(57)【要約】【課題】  複数のテトラヒドロイソキノリン環が連結した構造を有する化合物をより少ない工程で簡便に合成することができる製造方法を提供する。【解決手段】    特定の構造を有する非天然型アルデヒド基質とチロシン誘導体を、非リボソーム依存型ペプチド合成酵素を用いて反応させることで、テトラヒドロイソキノリン環が連結した五環性骨格を有する非天然型中間体化合物をワンポットで迅速に合成できることを見出した。また、特定の構造を有する非天然型アルデヒド基質を用いることで、酵素反応への適応性を確保しつつ、中間体の骨格形成後の化学変換を自在に実施でき、簡便かつ高効率でサフラマイシン類及びその類縁体が得られることを見出した。【特許請求の範囲】
【請求項１】
以下の式（Ｉ）で表される化合物を製造する方法であって
【化１】
2019176732.tif 000055
（式中、Ｘは、−Ｃ（Ｒ３）ＮＨ−又は−Ｃ（Ｒ３）Ｏ−であり、；Ｙは、−Ｃ（＝Ｏ）Ｒ４−ＮＨ−、−Ｃ（＝Ｏ）Ｒ４−Ｏ−、−Ｓ（＝Ｏ）２Ｒ４−ＮＨ−、−Ｓ（＝Ｏ）２Ｒ４−Ｏ−、−Ｐ（＝Ｏ）（ＯＲ５）Ｒ４−ＮＨ−、又は−Ｐ（＝Ｏ）（ＯＲ５）Ｒ４−Ｏ−であり；Ｚは、−Ｃ（＝Ｏ）Ｒ６、−Ｃ（＝Ｏ）ＯＲ６、−Ｓ（＝Ｏ）２Ｒ６、又は−Ｐ（＝Ｏ）（ＯＲ５）Ｒ６であり；；Ｒ１及びＲ２は、それぞれ独立に、同一でも異なっていてもよい、Ｃ１−Ｃ１０アルキル基であり；Ｒ３は、水素原子又は置換されていてもよいＣ１−Ｃ５アルキル基であり；Ｒ４は、置換されていてもよいアルキレン基であり；Ｒ５は、置換されていてもよいＣ１−Ｃ５アルキル基であり；Ｒ６は、飽和又は不飽和の炭化水素鎖であり；Ｒａは、置換されていてもよいアルキル基である。）、
［ステップＡ］以下の式（ａ）で表される化合物と、
【化２】
2019176732.tif 000056
（式中、Ｒ１及びＲ２は、式（Ｉ）中と同じ意味を有する。）
以下の式（ｂ）で表される化合物とを、
【化３】
2019176732.tif 000057
（式中、Ｘ、Ｙ、及びＺは、式（Ｉ）中と同じ意味を有する。）
非リボソーム依存型ペプチド合成酵素の存在下で反応させることによって、以下の式（ＩＩ）で表される化合物を得る工程
【化４】
2019176732.tif 000058
（式中、Ｘ、Ｙ、Ｚ、Ｒ１及びＲ２は、式（Ｉ）中と同じ意味を有する。）；
［ステップＢ］前記式（ＩＩ）で表される化合物にシアン化物イオンを添加し、以下の式（ＩＩＩ）で表される化合物を得る工程
【化５】
2019176732.tif 000059
（式中、Ｘ、Ｙ、Ｚ、Ｒ１及びＲ２は、式（Ｉ）中と同じ意味を有する。）；及び
［ステップＣ］前記式（ＩＩＩ）で表される化合物にアルデヒド及び還元剤を添加することにより第二級アミン部位をＮ−アルキル化し、前記式（Ｉ）で表される化合物を得る工程
を含む、該製造方法。
【請求項２】
前記非リボソーム依存型ペプチド合成酵素が、サフラマイシンＡ生合成酵素ＳｆｍＣである、請求項１に記載の製造方法。
【請求項３】
前記ステップＡにおいて、ＡＴＰ、ＮＡＤＰＨ、Ｍｇ２＋、及びＭｎ２＋を添加することを含む、請求項１又は２に記載の製造方法。
【請求項４】
Ｒ１及びＲ２が、いずれもメチル基である、請求項１〜３のいずれか１に記載の製造方法。
【請求項５】
式（ｂ）で表される化合物が、以下の化合物よりなる群から選択される、請求項１〜４のいずれか１に記載の製造方法。
【化６】
2019176732.tif 000060
（式中、Ｚａは、Ｃ6−Ｃ２０アルキル基であり、Ｍｅはメチル基を表す。）
【請求項６】
以下の式（Ｉ）で表される中間体化合物から
【化７】
2019176732.tif 000061
（式中、Ｘは、−Ｃ（Ｒ３）ＮＨ−であり；Ｙは、−Ｃ（＝Ｏ）Ｒ４−ＮＨ−であり；Ｚは、−Ｃ（＝Ｏ）ＯＲ６であり；Ｒ１及びＲ２は、それぞれ独立に、同一でも異なっていてもよい、Ｃ１−Ｃ１０アルキル基であり；Ｒ３は、水素原子又は置換されていてもよいＣ１−Ｃ５アルキル基であり；Ｒ４は、置換されていてもよいアルキレン基であり；Ｒ６は、飽和又は不飽和の炭化水素鎖であり；Ｒａは、置換されていてもよいアルキル基である。）
以下の式（ＩＶ）で表される化合物を製造する方法であって
【化８】
2019176732.tif 000062
（式中、Ｘ、Ｙ、Ｒ１、Ｒ２及びＲａは、式（Ｉ）中と同じ意味を有し、Ａは、水素原子又は保護基である。）；
［ステップＤ］  遷移金属触媒存在下において前記式（Ｉ）で表される化合物のＺ部位をＡに変換することにより、以下の式（Ｖ）で表される化合物を得る工程
【化９】
2019176732.tif 000063
（式中、Ｘ、Ｙ、Ａ、Ｒ１、Ｒ２及びＲａは、式（ＩＶ）中と同じ意味を有する。）
［ステップＥ］  前記式（Ｖ）で表される化合物を遷移金属触媒存在下において酸化し、フェノールをキノンに変換することにより、前記式（ＩＶ）で表される化合物を得る工程
を含む該製造方法。
【請求項７】
Ｒ１、Ｒ２及びＲａが、いずれもメチル基であり；Ｒ３が、水素原子であり；Ｒ４が、−ＣＨ（ＣＨ３）−である、請求項６に記載の製造方法。
【請求項８】
ステップＤにおける遷移金属触媒が、パラジウム錯体である、請求項６又は７に記載の製造方法。
【請求項９】
ステップＥにおける遷移金属触媒が、コバルト錯体である、請求項６〜８のいずれか１に記載の製造方法。
【請求項１０】
以下の式（Ｉ）で表される中間体化合物から
【化１０】
2019176732.tif 000064
（式中、Ｘは、−Ｃ（Ｒ３）ＮＨ−であり；Ｙは、−Ｃ（＝Ｏ）Ｒ４−Ｏ−であり；Ｚは、−Ｃ（＝Ｏ）Ｒ６であり；Ｒ１及びＲ２は、それぞれ独立に、同一でも異なっていてもよい、Ｃ１−Ｃ１０アルキル基であり；Ｒ３は、水素原子又は置換されていてもよいＣ１−Ｃ５アルキル基であり；Ｒ４は、１−メチルメチレン基であり；Ｒ６は、飽和又は不飽和の炭化水素鎖であり；Ｒａは、置換されていてもよいアルキル基である。）
以下の式（ＶＩ）で表される化合物を製造する方法であって
【化１１】
2019176732.tif 000065
（式中、Ｘ、Ｒ１、Ｒ２及びＲａは、式（Ｉ）中と同じ意味を有する。）；
［ステップＦ］  前記式（Ｉ）で表される化合物を塩基性条件下で加水分解し、Ｙ部位の末端をＯＨ基に変換することにより、以下の式（ＶＩＩ）で表される化合物を得る工程
【化１２】
2019176732.tif 000066
（式中、Ｘ、Ｒ１、Ｒ２及びＲａは、式（Ｉ）中と同じ意味を有する。）
［ステップＧ］  前記式（ＶＩＩ）で表される化合物を遷移金属触媒存在下において酸化し、フェノールをキノンに変換することにより、以下の式（ＶＩＩＩ）で表される化合物を得る工程
【化１３】
2019176732.tif 000067
（式中、Ｘ、Ｒ１、Ｒ２及びＲａは、式（Ｉ）中と同じ意味を有する。）；及び
［ステップＨ］  前記（ＶＩＩＩ）で表される化合物をＤＭＳＯ酸化又は超原子価ヨウ素試薬を用いる酸化により、末端のＯＨ基をカルボニル基に変換することにより、前記式（ＶＩ）で表される化合物を得る工程
を含む該製造方法。
【請求項１１】
Ｒ１、Ｒ２及びＲａが、いずれもメチル基である、請求項１０に記載の製造方法。
【請求項１２】
ステップＧにおける遷移金属触媒が、コバルト錯体である、請求項１０又は１１に記載の製造方法。
【請求項１３】
以下の式（Ｉ）で表される化合物。
【化１４】
2019176732.tif 000068
（式中、Ｘは、−Ｃ（Ｒ３）ＮＨ−又は−Ｃ（Ｒ３）Ｏ−であり、；Ｙは、−Ｃ（＝Ｏ）Ｒ４−ＮＨ−、−Ｃ（＝Ｏ）Ｒ４−Ｏ−、−Ｓ（＝Ｏ）２Ｒ４−ＮＨ−、−Ｓ（＝Ｏ）２Ｒ４−Ｏ−、−Ｐ（＝Ｏ）（ＯＲ５）Ｒ４−ＮＨ−、又は−Ｐ（＝Ｏ）（ＯＲ５）Ｒ４−Ｏ−であり；Ｚは、−Ｃ（＝Ｏ）Ｒ６、−Ｃ（＝Ｏ）ＯＲ６、−Ｓ（＝Ｏ）２Ｒ６、又は−Ｐ（＝Ｏ）（ＯＲ５）Ｒ６であり；Ｒ１及びＲ２は、それぞれ独立に、同一でも異なっていてもよい、Ｃ１−Ｃ１０アルキル基であり；Ｒ３は、水素原子又は置換されていてもよいＣ１−Ｃ５アルキル基であり；Ｒ４は、置換されていてもよいアルキレン基であり；Ｒ５は、置換されていてもよいＣ１−Ｃ５アルキル基であり；Ｒ６は、飽和又は不飽和の炭化水素鎖であり；Ｒａは、置換されていてもよいアルキル基である。）
【請求項１４】
以下の化合物よりなる群から選択される、請求項１３に記載の化合物。
【化１５】
2019176732.tif 000069
（式中、Ｚａは、Ｃ６−Ｃ２０アルキル基であり、Ｍｅはメチル基を表す。）
【請求項１５】
以下の式（ＩＩ）で表される化合物。
【化１６】
2019176732.tif 000070
（式中、Ｘは、−Ｃ（Ｒ３）ＮＨ−又は−Ｃ（Ｒ３）Ｏ−であり、；Ｙは、−Ｃ（＝Ｏ）Ｒ４−ＮＨ−、−Ｃ（＝Ｏ）Ｒ４−Ｏ−、−Ｓ（＝Ｏ）２Ｒ４−ＮＨ−、−Ｓ（＝Ｏ）２Ｒ４−Ｏ−、−Ｐ（＝Ｏ）（ＯＲ５）Ｒ４−ＮＨ−、又は−Ｐ（＝Ｏ）（ＯＲ５）Ｒ４−Ｏ−であり；Ｚは、−Ｃ（＝Ｏ）Ｒ６、−Ｃ（＝Ｏ）ＯＲ６、−Ｓ（＝Ｏ）２Ｒ６、又は−Ｐ（＝Ｏ）（ＯＲ５）Ｒ６であり；Ｒ１及びＲ２は、それぞれ独立に、同一でも異なっていてもよい、Ｃ１−Ｃ１０アルキル基であり；Ｒ３は、水素原子又は置換されていてもよいＣ１−Ｃ５アルキル基であり；Ｒ４は、置換されていてもよいアルキレン基であり；Ｒ５は、置換されていてもよいＣ１−Ｃ５アルキル基であり；Ｒ６は、飽和又は不飽和の炭化水素鎖であり；Ｒａは、置換されていてもよいアルキル基である。）
【請求項１６】
以下の化合物よりなる群から選択される、請求項１５に記載の化合物。
【化１７】
2019176732.tif 000071
（式中、Ｚａは、Ｃ６−Ｃ２０アルキル基であり、Ｍｅはメチル基を表す。）
【請求項１７】
以下の式（ｂ）で表されるアルデヒド化合物。
【化１８】
2019176732.tif 000072
（式中、Ｘは、−Ｃ（Ｒ３）ＮＨ−又は−Ｃ（Ｒ３）Ｏ−であり、；Ｙは、−Ｃ（＝Ｏ）Ｒ４−ＮＨ−、−Ｃ（＝Ｏ）Ｒ４−Ｏ−、−Ｓ（＝Ｏ）２Ｒ４−ＮＨ−、−Ｓ（＝Ｏ）２Ｒ４−Ｏ−、−Ｐ（＝Ｏ）（ＯＲ５）Ｒ４−ＮＨ−、又は−Ｐ（＝Ｏ）（ＯＲ５）Ｒ４−Ｏ−であり；Ｚは、−Ｃ（＝Ｏ）Ｒ６、−Ｃ（＝Ｏ）ＯＲ６、−Ｓ（＝Ｏ）２Ｒ６、又は−Ｐ（＝Ｏ）（ＯＲ５）Ｒ６であり；Ｒ３は、水素原子又は置換されていてもよいＣ１−Ｃ５アルキル基であり；Ｒ４は、置換されていてもよいアルキレン基であり；Ｒ５は、置換されていてもよいＣ１−Ｃ５アルキル基であり；Ｒ６は、飽和又は不飽和の炭化水素鎖である。）
【請求項１８】
以下の化合物よりなる群から選択される、請求項１７に記載のアルデヒド化合物。
【化１９】
2019176732.tif 000073
（式中、Ｚａは、Ｃ６−Ｃ２０アルキル基であり、Ｍｅはメチル基を表す。）
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
複数のテトラヒドロイソキノリン環が連結した構造を有する化合物の製造方法、特にサフラマイシン類及びその類縁体の製造方法に関する。また、本発明は、当該化合物を合成するための中間体化合物にも関する。
【背景技術】
【０００２】
サフラマイシン類に代表される抗腫瘍性アルカロイド群は、テトラヒドロイソキノリン（ＴＨＩＱ）環が複数連結した複雑な五環性骨格を有する化合物である。例えば、サフラマイシン類であるサフラマイシンＡ（化合物１）及びサフラマイシンＹ３（化合物２）は以下に示す構造を有している。その他にも同様の五環性母骨格を共有する天然物群として、ジョルナマイシンＡ、レニエラマイシンＭ、エクテナサイジン７４３（化合物３〜５）など、数多くの類縁体が報告されている。化合物１〜４は、二つのＴＨＩＱ環で構成され、アミノニトリルから生じるイミニウムカチオンでＤＮＡのグアニン塩基をアルキル化する機能を有している。また、核酸アルキル化部位とタンパク質相互作用部位を併せ持つ化合物５は制ガン薬（「トラベクテジン」、「ヨンデリス」）として臨床応用がなされている。
【化１】
2019176732.tif 000002
【０００３】
このような特異な構造を持ち、優れた制ガン作用を発現するテトラヒドロイソキノリンアルカロイド化合物群については、種々の全合成研究が活発に展開されてきた（非特許文献1及び２）。また、極めて複雑な多環性構造の制ガン薬である上記エクテナサイジン７４３（化合物５）は、培養で得られるシアノサフラシン（化合物６）からの多段階半合成 (２１工程) で供給されている（非特許文献３）。しかし、従来報告されているこれらの合成工程は、出発原料が複雑であり、また、反応を行う度に生成物を分離精製する必要があるため、多段階の合成ステップを要するという生産効率の問題があった。【０００４】
一方、これまで、発明者らは、サフラマイシンＡの生合成を触媒する非リボソーム依存型ペプチド合成酵素（ＮＲＰＳ）であるＳｆｍＣモジュールタンパク質が、元来の機能であるぺプチド形成を促進せず、長鎖脂肪酸アルデヒドとアミノ酸との間でのイミン形成及びその後のＰｉｃｔｅｔ−Ｓｐｅｎｇｌｅｒ （ＰＳ） 型環化を触媒することで、ＴＨＩＱ環を含む五環性骨格を形成させる特異な特性を有する酵素であることを報告している（非特許文献４）。しかしながら、他の官能基が分子内に多数存在する状況で、かかる酵素反応に必須の長鎖脂肪酸部分を選択的に除去することは極めて困難であった。そのため、酵素反応を利用して五環性骨格を形成させた後に、目的とするサフラマイシン類や化学修飾による新規類縁体の化学合成には制限があった。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【０００５】
【非特許文献１】Fukuyamaら, J. Am. Chem. Soc., 1990, 112, 3712
【非特許文献２】Myersら, J. Am. Chem. Soc., 1999, 121, 10828
【非特許文献３】Manzanaresら, Org. Lett., 2000, 2, 2545
【非特許文献４】Koketsu, K.; Watanabe, K.; Suda, H.; Oguri, H.; Oikawa, H., Nat. Chem. Biol., 2010, 6, 408
【非特許文献５】Tanifuji, R.; Oguri, H.; Koketsu, K.; Yoshinaga, Y.; Minami, A.; Oikawa, H. Tetrahedron Lett. 2016, 57, 623.
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
このような背景から、本発明は、複数のテトラヒドロイソキノリン環が連結した構造を有する化合物をより少ない工程で簡便に合成することができる製造方法を提供することを課題とする。また、天然のテトラヒドロイソキノリン環含有アルカロイド群以外の新規誘導体の合成をも可能とする化学修飾可能な中間体を提供することも課題とする。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
本発明者らは、上記課題を解決するべく鋭意検討を行った結果、生合成経路には存在しない特定の構造を有する非天然型アルデヒド基質とチロシン誘導体を、非リボソーム依存型ペプチド合成酵素を用いて反応させることで、テトラヒドロイソキノリン環が連結した五環性骨格を有する非天然型中間体化合物をワンポットで迅速に合成できることを見出した。また、特定の構造を有する非天然型アルデヒド基質を用いることで、酵素反応への適応性を確保しつつ、中間体の骨格形成後の化学変換を自在に実施でき、簡便かつ高効率でサフラマイシン類及びその類縁体が得られることを見出した。これら知見に基づき、本発明を完成するに至った。【０００８】
すなわち、本発明は、一態様において、
＜１＞  以下の式（Ｉ）で表される化合物を製造する方法であって
【化２】
2019176732.tif 000003
（式中、Ｘは、−Ｃ（Ｒ３）ＮＨ−又は−Ｃ（Ｒ３）Ｏ−であり、；Ｙは、−Ｃ（＝Ｏ）Ｒ４−ＮＨ−、−Ｃ（＝Ｏ）Ｒ４−Ｏ−、−Ｓ（＝Ｏ）２Ｒ４−ＮＨ−、−Ｓ（＝Ｏ）２Ｒ４−Ｏ−、−Ｐ（＝Ｏ）（ＯＲ５）Ｒ４−ＮＨ−、又は−Ｐ（＝Ｏ）（ＯＲ５）Ｒ４−Ｏ−であり；Ｚは、−Ｃ（＝Ｏ）Ｒ６、−Ｃ（＝Ｏ）ＯＲ６、−Ｓ（＝Ｏ）２Ｒ６、又は−Ｐ（＝Ｏ）（ＯＲ５）Ｒ６であり；Ｒ１及びＲ２は、それぞれ独立に、同一でも異なっていてもよい、Ｃ１−Ｃ１０アルキル基であり；Ｒ３は、水素原子又は置換されていてもよいＣ１−Ｃ５アルキル基であり；Ｒ４は、置換されていてもよいアルキレン基であり；Ｒ５は、置換されていてもよいＣ１−Ｃ５アルキル基であり；Ｒ６は、飽和又は不飽和の炭化水素鎖であり；Ｒａは、置換されていてもよいアルキル基である。）、
［ステップＡ］以下の式（ａ）で表される化合物と、
【化３】
2019176732.tif 000004
（式中、Ｒ１及びＲ２は、式（Ｉ）中と同じ意味を有する。）
以下の式（ｂ）で表される化合物とを、
【化４】
2019176732.tif 000005
（式中、Ｘ、Ｙ、及びＺは、式（Ｉ）中と同じ意味を有する。）
非リボソーム依存型ペプチド合成酵素の存在下で反応させることによって、以下の式（ＩＩ）で表される化合物を得る工程
【化５】
2019176732.tif 000006
（式中、Ｘ、Ｙ、Ｚ、Ｒ１及びＲ２は、式（Ｉ）中と同じ意味を有する。）；
［ステップＢ］前記式（ＩＩ）で表される化合物にシアン化物イオンを添加し、以下の式（ＩＩＩ）で表される化合物を得る工程
【化６】
2019176732.tif 000007
（式中、Ｘ、Ｙ、Ｚ、Ｒ１及びＲ２は、式（Ｉ）中と同じ意味を有する。）；及び
［ステップＣ］前記式（ＩＩＩ）で表される化合物にアルデヒド及び還元剤を添加することにより第二級アミン部位をＮ−アルキル化し、前記式（Ｉ）で表される化合物を得る工程を含む、該製造方法；
＜２＞前記非リボソーム依存型ペプチド合成酵素が、サフラマイシンＡ生合成酵素ＳｆｍＣである、上記＜１＞に記載の製造方法；
＜３＞前記ステップＡにおいて、ＡＴＰ、ＮＡＤＰＨ、Ｍｇ２＋、及びＭｎ２＋を添加することを含む、上記＜１＞又は＜２＞に記載の製造方法；
＜４＞Ｒ１及びＲ２が、いずれもメチル基である、上記＜１＞〜＜３＞のいずれか１に記載の製造方法；及び
＜５＞式（ｂ）で表される化合物が、以下の化合物よりなる群から選択される、上記＜１＞〜＜４＞のいずれか１に記載の製造方法；
【化７】
2019176732.tif 000008
（式中、Ｚａは、Ｃ6−Ｃ２０アルキル基であり、Ｍｅはメチル基を表す。）
を提供するものである。【０００９】
一つの好ましい態様において、本発明は、
＜６＞以下の式（Ｉ）で表される中間体化合物から
【化８】
2019176732.tif 000009
（式中、Ｘは、−Ｃ（Ｒ３）ＮＨ−であり；Ｙは、−Ｃ（＝Ｏ）Ｒ４−ＮＨ−であり；Ｚは、−Ｃ（＝Ｏ）ＯＲ６であり；Ｒ１及びＲ２は、それぞれ独立に、同一でも異なっていてもよい、Ｃ１−Ｃ１０アルキル基であり；Ｒ３は、水素原子又は置換されていてもよいＣ１−Ｃ５アルキル基であり；Ｒ４は、置換されていてもよいアルキレン基であり；Ｒ６は、飽和又は不飽和の炭化水素鎖であり；Ｒａは、置換されていてもよいアルキル基である。）
以下の式（ＩＶ）で表される化合物を製造する方法であって
【化９】
2019176732.tif 000010
（式中、Ｘ、Ｙ、Ｒ１、Ｒ２及びＲａは、式（Ｉ）中と同じ意味を有し、Ａは、水素原子又は保護基である。）；
［ステップＤ］  遷移金属触媒存在下において前記式（Ｉ）で表される化合物のＺ部位をＡに変換することにより、以下の式（Ｖ）で表される化合物を得る工程
【化１０】
2019176732.tif 000011
（式中、Ｘ、Ｙ、Ａ、Ｒ１、Ｒ２及びＲａは、式（ＩＶ）中と同じ意味を有する。）
［ステップＥ］  前記式（Ｖ）で表される化合物を遷移金属触媒存在下において酸化し、フェノールをキノンに変換することにより、前記式（ＩＶ）で表される化合物を得る工程を含む該製造方法；
＜７＞Ｒ１、Ｒ２及びＲａが、いずれもメチル基であり；Ｒ３が、水素原子であり；Ｒ４が、−ＣＨ（ＣＨ３）−である、上記＜６＞に記載の製造方法；
＜８＞ステップＤにおける遷移金属触媒が、パラジウム錯体である、上記＜６＞又は＜７＞に記載の製造方法；及び
＜９＞ステップＥにおける遷移金属触媒が、コバルト錯体である、上記＜６＞〜＜８＞のいずれか１に記載の製造方法
を提供するものである。【００１０】
別の好ましい態様において、本発明は、
＜１０＞以下の式（Ｉ）で表される中間体化合物から
【化１１】
2019176732.tif 000012
（式中、Ｘは、−Ｃ（Ｒ３）ＮＨ−であり；Ｙは、−Ｃ（＝Ｏ）Ｒ４−Ｏ−であり；Ｚは、−Ｃ（＝Ｏ）Ｒ６であり；Ｒ１及びＲ２は、それぞれ独立に、同一でも異なっていてもよい、Ｃ１−Ｃ１０アルキル基であり；Ｒ３は、水素原子又は置換されていてもよいＣ１−Ｃ５アルキル基であり；Ｒ４は、１−メチルメチレン基であり；Ｒ６は、飽和又は不飽和の炭化水素鎖であり；Ｒａは、置換されていてもよいアルキル基である。）
以下の式（ＶＩ）で表される化合物を製造する方法であって
【化１２】
2019176732.tif 000013
（式中、Ｘ、Ｒ１、Ｒ２及びＲａは、式（Ｉ）中と同じ意味を有する。）；
［ステップＦ］  前記式（Ｉ）で表される化合物を塩基性条件下で加水分解し、Ｙ部位の末端をＯＨ基に変換することにより、以下の式（ＶＩＩ）で表される化合物を得る工程
【化１３】
2019176732.tif 000014
（式中、Ｘ、Ｒ１、Ｒ２及びＲａは、式（Ｉ）中と同じ意味を有する。）
［ステップＧ］  前記式（ＶＩＩ）で表される化合物を遷移金属触媒存在下において酸化し、フェノールをキノンに変換することにより、以下の式（ＶＩＩＩ）で表される化合物を得る工程
【化１４】
2019176732.tif 000015
（式中、Ｘ、Ｒ１、Ｒ２及びＲａは、式（Ｉ）中と同じ意味を有する。）；及び
［ステップＨ］  前記（ＶＩＩＩ）で表される化合物をＤＭＳＯ酸化又は超原子価ヨウ素試薬を用いる酸化により、末端のＯＨ基をカルボニル基に変換することにより、前記式（ＶＩ）で表される化合物を得る工程
を含む該製造方法；
＜１１＞Ｒ１、Ｒ２及びＲａが、いずれもメチル基であり；Ｒ３が、−ＣＨ（ＣＨ３）−である、上記＜１０＞に記載の製造方法；及び
＜１２＞ステップＧにおける遷移金属触媒が、コバルト錯体である、上記＜１０＞又は＜１１＞に記載の製造方法
を提供するものである。【００１１】
一つの好ましい態様において、本発明は以下の中間体化合物にも関する。具体的には、
＜１３＞以下の式（Ｉ）で表される化合物；
【化１５】
2019176732.tif 000016
（式中、Ｘは、−Ｃ（Ｒ３）ＮＨ−又は−Ｃ（Ｒ３）Ｏ−であり、；Ｙは、−Ｃ（＝Ｏ）Ｒ４−ＮＨ−、−Ｃ（＝Ｏ）Ｒ４−Ｏ−、−Ｓ（＝Ｏ）２Ｒ４−ＮＨ−、−Ｓ（＝Ｏ）２Ｒ４−Ｏ−、−Ｐ（＝Ｏ）（ＯＲ５）Ｒ４−ＮＨ−、又は−Ｐ（＝Ｏ）（ＯＲ５）Ｒ４−Ｏ−であり；Ｚは、−Ｃ（＝Ｏ）Ｒ６、−Ｃ（＝Ｏ）ＯＲ６、−Ｓ（＝Ｏ）２Ｒ６、又は−Ｐ（＝Ｏ）（ＯＲ５）Ｒ６であり；Ｒ１及びＲ２は、それぞれ独立に、同一でも異なっていてもよい、Ｃ１−Ｃ１０アルキル基であり；Ｒ３は、水素原子又は置換されていてもよいＣ１−Ｃ５アルキル基であり；Ｒ４は、置換されていてもよいアルキレン基であり；Ｒ５は、置換されていてもよいＣ１−Ｃ５アルキル基であり；Ｒ６は、飽和又は不飽和の炭化水素鎖であり；Ｒａは、置換されていてもよいアルキル基である。）
＜１４＞以下の化合物よりなる群から選択される、上記＜１３＞に記載の化合物；
【化１６】
2019176732.tif 000017
（式中、Ｚａは、Ｃ６−Ｃ２０アルキル基であり、Ｍｅはメチル基を表す。）
＜１５＞以下の式（ＩＩ）で表される化合物；
【化１７】
2019176732.tif 000018
（式中、Ｘは、−Ｃ（Ｒ３）ＮＨ−又は−Ｃ（Ｒ３）Ｏ−であり、；Ｙは、−Ｃ（＝Ｏ）Ｒ４−ＮＨ−、−Ｃ（＝Ｏ）Ｒ４−Ｏ−、−Ｓ（＝Ｏ）２Ｒ４−ＮＨ−、−Ｓ（＝Ｏ）２Ｒ４−Ｏ−、−Ｐ（＝Ｏ）（ＯＲ５）Ｒ４−ＮＨ−、又は−Ｐ（＝Ｏ）（ＯＲ５）Ｒ４−Ｏ−であり；Ｚは、−Ｃ（＝Ｏ）Ｒ６、−Ｃ（＝Ｏ）ＯＲ６、−Ｓ（＝Ｏ）２Ｒ６、又は−Ｐ（＝Ｏ）（ＯＲ５）Ｒ６であり；Ｒ１及びＲ２は、それぞれ独立に、同一でも異なっていてもよい、Ｃ１−Ｃ１０アルキル基であり；Ｒ３は、水素原子又は置換されていてもよいＣ１−Ｃ５アルキル基であり；Ｒ４は、置換されていてもよいアルキレン基であり；Ｒ５は、置換されていてもよいＣ１−Ｃ５アルキル基であり；Ｒ６は、飽和又は不飽和の炭化水素鎖であり；Ｒａは、置換されていてもよいアルキル基である。）
＜１６＞以下の構造を有する、上記＜１５＞に記載の化合物；
【化１８】
2019176732.tif 000019
（式中、Ｚａは、Ｃ６−Ｃ２０アルキル基であり、Ｍｅはメチル基を表す。）
＜１７＞以下の式（ｂ）で表されるアルデヒド化合物；
【化１９】
2019176732.tif 000020
（式中、Ｘは、−Ｃ（Ｒ３）ＮＨ−又は−Ｃ（Ｒ３）Ｏ−であり、；Ｙは、−Ｃ（＝Ｏ）Ｒ４−ＮＨ−、−Ｃ（＝Ｏ）Ｒ４−Ｏ−、−Ｓ（＝Ｏ）２Ｒ４−ＮＨ−、−Ｓ（＝Ｏ）２Ｒ４−Ｏ−、−Ｐ（＝Ｏ）（ＯＲ５）Ｒ４−ＮＨ−、又は−Ｐ（＝Ｏ）（ＯＲ５）Ｒ４−Ｏ−であり；Ｚは、−Ｃ（＝Ｏ）Ｒ６、−Ｃ（＝Ｏ）ＯＲ６、−Ｓ（＝Ｏ）２Ｒ６、又は−Ｐ（＝Ｏ）（ＯＲ５）Ｒ６であり；Ｒ３は、水素原子又は置換されていてもよいＣ１−Ｃ５アルキル基であり；Ｒ４は、置換されていてもよいアルキレン基であり；Ｒ５は、置換されていてもよいＣ１−Ｃ５アルキル基であり；Ｒ６は、飽和又は不飽和の炭化水素鎖である。）
＜１８＞以下の化合物よりなる群から選択される、上記＜１７＞に記載のアルデヒド化合物。
【化２０】
2019176732.tif 000021
（式中、Ｚａは、Ｃ６−Ｃ２０アルキル基であり、Ｍｅはメチル基を表す。）
を提供するものである。
【発明の効果】
【００１２】
本発明の製造方法によれば、テトラヒドロイソキノリン環が連結した五環性骨格を有する非天然型中間体化合物をワンポットで迅速に合成することができる。かかる中間体化合物を経る合成スキームを用いることで、五環性骨格形成後に、他の官能基が多数存在する状況においても末端の長鎖脂肪酸部分を選択的に除去でき、従来の合成手法に比して短工程で効率的にサフラマイシン類及びその類縁体を得ることができるという優れた効果を奏するものである。【００１３】
また、本発明の中間体化合物は、上述のように従来の酵素触媒反応では難しかった長鎖脂肪酸部分の選択的な除去が可能であるのみならず、中間体の骨格形成後に任意の置換基を導入し化学変換を自在に実施できるため、天然のテトラヒドロイソキノリン環含有アルカロイド群以外の新規誘導体の合成への応用が可能となる。さらに、最終目的物の活性発現に関与する五環性骨格両端のベンゼン環／キノン環の作り分けが可能であるという利点も有する。
【発明を実施するための形態】
【００１４】
以下、本発明の実施形態について説明する。本発明の範囲はこれらの説明に拘束されることはなく、以下の例示以外についても、本発明の趣旨を損なわない範囲で適宜変更し実施することができる。
【００１５】
１．定義
本明細書中において、「アルキル又はアルキル基」は直鎖状、分枝鎖状、環状、又はそれらの組み合わせからなる脂肪族炭化水素基のいずれであってもよい。アルキル基の炭素数は特に限定されないが、例えば、炭素数１〜２０個（Ｃ１〜２０）、炭素数１〜１５個（Ｃ１〜１５）、炭素数１〜１０個（Ｃ１〜１０）である。本明細書において、アルキル基は任意の置換基を1個以上有していてもよい。例えば、Ｃ１〜８アルキルには、メチル、エチル、ｎ−プロピル、イソプロピル、ｎ−ブチル、イソブチル、ｓｅｃ−ブチル、ｔｅｒｔ−ブチル、ｎ−ペンチル、イソペンチル、ｎｅｏ−ペンチル、ｎ−ヘキシル、イソヘキシル、ｎ−ヘプチル、ｎ−オクチル等が含まれる。該置換基としては、例えば、アルコキシ基、ハロゲン原子（フッ素原子、塩素原子、臭素原子、又はヨウ素原子のいずれであってもよい）、アミノ基、モノ若しくはジ置換アミノ基、置換シリル基、又はアシルなどを挙げることができるが、これらに限定されることはない。アルキル基が２個以上の置換基を有する場合には、それらは同一でも異なっていてもよい。アルキル部分を含む他の置換基（例えばアルコシ基、アリールアルキル基など）のアルキル部分についても同様である。
【００１６】
本明細書中において、「アルキレン」とは、直鎖状または分枝状の飽和炭化水素からなる二価の基であり、例えば、メチレン、１−メチルメチレン、１，１−ジメチルメチレン、エチレン、１−メチルエチレン、１−エチルエチレン、１，１−ジメチルエチレン、１，２−ジメチルエチレン、１，１−ジエチルエチレン、１，２−ジエチルエチレン、１−エチル−２−メチルエチレン、トリメチレン、１−メチルトリメチレン、２−メチルトリメチレン、１，１−ジメチルトリメチレン、１，２−ジメチルトリメチレン、２，２−ジメチルトリメチレン、１−エチルトリメチレン、２−エチルトリメチレン、１，１−ジエチルトリメチレン、１，２−ジエチルトリメチレン、２，２−ジエチルトリメチレン、２−エチル−２−メチルトリメチレン、テトラメチレン、１−メチルテトラメチレン、２−メチルテトラメチレン、１，１−ジメチルテトラメチレン、１，２−ジメチルテトラメチレン、２，２−ジメチルテトラメチレン、２，２−ジ−ｎ−プロピルトリメチレン等が挙げられる。
【００１７】
本明細書中において、ある官能基について「置換されていてもよい」と定義されている場合には、置換基の種類、置換位置、及び置換基の個数は特に限定されず、２個以上の置換基を有する場合には、それらは同一でも異なっていてもよい。置換基としては、例えば、アルキル基、アルコキシ基、水酸基、カルボキシル基、ハロゲン原子、スルホ基、アミノ基、アルコキシカルボニル基、オキソ基などを挙げることができるが、これらに限定されることはない。これらの置換基にはさらに置換基が存在していてもよい。このような例として、例えば、ハロゲン化アルキル基などを挙げることができるが、これらに限定されることはない。
【００１８】
本明細書中において、「アシルまたはアシル基」は、脂肪族アシル基又は芳香族アシル基のいずれであってもよく、芳香族基を置換基として有する脂肪族アシル基であってもよい。アシル基は１個又は２個以上のヘテロ原子を含んでいてもよい。例えば、アシル基としてアルキルカルボニル基（アセチル基など）、アルキルオキシカルボニル基（アセトキシカルボニル基など）、アリールカルボニル基（ベンゾイル基など）、アリールオキシカルボニル基（フェニルオキシカルボニル基など）、アラルキルカルボニル基（ベンジルカルボニル基など）、アルキルチオカルボニル基（メチルチオカルボニル基など）、アルキルアミノカルボニル基（メチルアミノカルボニル基など）、アリールチオカルボニル基（フェニルチオカルボニル基など）、又はアリールアミノカルボニル基（フェニルアミノカルボニル基など）などのアシル基を挙げることができるが、これらに限定されることはない。これらのアシル基は任意の置換基を１個以上有していてもよい。該置換基としては、例えば、アルコキシ基、ハロゲン原子、アミノ基、モノ若しくはジ置換アミノ基、置換シリル基、又はアシル基などを挙げることができるが、これらに限定されることはない。アシル基が２個以上の置換基を有する場合には、それらは同一でも異なっていてもよい。
【００１９】
本明細書中において、「アリール又はアリール基」は単環式又は縮合多環式の芳香族炭化水素基のいずれであってもよく、環構成原子としてヘテロ原子（例えば、酸素原子、窒素原子、又は硫黄原子など）を１個以上含んでいてもよい。この場合、これを「ヘテロアリール」または「ヘテロ芳香族」と呼ぶ場合もある。アリールが単環および縮合環のいずれである場合も、すべての可能な位置で結合しうる。本明細書において、アリール基はその環上に任意の置換基を１個以上有していてもよい。該置換基としては、例えば、アルコキシ基、ハロゲン原子、アミノ基、モノ若しくはジ置換アミノ基、置換シリル基、又はアシルなどを挙げることができるが、これらに限定されることはない。アリール基が２個以上の置換基を有する場合には、それらは同一でも異なっていてもよい。アリール部分を含む他の置換基（例えばアリールオキシ基やアリールアルキル基など）のアリール部分についても同様である。
【００２０】
本明細書中において、「アルコキシ基」とは、前記アルキル基が酸素原子に結合した構造であり、例えば直鎖状、分枝状、環状又はそれらの組み合わせである飽和アルコキシ基が挙げられる。例えば、メトキシ基、エトキシ基、ｎ−プロポキシ基、イソプロポキシ基、シクロプロポキシ基、ｎ−ブトキシ基、イソブトキシ基、ｓ−ブトキシ基、ｔ−ブトキシ基、シクロブトキシ基、シクロプロピルメトキシ基、ｎ−ペンチルオキシ基、シクロペンチルオキシ基、シクロプロピルエチルオキシ基、シクロブチルメチルオキシ基、ｎ−ヘキシルオキシ基、シクロヘキシルオキシ基、シクロプロピルプロピルオキシ基、シクロブチルエチルオキシ基又はシクロペンチルメチルオキシ基等が好適な例として挙げられる。
【００２１】
本明細書中において用いられる「アミド」とは、ＲＮＲ’ＣＯ−（Ｒ＝アルキルの場合、アルキルアミノカルボニル−）およびＲＣＯＮＲ’−（Ｒ＝アルキルの場合、アルキルカルボニルアミノ−）の両方を含む。
【００２２】
本明細書中において用いられる「エステル」とは、ＲＯＣＯ−（Ｒ＝アルキルの場合、アルコキシカルボニル−）およびＲＣＯＯ−（Ｒ＝アルキルの場合、アルキルカルボニルオキシ−）の両方を含む。
【００２３】
本明細書中において、「環構造」という用語は、二つの置換基の組み合わせによって形成される場合、複素環または炭素環を意味し、そのような環は飽和、不飽和、または芳香族であることができる。従って、上記において定義した、シクロアルキル、シクロアルケニル、アリール、及びヘテロアリールを含むものである。
【００２４】
本明細書中において、「フェノール性ＯＨ基又はフェノール性水酸基」とは、ベンゼン環上の任意の位置に結合したＯＨ基を意味する。
【００２５】
本明細書中において、特定の置換基は、別の置換基と環構造を形成することができ、そのような置換基同士が結合する場合、当業者であれば、特定の置換、例えば水素への結合が形成されることを理解できる。従って、特定の置換基が共に環構造を形成すると記載されている場合、当業者であれば、当該環構造は通常の化学反応によって形成することができ、また容易に生成することを理解できる。かかる環構造およびそれらの形成過程はいずれも、当業者の認識範囲内である。また、当該ヘテロ環構造は、環上に任意の置換基を有していてもよい。
【００２６】
２．式（Ｉ）の中間体化合物の製造方法
本発明は、１の態様において、以下の式（Ｉ）で表される中間体化合物の製造方法に関する。
【化１８】
2019176732.tif 000022
【００２７】
式（Ｉ）で表される中間体化合物は、テトラヒドロイソキノリン（ＴＨＩＱ）環が二つ連結した五環性骨格を有している。分子中のＸ−Ｙ−Ｚ部分は、後述のステップＡにおける酵素反応を進行させるために必要な長鎖アルキルを含む側鎖である。サフラマイシンＹ３やサフラマイシンＡ等のサフラマイシン類は、上記五環性骨格を共通の骨格として有するため、最終的にこのＸ−Ｙ−Ｚにおける長鎖アルキル部分を切断・除去することで目的とするサフラマイシン類等が得られる。したがって、Ｘ及びＹのリンカー部分を当該目的物の構造に併せて選択することで所望の目的物を得ることができる。
【００２８】
式中、Ｘは、−Ｃ（Ｒ３）ＮＨ−又は−Ｃ（Ｒ３）Ｏ−であり；Ｙは、−Ｃ（＝Ｏ）Ｒ４−ＮＨ−、−Ｃ（＝Ｏ）Ｒ４−Ｏ−、−Ｓ（＝Ｏ）２Ｒ４−ＮＨ−、−Ｓ（＝Ｏ）２Ｒ４−Ｏ−、−Ｐ（＝Ｏ）（ＯＲ５）Ｒ４−ＮＨ−、又は−Ｐ（＝Ｏ）（ＯＲ５）Ｒ４−Ｏ−である。Ｒ４は、置換されていてもよいアルキレン基である。上述のように、Ｘ及びＹは、所望の目的物の構造に応じて選択することができる。例えば、後述のように、サフラマイシンＹ３を目的物とする場合には、Ｘは、−Ｃ（Ｒ３）ＮＨ−であり、Ｙは、−Ｃ（＝Ｏ）Ｒ４−ＮＨ−であることが好ましい。ここで、ＸとＹの連結部における「−ＮＨＣ（＝Ｏ）Ｏ−」は、カルバメート或いはウレタンと呼ばれる構造である。これにより、サフラマイシンＹ３の末端におけるＮＨ２基を１工程で得ることができる。また、サフラマイシンＡを目的物とする場合には、Ｘは、−Ｃ（Ｒ３）ＮＨ−であり、Ｙは、−Ｃ（＝Ｏ）Ｒ４−Ｏ−であることが好ましい。
【００２９】
ＸにおけるＲ３は、水素原子又は置換されていてもよいＣ１−Ｃ５アルキル基であり、好ましくは水素原子又はメチル基である。
【００３０】
Ｙにおける連結基であるＲ４は、置換されていてもよいアルキレン基である。好ましくは、Ｃ２−アルキレン基であり、より好ましくは、１−メチルメチレン（−ＣＨ（ＣＨ３）−）である。Ｙが、リン酸エステル又はリン酸アミドの場合、すなわち−Ｐ（＝Ｏ）（ＯＲ５）Ｒ４−ＮＨ−又は−Ｐ（＝Ｏ）（ＯＲ５）Ｒ４−Ｏ−の場合におけるＲ５は、置換されていてもよいＣ１−Ｃ５アルキル基であり、好ましくはメチルである。
【００３１】
また、式中、Ｚは、−Ｃ（＝Ｏ）Ｒ６、−Ｃ（＝Ｏ）ＯＲ６、−Ｓ（＝Ｏ）２Ｒ６、又は−Ｐ（＝Ｏ）（ＯＲ５）Ｒ６であり、ここで、Ｒ６は、飽和又は不飽和の炭化水素鎖である。後述のステップＡの酵素反応が進行する限り、Ｒ６の炭素数は特に限定されないが、好ましくは、Ｃ５−Ｃ３０アルキル基であり、より好ましくは、Ｃ１０−Ｃ２０アルキル基である。また、最終的に遷移金属触媒で側鎖を切断するという観点から、炭化水素鎖の任意の位置に不飽和二重結合を有していることが好ましい。
【００３２】
式中、Ｒ１及びＲ２は、それぞれ独立に、同一でも異なっていてもよい、Ｃ１−Ｃ１０アルキル基であり、好ましくはメチル基である。より好ましくは、各Ｒ１及びＲ２のいずれもメチル基であることが好ましい。ただし、目的とする最終生成物に応じてアルキル基以外の任意の置換基とすることもできる。
【００３３】
式中、Ｒａは、五環性骨格における第三級アミン上の置換基である。Ｒａは、好ましくは、置換されていてもよいアルキル基であり、より好ましくはメチル基である。ただし、目的とする最終生成物に応じてアルキル基以外の置換基とすることもできる。
【００３４】
発明の式（Ｉ）で表される中間体化合物の製造方法は、以下のステップＡ〜Ｃを含むことを特徴とする。すなわち、ステップＡでは、酵素反応によりＴＨＩＱ環が二つ連結した五環性骨格を有する前駆体化合物（ＩＩ）を合成し、ステップＢ及びＣにおいてこれをシアノ化及び還元的Ｎ−メチル化を行うことで、式（Ｉ）で表される中間体化合物が得られる。
【００３５】
［ステップＡ］：酵素触媒反応
ステップＡは、以下の式（ａ）で表される化合物と、
【化１９】
2019176732.tif 000023
以下の式（ｂ）で表される化合物とを、
【化２０】
2019176732.tif 000024
非リボソーム依存型ペプチド合成酵素の存在下で反応させることによって、以下の式（ＩＩ）で表される化合物を得る工程である。
【化２１】
2019176732.tif 000025
【００３６】
これらの式中において、Ｘ、Ｙ、Ｚ、Ｒ１及びＲ２は、式（Ｉ）に関して述べたものと同じである。
【００３７】
ステップＡは、チロシン誘導体である式（ａ）で表される化合物と、非天然型アルデヒド基質である式（ｂ）で表される化合物から、ＴＨＩＱ環の形成及び五環性骨格の形成の各反応を行い、前駆体化合物（ＩＩ）が生成する。ここで、当該反応は、酵素を触媒とする、生合成反応である
【００３８】
ステップＡで用いられる酵素は、非リボソーム依存型ペプチド合成酵素（ＮＲＰＳ：ｎｏｎ−ｒｉｂｏｓｏｍａｌ  ｐｅｐｔｉｄｅ  ｓｙｎｔｈｅｔａｓｅ）と呼ばれるペプチド合成酵素の少なくとも一部を構成するモジュールである。ＮＲＰＳは、分子量数千ｋＤａにも及ぶ巨大なマルチモジュール酵素複合体であり、リボソームを介することなく短鎖の生理活性ペプチドを合成することが知られている。一般に、ＮＲＰＳを構成する繰返し単位であるモジュールは、基質となるアミノ酸を認識・活性化するアデニル化活性ドメイン（Ａドメイン：ａｄｅｎｙｌａｔｉｏｎ  ｄｏｍａｉｎ）、活性化アミノ酸をチオエステルとして捕捉し、共有結合を形成してアミノ酸ユニットを酵素上へローディングするペプチジルキャリアタンパク質部位（ＰＣＰ部位）（又は、Ｔドメイン（ｔｈｉｏｌａｔｉｏｎ  ｄｏｍａｉｎ）ともいう）、そしてペプチド結合の形成を触媒する縮合ドメイン（Ｃドメインｃｏｎｄｅｎｓａｔｉｏｎ  ｄｏｍａｉｎ）を基本的な構成要素とする。
【００３９】
本発明において用いられるＮＲＰＳとしては、サフラマイシンＡ生合成酵素のモジュールであるＳｆｍＣを用いることが好ましい。このＳｆｍＣ酵素は、元来の機能であるぺプチド形成を促進せず、長鎖脂肪酸アルデヒドとアミノ酸（Ｌ−チロシン誘導体）との間でのイミン形成及びその後のＰｉｃｔｅｔ−Ｓｐｅｎｇｌｅｒ （ＰＳ） 型環化を触媒することで、ＴＨＩＱ環を含む五環性骨格を形成させる特異な特性を有する酵素であることが、本発明の発明者らによって見出されている（非特許文献４：Koketsu, K.; Watanabe, K.; Suda, H.; Oguri, H.; Oikawa, H., Nat. Chem. Biol., 2010, 6, 408）。
【００４０】
ＳｆｍＣ酵素は、以下に示されるように、Ｐｉｃｔｅｔ−Ｓｐｅｎｇｌｅｒ反応を触媒するＰＳドメイン；基質となるＬ−チロシンを認識・活性化するＡドメイン；活性化アミノ酸をチオエステルへ変換し酵素上へローディングするＰＣＰ（ペプチジルキャリアタンパク質部位）；及び、チオエステルを還元するＲｅｄドメインを有している。なお、ＰＳドメインは、本来はペプチド結合を触媒するＣドメイン（縮合ドメイン）に対応するが、ここでは、位置・立体選択的なＰｉｃｔｅｔ−Ｓｐｅｎｇｌｅｒ反応を触媒することから、「ＰＳドメイン」と表記している。
【化２２】
2019176732.tif 000026
【００４１】
かかるＳｆｍＣ酵素による五環性骨格形成の反応機構の詳細は、非特許文献４において説明されており、ＳｆｍＣ酵素の作成方法についても記載されている。したがって、当業者であれば、当該文献を参照することにより、ＳｆｍＣ酵素を取得し、使用することが理解できる。
【００４２】
また、ＳｆｍＣ酵素以外に用いられ得る酵素としては、エクテナサイジンやサフラシンの生合成において触媒機能を担っているＥｔｕＡ２、ＳａｃＣ等の酵素を挙げることができる。
【００４３】
本発明のステップＡの酵素反応を行うために、ＡＴＰ、ＮＡＤＰＨ、Ｍｇ２＋、及びＭｎ２＋を添加することが好ましい。
【００４４】
また、式（ｂ）で表される非天然型アルデヒド基質の具体例としては、以下の化合物を挙げることができる。ただし、これに限定されるものではない。
【化２３】
2019176732.tif 000027
【００４５】
式中、Ｚａは、Ｃ６−Ｃ２０アルキル基であり、Ｍｅはメチル基を表す。
【００４６】
［ステップＢ］：シアノ化反応
ステップＢは、上記ステップＡで得られた式（ＩＩ）で表される化合物にシアン化合物を添加することで、五環性骨格上のＯＨ基をシアノ基（ＣＮ基）に変換し、以下の式（ＩＩＩ）で表される化合物を得る工程である。
【化２４】
2019176732.tif 000028
【００４７】
式中、Ｘ、Ｙ、Ｚ、Ｒ１及びＲ２は、式（Ｉ）に関して述べたものと同じである。
【００４８】
ステップＢで用いられるシアン化合物としては、シアン化物イオンを含む化合物を用いることができる。典型的には、シアン化カリウム（ＫＣＮ）等のアルカリ金属シアン化物である。その他、当該技術分野公知のシアン化剤を用いることができる。
【００４９】
［ステップＣ］：Ｎ−アルキル化反応
上記ステップＡで得られた式（ＩＩＩ）で表される化合物に、アルデヒド及び還元剤を添加することにより第二級アミン部位をＮ−アルキル化し、前記式（Ｉ）で表される化合物を得る工程である。
【００５０】
ステップＣで用いられるアルデヒドは、Ｎ−アルキル化により付加されるアルキル基の種類に応じて選択される。例えば、メチル基を付加する場合には、ホルムアルデヒドが用いられる。また、還元剤としては、還元的アミノ化反応において用いられる、当該技術分野において公知の化合物を用いることができる。例えば、水素化トリアセトキシホウ素ナトリウム、シアノ水素化ホウ素ナトリウム等の水素化ホウ素化合物を用いることができる。
【００５１】
３．中間体化合物を用いるサフラマイシン類の製造方法
別の態様において、本発明は、以下の式（Ｉ）で表される中間体化合物を用いるサフラマイシン類の製造方法にも関する。以下では、その具体例として、サフラマイシンＹ３及びその誘導体（「サフラマイシンＹ３系化合物」）の製造方法、及びサフラマイシンＡ及びその誘導体（「サフラマイシンＡ系化合物」）の製造方法について説明する。
【００５２】
（１）サフラマイシンＹ３系化合物の製造方法
上記式（Ｉ）で表される中間体化合物から、以下の式（ＩＶ）で表される化合物を製造することができる。
【化２５】
2019176732.tif 000029
（式中、Ｘ、Ｒ１、Ｒ２及びＲａは、式（Ｉ）中と同じ意味を有すし、Ａは、水素原子又は保護基である。）
【００５３】
式（ＩＶ）の化合物は、サフラマイシンＹ３に対応する構造を有するものであり、五環性骨格に側鎖のＺ部位をＡに変換し、Ｙの末端をアミノ基末端又は当該アミノ基の水素原子を保護基とした化合物である。Ａの保護基としては、Ｆｍｏｃ、ＢｏｃやＡｌｌｏｃ（アリルオキシカルボニル）等のカルバメート系やエステル系、スルホン酸エステル系、シリル系の保護基などの当該技術分野において公知の保護基を用いることができる。Ａが保護基の場合でも、その後、脱保護を行うことにより、サフラマイシンＹ３と同様に末端をアミノ基に変化することができる。
【００５４】
かかる側鎖の変換を行う観点から、式（Ｉ）において、Ｘは、−Ｃ（Ｒ３）ＮＨ−であり、Ｙは、−Ｃ（＝Ｏ）Ｒ４−ＮＨ−であり、Ｚは、−Ｃ（＝Ｏ）ＯＲ６である化合物を用いることが好適である。それら以外のＲ１、Ｒ２、及びＲａは、式（Ｉ）について上述したとおりのものを用いることができる。
【００５５】
当該サフラマイシンＹ３系化合物の製造方法は、以下のステップＤ及びＥを含むことを特徴とする。ステップＤでは、側鎖のＺ部位からアシル鎖が除去されアミノ基又は保護化アミノ基に変換され、ステップＥでは、五環性骨格におけるフェノールがキノンに変換される。
【００５６】
［ステップＤ］：側鎖のアミノ基への変換反応（アシル鎖の除去）
ステップＤは、式（Ｉ）で表される中間体化合物を、遷移金属触媒存在下においてＺ部位からアシル鎖を除去し、アミノ基又は保護化アミノ基であるＡに変換することにより、以下の式（Ｖ）で表される化合物を得る工程である。
【化２６】
2019176732.tif 000030
（式中、Ｘ、Ｙ、Ａ、Ｒ１、Ｒ２及びＲａは、式（ＩＶ）中と同じ意味を有する。）
【００５７】
当該Ｚ部位からＡへの変換は、ＸとＹに「−ＮＨＣ（＝Ｏ）Ｏ−」、すなわち、カルバメート構造或いはウレタン構造を含むことにより、１工程で行い得ることが本発明において初めて見出されたものである。従来は、他の官能基が多数存在する状況で、末端アシル鎖の選択的除去及びアミノ化は困難であったため、かかる変換反応は本発明によって初めて達成できたものである。
【００５８】
ステップＤにおいて用いられる遷移金属触媒は、好ましくはパラジウム錯体である。パラジウム錯体の具体例としては、テトラキス（トリフェニルホスフィン）パラジウムを挙げることができる。
【００５９】
［ステップＥ］：キノンへの酸化反応
ステップＥは、ステップＤで得られた式（Ｖ）で表される化合物を遷移金属触媒存在下において酸化し、五環性骨格におけるフェノール部位をキノンに変換することにより、上記式（ＩＶ）で表されるサフラマイシンＹ３系化合物を得る工程である。
【００６０】
ここで、用いられる遷移金属触媒は、好ましくはコバルト錯体である。コバルト錯体の具体例としては、サルコミン（Ｎ,Ｎ’‐エチレンビス(サリチリデンアミナト)コバルト(ＩＩ)）、Ｆｒｅｍｙ塩（ニトロソジスルホン酸カリウム）等を挙げることができる。
【００６１】
なお、上述のように、式（ＩＶ）中のＡが保護基の場合でも、その後、脱保護を行うことにより、Ａを水素原子に戻し、サフラマイシンＹ３と同様に末端をアミノ基に変化することができる。かかる脱保護は、当該技術分野において慣用されている手法を用いることができる。
【００６２】
式（ＩＶ）において、好ましくは、Ｒ１、Ｒ２及びＲａが、いずれもメチル基であり；Ｒ４が、−ＣＨ（ＣＨ３）−であり、Ａは水素原子である。この場合、式（ＩＶ）の化合物は、サフラマイシンＹ３となる。
【００６３】
（２）サフラマイシンＡ系化合物の製造方法
上記式（Ｉ）で表される中間体化合物から、以下の式（ＶＩ）で表される化合物を製造することができる。
【化２７】
2019176732.tif 000031
（式中、Ｘ、Ｒ１、Ｒ２及びＲａは、式（Ｉ）中と同じ意味を有する。）
【００６４】
式（ＶＩ）の化合物は、サフラマイシンＡに対応する構造を有するものであり、五環性骨格に側鎖のＹ−Ｚ部位を変換し、カルボニル基末端とした化合物である。かかる側鎖の変換を行う観点から、式（Ｉ）において、Ｘは、−Ｃ（Ｒ３）ＮＨ−であり、Ｙは、−Ｃ（＝Ｏ）Ｒ４−Ｏ−であり、Ｚは、−Ｃ（＝Ｏ）Ｒ６である化合物を用いることが好適である。それら以外のＲ１、Ｒ２、及びＲａは、式（Ｉ）について上述したとおりのものを用いることができる。
【００６５】
当該サフラマイシンＡ系化合物の製造方法は、以下のステップＦ〜Ｈを含むことを特徴とする。ステップＦでは、側鎖のＹ−Ｚ部位からアシル鎖が除去されＯＨ基に変換され、ステップＧでは、五環性骨格におけるフェノールがキノンに変換され、ステップＨでは、側鎖末端のＯＨ基がカルボニル基に変換される。
【００６６】
［ステップＦ］：側鎖のＯＨ基への変換反応（アシル鎖の除去）
ステップＦは、式（Ｉ）で表される化合物を塩基性条件下で加水分解し、Ｙ−Ｚ部位アシル鎖が除去されたＯＨ基末端に変換することにより、以下の式（ＶＩＩ）で表される化合物を得る工程である。当該Ｙ−Ｚ部位からＯＨ基末端への変換は、ＹとＺの連結部として「−ＯＣ（＝Ｏ）−」、すなわち、エステル構造を用いることにより、１工程で行い得ることが本発明において初めて見出されたものである。従来は、他の官能基が多数存在する状況で、末端アシル鎖の選択的除去及びＯＨ基化は困難であったため、かかる変換反応は本発明によって初めて達成できたものである。
【化２８】
2019176732.tif 000032
（式中、Ｘ、Ｒ１、Ｒ２及びＲａは、式（Ｉ）中と同じ意味を有する。）
【００６７】
ステップＦにおいて塩基性条件下とするため、好ましくは水酸化物イオン（ＯＨ−）が添加される。典型的には、水酸化リチウム等のアルカリ金属水酸化物を用いることができる。
【００６８】
［ステップＧ］：キノンへの酸化反応
ステップＧは、ステップＦで得られた式（ＶＩＩ）の化合物を遷移金属触媒存在下において酸化し、五環性骨格におけるフェノール部位をキノンに変換することにより、以下の式（ＶＩＩＩ）で表される化合物を得る工程である。当該工程は、上記ステップＥと同様の反応である。
【化２９】
2019176732.tif 000033
（式中、Ｘ、Ｒ１、Ｒ２及びＲａは、式（Ｉ）中と同じ意味を有する。）
【００６９】
ここで、用いられる遷移金属触媒は、好ましくはコバルト錯体である。コバルト錯体の具体例としては、サルコミン（Ｎ,Ｎ’‐エチレンビス(サリチリデンイミナト)コバルト(ＩＩ)）、Ｆｒｅｍｙ塩（ニトロソジスルホン酸カリウム）等を挙げることができる。
【００７０】
［ステップＨ］：末端ＯＨ基のカルボニル化
ステップＨは、ステップＧで得られた式（ＶＩＩＩ）の化合物をＤＭＳＯ酸化又は超原子価ヨウ素試薬を用いて酸化し末端のＯＨ基をカルボニル基に変換することにより、前記式（ＶＩ）で表されるサフラマイシンＡ系化合物を得る工程である。
【００７１】
ステップＨで用いられる超原子価ヨウ素試薬好ましくは５価のヨウ素を含む化合物であり、典型的には、デス・マーチン試薬と呼ばれる１，１，１−トリアセトキシ−１,１−ジヒドロ−１,２−ベンズヨードキソール−３（１Ｈ）−オンを挙げることができる。また、ＤＭＳＯ酸化は公知の活性化剤を用いて行うことができ、活性化剤としては塩化オキサリルを挙げることができる。これら以外に、当該技術分野において周知の化合物・試薬を用いて酸化を行うことができる。
【００７２】
式（Ｉ）において、好ましくは、Ｒ１、Ｒ２及びＲａが、いずれもメチル基であり；Ｒ３が、水素原子である。この場合、最終生成物である式（ＶＩ）の化合物は、サフラマイシンＡとなる。
【００７３】
（３）その他の化合物の製造方法
また、上述のサフラマイシンＹ３系化合物の製造方法の変形例として、上記式（Ｉ）で表される中間体化合物から、五環性骨格に側鎖のＸ−Ｙ−Ｚ部位を変換し、ＯＨ基末端とした化合物を製造することもできる。かかる側鎖の変換を行う観点から、式（Ｉ）において、Ｘは、−Ｃ（Ｒ３）Ｏ−であり、Ｙは、−Ｃ（＝Ｏ）Ｒ４−ＮＨ−であり、Ｚが、−Ｃ（＝Ｏ）Ｒ６である化合物を用いることが好適である。それら以外のＲ１、Ｒ２、及びＲａは、式（Ｉ）について上述したとおりのものを用いることができる。
【００７４】
当該ＯＨ基末端の化合物の製造方法は、以下のステップＤ２及びＥ２を含むことを特徴とする。ステップＤ２では、側鎖のＸ−Ｙ−Ｚ部位からアシル鎖を除去することでＯＨ基に変換され、ステップＥ２では、五環性骨格におけるフェノール部位がキノンに変換される。
【００７５】
［ステップＤ２］：側鎖のＯＨ化反応（アシル鎖の除去）
ステップＤ２は、式（Ｉ）で表される中間体化合物を塩基性条件下で加水分解して、側鎖のＸ−Ｙ−Ｚ部位からアシル鎖を除去し、Ｘ−Ｙ−Ｚ部位を−Ｃ（Ｒ３）ＯＨ基に変換する工程である。
【００７６】
ステップＤ２において、塩基性条件下とするため、好ましくは水酸化物イオン（ＯＨ−）が添加される。典型的には、水酸化リチウム等のアルカリ金属水酸化物を用いることができる。
【００７７】
当該Ｘ−Ｙ−Ｚ部位から第一級水酸基への変換は、ＸとＹの連結部として「−Ｏ−Ｃ（＝Ｏ）Ｒ３」、すなわち、エステル構造を用いることにより、１工程で行い得ることが本発明において初めて見出されたものである。従来は、他の官能基が多数存在する状況で、アシル鎖の選択的除去及びＯＨ化は困難であったため、かかる変換反応は本発明によって初めて達成できたものである。
【００７８】
［ステップＥ２］：キノンへの酸化反応
ステップＥ２は、ステップＤ２で得られた化合物を遷移金属触媒存在下において酸化し、五環性骨格におけるフェノール部位をキノンに変換する工程である。当該工程は、上記ステップＥと同様の反応である。
【００７９】
ここで、用いられる遷移金属触媒は、好ましくはコバルト錯体である。コバルト錯体の具体例としては、サルコミン（Ｎ,Ｎ’‐エチレンビス(サリチリデンイミナト)コバルト(ＩＩ)）、Ｆｒｅｍｙ塩（ニトロソジスルホン酸カリウム）等を挙げることができる。
【００８０】
以上で説明した本発明の製造方法における各工程における溶媒や反応温度等の反応条件は、後述の実施例において代表的な例として詳細に記載するが、必ずしもそれらに限定されるわけではなく、当該技術分野における当業者であれば、有機合成における一般的な知識に基づいてそれぞれ適宜選択可能である。
【００８１】
式（ｂ）で表される非天然型アルデヒド基質が、以下の化合物から選択される場合、
【化３０】
2019176732.tif 000034
式（Ｉ）で表される中間体化合物は、以下の構造を有する。
【化３１】
2019176732.tif 000035
（式中、Ｚａは、Ｃ6−Ｃ２０アルキル基であり、Ｍｅはメチル基を表す。）
【００８２】
同様に、式（ｂ）で表される非天然型アルデヒド基質が上記の具体例から選択される場合、式（ＩＩ）で表される前駆体化合物は、以下の構造を有する。
【化３２】
2019176732.tif 000036
（式中、Ｚａは、Ｃ6−Ｃ２０アルキル基であり、Ｍｅはメチル基を表す。）
【００８３】
また、別の態様において、式（ｂ）で表される非天然型アルデヒド基質が、以下の化合物から選択される場合、
【化３３】
2019176732.tif 000037
式（Ｉ）で表される中間体化合物は、以下の構造を有する。
【化３４】
2019176732.tif 000038
（式中、Ｚａは、Ｃ6−Ｃ２０アルキル基であり、Ｍｅはメチル基を表す。）
【００８４】
同様に、式（ｂ）で表される非天然型アルデヒド基質が上記の具体例から選択される場合、式（ＩＩ）で表される前駆体化合物は、以下の構造を有する。
【化３５】
2019176732.tif 000039
（式中、Ｚａは、Ｃ6−Ｃ２０アルキル基であり、Ｍｅはメチル基を表す。）
【００８５】
本発明における各種中間体化合物又は生成物は、複数の不斉炭素を有し、光学異性体又はジアステレオ異性体などの立体異性体が存在するが、純粋な形態の立体異性体、立体異性体の任意の混合物、ラセミ体などはいずれも本発明の範囲に包含される。
【００８６】
また、本発明における各種中間体化合物又は生成物は、水和物又は溶媒和物として存在する場合もあるが、これらの物質はいずれも本発明の範囲に包含される。溶媒和物を形成する溶媒の種類は特に限定されないが、例えば、エタノール、アセトン、イソプロパノールなどの溶媒を例示することができる。
【実施例】
【００８７】
以下、実施例により本発明をさらに詳細に説明するが、本発明はこれらによって限定されるものではない。【００８８】
［試薬、装置等］
すべての反応は、特記しない限り、窒素雰囲気下で行った。 NMRスペクトルはJEOL JNM-ECA 500（1H / 500MHz、13C / 125MHz）分光計、Bruker VSP 500（1H / 500MHz、13C / 125MHz）分光計およびBruker AMX500（1H / 500MHz、13C / 125 MHz）分光計を用いた。1H、13C-NMRでは内部標準としてクロロホルム、アセトニトリルおよびジメチルスルホキシドを用いた。1H-NMRのデータは、化学シフト（水素数、多重度、カップリング定数）として記載する。多重度は、s（一重項）、d（二重項）、t（三重項）、q（四重項）、quin（五重項）、m（多重項）、br （ブロード）として記載する。ESI-マススペクトルはBruker Daltonics micrOTOF-QIIを用いた。中圧液体クロマトグラフィー（MPLC）精製は、YAMAZEN YFLC-AI-580およびBiotage Isoleraで行った。Ｄｅｓｓ−Ｍａｒｔｉｎペルヨージナンおよびサルコミンは、東京化成工業株式会社から入手した。ATP（二ナトリウム塩三水和物）は、和光純薬工業より購入した。 EDC・HCl、HATUおよびHBTUは渡辺化学工業株式会社から購入した。Grubbs触媒第1世代およびPd（PPh3）4はSigma-Aldrichから得た。 NADPHおよびNADHはOriental Yeast Co.Ltd.から購入した。すべての試薬および市販の溶媒は入手したまま使用した。反応は、Merck Millipore TLCシリカゲルF254プレート（0.25mm）を用いた薄層クロマトグラフィーによりモニターした。フラッシュカラムクロマトグラフィーは、Kanto Silica Gel 60Nを用いて行った。
【実施例１】
【００８９】
１．チロシン誘導体基質の合成
チロシン誘導体（化合物１）を非特許文献５（Tanifuji, R.; Oguri, H.; Koketsu, K.; Yoshinaga, Y.; Minami, A.; Oikawa, H. Tetrahedron Lett. 2016, 57, 623.）の記載にしたがって合成した。
【化３６】
2019176732.tif 000040
【実施例２】
【００９０】
２．アルデヒド基質の合成【００９１】
（１）アルデヒド基質１（化合物１１）の合成
以下の反応スキームにより、化合物６からアルデヒド基質１（化合物１１）を合成した。【００９２】
［化合物4の合成]
【化３７】
2019176732.tif 000041
【００９３】
THF（10mL）中の2（281mg、0.557mmol）及び10％Pd/C（178mg、0.167mmol、30mol％）の懸濁液を低水素圧（0.60MPa）下、室温で1.5時間撹拌した 。混合物からCeliteろ過により触媒を除去し、減圧濃縮して3を得、これをさらに精製することなく使用した。
CH2Cl2（10mL）中の粗精製7およびEt3N（0.621mL、4.46mmol、8.0当量）の懸濁液に、CH2Cl2（10mL）中のAlloc-OSu（222mg、1.11mmol、2.0当量）を添加し、 室温で13.5時間撹拌した。得られた混合物に水（20mL）、1M HCl水溶液5.0mLを加え、CH2Cl2（50mL×3）で抽出した。有機抽出物を飽和食塩水で洗浄し、Na2SO4で乾燥し、減圧濃縮した。粗残留物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（hexane/AcOEt）で精製して、4（224mg、0.492mmol、2工程で収率88％）を白色固体として得た。
1H NMR (500 MHz, CDCl3, δ): 1.06 (9H, s), 1.36 (3H, d, J = 6.9 Hz), 3.36-3.46 (2H, m), 3.74 (2H, t, J = 5.2 Hz), 4.11-4.24 (1H, m), 4.49-4.62 (2H, m), 5.16-5.33 (3H, m), 5.85-5.95 (1H, m), 6.30 (1H, br), 7.36--7.47 (6H, m), 7.61-7.66 (4H, m).; 13C NMR (125 MHz, CDCl3, δ):19.00, 19.33, 26.97, 41.73, 50.70, 62.64, 66.03, 118.11, 128.00, 130.06, 132.65, 133.26, 133.30, 135.64, 155.89, 172.16.; HRMS (ESI, m/z): [M+Na]+ calcd. for C25H34N2O4SiNa, 477.2186; found, 477.2173.【００９４】
［化合物5の合成］
【化３８】
2019176732.tif 000042
【００９５】
Grubbs触媒の第1世代（222mg、0.267mmol、5.0mol％）の還流溶液に、4（2.45g、5.40mmol）および1-ウンデセン（11.1mL、54.0mmol、10当量）のCH2Cl2（20mL）溶液に加えた。混合物を17.5時間加熱還流した後、減圧濃縮した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（hexane/AcOEt）で精製して5（2.45g、4.22mmol、収率78％）を淡黄色油状物として得た。
1H NMR (500 MHz, CDCl3, δ): 0.88 (3H, t, J = 6.9 Hz), 1.06 (9H, s), 1.20-1.31 (12H, m), 1.32-1.41 (4H, m), 2.03 (2H, q, J = 7.5 Hz), 3.36-3.47 (2H, m), 3.74 (2H, t, J = 5.2 Hz), 4.13-4.25 (1H, m), 4.41-4.57 (2H, m), 5.14 (1H, br), 5.49-5.60 (1H, m), 5.70-5.79 (1H, m), 6.33 (1H, s), 7.35-7.48 (6H, m), 7.60-7.67 (4H, m).; 13C NMR (125 MHz, CDCl3, δ):14.28, 18.95, 19.33, 22.83, 26.97, 29.05, 29.33, 29.48, 29.63, 29.70, 32.04, 32.41, 41.70, 50.68, 62.64, 66.25, 124.04, 127.99, 130.05, 133.25, 133.30, 135.42, 135.64, 136.75, 156.08, 172.22.; HRMS (ESI, m/z): [M+Na]+ calcd. for C34H52N2O4SiNa, 603.3588; found, 603.3573.【００９６】
［化合物6の合成］
【化３９】
2019176732.tif 000043
【００９７】
5（280mg、0.482mmol）のTHF（15.0mL、0.032M）溶液に、1M TBAFのTHF溶液（0.627mL、0.627mmol、1.3当量）を添加した。混合物を室温で45分間撹拌した。次に飽和NH4Cl水溶液（10mL）でクエンチし、室温で5分間撹拌した。混合物を減圧濃縮し、水20mLを加え、CH2Cl2（50mL×3）で抽出した。有機抽出物を飽和食塩水で洗浄し、Na2SO4で乾燥し、減圧濃縮した。粗残留物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（CHCl3/MeOH）で精製して、6（127mg、0.372mmol、収率77％）を白色固体として得た。
1H NMR (500 MHz, CDCl3, δ): 0.87 (3H, t, J = 7.5 Hz), 1.19-1.41 (17H, m), 2.02 (2H, q, J = 6.9 Hz), 3.29-3.50 (2H, m), 3.69 (1H, br), 4.13-4.30 (1H, m), 4.41-4.54 (2H, m), 5.45-5.57 (2H, m), 5.70-5.80 (1H, m), 6.88 (1H, br).; 13C NMR (125 MHz, CDCl3, δ): 14.26, 18.75, 22.81, 29.04, 29.33, 29.46, 29.61, 29.69, 29,83, 32.03, 32.41, 42.25, 50.80, 61.82, 66.37, 123.87, 136.90, 156.45, 173.62.; HRMS (ESI, m/z): [M+Na]+ calcd. for C18H34N2O4Na, 365.2411; found, 365.2394.【００９８】
［化合物7の合成］
【化４０】
2019176732.tif 000044
【００９９】
CH2Cl2（10mL、0.0090M）中の6（30.9mg、0.0902mmol）の溶液に、Dess-Martinペルヨージナン（134mg、0.316mmol、3.5当量）を添加した。混合物を0℃で1時間撹拌した。得られた混合物を10％ Na2S2O3の飽和NaHCO3 水溶液（5.0mL）でクエンチし、0℃で15分間撹拌した。混合物をCH2Cl2（30mL×3）で抽出し、有機抽出物を塩水で洗浄し、Na2SO4で乾燥し、減圧濃縮した。粗残留物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（CH2Cl2/AcOEt）で精製して、化合物7（22.0mg、0.0646mmol、収率72％）を白色固体として得た。
1H NMR (500 MHz, CDCl3, δ): 0.87 (3H, t, J = 6.9 Hz), 1.16-1.43 (18H, m), 19.98-2.11 (2H, m), 4.19 (2H, t, J = 5.2 Hz), 4.25-4.36 (1H, m), 4.44-4.55 (2H, m), 5.33 (1H, m), 5.46-5.58 (2H, m), 5.69-5.81 (2H, m), 6.95 (1H, br), 9.64 (1H, s).; 13C NMR (125 MHz, CDCl3, δ): 14.25, 18.56, 22.80, 27.69, 29.01, 29.31, 29.45, 29.60, 29.67, 29.82, 32.02, 32.39, 50.27, 50.50, 66.37, 123.48, 123.89, 135.56, 136.89, 156.26, 173.01, 196.36.; HRMS (ESI, m/z): [M+K]+ calcd. for C18H32N2O4K, 379.1994; found, 379.1984.【０１００】
（２）アルデヒド基質２（化合物11）の合成
以下の反応スキームにより、化合物8からアルデヒド基質11（化合物４を合成した。【０１０１】
［化合物9の合成］
【化４１】
2019176732.tif 000045
【０１０２】
乳酸エチル 8 (962 μL, 8.47 mmol) とアリルアミン (1.90 mL, 25.4 mmol, 3.0当量) のEtOH溶液 (10 mL, 0.85 M) をマイクロウェーブ照射下、120 °C で35時間撹拌した。エタノールを減圧留去した後、液体残渣を酢酸エチルを用いてシリカゲルを通過させ、粗精製した。減圧濃縮の後、粗残留物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（CHCl3/AcOEt）で精製して、9 (1.01 g, 7.83 mmol, 92%) を無色油状物として得た。
1H NMR (500 MHz, CDCl3, δ): 1.36 (3H, d, J = 6.9 Hz), 3.81-3.83 (2H, m), 4.17 (1H , m), 4.58 (1H, s), 5.08-5.16 (2H, m), 5.74-5.81 (1H, m), 7.05 (1H, br).; 13C NMR (125 MHz, CDCl3, δ): 21.16, 41.41, 68.28, 116.43, 133.75, 175.39.; HRMS (ESI, m/z): [M+Na]+ calcd. for C6H11NO2Na, 152.0682; found, 152.0688.【０１０３】
［化合物10の合成］
【化４２】
2019176732.tif 000046
【０１０４】
MNBA (2.52 g, 7.32 mmol, 1.2 当量)、ミリスチン酸 (2.03 g, 7.32 mmol, 1.2 当量)、DMAP (149 mg, 1.22 mmol, 20 mol%)とトリエチルアミン (2.13 mL, 15.2 mmol, 2.5 当量) のCH2Cl2溶液(5.0 mL) に9 (788 mg, 6.10 mmol) のCH2Cl2 溶液(15.3 mL, 0.30 M)を加えて室温で13 時間撹拌した。0 °Cまで冷却した後、飽和NaHCO3 水溶液 (15 mL)を加えて反応を終結させた。得られた混合物をCH2Cl2 (50 mL × 3)で抽出した。有機抽出物を飽和食塩水で洗浄し、Na2SO4で乾燥し、減圧濃縮した。粗残留物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー(CHCl3/AcOEt, hexane/AcOEt) で精製して10 (1.41 g, 4.15 mmol, 68%)を白色固体として得た。
1H NMR (500 MHz, CDCl3, δ): 0.86 (3H, t, J = 6.9 Hz), 1.24-1.32 (20H, m), 1.46 (3H, d, J = 6.9 Hz), 1.60-1.66 (2H, m), 2.36 (2H, t, J = 7.4 Hz), 3.89 (2H, m,), 5.13-5.24 (3H, m), 5.78-5.86 (1H, m), 6.21 (1H, br).; 13C NMR (125 MHz, CDCl3, δ): 14.21, 18.06, 22.78, 24.99, 29.18, 29.34, 29.45, 29.54, 29.69, 29.74, 29.76, 32.02, 34.43, 41.60, 70.49, 116.67, 133.87, 170.45, 172.39.; HRMS (ESI, m/z): [M+Na]+ calcd. for C20H37NO3Na, 362.2665; found, 362.2652.【０１０５】
［化合物11の合成］
【化４３】
2019176732.tif 000047
【０１０６】
10 (209 mg, 0.616 mmol) の CHCl3 (140 mL, 4.4 mM) 溶液へ、溶液が青紫色を呈するまで-30 °Cでオゾンを通気した。酸素と窒素を通気して過剰なオゾンを溶液から除いた。この過程をもう一度繰り返した後、Me2S (1.37 mL, 18.5 mmol, 30 当量) を加え、-30 °Cで10分間、室温で40分間撹拌した。減圧濃縮の後、粗残留物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（CHCl3/AcOEt）で精製して、11 (168 mg, 0.493 mmol, 80%)を白色固体として得た。
[α]D29 -7.1° (c 1.0, CHCl3); 1H NMR (500 MHz, CDCl3, δ): 0.85 (3H, t, J = 6.9 Hz), 1.17-1.29 (20H, m), 1.42-1.46 (3H, m), 1.61-1.67 (2H, m), 2.35-2.40 (2H, m), 4.20 (2H, d, J = 4.6 Hz), 5.24 (1H, q, J = 6.9 Hz), 6.89 (1H, s), 9.65 (1H, s).; 13C NMR (125 MHz, CDCl3, δ): 14.19, 17.95, 22.76, 24.93, 29.17, 29.32, 29.42, 29.52, 29.66, 29.72, 29.74, 32.00, 34.37, 49.99, 70.23, 171.06, 172.44, 195.83.; HRMS (ESI, m/z): [M+Na]+ calcd. for C19H35NO4Na, 364.2458; found, 364.2447.
【実施例３】
【０１０７】
３．サフラマイシンY３の合成
実施例１で得たチロシン誘導体（化合物１）と実施例２で得たアルデヒド基質１（化合物7）から、サフラマイシンY３(化合物16’)の合成を行った。反応に用いたホロ化酵素ＳｆｍＣは、非特許文献４（Koketsu, K.; Watanabe, K.; Suda, H.; Oguri, H.; Oikawa, H. Nat. Chem. Biol. 2010, 6, 408）の記載にしたがって作成した。【０１０８】
［化合物１３の合成］
【化４４】
2019176732.tif 000048
【０１０９】
13.7μMのホロ化SfmC、1.0mMの化合物1、400μMの化合物7（DMSO溶液として添加）、20mMのMgCl2、20μMのMnCl2、2.0mMのATPを含有する50mM KH2PO4-KOH緩衝液（pH7.5）の20mL溶液に、2.0 mMの NADPHを添加し、酵素反応を開始させ、30℃で2時間インキュベートした。反応混合物を100mM KCN 水溶液（750μL）で処理し、30℃で5分間インキュベートした。得られた混合物をMeCN（60mL）で希釈した後、7000×gで5分間遠心分離して SfmCを除去した。これをろ過して化合物12を含む溶液を得、さらに精製することなく使用した。【０１１０】
MeCN（60mL）, 水(20mL)中の化合物12の粗精製物および37％HCHO水溶液（39.8μL、14.7mg、50当量）の懸濁液に、2-ピコリンボラン（42.8mg、0.40mmol、50当量）を添加し、室温で30分間撹拌した。得られた混合物を減圧濃縮した。残渣に水（20mL）を加え、Et2O（30mL×3）で抽出した。有機抽出物を飽和食塩水で洗浄し、Na2SO4で乾燥させた。ろ過及び減圧濃縮した後、粗生成物をSep-Pak（登録商標）C18に通し、MeCNで溶離した。濃縮後、残渣を以下の条件下でInertsilsustain C18（GL Sciences、φ10×250mm、5μm）を用いたHPLCにより精製した：水に対するMeCNの割合を30％から75％まで35分間、直線勾配で増加させた。この際、流速は5.0mL /分、カラム温度は室温、UV検出器の波長は280nmとした。目的生成物を含む画分を減圧下で濃縮して化合物13を得た（1.37mg、1.84μmol、3段階で収率23％）。得られた化合物13を、1H-NMR、13C-NMR、H-COSY、HSQC、HMBCおよびROESYを含む一連のNMR測定によって分析した。
1H NMR (500 MHz, CDCl3, δ): 0.87 (3H, t, J = 6.9 Hz), 0.93 (3H, d, J = 6.9 Hz), 1.20-1.39 (17H, m), 2.02 (2H, q, J = 6.9 Hz), 2.09-2.19 (1H, m), 2.21 (3H, s), 2.27 (3H, s), 2.30 (3H, s), 2.56 (1H, d, J = 18.3 Hz), 2.80 (1H, dd, J = 15.5, 2.3 Hz), 3.05 (1H, dd, J = 18.0, 8.6 Hz), 3.20-3.33 (2H, m), 3.36 (1H, m), 3.45 (1H, m), 3.67-3.75 (4H, m), 3.79 (3H, s), 4.03 (1H, d, J = 2.3 Hz), 4.00-4.05 (1H, m), 4.14 (1H, br), 4.34-4.46 (2H, m), 5.16 (1H, br), 5.35 (1H, br), 5.43-5.54 (1H, m), 5.66-5.76 (1H, m), 5.85 (1H, s), 6,00 (1H, s), 6.42 (1H, s), 6.49 (1H, s).; 13C NMR (125 MHz, CDCl3, δ): 14.29, 15.83, 15.94, 19.14, 22.83, 25.51, 25.62, 29.08, 29.34, 29.48, 29.63, 29.70, 32.04, 32.11, 32.42, 41.53, 41.92, 50.18, 55.46, 56.63, 56.75, 57.00, 59.96, 60.92, 60.95, 64.61, 65.90, 111.80, 117.13, 117.59, 118.22, 121.14, 121.28, 124.18, 129.20, 131.02, 131.93, 136.45, 143.20, 143.66, 145.09, 146.99, 155.51, 171.68.; HRMS (ESI, m/z): [M+H]+ calcd. for C43H63N4O7, 747.4692; found, 747.4698.【０１１１】
［化合物14の合成］
【化４５】
2019176732.tif 000049
【０１１２】
CH2Cl2（0.50mL）中のPd(PPh3)4（9.91mg、 8.58μmol、 50mol%）およびフェニルシラン（5.29μL、42.9μmol、2.5当量）の溶液に、化合物13（12.8mg、17.1μmol）のCH2Cl2（1.0mL）溶液を添加した。混合物を30℃で20分間撹拌し、SiliaMetS Thiourea (登録商標、85.1 mg, 103 μmol, 6.0 eq. SILI CYCLE)を加え50分間室温で撹拌した。得られた混合物を濾過、減圧濃縮した後、残渣をSep-Pak（登録商標）C18に通し、MeCNで溶離して化合物14を含む溶液を得、さらに精製することなく使用した。
CH2Cl2（1.0mL）中の化合物14の溶液に、Fmoc-OSu (6.37 mg、18.9 μmol、1.1当量)のCH2Cl2（1.0mL）溶液を添加した。混合物を室温で6.5時間撹拌したのち、Sep-Pak（登録商標）C18に通し、MeCNで溶離した。濃縮後、残渣を以下の条件下でInertsustain C18（GL Sciences、φ10×250mm、5μm）を用いたHPLCにより精製した：水に対するMeCNの割合を30％から75％まで30分間、直線勾配で増加させた。この際、流速は5.0 mL /分、カラム温度は室温、UV検出器の波長は280 nmとした。目的生成物を含む画分を減圧下で濃縮して化合物15（10.4 mg、13.7 μmol、2段階で収率80％）を得た。得られた化合物15は、1H-NMR、13C-NMR、H-COSY、HSQC、HMBCおよびROESYを含む一連のNMR測定によって分析した。
1H NMR (500 MHz, CDCl3, δ): 0.96 (3H, d, J = 6.9 Hz), 2.11 (3H, s), 2.15-2.20 (1H, m), 2.25 (3H, s), 2.31 (3H, s), 2.55 (1H, d, J = 18.3 Hz), 2.80 (1H, dd, J = 15.5, 2.3 Hz), 3.05 (1H, dd, J = 18.3, 8.0 Hz), 3.26--3.32 (2H, m), 3.36 (1H, d, J = 8.0 Hz), 3.46 (1H, t, J = 6.6 Hz), 3.66 (3H, s), 3.73-3.82 (4H, m), 4.03 (1H, d, J = 2.3 Hz), 4.09-4.18 (3H, m), 4.21--4.34 (2H, m), 5.27 (1H, d, J = 6.3 Hz), 5.36 (1H, s), 5.86 (1H, s), 5.98 (1H, s), 6.38 (1H, s), 6.47 (1H, s), 7.27-7.34 (2H, m), 7.35-7.44 (2H, m), 7.47-7.60 (2H, m), 7.75 (2H, d, J = 7.4 Hz).; 13C NMR (125 MHz, CDCl3, δ): 15.72, 15.93, 19.12, 25.67, 32.11, 41.52, 41.91, 47.21, 50.29, 55.47, 56.64, 56.77, 56.92, 59.94, 60.81, 60.93, 66.97, 117.19, 117.63, 118.18, 120.12, 121.08, 121.24, 125.17, 125.24, 127.18, 127.83, 129.24, 130.99, 131.90, 141.37, 141.42, 143.21, 143.67, 143.89, 144.07, 145.11, 147.06, 155.50, 171.70.; HRMS (ESI, m/z): [M+H]+ calcd. For C44H48N5O7, 758.3548; found, 758.3557.
【０１１３】
［サフラマイシンY３の合成］
【化４６】
2019176732.tif 000050
【０１１４】
MeCN（10mL）、酢酸エチル（2ｍL）中の化合物15（10.3mg、13.6μmol）およびサルコミン（4.42mg、13.6μmol、1当量）の溶液に、室温で酸素ガスを 5分間吹き込んだ。酸素雰囲気下で2.5時間撹拌した後、再度酸素ガスを3分間吹き込んだ。30分間酸素雰囲気下で撹拌したのちSiliaMetS Thiourea (登録商標、89.9 mg, 108 μmol, 8.0 eq. SILI CYCLE)を加え15分間撹拌した。得られた混合物を濾過、減圧濃縮したのち、残渣をSep-Pak（登録商標）フロリジールに通し、AcOEtで溶離した。濃縮後、残渣を以下の条件下でInertsil Diol (GL Sciences, φ 10 × 250 mm, 5 μm)を用いたHPLCにより精製した：ヘキサンに対する酢酸AcOEtの割合を30％から60％まで30分間、直線勾配で増加させた。この際、流速は5.0 mL /分、カラム温度は室温、UV検出器の波長は280 nmとした。目的生成物を含む画分を減圧下で濃縮して化合物16（6.87 mg、8.74 μmol、収率64％）を得た。得られた化合物16は、1H-NMR、13C-NMR、H-COSY、HSQC、HMBCおよびROESYを含む一連のNMR測定によって分析した。1H NMR (500 MHz, CDCl3, δ): 1.19 (3H, d, J = 6.9 Hz), 1.81 (3H, s), 1.90 (3H, s), 2.30-2.37 (4H, m), 2.75-2.85 (2H, m), 3.09 (1H, dt, J = 11.3, 3.0 Hz), 3.29 (1H, m), 3.42 (1H, d, J = 7.7 Hz), 3.66-3.72 (2H, m), 3.85-3.95 (4H, m), 4.00 (3H, s), 4.06-4.14 (4H, m), 4.22-4.25 (1H, m), 4.91 (1H, d, J = 7.4 Hz), 5.90 (1H, br), 7.29-7.43 (4H, m), 7.60 (1H, d, J = 7.4 Hz), 7.71 (1H, d, J = 7.4 Hz), 7.76 (2H, d, J = 7.4 Hz).; 13C NMR (125 MHz, CDCl3, δ): 8.7, 8.8, 17.7, 21.4, 25.2, 40.1, 41.7, 47.1, 50.9, 54.1, 54.3, 54.7, 57.1, 58.2, 61.1, 61.2, 67.4, 117.0, 120.1, 120.1, 125.3, 125.4, 127.2, 127.3, 127.85, 127.90, 135.67, 135.74, 141.4, 141.6, 143.6, 144.3, 155.8, 156.2, 172.6, 181.3, 182.7, 185.5, 187.0.; HRMS (ESI, m/z): [M+H]+ calcd. for C44H44N5O9, 786.3134; found, 786.3110.【０１１５】
【化４７】
2019176732.tif 000051
化合物16 (1.69 mg, 2.15 μmol)を5%ピペリジン/DMF（0.50mL）中、室温で40分間撹拌した。得られた混合物をSep-Pak（登録商標）C18に通し、MeCNで溶離した。この溶液をLC-MSで分析することにより、サフラマイシンY3（化合物16’）の生成を確認した。  
【実施例４】
【０１１６】
４．サフラマイシンＡの合成
実施例１で得たチロシン誘導体（化合物１）と実施例２で得たアルデヒド基質２（化合物11）から、サフラマイシンＡ(化合物21)の合成を行った。反応に用いたホロ化酵素ＳｆｍＣは、非特許文献４（Koketsu, K.; Watanabe, K.; Suda, H.; Oguri, H.; Oikawa, H. Nat. Chem. Biol. 2010, 6, 408）の記載にしたがって作成した。【０１１７】
［化合物18の合成］
【化４８】
2019176732.tif 000052
【０１１８】
14.2 μMのホロ化SfmC、1.0 mMの化合物1、400 μMの化合物11（DMSO溶液として添加）、20 mMのMgCl2、20 μMのMnCl2、2.0 mMのATPを含有する50 mM KH2PO4-KOH緩衝液（pH7.5）の120mL溶液に、2.0 mMの NADPHを添加し、酵素反応を開始させ、30℃で2時間インキュベートした。反応混合物を100mM KCN 水溶液（750μL）で処理し、30℃で5分間インキュベートした。得られた混合物をMeCN（360mL）で希釈した後、7000×gで5分間遠心分離して SfmCを除去した。これをろ過して化合物17を含む溶液を得、さらに精製することなく使用した。
MeCN（360mL）, 水(120mL)中の化合物17の粗精製物および37％HCHO水溶液（195 μL、72.0 mg、2.40 mmol、50当量）の懸濁液に、2-ピコリンボラン（103 mg、0.96 mmol、20当量）を添加し、室温で30分間撹拌した。得られた混合物を減圧濃縮した。残渣をAcOEt（80 mL × 3）で抽出した。有機抽出物を飽和食塩水で洗浄し、Na2SO4で乾燥させた。ろ過及び減圧濃縮した後、粗生成物をSep-Pak（登録商標）C18に通し、MeCNで溶離した。濃縮後、残渣を以下の条件下でInertsustain C18（GL Sciences、φ10×250mm、5μm）を用いたHPLCにより精製した：水に対するMeCNの割合を30％から75％まで30分間、直線勾配で増加させた。この際、流速は5.0 mL /分、カラム温度は室温、UV検出器の波長は280 nmとした。目的生成物を含む画分を減圧下で濃縮して化合物18（4.58 mg、6.13 μmol、3段階で収率13％）を得た。得られた化合物18は、1H-NMR、13C-NMR、H-COSY、HSQC、HMBCおよびROESYを含む一連のNMR測定によって分析した。1H NMR (500 MHz, CDCl3, δ): 0.88 (3H, t, J = 6.9 Hz), 1.16-1.31 (23H, m), 1.38-1.43 (2H, m), 1.99-2.06 (3H, m), 2.23-2.28 (9H, m), 2.67 (1H, d, J = 18.3 Hz), 2.78 (1H, dd, J = 15.5, 1.7 Hz), 2.94 (1H, q, J = 8.8 Hz), 3.20-3.28 (1H, m), 3.30-3.36 (1H, m), 3.37-3.44 (1H, m), 3.64-3.70 (1H, m), 3.74-3.82 (6H, m), 4.06 (2H, d, J = 2.6 Hz), 4.15 (1H, s), 4.32 (1H, q, J = 6.9 Hz), 5.58-5.66 (1H, m ), 5.71 (1H, s), 5.88 (1H, s), 6.42 (1H, s), 6.47 (1H, s).; 13C NMR (125 MHz, CDCl3, δ): 14.26, 15.84, 15.96, 17.67, 22.83, 24.87, 25.17, 29.27, 29.34, 29.50, 29.66, 29.75, 29.80, 32.06, 32.22, 34.14, 40.14, 41.91, 55.46, 56.40, 56.57, 57.57, 59.84, 60.90, 60.95, 70.09, 116.66, 117.62, 118.45, 121.24, 121.35, 128.79, 129.14, 131.21, 132.71, 142.75, 143.69, 145.11, 146.58, 170.14, 171.47.; HRMS (ESI, m/z): [M+H]+ calcd. for C43H63N4O7, 747.4691; found, 747.4706.【０１１９】
［化合物19の合成］
【化４９】
2019176732.tif 000053
【０１２０】
t-BuOH (3.0 mL)中の化合物18 (12.2 mg、16.3 μmol)へLiOH・H2O (2.05 mg、48.8 μmol、3.0当量)の水溶液 (1.0 mL)を加えて室温で7時間撹拌した。さらにLiOH・H2O (1.37 mg、32.6 μmol、2.0当量)の水溶液 (0.50 mL)を加えて1時間撹拌した。200 mM NaH2PO4・NaOH水溶液 (2.0 mL) を加えて室温で5分間撹拌し、反応を終結させた。減圧濃縮の後、得られた残渣に水 (10 mL)を加え、AcOEt (30 mL × 3)で抽出した。有機抽出物を飽和食塩水で洗浄し、Na2SO4で乾燥した。ろ過及び減圧濃縮した後、粗生成物をSep-Pak（登録商標）C18に通し、MeCNで溶離した。濃縮後、残渣を以下の条件下でInertsustain C18（GL Sciences、φ10×250mm、5μm）を用いたHPLCにより精製した：水に対するMeCNの割合を30％から75％まで30分間、直線勾配で増加させた。この際、流速は5.0 mL /分、カラム温度は室温、UV検出器の波長は280 nmとした。目的生成物を含む画分を減圧下で濃縮して化合物19（7.93 mg、14.8 μmol、収率91％）を得た。得られた化合物19は、1H-NMR、13C-NMR、H-COSY、HSQC、HMBCおよびROESYを含む一連のNMR測定によって分析した。1H NMR (500 MHz, CDCl3, δ): 0.98 (3H, d, J = 6.9 Hz), 2.13 (1H, m), 2.22 (3H, s), 2.26 (3H, s), 2.30 (3H, s), 2.58 (1H, d, J = 17.8 Hz), 2.81 (1H, dd, J = 15.5, 2.3 Hz), 3.02 (1H, q, J = 8.8 Hz), 3.30-3.37 (2H, m), 3.42--3.49 (1H, m), 3.55 (1H, q, J = 6.7 Hz), 3.60-3.67 (1H, m), 3.73 (3H, s), 3.78 (3H, s), 4.04 (1H, d, J = 2.3 Hz), 4.11 (1H, d, J = 2.3 Hz), 4.16 (1H, br), 5.68-5.87 (2H, m), 5.98 (1H, br), 6.42 (1H, s), 6.50 (1H, s).; 13C NMR (125 MHz, CDCl3, δ): 15.81, 15.85, 20.85, 25.49, 32.16, 40.61, 41.90, 55.45, 56.60, 56.66, 56.92, 59.85, 60.90, 60.94, 68.25, 117.37, 117.71, 118.24, 121.04, 121.23, 128.86, 129.28, 131.48, 131.84, 142.80, 143.79, 145.24, 146.93, 174.40.; HRMS (ESI, m/z): [M+H]+ calcd. for C29H37N4O6, 537.2708; found, 537.2711.【０１２１】
［サフラマイシンＡの合成］
【化５０】
2019176732.tif 000054
【０１２２】
化合物19（7.61mg、10.2μmol）およびサルコミン（4.38 mg、13.5 μmol、1.0当量）のMeCN（5.0 mL）溶液に、室温で酸素ガスを 5分間吹き込んだ。酸素雰囲気下で1.5時間撹拌した後、SiliaMetS Thiourea (登録商標、89.1 mg、108 μmol、8.0当量)を加えて15分間室温で撹拌した。得られた混合物を濾過、減圧濃縮した後、残渣をSep-Pak（登録商標）C18に通し、MeCNで溶離して化合物20を含む溶液を得、さらに精製することなく使用した。
塩化オキサリル (11.6 μL、17.1 mg、135 μmol、10当量)のCH2Cl2溶液(4.0 mL)へジメチルスルホキシド (14.4 μL、15.8 mg、202 μmol、15当量)を-78 °Cで滴下し、5分間撹拌した。この混合液へ化合物19の粗精製物 (7.34 mg)のCH2Cl2溶液(1.0 mL)を-78 °Cでゆっくりと滴下し、15分間撹拌した。得られた混合物へトリエチルアミン (56.4 μL、40.9 mg、404 μmol、30当量)を-78 °Cで加え、10分間撹拌した。反応溶液を50分間かけて0  °Cまで昇温したのち、Sep-Pak（登録商標） フロリジルに通し、AcOEtで溶離した。濃縮後、残渣を以下の条件下でInertsil Diol (GL Sciences, φ 10 × 250 mm, 5 μm)を用いたHPLCにより精製した：ヘキサンに対する酢酸AcOEtの割合を30％から60％まで30分間、直線勾配で増加させた。この際、流速は5.0 mL /分、カラム温度は室温、UV検出器の波長は280 nmとした。目的生成物を含む画分を減圧下で濃縮して化合物19（4.97 mg、8.83 μmol、2段階で収率66％）を得た。得られた化合物19は、1H-NMR、13C-NMR、H-COSY、HSQC、HMBCおよびROESYを含む一連のNMR測定によって分析した。1H NMR (500 MHz, CDCl3, δ): 1.24-1.32 (2H, m), 1.91 (3H, s), 1.98 (3H, s), 2.22-2.26 (4H, m), 2.31 (3H, s), 2.79-2.90 (2H, m), 3.13 (1H, dt, J = 11.5, 2.9 Hz), 3.26 (1H, dt, J = 14.3, 4.0 Hz), 3.43 (1H, d, J = 7.4 Hz), 3.72 (1H, m), 3.97 (1H, s), 3.99 (1H, d, J = 2.3 Hz), 4.02 (6H, m), 4.06 (1H, m), 6.67 (1H, br).; 13C NMR (125 MHz, CDCl3, δ): 8.88, 21.63, 24.43, 25.18, 40.75, 41.73, 54.07, 54.31, 54.60, 56.40, 58.37, 61.11, 61.27, 116.78, 128.46, 129.37, 135.68, 135.71, 141.36, 141.66, 155.77, 156.05, 160.31, 180.96, 182.60, 185.44, 186.75, 196.85.; HRMS (ESI, m/z): [M+H]+ calcd. for C29H31N4O8, 563.2136; found, 563.2152.
【国際調査報告】
2019176732.tif 000074
2019176732.tif 000075
2019176732.tif 000076
2019176732.tif 000077