(57)【要約】  ヒト組織因子経路インヒビターを簡便かつ迅速に評価することができる血液凝固系解析装置を提供すること。  一対の電極と、前記一対の電極に対して交番電圧を所定の時間間隔で印加する印加部と、前記一対の電極間に配される血液試料の複素誘電率を測定する測定部と、前記血液試料に働いている抗凝固作用が解かれた以後から前記時間間隔で測定される所定期間における特定の周波数の複素誘電率に基づいてヒト組織因子経路インヒビター（ＴＦＰＩ）を評価する解析部と、を有する、血液凝固系解析装置を提供する。
2020021890.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
一対の電極と、
前記一対の電極に対して交番電圧を所定の時間間隔で印加する印加部と、
前記一対の電極間に配される血液試料の複素誘電率を測定する測定部と、
前記血液試料に働いている抗凝固作用が解かれた以後から前記時間間隔で測定される所定期間における特定の周波数の複素誘電率に基づいてヒト組織因子経路インヒビター（ＴＦＰＩ）を評価する解析部と、
を有する、血液凝固系解析装置。
【請求項２】
組織因子及び抗ＴＦＰＩ抗体を用いて前記ＴＦＰＩを評価する、請求項１に記載の血液凝固系解析装置。
【請求項３】
前記解析部は、組織因子及び抗ＴＦＰＩ抗体を用いて測定した前記複素誘電率と、組織因子を用いて測定した前記複素誘電率と、に基づいて、前記ＴＦＰＩを評価する、請求項２に記載の血液凝固系解析装置。
【請求項４】
更に、ヘパリン分解剤及び／又はヘパリン中和剤を用いる、請求項２に記載の血液凝固系解析装置。
【請求項５】
前記解析部は、組織因子、ヘパリン分解剤及び／又はヘパリン中和剤、及び抗ＴＦＰＩ抗体を用いて測定した前記複素誘電率と、組織因子、及びヘパリン分解剤及び／又はヘパリン中和剤を用いて測定した前記複素誘電率と、に基づいて、前記ＴＦＰＩを評価する、請求項４に記載の血液凝固系解析装置。
【請求項６】
前記評価の際に、前記特定の周波数の複素誘電率スペクトルから抽出される特徴量を用いる、請求項１に記載の血液凝固系解析装置。
【請求項７】
前記特徴量は、前記特定の周波数の複素誘電率スペクトルから抽出される時間特徴量及び／又は勾配特徴量である、請求項６に記載の血液凝固系解析装置。
【請求項８】
前記勾配特徴量は、前記特定の周波数の複素誘電率スペクトルから抽出される時間特徴量に基づいて抽出される、請求項７に記載の血液凝固系解析装置。
【請求項９】
前記特徴量は、１００ｋＨｚ以上３ＭＨｚ未満の低周波数で複素誘電率の極大値を与える時間ＣＴ０、低周波数で最大勾配を与える時間ＣＴ１、低周波数での最大勾配ＣＦＲ、ＣＴ１以降で傾きの絶対値がＣＦＲの所定割合になった際の時間ＣＴ４、３〜３０ＭＨｚの高周波数で複素誘電率の極小値を与える時間ＣＴ、高周波数で最大勾配を与える時間ＣＴ３、高周波数での最大勾配ＣＦＲ２、ＣＴ以降ＣＴ３以前でＣＴ３からＣＦＲ２の傾きで直線を引いた時に複素誘電率の最小値を与える時間ＣＴ２、及びＣＴ３以降で傾きの絶対値がＣＦＲ２の所定割合になった際の時間ＣＴ５からなる群より選ばれるいずれか１つ以上である、請求項６に記載の血液凝固系解析装置。
【請求項１０】
前記解析部は、術後の出血リスクの程度を解析する、請求項１に記載の血液凝固系解析装置。
【請求項１１】
前記出血リスクは、出血量である、請求項１０に記載の血液凝固系解析装置。
【請求項１２】
少なくとも外因系凝固能を評価するアッセイを含む１又は複数の電気的測定用容器、
を更に有する、請求項１に記載の血液凝固系解析装置。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本技術は、血液凝固系解析装置に関する。
【背景技術】
【０００２】
従来、臨床的に行われる血液状態の解析方法として、血液凝固検査がある。一般的な血液凝固検査としては、プロトロンビン時間（ＰＴ）、活性化部分トロンボプラスチン時間（ＡＰＴＴ）に代表される、血液凝固検査が知られている。これらの方法は、血液試料を遠心分離して得られる血漿中に含まれ、凝固反応に関与するタンパク質による凝固反応性を分析する方法である。【０００３】
しかし、前述の検査方法では、著しい血液凝固能の低下、すなわち出血傾向を評価するのに適しているが、著しい血液凝固能の亢進、すなわち血栓傾向、或いは血液凝固能の微妙な変化を捉えるのには適しておらず、また、血中のヒト組織因子経路インヒビター（ｔｉｓｓｕｅｆａｃｔｏｒ ｐａｔｈｗａｙ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ、以下、単に「ＴＦＰＩ」とも称する）の評価も困難である。【０００４】
ＴＦＰＩは、血液凝固系の調節機構を担う中心分子の一つであり、その血中濃度が高まると、本来血液凝固反応が起こるべき血管損傷部でも該反応が抑制され、効果的な止血ができなくなるという可能性がある。また、血中ＴＦＰＩはプロタミン等によっても中和できず、予期せぬ血液凝固抑制状態が継続することとなり、術後出血の継続などの原因の一つにもなってしまう。その一方で、血液凝固抑制状態を継続させる別の要因も複数存在するため、個々のケースで血中ＴＦＰＩが原因であるかどうかを見極めるのは容易ではない。したがって、血中のＴＦＰＩ濃度やＴＦＰＩ活性を迅速かつ簡便に評価したいという、医療現場の明確なニーズが存在する。【０００５】
ここで、別の機能検査として、トロンボエラストグラフィーやトロンボエラストメトリーがあり、これらはそれぞれＴＥＧ（登録商標）やＲＯＴＥＭ（登録商標）として製品化されているが、（１）測定が自動化されておらず、検査結果が測定者の手技に依存する、（２）振動の影響を受けやすい、（３）品質管理（ＱＣ）手順が煩雑で、ＱＣ用試薬が高価である、（４）出力信号（トロンボエラストグラム）の解釈に熟練を要する等の理由があり、十分に普及していない。また、外因系や内因系の各凝固因子の欠乏や阻害効果に対して、それほど高い感度を示さないことから、医療現場のニーズを満足できない可能性がある。【０００６】
これに対して、近年、血液凝固測定を簡便且つ正確に評価することができる別の手法として、血液凝固過程の誘電測定を行う方法が考案された（例えば、特許文献１及び２）。この手法では、１組の電極対などからなるコンデンサー状の試料部に血液試料を充填し、それに交流電場を印加して血液試料の凝固過程に伴う複素誘電率の変化を測定する方法である。非特許文献１には、この手法を用いることで、簡便に凝固及び線溶反応のプロセスをモニタリングできることが示されている。しかし、ＴＦＰＩの評価に関する知見は未だ得られていない。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００７】
【特許文献１】特開２０１０−１８１４００号公報
【特許文献２】特開２０１２−１９４０８７号公報
【非特許文献】
【０００８】
【非特許文献１】Y. Hayashi et al., Analytical Chemistry 87(19), 10072-10079 (2015)
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００９】
前述の通り、従来、ＴＦＰＩを評価したいという医療現場のニーズがあるにもかかわらず、現状では遠心分離によって得られる血漿成分を分析するしかなく、時間と手間がかかるため、周術期の臨床検査としては実施されていない。【００１０】
そこで、本技術では、ヒト組織因子経路インヒビターを簡便かつ迅速に評価することができる血液凝固系解析装置を提供することを主目的とする。
【課題を解決するための手段】
【００１１】
本技術では、一対の電極と、前記一対の電極に対して交番電圧を所定の時間間隔で印加する印加部と、前記一対の電極間に配される血液試料の複素誘電率を測定する測定部と、前記血液試料に働いている抗凝固作用が解かれた以後から前記時間間隔で測定される所定期間における特定の周波数の複素誘電率に基づいてヒト組織因子経路インヒビター（ＴＦＰＩ）を評価する解析部と、を有する、血液凝固系解析装置を提供する。
本技術では、組織因子及び抗ＴＦＰＩ抗体を用いて前記ＴＦＰＩを評価してもよい。この場合、前記解析部は、組織因子及び抗ＴＦＰＩ抗体を用いて測定した前記複素誘電率と、組織因子を用いて測定した前記複素誘電率と、に基づいて、前記ＴＦＰＩを評価することができる。
また、本技術では、更に、ヘパリン分解剤及び／又はヘパリン中和剤を用いてもよい。この場合、前記解析部は、組織因子、ヘパリン分解剤及び／又はヘパリン中和剤、及び抗ＴＦＰＩ抗体を用いて測定した前記複素誘電率と、組織因子、及びヘパリン分解剤及び／又はヘパリン中和剤を用いて測定した前記複素誘電率と、に基づいて、前記ＴＦＰＩを評価することができる。
更に、本技術では、前記評価の際に、前記特定の周波数の複素誘電率スペクトルから抽出される特徴量を用いてもよい。この場合、前記特徴量は、前記特定の周波数の複素誘電率スペクトルから抽出される時間特徴量及び／又は勾配特徴量であるものとすることができる。この場合、前記勾配特徴量は、前記特定の周波数の複素誘電率スペクトルから抽出される時間特徴量に基づいて抽出されるものとすることができる。また、この場合、前記特徴量は、１００ｋＨｚ以上３ＭＨｚ未満の低周波数で複素誘電率の極大値を与える時間ＣＴ０、低周波数で最大勾配を与える時間ＣＴ１、低周波数での最大勾配ＣＦＲ、ＣＴ１以降で傾きの絶対値がＣＦＲの所定割合になった際の時間ＣＴ４、３〜３０ＭＨｚの高周波数で複素誘電率の極小値を与える時間ＣＴ、高周波数で最大勾配を与える時間ＣＴ３、高周波数での最大勾配ＣＦＲ２、ＣＴ以降ＣＴ３以前でＣＴ３からＣＦＲ２の傾きで直線を引いた時に複素誘電率の最小値を与える時間ＣＴ２、及びＣＴ３以降で傾きの絶対値がＣＦＲ２の所定割合になった際の時間ＣＴ５からなる群より選ばれるいずれか１つ以上であるものとすることができる。
加えて、本技術では、前記解析部は、術後の出血リスクの程度を解析してもよい。この場合、前記出血リスクは、出血量であるものとすることができる。
また、本技術では、少なくとも外因系凝固能を評価するアッセイを含む１又は複数の電気的測定用容器、を更に有していてもよい。【００１２】
本技術において、「複素誘電率」の用語は、複素誘電率に等価な電気量をも包含する。複素誘電率に等価な電気量としては、複素インピーダンス、複素アドミッタンス、複素キャパシタンス、複素コンダクタンスなどがあり、これらは単純な電気量変換によって相互に変換可能である。また、「複素誘電率」の測定には、実数部のみ、或いは虚数部のみの測定も含まれる。また、本技術において、「血液試料」とは、赤血球と血漿等の液体成分とを含む試料であればよく、血液自体に限定されるものではない。より具体的には、例えば、全血、血漿、又はこれらの希釈液及び／又は薬剤添加物等の血液成分を含有する液体試料等が挙げられる。
【発明の効果】
【００１３】
本技術によれば、ヒト組織因子経路インヒビターを簡便かつ迅速に評価することができる。
なお、ここに記載された効果は、必ずしも限定されるものではなく、本開示中に記載されたいずれかの効果であってもよい。
【図面の簡単な説明】
【００１４】
【図１】本技術に係る血液凝固系解析装置１００の概念を模式的に示す模式概念図である。
【図２】電気的測定用容器１０１の実施形態の例を模式的に示す断面図である。
【図３】複素誘電率スペクトル（三次元）の測定例を説明する図面代用グラフである。
【図４】複素誘電率スペクトル（二次元）の測定例を説明する図面代用グラフである。
【図５】複素誘電率スペクトルから抽出される特徴量の例を説明する図面代用グラフである。
【図６】Ａ及びＢは、今回検討した測定群で得られた、血漿中のＴＦＰＩ濃度と術後２４時間内出血量の関係を示す図面代用グラフである。
【図７】今回検討した測定群において、血液凝固系解析装置の解析結果からＣＴ０について注目し、ＥＸＨＮＴの結果とＥＸＨＮの結果とを比較した図面代用グラフである。
【発明を実施するための形態】
【００１５】
以下、本技術を実施するための好適な形態について図面を参照しながら説明する。
以下に説明する実施形態は、本技術の代表的な実施形態の一例を示したものであり、これにより本技術の範囲が狭く解釈されることはない。なお、説明は以下の順序で行う。
１．血液凝固系解析装置１００
（１）一対の電極１ａ，１ｂ
（１−１）電気的測定用容器１０１
（１−２）接続部１０２
（１―３）容器保持部１０３
（２）印加部２
（３）測定部３
（４）解析部４
（５）通知部５
（６）表示部６
（７）記憶部７
（８）測定条件制御部８
（９）温度制御部９
（１０）血液試料供給部１０
（１１）薬剤供給部１１
（１２）精度管理部１２
（１３）駆動機構１３
（１４）サンプル待機部１４
（１５）撹拌機構１５
（１６）ユーザーインターフェース１６
（１７）サーバ１７
（１８）その他
【００１６】
１．血液凝固系解析装置１００
血液凝固系解析装置１００は、一対の電極１ａ，１ｂと、印加部２と、測定部３と、解析部４と、を少なくとも有する。また、血液凝固系解析装置１００は、必要に応じて、通知部５、表示部６、記憶部７、測定条件制御部８、温度制御部９、血液試料供給部１０、薬剤供給部１１、精度管理部１２、駆動機構１３、サンプル待機部１４、撹拌機構１５、ユーザーインターフェース１６、サーバ１７等の他の部を備えていてもよい。以下、各部について詳細に説明する。
【００１７】
（１）一対の電極１ａ，１ｂ
一対の電極１ａ，１ｂは、測定時に血液試料Ｂと接触し、血液試料Ｂに必要な電圧を印加する。
【００１８】
一対の電極１ａ，１ｂの配置や形態などは特に限定されず、血液試料Ｂに必要な電圧を印加することができれば適宜自由に設計することができるが、本技術では、一対の電極１ａ，１ｂは、後述する電気的測定用容器１０１に一体成形されていることが好ましい。
【００１９】
電極１ａ，１ｂを構成する素材についても特に限定されず、解析対象である血液試料Ｂの状態等に影響がない範囲で、公知の電気伝導性素材を１種又は２種以上適宜自由に選択して用いることができる。具体的には、例えば、チタン、アルミニウム、ステンレス、白金、金、銅、黒鉛等が挙げられる。
【００２０】
本技術では、これらの中でも特に、チタンを含む電気伝導性素材で電極１ａ，１ｂを形成することが好ましい。チタンは、血液試料に対して低凝固活性であるという性質を有するため、血液試料Ｂの測定に好適である。
【００２１】
（１−１）電気的測定用容器１０１
図２は、電気的測定用容器１０１の実施形態の例を模式的に示す断面図である。電気的測定用容器１０１には、解析対象である血液試料Ｂが保持される。本技術に係る血液凝固系解析装置１００において、この電気的測定用容器１０１の個数は特に限定されず、解析対象である血液試料Ｂの量、種類等に応じて、一又は複数の電気的測定用容器１０１を適宜自由に配置することができる。
【００２２】
本技術に係る血液凝固系解析装置１００では、電気的測定用容器１０１に血液試料Ｂを保持した状態で、複素誘電率の測定が行われる。そのため、電気的測定用容器１０１は、血液試料Ｂを保持した状態で密封可能な構成であることが好ましい。ただし、複素誘電率を測定するのに要する時間停滞可能であって、測定に影響がなければ、気密な構成でなくてもよい。
【００２３】
電気的測定用容器１０１への血液試料Ｂの具体的な導入及び密閉方法は特に限定されず、電気的測定用容器１０１の形態等に応じて、適宜自由な方法で導入することができる。例えば、電気的測定用容器１０１に蓋部を設け、ピペット等を用いて血液試料Ｂを導入した後に蓋部を閉じて密閉する方法等が挙げられる。
【００２４】
電気的測定用容器１０１の形態は、解析対象である血液試料Ｂを装置内に保持することができれば特に限定されず、適宜自由に設計することができる。また、電気的測定用容器１０１は、一又は複数の容器からなるものとすることができる。
【００２５】
電気的測定用容器１０１の具体的な形態は特に限定されず、解析対象である血液試料Ｂを保持可能であれば、円筒体、断面が多角（三角、四角或いはそれ以上）の多角筒体、円錐体、断面が多角（三角、四角或いはそれ以上）の多角錐体、或いはこれらを１種又は２種以上組み合わせた形態など、血液試料Ｂの状態等に応じて、適宜自由に設計することができる。
【００２６】
また、容器１０１を構成する素材についても特に限定されず、解析対象である血液試料Ｂの状態等に影響のない範囲で、適宜自由に選択することができる。本技術では特に、加工成形のし易さなどの観点から、容器１０１が樹脂により構成されていることが好ましい。本技術において、用いることができる樹脂の種類等も特に限定されず、血液試料Ｂの保持に適用可能な樹脂を、１種又は２種以上適宜自由に選択して用いることができる。例えば、ポリプロピレン、ポリメチルメタクリレート、ポリスチレン、アクリル、ポリサルホン、ポリテトラフルオロエチレンなどの疎水性かつ絶縁性のポリマーやコポリマー、ブレンドポリマー等が挙げられる。
【００２７】
本技術では、これらの中でも特に、ポリプロピレン、ポリスチレン、アクリル、及びポリサルホンから選ばれる一種以上の樹脂で電気的測定用容器１０１を形成することが好ましい。これらの樹脂は、血液試料に対して低凝固活性であるという性質を有するため、血液試料の測定に好適である。
【００２８】
なお、本技術では、電気的測定用容器１０１として、公知の使い捨てカートリッジタイプのものを用いることもできる。
【００２９】
本技術では、少なくとも外因系凝固能を評価するアッセイを含む１又は複数の電気的測定用容器を備えていることが好ましい。これにより、後述する解析部４でのＴＦＰＩの評価を効率的に行うことができる。前記アッセイとしては、例えば、組織因子及びカルシウムを試薬として含むもの等が挙げられ、これらの試薬は予め１又は複数の電気的測定用容器に封入されていることが好ましい。
【００３０】
本技術では、このように、薬剤を用いる場合、電気的測定用容器１０１には、予め、所定の薬剤を、固体化して、或いは液体のまま収容しておくことも可能である。例えば、抗凝固剤、凝固開始剤、組織因子や、ヘパリン分解剤、ヘパリン中和剤、抗ＴＦＰＩ抗体等を予め容器１０１に入れておくことができる。このように、容器１０１に予め薬剤を収容しておくことで、後述する薬剤供給部１１や薬剤を保持する部位が不要となり、装置の小型化やコストの低減が可能である。また、ユーザーの薬剤交換等の手間が不要となり、薬剤供給部１１や薬剤を保持する部位等の装置メンテナンスも不要となるためにユーザビリティを向上させることもできる。
【００３１】
（１−２）接続部１０２
接続部１０２は、後述する印加部３と電極１ａ，１ｂとを、電気的に接続する。接続部１０２の具体的な形態は特に限定されず、印加部３と電極１ａ，１ｂとを電気的に接続することが可能であれば、適宜自由に設計することができる。
【００３２】
（１−３）容器保持部１０３
容器保持部１０３は、電気的測定用容器１０１を保持する。容器保持部１０３の具体的な形態は特に限定されず、解析対象である血液試料Ｂが収容された容器１０１を保持可能であれば、適宜自由に設計することができる。
【００３３】
容器保持部１０３を構成する素材についても特に限定されず、電気的測定用容器１０１の形態等に応じて、適宜自由に選択することができる。
【００３４】
また、本技術では、容器保持部１０３は、電気的測定用容器１０１に備えられた情報記録媒体から、容器１０１に関する情報を、自動的に読み取る機能（例えば、バーコードリーターなど）を備えていてもよい。前記情報記憶媒体とは、例えば、ＩＣカード、ＩＣタグ、バーコードやマトリックス型二次元コードを備えるカード、バーコードやマトリックス型二次元コードを印字した紙又はシール等が挙げられる。
【００３５】
（２）印加部２
印加部２は、一対の電極１ａ，１ｂに対して交番電圧を所定の時間間隔で印加する。より具体的には、例えば、印加部２は、測定を開始すべき命令を受けた時点又は装置１０の電源が投入された時点を開始時点として、一対の電極１ａ，１ｂに交番電圧を印加する。より具体的には、印加部２は、設定された測定間隔又は後述する測定条件制御部８において制御された測定間隔ごとに、一対の電極１ａ，１ｂに対して、設定された周波数又は後述する測定条件制御部８において制御された周波数の交番電圧を印加する。
【００３６】
（３）測定部３
測定部３は、一対の電極１ａ，１ｂ間に配される血液試料の複素誘電率を測定する。測定部３の構成は、血液試料Ｂに対して測定目的である複素誘電率が測定可能となるように構成されていれば、適宜自由に設計することができる。具体的には、例えば、測定部３として、インピーダンスアナライザー、ネットワークアナライザー等を採用できる。
【００３７】
より具体的には、例えば、印加部２により血液試料Ｂに交番電圧が印加されることによって得られる血液試料Ｂのインピーダンスを経時的に測定するように構成され、測定を開始すべき命令を受けた時点又は装置１０の電源が投入された時点を開始時点として、電極１ａ，１ｂ間における血液試料Ｂのインピーダンスを経時的に測定するような構成を採用できる。そして、測定したインピーダンスから、複素誘電率を導出する。この複素誘電率の導出には、インピーダンスと誘電率との関係を示す既知の関数や関係式を用いることができる。
【００３８】
測定部３による測定結果は、周波数、時間、及び誘電率を各座標軸とする三次元の複素誘電率スペクトル（図２）、或いは、周波数、時間、及び誘電率から選択される２つを各座標軸とする二次元の複素誘電スペクトル（図３）として得ることができる。図２中のＺ軸は、各時間及び各周波数における複素誘電率の実数部を示す。
【００３９】
図３は、図２に示す三次元スペクトルを周波数７６０ｋＨｚで切り出した二次元スペクトルに対応する。図３中の符号（Ａ）は赤血球の連銭形成に伴うピークであり、符号（Ｂ）は血液試料凝固過程に伴うピークである。本願発明者らは、上記特許文献１において、血液試料の誘電率の時間的変化が血液試料の凝固過程を反映することを明らかにしている。したがって、測定部３で得られる複素誘電率スペクトルは、血液試料の凝固能を定量的に示す指標となるものであり、その変化に基づけば、血液試料凝固時間、血液試料凝固速度、血液試料凝固強度等の血液試料の凝固能に関する情報を得ることが可能である。
【００４０】
（４）解析部４
解析部４は、前記血液試料に働いている抗凝固作用が解かれた以後から前記時間間隔で測定される所定期間における特定の周波数の複素誘電率に基づいてヒト組織因子経路インヒビター（ＴＦＰＩ）を評価する。
【００４１】
解析部４は、具体的には、例えば、組織因子（ｔｉｓｓｕｅ ｆａｃｔｏｒ：ＴＦ）、及び抗ＴＦＰＩ抗体を用いてＴＦＰＩを評価する。
【００４２】
より具体的には、組織因子及び抗ＴＦＰＩ抗体を用いて測定した前記複素誘電率と、組織因子を用いて測定した前記複素誘電率と、を比較処理し、これらのスペクトルパターンの相違に基づいてＴＦＰＩを評価する。スペクトルパターンの比較は、両者の前記特定の周波数の複素誘電率の変化における特徴量に基づいて行うことができ、この特徴量の違いから、これらのスペクトルパターンの相違を検出できる。前記特徴量としては、血液試料凝固反応に関連する時間的な指標や、該反応の速度に関連する指標等を採用することができる。
【００４３】
図５は、複素誘電率スペクトルから抽出される特徴量の例を説明する図面代用グラフである。図５において、縦軸は誘電率、横軸は時間を示し、上側のグラフは周波数１ＭＨｚ付近（１００ｋＨｚ以上３ＭＨｚ未満）での測定結果に基づくものであり、下側のグラフは周波数１０ＭＨｚ付近（３〜３０ＭＨｚ）での測定結果に基づくものである。
【００４４】
本技術において、前記特徴量は、前記特定の周波数の複素誘電率スペクトルから抽出される時間特徴量及び／又は勾配特徴量を用いることができる。また、前記勾配特徴量は、前記特定の周波数の複素誘電率スペクトルから抽出される時間特徴量に基づいて抽出されるものとすることができる。より具体的には、前記特徴量としては、例えば、１００ｋＨｚ以上３ＭＨｚ未満の低周波数で複素誘電率の極大値を与える時間ＣＴ０、低周波数で最大勾配を与える時間ＣＴ１（不図示）、低周波数での最大勾配ＣＦＲ、ＣＴ１以降で傾きの絶対値がＣＦＲの所定割合（好ましくは、５０％）になった際の時間ＣＴ４（不図示）、３〜３０ＭＨｚの高周波数で複素誘電率の極小値を与える時間ＣＴ、高周波数で最大勾配を与える時間ＣＴ３、高周波数での最大勾配ＣＦＲ２、ＣＴ以降ＣＴ３以前でＣＴ３からＣＦＲ２の傾きで直線を引いた時に複素誘電率の最小値を与える時間ＣＴ２、及びＣＴ３以降で傾きの絶対値がＣＦＲ２の所定割合（好ましくは、５０％）になった際の時間ＣＴ５（不図示）からなる群より選ばれるいずれか１つ以上を用いることができる。また、これらの特徴量同士の演算値や、測定された複素誘電率等との演算値を用いることもできる。
【００４５】
更に具体的には、組織因子及び抗ＴＦＰＩ抗体を用いて測定した際の血液凝固時間（例えば、ＣＴ０等）の方が、組織因子を用いて測定した際の血液凝固時間よりも短縮していれば、その短縮は検体（血液試料Ｂ）中のＴＦＰＩを抗ＴＦＰＩ抗体によって抑制することにより得られたものであるから、このような検体ではＴＦＰＩの血中濃度が高まっていると評価できる。
【００４６】
ＴＦＰＩの血中濃度が高まると、本来血液凝固反応が起こるべき血管損傷部でも該反応が抑制され、効果的な止血ができなくなるという可能性がある。そのため、血中のＴＦＰＩ濃度が高いか否かについて判断することで、例えば、術後の出血リスクの程度を解析することも可能である。
【００４７】
また、本願発明者らは、後述する実施例において、血中のＴＦＰＩ濃度は、術後の出血量に影響していることを明らかにした。そのため、術後の出血リスクとして、例えば、出血量についても、解析部４にて予測することが可能である。なお、前述した組織因子及び抗ＴＦＰＩ抗体を用いて測定した場合の血液凝固時間の方が、組織因子を用いて測定した場合の血液凝固時間よりも短縮しているような検体の場合には、この検体はもともとＴＦＰＩによる出血リスクが高いと判断できることから、抗ＴＦＰＩ抗体を用いることでその出血リスクを軽減可能である。
【００４８】
本技術では、更に、ヘパリン分解剤及び／又はヘパリン中和剤を用いてＴＦＰＩを評価することが好ましい。これらを用いることで、残余ヘパリンを含んだ検体であっても、ヘパリンの抗凝固作用を除外した評価が可能となる。前記ヘパリン分解剤としては、例えば、ヘパリナーゼ等が挙げられ、前記ヘパリン中和剤としては、例えば、プロタミン、ポリブレン等が挙げられる。
【００４９】
本技術では、これらの中でも特に、ヘパリン分解剤を用いてＴＦＰＩを評価することがより好ましい。ヘパリン分解剤の場合は、過剰に添加したとしても測定結果に影響を与える可能性がなく、安定した測定結果を得ることができるからである。
【００５０】
ヘパリン分解剤及び／又はヘパリン中和剤を用いてＴＦＰＩを評価する場合、より具体的には、組織因子及び抗ＴＦＰＩ抗体を用いて測定した前記複素誘電率と、組織因子を用いて測定した前記複素誘電率と、を比較処理し、これらのスペクトルパターンの相違に基づいてＴＦＰＩを評価する。スペクトルパターンの相違に基づいてＴＦＰＩを評価する方法としては、前述したものと同様であるため、ここでは説明を割愛する。
【００５１】
（５）通知部５
通知部５は、解析部４での解析結果を、特定の時点で通知する。本技術において、通知部５の構成は特に限定されず、例えば、測定中に異常な解析結果が得られた場合にのみ、通知信号を発生し、その結果をリアルタイムでユーザーに通知する構成とすることができる。これにより、異常な解析結果が確定された特定の時点でのみユーザーに解析結果が通知されるため、ユーザビリティが向上する。
【００５２】
また、ユーザーへの通知方法も特に限定されず、例えば、後述する表示部６、ディスプレイ、プリンタ、スピーカー、照明等を介して通知することができる。また、例えば、通知部５には、携帯電話、スマートフォン等のモバイル機器へ向け、通知信号が発生したことを知らせるための電子メール等を送信するための通信機能を備える装置も併用することもできる。
【００５３】
また、本技術において、通知部５は、例えば、ＴＦＰＩの評価を行うことが予め装置１００に入力されているにも関わらず、前述した、少なくとも外因系凝固能を評価するアッセイを含む１又は複数の電気的測定用容器１０１を装置１００にセットされていない場合には、ユーザーに対して警告等を通知し、該容器１０１をセットするように促す機能を備えることもできる。
【００５４】
（６）表示部６
表示部６は、解析部４での解析結果、測定部３で測定された複素誘電率のデータ、通知部５からの通知結果等を表示する。表示部６の構成は特に限定されず、例えば、表示部６として、ディスプレイ、プリンタ等を採用できる。また、本技術において、表示部６は必須ではなく、外部の表示装置を接続することでもよい。
【００５５】
（７）記憶部７
記憶部７は、解析部４での解析結果、測定部３で測定された複素誘電率のデータ、通知部５からの通知結果等を記憶する。記憶部７の構成は特に限定されず、例えば、記憶部７として、例えば、ハードディスク（Ｈａｒｄ Ｄｉｓｋ Ｄｒｉｖｅ）、フラッシュメモリ、ＳＳＤ（Ｓｏｌｉｄ Ｓｔａｔｅ Ｄｒｉｖｅ）等を採用することができる。また、本技術において、記憶部７は必須ではなく、外部の記憶装置を接続することでもよい。
【００５６】
更に、本技術では、血液凝固系解析装置１００の動作プログラム等が記憶部７に保存されていてもよい。
【００５７】
（８）測定条件制御部８
測定条件制御部８は、測定部３における測定時間及び／又は測定周波数等を制御する。測定時間制御の具体的な方法としては、目的の解析に必要なデータ量等に応じて測定間隔の制御を行ったり、測定値がほぼ横ばいになった場合等に測定終了のタイミングの制御を行ったりすることができる。
【００５８】
また、測定対象である血液試料Ｂの種類や目的の解析に必要な測定値等に応じて、測定周波数の制御を行うことも可能である。測定周波数の制御としては、電極１ａ，１ｂ間に印加する交流電圧の周波数を変化させたり、複数の周波数を重畳させて、複数の周波数でのインピーダンス測定を行ったりする方法等が挙げられる。その具体的な方法としては、複数の単周波数アナライザーを並設する方法、周波数をスイープする方法、周波数を重畳させてフィルターで各周波数の情報を抽出する方法、インパルスに対するレスポンスで測定する方法等が挙げられる。
【００５９】
（９）温度制御部９
温度制御部９は、電気的測定用容器１０１における温度を制御する。本技術に係る血液凝固系解析装置１００において、この温度制御部９は必須ではないが、解析対象である血液試料Ｂを測定に最適な状態に保つためには、備えることが好ましい。
【００６０】
また、後述するように、サンプル待機部１４を設ける場合、温度制御部９は、サンプル待機部１４における温度を制御することも可能である。更に、測定時又は測定前に、血液試料Ｂに薬剤を入れる場合、薬剤の温度を制御するために、温度制御部９を備えていてもよい。この場合、温度制御部９は、電気的測定用容器１０１における温度制御、サンプル待機部１４における温度制御、及び薬剤の温度制御のためにそれぞれ設けることもできるし、一つの温度制御部９が全ての温度制御を行ってもよい。
【００６１】
温度制御の具体的な方法は特に限定されないが、例えば、容器保持部１０３に、温度調整機能を持たせることで、容器保持部１０３を温度制御部９として機能させてもよい。
【００６２】
（１０）血液試料供給部１０
血液試料供給部１０は、電気的測定用容器１０１に血液試料Ｂを自動的に供給する。本技術に係る血液凝固系解析装置１００において、この血液試料供給部１０は必須ではないが、血液試料供給部８を備えることで、血液凝固系解析の各工程をオートマチックに行うことができる。
【００６３】
血液試料Ｂの具体的な供給方法は特に限定されないが、例えば、ピペッターとその先端に装着するチップを用いて、電気的測定用容器１０１に血液試料Ｂを自動的に供給することができる。この場合、測定誤差等を防止するためにも、前記チップは使い捨てにすることが好ましい。また、血液試料Ｂの貯蔵庫から、ポンプ等を用いて電気的測定用容器１０１に血液試料Ｂを自動的に供給することもできる。更に、常設のノズル等を用いて電気的測定用容器１０１に血液試料Ｂを自動的に供給することも可能である。この場合、ノズルには、測定誤差等を防止するためにも、洗浄機能を付与することが好ましい。
【００６４】
また、本技術では、血液試料供給部１０に、検体である血液試料Ｂの種類等を識別し、自動的に読み取る機能（例えば、バーコードリーダーなど）等を備えることも可能である。
【００６５】
（１１）薬剤供給部１１
薬剤供給部１１は、電気的測定用容器１０１に１種又は２種以上の薬剤を自動的に供給する。本技術に係る血液凝固系解析装置１００において、この薬剤供給部１１は必須ではないが、薬剤供給部１１を備えることで、血液凝固系解析の各工程をオートマチックに行うことができる。
【００６６】
薬剤の具体的な供給方法は特に限定されず、前述した血液試料供給部１０と同様の方法を用いて行うことができる。特に、薬剤の供給は、電気的測定用容器１０１に接触することなく、一定量の薬剤を供給できる方法が好ましい。例えば、液体状の薬剤であれば、吐出による供給を行うことができる。より具体的には、例えば、予め薬液を吐出管内へ導入しておき、これに接続される管路を介して、別途接続される加圧空気を短時間管路へ吹き込むことにより、容器１０１へ薬液を吐出供給することができる。この際、空気圧とバルブ開閉時間を調整することにより、薬液の吐出量を調整可能とすることもできる。
【００６７】
また、空気を吹き込む以外に、加熱により薬液自体、或いはそれに溶存する空気の気化を利用して、容器１０１へ薬液を吐出供給することもできる。この際、発熱素子等を設置した気化室への印加電圧と時間を調整することにより、発生気泡容積を調整し、薬液の吐出量を調整することもできる。
【００６８】
更に、空気を使わず、圧電素子（ピエゾ素子）等を用いて、管路内に設けられた可動部を駆動し、可動部容積で定まる量の薬液を送出することにより、容器１０１へ薬液を供給することもできる。また、例えば、薬液を微滴化し、所望の容器１０１へ直接吹き付ける、所謂、インクジェット方式を用いることにより、薬剤を供給することも可能である。
【００６９】
また、本技術では、薬剤供給部１１に、撹拌機能、温度制御機能、薬剤の種類等を識別し、自動的に読み取る機能（例えば、バーコードリーダーなど）等を備えることも可能である。
【００７０】
（１２）精度管理部１２
精度管理部１２は、測定部３の精度管理を行う。本技術に係る血液凝固系解析装置１００において、この精度管理部１２は必須ではないが、精度管理部１２を備えることで、測定部３での測定精度の向上や、ユーザビリティの向上を図ることができる。
【００７１】
具体的な精度管理方法は特に限定されず、公知の精度管理方法を適宜自由に用いることができる。例えば、装置１００内に、ショート用の金属板等を設置しておき、測定開始前に電極と金属板とをショートさせることで測定部３のキャリブレーションを行う方法、キャリブレーション用のジグ等と電極とを接触させる方法、血液試料Ｂを入れる容器１０１と同一の形態の容器に金属板等を設置しておき、測定開始前に電極と金属板とをショートさせることで測定部３のキャリブレーションを行う方法等の測定部３のキャリブレーションを行うことにより、測定部３の精度管理を行う方法等が挙げられる。
【００７２】
また、前述した方法に限らず、実際の測定前に測定部３の状態をチェックし、異常があった時のみ、前述したキャリブレーション等を行って測定部３を校正することで、測定部３の精度管理を行う方法など、適宜自由な方法を選択して用いることができる。
【００７３】
（１３）駆動機構１３
駆動機構１３は、様々な目的に応じて、測定部３中の電気的測定用容器１０１を動かすために用いられる。例えば、容器１０１に保持された血液試料Ｂにかかる重力の方向を変化させる方向へ該容器１０１を動かすことで、血液試料Ｂ中の沈降成分の沈降により、測定値に影響が生じるのを防ぐことができる。
【００７４】
また、例えば、非測定時には、印加部２と電極１ａ、１ｂとを非接続状態とし、測定時には、印加部２と電極１ａ、１ｂとを電気的に接続可能となるように、電気的測定用容器１０１を駆動させることもできる。
【００７５】
更に、例えば、複数の電気的測定用容器１０１を備える場合には、容器１０１を動かすことができるように構成しておけば、容器１０１を必要な部位に移動させることで、測定、血液試料供給、薬剤供給などを行うことができる。即ち、測定部３、血液試料供給部１０、薬剤供給部１１等を目的の電気的測定用容器１０１に移動させる必要がないため、各部を動かすための駆動部などを設ける必要がなく、装置の小型化やコストの低減が可能である。
【００７６】
（１４）サンプル待機部１４
サンプル待機部１４は、分取した血液試料Ｂを測定前に待機させる。本技術に係る血液凝固系解析装置１００において、このサンプル待機部１２は必須ではないが、サンプル待機部１４を備えることで、誘電率の測定を円滑に行うことができる。
【００７７】
本技術では、サンプル待機部１４に、撹拌機能、温度制御機能、電気的測定用容器１０１への移動機構、血液試料Ｂの種類等を識別し、自動的に読み取る機能（例えば、バーコードリーダーなど）や、自動開栓機能等を備えることも可能である。
【００７８】
（１５）撹拌機構１５
撹拌機構１５は、血液試料Ｂの撹拌、血液試料Ｂと薬剤との撹拌を行う。本技術に係る血液凝固系解析装置１００において、この撹拌機構１３は必須ではないが、例えば、血液試料Ｂに沈降性成分が含まれる場合や、測定時に血液試料Ｂに薬剤を添加する場合などには、撹拌機構１５を備えることが好ましい。
【００７９】
具体的な撹拌方法は特に限定されず、公知の撹拌方法を適宜自由に用いることができる。例えば、ピペッティングによる撹拌、撹拌棒又は撹拌子等を用いた撹拌、血液試料Ｂや薬剤の入った容器を上下逆転させることによる撹拌等を挙げることができる。
【００８０】
（１６）ユーザーインターフェース１６
ユーザーインターフェース１６は、ユーザーが操作するための部位である。ユーザーは、ユーザーインターフェース１６を通じて、血液凝固系解析装置１００の各部にアクセスすることができる。
【００８１】
（１７）サーバ１７
サーバ１７は、測定部３でのデータ及び／又は解析部４での解析結果を記憶する記憶部を少なくとも備え、ネットワークを介して、少なくとも測定部３及び／又は解析部４と接続されている。
【００８２】
また、サーバ１７では、血液凝固系解析装置１００の各部からアップロードされた各種データの管理や、ユーザーからの指示により表示部６等に各種データを出力することも可能である。
【００８３】
（１８）その他
なお、本技術に係る血液凝固系解析装置１００の各部で行われる機能を、パーソナルコンピュータや、ＣＰＵ等を含む制御部及び記録媒体（不揮発性メモリ（ＵＳＢメモリ等）、ＨＤＤ、ＣＤ等）などを備えるハードウェア資源にプログラムとして格納し、パーソナルコンピュータや制御部によって機能させることも可能である。
【実施例】
【００８４】
以下、実施例に基づいて本技術を更に詳細に説明する。
なお、以下に説明する実施例は、本発明の代表的な実施例の一例を示したものであり、これにより本技術の範囲が狭く解釈されることはない。【００８５】
＜検体＞
人工心肺を用いる心臓血管手術を受ける成人患者の血液による測定を実施した。採血のタイミングは、下記の通りとした。
（i）麻酔導入後手術開始前
（ii）人工心肺終了後・プロタミンによるヘパリン中和の終了時
（iii）（ii）の１時間後
（iv）（ii）の２時間後（この時点ですでに閉胸となった場合には、（v）に進む。）
（v）閉胸後手術終了時【００８６】
＜測定＞
血液凝固系解析装置による測定の他、血算、一般的凝固検査、及び血漿を用いたＴＦＰＩを含む各凝固・線溶・調整因子の測定などを実施した。また、術後のドレーンからの出血量を計量した。更に、血液凝固系解析装置による測定において、抗ＴＦＰＩ抗体を添加したものについても測定を実施し、左記抗体を添加しないコントロールとの比較検討も実施した。【００８７】
血液凝固系解析装置では、クエン酸を抗凝固剤として用いて採血した採血管を装置の血液試料供給部にセットし、温度制御部によって３７℃に自動的に加温された。なお、検体の情報は、ユーザーインターフェースを通じて入力してもよいし、バーコードによる読み取りにより自動的に入力されてもよい。【００８８】
３７℃にコントロールされた測定部に、予め試薬が封入されている電気的測定用容器をセットした。なお、この電気的測定用容器中の試薬はアッセイ毎に異なっており、複数の電気的測定用容器（アッセイ）を用いて同時に測定できる。ユーザーはＴＦＰＩや他の評価項目を優先して行うことを、ユーザーインターフェースを通じて入力してもよいし、電気的測定用容器等に貼付可能なバーコード等の情報記憶媒体を通じて、自動で読み込ませてもよい。【００８９】
ＴＦＰＩの評価を行うためには、少なくとも外因系凝固能を評価できるアッセイ（例えば、組織因子とカルシウムを試薬として含むものなど）が装置にセットされていることが好ましい。便宜上、本実施例では、このアッセイを「ＥＸ」と称する。また、ヘパリンの効果を除外した評価を行うため、ＥＸにヘパリナーゼを加えたアッセイを便宜上、本実施例では、「ＥＸＨＮ」と称する。また、このＥＸＨＮに抗ＴＦＰＩ抗体を加えたものを便宜上、本実施例では、「ＥＸＨＮＴ」と称する。【００９０】
＜結果＞
図６のＡ及びＢは、今回検討した測定群で得られた、血漿中のＴＦＰＩ濃度と術後２４時間内出血量の関係を示す図面代用グラフである。これらのグラフでは、縦軸は２４時間での出血量（ｍＬ）、横軸は血漿中のＴＦＰＩ濃度（ｎｇ／ｍＬ）を示す。この結果から、ＴＦＰＩ値が高いと、有意に術後出血が増えることが示され、血中のＴＦＰＩ濃度は術後の出血量に影響していることが分かった。【００９１】
図７は、今回検討した測定群において、血液凝固系解析装置の解析結果からＣＴ０（＝１００ｋＨｚ以上３ＭＨｚ未満の低周波数で複素誘電率の極大値を与える時間、ここでは、血液凝固時間）について注目し、ＥＸＨＮＴの結果とＥＸＨＮの結果とを比較した図面代用グラフである。縦軸はＣＴ０（ｓｅｃ）を示し、横軸は血漿中のＴＦＰＩ濃度（ｎｇ／ｍＬ）を示す。この結果から明らかな通り、ＴＦＰＩ濃度が増加するとＥＸＨＮにおいてＣＴ０が延長し、血液凝固能（止血能）が低下していることが分かる。これは、図６に示したように、ＴＦＰＩ濃度が高くなると術後出血が増加することと関連している。【００９２】
一方で、抗ＴＦＰＩ抗体を添加したＥＸＨＮＴアッセイでは、ＴＦＰＩ濃度が高い検体であってもＣＴ０の延長は抑制されており、凝固能が維持されている。このような検体においては、凝固能の低下がＴＦＰＩによるものであることが分かるので、抗ＴＦＰＩ抗体による治療によって術後出血を抑制できることが検査結果として提示可能である。【００９３】
以上のことから、本技術によれば、術後出血の要因の一つである血中のＴＦＰＩに関し、ＴＦＰＩによる血液凝固抑制効果がどの程度かを評価可能となる。また、抗ＴＦＰＩ抗体によるＴＦＰＩ抑制効果が分かるので、抗ＴＦＰＩ抗体薬が有効な患者群とそうでない患者群を分別することができ、また、術後出血のリスクとしてＴＦＰＩの影響が大きいか、別の要因が大きいかを判断して、患者一人ひとりに最適な治療方針を決定するのに貢献することができる。【００９４】
なお、本技術では、以下の構成を取ることもできる。
（１）
一対の電極と、
前記一対の電極に対して交番電圧を所定の時間間隔で印加する印加部と、
前記一対の電極間に配される血液試料の複素誘電率を測定する測定部と、
前記血液試料に働いている抗凝固作用が解かれた以後から前記時間間隔で測定される所定期間における特定の周波数の複素誘電率に基づいてヒト組織因子経路インヒビター（ＴＦＰＩ）を評価する解析部と、
を有する、血液凝固系解析装置。
（２）
組織因子及び抗ＴＦＰＩ抗体を用いて前記ＴＦＰＩを評価する、（１）に記載の血液凝固系解析装置。
（３）
前記解析部は、組織因子及び抗ＴＦＰＩ抗体を用いて測定した前記複素誘電率と、組織因子を用いて測定した前記複素誘電率と、に基づいて、前記ＴＦＰＩを評価する、（２）に記載の血液凝固系解析装置。
（４）
更に、ヘパリン分解剤及び／又はヘパリン中和剤を用いる、（２）又は（３）に記載の血液凝固系解析装置。
（５）
前記解析部は、組織因子、ヘパリン分解剤及び／又はヘパリン中和剤、及び抗ＴＦＰＩ抗体を用いて測定した前記複素誘電率と、組織因子、及びヘパリン分解剤及び／又はヘパリン中和剤を用いて測定した前記複素誘電率と、に基づいて、前記ＴＦＰＩを評価する、（４）に記載の血液凝固系解析装置。
（６）
前記評価の際に、前記特定の周波数の複素誘電率スペクトルから抽出される特徴量を用いる、（１）から（５）のいずれかに記載の血液凝固系解析装置。
（７）
前記特徴量は、前記特定の周波数の複素誘電率スペクトルから抽出される時間特徴量及び／又は勾配特徴量である、（６）に記載の血液凝固系解析装置。
（８）
前記勾配特徴量は、前記特定の周波数の複素誘電率スペクトルから抽出される時間特徴量に基づいて抽出される、（７）に記載の血液凝固系解析装置。
（９）
前記特徴量は、１００ｋＨｚ以上３ＭＨｚ未満の低周波数で複素誘電率の極大値を与える時間ＣＴ０、低周波数で最大勾配を与える時間ＣＴ１、低周波数での最大勾配ＣＦＲ、ＣＴ１以降で傾きの絶対値がＣＦＲの所定割合になった際の時間ＣＴ４、３〜３０ＭＨｚの高周波数で複素誘電率の極小値を与える時間ＣＴ、高周波数で最大勾配を与える時間ＣＴ３、高周波数での最大勾配ＣＦＲ２、ＣＴ以降ＣＴ３以前でＣＴ３からＣＦＲ２の傾きで直線を引いた時に複素誘電率の最小値を与える時間ＣＴ２、及びＣＴ３以降で傾きの絶対値がＣＦＲ２の所定割合になった際の時間ＣＴ５からなる群より選ばれるいずれか１つ以上である、（６）から（８）のいずれかに記載の血液凝固系解析装置。
（１０）
前記解析部は、術後の出血リスクの程度を解析する、（１）から（９）のいずれかに記載の血液凝固系解析装置。
（１１）
前記出血リスクは、出血量である、（１０）に記載の血液凝固系解析装置。
（１２）
少なくとも外因系凝固能を評価するアッセイを含む１又は複数の電気的測定用容器、
を更に有する、（１）から（１１）のいずれかに記載の血液凝固系解析装置。
【符号の説明】
【００９５】
１００：血液凝固系解析装置
１ａ，１ｂ：一対の電極
１０１：電気的測定用容器
１０２：接続部
１０３：容器保持部
２：印加部
３：測定部
４：解析部
５：通知部
６：表示部
７：記憶部
８：測定条件制御部
９：温度制御部
１０：血液試料供給部
１１：薬剤供給部
１２：精度管理部
１３：駆動機構
１４：サンプル待機部
１５：撹拌機構
１６：ユーザーインターフェース
１７：サーバ
【図１】
2020021890.tif 000003
【図２】
2020021890.tif 000004
【図３】
2020021890.tif 000005
【図４】
2020021890.tif 000006
【図５】
2020021890.tif 000007
【図６】
2020021890.tif 000008
【図７】
2020021890.tif 000009
【国際調査報告】
2020021890.tif 000010
2020021890.tif 000011
2020021890.tif 000012
2020021890.tif 000013