(57)【要約】  抗生物質やワクチンなどの薬剤にできるだけ依存することなく、健康な豚の飼育に寄与することができる飼料添加剤、飼料および豚の生産方法を提供することを課題とする。  核酸成分を豚の免疫活性用の飼料添加剤とする。また、当該飼料添加剤を植物性飼料および／または動物性飼料を含む主飼料と混合して豚用飼料とする。当該飼料添加剤は、主飼料の重量に対する前記核酸成分の重量の比率が０．０１〜５．００％（Ｗ／Ｗ）となるように配合される。【特許請求の範囲】
【請求項１】
核酸成分を含む、豚の免疫活性化用の飼料添加剤。
【請求項２】
前記核酸成分が、リボ核酸および／またはヌクレオチドを含む、請求項１に記載の飼料添加剤。
【請求項３】
植物性飼料および／または動物性飼料を含む主飼料と、請求項１または２に記載の飼料添加剤とを含む、豚用飼料であって、
当該豚用飼料中、前記飼料添加剤に由来する核酸成分は、前記主飼料に対する前記核酸成分の重量比率が０．０１〜５．００％（Ｗ／Ｗ）となるように配合されている、豚用飼料。
【請求項４】
豚の免疫活性化用である、請求項３に記載の飼料。
【請求項５】
離乳後の豚に給与用である、請求項３または４に記載の飼料。
【請求項６】
植物性飼料および／または動物性飼料を含む主飼料と、請求項１または２に記載の飼料添加剤とを併用して給与する豚の生産方法であって、給与される前記主飼料に対する前記飼料添加剤に由来する核酸成分の重量比率が０．０１〜５．００％（Ｗ／Ｗ）となるように前記飼料添加剤を給与する、豚の生産方法。
【請求項７】
離乳期またはそれ以後の豚に、前記飼料添加剤を給与する、請求項６に記載の豚の生産方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、豚の飼育に適した飼料添加剤および飼料、ならびにこれらを用いた豚の生産方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
一般的に、豚用の飼料としては、いわゆる配合飼料が用いられている。配合飼料は、豚の生育を促進し、且つ、健康な豚を飼育するために、さまざまな成分が工夫されて配合されている。【０００３】
養豚を含む畜産業では、病気を防ぐ観点から、抗生物質などの薬剤を投与することが知られている。しかし、抗生物質は養豚用としては高価なものが多く、生産コストを上昇させる一因となる。また、抗生物質は、使用を継続するうちにウイルスや菌などが薬剤耐性を獲得して効果が失われる可能性がある。さらに、人の食品となる豚に対し抗生物質を飼料に配合して大量に摂食させることについては、人に対する影響について懸念の声もある。【０００４】
感染症等の予防のためワクチンを接種することもある。しかし、ワクチンもまた養豚用としては高価なものが多く、しかも接種には多大な労力がかかる。さらにワクチンは、菌株の違いなどによって、効果がないか効果が乏しい場合がある。【０００５】
以上のように、病害対策として抗生物質やワクチンなどの薬剤利用がなされており、一定の有用性はあるものの、このような薬剤にできるだけ依存しないようにすることが求められている。【０００６】
抗生物質やワクチンにできるだけ依存せずに病気を予防するための他の手段が提案されている。例えば、ラクトバチルス・カゼイの菌体を有効成分とする養豚飼料用補助剤を飼料に配合することが提案されている（例えば、特許文献１）。また、所定の中鎖脂肪酸を細胞性免疫活性化剤として豚用飼料に配合することが提案されている（例えば、特許文献２）。【０００７】
また、飼料効率を向上させるために、家畜に核酸を投与することが提案されている（例えば、特許文献３）。飼料効率の改善により、体重増加などの効果を得ることができる。【０００８】
以上のように、病気の予防や飼料効率の向上などの観点から豚用の飼料に様々な成分を配合することが試みられてきた。しかしながら、豚において、核酸の給与と免疫性との関係については明らかになっていなかった。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００９】
【特許文献１】特開２０００−２８７６２６号公報
【特許文献２】特開２００１−１９０２３０号公報
【特許文献３】特開２００１−１９０２３０号公報
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１０】
以上のような状況に鑑み、本発明は、抗生物質やワクチンなどの薬剤にできるだけ依存することなく、健康な豚の飼育に寄与することができる飼料添加剤、飼料および豚の生産方法を提供することを課題とする。
【課題を解決するための手段】
【００１１】
本発明者等は、鋭意研究の結果、下記の手段によって上記課題を解決できることを見出し、本願発明を完成させるに至った。
〔１〕核酸成分を含む、豚の免疫活性化用の飼料添加剤。
〔２〕前記核酸成分が、リボ核酸および／またはヌクレオチドを含む、上記〔１〕に記載の飼料添加剤。
〔３〕植物性飼料および／または動物性飼料を含む主飼料と、上記〔１〕または〔２〕に記載の飼料添加剤とを含む、豚用飼料であって、
当該豚用飼料中、前記飼料添加剤に由来する核酸成分は、前記主飼料に対する前記核酸成分の重量比率が０．０１〜５．００％（Ｗ／Ｗ）となるように配合されている、豚用飼料。
〔４〕豚の免疫活性化用である、上記〔３〕に記載の飼料。
〔５〕離乳後の豚に給与用である、上記〔３〕または〔４〕に記載の飼料。
〔６〕植物性飼料および／または動物性飼料を含む主飼料と、上記〔１〕または〔２〕に記載の飼料添加剤とを併用して給与する豚の生産方法であって、給与される前記主飼料に対する前記飼料添加剤に由来する核酸成分の重量比率が０．０１〜５．００％（Ｗ／Ｗ）となるように前記飼料添加剤を給与する、豚の生産方法。
〔７〕離乳期またはそれ以後の豚に、前記飼料添加剤を給与する、上記〔６〕に記載の豚の生産方法。
【発明の効果】
【００１２】
本発明によれば、簡便に豚の免疫を活性化し、健康な豚の飼育に寄与することができる。
【発明を実施するための形態】
【００１３】
以下、本発明の実施形態について説明する。なお、特に断りない限り、数値範囲について「ＡＡ〜ＢＢ」という記載は、「ＡＡ以上、ＢＢ以下」であることを示す（ここで、「ＡＡ」および「ＢＢ」は任意の数値を示す）。また、下限および上限の単位は、特に断りない限り、後者（すなわち、ここでは「ＢＢ」）の直後に付された単位と同じである。
【００１４】
１．飼料添加剤
本発明の飼料添加剤は、核酸成分を有効成分として含む。本発明の飼料添加剤に含まれる核酸成分は、核酸またはその構成単位であるヌクレオチドでありうる。核酸成分を構成する糖の種類は、デオキシリボースおよびリボースのいずれでもよい。すなわち、核酸成分はデオキシリボ核酸（ＤＮＡ）およびリボ核酸（ＲＮＡ）のいずれでもよい。核酸成分を構成する塩基の種類としては、主にアデニン、グアニン、チミン、シトシン、ウラシルが挙げられ、すなわち核酸成分を構成するヌクレオシドの種類としては、アデノシン、グアノシン、シチジン、ウリジン、チミジン、が挙げられる。ヌクレオチドを構成するリン酸は、一リン酸であっても、複数のリン酸で構成されていてもよい。核酸成分として、市販品を用いてもよい。核酸成分は、１種を単独で配合してもよいし、複数種を混合して配合してもよい。核酸成分としては、好ましくは、リボ核酸およびヌクレオチドを用いうる。リボ核酸およびヌクレオチドは、いずれか一方を単独で用いてもよいし、双方を用いてもよい。
【００１５】
核酸成分の由来は特に制限はなく、人工合成したものでもよいし、天然物由来のものであってもよい。例えば、酵母などの微生物から抽出または精製したものを用いてもよい。このように合成、抽出または精製した核酸成分は、豚が摂食した際に、吸収されやすい形態とすることができる。廃材とされた生物資源、例えば廃材とされた木材に含まれる木質糖分を用いて酵母などの微生物を増殖し、核酸成分を得て、本発明の飼料添加物として配合して用いることにより、廃材とされていたものを有用物質に転換することができ、持続可能な循環型社会の形成に寄与することができる。
【００１６】
飼料添加剤は、一般に添加剤として採用される形態でありうる。飼料添加剤の形態としては、例えば、粉体、顆粒、マッシュ、ペレット、クランブル、およびフレークなどが挙げられる。飼料添加剤の形態は、単一形態であってもよいし、上記のような形態のうちの２つ以上の形態のものの混合形態、例えば、ペレットとフレークの混合物、マッシュとペレットの混合物など、としてもよい。本発明の飼料添加剤には、必要に応じ任意成分として、水分、油分、ｐＨ調整剤、酸化防止剤、防腐剤、色材、香料、賦形剤、ビタミン類、ホルモン類、アミノ酸類、抗生物質、抗菌剤などを配合してもよい。
【００１７】
２．飼料
本発明の豚用飼料は、植物性飼料および／または動物性飼料を含む主飼料と、上記本発明の飼料添加剤とを含む。飼料添加剤は、当該飼料添加剤に由来する核酸成分の主飼料に対する重量比率が０．０１〜５．００％（Ｗ／Ｗ）となるように、豚用飼料中に配合される。
【００１８】
主飼料は、植物性飼料および／または動物性飼料を含む。植物性飼料は、植物由来の飼料であり、例えば、トウモロコシ、マイロ、大麦、小麦、キャッサバ、米ぬか、ふすま、大豆かす、菜種かす、米、米ぬか、およびビート、並びにこれらの加工品などが挙げられる。また、動物性飼料は、動物由来の飼料であり、例えば、魚粉、ポークミール、チキンミール、脱脂粉乳、および濃縮ホエーなどが挙げられる。これらは一種を単独で用いてもよいし、混合して用いてもよい。
【００１９】
本発明の豚用飼料または主飼料は、植物性飼料および動物性飼料の他に、例えば炭酸カルシウムなどの無機成分を含んでいてもよい。主飼料は、養豚用に一般に用いられている混合飼料、配合飼料、または粗飼料などを用いてもよい。また、本発明の豚用飼料または主飼料には、必要に応じ任意成分として、水分、油分、ｐＨ調整剤、酸化防止剤、防腐剤、色材、香料、賦形剤、ビタミン類、ホルモン類、アミノ酸類、抗生物質、抗菌剤などを配合してもよい。
【００２０】
飼料添加剤により添加される核酸成分の下限量は、主飼料に対する重量比率として、少なくとも０．０１％（Ｗ／Ｗ）以上であり、好ましくは０．０３％（Ｗ／Ｗ）以上であり、より好ましくは０．０４％（Ｗ／Ｗ）以上であり、さらに好ましくは０．０５％（Ｗ／Ｗ）以上である。飼料添加剤により添加される核酸成分の上限量は、主飼料に対する重量比率として、高々５．００％（Ｗ／Ｗ）であり、好ましくは３．００％（Ｗ／Ｗ）以下であり、より好ましくは２．００％（Ｗ／Ｗ）以下であり、さらに好ましくは１．００％（Ｗ／Ｗ）以下である。このような下限より少ない場合には、飼料添加剤を添加した効果が現れにくい。他方、このような上限を超えると、かえって炎症反応を活性化させすぎる可能性があり、体重の増加や小腸絨毛高さなどについて、好ましくない影響がでることがありうる。
【００２１】
本発明の豚用飼料は、豚の免疫活性化用の飼料添加剤を配合するため、豚の免疫活性化用の飼料としてもよい。本発明の豚用飼料によれば、飼料を与えるという豚の飼育において必須の工程を行うことに伴って、簡便に豚の免疫を活性化することができ、健康な豚の飼育に寄与することができる。また、このような手法によって豚の免疫を活性化できるため、抗生物質やワクチンに頼る必要性を低減または不要にすることができる。
【００２２】
本発明の豚用飼料の給与は豚の成育段階のどの段階でも行いうるが、好ましくは、離乳期またはそれ以後の豚に給与される。本発明の豚用飼料は、全身性の免疫を効果的に活性化しうると考えられる。一般に、離乳直後の豚は、肺炎などの全身性の細菌性疾患に罹ることは希であり、もっぱら腸管感染症に罹患することが多い。したがって、本発明の豚用飼料は、全身性の疾患に罹りやすくなる離乳後期から供与し始めることが好ましい。
【００２３】
３．豚の生産方法
本発明の他の一実施形態として、上記本発明の飼料添加剤を用いた豚の生産方法が提供される。
【００２４】
本発明の豚の生産方法では、植物性飼料および／または動物性飼料を含む主飼料と、核酸成分を含む飼料添加剤とを併用して給与する。ここで、「併用」との用語は、（１）飼料添加剤と主飼料とを別々に給与する形態と、（２）飼料添加剤と主飼料とを混合し、混合肥料（または配合肥料）として給与する形態の双方を含む意味で用いる。飼料添加剤と主飼料とを別々に用いる場合において、それぞれを給与するタイミングは、同じであってもよいし、異なっていてもよい。
【００２５】
飼料添加剤は、給与される主飼料に対する核酸成分の重量比率として、総じて、０．０１〜５．００％（Ｗ／Ｗ）となるように給与される。好ましくは、１日の中での給与、より好ましくは毎回の給与において、当該比率で給与する。
【００２６】
主飼料の重量に対する核酸成分の重量の好ましい比率については、上記本発明の豚用飼料にて説明した数値と同様である。また、本発明の豚の生産方法は、上記本発明の豚用飼料のところで説明したのと同様に、離乳期またはそれ以後の豚に対して好適である。
【実施例】
【００２７】
以下に実施例を挙げて本発明について具体的に説明するが、本発明の技術的範囲が下記の実施例に限定されるものではない。【００２８】
核酸成分を離乳期の仔豚へ投与して、免疫活性効果について検討を行うために、以下の実験を行った。【００２９】
＜１．供試動物＞
一般的な一貫経営農場で飼育されている交雑種仔豚（２１日齢）、１２頭（雌雄各６頭）を供試動物として用いた。【００３０】
＜２．基礎飼料、添加飼料、および核酸成分＞
基礎飼料として、ＳＤＳ  Ｎｏ．１（フィード・ワン社製）を用いた。
基礎飼料に所定量の核酸成分を配合して、添加飼料を用意した。基礎飼料に添加するＲＮＡとして、酵母由来の核酸であるＲＮＡ−Ｍ（日本製紙社製）を用いた。基礎飼料に添加するヌクレオチドとして、酵母由来の核酸であるＮＰＣ  ヌクレオチド（日本製紙社製）を用いた。【００３１】
＜３．試験群＞
上記供試動物を、以下の１群から３群に分けて、試験に供試した。
１群：被験物質無給与の対照群、
２群：ＲＮＡＭ  ０．１％添加飼料給与群
３群：ヌクレオチド  ０．１％添加飼料給与群
計：３群×４頭【００３２】
＜４．飼育＞
養豚場で飼育されている健康な１腹の母豚から、健康な哺乳期の２１日齢仔豚を６頭選抜した。導入時に体重測定を行い、体重及び性別が均一になるように配慮して、上述のように、２頭ずつ３群に群分けした。実験施設内に個体毎に飼育できる代謝ケージを設置し、その中に１頭ずつ収容して個体管理を行った。保温灯で温度管理した。導入時（試験開始後０日）から剖検時（試験開始後７日）まで各群所定の飼料を給餌した。飼料及び飲水は試験期間を通して自由摂取とした。【００３３】
観察期間は試験開始後０から７日までとした。試験期間中は毎日臨床的な観察（元気、食欲、姿勢、下痢、死亡）及び飼料摂取量測定を行った。試験開始後０及び７日に体重を測定した。上記飼育終了後に、再度仔豚を６頭、同条件で導入し、反復試験を行った。【００３４】
＜５．剖検＞
剖検直前に頸静脈から全頭採血を行った。【００３５】
ペントバルビタールを過剰量注射後、開腹し、腹部大静脈からヘパリン血を採取した。その後、放血致死させた。開腹後、各臓器及び組織の異常を肉眼的に観察した。回腸、盲腸及び直腸内容物を採取した。肺、腎臓、肝臓、脾臓、腸間膜リンパ節及びその他異常部位を採取して１０％中性緩衝ホルマリンで固定した。また、小腸、肺洗浄液及び脾臓はＲＮＡ−ｌａｔｅｒに浸漬し、凍結保存した。【００３６】
＜６．肺胞マクロファージ活性化＞
剖検時に肺胞洗浄液を採取した。採取後、即下記の操作を実施し、マクロファージ貪食活性について検討を行った。肺胞洗浄液中の生細胞数を１×１０6個／ｍＬとなるように２４穴プレートに播種した。同様にＦＩＴＣラベルしたＡ．ｐｒｅｕｒｏｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ培養後加熱死菌体またはＳ．Ｃｈｏｌｅｒａｅｓｕｉｓ培養後加熱死菌体を終濃度で２００μｇ／ｍＬ添加した。添加しないＢｌａｎｋ区も設けた。培養は３反復で実施した。５％ＣＯ2インキュベーター内で４時間培養後、ＦＩＴＣラベルした病原菌を貪食したマクロファージ数をフローサイトメーターで計測した。【００３７】
＜７．イムノグロブリン濃度の測定＞
剖検時の回腸および盲腸内容物中の総ＩｇＡ濃度をＥＬＩＳＡで測定した。剖検時血漿中の総ＩｇＧ濃度をＥＬＩＳＡで測定した。分析はＯｇａｗａ  ｅｔ  ａｌ．（２０１４）に準拠して行った。【００３８】
＜８．成熟リンパ球の割合＞
剖検時に採取した血液及び一部の脾臓は、即下記の操作を実施した。
赤血球をＡＣＫ  ｌｙｓｉｎｇ  ｂｕｆｆｅｒを用いて除去し、ＨＢＳＳで２回洗浄後、ＲＰＭＩ  １６４０培地に細胞を懸濁し、単位当たりの細胞数をカウントし、記録した（血液なら１ｍＬ中、脾臓なら１ｇ中）。適宜希釈後、ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ８、ＣＤ２１抗体で染色し、各抗体の陽性細胞数を速やかにＢＤ  ＡｃｃｕｒｉTM  Ｃ６  フローサイトメーターで解析した。ＣＤ３＋ＣＤ４＋ＣＤ８＋陽性細胞割合が多いと、成熟したＴリンパ球が多いと判断できる。ＣＤ２１陽性細胞割合でＢ細胞割合が判る。【００３９】
剖検時血液中の肺胞マクロファージ活性、総ＩｇＡ濃度および総ＩｇＧ濃度についての測定結果を表１に示す。血液における白血球、リンパ球およびリンパ球表面マーカーについての測定結果を表２−１〜２−３に示す。脾細胞における白血球、リンパ球およびリンパ球表面マーカーについての測定結果を表３−１〜３−３に示す。【００４０】
【表１】
2020189746.tif 000002
【００４１】
【表２−１】
2020189746.tif 000003
【００４２】
【表２−２】
2020189746.tif 000004
【００４３】
【表２−３】
2020189746.tif 000005
【００４４】
【表３−１】
2020189746.tif 000006
【００４５】
【表３−２】
2020189746.tif 000007
【００４６】
【表３−３】
2020189746.tif 000008
【００４７】
＜９．結果＞
表１に示されるように、肺胞マクロファージの貪食能は，ＲＮＡＭ又はヌクレオチドを給与することで活性化する傾向が認められた。また、血漿中の総ＩｇＧ濃度もＲＮＡＭ又はヌクレオチドを給与することで生産亢進する傾向が認められた。表２−１〜表２−３、および表３−１〜表３−３に示されるように、血液中及び脾臓中のリンパ球でも，成熟Ｔリンパ球の指標であるＣＤ３＋ＣＤ４＋ＣＤ８＋細胞数がＲＮＡＭ又はヌクレオチドを給与することで高値化しており、またＢ細胞の指標であるＣＤ２１＋細胞数も高値化する傾向を示した。
【手続補正書】
【提出日】令和3年8月6日(2021.8.6)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
リボ核酸を有効成分とする、豚の免疫活性化用の飼料添加剤。
【請求項２】
前記豚が、離乳期またはそれ以後の豚である、請求項１に記載の飼料添加剤。
【請求項３】
植物性飼料および／または動物性飼料を含む主飼料と、請求項１または２に記載の飼料添加剤とを含む、豚用飼料であって、
当該豚用飼料中、前記飼料添加剤に由来するリボ核酸は、前記主飼料に対する前記リボ核酸の重量比率が０．０１〜５．００％（Ｗ／Ｗ）となるように配合されている、豚用飼料。
【請求項４】
豚の免疫活性化用である、請求項３に記載の飼料。
【請求項５】
離乳期またはそれ以後の豚に給与用である、請求項３または４に記載の飼料。
【請求項６】
植物性飼料および／または動物性飼料を含む主飼料と、請求項１または２に記載の飼料添加剤とを併用して給与する豚の生産方法であって、給与される前記主飼料に対する前記飼料添加剤に由来するリボ核酸の重量比率が０．０１〜５．００％（Ｗ／Ｗ）となるように前記飼料添加剤を給与する、豚の生産方法。
【請求項７】
離乳期またはそれ以後の豚に、前記飼料添加剤を給与する、請求項６に記載の豚の生産方法。
【国際調査報告】
2020189746.tif 000009
2020189746.tif 000010
2020189746.tif 000011
2020189746.tif 000012