(57)【要約】  本発明は，Ｈ．スイス特異的な診断方法を提供することを目的とする。別の目的として，本発明は，Ｈ．スイスに特異的な診断方法であって，非侵襲的な方法を含む簡便な検査法を提供することを目的とする。本発明者らは，Ｈ．スイス感染者の体内にＨ．スイスにのみ特異的に存在する外膜タンパク質（ＨｓｖＡ；本発明者が命名）とそれに対する抗体が存在することを新規に発見し，ＨｓｖＡタンパク質の抗原部位となるアミノ酸配列を利用する診断法を見出した。よって，本発明は，ＨｓｖＡ抗原ペプチドからなるＨ．スイス特異的抗原及びｈｓｖＡ遺伝子由来のＨ．スイス特異的ＤＮＡを利用したＨ．スイスを特異的に検出可能な方法を提供するものである。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
ＨｓｖＡ抗原ペプチド又はその免疫学的に同等な変異体。
【請求項２】
Ｈ．スイス由来である，請求項１に記載の抗原ペプチド又はその免疫学的変異体免疫学的に同等な変異体。
【請求項３】
ＨｓｖＡ抗原ペプチドが，配列番号２，配列番号２８，配列番号３０，及び配列番号７８〜８３のいずれか１つに記載のアミノ酸配列に含まれる５〜５０アミノ酸からなる配列を有する，請求項１に記載の抗原ペプチド又はその免疫学的変異体免疫学的に同等な変異体。
【請求項４】
ＨｓｖＡ抗原ペプチドが，配列番号７８〜８３のいずれか１つに記載のアミノ酸配列に含まれる，５〜５０アミノ酸からなる配列を有する，請求項３に記載のペプチド又はその免疫学的に同等な変異体。
【請求項５】
ＨｓｖＡ抗原ペプチドが，以下の群から選択されるいずれか１つのアミノ酸配列を有するペプチド又はその免疫学的に同等な変異体である，請求項１に記載のペプチド又はその免疫学的に同等な変異体：
ＥＫＸ１ＡＶＸ２Ｘ３Ｘ４Ｘ５ＮＳＮＸ６Ｘ７（ペプチドＮｏ．１１：配列番号２４），
ＮＱＧＴＬＥＦＬＳＮＤＶＳＸ８（ペプチドＮｏ．１９：配列番号２５），
Ｘ９ＳＸ１０ＫＬＱＸ１１Ｘ１２ＬＫＳＸ１３Ｘ１４Ｘ１５（ペプチドＮｏ．３３：配列番号２６），
ＴＮＧＱＥＶＳＡＳＩＤＹＮＫ（ペプチドＮｏ．１６：配列番号１２），
ＡＫＬＳＮＦＡＳＮＤＡＬＰＤ（ペプチドＮｏ．２３：配列番号１３），
ＰＴＴＳＳＧＡＳＰＤＳＳＮＰ（ペプチドＮｏ．１０：配列番号１４），
ＧＬＧＲＤＬＦＶＨＳＭＧＤＫ（ペプチドＮｏ．２１：配列番号１５），
ＱＩＧＫＩＫＬＳＤＶＬＳＡＳ（ペプチドＮｏ．１５：配列番号１６），
ＹＧＡＩＤＫＥＬＨＦＳＧＧＫ（ペプチドＮｏ．３４：配列番号１７），
ＮＶＤＮＩＬＮＭＰＳＴＴＳＧ（ペプチドＮｏ．２０：配列番号１８），
ＧＮＬＫＧＶＹＹＰＫＳＳＴＴ（ペプチドＮｏ．２２：配列番号１９），
ＩＴＥＫＩＱＳＧＫＬＴＩＴＩ（ペプチドＮｏ．１４：配列番号２０），
ＦＨＤＦＬＶＳＬＫＧＫＫＦＡ（ペプチドＮｏ．２６：配列番号２１），
ＴＴＧＧＥＶＲＬＦＲＳＦＹＶ（ペプチドＮｏ．３１：配列番号２２），
ＩＧＡＲＦＧＬＤＹＱＤＩＮＩ（ペプチドＮｏ．３５：配列番号２３）
ＫＱＬＰＱＰＫＲＳＥＬＫＰＫ（ペプチドＮｏ．８：配列番号８６）、
ＴＮＩＫＱＹＭＱＮＮＨＲＳＱ（ペプチドＮｏ．３１Ｎ：配列番号８７）、
ＴＬＴＬＥＧＴＥＴＦＡＱＮＳ（ペプチドＮｏ．８１：配列番号８８）、
ＥＡＹＡＫＮＱＧＤＩＷＳＴＩ（ペプチドＮｏ．６３：配列番号８９）、
ＶＩＧＳＫＳＳＩＴＬＮＳＡＮ（ペプチドＮｏ．７３：配列番号９０）、及び
ＡＤＩＱＳＳＱＴＴＦＡＮＳＶ（ペプチドＮｏ．６１：配列番号９１）
ここで，Ｘ１はＫ又はＤであり，Ｘ２はＱ，Ｅ又はＴであり，Ｘ３はＱ又はＳであり，Ｘ４はＭ又はＬであり，Ｘ５はＥ又はＫであり，Ｘ６はＰ又はＳであり，Ｘ７はＤ又はＧであり，Ｘ８はＮ又はＴであり，Ｘ９はＬ又はＦであり，Ｘ１０はＮ又はＤであり，Ｘ１１はＧ，Ｄ又はＮであり，Ｘ１２はＱ又はＭであり，Ｘ１３はＭ又はＬであり，Ｘ１４はＧ又はＮであり，かつＸ１５はＬ又はＭである。
【請求項６】
ＨｓｖＡ抗原ペプチドが，以下の群から選択されるいずれか１つのアミノ酸配列を有するペプチド又はその免疫学的に同等な変異体である，請求項５に記載のペプチド又はその免疫学的に同等な変異体：
ＥＫＫＡＶＱＱＭＥＮＳＮＰＤ（ペプチドＮｏ．１１：配列番号３），
ＥＫＫＡＶＥＱＭＥＮＳＮＰＤ（ペプチドＮｏ．１１（ＴＫＹ）：配列番号４），
ＥＫＤＡＶＴＳＬＫＮＳＮＳＧ（ペプチドＮｏ．１１（ＳＨ８）：配列番号５），
ＥＫＤＡＶＴＳＬＥＮＳＮＳＧ（ペプチドＮｏ．１１（ＳＨ１０）：配列番号６），
ＮＱＧＴＬＥＦＬＳＮＤＶＳＮ（ペプチドＮｏ．１９：配列番号７），
ＮＱＧＴＬＥＦＬＳＮＤＶＳＴ（ペプチドＮｏ．１９（ＴＫＹ）：配列番号８），
ＬＳＮＫＬＱＧＱＬＫＳＭＧＬ（ペプチドＮｏ．３３：配列番号９），
ＬＳＮＫＬＱＤＱＬＫＳＭＧＬ（ペプチドＮｏ．３３（ＴＫＹ）：配列番号１０），
ＦＳＤＫＬＱＮＭＬＫＳＬＮＭ（ペプチドＮｏ．３３（ＳＨ１０）：配列番号１１），
ＴＮＧＱＥＶＳＡＳＩＤＹＮＫ（ペプチドＮｏ．１６：配列番号１２），
ＡＫＬＳＮＦＡＳＮＤＡＬＰＤ（ペプチドＮｏ．２３：配列番号１３），
ＰＴＴＳＳＧＡＳＰＤＳＳＮＰ（ペプチドＮｏ．１０：配列番号１４），
ＧＬＧＲＤＬＦＶＨＳＭＧＤＫ（ペプチドＮｏ．２１：配列番号１５），
ＱＩＧＫＩＫＬＳＤＶＬＳＡＳ（ペプチドＮｏ．１５：配列番号１６），
ＹＧＡＩＤＫＥＬＨＦＳＧＧＫ（ペプチドＮｏ．３４：配列番号１７），
ＮＶＤＮＩＬＮＭＰＳＴＴＳＧ（ペプチドＮｏ．２０：配列番号１８），
ＧＮＬＫＧＶＹＹＰＫＳＳＴＴ（ペプチドＮｏ．２２：配列番号１９），
ＩＴＥＫＩＱＳＧＫＬＴＩＴＩ（ペプチドＮｏ．１４：配列番号２０），
ＦＨＤＦＬＶＳＬＫＧＫＫＦＡ（ペプチドＮｏ．２６：配列番号２１），
ＴＴＧＧＥＶＲＬＦＲＳＦＹＶ（ペプチドＮｏ．３１：配列番号２２），
ＩＧＡＲＦＧＬＤＹＱＤＩＮＩ（ペプチドＮｏ．３５：配列番号２３）
ＫＱＬＰＱＰＫＲＳＥＬＫＰＫ（ペプチドＮｏ．８：配列番号８６）、
ＴＮＩＫＱＹＭＱＮＮＨＲＳＱ（ペプチドＮｏ．３１Ｎ：配列番号８７）、
ＴＬＴＬＥＧＴＥＴＦＡＱＮＳ（ペプチドＮｏ．８１：配列番号８８）、
ＥＡＹＡＫＮＱＧＤＩＷＳＴＩ（ペプチドＮｏ．６３：配列番号８９）、
ＶＩＧＳＫＳＳＩＴＬＮＳＡＮ（ペプチドＮｏ．７３：配列番号９０）、及び
ＡＤＩＱＳＳＱＴＴＦＡＮＳＶ（ペプチドＮｏ．６１：配列番号９１）。
【請求項７】
請求項１〜請求項６のいずれか１項のペプチド又はその免疫学的に同等な変異体に特異的に結合する抗体又はその免疫反応性断片。
【請求項８】
ｈｓｖＡ遺伝子とストリンジェントな条件下で結合可能である，５〜４０ヌクレオチドからなる核酸分子。
【請求項９】
ｈｓｖＡ遺伝子が，配列番号１，配列番号２７又は配列番号２９に記載の塩基配列を有する，請求項８に記載の核酸分子。
【請求項１０】
以下の群から選択されるいずれか１つの塩基配列を有する，請求項９に記載の核酸分子：
ＣＴＴＴＴＡＧＣＧＴＧＧＴＡＴＣＣＴＴＣ（配列番号３１），ＴＴＡＣＡＡＡＧＡＣＣＡＣＣＡＡＣＧＧＡ（配列番号３２），ＴＡＣＣＡＴＡＧＡＡＡＧＣＧＧＡＡＡＣ（配列番号３３），ＡＧＣＴＡＴＡＧＣＴＴＴＧＣＡＣＣＴＧＡ（配列番号３４），ＡＣＴＡＡＣＡＧＣＡＴＡＧＡＡＧＴＴＧＧＧＧＡ（配列番号３５），ＡＡＣＡＡＣＡＴＴＡＣＡＧＧＣＡＴＧＡＧ（配列番号３６），ＣＡＡＡＴＡＧＴＡＡＣＡＧＧＡＣＡＡＴＴ（配列番号３７），ＣＡＧＧＡＴＴＴＡＡＧＡＧＧＣＡＣＴＴＡ（配列番号３８），ＴＣＴＴＡＡＣＣＡＡＴＣＴＧＡＧＣＡＡ（配列番号３９），ＧＴＣＡＡＡＣＡＣＧＴＴＡＴＴＧＡＴＧＧＣＴＴ（配列番号４０），ＧＧＧＧＴＴＴＡＡＴＡＧＣＡＴＡＧＧＧ（配列番号４１），ＴＡＧＡＧＣＴＣＴＡＣＡＣＣＡＧＴＣＴＴ（配列番号４２），ＡＴＡＡＡＧＣＣＣＡＴＧＡＡＴＴＣＴＴＡＧＧＣＡＴＧＣＧＴＧＣＴＣＴＧ（配列番号４３），ＴＧＣＴＡＴＴＧＡＴＡＡＡＧＡＧＴＴＡＣＡＴＴＴＣＴＣＡＧＧ（配列番号４４），ＡＴＴＴＣＴＣＡＧＧＧＧＧＡＡＡＧＴＣ（配列番号４５），ＧＧＣＴＡＡＴＡＡＴＴＴＡＡＣＣＡＣＡＡＴＡＡＧＣＧＣＣＴＴＴＡＡ（配列番号４６），ＧＡＴＧＧＧＣＧＣＴＴＣＴＧＧＴＴＴＡ（配列番号４７），ＡＴＧＡＡＴＴＣＴＴＡＧＧＣＡＴＧＣＧＴＧＣＴＣＴ（配列番号４８），ＴＴＴＴＧＧＡＧＧＴＧＴＡＧＧＡＧＴＡＧＡＴ（配列番号４９），ＡＧＣＧＣＧＣＡＴＴＴＡＡＡＡＣＡＧＧＴ（配列番号５０），ＡＧＡＡＡＣＧＡＧＡＴＴＡＣＡＧＧＡＡＧ（配列番号５１），ＡＧＧＡＧＣＡＡＧＴＴＴＴＧＴＡＧＣＡＧ（配列番号５２），ＡＡＡＡＴＧＣＧＡＣＴＧＡＴＴＧＧＡＴＧ（配列番号５３），ＴＴＧＡＡＡＴＴＴＧＧＣＣＡＣＧＣＴ（配列番号５４），ＴＣＡＣＣＣＡＴＡＧＡＡＴＧＧＡＣＧＡＡ（配列番号５５），ＣＴＡＧＣＧＣＡＴＴＡＡＣＣＡＣＡＧＡＣＴＧ（配列番号５６），ＴＡＧＡＡＧＴＴＧＴＡＧＡＣＡＣＧＧＴ（配列番号５７），ＧＴＧＡＴＡＴＴＧＣＣＴＴＴＣＴＧＡＡＣ（配列番号５８），ＧＣＡＡＧＴＴＴＴＧＴＧＣＧＧＡＴＴ（配列番号５９），ＡＴＧＴＧＡＴＡＣＡＣＡＴＣＴＧＡＣＣ（配列番号６０），ＡＧＴＧＣＣＧＴＴＡＣＣＡＴＣＧＴＧＡＡ（配列番号６１），ＴＡＴＴＣＡＡＧＧＡＡＡＧＴＣＣＣＴＧＧＡＧＡＡＡＣＴＣＣＡＧＡＧＡＣ（配列番号６２），ＴＴＡＡＡＧＧＣＧＣＴＴＡＴＴＧＴＧＧＴＴＡＡＡＴＴＡＴＴＡＧＣＣ（配列番号６３），ＡＴＴＡＧＣＣＴＴＡＡＧＧＧＴＧＣＴＡＴＣ（配列番号６４），ＣＴＧＧＴＡＡＴＧＣＡＴＣＡＴＴＡＧＡＡＧＣＡＡＡ（配列番号６５），ＴＡＣＧＣＧＣＡＡＡＡＴＡＧＧＴＴＣＴＴ（配列番号６６），ＴＧＧＡＧＡＡＡＣＴＣＣＡＧＡＧＡＣＴＡ（配列番号６７），ＴＴＧＴＴＣＧＣＴＧＴＡＧＴＧＣＣＧＴＧＧ（配列番号６８），ＧＡＡＧＧＡＴＡＣＣＡＣＧＣＴＡＡＡＡＧ（配列番号６９），ＡＡＧＣＴＡＧＡＧＴＴＴＴＧＧＴＴＧＡＧ（配列番号７０），ＴＴＧＣＴＣＡＧＡＴＴＧＧＴＴＡＡＧＡ（配列番号７１），ＡＴＣＧＡＡＡＴＡＡＧＣＧＡＡＣＣＴＣＡ（配列番号７２），ＴＴＧＡＡＡＧＣＴＴＡＧＣＴＡＡＡＣＧＧ（配列番号７３），ＴＧＧＴＡＴＴＧＣＴＧＧＴＴＡＡＧＡＧＧ（配列番号７４），ＣＡＡＡＣＡＧＡＴＧＡＧＣＣＧＴ（配列番号７５），ＡＴＧＡＡＡＡＡＧＴＴＴＡＧＴＴＣＴＣＴＣＡＣＡＴＴＧＡＡＡＴＴＴＧＧＣＣＡＣＧＣＴＣ（配列番号７６），及びＣＴＡＡＡＡＡＧＣＡＴＡＧＣＧＣＡＴＣＣＣＧＡＣＡＴＴＧＣＣＴＧＴＡＡＴＡＴＴＡＡＴＡＴＣ（配列番号７７）。
【請求項１１】
ｈｓｖＡ遺伝子の全部又は一部を増幅可能なプライマーである，請求項８〜請求項１０のいずれか１項に記載の核酸分子。
【請求項１２】
ｈｓｖＡ遺伝子を検出するためのプローブである，請求項８〜請求項１０のいずれか１項に記載の核酸分子。
【請求項１３】
サンプル中のｈｓｖＡ遺伝子の全部又は一部を検出することを含む，Ｈ．スイスの存在を判定する方法，ここで，ｈｓｖＡ遺伝子の全部又は一部が検出されたサンプルをＨ．スイスが存在すると判定される。
【請求項１４】
請求項１３に記載のＨ．スイスの存在を判定する方法であって，
サンプル中のＤＮＡを鋳型として用いて，請求項１１に記載のプライマーを用いてｈｓｖＡ遺伝子の全部又は一部を増幅させること，
増幅されたＤＮＡを検出すること，及び
ＤＮＡの増幅が検出されたサンプルをＨ．スイスが存在すると判定すること，を含む方法。
【請求項１５】
請求項１３に記載のＨ．スイスの存在を判定する方法であって，
サンプル中のＤＮＡと請求項１２に記載のプローブとを接触させること，
請求項１２に記載のプローブと結合したＤＮＡを検出すること，及び
請求項１１に記載のプローブと結合したＤＮＡが検出されたサンプルをＨ．スイスが存在すると判定すること，を含む方法。
【請求項１６】
サンプル中のＨｓｖＡタンパク質又はその断片を検出すること，前記ＨｓｖＡタンパク質又はその断片が検出されたサンプルをＨ．スイスが存在すると判定することを含む，Ｈ．スイスの存在の判定方法。
【請求項１７】
請求項１６に記載のＨ．スイスの存在の判定方法であって：
サンプルと請求項７に記載の抗体又はその免疫反応性断片とを接触させること，
前記抗体又はその免疫反応性断片と結合した，前記サンプル中のＨｓｖＡタンパク質又はその断片を検出すること，及び
前記抗体又はその免疫反応性断片と結合したＨｓｖＡタンパク質又はその断片が検出されたサンプルをＨ．スイスが存在するサンプルと判定すること，を含む方法。
【請求項１８】
被験者のＨ．スイスへの感染を判定する方法であって，
被験者由来のサンプルをサンプルとして用いて請求項１２〜請求項１７のいずれか１項に記載の方法を行うこと，及び，
当該方法においてＨ．スイスが存在すると判定されたサンプルが由来する被験者をＨ．スイスに感染していると判定することを含む方法。
【請求項１９】
被験者のＨ．スイスへの感染を判定する方法であって，
被験者由来の血液サンプル中のＨｓｖＡ抗原ペプチドと結合する抗体を検出すること，及び
前記ペプチドと結合する抗体が検出された被験者をＨ．スイスに感染していると判定することを含む方法。
【請求項２０】
以下の工程を含む，請求項１９に記載のＨ．スイスへの感染を判定する方法：
被験者由来のサンプルと請求項１〜請求項６のいずれか１項に記載のペプチドとを接触させること，
前記ペプチドと結合した，前記血液サンプル中の抗体を検出すること，及び
前記ペプチドと結合した抗体が検出された被験者をＨ．スイスに感染していると判定すること。
【請求項２１】
請求項１〜請求項６のいずれか１項に記載のペプチド，請求項８〜請求項１０のいずれか１項に記載の核酸分子，及び請求項７に記載の抗体又はその免疫反応性断片から選択されるいずれか一つを含有するＨ．スイス感染判定用組成物。
【請求項２２】
請求項１〜請求項６のいずれか１項に記載のペプチド，請求項８〜請求項１０のいずれか１項に記載の核酸分子，及び請求項７に記載の抗体又はその免疫反応性断片から選択されるいずれか一つを含有する医薬組成物。
【請求項２３】
Ｈ．スイス除菌療法用である，請求項２２に記載の医薬組成物。
【請求項２４】
胃炎，胃潰瘍や十二指腸潰瘍，胃癌，慢性胃炎，胃ＭＡＬＴリンパ腫,鳥肌胃炎,特発性血小板減少紫斑病,機能性ディスペプシア，又はびまん性大細胞型Ｂ細胞性リンパ腫の治療用又は予防用である，請求項２２に記載の医薬組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は，新規に発見したヘリコバクター・スイスに特異的な外膜タンパク質遺伝子及びその遺伝子産物（タンパク質）並びにそれらに対する抗体を利用した，ヘリコバクター・スイス感染の診断方法及び診断薬に関する。
【背景技術】
【０００２】
現在，慢性胃炎，胃潰瘍や十二指腸潰瘍，胃癌，胃Ｍｕｃｏｓａ−Ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ  Ｌｙｍｐｈｏｉｄ  Ｔｉｓｓｕｅ（ＭＡＬＴ）リンパ腫，びまん性大細胞型Ｂ細胞性リンパ腫に，ヘリコバクター・ピロリ（Ｈｅｌｉｃｏｂａｃｔｅｒ  ｐｙｌｏｒｉ，ヒトの胃に寄生する微好気性のグラム陰性螺旋菌，  以下，「Ｈ．ピロリ」という）による感染が関与することが知られている。Ｈ．ピロリの感染検査方法として，分離培養法や尿素呼気試験，血清や尿中のＨ．ピロリ抗体価の測定（ＥＬＩＳＡとラッテクス凝集法），便中のＨ．ピロリ抗原測定（イムノクロマト法）が主に採用されている。【０００３】
しかし，近年，Ｈ．ピロリの診断や除菌薬の普及に伴い，Ｈ．ピロリ以外のヒトに重篤な胃疾患を誘発するヘリコバクターとして，広義のヘリコバクター・ハイルマニイが問題となってきた。広義のヘリコバクター・ハイルマニイ（ヘリコバクター・ハイルマニイ・センス・ラト：Ｈｅｌｉｃｏｂａｃｔｅｒ  ｈｅｉｌｍａｎｎｉｉ  ｓｅｎｓｕ  ｌａｔｏ，以下，「Ｈ．ハイルマニイ」という）には，狭義のヘリコバクター・ハイルマニイ（ヘリコバクター・ハイルマニイ・センス・ストリクト：Ｈ．ｈｅｉｌｍａｎｎｉｉ  ｓｅｎｓｕ  ｓｔｒｉｃｔｏ），ヘリコバクター・スイス（Ｈ．ｓｕｉｓ），Ｈ．ｂｉｚｚｏｚｅｒｏｎｎｉｉ，Ｈ．ｆｅｌｉｓ，及びＨ．ｓａｌｍｏｎｉｓが含まれ，このうちヒトの胃から見つかる大部分のヘリコバクターは，Ｈ．ｓｕｉｓ（以下，Ｈ．スイス）であるが，迅速診断法が確立していない（非特許文献１）。【０００４】
Ｈ．ピロリは霊長類にしか感染せず，乳幼児期においてのみ近親者からの感染が想定されるが，Ｈ．スイスは年齢に関係なく，豚，猫，医務などの動物から感染する。Ｈ．ピロリが全長２．５〜５．０μｍであるのに対して，Ｈ．ハイルマニイは５〜１０μｍである（非特許文献２）。Ｈ．ピロリの主要な病原因子であるＣａｇＰＡＩ（ｐａｔｈｏｇｅｎｉｃｉｔｙ  ｉｓｌａｎｄ）と呼ばれるＩＶ型分泌装置関連タンパク質遺伝子と宿主内に注入され癌を誘発するタンパク質遺伝子を含む遺伝子塊とＶａｃＡ（Ｖａｃｕｏｌａｔｉｎｇ  ｃｙｔｏｔｏｘｉｎ  Ａ）と呼ばれる胃粘膜にびらんや潰瘍を発症させたり，培養細胞には空砲変性させて死に至らしめたり，  アポトーシスを誘発するなど，  広範多岐にわたる作用を示すタンパク質毒素の遺伝子をＨ．スイスを含むＨ．ハイルマニイは欠損している（非特許文献３）。【０００５】
また，Ｈ．スイス感染により，リンパ球の集積が主体となる胃ＭＡＬＴリンパ腫を高頻度に発症することが報告されている。更に，マウスを用いた感染実験から，Ｈ．スイスの感染力はＨ．ピロリよりはるかに強いことが示されている他（非特許文献４），Ｈ．スイスは両端に鞭毛をもち，運動性が高く胃腺腔深部や壁細胞内に侵入し，抗生物質が効きにくいことが報告されている（非特許文献５）。【０００６】
実際に，Ｈ．ピロリ陰性であるにもかかわらず胃炎や胃疾患の症状を呈する患者の凡そ６０％以上はＨ．スイス感染陽性であると考えられている（非特許文献６）。また，ＭＡＬＴリンパ腫の２５〜５０％はＨ．スイス感染によるものと考えられている（非特許文献５）。【０００７】
しかし，Ｈ．ピロリがウレアーゼ陽性であるのに対して，ヒトから分離されたＨ．スイスはウレアーゼ遺伝子を有するにもかかわらずウレアーゼ試験や尿素呼気試験で陰性を示す場合が多い（動物から分離されたＨ．スイスはウレアーゼ試験や尿素呼気試験に陽性である）。よって，Ｈ．スイスは，Ｈ．ピロリで用いられているウレアーセ試験や尿素呼気試験により感染を診断することができない。また，豚から分離された株についてｉｎ  ｖｉｔｒｏ培養に成功した報告（特許文献１）はあるものの，分離寒天培地でのＨ．スイスのコロニー形成の報告は無く，ヒトから分離された株はｉｎ  ｖｉｔｒｏでの培養ができず，ヒト患者の胃バイオプシーに含まれるＨ．スイスは未だｉｎ  ｖｉｔｒｏでの純粋培養ができない（非特許文献７）。このためＨ．ピロリで用いられている分離培養法による診断も不可能であった。よって，ヒトで見つかるＨ．スイスは，難培養性の上にウレアーゼ活性が弱いため，通常のピロリの検査法では，検出できなかった。【０００８】
一方で，重症胃炎のネコから単離されたＨ．ｈｅｉｌｍａｎｎｉｉ  ｓｅｎｓｕ  ｓｔｒｉｃｔｏ  ＡＳＢ１株（非特許文献８），ヒト胃粘膜から単離されたＨ．  ｂｉｚｚｏｚｅｒｏｎｎｉｉ  ＣＩＩＩ−１株（非特許文献９），ブタの胃粘膜から単離されたＨ．スイス  Ｈ１株及びＨ５株（非特許文献１０，Ｈ．ｆｅｌｉｓ  ＣＳ１株（非特許文献１１），及び鳥肌胃炎の日本人患者から単離されたＨ．スイスＳＮＴＷ１０１株（非特許文献１２）の全ゲノムの概要（ドラフトゲノム）が解析され，報告されている。現在は，胃バイオプシーからＤＮＡを調製し，Ｈ．ハイルマニイ特異的１６Ｓ  ｒＲＮＡ遺伝子を標的としたＰＣＲ法がＨ．スイス含むＨ．ハイルマニイ感染の一般的な診断法である。【０００９】
しかし，既存のＨ．ハイルマニイの診断方法としては組織検査を要し，かつＨ．スイスと他のＨ．ハイルマニイを区別して診断することはできなかった（特許文献２）。このように，Ｈ．スイス感染のみを診断可能な方法，また非侵襲的な方法は未だに確立されていない（非特許文献１３）。そこで，簡便で高感度のＨ．スイスの検査法の開発が求められていた。
これまでに，本発明者らは，カニクイサルから単離されたＨ．スイスのゲノム解析情報に基づき，Ｆ２Ｒ２タンパク質及びその遺伝子配列を標的としたＨ．スイス感染の診断方法を報告している（特許文献３）。
【先行技術文献】
【特許文献】
【００１０】
【特許文献１】特開２０１１−１５６６４号公報
【特許文献２】米国特許公開２００６−００７８９１９号公報
【特許文献３】特開２０１６−１０３３１号公報
【非特許文献】
【００１１】
【非特許文献１】Ｂｌａｅｃｈｅｒ  Ｃら，Ｈｅｌｉｃｏｂａｃｔｅｒ．（２０１６）２２（３）：ｅ１２３６９
【非特許文献２】Ｏｖｅｒｂｙ  Ａら，Ｄｉｇｅｓｔｉｏｎ．（２０１６）９３（４）：２６０−５
【非特許文献３】Ｖｅｒｍｏｏｔｅ  Ｍら，Ｖｅｔ  Ｒｅｓ．（２０１１）４２：５１
【非特許文献４】Ｎａｋａｍｕｒａ  Ｍら，Ｉｎｆｅｃｔ  Ｉｍｍｕｎ．（２００７）７５（３）：１２１４−２２
【非特許文献５】Ｏｖｅｒｂｙ  Ａら，Ｄｉｇｅｓｔｉｏｎ．（２０１７）９５（１）：６１−６
【非特許文献６】中村正彦ら，検査と技術（２０１６）４４（４）：２７８−８４
【非特許文献７】Ｍａｔｓｕｉ  Ｈら，Ｈｅｌｉｃｏｂａｃｔｅｒ．（２０１４）１９（４）：２６０−７１
【非特許文献８】Ｓｍｅｔ  Ａら，Ｇｅｎｏｍｅ  Ａｎｎｏｕｎｃｅｍｅｎｔｓ（２０１３）１（１）：ｅ０００３３−１２
【非特許文献９】Ｓｃｈｏｔｔ  Ｔら，Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｂａｃｔｅｒｉｏｌｏｇｙ（２０１１）１９３（１７）：４５６５−６
【非特許文献１０】Ｖｅｒｍｏｏｔｅ  Ｍら，Ｖｅｔｅｒｉｎａｒｙ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ（２０１１）４２：５１
【非特許文献１１】Ａｒｎｏｌｄ  Ｉ  Ｃら，Ｇｅｎｏｍ  Ｂｉｏｌ．  Ｅｖｏｌ．  （２０１１）３：３０２−８
【非特許文献１２】Ｍａｔｓｕｉ  Ｈら，Ｇｅｎｏｍｅ  Ａｎｎｏｕｎｃｅｍｅｎｔｓ（２０１６）４（５）：ｅ００９３４−１６
【非特許文献１３】Ｂｅｎｔｏ−Ｍｉｒａｎｄａ  Ｍら，Ｗｏｒｌｄ  Ｊ  Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌ（２０１４）２０（４７）：１７７７９−８７
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１２】
本発明は，Ｈ．スイス特異的な診断方法を提供することを目的とする。別の目的として，本発明は，Ｈ．スイスに特異的な診断方法であって，非侵襲的な方法を含む簡易迅速検査法を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【００１３】
今回，本発明者らは，Ｈ．スイス感染者の体内にＨ．スイスにのみ特異的に存在する外膜タンパク質（ＨｓｖＡ；本発明者が命名）とそれに対する抗体が存在することを新規に発見し，ＨｓｖＡタンパク質の抗原部位となるアミノ酸配列を利用する診断法を見出した。Ｆ２Ｒ２タンパク質には，本発明で標的となるＨｓｖＡタンパク質に存在する菌体の外膜タンパク質に共通なアミノ末端側のシグナルペプチド領域と，カルボキシ末端側のオートトランスポーター（グラム陰性菌に特有なタンパク質の外膜輸送機構），機能発現に関与するｄｉｓｏｒｄｅｒ領域などの構造が存在しない（図１参照）。従って，Ｈ．スイス感染者は，外膜タンパク質と想定されるＨｓｖＡタンパク質に対する抗体価方がＦ２Ｒ２タンパク質に対する抗体価より高いと想定できる。【００１４】
本発明者らはＨ．スイス特異的に検出可能な方法について種々検討を行った結果，Ｈ．スイス感染した患者の血液中Ｈ．スイス特異的な外膜タンパク質であるＨｓｖＡに対する抗体が存在することを発見し，ＨｓｖＡタンパク質の抗原部位となるアミノ酸配列を利用することで，Ｈ．スイス感染をＨ．ピロリ感染と区別して検出可能であることを明らかとした。【００１５】
ｈｓｖＡ遺伝子は，鳥肌胃炎の患者から分離したＨ．スイス  ＳＮＴＷ１０１株（Ｍａｔｓｕｉ  Ｈら，Ｇｅｎｏｍｅ  Ａｎｎｏｕｎｃｅｍｅｎｔｓ（２０１６）４（５）：ｅ００９３４−１６参照）に含まれ，その塩基配列（ｈｓｖＡ遺伝子：配列番号１）は，Ｈ．ピロリの空砲化毒素タンパク質ＶａｃＡ（Ｃｏｖｅｒ  ＴＬら，Ｎａｔ  Ｒｅｖ  Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．（２００５）３（４）：３２０−３２）と分子量が大きく異なり同一性は無いが，Ｈ．ピロリの外膜タンパク質の特徴であるアミノ末端側のシグナルペプチド領域と，カルボキシ末端側のオートトランスポーター（グラム陰性菌に特有のタンパク質の外膜輸送機構）βドメインを有している。更に，機能発現に関与するｄｉｓｏｒｄｅｒ領域も有している（図１参照）。また，ｈｓｖＡ遺伝子は，ブタから分離されたＨ．スイス  ＨＳ１株及びＨＳ５株のドラフトゲノム中にも含まれているが（Ｖｅｒｍｏｏｔｅ  Ｍら，Ｖｅｔ  Ｒｅｓ．（２０１１）４２：５１），いずれもＨ．ピロリのＶａｃＡタンパク質と同一性は無く，Ｈ．ピロリのＶａｃＡの機能を有しないだけでなく，そもそも発現しない遺伝子と考えられていた。しかし，本発明者らは，Ｈ．スイス感染者の体内にＨｓｖＡタンパク質とそれに対する抗体の存在を新規に発見し，ＨｓｖＡについて更に検討した結果，ＨｓｖＡタンパク質は，Ｈ．スイスの外膜タンパク質として発現していることを初めて見出した。【００１６】
本発明はかかる知見に基づきなされたものであり，よって，本発明は以下の発明に関する。
（１）  ＨｓｖＡ抗原ペプチド又はその免疫学的に同等な変異体。
（２）  Ｈ．スイス由来である，（１）に記載の抗原ペプチド又はその免疫学的変異体免疫学的に同等な変異体。
（３）  ＨｓｖＡ抗原ペプチドが，配列番号２，配列番号２８，配列番号３０，及び配列番号７８〜８３のいずれか１つに記載のアミノ酸配列に含まれる５〜５０アミノ酸からなる配列を有する，（１）に記載の抗原ペプチド又はその免疫学的変異体免疫学的に同等な変異体。
（４）  ＨｓｖＡ抗原ペプチドが，配列番号７８〜８３のいずれか１つに記載のアミノ酸配列に含まれる，５〜５０アミノ酸からなる配列を有する，（３）に記載のペプチド又はその免疫学的に同等な変異体。
（５）  ＨｓｖＡ抗原ペプチドが，以下の群から選択されるいずれか１つのアミノ酸配列を有するペプチド又はその免疫学的に同等な変異体である，（１）に記載のペプチド又はその免疫学的に同等な変異体：
ＥＫＸ１ＡＶＸ２Ｘ３Ｘ４Ｘ５ＮＳＮＸ６Ｘ７（ペプチドＮｏ．１１：配列番号２４），
ＮＱＧＴＬＥＦＬＳＮＤＶＳＸ８（ペプチドＮｏ．１９：配列番号２５），
Ｘ９ＳＸ１０ＫＬＱＸ１１Ｘ１２ＬＫＳＸ１３Ｘ１４Ｘ１５（ペプチドＮｏ．３３：配列番号２６），
ＴＮＧＱＥＶＳＡＳＩＤＹＮＫ（ペプチドＮｏ．１６：配列番号１２），
ＡＫＬＳＮＦＡＳＮＤＡＬＰＤ（ペプチドＮｏ．２３：配列番号１３），
ＰＴＴＳＳＧＡＳＰＤＳＳＮＰ（ペプチドＮｏ．１０：配列番号１４），
ＧＬＧＲＤＬＦＶＨＳＭＧＤＫ（ペプチドＮｏ．２１：配列番号１５），
ＱＩＧＫＩＫＬＳＤＶＬＳＡＳ（ペプチドＮｏ．１５：配列番号１６），
ＹＧＡＩＤＫＥＬＨＦＳＧＧＫ（ペプチドＮｏ．３４：配列番号１７），
ＮＶＤＮＩＬＮＭＰＳＴＴＳＧ（ペプチドＮｏ．２０：配列番号１８），
ＧＮＬＫＧＶＹＹＰＫＳＳＴＴ（ペプチドＮｏ．２２：配列番号１９），
ＩＴＥＫＩＱＳＧＫＬＴＩＴＩ（ペプチドＮｏ．１４：配列番号２０），
ＦＨＤＦＬＶＳＬＫＧＫＫＦＡ（ペプチドＮｏ．２６：配列番号２１），
ＴＴＧＧＥＶＲＬＦＲＳＦＹＶ（ペプチドＮｏ．３１：配列番号２２），及び
及びＩＧＡＲＦＧＬＤＹＱＤＩＮＩ（ペプチドＮｏ．３５：配列番号２３）
ここで，Ｘ１はＫ又はＤであり，Ｘ２はＱ，Ｅ又はＴであり，Ｘ３はＱ又はＳであり，Ｘ４はＭ又はＬであり，Ｘ５はＥ又はＫであり，Ｘ６はＰ又はＳであり，Ｘ７はＤ又はＧであり，Ｘ８はＮ又はＴであり，Ｘ９はＬ又はＦであり，Ｘ１０はＮ又はＤであり，Ｘ１１はＧ，Ｄ又はＮであり，Ｘ１２はＱ又はＭであり，Ｘ１３はＭ又はＬであり，Ｘ１４はＧ又はＮであり，かつＸ１５はＬ又はＭである。
（６）  ＨｓｖＡ抗原ペプチドが，以下の群から選択されるいずれか１つのアミノ酸配列を有するペプチド又はその免疫学的に同等な変異体である，（５）に記載のペプチド又はその免疫学的に同等な変異体：
ＥＫＫＡＶＱＱＭＥＮＳＮＰＤ（ペプチドＮｏ．１１：配列番号３），
ＥＫＫＡＶＥＱＭＥＮＳＮＰＤ（ペプチドＮｏ．１１（ＴＫＹ）：配列番号４），
ＥＫＤＡＶＴＳＬＫＮＳＮＳＧ（ペプチドＮｏ．１１（ＳＨ８）：配列番号５），
ＥＫＤＡＶＴＳＬＥＮＳＮＳＧ（ペプチドＮｏ．１１（ＳＨ１０）：配列番号６），
ＮＱＧＴＬＥＦＬＳＮＤＶＳＮ（ペプチドＮｏ．１９：配列番号７），
ＮＱＧＴＬＥＦＬＳＮＤＶＳＴ（ペプチドＮｏ．１９（ＴＫＹ）：配列番号８），
ＬＳＮＫＬＱＧＱＬＫＳＭＧＬ（ペプチドＮｏ．３３：配列番号９），
ＬＳＮＫＬＱＤＱＬＫＳＭＧＬ（ペプチドＮｏ．３３（ＴＫＹ）：配列番号１０），
ＦＳＤＫＬＱＮＭＬＫＳＬＮＭ（ペプチドＮｏ．３３（ＳＨ１０）：配列番号１１），
ＴＮＧＱＥＶＳＡＳＩＤＹＮＫ（ペプチドＮｏ．１６：配列番号１２），
ＡＫＬＳＮＦＡＳＮＤＡＬＰＤ（ペプチドＮｏ．２３：配列番号１３），
ＰＴＴＳＳＧＡＳＰＤＳＳＮＰ（ペプチドＮｏ．１０：配列番号１４），
ＧＬＧＲＤＬＦＶＨＳＭＧＤＫ（ペプチドＮｏ．２１：配列番号１５），
ＱＩＧＫＩＫＬＳＤＶＬＳＡＳ（ペプチドＮｏ．１５：配列番号１６），
ＹＧＡＩＤＫＥＬＨＦＳＧＧＫ（ペプチドＮｏ．３４：配列番号１７），
ＮＶＤＮＩＬＮＭＰＳＴＴＳＧ（ペプチドＮｏ．２０：配列番号１８），
ＧＮＬＫＧＶＹＹＰＫＳＳＴＴ（ペプチドＮｏ．２２：配列番号１９），
ＩＴＥＫＩＱＳＧＫＬＴＩＴＩ（ペプチドＮｏ．１４：配列番号２０），
ＦＨＤＦＬＶＳＬＫＧＫＫＦＡ（ペプチドＮｏ．２６：配列番号２１），
ＴＴＧＧＥＶＲＬＦＲＳＦＹＶ（ペプチドＮｏ．３１：配列番号２２），
ＩＧＡＲＦＧＬＤＹＱＤＩＮＩ（ペプチドＮｏ．３５：配列番号２３）、
ＫＱＬＰＱＰＫＲＳＥＬＫＰＫ（ペプチドＮｏ．８：配列番号８６）、
ＴＮＩＫＱＹＭＱＮＮＨＲＳＱ（ペプチドＮｏ．３１Ｎ：配列番号８７）、
ＴＬＴＬＥＧＴＥＴＦＡＱＮＳ（ペプチドＮｏ．８１：配列番号８８）、
ＥＡＹＡＫＮＱＧＤＩＷＳＴＩ（ペプチドＮｏ．６３：配列番号８９）、
ＶＩＧＳＫＳＳＩＴＬＮＳＡＮ（ペプチドＮｏ．７３：配列番号９０）、及び
ＡＤＩＱＳＳＱＴＴＦＡＮＳＶ（ペプチドＮｏ．６１：配列番号９１）。
（７）  （１）〜（６）のいずれか１項のペプチド又はその免疫学的に同等な変異体に特異的に結合する抗体又はその免疫反応性断片。
（８）  ｈｓｖＡ遺伝子とストリンジェントな条件下で結合可能である，５〜４０ヌクレオチドからなる核酸分子。
（９）  ｈｓｖＡ遺伝子が，配列番号１，配列番号２７又は配列番号２９に記載の塩基配列を有する，（８）に記載の核酸分子。
（１０）  以下の群から選択されるいずれか１つの塩基配列を有する，（９）に記載の核酸分子：
ＣＴＴＴＴＡＧＣＧＴＧＧＴＡＴＣＣＴＴＣ（配列番号３１），ＴＴＡＣＡＡＡＧＡＣＣＡＣＣＡＡＣＧＧＡ（配列番号３２），ＴＡＣＣＡＴＡＧＡＡＡＧＣＧＧＡＡＡＣ（配列番号３３），ＡＧＣＴＡＴＡＧＣＴＴＴＧＣＡＣＣＴＧＡ（配列番号３４），ＡＣＴＡＡＣＡＧＣＡＴＡＧＡＡＧＴＴＧＧＧＧＡ（配列番号３５），ＡＡＣＡＡＣＡＴＴＡＣＡＧＧＣＡＴＧＡＧ（配列番号３６），ＣＡＡＡＴＡＧＴＡＡＣＡＧＧＡＣＡＡＴＴ（配列番号３７），ＣＡＧＧＡＴＴＴＡＡＧＡＧＧＣＡＣＴＴＡ（配列番号３８），ＴＣＴＴＡＡＣＣＡＡＴＣＴＧＡＧＣＡＡ（配列番号３９），ＧＴＣＡＡＡＣＡＣＧＴＴＡＴＴＧＡＴＧＧＣＴＴ（配列番号４０），ＧＧＧＧＴＴＴＡＡＴＡＧＣＡＴＡＧＧＧ（配列番号４１），ＴＡＧＡＧＣＴＣＴＡＣＡＣＣＡＧＴＣＴＴ（配列番号４２），ＡＴＡＡＡＧＣＣＣＡＴＧＡＡＴＴＣＴＴＡＧＧＣＡＴＧＣＧＴＧＣＴＣＴＧ（配列番号４３），ＴＧＣＴＡＴＴＧＡＴＡＡＡＧＡＧＴＴＡＣＡＴＴＴＣＴＣＡＧＧ（配列番号４４），ＡＴＴＴＣＴＣＡＧＧＧＧＧＡＡＡＧＴＣ（配列番号４５），ＧＧＣＴＡＡＴＡＡＴＴＴＡＡＣＣＡＣＡＡＴＡＡＧＣＧＣＣＴＴＴＡＡ（配列番号４６），ＧＡＴＧＧＧＣＧＣＴＴＣＴＧＧＴＴＴＡ（配列番号４７），ＡＴＧＡＡＴＴＣＴＴＡＧＧＣＡＴＧＣＧＴＧＣＴＣＴ（配列番号４８），ＴＴＴＴＧＧＡＧＧＴＧＴＡＧＧＡＧＴＡＧＡＴ（配列番号４９），ＡＧＣＧＣＧＣＡＴＴＴＡＡＡＡＣＡＧＧＴ（配列番号５０），ＡＧＡＡＡＣＧＡＧＡＴＴＡＣＡＧＧＡＡＧ（配列番号５１），ＡＧＧＡＧＣＡＡＧＴＴＴＴＧＴＡＧＣＡＧ（配列番号５２），ＡＡＡＡＴＧＣＧＡＣＴＧＡＴＴＧＧＡＴＧ（配列番号５３），ＴＴＧＡＡＡＴＴＴＧＧＣＣＡＣＧＣＴ（配列番号５４），ＴＣＡＣＣＣＡＴＡＧＡＡＴＧＧＡＣＧＡＡ（配列番号５５），ＣＴＡＧＣＧＣＡＴＴＡＡＣＣＡＣＡＧＡＣＴＧ（配列番号５６），ＴＡＧＡＡＧＴＴＧＴＡＧＡＣＡＣＧＧＴ（配列番号５７），ＧＴＧＡＴＡＴＴＧＣＣＴＴＴＣＴＧＡＡＣ（配列番号５８），ＧＣＡＡＧＴＴＴＴＧＴＧＣＧＧＡＴＴ（配列番号５９），ＡＴＧＴＧＡＴＡＣＡＣＡＴＣＴＧＡＣＣ（配列番号６０），ＡＧＴＧＣＣＧＴＴＡＣＣＡＴＣＧＴＧＡＡ（配列番号６１），ＴＡＴＴＣＡＡＧＧＡＡＡＧＴＣＣＣＴＧＧＡＧＡＡＡＣＴＣＣＡＧＡＧＡＣ（配列番号６２），ＴＴＡＡＡＧＧＣＧＣＴＴＡＴＴＧＴＧＧＴＴＡＡＡＴＴＡＴＴＡＧＣＣ（配列番号６３），ＡＴＴＡＧＣＣＴＴＡＡＧＧＧＴＧＣＴＡＴＣ（配列番号６４），ＣＴＧＧＴＡＡＴＧＣＡＴＣＡＴＴＡＧＡＡＧＣＡＡＡ（配列番号６５），ＴＡＣＧＣＧＣＡＡＡＡＴＡＧＧＴＴＣＴＴ（配列番号６６），ＴＧＧＡＧＡＡＡＣＴＣＣＡＧＡＧＡＣＴＡ（配列番号６７），ＴＴＧＴＴＣＧＣＴＧＴＡＧＴＧＣＣＧＴＧＧ（配列番号６８），ＧＡＡＧＧＡＴＡＣＣＡＣＧＣＴＡＡＡＡＧ（配列番号６９），ＡＡＧＣＴＡＧＡＧＴＴＴＴＧＧＴＴＧＡＧ（配列番号７０），ＴＴＧＣＴＣＡＧＡＴＴＧＧＴＴＡＡＧＡ（配列番号７１），ＡＴＣＧＡＡＡＴＡＡＧＣＧＡＡＣＣＴＣＡ（配列番号７２），ＴＴＧＡＡＡＧＣＴＴＡＧＣＴＡＡＡＣＧＧ（配列番号７３），ＴＧＧＴＡＴＴＧＣＴＧＧＴＴＡＡＧＡＧＧ（配列番号７４），ＣＡＡＡＣＡＧＡＴＧＡＧＣＣＧＴ（配列番号７５），ＡＴＧＡＡＡＡＡＧＴＴＴＡＧＴＴＣＴＣＴＣＡＣＡＴＴＧＡＡＡＴＴＴＧＧＣＣＡＣＧＣＴＣ（配列番号７６），及びＣＴＡＡＡＡＡＧＣＡＴＡＧＣＧＣＡＴＣＣＣＧＡＣＡＴＴＧＣＣＴＧＴＡＡＴＡＴＴＡＡＴＡＴＣ（配列番号７７）。
（１１）  ｈｓｖＡ遺伝子の全部又は一部を増幅可能なプライマーである，（８）〜（１０のいずれか１項に記載の核酸分子。
（１２）  ｈｓｖＡ遺伝子を検出するためのプローブである，（８）〜（１０）のいずれか１項に記載の核酸分子。
（１３）  サンプル中のｈｓｖＡ遺伝子の全部又は一部を検出することを含む，Ｈ．スイスの存在を判定する方法，ここで，ｈｓｖＡ遺伝子の全部又は一部が検出されたサンプルをＨ．スイスが存在すると判定される。
（１４）  （１３）に記載のＨ．スイスの存在を判定する方法であって，
サンプル中のＤＮＡを鋳型として用いて，（１１）に記載のプライマーを用いてｈｓｖＡ遺伝子の全部又は一部を増幅させること，
増幅されたＤＮＡを検出すること，及び
ＤＮＡの増幅が検出されたサンプルをＨ．スイスが存在すると判定すること，を含む方法。
（１５）  （１３）に記載のＨ．スイスの存在を判定する方法であって，
サンプル中のＤＮＡと（１２）に記載のプローブとを接触させること，
（１２）に記載のプローブと結合したＤＮＡを検出すること，及び
（１１）に記載のプローブと結合したＤＮＡが検出されたサンプルをＨ．スイスが存在すると判定すること，を含む方法。
（１６）  サンプル中のＨｓｖＡタンパク質又はその断片を検出すること，前記ＨｓｖＡタンパク質又はその断片が検出されたサンプルをＨ．スイスが存在すると判定することを含む，Ｈ．スイスの存在の判定方法。
（１７）  （１６）に記載のＨ．スイスの存在の判定方法であって：
サンプルと（７）に記載の抗体又はその免疫反応性断片とを接触させること，
前記抗体又はその免疫反応性断片と結合した，前記サンプル中のＨｓｖＡタンパク質又はその断片を検出すること，及び
前記抗体又はその免疫反応性断片と結合したＨｓｖＡタンパク質又はその断片が検出されたサンプルをＨ．スイスが存在するサンプルと判定すること，を含む方法。
（１８）  被験者のＨ．スイスへの感染を判定する方法であって，
被験者由来のサンプルをサンプルとして用いて（１２）〜（１７）のいずれか１項に記載の方法を行うこと，及び，
当該方法においてＨ．スイスが存在すると判定されたサンプルが由来する被験者をＨ．スイスに感染していると判定することを含む方法。
（１９）  被験者のＨ．スイスへの感染を判定する方法であって，
被験者由来の血液サンプル中のＨｓｖＡ抗原ペプチドと結合する抗体を検出すること，及び
前記ペプチドと結合する抗体が検出された被験者をＨ．スイスに感染していると判定することを含む方法。
（２０）  以下の工程を含む，（１９）に記載のＨ．スイスへの感染を判定する方法：
被験者由来のサンプルと（１）〜（６）のいずれか１項に記載のペプチドとを接触させること，
前記ペプチドと結合した，前記血液サンプル中の抗体を検出すること，及び
前記ペプチドと結合した抗体が検出された被験者をＨ．スイスに感染していると判定すること。
（２１）  （１）〜（６）のいずれか１項に記載のペプチド，（８）〜（１０）のいずれか１項に記載の核酸分子，及び（７）に記載の抗体又はその免疫反応性断片から選択されるいずれか一つを含有するＨ．スイス感染判定用組成物。
（２２）  （１）〜（６）のいずれか１項に記載のペプチド，（８）〜（１０）のいずれか１項に記載の核酸分子，及び（７）に記載の抗体又はその免疫反応性断片から選択されるいずれか一つを含有する医薬組成物。
（２３）  Ｈ．スイス除菌療法用である，（２２）に記載の医薬組成物。
（２４）  胃炎，胃潰瘍や十二指腸潰瘍，胃癌，慢性胃炎，胃ＭＡＬＴリンパ腫,鳥肌胃炎,特発性血小板減少紫斑病,機能性ディスペプシア，又はびまん性大細胞型Ｂ細胞性リンパ腫の治療用又は予防用である，（２２）に記載の医薬組成物。【００１７】
（Ｈ．スイス）
本明細書において，「Ｈ．スイス」とは，Ｈ．ハイルマニイ（広義）に含まれる，Ｈ．ハイルマニータイプ１に属する菌株を意味する。Ｈ．スイスは，ヒト以外にイヌ，ネコ，ブタ，サルなどの胃に感染することが知られている。本明細書におけるＨ．スイスが単離された感染哺乳動物は特に限定されるものではなく，例えば，ヒト，サル，又はブタであってよい。好ましくは，Ｈ．スイスはヒトから単離されたＨ．スイス（例えば，ＳＮＴＷ１０１株）である。【００１８】
（ｈｓｖＡ遺伝子及びＨｓｖＡタンパク質）
本明細書において，「ｈｓｖＡ遺伝子」及び「ＨｓｖＡタンパク質」とは，Ｈ．スイスに由来する，ヘリコバクター属細菌の外膜タンパク質のアミノ末端側のシグナルペプチド領域と，カルボキシ末端側のオートトランスポーター（タンパク質の外膜輸送機構）βドメイン及び，機能発現に関与するｄｉｓｏｒｄｅｒ領域を有する遺伝子及びアミノ酸を意味する。限定されない例の一つとして，ｈｓｖＡ遺伝子及びＨｓｖＡタンパク質は，それぞれＨ．スイス  ＳＮＴＷ１０１株に由来する，配列番号１に記載の塩基配列（又は，図２に記載の塩基配列，本明細書において同様）を有する遺伝子，及び配列番号２に記載のアミノ酸配列（又は，図２に記載のアミノ酸配列，本明細書において同様）を有するタンパク質を挙げることができる。配列番号２に記載のアミノ酸配列において，１番目〜２７番目のアミノ酸はシグナル配列をコードし，２２７３〜２４７５番目のアミノ酸はｄｉｓｏｒｄｅｒ領域をコードし，２６８６〜２９９２番目のアミノ酸は，オートトランスポーターβ領域をコードする。よって，本明細書においてＨｓｖＡタンパク質とは，配列番号２に記載のアミノ酸配列のうちシグナル配列を除く２８番目から２９９２番目のアミノ酸からなるタンパク質を含む。Ｈ．スイスの他の株に由来する他のｈｓｖＡ遺伝子及びＨｓｖＡタンパク質も本明細書のｈｓｖＡ遺伝子及びＨｓｖＡタンパク質に含まれる。一例として，ＨｓｖＡタンパク質は，Ｈ．スイスに由来するタンパク質であって，配列番号２に記載のアミノ酸配列（又は，配列番号２に記載のアミノ酸配列のうち２８番目から２９９２番目のアミノ酸からなるアミノ酸配列）と８０％，８５％，９０％，９５％，９８％，又は９９％の同一性を有するアミノ酸配列を有するタンパク質を含む。同様に，ｈｓｖＡ遺伝子は，Ｈ．スイスに由来する遺伝子であって，配列番号２に記載のアミノ酸配列（又は，配列番号２に記載のアミノ酸配列のうち２８番目から２９９２番目のアミノ酸からなるアミノ酸配列）と８０％，８５％，９０％，９５％，９８％，又は９９％の同一性を有するアミノ酸配列をコードする塩基配列を有する遺伝子を含む。ここで，アミノ酸配列の同一性は，例えば，ＢＬＡＳＴ，ＦＡＳＴＡ等の公知のプログラムを用いて当業者が通常用いる方法により決定することができる。あるいは，ｈｓｖＡ遺伝子は，Ｈ．スイスに由来する遺伝子であって，配列番号１に記載の塩基配列と相補的な塩基配列を有するＤＮＡとストリンジェントな条件でハイブリダイズするＤＮＡを含む遺伝子を含む。また，ＨｓｖＡタンパク質は当該遺伝子でコードされたタンパク質を含む。さらに，ＨｓｖＡタンパク質は，Ｈ．スイスに由来するタンパク質であって，配列番号２に記載のアミノ酸配列（又は，配列番号２に記載のアミノ酸配列のうち２８番目から２９９２番目のアミノ酸からなるアミノ酸配列）において，１〜５０個（例えば，１〜４０個，１〜３０個，１〜２５個，１〜２０個，１〜１５個，１〜１０個，１〜８個，１〜６個，１〜５個，１〜４個，１〜３個，又は１〜２個であってもよい。本明細書において，以下同じ）のアミノ酸が他のアミノ酸と置換され，欠失し，付加され，又は挿入されたアミノ酸配列を有するタンパク質を含む。同様に，ｈｓｖＡ遺伝子は，Ｈ．スイスに由来する遺伝子であって，配列番号２に記載のアミノ酸配列（又は，配列番号２に記載のアミノ酸配列のうち２８番目から２９９２番目のアミノ酸からなるアミノ酸配列）において，１〜５０個のアミノ酸が他のアミノ酸に置換され，欠失し，付加され，又は挿入されたたアミノ酸配列をコードする塩基配列を有する遺伝子を含む。【００１９】
例えば，ｈｓｖＡ遺伝子及びＨｓｖＡタンパク質は，それぞれＨ．スイス  ＨＳ１株又はＨＳ５に由来する，配列番号２７又は２９に記載の塩基配列を有する遺伝子，及び配列番号２８又は３０に記載のアミノ酸配列を含む。【００２０】
好ましくは，ＨｓｖＡタンパク質は，配列番号７８〜８３のいずれか１つの配列に記載のアミノ酸配列；配列番号７８〜８３のいずれか１つの配列に記載のアミノ酸配列と８０％，８５％，９０％，９５％，９８％，又は９９％の同一性を有するアミノ酸配列；又は，配列番号７８〜８３のいずれか１つの配列に記載のアミノ酸配列のうち１〜５０個のアミノ酸が他のアミノ酸に置換され，欠失し，付加され，又は挿入されたたアミノ酸配列を有する。【００２１】
（ＨｓｖＡ抗原ペプチド）
本明細書において，「ＨｓｖＡ抗原ペプチド」とは，上述のＨｓｖＡタンパク質に含まれるアミノ酸配列を有するペプチドであって、生体内において抗原として機能し得るペプチドを意味し，好ましくは，複数のＨ．スイス株間で保存されているアミノ酸配列を有するペプチドである。また，ＨｓｖＡ抗原ペプチドは，好ましくは，Ｈ．スイスに特異的で，Ｈ．ピロリ又は他のＨ．ハイルマニイには存在しないアミノ酸配列からなる。ＨｓｖＡは膜タンパク質であることから，好ましくは，ＨｓｖＡ抗原ペプチドはＨｓｖＡタンパク質の細胞外ドメインを構成するアミノ酸配列を含む。例えば，ＨｓｖＡ抗原ペプチドは，配列番号２に記載のＨ．スイス  ＳＮＴＷ１０１株由来ＨｓｖＡタンパク質のアミノ酸配列のうち，１４６７〜２９９２番目，１４６７〜２６８５番目，１５３５〜２１３５番目，又は２００８〜２１３５番目に含まれるアミノ酸配列からなる。本発明者らは，ＨｓｖＡに特異的でかつこのような条件を満たすアミノ酸配列について解析を行った結果，配列番号７８〜８３に示す部分アミノ酸配列を見出すことに成功した。配列番号７８〜８３に記載されたアミノ酸配列は異なる種に感染した異なる株のＨ．スイスに由来するＨｓｖＡタンパク質が有するものであるが，そのアミノ酸配列は比較的保存されており，７６．７％の同一性を有する。よって，本発明のＨｓｖＡタンパク質抗原ペプチドは，配列番号７８〜８３のいずれか１つの配列に記載のアミノ酸配列と７０％，７５％，８０％，８５％，９０％，９５％，９８％，又は９９％の同一性を有するアミノ酸配列；又は，配列番号７８〜８３のいずれか１つの配列に記載のアミノ酸配列のうち１〜５０個のアミノ酸が他のアミノ酸に置換され，欠失し，付加され，又は挿入されたたアミノ酸配列を有するか，当該アミノ酸配列に含まれるアミノ酸配列を有することができる。本明細書全体にわたって，「（特定の）アミノ酸配列を有する」との表現は，当該アミノ酸配列からなる場合を含むと解されることを意図している。【００２２】
ＨｓｖＡ抗原ペプチドを構成するアミノ酸数は，目的に応じて適宜選択することができるが，例えば，５〜５０アミノ酸，５〜４５アミノ酸，５〜４０アミノ酸，５〜３５アミノ酸，５〜３０アミノ酸，５〜２５アミノ酸，５〜２０アミノ酸，５〜１５アミノ酸，１０〜５０アミノ酸，１０〜４５アミノ酸，１０〜４０アミノ酸，１０〜３５アミノ酸，１０〜３０アミノ酸，１０〜２５アミノ酸，又は１０〜２０アミノ酸であってもよい。ＨｓｖＡ抗原ペプチドの一例として，ＥＫＸ１ＡＶＸ２Ｘ３Ｘ４Ｘ５ＮＳＮＸ６Ｘ７（ペプチドＮｏ．１１（ｍｉｘ）：配列番号２４）（ここで，Ｘ１はＫ又はＤであり，Ｘ２はＱ，Ｅ又はＴであり，Ｘ３はＱ又はＳであり，Ｘ４はＭ又はＬであり，Ｘ５はＥ又はＫであり，Ｘ６はＰ又はＳであり，かつＸ７はＤ又はＧである），ＥＫＫＡＶＱＱＭＥＮＳＮＰＤ（ペプチドＮｏ．１１（ＳＮＴＷ１０１；ＨＳ１；ＨＳ５）：配列番号３），ＥＫＫＡＶＥＱＭＥＮＳＮＰＤ（ペプチドＮｏ．１１（ＴＫＹ）：配列番号４），ＥＫＤＡＶＴＳＬＫＮＳＮＳＧ（ペプチドＮｏ．１１（ＳＨ８）：配列番号５），ＥＫＤＡＶＴＳＬＥＮＳＮＳＧ（ペプチドＮｏ．１１（ＳＨ１０）：配列番号６），ＮＱＧＴＬＥＦＬＳＮＤＶＳＸ８（ペプチドＮｏ．１９：配列番号２５）（ここで，Ｘ８はＮ又はＴである），ＮＱＧＴＬＥＦＬＳＮＤＶＳＮ（ペプチドＮｏ．１９：配列番号７），ＮＱＧＴＬＥＦＬＳＮＤＶＳＴ（ペプチドＮｏ．１９（ＴＫＹ）：配列番号８），Ｘ９ＳＸ１０ＫＬＱＸ１１Ｘ１２ＬＫＳＸ１３Ｘ１４Ｘ１５（ペプチドＮｏ．３３：配列番号２６）（ここで，Ｘ９はＬ又はＦであり，Ｘ１０はＮ又はＤであり，Ｘ１１はＧ，Ｄ又はＮであり，Ｘ１２はＱ又はＭであり，Ｘ１３はＭ又はＬであり，Ｘ１４はＧ又はＮであり，かつＸ１５はＬ又はＭである），ＬＳＮＫＬＱＧＱＬＫＳＭＧＬ（ペプチドＮｏ．３３：配列番号９），ＬＳＮＫＬＱＤＱＬＫＳＭＧＬ（ペプチドＮｏ．３３（ＴＫＹ）：配列番号１０），ＦＳＤＫＬＱＮＭＬＫＳＬＮＭ（ペプチドＮｏ．３３（ＳＨ１０）：配列番号１１），ＴＮＧＱＥＶＳＡＳＩＤＹＮＫ（ペプチドＮｏ．１６：配列番号１２），ＡＫＬＳＮＦＡＳＮＤＡＬＰＤ（ペプチドＮｏ．２３：配列番号１３），ＰＴＴＳＳＧＡＳＰＤＳＳＮＰ（ペプチドＮｏ．１０：配列番号１４），ＧＬＧＲＤＬＦＶＨＳＭＧＤＫ（ペプチドＮｏ．２１：配列番号１５），ＱＩＧＫＩＫＬＳＤＶＬＳＡＳ（ペプチドＮｏ．１５：配列番号１６），ＹＧＡＩＤＫＥＬＨＦＳＧＧＫ（ペプチドＮｏ．３４：配列番号１７），ＮＶＤＮＩＬＮＭＰＳＴＴＳＧ（ペプチドＮｏ．２０：配列番号１８），ＧＮＬＫＧＶＹＹＰＫＳＳＴＴ（ペプチドＮｏ．２２：配列番号１９），ＩＴＥＫＩＱＳＧＫＬＴＩＴＩ（ペプチドＮｏ．１４：配列番号２０），ＦＨＤＦＬＶＳＬＫＧＫＫＦＡ（ペプチドＮｏ．２６：配列番号２１），ＴＴＧＧＥＶＲＬＦＲＳＦＹＶ（ペプチドＮｏ．３１：配列番号２２），ＩＧＡＲＦＧＬＤＹＱＤＩＮＩ（ペプチドＮｏ．３５：配列番号２３）、ＫＱＬＰＱＰＫＲＳＥＬＫＰＫ（ペプチドＮｏ．８：配列番号８６）、ＴＮＩＫＱＹＭＱＮＮＨＲＳＱ（ペプチドＮｏ．３１Ｎ：配列番号８７）、ＴＬＴＬＥＧＴＥＴＦＡＱＮＳ（ペプチドＮｏ．８１：配列番号８８）、ＥＡＹＡＫＮＱＧＤＩＷＳＴＩ（ペプチドＮｏ．６３：配列番号８９）、ＶＩＧＳＫＳＳＩＴＬＮＳＡＮ（ペプチドＮｏ．７３：配列番号９０）、及びＡＤＩＱＳＳＱＴＴＦＡＮＳＶ（ペプチドＮｏ．６１：配列番号９１）に含まれるアミノ酸配列の全て又は一部を有するペプチドを挙げることができる。前記ＨｓｖＡ抗原ペプチドは，目的のＨｓｖＡ抗原としての機能を果たす限り，前記ペプチド配列中に１〜数個のアミノ酸が置換され，欠失し，付加され又は挿入されていてもよい。アミノ酸が置換される場合，好ましくは，類似するアミノ酸残基に保存的に置換され，例えば，ＧとＰ，ＧとＡ又はＶ，ＬとＩ，ＥとＱ，ＤとＮ，ＣとＴ，ＴとＳ又はＡ，ＫとＲ等のアミノ酸の間での置換を挙げることができる。【００２３】
本明細書において，アミノ酸は一文字表記にて記載される。すなわち，Ｃはシステイン，Ａはアラニン，Ｙはチロシン，Ｈはヒスチジン，Ｒはアルギニン，Ｇはグリシン，Ｅはグルタミン酸，Ｌはロイシン，Ｖはバリン，Ｗはトリプトファン，Ｔはスレオニン，Ｙはチロシン，Ｉはイソロイシン，Ｆはフェニルアラニン，Ｄはアスパラギン酸，Ｎはアスパラギン，Ｑはグルタミン，Ｍはメチオニン，Ｋはリジン，及びＰはプロリンを表す。また，本明細書においてＸｎ（ｎは自然数）は，各々定義された複数のアミノ酸からなる群から選択される１種類のアミノ酸を表す。例えば，ＥＫＸ１ＡＶＸ２Ｘ３Ｘ４Ｘ５ＮＳＮＸ６Ｘ７（配列番号２４）において「Ｘ１」がＫ又はＤであるとは，Ｘ１で表されるアミノ酸がリジン又はアスパラギン酸のいずれかであることを意味する。【００２４】
一態様において，本発明はＨｓｖＡ抗原ペプチドの免疫学的に同等な変異体に関する。本明細書において，「ペプチドの免疫学的に同等な変異体」とは，天然のＨｓｖＡタンパク質由来の配列を有するペプチドと結合する抗体と結合可能なペプチドであって，天然のＨｓｖＡタンパク質由来の配列を有するペプチドとは異なるアミノ酸配列を有するペプチドを意味する。例えば，該変異体は，ペプチド配列中の１〜数個のアミノ酸が，天然又は人工のアミノ酸と置換され，欠失し，付加され，又は挿入されたペプチドであってもよい。あるいは，該変異体は，天然のＨｓｖＡタンパク質由来の配列を有するペプチドを構成するアミノ酸の一部が修飾されたペプチドであってもよい。あるいは，アミノ酸変異と修飾の両方の変異が導入されていてもよい。天然のＨｓｖＡタンパク質由来の配列を有するペプチドと結合する抗体と結合するとは，言い換えれば，抗ＨｓｖＡ抗体と結合することを意味する。例えば，Ｈ．スイスに感染した患者の血中に存在する抗ＨｓｖＡ抗体と結合可能なペプチドは，本発明のペプチドの免疫学的に同等な変異体に含まれる。天然のＨｓｖＡタンパク質由来の配列を有するペプチドと結合する抗体，又は，Ｈ．スイスに感染した患者の血中に存在する抗ＨｓｖＡ抗体と，被検ペプチド変異体が結合可能であるか否かは，当該ペプチド変異体を結合させた固相に当該抗体を反応させ，洗浄後に更に標識化抗ＩｇＧ抗体と反応させることにより判定することができる。標識化ＩｇＧを洗浄後に固相に結合した標識化ＩｇＧが検出された場合，当該ペプチドは，本発明のペプチドの免疫学的に同等な変異体であると判定される。なお、本願明細書全体にわたって、特にそのように解することが不整合である場合を除き、「ＨｓｖＡ抗原ペプチド」の語はＨｓｖＡ抗原ペプチドの免疫学的に同等な変異体を含む。【００２５】
（抗ＨｓｖＡ抗体又はその免疫反応性断片）
他の態様において，本発明は，ＨｓｖＡタンパク質を特異的に認識する抗体（本明細書において「抗ＨｓｖＡ抗体」という）若しくはその免疫反応性断片に関する。本発明の抗ＨｓｖＡ抗体は好ましくは，上述において定義されたＨｓｖＡタンパク質抗原ペプチドのいずれかと結合する。例えば，抗ＨｓｖＡ抗体は，配列番号７８〜８３のいずれか１つの配列に記載のアミノ酸配列；配列番号７８〜８３のいずれか１つの配列に記載のアミノ酸配列と８０％，８５％，９０％，９５％，９８％，又は９９％の同一性を有するアミノ酸配列；又は，配列番号７８〜８３のいずれか１つの配列に記載のアミノ酸配列のうち１〜５０個のアミノ酸が他のアミノ酸に置換され，欠失し，付加され，又は挿入されたたアミノ酸配列を有するペプチドと結合する。「抗体の免疫反応性断片」とは，抗体の一部分（部分断片）または抗体の一部分を含むペプチドであって，抗体の抗原への結合作用を保持するものを意味する。このような抗体の断片としては，例えば，Ｆ（ａｂ’）２，Ｆａｂ’，Ｆａｂ，一本鎖Ｆｖ（以下，「ｓｃＦｖ」という），ジスルフィド結合Ｆｖ（以下，「ｄｓＦｖ」という）若しくはこれらの重合体，二量体化Ｖ領域（以下，「Ｄｉａｂｏｄｙ」という），またはＣＤＲを含むペプチドを挙げることができる。好ましくは，本発明の抗体若しくはその免疫反応性断片は，ＨｓｖＡ抗原ペプチドを特異的に認識する。本明細書において，抗体又はその免疫反応性断片が「特異的に」認識する（結合する）とは，その抗体又はその免疫反応性断片が他のアミノ酸配列や立体構造に対する親和性よりも，ＨｓｖＡ抗原ペプチドに対して実質的に高い親和性で結合することを意味する。本発明の抗体とＨｓｖＡ抗原との結合における結合定数（Ｋａ）としては，例えば，少なくとも１０７Ｍ−１，少なくとも１０８Ｍ−１，少なくとも１０９Ｍ−１，少なくとも１０１０Ｍ−１，少なくとも１０１１Ｍ−１，少なくとも１０１２Ｍ−１，少なくとも１０１３Ｍ−１を挙げることができる。【００２６】
本発明の抗体は，ＨｓｖＡ抗原ペプチドを特異的に認識することができる限り，ポリクローナルであってもモノクローナルであってもよいが，好ましくはモノクローナル抗体である。ここで，「モノクローナル抗体」は，単一クローンに由来する抗体であることを意味する。本発明の抗体は，完全抗体の他，抗原との結合活性を保持する限り，バイスペシフィック抗体，及び一本鎖抗体を含む。完全抗体は，非ヒト動物の抗体，非ヒト動物の抗体のアミノ酸配列とヒト由来の抗体のアミノ酸配列を有する抗体，及び，ヒト抗体を包含する。非ヒト動物の抗体としては，例えば，マウス，ラット，ハムスター，ラビットなどの抗体を挙げることができ，好ましくは，ハイブリドーマを作製することができる動物の抗体であり，より好ましくはマウスの抗体である。非ヒト動物の抗体のアミノ酸配列とヒト由来の抗体のアミノ酸配列を有する抗体としては，ヒト抗体に動物由来のモノクローナル抗体の抗原結合ドメインＦｖを入れ替えたヒト型キメラ抗体，動物由来抗体モノクローナル抗体の抗原結合に直接関わるＦｖドメイン上の配列であるＣＤＲをヒト抗体のフレームに組み込んだヒト化抗体を挙げることができる。また，ヒト抗体とは，完全にヒト由来の抗体遺伝子の発現産物であるヒト抗体のことである。また，本発明の抗体のイムノグロブリンクラスは特に限定されるものではなく，ＩｇＧ，ＩｇＭ，ＩｇＡ，ＩｇＥ，ＩｇＤ，ＩｇＹのいずれのイムノグロブリンクラスであってもよく，好ましくはＩｇＧである。また，本発明の抗体はいずれのアイソタイプの抗体をも包含するものである。【００２７】
また，ＨｓｖＡ抗原ペプチド，抗ＨｓｖＡ抗体又はその免疫反応性断片は，必要に応じて標識化されていてもよい。当該標識としては，放射能標識，酵素，蛍光標識，生物発光標識，化学発光標識金属等の検出可能な標識を用いることができる。このような標識としては，これに限定されるものではないが例として，３５Ｓ（イオウ３５），３２Ｐ（リン３２），３Ｈ（トリチウム），１２５Ｉ（ヨウ素１２５），１３１Ｉ（ヨウ素１３１），１４Ｃ（炭素１４）等の放射能標識；βガラクトシダーゼ，ペルオキシダーゼ，アルカリフォスファターゼ，グルコースオキシダーゼ，乳酸オキシダーゼ，アルコールオキシダーゼ，モノアミンオキシダーゼ，ホースラディッシュペルオキシダーゼ等の酵素；ＦＡＤ，ＦＭＮ，ＡＴＰ，ビオチン，ヘム等の補酵素又は補欠分子族；フルオレセイン誘導体（フルオレセインイソチオシアネート（ＦＩＴＣ），フルオレセインチオフルバミル等），ローダミン誘導体（テトラメチルローダミン，トリメチルローダミン（ＲＩＴＣ），テキサスレッド，ローダミン１１０等），Ｃｙ色素（Ｃｙ３，Ｃｙ５，Ｃｙ５．５，Ｃｙ７），Ｃｙ−クロム，スペクトラムグリーン，スペクトラムオレンジ，プロピジウムイオダイド，アロフィコシアニン（ＡＰＣ），Ｒ−フィコエリスリン（Ｒ−ＰＥ）、Ａｌｅｘａ−Ｆｌｏｕｒ（登録商標）４８８及びＡｌｅｘａ−Ｆｌｏｕｒ（登録商標）５６８等のＡｌｅｘａ−Ｆｌｏｕｒ（登録商標）蛍光色素（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｐｒｏｂｅｓ，  Ｉｎｃ．社、米国）、Ａｌｅｘａ−Ｆｌｏｕｒ（登録商標）５６８等の蛍光標識；ルシフェラーゼ等の生物発光標識；あるいは，ルミノール，イソルミノール，Ｎ−（４−アミノブチル）−Ｎ−エチルイソルミノースエステル等のルミノール誘導体，Ｎ−メチルアクリジニウムエステル，Ｎ−メチルアクリジニウムアシルスルホンアミドエステル等のアクリジニウム誘導体，ルシゲニン，アダマンチルジオキセタン，インドキシル誘導体，ルテニウム錯体等の化学発光標識；金コロイド等の金属等の検出可能な標識を挙げることができる。【００２８】
（ｈｓｖＡ遺伝子特異的塩基配列を有する核酸分子・プライマー・プローブ）
別の態様において，本発明は，ｈｓｖＡ遺伝子と特異的に結合可能な核酸分子に関する。好ましくは，ｈｓｖＡ遺伝子と特異的に結合可能な核酸分子は，ｈｓｖＡ遺伝子特異的塩基配列若しくは該塩基配列と相補的な配列を有する核酸分子，又は，ｈｓｖＡ遺伝子特異的塩基配列若しくは該塩基配列と相補的な配列とストリンジェントな条件下で結合可能な核酸分子（以下，「ｈｓｖＡ遺伝子特異的塩基配列を有する核酸分子等」という）に関する。前記ｈｓｖＡ特異的核酸分子は，用途に応じてプライマー又はプローブであってもよい。ここで，プライマーはＰＣＲ等によりＤＮＡを増幅させる目的で使用される核酸分子である。プライマーは相補的な配列を有するＤＮＡとハイブリダイズして，当該ＤＮＡを伸長させることにより，当該ＤＮＡを増幅することができる核酸分子であり，増幅されたＤＮＡを検出することにより当該ＤＮＡを検出することを可能とする。プローブは，標的ＤＮＡと結合することで標的ＤＮＡの存在を検出する目的で用いられる核酸分子である。本発明のｈｓｖＡ遺伝子と結合可能な核酸分子は，ｈｓｖＡ遺伝子が有する塩基配列のうち，Ｈ．ピロリ及びＨ．ハイルマニイ（ただし，Ｈ．スイスを除く）が同一又は類似する配列を持たない限り，ｈｓｖＡに由来しない塩基配列を有していてもよい。選択した塩基配列がｈｓｖＡ遺伝子特異的であるか否かは，例えば，当該配列について既に公開されているデータベースを検索して，Ｈ．ピロリ及びＨ．ハイルマニイ（Ｈ．スイスを除く）が同一又は類似する配列を持つか否かを調べ，持つ場合には特異的ではなく，持たない場合には特異的であると決定することができる。ここで，「類似しない」とは，同一性が１０％以下，２０％以下，３０％以下，４０％以下，又は５０％以下であることを意味してもよい。ｈｓｖＡ遺伝子と特異的に結合可能な核酸分子は例えば配列番号１から任意の配列を上記方法に従って選択することができる。また，本発明のｈｓｖＡ遺伝子と結合可能な核酸分子は，例えば，５〜５０ヌクレオチド，５〜４５ヌクレオチド，５〜４０ヌクレオチド，５〜３５ヌクレオチド，５〜３０ヌクレオチド，５〜２５ヌクレオチド，５〜２０ヌクレオチド，５〜１５ヌクレオチド，５〜１０ヌクレオチド，１０〜５０ヌクレオチド，１０〜４５ヌクレオチド，１０〜４０ヌクレオチド，１０〜３５ヌクレオチド，１０〜３０ヌクレオチド，１０〜２５ヌクレオチド，１０〜２０ヌクレオチド，１０〜１５ヌクレオチド，１５〜５０ヌクレオチド，１５〜４５ヌクレオチド，１５〜４０ヌクレオチド，１５〜３５ヌクレオチド，１５〜３０ヌクレオチド，１５〜２５ヌクレオチド，１５〜２０ヌクレオチド，又は１７〜２５ヌクレオチドとすることができる。好ましくは，ｈｓｖＡ遺伝子特異的塩基配列としては，例えば，ＣＴＴＴＴＡＧＣＧＴＧＧＴＡＴＣＣＴＴＣ（配列番号３１），ＴＴＡＣＡＡＡＧＡＣＣＡＣＣＡＡＣＧＧＡ（配列番号３２），ＴＡＣＣＡＴＡＧＡＡＡＧＣＧＧＡＡＡＣ（配列番号３３），ＡＧＣＴＡＴＡＧＣＴＴＴＧＣＡＣＣＴＧＡ（配列番号３４），ＡＣＴＡＡＣＡＧＣＡＴＡＧＡＡＧＴＴＧＧＧＧＡ（配列番号３５），ＡＡＣＡＡＣＡＴＴＡＣＡＧＧＣＡＴＧＡＧ（配列番号３６），ＣＡＡＡＴＡＧＴＡＡＣＡＧＧＡＣＡＡＴＴ（配列番号３７），ＣＡＧＧＡＴＴＴＡＡＧＡＧＧＣＡＣＴＴＡ（配列番号３８），ＴＣＴＴＡＡＣＣＡＡＴＣＴＧＡＧＣＡＡ（配列番号３９），ＧＴＣＡＡＡＣＡＣＧＴＴＡＴＴＧＡＴＧＧＣＴＴ（配列番号４０），ＧＧＧＧＴＴＴＡＡＴＡＧＣＡＴＡＧＧＧ（配列番号４１），ＴＡＧＡＧＣＴＣＴＡＣＡＣＣＡＧＴＣＴＴ（配列番号４２），ＡＴＡＡＡＧＣＣＣＡＴＧＡＡＴＴＣＴＴＡＧＧＣＡＴＧＣＧＴＧＣＴＣＴＧ（配列番号４３），ＴＧＣＴＡＴＴＧＡＴＡＡＡＧＡＧＴＴＡＣＡＴＴＴＣＴＣＡＧＧ（配列番号４４），ＡＴＴＴＣＴＣＡＧＧＧＧＧＡＡＡＧＴＣ（配列番号４５），ＧＧＣＴＡＡＴＡＡＴＴＴＡＡＣＣＡＣＡＡＴＡＡＧＣＧＣＣＴＴＴＡＡ（配列番号４６），ＧＡＴＧＧＧＣＧＣＴＴＣＴＧＧＴＴＴＡ（配列番号４７），ＡＴＧＡＡＴＴＣＴＴＡＧＧＣＡＴＧＣＧＴＧＣＴＣＴ（配列番号４８），ＴＴＴＴＧＧＡＧＧＴＧＴＡＧＧＡＧＴＡＧＡＴ（配列番号４９），ＡＧＣＧＣＧＣＡＴＴＴＡＡＡＡＣＡＧＧＴ（配列番号５０），ＡＧＡＡＡＣＧＡＧＡＴＴＡＣＡＧＧＡＡＧ（配列番号５１），ＡＧＧＡＧＣＡＡＧＴＴＴＴＧＴＡＧＣＡＧ（配列番号５２），ＡＡＡＡＴＧＣＧＡＣＴＧＡＴＴＧＧＡＴＧ（配列番号５３），ＴＴＧＡＡＡＴＴＴＧＧＣＣＡＣＧＣＴ（配列番号５４），ＴＣＡＣＣＣＡＴＡＧＡＡＴＧＧＡＣＧＡＡ（配列番号５５），ＣＴＡＧＣＧＣＡＴＴＡＡＣＣＡＣＡＧＡＣＴＧ（配列番号５６），ＴＡＧＡＡＧＴＴＧＴＡＧＡＣＡＣＧＧＴ（配列番号５７），ＧＴＧＡＴＡＴＴＧＣＣＴＴＴＣＴＧＡＡＣ（配列番号５８），ＧＣＡＡＧＴＴＴＴＧＴＧＣＧＧＡＴＴ（配列番号５９），ＡＴＧＴＧＡＴＡＣＡＣＡＴＣＴＧＡＣＣ（配列番号６０），ＡＧＴＧＣＣＧＴＴＡＣＣＡＴＣＧＴＧＡＡ（配列番号６１），ＴＡＴＴＣＡＡＧＧＡＡＡＧＴＣＣＣＴＧＧＡＧＡＡＡＣＴＣＣＡＧＡＧＡＣ（配列番号６２），ＴＴＡＡＡＧＧＣＧＣＴＴＡＴＴＧＴＧＧＴＴＡＡＡＴＴＡＴＴＡＧＣＣ（配列番号６３），ＡＴＴＡＧＣＣＴＴＡＡＧＧＧＴＧＣＴＡＴＣ（配列番号６４），ＣＴＧＧＴＡＡＴＧＣＡＴＣＡＴＴＡＧＡＡＧＣＡＡＡ（配列番号６５），ＴＡＣＧＣＧＣＡＡＡＡＴＡＧＧＴＴＣＴＴ（配列番号６６），ＴＧＧＡＧＡＡＡＣＴＣＣＡＧＡＧＡＣＴＡ（配列番号６７），ＴＴＧＴＴＣＧＣＴＧＴＡＧＴＧＣＣＧＴＧＧ（配列番号６８），ＧＡＡＧＧＡＴＡＣＣＡＣＧＣＴＡＡＡＡＧ（配列番号６９），ＡＡＧＣＴＡＧＡＧＴＴＴＴＧＧＴＴＧＡＧ（配列番号７０），ＴＴＧＣＴＣＡＧＡＴＴＧＧＴＴＡＡＧＡ（配列番号７１），ＡＴＣＧＡＡＡＴＡＡＧＣＧＡＡＣＣＴＣＡ（配列番号７２），ＴＴＧＡＡＡＧＣＴＴＡＧＣＴＡＡＡＣＧＧ（配列番号７３），ＴＧＧＴＡＴＴＧＣＴＧＧＴＴＡＡＧＡＧＧ（配列番号７４），ＣＡＡＡＣＡＧＡＴＧＡＧＣＣＧＴ（配列番号７５），ＡＴＧＡＡＡＡＡＧＴＴＴＡＧＴＴＣＴＣＴＣＡＣＡＴＴＧＡＡＡＴＴＴＧＧＣＣＡＣＧＣＴＣ（配列番号７６），ＣＴＡＡＡＡＡＧＣＡＴＡＧＣＧＣＡＴＣＣＣＧＡＣＡＴＴＧＣＣＴＧＴＡＡＴＡＴＴＡＡＴＡＴＣ（配列番号７７）を挙げることができる。【００２９】
ｈｓｖＡ遺伝子特異的塩基配列を有する核酸分子をプライマーとして使用する場合、フォワードプライマー及びリバースプライマーとしては、以下のプライマーから選択されるプライマーの組み合わせを使用することができる。
（フォワードプライマー）
ＨＳＶＡＮＯＦＷ−２：ＡＧＡＡＡＣＧＡＧＡＴＴＡＣＡＧＧＡＡＧ（配列番号５１）
ＨＳＶＡＮＯＦＷ−３：ＡＧＧＡＧＣＡＡＧＴＴＴＴＧＴＡＧＣＡＧ（配列番号５２）ＨＳＶＡＮＯＦＷ−５：ＡＡＡＡＴＧＣＧＡＣＴＧＡＴＴＧＧＡＴＧ（配列番号５３）
（リバースプライマー）
ＨＳＶＡＮＯＲＶ−１：ＡＴＣＧＡＡＡＴＡＡＧＣＧＡＡＣＣＴＣＡ（配列番号７２）
ＨＳＶＡＮＯＲＶ−３：ＴＴＧＡＡＡＧＣＴＴＡＧＣＴＡＡＡＣＧＧ（配列番号７３）
ＨＳＶＡＮＯＲＶ−４：ＴＧＧＴＡＴＴＧＣＴＧＧＴＴＡＡＧＡＧＧ（配列番号７４）。【００３０】
ｈｓｖＡ遺伝子特異的塩基配列を有する核酸分子をプライマーとして使用する場合、フォワードプライマー及びリバースプライマーの組み合わせとして、好ましくは、ＨＳＶＡＮＯＦＷ−２／ＨＳＶＡＮＯＲＶ−４（１０１ｂｐ）、ＨＳＶＡＮＯＦＷ−３／ＨＳＶＡＮＯＲＶ−４（２９１ｂｐ）、ＨＳＶＡＮＯＦＷ−５／ＨＳＶＡＮＯＲＶ−４（５５６ｂｐ）、ＨＳＶＡＮＯＦＷ−２／ＨＳＶＡＮＯＲＶ−１（５０８ｂｐ）、及びＨＳＶＡＮＯＦＷ−５／ＨＳＶＡＮＯＲＶ−３（１０８ｂｐ）の組み合わせである（カッコ内は当該プライマーを用いたＰＣＲによる増幅により得られるＤＮＡ断片の長さを表す）。【００３１】
本明細書において，「ストリンジェントな条件下でハイブリダイズ」するとは，当業者に通常用いられるハイブリダイゼーション条件でハイブリダイズすることを意味する。例えば，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ，ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｎｕａｌ，Ｆｏｕｒｔｈ  Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ（２０１２）又は，    Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，  Ｗｉｌｅｙ  Ｏｎｌｉｎｅ  Ｌｉｂｒａｒｙ等に記載の方法によりハイブリダイズするか否かを決定することができる。例えば，ハイブリダイズの条件は，６×ＳＳＣ（０．９Ｍ  ＮａＣｌ，０．０９Ｍ  クエン酸三ナトリウム）又は６×ＳＳＰＥ（３Ｍ  ＮａＣｌ，０，２Ｍ  ＮａＨ２ＰＯ４，２０ｍＭ  ＥＤＴＡ・２Ｎａ，ｐＨ７．４）中４２℃でハイブリダイズさせ，その後４２℃で０．５×ＳＳＣで洗浄する条件であってもよい。【００３２】
本明細書全体に亘って，ある配列が「特異的」であるとは，当該タンパク質，ペプチド，又は核酸分子に特徴的であることを意味し，他のタンパク質，ペプチド，又は核酸分子には実質的に存在しないことを意味する。ここで，「実質的に存在しない」とは，完全に一致する配列が存在しない場合の他，区別して検出しようとする他の分子（例えば，Ｈ．ピロリ由来成分）において目的の分子（ｈｓｖＡ遺伝子又はＨｓｖＡタンパク質）と類似する配列が存在していても，生物学的結合反応において区別可能な程度存在する場合を含む。【００３３】
また，「特異的に認識する」又は，「特異的に結合する」とは，目的の物質と結合するが，他の物質とは実質的に結合しないことを意味する。候補物質が目的の物質と結合するか否か，及び／又は，その他の物質と実質的に結合しないか否かは，候補物質（核酸か抗体かなど）及び目的の物質の種類（核酸かタンパク質かなど）に応じて，サザンハイブリダイゼーション，ＰＣＲ，ウェスタンブロッティング，及びＥＬＩＳＡなど，当業者周知の方法を採用して確認することができる。例えば，タンパク質をウェスタンブロッティングにより確認する場合，該タンパク質を２％ＳＤＳ，１０％グリセロール，５０ｍＭ  Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ（ｐＨ６．８），１００ｍＭジチオスレイトール溶液中に溶解し，煮沸して抗Ｈｉｓ抗体及び被検抗体によりウェスタンブロット分析を行うことにより確認することができる。サザンハイブリダイゼーション，ＰＣＲ，又はＥＬＩＳＡにより確認する場合，後述の方法を利用して確認することができる。ここで，「実質的に結合しない」とは，目的の物質への結合との比較において，結合しない（又は認識しない）とされる核酸，タンパク質又はペプチドへの被検物質の結合が十分区別可能な程度低い場合を含む。例えば，目的の物質と比較した，その他の物質との交差反応率が，１％以下，０．５％以下，０．３％以下，０．１％以下，０．０５％以下，０．０３％以下であってもよい。交差反応性は，｛（比較対象となるその他の物質への結合に関する実測値（濃度）／（比較対象となるその他の物質の添加サンプル濃度）×１００％｝として計算して得ることができる。特に，本明細書において，抗体又はその免疫反応性断片が「特異的に」認識する（結合する）とは，該抗体又はその免疫反応性断片が，他のアミノ酸配列に対する親和性と比較して，実質的に高い親和性で当該抗原と結合すること，あるいは，該抗原が，他の抗体又はその免疫反応性断片に対する親和性と比較して，実質的に高い親和性で当該抗体又はその免疫反応性断片と結合することを意味する。本明細書において，「実質的に高い親和性」とは，所望の測定装置または方法によって，その特定のアミノ酸配列を他のアミノ酸配列から区別して検出することが可能な程度に高い親和性を意味する。例えば，実質的に高い親和性は，ＥＬＩＳＡ又はＥＩＡにより検出された強度（例えば，蛍光強度）として，３倍以上，４倍以上，５倍以上，６倍以上，７倍以上，８倍以上，９倍以上，１０倍以上であってもよい。【００３４】
（キット及び組成物）
別の態様において，本発明は，ＨｓｖＡ抗原ペプチド及びｈｓｖＡ遺伝子と特異的に結合可能な核酸分子を含有する，Ｈ．スイス感染の判定用キット，Ｈ．スイスの感染判定用組成物，医薬組成物に関する。本発明のキット及び組成物は，更に，固相，ハプテン，及び不溶性担体からなる群より選択される担体を含んでいてもよい。【００３５】
本発明のキット及び組成物がｈｓｖＡ遺伝子と特異的に結合可能な核酸分子を含有する場合，核酸を用いた公知の方法に基づくことができる。このような方法としては，例えばハイブリダイゼーションを利用した方法；ＰＣＲを利用した方法；並びに，インベーダー（登録商標）法として知られる方法（例えば，Ｋｗｉａｔｋｏｗｓｋｉ，Ｒ．Ｗ．ら，Ｍｏｌ．Ｄｉａｇｎ．（１９９９）４：３５３−３６４参照）を挙げることができる。【００３６】
例えば，本発明のキット及び組成物は，標識化されたｈｓｖＡ遺伝子と特異的に結合可能な核酸分子が固定化した固相又はハプテン，及び，任意でハプテンと特異的に結合する物質が固定化した固相を含んでいてもよい。また，本発明のキット及び組成物は，ｈｓｖＡ遺伝子と特異的に結合可能な核酸分子をプライマー（又はプライマーペア），又はプローブとして含んでいてもよい。あるいは，本発明のキット及び組成物は，ｈｓｖＡ遺伝子特異的塩基配列等及び消光プローブの一部と相補的な配列（フラップ）を備えるアレル特異的プローブ，ｈｓｖＡ遺伝子特異的塩基配列等を備えるインベーダープローブ，三重鎖特異的ＤＮＡ分解酵素，及び，消光プローブを備える蛍光標識ユニバーサルプローブを備えることができる。上記フラップは，各アレル特異的プローブ間で異なっていることが好ましい。上記蛍光標識は，当業者周知のプローブを適宜選択することができ，各蛍光標識ユニバーサルプローブ間で異なっていることが好ましい。例えば，蛍光標識として，ＦＡＭ及びＶＩＣを使用することができる。【００３７】
ＨｓｖＡ抗原ペプチド又は，該ペプチドを認識する抗体若しくはその免疫反応性断片を含有するキット及び組成物は，抗体分子を用いた公知の方法に基づくことができる。このような方法としては，例えば，標識化免疫測定法；イムノブロッティング法；イムノクロマト法；クロマトグラフィ法；比濁法（ＴＩＡ法）；比ろう法（ＮＩＡ法）；比色法；ラテックス凝集法（ＬＩＡ法）；粒子計数法（ＣＩＡ法）；化学発光測定法（ＣＬＩＡ法，ＣＬＥＩＡ法）；沈降反応法；表面プラズモン共鳴法（ＳＰＲ法）；レゾナントミラーディテクター法（ＲＭＤ法）；比較干渉法等を挙げることができる。本発明のキットが，所望の測定を実施することが可能であるか否かは，当該サンプル又は当該濃度のサンプルを用いて，各測定法を当業者周知の方法により実施することにより，検出可能であるか否かを測定することにより確認することができる。【００３８】
例えば，本発明のキット及び組成物は，（ｉ）ＨｓｖＡ抗原ペプチド，あるいは，該ペプチドを認識する抗体若しくはその免疫反応性断片が固定化した固相又はハプテン，及び（ｉｉ）標識化された第二抗体を含むことができる。第二抗体は，固定化された物質及び検出対象に応じて，抗ＩｇＧ抗体（ＨｓｖＡ抗原ペプチドを固定化），又は抗ＨｓｖＡ抗体（抗ＨｓｖＡ抗体若しくはその免疫反応性断片を固定化）とすることができる。また，本発明のキット及び組成物がハプテンを含む場合，ハプテンと特異的に結合する物質が固定化した固相をさらに含んでいてもよい。【００３９】
本発明のキット及び組成物において，固相は免疫化学測定に使用できる固相であれば特に限定されないが，例えば，ニトロセルロース，セファロース，ナイロン，ビニロン，ポリエステル，アクリル，ポリオレフィン，ポリウレタン，レーヨン，ポリノジック，キュプラ，リヨセル，アセテート，ポリビニリデンジフルオリド，シリコンラバー，ラテックス，ポリスチレン，ポリプロピレン，ポリエチレン，ポリ塩化ビニル，ポリ塩化ビニリデン，ポリスチレン，ポリ酢酸ビニル，フッ素加工樹脂，ＡＢＳ樹脂，ＡＳ樹脂，アクリル樹脂，ポリマーアロイ，ガラス繊維，炭素繊維，ガラス，ゼラチン，ポリアミノ酸及び／又は磁気感応性素材等を含有する，プレート，チューブ，チップ（例えば，プロテインチップ，ラボチップ等），ビーズ，膜，吸収体及び／又は粒子等を挙げることができ，好ましくは，プレート及び磁気ビーズである。本明細書において不溶性担体とは，ビーズ等の懸濁可能な不溶性の固相を意味し，例えば，ラテックスビーズや磁気ビーズを挙げることができる。【００４０】
本発明のキット及び組成物は，必要に応じて，発色試薬，反応停止用試薬，標準抗原試薬，サンプル前処理用試薬，ブロッキング試薬等を含んでいてもよい。また，本発明のキット及び組成物が標識化された抗体を含む場合，更に標識と反応する基質を含んでいてもよい。更に，本発明のキットは，添付文書，説明書，及びキットや組成物を格納する容器等を適宜含んでいてもよい。
【発明の効果】
【００４１】
ＨｓｖＡ抗原ペプチド及びｈｓｖＡ遺伝子と特異的に結合可能な核酸分子は，Ｈ．スイス感染診断対象者由来血液中の抗Ｈ．スイス抗体の有無又は抗体価を測定するために使用することができる。また，ＨｓｖＡ抗原ペプチドは，Ｈ．スイス感染予防又は治療のための，ペプチドワクチンとして利用することが考えられる。更に，ＨｓｖＡ抗原ペプチドは，抗ＨｓｖＡ抗体取得のための抗原として用いることができる。また，抗ＨｓｖＡ抗体又はその免疫反応性断片は，ＨｓｖＡ抗原ペプチドの検出に用いることができる。更に，抗ＨｓｖＡ抗体又はその免疫反応性断片は，Ｈ．スイス感染治療のための治療薬として用いることができる。
【図面の簡単な説明】
【００４２】
【図１】ｈｓｖＡ遺伝子特異的核酸分子の概略図である。
【図２Ａ】Ｈ．スイスのＳＮＴＷ１０１株由来のｈｓｖＡ遺伝子及びＨｓｖＡタンパク質の配列を示す。図２Ａ〜図２Ｎまで連続しており，１つの遺伝子及びタンパク質をコードする配列を示す。
【図２Ｂ】Ｈ．スイスのＳＮＴＷ１０１株由来のｈｓｖＡ遺伝子及びＨｓｖＡタンパク質の配列を示す。
【図２Ｃ】Ｈ．スイスのＳＮＴＷ１０１株由来のｈｓｖＡ遺伝子及びＨｓｖＡタンパク質の配列を示す。
【図２Ｄ】Ｈ．スイスのＳＮＴＷ１０１株由来のｈｓｖＡ遺伝子及びＨｓｖＡタンパク質の配列を示す。
【図２Ｅ】Ｈ．スイスのＳＮＴＷ１０１株由来のｈｓｖＡ遺伝子及びＨｓｖＡタンパク質の配列を示す。
【図２Ｆ】Ｈ．スイスのＳＮＴＷ１０１株由来のｈｓｖＡ遺伝子及びＨｓｖＡタンパク質の配列を示す。
【図２Ｇ】Ｈ．スイスのＳＮＴＷ１０１株由来のｈｓｖＡ遺伝子及びＨｓｖＡタンパク質の配列を示す。
【図２Ｈ】Ｈ．スイスのＳＮＴＷ１０１株由来のｈｓｖＡ遺伝子及びＨｓｖＡタンパク質の配列を示す。
【図２Ｉ】Ｈ．スイスのＳＮＴＷ１０１株由来のｈｓｖＡ遺伝子及びＨｓｖＡタンパク質の配列を示す。
【図２Ｊ】Ｈ．スイスのＳＮＴＷ１０１株由来のｈｓｖＡ遺伝子及びＨｓｖＡタンパク質の配列を示す。
【図２Ｋ】Ｈ．スイスのＳＮＴＷ１０１株由来のｈｓｖＡ遺伝子及びＨｓｖＡタンパク質の配列を示す。
【図２Ｌ】Ｈ．スイスのＳＮＴＷ１０１株由来のｈｓｖＡ遺伝子及びＨｓｖＡタンパク質の配列を示す。
【図２Ｍ】Ｈ．スイスのＳＮＴＷ１０１株由来のｈｓｖＡ遺伝子及びＨｓｖＡタンパク質の配列を示す。
【図２Ｎ】Ｈ．スイスのＳＮＴＷ１０１株由来のｈｓｖＡ遺伝子及びＨｓｖＡタンパク質の配列を示す。
【図３】Ｈ．スイスのＳＮＴＷ１０１株（配列番号７８），ＨＳ１株（配列番号７９），ＨＳ５株（配列番号８０），ＴＫＹ株（配列番号８１），ＳＨ８株（配列番号８２）及びＳＨ１０株（配列番号８３）のペプチドＮｏｓ．１１，３３，１９が含まれる領域のアミノ酸配列を比較した図である。
【図４】Ｈ．スイスのＳＮＴＷ１０１株，ＨＳ１株，ＨＳ５株，ＴＫＹ株，ＳＨ８株及びＳＨ１０株のペプチドＮｏｓ．１１，３３，１９に該当する領域のアミノ酸配列を比較した図である（配列番号３〜１１）。
【図５】ＰＣＲよるＨ．スイスの判定。Ｈ．ピロリ（ＳＳ１株，ＴＮ２ＧＦ４株，ＮＣＴＣ１１６３７株，ＡＴＣＣ４３５７９株，及びＲＣ−１株）及びＨ．スイス（ＳＮＴＷ１０１株及びＴＫＹ株）について，設計したフォワードプライマーＦＷ２，ＦＷ３，ＦＷ５，又はＶＡＣ３６２４Ｆ（上記非特許文献７），及びリバースプライマーＲＶ１，ＲＶ３，ＲＶ４，又はＶＡＣ４０４１Ｒ（上記非特許文献７）を用いてＰＣＲで増幅させ，電気泳動で増幅産物を確認した写真である。各レーンは，１）Ｈ．スイス  ＴＫＹ株，２）Ｈ．スイス  ＳＮＴＷ１０１株，３）Ｈ．ピロリ  ＳＳ１株，４）Ｈ．ピロリＴＮ２ＧＦ４株，５）Ｈ．ピロリＮＣＴＣ  １１６３７株，６）Ｈ．ピロリＡＴＣＣ４３５７９株，７）Ｈ．ピロリＲＣ−１株から調製したＤＮＡを鋳型としたことを示す。各写真の下に用いたプライマーセットを示す。フォワードプライマーＦＷ２，ＦＷ３，ＦＷ５，及びリバースプライマーＲＶ１，ＲＶ３，ＲＶ４のプライマーセットは，いずれもＨ．スイス感染マウスの胃粘膜から調製したＤＮＡにおいてのみ増幅産物が認められた。
【図６】Ａ，Ｈ．スイス感染ヒト，Ｂ，Ｈ．ピロリ感染ヒト，及びＣ，非感染ヒトから得た血清中の抗体の各種ペプチドに対する結合価をＥＬＩＳＡで測定した結果を表すグラフである。横軸はペプチドの番号を示す。縦軸は４５０ｎｍにおける吸光度を表す。２回の実験の平均値を示す。合成した１５本のＨｓｖＡ抗原ペプチド（Ｎｏｓ．１０（配列番号１４），１１（配列番号３），１４（配列番号２０），１５（配列番号１６），１６（配列番号１２），１９（配列番号７），２０（配列番号１８），２１（配列番号１５），２２（配列番号１９），２３（配列番号１３），２６（配列番号２１），３１（配列番号２２），３３（配列番号９），３４（配列番号１７），及び３５（配列番号２３））とＨ．スイス感染者の血清は特異的に反応した。
【図７】５名の被験者血清中の抗体のＮｏ．１１ペプチド（配列番号３），Ｂ，Ｎｏ．１９ペプチド（配列番号７），及びＣ，Ｎｏ．３３ペプチド（配列番号９）に対する結合価をＥＬＩＳＡで測定した結果を表すグラフである。Ａ及びＢはそれぞれ異なるＨ．スイス感染血清のデータを示し，Ｃ及びＤはそれぞれ異なるＨ．ピロリ感染血清のデータを示し，Ｅは非感染血清のデータを示す。横軸は抗原ペプチドの配列番号及び血清の希釈倍率を示し，縦軸は４５０ｎｍにおける吸光度を表す。３回の実験の平均値と標準偏差を示す。いずれのペプチドにおいても，Ｈ．スイス感染血清と強く反応し，Ｈ．ピロリ感染及び非感染血清との反応は弱かった。
【図８】６名の被験者（Ｈ．スイス感染２名，Ｈ．ピロリ感染３名，非感染１名）血清中の抗体のＮｏ．１１ペプチド（配列番号３，４，５，６，２４），Ｎｏ．１９ペプチド（配列番号７，８，２５）及びＮｏ．３３ペプチド（配列番号９，１０，１１，２６）に対する結合価をＥＬＩＳＡで測定した結果を表すグラフである。Ａ及びＢはそれぞれ異なるＨ．スイス感染血清のデータを示し，Ｃ，Ｄ及びＥはそれぞれ異なるＨ．ピロリ感染血清のデータを示し，Ｆは非感染血清のデータを示す。横軸は抗原ペプチドの配列番号及び血清の希釈倍率を示し，縦軸は４５０ｎｍにおける吸光度を表す。２回の実験の平均値を示す。いずれのペプチドにおいても，Ｈ．スイス感染血清と強く反応し，Ｈ．ピロリ感染及び非感染血清との反応は弱かった。
【図９】８名の被験者（Ｈ．スイス感染３名，Ｈ．ピロリ感染３名，  非感染２名）血清中の抗体のＨ．ピロリＴＮ２ＧＦ４株全菌体に対する結合価をＥＬＩＳＡで測定した結果を表すグラフである。Ａ及びＢは，それぞれ血清を６００倍と１８００倍希釈したときの結果を示す。縦軸は４５０ｎｍにおける吸光度を表す。２回の実験の平均値を示す。Ｈ．ピロリ感染血清のみがＨ．ピロリの菌体と強く反応した。
【図１０】Ｈ．スイス  ＴＫＹ株又はＨ．スイス  ＳＮＴＷ１０１株を感染させたマウス血清のＮｏ．１１ペプチド（配列番号３，４，５，６，２４），Ｎｏ．１９ペプチド（配列番号７，８，２５），Ｎｏ．３３ペプチド（配列番号９，１０，１１，２６）及びＨ．ピロリＴＮ２ＧＦ４株とＳＳ１株の全菌体に対する結合価をＥＬＩＳＡで測定した結果を表すグラフである。横軸はＥＬＩＳＡに用いたペプチド又は菌体の種類を示す。Ａ，Ｂ及びＣはそれぞれ異なるＨ．スイス  ＴＫＹ株の感染血清のデータを示し，ＣＤ，Ｅ及びＦはそれぞれ異なるＨ．スイス  ＳＮＴＷ１０１株感染血清のデータを示す。Ａ及びＤは２０倍希釈，Ｂ及びＥは１００倍希釈，Ｃ及びＦは４００倍希釈の血清を表す。横軸は抗原ペプチドの配列番号及び血清の希釈倍率を表し，縦軸は４５０ｎｍにおける吸光度を表す。２回の実験の平均値を示す。Ｈ．スイス感染マウス血清は，Ｈ．ピロリ全菌体と強く反応ししたが，Ｎｏｓ．１１，１９，及び３３のいずれのペプチドに対しても強く反応した。
【図１１】Ｈ．スイス  ＴＫＹ株又はＨ．ピロリ  ＳＳ１株を感染させたマウスの血清をサンドイッチＥＬＩＳＡで測定した結果を示すグラフである。横軸はサンドイッチＥＬＩＳＡに用いたペプチド又は菌体の種類を示す。使用したペプチドと菌体は以下のとおりである：配列番号３（ペプチドＮｏ．１１（ＳＮＴＷ１０１；ＨＳ１；ＨＳ５），配列番号７（ペプチドＮｏ．１９（ＳＮＴＷ１０１；ＨＳ１；ＨＳ５；ＳＨ８），配列番号９（ペプチドＮｏ．３３（ＳＮＴＷ１０１；ＨＳ１；ＨＳ５），縦軸は４５０ｎｍにおける吸光度を表す。３回の実験の平均値と標準偏差を示す。Ｈ．スイス感染マウス血清においてのみＮｏｓ．１１，１９，及び３３のいずれのペプチドに対して強く反応した。
【図１２】各種抗原（ＨｓｖＡ由来ペプチド又はＨ．ピロリ全菌体）への各ウサギ抗体の結合についてのＥＬＩＳＡの結果を表すグラフである。横軸は固相化した各種抗原（番号は図１０と同様）を示し，縦軸は４５０ｎｍにおける吸光度を示す。Ａは，実施例２で作製したＮｏ．１１ペプチド（配列番号３）に対するウサギ抗体，Ｂは，実施例２で作製したＮｏ．３３ペプチド（配列番号９）に対するウサギ抗体，及び，Ｃは，実施例２で作製したＮｏ．１９ペプチド（配列番号７）に対するウサギ抗体を用いた結果である。３回の実験の平均値と標準偏差を示す。各種ペプチドに対する抗体は，それぞれのペプチドに対して強く反応したが，Ｈ．ピロリ全菌体に対する反応は弱かった。
【図１３】Ｎｏ．１１ペプチドをウサギに免役して得たポリクローナル抗体を用いた免疫組織化学の写真を表す。Ｈ．スイス感染患者の胃組織切片をリン酸緩衝食塩水で２μｇ／ｍＬに調製したＮｏ．１１ペプチドに対するウサギ抗体で反応後，リン酸緩衝食塩水で４００倍希釈のＡｌｅｘａ−Ｆｌｏｕｒ４８８抗ウサギＩｇＧと反応させ，Ｌｅｉｃａ社の共焦点レーザー蛍光顕微鏡（ＴＣＳ−ＳＰ５）で撮影した写真である。対比染色にはリン酸緩衝食塩水で４００倍希釈のＡｌｅｘａ−Ｆｌｏｕｒ５６８を用いた。Ａは２００倍，Ｂは，Ａの囲んだ部分を７６０倍に拡大した写真である。矢印は，Ｈ．スイス菌体を示す。
【図１４】Ｈ．スイス又はＨ．ピロリに感染した患者から採取した血清中の抗体の、各ペプチドや菌体に対する結合性をＥＬＩＳＡにより測定した結果を表すグラフである。値は平均値（ｍｅａｎ）±標準偏差（ｓｔａｎｄａｒｄ  ｄｅｖｉａｔｉｏｎ，  ＳＤ）で示される。（Ａ）Ｈ．スイス感染患者から採取した血清（ｎ＝４）中の抗体と各ペプチドとの結合を示す。縦軸は４５０ｎｍにおける吸光度を示し、横軸は固相化に使用したペプチドを配列番号で示す。（Ｂ）Ｈ．ピロリ感染患者から採取した血清（ｎ＝５）中の抗体と各ペプチドとの結合を示す。縦軸は４５０ｎｍにおける吸光度を示し、横軸は固相化に使用したペプチドを配列番号で示す。（Ｃ）非感染患者から得られた血清（ｎ＝３）中の抗体と各ペプチドとの結合を示す。縦軸は４５０ｎｍにおける吸光度を示し、横軸は固相化に使用したペプチドを配列番号で示す。（Ｄ）６００倍又は１８００倍希釈のＨ．スイス感染患者由来血清、Ｈ．ピロリ感染患者由来血清、および非感染患者由来血清のそれぞれに含まれる抗体の、Ｈ．ピロリ  ＴＮ２ＧＦ４（黒印）又はＳＳ１（白印）への結合を示す。縦軸は４５０ｎｍにおける吸光度を示す。横軸は使用した血清の由来する患者の属性を示す（Ｈ．ｓｕｉｓ：Ｈ．スイス感染患者、Ｈ．ｐｙｌｏｒｉ：Ｈ．ピロリ感染患者、ｎｏｎｅ：非感染患者）。上部に示された１：６００は患者血清を６００倍希釈してサンプルとして用いたことを、１：１８００は患者血清を１８００倍希釈してサンプルとして用いたことを示す。６００倍と１８００倍のそれぞれにおいて、左側の黒印で示される結果はＨ．ピロリ  ＴＮ２ＧＦ４への結合を、右側の白印で示される結果はＨ．ピロリ  ＳＳ１への結合を示す。＊＊＊Ｐ＜０．０００１（Ｈ．スイス感染血清ｖｓ．Ｈ．ピロリ感染血清ｏｒ非感染血清）。
【図１５】Ｎｏｓ．６１，１１，３３，１９，１０，及び１６の各ペプチド抗体の対応抗原ペプチドに対する特異性を調べた結果を示すグラフである。各グラフ上部には当該グラフにおいて測定された抗体がどのペプチドを抗原として得られた抗体であるかが記載されている（例えば、「Ａｂ．ａｇａｉｎｓｔ  ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：９１」とは、配列番号９１のペプチドを抗原として得られた抗体を意味する）。縦軸は４５０ｎｍにおける吸光度を示し、横軸は固相化に使用したペプチドを配列番号で示す。値は、平均値（ｍｅａｎ）±標準偏差（ｓｔａｎｄａｒｄ  ｄｅｖｉａｔｉｏｎ，  ＳＤ）で示す。
【図１６】実施例２で得られた抗ペプチドウサギポリクローナル抗体の各ヘリコバクター種の菌体に対する結合性をＥＬＩＳＡで測定した結果を示すグラフである。各グラフ上部には当該グラフにおいて測定された抗体がどのペプチドを抗原として得られた抗体であるかが記載されている（例えば、「Ａｂ．ａｇａｉｎｓｔ  ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：９１」とは、配列番号９１のペプチドを抗原として得られた抗体を意味する）。縦軸は４５０ｎｍにおける吸光度を示し、横軸は固相化に使用した各ヘリコバクター種の菌株を示す。平均値（ｍｅａｎ）±標準偏差（ｓｔａｎｄａｒｄ  ｄｅｖｉａｔｉｏｎ，  ＳＤ）で示す。
【図１７】（Ａ）Ｈ．スイス  ＳＮＴＷ１０１感染マウス胃切片、（Ｂ）（Ａ）の囲み部分の拡大図、（Ｃ）非感染マウスの胃切片について、抗Ｎｏ．１６ペプチド（配列番号１２）抗体を用いて免疫組織化学染色した結果を示す写真である。矢印は、染色された菌体を示す。
【発明を実施するための形態】
【００４３】
一態様において，本発明は，サンプル中のｈｓｖＡ遺伝子若しくはその一部，ＨｓｖＡタンパク質若しくはその一部，又は，ＨｓｖＡタンパク質に対する抗体を検出することを含む，当該サンプル中のＨ．スイスの存在を判定する方法に関する。特に，本発明は，被験者由来のサンプル中のｈｓｖＡ遺伝子若しくはその一部，ＨｓｖＡタンパク質若しくはその一部，又は，ＨｓｖＡタンパク質に対する抗体を検出することを含む，被験者におけるＨ．スイスの感染を判定する方法に関する。本方法において，ｈｓｖＡ遺伝子若しくはその一部，ＨｓｖＡタンパク質若しくはその一部，又は，ＨｓｖＡタンパク質に対する抗体が検出されたサンプル又は被験者は，それぞれＨ．スイスが存在する又はＨ．スイスに感染していると判定される。
【００４４】
本発明の方法が，前記サンプル中のポリヌクレオチド，タンパク質又はその一部，抗体又はその一部と，被検試薬との結合を測定することにより行われる場合，判定において「検出された」か否かは，絶対的な検出の有無である必要はなく，他のサンプルとの比較において決定してもよい。すなわち，±の検出結果に基づくものではなく，測定値から検出の有無を決定してもよい。すなわち，本発明の方法において，「検出する」工程は，必要に応じて「測定する」と置き換えることができ，「検出された」か否かは，対象物質の測定値に基づき陰性対象との比較において決定してもよい。例えば，陰性対象，即ち，Ｈ．スイスを含まないサンプル又はＨ．スイスに感染していないことが明らかな被験者由来のサンプル等において目的の物質が検出される場合，検被者の測定値が当該陰性対象の測定値と同等であれば，微量ながら検出されていても，本発明の方法においては「検出されなかった」としてＨ．スイスが存在しない又はＨ．スイスに感染していないと判定される。一方で，陰性対象の測定値と比較して，被験者の測定値が高い場合には，「検出された」としてＨ．スイスが存在する又はＨ．スイスに感染していると判定される。よって，本発明の方法において，陰性である対象についてわずかな測定値が認められることは，本発明が予め許容する範囲内である。
【００４５】
好ましくは，本発明におけるＨ．スイスの存在を判定する方法又は被験者におけるＨ．スイスの感染を判定する方法は，被験者由来のサンプルにおける，（ｉ）ｈｓｖＡ遺伝子と特異的に結合可能な核酸分子，（ｉｉ）ＨｓｖＡ抗原ペプチド，及び，（ｉｉｉ）抗ＨｓｖＡ抗体又はその免疫反応性断片からなる群から選択される少なくとも一つを用いる。
【００４６】
（ｈｓｖＡ遺伝子特異的塩基配列を有する核酸分子を利用した方法）
被験者がＨ．スイスに感染しているか否かは，被験者のサンプル中に存在するｈｓｖＡ遺伝子を検出することにより，その感染の有無を決定することができる。ｈｓｖＡ遺伝子と特異的に結合可能な核酸分子を利用した，Ｈ．スイスの検出は，ハイブリダイゼーションを利用した方法；ＰＣＲを利用した方法；並びに，インベーダー（登録商標）法として知られる方法（例えば，Ｋｗｉａｔｋｏｗｓｋｉ，Ｒ．Ｗ．ら，Ｍｏｌ．Ｄｉａｇｎ．（１９９９）４：３５３−３６４参照）により行うことができる。
【００４７】
ハイブリダイゼーションを利用した方法としては，サザンハイブリダイゼーション，ノーザンハイブリダイゼーション，ドットハイブリダイゼーション，蛍光ｉｎ  ｓｉｔｕハイブリダイゼーション（ＦＩＳＨ），ＤＮＡマイクロアレイ，ＡＳＯ法等の方法を挙げることができる。例えば，本発明におけるサンプル中のＨ．スイスの存在を判定する方法は，以下を備えていてもよい：
（ａ）少なくとも１つのｈｓｖＡ遺伝子と特異的に結合可能な核酸分子とサンプルを接触させること；
（ｂ）前記ｈｓｖＡ遺伝子と特異的に結合可能な核酸分子への前記サンプル中のポリヌクレオチドの結合を検出すること；及び，
（ｃ）前記結合が検出されたサンプルを，Ｈ．スイスが存在するサンプルとして決定し，かつ，前記結合が検出されなかったサンプルを，Ｈ．スイスが存在しないサンプルとして決定することにより，Ｈ．スイスの存在を判定すること
【００４８】
また，例えば，本発明は，被験者のＨ．スイスへの感染を判定する方法であって，以下を含む方法であってもよい：
（ａ）少なくとも１つのｈｓｖＡ遺伝子と特異的に結合可能な核酸分子と被験者由来のサンプルを接触させること；
（ｂ）前記ｈｓｖＡ遺伝子と特異的に結合可能な核酸分子への前記サンプル中のポリヌクレオチドの結合を検出すること；及び，
（ｃ）前記結合が検出されたサンプルの由来する被験者を，Ｈ．スイスに感染している判定し，かつ／又は，前記結合が測定又は検出されなかったサンプルを，Ｈ．スイスが存在しないサンプルとして判定すること。
【００４９】
ｈｓｖＡ遺伝子と特異的に結合可能な核酸分子への前記サンプル中のポリヌクレオチドの結合の検出は，例えば，ｈｓｖＡ遺伝子と特異的に結合可能な核酸分子を予め標識しておき，ｈｓｖＡ遺伝子と特異的に結合可能な核酸分子と被験者由来のサンプルを接触させた後に洗浄し，残ったｈｓｖＡ遺伝子と特異的に結合可能な核酸分子の標識を検出又は測定することにより行うことができる。この場合，好ましくは，被験者由来のサンプルは固相に固定化されている。
【００５０】
また，ＰＣＲを利用した方法としては，ＡＲＭＳ（Ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ    Ｒｅｆｒａｃｔｏｒｙ    Ｍｕｔａｔｉｏｎ    Ｓｙｓｔｅｍ）法，ＲＴ−ＰＣＲ（Ｒｅｖｅｒｓｅ  ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ−ＰＣＲ）法，Ｎｅｓｔｅｄ  ＰＣＲ法等の方法を挙げることができる。例えば，本発明におけるＨ．スイスの存在を判定する方法は，以下のステップを備えていてもよい：
（ａ）ｈｓｖＡ遺伝子と特異的に結合可能な核酸分子をプライマーとして用いて，サンプル中のｈｓｖＡ遺伝子の一部を増幅させること：
（ｂ）増幅された核酸分子を検出すること；並びに，
（ｃ）増幅された核酸分子が検出されたサンプルを，Ｈ．スイスが存在するサンプルとして決定し，かつ，増幅された核酸分子が検出されなかったサンプルを，Ｈ．スイスが存在しないサンプルとして決定することにより，Ｈ．スイスの存在を判定すること。
【００５１】
また，本発明は，以下を有するＨ．スイス感染の判定方法に関する：
（ａ）ｈｓｖＡ遺伝子と特異的に結合可能な核酸分子をプライマーとして用いて，被験者由来のサンプル中のｈｓｖＡ遺伝子の一部を増幅させること：
（ｂ）増幅された核酸分子を検出すること；並びに，
（ｃ）増幅された核酸分子が検出されたサンプルが由来する被験者を，Ｈ．スイスが感染していると判定し，かつ，増幅された核酸分子が検出されなかったサンプルが由来する被験者を，Ｈ．スイスに感染していないと判定すること。
【００５２】
また，別の態様において，本発明は，以下を有するＨ．スイス感染の判定方法に関する：
（ａ）ｈｓｖＡ遺伝子特異的核酸分子等をプライマーとして用いて，被験者由来のサンプル中のｈｓｖＡ遺伝子の一部を増幅させること，
（ｂ）増幅された核酸分子のレベルを測定すること；並びに，
（ｃ）測定された核酸分子のレベルが，同様の方法により陰性対照について測定された核酸分子のレベルよりも高い場合，被験者をＨ．スイスに感染していると判定し，かつ，測定された核酸分子のレベルが，同様の方法により陰性対照について測定された核酸分子のレベルと同等か低い場合，被験者を，Ｈ．スイスに感染していないと判定すること。
【００５３】
被験者由来のサンプル中のｈｓｖＡ遺伝子の一部の増幅は，被験者由来のサンプルを鋳型としてＰＣＲ反応等を行うことにより実施することができる。
【００５４】
増幅された核酸は，ドット・ブロット・ハイブリダイゼーション法，表面プラズモン共鳴法（ＳＰＲ法），ＰＣＲ−ＲＦＬＰ法，Ｉｎ  ｓｉｔｕ  ＲＴ−ＰＣＲ法，ＰＣＲ−ＳＳＯ（ｓｅｑｕｅｎｃｅ  ｓｐｅｃｉｆｉｃ  Ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ）法，ＰＣＲ−ＳＳＰ法，ＡＭＰＦＬＰ（Ａｍｐｌｉｆｉａｂｌｅ  ｆｒａｇｍｅｎｔ  ｌｅｎｇｔｈ  ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍ）法，ＭＶＲ−ＰＣＲ法，ＰＣＲ−ＳＳＣＰ（ｓｉｎｇｌｅ  ｓｔｒａｎｄ  ｃｏｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ  ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍ）法により判定することができる。
【００５５】
インベーダー（登録商標）法として知られる方法を用いて行う場合，例えば，Ｈ．スイスの存在を判定する方法は，以下のステップを備えていてもよい：
（ａ）以下の（ｉ）及び（ｉｉ）に記載の核酸に該試料を接触させて，アレルプローブと相補的なＤＮＡに三重鎖を形成させるステップ：
（ｉ）ｈｓｖＡ遺伝子特異的塩基配列又は該配列と相補的な配列及び消光プローブの一部と相補的な配列（フラップ）を備えるアレル特異的プローブ，及び／又は，ｈｓｖＡ特異的塩基配列または該配列と相補的な配列及び消光プローブの一部と相補的な配列（フラップ）を備えるアレル特異的プローブ，
（ｉｉ）ｈｓｖＡ遺伝子特異的塩基配列を備えるインベーダープローブ；
（ｂ）（ａ）により得られた核酸試料に，三重鎖特異的ＤＮＡ分解酵素を接触させて三重鎖を形成した核酸からフラップを遊離させるステップ；
（ｃ）遊離されたフラップを，それぞれ当該フラップと相補的な配列及び消光プローブを備える蛍光標識ユニバーサルプローブと接触させるステップ；
（ｄ）（ｃ）により得られた核酸試料に，三重鎖特異的ＤＮＡ分解酵素を接触させて蛍光標識を遊離させ，蛍光を発色させるステップ；    
（ｅ）発色した蛍光を検出することにより，ｈｓｖＡ遺伝子を検出するステップ；ここで，蛍光発色が検出されたサンプルを，Ｈ．スイスが存在するサンプルとして決定し，かつ，蛍光発色が検出されなかったサンプルを，Ｈ．スイスが存在しないサンプルとして決定することにより，Ｈ．スイスの存在を判定するステップ。
【００５６】
（ＨｓｖＡタンパク質特異的抗体を検出することを利用した方法）
被験者がＨ．スイスに感染しているか否かは，被験者自身の免疫系が生み出したＨ．スイス由来タンパク質（特には，ＨｓｖＡタンパク質）に対する抗体の存在を確認することにより決定することができる。ＨｓｖＡ抗原ペプチド，又は抗ＨｓｖＡ抗体又はその免疫反応性断片を利用したＨ．スイスの検出は，酵素免疫測定法（ＥＩＡ法），簡易ＥＩＡ法，酵素結合イムノソルベントアッセイ法（ＥＬＩＳＡ法），ラジオイムノアッセイ法（ＲＩＡ法），蛍光免疫測定法（ＦＩＡ法）等の標識化免疫測定法；ウェスタンブロッティング法等のイムノブロッティング法；金コロイド凝集法等のイムノクロマト法；イオン交換クロマトグラフィ法，アフィニティクロマトグラフィ法等のクロマトグラフィ法；比濁法（ＴＩＡ法）；比ろう法（ＮＩＡ法）；比色法；ラテックス凝集法（ＬＩＡ法）；粒子計数法（ＣＩＡ法）；化学発光測定法（ＣＬＩＡ法，ＣＬＥＩＡ法）；沈降反応法；表面プラズモン共鳴法（ＳＰＲ法）；レゾナントミラーディテクター法（ＲＭＤ法）；比較干渉法等により行うことができる。
【００５７】
一態様において，本発明は，以下を有するＨ．スイス感染の判定方法に関する：
（ａ）被験者由来のサンプルを本発明のＨｓｖＡ抗原と接触させること，
（ｂ）前記ペプチドと結合した，前記血液サンプル中の抗体を検出すること，及び
（ｃ）前記ペプチドと結合した抗体が検出された被験者をＨ．スイスに感染していると判定し，かつ，前記ペプチドと結合した抗体が検出されなかった被験者を，Ｈ．スイスに感染していないと判定すること。
すること。
【００５８】
他の態様において，本発明は，以下を有するＨ．スイス感染の判定方法に関する：
（ａ）被験者由来のサンプルを，本発明のＨｓｖＡ抗原ペプチドと接触させること，
（ｂ）前記ペプチドと結合した，前記血液サンプル中の抗体のレベルを測定すること，及び
（ｃ）測定された抗体のレベルが，同様の方法により陰性対照について測定された抗体のレベルよりも高い場合，該被験者をＨ．スイスに感染していると判定し，かつ，測定された抗体のレベルが，同様の方法により陰性対照について測定された抗体のレベルと同等か低い場合，該被験者を，Ｈ．スイスに感染していないと判定すること。
【００５９】
前記ペプチドと被験者由来のサンプル中の抗体が結合したか否かは，例えば，被験者由来のサンプルを，本発明のＨｓｖＡ抗原ペプチドと接触させた後に，反応液を洗浄して非結合の抗体を除去し，標識化した抗Ｉｇ抗体と接触させて前記ＨｓｖＡ抗原ペプチドと結合した被験者由来の抗体と該抗Ｉｇ抗体とを結合させ，反応液を洗浄して非結合の抗体を除去して該抗Ｉｇ抗体の標識を検出し，該抗Ｉｇ抗体の標識が検出された場合に前記ペプチドと被験者由来のサンプル中の抗体が結合したとして，確認することができる。該抗Ｉｇ抗体の標識レベルを測定することで，前記ペプチドと被験者由来のサンプル中の抗体との結合レベルを測定することもできる。結合レベルを利用する場合，予め存在量が判明している標準溶液を用いて標準曲線を作成することにより，測定値から抗体量を計算することができる。あるいは，表面プラズモン共鳴センサーを用いて，前記ペプチドと被験者由来のサンプル中の抗体の結合を検出又は測定することもできる。
【００６０】
（ＨｓｖＡ抗原ペプチドの検出を利用したＨ．スイス感染診断）
被験者がＨ．スイスに感染しているか否かは，被験者由来のサンプル中のＨ．スイス由来タンパク質（特には，ＨｓｖＡタンパク質）の存在を確認することにより決定することができる。ＨｓｖＡタンパク質を利用したＨ．スイスの検出は，上述のＨｓｖＡタンパク質特異的抗体を検出することを利用した方法と同様な方法により行うことができる。
例えば，本発明のＨ．スイスの存在の判定方法は，以下を備えていてもよい：
（ａ）サンプルを，標識化された抗ＨｓｖＡ抗体又はその免疫反応性断片に接触させること；
（ｂ）結合した抗体の標識を検出すること；
（ｃ）該標識が検出されたサンプルを，Ｈ．スイスが存在するサンプルとして決定し，かつ，該結合が検出されなかったサンプルを，Ｈ．スイスが存在しないサンプルとして決定することにより，Ｈ．スイスの存在を判定すること。
【００６１】
また，本発明の被験者のＨ．スイスへの感染の判定方法は，以下を備えていてもよい：
（ａ）被験者由来のサンプルを，標識化された抗ＨｓｖＡ抗体又はその免疫反応性断片に接触させること；
（ｂ）結合した抗体の標識を検出すること；
（ｃ）該標識が検出されたサンプルが由来する被験者を，Ｈ．スイスに感染していると判定し，かつ／又は，該標識が検出されなかったサンプルが由来する被験者を，Ｈ．スイスに感染していないと判定すること。
【００６２】
あるいは，本発明のＨ．スイスの存在の判定方法は，以下を備えていてもよい：
（ａ）サンプルを，抗ＨｓｖＡ抗体又はその免疫反応性断片に接触させること；
（ｂ）（ａ）より得られたサンプルを，前記抗ＨｓｖＡ抗体又はその免疫反応性断片とは異なる標識化された抗ＨｓｖＡ抗体若しくはその免疫反応性断片と接触させること；
（ｃ）結合した抗体の標識を測定又は検出すること；
（ｄ）該結合が測定又は検出されたサンプルを，Ｈ．スイスが存在するサンプルとして決定し，かつ，該結合が測定又は検出されなかったサンプルを，Ｈ．スイスが存在しないサンプルとして決定することにより，Ｈ．スイスの存在を判定すること。
【００６３】
本発明の被験者のＨ．スイスへの感染の判定方法は，以下を備えていてもよい：
（ａ）被験者由来のサンプルを，抗ＨｓｖＡ抗体又はその免疫反応性断片に接触させること；
（ｂ）（ａ）より得られたサンプルを，前記抗ＨｓｖＡ抗体又はその免疫反応性断片とは異なる標識化された抗ＨｓｖＡ抗体若しくはその免疫反応性断片と接触させること；
（ｃ）結合した抗体の標識を測定又は検出すること；
（ｄ）該結合が測定又は検出されたサンプルが由来する被験者を，Ｈ．スイスに感染していると判定し，かつ／又は，該結合が測定又は検出されなかったサンプルが由来する被験者を，Ｈ．スイスに感染していないと判定すること。
【００６４】
抗体又はその断片の標識化は当分野において一般的な方法により行うことができる。例えば，タンパク質又はペプチドを蛍光標識する場合，タンパク質又はペプチドをリン酸緩衝液で洗浄した後，ＤＭＳＯ，緩衝液等で調製した色素を加え，混合した後室温で１０分間静置することにより結合させることができる。また，市販の標識キットとして，ビオチン標識キット（Ｂｉｏｔｉｎ  Ｌａｂｅｌｉｎｇ  Ｋｉｔ−ＮＨ２，Ｂｉｏｔｉｎ  Ｌａｂｅｌｉｎｇ  Ｋｉｔ−ＳＨ：株式会社同仁化学研究所），アルカリフォスファターゼ標識用キット（Ａｌｋａｌｉｎｅ  Ｐｈｏｓｐｈａｔａｓｅ    Ｌａｂｅｌｉｎｇ    Ｋｉｔ−ＮＨ２，Ａｌｋａｌｉｎｅ  Ｐｈｏｓｐｈａｔａｓｅ    Ｌａｂｅｌｉｎｇ    Ｋｉｔ−ＳＨ：株式会社同仁化学研究所），ペルオキシダーゼ標識キット（Ｐｅｒｏｘｉｄａｓｅ  Ｌａｂｅｒｉｎｇ  Ｋｉｔ−ＮＨ２，Ｐｅｒｏｘｉｄａｓｅ  Ｌａｂｅｒｉｎｇ  Ｋｉｔ−ＮＨ２：株式会社同仁化学研究所），フィコビリプロテイン標識キット（Ａｌｌｏｐｈｙｃｏｃｙａｎｉｎ  Ｌａｂｅｌｉｎｇ  Ｋｉｔ−ＮＨ２，Ａｌｌｏｐｈｙｃｏｃｙａｎｉｎ  Ｌａｂｅｌｉｎｇ  Ｋｉｔ−ＳＨ，Ｂ−Ｐｈｙｃｏｅｒｙｔｈｒｉｎ  Ｌａｂｅｌｉｎｇ  Ｋｉｔ−ＮＨ２，Ｂ−Ｐｈｙｃｏｅｒｙｔｈｒｉｎ  Ｌａｂｅｌｉｎｇ  Ｋｉｔ−ＳＨ，Ｒ−Ｐｈｙｃｏｅｒｙｔｈｒｉｎ    Ｌａｂｅｌｉｎｇ    Ｋｉｔ−ＮＨ２，Ｒ−Ｐｈｙｃｏｅｒｙｔｈｒｉｎ  Ｌａｂｅｌｉｎｇ    Ｋｉｔ−ＳＨ：株式会社同仁化学研究所），蛍光標識キット（Ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｉｎ  Ｌａｂｅｌｉｎｇ  Ｋｉｔ−ＮＨ２，ＨｉＬｙｔｅ  Ｆｌｕｏｒ（登録商標）  ５５５  Ｌａｂｅｌｉｎｇ    Ｋｉｔ−ＮＨ２，ＨｉＬｙｔｅ  Ｆｌｕｏｒ（登録商標）  ６４７  Ｌａｂｅｌｉｎｇ  Ｋｉｔ−ＮＨ２：株式会社同仁化学研究所），ＤｙＬｉｇｈｔ５４７，ＤｙＬｉｇｈｔ６４７（テクノケミカル株式会社），Ｚｅｎｏｎ（登録商標）Ａｌｅｘａ  Ｆｌｕｏｒ（登録商標）抗体標識キット，Ｑｄｏｔ（登録商標）抗体標識キット（インビトロゲン社），ＥＺ−Ｌａｂｅｌ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｌａｂｅｌｉｎｇ  Ｋｉｔ（フナコシ株式会社）等を用いて標識することもできる。また，標識した抗体又はその断片の検出は，適宜標識に適した機器を使用することにより行うことができる。
【００６５】
Ｈ．スイスは広く哺乳動物に感染することから，本明細書記載のＨ．スイスの存在を判定する方法及びＨ．スイスへの感染を判定する方法における被験者は，ヒト,サル,ブタ,ネコ,イヌ,ウサギ,及びヒツジ等の哺乳動物とすることができ，好ましくは，ヒトであり，より好ましくは，ヒトの胃炎,慢性胃炎,鳥肌胃炎,胃ＭＡＬＴリンパ腫,びまん性大細胞型Ｂ細胞性リンパ腫,胃癌,胃・十二指腸潰瘍,特発性血小板減少紫斑病,機能性ディスペプシア患者である。また，本発明の方法は，定性的，定量的または半定量的に行うことができる。
【００６６】
本明細書記載のＨ．スイス存在を判定する方法において用いるサンプルとしては，例えば，生検として被験者から採取した組織試料または被験者から採取した液体を使用することができる。サンプルは，本発明の方法の対象となるものであれば特に限定はなく，例えば，組織，血液，血漿，血清，リンパ液，尿，便，漿液，髄液，関節液，眼房水，涙液，唾液またはそれらの分画物若しくは処理物を挙げることができる。本明細書記載のＨ．スイス存在を判定する方法において核酸を検出対象とする場合には，サンプルとして好ましくは組織（特には胃組織（胃バイオプシーサンプル））又は便である。本明細書記載のＨ．スイス存在を判定する方法において抗体を検出対象とする場合には，サンプルとして好ましくは，血液，血漿，血清，リンパ液，及び尿である。
【００６７】
本発明のペプチド，核酸分子，及び，抗体若しくはその免疫反応性断片は，本明細書の開示を参照して当業者周知の方法により適宜調製することができる。また，本発明の組成物及びキットは，当該技術分野周知の方法により，適宜製造することができる。
【００６８】
更に，本発明の核酸分子，及び，抗体若しくはその免疫反応性断片は，Ｈ．スイスと特異的に結合することから，例えば，ｓｉＲＮＡ，アンチセンスＤＮＡ若しくはＲＮＡ，中和抗体若しくはその免疫反応性断片，非中和抗体などを選択することにより，Ｈ．スイス感染者の体内からＨ．スイスを除去するための、又はＨ．スイス感染を防御するための医薬組成物として使用することができる。例えば，本発明の核酸分子，及び，抗体若しくはその免疫反応性断片は，必要により精製した後，常法に従って製剤化することにより，Ｈ．スイス感染が発症又は増悪化に寄与する疾患又は障害の治療用又は予防用の医薬組成物として用いることができる。また，本発明は，Ｈ．スイス除去剤，又は，Ｈ．スイス感染が発症又は増悪化に寄与する疾患又は障害の治療薬又は予防薬を製造するための，本発明の核酸分子，及び，抗体若しくはその免疫反応性断片の使用を含む。あるいは，本発明は，本発明の核酸分子，及び，抗体若しくはその免疫反応性断片の，Ｈ．スイスの除去，又は，Ｈ．スイス感染が発症又は増悪化に寄与する疾患又は障害の治療若しくは予防のための使用を含む。更に，本発明は，本発明の抗体又はその免疫反応性断片を投与することを含む，Ｈ．スイス除去方法，又は，Ｈ．スイス感染が発症又は増悪化に寄与する疾患又は障害の治療方法若しくは予防方法に関する。本明細書において，Ｈ．スイス感染が発症又は増悪化に寄与する疾患又は障害とは，胃炎,慢性胃炎,鳥肌胃炎,胃ＭＡＬＴリンパ腫,びまん性大細胞型Ｂ細胞性リンパ腫,胃癌,胃・十二指腸潰瘍,特発性血小板減少紫斑病,及び機能性ディスペプシアを含む。以上において、「Ｈ．スイスの除去」とは、Ｈ．スイスに感染した感染者の体内からＨ．スイスを除去することを意味する。また、医薬組成物として使用する場合、好ましくは、抗体はヒト化されており、又は完全ヒト抗体である。
【００６９】
本発明の医薬組成物は，患者に投与することができる製剤であれば経口又は非経口のいかなる製剤を採用してもよい。非経口投与のための組成物としては，例えば，点眼，注射剤，点鼻剤，坐剤，貼布剤，軟膏等を挙げることができる。好ましくは，注射剤である。本発明の医薬組成物の剤形は，例えば，液剤又は凍結乾燥製剤を挙げることができる。本発明の医薬組成物を注射剤として使用する場合，必要に応じて，プロピレングリコール，エチレンジアミン等の溶解補助剤，リン酸塩等の緩衝材，塩化ナトリウム，グリセリン等の等張化剤，亜硫酸塩等の安定剤，フェノール等の保存剤，リドカイン等の無痛化剤等の添加物（「医薬品添加物事典」薬事日報社，「Ｈａｎｄｂｏｏｋ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｅｘｃｉｐｉｅｎｔｓ  Ｆｉｆｔｈ  Ｅｄｉｔｉｏｎ」ＡＰｈＡ  Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎｓ社参照）を加えることができる。また，本発明の医薬組成物を注射剤として使用する場合，保存容器としては，アンプル，バイアル，プレフィルドシリンジ，ペン型注射器用カートリッジ，及び，点滴用バッグ等を挙げることができる。
【００７０】
例えば，本発明の医薬組成物（治療薬若しくは予防薬）は，注射剤として利用することができ，静脈注射剤，皮下注射剤，皮内注射剤，筋肉注射剤，硝子体内注射剤，点滴注射剤などの剤形を包含する。このような注射剤は，公知の方法に従って，例えば，上記抗体等を通常注射剤に用いられる無菌の水性もしくは油性液に溶解，懸濁または乳化することによって調製することができる。注射用の水性液としては，例えば，生理食塩水，ブドウ糖，ショ糖，マンニトール，その他の補助薬を含む等張液等が用いることができ，適当な溶解補助剤，例えば，アルコール（例，エタノール），ポリアルコール（例，プロピレングリコール，ポリエチレングリコール），非イオン界面活性剤〔例，ポリソルベート８０，ポリソルベート２０，ＨＣＯ−５０（ｐｏｌｙｏｘｙｅｔｈｙｌｅｎｅ（５０ｍｏｌ）ａｄｄｕｃｔ  ｏｆ  ｈｙｄｒｏｇｅｎａｔｅｄ  ｃａｓｔｏｒ  ｏｉｌ）〕等と併用することができる。油性液としては，例えば，ゴマ油，大豆油などを用いることができ，溶解補助剤として安息香酸ベンジル，ベンジルアルコール等と併用することができる。調製された注射液は，通常，適当なアンプル，バイアル，シリンジに充填される。また，本発明の抗体又はその免疫反応性断片に適当な賦形剤を添加することにより，凍結乾燥製剤を調製し，用時，注射用水，生理食塩水などで溶解して注射液とすることもできる。なお，一般的に抗体などのタンパク質の経口投与は消化器により分解されるため困難とされるが，抗体断片や修飾した抗体断片と剤形の創意工夫により，経口投与の可能性もある。経口投与の製剤としては，例えば，カプセル剤，錠剤，シロップ剤，顆粒剤等を挙げることができる。
【００７１】
本発明の医薬組成物は，活性成分の投与量に適合するような投薬単位の剤形に調製されることが好適である。このような投薬単位の剤形としては，注射剤（アンプル，バイアル，プレフィルドシリンジ）が例示され，投薬単位剤形当たり通常５〜５００ｍｇ，５〜１００ｍｇ，１０〜２５０ｍｇの本発明の抗体又はその免疫反応性断片を含有していても良い。
【００７２】
本発明の医薬組成物（治療薬若しくは予防薬）の投与は，局所的であってもよく，全身的であってもよい。投与方法には特に制限はなく，上述のとおり非経口的又は経口的に投与される。非経口的投与経路としては，眼内，皮下，腹腔内，血中（静脈内，若しくは動脈内）又は脊髄液への注射又は点滴等が挙げられ，好ましくは血中への投与である。本発明の医薬組成物（治療薬若しくは予防薬）は，一時的に投与してもよいし，持続的又は断続的に投与してもよい。例えば，投与は，１分間〜２週間の持続投与することもできる。
【００７３】
本発明の医薬組成物の投与量は，所望の治療効果又は予防効果が得られる投与量であれば特に限定は無く，症状，性別，年齢等により適宜決定することができる。本発明の医薬組成物の投与量は，例えば，ｃＡＭＰが発症又は増悪化に寄与する疾患又は障害の治療効果又は予防効果を指標として決定することができる。例えば，ｃＡＭＰが発症又は増悪化に寄与する疾患又は障害の患者の予防および／または治療のために使用する場合には，本発明の医薬組成物の有効成分の１回量として，通常０．０１〜２０ｍｇ／ｋｇ体重程度，好ましくは０．１〜１０ｍｇ／ｋｇ体重程度，さらに好ましくは０．１〜５ｍｇ／ｋｇ体重程度を，１月１〜１０回程度，好ましくは１月１〜５回程度，静脈注射により投与するのが好都合である。他の非経口投与および経口投与の場合もこれに準ずる量を投与することができる。症状が特に重い場合には，その症状に応じて増量または投与回数を増加させてもよい。
【実施例】
【００７４】
以下に実施例を挙げて本発明を具体的に説明するが，本発明はこれに限定されるものではない。なお，本願全体を通して引用される全文献は参照によりそのまま本願に組み込まれる。【００７５】
（実施例１）ＰＣＲによる検出
（１）ＤＮＡの調製
（１）−１．Ｈ．ピロリ
Ｈ．ピロリとして，１１株（ＳＳ１，ＴＮ２ＧＦ４，ＲＣ−１，ＡＴＣＣ４３５７９，ＮＣＴＣ１１６３７，ＴＫ１０２９，ＴＫ１０８１，ＴＹ１２８９，ＴＹ２８１）を用いた。ニッスイプレート・ヘリコバクター寒天培地（日水製薬，東京）に−８０℃で保存していた菌液を塗布し，微好気条件下（５％Ｏ２，１０％ＣＯ２，８５％Ｎ２，湿度１００％），３７℃で３日間培養した。生じたコロニーを滅菌蒸留水に懸濁し，９５℃５分間処理後の遠心上清を粗精製染色体ＤＮＡとした。粗精製染色体ＤＮＡは，  等量のフェノール：クロロホルム：イソアミルアルコール（２５：２４：１）で抽出後，エタノール沈殿で精製し，少量の滅菌蒸留水に溶解させた。最終産物のＤＮＡ濃度は，２６０ｎｍの吸光度（Ａｂｓｏｒｂａｎｃｅ）（Ａ２６０）を測定し，以下の式により決定した。
ＤＮＡ濃度（μｇ／ｍＬ）＝Ａ２６０×５０（光路長１０ｍｍ）【００７６】
（１）−２．  Ｈ．スイス
Ｈ．スイスとして，２株（ＴＫＹ，  ＳＮＴＷ１０１）を用いた。Ｈ．スイスを感染させた雌のＣ５７ＢＬ／６マウス（チャールズリバージャパン，横浜）を解剖し，胃の大湾部を切開した。内容物をＰＢＳで洗浄し，スライドガラスを用いて，粘膜をかき取った。粘膜は２枚のスライドガラスのすりガラス部分でこすり合わせて懸濁液を調製した。ＤＮｅａｓｙ  Ｂｌｏｏｄ  ＆  Ｔｉｓｓｕｅ  ｋｉｔ（Ｑｉａｇｅｎ，Ｈｉｌｄｅｎ，Ｇｅｒｍａｎｙ）を用いて，菌を含むマウス胃粘膜のＤＮＡを調製した。最終産物のＤＮＡ濃度は，２６０ｎｍの吸光度（Ａ２６０）を測定し，以下の式により決定した。
ＤＮＡ濃度（μｇ／ｍＬ）＝Ａ２６０×５０（光路長１０ｍｍ）【００７７】
（１）−３．Ｈ．フェリス（Ｈ．ｆｅｌｉｓ），Ｈ．ムステーレ（Ｈ．ｍｕｓｔｅｌａｅ），Ｈ．ハイルマニイｓ．ｓ．（Ｈ．ｈｅｉｌｍａｎｎｉｉ  ｓｅｎｓｕ  ｓｔｒｉｃｔｏ），Ｈ．バクリフォルミス（Ｈ．ｂａｃｕｌｉｆｏｒｍｉｓ），Ｈ．ビゼゾロニー（Ｈ．ｂｉｚｚｏｚｅｒｏｎｉｉ），Ｈ．シノガストリクス（Ｈ．ｃｙｎｏｇａｓｔｒｉｃｕｓ），Ｈ．サルモニス（Ｈ．ｓａｌｍｏｎｉｓ）
−８０℃で保存していた菌液を滅菌蒸留水に懸濁し，９５℃５分間処理後の遠心上清を粗精製染色体ＤＮＡとした。粗精製染色体ＤＮＡは，等量のフェノール：クロロホルム：イソアミルアルコール（２５：２４：１）で抽出後，エタノール沈殿で精製し，少量の滅菌蒸留水に溶解させた。【００７８】
（２）ＰＣＲ
（２）−１．ＰＣＲ
Ｄｒｅａｍ  Ｔａｑ  ＤＮＡ  Ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｆｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉ．）を用いて，以下の組成の反応液（合計２５μＬ）についてＰＣＲ反応をデュプリケートで行った：１０×緩衝液  ２．５μＬ，１０ｍＭ  ｄＮＴＰ  ｍｉｘ  ０．５μＬ，フォワード（ＦＷ）プライマー（５μＭ）１μＬ，リバース（ＲＶ）プライマー１μＬ，鋳型ＤＮＡ  １μＬ（Ｈ．ピロリ（ＳＳ１株，ＴＮ２ＧＦ４株，ＲＣ−１株，ＡＴＣＣ４３５７９株，ＮＣＴＣ１１６３７株，ＴＫ１０２９株，ＴＫ１０８１株，ＴＹ１２８９株，及びＴＹ２８１株）ＤＮＡ各々１ｎｇ，及び１０ｎｇ，Ｈ．スイス（ＳＮＴＷ１０１株及びＴＫＹ株）感染マウスの胃生検から調製したＤＮＡ各々１０−３ｎｇ，１０−２ｎｇ，１０−１ｎｇ，１ｎｇ，１０ｎｇ，及び１００ｎｇ），ＤＮＡ  ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ  ０．２５μＬ，及び滅菌蒸留水１６．７５μＬ。ＰＣＲの反応条件は，９５℃１分でホールドした後，１サイクル９５℃３０秒，５５℃３０秒，及び７２℃１分を３５サイクル行い，その後７２℃で５分維持した。【００７９】
Ｈ．スイスのｈｓｖＡ遺伝子とＨ．フェリス，Ｈ．ビゼゾロニー，Ｈ．ピロリに存在するＶａｃＡ類似のオートトランスポータータンパク質を比較し，Ｈ．スイスの菌株間で同一性が高く，他の菌種と同一性のない領域にプライマーを設計した。設計されたプライマーは以下の通りであった。
（フォワードプライマー）
ＨＳＶＡＮＯＦＷ−２：ＡＧＡＡＡＣＧＡＧＡＴＴＡＣＡＧＧＡＡＧ（配列番号５１）
ＨＳＶＡＮＯＦＷ−３：ＡＧＧＡＧＣＡＡＧＴＴＴＴＧＴＡＧＣＡＧ（配列番号５２）ＨＳＶＡＮＯＦＷ−５：ＡＡＡＡＴＧＣＧＡＣＴＧＡＴＴＧＧＡＴＧ（配列番号５３）
（リバースプライマー）
ＨＳＶＡＮＯＲＶ−１：ＡＴＣＧＡＡＡＴＡＡＧＣＧＡＡＣＣＴＣＡ（配列番号７２）
ＨＳＶＡＮＯＲＶ−３：ＴＴＧＡＡＡＧＣＴＴＡＧＣＴＡＡＡＣＧＧ（配列番号７３）
ＨＳＶＡＮＯＲＶ４：ＴＧＧＴＡＴＴＧＣＴＧＧＴＴＡＡＧＡＧＧ（配列番号７４）【００８０】
また，Ｈ．ピロリのｖａｃＡ遺伝子を増幅するプライマーとして，以下のプライマーを用いた（Ｍａｔｓｕｉ  Ｈら，Ｈｅｌｉｃｏｂａｃｔｅｒ．（２０１４）１９（４）：２６０−７１．）。
ＶＡＣ３６２４Ｆ（フォワード）：ＧＡＧＣＧＡＧＣＴＡＴＧＧＴＴＡＴＧＡＣ（配列番号８４）
ＶＡＣ４０４１Ｒ（リバース）：ＣＡＴＴＣＣＴＡＡＡＴＴＧＧＡＡＧＣＧＡＡ（配列番号８５）【００８１】
得られた増副産物の１０μＬを１．５％アガロースゲル電気泳動に流し，エチジウムブロマイドで染色により増幅したバンドを確認した。【００８２】
（２）−２．リアルタイムＰＣＲ
ＩＤＴ社に委託して，以下の配列を有するダブルクエンチャープローブ（ＰｒｉｍｅＴｉｍｅ（登録商標）ｑＰＣＲ  Ｐｒｏｂｅｓ）を合成した。プライマーは，上述のＦＷ５とＲＷ３がＨ．スイスの菌株間で同一性が高いことから，同じ領域に新たなプライマーとして設計した。
プローブ：ＦＡＭ／ＴＧＴＡＣＡＣＡＣ／ＺＥＮ／ＣＡＡＡＣＡＧＡＴＧＡＧＣＣＧＴ（配列番号７５）／３ＩＡＢｋＦＱ
フォワード：
ＧＡＴＧＧＧＣＧＣＴＴＣＴＧＧＴＴＴＡ（配列番号４７）
リバース：
ＣＴＧＧＴＡＡＴＧＣＡＴＣＡＴＴＡＧＡＡＧＣＡＡＡ（配列番号６５）【００８３】
ＰＣＲ反応は，上記プローブ（終濃度０．２５μＭ），上記プライマー（終濃度０．５μＭ），及びＰＣＲ  ｍａｓｔｅｒ  ｍｉｘ：  ＰｒｉｍｅＴｉｍｅ  Ｇｅｎｅ  Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  Ｍａｓｔｅｒ  Ｍｉｘ（Ｉｎｔｅｇｒａｔｅｄ  ＤＮＡ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）を用いて，ＱｕａｎｔＳｔｕｄｉｏ（Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ）で，ＩＤＴ社添付のプロトコルに従い，以下の条件で行った。
９５℃  ３分，１サイクル
９５℃  １５秒−６０℃  １分，４０サイクル【００８４】
（３）結果
事前に対象領域をクローニングしたプラスミドを用いて検量線を作成した。その結果，１０２コピーから１０７コピーの間で良好な増幅効率，定量性を示した（結果非図示）。Ｈ．ピロリ及びＨ．スイス感染マウス胃生検組織ＤＮＡを用いたＰＣＲの結果を図５に示す。設計されたＨＳＶＡＮＯＦＷ−２／ＨＳＶＡＮＯＲＶ−４、ＨＳＶＡＮＯＦＷ−３／ＨＳＶＡＮＯＲＶ−４、ＨＳＶＡＮＯＦＷ−５／ＨＳＶＡＮＯＲＶ−４のプライマーの組み合わせは，いずれもＨ．スイス特異的に増幅し，Ｈ．ピロリのＤＮＡの増幅は見られなかった。一方で，Ｈ．ピロリのｖａｃＡに対して設計されたプライマーは，Ｈ．ピロリのＤＮＡのみを増幅し，Ｈ．スイスのＤＮＡは増幅しなかった。【００８５】
Ｈ．スイス感染マウス胃生検組織ＤＮＡを用いた定量ＰＣＲの結果，ＤＮＡ量１００ｎｇから１０−２ｎｇまで，良好な増幅効率を示した（結果非図示）。また，Ｈ．スイス  ＳＮＴＷ１０１株は１０ｎｇＤＮＡあたり６．９×１０５コピーであり，Ｈ．スイス  ＴＫＹ株は１０ｎｇＤＮＡあたり３．７×１０５コピーであり、Ｈ．スイスＳＨ８株は１０ｎｇＤＮＡあたり１．５×１０３コピーであり、Ｈ．スイスＳＨ１０株は１０ｎｇＤＮＡあたり４．２×１０３コピーであった。一方，Ｈ．ピロリ  ＤＮＡ（ＳＳ１株，ＴＮ２ＧＦ４株，ＲＣ−１株，ＡＴＣＣ４３５７９株，ＮＣＴＣ１１６３７株，ＴＫ１０２９株，ＴＫ１０８１株，ＴＹ１２８９株，及びＴＹ２８１株）では増幅は観察されなかった。同様にＨ．フェリス，Ｈ．ムステーレ，Ｈ．ハイルマニイｓ．ｓ．ＡＳＢ１．４，Ｈ．バクリフォルミス，Ｈ．ビゼゾロニー，Ｈ．シノガストリクス，Ｈ．サルモニスの染色体ＤＮＡを鋳型とした場合は増殖が認められなかった。Ｈ．ピロリ（ＳＳ１株，ＴＮ２ＧＦ４株，ＮＣＴＣ１１６３７株，ＡＴＣＣ４３５７９株，ＲＣ−１株，ＴＫ１０２９株，  ＴＫ１０８１株，ＴＹ１２８９株，及びＴＹ２８１株），Ｈ．ｆｅｌｉｓ（Ｈ．フェリス），Ｈ．  ｍｕｓｔｅｌａｅ（Ｈ．ムステーレ），Ｈ．  ｈｅｉｌｍａｎｎｉｉ  ｓｅｎｓｕ  ｓｔｒｉｃｔｏ（Ｈ．ハイルマニイｓ．ｓ．ＡＳＢ１．４），Ｈ．  ｂａｃｕｌｉｆｏｒｍｉｓ（Ｈ．バクリフォルミス），Ｈ．  ｂｉｚｚｏｚｅｒｏｎｉｉ（Ｈ．ビゼゾロニー），Ｈ．  ｃｙｎｏｇａｓｔｒｉｃｕｓ（Ｈ．シノガストリクス），Ｈ．  ｓａｌｍｏｎｉｓ（Ｈ．サルモニス）では増幅が認められず，Ｈ．スイス感染マウス由来胃粘膜ＤＮＡにおいてのみ増幅が認められた。【００８６】
以上より，設計されたプライマーセットはいずれもＨ．ピロリ，Ｈ．フェリス，Ｈ．ムステーレ，Ｈ．ハイルマニイｓ．ｓ．ＡＳＢ１．４，Ｈ．バクリフォルミス，Ｈ．ビゼゾロニー，Ｈ．シノガストリクス，及びＨ．サルモニスと区別してＨ．スイス感染の診断ができることが明らかとなった。【００８７】
（実施例２）ペプチド合成および抗体作製
ＰＣＲによるＨ．スイスの特異的検出に成功したことから，ＨｓｖＡが発現している可能性を考慮し，ＨｓｖＡを標的としたＨ．スイス感染の診断が可能であるかに関する検討を行った。【００８８】
（１）ペプチド合成
ＨｓｖＡがコードしていると想定されるアミノ酸配列（配列番号２；図２）のうち，菌種の特異性及び株間での保存性から，抗原性が予測されるペプチド配列を以下の通り選択し，合成した。
Ｎｏ．１１：ＥＫＫＡＶＱＱＭＥＮＳＮＰＤ（配列番号３）
Ｎｏ．１１（ＴＫＹ）：ＥＫＫＡＶＥＱＭＥＮＳＮＰＤ（配列番号４）
Ｎｏ．１１（ＳＨ８）：ＥＫＤＡＶＴＳＬＫＮＳＮＳＧ（配列番号５）
Ｎｏ．１１（ＳＨ１０）：ＥＫＤＡＶＴＳＬＥＮＳＮＳＧ（配列番号６）
Ｎｏ．１９：ＮＱＧＴＬＥＦＬＳＮＤＶＳＮ（配列番号７）
Ｎｏ．１９（ＴＫＹ）：ＮＱＧＴＬＥＦＬＳＮＤＶＳＴ（配列番号８）
Ｎｏ．３３：ＬＳＮＫＬＱＧＱＬＫＳＭＧＬ（配列番号９）
Ｎｏ．３３（ＴＫＹ）：ＬＳＮＫＬＱＤＱＬＫＳＭＧＬ（配列番号１０）
Ｎｏ．３３（ＳＨ１０）：ＦＳＤＫＬＱＮＭＬＫＳＬＮＭ（配列番号１１）
Ｎｏ．１６：ＴＮＧＱＥＶＳＡＳＩＤＹＮＫ（配列番号１２）
Ｎｏ．２３：ＡＫＬＳＮＦＡＳＮＤＡＬＰＤ（配列番号１３）
Ｎｏ．１０：ＰＴＴＳＳＧＡＳＰＤＳＳＮＰ（配列番号１４）
Ｎｏ．２１：ＧＬＧＲＤＬＦＶＨＳＭＧＤＫ（配列番号１５）
Ｎｏ．１５：ＱＩＧＫＩＫＬＳＤＶＬＳＡＳ（配列番号１６）
Ｎｏ．３４：ＹＧＡＩＤＫＥＬＨＦＳＧＧＫ（配列番号１７）
Ｎｏ．２０：ＮＶＤＮＩＬＮＭＰＳＴＴＳＧ（配列番号１８）
Ｎｏ．２２：ＧＮＬＫＧＶＹＹＰＫＳＳＴＴ（配列番号１９）
Ｎｏ．１４：ＩＴＥＫＩＱＳＧＫＬＴＩＴＩ（配列番号２０）
Ｎｏ．２６：ＦＨＤＦＬＶＳＬＫＧＫＫＦＡ（配列番号２１）
Ｎｏ．３１：ＴＴＧＧＥＶＲＬＦＲＳＦＹＶ（配列番号２２）
Ｎｏ．３５：ＩＧＡＲＦＧＬＤＹＱＤＩＮＩ（配列番号２３）
Ｎｏ．８：ＫＱＬＰＱＰＫＲＳＥＬＫＰＫ（配列番号８６）
Ｎｏ．３１Ｎ：ＴＮＩＫＱＹＭＱＮＮＨＲＳＱ（配列番号８７）
Ｎｏ．８１：ＴＬＴＬＥＧＴＥＴＦＡＱＮＳ（配列番号８８）
Ｎｏ．６３：ＥＡＹＡＫＮＱＧＤＩＷＳＴＩ（配列番号８９）
Ｎｏ．７３：ＶＩＧＳＫＳＳＩＴＬＮＳＡＮ（配列番号９０）
Ｎｏ．６１：ＡＤＩＱＳＳＱＴＴＦＡＮＳＶ（配列番号９１）【００８９】
（２）抗体作製
以上の選択された配列のうち，Ｎｏ．１０、Ｎｏ．１１，Ｎｏ．１６、Ｎｏ．１９，Ｎｏ．３３、及びＮｏ．６１それぞれ１４−ｍｅｒのペプチドのアミノ末端にシステイン（Ｃ）を付加したペプチドを合成した。キーホールリンペットヘモシアニン（ＫＬＨ）をキャリアとして，ウサギ（ニュージーランドホワイト）へ免疫し，ＥＬＩＳＡ力価１：５１２，０００以上を得た。免疫ウサギ血清をＰｒｏｔｅｉｎ  Ｇを結合したアフィニティーカラムにて精製し，回収したＩｇＧ分画を抗ペプチドウサギ抗体（ポリクローナル抗体）として以下の実験において用いた。。【００９０】
（４）ＥＬＩＳＡ用Ｈ．ピロリ抗原の調製
Ｈ．ピロリは，１０％牛胎児血清（ＦＣＳ）を含むブルセラブロスで温度３７℃，湿度１００％，微好気条件（５％Ｏ２，１０％ＣＯ２，８５％Ｎ２）で４８時間振とう培養を行った後で,培養液を遠心分離により菌体を集めた。菌体は滅菌した蒸留水で３回洗浄し，リポ多糖成分を除き，少量の菌体は滅菌した蒸留水で懸濁した。【００９１】
（５）タンパク質の定量
９６−ｗｅｌｌプレートを使用するＢｉｏ−Ｒａｄプロテインアッセイキットを用いてタンパク質を定量した。検量線作成には，牛血清アルブミン（ＢＳＡ）を標準タンパク質として用いた。【００９２】
（実施例３）ＥＬＩＳＡ（ＥｎｚｙｍｅＬｉｎｋｅｄ  ＩｍｍｕｎｏＳｏｒｂｅｎｔ  Ａｓｓａｙ；  酵素免疫測定法）用いた感染者（ヒト）の抗Ｈ．スイス抗体価の測定
０．２Ｍ炭酸−重炭酸緩衝液（ｐＨ９．４）に溶解したペプチド又は実施例２（４）で調製したＨ．ピロリ全菌体（４μｇ／ｍＬ）１００μＬ／ｗｅｌｌを９６−ｗｅｌｌ  ＮＵＮＣ−Ｉｍｍｕｎｏ  Ｐｌａｔｅ  ＃４３９４５４へ滴下し，４℃に一夜置いた。翌日，ペプチド溶液を廃棄し，ＰＢＳ−Ｔ（０．０５％（Ｖ／Ｖ）Ｔｗｅｅｎ２０を含むリン酸緩衝食塩水，ｐＨ７．４）２００μＬ／ｗｅｌｌで３回洗浄した。滅菌蒸留水で５倍希釈したＮａｃａｌａｉ  Ｔｅｓｑｕｅ  ブロッキング溶液（ＰＢＳ系ｐＨ７．２）を２００μＬ／ｗｅｌｌ滴下し，３７℃に１時間置いた。ブロッキング溶液を廃棄し，ＰＢＳ−Ｔ（０．０５％（Ｖ／Ｖ）Ｔｗｅｅｎ２０を含む燐酸緩衝食塩水，ｐＨ７．４）２００μＬ／ｗｅｌｌで３回洗浄した。【００９３】
Ｈ．ピロリ感染者，及びＨ．スイス感染者からの血清をそれぞれ採取した。また，対照として，いずれにも感染していない健常人からの血清を採取した（非感染）。滅菌蒸留水で１０倍希釈したＮａｃａｌａｉ  Ｔｅｓｑｕｅブロッキング溶液（ＰＢＳ系ｐＨ  ７．２）を用いて希釈したヒト血清を１００μＬ／ｗｅｌｌ滴下し，３７℃に１時間置いた。血清溶液を廃棄し，ＰＢＳ−Ｔ（０．０５％（Ｖ／Ｖ）Ｔｗｅｅｎ  ２０を含む燐酸緩衝食塩水，ｐＨ７．４）２００μＬ／ｗｅｌｌで３回洗浄した。滅菌蒸留水で１０倍希釈のＮａｃａｌａｉ  Ｔｅｓｑｕｅブロッキング溶液（ＰＢＳ系ｐＨ  ７．２）を用いて１００，０００倍希釈した西洋わさびペルオキシ標識二次抗体（Ｇｏａｔ  ａｎｔｉ−Ｈｕｍａｎ  ＩｇＧ，Ｊａｃｋｓｏｎ  Ｉｍｍｕｎｏ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ）を１００μＬ／ｗｅｌｌ滴下し，３７℃に１時間置いた。二次抗体溶液を廃棄し，ＰＢＳ−Ｔ（０．０５％（Ｖ／Ｖ）Ｔｗｅｅｎ２０を含む燐酸緩衝食塩水，ｐＨ７．４）２００μＬ／ｗｅｌｌで３回洗浄した。ＳｕｐｅｒＢｌｕｅ  ＴＭＢ  Ｍｉｃｒｏｗｅｌｌ  Ｐｅｒｏｘｉｄａｓｅ  Ｓｕｂｓｔｒａｔｅ（１−Ｃｏｍｐｏｎｅｎｔ），ＫＰＬ社を１００μＬ／ｗｅｌｌ滴下し青く発色後に，１Ｎ塩酸を１００  μＬ／ｗｅｌｌ滴下し黄色へ変色させた。プレートリーダーを用いて４５０ｎｍの吸光度を測定した。【００９４】
ヒト血清を用いたＥＬＩＳＡの結果を図６〜図９に示す。Ｈ．スイス陽性の対象はＨｓｖＡ抗原ペプチドに対する抗体価が高く，Ｈ．スイスに感染していないＨ．ピロリ感染者及び非感染者のＨｓｖＡ抗原ペプチドに対する抗体価は低かった。また，Ｈ．ピロリ全菌体に対する抗体価はＨ．ピロリ感染者において高く，Ｈ．スイス感染者及び非感染者では低かった。このことから，Ｈ．スイスはヒト体内においてｈｓｖＡ遺伝子を発現していること，及び，Ｈ．スイスに感染したヒト血液中にＨｓｖＡタンパク質に対する抗体が産生されていることが初めて示された。これにより，ＨｓｖＡ抗原ペプチドを用いることにより，ヒトにおいてＨ．ピロリ感染と区別してＨ．スイス感染の診断ができることが明らかとなった。【００９５】
（実施例４）サンドイッチＥＬＩＳＡを用いた感染マウスの抗Ｈ．スイス抗体価の測定
０．２Ｍ炭酸−重炭酸緩衝液（ｐＨ９．４）に溶解したペプチド抗体Ｎｏｓ．１１，１９，及び３３（１μｇ／ｍＬ）１００  μＬ／ｗｅｌｌを９６−ｗｅｌｌ  ＮＵＮＣ−Ｉｍｍｕｎｏ  Ｐｌａｔｅ  ＃４３９４５４へ滴下し，４℃に一夜置いた。翌日，抗体溶液を廃棄し，ＰＢＳ−Ｔ（０．０５％（Ｖ／Ｖ）Ｔｗｅｅｎ２０を含むリン酸緩衝食塩水、ｐＨ７．４）２００μＬ／ｗｅｌｌで３回洗浄した。滅菌蒸留水で５倍希釈したＮａｃａｌａｉ  Ｔｅｓｑｕｅブロッキング溶液（リン酸緩衝液系ｐＨ７．２）を２００μＬ／ｗｅｌｌ滴下し，３７℃に１時間置いた。ブロッキング溶液を廃棄し，ＰＢＳ−Ｔ  （０．０５％（Ｖ／Ｖ）Ｔｗｅｅｎ２０を含むリン酸緩衝食塩水、ｐＨ７．４）２００μＬ／ｗｅｌｌで３回洗浄した。滅菌蒸留水で１０倍希釈のＮａｃａｌａｉ  Ｔｅｓｑｕｅ  ブロッキング溶液（リン酸緩衝液系ｐＨ７．２）を用いて希釈したペプチドＮｏｓ．１１，１９，３３（４μｇ／ｍＬ）を１００μＬ／ｗｅｌｌ滴下し，３７℃に１時間置いた。ペプチド溶液を廃棄し，ＰＢＳ−Ｔ（０．０５％（Ｖ／Ｖ）Ｔｗｅｅｎ２０を含むリン酸緩衝食塩水、ｐＨ７．４）２００μＬ／ｗｅｌｌで３回洗浄した。交換水で１０倍希釈のＮａｃａｌａｉ  Ｔｅｓｑｕｅブロッキング溶液（ＰＢＳ系ｐＨ７．２）を用いて希釈したマウス血清を１００μＬ／ｗｅｌｌ滴下し，３７℃に１時間置いた。血清溶液を廃棄し，ＰＢＳ−Ｔ（０．０５％（Ｖ／Ｖ）Ｔｗｅｅｎ２０を含むリン酸緩衝食塩水、ｐＨ７．４）２００μＬ／ｗｅｌｌで３回洗浄した。滅菌蒸留水で１０倍希釈のＮａｃａｌａｉ  Ｔｅｓｑｕｅブロッキング溶液（リン酸緩衝液系ｐＨ７．２）を用いて１００，０００倍希釈した西洋わさびペルオキシダーゼ標識二次抗体（Ｄｏｎｋｅｙ  Ａｎｔｉ−Ｍｏｕｓｅ  ＩｇＧ，  Ｊａｃｋｓｏｎ  Ｉｍｍｕｎｏ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ）を１００  μＬ／ｗｅｌｌ滴下し，３７℃に１時間置いた。二次抗体溶液を廃棄し，ＰＢＳ−Ｔ  （０．０５％（Ｖ／Ｖ）Ｔｗｅｅｎ２０を含むリン酸緩衝食塩水、ｐＨ７．４）２００μＬ／ｗｅｌｌで３回洗浄した。ＳｕｐｅｒＢｌｕｅ  ＴＭＢ  Ｍｉｃｒｏｗｅｌｌ  Ｐｅｒｏｘｉｄａｓｅ  Ｓｕｂｓｔｒａｔｅ（１−Ｃｏｍｐｏｎｅｎｔ），ＫＰＬ社を１００μＬ／ｗｅｌｌ滴下し青く発色後に，１Ｎ塩酸を１００  μＬ／ｗｅｌｌ滴下し黄色へ変色させた。プレートリーダーを用いて４５０  ｎｍの吸光度を測定した。【００９６】
Ｈ．スイス  ＴＫＹ株又はＨ．ピロリ  ＳＳ１株を感染させたマウスの血清中の抗体のペプチドに対する結合価をEＥＬＩＳＡで測定した結果を図１０に，サンドイッチＥＬＩＳＡで測定した結果を図１１に示す。いずれの系においても，Ｈ．スイス感染マウス血清においてＨｓｖＡタンパク質由来ペプチドに対して特異的に高い抗体価が認められた。このことから，Ｈ．スイスはマウス体内においてＨｓｖＡタンパク質を発現していること，及び，Ｈ．スイスに感染したマウス血液中にＨｓｖＡタンパク質に対する抗体が産生されていることが初めて示された。これにより，ＨｓｖＡ特異的抗原ペプチドを用いることにより，マウスにおいてもＨ．ピロリ感染と区別してＨ．スイス感染の診断ができることが明らかとなった。【００９７】
（実施例５）ＥＬＩＳＡ（ＥｎｚｙｍｅＬｉｎｋｅｄ  ＩｍｍｕｎｏＳｏｒｂｅｎｔ  Ａｓｓａｙ；  酵素免疫測定法）用いたペプチド抗体の特異性の測定
０．２Ｍ炭酸−重炭酸緩衝液（ｐＨ９．４）に溶解したＮｏｓ．１１，１９及び３３の各種ペプチド（４μｇ／ｍＬ）あるいは，Ｈ．ピロリ全菌体１００μＬ／ｗｅｌｌを９６−ｗｅｌｌ  ＮＵＮＣ−Ｉｍｍｕｎｏ  Ｐｌａｔｅ  ＃４３９４５４へ滴下し，４℃に一夜置いた。翌日，ペプチド溶液を廃棄し，ＰＢＳ−Ｔ（０．０５％（Ｖ／Ｖ）Ｔｗｅｅｎ２０を含むリン酸緩衝食塩水、ｐＨ７．４）２００μＬ／ｗｅｌｌで３回洗浄した。滅菌蒸留水で５倍希釈のＮａｃａｌａｉ  Ｔｅｓｑｕｅ  ブロッキング溶液（リン酸緩衝液系系ｐＨ  ７．２）を２００μＬ／ｗｅｌｌ滴下し，３７℃に１時間置いた。ブロッキング溶液を廃棄し，ＰＢＳ−Ｔ（０．０５％（Ｖ／Ｖ）Ｔｗｅｅｎ  ２０を含む燐酸緩衝食塩水、ｐＨ７．４）２００μＬ／ｗｅｌｌで３回洗浄した。交換水で１０倍希釈のＮａｃａｌａｉ  Ｔｅｓｑｕｅ  ブロッキング溶液（リン酸緩衝液系ｐＨ７．２）を用いて希釈した実施例２（２）で得られた各抗ペプチド抗体（１μｇ／ｍＬ）１００  μＬ／ｗｅｌｌ滴下し，３７℃に１時間置いた。血清溶液を廃棄し，ＰＢＳ−Ｔ  （０．０５％（Ｖ／Ｖ）Ｔｗｅｅｎ２０を含む燐酸緩衝食塩水、ｐＨ７．４）２００μＬ／ｗｅｌｌで３回洗浄した。交換水で１０倍希釈のＮａｃａｌａｉ  Ｔｅｓｑｕｅ  ブロッキング溶液（ＰＢＳ系ｐＨ７．２）を用いて１００，０００倍希釈した西洋わさびペルオキシダーゼ標識二次抗体（Ｇｏａｔ  ａｎｔｉ−Ｒａｂｂｉｔ  ＩｇＧ，Ｊａｃｋｓｏｎ  Ｉｍｍｕｎｏ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ）を１００μＬ／ｗｅｌｌ滴下し，３７℃に１時間置いた。二次抗体溶液を廃棄し，ＰＢＳ−Ｔ（０．０５％（Ｖ／Ｖ）Ｔｗｅｅｎ２０を含むリン酸緩衝食塩水、ｐＨ７．４）２００μＬ／ｗｅｌｌで３回洗浄した。ＳｕｐｅｒＢｌｕｅ  ＴＭＢ  Ｍｉｃｒｏｗｅｌｌ  Ｐｅｒｏｘｉｄａｓｅ  Ｓｕｂｓｔｒａｔｅ（１−Ｃｏｍｐｏｎｅｎｔ），ＫＰＬ社を１００μＬ／ｗｅｌｌ滴下し青く発色後に，１Ｎ塩酸を１００  μＬ／ｗｅｌｌ滴下し黄色へ変色させた。プレートリーダーを用いて４５０ｎｍの吸光度を測定した。【００９８】
各種抗原（Ｈ．スイスＨｓｖＡ抗原ペプチド（Ｎｏｓ．１１，１９及び３３），又はＨ．ピロリ全菌体（ＴＮ２ＧＦ４株及びＳＳ１株）を結合したウェル上への実施例２で作製した抗ペプチドウサギ抗体への結合を測定した結果を図１２示す。ペプチドＮｏ．１１（配列番号３），ペプチドＮｏ．３３（配列番号９），ペプチドＮｏ．１９（配列番号７）に対する抗体は，それぞれの抗体の作製において抗原として使用したペプチドに対して特異的に強い結合を示す一方，Ｈ．ピロリ全菌体に対しては弱い結合しか示さなかった。特にＮｏ．１１ペプチドに対する抗体のＨ．ピロリ全菌体に対する非特異的結合力の低さが示された。【００９９】
（実施例６）抗Ｎｏ．１１  ペプチド抗体を用いた免疫染色
Ｈ．スイス感染ヒト胃パラフィン切片を，キシレン３回，無水エタノール１回，９０％エタノール１回，８０％エタノール１回，純水１回の順に浸し（それぞれ５分間），脱パラフィン処理した。脱パラフィン処理のスライドガラスを１％  （Ｗ／Ｖ）スキムミルクを含むリン酸緩衝食塩水ｐＨ７．２を滴下し，室温３０分置いてブロッキング処理した。次にスライドガラスをリン酸緩衝食塩水ｐＨ７．２で室温５分間，３回洗浄した。抗Ｎｏ．  １１ペプチド抗体をリン酸緩衝食塩水ｐＨ７．２で２μｇ／ｍＬに希釈し，スライドガラスへ滴下し室温３時間反応させた。スライドガラスから抗体溶液を除き，リン酸緩衝食塩水ｐＨ７．２で室温５分間，３回洗浄した。リン酸緩衝食塩水ｐＨ７．２で４００倍希釈したＡｌｅｘａ−Ｆｌｕｏｒ  ４８８抗ウサギＩｇＧ（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｆｉｓｈｅｒ）（二次抗体）をスライドガラスに滴下し，室温３時間反応させた。スライドガラスから二次抗体溶液を除き，リン酸緩衝食塩水ｐＨ７．２で室温５分間，３回洗浄した。リン酸緩衝食塩水ｐＨ７．２で４００倍希釈したＡｌｅｘａ−Ｆｌｕｏｒ  ５６８ファロイジン（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｆｉｓｈｅｒ）をスライドガラスに滴下し，室温３０分反応させて対比染色した（Ｆアクチンを染色）。スライドガラスから二次抗体溶液を除き，リン酸緩衝食塩水ｐＨ７．２で室温５分間，３回洗浄した。スライドガラスをパーマ  フロー（Ｔｈｅｒｍａ  Ｆｉｓｈｅｒ）で封入した。共焦点レーザー蛍光顕微鏡，Ｌｅｉｃａ  ＴＣＳ−ＳＰ５にて観察した。写真Ａは，２００倍，Ｂは，Ａの囲んだ部分を７６０倍に拡大した写真である。矢印は，Ｈ．スイス菌体を示す。【０１００】
結果を図１３に示す。Ｈ．スイス感染患者胃組織切片中の菌体が抗Ｎｏ．１１ペプチド抗体により染色された。抗Ｎｏ．１１ペプチド抗体を用いた免疫組織化学により,Ｈ．スイス感染の診断ができることが明らかとなった。【０１０１】
（実施例７）
実施例２で作製したペプチドＮｏｓ．８，３１Ｎ，８１，６３，７３，６１，１１＋１１（ＴＫＹ），１１（ＳＨ８），１１（ＳＨ１０），１９＋１９（ＴＫＹ），３３＋３３（ＴＫＹ），３３（ＳＨ１０），１６，２３，１０，２１，２０，２２，３１，３５ペプチドあるいはＨ．ｐｙｌｏｒｉ  ＴＮ２ＧＦ４及びＳＳ１全菌体（４μｇ／ｍＬ）を０．１Ｍ炭酸―重炭酸緩衝液（ｐＨ９．４）に溶解し、１００μＬ／ｗｅｌｌを９６−ｗｅｌｌプレート（ＮＵＮＣ−Ｉｍｍｕｎｏ  ｐｌａｔｅ  ＃４３９４５４）へ滴下し、４℃で一晩静置した。翌日、ペプチド溶液を廃棄し、ＰＢＳ−Ｔ（０．０５％（Ｖ／Ｖ）Ｔｗｅｅｎ２０を含むリン酸緩衝食塩水、ｐＨ７．４）２００μＬで３回洗浄した。ブロッキング溶液（ＢＳＡ，１％（Ｗ／Ｖ）リン酸緩衝液系、ｐＨ７．４）を２００μＬ／ｗｅｌｌ滴下し、３７℃で１時間静置した。ブロッキング溶液を廃棄し、ＰＢＳ−Ｔ  ２００μＬで３回洗浄した。【０１０２】
血清サンプルとして、Ｈ．スイス感染患者から得られた血清（ｎ＝４）、Ｈ．ピロリ感染患者から得られた血清（ｎ＝５）、及び非感染者から得られた血清（ｎ＝３）を用いた。蒸留水で１０倍希釈したＮａｃａｌａｉ  Ｔｅｓｑｕｅブロッキング溶液（リン酸緩衝液系ｐＨ７．２）を用いて各血清を１，８００倍希釈（Ｈ．ピロリ検体との反応用のみ、６００倍と１８００倍希釈）し、５０μＬ／ｗｅｌｌで上述の方法で調製したプレートに滴下し、３７℃で１時間静置した。血清溶液を廃棄し、ＰＢＳ−Ｔ  ２００μＬ／ｗｅｌｌで３回洗浄した。蒸留水で１０倍希釈のＮａｃａｌａｉ  Ｔｅｓｑｕｅブロッキング溶液（リン酸緩衝液系ｐＨ７．２）を用いて１００，０００倍希釈した西洋わさびペルオキシダーゼ標識二次抗体（Ｐｅｒｏｘｉｄａｓｅ−ｃｏｎｊｕｇａｔｅｄ  ＡｆｆｉｎｉＰｕｒｅ  Ｇｏａｔ  Ａｎｔｉ−Ｈｕｍａｎ  ＩｇＧ（Ｈ＋Ｌ），Ｊａｃｋｓｏｎ  ＩｍｍｕｎｏＲｅｓｅａｒｃｈ）を５０μＬ滴下し、３７℃で１時間静置した。二次抗体溶液を廃棄し、ＰＢＳ−Ｔで３回洗浄した。ＳｕｐｅｒＢｌｕｅ  ＴＭＢ  Ｍｉｃｒｏｗｅｌｌ  Ｐｅｒｐｘｉｄａｓｅ  Ｓｕｂｓｔｒａｔｅ（１−Ｃｏｍｐｏｎｅｎｔ，ＫＰＬ）を５０μＬ／ｗｅｌｌ滴下し青く発色後に、１Ｎ塩酸を５０μＬ滴下し黄色へ変色させた。プレートリーダーを用いて４５０ｎｍ（リファレンス６３０ｎｍ）の吸光度を測定した。【０１０３】
結果を図１４に示す。本ＥＬＩＳＡ法により、１８００倍希釈ヒト血清（Ｈ．ｓｕｉｓ陽性４検体（患者５，６，７，８）；Ｈ．ｐｙｌｏｒｉ陽性５検体（患者４，５，６，７，８）；非感染３検体（健常人４，５，６）について、吸光度０．５以上を陽性、以下を陰性として区別することができた。ペプチドＮｏｓ．８１，６１，２０，１１＋１１（ＴＫＹ），１１（ＳＨ８），１１（ＳＨ１０），１９＋１９（ＴＫＹ），１０，１６，及び２３の１０本がＨ．スイス陽性患者血清に高い反応性が認められた（Ａ）。一方Ｈ．ピロリ陽性患者血清（Ｂ）と非感染血清（Ｃ）は全てのペプチドと反応しなかった。また、Ｈ．ピロリ全菌体とはＨ．ピロリ感染血清が強い反応性を示したが、Ｈ．スイス感染血清では反応を示さなかった（Ｄ）。このことから、これらのペプチドがＨ．ピロリに対する抗体とは反応せず、Ｈ．スイスに対する抗体に極めて特異的であることが示された。よって、血清中の抗体を利用した特異的な感染診断に有用である。【０１０４】
（実施例８）Ｎｏｓ．６１，１１，３３，１９，１０，及び１６の各ペプチドに対する抗ペプチド抗体の対応抗原ペプチドに対する特異性
実施例２において作製したＮｏｓ．８，３１Ｎ，８１，６３，７３，６１，１１＋１１（ＴＫＹ），１１（ＳＨ８），１１（ＳＨ１０），１９＋１９（ＴＫＹ），３３＋３３（ＴＫＹ），３３（ＳＨ１０），１６，２３，１０，２１，２０，２２，３１，３５ペプチドを０．１Ｍ炭酸―重炭酸緩衝液（ｐＨ９．４）に溶解し（４μｇ／ｍＬ ）１００μＬ／ｗｅｌｌを、９６−ｗｅｌｌプレート（ＮＵＮＣ−Ｉｍｍｕｎｏ  ｐｌａｔｅ  ＃４３９４５４）へ滴下し、４℃で一晩静置した。翌日、ペプチド溶液を廃棄し、ＰＢＳ−Ｔ（０．０５％（Ｖ／Ｖ）Ｔｗｅｅｎ２０を含むリン酸緩衝食塩水、ｐＨ７．４）２００μＬで３回洗浄した。ブロッキング溶液（ＢＳＡ，１％（Ｗ／Ｖ）リン酸緩衝液系、ｐＨ７．４）を２００μＬ／ｗｅｌｌで滴下し、３７℃で１時間静置した。ブロッキング溶液を廃棄し、ＰＢＳ−Ｔ  ２００μＬで３回洗浄した。蒸留水で１０倍希釈のＮａｃａｌａｉ  Ｔｅｓｑｕｅブロッキング溶液（リン酸緩衝液系ｐＨ７．２）を用いて、実施例２において抗ペプチドウサギポリクローナル抗体（ＩｇＧ，０．２μｇ／ｍＬ）を５０μＬ／ｗｅｌｌで滴下し、３７℃で１時間静置した（ｎ＝２）。血清溶液を廃棄し、ＰＢＳ−Ｔ  ２００μＬ／ｗｅｌｌで３回洗浄した。蒸留水で１０倍希釈のＮａｃａｌａｉ  Ｔｅｓｑｕｅブロッキング溶液（リン酸緩衝液系（ｐＨ７．２）を用いて１００，０００倍希釈した西洋わさびペルオキシダーゼ標識二次抗体（Ｐｅｒｏｘｉｄａｓｅ−ｃｏｎｊｕｇａｔｅｄ  ＡｆｆｉｎｉＰｕｒｅ  Ｇｏａｔ  Ａｎｔｉ−Ｒａｂｂｉｔ  ＩｇＧ（Ｈ＋Ｌ），Ｊａｃｋｓｏｎ  ＩｍｍｕｎｏＲｅｓｅａｒｃｈ）を５０μＬ滴下し、３７℃で１時間静置した。二次抗体溶液を廃棄し、ＰＢＳ−Ｔで３回洗浄した。ＳｕｐｅｒＢｌｕｅ  ＴＭＢ  Ｍｉｃｒｏｗｅｌｌ  Ｐｅｒｐｘｉｄａｓｅ  Ｓｕｂｓｔｒａｔｅ（１−Ｃｏｍｐｏｎｅｎｔ，ＫＰＬ）を５０μＬ／ｗｅｌｌ滴下し、青く発色後に、１Ｎ塩酸を５０μＬ滴下して黄色へと変色させた。プレートリーダーを用いて４５０ｎｍ（リファレンス６３０ｎｍ）の吸光度を測定した。
結果を図１５に示す。各ペプチド抗体は、抗原として用いた対応するペプチドとのみ特異的に反応することが示された。【０１０５】
（実施例９）Ｎｏｓ．６１，１１，３３，１９，１０，及び１６の各ペプチドに対する抗ペプチド抗体の菌体に対する特異性
０．１Ｍ炭酸／重炭酸緩衝液（ｐＨ９．４）に溶解したＨ．ピロリＳＳ１，Ｈ．ピロリＴＮ２ＧＦ４，Ｈ．ピロリＮＣＴＣ１１６３７，Ｈ．ピロリＴＹ１２８９，Ｈ．ピロリＲＣ−１，Ｈ．ピロリＴＫ１０２９，Ｈ．ピロリＴＹ２８１，Ｈ．ピロリＡＴＣＣ４３５７９，Ｈ．ピロリＴＫ１０８１，Ｈ．スイスＳＮＴＷ１０１（４μｇ／ｍＬ）１００μＬ／ｗｅｌｌを９６−ｗｅｌｌプレート（ＮＵＮＣ−Ｉｍｍｕｎｏ  ｐｌａｔｅ  ＃４３９４５４）へ滴下し、４℃で一晩静置した。翌日、ペプチド溶液を廃棄し、ＰＢＳ−Ｔ（０．０５％（Ｖ／Ｖ）Ｔｗｅｅｎ２０を含むリン酸緩衝食塩水、ｐＨ７．４）２００μＬで３回洗浄した。ブロッキング溶液（ＢＳＡ，１％（Ｗ／Ｖ）リン酸緩衝液系、ｐＨ７．４）を２００μＬ／ｗｅｌｌ滴下し、３７℃で１時間静置した。ブロッキング溶液を廃棄し、ＰＢＳ−Ｔ  ２００μＬで３回洗浄した。蒸留水で１０倍希釈のＮａｃａｌａｉ  Ｔｅｓｑｕｅブロッキング溶液（リン酸緩衝液系ｐＨ７．２）を用いて、実施例２において調製した抗ペプチドウサギポリクローナル抗体（ＩｇＧ，０．２μｇ／ｍＬ）又はＨ．ピロリＳＳ１に対するポリクローナル抗体（ウサギＩｇＧ）（非特許文献４に記載）を５０μＬ／ｗｅｌｌ滴下し、３７℃で１時間静置した（ｎ＝２〜４）。血清溶液を廃棄し、ＰＢＳ−Ｔ  ２００μＬ／ｗｅｌｌで３回洗浄した。蒸留水で１０倍希釈のＮａｃａｌａｉ  Ｔｅｓｑｕｅブロッキング溶液（リン酸緩衝液系ｐＨ７．２）を用いて１００，０００倍希釈した西洋わさびペルオキシダーゼ標識二次抗体（Ｐｅｒｏｘｉｄａｓｅ−ｃｏｎｊｕｇａｔｅｄ  ＡｆｆｉｎｉＰｕｒｅ  Ｇｏａｔ  Ａｎｔｉ−Ｒａｂｂｉｔ  ＩｇＧ  （Ｈ＋Ｌ），Ｊａｃｋｓｏｎ  ＩｍｍｕｎｏＲｅｓｅａｒｃｈ）を５０μＬ滴下し、３７℃で１時間静置した。二次抗体溶液を廃棄し、ＰＢＳ−Ｔで３回洗浄した。ＳｕｐｅｒＢｌｕｅ  ＴＭＢ  Ｍｉｃｒｏｗｅｌｌ  Ｐｅｒｐｘｉｄａｓｅ  Ｓｕｂｓｔｒａｔｅ（１−Ｃｏｍｐｏｎｅｎｔ，ＫＰＬ）を５０μＬ／ｗｅｌｌ滴下し、青く発色後に、１Ｎ塩酸を５０μＬ滴下して黄色へ変色させた。プレートリーダーを用いて４５０ｎｍ（リファレンス６３０ｎｍ）の吸光度を測定した。【０１０６】
結果を図１６に示す。抗ペプチド抗体は、Ｈ．ピロリ菌体と反応しなかった。一方で、抗Ｈ．ピロリポリクローナル抗体は、Ｈ．ピロリおよびＨ．スイス菌体と反応した。【０１０７】
（実施例１０）Ｈ．スイスＳＮＴＷ１０１の培養法
（１）  感染マウスの胃粘膜中からのＨ．ｓｕｉｓ  ＳＮＴＷ１０１の分離・培養
Smet A., et al., International Journal of Systematic and Evolutionary Microbiology (2012), 62, 299-306の方法を基本に培地を改良して培養を行った。Ｂｒｅｃｅｌｌａ  ａｇａｒ  ｐｌａｔｅ（ｓｋｉｒｒｏｗ  ２ｖｉａｌｓ／Ｌ，ｖａｎｃｏｍｙｃｉｎ  １０ｍｇ／Ｌ，ｔｒｉｍｅｔｈｏｐｒｉｍ  ５ｍｇ／Ｌ，ｐｏｌｙｍｙｘｉｎ  Ｂ  ２５００ＩＵ／Ｌ，ｖｉｔｏｘ  ２ｖｉａｌｓ／Ｌ，ａｍｐｈｏｔｅｒｉｃｉｎ  Ｂ  ５ｍｇ／Ｌ，ｆｅｔａｌ  ｃａｌｆ  ｓｅｒｕｍ  ２０％（Ｖ／Ｖ））に塩酸０．０５％（Ｖ／Ｖ）とｌｉｎｅｚｏｌｉｄ  １０ｍｇ／Ｌを加えた。３７℃、湿度１００％、１２％ＣＯ２，５％Ｏ２，８３％Ｎ２条件下で２週間振とう培養し、１日おきにＢｒｕｃｅｌｌａ  ｂｒｏｔｈ（ｓｋｉｒｒｏｗ  ２ｖｉａｌｓ／Ｌ，ｖｉｔｏｘ  ２ｖｉａｌｓ／Ｌ，ｌｉｎｅｚｏｌｉｄ  ５ｍｇ／Ｌ，ｆｅｔａｌ  ｃａｌｆ  ｓｅｒｕｍ  ２０％（Ｖ／Ｖ），ｐＨ５）を１５０μＬ添加した。培養液の遠心沈殿を３回水洗したものをＨ．スイスＳＮＴＷ１０１菌体とした。蛋白質の定量は、Ｂｉｏ−Ｒａｄプロテインアッセイキットを用いた。牛血清アルブミン（ＢＳＡ）を標準蛋白質として、検量線を作成した。【０１０８】
（実施例１１）抗Ｎｏ．１６ペプチド（配列番号１２）抗体を用いた免疫組織化学
Ｈ．スイスＳＮＴＷ１０１感染Ｃ５７ＢＬ／６マウスの胃を大湾に沿って切開した。内容物をＰＢＳで洗浄し後、垂直方向に切除し、１０％中性緩衝ホルマリンで固定した。胃組織をパラフィンに包埋し、切片を４μｍで作製した。脱パラフィン後に水洗し、クエン酸緩衝液（ｐＨ６．０）を用いて９５℃で２０分間熱処理し、抗原の賦活化を行った。水洗後、０．３％の過酸化水素水と１０分間室温で反応させた。ＰＢＳで２回洗浄後、ａｎｔｉ−Ｎｏ．１６ペプチド抗体（２μｇ／ｍＬ  ＰＢＳ）と室温で１時間反応させた。ＰＢＳで２回洗浄後に二次抗体としてヒストファインシプルステインマウスＭＡＸ−ＰＯ（Ｒ）（ニチレイ，Ｃｏｄｅ．４１４３４１）と３０分間室温で反応させた。ＰＢＳで２回洗浄後にＤＡＢ（３，３’−ジアミノベンジジン四塩酸塩）溶液を用いて５分間室温で発色させた。ＰＢＳで２回洗浄後にヘマトキシリンにて後染色を行い、水洗後に脱水、透徹、封入し顕微鏡観察を行った。【０１０９】
結果を図１７に示すＮｏ．１６ペプチド（配列番号１２）抗体によりＨ．スイス菌体の免疫染色が可能であることが示された。
【図１】
2019225639.tif 000002
【図２Ａ】
2019225639.tif 000003
【図２Ｂ】
2019225639.tif 000004
【図２Ｃ】
2019225639.tif 000005
【図２Ｄ】
2019225639.tif 000006
【図２Ｅ】
2019225639.tif 000007
【図２Ｆ】
2019225639.tif 000008
【図２Ｇ】
2019225639.tif 000009
【図２Ｈ】
2019225639.tif 000010
【図２Ｉ】
2019225639.tif 000011
【図２Ｊ】
2019225639.tif 000012
【図２Ｋ】
2019225639.tif 000013
【図２Ｌ】
2019225639.tif 000014
【図２Ｍ】
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【図２Ｎ】
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【図３】
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【図４】
2019225639.tif 000018
【図５】
2019225639.tif 000019
【図６】
2019225639.tif 000020
【図７】
2019225639.tif 000021
【図８】
2019225639.tif 000022
【図９】
2019225639.tif 000023
【図１０】
2019225639.tif 000024
【図１１】
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【図１２】
2019225639.tif 000026
【図１３】
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【図１４】
2019225639.tif 000028
【図１５】
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【図１６】
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【図１７】
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【配列表】
2019225639000001.app
【手続補正書】
【提出日】令和2年2月3日(2020.2.3)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
配列番号２に記載のアミノ酸配列からなるタンパク質、又は配列番号２に記載のアミノ酸配列のうち、２８〜２９９２番目のアミノ酸からなるタンパク質。
【請求項２】
（削除）
【請求項３】
（削除）
【請求項４】
（削除）
【請求項５】
（削除）
【請求項６】
（削除）
【請求項７】
（削除）
【請求項８】
（削除）
【請求項９】
（削除）
【請求項１０】
（削除）
【請求項１１】
（削除）
【請求項１２】
（削除）
【請求項１３】
（削除）
【請求項１４】
（削除）
【請求項１５】
（削除）
【請求項１６】
被検者のＨ．スイスへの感染を判定する方法であって，
被験者由来のサンプル中のＨｓｖＡタンパク質を検出すること，前記ＨｓｖＡタンパク質又はその断片が検出されたサンプルをＨ．スイスが存在すると判定すること，及び
当該方法においてＨ．スイスが存在すると判定されたサンプルが由来する被験者をＨ．スイスに感染していると判定することを含む方法。
【請求項１７】
請求項１６に記載の感染判定方法であって：
前記被験者由来のサンプルとＨ．スイス由来のＨｓｖＡ抗原ペプチドに特異的に結合する抗体又はその免疫反応性断片とを接触させること，
前記抗体又はその免疫反応性断片と結合した，前記サンプル中のＨｓｖＡタンパク質を検出すること，及び
前記抗体又はその免疫反応性断片と結合したＨｓｖＡタンパク質が検出されたサンプルをＨ．スイスが存在するサンプルと判定することを含む方法。
【請求項１８】
請求項１６又は請求項１７に記載の感染判定方法であって，前記ＨｓｖＡ抗原ペプチドが，Ｈ．スイスに特異的であり、かつ、Ｈ．ピロリには存在しないアミノ酸配列からなるペプチドである，方法。
【請求項１９】
被験者のＨ．スイスへの感染を判定する方法であって，
被験者由来の血液サンプル中のＨｓｖＡ抗原ペプチドと結合する抗体を検出すること，及び
前記ペプチドと結合する抗体が検出された被験者をＨ．スイスに感染していると判定することを含む方法。
【請求項２０】
以下の工程を含む，請求項１９に記載のＨ．スイスへの感染を判定する方法：
被験者由来のサンプルと以下の群から選択されるいずれか１つのペプチドとを接触させること：
配列番号２、配列番号２８、配列番号３０、及び配列番号７８〜８３のいずれか１つに記載のアミノ酸配列に含まれる５〜５０アミノ酸からなる配列を有するＨ．スイス由来のＨｓｖＡ抗原ペプチド，
ＥＫＸ１ＡＶＸ２Ｘ３Ｘ４Ｘ５ＮＳＮＸ６Ｘ７（ペプチドＮｏ．１１：配列番号２４），
ＥＫＫＡＶＱＱＭＥＮＳＮＰＤ（ペプチドＮｏ．１１：配列番号３），
ＥＫＫＡＶＥＱＭＥＮＳＮＰＤ（ペプチドＮｏ．１１（ＴＫＹ）：配列番号４），
ＥＫＤＡＶＴＳＬＫＮＳＮＳＧ（ペプチドＮｏ．１１（ＳＨ８）：配列番号５），
ＥＫＤＡＶＴＳＬＥＮＳＮＳＧ（ペプチドＮｏ．１１（ＳＨ１０）：配列番号６），
ＮＱＧＴＬＥＦＬＳＮＤＶＳＸ８（ペプチドＮｏ．１９：配列番号２５），
ＮＱＧＴＬＥＦＬＳＮＤＶＳＮ（ペプチドＮｏ．１９：配列番号７），
ＮＱＧＴＬＥＦＬＳＮＤＶＳＴ（ペプチドＮｏ．１９（ＴＫＹ）：配列番号８），
Ｘ９ＳＸ１０ＫＬＱＸ１１Ｘ１２ＬＫＳＸ１３Ｘ１４Ｘ１５（ペプチドＮｏ．３３：配列番号２６），
ＬＳＮＫＬＱＧＱＬＫＳＭＧＬ（ペプチドＮｏ．３３：配列番号９），
ＬＳＮＫＬＱＤＱＬＫＳＭＧＬ（ペプチドＮｏ．３３（ＴＫＹ）：配列番号１０），
ＦＳＤＫＬＱＮＭＬＫＳＬＮＭ（ペプチドＮｏ．３３（ＳＨ１０）：配列番号１１），
ＴＮＧＱＥＶＳＡＳＩＤＹＮＫ（ペプチドＮｏ．１６：配列番号１２），
ＡＫＬＳＮＦＡＳＮＤＡＬＰＤ（ペプチドＮｏ．２３：配列番号１３），
ＰＴＴＳＳＧＡＳＰＤＳＳＮＰ（ペプチドＮｏ．１０：配列番号１４），
ＧＬＧＲＤＬＦＶＨＳＭＧＤＫ（ペプチドＮｏ．２１：配列番号１５），
ＱＩＧＫＩＫＬＳＤＶＬＳＡＳ（ペプチドＮｏ．１５：配列番号１６），
ＹＧＡＩＤＫＥＬＨＦＳＧＧＫ（ペプチドＮｏ．３４：配列番号１７），
ＮＶＤＮＩＬＮＭＰＳＴＴＳＧ（ペプチドＮｏ．２０：配列番号１８），
ＧＮＬＫＧＶＹＹＰＫＳＳＴＴ（ペプチドＮｏ．２２：配列番号１９），
ＩＴＥＫＩＱＳＧＫＬＴＩＴＩ（ペプチドＮｏ．１４：配列番号２０），
ＦＨＤＦＬＶＳＬＫＧＫＫＦＡ（ペプチドＮｏ．２６：配列番号２１），
ＴＴＧＧＥＶＲＬＦＲＳＦＹＶ（ペプチドＮｏ．３１：配列番号２２），
ＩＧＡＲＦＧＬＤＹＱＤＩＮＩ（ペプチドＮｏ．３５：配列番号２３）、
ＫＱＬＰＱＰＫＲＳＥＬＫＰＫ（ペプチドＮｏ．８：配列番号８６）、
ＴＮＩＫＱＹＭＱＮＮＨＲＳＱ（ペプチドＮｏ．３１Ｎ：配列番号８７）、
ＴＬＴＬＥＧＴＥＴＦＡＱＮＳ（ペプチドＮｏ．８１：配列番号８８）、
ＥＡＹＡＫＮＱＧＤＩＷＳＴＩ（ペプチドＮｏ．６３：配列番号８９）、
ＶＩＧＳＫＳＳＩＴＬＮＳＡＮ（ペプチドＮｏ．７３：配列番号９０）、及び
ＡＤＩＱＳＳＱＴＴＦＡＮＳＶ（ペプチドＮｏ．６１：配列番号９１）
ここで，Ｘ１はＫ又はＤであり，Ｘ２はＱ，Ｅ又はＴであり，Ｘ３はＱ又はＳであり，Ｘ４はＭ又はＬであり，Ｘ５はＥ又はＫであり，Ｘ６はＰ又はＳであり，Ｘ７はＤ又はＧであり，Ｘ８はＮ又はＴであり，Ｘ９はＬ又はＦであり，Ｘ１０はＮ又はＤであり，Ｘ１１はＧ，Ｄ又はＮであり，Ｘ１２はＱ又はＭであり，Ｘ１３はＭ又はＬであり，Ｘ１４はＧ又はＮであり，かつＸ１５はＬ又はＭである，
前記ペプチドと結合した，前記血液サンプル中の抗体を検出すること，及び
前記ペプチドと結合した抗体が検出された被験者をＨ．スイスに感染していると判定すること。
【請求項２１】
配列番号２、配列番号２８、配列番号３０、及び配列番号７８〜８３のいずれか１つに記載のアミノ酸配列に含まれる５〜５０アミノ酸からなる配列を有するＨ．スイス由来のＨｓｖＡ抗原ペプチド，及び／又は，配列番号２及び配列番号７８〜８３のいずれか１つに記載のアミノ酸配列に含まれる５〜５０アミノ酸からなる配列を有するＨ．スイス由来のＨｓｖＡ抗原ペプチドに特異的に結合する抗体又はその免疫反応性断片を含有する，Ｈ．スイス感染判定用組成物であって，
ここで，前記ＨｓｖＡ抗原ペプチドが，Ｈ．スイスに特異的であり、かつ、Ｈ．ピロリには存在しないアミノ酸配列からなるペプチドである，組成物。
【請求項２２】
配列番号２，配列番号２８，配列番号３０，及び配列番号７８〜８３のいずれか１つに記載のアミノ酸配列に含まれる５〜５０アミノ酸からなる配列を有するＨ．スイス由来のＨｓｖＡ抗原ペプチド，ｈｓｖＡ遺伝子とストリンジェントな条件下で結合可能である５〜４０ヌクレオチドからなる核酸分子，及び，配列番号２，配列番号２８，配列番号３０，及び配列番号７８〜８３のいずれか１つに記載のアミノ酸配列に含まれる５〜５０アミノ酸からなる配列を有するＨ．スイス由来のＨｓｖＡ抗原ペプチドに特異的に結合する抗体又はその免疫反応性断片から選択されるいずれか一つを含有する医薬組成物。
【請求項２３】
Ｈ．スイス除菌療法用である，請求項２２に記載の医薬組成物。
【請求項２４】
胃炎，胃潰瘍や十二指腸潰瘍，胃癌，慢性胃炎，胃ＭＡＬＴリンパ腫，鳥肌胃炎，特発性血小板減少紫斑病，機能性ディスペプシア，又はびまん性大細胞型Ｂ細胞性リンパ腫の治療用又は予防用である，請求項２２に記載の医薬組成物。
【請求項２５】
前記抗体が，配列番号２、配列番号２８、配列番号３０、及び配列番号７８〜８３のいずれか１つに記載のアミノ酸配列に含まれる５〜５０アミノ酸からなる配列を有するＨ．スイス由来のＨｓｖＡ抗原ペプチドに特異的に結合する抗体である，請求項１６〜請求項１９に記載の方法。
【請求項２６】
Ｈ．ピロリ感染が検出されないことを特徴とする、請求項１６〜請求項１８のいずれか１項に記載の感染判定方法。
【請求項２７】
ＨｓｖＡ抗原ペプチドが，配列番号２、配列番号２８、配列番号３０、及び配列番号７８〜８３のいずれか１つに記載のアミノ酸配列に含まれる５〜５０アミノ酸からなる配列を有するペプチドである，請求項１６〜請求項１８及び請求項２６のいずれか１項に記載の感染判定方法。
【請求項２８】
ＨｓｖＡ抗原ペプチドが，以下の群から選択されるいずれか１つのアミノ酸配列を有するペプチドである，請求項２７に記載の感染判定方法：
ＥＫＸ１ＡＶＸ２Ｘ３Ｘ４Ｘ５ＮＳＮＸ６Ｘ７（ペプチドＮｏ．１１：配列番号２４），
ＮＱＧＴＬＥＦＬＳＮＤＶＳＸ８（ペプチドＮｏ．１９：配列番号２５），
Ｘ９ＳＸ１０ＫＬＱＸ１１Ｘ１２ＬＫＳＸ１３Ｘ１４Ｘ１５（ペプチドＮｏ．３３：配列番号２６），
ＴＮＧＱＥＶＳＡＳＩＤＹＮＫ（ペプチドＮｏ．１６：配列番号１２），
ＡＫＬＳＮＦＡＳＮＤＡＬＰＤ（ペプチドＮｏ．２３：配列番号１３），
ＰＴＴＳＳＧＡＳＰＤＳＳＮＰ（ペプチドＮｏ．１０：配列番号１４），
ＧＬＧＲＤＬＦＶＨＳＭＧＤＫ（ペプチドＮｏ．２１：配列番号１５），
ＱＩＧＫＩＫＬＳＤＶＬＳＡＳ（ペプチドＮｏ．１５：配列番号１６），
ＹＧＡＩＤＫＥＬＨＦＳＧＧＫ（ペプチドＮｏ．３４：配列番号１７），
ＮＶＤＮＩＬＮＭＰＳＴＴＳＧ（ペプチドＮｏ．２０：配列番号１８），
ＧＮＬＫＧＶＹＹＰＫＳＳＴＴ（ペプチドＮｏ．２２：配列番号１９），
ＩＴＥＫＩＱＳＧＫＬＴＩＴＩ（ペプチドＮｏ．１４：配列番号２０），
ＦＨＤＦＬＶＳＬＫＧＫＫＦＡ（ペプチドＮｏ．２６：配列番号２１），
ＴＴＧＧＥＶＲＬＦＲＳＦＹＶ（ペプチドＮｏ．３１：配列番号２２），
ＩＧＡＲＦＧＬＤＹＱＤＩＮＩ（ペプチドＮｏ．３５：配列番号２３）、
ＫＱＬＰＱＰＫＲＳＥＬＫＰＫ（ペプチドＮｏ．８：配列番号８６）、
ＴＮＩＫＱＹＭＱＮＮＨＲＳＱ（ペプチドＮｏ．３１Ｎ：配列番号８７）、
ＴＬＴＬＥＧＴＥＴＦＡＱＮＳ（ペプチドＮｏ．８１：配列番号８８）、
ＥＡＹＡＫＮＱＧＤＩＷＳＴＩ（ペプチドＮｏ．６３：配列番号８９）、
ＶＩＧＳＫＳＳＩＴＬＮＳＡＮ（ペプチドＮｏ．７３：配列番号９０）、及び
ＡＤＩＱＳＳＱＴＴＦＡＮＳＶ（ペプチドＮｏ．６１：配列番号９１）
ここで，Ｘ１はＫ又はＤであり，Ｘ２はＱ，Ｅ又はＴであり，Ｘ３はＱ又はＳであり，Ｘ４はＭ又はＬであり，Ｘ５はＥ又はＫであり，Ｘ６はＰ又はＳであり，Ｘ７はＤ又はＧであり，Ｘ８はＮ又はＴであり，Ｘ９はＬ又はＦであり，Ｘ１０はＮ又はＤであり，Ｘ１１はＧ，Ｄ又はＮであり，Ｘ１２はＱ又はＭであり，Ｘ１３はＭ又はＬであり，Ｘ１４はＧ又はＮであり，かつＸ１５はＬ又はＭである。
【請求項２９】
ＨｓｖＡ抗原ペプチドが，以下の群から選択されるいずれか１つのアミノ酸配列を有するペプチドである，請求項２７に記載の感染判定方法：
ＥＫＫＡＶＱＱＭＥＮＳＮＰＤ（ペプチドＮｏ．１１：配列番号３），
ＥＫＫＡＶＥＱＭＥＮＳＮＰＤ（ペプチドＮｏ．１１（ＴＫＹ）：配列番号４），
ＥＫＤＡＶＴＳＬＫＮＳＮＳＧ（ペプチドＮｏ．１１（ＳＨ８）：配列番号５），
ＥＫＤＡＶＴＳＬＥＮＳＮＳＧ（ペプチドＮｏ．１１（ＳＨ１０）：配列番号６），
ＮＱＧＴＬＥＦＬＳＮＤＶＳＮ（ペプチドＮｏ．１９：配列番号７），
ＮＱＧＴＬＥＦＬＳＮＤＶＳＴ（ペプチドＮｏ．１９（ＴＫＹ）：配列番号８），
ＬＳＮＫＬＱＧＱＬＫＳＭＧＬ（ペプチドＮｏ．３３：配列番号９），
ＬＳＮＫＬＱＤＱＬＫＳＭＧＬ（ペプチドＮｏ．３３（ＴＫＹ）：配列番号１０），
ＦＳＤＫＬＱＮＭＬＫＳＬＮＭ（ペプチドＮｏ．３３（ＳＨ１０）：配列番号１１），
ＴＮＧＱＥＶＳＡＳＩＤＹＮＫ（ペプチドＮｏ．１６：配列番号１２），
ＡＫＬＳＮＦＡＳＮＤＡＬＰＤ（ペプチドＮｏ．２３：配列番号１３），
ＰＴＴＳＳＧＡＳＰＤＳＳＮＰ（ペプチドＮｏ．１０：配列番号１４），
ＧＬＧＲＤＬＦＶＨＳＭＧＤＫ（ペプチドＮｏ．２１：配列番号１５），
ＱＩＧＫＩＫＬＳＤＶＬＳＡＳ（ペプチドＮｏ．１５：配列番号１６），
ＹＧＡＩＤＫＥＬＨＦＳＧＧＫ（ペプチドＮｏ．３４：配列番号１７），
ＮＶＤＮＩＬＮＭＰＳＴＴＳＧ（ペプチドＮｏ．２０：配列番号１８），
ＧＮＬＫＧＶＹＹＰＫＳＳＴＴ（ペプチドＮｏ．２２：配列番号１９），
ＩＴＥＫＩＱＳＧＫＬＴＩＴＩ（ペプチドＮｏ．１４：配列番号２０），
ＦＨＤＦＬＶＳＬＫＧＫＫＦＡ（ペプチドＮｏ．２６：配列番号２１），
ＴＴＧＧＥＶＲＬＦＲＳＦＹＶ（ペプチドＮｏ．３１：配列番号２２），
ＩＧＡＲＦＧＬＤＹＱＤＩＮＩ（ペプチドＮｏ．３５：配列番号２３）、
ＫＱＬＰＱＰＫＲＳＥＬＫＰＫ（ペプチドＮｏ．８：配列番号８６）、
ＴＮＩＫＱＹＭＱＮＮＨＲＳＱ（ペプチドＮｏ．３１Ｎ：配列番号８７）、
ＴＬＴＬＥＧＴＥＴＦＡＱＮＳ（ペプチドＮｏ．８１：配列番号８８）、
ＥＡＹＡＫＮＱＧＤＩＷＳＴＩ（ペプチドＮｏ．６３：配列番号８９）、
ＶＩＧＳＫＳＳＩＴＬＮＳＡＮ（ペプチドＮｏ．７３：配列番号９０）、及び
ＡＤＩＱＳＳＱＴＴＦＡＮＳＶ（ペプチドＮｏ．６１：配列番号９１）。
【請求項３０】
ＨｓｖＡ抗原ペプチドが，以下の群から選択されるいずれか１つのアミノ酸配列を有するペプチドである，請求項１７に記載の感染判定方法：
ＥＫＫＡＶＱＱＭＥＮＳＮＰＤ（ペプチドＮｏ．１１：配列番号３），
ＥＫＫＡＶＥＱＭＥＮＳＮＰＤ（ペプチドＮｏ．１１（ＴＫＹ）：配列番号４），
ＥＫＤＡＶＴＳＬＫＮＳＮＳＧ（ペプチドＮｏ．１１（ＳＨ８）：配列番号５），
ＥＫＤＡＶＴＳＬＥＮＳＮＳＧ（ペプチドＮｏ．１１（ＳＨ１０）：配列番号６），
ＴＮＧＱＥＶＳＡＳＩＤＹＮＫ（ペプチドＮｏ．１６：配列番号１２）。
【請求項３１】
ＨｓｖＡ抗原ペプチドが，以下の群から選択されるいずれか１つのアミノ酸配列を有するペプチドである，請求項１７に記載の感染判定方法：
ＥＫＫＡＶＱＱＭＥＮＳＮＰＤ（ペプチドＮｏ．１１：配列番号３），
ＴＮＧＱＥＶＳＡＳＩＤＹＮＫ（ペプチドＮｏ．１６：配列番号１２）。
【国際調査報告】
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2019225639.tif 000033
2019225639.tif 000034
2019225639.tif 000035
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