(57)【要約】  ＩｇＡ腎症の発症の可能性を判定するための、より精度の高い方法を提供する。本発明の一態様に係る、被験体におけるＩｇＡ腎症の発症の可能性の判定方法は、上記被験体から採取されたサンプル中における、ＡＣＡ、ＭＡＨ、ＡＢＡ、ＳＴＬ、ＬＥＬ、ＷＧＡ、ＭＰＡ、Ｊａｃａｌｉｎ、ＭＡＬ＿Ｉ、ＰＮＡ、ＡＣＧ、ＧＳＬ＿Ｉ＿Ａ４、ＣｏｎＡ、ＳＳＡ、ＡＯＬおよびＧＳＬ＿ＩＩからなる群より選択される少なくとも１つのレクチンに結合する糖鎖のレベルを決定する工程を含む。【特許請求の範囲】
【請求項１】
被験体におけるＩｇＡ腎症の発症の可能性の判定方法であって、
上記被験体から採取されたサンプル中における、ＡＣＡ、ＭＡＨ、ＡＢＡ、ＳＴＬ、ＬＥＬ、ＷＧＡ、ＭＰＡ、Ｊａｃａｌｉｎ、ＭＡＬ＿Ｉ、ＰＮＡ、ＡＣＧ、ＧＳＬ＿Ｉ＿Ａ４、ＣｏｎＡ、ＳＳＡ、ＡＯＬおよびＧＳＬ＿ＩＩからなる群より選択される少なくとも１つのレクチンに結合する糖鎖のレベルを決定する工程を含む、方法。
【請求項２】
被験体におけるＩｇＡ腎症の発症の可能性の判定方法であって、
上記被験体から採取された第１のサンプル中における、ＡＣＡ、ＭＡＨ、ＡＢＡ、ＭＰＡ、Ｊａｃａｌｉｎ、ＬＥＬ、ＡＣＧ、ＳＴＬ、ＧＳＬ＿Ｉ＿Ａ４、ＷＧＡ、ＳＳＡ、ＰＮＡ、ＣｏｎＡ、Ｃａｌｓｅｐａ、ＡＯＬ、ＳＮＡ、ＵＤＡ、ＬＣＡ、ＧＳＬ＿ＩＩ、ＵＥＡ＿Ｉ、ＬＴＬ、ＭＡＬ＿Ｉ、ＴＪＡ＿Ｉ、ＥＣＡ、ＰＷＭ、ＰＳＡ、ＡＡＬ、ＤＳＡ、ＢＰＬ、ＴＪＡ＿ＩＩ、ＮＰＡ、ＰＨＡ＿Ｅ、ＲＣＡ１２０、ＥＥＬ、ＳＢＡ、ＨＰＡ、ＧＮＡ、ＨＨＬ、ＰＴＬ＿Ｉ、ＴｘＬＣ＿Ｉ、ＰＨＡ＿Ｌ、ＧＳＬ＿Ｉ＿Ｂ４、ＤＢＡ、ＷＦＡおよびＶＶＡからなる群より選択される少なくとも１つのレクチンに結合する糖鎖のレベルを決定する工程と、
上記被験体から採取された第２のサンプル中における、上記糖鎖のレベル以外のバイオマーカーを測定する工程と、
を含む、方法。
【請求項３】
原発性糸球体疾患に罹患している被験体、または原発性糸球体疾患への罹患が疑われる被験体における、ＩｇＡ腎症の発症の可能性の判定方法であって、
上記被験体から採取されたサンプル中における、ＡＣＡ、ＭＡＨ、ＡＢＡ、ＭＰＡ、Ｊａｃａｌｉｎ、ＬＥＬ、ＡＣＧ、ＳＴＬ、ＧＳＬ＿Ｉ＿Ａ４、ＷＧＡ、ＳＳＡ、ＰＮＡ、ＣｏｎＡ、Ｃａｌｓｅｐａ、ＡＯＬ、ＳＮＡ、ＵＤＡ、ＬＣＡ、ＧＳＬ＿ＩＩ、ＵＥＡ＿Ｉ、ＬＴＬ、ＭＡＬ＿Ｉ、ＴＪＡ＿Ｉ、ＥＣＡ、ＰＷＭ、ＰＳＡ、ＡＡＬ、ＤＳＡ、ＢＰＬ、ＴＪＡ＿ＩＩ、ＮＰＡ、ＰＨＡ＿Ｅ、ＲＣＡ１２０、ＳＢＡ、ＧＮＡ、ＨＨＬ、ＰＴＬ＿Ｉ、ＴｘＬＣ＿Ｉ、ＰＨＡ＿Ｌ、ＤＢＡ、ＷＦＡおよびＶＶＡからなる群より選択される少なくとも１つのレクチンに結合する糖鎖のレベルを決定する工程を含む、方法。
【請求項４】
原発性糸球体疾患に罹患している被験体、または原発性糸球体疾患への罹患が疑われる被験体における、ＩｇＡ腎症の発症の可能性の判定方法であって、
上記被験体から採取された第１のサンプル中における、ＡＣＡ、ＭＡＨ、ＡＢＡ、ＭＰＡ、Ｊａｃａｌｉｎ、ＬＥＬ、ＡＣＧ、ＳＴＬ、ＧＳＬ＿Ｉ＿Ａ４、ＷＧＡ、ＳＳＡ、ＰＮＡ、ＣｏｎＡ、Ｃａｌｓｅｐａ、ＡＯＬ、ＳＮＡ、ＵＤＡ、ＬＣＡ、ＧＳＬ＿ＩＩ、ＵＥＡ＿Ｉ、ＬＴＬ、ＭＡＬ＿Ｉ、ＴＪＡ＿Ｉ、ＥＣＡ、ＰＷＭ、ＰＳＡ、ＡＡＬ、ＤＳＡ、ＢＰＬ、ＴＪＡ＿ＩＩ、ＮＰＡ、ＰＨＡ＿Ｅ、ＲＣＡ１２０、ＥＥＬ、ＳＢＡ、ＨＰＡ、ＧＮＡ、ＨＨＬ、ＰＴＬ＿Ｉ、ＴｘＬＣ＿Ｉ、ＰＨＡ＿Ｌ、ＧＳＬ＿Ｉ＿Ｂ４、ＤＢＡ、ＷＦＡおよびＶＶＡからなる群より選択される少なくとも１つのレクチンに結合する糖鎖のレベルを決定する工程と、
上記被験体から採取された第２のサンプル中における、上記糖鎖のレベル以外のバイオマーカーを測定する工程と、
を含む、方法。
【請求項５】
（i）被験体におけるＩｇＡ腎症の発症の可能性の判定方法、または、（ii）原発性糸球体疾患に罹患している被験体、もしくは原発性糸球体疾患への罹患が疑われる被験体における、ＩｇＡ腎症の発症の可能性の判定方法であって、
上記被験体から採取されたサンプル中における、下記からなる群より選択される１種類以上の糖鎖のレベルを決定する工程を含む、方法：
（Ｇａｌβ１−４ＧｌｃＮＡｃ）ｎ、
（ＧｌｃＮＡｃβ１−４）ｎ、
（ＧｌｃＮＡｃβ４ＭｕｒＮＡｃ）ｎ、
Agalactosylated tri/tetra antennary glycans、
Ｆｕｃα１−２Ｇａｌβ１−４ＧｌｃＮＡｃ、
Ｆｕｃα１−６ＧｌｃＮＡｃ、
ＧａｌＮＡｃ、
Ｇａｌβ１−３ＧａｌＮＡｃ、
ＧｌｃＮＡｃ、
High-Man including Ｍａｎα１−６（Ｍａｎα１−３）Ｍａｎ、
Ｓｉａα２−３Ｇａｌβ１−３（Ｓｉａα２−６）ＧａｌＮＡｃ、
Ｓｉａα２−３Ｇａｌβ１−４ＧｌｃＮＡｃ、
Ｓｉａα２−６Ｇａｌ／ＧａｌＮＡｃ、および
α−ＧａｌＮＡｃ。
【請求項６】
上記糖鎖のレベル以外のバイオマーカーは、尿潜血、尿蛋白、血清ＩｇＡおよび血清ＩｇＡ／Ｃ３比から選択される１種類以上である、請求項２または４に記載の方法。
【請求項７】
上記糖鎖のレベルを決定する工程で用いるサンプルは、尿サンプルである、請求項１〜６のいずれか１項に記載の方法。
【請求項８】
（i）被験体におけるＩｇＡ腎症の発症の可能性を判定するためのキット、または、（ii）原発性糸球体疾患に罹患している被験体、もしくは原発性糸球体疾患への罹患が疑われる被験体における、ＩｇＡ腎症の発症の可能性を判定するためのキットであって、
下記Ａ〜Ｃの各群から、それぞれ１種類以上選択されるレクチンを備えており、
それ以外の種類のレクチンを備えていない、キット：
Ａ群：ＡＣＡ、ＭＡＨおよびＡＢＡ
Ｂ群：ＧＳＬ＿Ｉ＿Ａ４
Ｃ群：ＧＳＬ＿ＩＩ、ＭＡＬ＿Ｉ、ＡＯＬ、ＰＮＡ、ＳＮＡおよびＨＰＡ。
【請求項９】
（i）被験体におけるＩｇＡ腎症の発症の可能性を判定するためのキット、または、（ii）原発性糸球体疾患に罹患している被験体、もしくは原発性糸球体疾患への罹患が疑われる被験体における、ＩｇＡ腎症の発症の可能性を判定するためのキットであって、
下記ａ〜ｃの各群から、それぞれ１種類以上選択される糖鎖に結合するレクチンを備えており、
それ以外の種類のレクチンを備えていない、キット：
ａ群：Ｇａｌβ１−３ＧａｌＮＡｃおよびＳｉａα２−３Ｇａｌβ１−３（Ｓｉａα２−６）ＧａｌＮＡｃ
ｂ群：α−ＧａｌＮＡｃ
ｃ群：Agalactosylated tri/tetra antennary glycans、Ｆｕｃα１−２Ｇａｌβ１−４ＧｌｃＮＡｃ、Ｆｕｃα１−６ＧｌｃＮＡｃ、ＧｌｃＮａｃ、Ｇａｌβ１−３ＧａｌＮＡｃ、Ｓｉａα２−３Ｇａｌβ１−４ＧｌｃＮＡｃ、Ｓｉａα２−６Ｇａｌ／ＧａｌＮＡｃおよびα−ＧａｌＮＡｃ。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、ＩｇＡ腎症の発症の可能性の判定方法、およびＩｇＡ腎症の発症の可能性を判定するためのキットに関する。
【背景技術】
【０００２】
現在、慢性腎臓病（ＣＫＤ）の患者数は１，３３０万人に達している。この数は、日本国の成人人口の８人に１人がＣＫＤを患っていることを意味しており、国民病と言っても過言でない。ＣＫＤには様々な疾患が含まれており、その一種である慢性糸球体腎炎には、６，４６６人の患者があり、ＣＫＤの１７．８％を占めている。そして、慢性糸球体腎炎のなかでも最も患者数の多い疾患が、ＩｇＡ腎症である。【０００３】
これらの腎疾患は疾患に応じて治療法が確立されているので、患者がどの腎疾患に罹患しているかを鑑別する診断方法が重要となっている。つまり、（i）不特定の人間集団から、ＩｇＡ腎症患者を特定する診断方法と、（ii）慢性糸球体腎炎患者の集団から、ＩｇＡ腎症患者を特定する診断方法と、が重要である。一般的には、これらの腎疾患は腎生検によって診断が確定される。しかし、腎生検のリスクが高い症例では、腎生検を行わず、臨床情報のみに基づいて診断せねばならない場合がある。また、腎生検は侵襲的検査であるため、（i）尿所見が軽微であり、腎疾患の可能性が見逃されている場合や、（ii）身体へのリスクから、腎生検が行われていない場合などでは、腎疾患に関する診断自体が行われていない場合もある。【０００４】
このような背景の下、腎生検によらないＩｇＡ腎症の診断方法が検討および報告されている。例えば、非特許文献１は、ＩｇＡ腎症の診断方法として、ガラクトース欠損型異常ＩｇＡ１に結合するモノクローナル抗体を用いたＥＬＩＳＡが、従来のhelix aspersa agglutinin（ＨＡＡ）というレクチンを用いたアッセイよりも、ロバスト性に優れていることを報告している。また、非特許文献２は、４種類の臨床因子（血尿、蛋白尿、血清ＩｇＡ値および血清ＩｇＡ／Ｃ３比）を組み合わせたＩｇＡ腎症の診断方法を検討し報告している。【０００５】
さらに、本発明に関連する可能性がある文献として、特許文献１〜４が挙げられる。以下、それぞれの文献と本発明との相違点について略述する。【０００６】
特許文献１は、糖尿病、糖尿病性早期腎症および糖尿病性腎症を診断する技術を開示している。特許文献２は、タンパク質と糖鎖との相互作用を分析する技術を開示しており、特定の疾患の診断には言及していない。特許文献３は、糖尿病性腎症の進行度を診断する技術を開示している。特許文献４は、将来の腎機能の低下の可能性を判定する技術を開示している。これらの文献に開示された技術は、少なくともＩｇＡ腎症の診断方法ではない点で、本発明とは異なっている。すなわち、特許文献１〜３は、ＩｇＡ腎症について開示しておらず、特許文献４は「検査を行った時点における診断」を開示していない（文献４に開示されている技術は将来的な腎予後を予測するものであって、現在的な診断を行うものではない）。【０００７】
また、特許文献１〜４のいずれも、本明細書に開示されているキット（特定のレクチンを組み合わせたキット）を開示していない。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００８】
【特許文献１】日本国公開特許公報「特開平１０−３３２６９０号公報」
【特許文献２】国際公開第２００５／０６４３３３号パンフレット
【特許文献３】日本国公開特許公報「特開２０１０−２５６１３２号公報」
【特許文献４】国際公開第２０１８／１８１２９２号パンフレット
【非特許文献】
【０００９】
【非特許文献１】Yasutake J, Suzuki Y, Suzuki H, et al. Novel lectin-independent approach to detect galactose-deficient IgA1 in IgA nephropathy. Nephrol Dial Transplant. 2015;30:1315-1321.
【非特許文献２】Nakayama K, Ohsawa I, Maeda-Ohtani A, et al. Prediction of diagnosis of immunoglobulin A nephropathy prior to renal biopsy and correlation with urinary sediment findings and prognostic grading. J Clin Lab Anal. 2008;22(2):114-118.
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１０】
しかしながら、上述の先行技術では、ＩｇＡ腎症の診断精度に改善の余地があった。すなわち、非特許文献１に記載の診断方法は、実際のＩｇＡ腎症の診断精度について検討されておらず、その有用性は不明であった。また、非特許文献２に記載の診断方法では感度や特異度の点で充分とは言えず、この診断方法の妥当性を検証した報告も存在しなかった。【００１１】
本発明の一態様は、ＩｇＡ腎症の発症の可能性を判定するための、より精度の高い方法を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【００１２】
本発明には、以下の構成が包含されている。【００１３】
＜１＞
被験体におけるＩｇＡ腎症の発症の可能性の判定方法であって、
上記被験体から採取されたサンプル中における、ＡＣＡ、ＭＡＨ、ＡＢＡ、ＳＴＬ、ＬＥＬ、ＷＧＡ、ＭＰＡ、Ｊａｃａｌｉｎ、ＭＡＬ＿Ｉ、ＰＮＡ、ＡＣＧ、ＧＳＬ＿Ｉ＿Ａ４、ＣｏｎＡ、ＳＳＡ、ＡＯＬおよびＧＳＬ＿ＩＩからなる群より選択される少なくとも１つのレクチンに結合する糖鎖のレベルを決定する工程を含む、方法。【００１４】
＜２＞
被験体におけるＩｇＡ腎症の発症の可能性の判定方法であって、
上記被験体から採取された第１のサンプル中における、ＡＣＡ、ＭＡＨ、ＡＢＡ、ＭＰＡ、Ｊａｃａｌｉｎ、ＬＥＬ、ＡＣＧ、ＳＴＬ、ＧＳＬ＿Ｉ＿Ａ４、ＷＧＡ、ＳＳＡ、ＰＮＡ、ＣｏｎＡ、Ｃａｌｓｅｐａ、ＡＯＬ、ＳＮＡ、ＵＤＡ、ＬＣＡ、ＧＳＬ＿ＩＩ、ＵＥＡ＿Ｉ、ＬＴＬ、ＭＡＬ＿Ｉ、ＴＪＡ＿Ｉ、ＥＣＡ、ＰＷＭ、ＰＳＡ、ＡＡＬ、ＤＳＡ、ＢＰＬ、ＴＪＡ＿ＩＩ、ＮＰＡ、ＰＨＡ＿Ｅ、ＲＣＡ１２０、ＥＥＬ、ＳＢＡ、ＨＰＡ、ＧＮＡ、ＨＨＬ、ＰＴＬ＿Ｉ、ＴｘＬＣ＿Ｉ、ＰＨＡ＿Ｌ、ＧＳＬ＿Ｉ＿Ｂ４、ＤＢＡ、ＷＦＡおよびＶＶＡからなる群より選択される少なくとも１つのレクチンに結合する糖鎖のレベルを決定する工程と、
上記被験体から採取された第２のサンプル中における、上記糖鎖のレベル以外のバイオマーカーを測定する工程と、
を含む、方法。【００１５】
＜３＞
原発性糸球体疾患に罹患している被験体、または原発性糸球体疾患への罹患が疑われる被験体における、ＩｇＡ腎症の発症の可能性の判定方法であって、
上記被験体から採取されたサンプル中における、ＡＣＡ、ＭＡＨ、ＡＢＡ、ＭＰＡ、Ｊａｃａｌｉｎ、ＬＥＬ、ＡＣＧ、ＳＴＬ、ＧＳＬ＿Ｉ＿Ａ４、ＷＧＡ、ＳＳＡ、ＰＮＡ、ＣｏｎＡ、Ｃａｌｓｅｐａ、ＡＯＬ、ＳＮＡ、ＵＤＡ、ＬＣＡ、ＧＳＬ＿ＩＩ、ＵＥＡ＿Ｉ、ＬＴＬ、ＭＡＬ＿Ｉ、ＴＪＡ＿Ｉ、ＥＣＡ、ＰＷＭ、ＰＳＡ、ＡＡＬ、ＤＳＡ、ＢＰＬ、ＴＪＡ＿ＩＩ、ＮＰＡ、ＰＨＡ＿Ｅ、ＲＣＡ１２０、ＳＢＡ、ＧＮＡ、ＨＨＬ、ＰＴＬ＿Ｉ、ＴｘＬＣ＿Ｉ、ＰＨＡ＿Ｌ、ＤＢＡ、ＷＦＡおよびＶＶＡからなる群より選択される少なくとも１つのレクチンに結合する糖鎖のレベルを決定する工程を含む、方法。【００１６】
＜４＞
原発性糸球体疾患に罹患している被験体、または原発性糸球体疾患への罹患が疑われる被験体における、ＩｇＡ腎症の発症の可能性の判定方法であって、
上記被験体から採取された第１のサンプル中における、ＡＣＡ、ＭＡＨ、ＡＢＡ、ＭＰＡ、Ｊａｃａｌｉｎ、ＬＥＬ、ＡＣＧ、ＳＴＬ、ＧＳＬ＿Ｉ＿Ａ４、ＷＧＡ、ＳＳＡ、ＰＮＡ、ＣｏｎＡ、Ｃａｌｓｅｐａ、ＡＯＬ、ＳＮＡ、ＵＤＡ、ＬＣＡ、ＧＳＬ＿ＩＩ、ＵＥＡ＿Ｉ、ＬＴＬ、ＭＡＬ＿Ｉ、ＴＪＡ＿Ｉ、ＥＣＡ、ＰＷＭ、ＰＳＡ、ＡＡＬ、ＤＳＡ、ＢＰＬ、ＴＪＡ＿ＩＩ、ＮＰＡ、ＰＨＡ＿Ｅ、ＲＣＡ１２０、ＥＥＬ、ＳＢＡ、ＨＰＡ、ＧＮＡ、ＨＨＬ、ＰＴＬ＿Ｉ、ＴｘＬＣ＿Ｉ、ＰＨＡ＿Ｌ、ＧＳＬ＿Ｉ＿Ｂ４、ＤＢＡ、ＷＦＡおよびＶＶＡからなる群より選択される少なくとも１つのレクチンに結合する糖鎖のレベルを決定する工程と、
上記被験体から採取された第２のサンプル中における、上記糖鎖のレベル以外のバイオマーカーを測定する工程と、
を含む、方法。【００１７】
＜５＞
（i）被験体におけるＩｇＡ腎症の発症の可能性の判定方法、または、（ii）原発性糸球体疾患に罹患している被験体、もしくは原発性糸球体疾患への罹患が疑われる被験体における、ＩｇＡ腎症の発症の可能性の判定方法であって、
上記被験体から採取されたサンプル中における、下記からなる群より選択される１種類以上の糖鎖のレベルを決定する工程を含む、方法：
（Ｇａｌβ１−４ＧｌｃＮＡｃ）ｎ、
（ＧｌｃＮＡｃβ１−４）ｎ、
（ＧｌｃＮＡｃβ４ＭｕｒＮＡｃ）ｎ、
Agalactosylated tri/tetra antennary glycans、
Ｆｕｃα１−２Ｇａｌβ１−４ＧｌｃＮＡｃ、
Ｆｕｃα１−６ＧｌｃＮＡｃ、
ＧａｌＮＡｃ、
Ｇａｌβ１−３ＧａｌＮＡｃ、
ＧｌｃＮＡｃ、
High-Man including Ｍａｎα１−６（Ｍａｎα１−３）Ｍａｎ、
Ｓｉａα２−３Ｇａｌβ１−３（Ｓｉａα２−６）ＧａｌＮＡｃ、
Ｓｉａα２−３Ｇａｌβ１−４ＧｌｃＮＡｃ、
Ｓｉａα２−６Ｇａｌ／ＧａｌＮＡｃ、および
α−ＧａｌＮＡｃ。【００１８】
＜６＞
上記糖鎖のレベル以外のバイオマーカーは、尿潜血、尿蛋白、血清ＩｇＡおよび血清ＩｇＡ／Ｃ３比から選択される１種類以上である、＜２＞または＜４＞に記載の方法。【００１９】
＜７＞
上記糖鎖のレベルを決定する工程で用いるサンプルは、尿サンプルである、＜１＞〜＜６＞のいずれか１つに記載の方法。【００２０】
＜８＞
（i）被験体におけるＩｇＡ腎症の発症の可能性を判定するためのキット、または、（ii）原発性糸球体疾患に罹患している被験体、もしくは原発性糸球体疾患への罹患が疑われる被験体における、ＩｇＡ腎症の発症の可能性を判定するためのキットであって、
下記Ａ〜Ｃの各群から、それぞれ１種類以上選択されるレクチンを備えており、
それ以外の種類のレクチンを備えていない、キット：
Ａ群：ＡＣＡ、ＭＡＨおよびＡＢＡ
Ｂ群：ＧＳＬ＿Ｉ＿Ａ４
Ｃ群：ＧＳＬ＿ＩＩ、ＭＡＬ＿Ｉ、ＡＯＬ、ＰＮＡ、ＳＮＡおよびＨＰＡ。【００２１】
＜９＞
（i）被験体におけるＩｇＡ腎症の発症の可能性を判定するためのキット、または、（ii）原発性糸球体疾患に罹患している被験体、もしくは原発性糸球体疾患への罹患が疑われる被験体における、ＩｇＡ腎症の発症の可能性を判定するためのキットであって、
下記ａ〜ｃの各群から、それぞれ１種類以上選択される糖鎖に結合するレクチンを備えており、
それ以外の種類のレクチンを備えていない、キット：
ａ群：Ｇａｌβ１−３ＧａｌＮＡｃおよびＳｉａα２−３Ｇａｌβ１−３（Ｓｉａα２−６）ＧａｌＮＡｃ
ｂ群：α−ＧａｌＮＡｃ
ｃ群：Agalactosylated tri/tetra antennary glycans、Ｆｕｃα１−２Ｇａｌβ１−４ＧｌｃＮＡｃ、Ｆｕｃα１−６ＧｌｃＮＡｃ、ＧｌｃＮａｃ、Ｇａｌβ１−３ＧａｌＮＡｃ、Ｓｉａα２−３Ｇａｌβ１−４ＧｌｃＮＡｃ、Ｓｉａα２−６Ｇａｌ／ＧａｌＮＡｃおよびα−ＧａｌＮＡｃ。
【発明の効果】
【００２２】
本発明の一態様によれば、ＩｇＡ腎症の発症の可能性を判定するための、より精度の高い方法が提供される。
【発明を実施するための形態】
【００２３】
以下、本発明の実施の形態の一例について詳細に説明するが、本発明は、これらに限定されない。本明細書において特記しない限り、数値範囲を表す「Ａ〜Ｂ」は、「Ａ以上、Ｂ以下」を意味する。
【００２４】
〔１．レクチンに結合する糖鎖のレベル〕
本発明の方法は、第一の側面において、被験体から採取したサンプルにおける特定のレクチンに結合する糖鎖のレベルを決定する工程を含む。
【００２５】
（レクチンに結合する糖鎖のレベルを決定する方法）
本発明者らは、ある種のレクチンを用いたアッセイ（以下、「レクチンアッセイ」と呼ぶ）の結果に基づいて（つまり、レクチンシグナルの強度に基づいて）、ＩｇＡ腎症の発症が判定できることを見出した。一般に、特定のレクチンに対しては、特定の糖鎖が特異的に結合することが知られている。それゆえ、本発明者らの発見は、「ある種のレクチンに結合する糖鎖のレベルに基づいて、ＩｇＡ腎症の発症が判定できる」と換言することができる。
【００２６】
したがって、「レクチンＸと結合する糖鎖のレベルを決定する工程」とは、「レクチンＸと結合する特定の構造を有する糖鎖のレベルを決定する工程」であれば、方法は限定されない。つまり、「レクチンＸと結合する糖鎖のレベルを決定する工程」は、レクチンアッセイには限定されない。レクチンアッセイ以外の方法としては、例えば、液体クロマトグラフィー、質量分析、ＥＬＩＳＡ、二次元電気泳動法、プロテインアレイ、ビーズアッセイ、フローサイトメトリー、バイオプレックス（登録商標）などが挙げられる。
【００２７】
ただし、レクチンアッセイによる糖鎖のレベルの決定は、サンプルの下処理が容易であるため好ましい。特に、サンプルとして尿サンプルを用いる場合は、尿サンプルの濃縮、サンプル中に多く含まれるタンパク質（アルブミン、ＩｇＧなど）の除去などの工程が不要であるため、より好ましい。
【００２８】
一実施形態において、「糖鎖のレベルを決定する」とは、サンプル中に含まれる当該糖鎖の存在量の数量化を伴うものでありうる。この具体例としては、サンプル中に含まれる糖鎖の濃度を測定することが挙げられる。
【００２９】
他の実施形態において、「糖鎖のレベルを決定する」とは、サンプル中に含まれる当該糖鎖の存在量と、所定の基準値とを比較することでありうる。この具体例としては、サンプル中に含まれる糖鎖の濃度が、所定の基準値（カットオフ値）より高いか低いかを判定することが挙げられる。このとき、所定の基準値は、医学的手法、統計学的手法などにより適宜定めることができる。また、所定の基準値として、複数の基準値を設けてもよい。
【００３０】
レクチンに結合する糖鎖のレベルの高低と、ＩｇＡ腎症の発症との関係は、例えば、統計的手法によって決定される（その一例として、本願実施例を参照）。つまり、例えば統計的手法により、「糖鎖レベルが高いことがＩｇＡ腎症の発症と関連している」のか、それとも「糖鎖レベルが低いことがＩｇＡ腎症の発症と関連している」のかを判断することができる。
【００３１】
一例において、本願実施例における糖鎖１種類モデル（モデル（１））および／または糖鎖１種類＋臨床因子モデル（モデル（２））では、検討した４５種類のレクチンに関して、当該レクチンに結合する糖鎖レベルの低値とＩｇＡ腎症の発症とが関連していた。
【００３２】
また、本願実施例における複数種類糖鎖＋臨床因子モデル（モデル３）では、ＡＣＡ、ＧＳＬ＿Ｉ＿Ａ４、ＭＡＨおよびＡＢＡに関しては、これらのレクチンに結合する糖鎖レベルの低値とＩｇＡ腎症の発症とが関連していた。これに対して、ＧＳＬ＿ＩＩ、ＭＡＬ＿Ｉ、ＰＮＡ、ＳＮＡおよびＡＯＬに関しては、これらのレクチンに結合する糖鎖レベルの高値とＩｇＡ腎症の発症とが関連していた。
【００３３】
このように、糖鎖レベルの高低とＩｇＡ腎症の発症との関係は、採用するモデルによって異なりうる。しかし当業者ならば、本明細書の記載を参照した上で通常のルーティンワークを行うことによって、各モデルにおける糖鎖レベルの高低とＩｇＡ腎症の発症との関係を決定することができる。
【００３４】
（被験体）
本明細書において、「被験体」とは、ヒトに限定されない。本発明の一実施形態に係る方法は、非ヒト哺乳動物に対しても適用することができる。非ヒト哺乳動物としては、偶蹄類（ウシ、イノシシ、ブタ、ヒツジ、ヤギなど）、奇蹄類（ウマなど）、齧歯類（マウス、ラット、ハムスター、リスなど）、ウサギ目（ウサギなど）、食肉類（イヌ、ネコ、フェレットなど）などが挙げられる。上述した非ヒト哺乳動物には、家畜またはコンパニオンアニマル（愛玩動物）に加えて、野生動物も包含される。
【００３５】
本発明は、サンプル中の糖鎖のレベルによりＩｇＡ腎症の発症を判定しようとするものである。糖鎖は、タンパク質および核酸よりも、種間における構造の相違が小さい。したがって、上述した非ヒト哺乳動物の間ならば、本発明の一実施形態に係る方法は充分に有効であると考えられる。
【００３６】
（サンプル）
本明細書において、「サンプル」とは、被験体から採取されるもの全般を意図し、具体的には特に限定されない。ここで言うサンプルには、血液、脳脊髄液、リンパ液、母乳、唾液、鼻汁、汗、尿、便、呼気などに加えて、病理標本由来の組織可溶化物、生組織可溶化物、細胞可溶化物なども包含される。
【００３７】
本発明の一実施形態においては、尿をサンプルとする。尿サンプルは、生検材料として一般的である点、腎機能に関する他の指標も同時に調査できる点、（特にヒト被験体の場合に）採取が容易である点などにおいて、好適である。
【００３８】
本発明の一実施形態においては、血液をサンプルとする。血液サンプルは、生検材料として一般的である点、腎機能に関する他の指標も同時に調査できる点、（非ヒト被験体においても）採取が容易である点などにおいて、好ましい。ここで言う「血液」には、全血に加えて、全血を構成する部分（血清、血漿、血餅など）も含まれる。
【００３９】
（レクチン）
後述する各実施形態において、名前が挙げられているレクチンについて説明すると、以下の通りである：
ＡＣＡ：Amaranthus Caudatus Agglutinin（センニンコクレクチン）
ＭＡＨ：Maackia Amurensis Hemagglutitnin（イヌエンジュレクチンＩＩ）
ＡＢＡ：Amaranthus Caudatus Agglutinin（センニンコクレクチン）
ＭＰＡ：Maclura pomifera Agglutinin（アメリカハリグワレクチン）
Ｊａｃａｌｉｎ：Jackfruit Lectin（ジャックフルーツレクチン）
ＬＥＬ：Lycopersicon Esculentum Lectin（トマトレクチン）
ＡＣＧ：Agrocybe cylindracea Galectin（ヤナギマツタケレクチン）
ＳＴＬ：Solanum tuberosum Lectin（ジャガイモレクチン）
ＧＳＬ＿Ｉ＿Ａ４：Griffonia Simplicifolia Lectin I A4（バンデリアマメレクチンＩ  Ａ４）
ＷＧＡ：Triticum Unlgaris Agglutinin（コムギレクチン）
ＳＳＡ：Sambucus sieboldiana lectin（ニホンニワトコレクチン）
ＰＮＡ：Peanut Agglutinin（ピーナッツレクチン）
ＣｏｎＡ：Canavalia ensiformis Agglutinin（ナタマメレクチン）
Ｃａｌｓｅｐａ：Calystega Sepiem Lectin（ヒロハヒルガオレクチン）
ＡＯＬ：Aspergillus Oryzae Lectin（コウジカビレクチン）
ＳＮＡ：Sambucus nigra agglutinin（セイヨウニワトコレクチン）
ＵＤＡ：Urtica dioica Agglutinin （セイヨウイラクサレクチン）
ＬＣＡ：Lens Culinaris Agglutinin（レンズマメレクチン）
ＧＳＬ＿ＩＩ：Griffonia Simplicifolia Lectin II（バンデリアマメレクチンＩＩ）
ＵＥＡ＿Ｉ：Ulex Europaeus Agglutinin I（ハリエニシダレクチンＩ）
ＬＴＬ：Lotus Tetragonolobus Lectin（ロータスレクチン）
ＭＡＬ＿Ｉ：Maackia Amurensis Lectin I（イヌエンジュレクチンＩ）
ＴＪＡ＿Ｉ：Trichosanthes japonica agglutinin I lectin（キカラスウリレクチンＩ）ＥＣＡ：Erythrina Cristagalli Agglutinin（デイコマメレクチン）
ＰＷＭ：Phytolacca americana Agglutinin（アメリカヤマゴボウレクチン）
ＰＳＡ：Pisum Sativum Agglutinin（エンドウマメレクチン）
ＡＡＬ：Aleuria Aurantia Lectin（ヒイロチャワンタケレクチン）
ＤＳＡ：Datura Stramonium Agglutinin（チョウセンアサガオレクチン）
ＢＰＬ：Bauhinia Purpurea Lectin（ムラサキモクワンジュレクチン）
ＴＪＡ＿ＩＩ：Trichosanthes aponica Agglutinin-II（キカラスウリレクチンＩＩ）
ＮＰＡ：Narcissus Pseudonarcissus Agglutinin（ラッパズイセンレクチン）
ＰＨＡ＿Ｅ：Phaseolus Vulgaris ErythroAgglutinin（インゲンマメレクチンＥ）
ＲＣＡ１２０：Ricinus Communis Agglutinin I（ヒママメレクチン）
ＥＥＬ：Euonymus europaeus Lectin（スピンドルツリーレクチン）
ＳＢＡ：Glycine Max Agglutinin（ダイズレクチン）
ＨＰＡ：Helix pomatia Agglutinin（エスカルゴレクチン）
ＧＮＡ：Galanthus Nivalis Agglutinin（ユキノハナレクチン）
ＨＨＬ：Hippeastrum Hybrid Lectin（アマリリスレクチン）
ＰＴＬ＿Ｉ：Psophocarpus Tetragonolobus Lectin-I（シカクマメレクチン）
ＴｘＬＣ＿Ｉ：Tulipa gesneriana Lectin-I（チューリップレクチン）
ＰＨＡ＿Ｌ：Phaseolus Vulgaris LeucoAgglutin（インゲンマメレクチンＬ）
ＧＳＬ＿Ｉ＿Ｂ４：Griffonia Simplicifolia Lectin I B4（バンデリアマメレクチンＩ  Ｂ４）
ＤＢＡ：Dolichos biflorus Agglutinin（ドリコスマメレクチン）
ＷＦＡ：Wisteria Floribunda Agglutinin（フジレクチン）
ＶＶＡ：Vicia villosa Lectin（ヘアリーベッチレクチン）。
【００４０】
これらのレクチンは従来公知のレクチンであり、そのアミノ酸配列情報は各種データベースより入手可能である。これらのレクチンに結合する糖鎖レベルの高低とＩｇＡ腎症の発症との関連は、（レクチンに結合する糖鎖のレベルを決定する方法）の項目にて上述した通りである。
【００４１】
なお、本発明の一実施形態に係る方法において、２種類以上の糖鎖レベルを決定する場合、当該２種類以上の糖鎖は互いに構造の異なるものであることが好ましい（このことは、後述する他の実施形態に関しても妥当する）。つまり、本発明の一実施形態に係る方法において、レクチンＸに結合する糖鎖ｘおよびレクチンＹに結合する糖鎖ｙのレベルを決定する場合は、糖鎖ｘと糖鎖ｙの構造は互いに異なっていることが好ましい。これは、診断モデルの作成に際する多重共線性の問題を回避するためである。
【００４２】
［１−１．不特定の人間集団に対する判定］
本発明の一実施形態は、被験体におけるＩｇＡ腎症の発症の可能性の判定方法であって；上記被験体から採取されたサンプル中における、ＡＣＡ、ＭＡＨ、ＡＢＡ、ＳＴＬ、ＬＥＬ、ＷＧＡ、ＭＰＡ、Ｊａｃａｌｉｎ、ＭＡＬ＿Ｉ、ＰＮＡ、ＡＣＧ、ＧＳＬ＿Ｉ＿Ａ４、ＣｏｎＡ、ＳＳＡ、ＡＯＬおよびＧＳＬ＿ＩＩからなる群より選択される少なくとも１つのレクチンに結合する糖鎖のレベルを決定する工程を含む、方法である。
【００４３】
本実施形態に係る方法は、不特定の集団に属する被験体のＩｇＡ腎症の発症の可能性を判定するものである。つまり、被験体が何らかの腎疾患に罹患しているか否かが不明である状況において、当該被験体のＩｇＡ腎症の発症の可能性を判定するものである。
【００４４】
［１−２．原発性糸球体疾患の罹患者集団に対する判定］
本発明の他の実施形態は、原発性糸球体疾患に罹患している被験体、または原発性糸球体疾患への罹患が疑われる被験体における、ＩｇＡ腎症の発症の可能性の判定方法であって；上記被験体から採取されたサンプル中における、ＡＣＡ、ＭＡＨ、ＡＢＡ、ＭＰＡ、Ｊａｃａｌｉｎ、ＬＥＬ、ＡＣＧ、ＳＴＬ、ＧＳＬ＿Ｉ＿Ａ４、ＷＧＡ、ＳＳＡ、ＰＮＡ、ＣｏｎＡ、Ｃａｌｓｅｐａ、ＡＯＬ、ＳＮＡ、ＵＤＡ、ＬＣＡ、ＧＳＬ＿ＩＩ、ＵＥＡ＿Ｉ、ＬＴＬ、ＭＡＬ＿Ｉ、ＴＪＡ＿Ｉ、ＥＣＡ、ＰＷＭ、ＰＳＡ、ＡＡＬ、ＤＳＡ、ＢＰＬ、ＴＪＡ＿ＩＩ、ＮＰＡ、ＰＨＡ＿Ｅ、ＲＣＡ１２０、ＳＢＡ、ＧＮＡ、ＨＨＬ、ＰＴＬ＿Ｉ、ＴｘＬＣ＿Ｉ、ＰＨＡ＿Ｌ、ＤＢＡ、ＷＦＡおよびＶＶＡからなる群より選択される少なくとも１つのレクチンに結合する糖鎖のレベルを決定する工程を含む、方法である。
【００４５】
本実施形態に係る方法は、原発性糸球体疾患に罹患している（または罹患が疑われる）被験体集団に属する被験体の、ＩｇＡ腎症の発症の可能性を判定するものである。つまり、被験体が原発性腎疾患に罹患していることが判明している（または罹患が疑われる）状況において、当該被験体のＩｇＡ腎症の発症の可能性を判定するものである。この方法は、［１−１］で説明した診断方法と比較すると、母集団がより限定的になっている。
【００４６】
「被験体が原発性糸球体疾患に罹患している」こと、および「被験体が原発性糸球体疾患に罹患している可能性がある」ことは、公知の医療技術により知ることができる。
【００４７】
本実施形態に係る方法は、被験体のＩｇＡ腎症の発症の可能性を判定することができれば充分である。しかし、本実施形態に係る方法によって、原発性糸球体疾患に罹患している被験体または原発性糸球体疾患への罹患が疑われる被験体がＩｇＡ腎症を発症していない（発症している可能性が低い）と判定できる場合は、当該被験体がＩｇＡ腎症以外の原発性糸球体疾患を発症している（発症している可能性が高い）と判定してもよい。
【００４８】
ここで、日本国においては、ＩｇＡ腎症は原発性糸球体疾患のカテゴリに含めるのが通例であるが、ＷＨＯ分類によると、ＩｇＡ腎症は二次性糸球体疾患のカテゴリに含められる。本明細書の説明は、日本国における分類に則り、ＩｇＡ腎症を原発性糸球体疾患の一種として扱うものとする。
【００４９】
ちなみに、ＷＨＯ分類を採用する場合は、「原発性糸球体疾患に罹患している被験体、または原発性糸球体疾患への罹患が疑われる被験体における、ＩｇＡ腎症の発症の可能性の判定方法」は、「原発性糸球体疾患もしくはＩｇＡ腎症に罹患している被験体、または原発性糸球体疾患もしくはＩｇＡ腎症への罹患が疑われる被験体における、ＩｇＡ腎症の発症の可能性の判定方法」と読み換えることができる。このように読み換えたとしても、ＩｇＡ腎症と他の原発性糸球体疾患との鑑別精度を向上させる、という本実施形態の効果に変わりはない。
【００５０】
〔２．レクチンに結合する糖鎖のレベルと他のバイオマーカーとの組み合わせ〕
本発明の方法は、第二の側面において、（i）被験体から採取した第１のサンプルにおける特定のレクチンに結合する糖鎖のレベルを決定する工程と、（ii）当該被験体から採取した第２のサンプルにおけるバイオマーカーを測定する工程と、を含む。このとき、第２のサンプルにおいて測定されるバイオマーカーは、第１のサンプルにおいてレベルが決定される、特定のレクチンに結合する糖鎖とは異なっている。
【００５１】
本実施形態の方法によれば、被験体におけるＩｇＡ腎症の発症の可能性を、より高い精度で判定することができる。特に、ＩｇＡ腎症の診断に従前用いられてきたバイオマーカーと組み合わせれば、診断精度の上乗せ効果を期待しやすい。
【００５２】
特定のレクチンに結合する糖鎖のレベルを決定する方法、被験体、サンプルおよびレクチンに関しては、〔１〕節にて説明した通りである。
【００５３】
（第２のサンプルにおけるバイオマーカーを測定する方法）
第２のサンプルにおけるバイオマーカーを測定する方法は、サンプルの種類およびバイオマーカーの種類によって、適宜設定することができる。サンプルの種類および測定方法の種類に関しては、〔１〕の記載を参照されたい。
【００５４】
第２のサンプルは、第１のサンプルと同じであってもよいし、異なっていてもよい。また、第２のサンプルから複数のバイオマーカーを測定する場合、異なるサンプルから各バイオマーカーを測定してもよい。例えば本願実施例では、第１のサンプル（尿）から糖鎖のレベルを測定し、第２のサンプル（血清および尿）からは血清ＩｇＡ、尿潜血および尿蛋白を測定している。
【００５５】
また、第２のサンプルから測定されるバイオマーカーは、糖鎖であってもよい。すなわち、第１のサンプルにおいて特定のレクチンに結合する糖鎖Ａのレベルを決定し、第２のサンプルにおいて糖鎖Ａとは異なる糖鎖Ｂのレベルを決定する態様も、本実施形態に含まれる。
【００５６】
第２のサンプルから測定されるバイオマーカーの例としては、年齢、性別、ＢＭＩ、平均動脈圧、ＨｂＡ１ｃ、推定糸球体濾過量（ｅＧＦＲ：estimated glomerular filtration rate）、尿蛋白量、尿潜血、血清ＩｇＡ、補体Ｃ３、血清ＩｇＡ／Ｃ３比などが挙げられる。この中でも、尿蛋白量、尿潜血、血清ＩｇＡおよび血清ＩｇＡ／Ｃ３比は、ＩｇＡ腎症の発症を表すバイオマーカーと見做されており（非特許文献２を参照）、糖鎖レベルとの組み合わせによる上乗せ効果が期待しやすい。
【００５７】
［２−１．一般集団に対する判定］
本発明の一実施形態は、被験体におけるＩｇＡ腎症の発症の可能性の判定方法であって；上記被験体から採取された第１のサンプル中における、ＡＣＡ、ＭＡＨ、ＡＢＡ、ＭＰＡ、Ｊａｃａｌｉｎ、ＬＥＬ、ＡＣＧ、ＳＴＬ、ＧＳＬ＿Ｉ＿Ａ４、ＷＧＡ、ＳＳＡ、ＰＮＡ、ＣｏｎＡ、Ｃａｌｓｅｐａ、ＡＯＬ、ＳＮＡ、ＵＤＡ、ＬＣＡ、ＧＳＬ＿ＩＩ、ＵＥＡ＿Ｉ、ＬＴＬ、ＭＡＬ＿Ｉ、ＴＪＡ＿Ｉ、ＥＣＡ、ＰＷＭ、ＰＳＡ、ＡＡＬ、ＤＳＡ、ＢＰＬ、ＴＪＡ＿ＩＩ、ＮＰＡ、ＰＨＡ＿Ｅ、ＲＣＡ１２０、ＥＥＬ、ＳＢＡ、ＨＰＡ、ＧＮＡ、ＨＨＬ、ＰＴＬ＿Ｉ、ＴｘＬＣ＿Ｉ、ＰＨＡ＿Ｌ、ＧＳＬ＿Ｉ＿Ｂ４、ＤＢＡ、ＷＦＡおよびＶＶＡからなる群より選択される少なくとも１つのレクチンに結合する糖鎖のレベルを決定する工程と；上記被験体から採取された第２のサンプル中における、上記糖鎖のレベル以外のバイオマーカーを測定する工程と；を含む、方法である。
【００５８】
本実施形態に係る方法は、［１−１］節で説明した方法と同様に、不特定の集団に属する被験体のＩｇＡ腎症の発症の可能性を判定するものである。
【００５９】
レクチンに結合する糖鎖のレベルを決定する工程においては、２種類以上の糖鎖レベルを決定してもよい。例えば、
（１）ＡＣＡ、ＧＳＬ＿Ｉ＿Ａ４およびＧＳＬ＿ＩＩのそれぞれのレクチンに結合する糖鎖のレベルを決定してもよく；
（２）ＭＡＨ、ＧＳＬ＿Ｉ＿Ａ４およびＭＡＬ＿Ｉのそれぞれのレクチンに結合する糖鎖のレベルを決定してもよく；
（３）ＡＢＡ、ＧＳＬ＿Ｉ＿Ａ４およびＡＯＬのそれぞれのレクチンに結合する糖鎖のレベルを決定してもよく；
（４）ＭＡＨ、ＧＳＬ＿Ｉ＿Ａ４およびＰＮＡのそれぞれのレクチンに結合する糖鎖のレベルを決定してもよく；
（５）ＭＡＨ、ＧＳＬ＿Ｉ＿Ａ４およびＳＮＡのそれぞれのレクチンに結合する糖鎖のレベルを決定してもよく；
（６）ＡＢＡ、ＧＳＬ＿Ｉ＿Ａ４およびＭＡＬ＿Ｉのそれぞれのレクチンに結合する糖鎖のレベルを決定してもよく；
（７）ＡＢＡ＋ＧＳＬ＿Ｉ＿Ａ４＋ＧＳＬ＿ＩＩのそれぞれのレクチンに結合する糖鎖のレベルを決定してもよい。
【００６０】
本実施形態に係る方法は、レクチンに結合する糖鎖のレベルを決定する工程において、上記の組み合わせを含む糖鎖のレベルを決定してもよいし、上記の組み合わせの糖鎖のみのレベルを決定してもよい。例えば、（i）ＡＣＡ、ＧＳＬ＿Ｉ＿Ａ４およびＧＳＬ＿ＩＩのそれぞれのレクチンに結合する糖鎖のレベルに加えて、他のレクチンに結合する糖鎖のレベルを決定してもよいし、（ii）ＡＣＡ、ＧＳＬ＿Ｉ＿Ａ４およびＧＳＬ＿ＩＩのそれぞれのレクチンに結合する糖鎖のレベルのみを決定してもよい。
【００６１】
［２−２．原発性糸球体疾患の罹患者集団に対する判定］
本発明の他の実施形態は、原発性糸球体疾患に罹患している被験体、または原発性糸球体疾患への罹患が疑われる被験体における、ＩｇＡ腎症の発症の可能性の判定方法であって；上記被験体から採取された第１のサンプル中における、ＡＣＡ、ＭＡＨ、ＡＢＡ、ＭＰＡ、Ｊａｃａｌｉｎ、ＬＥＬ、ＡＣＧ、ＳＴＬ、ＧＳＬ＿Ｉ＿Ａ４、ＷＧＡ、ＳＳＡ、ＰＮＡ、ＣｏｎＡ、Ｃａｌｓｅｐａ、ＡＯＬ、ＳＮＡ、ＵＤＡ、ＬＣＡ、ＧＳＬ＿ＩＩ、ＵＥＡ＿Ｉ、ＬＴＬ、ＭＡＬ＿Ｉ、ＴＪＡ＿Ｉ、ＥＣＡ、ＰＷＭ、ＰＳＡ、ＡＡＬ、ＤＳＡ、ＢＰＬ、ＴＪＡ＿ＩＩ、ＮＰＡ、ＰＨＡ＿Ｅ、ＲＣＡ１２０、ＥＥＬ、ＳＢＡ、ＨＰＡ、ＧＮＡ、ＨＨＬ、ＰＴＬ＿Ｉ、ＴｘＬＣ＿Ｉ、ＰＨＡ＿Ｌ、ＧＳＬ＿Ｉ＿Ｂ４、ＤＢＡ、ＷＦＡおよびＶＶＡからなる群より選択される少なくとも１つのレクチンに結合する糖鎖のレベルを決定する工程と；上記被験体から採取された第２のサンプル中における、上記糖鎖のレベル以外のバイオマーカーを測定する工程と；を含む、方法である。
【００６２】
本実施形態に係る方法は、［１−２］節で説明した方法と同様に、原発性糸球体疾患に罹患している（または罹患が疑われる）被験体集団に属する被験体の、ＩｇＡ腎症の発症の可能性を判定するものである。なお、本実施形態に関する説明は、［１−２］節の記載が援用される。
【００６３】
レクチンに結合する糖鎖のレベルを決定する工程においては、２種類以上の糖鎖レベルを決定してもよい。例えば、ＭＡＨ、ＧＳＬ＿Ｉ＿Ａ４およびＨＰＡのそれぞれのレクチンに結合する糖鎖のレベルを決定してもよい。
【００６４】
本実施形態に係る方法は、レクチンに結合する糖鎖のレベルを決定する工程において、上記の組み合わせを含む糖鎖のレベルを決定してもよいし、上記の組み合わせの糖鎖のみのレベルを決定してもよい。例えば、（i）ＭＡＨ、ＧＳＬ＿Ｉ＿Ａ４およびＨＰＡのそれぞれのレクチンに結合する糖鎖のレベルに加えて、他のレクチンに結合する糖鎖のレベルを決定してもよいし、（ii）ＭＡＨ、ＧＳＬ＿Ｉ＿Ａ４およびＨＰＡのそれぞれのレクチンに結合する糖鎖のレベルのみを決定してもよい。
【００６５】
〔３．特定の糖鎖のレベルの決定〕
上述した通り、レクチンには、特定の構造を有する糖鎖と特異的に結合する性質がある。それゆえ、本明細書において「レクチンＸに結合する糖鎖」は、構造によっても特定することができる。下記表１に、本明細書に登場するレクチンと、そのレクチンに特異的に結合する糖鎖の例を示す。
【００６６】
【表１】
2020149105.tif 000002
【００６７】
表１に基づくと、［１−１］節における、「上記被験体から採取されたサンプル中における、ＡＣＡ、ＭＡＨ、ＡＢＡ、ＳＴＬ、ＬＥＬ、ＷＧＡ、ＭＰＡ、Ｊａｃａｌｉｎ、ＭＡＬ＿Ｉ、ＰＮＡ、ＡＣＧ、ＧＳＬ＿Ｉ＿Ａ４、ＣｏｎＡ、ＳＳＡ、ＡＯＬおよびＧＳＬ＿ＩＩからなる群より選択される少なくとも１つのレクチンに結合する糖鎖のレベルを決定する工程」とは、「上記被験体から採取されたサンプル中における、下記からなる群より選択される１種類以上の糖鎖のレベルを決定する工程：
（Ｇａｌβ１−４ＧｌｃＮＡｃ）ｎ、
（ＧｌｃＮＡｃβ１−４）ｎ、
（ＧｌｃＮＡｃβ４ＭｕｒＮＡｃ）ｎ、
Agalactosylated tri/tetra antennary glycans、
Ｆｕｃα１−２Ｇａｌβ１−４ＧｌｃＮＡｃ、
Ｆｕｃα１−６ＧｌｃＮＡｃ、
ＧａｌＮＡｃ、
Ｇａｌβ１−３ＧａｌＮＡｃ、
ＧｌｃＮＡｃ、
High-Man including Ｍａｎα１−６（Ｍａｎα１−３）Ｍａｎ、
Ｓｉａα２−３Ｇａｌβ１−３（Ｓｉａα２−６）ＧａｌＮＡｃ、
Ｓｉａα２−３Ｇａｌβ１−４ＧｌｃＮＡｃ、
Ｓｉａα２−６Ｇａｌ／ＧａｌＮＡｃ、および
α−ＧａｌＮＡｃ」と書き換えることができる。
【００６８】
同様に、表１に基づくと、［１−２］節における、「上記被験体から採取されたサンプル中における、ＡＣＡ、ＭＡＨ、ＡＢＡ、ＭＰＡ、Ｊａｃａｌｉｎ、ＬＥＬ、ＡＣＧ、ＳＴＬ、ＧＳＬ＿Ｉ＿Ａ４、ＷＧＡ、ＳＳＡ、ＰＮＡ、ＣｏｎＡ、Ｃａｌｓｅｐａ、ＡＯＬ、ＳＮＡ、ＵＤＡ、ＬＣＡ、ＧＳＬ＿ＩＩ、ＵＥＡ＿Ｉ、ＬＴＬ、ＭＡＬ＿Ｉ、ＴＪＡ＿Ｉ、ＥＣＡ、ＰＷＭ、ＰＳＡ、ＡＡＬ、ＤＳＡ、ＢＰＬ、ＴＪＡ＿ＩＩ、ＮＰＡ、ＰＨＡ＿Ｅ、ＲＣＡ１２０、ＳＢＡ、ＧＮＡ、ＨＨＬ、ＰＴＬ＿Ｉ、ＴｘＬＣ＿Ｉ、ＰＨＡ＿Ｌ、ＤＢＡ、ＷＦＡおよびＶＶＡからなる群より選択される少なくとも１つのレクチンに結合する糖鎖のレベルを決定する工程」は、「上記被験体から採取されたサンプル中における、下記からなる群より選択される１種類以上の糖鎖のレベルを決定する工程：
（Ｇａｌβ１−４ＧｌｃＮＡｃ）ｎ、
（ＧｌｃＮＡｃβ１−４）ｎ、
（ＧｌｃＮＡｃβ４）ｎ、
（ＧｌｃＮＡｃβ４ＭｕｒＮＡｃ）ｎ、
Agalactosylated tri/tetra antennary glycans、
bi- and tri-antennary N-glycans、
Blood group A antigen、
Ｆｕｃα１−２Ｇａｌβ１−４ＧｌｃＮＡｃ、
Ｆｕｃα１−６ＧｌｃＮＡｃ、
Ｆｕｃα２（Ｇａｌα３）Ｇａｌβ１−４ＧｌｃＮＡｃ、
Ｆｕｃα２Ｇａｌβ１、
Ｆｕｃα２Ｇａｌβ４ＧｌｃＮＡｃ（Ｈ−ｔｙｐｅ  ２）、
Ｆｕｃα３（Ｇａｌｂ４）ＧｌｃＮＡｃ（Ｌｅｘ）、
Ｆｕｃα３（Ｇａｌβ４）ＧｌｃＮＡｃ（Ｌｅｘ）、
Ｆｕｃα６ＧｌｃＮＡｃ（ｃｏｒｅ  Ｆｕｃ）、
Ｆｕｃα６ＧｌｃＮＡｃ、
ＧａｌＮＡｃ、
ＧａｌＮＡｃα１−３Ｇａｌ、
ＧａｌＮＡｃα１−３ＧａｌＮＡｃ、
ＧａｌＮＡｃβ１、
ＧａｌＮＡｃβ１−４ＧｌｃＮＡｃ、
Ｇａｌα１−３Ｇａｌβ１−４ＧｌｃＮＡｃ、
Ｇａｌβ１−３ＧａｌＮＡｃ、
Ｇａｌβ１−４ＧｌｃＮＡｃ、
Ｇａｌβ３（−６）ＧａｌＮＡｃ、
Ｇａｌβ４ＧｌｃＮＡｃ、
ＧｌｃＮＡｃ、
ＧｌｃＮＡｃβ４ＧｌｃＮＡｃ、
High-Man、
High-Man（Ｍａｎ２−６）、
High-Man including Ｍａｎα１−６（Ｍａｎα１−３）Ｍａｎ、
High-Man including Ｍａｎα３Ｍａｎ、
High-Man including Ｍａｎα６Ｍａｎ、
Ｍａｎ３  ｃｏｒｅ、
Ｍａｎ５〜Ｍａｎ９、
N-glycans including bisecting ＧｌｃＮＡｃ、
N-glycans with outer Ｇａｌ and bisecting ＧｌｃＮＡｃ、
Ｓｉａα２−３Ｇａｌβ１−３（Ｓｉａα２−６）ＧａｌＮＡｃ、
Ｓｉａα２−３Ｇａｌβ１−４ＧｌｃＮＡｃ、
Ｓｉａα２−６Ｇａｌ／ＧａｌＮＡｃ、
tetraantennary N-glycans、
Tri/tetra-antennary complex-type N-glycan、
triantennary、
αＧａｌ、
α−ＧａｌＮＡｃ」と書き換えることができる。
【００６９】
また、表１に基づくと、［２−１］節および［２−２］節における、「上記被験体から採取された第１のサンプル中における、ＡＣＡ、ＭＡＨ、ＡＢＡ、ＭＰＡ、Ｊａｃａｌｉｎ、ＬＥＬ、ＡＣＧ、ＳＴＬ、ＧＳＬ＿Ｉ＿Ａ４、ＷＧＡ、ＳＳＡ、ＰＮＡ、ＣｏｎＡ、Ｃａｌｓｅｐａ、ＡＯＬ、ＳＮＡ、ＵＤＡ、ＬＣＡ、ＧＳＬ＿ＩＩ、ＵＥＡ＿Ｉ、ＬＴＬ、ＭＡＬ＿Ｉ、ＴＪＡ＿Ｉ、ＥＣＡ、ＰＷＭ、ＰＳＡ、ＡＡＬ、ＤＳＡ、ＢＰＬ、ＴＪＡ＿ＩＩ、ＮＰＡ、ＰＨＡ＿Ｅ、ＲＣＡ１２０、ＥＥＬ、ＳＢＡ、ＨＰＡ、ＧＮＡ、ＨＨＬ、ＰＴＬ＿Ｉ、ＴｘＬＣ＿Ｉ、ＰＨＡ＿Ｌ、ＧＳＬ＿Ｉ＿Ｂ４、ＤＢＡ、ＷＦＡおよびＶＶＡからなる群より選択される少なくとも１つのレクチンに結合する糖鎖のレベルを決定する工程」は、「上記被験体から採取されたサンプル中における、下記からなる群より選択される１種類以上の糖鎖のレベルを決定する工程：
（Ｇａｌβ１−４ＧｌｃＮＡｃ）ｎ、
（ＧｌｃＮＡｃβ１−４）ｎ、
（ＧｌｃＮＡｃβ４）ｎ、
（ＧｌｃＮＡｃβ４ＭｕｒＮＡｃ）ｎ、
Agalactosylated tri/tetra antennary glycans、
bi- and tri-antennary N-glycans、
Blood group A antigen、
Ｆｕｃα１−２Ｇａｌβ１−４ＧｌｃＮＡｃ、
Ｆｕｃα１−６ＧｌｃＮＡｃ、
Ｆｕｃα２Ｇａｌβ１、
Ｆｕｃα２Ｇａｌβ４ＧｌｃＮＡｃ（Ｈ−ｔｙｐｅ  ２）、
Ｆｕｃα３（Ｇａｌｂ４）ＧｌｃＮＡｃ（Ｌｅｘ）、
Ｆｕｃα６ＧｌｃＮＡｃ（ｃｏｒｅ  Ｆｕｃ）、
Ｆｕｃα６ＧｌｃＮＡｃ、
ＧａｌＮＡｃ、
ＧａｌＮＡｃα１−３Ｇａｌ、
ＧａｌＮＡｃα１−３ＧａｌＮＡｃ、
ＧａｌＮＡｃβ１、
ＧａｌＮＡｃβ１−４ＧｌｃＮＡｃ、
Ｇａｌβ１−３ＧａｌＮＡｃ、
Ｇａｌβ１−４ＧｌｃＮＡｃ、
Ｇａｌβ３（−６）ＧａｌＮＡｃ、
Ｇａｌβ４ＧｌｃＮＡｃ、
ＧｌｃＮＡｃ、
ＧｌｃＮＡｃβ４ＧｌｃＮＡｃ、
High-Man、
High-Man（Ｍａｎ２−６）、
High-Man including Ｍａｎα１−６（Ｍａｎα１−３）Ｍａｎ、
High-Man including Ｍａｎα３Ｍａｎ、
High-Man including Ｍａｎα６Ｍａｎ、
Ｍａｎ３  ｃｏｒｅ、
Ｍａｎ５〜Ｍａｎ９、
N-glycans including bisecting ＧｌｃＮＡｃ、
N-glycans with outer Ｇａｌ and bisecting ＧｌｃＮＡｃ、
Ｓｉａα２−３Ｇａｌβ１−３（Ｓｉａα２−６）ＧａｌＮＡｃ、
Ｓｉａα２−３Ｇａｌβ１−４ＧｌｃＮＡｃ、
Ｓｉａα２−６Ｇａｌ／ＧａｌＮＡｃ、
tetraantennary N-glycans、
Tri/tetra-antennary complex-type N-glycan、
triantennary、
α−ＧａｌＮＡｃ」と書き換えることができる。
【００７０】
さらに、表１に基づくと、［２−１］節および［２−２］節における、
（１）「ＡＣＡ、ＧＳＬ＿Ｉ＿Ａ４およびＧＳＬ＿ＩＩのそれぞれのレクチンに結合する糖鎖」は、「Ｇａｌβ１−３ＧａｌＮＡｃ、α−ＧａｌＮＡｃ、および、Agalactosylated tri/tetra antennary glycansもしくはＧｌｃＮＡｃ」と書き換えることができ；
（２）「ＭＡＨ、ＧＳＬ＿Ｉ＿Ａ４およびＭＡＬ＿Ｉのそれぞれのレクチンに結合する糖鎖」は、「Ｓｉａα２−３Ｇａｌβ１−３（Ｓｉａα２−６）ＧａｌＮＡｃ、α−ＧａｌＮＡｃ、およびＳｉａα２−３Ｇａｌβ１−４ＧｌｃＮＡｃ」と書き換えることができ；
（３）「ＡＢＡ、ＧＳＬ＿Ｉ＿Ａ４およびＡＯＬのそれぞれのレクチンに結合する糖鎖」は、「Ｇａｌβ１−３ＧａｌＮＡｃ、α−ＧａｌＮＡｃ、および、Ｆｕｃα１−６ＧｌｃＮＡｃもしくはＦｕｃα１−２Ｇａｌβ１−４ＧｌｃＮＡｃ」と書き換えることができ；
（４）「ＭＡＨ、ＧＳＬ＿Ｉ＿Ａ４およびＰＮＡのそれぞれのレクチンに結合する糖鎖」は、「Ｓｉａα２−３Ｇａｌβ１−３（Ｓｉａα２−６）ＧａｌＮＡｃ、α−ＧａｌＮＡｃ、およびＧａｌβ１−３ＧａｌＮＡｃ」と書き換えることができ、
（５）「ＭＡＨ、ＧＳＬ＿Ｉ＿Ａ４およびＳＮＡのそれぞれのレクチンに結合する糖鎖」は、「Ｓｉａα２−３Ｇａｌβ１−３（Ｓｉａα２−６）ＧａｌＮＡｃ、α−ＧａｌＮＡｃ、およびＳｉａα２−６Ｇａｌ／ＧａｌＮＡｃ」と書き換えることができ；
（６）「ＡＢＡ、ＧＳＬ＿Ｉ＿Ａ４およびＭＡＬ＿Ｉのそれぞれのレクチンに結合する糖鎖」は、「Ｇａｌβ１−３ＧａｌＮＡｃ、α−ＧａｌＮＡｃ、およびＳｉａα２−３Ｇａｌβ１−４ＧｌｃＮＡｃ」と書き換えることができ；
（７）「ＡＢＡ＋ＧＳＬ＿Ｉ＿Ａ４＋ＧＳＬ＿ＩＩのそれぞれのレクチンに結合する糖鎖」は、「Ｇａｌβ１−３ＧａｌＮＡｃ、α−ＧａｌＮＡｃ、および、Agalactosylated tri/tetra antennary glycansもしくはＧｌｃＮＡｃ」と書き換えることができ；
（８）「ＭＡＨ、ＧＳＬ＿Ｉ＿Ａ４およびＨＰＡのそれぞれのレクチンに結合する糖鎖」は、「Ｓｉａα２−３Ｇａｌβ１−３（Ｓｉａα２−６）ＧａｌＮＡｃ、およびα−ＧａｌＮＡｃ」と書き換えることができる。
【００７１】
（推定される生化学的メカニズム）
後述する実施例では、ＡＣＡ、ＧＳＬ＿Ｉ＿Ａ４およびＧＳＬ＿ＩＩのそれぞれのレクチンに結合する糖鎖を、３種類の臨床因子に加えた診断モデルが、最もＡＵＣが大きかった。これらの糖鎖の組み合わせは、上述した通り、（i）Ｇａｌβ１−３ＧａｌＮＡｃ、（ii）α−ＧａｌＮＡｃ、および（iii）Agalactosylated tri/tetra antennary glycansもしくはＧｌｃＮＡｃ、の組み合わせである。
【００７２】
この事実は、ＩｇＡ腎症に関して知られている事実と整合している。すなわち、ＩｇＡ腎症においては、ＩｇＡ分子のＯ型糖鎖のガラクトース化不全が指摘されているところ、Ｇａｌβ１−３ＧａｌＮＡｃはガラクトース化されたＯ型糖鎖構造である。したがって、Ｇａｌβ１−３ＧａｌＮＡｃのレベルの低下がＩｇＡ腎症と関連していると解釈しても、妥当性はある。
【００７３】
さらに、上記の事実からは、ＩｇＡ腎症ではα２，３シアリルトランスフェラーゼ活性が上昇しているために、α−ＧａｌＮＡｃがＳｉａα２−３ＧａｌＮＡｃに変換され、α−ＧａｌＮＡｃのレベルが低下していると考えられる。また、agalactosylated tri/tetra antennary glycansはガラクトース不全のＮ型糖鎖構造であることから、Ｎ型糖鎖構造にもガラクトース化不全が存在することが示唆される。
【００７４】
もっとも、上記の説明は、本発明の理解を助けるための推定メカニズムであって、本発明の範囲を限定するものではない。
【００７５】
〔４．キット〕
［４−１．キットが備えているレクチン］
本発明の一実施形態に係るキットは、被験体から採取したサンプル中に含まれる特定の糖鎖に結合するレクチンを備えている。このような糖鎖、および糖鎖に結合するレクチンに関しては、〔１〕〜〔３〕節の説明を参照されたい。
【００７６】
本発明の一実施形態に係るキットは、（i）被験体におけるＩｇＡ腎症の発症の可能性を判定するためのキット、または、（ii）原発性糸球体疾患に罹患している被験体、もしくは原発性糸球体疾患への罹患が疑われる被験体における、ＩｇＡ腎症の発症の可能性を判定するためのキットであって；下記Ａ〜Ｃの各群から、それぞれ１種類以上選択されるレクチンを備えており；それ以外の種類のレクチンを備えていない：
Ａ群：ＡＣＡ、ＭＡＨおよびＡＢＡ
Ｂ群：ＧＳＬ＿Ｉ＿Ａ４
Ｃ群：ＧＳＬ＿ＩＩ、ＭＡＬ＿Ｉ、ＡＯＬ、ＰＮＡ、ＳＮＡおよびＨＰＡ。
【００７７】
ここで、Ａ〜Ｃの各群からは、それぞれ１種類以上のレクチンが選択される。すなわち、Ａ群からは１種類、２種類または３種類のレクチンが選択される。Ｂ群からは１種類のレクチンが選択される。Ｃ群からは１種類、２種類、３種類、４種類、５種類または６種類のレクチンが選択される。
【００７８】
一実施形態において、Ａ〜Ｃの各群から選択されるレクチンは、（i）Ａ群からＡＣＡおよび／またはＡＢＡを選択し、（ii）ＢからＧＳＬ＿Ｉ＿Ａ４を選択し、かつ、（iii）Ｃ群からＰＮＡおよび／またはＨＰＡを選択するものではない。
【００７９】
一実施形態において、Ａ〜Ｃの各群から選択されるレクチンは、（i）Ａ群からＡＣＡおよび／またはＡＢＡを選択し、（ii）ＢからＧＳＬ＿Ｉ＿Ａ４を選択し、かつ、（iii）Ｃ群からＰＮＡ、ＳＮＡおよび／またはＨＰＡを選択するものではない。
【００８０】
本発明の他の実施形態に係るキットは、（i）被験体におけるＩｇＡ腎症の発症の可能性を判定するためのキット、または、（ii）原発性糸球体疾患に罹患している被験体、もしくは原発性糸球体疾患への罹患が疑われる被験体における、ＩｇＡ腎症の発症の可能性を判定するためのキットであって；下記ａ〜ｃの各群から、それぞれ１種類以上選択される糖鎖に結合するレクチンを備えており；それ以外の種類のレクチンを備えていない。
ａ群：Ｇａｌβ１−３ＧａｌＮＡｃおよびＳｉａα２−３Ｇａｌβ１−３（Ｓｉａα２−６）ＧａｌＮＡｃ
ｂ群：α−ＧａｌＮＡｃ
ｃ群：Agalactosylated tri/tetra antennary glycans、Ｆｕｃα１−２Ｇａｌβ１−４ＧｌｃＮＡｃ、Ｆｕｃα１−６ＧｌｃＮＡｃ、ＧｌｃＮａｃ、Ｇａｌβ１−３ＧａｌＮＡｃ、Ｓｉａα２−３Ｇａｌβ１−４ＧｌｃＮＡｃ、Ｓｉａα２−６Ｇａｌ／ＧａｌＮＡｃおよびα−ＧａｌＮＡｃ。
【００８１】
ここで、a〜ｃの各群からは、それぞれ１種類以上の糖鎖が選択される。すなわち、a群からは１種類または２種類の糖鎖が選択される。ｂ群からは１種類の糖鎖が選択される。ｃ群からは１種類、２種類、３種類、４種類、５種類、６種類、７種類または８種類の糖鎖が選択される。
【００８２】
なお、各糖鎖に結合するレクチンの種類は、１種類であってもよいし、２種類以上であってもよい。例えば、ｃ群からAgalactosylated tri/tetra antennary glycansを選択する場合、本発明の一実施形態に係るキットは、Agalactosylated tri/tetra antennary glycansに結合するレクチンを１種類だけ備えていてもよいし、２種類以上備えていてもよい。
【００８３】
また、２つ以上の群から同じ糖鎖を選択してもよい。例えば、ｂ群およびｃ群から、α−ＧａｌＮＡｃを選択してもよい。この場合、本発明の一実施形態に係るキットは、α−ＧａｌＮＡｃと結合するレクチンを１種類のみ備えていてもよいし、２種類以上備えていてもよい。
【００８４】
一実施形態において、a〜ｃの各群から選択される糖鎖は、（i）ａ群からＧａｌβ１−３ＧａｌＮＡｃを選択し、（ii）ｂ群からα−ＧａｌＮＡｃを選択し、かつ、（iii）ｃ群からＧａｌβ１−３ＧａｌＮＡｃ、Ｓｉａα２−６Ｇａｌ／ＧａｌＮＡｃおよび／またはα−ＧａｌＮＡｃを選択するものではない。
【００８５】
一実施形態において、a〜ｃの各群から選択される糖鎖に結合するレクチンは、下記１、２の各群からそれぞれ１種類以上選択されるレクチンの組み合わせではない。
１群：ＢＰＬ、ＡＢＡ、Ｊａｃａｌｉｎ、ＰＮＡ、ＡＣＡ、ＭＰＡ
２群：ＨＰＡ、ＶＶＡ、ＰＴＬ＿Ｉ、ＧＳＬ＿Ｉ＿Ａ４
上述したレクチンの組み合わせを備えているキットを利用すれば、被験体におけるＩｇＡ腎症の発症の可能性を、従来技術よりも高い精度で判定することができる。この被験体は、不特定の集団に属する被験体であってもよいし、原発性糸球体疾患に罹患しているもしくは原発性糸球体疾患への罹患が疑われる被験体であってもよい。
【００８６】
上述のレクチンは、公知の手法により調製することができる。あるいは、市販されているレクチンを適宜使用してもよい。
【００８７】
［４−２．他の構成要素］
本発明の一実施形態に係るキットにおいて、レクチンは、任意の基材に固定されていてもよい。一例を挙げると、レクチンは、マイクロアレイ、ＥＬＩＳＡプレート、ラテックスビーズ、磁気ビーズなどの基材上に固定されていてもよい。
【００８８】
上述した中では、マイクロアレイにレクチンが固定されている態様が好ましい。このような態様ならば、サンプルとして尿を用いた場合に、（i）サンプルの濃縮が不要となる、（ii）サンプル中の主要タンパク質（アルブミン、ＩｇＧなど）の除去が不要となる、という利点がある。基材上にレクチンを固定する方法としては、タンパク質を基剤上に固定する公知の方法を用いることができる。
【００８９】
本発明の一実施形態に係るキットは他に、キットの使用に必要となる薬剤、器具、容器、説明書などを備えていてよい。また、上述した薬剤、器具、容器、説明書などは、市場または通信回線などを通じて、別途使用者に入手させてもよい。
【００９０】
〔５．その他の態様〕
本発明に係る被験体におけるＩｇＡ腎症の発症の可能性を判定する方法は、医師が行うＩｇＡ腎症の診断方法ではなく、あくまで被験体におけるＩｇＡ腎症の診断のための補助的な方法である。
【００９１】
ただし、本発明に係る被験体におけるＩｇＡ腎症の発症の可能性を判定する方法を、ＩｇＡ腎症の診断方法に適用することもできる。よって、本発明は、「ＩｇＡ腎症の診断方法」をも包含している。なお、「ＩｇＡ腎症の診断方法」に関する説明は、本明細書の「ＩｇＡ腎症の発症の可能性の判定方法」に関する説明を援用することができる。その際に、「ＩｇＡ腎症の発症の可能性の判定方法」との文言は、「ＩｇＡ腎症の診断方法」と読み換えることができる。
【００９２】
上記各項目で記載した内容は、他の項目においても適宜援用できる。本発明は上述した各実施形態に限定されるものではなく、請求項に示した範囲で種々の変更が可能である。したがって、異なる実施形態にそれぞれ開示されている技術的手段を適宜組み合わせて得られる実施形態についても、本発明の技術的範囲に含まれる。
【００９３】
本明細書中に記載された学術文献および特許文献のすべてが、本明細書中において参考文献として援用される。
【００９４】
以下、実施例により本発明をさらに詳細に説明するが、本発明は下記実施例のみに限定されるものではない。
【実施例】
【００９５】
本発明の一実施形態に係る方法によって、（i）健常人を含む集団からＩｇＡ腎症患者を鑑別する診断の診断精度と、（ii）原発性糸球体疾患を罹患している患者とＩｇＡ腎症患者とを鑑別する診断の診断精度と、を検討した。【００９６】
〔方法〕
［患者の選択］
腎疾患患者５１０名および健常者１５名の計５２５名から、ＩｇＡ腎症と他の腎疾患を併発していた患者１９名を除いた、５０６名を解析対象者とした。なお、全ての参加者からは、所定の手順によって事前の同意を得ている。慢性腎臓病患者はいずれも、２０１０年１２月〜２０１７年９月に岡山大学病院にて腎生検を施行され、腎病理診断が確定した患者であった。【００９７】
［レクチンアレイ解析による糖鎖レベルの測定］
レクチンアレイ（GlycoStation（登録商標。以下同様）およびLecChip（登録商標。以下同様）、グライコテクニカ社製）を用い、下記のプロトコールに従って、４５種類のレクチンに結合する尿中糖鎖のシグナル強度を数値化した。測定に使用した尿サンプルは、腎生検の前または健診受診時に採取し、保管していたものである。
１．１０倍稀釈した尿サンプル２０μＬと、Cy3 Mono-Reactive dye 100μg labeling（GE Healthcare Life Science製）とを混合し、室温、暗所にて１時間反応させた。
２．脱塩カラムを、１，５００×ｇ、１分間、４℃の条件で遠心した。
３．脱塩カラムに３００μＬのＴＢＳを通した。その後、脱塩カラムを１，５００×ｇ、１分間、４℃の条件で遠心し、洗浄した。本工程は、合計３回繰り返した。
４．脱塩カラムに、尿サンプルの全量と、２５μＬのＴＢＳとを通した。その後、１，５００×ｇ、２分間、４℃の条件で遠心し、未反応のCy3を除いた。
５．４で得られた尿サンプルに、４５０μＬのProbing Solution（GlycoTechnica製）を加えた後、５００μＬを量り取った。
６．LecChipをProbing Solutionで３回洗浄した（１回当たり１００ｍＬ／ウェル）。その後、５．にて調製した尿サンプル溶液をウェルに注入した（１００μＬ／ウェル）。
７．LecChipを、２０℃にて１６時間以上反応させた。
８．LecChipを、GlycoStation Reader 1200で測定した。測定は、尿サンプルを反応させたままの液相状態にて行われた。測定の積算回数は４回、露光時間は２９９ミリ秒、カメラゲインは８５、９５、１０５、１１５、１２５とした。
９．GlycoStaion ToolsPro Suite 1.5により、測定値を数値化した。
１０.各レクチンに対するシグナル強度から、バックグラウンドのシグナル値を差し引いた値を、各レクチンに対する糖鎖シグナルと定義し解析に用いた。【００９８】
［臨床因子］
以下の項目を臨床因子として測定した：腎生検時の年齢、性別、ＢＭＩ、血圧、血清Ｃｒ、血清ＩｇＡ、補体Ｃ３、糖尿病合併症の有無、ＨｂＡ１ｃ（ＮＧＳＰ値）、尿潜血の有無、１日尿中蛋白量（ｇ／日）。【００９９】
このうち、尿潜血の有無は、血尿診断ガイドライン２０１３年（日本臨床検査医学会）に基づいて判断した。具体的には、腎生検前の早朝に複数回施行した尿沈渣検査において、（i）尿中の赤血球数５／ＨＰＦ以上を２回以上観測し、かつ、（ii）尿中赤血球の形態から、糸球体性の尿潜血と判断されたものを「尿潜血あり」と判定した。【０１００】
ｅＧＦＲ（ｍｌ／ｍｉｎ／１．７３ｍ２）は、血清Ｃｒの値から、CKD-EPI equitionによって算出した。【０１０１】
各糖鎖シグナルの値は、その分布および値に応じて、１／１０００倍、１／１００００倍または対数変換した後で解析に供した。同様に、１日尿蛋白量は、自然対数変換した後で解析に供した。【０１０２】
［エンドポイント］
ＩｇＡ腎症と非ＩｇＡ腎症との鑑別診断を、主要エンドポイントとした（ただし、ＩｇＡ腎症に他の腎疾患が合併していた症例は除外した）。つまり、被験体が（i）ＩｇＡ腎症のみを罹患している被験体であるのか、または（ii）ＩｇＡ腎症以外の腎疾患を罹患している被験体もしくは健常者であるのか、を鑑別する診断を行った。【０１０３】
また、ＩｇＡ腎症と原発性糸球体疾患の鑑別診断を、副次エンドポイントとした。つまり、原発性糸球体疾患に罹患している被験体が、（i）ＩｇＡ腎症のみを罹患している被験体であるのか、または（ii）ＩｇＡ腎症以外の原発性糸球体疾患を罹患している被験体であるのか、を鑑別する診断を行った。【０１０４】
［解析］
単変量ロジスティック回帰分析または多変量ロジスティック回帰分析によって、下記の４種類のモデルのＲＯＣ−ＡＵＣを比較し、有用性を検討した。
・モデル（１）：血清ＩｇＡ（３１５ｍｇ／ｄＬ以上  ｖｓ  ３１５ｍｇ／ｄＬ未満）、尿潜血の有無、および１日尿蛋白量（０．３ｇ／日以上  ｖｓ  ０．３ｇ／日未満）から構成される多変量ロジスティック回帰モデルによるＲＯＣ−ＡＵＣ。なお、このモデルは従来技術に該当する。
・モデル（２）：４５種類のレクチンシグナルのそれぞれに対する、単変量ロジスティック回帰モデルによるＲＯＣ−ＡＵＣ。
・モデル（３）：１種類のレクチンシグナルと、モデル（１）における３種類の臨床因子とから構成される、複合的な多変量ロジスティック回帰モデルによるＲＯＣ−ＡＵＣ。
・モデル（４）：複数種類のレクチンシグナルと、モデル（１）における３種類の臨床因子とから構成される、複合的な多変量ロジスティック回帰モデルによるＲＯＣ−ＡＵＣ。【０１０５】
モデル（１）に関して、日本国の「ＩｇＡ腎症ガイドライン２０１７年」では、診断の予測モデルとして、上述の３種類の臨床因子に加えて、血清ＩｇＡ／補体Ｃ３（≧３．０１  ｖｓ  ＜３．０１）も提案されている。しかし、本研究に用いた集団では、血清ＩｇＡと血清ＩｇＡ／補体Ｃ３との相関が非常に強かった。そこで、多重共線性の問題を考慮して、血清ＩｇＡ／補体Ｃ３はモデル（１）の変量から除外することにした。なお、上記のガイドラインにおいても、血清ＩｇＡの方が血清ＩｇＡ／補体Ｃ３よりも重要性が高いと指摘されており、血清ＩｇＡの方がよりＩｇＡ腎症の病態を反映している因子であると考えられる。それゆえ、臨床因子モデルであるモデル（１）も、一定程度の妥当性は有していると推認されよう。【０１０６】
モデル（３）およびモデル（４）に関して、血清ＩｇＡおよび１日尿蛋白量は、カットオフ値を設けたカテゴリ変数ではなく、連続変数として扱った。これは、従前採用されているカットオフ値（モデル（１）を参照）が、日本人のＩｇＡ腎症患者においても一般化できるか否かの検討が、現時点では実証・報告されていないためである。【０１０７】
モデル（４）に関して、複数種類のレクチンシグナルをモデルに投入する際には、各レクチンシグナルと臨床因子との相関性を検討し、互いに相関の強くないものを選択して投入した。これは、多重共線性の問題を回避するためである。最終的にモデルに投入する因子は、変数増減法によって決定した。変数増減法のＰ値の水準は、０．１とした。【０１０８】
最終的に有用と考えられたモデルに関しては、Youden IndexおよびOptimum Distanceによる感度、特異度、一致率を算出した。本項目で説明した解析は全て、SAS (version 9.3, 9.4)を用いて行った。【０１０９】
〔結果〕
［結果１：解析対象者の分布］
表２、３に、解析対象者における腎疾患の分布を示す。表２は解析対象者全体、表３はＩｇＡ腎症以外の原発性糸球体疾患を罹患している患者全体を対象としている。【０１１０】
【表２】
2020149105.tif 000003
【０１１１】
【表３】
2020149105.tif 000004
【０１１２】
表２より、主要エンドポイントに関連して、５０６名の解析対象者のうち、ＩｇＡ腎症のみを有する症例数は１５７例（３１％）であり、非ＩｇＡ腎症に該当する症例数は３４９例（６９％）であった。【０１１３】
表３より、副次エンドポイントに関して、２４６名の解析対象患者のうち、ＩｇＡ腎症のみを有する症例数は１５７例（３１％）であり、ＩｇＡ腎症以外の原発性糸球体疾患に該当する症例数は８９例（３６％）であった。後者の中では、膜性腎症が最も多く（３１例）、次いで微小変化型ネフローゼ症候群が多かった（２９例）。【０１１４】
表４に、腎生検時における主要臨床因子を示す。【０１１５】
【表４】
2020149105.tif 000005
【０１１６】
表４によると、解析対象者全体における男性の割合は５１％、腎生検時の平均年齢は５１歳、平均ＢＭＩは２２．６（ｋｇ／ｍ２）であった。また、収縮期血圧、拡張期血圧、平均動脈圧の平均値は、それぞれ１２６．８ｍｍＨｇ、７８．５ｍｍＨｇ、９４．６ｍｍＨｇであり、高血圧を有する割合は４４％であった。腎機能に関連する臨床因子として、ｅＧＦＲの平均値は６１．９ｍｌ／ｍｉｎ／１．７３ｍ２、１日尿蛋白量の中央値は０．９２（ｇ／日、４分位：０．３５〜３．００）、尿潜血陽性は６２％の解析対象者で認められ、血清ＩｇＡの平均値は２８３．６ｍｇ／ｄＬであった。【０１１７】
ＩｇＡ腎症群と非ＩｇＡ腎症群との臨床因子を比較すると、ＩｇＡ腎症群は、統計学的に有意に、若年であり、高血圧患者割合が少なく、ｅＧＦＲが高く、尿蛋白量が少なく、尿潜血陽性患者割合が大きく、血清ＩｇＡ値が高かった。この結果は、血清ＩｇＡ、尿潜血の有無および１日尿蛋白量を用いる従来のＩｇＡ腎症の予測モデルの妥当性を、肯定するものであった。【０１１８】
［結果２：不特定の集団に対するＩｇＡ腎症患者の鑑別］
表５に、主要エンドポイントにおける、モデル（２）およびモデル（３）の解析結果を示す。なお、主要エンドポイントにおけるモデル（１）のＡＵＣは、０．６１７であった。すなわち、健常者も含む集団から、ＩｇＡ腎症のみを罹患している患者を鑑別するにあたって、従来技術に相当する診断方法のＡＵＣは、０．６１７であった。【０１１９】
【表５】
2020149105.tif 000006
【０１２０】
表５によると、モデル（２）では、１６種類のレクチンに関して、当該レクチンシグナルを投入したモデルのＡＵＣが０．６１７を上回った。具体的には、ＡＣＡ、ＭＡＨ、ＡＢＡ、ＳＴＬ、ＬＥＬ、ＷＧＡ、ＭＰＡ、Ｊａｃａｌｉｎ、ＭＡＬ＿Ｉ、ＰＮＡ、ＡＣＧ、ＧＳＬ＿Ｉ＿Ａ４、ＣｏｎＡ、ＳＳＡ、ＡＯＬまたはＧＳＬ＿ＩＩに結合する糖鎖シグナルを投入したモデルにおいて、ＡＵＣが従来技術を上回った。このうち、ＡＵＣが最大であったのはＡＣＡ結合糖鎖シグナルを投入したモデルであった。次いで、ＭＡＨ、ＡＢＡまたはＳＴＬ結合糖鎖糖鎖シグナルを投入したモデルでは、ＡＵＣが０．６６０を超えていた。さらにその次に、ＬＥＬ、ＷＧＡ、ＭＰＡまたはＪａｃａｌｉｎ結合糖鎖シグナルを投入したモデルでは、ＡＵＣが０．６４０を超えていた。【０１２１】
同じく表５によると、モデル（３）では、全４５種類のレクチンに関して、当該レクチンシグナルを投入したモデルのＡＵＣが０．６１７を上回った。つまり、検討に用いた４５種類のレクチン全てに関して、従来の診断方法に対する上乗せ効果が見られた。このうち、ＡＵＣが最大であったのは、臨床因子にＡＣＡ結合糖鎖シグナルを投入したモデルであった（０．８０１）。臨床因子にＡＣＡ、ＭＡＨまたはＡＢＡ結合糖鎖糖鎖シグナルを投入したモデルでは、ＡＵＣが０．７９０を超えていた。次いで、臨床因子にＭＰＡ、Ｊａｃａｌｉｎ、ＬＥＬ、ＡＣＧ、ＳＴＬ、ＧＳＬ＿Ｉ＿Ａ４、ＷＧＡ、ＳＳＡ、ＰＮＡまたはＣｏｎＡ結合糖鎖糖鎖シグナルを投入したモデルでは、ＡＵＣが０．７９０を超えていた（なお、表５ではモデル（３）におけるＡＵＣが高い順にレクチンを整序してある）。【０１２２】
表６に、主要エンドポイントにおける、モデル（４）の解析結果を示す。【０１２３】
【表６】
2020149105.tif 000007
【０１２４】
モデル（４）の解析を実行したところ、モデル（３）における最高のＡＵＣ（０．８０１）を超えるモデルには、以下の７種類が存在した：
ＡＣＡ＋ＧＳＬ＿Ｉ＿Ａ４＋ＧＳＬ＿ＩＩ；
ＭＡＨ＋ＧＳＬ＿Ｉ＿Ａ４＋ＭＡＬ＿Ｉ；
ＡＢＡ＋ＧＳＬ＿Ｉ＿Ａ４＋ＡＯＬ；
ＭＡＨ＋ＧＳＬ＿Ｉ＿Ａ４＋ＰＮＡ；
ＭＡＨ＋ＧＳＬ＿Ｉ＿Ａ４＋ＳＮＡ；
ＡＢＡ＋ＧＳＬ＿Ｉ＿Ａ４＋ＭＡＬ＿Ｉ；
ＡＢＡ＋ＧＳＬ＿Ｉ＿Ａ４＋ＧＳＬ＿ＩＩ。【０１２５】
このうち、最もＡＵＣが高かったのは、臨床因子にＡＣＡ、ＧＳＬ＿Ｉ＿Ａ４およびＧＳＬ＿ＩＩ結合糖鎖モデルを投入したものであって、０．８０７であった。このモデルでの感度は０．７６４、特異度０．７５４、一致率０．７５８であり、これはYouden IndexでもOptimum Distanceでも同様の結果であった。【０１２６】
上記の７通りの組み合わせにおいて、ＡＣＡ、ＭＡＨ、ＡＢＡおよびＧＳＬ＿Ｉ＿Ａ４のレクチンシグナルは、シグナル強度が小さいことがＩｇＡ腎症の発症と関連していた。一方、ＧＳＬ＿ＩＩ、ＭＡＬ＿Ｉ、ＡＯＬ、ＰＮＡおよびＳＮＡのレクチンシグナルは、シグナル強度が大きいことがＩｇＡ腎症の発症と関連していた。【０１２７】
［結果３：原発性糸球体疾患患者に対するＩｇＡ腎症患者の鑑別］
表７に、副次エンドポイントにおける、モデル（２）およびモデル（３）の解析結果を示す。なお、副次エンドポイントにおけるモデル（１）のＡＵＣは、０．６２０であった。すなわち、原発性糸球体疾患を罹患している集団から、ＩｇＡ腎症のみを罹患している患者を鑑別するに当たって、従来技術に相当する診断方法のＡＵＣは、０．６２０であった。【０１２８】
【表７】
2020149105.tif 000008
【０１２９】
表７によると、モデル（２）では、４２種類のレクチンに関して、当該レクチンシグナルを投入したモデルのＡＵＣが０．６１７を上回った。具体的には、ＨＰＡ、ＥＥＬまたはＧＳＬ＿Ｉ＿Ｂ４以外のレクチンに結合する糖鎖シグナルを投入したモデルにおいて、ＡＵＣが従来技術を上回った。このうち、ＡＵＣが最大であったのはＣｏｎＡ結合糖鎖シグナルを投入したモデルであった。【０１３０】
同じく表７によると、モデル（３）では、全４５種類のレクチンに関して、当該レクチンシグナルを投入したモデルのＡＵＣが０．６２０を上回った。つまり、検討に用いた４５種類のレクチン全てに関して、従来の診断方法に対する上乗せ効果が見られた。このうち、ＡＵＣが最大であったのは、臨床因子にＡＢＡ結合糖鎖シグナルを投入したモデルであった（０．８８４）。表７中、臨床因子にＡＢＡ結合糖鎖シグナル〜ＰＨＡ＿Ｌ結合糖鎖シグナルの３０種類のレクチンシグナルのうちいずれかを投入したモデルでは、ＡＵＣが０．８７３を超えていた。（なお、表７ではモデル（３）におけるＡＵＣが高い順にレクチンを整序してある）。【０１３１】
表８に、副次エンドポイントにおける、モデル（４）の解析結果を示す。【０１３２】
【表８】
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【０１３３】
モデル（４）の解析を実行したところ、モデル（３）における最高のＡＵＣ（０．８８４）を超えるモデルには、臨床因子にＭＡＨ、ＧＳＬ＿Ｉ＿Ａ４およびＨＰＡ結合糖鎖モデルを投入したモデルが存在し、ＡＵＣは０．８８９であった。このモデルでの感度は０．８６０、特異度０．８４１、一致率０．８５３であり、これはYouden IndexでもOptimum Distanceでも同様の結果であった。【０１３４】
上記組み合わせにおいて、ＭＡＨおよびＧＳＬ＿Ｉ＿Ａ４のレクチンシグナルは、シグナル強度が小さいことがＩｇＡ腎症の発症と関連していた。一方、ＨＰＡのレクチンシグナルは、シグナル強度が大きいことがＩｇＡ腎症の発症と関連していた。
【産業上の利用可能性】
【０１３５】
本発明は、例えば、ＩｇＡ腎症の診断に利用することができる。
【国際調査報告】
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