(57)【要約】  本発明は、ローヤルゼリーをエンドペプチダーゼ作用とエキソペプチダーゼ作用とを有するペプチダーゼで処理することを特徴とする、アレルギー性が低減され且つ製造時及び製造後の褐変化が抑制されてなるローヤルゼリー酵素分解物の製造方法、ローヤルゼリーをエンドペプチダーゼ作用とエキソペプチダーゼ作用とを有するペプチダーゼで処理することを特徴とする、ローヤルゼリー酵素分解物のアレルギー性低減且つ製造時及び製造後の褐変化抑制方法、並びに、ローヤルゼリー酵素分解物の乾燥物１００ｇに対して、Ｔｙｒ−Ａｓｐを１００ｍｇ以上含む、ローヤルゼリー酵素分解物を提供する。
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
ローヤルゼリーをエンドペプチダーゼ作用とエキソペプチダーゼ作用とを有するペプチダーゼで処理することを特徴とする、アレルギー性が低減され且つ製造時及び製造後の褐変化が抑制されてなるローヤルゼリー酵素分解物の製造方法。
【請求項２】
前記ペプチダーゼがアスペルギルス・オリゼー産生ペプチダーゼである、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記ペプチダーゼの至適温度が５０℃以上である、請求項１又は２に記載の方法。
【請求項４】
ローヤルゼリーをエンドペプチダーゼ作用とエキソペプチダーゼ作用とを有するペプチダーゼで処理することを特徴とする、ローヤルゼリー酵素分解物のアレルギー性低減且つ製造時及び製造後の褐変化抑制方法。
【請求項５】
前記ペプチダーゼがアスペルギルス・オリゼー産生ペプチダーゼである、請求項４に記載の方法。
【請求項６】
前記ペプチダーゼの至適温度が５０℃以上である、請求項４又は５に記載の方法。
【請求項７】
請求項１〜３のいずれか一項に記載の方法によって製造されたローヤルゼリー酵素分解物であって、ローヤルゼリー酵素分解物の乾燥物１００ｇに対して、Ｔｙｒ−Ａｓｐを１００ｍｇ以上含む、ローヤルゼリー酵素分解物。
【請求項８】
ローヤルゼリー酵素分解物の乾燥物１００ｇに対して、Ｔｙｒ−Ａｓｐを１００ｍｇ以上含む、ローヤルゼリー酵素分解物。
【請求項９】
さらにローヤルゼリー酵素分解物の乾燥物１００ｇに対して、Ｖａｌ−Ｐｒｏを４０ｍｇ以上、及び、Ｍｅｔ−Ｐｒｏを０．５ｍｇ以上含む、請求項７又は８に記載のローヤルゼリー酵素分解物。
【請求項１０】
さらに、Ｐｒｏ−Ｉｌｅ及び／若しくはＰｒｏ−Ｌｅｕ、Ｐｒｏ−Ｖａｌ、Ｉｌｅ−Ｐｒｏ及び／若しくはＬｅｕ−Ｐｒｏ、並びにＰｒｏ−Ｍｅｔからなる群より選択される１種以上のペプチドを含む、請求項７〜９のいずれか一項に記載のローヤルゼリー酵素分解物。
【請求項１１】
請求項７〜１０のいずれか一項に記載のローヤルゼリー酵素分解物を含む、食品組成物、医薬部外品又は医薬組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、ローヤルゼリー酵素分解物の製造方法及びローヤルゼリー酵素分解物に関する。具体的には本発明は、アレルギー性が低減され且つ褐変化が抑制されてなるローヤルゼリー酵素分解物の製造方法に関する。また、本発明は、ローヤルゼリー酵素分解物のアレルギー性低減且つ褐変化抑制方法に関する。さらに、本発明は、抗酸化活性を有し得るローヤルゼリー酵素分解物に関する。
【背景技術】
【０００２】
ローヤルゼリーは、有用な天然素材であるが、一方でアレルギー反応を引き起こす場合があることが知られている。そこで、アレルゲンとなりえるタンパク質を分解又は低分子化してアレルゲン量を低減させる方法が種々検討されている。【０００３】
例えば、ローヤルゼリーについてアレルゲン量を低減させる方法、言い換えれば低アレルゲン化ローヤルゼリーを調製する方法としては、エンドペプチダーゼ作用とエキソペプチダーゼ作用の両方を有するアルカリ性ペプチダーゼでローヤルゼリーを一段階酵素処理する方法（特許文献１）などが提案されている。【０００４】
しかし、ペプチダーゼによりタンパク質を分解し、低アレルゲン化されたローヤルゼリー（ローヤルゼリー酵素分解物）は、酵素処理していないローヤルゼリーと比べて温度や湿度の影響を受けやすく、加温や加湿条件などの過酷条件下で着色して褐色化が進行する。かかる着色は、酵素分解によって断片化されたペプチドやアミノ酸のアミド基と還元糖のアノメリック炭素との間に起こるメイラード反応によるものと考えられる。【０００５】
このような酵素処理ローヤルゼリーの着色を抑制する各種方法が報告されている（特許文献２〜６）。特許文献２では酵素処理を４０〜６００Ｍｐａの高圧条件下で行うことにより酵素処理によって生じる褐変化が有意に抑制されることが報告されている。特許文献３では、ローヤルゼリーと、デンプン及びデキストロース当量が１８以下のデキストリンから選ばれる少なくとも一種とを溶媒に溶解した後、凍結乾燥することで経時的な外観の変色を防止することができることが報告されている。特許文献４及び５では、ローヤルゼリーを酵母発酵処理することにより、ローヤルゼリーの経時的な外観の変色が抑制されることが報告されている。特許文献６では、ローヤルゼリーの水懸濁液のｐＨ近傍に至適ｐＨを有する酸性プロテアーゼを用いて酵素分解することで、従来の酵素法によるものと比べて黄色度が少ないことが報告されている。【０００６】
しかしながら、特許文献２〜５に記載の方法では、褐変化を抑制するために、高圧条件（特許文献２）、デンプン及びデキストリンの添加（特許文献３）、酵母による発酵処理（特許文献４及び５）がそれぞれ必要である。【０００７】
また、特許文献６に記載されているようにローヤルゼリーを酸性プロテアーゼで酵素処理した場合には、アレルゲン性が上昇することが特許文献１において記載されている。【０００８】
さらに、酵素分解によりローヤルゼリーに含まれるタンパク質がペプチド若しくは遊離アミノ酸に分解されるが、使用する酵素によって得られるペプチドの組成が異なることが予想されるものの（特許文献７及び８）、これまで産生されるペプチドの組成及びその機能性の詳細は明らかになっていない。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００９】
【特許文献１】特開２００７−２９５９１９号公報
【特許文献２】特開２００９−２５４３６３号公報
【特許文献３】特開２０１１−１５２１０３号公報
【特許文献４】特開２０１８−１０８１１６号公報
【特許文献５】特開２０１８−１０２２９２号公報
【特許文献６】特開２００３−３３４００３号公報
【特許文献７】特開２００５−００６５３３号公報
【特許文献８】特開２００５−２５５６７０号公報
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１０】
特許文献２〜５に記載の方法では、ローヤルゼリー酵素分解物の製造時及び製造後において褐変化を抑制できることは記載されていない。また、特許文献６に記載の方法では、酸性プロテアーゼを用いるためアレルギー性を低減させることができない。【００１１】
本発明は、アレルギー性が低減され且つ製造時及び製造後の褐変化が抑制されてなるローヤルゼリー酵素分解物の製造方法、並びにローヤルゼリー酵素分解物のアレルギー性低減且つ製造時及び製造後の褐変化抑制方法を提供することを目的とする。【００１２】
また、ローヤルゼリーは古くから高血圧や糖尿病、更年期症状、疼痛等の不定愁訴に効果があることが知られているが、その生理活性物質は不明な点が多い。本発明ではローヤルゼリーのタンパク質を酵素分解することにより、アレルギー性が低減され、製造時及び製造後の褐変化が抑制された、さらに、少なくとも抗酸化活性を有するペプチドを含む、ローヤルゼリー酵素分解物の提供を目的とする。
【課題を解決するための手段】
【００１３】
本発明者らは、上記目的を達成すべく鋭意研究を重ねた結果、エンドペプチダーゼ作用とエキソペプチダーゼ作用とを有するペプチダーゼで処理することにより、アレルギー性を低減できる上、製造時及び製造後の褐変化を抑制できるという知見を得た。【００１４】
本発明は、これら知見に基づき、更に検討を重ねて完成されたものであり、以下のローヤルゼリー酵素分解物の製造方法、並びにローヤルゼリー酵素分解物のアレルギー性低減且つ製造時及び製造後の褐変化抑制方法を提供するものである。【００１５】
(I)ローヤルゼリー酵素分解物の製造方法
(I-1)ローヤルゼリーをエンドペプチダーゼ作用とエキソペプチダーゼ作用とを有するペプチダーゼで処理することを特徴とする、アレルギー性が低減され且つ製造時及び製造後の褐変化が抑制されてなるローヤルゼリー酵素分解物の製造方法。
(I-2)前記ペプチダーゼがアスペルギルス・オリゼー産生ペプチダーゼである、(I-1)に記載の方法。
(I-3)前記ペプチダーゼの至適温度が５０℃以上である、(I-1)又は(I-2)に記載の方法。【００１６】
(II)ローヤルゼリー酵素分解物のアレルギー性低減且つ製造時及び製造後の褐変化抑制方法
(II-1)ローヤルゼリーをエンドペプチダーゼ作用とエキソペプチダーゼ作用とを有する
ペプチダーゼで処理することを特徴とする、ローヤルゼリー酵素分解物のアレルギー性低減且つ製造時及び製造後の褐変化抑制方法。
(II-2)前記ペプチダーゼがアスペルギルス・オリゼー産生ペプチダーゼである、(II-1)に記載の方法。
(II-3)前記ペプチダーゼの至適温度が５０℃以上である、(II-1)又は(II-2)に記載の方法。【００１７】
(III)ローヤルゼリー酵素分解物
(III-1)  (I-1)〜(I-3)のいずれかの方法によって製造されたローヤルゼリー酵素分解物であって、ローヤルゼリー酵素分解物の乾燥物１００ｇに対して、Ｔｙｒ−Ａｓｐを１００ｍｇ以上含む、ローヤルゼリー酵素分解物。
(III-2)  ローヤルゼリー酵素分解物の乾燥物１００ｇに対して、Ｔｙｒ−Ａｓｐを１００ｍｇ以上含む、ローヤルゼリー酵素分解物。
(III-3)  さらにローヤルゼリー酵素分解物の乾燥物１００ｇに対して、Ｖａｌ−Ｐｒｏを４０ｍｇ以上、及び、Ｍｅｔ−Ｐｒｏを０．５ｍｇ以上含む、(III-1)又は(III-2)のローヤルゼリー酵素分解物。
(III-4)  さらに、Ｐｒｏ−Ｉｌｅ及び／若しくはＰｒｏ−Ｉｌｅ−Ｌｅｕ、Ｐｒｏ−Ｖａｌ、Ｉｌｅ−Ｐｒｏ及び／若しくはＩｌｅ−Ｌｅｕ−Ｐｒｏ、並びにＰｒｏ−Ｍｅｔからなる群より選択される１種以上のペプチドを含む、(III-1)〜(III-3)のいずれかのローヤルゼリー酵素分解物。【００１８】
(IV)食品組成物、医薬部外品又は医薬組成物
(III-1)〜(III-4)のいずれかのローヤルゼリー酵素分解物を含む、食品組成物、医薬部外品又は医薬組成物。
【発明の効果】
【００１９】
本発明によれば、アレルギー性の低減による安全性の向上を実現しつつ、ペプチダーゼ分解によって生じる製造時及び製造後の褐変化が抑制されてなるローヤルゼリー酵素分解物の製造方法を提供することができる。また、本発明によれば、ローヤルゼリー酵素分解物について、アレルギー性を低減し且つ製造時及び製造後の褐変化を抑制する方法を提供することができる。さらに、本発明によれば、少なくとも抗酸化活性を有するローヤルゼリー酵素分解物を提供できる。本発明のローヤルゼリー酵素分解物はまた、糖尿病及び高血圧に対しても有効であり得る。
【図面の簡単な説明】
【００２０】
【図１】実施例及び比較例のヒスタミン遊離試験の結果を示すグラフである。縦軸は被験者のヒスタミン遊離量（ｎｇ／ｍＬ）を示す。
【図２】実施例及び比較例の褐変評価の結果を示すグラフである。縦軸はＨＳＬ色空間における輝度（％）を示す。
【発明を実施するための形態】
【００２１】
以下、本発明について詳細に説明する。
【００２２】
なお、本明細書において「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅ）」とは、「本質的にからなる（ｅｓｓｅｎｔｉａｌｌｙ  ｃｏｎｓｉｓｔ  ｏｆ）」という意味と、「のみからなる（ｃｏｎｓｉｓｔ  ｏｆ）」という意味をも包含する。
【００２３】
（１）ローヤルゼリー酵素分解物の製造方法
本発明のローヤルゼリー酵素分解物の製造方法は、アレルギー性が低減され且つ製造時及び製造後の褐変化が抑制されてなるローヤルゼリー酵素分解物の製造方法であって、ローヤルゼリーをエンドペプチダーゼ作用とエキソペプチダーゼ作用とを有するペプチダーゼで処理することを特徴とする。
【００２４】
ローヤルゼリーは、蜜蜂のうち日齢３〜１２日の働き蜂が下咽頭腺及び大腮腺から分泌する分泌物を混合して作る乳白色のゼリー状物質である。ローヤルゼリー中の主な生理活性成分としては、例えば、ローヤルゼリーに特有な１０−ハイドロキシデセン酸（以下、「デセン酸」と記載する）等の有機酸類をはじめ、タンパク質、脂質、糖類、ビタミンＢ類、葉酸、ニコチン酸、パントテン酸等のビタミン類、各種ミネラル類等が挙げられる。このローヤルゼリーの生理活性及び薬理作用としては、抗菌作用、免疫増強作用、抗うつ作用、抗腫瘍作用、抗炎症作用、血流量増加作用等が知られている。また、制癌剤の副作用低減及び放射線傷害時の延命効果も報告されている。
【００２５】
本発明で用いられるローヤルゼリーとしては、特に制限されず、例えば、生ローヤルゼリーであってもよく、生ローヤルゼリーに処理を施したローヤルゼリー処理物であってもよい。
【００２６】
ローヤルゼリー処理物としては、生ローヤルゼリーを濃縮又は希釈したローヤルゼリー濃縮物又は希釈物、生ローヤルゼリーを乾燥させて粉末化したローヤルゼリー粉末、ローヤルゼリーを水若しくは含水エタノール等により抽出した水抽出物又は有機溶媒抽出物等を挙げることができる。ローヤルゼリー処理物は複数の処理が施されたものであってもよい。
【００２７】
ローヤルゼリー濃縮物は、例えば、生ローヤルゼリーから水分を除去することにより得ることができる。ローヤルゼリー希釈物は、例えば、生ローヤルゼリーに水分を添加することにより得ることができる。
【００２８】
ローヤルゼリー粉末は、例えば、凍結乾燥及び噴霧乾燥等の本技術分野における公知の方法により生ローヤルゼリーを粉末化することにより得ることができる。乾燥方法としては、通風乾燥や天日乾燥などの自然乾燥、電気などで加熱して乾燥させる強制乾燥、凍結乾燥など、一般食品加工で採用される公知のいずれの方法を使用することができる。好ましくは、凍結乾燥である。なお、乾燥時間は特に制限されず、通風や天日乾燥などの自然乾燥の場合は、約３日程度、電気などで加熱して強制乾燥させる場合は、５０℃程度で１〜３日程度を挙げることができる。通常、水分含量が１０質量％以下、好ましくは５質量％以下になるように乾燥させることが好ましい。なお、通風や天日乾燥などの自然乾燥の場合のように水分含量を１０質量％以下にすることが難しい場合は、その後、凍結乾燥機にかけて更に水分を下げる処理を行ってもよい。
【００２９】
粉砕処理（粉末化処理）は、粉砕機（例えば、ピンミル、ハンマーミル、ボールミル、ジェットミル等のミル）を用いて粉砕する方法、石臼を用いてすりつぶす方法など、公知のいずれの方法を使用して行ってもよい。
【００３０】
当該生ローヤルゼリーの乾燥処理及び粉末化処理には、上記のような当業界で使用される公知の方法が広く採用でき、好ましくは凍結乾燥後、粉砕機（ミル）によって粉砕する方法で行うことができる。
【００３１】
ローヤルゼリー有機溶媒抽出物は、例えば、エタノール、メタノール、プロパノール、アセトン等の有機溶媒を溶媒として生ローヤルゼリー又はローヤルゼリー粉末を抽出することで得ることができる。抽出時間は、原料として用いられる生ローヤルゼリーの形態、溶媒の種類及び量、抽出の際の温度及び攪拌条件等に応じて適宜設定することができる。抽出後、ろ過、遠心分離等により固形分を除去してもよい。また、抽出された溶液をそのまま用いてもよいし、当該溶液から溶媒を除去して、濃縮液又は粉末として用いてもよい。ローヤルゼリー有機溶媒抽出物としては、ローヤルゼリーエタノール抽出物であることが好ましい。
【００３２】
生ローヤルゼリーは、例えば、常法に従い養蜂産品として入手することができる。ローヤルゼリーの産地は、制限されず、日本、中国、ブラジル、ヨーロッパ諸国、オセアニア諸国、アメリカ等のいずれであってもよい。
【００３３】
本発明で用いられるペプチダーゼは、エンドペプチダーゼ作用とエキソペプチダーゼ作用の両方を有するペプチダーゼである。かかるペプチダーゼを使用した酵素処理によれば、一段階酵素処理でタンパク質を低分子化することができるので、操作が簡便であるとともに、ローヤルゼリーに含まれる有用成分の生理活性の消失及び大幅な低減を防止することができるという利点がある。
【００３４】
また、本発明で用いられるペプチダーゼは、ＥＣ番号（酵素番号）が３．４群のものであり、本発明の効果を奏する限り、由来は特に制限されず、動物、植物、及び微生物（細菌、ウィルス、真菌類（カビ、酵母、キノコ等）、藻類など）に由来するペプチダーゼを広く使用できる。これらの中でも細菌又は真菌類由来のペプチダーゼが好ましく、アスペルギルス・オリゼー（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ  ｏｒｙｚａｅ）産生ペプチダーゼ、ストレプトマイセス・グリセウス（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ  ｇｒｉｓｅｕｓ）産生ペプチダーゼ、又は、アスペルギルス・メレウス（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ  ｍｅｌｌｅｕｓ）産生ペプチダーゼがより好ましく、アスペルギルス・オリゼー（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ  ｏｒｙｚａｅ）産生ペプチダーゼが特に好ましい。
【００３５】
「エキソペプチダーゼ」は、「アミノペプチダーゼ」と「カルボキシペプチダーゼ」に分類される。また、ペプチダーゼは、至適ｐＨによって、それぞれ酸性、中性、アルカリ性という用語を各酵素につけることがあり、例えば、「酸性エキソペプチダーゼ」、「中性アミノペプチダーゼ」、「アルカリ性エンドペプチダーゼ」のように記載することもある。
【００３６】
エンドペプチダーゼ作用とエキソペプチダーゼ作用の両方を有するペプチダーゼとしては、市販のものを使用することができ、そのような市販品としては、好ましくは、アスペルギルス・オリゼー（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ  ｏｒｙｚａｅ）産生ペプチダーゼ（商品名：スミチームＬＰ−Ｇ、プロテアックス、フレーバーザイム（Ｆｌａｖｏｕｒｚｙｍｅ）、プロテアーゼＡ）、ストレプトマイセス・グリセウス（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ  ｇｒｉｓｅｕｓ）産生ペプチダーゼ（商品名：アクチナーゼＡＳ）、アスペルギルス・メレウス（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ  ｍｅｌｌｅｕｓ）産生ペプチダーゼ（商品名：プロテアーゼＰ）を例示することができる。
【００３７】
本発明で用いられるペプチダーゼとしては、アスペルギルス・オリゼー由来の、至適温度が５０℃以上、至適ｐＨが７〜８のものが特に好ましく、そのようなペプチダーゼとしてはプロテアックスが挙げられる。また、本発明で用いられるペプチダーゼとしては、Ｔｒｉｓ−ＨＣｌバッファーにて抽出、トリクロロ酢酸にて沈殿、アセトンにて洗浄することで得たタンパク質をトリプシン消化、固相カラムで脱塩後、液体クロマトグラフィー質量分析法により、下記分析条件にて分析した際に、特徴的な分子量の化合物イオン（ｍ／ｚ：９７０．５７０５［Ｍ−Ｈ］、９８０．５４３５［Ｍ−Ｈ］、５４１．３７２３［Ｍ−Ｈ］、８６０．３８５０［Ｍ−Ｈ］、８５５．４０２１［Ｍ−Ｈ］、８１５．４５３８［Ｍ−Ｈ］、１１５４．６１０２［Ｍ＋Ｈ］、５９５．５０５２［Ｍ＋Ｈ］、１２０８．９２６１［Ｍ−Ｈ］、１２０９．２６０３［Ｍ−Ｈ］、各±５ｐｐｍ以内）を有するものも好ましく、そのようなペプチダーゼとしてはプロテアックスが挙げられる。
【００３８】
（分析条件）
カラム：Ａｃｑｕｉｔｙ  ＢＥＨ  Ｃ１８（Ｗａｔｅｒｓ：２．１×１００ｍｍ，ｉｄ  １．７μｍ）
カラム温度：４０℃
溶媒Ａ：０．１％ギ酸
溶媒Ｂ：アセトニトリル
流速：０．３ｍＬ／ｍｉｎ
グラジェント：５％Ｂ（０−２ｍｉｎ）、５−５０％Ｂ（２−１２ｍｉｎ）、５０−１００％Ｂ（１２−２２ｍｉｎ）、１００％Ｂ（２２−２５ｍｉｎ）、５％Ｂ（２５−３０ｍｉｎ）
【００３９】
ローヤルゼリーに対するペプチダーゼの使用量は、使用するローヤルゼリー濃度、酵素力価、反応温度及び反応時間により異なり一概には言えない。一般的には、ローヤルゼリーに含まれるタンパク質１ｇ当り５０〜１００００作用単位の割合でペプチダーゼを用いることが好ましい。なお、このとき、ペプチダーゼのローヤルゼリーへの添加は、一度に添加してもよく、少量ずつ分割して添加してもよい。
【００４０】
ペプチダーゼ処理に際してローヤルゼリーのｐＨは、使用酵素の至適ｐＨに対応して、ｐＨ２〜１２、好ましくはｐＨ７〜１０、より好ましくはｐＨ７〜８．５の範囲から選択される。具体的には、前記ローヤルゼリーにペプチダーゼを添加する前に、使用酵素の種類によりｐＨ２〜１２、好ましくはｐＨ７〜１０、より好ましくはｐＨ７〜８．５の範囲内になるように、酸、アルカリ剤、あるいは緩衝剤の添加により所望のｐＨに調整される。この場合、酸としては、塩酸、硫酸、硝酸、リン酸、酢酸等を；アルカリ剤としては水酸化ナトリウム、水酸化カリウム、炭酸カリウム等を；また、緩衝剤としては、リン酸緩衝剤、クエン酸緩衝剤等をそれぞれ例示することができる。
【００４１】
ペプチダーゼ処理の温度は、特に制限はなく、好ましくはエンドペプチダーゼ作用及びエキソペプチダーゼ作用の両作用が発現する最適温度範囲を含む、実用に供せられ得る範囲、すなわち、通常２０〜７０℃の範囲から選択される。好ましくは４０〜７０℃の範囲である。ペプチダーゼ処理の時間は、使用酵素の種類、反応温度、ｐＨ等の反応条件に依存し、特に限定されない。
【００４２】
なお、ローヤルゼリーは、そのまま、又は水に溶解若しくは分散させた状態でペプチダーゼ処理に供することができる。ローヤルゼリーが乾燥形態である場合は、水に溶解させた状態でペプチダーゼ処理に供することが好ましい。
【００４３】
ペプチダーゼ処理の停止は、ペプチダーゼを失活又は除去することにより行う。失活操作は加熱処理（例えば、８０℃で１５分間等）により行うことができる。
【００４４】
本発明では、ローヤルゼリーを少なくとも前述するようにペプチダーゼで処理すればよく、ペプチダーゼ処理だけでなく、本発明の効果を損なわない限りにおいて、その他の酵素との組み合わせ処理、例えば、ペプチダーゼ処理と合わせて糖分解酵素処理などを行うこともできる。
【００４５】
本発明の製造方法により製造されるローヤルゼリー酵素分解物は、その後、ドリンク剤やシロップ剤などの液剤の形態に調製されてもよいし、半液体形態、又は固体形態に調製されてもよい。半液体形態としてはペースト状及びゼリー状の形態が、固体形態としては凍結乾燥物（例えば、凍結乾燥粉末）、錠剤（トローチ、チュアブル錠、糖衣錠などを含む）、カプセル、顆粒などの形態を挙げることができる。なお、凍結乾燥物は、ペプチダーゼ処理を行ったローヤルゼリー酵素分解物を、凍結乾燥処理に供することによって調製することができる。凍結乾燥処理は、定法に従って行うことができる。
【００４６】
（２）ローヤルゼリー酵素分解物のアレルギー性低減且つ製造時及び製造後の褐変化抑制方法
本発明のローヤルゼリー酵素分解物のアレルギー性低減且つ製造時及び製造後の褐変化抑制方法は、ローヤルゼリーをエンドペプチダーゼ作用とエキソペプチダーゼ作用とを有するペプチダーゼで処理することにより実施することができる。
【００４７】
ここで対象とするローヤルゼリー、使用するペプチダーゼの種類やペプチダーゼ処理の条件については、（１）で前述した通りである。
【００４８】
当該方法によって得られるローヤルゼリー酵素分解物は、従来の方法によって得られるローヤルゼリー酵素分解物と同様にタンパク質が低分子化されているにもかかわらず、製造時及び製造後の両方の時点において褐変現象が有意に抑制されている。
【００４９】
（３）ローヤルゼリー酵素分解物
本発明のローヤルゼリー酵素分解物は、ローヤルゼリー酵素分解物の乾燥物１００ｇに対して、Ｔｙｒ−Ａｓｐ（チロシン−アスパラギン酸、ＹＤ）を１００ｍｇ以上含み、抗酸化活性を有する。ここで、ローヤルゼリー酵素分解物は、ローヤルゼリー又はローヤルゼリーのタンパク質を所定のタンパク質分解酵素で処理されたものであり、ローヤルゼリー酵素処理物ともいい、所定の組成を有する複数種のペプチドを含む。ローヤルゼリー酵素分解物は、酵素処理後のペプチド組成が調整されていない、ローヤルゼリータンパク質分解物である。
【００５０】
本発明のローヤルゼリー酵素分解物は、上述したローヤルゼリーをエンドペプチダーゼ作用とエキソペプチダーゼ作用とを有するペプチダーゼ、特にプロテアックスによって処理されたものであることが好ましい。また、本発明のローヤルゼリー酵素分解物が、本発明のローヤルゼリー酵素分解物の製造方法によって製造されたローヤルゼリー酵素分解物であることが好ましい。
【００５１】
本発明のローヤルゼリー酵素分解物は、溶液の状態であっても、例えば凍結乾燥や自然乾燥のように乾燥させて粉末状であってもよい。
【００５２】
本発明のローヤルゼリー酵素分解物に含まれる各ペプチドの量は、原料ローヤルゼリーによって変動し得る。例えば、ＹＤがローヤルゼリー酵素分解物の乾燥物１００ｇに対して、１００ｍｇ以上であってよく、例えば１２０ｍｇ以上、１５０ｍｇ以上又は１７０ｍｇ以上であることが好ましく、また、５００ｍｇ以下、３００ｍｇ以下又は２００ｍｇ以下であってもよい。
【００５３】
本発明のローヤルゼリー酵素分解物は、さらにローヤルゼリー酵素分解物の乾燥物１００ｇに対して、Ｖａｌ−Ｐｒｏ（バリン−プロリン、ＶＰ）を４０ｍｇ以上、及び、Ｍｅｔ−Ｐｒｏ（メチオニン−プロリン、ＭＰ）を０．５ｍｇ以上含んでもよい。例えば、ＶＰがローヤルゼリー酵素分解物の乾燥物１００ｇに対して、４０ｍｇ以上であってよく、例えば５０ｍｇ以上、５５ｍｇ以上又は６０ｍｇ以上であることが好ましく、また、２００ｍｇ以下、１５０ｍｇ以下又は１００ｍｇ以下であってもよい。ＭＰがローヤルゼリー酵素分解物の乾燥物１００ｇに対して、０．５ｍｇ以上であってよく、例えば０．６ｍｇ以上又は０．７ｍｇ以上であることが好ましく、また、１０ｍｇ以下、５ｍｇ以下又は２ｍｇ以下であってもよい。
【００５４】
本発明のローヤルゼリー酵素分解物はさらに、Ｐｒｏ−Ｉｌｅ（ＰＩ）及び／若しくはＰｒｏ−Ｌｅｕ（ＰＬ）、Ｐｒｏ−Ｖａｌ（ＰＶ）、Ｉｌｅ−Ｐｒｏ（ＩＰ）及び／若しくはＬｅｕ−Ｐｒｏ（ＬＰ）、並びにＰｒｏ−Ｍｅｔ（ＰＭ）からなる群より選択される１種以上のペプチドを含んでもよい。本発明のローヤルゼリー酵素分解物において、ローヤルゼリー酵素分解物の乾燥物１００ｇに対して、例えば、ＰＩ及び／若しくはＰＬが２ｍｇ以上、５ｍｇ以上又は８ｍｇ以上であってよく、また、２０ｍｇ以下、１５ｍｇ以下又は１０ｍｇ以下であってよい。ＰＶが１０ｍｇ以上、１５ｍｇ以上又は２０ｍｇ以上であってよく、また、４０ｍｇ以下、３０ｍｇ以下又は２５ｍｇ以下であってよい。ＩＰ及び／若しくはＬＰが２０ｍｇ以上、２５ｍｇ以上又は３０ｍｇ以上であってよく、また、５０ｍｇ以下、４５ｍｇ以下又は４０ｍｇ以下であってよい。ＰＭが０．２ｍｇ以上、０．４ｍｇ以上又は０．５ｍｇ以上であってよく、また、２ｍｇ以下、１．５ｍｇ以下又は１ｍｇ以下であってよい。
【００５５】
本発明のローヤルゼリー酵素分解物はさらに、Ａｓｐ−Ｔｙｒ（ＤＹ）、Ａｒｇ−Ｌｅｕ（ＲＬ）、Ａｒｇ−Ｉｌｅ（ＲＩ）、Ｌｅｕ−Ａｒｇ（ＬＲ）、及びＩｌｅ−Ａｒｇ（ＩＲ）からなる群より選択される１種以上のペプチドを含んでもよい。本発明のローヤルゼリー酵素分解物において、ローヤルゼリー酵素分解物の乾燥物１００ｇに対して、例えば、ＤＹが５ｍｇ以上又は８ｍｇ以上であってよく、また、２０ｍｇ以下又は１５ｍｇ以下であってよく、ＲＬが０．５ｍｇ以上又は１ｍｇ以上であってよく、また、５ｍｇ以下又は２ｍｇ以下であってよく、ＲＩが１ｍｇ以上又は２ｍｇ以上であってよく、また、４ｍｇ以下又は３ｍｇ以下であってよく、ＬＲが１．５ｍｇ以上又は２ｍｇ以上であってよく、また、４ｍｇ以下又は３ｍｇ以下であってよく、ＩＲが１０ｍｇ以上又は１２ｍｇ以上であってよく、また、２０ｍｇ以下又は１６ｍｇ以下であってよい。
【００５６】
ローヤルゼリー酵素分解物における各ペプチドの量は、通常用いられる方法によって測定することができる。ローヤルゼリー酵素分解物が液体又は粉末の状態の場合、例えばまず０．１％ギ酸水溶液に分散したのち、１５，０００ｒｐｍで１０分間遠心分離し、上清を回収し、さらに、０．１％ギ酸メタノール溶液を添加、１５，０００ｒｐｍで１０分間遠心分離し、上清を回収し、ローヤルゼリー酵素分解物に含まれるペプチドの溶液を得る。必要があれば、このペプチド溶液を固相カラムにて処理し、未吸着画分を試料とする。当該試料における各ペプチドの含有量は、水溶性液体クロマトグラフィー−質量分析法（ＬＣ−ＭＳ）にて解析し、試料中のペプチド酸濃度及び標準液で得られた検量線を用いて、ローヤルゼリー酵素分解物における各ペプチドの含有量を求めることができる。
【００５７】
本発明のローヤルゼリー酵素分解物は、抗酸化活性を有するＹＤを含むため、抗酸化活性を有し得る。本発明のローヤルゼリー酵素分解物はさらに、抗酸化活性及び抗糖尿病活性を有するＭＰ及びＶＰを含むことで、抗酸化活性及び抗糖尿病活性を有し得る。
【００５８】
（４）食品組成物、医薬部外品又は医薬組成物
本発明の食品組成物、医薬部外品又は医薬組成物は、上記ローヤルゼリー酵素分解物を含み、抗酸化活性を有し得る。
【００５９】
上記のローヤルゼリー酵素分解物は、医薬組成物、医薬部外品又は食品組成物等の製品としてそのまま用いられてもよく、医薬組成物、医薬部外品又は食品組成物等の製品の一成分として用いられてもよい。ローヤルゼリー酵素分解物を含む製品は、例えば、製品の製造工程における中間製品に、上述のローヤルゼリー酵素分解物を添加することにより得ることができる。
【００６０】
医薬組成物、医薬部外品又は食品組成物の一成分としてローヤルゼリー酵素分解物を用いる場合、医薬組成物、医薬部外品又は食品組成物は、ローヤルゼリー組成物以外の成分として、例えば、薬学的に許容される成分（例えば、賦形剤、結合材、滑沢剤、崩壊剤、乳化剤、界面活性剤、基剤、溶解補助剤、懸濁化剤）、食品として許容される成分（例えば、ミネラル類、ビタミン類、フラボノイド類、キノン類、ポリフェノール類、アミノ酸、核酸、必須脂肪酸、清涼剤、結合剤、甘味料、崩壊剤、滑沢剤、着色料、香料、安定化剤、防腐剤、徐放調整剤、界面活性剤、溶解剤、湿潤剤）を含んでいてもよい。
【００６１】
ローヤルゼリー酵素分解物を含む製品は、液体の形態、半液体形態又は固体形態であってもよい。液体の形態としては、ドリンク剤、シロップ、液剤、懸濁液、乳濁液、注射剤（使用時に、蒸留水又はアミノ酸輸液若しくは電解質輸液等の輸液に配合して液剤として調製する場合を含む）であってもよく、半液体形態としてはペースト状及びゼリー状の形態であってよく、固体形態としては凍結乾燥物（例えば、凍結乾燥粉末）、錠剤（素錠、糖衣錠、発泡錠、フィルムコート錠、チュアブル錠、トローチ剤等を含む）、カプセル剤、丸剤、粉末剤（散剤）、細粒剤、顆粒剤等の剤形であってもよい。これらの各種製剤は、例えば、上述の方法により得られたローヤルゼリー酵素分解物と、必要に応じて他の成分とを混合して上記剤形に成形することによって調製することができる。
【００６２】
上述のローヤルゼリー酵素分解物を食品組成物として又は食品組成物の一成分として用いる場合、該食品組成物は、食品の３次機能、すなわち体調調節機能が強調されたものであることが好ましい。食品の３次機能が強調された製品としては、例えば、健康食品、機能性表示食品、栄養機能食品、栄養補助食品、サプリメント及び特定保健用食品を挙げることができる。
【００６３】
食品組成物としては例えば、コーヒー、ジュース及び茶飲料等の清涼飲料、乳飲料、乳酸菌飲料、ヨーグルト飲料、炭酸飲料、並びに、日本酒、洋酒、果実酒及びハチミツ酒等の酒などの飲料；カスタードクリーム等のスプレッド；フルーツペースト等のペースト；チョコレート、ドーナツ、パイ、シュークリーム、ガム、ゼリー、キャンデー、クッキー、ケーキ及びプリン等の洋菓子；大福、餅、饅頭、カステラ、あんみつ及び羊羹等の和菓子；アイスクリーム、アイスキャンデー及びシャーベット等の氷菓；カレー、牛丼、雑炊、味噌汁、スープ、ミートソース、パスタ、漬物、ジャム等の調理済みの食品；ドレッシング、ふりかけ、旨味調味料及びスープの素等の調味料などが挙げられる。
【００６４】
本発明の食品組成物、医薬部外品又は医薬組成物におけるローヤルゼリー酵素分解物の含有量は、組成物の乾燥重量を１００重量部とした場合、ローヤルゼリー酵素分解物が０．１重量部以上、１０重量部以上、２５重量部以上、４０重量部以上、又は５０重量部以上であってもよく、また、１００重量部以下、９０重量部以下、８０重量部以下、７０重量部以下、６０重量部以下、５５重量部以下であってよい。
【実施例】
【００６５】
以下、本発明を実施例により詳細に説明する。しかし、本発明はこれら実施例等になんら限定されるものではない。【００６６】
〔実施例１〕
生ローヤルゼリー４７４ｇを３Ｌフラスコに量りとり、イオン交換水４００ｍｌを加えて均一になるまで攪拌してローヤルゼリー希釈液を調製した。２Ｎ  ＮａＯＨ水溶液を加えてローヤルゼリー希釈液のｐＨを７．８に調整した。次に、エンドペプチダーゼ作用とエキソペプチダーゼ作用の両方を有するプロテアックス（天野エンザイム株式会社）４．７５ｇをイオン交換水２０ｍＬに溶かした溶液をローヤルゼリー希釈液に加え、さらにイオン交換水を全量が９８０ｇになるように加えた。反応混合物をプロペラで撹拌しながら５０℃（恒温水槽）で２時間反応させて、加水分解を行った。恒温水槽の温度を８０℃に上げて１５分間攪拌し酵素を失活させた後、結晶セルロース１１．７３ｇ、ローカストビーンガム５．８５ｇを混合後、水冷した。【００６７】
〔比較例１〕
酵素として、プロテアックスに代えて、アクチナーゼＡＳ（科研製薬株式会社）を使用しｐＨを８．８とした以外は、実施例１と同様にして、ローヤルゼリー酵素分解物を得た。【００６８】
＜酵素分解度測定＞
ゲルろ過分析を用いて分解後の化合物の分子量を測定することで酵素分解度の確認を行った。酵素反応後溶液を２０μＬ量りとり、９．５ｍＬの５０ｍＭ  ＮａＰｉ／０．３Ｍ  ＮａＣｌ  ｂｕｆｆｅｒ（ｐＨ７．０）を加え分析サンプルとした。チトクロムＣ（ｎａｃａｌａｉ  ｔｅｓｑｕｅ、Ｍ．Ｗ．＝１２，３８４）を指標とし、チトクロムＣより早く溶出される成分の割合を算出した。分析条件を以下に示す。
カラム：Ｓｈｏｄｅｘ  ＰＲＯＴＥＩＮ  ＫＷ−８０２．５（５μｍ，８．０ｍｍ  ｉ．ｄ．×３００ｍｍ，昭和電工株式会社）、
ガードカラム：Ｓｈｏｄｅｘ  ＰＲＯＴＥＩＮ  ＫＷ−Ｇ（５μｍ，８．０ｍｍ  ｉ．ｄ．×１０ｍｍ，昭和電工株式会社）、カラムオーブン：３０℃、流速：０．５ｍＬ／ｍｉｎ、移動相：Ａ；５０ｍＭリン酸Ｎａ／０．３Ｍ  ＮａＣｌ緩衝液（ｐＨ７．０），Ｂ；なし、溶出：Ｂ  ０％（６０ｍｉｎ  ｈｏｌｄ）、注入量：１０μＬ、検出：ＵＶ（２２０ｎｍ）。【００６９】
結果を表１に示す。実施例１においてチトクロムＣ以前には明らかなピークは見られず、比較例と同程度の高分解度となることが確認された。【００７０】
【表１】
2020196065.tif 000003
【００７１】
＜ヒスタミン遊離試験（アレルゲン性確認）＞
実施例１及び比較例１で得たローヤルゼリー酵素分解物について、ＣＡＳＴ法（ｃｅｌｌｕｌａｒ  ａｎｔｉｇｅｎ  ｓｔｉｍｕｌａｔｉｏｎ  ｔｅｓｔ）によって、遊離するヒスタミン量を測定した。【００７２】
具体的には、生ローヤルゼリーに対してアレルギー反応を経験したことのある被験者の血液サンプルに対し、生ローヤルゼリーの酵素加水分解物を作用させて、遊離するヒスタミン量を測定した。被験者には、本試験内容を記載した説明書を配布し、試験の趣旨及び内容を十分に説明し、被験者本人の自由意志により参加する旨の同意書を得た者に対してのみ、本試験を行った。遊離ヒスタミンの測定は、市販のＥＬＩＳＡキット（Ｈｉｓｔａｍｉｎｅ  ＥＬＩＳＡ（ＩＭＭＵＮＯ−ＢＩＯＬＯＧＩＣＡＬ  ＬＡＢＯＲＡＴＯＲＩＥＳ社製））を用いて行った。【００７３】
結果を図１に示す。実施例１ではヒスタミン遊離値（ｎｇ／ｍＬ）が比較例１に比べて１／２以下となっており、当該方法によって得られるローヤルゼリー酵素分解物は従来の方法によって得られるローヤルゼリー酵素分解物より優位にアレルゲン性を低下できていると考えられる。【００７４】
＜褐変評価＞
実施例及び比較例の酵素反応後のローヤルゼリー溶液を凍結乾燥し粉末化させ、デジタルカメラで撮影した画像を用いて褐変評価（輝度分析）を行った。撮影は粉末化後及び５０℃にて７日間保管後に行った。輝度の算出はカラーピッカーソフトである「ＦｌａｔＣｏｌｏｒＰｉｃｋｅｒ」を用いて行い、ＨＳＬ色空間における輝度（％）をその値とした。【００７５】
粉末後の結果を表２に、５０℃にて７日間保管後の結果を図２に示す。従来の方法では酵素分解により見られていた輝度の低下、褐変の現象が本発明の方法によって得られるローヤルゼリー酵素分解物では見られず、５０℃にて７日間の保管後においても同様に褐変が抑制されていた。【００７６】
【表２】
2020196065.tif 000004
【００７７】
〔実施例３  ローヤルゼリー酵素分解物の組成解析〕
（試料の調製）
実施例１の方法にしたがって、プロテアックスで処理したローヤルゼリー溶液を得て、さらに凍結乾燥させ、２つのロット（１８１０３０、１９０５１０）のローヤルゼリー酵素分解物の粉末を得た。比較として、プロテアックスに代えて、アクチナーゼＡＳ（科研製薬株式会社）、プロテアーゼＡ処理ローヤルゼリー、及びプロテアーゼＰ処理ローヤルゼリーを使用し、ｐＨをそれぞれ、８．８、７．８、及び７．８とした以外は、実施例１と同様にして、それぞれのローヤルゼリー酵素分解物の凍結乾燥粉末を得た。また、市販の酵素処理ローヤルゼリーとして、ＭＦ４（アピ株式会社）、ＲＪペプチドパウダー（アピ株式会社）、水溶化ローヤルゼリー末（森川健康堂株式会社）、ブラックローヤルゼリー末（有限会社マルオ食研）、水溶性ローヤルゼリー末（株式会社中原）、及び日新ローヤルゼリーＰ（日新蜂蜜株式会社）を使用した。さらに、酵素処理されていない未酵素処理ローヤルゼリーの乾燥粉末も使用した。【００７８】
それぞれの凍結乾燥粉末１００ｍｇに８００μＬの０．１％ギ酸水溶液を添加し、さらに５ｍｍ径のジルコニアビーズを添加し、ビーズ式ホモジナイザーで２５Ｈｚで２分間ホモジナイズした。１５，０００ｒｐｍで１０分間遠心分離し、上清を１００μＬ回収し、さらに、０．１％ギ酸メタノール溶液３００μＬを添加、１５，０００ｒｐｍで１０分間遠心分離し、上清を回収し、得られたペプチド溶液を解析のための試料とした。【００７９】
（固相カラム処理）
ＭｏｎｏＳｐｉｎ  Ｃ１８カラムに０．１％ギ酸メタノール溶液を１００μＬ添加し、５，０００ｇで２分間遠心分離し、カラムに０．１％のギ酸を添加した７５％メタノール溶液１００μＬを添加し、さらに５，０００ｇで２分間遠心分離した。処理したカラムに上記得られた試料（ペプチド溶液）を１００μＬ添加し、５，０００ｇで２分間遠心分離し、カラム流出液（未吸着画分）を回収した。カラム流出液全量（約１００μｌ）に、０．１％のギ酸を添加した７５％メタノール溶液１００μＬを添加し、０．２μｍのシリンジフィルターでろ過した。【００８０】
（液体クロマトグラフィー−質量分析法（ＬＣ−ＭＳ）解析）
上記ろ液全量を無希釈でＨＰＬＣバイアルに封入し、そのうち２μＬをＬＣ−ＭＳへ注入し、以下の条件でＬＣ−ＭＳを行った。
使用機器：Ｕｌｔｉｍａｔｅ３０００（Ｔｈｅｒｍｏｆｉｓｈｅｒ）
カラム：ＸＢｒｉｄｇｅ  ＢＥＨ  Ａｍｉｄｅ（２．１×１５０ｍｍ、ｉ．ｄ．  ２．５μｍ  Ｗａｔｅｒｓ）
カラムオーブン：６０℃
溶媒Ａ：１０ｍＭ  ギ酸アンモニウム（ｐＨ２．５）
溶媒Ｂ：１０ｍＭ  ギ酸アンモニウム  ９５％アセトニトリル
流速：０．２ｍＬ／分
注入量：２μＬ
グラジェントは表３のとおりである。
【表３】
2020196065.tif 000005
ＭＳ測定条件
使用機器：Ｑ  Ｅｘａｃｔｉｖｅ  ｆｏｃｕｓ
Ｉｏｎ  ｓｏｕｒｃｅ：ＨＥＳＩ
Ｓｃａｎ  ｒａｎｇｅ：７０−１０００ｍ／ｚ
Ｆｕｌｌ  ｓｃａｎ  ｉｓｏｌａｔｉｏｎ：７０，０００【００８１】
標準液の各濃度とクロマトグラムより得られた各ピークの面積から検量線を得る。検量線から、試験溶液中の各ペプチド酸濃度を算出し、次式により、検体中の各々の含有量を求めた。
含有量（％）＝Ｙ＝Ｘ×Ｖ×Ｅ／Ｗ／１００００００×１００
含有量（ｍｇ／１００ｇ）＝Ｙ×１００／１００×１０００
Ｙ：ペプチドの含有量（％）
Ｘ：検量線から求めた試料溶液中の各ペプチドの濃度（ｎｇ／ｍＬ）
Ｖ：試料の最終希釈溶液の体積（ｍＬ）
Ｅ：試料の最終希釈溶液の希釈倍率
Ｗ：試料量（ｍｇ）【００８２】
（結果）
各試料のローヤルゼリーに含まれる特定のペプチドについての結果は、表４に示す。表４から、本発明のプロテアックス処理したローヤルゼリー酵素分解物は、他のローヤルゼリーに比べて多く含まれているペプチドとして、ＭＰ（０．７６〜０．９４ｍｇ／１００ｇローヤルゼリー酵素分解物）、ＶＰ（６１．４８〜７４．７６ｍｇ／１００ｇローヤルゼリー酵素分解物）、ＹＤ（１７３．０２〜１８０．９９ｍｇ／１００ｇローヤルゼリー酵素分解物）、ＰＩ（Ｌ）（８．７１〜８．８８ｍｇ／１００ｇローヤルゼリー酵素分解物）、ＰＶ（２０．５３〜２２．３６ｍｇ／１００ｇローヤルゼリー酵素分解物）、Ｉ（Ｌ）Ｐ（３２．６７〜３８．２１ｍｇ／１００ｇローヤルゼリー酵素分解物）、ＰＭ（０．５６〜０．９６ｍｇ／１００ｇローヤルゼリー酵素分解物）などが確認された。ＭＰ、ＶＰは抗糖尿病活性及び抗酸化活性を、ＹＤは抗酸化活性を有することが知られているため、本発明のローヤルゼリー酵素分解物は、他のローヤルゼリーに比べて、高い抗糖尿病活性、抗酸化活性を有することが示唆された。
【表４】
2020196065.tif 000006
【図１】
2020196065.tif 000007
【図２】
2020196065.tif 000008
【手続補正書】
【提出日】令和3年8月24日(2021.8.24)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ローヤルゼリーをエンドペプチダーゼ作用とエキソペプチダーゼ作用とを有するペプチダーゼで処理することを含む、アレルギー性が低減され且つ製造時及び製造後の褐変化が抑制されてなるローヤルゼリー酵素分解物の製造方法であって、前記ペプチダーゼがアスペルギルス・オリゼー産生ペプチダーゼであり、前記ペプチダーゼの至適温度が５０℃以上である、製造方法。
【請求項２】
ローヤルゼリーをエンドペプチダーゼ作用とエキソペプチダーゼ作用とを有するペプチダーゼで処理することを含む、ローヤルゼリー酵素分解物のアレルギー性低減且つ製造時及び製造後の褐変化抑制方法であって、前記ペプチダーゼがアスペルギルス・オリゼー産生ペプチダーゼであり、前記ペプチダーゼの至適温度が５０℃以上である、方法。
【請求項３】
請求項１に記載の方法によって製造されたローヤルゼリー酵素分解物であって、ローヤルゼリー酵素分解物の乾燥物１００ｇに対して、Ｔｙｒ−Ａｓｐを１００ｍｇ以上含む、ローヤルゼリー酵素分解物。
【請求項４】
ローヤルゼリー酵素分解物の乾燥物１００ｇに対して、Ｔｙｒ−Ａｓｐを１００ｍｇ以上含む、ローヤルゼリー酵素分解物。
【請求項５】
さらにローヤルゼリー酵素分解物の乾燥物１００ｇに対して、Ｖａｌ−Ｐｒｏを４０ｍｇ以上、及び、Ｍｅｔ−Ｐｒｏを０．５ｍｇ以上含む、請求項３又は４に記載のローヤルゼリー酵素分解物。
【請求項６】
さらに、Ｐｒｏ−Ｉｌｅ及び／若しくはＰｒｏ−Ｌｅｕ、Ｐｒｏ−Ｖａｌ、Ｉｌｅ−Ｐｒｏ及び／若しくはＬｅｕ−Ｐｒｏ、並びにＰｒｏ−Ｍｅｔからなる群より選択される１種以上のペプチドを含む、請求項３〜５のいずれか一項に記載のローヤルゼリー酵素分解物。
【請求項７】
請求項３〜６のいずれか一項に記載のローヤルゼリー酵素分解物を含む、食品組成物、医薬部外品又は医薬組成物。
【国際調査報告】
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