(57)【要約】  銅イオンを含有し、口腔バイオフィルム殺菌効果と共に口臭成分の発生抑制効果に優れ、口臭抑制用として好適な口腔用組成物を提供する。  （Ａ）銅イオンを０．００１〜０．２質量％、（Ｂ）ノニオン性殺菌剤を０．０１〜１質量％、及び（Ｃ）アシルタウリン、アシルアミノ酸及びこれらの塩から選ばれる１種又は２種以上のアニオン性界面活性剤を０．１〜２質量％含有する口腔用組成物。更に、（Ｄ）炭素数１０以下の有機酸及びその塩から選ばれる１種又は２種以上を０．０１〜３質量％含有する上記口腔用組成物。【特許請求の範囲】
【請求項１】
（Ａ）銅イオンを０．００１〜０．２質量％、
（Ｂ）ノニオン性殺菌剤を０．０１〜１質量％、及び
（Ｃ）アシルタウリン、アシルアミノ酸及びこれらの塩から選ばれる１種又は２種以上のアニオン性界面活性剤を０．１〜２質量％
含有する口腔用組成物。
【請求項２】
（Ａ）銅イオン源が、グルコン酸銅、クエン酸銅、硫酸銅及び塩化銅から選ばれる１種又は２種以上の水溶性銅化合物である請求項１記載の口腔用組成物。
【請求項３】
（Ｂ）ノニオン性殺菌剤が、イソプロピルメチルフェノールである請求項１又は２記載の口腔用組成物。
【請求項４】
アシルタウリン、アシルアミノ酸が、それぞれ炭素数８〜１８のアシル基を有するものである請求項１〜３のいずれか１項記載の口腔用組成物。
【請求項５】
（Ｃ）成分が、アシルタウリン及びその塩から選ばれる請求項１〜４のいずれか１項記載の口腔用組成物。
【請求項６】
（Ｃ）成分が、ラウロイルメチルタウリンナトリウムである請求項５記載の口腔用組成物。
【請求項７】
更に、（Ｄ）炭素数１０以下の有機酸及びその塩から選ばれる１種又は２種以上を０．０１〜３質量％含有する請求項１〜６のいずれか１項記載の口腔用組成物。
【請求項８】
シリカ系研磨剤含有の練歯磨剤組成物である請求項１〜７のいずれか１項記載の口腔用組成物。
【請求項９】
口臭抑制及び口腔バイオフィルム殺菌用である請求項１〜８のいずれか１項記載の口腔用組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、銅イオンを含有し、口腔バイオフィルム殺菌効果と共に口臭成分の発生抑制効果に優れ、口臭抑制用として好適な口腔用組成物に関する。
【背景技術】
【０００２】
従来、銅イオンを含む水溶性銅化合物の抗菌作用、消臭作用に着目し、口臭の予防を目的として水溶性銅化合物を口腔用組成物に配合した口腔用組成物が種々提案され、特許文献１（特許第２５４０８９２号公報）には、グルコン酸銅等の銅化合物と特定の殺菌剤とを併用し、抗菌効果と共に口臭除去効果の持続性が優れる口腔用組成物が提案されている。
また、水溶性銅化合物を用いた技術として、特許文献２（特開２０１１−１０５６５０号公報）は、口腔内に塗布して使用し得るゲル状口腔用組成物に水溶性銅化合物、フェノール系殺菌剤、界面活性剤等を配合することで、バイオフィルム抑制効果及びジンジパイン阻害効果が優れ、口腔内滞留性も高まり、歯周病改善に効果的であることを提案している。特許文献３（特開２００３−１９２５５５号公報）は、特殊な研磨剤（特定の合成無定形ケイ酸塩）を銅化合物に併用した歯磨剤組成物が、長期保存後も口臭抑制効果に優れることを提案している。
しかしながら、口臭発生には様々な要因が複雑に関与していることもあり、口臭を満足に抑制することは難しく、特に歯周病罹患者に対する口臭抑制効果は必ずしも十分ではなかった。【０００３】
ところで、歯周病の原因となる病原性細菌は、口腔内に強固なバイオフィルムを形成して生息しており、このバイオフィルムの浸透殺菌にイソプロピルメチルフェノール等のノニオン性殺菌剤が有効であることは知られている（特許文献４；特開２０１１−９８９１６号公報）が、バイオフィルムを殺菌するだけでは口臭を満足に抑制できなかった。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００４】
【特許文献１】特許第２５４０８９２号公報
【特許文献２】特開２０１１−１０５６５０号公報
【特許文献３】特開２００３−１９２５５５号公報
【特許文献４】特開２０１１−９８９１６号公報
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
本発明は、上記事情に鑑みなされたもので、銅イオンを含有し、口腔バイオフィルム殺菌効果と共に口臭成分の発生抑制効果に優れ、口臭抑制用として好適な口腔用組成物を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００６】
本発明者らは、上記目的を達成するため鋭意検討を行った結果、特定量の銅イオンにノニオン性殺菌剤と特定のアニオン性界面活性剤とを組み合わせて口腔用組成物に配合すると、口腔バイオフィルム殺菌効果に加えて口臭成分、特にメチルメルカプタンの発生を抑制する優れた作用効果を奏することを知見した。即ち、本発明では、（Ａ）銅イオンを０．００１〜０．２質量％、（Ｂ）ノニオン性殺菌剤を０．０１〜１質量％、（Ｃ）アシルタウリン、アシルアミノ酸及びこれらの塩から選ばれる１種又は２種以上のアニオン性界面活性剤を０．１〜２質量％含有する口腔用組成物が、口腔バイオフィルムの殺菌効果と共に口臭成分の発生抑制効果に優れ、バイオフィルムが形成されていても、口臭原因菌からの口臭成分の発生を長時間に亘って抑制し、また、味も良く、特に口臭の抑制又は除去用として有効であることを知見し、本発明をなすに至った。【０００７】
更に詳述すると、本発明者らが、特に歯周病罹患者における口臭予防をケアすることを目標に検討を行ったところ、銅イオンによる口臭抑制効果は十分ではなく、口腔用組成物に銅イオンを配合しただけでは口臭が満足に抑制されなかった。そこで、歯周病罹患者に多い傾向にあるバイオフィルムに着目し、バイオフィルム中の口臭原因菌が出す口臭成分が主な原因となっているのではないかと推定し、バイオフィルムからの口臭成分の発生抑制を目指して更に検討を進めた。その結果、（Ａ）成分に（Ｂ）及び（Ｃ）成分をそれぞれ適切量で組み合わせて口腔用組成物、特に歯磨剤組成物に配合すると、三者が相乗的に作用して、意外にも口臭成分の発生抑制作用が増強して発現し、これにより、バイオフィルム殺菌効果と共に、口臭原因菌がバイオフィルムを形成して生息していても口臭成分、特にメチルメルカプタンの発生を長時間に亘って抑制する優れた作用効果を付与できた。したがって、本発明によれば、バイオフィルムの殺菌だけでは抑制することが困難であった歯周病罹患者の口臭をも効果的に抑制又は除去することが可能である。
本発明では、（Ａ）、（Ｂ）及び（Ｃ）成分の組み合わせによって、上記格別な作用効果を与えることができたものであり、後述の比較例にも示すように、（Ａ）、（Ｂ）及び（Ｃ）成分のうちのいずれかの成分を欠くと、メチルメルカプタン発生抑制効果が悪く、作用効果が劣った（比較例１〜５）。一方、（Ａ）、（Ｂ）成分が配合され、更にアニオン性界面活性剤のラウリル硫酸ナトリウムが配合されていても、（Ｃ）成分が配合されていないと、メチルメルカプタン発生抑制効果が劣った（比較例６）。
なお、特許文献１は、銅化合物及び殺菌剤による抗菌及び口臭の持続的抑制であるがバイオフィルムに対する効果は検討されておらず不明である。特許文献２は、ゲル状口腔用組成物における、水溶性銅化合物のジンジパイン阻害作用とフェノール系殺菌剤のバイオフィルム浸透殺菌効果との向上、それによる歯周病の抑制である。特許文献３は、歯磨組成物の研磨剤として特殊な合成無定形ケイ酸塩による銅化合物の口臭抑制効果の改善である。これらに対して、本発明は、（Ａ）、（Ｂ）及び（Ｃ）成分の三者の組み合わせによる特異的な口腔バイオフィルムの殺菌及び口臭成分の発生抑制であり、口腔用組成物、特に練歯磨剤組成物において、格別顕著な作用効果を付与できたものである。【０００８】
したがって、本発明は、下記の口腔用組成物を提供する。
〔１〕
（Ａ）銅イオンを０．００１〜０．２質量％、
（Ｂ）ノニオン性殺菌剤を０．０１〜１質量％、及び
（Ｃ）アシルタウリン、アシルアミノ酸及びこれらの塩から選ばれる１種又は２種以上のアニオン性界面活性剤を０．１〜２質量％
含有する口腔用組成物。
〔２〕
（Ａ）銅イオン源が、グルコン酸銅、クエン酸銅、硫酸銅及び塩化銅から選ばれる１種又は２種以上の水溶性銅化合物である〔１〕に記載の口腔用組成物。
〔３〕
（Ｂ）ノニオン性殺菌剤が、イソプロピルメチルフェノールである〔１〕又は〔２〕に記載の口腔用組成物。
〔４〕
アシルタウリン、アシルアミノ酸が、それぞれ炭素数８〜１８のアシル基を有するものである〔１〕〜〔３〕のいずれかに記載の口腔用組成物。
〔５〕
（Ｃ）成分が、アシルタウリン及びその塩から選ばれる〔１〕〜〔４〕のいずれかに記載の口腔用組成物。
〔６〕
（Ｃ）成分が、ラウロイルメチルタウリンナトリウムである〔５〕に記載の口腔用組成物。
〔７〕
更に、（Ｄ）炭素数１０以下の有機酸及びその塩から選ばれる１種又は２種以上を０．０１〜３質量％含有する〔１〕〜〔６〕のいずれかに記載の口腔用組成物。
〔８〕
シリカ系研磨剤含有の練歯磨剤組成物である〔１〕〜〔７〕のいずれかに記載の口腔用組成物。
〔９〕
口臭抑制及び口腔バイオフィルム殺菌用である〔１〕〜〔８〕のいずれかに記載の口腔用組成物。
【発明の効果】
【０００９】
本発明によれば、銅イオンを含有し、口腔バイオフィルム殺菌効果と共に口臭成分の発生抑制効果に優れ、口臭抑制用として好適な口腔用組成物を提供できる。この口腔用組成物は、歯周病罹患者の口臭抑制又は除去にも有効に使用することができる。
【発明を実施するための形態】
【００１０】
以下、本発明につき更に詳述する。本発明の口腔用組成物は、（Ａ）銅イオン、（Ｂ）ノニオン性殺菌剤、及び（Ｃ）特定のアニオン性界面活性剤を含有する。
ここで、「銅イオン」は、組成物の液体媒体（水等）中に溶解している銅化合物の銅イオンを意味し、組成物中に固体状で存在する不溶の銅化合物ではない。
【００１１】
（Ａ）銅イオンは、口臭の抑制又は除去剤であり、口臭成分であるメチルメルカプタンの発生抑制剤として作用する。
銅イオン源となる銅含有化合物は、水溶性銅化合物であることが好ましい。水溶性銅化合物は、２５℃における水溶解度が５ｇ／１００ｍＬ以上の化合物であり、グルコン酸銅、クエン酸銅、硫酸銅、塩化銅等の水溶性の銅塩が好ましく、より好ましくはグルコン酸銅、クエン酸銅、硫酸銅、とりわけグルコン酸銅、クエン酸銅である。これらは、１種単独でも２種以上を併用してもよい。
（Ａ）成分は、他の態様として、２５℃における水への溶解度が５ｇ／１００ｍＬ未満の水難溶性又は不溶性の銅化合物を他の溶媒に溶解した溶液由来の銅イオンを使用することもでき、上記溶液をイオンの供給源として使用し配合することもできる。例えば、水不溶性の酸化銅を希塩酸等の酸性水溶液に溶解して得られた銅イオンを使用することもできる。また、金属錯体を形成させて系中に溶解させた銅含有化合物の銅、界面活性剤を用いて可溶化させた銅含有化合物の銅も、本発明の銅イオンとすることができる。
【００１２】
（Ａ）銅イオンの配合量は、組成物全体の０．００１〜０．２％（質量％、以下同様）、好ましくは０．００５〜０．１５％であり、より好ましくは０．０１〜０．１％である。０．００１％以上であると、十分な口臭除去効果が発現すると共にメチルメルカプタン発生抑制効果が発現する。０．２％を超えると、銅の金属味が増強して抑制が困難になり製剤の味が悪くなる。また、保存後の製剤安定性（液分離のなさ、変色のなさ）が劣ることがある。
【００１３】
（Ｂ）ノニオン性殺菌剤は、バイオフィルム殺菌作用を奏すると共に、口臭成分であるメチルメルカプタンの発生抑制剤として作用する。
ノニオン性殺菌剤は、イソプロピルメチルフェノール、トリクロサンが好ましく、より好ましくはイソプロピルメチルフェノール（３−メチル−４−イソプロピルフェノール）である。
（Ｂ）ノニオン性殺菌剤の配合量は、組成物全体の０．０１〜１％であり、好ましくは０．０５〜０．５％である。０．０１％未満では、十分なバイオフィルム殺菌効果及びメチルメルカプタン発生抑制効果が劣る。上限量は特に限定されないが、１％以下であると製剤に十分に溶解し、１％を超えると溶解性が低下して作用が劣ることがある。
【００１４】
（Ｃ）成分は、アシルタウリン、アシルアミノ酸及びこれらの塩から選ばれる１種又は２種以上のアニオン性界面活性剤である。（Ｃ）成分は、口臭成分であるメチルメルカプタンの発生抑制剤として作用する。また、（Ｂ）成分によるバイオフィルム殺菌作用の向上にも寄与する。（Ｃ）成分としては、上記作用効果の点から、特にアシルタウリン及びその塩から選ばれるものが好ましい。
（Ｃ）成分は、好ましくはアシル基の炭素数が８〜１８、特に１２〜１６であり、前記アシル基を有するアシルタウリン塩、アシルアミノ酸塩から選ばれ、アシルアミノ酸塩としては、特にアシルサルコシン塩が好適である。中でも、ラウロイルメチルタウリン塩、ラウロイルサルコシン塩、とりわけラウロイルメチルタウリン塩が好ましい。また、これらの塩は、アルカリ金属塩、アルカリ土類金属塩、有機アミン塩等であり、中でもアルカリ金属塩、特にナトリウム塩が好ましい。
【００１５】
アシルタウリン塩としては、例えばラウロイルメチルタウリンナトリウム、ミリストイルメチルタウリンナトリウム、ヤシ油脂肪酸メチルタウリンナトリウム等が挙げられる。
アシルアミノ酸塩としては、例えばラウロイルサルコシンナトリウム、ラウロイルグルタミン酸ナトリウム、ラウロイルアスパラギン酸ナトリウム等が挙げられる。
これらは市販品を使用でき、具体的には、ＮＩＫＫＯＬ  ＬＭＴ（ラウロイルメチルタウリンナトリウム、日光ケミカルズ（株）製）、ＮＩＫＫＯＬ  ＭＭＴ（ミリストイルメチルタウリンナトリウム、日光ケミカルズ（株）製）、ソイポンＳＬＰ（ラウロイルサルコシンナトリウム、川研ファインケミカル（株）製）、アミソフトＬＳ−１１(ラウロイルグルタミン酸ナトリウム、味の素ヘルシーサプライ（株）製)等を使用できる。
【００１６】
（Ｃ）成分の配合量は、組成物全体の０．１〜２％、好ましくは０．３〜１．５％である。配合量が０．１％未満では、メチルメルカプタン発生抑制効果が十分に得られず、また、バイオフィルム殺菌効果が低くなる傾向にある。２％を超えると、（Ａ）成分由来の銅の金属味が強くなり、製剤の味が低下する。
【００１７】
なお、本発明では、上記（Ｃ）成分以外のアニオン性界面活性剤は、本発明の効果を妨げない範囲であれば配合してもよいが、特にラウリル硫酸ナトリウム等のアルキル硫酸塩は配合しない（配合量０％）ほうがよく、配合する場合は組成物全体の０．５％以下、特に０．２％以下、とりわけ０．１％以下の量がよい。
【００１８】
本発明の口腔用組成物には、更に、（Ｄ）炭素数１０以下の有機酸又はその塩を配合することが好ましい。（Ｄ）成分を配合すると、（Ａ）成分由来の銅による金属味が改善して製剤の味がより優れる。
有機酸は炭素数１０以下、好ましくは４〜６であり、前記炭素数のトリカルボン酸、ジカルボン酸やこれらの塩を用いることができ、塩はアルカリ金属塩である。中でも、ヒドロキシ酸であるクエン酸、酒石酸、リンゴ酸やこれらの塩が好ましい。これらは、１種単独でも２種以上を併用してもよい。
【００１９】
（Ｄ）成分の配合量は、組成物全体の０．０１〜３％が好ましく、０．１〜２％がより好ましい。この範囲内であると、味の改善効果がより優れ、かつ十分なメチルメルカプタン発生抑制効果が発揮される。
【００２０】
本発明の口腔用組成物は、特に練歯磨、液状歯磨、潤製歯磨等の歯磨剤組成物、とりわけ練歯磨剤組成物として好適であり、上記成分に加えて、これら以外の公知成分を本発明の効果を妨げない範囲で必要に応じて配合できる。具体的には、研磨剤、湿潤剤、粘結剤、アニオン性界面活性剤以外の界面活性剤、更に必要により甘味剤、着色剤、防腐剤、香料、銅イオン源となる化合物及びノニオン性殺菌剤以外の有効成分を配合できる。
【００２１】
研磨剤は、口腔用として一般的な研磨剤を用いることができる。例えば、沈降性シリカ、火成性シリカといった無水ケイ酸、アルミノシリケート、ジルコノシリケート、チタン結合性シリカ等のシリカ系研磨剤、第２リン酸カルシウム・２水和物又は無水和物、第１リン酸カルシウム、第３リン酸カルシウム等のリン酸カルシウム系研磨剤、炭酸カルシウム、水酸化カルシウム、水酸化アルミニウム、不溶性メタリン酸ナトリウム、合成樹脂系研磨剤が挙げられ、歯磨剤用として一般的なシリカ系研磨剤が好適である。これら研磨剤の配合量は、通常、２〜４０％、特に１０〜３０％である。
【００２２】
湿潤剤は、ソルビット、キシリット等の糖アルコール、グリセリン、プロピレングリコール等の多価アルコールが挙げられる。湿潤剤の配合量は、通常、５〜５０％、特に１０〜４０％である。
【００２３】
粘結剤は、有機粘結剤、無機粘結剤を使用できる。有機粘結剤としては、カルボキシメチルセルロースナトリウム、メチルセルロース、ヒドロキシメチルセルロース、ヒドロキシエチルセルロース等のセルロース誘導体、キサンタンガム等のガム類、アルギン酸ナトリウム等のアルギン酸誘導体、カラギーナン、ポリビニルアルコール、ポリアクリル酸ナトリウムが挙げられる。無機粘結剤としては、ゲル化性シリカ、ゲル化性アルミニウムシリカ等が挙げられる。
粘結剤の配合量は、通常、０．１〜１０％、特に０．２〜８％であり、有機粘結剤の配合量は０．１〜５％、特に０．５〜３％がよく、無機粘結剤の配合量は０．１〜８％、特に０．５〜５％がよい。
【００２４】
界面活性剤は、ノニオン性界面活性剤、カチオン性界面活性剤、両性界面活性剤を任意に配合できる。具体的にノニオン性界面活性剤は、ショ糖脂肪酸エステル等の糖脂肪酸エステル、糖アルコール脂肪酸エステル、グリセリン脂肪酸エステル、ポリグリセリン脂肪酸エステル、ポリオキシエチレンソルビタン脂肪酸エステル、ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油等のポリオキシエチレン脂肪酸エステル、ポリオキシエチレンステアリルエーテル等のポリオキシエチレン高級アルコールエーテル、ラウリン酸ジエタノールアミド等の脂肪酸アルカノールアミドが挙げられる。カチオン性界面活性剤は、塩化ジステアリルメチルアンモニウム等のアルキルアンモニウム型、アルキルベンジルアンモニウム塩が挙げられる。両性界面活性剤は、アルキルベタインや、アルキルジメチルアミノ酢酸ベタイン、脂肪酸アミドプロピルベタイン等の酢酸ベタイン型、アルキルイミダゾリニウムベタイン等のベタイン型、イミダゾリン型が挙げられる。これら界面活性剤の配合量は、０〜１０％、特に０．０１〜５％がよい。ノニオン性界面活性剤は、配合量が０．０１％以下でもよく、配合せず０％でもよい。
【００２５】
甘味剤は、サッカリンナトリウム等、着色剤は、青色１号、黄色４号、二酸化チタン等が挙げられる。防腐剤は、パラオキシ安息香酸メチル等のパラオキシ安息香酸エステル、安息香酸又はその塩が挙げられる。
【００２６】
香料は、ペパーミント油、スペアミント油、アニス油、ユーカリ油、ウィンターグリーン油、カシア油、クローブ油、タイム油、セージ油、レモン油、オレンジ油、ハッカ油、カルダモン油、コリアンダー油、マンダリン油、ライム油、ラベンダー油、ローズマリー油、ローレル油、カモミル油、キャラウェイ油、マジョラム油、ベイ油、レモングラス油、オリガナム油、パインニードル油、ネロリ油、ローズ油、ジャスミン油、グレープフルーツ油、スウィーティー油、柚油、イリスコンクリート、アブソリュートペパーミント、アブソリュートローズ、オレンジフラワー等の天然香料や、これら天然香料の加工処理（前溜部カット、後溜部カット、分留、液液抽出、エッセンス化、粉末香料化等）した香料、及び、メントール、カルボン、アネトール、シネオール、サリチル酸メチル、シンナミックアルデヒド、オイゲノール、３−ｌ−メントキシプロパン−１，２−ジオール、チモール、リナロール、リナリールアセテート、リモネン、メントン、メンチルアセテート、Ｎ−置換−パラメンタン−３−カルボキサミド、ピネン、オクチルアルデヒド、シトラール、プレゴン、カルビールアセテート、アニスアルデヒド、エチルアセテート、エチルブチレート、アリルシクロヘキサンプロピオネート、メチルアンスラニレート、エチルメチルフェニルグリシデート、バニリン、ウンデカラクトン、ヘキサナール、ブタノール、イソアミルアルコール、ヘキセノール、ジメチルサルファイド、シクロテン、フルフラール、トリメチルピラジン、エチルラクテート、エチルチオアセテート等の単品香料、更に、ストロベリーフレーバー、アップルフレーバー、バナナフレーバー、パイナップルフレーバー、グレープフレーバー、マンゴーフレーバー、バターフレーバー、ミルクフレーバー、フルーツミックスフレーバー、トロピカルフルーツフレーバー等の調合香料等が挙げられ、口腔用組成物に用いられる公知の香料素材を組み合わせて使用することができる。
上記の香料素材の配合量は、０．０００００１〜１％が好ましく、上記香料素材を使用した賦香用香料の配合量は、０．１〜２％が好ましい。
【００２７】
有効成分は、塩化セチルピリジニウム、塩化ベンザルコニウム等のカチオン性殺菌剤、トラネキサム酸、イプシロンアミノカプロン酸、アラントイン等の抗炎症剤、デキストラナーゼ等の酵素、フッ化ナトリウム、モノフルオロリン酸ナトリウム等のフッ素含有化合物、アスコルビン酸、トコフェロール酢酸エステル等のビタミン類、グリチルリチン酸ジカリウム、硝酸カリウム、乳酸アルミニウム、塩化ナトリウム、タイム等の植物抽出物が挙げられる。上記任意の有効成分は、本発明の効果を妨げない範囲で有効量配合できる。
【実施例】
【００２８】
以下、実施例及び比較例を示し、本発明を具体的に説明するが、本発明は下記の実施例に制限されるものではない。なお、下記の例において％は特に断らない限りいずれも質量％を示す。【００２９】
［実施例、比較例］
表１〜３に示す組成の練歯磨剤組成物を常法によって調製し、下記方法で評価した。結果を表に併記した。【００３０】
（１）バイオフィルム殺菌効果の評価方法
口腔細菌として、アクチノマイセス  ヴィスコサス（Ａｃｔｉｎｏｍｙｃｅｓ  ｖｉｓｃｏｓｕｓ）ＡＴＣＣ４３１４６、フゾバクテリウム  ヌクレアタム（Ｆｕｓｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｎｕｃｌｅａｔｕｍ）ＡＴＣＣ１０９５３、ポルフィロモナス  ジンジバリス（Ｐｏｒｐｈｙｒｏｍｏｎａｓ  ｇｉｎｇｉｖａｌｉｓ）ＡＴＣＣ３３２７７は、５ｍｇ／Ｌのヘミン（Ｓｉｇｍａ社製）及び１ｍｇ／ＬのビタミンＫ（和光純薬工業（株）製）を含むトッドへヴィットブロス（Ｂｅｃｔｏｎ  ａｎｄ  Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ社製）培養液〔ＴＨＢＨＭ〕を用いて培養した。ベイヨネラ  パルビュラ（Ｖｅｉｌｌｏｎｅｌｌａ  ｐａｒｖｕｌａ）ＡＴＣＣ１７７４５は、１．２６％乳酸ナトリウム（Ｓｉｇｍａ社製）を含むトッドへヴィットブロス（Ｂｅｃｔｏｎ  ａｎｄ  Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ社製）培養液〔ＴＨＢＬ〕を用いて培養した。なお、培養は、３７℃で一晩嫌気培養（８０ｖｏｌ％窒素、１０ｖｏｌ％二酸化炭素、１０ｖｏｌ％水素）した。培養後、菌液は遠心分離（８，０００ｇ×１０ｍｉｎ）により集菌した。遠心集菌した各細菌は、ベイサルメディウムムチン培養液（ＢＭＭ）*1に再懸濁した。
直径７ｍｍ×厚さ３．５ｍｍのハイドロキシアパタイト（ＨＡ）板（旭光学工業（株）製）を０．４５μｍのフィルターでろ過したヒト無刺激唾液で処理したものをモデルバイオフィルム作製の担体に用い、２４穴マルチプレート（住友ベークライト（株）製）の底部に設置した。これに、ＢＭＭで１×１０7ｃｆｕ／ｍＬ（ｃｆｕ：ｃｏｌｏｎｙ  ｆｏｒｍｉｎｇ  ｕｎｉｔｓ）に調製した上記４菌株を播種し、３７℃、嫌気条件下（８０ｖｏｌ％窒素、１０ｖｏｌ％二酸化炭素、１０ｖｏｌ％水素）で６日間連続培養し、ＨＡ板表面に４菌種混合のモデルバイオフィルムを形成させた。
バイオフィルムを形成後、培養液を除去したバイオフィルム付着ＨＡ板に対し、試験製剤として各例の練歯磨剤組成物を蒸留水で３倍希釈した遠心上清を０．５ｍＬ作用させて３分間処置（コントロールはリン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ、和光純薬工業（株）製）を使用して同様に処置）し、１ｍＬのＰＢＳで６回洗浄した後、４ｍＬの生理食塩水に移し、超音波ホモジナイザーでバイオフィルムを分散した。このバイオフィルム分散液を生理食塩水で１０倍ずつ段階希釈し、血液寒天培地に５０μＬ塗抹し、嫌気培養を１週間行い、生えてきたコロニー数を計測した。
コロニー数をコントロール（ＰＢＳ処理）と比較し、下記基準によってバイオフィルム殺菌効果を評価した。
評価基準
◎：コロニー数が１／５００未満
○：コロニー数が１／５００以上１／１００未満
×：コロニー数が１／１００以上【００３１】
＊１；ＢＭＭの組成（１Ｌ中の質量で表す。）
プロテオースペプトン(Ｂｅｃｔｏｎ  ａｎｄ  Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ社製)：
４ｇ／Ｌ
トリプトン(Ｂｅｃｔｏｎ  ａｎｄ  Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ社製)：
２ｇ／Ｌ
イーストエキス(Ｂｅｃｔｏｎ  ａｎｄ  Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ社製)：
２ｇ／Ｌ
ムチン(Ｓｉｇｍａ社製)：                                  ５ｇ／Ｌ
ヘミン(Ｓｉｇｍａ社製)：                            ２．５ｍｇ／Ｌ
ビタミンＫ(和光純薬工業（株）製)：                  ０．５ｍｇ／Ｌ
ＫＣｌ(和光純薬工業（株）製)：                            １ｇ／Ｌ
システイン(和光純薬工業（株）製)：                    ０．２ｇ／Ｌ
蒸留水：                                                  残
（全量が１Ｌになるようにメスアップし、１２０℃で２０分間オートクレ
ーブした。）【００３２】
（２）メチルメルカプタン発生抑制効果の評価方法
（１）と同様にしてモデルバイオフィルムを形成後、試験製剤として各例の練歯磨剤組成物を蒸留水で３倍希釈した遠心上清０．５ｍＬを３分間作用させて処置（コントロールはＰＢＳを使用して同様に処置）し、ＰＢＳで洗浄後、ガラス瓶に移し、メチオニン含有ＰＢＳ溶液を添加して密封した。３７℃でインキュベートし、３時間経過後の気相中のメチルメルカプタン（ＭｅＳＨ）量をガスクロマトグラフィーにて測定してその濃度を求めた。
メチルメルカプタン濃度をコントロール（ＰＢＳ処理）と比較し、下記基準によってメチルメルカプタン発生抑制効果を評価した。
評価基準
◎：メチルメルカプタン濃度が１／１０未満
○：メチルメルカプタン濃度が１／１０以上１／４未満
△：メチルメルカプタン濃度が１／４以上１／２未満
×：メチルメルカプタン濃度が１／２以上【００３３】
（３）製剤の味（苦味、金属味のなさ）の評価方法
被験者５人によって使用感（味）の評価を行った。歯ブラシ（クリニカアドバンテージハブラシ、４列コンパクトふつうタイプ、ライオン（株）製）に試験製剤１ｇをのせ、３分間歯みがきを行った。歯みがき中の味について下記の評点基準で判定した。５人の平均点を求め、下記の評価基準によって製剤の味（苦味、金属味のなさ）を評価した。
評点基準
５：非常によい
４：よい
３：どちらともいえない
２：よくない
１：非常によくない
評価基準
◎：５人の平均点が４点以上
○：５人の平均点が３．５点以上４点未満
△：５人の平均点が３点以上３．５点未満
×：５人の平均点が３点未満【００３４】
【表１】
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＊：不溶粉末（固形物）中の銅量。【００３５】
【表２】
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【００３６】
【表３】
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【国際調査報告】
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