(57)【要約】  下記いずれかの蛍光性化合物、及びこの化合物を有する蛍光標識生体物質。2019230963.tif 000090  ＸはＣＲ５又はＮを、Ｒ１〜Ｒ７、Ｑ１、Ｑ２、Ｌ１及びＬ２は特定の基を示す。  環β１及び環β２の環員数は５〜８である。  Ｒ１〜Ｒ７、Ｌ１、Ｌ２、Ｑ１及びＱ２のうち少なくとも１つは、特定の親水性基を有する。  ただし、環β１及び環β２の環員数が６であり、かつ、Ｌ１及びＬ２がアリーレン基である場合、Ｒ５は、Ｃ１８以上の直鎖アルキル基置換アリール基ではない。また、上記環β１、環β２、Ｌ１及びＬ２の規定に加え、Ｒ５がジピロメテンホウ素錯体構造を有する置換基を有する場合、このジピロメテンホウ素錯体構造はホウ素原子に対してジピロメテン骨格が３座配位又は４座配位で配位結合する構造を有する。
2019230963.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
下記式（１）又は式（４）のいずれかで表される蛍光性化合物。
【化１】
2019230963.tif 000083
式中、ＸはＣＲ５又はＮを示す。
Ｒ１〜Ｒ６は、ハロゲン原子、シアノ基又は下記式（Ａ）で表される基を示す。
Ｒ７は、アルキル基、シクロアルキル基、脂肪族複素環基、アルケニル基、シクロアルケニル基、アルキニル基、水酸基、メルカプト基、アルコキシ基、アルキルチオ基、アリールオキシ基、アリールチオ基、アリール基、ヘテロアリール基又はハロゲン原子を示す。ただし、Ｒ６とＲ７は互いに結合して環を形成することはない。
Ｑ１及びＱ２は、下記式（１−１）〜式（１−３）のいずれかで表される基を示す。
Ｌ１及びＬ２は、アルキレン基、アルケニレン基、アリーレン基、ヘテロアリーレン基、シクロアルキレン基、シクロアルケニレン基、２価の脂肪族複素環基、もしくは、下記式（１−１）〜式（１−８）のいずれかで表される基、又は、これらを２〜４種組み合わせた連結基を示す。
環β１及び環β２の環員数は５〜８である。
ただし、Ｒ１〜Ｒ７、Ｌ１、Ｌ２、Ｑ１及びＱ２のうち少なくとも１つは、カルボキシ基もしくはその塩、スルホ基もしくはその塩、ホスホノ基もしくはその塩、オニオ基及びポリアミノ酸残基の少なくとも１種を有する。
ただし、ＸがＣＲ５であって、該Ｒ５が式（Ａ）で表される基であり、環β１及び環β２の環員数が６であり、かつ、Ｌ１及びＬ２がアリーレン基である場合、（ａ）Ｌ３が単結合であって、かつＲ１１１が炭素数１８以上の直鎖アルキル基を置換基として有するアリール基であることはなく、（ｂ）Ｌ３がアリーレン基であって、かつＲ１１１が炭素数１８以上の直鎖アルキル基であることはない。また、ＸがＣＲ５であって、該Ｒ５が式（Ａ）で表される基であり、環β１及び環β２の環員数が６であり、Ｌ１及びＬ２がアリーレン基であり、かつ、Ｒ１１１がジピロメテンホウ素錯体構造を有する置換基を有する場合、当該ジピロメテンホウ素錯体構造はホウ素原子に対してジピロメテン骨格が３座配位又は４座配位で配位結合する構造を有する。
【化２】
2019230963.tif 000084
式中、Ｌ３は、単結合、又は、アルキレン基、アリーレン基及び下記式（１−１）〜式（１−８）のいずれかで表される基のうちの１種又は２種以上を組み合わせた連結基を示す。
Ｒ１１１は、水素原子、アルキル基、アルケニル基、アルキニル基、アリール基、ヘテロアリール基、又は、１価の脂肪族複素環基を示す。
＊は結合部を示す。
【化３】
2019230963.tif 000085
式中、Ｒ１１及びＲ１２は水素原子又は置換基を示す。
＊は結合部を示す。
【請求項２】
前記Ｑ１及びＱ２が、いずれも、前記式（１−１）で表される基である、請求項１に記載の蛍光性化合物。
【請求項３】
前記ＸがＣＲ５であって、該Ｒ５が前記式（Ａ）で表され、該式（Ａ）中のＬ３及びＲ１１１が下記を満たす、請求項１又は２に記載の蛍光性化合物。
前記Ｌ３が単結合であって、前記Ｒ１１１が水素原子、アルキル基、アルケニル基、アルキニル基、アリール基又はヘテロアリール基であるか、前記Ｌ３がアルキレン基、アリーレン基及び上記式（１−１）〜（１−８）のいずれかで表される基のうちの１種または２種以上を組み合わせた基であって、前記Ｒ１１１が水素原子である。
【請求項４】
前記Ｒ３及びＲ４の少なくとも１つが、カルボキシ基もしくはその塩を含む基、スルホ基もしくはその塩を含む基、ホスホノ基もしくはその塩を含む基、オニオ基を含む基、又は、ポリアミノ酸残基を含む基である、請求項１〜３のいずれか１項に記載の蛍光性化合物。
【請求項５】
前記Ｒ３及びＲ４の少なくとも１つが、カルボキシ基もしくはその塩、スルホ基もしくはその塩、又は、ホスホノ基もしくはその塩である、請求項１〜４のいずれか１項に記載の蛍光性化合物。
【請求項６】
前記Ｒ３及びＲ４の少なくとも１つがスルホ基もしくはその塩である、請求項１〜５のいずれか１項に記載の蛍光性化合物。
【請求項７】
前記Ｌ１及びＬ２が、アルキレン基、エテニレン基、アリーレン基、ヘテロアリーレン基、シクロアルキレン基もしくは２価の脂肪族複素環基、又はこれらを２種組み合わせた連結基であって、前記環β１及び環β２の環員数が６〜８である、請求項１〜６のいずれか１項に記載の蛍光性化合物。
【請求項８】
下記式（２）または式（５）のいずれかで表される請求項１〜７のいずれか１項に記載の蛍光性化合物。
【化４】
2019230963.tif 000086
式中、ＸはＣＲ５又はＮを示す。
Ｒ１〜Ｒ７及びＱは上記式（１）又は（４）におけるＲ１〜Ｒ７及びＱ１と同義である。
環Ａは炭化水素環又はヘテロ環を示す。
Ｌ１１は、単結合、又は、アルキレン基、アルケニレン基、アリーレン基、ヘテロアリーレン基、シクロアルキレン基、２価の脂肪族複素環基もしくは上記式（１−１）〜式（１−８）のいずれかで表される基、もしくは、これらの基の２種を組み合わせた連結基を示す。
ただし、環β１１及び環β２１の環員数は６〜８である。
【請求項９】
下記式（３）または式（６）のいずれかで表される請求項１〜８のいずれか１項に記載の蛍光性化合物。
【化５】
2019230963.tif 000087
式中、ＸはＣＲ５又はＮを示す。
Ｒ１〜Ｒ７及びＱは上記式（１）又は（４）におけるＲ１〜Ｒ７及びＱ１と同義であり、Ｌ１１は上記式（２）又は（５）におけるＬ１１と同義である。
Ｒ８は置換基を示し、ｎは０〜４の整数である。
ただし、環β１１及び環β２１の環員数は６〜８である。
【請求項１０】
下記式（７）または式（８）のいずれかで表される請求項１〜６のいずれか１項に記載の蛍光性化合物。
【化６】
2019230963.tif 000088
式中、ＸはＣＲ５又はＮを示す。
Ｒ１〜Ｒ７及びＱは上記式（１）又は（４）におけるＲ１〜Ｒ７及びＱ１と同義である。
Ｌ１２は、単結合、又は、アルキレン基、アルケニレン基、アリーレン基、ヘテロアリーレン基、シクロアルキレン基、２価の脂肪族複素環基もしくは上記式（１−１）〜式（１−８）のいずれかで表される基、もしくは、これらの基の２種を組み合わせた連結基を示す。
Ｌ１３は、メチレン基、又は、上記式（１−１）〜式（１−８）のいずれかで表される基を示す。
ただし、環β１２及び環β２２の環員数は５〜８である。
【請求項１１】
下記式（９）で表される請求項１〜６のいずれか１項に記載の蛍光性化合物。
【化７】
2019230963.tif 000089
式中、ＸはＣＲ５又はＮを示す。
Ｒ１〜Ｒ５及びＱは上記式（１）又は（４）におけるＲ１〜Ｒ５及びＱ１と同義である。
Ｌ１１及びＬ１２は、単結合、又は、アルキレン基、アルケニレン基、アリーレン基、ヘテロアリーレン基、シクロアルキレン基、２価の脂肪族複素環基もしくは上記式（１−１）〜式（１−８）のいずれかで表される基、もしくは、これらの基の２種を組み合わせた連結基を示す。
Ｌ１３は、メチレン基、又は、上記式（１−１）〜式（１−８）のいずれかで表される基を示す。
環Ａは炭化水素環又はヘテロ環を示す。
ただし、環β１２の環員数は５〜８であって、環β２１の環員数は６〜８である。
【請求項１２】
前記Ｒ１〜Ｒ８、Ｌ１、Ｌ２、Ｌ１１〜Ｌ１３、Ｑ、Ｑ１及びＱ２の少なくとも一つが、生体物質との結合性部位を有する請求項１〜１１のいずれか１項に記載の蛍光性化合物。
【請求項１３】
請求項１２に記載の蛍光性化合物と生体物質とが結合してなる蛍光標識生体物質。
【請求項１４】
前記生体物質がタンパク質、ペプチド、アミノ酸、核酸、糖鎖及び脂質のいずれかである請求項１３に記載の蛍光標識生体物質。
【請求項１５】
前記蛍光性化合物と前記生体物質との結合が下記ｉ）〜ｖ）のいずれかによる結合である請求項１３又は１４に記載の蛍光標識生体物質。
ｉ）ペプチド間での非共有結合又は共有結合、
ii）蛍光性化合物中の長鎖アルキル基と生体物質中の脂質二重膜又は脂質とのファンデルワールス相互作用、
iii）蛍光性化合物中のＮ−ヒドロキシスクシンイミドエステルと生体物質中のアミノ基とを反応させてなるアミド結合、
iv）蛍光性化合物中のマレイミド基と生体物質中のスルファニル基とを反応させてなるチオエーテル結合、
ｖ）蛍光性化合物中のアジド基と生体物質中のアセチレン基、又は、蛍光性化合物中のアセチレン基と生体物質中のアジド基とをＣｌｉｃｋ反応させてなる、トリアゾール環の形成を伴う結合
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、蛍光性化合物及びこれを用いた蛍光標識生体物質に関する。
【背景技術】
【０００２】
生体中の生体分子、細胞及び組織等の動態及び機能等を解析するバイオイメージング技術が、種々の疾患の診断等に活用されている。近年、生体の特定の部位を蛍光色素により可視化して観察する生体蛍光イメージングが、生体観察の新しい技術として期待されている。
この生体蛍光イメージングでは、一般的には有機蛍光色素が用いられる。しかし、有機蛍光色素は耐光性が低く、励起光照射により劣化し、目的の生体観察を十分に行えない場合がある。【０００３】
ジピロメテンホウ素錯体は、量子収率が高く、シャープな発光特性を示す蛍光色素として知られており、様々な分野で用いられている。
例えば、特許文献１には、腫瘍の診断への使用が期待される蛍光脂質エーテル化合物が記載されており、この蛍光脂質エーテル化合物中のフルオロフォアの一例として、ジピロメテンホウ素錯体が記載されている。また、特許文献２には、化学結合を通したエネルギー移動カセットが記載されており、このカセットのドナー又はアクゼプターの一例としてジピロメテンホウ素錯体が記載されている。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００４】
【特許文献１】特開２０１６−１９３９０７号公報
【特許文献２】米国特許出願公開第２００９／０１９２２９８号明細書
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
しかし、ジピロメテンホウ素錯体は一般に水溶性に劣り、耐光性も低い。そのため、生体蛍光イメージング等の生体観察ツールへのジピロメテンホウ素錯体の適用には、ジピロメテンホウ素錯体に水溶性と耐光性の両特性を高いレベルで付与する必要がある。この観点で本発明者らが検討したところ、高水溶性のジピロメテンホウ素錯体の報告はあるものの、これらの高水溶性ジピロメテンホウ素錯体は褪色しやすく、依然、耐光性に劣ることがわかってきた。
本発明は、ジピロメテンホウ素錯体構造を有し、生体蛍光イメージングに求められる十分な親水性と優れた耐光性の両立を実現する蛍光性化合物を提供することを課題とする。また本発明は、この蛍光性化合物と生体物質とを結合してなる蛍光標識生体物質を提供することを課題とする。
【課題を解決するための手段】
【０００６】
本発明者らは、既存の水溶性ジピロメテンホウ素錯体の褪色は、主にホウ素原子に対する、活性酸素による光分解が原因であると考えた。この考えの下、ジピロメテン骨格に置換基を導入した化合物を３座配位子又は４座配位子としてホウ素原子に配位させた、特定構造を有する化合物に、さらに特定の親水性基を導入することにより、褪色を抑えることに成功し、親水性にも優れた蛍光色素が得られることを見出した。本発明はこれらの知見に基づき更に検討を重ね、完成されるに至ったものである。【０００７】
すなわち、本発明の上記課題は、下記の手段によって解決された。
＜１＞
下記式（１）又は式（４）のいずれかで表される蛍光性化合物。
【化１】
2019230963.tif 000003
式中、ＸはＣＲ５又はＮを示す。
Ｒ１〜Ｒ６は、ハロゲン原子、シアノ基又は下記式（Ａ）で表される基を示す。
Ｒ７は、アルキル基、シクロアルキル基、脂肪族複素環基、アルケニル基、シクロアルケニル基、アルキニル基、水酸基、メルカプト基、アルコキシ基、アルキルチオ基、アリールオキシ基、アリールチオ基、アリール基、ヘテロアリール基又はハロゲン原子を示す。ただし、Ｒ６とＲ７は互いに結合して環を形成することはない。
Ｑ１及びＱ２は、下記式（１−１）〜式（１−３）のいずれかで表される基を示す。
Ｌ１及びＬ２は、アルキレン基、アルケニレン基、アリーレン基、ヘテロアリーレン基、シクロアルキレン基、シクロアルケニレン基、２価の脂肪族複素環基、もしくは、下記式（１−１）〜式（１−８）のいずれかで表される基、又は、これらを２〜４種組み合わせた連結基を示す。
環β１及び環β２の環員数は５〜８である。
ただし、Ｒ１〜Ｒ７、Ｌ１、Ｌ２、Ｑ１及びＱ２のうち少なくとも１つは、カルボキシ基もしくはその塩、スルホ基もしくはその塩、ホスホノ基もしくはその塩、オニオ基及びポリアミノ酸残基の少なくとも１種を有する。
ただし、ＸがＣＲ５であって、このＲ５が式（Ａ）で表される基であり、環β１及び環β２の環員数が６であり、かつ、Ｌ１及びＬ２がアリーレン基である場合、（ａ）Ｌ３が単結合であって、かつＲ１１１が炭素数１８以上の直鎖アルキル基を置換基として有するアリール基であることはなく、（ｂ）Ｌ３がアリーレン基であって、かつＲ１１１が炭素数１８以上の直鎖アルキル基であることはない。また、ＸがＣＲ５であって、このＲ５が式（Ａ）で表される基であり、環β１及び環β２の環員数が６であり、Ｌ１及びＬ２がアリーレン基であり、かつ、Ｒ１１１がジピロメテンホウ素錯体構造を有する置換基を有する場合、このジピロメテンホウ素錯体構造はホウ素原子に対してジピロメテン骨格が３座配位又は４座配位で配位結合する構造を有する。
【化２】
2019230963.tif 000004
式中、Ｌ３は、単結合、又は、アルキレン基、アリーレン基及び下記式（１−１）〜式（１−８）のいずれかで表される基のうちの１種又は２種以上を組み合わせた連結基を示す。
Ｒ１１１は、水素原子、アルキル基、アルケニル基、アルキニル基、アリール基、ヘテロアリール基、又は、１価の脂肪族複素環基を示す。
＊は結合部を示す。
【化３】
2019230963.tif 000005
式中、Ｒ１１及びＲ１２は水素原子又は置換基を示す。
＊は結合部を示す。
＜２＞
上記Ｑ１及びＱ２が、いずれも、上記式（１−１）で表される基である、＜１＞に記載の蛍光性化合物。
＜３＞
上記ＸがＣＲ５であって、このＲ５が上記式（Ａ）で表され、この式（Ａ）中のＬ３及びＲ１１１が下記を満たす、＜１＞又は＜２＞に記載の蛍光性化合物。
上記Ｌ３が単結合であって、上記Ｒ１１１が水素原子、アルキル基、アルケニル基、アルキニル基、アリール基又はヘテロアリール基であるか、上記Ｌ３がアルキレン基、アリーレン基及び上記式（１−１）〜（１−８）のいずれかで表される基のうちの１種または２種以上を組み合わせた基であって、上記Ｒ１１１が水素原子である。
＜４＞
上記Ｒ３及びＲ４の少なくとも１つが、カルボキシ基もしくはその塩を含む基、スルホ基もしくはその塩を含む基、ホスホノ基もしくはその塩を含む基、オニオ基を含む基、又は、ポリアミノ酸残基を含む基である、＜１＞〜＜３＞のいずれか１つに記載の蛍光性化合物。
＜５＞
上記Ｒ３及びＲ４の少なくとも１つが、カルボキシ基もしくはその塩、スルホ基もしくはその塩、又は、ホスホノ基もしくはその塩である、＜１＞〜＜４＞のいずれか１つに記載の蛍光性化合物。
＜６＞
上記Ｒ３及びＲ４の少なくとも１つがスルホ基もしくはその塩である、＜１＞〜＜５＞のいずれか１つに記載の蛍光性化合物。
＜７＞
上記Ｌ１及びＬ２が、アルキレン基、エテニレン基、アリーレン基、ヘテロアリーレン基、シクロアルキレン基もしくは２価の脂肪族複素環基、又はこれらを２種組み合わせた連結基であって、上記環β１及び環β２の環員数が６〜８である、＜１＞〜＜６＞のいずれか１つに記載の蛍光性化合物。【０００８】
＜８＞
下記式（２）または式（５）のいずれかで表される＜１＞〜＜７＞のいずれか１つに記載の蛍光性化合物。
【化４】
2019230963.tif 000006
式中、ＸはＣＲ５又はＮを示す。
Ｒ１〜Ｒ７及びＱは上記式（１）又は（４）におけるＲ１〜Ｒ７及びＱ１と同義である。
環Ａは炭化水素環又はヘテロ環を示す。
Ｌ１１は、単結合、又は、アルキレン基、アルケニレン基、アリーレン基、ヘテロアリーレン基、シクロアルキレン基、２価の脂肪族複素環基もしくは上記式（１−１）〜式（１−８）のいずれかで表される基、もしくはこれらの基の２種を組み合わせた連結基を示す。
ただし、環β１１及び環β２１の環員数は６〜８である。
＜９＞
下記式（３）または式（６）のいずれかで表される＜１＞〜＜８＞のいずれか１つに記載の蛍光性化合物。
【化５】
2019230963.tif 000007
式中、ＸはＣＲ５又はＮを示す。
Ｒ１〜Ｒ７及びＱは上記式（１）又は（４）におけるＲ１〜Ｒ７及びＱ１と同義であり、Ｌ１１は上記式（２）又は（５）におけるＬ１１と同義である。
Ｒ８は置換基を示し、ｎは０〜４の整数である。
ただし、環β１１及び環β２１の環員数は６〜８である。【０００９】
＜１０＞
下記式（７）または式（８）のいずれかで表される＜１＞〜＜６＞のいずれか１つに記載の蛍光性化合物。
【化６】
2019230963.tif 000008
式中、ＸはＣＲ５又はＮを示す。
Ｒ１〜Ｒ７及びＱは上記式（１）又は（４）におけるＲ１〜Ｒ７及びＱ１と同義である。
Ｌ１２は、単結合、又は、アルキレン基、アルケニレン基、アリーレン基、ヘテロアリーレン基、シクロアルキレン基、２価の脂肪族複素環基もしくは上記式（１−１）〜式（１−８）のいずれかで表される基、もしくは、これらの基の２種を組み合わせた連結基を示す。
Ｌ１３は、メチレン基、又は、上記式（１−１）〜式（１−８）のいずれかで表される基を示す。
ただし、環β１２及び環β２２の環員数は５〜８である。
＜１１＞
下記式（９）で表される＜１＞〜＜６＞のいずれか１つに記載の蛍光性化合物。
【化７】
2019230963.tif 000009
式中、ＸはＣＲ５又はＮを示す。
Ｒ１〜Ｒ５及びＱは上記式（１）又は（４）におけるＲ１〜Ｒ５及びＱ１と同義である。
Ｌ１１及びＬ１２は、単結合、又は、アルキレン基、アルケニレン基、アリーレン基、ヘテロアリーレン基、シクロアルキレン基、２価の脂肪族複素環基もしくは上記式（１−１）〜式（１−８）のいずれかで表される基、もしくは、これらの基の２種を組み合わせた連結基を示す。
Ｌ１３は、メチレン基、又は、上記式（１−１）〜式（１−８）のいずれかで表される基を示す。
環Ａは炭化水素環又はヘテロ環を示す。
ただし、環β１２の環員数は５〜８であって、環β２１の環員数は６〜８である。
＜１２＞
上記Ｒ１〜Ｒ８、Ｌ１、Ｌ２、Ｌ１１〜Ｌ１３、Ｑ、Ｑ１及びＱ２の少なくとも一つが、生体物質との結合性部位を有する＜１＞〜＜１１＞のいずれか１つに記載の蛍光性化合物。
＜１３＞
上記＜１２＞に記載の蛍光性化合物と生体物質とが結合してなる蛍光標識生体物質。
＜１４＞
上記生体物質がタンパク質、ペプチド、アミノ酸、核酸、糖鎖及び脂質のいずれかである＜１３＞に記載の蛍光標識生体物質。
＜１５＞
上記蛍光性化合物と上記生体物質との結合が下記ｉ）〜ｖ）のいずれかによる結合である＜１３＞又は＜１４＞に記載の蛍光標識生体物質。
ｉ）ペプチド間での非共有結合又は共有結合、
ii）蛍光性化合物中の長鎖アルキル基と生体物質中の脂質二重膜又は脂質とのファンデルワールス相互作用、
iii）蛍光性化合物中のＮ−ヒドロキシスクシンイミドエステルと生体物質中のアミノ基とを反応させてなるアミド結合、
iv）蛍光性化合物中のマレイミド基と生体物質中のスルファニル基とを反応させてなるチオエーテル結合、
ｖ）蛍光性化合物中のアジド基と生体物質中のアセチレン基、又は、蛍光性化合物中のアセチレン基と生体物質中のアジド基とをＣｌｉｃｋ反応させてなる、トリアゾール環の形成を伴う結合
【発明の効果】
【００１０】
本発明の蛍光性化合物は、生体蛍光イメージングに求められる十分な親水性と高い耐光性の両立を実現する蛍光性化合物である。また、本発明の蛍光標識生体物質は親水性と耐光性の両特性に優れ、生体蛍光イメージングに好適に用いることができる。
【発明を実施するための形態】
【００１１】
本発明において、特定の符号又は式で表示された置換基もしくは連結基等（以下、置換基等という）が複数あるとき、又は、複数の置換基等を同時に規定するときには、特段の断りがない限り、それぞれの置換基等は互いに同一でも異なっていてもよい。このことは、置換基等の数の規定についても同様である。また、複数の置換基等が近接するとき（特に、隣接するとき）には、特段の断りがない限り、それらが互いに連結して環を形成していてもよい。また、特段の断りがない限り、環、例えば脂環、芳香族環及びヘテロ環は、さらに縮環して縮合環を形成していてもよい。
本明細書において、特段の断りがない限り、二重結合については、分子内にＥ型及びＺ型が存在する場合、そのいずれであっても、またこれらの混合物であってもよい。また、特段の断りがない限り、化合物としてジアステレオマー及びエナンチオマーが存在する場合には、そのいずれであっても、またこれらの混合物であってもよい。例えば、本発明の蛍光性化合物のうち３座配位のジピロメテン骨格を有する化合物には、ホウ素原子を不斉中心とするエナンチオマーが包含される。
【００１２】
本発明において、化合物（錯体を含む。）及び置換基の表示については、化合物そのもの及び置換基そのもののほか、その塩、そのイオンを含む意味に用いる。例えば、式（Ａ）におけるＲ１１１が解離性の水素原子（好ましくは、後述する特定の親水性基Ｐｉにおける解離性の水素原子）である場合には、水素原子が解離して、塩構造（好ましくは、特定の親水性基Ｐｉにおける塩）を取っていてもよい。
塩構造の場合、その塩の種類は１種類でもよく、２種類以上混在していてもよく、化合物中で塩型と遊離酸構造の基が混在していてもよく、また、塩構造の化合物と遊離酸構造化合物が混在していてもよい。
また、本発明の効果を損なわない範囲で、構造の一部を変化させたものを含む意味である。更に、置換又は無置換を明記していない化合物については、本発明の効果を損なわない範囲で、任意の置換基を有していてもよい意味である。このことは、置換基（例えば、「アルキル基」、「メチル基」、「メチル」などのように表現される基）及び連結基（例えば、「アルキレン基」、「メチレン基」、「メチレン」などのように表現される基）についても同様である。このような任意の置換基のうち、本発明において好ましい置換基は、後述の置換基群Ｔから選択される置換基である。
本発明において、ジピロメテンホウ素錯体構造とは、ホウ素原子に対してジピロメテン骨格が２座配位、３座配位及び４座配位のいずれかで配位する構造を意味する。なお、３座配位及び４座配位は、ジピロメテンの２つの窒素原子に加え、ジピロメテン骨格上の１つ又は２つの置換基がホウ素原子に配位することで、形成される。
また、本発明で記載する化学構造式において、ジピロメテンの２つの窒素原子のうちの１つの窒素原子上の正電荷、及び、ホウ素原子上の負電荷を省略して記載する。
【００１３】
また、本発明において「〜」を用いて表される数値範囲は、「〜」前後に記載される数値を下限値及び上限値として含む範囲を意味する。
また、本発明において、Ｃ○とは炭素数○を意味し、例えば、Ｃ１８以上の直鎖アルキル基とは炭素数１８以上の直鎖アルキル基を意味する。
【００１４】
本発明の蛍光性化合物は、下記式（１）又は後述の式（４）で表される。本発明の蛍光性化合物が、生体蛍光イメージングに求められる十分な親水性と優れた耐光性とを示す理由の詳細については定かではないが、次のように考えられる。
本発明の蛍光性化合物は、いずれも、各式で示されるように、ジピロメテン骨格に置換基を１つ又は２つ以上導入した化合物を、２座配位子ではなく３座もしくは４座配位子としてホウ素原子に配位させた、特定構造を有する化合物であり、さらに特定の親水性基を有する。そのため、化合物（錯体）におけるホウ素原子の安定性が向上し、ホウ素原子部位に対する、活性酸素による光分解が阻害され、優れた耐光性を示し、十分な親水性も示すと考えられる。
以下、本発明の式（１）で表される蛍光性化合物及び本発明の式（４）で表される蛍光性化合物について、順に詳述する。
【００１５】
＜式（１）で表される蛍光性化合物＞
本発明の式（１）で表される蛍光性化合物は、下記の通りである。
【００１６】
【化８】
2019230963.tif 000010
【００１７】
式中、ＸはＣＲ５又はＮを示す。
Ｒ１〜Ｒ５は、ハロゲン原子、シアノ基又は下記式（Ａ）で表される基を示す。
Ｑ１及びＱ２は、下記式（１−１）〜式（１−３）のいずれかで表される基を示す。
Ｌ１及びＬ２は、アルキレン基、アルケニレン基、アリーレン基、ヘテロアリーレン基、シクロアルキレン基、シクロアルケニレン基、２価の脂肪族複素環基、もしくは、下記式（１−１）〜式（１−８）のいずれかで表される基、又は、これらを２〜４種組み合わせた連結基を示す。
環β１（すなわち、Ｌ１、Ｑ１、ホウ素原子、並びに、ピロール環を構成する構原子のうち、Ｌ１と窒素原子とを結合する炭素原子及び窒素原子、で形成される環）及び環β２（すなわち、Ｌ２、Ｑ２、ホウ素原子、並びに、ピロール環を構成する原子のうち、Ｌ２と窒素原子とを結合する炭素原子及び窒素原子、で形成される環）の環員数は５〜８である。
ただし、Ｒ１〜Ｒ５、Ｌ１、Ｌ２、Ｑ１及びＱ２のうち少なくとも１つは、親水性基として、カルボキシ基もしくはその塩、スルホ基もしくはその塩、ホスホノ基もしくはその塩、オニオ基及びポリアミノ酸残基（以下、これらの親水性基を「特定の親水性基Ｐｉ」とも称す。）の少なくとも１種を有する。
また、Ｑ１、Ｑ２、Ｌ１及びＬ２において、下記式（１−１）〜式（１−３）のいずれかで表される基が２個以上連続した基は含まれない。
【００１８】
なお、ＸがＣＲ５であって、このＲ５が式（Ａ）で表される基であり、環β１及び環β２の環員数が６であり、かつＬ１及びＬ２がアリーレン基である場合、（ａ）Ｌ３が単結合であって、かつＲ１１１が炭素数１８以上の直鎖アルキル基を置換基として有するアリール基である化合物ではないことが好ましい。ＸがＣＲ５であって、このＲ５が式（Ａ）で表される基であり、環β１及び環β２の環員数が６であり、かつＬ１及びＬ２がアリーレン基である場合、（ｂ）Ｌ３がアリーレン基であって、かつＲ１１１が炭素数１８以上の直鎖アルキル基である化合物ではないことが好ましい。これらの（ａ）及び（ｂ）の蛍光性化合物では、ホウ素原子に配位するＱ１及びＱ２はアリーレン基に直結するため酸性度が高く、水中での加水分解及び生体由来物質による加水分解等が起こり得るため、十分な耐光性が得られない。これに対し、（ａ）及び（ｂ）の化合物でない本発明の蛍光性化合物は、Ｑ１及びＱ２がアリーレン基に直結しないため加水分解が抑制され、水中及び生体由来物質付近での高い耐光性を維持することができると考えられる。
また、ＸがＣＲ５であって、このＲ５が式（Ａ）で表される基である場合、（ｃ）Ｌ３が単結合であって、かつＲ１１１が炭素数１８以上の直鎖アルキル基を置換基として有するアリール基である化合物ではないことが好ましい。また、ＸがＣＲ５であって、このＲ５が式（Ａ）で表される基である場合、（ｄ）Ｌ３がアリーレン基であって、かつＲ１１１が炭素数１８以上の直鎖アルキル基である化合物ではないことが好ましい。なお、ホウ素原子の立体配座に生じるひずみを抑制することによりＱ１及びＱ２との配位結合を安定化し、より十分な耐光性を得る点からは、上記（ｃ）及び（ｄ）は、環β１及び環β２の環員数が６である場合に満たすことが好ましく、５、６又は８である場合に満たすことがより好ましい。
【００１９】
なお、ＸがＣＲ５であって、このＲ５が式（Ａ）で表される基であり、環β１及び環β２の環員数が６であり、Ｌ１及びＬ２がアリーレン基であり、Ｒ１１１がジピロメテンホウ素錯体構造を有する置換基を有する場合、（ｅ）このＲ１１１のジピロメテンホウ素錯体構造はホウ素原子に対してジピロメテン骨格が３座配位又は４座配位で配位結合する構造を有することが好ましい。すなわち、このＲ１１１のジピロメテンホウ素錯体構造はホウ素原子に対して３座配位骨格又は４座配位骨格を有する構造であることが好ましく、後述の式（４）で表される３座配位骨格又は上記式（１）で表される４座配位骨格を有することがより好ましい。この（ｅ）を満たさない蛍光性化合物、すなわち、Ｒ１１１のジピロメテンホウ素錯体構造が２座配位のジピロメテン骨格を有する蛍光性化合物は２座配位骨格を有するため、ホウ素原子に対する、活性酸素による光分解が起きやすく、十分な耐光性が得られない。これに対し、（ｅ）を満たす本発明の蛍光性化合物は、ジピロメテン骨格が３座配位又は４座配位で配位結合することで光分解を抑制し、高い耐光性を維持することができると考えられる。
また、ＸがＣＲ５であって、このＲ５が式（Ａ）で表される基であり、Ｒ１１１がジピロメテンホウ素錯体構造を有する置換基を有する場合、（ｆ）このジピロメテンホウ素錯体構造はホウ素原子に対してジピロメテン骨格が３座配位又は４座配位で配位結合する構造を有することが好ましい。すなわち、このジピロメテンホウ素錯体構造はホウ素原子に対して３座配位骨格又は４座配位骨格を有する構造であることが好ましく、後述の式（４）で表される３座配位骨格又は上記式（１）で表される４座配位骨格を有することがより好ましい。この（ｆ）を満たす化合物は、Ｒ１１１のジピロメテンホウ素錯体構造のジピロメテン骨格が３座配位又は４座配位で配位結合することで、２座配位に起因する光分解を抑制し、十分な耐光性を得られる。なお、この効果は、ホウ素原子の立体配座に生じるひずみによって耐光性が低下する場合に、より顕在化する。この点からは、上記（ｆ）の別の形態として、環β１及び環β２の環員数が６である場合に上記（ｆ）を満たすことが好ましく、５、６又は８である場合に上記（ｆ）を満たすことがより好ましい。
【００２０】
以下、式（１）における置換基等について詳述する。
【００２１】
・式（Ａ）で表される基
【００２２】
【化９】
2019230963.tif 000011
【００２３】
式中、Ｌ３は、単結合、又は、アルキレン基、アリーレン基及び下記式（１−１）〜式（１−８）のいずれかで表される基のうちの１種又は２種以上を組み合わせた連結基を示す。
ただし、Ｌ３において、下記式（１−１）〜式（１−３）のいずれかで表される基が２個以上連続した基は含まれない。
Ｒ１１１は、水素原子、アルキル基、アルケニル基、アルキニル基、アリール基、ヘテロアリール基、又は、１価の脂肪族複素環基を示す。
なお、Ｒ１１１として採り得る水素原子が、後述する特定の親水性基Ｐｉにおける解離性の水素原子である場合には、水素原子が解離して、特定の親水性基Ｐｉで後述する塩構造を取っていてもよく、この塩は後述の特定の親水性基Ｐｉで記載する塩と同義である。
また、アルキレン基、アリーレン基及び式（１−１）〜式（１−８）のいずれかで表される基の組み合わせについては、種類は１種又は２種以上であり、組み合わせの数は特に限定されない。
ただし、式（Ａ）で表される基のうち、＊に最も近い基がアルキレン基又はアリーレン基（以下、「＊−アルキレン基又は＊−アリーレン基」と称す。）であって、以下（ｉ）又は（ｉｉ）を満たす場合には、Ｌ３が単結合であって、Ｒ１１１がアルキル基又はアリール基である基として解する。
（ｉ）＊−アルキレン基又は＊−アリーレン基が無置換の基である。
（ｉｉ）式（Ａ）で表される基が特定の親水性基Ｐｉを有する基であって、この式（Ａ）で表される基が有する特定の親水性基Ｐｉの全てが、＊−アルキレン基又は＊−アリーレン基に直接結合する。
上記以外の＊−アルキレン基又は＊−アリーレン基を有する式（Ａ）で表される基については、Ｌ３が単結合でない基として解する。
＊は結合部を示す。
【００２４】
Ｌ３として採りうるアルキレン基は、後述する置換基群Ｔから選択されるアルキル基から更に水素原子を１つ除去した基と同義であり、好ましいものも同じである。
Ｌ３として採りうるアリーレン基は、後述する置換基群Ｔから選択されるアリール基から更に水素原子を１つ除去した基と同義であり、好ましいものも同じである。
Ｌ３として採りうるアルキレン基及びアリーレン基は、無置換の基であってもよく、置換基を有する基であってもよい。Ｌ３として採りうるアルキレン基及びアリーレン基が有していてもよい置換基としては、特に限定されず、好ましくは、後述する置換基群Ｔから選択され、置換基の数は、１個以上であれば特に制限されず、例えば４個以下とすることができる。
Ｌ３として採りうるアルキレン基及びアリーレン基が有していてもよい置換基としては、より好ましくは、アルコキシ基及び特定の親水性基Ｐｉが挙げられる。
【００２５】
Ｌ３として採り得る、アルキレン基、アリーレン基及び下記式（１−１）〜式（１−８）のいずれかで表される基のうちの１種又は２種以上を組み合わせた連結基は、アルキレン基、アリーレン基及び下記式（１−１）〜式（１−８）のいずれかで表される基のうちの１種〜６種を組み合わせた連結基が好ましく、アルキレン基、アリーレン基及び下記式（１−１）〜式（１−８）のいずれかで表される基のうちの１種〜３種を組み合わせた連結基がより好ましい。
Ｌ３として採り得る、アルキレン基、アリーレン基及び下記式（１−１）〜式（１−８）のいずれかで表される基のうちの１種又は２種以上を組み合わせた連結基において、組み合わせる基の数は、特に制限されないが、例えば、平均で、２〜２００００が好ましく挙げられる。
【００２６】
Ｒ１１１として採りうる、アルキル基、アルケニル基、アルキニル基、アリール基、ヘテロアリール基及び１価の脂肪族複素環基としては、それぞれ、置換基群Ｔにおける対応する基と同義であり、好ましいものも同じである。
また、Ｒ１１１として採り得る上記アルキル基、アルケニル基、アルキニル基、アリール基、ヘテロアリール基及び１価の脂肪族複素環基は、いずれも、無置換の基であってもよく、置換基を有する基であってもよい。Ｒ１１１として採り得る上記各基が有していてもよい置換基としては、特に限定されず、好ましくは、後述する置換基群Ｔから選択される基が挙げられ、より好ましくは、アルキル基、アルコキシ基、アリール基及び特定の親水性基Ｐｉが挙げられる。この場合、置換基の数は、構造として採り得る限り特に制限されないが、例えば、１〜５個が好ましい。また、特定の親水性基Ｐｉの個数は、構造として採り得る限り特に制限されない。具体的には、複数個の特定の親水性基Ｐｉを採り得る、アルキル基、アルケニル基、アルキニル基、アリール基、ヘテロアリール基及び１価の脂肪族複素環基では、例えば、１〜５個が好ましく、１〜４個がより好ましく、１又は２個がさらに好ましい。Ｒ１１１として採り得る上記各基が有していてもよい置換基（ただし、特定の親水性基Ｐｉは除く。）は、さらに置換基を有していてもよく、例えば、後述する置換基群Ｔから選択される基が挙げられ、好ましくは、アルキル基及びアルコキシ基が挙げられる。
１価の脂肪族複素環基が特定の親水性基Ｐｉを有する形態には、置換基として特定の親水性基Ｐｉを採る形態の他に、例えば、脂肪族複素環の環構成原子である窒素原子がアンモニオ基として組み込まれた形態（例えば、ピペラジニウム基）も含む。
【００２７】
上記Ｒ１１１としては、より具体的には以下の基がそれぞれ好ましく挙げられる。
（１）Ｌ３が単結合であって、式（Ａ）として特定の親水性基Ｐｉを有しない場合
Ｒ１１１は、水素原子、又は、特定の親水性基Ｐｉを有しない、アルキル基、アルケニル基、アルキニル基、アリール基もしくはヘテロアリール基が好ましい。
（２）Ｌ３が単結合であって、式（Ａ）として特定の親水性基Ｐｉを有する場合
Ｒ１１１は、特定の親水性基Ｐｉを有する、アルキル基、アルキニル基、アルキニル基、アリール基又は１価の脂肪族複素環基が好ましい。
（３）Ｌ３がアルキレン基、アリーレン基及び式（１−１）〜式（１−８）のいずれかで表される基のうちの１種又は２種以上を組み合わせた基である場合
Ｒ１１１は、水素原子、又は、特定の親水性基Ｐｉを有する、アルキル基、アルケニル基、アルキニル基、アリール基もしくは１価の脂肪族複素環基が好ましい。
なかでも、ＸがＣＲ５であって、このＲ５が式（Ａ）で表され、上記（１）〜（３）の好ましい形態を満たすことが、光化学的分解の抑制による高耐光性付与の点からより好ましい。このことは、The Journal of Physical Chemistry A, 2016, 120, p.2537-2546に記載されているように、２座のジピロメテン配位子を有するホウ素錯体において、メソ位がＮである場合、メソ位がＣＨである場合と比べて光化学的分解が起きやすいことと、同様のメカニズムによると考えられる。
【００２８】
・式（１−１）〜式（１−８）で表される基
【００２９】
【化１０】
2019230963.tif 000012
【００３０】
式中、Ｒ１１及びＲ１２は、各々独立に、水素原子又は置換基を示す。
＊は結合部を示す。
【００３１】
Ｒ１１として採りうる置換基としては、特に限定されず、好ましくは、後述する置換基群Ｔから選択される。Ｒ１１としては、水素原子、アルキル基、アリール基、ヘテロアリール基、アシル基、又は、スルホニル（アルキル、シクロアルキル又はアリールが置換したスルホニル基であり、アルキルスルホニルが好ましい。）が好ましく、水素原子又はアルキル基がより好ましい。
なお、Ｒ１１として採り得る上記アルキル基、アリール基、ヘテロアリール基、アシル基及びスルホニル基は、いずれも、無置換の基であってもよく、置換基を有する基であってもよい。上記、置換基を有する基としては、特定の親水性基Ｐｉを置換基として有する、アルキル基、アリール基、ヘテロアリール基、アシル基及びスルホニル基が好ましく挙げられる。
Ｒ１２として採りうる置換基としては、特に限定されず、好ましくは、後述する置換基群Ｔから選択される。Ｒ１２としては、水素原子、ヒドロキシ基、アルコキシ基、アリールオキシ基、アルキル基、アリール基又はヘテロアリール基が好ましく、ヒドロキシ基、アルコキシ基又はアリールオキシ基がより好ましく、ヒドロキシ基がさらに好ましい。
なお、Ｒ１２が後述する特定の親水性基Ｐｉにおける解離性の水素原子である場合には、水素原子が解離して、特定の親水性基Ｐｉで後述する塩型を取っていてもよく、この塩は後述の特定の親水性基Ｐｉで記載する塩と同義である。
【００３２】
上記式（１−１）〜式（１−８）で表される基を組み合わせた基としては、下記式（１Ａ−１）〜式（１Ａ−９）で表される基が好ましく挙げられる。
【００３３】
【化１１】
2019230963.tif 000013
【００３４】
Ｒ１１及びＲ１２は上記Ｒ１１及びＲ１２と同義である。
＊及び＊＊は結合部を示す。なお、＊＊は、Ｌ３として採り得る基である場合におけるＲ１１１との結合部を示す。式（１Ａ−２）は、Ｌ３中いずれの＊側でＲ１１１と結合してもよい。
【００３５】
上記Ｌ１及びＬ２として採り得る、上記式（１−１）〜式（１−８）のいずれかで表される基を組み合わせた連結基としては、上記式（１Ａ−２）で表される基が好ましい。なお、結合として可能である限り、いずれの＊側で結合してもよい。
上記Ｌ３として採り得る、上記式（１−１）〜式（１−８）のいずれかで表される基を組み合わせた連結基としては、上記式（１Ａ−１）、（１Ａ−２）、（１Ａ−４）又は式（１Ａ−８）で表される基が好ましい。
上記式（１Ａ−１）、（１Ａ−４）又は（１Ａ−８）で表される基とＲ１１１としての水素原子とで表される基は、特定の親水性基Ｐｉとしての、カルボキシ基、スルホ基又はホスホノ基にそれぞれ相当する。また、これらの基から水素原子が解離性の水素原子として解離した基は、それぞれ、カルボキシ基の塩、スルホ基の塩又はホスホノ基の塩に相当する。
【００３６】
なお、Ｌ１〜Ｌ３としては、式（１−１）〜式（１−８）のいずれかで表される基又はこれらの基を組み合わせた連結基とアルキレン基等とを組み合わせた連結基であってもよく、１又は２以上のアルキレン基等を介して、式（１−１）〜式（１−８）のいずれかで表される基又はこれらの基を組み合わせた連結基を２又は３以上連結した連結基であってもよい。ただし、Ｌ１及びＬ２は、環β１及び環β２の環員数を満たす範囲内での組み合わせである。
Ｌ３として採り得る２種以上を組み合わせた連結基としては、例えば、アルキレン基−［式（１Ａ−２）で表される基−アルキレン基］−式（１Ａ−１）、（１Ａ−４）又は（１Ａ−８）で表される基、アリーレン基−［式（１Ａ−２）で表される基−アルキレン基］−式（１Ａ−１）、（１Ａ−４）又は（１Ａ−８）で表される基、アリーレン基−式（１Ａ−２）で表される基−［アルキレン基−式（１−１）で表される基］−アルキレン基−式（１Ａ−１）、（１Ａ−４）又は（１Ａ−８）で表される基、及び、アルキレン基−式（１Ａ−２）で表される基−［アルキレン基−式（１−１）で表される基］−アルキレン基−式（１Ａ−１）、（１Ａ−４）又は（１Ａ−８）で表される基が好ましく挙げられる。なお、［  ］は繰り返し構造であることを示す。
Ｌ１及びＬ２として採り得る連結基については、後述する通りである。
【００３７】
・Ｘ
上記Ｘは、ＣＲ５又はＮを示し、ＣＲ５が好ましい。
・Ｒ１〜Ｒ５
上記Ｒ１〜Ｒ５は、各々独立に、ハロゲン原子、シアノ基又は上記式（Ａ）で表される基を示す。
Ｒ１〜Ｒ５が採りうるハロゲン原子としては、フッ素原子、塩素原子、臭素原子及びヨウ素原子が挙げられ、好ましくはフッ素原子である。
上記Ｒ１〜Ｒ４としては、上記式（Ａ）で表される基が好ましく、上記Ｒ１１１の好ましい態様（１）〜（３）のいずれかの基がより好ましい。上記Ｒ１〜Ｒ４が特定の親水性基Ｐｉを有する場合は、上記Ｒ１１１の好ましい態様（２）又は（３）で記載する、特定の親水性基Ｐｉを有する基がより好ましい。
上記Ｒ５としては、水素原子、アルキル基、アルケニル基、アルキニル基、アリール基又はヘテロアリール基が好ましい。ここで、Ｒ５として好ましい各置換基は、式（Ａ）のＲ１１１におけるアルキル基、アルケニル基、アルキニル基、アリール基又はヘテロアリール基と同義である。Ｒ５としてより好ましくは、アルキル基、アルケニル基、アルキニル基、アリール基又はヘテロアリール基である。これらのＲ５として好ましく採り得るアルキル基、アルケニル基、アルキニル基、アリール基及びヘテロアリール基は、特定の親水性基Ｐｉを有する基であることが好ましい。
【００３８】
・Ｑ１及びＱ２
上記Ｑ１及びＱ２は、各々独立に、上記式（１−１）〜式（１−３）のいずれかで表される基を示す。
Ｑ１及びＱ２は、それぞれ異なっていても同一でもよく、同一であることが好ましい。
より具体的には、Ｑ１及びＱ２は、最もホウ素原子との結合エネルギーが高く安定である点から、いずれかが上記式（１−１）で表される基であることが好ましく、いずれも上記式（１−１）で表される基であることがより好ましい。式（１−１）で表される基、すなわち酸素原子が、他の原子に比べ最もホウ素原子との結合エネルギーが高く安定であることは、例えば、Dean, John, A. Lange's Handbook of Chemistry. McGraw-Hill., PROPERTIES OF ATOMS, RADICALS, AND, BONDS, SECTION 4.41を参照することができる。
【００３９】
・Ｌ１及びＬ２
上記Ｌ１及びＬ２は、各々独立に、アルキレン基、アルケニレン基、アリーレン基、ヘテロアリーレン基、シクロアルキレン基、シクロアルケニレン基、２価の脂肪族複素環基、もしくは、上記式（１−１）〜式（１−８）のいずれかで表される基、又は、これらを２〜４種組み合わせた連結基を示す。
Ｌ１及びＬ２として採りうるアルキレン基、アルケニレン基、アリーレン基、ヘテロアリーレン基、シクロアルキレン基、シクロアルケニレン基及び２価の脂肪族複素環基は、それぞれ、後述する置換基群Ｔから選択されるアルキル基、アルケニル基、アリール基、ヘテロアリール基、シクロアルキル基、シクロアルケニル基及び脂肪族複素環基から更に水素原子を１つ除去した基と同義であり、好ましいものも同じである。
また、Ｌ１及びＬ２として採りうる上記各基は、無置換の基であってもよく、置換基を有する基であってもよい。Ｌ１及びＬ２として採りうる上記各基が有していてもよい置換基としては、特に限定されず、好ましくは、後述する置換基群Ｔから選択され、置換基の数は、１個以上であれば特に制限されず、例えば４個以下とすることができる。
Ｌ１及びＬ２として採りうる上記各基が有していてもよい置換基としては、より好ましくは、ハロゲン原子、シアノ基、アルコキシ基、酸素原子、１つ以上のカルボキシ基を含む基、１つ以上のスルホ基を含む基、１つ以上のホスホノ基を含む基、１つ以上のオニオ基を含む基、又は、ポリアミノ酸残基を含む基であり、さらに好ましくはカルボキシ基、ホスホノ基、スルホ基、オニオ基、ポリアミノ酸残基、又は、ポリアミノ酸残基を置換基として有するアミノ基である。なお、上記のカルボキシ基、スルホ基及びホスホノ基には、それぞれ、その塩が含まれる。
Ｌ１として採りうるアリーレン基、ヘテロアリーレン基、シクロアルキレン基、シクロアルケニレン基及び２価の脂肪族複素環基において、式（１）中のピロール環中の炭素原子と結合する結合部と上記Ｑ１と結合する結合部との関係は、特に制限されないが、各基中の隣接する２つの原子（ビシナル原子）であることが好ましい。また、Ｌ２として採りうるアリーレン基、ヘテロアリーレン基、シクロアルキレン基、シクロアルケニレン基及び２価の脂肪族複素環基においても、式（１）中のピロール環中の炭素原子と結合する結合部と及び上記Ｑ２と結合する結合部との関係は、特に制限されないが、各基中の隣接する２つの原子（ビシナル原子）であることが好ましい。
例えば、Ｌ１及びＬ２としてフェニレン基を採る場合、１，２−フェニレン基が好ましい。
Ｌ１として採りうるアルケニレン基及びシクロアルケニレン基における炭素−炭素二重結合（Ｃ＝Ｃ結合）の位置は特に制限されない。また、Ｌ２として採りうるアルケニレン基及びシクロアルケニレン基における炭素−炭素二重結合（Ｃ＝Ｃ結合）の位置についても、特に制限されない。
【００４０】
Ｌ１及びＬ２を構成し得るアルキレン基の炭素原子数は、アルキレン基を構成する全炭素原子数ではなく、式（１）において、ピロール環中の隣接する炭素原子及び窒素原子と、ホウ素原子と、Ｑ１とＬ１（又はＱ２とＬ２）とで形成される環（すなわち、環β１（又は環β２））構造に組み込まれている炭素原子の数を意味する。本発明においては、「Ｑ１（又はＱ２）とともに環構造を形成する炭素原子数」ともいう。例えば、１−カルボキシ−２，３−プロピリデン基の場合、カルボキシ基の置換する１位の炭素原子は、Ｑ１（又はＱ２）とともに環構造を形成する炭素原子ではないので、Ｑ１（又はＱ２）とともに環構造を形成する炭素原子数は２となる。Ｌ１及びＬ２を構成し得るアルキレン基は、上記炭素原子数については、１〜３が好ましく、１又は２がより好ましく、１がさらに好ましい。一方、Ｌ１及びＬ２の総炭素数については、１〜４６が好ましく、１〜１３がより好ましく、１〜７が更に好ましく、１〜３が特に好ましい。
Ｌ１及びＬ２を構成し得るアルケニレン基の炭素原子数及び総炭素数は、上記Ｌ１及びＬ２を構成し得るアルキレン基の炭素原子数及び総炭素数と同様に数える。Ｌ１及びＬ２を構成し得るアルケニレン基は、上記炭素原子数については、２〜３が好ましく、２がより好ましい。一方、Ｌ１及びＬ２の総炭素数については、２〜４６が好ましく、２〜１３がより好ましく、２〜７が更に好ましく、２〜３が特に好ましい。
前述するＬ３を構成し得るアルキレン基及び後述するＬ１１及びＬ１２を構成し得るアルキレン基の炭素原子数及び総炭素数は、Ｌ１及びＬ２を構成し得るアルキレン基の炭素原子数及び総炭素数と同様に数える。なお、Ｌ１〜Ｌ３、Ｌ１１及びＬ１２を構成し得るこれらの基以外の基（すなわち、アリーレン基、ヘテロアリーレン基、シクロアルキレン基、シクロアルケニレン基及び２価の脂肪族複素環基）の炭素数は、全炭素数を意味する。
Ｌ１及びＬ２は、それぞれ異なっていても同一でもよく、同一であることが好ましい。
【００４１】
式（１−１）〜式（１−８）のいずれかで表される基を含まないＬ１及びＬ２としては、アルキレン基、アルケニレン基（好ましくはエテニレン基であって、このエテニレン基は置換基を有していてもよい。以下、同様である。）、アリーレン基、ヘテロアリーレン基、シクロアルキレン基、シクロアルケニレン基もしくは２価の脂肪族複素環基、又はこれらを２種組み合わせた連結基が好ましく、アルキレン基、アルケニレン基（好ましくはエテニレン基）、アリーレン基、ヘテロアリーレン基、シクロアルキレン基もしくは２価の脂肪族複素環基、又はこれらを２種組み合わせた連結基がより好ましく、アルキレン基、アルケニレン基（好ましくはエテニレン基）、アリーレン基もしくはヘテロアリーレン基、又はこれらを２種組み合わせた連結基がさらに好ましい。
式（１−１）〜式（１−８）のいずれかで表される基を含むＬ１及びＬ２としては、［アルキレン基、アルケニレン基（好ましくはエテニレン基）、アリーレン基、ヘテロアリーレン基、シクロアルキレン基及び２価の脂肪族複素環基］のいずれかと［前述する式（１−１）〜式（１−８）のいずれかで表される基］とを２〜４種組み合わせた連結基が好ましく、［アルキレン基、アルケニレン基（好ましくはエテニレン基）、アリーレン基、ヘテロアリーレン基、シクロアルキレン基及び２価の脂肪族複素環基］のいずれかと［前述する式（１−１）、（１−２）、（１−３）、（１−４）及び（１Ａ−２）のいずれかで表される基］とを組み合わせた連結基がより好ましい。
【００４２】
・特定の親水性基Ｐｉ：カルボキシ基もしくはその塩、スルホ基もしくはその塩、ホスホノ基もしくはその塩、オニオ基及びポリアミノ酸残基
Ｒ１〜Ｒ５、Ｌ１、Ｌ２、Ｑ１及びＱ２のうち少なくとも１つは、カルボキシ基もしくはその塩、スルホ基（−ＳＯ３Ｈ）もしくはその塩、ホスホノ基〔−ＰＯ（ＯＨ）２〕もしくはその塩、オニオ基及びポリアミノ酸残基の少なくとも１種を有する。上記「塩」は、式（１）で表される蛍光性化合物の分子内で塩を形成する形態を含む意味である。
カルボキシ基、スルホ基及びホスホノ基の塩としては、例えば、Ｎａ、Ｌｉ及びＫ等のアルカリ金属の塩、Ｍｇ、Ｃａ及びＢａ等のアルカリ土類金属の塩、テトラアルキルアンモニウム等の有機アミンの塩が挙げられる。
式（１）で表される化合物中における特定の親水性基Ｐｉの数は、Ｒ１〜Ｒ５、Ｌ１、Ｌ２、Ｑ１及びＱ２のうちのいずれかが少なくとも１つ有する限り特に制限されない。式（１）で表される化合物として有し得る特定の親水性基Ｐｉの数は、親水性と耐光性の両立の点から、１〜６個が好ましく、１〜４個がより好ましく、１〜３個がさらに好ましく、２又は３個が特に好ましい。
式（１）で表される蛍光性化合物中に複数の上記カルボキシ基等が含まれる場合は、その複数の基は塩構造及び遊離酸構造のいずれであってもよく、互いに同一でもよく異なっていてもよい。
ここで、「ポリアミノ酸」とは、２以上のアミノ酸がペプチド結合で連結した化合物を意味し、ペプチド及びタンパク質を含む概念である。「ポリアミノ酸」を構成するアミノ酸の数は、２〜３０が好ましく、４〜２０がより好ましく、６〜１０がさらに好ましい。「ポリアミノ酸残基」は、ポリアミノ酸から得られる基である。「ポリアミノ酸残基」は、ポリアミノ酸を構成するアミノ酸が有する−ＮＨ２、−ＣＯ２Ｈ、−ＯＨ又は−ＳＨの水素原子の１つを結合手（−）に置き替えた基（例えば−ＣＯ２Ｈの水素原子を結合手に置き換えると−Ｃ（＝Ｏ）−Ｏ−＊＊となる。＊＊はポリアミノ酸が式（１）の蛍光性化合物中に組み込まれるための結合部となる。）が好ましい。また、ポリアミノ酸を構成するアミノ酸が有する−ＮＨ２、−ＣＯ２Ｈ、−ＯＨ又は−ＳＨの水素原子の１つを結合手（−）に置き替えた基は、更に、＞Ｃ＝Ｏ及び＞ＮＨ等の結合を介することにより、ポリアミノ酸残基として組み込まれていてもよい。
上記オニオ基は、アンモニオ基（ピリジニウム塩、ピペリジニウム塩、ピペラジニウム塩及びピロリジニウム塩などの環状アンモニオを含む。）、スルホニオ基及びホスホニオ基が挙げられ、アンモニオ基が好ましい。
オニオ基を構成する対イオンとしては、例えば、スルホネートイオン及びヨージドイオン等の無機イオンが挙げられる。
【００４３】
なかでも、ＨＯＭＯ軌道（Ｈｉｇｈｅｓｔ  Ｏｃｃｕｐｉｅｄ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｏｒｂｉｔａｌ）がリッチなＲ３及びＲ４の少なくともいずれかに、上記スルホ基等の電子求引性基を導入することで、分子全体の酸化電位を深くする効果が得られ、結果的に、水溶性（十分な親水性）に加えて高い耐光性を相乗効果として付与していると考えられる。
上記観点から、Ｒ３及びＲ４の少なくとも１つが、１つ以上のカルボキシ基もしくはその塩を含む基、１つ以上のスルホ基もしくはその塩を含む基、１つ以上のホスホノ基もしくはその塩を含む基、１つ以上のオニオ基を含む基、又は、ポリアミノ酸残基を含む基であることが好ましく、カルボキシ基もしくはその塩、スルホ基もしくはその塩、又は、ホスホノ基もしくはその塩であることがより好ましく、スルホ基もしくはその塩であることがさらに好ましい。
【００４４】
・その他の規定事項
環β１及び環β２の環員数は、各々独立に、５〜８であり、６〜８が好ましく、６又は７がより好ましく、７が更に好ましい。
ここで、環β１及び環β２は、互いに同一であっても異なっていてもよく、同一であることが好ましい。
環β１及び環β２環構造において、Ｌ１とＱ１の組み合わせ及びＬ２とＱ２の組み合わせ等は、特に制限されず、Ｌ１、Ｌ２、Ｑ１及びＱ２として、それぞれ、採りうる好ましい基又は連結基の組み合わせが好ましく挙げられる。例えば、Ｌ１及びＬ２が、アルキレン基、エテニレン基、アリーレン基若しくはヘテロアリーレン基又はこれらを２種組み合わせた連結基であって、環β１及び環β２の環員数が６〜８であることが好ましい。
本発明の蛍光性化合物は、式（１）で表されるジピロメテンホウ素錯体構造以外に、置換基としてジピロメテンホウ素錯体構造を有する置換基を有してもよい。同一分子内に２個以上のジピロメテンホウ素錯体構造を有する場合には、いずれのジピロメテンホウ素錯体構造もホウ素原子に対する３座配位骨格又は４座配位骨格を有する。これにより、高い耐光性を示すことができる。
【００４５】
また、Ｒ３及びＲ４の少なくとも１つが特定の親水性基Ｐｉを有し、かつ、ＸがＣＲ５であって、このＲ５において生体物質と結合してなる本発明の蛍光標識生体物質の耐光性を向上させる点からは、本発明の蛍光性化合物は、Ｌ１及びＬ２の少なくとも一方が無置換のアリーレン基であって、Ｒ５がジピロメテン骨格との結合位置に対するオルト位の少なくとも一方に置換基を有するアリール基であることが好ましい。本発明の蛍光性化合物を上記構成の化学構造を有する化合物とすることにより、生体物質に起因する分解反応が抑制されるためと考えられる。
また、Ｒ５は、ジピロメテン骨格との結合位置に対するオルト位の両方に置換基を有することがより好ましく、これらの置換基がアルキル基又はアルコキシ基であることがさらに好ましい。
【００４６】
ＸがＣＲ５であって、このＲ５が式（Ａ）であって、Ｌ３が単結合かつＲ１１１がアリール基である場合、このＲ１１１は、より十分な水溶性（親水性）を得る点から、炭素数１８以上の直鎖アルキル基を置換基として有するアリール基ではないことが好ましい。ＸがＣＲ５であって、このＲ５が式（Ａ）であって、Ｌ３が単結合かつＲ１１１がアリール基である場合、このＲ１１１は、炭素数１０以上の直鎖アルキル基を置換基として有するアリール基ではないことが好ましく、炭素数７以上の直鎖アルキル基を置換基として有するアリール基ではないことがより好ましい。
また、ＸがＣＲ５であって、このＲ５が式（Ａ）であって、Ｌ３が単結合かつＲ１１１がアリール基である場合、このＲ１１１は、ホウ素原子を含む置換基で置換されたアリール基ではないことが好ましい。
別の態様として、ＸがＣＲ５であって、このＲ５が式（Ａ）であって、Ｌ３が単結合かつＲ１１１がアリール基である場合、このＲ１１１は、アリール基又はヘテロアリール基を含む置換基で置換されていないアリール基であることが好ましい。
【００４７】
また、ＸがＣＲ５であって、このＲ５が式（Ａ）であって、Ｌ３がアリーレン基であってかつＲ１１１がアルキル基である場合、このＲ１１１は、より十分な水溶性（親水性）を得る点から、炭素数１８以上の直鎖アルキル基ではないことが好ましい。ＸがＣＲ５であって、このＲ５が式（Ａ）であって、Ｌ３がアリーレン基であってかつＲ１１１がアルキル基である場合、このＲ１１１は、炭素数１０以上の直鎖アルキル基ではないことが好ましく、炭素数７以上の直鎖アルキル基ではないことがより好ましい。
【００４８】
＜式（２）で表される蛍光性化合物＞
本発明の式（１）で表される蛍光性化合物は、下記式（２）で表されることが好ましい。
【００４９】
【化１２】
2019230963.tif 000014
【００５０】
式中、ＸはＣＲ５又はＮを示し、上記式（１）におけるＸと同義である。
Ｒ１〜Ｒ５及びＱは上記式（１）におけるＲ１〜Ｒ５及びＱ１とそれぞれ同義である。
環Ａは炭化水素環又はヘテロ環を示す。
Ｌ１１は、単結合、又は、アルキレン基、エテニレン基、アリーレン基、ヘテロアリーレン基、シクロアルキレン基、２価の脂肪族複素環基もしくは上記式（１−１）〜式（１−８）のいずれかで表される基、もしくは、これらの基の２種を組み合わせた連結基を示す。
ただし、環β１１及び環β２１（すなわち、Ｌ１１、Ｑ、環Ａを構成する原子のうちピロール環と結合する原子及びＬ１１と結合する原子、ホウ素原子、並びに、ピロール環を構成する原子のうち、環Ａと窒素原子とを結合する炭素原子及び窒素原子、で形成される２つの環）の環員数は、各々独立に、６〜８であり、６又は７が好ましく、７がより好ましい。環β１１及び環β２１は、互いに同一であっても異なっていてもよく、同一であることが好ましい。
【００５１】
Ｌ１１として採りうるアルキレン基、アリーレン基、ヘテロアリーレン基、シクロアルキレン基及び２価の脂肪族複素環基は、それぞれ、後述する置換基群Ｔから選択されるアルキル基、アリール基、ヘテロアリール基、シクロアルキル基及び脂肪族複素環基から更に水素原子を１つ除去した基と同義であり、好ましいものも同じである。
また、Ｌ１１として採りうる上記各基は、無置換の基であってもよく、置換基を有する基であってもよい。Ｌ１１として採りうる上記各基が有していてもよい置換基としては、特に限定されず、上記Ｌ１及びＬ２と同義である。好ましくは、１つ以上のカルボキシ基を含む基、１つ以上のスルホ基を含む基、１つ以上のホスホノ基を含む基、１つ以上のオニオ基を含む基、又は、ポリアミノ酸残基であり、より好ましくはカルボキシ基、ホスホノ基、スルホ基、オニオ基、又は、ポリアミノ酸残基である。なお、上記のカルボキシ基、スルホ基及びホスホノ基には、それぞれ、その塩が含まれる。
Ｌ１１として採りうるエテニレン基は、上記Ｌ１で記載するエテニレン基と同義である。
Ｌ１１としては、アルキレン基が好ましく、メチレン基がより好ましい。このメチレン基は、置換基を有していてもよい。
式中における２つのＬ１１は、それぞれ、互いに同一であってもよく、異なっていてもよい。
【００５２】
上記環Ａは、式（２）で表される蛍光性化合物中では２価の基として取り込まれる。
上記環Ａが採りうる炭化水素環及びヘテロ環としては、芳香族炭化水素環、脂肪族炭化水素環、芳香族ヘテロ環及び脂肪族ヘテロ環が挙げられる。この脂肪族炭化水素環及び脂肪族ヘテロ環における環は、不飽和結合を有していても構わない。これらの環は、後述する置換基群Ｔから選択されるアリール基、シクロアルキル基及びシクロアルケニル基、ヘテロアリール基並びにヘテロ環基における結合手部分を水素原子に置換した環と同義であり、好ましいものも同じである。
上記環Ａがヘテロ環である場合、環β１１又は環β２１を構成する原子は特に制限されないが、例えば、炭素原子、窒素原子、酸素原子及び硫黄原子が挙げられ、少なくとも１つの上記環を構成する原子が炭素原子であることが好ましい。
具体的には、芳香族炭化水素環としては、ベンゼン及びナフタレン等が挙げられ、脂肪族炭化水素環としては、シクロプロパン、シクロペンタン、シクロヘキサン、シクロプロペン、シクロペンテン及びシクロヘキセン等が挙げられ、芳香族ヘテロ環としては、フラン、チオフェン、ピロール、オキサゾール、チアゾール、イミダゾール、イソオキサゾール、イソチアゾール、ピラゾール、ピリジン、ピリミジン、ピリダジン、ピラジン、１，２，３−トリアジン及びこれらの縮合環等が挙げられ、脂肪族ヘテロ環としては、ピロリジン、ピペレジン、ピペラジン及びモルホリン等が挙げられる。
式中における２つの環Ａは、それぞれ、互いに同一であってもよく、異なっていてもよい。
【００５３】
特に、環Ａがベンゼン環、Ｑが式（１−１）で表される基である場合には、下記の通り、環β１１及び環β２１の環員数は６員環よりも７員環の方が、より高い耐光性を示す点から好ましい。
すなわち、Ｌ１１が単結合であって、環β１１及び環β２１の環員数が６である化合物は、ホウ素原子に配位するＱ（酸素原子）がフェノール性水酸基であるため酸性度が高く、水中での加水分解が起こり得る。これに対して、Ｌ１１が例えばメチレン基であって、環β１１及び環β２１の環員数が７である化合物は、ホウ素原子に配位するＱ（酸素原子）がベンジルアルコール型であるため水酸基の酸性度が低く、加水分解が抑制され、結果として水中でのより高い耐光性を維持していると考えられる。
【００５４】
＜式（３）で表される蛍光性化合物＞
本発明の式（１）で表される蛍光性化合物は、下記式（３）で表されることがより好ましい。
【００５５】
【化１３】
2019230963.tif 000015
【００５６】
式中、ＸはＣＲ５又はＮを示し、上記式（１）におけるＸと同義である。
Ｒ１〜Ｒ５及びＱは上記式（１）におけるＲ１〜Ｒ５及びＱ１とそれぞれ同義であり、Ｌ１１は上記式（２）におけるＬ１１と同義である。
Ｒ８は置換基を示す。
ｎは０〜４の整数であり、０〜３の整数が好ましく、０〜２の整数がより好ましく、０又は１が特に好ましい。
ただし、環β１１及び環β２１（すなわち、Ｌ１１、Ｑ、ベンゼン環を構成する原子のうちピロール環と結合する原子及びＬ１１と結合する原子、ホウ素原子、並びに、ピロール環を構成する構成原子のうち、ベンゼン環と窒素原子とを結合する炭素原子及び窒素原子、で形成される環）の環員数は６〜８であり、６又は７が好ましく、７がより好ましい。環β１１及び環β２１は、互いに同一であっても異なっていてもよく、同一であることが好ましい。
【００５７】
上記Ｒ８として採り得る置換基としては、上記Ｌ１及びＬ２として採りうる各基が有していてもよい置換基が挙げられ、ハロゲン原子、シアノ基、アルコキシ基又は酸素原子が好ましい。複数のＲ８が存在する場合、複数のＲ８は、互いに同一であっても異なっていてもよい。
なかでも、式（３）で表されるベンゼン環は、Ｌ１１との結合位置に対してピロール環とは逆側のメタ位にＲ８を有することが、本発明の蛍光性化合物の水溶液中での耐光性が向上される点で、好ましい。
なかでも、式（３）で表されるベンゼン環は、Ｌ１１との結合位置に対してピロール環とは逆側のメタ位にＲ８を有することが、本発明の蛍光性化合物を含有する蛍光標識生体物質を蛍光色素として使用した染色細胞の耐光性が向上される点で、好ましい。
【００５８】
＜式（７）で表される蛍光性化合物＞
本発明の式（１）で表される蛍光性化合物は、下記式（７）で表されることも好ましい。
【００５９】
【化１４】
2019230963.tif 000016
【００６０】
式中、ＸはＣＲ５又はＮを示し、上記式（１）におけるＸを同義である。
Ｒ１〜Ｒ５及びＱは上記式（１）におけるＲ１〜Ｒ５及びＱ１と同義である。
Ｌ１２は、単結合、又は、アルキレン基、アルケニレン基、アリーレン基、ヘテロアリーレン基、シクロアルキレン基、２価の脂肪族複素環基もしくは上記式（１−１）〜式（１−８）のいずれかで表される基、もしくは、これらの基の２種を組み合わせた連結基を示す。
Ｌ１３は、メチレン基、又は、上記式（１−１）〜式（１−８）のいずれかで表される基を示す。
ただし、環β１２及び環β２２（すなわち、Ｌ１２、Ｌ１３、Ｑ、ホウ素原子、並びに、ピロール環を構成する構成原子のうち、Ｌ１３と窒素原子とを結合する炭素原子及び窒素原子、で形成される環）の環員数は５〜８であり、６〜７が好ましく、７がより好ましい。環β１２及び環β２２は、互いに同一であっても異なっていてもよく、同一であることが好ましい。
【００６１】
式中における２つのＬ１２は、それぞれ、互いに同一であってもよく、異なっていてもよく、また、２つのＬ１３は、それぞれ、互いに同一であってもよく、異なっていてもよい。
Ｌ１２として採りうるアルキレン基、アリーレン基、ヘテロアリーレン基、シクロアルキレン基及び２価の脂肪族複素環基は、上記Ｌ１１におけるアルキレン基、アリーレン基、ヘテロアリーレン基、シクロアルキレン基及び２価の脂肪族複素環基の記載を好ましく適用することができる。
Ｌ１２は、アルキレン基、アルケニレン基、アリーレン基、ヘテロアリーレン基、シクロアルキレン基、２価の脂肪族複素環基、又は、アルキレン基と上記式（１−１）〜式（１−８）のいずれかで表される基とを組み合わせた連結基が好ましく、アルキレン基、アルケニレン基、アリーレン基、ヘテロアリーレン基、シクロアルキレン基、２価の脂肪族複素環基、又は、アルキレン基と上記式（１−３）若しくは式（１−４）で表される基とを組み合わせた連結基がより好ましく、アルキレン基、アルケニレン基、アリーレン基、ヘテロアリーレン基、シクロアルキレン基又は２価の脂肪族複素環基がさらに好ましく、アルキレン基又はシクロアルキレン基が特に好ましく、アルキレン基が最も好ましい。
上記アルキレン基の炭素原子数は、１又は２が好ましい。
Ｌ１３として採りうるメチレン基は、置換基を有していてもよい。
Ｌ１３は、メチレン基、又は、上記式（１−１）〜式（１−４）及び式（１−７）のいずれかで表される基が好ましく、メチレン基又は式（１−１）もしくは式（１−３）で表される基がより好ましく、メチレン基又は式（１−１）で表される基がさらに好ましく、メチレン基が特に好ましい。
【００６２】
＜式（９）で表される蛍光性化合物＞
本発明の式（１）で表される蛍光性化合物は、下記式（９）で表されることも好ましい。
【００６３】
【化１５】
2019230963.tif 000017
【００６４】
上記式（９）で表される蛍光性化合物は、式（２）における環β１１に代えて式（７）における環β１２を有する点で異なること以外は、上述の式（２）で表される蛍光性化合物と同じである。
したがって、式（９）において、Ｘ、Ｒ１〜Ｒ５及び環β２１並びに環β２１を構成するＬ１１、Ｑ及び環Ａは、それぞれ、上記式（２）における、Ｘ、Ｒ１〜Ｒ５及び環β２１並びに環β２１を構成するＬ１１、Ｑ及び環Ａと同義であり、好ましいものも同じである。
【００６５】
また、上記式（９）において、環β１２並びに環β１２を構成するＬ１２、Ｌ１３及びＱは、それぞれ、上記式（７）における、環β１２並びに環β１２を構成するＬ１２、Ｌ１３及びＱと同義であり、好ましいものも同じである。
【００６６】
＜式（４）で表される蛍光性化合物＞
本発明の式（４）で表される蛍光性化合物は、下記の通りである。
【００６７】
【化１６】
2019230963.tif 000018
【００６８】
上記式（４）で表される蛍光性化合物は、ピロール環中の隣接する炭素原子及び窒素原子とホウ素原子とＬ２とＱ２とで形成される環構造を有しない点で異なること以外は、上述の式（１）で表される蛍光性化合物と同じである。
したがって、式（４）において、Ｘ、Ｒ１〜Ｒ５、Ｌ１、Ｑ１及び環β１は、それぞれ、上記式（１）における、Ｘ、Ｒ１〜Ｒ５、Ｌ１、Ｑ１及び環β１と同義であり、好ましいものも同じである。
ただし、上記式（４）においては、Ｒ１〜Ｒ７、Ｌ１及びＱ１のうち少なくとも１つは、カルボキシ基もしくはその塩、スルホ基もしくはその塩、ホスホノ基もしくはその塩、オニオ基及びポリアミノ酸残基の少なくとも１種、すなわち前述の特定の親水性基Ｐｉを有する。
【００６９】
上記式（４）において、Ｒ６は上記式（１）におけるＲ１と同義である。ただし、Ｒ６としては、水素原子、アルキル基、アルコキシ基、アリール基、ハロゲン原子又はヘテロアリール基が好ましい。
【００７０】
Ｒ７は、アルキル基、シクロアルキル基、脂肪族複素環基、アルケニル基、シクロアルケニル基、アルキニル基、水酸基、メルカプト基、アルコキシ基、アルキルチオ基、アリールオキシ基、アリールチオ基、アリール基、ヘテロアリール基又はハロゲン原子を示す。Ｒ７として採りうるこれらの基又は原子は、Ｒ１として採りうる、対応する基又は原子と同義であり、好ましいものも同じである。ただし、Ｒ７としては、ハロゲン原子、アルキニル基、アルコキシ基、水酸基又はアリール基が好ましく、ハロゲン原子又は水酸基がより好ましい。
【００７１】
Ｒ６及びＲ７として採りうる上記各基は、それぞれ、無置換の基であってもよく、置換基を有する基であってもよい。Ｒ６及びＲ７として採りうる上記各基が有していてもよい置換基としては、特に限定されず、好ましくは、後述する置換基群Ｔから選択され、より好ましくは、アルキル基、アルコキシ基、カルバモイル基（これらのアルキル基、アルコキシ基及びカルバモイル基は無置換の基であってもよく、置換基を有する基であってもよく、これらのアルキル基及びアルコキシ基が有していてもよい置換基としては、特に限定されず、好ましくは、後述する置換基群Ｔから選択され、より好ましくは、親水性基Ｐｉが挙げられる。）又は特定の親水性基Ｐｉが挙げられる。置換基の数は、１個以上であれば特に制限されない。
Ｒ６とＲ７は、直接又は連結基を介して、互いに結合して環を形成することはない。この環とは、式（１）で表される蛍光性化合物中の、ピロール環中の隣接する炭素原子及び窒素原子とホウ素原子とＬ２とＱ２とで形成される環、すなわち環β１１を意味し、この環以外の環であれば形成してもよい。
【００７２】
＜式（５）で表される蛍光性化合物＞
本発明の式（４）で表される蛍光性化合物は、下記式（５）で表されることが好ましい。
【００７３】
【化１７】
2019230963.tif 000019
【００７４】
上記式（５）で表される蛍光性化合物は、Ｒ６とＲ７とが互いに結合して環を形成しておらず、式（２）における環β２１を有しない点で異なること以外は、上述の式（２）で表される蛍光性化合物と同じである。
したがって、式（５）において、Ｘ、Ｒ１〜Ｒ５、Ｌ１１、Ｑ、環β１１及び環Ａは、それぞれ、上記式（２）における、Ｘ、Ｒ１〜Ｒ５、Ｌ１１、Ｑ及び環β１１と同義であり、好ましいものも同じである。
【００７５】
上記式（５）において、Ｒ６及びＲ７は上記式（４）におけるＲ６及びＲ７と同義であり、好ましいものも同じである。
【００７６】
＜式（６）で表される蛍光性化合物＞
本発明の式（４）で表される蛍光性化合物は、下記式（６）で表されることがより好ましい。
【００７７】
【化１８】
2019230963.tif 000020
【００７８】
上記式（６）で表される蛍光性化合物は、Ｒ６とＲ７とが互いに結合して環を形成しておらず、式（３）における環β２１を有しない点で異なること以外は、上述の式（３）で表される蛍光性化合物と同じである。
したがって、式（５）において、Ｘ、Ｒ１〜Ｒ５、Ｒ８、Ｌ１１、Ｑ、ｎ及び環β１１は、それぞれ、上記式（３）における、Ｘ、Ｒ１〜Ｒ５、Ｒ８、Ｌ１１、Ｑ、ｎ及び環β１１と同義であり、好ましいものも同じである。
【００７９】
上記式（６）において、Ｒ６及びＲ７は上記式（４）におけるＲ６及びＲ７と同義であり、好ましいものも同じである。
【００８０】
＜式（８）で表される蛍光性化合物＞
本発明の式（４）で表される蛍光性化合物は、下記式（８）で表されることも好ましい。
【００８１】
【化１９】
2019230963.tif 000021
【００８２】
上記式（８）で表される蛍光性化合物は、Ｒ６とＲ７とが互いに結合して環を形成しておらず、式（７）における環β２２を有しない点で異なること以外は、上述の式（７）で表される蛍光性化合物と同じである。
したがって、式（８）において、Ｘ、Ｒ１〜Ｒ５、Ｌ１２、Ｌ１３、Ｑ及び環β１２は、それぞれ、上記式（７）における、Ｘ、Ｒ１〜Ｒ５、Ｌ１２、Ｌ１３、Ｑ及び環β１２と同義であり、好ましいものも同じである。
【００８３】
上記式（８）において、Ｒ６及びＲ７は上記式（４）におけるＲ６及びＲ７と同義であり、好ましいものも同じである。
【００８４】
上記式（７）及び式（８）のいずれかで表される蛍光性化合物は、環β１２又は環β２２におけるＬ１３として上述の特定の基を有するため、本発明の蛍光性化合物のうち、Ｌ１３の位置にアリーレン基及びヘテロアリーレン基等を有する化合物に比べてジピロメテン骨格のπ共役が伸長されず、より短波長側に励起波長又は発光波長を有する蛍光性化合物として使用することができる。
【００８５】
以下に、本発明の式（１）で表される蛍光性化合物および式（４）で表される蛍光性化合物の具体例を以下に示すが、本発明はこれらの化合物に限定されない。下記具体例において、特定の親水性基Ｐｉ等の解離性の水素原子を有する基については、水素原子が解離して塩構造を採っていてもよい。また、構造式中におけるｍは平均繰り返し数であり、０〜１００００を示す。
【００８６】
【化２０】
2019230963.tif 000022
【００８７】
【化２１】
2019230963.tif 000023
【００８８】
【化２２】
2019230963.tif 000024
【００８９】
【化２３】
2019230963.tif 000025
【００９０】
【化２４】
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【００９１】
【化２５】
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【００９２】
【化２６】
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【００９３】
【化２７】
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【００９４】
【化２８】
2019230963.tif 000030
【００９５】
【化２９】
2019230963.tif 000031
【００９６】
【化３０】
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【００９７】
【化３１】
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【００９８】
【化３２】
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【００９９】
【化３３】
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【０１００】
【化３４】
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【０１０１】
【化３５】
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【０１０２】
【化３６】
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【０１０３】
【化３７】
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【０１０４】
【化３８】
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【０１０５】
【化３９】
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【０１０６】
【化４０】
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【０１０７】
【化４１】
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【０１０８】
【化４２】
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【０１０９】
本発明の式（１）又は式（４）で表される蛍光性化合物は、公知の方法で合成できる。例えば、Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．，２００８，７３（５），１９６３〜１９７０及びＪ．Ｍａｔｅｒ．Ｃｈｅｍ．Ｂ，２０１４，２，１５７６〜１５８３が挙げられる。
【０１１０】
本発明の式（１）又は式（４）で表される蛍光性化合物は親水性に優れ、タンパク質、ペプチド、アミノ酸、核酸、糖鎖及び脂質などの生体物質に結合させることにより、生体蛍光イメージング用試薬として使用することができる。
さらに、本発明の式（１）又は式（４）で表される蛍光性化合物は、水を含む水溶性溶媒（水溶性溶媒は酸素を比較的多く含む溶媒である）中においても、耐光性に優れる。そのため、従来の蛍光性化合物を用いた場合に比べ、長期間、高解像度で生体観察等することが可能となる。
すなわち、本発明の式（１）又は式（４）で表される蛍光性化合物は、生体物質との間で相互作用（物理吸着及び化学結合等）する基を有した化合物も包含され、このような形態は、本発明の蛍光性化合物を生体蛍光イメージングに適用する点から特に好ましい。
具体的には、本発明の蛍光性化合物は、Ｒ１〜Ｒ８、Ｌ１、Ｌ２、Ｌ１１〜Ｌ１３、Ｑ、Ｑ１及びＱ２の少なくとも一つが（式（１）又は式（４）で表される蛍光性化合物においてはＲ１〜Ｒ７、Ｌ１、Ｌ２、Ｑ１及びＱ２の少なくとも一つが）、生体物質との結合性部位を有することが好ましく、結合性部位としては、例えば、下記蛍光標識生体物質で記載する部位が挙げられる。
以下に、生体物質との間で相互作用する基を有した化合物の具体例を示すが、本発明はこれらの化合物に限定されない。下記具体例において、特定の親水性基Ｐｉ等の解離性の水素原子を有する基については、水素原子が解離して塩構造を採っていてもよい。また、構造式中におけるｍは平均繰り返し数であり、０〜１００００を示す。
【０１１１】
【化４３】
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【０１１２】
【化４４】
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【０１１３】
【化４５】
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【０１１４】
生体物質に作用（付着を含む）もしくは結合するための基を有した化合物は、公知の方法で合成できる。例えば、Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ  Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ（Ｔｈｉｒｄ  Ｅｄｉｔｉｏｎ、Ｇｒｅｇ  Ｔ．  Ｈｅｒｍａｎｓｏｎ著）を参照することができる。
【０１１５】
＜＜蛍光標識生体物質＞＞
本発明の蛍光標識生体物質は、本発明の式（１）又は式（４）で表される蛍光性化合物と生体物質とが結合した物質である。式（１）又は式（４）で表される蛍光性化合物と生体物質との結合は、式（１）又は式（４）で表される蛍光性化合物と生体物質とが直接結合した形態でもよいし、連結基を介して連結した形態でもよい。
【０１１６】
上記生体物質としては、タンパク質、ペプチド、アミノ酸、核酸、糖鎖及び脂質が好ましく挙げられる。タンパク質としては抗体が好ましく挙げられ、脂質としてはリン脂質、脂肪酸及びステロールが好ましく挙げられる。
上記生体物質のうち、臨床病理的に有用な物質としては、特に制限されるものではないが、例えば、ＩｇＧ、ＩｇＭ、ＩｇＥ、ＩｇＡ、ＩｇＤ等の免疫グロブリン、補体、ＣＲＰ．フェリチン、α１マイクログロブリン、β２マイクログロブリン等の血漿タンパク及びそれらの抗体、α−フェトプロテイン、癌胎児抗原（ＣＥＡ）、前立線性酸性ホスファターゼ（ＰＡＰ）、ＣＡ１９‐９、ＣＡ‐１２５等の腫瘍マーカー及びそれらの抗体、黄体化ホルモン（ＬＨ）、卵胞刺激ホルモン（ＦＳＨ）、ヒト繊毛性ゴナドトロビン（ｈＣＧ）、エストロゲン、インスリン等のホルモン類及びそれらの抗体、ＨＢＶ関連抗原（ＨＢｓ．ＨＢｅ．ＨＢｃ）．ＨＩＶ．ＡＴＬ等のウイルス感染関連物質及びそれらの抗体、等が挙げられる。
さらに、ジフテリア菌、ボツリヌス菌、マイコプラズマ、梅毒トレポネーマ等のバクテリア及びそれらの抗体、トキソプラズマ、トリコモナス、リーシュマニア、トリバノゾーマ、マラリア原虫等の原虫類及びそれらの抗体、ＥＬＭ３、ＨＭ１、ＫＨ２、ｖ６．５、ｖ１７．２、ｖ２６．２（由来マウス１２９、１２９／ＳＶ、Ｃ５７ＢＬ／６、ＢＡＬＢ／ｃ）等のＥＳ細胞及びそれらの抗体、フェニトイン、フェノバルビタール等の抗てんかん薬、キニジン、ジゴキニシン等の心血管薬、テオフィリン等の抗喘息薬、クロラムフェニコール、ゲンタマイシン等の抗生物質等の薬物類及びそれらの抗体、その他の酵素、菌体外毒素（スチレリジンＯ等）及びそれらの抗体等も挙げられる。また、Ｆａｂ’２、Ｆａｂ、Ｆｖ等の抗体断片も用いる事ができる。
【０１１７】
本発明の式（１）又は式（４）で表される蛍光性化合物（以下、蛍光性化合物（１）又は（４）とも略す。）と生体物質が相互作用して結合した具体的な形態としては、例えば、下記に記載する形態が挙げられる。
ｉ）蛍光性化合物（１）又は（４）中のペプチドと生体物質中のペプチドとの非共有結合（例えば、水素結合、キレート形成を含むイオン結合）又は共有結合、
ｉｉ）蛍光性化合物（１）又は（４）中の長鎖アルキル基と生体物質中の脂質二重膜及び脂質などとのファンデルワールス力、
ｉｉｉ）蛍光性化合物（１）又は（４）中のＮＨＳエステル（Ｎ−ヒドロキシスクシンイミドエステル）と生体物質中のアミノ基との反応によるアミド結合、
ｉｖ）蛍光性化合物（１）又は（４）中のマレイミド基と生体物質中のスルファニル基（−ＳＨ）との反応によるチオエーテル結合、
ｖ）蛍光性化合物（１）又は（４）中のアジド基と生体物質中のアセチレン基とのＣｌｉｃｋ反応又は蛍光性化合物（１）又は（４）中のアセチレン基と生体物質中のアジド基とのＣｌｉｃｋ反応によるトリアゾール環の形成、
が挙げられる。
ただし、上記ｉｉ）で記載する蛍光性化合物（１）又は（４）中の長鎖アルキル基には、式（１）又は式（４）で規定する通り、ＸがＣＲ５であって、Ｒ５が式（Ａ）で表される基であり、Ｌ３が単結合かつＲ１１１がアリール基である場合、アリール基上の炭素数が１８以上の直鎖アルキル基は含まれない。
上記ｉ）〜ｖ）の形態以外にも、例えば、Lucas C. D. de Rezende and Flavio da Silva Emery,. A Review of the Synthetic Strategies for the Development of BODIPY Dyes for Conjugation with Proteins, Orbital: The Electronic Journal of Chemistry, 2013, Vol 5, No. 1, p.62-83に記載の形態により結合することができる。また、本発明の蛍光標識生体物質の作製においても、同文献に記載の方法等を適宜参照することができる。
【０１１８】
【化４６】
2019230963.tif 000048
【０１１９】
本発明の蛍光標識生体物質は親水性に優れ、また、水を含む水溶性溶媒（水溶性溶媒は酸素を比較的多く含む溶媒である）中においても、耐光性に優れる。そのため、従来のＢＯＤＩＰＹ（登録商標）化合物等のジピロメテンホウ素錯体構造を有する蛍光標識生体物質を用いた場合に比べ、長期間、高解像度で生体観察等することが可能となる。また、本発明の蛍光標識生体物質は、生理食塩水及びリン酸緩衝液等の水系媒体に溶解した溶液形態における耐光性に優れるため、溶液形態での保存性にも優れる。
【０１２０】
＜蛍光標識生体物質を含む試薬＞
本発明の蛍光標識生体物質を含む試薬において、本発明の蛍光標識生体物質は、例えば、生理食塩水及びリン酸緩衝液等の水系媒体に溶解した溶液形態、並びに、微粒子状粉末及び凍結乾燥粉末等の固形形態等、特に制限されることなく、使用目的等に応じてその形態を適宜選択することができる。
例えば、下記生体蛍光イメージング試薬として本発明の蛍光標識生体物質を用いる場合に、上記いずれかの形態の蛍光標識生体物質を含む試薬として使用することもできる。
【０１２１】
＜蛍光標識生体物質の用途＞
本発明の式（１）又は式（４）で表される蛍光性化合物から得られる本発明の蛍光標識生体物質は、光照射により励起された蛍光性化合物から放出される蛍光を安定的に検出することができる。しかも、生体蛍光イメージング試薬としての十分な親水性を備える。このため、本発明の蛍光標識生体物質は、例えば、生体蛍光イメージング試薬として好適である。
本発明の蛍光標識生体物質を蛍光色素として使用して染色した細胞は、褪色が高度に抑制されることにより、長時間に亘り蛍光強度を維持することができる。このため、本発明の蛍光標識生体物質は、タイムラプス測定による顕微鏡観察等の長期に亘る生体物質の観察、共焦点レーザー顕微鏡等の高解像度顕微鏡又はＳＴＥＤ顕微鏡（誘導放出抑制顕微鏡）等の超解像顕微鏡を用いた生体物質の観察などの、優れた耐光性が求められる生体蛍光イメージングにより好適に用いることができる。
【０１２２】
本発明の蛍光標識生体物質を用いた生体蛍光イメージングは、以下（ｉ）〜（ｉｉｉ）の工程を含む。
（ｉ）標的とする生体物質（以下、「標的生体物質」と称す。）と、標的生体物質と結合可能な生体物質と本発明の蛍光性化合物とが結合した本発明の蛍光標識生体物質と、を用意する工程
（ｉｉ）標的生体物質と本発明の蛍光標識生体物質とを結合させる工程
（ｉｉｉ）本発明の蛍光標識生体と標的生体物質とが結合した物質に、本発明の蛍光標識生体が吸収する波長域の光を照射し、本発明の蛍光標識生体が発する蛍光を検出する工程
【０１２３】
上記生体蛍光イメージングにおいて、標的生体物質と結合可能な生体物質としては、上記本発明の蛍光標識生体物質における生体物質が挙げられる。標的生体物質（被検体）にあわせて適宜選択することができ、被検体に対して特異的に結合可能な生体物質を選択することができる。
【０１２４】
上記標的生体物質としては、タンパク質、いわゆる疾患マーカーが挙げられる。疾患マーカーとしては、特に制限はされるものではないが、例えば、α−フェトプロテイン（ＡＦＰ）、ＰＩＶＫＡ−ＩＩ、ＢＣＡ２２５、塩基性フェトプロテイン（ＢＦＰ）、ＣＡ１５−３、ＣＡ１９−９、ＣＡ７２−４、ＣＡ１２５、ＣＡ１３０、ＣＡ６０２、ＣＡ５４／６１（ＣＡ５４６）、癌胎児性抗原（ＣＥＡ）、ＤＵＰＡＮ−２、エラスターゼ１、免疫抑制酸性タンパク（ＩＡＰ）、ＮＣＣ−ＳＴ−４３９、γ−セミノプロテイン（γ−Ｓｍ）、前立腺特異抗原（ＰＳＡ）、前立腺酸性フォスファターゼ（ＰＡＰ）、神経特異エノラーゼ（ＮＳＥ）、Ｉｂａ１、アミロイドβ、タウ、扁平上皮癌関連抗原（ＳＣＣ抗原）、シアリルＬｅＸ−ｉ抗原（ＳＬＸ）、ＳＰａｎ−１、組織ポリペプタイド抗原（ＴＰＡ）、シリアルＴｎ抗原（ＳＴＮ）、シフラ（ｃｙｔｏｋｅｒａｔｉｎ：ＣＹＦＲＡ）ペプシノゲン（ＰＧ）、Ｃ−反応性タンパク（ＣＲＰ）、血清アミロイドＡタンパク（ＳＡＡ）、ミオグロビン、クレアチンキナーゼ（ＣＫ）、トロポニンＴ、心室筋ミオシン軽鎖Ｉ等が挙げられる。
【０１２５】
上記標的生体物質のうち細菌としては、細胞微生物学的検査の対象とされる細菌が挙げられ、特に制限されるものではないが、例えば、大腸菌、サルモネラ菌、レジオネラ菌、公衆衛生に問題の生じる菌等が挙げられる。
【０１２６】
上記標的生体物質のうちウイルスとしては、特に制限されるものではないが、例えば、Ｃ型、Ｂ型肝炎ウイルスの抗原等の肝炎ウイルス抗原、ＨＩＶウイルスのｐ２４タンパク抗原、ＣＭＶ（サイトメガロウイルス）のｐｐ６５タンパク抗原、ＨＰＶ（パピローマウイルス）のＥ６及びＥ７タンパク等が挙げられる。
【０１２７】
上記（ｉ）において、標的生体物質は、特に制限されることなく、常法に従って調製することができる。
また、本発明の蛍光標識生体物質も、特に制限されることなく、標的生体物質と結合可能な生体物質と本発明の蛍光性化合物とを常法に従って結合させて調製することができる。結合の形態及び結合を形成する反応としては、上記本発明の蛍光標識生体物質で記載する相互作用して結合する形態及び反応を挙げることができる。
【０１２８】
上記（ｉｉ）において、本発明の蛍光標識生体物質と標的生体物質とは、直接結合させても、本発明の蛍光標識生体物質及び標的生体物質とは異なるその他の生体物質を介して結合させてもよい。本発明の蛍光標識生体物質を用いた生体蛍光イメージングは特に限定されないが、例えば、蛍光細胞染色を挙げることができる。蛍光細胞染色には、一次抗体として蛍光標識抗体を用いる直接法、蛍光標識抗体としての二次抗体を一次抗体と反応させて用いる間接法とがある。本発明の蛍光標識生体物質は、直接法及び間接法のいずれにおける蛍光標識抗体としても用いることができるが、間接法における蛍光標識抗体として用いることが好ましい。
本発明の蛍光標識生体物質と標的生体物質との結合は、特に制限されることなく、常法に従って行うことができる。
【０１２９】
上記（ｉｉｉ）において、本発明の蛍光標識生体を励起するための波長は、本発明の蛍光標識生体を励起可能な発光波長（波長光）であれば特に限定されない。通常、３００〜１０００ｎｍが好ましく、４００〜８００ｎｍがより好ましい。
【０１３０】
本発明に用いられる蛍光励起光源としては、本発明の蛍光標識生体を励起可能な発光波長（波長光）を発光するものであれば特に限定されず、各種レーザー光源を用いることができる。例えば、Ｈｅ−Ｎｅレーザー、ＣＯ２レーザー、Ａｒ，Ｋｒ，Ｈｅ−Ｃｄレーザー、エキシマレーザー、窒素レーザー等の気体レーザー、ルビーレーザー、イットリウム−アルミニウム−ガーネット（ＹＡＧ）レーザー、ガラスレーザー等の固体レーザー、色素レーザー、半導体レーザー等が挙げられる。また、各種光学フィルターを用いて、好ましい励起波長を得たり、蛍光のみを検出したりする事ができる。
【０１３１】
上記（ｉ）〜（ｉｉｉ）におけるその他の事項については、特に制限されることなく、通常用いられる手法、試薬、装置等の条件と適宜選択することができる。
【０１３２】
本発明の蛍光標識生体物質を用いた生体蛍光イメージングは、本発明の蛍光標識生体と標的生体物質とが結合した物質の褪色が高度に抑制されることにより、長期に亘り蛍光強度を維持して生体物質を観察することができ、また、高解像度顕微鏡、超解像度顕微鏡を用いた場合にも蛍光強度を維持した観察を行うことができる。
【０１３３】
また、本発明の蛍光標識生体物質は、上記の他、染色細胞の長期保存等においても、適宜保存条件を調整して好適に用いることができる。
【０１３４】
−  置換基群Ｔ  −
本発明において、好ましい置換基としては、下記置換基群Ｔから選ばれる置換基が挙げられる。
また、本明細書において、単に置換基としてしか記載されていない場合は、この置換基群Ｔを参照するものであり、各々の基、例えば、アルキル基、が記載されているのみの場合は、この置換基群Ｔの対応する基が好ましく適用される。
さらに、本明細書において、アルキル基を環状（シクロ）アルキル基と区別して記載している場合、アルキル基は、直鎖アルキル基及び分岐アルキル基を包含する意味で用いる。一方、アルキル基を環状アルキル基と区別して記載していない場合、及び、特段の断りがない場合、アルキル基は、直鎖アルキル基、分岐アルキル基及びシクロアルキル基を包含する意味で用いる。このことは、環状構造を採りうる基（アルキル基、アルケニル基、アルキニル基等）を含む基（アルコキシ基、アルキルチオ基、アルケニルオキシ基等）、環状構造を採りうる基を含む化合物についても同様である。基が環状骨格を形成しうる場合、環状骨格を形成する基の原子数の下限は、この構造を採りうる基について下記に具体的に記載した原子数の下限にかかわらず、３以上であり、５以上が好ましい。
下記置換基群Ｔの説明においては、例えば、アルキル基とシクロアルキル基のように、直鎖又は分岐構造の基と環状構造の基とを明確にするため、これらを分けて記載していることもある。
【０１３５】
置換基群Ｔに含まれる基としては、下記の基を含む。
アルキル基（好ましくは炭素数１〜３０、より好ましくは炭素数１〜２０、さらに好ましくは炭素数１〜１２、さらに好ましくは炭素数１〜８、さらに好ましくは炭素数１〜６、特に好ましくは炭素数１〜３）、アルケニル基（好ましくは炭素数２〜３０、より好ましくは炭素数２〜２０、さらに好ましくは炭素数２〜１２、さらに好ましくは炭素数２〜６、さらに好ましくは炭素数２〜４）、アルキニル基（好ましくは炭素数２〜３０、より好ましくは炭素数２〜２０、さらに好ましくは炭素数２〜１２、さらに好ましくは炭素数２〜６、さらに好ましくは炭素数２〜４）、シクロアルキル基（好ましくは炭素数３〜２０）、シクロアルケニル基（好ましくは炭素数５〜２０）、アリール基（単環の基であってもよく、縮環の基（好ましくは２〜６環の縮環の基）であってもよい。縮環の基である場合、５〜７員環等からなる。アリール基は好ましくは炭素数６〜４０、より好ましくは炭素数６〜３０、さらに好ましくは炭素数６〜２６、特に好ましくは炭素数６〜１０）、ヘテロ環基（環構成原子として少なくとも１つの窒素原子、酸素原子、硫黄原子、リン原子、ケイ素原子又はセレン原子を有し、単環の基であってもよく、縮環の基（好ましくは２〜６環の縮環の基）であってもよい。単環の基である場合、その環員数は５〜７員が好ましく、５員又は６員がより好ましい。ヘテロ環基の炭素数は好ましくは２〜４０、より好ましくは２〜２０である。ヘテロ環基は芳香族ヘテロ環基（ヘテロアリール基）及び脂肪族ヘテロ環基（脂肪族複素環基）が包含される。）、アルコキシ基（好ましくは炭素数１〜２０、より好ましくは炭素数１〜１２）、アルケニルオキシ基（好ましくは炭素数２〜２０、より好ましくは炭素数２〜１２）、アルキニルオキシ基（好ましくは炭素数２〜２０、より好ましくは炭素数２〜１２）、シクロアルキルオキシ基（好ましくは炭素数３〜２０）、アリールオキシ基（好ましくは炭素数６〜４０、より好ましくは炭素数６〜２６、さらに好ましくは炭素数６〜１４）、ヘテロ環オキシ基（好ましくは炭素数２〜２０）、
【０１３６】
アルコキシカルボニル基（好ましくは炭素数２〜２０）、シクロアルコキシカルボニル基（好ましくは炭素数４〜２０）、アリールオキシカルボニル基（好ましくは炭素数６〜２０）、アミノ基（好ましくは炭素数０〜２０で、無置換アミノ基（−ＮＨ２）、（モノ−又はジ−）アルキルアミノ基、（モノ−又はジ−）アルケニルアミノ基、（モノ−又はジ−）アルキニルアミノ基、（モノ−又はジ−）シクロアルキルアミノ基、（モノ−又はジ−）シクロアルケニルアミノ基、（モノ−又はジ−）アリールアミノ基、（モノ−又はジ−）ヘテロ環アミノ基を含む。無置換アミノ基を置換する上記各基は置換基群Ｔの対応する基と同義である。）、スルファモイル基（好ましくは炭素数０〜２０で、アルキル、シクロアルキルもしくはアリールのスルファモイル基が好ましい。）、アシル基（好ましくは炭素数１〜２０、より好ましくは炭素数２〜１５）、アシルオキシ基（好ましくは炭素数１〜２０）、カルバモイル基（好ましくは炭素数１〜２０で、アルキル、シクロアルキルもしくはアリールのカルバモイル基が好ましい。）、
【０１３７】
アシルアミノ基（好ましくは炭素数１〜２０）、スルホンアミド基（好ましくは炭素数０〜２０で、アルキル、シクロアルキルもしくはアリールのスルホンアミド基が好ましい。）、アルキルチオ基（好ましくは炭素数１〜２０、より好ましくは炭素数１〜１２）、シクロアルキルチオ基（好ましくは炭素数３〜２０）、アリールチオ基（好ましくは炭素数６〜４０、より好ましくは炭素数６〜２６、さらに好ましくは炭素数６〜１４）、ヘテロ環チオ基（好ましくは炭素数２〜２０）、アルキル、シクロアルキルもしくはアリールスルホニル基（好ましくは炭素数１〜２０）、
【０１３８】
シリル基（好ましくは炭素数１〜３０、より好ましくは炭素数１〜２０で、アルキル、アリール、アルコキシもしくはアリールオキシが置換したシリル基が好ましい。）、シリルオキシ基（好ましくは炭素数１〜２０で、アルキル、アリール、アルコキシもしくはアリールオキシが置換したシリルオキシ基が好ましい。）、ヒドロキシ基、シアノ基、ニトロ基、ハロゲン原子（例えばフッ素原子、塩素原子、臭素原子又はヨウ素原子）、酸素原子（具体的には、環を構成する＞ＣＨ２を＞Ｃ＝Ｏに置き換える）、カルボキシ基（−ＣＯ２Ｈ）、ホスホノ基〔−ＰＯ（ＯＨ）２〕、ホスホリル基〔−Ｏ−ＰＯ（ＯＨ）２〕、スルホ基（−ＳＯ３Ｈ）、ホウ酸基〔−Ｂ（ＯＨ）２〕、オニオ基（環状アンモニオを含むアンモニオ基、スルホニオ基、ホスホニオ基を含み、好ましくは炭素数０〜３０、より好ましくは１〜２０）、スルファニル基（−ＳＨ）、アミノ酸残基、又は、ポリアミノ酸残基が挙げられる。
また、カルボキシ基、ホスホノ基、スルホ基、オニオ基、アミノ酸残基、又は、ポリアミノ酸残基を置換基として有する上記のアルキル基、アルケニル基、アルキニル基、シクロアルキル基、シクロアルケニル基、アリール基、ヘテロ環基、アルコキシ基、アルケニルオキシ基、アルキニルオキシ基、シクロアルキルオキシ基、アリールオキシ基、ヘテロ環オキシ基、アルコキシカルボニル基、シクロアルコキシカルボニル基、アリールオキシカルボニル基、アミノ基、スルファモイル基、アシル基、アシルオキシ基、カルバモイル基、アシルアミノ基、スルホンアミド基、アルキルチオ基、シクロアルキルチオ基、アリールチオ基、ヘテロ環チオ基、アルキル、シクロアルキルもしくはアリールスルホニル基が挙げられる。
【０１３９】
置換基群Ｔから選ばれる置換基は、より好ましくは、アルキル基、アルケニル基、シクロアルキル基、アリール基、ヘテロ環基、アルコキシ基、シクロアルコキシ基、アリールオキシ基、アルコキシカルボニル基、シクロアルコキシカルボニル基、アミノ基、アシルアミノ基、シアノ基又はハロゲン原子であり、特に好ましくは、アルキル基、アルケニル基、アリール基、ヘテロ環基、アルコキシ基、アルコキシカルボニル基、アミノ基、アシルアミノ基又はシアノ基である。
【０１４０】
置換基群Ｔから選ばれる置換基は、特段の断りがない限り、上記の基を複数組み合わせてなる基をも含む。例えば、化合物又は置換基等がアルキル基、アルケニル基等を含むとき、これらは置換されていても置換されていなくてもよい。また、アリール基、ヘテロ環基等を含むとき、それらは単環でも縮環でもよく、置換されていても置換されていなくてもよい。
【実施例】
【０１４１】
以下に実施例に基づき、本発明についてさらに詳細に説明するが、本発明はこれに限定されない。【０１４２】
実施例及び比較例で用いた化合物（１）〜（２４）、比較化合物（１）〜（２）を、以下に示す。なお、化合物（１４）の構造式中の［  ］は繰り返し構造であることを示す。【０１４３】
【化４７】
2019230963.tif 000049
【０１４４】
【化４８】
2019230963.tif 000050
【０１４５】
比較化合物（１）は国際公開第２０１３／０３５３０３号の段落［００５２］に記載の化合物Ａである。
比較化合物（２）はＢＯＤＩＰＹ（登録商標）  ４９６／５１２（インビトロジェン社製、商品名）である。【０１４６】
以下に、各実施例で用いる化合物（１）〜（２４）及び標識抗体（１）〜（１２）の合成方法を詳しく説明するが、出発物質、色素中間体及び合成ルートはこれらに限定されるものではない。【０１４７】
特に記載のない場合、シリカゲルカラムクロマトグラフィーにおける担体は、ＳＮＡＰ
ＫＰ−Ｓｉｌ  Ｃａｒｔｒｉｄｇｅ（Ｂｉｏｔａｇｅ社）、ハイフラッシュカラムＷ００１、Ｗ００２、Ｗ００３、Ｗ００４又はＷ００５〔山善（株）〕を使用した。ＮＨシリカは、ＳＮＡＰ  ＫＰ−ＮＨ  Ｃａｒｔｒｉｄｇｅ（Ｂｉｏｔａｇｅ社）を使用した。溶離液における混合比は、容量比である。例えば、「クロロホルム：メタノール＝９０：１０→５０：５０」は、「クロロホルム：メタノール＝９０：１０」の溶離液を「クロロホルム：メタノール＝５０：５０」の溶離液へ変化させたことを意味する。
分取薄層シリカゲルクロマトグラフィーは、ＰＬＣガラスプレートシリカゲルＦ６０（メルク社）を使用した。ＮＨシリカは、ＰＬＣ０５  Ｐｌａｔｅｓ  ＮＨ〔富士シリシア化学（株）〕を使用した。【０１４８】
代表的には以下の条件である。【０１４９】
カラム：Ｗａｔｅｒｓ社製ＢＥＨＣ  １８  １．７μｍ，  ２．１ｘ３０  ｍｍ
溶媒：Ａ液：０．１％ギ酸−水
Ｂ液：０．１％ギ酸−アセトニトリル
グラジエントサイクル：０．００ｍｉｎ（Ａ液／Ｂ液＝９５／５）、２．００ｍｉｎ（Ａ液／Ｂ液＝５／９５）、３．００ｍｉｎ（Ａ液／Ｂ液＝５／９５）、３．０１ｍｉｎ（Ａ液／Ｂ液＝１００／０）、３．８０ｍｉｎ（Ａ液／Ｂ液＝１００／０）
流速：０．５  ｍＬ／ｍｉｎ
カラム温度：室温
検出波長：２５４ｎｍ【０１５０】
なお、本発明において、室温（ｒ．ｔ．）とは２５℃を意味する。
また、保持時間（ＲＴ）は、ＳＱＤ（Ｗａｔｅｒｓ社）を用いて測定し、分（ｍｉｎ）で示した。
各合成例における記載は、具体的には、以下の通りである。
ＲＴ（ｍｉｎ）：保持時間（分）【０１５１】
ＭＳスペクトルは、ＡＣＱＵＩＴＹ  ＳＱＤ  ＬＣ／ＭＳ  Ｓｙｓｔｅｍ〔Ｗａｔｅｒｓ社、イオン化法：ＥＳＩ（ＥｌｅｃｔｒｏＳｐｒａｙ  Ｉｏｎｉｚａｔｉｏｎ、エレクトロスプレーイオン化）〕又はＬＣＭＳ−２０１０ＥＶ〔（株）島津製作所、イオン化法：ＥＳＩ及びＡＰＣＩ（Ａｔｏｍｏｓｐｈｅｒｉｃ  Ｐｒｅｓｓｕｒｅ  ＣｈｅｍｉｃａｌＩｏｎｉｚａｔｉｏｎ、大気圧化学イオン化）を同時に行うイオン化法〕を用いて測定した。
特に記載のない場合、ＭＳは、ＭＳ（ＥＳＩ  ｍ／ｚ）：［Ｍ＋Ｈ］＋を意味する。【０１５２】
マイクロウェーブ反応装置は、Ｉｎｉｔｉａｔｏｒ  Ｓｉｘｔｙ（Ｂｉｏｔａｇｅ社）を使用した。【０１５３】
なお、各実施例における蛍光性化合物及び比較化合物並びに標識抗体は、特段の記載がない限り、作製後すぐに使用しない場合には、遮光条件下で保存したものを使用した。また、市販品の比較化合物及び参考標識抗体についても、購入後使用するまでは遮光条件下で保存した物を使用した。【０１５４】
〔化合物の合成〕
以下に示す各化合物の合成に用いた略語は下記の化合物である。【０１５５】
ＣＰＭＥ：シクロペンチルメチルエーテル
ＤＤＱ：２，３−ジクロロ−５，６−ジシアノ−１，４−ベンゾキノン
ＤＣＣ：ジシクロヘキシルカルボジイミド
ＨＡＴＵ：１−［ビス（ジメチルアミノ）メチレン］−１Ｈ−１，２，３−トリアゾロ［４，５−ｂ］ピリジニウム３−オキシドヘキサフルオロホスファート
ＮＢＳ：Ｎ−ブロモスクシンイミド
ＮＨＳ：Ｎ−ヒドロキシこはく酸イミド
ＧＡＢＡ：γ−アミノ酪酸
ＰｄＣｌ２（ｄｔｂｐｆ）：［１，１’−ビス（ジ−ｔｅｒｔ−ブチルホスフィノ）フェロセン］パラジウム（ＩＩ）ジクロリド
ＲｕＰｈｏｓ：２−ジシクロへキシルホスフィノ−２’，６’−ジイソプロポキシビフェニル
ＴＦＡ：トリフルオロ酢酸
ＤＩＰＥＡ：ジイソプロピルエチルアミン
ＤＣＭ：ジクロロメタン
ＤＭＡＰ：４−ジメチルアミノピリジン
ＤＭＦ：Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド
ＤＭＳＯ：ジメチルスルホキシド
ＰＢＳ：リン酸緩衝生理食塩水
ＴＨＦ：テトラヒドロフラン
Ａｎｔｉ−ＩｇＧ：抗マウスＩｇＧ抗体
Ａｃ：アセチル基
Ｂｏｃ又はＢＯＣ：ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル基
Ｂｕ：ブチル基
Ｍｅ：メチル基
Ｅｔ：エチル基
ＰＥＧ：ポリエチレングリコール
ｉＰｒ：イソプロピル基
ＴＭＳ：トリメチルシリル基【０１５６】
［合成例１］
下記のスキームに基づき、化合物（１）を合成した。【０１５７】
１）化合物（１−Ｃ）の合成
下記化合物（１−Ａ）、化合物（１−Ｂ）及び化合物（１−Ｃ）を、それぞれ、ｃｈｅｍ．Ｅｕｒ．Ｊ．２０１６，２２，９３−９６に記載の方法、Ｏｒｇ．Ｐｒｏｃｅｓｓ  Ｒｅｓ．Ｄｅｖ．２０１５，１９，１７７４−１７８３に記載の方法に準じて、合成した。【０１５８】
【化４９】
2019230963.tif 000051
【０１５９】
２）化合物（１）の合成【０１６０】
【化５０】
2019230963.tif 000052
【０１６１】
２−１）化合物（１−Ｄ）の合成
化合物（１−Ｃ）１１２ｍｇのＣＰＭＥ溶液１１ｍＬに、水０．０２ｍＬ、２−（ヒドロキシメチル）フェニルボロン酸  ７６ｍｇ〔和光純薬工業（株）〕、ＰｄＣｌ２（ｄｔｂｐｆ）  １６ｍｇ〔東京化成工業（株）〕及びフッ化セシウム１５２ｍｇ〔和光純薬工業（株）〕を添加し、加熱還流下９０分間撹拌した。続いて、反応液を室温まで冷却した後、反応液に飽和重層水を添加後、酢酸エチルで３回抽出し、減圧下溶媒を留去した。得られた残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ヘキサン：酢酸エチル＝１００：０
→  ５０：５０）で精製し、減圧下溶媒を留去した。得られた生成物をアセトン溶液２０ｍＬの溶液とし、塩化カルシウム９０ｍｇを加えてマイクロウェーブ反応装置にて１６０℃で３０分間撹拌した。その後、反応液を直接シリカゲルカラムクロマトグラフィー（酢酸エチルのみ）で精製し、減圧下溶媒を留去し、化合物（１−Ｄ）３１ｍｇ（赤褐色固体）を得た。
ＭＳ（ＥＳＩ  ｍ／ｚ）：４４１（Ｍ＋Ｈ）
ＲＴ（ｍｉｎ）：１．８３【０１６２】
２−２）化合物（１）の合成
化合物（１−Ｄ）４．５ｍｇのアセトニトリル溶液２ｍＬに、クロロスルホン酸３μＬ〔和光純薬工業（株）〕を添加し、室温下５分撹拌した。その後、反応液を直接分取薄層シリカゲルクロマトグラフィー（メタノール：クロロホルム＝２０：８０）にて精製し、化合物（１）１ｍｇ（赤褐色固体）を得た。
ＭＳ（ＥＳＩ  ｍ／ｚ）：５２１（Ｍ＋Ｈ）
ＲＴ（ｍｉｎ）：１．１９【０１６３】
［合成例２］
下記のスキームに基づき、化合物（２）を合成した。【０１６４】
【化５１】
2019230963.tif 000053
【０１６５】
化合物（１）の合成法において、２−（ヒドロキシメチル）フェニルボロン酸を４−フルオロ−２−（ヒドロキシメチル）フェニルボロン酸［Ｃｏｍｂｉ−Ｂｌｏｃｋｓ社］に変更した以外は化合物（１）の合成法と同様にして、化合物（２）１ｍｇ（赤褐色固体）を得た。
ＭＳ（ＥＳＩ  ｍ／ｚ）：５５７（Ｍ＋Ｈ）
ＲＴ（ｍｉｎ）：１．２８【０１６６】
［合成例３］
下記のスキームに基づき、化合物（３）を合成した。【０１６７】
【化５２】
2019230963.tif 000054
【０１６８】
化合物（１）の合成法において、２−（ヒドロキシメチル）フェニルボロン酸を５−フルオロ−２−（ヒドロキシメチル）フェニルボロン酸〔Ｌｕｍｉｎｅｓｃｅｎｃｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ社〕に変更した以外は化合物（１）の合成法と同様にして、化合物（３）１ｍｇ（赤褐色固体）を得た。
ＭＳ（ＥＳＩ  ｍ／ｚ）：５５７（Ｍ＋Ｈ）
ＲＴ（ｍｉｎ）：１．２８【０１６９】
［合成例４］
下記のスキームに基づき、化合物（４）と標識抗体（１）を合成した。【０１７０】
１）化合物（４）の合成【０１７１】
【化５３】
2019230963.tif 000055
【０１７２】
ｐ−ホルミル安息香酸メチル５ｇ、ピロール３６ｇを３００ｍｌ三ツ口フラスコに入れ、窒素置換した。氷浴にて内温１０℃にし、攪拌しながらトリフルオロ酢酸０．１１５ｍｌを滴下した。その後室温に戻し、２時間攪拌した。反応液をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶離液：酢酸エチル／ヘキサン＝０／１００→５０／５０のグラジエント）により精製し、その後精製物にヘキサン６０ｍｌとイソプロパノール３ｍｌを加え、攪拌した。沈殿物を濾別し、ヘキサンで洗浄を施した後に乾燥させることで、化合物（４−Ａ）を４．７ｇ得た。【０１７３】
５００ｍｌ三ツ口フラスコに化合物（４−Ａ）４．７ｇ、テトラヒドロフラン８０ｍｌを加え、窒素下で攪拌しながらアセトンードライアイスバスにて−６０℃以下に冷却した。Ｎ−ブロモスクシンイミド６．３ｇをテトラヒドロフラン６０ｍｌに溶解させた溶液を滴下して４５分間反応させた後、続いて２，３−ジクロロ−５，６−ジシアノ−１，４−ベンゾキノン４．１９ｇを６０ｍｌのテトラヒドロフランに溶解させた溶液を滴下して７０分間反応させた。その後、テトラヒドロフランをロータリーエバポレーターで濃縮してテトラヒドロフランを留去し、粗生成物を得た。これをジクロロメタンに溶解させ、酢酸エチル／ヘキサン＝０／１００〜４０／６０を溶離液としたシリカゲルカラムクロマトグラフィーにより精製し、化合物（４−Ｂ）を４．０ｇ得た。【０１７４】
５００ｍｌ三ツ口フラスコに化合物（４−Ｂ）４．０ｇ、ジクロロメタン１００ｍｌを加え、窒素下で攪拌しながら塩をまぶした氷浴にて０℃に冷却した。Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン５．６ｍｌを加え、１０分後に三フッ化ホウ素ジエチルエーテル錯体６．３ｍｌを加え、０℃にて３０分間反応させた。その後、炭酸水素ナトリウム飽和水溶液１００ｍｌを滴下し、攪拌させた。有機層を抽出し、ロータリーエバポレーターで濃縮した。最少量のジクロロメタンに溶解させ、酢酸エチル／ヘキサン＝０／１００〜１００／０を溶離液としたシリカゲルカラムクロマトグラフィーにより精製した。精製物を最小量のジクロロメタンに溶解させ、メタノールを加えてロータリーエバポレーターにてジクロロメタンを減圧留去し、沈殿物をろ過した。メタノール洗浄を施し、濾物を乾燥させることで化合物（４−Ｃ）を３．０ｇ得た。【０１７５】
５００ｍｌ三ツ口フラスコに化合物（４−Ｃ）１．７３ｇ、ＣＰＭＥ２３９ｍｌ、水０．４ｍｌ、フッ化セシウム３．２６ｇ、ｏ−（ヒドロキシメチル）フェニルボロン酸１．８２ｇを加え、攪拌しながら脱気および窒素置換を施した。その後、ＰｄＣｌ２（ｄｔｂｐｆ）  ３００ｍｇを加え、外温１２０℃にて１時間攪拌させた。放冷後、セライトろ過を施し、酢酸エチル／蒸留水で分液操作を行った。有機層を減圧濃縮し、酢酸エチル／ヘキサン＝０／１００→１００／０の溶離液としたシリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製し、化合物（４−Ｄ）０．５８ｇおよび化合物（５−Ａ）０．１５ｇを得た。【０１７６】
３００ｍｌ三ツ口フラスコに化合物（４−Ｄ）０．５０ｇ、トルエン９ｍｌ、ピリジン０．２ｍｌを入れた。窒素下で攪拌しながら無水酢酸０．２ｍｌを滴下した後、外温１４０℃にて４時間攪拌した。反応液を室温に戻し、酢酸０．１ｍｌ、蒸留水９ｍｌを加え、３０分間攪拌した後、有機層を分液操作で抽出した。酢酸エチル／ヘキサン＝０／１００→５０／５０の溶離液としたシリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製し、化合物（４−Ｅ）０．３２ｇを得た。【０１７７】
１００ｍｌ三ツ口フラスコに化合物（４−Ｅ）５０ｍｇ、ジクロロメタン８ｍｌを入れ、窒素置換した。攪拌しながらクロロスルホン酸０．０１３ｍｌ添加し、室温で反応させた。その後、炭酸カリウム０．１１１ｇ、メタノール０．８ｍｌ、蒸留水４ｍｌを加え、室温で反応させた。反応溶媒を減圧留去し、アセトニトリル／水＝０／１００→２５／７５を溶離液とした逆相カラムクロマトグラフィー（Ｂｉｏｔａｇｅ  ＳＮＡＰＣｏｌｕｍｎ  Ｕｌｔｒａ  Ｃ１８）で精製し、化合物（４―Ｆ）３０ｍｇを得た。【０１７８】
５０ｍｌナスフラスコに化合物（４−Ｆ）３０ｍｇ、テトラヒドロフラン（安定剤含有）１ｍｌを入れ、窒素下で攪拌しながらカリウムトリメチルシラノラート２３ｍｇを加え、室温にて１．５時間反応させた。その後、蒸留水２ｍｌを加え、アセトニトリル／水＝０／１００→２５／７５を溶離液とした逆相カラムクロマトグラフィー（Ｂｉｏｔａｇｅ  ＳＮＡＰＣｏｌｕｍｎ  Ｕｌｔｒａ  Ｃ１８）で精製し、化合物（４）５ｍｇを得た。
ＭＳ（ＥＳＩ  ｍ／ｚ）：５６５（Ｍ−Ｋ＋２Ｈ）
ＲＴ（ｍｉｎ）：１．０７【０１７９】
２）標識抗体（１）の合成【０１８０】
【化５４】
2019230963.tif 000056
【０１８１】
化合物（４）６ｍｇのＤＭＦ溶液１ｍＬに、Ｎ−ヒドロキシこはく酸イミド３ｍｇ〔富士フイルム和光純薬（株）〕、ジシクロヘキシルカルボジイミド１２ｍｇ〔富士フイルム和光純薬（株）〕を添加し、室温下１４時間撹拌した。続いて、反応液を直接逆相シリカカラムクロマトグラフィー〔ＳＮＡＰ１２カラムウルトラＣ１８、Ｂｉｏｔａｇｅ社製〕（アセトニトリル：水＝０：１００→２０：８０）で精製し、フラクションを回収後凍結乾燥することで、化合物（４−ＮＨＳ）３ｍｇ（赤褐色個体）を得た。
ＭＳ（ＥＳＩ  ｍ／ｚ）：６６２（Ｍ＋Ｈ）【０１８２】
抗マウスＩｇＧ抗体〔ホスト：ヤギ、２．４ｍｇ／ｍＬ、カタログ番号：１１５−００５−００３、ＪａｃｋｓｏｎＩｍｍｕｎｏＲｅｓｅａｒｃｈ社製〕４００μＬに０．２Ｍ炭酸水素ナトリウム水溶液１０μＬ、化合物（４−ＮＨＳ）の濃度２０ｍＭのＤＭＳＯ溶液３．２μＬを加え、攪拌後１時間室温静置した。続いて、反応液を直接Ｓｅｐｈａｄｅｘ  Ｇ−２５カラム〔カタログ番号：１７０８５１０１、ＧＥヘルスケア社製〕にチャージし、ＰＢＳ〔ｐＨ＝７．４、富士フイルム和光純薬（株）〕で精製することで標識抗体（１）を得た。【０１８３】
［合成例５］
下記のスキームに基づき、化合物（５）と標識抗体（２）を合成した。【０１８４】
【化５５】
2019230963.tif 000057
【０１８５】
化合物（４−ＮＨＳ）３ｍｇのＤＭＳＯ溶液４３μＬにジイソプロピルエチルアミン２μＬ〔富士フイルム和光純薬（株）〕、γ−アミノ酪酸１ｍｇ〔富士フイルム和光純薬（株）〕を加え、室温にて３．５時間攪拌した。続いて、反応液を直接逆相シリカカラムクロマトグラフィー〔ＳＮＡＰ１２カラムウルトラＣ１８、Ｂｉｏｔａｇｅ社製〕（アセトニトリル：水＝０：１００→２０：８０）で精製し、フラクションを回収後凍結乾燥することで、化合物（５）２ｍｇ（赤褐色個体）を得た。
ＭＳ（ＥＳＩ  ｍ／ｚ）：６５０（Ｍ−２Ｘ＋３Ｈ）【０１８６】
化合物（４−ＮＨＳ）の合成法において、化合物（４）を化合物（５）に変更した以外は同様にして、化合物（５−ＮＨＳ）１ｍｇ（赤褐色固体）を得た。
ＭＳ（ＥＳＩ  ｍ／ｚ）：７４７（Ｍ−Ｘ＋２Ｈ）【０１８７】
標識抗体（１）の合成法において、化合物（４−ＮＨＳ）を化合物（５−ＮＨＳ）に変更した以外は同様にして、標識抗体（２）を得た。【０１８８】
［合成例６］
下記のスキームに基づき、化合物（６）と標識抗体（３）を合成した。【０１８９】
【化５６】
2019230963.tif 000058
【０１９０】
化合物（４−Ｅ）から化合物（４）の合成法において、クロロスルホン酸０．０１３ｍｌを０．０２６ｍｌとし、逆相カラムクロマトグラフィーの溶離液におけるアセトニトリル／水＝２５／７５を１０／９０に変更した以外は同様にして、化合物（６）０．３ｍｇ（赤褐色固体）を得た。
ＭＳ（ＥＳＩ  ｍ／ｚ）：６４５（Ｍ−２Ｋ＋３Ｈ）【０１９１】
化合物（４−ＮＨＳ）の合成法において、化合物（４）を化合物（６）に変更した以外は同様にして、化合物（６−ＮＨＳ）０．１ｍｇ（赤褐色固体）を得た。
ＭＳ（ＥＳＩ  ｍ／ｚ）：７８０（Ｍ−２Ｋ＋３Ｈ）【０１９２】
標識抗体（１）の合成法において、化合物（４−ＮＨＳ）を化合物（６−ＮＨＳ）に変更した以外は同様にして、標識抗体（３）を得た。【０１９３】
［合成例７］
下記のスキームに基づき、化合物（７）と標識抗体（４）を合成した。【０１９４】
１）化合物（７）の合成【０１９５】
【化５７】
2019230963.tif 000059
【０１９６】
１Ｌ三ツ口フラスコを窒素置換し、化合物（７−Ａ）２５ｇ、ＤＭＡＰ１７．５５ｇ、ＴＨＦ（超脱水、安定剤含有）１２５ｍｌ、ｔ−ブタノール１２５ｍｌを入れ、室温で攪拌しながら、二炭酸ジ−ｔｅｒｔ−ブチル４１．３ｇを滴下した。４時間攪拌後、一晩放置し、その後７０℃に昇温して１時間加熱攪拌した。室温に戻し、減圧濃縮により溶媒を留去し、エタノール１８８ｍｌ、イミダゾール１５．４ｇを加えて３時間攪拌した。その後、溶媒を減圧留去し、ヘキサン２００ｍｌ、酢酸エチル２６５ｍｌを加え、室温で２０分攪拌した。沈殿物を濾別し、酢酸エチル／ヘキサン＝１／２の混合液２４０ｍｌで掛け洗いし、粗生成物５０ｇを得た。ジクロロメタン５０ｍｌに溶解し、ヘキサン９５ｍｌを加えて酢酸エチル／ヘキサン＝０／１００→５／９５→１５／８５を溶離液としたシリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製し、化合物（７−Ｂ）１８．２ｇを得た。【０１９７】
１Ｌ三ツ口フラスコを窒素置換し、化合物（７−Ｂ）１８．２３ｇ、ＴＨＦ（超脱水、安定剤含有）４１４ｍｌを入れ、攪拌しながらドライアイス−アセトンバスを用いて−６０℃以下に冷却した。ｎ−ブチルリチウム３６ｍｌをゆっくり滴下し、３０分間反応させ、ＤＭＦ（超脱水）９ｍｌをゆっくり滴下して１０分間攪拌した後、０〜１０℃に昇温して２時間攪拌した。飽和の塩化アンモニウム水溶液２００ｍｌを滴下し、３０分間攪拌した後、３０％塩散水１０ｍｌを滴下した。１Ｌ分液ロートに移し、少量の酢酸エチルと２５％塩化ナトリウム水溶液を加えて分液操作を施した後、硫酸マグネシウムを加えて乾燥させ、自然ろ過した。濾液の溶媒を減圧留去し、粗生成物１９．１１ｇを得た。ジクロロメタン３０ｍｌ、ヘキサン３０ｍｌを加えて溶液を調整し、酢酸エチル／ヘキサン＝０／１００→１０／９０→２０／８０を溶離液としたシリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製し、化合物（７−Ｃ）１２．２５ｇを得た。【０１９８】
化合物（４−Ｅ）の合成方法において、ｐ−ホルミル安息香酸メチルを化合物（７−Ｃ）に変更した以外は同様にして化合物（７−Ｈ）を合成した。また、化合物（４−Ｅ）から化合物（４−Ｆ）の合成方法において、化合物（４−Ｅ）を化合物（７−Ｈ）に変更することで、化合物（７）を合成した。
ＭＳ（ＥＳＩ  ｍ／ｚ）：６２３（Ｍ−Ｋ）【０１９９】
２）標識抗体（４）の合成【０２００】
【化５８】
2019230963.tif 000060
【０２０１】
化合物（４−ＮＨＳ）の合成法において、化合物（４）を化合物（７）に変更した以外は同様にして、化合物（７−ＮＨＳ）２８ｍｇ（赤褐色固体）を得た。
ＭＳ（ＥＳＩ  ｍ／ｚ）：７２２（Ｍ-Ｋ＋２Ｈ）【０２０２】
標識抗体（１）の合成法において、化合物（４−ＮＨＳ）を化合物（７−ＮＨＳ）に変更した以外は同様にして、標識抗体（４）を得た。【０２０３】
［合成例８］
下記のスキームに基づき、化合物（８）と標識抗体（５）を合成した。【０２０４】
【化５９】
2019230963.tif 000061
【０２０５】
化合物（７−Ｆ）から化合物（７）を合成する方法において、ｏ−（ヒドロキシメチル）フェニルボロン酸を化合物（８−Ａ）に変更した以外は同様にして化合物（８）を合成した。
ＭＳ（ＥＳＩ  ｍ／ｚ）：６５９（Ｍ−Ｋ）【０２０６】
化合物（４−ＮＨＳ）の合成法において、化合物（４）を化合物（８）に変更した以外は同様にして、化合物（８−ＮＨＳ）２０ｍｇ（赤褐色固体）を得た。
ＭＳ（ＥＳＩ  ｍ／ｚ）：７５８（Ｍ−Ｋ＋２Ｈ）【０２０７】
標識抗体（１）の合成法において、化合物（４−ＮＨＳ）を化合物（８−ＮＨＳ）に変更した以外は同様にして、標識抗体（５）を得た。【０２０８】
［合成例９］
下記のスキームに基づき、化合物（９）と標識抗体（６）を合成した。【０２０９】
【化６０】
2019230963.tif 000062
【０２１０】
化合物（７−Ｆ）から化合物（７）を合成する方法において、ｏ−（ヒドロキシメチル）フェニルボロン酸を化合物（９−Ａ）に変更した以外は同様にして化合物（９）を合成した。
ＭＳ（ＥＳＩ  ｍ／ｚ）：６８３（Ｍ−Ｋ）【０２１１】
化合物（４−ＮＨＳ）の合成法において、化合物（４）を化合物（９）に変更した以外は同様にして、化合物（９−ＮＨＳ）３ｍｇ（赤褐色固体）を得た。
ＭＳ（ＥＳＩ  ｍ／ｚ）：７８２（Ｍ−Ｋ＋２Ｈ）【０２１２】
標識抗体（１）の合成法において、化合物（４−ＮＨＳ）を化合物（９−ＮＨＳ）に変更した以外は同様にして、標識抗体（６）を得た。【０２１３】
［合成例１０］
下記のスキームに基づき、化合物（１０）と標識抗体（７）を合成した。【０２１４】
１）化合物（１０）の合成【０２１５】
【化６１】
2019230963.tif 000063
【０２１６】
化合物（７−Ｂ）の合成法において、化合物（７−Ａ）を化合物（１０−Ａ）に変更した以外は同様にして、化合物（１０−Ｂ）を合成した。
化合物（７−Ｃ）から化合物（７）を合成する方法において、化合物（７−Ｃ）を化合物（１０−Ｂ）に変更した以外は同様にして化合物（１０）を合成した。
ＭＳ（ＥＳＩ  ｍ／ｚ）：５９１（Ｍ−Ｋ）【０２１７】
２）標識抗体（７）の合成【０２１８】
【化６２】
2019230963.tif 000064
【０２１９】
化合物（４−ＮＨＳ）の合成法において、化合物（４）を化合物（１０）に変更した以外は同様にして、化合物（１０−ＮＨＳ）１３ｍｇ（赤褐色固体）を得た。
ＭＳ（ＥＳＩ  ｍ／ｚ）：６９０（Ｍ−Ｋ＋２Ｈ）【０２２０】
標識抗体（１）の合成法において、化合物（４−ＮＨＳ）を化合物（１０−ＮＨＳ）に変更した以外は同様にして、標識抗体（７）を得た。【０２２１】
［合成例１１］
下記のスキームに基づき、化合物（１１）と標識抗体（８）を合成した。【０２２２】
【化６３】
2019230963.tif 000065
【０２２３】
化合物（９）の合成法において、化合物（７−Ｆ）を化合物（１０−Ｅ）に変更した以外は同様にして化合物（１１）を合成した。
ＭＳ（ＥＳＩ  ｍ／ｚ）：６５１（Ｍ−Ｋ）【０２２４】
化合物（４−ＮＨＳ）の合成法において、化合物（４）を化合物（１１）に変更した以外は同様にして、化合物（１１−ＮＨＳ）３ｍｇ（赤褐色固体）を得た。
ＭＳ（ＥＳＩ  ｍ／ｚ）：７５０（Ｍ−Ｋ＋２Ｈ）【０２２５】
標識抗体（１）の合成法において、化合物（４−ＮＨＳ）を化合物（１１−ＮＨＳ）に変更した以外は同様にして、標識抗体（８）を得た。【０２２６】
［合成例１２］
下記のスキームに基づき、化合物（１２）と標識抗体（９）を合成した。【０２２７】
【化６４】
2019230963.tif 000066
【０２２８】
化合物（５）の合成法において、化合物（４−ＮＨＳ）を化合物（７−ＮＨＳ）かつγ−アミノ酪酸をα−スルホ−β−アラニンに変更した以外は同様にして、化合物（１２）２ｍｇ（赤褐色固体）を得た。
ＭＳ（ＥＳＩ  ｍ／ｚ）：７７６（Ｍ−Ｘ＋２Ｈ）【０２２９】
化合物（４−ＮＨＳ）の合成法において、化合物（４）を化合物（１２）に変更した以外は同様にして、化合物（１２−ＮＨＳ）０．４ｍｇ（赤褐色固体）を得た。
ＭＳ（ＥＳＩ  ｍ／ｚ）：８７３（Ｍ−２Ｘ＋３Ｈ）【０２３０】
標識抗体（１）の合成法において、化合物（４−ＮＨＳ）を化合物（１２−ＮＨＳ）に変更した以外は同様にして、標識抗体（９）を得た。【０２３１】
［合成例１３］
下記のスキームに基づき、化合物（１３）と標識抗体（１０）を合成した。【０２３２】
【化６５】
2019230963.tif 000067
【０２３３】
化合物（１５）３ｍｇのＤＭＳＯ溶液４μＬに１−［ビス（ジメチルアミノ）メチレン］−１Ｈ−１，２，３−トリアゾロ［４，５−ｂ］ピリジニウム３−オキシドヘキサフルオロホスファート５ｍｇ〔富士フイルム和光純薬（株）〕、ジイソプロピルエチルアミン２μＬ〔富士フイルム和光純薬（株）〕、α−スルホ−β−アラニン１ｍｇ〔富士フイルム和光純薬（株）〕を加え、室温にて１２時間攪拌した。続いて、反応液を直接逆相シリカカラムクロマトグラフィー〔ＳＮＡＰ１２カラムウルトラＣ１８、Ｂｉｏｔａｇｅ社製〕（アセトニトリル：水＝０：１００→２０：８０）で精製し、フラクションを回収後凍結乾燥することで、化合物（１３）２ｍｇ（赤褐色固体）を得た。
ＭＳ（ＥＳＩ  ｍ／ｚ）：７７６（Ｍ−Ｘ＋２Ｈ）【０２３４】
化合物（４−ＮＨＳ）の合成法において、化合物（４）を化合物（１３）に変更した以外は同様にして、化合物（１３−ＮＨＳ）１ｍｇ（赤褐色固体）を得た。
ＭＳ（ＥＳＩ  ｍ／ｚ）：７３３（Ｍ−Ｘ＋２Ｈ）【０２３５】
標識抗体（１）の合成法において、化合物（４−ＮＨＳ）を化合物（１３−ＮＨＳ）に変更した以外は同様にして、標識抗体（１０）を得た。【０２３６】
［合成例１４］
下記のスキームに基づき、化合物（１４）を合成した。【０２３７】
【化６６】
2019230963.tif 000068
【０２３８】
化合物（５）の合成法において、化合物（４−ＮＨＳ）を化合物（７−ＮＨＳ）かつγ−アミノ酪酸を（ポリ（エチレングリコール）２−アミノエチルエーテル）酢酸〔数平均分子量＝１１００、カタログ番号：７５７８６１、Ａｌｄｒｉｃｈ社〕に変更した以外は同様にして、化合物（１４）４ｍｇ（赤褐色オイル）を得た。
ＭＳ（ＥＳＩ  ｍ／ｚ）：１９５９（Ｍ−Ｘ＋２Ｈ）、１９１５（Ｍ−Ｘ＋２Ｈ）、１８７１（Ｍ−Ｘ＋２Ｈ）、１８２７（Ｍ−Ｘ＋２Ｈ）、１７８３（Ｍ−Ｘ＋２Ｈ）、１７３９（Ｍ−Ｘ＋２Ｈ）
（左からｎ＝２８、２７、２６、２５、２４、２３）【０２３９】
［合成例１５］
下記のスキームに基づき、化合物（１５）を合成した。【０２４０】
【化６７】
2019230963.tif 000069
【０２４１】
化合物（４−Ｆ）〜化合物（４）を合成する方法において、化合物（４−Ｆ）を化合物（１５−Ａ）に変更した以外は同様にして、化合物（１５）を合成した。
ＭＳ（ＥＳＩ  ｍ／ｚ）：４８５（Ｍ＋Ｈ）【０２４２】
［合成例１６］
下記のスキームに基づき、化合物（１６）を合成した。【０２４３】
【化６８】
2019230963.tif 000070
【０２４４】
５０ｍｌナス型フラスコに化合物（１５）８ｍｇ、タウリン６ｍｇ、ＤＭＦ（超脱水）０．５ｍｌを入れ、窒素下にて攪拌した。そこへ、ＨＡＴＵ１４ｍｇ、ＤＩＰＥＡ１４μＬを加え、室温でしばらく攪拌した。
ＭＳ（ＥＳＩ  ｍ／ｚ）：５９２（Ｍ−Ｘ＋２Ｈ）【０２４５】
［合成例１７］
下記のスキームに基づき、化合物（１７）及び化合物（１８）を合成した。【０２４６】
【化６９】
2019230963.tif 000071
【０２４７】
化合物（７―Ｅ）の合成方法において、ＮＢＳ及びＤＤＱの当量を化合物（７−Ｅ）の合成における半量に変更した以外は同様にして、化合物（１７−Ａ）を合成した。
化合物（７−Ｅ）〜化合物（７）を合成する方法において、化合物（７−Ｅ）を化合物（１７−Ａ）に変更し、化合物（７）の合成までに用いる試薬の当量を半量に変更した以外は、化合物（７）の合成と同様にして、化合物（１７）及び化合物（１８）を合成した。
ＭＳ（ＥＳＩ  ｍ／ｚ）：５６５（Ｍ−Ｋ）【０２４８】
［合成例１８］
下記のスキームに基づき、化合物（１９）と標識抗体（１１）を合成した。【０２４９】
【化７０】
2019230963.tif 000072
【０２５０】
【化７１】
2019230963.tif 000073
【０２５１】
化合物（７−Ｆ）から化合物（７−Ｇ）を合成する方法において、ｏ−（ヒドロキシメチル）フェニルボロン酸に代えて、１／２当量の化合物（９−Ａ）と１／２当量の化合物（１９−Ａ）とを用いた以外は同様にして、化合物（１９−Ｂ）を合成した。
化合物（７−Ｇ）から化合物（７）を合成する方法において、化合物（７−Ｇ）に代えて化合物（１９−Ｂ）を用いた以外は同様にして、化合物（１９）を合成した。
ＭＳ（ＥＳＩ  ｍ／ｚ）：６７１（Ｍ−Ｋ）【０２５２】
化合物（４−ＮＨＳ）の合成法において、化合物（４）を化合物（１９）に変更した以外は同様にして、化合物（１９−ＮＨＳ）０．４ｍｇ（赤褐色固体）を得た。
ＭＳ（ＥＳＩ  ｍ／ｚ）：７６８（Ｍ−１）【０２５３】
標識抗体（１）の合成法において、化合物（４−ＮＨＳ）を化合物（１９−ＮＨＳ）に変更した以外は同様にして、標識抗体（１１）を得た。【０２５４】
［合成例１９］
下記のスキームに基づき、化合物（２０）を合成した。【０２５５】
【化７２】
2019230963.tif 000074
【０２５６】
１００ｍｌ三ツ口フラスコに化合物（４−Ｃ）０．５ｇ、ＴＨＦ２５ｍｌ、トリエチルアミン２ｍｌ、エチニルアニソール０．１３７ｇ、ヨウ化銅７ｍｇ、ジクロロビス（トリフェニルホスフィン）パラジウム（ＩＩ）１１ｍｇを入れ、窒素置換した後に外温７５℃で１時間反応させた。反応後溶媒を留去し、酢酸エチル／ヘキサン＝０／１００→５０／５０を溶離液としたシリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製し、化合物（２０−Ａ）０．４０ｇを得た。【０２５７】
化合物（１５）の合成方法において、化合物（１５−Ａ）を化合物（２０−Ｂ）に置き換えた以外は同様にして化合物（２０−Ｃ）を合成した。
化合物（７−Ｆ）から化合物（７−Ｈ）を合成する方法において、化合物（７−Ｆ）を化合物（２０−Ａ）に置き換えた以外は同様にして化合物（２０−Ｄ）を合成した。化合物（１５−Ａ）から化合物（１６）を合成する方法において、化合物（１５−Ａ）を化合物（２０−Ｄ）に置き換えることで化合物（２０）を合成した。
ＭＳ（ＥＳＩ  ｍ／ｚ）：６６４（Ｍ−Ｘ）【０２５８】
［合成例２０］
下記のスキームに基づき、化合物（２１）を合成した。【０２５９】
【化７３】
2019230963.tif 000075
【０２６０】
１００ｍｌ三ツ口フラスコに化合物（４−Ｃ）０．５ｇ、２−メチル−１Ｈ−ピロール０．１２６ｇ、トルエン５ｍｌを入れ、窒素置換した後に外温１３０℃で２．５時間反応させた。室温に戻し、酢酸エチル／ヘキサン＝０／１００→５０／５０を溶離液としたシリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製し、化合物（２１−Ａ）０．３０ｇを得た。【０２６１】
化合物（２０）の合成方法において、化合物（２０−Ａ）を化合物（２１−Ａ）に置き換えた以外は同様にして化合物（２１）を合成した。
ＭＳ（ＥＳＩ  ｍ／ｚ）：６１３（Ｍ−Ｘ）【０２６２】
［合成例２１］
下記のスキームに基づき、化合物（２２）を合成した。【０２６３】
【化７４】
2019230963.tif 000076
【０２６４】
化合物（７−Ｆ）から化合物（１９）を合成する方法において、化合物（７−Ｆ）に代えて化合物（１０−Ｅ）を用いた以外は同様にして、化合物（２２）を合成した。
ＭＳ（ＥＳＩ  ｍ／ｚ）：６３９（Ｍ−Ｋ）【０２６５】
［合成例２２］
下記のスキームに基づき、化合物（２３）を合成した。【０２６６】
【化７５】
2019230963.tif 000077
【０２６７】
２ｍｌ耐圧試験管に化合物（７−Ｆ）２９ｍｇ、Ｎ−ＢＯＣ−エタノールアミン〔富士フイルム和光純薬（株）〕２６ｍｇ、ＲｕＰｈｏｓ〔Ａｌｄｒｉｃｈ社〕９ｍｇ、酢酸パラジウム〔富士フイルム和光純薬（株）〕２ｍｇ、炭酸セシウム〔富士フイルム和光純薬（株）〕６５ｍｇ、シクロペンチルメチルエーテル〔富士フイルム和光純薬（株）〕０．５ｍｌを加え、マイクロウェーブ反応装置〔Ｂｉｏｔａｇｅ社〕にて１２０℃で２０分加熱攪拌した。反応溶液を分取薄層シリカゲルカラムクロマトグラフィー（酢酸エチル／ヘキサン＝５０／５０）にて精製し、酢酸エチルで抽出後減圧下溶媒を留去し、化合物（２３−Ａ）０．３ｍｇを得た。
ＭＳ（ＥＳＩ  ｍ／ｚ）：７０７（Ｍ＋Ｋ）【０２６８】
５ｍｌナスフラスコに化合物（２３−Ａ）０．３ｍｇ、トリフルオロ酢酸〔富士フイルム和光純薬（株）〕０．０２ｍｌ、アセトニトリル〔富士フイルム和光純薬（株）〕０．０２ｍｌを加え、室温にて５分攪拌した。反応溶液を分取薄層シリカゲルカラムクロマトグラフィー（クロロホルム／メタノール＝８０／２０）にて精製し、酢酸エチルで抽出後減圧下溶媒を留去し、化合物（２３）を得た（極少量につき秤量不可）。
ＭＳ（ＥＳＩ  ｍ／ｚ）：４５１（Ｍ＋Ｋ）【０２６９】
［合成例２３］
下記のスキームに基づき、化合物（２４）と標識抗体（１２）を合成した。【０２７０】
【化７６】
2019230963.tif 000078
【０２７１】
５０ｍｌナスフラスコに３−（１Ｈ−ピロール−２−イル）プロパン−１−オール〔Ｅｎａｍｉｎｅ  ＢＢ社〕０．９３ｇ、無水酢酸〔富士フイルム和光純薬（株）〕０．７７ｍｌ、ピリジン〔富士フイルム和光純薬（株）〕０．７２ｍｌ、塩化メチレン〔富士フイルム和光純薬（株）〕７．４ｍｌを加え、室温にて１時間攪拌した。反応溶液をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（酢酸エチル／ヘキサン＝０／１００→２０／８０）にて精製し、減圧下溶媒を留去し、乳白色固体の化合物（２４−Ａ）０．６３ｇを得た。
ＭＳ（ＥＳＩ  ｍ／ｚ）：１６８（Ｍ＋Ｋ）【０２７２】
５０ｍｌナスフラスコに化合物（２４−Ａ）２６４ｍｇ、化合物（１０−Ｂ）１４８ｍｇ、トリフルオロ酢酸〔富士フイルム和光純薬（株）〕０．００５ｍｌ、塩化メチレン〔富士フイルム和光純薬（株）〕０．６３ｍｌを加え、室温にて１０分間攪拌した。続いて反応液を０℃に冷却し、塩化メチレン〔富士フイルム和光純薬（株）〕５．７ｍｌにて希釈したのち２，３−ジクロロ−５，６−ジシアノーｐ−ベンゾキノン〔富士フイルム和光純薬（株）〕２２９ｍｇを加え、０℃にて１５分間攪拌した。続いてトリフルオロボラン−ジエチルエーテル錯体〔富士フイルム和光純薬（株）〕０．８７ｍｌとジイソプロピルエチルアミン〔富士フイルム和光純薬（株）〕０．７７ｍｌを加え、室温にて１０分攪拌した。飽和重曹水を加えたのち、塩化メチレンで４回抽出し、減圧下溶媒を留去した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（酢酸エチル／ヘキサン＝０／１００→２０／８０）にて精製し、減圧下溶媒を留去し、化合物（２４−Ｂ）２２６ｍｇを得た。
ＭＳ（ＥＳＩ  ｍ／ｚ）：５９５（Ｍ−Ｋ）【０２７３】
５ｍＬ耐圧試験管に化合物（２４−Ｂ）１０ｍｇ、塩化メチレン〔富士フイルム和光純薬（株）〕１．４ｍｌを加え、０℃に冷却した後、クロロスルホン酸〔富士フイルム和光純薬（株）〕０．００６ｍｌを添加し、０℃にて１５分攪拌した。続いて炭酸カリウム〔富士フイルム和光純薬（株）〕２０ｍｇ、蒸留水０．７ｍｌを加え、減圧下塩化メチレンのみを留去した。反応液にメタノール〔富士フイルム和光純薬（株）〕０．１ｍｌを加えマイクロウェーブ反応装置〔Ｂｉｏｔａｇｅ社製〕にて８０℃で１０分間加熱攪拌した。反応液を逆相シリカゲルカラムクロマトグラフィー〔ＳＮＡＰ１２カラムウルトラＣ１８、Ｂｉｏｔａｇｅ社製〕（アセトニトリル：水＝０：１００）にて精製し、凍結乾燥にて溶媒を留去し橙色固体の化合物（２４）１ｍｇを得た。
ＭＳ（ＥＳＩ  ｍ／ｚ）：５７５（Ｍ−Ｋ）【０２７４】
化合物（４−ＮＨＳ）の合成法において、化合物（４）を化合物（２４）に変更した以外は同様にして、化合物（２４−ＮＨＳ）１０ｍｇ（橙色固体）を得た。
ＭＳ（ＥＳＩ  ｍ／ｚ）：６７２（Ｍ−Ｋ）【０２７５】
標識抗体（１）の合成法において、化合物（４−ＮＨＳ）を化合物（２４−ＮＨＳ）に変更した以外は同様にして、標識抗体（１２）を得た。【０２７６】
なお、実施例化合物において、特に記載はしていないが、スルホ基およびカルボキシ基は塩構造（例えば、カリウム塩、ナトリウム塩、あるいはＤＩＰＥＡ塩）を含む。【０２７７】
＜実施例１＞化合物の水溶性及び耐光性評価
上記で合成した化合物及び比較化合物について、下記特性を評価し、その結果を表１に示した。【０２７８】
［水溶性の評価］
１．５ｍＬのエッペンチューブ中に、上記で合成した化合物を含むＤＭＳＯ溶液（２０ｍＭ  ｉｎ  ＤＭＳＯ（ジメチルスルホキシド）、評価サンプル溶液）５μＬと、ｐＨ７．４のリン酸緩衝生理食塩水（以下、「ＰＢＳ溶液」とも称す。）４９５μＬとを入れて混合し、マルチシェーカーＭＳ  ３００（商品名、アズワン社製）により、２０００ｒｐｍで３０分間撹拌した。混合液を遮光下で６０分間静置した後、さらに遠心沈降（１２０００ｒｐｍ、５分間）させた。０．２０μｍのフィルタでろ過したろ液について、ＵＨＰＬＣ  Ｎｅｘｅｒａ〔（株）島津製作所、Ｓｈｉｍ−ｐａｃｋ  ＸＲ−ＯＤＳＩＩ〕を用いて化合物濃度（化合物がすべて溶解した場合、化合物濃度は２００μＭとなる。）を測定し、以下の評価基準に基づき評価した。
本試験において、水溶性は、評価ランク「Ｂ」以上が合格である。
−  水溶性の評価基準  −  
Ａ：  １００μＭ以上
Ｂ：  １μＭ以上１００μＭ未満
Ｃ：  ０．１μＭ以上１μＭ未満
Ｄ：  水溶性が低く濃度測定不可【０２７９】
［耐光性の評価］
ＰＢＳ溶液（ｐＨ７．４）に上記で合成した化合物を、吸収波長ピークの吸光度が０．０９５〜０．１０５となるように溶解した。この溶液を、メリーゴーランド光照射機〔ウシオ電機（株）のキセノンランプＵＸＬ−５００Ｄ−Ｏ、ＨＡ−５０フィルタ、Ｙ４４フィルタ、露光強度２２ｍＷ／ｃｍ２（５００ｎｍ換算）〕を用いて露光した状態で、各化合物の吸収波長ピークの吸光度を分光器（ＨＰ社、Ａｇｉｌｅｎｔ８４５３）により経時的に測定した。露光前の吸収波長ピークの吸光度を１００％として、この吸収波長ピークの吸光度が２０％低下（吸収波長ピークの吸光度が８０％に到達）するまでの露光時間を求め、以下の評価基準に基づき評価した。
本試験において、耐光性は、評価ランク「Ｃ」以上が合格である。
−  耐光性の評価基準  −  
Ａ：１００時間以上
Ｂ：５０時間以上１００時間未満
Ｃ：２５時間以上５０時間未満
Ｄ：２時間以上２５時間未満
Ｅ：２時間未満
Ｆ：低水溶性により評価不可【０２８０】
【表１】
2019230963.tif 000079
【０２８１】
上記表１の結果から、本発明の式（１）または式（４）で表される蛍光性化合物は、水溶性に優れ、また耐光性にも優れることがわかる。
また、比較化合物（１）との比較から、本発明の蛍光性化合物が有する親水性基は、化合物の親水性を高めるだけでなく、耐光性の向上にも寄与することがわかる。
このように、本発明の蛍光性化合物は十分な親水性と優れた耐光性の両立を実現した、生体蛍光イメージングの蛍光色素として好適な化合物である。【０２８２】
＜実施例２＞標識抗体の水溶性及び耐光性評価
上記で合成した標識抗体について、水溶性及び耐光性の両特性を評価し、その結果を表２に示した。
水溶性及び耐光性は、上記実施例１における水溶性及び耐光性の評価において、化合物に代えて標識抗体を用いた以外は同様にして評価を行った。ただし、本実施例２における耐光性は、評価ランク「Ｄ」以上が合格である。【０２８３】
【表２】
2019230963.tif 000080
【０２８４】
＜表の注＞
参考標識抗体（１）は、Ａｌｅｘａ  Ｆｌｕｏｒ（登録商標）  ５６８標識抗マウスＩｇＧ抗体（アブカム社製、商品名）である。なお、この標識抗体におけるＡｌｅｘａ  Ｆｌｕｏｒ  ５６８は、下記化学構造を有する蛍光色素と推定される。下記構造式中において、＊は抗マウスＩｇＧ抗体との結合部位を示す。【０２８５】
【化７７】
2019230963.tif 000081
【０２８６】
上記表２の結果から、本発明の式（１）または式（４）で表される蛍光性化合物から得られる本発明の標識抗体は、水溶性に優れ、また耐光性にも優れることがわかる。
このように、本発明の蛍光標識生体物質は十分な親水性と優れた耐光性の両立を実現し、長期間、高解像度での生体観察等、生体蛍光イメージングの標識生体物質として好適である。【０２８７】
＜実施例３＞標識抗体の染色細胞での耐光性評価
上記で合成した標識抗体及び比較標識抗体を用いて、下記の通り細胞染色を行った。調製した染色細胞について、下記特性を評価し、その結果を表３に示した。【０２８８】
［染色細胞サンプルの作製］
ＮＣＩ−Ｈ４６０細胞〔カタログ番号：ＨＴＢ−１７７ＴＭ、ＡＴＣＣ社〕をスライドチャンバーに播種し、１０％のウシ胎児血清と１％のＰｅｎｉｃｉｌｌｉｎｅ／Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｉｎとを含むＲＰＭＩ−１６４０培地〔いずれもＴｈｅｒｍｏ  Ｆｉｓｈｅｒ社〕にて３日間、インキュベータにて培養した。
続いて培地を除き、４％パラホルムアルデヒド溶液を用いて２０分間処理を行い固定化したのちＰＢＳ〔Ｔｈｅｒｍｏ  Ｆｉｓｈｅｒ社〕で洗浄し、濃度０．５％のＴｒｉｔｏｎＸ−１００（ポリエチレングリコールモノ−ｐ−イソオクチルフェニルエーテル）のＰＢＳ溶液で１０分間処理をした後、ＰＢＳで洗浄した。続いて濃度１％のＢＳＡ（ウシ血清アルブミン）水溶液を加え３０分処理した後、一次抗体として抗α−Ｔｕｂｕｌｉｎ抗体〔マウスモノクローナル、カタログ番号：０１７−２５０３１、富士フイルム和光純薬社〕希釈液を加え、抗体終濃度０．５μｇ／ｍＬにて室温にて１時間静置した。ＰＢＳで洗浄したのち、二次抗体として１０μｇ／ｍＬの各標識抗体水溶液を加え、遮光しながら室温にて１時間静置し、再度ＰＢＳで洗浄することで各染色細胞サンプルを得た。
なお、下記耐光性の評価は、作製直後の染色細胞サンプルを用いた。【０２８９】
［染色細胞での耐光性の評価］
各染色細胞サンプルを共焦点レーザー顕微鏡〔ＴＣＳ  ＳＰ５、ライカ社製〕に設置し、光源のＨｅ−Ｎｅレーザー（出力１００％）を波長５４３ｎｍ、検出を波長５５４〜７７３ｎｍとして各４時間のタイムラプス測定を実施した。染色部４か所、非染色部４か所の蛍光強度の時間プロファイルを取得し、染色部の平均信号強度から非染色部の平均信号強度を差し引いた値を正味の蛍光強度とした。露光前の蛍光強度を１００％として、２０％低下（蛍光強度が８０％に到達）するまでの露光時間を求め、以下の評価基準に基づき評価した。
−  耐光性の評価基準  −  
Ａ：４時間以上
Ｂ：３時間以上４時間未満
Ｃ：２時間以上３時間未満
Ｄ：１時間以上２時間未満
Ｅ：１時間未満【０２９０】
【表３】
2019230963.tif 000082
【０２９１】
上記表３の結果から、参考標識抗体（１）を用いて作製した染色細胞に比べて、本発明の式（１）又は式（４）で表される蛍光性化合物で標識した抗体を用いて作製した染色細胞は、優れた耐光性を示すことがわかる。
このように、本発明の蛍光性化合物を用いた蛍光標識生体物質は、従来のジピロメテンホウ素錯体構造を有する化合物の欠点であった耐光性を改善することができ、生体物質のイメージング又は生体物質の検出に使用する蛍光色素としての汎用性を大きく向上させることができる。【０２９２】
本発明をその実施態様とともに説明したが、我々は特に指定しない限り我々の発明を説明のどの細部においても限定しようとするものではなく、添付の請求の範囲に示した発明の精神と範囲に反することなく幅広く解釈されるべきであると考える。【０２９３】
本願は、２０１８年６月１日に日本国で特許出願された特願２０１８−１０６４６０及び２０１９年２月１５日に日本国で特許出願された特願２０１９−０２５９５８に基づく優先権を主張するものであり、これらはここに参照してその内容を本明細書の記載の一部として取り込む。
【手続補正書】
【提出日】令和2年11月18日(2020.11.18)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
下記式（１）又は式（４）のいずれかで表される蛍光性化合物。
【化１】
2019230963.tif 000091
式中、ＸはＣＲ５又はＮを示す。
Ｒ１〜Ｒ６は、ハロゲン原子、シアノ基又は下記式（Ａ）で表される基を示す。
Ｒ７は、アルキル基、シクロアルキル基、脂肪族複素環基、アルケニル基、シクロアルケニル基、アルキニル基、水酸基、メルカプト基、アルコキシ基、アルキルチオ基、アリールオキシ基、アリールチオ基、アリール基、ヘテロアリール基又はハロゲン原子を示す。ただし、Ｒ６とＲ７は互いに結合して環を形成することはない。
Ｑ１及びＱ２は、下記式（１−１）〜式（１−３）のいずれかで表される基を示す。
Ｌ１及びＬ２は、アルキレン基、アルケニレン基、アリーレン基、ヘテロアリーレン基、シクロアルキレン基、シクロアルケニレン基、２価の脂肪族複素環基、もしくは、下記式（１−１）〜式（１−８）のいずれかで表される基、又は、これらを２〜４種組み合わせた連結基を示す。
環β１及び環β２の環員数は５〜８である。
ただし、Ｒ１〜Ｒ７、Ｌ１、Ｌ２、Ｑ１及びＱ２のうち少なくとも１つは、カルボキシ基もしくはその塩、スルホ基もしくはその塩、ホスホノ基もしくはその塩、オニオ基及びポリアミノ酸残基の少なくとも１種を有する。
ただし、ＸがＣＲ５であって、該Ｒ５が式（Ａ）で表される基であり、環β１及び環β２の環員数が６であり、かつ、Ｌ１及びＬ２がアリーレン基である場合、（ａ）Ｌ３が単結合であって、かつＲ１１１が炭素数１８以上の直鎖アルキル基を置換基として有するアリール基であることはなく、（ｂ）Ｌ３がアリーレン基であって、かつＲ１１１が炭素数１８以上の直鎖アルキル基であることはない。また、ＸがＣＲ５であって、該Ｒ５が式（Ａ）で表される基であり、環β１及び環β２の環員数が６であり、Ｌ１及びＬ２がアリーレン基であり、かつ、Ｒ１１１がジピロメテンホウ素錯体構造を有する置換基を有する場合、当該ジピロメテンホウ素錯体構造はホウ素原子に対してジピロメテン骨格が３座配位又は４座配位で配位結合する構造を有する。
【化２】
2019230963.tif 000092
式中、Ｌ３は、単結合、又は、アルキレン基、アリーレン基及び下記式（１−１）〜式（１−８）のいずれかで表される基のうちの１種又は２種以上を組み合わせた連結基を示す。
Ｒ１１１は、水素原子、アルキル基、アルケニル基、アルキニル基、アリール基、ヘテロアリール基、又は、１価の脂肪族複素環基を示す。
＊は結合部を示す。
【化３】
2019230963.tif 000093
式中、Ｒ１１及びＲ１２は水素原子又は置換基を示す。
＊は結合部を示す。
【請求項２】
前記Ｑ１及びＱ２が、いずれも、前記式（１−１）で表される基である、請求項１に記載の蛍光性化合物。
【請求項３】
前記ＸがＣＲ５であって、該Ｒ５が前記式（Ａ）で表され、該式（Ａ）中のＬ３及びＲ１１１が下記を満たす、請求項１又は２に記載の蛍光性化合物。
前記Ｌ３が単結合であって、前記Ｒ１１１が水素原子、アルキル基、アルケニル基、アルキニル基、アリール基又はヘテロアリール基であるか、前記Ｌ３がアルキレン基、アリーレン基及び上記式（１−１）〜（１−８）のいずれかで表される基のうちの１種または２種以上を組み合わせた基であって、前記Ｒ１１１が水素原子である。
【請求項４】
前記Ｒ３及びＲ４の少なくとも１つが、カルボキシ基もしくはその塩を含む基、スルホ基もしくはその塩を含む基、ホスホノ基もしくはその塩を含む基、オニオ基を含む基、又は、ポリアミノ酸残基を含む基である、請求項１〜３のいずれか１項に記載の蛍光性化合物。
【請求項５】
前記Ｒ３及びＲ４の少なくとも１つが、カルボキシ基もしくはその塩、スルホ基もしくはその塩、又は、ホスホノ基もしくはその塩である、請求項１〜４のいずれか１項に記載の蛍光性化合物。
【請求項６】
前記Ｒ３及びＲ４の少なくとも１つがスルホ基もしくはその塩である、請求項１〜５のいずれか１項に記載の蛍光性化合物。
【請求項７】
前記Ｌ１及びＬ２が、アルキレン基、エテニレン基、アリーレン基、ヘテロアリーレン基、シクロアルキレン基もしくは２価の脂肪族複素環基、又はこれらを２種組み合わせた連結基であって、前記環β１及び環β２の環員数が６〜８である、請求項１〜６のいずれか１項に記載の蛍光性化合物。
【請求項８】
前記Ｑ１及びＱ２が前記式（１−１）で表される基であり、
前記Ｒ１〜Ｒ４が前記式（Ａ）で表され、かつ、前記式（Ａ）中、Ｌ３が単結合又は−ＳＯ３−であり、Ｒ１１１が水素原子であり、
前記Ｒ６が、前記式（Ａ）で表され、かつ、前記式（Ａ）中、Ｌ３が単結合、アリーレン基もしくは前記式（１−１）で表される基であるか、又は、アリーレン基および前記式（１−１）で表される基を組合せてなる基であり、前記Ｒ１１１が水素原子又はアルキル基であり、
前記Ｒ７が水酸基であり、
前記Ｌ１及びＬ２が、アルキレン基もしくはアリーレン基であるか、又は、アルキレン基およびアリーレン基を組合せてなる基であり、
前記環β１及び環β２の環員数が７であり、
前記ＸがＣＲ５であり、該Ｒ５が前記式（Ａ）で表され、かつ、前記式（Ａ）中、Ｌ３及びＲ１１１が下記（ａ）又は（ｂ）を満たす、請求項１に記載の蛍光性化合物。
（ａ）前記Ｌ３が単結合であり前記Ｒ１１１がアリール基である。
（ｂ）前記Ｌ３がアルキレン基、アリーレン基、上記式（１−１）で表される基、式（１−３）で表される基、式（１−４）で表される基もしくは式（１−７）で表される基であるか、又は、アルキレン基、アリーレン基、上記式（１−１）で表される基、式（１−３）で表される基、式（１−４）で表される基および式（１−７）で表される基から選ばれる２種以上を組合せてなる基であり、前記Ｒ１１１が水素原子である。
ただし、前記式（１）で表される蛍光性化合物合物においては、前記Ｒ３及びＲ４の少なくとも１つがスルホ基もしくはその塩であるか、又は、前記Ｒ１〜Ｒ５の少なくとも１つがカルボキシ基もしくはその塩、スルホ基もしくはその塩、ホスホノ基もしくはその塩、オニオ基及びポリアミノ酸残基の２種以上を有し、前記式（４）で表される蛍光性化合物合物においては、前記Ｒ３及びＲ４の少なくとも１つがスルホ基もしくはその塩であるか、又は、Ｒ１〜Ｒ７の少なくとも１つがカルボキシ基もしくはその塩、スルホ基もしくはその塩、ホスホノ基もしくはその塩、オニオ基及びポリアミノ酸残基の２種以上を有する。
【請求項９】
下記式（２）または式（５）のいずれかで表される請求項１〜７のいずれか１項に記載の蛍光性化合物。
【化４】
2019230963.tif 000094
式中、ＸはＣＲ５又はＮを示す。
Ｒ１〜Ｒ７及びＱは上記式（１）又は（４）におけるＲ１〜Ｒ７及びＱ１と同義である。
環Ａは炭化水素環又はヘテロ環を示す。
Ｌ１１は、単結合、又は、アルキレン基、アルケニレン基、アリーレン基、ヘテロアリーレン基、シクロアルキレン基、２価の脂肪族複素環基もしくは上記式（１−１）〜式（１−８）のいずれかで表される基、もしくは、これらの基の２種を組み合わせた連結基を示す。
ただし、環β１１及び環β２１の環員数は６〜８である。
【請求項１０】
下記式（３）または式（６）のいずれかで表される請求項１〜７および９のいずれか１項に記載の蛍光性化合物。
【化５】
2019230963.tif 000095
式中、ＸはＣＲ５又はＮを示す。
Ｒ１〜Ｒ７及びＱは上記式（１）又は（４）におけるＲ１〜Ｒ７及びＱ１と同義であり、Ｌ１１は上記式（２）又は（５）におけるＬ１１と同義である。
Ｒ８は置換基を示し、ｎは０〜４の整数である。
ただし、環β１１及び環β２１の環員数は６〜８である。
【請求項１１】
前記蛍光性化合物が前記式（３）で表され、
前記ＸがＣＲ５であり、該Ｒ５が前記式（Ａ）で表され、かつ、前記式（Ａ）中、Ｌ３が単結合、アルキレン基、アリーレン基、前記式（１−１）で表される基、式（１−３）で表される基、式（１−４）で表される基もしくは式（１−７）で表される基であるか、又は、アルキレン基、アリーレン基、前記式（１−１）で表される基、式（１−３）で表される基、式（１−４）で表される基および式（１−７）で表される基から選ばれる２種以上を組合せてなる基であり、前記Ｒ１１１が水素原子又はアリール基であり、
前記Ｒ１及びＲ２は水素原子であり、
前記Ｒ３及びＲ４は、前記式（Ａ）で表され、かつ、前記式（Ａ）中、Ｌ３が単結合又は−ＳＯ３−であり、Ｒ１１１が水素原子であり、
前記Ｑは、前記式（１−１）で表される基であり、
前記Ｌ１１がメチレン基であり、
前記Ｒ８が、Ｌ１１の結合位置に対してピロール環とは逆側のメタ位のみに位置し、かつ、アルコキシ基又はハロゲン原子であり、ｎは０または１であり、
ｎが０の場合において、前記Ｒ１〜Ｒ５、Ｌ１１、Ｑの少なくとも１つは、カルボキシ基もしくはその塩、及びスルホ基もしくはその塩の少なくとも１種を有し、ｎが１の場合において、前記Ｒ１〜Ｒ５、Ｒ８、Ｌ１１、Ｑの少なくとも１つは、カルボキシ基もしくはその塩、及びスルホ基もしくはその塩の少なくとも１種を有する、請求項１０に記載の蛍光性化合物。
ただし、前記Ｒ３及びＲ４の少なくとも１つがスルホ基もしくはその塩であるか、又は、ｎが０の場合には前記Ｒ１〜Ｒ５のうち少なくとも１つが、ｎが１の場合には前記Ｒ１〜Ｒ５およびＲ８のうち少なくとも１つが、カルボキシ基もしくはその塩、スルホ基もしくはその塩、ホスホノ基もしくはその塩、オニオ基及びポリアミノ酸残基の２種以上を有する。
【請求項１２】
下記式（７）または式（８）のいずれかで表される請求項１〜６のいずれか１項に記載の蛍光性化合物。
【化６】
2019230963.tif 000096
式中、ＸはＣＲ５又はＮを示す。
Ｒ１〜Ｒ７及びＱは上記式（１）又は（４）におけるＲ１〜Ｒ７及びＱ１と同義である。
Ｌ１２は、単結合、又は、アルキレン基、アルケニレン基、アリーレン基、ヘテロアリーレン基、シクロアルキレン基、２価の脂肪族複素環基もしくは上記式（１−１）〜式（１−８）のいずれかで表される基、もしくは、これらの基の２種を組み合わせた連結基を示す。
Ｌ１３は、メチレン基、又は、上記式（１−１）〜式（１−８）のいずれかで表される基を示す。
ただし、環β１２及び環β２２の環員数は５〜８である。
【請求項１３】
前記蛍光性化合物が前記式（７）で表され、
前記Ｑが前記式（１−１）で表される基であり、
前記Ｒ１及びＲ２が水素原子であり、
前記Ｒ３及びＲ４が前記式（Ａ）で表され、かつ、前記式（Ａ）中、Ｌ３が単結合又は−ＳＯ３−であり、Ｒ１１１が水素原子であり、
前記Ｌ１２がアルキレン基であり、
前記Ｌ１３がメチレン基又は前記式（１−３）で表される基であり、
前記環β１２及び環β２２の環員数は７であり、
前記ＸがＣＲ５であり、該Ｒ５が前記式（Ａ）で表され、かつ、前記式（Ａ）中、Ｌ３及びＲ１１１が下記（ａ）又は（ｂ）を満たす、請求項１２に記載の蛍光性化合物。
（ａ）前記Ｌ３が単結合であり前記Ｒ１１１がアリール基である。
（ｂ）前記Ｌ３がアルキレン基、アリーレン基、上記式（１−１）で表される基、式（１−３）で表される基、式（１−４）で表される基もしくは式（１−７）で表される基であるか、又は、アルキレン基、アリーレン基、上記式（１−１）で表される基、式（１−３）で表される基、式（１−４）で表される基および式（１−７）で表される基から選ばれる２種以上を組合せてなる基であり、前記Ｒ１１１が水素原子である。
【請求項１４】
下記式（９）で表される請求項１〜６のいずれか１項に記載の蛍光性化合物。
【化７】
2019230963.tif 000097
式中、ＸはＣＲ５又はＮを示す。
Ｒ１〜Ｒ５及びＱは上記式（１）又は（４）におけるＲ１〜Ｒ５及びＱ１と同義である。
Ｌ１１及びＬ１２は、単結合、又は、アルキレン基、アルケニレン基、アリーレン基、ヘテロアリーレン基、シクロアルキレン基、２価の脂肪族複素環基もしくは上記式（１−１）〜式（１−８）のいずれかで表される基、もしくは、これらの基の２種を組み合わせた連結基を示す。
Ｌ１３は、メチレン基、又は、上記式（１−１）〜式（１−８）のいずれかで表される基を示す。
環Ａは炭化水素環又はヘテロ環を示す。
ただし、環β１２の環員数は５〜８であって、環β２１の環員数は６〜８である。
【請求項１５】
前記Ｒ１〜Ｒ８、Ｌ１、Ｌ２、Ｌ１１〜Ｌ１３、Ｑ、Ｑ１及びＱ２の少なくとも一つが、生体物質との結合性部位を有する請求項１〜１４のいずれか１項に記載の蛍光性化合物。
【請求項１６】
請求項１５に記載の蛍光性化合物と生体物質とが結合してなる蛍光標識生体物質。
【請求項１７】
前記生体物質がタンパク質、ペプチド、アミノ酸、核酸、糖鎖及び脂質のいずれかである請求項１６に記載の蛍光標識生体物質。
【請求項１８】
前記蛍光性化合物と前記生体物質との結合が下記ｉ）〜ｖ）のいずれかによる結合である請求項１６又は１７に記載の蛍光標識生体物質。
ｉ）ペプチド間での非共有結合又は共有結合、
ii）蛍光性化合物中の長鎖アルキル基と生体物質中の脂質二重膜又は脂質とのファンデルワールス相互作用、
iii）蛍光性化合物中のＮ−ヒドロキシスクシンイミドエステルと生体物質中のアミノ基とを反応させてなるアミド結合、
iv）蛍光性化合物中のマレイミド基と生体物質中のスルファニル基とを反応させてなるチオエーテル結合、
ｖ）蛍光性化合物中のアジド基と生体物質中のアセチレン基、又は、蛍光性化合物中のアセチレン基と生体物質中のアジド基とをＣｌｉｃｋ反応させてなる、トリアゾール環の形成を伴う結合
【国際調査報告】
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