(57)【要約】  本発明は、飲食品における利用に適した、腸内のＦＢ比を低減させる作用を有する剤（腸内ＦＢ比低減剤）およびそれを含有するＦＢ比低減用食品組成物を提供する。本発明の腸内ＦＢ比低減剤は、酵母マンナンを含有することを特徴とする腸内ＦＢ比低減剤であり、本発明のＦＢ比低減用食品組成物は、当該腸内ＦＢ比低減剤を含有するＦＢ比低減用食品組成物である。ここでＦＢ比は、腸内の、［ファーミキューテス門に属する細菌の占有率／バクテロイデス門に属する細菌の占有率］として定義されるものであってもよいし、［ファーミキューテス門に属する細菌のうちクロストリジウム綱に属する細菌およびエリシペロトリクス綱に属する細菌の合計の占有率／バクテロイデス門のうちバクテロイデス綱に属する細菌の占有率］として定義されるものであってもよい。【特許請求の範囲】
【請求項１】
酵母マンナンを含有することを特徴とする、腸内の、［ファーミキューテス門に属する細菌の占有率／バクテロイデス門に属する細菌の占有率］として定義されるＦＢ比の低減剤。
【請求項２】
酵母マンナンを含有することを特徴とする、腸内の、［ファーミキューテス門に属する細菌のうちクロストリジウム綱に属する細菌およびエリシペロトリクス綱に属する細菌の合計の占有率／バクテロイデス門のうちバクテロイデス綱に属する細菌の占有率］として定義されるＦＢ比の低減剤。
【請求項３】
前記バクテロイデス門に属する細菌またはバクテロイデス門のうちバクテロイデス綱に属する細菌に、Bacteroides thetaiotaomicronが含まれる、請求項１または２に記載のＦＢ比の低減剤。
【請求項４】
請求項１〜３のいずれか一項に記載のＦＢ比の低減剤を含有する、ＦＢ比低減用食品組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、腸内細菌叢のうち特にバクテロイデス門（Bacteroidetes）の細菌の増殖および活性化を促進するプレバイオティクスに関する。また、本発明は、酵母細胞壁から抽出されるマンナン（酵母マンナン）の用途に関する。
【背景技術】
【０００２】
ヒト、マウス等の哺乳類の腸内には多種多様な細菌が生息して腸内細菌叢を作り出しているが、その中の一つとしてバクテロイデス門（Bacteroidetes）の細菌が挙げられる。バクテロイデス門の細菌の優勢菌種としては、例えば、バクテロイデス・テタイオタオミクロン（Bacteroides thetaiotaomicron；B. thetaiotaomicron）、バクテロイデス・オバタス（Bacteroides ovatus；B. ovatus）が挙げられる。B. thetaiotaomicronは、痩せ型の個体の腸内に特徴的に多いとされる７菌種のうちの一つとして知られている。近年、痩せ型の個体の腸内にはバクテロイデス門の細菌が多く、肥満型の個体の腸内にはファーミキューテス門（Firmicutes）の細菌が多いことが知られるようになり、ＦＢ比＝（Firmicutes門の占有率）/（Bacteoirdetes門の占有率）が、太りやすさの指標のひとつとして使用されるようになってきている（非特許文献１）。【０００３】
特許文献１（特開２０１０−２５４５９４号公報）には、イソマルトオリゴ糖、ガラクトオリゴ糖、マンナンオリゴ糖、食物繊維（例えば難消化性デキストリン）および糖吸収抑制物質（例えばサラシア属植物の抽出物）の少なくとも１種を含有する、腸内バクテロイデス増殖促進剤が記載されており、その腸内バクテロイデス増殖促進剤を摂取することにより、腸内バクテロイデスが増加し、免疫機能の増進などが期待されることなども記載されている。実施例では、各種の成分を含有する腸内バクテロイデス増殖促進剤を用いて（例えば難消化性デキストリンを含有する剤。マンナンオリゴ糖を含有する剤は用いられていない。）、腸内細菌叢に占めるバクテロイデスの割合（総菌体数を１００％とした率）が、摂取前と摂取後でどのように変化したかが示されている。【０００４】
一方、ビール、清酒、パン等の製造に用いられる酵母は、その細胞壁にグルカン、マンナンなどの食物繊維を豊富に含んでいる。酵母の細胞壁から精製されるマンナンは「酵母マンナン」として知られ、整腸作用関連、鉄分吸収促進効果、抗潰瘍作用、糖尿病改善効果など、様々な作用効果を有する機能性素材として、応用研究が進められている。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００５】
【特許文献１】特開２０１０−２５４５９４号公報
【非特許文献】
【０００６】
【非特許文献１】Ley, RE., Turnbaugh, PJ.,Klein, S., Gordon, JI., Nature, 2006,  53,  65-69
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
腸内細菌のＦＢ比を改善する、つまり痩せ型の値に近づけるよう低減させることのできる保健機能食品（機能性表示食品等）、あるいはその有効成分（機能性関与成分等）となる剤が望まれているが、十分な改善効果を有するものはまだ開発されていない。【０００８】
特許文献１で例示されている「食物繊維」のうち、不溶性食物繊維は不溶性であるがゆえに食品形態として用途が限定され、一方でグルコマンナンは粘性が高いため、飲料への使用が困難である。また「マンナンオリゴ糖」は、同様の構成ユニットから構成されるものであっても、その由来により分子量や分子構造において異なる化合物（の集合体）であり、性質も異なるが、特許文献１の発明との関係で記載されているものは「構成単糖の数が、通常２〜９０のもの」（分子量でいえば３６０〜１６２００程度のもの）である。マンナンオリゴ糖またはその他の成分を含有する腸内バクテロイデス増殖促進剤によって、単にバクテロイデスを増殖するだけでなく、ＦＢ比を大きく改善する（低減させる）ことができるかどうか、特許文献１の記載、特にその実施例のデータからは不明である。【０００９】
本発明は、飲食品における利用に適した、腸内のＦＢ比を低減させる作用を有する剤、すなわち腸内ＦＢ比低減剤を提供することを一つの課題とする。
【課題を解決するための手段】
【００１０】
本発明者らは、酵母から抽出されたα−マンナン（本明細書において「酵母マンナン」、又は、「酵母α−マンナン」と称する。）が、腸内の、［ファーミキューテス門に属する細菌の占有率／バクテロイデス門に属する細菌の占有率］として定義されるＦＢ比（本明細書において「広義のＦＢ比」と呼ぶ。）の低減に、優れた作用を有することを見出した。また、酵母マンナンは、特許文献１に記載されているようなマンナンオリゴ糖よりも分子量が高いが（通常５〜１０万またはそれ以上）、水溶性であり、水溶液の粘性は非常に低いため、飲食品への利用に適した腸内ＦＢ比低減剤となる。後記実施例において示すように、酵母マンナンを用い場合は、難消化性デキストリン等の一般的な水溶性食物繊維に比べて、ＦＢ比を著しく低減させることができる。【００１１】
本発明者らはさらに、ファーミキューテス門に属する細菌およびバクテロイデス門に属する細菌のうち特定のものに注目し、［ファーミキューテス門に属する細菌のうちクロストリジウム綱に属する細菌およびエリシペロトリクス綱に属する細菌の合計の占有率／バクテロイデス門のうちバクテロイデス綱に属する細菌の占有率］として定義されるＦＢ比（本明細書において「狭義のＦＢ比」と呼ぶ。）についても、酵母マンナンは優れた低減作用を有することを見出した。【００１２】
すなわち本発明は、下記の事項を包含する。
［項１］
酵母マンナンを含有することを特徴とする、腸内の、［ファーミキューテス門に属する細菌の占有率／バクテロイデス門に属する細菌の占有率］として定義されるＦＢ比の低減剤。
［項２］
酵母マンナンを含有することを特徴とする、腸内の、［ファーミキューテス門に属する細菌のうちクロストリジウム綱に属する細菌およびエリシペロトリクス綱に属する細菌の合計の占有率／バクテロイデス門のうちバクテロイデス綱に属する細菌の占有率］として定義されるＦＢ比の低減剤。
［項３］
前記バクテロイデス門に属する細菌またはバクテロイデス門のうちバクテロイデス綱に属する細菌に、Bacteroides thetaiotaomicronが含まれる、項１または２に記載のＦＢ比の低減剤。
［項４］
項１〜３のいずれか一項に記載のＦＢ比の低減剤を含有する、ＦＢ比低減用食品組成物。
【発明の効果】
【００１３】
酵母マンナンを含有する本発明のＦＢ比低減剤を利用することにより、ＦＢ比低減作用に優れ、かつ摂取しやすい、ＦＢ比低減用食品組成物を製造することが可能となる。
【図面の簡単な説明】
【００１４】
【図１】図１は、実施例１の実験１（通常食）の表１（広義のＦＢ比）に対応する、各細菌の割合（占有率）を表した円グラフである。「対照」は「比較例１」（5%セルロース）、「2%マンナン」および「5%マンナン」はそれぞれ「実施例１」および「実施例２」、「5%難デキ」は「比較例２」に対応する。四捨五入により、円グラフ中の数値と表１の数値に微差があるものがある。
【図２】図２は、実施例５の表５に対応する、各被験者のＦＢ比の平均値を表した棒グラフである。
【発明を実施するための形態】
【００１５】
［ＦＢ比低減剤］
本発明のＦＢ比低減剤は酵母マンナンを含有するものであり、ＦＢ比低減という用途における有効成分として酵母マンナンのみを含む（酵母マンナンからなる）ものであってもよいし、酵母マンナンに加えて同じ用途に対する他の有効成分を含むものであってもよい。この「ＦＢ比」には、本明細書中で説明する「広義のＦＢ比」と「狭義のＦＢ比」の両方が包含される。
【００１６】
（１）酵母マンナン
本発明において、酵母マンナンは、酵母由来の「α−マンナン」及び酵母由来の「α−マンナン―タンパク質複合体」の、少なくとも１種を含む物質を指す。α−マンナン及びα−マンナン―タンパク質複合体は、いずれも酵母の細胞壁を構成する主要な成分である。
【００１７】
上述の「α−マンナン」は、Ｄ−マンノースがα１，６−結合、α１，２−結合、又はα１，３−結合により重合した多糖類であり、その主鎖には、マンノピラノースが１又は２以上、α１，２−結合又はα１，３−結合した側鎖が結合していてもよい。このα―マンナンは水溶性である。
【００１８】
一方、上述の「α−マンナン―タンパク質複合体」は、酵母の細胞壁に局在するタンパク質に、Ｎ−グリコシド結合又はＯ−グリコシド結合により、１又は２以上のα−マンナン鎖が結合した水溶性の糖タンパク質である。この糖タンパク質に結合している「α−マンナン鎖」は、上記「α−マンナン」と同様に、Ｄ−マンノースがα１，６−結合、α１，２−結合、又はα１，３−結合により重合した多糖鎖であり、その主鎖には、マンノピラノースが１又は２以上、α１，２−結合又はα１，３−結合した側鎖が結合していてもよい。
【００１９】
酵母マンナンは、酵母に由来している限り、どのように回収されたものであってもよい。例えば、酵母の細胞壁を酵素又は化学的処理等により損傷させて分離回収（抽出）した酵母マンナンであってもよく、酵母から培地中に放出されたものを回収した酵母マンナンであってもよい。
【００２０】
酵母マンナンは、商品としても容易に入手することもできる。具体的には、マンナン  ｆｒｏｍ  Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ  ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ  Ｍ７５０４（シグマ  アルドリッチ  ジャパン合同会社）等が挙げられる。また、酵母マンナンは、以下に記載するような公知のいずれかの方法を用いて、酵母から調製することができる。
【００２１】
（２）酵母マンナンの調製方法
酵母マンナンの調製方法としては、公知のいずれかの方法を用いることができる。例えば、酵母からその細胞壁を調製する工程として、ビール、清酒、及び、パン等の製造に用いられた酵母から酵母エキスを抽出し、残滓である酵母の細胞壁から酵母マンナンを調製する工程により、酵母マンナンを得ることができる。酵母マンナンの原料とする酵母の細胞壁としては、例えば「酵母細胞壁」の商品名でアサヒグループ食品株式会社から販売されている酵母の細胞壁や、その他の同様の商品を用いてもよい。
【００２２】
酵母の細胞壁から酵母マンナンを調製する工程としては、例えば、酵母の細胞壁から酵母マンナン粗抽出物を得る工程（本明細書において「粗抽出工程」と呼ぶ。）を含み、必要に応じて当該工程の後にさらに、酵母マンナン粗抽出物を精製し、酵母マンナン精製物を得る工程（本明細書において「精製工程」と呼ぶ。）を含む工程が挙げられる。粗抽出工程の前に、酵母からその細胞壁を調製する工程を行う場合もあるが、予め製造された酵母の細胞壁を原料として用いる場合はそのような工程は不要となる。粗抽出工程においては、例えば、熱水（希アルカリを含む）抽出法（例えば、特公昭６４−３４７９号公報、及び、特開昭５８−１０９４２３号公報参照。）、自己消化法（例えば、特公昭５８−５７１５３号公報参照。）、細胞壁溶解酵素による酵素消化方法（例えば、特公昭５９−４０１２６号公報参照。）等の方法を用いることができる。精製工程においては、例えば、塩酸等によるタンパク質の除去処理、アルコール沈殿処理、プロテアーゼ処理、及び、クロマトグラフィーによる処理等を行うことができる。
【００２３】
本明細書では、酵母マンナン粗抽出物と酵母マンナン精製物とを総称して「酵母マンナン調製物」と呼ぶ。上述したような市販されている酵母マンナンも酵母マンナン調製物に該当する。酵母マンナン調製物中には、酵母由来のα−マンナンおよび／または酵母由来のα−マンナン−タンパク質複合体の他、酵母の細胞壁中に存在していたり、酵母マンナンの調製のための処理により生じたりした、様々な夾雑物（例えば、グルカン、タンパク質、マンノース等）も含まれていてもよい。酵母マンナン調製物中の酵母マンナンの含有量は、酵母マンナンとして酵母マンナン調製物を用いたときに本発明の作用効果が奏される含有量の後述する酵母α−マンナンを有する酵母マンナンである限り、特に限定されるものではない。粗抽出工程でどのような方法を用いるか、および精製工程を行うかどうか、精製工程を行う場合はどのような処理を用いるかなどは、所望の含有量の酵母α−マンナンを有する酵母マンナン調製物が得られるよう、適宜選択すればよい。当業者であれば、一般的な方法および条件に従って、本発明の作用効果を奏する上で支障のない含有量の酵母α−マンナンを有する酵母マンナンを調製することができる。言い換えれば、一般的な方法および条件に従って当業者によって調製された酵母マンナンは、本発明の作用効果を奏する上で支障のない含有量の酵母α−マンナンを有している。
【００２４】
上述の酵母マンナンの調製方法における原料として用いられる酵母は、上述のα−マンナン、及び、上述のα−マンナン―タンパク質複合体を細胞壁の構成成分とする酵母であれば特に限定されるものではない。このような酵母は、例えば、サッカロマイセス（Saccharomyces）属菌、シゾサッカロマイセス（Shizosaccharomyces）属菌、ピキア（Pichia）属菌、キャンディダ（Candida）属菌、クリベロマイセス（Kluyveromyces）属菌、ウィリオプシス（Williopsis）属菌、デバリオマイセス（Debaryomyces）属菌、ガラクトマイセス（Galactomyces）属菌、トルラスポラ（Torulaspora）属菌、ロドトルラ（Rhodotorula）属菌、ヤロウィア（Yarrowia）属菌、ジゴサッカロマイセス（Zygosaccharomyces）属菌等の酵母であってもよく、サッカロマイセス属菌が好ましい。当業者であれば、一般的な方法および条件に従って、本発明の作用効果を奏する酵母マンナンを調製するための原料として用いる上で支障のない酵母を培養することができる。言い換えれば、一般的な方法および条件に従って当業者によって培養された酵母は、本発明の作用効果を奏する酵母マンナンを調製する上で支障のない原料として用いることができる。
【００２５】
また、上述の酵母マンナンの原料として用いられる酵母は、可食性の酵母であることが好ましく、パン酵母又はビール酵母として使用されている酵母であることがより好ましい。具体的には、サッカロマイセス・セレビシエ（Saccharomyces cerevisiae）、シゾサッカロマイセス・ポンベ（Schizosaccharomyces pombe）、サッカロマイセス・パストリアヌス（Saccharomyces pastorianus）、サッカロマイセス・パラドキサス（Saccharomyces paradoxus）、サッカロマイセス・ミカタエ（Saccharomyces mikatae）、サッカロマイセス・バヤヌス（Saccharomyces bayanus）、サッカロマイセス・クドリアヴゼヴィイ（Saccharomyces kudriavzevii）、クルイベロマイセス・ラクチス（Kluyveromyces lactis）、キャンディダ・ユーティリス（Candida utilis）、キャンディダ・アルビカンス（Candida albicans）、キャンディダ・トロピカリス（Candida tropicalis）、キャンディダ・リポリティカ（Candida lypolitica）、及び、キャンディダ・サケ（Candida sake）等が挙げられる。上述の酵母マンナンの原料として用いられる酵母は、例えば、サッカロマイセス・セレビシエ、サッカロマイセス・パストリアヌス、及び、サッカロマイセス・バヤヌスであることが好ましい。
【００２６】
（３）酵母α−マンナンの含有率の算出方法
上記の調製方法により得られる酵母マンナン調製物には、酵母由来のα−マンナン−タンパク質複合体（つまりα−マンナン鎖と結合した状態のタンパク質部分）も含まれていてもよい。ここで、本明細書において、酵母由来のα−マンナンと、酵母由来のα−マンナン−タンパク質複合体のうちのα−マンナン鎖部分とをあわせて「酵母α−マンナン」と総称することとする（「酵母α−マンナン」は、純粋な酵母マンナンということもできる）。酵母マンナン中の酵母α−マンナンの含有率は、酵母マンナンの調製方法によって多少変動するが概ね一定の範囲内にあり、通常は３０〜９５％である。酵母α−マンナンの含有率は、酵母マンナンとして酵母マンナン調製物を用いたときに本発明の作用効果が奏される限り特に限定されるものではない。当業者であれば、一般的な方法および条件に従って、本発明の作用効果を奏する上で支障のない酵母α−マンナンの含有率を有する酵母マンナンを調製することができる。言い換えれば、一般的な方法および条件に従って当業者によって調製された酵母マンナンは、本発明の作用効果を奏する上で支障のない、酵母α−マンナンの含有率を有している。
【００２７】
酵母マンナン調製物中の酵母α−マンナンの含有率は、次の方法により算出する。まず、酵母マンナン調製物の検体（Ａ）中のマンノース、および、酵母マンナン調製物を加水分解した検体（Ｂ）中のマンノースを各々定量する。ここで、検体（Ｂ）は、検体（Ａ）を硫酸で処理することにより、検体（Ａ）中の全ての糖鎖を単糖に加水分解した後、中和された検体である。各検体中のマンノースは、例えば、高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ：high performance liquid chromatography）により定量することができ、一般財団法人  日本食品分析センターで実施されている方法で定量してもよい。続いて、検体（Ｂ）のマンノース量から検体（Ａ）のマンノース量を差し引いた値に対して、酵母α−マンナンの加水分解により結合した水の量を減じるため、０．９を乗じることにより酵母マンナン調製物中の酵母α−マンナンの含有量を算出する。最後に、検体（Ａ）の重量に対する、酵母α−マンナンの含有量の割合を算出することにより、酵母マンナン調製物中の酵母α−マンナンの割合、すなわち酵母α−マンナンの含有率を算出することができる。
【００２８】
本発明の各剤は、酵母α−マンナンの含有率が１００％である酵母マンナン調製物を用いる必要はなく、酵母α−マンナンの含有率が上記のような一般的な範囲にある酵母マンナン調製物を用いてもよい。
【００２９】
本発明のＦＢ比低減剤の剤型は特に限定されるものではなく、粉末状であってもよいし、水または他の溶媒を用いた溶液状（分散液状）であってもよい。本発明のＦＢ比低減剤は、典型的にはＦＢ比低減用食品組成物に配合して使用されるので、そのような食品組成物の製造に適した剤型とすることが好ましい。
【００３０】
本発明において、「広義のＦＢ比」は、［ファーミキューテス門に属する細菌の占有率／バクテロイデス門に属する細菌の占有率］として定義され、「狭義のＦＢ比」は、［ファーミキューテス門に属する細菌のうちクロストリジウム綱に属する細菌およびエリシペロトリクス綱に属する細菌の合計の占有率／バクテロイデス門のうちバクテロイデス綱に属する細菌の占有率］として定義される。
【００３１】
バクテロイデス門（Bacteroidetes）には、バクテロイデス綱（Bacteroides）、フラボバクテリウム綱（Flavobacteria）、スフィンゴバクテリウム綱（Sphingobacteria）などが含まれる。
バクテロイデス綱には、バクテロイデス属（Bacteroides）、パラバクテロイデス属（Parabacteroides）、プレボテラ属（Prevotella）、パラプレボテラ属（Paraprevotella）、アリスティピス属（Alistipes）、バルネシエラ属（Barnesiella）、ブチリシモナス属（Butyricimonas）、オドリバクター属（Odoribacter）などが含まれる。
フラボバクテリウム綱には、フラボバクテリウム属（Flavobacterium）などが含まれる。スフィンゴバクテリウム綱には、スフィンゴバクテリウム属（Sphingobacterium）などが含まれる。
【００３２】
腸内細菌叢において、フラボバクテリウム綱の細菌およびスフィンゴバクテリウム綱の細菌は、検出はされるものの占有率は非常に低い。そのため、ＦＢ比を産出する際には、「バクテロイデス門に属する細菌の占有率」は実質的に「バクテロイデス綱に属する細菌の占有率」とみなしてもよい。また、本発明において、ＦＢ比を算出する際の「バクテロイデス門に属する細菌」または「バクテロイデス門のうちバクテロイデス綱に属する細菌」には、Bacteroides thetaiotaomicronが含まれることが好ましい。バクテロイデス綱に属する細菌には、Bacteroides thetaiotaomicronの他、Bacteroides ovatusなども含まれる。
【００３３】
ファーミキューテス門（Firmicutes）には、クロストリジウム綱（Clostridia）、エリシペロトリクス綱（Erysipelotrichi）、バシラス綱などが含まれる。
クロストリジウム綱には、クロストリジウム属（Clostridium）、ブラウティア属（Blautia）、SMB53、コプロコッカス属（Coprococcus）、ドレア属（Dorea）、ラクノスピラ属（Lachnospira）、ロゼブリア属（Roseburia）、ルミノコッカス属（Ruminococcus）、ベイロネラ属（Veillonella）などが含まれる。
エリシペロトリクス綱には、アロバキュラム属（Allobaculum）、カテニバクテリウム属（Catenibacterium）、コプロバシラス属（Coprobacillus）、ホルデマニア属（Holdemania）などが含まれる。
バシラス綱には、バシラス属（Bacillus）、ラクトバシラス属（Lactobacillus）、ペディオコッカス属(Pediococcus)、ラクトコッカス属（Lactococcus）、ロイコノストック属（Leuconostoc）、ワイセラ属（Weissella）などが含まれる。
【００３４】
狭義のＦＢ比の算出には、ファーミキューテス門に属する細菌のうち、クロストリジウム綱に属する細菌およびエリシペロトリクス綱に属する細菌の合計の占有率を用いる。これはファーミキューテス門に属する細菌のうち、一般的に善玉菌と認識されることの多い乳酸菌、枯草菌などを含むバシラス綱を除外するためである。
【００３５】
本発明のＦＢ比低減剤、またはその有効成分として含有される酵母マンナンは、それを摂取することにより、ヒト、マウス、その他の哺乳類の腸内のＦＢ比を低減させることができる。ＦＢ比は、試験条件によって、例えば実験動物を用いた試験における給餌条件（摂取量や、普通食か高脂肪食か）によって変動するものであり、効果を一律に数値範囲等で規定することは困難である。しかしながら少なくとも、比較可能なように適切に設定された試験条件下で、ＦＢ比低減剤の摂取後のＦＢ比を、摂取前のＦＢ比よりも低下させることができればよい。また、ＦＢ比低減剤の摂取後のＦＢ比は、コントロール群（ＦＢ比低減剤を摂取しない群、またはセルロースを摂取した群）と比較して、好ましくはさらに「難消化性デキストリン」など他の成分を摂取した群と比較して、小さければよい。本発明の一つの側面において、本発明のＦＢ比低減剤は、コントロール群（ＦＢ比低減剤を摂取しない群、またはセルロースを摂取した群）と比較して、ＦＢ比の数値を、好ましくは８５％以下、より好ましくは７０％以下、さらに好ましくは６０％以下に低減する（低減幅としては、それぞれ１５％以上、３０％以上および４０％以上とする）ことができる。この際、低減の限度は特にないが、必要であれば例えば、好ましくは１０％まで、より好ましくは１５％まで、さらに好ましくは２０％までの低減とする（低減幅としては、それぞれ９０％まで、８５％までおよび８０％までとする）ことができる。
【００３６】
「広義のＦＢ比」および「狭義のＦＢ比」を算出するための、各綱または属の細菌の占有率は、腸内細菌叢の解析のために一般的に用いられている手法により測定することができる。例えば、糞便検体からＤＮＡを調製し、微生物の系統解析で利用されるリボソームＲＮＡ（代表的には１６Ｓ  ｒＲＮＡ）領域を増幅し、次世代シーケンサーを用いて大量の塩基配列を取得した後、データベースに対する相同性検索および系統分類解析を実施することにより、所望の細菌の占有率を測定することができる。
【００３７】
［食品組成物］
本発明のＦＢ比低減用食品組成物は、本発明のＦＢ比低減剤および食品組成物の形態に適合したその他の成分を含有するものである。なお、ＦＢ比低減剤の有効成分である酵母マンナンを、細胞壁を有する酵母の形態で含有するが、組成物として製造されていない天然の素材またはその調理・加工品、例えば酵母が残存している発酵食品自体は、本発明の食品組成物には該当しない。
【００３８】
食品組成物の形態は特に限定されるものではなく、本発明のＦＢ比低減剤を配合することのできる、公知の各種の飲食品と同様の形態とすることができる。例えば、錠剤、カセル剤、散剤（顆粒剤）、その他の剤型のサプリメント（栄養補助食品）；清涼飲料（炭酸飲料、ノンアルコール飲料、ジュース、コーヒー飲料、茶系飲料、ミネラルウォーター、スポーツ飲料など）、乳飲料、豆乳飲料、発酵乳、乳酸菌飲料、ココア、アルコール飲料（ビール、発泡酒、その他の醸造酒、リキュール、日本酒、甘酒、ワイン、焼酎など）、インスタント粉末から調製される飲料、その他の飲料；パン、シリアル、菓子類（ビスケット、クッキー、チョコレートなど）、加工品（かつおぶし、塩辛、くさやなど）、漬物（ぬか漬け、キムチ、ピクルスなど）、発酵食品（納豆、チーズ、ヨーグルトなど）、調味料（醤油、味噌、酢など）、食品添加物、その他の食品が挙げられる。
【００３９】
食品組成物中のＦＢ比低減剤の含有量、またはその有効成分としての酵母マンナンの含有量は、本発明によるＦＢ比低減の効果が奏される限り特に限定されるものではない。食品組成物の形態や製造方法などを考慮して、また必要に応じて一食または一日あたりの有効成分量などを考慮して、適宜設定することができる。本発明のＦＢ比低減剤として、酵母マンナン調製物を用いる場合は、その酵母マンナン調製物の重量と、その酵母マンナン調製物中に含まれる酵母α−マンナンの割合（すなわち、酵母α−マンナンの含有率）とによって、有効成分としての酵母α−マンナンの含有量が本発明の作用効果を奏する範囲となるよう調節することができる。
【００４０】
例えば、本発明の食品組成物がサプリメントである場合は、ＦＢ比低減剤の含有量は、そこに含まれる酵母α−マンナンの含有量が、食品組成物（サプリメント）の全質量に対して、通常５％以上、好ましくは１０％以上となり、通常７５％以下とすることができる。本発明の食品組成物が飲料である場合は、ＦＢ比低減剤の含有量は、そこに含まれる酵母α−マンナンの含有量が、食品組成物（飲料）の全質量に対して、通常０．０４％以上、好ましくは０．１％以上となり、通常７．５％以下、好ましくは４％以下とすることができる。
【００４１】
本発明の食品組成物の、ＦＢ比低減剤以外の原料または成分は、従来の食品組成物と同様とすることができる。
【００４２】
例えば、サプリメントの形態をとる本発明の食品組成物は、ＦＢ比低減剤に加えて、一般的ないし公知のサプリメントが含有する各種の成分、例えば賦形剤、甘味料、着色料、香料およびその他の成分から選ばれる少なくとも１種を含有することができる。
【００４３】
飲料の形態をとる本発明の食品組成物は、ＦＢ比低減剤に加えて、一般的ないし公知の飲料が含有する各種の成分、例えば水（炭酸水）、コーヒー抽出物、茶葉抽出物、果汁、その他の植物原料抽出物、乳、豆乳、発酵乳、甘味料、酸味料、着色料および香料から選ばれる少なくとも１種を含有することができる。
【００４４】
このような本発明の食品組成物は、成分として本発明のＦＢ比低減剤を加える工程をさらに含むこと以外は、従来の食品組成物と同様の方法により製造することができる。
【００４５】
食品組成物は、保健機能食品（すなわち、栄養機能食品、特定保健用食品および機能性表示食品）として、また治療食（すなわち、治療の目的を果たすもの、又は、医師が食事箋を出し、それに従い栄養士等が作成した献立に基づいて調理されたもの。）、食事療法食、介護食などとして、製造することもできる。
【００４６】
食品組成物の一食分または一日あたりの摂取目安量（有効成分量）は、ＦＢ比を低減させる対象の年齢、体重、性別や、摂取前のＦＢ比その他の指標値などに応じて、また非臨床的または臨床的な試験結果等に基づいて、適宜設定することができる。食品組成物の摂取期間も適宜設定することができ、長期間に亘って繰り返し、また日常的に、摂取することが好ましい。本発明の一つの側面において、本発明の食品組成物は、そこに含まれる有効成分としての酵母α−マンナンの摂取量が、好ましくは０．１ｇ／日以上、より好ましくは０．２ｇ／日以上、さらに好ましくは０．３ｇ／日以上であり、好ましくは４ｇ／日以下、より好ましくは２．５ｇ／日以下、さらに好ましくは１．５ｇ／日以下となるよう摂取されるものである。
【００４７】
本発明の食品組成物の「ＦＢ比低減」という用途は、直接的にまたは間接的に表示することができる。直接的な表示の例は、製品自体、パッケージ、容器、ラベル、タグ等の有体物への記載であり、間接的な表示の例は、ウェブサイト、店頭、展示会、看板、掲示板、新聞、雑誌、テレビ、ラジオ、郵送物、電子メール等の場所または手段による、広告・宣伝活動である。本発明の食品組成物を機能性表示食品として製造する場合は、例えば「ＦＢ比を低減させる（改善する）」のように、機能性成分として含まれる酵母マンナンの作用効果に基づく機能性を表示することができる。
【００４８】
［本発明の他の側面］
本発明は一つの側面において、有効量の酵母マンナンを摂取させることを含む、ヒトおよびヒト以外の哺乳類（例えばマウス等の実験動物、またはペット）の腸内の、［ファーミキューテス門に属する細菌の占有率／バクテロイデス門に属する細菌の占有率］として定義される（広義の）ＦＢ比を低減させる方法を提供する。本発明は一つの側面において、有効量の酵母マンナンを摂取させることを含む、ヒトおよびヒト以外の哺乳類（例えばマウス等の実験動物、またはペット）の腸内の、［ファーミキューテス門に属する細菌のうちクロストリジウム綱に属する細菌およびエリシペロトリクス綱に属する細菌の合計の占有率／バクテロイデス門のうちバクテロイデス綱に属する細菌の占有率］として定義される（狭義の）ＦＢ比を低減させる方法を提供する。これらの「（広義または狭義の）ＦＢ比低減方法」の発明は、上述した「ＦＢ比低減剤」および「ＦＢ比低減用食品組成物」の発明から当業者であれば転換可能であり、本明細書に記載した「ＦＢ比低減剤」および「ＦＢ比低減用食品組成物」に関する事項を同様に適用することができる。
【００４９】
本発明は一つの側面において、ヒトおよびヒト以外の哺乳類（例えばマウス等の実験動物、またはペット）の腸内の、［ファーミキューテス門に属する細菌の占有率／バクテロイデス門に属する細菌の占有率］として定義される（広義の）ＦＢ比を低減させるための食品組成物の製造における酵母マンナンの使用を提供する。本発明は一つの側面において、ヒトおよびヒト以外の哺乳類（例えばマウス等の実験動物、またはペット）の腸内の、［ファーミキューテス門に属する細菌のうちクロストリジウム綱に属する細菌およびエリシペロトリクス綱に属する細菌の合計の占有率／バクテロイデス門のうちバクテロイデス綱に属する細菌の占有率］として定義される（狭義の）ＦＢ比を低減させるための食品組成物の製造における酵母マンナンの使用を提供する。このような「酵母マンナンの使用」は、上述した「ＦＢ比低減剤」および「ＦＢ比低減用食品組成物」の発明から当業者であれば転換可能であり、本明細書に記載した「ＦＢ比低減剤」および「ＦＢ比低減用食品組成物」に関する事項を同様に適用することができる。
【実施例】
【００５０】
（酵母α−マンナンの含有率の算出方法）
本実施例では、一般財団法人  日本食品分析センターに委託し、後述するようにして得られた酵母マンナン調製物Ｘ、ＡおよびＢそれぞれの検体（ＳＡ）中のマンノース、ならびに酵母マンナン調製物Ｘ、ＡおよびＢそれぞれを加水分解した検体（ＳＢ）中のマンノースを各々定量した。その定量結果に基づいて、酵母マンナン調製物Ｘ、ＡおよびＢ中の酵母α−マンナンの含有率を上述した算出方法により算出した。【００５１】
一般財団法人  日本食品分析センターにおける、検体（ＳＡ）および検体（ＳＢ）中のマンノースの定量方法の具体的な手順は次の通りである。検体（ＳＡ）および検体（ＳＢ）それぞれ０．６ｇを採取し、濃度７２％の硫酸に添加し、室温で１時間撹拌した。検体溶液の硫酸の濃度を４％に希釈した後、オートクレーブ（１２１℃）中で１時間を加熱した。検体溶液を室温に冷却後、中和して、水で２００ｍＬに定量した。定量後の検体溶液を濾紙で濾過し、濾液を水で５０倍に希釈し、希釈液をさらにメンブランフィルターで濾過した。この濾液を下記の操作条件による高速液体クロマトグラフ法で分析し、濾液中のマンノースの濃度を測定して、検体（ＳＡ）および検体（ＳＢ）中のマンノースを定量した。
機種：ＬＣ−２０ＡＤ（株式会社島津製作所）
検出器：蛍光分光光度計ＲＦ−２０Ａxs（株式会社島津製作所）
カラム：ＴＳＫｇｅｌ  ＳＵＧＡＲ  ＡＸＩ，φ４．６ｍｍ×１５０ｍｍ（東ソー株式会社）
カラム温度：６０℃
移動相：０．５ｍｏｌ／Ｌ  ホウ酸緩衝液（ｐＨ８．７）
流量：０．４ｍＬ／ｍｉｎ
注入量：２０μＬ
蛍光励起波長：３２０ｎｍ
蛍光測定波長：４３０ｎｍ
ポストカラム：反応液；１ｗ／ｖ％  Ｌ−アルギニン溶液
反応液流量；０．７ｍＬ／ｍｉｎ
反応温度；１５０℃【００５２】
［実施例１〜４及び比較例１〜３］
（酵母マンナン調製物Ｘ）
市販の酵母の細胞壁（商品名「酵母細胞壁」、アサヒグループ食品株式会社）１０ｋｇを蒸留水に懸濁し、水酸化ナトリウムを添加してｐＨ１１．０に調整した後、９０℃で１２時間煮沸した。遠心分離により上清を回収し、塩酸を添加してｐＨ５．５に調整した。凍結乾燥操作により２ｋｇの酵母マンナン調製物Ｘを得た。上述した方法により、酵母α−マンナンの含有率を算出したところ、５０％であった。【００５３】
実施例１〜４の「酵母マンナン（２％）」および「酵母マンナン（５％）」はそれぞれ、飼料（「ＡＩＮ９３Ｇ」、オリエンタル酵母工業社製）の質量に対して、２％および５％の質量の酵母マンナン調製物Ｘを混合したことを意味する。【００５４】
（セルロース及び難消化性デキストリン）
比較例１では、セルロース（「セオラスＵＦ−Ｆ７０２」、旭化成ケミカルズ社製）を使用した。また、比較例２では、難消化性デキストリン（「ファイバーソル２」、松谷化学社製）を使用した。【００５５】
比較例１および２の「セルロース（５％）」および「難消化性デキストリン（５％）」は、飼料（「ＡＩＮ９３Ｇ」、オリエンタル酵母工業製）の質量に対してセルロースまたは難消化性デキストリンを各々混合した重量比率を意味する。【００５６】
（実験１：通常食）
上述したように、酵母マンナン調製物Ｘ、セルロース、及び、難消化性デキストリンを飼料（「ＡＩＮ９３Ｇ」、オリエンタル酵母工業社製）に各々混合して各試験飼料を調製した。４週齢のオスのＩＣＲマウスを９匹ずつに分け、各試験飼料を６週間自由摂食させた。マウス糞便から抽出したＤＮＡを鋳型とし、下記の塩基配列を有するフォワードプライマー（配列番号１）およびリバースプライマー（配列番号２）を用いて、イルミナ（株）のプロトコール（下記資料１）に従ってライブラリーを調製し、MiSeq Reagent Kit version 2（300cycle）（イルミナ（株））およびMiSeqを用いて１６Ｓ  ｒＤＮＡ（１６Ｓ  ｒＲＮＡをコードするＤＮＡ）のＶ４領域のシーケンスを行なった。得られたシーケンスはQIIME v.1.8.0（下記資料２）、ＲおよびＳＰＳＳを用いて解析し、広義のＦＢ比および狭義のＦＢ比を算出した。
配列番号１：5'-TCGTCGGCAGCGTCAGATGTGTATAAGAGACAGGTGCCAGCMGCCGCGGTAA-3'
配列番号２：5'-GTCTCGTGGGCTCGGAGATGTGTATAAGAGACAGGACTACHVGGGTATCTAATCC-3'
資料１：16S Metagenomic Sequencing Library Preparation. (http://support.illumina.com/documents/documentation/chemistry_documentation/16s/16s-metagenomic-library-prep-guide-15044223-b.pdf).
資料２：QIIME allows analysis of high-throughput community sequencing data. Caporaso JG, Kuczynski J, Stombaugh J, et al. Nat Methods (2010) 7, 335.【００５７】
６週間にわたる試験期間中の摂餌量および体重に有意差はなかった。試験期間終了時の腸内細菌の総菌数（約1011copy数／g feces）は各群の間に有意差はなかった（図示せず）。【００５８】
各試験飼料を６週間摂取させた後の広義のＦＢ比とその算出に関係する腸内細菌の割合（総菌体を１００％とした率）を表１に示す。また、この表に対応する、バクテロイデス門、ファーミキューテス門、およびその他の腸内細菌の割合を表した円グラフを図１に示す。【００５９】
【表１】
2019142844.tif 000002
【００６０】
各試験飼料を６週間摂取させた後の狭義のＦＢ比とその算出に関係する腸内細菌の割合（総菌体を１００％とした率）を表２に示す。【００６１】
【表２】
2019142844.tif 000003
【００６２】
（実験２：高脂肪食）
６週齢のオスのＣ５７ＢＬ／６Ｊマウスを１０匹ずつに分け、高脂肪食ＨＦＤ（オリエンタル酵母工業製）で飼育しながら、酵母マンナン調製物Ｘを３００または１０００ｍｇ／ｋｇ／ｄａｙで経口（５日／週）にて６週間投与し、実験１と同様の手順で１６Ｓ  ｒＤＮＡの解析を行い、広義のＦＢ比および狭義のＦＢ比を算出した。【００６３】
酵母マンナン調製物Ｘを６週間摂取させた後の広義のＦＢ比とその算出に関係する腸内細菌の割合（総菌体を１００％とした率）を表３に示す。【００６４】
【表３】
2019142844.tif 000004
【００６５】
酵母マンナン調製物Ｘを６週間摂取させた後の狭義のＦＢ比とその算出に関係する腸内細菌の割合（総菌体を１００％とした率）を表４に示す。
【表４】
2019142844.tif 000005
【００６６】
［実施例５］
試験には、健康な男性２名と女性１名の糞便を検体として使用し、それぞれの検体を酵母マンナン調製物またはマンノースを添加した各培地で培養し、検体毎に酵母マンナン調製物添加区およびマンノース添加区のＦＢ比を対照区のＦＢ比と比較した。なお、実施例５におけるＦＢ比は、本発明における「広義のＦＢ比」に該当する。【００６７】
（酵母マンナン調製物Ａ）
市販の酵母の細胞壁（商品名「酵母細胞壁」、アサヒグループ食品株式会社）１０ｋｇを蒸留水に懸濁し、水酸化ナトリウムを添加してｐＨ１１．０に調整した後、９０℃で１２時間煮沸した。遠心分離により上清を回収し、塩酸を添加してｐＨ５．５に調整した。凍結乾燥操作により２ｋｇの酵母マンナン調製物Ａを得た。上述した方法で測定したところ、酵母α−マンナンの含有率は４７．６％であった。【００６８】
（酵母マンナン調製物Ｂ）
市販の試薬（商品名「マンナン  ｆｒｏｍ  Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ  ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ」、シグマアルドリッチ社製）を用いた。上述した方法で測定したところ、酵母α−マンナンの含有率は７８．８％であった。【００６９】
（マンノース）
市販の試薬（商品名「Ｄ（＋）−マンノース」、和光純薬社製）を用いた。【００７０】
（培養方法）
各検体に対して、培養は、Ｔａｋａｇｉら（Ｔａｋａｇｉ，  Ｒ  ｅｔ  ａｌ．  Ａ  Ｓｉｎｇｌｅ−Ｂａｔｃｈ  Ｆｅｒｍｅｎｔａｔｉｏｎ  Ｓｙｓｔｅｍ  ｔｏ  Ｓｉｍｕｌａｔｅ  Ｈｕｍａｎ  Ｃｏｌｏｎｉｃ  Ｍｉｃｒｏｂｉｏｔａ  ｆｏｒ  Ｈｉｇｈ−Ｔｈｒｏｕｇｈｐｕｔ  Ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｐｒｅｂｉｏｔｉｃｓ．  ＰＬｏＳ  Ｏｎｅ  １１  （２０１６））の方法を参考に実施した。【００７１】
培養に使用された各培地は、以下のように調製した。
ＧＡＭブイヨン（製品コード「０５４２２」、日水製薬株式会社）５９．０ｇに蒸留水を加えて８００ｍｌにメスアップした溶液をオートクレーブし、ＧＡＭ培地ベースとした。【００７２】
酵母マンナン調製物Ａ（酵母α−マンナンの含有率：４７．６％）を用いて０．２１０ｇ／ｌ酵母マンナン調製物Ａ溶液を調製した。本溶液は、酵母α−マンナン１．００％溶液と計算される。酵母マンナン調製物Ｂ（酵母α−マンナンの含有率：７８．８％）を用いて０．１２７ｇ／ｌ酵母マンナン調製物Ｂ溶液を調製した。本溶液は、酵母α−マンナン１．００％溶液と計算される。マンノース（マンノースの含有率：１００％）を用いて１０．０ｇ／ｌマンノース溶液（１．００％溶液）を調製した。【００７３】
上述した酵母マンナン調製物Ａ溶液、酵母マンナン調製物Ｂ溶液、マンノース溶液をそれぞれオートクレーブした。【００７４】
酵母マンナン調製物Ａ添加区の培地は、上述したＧＡＭ培地ベース８０．０ｍｌと上述した０．２１０ｇ／ｌ酵母マンナン調製物Ａ溶液２０ｍｌとを混合して調製した。酵母マンナン調製物Ｂ添加区の培地は、上述したＧＡＭ培地ベース８０．０ｍｌと上述した０．１２７ｇ／ｌ酵母マンナン調製物Ｂ溶液２０ｍｌを混合して調製した。酵母マンナン調製物Ａ添加区と酵母マンナン調製物Ｂ添加区の培地中の酵母α−マンナンの最終含有率は、ともに０．２０％と算出される。マンノース添加区の培地は、上述したＧＡＭ培地ベース８０．０ｍｌと１０．０ｇ／ｌマンノース溶液２０ｍｌを混合して調製した。対照区の培地は、上述したＧＡＭ培地ベース８０．０ｍｌと蒸留水２０ｍｌを混合して調製した。【００７５】
培養装置（「Ｂｉｏ  Ｊｒ．８」、ＡＢＬＥ社製）の各培養槽に上述した培地をそれぞれ入れた。検体として、カルチャースワブ（Ｂｅｃｔｏｎ  Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ）に採取したヒト糞便を、１ｍｌの０．１Ｍリン酸緩衝整理食塩水（ｐＨ６．５）で懸濁して、各培養槽に投入した。窒素と二酸化炭素の混合ガス（窒素：二酸化炭素＝４：１）を１５ｍｌ／ｍｉｎで通気しながら、３７℃で３０時間、培養した。【００７６】
（ＦＢ比の算出）
上述の培養後に採取した各培養液からＤＮＡを抽出して、各ＦＢ比を算出した。【００７７】
培養液からのＤＮＡの抽出は、Ｔａｋａｇｉら（Ｔａｋａｇｉ，  Ｒ  ｅｔ  ａｌ．  Ａ  Ｓｉｎｇｌｅ−Ｂａｔｃｈ  Ｆｅｒｍｅｎｔａｔｉｏｎ  Ｓｙｓｔｅｍ  ｔｏ  Ｓｉｍｕｌａｔｅ  Ｈｕｍａｎ  Ｃｏｌｏｎｉｃ  Ｍｉｃｒｏｂｉｏｔａ  ｆｏｒ  Ｈｉｇｈ−Ｔｈｒｏｕｇｈｐｕｔ  Ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｐｒｅｂｉｏｔｉｃｓ．  ＰＬｏＳ  Ｏｎｅ  １１  （２０１６））の方法に従って行った。培養液２００μｌに、Ｔｒｉｓ−ＥＤＴＡ（ＴＥ）飽和フェノール５００μｌ、溶菌Ｂｕｆｆｅｒ（１Ｍ  Ｔｒｉｓ  ｐＨ８．０，０．５Ｍ  ＥＤＴＡ）２５０μｌ、１０％  ＳＤＳ  ５０μｌ、ガラスビーズ（φ０．１ｍｍ）０．３ｇを添加し、ＦａｓｔＰｒｅｐ２４  （ＭＰ  Ｂｉｏｍｅｄｉｃａｌｓ）を用い、パワーレベル５．０で３０秒間縦方向に激しく振とうした。遠心分離により上清を回収しフェノール・クロロホルム・イソアミルアルコールと混合して遠心分離した水層をイソプロパノール沈殿によりＤＮＡを析出させた後に、７０％エタノールで洗浄、乾燥して、１００μｌのＴＥに溶解することで、培養液からのＤＮＡ抽出を行い、定量ＰＣＲの鋳型ＤＮＡとして使用した。【００７８】
培養液から抽出されたＤＮＡ中のファーミキューテス門に属する細菌、バクテロイデス門に属する細菌および真正細菌を以下の方法で検出し、真正細菌中に占めるファーミキューテス門に属する細菌の割合すなわち占有率を算出した。同様にして真正細菌中に占めるバクテロイデス門に属する細菌の割合すなわち占有率も算出した。【００７９】
ファーミキューテス門に属する細菌は、Ｇｒｅｇｏｒｉｓらの方法(Ｔｒｉｓｔａｎｏ  Ｂａｃｃｈｅｔｔｉ  Ｄｅ  Ｇｒｅｇｏｒｉｓ  ｅｔ  ａｌ．  Ｉｍｐｒｏｖｅｍｅｎｔ  ｏｆ  ｐｈｙｌｕｍ−ａｎｄ  ｃｌａｓｓ−ｓｐｅｃｉｆｉｃ  ｐｒｉｍｅｒｓ  ｆｏｒ  ｒｅａｌ−ｔｉｍｅ  ＰＣＲ  ｑｕａｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｂａｃｔｅｒｉａｌ  ｔａｘａ．  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ８６  （２０１１）  ３５１−３５６）のファーミキューテス門に属する細菌に特異的なプライマー（ｆｏｒｗａｒｄ；５’−ＴＧＡＡＡＣＴＹＡＡＡＧＧＡＡＴＴＧＡＣＧ−３’，  ｒｅｖｅｒｓｅ；５’−ＡＣＣＡＴＧＣＡＣＣＡＣＣＴＧＴＣ−３’）を用いたＰＣＲにより定量した。【００８０】
バクテロイデス門に属する細菌は、Ｇｒｅｇｏｒｉｓらの方法のバクテロイデス門に属する細菌に特異的なプライマー（ｆｏｒｗａｒｄ；５’−ＣＲＡＡＣＡＧＧＡＴＴＡＧＡＴＡＣＣＣＴ−３’，  ｒｅｖｅｒｓｅ；５’−ＧＧＴＡＡＧＧＴＴＣＣＴＣＧＣＧＴＡＴ−３’）  を用いたＰＣＲにより定量した。【００８１】
定量ＰＣＲ用試薬には、ＳｓｏＡｄｖａｎｃｅｄTM  Ｕｎｉｖｅｒｓａｌ  ＳＹＢＲ（登録商標）  Ｇｒｅｅｎ  Ｓｕｐｅｒｍｉｘ  (ＢＩＯ  ＲＡＤ)を使用し、ＰＣＲ反応および検出には、ＱｕａｎｔＳｔｕｄｉｏ３  Ｒｅａｌ−Ｔｉｍｅ  ＰＣＲ  Ｓｙｓｔｅｍｓ（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ  ＳＣＩＥＮＴＩＦＩＣ）を使用した。【００８２】
ファーミキューテス門に属する細菌とバクテロイデス門に属する細菌の定量ＰＣＲは、どちらも９５℃５秒の反応につづいて、９５℃１５秒、６１．５℃１５秒、７２℃２０秒を３０サイクル繰り返した後に、７２℃５秒反応させた。【００８３】
真正細菌は、Ｆｕｒｅｔらの方法（Ｆｕｒｅｔ  ＪＰ  ｅｔ  ａｌ．  Ｃｏｍｐａｒａｔｉｖｅ  ａｓｓｅｓｓｍｅｎｔ  ｏｆ  ｈｕｍａｎ  ａｎｄ  ｆａｒｍ  ａｎｉｍａｌ  ｆａｅｃａｌ  ｍｉｃｒｏｂｉｏｔａ  ｕｓｉｎｇ  ｒｅａｌ−ｔｉｍｅ  ｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅ  ＰＣＲ．ＦＥＭＳ  Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ  Ｅｃｏｌ．  ２００９  Ｊｕｎ；６８（３）：３５１−６２）の真正細菌に特異的なプライマー（ｆｏｒｗａｒｄ；５’−ＣＧＧＴＧＡＡＴＡＣＧＴＴＣＣＣＧＧ−３’，  ｒｅｖｅｒｓｅ；５’−ＴＡＣＧＧＣＴＡＣＣＴＴＧＴＴＡＣＧＡＣＴＴ−３’）を用いたＰＣＲにより定量した。【００８４】
定量ＰＣＲ用試薬には、ＳｓｏＡｄｖａｎｃｅｄTM  Ｕｎｉｖｅｒｓａｌ  ＳＹＢＲ（登録商標）  Ｇｒｅｅｎ  Ｓｕｐｅｒｍｉｘ  (ＢＩＯ  ＲＡＤ)を使用し、ＰＣＲ反応および検出には、ＱｕａｎｔＳｔｕｄｉｏ３  Ｒｅａｌ−Ｔｉｍｅ  ＰＣＲ  Ｓｙｓｔｅｍｓ（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ  ＳＣＩＥＮＴＩＦＩＣ）を使用した。【００８５】
ＰＣＲ反応は、９５℃２０秒、５６℃２０秒、７２℃３０秒を４０サイクル繰り返した。【００８６】
各培養液のＦＢ比は、「ＦＢ比＝（ファーミキューテス門に属する細菌の占有率）／（バクテロイデス門に属する細菌の占有率）」として算出した。そして、被験者毎に、対照区のＦＢ比を１として、酵母マンナン調製物添加区およびマンノース添加区のＦＢ比の相対値を算出した。各被験者のＦＢ比の相対値とその平均値を表５に示す。【００８７】
【表５】
2019142844.tif 000006
【図１】
2019142844.tif 000007
【図２】
2019142844.tif 000008
【配列表】
2019142844000001.app
【国際調査報告】
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2019142844.tif 000010
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