジメチコンコポリオール等のポリエーテル変性シリコーン、ポリグリセリン変性シリコーン、糖変性シリコーン、カルボン酸変性シリコーン、リン酸変性シリコーン、硫酸変性シリコーン、アルキル変性シリコーン、脂肪酸変性シリコーン、アルキルエーテル変性シリコーン、アミノ酸変性シリコーン、ペプチド変性シリコーン、フッ素変性シリコーン、カチオン変性およびポリエーテル変性シリコーン、アミノ変性およびポリエーテル変性シリコーン、アルキル変性およびポリエーテル変性シリコーン、ポリシロキサン・オキシアルキレン共重合体等のシリコーン類；パーフルオロデカン、パーフルオロオクタン、パーフルオロポリエーテル等のフッ素系油剤類が挙げられる。この中でも、オレイン酸等の長鎖脂肪酸、オリーブ油、ホホバ油等の植物性油脂類、ミリスチン酸イソプロピル、パルミチン酸イソプロピル、パルミチン酸オクチル、イソステアリン酸イソプロピル等の炭素数１２乃至１８の脂肪酸��炭素数１乃至８のアルキルエステル類、スクワラン等の炭化水素類が好ましく、ミリスチン酸イソプロピル、スクワランがより好ましい。
【００２１】
（油溶性経皮浸透促進物質）
本発明の経皮吸収性製剤においては、油溶性経皮浸透促進物質を添加してもよい。油溶性経皮浸透促進物質は、油性基剤に溶け、親水性薬物が皮膚と接触した際に、薬物の皮膚中への浸透を促進する作用を有し、かつ化粧品および医薬品分野でヒトを含む動物に適用可能な成分であれば特に限定はない。油溶性経皮浸透促進物質の量は、特に限定はなく、任意の割合で基剤中に投入することがきる。添加する場合の油溶性経皮浸透促進物質の油性基剤に対する比（容量基準）としては、０．０１：１００〜１００：０．０１であり、好ましくは０．１：１００〜１００：０．１であり、より好ましくは１：１０〜１０：１であり、特に好ましくは１：２〜２：１である。本発明の経皮吸収性製剤においては、実質的に水を含まないことが好ましい。「実質的に水を含まない」とは、水の経皮吸収性製剤に対する重量割合が、１０％未満であることを指し、好ましくは、５％未満であり、更に好ましくは２％未満であり、最も好ましくは、１％未満である。水を含むことで、当該経皮吸収性製剤が、水相と油相に分離し、経皮吸収性能に悪影響を与える恐れがある。特に、油溶性経皮浸透促進物質を含む様態においては、水の油溶性経皮浸透促進物質に対する重量割合が、例えば２０％未満であり、好ましくは１０％未満であり、より好ましくは５％未満であり、更に好ましくは３％未満であり、最も好ましくは１％未満である。油溶性経皮浸透促進物質に対する水分量が多いと、当該経皮吸収性製剤にゲル化が生じ、経皮吸収性能に悪影響を与える恐れがある。
【００２２】
油溶性経皮浸透促進物質の例としては、ホスホグリセリド、グリセリド、糖アルコールの脂肪酸エステル、グリコールの脂肪酸エステル、脂肪酸、テルペンおよび精油等が挙げられる。
ホスホグリセリドの例としては、レシチン（ホスファチジルコリン）が挙げられる。
グリセリド（すなわち、グリセリンの脂肪酸エステル）は、グリセリンの飽和脂肪酸エステルまたは不飽和脂肪酸エステルのいずれでもよいが、グリセリンの不飽和脂肪酸エステルが好ましく、グリセリンの炭素数１６〜２２の不飽和脂肪酸エステル、例えば、モノオレイン酸グリセリル、ジオレイン酸グリセリル、モノリノール酸グリセリル、モノリノレン酸グリセリルがより好ましく、モノオレイン酸グリセリル、モノリノール酸グリセリルまたはその組み合わせが特に好ましい。
糖アルコールの脂肪酸エステルの例としては、ショ糖オレイン酸エステル、オレイン酸ソルビタンが挙げられ、グリコールの脂肪酸エステルの例としては、オレイン酸プロピレングリコール、オレイン酸ポリエチレングリコールが挙げられる。
脂肪酸の例としては、オレイン酸、リノール酸、リノレン酸等が挙げられ、テルペンの例としては、ファルネソール、β-シトロネロール、シトラール、ゲラニオール、ネロリドール等が挙げられる。
油溶性経皮浸透促進物質は、好ましくは、レシチン、テルペン、モノオレイン酸グリセリル、モノリノール酸グリセリルまたはその組み合わせである。
【００２３】
（経皮吸収性製剤の調製）
本発明における経皮吸収性製剤の調製方法は、(i)油性基剤と親水性薬物とを混合する工程、を含む。本発明における経皮吸収性製剤は、親水性薬物の少なくとも一部を、油性基剤中で溶解させることなく懸濁状態で存在させること、好ましくは沈降させることが必要である。そのために、(ii)親水性薬物を粉砕する工程、を含むことが好ましい。工程(ii)は、工程(i)の前および／または後に実施することができ、工程(ii)で使用できる粉砕方法としては、公知の方法、例えば、ホモジナイザー、超音波破砕法、ビーズ粉砕法、乳鉢粉砕法、スプレードライ法等が挙げられる。
【００２４】
工程(i)の前の工程(ii)は、例えば、上記粉砕方法により、親水性薬物を粉砕、微粒化することにより実施してもよく、また予め所定の粒子径に粉砕された親水性薬物を購入してもよい。一方、工程(i)の後の工程(ii)は、上記粉砕方法により、油性基剤中の親水性薬物を粉砕、微粒化し、油性基剤中に懸濁させることにより実施してもよい。また、工程(i)の前に、工程(ii)を実施し、親水性薬物を粉砕、粗粒化しておき、さらに工程(i)の後に、工程(ii)を追加実施し、親水性薬物を粉砕、微粒化してもよい。粉砕条件は、粉砕により薬物分子が損傷されるものでなければ、特に限定されない。例えば、ホモジナイザーを用いる場合、その回転数は、好ましくは１５０００rpm〜２００００rpmである。
【００２５】
本発明における親水性薬物の粒子径は、小さいほど、より高い経皮吸収効果を示すが、好ましくは１００μm以下であり、より好ましくは５０μm以下であり、最も好ましくは１０μm以下であり、また好ましくは０．０１μm以上であり、より好ましくは０．１μm以上であり、最も好ましくは０．３μm以上である。
【００２６】
本発明における親水性薬物のゼータ電位（ζ電位）は、例えば、後述の実施例６に記載の測定方法に従い、リン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）中、２５℃で、電気泳動光散乱法により測定した場合、好ましくは−５０〜１０mVであり、より好ましくは−４０〜０mVであり、特に好ましくは負の値、例えば−３０〜−０．００１mVである。
【００２７】
さらに本発明における経皮吸収性製剤の調製方法は、(iii)油溶性経皮浸透促進物質を混合する工程を含んでもよい。工程(iii)は、工程(i)を含む製造方法において、任意の順番で実施すればよい。例えば、上述の混合工程(i)の前に、(iii-a)油性基剤と、油溶性経皮浸透促進物質とを混合すること、または、(iii-b)親水性薬物と、油溶性経皮浸透促進物質とを混合することにより実施してもよく、あるいは、上述の工程(i)の後に、(iii-c)油性基剤および親水性薬物の混合物と、油溶性経皮浸透促進物質とを混合することにより実施してもよい。その際、上述の工程(ii)は、工程(i)の前および／または後に実施してもよいが、工程(iii-b)の前および／または後、工程(iii-c)の前および／または後に実施してもよい。すなわち、本発明における経皮吸収性製剤の調製方法は、典型的には、工程(i)を含み、好ましくは工程(i)および(ii)を含み、より好ましくは工程(i)、(ii)および(iii)を含み、製剤に含まれる各成分等に応じて、工程(i)→工程(ii)の順、工程(ii)→工程(i)→工程(ii)の順、工程(i)→工程(ii)→工程(iii-c)の順、工程(iii-a)→工程(i)→工程(ii)の順、工程(iii-b)→工程(i)→工程(ii)の順、工程(iii-b)→工程(ii)→工程(i)の順等で実施することができる。
【００２８】
このようにして得られる本発明における経皮吸収性製剤は、そのまま使用してもよいが、さらに当業者に公知の方法により製剤化を行い、軟膏剤、クリーム剤、ローション剤、スプレー剤、貼付剤の形態で使用してもよい。
【００２９】
本発明はまた、親水性薬物および油性基剤を含む経皮吸収性製剤において、 親水性薬物の少なくとも一部を油性基剤中で溶解することなく懸濁状態で存在させることを特徴とする、親水性薬物の経皮吸収性を向上させる方法に関する。かかる方法において、「親水性薬物」、「油性基剤」、「経皮吸収性製剤」等の用語の意味や好ましい態様は、上記のとおりである。また、本発明において「経皮吸収性が向上する」とは、例えば、後述の実施例９に記載したように、in vitro皮膚浸透性試験において、本発明の製剤と、ＰＢＳ溶液およびＳ／Ｏ製剤とを比較した際に、皮膚浸透量において前者が後者よりも高い値を示すことを意味する。
【００３０】
本発明はまた、親水性薬物および油性基剤を含む経皮吸収性製剤であって、 親水性薬物の少なくとも一部が油性基剤中で溶解することなく懸濁状態で存在することを特徴とする製剤を、皮膚と接触させる工程を含む、親水性薬物を経皮投与する方法に関する。かかる方法において、「親水性薬物」、「油性基剤」、「経皮吸収性製剤」等の用語の意味や好ましい態様は、上記のとおりである。また、本発明において、「製剤を、皮膚と接触させる工程」は、例えば、軟膏剤、クリーム剤、ローション剤、スプレー剤、貼付剤の形態である製剤を、その製剤形態に応じて、ヒトの皮膚表面の適切な箇所に、適宜、塗布、噴霧、貼付することにより実施される。
【００３１】
以下に本発明の実施例を示すが、それによって本発明を何ら限定するものではない。
【実施例】
【００３２】
（実施例１：乳アレルギーペプチド（cow’s milk allergy peptide, ＣＭＡＰ）ワクチンの皮膚浸透性への油性基剤の影響）
＜製剤の調製＞
ＦＩＴＣ（Fluorescein isothiocyanate）を標識したＣＭＡＰペプチド（配列：ＬＬＤＡＱＳＡＰＬＲＶＹＶＥＥＬＫＰ）８mgを５mL容ガラスバイアル瓶に秤量し、ミリスチン酸イソプロピル（ＩＰＭ；東京化成工業（株）製）４mLを添加後、７mm径シャフトを装着したポリトロンホモジナイザー ＰＴ２５００（キネマチカ製）を用いて２０，０００rpmで２分間撹拌することで、２mg/mLのペプチド粒子を含むSolid in Oil Suspension（Ｓ／Ｏ−Ｓ）製剤を得た。
２mg/mLのＳ／Ｏ−Ｓ製剤と、ＩＰＭ、流動パラフィン（和光純薬工業（株）製）、揮発性シリコーン（ＫＦ−９９５；信越化学工業（株）製）、オリーブ油（和光純薬工業（株）製）、ホホバ油（和光純薬工業（株）製）、オレイン酸（和光純薬工業（株）製）またはリノール酸（和光純薬工業（株）製）とを、それぞれ１：１（v/v）で混合することで、各種油性基剤を含む、ＯＶＡ含有量１mg/mLのＳ／Ｏ−Ｓ製剤を得た。【００３３】
＜in vitro皮膚浸透性試験＞
チャールスリバーより購入したYucatan micropig（ＹＭＰ）皮膚をフランツ型拡散セル（有効面積０．７８５cm2）にセットし、レシーバー相に５mLのＰＢＳ溶液を充填した。ドナー相に２００μLのＳ／Ｏ−Ｓ製剤を添加し、３２℃でインキュベートした。２４時間後、ＹＭＰ皮膚を回収してエタノールおよび純水（Milli-Q水）で洗浄後、細かく刻み、ＰＢＳ溶液中２４時間高速振盪した。ＰＢＳ溶液に抽出されたＦＩＴＣ−標識ＣＭＡＰペプチド量を、蛍光プレートリーダーを用いて定量した。
各種油性基剤を添加したＳ／Ｏ−Ｓ製剤を用いた際の、ＣＭＡＰペプチドの皮膚浸透量を図１に示す。
オリーブ油およびオレイン酸を油性基剤として使用したときに、高い経皮浸透促進効果が得られることが分った。【００３４】
（実施例２：卵白アルブミン（ＯＶＡ）の皮膚浸透性に与える油溶性経皮浸透促進物質の影響）
＜製剤の調製＞
ＦＩＴＣ（Fluorescein isothiocyanate）を標識したＯＶＡ（Sigma-Aldlich製）８mgを５mL容ガラスバイアル瓶に秤量し、ＩＰＭ４mLを添加後、７mm径シャフトを装着したポリトロンホモジナイザー ＰＴ２５００を用いて２０，０００rpmで２分間撹拌することで、２mg/mLのＯＶＡ粒子を含むＳ／Ｏ−Ｓ製剤を得た。
ショ糖ラウリン酸エステル（Ｌ１９５；三菱ケミカルフーズ（株）製）、大豆由来レシチンPhospholipon 90G（Ｐ９０Ｇ；エイチ・ホルスタイン（株）製）、モノオレイン酸グリセリル（ＭＧＯＬ−７０；日光ケミカルズ（株）製）またはショ糖オレイン酸エステル（Ｏ１７０；三菱ケミカルフーズ（株）製）をそれぞれ、５０mg/mLとなるようＩＰＭに溶解させ、上記Ｓ／Ｏ−Ｓ製剤と１：１（v/v）で混合することで、各種油溶性経皮浸透促進物質を含む、ＯＶＡ含有量１mg/mLのＳ／Ｏ−Ｓ製剤を得た。【００３５】
＜in vitro皮膚浸透性試験＞
チャールスリバーより購入したYucatan micropig（ＹＭＰ）皮膚をフランツ型拡散セル（有効面積０．７８５cm2）にセットし、レシーバー相に５mLのＰＢＳ溶液を充填した。ドナー相に２００μLのＳ／Ｏ−Ｓ製剤を添加し、３２℃でインキュベートした。２４時間後、ＹＭＰ皮膚を回収してエタノールおよびMilli-Q水で洗浄後、細かく刻み、ＰＢＳ溶液中２４時間高速振盪した。ＰＢＳ溶液に抽出されたＦＩＴＣ−標識ＯＶＡ量を、蛍光プレートリーダーを用いて定量した。またコントロールとして、ＰＢＳ溶液（ＯＶＡ濃度１mg/mL）、油溶性経皮浸透促進物質を含まないＳ／Ｏ−Ｓ製剤（ＯＶＡ濃度１mg/mL）、Ｌ１９５を用いて調製したＳ／Ｏナノ粒子（ＯＶＡ濃度１mg/mL）を用いた。
Ｓ／Ｏ−Ｓ製剤への各種油溶性経皮浸透促進物質の経皮浸透促進効果を図２に示す。
Ｓ／Ｏ−Ｓ製剤にＭＧＯＬ-７０を添加することで、添加しない場合の１５倍、ＰＢＳ溶液の３０倍という高い経皮浸透促進効果が得られた。【００３６】
（実施例３：卵白アルブミン（ＯＶＡ）の皮膚浸透性と油溶性経皮浸透促進物質濃度の関係）
＜製剤の調製＞
ＦＩＴＣ（Fluorescein isothiocyanate）を標識したＯＶＡ８mgを５mL容ガラスバイアル瓶に秤量し、ＩＰＭ４mLを添加後、７mm径シャフトを装着したポリトロンホモジナイザー ＰＴ２５００（キネマチカ製）を用いて２０，０００rpmで２分間撹拌することで、２mg/mLのＯＶＡ粒子を含むＳ／Ｏ−Ｓ製剤を得た。
ショ糖ラウリン酸エステル（Ｌ−１９５）、ショ糖エルカ酸エステル（ＥＲ−２９０；三菱ケミカルフーズ（株）製）、大豆由来レシチンPhospholipon 90G（Ｐ９０Ｇ）およびモノオレイン酸グリセリル（ＭＧＯＬ−７０）をそれぞれ、２、１０、５０、１００mg/mLとなるようＩＰＭに溶解させ、上記Ｓ／Ｏ−Ｓ製剤と１：１（v/v）で混合することで、各種油溶性経皮浸透促進物質を含む１mg/mLのＳ／Ｏ−Ｓ製剤を得た。【００３７】
＜in vitro皮膚浸透性試験＞
チャールスリバーより購入したYucatan micropig（ＹＭＰ）皮膚をフランツ型拡散セル（有効面積０．７８５cm2）にセットし、レシーバー相に５mLのＰＢＳ溶液を充填した。ドナー相に２００μLのＳ／Ｏ−Ｓ製剤を添加し、３２℃でインキュベートした。２４時間後、ＹＭＰ皮膚を回収してエタノールおよびMilli-Q水で洗浄後、細かく刻み、ＰＢＳ溶液中２４時間高速振盪した。ＰＢＳ溶液に抽出されたＦＩＴＣ−標識ＯＶＡ量を、蛍光プレートリーダーを用いて定量した。
Ｓ／Ｏ−Ｓ製剤への各種油溶性経皮浸透促進物質濃度と経皮浸透促進効果の関係を図３に示した。
油溶性経皮浸透促進物質としてＥＲ２９０（Ａ）、Ｌ１９５（Ｂ）、Ｐ９０Ｇ（Ｃ）、ＭＧＯＬ−７０（Ｄ）を使用した。ＥＲ２９０およびＬ１９５がＯＶＡの経皮浸透を阻害する傾向にある一方、Ｐ９０ＧおよびＭＧＯＬ−７０は促進する傾向にあることが分った。【００３８】
（実施例４：卵白アルブミン（ＯＶＡ）の皮膚浸透性に与えるテルペンの影響）
＜製剤の調製＞
ＦＩＴＣ（Fluorescein isothiocyanate）を標識したＯＶＡ８mgを５mL容ガラスバイアル瓶に秤量し、Phospholipon 90Gを２mg/mL含有するＩＰＭ４mLを添加後、７mm径シャフトを装着したポリトロンホモジナイザー ＰＴ２５００（キネマチカ製）を用いて２０，０００rpmで２分間撹拌することで、２mg/mLのＯＶＡ粒子を含むＳ／Ｏ−Ｓ製剤を得た。
Farnesol、Nerolidol、Geraniolまたはβ-Citronellol各１００μLとＩＰＭ９００μLを混合したものを、それぞれ上記Ｓ／Ｏ−Ｓ製剤と１：１（v/v）で混合することで、５vol%のテルペンを含む１mg/mLのＳ／Ｏ−Ｓ製剤を得た。【００３９】
＜in vitro皮膚浸透性試験＞
チャールスリバーより購入したYucatan micropig（ＹＭＰ）皮膚をフランツ型拡散セル（有効面積０．７８５cm2）にセットし、レシーバー相に５mLのＰＢＳ溶液を充填した。ドナー相に２００μLのＳ／Ｏ−Ｓ製剤を添加し、３２℃でインキュベートした。２４時間後、ＹＭＰ皮膚を回収してエタノールおよびMilli-Q水で洗浄後、細かく刻み、ＰＢＳ溶液中２４時間高速振盪した。ＰＢＳ溶液に抽出されたＦＩＴＣ−標識ＯＶＡ量を、蛍光プレートリーダーを用いて定量した。またコントロールとして、ＰＢＳ溶液（ＯＶＡ濃度１mg/mL）、乳化剤を含まないＳ／Ｏ−Ｓ製剤（ＯＶＡ濃度１mg/mL）、Ｌ１９５を用いて調製したＳ／Ｏナノ粒子（ＯＶＡ濃度１mg/mL）を用いた。
Ｓ／Ｏ−Ｓ製剤へのテルペンによる経皮浸透促進効果を図４に示す。結果より、Nerolidolを含むＳ／Ｏ−Ｓ製剤が、ＰＢＳ溶液の３６倍という高い経皮浸透促進効果を示すことが明らかとなった。【００４０】
（実施例５：卵白アルブミン（ＯＶＡ）の皮膚浸透性とテルペン濃度の関係）
＜製剤の調製＞
ＦＩＴＣ（Fluorescein isothiocyanate）を標識したＯＶＡ８mgを５mL容ガラスバイアル瓶に秤量し、Phospholipon 90Gを２mg/mL含有するＩＰＭ４mLを添加後、７mm径シャフトを装着したポリトロンホモジナイザー ＰＴ２５００（キネマチカ製）を用いて２０，０００rpmで２分間撹拌することで、２mg/mLのＯＶＡ粒子を含むＳ／Ｏ−Ｓ製剤を得た。
NerolidolまたはGeraniolを５mL容バイアルに５０、１００、２００、１０００μL添加し、ＩＰＭを加えて全量が１０００μLとなるように調整した。得られたテルペンとＩＰＭの混合液を、さらに上記Ｓ／Ｏ−Ｓ製剤と１：１（v/v）で混合することで、２．５、５、１０、５０vol%のテルペンを含む１mg/mLのＳ／Ｏ−Ｓ製剤を得た。【００４１】
＜in vitro皮膚浸透性試験＞
チャールスリバーより購入したYucatan micropig（ＹＭＰ）皮膚をフランツ型拡散セル（有効面積０．７８５cm2）にセットし、レシーバー相に５mLのＰＢＳ溶液を充填した。ドナー相に２００μLのＳ／Ｏ−Ｓ製剤を添加し、３２℃でインキュベートした。２４時間後、ＹＭＰ皮膚を回収してエタノールおよびMilli-Q水で洗浄後、細かく刻み、ＰＢＳ溶液中２４時間高速振盪した。ＰＢＳ溶液に抽出されたＦＩＴＣ−標識ＯＶＡ量を、蛍光プレートリーダーを用いて定量した。
油溶性経皮浸透促進物質としてNerolidol（Ａ）とGeraniol（Ｂ）を使用した。Ｓ／Ｏ−Ｓ製剤へのテルペンの添加濃度と経皮浸透促進効果の関係を図５に示す。Nerolidolは添加量が５−１０vol%で最大の経皮浸透効果を発揮し、過剰に添加すると浸透促進効果が減少したのに対し、Geraniolは添加量を５０%に増やしても経皮浸透促進効果が減少しなかった。【００４２】
（実施例６：ＭＧＯＬ−７０を含むＳ／Ｏ−Ｓ製剤の親水性高分子への経皮浸透促進効果）
＜製剤の調製＞
下記表１に示した各種親水性高分子８mgを５mL容ガラスバイアル瓶に秤量し、ＩＰＭ４mLを添加後、７mm径シャフトを装着したポリトロンホモジナイザー ＰＴ２５００（キネマチカ製）を用いて２０，０００rpmで２分間撹拌することで、２mg/mLの各種親水性高分子を含むＳ／Ｏ−Ｓ製剤を得た。
ＭＧＯＬ−７０を５０mg/mLとなるようＩＰＭに溶解させ、上記Ｓ／Ｏ−Ｓ製剤と１：１（v/v）で混合することで、２５mg/mLのＭＧＯＬ−７０を含む１mg/mLの親水性高分子Ｓ／Ｏ−Ｓ製剤を得た。【００４３】
＜in vitro皮膚浸透性試験＞
チャールスリバーより購入したYucatan micropig（ＹＭＰ）皮膚をフランツ型拡散セル（有効面積０．７８５cm2）にセットし、レシーバー相に５mLのＰＢＳ溶液を充填した。ドナー相に２００μLのＳ／Ｏ−Ｓ製剤を添加し、３２℃でインキュベートした。２４時間後、ＹＭＰ皮膚を回収してエタノールおよびMilli-Q水で洗浄後、細かく刻み、ＰＢＳ溶液中２４時間高速振盪した。
ＰＢＳ溶液に抽出されたＦＩＴＣ−標識親水性高分子量を、蛍光プレートリーダーを用いて定量した。
Green fluorescent protein（ＧＦＰ）は、タンパク質由来の蛍光強度をもとに定量を行った。Horseraddish peroxidase（ＨＲＰ）は、3,3',5,5'-tetramethylbenzidine（ＴＭＢ）溶液の発色反応を行い、４５０nmの吸光度から定量を行った。
表１より、ＭＧＯＬ−７０を含むＳ／Ｏ−Ｓ製剤が、各種親水性高分子の経皮浸透を促進することが示された。さらに、ＧＦＰやＨＲＰの挙動から、タンパク質を変性させずに皮膚内部へ浸透させることができる可能性が示唆された。【００４４】
【表１】
2019230939.tif 000003
【００４５】
＜ゼータ電位測定＞
上記表１に示した各種親水性高分子の一部（７種）１mgを、それぞれ１mLのＰＢＳ溶液に溶解させ、２５℃中、ゼータサイザーナノＺＳ（マルバーン社）を使用し、電気泳動光散乱法によりゼータ電位を測定した。結果を表２に示す。【００４６】
【表２】
2019230939.tif 000004
【００４７】
（実施例７：粒子径と浸透量の関係）
＜製剤の調製＞
ＦＩＴＣ（Fluorescein isothiocyanate）を標識したＯＶＡ８mgを５mL容ガラスバイアル瓶に秤量し、ＩＰＭ４mLを添加後、７mm径シャフトを装着したポリトロンホモジナイザー ＰＴ２５００（キネマチカ製）を用いて２０，０００rpmで２分間（Ｓ／Ｏ−Ｓ−２）撹拌することで、２mg/mLのＯＶＡ粒子を含むＳ／Ｏ−Ｓ製剤を得た。得られたＳ／Ｏ−Ｓ製剤を、６３５メッシュ（２０μm）の篩いにかけ、粒子の大きさによって分類した。ＭＧＯＬ−７０を２５mg/mLとなるよう添加し、粒子含有量を１mg/mLとなるように揃えて、Ｓ／Ｏ−Ｓ製剤１（２０μm以上）および製剤２（２０μm以下）を得た。【００４８】
＜in vitro皮膚浸透性試験＞
チャールスリバーより購入したYucatan micropig（ＹＭＰ）皮膚をフランツ型拡散セル（有効面積０．７８５cm2）にセットし、レシーバー相に５mLのＰＢＳ溶液を充填した。ドナー相に２００μLのＳ／Ｏ−Ｓ製剤を添加し、３２℃でインキュベートした。２４時間後、ＹＭＰ皮膚を回収してエタノールおよび純水（Milli-Q水）で洗浄後、細かく刻み、ＰＢＳ溶液中２４時間高速振盪した。ＰＢＳ溶液に抽出されたＦＩＴＣ−標識ＯＶＡ量を、蛍光プレートリーダーを用いて定量した。
皮膚浸透性試験結果を図６に示す。粒子の大きさが小さいほど皮膚への浸透性が上がる可能性が示唆された。【００４９】
（実施例８：基剤油の種類検討）
＜製剤の調製＞
ＦＩＴＣ（Fluorescein isothiocyanate）を標識したＯＶＡ４mgを５mL容ガラスバイアル瓶に秤量し、２５mg/mLのＭＧＯＬ−７０を含む油性基剤（ミリスチン酸イソプロピル、パルミチン酸イソプロピル、オリーブ油、スクアラン、流動パラフィン、揮発性シリコーンＫＦ−９９５）をそれぞれ４mL添加し、７mm径シャフトを装着したポリトロンホモジナイザー ＰＴ２５００（キネマチカ製）を用いて２０，０００rpmで２分間撹拌することで、１mg/mLのＯＶＡ粒子を含むＳ／Ｏ−Ｓ製剤を得た。【００５０】
＜in vitro皮膚浸透性試験＞
チャールスリバーより購入したYucatan micropig（ＹＭＰ）皮膚をフランツ型拡散セル（有効面積０．７８５cm2）にセットし、レシーバー相に５mLのＰＢＳ溶液を充填した。ドナー相に２００μLのＳ／Ｏ−Ｓ製剤を添加し、３２℃でインキュベートした。２４時間後、ＹＭＰ皮膚を回収してエタノールおよび純水（Milli-Q水）で洗浄後、細かく刻み、ＰＢＳ溶液中２４時間高速振盪した。ＰＢＳ溶液に抽出されたＦＩＴＣ−標識ＯＶＡ量を、蛍光プレートリーダーを用いて定量した。
皮膚浸透性試験結果を表３および図７に示す。ミリスチン酸イソプロピル、パルミチン酸イソプロピル、スクアラン等の油性基剤を用いることで、高い皮膚浸透効果が得られた。【００５１】
【表３】
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【００５２】
（実施例９：オリゴヒアルロン酸の経皮浸透）
＜製剤の調製＞
ＦＩＴＣ（Fluorescein isothiocyanate）を標識したオリゴヒアルロン酸（キユーピー（株）製）４mgを５mL容ガラスバイアル瓶に秤量し、２５mg/mLのＭＧＯＬ−７０を含むスクアランを４mL添加し、７mm径シャフトを装着したポリトロンホモジナイザー ＰＴ２５００（キネマチカ製）を用いて２０，０００rpmで２分間撹拌することで、１mg/mLのＦＩＴＣ−標識オリゴヒアルロン酸を含むＳ／Ｏ−Ｓ製剤を得た。
一方、ＦＩＴＣを標識したオリゴヒアルロン酸１mgを純水に、ショ糖エルカ酸エステルＥＲ−２９０ ２０mgをシクロヘキサンに溶解させたものを、ガラスバイアルに加えた。油相と水相を、１２mm径シャフトを装着したポリトロンホモジナイザー ＰＴ２５００（キネマチカ製）を用いて２６，０００rpmで２分間撹拌することで、Water-in-oil (Ｗ／Ｏ)エマルションを調製した。このＷ／Ｏエマルションを凍結乾燥し、得られたペースト状の界面活性剤-薬物複合体を1 mLのＩＰＭに分散させることで、１mg/mLのＦＩＴＣ−標識オリゴヒアルロン酸を含むＳ／Ｏ製剤を得て、対照として用いた。
さらにＦＩＴＣを標識したオリゴヒアルロン酸１mgを１mLのＰＢＳ溶液に溶解させ、１mg/mLのＦＩＴＣ−標識オリゴヒアルロン酸を含むＰＢＳ溶液として用いた。【００５３】
＜in vitro皮膚浸透性試験＞
ケー・エー・シーより購入したＳＰＦブタの皮膚（ＪＡ産）の皮下組織を除去し、フランツ型拡散セル（有効面積０．７８５cm2）にセットした後、レシーバー相に５mLのＰＢＳ溶液を充填した。ドナー相に２００μLのＳ／Ｏ−Ｓ製剤、Ｓ／Ｏ製剤およびＰＢＳ溶液をそれぞれ添加し、３２℃でインキュベートした。２４時間後、ブタ皮膚を回収してエタノールおよび純水（Milli-Q水）で洗浄後、細かく刻み、ＰＢＳ溶液中２４時間高速振盪した。ＰＢＳ溶液に抽出されたＦＩＴＣ−標識オリゴヒアルロン酸量を、蛍光プレートリーダーを用いて定量した。
皮膚浸透性試験結果を表４および図８に示す。Ｓ／Ｏ−Ｓ製剤にした場合、オリゴヒアルロン酸をＰＢＳ溶液の９倍の高効率で経皮浸透できた。【００５４】
【表４】
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【００５５】
＜蛍光顕微鏡観察＞
In vitro経皮浸透試験と同様の手順で、ＦＩＴＣ標識オリゴヒアルロン酸のＳ／Ｏ−Ｓ製剤、Ｓ／Ｏ製剤およびＰＢＳ溶液それぞれを食用ブタ皮膚に投与し、２４時間後にエタノールとMilli-Q水を用いて皮膚を洗浄した。
洗浄した皮膚をＯＣＴコンパウンド中−８０℃で瞬間凍結させ、クライオスタットミクロトームを用いて１５μmの組織切片を作製した。
得られた皮膚切片を、Keyence製蛍光顕微鏡を用いて観察した。結果を図９に示す。
Ｓ／Ｏ−Ｓ製剤を投与した皮膚では、皮膚深部からも緑色の蛍光が観察され、オリゴヒアルロン酸が皮膚内部へと浸透したことが示唆された。【００５６】
（実施例１０：５−アミノレブリン酸の経皮浸透）
＜製剤の調製＞
５−アミノレブリン酸（５−ＡＬＡ）４mgを５mL容ガラスバイアル瓶に秤量し、２５mg/mLのＭＧＯＬ−７０を含むミリスチン酸イソプロピルを４mL添加し、７mm径シャフトを装着したポリトロンホモジナイザー ＰＴ２５００（キネマチカ製）を用いて１５，０００rpmで１分間撹拌することで、１mg/mLの５−ＡＬＡを含むＳ／Ｏ−Ｓ製剤を得た。
一方、５−ＡＬＡ１mgを純水に、ショ糖エルカ酸エステルＥＲ−２９０ ２０mgをシクロヘキサンに溶解させたものを、ガラスバイアルに加えた。油相と水相を、１２mm径シャフトを装着したポリトロンホモジナイザー ＰＴ２５００（キネマチカ製）を用いて２６，０００rpmで２分間撹拌することで、Water-in-oil (Ｗ／Ｏ)エマルションを調製した。このＷ／Ｏエマルションを凍結乾燥し、得られたペースト状の界面活性剤-薬物複合体を1 mLのＩＰＭに分散させることで、１mg/mLの５−ＡＬＡを含むＳ／Ｏ製剤を得て、対照として用いた。
５−ＡＬＡ１mgを１mLのＰＢＳ溶液に溶解させ、１mg/mLの５−ＡＬＡを含むＰＢＳ溶液として対照として用いた。【００５７】
＜in vitro皮膚浸透性試験＞
星野試験動物飼育所より購入したＨＲ−１マウスの皮膚の皮下組織を除去し、フランツ型拡散セル（有効面積０．７８５cm2）にセットした後、レシーバー相に５mLのＰＢＳ溶液を充填した。ドナー相に２００μLのＳ／Ｏ−Ｓ製剤を添加し、３２℃でインキュベートした。５時間後、皮膚を回収してエタノールおよび純水（Milli-Q水）で洗浄後、４分割し、１mLＰＢＳ中１時間高速振盪した。ＰＢＳに抽出された５−アミノレブリン酸量をＬＣ−ＭＳを用いて定量した。
皮膚浸透性試験結果を表５および６に示す。Ｓ／Ｏ−Ｓ製剤にした場合、５−アミノレブリン酸を、ＰＢＳ溶液の６倍の効率で経皮浸透できた。【００５８】
【表５】
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【００５９】
【表６】
2019230939.tif 000008
【００６０】
（実施例１１：卵白アルブミン（ＯＶＡ）の皮膚浸透性に与えるグリセリンの脂肪酸エステルの影響）
＜製剤の調製＞
ＦＩＴＣ（Fluorescein isothiocyanate）を標識したＯＶＡ８mgを５mL容ガラスバイアル瓶に秤量し、ＩＰＭ４mL添加し、７mm径シャフトを装着したポリトロンホモジナイザー ＰＴ２５００（キネマチカ製）を用いて２０，０００rpmで２分間撹拌することで、製剤１を得た。
モノオレイン酸グリセリルおよびモノリノール酸グリセリルを、下記表７の組成でＩＰＭに溶解させ、製剤２とした。
製剤１と製剤２を１対１の容積比で混合させ、以下の皮膚浸透性試験に用いた。【００６１】
【表７】
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【００６２】
＜in vitro皮膚浸透性試験＞
星野試験動物飼育所より購入したＨＲ−１マウスの皮膚の皮下組織を除去し、フランツ型拡散セル（有効面積０．７８５cm2）にセットした後、レシーバー相に５mLのＰＢＳ溶液を充填した。ドナー相に２００μLのＳ／Ｏ−Ｓ製剤を添加し、３２℃でインキュベートした。４時間後にレシーバー相を回収し、プレートリーダーを用いて皮膚を透過したＦＩＴＣ−ＯＶＡの量を定量した。結果を表８に示す。
表８のモノリノール酸グリセリルと皮膚浸透量の関係より、モノリノール酸グリセリルの添加比率が増えるに従い、薬物の皮膚浸透量が上昇した。【００６３】
【表８】
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【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【配列表】
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【国際調査報告】
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