(57)【要約】【課題】    がん細胞に高い集積性を示し、かつα線を放出し得る化合物を開発し、当該化合物を含むがん治療用医薬組成物を提供すること。【解決手段】    アミノ酸トランスポーターＬＡＴ１に親和性を有するアミノ酸誘導体に２１１Ａｔを置換基として導入した構造を有する化合物またはその薬学的に許容される塩を含む、がん治療用医薬組成物。
2019176505.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
アミノ酸トランスポーターＬＡＴ１に親和性を有するアミノ酸誘導体に２１１Ａｔを置換基として導入した構造を有する化合物またはその薬学的に許容される塩を含む、がん治療用医薬組成物。
【請求項２】
前記化合物が以下の式（Ｉ）で表される構造を有する１種以上の化合物である、請求項１に記載の医薬組成物。
【化１】
2019176505.tif 000015
（式中、Ｌは、直接結合、又は置換されていてもよいＣ１−Ｃ５アルキレン基であり；Ｍは、水素原子又はハロゲン原子であり；Ｒ１は、水素原子又は置換されていてもよいＣ１−Ｃ５アルキル基であり；Ｒ２は、水素原子、Ｃ１−Ｃ５のアルキル基、Ｃ６−Ｃ１４のアリール基又はＣ７−Ｃ１６のアリールアルキル基であり；及び、Ｒ３は、水素原子又はＣ１−Ｃ３のアルキル基である。）
【請求項３】
Ｌが、直接結合であり；Ｍは、水素原子又はハロゲン原子であり；Ｒ１が、置換されていてもよいＣ１−Ｃ５アルキル基であり；Ｒ２が、水素原子又はＣ１−Ｃ５のアルキル基であり；Ｒ３が、水素原子である、請求項２に記載の医薬組成物。
【請求項４】
前記化合物が以下の構造を有する化合物のいずれか又はそれらの組み合わせである、請求項１に記載の医薬組成物。
【化２】
2019176505.tif 000016
（式中、Ｍは、Ｉ又はＢｒである。）
【請求項５】
前記がんが、ＬＡＴ１の発現を伴うがんである、請求項１〜４のいずれかに記載の医薬組成物。
【請求項６】
前記がんが、すい臓がん、白血病、メラノーマ、大腸がん、肺がん、前立腺がん、胃がん、乳がん、腎臓がん、喉頭がん、食道がん、肝臓がん、リンパ腫、骨髄腫、頭頚部がん、、卵巣がん、膀胱がん、小児がん、小児白血病及び脳腫瘍よりなる群から選択される、請求項１〜５のいずれかに記載の医薬組成物。
【請求項７】
前記化合物の生体内における安定性を高めるための安定剤をさらに含み、該安定剤がアスコルビン酸、アスコルビン酸アルカリ金属塩及びアスコルビン酸アルカリ金属土類塩よりなる群から選択される、請求項１〜６のいずれかに記載の医薬組成物。
【請求項８】
がん組織を検出可能なプローブ化合物をさらに含む、請求項１〜７のいずれかに記載の医薬組成物。
【請求項９】
前記がん組織を検出可能なプローブ化合物が、ポジトロン断層撮影法（ＰＥＴ）用プローブ化合物である、請求項８に記載の医薬組成物。
【請求項１０】
アミノ酸トランスポーターＬＡＴ１に親和性を有するアミノ酸誘導体に２１１Ａｔを置換基として導入した構造を有する化合物またはその薬学的に許容される塩と；アスコルビン酸又はアスコルビン酸塩とを含む、キット。
【請求項１１】
以下の式（Ｉ）で表される化合物の製造方法であって
【化３】
2019176505.tif 000017
（式中、Ｌは、直接結合、又は置換されていてもよいＣ１−Ｃ５アルキレン基であり；Ｍは、水素原子又はハロゲン原子であり；Ｒ１は、水素原子又は置換されていてもよいＣ１−Ｃ５アルキル基であり；Ｒ２は、水素原子、Ｃ１−Ｃ５のアルキル基、Ｃ６−Ｃ１４のアリール基又はＣ７−Ｃ１６のアリールアルキル基であり；及び、Ｒ３は、水素原子又はＣ１−Ｃ３のアルキル基である。）；
以下の工程
Ａ）以下の式（Ｉａ）で表される化合物に、
【化４】
2019176505.tif 000018
（式中、Ｌ、Ｒ１、Ｒ２、及びＲ３は、上記式（Ｉ）の定義と同じである。）
水銀化合物を添加し、以下の式（Ｉｂ−１）又は式（Ｉｂ−２）で表される前駆体化合物を得る工程
【化５】
2019176505.tif 000019
（式中、Ｌ、Ｒ１、Ｒ２、及びＲ３は、上記式（Ｉ）の定義と同じである。）；
Ｂ）前記工程Ａ）で得られた式（Ｉｂ−１）又は式（Ｉｂ−２）で表される前駆体化合物に、２１１Ａｔ、及びアスタチン以外のハロゲン元素よりなるハロゲン化物を添加する工程；
Ｃ）前記工程Ｂ）で得られた反応物を精製して、前記式（Ｉ）で表される化合物を得る工程
を含む、該製造方法。
【請求項１２】
前記工程Ｃ）における精製の後に、アスコルビン酸又はアスコルビン酸塩を添加する工程をさらに含む、請求項１１に記載の製造方法。
【請求項１３】
前記工程Ｂ）における前記ハロゲン化物が、三ヨウ化物である、請求項１１又は１２に記載の製造方法。
【請求項１４】
前記工程Ｃ）における精製が、イオン交換樹脂を用いるカラムクロマトグラフィーにより行われる、請求項１１〜１３のいずれかに記載の製造方法。
【請求項１５】
Ｌが単結合である、請求項１０〜１４のいずれかに記載の製造方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、２１１Ａｔを標識化したアミノ酸誘導体を含む医薬組成物及びその製造方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
多くの必須アミノ酸を含む中性分枝鎖アミノ酸や芳香族アミノ酸の細胞内取り込みに必要な膜タンパク質であるアミノ酸トランスポーターのうちで、ＬＡＴ１（Ｌ−ｔｙｐｅ  ａｍｉｎｏ  ａｃｉｄ  ｔｒａｎｓｐｏｒｔｅｒ  １）と呼ばれる大型中性アミノ酸トランスポーターは、がん細胞のアミノ酸取り込み口として働くことが知られている。このＬＡＴ１はほとんどの組織において正常細胞には存在しないが、がん細胞に特異的に発現し、がん組織における栄養分としてのアミノ酸供給を担っている（非特許文献１）。【０００３】
これまで、かかるがん細胞に特異的に発現するＬＡＴ１を機能阻害させることにより、がん特異的に栄養飢餓を誘導してがん組織の縮小を図るＬＡＴ１阻害薬の開発が行われている。しかしながら、ＬＡＴ１阻害薬は、様々ながん種に対応可能で効能が広いが、一方で、体内半減期が短く、がん細胞の栄養飢餓を誘導するため、一定期間連続的に投与する必要があるという課題もあった。【０００４】
また、α−メチルチロシン（ＡＭＴ）は、正常細胞のアミノ酸トランスポーターよりもがん細胞特異的なＬＡＴ１に多く取り込まれるアミノ酸であることが知られている。ＬＡＴ１親和性を有することから、従来、α−メチルチロシンを１８Ｆで標識化したフルオロ−α−メチルチロシンが、ＰＥＴ(Ｐｏｓｉｔｒｏｎ Ｅｍｉｓｓｉｏｎ Ｔｏｍｏｇｒａｐｈｙ：ポジトロン断層撮影法)用の造影プローブとして用いられていた（非特許文献２）。【０００５】
一方、外科手術による治療が困難な進行がんや難治性がんの場合には、放射性元素を含む薬剤を患者に投与し、患部に集積した薬剤が体内で放出する放射線によってがん細胞を殺滅する核医学的治療が試みられてきた。従来、そのような薬剤として、ヨウ素（１３１Ｉ）を有する化合物が用いられているが、ヨウ素が放出するβ線は、エネルギーが低い一方、透過性が高いため、細胞殺傷能力が十分でないうえに、周囲の通常細胞も損傷するおそれがあった。【０００６】
これに対し、β線よりも透過性が低く、かつ高いエネルギーのα線を放出する核種を用いれば、正常組織に対する影響を最小限に抑えつつ、高い細胞殺傷能力により標的とするがん細胞に対する効果的な治療が期待できる。しかしながら、かかるα線放出核種を用いる治療薬は、α線核種自体の製造技術や化合物の安定性等の課題があり、実用化は未だ十分ではないのが現状である。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【０００７】
【非特許文献１】Kanai et al., J. Biol. Chem. 273: 23629, 1998
【非特許文献２】Kaira et al., Clin Cancer Res. 13: 6369-6378, 2007
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００８】
このような背景から、本発明は、がん細胞に高い集積性を示し、かつα線を放出し得る化合物を開発し、当該化合物を含むがん治療用医薬組成物を提供することを課題とする。また、かかる化合物の製造方法を提供することも課題とする。
【課題を解決するための手段】
【０００９】
本発明者らは、上記課題を解決するべく鋭意検討を行った結果、アミノ酸トランスポーターＬＡＴ１に親和性を有するアミノ酸誘導体に、α線を放出しかつ比較的短い半減期を有する放射性核種であるアスタチン−２１１（２１１Ａｔ）を標識化した新規化合物の合成方法を見出し、当該化合物ががん細胞に対して高い集積性を示し、非常に優れた腫瘍増殖抑制効果を有するとともに、体重減少等の副作用が少ないことを見出した。さらには、かかる化合物を還元剤であるアスコルビン酸と併用することで生体内において長時間安定に存在させることでき、がん細胞への集積性を向上できることも見出した。これら知見に基づき、本発明を完成するに至ったものである。【００１０】
すなわち、本発明は、一態様において、
＜１＞  アミノ酸トランスポーターＬＡＴ１に親和性を有するアミノ酸誘導体に２１１Ａｔを置換基として導入した構造を有する化合物またはその薬学的に許容される塩を含む、がん治療用医薬組成物；
＜２＞前記化合物が以下の式（Ｉ）で表される構造を有する１種以上の化合物である、上記＜１＞に記載の医薬組成物；
【化１】
2019176505.tif 000003
（式中、Ｌは、直接結合、又は置換されていてもよいＣ１−Ｃ５アルキレン基であり；Ｍは、水素原子又はハロゲン原子であり；Ｒ１は、水素原子又は置換されていてもよいＣ１−Ｃ５アルキル基であり；Ｒ２は、水素原子、Ｃ１−Ｃ５のアルキル基、Ｃ６−Ｃ１４のアリール基又はＣ７−Ｃ１６のアリールアルキル基であり；及び、Ｒ３は、水素原子又はＣ１−Ｃ３のアルキル基である。）
＜３＞  Ｌが、直接結合であり；Ｍは、水素原子又はハロゲン原子であり；Ｒ１が、置換されていてもよいＣ１−Ｃ５アルキル基であり；Ｒ２は、水素原子又はＣ１−Ｃ５のアルキル基であり；Ｒ３が、水素原子である、上記＜２＞に記載の医薬組成物；
＜４＞前記化合物が以下の構造を有する化合物のいずれか又はそれらの組み合わせである、上記＜１＞に記載の医薬組成物；
【化２】
2019176505.tif 000004
（式中、Ｍは、Ｉ又はＢｒである。）
＜５＞前記がんが、ＬＡＴ１の発現を伴うがんである、上記＜１＞〜＜４＞のいずれかに記載の医薬組成物；
＜６＞前記がんが、すい臓がん、白血病、メラノーマ、大腸がん、肺がん、前立腺がん、胃がん、乳がん、腎臓がん、喉頭がん、食道がん、肝臓がん、リンパ腫、骨髄腫、頭頚部がん、卵巣がん、膀胱がん、小児がん、小児白血病又は脳腫瘍よりなる群から選択される、請求項１〜５のいずれかに記載の医薬組成物。
＜７＞前記化合物の生体内における安定性を高めるための安定剤をさらに含み、該安定剤がアスコルビン酸、アスコルビン酸アルカリ金属塩及びアスコルビン酸アルカリ金属土類塩よりなる群から選択される、上記＜１＞〜＜６＞のいずれかに記載の医薬組成物；
＜８＞がん組織を検出可能なプローブ化合物をさらに含む、上記＜１＞〜＜７＞のいずれかに記載の医薬組成物；
＜９＞前記がん組織を検出可能なプローブ化合物が、ポジトロン断層撮影法（ＰＥＴ）用プローブ化合物である、上記＜７＞に記載の医薬組成物；及び
＜９＞アミノ酸トランスポーターＬＡＴ１に親和性を有するアミノ酸誘導体に２１１Ａｔを置換基として導入した構造を有する化合物またはその薬学的に許容される塩と；アスコルビン酸又はアスコルビン酸塩とを含む、キット。
を提供するものである。【００１１】
別の態様において、本発明は２１１Ａｔを標識化したアミノ酸誘導体の製造方法にも関し、
＜１１＞以下の式（Ｉ）で表される化合物の製造方法であって
【化３】
2019176505.tif 000005
（式中、Ｌは、直接結合、又は置換されていてもよいＣ１−Ｃ５アルキレン基であり；Ｍは、水素原子又はハロゲン原子であり；Ｒ１は、水素原子又は置換されていてもよいＣ１−Ｃ５アルキル基であり；Ｒ２は、水素原子、Ｃ１−Ｃ５のアルキル基、Ｃ６−Ｃ１４のアリール基又はＣ７−Ｃ１６のアリールアルキル基であり；及び、Ｒ３は、水素原子又はＣ１−Ｃ３のアルキル基である。）；
以下の工程
Ａ）以下の式（Ｉａ）で表される化合物に、
【化４】
2019176505.tif 000006
（式中、Ｌ、Ｒ１、Ｒ２、及びＲ３は、上記式（Ｉ）の定義と同じである。）
水銀化合物を添加し、以下の式（Ｉｂ−１）又は式（Ｉｂ−２）で表される前駆体化合物を得る工程
【化５】
2019176505.tif 000007
（式中、Ｌ、Ｒ１、Ｒ２、及びＲ３は、上記式（Ｉ）の定義と同じである。）；
Ｂ）前記工程Ａ）で得られた式（Ｉｂ−１）又は式（Ｉｂ−２）で表される前駆体化合物に、２１１Ａｔ、及びアスタチン以外のハロゲン元素よりなるハロゲン化物を添加する工程；
Ｃ）前記工程Ｂ）で得られた反応物を精製して、前記式（Ｉ）で表される化合物を得る工程
を含む、該製造方法；
＜１２＞前記工程Ｃ）における精製の後に、アスコルビン酸又はアスコルビン酸塩を添加する工程をさらに含む、上記＜１１＞に記載の製造方法；
＜１３＞前記工程Ｂ）における前記ハロゲン化物が、三ヨウ化物である、上記＜１１＞又は＜１２＞に記載の製造方法；
＜１４＞前記工程Ｃ）における精製が、イオン交換樹脂を用いるカラムクロマトグラフィーにより行われる、上記＜１１＞〜＜１３＞のいずれかに記載の製造方法；及び
＜１５＞Ｌが単結合である、上記＜１１＞〜＜１４＞のいずれかに記載の製造方法
を提供するものである。
【発明の効果】
【００１２】
本発明によれば、がん細胞に対する特異的かつ高い集積性を有し、α線の放射によりがん細胞を治療することができる。既存のがん治療に用いられている１３１Ｉなどの放射性核種は、半減期がより長く、飛距離の長いベータ線等を放出するのに対し、本発明で用いられる２１１Ａｔは半減期が７．２時間と短く、飛距離の短いα線を特異的に放出するため、より特異的な細胞殺傷能力を有することができ、正常細胞への悪影響が少ないという点で優れている。加えて、そもそもＬＡＴ１自体が正常細胞にはほとんど発現しないものであるため、副作用の可能性も無視できる程度であるといえる。【００１３】
また、本発明の医薬組成物は、膵がんや白血病等の患者に経口・注射投与により投与することで、患部に選択的に集積した２１１Ａｔが放出するα線の照射により患部を治療することができるため、難治性がん、手術不応の進行がんへの核医学治療に有用である。α線の細胞殺傷能力はβ線の約１００倍であるため、２１１Ａｔを用いる本発明の医薬組成物は、一度の投与で腫瘍の退縮が期待できる点で、がん細胞の栄養飢餓を誘導する従来のＬＡＴ１阻害剤よりも優位といえる。
【図面の簡単な説明】
【００１４】
【図１】図１は、アスコルビン酸の存在下及び非存在下における２１１Ａｔ標識化アミノ酸誘導体化合物（２１１Ａｔ−ＡＡＭＴ）の安定性を示す画像である。
【図２】図２は、２１１Ａｔ−ＡＡＭＴ（アスコルビン酸添加）を静注した正常ラット（２匹）の１ｈｒ後の血液中および尿中放射能の安定性を示す画像である。
【図３】図３は、アスコルビン酸添加又は無添加において２１１Ａｔ−ＡＡＭＴを正常マウスに静注したときの主要臓器の体内分布を示すグラフである。
【図４】図４は、ヒトすい臓がん細胞株 （ＰＡＮＣ−1）に対する２１１Ａｔ−ＡＡＭＴの集積性を示すグラフである。
【図５】図５は、２１１Ａｔ−ＡＡＭＴのがん細胞集積性をアスコルビン酸の存在下及び非存在下で比較したグラフである。
【図６】図６は、ヒトすい臓がん細胞株 （ＰＡＮＣ−1）に対する２１１Ａｔ−ＡＡＭＴの殺細胞効果を示すグラフである。
【図７】図７は、２１１Ａｔ−ＡＡＭＴの殺細胞効果をアスコルビン酸の存在下及び非存在下で比較したグラフである。
【図８】図８は、２１１Ａｔ−ＡＡＭＴを投与した担がんマウスの腫瘍サイズの推移（図８（Ａ））及び体重推移（図８（Ｂ））を示すグラフである。
【図９】図９は、すい臓がん(ＰＡＮＣ−１)移植マウス（２匹）の２１１Ａｔ−ＡＡＭＴ(アスコルビン酸添加、各１ＭＢｑ静注)によるＳＰＥＣＴイメージング画像である。
【図１０】図１０は、正常ラットにおける２１１Ａｔ−ＡＡＭＴ(アスコルビン酸無添加, １ＭＢｑ静注）のＳＰＥＣＴイメージング画像（２０ｍｉｎ〜１ｈｒ）である。
【図１１】図１１は、メラノーマ細胞（Ｂ１６）移植マウスに２１１Ａｔ−ＡＡＭＴを添加した場合の結節数を示すグラフである。
【図１２】図１２は、メラノーマ細胞（Ｂ１６）移植マウスに２１１Ａｔ−ＡＡＭＴを添加した場合の体重変化を示すグラフである。
【発明を実施するための形態】
【００１５】
以下、本発明の実施形態について説明する。本発明の範囲はこれらの説明に拘束されることはなく、以下の例示以外についても、本発明の趣旨を損なわない範囲で適宜変更し実施することができる。
【００１６】
１．定義
本明細書中において、「アルキル又はアルキル基」は直鎖状、分枝鎖状、環状、又はそれらの組み合わせからなる脂肪族炭化水素基のいずれであってもよい。アルキル基の炭素数は特に限定されないが、例えば、炭素数１〜２０個（Ｃ１〜２０）、炭素数１〜１５個（Ｃ１〜１５）、炭素数１〜１０個（Ｃ１〜１０）である。本明細書において、アルキル基は任意の置換基を1個以上有していてもよい。例えば、Ｃ１〜８アルキルには、メチル、エチル、ｎ−プロピル、イソプロピル、ｎ−ブチル、イソブチル、ｓｅｃ−ブチル、ｔｅｒｔ−ブチル、ｎ−ペンチル、イソペンチル、ｎｅｏ−ペンチル、ｎ−ヘキシル、イソヘキシル、ｎ−ヘプチル、ｎ−オクチル等が含まれる。該置換基としては、例えば、アルコキシ基、ハロゲン原子（フッ素原子、塩素原子、臭素原子、又はヨウ素原子のいずれであってもよい）、アミノ基、モノ若しくはジ置換アミノ基、置換シリル基、又はアシルなどを挙げることができるが、これらに限定されることはない。アルキル基が２個以上の置換基を有する場合には、それらは同一でも異なっていてもよい。アルキル部分を含む他の置換基（例えばアルコシ基、アリールアルキル基など）のアルキル部分についても同様である。
【００１７】
本明細書中において、「アルキレン」とは、直鎖状または分枝状の飽和炭化水素からなる二価の基であり、例えば、メチレン、１−メチルメチレン、１，１−ジメチルメチレン、エチレン、１−メチルエチレン、１−エチルエチレン、１，１−ジメチルエチレン、１，２−ジメチルエチレン、１，１−ジエチルエチレン、１，２−ジエチルエチレン、１−エチル−２−メチルエチレン、トリメチレン、１−メチルトリメチレン、２−メチルトリメチレン、１，１−ジメチルトリメチレン、１，２−ジメチルトリメチレン、２，２−ジメチルトリメチレン、１−エチルトリメチレン、２−エチルトリメチレン、１，１−ジエチルトリメチレン、１，２−ジエチルトリメチレン、２，２−ジエチルトリメチレン、２−エチル−２−メチルトリメチレン、テトラメチレン、１−メチルテトラメチレン、２−メチルテトラメチレン、１，１−ジメチルテトラメチレン、１，２−ジメチルテトラメチレン、２，２−ジメチルテトラメチレン、２，２−ジ−ｎ−プロピルトリメチレン等が挙げられる。
【００１８】
本明細書中において、「アリール又はアリール基」は単環式又は縮合多環式の芳香族炭化水素基のいずれであってもよく、環構成原子としてヘテロ原子（例えば、酸素原子、窒素原子、又は硫黄原子など）を１個以上含んでいてもよい。この場合、これを「ヘテロアリール」または「ヘテロ芳香族」と呼ぶ場合もある。アリールが単環および縮合環のいずれである場合も、すべての可能な位置で結合しうる。本明細書において、アリール基はその環上に任意の置換基を１個以上有していてもよい。該置換基としては、例えば、アルコキシ基、ハロゲン原子、アミノ基、モノ若しくはジ置換アミノ基、置換シリル基、又はアシルなどを挙げることができるが、これらに限定されることはない。アリール基が２個以上の置換基を有する場合には、それらは同一でも異なっていてもよい。アリール部分を含む他の置換基（例えばアリールオキシ基やアリールアルキル基など）のアリール部分についても同様である。
【００１９】
本明細書中において、「アリールアルキル」は、上記アリールで置換されたアルキルを表す。アリールアルキルは、任意の置換基を１個以上有していてもよい。該置換基としては、例えば、アルコキシ基、ハロゲン原子、アミノ基、モノ若しくはジ置換アミノ基、置換シリル基、又はアシル基などを挙げることができるが、これらに限定されることはない。アシル基が２個以上の置換基を有する場合には、それらは同一でも異なっていてもよい。代表的には、アリールアルキルベンジル、ｐ−メトキシベンジルなどである。
【００２０】
本明細書中において、ある官能基について「置換されていてもよい」と定義されている場合には、置換基の種類、置換位置、及び置換基の個数は特に限定されず、２個以上の置換基を有する場合には、それらは同一でも異なっていてもよい。置換基としては、例えば、アルキル基、アルコキシ基、水酸基、カルボキシル基、ハロゲン原子、スルホ基、アミノ基、アルコキシカルボニル基、オキソ基などを挙げることができるが、これらに限定されることはない。これらの置換基にはさらに置換基が存在していてもよい。このような例として、例えば、ハロゲン化アルキル基などを挙げることができるが、これらに限定されることはない。
【００２１】
本明細書中において用いられる「アミド」とは、ＲＮＲ’ＣＯ−（Ｒ＝アルキルの場合、アルキルアミノカルボニル−）およびＲＣＯＮＲ’−（Ｒ＝アルキルの場合、アルキルカルボニルアミノ−）の両方を含む。
【００２２】
本明細書中において用いられる「エステル」とは、ＲＯＣＯ−（Ｒ＝アルキルの場合、アルコキシカルボニル−）およびＲＣＯＯ−（Ｒ＝アルキルの場合、アルキルカルボニルオキシ−）の両方を含む。
【００２３】
本明細書中において、特定の置換基は、別の置換基と環構造を形成することができ、そのような置換基同士が結合する場合、当業者であれば、特定の置換、例えば水素への結合が形成されることを理解できる。従って、特定の置換基が共に環構造を形成すると記載されている場合、当業者であれば、当該環構造は通常の化学反応によって形成することができ、また容易に生成することを理解できる。かかる環構造およびそれらの形成過程はいずれも、当業者の認識範囲内である。また、当該ヘテロ環構造は、環上に任意の置換基を有していてもよい。
【００２４】
２．２１１Ａｔ標識化アミノ酸誘導体
本発明の医薬組成物は、アミノ酸トランスポーターＬＡＴ１に親和性を有するアミノ酸誘導体に２１１Ａｔを置換基として導入した構造を有する化合物（本明細書中では「２１１Ａｔ標識化アミノ酸誘導体化合物」ともいう。）またはその薬学的に許容される塩を含むことを特徴とする。
【００２５】
ＬＡＴ１は、中性分枝鎖アミノ酸や芳香族アミノ酸の細胞内取り込みに必要な膜タンパク質であるアミノ酸トランスポーターの一種であり、がんに特異的に発現することが明らかになっている。ＬＡＴ１は、がん組織における栄養分としてのアミノ酸供給を担っている。本明細書中において、「ＬＡＴ１に親和性を有するアミノ酸誘導体」という用語は、ＬＡＴ１に取り込まれ得るアミノ酸誘導体を意味し、より好ましくは、正常細胞におけるアミノ酸トランスポーター（例えば、ＬＡＴ２）よりも、ＬＡＴ１に取り込まれやすい性質を有するアミノ酸誘導体である。ＬＡＴ１に親和性を有するアミノ酸誘導体としては、好ましくは芳香族アミノ酸誘導体であり、典型的な例としては、α−メチルチロシン等のチロシン誘導体を挙げることができる。
【００２６】
一方、２１１Ａｔは、ハロゲンに属する元素であるアスタチン（Ａｔ）の放射性同位体である。当該２１１Ａｔは、細胞殺傷性である高エネルギーのα線を放出して、安定な鉛（２０７Ｐｂ）に壊変する。２１１Ａｔの半減期は７．２時間である。すなわち、２１１Ａｔは、短寿命かつ高い細胞殺傷性であるため、当該２１１Ａｔを置換基として標識化して患部に導くことにより、効率的にがん組織を破壊することができる。そして、かかる２１１ＡｔをＬＡＴ１親和性化合物に置換基として標識化することで、ＬＡＴ１が発現しているがん細胞へ特異的に集積してα線照射を行うことができ、さらに、ＬＡＴ１自体が正常細胞にはほんとど発現しないものであるため副作用のおそれもほとんどないという治療効果を提供することができる。
【００２７】
本発明の好ましい態様では、上記「アミノ酸トランスポーターＬＡＴ１に親和性を有するアミノ酸誘導体に２１１Ａｔを置換基として導入した構造を有する化合物」は、以下の式（Ｉ）で表される構造を有する。当該式（Ｉ）で表される化合物は、チロシンを基本骨格として有するものである。ここで、当該式（Ｉ）で表される化合物を単独で用いてもよいし、好ましい態様では、当該式（Ｉ）で表される化合物の２種類以上を組み合わせて用いることもできる。
【化６】
2019176505.tif 000008
【００２８】
式中、Ｌは、直接結合、又は置換されていてもよいＣ１−Ｃ５アルキレン基であり；Ｍは、水素原子又はハロゲン原子であり；Ｒ１は、水素原子又は置換されていてもよいＣ１−Ｃ５アルキル基であり；Ｒ２は、水素原子、Ｃ１−Ｃ５のアルキル基、Ｃ６−Ｃ１４のアリール基又はＣ７−Ｃ１６のアリールアルキル基であり；及び、Ｒ３は、水素原子又はＣ１−Ｃ３のアルキル基である。
【００２９】
好ましくは、Ｌは、直接結合であり；Ｒ１は、置換されていてもよいＣ１−Ｃ５アルキル基であり；Ｒ２は、水素原子又はＣ１−Ｃ５のアルキル基であり；Ｒ３は、水素原子である。
【００３０】
Ｍにおけるハロゲン原子は、好ましくは、Ｉ（ヨウ素）又はＢｒ（臭素）であり、より好ましくはＩである。好ましい態様において、Ｍは、水素原子又はＩである。
【００３１】
２１１Ａｔ−Ｌは、ベンゼン環上の任意の位置に存在することができるが、好ましくは、ＯＨ基に対してオルト位に存在する。より好ましくは、２１１Ａｔ−Ｌは、ベンゼン環上のＯＨ基に対してオルト位であり、かつ、側鎖（Ｒ１、ＣＯＯＲ２、及びＮＨＲ３を有する部分への連結基）に対してメタ位であることができる。また、Ｍは、ベンゼン環上の任意の位置（２１１Ａｔ−ＬとＯＨ基が存在する場所以外の任意の位置）に存在することができるが、好ましくは、ＯＨ基に対してオルト位であり、かつ２１１Ａｔ−Ｌに対してメタ位であることができる（この場合、側鎖に対してメタ位となる）。
【００３２】
式（１）で表されるアミノ酸誘導体化合物の非限定的な具体例としては、以下の化合物を挙げられる（本明細書中では「２１１Ａｔ−ＡＡＭＴ」ともいう。）。当該化合物は、α−メチルチロシンのベンゼン環上に直接２１１Ａｔを導入したものである。
【化７】
2019176505.tif 000009
【００３３】
さらに、別の好ましい態様において、式（１）で表されるアミノ酸誘導体化合物の非限定的な具体例として、以下の化合物を挙げることもできる（本明細書中にでは「２１１Ａｔ−ＡＩＡＭＴ」ともいう。）。当該化合物は、α−メチルチロシンのベンゼン環上に直接２１１Ａｔを導入した点は、上記２１１Ａｔ−ＡＡＭＴと同様であるが、それに加えて、ＯＨ基に対してオルト位であり、かつ２１１Ａｔ−Ｌに対してメタ位にハロゲン原子Ｍを導入した構造を有するものである。式中、Ｍは、Ｉ又はＢｒである。
【化８】
2019176505.tif 000010
【００３４】
上述のとおり、２１１Ａｔ−ＡＡＭＴと２１１Ａｔ−ＡＩＡＭＴは、それぞれを単独で用いることもできるし、これら２つの化合物を組み合わせて用いることもできる。
【００３５】
本発明の医薬組成物に用いられる２１１Ａｔ標識化アミノ酸誘導体化合物は、それらの薬学的に許容される塩の形態であることができる。そのような塩は、特に限定されないが、例えば、塩基付加塩、酸付加塩、アミノ酸塩などを挙げることができる。塩基付加塩としては、例えば、ナトリウム塩、カリウム塩、カルシウム塩、マグネシウム塩などのアルカリ土類金属塩、アンモニウム塩、又はトリエチルアミン塩、ピペリジン塩、モルホリン塩などの有機アミン塩を挙げることができ、酸付加塩としては、例えば、塩酸塩、臭化水素酸塩、硫酸塩、硝酸塩、リン酸塩などの鉱酸塩；メタンスルホン酸、ベンゼンスルホン酸、パラトルエンスルホン酸、酢酸、プロピオン酸塩、酒石酸、フマル酸、マレイン酸、リンゴ酸、シュウ酸、コハク酸、クエン酸、安息香酸、マンデル酸、ケイ皮酸、乳酸、グリコール酸、グルクロン酸、アスコルビン酸、ニコチン酸、サリチル酸などの有機酸塩を挙げることができる。アミノ酸塩としてはグリシン塩、アスパラギン酸塩、グルタミン酸塩などを例示することができる。また、アルミニウム塩等の金属塩であってもよい。
【００３６】
本発明の医薬組成物に用いられる２１１Ａｔ標識化アミノ酸誘導体化合物は、Ｄ体又はＬ体であることができるが、好ましくはＬ体である。また、２１１Ａｔ標識化アミノ酸誘導体化合物は、置換基の種類に応じて１個または２個以上の不斉炭素を有する場合があり、光学異性体又はジアステレオ異性体などの立体異性体が存在する場合がある。純粋な形態の立体異性体、立体異性体の任意の混合物、ラセミ体などはいずれも本発明の範囲に包含される。
【００３７】
本発明の医薬組成物に用いられる２１１Ａｔ標識化アミノ酸誘導体化合物又はその薬学的に許容される塩は、水和物又は溶媒和物として存在する場合もあるが、これらの物質はいずれも本発明の範囲に包含される。溶媒和物を形成する溶媒の種類は特に限定されないが、例えば、エタノール、アセトン、イソプロパノールなどの溶媒を例示することができる。
【００３８】
３．医薬組成物
本発明の医薬組成物は、２１１Ａｔ標識化アミノ酸誘導体化合物またはその薬学的に許容される塩を含むものである。ここで、「組成物」とは、活性成分と、担体を構成する不活性成分（医薬的に許容される賦形剤）とを含む生成物ばかりでなく、任意の２つ以上の成分の会合、複合体化もしくは凝集の結果として、または１つ以上の成分の解離の結果として、または１つ以上の成分の別のタイプの反応もしくは相互作用の結果として、直接もしくは間接的に生ずる任意の生成物も包含する。本発明の医薬組成物は、「２１１Ａｔ標識化アミノ酸誘導体化合物」に該当する２種類以上の化合物の組み合わせを含むことができる。
【００３９】
本発明の好ましい態様では、当該医薬組成物は、がん治療用に用いられる医薬組成物である。本発明の医薬組成物が対象とするがんは、ＬＡＴ１が発現しているがん細胞であれば、特に限定されるものではなく、任意の悪性腫瘍を包含する。例えば、すい臓がん、白血病（骨髄性白血病及びリンパ性白血病のいずれも含む）、メラノーマ（悪性黒色腫）、大腸がん、肺がん、前立腺がん、胃がん、乳がん、腎臓がん、喉頭がん、食道がん、肝臓がん、リンパ腫、骨髄腫、頭頚部がん、卵巣がん、膀胱がん、小児がん、小児白血病又は脳腫瘍を挙げることができる。好ましくは、難治性がん、外科治療が困難な進行性がんに対して用いることができる。
【００４０】
また、本発明の医薬組成物は、有効成分である２１１Ａｔ標識化アミノ酸誘導体化合物以外に、２１１Ａｔと炭素原子との結合を安定化させ、化合物の分解を抑制するともに、当該化合物の生体内における安定性を高める目的で安定剤をさらに含んでいてもよい。そのような安定剤としては、典型的には還元作用を有する化合物であることができ、例えば、アスコルビン酸、アスコルビン酸アルカリ金属塩、アスコルビン酸アルカリ金属土類塩、システイン、グルタチオン、ゲンチジン酸、グルコース等を挙げることができる。好ましくは、アスコルビン酸、アスコルビン酸アルカリ金属塩、又はアスコルビン酸アルカリ金属土類塩であり、より好ましくは、アスコルビン酸又はアスコルビン酸ナトリウムである。後述の実施例において示すように、本発明では、驚くべきことに、２１１Ａｔ標識化アミノ酸誘導体化合物とアスコルビン酸等の還元剤を併用することによって、上述のように化合物を長時間安定に存在させることできるだけでなく、当該化合物が生体内に取り込まれた後も生体内における安定性を高めることができ、それにより当該化合物のがん細胞への集積性を向上できることを見出した点でも従来技術にはない特徴を有するものである。
【００４１】
本発明の医薬組成物には、がん組織を検出可能なプローブ化合物をさらに含むことができる。好ましくは、かかるプローブ化合物は、ポジトロン断層撮影法（ＰＥＴ）用プローブ化合物である。ＰＥＴ用プローブ化合物（ＰＥＴ剤）としては、当該技術分野において公知のものを用いることができ、例えば、フッ素（１８Ｆ）でラベル化されたＰＥＴ剤を用いることができる。α線治療能を有する２１１Ａｔ標識化アミノ酸誘導体化合物とがん組織を検出可能なプローブ化合物を併用することで、患部への薬剤の到達、或いは投与後の患部の状態等を治療と同時にモニタリングすることができる。
【００４２】
本発明の医薬組成物の剤型は特に限定されないが、顆粒剤、細粒剤、散剤、硬カプセル剤、軟カプセル剤、シロップ剤、乳剤、懸濁剤又は液剤等の形態の経口投与用医薬組成物、静脈内投与用、筋肉内投与用、若しくは皮下投与用などの注射剤、点滴剤、経皮吸収剤、経粘膜吸収剤、点鼻剤、吸入剤、坐剤などの形態の非経口投与用医薬組成物として調製することができる。これらの製剤は常法に従って調製することができる。好ましくは、経口投与用又は注射用の液体製剤である。
【００４３】
かかる液体製剤は、本発明の２１１Ａｔ標識化アミノ酸誘導体化合物を水に溶解させて調製されるが、必要に応じて生理食塩水あるいはブドウ糖溶液に溶解させてもよく、また緩衝剤や保存剤を添加してもよい。また、上述のとおり、アスコルビン酸等の還元剤をさらに含有することができる。特に、注射剤を製造するには、有効成分を必要に応じて塩酸、水酸化ナトリウム、乳糖、乳酸、ナトリウム、リン酸一水素ナトリウム、リン酸二水素ナトリウムなどのｐＨ調整剤、塩化ナトリウム、ブドウ糖などの等張化剤と共に注射用蒸留水に溶解し、無菌濾過してアンプルに充填するか、さらにマンニトール、デキストリン、シクロデキストリン、ゼラチンなどを加えて真空凍結乾燥し、用事溶解型の注射剤としてもよい。また、有効成分にレチシン、ポリソルベート８０ 、ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油などを加えて水中で乳化せしめ注射剤用乳剤とすることもできる。
【００４４】
医薬組成物の製造に用いられる製剤用添加物の種類、有効成分に対する製剤用添加物の割合、又は医薬組成物の製造方法は、組成物の形態に応じて当業者が適宜選択することが可能である。製剤用添加物としては無機又は有機物質あるいは固体又は液体の物質を用いることができ、一般的には、有効成分重量に対して１重量％から９０重量％の間で配合することができる。
【００４５】
本発明の医薬組成物の投与量及び投与回数は特に限定されず、治療対象疾患の悪化・進展の防止及び／又は治療の目的、疾患の種類、患者の体重や年齢、疾患の重篤度などの条件に応じて、医師の判断により適宜選択することが可能である。
【００４６】
場合によっては、本発明の２１１Ａｔ標識化アミノ酸誘導体化合物と、アスコルビン酸又はアスコルビン酸塩等の還元剤とを含む、キットの形態とすることもできる。この場合には、使用時に、当該化合物とアスコルビン酸等の還元剤を混合した水溶液の形態として用いられる。
【００４７】
４．２１１Ａｔ標識化アミノ酸誘導体の製造方法
別の態様において、本発明は、２１１Ａｔ標識化アミノ酸誘導体の製造方法にも関する。より詳細には、本発明の製造方法は、上記式（Ｉ）で表される化合物の製造方法であって、以下の工程Ａ）〜Ｃ）を含むことを特徴とする。
【００４８】
工程Ａ）：
以下の式（Ｉａ）で表される化合物に、
【化９】
2019176505.tif 000011
（式中、Ｌ、Ｒ１、Ｒ２、及びＲ３は、上記式（Ｉ）の定義と同じである。）
水銀化合物を添加し、以下の式（Ｉｂ−１）又は式（Ｉｂ−２）で表される前駆体化合物を得る工程
【化１０】
2019176505.tif 000012
（式中、Ｌ、Ｒ１、Ｒ２、及びＲ３は、上記式（Ｉ）の定義と同じである。）。
【００４９】
工程Ａ）は、２１１Ａｔを有しない出発物質である式（Ｉａ）のアミノ酸誘導体において、水銀化合物を添加し、芳香族炭化水素−水銀結合を形成させた前駆体を得る工程である。ここで、水銀化合物としては、水銀イオン（Ｈｇ２＋）を含むものであれば特に限定はされないが、例えば、ＨｇＳＯ４やＨｇ(ＯＡc)2を用いることができる。当該工程Ａ）は、好ましくは、硫酸等を添加し、酸性条件下で行われる。また、式（Ｉｂ−１）及び式（Ｉｂ−２）で表される前駆体化合物は、工程Ａ）で用いる水銀化合物の量を変化させることで作り分けることができる。より詳細には、原料である式（Ｉａ）で表される化合物に対する水銀化合物のモル比を増やすことによって、典型的には、モル比［水銀化合物／式（Ｉａ）で表される化合物］を１以上とした条件で反応を行うことによって、ベンゼン環上の２カ所に水銀イオン（Ｈｇ）を導入した式（Ｉｂ−２）の前駆体化合物を生成させることができる。なお、条件によっては、式（Ｉｂ−１）と式（Ｉｂ−２）の前駆体化合物が共に生成する場合もあり得るが、後の工程Ｂ）及びＣ）を経て式（Ｉ）に該当する化合物が生成される限りそのような工程も許容される。
【００５０】
工程Ｂ）：
工程Ｂ）は、前記工程Ａ）で得られた式（Ｉｂ−１）又は式（Ｉｂ−２）で表される前駆体化合物に、２１１Ａｔ、及びアスタチン以外のハロゲン元素よりなるハロゲン化物を添加する工程である。当該反応は、ハロゲン化物イオンをキャリアとして用い、式（Ｉｂ）におけるＨｇ＋に置換して２１１Ａｔを導入する反応である。
【００５１】
工程Ｂ）で用いられる２１１Ａｔは、加速器（サイクロトロン）を用いてビスマス（Ｂｉ）から得ることができる。より詳細には、サイクロトロンで２８ＭｅＶ以上に加速したヘリウム粒子をビスマスに照射し、２０９Ｂｉ（α、２ｎ）２１１Ａｔの核反応により２１１Ａｔを生成させ、捕集した２１１Ａｔを水又は有機溶媒に溶解させて得た２１１Ａｔ原液を工程Ｂ）の反応に用いることができる。
【００５２】
工程Ｂ）で用いられるハロゲン化物は、好ましくは三ヨウ化物である。より好ましくは、ＫＩ３等のアルカリ金属三ヨウ化物塩を用いることができる。また、当該三ヨウ化物を添加後に、さらに対応する一ヨウ化物を追加で添加することができる。例えば、２１１ＡｔとＫＩ３を同時に添加し、一定時間撹拌した後に、ＫＩをさらに添加することができる。
【００５３】
工程Ｃ）：
工程Ｃ）は、前記工程Ｂ）で得られた反応物を精製して、前記式（Ｉ）で表される化合物を得る工程である。これは、工程Ｂ）の生成物中には、目的とする式（Ｉ）の化合物以外の副生成物を除去するためのものである。
【００５４】
工程Ｃ）における精製は、好ましくは、イオン交換樹脂を用いるカラムクロマトグラフィーにより行われる。例えば、陽イオン交換カラムクロマトグラフィーを行い、その後、陰イオン交換カラムクロマトグラフィーを行うことが目的生成物を分離・精製することができる。なお、イオン交換樹脂としては、当該技術分野において汎用されているものを用いることができる。
【００５５】
また、好ましい態様では、工程Ｃ）における精製の後に、アスコルビン酸又はアスコルビン酸塩を添加する工程をさらに含むことができる。これにより、精製後の式（Ｉ）の化合物の分解を抑制し、長期間保持することが可能となる。
【００５６】
以上で説明した本発明の製造方法における各工程における溶媒や反応温度等の反応条件は、後述の実施例において代表的な例として詳細に記載するが、必ずしもそれらに限定されるわけではなく、当該技術分野における当業者であれば、有機合成における一般的な知識に基づいてそれぞれ適宜選択可能である。
【実施例】
【００５７】
以下、実施例により本発明をさらに詳細に説明するが、本発明はこれらによって限定されるものではない。
【実施例１】
【００５８】
１−１．２１１Ａｔ標識化アミノ酸誘導体化合物（２１１Ａｔ−ＡＡＭＴ）の合成
（１）２１１Ａｔ水溶液の調製
サイクロトロンで加速したヘリウム粒子（２８ＭｅＶ、１−２μＡ）をターゲット物質であるビスマスに照射し、２０９Ｂｉ（α、２ｎ）２１１Ａｔの核反応により、ターゲット物質中に２１１Ａｔを生成させた。２１１Ａｔを含むターゲット物質を、電熱器内で８５０℃に加熱して溶解し、蒸散した２１１Ａｔを少量の水（０．１〜２ｍＬ）に溶解して、放射能濃度が約５ＭＢｑ／ｍｌの２１１Ａｔ水溶液を調製した。【００５９】
（２）２１１Ａｔ標識化反応
α−メチル−Ｌ−チロシン（２２μｍｏｌ）及びＨｇＳＯ４（２０μｍｏｌ）を、０．５ｍＬのＨ２ＳＯ４水溶液（０．２Ｍ）に添加し、室温で２時間撹拌した。ＮａＣｌ（４５μｍｏｌ）を反応溶液に添加し、５分間撹拌した。反応溶液に、上記（１）で得た２１１Ａｔ水溶液（約５ＭＢｑ／ｍｌ）を１００μＬ、及び１Ｍ  ＫＩ３を５μＬ添加し、３０分間撹拌した。その後、ＫＩを、懸濁溶液が透明になるまで適量添加し、反応を終了させた。得られた反応溶液を陽イオンカラム（ＤｏwｅxTM ５０Wx８  １００-２００メッシュ、０.２Ｍ  ＮＨ３水溶液）、次いで陰イオンカラム（ＤｏwｅxTM １x８ ５０−１００メッシュ、２％ＡcＯＨ水溶液）に通して脱塩し、以下の化合物（２１１Ａｔ−ＡＡＭＴ）を得た。収率は６０〜８０％であった。
【化１１】
2019176505.tif 000013
【００６０】
１−２．２１１Ａｔ標識化アミノ酸誘導体化合物（２１１Ａｔ−ＡＩＡＭＴ）の合成
（１）２１１Ａｔ水溶液の調製
上記の手順と同様に、放射能濃度が約５ＭＢｑ／ｍｌの２１１Ａｔ水溶液を調製した。【００６１】
（２）２１１Ａｔ標識化反応
α−メチル−Ｌ−チロシン（２２μｍｏｌ）及びＨｇＳＯ４（１００μｍｏｌ）を、０．５ｍＬのＨ２ＳＯ４水溶液（０．２Ｍ）に添加し、室温で２時間撹拌した。ＮａＣｌ（４５μｍｏｌ）を反応溶液に添加し、５分間撹拌した。反応溶液に、上記（１）で得た２１１Ａｔ水溶液（約５ＭＢｑ／ｍｌ）を１００μＬ、及び１Ｍ  ＫＩ３を５μＬ添加し、３０分間撹拌した。その後、ＫＩを、懸濁溶液が透明になるまで適量添加し、反応を終了させた。得られた反応溶液を陽イオンカラム（ＤｏwｅxTM ５０Wx８  １００-２００メッシュ、０.２Ｍ  ＮＨ３水溶液）、次いで陰イオンカラム（ＤｏwｅxTM １x８ ５０−１００メッシュ、２％ＡcＯＨ水溶液）に通して脱塩し、以下の化合物（２１１Ａｔ−ＡＩＡＭＴ）を得た。収率は２４．５〜４１．５％であった。
【化１２】
2019176505.tif 000014
【実施例２】
【００６２】
２．２１１Ａｔ標識化アミノ酸誘導体化合物（２１１Ａｔ−ＡＡＭＴ）の安定性【００６３】
（１）ｉｎ  ｖｉｔｒｏにおける安定性
実施例１で合成した２１１Ａｔ−ＡＡＭＴの安定性について、薄層クロマトグラフィー（ＴＬＣ）を用いて、アスコルビン酸Ｎａの存在下及び非存在下における比較を行った。結果を図１に示す。【００６４】
その結果、アスコルビン酸Ｎａが非存在下では、４０分程度で２１１Ａｔ−ＡＡＭＴはほぼ全て分解したのに対して、アスコルビン酸Ｎａを添加した場合には７時間以上経過した後も安定に存在することが分かった。これは、還元剤であるアスコルビン酸が存在することで、芳香族炭素−２１１Ａｔの乖離が抑制され、２１１Ａｔ−ＡＡＭＴを安定化することができることを示している。【００６５】
（２）ｉｎ  ｖｉｖｏ（マウス生体内）における安定性
アスコルビン酸を最終濃度が１％になるように添加した２１１Ａｔ−ＡＡＭＴを正常ラットに静注し、 1時間後に血液および尿を採取して薄層クロマトグラフ法（ＴＬＣ）で分析した。薄層板はシリカゲルＧ６０Ｆ２５４（メルク社）、展開溶媒はブタノール：水：酢酸の混液（４:１:１）を用いた（ナカライテスク）。展開後の薄層板はバイオイメージング解析装置（Ｔｙｈｏｏｎ７０００、ＧＥヘルスケア）で解析した（図２）。その結果、血液中および尿中のいずれにおいても、２１１Ａｔ−ＡＡＭＴのみが検出され、遊離の２１１Ａｔは認められなかった。すなわち、アスコルビン酸を添加した２１１Ａｔ−ＡＡＭＴは生体内で代謝されず、また分解もされず、安定に存在することが示された。【００６６】
（３）２１１Ａｔ−ＡＡＭＴの体内分布におけるアスコルビン酸添加の効果
次に、マウス体内における２１１Ａｔ−ＡＡＭＴの体内分布に与えるアスコルビン酸の影響について比較を行った。日本ＳＬＣより購入したｄｄＹマウス（オス、５週齢）を一週間馴化して使用した（実験実施時６週齢）。アスコルビン酸１％添加又はアスコルビン酸無添加の２１１Ａｔ−ＡＡＭＴを正常マウス（Ｎ＝３）に静注し、１時間後に解剖した。臓器は全てチャック付きのポリエチレン袋（Ａ−４, ０．０４ｍｍ、セイニチ）に入れ、Ｗｉｚａｒｄ２ ｇａｍｍａ ｃｏｕｎｔｅｒ （ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ）を用いて放射能を測定した。主要臓器ごとの２１１Ａｔ分布の結果を図３に示す。その結果、アスコルビン酸１％添加群は、アスコルビン酸無添加群に比べて胃及び腎臓の集積が大きく減少することが確認された。この結果は、アスコルビン酸添加によって、生体投与後の２１１Ａｔ−ＡＡＭＴが体内において安定に存在し得るという効果を示すものである。
【実施例３】
【００６７】
３．２１１Ａｔ−ＡＡＭＴのがん細胞への特異的集積性（ｉｎ  ｖｉｔｒｏ実験）
ヒトすい臓がん細胞株 （ＰＡＮＣ−1）に２１１Ａｔ−ＡＡＭＴを処理し、一定時間の培養後に細胞を洗浄し、取りこまれなかった２１１Ａｔ−ＡＡＭＴを取り除く。細胞内の残存放射線量から、細胞内取り込みを測定した結果を図４に示す。【００６８】
その結果、２１１Ａｔ−ＡＡＭＴは、添加直後から１０分程度で取り込まれ、最大値を示した。また、比較例として、ＬＡＴ１阻害剤であるＢＣＨ（２−Ａｍｉｎｏｂｉｃｙｃｌｏ［２．２．１］ｈｅｐｔａｎｅ−２−ｃａｒｂｏｘｙｌｉｃ ａｃｉｄ）、及びメチルチロシンを競合させた場合には、２１１Ａｔ−ＡＡＭＴの取り込みが減少した。この結果から、２１１Ａｔ−ＡＡＭＴはＬＡＴ１を介して特異的にがん細胞に集積することが分かった。【００６９】
また、２１１Ａｔ−ＡＡＭＴの細胞集積に対するアスコルビン酸の影響についても検証を行った。ヒト膵癌細胞株におけるアスコルビン酸の非存在下及び存在下での放射線量の測定結果を図５に示す。その結果、アスコルビン酸（０．１％）の添加によって、２１１Ａｔ−ＡＡＭＴのすい臓がん細胞株（ＰＡＮＣー１）への集積性が大幅に増大することが分かった。【００７０】
当該結果と実施例２（３）の結果を併せて見ると、アスコルビン酸の添加時には、腫瘍細胞に対しては集積性が増加するのに対し、腫瘍が存在しない正常な場合にはむしろ集積性が減少することから、アスコルビン酸添加によって標的臓器以外でのクリアランスが早くなるという効果が得られることが分かった。
【実施例４】
【００７１】
４．２１１Ａｔ−ＡＡＭＴの殺細胞効果の検証
実施例３と同様の条件でヒトすい臓がん細胞株 （ＰＡＮＣ−1）に２１１Ａｔ−ＡＡＭＴを投与した際の、細胞生存率を図６に示す。その結果、２１１Ａｔ−ＡＡＭＴによってがん細胞をほぼ殺傷できることが確認された。一方で、阻害剤ＢＣＨ及びメチルチロシンが存在する場合には、２１１Ａｔ−ＡＡＭＴの細胞取り込みが減少する結果、細胞生存率の大幅な減少を見られなかった。【００７２】
同様に、殺細胞効果に対するアスコルビン酸の影響を比較した結果を図７に示す。その結果、アスコルビン酸の添加によって、２１１Ａｔ−ＡＡＭＴのがん細胞殺傷能力が向上することが分かった。これはアスコルビン酸の添加によって、２１１Ａｔ−ＡＡＭＴのがん細胞取り込みが４倍程度増加したことによる。
【実施例５】
【００７３】
５．担がんマウスへの２１１Ａｔ−ＡＡＭＴの投与
ヒト膵がん細胞株ＰＡＮＣ−１を用いて作成した担がんマウスに、１匹あたり０．６ＭＢｑの２１１Ａｔ−ＡＡＭＴを経静脈投与した。投与による腫瘍サイズの推移を図８（Ａ）に、担がんマウスの体重の推移を図８（Ｂ）に示す。【００７４】
図８（Ａ）に示すように、投与７日後では、腫瘍の退縮効果が得られた。一方で、体重については、図８（Ｂ）に示すように、投与７日後においても実質的な減少は認められなかったことから、２１１Ａｔ−ＡＡＭＴは顕著な副作用なく腫瘍退縮効果を提供し得ることが分かった。【００７５】
なお、正常ラットに２１１Ａｔ−ＡＡＭＴを投与し、体内における局在をガンマカメラによる画像解析を行った結果、放射能は腎臓とその周辺臓器に集積が認められることから、速やかに腎排泄されることを確認した。
【実施例６】
【００７６】
６．すい臓がんマウスへの２１１Ａｔ−ＡＡＭＴの投与
日本ＳＬＣより購入したＢａｌｂ／ｃ−ｎｕ／ｎｕマウス（メス、5週齢）を一週間飼育スペースにて馴化させた。ヒトすい臓がん細胞ＰＡＮＣ−１（ＲＩＫＥＮ ｃｅｌｌ ｂａｎｋ）は、ＲＰＭＩ１６４０培地（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ）に１０％ウシ胎児血清（ＧＩＢＣＯ社）と１％の抗生剤（１００ｘ、富士フィルム和光純薬）を入れて維持し、５×１０６ｃｅｌｌｓ／１００μＬの濃度に調整した。その後マトリゲル（Ｇｒｏｗｔｈ Ｆａｃｔｏｒ Ｒｅｄｕｃｅｄ, ＢＤ）と１:１に混合し、シリンジ（ＦＮシリンジ２７Ｇ、テルモ）にてマウス後背部皮下に移植した。その後１ヶ月経過観察を行い、腫瘍サイズが十分に大きくなったところで実験に使用した。このすい臓がん移植マウス（動物１：２５．５ｇ, 動物２：３０．２ｇ）に２１１Ａｔ−ＡＡＭＴ(アスコルビン酸１％添加、各１ＭＢｑ)を静注し、１０分後にＳＰＥＣＴイメージングを実施した。撮像はガンマカメラＥ−Ｃａｍ（シーメンス）を用いた（撮像時間１０分、コリメーター: Ｌｏｗ Ｅｎｅｒｇｙ Ａｌｌ Ｐｕｒｐｏｓｅ、Ｐｉｘｅｌサイズ：１．２ｍｍ×１．２ｍｍ、Ｍａｔｒｉｘ: ２５６×２５６、Ｚｏｏｍ: ２倍、Ｅｎｅｒｇｙ Ｗｉｎｄｏｗ:７９±２０％）。得られた結果を図９に示す。【００７７】
その結果、腫瘍はいずれも明瞭に描出された。一方、甲状腺は描出されなかったことから、本条件下では生体内で遊離の２１１Ａｔが生成している可能性は低いことが示された。すなわち、アスコルビン酸添加２１１Ａｔ−ＡＡＭＴは、すい臓がんへの集積性が高く、かつ生体内で安定であることがわかった。
【実施例７】
【００７８】
７．正常ラットにおけるＳＰＥＣＴイメージング
正常ラット（Ｗｉｓｔｅｒ、３ヶ月齢、オス、３匹、体重２８９．８±５．５ｇ）に２１１Ａｔ−ＡＡＭＴ(アスコルビン酸無添加, １ＭＢｑ）を静注し、２０分から１時間後にＳＰＥＣＴイメージングを行った。撮像はガンマカメラＥ−Ｃａｍ（シーメンス）を用いた（撮像時間：２０分、コリメーター: Ｌｏｗ Ｅｎｅｒｇｙ Ａｌｌ Ｐｕｒｐｏｓｅ、Ｐｉｘｅｌサイズ：２．４ｍｍ×２．４ｍｍ×２．４ｍｍ （ＳＰＥＣＴ）、Ｍａｔｒｉｘ: １２８×１２８）。得られた結果を図１０に示す。【００７９】
その結果、いずれの動物も甲状腺および胃への放射能集積を認めたことから、アスコルビン酸無添加の場合、２１１Ａｔ−ＡＡＭＴは生体内で代謝されて遊離の２１１Ａｔを生成し、甲状腺および胃に集積したことが示唆された。
【実施例８】
【００８０】
８．２１１Ａｔ−ＡＡＭＴによる肺のメラノーマ転移治療効果の検証
日本ＳＬＣより購入したＣ５７ＢＬ／６マウス（メス、５週齢）を一週間飼育スペースにて馴化させたのち、実験に使用した。メラノーマ細胞Ｂ１６Ｆ１０（Ｂ１６よりクローニングされた肺高転移株、ＲＩＫＥＮ ｃｅｌｌ ｂａｎｋ）は、Ｄ−ＭＥＭ培地（高グルコース, Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ）に１０％ウシ胎児血清（ＧＩＢＣＯ）と１％の抗生剤（１００ｘ、富士フィルム和光純薬）を入れて維持した。この細胞２×１０５ｃｅｌｌｓを経静脈的に各マウスに移植した。翌日に２１１Ａｔ−ＡＡＭＴ（アスコルビン酸１％添加）を０．０ＭＢｑ（対照群）, ０．１ＭＢｑ又は１ＭＢｑずつマウスに静注した（Ｎ＝５）。１４日後に解剖し、肺に転移した結節数を目視でカウントした。得られた結節数及び体重変化の結果をそれぞれ図１１及び図１２に示す。【００８１】
その結果、２１１Ａｔの用量が多い群ほど肺のメラノーマ結節数が減少することがわかった（図１１）。また、この間、体重の推移は２１１Ａｔ−ＡＡＭＴ群と対照群の間に差は見られなかった（図１２）。これらの結果は、２１１Ａｔ−ＡＡＭＴ（アスコルビン酸１％添加）がメラノーマの転移治療に用量依存的に効果があることを示すものである。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【国際調査報告】
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