(57)【要約】  皮膚に常在する有害菌の割合を特異的に減少させることにより、不快な体臭を軽減する手段及び薬剤を提供する。エンテロコッカス・フェカリス（Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ  ｆａｅｃａｌｉｓ）ＥＣ−１２株（受託番号ＦＥＲＭ  ＢＰ−１０２８４）の菌体を有効成分として含有する体臭発生抑制剤と、それを利用した皮膚外用剤、洗濯用組成物、ならびに衛生シート材。
2020004580.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
エンテロコッカス・フェカリス（Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ  ｆａｅｃａｌｉｓ）ＥＣ−１２株（受託番号ＦＥＲＭ  ＢＰ−１０２８４）の菌体を有効成分として含有する体臭発生抑制剤。
【請求項２】
前記菌体が組成物中に少なくとも５×１０８個／ｇの濃度で含有される請求項１に記載の体臭発生抑制剤。
【請求項３】
前記組成物の２５℃における粘度が１０００ｍＰａ・ｓ以上である請求項２に記載の体臭発生抑制剤。
【請求項４】
スタフィロコッカス属、コリネバクテリウム属またはマイクロコッカス属に属する１種または複数の皮膚常在菌の増殖を抑制するための、請求項１〜３の何れか一項に記載の体臭発生抑制剤。
【請求項５】
アミン臭、チオール臭、脂肪酸臭、２−ノネナール臭の何れかまたはそれらの混合臭からなる体臭の発生を抑制するための、請求項１〜３の何れか一項に記載の体臭発生抑制剤。
【請求項６】
皮膚外用剤の形態にある請求項１〜３の何れか一項に記載の体臭発生抑制剤。
【請求項７】
洗濯用組成物の形態にある請求項１〜３の何れか一項に記載の体臭発生抑制剤。
【請求項８】
衛生シート材の形態にある請求項１に記載の体臭発生抑制剤。
【請求項９】
体臭発生抑制剤の製造における、エンテロコッカス・フェカリス（Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ Ｆａｅｃａｌｉｓ）ＥＣ−１２株（受託番号ＦＥＲＭ  ＢＰ−１０２８４）の菌体の使用。
【請求項１０】
エンテロコッカス・フェカリス（Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ Ｆａｅｃａｌｉｓ）ＥＣ−１２株（受託番号ＦＥＲＭ  ＢＰ−１０２８４）の菌体を含む組成物を、体臭発生を抑制する必要のある対象に塗布することを特徴とする体臭発生抑制方法。
【発明の詳細な説明】
【クロスリファレンス】
【０００１】
本出願は、２０１８年６月２８日に日本国において出願された特願２０１８−１２２８８１号に基づく優先権を主張するものであり、当該出願に記載された内容は全て、参照によりそのまま本明細書に援用される。また、本願において引用した全ての特許、特許出願及び文献に記載された内容は全て、参照によりそのまま本明細書に援用される。
【技術分野】
【０００２】
本発明は、乳酸菌を含む体臭発生抑制剤に関し、詳細には、乳酸球菌であるエンテロコッカス・フェカリスＥＣ−１２株を含む皮膚外用剤、洗濯用組成物または衛生シート材等の形態を有する体臭発生抑制剤に関する。
【背景技術】
【０００３】
近年、生活の多様化、生活態様や意識の変化・向上などに伴い、身の周りの様々な臭気に対して注意が向けられている。特に、人が放つ体臭については、無臭であることが好まれ、臭うことは嫌われる傾向が強くなってきている。例えば、中高年以降にみられるいわゆる加齢臭は、特に嫌われる匂いの一つといえる。加齢に伴って特異的に生じるこの体臭は、不飽和アルデヒドの一種である２−ノネナールによるものであることが明らかになっている。２−ノネナールは、加齢臭が発生する年齢とされる４０歳以降に特異的に増大する傾向が認められ（非特許文献１）、その発生メカニズムについては、皮脂中に存在する不飽和脂肪酸（９−ヘキサデセン酸）が酸化あるいは皮膚常在菌によって分解されることによるものであるとされている。【０００４】
体臭に対する意識は、老若男女を問わず一層高まる傾向にあり、それに関連するエチケット製品の市場ブームは加速的に進んでいる。こうしたエチケット製品の体系としては洗濯用品をはじめ、玄関・トイレ・部屋用の消臭剤、ボディー又はヘアー用洗浄剤や消臭剤、人体衛生用シートなど、ありとあらゆる日常の生活場面で使用されている。【０００５】
例えば、皮膚に外用する消臭剤では、殺菌・静菌を主な目的として、アルミニウム化合物、銀化合物、亜鉛化合物、銅化合物、アルコール類、植物抽出エキス、環状糖などが用いられる。しかしながら、皮膚の良好状態を保つための有用菌に対してもその影響を与えることが知られている。そして金属化合物においては、金属アレルギーや皮膚刺激を引き起こす恐れがあるという問題もある。【０００６】
また、臭いのマスキングのために、トレハロース等の糖質（特許文献１）や香料なども用いられるが、臭いの原因に対する根本的な解決には至っていない。更に、これらの従来の消臭成分は皮膚刺激性や強い香りを持つものも多く、また、処方の難しさなど、改善すべき点もある。【０００７】
ところで、ヒトの皮膚には共生微生物が皮膚常在菌叢として集団を形成している。皮膚常在菌として、スタフィロコッカス属、コリネバクテリウム属、プロピオニバクテリウム属、マイクロコッカス属などの菌が生息し、これら菌のバランスによって皮膚の外界からの保護機能が維持されている。しかし、環境的な要因である急激な温度変化、乾燥、強力な洗浄剤や薬品、または心身的な要因である外傷、精神的ストレス、病気による全身状態の不良によってそれら菌叢バランスは崩れ、かかる保護機能が破綻することが知られている（非特許文献２）【０００８】
そして、足、脇、頭皮、陰部などの不快な臭いの原因は、それぞれの部位に繁殖した皮膚常在菌の代謝物に起因することが知られている。これらの部位は、汗、体内からの分泌物などにより湿った状態にあり、その結果、微生物が繁殖しやすい状態にある。皮膚常在菌として、コリネバクテリウム属の細菌は芳香族アミン類、ステロイド類、チオアルコール類、マイクロコッカス属の細菌は脂肪酸、スタフィロコッカス属の細菌は脂肪酸とチオール化合物を生成し、臭いの原因になっている。中でもスタフィロコッカス属のスタフィロコッカス・ホミニスはチオ化合物の内、チオールアルコール産生菌として腋臭の原因となっている（非特許文献３）。【０００９】
一方、乳酸球菌であるＥｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ    ｆａｅｃａｌｉｓ    ＥＣ−１２の菌体が、表皮ブドウ球菌由来のグリセロール産生および皮膚表皮角化細胞由来の抗菌ペプチドの産生を促進することで皮膚表面の状態を健常に保つことが報告されているが（特許文献３）、体臭の原因となる皮膚常在菌に対する作用については明らかではない。
【先行技術文献】
【特許文献】
【００１０】
【特許文献１】特開２００２−０８０３３６号公報
【特許文献２】特開２００４−０５１５３０号公報
【特許文献３】特許第６１８５０４１号公報
【非特許文献】
【００１１】
【非特許文献１】Ｔｈｅ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｉｎｖｅｓｔｍｅｎｔ  Ｄｅｒｍａｔｏｌｏｇｙ，１１６，  ｐ５２０  （２００１）
【非特許文献２】Ｇａｌｌｏ，  Ｒ．Ｌ．ら，Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｉｖｅ  Ｄｅｒｍａｔｏｌｏｇｙ  １３１，Ｐ１９７４−１９８０（２０１１）
【非特許文献３】Ｊａｍｅｓ  ＡＧら，ＦＥＭＳ  Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ  Ｅｃｏｌ．  Ｍａｒ；８３（３）：Ｐ５２７−５４０．  （２０１３）
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１２】
従来報告されている消臭剤、消臭用組成物は、においの原因となる皮膚常在菌の増殖や機能に対して特異的に働くことができず、根本的な解決には不十分であるという問題があった。そこで、本発明は、皮膚に常在し体臭の原因となる有害菌の割合を特異的に減少させることにより、不快な体臭を軽減することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【００１３】
本発明者らは、上記課題を解決するために様々な乳酸菌を調査し、鋭意検討を重ねた結果、乳酸球菌であるＥｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ  ｆａｅｃａｌｉｓ  ＥＣ−１２の菌体、特にその加熱処理死菌体が皮膚常在菌叢を整えることを見出した。そして、この乳酸菌体が、不快な体臭の原因となる皮膚常在菌の内、芳香族アミノ酸類、ステロイド類、チオール化合物類の生成菌であるコリネバクテリウム属の割合、チオール化合物の内のチオールアルコールの生成菌であるスタフィロコッカス・ホルミニスの割合、アミン類、脂肪酸の生成菌である黄色ブドウ球菌の割合、脂肪酸類の生成菌であるマイクロコッカス属の割合を著しく減少させることを見出し、これらの知見に基づいて本発明を完成した。【００１４】
すなわち本発明は、以下の態様を含む。
［１］エンテロコッカス・フェカリス（Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ  ｆａｅｃａｌｉｓ）ＥＣ−１２株（受託番号ＦＥＲＭ  ＢＰ−１０２８４）の菌体を有効成分として含有する体臭発生抑制剤。
［２］菌体が、組成物中に少なくとも５×１０８個／ｇの濃度で含有されており、組成物が水性組成物の場合は、この水性組成物が菌体の分散に有効量の水溶性高分子化合物を含む［１］に記載の体臭発生抑制剤。
［３］組成物の２５℃における粘度が１０００ｍＰａ・ｓ以上である［２］に記載の体臭発生抑制剤。
［４］スタフィロコッカス属、コリネバクテリウム属またはマイクロコッカス属に属する１種または複数の皮膚常在菌の増殖を抑制するための、［１］〜［３］の何れか一項に記載の体臭発生抑制剤。
［５］アミン臭、チオール臭、脂肪酸臭、２−ノネナール臭の何れかまたはそれらの混合臭からなる体臭の発生を抑制するための、［１］〜［４］の何れか一項に記載の体臭発生抑制剤。
［６］皮膚外用剤の形態にある［１］〜［５］の何れか一項に記載の体臭発生抑制剤。
［７］洗濯用組成物の形態にある［１］〜［５］の何れか一項に記載の体臭発生抑制剤。
［８］衛生シート材の形態にある［１］に記載の体臭発生抑制剤。
［９］体臭発生抑制剤の製造における、エンテロコッカス・フェカリス（Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ Ｆａｅｃａｌｉｓ）ＥＣ−１２株（受託番号ＦＥＲＭ  ＢＰ−１０２８４）の菌体の使用。
［１０］エンテロコッカス・フェカリス（Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ Ｆａｅｃａｌｉｓ）ＥＣ−１２株（受託番号ＦＥＲＭ  ＢＰ−１０２８４）の菌体を含む組成物を、体臭発生を抑制する必要のある対象に塗布することを特徴とする体臭発生抑制方法。
【発明の効果】
【００１５】
本発明の体臭発生抑制剤は、エンテロコッカス・フェカリス（Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ  ｆａｅｃａｌｉｓ）ＥＣ−１２株（受託番号ＦＥＲＭ  ＢＰ−１０２８４）の菌体を有効成分として含有することで、においの原因となる皮膚常在菌の増殖を特異的に抑制し、体臭発生を効果的に抑制することができる。
【図面の簡単な説明】
【００１６】
【図１】エンテロコッカス・フェカリス・ＥＣ−１２の加熱処理死菌体含む足スプレー剤を使用したヒトモニター試験における、足底部から採取した臭い成分のうち、アミン類を定量した結果を表す。
【図２】皮脂採取法による皮脂スコア定量試験の試験デザインの説明図である。
【図３】額における皮脂スコア定量試験の結果を示す。
【発明を実施するための形態】
【００１７】
本明細書において、「体臭発生抑制剤」は、エンテロコッカス・フェカリス（Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ  ｆａｅｃａｌｉｓ）ＥＣ−１２株（受託番号ＦＥＲＭ  ＢＰ−１０２８４）の菌体を有効成分として含有する組成物であって、皮膚常在菌に作用することによって体臭の発生の予防または改善に有効な組成物を意味する。本発明の体臭発生抑制剤は、以下に詳述するように、化粧品や医薬部外品としてのローション、乳液、クリーム、パック剤、石鹸等の薬用化粧品、および医薬品としてのローション、乳液、クリーム、軟膏等の皮膚外用剤、並びに洗濯用組成物や衛生シートなどのヘルスケア製品を含む。また、これらの製品を製造するための中間製品としての組成物であってもよい。これらの中でも皮膚外用剤が好ましく、特に、所定の粘度を有するように本発明に係る有効成分を懸濁調整した水性組成物が好ましい。
【００１８】
本明細書において「組成物」は、液体、クリーム、ゲル、又は粉体等の様々な形態を採ることができる。水を含有する水性組成物の場合、通常は、組成物中に水を１重量％以上、好ましくは５重量％以上、より好ましくは２０重量％以上、更に好ましくは５０重量％以上含有するものを意味する。本発明の水性組成物に含有される水は、医薬上、薬理学的に（製薬上）又は生理学的に許容されるものであればよい。例えば、蒸留水、常水、精製水、滅菌精製水、注射用水、注射用蒸留水等を使用できる。これらの定義は第一五改正日本薬局方に基づく。なお、本明細書において、組成物中の各成分の含有量の表示は特に明記されていない場合は「重量％」を示すものとする。
【００１９】
本発明の水性組成物は、目的に応じて種々の製剤形態をとることができる。例えば、本発明の水性組成物の形態として、液剤、半固形剤（軟膏等）等が挙げられる。好ましくは液剤である。さらに、本明細書における「粘度」とは、本発明の有効成分を所定の濃度となるよう水に分散させた水性組成物を、Ｂ型粘度計（スピンドルＮｏ．３、回転数１０ｒｐｍ）により２５℃で測定した値である。
【００２０】
以下、本発明の好適な実施形態について次の順序により説明する。
（Ｉ）体臭発生抑制剤の成分及び組成
（ＩＩ）体臭発生抑制剤の製造方法
（ＩＩＩ）性状および作用効果
（ＩＶ）形態、用途または使用方法
【００２１】
（Ｉ）体臭発生抑制剤の成分及び組成
本発明の好ましい実施形態によれば、体臭発生抑制剤の有効成分として乳酸球菌が用いられる。より好ましくは、エンテロコッカス属に属する菌であり、さらに好ましくは、エンテロコッカス・フェカリス（Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ    ｆａｅｃａｌｉｓ）である。
【００２２】
エンテロコッカス・フェカリスとしては、例えば、エンテロコッカス・フェカリス・ＥＣ−１２株、ＡＴＣＣ１９４３３、ＡＴＣＣ１４５０８、ＡＴＣＣ２３６５５、ＩＦＯ１６８０３、ＩＦＯ１６８０４等の菌株またはその変異株が例示できる。有効成分として用いられる乳酸球菌としては、このうち、上記ＥＣ−１２株が最も好ましい。なおここで「変異株」は、特定の菌株に対し、当業者に周知の方法により当業者がその性質に変化を及ぼさない範囲で変異させたもの、あるいは、それと同等であると当業者が確認できるものを包含する意味である。
【００２３】
なお、エンテロコッカス・フェカリス・ＥＣ−１２株（Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ    ｆａｅｃａｌｉｓ    ＥＣ−１２）は、平成１７年（２００５年）２月２５日（原寄託日）付で独立行政法人産業技術総合研究所    特許生物寄託センター（〒３０５−８５６６日本国茨城県つくば市東１丁目１番地１中央第６）に寄託されている。受託番号は、ＦＥＲＭ  ＢＰ−１０２８４である。
【００２４】
有効成分として用いられる乳酸球菌は、生菌および／または死菌体を用いることができるが、剤の保存性などから、好ましくは死菌体が用いられ、より好ましくは、上記乳酸球菌を公知の加熱処理手段で殺菌して得られる加熱殺菌菌体が用いられる。加熱殺菌菌体は、上記乳酸球菌を常法に従って培養して得られた培養物から、濾過、遠心分離等の方法により菌体を回収し、水洗後、水等に懸濁して加熱処理した後、必要に応じて、濃縮、乾燥することにより調製できる。また、菌体を焼成、蒸煮に付すことによって調製してもよい。なお、上記ＥＣ−１２株の加熱処理による殺菌菌体粉末は、商品名「ＥＣ−１２」（コンビ株式会社製）または「ラ・フローラＥＣ−１２」（一丸ファルコス株式会社製）として市販されている。このため、本発明においては、有効成分として用いられる乳酸球菌として、このような市販品を用いてもよい。
【００２５】
（菌体数の計測方法）
なお、乳酸球菌の菌体数は、常法に従って検鏡計数法、濁度法、コールカウンター法、酵素結合免疫吸着測定法（ＥＬＩＳＡ法やＳＹＢＲ    Ｇｒｅｅｎ法）等により測定することが可能である。また、本発明の体臭発生抑制剤における乳酸球菌の菌体数は、上述の市販品等を適当量配合することで、所望の数値範囲に調整することができる。
【００２６】
本実施形態にかかる体臭発生抑制剤は、皮膚外用剤、洗濯用組成物、衛生シート材等のそれぞれの処方に合わせて、必要に応じて以下に例示する成分や添加剤を任意に選択および併用して製造することができる。これらの処方系中への配合量は、特に限定されるものではないが、通常、０．０００１〜５０重量％程度が好ましいと考えられる。
【００２７】
（１）各種油脂類
アボカド油、アーモンド油、ウイキョウ油、エゴマ油、オリーブ油、オレンジ油、オレンジラファー油、ゴマ油、カカオ脂、カミツレ油、カロット油、キューカンバー油、牛脂脂肪酸、ククイナッツ油、サフラワー油、シア脂、液状シア脂、大豆油、ツバキ油、トウモロコシ油、ナタネ油、パーシック油、ヒマシ油、綿実油、落花生油、タートル油、ミンク油、卵黄油、パーム油、パーム核油、モクロウ、ヤシ油、牛脂、豚脂、スクワレン、スクワラン、プリスタン又はこれら油脂類の水素添加物（硬化油等）等。
【００２８】
（２）ロウ類
ミツロウ、カルナバロウ、鯨ロウ、ラノリン、液状ラノリン、還元ラノリン、硬質ラノリン、カンデリラロウ、モンタンロウ、セラックロウ、ライスワックス等。
【００２９】
（３）鉱物油
流動パラフィン、ワセリン、パラフィン、オゾケライド、セレシン、マイクロクリスタンワックス等。
【００３０】
（４）脂肪酸類
ラウリン酸、ミリスチン酸、パルミチン酸、ステアリン酸、ベヘン酸、オレイン酸、リノール酸、リノレン酸、ドコサヘキサエン酸、エイコサペンタエン酸、１２−ヒドロキシステアリン酸、ウンデシレン酸、トール油、ラノリン脂肪酸等の天然脂肪酸、イソノナン酸、カプロン酸、２−エチルブタン酸、イソペンタン酸、２−メチルペンタン酸、２−エチルヘキサン酸、イソペンタン酸等の合成脂肪酸。
【００３１】
（５）アルコール類
エタノール、イソプロパノール、ラウリルアルコール、セタノール、ステアリルアルコール、オレイルアルコール、ラノリンアルコール、コレステロール、フィトステロール、フェノキシエタノール等の天然アルコール、２−ヘキシルデカノール、イソステアリルアルコール、２−オクチルドデカノール等の合成アルコール。
【００３２】
（６）多価アルコール類
酸化エチレン、エチレングリコール、ジエチレングリコール、トリエチレングリコール、エチレングリコールモノエチルエーテル、エチレングリコールモノブチルエーテル、ジエチレングリコールモノメチルエーテル、ジエチレングリコールモノエチルエーテル、ポリエチレングリコール、酸化プロピレン、プロピレングリコール、ポリプロピレングリコール、１，３−ブチレングリコール、ペンチルグリコール、グリセリン、ペンタエリトリトール、トレイトール、アラビトール、キシリトール、リビトール、ガラクチトール、ソルビトール、マンニトール、ラクチトール、マルチトール等。
【００３３】
（７）エステル類
ミリスチン酸イソプロピル、パルミチン酸イソプロピル、ステアリン酸ブチル、ラウリン酸ヘキシル、ミリスチン酸ミリスチル、オレイン酸オレイル、オレイン酸デシル、ミリスチン酸オクチルドデシル、ジメチルオクタン酸ヘキシルデシル、乳酸セチル、乳酸ミリスチル、フタル酸ジエチル、フタル酸ジブチル、酢酸ラノリン、モノステアリン酸エチレングリコール、モノステアリン酸プロピレングリコール、ジオレイン酸プロピレングリコール等。
【００３４】
（８）金属セッケン類
ステアリン酸アルミニウム、ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸亜鉛、ステアリン酸カルシウム、パルミチン酸亜鉛、ミリスチン酸マグネシウム、ラウリン酸亜鉛、ウンデシレン酸亜鉛等。
【００３５】
（９）ガム質、糖類又は水溶性高分子化合物
アラビアゴム、ベンゾインゴム、ダンマルゴム、グアヤク脂、アイルランド苔、カラヤゴム、トラガントゴム、キャロブゴム、クインシード、寒天、カゼイン、乳糖、果糖、ショ糖又はそのエステル、トレハロース又はその誘導体、デキストリン、ゼラチン、ペクチン、デンプン、カラギーナン、カルボキシメチルキチン又はキトサン、エチレンオキサイド等のアルキレン（Ｃ２〜Ｃ４）オキサイドが付加されたヒドロキシアルキル（Ｃ２〜Ｃ４）キチン又はキトサン、低分子キチン又はキトサン、キトサン塩、硫酸化キチン又はキトサン、リン酸化キチン又はキトサン、アルギン酸又はその塩、ヒアルロン酸又はその塩、コンドロイチン硫酸又はその塩、ヘパリン、エチルセルロース、メチルセルロース、カルボキシメチルセルロース、カルボキシエチルセルロース、カルボキシエチルセルロースナトリウム、ヒドロキシエチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、ニトロセルロース、結晶セルロース、ポリビニルアルコール、ポリビニルメチルエーテル、ポリビニルピロリドン、ポリビニルメタアクリレート、ポリアクリル酸塩、ポリエチレンオキサイドやポリプロピレンオキサイド等のポリアルキレンオキサイド又はその架橋重合物、カルボキシビニルポリマー、ポリエチレンイミン等。これらは、分散安定化剤または粘度調節剤として用いることができ、特に、キサンタンガム、グアーガム、カルボキシメチルセルロース、ポリビニルアルコール、ポリビニルピロリドン、カルボキシビニルポリマー、ヒドロキシエチルセルロース、ポリオキシエチレングリコールジステアレート等の水溶性高分子が好ましい。
【００３６】
（１０）界面活性剤
アニオン界面活性剤（アルキルカルボン酸塩、アルキルスルホン酸塩、アルキル硫酸エステル塩、アルキルリン酸エステル塩）、カチオン界面活性剤（アルキルアミン塩、アルキル四級アンモニウム塩）、両性界面活性剤：カルボン酸型両性界面活性剤（アミノ型、ベタイン型）、硫酸エステル型両性界面活性剤、スルホン酸型両性界面活性剤、リン酸エステル型両性界面活性剤、非イオン界面活性剤（エーテル型非イオン界面活性剤、エーテルエステル型非イオン界面活性剤、エステル型非イオン界面活性剤、ブロックポリマー型非イオン界面活性剤、含窒素型非イオン界面活性剤）、その他の界面活性剤（天然界面活性剤、タンパク質加水分解物の誘導体、高分子界面活性剤、チタン・ケイ素を含む界面活性剤、フッ化炭素系界面活性剤）等。
【００３７】
（１１）各種ビタミン類
ビタミンＡ群：レチノール、レチナール（ビタミンＡ１）、デヒドロレチナール（ビタミンＡ２）、カロチン、リコピン（プロビタミンＡ）、ビタミンＢ群：チアミン塩酸塩、チアミン硫酸塩（ビタミンＢ１）、リボフラビン（ビタミンＢ２）、ピリドキシン（ビタミンＢ６）、シアノコバラミン（ビタミンＢ１２）、葉酸類、ニコチン酸類、パントテン酸類、ビオチン類、コリン、イノシトール類、ビタミンＣ群：ビタミンＣ酸又はその誘導体、ビタミンＤ群：エルゴカルシフェロール（ビタミンＤ２）、コレカルシフェロール（ビタミンＤ３）、ジヒドロタキステロール、ビタミンＥ群：ビタミンＥ又はその誘導体、ユビキノン類、ビタミンＫ群：フィトナジオン（ビタミンＫ１）、メナキノン（ビタミンＫ２）、メナジオン（ビタミンＫ３）、メナジオール（ビタミンＫ４）、その他、必須脂肪酸（ビタミンＦ）、カルニチン、フェルラ酸、γ−オリザノール、オロット酸、ビタミンＰ類（ルチン、エリオシトリン、ヘスペリジン）、ビタミンＵ等。
【００３８】
（１２）各種アミノ酸類
バリン、ロイシン、イソロイシン、トレオニン、メチオニン、フェニルアラニン、トリプトファン、リジン、グリシン、アラニン、アスパラギン、グルタミン、セリン、システイン、シスチン、チロシン、プロリン、ヒドロキシプロリン、アスパラギン酸、グルタミン酸、ヒドロキシリジン、アルギニン、オルニチン、ヒスチジン等や、それらの硫酸塩、リン酸塩、硝酸塩、クエン酸塩、或いはピロリドンカルボン酸のごときアミノ酸誘導体等。
【００３９】
（１３）植物又は動物系原料由来の種々の添加物
これらは、添加しようとする製品種別、形態に応じて常法的に行われる加工（例えば、粉砕、製粉、洗浄、加水分解、醗酵、精製、圧搾、抽出、分画、ろ過、乾燥、粉末化、造粒、溶解、滅菌、ｐＨ調整、脱臭、脱色等を任意に選択、組み合わせた処理）を行い、各種の素材から任意に選択して供すれば良い。
【００４０】
尚、植物または動物系原料由来の添加物を、全身用又は局所用の外用剤、化粧品類に供する場合、皮膚や頭髪の保護をはじめ、保湿、感触・風合いの改善、柔軟性の付与、刺激の緩和、芳香によるストレスの緩和、細胞賦活（細胞老化防止）、炎症の抑制、肌質・髪質の改善、肌荒れ防止及びその改善、発毛、育毛、脱毛防止、光沢の付与、清浄効果、疲労の緩和、血流促進、温浴効果等の美容的効果のほか、香付け、消臭、増粘、防腐、緩衝等の効果も期待できる。
【００４１】
さらにこの他にも、これまでに知られている各原料素材の様々な美容的、薬剤的効果を期待し、これらを組み合わせることによって、本発明の目的とする体臭発生抑制効果に加えて、多機能的な効果を期待した製品とすることも可能である。
【００４２】
原料とする具体的な植物（生薬）または動物系原料としては、例えば、上述した特許文献３の段落番号００４２〜００５０に記載されている。さらに、本発明の体臭発生抑制効果またはその他の美容的効果の相加的又は相乗的向上が期待できる種々の添加剤は、特許文献３の段落００５１〜００８１に記載されており、これらの内容は参照により本明細書に組み込まれるものとする。
【００４３】
（ＩＩ）体臭発生抑制剤の製造方法
有効成分であるエンテロコッカス属乳酸球菌の培養方法としては、従来公知の乳酸菌の培養方法も含め特に制限されるものではないが、加熱処理死菌体は、次の方法によって製造することができる。エンテロコッカス属乳酸球菌を常法にしたがって培養して得られた培養物から、例えば、濾過、遠心分離等の方法により菌体を回収し、水洗後、水等に懸濁して加熱処理した後、必要に応じて濃縮、乾燥することにより調製できる。通常使用される噴霧乾燥、凍結乾燥機等を用いて行ってもよい。場合によっては、加熱等による殺菌処理の前後、あるいは、乾燥処理の前後に、酵素処理、界面活性剤処理、磨砕・粉砕処理を行うこともでき、これらの処理により得られるものも、本発明の死菌体またはその処理物に含まれる。
【００４４】
水洗及び懸濁に使用する水は、純水、水道水、井戸水、鉱泉水、鉱水、温泉水、湧水、淡水等の他、これらに各種処理を施したものが含まれる。水に施す処理としては、例えば、精製、加熱、殺菌、ろ過、イオン交換、浸透圧の調整、緩衝化等が含まれる。従って、本発明において抽出溶媒として使用可能な水には、精製水、加熱処理水、イオン交換水、生理食塩水、種々緩衝液等も含まれる。
【００４５】
以上のようにして得られるエンテロコッカス属乳酸球菌は、乾燥粉末または水性組成物などの組成物のいずれの状態でもよいが、中間原料として用いる場合は、上記のエンテロコッカス属乳酸球菌を１グラムあたり５×１０１１個以上、特に好ましくは５×１０１２個以上含まれるように調整されていることが、種々の形態の医薬品、医薬部外品、化粧料に配合するうえで好ましい。また、最終製品としての皮膚外用剤、洗濯用組成物、衛生シート材にあっては、例えば、１回の使用当たり上記のエンテロコッカス属乳酸球菌を１×１０１１個〜５×１０１２個程度が適用されるよう配合調整されている。
【００４６】
（ＩＩＩ）性状および作用効果
本実施形態にかかる体臭発生抑制剤は、粉体組成物、ゲル組成物（ハードゲル組成物も含む）、水性組成物など組成物の形態に限定されることはないがが、組成物の製造の観点などで、水性組成物が好ましい場合もある。また、有効成分であるエンテロコッカス・フェカリス（Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ  ｆａｅｃａｌｉｓ）ＥＣ−１２株の菌体を、少なくとも５×１０８個／ｇの濃度で水性媒体中に懸濁などにより含有された組成物が好ましい。さらに好ましくは、１×１０９個／ｇ以上、さらになお好ましくは、５×１０９個／ｇ以上の濃度で、懸濁などにより、含有された水性組成物である。また、水性組成物の場合、有効成分が均一な分散状態となるように水溶性高分子化合物などの粘度調整剤を含有することが好ましい。水性組成物中に菌体を分散させるなどのために有効な粘度としては、２５℃においてＢ型粘度計を用いて測定した値の下限が１００ｍＰａ・ｓ以上、好ましくは５００ｍＰａ・ｓ以上、特に好ましくは、１０００ｍＰａ・ｓ以上であり、２５℃においてＢ型粘度計を用いて測定した値の上限が２００００００ｍＰａ・ｓ以下、好ましくは１００００００ｍＰａ・ｓ以下、特に好ましくは５０００００ｍＰａ・ｓ以下である。このような粘度とするために水性組成物中に添加する水溶性高分子化合物の濃度は、当業者において適宜設定することができる。例えば、カルボキシビニルポリマーやキサンタンガムなどの水溶性高分子化合物を０．１〜０．２重量％程度添加する。
【００４７】
本実施形態の体臭発生抑制剤に含まれる有効成分が、ヒトの体臭を抑制する作用については、必ずしも明らかではなく、また、いかなる理論にも拘束されるわけではないが、次のような作用機構に基づくと推定される。すなわち、本発明の有効成分は、皮膚の表皮を構成する細胞や皮膚に存在する常在菌と相互作用することによって、なんらかのメカニズムで皮膚常在菌の多様性を維持すると考えられる。つまり、不快な体臭源となる臭気物質を発生する皮膚常在菌が特異的に生育することを抑制し、一方、表皮ブドウ球菌などの有用菌の増殖を促進して皮膚常在菌バランスを整えると考えられる。
【００４８】
臭気物質を発生する皮膚常在菌としては、例えば、チオール化合物、特にチオールアルコールの生成菌であるスタフィロコッカス・ホルミニス、芳香族アミノ酸類、ステロイド類、チオール化合物類の生成菌であるコリネバクテリウム属の細菌、さらに、病原性を持ち、かつ脂肪酸臭を発する黄色ブドウ球菌（スタフィロコッカス・オーレウス）などがある。本実施形態の体臭発生抑制剤は、これらの皮膚常在菌の増殖を抑制することは、例えば、実施例の実験結果である表２〜表５に示される。よって、本発明の好ましい実施形態では、スタフィロコッカス属、コリネバクテリウム属またはマイクロコッカス属に属する１種または複数の皮膚常在菌の増殖を抑制するための体臭発生抑制剤である。さらに好ましくは、スタフィロコッカス属、特に、スタフィロコッカス・ホルミニス、スタフィロコッカス・オーレウスなどの細菌の増殖を抑制することができる。
【００４９】
そして、このような作用により、身体からの分泌物に含まれる体臭源物質である、アミン類／チオール化合物類／２−ノネナール／ヘプタナール、オクタナール、メチルヘプテン、ノナナール等、さらに、身体からの分泌物に含まれるその他の体臭源物質の発生を抑制すると考えられる（表７参照）。したがって、本発明の好ましい実施形態では、アミン臭、チオール臭、脂肪酸臭、２−ノネナール臭の何れかまたはそれらの混合臭からなる体臭の発生を抑制するための、体臭発生抑制剤が提供される。
【００５０】
（ＩＶ）形態、用途または使用方法
本実施形態の体臭発生抑制剤は、アンプル、カプセル、粉末、顆粒、液体、ゲル、気泡、エマルジョン、シート、ミスト、液体スプレー剤、パウダースプレー剤等、利用上の適当な形態の１）医薬品類、２）医薬部外品類、３）局所用又は全身用の皮膚外用剤類（例えば、化粧水，乳液，クリーム，軟膏，ローション，オイル，パック等の基礎化粧料，固形石鹸，液体ソープ，ハンドウォッシュ等の洗顔料や皮膚洗浄料，マッサージ用剤，クレンジング用剤，除毛剤，脱毛剤，髭剃り処理料，アフターシェーブローション，プレショーブローション，シェービングクリーム，ファンデーション，口紅，頬紅，アイシャドウ，アイライナー，マスカラ等のメークアップ化粧料，香水類，プラスター剤，テープ剤，貼付剤，エアゾール剤等）、４）頭皮・頭髪に適用する薬用又は／及び化粧用の製剤類（例えば、シャンプー剤、リンス剤、ヘアートリートメント剤、プレヘアートリートメント剤、パーマネント液、染毛料、整髪料、ヘアートニック剤、育毛・養毛料、エアゾール剤等）、５）浴湯に投じて使用する浴用剤、６）腋臭防止剤や消臭剤、制汗剤、てんか粉、制汗パウダー等、７）ランドリー・洗濯用品（洗濯用洗剤、柔軟剤、漂白剤）等を含む。また本発明によるエンテロコッカス・フェカリス（Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ  ｆａｅｃａｌｉｓ）ＥＣ−１２株（受託番号ＦＥＲＭ  ＢＰ−１０２８４）を有効成分とする体臭発生抑制剤を付着させた衛生シート材、（特には、不織布製衛生シート材であることが好ましい。）は、８）衛生用品、化粧用コットン、化粧用フェイシャルシート、ボディー用ウェットシート、制汗不織布、脇汗パット、ナプキン、タンポン等の生理用品、おりものシート、シート状衛生綿類、ウエットティッシュ、赤ちゃん用紙おむつ、成人用紙おむつ、枕用カバーシート、寝具敷きパットシート、靴の中敷きシート等を挙げることができる。
【００５１】
これらの中でも特に皮膚外用剤の形態にあることが好ましく、この場合、本発明にかかる体臭発生抑制効果に加えて、その他の美容的効果も同時に達成することができる。例えば、体臭の原因となる皮脂の生成を抑制することで、肌のてかりや脂っぽさを低下させる皮脂抑制剤としての効果も期待される。
【００５２】
他の好ましい実施形態では、洗濯用組成物を挙げることができる。この実施形態の洗濯用組成物は、本発明の有効成分の他に、上述した界面活性剤、洗剤ビルダーまたは錯生成剤、例えばゼオライト、ジホスフェート、三リン酸、ホスホネート、カーボネート、シトレート、ニトリロ三酢酸、エチレンジアミン四酢酸、ジエチレントリアミン六酢酸、アルキル−又はアルキニルコハク酸、可溶性シリケート又は層化されたシリケートを含むことができる。
【００５３】
洗濯用組成物に用いるに好ましい陰イオン界面活性剤としては、高級アルコールの硫酸エステル塩、高級アルコールのエトキシル化物の硫酸エステル塩、アルキルベンゼンスルホン酸塩、パラフィンスルホン酸塩、α−オレフィンスルホン酸塩、α−スルホ脂肪酸塩若しくはそのエステル塩、又は脂肪酸塩が挙げられる。特に、アルキル鎖の炭素数が１０〜１８（好ましくは１２〜１４）の直鎖アルキルベンゼンスルホン酸塩、炭素数が１０〜２０のα−スルホ脂肪酸アルキルエステル塩が好ましい。また、対イオンとしては、アルカリ金属、アルカリ土類金属、アンモニア、アルカノールアミン等が挙げられる。
【００５４】
非イオン界面活性剤としては、高級アルコールのエチレンオキシド（以下「ＥＯ」という）付加物、若しくはＥＯ／プロピレンオキシド（以下「ＰＯ」という）付加物、脂肪酸アルカノールアミド、アルキル（ポリ）グリコシド等が挙げられる。特に炭素数が１０〜１６のアルコールのＥＯ１〜１０モル付加物が皮脂汚れの除去、耐硬水性、生分解性の点で好ましい。
【００５５】
陽イオン界面活性剤として、アミン塩又は第４級アンモニウム塩等を用いることができる。特にジ長鎖アルキル型の第４級アンモニウム塩が好適であり、アルキル基中に−ＣＯＯ−、−ＯＣＯ−、−ＮＨＣＯ−、−ＣＯＮＨ−のような連結基を含むものであってもよい。また、両性界面活性剤として、カルボベタイン型、スルホベタイン型両性界面活性剤等が挙げられる。
【００５６】
その他、洗剤、仕上げ剤（柔軟剤、糊剤等）等、洗濯用組成物として特徴的な性質を付与できる成分を含有することができる。また、従来知られている洗剤、仕上げ剤（柔軟剤、糊剤等）等の洗濯用組成物に本発明の有効成分を添加することで、体臭発生抑制効果を有する洗濯用組成物とすることができる。
【００５７】
本実施形態の洗濯用組成物は、衣料、寝具等の繊維製品を対象とすることが好ましい。また、本発明の洗濯用組成物は、洗剤組成物、柔軟剤組成物、糊剤組成物などの洗濯用組成物としての応用が可能である。
【００５８】
さらに他の実施形態として、衛生シート材が挙げられる。この実施形態における衛生シートは、繊維基材に本発明の有効成分を付着させたものである。繊維基材に対して本発明の有効成分を付着させる方法は特に制限がないが、たとえば、プリント法およびパッド法、コーティング法、噴射プリント法などがある。プリント法は、プリント糊、本発明の有効成分を含む液状組成物を、スクリーン印刷法を用いて繊維基材に付着する。その後、加熱乾燥し、繊維基材に定着させるため、繊維基材表面に有効成分を安定に定着させることができる点、および、製造の歩留まりが良好である点で好ましい。
【００５９】
繊維製品に対する本発明の有効成分の配合量は、繊維基材の種類や用途に応じて適宜設定することができ、通常、繊維製品の重量に対し、０．００１〜３０重量％、好ましくは０．０１〜１０重量％とする。このような範囲とすれば本発明の有効成分を繊維基材に安定に定着させることができる。
【実施例】
【００６０】
以下に、エンテロコッカス属乳酸球菌として、本発明の目的効果において最も顕著であったエンテロコッカス・フェカリス  ＥＣ−１２株での実施例を示すが、本発明はこれらの実施例等に限定されるものではない。【００６１】
（微生物の寄託）
エンテロコッカス・フェカリス  ＥＣ−１２（Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ  ｆａｅｃａｌｉｓ  ＥＣ−１２）は、平成１７年（２００５年）２月２５日（原寄託日）付で独立行政法人産業技術総合研究所  特許生物寄託センター（茨城県つくば市東１丁目１番地１  中央第６）に寄託された。受託番号は、ＦＥＲＭ  ＢＰ−１０２８４である。【００６２】
本発明の好ましい態様によれば、有効成分として用いられる細菌は、エンテロコッカス属に属する菌である。より好ましくは、該細菌は、エンテロコッカス・フェカリス（Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ  ｆａｅｃａｌｉｓ）である。【００６３】
エンテロコッカス・フェカリスとしては、例えば、Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ  ｆａｅｃａｌｉｓ  ＥＣ−１２（受託番号ＦＥＲＭ  ＢＰ−１０２８４）、ＡＴＣＣ  １９４３３、ＡＴＣＣ  １４５０８、ＡＴＣＣ  ２３６５５、ＩＦＯ  １６８０３、ＩＦＯ  １６８０４等の菌株またはその変異株が例示できる。有効成分として用いられる細菌としては、このうち、前記ＥＣ−１２が最も好ましい。なおここで「変異株」とは、特定の菌株に対し、当業者に周知の方法により当業者がその性質に変化を及ぼさない範囲で変異させたもの、あるいは、それと同等であると当業者が確認できるものを包含する意味である。【００６４】
（エンテロコッカス属乳酸球菌およびその加熱処理死菌体の入手）
Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ  ｆａｅｃａｌｉｓ  ＥＣ−１２（受託番号ＦＥＲＭ  ＢＰ−１０２８４）はコンビ株式会社製のものを用いた。【００６５】
（スプレーの調整）
ヒトの足や胴体に散布するためのスプレーの組成（均一に混合したもの）は以下の通りである。
１．プラセボ群（スプレーＢ）
・メチルパラベン（メッキンス−Ｍ、上野製薬株式会社）    ０．２０％
・１，３−ブタンジオール（株式会社ダイセル）            ５．００％
・水                                                  ９４．８％
２．ＥＣ−１２投与群（スプレーＡ）
・エンテロコッカス属乳酸球菌加熱処理死菌体              ０．１０ｗ／ｖ％
・メチルパラベン（メッキンス−Ｍ、上野製薬株式会社）    ０．２０％
・１，３−ブタンジオール（株式会社ダイセル）            ５．００％
・水                                                  ９４．７％【００６６】
（ヒト皮膚常在菌試験）
成人男性被験者が毎日就寝前に、右足にはスプレーＡを、左足には対照となるプラセボスプレーＢを７日間連続使用し、８日目起床後、各足指周辺を滅菌綿棒で擦り、皮膚常在菌を回収した。次いで、綿棒をリン酸緩衝生理食塩水２００μＬ中で洗い、皮膚常在菌ゲノムＤＮＡを抽出した。【００６７】
（皮膚常在菌１６ＳｒＲＮＡ解析）
１６ｓｒＲＮＡのＶ２、３、４、６、７、８、９領域配列をＩＯＮ  ＰＧＭシークエンサー（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ社製）によって解析した。菌叢解析にはＷｏｒｌｄＦｕｓｉｏｎ社製メタゲノム解析ソフトＭｅｔａｇｅｎｏｍｅ＠ＫＩＮを使用した。【００６８】
（皮膚常在菌解析の結果）
前記の１６ｓｒＲＮＡ解析で得た菌種の多様性の指標であるＳｉｍｐｓｏｎ’ｓ  ＩｎｄｅｘとＳｈａｎｎｏｎ  Ｅｎｔｒｏｐｙを表１に示す。菌種の多様性が高いほどＳｉｍｐｓｏｎ’ｓ  Ｉｎｄｅｘは１に近い値を示し、Ｓｈａｎｎｏｎ  Ｅｎｔｒｏｐｙは低い値を示す。これらの解析結果から、エンテロコッカス属乳酸球菌加熱処理死菌体入りのスプレーＡを用いた場合、被検体を含まないプラセボスプレーＢを用いた場合と比べ、菌種の多様性が増加することが明らかとなった。【００６９】
【表１】
2020004580.tif 000003
【００７０】
（菌種ごとの割合の結果）
スタフィロコッカス・ホミニスの割合の結果を表２に、コルネバクテリア属の割合の結果を表３に、マイクロコッカス属の割合の結果を表４に、黄色ブドウ球菌の割合の結果を表５に示した。スタフィロコッカス・ホミニスの割合はスプレーＡ散布により低下した。コリネバクテリア属に属する皮膚常在菌は２９菌種が検出され、すべての菌種がスプレーＡを散布により割合が低下した。マイクロコッカス属に属する皮膚常在菌は３菌種が検出され、それらすべての菌種がスプレーＡ散布により割合が低下した。黄色ブドウ球菌の割合も同様に低下した。【００７１】
【表２】
2020004580.tif 000004
【００７２】
【表３】
2020004580.tif 000005
【００７３】
【表４】
2020004580.tif 000006
【００７４】
【表５】
2020004580.tif 000007
【００７５】
（ヒト足臭い試験）
成人男性被験者４人が毎日就寝前に、右足にはエンテロコッカス属乳酸球菌加熱処理死菌体入り足スプレーＡを、左足には対照となる同乳酸球菌加熱処理死菌体無添加のプラセボ足スプレーＢを７日間連続使用し、足底部からの分泌物を回収した。足底部からの分泌物の採取のため、靴の中に紙製靴中敷（アシートコバシ株式会社製）を敷いた。たとえ、靴を変える際も、この紙製の靴の中敷きを継続して用い、足底部からの分泌物を集めた。７日後に中敷きを密閉ビニール袋に入れ、−２０℃の冷凍庫で保存した。【００７６】
（アミン臭の検出）
前記で採取した足底部の分泌物を含んだ紙中敷き入りの密閉ビニール袋内の気体を室温に温め、臭気検知管アミン類（株式会社ガステック社製）により４００ｍＬその気体を吸引し、アミン臭を測定した。その結果を図１に示す。エンテロコッカス属乳酸球菌加熱処理死菌体入りの足スプレーＡを用いた場合、被験者１−３、５でアミン臭の低減が見られた。被験者４ではアミン臭が検出されなかった。【００７７】
（ヒト体臭試験）
成人男性被験者５人が毎日朝起床後、および夜就寝前に、エンテロコッカス属乳酸球菌加熱処理死菌体入りスプレーＡを７日間連続使用した。スプレーＡの散布前日に、新しい木綿製の肌着（ヘインズ製白地Ｔシャツ、無香料、無蛍光、無抗菌洗剤で洗濯したもの）を着用し、少なくとも８時間以上の活動時間中の体臭を採取した。その肌着は密閉ビニール袋に入れ、散布前の体臭サンプルとした。同様に、７日間散布後、別の新しい肌着を着用し、同様に体臭を採取し、散布後の体臭サンプルとした。それぞれの散布前、散布後のサンプルは−２０℃の冷凍庫で保存した。【００７８】
（官能性評価による体臭検出）
前記で採取した体臭入りの密閉ビニール袋内の気体を室温に温め、３人の官能性試験担当者で臭いの評価を行った。臭いの判定は６段階（６段階臭気強度表示法）にて行った。０：無臭、１：やっと感知できるにおい、２：何のにおいか判る弱いにおい、３：楽に感知できるにおい、４：強いにおい、５：強烈なにおい、である。その結果を表６に示す。エンテロコッカス属乳酸球菌加熱処理死菌体入りのボディースプレーを用いた場合、被験者１、２、４及び５で体臭の低減が見られた。【００７９】
体臭の官能性評価
【表６】
2020004580.tif 000008
【００８０】
（ガスクロマトグラフィーによる体臭分析）
被験者４の前記で採取した散布前・散布後の木綿製の肌着を縦方向におよそ２分割し、サンプリングバッグに採取し、高純度窒素ガスを充填後、４０℃にて３０分間加温した。加温後のサンプリングバッグ内のガスについて、コールドトラップデハイドレーション‐ガスクロマトグラフ質量分析法（ＣＴＤ−ＧＣ／ＭＳ法）によるスキャンモードでの測定を行った。その際、ＣＴＤとしてＥＮＴＥＣＨ製ＥＮＴ−７１００Ａ型を、ＧＣ／ＭＳとしてＡｇｉｌｅｎｔ製ＧＣ６８９０Ｎ＋ＭＳＤ５９７５Ｂ型を用いた。検出されたピークはＷｉｌｅｙ又はＮＩＳＴライブラリーを用いて、化合物の同定を行った。その結果を表７に示す。脂肪族アルデヒド類（オクタナールなど）の体臭成分のにおいを低減できた。【００８１】
【表７】
2020004580.tif 000009
【００８２】
（粘度試験）
カルボキシビニルポリマーで粘度を調整した溶液にエンテロコッカス属乳酸球菌加熱処理死菌体を１％懸濁し、２５℃で２４時間保存後の粘度と乳酸菌加熱処理死菌体の分散の程度を測定した。粘度の測定は医薬部外品原料規格２００６に則り、Ｂ型粘度計を用い測定した。分散の程度は、沈降した乳酸菌死菌体の重量を測定し、（（全量）−（沈降した乳酸菌死菌体重量））／（全量）を分散度とした。その結果を表８に示す。【００８３】
【表８】
2020004580.tif 000010
【００８４】
（皮脂採取法による皮脂スコア定量試験）
図２に示した試験デザインに従って二重盲検プラセボ比較試験を行った。被験者（男性２９名、平均年齢４３．５歳）を２群に分け、Ａ群は２週間配合ジェル（表９参照）を、１日２回塗布し、その後２週間Ｐｌａｃｅｂｏ（表９においてエンテロコッカス属乳酸球菌加熱処理死菌体無添加のジェル）を塗布し、Ｂ群は、最初の２週間Ｐｌａｃｅｂｏを塗布し、その後２週間配合ジェルを塗布した。ここで、本実施例においての「配合ジェル」は、エンテロコッカス属乳酸球菌加熱処理死菌体（エンテロコッカス・フェカリス）含有のジェルであり、この死菌体の配合率は０．１％である（表９参照）。表９に、配合ジェルの処方（組成）を示す。【００８５】
【表９】
2020004580.tif 000011
【００８６】
期間中毎週末に、被験者の額の所定の皮膚表面をあぶらとりフィルム（２６ｍｍ×２４ｍｍ）を用いて皮脂を回収し、ｉｍａｇｅＲＵＮＮＥＲ  ＡＤＶＡＮＣＥ  ｃ５５４０Ｆ（キヤノン株式会社）を用いて、あぶらとりフィルムをスキャンして、ＩｍａｇｅＪ（アメリカ国立衛生研究所）にてその明度を測定した。なお、陽性コントロールとしてトリグリセリド（ココナードＭＴ（花王株式会社））を塗ったフィルムのスコアを１００とし、陰性コントロールとして、何も塗っていないフィルムのスコアを０とし、０〜１００のスコアで皮脂スコアを定量した。【００８７】
その結果を図３に示す。図３は、順化期間である第１週の皮脂スコアを基準にして皮脂スコアの高かった上位２５％の被験者（Ａ群４人、Ｂ群３人）について、３週目及び５週目の週末に測定した額の皮脂スコアを測定し、１週目の皮脂スコアとの相対値をプロットした結果である。Ａ群およびＢ群ともに配合ジェルを塗布した被験者の皮脂スコアが低下していること、特にＡ群においてはその低下が有意に低下していること、が分かった。
この結果より、エンテロコッカス属乳酸球菌加熱処理死菌体（エンテロコッカス・フェカリス）を含有した皮膚外用剤は、皮脂抑制作用を有することが示された。【００８８】
（各種体臭予防・軽減する皮膚外用剤の製造例）
１．デオドラントジェル
（Ａ相）
エタノール                                  １０．００％
カルボマーＮａ                                １．２０％
（Ｂ相）
水                                          ７７．９０％
（Ｃ相）
水                                            ５．００％
フェノールスルホン酸亜鉛                      ０．３５％
（Ｄ相）
エタノール                                    ５．００％
メントール                                    ０．５０％
ベンザルコニウムクロリド（５０％水溶液）      ０．０５％
エンテロコッカス属乳酸球菌加熱処理死菌体      ０．０１−１％（適量）【００８９】
（製造法）
Ａ相を攪拌しながら分散する。
Ａ相を攪拌しながら、Ｂ相を加え溶解しＥ相とする。
Ｃ相を攪拌しながら溶解する。
Ｄ相を攪拌しながら溶解する。
Ｅ相を攪拌しながら、Ｃ相及びＤ相を加え溶解し、製品とする（粘度［ｍＰａ・ｓ］：１７，０００）。【００９０】
２．デオドラントスプレー
（Ａ相）
エタノール                                      １０．００％
カルボマーＮａ                                    ０．５０％
（Ｂ相）
水                                              ２８．６０％
（ビス−ステアリル  ＰＥＧ／ＰＰＧ―８／  ６  ＳＭＤＩ／ＰＥＧ―４００）コポリマー、水（１％水溶液）                ５０．００％
（Ｃ相）
エタノール                                        ５．００％
メントール                                        ０．５０％
ベンザルコニウムクロリド（５０％水溶液）          ０．０５％
（Ｄ相）
水                                                ５．００％
フェノールスルホン酸亜鉛                          ０．３５％
エンテロコッカス属乳酸球菌加熱処理死菌体          ０．０１−１％（適量）【００９１】
（製造法）    
Ａ相を攪拌しながら分散する。
Ｂ相を攪拌しながら均一にする。
Ａ相を攪拌しながら、Ｂ相を加えて溶解しＥ相とする。
Ｃ相を攪拌しながら溶解する。
Ｄ相を攪拌しながら溶解する。
Ｅ相を攪拌しながら、Ｃ相及びＤ相を加えて溶解し、製品とする（粘度［ｍＰａ・ｓ］：１，５００）。【００９２】
３．ボディローション  （Ｗ／Ｏ  Ｅｍｕｌｓｉｏｎ）  
（Ａ相）      
安息香酸アルキル（Ｃ１２―１５）                  １．００％
ミツロウ                                          ３．００％
（カプリル酸／カプリン酸）ヤシアルキル            ６．８０％
ジカプリリルエーテル                              ６．８０％
ジメチコン、ジメチコノール                        ６．６０％
ステアリン酸Ｍｇ                                  ２．００％
ジポリヒドロキシステアリン酸ポリグリセリルー２    ６．８０％
アロエベラエキス―１〜３                          ４．００％
エンテロコッカス属乳酸球菌加熱処理死菌体          ０．０１−１％（適量）
（Ｂ相）
水                                              ５６．４５％
グリセリン                                        ５．００％
塩化Ｎａ                                          １．００％
（Ｃ相）
香料                                              ０．２５％
フェノキシエタノール、メチルパラベン、ブチルパラベン、エチルパラベン、プロピルパラベン、イソブチルパラベン            ０．３０％【００９３】
（製造法）    
別々の容器でＡ相とＢ相を７５℃に加熱する。
Ａ相を均一に分散させながらＢ相を加える。
ゆっくり攪拌しながら室温まで冷却し、４０℃以下になったらＣ相を加える（粘度［ｍＰａ・ｓ］：１，５００−３，０００）。【００９４】
４．シェービングクリーム
（Ｉ相）
水                                            全量で１００％
グリセリン                                        ３．００％
エチレンジアミンジコハク酸３Ｎａ                  ０．３０％
（ＩＩ相）
オリーブ油脂肪酸セテアリル、オリーブ油脂肪酸ソルビタンミックス
３．００％
パルミチン酸セチル、パルミチン酸ソルビタン、オリーブ油脂肪酸ソルビタンミックス                                        １．５０％
オリーブ油脂肪酸ラウリル                          ４．００％
ガルシニアインディカ種子脂                        ４．００％
ステアリン酸                                      ０．５０％
ＢＨＴ                                            ０．１０％
エンテロコッカス属乳酸球菌                        ０．０１−１％（適量）
（ＩＩＩ相）  
ポリアクリレート―１３、ポリイソブテン、ポリソルベート２０    ０．３３％
（ＩＶ相）
防腐剤                                              適量
香料                                                適量【００９５】
（製造法）    
Ｉ相とＩＩ相を調製し、それぞれ７５〜８０℃に加熱する。
高速撹拌機にて、７０〜７５℃でホモジナイズしながらＩＩ相をＩ相へ添加する。
撹拌しながら水浴で４０℃まで冷却する。
ＩＩＩ相を添加し、高速撹拌機でホモジナイズする。
ＩＶ相を添加する。
粘度はＢ型粘度計を用い測定し、スピンドルＮｏ．Ｔ―Ｃ，  １０ｒｐｍ，  室温２４時間後に、６，０００〜１８，０００ｍＰａ・ｓ  である。【００９６】
５．ボディシャンプー
（Ｉ相）      
オリーブ油ＰＥＧ―７カルボン酸Ｎａ              １５．００％
デシルグルコシド                                １０．００％
ラウラミドプロピルベタイン                      １０．００％
ジオレイン酸ＰＥＧ−１２０メチルグルコース        １．５０％
（ＩＩ相）
オリーブ油ＰＥＧ―７                              ２．００％
オリーブ油脂肪酸エチルヘキシル                    ０．５０％ 
トコフェロール                                    ０．２５％
香料                                               適量
（ＩＩＩ相）  
水                                                全量で１００％
ベタイン                                          １．００％
パンテノール                                      ０．２０％
グリセリン                                        ３．００％
エチレンジアミンジコハク酸３Ｎａ                  ０．３０％
ヒドロキシメチルグリシンＮａ                      ０．５０％
（ＩＶ相）
塩化ナトリウム                                    １．００％
（Ｖ相）
乳酸（８０％）                                    ０．２５％
エンテロコッカス属乳酸球菌加熱処理死菌体          ０．０１−１％（適量）【００９７】
（製造法）
Ｉ相を調製し、４０℃に加温して全て溶解するまで撹拌する
ＩＩ相を調製し、Ｉ相へ添加し、透明になるまで撹拌する。
ＩＩＩ相を調製し、Ｉ相とＩＩ相の混合物へ撹拌しながら添加する。
ＩＶ相とＶ相を調製し、均質化するまで撹拌をする。
粘度：７５０〜１，０００ｍＰａ・ｓ（Ｂ型粘度計１０ｒｐｍ、  スピンドルＮｏ．３，  室温２４時間後）【００９８】
６．高性能シャンプー
（Ａ相）
精製水                                            バランス
カチオン化セルロース                                ０．５％
（Ｂ相）  
アンホレックス３０Ｓ                                ６．０％
ポリオキシエチレンラウリルエーテル硫酸ナトリウム  ３６．０％
アンホレックスＰＢ―１                              ８．０％
アミコールＣＭＥＡ                                  ２．０％
パルナーＳＥＧ―Ａ                                  １．５％
（Ｃ相）
ＭファインオイルＣＯＧ―７Ｍ                        ５．０％
エンテロコッカス属乳酸球菌加熱処理死菌体            ０．０１−１％（適量）
（Ｄ相）      
クエン酸                                              適量【００９９】
（製造法）    
Ａ相を溶し、Ｂ相を７５℃で溶解する。
Ｃ相を添加し溶解した後、冷却しＤでｐＨを調整する。粘度：５００−２０００ｍＰａ・ｓ（Ｂ型粘度計１０ｒｐｍ、  スピンドルＮｏ．３，  室温２４時間後）【０１００】
７．洗濯用柔軟剤
精製水                                          １５０ｍＬ
クエン酸                                          ４５ｍＬ
グリセリン                                        ３０ｍＬ
グルコシルトレハロース                            ２５ｍＬ
精油                                                ３ｍＬ
メチルパラベン                                  ０．８ｇ
エンテロコッカス属乳酸球菌加熱処理死菌体        ０．０１−１％（適量）【０１０１】
（製造法）
精製水、クエン酸を４０℃に加温して全て溶解するまで撹拌する。
グリセリン、グルコシルトレハロース、メチルパラベンを加え、透明になるまで撹拌する。エンテロコッカス属乳酸球菌加熱処理死菌体を加え、分散させる。精油を加え、攪拌する。粘度：５００−１０００ｍＰａ・ｓ（Ｂ型粘度計１０ｒｐｍ、スピンドルＮｏ．３、室温２４時間後）
【産業上の利用可能性】
【０１０２】
本発明で有効成分として使用するエンテロコッカス属乳酸球菌は、皮膚常在菌叢の菌種の割合を変える。すなわち、スタフィロコッカス属（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ）、コリネバクテリウム属（Ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ）、マイクロコッカス属（Ｍｉｃｒｏｃｏｃｃｕｓ）などの、不快な体臭源となる臭気物質を産生する菌を特異的に減少させ、またはそれら菌の増殖を抑制する。実際に、人体におけるアミン臭、チオールアルコール臭、２−ノネナール臭の発生抑制効果も認められ、脇、足、頭皮、陰部などの不快な体臭源となる臭気物質の産生を抑制する。よって、外界からの皮膚保護機能が維持された好ましい菌叢状態を保持しながら、不快な体臭を軽減させる体臭発生抑制剤、およびこれら利用した体臭予防・軽減する皮膚外用剤、洗濯用組成物、衛生シート材など広範囲での利用性が高い。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【国際調査報告】
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