(57)【要約】【課題】  ダニアレルギー治療に有用であると期待される核酸を提供する。【解決手段】  シグナルペプチドをコードする塩基配列、ＬＡＭＰの細胞小器官内安定化ドメインをコードする塩基配列、Ｄｅｒ  ｐ  １、Ｄｅｒ  ｐ  ２、Ｄｅｒ  ｐ  ２３及びＤｅｒ  ｐ  ７を含むアレルゲンドメインをコードする塩基配列、膜貫通ドメインをコードする塩基配列、並びに、ＬＡＭＰのエンドソーム／リソソーム標的ドメインをコードする塩基配列を順番に含む核酸であって、キメラタンパク質をコードする塩基配列を含む核酸を提供する。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
キメラタンパク質をコードする塩基配列を含む核酸であって、該塩基配列は、以下の塩基配列を順番に含む塩基配列である、核酸：
シグナルペプチドをコードする塩基配列、
ＬＡＭＰの細胞小器官内安定化ドメインをコードする塩基配列、
Ｄｅｒ  ｐ  １、Ｄｅｒ  ｐ  ２、Ｄｅｒ  ｐ  ２３及びＤｅｒ  ｐ  ７を含むアレルゲンドメインをコードする塩基配列、
膜貫通ドメインをコードする塩基配列、並びに、
ＬＡＭＰのエンドソーム／リソソーム標的ドメインをコードする塩基配列。
【請求項２】
キメラタンパク質をコードする塩基配列を含む核酸であって、該塩基配列は、以下の塩基配列を順番に含む塩基配列である、核酸：
シグナルペプチドをコードする塩基配列、
ＬＡＭＰの細胞小器官内安定化ドメインをコードする塩基配列、
Ｄｅｒ  ｐ  １、Ｄｅｒ  ｐ  ２、Ｄｅｒ  ｐ  ２３及びＤｅｒ  ｐ  ７を順番に含むアレルゲンドメインをコードする塩基配列、
膜貫通ドメインをコードする塩基配列、並びに、
ＬＡＭＰのエンドソーム／リソソーム標的ドメインをコードする塩基配列。
【請求項３】
シグナルペプチドがＬＡＭＰのシグナルペプチドである、請求項１又は２に記載の核酸。
【請求項４】
膜貫通ドメインがＬＡＭＰの膜貫通ドメインである、請求項１〜３のいずれかに記載の核酸。
【請求項５】
シグナルペプチドが配列番号２のアミノ酸番号１から２７までのアミノ酸配列からなり、細胞小器官内安定化ドメインが配列番号２のアミノ酸番号２８から３８０までのアミノ酸配列からなり、アレルゲンドメインが、配列番号２のアミノ酸番号３８３から５９４までのアミノ酸配列からなるＤｅｒ  ｐ  １、配列番号２のアミノ酸番号５９９から７２７までのアミノ酸配列からなるＤｅｒ  ｐ  ２、配列番号２のアミノ酸番号７３２から８００までのアミノ酸配列からなるＤｅｒ  ｐ  ２３及び配列番号２のアミノ酸番号８０５から１００２までのアミノ酸配列からなるＤｅｒ  ｐ  ７を含むアレルゲンドメインであり、膜貫通ドメインが配列番号２のアミノ酸番号１００６から１０２８までのアミノ酸配列からなり、エンドソーム／リソソーム標的ドメインが配列番号２のアミノ酸番号１０３７から１０４０までのアミノ酸配列からなる、請求項１〜４のいずれかに記載の核酸。
【請求項６】
配列番号２に示されるアミノ酸配列との同一性が９０％以上であるアミノ酸配列からなるキメラタンパク質をコードする塩基配列を含む核酸であって、
該核酸は、Ｄｅｒ  ｐ  １、Ｄｅｒ  ｐ  ２、Ｄｅｒ  ｐ  ２３及びＤｅｒ  ｐ  ７からなる群から選ばれるアレルゲンに対するＴｈ１型免疫を誘導する作用を有する、核酸。
【請求項７】
ａ）配列番号２に示されるアミノ酸配列からなるキメラタンパク質をコードする塩基配列を含む核酸、又は、
ｂ）配列番号２に示されるアミノ酸配列において１〜１０個のアミノ酸が欠失、置換、挿入、及び／若しくは付加されたアミノ酸配列からなるキメラタンパク質をコードする塩基配列を含む核酸であって、該核酸は、Ｄｅｒ  ｐ  １、Ｄｅｒ  ｐ  ２、Ｄｅｒ  ｐ  ２３及びＤｅｒ  ｐ  ７からなる群から選ばれるアレルゲンに対するＴｈ１型免疫を誘導する作用を有する、核酸。
【請求項８】
配列番号２に示されるアミノ酸配列からなるキメラタンパク質をコードする塩基配列を含む核酸。
【請求項９】
請求項１〜８のいずれかに記載の核酸を含む発現ベクター。
【請求項１０】
請求項８に記載の核酸を含む発現ベクター。
【請求項１１】
請求項１〜８のいずれかに記載の核酸で形質転換された宿主細胞。
【請求項１２】
請求項１〜８のいずれかに記載の核酸で形質転換された宿主細胞を培養する工程を含む、核酸を生産する方法。
【請求項１３】
請求項１０に記載の発現ベクター及び薬学的に許容される賦形剤を含む、医薬組成物。
【請求項１４】
ダニアレルギーの予防又は治療用医薬組成物である、請求項１３に記載の医薬組成物。
【請求項１５】
請求項１０に記載の発現ベクターの予防有効量又は治療有効量を投与する工程を包含する、ダニアレルギーを予防又は治療する方法。
【請求項１６】
ダニアレルギーの予防又は治療に使用するための、請求項１０に記載の発現ベクター。
【請求項１７】
ダニアレルギーの予防又は治療用医薬組成物の製造における、請求項１０に記載の発現ベクターの使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、医薬組成物の有効成分として有用であると期待される核酸であり、例えばダニアレルギー治療に有用であると期待される核酸に関する。
【背景技術】
【０００２】
ダニアレルギーは、ダニ由来のアレルゲンに反応して起こるアレルギー疾患である。アレルギー疾患は、１）体内に取り込まれたアレルゲンが抗原提示細胞に貪食されてナイーブＴ細胞に抗原提示され、２）ナイーブＴ細胞がＴｈ２細胞へと分化し、３）Ｔｈ２細胞等の免疫細胞からＩＬ−４等のサイトカインが産生され、４）ＩＬ−４によってＢ細胞がＩｇＥを産生し、５）アレルゲンに結合したＩｇＥがマスト細胞に結合することによって引き起こされる。アレルギー疾患患者においては、ＩＦＮ−γ等を産生するＴｈ１細胞が関与するＴｈ１型免疫とＩＬ−４等を産生するＴｈ２細胞が関与するＴｈ２型免疫の拮抗が、Ｔｈ２型優位になり、Ｔｈ２型の炎症免疫反応が起こっていることが知られている（Ｍｉｄｄｌｅｔｏｎ’ｓ  Ａｌｌｅｒｇｙ  Ｓｅｖｅｎｔｈ  ｅｄｉｔｉｏｎ  Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ  ＆  Ｐｒａｃｔｉｃｅ、２００９）。このように、ＩＦＮ−γはＴｈ１型免疫の指標に、ＩＬ−４はＴｈ２型免疫の指標に、使用され得る。また、マウスにおいては、ＩＦＮ−γが活性化されたＢ細胞におけるＩｇＧ２ａアイソタイプへの優先したクラススイッチを起こさせている一方で、他のすべてのアイソタイプへの応答を抑制する。すなわちＩｇＧ２ａもＴｈ１型免疫の指標に使用され得る。例えば、ＩＬ−４欠損マウスではＩｇＧ２ａの産生が促進され、ＩＦＮ−γ欠損マウスではＩｇＧ２ａ産生が抑制されることが知られている（Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ  Ｒｅｓ．、２００２、Ｖｏｌ．４、ｐ．５４−５８）。また、アレルゲン免疫療法の作用メカニズムに、Ｂ細胞から産生される抗体が関与しているという報告も存在する。例えば、ヒトにおいては、ＩｇＧはアレルゲンに結合するＩｇＥに拮抗して、アレルゲン−ＩｇＥ複合体形成を阻害し、マスト細胞からのヒスタミン遊離を阻害することが知られている（Ｊ  Ａｌｌｅｒｇｙ  Ｃｌｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．、２０１７、Ｖｏｌ．１４０、ｐ．１４８５−１４９８）。【０００３】
現在に至るまで、ダニアレルギーに対する複数の免疫療法の開発が進められてきた（Ｊ  Ａｌｌｅｒｇｙ  Ｃｌｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．、２０１３、Ｖｏｌ．１３２、ｐ．１３２２−１３３６；ＷＯ２０１４／１９５８０３；Ｅｘｐｅｒｔ  Ｒｅｖ  Ｖａｃｃｉｎｅｓ.、２０１４、Ｖｏｌ．１３、ｐ．１４２７−１４３８）。また、ダニアレルギーに関連するアレルゲンとして、Ｄｅｒ  ｐ  １、Ｄｅｒ  ｐ  ２、Ｄｅｒ  ｐ  ７、Ｄｅｒ  ｐ  ２３等（特許文献１、特許文献２、非特許文献１）が知られている。しかしながら、例えば、皮下免疫療法（ｓｕｂｃｕｔａｎｅｏｕｓ  ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒａｐｙ（ＳＣＩＴ））及び舌下免疫療法（ｓｕｂｌｉｎｇｕａｌ  ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒａｐｙ（ＳＬＩＴ））は、アナフィラキシーの可能性や数年に及ぶ長い治療期間等の課題を抱えている。【０００４】
核酸ワクチンの技術の１つとして、リソソーム関連膜タンパク質（ｌｙｓｏｓｏｍｅ−ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ  ｍｅｍｂｒａｎｅ  ｐｒｏｔｅｉｎ；ＬＡＭＰ）を利用した、アレルギー治療のための核酸ワクチンが研究されている。そして、ＬＡＭＰファミリーのメンバーであるＬＡＭＰ−１及びクリプトメリア・ジャポニカ（Ｃｒｙｐｔｏｍｅｒｉａ  ｊａｐｏｎｉｃａ）のアレルゲンであるＣｒｙ  Ｊ１及び／又はＣｒｙ  Ｊ２を含むキメラタンパク質をコードする核酸を含むプラスミドが構築された（特許文献３、非特許文献２）。そして、そのようなプラスミドは、アナフィラキシーの原因となる全身への遊離アレルゲン放出を起こさず、Ｔｈ１型の免疫反応を誘導することが報告されている。また、ＬＡＭＰ−１並びにピーナッツのアレルゲンであるＡｒａ  Ｈ１、Ａｒａ  Ｈ２及びＡｒａ  Ｈ３を含むキメラタンパク質をコードする核酸を含むプラスミドは、マウスモデルでＩｇＥの産生を緩和したことが報告されている（特許文献４）。ダニアレルギーの分野においては、Ｄｅｒ  ｐ  １並びにＬＡＭＰ−１の膜貫通ドメイン及びエンドソーム／リソソーム標的ドメインを含むキメラタンパク質をコードする核酸を含むワクチンが構築されている（特許文献５、非特許文献３）。しかしながら、複数のダニアレルゲン抗原、並びに、ＬＡＭＰ−１の細胞小器官内安定化ドメイン及びエンドソーム／リソソーム標的ドメインを含む、ダニアレルギー治療のための核酸ワクチンは、未だ報告されていない。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００５】
【特許文献１】国際公開番号１９８８／０１０２９７号
【特許文献２】国際公開番号２００７／１２４５２４号
【特許文献３】国際公開番号２０１３／１８７９０６号
【特許文献４】国際公開番号２０１５／２００３５７号
【特許文献５】国際公開番号２００４／０１９９７８号
【非特許文献】
【０００６】
【非特許文献１】「クリニカル・アンド・エクスペリメンタル・アラージー（Ｃｌｉｎｉｃａｌ  ＆  Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ  Ａｌｌｅｒｇｙ）」、（英国）、１９９５；２５：４１６−４２２
【非特許文献２】「ジャーナル・オブ・イムノロジー・リサーチ（Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ）」、（エジプト）、２０１６；Ａｒｔｉｃｌｅ  ＩＤ  ４８５７８６９
【非特許文献３】「ワクチン（Ｖａｃｃｉｎｅ）」、（オランダ）、２００６；２４（２９−３０）：５７６２−５７７１
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
本発明の課題は、ダニアレルギー治療に有用であると期待される核酸を提供することにある。
【課題を解決するための手段】
【０００８】
本発明者らは、ダニアレルギー治療のための核酸の作製において相当の創意検討を重ねた結果、ＬＡＭＰ−Ｄｅｒ  ｐ  １−Ｄｅｒ  ｐ  ２−Ｄｅｒ  ｐ  ２３−Ｄｅｒ  ｐ  ７プラスミドを作製し（実施例１）、該プラスミドからキメラタンパク質が発現することを確認し（実施例２）、該プラスミドを投与したマウスにおいてＴｈ１型免疫反応が誘導されることを見出した（実施例３、実施例４）。これらの結果、ダニアレルギー治療に有用であると期待される核酸を提供し、本発明を完成させた。【０００９】
すなわち、本発明は、以下の［１］〜［１７］に関する。
［１］
キメラタンパク質をコードする塩基配列を含む核酸であって、該塩基配列は、以下の塩基配列を順番に含む塩基配列である、核酸：
シグナルペプチドをコードする塩基配列、
ＬＡＭＰの細胞小器官内安定化ドメインをコードする塩基配列、
Ｄｅｒ  ｐ  １、Ｄｅｒ  ｐ  ２、Ｄｅｒ  ｐ  ２３及びＤｅｒ  ｐ  ７を含むアレルゲンドメインをコードする塩基配列、
膜貫通ドメインをコードする塩基配列、並びに、
ＬＡＭＰのエンドソーム／リソソーム標的ドメインをコードする塩基配列。
［２］
キメラタンパク質をコードする塩基配列を含む核酸であって、該塩基配列は、以下の塩基配列を順番に含む塩基配列である、核酸：
シグナルペプチドをコードする塩基配列、
ＬＡＭＰの細胞小器官内安定化ドメインをコードする塩基配列、
Ｄｅｒ  ｐ  １、Ｄｅｒ  ｐ  ２、Ｄｅｒ  ｐ  ２３及びＤｅｒ  ｐ  ７を順番に含むアレルゲンドメインをコードする塩基配列、
膜貫通ドメインをコードする塩基配列、並びに、
ＬＡＭＰのエンドソーム／リソソーム標的ドメインをコードする塩基配列。
［３］
シグナルペプチドがＬＡＭＰのシグナルペプチドである、［１］又は［２］に記載の核酸。
［４］
膜貫通ドメインがＬＡＭＰの膜貫通ドメインである、［１］〜［３］のいずれかに記載の核酸。
［５］
シグナルペプチドが配列番号２のアミノ酸番号１から２７までのアミノ酸配列からなり、細胞小器官内安定化ドメインが配列番号２のアミノ酸番号２８から３８０までのアミノ酸配列からなり、アレルゲンドメインが、配列番号２のアミノ酸番号３８３から５９４までのアミノ酸配列からなるＤｅｒ  ｐ  １、配列番号２のアミノ酸番号５９９から７２７までのアミノ酸配列からなるＤｅｒ  ｐ  ２、配列番号２のアミノ酸番号７３２から８００までのアミノ酸配列からなるＤｅｒ  ｐ  ２３及び配列番号２のアミノ酸番号８０５から１００２までのアミノ酸配列からなるＤｅｒ  ｐ  ７を含むアレルゲンドメインであり、膜貫通ドメインが配列番号２のアミノ酸番号１００６から１０２８までのアミノ酸配列からなり、エンドソーム／リソソーム標的ドメインが配列番号２のアミノ酸番号１０３７から１０４０までのアミノ酸配列からなる、［１］〜［４］のいずれかに記載の核酸。
［６］
配列番号２に示されるアミノ酸配列との同一性が９０％以上であるアミノ酸配列からなるキメラタンパク質をコードする塩基配列を含む核酸であって、
該核酸は、Ｄｅｒ  ｐ  １、Ｄｅｒ  ｐ  ２、Ｄｅｒ  ｐ  ２３及びＤｅｒ  ｐ  ７からなる群から選ばれるアレルゲンに対するＴｈ１型免疫を誘導する作用を有する、核酸。
［７］
ａ）配列番号２に示されるアミノ酸配列からなるキメラタンパク質をコードする塩基配列を含む核酸、又は、
ｂ）配列番号２に示されるアミノ酸配列において１〜１０個のアミノ酸が欠失、置換、挿入、及び／若しくは付加されたアミノ酸配列からなるキメラタンパク質をコードする塩基配列を含む核酸であって、該核酸は、Ｄｅｒ  ｐ  １、Ｄｅｒ  ｐ  ２、Ｄｅｒ  ｐ  ２３及びＤｅｒ  ｐ  ７からなる群から選ばれるアレルゲンに対するＴｈ１型免疫を誘導する作用を有する、核酸。
［８］
配列番号２に示されるアミノ酸配列からなるキメラタンパク質をコードする塩基配列を含む核酸。
［９］
［１］〜［８］のいずれかに記載の核酸を含む発現ベクター。
［１０］
［８］に記載の核酸を含む発現ベクター。
［１１］
［１］〜［８］のいずれかに記載の核酸で形質転換された宿主細胞。
［１２］
［１］〜［８］のいずれかに記載の核酸で形質転換された宿主細胞を培養する工程を含む、核酸を生産する方法。
［１３］
［１０］に記載の発現ベクター及び薬学的に許容される賦形剤を含む、医薬組成物。
［１４］
ダニアレルギーの予防又は治療用医薬組成物である、［１３］に記載の医薬組成物。
［１５］
［１０］に記載の発現ベクターの予防有効量又は治療有効量を投与する工程を包含する、ダニアレルギーを予防又は治療する方法。
［１６］
ダニアレルギーの予防又は治療に使用するための、［１０］に記載の発現ベクター。
［１７］
ダニアレルギーの予防又は治療用医薬組成物の製造における、［１０］に記載の発現ベクターの使用。
【発明の効果】
【００１０】
本発明の核酸は、ダニアレルギーの予防又は治療に使用できる。
【図面の簡単な説明】
【００１１】
【図１】図１は、本発明の核酸をマウスに投与した際に誘導されるＤｅｒ  ｐ  １、Ｄｅｒ  ｐ  ２、Ｄｅｒ  ｐ  ２３及びＤｅｒ  ｐ  ７特異的ＩｇＧ２ａ産生を示した図である。縦軸は４５０ｎｍの吸光度、横軸は各投与群を示す。水平線は算術平均値を示す。
【図２】図２は、本発明の核酸を投与したマウスの脾細胞をＤｅｒ  ｐ  １タンパク質、Ｄｅｒ  ｐ  ２タンパク質、Ｄｅｒ  ｐ  ７タンパク質又はＤｅｒ  ｐ  ２３タンパク質で刺激した際のＩＦＮ−γ産生を示した図である。縦軸は培養上清中ＩＦＮ−γ濃度（ｐｇ／ｍＬ）、横軸は各投与群を示す。水平線は算術平均値を示す。点線は定量下限値（ＬＬＯＤ）を示す。
【図３】図３は、本発明の核酸を投与したマウスの脾細胞をＤｅｒ  ｐ  １タンパク質、Ｄｅｒ  ｐ  ２タンパク質、Ｄｅｒ  ｐ  ７タンパク質又はＤｅｒ  ｐ  ２３タンパク質で刺激した際のＩＬ−４産生を示した図である。縦軸は培養上清中ＩＬ−４濃度（ｐｇ／ｍＬ）、横軸は各投与群を示す。水平線は算術平均値を示す。点線は定量下限値（ＬＬＯＤ）を示す。
【発明を実施するための形態】
【００１２】
以下に、本発明について詳述する。
【００１３】
＜本発明の核酸＞
本発明の核酸には、以下の特徴を有する核酸が含まれる：
キメラタンパク質をコードする塩基配列を含む核酸であって、該塩基配列は、以下の塩基配列を順番に含む塩基配列である、核酸：
シグナルペプチドをコードする塩基配列、
ＬＡＭＰの細胞小器官内安定化ドメインをコードする塩基配列、
Ｄｅｒ  ｐ  １、Ｄｅｒ  ｐ  ２、Ｄｅｒ  ｐ  ２３及びＤｅｒ  ｐ  ７を含むアレルゲンドメインをコードする塩基配列、
膜貫通ドメインをコードする塩基配列、並びに、
ＬＡＭＰのエンドソーム／リソソーム標的ドメインをコードする塩基配列。
【００１４】
本発明において、核酸とは、ヌクレオチドが重合してできた任意の長さの塩基配列からなる高分子である。ヌクレオチドは、デオキシリボヌクレオチド、リボヌクレオチド、及び／又はそれらの類縁体を包含し得る。本発明の核酸は、例えば、ＤＮＡ、ＲＮＡ又はそれらの改変された核酸である。１つの実施形態において、本発明の核酸は、ＤＮＡである。
【００１５】
１つの実施形態において、本発明の核酸は、発現ベクターに組み込まれた核酸である。また、１つの実施形態において、本発明の核酸は、プラスミドベクターに組み込まれた核酸である。
【００１６】
本明細書において、「キメラタンパク質」とは、遺伝子組み換え技術を用いて２個以上の遺伝子を融合させた塩基配列によりコードされるタンパク質を意味する。本発明の核酸は、シグナルペプチド、ＬＡＭＰの細胞小器官内安定化ドメイン、Ｄｅｒ  ｐ  １、Ｄｅｒ  ｐ  ２、Ｄｅｒ  ｐ  ２３及びＤｅｒ  ｐ  ７を含むアレルゲンドメイン、膜貫通ドメイン並びにＬＡＭＰのエンドソーム／リソソーム標的ドメインをこの順番に含むキメラタンパク質（以下、「本発明に関するキメラタンパク質」という）をコードする塩基配列を含む。
【００１７】
ＬＡＭＰは当業者に周知のタンパク質である（Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ．、１９９１、Ｖｏｌ．２６６、ｐ．２１３２７−２１３３０）。本明細書においてＬＡＭＰとは、特に限定されないが、ＬＡＭＰ−１、ＬＡＭＰ−２、ＣＤ６３／ＬＡＭＰ−３、ＤＣ−ＬＡＭＰ及びＬＩＭＰ  ＩＩ、並びに、それらのホモログ、オルソログ、パラログ、変異体及び改変体を含む。本発明の１つの実施形態において、ＬＡＭＰはＬＡＭＰ−１である。本発明おけるＬＡＭＰの由来動物は特に限定されないが、１つの実施形態において、ＬＡＭＰはヒトＬＡＭＰである。１つの実施形態において、ヒトＬＡＭＰはヒトＬＡＭＰ−１である。ヒトＬＡＭＰ−１のアミノ酸配列としては、例えば、配列番号２のアミノ酸番号１から３８０に示されるアミノ酸配列のＣ末端に、配列番号２のアミノ酸番号１００５から１０４０に示されるアミノ酸配列が結合したアミノ酸配列が挙げられる。
【００１８】
シグナルペプチドの一般的な構造は当業者に周知である（Ａｎｎｕ  Ｒｅｖ  Ｂｉｏｃｈｅｍ．、２００３、Ｖｏｌ．７２、ｐ．３９５−４４７）。シグナルペプチドはタンパク質の輸送及び局在化を指示する機能を有する。本発明において使用されるシグナルペプチドとしては、タンパク質の輸送及び局在化を指示する機能を有する限り、任意の適切なシグナルペプチドを選択することが可能である。１つの実施形態において、本発明において使用されるシグナルペプチドはＬＡＭＰのシグナルペプチドである。１つの実施形態において、本発明において使用されるＬＡＭＰのシグナルペプチドは、ＬＡＭＰ−１のシグナルペプチドである。
【００１９】
１つの実施形態において、本発明において使用されるシグナルペプチドは、以下の（ａ）又は（ｂ）のアミノ酸配列からなる。
（ａ）配列番号２のアミノ酸番号１から２７までのアミノ酸配列との同一性が９０％以上であるアミノ酸配列；又は、
（ｂ）配列番号２のアミノ酸番号１から２７までのアミノ酸配列、又は、配列番号２のアミノ酸番号１から２７までのアミノ酸配列において１〜３個のアミノ酸が欠失、置換、挿入、及び／若しくは付加されたアミノ酸配列。
【００２０】
本明細書における「同一性」とは、ＥＭＢＯＳＳ  Ｎｅｅｄｌｅ（Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．、２０１５、Ｖｏｌ．４３、ｐ．Ｗ５８０−Ｗ５８４；https://www.ebi.ac.uk/Tools/psa/emboss_needle/）を用いて、デフォルトで用意されているパラメータによって得られたＩｄｅｎｔｉｔｙの値を意味する。前記のパラメータは以下のとおりである。
Ｇａｐ  Ｏｐｅｎ  Ｐｅｎａｌｔｙ  ＝  １０
Ｇａｐ  Ｅｘｔｅｎｄ  Ｐｅｎａｌｔｙ  ＝  ０．５
Ｍａｔｒｉｘ  ＝  ＥＢＬＯＳＵＭ６２
Ｅｎｄ  Ｇａｐ  Ｐｅｎａｌｔｙ  ＝  ｆａｌｓｅ
【００２１】
１つの実施形態において、本発明において使用されるシグナルペプチドは、配列番号２のアミノ酸番号１から２７までのアミノ酸配列からなる。
【００２２】
ＬＡＭＰの細胞小器官内安定化ドメインの配列は当業者に周知である（国際公開番号２０１３／１８７９０６号）。ＬＡＭＰの細胞小器官内安定化ドメインは、アレルゲンドメインを、タンパク質分解酵素、低ｐＨ、並びに、その他のタンパク質を不安定化させる物質及び条件から保護する機能を有する。本発明において使用されるＬＡＭＰの細胞小器官内安定化ドメインとしては、アレルゲンドメインを、タンパク質分解酵素、低ｐＨ、並びに、その他のタンパク質を不安定化させる物質及び条件から保護する機能を有する限り、任意の適切なＬＡＭＰの細胞小器官内安定化ドメインを選択することが可能である。１つの実施形態において、本発明において使用されるＬＡＭＰの細胞小器官内安定化ドメインは、ＬＡＭＰ−１の細胞小器官内安定化ドメインである。
【００２３】
１つの実施形態において、本発明において使用されるＬＡＭＰの細胞小器官内安定化ドメインは、以下の（ａ）又は（ｂ）のアミノ酸配列からなる：
（ａ）配列番号２のアミノ酸番号２８から３８０までのアミノ酸配列との同一性が９０％以上であるアミノ酸配列；又は、
（ｂ）配列番号２のアミノ酸番号２８から３８０までのアミノ酸配列、又は、配列番号２のアミノ酸番号２８から３８０までのアミノ酸配列において１〜１０個のアミノ酸が欠失、置換、挿入、及び／若しくは付加されたアミノ酸配列。
【００２４】
１つの実施形態において、本発明において使用されるＬＡＭＰの細胞小器官内安定化ドメインは、配列番号２のアミノ酸番号２８から３８０までのアミノ酸配列からなる。
【００２５】
本発明において使用されるアレルゲンドメインは、アレルゲンとしてＤｅｒ  ｐ  １、Ｄｅｒ  ｐ  ２、Ｄｅｒ  ｐ  ２３及びＤｅｒ  ｐ  ７を含む。Ｄｅｒ  ｐ  １、Ｄｅｒ  ｐ  ２、Ｄｅｒ  ｐ  ２３及びＤｅｒ  ｐ  ７は、ダニに観察され得るアレルゲンである（国際公開番号１９８８／０１０２９７号；国際公開番号２００７／１２４５２４号；Ｃｌｉｎ  Ｅｘｐ  Ａｌｌｅｒｇｙ．、１９９５、Ｖｏｌ．２５、ｐ．４１６−４２２）。本発明において使用されるＤｅｒ  ｐ  １、Ｄｅｒ  ｐ  ２、Ｄｅｒ  ｐ  ２３及びＤｅｒ  ｐ  ７は、抗原性を有する限り、それらの変異体であってもよい。任意のタンパク質が抗原性を有することは、例えば動物に投与することでそのタンパク質に対する抗体産生やＴ細胞応答が惹起されることを観察することで確認することができる（Ｂｉｏａｎａｌｙｓｉｓ．、２０１２、Ｖｏｌ．４、ｐ．３９７−４０６）。１つの実施形態において、本発明において使用されるＤｅｒ  ｐ  １、Ｄｅｒ  ｐ  ２、Ｄｅｒ  ｐ  ２３及びＤｅｒ  ｐ  ７は、シグナルペプチドが欠失している。
【００２６】
１つの実施形態において、Ｄｅｒ  ｐ  １は、以下の（ａ）又は（ｂ）のアミノ酸配列からなる：
（ａ）配列番号２のアミノ酸番号３８３から５９４までのアミノ酸配列との同一性が９０％以上であるアミノ酸配列；又は、
（ｂ）配列番号２のアミノ酸番号３８３から５９４までのアミノ酸配列、又は、配列番号２のアミノ酸番号３８３から５９４までのアミノ酸配列において１〜１０個のアミノ酸が欠失、置換、挿入、及び／若しくは付加されたアミノ酸配列。
【００２７】
１つの実施形態において、Ｄｅｒ  ｐ  １は、配列番号２のアミノ酸番号３８３から５９４までのアミノ酸配列からなる。
【００２８】
１つの実施形態において、Ｄｅｒ  ｐ  ２は、以下の（ａ）又は（ｂ）のアミノ酸配列からなる：
（ａ）配列番号２のアミノ酸番号５９９から７２７までのアミノ酸配列との同一性が９０％以上であるアミノ酸配列；又は、
（ｂ）配列番号２のアミノ酸番号５９９から７２７までのアミノ酸配列、又は、配列番号２のアミノ酸番号５９９から７２７までのアミノ酸配列において１〜１０個のアミノ酸が欠失、置換、挿入、及び／若しくは付加されたアミノ酸配列。
【００２９】
１つの実施形態において、Ｄｅｒ  ｐ  ２は、配列番号２のアミノ酸番号５９９から７２７までのアミノ酸配列からなる。
【００３０】
１つの実施形態において、Ｄｅｒ  ｐ  ２３は、以下の（ａ）又は（ｂ）のアミノ酸配列からなる：
（ａ）配列番号２のアミノ酸番号７３２から８００までのアミノ酸配列との同一性が９０％以上であるアミノ酸配列；又は、
（ｂ）配列番号２のアミノ酸番号７３２から８００までのアミノ酸配列、又は、配列番号２のアミノ酸番号７３２から８００までのアミノ酸配列において１〜１０個のアミノ酸が欠失、置換、挿入、及び／若しくは付加されたアミノ酸配列。
【００３１】
１つの実施形態において、Ｄｅｒ  ｐ  ２３は、配列番号２のアミノ酸番号７３２から８００までのアミノ酸配列からなる。
【００３２】
１つの実施形態において、Ｄｅｒ  ｐ  ７は、以下の（ａ）又は（ｂ）のアミノ酸配列からなる：
（ａ）配列番号２のアミノ酸番号８０５から１００２までのアミノ酸配列との同一性が９０％以上であるアミノ酸配列；又は、
（ｂ）配列番号２のアミノ酸番号８０５から１００２までのアミノ酸配列、又は、配列番号２のアミノ酸番号８０５から１００２までのアミノ酸配列において１〜１０個のアミノ酸が欠失、置換、挿入、及び／若しくは付加されたアミノ酸配列。
【００３３】
１つの実施形態において、Ｄｅｒ  ｐ  ７は、配列番号２のアミノ酸番号８０５から１００２までのアミノ酸配列からなる。
【００３４】
１つの実施形態において、本発明において使用されるアレルゲンドメインは、Ｄｅｒ  ｐ  １、Ｄｅｒ  ｐ  ２、Ｄｅｒ  ｐ  ２３及びＤｅｒ  ｐ  ７を任意の順番で含む。また、１つの実施形態において、本発明において使用されるアレルゲンドメインは、Ｄｅｒ  ｐ  １、Ｄｅｒ  ｐ  ２、Ｄｅｒ  ｐ  ２３及びＤｅｒ  ｐ  ７をこの順番で含む。
【００３５】
１つの実施形態において、本発明において使用されるアレルゲンドメインは、配列番号２のアミノ酸番号３８３から１００２までのアミノ酸配列からなる。
【００３６】
膜貫通ドメインの一般的な構造は当業者に周知である（Ａｎｎｕ  Ｒｅｖ  Ｂｉｏｃｈｅｍ．、２００７、Ｖｏｌ．７６、ｐ．１２５−１４０）。膜貫通ドメインはタンパク質を生体膜に係留する機能を有する。本発明において使用される膜貫通ドメインとしては、タンパク質を生体膜に係留する機能を有する限り、任意の適切な膜貫通ドメインを選択することが可能である。１つの実施形態において、本発明において使用される膜貫通ドメインはＬＡＭＰの膜貫通ドメインである。１つの実施形態において、本発明において使用されるＬＡＭＰの膜貫通ドメインは、ＬＡＭＰ−１の膜貫通ドメインである。
【００３７】
１つの実施形態において、本発明において使用される膜貫通ドメインは、以下の（ａ）又は（ｂ）のアミノ酸配列からなる：
（ａ）配列番号２のアミノ酸番号１００６から１０２８までのアミノ酸配列との同一性が９０％以上であるアミノ酸配列；又は、
（ｂ）配列番号２のアミノ酸番号１００６から１０２８までのアミノ酸配列、又は、配列番号２のアミノ酸番号１００６から１０２８までのアミノ酸配列において１〜２個のアミノ酸が欠失、置換、挿入、及び／若しくは付加されたアミノ酸配列。
【００３８】
１つの実施形態において、本発明において使用される膜貫通ドメインは、配列番号２のアミノ酸番号１００６から１０２８までのアミノ酸配列からなる。
【００３９】
ＬＡＭＰのエンドソーム／リソソーム標的ドメインの構造は当業者に周知である（国際公開番号１９９４／０１７１９２号）。ＬＡＭＰのエンドソーム／リソソーム標的ドメインは、タンパク質をリソソームに輸送する機能を有する。本発明において使用されるＬＡＭＰのエンドソーム／リソソーム標的ドメインとしては、タンパク質をリソソームに輸送する機能を有する限り、任意の適切なＬＡＭＰのエンドソーム／リソソーム標的ドメインを選択することが可能である。１つの実施形態において、本発明において使用されるＬＡＭＰのエンドソーム／リソソーム標的ドメインは、ＬＡＭＰ−１のエンドソーム／リソソーム標的ドメインである。
【００４０】
１つの実施形態において、本発明において使用されるＬＡＭＰのエンドソーム／リソソーム標的ドメインは、配列番号２のアミノ酸番号１０３７から１０４０までのアミノ酸配列、又は、配列番号２のアミノ酸番号１０３７から１０４０までのアミノ酸配列において１個のアミノ酸が欠失、置換、挿入、及び／若しくは付加されたアミノ酸配列からなる。
【００４１】
１つの実施形態において、本発明において使用されるＬＡＭＰのエンドソーム／リソソーム標的ドメインは、配列番号２のアミノ酸番号１０３７から１０４０までのアミノ酸配列からなる。
【００４２】
本発明に関するキメラタンパク質において、シグナルペプチド、ＬＡＭＰの細胞小器官内安定化ドメイン、アレルゲンドメインに含まれる各アレルゲン、膜貫通ドメイン及びＬＡＭＰのエンドソーム／リソソーム標的ドメインは、直接つながっていてもよく、又は、リンカーペプチドを介して間接的につながっていてもよい。使用されるリンカーペプチドは、当業者に適宜に選択され得る。１つの実施形態において、当該リンカーペプチドは１０個以下のアミノ酸からなる。１つの実施形態において、ＬＡＭＰの細胞小器官内安定化ドメインとアレルゲンドメインの間、各アレルゲンの間、及び、アレルゲンドメインと膜貫通ドメインの間に使用されるリンカーペプチドは、ＬｅｕＧｌｕ、ＧｌｙＧｌｙＧｌｙＧｌｙ、及び、ＧｌｕＰｈｅＴｈｒからなる群から選ばれるリンカーペプチドである。１つの実施形態において、膜貫通ドメインとＬＡＭＰのエンドソーム／リソソーム標的ドメインの間に使用されるリンカーペプチドは、配列番号２のアミノ酸番号１０２９から１０３６までのアミノ酸配列からなるリンカーペプチドである。
【００４３】
１つの実施形態において、本発明の核酸は、以下の核酸である：
キメラタンパク質をコードする塩基配列を含む核酸であって、該塩基配列は、以下の塩基配列を順番に含む塩基配列である、核酸：
ＬＡＭＰのシグナルペプチドをコードする塩基配列、
ＬＡＭＰの細胞小器官内安定化ドメインをコードする塩基配列、
Ｄｅｒ  ｐ  １、Ｄｅｒ  ｐ  ２、Ｄｅｒ  ｐ  ２３及びＤｅｒ  ｐ  ７を含むアレルゲンドメインをコードする塩基配列、
ＬＡＭＰの膜貫通ドメインをコードする塩基配列、並びに、
ＬＡＭＰのエンドソーム／リソソーム標的ドメインをコードする塩基配列。
【００４４】
１つの実施形態において、本発明の核酸は、以下の核酸である：
キメラタンパク質をコードする塩基配列を含む核酸であって、該塩基配列は、以下の塩基配列を順番に含む塩基配列である、核酸：
ＬＡＭＰ−１のシグナルペプチドをコードする塩基配列、
ＬＡＭＰ−１の細胞小器官内安定化ドメインをコードする塩基配列、
Ｄｅｒ  ｐ  １、Ｄｅｒ  ｐ  ２、Ｄｅｒ  ｐ  ２３及びＤｅｒ  ｐ  ７を含むアレルゲンドメインをコードする塩基配列、
ＬＡＭＰ−１の膜貫通ドメインをコードする塩基配列、並びに、
ＬＡＭＰ−１のエンドソーム／リソソーム標的ドメインをコードする塩基配列。
【００４５】
１つの実施形態において、本発明の核酸は、以下の核酸である：
キメラタンパク質をコードする塩基配列を含む核酸であって、該塩基配列は、以下の塩基配列を順番に含む塩基配列である、核酸：
配列番号２のアミノ酸番号１から２７までのアミノ酸配列からなるシグナルペプチドをコードする塩基配列、
配列番号２のアミノ酸番号２８から３８０までのアミノ酸配列からなるＬＡＭＰの細胞小器官内安定化ドメインをコードする塩基配列、
配列番号２のアミノ酸番号３８３から５９４までのアミノ酸配列からなるＤｅｒ  ｐ  １、配列番号２のアミノ酸番号５９９から７２７までのアミノ酸配列からなるＤｅｒ  ｐ  ２、配列番号２のアミノ酸番号７３２から８００までのアミノ酸配列からなるＤｅｒ  ｐ  ２３及び配列番号２のアミノ酸番号８０５から１００２までのアミノ酸配列からなるＤｅｒ  ｐ  ７を含むアレルゲンドメインをコードする塩基配列、
配列番号２のアミノ酸番号１００６から１０２８までのアミノ酸配列からなる膜貫通ドメインをコードする塩基配列、並びに、
配列番号２のアミノ酸番号１０３７から１０４０までのアミノ酸配列からなるＬＡＭＰのエンドソーム／リソソーム標的ドメインをコードする塩基配列。
【００４６】
１つの実施形態において、本発明の核酸は、以下の核酸である：
キメラタンパク質をコードする塩基配列を含む核酸であって、該塩基配列は、以下の塩基配列を順番に含む塩基配列である、核酸：
配列番号２のアミノ酸番号１から２７までのアミノ酸配列からなるシグナルペプチドをコードする塩基配列、
配列番号２のアミノ酸番号２８から３８０までのアミノ酸配列からなるＬＡＭＰの細胞小器官内安定化ドメインをコードする塩基配列、
配列番号２のアミノ酸番号３８３から５９４までのアミノ酸配列からなるＤｅｒ  ｐ  １、配列番号２のアミノ酸番号５９９から７２７までのアミノ酸配列からなるＤｅｒ  ｐ  ２、配列番号２のアミノ酸番号７３２から８００までのアミノ酸配列からなるＤｅｒ  ｐ  ２３及び配列番号２のアミノ酸番号８０５から１００２までのアミノ酸配列からなるＤｅｒ  ｐ  ７を含むアレルゲンドメインをコードする塩基配列、
配列番号２のアミノ酸番号１００６から１０２８までのアミノ酸配列からなる膜貫通ドメインをコードする塩基配列、
配列番号２のアミノ酸番号１０２９から１０３６までのアミノ酸配列からなるペプチドリンカーをコードする塩基配列、並びに、
配列番号２のアミノ酸番号１０３７から１０４０までのアミノ酸配列からなるＬＡＭＰのエンドソーム／リソソーム標的ドメインをコードする塩基配列。
【００４７】
１つの実施形態において、本発明の核酸は、以下の核酸である：
キメラタンパク質をコードする塩基配列を含む核酸であって、該塩基配列は、以下の塩基配列を順番に含む塩基配列である、核酸：
シグナルペプチドをコードする塩基配列、
ＬＡＭＰの細胞小器官内安定化ドメインをコードする塩基配列、
Ｄｅｒ  ｐ  １、Ｄｅｒ  ｐ  ２、Ｄｅｒ  ｐ  ２３及びＤｅｒ  ｐ  ７を順番に含むアレルゲンドメインをコードする塩基配列、
膜貫通ドメインをコードする塩基配列、並びに、
ＬＡＭＰのエンドソーム／リソソーム標的ドメインをコードする塩基配列。
【００４８】
１つの実施形態において、本発明の核酸は、以下の核酸である：
キメラタンパク質をコードする塩基配列を含む核酸であって、該塩基配列は、以下の塩基配列を順番に含む塩基配列である、核酸：
ＬＡＭＰのシグナルペプチドをコードする塩基配列、
ＬＡＭＰの細胞小器官内安定化ドメインをコードする塩基配列、
Ｄｅｒ  ｐ  １、Ｄｅｒ  ｐ  ２、Ｄｅｒ  ｐ  ２３及びＤｅｒ  ｐ  ７を順番に含むアレルゲンドメインをコードする塩基配列、
ＬＡＭＰの膜貫通ドメインをコードする塩基配列、並びに、
ＬＡＭＰのエンドソーム／リソソーム標的ドメインをコードする塩基配列。
【００４９】
１つの実施形態において、本発明の核酸は、以下の核酸である：
キメラタンパク質をコードする塩基配列を含む核酸であって、該塩基配列は、以下の塩基配列を順番に含む塩基配列である、核酸：
ＬＡＭＰ−１のシグナルペプチドをコードする塩基配列、
ＬＡＭＰ−１の細胞小器官内安定化ドメインをコードする塩基配列、
Ｄｅｒ  ｐ  １、Ｄｅｒ  ｐ  ２、Ｄｅｒ  ｐ  ２３及びＤｅｒ  ｐ  ７を順番に含むアレルゲンドメインをコードする塩基配列、
ＬＡＭＰ−１の膜貫通ドメインをコードする塩基配列、並びに、
ＬＡＭＰ−１のエンドソーム／リソソーム標的ドメインをコードする塩基配列。
【００５０】
１つの実施形態において、本発明の核酸は、以下の核酸である：
キメラタンパク質をコードする塩基配列を含む核酸であって、該塩基配列は、以下の塩基配列を順番に含む塩基配列である、核酸：
配列番号２のアミノ酸番号１から２７までのアミノ酸配列からなるシグナルペプチドをコードする塩基配列、
配列番号２のアミノ酸番号２８から３８０までのアミノ酸配列からなるＬＡＭＰの細胞小器官内安定化ドメインをコードする塩基配列、
配列番号２のアミノ酸番号３８３から５９４までのアミノ酸配列からなるＤｅｒ  ｐ  １、配列番号２のアミノ酸番号５９９から７２７までのアミノ酸配列からなるＤｅｒ  ｐ  ２、配列番号２のアミノ酸番号７３２から８００までのアミノ酸配列からなるＤｅｒ  ｐ  ２３及び配列番号２のアミノ酸番号８０５から１００２までのアミノ酸配列からなるＤｅｒ  ｐ  ７を順番に含むアレルゲンドメインをコードする塩基配列、
配列番号２のアミノ酸番号１００６から１０２８までのアミノ酸配列からなる膜貫通ドメインをコードする塩基配列、並びに、
配列番号２のアミノ酸番号１０３７から１０４０までのアミノ酸配列からなるＬＡＭＰのエンドソーム／リソソーム標的ドメインをコードする塩基配列。
【００５１】
１つの実施形態において、本発明の核酸は、以下の核酸である：
キメラタンパク質をコードする塩基配列を含む核酸であって、該塩基配列は、以下の塩基配列を順番に含む塩基配列である、核酸：
配列番号２のアミノ酸番号１から２７までのアミノ酸配列からなるシグナルペプチドをコードする塩基配列、
配列番号２のアミノ酸番号２８から３８０までのアミノ酸配列からなるＬＡＭＰの細胞小器官内安定化ドメインをコードする塩基配列、
配列番号２のアミノ酸番号３８３から５９４までのアミノ酸配列からなるＤｅｒ  ｐ  １、配列番号２のアミノ酸番号５９９から７２７までのアミノ酸配列からなるＤｅｒ  ｐ  ２、配列番号２のアミノ酸番号７３２から８００までのアミノ酸配列からなるＤｅｒ  ｐ  ２３及び配列番号２のアミノ酸番号８０５から１００２までのアミノ酸配列からなるＤｅｒ  ｐ  ７を順番に含むアレルゲンドメインをコードする塩基配列、
配列番号２のアミノ酸番号１００６から１０２８までのアミノ酸配列からなる膜貫通ドメインをコードする塩基配列、
配列番号２のアミノ酸番号１０２９から１０３６までのアミノ酸配列からなるペプチドリンカーをコードする塩基配列、並びに、
配列番号２のアミノ酸番号１０３７から１０４０までのアミノ酸配列からなるＬＡＭＰのエンドソーム／リソソーム標的ドメインをコードする塩基配列。
【００５２】
本発明の核酸は、本発明に関するキメラタンパク質をコードし、該核酸がヒト又は動物に投与された場合に、Ｄｅｒ  ｐ  １、Ｄｅｒ  ｐ  ２、Ｄｅｒ  ｐ  ２３及びＤｅｒ  ｐ  ７からなる群から選ばれるアレルゲンに対するＴｈ１型免疫を誘導する作用を有する限り、特に限定されない。ある核酸がヒト又は動物に投与された場合に、該核酸が上記アレルゲンに対するＴｈ１型免疫を誘導する作用を有するか否かは、例えば実施例３及び／又は実施例４に記載の方法で確認することができる。また、本発明の核酸は、該核酸がヒト又は動物に投与された場合に、Ｔｈ１細胞優位の免疫反応を誘導する作用を有する核酸であってもよい。ある核酸がヒト又は動物に投与された場合に、該核酸がＴｈ１細胞優位の免疫反応を誘導する作用を有するか否かは、例えば実施例４に記載の方法で確認することができる。
【００５３】
１つの実施形態において、本発明の核酸は、以下の核酸である：
配列番号２に示されるアミノ酸配列との同一性が、９０％、９２％、９４％、９６％、９８％又は９９％以上であるアミノ酸配列からなるキメラタンパク質をコードする塩基配列を含む核酸。
【００５４】
１つの実施形態において、本発明の核酸は、以下の核酸である：
配列番号２に示されるアミノ酸配列との同一性が９０％以上であるアミノ酸配列からなるキメラタンパク質をコードする塩基配列を含む核酸。
【００５５】
１つの実施形態において、本発明の核酸は、以下の核酸である：
配列番号２に示されるアミノ酸配列からなるキメラタンパク質、又は、配列番号２に示されるアミノ酸配列において１〜１０個のアミノ酸が欠失、置換、挿入、及び／若しくは付加されたアミノ酸配列からなるキメラタンパク質、をコードする塩基配列を含む核酸。
【００５６】
１つの実施形態において、本発明の核酸は、以下の核酸である：
配列番号２に示されるアミノ酸配列との同一性が９０％以上であるアミノ酸配列からなるキメラタンパク質をコードする塩基配列を含む核酸であって、
該核酸は、Ｄｅｒ  ｐ  １、Ｄｅｒ  ｐ  ２、Ｄｅｒ  ｐ  ２３及びＤｅｒ  ｐ  ７からなる群から選ばれるアレルゲンに対するＴｈ１型免疫を誘導する作用を有する、核酸。
【００５７】
１つの実施形態において、本発明の核酸は、以下の核酸である：
ａ）配列番号２に示されるアミノ酸配列からなるキメラタンパク質をコードする塩基配列を含む核酸、又は、
ｂ）配列番号２に示されるアミノ酸配列において１〜１０個のアミノ酸が欠失、置換、挿入、及び／若しくは付加されたアミノ酸配列からなるキメラタンパク質をコードする塩基配列を含む核酸であって、該核酸は、Ｄｅｒ  ｐ  １、Ｄｅｒ  ｐ  ２、Ｄｅｒ  ｐ  ２３及びＤｅｒ  ｐ  ７からなる群から選ばれるアレルゲンに対するＴｈ１型免疫を誘導する作用を有する、核酸。
【００５８】
１つの実施形態において、本発明の核酸は、以下の核酸である：
配列番号２に示されるアミノ酸配列との同一性が９０％以上であるアミノ酸配列からなるキメラタンパク質をコードする塩基配列を含む核酸であって、
該核酸は、Ｄｅｒ  ｐ  １、Ｄｅｒ  ｐ  ２、Ｄｅｒ  ｐ  ２３及びＤｅｒ  ｐ  ７に対するＴｈ１型免疫を誘導する作用を有する、核酸。
【００５９】
１つの実施形態において、本発明の核酸は、以下の核酸である：
ａ）配列番号２に示されるアミノ酸配列からなるキメラタンパク質をコードする塩基配列を含む核酸、又は、
ｂ）配列番号２に示されるアミノ酸配列において１〜１０個のアミノ酸が欠失、置換、挿入、及び／若しくは付加されたアミノ酸配列からなるキメラタンパク質をコードする塩基配列を含む核酸であって、該核酸は、Ｄｅｒ  ｐ  １、Ｄｅｒ  ｐ  ２、Ｄｅｒ  ｐ  ２３及びＤｅｒ  ｐ  ７に対するＴｈ１型免疫を誘導する作用を有する、核酸。
【００６０】
１つの実施形態において、本発明の核酸は、以下の核酸である：
配列番号２に示されるアミノ酸配列からなるキメラタンパク質をコードする塩基配列を含む核酸。
【００６１】
１つの実施形態において、配列番号２に示されるアミノ酸配列からなるキメラタンパク質をコードする塩基配列とは、配列番号１に示される塩基配列である。
【００６２】
本発明の核酸は、その塩基配列に基づき、当該分野で公知の方法を使用して、当業者によって容易に作製され得る。例えば、本発明の核酸は、当該分野で公知の遺伝子合成方法を利用して合成することが可能である。このような遺伝子合成方法としては、国際公開番号９０／０７８６１号に記載の抗体遺伝子の合成方法等の当業者に公知の種々の方法が使用され得る。
【００６３】
本発明の核酸は、一度合成された後には、当該分野で公知の方法を使用して、当業者によって容易に複製され得る。例えば、本発明の核酸は、後述の＜本発明の核酸を生産する方法及び該方法により生産できる核酸＞に記載の方法で、複製することが可能である。
【００６４】
＜本発明の発現ベクター＞
本発明の発現ベクターには、本発明の核酸を含む発現ベクターが含まれる。
【００６５】
本発明の核酸からキメラタンパク質を発現させるために用いる発現ベクターとしては、動物細胞中で本発明の核酸からキメラタンパク質を発現できるものである限り、特に制限されるものではない。１つの実施形態において、本発明の核酸からキメラタンパク質を発現させるために用いる発現ベクターは、ヒト体内においてキメラタンパク質を発現させるために用いることのできる発現ベクターである。本発明に用いる発現ベクターとしては、例えば、プラスミドベクター、ウイルスベクター（例えば、アデノウイルス、レトロウイルス、アデノ随伴ウイルス）等が挙げられる。１つの実施形態において、本発明に用いる発現ベクターは、プラスミドベクターである。本明細書において、「プラスミド」とは、プラスミドベクターを意味する。
【００６６】
本発明の発現ベクターは、本発明の核酸に機能可能に連結されたプロモーターを含み得る。動物細胞で本発明の核酸からキメラタンパク質を発現させるためのプロモーターとしては、例えば、ＣＭＶ（ｃｙｔｏｍｅｇａｌｏｖｉｒｕｓ）、ＲＳＶ（ｒｅｓｐｉｒａｔｏｒｙ  ｓｙｎｃｙｔｉａｌ  ｖｉｒｕｓ）、ＳＶ４０（ｓｉｍｉａｎ  ｖｉｒｕｓ  ４０）等のウイルス由来プロモーター、アクチンプロモーター、ＥＦ（ｅｌｏｎｇａｔｉｏｎ  ｆａｃｔｏｒ）１αプロモーター、ヒートショックプロモーター等が挙げられる。１つの実施形態において、本発明の発現ベクターに含まれるプロモーターは、ＣＭＶプロモーターである。本発明の発現ベクターは、開始コドン及び終止コドンを含み得る。この場合、エンハンサー配列、非翻訳領域、スプライシング接合部、ポリアデニレーション部位、又は複製可能単位等を含んでいてもよい。
【００６７】
１つの実施形態において、本発明の発現ベクターは、以下の核酸を含む発現ベクターである：
キメラタンパク質をコードする塩基配列を含む核酸であって、該塩基配列は、以下の塩基配列を順番に含む塩基配列である、核酸：
配列番号２のアミノ酸番号１から２７までのアミノ酸配列からなるシグナルペプチドをコードする塩基配列、
配列番号２のアミノ酸番号２８から３８０までのアミノ酸配列からなるＬＡＭＰの細胞小器官内安定化ドメインをコードする塩基配列、
配列番号２のアミノ酸番号３８３から５９４までのアミノ酸配列からなるＤｅｒ  ｐ  １、配列番号２のアミノ酸番号５９９から７２７までのアミノ酸配列からなるＤｅｒ  ｐ  ２、配列番号２のアミノ酸番号７３２から８００までのアミノ酸配列からなるＤｅｒ  ｐ  ２３及び配列番号２のアミノ酸番号８０５から１００２までのアミノ酸配列からなるＤｅｒ  ｐ  ７を含むアレルゲンドメインをコードする塩基配列、
配列番号２のアミノ酸番号１００６から１０２８までのアミノ酸配列からなる膜貫通ドメインをコードする塩基配列、並びに、
配列番号２のアミノ酸番号１０３７から１０４０までのアミノ酸配列からなるＬＡＭＰのエンドソーム／リソソーム標的ドメインをコードする塩基配列。
【００６８】
１つの実施形態において、本発明の発現ベクターは、以下の核酸を含む発現ベクターである：
キメラタンパク質をコードする塩基配列を含む核酸であって、該塩基配列は、以下の塩基配列を順番に含む塩基配列である、核酸：
配列番号２のアミノ酸番号１から２７までのアミノ酸配列からなるシグナルペプチドをコードする塩基配列、
配列番号２のアミノ酸番号２８から３８０までのアミノ酸配列からなるＬＡＭＰの細胞小器官内安定化ドメインをコードする塩基配列、
配列番号２のアミノ酸番号３８３から５９４までのアミノ酸配列からなるＤｅｒ  ｐ  １、配列番号２のアミノ酸番号５９９から７２７までのアミノ酸配列からなるＤｅｒ  ｐ  ２、配列番号２のアミノ酸番号７３２から８００までのアミノ酸配列からなるＤｅｒ  ｐ  ２３及び配列番号２のアミノ酸番号８０５から１００２までのアミノ酸配列からなるＤｅｒ  ｐ  ７を含むアレルゲンドメインをコードする塩基配列、
配列番号２のアミノ酸番号１００６から１０２８までのアミノ酸配列からなる膜貫通ドメインをコードする塩基配列、
配列番号２のアミノ酸番号１０２９から１０３６までのアミノ酸配列からなるペプチドリンカーをコードする塩基配列、並びに、
配列番号２のアミノ酸番号１０３７から１０４０までのアミノ酸配列からなるＬＡＭＰのエンドソーム／リソソーム標的ドメインをコードする塩基配列。
【００６９】
１つの実施形態において、本発明の発現ベクターは、以下の核酸を含む発現ベクターである：
キメラタンパク質をコードする塩基配列を含む核酸であって、該塩基配列は、以下の塩基配列を順番に含む塩基配列である、核酸：
配列番号２のアミノ酸番号１から２７までのアミノ酸配列からなるシグナルペプチドをコードする塩基配列、
配列番号２のアミノ酸番号２８から３８０までのアミノ酸配列からなるＬＡＭＰの細胞小器官内安定化ドメインをコードする塩基配列、
配列番号２のアミノ酸番号３８３から５９４までのアミノ酸配列からなるＤｅｒ  ｐ  １、配列番号２のアミノ酸番号５９９から７２７までのアミノ酸配列からなるＤｅｒ  ｐ  ２、配列番号２のアミノ酸番号７３２から８００までのアミノ酸配列からなるＤｅｒ  ｐ  ２３及び配列番号２のアミノ酸番号８０５から１００２までのアミノ酸配列からなるＤｅｒ  ｐ  ７を順番に含むアレルゲンドメインをコードする塩基配列、
配列番号２のアミノ酸番号１００６から１０２８までのアミノ酸配列からなる膜貫通ドメインをコードする塩基配列、並びに、
配列番号２のアミノ酸番号１０３７から１０４０までのアミノ酸配列からなるＬＡＭＰのエンドソーム／リソソーム標的ドメインをコードする塩基配列。
【００７０】
１つの実施形態において、本発明の発現ベクターは、以下の核酸を含む発現ベクターである：
キメラタンパク質をコードする塩基配列を含む核酸であって、該塩基配列は、以下の塩基配列を順番に含む塩基配列である、核酸：
配列番号２のアミノ酸番号１から２７までのアミノ酸配列からなるシグナルペプチドをコードする塩基配列、
配列番号２のアミノ酸番号２８から３８０までのアミノ酸配列からなるＬＡＭＰの細胞小器官内安定化ドメインをコードする塩基配列、
配列番号２のアミノ酸番号３８３から５９４までのアミノ酸配列からなるＤｅｒ  ｐ  １、配列番号２のアミノ酸番号５９９から７２７までのアミノ酸配列からなるＤｅｒ  ｐ  ２、配列番号２のアミノ酸番号７３２から８００までのアミノ酸配列からなるＤｅｒ  ｐ  ２３及び配列番号２のアミノ酸番号８０５から１００２までのアミノ酸配列からなるＤｅｒ  ｐ  ７を順番に含むアレルゲンドメインをコードする塩基配列、
配列番号２のアミノ酸番号１００６から１０２８までのアミノ酸配列からなる膜貫通ドメインをコードする塩基配列、
配列番号２のアミノ酸番号１０２９から１０３６までのアミノ酸配列からなるペプチドリンカーをコードする塩基配列、並びに、
配列番号２のアミノ酸番号１０３７から１０４０までのアミノ酸配列からなるＬＡＭＰのエンドソーム／リソソーム標的ドメインをコードする塩基配列。
【００７１】
１つの実施形態において、本発明の発現ベクターは、配列番号２に示されるアミノ酸配列からなるキメラタンパク質をコードする塩基配列を含む核酸を含む発現ベクターである。
【００７２】
１つの実施形態において、本発明の発現ベクターは、配列番号１に示される塩基配列を含む核酸を含む発現ベクターである。
【００７３】
１つの実施形態において、本発明の発現ベクターは、配列番号３に示される塩基配列からなる核酸を含む発現ベクターである。
【００７４】
＜本発明の宿主細胞＞
本発明の宿主細胞には、本発明の核酸で形質転換された宿主細胞が含まれる。１つの実施形態において、本発明の宿主細胞は、本発明の発現ベクターで形質転換された宿主細胞である。１つの実施形態において、本発明の宿主細胞は、プラスミドベクターである本発明の発現ベクターで形質転換された宿主細胞である。
【００７５】
本発明の核酸で形質転換される宿主細胞としては、特に限定されないが、核酸の複製に使用し得る細胞である限り、当該分野で公知の細胞を選択することができる。
【００７６】
核酸の複製に使用し得る宿主細胞としては、例えば、本発明の技術分野において通常使用される天然細胞又は人工的に樹立された細胞等種々の細胞（例えば、動物細胞（例えば、ＣＨＯＫ１ＳＶ細胞等）、昆虫細胞（例えば、Ｓｆ９等）、細菌（大腸菌等）、酵母（サッカロマイセス属、ピキア属等）等）が挙げられる。１つの実施形態において、大腸菌を宿主細胞として使用することができる。形質転換自体は、公知の方法で実施することができる。
【００７７】
＜本発明の核酸を生産する方法及び該方法により生産できる核酸＞
本発明の核酸を生産する方法には、本発明の核酸又は発現ベクターで形質転換された宿主細胞を培養する工程を含む、核酸又は発現ベクターを生産する方法が含まれる。１つの実施形態において、本発明の核酸を生産する方法は、本発明の核酸で形質転換された宿主細胞を培養し、本発明の核酸を複製する工程を含む。１つの実施形態において、本発明の核酸を生産する方法は、本発明の発現ベクターで形質転換された宿主細胞を培養し、本発明の発現ベクターを複製する工程を含む。
【００７８】
１つの実施形態において、本発明の核酸を生産する方法に使用される宿主細胞は、大腸菌である。大腸菌の培養には、適切な培地、例えば、ＬＢ培地、Ｍ９培地、Ｔｅｒｒｉｆｉｃ  Ｂｒｏｔｈ培地、ＳＯＢ培地、ＳＯＣ培地、又は、２×ＹＴ培地等を選択することができる。また、当該大腸菌の培養は、炭素（資化可能な炭素化合物であれば特に限定されず、例えば、グリセリン等のポリオール類、又は、ピルビン酸、コハク酸若しくはクエン酸等の有機酸類）、窒素（大腸菌が利用可能な窒素化合物であれば特に限定されず、例えば、ペプトン、肉エキス、酵母エキス、カゼイン加水分解物、大豆粕アルカリ抽出物、又はアンモニア若しくはその塩）、無機物及び無機イオン（特に限定されるものではないが、例えば、リン酸塩、炭酸塩、硫酸塩、マグネシウム、カルシウム、カリウム、鉄、マンガン及び亜鉛）、ビタミン源並びに消泡剤等が適正濃度に制御された環境で行うことができる。また、培養の制御には、ｐＨ、温度、攪拌、空気流、溶存酸素等のパラメータの制御が含まれる。１つの実施形態において、培養の条件は、ｐＨが６．７から７．５、温度が２０から３７℃、及び、攪拌速度が２００から３００ｒｐｍの範囲である。
【００７９】
本発明の核酸を生産する方法は、回収した培養液からライセート（溶菌液）を得る工程を含んでもよい。ライセートは、例えば、回収した培養液をアルカリ溶解法又はボイリング法で処理することで得ることができる。また、ライセートを得る工程には、最終的な溶解物を滅菌ろ過する工程を含んでもよい。
【００８０】
本発明の核酸を生産する方法は、さらに、ライセートから核酸又は発現ベクターを精製する工程を含んでもよい。ライセートからの核酸又は発現ベクターの精製には、イオン交換クロマトグラフィー及び／又は疎水相互作用クロマトグラフィーを用いることができる。ライセートから核酸又は発現ベクターを精製する工程には、限外ろ過及び／又は透析ろ過をする工程を含んでもよい。また、精製の工程の最終処置として、滅菌ろ過をする工程を含んでもよい。
【００８１】
１つの実施形態において、本発明の核酸は、本発明の核酸を生産する方法により生産された核酸である。
【００８２】
１つの実施形態において、本発明の発現ベクターは、本発明の核酸を生産する方法により生産された発現ベクターである。
【００８３】
＜本発明の医薬組成物＞
本発明の医薬組成物には、本発明の核酸、及び、薬学的に許容される賦形剤を含む医薬組成物が含まれる。１つの実施形態において、本発明の医薬組成物は、本発明のベクター、及び、薬学的に許容される賦形剤を含む医薬組成物である。本発明の医薬組成物は、当該分野において通常用いられている賦形剤、即ち、薬剤用賦形剤や薬剤用担体等を用いて、通常使用される方法によって調製することができる。これら医薬組成物の剤型の例としては、例えば、注射剤、点滴用剤等の非経口剤が挙げられ、静脈内投与、皮下投与、皮内投与、筋肉内投与等により投与することができる。製剤化にあたっては、薬学的に許容される範囲で、これら剤型に応じた賦形剤、担体、添加剤等を使用することができる。
【００８４】
１つの実施形態において、本発明の医薬組成物は、本発明の核酸又は発現ベクター、及び、薬学的に許容される賦形剤を含む、医薬組成物である。
【００８５】
本発明の核酸又は発現ベクターの投与量は、患者の症状の程度や年齢、使用する製剤の剤型等により異なるが、例えば、０．００１ｍｇ／ｋｇ〜１００ｍｇ／ｋｇ程度を用いることができる。また、そのような投与量に対応する量の本発明の核酸又は発現ベクターを添加して、製剤化することができる。
【００８６】
本発明の医薬組成物は、Ｄｅｒ  ｐ  １、Ｄｅｒ  ｐ  ２、Ｄｅｒ  ｐ  ２３及びＤｅｒ  ｐ  ７から選択されるアレルゲンに起因するアレルギーの予防又は治療剤として用いることができる。また、本発明の医薬組成物は、ダニアレルギーの予防又は治療剤として用いることができる。
【００８７】
本発明には、本発明の核酸を含む、アレルギーの予防又は治療用医薬組成物が含まれる。また、本発明には、本発明の核酸の予防有効量又は治療有効量を投与する工程を包含する、アレルギーを予防又は治療する方法が含まれる。また、本発明には、アレルギーの予防又は治療に使用するための、本発明の核酸が含まれる。また、本発明には、アレルギーの予防又は治療用医薬組成物の製造における、本発明の核酸の使用が含まれる。１つの実施形態において、上記アレルギーは、Ｄｅｒ  ｐ  １、Ｄｅｒ  ｐ  ２、Ｄｅｒ  ｐ  ２３及びＤｅｒ  ｐ  ７からなる群から選ばれるアレルゲンに起因するアレルギーである。また、１つの実施形態において、上記アレルギーは、Ｄｅｒ  ｐ  １、Ｄｅｒ  ｐ  ２、Ｄｅｒ  ｐ  ２３及びＤｅｒ  ｐ  ７からなる群から選ばれるアレルゲンに反応する抗体を有するアレルギー患者が罹患しているアレルギーである。さらに、１つの実施形態において、上記アレルギーは、ダニアレルギーである。
【００８８】
１つの実施形態において、本発明の医薬組成物は、以下の核酸及び薬学的に許容される賦形剤を含む、アレルギーの予防又は治療用医薬組成物である：
キメラタンパク質をコードする塩基配列を含む核酸であって、該塩基配列は、以下の塩基配列を順番に含む塩基配列である、核酸：
配列番号２のアミノ酸番号１から２７までのアミノ酸配列からなるシグナルペプチドをコードする塩基配列、
配列番号２のアミノ酸番号２８から３８０までのアミノ酸配列からなるＬＡＭＰの細胞小器官内安定化ドメインをコードする塩基配列、
配列番号２のアミノ酸番号３８３から５９４までのアミノ酸配列からなるＤｅｒ  ｐ  １、配列番号２のアミノ酸番号５９９から７２７までのアミノ酸配列からなるＤｅｒ  ｐ  ２、配列番号２のアミノ酸番号７３２から８００までのアミノ酸配列からなるＤｅｒ  ｐ  ２３及び配列番号２のアミノ酸番号８０５から１００２までのアミノ酸配列からなるＤｅｒ  ｐ  ７を含むアレルゲンドメインをコードする塩基配列、
配列番号２のアミノ酸番号１００６から１０２８までのアミノ酸配列からなる膜貫通ドメインをコードする塩基配列、並びに、
配列番号２のアミノ酸番号１０３７から１０４０までのアミノ酸配列からなるＬＡＭＰのエンドソーム／リソソーム標的ドメインをコードする塩基配列。
【００８９】
１つの実施形態において、本発明の医薬組成物は、以下の核酸及び薬学的に許容される賦形剤を含む、アレルギーの予防又は治療用医薬組成物である：
キメラタンパク質をコードする塩基配列を含む核酸であって、該塩基配列は、以下の塩基配列を順番に含む塩基配列である、核酸：
配列番号２のアミノ酸番号１から２７までのアミノ酸配列からなるシグナルペプチドをコードする塩基配列、
配列番号２のアミノ酸番号２８から３８０までのアミノ酸配列からなるＬＡＭＰの細胞小器官内安定化ドメインをコードする塩基配列、
配列番号２のアミノ酸番号３８３から５９４までのアミノ酸配列からなるＤｅｒ  ｐ  １、配列番号２のアミノ酸番号５９９から７２７までのアミノ酸配列からなるＤｅｒ  ｐ  ２、配列番号２のアミノ酸番号７３２から８００までのアミノ酸配列からなるＤｅｒ  ｐ  ２３及び配列番号２のアミノ酸番号８０５から１００２までのアミノ酸配列からなるＤｅｒ  ｐ  ７を順番に含むアレルゲンドメインをコードする塩基配列、
配列番号２のアミノ酸番号１００６から１０２８までのアミノ酸配列からなる膜貫通ドメインをコードする塩基配列、並びに、
配列番号２のアミノ酸番号１０３７から１０４０までのアミノ酸配列からなるＬＡＭＰのエンドソーム／リソソーム標的ドメインをコードする塩基配列。
【００９０】
１つの実施形態において、本発明の医薬組成物は、配列番号２に示されるアミノ酸配列からなるキメラタンパク質をコードする塩基配列を含む核酸及び薬学的に許容される賦形剤を含む、アレルギーの予防又は治療用医薬組成物である。
【００９１】
本発明には、本発明の発現ベクターを含む、アレルギーの予防又は治療用医薬組成物が含まれる。また、本発明には、本発明の発現ベクターの予防有効量又は治療有効量を投与する工程を包含する、アレルギーを予防又は治療する方法が含まれる。また、本発明には、アレルギーの予防又は治療に使用するための、本発明の発現ベクターが含まれる。また、本発明には、アレルギーの予防又は治療用医薬組成物の製造における、本発明の発現ベクターの使用が含まれる。１つの実施形態において、上記アレルギーは、Ｄｅｒ  ｐ  １、Ｄｅｒ  ｐ  ２、Ｄｅｒ  ｐ  ２３及びＤｅｒ  ｐ  ７からなる群から選ばれるアレルゲンに起因するアレルギーである。また、１つの実施形態において、上記アレルギーは、Ｄｅｒ  ｐ  １、Ｄｅｒ  ｐ  ２、Ｄｅｒ  ｐ  ２３及びＤｅｒ  ｐ  ７からなる群から選ばれるアレルゲンに反応する抗体を有するアレルギー患者が罹患しているアレルギーである。さらに、１つの実施形態において、上記アレルギーは、ダニアレルギーである。
【００９２】
１つの実施形態において、本発明の医薬組成物は、以下の核酸を含む発現ベクター及び薬学的に許容される賦形剤を含む、アレルギーの予防又は治療用医薬組成物である：
キメラタンパク質をコードする塩基配列を含む核酸であって、該塩基配列は、以下の塩基配列を順番に含む塩基配列である、核酸：
配列番号２のアミノ酸番号１から２７までのアミノ酸配列からなるシグナルペプチドをコードする塩基配列、
配列番号２のアミノ酸番号２８から３８０までのアミノ酸配列からなるＬＡＭＰの細胞小器官内安定化ドメインをコードする塩基配列、
配列番号２のアミノ酸番号３８３から５９４までのアミノ酸配列からなるＤｅｒ  ｐ  １、配列番号２のアミノ酸番号５９９から７２７までのアミノ酸配列からなるＤｅｒ  ｐ  ２、配列番号２のアミノ酸番号７３２から８００までのアミノ酸配列からなるＤｅｒ  ｐ  ２３及び配列番号２のアミノ酸番号８０５から１００２までのアミノ酸配列からなるＤｅｒ  ｐ  ７を含むアレルゲンドメインをコードする塩基配列、
配列番号２のアミノ酸番号１００６から１０２８までのアミノ酸配列からなる膜貫通ドメインをコードする塩基配列、並びに、
配列番号２のアミノ酸番号１０３７から１０４０までのアミノ酸配列からなるＬＡＭＰのエンドソーム／リソソーム標的ドメインをコードする塩基配列。
【００９３】
１つの実施形態において、本発明の医薬組成物は、以下の核酸を含む発現ベクター及び薬学的に許容される賦形剤を含む、アレルギーの予防又は治療用医薬組成物である：
キメラタンパク質をコードする塩基配列を含む核酸であって、該塩基配列は、以下の塩基配列を順番に含む塩基配列である、核酸：
配列番号２のアミノ酸番号１から２７までのアミノ酸配列からなるシグナルペプチドをコードする塩基配列、
配列番号２のアミノ酸番号２８から３８０までのアミノ酸配列からなるＬＡＭＰの細胞小器官内安定化ドメインをコードする塩基配列、
配列番号２のアミノ酸番号３８３から５９４までのアミノ酸配列からなるＤｅｒ  ｐ  １、配列番号２のアミノ酸番号５９９から７２７までのアミノ酸配列からなるＤｅｒ  ｐ  ２、配列番号２のアミノ酸番号７３２から８００までのアミノ酸配列からなるＤｅｒ  ｐ  ２３及び配列番号２のアミノ酸番号８０５から１００２までのアミノ酸配列からなるＤｅｒ  ｐ  ７を順番に含むアレルゲンドメインをコードする塩基配列、
配列番号２のアミノ酸番号１００６から１０２８までのアミノ酸配列からなる膜貫通ドメインをコードする塩基配列、並びに、
配列番号２のアミノ酸番号１０３７から１０４０までのアミノ酸配列からなるＬＡＭＰのエンドソーム／リソソーム標的ドメインをコードする塩基配列。
【００９４】
１つの実施形態において、本発明の医薬組成物は、配列番号２に示されるアミノ酸配列からなるキメラタンパク質をコードする塩基配列を含む核酸を含む発現ベクター及び薬学的に許容される賦形剤を含む、アレルギーの予防又は治療用医薬組成物である。
【００９５】
本発明についてさらに理解を得るために参照する特定の実施例をここに提供するが、これらは例示目的とするものであって、本発明を限定するものではない。
【実施例】
【００９６】
［実施例１：ＬＡＭＰ−Ｄｅｒ  ｐ  １−Ｄｅｒ  ｐ  ２−Ｄｅｒ  ｐ  ２３−Ｄｅｒ  ｐ  ７プラスミドの構築］
配列番号３に示される塩基配列からなるＬＡＭＰ−Ｄｅｒ  ｐ  １−Ｄｅｒ  ｐ  ２−Ｄｅｒ  ｐ  ２３−Ｄｅｒ  ｐ  ７プラスミド（以下の塩基配列を順番に含む塩基配列（すなわち、配列番号２に示されるアミノ酸配列からなるキメラタンパク質をコードする塩基配列）を含む核酸を含む発現ベクター：ＬＡＭＰ−１のシグナルペプチド（配列番号２の１から２７までのアミノ酸配列）をコードする塩基配列、ＬＡＭＰ−１の細胞小器官内安定化ドメイン（配列番号２の２８から３８０までのアミノ酸配列）をコードする塩基配列、Ｄｅｒ  ｐ  １、Ｄｅｒ  ｐ  ２、Ｄｅｒ  ｐ  ２３及びＤｅｒ  ｐ  ７を順番に含むアレルゲンドメイン（配列番号２の３８３から１００２までのアミノ酸配列）をコードする塩基配列、ＬＡＭＰ−１の膜貫通ドメイン（配列番号２の１００６から１０２８までのアミノ酸配列）をコードする塩基配列、並びに、ＬＡＭＰ−１のエンドソーム／リソソーム標的ドメイン（配列番号２の１０３７から１０４０までのアミノ酸配列）をコードする塩基配列）を構築した。当該プラスミドは、日本国特許第５８０７９９４号の配列番号６に記載のプラスミドのＥｃｏ  ＲＩ−Ｘｈｏ  Ｉサイトに、配列番号１の塩基番号１１４７から３００６までの塩基配列（Ｄｅｒ  ｐ  １、Ｄｅｒ  ｐ  ２、Ｄｅｒ  ｐ  ２３及びＤｅｒ  ｐ  ７を順番に含むアレルゲンドメインをコードする塩基配列）の５’末側にＸｈｏ  Ｉ認識配列、３’末側にＥｃｏ  ＲＩ認識配列を付加した合成ＤＮＡを挿入することで構築することができる。構築したＬＡＭＰ−Ｄｅｒ  ｐ  １−Ｄｅｒ  ｐ  ２−Ｄｅｒ  ｐ  ２３−Ｄｅｒ  ｐ  ７プラスミドで大腸菌を形質転換し、液体培養を行った。培養液を遠心し菌体を回収し、一般的なプラスミド抽出精製法（ミニプレップ法）に準じた方法で、増幅したＬＡＭＰ−Ｄｅｒ  ｐ  １−Ｄｅｒ  ｐ  ２−Ｄｅｒ  ｐ  ２３−Ｄｅｒ  ｐ  ７プラスミドを得た。【００９７】
［実施例２：ＬＡＭＰ−Ｄｅｒ  ｐ  １−Ｄｅｒ  ｐ  ２−Ｄｅｒ  ｐ  ２３−Ｄｅｒ  ｐ  ７キメラタンパク質の発現］
ヒト胎児腎由来２９３Ｔ細胞株を用いてＬＡＭＰ−Ｄｅｒ  ｐ  １−Ｄｅｒ  ｐ  ２−Ｄｅｒ  ｐ  ２３−Ｄｅｒ  ｐ  ７キメラタンパク質（配列番号１に示される塩基配列がコードするアミノ酸配列（すなわち配列番号２に示されるアミノ酸配列）からなるキメラタンパク質）のｉｎ  ｖｉｔｒｏ発現を評価した。【００９８】
（１）細胞培養及びプラスミド導入
ヒト胎児腎由来２９３Ｔ細胞（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｆｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ社  Ｃａｔ．ＨＣＬ４５１７）を、１０％ウシ胎児血清（Ｈｙｃｌｏｎｅ社、Ｃａｔ．ＳＨ３００７０．０３）及び１００倍希釈のペニシリン−ストレプトマイシン（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ社、Ｃａｔ．１５０７００６３）を含むＤ−ＭＥＭ培地（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ社、Ｃａｔ．Ｄ５７９６）にて、３×１０5細胞／ウェルになるように６ウェルプレート（ＩＷＡＫＩ社、Ｃａｔ．３８１０−００６）に播種した。播種した細胞を３７℃、５％ＣＯ2存在下で一晩培養後、ＬＡＭＰ−Ｄｅｒ  ｐ  １−Ｄｅｒ  ｐ  ２−Ｄｅｒ  ｐ  ２３−Ｄｅｒ  ｐ  ７プラスミド：Ｌｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅ  ２０００（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｆｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ社  Ｃａｔ．１１６６８０２７）＝２．５（μｇ）：１０（μＬ）の混合液を添加した。さらに３７℃、５％ＣＯ2存在下で一晩培養後、培地を除去しＰＢＳで一回洗浄の後、ウェスタンブロッティングを行った。【００９９】
（２）ウェスタンブロッティング
前処理：細胞をプロテアーゼインヒビター（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ社  Ｃａｔ．１８７３５８０）を含むＲＩＰＡバッファー（Ｐｉｅｒｃｅ社  Ｃａｔ．８９９００）にて溶解し、２００００×ｇ、５分間の遠心後の上清のタンパク質濃度を測定した。タンパク質濃度が２００μｇ／ｍＬになるようにプロテアーゼインヒビターを含むＰＢＳで希釈した細胞溶解液５μＬに、１００ｍＭ  ＤＴＴを含むＬＤＳサンプルバッファー（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｆｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ社  Ｃａｔ．ＮＰ０００７）５μＬを添加し、７０℃で１０分間加熱処理した。
ＳＤＳ−ＰＡＧＥ：ＮｕＰＡＧＥ（登録商標）  ＭＯＰＳ  ＳＤＳ  Ｒｕｎｎｉｎｇバッファー（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｆｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ社、Ｃａｔ．ＮＰ０００１）及びＮｕＰＡＧＥ（登録商標）  ４−１２％  Ｂｉｓ−Ｔｒｉｓ  Ｇｅｌ（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｆｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ社、Ｃａｔ．ＮＰ０３２３）を用いて、前述の前処理を施した細胞溶解液を該Ｇｅｌにアプライし、２００Ｖの定電圧で電気泳動を行った。
ブロッティング：ＳＤＳ−ＰＡＧＥ後のＧｅｌにＰＶＤＦメンブレン（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｆｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ社  Ｃａｔ．ＬＣ２００５）を接触させ、２０％メタノール含有ＮｕＰＡＧＥ（登録商標）  Ｔｒａｎｓｆｅｒバッファー（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｆｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ社、Ｃａｔ．ＮＰ０００６）を満たしたＸＣｅｌｌ  ＩＩ  Ｂｌｏｔ  Ｍｏｄｕｌｅ（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｆｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ社、Ｃａｔ．ＥＩ９０５１）中にて、１８０ｍＡで９０分間通電し、ブロッティングを行った。
ブロッキング:Ｂｌｏｃｋｉｎｇ  Ｏｎｅ（ナカライテスク社、Ｃａｔ．０３９５３−９５）に通電後のメンブレンを浸漬し、室温で１時間振盪した。
１次抗体：Ａｎｔｉ−ｈｕｍａｎ  ＬＡＭＰ１抗体（Ｓｉｎｏ  ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ社、Ｃａｔ．１１２１５−ＲＰ０１）を、１０％Ｂｌｏｃｋｉｎｇ  Ｏｎｅを含むＴＢＳ  Ｔｗｅｅｎ−２０バッファー（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｆｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ社、Ｃａｔ．２８３６０）に１０００倍希釈になるように加えた。このバッファーにメンブレンを浸漬し、４℃で一晩振盪した。
２次抗体：ＴＢＳ  Ｔｗｅｅｎ−２０バッファーでメンブレンを洗浄した。Ａｎｔｉ−ｒａｂｂｉｔ  ＩｇＧ（Ｈ＋Ｌ  ｃｈａｉｎ）ｐＡｂ−ＨＲＰ（ＭＢＬ社、Ｃａｔ．４５８）を、１０％Ｂｌｏｃｋｉｎｇ  Ｏｎｅを含むＴＢＳ  Ｔｗｅｅｎ−２０バッファーに３０００倍希釈になるように加えた。このバッファーにメンブレンを浸漬し、室温で１時間振盪した。
検出：ＴＢＳ  Ｔｗｅｅｎ−２０バッファーでメンブレンを洗浄した。ＥＣＬ  ｐｒｉｍｅ  ｗｅｓｔｅｒｎ  ｂｌｏｔｔｉｎｇ  ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ  ｒｅａｇｅｎｔ（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ社、Ｃａｔ．ＲＰＮ２２３２）にメンブレンを浸漬し、ＬｕｍｉＶｉｓｉｏｎ  ＰＲＯ  ４００ＥＸ（アイシン精機株式会社）で画像を検出した。当該画像において、キメラタンパク質に該当するａｎｔｉ−ｈｕｍａｎ  ＬＡＭＰ１抗体に反応するバンドが検出された。【０１００】
上記試験の結果、ヒト胎児腎由来２９３Ｔ細胞株にＬＡＭＰ−Ｄｅｒ  ｐ  １−Ｄｅｒ  ｐ  ２−Ｄｅｒ  ｐ  ２３−Ｄｅｒ  ｐ  ７プラスミドを導入することにより、細胞内でのＬＡＭＰ−Ｄｅｒ  ｐ  １−Ｄｅｒ  ｐ  ２−Ｄｅｒ  ｐ  ２３−Ｄｅｒ  ｐ  ７キメラタンパク質が発現することが確認された。【０１０１】
［実施例３：ＬＡＭＰ−Ｄｅｒ  ｐ  １−Ｄｅｒ  ｐ  ２−Ｄｅｒ  ｐ  ２３−Ｄｅｒ  ｐ  ７プラスミド投与によるＩｇＧ２ａの産生誘導］
ｉｎ  ｖｉｖｏにおける抗体産生誘導の評価を行った。各群８例として、投与開始時７週齢のＢＡＬＢ／ｃ雌性マウス（日本チャールス・リバー社）の耳に５０μｇのＬＡＭＰ−Ｄｅｒ  ｐ  １−Ｄｅｒ  ｐ  ２−Ｄｅｒ  ｐ  ２３−Ｄｅｒ  ｐ  ７プラスミドを含むＰＢＳ溶液２５μＬを１週間毎に３回、皮内投与し（０、７及び１４日目）、最終投与１週間後に採血し血漿サンプルを取得した（２１日目）。比較対照として、ＬＡＭＰ−Ｄｅｒ  ｐ  ２３−Ｄｅｒ  ｐ  ７−Ｄｅｒ  ｐ  ２−Ｄｅｒ  ｐ  １プラスミド（以下の塩基配列を順番に含む塩基配列を含む核酸を含む発現ベクター：配列番号２のアミノ酸番号１から３８０までのアミノ酸配列（以下、実施例３及び４において、ＬＡＭＰ−１のＮ末端という）をコードする塩基配列、配列番号２のアミノ酸番号７３２から８００までのアミノ酸配列からなるＤｅｒ  ｐ  ２３（以下、実施例３及び４において、Ｄｅｒ  ｐ  ２３ドメインという）、配列番号２のアミノ酸番号８０５から１００２までのアミノ酸配列からなるＤｅｒ  ｐ  ７（以下、実施例３及び４において、Ｄｅｒ  ｐ  ７ドメインという）、配列番号２のアミノ酸番号５９９から７２７までのアミノ酸配列からなるＤｅｒ  ｐ  ２（以下、実施例３及び４において、Ｄｅｒ  ｐ  ２ドメインという）及び、配列番号２のアミノ酸番号３８３から５９４までのアミノ酸配列からなるＤｅｒ  ｐ  １（以下、実施例３及び４において、Ｄｅｒ  ｐ  １ドメインという）を順番に含むアレルゲンドメインをコードする塩基配列、並びに、配列番号２のアミノ酸番号１００６から１０４０までのアミノ酸配列（以下、実施例３及び４において、ＬＡＭＰ−１のＣ末端という）をコードする塩基配列）、並びに、ＬＡＭＰ−Ｄｅｒ  ｐ  １−Ｄｅｒ  ｐ  ２プラスミド（以下の塩基配列を順番に含む塩基配列を含む核酸を含む発現ベクター：ＬＡＭＰ−１のＮ末端をコードする塩基配列、Ｄｅｒ  ｐ  １ドメイン及びＤｅｒ  ｐ  ２ドメインを順番に含むアレルゲンドメインをコードする塩基配列、並びに、ＬＡＭＰ−１のＣ末端をコードする塩基配列）とＬＡＭＰ−Ｄｅｒ  ｐ  ２３−Ｄｅｒ  ｐ  ７プラスミド（以下の塩基配列を順番に含む塩基配列を含む核酸を含む発現ベクター：ＬＡＭＰ−１のＮ末端をコードする塩基配列、Ｄｅｒ  ｐ  ２３ドメイン及びＤｅｒ  ｐ  ７ドメインを順番に含むアレルゲンドメインをコードする塩基配列、並びに、ＬＡＭＰ−１のＣ末端をコードする塩基配列）の混合物、並びに、ＬＡＭＰ−Ｄｅｒ  ｐ  １プラスミド（以下の塩基配列を順番に含む塩基配列を含む核酸を含む発現ベクター：ＬＡＭＰ−１のＮ末端をコードする塩基配列、Ｄｅｒ  ｐ  １ドメインを含むアレルゲンドメインをコードする塩基配列、及び、ＬＡＭＰ−１のＣ末端をコードする塩基配列）、ＬＡＭＰ−Ｄｅｒ  ｐ  ２プラスミド（以下の塩基配列を順番に含む塩基配列を含む核酸を含む発現ベクター：ＬＡＭＰ−１のＮ末端をコードする塩基配列、Ｄｅｒ  ｐ  ２ドメインを含むアレルゲンドメインをコードする塩基配列、及び、ＬＡＭＰ−１のＣ末端をコードする塩基配列）、ＬＡＭＰ−Ｄｅｒ  ｐ  ７プラスミド（以下の塩基配列を順番に含む塩基配列を含む核酸を含む発現ベクター：ＬＡＭＰ−１のＮ末端をコードする塩基配列���Ｄｅｒ  ｐ  ７ドメインを含むアレルゲンドメインをコードする塩基配列、及び、ＬＡＭＰ−１のＣ末端をコードする塩基配列）、及び、ＬＡＭＰ−Ｄｅｒ  ｐ  ２３プラスミド（以下の塩基配列を順番に含む塩基配列を含む核酸を含む発現ベクター：ＬＡＭＰ−１のＮ末端をコードする塩基配列、Ｄｅｒ  ｐ  ２３ドメインを含むアレルゲンドメインをコードする塩基配列、及び、ＬＡＭＰ−１のＣ末端をコードする塩基配列）の混合物を準備した。なお、比較対象の各プラスミドは、実施例１に記載の方法と同様の方法により作製することができる。５０μｇの上記プラスミド及びプラスミド混合物を含むＰＢＳ溶液２５μＬ、又は、２５μＬのＰＢＳをマウスに投与した。抗体価の測定は１００倍又は１０００倍希釈の血漿サンプルを用いてＥＬＩＳＡ法により実施し、４５０ｎｍの吸光度を測定した。ＥＬＩＳＡ測定は、テストプレートとしてＦ９６  ＭＡＸＩＳＯＲＰ  ＮＵＮＣ−ＩＭＭＵＮＯ  ＰＬＡＴＥ（Ｎｕｎｃ社、Ｃａｔ．４３９４５４）を用い、一般的なＥＬＩＳＡ法に準じて行った。精製タンパク質であるＤｅｒ  ｐ  １（Ｉｎｄｏｏｒ  ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ社、ＮＡ−ＤＰ１−１、ｌｏｔ：  ３８０５２）、精製タンパク質であるＤｅｒ  ｐ  ２（Ｉｎｄｏｏｒ  ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ社、ＮＡ−ＤＰ２−１、ｌｏｔ：  ３６１１８）、組換え精製タンパク質であるＤｅｒ  ｐ  ７（Ｉｎｄｏｏｒ  ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ社、ＲＰ−ＤＰ７−１、ｌｏｔ：  ３４０３３）又は組換え精製タンパク質であるＤｅｒ  ｐ  ２３（Ｓｙｓｍｅｘ社、ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ：Ａ０Ａ０Ｋ２ＤＱＵ８）をＰＢＳで１μｇ／ｍＬに調製し、テストプレートに５０μＬ／ウェルで添加し４℃で一晩静置した。テストプレートを洗浄バッファー（ＰＢＳ  Ｔｗｅｅｎ−２０バッファー、Ｔｈｅｒｍｏ  Ｆｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ社、Ｃａｔ．２８３５２）を用いて３回洗浄した後に１％ＢＳＡ（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ社、Ｃａｔ．Ａ８０２２）を含むＰＢＳを１００μＬ／ウェルで添加し、室温に１時間静置した。洗浄バッファーを用いて３回洗浄した後に、１％ＢＳＡ含有ＰＢＳで１００倍又は１０００倍希釈した血漿サンプルを５０μＬ／ウェルで添加し、室温で１時間静置した。洗浄バッファーを用いて３回洗浄した後に、１％ＢＳＡを含むＰＢＳで５００００倍希釈した二次抗体Ｇｏａｔ  ａｎｔｉ−ｍｏｕｓｅ  ＩｇＧ２ａ  ＨＲＰ  Ｃｏｎｊｕｇａｔｅｄ（Ｂｅｔｈｙｌ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ社、Ｃａｔ．Ａ９０−１０７Ｐ）を５０μＬ／ウェルで添加し、テストプレートを室温で１時間静置した。洗浄バッファーを用いて３回で洗浄した後に、基質溶液であるＴＭＢ  Ｍｉｃｒｏｗｅｌｌ  Ｐｅｒｏｘｉｄａｓｅ  Ｓｕｂｓｔｒａｔｅ  Ｓｙｓｔｅｍ（セラケア社、Ｃａｔ．５０−７６−０３）を５０μＬ／ウェルで添加し、遮光して室温で１５分間静置した。反応停止液（２Ｎ  Ｈ2ＳＯ4）を５０μＬ／ウェルで添加し、４５０ｎｍの吸光度を測定した。【０１０２】
上記試験の結果、ＬＡＭＰ−Ｄｅｒ  ｐ  １−Ｄｅｒ  ｐ  ２−Ｄｅｒ  ｐ  ２３−Ｄｅｒ  ｐ  ７プラスミド（Ｄｅｒ  ｐ１−ｐ２−ｐ２３−ｐ７）をマウスに投与することにより、Ｄｅｒ  ｐ  １、Ｄｅｒ  ｐ  ２、Ｄｅｒ  ｐ  ２３及びＤｅｒ  ｐ  ７特異的ＩｇＧ２ａの産生が検出された（図１）。一方ＬＡＭＰ−Ｄｅｒ  ｐ  ２３−Ｄｅｒ  ｐ  ７−Ｄｅｒ  ｐ  ２−Ｄｅｒ  ｐ  １プラスミド（Ｄｅｒ  ｐ２３−ｐ７−ｐ２−ｐ１）、ＬＡＭＰ−Ｄｅｒ  ｐ  １−Ｄｅｒ  ｐ  ２プラスミドとＬＡＭＰ−Ｄｅｒ  ｐ  ２３−Ｄｅｒ  ｐ  ７プラスミドの混合物（Ｄｅｒ  ｐ１−ｐ２  ＋  Ｄｅｒ  ｐ２３−ｐ７）、並びに、ＬＡＭＰ−Ｄｅｒ  ｐ  １プラスミド、ＬＡＭＰ−Ｄｅｒ  ｐ  ２プラスミド、ＬＡＭＰ−Ｄｅｒ  ｐ  ７プラスミド、及び、ＬＡＭＰ−Ｄｅｒ  ｐ  ２３プラスミドの混合物（４  ｐｌａｓｍｉｄ  ｍｉｘ）をマウスに投与しても、Ｄｅｒ  ｐ  １特異的ＩｇＧ２ａの産生は検出されなかった。また、ＬＡＭＰ−Ｄｅｒ  ｐ  １−Ｄｅｒ  ｐ  ２プラスミドとＬＡＭＰ−Ｄｅｒ  ｐ  ２３−Ｄｅｒ  ｐ  ７プラスミドの混合物（Ｄｅｒ  ｐ１−ｐ２  ＋  Ｄｅｒ  ｐ２３−ｐ７）のマウスへの投与では、Ｄｅｒ  ｐ  ２特異的ＩｇＧ２ａも産生が検出されなかった。すなわちプラスミドにコードされた全てのアレルゲンに特異的なＩｇＧ２ａの産生が検出されたのはＬＡＭＰ−Ｄｅｒ  ｐ  １−Ｄｅｒ  ｐ  ２−Ｄｅｒ  ｐ  ２３−Ｄｅｒ  ｐ  ７プラスミドだけであった。以上の結果により、試験したプラスミドのうち、ＬＡＭＰ−Ｄｅｒ  ｐ  １−Ｄｅｒ  ｐ  ２−Ｄｅｒ  ｐ  ２３−Ｄｅｒ  ｐ  ７プラスミドのみが、プラスミドにコードされた全てのアレルゲンについてＴｈ１免疫応答を誘導し、活性化されたＢ細胞のＩｇＧ２ａアイソタイプへのクラススイッチを起こすことが示唆された。【０１０３】
［実施例４：ＬＡＭＰ−Ｄｅｒ  ｐ  １−Ｄｅｒ  ｐ  ２−Ｄｅｒ  ｐ  ２３−Ｄｅｒ  ｐ  ７プラスミドによるＩＦＮ−γ及びＩＬ−４の産生誘導］
ＬＡＭＰ−Ｄｅｒ  ｐ  １−Ｄｅｒ  ｐ  ２−Ｄｅｒ  ｐ  ２３−Ｄｅｒ  ｐ  ７プラスミドを投与したマウスから採取した脾細胞を、アレルゲンで刺激した際のサイトカイン産生誘導の評価を行った。６３日目に、実施例３で使用したマウス、及び、実施例３と同様のプロトコールでコントロールプラスミド（以下の塩基配列を順番に含む塩基配列を含む核酸を含む発現ベクター：ＬＡＭＰ−１のＮ末端をコードする塩基配列、及び、ＬＡＭＰ−１のＣ末端をコードする塩基配列）を投与したマウスから、一般的な方法に従い脾細胞を調製した。なお、コントロールプラスミドは、日本国特許第５８０７９９４号の配列番号６に記載のプラスミドのＥｃｏ  ＲＩ−Ｘｈｏ  Ｉサイトを削除することで作製することができる。脾細胞を、１０％ウシ胎児血清（Ｈｙｃｌｏｎｅ社、Ｃａｔ．ＳＨ３００７０．０３）及び１００倍希釈のペニシリン−ストレプトマイシン（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｆｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ社、Ｃａｔ．１５０７００６３）を含むＲＰＭＩ−１６４０培地（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ社、Ｃａｔ．Ｒ８７５８）にて、８×１０5細胞／ウェルになるように９６ウェルプレート（ＩＷＡＫＩ社、Ｃａｔ．３８６０−０９６）に播種した。Ｄｅｒ  ｐ  １（Ｉｎｄｏｏｒ  ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ社、ＮＡ−ＤＰ１−１、ｌｏｔ：  ３８０５２）、Ｄｅｒ  ｐ  ２（Ｉｎｄｏｏｒ  ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ社、ＮＡ−ＤＰ２−１、ｌｏｔ：  ３６１１８）、Ｄｅｒ  ｐ  ７（Ｉｎｄｏｏｒ  ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ社、ＲＰ−ＤＰ７−１、ｌｏｔ：  ３４０３３）及びＤｅｒ  ｐ  ２３（Ｓｙｓｍｅｘ社、ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ：Ａ０Ａ０Ｋ２ＤＱＵ８）を最終濃度がそれぞれ３、３、３及び１．３μｇ／ｍＬになるように添加した。３７℃、５％ＣＯ2下で７２時間培養を行った。培養上清中のＩＦＮ−γ及びＩＬ−４の濃度をＥＬＩＳＡ法により測定した。ＩＦＮ−γの測定には０．１％  ＢＳＡ及び０．０５％  Ｔｗｅｅｎ  ２０を含有するＴＢＳで１０倍希釈した上清サンプルを用い、ＩＬ−４の測定には上清原液サンプルを用いた。ＥＬＩＳＡ測定のテストプレートとしては、Ｆ９６  ＭＡＸＩＳＯＲＰ  ＮＵＮＣ−ＩＭＭＵＮＯ  ＰＬＡＴＥ（Ｎｕｎｃ社、Ｃａｔ．４３９４５４）を用いた。マウスＩＦＮ−γ  ＤｕｏＳｅｔ  ＥＬＩＳＡ（Ｒ＆Ｄシステムズ社、Ｃａｔ．ＤＹ４８５）及びマウスＩＬ−４  ＤｕｏＳｅｔ  ＥＬＩＳＡ（Ｒ＆Ｄシステムズ社、Ｃａｔ．ＤＹ４０４）を用いて添付プロトコールに準拠して行った。上記試験の結果、５０μｇのＬＡＭＰ−Ｄｅｒ  ｐ  １−Ｄｅｒ  ｐ  ２−Ｄｅｒ  ｐ  ２３−Ｄｅｒ  ｐ  ７プラスミド（Ｄｅｒ  ｐ１−ｐ２−ｐ２３−ｐ７）をマウスに３回投与することで、ダニ由来アレルゲン特異的なＩＦＮ−γ産生が誘導された（図２）。またＬＡＭＰ−Ｄｅｒ  ｐ  ２３−Ｄｅｒ  ｐ  ７−Ｄｅｒ  ｐ  ２−Ｄｅｒ  ｐ  １プラスミド（Ｄｅｒ  ｐ２３−ｐ７−ｐ２−ｐ１）、ＬＡＭＰ−Ｄｅｒ  ｐ  １−Ｄｅｒ  ｐ  ２プラスミドとＬＡＭＰ−Ｄｅｒ  ｐ  ２３−Ｄｅｒ  ｐ  ７プラスミドの混合物（Ｄｅｒ  ｐ１−ｐ２  ＋  Ｄｅｒ  ｐ２３−ｐ７）、並びに、ＬＡＭＰ−Ｄｅｒ  ｐ  １プラスミド、ＬＡＭＰ−Ｄｅｒ  ｐ  ２プラスミド、ＬＡＭＰ−Ｄｅｒ  ｐ  ７��ラスミド、及び、ＬＡＭＰ−Ｄｅｒ  ｐ  ２３プラスミドの混合物（４  ｐｌａｓｍｉｄ  ｍｉｘ）をマウスに３回投与した場合でも、同等のダニ由来アレルゲン特異的なＩＦＮ−γ産生が誘導された。一方、５０μｇのＬＡＭＰ−Ｄｅｒ  ｐ  １−Ｄｅｒ  ｐ  ２−Ｄｅｒ  ｐ  ２３−Ｄｅｒ  ｐ  ７プラスミド（Ｄｅｒ  ｐ１−ｐ２−ｐ２３−ｐ７）を３回投与したマウスでは、ダニ由来アレルゲン特異的なＩＬ−４産生は定量下限値であった（図３）。ＬＡＭＰ−Ｄｅｒ  ｐ  ２３−Ｄｅｒ  ｐ  ７−Ｄｅｒ  ｐ  ２−Ｄｅｒ  ｐ  １プラスミド（Ｄｅｒ  ｐ２３−ｐ７−ｐ２−ｐ１）、ＬＡＭＰ−Ｄｅｒ  ｐ  １−Ｄｅｒ  ｐ  ２プラスミドとＬＡＭＰ−Ｄｅｒ  ｐ  ２３−Ｄｅｒ  ｐ  ７プラスミド（Ｄｅｒ  ｐ１−ｐ２  ＋  Ｄｅｒ  ｐ２３−ｐ７）の混合物、並びに、ＬＡＭＰ−Ｄｅｒ  ｐ  １プラスミド、ＬＡＭＰ−Ｄｅｒ  ｐ  ２プラスミド、ＬＡＭＰ−Ｄｅｒ  ｐ  ７プラスミド、及び、ＬＡＭＰ−Ｄｅｒ  ｐ  ２３プラスミドの混合物（４  ｐｌａｓｍｉｄ  ｍｉｘ）をマウスに３回投与した場合でもダニ由来アレルゲン特異的なＩＬ−４産生は定量下限値以下であった。【０１０４】
上記試験の結果、ＬＡＭＰ−Ｄｅｒ  ｐ  １−Ｄｅｒ  ｐ  ２−Ｄｅｒ  ｐ  ２３−Ｄｅｒ  ｐ  ７プラスミド、ＬＡＭＰ−Ｄｅｒ  ｐ  ２３−Ｄｅｒ  ｐ  ７−Ｄｅｒ  ｐ  ２−Ｄｅｒ  ｐ  １プラスミド、ＬＡＭＰ−Ｄｅｒ  ｐ  １−Ｄｅｒ  ｐ  ２プラスミドとＬＡＭＰ−Ｄｅｒ  ｐ  ２３−Ｄｅｒ  ｐ  ７プラスミドの混合物、並びに、ＬＡＭＰ−Ｄｅｒ  ｐ  １プラスミド、ＬＡＭＰ−Ｄｅｒ  ｐ  ２プラスミド、ＬＡＭＰ−Ｄｅｒ  ｐ  ７プラスミド、及び、ＬＡＭＰ−Ｄｅｒ  ｐ  ２３プラスミドの混合物は、Ｔｈ１細胞優位の免疫応答を誘導することが示された。
【産業上の利用可能性】
【０１０５】
本発明の核酸は、ダニアレルギーの予防又は治療に有用であることが期待される。また、本発明の核酸を生産する方法は、前記核酸を生産するのに有用である。
【配列表フリーテキスト】
【０１０６】
以下の配列表の数字見出し＜２２３＞には、「Ａｒｔｉｆｉｃｉａｌ  Ｓｅｑｕｅｎｃｅ」の説明を記載する。具体的には、配列表の配列番号１で示される塩基配列は、ＬＡＭＰ−Ｄｅｒ  ｐ  １−Ｄｅｒ  ｐ  ２−Ｄｅｒ  ｐ  ２３−Ｄｅｒ  ｐ  ７キメラタンパク質をコードする塩基配列であり、配列表の配列番号２で示されるアミノ酸配列は、配列番号１によりコードされるアミノ酸配列である。また、配列番号３で示される塩基配列は、ＬＡＭＰ−Ｄｅｒ  ｐ  １−Ｄｅｒ  ｐ  ２−Ｄｅｒ  ｐ  ２３−Ｄｅｒ  ｐ  ７プラスミドの塩基配列である。
【図１】
2019216394.tif 000002
【図２】
2019216394.tif 000003
【図３】
2019216394.tif 000004
【配列表】
2019216394000001.app
【手続補正書】
【提出日】令和1年8月6日(2019.8.6)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
（削除）
【請求項２】
キメラタンパク質をコードする塩基配列を含む核酸であって、該塩基配列は、以下の塩基配列を順番に含む塩基配列である、核酸：
シグナルペプチドをコードする塩基配列、
ＬＡＭＰの細胞小器官内安定化ドメインをコードする塩基配列、
Ｄｅｒ  ｐ  １、Ｄｅｒ  ｐ  ２、Ｄｅｒ  ｐ  ２３及びＤｅｒ  ｐ  ７を順番に含むアレルゲンドメインをコードする塩基配列、
膜貫通ドメインをコードする塩基配列、並びに、
ＬＡＭＰのエンドソーム／リソソーム標的ドメインをコードする塩基配列。
【請求項３】
シグナルペプチドがＬＡＭＰのシグナルペプチドである、請求項２に記載の核酸。
【請求項４】
膜貫通ドメインがＬＡＭＰの膜貫通ドメインである、請求項２又は３のいずれかに記載の核酸。
【請求項５】
シグナルペプチドが配列番号２のアミノ酸番号１から２７までのアミノ酸配列からなり、細胞小器官内安定化ドメインが配列番号２のアミノ酸番号２８から３８０までのアミノ酸配列からなり、アレルゲンドメインが、配列番号２のアミノ酸番号３８３から５９４までのアミノ酸配列からなるＤｅｒ  ｐ  １、配列番号２のアミノ酸番号５９９から７２７までのアミノ酸配列からなるＤｅｒ  ｐ  ２、配列番号２のアミノ酸番号７３２から８００までのアミノ酸配列からなるＤｅｒ  ｐ  ２３及び配列番号２のアミノ酸番号８０５から１００２までのアミノ酸配列からなるＤｅｒ  ｐ  ７を含むアレルゲンドメインであり、膜貫通ドメインが配列番号２のアミノ酸番号１００６から１０２８までのアミノ酸配列からなり、エンドソーム／リソソーム標的ドメインが配列番号２のアミノ酸番号１０３７から１０４０までのアミノ酸配列からなる、請求項２〜４のいずれかに記載の核酸。
【請求項６】
配列番号２に示されるアミノ酸配列との同一性が９０％以上であるアミノ酸配列からなるキメラタンパク質をコードする塩基配列を含む核酸であって、
該核酸は、Ｄｅｒ  ｐ  １、Ｄｅｒ  ｐ  ２、Ｄｅｒ  ｐ  ２３及びＤｅｒ  ｐ  ７からなる群から選ばれるアレルゲンに対するＴｈ１型免疫を誘導する作用を有する、核酸。
【請求項７】
ａ）配列番号２に示されるアミノ酸配列からなるキメラタンパク質をコードする塩基配列を含む核酸、又は、
ｂ）配列番号２に示されるアミノ酸配列において１〜１０個のアミノ酸が欠失、置換、挿入、及び／若しくは付加されたアミノ酸配列からなるキメラタンパク質をコードする塩基配列を含む核酸であって、該核酸は、Ｄｅｒ  ｐ  １、Ｄｅｒ  ｐ  ２、Ｄｅｒ  ｐ  ２３及びＤｅｒ  ｐ  ７からなる群から選ばれるアレルゲンに対するＴｈ１型免疫を誘導する作用を有する、核酸。
【請求項８】
配列番号２に示されるアミノ酸配列からなるキメラタンパク質をコードする塩基配列を含む核酸。
【請求項９】
請求項２〜８のいずれかに記載の核酸を含む発現ベクター。
【請求項１０】
請求項８に記載の核酸を含む発現ベクター。
【請求項１１】
請求項２〜８のいずれかに記載の核酸で形質転換された宿主細胞。
【請求項１２】
請求項２〜８のいずれかに記載の核酸で形質転換された宿主細胞を培養する工程を含む、核酸を生産する方法。
【請求項１３】
請求項１０に記載の発現ベクター及び薬学的に許容される賦形剤を含む、医薬組成物。
【請求項１４】
ダニアレルギーの予防又は治療用医薬組成物である、請求項１３に記載の医薬組成物。
【請求項１５】
請求項１０に記載の発現ベクターの予防有効量又は治療有効量を投与する工程を包含する、ダニアレルギーを予防又は治療する方法。
【請求項１６】
ダニアレルギーの予防又は治療に使用するための、請求項１０に記載の発現ベクター。
【請求項１７】
ダニアレルギーの予防又は治療用医薬組成物の製造における、請求項１０に記載の発現ベクターの使用。
【国際調査報告】
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