(57)【要約】  脳血流低下を予防及び／又は改善できる組成物を提供すること。  ビフィドバクテリウム属細菌を有効成分として含有する脳血流低下の予防及び／又は改善用組成物；好適には、前記ビフィドバクテリウム属細菌がビフィドバクテリウム・ロンガム及び／又はビフィドバクテリウム・ブレーベである；また、前記組成物が、脳血管性認知症に用いられるものである；また、好適には前記組成物が医薬品組成物又は飲食品組成物である。【特許請求の範囲】
【請求項１】
ビフィドバクテリウム属細菌を有効成分として含有する脳血流低下の予防及び／又は改善用組成物。
【請求項２】
ビフィドバクテリウム属細菌を有効成分として含有する、脳血管性認知症、めまい、立ちくらみ、手足の麻痺、頭痛、耳鳴りから選択される症状又は疾患の予防及び／又は改善用組成物。
【請求項３】
前記ビフィドバクテリウム属細菌がビフィドバクテリウム・ロンガム及び／又はビフィドバクテリウム・ブレーベである、請求項１又は２記載の組成物。
【請求項４】
前記組成物が脳血管性認知症に用いられるものである、請求項１〜３の何れか１項記載の組成物。
【請求項５】
前記組成物が医薬品組成物又は飲食品組成物である、請求項１〜４の何れか１項記載の組成物。
【請求項６】
脳血流低下の予防及び／若しくは改善のための、ビフィドバクテリウム属細菌又はその使用。
【請求項７】
ビフィドバクテリウム属細菌を投与又は摂取する、脳血流低下の予防及び／若しくは改善のための方法。
【請求項８】
脳血流低下の予防及び／若しくは改善用組成物の製造のための、ビフィドバクテリウム属細菌の使用。
【請求項９】
下記工程（Ａ）〜（Ｂ）を含む、脳血管性認知症予防・改善用飲食品組成物の製造方法：
（Ａ）培地でビフィドバクテリウム属細菌を培養し、培養物を得る工程；
（Ｂ）前記培養物を凍結乾燥に供し、菌末を得る工程。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本技術は、脳血流低下の予防及び／又は改善用の組成物に関する。
【背景技術】
【０００２】
社会が成熟することによって中高年から高齢者の人口が増加する傾向にある。高齢者人口が増加するとともに認知症が社会的な問題となってきている。クオリティー・オブ・ライフの向上やロコモティブシンドロームの対策等が提唱されていることもあり、認知症に対する予防又は改善への関心が高まっている。【０００３】
ところで、認知症には、アルツハイマー型認知症、脳血管性認知症、レビー小体型認知症、前頭側頭型認知症等があることが知られている。アルツハイマー型認知症が主な割合を占め、次に脳血管性認知症やレビー小体型認知症が続く。アルツハイマー型認知症の症状は、老人斑や神経原線維変化により神経細胞の脱落と脳の萎縮が生じることによって、緩徐に進行していく（非特許文献１）。一方で、脳血管性認知症の症状は、脳の血管障害、脳梗塞や脳出血等によって脳内の脳血流が低下することにより脳の神経細胞又は神経回路網に酸素や栄養が行き届かなくなり、進行していく（非特許文献２）。【０００４】
そして、実際の医療現場では、脳血管性認知症は、アルツハイマー病（アルツハイマー型認知症）やパーキンソン病といった神経変異性疾患とは治療方針も異なるため、アルツハイマー型認知症と区別されている。このため、脳血管性認知症とアルツハイマー型認知症とは、臨床学的な基準をもって鑑別されている。これらを鑑別するため、例えば、米国精神医学会による精神疾患の診断・統計マニュアル；改定第４版（DSM-IV）における、Alzheimer診断基準及び血管性認知症（Vascular Dementia；VaD)の診断基準が利用されている（非特許文献１及び２）。【０００５】
脳血管性認知症は、アルツハイマー型認知症に次いで頻度の高い認知症である。けれどアルツハイマー型認知症の予防又は改善用の化合物の研究開発は積極的に行われているのに対し、脳血管性認知症の予防又は改善用の化合物の研究開発は未だ不十分である。【０００６】
例えば、非特許文献３では、ペプチドホルモンであるアデレノメデュリンを過剰発現させたマウスに慢性脳低灌流モデル（ＢＣＡＳ）手術を施してから７日目に脳血流や血管新生を評価し、さらに手術２８日後に作業記憶障害の抑制についての検討が行われている。その結果、非特許文献３では、アデレノメデュリンが脳血管性認知症の治療法となり得ると結論付けられている。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【０００７】
【非特許文献１】日本神経学会https://www.neurology-jp.org/guidelinem/degl/sinkei_degl_2010_06.pdf  219-250  第5章  Alzheimer病。
【非特許文献２】日本神経学会  https://www.neurology-jp.org/guidelinem/degl/sinkei_degl_2010_07.pdf  251-294  第6章  血管性認知症。
【非特許文献３】上原記念生命科学財団研究報告集, 25 (2011)https://ueharazaidan.yoshida-p.net/houkokushu/Vol.25/pdf/152_report.pdf
【非特許文献４】Shibata et al., Stroke. 35:2598-2603, 2004
【非特許文献５】Transl. Stroke Res. (2018) 9: 51-63
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００８】
しかしながら、脳血管性認知症の予防又は改善用の化合物の知見は未だ不十分である。
ここで、上述した慢性脳低灌流モデル（ＢＣＡＳ）は、コイル装着により脳血流を長期間低下させてマウスの脳が慢性虚血状態に陥り、認知機能低下が誘導される（非特許文献４）。そして、ＢＣＡＳ手術を施した後でもＣ−ＲＩＣ療法によって脳血流改善ができること、及びこの療法により新規物体認識機能も改善できる（非特許文献５）。このことから、ＢＣＡＳモデルを用いて新規物体認識機能の低下が予防又は改善できる化合物を探索できれば、当該化合物は脳血流の低下も同様に予防又は改善できると本発明者らは考えた。
そして、本発明者らは、両側総頸動脈にマイクロコイルを外科的手術により装着することによって脳内の脳血流量を低下させた慢性脳低灌流モデル（ＢＣＡＳ）を利用して、脳血流低下の予防及び／又は改善できる組成物を提供するものである。【０００９】
すなわち、本技術は、脳血流低下を予防及び／又は改善できる組成物を提供することを主な目的とする。
【課題を解決するための手段】
【００１０】
そして、本発明者らは、鋭意検討を行った結果、ビフィドバクテリウム属細菌を摂取させれば脳血流の低下を予防及び／又は改善できること、並びに脳血管性の認知症を予防及び／又は改善できることを見出し、本発明を完成させた。
すなわち、本発明は以下のとおりである。【００１１】
〔１〕  ビフィドバクテリウム属細菌を有効成分として含有する脳血流低下の予防及び／又は改善用組成物。
〔２〕  ビフィドバクテリウム属細菌を有効成分として含有する、脳血管性認知症、めまい、立ちくらみ、手足の麻痺、頭痛、耳鳴りから選択される症状又は疾患の予防及び／又は改善用組成物。
〔３〕前記ビフィドバクテリウム属細菌がビフィドバクテリウム・ロンガム及び／又はビフィドバクテリウム・ブレーベである、前記〔１〕又は〔２〕に記載の組成物。
〔４〕  前記組成物が脳血管性認知症に用いられるものである、前記〔１〕〜〔３〕の何れか１つに記載の組成物。
〔５〕  前記組成物が医薬品組成物又は飲食品組成物である、前記〔１〕〜〔３〕の何れか１つ記載の組成物。
〔６〕  脳血流低下の予防及び／若しくは改善のための、ビフィドバクテリウム属細菌又はその使用。
〔７〕  ビフィドバクテリウム属細菌を投与又は摂取する、脳血流低下の予防及び／若しくは改善のための方法。
〔８〕  脳血流低下の予防及び／若しくは改善用組成物の製造のための、ビフィドバクテリウム属細菌の使用。
〔９〕  下記工程（Ａ）〜（Ｂ）を含む、脳血管性認知症予防・改善用飲食品組成物の製造方法：（Ａ）培地でビフィドバクテリウム属細菌を培養し、培養物を得る工程；（Ｂ）前記培養物を凍結乾燥に供し、菌末を得る工程。
【発明の効果】
【００１２】
本技術によれば、脳血流低下を予防及び／又は改善できる組成物を提供することができる。なお、ここに記載された効果は、必ずしも限定されるものではなく、本技術中に記載されたいずれかの効果であってもよい。
【発明を実施するための形態】
【００１３】
以下、本発明の好ましい実施形態について説明する。ただし、本発明は以下の好ましい実施形態に限定されず、本発明の範囲内で自由に変更することができるものである。これにより本技術の範囲が狭く解釈されることはない。なお、本明細書において百分率は特に断りのない限り質量による表示である。
【００１４】
本技術は、ビフィドバクテリウム属に属する細菌（以下、「ビフィドバクテリウム属細菌」ともいう）を有効成分として含有する組成物であり、当該組成物は脳血流低下の予防及び／又は改善用組成物である。当該組成物としては、医薬品組成物及び飲食品組成物、動物飼料組成物等が挙げられる。
【００１５】
本技術に使用するビフィドバクテリウム属細菌は、特に限定されない。本技術に使用するビフィドバクテリウム属細菌は、ヒト又はヒト以外の動物の腸内環境を整えることができるプロバイオティクスに使用可能な細菌であることが好適であり、これにより本技術のビフィドバクテリウム属細菌は長期間摂取しても安全性が高い。
【００１６】
本技術に使用するビフィドバクテリウム属細菌として、特に限定されないが、例えば、Bifidobacterium longum（以下、「ビフィドバクテリウム・ロンガム」ともいう）；Bifidobacterium breve（以下、「ビフィドバクテリウム・ブレーベ」ともいう）； Bifidobacterium bifidum；Bifidobacterium animalis；Bifidobacterium adolescentis等が挙げられる。
また、本技術に使用するビフィドバクテリウム属細菌として、例えば、ビフィドバクテリウム・ロンガム・サブスピーシーズ・ロンガム（Bifidobacterium longum subsp. longum）；ビフィドバクテリウム・ブレーベ（Bifidobacterium breve）；ビフィドバクテリウム・ロンガム・サブスピーシーズ・インファンティス（Bifidobacterium longum subsp. infantis）； ビフィドバクテリウム・ビフィダム（Bifidobacterium bifidum）；Bifidobacterium animalis subsp. animalis；Bifidobacterium animalis subsp. lactis；Bifidobacterium adolescentis等が挙げられる。
これらからなる群から選ばれる１種又は２種以上を用いることが可能である。
また、ビフィドバクテリウム属細菌の形態は、特に制限されず、生菌体、死菌体、殺菌体、湿潤菌、乾燥菌及びこれらの破砕物等、任意の形態の何れでもよい。この形態のうち、湿潤又は乾燥の状態を問わないが、生菌体及び／又は死菌体が好ましく、生菌体がより好ましい。
前記ビフィドバクテリウム属細菌のうち、より好ましくはビフィドバクテリウム・ロンガム及び／又はビフィドバクテリウム・ブレーベであり、また、ビフィドバクテリウム・ロンガムのうち、ビフィドバクテリウム・ロンガム・サブスピーシーズ・ロンガムが、効能の観点から、好ましい。本技術において、ビフィドバクテリウム・ブレーベ及び／又はビフィドバクテリウム・ロンガム・サブスピーシーズ・ロンガムが好ましい。
【００１７】
なお、ビフィドバクテリウム・ロンガム・サブスピーシーズ・ロンガムは、乳幼児、小児、成人及び老人と幅広い年齢層で、ヒトの腸内に存在する細菌であり、安全性が高い。
ビフィドバクテリウム・ブレーベは、乳幼児、小児の年齢層で見られ、ヒトの腸内に存在する細菌であり、安全性が高い。しかし、ビフィドバクテリウム・ブレーベの細菌は、年齢とともに減少し成人及び老人になると減少又は存在しなくなる細菌である。
ビフィドバクテリウム・ロンガム・サブスピーシーズ・インファンティスは、乳幼児、小児の年齢層で見られ、ヒトの腸内に存在する細菌であり、安全性が高い。しかし、当該細菌は、年齢とともに減少し成人及び老人になると減少又は存在しなくなる細菌である。
【００１８】
前記ビフィドバクテリウム・ロンガム・サブスピーシーズ・ロンガムのうち、［１］ビフィドバクテリウム・ロンガム  ＮＩＴＥ  ＢＰ−０２６２１（別名：ビフィドバクテリウム・ロンガム  BB536）が好ましい。
前記ビフィドバクテリウム・ブレーベのうち、［２］ビフィドバクテリウム・ブレーベ  ＦＥＲＭ  ＢＰ−１１１７５（別名：ビフィドバクテリウム・ブレーベ  MCC1274）が好ましい。
これらからなる群から選ばれる１種又は２種以上の細菌の混合物が、好ましい。
【００１９】
［１］  ビフィドバクテリウム・ロンガム  ＮＩＴＥ  ＢＰ−０２６２１（Bifidobacterium longum BB536）は、独立行政法人  製品評価技術基盤機構  特許微生物寄託センター（ＮＰＭＤ）（住所：〒２９２−０８１８  日本国千葉県木更津市かずさ鎌足２−５−８  １２２号室）に、２０１８年１月２６日にＮＩＴＥ  ＢＰ−０２６２１の受託番号で、ブダペスト条約に基づく国際寄託がなされたものである。これと同一の細菌であるBifidobacterium longum subsp. longum ATCC BAA-999（番号：ATCC BAA-999）菌は、American Type Culture Collection（ＡＴＣＣ）から、ATCC BAA-999として入手可能である（例えば、特開2012-223134等参照）。
［２］  ビフィドバクテリウム・ブレーベ  ＦＥＲＭ  ＢＰ‐１１１７５（Bifidobacterium breve MCC1274）は、独立行政法人産業技術総合研究所特許生物寄託センター（現  独立行政法人製品評価技術基盤機構（ＮＩＴＥ）特許生物寄託センター（IPOD）（NITE-IPOD））（（住所：〒２９２−０８１８  日本国千葉県木更津市かずさ鎌足２−５−８  １２２号室）に、２００９年８月２５日に受託番号FERM BP-11175の受託番号で、ブダペスト条約に基づく国際寄託がなされたものである。
これら［１］、［２］の細菌は、上記保存機関又は国際寄託機関より一般に入手可能である。
【００２０】
前記［１］及び［２］の各細菌と同一の細菌とは、同属の細菌であって、１６ＳｒＲＮＡ遺伝子の塩基配列が、これら各細菌の１６ＳｒＲＮＡ遺伝子の塩基配列と９８％以上、好ましくは９９％以上、より好ましくは１００％の相同性を有し、且つ、好ましくはこれら各細菌と同一の菌学的性質を有する。
さらに、本技術の効能が損なわれない限り、これら各細菌から、変異処理、遺伝子組換え、自然変異株の選択等によって育種された細菌であってもよい。
【００２１】
なお、上記例示した菌株名で特定される菌株には、当該菌株名で所定の機関に寄託や登録がなされている株そのもの（以下、説明の便宜上、「寄託株」ともいう）に限られず、それと実質的に同等な株（「派生株」または「誘導株」ともいう）も包含される。すなわち、例えば、上記［１］「ビフィドバクテリウム・ブレーベ  ＦＥＲＭ  ＢＰ‐１１１７５（Bifidobacterium breve MCC1274）には、ＦＥＲＭ  ＢＰ−１１１７５の寄託番号で上記寄託機関に寄託されている株そのものに限られず、それと実質的に同等な株も包含され、また、上記[２]もこの定義と同様である。
菌株について、「上記寄託株と実質的に同等の株」とは、上記寄託株と同一の種に属し、本技術の効果である脳血流低下の予防効果及び／又は改善効果等を得られる株を意味する。上記寄託株と実質的に同等の株は、例えば、当該寄託株を親株とする派生株であってよい。派生株としては、寄託株から育種された株や寄託株から自然に生じた株が挙げられる。
【００２２】
実質的に同一の菌株、派生株は下記のような株が挙げられる。
（１）ＲＡＰＤ法（Ｒａｎｄｏｍｌｙ  Ａｍｐｌｉｆｉｅｄ  Ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｃ  ＤＮＡ）、ＰＦＧＥ法（Ｐｕｌｓｅｄ−ｆｉｅｌｄ  ｇｅｌ  ｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｓｉｓ）法により同一の菌株と判定される菌株（Ｐｒｏｂｉｏｔｉｃｓ  ｉｎ  ｆｏｏｄ／Ｈｅａｌｔｈ  ａｎｄ  ｎｕｔｒｉｔｉｏｎａｌ  ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ  ａｎｄ  ｇｕｉｄｅｌｉｎｅｓ  ｆｏｒ  ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ  ８５  Ｐａｇｅ４３に記載）
（２）当該寄託菌株由来の遺伝子のみ保有し、外来由来の遺伝子を持たず、ＤＮＡの同一性が９５％以上（好適には９８％以上）である菌株
（３）当該菌株から育種された株（遺伝子工学的改変、突然変異、自然突然変異を含む）、同一の形質を有する株
【００２３】
本技術のビフィドバクテリウム属細菌は、それらを培養することにより容易に増殖させることができる。
本技術のビフィドバクテリウム属細菌を培養する方法は、ビフィドバクテリウム属細菌が増殖できる限り特に限定されず、ビフィドバクテリウム属細菌の培養に通常用いられる方法を必要により適宜修正して用いることができる。例えば、培養温度は２５〜５０℃でよく、３０〜４０℃であることが好ましい。培養は、嫌気条件下で行うことが好ましく、例えば、炭酸ガス等の嫌気ガスを通気しながら培養することができる。
【００２４】
前記ビフィドバクテリウム属細菌を培養する培地としては、特に限定されず、ビフィドバクテリウム属細菌の培養に通常用いられる培地を必要により適宜修正して用いることができる。当該培地の炭素源としては、例えば、ガラクトース、グルコース、フルクトース、マンノース、セロビオース、マルトース、ラクトース、スクロース、トレハロース、デンプン、デンプン加水分解物、廃糖蜜等の糖類を資化性に応じて使用できる。当該培地の窒素源としては、例えば、アンモニア、硫酸アンモニウム、塩化アンモニウム、硝酸アンモニウムなどのアンモニウム塩類や硝酸塩類を使用できる。また、当該培地の無機塩類としては、例えば、塩化ナトリウム、塩化カリウム、リン酸カリウム、硫酸マグネシウム、塩化カルシウム、硝酸カルシウム、塩化マンガン、硫酸第一鉄等を用いることができる。また、当該培地にはペプトン、大豆粉、脱脂大豆粕、肉エキス、酵母エキス等の有機成分を用いてもよい。また、当該培地は公知の培地を調製して使用してもよく、また、当該培地として、調製済みの培地としては、例えばＭＲＳ培地を好適に用いることができる。
【００２５】
本技術のビフィドバクテリウム属細菌は、培養後、得られた培養物をそのまま用いてもよく、希釈又は濃縮して用いてもよく、培養物から回収した菌体を用いてもよい。細菌は、生菌であっても死菌であってもよく、生菌及び死菌の両方であってもよいが、生菌であることが好ましい。
また、本技術の効能を損なわない限り、培養後に加熱、及び凍結乾燥等の種々の追加操作を行うことができる。追加の操作は、生菌の生残性が高いものであることが好ましい。  
【００２６】
本技術のビフィドバクテリウム属細菌は、後記実施例に示すように、脳血流低下の予防及び／又は改善作用、並びに、脳血管性認知症の予防及び／又は改善作用を有する。また、本技術のビフィドバクテリウム属細菌又は当該ビフィドバクテリウム属細菌含有組成物は、上述した脳血流低下に起因する症状又は疾患及び脳血管性認知症に対して有効である。
したがって、本技術のビフィドバクテリウム属細菌は、有効成分として脳血流低下の予防及び／又は改善作用の組成物、又は、脳血管性認知症の予防及び／又は改善作用の組成物に含有させることができる。また、本技術のビフィドバクテリウム属細菌は、有効成分として上述した各種効能を期待する組成物に含有させることができ、これら各種組成物は製剤としても使用できる。
本技術のビフィドバクテリウム属細菌は、ビフィドバクテリウム属細菌自体を単独としてそのまま用いることが可能であり、又は生理的若しくは薬剤学的に許容される通常の担体若しくは希釈剤と共に混合して用いることもできる。
また、本技術のビフィドバクテリウム属細菌は、医薬、飲食品及び飼料等の種々の用途及び種々の組成物に使用できる。
【００２７】
また、本技術は、上述した脳血流低下の予防・改善又は脳血管性認知症の予防・改善等の目的のために用いる、ビフィドバクテリウム属細菌又はその使用を提供することができる。また、本技術のビフィドバクテリウム属細菌は、脳血流低下を予防・改善する方法又は脳血管性認知症を予防・改善する方法の有効成分として使用することができる。
また、本技術のビフィドバクテリウム属細菌は、上述した効能を有する又は使用目的の各種製剤又は各種組成物等の製造のために使用することができる。
また、本技術のビフィドバクテリウム属細菌又は当該ビフィドバクテリウム属細菌含有組成物は、脳血流低下に起因する症状若しくは疾患に対する又は脳血管性認知症に対する、予防、改善又は治療に使用することが可能である。
【００２８】
また、本技術における脳血流の低下とは、脳全体又は脳の一部組織への必要な血流量が低下することである。この原因として、脳内の血管の幅が狭い又は狭くなること、脳内の血流の量又は速度が低下すること等が挙げられる。
本技術における脳血流低下に起因する症状若しくは疾患として、例えば、脳血管性認知症、めまい、立ちくらみ、手足の麻痺、頭痛、耳鳴り等が挙げられる。
【００２９】
また、本技術のビフィドバクテリウム属細菌は、適用対象であるヒト若しくは非ヒト動物（好適には霊長類）に使用してもよく、ヒト及びペットが好ましく、より好ましくはヒトである。
【００３０】
また、本技術は、治療目的使用であっても、非治療目的使用であってもよい。
「非治療目的」とは、医療行為、すなわち、治療による人体への処置行為を含まない概念である。例えば、健康増進、生活習慣病予防（例えば、境界領域の予備軍）等が挙げられる。
「予防」とは、適用対象における疾患若しくは症状の発症の防止や遅延、又は適用対象の疾患若しくは症状の危険性の低下をいう。
「改善」とは、疾患、症状又は状態の好転；悪化の防止又は遅延；進行の逆転、防止又は遅延をいう。
【００３１】
本技術において、本技術のビフィドバクテリウム属細菌の他に、必要に応じて、任意の成分を組み合わせて使用してもよい。任意成分として、医薬品、飲食品又は飼料等において許容される成分を適宜使用すればよい。任意成分として、例えば、糖類、糖アルコール類、多糖類、ｐＨ調整剤、脂肪酸エステル類、矯味矯臭剤、香料、賦形剤等が挙げられる。
【００３２】
本技術の組成物は、本技術のビフィドバクテリウム属細菌を用いることで製造することができる。また、本技術の組成物は、組成物の各種原料に、本技術のビフィドバクテリウム属細菌を後述するような所定の含有量になるように混合して、得ることができる。また、本技術の組成物で使用する各種原料の含有量又は使用量は、目的とする組成物で通常使用している各種原料の量を参照にして同等又は類似の量であってもよい。
本技術の組成物は、公知の製造方法を利用して製造することができる。
【００３３】
本技術の組成物の製造方法について、以下に説明するが、本技術の製造方法はこれに限定されない。これにより、新たな組成物を提供することができ、例えば、当該組成物の用途として、脳血流低下の予防・改善用、脳血管性認知症の予防・改善用、めまい予防・改善用、立ちくらみ予防・改善用、手足の麻痺の予防・改善用、頭痛の予防・改善用、耳鳴りの予防・改善用等が挙げられる。
【００３４】
また、本技術の製造方法において、飲食品組成物を製造することが好適であり、これは、本技術のビフィドバクテリウム属細菌は、摂取可能で安全性が高いので製造段階での取扱も容易であり、また、発酵技術（好適には発酵乳技術）を適用しやすく、また、要望に応じて乳成分又は植物系等の資化成分などの原料を適宜使用できるからである。また、本技術の製造方法では、健康を意識した飲食品組成物を提供することも可能であり、このうち、脳血管性認知症の予防・改善用飲食品組成物が好適である。
【００３５】
なお、本技術の組成物は発酵乳であってもよく、本技術の発酵乳を製造する場合、本技術の製造方法の製造工程において、ビフィドバクテリウム属細菌を用いた発酵工程を含んでもよいし、別のラインで製造された発酵物を混合する工程を含んでもよい。
また、本技術の製造方法で得られた組成物は、本技術のビフィドバクテリウム属細菌を含むため、本技術の効能を付加するための飲食品原料として使用することができ、本技術の効能が付加された飲食品又はその製造方法に使用することができる。
【００３６】
また、本技術の組成物の形態（例えば、タブレット、カプセル剤、錠剤等）に応じて、本技術の製造方法に、当該形態を形成するための工程を含んでもよく、これにより、本技術のビフィドバクテリウム属細菌を含む組成物を種々の形態にすることができる。この形成工程において、ビフィドバクテリウム属細菌と賦形剤等を混合して混合物を得ることができ、例えば、タブレットの場合、当該混合物を打錠すること；ドリンクの場合、当該混合物を容器に充填すること；カプセル剤の場合、当該混合物をカプセルに充填すること；が挙げられる。
【００３７】
本技術の組成物の製造方法について、第一の実施形態及び第二の実施形態として、説明するが、組成物の用途として、脳血管性認知症予防・改善用組成物に限定されるものではない。
また、本技術の第二の実施形態の製造方法として、第一の実施形態と重複する構成については、適宜省略する。第二の実施形態における（Ａ）培養を得る工程については、第一の実施形態の培養物を得る工程と同様に行うことができる。また、第二の実施形態における（Ｂ）菌末を得る工程については、第一の実施形態の菌末を得る工程と同様に行うことができる。
【００３８】
本技術は、第一の実施形態の製造方法として、下記（ａ）工程又は下記（ｂ）工程の少なくともいずれかを含む、脳血管性認知症予防・改善用組成物の製造方法：
（ａ）本技術のビフィドバクテリウム属細菌、及びプレバイオティクスを混合する工程；、又は、（ｂ）本技術のビフィドバクテリウム属細菌、及び乳成分を混合する工程；
を提供することができる。
さらに、前記（ａ）混合工程において、さらに乳成分を混合することが好適である。
【００３９】
本技術の第一の実施形態の製造方法によって、コストや作業性等の生産効率よく、また、本技術の効果を良好に発揮できる、脳血管性認知症予防・改善用組成物を得ることができる。
【００４０】
本技術の第一実施形態の製造工程において、さらに、プレバイオティクス及び／又は乳成分を混合することが好適である。当該プレバイオティクス及び／又は乳成分の混合する場合、当該製造工程のいずれの工程であってもよい。例えば、前記乳成分を配合する場合、前記（ａ）工程と同時期に、又はこの前工程若しくはこの後工程の何れでもよい。乳成分は粉体が好適である。本技術において、粉体状の組成物を製造する場合には、生産効率の観点から、粉体同士の材料を混合して粉体状の組成物を得ることが好適であるが、本技術は、これに限定されず、これら材料を混合後に公知の乾燥（例えば、後述の細菌の乾燥方法等）を行って粉体状の組成物を得ることも可能である。
【００４１】
また、本技術は、第二の実施形態の製造方法として、下記工程（Ａ）〜（Ｂ）を含む、脳血管性認知症予防・改善用の組成物の製造方法：
（Ａ）培地で本技術のビフィドバクテリウム属細菌を培養し、培養物を得る工程；
（Ｂ）前記培養物を乾燥に供し、菌末を得る工程；
を提供することができる。当該乾燥は、凍結乾燥が好適である。
【００４２】
本技術の第二の実施形態の製造方法によって、生産効率よく、また、本技術の効果を良好に発揮できる、脳血管性認知症予防・改善用の組成物を得ることができる。当該第二の実施形態の製造方法によって、飲食品組成物、医薬品組成物や飼料組成物を得ることができ、このうち、生産効率の観点から、発酵乳や菌末等の飲食品組成物を得ることが好適である。
【００４３】
本技術の製造方法に用いるビフィドバクテリウム属細菌は、上述した本技術のビフィドバクテリウム属細菌を用いることができる。当該ビフィドバクテリウム属細菌は、上述した本技術のビフィドバクテリウム属細菌を培養する方法に準じて、培養し培養物を得ることができる。
前記培養のための培地に、例えば、乳成分を混合してもよく、適宜発酵させて発酵乳としてもよい。さらに、発酵のために、乳酸菌及び／又は他のビフィドバクテリウム属細菌を適宜使用してもよい。
【００４４】
前記乳成分として、特に限定されないが、例えば、牛乳、水牛乳、羊乳、山羊乳、馬乳、脱脂乳、脱脂濃縮乳、脱脂粉乳、濃縮乳、全脂粉乳、クリーム、バター、バターミルク、練乳及び乳タンパク質等を挙げることができ、これらからなる群から選ばれる１種又は２種以上を使用することができる。また、乳タンパク質として、特に限定されないが、例えば、ホエイ、カゼイン、及びこれらの加水分解物等が挙げられ、これらからなる群から選ばれる１種又は２種以上を用いることができる。乳成分のうち、牛乳由来のものが好適である。
【００４５】
前記加水分解物は、前記乳成分（好適には乳タンパク質）を加水分解することで、ホエイ加水分解物やカゼイン加水分解物等を製造することができる。当該加水分解として、例えば、酸・アルカリ、及び酵素等が挙げられる。このうち、酵素が好適であり、当該酵素として、タンパク質分解酵素が好適である。前記タンパク質分解酵素として、例えば、プロテアーゼ、トリペプシン、キモトリプシン、プラスミン、ペプシン、パパイン、ペプチダーゼ及びアミノペプチダーゼ等が挙げられる。加水分解反応の際のｐＨは、使用する酵素の至適ｐＨに適宜調整して、例えばｐＨ２〜６等で行うことができる。加水分解反応の際の温度は、特に限定されず、通常３０〜６０℃の範囲で行うことが好適であり、また、反応時間は、２〜１０時間が好ましい。
【００４６】
前記ビフィドバクテリウム属細菌又はこれを含む培養物の形態は、特に限定されず、液体又は固体の何れでもよいが、当該形態は、乾燥形態（例えば、菌末状や培養乾燥物等）が、製造時や保管時の取扱が容易な観点から、好適である。また、当該培養物として、上述のように、培養液が分離された菌体自体、及び、菌体を含む培養物が挙げられる。
【００４７】
前記乾燥方法として、特に限定されないが、噴霧乾燥法（スプレードライ法）、レトルト殺菌法、凍結乾燥法、ＵＨＴ殺菌法、加圧殺菌法、高圧蒸気滅菌法、乾熱滅菌法、流通蒸気消毒法、電磁波殺菌法、電子線滅菌法、高周波滅菌法、放射線滅菌法、紫外線殺菌法、酸化エチレンガス滅菌法、過酸化水素ガスプラズマ滅菌法、化学的殺菌法（アルコール殺菌法、ホルマリン固定法、電解水処理法）等が挙げられる。
【００４８】
また、菌体は破砕されていてもよく、当該破砕物は、生菌を破砕したものでも死菌を破砕したものでもよく、破砕後に加熱や凍結乾燥等を施したものでもよい。
このうち、生菌率を高くする観点から、前記培養物を凍結乾燥に供するのが好適であり、また、生産効率を高くする観点から、前記培養物を噴霧乾燥に供するのが好適である。
【００４９】
また、本技術の組成物には、本技術の効果を損なわない限り、公知の又は将来的に見出されるプロバイオティクス効果を有する成分又はプロバイオティクス効果を補助する成分を使用することができる。ここで、一般的に、プロバイオティクスとは、腸内で有益な働きをする細菌をいう。また、一般的に、腸内で有益な働きをする細菌の選択的な栄養源となり、それらの増殖を促進する物質をプレバイオティクスという。
本技術のビフィドバクテリウム属細菌の増殖促進のために、プレバイオティクスを使用又は含有させる場合、菌１００質量部に対して、１〜１，０００，０００質量部が好ましく、１０〜１０，０００質量部がより好ましい。
【００５０】
前記プレバイオティクスとして、例えば、ホエイタンパク質、カゼインタンパク質、大豆タンパク質、若しくはエンドウ豆タンパク質（ピープロテイン）等の各種タンパク質若しくはその混合物、分解物；ロイシン、バリン、イソロイシン若しくはグルタミン等のアミノ酸；ビタミンＢ６若しくはビタミンＣ等のビタミン類；クレアチン；クエン酸；フィッシュオイル；又は、イソマルトオリゴ糖、ガラクトオリゴ糖、キシロオリゴ糖、大豆オリゴ糖、フラクトオリゴ糖、ラクチュロース、ヒトミルクオリゴ糖（ＨＭＯ）等のオリゴ糖等の成分等が挙げられ、これらからなる群から選ばれる１種又は２種以上を使用してもよい。
また、本技術の組成物は、当該プレバイオティクス成分と、本技術の細菌又はその培養物とを配合して製造することができる。
【００５１】
また、本技術で使用できる「ヒトミルクオリゴ糖」としては、２’−フコシルラクトース、３−フコシルラクトース、２’，３−ジフコシルラクトース、ラクト−Ｎ−トリオースＩＩ、ラクト−Ｎ−テトラオース、ラクト−Ｎ−ネオテトラオース、ラクト−Ｎ−フコペンタオースＩ、ラクト−Ｎ−ネオフコペンタオース、ラクト−Ｎ−フコペンタオースＩＩ、ラクト−Ｎ−フコペンタオースＩＩＩ、ラクト−Ｎ−フコペンタオースＶ、ラクト−Ｎ−ネオフコペンタオースＶ、ラクト−Ｎ−ジフコヘキサオースＩ、ラクト−Ｎ−ジフコヘキサオースＩＩ、６’−ガラクトシルラクトース、３’−ガラクトシルラクトース、ラクト−Ｎ−ヘキサオースおよびラクト−Ｎ−ネオヘキサオース等の中性ヒトミルクオリゴ糖、３’−シアリルラクトース、６’−シアリルラクトース、３−フコシル−３’−シアリルラクトース、ジシアリル−ラクト−Ｎ−テトラオースなどの酸性ヒトミルクオリゴ糖が使用でき、これらからなる群より選ばれた１種又は２種以上を使用してもよい。
【００５２】
本技術の製造方法の一例として、以下に説明するが、本技術はこれに限定されることはない。
本技術の製造方法の例１は、本技術のビフィドバクテリウム属細菌を含む菌末又は成形品（例えばサプリメント）等の製造方法である。
ビフィドバクテリウム属細菌を培地中で嫌気培養する工程、当該培養液を濃縮し、凍結乾燥を行い、凍結乾燥粉末（菌末）を得る工程を行う。これにより、脳血流低下予防・改善用等の用途の菌末を提供することができる。このとき、ビフィドバクテリウム属細菌を含む培養液を、噴霧乾燥を行い、顆粒状粉末にしてもよい。本技術の細菌を、当該組成物中の所定の菌体量になるように配合する。
また、本技術のサプリメントやタブレットを製造する場合、ビフィドバクテリウム属細菌を含む培養液と賦形剤を混合して混合物を得る工程、当該所定の形状に成形する工程を含むことができる。成形工程として、例えば、打錠等が挙げられ、打錠の一例としては、例えば、粉末や顆粒の混合物を圧縮成形してタブレットを得ること等が挙げられる。
【００５３】
本技術の製造方法の例２は、本技術のビフィドバクテリウム属細菌を含む乳飲料又は乳製品の製造方法である。
本技術の製造方法の例２として、上述の製造方法の例１で得られた前記菌末と、牛乳又は脱脂乳とを混合する工程を行う。この際、（Ａ）乳タンパク質  ３．５質量％以上、（Ｂ）乳脂肪  ３．５質量％以下、（Ｃ）炭水化物  ５．０質量％以上、及び（Ｄ）カルシウム  ０．１５質量％以上を含むように調整する。また、当該粉末中の本技術の細菌は、所定の菌体量になるように配合する。これにより、脳血流低下予防・改善用等の用途の乳飲料又は乳製品を提供することができる。
【００５４】
本技術の製造方法の例３として、本技術のビフィドバクテリウム属細菌を含む発酵乳の製造方法である。
本技術の製造方法の例３として、上述の製造方法の例１で得られた前記菌末を、発酵乳原料に添加し、本技術のビフィドバクテリウム属細菌を含む発酵乳を得る工程を行う。又は、前記菌末と、発酵乳とを混合して、本技術のビフィドバクテリウム属細菌を含む発酵乳を得る発酵乳を得る工程を行う。当該組成物中の本技術の細菌の菌体量は、所定の菌体量になるように発酵条件や配合量を調整する。これにより、脳血流低下予防・改善用等の用途の発酵乳又は発酵製品を提供することができる。
【００５５】
本技術のビフィドバクテリウム属細菌（生菌又は死菌）の含有量又は使用量は、特に限定されないが、前記組成物中、好ましくは１×１０３〜１×１０１２（ＣＦＵ／ｇ若しくはＣＦＵ／ｍＬ、又はｃｅｌｌｓ（個）／ｇ若しくはｃｅｌｌｓ（個）／ｍＬ）、より好ましくは１×１０５〜１×１０１１（ＣＦＵ／ｇ若しくはＣＦＵ／ｍＬ、又はｃｅｌｌｓ（個）／ｇ若しくはｃｅｌｌｓ（個）／ｍＬ）、さらに好ましくは１×１０７〜１×１０１０（ＣＦＵ／ｇ若しくはＣＦＵ／ｍＬ、又はｃｅｌｌｓ（個）／ｇ若しくはｃｅｌｌｓ（個）／ｍＬ）である。なお、ＣＦＵはＣｏｌｏｎｙ  ｆｏｒｍｉｎｇ  ｕｎｉｔを示す。
本技術のビフィドバクテリウム・ロンガム（生菌又は死菌）の含有量又は使用量は、特に限定されないが、前記組成物中、好ましくは１×１０３〜１×１０１２（ＣＦＵ／ｇ若しくはＣＦＵ／ｍＬ、又はｃｅｌｌｓ（個）／ｇ若しくはｃｅｌｌｓ（個）／ｍＬ）、より好ましくは１×１０５〜１×１０１１（ＣＦＵ／ｇ若しくはＣＦＵ／ｍＬ、又はｃｅｌｌｓ（個）／ｇ若しくはｃｅｌｌｓ（個）／ｍＬ）、さらに好ましくは１×１０７〜１×１０１０（ＣＦＵ／ｇ若しくはＣＦＵ／ｍＬ、又はｃｅｌｌｓ（個）／ｇ若しくはｃｅｌｌｓ（個）／ｍＬ）である。
本技術のビフィドバクテリウム・ブレーベ（生菌又は死菌）の含有量又は使用量は、特に限定されないが、前記組成物中、好ましくは１×１０３〜１×１０１２（ＣＦＵ／ｇ若しくはＣＦＵ／ｍＬ、又はｃｅｌｌｓ（個）／ｇ若しくはｃｅｌｌｓ（個）／ｍＬ）、より好ましくは１×１０５〜１×１０１１（ＣＦＵ／ｇ若しくはＣＦＵ／ｍＬ、又はｃｅｌｌｓ（個）／ｇ若しくはｃｅｌｌｓ（個）／ｍＬ）、さらに好ましくは１×１０７〜１×１０１０（ＣＦＵ／ｇ若しくはＣＦＵ／ｍＬ、又はｃｅｌｌｓ（個）／ｇ若しくはｃｅｌｌｓ（個）／ｍＬ）である。
【００５６】
投与対象は、通常、ヒトであることが好ましいが、ヒト以外の哺乳動物、例えばイヌ、ネコ等のペット動物、ウシ、ヒツジ、ブタ等の家畜も含むものとする。
【００５７】
本技術のビフィドバクテリウム属細菌（生菌又は死菌）の１日当たりの投与量は、特に限定されないが、１日当たり１×１０３〜１×１０１２ＣＦＵ／日（又はｃｅｌｌｓ（個）／日）であることが好ましく、１×１０５〜１×１０１１ＣＦＵ／日（又はｃｅｌｌｓ（個）／日）であることがより好ましく、１×１０７〜１×１０１０ＣＦＵ／日（又はｃｅｌｌｓ（個）／日）であることがさらに好ましい。
【００５８】
また、本技術の投与間隔は、特に限定されず、１日１回でもよく、複数回に分けて行ってもよいが、好ましくは１日１回が簡便かつ効能が得られるので好ましい。
また、本技術のビフィドバクテリウム属細菌は、安全性が高いので脳血流低下に起因する症状又は疾患が認められる前に投与又は摂取することが可能である。また本技術は、脳血流低下に起因する症状又は疾患が認められる前に投与又は摂取することが、予防の観点から好ましい。
また、本技術のビフィドバクテリウム属細菌は、脳血流低下等の症状が認められる前に投与又は摂取することが、後記実施例に示すように脳血流低下後の症状を改善しやすくなるので、好ましい。
本技術は、脳血流低下等の症状が認められる前の１週間前に（より好適には２週間前に）投与又は摂取することが予防効果及びその後の改善効果を得やすい観点から好ましい。
また、本技術は、脳血流低下等の症状が認められた後の場合、長期的に投与又は摂取することが効能の観点から好ましく、より好ましくは２週間以上、さらに好ましくは４週間以上であることが改善効果を得やすい観点から好適である。
【００５９】
〔医薬品組成物〕
ビフィドバクテリウム属細菌を医薬品組成物又は医薬用途に利用する場合、該医薬品は、経口投与及び非経口投与のいずれでもよいが、経口投与及び粘膜に作用する投与が好ましい。非経口投与としては、例えば、注射（血液、皮膚、筋肉等）、直腸投与、吸入等が挙げられる。経口投与の剤形としては、例えば、錠剤、カプセル剤、トローチ剤、シロップ剤、顆粒剤、散剤、軟膏等が挙げられる。
本技術の医薬品組成物における用法・用量は、上述のとおりである。
【００６０】
また、製剤化に際しては、ビフィドバクテリウム属細菌の他に、通常製剤化に用いられている賦形剤、ｐＨ調整剤、着色剤、矯味剤等の成分を用いることができる。更に、公知の又は将来的に見出される疾患の予防又は治療の効果を有する成分を、目的に応じて併用することも可能である。
【００６１】
更に、投与方法に応じて、適宜所望の剤形に製剤化することができる。例えば、経口投与の場合、散剤、顆粒剤、錠剤、カプセル剤等の固形製剤；溶液剤、シロップ剤、懸濁剤、乳剤等の液剤等に製剤化することができる。また、非経口投与の場合、座剤、噴霧剤、軟膏剤、貼付剤、注射剤等に製剤化することができる。
【００６２】
加えて、製剤化は剤形に応じて適宜公知の方法により実施できる。製剤化に際しては、カゼイン酵素処理物のみ又は各分離・各精製画分のみを製剤化してもよく、適宜、製剤担体を配合する等して製剤化してもよい。
【００６３】
また、前記製剤担体としては、剤形に応じて、各種有機又は無機の担体を用いることができる。固形製剤の場合の担体としては、例えば、賦形剤、結合剤、崩壊剤、滑沢剤、安定剤、矯味矯臭剤等が挙げられる。
【００６４】
賦形剤としては、例えば、乳糖、白糖、ブドウ糖、マンニット、ソルビット等の糖誘導体；トウモロコシデンプン、馬鈴薯デンプン、α−デンプン、デキストリン、カルボキシメチルデンプン等のデンプン誘導体；結晶セルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、カルボキシメチルセルロース、カルボキシメチルセルロースカルシウム等のセルロース誘導体；アラビアゴム；デキストラン；プルラン；軽質無水珪酸、合成珪酸アルミニウム、メタ珪酸アルミン酸マグネシウム等の珪酸塩誘導体；リン酸カルシウム等のリン酸塩誘導体；炭酸カルシウム等の炭酸塩誘導体；硫酸カルシウム等の硫酸塩誘導体等が挙げられる。
【００６５】
結合剤としては、例えば、上記賦形剤の他、ゼラチン；ポリビニルピロリドン；マクロゴール等が挙げられる。
【００６６】
崩壊剤としては、例えば、上記賦形剤の他、クロスカルメロースナトリウム、カルボキシメチルスターチナトリウム、架橋ポリビニルピロリドン等の化学修飾されたデンプン又はセルロース誘導体等が挙げられる。
【００６７】
滑沢剤としては、例えば、タルク；ステアリン酸；ステアリン酸カルシウム、ステアリン酸マグネシウム等のステアリン酸金属塩；コロイドシリカ；ピーガム、ゲイロウ等のワックス類；硼酸；グリコール；フマル酸、アジピン酸等のカルボン酸類；安息香酸ナトリウム等のカルボン酸ナトリウム塩；硫酸ナトリウム等の硫酸塩類；ロイシン；ラウリル硫酸ナトリウム、ラウリル硫酸マグネシウム等のラウリル硫酸塩；無水珪酸、珪酸水和物等の珪酸類；デンプン誘導体等が挙げられる。
【００６８】
安定剤としては、例えば、メチルパラベン、プロピルパラベン等のパラオキシ安息香酸エステル類；クロロブタノール、ベンジルアルコール、フェニルエチルアルコール等のアルコール類；塩化ベンザルコニウム；無水酢酸；ソルビン酸等が挙げられる。
【００６９】
矯味矯臭剤としては、例えば、甘味料、酸味料、香料等が挙げられる。
なお、経口投与用の液剤の場合に使用する担体としては、水等の溶剤、矯味矯臭剤等が挙げられる。
【００７０】
〔飲食品組成物〕
本技術は、ビフィドバクテリウム属細菌を有効成分とする、飲食品組成物を提供することができる。本技術の飲食品組成物は、脳血管性認知症、めまい、立ちくらみ、手足の麻痺、頭痛、耳鳴り等の予防や改善の用途に応用できる。例えば、脳血流低下の予防及び／又は改善等の用途をコンセプトとする健康食品、機能性食品等である。
【００７１】
さらに、本技術に係る飲食品組成物として、乳児用調製粉乳を挙げることができる。育児用調製粉乳とは、０〜１２か月の乳児を対象とする乳児用調製粉乳、６〜９か月以降の乳児および年少幼児（３歳まで）を対象とするフォローアップミルク、出生時の体重が２５００ｇ未満の新生児（低出生体重児）を対象とする低出生体重児用調製粉乳、牛乳アレルギーや乳糖不耐症等の病的状態を有する児の治療に用いられる各種治療用ミルクなどを指す。
【００７２】
ビフィドバクテリウム属細菌をヒト若しくは動物用の飲食品に利用する場合、公知の飲食品に添加して調製することもできるし、飲食品の原料中に混合して新たな飲食品を製造することもできる。
本技術の飲食品組成物における使用方法・使用量・含有量は、上述のとおりである。
【００７３】
前記飲食品は、液状、ペースト状、固体、粉末等の形態を問わず、錠菓、流動食、飼料（ペット用を含む）等のほか、例えば、小麦粉製品、即席食品、農産加工品、水産加工品、畜産加工品、乳・乳製品、油脂類、基礎調味料、複合調味料・食品類、冷凍食品、菓子類、飲料、これら以外の市販品等が挙げられる。
【００７４】
小麦粉製品としては、例えば、パン、マカロニ、スパゲッティ、めん類、ケーキミックス、から揚げ粉、パン粉等が挙げられる。
即席食品類としては、例えば、即席めん、カップめん、レトルト・調理食品、調理缶詰め、電子レンジ食品、即席スープ・シチュー、即席みそ汁・吸い物、スープ缶詰め、フリーズ・ドライ食品、その他の即席食品等が挙げられる。
農産加工品としては、例えば、農産缶詰め、果実缶詰め、ジャム・マーマレード類、漬物、煮豆類、農産乾物類、シリアル（穀物加工品）等が挙げられる。
水産加工品としては、例えば、水産缶詰め、魚肉ハム・ソーセージ、水産練り製品、水産珍味類、つくだ煮類等が挙げられる。
畜産加工品としては、例えば、畜産缶詰め・ペースト類、畜肉ハム・ソーセージ等が挙げられる。
乳・乳製品としては、例えば、加工乳、乳飲料、ヨーグルト類、乳酸菌飲料類、チーズ、アイスクリーム類、調製粉乳類、クリーム、その他の乳製品等が挙げられる。
油脂類としては、例えば、バター、マーガリン類、植物油等が挙げられる。
基礎調味料としては、例えば、しょうゆ、みそ、ソース類、トマト加工調味料、みりん類、食酢類等が挙げられ、前記複合調味料・食品類として、調理ミックス、カレーの素類、たれ類、ドレッシング類、めんつゆ類、スパイス類、その他の複合調味料等が挙げられる。
冷凍食品としては、例えば、素材冷凍食品、半調理冷凍食品、調理済冷凍食品等が挙げられる。
菓子類としては、例えば、キャラメル、キャンディー、チューインガム、チョコレート、クッキー、ビスケット、ケーキ、パイ、スナック、クラッカー、和菓子、米菓子、豆菓子、デザート菓子、その他の菓子等が挙げられる。
【００７５】
飲料類としては、例えば、炭酸飲料、天然果汁、果汁飲料、果汁入り清涼飲料、果肉飲料、果粒入り果実飲料、野菜系飲料、豆乳、豆乳飲料、コーヒー飲料、お茶飲料、粉末飲料、濃縮飲料、スポーツ飲料、栄養飲料、アルコール飲料、その他の嗜好飲料等が挙げられる。
上記以外の市販食品としては、例えば、ベビーフード、ふりかけ、お茶漬けのり等が挙げられる。
【００７６】
また、本技術で定義される飲食品は、保健用途が表示された飲食品として提供・販売されることも可能である。
「表示」行為には、需要者に対して前記用途を知らしめるための全ての行為が含まれ、前記用途を想起・類推させうるような表現であれば、表示の目的、表示の内容、表示する対象物・媒体等の如何に拘わらず、全て本技術の「表示」行為に該当する。
【００７７】
また、「表示」は、需要者が上記用途を直接的に認識できるような表現により行われることが好ましい。具体的には、飲食品に係る商品又は商品の包装に前記用途を記載したものを譲渡し、引き渡し、譲渡若しくは引き渡しのために展示し、輸入する行為、商品に関する広告、価格表若しくは取引書類に上記用途を記載して展示し、若しくは頒布し、又はこれらを内容とする情報に上記用途を記載して電磁気的（インターネット等）方法により提供する行為等が挙げられる。
【００７８】
一方、表示内容としては、行政等によって認可された表示（例えば、行政が定める各種制度に基づいて認可を受け、そのような認可に基づいた態様で行う表示等）であることが好ましい。また、そのような表示内容を、包装、容器、カタログ、パンフレット、ＰＯＰ等の販売現場における宣伝材、その他の書類等へ付することが好ましい。
【００７９】
また、「表示」には、健康食品、機能性食品、経腸栄養食品、特別用途食品、保健機能食品、特定保健用食品、栄養機能食品、機能性表示食品、医薬用部外品等としての表示も挙げられる。この中でも特に、消費者庁によって認可される表示、例えば、特定保健用食品制度、これに類似する制度にて認可される表示等が挙げられる。後者の例としては、特定保健用食品としての表示、条件付き特定保健用食品としての表示、身体の構造や機能に影響を与える旨の表示、疾病リスク減少表示等を挙げることができる。より具体的には、健康増進法施行規則（平成１５年４月３０日日本国厚生労働省令第８６号）に定められた特定保健用食品としての表示（特に保健の用途の表示）及びこれに類する表示が典型的な例である。
【００８０】
〔飼料組成物〕
ビフィドバクテリウム属細菌を飼料に利用する場合、公知の飼料に添加して調製することもできるし、飼料の原料中に混合して新たな飼料を製造することもできる。
本技術の飼料組成物における使用方法・使用量・含有量は、上述のとおりである。
【００８１】
前記飼料の原料としては、例えば、トウモロコシ、小麦、大麦、ライ麦等の穀類；ふすま、麦糠、米糠、脱脂米糠等の糠類；コーングルテンミール、コーンジャムミール等の製造粕類；脱脂粉乳、ホエイ、魚粉、骨粉等の動物性飼料類；ビール酵母等の酵母類；リン酸カルシウム、炭酸カルシウム等の鉱物質飼料；油脂類；アミノ酸類；糖類等が挙げられる。また、前記飼料の形態としては、例えば、愛玩動物用飼料（ペットフード等）、家畜飼料、養魚飼料等が挙げられる。
【００８２】
このように、本技術は、飲食品、飲食品組成物、機能性食品、医薬品、飼料等の幅広い分野に使用することができる。
【００８３】
また、本技術は、以下の構成を採用することも可能である。
〔１〕  ビフィドバクテリウム属細菌を有効成分として含有する、脳血流低下の予防及び／若しくは改善用組成物；又は脳血流低下に起因する症状若しくは疾患（これら予備軍を含む）の予防・改善・治療に用いる組成物、又は、ビフィドバクテリウム属細菌を有効成分として含有する、脳血管性認知症、めまい、立ちくらみ、手足の麻痺、頭痛、耳鳴りからなる群から選択される１種又は２種以上の症状又は疾患の予防・改善・治療に用いる組成物。
〔２〕  脳血流低下の予防及び／若しくは改善に用いるための；又は、脳血流低下に起因する症状若しくは疾患（これら予備軍を含む）の予防・改善・治療に用いるための；又は、脳血管性認知症、めまい、立ちくらみ、手足の麻痺、頭痛、耳鳴りからなる群から選択される１種又は２種以上の症状又は疾患の予防・改善・治療に用いるための、ビフィドバクテリウム属細菌。
〔３〕  脳血流低下の予防及び／若しくは改善のための；又は、脳血流低下に起因する症状若しくは疾患（これら予備軍を含む）の予防・改善・治療のための；又は、脳血管性認知症、めまい、立ちくらみ、手足の麻痺、頭痛、耳鳴りからなる群から選択される１種又は２種以上の症状又は疾患の予防・改善・治療に用いるための、ビフィドバクテリウム属細菌の使用。
〔４〕  ビフィドバクテリウム属細菌を投与又は摂取する、脳血流低下の予防及び／若しくは改善のための方法；又は、脳血流低下に起因する症状若しくは疾患（これら予備軍を含む）の予防・改善・治療のための方法；又は、脳血管性認知症、めまい、立ちくらみ、手足の麻痺、頭痛、耳鳴りからなる群から選択される１種又は２種以上の症状又は疾患の予防・改善・治療のための方法。
〔５〕  脳血流低下の予防及び／若しくは改善用組成物の製造のための；又は脳血流低下に起因する症状若しくは疾患（これら予備軍を含む）の予防・改善・治療に用いる組成物の製造のための；又は、脳血管性認知症、めまい、立ちくらみ、手足の麻痺、頭痛、耳鳴りからなる群から選択される１種又は２種以上の症状又は疾患の予防・改善・治療に用いる組成物の製造のための、ビフィドバクテリウム属細菌の使用。
【００８４】
〔６〕  下記（ａ）工程又は下記の（ｂ）工程の少なくともいずれかを含む、脳血管性認知症予防・改善用組成物の製造方法：
（ａ）ビフィドバクテリウム属細菌、及びプレバイオティクスを混合する工程、又は、
（ｂ）ビフィドバクテリウム属細菌（好適は菌末）、及び乳成分（好適には粉乳）を混合する工程。
前記乳成分は、粉乳が好適である。
前記（ａ）工程のときに、前記（ａ）工程の前工程、又は前記（ａ）工程の後工程のいずれかで、さらに乳成分を混合することが好適である。
〔７〕  下記工程（Ａ）〜（Ｂ）を含む、脳血管性認知症予防・改善用組成物の製造方法：
（Ａ）培地でビフィドバクテリウム属細菌を培養し、培養物を得る工程；
（Ｂ）前記培養物を乾燥に供し、菌末を得る工程。
前記（Ａ）工程及び（Ｂ）工程後に、（Ｃ）前記菌末及びプレバイオティクスを混合し、組成物を得る工程を含むことが好適である。
また、前記組成物は、飲食品組成物が好適である。
また、前記培地は、より好適には、乳成分を含有する培地であり、これにより菌体数を増加させて回収率を高めたり、場合によっては発酵乳にし、その風味や効能を得ることができる。
また、前記乾燥は、生菌率を高める観点から、より好適には、凍結乾燥である。
【００８５】
〔８〕  前記〔１〕〜〔７〕のいずれか１つにおいて、好適には、前記組成物が、脳血管性認知症に用いられるものである；又は、脳血流低下に起因する症状若しくは疾患が、脳血管性認知症である；又は、脳血管性認知症、めまい、立ちくらみ、手足の麻痺、頭痛、耳鳴りからなる群から選択される１種又は２種以上の症状又は疾患の予防・改善・治療に用いられるものである。
〔９〕  前記〔１〕〜〔８〕のいずれか１つにおいて、好適には、前記組成物が、医薬品組成物又は飲食品組成物である；又は前記組成物が、非治療目的である；又は前記ビフィドバクテリウム属細菌の使用、投与又は摂取が非治療目的である。
〔１０〕  前記〔１〕〜〔９〕の何れか１つにおいて、好適には、前記ビフィドバクテリウム属細菌が、ビフィドバクテリウム・ロンガム及び／又はビフィドバクテリウム・ブレーベである。より好適には、前記ビフィドバクテリウム属細菌が、ビフィドバクテリウム・ロンガム及び／又はビフィドバクテリウム・ブレーベである。
〔１１〕  前記〔１〕〜〔１０〕の何れか１つにおいて、好適には、前記ビフィドバクテリウム属細菌を投与又は摂取する場合、当該投与又は摂取は、脳血流低下が認識される前である、及び／又は、脳血流低下後、長期間継続である；当該投与又は摂取は、症状又は疾患が認識される前である、及び／又は、症状又は疾患が認識された後、長期間継続である。
〔１２〕  前記〔１〕〜〔１１〕の何れか１つにおいて、前記脳血流低下に起因する症状若しくは疾患は、脳血管性認知症、めまい、立ちくらみ、手足の麻痺、頭痛、耳鳴りからなる群から選択される１種又は２種以上のものである。
〔１３〕  前記〔１〕〜〔１２〕の何れか１つにおいて、前記組成物が、医薬用組成物、飲食品用組成物、粉乳（例えば、育児用調整粉乳等）、又はサプリメントのいずれかである。
【実施例】
【００８６】
以下に実施例等を用いて本発明をさらに詳しく説明するが、本発明はこれら実施例に限定されるものではない。【００８７】
〔実験方法〕
慢性脳低灌流モデル（ＢＣＡＳモデル）マウスの脳血流低下への効果検証マウスの両側総頸動脈にマイクロコイルを装着したマウス（ＢＣＡＳマウス）を用いて、ビフィドバクテリウム・ロンガム  ＮＩＴＥ  ＢＰ−０２６２１及びビフィドバクテリウム・ブレーベ  ＦＥＲＭ  ＢＰ‐１１１７５の脳血流低下の改善効果をそれぞれ検討した。
なお、ビフィドバクテリウム・ロンガム  ＮＩＴＥ  ＢＰ−０２６２１及びビフィドバクテリウム・ブレーベ  ＦＥＲＭ  ＢＰ‐１１１７５は、国際寄託機関から入手したものである。【００８８】
試験には１０週齢（入手時週齢）のＣ５７ＢＬ／６Ｊマウスを用いた。ＢＣＡＳ手術の１週間前よりビフィドバクテリウム・ロンガム  ＮＩＴＥ  ＢＰ−０２６２１及びビフィドバクテリウム・ブレーベ  ＦＥＲＭ  ＢＰ‐１１１７５をそれぞれ１×１０９  ＣＦＵ／日投与し、その後も投与を続け、手術後３０日目に新規物体認識試験を行った。
ＢＣＡＳ手術は具体的に、マウスを塩酸メデトミジン０．３ｍｇ／ｋｇ、ミダゾラム４ｍｇ／ｋｇ、酒石酸ブトルファノール５ｍｇ／ｋｇの腹腔内投与により麻酔後、頸部を開き、両側総頸動脈を剥離し、そこに内径０．１８ｍｍのマイクロコイルを装着した。なお、偽手術群は頸部を開き、頸動脈を露出後、縫合したものとした。
行動試験では、マウスが新規物体を探索する時間を計測し、物体を探索した合計時間に対する割合を認知機能の指標とした。【００８９】
〔結果と考察〕
その結果、ＢＣＡＳマウスに対するビフィドバクテリウム・ロンガム  ＮＩＴＥ  ＢＰ−０２６２１及びビフィドバクテリウム・ブレーベ  ＦＥＲＭ  ＢＰ‐１１１７５の各投与によって、ＢＣＡＳマウスに生理食塩水を投与した群と比較して、陽性対照のアジルサルタンと同等の新規物体探索時間の長さが見られた。このことから、ビフィドバクテリウム・ロンガム及び／又はビフィドバクテリウム・ブレーベを経口摂取することで、脳血流低下も改善されることが示された（例えば、非特許文献４及び５参照）。また、陽性対照であるアジルサルタンには脳血流低下の改善効果があることが知られているので、このことからも新規物体認識の低下が改善できれば脳血流低下の改善もできると云える。
このように、ビフィドバクテリウム・ロンガム  ＮＩＴＥ  ＢＰ−０２６２１及びビフィドバクテリウム・ブレーベ  ＦＥＲＭ  ＢＰ‐１１１７５に、脳血流低下の改善作用が見られたことにより、脳血流低下を起因とする症状又は疾患（例えば脳血管性認知症や手足の麻痺など）の予防及び改善も期待できる。【００９０】
【表１】
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【００９１】
以上のように、本技術のビフィドバクテリウム属細菌（より好適には、ビフィドバクテリウム・ロンガム及び／又はビフィドバクテリウム・ブレーベ）は、脳血流低下の予防・改善作用効果を発揮する。そして、本技術の組成物は、脳血流低下に対して用いられる組成物及び／又は脳血管性認知症等に対して用いられる組成物であり、当該組成物は医薬品用、飲食品用、飼料用、ペット用と幅広い用途に使用できる。【００９２】
［製造例１］
ビフィドバクテリウム・ロンガム  ＮＩＴＥ  ＢＰ−０２６２１及び／又はビフィドバクテリウム・ブレーベＦＥＲＭ  ＢＰ−１１１７５の細菌をＭＲＳ液体培地３ｍＬに添加し、３７℃で１６時間嫌気培養し、培養液を濃縮し、凍結乾燥を行い、該細菌の凍結乾燥粉末（菌末）を得る。当該菌末と、牛乳又は脱脂乳とを均一に混合しつつ、（Ａ）乳タンパク質  ３．５質量％以上、（Ｂ）乳脂肪  ３．５質量％以下、（Ｃ）炭水化物  ５．０質量％以上、及び（Ｄ）カルシウム  ０．１５質量％以上を含むように調整する。これにより、ビフィズス菌入りの脳血流低下予防・改善用組成物を得る。菌の摂取量が１×１０８〜１×１０１０ＣＦＵ／ｋｇ体重／日になるようにし、１〜４週間以上、毎日２００ｍＬを摂取する。
これは、飲食品組成物（乳飲料）としても摂取可能であり、脳血管性認知症予防・改善用等の飲食品組成物（乳飲料）としても摂取可能であり、脳血流低下予防・改善効果及び脳血管性認知症予防・改善効果等が期待できる。【００９３】
［製造例２］
ビフィドバクテリウム・ロンガム  ＮＩＴＥ  ＢＰ−０２６２１及び／又はビフィドバクテリウム・ブレーベＦＥＲＭ  ＢＰ−１１１７５の細菌をＭＲＳ液体培地３ｍＬに添加し、３７℃で１６時間嫌気培養し、培養液を濃縮し、凍結乾燥を行い、該細菌の顆粒状（菌末）を、脳血流低下予防・改善用組成物（顆粒状又はタブレット状）として、得る。当該顆粒状の菌末を、菌の摂取量が１×１０８〜１×１０１０ＣＦＵ／ｋｇ体重／日になるようにし、１週間以上毎日摂取する。
これは、飲食品組成物としても摂取可能であり、脳血管性認知症予防・改善用等の飲食品組成物（顆粒状又はタブレット状）としても利用可能であり、脳血流低下予防・改善効果及び脳血管性認知症予防・改善効果等が期待できる。
前記菌末を得る際に、「凍結乾燥」に代えて「噴霧乾燥」にて、噴霧乾燥の菌末を得ることも可能である。【００９４】
［製造例３］
ビフィドバクテリウム・ロンガム  ＮＩＴＥ  ＢＰ−０２６２１及び／又はビフィドバクテリウム・ブレーベＦＥＲＭ  ＢＰ−１１１７５の細菌をＭＲＳ液体培地３ｍＬに添加し、３７℃で１６時間嫌気培養し、培養液を濃縮し、凍結乾燥を行い、該細菌の顆粒状（菌末）を、発酵乳原料に添加し、発酵乳を得る。当該脳血流低下予防・改善用発酵乳を、菌の摂取量が１×１０８〜１×１０１０ＣＦＵ／ｋｇ体重／日になるようにし、１週間以上毎日摂取する。
これは、脳血管性認知症予防・改善用等の発酵乳としても摂取可能であり、脳血流低下予防・改善効果及び脳血管性認知症予防・改善効果等が期待できる。【００９５】
［製造例４］
前記［製造例２］で得られた菌末（当該菌末は、凍結乾燥物及び／又は噴霧乾燥物のいずれでもよい）と、プロバイオティクスとを混合し、菌及びプロバイオティクス混合物を得る。当該プロバイオティクスとして、ヒトミルクオリゴ糖を使用する。プロバイオティクスにより、使用する菌を増殖させやすい利点がある。
当該菌及びプロバイオティクス混合物を、菌の摂取量が１×１０８〜１×１０１０ＣＦＵ／ｋｇ体重／日になるようにし、１週間以上毎日摂取する。
これは、脳血管性認知症予防・改善用等の飲食品組成物としても摂取可能であり、脳血流低下予防・改善効果及び脳血管性認知症予防・改善効果等が期待できる。
【受託番号】
【００９６】
（１）ビフィドバクテリウム・ロンガム  ＮＩＴＥ  ＢＰ−０２６２１株（受託番号：ＮＩＴＥ  ＢＰ−０２６２１）（受託日：２０１８年１月２６日）、受託先：〒２９２−０８１８  日本国千葉県木更津市かずさ鎌足２−５−８  １２２号室、独立行政法人  製品評価技術基盤機構  特許微生物寄託センター（ＮＰＭＤ）。
（２）  ビフィドバクテリウム・ブレーベ  ＦＥＲＭ  ＢＰ‐１１１７５株（受託番号：ＦＥＲＭ  ＢＰ‐１１１７５）（受託日：２００９年８月２５日）、受託先：〒２９２−０８１８  日本国千葉県木更津市かずさ鎌足２−５−８、独立行政法人産業技術総合研究所特許生物寄託センター（現  独立行政法人製品評価技術基盤機構（ＮＩＴＥ）特許生物寄託センター（ＩＰＯＤ）（ＮＩＴＥ−ＩＰＯＤ））。
【国際調査報告】
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